JP2020158508A - 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド - Google Patents

腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド Download PDF

Info

Publication number
JP2020158508A
JP2020158508A JP2020088048A JP2020088048A JP2020158508A JP 2020158508 A JP2020158508 A JP 2020158508A JP 2020088048 A JP2020088048 A JP 2020088048A JP 2020088048 A JP2020088048 A JP 2020088048A JP 2020158508 A JP2020158508 A JP 2020158508A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cancer
oncology
optionally substituted
isolated polynucleotide
thio
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2020088048A
Other languages
English (en)
Inventor
バンセル、ステファヌ
Bancel Stephane
チャクラボルティ、ティルタ
Chakraborty Tirtha
フジェローレ、アントニン ドゥ
De Fougerolles Antonin
フジェローレ、アントニン ドゥ
エム． エルバシール、セイダ
M Elbashir Sayda
エム． エルバシール、セイダ
ジョン、マティアス
John Matthias
ロイ、アタヌ
Roy Atanu
ホリスキー、スーザン
Whoriskey Susan
エム． ウッド、クリスティ
M Wood Kristy
エム． ウッド、クリスティ
ハタラ、ポール
Hatala Paul
ピー． シュラム、ジェイソン
P Schrum Jason
ピー． シュラム、ジェイソン
エジェベ、ケネチ
Ejebe Kenechi
リン エルスワース、ジェフ
Lynn Ellsworth Jeff
リン エルスワース、ジェフ
ギルド、ジャスティン
Guild Justin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ModernaTx Inc
Original Assignee
ModernaTx Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49235350&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP2020158508(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ModernaTx Inc filed Critical ModernaTx Inc
Publication of JP2020158508A publication Critical patent/JP2020158508A/ja
Priority to JP2022085185A priority Critical patent/JP2022122923A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7115—Nucleic acids or oligonucleotides having modified bases, i.e. other than adenine, guanine, cytosine, uracil or thymine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1891—Angiogenesic factors; Angiogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/45—Transferases (2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/145—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/08—Antiseborrheics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43595—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from coelenteratae, e.g. medusae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4723—Cationic antimicrobial peptides, e.g. defensins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4746—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used p53
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF] (urogastrone)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5418—IL-7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/56—IFN-alpha
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormones [GH] (Somatotropin)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0091—Oxidoreductases (1.) oxidizing metal ions (1.16)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6435—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6437—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6443—Coagulation factor XIa (3.4.21.27)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6451—Coagulation factor XIIa (3.4.21.38)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93—Ligases (6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y603/00—Ligases forming carbon-nitrogen bonds (6.3)
    • C12Y603/02—Acid—amino-acid ligases (peptide synthases)(6.3.2)
    • C12Y603/02019—Ubiquitin-protein ligase (6.3.2.19), i.e. ubiquitin-conjugating enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y113/00—Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13)
    • C12Y113/12—Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13) with incorporation of one atom of oxygen (internal monooxygenases or internal mixed function oxidases)(1.13.12)
    • C12Y113/12007—Photinus-luciferin 4-monooxygenase (ATP-hydrolysing) (1.13.12.7), i.e. firefly-luciferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y116/00—Oxidoreductases oxidizing metal ions (1.16)
    • C12Y116/03—Oxidoreductases oxidizing metal ions (1.16) with oxygen as acceptor (1.16.3)
    • C12Y116/03001—Ferroxidase (1.16.3.1), i.e. ceruloplasmin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07012—UDP-glucose--hexose-1-phosphate uridylyltransferase (2.7.7.12)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21027—Coagulation factor XIa (3.4.21.27)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y403/00—Carbon-nitrogen lyases (4.3)
    • C12Y403/02—Amidine-lyases (4.3.2)
    • C12Y403/02001—Argininosuccinate lyase (4.3.2.1)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

【課題】腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次転写物、及び腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ分子の組成物、並びに、これらの調製、製造、及び治療的使用の方法の提供。【解決手段】目的の腫瘍学関連ポリペプチドのレベルを高めることにより、疾患、障害、及び／又は状態の治療を必要とする対象の前記疾患、障害、及び／又は状態を治療する方法であって、前記腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含む方法。【選択図】なし

Description

配列表の参照
本出願は、配列表とともに電子書式で出願されている。ＭＮＣ２＿２０ＳＱＬＳＴ．ｔ
ｘｔと題される配列表ファイルは、２０１３年３月９日に作成され、９１，３６３，８８
１バイトの大きさである。この配列表の電子書式での情報は、参照によりその全体が組み
込まれる。
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，７４２号、表
題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ−Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ」、２０１２年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／７３７，２２
４号、表題「Ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＲＮＡｓ
」、２０１２年１２月１４日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６９６１０号、
表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ａｎｄ Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮
特許出願第６１／６１８，８６２号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ」、２０
１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，６４５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ」、２０１２年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／７３７
，１３０号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈ
ｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ」、２０１２年４月２日出願の米
国仮特許出願第６１／６１８，８６６号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」
、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，６４７号、表題「Ｍｏｄ
ｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、２０１２年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１
／７３７，１３４号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、２０１２年４月２
日出願の米国仮特許出願第６１／６１８，８６８号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎ
ｅｓ」、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，６４８号、表題「
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、２０１２年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６
１／７３７，１３５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆ
ｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、２０１２年４月２日
出願の米国仮特許出願第６１／６１８，８７０号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎ
ｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、２０１２年８月１０日出願
の米国仮特許出願第６１／６８１，６４９号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃ
ｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、２０１２年１２月１４日出願の
米国仮特許出願第６１／７３７，１３９号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌ
ｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮
特許出願第６１／６１８，８７３号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ」、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，６５０号、表
題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年１２月１４日出
願の米国仮特許出願第６１／７３７，１４７号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮特許出願第６１／６１８，８７
８号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐ
ｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２
０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，６５４号、表題「Ｍｏｄｉｆ
ｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏ
ｆ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年１２月１４日出
願の米国仮特許出願第６１／７３７，１５２号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｓｍａ Ｍ
ｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮特許出願第６１
／６１８，８８５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎｄ Ｃｙｔｏ
ｓｋｅｌｅｔａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第
６１／６８１，６５８号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎｄ Ｃｙ
ｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年１２月１４日出願の米国仮特許
出願第６１／７３７，１５５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ａｎｄ
Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮特
許出願第６１／６１８，８９６号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉ
ｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｂｏｕｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年７月５日出願の米国仮
特許出願第６１／６６８，１５７号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ
Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｂｏｕｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年８月１０日出願の米
国仮特許出願第６１／６８１，６６１号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌ
ａｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｂｏｕｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年１２月１４日出
願の米国仮特許出願第６１／７３７，１６０号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｂｏｕｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年４月２日
出願の米国仮特許出願第６１／６１８，９１１号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎ
ｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，６
６７号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年１２月
１４日出願の米国仮特許出願第６１／７３７，１６８号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏ
ｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌ
ｅａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮特許出願第６１／６１８
，９２２号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈ
ｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年８月１０日出願の米
国仮特許出願第６１／６８１，６７５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２
０１２年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／７３７，１７４号、表題「Ｍｏｄｉ
ｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、２０１２年４月２日出願の米国仮特許出願第６１／６１８，
９３５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ
Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年８月１０日出願の米国仮特許出願第６１／６
８１，６８７号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ
ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉ
ｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年１２月１４日出願の米国仮特許出願第
６１／７３７，１８４号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年４月２日出願の米国仮特許出
願第６１／６１８，９４５号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａ
ｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年８月１０日出願の米国仮
特許出願第６１／６８１，６９６号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年１２月１４日出願
の米国仮特許出願第６１／７３７，１９１号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃ
ｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年４月２日
出願の米国仮特許出願第６１／６１８，９５３号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎ
ｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２年８月
１０日出願の米国仮特許出願第６１／６８１，７０４号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏ
ｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、２０１２
年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／７３７，２０３号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅ
ｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」、
２０１２年４月２日出願の米国仮特許出願第６１／６１８，９６１号、表題「Ｄｏｓｉｎ
ｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍＲＮＡ」、２０１２年５月１７日出
願の米国仮特許出願第６１／６４８，２８６号、表題「Ｄｏｓｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｆｏｒ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍＲＮＡ」に対する優先権を主張するものであり、これら各
々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１２年１０月３日出願の国際公開第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／５８５１９
号、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ａｎ
ｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」、および２０１
２年１２月１４日出願の国際公開第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／６９６１０号、表題「Ｍｏｄ
ｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」にも関連する。
本出願は、同時係属出願にも関連し、それぞれ、２０１３年３月９日に本出願と共に同
時に出願され、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔ
ｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」の代理人整理番号Ｍ３
００．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」の代理人整理番号Ｍ３０１．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ
）、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒ
ｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」の代理人整理番号Ｍ３
０４．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」の代理人整理番号３０４．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）
、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」の代理人整理番号Ｍ３０
５．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃ
ｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍ
ｉｃ ａｎｄ Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」の代理人整理番号Ｍ３０
６．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃ
ｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ」の代理人整理番号Ｍ３０８．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）、
表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄ
ｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」の代理人整理番号Ｍ３０９．２０（ＰＣＴ／Ｕ
Ｓ１３／ＸＸＸＸＸ）、表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆ
ｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ」の代理人整理番号Ｍ３１０．２０（ＰＣＴ／
ＵＳ１３／ＸＸＸＸＸ）、および表題「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」の代理人整理番号ＭＮＣ１．２０（ＰＣＴ／ＵＳ１３
／ＸＸＸＸＸ）を有し、これら各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込ま
れる。
発明の分野
本発明は、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および修飾ｍＲＮＡ分子（ｍｍ
ＲＮＡ）の組成、これらの設計、調製、製造、および／または製剤化の方法、プロセス、
キット、ならびにデバイスに関する。
癌は、身体内のコントロール不良の細胞分裂および増殖で特徴づけられる疾患である。
アメリカでは、全ての女性のおおよそ３分の１及び全ての男性のおおよそ２分の１が、生
涯において癌を経験するであろう。ポリペプチドは癌細胞生物学(発癌、細胞周期抑制、
ＤＮＡ修復および血管新生)、治療(免疫療法、ホルモン操作、酵素阻害)、癌の種類の診
断および判定(例えば乳癌、前立腺癌、結腸癌および子宮頸癌のための分子マーカー)を含
む疾患の各諸点に関与する。今日使用される化学療法および放射線療法等の標準治療によ
って引き起こされた望ましくない結果の宿主に対し、疾患関連ペプチドの操作のための遺
伝子治療は、疾患の診断、治療および管理へのより的を絞ったアプローチを提供する。
この目的を達成するために、本発明者らは、ある特定の修飾ｍＲＮＡ配列が、単に免疫
応答を逃れるか、回避するか、または低減させるだけではない利点を有する治療薬として
の可能性を有することを示した。そのような研究は、公開された同時係属出願である、２
０１１年８月５日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４６８６１号および２０１
１年１０月３日出願の同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５４６３６号、２０１１年１０月３
日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５４６１７号に詳述されており、これらの
内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードし、当技術分野における課題の
うちの１つ以上を回避する構造的および／または化学的特徴を有する核酸系化合物または
ポリヌクレオチドをコードする核酸系化合物（例えば、修飾ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ）
を提供することによって、この必要性に対処する。
発明の概要
少なくとも１つの目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡ（ｍｍ
ＲＮＡ）分子の組成、少なくとも１つの目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする
修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）分子の設計、調製、製造、および／または製剤化方法、プロ
セス、キット、ならびにデバイスが本明細書に記載される。
本発明は、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドのレベルを高めることにより、疾患、障
害、および／または状態の治療を必要とする対象の疾患、障害、および／または状態を治
療する方法であって、腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを対象
に投与することを含む方法を提供する。疾患、障害、および／または状態は、副腎皮質癌
、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳
癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食
道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍、妊娠性絨
毛疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭癌と下咽頭癌、急性リンパ性白血病、
急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝
癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発
性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔癌と副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキン
リンパ腫、口腔癌と中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、
網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織肉腫、基底細胞癌と扁平上皮癌、メ
ラノーマ、小腸癌、胃癌、睾丸癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌
、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、および癌治療に起因
する二次癌を含み得るが、これに限定されない。
本発明は、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドのレベルを高めることにより、腫瘍の増
殖の減少、排除または予防を必要とする対象の腫瘍の増殖を減少、排除または予防する方
法であって、腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを対象に投与す
ることを含む方法を提供する。腫瘍の増殖は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性
貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャ
ッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、
胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、ホジキン病、カポジ肉
腫、腎細胞癌、喉頭癌と下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ
性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌
、肺カルチノイド腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、
鼻腔癌と副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔癌と中咽頭癌、
骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾
液腺腫、成人軟部組織肉腫、基底細胞癌と扁平上皮癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、睾丸
癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マク
ログロブリン血症、ウィルムス腫瘍および癌治療に起因する二次癌等の疾患、障害、およ
び／または状態と関連するかあるいはこれらに起因するが、これに限定されない。
本発明は、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドのレベルを高めることにより、少なくと
も１つの癌症状の軽減および／または寛解を必要とする対象の少なくとも１つの癌症状を
軽減および／または寛解させる方法であって、腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離
ポリヌクレオチドを対象に投与することを含む方法を提供する。
本発明は、結合ヌクレオシドの第１の領域を含む単離ポリヌクレオチドを提供する。第
１の領域は、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする。第１の領域の５’末端に
位置する第１の隣接領域は、配列番号４７０４〜９２０３、配列番号１〜４、およびその
機能的変異形のうちのいずれかの天然５’非翻訳領域からなる群から選択される結合ヌク
レオシドの配列を含む。第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域は、配列番号４
７０４〜９２０３、配列番号５〜２１、およびその機能的変異形のうちのいずれかの天然
３’ＵＴＲからなる群から選択される結合ヌクレオシドの配列と、結合ヌクレオシドの３
’尾部配列とを含む。さらに、単離ポリヌクレオチドは実質的に精製されうる。
さらに、本発明の単離ポリヌクレオチドの第１の領域は、２つの停止コドンを含み得る
。一実施形態では、第１の領域はさらに、第１の停止コドン「ＴＧＡ」と、「ＴＡＡ」、
「ＴＧＡ」および「ＴＡＧ」からなる群から選択される第２の停止コドンとを含む。
本発明の単離ポリヌクレオチドの３’尾部配列は、約１３０個のヌクレオチドのポリ−
Ａ尾部と、ポリＡ〜Ｇ四重項等の結合ヌクレオシドとをさらに含み得るが、これに限定さ
れない。
単離ポリヌクレオチドの第１の隣接領域は、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン
、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８
−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジ
ド−グアノシン等の少なくとも１つの５’末端キャップをさらに含み得るが、これに限定
されない。
本発明の単離ポリヌクレオチドのヌクレオチドは、少なくとも２つの修飾と、翻訳可能
な領域とを含み得る。修飾は、少なくとも１つのヌクレオシドおよび／または当該ヌクレ
オチドの骨格上、あるいはヌクレオシドおよび骨格結合の両方、あるいはヌクレオシドの
糖に存在し得る。修飾は、少なくとも１つのホスホジエステル結合をホスホロチオエート
結合に置換することを含み得る。修飾は、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−ア
ザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−シュード
ウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン
、５−カルボキシメチル−ウリジン、１−カルボキシメチル−シュードリジン、５−プロ
ピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチルウリジン、
１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、１−
タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチルシュードウリ
ジン、４−チオ−１−メチルシュードウリジン、２−チオ−１−メチルシュードウリジン
、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シ
ュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウ
リジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−
４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュ
ードウリジン、５−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチルシチジン、Ｎ４
−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメ
チルシチジン、１−メチル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュー
ドイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチルシチジン、４−チオ−シュ
ードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチ
ル−１−デアザ−シュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジ
ン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ
−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メ
チルシチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュ
ードイソシチジン、２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン
、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−
アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ
−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−イ
ソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２
−メチルチオ−Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシ
ニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチ
オ−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−
メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、イノシン、１−
メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−
８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６
−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−
メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグア
ノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グア
ノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ
２−メチル−６−チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシ
ンを含み得るが、これに限定されない。骨格結合は、１つ以上の酸素原子の置換により修
飾され得る。修飾される核酸塩基は、シトシン、グアニン、アデニン、チミンおよびウラ
シルから選択され得るが、これに限定されない。
本発明の単離ポリヌクレオチドは製剤化され得る。製剤は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉ
ｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉ
ｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ペグ化脂質、およびそれらの
混合物を含む脂質を含み得るが、これに限定されない。
本発明の単離ポリヌクレオチドは、１日合計０．００１ｕｇないし１５０ｕｇの用量で
投与され得る。投与は注射、局所投与、眼投与および鼻腔内投与により行われ得る。注射
は皮内、皮下、および筋肉内を含み得るが、これに限定されない。局所投与は、クリーム
、ローション、軟膏、ゲル、スプレー、溶液等であり得るが、これに限定されない。局所
投与は、界面活性物質、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、非キレート性非界面活性剤、
ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテ
ル、胆汁酸および／または塩類を含有する脂肪酸および／または塩類、ラウリン酸、カプ
リン酸およびＵＤＣＡを含有するナトリウム塩等の浸透促進剤をさらに含み得るが、これ
に限定されない。
単離ポリヌクレオチド製剤は、溶媒、水性溶媒、非水溶媒、分散媒、希釈剤、分散剤、
懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤、脂質、リピドイドリポソ
ーム、脂質ナノ粒子、コアシェルナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、ペプチド、タン
パク質、細胞、ヒアルロニダーゼ、およびこれらの混合物等の薬学的に許容される賦形剤
をさらに含み得るが、これに限定されない。
本発明の様々な実施形態の詳細が、以下の発明を実施するための形態において説明され
る。本発明の他の特徴、目的、および利点は、発明を実施するための形態および図面、な
らびに特許請求の範囲から明らかになる。
前述および他の目的、特徴、および利点は、添付の図面に図示されるように、本発明の
特定の実施形態の以下の記述から明らかになり、その図面において、同様の参照文字は、
異なる図面を通して同一の部分を指す。図面は、必ずしも原寸に比例しておらず、むしろ
、本発明の様々な実施形態の原理を例示説明することに重点が置かれている。
本発明の腫瘍学関連一次構築物の概略図である。 本発明において有用な先行技術における脂質構造を図示する。９８Ｎ１２−５（ＴＥＴＡ５−ＬＡＰ）、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ（２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン）、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、およびＣ１２−２００の構造を示す。 本明細書に教示されるＩＶＴ反応において有用な代表的なプラスミドである。このプラスミドは、本発明者らによって設計された挿入物６４８１８を含有する。 ＰＬＧＡマイクロスフェアにカプセル封入された修飾ｍＲＮＡのゲルプロファイルである。
治療薬、診断、試薬の分野、および生物学的アッセイにおいて、例えば、核酸の細胞内
翻訳およびコードされた目的とするポリペプチドの産生を引き起こすために、インビトロ
、インビボ、インサイツ、またはエクスビボにかかわらず、細胞内に核酸、例えば、リボ
核酸（ＲＮＡ）を送達することができることは大変興味深いことである。非組み込みポリ
ヌクレオチドの送達および機能が特に重要である。
１個以上の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの組成物
（薬学的組成物を含む）、ならびにその設計、調製、製造、および／または製剤化方法が
本明細書に記載される。本明細書に記載の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドを選択、設計、および／または利用するためのシステム、プロセス、
デバイス、およびキットも提供される。
本発明に従って、これらの腫瘍学関連ポリヌクレオチドは、好ましくは、当技術分野の
他のポリペプチドをコードする分子の欠陥を回避するように修飾される。したがって、こ
れらのポリヌクレオチドは、修飾ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡと称される。
抗体、ウイルス、獣医学における適用の分野、および様々なインビボ環境における修飾
ポリヌクレオチドの使用が本発明者らによって研究されており、これらの研究は、例えば
、同時係属および共同所有の、ｍｍＲＮＡのインビボ適用を教示する２０１１年３月３１
日出願の米国仮特許出願第６１／４７０，４５１号；抗体ポリペプチドの産生のために操
作された核酸を教示する２０１１年４月２６日出願の同第６１／５１７，７８４号；ｍｍ
ＲＮＡ技術の獣医学における適用を教示する２０１１年５月１７日出願の同第６１／５１
９，１５８号；ｍｍＲＮＡ技術の抗菌剤における適用を教示する２０１１年９月１２日出
願の同第６１／５３３，５３７号；ｍｍＲＮＡ技術のウイルス適用を教示する２０１１年
９月１２日出願の同第６１／５３３，５５４号；ｍｍＲＮＡ技術で用いる様々な化学修飾
を教示する２０１１年１０月３日出願の同第６１／５４２，５３３号；ｍｍＲＮＡ技術の
作製および使用で用いるモバイルデバイスを教示する２０１１年１２月１４日出願の同第
６１／５７０，６９０号；救急治療状況下でのｍｍＲＮＡの使用を教示する２０１１年１
２月１４日出願の同第６１／５７０，７０８号；ｍｍＲＮＡの末端修飾構造を教示する２
０１１年１２月１６日出願の同第６１／５７６，６５１号；リピドイドを用いたｍｍＲＮ
Ａの送達方法を教示する２０１１年１２月１６日出願の同第６１／５７６，７０５号；ｍ
ｍＲＮＡを用いて器官または組織の生存率を増加させるための方法を教示する２０１１年
１２月２１日出願の同第６１／５７８，２７１号；細胞透過性ペプチドをコードするｍｍ
ＲＮＡを教示する２０１１年１２月２９日出願の同第６１／５８１，３２２号；ｍｍＲＮ
Ａへの細胞傷害性ヌクレオシドの組み込みを教示する２０１１年１２月２９日出願の同第
６１／５８１，３５２号；および血液脳関門を横断するためにｍｍＲＮＡを用いる方法を
教示する２０１２年１月１０日出願の同６１／６３１，７２９号に開示されており、これ
らはすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
組織における安定性および／もしくは排除、受容体の取り込みおよび／もしくは動態、
組成物による細胞到達、翻訳機構との関わり、ｍＲＮＡ半減期、翻訳の効率、免疫回避、
タンパク質産生能力、分泌の効率（適用される場合）、血液循環への到達可能性、タンパ
ク質半減期、ならびに／または細胞の状態、機能、および／もしくは活性の調節のうちの
１つ以上を改善するように設計された、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および／または腫瘍学関連ｍｍＲ
ＮＡが本明細書の一部分に提供される。
Ｉ． 本発明の組成物（ｍｍＲＮＡ）
本発明は、１個以上の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする核酸分子、具体
的には、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および／または腫瘍学関
連ｍｍＲＮＡを提供する。「核酸」という用語は、その最も広い意味において、ヌクレオ
チドのポリマーを含む任意の化合物および／または物質を含む。これらのポリマーは、多
くの場合、ポリヌクレオチドと称される。本発明の例示の核酸またはポリヌクレオチドに
は、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グ
リコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ、β−Ｄ−リ
ボ配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマ
ー）、２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、および２’−アミノ官能化を
有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）、またはこれらのハイブリッドが含まれるが、
これらに限定されない。
好ましい実施形態において、核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。
本明細書で使用するとき、「メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）」という用語は、目的と
する腫瘍学関連ポリペプチドをコードし、かつ翻訳されてインビトロ、インビボ、インサ
イツ、またはエクスビボで、コードされた目的とする腫瘍学関連ポリペプチドを産生する
ことができる任意の腫瘍学関連ポリヌクレオチドを指す。
従来、ｍＲＮＡ分子の主要成分には、少なくともコーディング領域、５’ＵＴＲ、３’
ＵＴＲ、５’キャップ、およびポリＡ尾部が含まれる。この野生型モジュール構造を基に
、本発明は、モジュール組織を維持するが、いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポ
リヌクレオチドが導入される部分への細胞の自然免疫応答の実質的な誘導の欠如を含む、
有用な特性をポリヌクレオチドに付与する１つ以上の構造および／もしくは化学修飾また
は改変を含む腫瘍学関連ポリヌクレオチドまたは腫瘍学関連一次ＲＮＡ構築物を提供する
ことによって従来のｍＲＮＡ分子の機能の範囲を拡大する。したがって、本発明の修飾ｍ
ＲＮＡ分子は、「ｍｍＲＮＡ」と称される。本明細書で使用するとき、「構造的」特徴ま
たは修飾は、２個以上の結合ヌクレオチドが、ヌクレオチド自体への著しい化学修飾なく
、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡに
おいて挿入、欠失、複製、反転、またはランダム化される特徴または修飾である。化学結
合が必然的に破壊および再形成されて構造修飾をもたらすため、構造修飾は、化学的性質
のものであり、したがって、化学修飾である。しかしながら、構造修飾は、異なるヌクレ
オチド配列をもたらす。例えば、ポリヌクレオチド「ＡＴＣＧ」は、「ＡＴ−５ｍｅＣ−
Ｇ」に化学修飾され得る。同一のポリヌクレオチドは、「ＡＴＣＧ」から「ＡＴＣＣＣＧ
」に構造修飾され得る。ここで、ジヌクレオチド「ＣＣ」が挿入されており、腫瘍学関連
ポリヌクレオチドへの構造修飾をもたらす。
ｍｍＲＮＡ構造
本発明のｍｍＲＮＡは、本明細書で証明されるように核酸系治療薬を用いた効果的なポ
リペプチド産生の既存の問題の打開に役立つそれらの機能的および／または構造的設計特
徴において野生型ｍＲＮＡと区別される。
図１は、本発明の代表的なポリヌクレオチド一次構築物１００を示す。本明細書で使用
するとき、「一次構築物」または「一次ｍＲＮＡ構築物」という用語は、１個以上の目的
とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードし、その中でコードされる目的とするポリペプチ
ドが翻訳されることを可能とするのに十分な構造的および／または化学的特徴を保持する
、腫瘍学関連ポリヌクレオチド転写物を指す。腫瘍学関連一次構築物は、本発明の腫瘍学
関連ポリヌクレオチドであり得る。構造または化学修飾された場合、腫瘍学関連一次構築
物は、腫瘍学関連ｍｍＲＮＡと称され得る。
図１を参照して、ここで、腫瘍学関連一次構築物１００は、第１の隣接領域１０４およ
び第２の隣接領域１０６に隣接する結合ヌクレオチド１０２の第１の領域を含有する。本
明細書で使用するとき、「第１の領域」は、「コーディング領域」もしくは「コード領域
」、または単に「第１の領域」と称され得る。この第１の領域は、コードされた目的とす
る腫瘍学関連ポリペプチドを含み得るが、これに限定されない。目的とする腫瘍学関連ポ
リペプチドは、その５’末端に、シグナル配列領域１０３によってコードされた１つ以上
のシグナル配列を含み得る。隣接領域１０４は、１つ以上の完全または不完全な５’ＵＴ
Ｒ配列を含む結合ヌクレオチドの領域を含み得る。隣接領域１０４は、５’末端キャップ
１０８も含み得る。第２の隣接領域１０６は、１つ以上の完全または不完全な３’ＵＴＲ
を含む結合ヌクレオチドの領域を含み得る。隣接領域１０６は、３’尾部配列１１０も含
み得る。
第１の領域１０２と第１の隣接領域１０４の５’末端の架橋は、第１の操作領域１０５
である。従来、この操作領域は、開始コドンを含む。あるいは、この操作領域は、開始コ
ドンを含む任意の翻訳開始配列またはシグナルを含み得る。
第１の領域１０２と第２の隣接領域１０６の３’末端の架橋は、第２の操作領域１０７
である。従来、この操作領域は、終止コドンを含む。あるいは、この操作領域は、終止コ
ドンを含む任意の翻訳開始配列またはシグナルを含み得る。本発明に従って、複数の連続
終止コドンも使用され得る。一実施形態では、本発明の動作領域は２つの停止コドンを含
み得る。第１の停止コドンは「ＴＧＡ」であり得、第２の停止コドンは「ＴＡＡ」、「Ｔ
ＧＡ」、および「ＴＡＧ」からなる群から選択され得る。
概して、本発明の一次構築物の第１の領域の最短の長さは、ジペプチド、トリペプチド
、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド
、ノナペプチド、またはデカペプチドをコードするのに十分な核酸配列の長さであり得る
。別の実施形態において、この長さは、２〜３０個のアミノ酸、例えば、５〜３０、１０
〜３０、２〜２５、５〜２５、１０〜２５、または１０〜２０個のアミノ酸のペプチドを
コードするのに十分であり得る。この長さは、少なくとも１１、１２、１３、１４、１５
、１７、２０、２５、もしくは３０個のアミノ酸のペプチド、または４０個のアミノ酸よ
り長くないペプチド、例えば、３５、３０、２５、２０、１７、１５、１４、１３、１２
、１１、もしくは１０個のアミノ酸より長くないペプチドをコードするのに十分であり得
る。ポリヌクレオチド配列がコードし得るジペプチドの例には、カルノシンおよびアンセ
リンが挙げられるが、それらに限定されない。
概して、本発明の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする第１の領域の長さは
、約３０ヌクレオチド長を超える（例えば、少なくとも、約３５、４０、４５、５０、５
５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５
０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，
０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、
１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、および３，０００、４
，０００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、１０，００
０、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，
０００、８０，０００、９０，０００、もしくは１００，０００ヌクレオチド長（１００
，０００を含む）まで、またはそれらを超える）。本明細書で使用するとき、「第１の領
域」は、「コーディング領域」もしくは「コード領域」、または単に「第１の領域」と称
され得る。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、
または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、約３０〜約１００，０００個のヌクレオチド（例えば、
３０〜５０、３０〜１００、３０〜２５０、３０〜５００、３０〜１，０００、３０〜１
，５００、３０〜３，０００、３０〜５，０００、３０〜７，０００、３０〜１０，００
０、３０〜２５，０００、３０〜５０，０００、３０〜７０，０００、１００〜２５０、
１００〜５００、１００〜１，０００、１００〜１，５００、１００〜３，０００、１０
０〜５，０００、１００〜７，０００、１００〜１０，０００、１００〜２５，０００、
１００〜５０，０００、１００〜７０，０００、１００〜１００，０００、５００〜１，
０００、５００〜１，５００、５００〜２，０００、５００〜３，０００、５００〜５，
０００、５００〜７，０００、５００〜１０，０００、５００〜２５，０００、５００〜
５０，０００、５００〜７０，０００、５００〜１００，０００、１，０００〜１，５０
０、１，０００〜２，０００、１，０００〜３，０００、１，０００〜５，０００、１，
０００〜７，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜２５，０００、１，００
０〜５０，０００、１，０００〜７０，０００、１，０００〜１００，０００、１，５０
０〜３，０００、１，５００〜５，０００、１，５００〜７，０００、１，５００〜１０
，０００、１，５００〜２５，０００、１，５００〜５０，０００、１，５００〜７０，
０００、１，５００〜１００，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜５，００
０、２，０００〜７，０００、２，０００〜１０，０００、２，０００〜２５，０００、
２，０００〜５０，０００、２，０００〜７０，０００、および２，０００〜１００，０
００個）を含む。
本発明に従って、第１および第２の隣接領域は、独立して、１５〜１，０００ヌクレオ
チド長の範囲（例えば、３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１０
０、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５
０、５００、６００、７００、８００、および９００を超えるヌクレオチド長、または少
なくとも３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１
４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６
００、７００、８００、９００、および１，０００ヌクレオチド長）であり得る。
本発明に従って、尾部配列は、０〜５００ヌクレオチド長の範囲（例えば、少なくとも
６０、７０、８０、９０、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、
３５０、４００、４５０、または５００ヌクレオチド長）であり得る。尾部領域がポリＡ
尾部である場合、長さは、ポリＡ結合タンパク質結合の単位で、またはその関数として決
定され得る。この実施形態において、ポリＡ尾部は、ポリＡ結合タンパク質の少なくとも
４個の単量体に結合するのに十分な長さである。ポリＡ結合タンパク質の単量体は、一続
きの約３８個のヌクレオチドに結合する。したがって、約８０個のヌクレオチドおよび１
６０個のヌクレオチドのポリＡ尾部が機能的であることが観察されている。
本発明に従って、キャッピング領域は、単一のキャップまたはキャップを形成する一連
のヌクレオチドを含み得る。この実施形態において、キャッピング領域は、１〜１０、例
えば、２〜９、３〜８、４〜７、１〜５、５〜１０、または少なくとも２、もしくは１０
以下のヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態において、キャップは不在である
。
本発明に従って、第１および第２の操作領域は、３〜４０、例えば、５〜３０、１０〜
２０の範囲、１５、または少なくとも４、もしくは３０以下のヌクレオチド長であり得、
開始コドンおよび／または終止コドンに加えて、１つ以上のシグナルおよび／または制限
配列を含み得る。
環状ｍｍＲＮＡ
本発明に従って、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、環化またはコ
ンカテマー化されて翻訳コンピテント分子を生成し、ポリＡ結合タンパク質と５’末端結
合タンパク質との間の相互作用を補助し得る。環化またはコンカテマー化の機構は、少な
くとも３つの異なる経路、すなわち１）化学的経路、２）酵素的経路、および３）リボザ
イム触媒経路を通って生じ得る。新たに形成された５’／３’連結は、分子内または分子
間であり得る。
第１の経路において、核酸の５’末端および３’末端は、接近しているときに分子の５
’末端と３’末端との間に新たな共有結合を形成する化学反応基を含有し得る。有機溶媒
中で、合成ｍＲＮＡ分子の３’末端上の３’−アミノ末端ヌクレオチドが５’−ＮＨＳ−
エステル部分上で求核攻撃を経て新たな５’／３’アミド結合を形成するように、５’末
端は、ＮＨＳ−エステル反応基を含有し得、３’末端は、３’−アミノ末端ヌクレオチド
を含有し得る。
第２の経路において、Ｔ４ ＲＮＡリガーゼを用いて、５’−リン酸化核酸分子を核酸
の３’−ヒドロキシル基に酵素結合させて、新たなホスホロジエステル結合を形成するこ
とができる。反応の例において、１μｇの核酸分子が、製造業者のプロトコルに従って、
１〜１０単位のＴ４ ＲＮＡリガーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐ
ｓｗｉｃｈ，ＭＡ）と３７℃で１時間インキュベートされる。連結反応が、５’領域およ
び３’領域の両方と並んで塩基対合して、酵素的連結反応を補助することができる分裂し
たオリゴヌクレオチドの存在下で生じ得る。
第３の経路において、ｃＤＮＡ鋳型の５’末端または３’末端のいずれかは、インビト
ロ転写中に、結果として生じる核酸分子が核酸分子の５’末端を核酸分子の３’末端に連
結することができる活性リボザイム配列を含有し得るように、リガーゼリボザイム配列を
コードする。リガーゼリボザイムは、Ｉ群イントロン、Ｉ群イントロン、デルタ肝炎ウイ
ルス、ヘアピンリボザイムに由来し得るか、またはＳＥＬＥＸ（試験管内進化法、ｓｙｓ
ｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔ
ｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）によって選択され得る。リボザイムリガーゼ反応は、０
〜３７℃の温度で１〜２４時間かかり得る。
ｍｍＲＮＡ多量体
本発明に従って、複数のはっきりと異なる腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一
次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、３’末端で修飾されたヌクレオチドを用いて
３’末端を介して結合され得る。化学的複合体形成を用いて、細胞への送達の化学量論を
制御することができる。例えば、グリオキシル酸回路酵素、イソクエン酸リアーゼ、およ
びリンゴ酸シンターゼは、ＨｅｐＧ２細胞に１：１の比率で供給されて細胞脂肪酸の代謝
を変化させ得る。この比率は、一方の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築
物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ種に３’−アジド末端ヌクレオチドを用い、かつ反対側
の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ種
にＣ５−エチニルまたはアルキニル含有ヌクレオチドを用いて化学結合腫瘍学関連ポリヌ
クレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを化学結合させること
によって制御され得る。この修飾されたヌクレオチドは、製造業者のプロトコルに従って
末端トランスフェラーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ，
ＭＡ）を用いて転写後に添加される。３’末端修飾ヌクレオチドの添加後、これら２個の
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ種は
、銅の存在下または不在下において水溶液中で合わせられて、文献内に記載のクリック化
学機構を介して新たな共有結合を形成し得る。
別の例において、３個以上の腫瘍学関連ポリヌクレオチドが官能化リンカー分子を用い
て結合され得る。例えば、官能化サッカリド分子は、複数の化学反応基（ＳＨ−、ＮＨ２
−、Ｎ３等）を含有して３’−官能化腫瘍学関連ｍＲＮＡ分子上の同族部分（すなわち、
３’−マレイミドエステル、３’−ＮＨＳ−エステル、アルキニル）と反応するように化
学修飾され得る。この修飾されたサッカリド上の反応基の数は、化学量論的様式で制御さ
れて、複合体化された腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍
学関連ｍｍＲＮＡの化学量論比を直接制御し得る。
ｍｍＲＮＡ複合体および組み合わせ
腫瘍学関連タンパク質産生をさらに亢進するために、本発明の腫瘍学関連一次構築物ま
たは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、他のポリヌクレオチド、腫瘍学関連ポリペプチド、染料、
挿入剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、プソラレン、マイトマイシンＣ）、ポ
ルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環芳香族炭化水素（例えば
、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、
アルキル化剤、リン酸塩、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、Ｍ
ＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射標識マーカー、酵
素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミン
Ｅ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペプチ
ド、例えば、コリガンドに特異的親和性を有する分子、または抗体、例えば、癌細胞、内
皮細胞、または骨細胞等の特定の細胞型に結合する抗体、ホルモンおよびホルモン受容体
、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、共同因子、または薬物
と複合体化されるように設計され得る。
複合体化は、安定性および／または半減期の増加をもたらし得、腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを、細胞、組織、または生
物体の特定の部位に標的化するときに特に有用であり得る。
本発明に従って、腫瘍学関連ｍｍＲＮＡまたは腫瘍学関連一次構築物は、ＲＮＡｉ剤、
ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、アンチセンスＲＮＡ、リボ
ザイム、触媒ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー、もしく
はベクター等のうちの１つ以上とともに投与され得るか、またはこれらをさらにコードし
得る。
二機能性ｍｍＲＮＡ
本発明の一実施形態は、二機能性腫瘍学関連ポリヌクレオチド（例えば、二機能性腫瘍
学関連一次構築物または二機能性腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ）である。その名称が示すように
、二機能性腫瘍学関連ポリヌクレオチドは、少なくとも２つの機能を有するか、または少
なくとも２つの機能の能力があるポリヌクレオチドである。これらの分子は、慣例により
、多機能性とも称され得る。
二機能性腫瘍学関連ポリヌクレオチドの複数の機能は、ＲＮＡによってコードされ得る
（この機能は、コードされた産物が翻訳されるまで現れ得ない）か、またはポリヌクレオ
チド自体の特性であり得る。これは、構造的または化学的であり得る。二機能性腫瘍学関
連修飾ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドと共有結合的または静電的に関連した機能
を含み得る。さらに、これら２つの機能は、ｍｍＲＮＡおよび別の分子の複合体との関連
において提供され得る。
二機能性腫瘍学関連ポリヌクレオチドは、抗増殖性腫瘍学関連ペプチドをコードし得る
。これらのペプチドは、線状、環状、拘束、またはランダムコイルであり得る。これらは
、アプタマー、シグナル伝達分子、リガンド、またはこれらの模倣物もしくはミメティッ
クとして機能し得る。抗増殖性ペプチドは、翻訳されると、３〜５０アミノ酸長であり得
る。それらは、５〜４０、１０〜３０、または約１５アミノ酸長であり得る。それらは、
一本鎖、多本鎖、または分岐鎖であり得、翻訳されると、複合体、凝集体、または任意の
多ユニット構造を形成し得る。
非コード腫瘍学関連ポリヌクレオチドおよび一次構築物
本明細書に記載されるように、部分的または実質的に翻訳可能ではない配列、例えば、
非コード領域を有する腫瘍学関連ポリヌクレオチドおよび腫瘍学関連一次構築物が提供さ
れる。そのような非コード領域は、腫瘍学関連一次構築物の「第１の領域」であり得る。
あるいは、非コード領域は、第１の領域以外の領域であり得る。そのような分子は、通常
翻訳されないが、リボソームタンパク質または転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）等の１つ以上の翻
訳機構成分への結合および隔離のうちの１つ以上によってタンパク質産生に影響を及ぼし
、それによって、細胞におけるタンパク質発現を効果的に低下させるか、細胞における１
つ以上の経路またはカスケードを調節し得、それが次いでタンパク質レベルを変化させる
。腫瘍学関連ポリヌクレオチドおよび／または腫瘍学関連一次構築物は、１個以上の長い
非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡもしくはｌｉｎｃＲＮＡ）もしくはその部分、低分子核Ｒ
ＮＡ（ｓｎｏ−ＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮ
Ａ）、またはＰｉｗｉ干渉ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）を含有し得るか、あるいはこれらをコー
ドし得る。
目的とするポリペプチド
本発明に従って、腫瘍学関連一次構築物は、１個以上の目的とする腫瘍学関連ポリペプ
チドまたはその断片をコードするように設計される。目的とする腫瘍学関連ポリペプチド
は、全ポリペプチド、複数のポリペプチド、またはポリペプチドの断片を含み得るが、こ
れらに限定されず、これらは、独立して、１個以上の核酸、複数の核酸、核酸の断片、ま
たは前述のうちのいずれかの変異形によってコードされ得る。本明細書で使用するとき、
「目的とする腫瘍学関連ポリペプチド」という用語は、選択されて本発明の腫瘍学関連一
次構築物においてコードされる任意のポリペプチドを指す。本明細書で使用するとき、「
ポリペプチド」とは、ほとんどの場合ペプチド結合によって結合されるアミノ酸残基（天
然または非天然）のポリマーを意味する。この用語は、本明細書で使用するとき、任意の
大きさ、構造、または機能を有するタンパク質、ポリペプチド、およびペプチドを指す。
いくつかの例において、コードされたポリペプチドが約５０個のアミノ酸よりも小さい場
合、このポリペプチドは、ペプチドと称される。ポリペプチドがペプチドである場合、こ
れは、少なくとも約２、３、４、または少なくとも５アミノ酸残基長である。したがって
、ポリペプチドは、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、相同
体、オルソログ、パラログ、前述の断片および他の等価物、変異形、ならびに類似体を含
む。ポリペプチドは、単一の分子であり得るか、または二量体、三量体、もしくは四量体
等の多分子複合体であり得る。それらは、抗体またはインスリン等の一本鎖または多本鎖
ポリペプチドも含み得、会合または結合され得る。ほとんどの場合、ジスルフィド結合が
多本鎖ポリペプチドに見られる。「ポリペプチド」という用語は、１個以上のアミノ酸残
基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的類似体であるアミノ酸ポリマーにも適
用され得る。
「ポリペプチド変異形」という用語は、それらのアミノ酸配列が天然配列または参照配
列とは異なる分子を指す。アミノ酸配列変異形は、天然配列または参照配列と比較して、
アミノ酸配列内のある特定の位置に置換、欠失、および／または挿入を有し得る。通常、
変異形は、天然配列または参照配列と少なくとも約５０％の同一性（相同性）を有し、好
ましくは、それらは、天然配列または参照配列と少なくとも約８０％、より好ましくは、
少なくとも約９０％同一（相同）である。
いくつかの実施形態において、「変異形模倣物」が提供される。本明細書で使用すると
き、「変異形模倣物」という用語は、活性化配列を模倣する１個以上のアミノ酸を含有す
るものである。例えば、グルタミン酸塩は、ホスホロ−トレオニンおよび／またはホスホ
ロ−セリンの模倣物の役割を果たし得る。あるいは、変異形模倣物は、その模倣物を含有
する産物の失活または不活性化をもたらし得、例えば、フェニルアラニンは、チロシンの
不活性化置換としての機能を果たし得るか、またはアラニンは、セリンの不活性化置換と
しての機能を果たし得る。
「相同性」は、アミノ酸配列に適用されるとき、最大の相同パーセントを得るために、
配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の第２の配列のアミノ酸配列内の残
基と同一の候補アミノ酸配列内の残基の割合（％）と定義される。整列させるための方法
およびコンピュータプログラムは、当技術分野で周知である。相同性が同一性パーセント
の計算に依存するが、計算に導入されるギャップおよびペナルティのため値が異なり得る
ことが理解される。
「相同体」とは、ポリペプチド配列に適用されるとき、第２の種の第２の配列に対して
かなりの割合の同一性を有する他の種の対応する配列を意味する。
「類似体」は、親または出発ポリペプチドの特性のうちの１つ以上を依然として維持す
る、１つ以上のアミノ酸改変、例えば、アミノ酸残基の置換、付加、または欠失によって
異なるポリペプチド変異形を含むよう意図される。
本発明は、変異形および誘導体を含むポリペプチド系のいくつかの種類の組成物を企図
する。これらは、置換、挿入、欠失、および共有結合変異形および誘導体を含む。「誘導
体」という用語は、「変異形」という用語と同義に使用されるが、概して、任意の方法で
参照分子または出発分子に対して修飾され、かつ／または変化した分子を指す。
したがって、参照配列、具体的には、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリペプチド配列に
対して置換、挿入および／または付加、欠失、ならびに共有結合修飾を含有する腫瘍学関
連ポリペプチドをコードするｍｍＲＮＡが、本発明の範囲内に包含される。例えば、配列
タグまたはアミノ酸、例えば、１個以上のリジンが、本発明のペプチド配列に付加され得
る（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）。配列タグは、ペプチド精製または局在化に使用さ
れ得る。リジンを用いて、ペプチド溶解度を増加させるか、またはビオチン化を可能にす
る。あるいは、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシおよびアミノ末端
領域に位置するアミノ酸残基が任意に欠失されて、切断配列を提供し得る。あるいは、あ
る特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端またはＮ末端残基）は、配列の使用に応じて、例えば
、可溶性のより大きい配列の一部として配列の発現時に欠失され得るか、または固体支持
体に結合され得る。
「置換変異形」とは、ポリペプチドについて言及するとき、天然配列または出発配列内
の少なくとも１個のアミノ酸残基が除去され、その場所の同一の位置に異なるアミノ酸が
挿入されたものである。これらの置換は、単一置換であり、分子中の１個のアミノ酸のみ
が置換されたものであり得、またはこれらの置換は、多置換であり、同一の分子中の２個
以上のアミノ酸が置換されたものであり得る。
本明細書で使用するとき、「保存アミノ酸置換」という用語は、配列に通常存在するア
ミノ酸を、同様の大きさ、電荷、または極性を有する異なるアミノ酸で置換することを指
す。保存置換の例には、イソロイシン、バリン、およびロイシン等の非極性（疎水性）残
基の別の非極性残基との置換が挙げられる。同様に、保存置換の例には、アルギニンとリ
ジン、グルタミンとアスパラギン、およびグリシンのセリン等の極性（親水性）残基の別
の残基との置換が挙げられる。さらに、リジン、アルギニン、もしくはヒスチジン等の塩
基性残基の別の塩基性残基との置換、またはアスパラギン酸もしくはグルタミン酸等のあ
る酸性残基の別の酸性残基との置換が、保存置換のさらなる例である。非保存置換の例に
は、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニン等の非極性（疎水性）アミ
ノ酸残基の、システイン、グルタミン、グルタミン酸、もしくはリジン等の極性（親水性
）残基との置換、および／または極性残基の非極性残基との置換が挙げられる。
「挿入変異形」とは、ポリペプチドについて言及するとき、１個以上のアミノ酸が天然
配列または出発配列内の特定の位置のアミノ酸にすぐ隣接して挿入されたものである。ア
ミノ酸に「すぐ隣接した」とは、アミノ酸のα−カルボキシ官能基またはα−アミノ官能
基のいずれかに連結されていることを意味する。
「欠失変異形」とは、ポリペプチドについて言及するとき、天然アミノ酸配列または出
発アミノ酸配列内の１個以上のアミノ酸が除去されたものである。通常、欠失変異形は、
１個以上のアミノ酸を分子の特定の領域で欠失させる。
「共有結合誘導体」は、ポリペプチドについて言及するとき、有機タンパク質性もしく
は非タンパク質性誘導体化剤での天然タンパク質もしくは出発タンパク質の修飾、および
／または翻訳後修飾を含む。共有結合修飾は、従来、タンパク質の標的アミノ酸残基を、
選択された側鎖または末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させること
によって、または選択された組換え宿主細胞において機能する翻訳後修飾の機構を利用す
ることによって導入される。結果として生じる共有結合誘導体は、組換え糖タンパク質の
免疫親和性精製のための抗タンパク質抗体の生物学的活性、免疫学的アッセイ、または調
製に重要な残基の特定を目的としたプログラムにおいて有用である。そのような修飾は、
当技術分野の技術の範囲内であり、過度の実験なく行われる。
ある特定の翻訳後修飾は、発現腫瘍学関連ポリペプチドにおける組換え宿主細胞の作用
の結果である。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、高い頻度で、翻訳後に対応す
るグルタミルおよびアスパルチル残基に脱アミド化される。あるいは、これらの残基は、
弱酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれかの形態も、本発明に従って産
生された腫瘍学関連ポリペプチドに存在し得る。
他の翻訳後修飾は、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル
残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のα−ア
ミノ基のメチル化を含む（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａ
ｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３））。
「特徴」は、ポリペプチドについて言及するとき、分子のはっきりと異なるアミノ酸配
列に基づく成分と定義される。本発明のｍｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドの
特徴には、表面出現、局所立体配座形状、折り畳み、ループ、半ループ、ドメイン、半ド
メイン、部位、末端、またはこれらの任意の組み合わせが含まれる。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「表面出現」という用語は
、タンパク質のポリペプチド系成分が最も外側の表面に現れることを指す。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「局所立体配座形状」とい
う用語は、タンパク質の定義可能な空間内に位置するタンパク質のポリペプチド系構造の
出現を意味する。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「折り畳み」という用語は
、エネルギー最小化時のアミノ酸配列の結果として生じる立体構造を指す。折り畳みは、
折り畳みプロセスの二次または三次レベルで生じ得る。二次レベルの折り畳みの例には、
βシートおよびαヘリックスが挙げられる。三次レベルの折り畳みの例には、エネルギー
力の凝集または分離が原因で形成されるドメインおよび領域を含む。このようにして形成
された領域は、疎水性および親水性ポケット等を含む。
本明細書で使用する「回転」という用語は、タンパク質構造に関するとき、ペプチドま
たはポリペプチドの骨格の方向を変化させる屈曲を意味し、１、２、または３個以上のア
ミノ酸残基が関与し得る。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「ループ」という用語は、
ペプチドまたはポリペプチドの骨格の方向を逆転させる役目を果たし得るポリペプチドの
構造的特徴を指す。ループがポリペプチドで見つけられ、かつ骨格の方向のみを変化させ
る場合、これは、４個以上のアミノ酸残基を含み得る。Ｏｌｉｖａらは、少なくとも５つ
のクラスのタンパク質ループを特定している（Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６６（４）：８
１４−８３０；１９９７）。ループは、開ループまたは閉ループであり得る。閉ループま
たは「環状」ループは、架橋部分の間に２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個
以上のアミノ酸を含み得る。そのような架橋部分は、ジスルフィド架橋を有するポリペプ
チドにおいて典型的なシステイン−システイン架橋（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）を含み得るか、ま
たはあるいは架橋部分は、本明細書で用いられるジブロモジルイル剤（ｄｉｂｒｏｍｏｚ
ｙｌｙｌ ａｇｅｎｔ）等の非タンパク質系のものであり得る。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「半ループ」という用語は
、それが由来するループとして特定されたアミノ酸残基の少なくとも半数を有するループ
の部分を指す。ループが必ずしも偶数のアミノ酸残基を含有するわけではないことが理解
される。したがって、ループが奇数のアミノ酸を含有するか、または奇数のアミノ酸を含
むと特定された場合において、奇数のループの半ループは、ループの整数部分または次の
整数部分（ループのアミノ酸の数／２＋／−０．５個のアミノ酸）を含む。例えば、７ア
ミノ酸ループと特定されたループは、３個のアミノ酸または４個のアミノ酸（７／２＝３
．５＋／−０．５で３または４になる）の半ループをもたらし得る。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「ドメイン」という用語は
、１つ以上の特定可能な構造または機能特徴または特性（例えば、結合能力、タンパク質
間の相互作用の部位としての役割を果たす）を有するポリペプチドのモチーフを指す。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「半ドメイン」という用語
は、それが由来するドメインとして特定されたアミノ酸残基の少なくとも半数を有するド
メインの部分を意味する。ドメインが必ずしも偶数のアミノ酸残基を含有するわけではな
いことが理解される。したがって、ドメインが奇数のアミノ酸を含有するか、または奇数
のアミノ酸を含むと特定された場合において、奇数のドメインの半ドメインは、ドメイン
の整数部分または次の整数部分（ドメインのアミノ酸の数／２＋／−０．５個のアミノ酸
）を含む。例えば、７アミノ酸ドメインと特定されたドメインは、３個のアミノ酸または
４個のアミノ酸（７／２＝３．５＋／−０．５で３または４になる）の半ドメインをもた
らし得る。サブドメインがドメインまたは半ドメイン内で特定され得、これらのサブドメ
インが、それらが由来するドメインまたは半ドメインで特定された構造特性または機能特
性のすべてに満たない構造特性または機能特性を有することも理解される。本明細書のド
メイン型のうちのいずれを含むアミノ酸もポリペプチドの骨格に沿って隣接している必要
はない（すなわち、非隣接アミノ酸が構造的に折り畳まれて、ドメイン、半ドメイン、ま
たはサブドメインをもたらし得る）ことも理解される。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「部位」という用語は、ア
ミノ酸系の実施形態に関するとき、「アミノ酸残基」および「アミノ酸側鎖」と同義に使
用される。部位は、本発明のポリペプチド系分子内で修飾、操作、改変、誘導体化、また
は変更され得るペプチドまたはポリペプチド内の位置を表す。
本明細書で使用され、ポリペプチドについて言及するとき、「末端（ｔｅｒｍｉｎｉ）
」または「末端（ｔｅｒｍｉｎｕｓ）」という用語は、ペプチドまたはポリペプチドの端
を指す。そのような端は、ペプチドまたはポリペプチドの第１または最終部位に限定され
るだけでなく、末端領域にさらなるアミノ酸も含み得る。本発明のポリペプチド系分子は
、Ｎ末端（アミノ酸によって遊離アミノ基（ＮＨ２）で終端する）もＣ末端（アミノ酸に
よって遊離カルボキシル基（ＣＯＯＨ）で終端する）もいずれも有することを特徴とし得
る。本発明のタンパク質は、ある場合には、ジスルフィド結合または非共有結合力（多量
体、オリゴマー）によって結び付けられた複数のポリペプチド鎖からなりうる。これらの
種類のタンパク質は、複数のＮ末端およびＣ末端を有する。あるいは、ポリペプチドの末
端は、それらが場合によって有機複合体等の非ポリペプチド系部分で始まるか、または終
了するように修飾され得る。
これらの特徴のうちのいずれかが本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡによってコードされるポリペプチドの所望の成分であると特定または定義されると
、これらの特徴のいくつかの操作および／または修飾のうちのいずれも、移動、交換、反
転、欠失、ランダム化、または複製によって行われ得る。さらに、特徴の操作が本発明の
分子に対する修飾と同一の結果をもたらすことが理解される。例えば、ドメインの欠失を
伴う操作は、全長分子未満をコードする核酸の修飾のような分子の長さの改変をもたらす
。
修飾および操作は、部位特異的変異誘発等であるが、これに限定されない当技術分野で
既知の方法によって達成され得る。その後、結果として生じる修飾された分子は、本明細
書に記載のアッセイ等のインビトロまたはインビボアッセイ、または当技術分野で既知の
任意の他の好適なスクリーニングアッセイを用いて活性について試験され得る。
本発明に従って、腫瘍学関連ポリペプチドは、一連の実験によって発見されるコンセン
サス配列を含み得る。本明細書で使用するとき、「コンセンサス」配列とは、１つ以上の
部位で可変性を可能にする配列の集合集団を表す単一配列である。
当業者によって認識されるように、タンパク質断片、機能的タンパク質ドメイン、およ
び相同タンパク質も、本発明の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドの範囲内であると見な
される。例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、ま
たは１００を超えるアミノ酸長の参照タンパク質の任意のタンパク質断片（少なくとも１
個のアミノ酸残基が参照腫瘍学関連ポリペプチド配列よりも短いが、他の点では同一であ
る腫瘍学関連ポリペプチド配列を意味する）が本明細書に提供される。別の例において、
本明細書に記載の配列のうちのいずれかと約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約
８０％、約９０％、約９５％、または約１００％同一の一続きの約２０、約３０、約４０
、約５０、または約１００個のアミノ酸を含む任意の腫瘍学関連タンパク質が本発明に従
って利用され得る。ある特定の実施形態において、本発明に従って利用されるポリペプチ
ドは、本明細書に提供または参照される配列のうちのいずれかに示される２、３、４、５
、６、７、８、９、１０以上の変異を含む。
コードされた腫瘍学関連ポリペプチド
本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、腫瘍学関連ペプチドお
よびタンパク質のような目的とするポリペプチドをコードするように設計され得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、参照腫瘍
学関連ポリペプチド配列とある特定の同一性を有する変異形ポリペプチドをコードし得る
。本明細書で使用するとき、「参照腫瘍学関連ポリペプチド配列」は、出発腫瘍学関連ポ
リペプチド配列を指す。参照配列は、別の配列の設計において参照される野生型配列また
は任意の配列であり得る。「参照ポリペプチド配列」は、例えば、本明細書に開示の配列
番号４７０４〜９２０３のうちのいずれか１つ、例えば、配列番号４７０４、４７０５、
４７０６、４７０７、４７０８、４７０９、４７１０、４７１１、４７１２、４７１３、
４７１４、４７１５、４７１６、４７１７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、
４７２２、４７２３、４７２４、４７２５、４７２６、４７２７、４７２８、４７２９、
４７３０、４７３１、４７３２、４７３３、４７３４、４７３５、４７３６、４７３７、
４７３８、４７３９、４７４０、４７４１、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、
４７４６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７５２、４７５３、
４７５４、４７５５、４７５６、４７５７、４７５８、４７５９、４７６０、４７６１、
４７６２、４７６３、４７６４、４７６５、４７６６、４７６７、４７６８、４７６９、
４７７０、４７７１、４７７２、４７７３、４７７４、４７７５、４７７６、４７７７、
４７７８、４７７９、４７８０、４７８１、４７８２、４７８３、４７８４、４７８５、
４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４７９１、４７９２、４７９３、
４７９４、４７９５、４７９６、４７９７、４７９８、４７９９、４８００、４８０１、
４８０２、４８０３、４８０４、４８０５、４８０６、４８０７、４８０８、４８０９、
４８１０、４８１１、４８１２、４８１３、４８１４、４８１５、４８１６、４８１７、
４８１８、４８１９、４８２０、４８２１、４８２２、４８２３、４８２４、４８２５、
４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３１、４８３２、４８３３、
４８３４、４８３５、４８３６、４８３７、４８３８、４８３９、４８４０、４８４１、
４８４２、４８４３、４８４４、４８４５、４８４６、４８４７、４８４８、４８４９、
４８５０、４８５１、４８５２、４８５３、４８５４、４８５５、４８５６、４８５７、
４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６２、４８６３、４８６４、４８６５、
４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、４８７３、
４８７４、４８７５、４８７６、４８７７、４８７８、４８７９、４８８０、４８８１、
４８８２、４８８３、４８８４、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、
４８９０、４８９１、４８９２、４８９３、４８９４、４８９５、４８９６、４８９７、
４８９８、４８９９、４９００、４９０１、４９０２、４９０３、４９０４、４９０５、
４９０６、４９０７、４９０８、４９０９、４９１０、４９１１、４９１２、４９１３、
４９１４、４９１５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９２１、
４９２２、４９２３、４９２４、４９２５、４９２６、４９２７、４９２８、４９２９、
４９３０、４９３１、４９３２、４９３３、４９３４、４９３５、４９３６、４９３７、
４９３８、４９３９、４９４０、４９４１、４９４２、４９４３、４９４４、４９４５、
４９４６、４９４７、４９４８、４９４９、４９５０、４９５１、４９５２、４９５３、
４９５４、４９５５、４９５６、４９５７、４９５８、４９５９、４９６０、４９６１、
４９６２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、
４９７０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、
４９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、
４９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、
４９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、
５００２、５００３、５００４、５００５、５００６、５００７、５００８、５００９、
５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、５０１７、
５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、５０２５、
５０２６、５０２７、５０２８、５０２９、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、
５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、
５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、
５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０５７、
５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、５０６５、
５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、５０７３、
５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５０８０、５０８１、
５０８２、５０８３、５０８４、５０８５、５０８６、５０８７、５０８８、５０８９、
５０９０、５０９１、５０９２、５０９３、５０９４、５０９５、５０９６、５０９７、
５０９８、５０９９、５１００、５１０１、５１０２、５１０３、５１０４、５１０５、
５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１１、５１１２、５１１３、
５１１４、５１１５、５１１６、５１１７、５１１８、５１１９、５１２０、５１２１、
５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２６、５１２７、５１２８、５１２９、
５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３４、５１３５、５１３６、５１３７、
５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４２、５１４３、５１４４、５１４５、
５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、
５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、
５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、
５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、
５１７８、５１７９、５１８０、５１８１、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、
５１８６、５１８７、５１８８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、
５１９４、５１９５、５１９６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、
５２０２、５２０３、５２０４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、
５２１０、５２１１、５２１２、５２１３、５２１４、５２１５、５２１６、５２１７、
５２１８、５２１９、５２２０、５２２１、５２２２、５２２３、５２２４、５２２５、
５２２６、５２２７、５２２８、５２２９、５２３０、５２３１、５２３２、５２３３、
５２３４、５２３５、５２３６、５２３７、５２３８、５２３９、５２４０、５２４１、
５２４２、５２４３、５２４４、５２４５、５２４６、５２４７、５２４８、５２４９、
５２５０、５２５１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５６、５２５７、
５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６４、５２６５、
５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２７２、５２７３、
５２７４、５２７５、５２７６、５２７７、５２７８、５２７９、５２８０、５２８１、
５２８２、５２８３、５２８４、５２８５、５２８６、５２８７、５２８８、５２８９、
５２９０、５２９１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、
５２９８、５２９９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、
５３０６、５３０７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、
５３１４、５３１５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、
５３２２、５３２３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、
５３３０、５３３１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、
５３３８、５３３９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、
５３４６、５３４７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、
５３５４、５３５５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、
５３６２、５３６３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、
５３７０、５３７１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、
５３７８、５３７９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、
５３８６、５３８７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、
５３９４、５３９５、５３９６、５３９７、５３９８、５３９９、５４００、５４０１、
５４０２、５４０３、５４０４、５４０５、５４０６、５４０７、５４０８、５４０９、
５４１０、５４１１、５４１２、５４１３、５４１４、５４１５、５４１６、５４１７、
５４１８、５４１９、５４２０、５４２１、５４２２、５４２３、５４２４、５４２５、
５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３０、５４３１、５４３２、５４３３、
５４３４、５４３５、５４３６、５４３７、５４３８、５４３９、５４４０、５４４１、
５４４２、５４４３、５４４４、５４４５、５４４６、５４４７、５４４８、５４４９、
５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、５４５６、５４５７、
５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、５４６４、５４６５、
５４６６、５４６７、５４６８、５４６９、５４７０、５４７１、５４７２、５４７３、
５４７４、５４７５、５４７６、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、５４８１、
５４８２、５４８３、５４８４、５４８５、５４８６、５４８７、５４８８、５４８９、
５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、５４９６、５４９７、
５４９８、５４９９、５５００、５５０１、５５０２、５５０３、５５０４、５５０５、
５５０６、５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、
５５１４、５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、
５５２２、５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、
５５３０、５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５３７、
５５３８、５５３９、５５４０、５５４１、５５４２、５５４３、５５４４、５５４５、
５５４６、５５４７、５５４８、５５４９、５５５０、５５５１、５５５２、５５５３、
５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、
５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、
５５７０、５５７１、５５７２、５５７３、５５７４、５５７５、５５７６、５５７７、
５５７８、５５７９、５５８０、５５８１、５５８２、５５８３、５５８４、５５８５、
５５８６、５５８７、５５８８、５５８９、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、
５５９４、５５９５、５５９６、５５９７、５５９８、５５９９、５６００、５６０１、
５６０２、５６０３、５６０４、５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、
５６１０、５６１１、５６１２、５６１３、５６１４、５６１５、５６１６、５６１７、
５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６２４、５６２５、
５６２６、５６２７、５６２８、５６２９、５６３０、５６３１、５６３２、５６３３、
５６３４、５６３５、５６３６、５６３７、５６３８、５６３９、５６４０、５６４１、
５６４２、５６４３、５６４４、５６４５、５６４６、５６４７、５６４８、５６４９、
５６５０、５６５１、５６５２、５６５３、５６５４、５６５５、５６５６、５６５７、
５６５８、５６５９、５６６０、５６６１、５６６２、５６６３、５６６４、５６６５、
５６６６、５６６７、５６６８、５６６９、５６７０、５６７１、５６７２、５６７３、
５６７４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、
５
６８２、５６８３、５６８４、５６８５、５６８６、５６８７、５６８８、５６８９、５
６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５６９７、５
６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０４、５７０５、５
７０６、５７０７、５７０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５
７１４、５７１５、５７１６、５７１７、５７１８、５７１９、５７２０、５７２１、５
７２２、５７２３、５７２４、５７２５、５７２６、５７２７、５７２８、５７２９、５
７３０、５７３１、５７３２、５７３３、５７３４、５７３５、５７３６、５７３７、５
７３８、５７３９、５７４０、５７４１、５７４２、５７４３、５７４４、５７４５、５
７４６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５２、５７５３、５
７５４、５７５５、５７５６、５７５７、５７５８、５７５９、５７６０、５７６１、５
７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７６７、５７６８、５７６９、５
７７０、５７７１、５７７２、５７７３、５７７４、５７７５、５７７６、５７７７、５
７７８、５７７９、５７８０、５７８１、５７８２、５７８３、５７８４、５７８５、５
７８６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５
７９４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５
８０２、５８０３、５８０４、５８０５、５８０６、５８０７、５８０８、５８０９、５
８１０、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８１５、５８１６、５８１７、５
８１８、５８１９、５８２０、５８２１、５８２２、５８２３、５８２４、５８２５、５
８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３２、５８３３、５
８３４、５８３５、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４０、５８４１、５
８４２、５８４３、５８４４、５８４５、５８４６、５８４７、５８４８、５８４９、５
８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８５６、５８５７、５
８５８、５８５９、５８６０、５８６１、５８６２、５８６３、５８６４、５８６５、５
８６６、５８６７、５８６８、５８６９、５８７０、５８７１、５８７２、５８７３、５
８７４、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８７９、５８８０、５８８１、５
８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８９、５
８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９７、５
８９８、５８９９、５９００、５９０１、５９０２、５９０３、５９０４、５９０５、５
９０６、５９０７、５９０８、５９０９、５９１０、５９１１、５９１２、５９１３、５
９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２１、５
９２２、５９２３、５９２４、５９２５、５９２６、５９２７、５９２８、５９２９、５
９３０、５９３１、５９３２、５９３３、５９３４、５９３５、５９３６、５９３７、５
９３８、５９３９、５９４０、５９４１、５９４２、５９４３、５９４４、５９４５、５
９４６、５９４７、５９４８、５９４９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５
９５４、５９５５、５９５６、５９５７、５９５８、５９５９、５９６０、５９６１、５
９６２、５９６３、５９６４、５９６５、５９６６、５９６７、５９６８、５９６９、５
９７０、５９７１、５９７２、５９７３、５９７４、５９７５、５９７６、５９７７、５
９７８、５９７９、５９８０、５９８１、５９８２、５９８３、５９８４、５９８５、５
９８６、５９８７、５９８８、５９８９、５９９０、５９９１、５９９２、５９９３、５
９９４、５９９５、５９９６、５９９７、５９９８、５９９９、６０００、６００１、６
００２、６００３、６００４、６００５、６００６、６００７、６００８、６００９、６
０１０、６０１１、６０１２、６０１３、６０１４、６０１５、６０１６、６０１７、６
０１８、６０１９、６０２０、６０２１、６０２２、６０２３、６０２４、６０２５、６
０２６、６０２７、６０２８、６０２９、６０３０、６０３１、６０３２、６０３３、６
０３４、６０３５、６０３６、６０３７、６０３８、６０３９、６０４０、６０４１、６
０４２、６０４３、６０４４、６０４５、６０４６、６０４７、６０４８、６０４９、６
０５０、６０５１、６０５２、６０５３、６０５４、６０５５、６０５６、６０５７、６
０５８、６０５９、６０６０、６０６１、６０６２、６０６３、６０６４、６０６５、６
０６６、６０６７、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０７３、６
０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０７９、６０８０、６０８１、６
０８２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６
０９０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６
０９８、６０９９、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０４、６１０５、６
１０６、６１０７、６１０８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６
１１４、６１１５、６１１６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６
１２２、６１２３、６１２４、６１２５、６１２６、６１２７、６１２８、６１２９、６
１３０、６１３１、６１３２、６１３３、６１３４、６１３５、６１３６、６１３７、６
１３８、６１３９、６１４０、６１４１、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６
１４６、６１４７、６１４８、６１４９、６１５０、６１５１、６１５２、６１５３、６
１５４、６１５５、６１５６、６１５７、６１５８、６１５９、６１６０、６１６１、６
１６２、６１６３、６１６４、６１６５、６１６６、６１６７、６１６８、６１６９、６
１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７５、６１７６、６１７７、６
１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８３、６１８４、６１８５、６
１８６、６１８７、６１８８、６１８９、６１９０、６１９１、６１９２、６１９３、６
１９４、６１９５、６１９６、６１９７、６１９８、６１９９、６２００、６２０１、６
２０２、６２０３、６２０４、６２０５、６２０６、６２０７、６２０８、６２０９、６
２１０、６２１１、６２１２、６２１３、６２１４、６２１５、６２１６、６２１７、６
２１８、６２１９、６２２０、６２２１、６２２２、６２２３、６２２４、６２２５、６
２２６、６２２７、６２２８、６２２９、６２３０、６２３１、６２３２、６２３３、６
２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２４０、６２４１、６
２４２、６２４３、６２４４、６２４５、６２４６、６２４７、６２４８、６２４９、６
２５０、６２５１、６２５２、６２５３、６２５４、６２５５、６２５６、６２５７、６
２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２６３、６２６４、６２６５、６
２６６、６２６７、６２６８、６２６９、６２７０、６２７１、６２７２、６２７３、６
２７４、６２７５、６２７６、６２７７、６２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６
２８２、６２８３、６２８４、６２８５、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６
２９０、６２９１、６２９２、６２９３、６２９４、６２９５、６２９６、６２９７、６
２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０５、６
３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１３、６
３１４、６３１５、６３１６、６３１７、６３１８、６３１９、６３２０、６３２１、６
３２２、６３２３、６３２４、６３２５、６３２６、６３２７、６３２８、６３２９、６
３３０、６３３１、６３３２、６３３３、６３３４、６３３５、６３３６、６３３７、６
３３８、６３３９、６３４０、６３４１、６３４２、６３４３、６３４４、６３４５、６
３４６、６３４７、６３４８、６３４９、６３５０、６３５１、６３５２、６３５３、６
３５４、６３５５、６３５６、６３５７、６３５８、６３５９、６３６０、６３６１、６
３６２、６３６３、６３６４、６３６５、６３６６、６３６７、６３６８、６３６９、６
３７０、６３７１、６３７２、６３７３、６３７４、６３７５、６３７６、６３７７、６
３７８、６３７９、６３８０、６３８１、６３８２、６３８３、６３８４、６３８５、６
３８６、６３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６
３９４、６３９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６
４０２、６４０３、６４０４、６４０５、６４０６、６４０７、６４０８、６４０９、６
４１０、６４１１、６４１２、６４１３、６４１４、６４１５、６４１６、６４１７、６
４１８、６４１９、６４２０、６４２１、６４２２、６４２３、６４２４、６４２５、６
４２６、６４２７、６４２８、６４２９、６４３０、６４３１、６４３２、６４３３、６
４３４、６４３５、６４３６、６４３７、６４３８、６４３９、６４４０、６４４１、６
４４２、６４４３、６４４４、６４４５、６４４６、６４４７、６４４８、６４４９、６
４５０、６４５１、６４５２、６４５３、６４５４、６４５５、６４５６、６４５７、６
４５８、６４５９、６４６０、６４６１、６４６２、６４６３、６４６４、６４６５、６
４６６、６４６７、６４６８、６４６９、６４７０、６４７１、６４７２、６４７３、６
４７４、６４７５、６４７６、６４７７、６４７８、６４７９、６４８０、６４８１、６
４８２、６４８３、６４８４、６４８５、６４８６、６４８７、６４８８、６４８９、６
４９０、６４９１、６４９２、６４９３、６４９４、６４９５、６４９６、６４９７、６
４９８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０４、６５０５、６
５０６、６５０７、６５０８、６５０９、６５１０、６５１１、６５１２、６５１３、６
５１４、６５１５、６５１６、６５１７、６５１８、６５１９、６５２０、６５２１、６
５２２、６５２３、６５２４、６５２５、６５２６、６５２７、６５２８、６５２９、６
５３０、６５３１、６５３２、６５３３、６５３４、６５３５、６５３６、６５３７、６
５３８、６５３９、６５４０、６５４１、６５４２、６５４３、６５４４、６５４５、６
５４６、６５４７、６５４８、６５４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６
５５４、６５５５、６５５６、６５５７、６５５８、６５５９、６５６０、６５６１、６
５６２、６５６３、６５６４、６５６５、６５６６、６５６７、６５６８、６５６９、６
５７０、６５７１、６５７２、６５７３、６５７４、６５７５、６５７６、６５７７、６
５７８、６５７９、６５８０、６５８１、６５８２、６５８３、６５８４、６５８５、６
５８６、６５８７、６５８８、６５８９、６５９０、６５９１、６５９２、６５９３、６
５９４、６５９５、６５９６、６５９７、６５９８、６５９９、６６００、６６０１、６
６０２、６６０３、６６０４、６６０５、６６０６、６６０７、６６０８、６６０９、６
６１０、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６、６６１７、６
６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４、６６２５、６
６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２、６６３３、６
６３４、６６３５、６６３６、６６３７、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６
６４２、６６４３、６６４４、６６４５、６６４６、６６４７、６６４８、６６４９、６
６５０、６６５１、６６５２、６６５３、６６５４、６６５５、６６５６、６６５７、６
６５８、６６５９、６６６０、６６６１、６６６２、６６６３、６６６４、６６６５、６
６６６、６６６７、６６６８、６６６９、６６７０、６６７１、６６７２、６６７３、６
６７４、６６７５、６６７６、６６７７、６６７８、６６７９、６６８０、６６８１、６
６８２、６６８３、６６８４、６６８５、６６８６、６６８７、６６８８、６６８９、６
６９０、６６９１、６６９２、６６９３、６６９４、６６９５、６６９６、６６９７、６
６９８、６６９９、６７００、６７０１、６７０２、６７０３、６７０４、６７０５、６
７
０６、６７０７、６７０８、６７０９、６７１０、６７１１、６７１２、６７１３、６７
１４、６７１５、６７１６、６７１７、６７１８、６７１９、６７２０、６７２１、６７
２２、６７２３、６７２４、６７２５、６７２６、６７２７、６７２８、６７２９、６７
３０、６７３１、６７３２、６７３３、６７３４、６７３５、６７３６、６７３７、６７
３８、６７３９、６７４０、６７４１、６７４２、６７４３、６７４４、６７４５、６７
４６、６７４７、６７４８、６７４９、６７５０、６７５１、６７５２、６７５３、６７
５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７
６２、６７６３、６７６４、６７６５、６７６６、６７６７、６７６８、６７６９、６７
７０、６７７１、６７７２、６７７３、６７７４、６７７５、６７７６、６７７７、６７
７８、６７７９、６７８０、６７８１、６７８２、６７８３、６７８４、６７８５、６７
８６、６７８７、６７８８、６７８９、６７９０、６７９１、６７９２、６７９３、６７
９４、６７９５、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０１、６８
０２、６８０３、６８０４、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８
１０、６８１１、６８１２、６８１３、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８
１８、６８１９、６８２０、６８２１、６８２２、６８２３、６８２４、６８２５、６８
２６、６８２７、６８２８、６８２９、６８３０、６８３１、６８３２、６８３３、６８
３４、６８３５、６８３６、６８３７、６８３８、６８３９、６８４０、６８４１、６８
４２、６８４３、６８４４、６８４５、６８４６、６８４７、６８４８、６８４９、６８
５０、６８５１、６８５２、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８
５８、６８５９、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８
６６、６８６７、６８６８、６８６９、６８７０、６８７１、６８７２、６８７３、６８
７４、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８０、６８８１、６８
８２、６８８３、６８８４、６８８５、６８８６、６８８７、６８８８、６８８９、６８
９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８
９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９
０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９
１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９
２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９
３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９３７、６９
３８、６９３９、６９４０、６９４１、６９４２、６９４３、６９４４、６９４５、６９
４６、６９４７、６９４８、６９４９、６９５０、６９５１、６９５２、６９５３、６９
５４、６９５５、６９５６、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６１、６９
６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９
７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９７４、６９７５、６９７６、６９７７、６９
７８、６９７９、６９８０、６９８１、６９８２、６９８３、６９８４、６９８５、６９
８６、６９８７、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９
９４、６９９５、６９９６、６９９７、６９９８、６９９９、７０００、７００１、７０
０２、７００３、７００４、７００５、７００６、７００７、７００８、７００９、７０
１０、７０１１、７０１２、７０１３、７０１４、７０１５、７０１６、７０１７、７０
１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０２２、７０２３、７０２４、７０２５、７０
２６、７０２７、７０２８、７０２９、７０３０、７０３１、７０３２、７０３３、７０
３４、７０３５、７０３６、７０３７、７０３８、７０３９、７０４０、７０４１、７０
４２、７０４３、７０４４、７０４５、７０４６、７０４７、７０４８、７０４９、７０
５０、７０５１、７０５２、７０５３、７０５４、７０５５、７０５６、７０５７、７０
５８、７０５９、７０６０、７０６１、７０６２、７０６３、７０６４、７０６５、７０
６６、７０６７、７０６８、７０６９、７０７０、７０７１、７０７２、７０７３、７０
７４、７０７５、７０７６、７０７７、７０７８、７０７９、７０８０、７０８１、７０
８２、７０８３、７０８４、７０８５、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９、７０
９０、７０９１、７０９２、７０９３、７０９４、７０９５、７０９６、７０９７、７０
９８、７０９９、７１００、７１０１、７１０２、７１０３、７１０４、７１０５、７１
０６、７１０７、７１０８、７１０９、７１１０、７１１１、７１１２、７１１３、７１
１４、７１１５、７１１６、７１１７、７１１８、７１１９、７１２０、７１２１、７１
２２、７１２３、７１２４、７１２５、７１２６、７１２７、７１２８、７１２９、７１
３０、７１３１、７１３２、７１３３、７１３４、７１３５、７１３６、７１３７、７１
３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１
４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１
５４、７１５５、７１５６、７１５７、７１５８、７１５９、７１６０、７１６１、７１
６２、７１６３、７１６４、７１６５、７１６６、７１６７、７１６８、７１６９、７１
７０、７１７１、７１７２、７１７３、７１７４、７１７５、７１７６、７１７７、７１
７８、７１７９、７１８０、７１８１、７１８２、７１８３、７１８４、７１８５、７１
８６、７１８７、７１８８、７１８９、７１９０、７１９１、７１９２、７１９３、７１
９４、７１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７１９９、７２００、７２０１、７２
０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２
１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２
１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２
２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２
３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２
４２、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２
５０、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２
５８、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２
６６、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２７１、７２７２、７２７３、７２
７４、７２７５、７２７６、７２７７、７２７８、７２７９、７２８０、７２８１、７２
８２、７２８３、７２８４、７２８５、７２８６、７２８７、７２８８、７２８９、７２
９０、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２
９８、７２９９、７３００、７３０１、７３０２、７３０３、７３０４、７３０５、７３
０６、７３０７、７３０８、７３０９、７３１０、７３１１、７３１２、７３１３、７３
１４、７３１５、７３１６、７３１７、７３１８、７３１９、７３２０、７３２１、７３
２２、７３２３、７３２４、７３２５、７３２６、７３２７、７３２８、７３２９、７３
３０、７３３１、７３３２、７３３３、７３３４、７３３５、７３３６、７３３７、７３
３８、７３３９、７３４０、７３４１、７３４２、７３４３、７３４４、７３４５、７３
４６、７３４７、７３４８、７３４９、７３５０、７３５１、７３５２、７３５３、７３
５４、７３５５、７３５６、７３５７、７３５８、７３５９、７３６０、７３６１、７３
６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３６６、７３６７、７３６８、７３６９、７３
７０、７３７１、７３７２、７３７３、７３７４、７３７５、７３７６、７３７７、７３
７８、７３７９、７３８０、７３８１、７３８２、７３８３、７３８４、７３８５、７３
８６、７３８７、７３８８、７３８９、７３９０、７３９１、７３９２、７３９３、７３
９４、７３９５、７３９６、７３９７、７３９８、７３９９、７４００、７４０１、７４
０２、７４０３、７４０４、７４０５、７４０６、７４０７、７４０８、７４０９、７４
１０、７４１１、７４１２、７４１３、７４１４、７４１５、７４１６、７４１７、７４
１８、７４１９、７４２０、７４２１、７４２２、７４２３、７４２４、７４２５、７４
２６、７４２７、７４２８、７４２９、７４３０、７４３１、７４３２、７４３３、７４
３４、７４３５、７４３６、７４３７、７４３８、７４３９、７４４０、７４４１、７４
４２、７４４３、７４４４、７４４５、７４４６、７４４７、７４４８、７４４９、７４
５０、７４５１、７４５２、７４５３、７４５４、７４５５、７４５６、７４５７、７４
５８、７４５９、７４６０、７４６１、７４６２、７４６３、７４６４、７４６５、７４
６６、７４６７、７４６８、７４６９、７４７０、７４７１、７４７２、７４７３、７４
７４、７４７５、７４７６、７４７７、７４７８、７４７９、７４８０、７４８１、７４
８２、７４８３、７４８４、７４８５、７４８６、７４８７、７４８８、７４８９、７４
９０、７４９１、７４９２、７４９３、７４９４、７４９５、７４９６、７４９７、７４
９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５
０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７５
１４、７５１５、７５１６、７５１７、７５１８、７５１９、７５２０、７５２１、７５
２２、７５２３、７５２４、７５２５、７５２６、７５２７、７５２８、７５２９、７５
３０、７５３１、７５３２、７５３３、７５３４、７５３５、７５３６、７５３７、７５
３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３、７５４４、７５４５、７５
４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１、７５５２、７５５３、７５
５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９、７５６０、７５６１、７５
６２、７５６３、７５６４、７５６５、７５６６、７５６７、７５６８、７５６９、７５
７０、７５７１、７５７２、７５７３、７５７４、７５７５、７５７６、７５７７、７５
７８、７５７９、７５８０、７５８１、７５８２、７５８３、７５８４、７５８５、７５
８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７５９３、７５
９４、７５９５、７５９６、７５９７、７５９８、７５９９、７６００、７６０１、７６
０２、７６０３、７６０４、７６０５、７６０６、７６０７、７６０８、７６０９、７６
１０、７６１１、７６１２、７６１３、７６１４、７６１５、７６１６、７６１７、７６
１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６２４、７６２５、７６
２６、７６２７、７６２８、７６２９、７６３０、７６３１、７６３２、７６３３、７６
３４、７６３５、７６３６、７６３７、７６３８、７６３９、７６４０、７６４１、７６
４２、７６４３、７６４４、７６４５、７６４６、７６４７、７６４８、７６４９、７６
５０、７６５１、７６５２、７６５３、７６５４、７６５５、７６５６、７６５７、７６
５８、７６５９、７６６０、７６６１、７６６２、７６６３、７６６４、７６６５、７６
６６、７６６７、７６６８、７６６９、７６７０、７６７１、７６７２、７６７３、７６
７４、７６７５、７６７６、７６７７、７６７８、７６７９、７６８０、７６８１、７６
８２、７６８３、７６８４、７６８５、７６８６、７６８７、７６８８、７６８９、７６
９０、７６９１、７６９２、７６９３、７６９４、７６９５、７６９６、７６９７、７６
９８、７６９９、７７００、７７０１、７７０２、７７０３、７７０４、７７０５、７７
０６、７７０７、７７０８、７７０９、７７１０、７７１１、７７１２、７７１３、７７
１４、７７１５、７７１６、７７１７、７７１８、７７１９、７７２０、７７２１、７７
２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７、７７２８、７７２９、７７
３
０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５、７７３６、７７３７、７７３
８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３、７７４４、７７４５、７７４
６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２、７７５３、７７５
４、７７５５、７７５６、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６
２、７７６３、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７６９、７７７
０、７７７１、７７７２、７７７３、７７７４、７７７５、７７７６、７７７７、７７７
８、７７７９、７７８０、７７８１、７７８２、７７８３、７７８４、７７８５、７７８
６、７７８７、７７８８、７７８９、７７９０、７７９１、７７９２、７７９３、７７９
４、７７９５、７７９６、７７９７、７７９８、７７９９、７８００、７８０１、７８０
２、７８０３、７８０４、７８０５、７８０６、７８０７、７８０８、７８０９、７８１
０、７８１１、７８１２、７８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１
８、７８１９、７８２０、７８２１、７８２２、７８２３、７８２４、７８２５、７８２
６、７８２７、７８２８、７８２９、７８３０、７８３１、７８３２、７８３３、７８３
４、７８３５、７８３６、７８３７、７８３８、７８３９、７８４０、７８４１、７８４
２、７８４３、７８４４、７８４５、７８４６、７８４７、７８４８、７８４９、７８５
０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４、７８５５、７８５６、７８５７、７８５
８、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６
６、７８６７、７８６８、７８６９、７８７０、７８７１、７８７２、７８７３、７８７
４、７８７５、７８７６、７８７７、７８７８、７８７９、７８８０、７８８１、７８８
２、７８８３、７８８４、７８８５、７８８６、７８８７、７８８８、７８８９、７８９
０、７８９１、７８９２、７８９３、７８９４、７８９５、７８９６、７８９７、７８９
８、７８９９、７９００、７９０１、７９０２、７９０３、７９０４、７９０５、７９０
６、７９０７、７９０８、７９０９、７９１０、７９１１、７９１２、７９１３、７９１
４、７９１５、７９１６、７９１７、７９１８、７９１９、７９２０、７９２１、７９２
２、７９２３、７９２４、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９３
０、７９３１、７９３２、７９３３、７９３４、７９３５、７９３６、７９３７、７９３
８、７９３９、７９４０、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７９４５、７９４
６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７９５３、７９５
４、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７９６
２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７
０、７９７１、７９７２、７９７３、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７９７
８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７９８
６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７９９
４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８００１、８００
２、８００３、８００４、８００５、８００６、８００７、８００８、８００９、８０１
０、８０１１、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１
８、８０１９、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２
６、８０２７、８０２８、８０２９、８０３０、８０３１、８０３２、８０３３、８０３
４、８０３５、８０３６、８０３７、８０３８、８０３９、８０４０、８０４１、８０４
２、８０４３、８０４４、８０４５、８０４６、８０４７、８０４８、８０４９、８０５
０、８０５１、８０５２、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０５
８、８０５９、８０６０、８０６１、８０６２、８０６３、８０６４、８０６５、８０６
６、８０６７、８０６８、８０６９、８０７０、８０７１、８０７２、８０７３、８０７
４、８０７５、８０７６、８０７７、８０７８、８０７９、８０８０、８０８１、８０８
２、８０８３、８０８４、８０８５、８０８６、８０８７、８０８８、８０８９、８０９
０、８０９１、８０９２、８０９３、８０９４、８０９５、８０９６、８０９７、８０９
８、８０９９、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０
６、８１０７、８１０８、８１０９、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１
４、８１１５、８１１６、８１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２
２、８１２３、８１２４、８１２５、８１２６、８１２７、８１２８、８１２９、８１３
０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５、８１３６、８１３７、８１３
８、８１３９、８１４０、８１４１、８１４２、８１４３、８１４４、８１４５、８１４
６、８１４７、８１４８、８１４９、８１５０、８１５１、８１５２、８１５３、８１５
４、８１５５、８１５６、８１５７、８１５８、８１５９、８１６０、８１６１、８１６
２、８１６３、８１６４、８１６５、８１６６、８１６７、８１６８、８１６９、８１７
０、８１７１、８１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７
８、８１７９、８１８０、８１８１、８１８２、８１８３、８１８４、８１８５、８１８
６、８１８７、８１８８、８１８９、８１９０、８１９１、８１９２、８１９３、８１９
４、８１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０
２、８２０３、８２０４、８２０５、８２０６、８２０７、８２０８、８２０９、８２１
０、８２１１、８２１２、８２１３、８２１４、８２１５、８２１６、８２１７、８２１
８、８２１９、８２２０、８２２１、８２２２、８２２３、８２２４、８２２５、８２２
６、８２２７、８２２８、８２２９、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３、８２３
４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１、８２４
２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９、８２５
０、８２５１、８２５２、８２５３、８２５４、８２５５、８２５６、８２５７、８２５
８、８２５９、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２６４、８２６５、８２６
６、８２６７、８２６８、８２６９、８２７０、８２７１、８２７２、８２７３、８２７
４、８２７５、８２７６、８２７７、８２７８、８２７９、８２８０、８２８１、８２８
２、８２８３、８２８４、８２８５、８２８６、８２８７、８２８８、８２８９、８２９
０、８２９１、８２９２、８２９３、８２９４、８２９５、８２９６、８２９７、８２９
８、８２９９、８３００、８３０１、８３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０
６、８３０７、８３０８、８３０９、８３１０、８３１１、８３１２、８３１３、８３１
４、８３１５、８３１６、８３１７、８３１８、８３１９、８３２０、８３２１、８３２
２、８３２３、８３２４、８３２５、８３２６、８３２７、８３２８、８３２９、８３３
０、８３３１、８３３２、８３３３、８３３４、８３３５、８３３６、８３３７、８３３
８、８３３９、８３４０、８３４１、８３４２、８３４３、８３４４、８３４５、８３４
６、８３４７、８３４８、８３４９、８３５０、８３５１、８３５２、８３５３、８３５
４、８３５５、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３６
２、８３６３、８３６４、８３６５、８３６６、８３６７、８３６８、８３６９、８３７
０、８３７１、８３７２、８３７３、８３７４、８３７５、８３７６、８３７７、８３７
８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８３８３、８３８４、８３８５、８３８
６、８３８７、８３８８、８３８９、８３９０、８３９１、８３９２、８３９３、８３９
４、８３９５、８３９６、８３９７、８３９８、８３９９、８４００、８４０１、８４０
２、８４０３、８４０４、８４０５、８４０６、８４０７、８４０８、８４０９、８４１
０、８４１１、８４１２、８４１３、８４１４、８４１５、８４１６、８４１７、８４１
８、８４１９、８４２０、８４２１、８４２２、８４２３、８４２４、８４２５、８４２
６、８４２７、８４２８、８４２９、８４３０、８４３１、８４３２、８４３３、８４３
４、８４３５、８４３６、８４３７、８４３８、８４３９、８４４０、８４４１、８４４
２、８４４３、８４４４、８４４５、８４４６、８４４７、８４４８、８４４９、８４５
０、８４５１、８４５２、８４５３、８４５４、８４５５、８４５６、８４５７、８４５
８、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４６４、８４６５、８４６
６、８４６７、８４６８、８４６９、８４７０、８４７１、８４７２、８４７３、８４７
４、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８４７９、８４８０、８４８１、８４８
２、８４８３、８４８４、８４８５、８４８６、８４８７、８４８８、８４８９、８４９
０、８４９１、８４９２、８４９３、８４９４、８４９５、８４９６、８４９７、８４９
８、８４９９、８５００、８５０１、８５０２、８５０３、８５０４、８５０５、８５０
６、８５０７、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２、８５１３、８５１
４、８５１５、８５１６、８５１７、８５１８、８５１９、８５２０、８５２１、８５２
２、８５２３、８５２４、８５２５、８５２６、８５２７、８５２８、８５２９、８５３
０、８５３１、８５３２、８５３３、８５３４、８５３５、８５３６、８５３７、８５３
８、８５３９、８５４０、８５４１、８５４２、８５４３、８５４４、８５４５、８５４
６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５
４、８５５５、８５５６、８５５７、８５５８、８５５９、８５６０、８５６１、８５６
２、８５６３、８５６４、８５６５、８５６６、８５６７、８５６８、８５６９、８５７
０、８５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７
８、８５７９、８５８０、８５８１、８５８２、８５８３、８５８４、８５８５、８５８
６、８５８７、８５８８、８５８９、８５９０、８５９１、８５９２、８５９３、８５９
４、８５９５、８５９６、８５９７、８５９８、８５９９、８６００、８６０１、８６０
２、８６０３、８６０４、８６０５、８６０６、８６０７、８６０８、８６０９、８６１
０、８６１１、８６１２、８６１３、８６１４、８６１５、８６１６、８６１７、８６１
８、８６１９、８６２０、８６２１、８６２２、８６２３、８６２４、８６２５、８６２
６、８６２７、８６２８、８６２９、８６３０、８６３１、８６３２、８６３３、８６３
４、８６３５、８６３６、８６３７、８６３８、８６３９、８６４０、８６４１、８６４
２、８６４３、８６４４、８６４５、８６４６、８６４７、８６４８、８６４９、８６５
０、８６５１、８６５２、８６５３、８６５４、８６５５、８６５６、８６５７、８６５
８、８６５９、８６６０、８６６１、８６６２、８６６３、８６６４、８６６５、８６６
６、８６６７、８６６８、８６６９、８６７０、８６７１、８６７２、８６７３、８６７
４、８６７５、８６７６、８６７７、８６７８、８６７９、８６８０、８６８１、８６８
２、８６８３、８６８４、８６８５、８６８６、８６８７、８６８８、８６８９、８６９
０、８６９１、８６９２、８６９３、８６９４、８６９５、８６９６、８６９７、８６９
８、８６９９、８７００、８７０１、８７０２、８７０３、８７０４、８７０５、８７０
６、８７０７、８７０８、８７０９、８７１０、８７１１、８７１２、８７１３、８７１
４、８７１５、８７１６、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２
２、８７２３、８７２４、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３
０、８７３１、８７３２、８７３３、８７３４、８７３５、８７３６、８７３７、８７３
８、８７３９、８７４０、８７４１、８７４２、８７４３、８７４４、８７４５、８７４
６、８７４７、８７４８、８７４９、８７５０、８７５１、８７５２、８７５３、８７５
４
、８７５５、８７５６、８７５７、８７５８、８７５９、８７６０、８７６１、８７６２
、８７６３、８７６４、８７６５、８７６６、８７６７、８７６８、８７６９、８７７０
、８７７１、８７７２、８７７３、８７７４、８７７５、８７７６、８７７７、８７７８
、８７７９、８７８０、８７８１、８７８２、８７８３、８７８４、８７８５、８７８６
、８７８７、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８７９２、８７９３、８７９４
、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８８００、８８０１、８８０２
、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８０７、８８０８、８８０９、８８１０
、８８１１、８８１２、８８１３、８８１４、８８１５、８８１６、８８１７、８８１８
、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８８２４、８８２５、８８２６
、８８２７、８８２８、８８２９、８８３０、８８３１、８８３２、８８３３、８８３４
、８８３５、８８３６、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４２
、８８４３、８８４４、８８４５、８８４６、８８４７、８８４８、８８４９、８８５０
、８８５１、８８５２、８８５３、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８
、８８５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６６
、８８６７、８８６８、８８６９、８８７０、８８７１、８８７２、８８７３、８８７４
、８８７５、８８７６、８８７７、８８７８、８８７９、８８８０、８８８１、８８８２
、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８８８、８８８９、８８９０
、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８９６、８８９７、８８９８
、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９０４、８９０５、８９０６
、８９０７、８９０８、８９０９、８９１０、８９１１、８９１２、８９１３、８９１４
、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９１９、８９２０、８９２１、８９２２
、８９２３、８９２４、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９２９、８９３０
、８９３１、８９３２、８９３３、８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８
、８９３９、８９４０、８９４１、８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６
、８９４７、８９４８、８９４９、８９５０、８９５１、８９５２、８９５３、８９５４
、８９５５、８９５６、８９５７、８９５８、８９５９、８９６０、８９６１、８９６２
、８９６３、８９６４、８９６５、８９６６、８９６７、８９６８、８９６９、８９７０
、８９７１、８９７２、８９７３、８９７４、８９７５、８９７６、８９７７、８９７８
、８９７９、８９８０、８９８１、８９８２、８９８３、８９８４、８９８５、８９８６
、８９８７、８９８８、８９８９、８９９０、８９９１、８９９２、８９９３、８９９４
、８９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２
、９００３、９００４、９００５、９００６、９００７、９００８、９００９、９０１０
、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１５、９０１６、９０１７、９０１８
、９０１９、９０２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６
、９０２７、９０２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０３２、９０３３、９０３４
、９０３５、９０３６、９０３７、９０３８、９０３９、９０４０、９０４１、９０４２
、９０４３、９０４４、９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０
、９０５１、９０５２、９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８
、９０５９、９０６０、９０６１、９０６２、９０６３、９０６４、９０６５、９０６６
、９０６７、９０６８、９０６９、９０７０、９０７１、９０７２、９０７３、９０７４
、９０７５、９０７６、９０７７、９０７８、９０７９、９０８０、９０８１、９０８２
、９０８３、９０８４、９０８５、９０８６、９０８７、９０８８、９０８９、９０９０
、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０９６、９０９７、９０９８
、９０９９、９１００、９１０１、９１０２、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６
、９１０７、９１０８、９１０９、９１１０、９１１１、９１１２、９１１３、９１１４
、９１１５、９１１６、９１１７、９１１８、９１１９、９１２０、９１２１、９１２２
、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８、９１２９、９１３０
、９１３１、９１３２、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、９１３８
、９１３９、９１４０、９１４１、９１４２、９１４３、９１４４、９１４５、９１４６
、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１５２、９１５３、９１５４
、９１５５、９１５６、９１５７、９１５８、９１５９、９１６０、９１６１、９１６２
、９１６３、９１６４、９１６５、９１６６、９１６７、９１６８、９１６９、９１７０
、９１７１、９１７２、９１７３、９１７４、９１７５、９１７６、９１７７、９１７８
、９１７９、９１８０、９１８１、９１８２、９１８３、９１８４、９１８５、９１８６
、９１８７、９１８８、９１８９、９１９０、９１９１、９１９２、９１９３、９１９４
、９１９５、９１９６、９１９７、９１９８、９１９９、９２００、９２０１、９２０２
、９２０３のうちのいずれかであり得る。
当技術分野で既知の「同一性」という用語は、配列を比較することによって決定される
２個以上のペプチドの配列間の関係を指す。当技術分野において、同一性は、２個以上の
アミノ酸残基のストリング間のマッチ数によって決定されるペプチド間の配列関連性の程
度も意味する。同一性は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、
「アルゴリズム」）によって処理されるギャップアライメント（存在する場合）を有する
２つ以上の配列のうちのより小さい配列間の同一のマッチの割合（％）を測定する。関連
ペプチドの同一性は、既知の方法によって容易に計算され得る。そのような方法には、Ｃ
ｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．
，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９
８８、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐ
ｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ，１９９３、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ
．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４、Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ
Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，
Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１、お
よびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８，
１０７３（１９８８）に記載の方法が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ポリペプチド変異形は、参照腫瘍学関連ポリペプチドと
同一または同様の活性を有し得る。あるいは、変異形は、参照腫瘍学関連ポリペプチドと
比較して変化（例えば、増加または減少）した活性を有し得る。概して、本発明の特定の
腫瘍学関連ポリヌクレオチドまたは腫瘍学関連ポリペプチドの変異形は、本明細書に記載
され、かつ当業者に既知の配列アライメントプログラムおよびパラメータによって決定さ
れるように、特定の参照腫瘍学関連ポリヌクレオチドまたは腫瘍学関連ポリペプチドの変
異形と少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％
、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％
、９８％、９９％であるが、１００％未満の配列同一性を有する。そのようなアライメン
トのツールは、ＢＬＡＳＴプログラム一式を含む（Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕ
ｌ，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ，Ａｌｅｊａｎｄｒｏ Ａ．Ｓｃｈaｆｆｅｒ，Ｊ
ｉｎｇｈｕｉ Ｚｈａｎｇ，Ｚｈｅｎｇ Ｚｈａｎｇ，Ｗｅｂｂ Ｍｉｌｌｅｒ，ａｎｄ
Ｄａｖｉｄ Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９９７），“Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ
ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａ
ｔａｂｅｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．２５：３３８９−３４０２）。他のツールは、本明細書、具体的には、「同一性」の
定義に記載される。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムの初期設定パラメータは、例えば、予測閾値１０、ワードサイ
ズ２８、マッチ／ミスマッチスコア１、−２、線形ギャップコストを含む。任意のフィル
ター、ならびに種特異的繰り返し配列、例えば、ヒト特異的繰り返し配列の選択が適用さ
れ得る。
一実施形態では、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、対象の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用
され得る。
一実施形態では、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、対象の腫瘍増殖を減少、排除または予防するために使用され得
る。
一実施形態では、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または寛解させ
るために使用され得る。癌の症状は衰弱、うずきと痛み、発熱、疲労、体重減少、血餅、
血中カルシウム濃度の上昇、白血球数の低下、息切れ、眩暈、頭痛、色素沈着過剰、黄疸
、紅斑、掻痒症、多毛症、排便習慣の変化、膀胱機能の変化、長続きするただれ、口腔内
の白斑、舌の白点、異常な出欠または排出、身体部位の肥厚またはしこり、消化不良、嚥
下困難、いぼまたはほくろの変化、新しい皮膚およびしつこい席の変化または嗄声を含み
得るが、これらに限定されない。さらに、腫瘍学連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構
築物および／または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡはケモブレイン、末梢神経障害、疲労、うつ病
、吐き気、嘔吐、痛み、貧血、リンパ浮腫、感染症、性的副作用、減少した不妊症または
妊孕性、オストミー、不妊症および脱毛のような癌に関する副作用を減少し得るが、これ
らに限定されない。
腫瘍学関連タンパク質または腫瘍学関連ペプチド
本明細書に開示の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、１個以上の有
効なまたは「試験中の」腫瘍学関連タンパク質または腫瘍学関連ペプチドをコードし得る
。
本発明に従って、現在販売されているか、または開発中の１個以上の腫瘍学関連タンパ
ク質または腫瘍学関連ペプチドは、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一
次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡによってコードされ得る。理論によって束縛される
ことを望まないが、少なくとも部分的に、特異性、純度、および構築物設計の選択性によ
り、本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡへの組み込みが治療効果
の改善をもたらすと考えられる。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または腫瘍学関連ｍｍＲ
ＮＡは細胞周期、ＤＮＡ損傷応答（例えば、ＤＮＡ損傷修復）、アポトーシス、血管新生
、細胞運動性、上皮細胞の上皮間葉転換、ホスファチジルイノシトール３（ＰＩ３）キナ
ーゼ／Ａｋｔ細胞のシグナル伝達経路、テロメラーゼ活性および／または発現、腫瘍転移
、腫瘍形成、カテプシン、細胞老化、受容体チロシンキナーゼシグナル伝達、代謝および
薬物代謝、Ｇタンパク質シグナル伝達、成長因子および受容体、熱ショックタンパク質、
ヒストンデアセチラーゼ、ホルモン受容体、低酸素症、ポリADPリボースポリメラーゼ、
タンパク質キナーゼ、ＲＡＳシグナル伝達、トポイソメラーゼ、癌性、前癌性、および／
または他の細胞の転写因子および抗腫瘍活性等の生物学的および／または生理学的過程お
よび／または化合物を変更し得るが、これらに限定されない。
一実施形態では、ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または腫瘍学関連
ｍｍＲＮＡは、欠失または変異遺伝子から産出されるタンパク質を置換する目的で、細胞
または組織のポリペプチドを発現するために使用され得る。
さらに、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関
連ｍｍＲＮＡは天然および／または合成起源の発癌物質が原因で発生した癌を治療するた
めに使用され得る。別の実施形態では、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構
築物および／または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの使用は、他の有機体が原因で発生した癌およ
び／またはウイルス感染が原因で発生した癌を治療するために使用され得る。
隣接領域：非翻訳領域（ＵＴＲ）
遺伝子の非翻訳領域（ＵＴＲ）は、転写されるが、翻訳されない。５’ＵＴＲが転写開
始部位で始まり開始コドンに続くが、開始コドンを含まない一方で、３’ＵＴＲは、終止
コドンの直後に始まり、転写終結シグナルまで続く。核酸分子および翻訳の安定性におい
てＵＴＲが果たす制御的役割についての報告が相次いでいる。ＵＴＲの制御特徴は、本発
明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および／または腫瘍学関連ｍ
ｍＲＮＡに組み込まれて、分子の安定性を高め得る。特定の特徴も組み込まれて、万が一
それらが望ましくない器官部位に誤指向される場合には転写物の制御された下方制御を確
保することができる。
５’ＵＴＲおよび翻訳開始
天然５’ＵＴＲは、翻訳開始に関与する特徴を有する。それらは、リボソームが多くの
遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することで一般に知られているコザック配列のよ
うな特徴を有する。コザック配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧを有し
、式中、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）
であり、この後に別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲは、伸長因子結合に関与する二次構造を
形成することも知られている。
特定の標的器官の多量に発現した遺伝子において典型的に見られる特徴を操作すること
によって、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡの安定性および腫瘍学関連タンパク質産生を高めることができる。例えば
、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、
αフェトタンパク質、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子等の肝臓で発現したｍＲ
ＮＡの５’ＵＴＲ導入を用いて、肝細胞株または肝臓でのｍｍＲＮＡ等の核酸分子の発現
を高めることができる。同様に、他の組織特異的ｍＲＮＡからの５’ＵＴＲを用いてその
組織での発現を高めることは、筋肉（ＭｙｏＤ、ミオシン、ミオグロビン、ミオゲニン、
ヘルクリン（Ｈｅｒｃｕｌｉｎ））、内皮細胞（Ｔｉｅ−１、ＣＤ３６）、骨髄細胞（Ｃ
／ＥＢＰ、ＡＭＬ１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ１１ｂ、ＭＳＲ、Ｆｒ−１、ｉ−
ＮＯＳ）、白血球（ＣＤ４５、ＣＤ１８）、脂肪組織（ＣＤ３６、ＧＬＵＴ４、ＡＣＲＰ
３０、アディポネクチン）、および肺上皮細胞（ＳＰ−Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ）において可能で
ある。
他の非ＵＴＲ配列が、５’ＵＴＲ（または３’ＵＴＲ）に組み込まれ得る。例えば、イ
ントロンまたはイントロン配列の一部は、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学
関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの隣接領域に組み込まれ得る。イントロン
配列の組み込みは、タンパク質産生、ならびにｍＲＮＡレベルを増加させ得る。
３’ＵＴＲおよびＡＵ豊富な要素
３’ＵＴＲは、それらに包理される一続きのアデノシン（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）および
ウリジン（Ｕｒｉｄｉｎｅ）を有することで知られている。これらのＡＵ豊富な特徴は、
特に高代謝回転率を有する遺伝子においてよく見られる。それらの配列特徴および機能特
性に基づいて、ＡＵ豊富な要素（ＡＲＥ）は、３つのクラスに分類され得る（Ｃｈｅｎ
ｅｔ ａｌ，１９９５）：クラスＩのＡＲＥは、Ｕ豊富な領域内にＡＵＵＵＡモチーフの
いくつかの分散したコピーを含有する。Ｃ−ＭｙｃおよびＭｙｏＤは、クラスＩのＡＲＥ
を含有する。クラスＩＩのＡＲＥは、２個以上の重複したＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ
／Ａ）九量体を有する。この種のＡＲＥを含有する分子は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−
ａを含む。クラスＩＩＩのＡＲＥは、あまり明確にされていない。これらのＵ豊富な領域
は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。Ｃ−Ｊｕｎおよびミオゲニンが、十分に研究され
たこのクラスの例の２つである。ＡＲＥに結合する大半のタンパク質がメッセンジャーを
不安定にすることで知られているが、ＥＬＡＶファミリーのメンバー、中でも注目すべき
ＨｕＲがｍＲＮＡの安定性を向上させることが実証されている。ＨｕＲは、これら３つの
クラスのＡＲＥに結合する。ＨｕＲ特異的結合部位を操作して核酸分子の３’ＵＴＲに入
れることで、ＨｕＲ結合、ひいてはインビボでのメッセージの安定化につながる。
３’ＵＴＲのＡＵ豊富な要素（ＡＲＥ）の導入、除去、または修飾を用いて、本発明の
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの安
定性を調節することができる。特定の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築
物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを操作するとき、ＡＲＥの１つ以上のコピーが導入され
て、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍ
ｍＲＮＡの安定性を低下させ、それによって、結果として生じるタンパク質の翻訳を抑制
し、その産生を低減させ得る。同様に、ＡＲＥは、特定および除去されるか、または変異
されて、細胞内安定性を向上させ、ひいては結果として生じるタンパク質の翻訳および産
生を増加させることができる。本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構
築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを用いたトランスフェクション実験を関連細胞株にお
いて行うことができ、タンパク質産生をトランスフェクション後の様々な時点でアッセイ
することができる。例えば、細胞を、異なるＡＲＥ操作分子でトランスフェクトすること
ができ、関連タンパク質に対してＥＬＩＳＡキットを用いてトランスフェクション後６時
間、１２時間、２４時間、４８時間、および７日時点で産生されたタンパク質をアッセイ
することができる。
マイクロＲＮＡ結合部位の組み込み
マイクロＲＮＡ（またはｍｉＲＮＡ）は、核酸分子の３’ＵＴＲに結合し、かつ核酸分
子安定性を低下させるか、または翻訳を阻害するかのいずれかによって遺伝子発現を下方
制御する１９〜２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。本発明の腫瘍学関連ポリヌ
クレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、１つ以上のマイク
ロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ配列、またはマイクロＲＮＡ種を含み得る。そのよう
な配列は、米国特許公開第ＵＳ２００５／０２６１２１８号および米国特許公開第ＵＳ２
００５／００５９００５号に教示されるもの等の任意の既知のマイクロＲＮＡに対応し得
、これらの内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。
マイクロＲＮＡ配列は、「種」領域、すなわち、成熟マイクロＲＮＡの２〜８位の領域
における配列を含み、この配列は、ｍｉＲＮＡ標的配列に対して完全なワトソン・クリッ
ク相補性を有する。マイクロＲＮＡ種は、成熟マイクロＲＮＡの２〜８位または２〜７位
を含み得る。いくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡ種は、７個のヌクレオチド（
例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２〜８位）を含み得、対応するｍｉＲＮＡ標
的におけるこの種相補的部位は、マイクロＲＮＡ１位と反対のアデニン（Ａ）に隣接する
。いくつかの実施形態において、マイクロＲＮＡ種は、６個のヌクレオチド（例えば、成
熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２〜７位）を含み得、対応するｍｉＲＮＡ標的における
種相補的部位は、マイクロＲＮＡ１位と反対のアデニン（Ａ）に隣接する。例えば、Ｇｒ
ｉｍｓｏｎ Ａ，Ｆａｒｈ ＫＫ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＷＫ，Ｇａｒｒｅｔｔ−Ｅｎｇｅ
ｌｅ Ｐ，Ｌｉｍ ＬＰ，Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ；Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．２００７ Ｊｕｌ
６；２７（１）：９１−１０５を参照されたく、それぞれ、参照によりそれらの全体が本
明細書に組み込まれる。マイクロＲＮＡ種の塩基は、標的配列と完全な相補性を有する。
マイクロＲＮＡ標的配列を操作して、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連
一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの３’ＵＴＲに入れることによって、分解また
は翻訳減少のためにこの分子を標的化することができるが、但し、問題のマイクロＲＮＡ
が利用可能であることを条件とする。このプロセスは、核酸分子送達時のオフターゲット
効果の危険を低下させる。マイクロＲＮＡ、マイクロＲＮＡ標的領域、およびそれらの発
現パターンの特定、ならびに生物学におけるそれらの役割が報告されている（それぞれ、
参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｏｎａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒ
ｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２０１０ １１：９４３−９４９、Ａｎａｎｄ ａｎｄ
Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１−１
７６、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ ａｎｄ Ｒａｏ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１２ ２６：４０
４−４１３（２０１１ Ｄｅｃ ２０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３
５６）、Ｂａｒｔｅｌ Ｃｅｌｌ ２００９ １３６：２１５−２３３、Ｌａｎｄｇｒａ
ｆ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，２００７ １２９：１４０１−１４１４）。
例えば、核酸分子がｍＲＮＡであり、肝臓に送達されることが意図されないが、そこで
落ち着く場合、肝臓中に豊富なマイクロＲＮＡであるｍｉＲ−１２２が、ｍｉＲ−１２２
の１つまたは複数の標的部位が操作されて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一
次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの３’ＵＴＲに入れられると、目的とする遺伝子
の発現を阻害することができる。異なるマイクロＲＮＡの１つまたは複数の結合部位の導
入を操作して、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連
ｍｍＲＮＡの長寿命、安定性、およびタンパク質翻訳をさらに減少させることができる。
本明細書で使用するとき、「マイクロＲＮＡ部位」という用語は、マイクロＲＮＡ標的部
位もしくはマイクロＲＮＡ認識部位、またはマイクロＲＮＡが結合もしくは会合する任意
のヌクレオチド配列を指す。「結合」は、従来のワトソン・クリックハイブリダイゼーシ
ョン規則に従い得るか、あるいはマイクロＲＮＡ部位に、またはマイクロＲＮＡ部位に隣
接して標的配列を有するマイクロＲＮＡの任意の安定した会合を示し得ることを理解され
たい。
逆に、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関
連ｍｍＲＮＡの目的のために、特定の組織でのタンパク質発現を増加させるために自然に
生じるマイクロＲＮＡ結合部位を操作して配列から出す（すなわち、配列から除去する）
ことができる。例えば、ｍｉＲ−１２２結合部位が除去されて、肝臓でのタンパク質発現
を改善することができる。複数の組織での発現の制御は、１つまたはいくつかのマイクロ
ＲＮＡ結合部位の導入または除去によって達成され得る。
マイクロＲＮＡがｍＲＮＡを制御し、その結果タンパク質発現を制御することで知られ
ている組織の例には、肝臓（ｍｉＲ−１２２）、筋肉（ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−２０６
、ｍｉＲ−２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１２６）、骨髄細胞（ｍ
ｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２
２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７）、脂肪組織（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−３０ｃ）、心臓
（ｍｉＲ−１ｄ、ｍｉＲ−１４９）、腎臓（ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−
２０４）、および肺上皮細胞（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１２６）が挙げら
れるが、これらに限定されない。マイクロＲＮＡは、血管新生（ｍｉＲ−１３２）等の複
雑な生物学的プロセスも制御し得る（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｎａ
ｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８
：１７１−１７６）。本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、ま
たは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡにおいて、そのようなプロセスに関与するマイクロＲＮＡの結
合部位は、生物学的に関連した細胞型に対して、または関連生物学的プロセスに関連して
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの発
現を調整するために除去または導入され得る。マイクロＲＮＡ、ｍｉＲ配列、およびｍｉ
Ｒ結合部位の一覧が、２０１３年１月１７日出願の米国特許仮出願第６１／７５３，６６
１号の表９、２０１３年１月１８日出願の米国特許仮出願第６１／７５４，１５９号の表
９、および２０１３年１月３１日出願の米国特許仮出願第６１／７５８，９２１号の表７
に列記されており、それぞれ、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。
最後に、異なる腫瘍学関連細胞型におけるマイクロＲＮＡの発現パターンの理解を通じ
て、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａは、特定の細胞型におけるより標的化された発現または特定の生物学的条件下のみでの
より標的化された発現のために操作され得る。組織特異的マイクロＲＮＡ結合部位の導入
によって、組織での腫瘍学関連タンパク質発現または生物学的条件に関連した腫瘍学関連
タンパク質発現に最適な腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫
瘍学関連ｍｍＲＮＡが設計され得る。組織または疾患特異的遺伝子発現を駆動するための
マイクロＲＮＡの使用例が列記されている（参照により全体が本明細書に組み込まれる、
Ｇｅｔｎｅｒ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ．２０１２，
８０：３９３−４０３）。加えて、マイクロＲＮＡ種部位は、ｍＲＮＡに組み込まれてあ
る特定の細胞における発現を低下させ得、これは、生物学的改善をもたらす。これについ
ての例は、ｍｉＲ−１４２部位のＵＧＴ１Ａ１発現レンチウイルスベクターへの組み込み
である。ｍｉＲ−１４２種部位の存在が造血細胞での発現を低下させ、結果として抗原提
示細胞での発現を低下させ、ウイルスによって発現したＵＧＴ１Ａ１に対する免疫応答の
不在をもたらした（それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｍｉ
ｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１０；１３９：９９９−
１００７、Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ａｓｅｑｕｉｎｏｌａｚａ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅ
ｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１０，１３９：７２６−７２９）。ｍｉＲ−１４２部位の修飾
ｍＲＮＡへの組み込みが、造血細胞でのコードされたタンパク質の発現を低下させること
ができただけでなく、ｍＲＮＡでコードされたタンパク質に対する免疫応答を低下または
無効にすることもできた。ｍｉＲ−１４２種部位（１つまたは複数）のｍＲＮＡへの組み
込みは、Ｉ型ＵＧＴ１Ａ１、ＬＤＬＲ欠損患者、およびＣＲＩＭ陰性Ｐｏｍｐｅ患者のよ
うな完全なタンパク質欠乏症が挙げられるがこれらに限定されない完全なタンパク質欠乏
症を有する患者の治療時に重要である。
操作された腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍ
ｍＲＮＡを用いたトランスフェクション実験を関連細胞株において行うことができ、タン
パク質産生をトランスフェクション後の様々な時点でアッセイすることができる。例えば
、細胞を、異なるマイクロＲＮＡ結合部位操作腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連
一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡでトランスフェクトすることができ、関連タン
パク質に対してＥＬＩＳＡキットを用いてトランスフェクション後６時間、１２時間、２
４時間、４８時間、７２時間、および７日時点で産生されたタンパク質をアッセイするこ
とができる。マイクロＲＮＡ結合部位操作分子を用いたインビボ実験を行って、製剤化さ
れた腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
の組織特異的発現の変化を試験することもできる。
５’キャッピング
ｍＲＮＡの５’キャップ構造は、核外輸送に関与し、ｍＲＮＡの安定性を向上させ、ｍ
ＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）に結合し、これは、ＣＢＰのポリ（Ａ）結合タ
ンパク質との会合を介して細胞におけるｍＲＮＡ安定性および翻訳適格性に関与し、成熟
環状ｍＲＮＡ種を形成する。このキャップはさらに、ｍＲＮＡスプライシング中に５’近
位のイントロンの除去を支援する。
内因性ｍＲＮＡ分子は、５’末端キャップされて、末端グアノシンキャップ残基とｍＲ
ＮＡ分子の５’末端転写センスヌクレオチドとの間に５’−ｐｐｐ−５’−トリホスフェ
ート結合をもたらし得る。その後、この５’−グアニル酸キャップがメチル化されて、Ｎ
７−メチル−グアニル酸残基を生成し得る。ｍＲＮＡの５’末端の末端および／または前
末端転写ヌクレオチドのリボース糖も、任意に２’−Ｏ−メチル化され得る。グアニル酸
キャップ構造の加水分解および切断を介する５’デキャッピングは、分解するためにｍＲ
ＮＡ分子等の核酸分子を標的とし得る。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡの修飾は、デキャッピングを阻止する非加水分解性のキャップ構造を生成し、その
結果ｍＲＮＡの半減期を増加させ得る。キャップ構造の加水分解が５’−ｐｐｐ−５’ホ
スホロジエステル結合の切断を必要とするため、修飾ヌクレオチドが、キャッピング反応
中に用いられ得る。例えば、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｉｐｓｗｉｃｈ
，ＭＡ）のワクシニアキャッピング酵素を製造業者の指示に従ってα−チオ−グアノシン
ヌクレオチドとともに用いて、５’−ｐｐｐ−５’キャップにおけるホスホロチオエート
結合を引き起こすことができる。α−メチル−ホスホネートおよびセレノ−ホスフェート
ヌクレオチド等のさらなる修飾グアノシンヌクレオチドを用いることができる。
さらなる修飾には、糖環の２’−ヒドロキシル基におけるｍＲＮＡの５’末端および／
または５’前末端ヌクレオチドのリボース糖の２’−Ｏ−メチル化（上述のもの）が含ま
れるが、これに限定されない。複数のはっきりと異なる５’−キャップ構造を用いて、ｍ
ＲＮＡ分子等の核酸分子の５’キャップを生成することができる。
本明細書において合成キャップ類似体、化学キャップ、化学キャップ類似体、または構
造もしくは機能キャップ類似体とも称されるキャップ類似体は、それらの化学構造の点で
天然の（すなわち、内因性、野生型、または生理学的）５’キャップとは異なるが、キャ
ップ機能は保持する。キャップ類似体は、化学的（すなわち、非酵素的）もしくは酵素的
に合成され、かつ／または核酸分子に結合され得る。
例えば、反逆方向キャップ類似体（ＡＲＣＡ）キャップは、５’−５’−トリホスフェ
ート基によって結合される２個のグアニンを含有し、一方のグアニンは、Ｎ７メチル基、
ならびに３’−Ｏ−メチル基（すなわち、Ｎ７，３’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’
−トリホスフェート−５’−グアノシン（ｍ７Ｇ−３’ｍｐｐｐ−Ｇ、これは同等に３’
Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇと指定され得る）を含有する。他方の未修飾
グアニンの３’−Ｏ原子は、キャップされた核酸分子（例えば、ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮ
Ａ）の５’末端ヌクレオチドに結合される。Ｎ７−および３’−Ｏ−メチル化グアニンは
、キャップされた核酸分子（例えば、ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ）の末端部分を提供する
。
別の例示のキャップには、ｍＣＡＰがあり、これは、ＡＲＣＡと同様であるが、グアノ
シン上に２’−Ｏ−メチル基（すなわち、Ｎ７，２’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’
−トリホスフェート−５’−グアノシン、ｍ７Ｇｍ−ｐｐｐ−Ｇ）を有する。
キャップ類似体がインビトロ転写反応において同時に起こる核酸分子のキャッピングを
可能にする一方で、転写物の最大２０％がキャップされないままであり得る。これ、なら
びに内因性細胞転写機構によって産生される核酸の内因性５’−キャップ構造とのキャッ
プ類似体の構造差は、翻訳適格性の低下および細胞安定性の低下をもたらし得る。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡは、より真正の５’−キャップ構造を生成するために、酵素を用いて転写後にもキ
ャップされ得る。本明細書で使用するとき、「より真正の」という表現は、構造的または
機能的のいずれかで内因性または野生型特徴を酷似させるか、または模倣する特徴を指す
。すなわち、「より真正の」特徴は、先行技術の合成特徴もしくは類似体等と比較して、
より良好に内因性、野生型、天然、もしくは生理学的細胞機能および／もしくは構造を表
しているか、またはこれは、対応する内因性、野生型、天然または生理学的特徴を１つ以
上の点においてしのぐ。本発明のより真正の５’キャップ構造の非限定的な例には、当技
術分野で既知の合成５’キャップ構造（または野生型、天然、または生理学的５’キャッ
プ構造）と比較して、とりわけ、強化されたキャップ結合タンパク質の結合、増加した半
減期、低下した５’エンドヌクレアーゼに対する感受性、および／または低下した５’デ
キャッピングを有するものがある。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素
および組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ酵素は、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオ
チドとグアニンキャップヌクレオチドとの間に基準の５’−５’−トリホスフェート結合
を生成し得、キャップグアニンは、Ｎ７メチル化を含有、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチ
ドは、２’−Ｏ−メチルを含有する。そのような構造は、キャップ１構造と称される。こ
のキャップは、例えば、当技術分野で既知の他の５’キャップ類似体構造と比較して、よ
り高い翻訳適格性および細胞安定性、ならびに細胞炎症誘発性サイトカインの活性化の低
下をもたらす。キャップ構造には、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ，ｐＮ２ｐ（キャッ
プ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）、および７ｍＧ（５
’）−ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）が含まれるが、これらに限定され
ない。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡが
転写後にキャップされ得、かつこのプロセスがより効率的であるため、ほぼ１００％の腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡがキャ
ップされ得る。これは、キャップ類似体がインビトロ転写反応の過程でｍＲＮＡに結合さ
れるときの約８０％とは大いに異なる。
本発明に従って、５’末端キャップは、内因性キャップまたはキャップ類似体を含み得
る。本発明に従って、５’末端キャップは、グアニン類似体を含み得る。有用なグアニン
類似体には、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デ
アザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノ
シン、および２−アジド−グアノシンが含まれるが、これらに限定されない。
ウイルス配列
大麦縞萎縮ウイルス（ＢＹＤＶ−ＰＡＶ）の翻訳エンハンサー配列、ヤーグジークテヒ
ツジレトロウイルス（ＪＳＲＶ）、および／または地方病性鼻腫瘍ウイルス（例えば、参
照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２１２９６４８号を参照
のこと）等であるが、これらに限定されないさらなるウイルス配列は、本発明の腫瘍学関
連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの３’ＵＴＲ
に操作および挿入され得、インビトロおよびインビボで構築物の翻訳を刺激し得る。トラ
ンスフェクション実験を関連細胞株において行うことができ、ＥＬＩＳＡによってタンパ
ク質産生をトランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、および７
日時点でアッセイすることができる。
ＩＲＥＳ配列
さらに、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有し得る腫瘍学関連ポリヌクレオチ
ド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡが提供される。最初に特徴的な
ピコルナウイルスＲＮＡと特定されたＩＲＥＳは、５’キャップ構造の不在下でタンパク
質合成を開始するときに重要な役割を果たす。ＩＲＥＳは、ｍＲＮＡの唯一のリボソーム
結合部位として働き得るか、または複数のリボソーム結合部位のうちの１つの役割を果た
し得る。２個以上の機能的リボソーム結合部位を含有する腫瘍学関連ポリヌクレオチド、
腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、リボソーム（「多シストロン性
核酸分子」）によって独立して翻訳されるいくつかの腫瘍学関連ペプチドまたは腫瘍学関
連ポリペプチドをコードし得る。腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、
または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡにＩＲＥＳが提供されるとき、第２の翻訳可能な領域がさら
に任意に提供される。本発明に従って用いられ得るＩＲＥＳ配列の例には、制限なく、ピ
コルナウイルス（例えば、ＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（
ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイル
ス（ＨＣＶ）、豚コレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル
免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、またはコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）由来のものが挙
げられる。
ポリＡ尾部
ＲＮＡ処理中、長いアデニンヌクレオチド鎖（ポリＡ尾部）が、安定性を向上させるた
めにｍＲＮＡ分子等のポリヌクレオチドに付加され得る。転写直後、転写物の３’末端が
切断されて３’ヒドロキシルを遊離させ得る。その後、ポリＡポリメラーゼは、アデニン
ヌクレオチド鎖をＲＮＡに付加する。ポリアデニル化と呼ばれるこのプロセスは、例えば
、約１００〜２５０残基長であり得るポリＡ尾部を付加する。
特有のポリＡ尾部の長さが、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構
築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡにある特定の利点を提供することが見出されている。
概して、本発明のポリＡ尾部の長さは、３０ヌクレオチド長を超える。別の実施形態に
おいて、ポリＡ尾部は、３５ヌクレオチド長を超える（例えば、少なくとも約３５、４０
、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８
０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８０
０、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５０
０、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、およ
び３，０００ヌクレオチド長であるか、またはこれらを超える）。いくつかの実施形態に
おいて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲ
ＮＡは、約３０〜約３，０００個のヌクレオチド（例えば、３０〜５０、３０〜１００、
３０〜２５０、３０〜５００、３０〜７５０、３０〜１，０００、３０〜１，５００、３
０〜２，０００、３０〜２，５００、５０〜１００、５０〜２５０、５０〜５００、５０
〜７５０、５０〜１，０００、５０〜１，５００、５０〜２，０００、５０〜２，５００
、５０〜３，０００、１００〜５００、１００〜７５０、１００〜１，０００、１００〜
１，５００、１００〜２，０００、１００〜２，５００、１００〜３，０００、５００〜
７５０、５００〜１，０００、５００〜１，５００、５００〜２，０００、５００〜２，
５００、５００〜３，０００、１，０００〜１，５００、１，０００〜２，０００、１，
０００〜２，５００、１，０００〜３，０００、１，５００〜２，０００、１，５００〜
２，５００、１，５００〜３，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜２，５０
０、および２，５００〜３，０００個）を含む。
一実施形態において、ポリＡ尾部は、全体の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連
一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの長さに対して設計される。この設計は、コー
ディング領域の長さ、特定の特徴もしくは領域の長さ（第１もしくは隣接領域等）に基づ
き得るか、または腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡから発現した最終産物の長さに基づき得る。
この文脈において、ポリＡ尾部は、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築
物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ、またはその特徴よりも１０％、２０％、３０％、４
０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％長い長さであり得る
。ポリＡ尾部は、それが属する腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、ま
たは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの画分としても設計され得る。この文脈において、ポリＡ尾部
は、構築物の全長または構築物の全長からポリＡ尾部を差し引いた長さの１０％、２０％
、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％以上であり得る。さ
らに、結合部位の操作、および腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、ま
たは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡのポリＡ結合タンパク質への複合体化は、発現を高め得る。
さらに、複数のはっきりと異なる腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物
、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、ポリＡ尾部の３’末端で修飾されたヌクレオチドを用
いて３’末端を介してＰＡＢＰ（ポリＡ結合タンパク質）に結合され得る。トランスフェ
クション実験を関連細胞株において行うことができ、ＥＬＩＳＡによって腫瘍学関連タン
パク質産生をトランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、および
７日時点でアッセイすることができる。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチドおよび腫瘍学関連一次構築
物は、ポリＡ〜Ｇ四重項を含むように設計される。Ｇ四重項は、ＤＮＡおよびＲＮＡの両
方においてＧ豊富な配列によって形成され得る４個のグアニンヌクレオチドの環状水素結
合アレイである。この実施形態において、Ｇ四重項は、ポリＡ尾部の終端に組み込まれる
。結果として生じる腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ構築物は、安定性、タンパク質産生、および様
々な時点での半減期他のパラメータについてアッセイされる。ポリＡ〜Ｇ四重項が、１２
０個のヌクレオチドのポリＡ尾部を単独で用いてもたらされるタンパク質産生の少なくと
も７５％に相当するタンパク質産生をもたらすことが見出されている。
定量化
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、
または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、１つ以上の体液由来のエクソソームにおいて定量化され
得る。本明細書で使用するとき、「体液」には、末梢血、血清、血漿、腹水、尿、脳脊髄
液（ＣＳＦ）、痰、唾液、骨髄、滑液、房水、羊水、耳垢、母乳、気管支肺胞洗浄液、精
液、前立腺液、クーパー腺液または射精前液、汗、糞便、毛髪、涙液、嚢胞液、胸膜およ
び腹水、心嚢液、リンパ液、粥状液、乳糜、胆汁、間質液、帯下、膿汁、皮脂、嘔吐物、
膣分泌物、粘膜分泌物、水便、膵液、鼻腔からの洗浄液、気管支肺吸引物、胚盤胞腔液、
および臍帯血が含まれる。あるいは、エクソソームは、肺、心臓、膵臓、胃、腸、膀胱、
腎臓、卵巣、睾丸、皮膚、結腸、乳房、前立腺、脳、食道、肝臓、および胎盤からなる群
から選択される器官から回収され得る。
定量化方法において、２ｍＬ未満の試料が対象から得られ、エクソソームが、サイズ排
除クロマトグラフィー、密度勾配遠心分離、分画遠心分離、ナノ膜限外濾過、免疫吸収捕
獲、親和性精製、微小流体分離、またはこれらの組み合わせによって単離される。分析に
おいて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲ
ＮＡのレベルまたは濃度は、投与された構築物の発現レベル、存在、不在、切断、または
改変であり得る。このレベルを１つ以上の臨床表現型またはヒト疾患バイオマーカーにつ
いてのアッセイと相関させることは、有利である。このアッセイが、構築物特異的プロー
ブ、サイトメトリー、ｑＲＴ−ＰＣＲ、実時間ＰＣＲ、ＰＣＲ、フローサイトメトリー、
電気泳動、質量分析、またはこれらの組み合わせを用いて行われ得る一方で、エクソソー
ムは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）等の免疫組織化学法を用いて単離され得る
。エクソソームは、サイズ排除クロマトグラフィー、密度勾配遠心分離、分画遠心分離、
ナノ膜限外濾過、免疫吸収捕獲、親和性精製、微小流体分離、またはこれらの組み合わせ
によっても単離され得る。
これらの方法は、残存しているか、または送達された腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫
瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡのレベルをリアルタイムで監視する能
力を研究者に提供する。これは、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次
構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡが構造および／または化学修飾に起因して内因性形
態とは異なるといった理由から、可能である。
ＩＩ． ｍｍＲＮＡの設計および合成
本発明に従って用いる腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫
瘍学関連ｍｍＲＮＡは、化学合成、一般にインビトロ転写（ＩＶＴ）と称される酵素合成
、またはより長い前駆体の酵素的もしくは化学的切断等を含むが、これらに限定されない
任意の利用可能な技法に従って調製され得る。ＲＮＡを合成する方法は、当技術分野にお
いて既知である（例えば、いずれも参照により本明細書に組み込まれる、Ｇａｉｔ，Ｍ．
Ｊ．（ｅｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ ｐｒａｃｔ
ｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ［Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ］，Ｗａｓｈｉｎ
ｇｔｏｎ，ＤＣ：ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８４、およびＨｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．（ｅ
ｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ，ｖ．２８８（Ｃｌｉｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ，２００５を参照のこと）。
本発明の腫瘍学関連一次構築物の設計および合成のプロセスは、概して、遺伝子構築ス
テップ、ｍＲＮＡ産生ステップ（修飾を伴うか、または伴わない）、および精製ステップ
を含む。酵素合成方法において、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする標的腫
瘍学関連ポリヌクレオチド配列が、増幅されてｃＤＮＡ鋳型を産生するベクターへの組み
込みのために最初に選択される。任意に、標的腫瘍学関連ポリヌクレオチド配列および／
または任意の隣接配列は、コドン最適化され得る。その後、ｃＤＮＡ鋳型を用いて、イン
ビトロ転写（ＩＶＴ）によってｍＲＮＡを産生する。産生後、ｍＲＮＡは、精製および浄
化プロセスを経り得る。これらのステップは、以下でより詳細に提供される。
遺伝子構築
遺伝子構築ステップは、遺伝子合成、ベクター増幅、プラスミド精製、プラスミド線形
化および浄化、ならびにｃＤＮＡ鋳型合成および浄化を含み得るが、これらに限定されな
い。
遺伝子合成
目的とする腫瘍学関連ポリペプチドまたは標的が産生のために選択された時点で、腫瘍
学関連一次構築物が設計される。腫瘍学関連一次構築物内で、目的とするポリペプチドを
コードする結合ヌクレオシドの第１の領域は、選択された核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）転
写物のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を用いて構築され得る。ＯＲＦは、野生
型ＯＲＦ、アイソフォーム、変異形、またはその断片を含み得る。本明細書で使用すると
き、「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」は、目的とする腫瘍学関連ポリ
ペプチドをコードすることができる核酸配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を指すよう意図され
る。ＯＲＦは、多くの場合、開始コドンＡＴＧで始まり、ナンセンスまたは終止コドンも
しくはシグナルで終わる。
さらに、第１の領域のヌクレオチド配列は、コドン最適化され得る。コドン最適化方法
は、当技術分野において既知であり、いくつかの目標のうちの１つ以上を達成する取り組
みにおいて有用であり得る。これらの目標には、標的および宿主生物体におけるコドン頻
度を一致させて適切な折り畳みを確実にすること、ＧＣ含量を付勢させてｍＲＮＡの安定
性を高めるか、または二次構造を減少させること、遺伝子構築または発現を障害し得る縦
列反復コドンまたは塩基泳動を最小限に抑えること、転写および翻訳制御領域をカスタマ
イズすること、タンパク質輸送配列を挿入または除去すること、コードされたタンパク質
における翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加すること、タンパク
質ドメインを付加、除去、または組み替えること、制限部位を挿入するか、または欠失さ
せること、リボソーム結合部位およびｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、翻訳速度を調節
してタンパク質の様々なドメインの適切な折り畳みを可能にすること、あるいはｍＲＮＡ
内の問題の二次構造を減少させるか、または排除することが含まれる。コドン最適化ツー
ル、アルゴリズム、およびサービスは、当技術分野において既知であり、非限定的な例に
は、ＧｅｎｅＡｒｔのサービス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０
（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ ＣＡ）、および／または所有権を有する方法が挙げられる。一
実施形態において、ＯＲＦ配列は、最適化アルゴリズムを用いて最適化される。各アミノ
酸のコドン選択肢が表１に提供される。
表１． コドン選択肢
本発明のいくつかの実施形態において有益であると見なされ得る特徴は、腫瘍学関連一
次構築物によってコードされ得、第１または第２の隣接領域としてＯＲＦに隣接し得る。
この隣接領域は、ＯＲＦの最適化前および／または後に腫瘍学関連一次構築物に組み込ま
れ得る。腫瘍学関連一次構築物が５’隣接領域と３’隣接領域の両方を含有する必要はな
い。そのような特徴の例には、非翻訳領域（ＵＴＲ）、コザック配列、オリゴ（ｄＴ）配
列、および検出可能なタグが挙げられるが、これらに限定されず、ＸｂａＩ認識を有し得
る複数のクローニング部位も挙げられ得る。
いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲが、隣接領域とし
て提供され得る。複数の５’または３’ＵＴＲが、隣接領域に含まれ得、同一または異な
る配列であり得る。隣接領域の任意の部分（そのような部分がない場合を含み）が、コド
ン最適化され得、それらのいずれも、独立して、コドン最適化の前および／または後に１
つ以上の異なる構造または化学修飾を含有し得る。特徴の組み合わせは、第１および第２
の隣接領域に含まれ得、他の特徴内に含有され得る。例えば、ＯＲＦは、ポリＡ尾部の鋳
型付加のために、強力なコザック翻訳開始シグナルを含有し得る５’ＵＴＲおよび／また
はオリゴ（ｄＴ）配列を含み得る３’ＵＴＲに隣接し得る。参照により全体が本明細書に
組み込まれる、米国特許出願公開第２０１００２９３６２５号に記載の５’ＵＴＲ等の５
’ＵＴＲは、同一および／または異なる遺伝子由来の第１のポリヌクレオチド断片および
第２のポリヌクレオチド断片を含み得る。
表２および表３は、隣接領域として本発明の腫瘍学関連一次構築物において利用され得
る例示のＵＴＲの一覧を提供する。本発明の５’非翻訳領域の一覧が表２に示される。Ａ
、Ｔ、Ｃ、もしくはＧを含む１個以上のヌクレオチドが末端に付加されるか、または末端
から除去される５’ＵＴＲの変異形が利用され得る。
表２． ５’非翻訳領域
本発明の３’非翻訳領域の代表的な一覧が表３に示される。Ａ、Ｔ、Ｃ、もしくはＧを
含む１個以上のヌクレオチドが末端に付加されるか、または末端から除去される３’ＵＴ
Ｒの変異形が利用され得る。
表３． ３’非翻訳領域
先の表に列記されるものは例であり、任意の遺伝子由来の任意のＵＴＲが一次構築物の
それぞれの第１または第２の隣接領域に組み込まれ得ることを理解されたい。さらに、任
意の既知の遺伝子の複数の野生型ＵＴＲが利用され得る。野生型遺伝子の変異形ではない
人工ＵＴＲを提供することも本発明の範囲内である。これらのＵＴＲもしくはその部分は
、それらが選択され得る転写物のＵＴＲもしくはその部分と同一の配向で配置され得るか
、または配向もしくは位置を変更し得る。したがって、５’または３’ＵＴＲは、反転し
、短縮され、延長され、１つ以上の他の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲでキメラにされ得る
。本明細書で使用する「変更される」という用語は、ＵＴＲ配列に関するとき、ＵＴＲが
参照配列との関連である点において変化したことを意味する。例えば、３’または５’Ｕ
ＴＲは、上で教示される配向もしくは位置の変化によって野生型または天然ＵＴＲに対し
て変更され得るか、またはさらなるヌクレオチドの包含、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオ
チドの交換もしくは転置によって変更され得る。「変更された」ＵＴＲ（３’または５’
にかかわらず）をもたらすこれらの変化のうちのいずれかは、変異形ＵＴＲを含む。
一実施形態において、５’または３’ＵＴＲ等の二重、三重、または四重ＵＴＲが用い
られ得る。本明細書で使用するとき、「二重」ＵＴＲは、同一のＵＴＲの２つのコピーが
連続して、または実質的に連続してのいずれかでコードされるものである。例えば、内容
が参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１００１２９８７７号
に記載の二重β−グロビン３’ＵＴＲが用いられ得る。
パターン化されたＵＴＲを有することも本発明の範囲内である。本明細書で使用すると
き、「パターン化されたＵＴＲ」は、１回、２回、または３回以上繰り返された繰り返し
または交互のパターン、例えば、ＡＢＡＢＡＢもしくはＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢもしく
はＡＢＣＡＢＣＡＢＣまたはその変異形を示すＵＴＲである。これらのパターンにおいて
、各文字、Ａ、Ｂ、またはＣは、ヌクレオチドレベルでの異なるＵＴＲを表す。
一実施形態において、隣接領域は、そのタンパク質が共通の機能、構造、特性特徴を共
有する転写物のファミリーから選択される。例えば、目的とする腫瘍学関連ポリペプチド
は、特定の細胞、組織で発現するか、または発生中のある時点で発現するタンパク質のフ
ァミリーに属し得る。これらの遺伝子のうちのいずれのＵＴＲも、同一または異なるタン
パク質ファミリーの任意の他のＵＴＲと交換されて、新たなキメラ一次転写物を作成し得
る。本明細書で使用するとき、「タンパク質のファミリー」は、最も広い意味において、
少なくとも１つの機能、構造、特徴、局在化、起源、または発現パターンを共有する２個
以上の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドの群を指すために用いられる。
最適化後（所望の場合）、腫瘍学関連一次構築物成分は、プラスミド、ウイルス、コス
ミド、および人工染色体等であるが、これらに限定されないベクターに再構築および変換
され得る。例えば、最適化された構築物は、化学的にコンピテントな大腸菌、酵母、アカ
パンカビ、トウモロコシ、ショウジョウバエ等に再構築および変換され得、高コピー数の
プラスミド様または染色体構造は、本明細書に記載の方法によって生じる。
非翻訳領域は、翻訳エンハンサー要素（ＴＥＥ）も含み得る。非限定的な例として、Ｔ
ＥＥには、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願第２００９０２２６
４７０号に記載のＴＥＥ、および当技術分野で既知のＴＥＥが含まれ得る。
終止コドン
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物は、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の
前に少なくとも２つの終止コドンを含み得る。終止コドンは、ＴＧＡ、ＴＡＡ、およびＴ
ＡＧから選択され得る。一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物は、終止コ
ドンＴＧＡおよびもう１つの終止コドンを含む。さらなる実施形態において、もう１つの
終止コドンは、ＴＡＡであり得る。別の実施形態において、本発明の一次構築物は、３つ
の終止コドンを含む。
ベクター増幅
腫瘍学関連一次構築物を含有するベクターは、その後、増幅され、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ ＰＵＲＥＬＩＮＫ（商標）ＨｉＰｕｒｅ Ｍａｘｉｐｒｅｐキット（Ｃａｒｌｓｂａ
ｄ，ＣＡ）を用いたマキシプレップ等であるが、これらに限定されない当技術分野で既知
の方法を用いてプラスミドが単離および精製される。
プラスミド線形化
プラスミドは、その後、制限酵素および緩衝液の使用等であるが、これらに限定されな
い当技術分野で既知の方法を用いて線形化され得る。線形化反応物は、例えば、Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎのＰＵＲＥＬＩＮＫ（商標）ＰＣＲ Ｍｉｃｒｏキット（Ｃａｒｌｓｂａｄ
，ＣＡ）、ならびに強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（
ＲＰ−ＨＰＬＣ）、および疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）等であるが、こ
れらに限定されないＨＰＬＣに基づく精製方法、ならびにＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎの標準Ｐ
ＵＲＥＬＩＮＫ（商標）ＰＣＲキット（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む方法を用いて精
製され得る。精製方法は、もたらされた線形化反応物の大きさに応じて修正され得る。そ
の後、線形化されたプラスミドを用いて、インビトロ転写（ＩＶＴ）反応のためのｃＤＮ
Ａを生成する。
ｃＤＮＡ鋳型合成
ｃＤＮＡ鋳型は、線形化されたプラスミドにポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を経させ
ることによって合成され得る。表４は、本発明のＰＣＲ反応において有用であり得るプラ
イマーおよびプローブの一覧である。この一覧が網羅的ではなく、任意の増幅のためのプ
ライマー−プローブ設計が当技術分野の技術の範囲内であることを理解されたい。プロー
ブは、標的分子に対する塩基対合忠実性および塩基対合強度を高めるように化学的に修飾
された塩基も含有し得る。そのような修飾には、５−メチル−シチジン、２、６−ジ−ア
ミノ−プリン、２’−フルオロ、ホスホロ−チオエート、またはロックド核酸が含まれ得
る。
表４． プライマーおよびプローブ
＊ＵＦＰはユニバーサル順方向プライマーであり、ＵＲＰはユニバーサル逆方向プライ
マーである。
一実施形態において、ｃＤＮＡは、転写を経る前に配列決定分析のために提出され得る
。
ｍＲＮＡ産生
ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ産生のプロセスは、インビトロ転写、ｃＤＮＡ鋳型除去およ
びＲＮＡ浄化、ならびにｍＲＮＡキャッピングおよび／またはテーリング反応を含み得る
が、これらに限定されない。
インビトロ転写
先のステップで産生されたｃＤＮＡは、インビトロ転写（ＩＶＴ）系を用いて転写され
得る。この系は、典型的には、転写緩衝液、ヌクレオチドトリホスフェート（ＮＴＰ）、
ＲＮａｓｅ阻害剤、およびポリメラーゼを含む。ＮＴＰは、自家で製造され得るか、供給
業者から選択され得るか、または本明細書に記載されるように合成され得る。ＮＴＰは、
天然および非天然（修飾された）ＮＴＰを含む本明細書に記載のＮＴＰから選択され得る
が、これらに限定されない。ポリメラーゼは、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３ ＲＮＡ
ポリメラーゼ、および修飾された核酸に組み込まれることができるポリメラーゼ等である
が、これらに限定されない変異体ポリメラーゼから選択され得るが、これらに限定されな
い。
ＲＮＡポリメラーゼ
任意の数のＲＮＡポリメラーゼまたは変異形が本発明の腫瘍学関連一次構築物の設計に
おいて用いられ得る。
ＲＮＡポリメラーゼは、ＲＮＡポリメラーゼ配列のアミノ酸を挿入するか、または欠失
させることによって修飾され得る。非限定的な例として、ＲＮＡポリメラーゼは、未修飾
ＲＮＡポリメラーゼと比較して、２’−修飾ヌクレオチドトリホスフェートを組み込む能
力の向上を示すように修飾され得る（参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる
、国際公開第ＷＯ２００８０７８１８０号および米国特許第８，１０１，３８５号を参照
のこと）。
変異形は、ＲＮＡポリメラーゼを進化させ、ＲＮＡポリメラーゼアミノ酸および／また
は核酸配列を最適化し、かつ／または当技術分野で既知の他の方法を用いることによって
得られ得る。非限定的な例として、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ変異形は、Ｅｓｖｅｌｔら
（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｎａｔｕｒｅ（２０１１）４７２（７３４
４）：４９９−５０３）によって立案された連続指向進化システムを用いて進化させられ
得、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼのクローンは、９３位のリジンがトレオニンで置換された
変異（Ｋ９３Ｔ）、Ｉ４Ｍ、Ａ７Ｔ、Ｅ６３Ｖ、Ｖ６４Ｄ、Ａ６５Ｅ、Ｄ６６Ｙ、Ｔ７６
Ｎ、Ｃ１２５Ｒ、Ｓ１２８Ｒ、Ａ１３６Ｔ、Ｎ１６５Ｓ、Ｇ１７５Ｒ、Ｈ１７６Ｌ、Ｙ１
７８Ｈ、Ｆ１８２Ｌ、Ｌ１９６Ｆ、Ｇ１９８Ｖ、Ｄ２０８Ｙ、Ｅ２２２Ｋ、Ｓ２２８Ａ、
Ｑ２３９Ｒ、Ｔ２４３Ｎ、Ｇ２５９Ｄ、Ｍ２６７Ｉ、Ｇ２８０Ｃ、Ｈ３００Ｒ、Ｄ３５１
Ａ、Ａ３５４Ｓ、Ｅ３５６Ｄ、Ｌ３６０Ｐ、Ａ３８３Ｖ、Ｙ３８５Ｃ、Ｄ３８８Ｙ、Ｓ３
９７Ｒ、Ｍ４０１Ｔ、Ｎ４１０Ｓ、Ｋ４５０Ｒ、Ｐ４５１Ｔ、Ｇ４５２Ｖ、Ｅ４８４Ａ、
Ｈ５２３Ｌ、Ｈ５２４Ｎ、Ｇ５４２Ｖ、Ｅ５６５Ｋ、Ｋ５７７Ｅ、Ｋ５７７Ｍ、Ｎ６０１
Ｓ、Ｓ６８４Ｙ、Ｌ６９９Ｉ、Ｋ７１３Ｅ、Ｎ７４８Ｄ、Ｑ７５４Ｒ、Ｅ７７５Ｋ、Ａ８
２７Ｖ、Ｄ８５１Ｎ、またはＬ８６４Ｆ等であるが、これらに限定されない少なくとも１
つの変異をコードし得る。別の非限定的な例として、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ変異形は
、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１００１２００２４号
および同第２００７０１１７１１２号に記載の少なくとも１つの変異をコードし得る。Ｒ
ＮＡポリメラーゼの変異形には、置換変異形、保存アミノ酸置換、挿入変異形、欠失変異
形、および／または共有結合誘導体も含まれ得るが、これらに限定されない。
一実施形態において、一次構築物は、野生型または変異形ＲＮＡポリメラーゼによって
認識されるように設計され得る。そうすることで、一次構築物は、野生型または親一次構
築物由来の配列変化部位または領域を含有するように修飾され得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物は、５’ＵＴＲ内、５’ＵＴＲの前、およ
び／または５’ＵＴＲの後に、少なくとも１つの置換および／または挿入を、腫瘍学関連
一次構築物のＲＮＡポリメラーゼ結合または認識部位の上流、ＲＮＡポリメラーゼ結合ま
たは認識部位の下流、ＴＡＴＡボックス配列の上流、ＴＡＴＡボックス配列の下流である
が、腫瘍学関連一次構築物のコーディング領域の上流に含むように設計され得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物の５’ＵＴＲは、同一の塩基のヌクレオチ
ドの少なくとも１つの領域および／またはストリングの挿入によって置換され得る。ヌク
レオチドの領域および／またはストリングは、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも
５、少なくとも６、少なくとも７、または少なくとも８個のヌクレオチドを含み得るが、
これらに限定されず、このヌクレオチドは、天然および／または非天然であり得る。非限
定的な例として、このヌクレオチド基は、５〜８個のアデニン、シトシン、チミン、本明
細書に開示の他のヌクレオチドのうちのいずれかのストリング、および／またはこれらの
組み合わせを含み得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物の５’ＵＴＲは、アデニン、シトシン、チ
ミン、本明細書に開示の他のヌクレオチドのうちのいずれか、および／またはこれらの組
み合わせ等であるが、これらに限定されない２つの異なる塩基のヌクレオチドの少なくと
も２つの領域および／またはストリングの挿入によって置換され得る。例えば、５’ＵＴ
Ｒは、５〜８個のアデニン塩基を挿入し、その後、５〜８個のシトシン塩基を挿入するこ
とによって置換され得る。別の例において、５’ＵＴＲは、５〜８個のシトシン塩基を挿
入し、その後、５〜８個のアデニン塩基を挿入することによって置換され得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物は、ＲＮＡポリメラーゼによって認識され
得る転写開始部位の下流に少なくとも１つの置換および／または挿入を含み得る。非限定
的な例として、少なくとも１つの置換および／または挿入は、転写開始部位のすぐ下流（
＋１〜＋６等であるが、これらに限定されない）の領域内の少なくとも１個の核酸を置換
することによって転写開始部位の下流で生じ得る。転写開始部位のすぐ下流のヌクレオチ
ド領域を変化させることにより、開始速度に影響を及ぼし、見かけ上のヌクレオチドトリ
ホスフェート（ＮＴＰ）反応一定値を増加させ、かつ初期転写物を硬化させることによる
転写複合体からの短い転写物の解離を高め得る（参照により全体が本明細書に組み込まれ
る、Ｂｒｉｅｂａ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）４１：５１４４
−５１４９）。少なくとも１個の核酸の修飾、置換、および／または挿入は、核酸配列の
サイレント変異を引き起こし得るか、またはアミノ酸配列における変異を引き起こし得る
。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物は、転写開始部位の下流で、少なくとも１
、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくと
も７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２
、または少なくとも１３個のグアニン塩基の置換を含み得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物は、転写開始部位のすぐ下流の領域におい
て、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または
少なくとも６個のグアニン塩基の置換を含み得る。非限定的な例として、その領域内のヌ
クレオチドがＧＧＧＡＧＡであるとき、グアニン塩基は、少なくとも１、少なくとも２、
少なくとも３、または少なくとも４個のアデニンヌクレオチドによって置換され得る。別
の非限定的な例において、その領域内のヌクレオチドがＧＧＧＡＧＡであるとき、グアニ
ン塩基は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、または少なくとも４個のシトシ
ン塩基によって置換され得る。別の非限定的な例において、その領域内のヌクレオチドが
ＧＧＧＡＧＡであるとき、グアニン塩基は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３
、もしくは少なくとも４個のチミン、および／または本明細書に記載のヌクレオチドのう
ちのいずれかによって置換され得る。
一実施形態において、腫瘍学関連一次構築物は、開始コドンの上流に少なくとも１つの
置換および／または挿入を含み得る。明確化のために、当業者は、開始コドンがタンパク
質コーディング領域の第１のコドンである一方で、転写開始部位が転写が始まる部位であ
ることを理解する。腫瘍学関連一次構築物は、ヌクレオチド塩基の少なくとも１つ、少な
くとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少な
くとも７つ、もしくは少なくとも８つの置換および／または挿入を含み得るが、これらに
限定されない。ヌクレオチド塩基は、開始コドンの上流の１つ、少なくとも１つ、少なく
とも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４、もしくは少なくとも５つの位置に挿入または
置換され得る。挿入および／または置換されたヌクレオチドは、同一の塩基（例えば、す
べてＡもしくはすべてＣもしくはすべてＴもしくはすべてＧ）、２個の異なる塩基（例え
ば、ＡおよびＣ、ＡおよびＴ、もしくはＣおよびＴ）、３個の異なる塩基（例えば、Ａ、
Ｃ、およびＴ、もしくはＡ、Ｃ、およびＴ）、または少なくとも４個の異なる塩基であり
得る。非限定的な例として、腫瘍学関連一次構築物内のコーディング領域の上流のグアニ
ン塩基は、アデニン、シトシン、チミン、または本明細書に記載のヌクレオチドのうちの
いずれかで置換され得る。別の非限定的な例において、腫瘍学関連一次構築物におけるグ
アニン塩基の置換は、転写開始部位の下流であり、かつ開始コドンの前の領域に１個のグ
アニン塩基を残すように設計され得る（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｅｓ
ｖｅｌｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１１）４７２（７３４４）：４９９−５０３
を参照のこと）。非限定的な例として、少なくとも５個のヌクレオチドは、転写開始部位
の下流および開始コドンの上流の１つの位置に挿入され得、少なくとも５個のヌクレオチ
ドは、同一の塩基型であり得る。
ｃＤＮＡ鋳型除去および浄化
ｃＤＮＡ鋳型は、デオキシリボヌクレアーゼＩ（ＤＮａｓｅ Ｉ）での処理等であるが
、これに限定されない当技術分野で既知の方法を用いて除去され得る。ＲＮＡ浄化は、Ｂ
ｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）のＡＧＥＮＣＯＵＲＴ（登録商
標）ＣＬＥＡＮＳＥＱ（登録商標）システム；強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換
ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、および疎水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−
ＨＰＬＣ）等であるが、これらに限定されないＨＰＬＣに基づく精製方法等であるが、こ
れらに限定されない精製方法も含み得る。
キャッピングおよび／またはテーリング反応
腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、キャッピングおよび／またはテ
ーリング反応も経り得る。キャッピング反応は、５’キャップを腫瘍学関連一次構築物の
５’末端に付加する当技術分野で既知の方法を用いて行われ得る。キャッピングのための
方法には、ワクシニアキャッピング酵素（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉ
ｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）の使用が含まれるが、これに限定されない。
ポリＡテーリング反応は、２’Ｏ−メチルトランスフェラーゼおよび本明細書に記載の
方法等であるが、これらに限定されない当技術分野で既知の方法を用いて行われ得る。ｃ
ＤＮＡから生成された腫瘍学関連一次構築物がポリＴを含まない場合、腫瘍学関連一次構
築物が浄化される前にポリＡテーリング反応を行うことは有益であり得る。
ｍＲＮＡ精製
一次構築物またはｍｍＲＮＡ精製は、ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ浄化、品質保証、およ
び品質管理を含み得るが、これらに限定されない。ｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ浄化は、Ａ
ＧＥＮＣＯＵＲＴ（登録商標）ビーズ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎｏｍｉ
ｃｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）；ポリＴビーズ；ＬＮＡ（商標）オリゴＴ捕捉プローブ（
ＥＸＩＱＯＮ（登録商標）Ｉｎｃ、Ｖｅｄｂａｅｋ，Ｄｅｎｍａｒｋ）；または強アニオ
ン交換ＨＰＬＣ、弱アニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、および疎
水性相互作用ＨＰＬＣ（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）等であるが、これらに限定されないＨＰＬＣ
に基づく精製方法等であるが、これらに限定されない当技術分野で既知の方法を用いて行
われ得る。「精製されたｍＲＮＡまたはｍｍＲＮＡ」等の「精製された」という用語は、
ポリヌクレオチドとの関連で用いられるとき、少なくとも１つの混入物質から分離される
ものを指す。本明細書で使用するとき、「混入物質」とは、別の物質を不適切、不純、ま
たは劣性にする任意の物質である。したがって、精製された腫瘍学関連ポリヌクレオチド
（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）は、天然に見られる形態もしくは環境とは異なる形態も
しくは環境、またはそれを処理もしくは精製方法に供する前に存在した形態もしくは環境
とは異なる形態もしくは環境において存在する。
品質保証および／または品質管理検査は、ゲル電気泳動、紫外線吸収、または分析的Ｈ
ＰＬＣ等であるが、これらに限定されない方法を用いて行われ得る。
別の実施形態において、腫瘍学関連ｍＲＮＡまたは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、逆転写Ｐ
ＣＲを含むが、これに限定されない方法を用いて配列決定され得る。
一実施形態において、腫瘍学関連ｍＲＮＡまたは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、紫外可視分
光法（ＵＶ／Ｖｉｓ）等であるが、これに限定されない方法を用いて定量化され得る。Ｕ
Ｖ／Ｖｉｓ分光計の非限定的な例には、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（登録商標）分光計（Ｔｈｅｒ
ｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）がある。定量化された腫瘍学関連ｍＲＮＡま
たは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、腫瘍学関連ｍＲＮＡまたは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡが適切な
大きさであり得るかを決定し、腫瘍学関連ｍＲＮＡまたは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの分解が
生じていないことを確認するために分析され得る。腫瘍学関連ｍＲＮＡおよび／または腫
瘍学関連ｍｍＲＮＡの分解は、アガロースゲル電気泳動；強アニオン交換ＨＰＬＣ、弱ア
ニオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、および疎水性相互作用ＨＰＬＣ
（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ）等であるが、これらに限定されないＨＰＬＣに基づく精製方法；液
体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）；キャピラリー電気泳動（ＣＥ）；ならびに
キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）等であるが、これらに限定されない方法を用いて確
認され得る。
シグナル配列
腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、腫瘍学関連ポリペプチドの治療
関連部位への輸送を促進するさらなる特徴もコードし得る。タンパク質輸送を支援するそ
のような特徴の１つに、シグナル配列がある。本明細書で使用するとき、「シグナル配列
」または「シグナルペプチド」とは、それぞれ、コーディング領域またはコードされたポ
リペプチドの５’（またはＮ末端）に組み込まれる、それぞれ、約９〜２００ヌクレオチ
ド長（３〜６０アミノ酸長）のポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。これらの配
列の付加は、１つ以上の分泌経路を通るコードされた腫瘍学関連ポリペプチドの小胞体へ
の輸送をもたらす。いくつかのシグナルペプチドは、タンパク質が輸送された後にシグナ
ルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。
表５は、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡをコードするために組み込まれ得るタンパク質シグナル配列の代表的な一
覧である。
表５． シグナル配列
この表において、ＳＳは分泌シグナルであり、ＭＬＳはミトコンドリアリーダーシグナ
ルである。本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、配列番号９４
〜１５５のシグナル配列のうちのいずれか、またはその断片もしくは変異形をコードする
ように設計され得る。これらの配列は、腫瘍学関連ポリペプチドコーディング領域の最初
、中間、もしくは最後に含まれ得るか、またはあるいは隣接領域に含まれ得る。さらに、
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド一次構築物のうちのいずれかは、配列番号３２〜９
３によって定義される配列のうちの１つ以上も含み得る。これらは、第１の領域またはい
ずれかの隣接領域に存在し得る。
本発明において利用され得るさらなるシグナル配列は、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ
．ｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ．ｄｅ／またはｈｔｔｐ：／／ｐｒｏｌｉｎｅ．ｂｉｃ．
ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｓｐｄｂ／で見出されるデータベース等のデータベースに教示さ
れるシグナル配列を含む。米国特許第８，１２４，３７９号、同第７，４１３，８７５号
、および同第７，３８５，０３４号に記載のものも本発明の範囲内であり、これら各々の
内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。
標的選択
本発明に従って、腫瘍学関連一次構築物は、少なくとも１つの目的とする腫瘍学関連ポ
リペプチドをコードする結合ヌクレオシドの少なくとも１つの第１の領域を含む。
本発明の目的とする腫瘍学関連ポリペプチドまたは「標的」または腫瘍学関連タンパク
質および腫瘍学関連ペプチドが表６および表７に列記される。目的とする腫瘍学関連ポリ
ペプチドをコードする遺伝子の標的番号（Ｔａｒｇｅｔ Ｎｏ）、名称および説明（標的
説明）に加えて、ＥＮＳＥＭＢＬ転写物配列番号（ＥＮＳＴ）および配列番号（トランス
配列番号）、ＥＮＳＥＭＢＬタンパク質配列番号（ＥＮＳＰ）および配列番号（ペプチド
配列番号）、および利用可能な場合、最適化された転写および／またはＯＲＦ配列識別名
（最適化トランス配列番号または最適化ＯＲＦ配列番号）も表６に示される。身近な癌症
候群、癌抑制遺伝子および配列識別子（例えば、ＥＮＳＥＭＢＬ転写配列に関連した配列
識別子のためのＥＮＳＴ配列番号またはＥＮＳＥＭＢＬタンパク質配列に関連した配列識
別子のためのＥＮＳＰ配列番号）、癌抑制遺伝子の機能、染色体位置、観察された腫瘍型
を表７に示す。任意の特定の遺伝子について、１つ以上の変異形またはアイソフォームが
存在し得る。これらが存在する場合、それらも同様に表に示される。当業者であれば、表
に開示されるものが可能性のある隣接領域であることを理解する。これらは、各ＥＮＳＴ
転写物におけるＯＲＦまたはコーディング領域の５’（上流）または３’（下流）のいず
れかにコードされる。コーディング領域は、ＥＮＳＰ配列を教示することによって断定的
かつ具体的に開示される。その結果として、タンパク質をコードする隣接する教示の配列
が隣接領域と見なされる。１つ以上の利用可能なデータベースまたはアルゴリズムを利用
することによって５’および３’隣接領域をさらに特徴付けることも可能である。データ
ベースは、ＥＮＳＴ転写物の隣接領域に含有される特徴に注釈を付けており、これらは、
当技術分野において利用可能である。
表６． 腫瘍学関連標的
表７． 家族性癌症候群標的
タンパク質切断シグナルおよび部位
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリペプチドは、少なくとも１個のタンパク
質切断部位を含有する少なくとも１個のタンパク質切断シグナルを含み得る。タンパク質
切断部位は、Ｎ末端とＣ末端の真ん中、Ｎ末端と中間点との間、中間点とＣ末端との間、
およびこれらの組み合わせ等であるが、これらに限定されないＮ末端とＣ末端との間の任
意の空間で、Ｎ末端、Ｃ末端に位置し得る。
本発明の腫瘍学関連ポリペプチドは、プロタンパク質コンバターゼ（またはプロホルモ
ンコンバターゼ）、トロンビン、または第Ｘａ因子タンパク質切断シグナルを含み得るが
、これらに限定されない。プロタンパク質コンバターゼは、プロホルモンコンバターゼ１
／３（ＰＣ１／３）、ＰＣ２、フーリン、ＰＣ４、ＰＣ５／６、対合塩基性アミノ酸切断
酵素４（ＰＡＣＥ４）、およびＰＣ７として既知の酵母ケキシンに関連した７個の塩基性
アミノ酸特異的サブチリシン様セリンプロテイナーゼと、サブチリシンケキシンアイソザ
イム１（ＳＫＩ−１）およびプロタンパク質コンバターゼサブチリシンケキシン９（ＰＣ
ＳＫ９）と呼ばれる非塩基性残基で切断する他の２個のサブチラーゼを含む９個のプロテ
イナーゼのファミリーである。タンパク質切断シグナルアミノ酸配列の非限定的な例が表
８に列記される。表８において、「Ｘ」は、任意のアミノ酸を指し、「ｎ」は、０、２、
４、または６個のアミノ酸であり得、「＊」は、タンパク質切断部位を指す。表８におい
て、配列番号３３８８５は、ｎが４であるときを指し、配列番号３３８８６は、ｎが６で
あるときを指す。
表８． タンパク質切断部位配列
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、
腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡが少なくとも１個のコードされたタン
パク質切断シグナルを含有するように操作され得る。コードされたタンパク質切断シグナ
ルは、開始コドンの前、開始コドンの後、コーディング領域の前、コーディング領域内に
位置し得、例えば、コーディング領域の中間、開始コドンと中間点との間、中間点と終止
コドンとの間、コーディング領域の後、終止コドンの後、２つの終止コドンの間、終止コ
ドンの後、およびこれらの組み合わせ等であるが、これらに限定されない。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、
少なくとも１個のタンパク質切断部位を含有する少なくとも１個のコードされたタンパク
質切断シグナルを含み得る。コードされたタンパク質切断シグナルは、プロタンパク質コ
ンバターゼ（もしくはプロホルモンコンバターゼ）、トロンビン、および／または第Ｘａ
因子タンパク質切断シグナルを含み得るが、これらに限定されない。当業者であれば、上
の表１または他の既知の方法を用いて、本発明の腫瘍学関連一次構築物またはｍｍＲＮＡ
に含める適切なコードされたタンパク質切断シグナルを決定することができる。例えば、
表８のシグナルから始め、表１のコドンを考慮して、結果として生じる腫瘍学関連ポリペ
プチドにおいてタンパク質シグナルを生成し得る腫瘍学関連一次構築物のシグナルを設計
することができる。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリペプチドは、少なくとも１個のタンパク
質切断シグナルおよび／または部位を含む。
非限定的な例として、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第
７，３７４，９３０号および米国特許公開第２００９０２２７６６０号は、フーリン切断
部位を用いて、発現産物におけるＧＬＰ−１のＮ末端メチオニンをその細胞のゴルジ装置
から切断する。一実施形態において、本発明のポリペプチドは、少なくとも１個のタンパ
ク質切断シグナルおよび／または部位を含むが、但し、ポリペプチドがＧＬＰ−１ではな
いことを条件とする。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、
少なくとも１個のコードされたタンパク質切断シグナルおよび／または部位を含む。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、
少なくとも１個のコードされたタンパク質切断シグナルおよび／または部位を含むが、但
し、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡがＧＬＰ−１をコードしないこと
を条件とする。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、
２つ以上のコーディング領域を含み得る。複数のコーディング領域が本発明の腫瘍学関連
一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡに存在する場合、複数のコーディング領域は、コ
ードされたタンパク質切断部位によって分離され得る。非限定的な例として、腫瘍学関連
一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、順序付けられたパターンで書き込まれ得る。
そのようなパターンは、ＡＸＢＹ形態に従い、式中、ＡおよびＢは、同一もしくは異なる
コーディング領域であり得、かつ／または同一もしくは異なる腫瘍学関連ポリペプチドを
コードし得るコーディング領域であり、ＸおよびＹは、同一もしくは異なるタンパク質切
断シグナルをコードし得るコードされたタンパク質切断シグナルである。第２のそのよう
なパターンは、ＡＸＹＢＺ形態に従い、式中、ＡおよびＢは、同一もしくは異なるコーデ
ィング領域であり得、かつ／または同一もしくは異なる腫瘍学関連ポリペプチドをコード
し得るコーディング領域であり、Ｘ、Ｙ、およびＺは、同一もしくは異なるタンパク質切
断シグナルをコードし得るコードされたタンパク質切断シグナルである。第３のパターン
は、ＡＢＸＣＹ形態に従い、Ａ、Ｂ、およびＣは、同一もしくは異なるコーディング領域
であり得、かつ／または同一もしくは異なる腫瘍学関連ポリペプチドをコードし得るコー
ディング領域であり、ＸおよびＹは、同一もしくは異なるタンパク質切断シグナルをコー
ドし得るコードされたタンパク質切断シグナルである。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリペプチド、腫瘍学関連一次構築物および、腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡは、腫瘍学関連ポリペプチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連
ｍｍＲＮＡがタンパク質切断部位に特異的なプロテアーゼでの処理によって担体領域また
は融合パートナーから放出され得るように、前述のタンパク質切断部位をコードする配列
も含有し得る。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリペプチド、一次構築物、およびｍｍＲＮ
Ａは、２Ａペプチドをコードする配列を含み得る。一実施形態において、この配列を用い
て、２個以上の目的とするポリペプチドのコーディング領域を分離することができる。非
限定的な例として、２Ａペプチドをコードする配列は、コーディング領域Ａとコーディン
グ領域Ｂとの間に存在し得る（Ａ−２Ａｐｅｐ−Ｂ）。２Ａペプチドの存在は、１個の長
いタンパク質のタンパク質Ａ、タンパク質Ｂ、および２Ａペプチドへの切断をもたらす。
タンパク質Ａおよびタンパク質Ｂは、同一または異なる目的とするポリペプチドであり得
る。別の実施形態において、２Ａペプチドを本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次
構築物、および／またはｍｍＲＮＡで用いて、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個
以上のタンパク質を産生することができる。
転写後制御調節因子の組み込み
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／ま
たはｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの転写後制御調節因子を含み得る。これらの転写後制
御調節因子は、小分子、化合物、および制御配列であり得るが、これらに限定されない。
非限定的な例として、転写後制御は、ＧＥＭＳ（商標）（小分子による遺伝子発現調節（
Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅ
ｃｌｕｅｓ））スクリーニング技術を用いてＰＴＣ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ
．（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ）によって特定された小分子を用いて達成
され得る。
転写後制御調節因子は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２
００６０２２７１２号に詳述される方法によってスクリーニングされる遺伝子発現調節因
子、またはこれに記載の遺伝子発現調節因子であり得る。翻訳制御に関与するＲＮＡ制御
配列を特定する方法は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０
０４０６７７２８号に記載されており、遺伝子の非翻訳領域依存的発現を調節する化合物
を特定する方法は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００４
０６５５６１号に記載されている。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／ま
たはｍｍＲＮＡは、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ
の５’および／または３’非翻訳領域に位置する少なくとも１つの転写後制御調節因子を
含み得る。
別の実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／
またはｍｍＲＮＡは、未熟な翻訳終結を調節するために少なくとも１つの転写後制御調節
因子を含み得る。転写後制御調節因子は、それぞれ、参照により全体が本明細書に組み込
まれる、国際公開第ＷＯ２００４０１０１０６号、同第ＷＯ２００６０４４４５６号、同
第ＷＯ２００６０４４６８２号、同第ＷＯ２００６０４４５０３号、および同第ＷＯ２０
０６０４４５０５号に記載の化合物、またはこれらに概説の方法によって見出される化合
物であり得る。非限定的な例として、この化合物は、未熟な翻訳終結を調節するために、
２８ＳリボソームＲＮＡの領域に結合し得る（例えば、参照により全体が本明細書に組み
込まれる、国際公開第ＷＯ２００４０１０１０６号を参照のこと）。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／ま
たはｍｍＲＮＡは、タンパク質発現を変化させるために少なくとも１つの転写後制御調節
因子を含み得る。非限定的な例として、ＶＥＧＦの発現は、それぞれ、参照により全体が
本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００５１１８８５７号、同第ＷＯ２００６０
６５４８０号、同第ＷＯ２００６０６５４７９号、および同第ＷＯ２００６０５８０８８
号に記載の化合物、またはこれらに記載の方法によって見出され得る化合物を用いて制御
され得る。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、翻
訳を制御するために少なくとも１つの転写後制御調節因子を含み得る。一実施形態におい
て、転写後制御調節因子は、ＲＮＡ制御配列であり得る。非限定的な例として、ＲＮＡ制
御配列は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００６０７１９
０３号に記載の方法によって特定され得る。
ＩＩＩ． 修飾
本明細書における腫瘍学関連ポリヌクレオチド（腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関
連ｍＲＮＡ分子等）において、「修飾」または必要に応じて「修飾された」という用語は
、Ａ、Ｇ、Ｕ、またはＣリボヌクレオチドに対する修飾を指す。概して、本明細書におい
て、これらの用語は、天然に存在する５’末端ｍＲＮＡキャップ部分におけるリボヌクレ
オチド修飾を指すようには意図されていない。ポリペプチドにおいて、「修飾」という用
語は、基準の組の２０個のアミノ酸（部分）と比較した修飾を指す。
この修飾は、様々なはっきりと異なる修飾であり得る。いくつかの実施形態において、
コーディング領域、隣接領域、および／または末端領域は、１つ、２つ、または２つ以上
の（任意に異なる）ヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含有し得る。いくつかの実施
形態において、細胞に導入された修飾腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築
物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、未修飾腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一
次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡと比較して、細胞における分解の減少を呈し得る
。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは
、糖、核酸塩基、またはヌクレオシド間結合（例えば、結合リン酸／ホスホジエステル結
合／ホスホジエステル骨格への）等に対する任意の有用な修飾を含み得る。ピリミジン核
酸塩基の１個以上の原子は、任意に置換されたアミノ、任意に置換されたチオール、任意
に置換されたアルキル（例えば、メチルもしくはエチル）、またはハロ（例えば、クロロ
もしくはフルオロ）と置き換えれ得るか、またはこれらで置換され得る。ある特定の実施
形態において、修飾（例えば、１つ以上の修飾）は、糖およびヌクレオシド間結合の各々
において存在する。本発明に従う修飾は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸
（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮ
Ａ）、またはこれらのハイブリッド）に対するリボ核酸（ＲＮＡ）の修飾であり得る。さ
らなる修飾が本明細書に記載される。
本明細書に記載されるように、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次
構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、ｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫応答を実
質的に誘導しない。誘導された自然免疫応答の特徴には、１）炎症誘発性サイトカインの
発現の増加、２）細胞内ＰＲＲ（ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５等の活性化、および／または３）
タンパク質翻訳の終結もしくは減少が含まれる。
ある特定の実施形態において、細胞に導入された修飾核酸分子を細胞内で分解すること
が望ましくあり得る。例えば、修飾腫瘍学関連核酸分子の分解は、タンパク質産生の正確
なタイミングが所望される場合に好ましくあり得る。したがって、いくつかの実施形態に
おいて、本発明は、指向された様式で細胞内で作用され得る、分解ドメインを含有する修
飾腫瘍学関連核酸分子を提供する。別の態様において、本開示は、腫瘍学関連ポリヌクレ
オチドとの主溝相互作用（例えば、結合）パートナーの結合を攪乱し得るヌクレオシドま
たはヌクレオチドを含む腫瘍学関連ポリヌクレオチドを提供する（例えば、修飾ヌクレオ
チドは、未修飾ヌクレオチドと比較して、主溝相互作用パートナーに対して低下した結合
親和性を有する場合）。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは
、他の作用物質（例えば、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉ
ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん形成を誘
導するＲＮＡ、アプタマー、ベクター等）を任意に含み得る。いくつかの実施形態におい
て、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
は、１個以上のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）および１個以上の修飾ヌクレオシドま
たはヌクレオチド（例えば、ｍｍＲＮＡ分子）を含み得る。これらの腫瘍学関連ポリヌク
レオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡについての詳細は、以下
に続く。
腫瘍学関連ポリヌクレオチドおよび腫瘍学関連一次構築物
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、目的とする
ポリペプチドをコードする結合ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端に位置
する第１の隣接領域、および第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域を含む。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（Ｉａ）
もしくは式（Ｉａ−１）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、
式中、
Ｕが、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎｕが、０〜２
の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたアルキルであり
、
−−−が、一重結合であるか、または不在であり、
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々が、独
立して、存在する場合、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアルキル、
任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたア
ルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアル
コキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に置換されたアミノ、アジド、任
意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノア
ルケニル、任意に置換されたアミノアルキニルであるか、または不在であり、Ｒ３と、Ｒ
１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、またはＲ５のうちの１つ以上との組み合わせ（例えば、
Ｒ１’とＲ３の組み合わせ、Ｒ１”とＲ３の組み合わせ、Ｒ２’とＲ３の組み合わせ、Ｒ
２”とＲ３の組み合わせ、またはＲ５とＲ３の組み合わせ）が一緒になって、任意に置換
されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを形成し得、および、それら
が結合する炭素と一緒になって、任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三
環式、または四環式ヘテロシクリル）を提供し得、Ｒ５と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、ま
たはＲ２”のうちの１つ以上との組み合わせ（例えば、Ｒ１’とＲ５の組み合わせ、Ｒ１
”とＲ５の組み合わせ、Ｒ２’とＲ５の組み合わせ、またはＲ２”とＲ５の組み合わせ）
が一緒になって、任意に置換されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレン
を形成し得、および、それらが結合する炭素と一緒になって、任意に置換されたヘテロシ
クリル（例えば、二環式、三環式、または四環式ヘテロシクリル）を提供し得、Ｒ４と、
Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３、またはＲ５のうちの１つ以上との組み合わせが
一緒になって、任意に置換されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを
形成し得、および、それらが結合する炭素と一緒になって、任意に置換されたヘテロシク
リル（例えば、二環式、三環式、または四環式ヘテロシクリル）を提供し得、ｍ’および
ｍ”の各々が、独立して、０〜３（例えば、０〜２、０〜１、１〜３、または１〜２）の
整数であり、
Ｙ１、Ｙ２、およびＹ３の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意に置
換されたアルキレン、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、式中、ＲＮ１が
、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアル
キニル、任意に置換されたアリールであるか、または不在であり、
各Ｙ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意に置換されたアルキ
ル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアル
コキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意
に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、または任意に置
換されたアミノであり、
各Ｙ５が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意に置換されたアルキレン（例えば、メチレン
）、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、
ｎが、１〜１００，０００の整数であり、
Ｂが、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、またはこれらの誘導体）であり、Ｂと
Ｒ１’の組み合わせ、ＢとＲ２’の組み合わせ、ＢとＲ１”の組み合わせ、もしくはＢと
Ｒ２”の組み合わせが、それらが結合する炭素と一緒になって、二環式基（例えば、二環
式ヘテロシクリル）を任意に形成し得るか、またはＢ、Ｒ１”、およびＲ３の組み合わせ
、もしくはＢ、Ｒ２”、およびＲ３の組み合わせが、三環式もしくは四環式基（例えば、
本明細書の式（ＩＩｏ）−（ＩＩｐ）等の三環式または四環式ヘテロシクリル）を任意に
形成し得る。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、
またはｍｍＲＮＡは、修飾リボースを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域
、または第２の隣接領域）は、式（Ｉａ−２）〜（Ｉａ−５）を有するｎ個の結合ヌクレ
オシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（Ｉｂ）
もしくは式（Ｉｂ−１）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、
式中、
Ｕが、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎｕが、０〜２
の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたアルキルであり
、
−−−が、一重結合であるか、または不在であり、
Ｒ１、Ｒ３’、Ｒ３”、およびＲ４の各々が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意
に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキ
シ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置
換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に置換さ
れたアミノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキル、任
意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニルであるか、または
不在であり、Ｒ１とＲ３’の組み合わせまたはＲ１とＲ３”の組み合わせが一緒になって
、任意に置換されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを形成し得（例
えば、ロックド核酸を産生するために）、
各Ｒ５が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換
されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオ
キシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシであ
るか、または不在であり、
Ｙ１、Ｙ２、およびＹ３の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意に置
換されたアルキレン、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、式中、ＲＮ１が
、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアル
キニル、または任意に置換されたアリールであり、
各Ｙ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意に置換されたアルキ
ル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアル
コキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意
に置換されたアルコキシアルコキシ、または任意に置換されたアミノであり、
ｎが、１〜１００，０００の整数であり、
Ｂが、核酸塩基である。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（Ｉｃ）
：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、
式中、
Ｕが、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎｕが、０〜２
の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたアルキルであり
、
−−−が、一重結合であるか、または不在であり、
Ｂ１、Ｂ２、およびＢ３の各々が、独立して、核酸塩基（例えば、本明細書に記載のプ
リン、ピリミジン、またはその誘導体）、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換
されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任
意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置換され
たアルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に置換されたア
ミノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置
換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニルであり、Ｂ１、Ｂ
２、およびＢ３のうちの１つのみが核酸塩基であり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒ３、およびＲ５の各々が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキ
シ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換さ
れたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノア
ルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコ
キシ、任意に置換されたアミノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換された
アミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミノア
ルキニルであり、
Ｙ１、Ｙ２、およびＹ３の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意に置
換されたアルキレン、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、式中、ＲＮ１が
、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアル
キニル、または任意に置換されたアリールであり、
各Ｙ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意に置換されたアルキ
ル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアル
コキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意
に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、または任意に置
換されたアミノであり、
各Ｙ５が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意に置換されたアルキレン（例えば、メチレン
）、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、
ｎが、１〜１００，０００の整数であり、
Ｕを含む環が、１つ以上の二重結合を含み得る。
特定の実施形態において、Ｕを含む環は、Ｕ−ＣＢ３Ｒｂ３間またはＣＢ３Ｒｂ３−Ｃ
Ｂ２Ｒｂ２間に二重結合を有しない。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（Ｉｄ）
：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、
式中、
Ｕが、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎｕが、０〜２
の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたアルキルであり
、
各Ｒ３が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアルキル、
任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたア
ルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアル
コキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に置換されたアミノ、アジド、任
意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノア
ルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニルであり、
Ｙ１、Ｙ２、およびＹ３の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意に置
換されたアルキレン、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、式中、ＲＮ１が
、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアル
キニル、または任意に置換されたアリールであり、
各Ｙ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意に置換されたアルキ
ル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアル
コキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意
に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、または任意に置
換されたアミノであり、
各Ｙ５が、独立して、Ｏ、Ｓ、任意に置換されたアルキレン（例えば、メチレン）、ま
たは任意に置換されたヘテロアルキレンであり、
ｎが、１〜１００，０００の整数であり、
Ｂが、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、またはその誘導体）である。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（Ｉｅ）
：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、
式中、
Ｕ’およびＵ”の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）ｎｕ
であり、式中、ｎｕが、０〜２の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任
意に置換されたアルキルであり、
各Ｒ６が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアルキル、
任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたア
ルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアル
コキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に置換されたアミノ、アジド、任
意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノア
ルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニルであり、
各Ｙ５’が、独立して、Ｏ、Ｓ、任意に置換されたアルキレン（例えば、メチレンもし
くはエチレン）、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、
ｎが、１〜１００，０００の整数であり、
Ｂが、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、またはその誘導体）である。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（Ｉｆ）
もしくは（Ｉｆ−１）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、
式中、
Ｕ’およびＵ”の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、またはＣ（ＲＵ）
ｎｕであり、式中、ｎｕが、０〜２の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、また
は任意に置換されたアルキルであり（例えば、Ｕ’がＯであり、Ｕ”がＮである）、
−−−が、一重結合であるか、または不在であり、
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ３、およびＲ４の各々が、独立して、Ｈ、ハロ、
ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意
に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換された
アミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキ
シアルコキシ、任意に置換されたアミノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置
換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノ
アルキニルであるか、または不在であり、Ｒ１’とＲ３の組み合わせ、Ｒ１”とＲ３の組
み合わせ、Ｒ２’とＲ３の組み合わせ、またはＲ２”とＲ３の組み合わせが一緒になって
、任意に置換されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを形成し得（例
えば、ロックド核酸を産生するため）、ｍ’およびｍ”の各々が、独立して、０〜３（例
えば、０〜２、０〜１、１〜３、または１〜２）の整数であり、
Ｙ１、Ｙ２、およびＹ３の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意に置
換されたアルキレン、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、式中、ＲＮ１が
、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアル
キニル、任意に置換されたアリールであるか、または不在であり、
各Ｙ４が、独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意に置換されたアルキ
ル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアル
コキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意
に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、または任意に置
換されたアミノであり、
各Ｙ５が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意に置換されたアルキレン（例えば、メチレン
）、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、
ｎが、１〜１００，０００の整数であり、
Ｂが、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、またはその誘導体）である。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）、（Ｉａ−１）〜（Ｉａ−３）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ）、およ
び（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ））、Ｕを含む環は、１つまたは２つの二重結合を有する。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ１、Ｒ１’、およびＲ１”の各々は、存在する場合、Ｈである。さらなる実施形態に
おいて、Ｒ２、Ｒ２’、およびＲ２”の各々は、存在する場合、独立して、Ｈ、ハロ（例
えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意に置換されたアルコキシ（例えば、メトキシもしく
はエトキシ）、または任意に置換されたアルコキシアルコキシである。特定の実施形態に
おいて、アルコキシアルコキシは、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）
ｓ３ＯＲ’であり、式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であ
り、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、
１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’が、ＨまたはＣ１〜２０アルキルである。
いくつかの実施形態において、ｓ２は０であり、ｓ１は１または２であり、ｓ３は０また
は１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ２、Ｒ２’、およびＲ２”の各々は、存在する場合、Ｈである。さらなる実施形態に
おいて、Ｒ１、Ｒ１’、およびＲ１”の各々は、存在する場合、独立して、Ｈ、ハロ（例
えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意に置換されたアルコキシ（例えば、メトキシまたは
エトキシ）、または任意に置換されたアルコキシアルコキシである。特定の実施形態にお
いて、アルコキシアルコキシは、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ
３ＯＲ’であり、式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり
、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１
〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’が、ＨまたはＣ１〜２０アルキルである。い
くつかの実施形態において、ｓ２は０であり、ｓ１は１または２であり、ｓ３は０または
１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロ
キシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ（例えば、メトキシもし
くはエトキシ）、または任意に置換されたアルコキシアルコキシである。特定の実施形態
において、Ｒ３がＨであり、Ｒ４がＨであり、Ｒ５がＨであるか、またはＲ３、Ｒ４、お
よびＲ５のすべてがＨである。特定の実施形態において、Ｒ３がＣ１〜６アルキルであり
、Ｒ４がＣ１〜６アルキルであり、Ｒ５がＣ１〜６アルキルであるか、またはＲ３、Ｒ４
、およびＲ５のすべてがＣ１〜６アルキルである。特定の実施形態において、Ｒ３もＲ４
もいずれもＨであり、Ｒ５はＣ１〜６アルキルである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ３およびＲ５が一緒になって、任意に置換されたアルキレンまたは任意に置換された
ヘテロアルキレンを形成し、かつそれらが結合する炭素と一緒になって、トランス−３’
，４’類似体等の任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環式、または四
環式ヘテロシクリル）を提供し、Ｒ３およびＲ５が一緒になって、ヘテロアルキレンを形
成する（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−であって、式中
、ｂ１、ｂ２、およびｂ３の各々が、独立して、０〜３の整数である）。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ３と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、またはＲ５のうちの１つ以上が一緒になっ
て、任意に置換されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを形成し、そ
れらが結合する炭素と一緒になって、任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式
、三環式、または四環式ヘテロシクリル）を提供し、Ｒ３と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、
Ｒ２”、またはＲ５のうちの１つ以上が一緒になって、ヘテロアルキレンを形成する（例
えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−であって、式中、ｂ１、ｂ
２、およびｂ３の各々が、独立して、０〜３の整数である）。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ５と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、またはＲ２”のうちの１つ以上が一緒になって、任
意に置換されたアルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを形成し、それらが
結合する炭素と一緒になって、任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環
式、または四環式ヘテロシクリル）を提供し、Ｒ５と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、または
Ｒ２”のうちの１つ以上が一緒になって、ヘテロアルキレンを形成する（例えば、−（Ｃ
Ｈ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−であって、式中、ｂ１、ｂ２、およびｂ
３の各々が、独立して、０〜３の整数である）。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、各Ｙ２は、独立して、Ｏ、Ｓ、または−ＮＲＮ１−であり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任意
に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、ま
たは任意に置換されたアリールである。特定の実施形態において、Ｙ２は、ＮＲＮ１−で
あり、式中、ＲＮ１が、Ｈまたは任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル
、例えば、メチル、エチル、イソプロピル、またはｎ−プロピル）である。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、各Ｙ３は、独立して、ＯまたはＳである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｒ１は、Ｈであり、各Ｒ２は、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ
、任意に置換されたアルコキシ（例えば、メトキシもしくはエトキシ）、または任意に置
換されたアルコキシアルコキシであり（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ
１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４
）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜
６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’が、ＨまたはＣ１〜２０アル
キルであり、例えば、式中、ｓ２が０であり、ｓ１が１または２であり、ｓ３が０または
１であり（例えば、Ｒ’が、Ｃ１〜６アルキルであり）、各Ｙ２は、独立して、Ｏまたは
−ＮＲＮ１−であり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換され
たアルケニル、任意に置換されたアルキニル、または任意に置換されたアリールであり（
例えば、式中、ＲＮ１が、Ｈまたは任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキ
ル、例えば、メチル、エチル、イソプロピル、またはｎ−プロピル）であり）、各Ｙ３は
、独立して、ＯまたはＳ（例えば、Ｓ）である。さらなる実施形態において、Ｒ３は、Ｈ
、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換され
たアルコキシ（例えば、メトキシもしくはエトキシ）、または任意に置換されたアルコキ
シアルコキシである。なおさらなる実施形態において、各Ｙ１は、独立して、Ｏまたは−
ＮＲＮ１−であり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換された
アルケニル、任意に置換されたアルキニル、または任意に置換されたアリールであり（例
えば、式中、ＲＮ１が、Ｈまたは任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル
、例えば、メチル、エチル、イソプロピル、またはｎ−プロピル）であり）、各Ｙ４は、
独立して、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたア
ルコキシ、任意に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、
または任意に置換されたアミノである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、各Ｒ１は、独立して、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意に置換された
アルコキシ（例えば、メトキシもしくはエトキシ）、または任意に置換されたアルコキシ
アルコキシであり（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３Ｏ
Ｒ’であり、式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ
２およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６
、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１〜２０アルキルであり（例えば
、式中、ｓ２が０であり、ｓ１が１または２であり、ｓ３が０または１であり、Ｒ’がＣ
１〜６アルキルであり）、Ｒ２がＨであり、各Ｙ２は、独立して、Ｏまたは−ＮＲＮ１−
であり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル
、任意に置換されたアルキニル、または任意に置換されたアリールであり（例えば、式中
、ＲＮ１が、Ｈまたは任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、例えば、
メチル、エチル、イソプロピル、またはｎ−プロピル）であり）、各Ｙ３は、独立して、
ＯまたはＳ（例えば、Ｓ）である。さらなる実施形態において、Ｒ３は、Ｈ、ハロ（例え
ば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ
（例えば、メトキシもしくはエトキシ）、または任意に置換されたアルコキシアルコキシ
である。なおさらなる実施形態において、各Ｙ１は、独立して、Ｏまたは−ＮＲＮ１−で
あり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、
任意に置換されたアルキニル、または任意に置換されたアリールであり（例えば、式中、
ＲＮ１が、Ｈまたは任意に置換されたアルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、例えば、メ
チル、エチル、イソプロピル、またはｎ−プロピル）であり）、各Ｙ４は、独立して、Ｈ
、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任
意に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、または任意に
置換されたアミノである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）−（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｕを含む環は、β−Ｄ（例えば、β−Ｄ−リボ）配置である。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｕを含む環は、α−Ｌ（例えば、α−Ｌ−リボ）配置である。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、１つ以上のＢがシュードウリジン（ψ）または５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）である
ことはない。いくつかの実施形態において、ｎ個のＢ核酸塩基の約１０％〜約１００％は
、ψでもｍ５Ｃでもない（例えば、ｎ個のＢの１０％〜２０％、１０％〜３５％、１０％
〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７５％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％
〜９８％、１０％〜９９％、２０％〜３５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％
〜７５％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜９８％、２０％〜９９％、２０％
〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７５％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０
％〜９８％、５０％〜９９％、５０％〜１００％、７５％〜９０％、７５％〜９５％、７
５％〜９８％、７５％〜９９％、および７５％〜１００％は、ψでもｍ５Ｃでもない）。
いくつかの実施形態において、Ｂは、ψでもｍ５Ｃでもない。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいくつかの実施形態に
おいて（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（
ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩ
ｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））
、Ｂが、シトシン、グアニン、ウラシル、およびアデニンから選択される未修飾核酸塩基
であるとき、Ｙ１、Ｙ２、またはＹ３のうちの少なくとも１つは、Ｏではない。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、修飾リボースを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第
２の隣接領域）は、式（ＩＩａ）〜（ＩＩｃ）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含む。特定の実施形態において、Ｕは、ＯまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎｕが
、０〜２の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたアルキ
ルである（例えば、Ｕが、−ＣＨ２−または−ＣＨ−である）。他の実施形態では、Ｒ１
、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール
、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニ
ルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任
意に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に
置換されたアミノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキ
ル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニルであるか、
または不在であり（例えば、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任
意に置換されたアルキル、または任意に置換されたアルコキシであり、各Ｒ３およびＲ４
は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、Ｒ５は、Ｈまたはヒドロキシ
であり）、−−−は、一重結合または二重結合である。
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドまたはｍｍＲＮＡは、式（ＩＩｂ−１）〜
（ＩＩｂ−２）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含む。いくつかの実施形態において、Ｕは、ＯまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎ
ｕが、０〜２の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたア
ルキルである（例えば、Ｕは、−ＣＨ２−または−ＣＨ−である）。他の実施形態では、
Ｒ１およびＲ２ の各々は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換さ
れたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意
に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意に置換された
アルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意に置換されたアミ
ノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換
されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニルであるか、または不在であ
る（例えば、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意に置換された
アルキル、または任意に置換されたアルコキシ、例えば、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、アルキ
ル、またはアルコキシである）。特定の実施形態において、Ｒ２は、ヒドロキシまたは任
意に置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、または本明細書に記載のいず
れか）である。
特定の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮ
Ａは、式（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−４）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含む。いくつかの実施形態において、Ｕは、ＯまたはＣ（ＲＵ）ｎｕであり、式中、ｎ
ｕが、０〜２の整数であり、各ＲＵが、独立して、Ｈ、ハロ、または任意に置換されたア
ルキルである（例えば、Ｕが、−ＣＨ２−または−ＣＨ−である）。いくつかの実施形態
において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３の各々は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオー
ル、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケ
ニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、
任意に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたヒドロキシアルコキシ、任意
に置換されたアミノ、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアミノアル
キル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニルであるか
、または不在である（例えば、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、
任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたアルコキシ、例えば、Ｈ、ハロ、ヒ
ドロキシ、アルキル、またはアルコキシであり、各Ｒ３は、独立して、Ｈまたは任意に置
換されたアルキル）である）。特定の実施形態において、Ｒ２は、任意に置換されたアル
コキシ（例えば、メトキシもしくはエトキシ、または本明細書に記載のいずれか）である
。特定の実施形態において、Ｒ１は、任意に置換されたアルキルであり、Ｒ２は、ヒドロ
キシである。他の実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシであり、Ｒ２は、任意に置換された
アルキルである。さらなる実施形態において、Ｒ３は、任意に置換されたアルキルである
。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、非環式修飾リボースを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌ
クレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、ま
たは第２の隣接領域）は、式（ＩＩｄ）〜（ＩＩｆ）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含む。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、非環式修飾ヘキシトールを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域
、または第２の隣接領域）は、式（ＩＩｇ）〜（ＩＩｊ）：
のｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む
。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、短縮または延長したリボース環を有する糖部分を含む。いくつかの実施形態に
おいて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、第１の
領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（ＩＩｋ）〜（ＩＩｍ）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、式中、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、およびＲ２”の各々が、独立して、Ｈ、ハロ、
ヒドロキシ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換され
たアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアル
コキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシであるか、または不在であり、Ｒ２’と
Ｒ３の組み合わせまたはＲ２”とＲ３の組み合わせが一緒になって、任意に置換されたア
ルキレンまたは任意に置換されたヘテロアルキレンを形成し得る。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、ロックド修飾リボースを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリ
ヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、
または第２の隣接領域）は、式（ＩＩｎ）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、式中、Ｒ３’が、Ｏ、Ｓ、または−ＮＲＮ１−であり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任
意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、
または任意に置換されたアリールであり、Ｒ３”が、任意に置換されたアルキレン（例え
ば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）または任意に置
換されたヘテロアルキレン（例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２
ＯＣＨ２−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−）である（例えば、Ｒ３’がＯであり、
Ｒ３”が任意に置換されたアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、もしく
は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）である）。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、式（ＩＩｎ−１）〜（ＩＩ−ｎ２）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、式中、Ｒ３’が、Ｏ、Ｓ、または−ＮＲＮ１−であり、式中、ＲＮ１が、Ｈ、任
意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、
または任意に置換されたアリールであり、Ｒ３”が、任意に置換されたアルキレン（例え
ば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）または任意に置
換されたヘテロアルキレン（例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２
ＯＣＨ２−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−）である（例えば、Ｒ３’がＯであり、
Ｒ３”が任意に置換されたアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、もしく
は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）である）。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、四環式ヘテロシクリルを形成するロックド修飾リボースを含む。いくつかの実
施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば
、第１の領域、第１の隣接領域、または第２の隣接領域）は、式（ＩＩｏ）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシド、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体
を含み、式中、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｃ、Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、Ｔ２”、Ｖ１、およびＶ
３は、本明細書に記載の通りである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの式のうちのいずれかは
、本明細書に記載の１個以上の核酸塩基（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ４３））を含み得る
。
一実施形態において、本発明は、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを
調製する方法を提供し、このポリヌクレオチドは、本明細書で定義される式（Ｉａ）：
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、この方法は、本明細書で定義される式（ＩＩＩａ）
：
の化合物を、ＲＮＡポリメラーゼおよびｃＤＮＡ鋳型と反応させることを含む。
さらなる実施形態において、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、ｍｍ
ＲＮＡ分子）を含むポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを増幅する方法を
提供し、この方法は、本明細書で定義される式（ＩＩＩａ）の化合物を、プライマー、ｃ
ＤＮＡ鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼと反応させることを含む。
一実施形態において、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、ｍｍＲＮＡ
分子）を含むポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを調製する方法を提供し
、このポリヌクレオチドは、本明細書で定義される式（Ｉａ）：
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、この方法は、本明細書で定義される式（ＩＩＩａ−
１）：
の化合物を、ＲＮＡポリメラーゼおよびｃＤＮＡ鋳型と反応させることを含む。
さらなる実施形態において、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、ｍｍ
ＲＮＡ分子）を含むポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを増幅する方法を
提供し、この方法は、
本明細書で定義される式（ＩＩＩａ−１）の化合物を、プライマー、ｃＤＮＡ鋳型、お
よびＲＮＡポリメラーゼと反応させることを含む。
一実施形態において、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、ｍｍＲＮＡ
分子）を含む修飾ｍＲＮＡを調製する方法を提供し、このポリヌクレオチドは、本明細書
で定義される式（Ｉａ−２）：
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、この方法は、本明細書で定義される式（ＩＩＩａ−
２）：
の化合物を、ＲＮＡポリメラーゼおよびｃＤＮＡ鋳型と反応させることを含む。
さらなる実施形態において、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、ｍｍ
ＲＮＡ分子）を含む修飾ｍＲＮＡを増幅する方法を提供し、この方法は、
本明細書で定義される式（ＩＩＩａ−２）の化合物を、プライマー、ｃＤＮＡ鋳型、お
よびＲＮＡポリメラーゼと反応させることを含む。
いくつかの実施形態において、反応は、１〜約７，０００回繰り返され得る。本明細書
の実施形態のうちのいずれかにおいて、Ｂは、式（ｂ１）〜（ｂ４３）の核酸塩基であり
得る。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、本明細書に記載の５
’および／または３’隣接領域を任意に含み得る。
修飾ＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）分子
本発明は、修飾ＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）分子のビルディングブロック、例えば、修飾リボ
ヌクレオシド、修飾リボヌクレオチドも含む。例えば、これらのビルディングブロックは
、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの調製に有用で
あり得る。
いくつかの実施形態において、ビルディングブロック分子は、式（ＩＩＩａ）もしくは
（ＩＩＩａ−１）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、置換基は、本明細書
に記載のもの（例えば、式（Ｉａ）および（Ｉａ−１））であり、Ｂが、シトシン、グア
ニン、ウラシル、およびアデニンから選択される未修飾核酸塩基であるとき、Ｙ１、Ｙ２
、またはＹ３のうちの少なくとも１つは、Ｏではない。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、式（ＩＶａ）〜（ＩＶｂ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記
載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。特定の実施形
態において、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（
ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のうちのいずれか１つ
、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、または（ｂ３０））と組み
合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾シトシ
ン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、および（ｂ３２）〜
（ｂ３６）のうちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）または（ｂ３２））と組み合わ
せられる。特定の実施形態において、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修飾グアニン（
例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４０）のうちのいずれか１つ
）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）は、修
飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のうちの
いずれか１つ）と組み合わせられる。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記
載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。特定の実施形
態において、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうちの１つは、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ
１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のうちのいず
れか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、または（ｂ３０）
）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうちの１
つは、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、お
よび（ｂ３２）〜（ｂ３６）のうちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）または（ｂ３
２））と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）のうち
の１つは、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４
０）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＶｃ
）〜（ＩＶｋ）のうちの１つは、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）およ
び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。
他の実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得
るビルディングブロック分子は、式（Ｖａ）もしくは（Ｖｂ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記
載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。
他の実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得
るビルディングブロック分子は、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記
載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。特定の実施形
態において、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうちの１つは、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ
１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のうちのいず
れか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、または（ｂ３０）
）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうちの１
つは、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、お
よび（ｂ３２）〜（ｂ３６）のうちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）または（ｂ３
２））と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）のうち
の１つは、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４
０）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸａ
）〜（ＩＸｄ）のうちの１つは、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）およ
び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。
他の実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得
るビルディングブロック分子は、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記
載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。特定の実施形
態において、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうちの１つは、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ
１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のうちのいず
れか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、または（ｂ３０）
）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうちの１
つは、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、お
よび（ｂ３２）〜（ｂ３６）のうちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）または（ｂ３
２））と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）のうち
の１つは、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４
０）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｅ
）〜（ＩＸｇ）のうちの１つは、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）およ
び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。
他の実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得
るビルディングブロック分子は、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記
載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。特定の実施形
態において、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうちの１つは、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ
１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、および（ｂ２８）〜（ｂ３１）のうちのいず
れか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、または（ｂ３０）
）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうちの１
つは、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、お
よび（ｂ３２）〜（ｂ３６）のうちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）または（ｂ３
２））と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）のうち
の１つは、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７）〜（ｂ４
０）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｈ
）〜（ＩＸｋ）のうちの１つは、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）およ
び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。
他の実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得
るビルディングブロック分子は、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有し、式中、各ｒ１およびｒ２は
、独立して、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数であり、Ｂは、本
明細書に記載のもの（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）である。特
定の実施形態において、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）のうちの１つは、修飾ウラシル（例え
ば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、および（ｂ２８）〜（ｂ３１）の
うちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、または
（ｂ３０））と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）
のうちの１つは、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ
２５）、および（ｂ３２）〜（ｂ３６）のうちのいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）ま
たは（ｂ３２））と組み合わせられる。特定の実施形態において、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸ
ｒ）のうちの１つは、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）および（ｂ３７
）〜（ｂ４０）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。特定の実施形態において、
式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）のうちの１つは、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ
２０）および（ｂ４１）〜（ｂ４３）のうちのいずれか１つ）と組み合わせられる。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体からなる群から選択され得、式中、
各ｒは、独立して、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数である。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体からなる群から選択され得、式中、
各ｒは、独立して、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数であり、ｓ
１は、本明細書に記載の通りである。
いくつかの実施形態において、核酸（例えば、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリヌクレオチド、
一次構築物、またはｍｍＲＮＡ）に組み込まれ得るビルディングブロック分子は、修飾ウ
リジンである（例えば、以下からなる群から選択されるもの、またはその薬学的に許容さ
れる塩もしくは立体異性体であり、式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、およびｒは、本明細
書に記載の通りである（例えば、各ｒは、独立して、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、
または１〜５の整数である）：
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、修飾シチジンである（例えば、以下からなる
群から選択されるもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり、式
中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、およびｒは、本明細書に記載の通りである（例えば、各ｒ
は、独立して、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、または１〜５の整数である）：
例えば、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得るビルディン
グブロック分子は、
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり得、式中、各ｒは、独立して
、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数である。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、修飾アデノシンである（例えば、以下からな
る群から選択されるもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり、
式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、およびｒは、本明細書に記載の通りである（例えば、各
ｒは、独立して、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、または１〜５の整数である）：
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組
み込まれ得るビルディングブロック分子は、修飾グアノシンである（例えば、以下からな
る群から選択されるもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり、
式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、およびｒは、本明細書に記載の通りである（例えば、各
ｒは、独立して、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、または１〜５の整数である）：
いくつかの実施形態において、化学修飾は、（例えば、ピリミジンヌクレオシド、例え
ば、シトシンまたはウラシルの）環のＣ−５のＣ基のＮとの置換（例えば、Ｃ−５の＞Ｃ
Ｈ基の＞ＮＲＮ１基との置換（式中、ＲＮ１は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであ
る））を含み得る。例えば、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込
まれ得るビルディングブロック分子は、
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり得、式中、各ｒは、独立して
、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数である。
別の実施形態において、化学修飾は、シトシンのＣ−５の水素のハロ（例えば、Ｂｒ、
Ｃｌ、Ｆ、もしくはＩ）または任意に置換されたアルキル（例えば、メチル）との置換を
含み得る。例えば、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得る
ビルディングブロック分子は、
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり得、式中、各ｒは、独立して
、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数である。
なおさらなる実施形態において、化学修飾は、Ｃ−４位でＮＨ２によって、かつＣ−５
位で炭素原子によって形成される縮合環を含み得る。例えば、ポリヌクレオチド、一次構
築物、またはｍｍＲＮＡに組み込まれ得るビルディングブロック分子は、
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であり得、式中、各ｒは、独立して
、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、または１〜５）の整数である。
糖における修飾
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載のＲＮＡ
またはｍＲＮＡ）に組み込まれ得る修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチド（例えば、ビル
ディングブロック分子）は、リボ核酸の糖において修飾され得る。例えば、２’ヒドロキ
シル基（ＯＨ）は、いくつかの異なる置換基で修飾または置換され得る。２’位での例示
の置換には、Ｈ、ハロ、任意に置換されたＣ１〜６アルキル、任意に置換されたＣ１〜６
アルコキシ、任意に置換されたＣ６〜１０アリールオキシ、任意に置換されたＣ３〜８シ
クロアルキル、任意に置換されたＣ３〜８シクロアルコキシ、任意に置換されたＣ６〜１
０アリールオキシ、任意に置換されたＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ、任意に
置換されたＣ１〜１２（ヘテロシクリル）オキシ、糖（例えば、リボース、ペントース、
または本明細書に記載のいずれか）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２
ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ（式中、ＲがＨまたは任意に置換されたアルキルであり、
ｎが０〜２０（例えば、０〜４、０〜８、０〜１０、０〜１６、１〜４、１〜８、１〜１
０、１〜１６、１〜２０、２〜４、２〜８、２〜１０、２〜１６、２〜２０、４〜８、４
〜１０、４〜１６、および４〜２０）の整数である）、２’−ヒドロキシルがＣ１〜６ア
ルキレンまたはＣ１〜６ヘテロアルキレン架橋によって同一のリボース糖の４’−炭素に
結合される「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（例示の架橋には、メチレン、プロピレン、エー
テル、またはアミノ架橋が挙げられる）、本明細書で定義されるアミノアルキル、本明細
書で定義されるアミノアルコキシ、本明細書で定義されるアミノ、および本明細書で定義
されるアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。
概して、ＲＮＡは、酸素を有する５員環の糖類リボースを含む。非限定的な例示の修飾
ヌクレオチドには、リボースの酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、またはアルキレン、例えば、
メチレンまたはエチレンとの）置換、二重結合の付加（例えば、リボースをシクロペンテ
ニルまたはシクロヘキセニルと置換するため）、リボースの環縮小（例えば、シクロブタ
ンまたはオキセタンの４員環を形成するため）、リボースの環拡大（例えば、無水ヘキシ
トール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、および
ホスホラミデート骨格も有するモルホリノ等のさらなる炭素またはヘテロ原子を有する６
または７員環を形成するため）、多環式形態（例えば、トリシクロ、および「アンロック
ド」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ−ＧＮＡまたはＳ−ＧＮＡ、
リボースがホスホジエステル結合に結合するグリコール単位で置換される部分）、トレオ
ース核酸（ＴＮＡ、リボースがα−Ｌ−トレオフラノシル−（３’→２’）で置換される
部分）、ならびにペプチド核酸（ＰＮＡ、２−アミノ−エチル−グリシン結合がリボース
およびホスホジエステル骨格を置換する部分）が挙げられる。糖基は、リボースの対応す
る炭素の立体化学配置とは逆の立体化学配置を有する１個以上の炭素も含有し得る。した
がって、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ分子は、糖として、例えば、
アラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。
核酸塩基における修飾
本開示は、修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドを提供する。本明細書に記載の「ヌク
レオシド」は、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明
細書において「核酸塩基」とも称される）と組み合わせて糖分子（例えば、ペントースも
しくはリボース）またはその誘導体を含有する化合物と定義される。本明細書に記載され
る「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドと定義される。修飾ヌクレオチドは
、（１個以上の修飾または非天然ヌクレオシドを含めるために、例えば、化学的、酵素的
、または組換え的に）本明細書に記載の任意の有用な方法によって合成され得る。
修飾ヌクレオチド塩基対合は、標準のアデノシン−チミン、アデノシン−ウラシル、ま
たはグアノシン−シトシン塩基対のみならず、非標準塩基または修飾塩基を含むヌクレオ
チド間および／または修飾ヌクレオチド間に形成される塩基対も包含し、水素結合ドナー
および水素結合受容体の配置は、非標準塩基および標準塩基間または２つの相補的非標準
塩基構造間の水素結合を可能にする。そのような非標準塩基対合の一例は、修飾ヌクレオ
チドイノシンと、アデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対合である。
修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、修飾核酸塩基を含み得る。ＲＮＡに見られる
核酸塩基の例には、アデニン、グアニン、シトシン、およびウラシルが挙げられるが、こ
れらに限定されない。ＤＮＡに見られる核酸塩基の例には、アデニン、グアニン、シトシ
ン、およびチミンが挙げられるが、これらに限定されない。これらの核酸塩基は、修飾ま
たは完全に置換されて、強化された特性、例えば、主溝結合パートナーの結合の破壊によ
るヌクレアーゼへの耐性を有する腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡ分子を提供し得る。以下の表９は、各基準のヌクレオチドの化学的外観を特定する
。円は、それぞれの化学領域を含む原子を特定する。
表９
いくつかの実施形態において、Ｂは、修飾ウラシルである。例示の修飾ウラシルは、式
（ｂ１）〜（ｂ５）：
を有するもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
が、一重または二重結合であり、
Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、およびＴ２”の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたア
ルキル、任意に置換されたアルコキシ、もしくは任意に置換されたチオアルコキシである
か、またはＴ１’とＴ１”の組み合わせもしくはＴ２’とＴ２”の組み合わせが一緒にな
って（例えば、Ｔ２にあるような）、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、もしくはＳｅ（セレノ
）を形成し、
Ｖ１およびＶ２の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｂ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶｂ）
ｎｖであり、式中、ｎｖが、０〜２の整数であり、各ＲＶｂが、独立して、Ｈ、ハロ、任
意に置換されたアミノ酸、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたハロアルキル、
任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキ
シ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置
換されたヒドロキシアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換され
たヒドロキシアルキニル、任意に置換されたアミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例え
ば、本明細書に記載のいずれか、例えば、トリフルオロアセチルで置換されたもの）、任
意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置換され
たアシルアミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例
えば、トリフルオロアセチルで置換されたもの）、任意に置換されたアルコキシカルボニ
ルアルキル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意に置換されたアル
コキシカルボニルアルキニル、または任意に置換されたアルキニルオキシ（例えば、本明
細書に記載のいずれかの置換基、例えば、アルキルの（１）〜（２１）から選択された置
換基で任意に置換されたもの）であり、
Ｒ１０が、Ｈ、ハロ、任意に置換されたアミノ酸、ヒドロキシ、任意に置換されたアル
キル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたア
ミノアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、任意に置換されたヒドロキシアル
ケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意に置換されたアミノアルケニル、
任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたア
ルコキシカルボニルアルキル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意
に置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意に置換されたアルコキシカルボニル
アルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアル
キル、または任意に置換されたカルバモイルアルキルであり、
Ｒ１１が、Ｈまたは任意に置換されたアルキルであり、
Ｒ１２ａが、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、
任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意
に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、または任意に置換さ
れたアミノアルキニル、任意に置換されたカルボキシアルキル（例えば、ヒドロキシで任
意に置換されたもの）、任意に置換されたカルボキシアルコキシ、任意に置換されたカル
ボキシアミノアルキル、または任意に置換されたカルバモイルアルキルであり、
Ｒ１２ｃが、Ｈ、ハロ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任
意に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアミノ、任意に置換されたヒドロキシ
アルキル、任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキ
ニル、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、または任
意に置換されたアミノアルキニルである。
他の例示の修飾ウラシルは、式（ｂ６）〜（ｂ９）：
を有するもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
が、一重または二重結合であり、
Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、およびＴ２”の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたア
ルキル、任意に置換されたアルコキシ、もしくは任意に置換されたチオアルコキシである
か、またはＴ１’とＴ１”の組み合わせが一緒になって（例えば、Ｔ１にあるような）、
またはＴ２’とＴ２”の組み合わせが一緒になって（例えば、Ｔ２にあるような）、Ｏ（
オキソ）、Ｓ（チオ）、もしくはＳｅ（セレノ）を形成するか、または各Ｔ１およびＴ２
が、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、もしくはＳｅ（セレノ）であり、
Ｗ１およびＷ２の各々が、独立して、Ｎ（ＲＷａ）ｎｗまたはＣ（ＲＷａ）ｎｗであり
、式中、ｎｗが、０〜２の整数であり、各ＲＷａが、独立して、Ｈ、任意に置換されたア
ルキル、または任意に置換されたアルコキシであり、
各Ｖ３が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶａ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶａ）ｎｖであり、式
中、ｎｖが、０〜２の整数であり、各ＲＶａが、独立して、Ｈ、ハロ、任意に置換された
アミノ酸、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、任意に置
換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意に置換さ
れたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたヘテロシクリル、任意
に置換されたアルキルヘテロシクリル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換された
アルケニルオキシ、または任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノ
アルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例えば、トリフル
オロアセチル、もしくはスルホアルキルで置換されたもの）、任意に置換されたアミノア
ルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置換されたアシルアミノアルキル
（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例えば、トリフルオロアセ
チルで置換されたもの）、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意に置換
されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキ
ニル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアシル、任意に置換されたアルコキシカル
ボニルアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルキル（例えば、ヒドロキシおよび／
もしくはＯ−保護基で任意に置換されたもの）、任意に置換されたカルボキシアルコキシ
、任意に置換されたカルボキシアミノアルキル、または任意に置換されたカルバモイルア
ルキル（例えば、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、アルキルの（１）〜（２１）
から選択される置換基で任意に置換されたもの）であり、ＲＶａおよびＲ１２ｃが、それ
らが結合する炭素原子と一緒になって、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換さ
れたアリール、または任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、５もしくは６員環）を
形成し得、
Ｒ１２ａが、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、
任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意
に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたア
ミノアルキニル、任意に置換されたカルボキシアルキル（例えば、ヒドロキシおよび／も
しくはＯ−保護基で任意に置換されたもの）、任意に置換されたカルボキシアルコキシ、
任意に置換されたカルボキシアミノアルキル、任意に置換されたカルバモイルアルキルで
あるか、または不在であり、
Ｒ１２ｂは、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置
換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、任意に置換されたヒドロキ
シアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意に置換されたアミノアルキ
ル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置
換されたアルキルアリール、任意に置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルキ
ルヘテロシクリル、任意に置換されたアミノ酸、任意に置換されたアルコキシカルボニル
アシル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意に置換されたアルコキ
シカルボニルアルキル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意に置換
されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルコ
キシ、任意に置換されたカルボキシアルキル（例えば、ヒドロキシおよび／もしくはＯ−
保護基で任意に置換されたもの）、任意に置換されたカルボキシアルコキシ、任意に置換
されたカルボキシアミノアルキル、または任意に置換されたカルバモイルアルキルであり
、
Ｒ１２ｂとＴ１’の組み合わせまたはＲ１２ｂとＲ１２ｃの組み合わせが一緒になって
、任意に置換されたヘテロシクリルを形成し得、
Ｒ１２ｃは、Ｈ、ハロ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、任
意に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアミノ、任意に置換されたアミノアル
キル、任意に置換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニルで
ある。
さらなる例示の修飾ウラシルは、式（ｂ２８）〜（ｂ３１）：
を有するもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ１およびＴ２の各々が、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、またはＳｅ（セレノ
）であり、
各ＲＶｂ’およびＲＶｂ”が、独立して、Ｈ、ハロ、任意に置換されたアミノ酸、任意
に置換されたアルキル、任意に置換されたハロアルキル、任意に置換されたヒドロキシア
ルキル、任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニ
ル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアル
コキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意
に置換されたアミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか
、例えば、トリフルオロアセチル、もしくはスルホアルキルで置換されたもの）、任意に
置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置換されたア
シルアミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例えば
、トリフルオロアセチルで置換されたもの）、任意に置換されたアルコキシカルボニルア
ルキル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意に置換されたアルコキ
シカルボニルアルキニル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアシル、任意に置換さ
れたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルキル（例えば、
ヒドロキシおよび／もしくはＯ−保護基で任意に置換されたもの）、任意に置換されたカ
ルボキシアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアミノアルキル、または任意に置換さ
れたカルバモイルアルキル（例えば、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、アルキル
の（１）〜（２１）から選択される置換基で任意に置換されたもの）であり（例えば、Ｒ
Ｖｂ’が、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、または任意に置換
されたアミノアルキル、例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例え
ば、トリフルオロアセチル、もしくはスルホアルキルで置換されたものであり）、
Ｒ１２ａが、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたカルボキシアミノアル
キル、任意に置換されたアミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載
のいずれか、例えば、トリフルオロアセチル、もしくはスルホアルキルで置換されたもの
）、任意に置換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニルであ
り、
Ｒ１２ｂが、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置
換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、任意に置換されたヒドロキ
シアルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意に置換されたアミノアルキ
ル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル（例えば、
Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例えば、トリフルオロアセチル、もし
くはスルホアルキルで置換されたもの）、
任意に置換されたアルコキシカルボニルアシル、任意に置換されたアルコキシカルボニ
ルアルコキシ、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意に置換されたアル
コキシカルボニルアルケニル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意
に置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルコキシ
、任意に置換されたカルボキシアルキル、または任意に置換されたカルバモイルアルキル
である。
特定の実施形態において、Ｔ１は、Ｏ（オキソ）であり、Ｔ２は、Ｓ（チオ）またはＳ
ｅ（セレノ）である。他の実施形態では、Ｔ１は、Ｓ（チオ）であり、Ｔ２は、Ｏ（オキ
ソ）またはＳｅ（セレノ）である。いくつかの実施形態において、ＲＶｂ’は、Ｈ、任意
に置換されたアルキル、または任意に置換されたアルコキシである。
他の実施形態では、各Ｒ１２ａおよびＲ１２ｂは、独立して、Ｈ、任意に置換されたア
ルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、または任意に置換
されたヒドロキシアルキルである。特定の実施形態において、Ｒ１２ａは、Ｈである。他
の実施形態では、Ｒ１２ａもＲ１２ｂもいずれもＨである。
いくつかの実施形態において、Ｒ１２ｂの各ＲＶｂ’は、独立して、任意に置換された
アミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例えば、ト
リフルオロアセチル、もしくはスルホアルキルで置換されたもの）、任意に置換されたア
ミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル、または任意に置換されたアシルア
ミノアルキル（例えば、Ｎ−保護基、例えば、本明細書に記載のいずれか、例えば、トリ
フルオロアセチルで置換されたもの）である。いくつかの実施形態において、任意に置換
されたアミノアルキルのアミノおよび／またはアルキルは、任意に置換されたアルキル、
任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたスルホアルキル、任意に置換されたカル
ボキシ（例えば、Ｏ−保護基で置換されたもの）、任意に置換されたヒドロキシ（例えば
、Ｏ−保護基で置換されたもの）、任意に置換されたカルボキシアルキル（例えば、Ｏ−
保護基で置換されたもの）、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキル（例えば、
Ｏ−保護基で置換されたもの）、またはＮ−保護基のうちの１つ以上で置換される。いく
つかの実施形態において、任意に置換されたアミノアルキルは、任意に置換されたスルホ
アルキルまたは任意に置換されたアルケニルで置換される。特定の実施形態において、Ｒ
１２ａもＲＶｂ”もいずれもＨである。特定の実施形態において、Ｔ１は、Ｏ（オキソ）
であり、Ｔ２は、Ｓ（チオ）またはＳｅ（セレノ）である。
いくつかの実施形態において、ＲＶｂ’は、任意に置換されたアルコキシカルボニルア
ルキルまたは任意に置換されたカルバモイルアルキルである。
特定の実施形態において、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｂ、Ｒ１２ｃ、またはＲＶａの任意の置換
基は、ポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（
ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６もしくは１〜４）
の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６
、１〜４、１〜６、もしくは１〜１０）の整数であり、Ｒ’が、ＨもしくはＣ１〜２０ア
ルキルである）、またはアミノ−ポリエチレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ
２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１であり、式中、ｓ１が、１〜１
０（例えば、１〜６もしくは１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して
、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、もしくは１〜１０）の整数であ
り、各ＲＮ１が、独立して、水素もしくは任意に置換されたＣ１〜６アルキルである）で
ある。
いくつかの実施形態において、Ｂは、修飾シトシンである。例示の修飾シトシンは、式
（ｂ１０）〜（ｂ１４）：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ３’およびＴ３”の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換
されたアルコキシ、もしくは任意に置換されたチオアルコキシであるか、またはＴ３’と
Ｔ３”の組み合わせが一緒になって（例えば、Ｔ３にあるような）、Ｏ（オキソ）、Ｓ（
チオ）、もしくはＳｅ（セレノ）を形成し、
各Ｖ４が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｃ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶｃ）ｎｖであり、式
中、ｎｖが、０〜２の整数であり、各ＲＶｃが、独立して、Ｈ、ハロ、任意に置換された
アミノ酸、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換された
アルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に
置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルキルヘテロシクリル、または任意に置
換されたアルキニルオキシ（例えば、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、アルキル
の（１）〜（２１）から選択される置換基で任意に置換されたもの）であり、Ｒ１３ｂと
ＲＶｃの組み合わせが一緒になって、任意に置換されたヘテロシクリルを形成し得、
各Ｖ５が、独立して、Ｎ（ＲＶｄ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶｄ）ｎｖであり、式中、ｎｖ
が、０〜２の整数であり、各ＲＶｄが、独立して、Ｈ、ハロ、任意に置換されたアミノ酸
、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニ
ル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換され
たヘテロシクリル、任意に置換されたアルキルヘテロシクリル、または任意に置換された
アルキニルオキシ（例えば、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、アルキルの（１）
〜（２１）から選択される置換基で任意に置換されたもの）であり（例えば、Ｖ５が、−
ＣＨまたはＮであり）、
Ｒ１３ａおよびＲ１３ｂの各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアシル、任意に置
換されたアシルオキシアルキル、任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたア
ルコキシであり、Ｒ１３ｂとＲ１４の組み合わせが一緒になって、任意に置換されたヘテ
ロシクリルを形成し得、
各Ｒ１４が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアシル、
任意に置換されたアミノ酸、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたハロアルキル
、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロ
キシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されたもの）、任意に置換されたヒドロキシア
ルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意
に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換された
アミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたアシルオ
キシアルキル、任意に置換されたアミノ（例えば、−ＮＨＲ（式中、Ｒが、Ｈ、アルキル
、アリール、もしくはホスホリルである））、アジド、任意に置換されたアリール、任意
に置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルキルヘテロシクリル、任意に置換さ
れたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミ
ノアルキルであり、
Ｒ１５およびＲ１６の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換
されたアルケニル、または任意に置換されたアルキニルである。
さらなる例示の修飾シトシンは、式（ｂ３２）〜（ｂ３５）：
を有するもの、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ１およびＴ３の各々が、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、またはＳｅ（セレノ
）であり、
Ｒ１３ａおよびＲ１３ｂの各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアシル、任意に置
換されたアシルオキシアルキル、任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたア
ルコキシであり、Ｒ１３ｂとＲ１４の組み合わせが一緒になって、任意に置換されたヘテ
ロシクリルを形成し得、
各Ｒ１４が、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置換されたアシル、
任意に置換されたアミノ酸、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたハロアルキル
、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロ
キシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されたもの）、任意に置換されたヒドロキシア
ルケニル、任意に置換されたヒドロキシアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意
に置換されたアルケニルオキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換された
アミノアルコキシ、任意に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたアシルオ
キシアルキル、任意に置換されたアミノ（例えば、−ＮＨＲ（式中、Ｒが、Ｈ、アルキル
、アリール、もしくはホスホリルである）、アジド、任意に置換されたアリール、任意に
置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルキルヘテロシクリル、任意に置換され
たアミノアルキル（例えば、ヒドロキシアルキル、アルキル、アルケニル、もしくはアル
キニル）、任意に置換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニ
ルであり、
Ｒ１５およびＲ１６の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換
されたアルケニル、または任意に置換されたアルキニルである（例えば、Ｒ１５が、Ｈで
あり、Ｒ１６が、Ｈまたは任意に置換されたアルキルである）。
いくつかの実施形態において、Ｒ１５は、Ｈであり、Ｒ１６は、Ｈまたは任意に置換さ
れたアルキルである。特定の実施形態において、Ｒ１４は、Ｈ、アシル、またはヒドロキ
シアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１４は、ハロである。いくつかの実
施形態において、Ｒ１４もＲ１５もいずれもＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ
１５もＲ１６もいずれもＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ１４およびＲ１５お
よびＲ１６の各々は、Ｈである。さらなる実施形態において、Ｒ１３ａおよびＲ１３ｂの
各々は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたアルキルである。
修飾シトシンのさらなる非限定的な例には、式（ｂ３６）：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体が挙げられ、
式中、
各Ｒ１３ｂが、独立して、Ｈ、任意に置換されたアシル、任意に置換されたアシルオキ
シアルキル、任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたアルコキシであり、Ｒ
１３ｂとＲ１４ｂの組み合わせが一緒になって、任意に置換されたヘテロシクリルを形成
し得、
各Ｒ１４ａおよびＲ１４ｂが、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意に置
換されたアシル、任意に置換されたアミノ酸、任意に置換されたアルキル、任意に置換さ
れたハロアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に
置換されたヒドロキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換されたもの）、任意に置換さ
れたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニル
オキシ、任意に置換されたアルキニルオキシ、任意に置換されたアミノアルコキシ、任意
に置換されたアルコキシアルコキシ、任意に置換されたアシルオキシアルキル、任意に置
換されたアミノ（例えば、−ＮＨＲ（式中、Ｒが、Ｈ、アルキル、アリール、ホスホリル
、任意に置換されたアミノアルキル、もしくは任意に置換されたカルボキシアミノアルキ
ルである））、アジド、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロシクリル、
任意に置換されたアルキルヘテロシクリル、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置
換されたアミノアルケニル、または任意に置換されたアミノアルキニルであり、
Ｒ１５の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケ
ニル、または任意に置換されたアルキニルである。
特定の実施形態において、Ｒ１４ｂは、任意に置換されたアミノ酸（例えば、任意に置
換されたリジン）である。いくつかの実施形態において、Ｒ１４ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、修飾グアニンである。例示の修飾グアニンは、式
（ｂ１５）〜（ｂ１７）：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ４’、Ｔ４”、Ｔ５’、Ｔ５”、Ｔ６’、およびＴ６”の各々が、独立して、Ｈ、任
意に置換されたアルキル、または任意に置換されたアルコキシであり、Ｔ４’とＴ４”の
組み合わせ（例えば、Ｔ４にあるような）またはＴ５’とＴ５”の組み合わせ（例えば、
Ｔ５にあるような）またはＴ６’とＴ６”の組み合わせ（例えば、Ｔ６にあるような）が
一緒になって、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、またはＳｅ（セレノ）を形成し、
Ｖ５およびＶ６の各々が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｄ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶｄ）
ｎｖであり、式中、ｎｖが、０〜２の整数であり、各ＲＶｄが、独立して、Ｈ、ハロ、チ
オール、任意に置換されたアミノ酸、シアノ、アミジン、任意に置換されたアミノアルキ
ル、任意に置換されたアミノアルケニル、任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置
換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に
置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、または任意に置換されたア
ルキニルオキシ（例えば、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、アルキルの（１）〜
（２１）から選択される置換基で任意に置換されたもの）、任意に置換されたチオアルコ
キシ、または任意に置換されたアミノであり、
Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂ、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、およびＲ２４の各々
が、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアル
ケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたチオアルコキシ、任意に置換さ
れたアミノ、または任意に置換されたアミノ酸である。
例示の修飾グアノシンは、式（ｂ３７）〜（ｂ４０）：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
Ｔ４’の各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、または任意に置換された
アルコキシであり、各Ｔ４が、独立して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、またはＳｅ（セレ
ノ）であり、
Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂ、およびＲ２１の各々が、独立して、Ｈ、ハロ、チオール
、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニ
ル、任意に置換されたチオアルコキシ、任意に置換されたアミノ、または任意に置換され
たアミノ酸である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１８は、Ｈまたは任意に置換されたアルキルである。
さらなる実施形態において、Ｔ４は、オキソである。いくつかの実施形態において、Ｒ１
９ａおよびＲ１９ｂの各々は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたアルキルである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、修飾アデニンである。例示の修飾アデニンは、式
（ｂ１８）〜（ｂ２０）：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、各Ｖ７が
、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｅ）ｎｖ、またはＣ（ＲＶｅ）ｎｖであり、式中、ｎｖが
、０〜２の整数であり、各ＲＶｅが、独立して、Ｈ、ハロ、任意に置換されたアミノ酸、
任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル
、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアルケニルオキシ、または任意に置換
されたアルキニルオキシ（例えば、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、アルキルの
（１）〜（２１）から選択される置換基で任意に置換されたもの）であり、
各Ｒ２５が、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換
されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたチオアルコキシ、ま
たは任意に置換されたアミノであり、
Ｒ２６ａおよびＲ２６ｂの各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアシル、任意に置
換されたアミノ酸、任意に置換されたカルバモイルアルキル、任意に置換されたアルキル
、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロ
キシアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシア
ルキニル、任意に置換されたアルコキシ、またはポリエチレングリコール基（例えば、−
（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（式中、ｓ１が、１〜１０
（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０
〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ
’が、ＨまたはＣ１〜２０アルキル）である））、またはアミノポリエチレングリコール
基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１
（式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ
３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１
〜１０）の整数であり、各ＲＮ１が、独立して、水素または任意に置換されたＣ１〜６ア
ルキルである））であり、
各Ｒ２７が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル
、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたチオア
ルコキシ、または任意に置換されたアミノであり、
各Ｒ２８が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル
、または任意に置換されたアルキニルであり、
各Ｒ２９が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアシル、任意に置換されたアミノ酸、任
意に置換されたカルバモイルアルキル、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたア
ルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロキシアルキル、任意に
置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたアルコキシ、または任意に置換され
たアミノである。
例示の修飾アデニンは、式（ｂ４１）〜（ｂ４３）：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含み、式中、
各Ｒ２５が、独立して、Ｈ、ハロ、チオール、任意に置換されたアルキル、任意に置換
されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたチオアルコキシ、ま
たは任意に置換されたアミノであり、
Ｒ２６ａおよびＲ２６ｂの各々が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアシル、任意に置
換されたアミノ酸、任意に置換されたカルバモイルアルキル、任意に置換されたアルキル
、任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたヒドロ
キシアルキル、任意に置換されたヒドロキシアルケニル、任意に置換されたヒドロキシア
ルキニル、任意に置換されたアルコキシ、またはポリエチレングリコール基（例えば、−
（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（式中、ｓ１が、１〜１０
（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０
〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ
’が、ＨまたはＣ１〜２０アルキルである））、またはアミノポリエチレングリコール基
（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（
式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３
の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜
１０）の整数であり、各ＲＮ１が、独立して、水素または任意に置換されたＣ１〜６アル
キルである））であり、
各Ｒ２７が、独立して、Ｈ、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたアルケニル
、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたチオア
ルコキシ、または任意に置換されたアミノである。
いくつかの実施形態において、Ｒ２６ａは、Ｈであり、Ｒ２６ｂは、任意に置換された
アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２６ａおよびＲ２６ｂの各々は、独立
して、任意に置換されたアルキルである。特定の実施形態において、Ｒ２７は、任意に置
換されたアルキル、任意に置換されたアルコキシ、または任意に置換されたチオアルコキ
シである。他の実施形態では、Ｒ２５は、任意に置換されたアルキル、任意に置換された
アルコキシ、または任意に置換されたチオアルコキシである。
特定の実施形態において、Ｒ２６ａ、Ｒ２６ｂ、またはＲ２９の任意の置換基は、ポリ
エチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ
３ＯＲ’（式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２
およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、
または１〜１０）の整数であり、Ｒ’が、ＨまたはＣ１〜２０アルキルである））、また
はアミノポリエチレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２
Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（式中、ｓ１が、１〜１０（例えば、１〜６または１〜
４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々が、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０
〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１が、独立して、水素ま
たは任意に置換されたＣ１〜６アルキルである））である。
いくつかの実施形態において、Ｂは、式（ｂ２１）：
を有し得、式中、Ｘ１２は、独立して、Ｏ、Ｓ、任意に置換されたアルキレン（例えば、
メチレン）、または任意に置換されたヘテロアルキレンであり、ｘａは、０〜３の整数で
あり、Ｒ１２ａおよびＴ２は、本明細書に記載の通りである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、式（ｂ２２）：
を有し得、式中、Ｒ１０’は、独立して、任意に置換されたアルキル、任意に置換された
アルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアリール、任意に置換され
たヘテロシクリル、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニ
ル、任意に置換されたアミノアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換され
たアルコキシカルボニルアルキル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、
任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意に置換されたアルコキシカルボ
ニルアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルコキシ、任意に置換されたカルボキシ
アルキル、または任意に置換されたカルバモイルアルキルであり、Ｒ１１、Ｒ１２ａ、Ｔ
１、およびＴ２は、本明細書に記載の通りである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、式（ｂ２３）：
を有し得、式中、Ｒ１０は、任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、任意に置換され
たフリル、任意に置換されたチエニル、もしくは任意に置換されたピロリル）、任意に置
換されたアリール（例えば、任意に置換されたフェニルもしくは任意に置換されたナフチ
ル）、または本明細書に記載の任意の置換基（例えば、Ｒ１０のもの）であり、Ｒ１１（
例えば、Ｈまたは本明細書に記載の任意の置換基）、Ｒ１２ａ（例えば、Ｈまたは本明細
書に記載の任意の置換基）、Ｔ１（例えば、オキソまたは本明細書に記載の任意の置換基
）、およびＴ２（例えば、オキソまたは本明細書に記載の任意の置換基）は、本明細書に
記載の通りである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、式（ｂ２４）：
を有し得、式中、Ｒ１４’は、独立して、任意に置換されたアルキル、任意に置換された
アルケニル、任意に置換されたアルキニル、任意に置換されたアリール、任意に置換され
たヘテロシクリル、任意に置換されたアルキルアリール、任意に置換されたアルキルヘテ
ロシクリル、任意に置換されたアミノアルキル、任意に置換されたアミノアルケニル、任
意に置換されたアミノアルキニル、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたアル
コキシカルボニルアルケニル、任意に置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意
に置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意に置換されたアルコキシカルボニルア
ルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルコキシ、任意に置換されたカルボキシアルキ
ル、または任意に置換されたカルバモイルアルキルであり、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、Ｒ１５
、およびＴ３は、本明細書に記載の通りである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、式（ｂ２５）：
を有し得、式中、Ｒ１４’は、任意に置換されたヘテロシクリル（例えば、任意に置換さ
れたフリル、任意に置換されたチエニル、もしくは任意に置換されたピロリル）、任意に
置換されたアリール（例えば、任意に置換されたフェニルもしくは任意に置換されたナフ
チル）、または本明細書に記載の任意の置換基（例えば、Ｒ１４またはＲ１４’のもの）
であり、Ｒ１３ａ（例えば、Ｈまたは本明細書に記載の任意の置換基）、Ｒ１３ｂ（例え
ば、Ｈまたは本明細書に記載の任意の置換基）、Ｒ１５（例えば、Ｈまたは本明細書に記
載の任意の置換基）、およびＴ３（例えば、オキソまたは本明細書に記載の任意の置換基
）は、本明細書に記載の通りである。
いくつかの実施形態において、Ｂは、シトシン、グアニン、アデニン、およびウラシル
からなる群から選択される核酸塩基である。いくつかの実施形態において、Ｂは、
であり得る。
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを
有する例示の核酸塩基およびヌクレオシドには、シュードウリジン（ψ）、ピリジン−４
−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−ア
ザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ４Ｕ）、４−チ
オ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ
５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリ
ジンまたは５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ３Ｕ）、５−メトキシ−
ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢
酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１
−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（
ｃｈｍ５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５
Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニ
ルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリ
ジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５−メチル
アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−
セレノ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ５
Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５−カルボキシ
メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−プロピニル−ウリ
ジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（τｍ５Ｕ）
、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（
τｍ５ｓ２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、５−メチル−ウリ
ジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有するもの）、１−メチルシュード
ウリジン（ｍ１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１−メチル−４
−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、
３−メチル−シュードウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、
１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュ
ードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６−ジヒドロ
ウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２
−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ
−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリ
ジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン（１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）として
も既知のもの）、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）
、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ
３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５−（イソペン
テニルアミノメチル）−２−チオ−ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、
２’−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ５Ｕｍ）
、２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジ
ン（ｓ２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ
５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５
−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３
，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−
２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン
、２’‐Ｆ‐アラ‐ウリジン、２’‐Ｆ‐ウリジン、２’‐ＯＨ‐アラ‐ウリジン、５‐
（２‐カルボメトキシビニル）ウリジン、および５‐［３‐（１‐Ｅ‐プロペニルアミノ
）ウリジンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを
有する例示の核酸塩基およびヌクレオシドには、５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジ
ン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジ
ン（ａｃ４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ４Ｃ
）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチ
ジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチ
ジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ
）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、４−チオ−１
−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシ
チジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブ
ラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラ
リン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−
シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン、リシジン（
ｋ２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−
ジメチル−シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ
４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ
−メチル−シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−ｔｒｉメチル−シチジン（ｍ
４ ２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’‐Ｆ‐アラ‐シチジン、２’‐Ｆ‐シチジン、お
よび２’‐ＯＨ‐アラ‐シチジンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを
有する例示の核酸塩基およびヌクレオシドには、２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノ
プリン、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、
６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、
８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７
−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デア
ザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メ
チル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノ
シン（ｍ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６−
イソペンテニル−アデノシン（ｉ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデ
ノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉ
ｏ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（
ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６−トレ
オニルカルバモイル−アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモ
イル−アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイル−ア
デノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ６ ２Ａ）、Ｎ６−ヒ
ドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒ
ドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６−アセチル−ア
デノシン（ａｃ６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキ
シ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，
２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−ｔｒｉメチル−
アデノシン（ｍ６ ２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’−
Ｏ−リボシルアデノシン（ホスフェート）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−
プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’‐Ｆ‐アラ‐アデノシン
、２’‐Ｆ‐アデノシン、２’‐ＯＨ‐アラ‐アデノシン、およびＮ６‐（１９‐アミノ
‐ペンタオキサノナデシル）−アデノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを
有する例示の核酸塩基およびヌクレオシドには、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン
（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−デメチル−ワ
イオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペル
オキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ）、未修飾ヒドロ
キシワイブトシン（ＯＨｙＷ＊）、７−デアザ−グアノシン、クエオシン（Ｑ）、エポキ
シクエオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−クエオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−クエオシ
ン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチ
ル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７−デアザ−８
−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−
チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、６−チ
オ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−
メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジ
メチル−グアノシン（ｍ２ ２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ
２、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７
−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル
−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グ
アノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−
グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２
２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチ
ル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉ
ｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ１Ｉｍ）、および２’−Ｏ−リボシルグア
ノシン（ホスフェート）（Ｇｒ（ｐ））が挙げられる。
ヌクレオチドの核酸塩基は、プリン、ピリミジン、プリン、またはピリミジン類似体か
ら独立して選択され得る。例えば、核酸塩基はそれぞれ、アデニン、シトシン、グアニン
、ウラシル、またはヒポキサンチンから独立して選択され得る。別の実施形態において、
核酸塩基には、例えば、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、５−メチルシトシン（５−
ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノ
アデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンお
よびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチ
ミンおよび２−チオシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシ
ル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８
−ハロ（例えば、８−ブロモ）、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒ
ドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に、５−ブロモ、
５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニ
ンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、デアザグアニ
ン、７−デアザグアニン、３−デアザグアニン、デアザアデニン、７−デアザアデニン、
３−デアザアデニン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、イミダゾ［１，５−ａ］１，
３，５トリアジノン、９−デアザプリン、イミダゾ［４，５−ｄ］ピラジン、チアゾロ［
４，５−ｄ］ピリミジン、ピラジン−２−オン、１，２，４−トリアジン、ピリダジン、
および１，３，５トリアジンを含む塩基の天然に存在する合成誘導体も含み得る。ヌクレ
オチドがＡ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、またはＵの略語を用いて示されるとき、各文字は、代表的な塩
基および／またはその誘導体を指し、例えば、Ａは、アデニン、または、例えば、７−デ
アザアデニンのようなアデニン類似体を含む。
ヌクレオシド間結合における修飾
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ分子に組み込まれ得る修飾ヌクレオ
チドは、ヌクレオシド間結合（例えば、リン酸骨格）において修飾され得る。本明細書に
おいて、ポリヌクレオチド骨格との関連で、「リン酸塩」および「ホスホジエステル」と
いう表現は、同義に使用される。骨格リン酸基は、酸素原子のうちの１個以上を異なる置
換基で置換することによって修飾され得る。さらに、修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチ
ドは、未修飾リン酸塩部分の別の本明細書に記載のヌクレオシド間結合との大規模な置換
を含み得る。修飾リン酸基の例には、ホスホロチオエート、ホスホロセレナート、ボラノ
ホスフェート、ボラノホスフェートエステル、水素ホスホネート、ホスホロラミデート、
ホスホロジアミデート、アルキルまたはアリールホスホネート、およびホスホトリエステ
ルが挙げられるが、これらに限定されない。ホスホロジチオエートは、硫黄で置換された
両方の非結合酸素を有する。リン酸リンカーは、結合酸素の窒素（架橋ホスホロアミデー
ト）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、および炭素（架橋メチレンホスホネート）での
置換によっても修飾され得る。
α−チオ置換リン酸部分は、非天然ホスホロチオエート骨格結合を介してＲＮＡおよび
ＤＮＡポリマーに安定性を付与するように提供される。ホスホロチオエートＤＮＡおよび
ＲＮＡは、ヌクレアーゼ耐性の増加、続いて細胞環境においてより長い半減期を有する。
ホスホロチオエート結合腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ分
子は、細胞の自然免疫分子のより弱い結合／活性化によって自然免疫応答も低下させるこ
とが見込まれている。
特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、α−チオ−ヌクレオシド（例えば、５
’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−アデノシン、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）
−シチジン（α−チオ−シチジン）、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−グアノシン
、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−ウリジン、または５’−Ｏ−（１−チオホスフ
ェート）−シュードウリジン）を含む。
リン原子を含有しないヌクレオシド間結合を含む本発明に従って用いられ得る他のヌク
レオシド間結合は、以下の本明細書に記載される。
修飾糖、核酸塩基、およびヌクレオシド間結合の組み合わせ
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩
基、および／またはヌクレオシド間結合への修飾の組み合わせを含み得る。これらの組み
合わせは、本明細書に記載のいずれか１つ以上の修飾を含み得る。例えば、式（Ｉａ）、
（Ｉａ−１）〜（Ｉａ−３）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ
−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ
−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、および（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ）における本明細書に記
載のヌクレオチドのうちのいずれかは、本明細書に記載の核酸塩基のうちのいずれ（例え
ば、式（ｂ１）〜（ｂ４３）または本明細書に記載の任意の他のもの）とも組み合わせら
れ得る。
腫瘍学関連ポリペプチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡ分子の合成
本発明に従って用いる腫瘍学関連ポリペプチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡ分子は、本明細書に記載の任意の有用な技法に従って調製され得る。本明
細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍ
ｍＲＮＡ分子の合成において用いられる修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、以下の
一般的な方法および手順を用いて容易に入手可能な出発物質から調製され得る。典型的な
プロセス条件または好ましいプロセス条件（例えば、反応温度、時間、反応物質のモル比
、溶媒、圧力等）が提供される場合、当業者であれば、さらなるプロセス条件を最適化お
よび開発することができるであろう。最適な反応条件は、用いる特定の反応物または溶媒
によって異なり得るが、そのような条件は、日常的な最適化手順を用いて当業者によって
決定され得る。
本明細書に記載のプロセスは、当技術分野で既知の任意の好適な方法に従って監視され
得る。例えば、産物形成は、核磁気共鳴分光学（例えば、１Ｈもしくは１３Ｃ）、赤外線
分光学、分光測光（例えば、紫外線可視）、もしく質量分析等の分光学的手段、または高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィー等のクロマトグ
ラフィーによって監視され得る。
本発明の腫瘍学関連ポリペプチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａ分子の調製は、様々な化学基の保護および脱保護を伴い得る。保護および脱保護の必要
性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学
は、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎｅ，ｅｔ ａｌ．，
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２
ｄ．Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９１において見出され得る。
本明細書に記載のプロセスの反応は、有機合成分野の技術者によって容易に選択され得
る好適な溶媒において行われ得る。好適な溶媒は、反応が行われる温度、すなわち、溶媒
の凍結温度から溶媒の沸点の範囲であり得る温度で、出発物質（反応物）、中間体、また
は産物とは実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または２つ以上の溶
媒の混合物において行われ得る。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに好
適な溶媒が選択され得る。
修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチド（例えば、ｍｍＲＮＡ分子）のラセミ混合物の分
解は、当技術分野で既知の多数の方法のうちのいずれかによって行われ得る。方法の例に
は、光学活性の塩形成有機酸である「キラル分解酸」を用いた分別再結晶が挙げられる。
分別再結晶法に好適な分解酸には、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒
石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、または様々な光学活性カンファースルホン酸のＤお
よびＬ形態等の光学活性酸がある。ラセミ混合物の分解は、光学活性分解剤（例えば、ジ
ニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラム上での溶出によっても行われ得る
。好適な溶出溶媒組成物は、当業者によって決定され得る。
修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチド（例えば、ビルディングブロック分子）は、各々
が参照によりそれらの全体が組み込まれる、Ｏｇａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃ
ｈｅｍ．７４：２５８５−２５８８（２００９）、Ｐｕｒｍａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２（１）：７２−７８，（１９９４）、Ｆｕｋｕｈａｒａ
ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１（４）：５６３−５６８（１９６２）、お
よびＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８（９）：１７２９−１７４０（
１９９２）に記載の合成方法に従って調製され得る。
本発明の腫瘍学関連ポリペプチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａは、分子の全長に沿って均一に修飾されてもされなくてもよい。例えば、１種類以上ま
たはすべての種類のヌクレオチド（例えば、プリンもしくはピリミジン、またはＡ、Ｇ、
Ｕ、Ｃのうちのいずれか１つ以上もしくはすべて）は、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チドまたはその所与の既定の配列領域（例えば、図１に表される配列領域のうちの１つ以
上）において均一に修飾されてもされなくてもよい。いくつかの実施形態において、本発
明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド（またはその所与の配列領域）におけるすべてのヌクレ
オチドＸが修飾され、ここでＸは、ヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのうちのいずれか１つ、
または組み合わせＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋
Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、もしくはＡ＋Ｇ＋Ｃのうちのいずれか１つであり得る。
異なる糖修飾、ヌクレオチド修飾、および／またはヌクレオシド間結合（例えば、骨格
構造）は、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡの様々な位置で存在し得る。当業者であれば、ヌクレオチド類似体または他の修飾
（複数可）が、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連
ｍｍＲＮＡの機能が実質的に低下するように、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連
一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの任意の位置（複数可）に位置し得ることを認
識する。修飾は、５’または３’末端修飾でもあり得る。腫瘍学関連ポリヌクレオチド、
腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、約１％〜約１００％の修飾ヌク
レオチド（全ヌクレオチド含量または１種類以上のヌクレオチド、すなわち、Ａ、Ｇ、Ｕ
、もしくはＣのうちのいずれか１つ以上のいずれかと関連したもの）または任意の中間の
割合（例えば、１％〜２０％、１％〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０
％、１％〜８０％、１％〜９０％、１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１
０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１
０％〜９５％、１０％〜１００％、２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、
２０％〜７０％、２０％〜８０％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％
、５０％〜６０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％
、５０％〜１００％、７０％〜８０％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１０
０％、８０％〜９０％、８０％〜９５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜
１００％、および９５％〜１００％）を含有し得る。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、
または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、修飾ピリミジン（例えば、修飾ウラシル／ウリジン／Ｕ
または修飾シトシン／シチジン／Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ分子中のウラシ
ルまたはウリジン（概して、Ｕ）は、約１％〜約１００％の修飾ウラシルまたは修飾ウリ
ジン（例えば、１％〜２０％、１％〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０
％、１％〜８０％、１％〜９０％、１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１
０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１
０％〜９５％、１０％〜１００％、２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、
２０％〜７０％、２０％〜８０％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％
、５０％〜６０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％
、５０％〜１００％、７０％〜８０％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１０
０％、８０％〜９０％、８０％〜９５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜
１００％、および９５％〜１００％の修飾ウラシルまたは修飾ウリジン）と置換され得る
。修飾ウラシルまたはウリジンは、単一の固有の構造を有する化合物または異なる構造（
例えば、本明細書に記載の２、３、４つ以上の固有の構造）を有する複数の化合物に置換
され得る。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次
構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ分子中のシトシンまたはシチジン（概して、Ｃ）は
、約１％〜約１００％の修飾シトシンまたは修飾シチジン（例えば、１％〜２０％、１％
〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０％、１％〜８０％、１％〜９０％、
１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１０％〜５０％、１０％〜６０％、１
０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％〜１００％、
２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％〜７０％、２０％〜８０％、
２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７０％
、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０％〜１００％、７０％〜８０
％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１００％、８０％〜９０％、８０％〜９
５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜１００％、および９５％〜１００％
の修飾シトシンまたは修飾シチジン）と置換され得る。修飾シトシンまたはシチジンは、
単一の固有の構造を有する化合物または異なる構造（例えば、本明細書に記載の２、３、
４つ以上の固有の構造）を有する複数の化合物に置換され得る。
いくつかの実施形態において、本開示は、式（Ｉａ−１）：
を有するｎ個の結合ヌクレオシドを含む腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構
築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ（例えば、第１の領域、第１の隣接領域、または第２
の隣接領域）を合成する方法を提供し、この方法は、
ａ） 式（ＩＶ−１）：
のヌクレオチドを、式（Ｖ−１）：
のホスホラミダイト化合物と反応させて（式中、Ｙ９が、Ｈ、ヒドロキシ、ホスホリル、
ピロリン酸塩、硫酸塩、アミノ、チオール、任意に置換されたアミノ酸、またはペプチド
（例えば、２〜１２個のアミノ酸を含む）であり、各Ｐ１、Ｐ２、およびＰ３が、独立し
て、好適な保護基であり、
が、固体支持体を示す）、
式（ＶＩ−１）の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡを提供することと、
ｂ） 式（Ｖ）の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡを酸化または硫化して、式（ＶＩＩ−１）の腫瘍学関連ポリヌクレオチド
、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを産出することと、
ｃ） 保護基を除去して、式（Ｉａ）の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次
構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを産出することとを含む。
いくつかの実施形態において、ステップａ）およびｂ）は、１〜約１０，０００回繰り
返される。いくつかの実施形態において、この方法は、Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵ（アデノシ
ン、シトシン、グアノシン、およびウラシル）からなる群から選択されるヌクレオチド（
例えば、ｍｍＲＮＡ分子）をさらに含む。いくつかの実施形態において、核酸塩基は、ピ
リミジンまたはその誘導体であり得る。いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌ
クレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、翻訳可能であり得
る。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの
他の成分は任意であり、いくつかの実施形態において有益である。例えば、５’非翻訳領
域（ＵＴＲ）および／または３’ＵＴＲが提供され、これらのいずれか、または両方とも
に、独立して、１つ以上の異なるヌクレオチド修飾を含有し得る。そのような実施形態に
おいて、ヌクレオチド修飾は、翻訳可能な領域においても存在し得る。コザック配列を含
有する腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａも提供される。
修飾核酸またはｍｍＲＮＡ、例えば、ＲＮＡまたはｍＲＮＡに組み込まれる腫瘍学関連
修飾ヌクレオチドの例示の合成は、以下のスキーム１〜スキーム１１で提供される。スキ
ーム１は、修飾ヌクレオシドを含むヌクレオシドのリン酸化の一般的な方法を提供する。
スキーム１
様々な保護基を用いて、反応を制御することができる。例えば、スキーム２は、２’お
よび３’ヒドロキシル基ではなく、糖の５’位のリン酸化を促進するための複数の保護ス
テップおよび脱保護ステップの使用を提供する。
スキーム２
修飾ヌクレオチドは、任意の有用な方法で合成され得る。スキーム３、４、および７は
、修飾プリン核酸塩基を有する修飾ヌクレオチドを合成するための例示の方法を提供し、
スキーム５および６は、それぞれ、修飾シュードウリジンまたはシュードイソシチジンを
有する修飾ヌクレオチドを合成するための例示の方法を提供する。
スキーム３
スキーム４
スキーム５
スキーム６
スキーム７
スキーム８および９は、修飾ヌクレオチドの例示の合成を提供する。スキーム１０は、
ヌクレオチドを産生するための非限定的な生体触媒方法を提供する。
スキーム８
スキーム９
スキーム１０
スキーム１１は、修飾ウラシルの例示の合成を提供し、そこでは、Ｎ１位は、他の箇所
で提供されるように、Ｒ１２ｂで修飾され、リボースの５’位は、リン酸化される。Ｔ１
、Ｔ２、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｂ、およびｒは、本明細書に提供される通りである。この合成
ならびにその最適化されたバージョンを用いて、他のピリミジン核酸塩基およびプリン核
酸塩基（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ４３）を参照のこと）を修飾し、かつ／または１個以
上のリン酸基を（例えば、糖の５’位に）導入することができる。このアルキル化反応を
用いて、本明細書に記載の任意の核酸塩基における任意の反応基（例えば、アミノ基）（
例えば、シトシン、ウラシル、アデニン、およびグアニンのワトソン・クリック塩基対合
面のアミノ基）に１個以上の任意に置換されたアルキル基を含むこともできる。
スキーム１１
ｍｍＲＮＡにおけるヌクレオチドの組み合わせ
修飾ヌクレオチドと修飾ヌクレオチドの組み合わせのさらなる例が以下の表１０に提供
される。修飾ヌクレオチドのこれらの組み合わせを用いて、本発明の腫瘍学関連ポリペプ
チド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを形成することができる。
別途述べられない限り、修飾ヌクレオチドは、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡの天
然ヌクレオチドと完全に置換され得る。非限定的な例として、天然ヌクレオチドウリジン
は、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドで置換され得る。別の非限定的な例において、天
然ヌクレオチドウリジンは、本明細書に開示の修飾ヌクレオシドのうちの少なくとも１つ
で部分的に置換され得る（例えば、約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、
２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、
７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９．９％）。
表１０
修飾ヌクレオチドの組み合わせのさらなる例が以下の表１１に提供される。修飾ヌクレ
オチドのこれらの組み合わせを用いて、本発明のポリペプチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡを形成することができる。
表１１
いくつかの実施形態において、シトシンの少なくとも２５％は、式（ｂ１０）〜（ｂ１
４）の化合物に置換される（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なく
とも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なく
とも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なく
とも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または
約１００％）。
いくつかの実施形態において、ウラシルの少なくとも２５％は、式（ｂ１）〜（ｂ９）
の化合物に置換される（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも
約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも
約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも
約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１
００％）。
いくつかの実施形態において、シトシンの少なくとも２５％は、式（ｂ１０）〜（ｂ１
４）に化合物に置換され、ウラシルの少なくとも２５％は、式（ｂ１）〜（ｂ９）の化合
物に置換される（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０
％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０
％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０
％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％
）。
ＩＶ． 薬学的組成物
製剤化、投与、送達、および投薬
本発明は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの組成物および複合体を提
供する。薬学的組成物は、任意に、１つ以上のさらなる活性物質、例えば、治療上および
／または予防上活性物質を含んでもよい。医薬品の製剤および／または製造における一般
の考慮事項は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈ
ｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ
ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５において
見出され得る。
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒト、すなわちヒト患者または対象に投与さ
れる。本開示の目的のために、「活性成分」という表現は、一般に、本明細書に記載の送
達対象の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍＲ
ＮＡを指す。
本明細書に提供される薬学的組成物の説明は、原則的に、ヒトへの投与に好適である薬
学的組成物を対象とするが、そのような組成物は一般に、任意の他の動物への、例えば、
非ヒト動物、例えば、非ヒト哺乳動物への投与に好適であることが当業者によって理解さ
れるであろう。組成物を種々の動物への投与に好適であるようにするための、ヒトへの投
与に好適な薬学的組成物の修飾は、よく理解されており、獣医薬理学の専門家は、たとえ
用いるとしても単なる通常の実験法を用いて、そのような修飾を設計および／または実施
することができる。薬学的組成物の投与が企図される対象には、ヒトおよび／もしくは他
の霊長類；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、および／もしくはラット等
の商業的に関連性のある哺乳動物を含む哺乳動物；ならびに／または家禽類、ニワトリ、
アヒル、ガチョウ、および／もしくはシチメンチョウ等の商業的に適切な鳥類を含む鳥類
が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の薬学的組成物の製剤は、薬理学の技術分野で既知であるか今後開発さ
れる、任意の方法によって調製されて得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分を
賦形剤および／または１つ以上の他の副成分と混合し、次いで、必要かつ／または望まし
い場合、生成物を所望の単回または複数回用量単位へと分割、成形、および／またはパッ
ケージ化するステップを含む。
本発明に従う薬学的組成物は、バルクで、１つの単回単位用量として、および／または
複数の単回単位用量として、調製され、パッケージ化され、かつ／または販売され得る。
本明細書で使用されるとき、「単位用量」は、既定量の活性成分を含む、薬学的組成物の
個別的な量である。活性成分の量は一般に、対象に投与されるであろう活性成分の投薬量
、および／または例えば、そのような投薬量の２分の１もしくは３分の１等の、そのよう
な投薬量の好都合な分率に等しい。
本発明に従う薬学的組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、および／または
任意のさらなる成分の相対的な量は、治療される対象の素性、大きさ、および／または状
態に応じて変化し、組成物が投与されるべき経路に応じてさらに変化するあろう。例とし
て、組成物は、０．１％〜１００ｗ／ｗ％、例えば、０．５〜５０ｗ／ｗ％、１〜３０ｗ
／ｗ％、５〜８０ｗ／ｗ％、少なくとも８０ｗ／ｗ％の活性成分を含み得る。
製剤化
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡは、：（１）安定性を増加させ、（２）細胞トランスフェクションを増加させ、（
３）（例えば、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連
ｍｍＲＮＡのデポー製剤からの）持続放出もしくは遅延放出を可能にし、（４）生体分布
を変化させ（例えば、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡの標的を特定の組織または細胞型に定める）、（５）コードされたタンパク質の翻
訳をインビボで増加させ、かつ／または（６）コードされたタンパク質の放出プロファイ
ルをインビボで変化させるために、１つ以上の賦形剤を用いて製剤化することができる。
ありとあらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散もしくは懸濁助
剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、防腐剤等の伝統的な賦形剤に加えて、
本発明の賦形剤は、制限なく、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポ
プレックス、コア−シェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、腫瘍学関連ポリヌクレオチ
ド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ（例えば、対象への移植のた
めに）でトランスフェクトされた細胞、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣体、およびこれ
らの組み合わせを含むことができる。さらに、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫
瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、自己集合性核酸ナノ粒子を用いて
製剤化されてもよい。
したがって、本発明の製剤は、１つ以上の賦形剤を含むことができ、各々は一緒に腫瘍
学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの安定
性を増加させる、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡによる細胞トランスフェクションを増加させる、腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡによりコードされるタンパ
ク質の発現を増加させる、および／または腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次
構築物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡによりコードされるタンパク質の放出プロファイ
ルを変化させる量である。さらに、本発明の腫瘍学関連一次構築物および腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡは、自己集合性核酸ナノ粒子を用いて製剤化されてもよい。
本明細書に記載の薬学的組成物の製剤は、薬理学の技術分野で既知であるか今後開発さ
れる、任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分を賦
形剤および／または１つ以上の他の副成分と混合するステップを含む。
本開示による薬学的組成物は、バルクで、１つの単回単位用量として、および／または
複数の単回単位用量として、調製され、パッケージ化され、かつ／または販売されてもよ
い。本明細書で使用されるとき、「単位用量」は、既定量の活性成分を含む、薬学的組成
物の個別的な量を指す。活性成分の量は一般に、対象に投与されるであろう活性成分の投
薬量、および／または例えば、そのような投薬量の２分の１もしくは３分の１を含むが、
これらに限定されない、そのような投薬量の好都合な分率に等しい。
本開示による薬学的組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、および／または
任意のさらなる成分の相対的な量は、治療されている対象の素性、サイズ、および／また
は状態に応じて変化し、組成物が投与されるべき経路に応じてさらに変化するであろう。
例えば、組成物は、０．１ｗ／ｗ％〜９９％の活性成分を含み得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の製剤は、少なくとも１つの腫瘍学関連
ｍｍＲＮＡを含有し得る。非限定的な例として、製剤は、１、２、３、４、または５つの
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを含有してもよい。一実施形態において、製剤は、腫瘍学関連タン
パク質等のカテゴリーから選択されるタンパク質をコードする修飾ｍＲＮＡを含有し得る
。一実施形態において、製剤は、少なくとも３つの腫瘍学関連修飾ｍＲＮＡがコードする
腫瘍学関連タンパク質を含有する。一実施形態において、製剤は、少なくとも５つの腫瘍
学関連修飾ｍＲＮＡがコードする腫瘍学関連タンパク質を含有する。
薬学的製剤は、所望される特定の剤形に適している、本明細書で使用されるときにあり
とあらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散もしくは懸濁助剤、
界面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、防腐剤等を含むが、これらに限定されない
、薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。薬学的組成物を製剤化するための種
々の賦形剤および組成物を調製するための技法は、当技術分野で知られている（参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎ
ｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．
Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔ
ｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照のこと）。任意の従来の賦形剤媒体が任意の望ましく
ない生体影響を引き起こすか、またはさもなければ薬学的組成物の任意の他の構成成分（
複数可）と有害な様態で相互作用するといった、物質またはその誘導体と不適合性である
場合を除いて、その使用が本開示の範囲内で企図され得る。
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子の粒径は、増加および／または減少し得る
。粒径の変化は、炎症等であるが、これらに限定されない生体反応に対抗する一助となる
ことが可能であり得るか、または哺乳動物に送達される腫瘍学関連修飾ｍＲＮＡの生体効
果を増加させ得る。
薬学的組成物の製造に使用される薬学的に許容される賦形剤には、不活性希釈剤、界面
活性剤および／もしくは乳化剤、防腐剤、緩衝剤、滑沢剤、ならびに／または油が含まれ
るが、これらに限定されない。そのような賦形剤が任意に本発明の薬学的製剤に含まれて
もよい。
リピドイド
リピドイドの合成が詳細に記載されており、これらの化合物を含有する製剤は、腫瘍学
関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの送達に特に適している（これら
すべてが参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｍａｈｏｎ ｅｔ ａｌ．
，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０１０ ２１：１４４８−１４５４、Ｓｃｈｒｏｅ
ｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．２０１０ ２６７：９−２１、Ａｋ
ｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８ ２６：５６１−５６
９、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１
０ １０７：１８６４−１８６９、Ｓｉｅｇｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔ
ｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１１０８：１２９９６−３００１を参照のこと）
。
これらのリピドイドを用いて、齧歯類および非ヒト霊長類において２本鎖低分子干渉Ｒ
ＮＡが有効に送達されているが（これらすべて、それらの全体が本明細書に組み込まれる
、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８ ２６：５６１
−５６９、Ｆｒａｎｋ−Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａ
ｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００８ １０５：１１９１５−１１９２０、Ａｋｉｎｃ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２−８７９、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０ １０７：１８６４−
１８６９、Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１
１ ２９：１００５−１０１０を参照のこと）、本開示は、１本鎖腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを送達することにおけるそれらの製剤化および使
用を記載する。これらのリピドイドを含有する複合体、ミセル、リポソーム、または粒子
が調製され得、したがって、局所および／または全身投与経路を介したリピドイド製剤の
注入後に、コードされたタンパク質の産生によって判定するとき、腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの有効な送達をもたらすことができる。腫瘍学関
連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのリピドイド複合体は、静脈内、筋
肉内、または皮下経路を含むが、これらに限定されない、種々の手段によって投与するこ
とができる。
核酸のインビボ送達は、製剤組成、粒子ＰＥＧ化の性質、負荷の程度、オリゴヌクレオ
チド対脂質比を含むが、これらに限定されない多くのパラメータ、および粒径等であるが
、これらに限定されない生物物理学的パラメータによって影響を受け得る（参照により全
体が本明細書に組み込まれる、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９
１７：８７２−８７９）。例として、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）脂質のア
ンカー鎖長のわずかな変化が、インビボ有効性に対する大きな効果をもたらし得る。ペン
タ［３−（１−ラウリルアミノプロピオニル）］−トリエチレンテトラミン塩酸塩（ＴＥ
ＴＡ−５ＬＡＰ（９８Ｎ１２−５としても知られる）、参照により全体が本明細書に組み
込まれる、Ｍｕｒｕｇａｉａｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ，４０１：６１（２０１０）を参照のこと）、Ｃ１２−２００（誘導体および
変異形を含む）、およびＭＤ１を含むが、これらに限定されない、異なるリピドイドを有
する製剤がインビボ活性について試験され得る。
本明細書において「９８Ｎ１２−５」と称されるリピドイドは、参照によりその全体が
組み込まれる、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２
−８７９（図２を参照のこと）によって開示されている（図２を参照のこと）。
本明細書において「Ｃ１２−２００」と称されるリピドイドは、両方ともに参照により
それらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０ １０７：１８６４−１８６９（図２を参照のこ
と）およびＬｉｕ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．２０１
０ ６６９−６７０（図２を参照のこと）によって開示されている。リピドイド製剤は、
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに加えて、３つもしくは４
つのいずれかまたはそれよりも多い構成成分を含む粒子を含むことができる。例として、
ある特定のリピドイドを有する製剤は、９８Ｎ１２−５を含むが、これらに限定されず、
４２％リピドイド、４８％コレステロール、および１０％ＰＥＧ（Ｃ１４アルキル鎖長）
を含有してもよい。別の例として、ある特定のリピドイドを有する製剤は、Ｃ１２−２０
０を含むが、これらに限定されず、５０％リピドイド、１０％ジステアロイルホスファチ
ジル（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ）コリン、３８．５％コレステロー
ル、および１．５％ＰＥＧ−ＤＭＧを含有してもよい。
一実施形態において、全身静脈内投与のためにリピドイドとともに製剤化される腫瘍学
関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、肝臓を標的とすることができ
る。例えば、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを使用し、４
２％の９８Ｎ１２−５、４８％のコレステロール、および１０％のＰＥＧ−脂質の脂質モ
ル組成を含み、約７．５〜１の総脂質対腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、また
はｍｍＲＮＡの最終重量比、およびＰＥＧ脂質上のＣ１４アルキル鎖長を有し、概ね５０
〜６０ｎｍの平均粒径を有する、最終的な最適化された静脈内製剤は、肝臓への９０％超
の製剤の分布をもたらし得る（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｋｉｎｃ
ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２−８７９を参照のこと）。別
の例において、Ｃ１２−２００（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれ
る、米国仮出願第６１／１７５，７７０号および公開された国際出願第ＷＯ２０１０１２
９７０９号を参照のこと）リピドイドを使用し、５０／１０／３８．５／１．５のＣ１２
−２００／ジステアロイルホスファチジル（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙ
ｌ）コリン／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧのモル比を有し得、７対１の総脂質対腫瘍
学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの重量比、および８０ｎｍの平
均粒径を有する静脈内製剤が、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲ
ＮＡを肝細胞に送達するのに有効であり得る（参照により全体が本明細書に組み込まれる
、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０
１０７：１８６４−１８６９を参照のこと）。別の実施形態において、ＭＤ１リピドイ
ド含有製剤を用いて、インビボで腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡを肝細胞に有効に送達し得る。筋肉内または皮下経路のために最適化されたリピド
イド製剤の特性は、標的細胞型、および製剤が細胞外マトリックスを介して血流中に拡散
する能力に応じて大きく異なり得る。内皮窓（ｆｅｎｅｓｔｒａｅ）のサイズに起因して
、１５０ｎｍ未満の粒径が有効な肝細胞送達のために所望され得るが（参照により全体が
本明細書に組み込まれる、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １
７：８７２−８７９を参照のこと）、製剤を、内皮細胞、骨髄細胞、および筋肉細胞を含
むが、これらに限定されない他の細胞型に送達するためのリピドイド製剤化腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの使用は、同様にサイズ制限されない場
合がある。ｓｉＲＮＡをインビボで骨髄細胞および内皮等の他の非肝細胞細胞に送達する
ためのリピドイド製剤の使用が報告されている（各々が参照により全体が本明細書に組み
込まれる、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８ ２６
：５６１−５６９、Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
．２０１１ ２９：１００５−１０１０、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ．Ｆｕｎｃｔ．Ｍ
ａｔｅｒ．２００９ １９：３１１２−３１１８、８ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｊｕｄａｈ Ｆｏｌｋｍａｎ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ Ｏ
ｃｔｏｂｅｒ ８−９，２０１０を参照のこと）。単球等の骨髄細胞への有効な送達、リ
ピドイド製剤は、同様の構成成分モル比を有し得る。リピドイドと、ジステアロイルホス
ファチジル（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ）コリン、コレステロール、
およびＰＥＧ−ＤＭＧを含むが、これらに限定されない他の構成成分との異なる比率を用
いて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの製剤を、肝細胞、
骨髄細胞、筋肉細胞等を含むが、これらに限定されない異なる細胞型への送達のために最
適化し得る。
例えば、構成成分モル比は、５０％のＣ１２−２００、１０％のジステアロイルホスフ
ァチジル（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ）コリン、３８．５％のコレス
テロール、および１．５％のＰＥＧ−ＤＭＧを含み得るが、これらに限定されない（参照
により全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１１ ２９：１００５−１０１０を参照のこと）。皮下送達ま
たは筋肉内送達のいずれかを介した、核酸の細胞（脂肪細胞および筋肉細胞等であるが、
これらに限定されない）への局所送達のためのリピドイド製剤の使用は、全身送達に所望
される製剤構成成分のすべてを必要とするわけではない場合があり、したがって、リピド
イドおよび腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのみを含んでも
よい。
リピドイドは、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡによる細
胞トランスフェクションを増加させ、かつ／またはコードされたタンパク質の翻訳を増加
させることが可能であり得るため、異なるリピドイドの組み合わせを用いて、腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの指示によるタンパク質産生の有効性
を改善し得る（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ ｅｔ
ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１１，１９：１６８８−１６９４を参照のこと）。
リポソーム、リポプレックス、および脂質ナノ粒子
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、１つ以上の
リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子を用いて製剤化することができる。一
実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの薬学的組成物は
、リポソームを含む。リポソームは、主に脂質二重層から構成され得、栄養素および薬学
的製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用され得る、人工的に調製された小胞である
。リポソームは、直径数百ナノメートルであり得、かつ狭い水性の区画によって分離され
る一連の同心状二重層を含有し得る多層小胞（ＭＬＶ）、直径５０ｎｍよりも小さい場合
がある小さい単細胞小胞（ＳＵＶ）、および直径５０〜５００ｎｍであり得る大きい単層
小胞（ＬＵＶ）等であるが、これらに限定されない、異なるサイズのものであり得る。リ
ポソーム設計は、不健康な組織へのリポソームの結合を改善するため、またはエンドサイ
トーシス等であるが、これらに限定されない事象を活性化するための、オプソニンまたは
リガンドを含むが、これらに限定されない。リポソームは、薬学的製剤の送達を改善する
ために低ｐＨまたは高ｐＨを含有してもよい。
リポソームの形成は、封入される薬学的製剤およびリポソーム成分、脂質小胞が分散さ
れる媒体の性質、封入される物質の有効濃度およびその潜在的な毒性、小胞の適用および
／または送達中に伴われる任意のさらなるプロセス、意図される適用のための小胞の最適
化サイズ、多分散性、および貯蔵寿命、ならびに安全かつ効率的なリポソーム生成物のバ
ッチ間の再現性および大規模産生の可能性等であるが、これらに限定されない、物理化学
特性に依存し得る。
一実施形態において、本明細書に記載の薬学的組成物は、制限なく、１，２−ジオレイ
ルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、Ｍａｒｉｎａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）によるＤｉＬａ２リポソーム、１，２−ジリノ
レイルオキシ（ｄｉｌｉｎｏｌｅｙｌｏｘｙ）−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ
−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−
ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、およびＭＣ３（参照により全体が本明細書
に組み込まれる、米国特許公開第２０１００３２４１２０号）から形成されるもの等のリ
ポソーム、ならびにＪａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｈｏｒｓｈａｍ、ＰＡ
）によるＤＯＸＩＬ（登録商標）等であるが、これらに限定されない小分子薬物を送達し
得るリポソームを含んでもよい。
一実施形態において、本明細書に記載の薬学的組成物は、制限なく、以前に記載されて
おり、インビトロおよびインビボでのオリゴヌクレオチド送達に好適であることが示され
た、安定化プラスミド−脂質粒子（ＳＰＬＰ）または安定化核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）
の合成から形成されるもの等のリポソームを含んでもよい（これらすべてが参照によりそ
れらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｗｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ．１９９９ ６：２７１−２８１、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ．１９９９ ６：１４３８−１４４７、Ｊｅｆｆｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍ
Ｒｅｓ．２００５ ２２：３６２−３７２、Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５ ２：１００２−１００７、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６ ４４１：１１１−１１４、Ｈｅｙｅｓ ｅｔ
ａｌ．Ｊ Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２００５ １０７：２７６−２８７、Ｓｅｍｐｌｅ ｅ
ｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０ ２８：１７２−１７６、Ｊｕｄｇ
ｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００９ １１９：６６１−６７３、ｄ
ｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓＨｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １９：１２５−１３
２を参照のこと）。Ｗｈｅｅｌｅｒらによる元の製造方法は、洗浄剤透析法（ｄｅｔｅｒ
ｇｅｎｔ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ）であり、それは後にＪｅｆｆｓらによって
改善され、自発的小胞形成法（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｖｅｓｉｃｌｅ ｆｏｒｍａｔ
ｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）と称される。リポソーム製剤は、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、
一次構築物、またはｍｍＲＮＡに加えて、３〜４つの脂質構成成分から構成される。例と
してリポソームは、Ｊｅｆｆｓらによって記載されるように、５５％のコレステロール、
２０％のジステアロイルホスファチジル（ｄｉｓｔｅｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ
）コリン（ＤＳＰＣ）、１０％のＰＥＧ−Ｓ−ＤＳＧ、および１５％の１，２−ジオレイ
ルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）を含有することができるが、
これらに限定されない。別の例として、ある特定のリポソーム製剤は、Ｈｅｙｅｓらによ
って記載されるように、４８％のコレステロール、２０％のＤＳＰＣ、２％のＰＥＧ−ｃ
−ＤＭＡ、および３０％のカチオン性脂質を含有してもよいが、これらに限定されず、こ
のカチオン性脂質は、１，２−ジステアリルオキシ（ｄｉｓｔｅａｒｌｏｘｙ）−Ｎ，Ｎ
−ジメチルアミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、または１，
２−ジリノレニルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）であり得る。
一実施形態において、薬学的組成物は、少なくとも１つの免疫原をコードし得るｍｍＲ
ＮＡを送達するために形成され得る、リポソームを含んでもよい。ｍｍＲＮＡは、リポソ
ームによってカプセル封入されてもよく、かつ／またはそれは、水性コアに含有されても
よく、それが次いでリポソームによってカプセル封入されてもよい（各々が参照によりそ
れらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０３１０４６号、同第Ｗ
Ｏ２０１２０３１０４３号、同第ＷＯ２０１２０３０９０１号、および同第ＷＯ２０１２
００６３７８号を参照のこと）。別の実施形態において、免疫原をコードし得るｍｍＲＮ
Ａは、カチオン性水中油型エマルション中で製剤化されてもよく、そのエマルション粒子
は、ｍｍＲＮＡと相互作用して分子をエマルション粒子に固着させることができる油中子
およびカチオン性脂質を含む（参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第Ｗ
Ｏ２０１２００６３８０号を参照のこと）。さらに別の実施形態において、脂質製剤は、
トランスフェクションを向上させ得る脂質である少なくともカチオン性脂質、および脂質
部分に連結された親水性頭頂基を含有する少なくとも１つの脂質を含んでもよい（各々が
参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１１０７６８０
７号および米国公開第２０１１０２００５８２号を参照のこと）。別の実施形態において
、免疫原をコードする腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲ
ＮＡは、官能化脂質二重層の間に架橋を有し得る脂質小胞中に製剤化されてもよい（参照
により全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２０１７７７２４号を参照のこ
と）。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍ
ＲＮＡは、官能化脂質二重層の間に架橋を有し得る脂質小胞中に製剤化されてもよい。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍ
ＲＮＡは、カチオン性脂質を含むリポソーム中に製剤化されてもよい。リポソームは、参
照により全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１３００６８２５号に記載さ
れるように、１：１〜２０：１のカチオン性脂質中の窒素原子：ＲＮＡ中のリン酸塩（Ｎ
：Ｐ比）のモル比を有し得る。別の実施形態において、リポソームは、２０：１超または
１：１未満のＮ：Ｐ比を有し得る。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍ
ＲＮＡは、脂質−ポリカチオン複合体中に製剤化されてもよい。脂質−ポリカチオン複合
体の形成は、当技術分野で既知の方法によって、および／または参照により全体が本明細
書に組み込まれる米国公開第２０１２０１７８７０２号に記載されるように遂行されても
よい。非限定的な例として、ポリカチオンには、ポリリジン、ポリオルニチン、および／
またはポリアルギニン等であるが、これらに限定されないカチオン性ペプチドまたはポリ
ペプチド、ならびに参照により全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２０
１３３２６号に記載のカチオン性ペプチドが含まれてもよい。別の実施形態において、腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、コレステロール
またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）等であるが、これらに
限定されない中性脂質をさらに含み得る、脂質−ポリカチオン複合体中に製剤化されても
よい。
リポソーム製剤は、カチオン性脂質構成成分の選択、カチオン性脂質飽和の程度、ＰＥ
Ｇ化の性質、すべての構成成分の比率、およびサイズ等の生物物理学的パラメータによっ
て影響を受け得るが、これらに限定されない。Ｓｅｍｐｌｅら（参照により全体が本明細
書に組み込まれる、Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１
０ ２８：１７２−１７６）による一例において、リポソーム製剤は、５７．１％のカチ
オン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロ
ール、および１．４％のＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡから構成された。別の例として、カチオン性
脂質の組成を変化させることにより、ｓｉＲＮＡを種々の抗原提示細胞により有効に送達
することができた（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｂａｓｈａ ｅｔ ａｌ
．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１１ １９：２１８６−２２００）。
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤中のＰＥＧの比率は、増加
もしくは減少し得、かつ／またはＰＥＧ脂質の炭素鎖長がＣ１４からＣ１８に修飾されて
、ＬＮＰ製剤の薬物動態および／もしくは生体分布を変化させ得る。非限定的な例として
、ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、ＤＳＰＣ、およびコレステロールと比較して、１〜５
％の脂質モル比のＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを含有してもよい。別の実施形態において、ＰＥ
Ｇ−ｃ−ＤＯＭＧは、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、
メトキシポリエチレングリコール）またはＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓ
ｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）等であるが、これらに限定されな
いＰＥＧ脂質と置き換えられてもよい。カチオン性脂質は、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、
ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、Ｃ１２−２００、およびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ等であるが、これ
らに限定されない、当技術分野で既知の任意の脂質から選択されてもよい。
一実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２１７０９３０号に記載の脂質ナ
ノ粒子等に製剤化されてもよい。
一実施形態において、カチオン性脂質は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に
組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０４０１８４号、同第ＷＯ２０１１１５３１２０
号、同第ＷＯ２０１１１４９７３３号、同第ＷＯ２０１１０９０９６５号、同第ＷＯ２０
１１０４３９１３号、同第ＷＯ２０１１０２２４６０号、同第ＷＯ２０１２０６１２５９
号、同第ＷＯ２０１２０５４３６５号、同第ＷＯ２０１２０４４６３８号、同第ＷＯ２０
１００８０７２４号、同第ＷＯ２０１０２１８６５号、および同第ＷＯ２００８１０３２
７６号、米国特許第７，８９３，３０２号、同第７，４０４，９６９号、および同第８，
２８３，３３３号、ならびに米国特許公開第ＵＳ２０１０００３６１１５号、および同第
ＵＳ２０１２０２０２８７１号に記載のカチオン性脂質から選択されてもよいが、これら
に限定されない。別の実施形態において、カチオン性脂質は、各々が参照によりそれらの
全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０４０１８４号、同第ＷＯ２０
１１１５３１２０号、同第ＷＯ２０１１１４９７３３号、同第ＷＯ２０１１０９０９６５
号、同第ＷＯ２０１１０４３９１３号、同第ＷＯ２０１１０２２４６０号、同第ＷＯ２０
１２０６１２５９号、同第ＷＯ２０１２０５４３６５号、および同第ＷＯ２０１２０４４
６３８号に記載の式Ａから選択されてもよいが、これらに限定されない。さらに別の実施
形態において、カチオン性脂質は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込ま
れる、国際公開第ＷＯ２００８１０３２７６号の式ＣＬＩ−ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７
，８９３，３０２号の式ＣＬＩ−ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，４０４，９６９号の式Ｃ
ＬＩ−ＣＬＸＸＸＸＩＩ、および米国特許公開第ＵＳ２０１０００３６１１５号の式Ｉ−
ＶＩから選択されてもよいが、これらに限定されない。非限定的な例として、カチオン性
脂質は、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０，２３−ジエン−１０−
アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ（ｄｉｍｅｍｙｌｈｅｘａｃ
ｏｓａ）−１７，２０−ジエン−９−アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ５Ｎ−ジメチルペン
タコサ−１６，１９−ジエン−８−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルドコ
サ−１３，１６−ジエン−５−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘニコサ
−１２，１５−ジエン−４−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−
１４，１７−ジエン−６−アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルテトラコサ−
１５，１８−ジエン−７−アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−
１８，２１−ジエン−１０−アミン、（１５Ζ，１８Ζ）−Ν，Ν−ジメチルテトラコサ
−１５，１８−ジエン−５−アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリコサ−
１４，１７−ジエン−４−アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ（
ｄｉｍｅｉｈｙｌｏｃｔａｃｏｓａ）−１９，２２−ジエン−９−アミン、（１８Ｚ，２
１ Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ−１８，２１−ジエン−８−アミン、（１７Ｚ，
２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７，２０−ジエン−７−アミン、（１６Ｚ，
１９Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６，１９−ジエン−６−アミン、（２２Ｚ，
２５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２，２５−ジエン−１０−アミン、（
２１Ｚ，２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリアコンタ−２１，２４−ジエン−９−アミン、
（１８Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサ（ｄｉｍｅｔｙｌｈｅｐｔａｃｏｓ）−１８−
エン−１０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキサコサ−１７−エン−９−アミ
ン、（１９Ｚ，２２Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタコサ−１９，２２−ジエン−７−アミ
ン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヘプタコサン−１０−アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ−エチル−
Ｎ−メチルノナコサ−２０，２３−ジエン−１０−アミン、１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−
１−ノニルイコサ−１１，１４−ジエン−１−イル］ピロリジン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−
ジメチルヘプタコサ−２０−エン−１０−アミン、（１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエプタ
コサ（ｅｐｔａｃｏｓ）−１５−エン−１０−アミン、（１４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノ
ナコサ−１４−エン−１０−アミン、（１７Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１７−エ
ン−１０−アミン、（２４Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルトリトリアコンタ−２４−エン−１０
−アミン、（２０Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−２０−エン−１０−アミン、（２２
Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルヘントリアコンタ−２２−エン−１０−アミン、（１６Ｚ）−Ｎ
，Ｎ−ジメチルペンタコサ−１６−エン−８−アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジ
メチル−２−ノニルヘニコサ−１２，１５−ジエン−１−アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）−
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメ
チル−１−［（ｌＳ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］エプタデカン（ｅｐｔａｄ
ｅｃａｎ）−８−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−ヘキシルシクロプロピル］−Ｎ，
Ｎ−ジメチルノナデカン−１０−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２
−オクチルシクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２１−［（
１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘニコサン−１０−アミン，Ν，Ν−ジメ
チル−１−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンチルシクロプロピル］
メチル｝シクロプロピル］ノナデカン−１０−アミン，Ν，Ν−ジメチル−１−［（１Ｓ
，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン−８−アミン、Ν，Ν−ジメチル
−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン−５−アミン、Ｎ，
Ｎ−ジメチル−３−｛７−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘプチル｝
ドデカン−１−アミン、１−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−ヘプチルシクロプロピル］−Ν，Ν
−ジメチルオクタデカン−９−アミン、１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−デシルシクロプロピ
ル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルペンタデカン−６−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（ｌＳ，
２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ペンタデカン−８−アミン、Ｒ−Ｎ，Ｎ−ジメチ
ル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−
（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、Ｓ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２
Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ）プロ
パン−２−アミン、１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１
−イルオキシ］−１−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）−Ｎ
，Ｎ−ジメチル−１−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオ
キシ］−３−［（５Ｚ）−オクタ−５−エン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、
１−｛２−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−１
−［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ
）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−
イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−（ヘプチルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメ
チル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロ
パン−２−アミン、Ν，Ν−ジメチル−１−（ノニルオキシ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）
−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ν，Ν−ジ
メチル−１−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオ
キシ）プロパン−２−アミン；（２Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（６Ｚ，９Ｚ，１２
Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン−１−イルオキシ］−３−（オクチルオキシ
）プロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−
ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（ペンチルオキシ）プロパン−２−
アミン、（２Ｓ）−１−（ヘキシルオキシ）−３−［（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１
，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（
１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン−１−イルオキシ］−Ν，Ν−ジメチル
−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−
ｌ３，１６−ジエン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プ
ロパン−２−アミン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ，１６Ｚ）−ドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−イルオキシ］−３−（ヘキシルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミ
ン、（２Ｓ）−１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１３−エン−１−イルオキシ］−３−（ヘキ
シルオキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−２−アミン、１−［（１３Ｚ）−ドコサ−１
３−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２
−アミン、１−［（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン−１−イルオキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチ
ル−３−（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｈ（
１−メトイルオクチル）オキシ］−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジ
エン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、（２Ｒ）−１−［（３，７−ジメチルオ
クチル）オキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２
−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−２−アミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（オクチル
オキシ）−３−（｛８−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンチルシク
ロプロピル］メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン−２−アミン、Ｎ，
Ｎ−ジメチル−１−｛［８−（２−オクチルシクロプロピル）オクチル］オキシ｝−３−
（オクチルオキシ）プロパン−２−アミン、および（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ
−ジメチルノナコサ−１１，２０，２−トリエン−１０−アミン、またはそれらの薬学的
に許容される塩もしくは立体異性体から選択されてもよい。
一実施形態において、脂質は、参照により全体が本明細書に組み込まれる国際公開第Ｗ
Ｏ２０１２１７０８８９号に記載の脂質等の切断可能な脂質であってもよい。
一実施形態において、カチオン性脂質は、当技術分野で既知の方法によって、かつ／ま
たは各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２
０４０１８４号、同第ＷＯ２０１１１５３１２０号、同第ＷＯ２０１１１４９７３３号、
同第ＷＯ２０１１０９０９６５号、同第ＷＯ２０１１０４３９１３号、同第ＷＯ２０１１
０２２４６０号、同第ＷＯ２０１２０６１２５９号、同第ＷＯ２０１２０５４３６５号、
同第ＷＯ２０１２０４４６３８号、同第ＷＯ２０１００８０７２４号、および同第ＷＯ２
０１０２１８６５号に記載されるように合成されてもよい。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍ
ＲＮＡのＬＮＰ製剤は、３％脂質モル比でＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを含有してもよい。別の
実施形態において、ＬＮＰ製剤ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮ
Ａは、１．５％脂質モル比でＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧを含有してもよい。
一実施形態において、薬学的の組成物腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およ
び／またはｍｍＲＮＡは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２０９９
７５５号に記載のＰＥＧ化脂質のうちの少なくとも１つを含んでもよい。
一実施形態において、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ ２０００（１，２−ジミリスト
イル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレング
リコール）−２０００）を含有してもよい。一実施形態において、ＬＮＰ製剤は、当技術
分野で既知のカチオン性脂質であるＰＥＧ−ＤＭＧ ２０００および少なくとも１つの他
の構成成分を含有してもよい。別の実施形態において、ＬＮＰ製剤は、当技術分野で既知
のカチオン性脂質であるＰＥＧ−ＤＭＧ ２０００、ＤＳＰＣ、およびコレステロールを
含有してもよい。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ−ＤＭＧ ２０００、ＤＬ
ｉｎ−ＤＭＡ、ＤＳＰＣ、およびコレステロールを含有してもよい。別の非限定的な例と
して、ＬＮＰ製剤は、２：４０：１０：４８のモル比で、ＰＥＧ−ＤＭＧ ２０００、Ｄ
Ｌｉｎ−ＤＭＡ、ＤＳＰＣ、およびコレステロールを含有してもよい（例えば、参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｅａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｎｖｉｒａｌ ｄｅ
ｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｅｌｆ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ＲＮＡ ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｐ
ＮＡＳ ２０１２；ＰＭＩＤ：２２９０８２９４を参照のこと）。別の非限定的な例とし
て、本明細書に記載の修飾ＲＮＡは、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国公開
第２０１２０２０７８４５号に記載されるように、非経口経路によって送達されるナノ粒
子中に製剤化されてもよい。
一実施形態において、ＬＮＰ製剤は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み
込まれる、国際公開第ＷＯ２０１１１２７２５５号または同第ＷＯ２００８１０３２７６
号に記載の方法によって製剤化されてもよい。非限定的な例として、本明細書に記載の修
飾ＲＮＡは、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２
０１１１２７２５５号および／または同第ＷＯ２００８１０３２７６号に記載されるよう
に、ＬＮＰ製剤中にカプセル封入されてもよい。
一実施形態において、本明細書に記載のＬＮＰ製剤は、ポリカチオン性組成物を含んで
もよい。非限定的な例として、ポリカチオン性組成物は、参照により全体が本明細書に組
み込まれる米国特許公開第ＵＳ２００５０２２２０６４号の式１〜６０から選択されても
よい。別の実施形態において、ポリカチオン性組成物を含むＬＮＰ製剤は、本明細書に記
載の修飾ＲＮＡのインビボおよび／またはインビトロでの送達に使用されてもよい。
一実施形態において、本明細書に記載のＬＮＰ製剤は、透過性促進剤分子をさらに含ん
でもよい。非限定的な透過性促進剤分子は、参照により全体が本明細書に組み込まれる米
国特許公開第ＵＳ２００５０２２２０６４号に記載されている。
一実施形態において、薬学的組成物は、ＤｉＬａ２リポソーム（Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓ
ｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）系リポソーム（例えば、卵巣癌に対するｓｉＲＮＡ送
達（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｌａｎｄｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｙ ２００６ ５（１２）１７０８−１７１３））、
およびヒアルロナンコーティングリポソーム（Ｑｕｉｅｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，
Ｉｓｒａｅｌ）等であるが、これらに限定されないリポソーム中に製剤化されてもよい。
ナノ粒子製剤は、炭水化物担体および修飾核酸分子（例えば、ｍｍＲＮＡ）を含む、炭
水化物ナノ粒子であってもよい。非限定的な例として、炭水化物担体は、無水物で修飾さ
れた植物グリコーゲンまたはグリコーゲン型材料、植物グリコーゲン（ｐｈｔｏｇｌｙｃ
ｏｇｅｎ）オクテニルコハク酸塩、植物グリコーゲンβ−デキストリン、無水物で修飾さ
れた植物グリコーゲンβ−デキストリンを含んでもよいが、これらに限定されない。（例
えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２１０９１２１
号を参照のこと）。
脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質を、急速排出（ｒａｐｉｄｌｙ ｅｌｉｍｉｎａ
ｔｅｄ）脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）として知られている生分解性カチオン性脂質と置き
換えることによって改善されてもよい。ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、お
よびＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ等であるが、これらに限定されない、イオン化できるカチ
オン性脂質は、時間とともに血漿および組織中に蓄積することが示されてきており、潜在
的な毒性の源であり得る。急速排出脂質の急速な代謝は、ラットにおいて１ｍｇ／ｋｇ用
量〜１０ｍｇ／ｋｇ用量の１桁分、脂質ナノ粒子の耐性および治療指数を改善することが
できる。酵素的に分解されるエステル結合の組み込みは、ｒｅＬＮＰ製剤の活性を依然と
して維持しながら、カチオン性構成成分の分解および代謝プロファイルを改善することが
できる。エステル結合は、脂質鎖の内部に位置することができるか、またはそれは、脂質
鎖の末端において末端に位置してもよい。内部エステル結合は、脂質鎖内の任意の炭素を
置き換えてもよい。
一実施形態において、内部エステル結合は、飽和炭素のいずれの側に位置してもよい。
ｒｅＬＮＰの非限定的な例としては、
が挙げられる。
一実施形態において、免疫応答が、ナノ化学種、ポリマー、および免疫原を含み得る脂
質ナノ粒子を送達することによって、誘発され得る。（各々が参照によりそれらの全体が
本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２０１８９７００号および国際公開第ＷＯ２
０１２０９９８０５号）。ポリマーは、ナノ化学種をカプセル封入しても、ナノ化学種を
部分的にカプセル封入してもよい。免疫原は、本明細書に記載の組換えタンパク質、修飾
ＲＮＡ、および／または一次構築物であってもよい。一実施形態において、脂質ナノ粒子
は、病原体に対するもの等であるが、これらに限定されないワクチンにおいて使用するた
めに製剤化されてもよい。
脂質ナノ粒子は、脂質ナノ粒子が粘膜関門を透過するように、粒子の表面特性を変化さ
せるように操作されてもよい。粘液は、口腔（例えば、周口膜および食道膜ならびに扁桃
組織）、眼、胃腸（例えば、胃、小腸、大腸、結腸、直腸）、鼻、呼吸器（例えば、経鼻
、咽頭、気管、および気管支膜）、生殖器（例えば、膣内、子宮頚部、および尿道膜）上
に位置する粘膜組織等であるが、これらに限定されない。より高い薬物カプセル封入効率
および幅広い薬物の持続送達を提供する能力のために好ましい１０〜２００ｎｍよりも大
きいナノ粒子、は、粘膜関門を通って急速に拡散するには大きすぎると考えられている。
粘液は、継続的に分泌され、脱落し、破棄されるかまたは消化され、再生されるため、捕
捉された粒子のほとんどは、数秒または数時間以内に粘膜（ｍｕｃｏｓｌａ）組織から除
去され得る。低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で密にコーティングされた大き
いポリマーナノ粒子（直径２００ｎｍ〜５００ｎｍ）は、水中で拡散している同じ粒子よ
りもわずか４〜６倍低く、粘液を通って拡散した（各々が参照によりそれらの全体が本明
細書に組み込まれる、Ｌａｉ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２００７ １０４（５）：１４８
２−４８７、Ｌａｉ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２００９
６１（２）：１５８−１７１）。ナノ粒子の輸送は、蛍光退色後回復測定（ＦＲＡＰ）お
よび高解像度多数粒子追跡（ＭＰＴ）を含むが、これらに限定されない、透過速度および
／または蛍光顕微鏡技法を用いて決定され得る。非限定的な例として、粘膜関門を透過し
得る組成物は、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，２４１，６７０
号に記載されるように作製されてもよい。
粘液を透過するように操作された脂質ナノ粒子は、ポリマー材料（すなわちポリマーコ
ア）および／またはポリマー−ビタミン複合体および／またはトリブロックコポリマーを
含んでもよい。ポリマー材料には、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステ
ル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリ（スチレン）、ポリイミド、
ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポ
リイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、お
よびポリアリレートが含まれてもよいが、これらに限定されない。ポリマー材料は、生分
解性および／または生体適合性であってもよい。ポリマー材料は、さらに照射されてもよ
い。非限定的な例として、ポリマー材料は、γ照射されてもよい（例えば、参照により全
体が本明細書に組み込まれる、国際出願第ＷＯ２０１２８２１６５号を参照のこと）。具
体的なポリマーの非限定的な例としては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン
酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ
）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）
、ポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（
ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプ
ロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン−ｃｏ−グリコリド）、
ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＥＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラ
クチド−ｃｏ−ＰＰＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート（
ａｃｒａｌａｔｅ）、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピル
メタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ
（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリア
ミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリエチレンおよびポリプロピレ
ン等のポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリアルキレンオキシ
ド（ＰＥＯ）等のポリアルキレングリコール、ポリ（エチレンテレフタレート）等のポリ
アルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポ
リ（酢酸ビニル）等のポリビニルエステル、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）等のハロゲン
化ポリビニル、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリウ
レタン、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セ
ルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロース等の誘導体化セルロース、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ
）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ
（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（
イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フ
ェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアク
リレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）等の
アクリル酸のポリマー、ならびにそのコポリマーおよび混合物、ポリジオキサノンおよび
そのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマル酸塩、ポリオキ
シメチレン、ポロキサマー、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、
ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、およびトリメチレンカーボネート、ポリビニ
ルピロリドンが挙げられる。脂質ナノ粒子は、ブロックコポリマー（参照により全体が本
明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１３０１２４７６号に記載の分岐状ポリエー
テル−ポリアミドブロックコポリマー等が挙げられるが、これらに限定されない）、およ
び（ポリ（エチレングリコール）−（ポリ（プロピレンオキシド）−（ポリ（エチレング
リコール）トリブロックコポリマー（例えば、各々が参照によりそれらの全体が本明細書
に組み込まれる、米国公開第２０１２０１２１７１８号および米国公開２０１００００３
３３７号ならびに米国特許第８，２６３，６６５号を参照のこと）等であるが、これらに
限定されない、コポリマーでコーティングされるか、またはそれと会合されてもよい。コ
ポリマーは、一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ポリマーであってもよく、脂質ナノ粒
子の形成は、新たな化学実体が何ら作り出されないような方式であってもよい。例えば、
脂質ナノ粒子は、新たな化学実体を形成することなく、依然としてヒト粘液に急速に透過
可能である、ポロキサマーコーティングＰＬＧＡナノ粒子を含んでもよい（参照により全
体が本明細書に組み込まれる、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．
Ｅｄ．２０１１ ５０：２５９７−２６００）。
ポリマー−ビタミン複合体のビタミンは、ビタミンＥであってもよい。この複合体のビ
タミン部分は、ビタミンＡ、ビタミンＥ、他のビタミン、コレステロール、他の界面活性
剤の疎水性部分または疎水性構成成分（例えば、ステロール鎖、脂肪酸、炭化水素鎖、お
よびアルキレンオキシド鎖）等であるが、これらに限定されない他の好適な構成成分で置
換されてもよい。
粘液に透過するように操作された脂質ナノ粒子には、ｍｍＲＮＡ、アニオン性タンパク
質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、ジメチルジオクタデシル−ア
ンモニウムブドミド等の、例えば、カチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えば
、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール
、およびポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン、餅草、ブロメ
ライ、パパイン、クレロデンドロン、アセチルシステイン、ブロムヘキシン、カルボシス
テイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レト
ステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、サイモシンβ４ドルナーゼα、ネ
ルテネキシン、エルドステイン）、およびｒｈＤＮａｓｅを含む種々のＤＮａｓｅ等であ
るが、これらに限定されない表面変質剤が含まれてもよい。表面変質薬剤は、粒子の表面
に包埋されるもしくは絡ませられるか、または脂質ナノ粒子の表面上に（例えば、コーテ
ィング、吸着、共有結合、または他のプロセスによって）配置されてもよい。（例えば、
各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国公開２０１００２１５５
８０号および米国公開２００８０１６６４１４号を参照のこと）。
粘液透過性脂質ナノ粒子は、本明細書に記載の少なくとも１つのｍｍＲＮＡを含んでも
よい。ｍｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子中にカプセル封入され、かつ／または粒子の表面上に
配置されてもよい。ｍｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子に共有結合されてもよい。粘液透過性脂
質ナノ粒子の製剤は、複数のナノ粒子を含んでもよい。さらに、製剤は、粘液と相互作用
し、周囲の粘液の構造特性および／または付着特性を、粘膜付着を減少させるように変質
させ得、それにより粘液透過性脂質ナノ粒子の粘膜組織への送達を増加させ得る、粒子を
含有してもよい。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは
、制限なく、Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ
Ｋｉｎｇｄｏｍ）によるＡＴＵＰＬＥＸ（商標）系、ＤＡＣＣ系、ＤＢＴＣ系、および
他のｓｉＲＮＡ−リポプレックス技術、ＳＴＥＭＧＥＮＴ（登録商標）（Ｃａｍｂｒｉｄ
ｇｅ，ＭＡ）によるＳＴＥＭＦＥＣＴ（商標）、ならびにポリエチレンイミン（ＰＥＩ）
またはプロタミンベースの標的を定めたおよび標的を定めない核酸送達等の、リポプレッ
クスとして製剤化される（すべてが参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｌｅｋ
ｕ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８ ６８：９７８８−９７９８、Ｓｔｒ
ｕｍｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ２
０１２ ５０：７６−７８、Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００
６ １３：１２２２−１２３４、Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２
００６ １３：１３６０−１３７０、Ｇｕｔｂｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｕｌｍ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１０ ２３：３３４−３４４、Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ
ａｌ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２０１０ ８０：２８６−２９３Ｗｅｉｄｅ ｅｔ
ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９ ３２：４９８−５０７、Ｗｅｉｄｅ ｅ
ｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００８ ３１：１８０−１８８、Ｐａｓｃｏｌ
ｏ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１２８５−１２９４、Ｆｏｔｉ
ｎ−Ｍｌｅｃｚｅｋ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：１−
１５、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５，２３
：７０９−７１７、Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ．２００７ ６；１０４：４０９５−４１００、ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓＨｕ
ｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １９：１２５−１３２）。
一実施形態において、そのような製剤は、それらが受動的または能動的に、肝細胞、免
疫細胞、腫瘍細胞、内皮細胞、抗原提示細胞、および白血球を含むが、これらに限定され
ない異なる細胞型をインビボで指向するようにも構築され得るか、または組成を変化し得
る（すべてが参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．Ｍｏ
ｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８：１３５７−１３６４、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５ ２３：７０９−７１７、Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．
，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００９ １１９：６６１−６７３、Ｋａｕｆｍａｎｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２０１０ ８０：２８６−２９３、Ｓａ
ｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００６ １３：１２２２−１２３４、
Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００６ １３：１３６０−１３７
０、Ｇｕｔｂｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｕｌｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１
０ ２３：３３４−３４４、Ｂａｓｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１１
１９：２１８６−２２００、Ｆｅｎｓｋｅ ａｎｄ Ｃｕｌｌｉｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐ
ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２００８ ５：２５−４４、Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ．２００８ ３１９：６２７−６３０、Ｐｅｅｒ ａｎｄ Ｌｉｅｂｅｒｍ
ａｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１１ １８：１１２７−１１３３）。肝臓細胞に対する
製剤の受動的な標的化の一例としては、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、
およびＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡベースの脂質ナノ粒子製剤が挙げられ、それらはアポリ
ポタンパク質Ｅに結合し、インビボでこれらの製剤の結合および肝細胞中への取り込みを
促進することが示されている（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｋｉｎｃ
ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８：１３５７−１３６４）。製剤は、葉酸
塩、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、および抗体で標
的を定めるアプローチにより例として示されるが、これらによって限定されない、それら
の表面上の異なるリガンドの発現を介して選択的に標的を定めることもできる（すべてが
参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｏｌｈａｔｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒ
ｒ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１ ８：１９７−２０６、Ｍｕｓ
ａｃｃｈｉｏ ａｎｄ Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．２０１１ １
６：１３８８−１４１２、Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｍｂｒ Ｂｉｏｌ．２０１
０ ２７：２８６−２９８、Ｐａｔｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｈｅｒ
Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．２００８ ２５：１−６１、Ｂｅｎｏｉｔ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１ １２：２７０８−２７１４
、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２００８
５：３０９−３１９、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８
：１３５７−１３６４、Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ．２０１２ ８２０：１０５−１１６、Ｂｅｎ−Ａｒｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１２ ７５７：４９７−５０７、Ｐｅｅｒ ２０
１０ Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ．２０：６３−６８、Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ
．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：４０９５−４
１００、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１１ ７２１
：３３９−３５３、Ｓｕｂｒａｍａｎｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０
１８：２０２８−２０３７、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
．２００５ ２３：７０９−７１７、Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００
８ ３１９：６２７−６３０、Ｐｅｅｒ ａｎｄ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈ
ｅｒ．２０１１ １８：１１２７−１１３３）。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは
、固体脂質ナノ粒子として製剤化される。固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、平均直径が１
０〜１０００ｎｍの球状であり得る。ＳＬＮは、親油性分子を可溶化することができ、界
面活性剤および／または乳化剤により安定化され得る、固体脂質コアマトリックスを有す
る。さらなる実施形態において、脂質ナノ粒子は、自己集合性脂質−ポリマーナノ粒子で
あってもよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，
ＡＣＳ Ｎａｎｏ，２００８，２（８），ｐｐ １６９６−１７０２を参照のこと）。
リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子は、これらの製剤が、腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡによる細胞トランスフェクションを増
加させ、かつ／またはコードされたタンパク質の翻訳を増加させることが可能であり得る
ため、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの指示によるタンパク質産生の
有効性を改善するために使用されてもよい。１つのそのような例は、ポリプレックスプラ
スミドＤＮＡの有効な全身送達を可能にするための脂質カプセル封入の使用を伴う（参照
により全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．
２００７ １５：７１３−７２０）。リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子
は、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの安定性を増加させる
ためにも使用され得る。
一実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲ
ＮＡは、制御放出および／または標的を定めた送達のために製剤化することができる。本
明細書で使用されるとき、「制御放出」は、特定の放出パターンに適合して治療成果をも
たらす、薬学的組成物または化合物放出プロファイルを指す。一実施形態において、ポリ
ヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、制御放出および／または標的を定めた
送達のために、本明細書に記載され、かつ／または当技術分野で既知の送達剤中にカプセ
ル封入されてもよい。本明細書で使用されるとき、「カプセル封入」という用語は、封入
する、包囲する、または包み込むことを意味する。それが本発明の化合物の製剤に関する
とき、カプセル封入は、実質的、完全、または部分的であってもよい。「実質的にカプセ
ル封入される」という用語は、本発明の薬学的組成物または化合物の少なくとも５０％超
、６０％超、７０％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９６％超、９７％超
、９８％超、９９％超、９９．９％超、９９．９％超、または９９．９９９％超が、送達
剤内に封入される、包囲される、または包み込まれることを意味する。「部分的カプセル
封入」は、本発明の薬学的組成物または化合物の１０未満、１０、２０、３０、４０、５
０以下が、送達剤内に封入される、包囲される、または包み込まれることを意味する。有
利なことに、カプセル封入は、蛍光および／または電子顕微鏡写真を用いて、本発明の薬
学的組成物または化合物の脱出または活性を測定することによって決定されてもよい。例
えば、本発明の薬学的組成物または化合物の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０
、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９
９．９９、または９９．９９％超が、送達剤中にカプセル封入される。
一実施形態において、制御放出製剤は、トリブロックコポリマーを含んでもよいが、こ
れらに限定されない。非限定的な例として、製剤は、２つの異なる種類のトリブロックコ
ポリマーを含んでもよい（各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公
開第ＷＯ２０１２１３１１０４号および同第ＷＯ２０１２１３１１０６号）。
別の実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、脂質ナ
ノ粒子または急速排出脂質ナノ粒子中にカプセル封入されてもよく、脂質ナノ粒子または
急速排出脂質ナノ粒子は次いで、本明細書に記載され、かつ／または当技術分野で既知の
ポリマー、ヒドロゲル、および／または手術用シーリング材中にカプセル封入されてもよ
い。非限定的な例として、ポリマー、ヒドロゲル、または手術用シーリング材は、ＰＬＧ
Ａ、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）（Ｎ
ａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．Ａｌａｃｈｕａ，ＦＬ）、ＨＹＬＥＮＥＸ（
登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ
）、フィブリノーゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｉｎｃ．Ｃｏｒｎｅｌｉａ、ＧＡ）、
ＴＩＳＳＥＬＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ Ｄ
ｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）、ＰＥＧベースのシーリング材、およびＣＯＳＥＡＬ（登録商
標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ
）等の手術用シーリング材であってもよい。
別の実施形態において、脂質ナノ粒子は、対象に注入されるとゲルを形成し得る、当技
術分野で既知の任意のポリマー中にカプセル封入されてもよい。別の非限定的な例として
、脂質ナノ粒子は、生分解性であり得るポリマーマトリックス中にカプセル封入されても
よい。
一実施形態において、制御放出および／または標的を定めた送達のための腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ製剤は、少なくとも１つの制御放出コー
ティング剤も含んでもよい。制御放出コーティング剤には、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、
ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロ
ピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
ＥＵＤＲＡＧＩＴ ＲＬ（登録商標）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ ＲＳ（登録商標）、およびエ
チルセルロース水性分散液（ＡＱＵＡＣＯＡＴ（登録商標）およびＳＵＲＥＬＥＡＳＥ（
登録商標））等のセルロース誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、制御放出および／または標的を定めた送達製剤は、ポリカチオン
性側鎖を含有し得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含んでもよい。分解性（Ｄｅ
ｇｒａｄｅａｂｌｅ）ポリエステルには、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド
−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、およびこれら
の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、分解性ポリ
エステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧ複合体化を含んでもよい。
一実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲ
ＮＡは、治療的ナノ粒子中にカプセル封入されてもよい。治療的ナノ粒子は、本明細書に
記載の方法、ならびに各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公
開第ＷＯ２０１０００５７４０号、同第ＷＯ２０１００３０７６３号、同第ＷＯ２０１０
００５７２１号、同第ＷＯ２０１０００５７２３号、同第ＷＯ２０１２０５４９２３号、
米国公開第ＵＳ２０１１０２６２４９１号、同第ＵＳ２０１００１０４６４５号、同第Ｕ
Ｓ２０１０００８７３３７号、同第ＵＳ２０１０００６８２８５号、同第ＵＳ２０１１０
２７４７５９号、同第ＵＳ２０１０００６８２８６号、および同第ＵＳ２０１２０２８８
５４１、ならびに米国特許第８，２０６，７４７号、同第８，２９３，２７６号、同第８
，３１８，２０８号、および同第８，３１８，２１１号等であるが、これらに限定されな
い当技術分野で既知の方法によって製剤化されてもよい。別の実施形態において、治療的
ポリマーナノ粒子は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第ＵＳ２０１
２０１４０７９０号に記載の方法によって特定されてもよい。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、持続放出のために製剤化されてもよい。本明
細書で使用されるとき、「持続放出」は、特定の一定期間にわたる放出速度に適合する薬
学的組成物または化合物を指す。一定期間は、数時間、数日間、数週間、数ヶ月間、およ
び数年間を含んでもよいが、これらに限定されない。非限定的な例として、持続放出ナノ
粒子は、ポリマー、ならびに本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡ
等であるが、それらに限定されない治療剤を含んでもよい（各々が参照によりそれらの全
体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１００７５０７２号、ならびに米国公開第
ＵＳ２０１００２１６８０４号、同第ＵＳ２０１１０２１７３７７号、および同第ＵＳ２
０１２０２０１８５９号を参照のこと）。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、標的特異的となるように製剤化されてもよい
。非限定的な例として、治療的（ｔｈｅｒｅａｐｅｕｔｉｃ）ナノ粒子は、コルチコステ
ロイドを含んでもよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０
１１０８４５１８号を参照のこと）。一実施形態において、治療的ナノ粒子は、癌特異的
となるように製剤化されてもよい。非限定的な例として、治療的ナノ粒子は、各々が参照
によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００８１２１９４９号
、同第ＷＯ２０１０００５７２６号、同第ＷＯ２０１０００５７２５号、同第ＷＯ２０１
１０８４５２１号、ならびに米国公開第ＵＳ２０１０００６９４２６号、同第ＵＳ２０１
２０００４２９３号、および同第ＵＳ２０１００１０４６５５号に記載のナノ粒子に製剤
化されてもよい。
一実施形態において、本発明のナノ粒子は、ポリマーマトリックスを含んでもよい。非
限定的な例として、ナノ粒子は、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒ
ドロキシ酸、ポリプロピルフマレート（ｆｕｍｅｒａｔｅ）、ポリカプロラクトン、ポリ
アミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリ
シアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリア
クリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、
ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ
−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）また
はこれらの組み合わせ等であるが、これらに限定されない２つ以上のポリマーを含んでも
よい。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、ジブロックコポリマーを含む。一実施形態に
おいて、ジブロックコポリマーには、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポ
リヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート（ｆｕｍｅｒａｔｅ）、ポリカプロラクトン、
ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、
ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポ
リアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレ
ン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ
（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）
またはこれらの組み合わせ等であるが、これらに限定されないポリマーと組み合わせたＰ
ＥＧが含まれてもよい。
非限定的な例として、治療的ナノ粒子は、ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを含む
（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第ＵＳ２０１２０
００４２９３号および米国特許第８，２３６，３３０号を参照のこと）。別の非限定的な
例において、治療的ナノ粒子は、ＰＥＧとＰＬＡまたはＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコ
ポリマーを含む、ステルスナノ粒子である（各々が参照によりその全体が本明細書に組み
込まれる、米国特許第８，２４６，９６８号および国際公開第ＷＯ２０１２１６６９２３
号を参照のこと）。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、マルチブロックコポリマーを含んでもよい（
例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２６３，
６６５号および同第８，２８７，９１０号を参照のこと）。
一実施形態において、本明細書に記載のブロックコポリマーは、非ポリマーミセルおよ
びブロックコポリマーを含む、ポリイオン複合体に含まれてもよい。（例えば、参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２００７６８３６号を参照のこと）
。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、少なくとも１つのアクリルポリマーを含んで
もよい。アクリルポリマーには、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸
とのコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シ
アノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル
酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート、ならびにこれらの組み合わせが
含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、本明細書に記載され、かつ／または当技術分
野で既知の少なくとも１つのカチオン性ポリマーを含んでもよい。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（ア
ミドアミン）デンドリマー、ポリ（β−アミノエステル）（例えば、参照により全体が本
明細書に組み込まれる、米国特許第８，２８７，８４９号を参照のこと）、およびこれら
の組み合わせ等であるが、これらに限定されない少なくとも１つのアミン含有ポリマーを
含んでもよい。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、ポリカチオン性側鎖を含有し得る少なくとも
１つの分解性ポリエステルを含んでもよい。分解性（Ｄｅｇｒａｄｅａｂｌｅ）ポリエス
テルには、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（
４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、およびこれらの組み合わせが含まれるが、こ
れらに限定されない。別の実施形態において、分解性ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマー
を形成するためのＰＥＧ複合体化を含んでもよい。
別の実施形態において、治療的ナノ粒子は、少なくとも１つの標的化リガンドの複合体
化を含んでもよい。標的化リガンドは、モノクローナル抗体等であるが、これらに限定さ
れない、当技術分野で既知の任意のリガンドであってもよい。（参照により全体が本明細
書に組み込まれる、Ｋｉｒｐｏｔｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００６
６６：６７３２−６７４０）。
一実施形態において、治療的ナノ粒子は、水溶液中で製剤化されてもよく、それを用い
て癌を標的としてもよい（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国
際公開第ＷＯ２０１１０８４５１３号および米国公開第ＵＳ２０１１０２９４７１７号を
参照のこと）。
一実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、合成ナノ
担体中にカプセル封入され、それと連結され、かつ／またはそれと会合されてもよい。合
成ナノ担体には、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第
ＷＯ２０１０００５７４０号、同第ＷＯ２０１００３０７６３号、同第ＷＯ２０１２１３
５０１号、同第ＷＯ２０１２１４９２５２号、同第ＷＯ２０１２１４９２５５号、同第Ｗ
Ｏ２０１２１４９２５９号、同第ＷＯ２０１２１４９２６５号、同第ＷＯ２０１２１４９
２６８号、同第ＷＯ２０１２１４９２８２号、同第ＷＯ２０１２１４９３０１号、同第Ｗ
Ｏ２０１２１４９３９３号、同第ＷＯ２０１２１４９４０５号、同第ＷＯ２０１２１４９
４１１号、同第ＷＯ２０１２１４９４５４号、および同第ＷＯ２０１３０１９６６９号、
ならびに米国公開第ＵＳ２０１１０２６２４９１号、同第ＵＳ２０１００１０４６４５号
、同第ＵＳ２０１０００８７３３７号、および同第ＵＳ２０１２０２４４２２２号に記載
の合成ナノ担体が含まれるが、これらに限定されない。合成ナノ担体は、当技術分野で既
知のおよび／または本明細書に記載の方法を用いて製剤化され得る。非限定的な例として
、合成ナノ担体は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開
第ＷＯ２０１０００５７４０号、同第ＷＯ２０１００３０７６３号、および同第ＷＯ２０
１２１３５０１号、ならびに米国公開第ＵＳ２０１１０２６２４９１号、同第ＵＳ２０１
００１０４６４５号、同第ＵＳ２０１０００８７３３７号、および同第ＵＳ２０１２０２
４４２２号に記載の方法によって製剤化され得る。別の実施形態において、合成ナノ担体
製剤は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０
１１０７２２１８号および米国特許第８，２１１，４７３号に記載の方法によって凍結乾
燥させ得る。
一実施形態において、合成ナノ担体は、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド
、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを放出するための反応性基を含有してもよい（
各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０９
５２５５２号および米国公開第ＵＳ２０１２０１７１２２９号を参照のこと）。
一実施形態において、合成ナノ担体は、合成ナノ担体の送達による免疫応答を向上させ
るための免疫刺激性薬剤を含有してもよい。非限定的な例として、合成ナノ担体は、免疫
系のＴｈ１ベースの応答を向上させ得るＴｈ１免疫刺激性薬剤を含んでもよい（各々が参
照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０１２３５６９号および
米国公開第ＵＳ２０１１０２２３２０１号を参照のこと）。
一実施形態において、合成ナノ担体は、標的を定めた放出のために製剤化されてもよい
。一実施形態において、合成ナノ担体は、指定されるｐＨで、かつ／または所望の時間間
隔の後に腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを放出す
るように製剤化される。非限定的な例として、合成ナノ粒子は、２４時間後にかつ／また
は４．５のｐＨで腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ
を放出するように製剤化されてもよい（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み
込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０１３８１９３号、および同第ＷＯ２０１０１３８１９
４号、ならびに米国公開第ＵＳ２０１１００２０３８８号、および同第ＵＳ２０１１００
２７２１７号を参照のこと）。
一実施形態において、合成ナノ担体は、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド
、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡの制御放出および／または持続放出のために製
剤化されてもよい。非限定的な例として、持続放出のための合成ナノ担体は、当技術分野
で既知であり、本明細書に記載され、かつ／または各々が参照によりそれらの全体が本明
細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０１３８１９２および米国公開第２０１００
３０３８５０号に記載の方法によって製剤化されてもよい。
一実施形態において、合成ナノ担体は、ワクチンとして使用するために製剤化されても
よい。一実施形態において、合成ナノ担体は、少なくとも１つの抗原をコードする少なく
とも１つのポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡをカプセル封入し
てもよい。非限定的な例として、合成ナノ担体は、少なくとも１つの抗原およびワクチン
剤形のため賦形剤を含んでもよい（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込ま
れる、国際公開第ＷＯ２０１１１５０２６４号および米国公開第ＵＳ２０１１０２９３７
２３号を参照のこと）。別の非限定的な例として、ワクチン剤形が、同じまたは異なる抗
原を有する少なくとも２つの合成ナノ担体、および賦形剤を含んでもよい（各々が参照に
よりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１１１５０２４９号お
よび米国公開第ＵＳ２０１１０２９３７０１号を参照のこと）。ワクチン剤形は、本明細
書に記載され、当技術分野で既知であり、かつ／または各々が参照によりそれらの全体が
本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１１１５０２５８号および米国公開第ＵＳ
２０１２００２７８０６号に記載の方法によって、選択されてもよい。
一実施形態において、合成ナノ担体は、少なくとも１つのアジュバントをコードする少
なくとも１つのポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを含んでもよ
い。非限定的な例として、アジュバントは、ジメチルジオクタデシルアンモニウム−ブロ
ミド、ジメチルジオクタデシルアンモニウム−クロリド、ジメチルジオクタデシルアンモ
ニウム−リン酸塩、またはジメチルジオクタデシルアンモニウム−酢酸塩（ＤＤＡ）、お
よびマイコバクテリウム属の総脂質抽出物の無極性画分または該無極性画分の一部を含ん
でもよい（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２４１，
６１０号を参照のこと）。別の実施形態において、合成ナノ担体は、少なくとも１つのポ
リヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ、ならびにアジュバントを含ん
でもよい。非限定的な例として、アジュバントを含む合成ナノ担体は、各々が参照により
全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１１１５０２４０号および米国公開
第ＵＳ２０１１０２９３７００号に記載の方法によって製剤化されてもよい。
一実施形態において、合成ナノ担体は、ウイルス由来のペプチド、断片、または領域を
コードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ
をカプセル封入してもよい。非限定的な例として、合成ナノ担体には、各々が参照により
それらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０２４６２１号、同第
ＷＯ２０１２０２６２９号、同第ＷＯ２０１２０２４６３２号、ならびに米国公開第ＵＳ
２０１２００６４１１０号、同第ＵＳ２０１２００５８１５３号、および同第ＵＳ２０１
２００５８１５４号に記載のナノ担体が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、合成ナノ担体は、体液性応答および／または細胞傷害性Ｔリンパ
球（ＣＴＬ）応答を触発することが可能であり得るポリヌクレオチド、一次構築物、また
はｍｍＲＮＡに連結されてもよい（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、
国際公開第ＷＯ２０１３０１９６６９号を参照のこと）。
一実施形態において、ナノ粒子は、経口投与のために最適化されてもよい。ナノ粒子は
、キトサンまたはその誘導体等であるが、これらに限定されない少なくとも１つのカチオ
ン性バイオポリマーを含んでもよい。非限定的な例として、ナノ粒子は、参照により全体
が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２０２８２３４３号に記載の方法によって
製剤化されてもよい。
ポリマー、生分解性ナノ粒子、およびコア−シェルナノ粒子
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、天然および
／または合成ポリマーを用いて製剤化することができる。送達に使用され得るポリマーの
非限定的な例としては、ＭＩＲＵＳ（登録商標）Ｂｉｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）および
Ｒｏｃｈｅ Ｍａｄｉｓｏｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によるＤＹＮＡＭＩＣ ＰＯＬＹ
ＣＯＮＪＵＧＡＴＥ（登録商標）（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅａｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐ
．，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ）製剤、制限なく、ＳＭＡＲＴＴ ＰＯＬＹＭＥＲ ＴＥＣ
ＨＮＯＬＯＧＹ（商標）（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）等のＰＨＡＳＥＲＸ（登録商標）ポリ
マー製剤、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、Ｖｉｃａｌ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ
）によるＶＡＸＦＥＣＴＩＮ（登録商標）アジュバント、キトサン、Ｃａｌａｎｄｏ Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ）によるシクロデキストリン、
デンドリマーおよびポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ポリマー、ＲＯＮＤ
ＥＬ（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（Ａｒｒｏｗｈｅ
ａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ）、ならび
にＰＨＡＳＥＲＸ（登録商標）（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）等であるが、これらに限定され
ないｐＨ応答性ブロックコポリマー（ｃｏ−ｂｌｏｃｋ ｐｏｌｙｍｅｒｓ）が挙げられ
る。
キトサン製剤の非限定的な例としては、正電荷性のキトサンのコア、ならびに負電荷性
の基質の外側部分が挙げられる（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第
２０１２０２５８１７６号）。キトサンには、Ｎ−トリメチルキトサン、モノ−Ｎ−カル
ボキシメチルキトサン（ＭＣＣ）、Ｎ−パルミトイルキトサン（ＮＰＣＳ）、ＥＤＴＡ−
キトサン、低分子量キトサン、キトサン誘導体、またはこれらの組み合わせが含まれるが
、これらに限定されない。
一実施形態において、本発明において使用されるポリマーは、細菌等であるが、これら
に限定されない望ましくない物質のポリマーの表面への結合を低減し、かつ／または阻害
するためのプロセシングを経ている。ポリマーは、当技術分野で既知であり、かつ／また
は当技術分野で記載され、かつ／または参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際
公開第ＷＯ２０１２１５０４６７号に記載の方法によって処理されてもよい。
ＰＬＧＡ製剤の非限定的な例としては、ＰＬＧＡ注入用デポーが挙げられるが、これら
に限定されない（例えば、ＰＬＧＡを、６６％のＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）
中に溶解させることによって形成され、残りの部分が水性溶媒およびロイプロリドである
、ＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標）。一旦注入されると、ＰＬＧＡおよびロイプロリドペプチ
ドは、皮下腔に沈殿する）。
これらのポリマーアプローチのうちの多くは、インビボでオリゴヌクレオチドを細胞の
細胞質中に送達することにおいて有効性を実証している（参照により全体が本明細書に組
み込まれる、ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １
９：１２５−１３２において概説される）。核酸（この実例では小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉ
ＲＮＡ）を用いて）の強固なインビボ送達をもたらした２つのポリマーアプローチは、動
的ポリ複合体（ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅ）およびシクロデキストリンベースのナノ粒
子である。これらの送達アプローチのうちの第１のアプローチは、動的ポリ複合体を使用
し、マウスにおいてインビボでｓｉＲＮＡを有効に送達し、肝細胞内で内因性標的ｍＲＮ
Ａをサイレンシングすることが示されている（参照により全体が本明細書に組み込まれる
、Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０
０７ １０４：１２９８２−１２８８７）。この特定のアプローチは、多成分ポリマー系
であり、その主要な特長として、核酸（この実例ではｓｉＲＮＡ）がジスルフィド結合を
介して共有結合され、ＰＥＧ（電荷遮蔽のため）基およびＮ−アセチルガラクトサミン（
肝細胞標的化のため）基の両方がｐＨ感受性結合を介して連結される、膜活性ポリマーが
含まれる（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐ
ｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：１２９８２−１２８
８７）。肝細胞に結合し、エンドソームに進入すると、ポリマー複合体は、低ｐＨ環境に
おいて解体し、このポリマーがその陽電荷を露出して、エンドソームからの脱出、および
ポリマーから細胞質へのｓｉＲＮＡの放出をもたらす。Ｎ−アセチルガラクトサミン基の
、マンノース基との置き換えを介して、アシアロ糖タンパク質受容体を発現する肝細胞か
ら、類洞内皮細胞およびクッパー細胞へと標的合わせを変化させ得ることが示された。別
のポリマーアプローチは、トランスフェリンを標的とするシクロデキストリン含有ポリカ
チオンナノ粒子を使用することを伴う。これらのナノ粒子は、トランスフェリン受容体を
発現するユーイング肉腫腫瘍細胞において、ＥＷＳ−ＦＬＩ１遺伝子産物の標的を定めた
サイレンシングを実証してきており（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｕ−
Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００５ ６５：８９８４
−８９８２）、これらのナノ粒子中に製剤化されたｓｉＲＮＡは、非ヒト霊長類において
耐性が良好であった（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅｉｄｅｌｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００７ １０４：５７１５−
２１）。これらの送達戦略の両方は、標的を定めた送達機構およびエンドソームからの脱
出機構の両方を用いた合理的なアプローチを組み込む。
ポリマー製剤は、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの持続放出または
遅延放出を可能にし得る（例えば、筋肉内または皮下注入後に）。腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡについての変化した放出プロファイルは、例えば
、長期間にわたってコードされたタンパク質の翻訳をもたらすことができる。ポリマー製
剤をまた使用して、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの安定
性を増加させ得る。生分解性ポリマーが、ｍｍＲＮＡ以外の核酸を分解から保護するため
に以前に使用されており、インビボでペイロードの持続放出をもたらすことが示されてい
る（各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．
，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：１２９８２−１
２８８７、Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅ
ｌｉｖ．２０１０ ７：１４３３−１４４６、Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂ
ｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１０ Ｏｃｔ １、Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ａ
ｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊａｎ １３、Ｍａｎｇａｎｉｅｌｌｏ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１２ ３３：２３０１−２３０９、Ｂｅｎｏｉｔ
ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１ １２：２７０８−２
７１４、Ｓｉｎｇｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．２０１１
２：１３３−１４７、ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２
００８ １９：１２５−１３２、Ｓｃｈａｆｆｅｒｔ ａｎｄ Ｗａｇｎｅｒ，Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．２００８ １６：１１３１−１１３８、Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ｅｔ ａｌ
．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２０１１ ８：１４５５−１４６
８、Ｄａｖｉｓ、Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２００９ ６：６５９−６６８、Ｄａｖｉｓ，Ｎ
ａｔｕｒｅ ２０１０ ４６４：１０６７−１０７０）。
一実施形態において、薬学的組成物は、持続放出製剤であってもよい。さらなる実施形
態において、持続放出製剤は、皮下送達のためであってもよい。持続放出製剤には、ＰＬ
ＧＡミクロスフェア、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ
（登録商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．Ａｌａｃｈｕａ，ＦＬ）、
ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）、フィブリノーゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｉｎｃ．Ｃｏｒｎｅ
ｌｉａ，ＧＡ）、ＴＩＳＳＥＬＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ，Ｉｎｃ Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、ＰＥＧベースのシーリング材、およびＣＯ
ＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ Ｄｅｅｒ
ｆｉｅｌｄ，ＩＬ）等の手術用シーリング材が含まれ得る。
非限定的な例として、修飾ｍＲＮＡは、調整可能な放出速度を有する（例えば、数日間
および数週間）ＰＬＧＡミクロスフェアを調製し、修飾ｍＲＮＡを、カプセル封入プロセ
ス中に修飾ｍＲＮＡの完全性を維持しながら、ＰＬＧＡミクロスフェア中にカプセル封入
することによって、ＰＬＧＡミクロスフェア中に製剤化されてもよい。ＥＶＡｃは、前臨
床の持続放出埋込物適用において広範に使用される、非生分解性（ｎｏｎ−ｂｉｏｄｅｇ
ｒａｄｅａｂｌｅ）の、生体適合性ポリマーである（例えば、緑内障に対するピロカルピ
ン眼内挿入物である持続放出製品Ｏｃｕｓｅｒｔまたは持続放出プロゲステロン子宮内器
具であるＰｒｏｇｅｓｔａｓｅｒｔ；経皮送達系Ｔｅｓｔｏｄｅｒｍ、Ｄｕｒａｇｅｓｉ
ｃ、およびＳｅｌｅｇｉｌｉｎｅ；カテーテル）。ポロキサマー Ｆ−４０７ ＮＦは、
５℃未満の温度で低粘度を有する、親水性の非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチ
レン−ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンのトリブロックコポリマーであり、１
５℃を超える温度で固体ゲルを形成する。ＰＥＧベースの手術用シーリング材は、１分間
で調製することができ、３分間でシーリングし、３０日以内に再吸収される、送達デバイ
スにおいて混合された２つの合成ＰＥＧ構成成分を含む。ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）お
よび天然ポリマーは、投与部位におけるインサイツのゲル化が可能である。それらは、イ
オン性相互作用（ｉｎｅｒａｃｔｉｏｎ）を介してタンパク質およびペプチド治療候補と
相互作用して、安定化効果を提供することが示されている。
ポリマー製剤は、葉酸塩、トランスフェリン、およびＮ−アセチルガラクトサミン（Ｇ
ａｌＮＡｃ）により例として示されるが、これらによって限定されない異なるリガンドの
発現を介して選択的に標的を定めることもできる（各々が参照により全体が本明細書に組
み込まれる、Ｂｅｎｏｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０
１１ １２：２７０８−２７１４、Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：１２９８２−１２８８７、Ｄａｖｉｓ，
Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２００９ ６：６５９−６６８、Ｄａｖｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ ２０
１０ ４６４：１０６７−１０７０）。
本発明の修飾核酸、およびｍｍＲＮＡは、ポリマー化合物とともにまたはポリマー化合
物中に製剤化されてもよい。ポリマーには、ポリエテン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｎｅｓ）、ポ
リエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ｌ−リジン）（ＰＬＬ）、ＰＬＬにグラフトさ
れたＰＥＧ、カチオン性リポポリマー、生分解性カチオン性リポポリマー、ポリエチレン
イミン（ＰＥＩ）、架橋分岐状ポリ（アルキレンイミン）、ポリアミン誘導体、修飾ポロ
キサマー、生分解性ポリマー、弾力のある生分解性ポリマー、生分解性ブロックコポリマ
ー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエス
テルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルブロックランダムコポリマー、マルチブ
ロックコポリマー、線状生分解性コポリマー、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グ
リコール酸）（ＰＡＧＡ）、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、ポリカ
ーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート（ｆｕｍｅｒａｔ
ｅ）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル
、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレ
タン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレ
ート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポ
リ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキ
シ−Ｌ−プロリンエステル）、アクリルポリマー、アミン含有ポリマー、デキストランポ
リマー、デキストランポリマー誘導体またはこれらの組み合わせ等であるが、これらに限
定されない少なくとも１つのポリマーが含まれてもよい。
非限定的な例として、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、参照によりその全体が本
明細書に組み込まれる米国特許第６，１７７，２７４号に記載のＰＬＬでグラフトされた
ＰＥＧのポリマー化合物とともに製剤化されてもよい。製剤は、インビトロで細胞をトラ
ンスフェクトするため、または修飾核酸およびｍｍＲＮＡのインビボ送達のために使用さ
れてもよい。別の例において、修飾核酸およびｍｍＲＮＡは、カチオン性ポリマーを含む
溶液もしくは媒体中に、乾燥した薬学的組成物中に、または各々が参照によりそれらの全
体が本明細書に組み込まれる米国公開第２００９００４２８２９号および同第２００９０
０４２８２５号に記載の乾燥させることができる溶液中に懸濁させてもよい。
別の非限定的な例として、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、または
ｍｍＲＮＡは、ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー（参照により全体が本明細書に組み
込まれる、米国公開第ＵＳ２０１２０００４２９３号および米国特許第８，２３６，３３
０号を参照のこと）またはＰＬＧＡ−ＰＥＧ−ＰＬＧＡブロックコポリマー（参照により
全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，００４，５７３号を参照のこと）ととも
に製剤化されてもよい。非限定的な例として、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一
次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ＰＥＧとＰＬＡまたはＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコ
ポリマーとともに製剤化されてもよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国
特許第８，２４６，９６８号を参照のこと）。
ポリアミン誘導体を用いて、核酸を送達するか、または疾患を治療および／もしくは予
防するか、または埋込型もしくは注入型デバイスに含めてもよい（参照により全体が本明
細書に組み込まれる、米国公開第２０１００２６０８１７号）。非限定的な例として、薬
学的組成物は、修飾核酸およびｍｍＲＮＡ、ならびに内容が参照によりその全体が本明細
書に組み込まれる米国公開第２０１００２６０８１７号に記載のポリアミン誘導体を含ん
でもよい。非限定的な例として、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、お
よびｍｍＲＮＡは、炭水化物ジアジドモノマーを、オリゴアミンを含むジルキン（ｄｉｌ
ｋｙｎｅ）単位と組み合わせることによって調製される１，３−双極性付加ポリマーを含
むポリマー等であるが、これらに限定されない、ポリアミドポリマーを用いて送達されて
もよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２３６，２８０号）
。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２
０１１１１５８６２号、同第ＷＯ２０１２０８２５７４号、および同第ＷＯ２０１２０６
８１８７号、ならびに米国公開第２０１２０２８３４２７号に記載の少なくとも１つのポ
リマーおよび／またはその誘導体とともに製剤化されてもよい。別の実施形態において、
本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際
公開第ＷＯ２０１１１１５８６２号に記載の式Ｚのポリマーとともに製剤化されてもよい
。さらに別の実施形態において、修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、各々が参照によりそれら
の全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０８２５７４号または同第Ｗ
Ｏ２０１２０６８１８７号および米国公開第２０１２０２８３４２号に記載の式Ｚ、Ｚ’
、またはＺ’’のポリマーとともに製剤化されてもよい。本発明の修飾ＲＮＡとともに製
剤化されるポリマーは、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際
公開第ＷＯ２０１２０８２５７４号または同第ＷＯ２０１２０６８１８７号に記載の方法
によって合成されてもよい。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、少なくとも
１つのアクリルポリマーとともに製剤化されてもよい。アクリルポリマーには、アクリル
酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸とのコポリマー、メチルメタクリレートコ
ポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキ
ルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノ
アクリレート、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの製剤は、ポリ
リジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、またはこれらの組み
合わせ等であるが、これらに限定されない少なくとも１つのアミン含有ポリマーを含んで
もよい。
例えば、本発明の修飾核酸またはｍｍＲＮＡは、ポリ（アルキレンイミン）、生分解性
カチオン性リポポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ポリマー、もしくは生
分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエ
ステルポリマー、生分解性ポリエステルランダムコポリマー、線状生分解性コポリマー、
ＰＡＧＡ、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、またはこれらの組み合わ
せを含む薬学的化合物中に製剤化されてもよい。生分解性カチオン性リポポリマーは、当
技術分野で既知の方法、ならびに／または各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組
み込まれる、米国特許第６，６９６，０３８号、米国出願第２００３００７３６１９号、
および同第２００４０１４２４７４号に記載の方法によって作製されてもよい。ポリ（ア
ルキレンイミン）は、当技術分野で既知の方法、および／または参照により全体が本明細
書に組み込まれる米国公開第２０１００００４３１５号に記載の方法を用いて作製されて
もよい。生分解性（ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂａｌｅ）ポリマー、生分解性ブロックコポリ
マー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解
性ポリエステルポリマー、または生分解性ポリエステルランダムコポリマーは、当技術分
野で既知の方法、ならびに／または内容がそれぞれ参照により全体が本明細書に組み込ま
れる、米国特許第６，５１７，８６９号および同第６，２６７，９８７号に記載の方法を
用いて作製されてもよい。線状生分解性コポリマーは、当技術分野で既知であり、かつ／
または米国特許第６，６５２，８８６号に記載の方法を用いて作製されてもよい。ＰＡＧ
Ａポリマーは、当技術分野で既知の方法、ならびに／または参照により全体が本明細書に
組み込まれる米国特許第６，２１７，９１２号に記載の方法を用いて作製されてもよい。
ＰＡＧＡポリマーは、共重合して、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアルギン（ｐｏｌｙａｒｇｉ
ｎｅ）、ポリオルニチン、ヒストン、アビジン、プロタミン、ポリラクチド、およびポリ
（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）等であるが、これらに限定されないポリマーとともにコ
ポリマーまたはブロックコポリマーを形成してもよい。生分解性架橋カチオン性マルチブ
ロックコポリマーは、当技術分野で既知の方法、ならびに／または各々が参照によりそれ
らの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，０５７，８２１もしくは米国公開第
２０１２００９１４５号に記載の方法によって作製されてもよい。例えば、マルチブロッ
クコポリマーは、分岐状ポリエチレンイミンと比較して明確に異なるパターンを有する線
状ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）ブロックを用いて合成されてもよい。さらに、組成物
または薬学的組成物は、当技術分野で既知の方法、本明細書に記載の方法、または各々が
参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１００００４３１５
号もしくは米国特許第６，２６７，９８７号および同第６，２１７，９１２号に記載の方
法によって作製されてもよい。
本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、ポリカチオン性側鎖を
含有し得る少なくとも１つの分解性ポリエステルとともに製剤化されてもよい。分解性（
Ｄｅｇｒａｄｅａｂｌｅ）ポリエステルには、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラク
チド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、およびこ
れらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、分解性
ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧ複合体化を含んでもよい。
本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、ｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの架橋性ポリ
エステルとともに製剤化されてもよい。架橋性ポリエステルは、当技術分野で既知であり
、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国公開第２０１２０２６９７６１号に記載
の架橋性ポリエステルを含む。
一実施形態において、本明細書に記載のポリマーは、脂質末端を有する（ｌｉｐｉｄ−
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ）ＰＥＧに複合体化されてもよい。非限定的な例として、ＰＬＧ
Ａは、脂質末端を有するＰＥＧに複合体化されて、ＰＬＧＡ−ＤＳＰＥ−ＰＥＧを形成し
てもよい。別の非限定的な例として、本発明とともに使用するためのＰＥＧ複合体は、参
照により全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２００８１０３２７６号に記載さ
れている。ポリマーは、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，２７３
，３６３号に記載の複合体等であるが、これらに限定されないリガンド複合体を用いて接
合されてもよい。
一実施形態において、本明細書に記載の修飾ＲＮＡは、別の化合物と複合体化されても
よい。複合体の非限定的な例は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれ
る、米国特許第７，９６４，５７８号および同第７，８３３，９９２号に記載されている
。別の実施形態において、本発明の修飾ＲＮＡは、各々が参照によりそれらの全体が本明
細書に組み込まれる、米国特許第７，９６４，５７８号および同第７，８３３，９９２号
に記載の式１〜１２２の複合体と複合体化されてもよい。本明細書に記載の腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、金等であるが、これらに限
定されない金属と複合体化されてもよい。（例えば、参照により全体が本明細書に組み込
まれる、Ｇｉｌｊｏｈａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．
２００９ １３１（６）：２０７２−２０７３を参照のこと）。別の実施形態において、
本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ
は、金ナノ粒子中と複合体化および／またはカプセル封入されてもよい。（各々が参照に
よりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２１６２６９号およ
び米国公開第２０１２０３０２９４０号）。
参照により全体が本明細書に組み込まれる米国公開第２０１００００４３１３号に記載
されるように、遺伝子送達組成物は、ヌクレオチド配列およびポロキサマーを含んでもよ
い。例えば、本発明（ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎｖｅｉｔｉｏｎ）の修飾核酸およびｍｍＲＮ
Ａは、米国公開第２０１００００４３１３号に記載のポロキサマーを含む遺伝子送達組成
物において使用されてもよい。
一実施形態において、本発明のポリマー製剤は、カチオン性担体を含み得るポリマー製
剤を、コレステロール基およびポリエチレングリコール基に共有結合され得るカチオン性
リポポリマーと接触させることによって、安定化されてもよい。ポリマー製剤は、参照に
より全体が本明細書に組み込まれる米国公開第２００９００４２８２９号に記載の方法を
用いてカチオン性リポポリマーと接触させてもよい。カチオン性担体には、ポリエチレン
イミン、ポリ（トリメチレンイミン）、ポリ（テトラメチレンイミン）、ポリプロピレン
イミン、アミノグリコシド−ポリアミン、ジデオキシ−ジアミノ−ｂ−シクロデキストリ
ン、スペルミン、スペルミジン、ポリ（２−ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、ポ
リ（リジン）、ポリ（ヒスチジン）、ポリ（アルギニン）、カチオン化ゼラチン、デンド
リマー、キトサン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（Ｄ
ＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリ
メチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１−［２−（オレオイルオキシ）エチル］
−２−オレイル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ
）、２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，
Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロ酢酸塩（ＤＯＳＰＡ）、３Ｂ−［Ｎ
-（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール塩酸塩（ＤＣ
−コレステロールＨＣｌ）ジヘプタデシルアミドグリシルスペルミジン（ＤＯＧＳ）、Ｎ
，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１，
２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル
アンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチル塩化アン
モニウムＤＯＤＡＣ）、およびこれらの組み合わせが含まれてもよいが、これらに限定さ
れない。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、１
つ以上のポリマーのポリプレックス中に製剤化されてもよい（各々が参照によりその全体
が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２０２３７５６５号および同第２０１２０
２７０９２７号）。一実施形態において、ポリプレックスは、２つ以上のカチオン性ポリ
マーを含む。カチオン性（ｃａｔｉｏｉｎｉｃ）ポリマーは、線状ＰＥＩ等のポリ（エチ
レンイミン）（ＰＥＩ）を含んでもよい。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、ポリマー、
脂質、および／またはリン酸カルシウム等であるが、これらに限定されない他の生分解性
薬剤の組み合わせを用いてナノ粒子として製剤化することもできる。構成成分は、ポリヌ
クレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡの送達が向上し得るようにナノ粒子の微調整
を可能にするために、コア−シェル、ハイブリッド、および／または交互積層アーキテク
チャとして組み合わされてもよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｗａｎｇ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍａｔｅｒ．２００６ ５：７９１−７９６、Ｆｕｌｌｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２００８ ２９：１５２６−１５３２、Ｄｅ
Ｋｏｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１１ ６３：
７４８−７６１、Ｅｎｄｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１１
３２：７７２１−７７３１、Ｓｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２０１１ Ｊｕ
ｎ ６；８（３）：７７４−８７）。非限定的な例として、ナノ粒子は、親水性−疎水性
ポリマー（例えば、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ）、疎水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）、および／
または親水性ポリマー等であるが、これらに限定されない複数のポリマーを含んでもよい
（参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０２２５１２９号
）。
脂質および／またはポリマーと組み合わせた生分解性リン酸カルシウムナノ粒子は、イ
ンビボでポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡを送達することが示されてい
る。一実施形態において、アニスアミド等の標的化リガンドもまた含有し得る、脂質でコ
ーティングされたリン酸カルシウムナノ粒子を用いて、本発明のポリヌクレオチド、一次
構築物、およびｍｍＲＮＡを送達してもよい。例えば、マウス転移性肺モデルにおいてｓ
ｉＲＮＡを有効に送達するために、脂質でコーティングされたリン酸カルシウムナノ粒子
が使用された（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃ
ｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２０１０ １４２：４１６−４２１、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏ
ｎｔｒ Ｒｅｌ．２０１２ １５８：１０８−１１４、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ
Ｔｈｅｒ．２０１２ ２０：６０９−６１５）。この送達系は、ｓｉＲＮＡの送達を改
善するために、標的を定めたナノ粒子と、エンドソームからの脱出を向上させるための構
成成分リン酸カルシウムとの両方を組み合わせる。
一実施形態において、ＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマーとともにリン酸カルシ
ウムを用いて、ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡを送達してもよい（参
照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｋａｚｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎ
ｔｒ Ｒｅｌ．２００４ ９７：３４５−３５６、Ｋａｚｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ
Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２００６ １１１：３６８−３７０）。
一実施形態において、ＰＥＧ電荷変換型ポリマー（Ｐｉｔｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｂ
ｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１１ ３２：３１０６−３１１４）を用いて、本発明の腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡを送達するためのナノ粒子を
形成してもよい。ＰＥＧ電荷変換型ポリマーは、酸性ｐＨでポリカチオンへと切断され、
それ故に、エンドソームからの脱出を向上させることによって、ＰＥＧ−ポリアニオンブ
ロックコポリマーを改善し得る。
コア−シェルナノ粒子の使用は、カチオン性架橋ナノゲルコアおよび種々のシェルを合
成するための高処理アプローチにさらに焦点を当てている（Ｓｉｅｇｗａｒｔ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１ １０８：１２９９６
−１３００１）。ポリマーナノ粒子の複合体形成、送達、および内在化は、ナノ粒子のコ
ア構成成分およびシェル構成成分の両方の化学組成を変化させることによって精密に制御
することができる。例えば、コア−シェルナノ粒子は、コレステロールをナノ粒子に共有
結合させた後に、ｓｉＲＮＡをマウス肝細胞に効率的に送達し得る。
一実施形態において、中間のＰＬＧＡ層およびＰＥＧを含有する外側の中性脂質層を含
む、中空の脂質コアを用いて、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮ
Ａを送達してもよい。非限定的な例として、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒｅａｓｅ）
発現腫瘍を担持するマウスにおいて、脂質−ポリマー−脂質ハイブリッドナノ粒子が、従
来のリポプレックスと比較して、ルシフェラーゼ発現を有意に抑制することが確認された
（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅ
ｍ Ｉｎｔ Ｅｄ．２０１１ ５０：７０２７−７０３１）。
一実施形態において、脂質ナノ粒子は、本明細書に開示の修飾核酸分子のコア、および
ポリマーシェルを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技術分野で
既知のポリマーのうちのいずれでもあり得る。さらなる実施形態において、ポリマーシェ
ルを用いて、コアにおける修飾核酸を保護し得る。
本発明の修飾核酸分子とともに使用するためのコア−シェルナノ粒子が記載されており
、これは、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，３１３，７７７号に
記載の方法によって形成されてもよい。
一実施形態において、コア−シェルナノ粒子は、本明細書に開示の修飾核酸分子のコア
、およびポリマーシェルを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技
術分野で既知のポリマーのうちのいずれでもあり得る。さらなる実施形態において、ポリ
マーシェルを用いて、コアにおける修飾核酸分子を保護し得る。非限定的な例として、コ
ア−シェルナノ粒子を用いて、眼疾患または障害を治療し得る（例えば、参照により全体
が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２０３２１７１９号を参照のこと）。
一実施形態において、本明細書に記載の製剤とともに使用されるポリマーは、参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１１１２００５３号に記載の修飾ポ
リマー（修飾ポリアセタール等であるが、これらに限定されない）であってもよい。
ペプチドおよびタンパク質
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡによる細胞のトランスフェクションを
増加させるために、ペプチドおよび／またはタンパク質とともに製剤化することができる
。一実施形態において、細胞透過性ペプチドならびに細胞内送達を可能にするタンパク質
およびペプチド等であるが、これらに限定されないペプチドを用いて、薬学的製剤を送達
してもよい。本発明の薬学的製剤とともに使用され得る細胞透過性ペプチドの非限定的な
例としては、細胞内空間への送達を容易にする、ポリカチオンに結合した細胞透過性ペプ
チド配列、例えば、ＨＩＶ由来ＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トランスポータン、また
はｈＣＴ由来細胞透過性ペプチドである（例えば、すべてが参照により全体が本明細書に
組み込まれる、Ｃａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．３（３）：３１０−８（
２００１）、Ｌａｎｇｅｌ，Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｐ
ｒｏｃｅｓｓｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ ＦＬ，２００２）、Ｅｌ−Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒ
ｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．１１（２８）：３５９７−６１１（２００３）、およびＤｅｓ
ｈａｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６２（１６）：１８
３９−４９（２００５）を参照のこと）。組成物は、組成物の細胞内空間への送達を向上
させる細胞透過性薬剤、例えば、リポソームを含むように製剤化することもできる。本発
明のポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、細胞内送達を可能にするため
に、Ａｉｌｅｒｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）およびＰ
ｅｒｍｅｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）によるペプチドおよび
／またはタンパク質等であるが、これらに限定されない、ペプチドおよび／またはタンパ
ク質に複合体形成されてもよい（すべてが参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｃ
ｒｏｎｉｃａｎ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１０ ５：７４７−
７５２、ＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ２００９ １０６：６１１１−６１１６、Ｓａｗｙｅｒ，Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ
Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．２００９ ７３：３−６、Ｖｅｒｄｉｎｅ ａｎｄ Ｈｉｌｉｎｓ
ｋｉ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０１２；５０３：３−３３）。
一実施形態において、細胞透過性ポリペプチドは、第１のドメインおよび第２のドメイ
ンを含み得る。第１のドメインは、超荷電ポリペプチドを含み得る。第２のドメインは、
タンパク質結合パートナーを含み得る。本明細書で使用されるとき、「タンパク質結合パ
ートナー」には、抗体およびその機能的断片、足場タンパク質、またはペプチドが含まれ
るが、これらに限定されない。細胞透過性ポリペプチドは、タンパク質結合パートナーの
ための細胞内結合パートナーをさらに含み得る。細胞透過性ポリペプチドは、腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが導入され得る細胞から分泌されるこ
とが可能であり得る。
ペプチドまたはタンパク質を含む製剤を用いて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構
築物、もしくはｍｍＲＮＡによる細胞トランスフェクションを増加させ、腫瘍学関連ポリ
ヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡの生体分布を変化させ（例えば、具体的
な組織または細胞型を標的とすることによって）、かつ／またはコードされたタンパク質
の翻訳を増加させることができる。（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる
、国際公開第ＷＯ２０１２１１０６３６号を参照のこと）。
細胞
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、エクスビボ
で細胞中にトランスフェクトすることができ、それがその後、対象に移植される。非限定
的な例として、薬学的組成物は、修飾ＲＮＡを肝臓および骨髄細胞に送達するための赤血
球、修飾ＲＮＡをウイルス様粒子（ＶＬＰ）中で送達するためのビロソーム、ならびにＭ
ＡＸＣＹＴＥ（登録商標）（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）による細胞、およびＥＲ
ＹＴＥＣＨ（登録商標）（Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）による細胞等であるが、これらに限
定されない、修飾ＲＮＡを送達するためのエレクトロポレーション処理された細胞を含ん
でもよい。ｍｍＲＮＡ以外のペイロードを送達するための赤血球、ウイルス粒子、および
エレクトロポレーション処理された細胞の使用例が、文書化されている（すべてが参照に
より全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｏｄｆｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏ
ｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１２ １２：１２７−１３３、Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ
．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１２ １２：３８５−３８９、
Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１ １０
８：１０９８０−１０９８５、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２０１０
２７：４００−４２０、Ｈｕｃｋｒｉｅｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｌｉｐｏｓｏｍｅ
Ｒｅｓ．２００７；１７：３９−４７、Ｃｕｓｉ，Ｈｕｍ Ｖａｃｃｉｎ．２００６ ２
：１−７、ｄｅ Ｊｏｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００６ １３：４
００−４１１）。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、各々が参照によりそ
れらの全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１１０８５２３１号および米国
公開第２０１１０１７１２４８号に記載の方法によって合成される合成ＶＬＰ中で送達さ
れてもよい。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡの細胞ベースの
製剤を用いて、細胞トランスフェクションを確実にし（例えば、細胞担体中の）、腫瘍学
関連ポリヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡの生体分布を変化させ（例えば
、細胞担体の標的を具体的な組織または細胞型に定めることによって）、かつ／またはコ
ードされたタンパク質の翻訳を増加させてもよい。
ウイルスおよび非ウイルス媒介性技法を含む、核酸の細胞内への導入に好適である多様
な方法が当技術分野で知られている。典型的な非ウイルス媒介性技法の例としては、エレ
クトロポレーション、リン酸カルシウム媒介性移入、ヌクレオフェクション、ソノポレー
ション、熱ショック、マグネトフェクション、リポソーム媒介性移入、マイクロインジェ
クション、マイクロプロジェクタイル媒介性移入（ナノ粒子）、カチオン性ポリマー媒介
性移入（ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）等）、または細胞融合が挙げられるが、これらに限定されない。
ソノポレーション、または細胞超音波処理の技法は、細胞原形質膜の透過性修飾するた
めに音（例えば、超音波周波数）を使用するものである。ソノポレーション法は、当業者
に知られており、インビボで核酸を送達するために使用される（すべて参照により全体が
本明細書に組み込まれる、Ｙｏｏｎ ａｎｄ Ｐａｒｋ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒ
ｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２０１０ ７：３２１−３３０、Ｐｏｓｔｅｍａ ａｎｄ Ｇｉｌｊ
ａ，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００７ ８：３５５−３６１、Ｎ
ｅｗｍａｎ ａｎｄ Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００７ １４：４６
５−４７５）。ソノポレーション法は、当技術分野で知られており、また、例えば、それ
が細菌に関する場合には、米国特許公開第２０１００１９６９８３号において、それが他
の細胞型に関する場合には、例えば、米国特許公開２０１００００９４２４号において教
示され、これらの各々は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。
エレクトロポレーション技法もまた、当技術分野で周知であり、インビボでおよび臨床
的に核酸を送達するために使用される（すべて参照により全体が本明細書に組み込まれる
、Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１０ １０：２６７
−２８０、Ｃｈｉａｒｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１
０ １０：２８１−２８６、Ｈｏｊｍａｎ，Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１０
１０：１２８−１３８）。一実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、または
ｍｍＲＮＡは、実施例８に記載されるようにエレクトロポレーションによって送達され得
る。
ヒアルロニダーゼ
本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの筋肉内または皮下局所注
入は、ヒアルロナンの加水分解を触媒する、ヒアルロニダーゼを含むことができる。介在
性の関門の構成物質であるヒアルロナンの加水分解を触媒することによって、ヒアルロニ
ダーゼは、ヒアルロナンの粘度を低下させて、それによって組織透過性を増加させる（参
照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｆｒｏｓｔ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕ
ｇ Ｄｅｌｉｖ．（２００７）４：４２７−４４０）。それらの分散およびトランスフェ
クトされた細胞によって産生されるコードされたタンパク質の全身への分布を加速するこ
とが有用である。あるいは、ヒアルロニダーゼを用いて、筋肉内にまたは皮下に投与され
た本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに曝露される細
胞の数を増加させることができる。
ナノ粒子模倣体
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ナノ粒子模
倣体内にカプセル封入されかつ／またはそれに吸収され得る。ナノ粒子模倣体は、病原体
、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、プリオン、および細胞等であるが、これらに限定され
ない、生物または粒子の送達機能を模倣することができる。非限定的な例として、本発明
の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ウイルスの送達機能
を模倣することができる非バイロン（ｖｉｒｏｎ）粒子中にカプセル封入されてもよい（
参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２００６３７６号を参
照のこと）。
ナノチューブ
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ロゼットナ
ノチューブ、リンカーを用いたツイン塩基（ｔｗｉｎ ｂａｓｅｓ）を有するロゼットナ
ノチューブ、カーボンナノチューブおよび／または単層カーボンナノチューブ等であるが
、これらに限定されない、少なくとも１つのナノチューブに付着または結合され得る。腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、立体（ｓｔｅｒｉｃ）力
、イオン力、共有結合力、および／または他の力等であるが、これらに限定されない力を
介してナノチューブに結合され得る。
一実施形態において、ナノチューブは、１つ以上のポリヌクレオチド、一次構築物、ま
たはｍｍＲＮＡを細胞内に放出することができる。少なくとも１つのナノチューブのサイ
ズおよび／または表面構造を、体内でナノチューブの相互作用を制御し、かつ／または本
明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡに付着ま
たは結合するように変化させることができる。一実施形態において、少なくとも１つのナ
ノチューブのビルディングブロックおよび／またはそのビルディングブロックに結合され
る官能基を、ナノチューブの寸法および／または特性を調整するように変化させることが
できる。非限定的な例として、ナノチューブの長さは、ナノチューブが正常な血管の壁の
穴を通過するのを妨害するが、依然として腫瘍組織の血管におけるより大きい穴を通過す
るのに十分に小さくあるように変化させてもよい。
一実施形態において、少なくとも１つのナノチューブは、ポリエチレングリコール等で
あるが、これらに限定されないポリマーを含む送達向上化合物でコーティングされてもよ
い。別の実施形態において、少なくとも１つのナノチューブおよび／または腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、薬学的に許容される賦形剤および／
または送達ビヒクルと混合されてもよい。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは
、少なくとも１つのロゼットナノチューブに付着および／または結合される。ロゼットナ
ノチューブは、当技術分野で既知のプロセスによって、かつ／または参照により全体が本
明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２０９４３０４号に記載のプロセスによって
形成され得る。少なくとも１つのポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲ
ＮＡは、参照により全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２０９４３０４
号に記載のプロセスによって、少なくとも１つのロゼットナノチューブに付着および／ま
たは結合されてもよく、ここでロゼットナノチューブまたはロゼットナノチューブを形成
するモジュールは、水性媒体中で、少なくとも１つのポリヌクレオチド、一次構築物、ま
たはｍｍＲＮＡがロゼットナノチューブに付着または結合するようになり得る条件下で、
少なくとも１つのポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡと混合され
る。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは
、少なくとも１つのカーボンナノチューブに付着および／または結合されてもよい。非限
定的な例として、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、連結
剤に結合されてもよく、この連結された薬剤が、カーボンナノチューブに結合されてもよ
い（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２４６，９９５
号を参照のこと）。カーボンナノチューブは、単層ナノチューブであってもよい（例えば
、参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２４６，９９５号を参照の
こと）。
複合体
本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、担体もしくは標的化基
に共有結合された、または一緒に融合タンパク質を産生する２つのコード領域を含む（例
えば、標的化基および治療的タンパク質またはペプチドを担持する）、腫瘍学関連ポリヌ
クレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ等の複合体を含む。
本発明の複合体は、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低比重リポ
タンパク質（ＬＤＬ）、高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）、またはグロブリン）、炭水化
物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリ
ンまたはヒアルロン酸）、または脂質等の、天然に生じる物質を含む。リガンドは、合成
ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）等の
組換えまたは合成分子であってもよい。ポリアミノ酸の例としては、ポリアミノ酸は、ポ
リリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−マレ
イン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｅｄ
））コポリマー、ジビニルエーテル−マレイン無水物コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシ
プロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル（ａｃ
ｒｙｌｌｉｃ）酸）、Ｎ−イソプロピルａｃｒｙｌアミドポリマー、またはポリホスファ
ゼン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ）が挙げられる。ポリアミンの例としては、ポリ
エチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、シュ
ードペプチド−ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギ
ニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの
第四級塩、αヘリックスペプチドが挙げられる。
ポリヌクレオチド複合体の調製、特にＲＮＡへのの調製を教示する、代表的な米国特許
には、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，８２８
，９７９号、同第４，９４８，８８２号、同第５，２１８，１０５号、同第５，５２５，
４６５号、同第５，５４１，３１３号、同第５，５４５，７３０号、同第５，５５２，５
３８号、同第５，５７８，７１７号、５，５８０，７３１号、同第５，５９１，５８４号
、同第５，１０９，１２４号、同第５，１１８，８０２号、同第５，１３８，０４５号、
同第５，４１４，０７７号、同第５，４８６，６０３号、同第５，５１２，４３９号、同
第５，５７８，７１８号、同第５，６０８，０４６号、同第４，５８７，０４４号、同第
４，６０５，７３５号、同第４，６６７，０２５号、同第４，７６２，７７９号、同第４
，７８９，７３７号、同第４，８２４，９４１号、同第４，８３５，２６３号、同第４，
８７６，３３５号、同第４，９０４，５８２号、同第４，９５８，０１３号、同第５，０
８２，８３０号、同第５，１１２，９６３号、同第５，２１４，１３６号、同第５，０８
２，８３０号、同第５，１１２，９６３号、同第５，２１４，１３６号、同第５，２４５
，０２２号、同第５，２５４，４６９号、同第５，２５８，５０６号、同第５，２６２，
５３６号、同第５，２７２，２５０号、同第５，２９２，８７３号、同第５，３１７，０
９８号、同第５，３７１，２４１号、同第５，３９１，７２３号、同第５，４１６，２０
３号、同第５，４５１，４６３号、同第５，５１０，４７５号、同第５，５１２，６６７
号、同第５，５１４，７８５号、同第５，５６５，５５２号、同第５，５６７，８１０号
、同第５，５７４，１４２号、同第５，５８５，４８１号、同第５，５８７，３７１号、
同第５，５９５，７２６号、同第５，５９７，６９６号、同第５，５９９，９２３号、同
第５，５９９，９２８号および同第５，６８８，９４１号、同第６，２９４，６６４号、
同第６，３２０，０１７号、同第６，５７６，７５２号、同第６，７８３，９３１号、同
第６，９００，２９７号、同第７，０３７，６４６号が含まれるが、これらに限定されな
い。
一実施形態において、本発明の複合体は、本発明の修飾核酸およびｍｍＲＮＡのための
担体として機能し得る。複合体は、ポリ（エチレングリコール）でグラフトされ得る、ポ
リアミン、ポリリジン、ポリアルキレンイミン、およびポリエチレンイミン等であるが、
これらに限定されないカチオン性ポリマーを含んでもよい。非限定的な例として、複合体
は、ポリマー複合体と同様であってもよく、ポリマー複合体を合成する方法は、参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，５８６，５２４号に記載されている。
複合体は、標的化基、例えば、細胞または組織標的化薬剤、例えば、レクチン、糖タン
パク質、脂質、またはタンパク質、例えば、腎臓細胞等の指定される細胞型に結合する抗
体も含み得る。標的化基は、チロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、
サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、
Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン多価マンノース、多価フコ
ース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネ
ート、ポリグルタミン酸塩、ポリアスパラギン酸塩、脂質、コレステロール、ステロイド
、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチド模倣体
、またはアプタマーであり得る。
標的化基は、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペプチド、例えば、コリガン
ド（ｃｏ−ｌｉｇａｎｄ）に対する特異的親和性を有する分子、または抗体、例えば、癌
細胞、内皮細胞、もしくは骨細胞等の指定される細胞型に結合する抗体であり得る。標的
化基には、ホルモンおよびホルモン受容体も含まれ得る。それらには、等の脂質、レクチ
ン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−
ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン多価マンノース、多価フコース、またはア
プタマー等の非ペプチド種も含まれ得る。リガンドは、例えば、リポ多糖、またはｐ３８
ＭＡＰキナーゼの活性化因子であり得る。
標的化基は、具体的な受容体を標的とすることが可能な任意のリガンドであり得る。例
としては、制限なく、葉酸塩、ＧａｌＮＡｃ、ガラクトース、マンノース、マンノース−
６Ｐ、アプタマー（ａｐａｔａｍｅｒｓ）、インテグリン受容体リガンド、ケモカイン受
容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エ
ンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ、およびＨＤＬリガンドが挙げられる
。特定の実施形態において、標的化基は、アプタマーである。アプタマーは、修飾されて
いないことも、本明細書に開示の修飾の任意の組み合わせを有することもあり得る。
一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、ロックト核酸と同様の修飾等であるが
、これらに限定されない化学修飾を含んでもよい。
Ｓａｎｔａｒｉｓによるもの等のロックト核酸（ＬＮＡ）の調製を教示する、代表的な
米国特許には、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２
６８，４９０号、同第６，６７０，４６１号、同第６，７９４，４９９号、同第６，９９
８，４８４号、同第７，０５３，２０７号、同第７，０８４，１２５号、および同第７，
３９９，８４５号が含まれるが、これらに限定されない。
ＰＮＡ化合物の調製を教示する、代表的な米国特許には、各々が参照により本明細書に
組み込まれる、米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号、および同
第５，７１９，２６２号が含まれるが、これらに限定されない。ＰＮＡ化合物のさらなる
教示は、例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，
１４９７−１５００において見出すことができる。
本発明の特色をなすいくつかの実施形態は、ホスホロチオエート骨格を有するポリヌク
レオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ、ならびに他の修飾骨格、特に、上に参照され
る米国特許第５，４８９，６７７号の−−ＣＨ２−−ＮＨ−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−
−Ｎ（ＣＨ３）−−Ｏ−−ＣＨ２−−［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格とし
て知られている］、−−ＣＨ２−−Ｏ−−Ｎ（ＣＨ３）−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ２−−
Ｎ（ＣＨ３）−−Ｎ（ＣＨ３）−−ＣＨ２−−、および−−Ｎ（ＣＨ３）−−ＣＨ２−−
ＣＨ２−−［式中、天然ホスホジエステル骨格は、−−Ｏ-Ｐ（Ｏ）２−−Ｏ−−ＣＨ２
−−として表される］、および上に参照される米国特許第５，６０２，２４０号のアミド
骨格を有する、オリゴヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、本明細書の特
色をなすポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｔｏｔｉｄｅｓ）は、上に参照される米
国特許第５，０３４，５０６号のモルホリノ骨格構造を有する。
２’位における修飾もまた、送達を補助し得る。好ましくは、２’位における修飾は、
ポリペプチドコード配列には位置しない、すなわち、翻訳可能領域にない。２’位におけ
る修飾は、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、および／または尾部領域に位置してもよい。２’位
における修飾は、２’位において次のうちの１つを含むことができる：Ｈ（すなわち、２
’−デオキシ）；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−ア
ルケニル；Ｏ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルキニル；またはＯ−アルキル−Ｏ−アルキル（
式中、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ１０アル
キルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであってもよい。例示の好適な修飾
には、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２
、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ
２）ｎＣＨ３）］２が含まれ、式中、ｎおよびｍは、１〜約１０である。他の実施形態に
おいて、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、２’位におい
て次のうちの１つを含む：Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリール
、アラルキル、Ｏ−アルカリールもしくはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃ
ｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ
３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ
、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター
、薬物動態特性を改善するための基、または薬力学特性を改善するための基、および同様
の特性を有する他の置換基。いくつかの実施形態において、修飾は、２’−メトキシエト
キシ（２’−Ｏ−−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２
’−ＭＯＥ）としても知られている）（Ｍａｒｔｉｎｅｔ ａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ
．Ａｃｔａ，１９９５，７８：４８６−５０４）すなわち、アルコキシ−アルコキシ基を
含む。別の例示の修飾は、本明細書の以下の実施例に記載の２’−ジメチルアミノオキシ
エトキシ、すなわち、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基（２’−ＤＭＡＯＥとしても知
られている）、および同様に本明細書の以下の実施例に記載の２’−ジメチルアミノエト
キシ（当技術分野で２’−Ｏ−ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’−ＤＭＡＥＯＥ
としても知られる）、すなわち、２’−Ｏ−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−Ｎ（ＣＨ２）
２である。他の修飾は、２’−メトキシ（２’−ＯＣＨ３）、２’−アミノプロポキシ（
２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および２’−フルオロ（２’−Ｆ）を含む。同様
の修飾は、他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位で、または２’−５’結
合ｄｓＲＮＡにおいて、および５’末端ヌクレオチドの５’位で行われてもよい。本発明
のポリヌクレオチドは、ペントフラノシル糖の代わりに、シクロブチル部分等の糖模倣体
を有してもよい。そのような修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許には、各々が
参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，９８１，９５７号、同第５，１１８
，８００号、同第５，３１９，０８０号、同第５，３５９，０４４号、同第５，３９３，
８７８号、同第５，４４６，１３７号、同第５，４６６，７８６号、同第５，５１４，７
８５号、同第５，５１９，１３４号、同第５，５６７，８１１号、同第５，５７６，４２
７号、同第５，５９１，７２２号、同第５，５９７，９０９号、同第５，６１０，３００
号、同第５，６２７，０５３号、同第５，６３９，８７３号、同第５，６４６，２６５号
、同第５，６５８，８７３号、同第５，６７０，６３３号、および同第５，７００，９２
０号が含まれるが、これらに限定されない。
依然として他の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、または
ｍｍＲＮＡは、細胞透過性ポリペプチドに共有結合的に複合体化される。細胞透過性ペプ
チドは、シグナル配列も含み得る。本発明の複合体は、増加した安定性、増加した細胞ト
ランスフェクション、および／または変化した生体分布（例えば、具体的な組織または細
胞型に標的を定められる）を有するように設計することができる。
一実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、送達を向
上させるための薬剤に複合体化されてもよい。非限定的な例として、薬剤は、参照により
全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１１０６２９６５号に記載の標的化ブ
ロックを有する標的化モノマーまたはポリマー等のモノマーまたはポリマーであってもよ
い。別の非限定的な例において、薬剤は、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、また
はｍｍＲＮＡに共有結合された輸送剤であってもよい（例えば、各々が参照によりその全
体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，８３５．３９３号および同第７，３７４，
７７８号を参照のこと）。さらに別の非限定的な例において、薬剤は、各々が参照により
その全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，７３７，１０８号および同第８，０
０３，１２９号に記載される薬剤等の膜関門輸送向上剤であってもよい。
別の実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ＳＭＡ
ＲＴＴ ＰＯＬＹＭＥＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）（ＰＨＡＳＥＲＸ（登録商
標）、Ｉｎｃ．Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）に複合体化されてもよい。
自己集合性ナノ粒子
核酸自己集合性ナノ粒子
自己集合性ナノ粒子は、核酸鎖が容易にリプログラミング可能であり得るように精密に
制御され得る、明確に定義されたサイズを有する。例えば、２０ｎｍ超の直径が、向上し
た透過性および保持効果により腎クリアランスを回避し、ある特定の腫瘍への送達を向上
させるため、癌標的化ナノ送達担体のために最適な粒径は、２０〜１００ｎｍである。自
己集合性核酸ナノ粒子を用いて、向上した送達のために癌標的化リガンドの精密に制御さ
れた空間定位および密度を有する、サイズおよび形が均一な単一の集団。非限定的な例と
して、オリゴヌクレオチドナノ粒子が、短いＤＮＡ断片および治療的ｓｉＲＮＡのプログ
ラミング可能な自己集合を用いて調製された。これらのナノ粒子は、制御可能な粒径なら
びに標的リガンド箇所および密度を有して、分子的に同一である。ＤＮＡ断片およびｓｉ
ＲＮＡは、１ステップ反応へと自己集合して、標的を定めたインビボ送達のためにＤＮＡ
／ｓｉＲＮＡ四面体ナノ粒子を生成した。（参照により全体が本明細書に組み込まれる、
Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１２ ７：
３８９−３９３）。
一実施形態において、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、お
よび／またはｍｍＲＮＡは、自己集合性ナノ粒子として製剤化され得る。非限定的な例と
して、核酸を用いて、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／また
はｍｍＲＮＡのための送達系に使用され得るナノ粒子を作製してもよい（例えば、参照に
より全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２１２５９８７号を参照のこ
と）。
一実施形態において、核酸自己集合性ナノ粒子は、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌ
クレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのコア、およびポリマーシェルを含んでもよ
い。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技術分野で既知のポリマーのうちの
いずれかであり得る。さらなる実施形態において、ポリマーシェルを用いて、コアにおけ
るポリヌクレオチド、一次構築物（ｃｏｎｔｒｕｃｔｓ）、およびｍｍＲＮＡを保護して
もよい。
ポリマーベースの自己集合性ナノ粒子
ポリマーを用いて、ナノ粒子へと自己集合したシートを形成してもよい。これらのナノ
粒子を用いて、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡを
送達してもよい。一実施形態において、これらの自己集合性ナノ粒子は、マイクロスポン
ジへと自己集合する前に結晶質の「ひだ状」のシートを形成するＲＮＡヘアピンの長いポ
リマーで形成される、マイクロスポンジであってもよい。これらのマイクロスポンジは、
効率的な担体として機能し得、積荷を細胞に送達することが可能であり得る、密に充填さ
れたスポンジ様の微粒子である。マイクロスポンジは、直径１μｍ〜３００ｎｍであり得
る。マイクロスポンジは、当技術分野で既知の他の薬剤と複合体形成されて、より大きい
マイクロスポンジを形成することができる。非限定的な例として、マイクロスポンジは、
ポリカチオンポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｅ）（ＰＥＩ）等の、
細胞取り込みを促進するための外側層を形成する薬剤と複合体形成され得る。この複合体
は、高温（１５０℃）で安定したままであり得る、２５０ｎｍ直径の粒子を形成すること
ができる（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｒａｂｏｗ ａｎｄ Ｊａｅｇ
ａｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１２，１１：２６９−２６９）。さらに
これらのマイクロスポンジは、リボヌクレアーゼによる分解からの並外れた保護度を示す
ことが可能であり得る。
別の実施形態において、マイクロスポンジ等であるが、これらに限定されないポリマー
ベースの自己集合性ナノ粒子は、完全にプログラミング可能なナノ粒子であり得る。ナノ
粒子の形状、サイズ、および化学量を、ポリヌクレオチド、一次構築物、および／または
ｍｍＲＮＡ等であるが、これらに限定されない積荷の送達に最適なナノ粒子を作り出すた
めに、精密に制御することができる。
一実施形態において、ポリマーベースのナノ粒子は、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリ
ヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡのコア、ならびにポリマーシェル
を含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技術分野で既知のポリマー
のうちのいずれかであり得る。さらなる実施形態において、ポリマーシェルを用いて、コ
アにおけるポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを保護してもよい
。
さらに別の実施形態において、ポリマーベースのナノ粒子は、参照により全体が本明細
書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１３００９７３６号に記載されるモノマー等の複数
の不均一なモノマーを含む非核酸ポリマーを含んでもよい。
無機ナノ粒子
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、無
機ナノ粒子中に製剤化されてもよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特
許第８，２５７，７４５号）。無機ナノ粒子は、水膨潤性である粘土物質を含んでもよい
が、これらに限定されない。非限定的な例として、無機ナノ粒子は、単純なケイ酸塩から
作製される合成スメクタイト粘土を含んでもよい（例えば、各々が参照によりそれらの全
体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５８５，１０８号および同第８，２５７，
７４５号を参照のこと）。
一実施形態において、無機ナノ粒子は、本明細書に開示の修飾核酸のコア、およびポリ
マーシェルを含んでもよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技術分野で
既知のポリマーのうちのいずれかであり得る。さらなる実施形態において、ポリマーシェ
ルを用いて、コアにおける修飾核酸を保護してもよい。
半導性および金属性ナノ粒子
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、半
導性または金属性材料を含む水分散性ナノ粒子中に製剤化されるか（参照により全体が本
明細書に組み込まれる、米国公開第２０１２０２２８５６５号）、または磁性ナノ粒子中
に形成されてもよい（各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第
２０１２０２６５００１号および同第２０１２０２８３５０３号）。水分散性ナノ粒子は
、疎水性ナノ粒子であっても親水性ナノ粒子であってもよい。
一実施形態において、半導性および／または金属性ナノ粒子は、本明細書に開示の腫瘍
学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡのコア、ならびにポリ
マーシェルを含んでもよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技術分野で
既知のポリマーのうちのいずれかであり得る。さらなる実施形態において、ポリマーシェ
ルを用いて、コアにおける腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍ
ｍＲＮＡを保護してもよい。
ゲルおよびヒドロゲル
一実施形態において、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、お
よび／またはｍｍＲＮＡは、対象に注入されるとゲルを形成し得る、当技術分野で既知の
任意のヒドロゲル中にカプセル封入されてもよい。ヒドロゲルは、親水性であり、ときに
は、水が分散媒体であるコロイド状ゲルとして見出される、ポリマー鎖のネットワークで
ある。ヒドロゲルは、高度に吸収性の（それらは、９９％超の水を含有することができる
）天然または合成ポリマーである。ヒドロゲルは、それらのかなりの含水量のため、天然
組織と非常に類似した柔軟度も有する。本明細書に記載のヒドロゲルを用いて、生体適合
性、生分解性、かつ／または多孔質である脂質ナノ粒子をカプセル封入してもよい。
非限定的な例として、ヒドロゲルは、アプタマー官能化ヒドロゲルであってもよい。ア
プタマー官能化ヒドロゲルは、核酸ハイブリダイゼーションを用いて１つ以上のポリヌク
レオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを放出するようにプログラミングされ
てもよい。（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｂａｔｔｉｇ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃｉｅｔｙ．２０１２ １３４：１２４１０−１２４１３）。
別の非限定的な例として、ヒドロゲルは、反転オパールとして成形されてもよい。オパ
ールヒドロゲルは、より高い膨潤率を示し、その膨潤速度もまた１桁分より速い。オパー
ルヒドロゲルを生成する方法およびオパールヒドロゲルの説明は、参照によりその全体が
本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２１４８６８４号に記載されている。
さらに別の非限定的な例において、ヒドロゲルは、抗菌性ヒドロゲルであってもよい。
抗細菌性ヒドロゲルは、医薬品等級および／または医療等級の銀塩およびアロエベラゲル
もしくは抽出物等であるが、これらに限定されない、薬学的許容される塩または有機材料
を含んでもよい。（参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２
１５１４３８号）。
一実施形態において、修飾ｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子中にカプセル封入されてもよく、
次いでこの脂質ナノ粒子が、ヒドロゲル（ｈｙｒｄｏｇｅｌ）中にカプセル封入されても
よい。
一実施形態において、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、お
よび／またはｍｍＲＮＡは、当技術分野で既知の任意のゲル中にカプセル封入されてもよ
い。非限定的な例として、ゲルは、フルオロウラシル注入用ゲル、または当技術分野で既
知の化学化合物および／もしくは薬物を含有するフルオロウラシル注入用ゲルであっても
よい。別の例として、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲ
ＮＡは、エピネフリンを含有するフルオロウラシルゲル中にカプセル封入されてもよい（
例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｔｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９９ ４
４（４）：２６７−２７４を参照のこと）。
一実施形態において、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、お
よび／またはｍｍＲＮＡは、フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、またはフィブリン
糊中にカプセル封入されてもよい。別の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド
、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、
またはフィブリン糊中にカプセル封入される前に、脂質ナノ粒子または急速排出脂質ナノ
粒子中に製剤化されてもよい。さらに別の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチ
ド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、フィブリンゲル、ヒドロゲル、またはフ
ィブリン糊中にカプセル封入される前に、リポプレックスとして製剤化されてもよい。フ
ィブリンゲル、ヒドロゲル、および糊は、２つの構成成分、すなわちフィブリノーゲン溶
液およびカルシウムが豊富であるトロンビン溶液を含む（例えば、各々が参照によりその
全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｐｉｃｅｒ ａｎｄ Ｍｉｋｏｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１０．１４８：４９−５５、Ｋｉｄ
ｄ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０
１２．１５７：８０−８５を参照のこと）。フィブリンゲル、ヒドロゲル、および／また
は糊の構成成分の濃度は、フィブリンゲル、ヒドロゲル、および／または糊の放出特性を
変更すること等であるが、これらに限定されない、ゲル、ヒドロゲル、および／または糊
の特性、ネットワークメッシュサイズ、および／または分解特性を変更するように変化さ
せることができる。（例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓ
ｐｉｃｅｒ ａｎｄ Ｍｉｋｏｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅ
ｌｅａｓｅ ２０１０．１４８：４９−５５、Ｋｉｄｄ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１２．１５７：８０−８５、Ｃａｔ
ｅｌａｓ ｅｔ ａｌ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２００８．１４：１１
９−１２８を参照のこと）。この特長は、本明細書に開示の修飾ｍＲＮＡを送達するため
に使用されるときに有利であり得る。（例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に
組み込まれる、Ｋｉｄｄ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１２．１５７：８０−８５、Ｃａｔｅｌａｓ ｅｔ ａｌ．Ｔｉｓ
ｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２００８．１４：１１９−１２８を参照のこと）。
カチオンおよびアニオン
本明細書に開示のポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡの製剤は
、カチオンまたはアニオンを含んでもよい。一実施形態において、製剤は、Ｚｎ２＋、Ｃ
ａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｇ＋、およびこれらの組み合わせ等であるが、これらに限定されな
い金属カチオンを含む。非限定的な例として、製剤は、ポリマー、ならびに金属カチオン
と錯化されたポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを含んでもよい
（例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２６５
，３８９号および同第６，５５５，５２５号を参照のこと）。
成形されたナノ粒子および微粒子
本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮ
Ａは、ナノ粒子および／または微粒子中に製剤化されてもよい。これらのナノ粒子および
／または微粒子は、任意のサイズ形および化学組成へと成形され得る。例として、ナノ粒
子および／または微粒子は、ＬＩＱＵＩＤＡ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ（登録商標）（
Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ）によるＰＲＩＮＴ（登録商標）技術を用いて作製するこ
とができる（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００
７０２４３２３号を参照のこと）。
一実施形態において、成形されたナノ粒子は、本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡのコア、ならびにポリマーシェルを含ん
でもよい。ポリマーシェルは、本明細書に記載され、かつ当技術分野で既知のポリマーの
うちのいずれかであり得る。さらなる実施形態において、ポリマーシェルを用いて、コア
におけるポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡを保護してもよい。
ナノジャケット（ＮａｎｏＪａｃｋｅｔｓ）およびナノリポソーム（ＮａｎｏＬｉｐｏ
ｓｏｍｅｓ）
本明細書に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮ
Ａは、Ｋｅｙｓｔｏｎｅ Ｎａｎｏ（Ｓｔａｔｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ，ＰＡ）によるナノジ
ャケットおよびナノリポソーム中に製剤化されてもよい。ナノジャケットは、体内で自然
に見つけられ、カルシウム、リン酸塩を含み、また少量のケイ酸塩も含み得る、化合物で
作製される。ナノジャケットは、サイズが５〜５０ｎｍの範囲であり得、これを用いて、
ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ等であるが、これらに限定さ
れない親水性および疎水性化合物を送達することができる。
ナノリポソームは、体内で天然に生じる脂質等であるが、これらに限定されない脂質で
作製される。ナノリポソームは、サイズが６０〜８０ｎｍの範囲であり得、これを用いて
、ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡ等であるが、これらに限定
されない親水性および疎水性化合物を送達することができる。一態様において、本明細書
に開示の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡは、セラ
ミドナノリポソーム等であるが、これらに限定されないナノリポソーム中に製剤化される
。
賦形剤
薬学的製剤は、本明細書で使用されるとき、所望される特定の剤形に適している、あり
とあらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散もしくは懸濁助剤、
界面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、防腐剤、固体結合剤、滑沢剤等を含む、薬
学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。参照により全体が本明細書に組み込まれ
る、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏ
ｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐ
ｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２
００６は、薬学的組成物を製剤化するのに使用される種々の賦形剤およびこれらの調製の
ための既知の技法を開示する。任意の従来の賦形剤媒体が任意の望ましくない生体影響を
引き起こすか、またはさもなければ薬学的組成物の任意の他の構成成分（複数可）と有害
な様態で相互作用するといった、物質またはその誘導体と不適合性である場合を除いて、
その使用が本開示の範囲内で企図される。
いくつかの実施形態において、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少な
くとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００
％純粋である。いくつかの実施形態において、賦形剤は、ヒトにおける使用および獣医学
的使用に対して認可されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国食品医薬
品局（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒ
ａｔｉｏｎ）によって認可されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、医薬品
等級である。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国薬局方（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔ
ａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（ＵＳＰ））、欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ
Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（ＥＰ））、英国薬局方（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｐｏｅｉａ）、および／または国際薬局方（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｐｏｅｉａ）の基準を満たしている。
薬学的組成物の製造に使用される薬学的に許容される賦形剤には、不活性希釈剤、分散
化剤および／もしくは造粒剤、界面活性剤および／もしくは乳化剤、崩壊剤、結合剤、防
腐剤、緩衝剤、滑沢剤、ならびに／または油が含まれるが、これらに限定されない。その
ような賦形剤が任意に薬学的組成物中に含まれてもよい。
例示の希釈剤には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カ
ルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、シ
ョ糖、セルロース、微小結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノ
シトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、トウモロコシデンプン、粉糖等、および／ま
たはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
例示の造粒剤および／または分散化剤には、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプ
ン、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガ
ム、柑橘パルプ、寒天、ベントナイト、セルロースおよび木質製品、天然スポンジ、カチ
オン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリ
ドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（デンプングリコール
酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、α化デンプン（デンプン１５００）、
微小結晶デンプン、水不溶性デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、ケイ酸
アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第
四級アンモニウム化合物等、ならびに／またはこれらの組み合わせが含まれるが、これら
に限定されない。
例示の界面活性剤および／または乳化剤には、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、
アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガント、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）
、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレス
テロール、ワックス、およびレシチン）、コロイド状粘土（例えば、ベントナイト［ケイ
酸アルミニウム］およびＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］
）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチル
アルコール、オレイルアルコール、モノステアリン酸トリアセチン（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ
ｍｏｎｏｓｔｅａｒａｔｅ）、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸
グリセリル、およびモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、
カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、
およびカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボ
キシメチルセルロースナトリウム、粉末化セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒ
ドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース
）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリル酸ポリオキシエチレンソルビタン
［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮｎ（登録
商標）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）
８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、モノステアリン酸
ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登
録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登
録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシ
エチレン［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキ
シル化（ｐｏｌｙｅｔｈｏｘｙｌａｔｅｄ）ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレン
、およびＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコー
ル脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエ
ーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］
）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、モノラウリル酸ジエチレングリコール、オレイン酸ト
リエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、
オレイン酸、ラウリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＯＲＩＮＣ（登録商標
）Ｆ ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチル
ピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム等、ならびに／またはこ
れらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
例示の結合剤には、デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびデンプンペースト
）；ゼラチン；糖類（例えば、ショ糖、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖
蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然および合成ガム（例えば、アカシ
ア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュ・モスの抽出物、パンワールガム（ｐａｎｗａ
ｒ ｇｕｍ）、ガッチガム（ｇｈａｔｔｉ ｇｕｍ）、イサポール皮（ｉｓａｐｏｌ ｈ
ｕｓｋ）の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、
ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース、微小結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケ
イ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標））、およびカラマツアラビノ
ガラクタン（ｌａｒｃｈ ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ））；アルギン酸塩；ポリエチレ
ンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート
；ワックス；水；アルコール等；ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限
定されない。
例示の防腐剤には、酸化防止剤、キレート剤、抗菌性防腐剤、抗真菌性防腐剤、アルコ
ール防腐剤、酸性防腐剤、および／または他の防腐剤が含まれ得るが、これらに限定され
ない。例示の酸化防止剤には、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコ
ルビル（ａｓｃｏｒｂｉｃ）、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトル
エン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル
、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および／
または硫酸ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない。例示のキレート剤には、エ
チレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エ
デト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石
酸、および／またはエデト酸三ナトリウムが含まれる。例示の抗菌性防腐剤には、塩化ベ
ンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド
、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、
クロロキシレノール（ｃｈｌｏｒｏｘｙｌｅｎｏｌ）、クレゾール、エチルアルコール、
グリセリン、ヘキセチジ、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエ
チルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、および／またはチメロサー
ルが含まれるが、これらに限定されない。例示の抗真菌性防腐剤には、ブチルパラベン、
メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、
安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム
、および／またはソルビン酸が含まれるが、これらに限定されない。例示のアルコール防
腐剤には、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール系化合物、ビ
スフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸塩、および／またはフェニルエチ
ルアルコールが含まれるが、これらに限定されない。例示の酸性防腐剤には、ビタミンＡ
、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロテン、クエン酸、酢酸、ジヒドロ酢酸、アスコルビ
ン酸、ソルビン酸、および／またはフィチン酸が含まれるが、これらに限定されない。他
の防腐剤には、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム（ｄｅｔｅ
ｒｏｘｉｍｅ ｍｅｓｙｌａｔｅ）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨ
Ａ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エ
チレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム
（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、メタ重亜
硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）
、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）
ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、および／またはＥＵＸＹＬ（登
録商標）が含まれるが、これらに限定されない。
例示の緩衝剤には、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、
炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グル
セプチン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシ
ウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カ
ルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、酢酸カリウム、塩化
カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、第二リン酸カリウム、第一リン酸カリ
ウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、二炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ク
エン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リ
ン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アル
ギン酸、発熱性物質除去水、等張食塩水、リンゲル液、エチルアルコール等、および／ま
たはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
例示の滑沢剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン
酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸（ｂｅｈａｎａｔｅ）グリセリル、水素化植物油、
ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイ
シン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム等、およびこれらの組み合わ
せが含まれるが、これらに限定されない。
例示の油には、アーモンド油、杏仁油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、ブラ
ックカラント種子油、カデ油、カモミール油、キャノーラ油、キャラウェイ油、カルナウ
バ油、ヒマシ油、桂皮油、ココアバター油、ココナッツ油、タラの肝油、コーヒー油、ト
ウモロコシ油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、月見草油、魚油、亜麻仁油、ゲラニオ
ール油、ヒョウタン油、ブドウ種子油、ヘーゼルナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イ
ソプロピル油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ナツメグ油、オリー
ブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、桃仁油、ピーナッツ油
、ケシ油、カボチャ種子油、菜種油、コメヌカ油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャク
ダン油、サスクアナ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セボリー、シーバックソーン油、ゴマ油、
シアバター油、シリコーン油、大豆油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ
油、ベチバー油、胡桃油、および小麦胚芽油が含まれるが、これらに限定されない。例示
の油には、ブチルステアリン酸、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド
、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル
、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、および／またはこ
れらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
調合者の判断に従って、ココアバターおよび坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、
甘味剤、香味剤、ならびに／または芳香剤等の賦形剤が、組成物中に存在し得る。
送達
本開示は、薬物送達の科学進展の見込みを考慮した任意の適切な経路による、治療目的
、薬学目的、診断目的、または撮像目的のうちのいずれのための腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの送達をも包含する。送達は、ネイキッドであって
も製剤化されてもよい。
ネイキッド送達
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ネイキッド
で細胞に送達されてもよい。本明細書で使用されるとき、「ネイキッド」とは、トランス
フェクションを促進する薬剤を用いずにポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮ
Ａを送達することを指す。例えば、細胞に送達される腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次
構築物、またはｍｍＲＮＡは、修飾を全く含有しない場合がある。ネイキッドポリヌクレ
オチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、細胞に、当技術分野で既知であり、かつ本明
細書に記載の投与経路を用いて送達されてもよい。
製剤化された送達
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、本明細書に
記載の方法を用いて製剤化されてもよい。製剤は、修飾されているかつ／または修飾され
ていない場合があるポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを含有してもよい
。製剤は、細胞透過剤、薬学的に許容される担体、送達剤、生崩壊性または生体適合性ポ
リマー、溶媒、および持続放出送達デポーをさらに含むことができるが、これらに限定さ
れない。製剤化されたポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、細胞に、当
技術分野で既知であり、かつ本明細書に記載の投与経路を用いて送達されてもよい。
組成物は、直接浸水または浸漬、カテーテルを介して、ゲル、粉末、軟膏、クリーム、
ゲル、ローション、および／または液滴によって、組成物でコーティングまたは含浸され
た織物または生分解性材料等の基質を使用することによって等を含むが、これらに限定さ
れない当技術分野におけるいくつかの方法のうちのいずれかにおける器官または組織への
直接送達のためにも製剤化され得る。
投与
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、治療上有効
成果をもたらす任意の経路によって投与されてもよい。これらには、経腸、経胃腸、硬膜
外、経口、経皮、硬膜外（硬膜上）、脳内（大脳の中へ）、脳室内（脳室の中へ）、皮膚
上（皮膚上への適用）、皮内、（皮膚自体の中へ）、皮下（皮膚の下）、経鼻投与（鼻を
介して）、静脈内（静脈の中へ）、動脈内（動脈の中へ）、筋肉内（筋肉の中へ）、心臓
内（心臓の中へ）、骨内輸注（骨髄の中へ）、髄腔内（脊柱管の中へ）、腹腔内（腹腔の
中への輸注または注入）、膀胱内輸注、硝子体内（眼を介して）、空洞内注入（陰茎基部
の中へ）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身への分布のための無傷の皮膚（ｉ
ｎｔａｃｔ ｓｋｉｎ）を介した拡散）、経粘膜（粘膜を介した拡散）、ガス注入（鼻か
らの吸引）、舌下、口唇下、浣腸、点眼（結膜上に）、または点耳におけるもの含まれる
が、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、それらが血液−脳関門
、血管関門、または他の上皮関門を横断することを可能にするような方式で投与されても
よい。本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのための非
限定的な投与経路が以下に記載される。
非経口および注入による投与
非経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマル
ション、溶液、懸濁液、シロップ、および／またはエリキシルが含まれるが、これらに限
定されない。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒、エチルアルコ
ール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジ
ル安息香酸塩、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムア
ミド、油（具体的には、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ、胚芽油、オリーブ油、ヒ
マシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ソルビタ
ンのポリエチレングリコールおよび脂肪酸エステル等の可溶化剤および乳化剤、ならびに
これらの混合物等の、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。不
活性希釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、お
よび／または芳香剤等のアジュバントを含むことができる。非経口投与のためのある特定
の実施形態において、組成物は、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、変
性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはこ
れらの組み合わせ等の可溶化剤と混合される。
注入用調製物、例えば、滅菌注入用水性または油性懸濁液は、既知の技術に従って、好
適な分散化剤、湿潤剤、および／または懸濁化剤を用いて製剤化されてもよい。滅菌注入
用調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤および／または溶媒中の、滅菌注入用
溶液、懸濁液、および／またはエマルション、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液
としてのものであってもよい。用いられ得る許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水
、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張塩化ナトリウム溶液がある。無刺激の固定油が
溶媒または懸濁化媒体として慣習的に用いられる。この目的のために、合成モノグリセリ
ドまたはジグリセリドを含む、任意の無菌性の固定油が用いられ得る。オレイン酸等の脂
肪酸が注入物の調製において使用され得る。
注入用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によって、かつ／または使用
前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体中に溶解もしくは分散させることができる滅菌固体
組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。
活性成分の効果を延長するために、皮下または筋肉内注入からの活性成分の吸収を緩徐
化することがしばしば望ましい。これは、水への溶解度が低い結晶質または非晶質材料の
液体懸濁液の使用によって遂行されてもよい。薬物の吸収速度は次いで、その溶解速度に
依存し、溶解速度が今度は、結晶サイズおよび結晶形に依存し得る。あるいは、非経口的
に投与される薬物形態の遅延吸収は、薬物を油性ビヒクル中に溶解させるまたは懸濁させ
ることによって遂行される。注入用デポー形態は、薬物のマイクロカプセルマトリックス
（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌｅ ｍａｔｒｉｃｅｓ）を、ポリラクチド−ポリグリコラ
イド等の生分解性ポリマー中に形成することによって作製される。薬物対ポリマーの比お
よび用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる
。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が
挙げられる。デポー注入用製剤は、薬物を、身体組織と適合性のリポソームまたはマイク
ロエマルション中に封入することによって調製される。
直腸および膣内投与
直腸または膣内投与のための組成物は、典型的に坐剤であり、それは組成物を、周囲温
度では固体であるが、体温では液体であり、したがって直腸または膣腔で溶解して活性成
分を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤ワックス等の好適な
非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。
経口投与
経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマルシ
ョン、溶液、懸濁液、シロップ、および／またはエリキシルが含まれるが、これらに限定
されない。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒等、エチルアルコ
ール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジ
ル安息香酸塩、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムア
ミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油
、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ソルビタンのポ
リエチレングリコールおよび脂肪酸エステル等の可溶化剤および乳化剤、ならびにこれら
の混合物等の、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含んでもよい。不活性希
釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、および／
または芳香剤等のアジュバントを含むことができる。非経口投与のためのある特定の実施
形態において、組成物は、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、変性油、
グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはこれらの
組み合わせ等の可溶化剤と混合される。
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、粉剤、および顆粒が含まれる
。そのような固体剤形において、活性成分は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カル
シウム等の少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される賦形剤、および／または充填剤
もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトール、
およびケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチ
ン、ポリビニルピロリジノン、ショ糖、およびアカシア）、保水剤（例えば、グリセロー
ル）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、ア
ルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏ
ｎ ｒｅｔａｒｄｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば
、第四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリ
ン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）、ならびに滑
沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリ
エチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、ならびにこれらの混合物と混合される
。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、剤形は、緩衝剤も含んでもよい。
局所または経皮投与
本明細書に記載されるように、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、ま
たはｍｍＲＮＡを含有する組成物は、局所的な投与のために製剤化されてもよい。皮膚は
、それが容易に接触可能であるため、送達に理想的な標的であり得る。遺伝子発現は、皮
膚に対してのみ制限され、非特異的な毒性を回避する可能性があるだけでなく、皮内の特
定の層および細胞型にも制限され得る。
送達された組成物の皮膚発現の部位は、核酸送達の経路に依存する。次の３つの経路が
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを皮膚へと送達するために考慮される
：（ｉ）局所適用（例えば、局所／局部治療および／または腫瘍学関連用途のため）、（
ｉｉ）経皮注入（例えば、局所／局部治療および／または腫瘍学関連用途のため）、なら
びに（ｉｉｉ）全身送達（例えば、皮膚領域および皮膚外領域の両方を侵す皮膚疾患の治
療のため）。ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、当技術分野で既知の
いくつかの異なるアプローチによって皮膚に送達することができる。非カチオン性リポソ
ーム−ＤＮＡ複合体、カチオン性リポソーム−ＤＮＡ複合体の局所適用、粒子媒介性（遺
伝子銃）、穿刺媒介性遺伝子トランスフェクション、およびウイルス送達アプローチ等で
あるが、これらに限定されない、ほとんどの局所送達アプローチが、ＤＮＡの送達に有効
であることが示されている。核酸の送達後に、遺伝子産物が、基底角化細胞、皮脂腺細胞
、真皮線維芽細胞、および真皮マクロファージを含むが、これらに限定されない、いくつ
かの異なる皮膚細胞型において検出されている。
一実施形態において、本発明は、本発明の方法を好都合にかつ／または有効に行うため
の多様なドレッシング（例えば、創傷ドレッシング）または包帯（例えば、粘着包帯）を
提供する。典型的に、ドレッシングまたは包帯は、使用者が対象（複数可）の複数の治療
を行うことを可能にするために、本明細書に記載の十分な量の薬学的組成物および／また
はポリヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡを含むことができる。
一実施形態において、本発明は、１回を超える注入で送達される腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ組成物を提供する。
一実施形態において、局所および／または経皮投与の前に、皮膚等の少なくとも１つの
組織の領域が、透過性を増加させ得るデバイスおよび／または溶液に供されてもよい。一
実施形態において、組織は、皮膚の透過性を増加させるために、研磨デバイスに供されて
もよい（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００８０２７５４
６８号を参照のこと）。別の実施形態において、組織は、超音波強化デバイスに供されて
もよい。超音波強化デバイスには、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込ま
れる、米国公開第２００４０２３６２６８号ならびに米国特許第６，４９１，６５７号お
よび同第６，２３４，９９０号に記載のデバイスが含まれてもよいが、これらに限定され
ない。組織の透過性を向上させる方法は、各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組
み込まれる、米国公開第２００４０１７１９８０号および同第２００４０２３６２６８号
ならびに米国特許第６，１９０，３１５号に記載されている。
一実施形態において、デバイスを用いて、本明細書に記載の修飾ｍＲＮＡ製剤を送達す
る前に組織の透過性を増加させてもよい。皮膚の透過性は、当技術分野で既知の方法、お
よび／または参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，１９０，３１５号
に記載の方法によって測定することができる。非限定的な例として、修飾ｍＲＮＡ製剤は
、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，１９０，３１５号に記載の薬
物送達方法によって送達されてもよい。
別の非限定的な例において、組織は、透過性を増加させ得るデバイスに組織が供され得
る前、その間および／またはその後に、局所麻酔薬の共融混合物（ＥＭＬＡ）クリームで
処理されてもよい。Ｋａｔｚら（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｎｅｓｔ
ｈ Ａｎａｌｇ（２００４）；９８：３７１−７６）は、ＥＭＬＡクリームを低エネルギ
ーと組み合わせて使用して、表在性皮膚鎮痛の発生が低エネルギー超音波での前処理の早
くも５分後に見られたことを示した。
一実施形態において、透過性を増加させるために組織が処理される前、その間、および
／またはその後に、促進剤が組織に適用されてもよい。促進剤には、輸送促進剤、物理的
促進剤、および空洞形成（ｃａｖｉｔａｔｉｏｎ）促進剤が含まれるが、これらに限定さ
れない。促進剤の非限定的な例は、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第
６，１９０，３１５号に記載されている。
一実施形態において、デバイスを用いて、免疫応答を呼び起こす物質をさらに含有し得
る、本明細書に記載の修飾ｍＲＮＡの製剤を送達する前に、組織の透過性を増加させても
よい。別の非限定的な例において、免疫応答を呼び起こす物質を含有する製剤は、各々が
参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第２００４０１７１９８０
号および同第２００４０２３６２６８号に記載の方法によって送達されてもよい。
組成物の局所および／または経皮投与のための剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、
ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤、および／またはパッチが含まれても
よい。一般に、活性成分は、滅菌条件下で、必要とされ得る通りに薬学的に許容される賦
形剤ならびに／または任意の必要とされる防腐剤および／もしくは緩衝液と混和される。
さらに、本発明は、経皮パッチの使用を企図し、それはしばしば、身体への化合物の制御
送達を提供するという追加の利点を有し得る。そのような剤形は、例えば、化合物を適正
な媒体中に溶解させるおよび／または分与することによって、調製することができる。あ
るいは、またはさらに、速度は、速度制御膜を提供することかつ／または化合物をポリマ
ーマトリックスおよび／もしくはゲル中に分散させることによってのいずれかで制御する
ことができる。
局所投与に好適な製剤には、リニメント剤、ローション等の液体および／もしくは半液
体調製物、クリーム、軟膏、および／もしくはペースト等の水中油型および／もしくは油
中水型エマルション、ならびに／または溶液および／もしくは懸濁液が含まれるが、これ
らに限定されない。
局所的に投与可能な製剤は、例えば、約０．１ｗ／ｗ％〜約１０ｗ／ｗ％の活性成分を
含み得るが、活性成分の濃度は、最大で溶媒中の活性成分の可溶性の限度まで高くてもよ
い。局所投与のための製剤は、本明細書に記載のさらなる成分のうちの１つ以上をさらに
含んでもよい。
デポー投与
本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態において、組成物は、持続放出のた
めのデポー中に製剤化される。一般に、具体的な器官または組織（「標的組織」）が、投
与のための標的とされる。
本発明のいくつかの態様において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、または
ｍｍＲＮＡは、標的組織内またはその近位で空間的に保持される。標的組織（１つ以上の
標的細胞を含有する）を組成物と、組成物、特に組成物の核酸構成成分（複数可）が標的
組織内に実質的に保持される、つまり、組成物の少なくとも１０、２０、３０、４０、５
０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．
９９、または９９．９９％超が標的組織内に保持されるような条件下で接触させることに
よって、組成物を哺乳類対象の標的組織に提供する方法が提供される。有利なことに、保
持は、１つ以上の標的細胞に進入する、組成物中に存在する核酸の量を測定することによ
って決定される。例えば、投与の一定期間後に、対象に投与される核酸の少なくとも１、
５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７
、９８、９９、９９．９、９９．９９、または９９．９９％超が、細胞内に存在する。例
えば、哺乳類対象への筋肉内注入が、リボ核酸およびトランスフェクション試薬を含有す
る水性組成物を用いて行われ、組成物の保持は、筋肉細胞内に存在するリボ核酸の量を測
定することによって決定される。
本発明の態様は、標的組織（１つ以上の標的細胞を含有する）を組成物と、組成物が標
的組織内に実質的に保持されるような条件下で接触させることによって、組成物を哺乳類
対象の標的組織に提供する方法を対象とする。組成物は、目的とするポリペプチドが少な
くとも１つの標的細胞内で産生されるように、有効量のポリヌクレオチド、一次構築物、
またはｍｍＲＮＡを含有する。組成物は一般に、細胞透過剤、および薬学的に許容される
担体を含有するが、「ネイキッド」核酸（細胞透過剤または他の薬剤を含まない核酸等）
もまた企図される。
いくつかの状況において、組織内の細胞によって産生されるタンパク質の量は、望まし
くは増加される。好ましくは、タンパク質産生のこの増加は、標的組織内の細胞に空間的
に制限される。したがって、哺乳類対象の組織内における目的とするタンパク質の産生を
増加させる方法が提供される。標的組織の既定体積内に含有される細胞の実質的な割合（
％）において目的とするポリペプチドを産生するように組成物の単位量が決定されている
ことで特徴付けられる、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを含有する組
成物が提供される。
いくつかの実施形態において、組成物は、複数の異なるポリヌクレオチド、一次構築物
、またはｍｍＲＮＡを含み、この腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡのうちの１つ以上が目的とするポリペプチドをコードする。任意に、組成物は、組
成物の細胞内送達を補助するための細胞透過剤も含有する。標的組織の既定体積内に含有
される細胞のかなりの割合（％）において目的とするポリペプチドを産生する（一般に、
既定体積に隣接した、または標的組織に遠位の組織において、目的とするポリペプチドの
大幅な産生を誘導することなく）のに必要とされる組成物の用量の決定が行われる。この
決定に次いで、決定された用量が哺乳類対象の組織に直接導入される。
一実施形態において、本発明は、１回を超える注入でまたは分割用量注入によって送達
される対象となる腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを提供す
る。
一実施形態において、本発明は、小型の使い捨て薬物リザーバ、パッチポンプ、または
浸透圧ポンプを用いて、標的組織の付近で保持されてもよい。パッチポンプの非限定的な
例としては、ＢＤ（登録商標）（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、Ｉｎｓｕｌｅ
ｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）、ＳｔｅａｄｙＭｅｄ Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（Ｍｉｎ
ｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）（例えば、ＭｉｎｉＭｅｄ）、ＵｎｉＬｉｆｅ（Ｙｏｒｋ，Ｐ
Ａ）、Ｖａｌｅｒｉｔａｓ（Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）、およびＳｐｒｉｎｇＬｅ
ａｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によって製造および／または販
売されるものが挙げられる。浸透圧ポンプの非限定的な例としては、ＤＵＲＥＣＴ（登録
商標）（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ）（例えば、ＤＵＲＯＳ（登録商標）およびＡＬＺＥ
Ｔ（登録商標））によって製造されるものが挙げられる。
肺投与
薬学的組成物は、頬腔を介した肺投与に好適な製剤中に調製され、パッケージ化され、
かつ／または販売されてもよい。そのような製剤は、活性成分を含み、かつ約０．５ｎｍ
〜約７ｎｍまたは約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲の直径を有する、乾燥粒子を含んでもよい。
そのような組成物は、好適には、噴射剤の流れが粉末を分散するようにそこに向けられ得
る乾燥粉末リザーバを含むデバイスを用い、かつ／または密封容器中の低沸点噴射剤中に
溶解および／もしくは懸濁させた活性成分を含むデバイス等の自己噴射溶媒／粉末分与容
器を用いた投与のために、乾燥粉末の形態にある。そのような粉末は、粒子の少なくとも
９８重量％が０．５ｎｍ超の直径を有し、粒子の少なくとも９５％（数量）が７ｎｍ未満
の直径を有する、粒子を含む。あるいは、粒子の少なくとも９５重量％は、１ｎｍ超の直
径を有し、粒子の少なくとも９０％（数量）は、６ｎｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組
成物は、糖等の固体微粉末希釈剤を含んでもよく、それは単位用量形態で好都合に提供さ
れる。
低沸点噴射剤には一般に、大気圧で６５°Ｆ（約１８．３℃）を下回る融点を有する液
体噴射剤が含まれる。一般に、噴射剤は、組成物の５０ｗ／ｗｖ％〜９９．９ｗ／ｗｖ％
を構成し得、活性成分は、組成物の０．１ｗ／ｗ％〜２０ｗ／ｗ％を構成し得る。噴射剤
は、液体非イオン性および／もしくは固体アニオン性界面活性剤ならびに／または固体希
釈剤（活性成分を含む粒子と同じ規模の粒径を有し得る）等のさらなる成分をさらに含ん
でもよい。
非限定的な例として、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、お
よび／またはｍｍＲＮＡは、参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，２
５７，６８５号に記載の方法によって肺送達のために製剤化されてもよい。
肺送達のために製剤化される薬学的組成物は、溶液および／または懸濁液の液滴の形態
で活性成分を提供してもよい。そのような製剤は、任意に滅菌された、活性成分を含む、
水性および／または希釈アルコール溶液および／または懸濁液として調製され、パッケー
ジ化され、かつ／または販売されてもよく、好都合に、任意の噴霧および／または微粒化
デバイスを用いて投与され得る。そのような製剤は、サッカリンナトリウム等の香味剤、
揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、および／または安息香酸メチルヒドロキシ等の防腐剤を
含むが、これらに限定されない１つ以上のさらなる成分をさらに含んでもよい。この投与
経路によって提供される液滴は、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均直径を有し得
る。
鼻腔内、経鼻、および頬側投与
肺送達に有用であるとして本明細書に記載される製剤は、薬学的組成物の鼻腔内送達に
有用である。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み、約０．２μｍ〜５００μ
ｍの平均粒子を有する、粗粉である。そのような製剤は、鼻からの吸入が行われる様態で
、すなわち、鼻に近接して保持された粉末の容器からの鼻孔を通じた急速な吸入によって
、投与される。
経鼻投与に好適な製剤は、例えば、最少約０．１ｗ／ｗ％〜最大１００ｗ／ｗｖ％の活
性成分を含んでもよく、本明細書に記載のさらなる成分のうちの１つ以上を含んでもよい
。薬学的組成物は、頬側投与に好適な製剤中に調製され、パッケージ化され、かつ／また
は販売されてもよい。そのような製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤お
よび／またはロゼンジの形態にあってもよく、また、例えば、０．１ｗ／ｗ％〜２０ｗ／
ｗ％の活性成分であってもよく、残りが経口的に溶解性および／または分解性の組成物、
ならびに任意に、本明細書に記載のさらなる成分のうちの１つ以上を含む。代わりに、頬
側投与に好適な製剤は、活性成分を含む、粉末ならびに／またはエアロゾル化および／も
しくは微粒化溶液および／もしくは懸濁液を含んでもよい。そのような粉末化、エアロゾ
ル化、および／またはエアロゾル化製剤は、分散されるとき、約０．１ｎｍ〜約２００ｎ
ｍの範囲の平均粒径および／または液滴径を有し得、本明細書に記載の任意のさらなる成
分のうちの１つ以上をさらに含んでもよい。
眼内投与
薬学的組成物は、眼内投与に好適な製剤中に調製され、パッケージ化され、かつ／また
は販売されてもよい。そのような製剤は、例えば、水性または油性液体賦形剤中に、例え
ば、０．１／１．０ｗ／ｗ％の活性成分の溶液および／または懸濁液を含む、点眼の形態
にあってもよい。そのような液滴は、緩衝剤、塩、および／または本明細書に記載の任意
のさらなる成分のうちのもう１つ以上をさらに含んでもよい。有用である他の眼内投与可
能な製剤には、微小結晶形態でおよび／またはリポソーム調製物中に活性成分を含むもの
が含まれる。点耳および／または点眼は、本発明の範囲内にあるものとして企図される。
眼および／または包囲組織への送達のために、多層薄膜デバイスが、薬学的組成物を含有
するように調製されてもよい。
ペイロード投与：検出可能な薬剤および治療剤
本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、物
質（「ペイロード」）の生体標的への送達、例えば、標的の検出のための検出可能な物質
の送達、または治療剤の送達が所望される、いくつかの異なるシナリオにおいて使用する
ことができる。検出方法には、インビトロ画像法およびインビボ画像法の両方、例えば、
免疫組織化学、生物発光画像法（ＢＬＩ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ポジトロン放出
断層撮影法（ＰＥＴ）、電子顕微鏡法、Ｘ線コンピュータ断層撮影法、ラマン画像法、光
干渉断層撮影法、吸収画像法、熱画像法、蛍光反射画像法、蛍光顕微鏡法、蛍光分子トモ
グラフィー画像法、核磁気共鳴画像法、Ｘ線画像法、超音波画像法、光音響画像法、研究
室アッセイ、またはタギング／染色／画像法が必要とされる任意の状況における方法が含
まれ得るが、これらに限定されない。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、任意の有用な定位で
リンカーおよびペイロードの両方を含むように設計することができる。例えば、２つの末
端を有するリンカーを用いて、デアザ−アデノシンもしくはデアザ−グアノシンのＣ−７
もしくはＣ−８位において、またはシトシンもしくはウラシルのＮ−３もしくはＣ−５位
に等、一方の末端がペイロードに、および他方の末端が核酸塩基に結合される。本発明の
ポリヌクレオチドは、１つを超えるペイロード（例えば、標識および転写阻害剤）、なら
びに切断可能リンカーを含むことができる。一実施形態において、修飾ヌクレオチドは、
切断可能リンカーの一方の末端が７−デアザ−アデニンのＣ７位に結合され、リンカーの
他方の末端が阻害剤（例えば、シチジン上の核酸塩基のＣ５位）に結合され、標識（例え
ば、Ｃｙ５）がリンカーの中心に結合される、修飾７−デアザ−アデノシン三リン酸塩で
ある（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９９４，３０４号の図
５におけるＡ＊ｐＣｐ Ｃ５ Ｐａｒｇ Ｃａｐｌｅｓｓの化合物１ならびに第９および
１０欄を参照のこと）。修飾７−デアザ−アデノシン三リン酸塩がコード領域へと組み込
まれると、結果として生じる切断可能リンカーを有するポリヌクレオチドは、標識および
阻害剤（例えば、ポリメラーゼ阻害剤）に結合される。リンカーが切断されると（例えば
、切断可能ジスルフィド部分を有するリンカーを還元するための還元条件により）、標識
および阻害剤が放出される。さらなるリンカーおよびペイロード（例えば、治療剤、検出
可能な標識、および細胞透過性ペイロード）が本明細書に記載される。
下記のスキーム１２は、核酸塩基であるアデニンが７−デアザアデニンのＣ−７炭素に
おいてリンカーに結合される、例示の修飾ヌクレオチドを描写する。さらに、スキーム１
２は、リンカーおよびペイロード、例えば、検出可能な薬剤がｍＲＮＡの３’末端上に組
み込まれた、修飾ヌクレオチドを描写する。ジスルフィド切断およびプロパルギルエステ
ル上へのチオール基の１，２−付加により、検出可能な薬剤が放出される。残りの構造（
例えば、スキーム１２におけるｐＡｐＣ５Ｐａｒｇとして描写される）は、阻害剤である
。修飾ヌクレオチドの構造に対する理論的根拠は、係留された阻害剤が、第２の塩基を組
み込むポリメラーゼの能力を立体的に干渉することである。したがって、係留物がこの機
能に影響を及ぼすのに十分に長いこと、および阻害剤（ｉｎｈｉｂｉｔｅｒ）が、第２か
つ後続のヌクレオチドが伸長しているポリヌクレオチド鎖へと加わることを阻害するまた
は禁止する立体化学的定位にあることが必要不可欠である。
スキーム１２
例えば、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮ
Ａは、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）を再プログラミングするのに使用することができ
、それによりクラスター中の総細胞と比較して、トランスフェクトされる細胞を直接追跡
することができる。別の例において、リンカーを介して腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一
次構築物、またはｍｍＲＮＡに結合され得、また蛍光標識され得る薬物を用いて、薬物を
インビボで、例えば、細胞内で追跡することができる。他の例としては、細胞内への可逆
的な薬物送達におけるポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの使用が挙げら
れるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ペ
イロード、例えば、検出可能な薬剤または治療剤の、特定の細胞小器官への細胞内標的化
において使用することができる。例示の細胞内標的には、高度なｍＲＮＡプロセシングの
ための核局在化、または阻害剤を含有するｍＲＮＡに連結された核局在化配列（ＮＬＳ）
が含まれ得るが、これらに限定されない。
さらに、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮ
Ａを用いて、例えば、生存動物において、治療剤を細胞または組織に送達することができ
る。例えば、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲ
ＮＡを用いて、癌細胞を死滅させるために高極性化学療法剤を送達することができる。リ
ンカーを介して治療剤に結合される腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍ
ｍＲＮＡは、部材の透過を容易にすることにより、治療剤が細胞内に移動して細胞内標的
に到達することを可能にし得る。
一例において、リンカーは、リボース環の２’位においてならびに／またはポリヌクレ
オチド、一次構築物ｍｍＲＮＡの３’および／もしくは５’位において結合される（例え
ば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０３０６８３号
を参照のこと）。リンカーは、本明細書に開示され、当技術分野で既知であり、かつ／ま
たは参照により全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１２０３０６８３号に
開示の任意のリンカーであってもよい。
別の例において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、切
断可能リンカーを介して腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡウ
イルス阻害性ペプチド（ＶＩＰ）に結合され得る。切断可能リンカーは、ＶＩＰおよび色
素を細胞内に放出することができる。別の例において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一
次構築物、またはｍｍＲＮＡは、リンカーを介して、コレラ毒素、ジフテリア毒素、およ
び百日咳毒素等のいくつかの細菌毒素の作用に関与する、ＡＤＰ−リボシレートに結合さ
れ得る。これらの毒素タンパク質は、ヒト細胞において標的タンパク質を修飾するＡＤＰ
−リボシルトランスフェラーゼである。例えば、コレラ毒素ＡＤＰ−リボシレートＧタン
パク質は、致命的な下痢をもたらす、小腸の内壁からの大量の体液分泌を引き起こすこと
によって、ヒト細胞を変性させる。
いくつかの実施形態において、ペイロードは、細胞毒、放射性イオン、化学療法剤、ま
たは他の治療剤等の治療剤であってもよい。細胞毒または細胞傷害性薬剤には、細胞に有
害であり得るいずれの薬剤も含まれる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グ
ラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、
ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒ
ドロキシアントラセンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｎｔｈｒａｃｉｎｅｄｉｏｎｅ）、
ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン
（ｄｅｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラ
カイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、マイタンシノイド、例えば
、マイタンシノール（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，２０８
，０２０号）、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５、すべてが参照により本明細書に組み込
まれる、米国特許第５，４７５，０９２号、同第５，５８５，４９９号、および同第５，
８４６，５４５号を参照のこと）、ならびにこれらの類似体または相同体が挙げられるが
、これらに限定されない。放射性イオンには、ヨウ素（例えば、ヨウ素１２５またはヨウ
素１３１）、ストロンチウム８９、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩
、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３、およびプラセオジミウムが含まれる
が、これらに限定されない。他の治療剤には、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、
６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルダカルバ
ジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ
クロラムブシル、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）、メルファラン、カルムスチン（Ｂ
ＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマン
ニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびｃｉｓ−ジクロロジアミン白
金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（
かつてはダウノマイシン）およびｄオキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイ
シン（かつてはアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラ
マイシン（ＡＭＣ））、および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン
、タキソール、およびマイタンシノイド）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ペイロードは、種々の有機小分子、無機化合物、ナノ粒
子、酵素もしくは酵素基質、蛍光物質、発光物質（例えば、ルミノール）、生物発光物質
（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびイクオリン）、化学発光物質、放射性
物質（例えば、１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３
３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、またはｒ９９ｍＴｃ（例えば、
過テクネチウム酸塩（テクネチウム酸塩（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４−として）、および造影剤
（例えば、金（例えば、金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えば、キレート化Ｇｄ）、酸化
鉄（例えば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）、および
極小超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ）、マンガンキレート（例えば、Ｍｎ−ＤＰＤＰ）、硫
酸バリウム、ヨード系造影剤媒体（イオヘキソール（Ｉｏｈｅｘｏｌ））、微小気泡、ま
たはペルフルオロ炭素）等の検出可能な薬剤であり得る。そのような光検出可能な標識に
は、例えば、制限なく、４−アセトアミド−４’−イソチオシアン酸スチルベン−２，２
’ジスルホン酸；アクリジンおよび誘導体（例えば、アクリジンおよびアクリジンイソチ
オシアネート）；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤ
ＡＮＳ）；４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，
５ジスルホン酸塩；Ｎ−（４−アニリノ−１−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミ
ド；ＢＯＤＩＰＹ；ブリリアントイエロー；クマリンおよび誘導体（例えば、クマリン、
７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、および７−アミノ−４−
トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１）；シアニン色素；シアノシン；４’，６
−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５”−ジブロモピロガロール
−スルホナフタレン（ｎａｐｈｔｈａｌｅｉｎ）（ブロモピロガロールレッド）；７−ジ
エチルアミノ−３−（４’−イソチオシアン酸フェニル）−４−メチルクマリン；ジエチ
レントリアミン五酢酸塩；４，４’−ジイソチオシアン酸ジヒドロ−スチルベン−２，２
’−ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアン酸スチルベン−２，２’−ジスルホン酸
；５−［ジメチルアミノ］−ナフタレン−１−スルホニルクロリド（ＤＮＳ、ダンシルク
ロリド）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡ
ＢＩＴＣ）；エオシンおよび誘導体（例えば、エオシンおよびエオシンイソチオシアネー
ト）；エリスロシンおよび誘導体（例えば、エリスロシンＢおよびエリスロシンイソチオ
シアネート）；エチジウム；フルオロセインおよび誘導体（例えば、５−カルボキシフル
オロセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオロ
セイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４’５’−ジクロロ−６−カルボキシフ
ルオロセイン、フルオロセイン、フルオロセインイソチオシアネート、Ｘ−ローダミン−
５−（および−６）−イソチオシアネート（ＱＦＩＴＣまたはＸＲＩＴＣ）、およびフル
オレスカミン）；２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメチル−３−（３
−スルホプロピル）−２Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール−２−イリデン］エチリデン］−２
−［４−（エトキシカルボニル）−１−ピペラジニル］−１−シクロペンテン−１−イル
］エテニル］−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル（ｓｕｌｆｏｒｐｒｏｐｙ
ｌ））−１Ｈ−ベンズ［ｅ］インドリウム水酸化物、分子内塩、ｎ，ｎ−ジエチルエタン
アミン（１：１）（ＩＲ１４４）との化合物；５−クロロ−２−［２−［３−［（５−ク
ロロ−３−エチル−２（３Ｈ）−ベンゾチアゾール−イリデン）エチリデン］−２−（ジ
フェニルアミノ）−１−シクロペンテン−１−イル］エテニル］−３−エチルベンゾチア
ゾリウム過塩素酸塩（ＩＲ１４０）；マラカイトグリーンイソチオシアネート；４−メチ
ルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラローザニリン；
フェノールレッド；Ｂ−フィコエリトリン；ｏ−フタルジアルデヒド；ピレンおよび誘導
体（例えば、ピレン、酪酸ピレン、およびスクシンイミジル１−ピレン）；酪酸塩量子ド
ット；リアクティブレッド４（ＣＩＢＡＣＲＯＮ（商標）ブリリアントレッド３Ｂ−Ａ）
；ローダミンおよび誘導体（例えば、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−
カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢスルホニルクロリドローダミン
（ｒｈｏｄａｒｎｉｎｅ）（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミン
Ｘイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミ
ン１０１のスルホニルクロリド誘導体（テキサスレッド）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメ
チル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）テトラメチルローダミン、およびテトラ
メチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）；リボフラビン；ロゾール酸；テル
ビウムキレート誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−
５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）；ＩＲＤ ７００；ＩＲＤ ８００；Ａ
ｌｅｘａ ６４７；Ｌａ Ｊｏｌｔａ Ｂｌｕｅ；フタロシアニン；ならびにナフタロシ
アニンが含まれる。
いくつかの実施形態において、検出可能な薬剤は、活性化されると検出可能となる、検
出不可能な前駆体（例えば、蛍光発生テトラジン−フルオロフォア構築物（例えば、テト
ラジン−ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、テトラジン−オレゴングリーン４８８、またはテトラジン
−ＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ−Ｘ）、または酵素により活性化可能な蛍光発生剤（例えば、Ｐ
ＲＯＳＥＮＳＥ（登録商標）（ＶｉｓＥｎ Ｍｅｄｉｃａｌ））であってもよい。酵素標
識組成物が使用され得るインビトロアッセイには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳ
Ａ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光法、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、放射免疫アッセイ
（ＲＩＡ）、およびウエスタンブロット分析が含まれるが、これらに限定されない。
組み合わせ
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、１つ以上の他の治療
剤、予防剤、診断剤、または撮像剤と組み合わせて使用されてもよい。「と組み合わせて
」とは、薬剤が同時に投与されるかつ／または一緒に送達するために製剤化される必要が
あることを暗示するようには意図さないが、これらの送達方法は、本開示の範囲内にある
。組成物は、１つ以上の他の所望の治療薬または医療処置と並行して、その前に、または
その後に投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤のために決定された用量で
および／または時間スケジュールに基づいて投与されるであろう。いくつかの実施形態に
おいて、本開示は、薬学的、予防的、診断的、または撮像組成物を、それらの生体利用能
を改善し、それらの代謝を低減および／もしくは修飾し、それらの排泄を阻害し、かつ／
またはそれらの体内分布を修飾し得る薬剤と組み合わせて、送達することを包含する。非
限定的な例として、核酸またはｍｍＲＮＡは、癌の治療のためまたは過剰増殖性細胞を制
御するための医薬品と組み合わせて使用されてもよい。参照により全体が本明細書に組み
込まれる米国特許第７，９６４，５７１号において、リポポリマーとともにインターロイ
キン−１２をコードするＤＮＡプラスミドを含む薬学的組成物を使用し、また少なくとも
１つの抗癌剤または化学療法剤を投与する、原発性または転移性固形腫瘍の治療のための
併用療法が記載される。さらに、抗増殖性分子をコードする本発明の核酸およびｍｍＲＮ
Ａは、リポポリマーとともに薬学的組成物中にあってもよい（例えば、抗増殖性分子をコ
ードするＤＮＡプラスミドおよびリポポリマーを含む薬学的組成物を特許請求する、参照
により全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１１０２１８２３１号を参照のこ
と）、それは少なくとも１つの化学療法剤または抗癌剤とともに投与され得る。
組み合わせて利用される治療上、予防上、診断上、または撮像活性剤は、単一の組成物
中で一緒に投与されても、異なる組成物中で別個に投与されてもよいことがさらに理解さ
れよう。一般に、組み合わせて利用される薬剤は、それらが個々に利用されるレベルを超
えないレベルで利用されることが予想される。いくつかの実施形態において、組み合わせ
て利用されるレベルは、個々に利用されるレベルよりも低いであろう。一実施形態におい
て、組み合わせは、各々または一緒に、本明細書に記載の分割投薬レジメンに従って投与
されてもよい。
投薬
本発明は、本発明に従う修飾ｍＲＮＡおよびそれらのコードされたタンパク質または複
合体をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。核酸、タンパク質、
もしくは複合体、またはその薬学的、画像化、診断的、もしくは予防的組成物は、疾患、
障害、および／または状態（例えば、記憶障害の取り組みに関連した疾患、障害、および
／または状態）の予防、治療、診断、または画像化に有効な任意の量および任意の投与経
路を用いて対象に投与することができる。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、お
よび全身状態、疾患の重症度、特定の組成物、その投与方法、その活性方法等に応じて、
対象によって異なる。本発明に従う組成物は、投与を容易にし、かつ投薬量を均一にする
ために、典型的には、単位剤形で製剤化される。しかしながら、本発明の組成物の総１日
使用量は、適切な医学的判断の範囲内で担当医によって決定されてもよいことが理解され
る。任意の特定の患者の特定の治療上有効、予防上有効、または適切な画像化用量レベル
は、治療される障害および障害の重症度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特
定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、および食生活；投与時間、投
与経路、および用いられる特定の化合物の排泄速度；治療の持続期間；用いられる特定の
化合物と組み合わせて、またはそれと同時に使用される薬物；医学分野で周知の要素等を
含む様々な要素に依存する。
ある特定の実施形態において、本発明に従う組成物は、所望の治療的、診断的、予防的
、または画像効果を得るために、１日当たり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／
ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約０
．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ
／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ
／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／
ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋ
ｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）を１日１回以上送達するのに十分な投薬量レベルで
投与され得る。所望の投薬量は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おきに、２日おき
に、週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回送達されてもよい。ある
特定の実施形態において、所望の投薬量は、複数回の投与（例えば、２回、３回、４回、
５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回以上の投与）
によって送達されてもよい。複数回の投与が用いられるとき、本明細書に記載の分割投薬
レジメン等の分割投薬レジメンが使用され得る。
本発明に従って、分割用量レジメンでのｍｍＲＮＡの投与が哺乳類対象においてより高
いレベルのタンパク質を産生することが見出されている。本明細書で使用されるとき、「
分割用量」とは、単回単位用量または総１日用量の２つ以上の用量、例えば、単回単位用
量の２回以上の投与への分割である。本明細書で使用されるとき、「単回単位用量」とは
、１回用量で／一度に／単一経路で／単一接触点で、すなわち、単回投与事象で投与され
る任意の治療薬の用量である。本明細書で使用されるとき、「総１日用量」は、２４時間
内に所与または処方される量である。これは、単回単位用量として投与されてもよい。一
実施形態において、本発明のｍｍＲＮＡは、分割用量で対象に投与される。ｍｍＲＮＡは
、緩衝液のみまたは本明細書に記載の製剤中で製剤化されてもよい。
剤形
本明細書に記載の薬学的組成物は、局所、鼻腔内、気管内、または注入用（例えば、静
脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、皮下）等の本明細書に記載の剤形に製
剤化され得る。
液体剤形
非経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマルショ
ン、溶液、懸濁液、シロップ、および／またはエリキシルが含まれるが、これらに限定さ
れない。活性成分に加えて、液体剤形は、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例
えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジル
アルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、
ジメチルホルムアミド、油（具体的には、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ、胚芽油
、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアル
コール、ソルビタンポリエチレングリコールおよび脂肪酸エステル、ならびにこれらの混
合物を含むが、これらに限定されない当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含ん
でもよい。非経口投与についてのある特定の実施形態において、組成物は、可溶化剤、例
えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、修飾油、グリコール、ポリソ
ルベート、シクロデキストリン、ポリマー、および／またはこれらの組み合わせと混合さ
れてもよい。
注入物
注入用調製物、例えば、滅菌注入用水性または油性懸濁液は、既知の技術に従って製剤化
されてもよく、好適な分散化剤、湿潤剤、および／または懸濁化剤を含んでもよい。滅菌
注入用調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤および／または溶媒、例えば、１
，３−ブタンジオール溶液中の滅菌注入用溶液、懸濁液、および／またはエマルションで
あり得る。用いられ得る許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンガー溶液、Ｕ
．Ｓ．Ｐ．、および等張性塩化ナトリウム溶液が含まれるが、これらに限定されない。無
刺激固定油が溶媒または懸濁化媒体として慣習的に用いられる。この目的のために、合成
モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激固定油が用いられ得る。オレイン
酸等の脂肪酸が注入物の調製において使用され得る。
注入用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によって、かつ／または使用
前に滅菌剤を滅菌水または他の滅菌注入用媒体中に溶解もしくは分散され得る滅菌固体組
成物の形態で組み込むことによって滅菌され得る。
長活性成分の効果を長引かせるために、皮下または筋肉内注入からの活性成分の吸収を
遅延させることが所望され得る。これは、水への溶解度が低い結晶質または非晶質材料の
液体懸濁液の使用によって遂行されてもよい。その後、ポリヌクレオチド、一次構築物、
またはｍｍＲＮＡの吸収速度は、その溶解速度に依存し、次いで、結晶の大きさおよび結
晶形態に依存し得る。あるいは、非経口的に投与されたポリヌクレオチド、一次構築物、
またはｍｍＲＮＡの遅延吸収は、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを油
ビヒクル中に溶解または懸濁させることによって遂行され得る。注入用デポー形態は、ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのマイクロカプセルマトリックスを、ポ
リラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に形成することによって作製される
。ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡとポリマーとの比率、および用いら
れる特定のポリマーの性質に応じて、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ
の放出速度を調節することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルト
エステル）およびポリ（無水物）が挙げられるが、これらに限定されない。デポー注入用
製剤は、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを、身体組織と適合性のリポ
ソームまたはマイクロエマルション中に封入することによって調製されてもよい。
肺
肺送達に有用であるとして本明細書に記載される製剤は、薬学的組成物の鼻腔内送達に
も使用され得る。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み、約０．２μｍ〜５０
０μｍの平均粒子を有する粗粉であってもよい。そのような製剤は、鼻からの吸入が行わ
れる様態で、すなわち鼻に近接して保持された粉末の容器からの鼻孔を通じた急速な吸入
によって投与されてもよい。
経鼻投与に好適な製剤は、例えば、最少約０．１ｗ／ｗ％〜最大１００ｗ／ｗ％の活性
成分を含んでもよく、本明細書に記載のさらなる成分のうちの１つ以上を含んでもよい。
薬学的組成物は、頬側投与に好適な製剤中に調製され、パッケージ化され、かつ／または
販売されてもよい。そのような製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤およ
び／またはロゼンジの形態であってもよく、例えば、約０．１ｗ／ｗ％〜２０ｗ／ｗ％の
活性成分を含有してもよく、この平衡物は、経口溶解性および／または分解性組成物と、
任意に、本明細書に記載のさらなる成分のうちの１つ以上とを含んでもよい。代わりに、
頬側投与に好適な製剤は、活性成分を含む、粉末ならびに／またはエアロゾル化および／
もしくは微粒化溶液および／もしくは懸濁液を含んでもよい。そのような粉末化、エアロ
ゾル化、および／またはエアロゾル化製剤は、分散されるとき、約０．１ｎｍ〜約２００
ｎｍの範囲の平均粒径および／または液滴径を有し得、本明細書に記載の任意のさらなる
成分のうちの１つ以上をさらに含んでもよい。
医薬品の製剤および／または製造における一般の考慮事項は、例えば、参照により全体
が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ２１ｓｔｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５において見出され得る。
コーティング剤またはシェル
錠剤、糖衣錠、カプセル、丸剤、および顆粒の固体剤形を、コーティング剤およびシェ
ル、例えば、腸溶性コーティング剤および医薬品製剤化分野で周知の他のコーティング剤
で調製することができる。それらは、任意に、乳白剤を含んでもよく、それらが、腸管の
ある特定の部分において、任意に、遅延様式で、活性成分（複数可）のみを放出するか、
またはそれを優先的に放出する組成物であり得る。使用することができる包埋組成物の例
としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。同様の種類の固体組成物は、その
ような賦形剤をラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコール等とし
て使用した軟質および硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として用いてもよい。
薬学的組成物の特性
本明細書に記載の薬学的組成物は、生物学的利用能、治療域、および／または分布量の
うちの１つ以上によって特徴付けられ得る。
生物学的利用能
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載の送
達剤で組成物に製剤化されるとき、本明細書に記載の送達剤を欠いた組成物と比較して、
生物学的利用能の増加を呈し得る。本明細書で使用されるとき、「生物学的利用能」とい
う用語は、哺乳動物に投与される腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡの所与の量の全身利用能を指す。生物学的利用能は、化合物を哺乳動物に投与した
後に、変化していない形態の化合物の曲線下面積（ＡＵＣ）または最大血清または血漿濃
度（Ｃｍａｘ）を測定することによって評価され得る。ＡＵＣは、縦座標（Ｙ軸）に沿っ
た化合物の血清または血漿濃度を横座標（Ｘ軸）に沿った時間に対してプロットした曲線
下面積の決定である。一般に、特定の化合物のＡＵＣは、当業者に既知の方法、および参
照により全体が本明細書に組み込まれるＧ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ，Ｍｏｄｅｒｎ Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ，ｖ．７２，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｉｎｃ．
，１９９６に記載の方法を用いて算出され得る。
Ｃｍａｘ値は、化合物を哺乳動物に投与した後に哺乳動物の血清または血漿において達
成される化合物の最大濃度である。特定の化合物のＣｍａｘ値は、当業者に既知の方法を
用いて測定され得る。「生物学的利用能の増加」または「薬物動態の改善」という表現は
、哺乳動物においてＡＵＣ、Ｃｍａｘ、またはＣｍｉｎとして測定された第１のポリヌク
レオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの全身利用能が、本明細書に記載の送達剤と共
投与された場合、本明細書に記載の送達剤との共投与が行われない場合よりも高いことを
意味する。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲ
ＮＡの生物学的利用能は、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、
少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、
少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、
少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、
少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、
少なくとも約９５％、または約１００％増加し得る。
治療域
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載の送
達剤で組成物に製剤化されるとき、本明細書に記載の送達剤を欠いた投与されたポリヌク
レオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ組成物の治療域と比較して、投与されたポリヌ
クレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ組成物の治療域の増加を呈し得る。本明細書
で使用されるとき、「治療域」は、治療的効果を誘発する可能性の高い、血漿濃度の範囲
、または作用部位における治療上活性物質のレベルの範囲を指す。いくつかの実施形態に
おいて、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの治療域は、本明細書に記載
の送達剤と共投与されるとき、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０
％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０
％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０
％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０
％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０
％、少なくとも約９５％、または約１００％増加し得る。
分布量
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載の送
達剤で組成物に製剤化されるとき、本明細書に記載の送達剤を欠いた組成物と比較して、
分布量（Ｖｄｉｓｔ）の改善、例えば、低減または標的化を呈し得る。分布量（Ｖｄｉｓ
ｔ）は、体内の薬物の量を血液または血漿中の薬物の濃度と関連付ける。本明細書で使用
されるとき、「分布量」という用語は、血液または血漿中の濃度と同一の濃度で体内の薬
物の総量を含有するよう要求される液量を指し、Ｖｄｉｓｔは、体内の薬物の量／血液ま
たは血漿中の薬物の濃度に等しい。例えば、用量１０ｍｇおよび血漿濃度１０ｍｇ／Ｌの
場合、分布量は、１リットルである。分布量は、薬物が血管外組織に存在する程度を反映
する。大量の分布量は、血漿タンパク質結合と比較して組織構成成分に結合する化合物の
傾向を反映する。臨床現場において、Ｖｄｉｓｔを用いて負荷用量を決定し、定常状態濃
度を達成することができる。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築
物、またはｍｍＲＮＡの分布量は、本明細書に記載の送達剤と共投与されるとき、少なく
とも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも
約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも
約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも
約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％減少し得る。
生物学的効果
一実施形態において、動物に送達される修飾ｍＲＮＡの生物学的効果は、動物における
タンパク質発現を分析することによって分類され得る。タンパク質発現は、本発明の修飾
ｍＲＮＡを投与した哺乳動物から収集された生体試料を分析することによって決定され得
る。一実施形態において、哺乳動物に投与される修飾ｍＲＮＡによってコードされた少な
くとも５０ｐｇ／ｍＬの発現タンパク質が好ましくあり得る。例えば、哺乳動物に送達さ
れる修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の５０〜２００ｐｇ／ｍＬの発現タン
パク質が、哺乳動物における治療上有効量のタンパク質と見なされ得る。
質量分析による修飾核酸の検出
質量分析（ＭＳ）は、分子のイオン変換後の分子の構造質量および分子量／濃度情報を
提供することができる分析的技法である。分子は、最初に、イオン化されて正電荷または
負電荷を得て、次いで、それらは、質量分析器を通って移動して、それらの質量／電荷（
ｍ／ｚ）比に従って検出器の異なる領域に到達する。
質量分析は、分画された試料をイオン化し、かつさらなる分析のために荷電分子を作成
するためのイオン源を含む質量分析計を用いて行われる。例えば、試料のイオン化は、エ
レクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、光イオン化、
電子イオン化高速原子衝撃（ＦＡＢ）／液体二次イオン化（ＬＳＩＭＳ）、マトリックス
支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）、電界イオン化、電界脱離、サーモスプレー
／血漿スプレーイオン化、および粒子ビームイオン化によって実施され得る。当業者であ
れば、イオン化方法の選択が、測定される分析物、試料の種類、検出器の種類、正モード
と負モードの選択等に基づいて決定され得ることを理解する。
試料がイオン化された後、その結果作成される正電荷イオンまたは負電荷イオンが分析
されて、質量対電荷比（すなわち、ｍ／ｚ）を決定することができる。質量対電荷比の決
定に好適な分析器には、四重極分析器、イオントラップ分析器、および飛行時間分析器が
含まれる。イオンは、いくつかの検出モードを用いて検出され得る。例えば、選択された
イオンは、検出され得る（すなわち、選択的イオン監視モード（ＳＩＭ）を用いて）か、
またはあるいは、イオンは、走査モード、例えば、多重反応監視（ＭＲＭ）もしくは選択
反応監視（ＳＲＭ）を用いて検出され得る。
ペプチド標準物の安定した同位体標識化希釈と連動した液体クロマトグラフィー−多重
反応監視（ＬＣ−ＭＳ／ＭＲＭ）が、タンパク質の検証に有効な方法であることが示され
ている（例えば、これらの各々が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｅ
ｓｈｉｓｈｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ２００９
８：２３３９−２３４９、Ｋｕｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ２００９
５５：１１０８−１１１７、Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ２０１０
５６：２８１−２９０）。バイオマーカー発見の研究で頻繁に用いられる標的化されて
いない質量分析とは異なり、標的化されたＭＳ方法は、計器の完全な分析能力を複合体混
合物中の何十〜何百もの選択されたペプチドに集中させるＭＳのペプチド配列に基づくモ
ードである。検出および断片化を目的とするタンパク質に由来するペプチドのみに制限す
ることによって、感受性および再現性は、発見モードのＭＳ方法と比較して劇的に改善さ
れる。このタンパク質の質量分析に基づく多重反応監視（ＭＲＭ）定量化方法は、臨床試
料の迅速な標的化された多重化タンパク質発現プロファイリングを介してバイオマーカー
の発見および定量化に劇的に影響を与えることができる。
一実施形態において、本発明の少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡによってコードされる少
なくとも１つのタンパク質を含有し得る生体試料は、ＭＲＭ−ＭＳ法によって分析され得
る。生体試料の定量化は、内部標準物として同位体標識ペプチドまたはタンパク質をさら
に含むことができるが、これらに限定されない。
本発明に従って、生体試料は、対象から得られた時点で、酵素消化に供されてもよい。
本明細書で使用されるとき、「消化」という用語は、より短いペプチドに分裂することを
意味する。本明細書で使用されるとき、「タンパク質を消化するために試料を処理する」
という表現は、試料中のタンパク質を解体するような方法で試料を操作することを意味す
る。これらの酵素には、トリプシン、エンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ、およびキモトリ
プシンが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本発明の少なくとも
１つの修飾ｍＲＮＡによってコードされる少なくとも１つのタンパク質を含有し得る生体
試料は、酵素を用いて消化され得る。
一実施形態において、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し
得る生体試料は、エレクトロスプレーイオン化を用いてタンパク質について分析され得る
。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）質量分析（ＥＳＩＭＳ）は、それらが質量分析
によって分析される前に溶液から気相へのイオンの移動を支援するために電気的エネルギ
ーを用いる。試料は、当技術分野で既知の方法を用いて分析され得る（例えば、参照によ
り全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｒ
ｅｖ．２００３ ２４（１）：３−１２）。溶液に含有されるイオン種は、液滴の微粒ス
プレーを分散させ、溶媒を蒸発させ、高度に帯電した液滴の噴霧を生成するためにイオン
を液滴から排出させることによって気相に移動し得る。高度に帯電した液滴の噴霧は、四
重極質量分析器等であるが、これに限定されない、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少
なくとも３つ、または少なくとも４つの質量分析器を用いて分析され得る。さらに、質量
分析法には、精製ステップが含まれ得る。非限定的な例として、第１の四重極は、単一ｍ
／ｚ比を選択するように設定されてもよく、従って、異なるｍ／ｚ比を有する他の分子イ
オンを濾去することができ、これは、ＭＳ分析前に複雑で時間のかかる試料精製手順を排
除し得る。
一実施形態において、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し
得る生体試料は、タンデムＥＳＩＭＳ系（例えば、ＭＳ／ＭＳ）において、タンパク質に
ついて分析され得る。非限定的な例として、液滴は、産物スキャン（もしくは娘スキャン
）、前駆体スキャン（親スキャン）、中性損失、または多重反応監視を用いて分析され得
る。
一実施形態において、本発明の修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し
得る生体試料は、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析（Ｍ
ＡＬＤＩＭＳ）を用いて分析され得る。ＭＡＬＤＩは、タンパク質等の巨大分子および小
分子の両方の非破壊蒸発およびイオン化を提供する。ＭＡＬＤＩ分析において、分析物は
、最初に、紫外線吸収弱有機酸も含み得るが、これに限定されない高モル過剰のマトリッ
クス化合物と共結晶化される。ＭＡＬＤＩに用いられるマトリックスの非限定的な例とし
ては、α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸、３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシ桂皮酸
、および２，５−ジヒドロキシ安息香酸がある。分析物−マトリックス混合物のレーザー
放射は、マトリックスおよび分析物の蒸発をもたらし得る。レーザー誘起脱離は、無傷の
分析物の高イオン収率を提供し、高精度の化合物の測定を可能にする。試料は、当技術分
野で既知の方法を用いて分析され得る（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれ
る、Ｌｅｗｉｓ，Ｗｅｉ ａｎｄ Ｓｉｕｚｄａｋ，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０００：５８８０−５８９４）。非限定
的な例として、ＭＡＬＤＩ分析に用いられる質量分析器には、線形飛行時間（ＴＯＦ）、
ＴＯＦリフレクトロン、またはフーリエ変換質量分析器が含まれ得る。
一実施形態において、分析物−マトリックス混合物は、乾燥液滴法を用いて形成され得
る。生体試料は、マトリックスと混合されて飽和マトリックス溶液を作成し、マトリック
スと試料の比率は、およそ５０００：１である。その後、一定分量（およそ０．５〜２．
０μＬ）の飽和マトリックス溶液が、乾燥させられて分析物−マトリックス混合物を形成
する。
一実施形態において、分析物−マトリックス混合物は、薄層法を用いて形成され得る。
マトリックス均質薄膜が最初に形成され、その後、その試料が適用され、マトリックスに
よって吸収されて分析物−マトリックス混合物を形成し得る。
一実施形態において、分析物−マトリックス混合物は、厚層法を用いて形成され得る。
マトリックス均質薄膜は、ニトロ−セルロースマトリックス添加剤で形成される。均一な
ニトロ−セルロースマトリックス層が得られた時点で、試料が適用され、マトリックスに
吸収されて、分析物−マトリックス混合物を形成する。
一実施形態において、分析物−マトリックス混合物は、サンドイッチ法を用いて形成さ
れ得る。マトリックス結晶の薄層が、薄層法にあるように調製され、その後、水性トリフ
ルオロ酢酸、試料、およびマトリックスの液滴が添加される。その後、試料はマトリック
スに吸収されて、分析物−マトリックス混合物を形成する。
Ｖ． 本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関
連ｍｍＲＮＡの使用
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、および腫瘍学関連ｍｍ
ＲＮＡは、好ましい実施形態において、免疫応答および／もしくは分解経路等の有害な生
体応答の回避（ａｖｏｉｄａｎｃｅ）もしくは回避（ｅｖａｓｉｏｎ）、発現の閾値の克
服および／もしくはタンパク質産生能力の改善、改善された発現率もしくは翻訳効率、改
善された薬物もしくはタンパク質半減期および／もしくはタンパク質濃度、最適化された
タンパク質局在化を提供して、組織内の安定性および／もしくはクリアランス、受容体に
よる取り込みおよび／もしくは動態、組成物による細胞到達、翻訳機構との関わり、分泌
効率（該当する場合）、血液循環への到達可能性、ならびに／または細胞の状態、機能、
および／もしくは活性の調節のうちの１つ以上を改善するように設計される。
治療薬
治療剤
本明細書に記載される、修飾核酸および修飾ＲＮＡ等の本発明の腫瘍学関連ポリヌクレ
オチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ、ならびにそれらから翻訳
されるタンパク質は、治療剤または予防剤として使用することができる。それらは、医薬
において使用するために提供される。例えば、本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、対象に投与することがで
き、この腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲ
ＮＡは、インビボで翻訳されて、対象において治療的または予防的腫瘍学関連ポリペプチ
ドを産生する。ヒトおよび他の哺乳動物における疾患または状態の診断、治療、または予
防のための組成物、方法、キット、および試薬が提供される。本発明の活性治療剤は、腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ、腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを含
有する細胞、または腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチドを含む。
ある特定の実施形態において、抗体依存性細胞傷害性を誘導するタンパク質とともに、
哺乳類対象の免疫性を後押しするタンパク質（単数または複数）をコードする翻訳可能領
域を含有する、１つ以上の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを含有する、組み合わせ治療薬が本明細書に提供される。例えば、
トラスツズマブおよび顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）をコードする１つ以上の核
酸を含有する治療薬が本明細書に提供される。具体的には、そのような組み合わせ治療薬
は、トラスツズマブへの誘導耐性を発達するＨｅｒ２＋乳癌患者において有用である。（
例えば、Ａｌｂｒｅｃｈｔ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．２（６）：７９５−８（２０
１０）を参照のこと）。
本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡを用いて、細胞集団内で組換えポリペプチドの翻訳を誘導する方法が、本
明細書に提供される。そのような翻訳は、インビボ、エクスビボ、培養下、またはインビ
トロであり得る。細胞集団は、少なくとも１つのヌクレオシド修飾および組換え腫瘍学関
連ポリペプチドをコードする翻訳可能領域を有する腫瘍学関連核酸を含有する有効量の組
成物と接触させられる。集団は、腫瘍学関連核酸が細胞集団の１つ以上の細胞内に局在化
され、組換え腫瘍学関連ポリペプチドが細胞内で腫瘍学関連核酸から翻訳されるような条
件下で接触させられる。
組成物の「有効量」は、少なくとも部分的に、標的組織、標的細胞型、投与手段、核酸
の物理的特徴（例えば、サイズ、および修飾ヌクレオシドの程度）、および他の決定因子
に基づいて提供される。一般に、有効量の組成物は、細胞内での効率的な、好ましくは対
応する未修飾核酸を含有する組成物よりも効率的な、タンパク質産生を提供する。増加し
た効率は、増加した細胞トランスフェクション（すなわち、核酸でトランスフェクトされ
た細胞の割合（％））、核酸からの増加したタンパク質翻訳、減少した核酸分解（例えば
、修飾核酸からのタンパク質翻訳の増加した持続期間によって実証される）、または宿主
細胞の低減された自然免疫応答によって実証され得る。
本発明の態様は、必要性のある哺乳類対象において組換えポリペプチドのインビボ翻訳
を誘導する方法を対象とする。その中で、少なくとも１つの構造修飾または化学修飾およ
び組換えポリペプチドをコードする翻訳可能領域を有する核酸を含有する、有効量の組成
物が、本明細書に記載の送達方法を用いて対象に投与される。核酸は、核酸が対象の細胞
内に局在化され、組換えポリペプチドが細胞内で核酸から翻訳されるような量および他の
条件下で提供される。核酸が局在化される細胞、または細胞が存在する組織は、１周期以
上の核酸投与により標的とされ得る。
ある特定の実施形態において、投与される腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一
次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、組換え腫瘍学関連ポリペプチドが翻訳される
細胞、組織、または生物内で実質的に不在である機能的活性を提供する、１つ以上の組換
えポリペプチドの産生を指示する。例えば、欠損した機能的活性は、酵素的活性、構造的
活性、または遺伝子調節活性の性質を有し得る。関連する実施形態において、投与される
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、
組換え腫瘍学関連ポリペプチドが翻訳される細胞内に存在しているが、実質的に不全であ
る機能的活性を増加させる（例えば、相乗的に）、１つ以上の組換え腫瘍学関連ポリペプ
チドの産生を指示する。
他の実施形態において、投与される腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築
物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、組換え腫瘍学関連ポリペプチドが翻訳される細胞内
で実質的に不在である１つの腫瘍学関連ポリペプチド（または複数の腫瘍学関連ポリペプ
チド）を置き換える、１つ以上の組換え腫瘍学関連ポリペプチドの産生を指示する。その
ような不在性は、コード遺伝子の遺伝子突然変異またはその調節経路に起因し得る。いく
つかの実施形態において、組換え腫瘍学関連ポリペプチドは、細胞内の内因性腫瘍学関連
タンパク質のレベルを所望のレベルまで増加させ、そのような増加は、内因性腫瘍学関連
タンパク質のレベルを正常未満のレベルから正常なレベルへと、または正常なレベルから
過正常なレベルへと至らせ得る。
あるいは、組換え腫瘍学関連ポリペプチドは、細胞内に存在する、最上の表面上にある
、または細胞から分泌される内因性タンパク質の活性に拮抗するように機能する。通常、
内因性腫瘍学関連タンパク質の活性は、例えば、内因性腫瘍学関連タンパク質の突然変異
が変化した活性または局在化をもたらすことに起因して、対象に有害である。さらに、組
換え腫瘍学関連ポリペプチドは、細胞内に存在する、最上の表面上にある、または細胞か
ら分泌される生体部分の活性に、直接的または間接的に拮抗する。拮抗対象の生体部分の
例としては、脂質（例えば、コレステロール）、リポタンパク質（例えば、低比重リポタ
ンパク質）、核酸、炭水化物、志賀毒素および破傷風毒素等のタンパク質毒素、またはボ
ツリヌス毒素、コレラ毒素、およびジフテリア毒素等の小分子毒素が挙げられる。さらに
、拮抗対象の生物学的分子は、細胞傷害性活性または細胞増殖抑制性活性等の望ましくな
い活性を示す内因性タンパク質である場合がある。
本明細書に記載の組換え腫瘍学関連タンパク質は、細胞内、可能性としては核等の特定
の区画内での局在化のために操作されてもよく、または細胞からの分泌もしくは細胞の原
形質膜への移行のために操作される。
いくつかの実施形態において、本発明に従う修飾腫瘍学関連ｍＲＮＡおよびそれらのコ
ードされた腫瘍学関連ポリペプチドは、本発明に記載の多様な疾患、障害、および／また
は状態のいずれの治療に使用されてもよい。
感染および／または敗血症を発症する危険性がある対象において感染および／または敗
血症を予防するための方法が本明細書に提供され、本方法は、そのような予防を必要とす
る対象に、感染および／または敗血症を予防するのに十分な量で、抗菌性ポリペプチド（
例えば、抗細菌性ポリペプチド）、またはその部分的もしくは完全にプロセシングされた
形態をコードする腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡ前駆体
を含む組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、感染および／または
敗血症を発症する危険性がある対象は、癌患者であり得る。ある特定の実施形態において
、癌患者は、前処置レジメンを経た場合がある。いくつかの実施形態において、前処置統
制（ｒｅｇｉｍｅｎｔ）は、化学療法、放射線療法、または両方を含むが、これらに限定
されない。
対象において感染および／または敗血症を治療するための方法が本明細書にさらに提供
され、本方法は、そのような治療を必要とする対象に、感染および／または敗血症を治療
するのに十分な量で、抗菌性ポリペプチド（例えば、抗細菌性ポリペプチド）、例えば、
本明細書に記載の抗菌性ポリペプチド、またはその部分的もしくは完全にプロセシングさ
れた形態をコードする腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡ前
駆体を含む組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、治療を必要とす
る対象は、癌患者である。ある特定の実施形態において、癌患者は、前処置レジメンを経
ている。いくつかの実施形態において、前処置統制（ｒｅｇｉｍｅｎｔ）は、化学療法、
放射線療法、または両方を含むが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態において、対象は、急性または慢性微生物感染（例えば、細菌感染
）を呈する場合がある。ある特定の実施形態において、対象は、治療を受けた場合がある
か、または受けている場合がある。ある特定の実施形態において、治療には、放射線療法
、化学療法、ステロイド、紫外線放射、またはこれらの組み合わせが含まれ得るが、これ
らに限定されない。ある特定の実施形態において、患者は、微小血管障害を患っている場
合がある。いくつかの実施形態において、微小血管障害は、糖尿病であり得る。ある特定
の実施形態において、患者は、創傷を有し得る。いくつかの実施形態において、創傷は、
潰瘍であり得る。具体的な実施形態において、創傷は、糖尿病性足部潰瘍であり得る。あ
る特定の実施形態において、対象は、１つ以上の熱傷創を有し得る。ある特定の実施形態
において、投与は、局所であっても全身であってもよい。ある特定の実施形態において、
投与は、皮下であってもよい。ある特定の実施形態において、投与は、静脈内であっても
よい。ある特定の実施形態において、投与は、経口であってもよい。ある特定の実施形態
において、投与は、局所であってもよい。ある特定の実施形態において、投与は、吸入に
よるものであってもよい。ある特定の実施形態において、投与は、直腸であってもよい。
ある特定の実施形態において、投与は、膣内であってもよい。
本開示の他の態様は、哺乳類対象への、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、ま
たはｍｍＲＮＡを含有する細胞の移植に関する。哺乳類対象への細胞の投与は、当業者に
知られており、局所（局所）移植（例えば、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）または皮下投与）、
器官送達または全身埋込（例えば、静脈内注入または吸入）、および薬学的に許容される
担体中の細胞の製剤を含むが、これらに限定されない。腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一
次構築物、またはｍｍＲＮＡを含有するそのような組成物は、筋肉内に、経動脈的に、腹
腔内に、静脈内に、鼻腔内に、皮下に、内視鏡的に、経皮的に、または髄腔内に投与する
ために製剤化することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、持続放出のた
めに製剤化されてもよい。
治療剤が投与され得る対象は、疾患、障害、または有害な状態を患うか、またはそれを
発症する危険性があり得る。これらに基づいて、対象を特定する、診断する、および分類
する方法が提供され、それは臨床診断、バイオマーカーレベル、全ゲノム相関解析（ＧＷ
ＡＳ）、および当技術分野で既知の他の方法を含んでもよい。
腫瘍学関連用途
一実施形態では、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、治療、管理、特徴づけおよび／または癌、癌関連および／また
は癌治療関連の障害、副作用、および／または状態の診断において使用され得る。そのよ
うな疾患、障害、および状態は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌
、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病
、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、卵管癌、胆嚢
癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、
腎細胞癌、喉頭癌と下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白
血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺
カルチノイド腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔
癌と副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔癌と中咽頭癌、骨肉
腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺
癌、成人軟部組織肉腫、基底細胞癌と扁平上皮癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、睾丸癌、
胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン
血症、ウィルムス腫瘍を含むが、これらに限定されない。
別の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／
または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、ケモブレイン、末梢神経障害、疲労、うつ病、吐き気と
嘔吐、痛み、貧血、リンパ浮腫、感染症、癌治療に起因する二次癌、性的副作用、減少し
た不妊症または妊孕性、オストミー、不眠症および脱毛等の少なくとも１つの癌関連また
は癌治療関連障害、副作用または状態の治療、管理、または操作において使用され得る。
一実施形態では、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物および／または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、対象の少なくとも１つの癌症状の作用を軽減するために使用さ
れ得る。症状は衰弱、うずきと痛み、発熱、疲労、体重減少、血餅、血中カルシウム濃度
の上昇、白血球数の低下、息切れ、眩暈、頭痛、色素沈着過剰、黄疸、紅斑、掻痒症、多
毛症、排便習慣の変化、膀胱機能の変化、長続きするただれ、口腔内の白斑、舌の白点、
異常な出血または排出、身体部位の肥厚またはしこり、消化不良、嚥下困難、いぼまたは
ほくろの変化、新しい皮膚の変化およびしつこい咳、または嗄声を含み得るが、これらに
限定されない。
癌の一般カテゴリー
脳癌
脳癌は、通常悪性脳腫瘍の増殖に関連する脳組織における異常細胞の増殖である。脳腫
瘍は増殖して脳の近くのエリアを圧迫し、これは脳のその部分が適切に働くのを妨げるこ
とが可能である。脳癌が脳の外側の他の組織に広がることは滅多にない。腫瘍の悪性度（
癌細胞が顕微鏡下でいかに異常に見えるかに基づく）は、遅くまたは速く増殖する腫瘍を
見分けるために使用され得る。悪性度Ｉの腫瘍はゆっくりと増殖し、近くの組織に広がる
ことは滅多になく、正常な細胞のように見える細胞を含み、腫瘍全体が手術により取り除
かれ得る。悪性度ＩＩの腫瘍もゆっくりと増殖するが、周囲の組織に広がり得り、繰り返
され得る。悪性度ＩＩＩの腫瘍は急速に増殖し、周囲の組織に広がる可能性があり、細胞
は、正常な細胞とは外観が大きく異なる。悪性度ＩＶ（高悪性度）は極めて高速に増殖し
および広がり、腫瘍中に死滅した細胞のエリアが存在し得る。脳癌の症状は、起床時の頭
痛または嘔吐後に治る頭痛、高頻度の吐き気と嘔吐、視覚、聴覚、および発話障害、平衡
感覚障害および歩行困難、半身の衰弱、異常な眠気または活動レベルの変化、性格や態度
の異常変化、発作を含み得るが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、脳癌と診断されたまたは診断され得る対象の疾患、障害、およ
び／または状態を、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリ
ヌクレオチドを投与することにより治療するために使用され得る。一実施形態では、本発
明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは
、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投
与することにより、脳癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排除、
または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍
学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、脳癌と診
断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または寛解さ
せるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドは
、配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１７、
４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２５、
４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４６、
４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８３、
４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２５、
４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８５４、４８５５、
４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６４、
４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、
４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９１、
４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１５、
４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６２、
４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７０、
４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７８、
４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８６、
４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９４、
４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００２、
５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、
５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、
５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３２、
５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、
５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、
５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、
５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、
５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、
５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０３、
５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１８、
５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２６、
５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３４、
５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４５、
５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、
５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、
５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、
５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、
５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８８、
５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９６、
５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０４、
５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１２、
５２１３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５６、
５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６４、
５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９１、
５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９９、
５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０７、
５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１５、
５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２３、
５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３１、
５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３９、
５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４７、
５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５５、
５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６３、
５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７１、
５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７９、
５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８７、
５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５３９４、５３９５、
５３９６、５３９７、５３９８、５３９９、５４００、５４０１、５４０２、５４１９、
５４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４７、
５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、
５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、
５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、
５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、
５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、
５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、
５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、
５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、
５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５１、
５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、
５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、
５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、
５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０５、
５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１７、
５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３２、
５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、
５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８８、
５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、
５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０８、
５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１６、
５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、
５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５８、
５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、
５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、
５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、
５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、
５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０２、
５８０３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２３、
５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、
５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４９、
５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６５、
５８６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、
５８８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、
５８８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、
５８９７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、
５９１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、
５９２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、
５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、５９８３、
５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９９、
６０００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、
６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８２、
６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、
６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、
６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０８、
６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１６、
６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２４、
６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、
６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５６、
６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７５、
６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８５、
６１８６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３３、
６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５６、
６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、６２７９、
６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６２９０、
６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０５、
６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１３、
６３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８７、
６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９５、
６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０３、
６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９８、
６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１１、
６
５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５４９、６
５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７、６
５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３、６
６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６
６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６
６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６
６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６
６４３、６６４４、６６５８、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８、６
６９９、６７００、６７０１、６７０２、６７０３、６７０４、６７０５、６７０６、６
７０７、６７０８、６７０９、６７１０、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６
７５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６
７６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６
８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６
８１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３、６
８３４、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１、６
８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９、６
８７２、６８７３、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５、６
８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６
８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６
９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６
９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６
９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６
９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６
９３６、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６
９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６
９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８、６
９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７、７
００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７、７
０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６、７
０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７、７
１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７
１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７
１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１、７
２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７
２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７
２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７
２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７
２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７
２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７
２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７
２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７
２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３、７
２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２９８、７３０５、７３０６、７３０７、７
３０８、７３０９、７３１０、７３１１、７３１２、７３１３、７３１４、７３１５、７
３１６、７３１７、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０、７
３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４、７
３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７、７
４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７、７
４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２、７
５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０、７
５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４、７
５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３、７
５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１、７
５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９、７
５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１、７
５９２、７５９３、７５９４、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００、７
６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７
６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７
６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８、７
７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７
７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７
７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７
７４３、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７
７５２、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７
７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７
８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７
８２１、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７
８５４、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７
８６６、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７
９１９、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７
９４３、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７
９５１、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７
９６０、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７
９６８、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７
９７７、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７
９８５、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７
９９３、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８
０１１、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８
０１９、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８
０２７、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８
０５２、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８
０８９、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８
０９９、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８
１０７、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８
１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８
１２５、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８
１３５、８１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８
１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８
１８０、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８
１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８
２１０、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８
２３３、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８
２４１、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８
２４９、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８
３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３５４、８３５５、８
３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６、８
３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１、８
４１２、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７４、８
４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８
５１２、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０、８
５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２、８
５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０、８
５８１、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７、８
６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６１８、８
６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、８
７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、８
７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、８
７３３、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８
７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８
８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、８
８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８
８２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８
８４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８
８５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８
８６８、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、８
８８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８
８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８
８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８
９０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８
９１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８
９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８
９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８
９５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、８
９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９
００３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９
０２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９
０２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９
０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９
０
５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０
６６、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０
９６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１
０８、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１
２８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１
３７、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１
６０、９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定
されない。
乳癌
乳癌は男性および女性の乳管および小葉等の乳房の組織に発生するが、これらに限定さ
れない。最も一般的なタイプの乳癌は乳管の細胞の中で始まる腺管癌である。小葉癌（葉
または小葉の中で始まる）は、しばしば両乳房で発見される。珍しいタイプの乳癌である
炎症性乳癌は、胸部に熱感を生じさせ、赤みと腫れを生じさせる。遺伝性乳癌は全ての乳
癌のおおよそ５〜１０％を占め、変更された遺伝子はいくつかの民族において一般的であ
り、その民族をより乳癌に弱くする。乳癌の症状は、乳房、または乳房の近くの、または
脇の下のエリアのしこりまたは肥厚、乳房のサイズまたは形の変化、乳房の皮膚のえくぼ
形成またはしわ寄り、内側に引き込まれた乳房の乳首、乳首からの母乳ではない液体、鱗
状の、赤いまたは腫れた乳房、乳頭、または乳輪の皮膚、およびオレンジの皮に似た外観
の乳房のえくぼ（橙皮状皮膚）を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、乳癌と診断されたまたは診断され得る対象の
疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本発
明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは
、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投
与することにより、乳癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排除、
または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍
学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、乳癌と診
断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または寛解さ
せるために使用され得る。更なる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドは配
列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１７、４７
１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２５、４７
２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４６、４７
４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７５３、４７５６、４７５７、４７
５８、４７５９、４７６１、４７６２、４７７６、４７７７、４７７８、４７７９、４７
８０、４７８１、４７８２、４７８３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７
８８、４７８９、４７９０、４８２５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８
３０、４８３２、４８３５、４８３６、４８５４、４８５５、４８５６、４８５７、４８
５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６４、４８６５、４８６６、４８
６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、４８７３、４８８５、４８
８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９１、４８９２、４８９３、４８
９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１５、４９１６、４９１７、４９
１８、４９１９、４９２０、４９４６、４９４７、４９４８、４９４９、４９５０、４９
５８、４９５９、４９６０、４９６１、４９６２、４９６３、４９６４、４９６５、４９
６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７０、４９７１、４９７２、４９７３、４９
７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４９
８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４９
９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４９
９８、４９９９、５０００、５００１、５００２、５００８、５００９、５０１０、５０
１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、５０１７、５０１８、５０
１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、５０２５、５０２６、５０
２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、５０３４、５０３５、５０
３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、５０４２、５０４３、５０
４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、５０５０、５０５１、５０
５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０５７、５０５８、５０５９、５０
６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、５０６５、５０６６、５０６７、５０
６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、５０７３、５０７４、５０７５、５０
７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０３、５１０４、５１０５、５１０６、５１
０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１８、５１１９、５１２０、５１２１、５１
２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２６、５１２７、５１２８、５１２９、５１
３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３４、５１３５、５１３６、５１３７、５１
３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４２、５１４３、５１４４、５１４５、５１
４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、５１
５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、５１
６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、５１
７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、５１
７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８８、５１
８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９６、５１
９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０４、５２
０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１２、５２
１３、５２１４、５２１５、５２１６、５２１７、５２１８、５２１９、５２２０、５２
２１、５２２２、５２２３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２
５５、５２５６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２
６３、５２６４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２
７１、５２８２、５２９１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２
９７、５２９８、５２９９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３
０５、５３０６、５３０７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３
１３、５３１４、５３１５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３
２１、５３２２、５３２３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３
２９、５３３０、５３３１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３
３７、５３３８、５３３９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３
４５、５３４６、５３４７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３
５３、５３５４、５３５５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３
６１、５３６２、５３６３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３
６９、５３７０、５３７１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３
７７、５３７８、５３７９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３
８５、５３８６、５３８７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３
９３、５４１９、５４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４
３８、５４４７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４
５４、５４５５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４
６２、５４６３、５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４
７９、５４８０、５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４
９４、５４９５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５
０６、５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５
１４、５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５
２２、５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５
３０、５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５
４９、５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５
５８、５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５
６６、５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５
７９、５５８０、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５
９６、５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６
１６、５６１７、５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６
３１、５６３２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６６０、５６６１、５６
６２、５６６３、５６６４、５６６５、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５６
７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８８、５６
８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５６
９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０４、５７
０５、５７０６、５７０７、５７０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７
１３、５７１４、５７１５、５７１６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７
４２、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４７、５７４８、５７４９、５７
５０、５７５１、５７５２、５７５３、５７５４、５７５５、５７５７、５７５８、５７
５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７
６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、５７
７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８１、５７８２、５７８３、５７８４、５７
８５、５７８６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７
９３、５７９４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８
０１、５８０２、５８０３、５８０６、５８０７、５８０８、５８０９、５８１０、５８
１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２３、５８２４、５８
２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３２、５８
３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４９、５８
５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６５、５８
６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、５８
８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８
８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８
９７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、５９
１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９
２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、５９
５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、５９８３、５９
８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９９、６０
００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０
７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８２、６０
８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、６０
９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、６１
００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０８、６１
０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１６、６１
１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２４、６１
２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、６１
４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５６、６１
５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７５、６１
７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８５、６１
８６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３３、６２
３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５６、６２
５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、６２７９、６２
８０、６２８１、６２８２、６２８３、６２８４、６２８６、６２８７、６２８８、６２
８９、６２９０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３
０
４、６３０５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１
２、６３１３、６３１４、６３１５、６３２７、６３２８、６３２９、６３３３、６３３
４、６３３５、６３３６、６３３７、６３３８、６３３９、６３４０、６３５６、６３５
７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９
１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９
９、６４００、６４０１、６４０２、６４０３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５
１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９８、６４９９、６５００、６５０１、６５０
２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１１、６５１２、６５１４、６５１９、６５２
０、６５２１、６５２２、６５２３、６５２４、６５２５、６５４９、６５５０、６５５
１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７、６５５８、６５８
８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３、６６０４、６６０
５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６、６６１
７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４、６６２
５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２、６６３
３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６６４３、６６４
４、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８、６６９９、６７００、６７０
１、６７１８、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６７３７、６７３８、６７３
９、６７４０、６７４１、６７４２、６７４３、６７４７、６７４８、６７４９、６７５
０、６７５１、６７５２、６７５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５
９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９
８、６７９９、６８００、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１
４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３
１、６８３２、６８３３、６８３４、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５
７、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６
７、６８６８、６８６９、６８７０、６８７１、６８７２、６８７３、６８７５、６８７
６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５、６８８８、６８８９、６８９０、６８９
１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９
９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０
７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１
５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２
３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３
１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９５３、６９５４、６９５
５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６２、６９６３、６９６４、６９６
５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７２、６９７
３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９
２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０、７０１
１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０、７０２
１、７０２７、７０２８、７０２９、７０３０、７０３４、７０３５、７０４５、７０４
６、７０４７、７０４８、７０４９、７０５０、７０５１、７０５２、７０５３、７０５
４、７０５５、７０５６、７０５７、７０５８、７０５９、７０６０、７０８４、７０８
６、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７０９３、７０９
４、７０９５、７０９６、７０９７、７０９８、７０９９、７１００、７１０１、７１０
２、７１０３、７１０４、７１０５、７１０６、７１２５、７１２６、７１２７、７１２
８、７１２９、７１３０、７１３１、７１３２、７１３３、７１３４、７１３５、７１３
６、７１３７、７１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４
４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５
２、７１５３、７１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７２０
０、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０
８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１
６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２
４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３
２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４
０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４
９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５
７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６
５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２７１、７２９１、７２９
２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２９８、７３４７、７３４
８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０、７３６１、７３６２、７３６３、７３６
４、７３６５、７３６８、７３６９、７３７０、７３７１、７３７２、７３７３、７３７
４、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８０、７３８３、７４１５、７４１
６、７４１７、７４３８、７４４３、７４４４、７４４５、７４４６、７４４７、７４４
８、７４４９、７４５０、７４５１、７４５２、７４５３、７４５４、７４５５、７４５
６、７４５７、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７
７、７４８４、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０
１、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０
９、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３
３、７５３４、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４
２、７５４３、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５
０、７５５１、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５
８、７５５９、７５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９
０、７５９１、７５９２、７５９３、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６０
０、７６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２
３、７６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７
５、７６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１
８、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２
６、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３
４、７７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４
２、７７４３、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５
１、７７５２、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６
３、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７７９
８、７７９９、７８００、７８０１、７８０２、７８０３、７８０４、７８０５、７８１
３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２
１、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５
４、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６
６、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７９１
９、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４
３、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５
１、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６
０、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６
８、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７
７、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８
５、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９
３、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１
１、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１
９、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２
７、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５
２、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８
９、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９
９、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０
７、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１
７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２
５、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３
５、８１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７
２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８
０、８１８１、８１８２、８１８３、８１８４、８１８５、８１８６、８１８７、８１８
８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８１９６、８１９７、８１９
８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８２１０、８２１１、８２１２、８２１
５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３、８２３４、８２３５、８２３
６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１、８２４２、８２４３、８２４
４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９、８２５０、８２５１、８２６
０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８３０２、８３０３、８３０４、８３０
５、８３０６、８３１３、８３１４、８３５３、８３５４、８３５５、８３５６、８３５
７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６、８３７７、８３７
８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１、８４１２、８４４
０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７４、８４７５、８４７
６、８４７７、８４７８、８５０４、８５０５、８５０６、８５０８、８５０９、８５１
０、８５１１、８５１２、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４
９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５６８、８５６
９、８５７０、８５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７
７、８５７８、８５７９、８５８０、８５８１、８５８６、８５８７、８５９３、８５９
４、８５９５、８５９６、８５９７、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０
５、８６１５、８６１７、８６１８、８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１
３、８７１４、８７１５、８７１６、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２
１、８７２２、８７２３、８７２４、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２
９、８７３０、８７３１、８７３２、８７３３、８７３４、８７７０、８７７１、８７８
８、８７８９、８７９０、８７９１、８７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９
６、８７９７、８７９８、８７９９、８８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０
４、８８０５、８８０６、８８１０、８８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２
０
、８８２１、８８２２、８８２３、８８２９、８８３０、８８３５、８８３６、８８３７
、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８８４９、８８５０、８８５１
、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８５９、８８６０、８８６１
、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８６８、８８７２、８８７３
、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、８８８０、８８８１、８８８２
、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８８８、８８８９、８８９０
、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８９６、８８９７、８８９８
、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９０４、８９０５、８９０６
、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９１９、８９２０
、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８９３４、８９３５
、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８９４２、８９４３
、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８９５０、８９５１
、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、８９９５、８９９６
、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９００３、９０１０
、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９０２０、９０２１
、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２８、９０２９
、９０３０、９０３１、９０３６、９０３７、９０３８、９０３９、９０４０、９０４１
、９０４２、９０４３、９０４４、９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９
、９０５０、９０５１、９０５２、９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７
、９０５８、９０５９、９０６５、９０６６、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２
、９０９３、９０９４、９０９５、９０９６、９０９７、９０９８、９０９９、９１００
、９１０１、９１０２、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０８
、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８
、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７
、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１６０
、９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定され
ない。
子宮頸癌
子宮頸癌は子宮頚部の組織に発生し、通常成長が遅い。子宮頸癌の原因は通常ヒトパピ
ローマウイルス（ＨＰＶ）の感染に関連する。子宮頸癌はいかなる兆候も示さないかもし
れないが、考えられる症状は、膣出血、異常な膣分泌物、骨盤痛および性交中の痛みを含
むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、子宮頸癌と診断されたまたは診断され得る対
象の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド
を投与することにより、子宮頸癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少
、排除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリ
ヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的と
する腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、
子宮頸癌と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／
または寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポ
リペプチドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、
４７１７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、
４７２５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、
４７４６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、
４７８３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、
４８２５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８５４、
４８５５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、
４８６４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７１、４８７３、
４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９１、４８９２、
４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１５、４９１６、
４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６２、４９６４、
４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７０、４９７１、４９７２、
４９７３、４９７４、４９７５、４９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、
４９８３、４９８４、４９８５、４９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、
４９９１、４９９２、４９９３、４９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、
４９９９、５０００、５００１、５００２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、
５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、
５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、
５０２８、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、
５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、
５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、
５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、
５０６４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、
５０７２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、
５１０３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、
５１１８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、
５１２６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、
５１３４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、
５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、
５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、
５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、
５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、
５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８８、
５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９６、
５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０４、
５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１２、
５２１３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５６、
５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６４、
５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９１、
５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９９、
５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０７、
５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、
５３２０、５３２１、５３２２、５３２３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、
５３３０、５３３１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、
５３３８、５３３９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、
５３４６、５３４７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、
５３５４、５３５５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、
５３６２、５３６３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、
５３７０、５３７１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、
５３７８、５３７９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、
５３８６、５３８７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、
５４１９、５４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、
５４４７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、
５４５５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、
５４６３、５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、
５４８０、５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、
５４９５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、
５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、
５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、
５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、
５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、
５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、
５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、
５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、
５５８０、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、
５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、
５６１７、５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、
５６３２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、
５６７４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、
５６８８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、
５６９６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、
５７０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、
５７１６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４５、
５７４６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、
５７５８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、
５７６６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、
５７７６、５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、
５７８６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、
５７９４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、
５８０２、５８０３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、
５８２３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、
５８３１、５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、
５８４９、５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、
５８６５、５８６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、
５８８０、５８８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、
５８８８、５８８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、
５８９６、５８９７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、
５９１２、５９１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、
５９２０、５９２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、
５９５４、５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、
５９８３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、
５９９９、６０００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、
６０７２、６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、
６０８２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、
６０９０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、
６０９８、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、
６１０８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、
６１１６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、
６１２４、６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、
６１４７、６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、
６１５６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、
６１７５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、
６１８５、６１８６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、
６２３３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、
６２５６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、
６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、
６２９０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、
６３０５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、
６３１３、６３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、
６３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、
６３９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、
６４０３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、
６４９８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、
６５１１、６５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、
６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７、
６５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３、
６
６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６
６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６
６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６
６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６
６４３、６６４４、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８、６６９９、６
７００、６７０１、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６７５４、６７５５、６
７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３、６
７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０５、６８０６、６
８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６
８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４、６８５３、６
８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６
８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９、６８７２、６８７３、６
８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５、６８８８、６８８９、６
８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６
８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６
９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６
９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６
９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６
９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９５３、６
９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６２、６９６３、６
９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６
９７２、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６
９９１、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７
０１０、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７
０２０、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６、７０８７、７０８８、７
０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７、７１３８、７１３９、７
１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７
１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７
１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７
２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７
２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７
２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７
２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７
２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７
２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７
２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７
２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７
２６９、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７
２９６、７２９７、７２９８、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７
３６０、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７
３７４、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７
４１７、７４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７
４７７、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７
５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７
５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４、７５３５、７
５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３、７５４４、７
５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１、７５５２、７
５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９、７５６０、７
５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７
５９３、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００、７６０１、７６１７、７
６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６３８、７６６８、７
６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７６、７６８５、７
６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８、７７１９、７７２０、７
７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７、７７２８、７
７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５、７７３６、７
７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３、７７４４、７
７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２、７７５７、７
７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４、７７６５、７
７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３、７８１４、７
８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１、７８２２、７
８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４、７８５９、７
８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６、７８６７、７
８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７９１９、７９２５、７
９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７
９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７
９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７
９６２、７９６３、７９６４、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７０、７
９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７９７８、７９７９、７
９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７９８６、７９８７、７
９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７９９４、７９９５、７
９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１、８０１２、８０１３、８
０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９、８０２０、８０２１、８
０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７、８０２８、８０２９、８
０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２、８０５３、８０５４、８
０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９、８０９０、８０９１、８
０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９、８１００、８１０１、８
１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７、８１１０、８１１１、８
１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７、８１１８、８１１９、８
１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５、８１２６、８１２７、８
１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５、８１３６、８１４４、８
１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２、８１７３、８１７４、８
１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０、８１８１、８１８２、８
１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８１９６、８１９７、８
１９８、８２０９、８２１０、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８
２３１、８２３２、８２３３、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８
２３９、８２４０、８２４１、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８
２４７、８２４８、８２４９、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８
２６３、８２９９、８３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８
３５４、８３５５、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８
３７５、８３７６、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８
４１０、８４１１、８４１２、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８
４６３、８４７４、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８
５１０、８５１１、８５１２、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８
５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８
５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８
５７９、８５８０、８５８１、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８
５９６、８５９７、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８
６１７、８６１８、８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８
７１５、８７１６、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８
７２３、８７２４、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８
７３１、８７３２、８７３３、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８
７９０、８７９１、８７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８
７９８、８７９９、８８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８
８０６、８８１０、８８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８
８２２、８８２３、８８２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８
８４１、８８４８、８８４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８
８５７、８８５８、８８５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８
８６５、８８６７、８８６８、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８
８７８、８８７９、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８
８８７、８８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８
８９５、８８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８
９０３、８９０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８
９１８、８９１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８
９３３、８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８
９４１、８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８
９４９、８９５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８
９９４、８９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９
００２、９００３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９
０１９、９０２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９
０２７、９０２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９
０４４、９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９
０５２、９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９
０６５、９０６６、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９
０９５、９０９６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９
１０７、９１０８、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９
１２７、９１２８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９
１３６、９１３７、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９
１５１、９１６０、９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、
こ
れらに限定されない。
食道癌
食道癌は、食道の内側の組織に発生する癌である。食道癌には２つの一般的な種類があ
り、悪性になる細胞の種類に応じた名称が付けられる。扁平上皮癌は、食道を裏打ちして
いる薄くて平たい細胞に発生する癌である(類表皮癌とも呼ばれる)。粘液等の液体を産出
し放出する腺（分泌）細胞に発生する癌は、腺癌と呼ばれる。食道癌に関連する一般的な
症状は、苦痛または困難な嚥下、体重減少、胸骨の後ろの痛み、嗄声および咳、および消
化不良、および胸焼けを含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、食道癌と診断されたまたは診断され得る対象
の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本
発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
は、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを
投与することにより、食道癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排
除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌク
レオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする
腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、食道
癌と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または
寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプ
チドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１
７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２
５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４
６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８
３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２
５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８５４、４８５
５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６
４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７
２、４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９
１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１
５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６
２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７
０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７
８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８
６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９
４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００
２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１
５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２
３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３
２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４
０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４
８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５
６、５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６
４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７
２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０
３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１
８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２
６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３
４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４
５、５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５
３、５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６
１、５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６
９、５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７
７、５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８
８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９
６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０
４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１
２、５２１３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５
６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６
４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９
１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９
９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０
７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１
５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２
３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３
１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３
９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４
７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５
５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６
３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７
１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７
９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８
７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５４１９、５４２
０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４７、５４４
８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、５４５
６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、５４６
４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、５４８
１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、５４９
６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５５０
８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５５１
６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５５２
４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５５３
２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５１、５５５
２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６
０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６
８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５５９
０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０５、５６０
６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１７、５６１
８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３２、５６３
３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５６７
５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８８、５６８
９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５６９
７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０８、５７０
９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１６、５７１
７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４
７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５８、５７５
９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７６
７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、５７７
７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、５７８
７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、５７９
５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０２、５８０
３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２３、５８２
４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３
３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４９、５８５
０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６５、５８６
６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、５８８
１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８
９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９
７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、５９１
３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２
１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、５９５
５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、５９８３、５９８
４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９９、６００
０、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０７
４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８２、６０８
３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、６０９
１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、６１０
０、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０８、６１０
９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１６、６１１
７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２４、６１２
８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、６１４
８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５６、６１５
７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７５、６１７
６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８５、６１８
６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３３、６２３
４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５６、６２５
７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、６２７９、６２８
０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６２９０、６２９
８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０５、６３０
６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１３、６３１
４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８７、６３８
８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３９
６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０３、６４０
５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９８、６４９
９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１１、６５１
２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５４９、６５５
０
、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７、６５５８
、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３、６６０４
、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６
、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４
、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２
、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６６４３
、６６４４、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８、６６９９、６７００
、６７０１、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６７５４、６７５５、６７５６
、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３、６７６４
、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０５、６８０６、６８０７
、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６８２４
、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４、６８５３、６８５４
、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４
、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９、６８７２、６８７３、６８７５
、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５、６８８８、６８８９、６８９０
、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８
、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６
、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４
、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２
、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０
、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９５３、６９５４
、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６２、６９６３、６９６４
、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７２
、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１
、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０
、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０
、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９
、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７、７１３８、７１３９、７１４０
、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４８
、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７１９５
、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４
、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２
、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０
、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８
、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６
、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５
、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３
、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１
、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９
、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６
、７２９７、７２９８、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０
、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４
、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７
、７４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７
、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２
、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０
、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４
、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３
、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１
、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９
、７５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１
、７５９２、７５９３、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００、７６０１
、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６３８
、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７６
、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８、７７１９
、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７
、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５
、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３
、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２
、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４
、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３
、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１
、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４
、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６
、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７９１９
、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４３
、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１
、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０
、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８
、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７
、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５
、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３
、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１
、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９
、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７
、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２
、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９
、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９
、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７
、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７
、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５
、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５
、８１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２
、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０
、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５
、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８２１０
、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３
、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１
、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９
、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８３０２
、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３５４、８３５５、８３５６
、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６、８３７７
、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１、８４１２
、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７４、８４７５
、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２
、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０、８５５１
、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２、８５７３
、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０、８５８１
、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７、８６０１
、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６１８、８６５５
、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、８７１７
、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、８７２５
、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、８７３３
、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８７９２
、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８８００
、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、８８１１
、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８８２９
、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８８４９
、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８５９
、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８６８
、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、８８８０
、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８８８
、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８９６
、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９０４
、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９１９
、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８９３４
、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８９４２
、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８９５０
、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、８９９５
、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９００３
、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９０２０
、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２８
、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９０４５
、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９０５３
、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０６６
、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０９６
、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０８
、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８
、
９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、
９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１６０、
９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定されな
い。
家族性癌症候群
家族性癌症候群は、対象の癌になる遺伝的素因を表す。全ての癌の５〜１０％は遺伝性
であり、１つの血族から別の血族へと受け継いだ特異的遺伝子における特異性によって受
け継がれる。これらの遺伝子変化の１つを受け継いだ対象は生涯のうちに癌になる可能性
が高い。家族性癌症候群は毛細血管拡張性運動失調、基底細胞母斑症候群、母斑性基底細
胞癌症候群、ゴーリン症候群、ベックウィズ−ヴィーデマン症候群、バート−ホッジ−デ
ューブ症候群、ブルーム症候群、遺伝性乳癌および／または卵巣癌、カーニー複合、Ｉ型
およびＩＩ型、家族性脊索腫、結腸癌、遺伝性非ポリポーシス−リンチ症候群、コステロ
症候群、顔面皮膚骨格（Ｆａｃｉｏ−Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ−Ｓｋｅｌｅｔａｌ）症候群、
カウデン症候群、先天性角化不全症、食道癌に伴う肥厚化、食道癌に伴う手掌足底角化症
、ハウエル−エバンス症候群、遺伝性多発性外骨症、ファンコニ貧血、遺伝性びまん性胃
癌、消化管間質腫瘍、多発性消化管間質腫瘍、家族性上皮小体機能亢進症、急性骨髄性白
血病、家族性白血病、慢性リンパ性白血病、リー−フラウメニ症候群、ホジキンリンパ腫
、非ホジキンリンパ腫、遺伝性多発性メラノーマ、多彩異数性モザイク、多発性内分泌腺
腫症Ｉ型、２Ａ型および２Ｂ型、家族性甲状腺髄様癌、家族性多発性骨髄腫、遺伝性神経
芽細胞腫、神経線維腫症１型および２型、ナイミーヘン染色体不安定症候群、遺伝性膵癌
、遺伝性傍神経節腫、ポイツ−イェガース症候群、家族性腺腫性ポリポーシス、家族性若
年性ポリポーシス、ＭＹＨ関連ポリポーシス、遺伝性前立腺癌、多発性皮膚平滑筋種およ
び子宮平滑筋種を伴う遺伝性腎細胞癌、遺伝性腎細胞癌、遺伝性乳頭状腎細胞癌、ラブド
イド素因症候群、ロートムンド−トムソン症候群、シンプソン・ゴラビ・べーメル症候群
、家族性精巣胚細胞腫瘍、家族性非髄様甲状腺癌、結節性硬化症複合体、フォンヒッペル
−リンダウ症候群、家族性ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ウェルナー症
候群、家族性ウィルムス腫瘍および色素性乾皮症等の障害を含むが、これらに限定されな
い。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、家族性癌症候群と診断されたまたは診断され
得る対象の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態
では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍ
ｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレ
オチドを投与することにより、家族性癌症候群と診断されたまたは診断され得る対象の腫
瘍増殖を減少、排除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該
対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与する
ことにより、家族性癌症候群と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌
症状を軽減および／または寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的
とする腫瘍学関連ポリペプチドは配列番号４７０４、４７０５、４７０６、４７０７、４
７０８、４７０９、４７１０、４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４
７１６、４７１７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４
７２４、４７２５、４７２６、４７２７、４７２８、４７２９、４７３０、４７３１、４
７３２、４７３３、４７３４、４７３５、４７３６、４７３７、４７３８、４７３９、４
７４０、４７４１、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４６、４７４７、４
７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７５２、４７５３、４７５４、４７５５、４
７５６、４７５７、４７５８、４７５９、４７６０、４７６１、４７６２、４７６３、４
７６４、４７６５、４７６６、４７６７、４７６８、４７６９、４７７０、４７７１、４
７７２、４７７３、４７７４、４７７５、４７７６、４７７７、４７７８、４７７９、４
７８０、４７８１、４７８２、４７８３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４
７８８、４７８９、４７９０、４７９１、４７９２、４７９３、４７９４、４７９５、４
７９６、４７９７、４７９８、４７９９、４８００、４８０１、４８０２、４８０３、４
８０４、４８０５、４８０６、４８０７、４８０８、４８０９、４８１０、４８１１、４
８１２、４８１３、４８１４、４８１５、４８１６、４８１７、４８１８、４８１９、４
８２０、４８２１、４８２２、４８２３、４８２４、４８２５、４８２６、４８２７、４
８２８、４８２９、４８３０、４８３１、４８３２、４８３３、４８３４、４８３５、４
８３６、４８３７、４８３８、４８３９、４８４０、４８４１、４８４２、４８４３、４
８４４、４８４５、４８４６、４８４７、４８４８、４８４９、４８５０、４８５１、４
８５２、４８５３、４８５４、４８５５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４
８６０、４８６１、４８６２、４８６３、４８６４、４８６５、４８６６、４８６７、４
８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、４８７３、４８７４、４８７５、４
８７６、４８７７、４８７８、４８７９、４８８０、４８８１、４８８２、４８８３、４
８８４、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９１、４
８９２、４８９３、４８９４、４８９５、４８９６、４８９７、４８９８、４８９９、４
９００、４９０１、４９０２、４９０３、４９０４、４９０５、４９０６、４９０７、４
９０８、４９０９、４９１０、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１５、４
９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９２１、４９２２、４９２３、４
９２４、４９２５、４９２６、４９２７、４９２８、４９２９、４９３０、４９３１、４
９３２、４９３３、４９３４、４９３５、４９３６、４９３７、４９３８、４９３９、４
９４０、４９４１、４９４２、４９４３、４９４４、４９４５、４９４６、４９４７、４
９４８、４９４９、４９５０、４９５１、４９５２、４９５３、４９５４、４９５５、４
９５６、４９５７、４９５８、４９５９、４９６０、４９６１、４９６２、４９６３、４
９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７０、４９７１、４
９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７８、４９７９、４
９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８６、４９８７、４
９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９４、４９９５、４
９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００２、５００３、５
００４、５００５、５００６、５００７、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５
０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５
０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５
０２８、５０２９、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、５０３４、５０３５、５
０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、５０４２、５０４３、５
０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、５０５０、５０５１、５
０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０５７、５０５８、５０５９、５
０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、５０６５、５０６６、５０６７、５
０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、５０７３、５０７４、５０７５、５
０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５０８０、５０８１、５０８２、５０８３、５
０８４、５０８５、５０８６、５０８７、５０８８、５０８９、５０９０、５０９１、５
０９２、５０９３、５０９４、５０９５、５０９６、５０９７、５０９８、５０９９、５
１００、５１０１、５１０２、５１０３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５
１０８、５１０９、５１１０、５１１１、５１１２、５１１３、５１１４、５１１５、５
１１６、５１１７、５１１８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５
１２４、５１２５、５１２６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５
１３２、５１３３、５１３４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５
１４０、５１４１、５１４２、５１４３、５１４４、５１４５、５１４６、５１４７、５
１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、５１５４、５１５５、５
１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、５１６２、５１６３、５
１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、５１７０、５１７１、５
１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、５１７８、５１７９、５
１８０、５１８１、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５
１８８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５
１９６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５
２０４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５
２１２、５２１３、５２１４、５２１５、５２１６、５２１７、５２１８、５２１９、５
２２０、５２２１、５２２２、５２２３、５２２４、５２２５、５２２６、５２２７、５
２２８、５２２９、５２３０、５２３１、５２３２、５２３３、５２３４、５２３５、５
２３６、５２３７、５２３８、５２３９、５２４０、５２４１、５２４２、５２４３、５
２４４、５２４５、５２４６、５２４７、５２４８、５２４９、５２５０、５２５１、５
２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５６、５２５７、５２５８、５２５９、５
２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６４、５２６５、５２６６、５２６７、５
２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２７２、５２７３、５２７４、５２７５、５
２７６、５２７７、５２７８、５２７９、５２８０、５２８１、５２８２、５２８３、５
２８４、５２８５、５２８６、５２８７、５２８８、５２８９、５２９０、５２９１、５
２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９９、５
３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０７、５
３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１５、５
３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２３、５
３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３１、５
３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３９、５
３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４７、５
３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５５、５
３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６３、５
３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７１、５
３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７９、５
３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８７、５
３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５３９４、５３９５、５
３９６、５３９７、５３９８、５３９９、５４００、５４０１、５４０２、５４０３、５
４０４、５４０５、５４０６、５４０７、５４０８、５４０９、５４１０、５４１１、５
４１２、５４１３、５４１４、５４１５、５４１６、５４１７、５４１８、５４１９、５
４２０、５４２１、５４２２、５４２３、５４２４、５４２５、５４２６、５４２７、５
４２８、５４２９、５４３０、５４３１、５４３２、５４３３、５４３４、５４３５、５
４３６、５４３７、５４３８、５４３９、５４４０、５４４１、５４４２、５４４３、５
４４４、５４４５、５４４６、５４４７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５
４５２、５４５３、５４５４、５４５５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５
４６０、５４６１、５４６２、５４６３、５４６４、５４６５、５４６６、５４６７、５
４６８、５４６９、５４７０、５４７１、５４７２、５４７３、５４７４、５４７５、５
４７６、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、５４８１、５４８２、５４８３、５
４８４、５４８５、５４８６、５４８７、５４８８、５４８９、５４９０、５４９１、５
４９２、５４９３、５４９４、５４９５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５
５００、５５０１、５５０２、５５０３、５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５
５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５
５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５
５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５
５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５３７、５５３８、５５３９、５
５４０、５５４１、５５４２、５５４３、５５４４、５５４５、５５４６、５５４７、５
５４８、５５４９、５５５０、５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５
５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５
５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５
５７２、５５７３、５５７４、５５７５、５５７６、５５７７、５５７８、５５７９、５
５８０、５５８１、５５８２、５５８３、５５８４、５５８５、５５８６、５５８７、５
５８８、５５８９、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５
５９６、５５９７、５５９８、５５９９、５６００、５６０１、５６０２、５６０３、５
６０４、５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５
６１２、５６１３、５６１４、５６１５、５６１６、５６１７、５６１８、５６１９、５
６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６２４、５６２５、５６２６、５６２７、５
６
２８、５６２９、５６３０、５６３１、５６３２、５６３３、５６３４、５６３５、５６
３６、５６３７、５６３８、５６３９、５６４０、５６４１、５６４２、５６４３、５６
４４、５６４５、５６４６、５６４７、５６４８、５６４９、５６５０、５６５１、５６
５２、５６５３、５６５４、５６５５、５６５６、５６５７、５６５８、５６５９、５６
６０、５６６１、５６６２、５６６３、５６６４、５６６５、５６６６、５６６７、５６
６８、５６６９、５６７０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５６７５、５６
７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８２、５６８３、５６
８４、５６８５、５６８６、５６８７、５６８８、５６８９、５６９０、５６９１、５６
９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５６９７、５６９８、５６９９、５７
００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０４、５７０５、５７０６、５７０７、５７
０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７
１６、５７１７、５７１８、５７１９、５７２０、５７２１、５７２２、５７２３、５７
２４、５７２５、５７２６、５７２７、５７２８、５７２９、５７３０、５７３１、５７
３２、５７３３、５７３４、５７３５、５７３６、５７３７、５７３８、５７３９、５７
４０、５７４１、５７４２、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４７、５７
４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５２、５７５３、５７５４、５７５５、５７
５６、５７５７、５７５８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７
６４、５７６５、５７６６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７１、５７
７２、５７７３、５７７４、５７７５、５７７６、５７７７、５７７８、５７７９、５７
８０、５７８１、５７８２、５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、５７８７、５７
８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、５７９５、５７
９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０２、５８０３、５８
０４、５８０５、５８０６、５８０７、５８０８、５８０９、５８１０、５８１１、５８
１２、５８１３、５８１４、５８１５、５８１６、５８１７、５８１８、５８１９、５８
２０、５８２１、５８２２、５８２３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８
２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３２、５８３３、５８３４、５８３５、５８
３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４０、５８４１、５８４２、５８４３、５８
４４、５８４５、５８４６、５８４７、５８４８、５８４９、５８５０、５８５１、５８
５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８５６、５８５７、５８５８、５８５９、５８
６０、５８６１、５８６２、５８６３、５８６４、５８６５、５８６６、５８６７、５８
６８、５８６９、５８７０、５８７１、５８７２、５８７３、５８７４、５８７５、５８
７６、５８７７、５８７８、５８７９、５８８０、５８８１、５８８２、５８８３、５８
８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８９、５８９０、５８９１、５８
９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９７、５８９８、５８９９、５９
００、５９０１、５９０２、５９０３、５９０４、５９０５、５９０６、５９０７、５９
０８、５９０９、５９１０、５９１１、５９１２、５９１３、５９１４、５９１５、５９
１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２１、５９２２、５９２３、５９
２４、５９２５、５９２６、５９２７、５９２８、５９２９、５９３０、５９３１、５９
３２、５９３３、５９３４、５９３５、５９３６、５９３７、５９３８、５９３９、５９
４０、５９４１、５９４２、５９４３、５９４４、５９４５、５９４６、５９４７、５９
４８、５９４９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、５９５５、５９
５６、５９５７、５９５８、５９５９、５９６０、５９６１、５９６２、５９６３、５９
６４、５９６５、５９６６、５９６７、５９６８、５９６９、５９７０、５９７１、５９
７２、５９７３、５９７４、５９７５、５９７６、５９７７、５９７８、５９７９、５９
８０、５９８１、５９８２、５９８３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９
８８、５９８９、５９９０、５９９１、５９９２、５９９３、５９９４、５９９５、５９
９６、５９９７、５９９８、５９９９、６０００、６００１、６００２、６００３、６０
０４、６００５、６００６、６００７、６００８、６００９、６０１０、６０１１、６０
１２、６０１３、６０１４、６０１５、６０１６、６０１７、６０１８、６０１９、６０
２０、６０２１、６０２２、６０２３、６０２４、６０２５、６０２６、６０２７、６０
２８、６０２９、６０３０、６０３１、６０３２、６０３３、６０３４、６０３５、６０
３６、６０３７、６０３８、６０３９、６０４０、６０４１、６０４２、６０４３、６０
４４、６０４５、６０４６、６０４７、６０４８、６０４９、６０５０、６０５１、６０
５２、６０５３、６０５４、６０５５、６０５６、６０５７、６０５８、６０５９、６０
６０、６０６１、６０６２、６０６３、６０６４、６０６５、６０６６、６０６７、６０
６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０７３、６０７４、６０７５、６０
７６、６０７７、６０７８、６０７９、６０８０、６０８１、６０８２、６０８３、６０
８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、６０９１、６０
９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、６０９９、６１
００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０４、６１０５、６１０６、６１０７、６１
０８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１
１６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１
２４、６１２５、６１２６、６１２７、６１２８、６１２９、６１３０、６１３１、６１
３２、６１３３、６１３４、６１３５、６１３６、６１３７、６１３８、６１３９、６１
４０、６１４１、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、６１
４８、６１４９、６１５０、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１
５６、６１５７、６１５８、６１５９、６１６０、６１６１、６１６２、６１６３、６１
６４、６１６５、６１６６、６１６７、６１６８、６１６９、６１７０、６１７１、６１
７２、６１７３、６１７４、６１７５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１
８０、６１８１、６１８２、６１８３、６１８４、６１８５、６１８６、６１８７、６１
８８、６１８９、６１９０、６１９１、６１９２、６１９３、６１９４、６１９５、６１
９６、６１９７、６１９８、６１９９、６２００、６２０１、６２０２、６２０３、６２
０４、６２０５、６２０６、６２０７、６２０８、６２０９、６２１０、６２１１、６２
１２、６２１３、６２１４、６２１５、６２１６、６２１７、６２１８、６２１９、６２
２０、６２２１、６２２２、６２２３、６２２４、６２２５、６２２６、６２２７、６２
２８、６２２９、６２３０、６２３１、６２３２、６２３３、６２３４、６２３５、６２
３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２４０、６２４１、６２４２、６２４３、６２
４４、６２４５、６２４６、６２４７、６２４８、６２４９、６２５０、６２５１、６２
５２、６２５３、６２５４、６２５５、６２５６、６２５７、６２５８、６２５９、６２
６０、６２６１、６２６２、６２６３、６２６４、６２６５、６２６６、６２６７、６２
６８、６２６９、６２７０、６２７１、６２７２、６２７３、６２７４、６２７５、６２
７６、６２７７、６２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８３、６２
８４、６２８５、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６２９０、６２９１、６２
９２、６２９３、６２９４、６２９５、６２９６、６２９７、６２９８、６２９９、６３
００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０５、６３０６、６３０７、６３
０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１３、６３１４、６３１５、６３
１６、６３１７、６３１８、６３１９、６３２０、６３２１、６３２２、６３２３、６３
２４、６３２５、６３２６、６３２７、６３２８、６３２９、６３３０、６３３１、６３
３２、６３３３、６３３４、６３３５、６３３６、６３３７、６３３８、６３３９、６３
４０、６３４１、６３４２、６３４３、６３４４、６３４５、６３４６、６３４７、６３
４８、６３４９、６３５０、６３５１、６３５２、６３５３、６３５４、６３５５、６３
５６、６３５７、６３５８、６３５９、６３６０、６３６１、６３６２、６３６３、６３
６４、６３６５、６３６６、６３６７、６３６８、６３６９、６３７０、６３７１、６３
７２、６３７３、６３７４、６３７５、６３７６、６３７７、６３７８、６３７９、６３
８０、６３８１、６３８２、６３８３、６３８４、６３８５、６３８６、６３８７、６３
８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３
９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０３、６４
０４、６４０５、６４０６、６４０７、６４０８、６４０９、６４１０、６４１１、６４
１２、６４１３、６４１４、６４１５、６４１６、６４１７、６４１８、６４１９、６４
２０、６４２１、６４２２、６４２３、６４２４、６４２５、６４２６、６４２７、６４
２８、６４２９、６４３０、６４３１、６４３２、６４３３、６４３４、６４３５、６４
３６、６４３７、６４３８、６４３９、６４４０、６４４１、６４４２、６４４３、６４
４４、６４４５、６４４６、６４４７、６４４８、６４４９、６４５０、６４５１、６４
５２、６４５３、６４５４、６４５５、６４５６、６４５７、６４５８、６４５９、６４
６０、６４６１、６４６２、６４６３、６４６４、６４６５、６４６６、６４６７、６４
６８、６４６９、６４７０、６４７１、６４７２、６４７３、６４７４、６４７５、６４
７６、６４７７、６４７８、６４７９、６４８０、６４８１、６４８２、６４８３、６４
８４、６４８５、６４８６、６４８７、６４８８、６４８９、６４９０、６４９１、６４
９２、６４９３、６４９４、６４９５、６４９６、６４９７、６４９８、６４９９、６５
００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０４、６５０５、６５０６、６５０７、６５
０８、６５０９、６５１０、６５１１、６５１２、６５１３、６５１４、６５１５、６５
１６、６５１７、６５１８、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５
２４、６５２５、６５２６、６５２７、６５２８、６５２９、６５３０、６５３１、６５
３２、６５３３、６５３４、６５３５、６５３６、６５３７、６５３８、６５３９、６５
４０、６５４１、６５４２、６５４３、６５４４、６５４５、６５４６、６５４７、６５
４８、６５４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５
５６、６５５７、６５５８、６５５９、６５６０、６５６１、６５６２、６５６３、６５
６４、６５６５、６５６６、６５６７、６５６８、６５６９、６５７０、６５７１、６５
７２、６５７３、６５７４、６５７５、６５７６、６５７７、６５７８、６５７９、６５
８０、６５８１、６５８２、６５８３、６５８４、６５８５、６５８６、６５８７、６５
８８、６５８９、６５９０、６５９１、６５９２、６５９３、６５９４、６５９５、６５
９６、６５９７、６５９８、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３、６６
０４、６６０５、６６０６、６６０７、６６０８、６６０９、６６１０、６６１１、６６
１２、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６
２０、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６
２８、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２、６６３３、６６３４、６６３５、６６
３６、６６３７、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６６４３、６６
４４、６６４５、６６４６、６６４７、６６４８、６６４９、６６５０、６６５１、６６
５
２、６６５３、６６５４、６６５５、６６５６、６６５７、６６５８、６６５９、６６６
０、６６６１、６６６２、６６６３、６６６４、６６６５、６６６６、６６６７、６６６
８、６６６９、６６７０、６６７１、６６７２、６６７３、６６７４、６６７５、６６７
６、６６７７、６６７８、６６７９、６６８０、６６８１、６６８２、６６８３、６６８
４、６６８５、６６８６、６６８７、６６８８、６６８９、６６９０、６６９１、６６９
２、６６９３、６６９４、６６９５、６６９６、６６９７、６６９８、６６９９、６７０
０、６７０１、６７０２、６７０３、６７０４、６７０５、６７０６、６７０７、６７０
８、６７０９、６７１０、６７１１、６７１２、６７１３、６７１４、６７１５、６７１
６、６７１７、６７１８、６７１９、６７２０、６７２１、６７２２、６７２３、６７２
４、６７２５、６７２６、６７２７、６７２８、６７２９、６７３０、６７３１、６７３
２、６７３３、６７３４、６７３５、６７３６、６７３７、６７３８、６７３９、６７４
０、６７４１、６７４２、６７４３、６７４４、６７４５、６７４６、６７４７、６７４
８、６７４９、６７５０、６７５１、６７５２、６７５３、６７５４、６７５５、６７５
６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３、６７６
４、６７６５、６７６６、６７６７、６７６８、６７６９、６７７０、６７７１、６７７
２、６７７３、６７７４、６７７５、６７７６、６７７７、６７７８、６７７９、６７８
０、６７８１、６７８２、６７８３、６７８４、６７８５、６７８６、６７８７、６７８
８、６７８９、６７９０、６７９１、６７９２、６７９３、６７９４、６７９５、６７９
６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０１、６８０２、６８０３、６８０
４、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１０、６８１１、６８１
２、６８１３、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６８１９、６８２
０、６８２１、６８２２、６８２３、６８２４、６８２５、６８２６、６８２７、６８２
８、６８２９、６８３０、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４、６８３５、６８３
６、６８３７、６８３８、６８３９、６８４０、６８４１、６８４２、６８４３、６８４
４、６８４５、６８４６、６８４７、６８４８、６８４９、６８５０、６８５１、６８５
２、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８５８、６８５９、６８６
０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６
８、６８６９、６８７０、６８７１、６８７２、６８７３、６８７４、６８７５、６８７
６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８０、６８８１、６８８２、６８８３、６８８
４、６８８５、６８８６、６８８７、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９
２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９０
０、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０
８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１
６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２
４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３
２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９３７、６９３８、６９３９、６９４
０、６９４１、６９４２、６９４３、６９４４、６９４５、６９４６、６９４７、６９４
８、６９４９、６９５０、６９５１、６９５２、６９５３、６９５４、６９５５、６９５
６、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６１、６９６２、６９６３、６９６
４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７
２、６９７３、６９７４、６９７５、６９７６、６９７７、６９７８、６９７９、６９８
０、６９８１、６９８２、６９８３、６９８４、６９８５、６９８６、６９８７、６９８
８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、６９９
６、６９９７、６９９８、６９９９、７０００、７００１、７００２、７００３、７００
４、７００５、７００６、７００７、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１
２、７０１３、７０１４、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２
０、７０２１、７０２２、７０２３、７０２４、７０２５、７０２６、７０２７、７０２
８、７０２９、７０３０、７０３１、７０３２、７０３３、７０３４、７０３５、７０３
６、７０３７、７０３８、７０３９、７０４０、７０４１、７０４２、７０４３、７０４
４、７０４５、７０４６、７０４７、７０４８、７０４９、７０５０、７０５１、７０５
２、７０５３、７０５４、７０５５、７０５６、７０５７、７０５８、７０５９、７０６
０、７０６１、７０６２、７０６３、７０６４、７０６５、７０６６、７０６７、７０６
８、７０６９、７０７０、７０７１、７０７２、７０７３、７０７４、７０７５、７０７
６、７０７７、７０７８、７０７９、７０８０、７０８１、７０８２、７０８３、７０８
４、７０８５、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９
２、７０９３、７０９４、７０９５、７０９６、７０９７、７０９８、７０９９、７１０
０、７１０１、７１０２、７１０３、７１０４、７１０５、７１０６、７１０７、７１０
８、７１０９、７１１０、７１１１、７１１２、７１１３、７１１４、７１１５、７１１
６、７１１７、７１１８、７１１９、７１２０、７１２１、７１２２、７１２３、７１２
４、７１２５、７１２６、７１２７、７１２８、７１２９、７１３０、７１３１、７１３
２、７１３３、７１３４、７１３５、７１３６、７１３７、７１３８、７１３９、７１４
０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４
８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７１５
６、７１５７、７１５８、７１５９、７１６０、７１６１、７１６２、７１６３、７１６
４、７１６５、７１６６、７１６７、７１６８、７１６９、７１７０、７１７１、７１７
２、７１７３、７１７４、７１７５、７１７６、７１７７、７１７８、７１７９、７１８
０、７１８１、７１８２、７１８３、７１８４、７１８５、７１８６、７１８７、７１８
８、７１８９、７１９０、７１９１、７１９２、７１９３、７１９４、７１９５、７１９
６、７１９７、７１９８、７１９９、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０
４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１
２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２
０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２
８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３
６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４２、７２４３、７２４
４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５
２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６
０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６
８、７２６９、７２７０、７２７１、７２７２、７２７３、７２７４、７２７５、７２７
６、７２７７、７２７８、７２７９、７２８０、７２８１、７２８２、７２８３、７２８
４、７２８５、７２８６、７２８７、７２８８、７２８９、７２９０、７２９１、７２９
２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２９８、７２９９、７３０
０、７３０１、７３０２、７３０３、７３０４、７３０５、７３０６、７３０７、７３０
８、７３０９、７３１０、７３１１、７３１２、７３１３、７３１４、７３１５、７３１
６、７３１７、７３１８、７３１９、７３２０、７３２１、７３２２、７３２３、７３２
４、７３２５、７３２６、７３２７、７３２８、７３２９、７３３０、７３３１、７３３
２、７３３３、７３３４、７３３５、７３３６、７３３７、７３３８、７３３９、７３４
０、７３４１、７３４２、７３４３、７３４４、７３４５、７３４６、７３４７、７３４
８、７３４９、７３５０、７３５１、７３５２、７３５３、７３５４、７３５５、７３５
６、７３５７、７３５８、７３５９、７３６０、７３６１、７３６２、７３６３、７３６
４、７３６５、７３６６、７３６７、７３６８、７３６９、７３７０、７３７１、７３７
２、７３７３、７３７４、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３７９、７３８
０、７３８１、７３８２、７３８３、７３８４、７３８５、７３８６、７３８７、７３８
８、７３８９、７３９０、７３９１、７３９２、７３９３、７３９４、７３９５、７３９
６、７３９７、７３９８、７３９９、７４００、７４０１、７４０２、７４０３、７４０
４、７４０５、７４０６、７４０７、７４０８、７４０９、７４１０、７４１１、７４１
２、７４１３、７４１４、７４１５、７４１６、７４１７、７４１８、７４１９、７４２
０、７４２１、７４２２、７４２３、７４２４、７４２５、７４２６、７４２７、７４２
８、７４２９、７４３０、７４３１、７４３２、７４３３、７４３４、７４３５、７４３
６、７４３７、７４３８、７４３９、７４４０、７４４１、７４４２、７４４３、７４４
４、７４４５、７４４６、７４４７、７４４８、７４４９、７４５０、７４５１、７４５
２、７４５３、７４５４、７４５５、７４５６、７４５７、７４５８、７４５９、７４６
０、７４６１、７４６２、７４６３、７４６４、７４６５、７４６６、７４６７、７４６
８、７４６９、７４７０、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７
６、７４７７、７４７８、７４７９、７４８０、７４８１、７４８２、７４８３、７４８
４、７４８５、７４８６、７４８７、７４８８、７４８９、７４９０、７４９１、７４９
２、７４９３、７４９４、７４９５、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５０
０、７５０１、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０
８、７５０９、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５１
６、７５１７、７５１８、７５１９、７５２０、７５２１、７５２２、７５２３、７５２
４、７５２５、７５２６、７５２７、７５２８、７５２９、７５３０、７５３１、７５３
２、７５３３、７５３４、７５３５、７５３６、７５３７、７５３８、７５３９、７５４
０、７５４１、７５４２、７５４３、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４
８、７５４９、７５５０、７５５１、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５
６、７５５７、７５５８、７５５９、７５６０、７５６１、７５６２、７５６３、７５６
４、７５６５、７５６６、７５６７、７５６８、７５６９、７５７０、７５７１、７５７
２、７５７３、７５７４、７５７５、７５７６、７５７７、７５７８、７５７９、７５８
０、７５８１、７５８２、７５８３、７５８４、７５８５、７５８６、７５８７、７５８
８、７５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７５９３、７５９４、７５９５、７５９
６、７５９７、７５９８、７５９９、７６００、７６０１、７６０２、７６０３、７６０
４、７６０５、７６０６、７６０７、７６０８、７６０９、７６１０、７６１１、７６１
２、７６１３、７６１４、７６１５、７６１６、７６１７、７６１８、７６１９、７６２
０、７６２１、７６２２、７６２３、７６２４、７６２５、７６２６、７６２７、７６２
８、７６２９、７６３０、７６３１、７６３２、７６３３、７６３４、７６３５、７６３
６、７６３７、７６３８、７６３９、７６４０、７６４１、７６４２、７６４３、７６４
４、７６４５、７６４６、７６４７、７６４８、７６４９、７６５０、７６５１、７６５
２、７６５３、７６５４、７６５５、７６５６、７６５７、７６５８、７６５９、７６６
０、７６６１、７６６２、７６６３、７６６４、７６６５、７６６６、７６６７、７６６
８、７６６９、７６７０、７６７１、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７
６
、７６７７、７６７８、７６７９、７６８０、７６８１、７６８２、７６８３、７６８４
、７６８５、７６８６、７６８７、７６８８、７６８９、７６９０、７６９１、７６９２
、７６９３、７６９４、７６９５、７６９６、７６９７、７６９８、７６９９、７７００
、７７０１、７７０２、７７０３、７７０４、７７０５、７７０６、７７０７、７７０８
、７７０９、７７１０、７７１１、７７１２、７７１３、７７１４、７７１５、７７１６
、７７１７、７７１８、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４
、７７２５、７７２６、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２
、７７３３、７７３４、７７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０
、７７４１、７７４２、７７４３、７７４４、７７４５、７７４６、７７４７、７７４８
、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２、７７５３、７７５４、７７５５、７７５６
、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４
、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７６９、７７７０、７７７１、７７７２
、７７７３、７７７４、７７７５、７７７６、７７７７、７７７８、７７７９、７７８０
、７７８１、７７８２、７７８３、７７８４、７７８５、７７８６、７７８７、７７８８
、７７８９、７７９０、７７９１、７７９２、７７９３、７７９４、７７９５、７７９６
、７７９７、７７９８、７７９９、７８００、７８０１、７８０２、７８０３、７８０４
、７８０５、７８０６、７８０７、７８０８、７８０９、７８１０、７８１１、７８１２
、７８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０
、７８２１、７８２２、７８２３、７８２４、７８２５、７８２６、７８２７、７８２８
、７８２９、７８３０、７８３１、７８３２、７８３３、７８３４、７８３５、７８３６
、７８３７、７８３８、７８３９、７８４０、７８４１、７８４２、７８４３、７８４４
、７８４５、７８４６、７８４７、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２
、７８５３、７８５４、７８５５、７８５６、７８５７、７８５８、７８５９、７８６０
、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６、７８６７、７８６８
、７８６９、７８７０、７８７１、７８７２、７８７３、７８７４、７８７５、７８７６
、７８７７、７８７８、７８７９、７８８０、７８８１、７８８２、７８８３、７８８４
、７８８５、７８８６、７８８７、７８８８、７８８９、７８９０、７８９１、７８９２
、７８９３、７８９４、７８９５、７８９６、７８９７、７８９８、７８９９、７９００
、７９０１、７９０２、７９０３、７９０４、７９０５、７９０６、７９０７、７９０８
、７９０９、７９１０、７９１１、７９１２、７９１３、７９１４、７９１５、７９１６
、７９１７、７９１８、７９１９、７９２０、７９２１、７９２２、７９２３、７９２４
、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９３０、７９３１、７９３２
、７９３３、７９３４、７９３５、７９３６、７９３７、７９３８、７９３９、７９４０
、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８
、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７９５３、７９５４、７９５５、７９５６
、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４
、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２
、７９７３、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７９７８、７９７９、７９８０
、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７９８６、７９８７、７９８８
、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７９９４、７９９５、７９９６
、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８００１、８００２、８００３、８００４
、８００５、８００６、８００７、８００８、８００９、８０１０、８０１１、８０１２
、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９、８０２０
、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７、８０２８
、８０２９、８０３０、８０３１、８０３２、８０３３、８０３４、８０３５、８０３６
、８０３７、８０３８、８０３９、８０４０、８０４１、８０４２、８０４３、８０４４
、８０４５、８０４６、８０４７、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２
、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０５８、８０５９、８０６０
、８０６１、８０６２、８０６３、８０６４、８０６５、８０６６、８０６７、８０６８
、８０６９、８０７０、８０７１、８０７２、８０７３、８０７４、８０７５、８０７６
、８０７７、８０７８、８０７９、８０８０、８０８１、８０８２、８０８３、８０８４
、８０８５、８０８６、８０８７、８０８８、８０８９、８０９０、８０９１、８０９２
、８０９３、８０９４、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９、８１００
、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７、８１０８
、８１０９、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６
、８１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４
、８１２５、８１２６、８１２７、８１２８、８１２９、８１３０、８１３１、８１３２
、８１３３、８１３４、８１３５、８１３６、８１３７、８１３８、８１３９、８１４０
、８１４１、８１４２、８１４３、８１４４、８１４５、８１４６、８１４７、８１４８
、８１４９、８１５０、８１５１、８１５２、８１５３、８１５４、８１５５、８１５６
、８１５７、８１５８、８１５９、８１６０、８１６１、８１６２、８１６３、８１６４
、８１６５、８１６６、８１６７、８１６８、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２
、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０
、８１８１、８１８２、８１８３、８１８４、８１８５、８１８６、８１８７、８１８８
、８１８９、８１９０、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８１９６
、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０２、８２０３、８２０４
、８２０５、８２０６、８２０７、８２０８、８２０９、８２１０、８２１１、８２１２
、８２１３、８２１４、８２１５、８２１６、８２１７、８２１８、８２１９、８２２０
、８２２１、８２２２、８２２３、８２２４、８２２５、８２２６、８２２７、８２２８
、８２２９、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３、８２３４、８２３５、８２３６
、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１、８２４２、８２４３、８２４４
、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９、８２５０、８２５１、８２５２
、８２５３、８２５４、８２５５、８２５６、８２５７、８２５８、８２５９、８２６０
、８２６１、８２６２、８２６３、８２６４、８２６５、８２６６、８２６７、８２６８
、８２６９、８２７０、８２７１、８２７２、８２７３、８２７４、８２７５、８２７６
、８２７７、８２７８、８２７９、８２８０、８２８１、８２８２、８２８３、８２８４
、８２８５、８２８６、８２８７、８２８８、８２８９、８２９０、８２９１、８２９２
、８２９３、８２９４、８２９５、８２９６、８２９７、８２９８、８２９９、８３００
、８３０１、８３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３０７、８３０８
、８３０９、８３１０、８３１１、８３１２、８３１３、８３１４、８３１５、８３１６
、８３１７、８３１８、８３１９、８３２０、８３２１、８３２２、８３２３、８３２４
、８３２５、８３２６、８３２７、８３２８、８３２９、８３３０、８３３１、８３３２
、８３３３、８３３４、８３３５、８３３６、８３３７、８３３８、８３３９、８３４０
、８３４１、８３４２、８３４３、８３４４、８３４５、８３４６、８３４７、８３４８
、８３４９、８３５０、８３５１、８３５２、８３５３、８３５４、８３５５、８３５６
、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３６２、８３６３、８３６４
、８３６５、８３６６、８３６７、８３６８、８３６９、８３７０、８３７１、８３７２
、８３７３、８３７４、８３７５、８３７６、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０
、８３８１、８３８２、８３８３、８３８４、８３８５、８３８６、８３８７、８３８８
、８３８９、８３９０、８３９１、８３９２、８３９３、８３９４、８３９５、８３９６
、８３９７、８３９８、８３９９、８４００、８４０１、８４０２、８４０３、８４０４
、８４０５、８４０６、８４０７、８４０８、８４０９、８４１０、８４１１、８４１２
、８４１３、８４１４、８４１５、８４１６、８４１７、８４１８、８４１９、８４２０
、８４２１、８４２２、８４２３、８４２４、８４２５、８４２６、８４２７、８４２８
、８４２９、８４３０、８４３１、８４３２、８４３３、８４３４、８４３５、８４３６
、８４３７、８４３８、８４３９、８４４０、８４４１、８４４２、８４４３、８４４４
、８４４５、８４４６、８４４７、８４４８、８４４９、８４５０、８４５１、８４５２
、８４５３、８４５４、８４５５、８４５６、８４５７、８４５８、８４５９、８４６０
、８４６１、８４６２、８４６３、８４６４、８４６５、８４６６、８４６７、８４６８
、８４６９、８４７０、８４７１、８４７２、８４７３、８４７４、８４７５、８４７６
、８４７７、８４７８、８４７９、８４８０、８４８１、８４８２、８４８３、８４８４
、８４８５、８４８６、８４８７、８４８８、８４８９、８４９０、８４９１、８４９２
、８４９３、８４９４、８４９５、８４９６、８４９７、８４９８、８４９９、８５００
、８５０１、８５０２、８５０３、８５０４、８５０５、８５０６、８５０７、８５０８
、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２、８５１３、８５１４、８５１５、８５１６
、８５１７、８５１８、８５１９、８５２０、８５２１、８５２２、８５２３、８５２４
、８５２５、８５２６、８５２７、８５２８、８５２９、８５３０、８５３１、８５３２
、８５３３、８５３４、８５３５、８５３６、８５３７、８５３８、８５３９、８５４０
、８５４１、８５４２、８５４３、８５４４、８５４５、８５４６、８５４７、８５４８
、８５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５５６
、８５５７、８５５８、８５５９、８５６０、８５６１、８５６２、８５６３、８５６４
、８５６５、８５６６、８５６７、８５６８、８５６９、８５７０、８５７１、８５７２
、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０
、８５８１、８５８２、８５８３、８５８４、８５８５、８５８６、８５８７、８５８８
、８５８９、８５９０、８５９１、８５９２、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６
、８５９７、８５９８、８５９９、８６００、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４
、８６０５、８６０６、８６０７、８６０８、８６０９、８６１０、８６１１、８６１２
、８６１３、８６１４、８６１５、８６１６、８６１７、８６１８、８６１９、８６２０
、８６２１、８６２２、８６２３、８６２４、８６２５、８６２６、８６２７、８６２８
、８６２９、８６３０、８６３１、８６３２、８６３３、８６３４、８６３５、８６３６
、８６３７、８６３８、８６３９、８６４０、８６４１、８６４２、８６４３、８６４４
、８６４５、８６４６、８６４７、８６４８、８６４９、８６５０、８６５１、８６５２
、８６５３、８６５４、８６５５、８６５６、８６５７、８６５８、８６５９、８６６０
、８６６１、８６６２、８６６３、８６６４、８６６５、８６６６、８６６７、８６６８
、８６６９、８６７０、８６７１、８６７２、８６７３、８６７４、８６７５、８６７６
、８６７７、８６７８、８６７９、８６８０、８６８１、８６８２、８６８３、８６８４
、８６８５、８６８６、８６８７、８６８８、８６８９、８６９０、８６９１、８６９２
、８６９３、８６９４、８６９５、８６９６、８６９７、８６９８、８６９９、８７００
、
８７０１、８７０２、８７０３、８７０４、８７０５、８７０６、８７０７、８７０８、
８７０９、８７１０、８７１１、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、
８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、
８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、
８７３３、８７３４、８７３５、８７３６、８７３７、８７３８、８７３９、８７４０、
８７４１、８７４２、８７４３、８７４４、８７４５、８７４６、８７４７、８７４８、
８７４９、８７５０、８７５１、８７５２、８７５３、８７５４、８７５５、８７５６、
８７５７、８７５８、８７５９、８７６０、８７６１、８７６２、８７６３、８７６４、
８７６５、８７６６、８７６７、８７６８、８７６９、８７７０、８７７１、８７７２、
８７７３、８７７４、８７７５、８７７６、８７７７、８７７８、８７７９、８７８０、
８７８１、８７８２、８７８３、８７８４、８７８５、８７８６、８７８７、８７８８、
８７８９、８７９０、８７９１、８７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、
８７９７、８７９８、８７９９、８８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、
８８０５、８８０６、８８０７、８８０８、８８０９、８８１０、８８１１、８８１２、
８８１３、８８１４、８８１５、８８１６、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、
８８２１、８８２２、８８２３、８８２４、８８２５、８８２６、８８２７、８８２８、
８８２９、８８３０、８８３１、８８３２、８８３３、８８３４、８８３５、８８３６、
８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４２、８８４３、８８４４、
８８４５、８８４６、８８４７、８８４８、８８４９、８８５０、８８５１、８８５２、
８８５３、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８５９、８８６０、
８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６６、８８６７、８８６８、
８８６９、８８７０、８８７１、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、
８８７７、８８７８、８８７９、８８８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、
８８８５、８８８６、８８８７、８８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、
８８９３、８８９４、８８９５、８８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、
８９０１、８９０２、８９０３、８９０４、８９０５、８９０６、８９０７、８９０８、
８９０９、８９１０、８９１１、８９１２、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、
８９１７、８９１８、８９１９、８９２０、８９２１、８９２２、８９２３、８９２４、
８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９２９、８９３０、８９３１、８９３２、
８９３３、８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、
８９４１、８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、
８９４９、８９５０、８９５１、８９５２、８９５３、８９５４、８９５５、８９５６、
８９５７、８９５８、８９５９、８９６０、８９６１、８９６２、８９６３、８９６４、
８９６５、８９６６、８９６７、８９６８、８９６９、８９７０、８９７１、８９７２、
８９７３、８９７４、８９７５、８９７６、８９７７、８９７８、８９７９、８９８０、
８９８１、８９８２、８９８３、８９８４、８９８５、８９８６、８９８７、８９８８、
８９８９、８９９０、８９９１、８９９２、８９９３、８９９４、８９９５、８９９６、
８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９００３、９００４、
９００５、９００６、９００７、９００８、９００９、９０１０、９０１１、９０１２、
９０１３、９０１４、９０１５、９０１６、９０１７、９０１８、９０１９、９０２０、
９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２８、
９０２９、９０３０、９０３１、９０３２、９０３３、９０３４、９０３５、９０３６、
９０３７、９０３８、９０３９、９０４０、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、
９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、
９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６０、
９０６１、９０６２、９０６３、９０６４、９０６５、９０６６、９０６７、９０６８、
９０６９、９０７０、９０７１、９０７２、９０７３、９０７４、９０７５、９０７６、
９０７７、９０７８、９０７９、９０８０、９０８１、９０８２、９０８３、９０８４、
９０８５、９０８６、９０８７、９０８８、９０８９、９０９０、９０９１、９０９２、
９０９３、９０９４、９０９５、９０９６、９０９７、９０９８、９０９９、９１００、
９１０１、９１０２、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０８、
９１０９、９１１０、９１１１、９１１２、９１１３、９１１４、９１１５、９１１６、
９１１７、９１１８、９１１９、９１２０、９１２１、９１２２、９１２３、９１２４、
９１２５、９１２６、９１２７、９１２８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３２、
９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、９１３８、９１３９、９１４０、
９１４１、９１４２、９１４３、９１４４、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、
９１４９、９１５０、９１５１、９１５２、９１５３、９１５４、９１５５、９１５６、
９１５７、９１５８、９１５９、９１６０、９１６１、９１６２、９１６３、９１６４、
９１６５、９１６６、９１６７、９１６８、９１６９、９１７０、９１７１、９１７２、
９１７３、９１７４、９１７５、９１７６、９１７７、９１７８、９１７９、９１８０、
９１８１、９１８２、９１８３、９１８４、９１８５、９１８６、９１８７、９１８８、
９１８９、９１９０、９１９１、９１９２、９１９３、９１９４、９１９５、９１９６、
９１９７、９１９８、９１９９、９２００、９２０１、９２０２、９２０３を含み得るが
、これらに限定されない。
白血病
白血病は骨髄等の造血組織から発生し、大量の血球が作られ、それらが血流内に入り込
んでいき得る癌の一種である。白血病はまた、中枢神経系に拡がり、脳および脊髄癌を引
き起こす場合がある。白血病の種類は成人急性リンパ性、小児急性リンパ性、成人急性骨
髄性、慢性リンパ性、慢性骨髄性、および有毛細胞を含むが、これらに限定されない。白
血病の症状の非限定的な例は、衰弱または疲労感、発熱、あざまたは出血が起こりやすく
なる、点状出血、息切れ、体重減少または食欲不振、骨または胃の痛み、肋骨の下の痛み
または膨満感、首、脇の下、胃または鼠蹊部の無痛性のしこりを含む。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、白血病と診断されたまたは診断され得る対象
の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本
発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
は、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを
投与することにより、白血病と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排
除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌク
レオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする
腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、白血
病と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または
寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプ
チドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１
７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２
５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４
６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８
３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２
５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８４６、４８５
４、４８５５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６
３、４８６４、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、４８７３、４８７
４、４８７５、４８７６、４８７７、４８７８、４８７９、４８８０、４８８１、４８８
２、４８８３、４８８４、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９
０、４８９１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１
４、４９１５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６
１、４９６２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６
９、４９７０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７
７、４９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８
５、４９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９
３、４９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００
１、５００２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１
４、５０１５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２
２、５０２３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３
１、５０３２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３
９、５０４０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４
７、５０４８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５
５、５０５６、５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６
３、５０６４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７
１、５０７２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７
９、５０９３、５０９４、５０９５、５０９６、５０９７、５０９８、５０９９、５１０
０、５１０３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１
０、５１１１、５１１２、５１１３、５１１４、５１１５、５１１６、５１１７、５１１
８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２
６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３
４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４
５、５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５
３、５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６
１、５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６
９、５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７
７、５１７８、５１７９、５１８０、５１８１、５１８２、５１８３、５１８４、５１８
５、５１８６、５１８７、５１８８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９
３、５１９４、５１９５、５１９６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０
１、５２０２、５２０３、５２０４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０
９、５２１０、５２１１、５２１２、５２１３、５２１６、５２１７、５２１８、５２１
９、５２２０、５２２１、５２２２、５２２３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５
３、５２５４、５２５５、５２５６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６
１、５２６２、５２６３、５２６４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６
９、５２７０、５２７１、５２９１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９
６、５２９７、５２９８、５２９９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０
４、５３０５、５３０６、５３０７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１
２、５３１３、５３１４、５３１５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２
０、５３２１、５３２２、５３２３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２
８、５３２９、５３３０、５３３１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３
６、５３３７、５３３８、５３３９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４
４、５３４５、５３４６、５３４７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５
２、５３５３、５３５４、５３５５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６
０、５３６１、５３６２、５３６３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６
８、５３６９、５３７０、５３７１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７
６、５３７７、５３７８、５３７９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８
４、５３８５、５３８６、５３８７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９
２、５３９３、５４１９、５４２０、５４２１、５４２５、５４２６、５４２７、５４２
８、５４２９、５４３８、５４３９、５４４０、５４４１、５４４２、５４４３、５４４
７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５
５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６
３、５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８
０、５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９
５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５００、５５０１、５５０２、５５０
３、５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１
１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１
９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２
７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３
５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５
５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６
３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７
１、５５７４、５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５５９０、５５９１、５５９
２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０５、５６０６、５６０７、５６０
８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１７、５６１８、５６１９、５６２
０、５６２１、５６２２、５６２３、５６２７、５６２８、５６２９、５６３０、５６３
１、５６３２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７
３、５６７４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８
１、５６８８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９
５、５６９６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０
３、５７０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１
５、５７１６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４
５、５７４６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５
７、５７５８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６
５、５７６６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７
５、５７７６、５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８
５、５７８６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９
３、５７９４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０
１、５８０２、５８０３、５８０６、５８０７、５８０８、５８０９、５８１１、５８１
２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２３、５８２４、５８２５、５８２
６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３３、５８３４、５８３
６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４９、５８５０、５８５１、５８５
２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６５、５８６６、５８６７、５８６
８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、５８８１、５８８２、５８８
３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８９、５８９０、５８９
１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９７、５８９８、５８９
９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、５９１３、５９１４、５９１
５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２１、５９２２、５９２
３、５９２４、５９２５、５９２６、５９２７、５９２８、５９２９、５９５０、５９５
１、５９５２、５９５３、５９５４、５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６
９、５９７０、５９７１、５９７２、５９７３、５９８２、５９８３、５９８４、５９８
５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９９、６０００、６００
１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０７４、６０７
５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８２、６０８３、６０８
４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、６０９１、６０９
２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、６１００、６１０
１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０８、６１０９、６１１
０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１６、６１１７、６１１
８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２４、６１２８、６１３
０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、６１４８、６１４
９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５６、６１５７、６１６
９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７５、６１７６、６１７
７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８５、６１８６、６１８
７、６１９１、６１９６、６１９７、６１９８、６１９９、６２００、６２０１、６２０
２、６２０３、６２０４、６２０５、６２０６、６２０７、６２０８、６２０９、６２３
１、６２３２、６２３３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３
９、６２５１、６２５６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６
２
、６２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８
、６２８９、６２９０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３
、６３０４、６３０５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１
、６３１２、６３１３、６３１４、６３１５、６３１８、６３１９、６３２０、６３２１
、６３２２、６３２３、６３２４、６３２５、６３２６、６３５６、６３５７、６３５８
、６３７８、６３７９、６３８３、６３８４、６３８５、６３８６、６３８７、６３８８
、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３９６
、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０３、６４０５
、６４０６、６４０７、６４２２、６４２３、６４２４、６４２５、６４２６、６４２７
、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９８、６４９９、６５００、６５０１
、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１１、６５１２、６５１４、６５１９
、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５３３、６５３４、６５３５、６５３６
、６５３７、６５３８、６５３９、６５４０、６５４１、６５４２、６５４３、６５４４
、６５４５、６５４６、６５４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４
、６５５５、６５５６、６５５７、６５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００
、６６０１、６６０２、６６０３、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２
、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０
、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８
、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９
、６６４０、６６４１、６６４２、６６４３、６６４４、６６６５、６６６６、６６６７
、６６６８、６６６９、６６７０、６６７５、６６７６、６６７７、６６７８、６６７９
、６６８０、６６８１、６６８２、６６８３、６６８４、６６８５、６６８６、６６８８
、６６８９、６６９７、６６９８、６６９９、６７００、６７０１、６７１３、６７１４
、６７１５、６７１７、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６７５４、６７５５
、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３
、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０５、６８０６
、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８
、６８２４、６８２５、６８２６、６８２７、６８２８、６８２９、６８３０、６８３１
、６８３２、６８３３、６８３４、６８３８、６８４７、６８５３、６８５４、６８５５
、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５
、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９、６８７２、６８７３、６８７５、６８７６
、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１
、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９
、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７
、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５
、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３
、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１
、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９５３、６９５４、６９５５
、６９５６、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６２、６９６３、６９６４
、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７２
、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１
、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０
、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０
、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９
、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７、７１３８、７１３９、７１４０
、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４８
、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７１９５
、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４
、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２
、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０
、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８
、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６
、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５
、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３
、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１
、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９
、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６
、７２９７、７２９８、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０
、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４
、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７
、７４３７、７４３８、７４５８、７４５９、７４６０、７４６１、７４６７、７４６８
、７４６９、７４７０、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６
、７４７７、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１
、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９
、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３
、７５３４、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２
、７５４３、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０
、７５５１、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８
、７５５９、７５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０
、７５９１、７５９２、７５９３、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００
、７６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３
、７６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５
、７６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８
、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６
、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４
、７７３５、７７３６、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３
、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２
、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４
、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３
、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１
、７８２２、７８２３、７８２４、７８２５、７８２６、７８２７、７８２８、７８２９
、７８３０、７８３１、７８３２、７８３３、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１
、７８５２、７８５３、７８５４、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３
、７８６４、７８６５、７８６６、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５
、７９１７、７９１８、７９１９、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９
、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８
、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７
、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５
、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４
、７９７５、７９７６、７９７７、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２
、７９８３、７９８４、７９８５、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０
、７９９１、７９９２、７９９３、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８
、７９９９、８０００、８０１１、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６
、８０１７、８０１８、８０１９、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４
、８０２５、８０２６、８０２７、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９
、８０５０、８０５１、８０５２、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７
、８０８７、８０８８、８０８９、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６
、８０９７、８０９８、８０９９、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４
、８１０５、８１０６、８１０７、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４
、８１１５、８１１６、８１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２
、８１２３、８１２４、８１２５、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２
、８１３３、８１３４、８１３５、８１３６、８１４４、８１４５、８１５１、８１５２
、８１５３、８１５４、８１５５、８１５６、８１５７、８１６６、８１６９、８１７０
、８１７１、８１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８
、８１７９、８１８０、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３
、８１９４、８１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１
、８２０２、８２０３、８２０４、８２０５、８２０６、８２０７、８２０８、８２０９
、８２１０、８２１１、８２１２、８２１５、８２２１、８２２７、８２３０、８２３１
、８２３２、８２３３、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９
、８２４０、８２４１、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７
、８２４８、８２４９、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３
、８２６４、８２６５、８２６６、８２６７、８２６８、８２６９、８２７０、８２７１
、８２７２、８２７３、８２７４、８２７５、８２７６、８２７７、８２７８、８２７９
、８２８０、８２８１、８２８２、８２８３、８２８４、８２９９、８３０２、８３０３
、８３０４、８３０５、８３０６、８３１５、８３１６、８３１７、８３５３、８３５４
、８３５５、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５
、８３７６、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８３８３
、８３８４、８３８５、８３８６、８３８７、８３８８、８３８９、８３９０、８３９１
、８３９２、８３９３、８３９４、８３９７、８３９８、８３９９、８４００、８４０１
、８４０２、８４０３、８４０４、８４０５、８４０６、８４１０、８４１１、８４１２
、８４１９、８４２０、８４２１、８４２２、８４２３、８４２４、８４２５、８４２６
、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７３、８４７４
、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１
、８５１２、８５１４、８５１５、８５３３、８５３４、８５４６、８５４７、８５４８
、８５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０
、８５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８
、８５７９、８５８０、８５８１、８５８２、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４
、８５９５、８５９６、８５９７、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５
、
８６１０、８６１１、８６１２、８６１３、８６１４、８６１５、８６１７、８６１８、
８６４１、８６４２、８６４３、８６４４、８６４５、８６４６、８６４７、８６４８、
８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、
８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、
８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、
８７３３、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、
８７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、
８８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、
８８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、
８８２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、
８８４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、
８８５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、
８８６８、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、
８８８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、
８８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、
８８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、
８９０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、
８９１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、
８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、
８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、
８９５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、
８９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、
９００３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、
９０２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、
９０２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、
９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、
９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、
９０６６、９０８７、９０８８、９０８９、９０９０、９０９１、９０９２、９０９３、
９０９４、９０９５、９０９６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、
９１０６、９１０７、９１０８、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、
９１２６、９１２７、９１２８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、
９１３５、９１３６、９１３７、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、
９１５０、９１５１、９１６０、９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０２、
９２０３を含み得るが、これらに限定されない。
肝癌
２つの種類の肝癌があり、肝臓の組織で発生する原発性肝癌および、身体の他の部位か
ら肝臓に広がる、続発性肝癌、または転移性肝癌がある。肝癌の考えられる症状は、胸部
の真下の右側の硬いしこり、右側の上腹部の不快感、右の肩甲骨あたりの痛み、不明な体
重減少、黄疸、異常な疲労、吐き気および食欲不振を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、肝癌と診断されたまたは診断され得る対象の
疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本発
明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは
、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投
与することにより、肝癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排除、
または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍
学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、肝癌と診
断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または寛解さ
せるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドは
配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１７、４
７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２５、４
７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４６、４
７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７７４、４７７５、４７８１、４
７８２、４７８３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４
７９０、４８２５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４
８４４、４８４５、４８４６、４８５４、４８５５、４８５６、４８５７、４８５８、４
８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６４、４８６５、４８６６、４８６７、４
８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、４８７３、４８８５、４８８６、４
８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９１、４８９２、４８９３、４８９４、４
９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１５、４９１６、４９１７、４９１８、４
９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６２、４９６３、４９６４、４９６５、４
９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７０、４９７１、４９７２、４９７３、４
９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４
９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４
９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４
９９８、４９９９、５０００、５００１、５００２、５００８、５００９、５０１０、５
０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、５０１７、５０１８、５
０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、５０２５、５０２６、５
０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、５０３４、５０３５、５
０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、５０４２、５０４３、５
０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、５０５０、５０５１、５
０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０５７、５０５８、５０５９、５
０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、５０６５、５０６６、５０６７、５
０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、５０７３、５０７４、５０７５、５
０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０３、５１０４、５１０５、５１０６、５
１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１８、５１１９、５１２０、５１２１、５
１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２６、５１２７、５１２８、５１２９、５
１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３４、５１３５、５１３６、５１３７、５
１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４５、５１４６、５１４７、５１４８、５
１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、５１５４、５１５５、５１５６、５
１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、５１６２、５１６３、５１６４、５
１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、５１７０、５１７１、５１７２、５
１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、５１７８、５１８２、５１８３、５
１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８８、５１８９、５１９０、５１９１、５
１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９６、５１９７、５１９８、５１９９、５
２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０４、５２０５、５２０６、５２０７、５
２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１２、５２１３、５２１４、５２１５、５
２１６、５２１７、５２１８、５２１９、５２２０、５２２１、５２２２、５２２３、５
２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５６、５２５７、５
２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６４、５２６５、５
２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９１、５２９２、５
２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９９、５３００、５
３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０７、５３０８、５
３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１５、５３１６、５
３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２３、５３２４、５
３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３１、５３３２、５
３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３９、５３４０、５
３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４７、５３４８、５
３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５５、５３５６、５
３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６３、５３６４、５
３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７１、５３７２、５
３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７９、５３８０、５
３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８７、５３８８、５
３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５４１９、５４２０、５４２１、５
４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４７、５４４８、５４４９、５
４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、５４５６、５４５７、５
４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、５４６４、５４６５、５
４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、５４８１、５４８２、５
４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、５４９６、５４９７、５
４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５５０８、５５０９、５
５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５５１６、５５１７、５
５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５５２４、５５２５、５
５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５５３２、５５３３、５
５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５１、５５５２、５５５３、５
５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、５
５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、５
５７０、５５７１、５５７５、５５７６、５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５
５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５５９７、５
５９８、５５９９、５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５
６１１、５６１６、５６１７、５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５
６２３、５６３１、５６３２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５
６７２、５６７３、５６７４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５
６８０、５６８１、５６８８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５
６９４、５６９５、５６９６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５
７０２、５７０３、５７０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５
７１４、５７１５、５７１６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４２、５
７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５
７５１、５７５５、５７５７、５７５８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５
７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５
７７２、５７７３、５７７５、５７７６、５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５
７８３、５７８４、５７８５、５７８６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５
７９１、５７９２、５７９３、５７９４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５
７９９、５８００、５８０１、５８０２、５８０３、５８１１、５８１２、５８１３、５
８１４、５８２１、５８２２、５８２３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５
８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５
８３８、５８３９、５８４２、５８４３、５８４４、５８４５、５８４６、５８４７、５
８４８、５８４９、５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５
８６４、５８６５、５８６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５
８７８、５８８０、５８８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５
８８７、５８８８、５８８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５
８９５、５８９６、５８９７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５
９１１、５９１２、５９１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５
９１９、５９２０、５９２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５
９５３、５９５４、５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６８、５９６９、５
９７０、５９８２、５９８３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５
９９７、５９９８、５９９９、６０００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６
０７０、６０７１、６０７２、６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６
０８０、６０８１、６０８２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６
０８８、６０８９、６０９０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６
０９６、６０９７、６０９８、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６
１０６、６１０７、６１０８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６
１１４、６１１５、６１１６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６
１２２、６１２３、６１２４、６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６
１４５、６１４６、６１４７、６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６
１５４、６１５５、６１５６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６
１７３、６１７４、６１７５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６
１８１、６１８２、６１８５、６１８６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６
２３１、６２３２、６２３３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６
２３９、６２５１、６２５６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６
２６２、６２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６
２８８、６２８９、６２９０、６２９１、６２９２、６２９３、６２９４、６２９５、６
２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０５、６
３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１３、６
３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８０、６
３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６
３
９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４
０３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４
９８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５
１１、６５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５
４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５
５７、６５５８、６５５９、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６
０２、６６０３、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６
１４、６６１５、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６
２２、６６２３、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６
３０、６６３１、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６
４１、６６４２、６６４３、６６４４、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６
９８、６６９９、６７００、６７０１、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６７
５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７
６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８
０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８
１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３、６８
３４、６８４４、６８４５、６８４６、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８
５７、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８
６７、６８６８、６８６９、６８７２、６８７３、６８７５、６８７６、６８７７、６８
７８、６８７９、６８８５、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８
９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９
０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９
０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９
１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９
２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９
３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９
５８、６９５９、６９６０、６９６１、６９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９
６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９
８３、６９８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９
９３、６９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０
１２、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０
３４、７０３５、７０８４、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０
９１、７０９２、７１２８、７１３７、７１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１
４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１
５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１
９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２
０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２
１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２
２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２
３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２
３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２
４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２
５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２
６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２
７１、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２
９８、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０、７３６１、７３
６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４、７３７５、７３
７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７、７４３８、７４
７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７、７４９０、７４
９２、７４９３、７４９４、７４９５、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５
００、７５０１、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５
０８、７５０９、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５
３２、７５３３、７５３４、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５
４１、７５４２、７５４３、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５
４９、７５５０、７５５１、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５
５７、７５５８、７５５９、７５６０、７５７７、７５７８、７５７９、７５８５、７５
８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７５９３、７５
９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００、７６０１、７６１７、７６１８、７６
１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６３８、７６６８、７６６９、７６
７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７６、７６８５、７６８７、７６
９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８、７７１９、７７２０、７７２１、７７
２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７、７７２８、７７２９、７７
３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５、７７３６、７７３７、７７
３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３、７７４４、７７４６、７７
４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２、７７５７、７７５８、７７
５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４、７７６５、７７６６、７７
６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３、７８１４、７８１５、７８
１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１、７８２２、７８４８、７８
４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４、７８５９、７８６０、７８
６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６、７８６７、７８６９、７８
７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７９１９、７９２５、７９２６、７９
２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７９４５、７９
４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７９５３、７９
５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７９６２、７９
６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７０、７９
７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７９７８、７９７９、７９
８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７９８６、７９８７、７９
８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７９９４、７９９５、７９
９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１、８０１２、８０１３、８０
１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９、８０２０、８０２１、８０
２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７、８０２８、８０２９、８０
３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２、８０５３、８０５４、８０
５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９、８０９０、８０９１、８０
９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９、８１００、８１０１、８１
０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７、８１１０、８１１１、８１
１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７、８１１８、８１１９、８１
２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５、８１２６、８１２７、８１
３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５、８１３６、８１４４、８１
４５、８１４６、８１４７、８１４８、８１４９、８１５０、８１６６、８１６９、８１
７０、８１７１、８１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１
７８、８１７９、８１８０、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１
９３、８１９４、８１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２
０１、８２０９、８２１０、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２
３１、８２３２、８２３３、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２
３９、８２４０、８２４１、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２
４７、８２４８、８２４９、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２
６３、８２９９、８３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３
５４、８３５５、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３
７５、８３７６、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４
１０、８４１１、８４１２、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４
６３、８４６４、８４６５、８４６６、８４７４、８４７５、８４７６、８４７７、８４
７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２、８５１４、８５１５、８５
４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５
５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５
７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０、８５８１、８５８３、８５８６、８５
８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７、８６０１、８６０２、８６
０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６１８、８６５５、８６８６、８７
０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、８７１７、８７１８、８７
１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、８７２５、８７２６、８７
２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、８７３３、８７３４、８７
３５、８７３６、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８７
９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８８
００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、８８
１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８８
２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８８
４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８
５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８
６８、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、８８
８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８
８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８
９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９
０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９
１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８９
３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８９
４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８９
５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、８９
９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９０
０３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９０
２
０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２
８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９０４
５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９０５
３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０６
６、９０６７、９０６８、９０６９、９０７０、９０７１、９０７２、９０７３、９０７
４、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０９
６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０
８、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２
８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３
７、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１５
３、９１５４、９１５５、９１５６、９１５７、９１５８、９１５９、９１６０、９１６
１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定されない。
肺癌
肺癌は肺の組織、通常は気道の内側の細胞に発生し、小細胞肺癌または非小細胞肺癌の
いずれかに分類される。２つの種類の小細胞肺癌があり、小細胞癌および混合性小細胞癌
である。非小細胞肺癌の種類には、扁平上皮癌（癌が扁平上皮細胞に発生する）、大細胞
癌（癌は数種類の細胞に発生しうる）、および腺癌（癌は肺胞の内側を覆っている細胞お
よび粘液を産出する細胞に発生する）がある。肺癌の症状、胸部の不快感または痛み、治
らないまたは時間とともに悪化する咳、呼吸困難、喘鳴、唾液中の血液、嗄声、食欲不振
、原因不明の体重減少、猛烈な疲労感、嚥下困難、および顔面および／または首の静脈の
腫脹を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、肺癌と診断されたまたは診断され得る対象の
疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本発
明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは
、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投
与することにより、肺癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排除、
または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍
学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、肺癌と診
断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または寛解さ
せるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドは
配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１７、４
７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２５、４
７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４６、４
７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８３、４
７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４７９１、４
７９７、４７９８、４７９９、４８００、４８０１、４８０２、４８０３、４８０４、４
８０５、４８０６、４８０７、４８０８、４８２５、４８２６、４８２７、４８２８、４
８２９、４８３０、４８３１、４８３２、４８５１、４８５２、４８５３、４８５４、４
８５５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４
８６４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４
８７２、４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４
８９１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４
９１５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４
９６２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４
９７０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４
９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４
９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４
９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５
００２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５
０１５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５
０２３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５
０３２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５
０４０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５
０４８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５
０５６、５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５
０６４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５
０７２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５
１０３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５
１１８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５
１２６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５
１３４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５
１４５、５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５
１５３、５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５
１６１、５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５
１６９、５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５
１７７、５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５
１８８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５
１９６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５
２０４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５
２１２、５２１３、５２１４、５２１５、５２１６、５２１７、５２１８、５２１９、５
２２０、５２２１、５２２２、５２２３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５
２５４、５２５５、５２５６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５
２６２、５２６３、５２６４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５
２７０、５２７１、５２８２、５２８３、５２８６、５２８７、５２８８、５２８９、５
２９１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５
２９９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５
３０７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５
３１５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５
３２３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５
３３１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５
３３９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５
３４７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５
３５５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５
３６３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５
３７１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５
３７９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５
３８７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５４１９、５
４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４７、５
４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、５
４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、５
４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、５
４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、５
４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５００、５５０１、５５０２、５５０３、５
５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５
５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５
５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５
５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５
５３６、５５４８、５５４９、５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５
５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５
５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５
５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５５８２、５５８３、５５８４、５５８５、５
５８６、５５８７、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５
５９６、５６００、５６０１、５６０２、５６０３、５６０４、５６０５、５６０６、５
６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１７、５６１８、５
６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６２４、５６２５、５６２６、５
６３１、５６３２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６４８、５６４９、５
６５０、５６５１、５６５２、５６５３、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５
６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８８、５
６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５
６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０８、５
７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１６、５
７１７、５７２７、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４７、５７４８、５
７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５８、５７５９、５７６０、５
７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７６７、５７６８、５
７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、５７７７、５７７８、５
７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、５７８７、５７８８、５
７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、５７９５、５７９６、５
７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０２、５８０３、５８０４、５
８０５、５８０６、５８０７、５８０８、５８０９、５８１０、５８１５、５８１６、５
８１７、５８２１、５８２２、５８２３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５
８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５
８３８、５８３９、５８４０、５８４１、５８４８、５８４９、５８５０、５８５１、５
８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６５、５８６６、５８６７、５
８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、５８８１、５８８２、５
８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８９、５８９０、５
８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９７、５８９８、５
８９９、５９０６、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、５９１３、５
９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２１、５
９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、５９５５、５
９５６、５９６３、５９６４、５９６５、５９６６、５９６７、５９６９、５９７０、５
９８２、５９８３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５
９９８、５９９９、６０００、６００１、６００２、６０２９、６０６８、６０６９、６
０７０、６０７１、６０７２、６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６
０８０、６０８１、６０８２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６
０８８、６０８９、６０９０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６
０９６、６０９７、６０９８、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６
１０６、６１０７、６１０８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６
１１４、６１１５、６１１６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６
１２２、６１２３、６１２４、６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６
１４５、６１４６、６１４７、６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６
１５４、６１５５、６１５６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６
１７３、６１７４、６１７５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６
１８１、６１８２、６１８５、６１８６、６１８７、６１８８、６１９１、６２０８、６
２０９、６２３１、６２３２、６２３３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６
２３８、６２３９、６２５１、６２５６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６
２６１、６２６２、６２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６
２
８７、６２８８、６２８９、６２９０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３
０２、６３０３、６３０４、６３０５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３
１０、６３１１、６３１２、６３１３、６３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３
５８、６３６０、６３６１、６３６２、６３６３、６３６４、６３７５、６３７６、６３
７７、６３７８、６３７９、６３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３
９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４
００、６４０１、６４０２、６４０３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４
５２、６４５３、６４９７、６４９８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５
０３、６５０９、６５１０、６５１１、６５１２、６５１３、６５１４、６５１５、６５
１６、６５１７、６５１８、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５
４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５
５７、６５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６
０３、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６
１５、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６
２３、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６
３１、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６
４２、６６４３、６６４４、６６４５、６６４６、６６８４、６６８５、６６８６、６６
９７、６６９８、６６９９、６７００、６７０１、６７１９、６７２０、６７２１、６７
２３、６７２４、６７５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７
６０、６７６１、６７６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７
９９、６８００、６８０２、６８０３、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８
０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８
２６、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４、６８３９、６８４０、６８４１、６８
４２、６８４３、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８
６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８
６９、６８７２、６８７３、６８７４、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８
７９、６８８５、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８
９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９
０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９
１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９
１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９
２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９
３４、６９３５、６９３６、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９
５９、６９６０、６９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９
６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９７４、６９７５、６９
７６、６９７７、６９７８、６９７９、６９８０、６９８１、６９８２、６９８３、６９
８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９
９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１２、７０
１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０３４、７０
３５、７０８４、７０８５、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０
９１、７０９２、７１２８、７１３７、７１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１
４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１
５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１
９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２
０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２
１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２
２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２
３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２
３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２
４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２
５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２
６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２
７１、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２
９８、７２９９、７３００、７３０１、７３０２、７３０３、７３０４、７３４７、７３
４８、７３４９、７３５０、７３５１、７３５２、７３５３、７３５４、７３５８、７３
５９、７３６０、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３
７３、７３７４、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４
１６、７４１７、７４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４
７６、７４７７、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５
０１、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５
０９、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５１６、７５
１７、７５１８、７５１９、７５２０、７５２１、７５２２、７５２３、７５２４、７５
２５、７５２６、７５３２、７５３３、７５３４、７５３５、７５３７、７５３８、７５
３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３、７５４４、７５４５、７５４６、７５
４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１、７５５２、７５５３、７５５４、７５
５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９、７５６０、７５８５、７５８６、７５
８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７５９３、７５９５、７５
９６、７５９７、７５９９、７６００、７６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６
２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６
７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６
９５、７６９６、７７１７、７７１８、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７
２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７
３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７
３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３、７７４４、７７４６、７７４７、７７
４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２、７７５７、７７５８、７７５９、７７
６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７
６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８
１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１、７８２２、７８４８、７８４９、７８
５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４、７８５９、７８６０、７８６１、７８
６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６、７８６７、７８６９、７８７０、７８
７４、７８７５、７８８１、７８８６、７８８７、７８８８、７８８９、７８９０、７８
９１、７８９２、７８９３、７９１７、７９１８、７９１９、７９２５、７９２６、７９
２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７９４５、７９
４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７９５３、７９
５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７９６２、７９
６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７０、７９
７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７９７８、７９７９、７９
８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７９８６、７９８７、７９
８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７９９４、７９９５、７９
９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１、８０１２、８０１３、８０
１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９、８０２０、８０２１、８０
２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７、８０２８、８０２９、８０
３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２、８０５３、８０５４、８０
５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９、８０９０、８０９１、８０
９２、８０９３、８０９４、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９、８１
００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７、８１
１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７、８１
１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５、８１
２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５、８１
３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２、８１
７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０、８１
８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８１
９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８２１０、８２
１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３、８２
３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１、８２
４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９、８２
５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８３０２、８３
０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３０７、８３０８、８３２６、８３５３、８３
５４、８３５５、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３
７５、８３７６、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４
０７、８４０８、８４０９、８４１０、８４１１、８４１２、８４４０、８４５９、８４
６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４６７、８４６８、８４７４、８４７５、８４
７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２、８５
１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０、８５５１、８５
５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２、８５７３、８５
７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０、８５８１、８５
８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７、８５９８、８５
９９、８６００、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６
１７、８６１８、８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７
１５、８７１６、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７
２３、８７２４、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７
３１、８７３２、８７３３、８７３４、８７６８、８７６９、８７７０、８７７１、８７
７２、８７７３、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８７９２、８７９３、８７
９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８８００、８８０１、８８
０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、８８１１、８８１７、８８
１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８８２９、８８３０、８８
３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８８４９、８８５０、８８
５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８５９、８８６０、８８
６
１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８６８、８８７２、８８７
３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、８８８０、８８８１、８８８
２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８８８、８８８９、８８９
０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８９６、８８９７、８８９
８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９０４、８９０６、８９１
３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９１９、８９２０、８９２
１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８９３４、８９３５、８９３
６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８９４２、８９４３、８９４
４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８９５０、８９５１、８９５
４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、８９９５、８９９６、８９９
７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９００３、９０１０、９０１
１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９０２０、９０２１、９０２
２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２８、９０２９、９０３
０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９０４５、９０４６、９０４
７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９０５３、９０５４、９０５
５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０６６、９０８７、９０８
８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０９６、９０９７、９０９
８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０８、９１０９、９１１
０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８、９１２９、９１３
０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、９１４５、９１４
６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１６０、９１６１、９１６
２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定されない。
リンパ腫
リンパ腫は、免疫系の細胞に発生する癌である。ホジキンリンパ腫の対象はリード−ス
タンバーグ細胞と呼ばれる細胞を持ち、非ホジキンリンパ腫は多種の免疫系細胞の癌を含
む。リンパ腫の例は、首、脇の下または鼠蹊部の痛みのないリンパ節の腫脹、原因不明の
発熱、盗汗、原因不明の体重減少、皮膚の痒みおよび疲労を含むが、これらに限定されな
い。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、リンパ腫と診断されたまたは診断され得る対
象の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド
を投与することにより、リンパ腫と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少
、排除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリ
ヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的と
する腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、
リンパ腫と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／
または寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポ
リペプチドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、
４７１７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、
４７２５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、
４７４６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、
４７８３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、
４８０９、４８１０、４８１１、４８１２、４８１３、４８１４、４８２５、４８２６、
４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８３３、４８３４、４８５０、
４８５４、４８５５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、
４８６３、４８６４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、
４８７１、４８７２、４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、
４８９０、４８９１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、
４９１４、４９１５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、
４９６１、４９６２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、
４９６９、４９７０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、
４９７７、４９７８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、
４９８５、４９８６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、
４９９３、４９９４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、
５００１、５００２、５００３、５００４、５００５、５００６、５００７、５００８、
５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、
５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、
５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、
５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、
５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、
５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０５７、
５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、５０６５、
５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、５０７３、
５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０３、５１０４、
５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１８、５１１９、
５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２６、５１２７、
５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３４、５１３５、
５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４５、５１４６、
５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、５１５４、
５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、５１６２、
５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、５１７０、
５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、５１７８、
５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８８、５１８９、
５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９６、５１９７、
５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０４、５２０５、
５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１２、５２１３、
５２１４、５２１５、５２１６、５２１７、５２１８、５２１９、５２２０、５２２１、
５２２２、５２２３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、
５２５６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、
５２６４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、
５２９１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、
５２９９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、
５３０７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、
５３１５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、
５３２３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、
５３３１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、
５３３９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、
５３４７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、
５３５５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、
５３６３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、
５３７１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、
５３７９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、
５３８７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５４１９、
５４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３０、５４３１、
５４３２、５４３３、５４３４、５４３５、５４３６、５４３７、５４３８、５４３９、
５４４０、５４４１、５４４２、５４４３、５４４４、５４４５、５４４６、５４４７、
５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、
５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、
５４６４、５４６５、５４６６、５４６７、５４６８、５４６９、５４７０、５４７１、
５４７２、５４７３、５４７４、５４７５、５４７６、５４７７、５４７８、５４７９、
５４８０、５４８１、５４８２、５４８３、５４８４、５４８５、５４８６、５４８７、
５４８８、５４８９、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、
５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５００、５５０１、５５０２、５５０３、
５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、
５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、
５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、
５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、
５５３６、５５４８、５５４９、５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、
５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、
５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、
５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、
５５９４、５５９５、５５９６、５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、
５６１０、５６１１、５６１２、５６１３、５６１４、５６１５、５６１６、５６１７、
５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３２、
５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６６６、５６６７、５６６８、５６６９、
５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、
５６７９、５６８０、５６８１、５６８８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、
５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、
５７０１、５７０２、５７０３、５７０８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、
５７１３、５７１４、５７１５、５７１６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、
５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、
５７５１、５７５５、５７５７、５７５８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、
５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、
５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、
５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、
５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、
５７９９、５８００、５８０１、５８０２、５８０３、５８０４、５８０５、５８０６、
５８０７、５８０８、５８０９、５８１０、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、
５８１５、５８１６、５８１７、５８１８、５８１９、５８２０、５８２１、５８２２、
５８２３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、
５８３１、５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、
５８４９、５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、
５８６５、５８６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、
５８８０、５８８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、
５８８８、５８８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、
５８９６、５８９７、５８９８、５８９９、５９００、５９０１、５９０７、５９０８、
５９０９、５９１１、５９１２、５９１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、
５９１８、５９１９、５９２０、５９２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、
５９５２、５９５３、５９５４、５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、
５９７０、５９８２、５９８３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、
５９９７、５９９８、５９９９、６０００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、
６０７０、６０７１、６０７２、６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、
６０８０、６０８１、６０８２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、
６０８８、６０８９、６０９０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、
６０９６、６０９７、６０９８、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、
６１０６、６１０７、６１０８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、
６１１４、６１１５、６１１６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、
６１２２、６１２３、６１２４、６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、
６１４５、６１４６、６１４７、６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、
６１５４、６１５５、６１５６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、
６１７３、６１７４、６１７５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、
６１８１、６１８２、６１８５、６１８６、６１８７、６１９１、６１９２、６１９３、
６１９４、６１９５、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３３、６２３４、
６
２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５６、６２５７、６
２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７１、６２７２、６２７３、６
２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６
２８９、６２９０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６
３０４、６３０５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６
３１２、６３１３、６３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６
３７９、６３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６
３９４、６３９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６
４０２、６４０３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６
４９７、６４９８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６
５１０、６５１１、６５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６
５２３、６５４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６
５５６、６５５７、６５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６
６０２、６６０３、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６
６１４、６６１５、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６
６２２、６６２３、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６
６３０、６６３１、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６
６４１、６６４２、６６４３、６６４４、６６８４、６６８５、６６８６、６６８７、６
６９７、６６９８、６６９９、６７００、６７０１、６７１９、６７２１、６７２３、６
７２４、６７５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６
７６１、６７６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６
８００、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６
８１６、６８１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６
８３３、６８３４、６８３５、６８３６、６８３７、６８４８、６８４９、６８５０、６
８５１、６８５２、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６
８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６
８６９、６８７２、６８７３、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６
８８５、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６
８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６
９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６
９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６
９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６
９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６
９３５、６９３６、６９３７、６９３８、６９３９、６９４０、６９４１、６９４２、６
９４３、６９４４、６９４５、６９４６、６９４７、６９４８、６９４９、６９５０、６
９５１、６９５２、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６
９６０、６９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６
９６９、６９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６
９８８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７
００７、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７
０１７、７０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７
０８６、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７
１３７、７１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７
１４５、７１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７
１５３、７１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７１９９、７
２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７
２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７
２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７
２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７
２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７
２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７
２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７
２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７
２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２７１、７２８７、７
２８８、７２８９、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７
２９７、７２９８、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０、７
３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４、７
３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７、７
４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７、７
４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２、７
５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０、７
５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４、７
５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３、７
５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１、７
５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９、７
５６０、７５７１、７５７２、７５７３、７５７４、７５７５、７５７６、７５８５、７
５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７５９３、７
５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００、７６０１、７６１７、７６１８、７
６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６３８、７６６８、７６６９、７
６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７６、７６７７、７６８５、７
６８７、７６８９、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８、７７１９、７
７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７、７
７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５、７
７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３、７
７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２、７
７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４、７
７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３、７
８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１、７
８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４、７
８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６、７
８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７９１９、７
９２０、７９２１、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９３０、７
９３１、７９３２、７９３３、７９３４、７９３５、７９３６、７９３７、７９３８、７
９３９、７９４０、７９４１、７９４２、７９４３、７９４４、７９４５、７９４６、７
９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１、７９５２、７９５３、７９５５、７
９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７９６１、７９６２、７９６３、７
９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８、７９６９、７９７０、７９７１、７
９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７９７８、７９７９、７９８０、７
９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７９８６、７９８７、７９８８、７
９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７９９４、７９９５、７９９６、７
９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１、８０１２、８０１３、８０１４、８
０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９、８０２０、８０２１、８０２２、８
０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７、８０２８、８０２９、８０３０、８
０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２、８０５３、８０５４、８０５５、８
０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９、８０９０、８０９１、８０９２、８
０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９、８１００、８１０１、８１０２、８
１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７、８１１０、８１１１、８１１２、８
１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８
１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５、８１２６、８１２７、８１３０、８
１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５、８１３６、８１４４、８１４５、８
１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８
１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０、８１８１、８１８２、８１８８、８
１８９、８１９０、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８１９６、８
１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８２１０、８２１１、８
２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３、８２３４、８
２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１、８２４２、８
２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９、８２５０、８
２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８３０２、８３０３、８
３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３５４、８３５５、８３５６、８３５７、８
３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６、８３７７、８３７８、８
３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１、８４１２、８４１４、８
４１５、８４１６、８４１７、８４１８、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８
４６２、８４６３、８４７４、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８４８７、８
４８８、８４８９、８４９０、８４９１、８４９２、８４９３、８４９４、８５０８、８
５０９、８５１０、８５１１、８５１２、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８
５４８、８５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８
５７０、８５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８
５７８、８５７９、８５８０、８５８１、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８
５９５、８５９６、８５９７、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８
６１５、８６１７、８６１８、８６５２、８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８
７１３、８７１４、８７１５、８７１６、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８
７２１、８７２２、８７２３、８７２４、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８
７２９、８７３０、８７３１、８７３２、８７３３、８７３４、８７３７、８７３８、８
７３９、８７４０、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８
７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８
８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、８
８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８
８２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８
８
４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８
５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８
６８、８８６９、８８７０、８８７１、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８
７６、８８７８、８８７９、８８８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８
８５、８８８６、８８８７、８８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８
９３、８８９４、８８９５、８８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９
０１、８９０２、８９０３、８９０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９
１６、８９１７、８９１８、８９１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９
２７、８９２８、８９３３、８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９
３９、８９４０、８９４１、８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９
４７、８９４８、８９４９、８９５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９
９２、８９９３、８９９４、８９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０
００、９００１、９００２、９００３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０
１４、９０１５、９０１６、９０１７、９０１８、９０１９、９０２０、９０２１、９０
２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２８、９０２９、９０
３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９０４５、９０４６、９０
４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９０５３、９０５４、９０
５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０６６、９０８７、９０
８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０９６、９０９７、９０
９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０８、９１０９、９１
１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８、９１２９、９１
３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、９１４５、９１
４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１６０、９１６１、９１
６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定されない。
卵巣癌
卵巣癌は、上皮性卵巣癌（卵巣表面の細胞から発生する癌）または悪性胚細胞腫瘍（卵
細胞から発生する癌）のいずれかである、卵巣の組織で発生する癌である。卵巣癌の症状
は腹部の痛みまたは腫脹、骨盤の痛み、ガス、腹部膨満、または便秘等の胃腸障害、およ
び閉経後の膣出血を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、卵巣癌と診断されたまたは診断され得る対象
の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本
発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
は、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを
投与することにより、卵巣癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排
除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌク
レオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする
腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、卵巣
癌と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または
寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプ
チドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１
７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２
５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４
６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８
３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２
５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８５４、４８５
５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６
４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７
２、４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９
１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１
５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６
２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７
０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７
８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８
６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９
４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００
２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１
５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２
３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３
２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４
０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４
８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５
６、５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６
４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７
２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０
３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１
８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２
６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３
４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４
５、５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５
３、５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６
１、５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６
９、５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７
７、５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８
８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９
６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０
４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１
２、５２１３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５
６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６
４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９
１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９
９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０
７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１
５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２
３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３
１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３
９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４
７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５
５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６
３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７
１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７
９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８
７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５４１９、５４２
０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４７、５４４
８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５５、５４５
６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６３、５４６
４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８０、５４８
１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９５、５４９
６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、５５０７、５５０
８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１５、５５１
６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２３、５５２
４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３１、５５３
２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５１、５５５
２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６
０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６
８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５５９
０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０５、５６０
６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１７、５６１
８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３２、５６３
３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５６７
５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８８、５６８
９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９６、５６９
７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０８、５７０
９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１６、５７１
７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、５７４
７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５８、５７５
９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、５７６
７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、５７７
７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、５７８
７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、５７９
５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０２、５８０
３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２３、５８２
４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、５８３
３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４９、５８５
０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６５、５８６
６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、５８８
１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８
９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９
７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、５９１
３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２
１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、５９５
５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、５９８３、５９８
４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９９、６００
０、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０７
４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８２、６０８
３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、６０９
１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、６１０
０、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０８、６１０
９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１６、６１１
７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２４、６１２
８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、６１４
８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５６、６１５
７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７５、６１７
６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８５、６１８
６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３３、６２３
４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５６、６２５
７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、６２７９、６２８
０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６２９０、６２９
８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０５、６３０
６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１３、６３１
４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８７、６３８
８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３９
６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０３、６４０
５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９８、６４９
９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１１、６５１
２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５４９、６５５
０
、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７、６５５８
、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３、６６０４
、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６
、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４
、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２
、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６６４３
、６６４４、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８、６６９９、６７００
、６７０１、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４、６７５４、６７５５、６７５６
、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３、６７６４
、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０５、６８０６、６８０７
、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６８１８、６８２４
、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４、６８５３、６８５４
、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１、６８６２、６８６３、６８６４
、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９、６８７２、６８７３、６８７５
、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５、６８８８、６８８９、６８９０
、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５、６８９６、６８９７、６８９８
、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３、６９０４、６９０５、６９０６
、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１、６９１２、６９１３、６９１４
、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９、６９２０、６９２１、６９２２
、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７、６９２８、６９２９、６９３０
、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５、６９３６、６９５３、６９５４
、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０、６９６２、６９６３、６９６４
、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９、６９７０、６９７１、６９７２
、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１
、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０
、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０
、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６、７０８７、７０８８、７０８９
、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７、７１３８、７１３９、７１４０
、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７１４６、７１４７、７１４８
、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７１５４、７１５５、７１９５
、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７２０４
、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７２１２
、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７２２０
、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７２２８
、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７２３６
、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７２４５
、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７２５３
、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７２６１
、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７２６９
、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６
、７２９７、７２９８、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０
、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４
、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７
、７４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７
、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２
、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０
、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４
、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３
、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１
、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９
、７５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１
、７５９２、７５９３、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００、７６０１
、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３、７６３８
、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５、７６７６
、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８、７７１９
、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６、７７２７
、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４、７７３５
、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２、７７４３
、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１、７７５２
、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３、７７６４
、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５、７８１３
、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０、７８２１
、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３、７８５４
、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５、７８６６
、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８、７９１９
、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４３
、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１
、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０
、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８
、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７
、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５
、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３
、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１
、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９
、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７
、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２
、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９
、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９
、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７
、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７
、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５
、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５
、８１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２
、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０
、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５
、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８２１０
、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３
、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１
、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９
、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８３０２
、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３５４、８３５５、８３５６
、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６、８３７７
、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１、８４１２
、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７４、８４７５
、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２
、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０、８５５１
、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２、８５７３
、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０、８５８１
、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７、８６０１
、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６１８、８６５５
、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、８７１７
、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、８７２５
、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、８７３３
、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８７９２
、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８８００
、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０、８８１１
、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３、８８２９
、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８、８８４９
、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８５９
、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８６８
、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９、８８８０
、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８８８
、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８９６
、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９０４
、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９１９
、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８９３４
、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８９４２
、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８９５０
、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４、８９９５
、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９００３
、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９０２０
、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０２８
、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９０４５
、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９０５３
、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０６６
、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０９６
、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１０８
、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８
、
９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、
９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１６０、
９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに限定されな
い。
前立腺癌
前立腺の組織に発生する前立腺は、主に高齢の男性に影響する。前立腺癌の非限定的な
例は、弱いまたは断続性の尿の流れ、頻尿、排尿困難、排尿時の痛みまたは灼熱感、尿ま
たは精液中の血液、治らない背中、臀部または骨盤の痛み、および射精時疼痛を含むが、
これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、前立腺癌と診断されたまたは診断され得る対
象の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮ
Ａは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド
を投与することにより、前立腺癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少
、排除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリ
ヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的と
する腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、
前立腺癌と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／
または寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポ
リペプチドは配列番号４７０４、４７０５、４７０６、４７０７、４７０８、４７０９、
４７１０、４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１７、
４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２５、
４７２６、４７２７、４７２８、４７２９、４７３０、４７３１、４７３２、４７３３、
４７３４、４７３５、４７３６、４７３７、４７３８、４７３９、４７４０、４７４１、
４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４６、４７４７、４７４８、４７４９、
４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８３、４７８４、４７８５、４７８６、
４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２５、４８２６、４８２７、４８２８、
４８２９、４８３０、４８３２、４８３５、４８３６、４８５４、４８５５、４８５６、
４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６４、４８６５、
４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７２、４８７３、
４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９１、４８９２、
４８９３、４８９４、４８９５、４８９６、４８９７、４８９８、４８９９、４９００、
４９０１、４９０２、４９０３、４９０４、４９０５、４９０６、４９０７、４９０８、
４９０９、４９１０、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１５、４９１６、
４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６２、４９６３、
４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７０、４９７１、
４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７８、４９７９、
４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８６、４９８７、
４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９４、４９９５、
４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００２、５００８、
５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１５、５０１６、
５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２３、５０２４、
５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３２、５０３３、
５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４０、５０４１、
５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４８、５０４９、
５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５６、５０５７、
５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６４、５０６５、
５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７２、５０７３、
５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０３、５１０４、
５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１８、５１１９、
５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２６、５１２７、
５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３４、５１３５、
５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４５、５１４６、
５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５３、５１５４、
５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６１、５１６２、
５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６９、５１７０、
５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７７、５１７８、
５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８８、５１８９、
５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９６、５１９７、
５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０４、５２０５、
５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１２、５２１３、
５２３０、５２３１、５２３３、５２３４、５２３５、５２３６、５２４９、５２５０、
５２５１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５６、５２５７、５２５８、
５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６４、５２６５、５２６６、
５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２７２、５２７３、５２７４、
５２７５、５２７６、５２７７、５２７８、５２７９、５２８０、５２８１、５２９１、
５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９９、
５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０７、
５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１５、
５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２３、
５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３１、
５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３９、
５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４７、
５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５５、
５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６３、
５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７１、
５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７９、
５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８７、
５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５４１９、５４２０、
５４２１、５４２２、５４２３、５４２４、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、
５４３８、５４４７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、
５４５４、５４５５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、
５４６２、５４６３、５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、
５４７９、５４８０、５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、
５４９４、５４９５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、
５５０６、５５０７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、
５５１４、５５１５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、
５５２２、５５２３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、
５５３０、５５３１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５３７、
５５３８、５５３９、５５４０、５５４１、５５４２、５５４３、５５４４、５５４５、
５５４６、５５４７、５５４８、５５４９、５５５１、５５５２、５５５３、５５５４、
５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５９、５５６０、５５６１、５５６２、
５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６７、５５６８、５５６９、５５７０、
５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、５５８０、５５９０、５５９１、５５９２、
５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０５、５６０６、５６０７、５６０８、
５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１７、５６１８、５６１９、５６２０、
５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３２、５６３３、５６３８、５６３９、
５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７４、５６７５、５６７６、５６７７、
５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８２、５６８３、５６８４、５６８５、
５６８６、５６８７、５６８８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、
５６９４、５６９５、５６９６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、
５７０２、５７０３、５７０４、５７０５、５７０６、５７０７、５７０８、５７０９、
５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１６、５７１７、
５７２７、５７４０、５７４１、５７４２、５７４３、５７４４、５７４５、５７４６、
５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５８、
５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６６、
５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７６、
５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８６、
５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９４、
５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０２、
５８０３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２３、
５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３１、
５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４９、
５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８５６、５８５７、
５８５８、５８５９、５８６０、５８６１、５８６２、５８６３、５８６４、５８６５、
５８６６、５８６７、５８６８、５８６９、５８７０、５８７１、５８７２、５８７３、
５８７４、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８０、５８８１、５８８２、
５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８８、５８８９、５８９０、
５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９６、５８９７、５８９８、
５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１２、５９１３、５９１４、
５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２０、５９２１、５９２２、
５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５４、５９５５、５９５６、
５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９７４、５９７５、５９７６、５９７７、
５９７８、５９７９、５９８０、５９８１、５９８２、５９８３、５９８４、５９８５、
５９８６、５９８７、５９８８、５９９４、５９９５、５９９６、５９９７、５９９８、
５９９９、６０００、６００１、６００２、６０２０、６０２１、６０２２、６０２３、
６０２４、６０２５、６０２６、６０２７、６０２８、６０５６、６０５７、６０５８、
６０５９、６０６０、６０６１、６０６２、６０６３、６０６４、６０６５、６０６６、
６０６７、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７２、６０７３、６０７４、
６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０７９、６０８０、６０８１、６０８２、
６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９０、
６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９８、
６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０８、
６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１６、
６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２４、
６
１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４７、６
１４８、６１４９、６１５０、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６
１５６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６
１７５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６
１８５、６１８６、６１８７、６１８９、６１９０、６１９１、６２０８、６２０９、６
２３１、６２３２、６２３３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６
２３９、６２５１、６２５６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６
２６２、６２７８、６２７９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６
２８８、６２８９、６２９０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６
３０３、６３０４、６３０５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６
３１１、６３１２、６３１３、６３１４、６３１５、６３４６、６３４７、６３５６、６
３５７、６３５８、６３６５、６３６６、６３６７、６３６８、６３６９、６３７０、６
３７２、６３７８、６３７９、６３８７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６
３９２、６３９３、６３９４、６３９５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６
４００、６４０１、６４０２、６４０３、６４０５、６４０６、６４０７、６４４６、６
４４７、６４４８、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９８、６４９９、６
５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０４、６５０５、６５０６、６５０７、６
５０８、６５０９、６５１０、６５１１、６５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６
５２１、６５２２、６５２３、６５４９、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６
５５４、６５５５、６５５６、６５５７、６５５８、６５８８、６５８９、６５９１、６
５９２、６５９３、６５９４、６５９５、６５９６、６５９７、６５９８、６５９９、６
６００、６６０１、６６０２、６６０３、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６
６１２、６６１３、６６１４、６６１５、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６
６２０、６６２１、６６２２、６６２３、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６
６２８、６６２９、６６３０、６６３１、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６
６３９、６６４０、６６４１、６６４２、６６４３、６６４４、６６８４、６６８５、６
６８６、６６９７、６６９８、６６９９、６７００、６７０１、６７１６、６７１９、６
７２１、６７２３、６７２４、６７２５、６７２６、６７２７、６７２８、６７２９、６
７３０、６７３１、６７３２、６７３３、６７３４、６７３５、６７５４、６７５５、６
７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１、６７６２、６７６３、６
７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００、６８０１、６８０５、６
８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６、６８１７、６
８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３、６８３４、６
８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８５８、６８５９、６８６０、６
８６１、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６
８６９、６８７２、６８７３、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６
８８５、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６
８９５、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６
９０３、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６
９１１、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６
９１９、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６
９２７、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６
９３５、６９３６、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６
９６０、６９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６
９６９、６９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６
９８６、６９８７、６９８８、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６
９９４、６９９５、７００７、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１２、７
０１５、７０１６、７０１７、７０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０２２、７
０２３、７０２４、７０２５、７０２６、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６、７
０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７、７
１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５、７
１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３、７
１５４、７１５５、７１８３、７１８４、７１８５、７１８６、７１８８、７１８９、７
１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１、７２０２、７２０３、７
２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９、７２１０、７２１１、７
２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７、７２１８、７２１９、７
２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５、７２２６、７２２７、７
２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３、７２３４、７２３５、７
２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１、７２４３、７２４４、７
２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０、７２５１、７２５２、７
２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８、７２５９、７２６０、７
２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６、７２６７、７２６８、７
２６９、７２７０、７２７１、７２７２、７２７３、７２７４、７２７５、７２９１、７
２９２、７２９３、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２９８、７３４７、７
３４８、７３４９、７３５５、７３５６、７３５７、７３５８、７３５９、７３６０、７
３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４、７
３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７、７
４３８、７４３９、７４４０、７４４１、７４４２、７４７１、７４７２、７４７３、７
４７４、７４７５、７４７６、７４７７、７４７８、７４９０、７４９６、７４９７、７
４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２、７５０３、７５０４、７５０５、７
５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０、７５１１、７５１２、７５１３、７
５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４、７５３５、７５３７、７５３８、７
５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３、７５４４、７５４５、７５４６、７
５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１、７５５２、７５５３、７５５４、７
５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９、７５６０、７５６１、７５６２、７
５６３、７５６４、７５６５、７５６６、７５６７、７５６８、７５６９、７５７０、７
５８１、７５８２、７５８３、７５８４、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７
５８９、７５９０、７５９１、７５９２、７５９３、７５９５、７５９６、７５９７、７
５９９、７６００、７６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７
６２２、７６２３、７６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７
６７４、７６７５、７６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７
７１７、７７１８、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７
７２５、７７２６、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７
７３３、７７３４、７７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７
７４１、７７４２、７７４３、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７
７５０、７７５１、７７５２、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７
７６２、７７６３、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７
７９７、７８０５、７８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７
８１９、７８２０、７８２１、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７
８５２、７８５３、７８５４、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７
８６４、７８６５、７８６６、７８６７、７８６９、７８７０、７８７１、７８７２、７
８７３、７８７４、７８７５、７８７６、７８７７、７９１７、７９１８、７９１９、７
９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２、７９４３、７
９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０、７９５１、７
９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９、７９６０、７
９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７、７９６８、７
９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６、７９７７、７
９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４、７９８５、７
９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２、７９９３、７
９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００、８０１１、８
０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８、８０１９、８
０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６、８０２７、８
０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１、８０５２、８
０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８、８０８９、８
０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、８０９９、８
１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６、８１０７、８
１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６、８１１７、８
１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４、８１２５、８
１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４、８１３５、８
１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１、８１７２、８
１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９、８１８０、８
１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４、８１９５、８
１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９、８２１０、８
２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２、８２３３、８
２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０、８２４１、８
２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８、８２４９、８
２５０、８２５１、８２５２、８２５３、８２５４、８２５５、８２５６、８２５７、８
２５８、８２５９、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９、８３０２、８
３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３３４、８３３５、８３３６、８３３７、８
３３８、８３３９、８３４０、８３４１、８３４２、８３４３、８３４４、８３５３、８
３５４、８３５５、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８
３６５、８３６６、８３６７、８３６８、８３６９、８３７０、８３７１、８３７５、８
３７６、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８
４１１、８４１２、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８
４７４、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８５０１、８５０２、８５０３、８
５０７、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１、８５１２、８５１４、８５１５、８
５３７、８５３８、８５３９、８５４４、８５４５、８５４６、８５４７、８５４８、８
５４９、８５５０、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５５８、８
５
５９、８５６０、８５６１、８５６２、８５６３、８５６４、８５６５、８５６６、８５
６７、８５７０、８５７１、８５７２、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５
７７、８５７８、８５７９、８５８０、８５８１、８５８６、８５８７、８５８８、８５
８９、８５９０、８５９１、８５９２、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５
９７、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６
１８、８６５５、８６８６、８６９３、８６９４、８６９５、８６９６、８６９７、８６
９８、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６、８７１７、８７
１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４、８７２５、８７
２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２、８７３３、８７
３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１、８７９２、８７
９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９、８８００、８８
０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８０７、８８０８、８８
０９、８８１０、８８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８
２２、８８２３、８８２４、８８２５、８８２６、８８２７、８８２８、８８２９、８８
３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４２、８８４３、８８
４４、８８４５、８８４６、８８４７、８８４８、８８４９、８８５０、８８５１、８８
５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８、８８５９、８８６０、８８６１、８８
６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７、８８６８、８８７２、８８７３、８８
７４、８８７５、８８７６、８８７７、８８７８、８８７９、８８８０、８８８１、８８
８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７、８８８８、８８８９、８８
９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５、８８９６、８８９７、８８
９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３、８９０４、８９０６、８９
１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８、８９１９、８９２０、８９
２１、８９２３、８９２４、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３、８９
３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１、８９
４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９、８９
５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９７４、８９７５、８９７６、８９
７７、８９７８、８９７９、８９８０、８９８１、８９９２、８９９３、８９９４、８９
９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２、９０
０３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９、９０
２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７、９０
２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４、９０
４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２、９０
５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、９０
６６、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、９０
９６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、９１
０８、９１０９、９１１０、９１１１、９１１２、９１１３、９１１４、９１１５、９１
２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、９１２８、９１２９、９１３０、９１
３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、９１３７、９１４５、９１４６、９１
４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、９１６０、９１６１、９１６２、９１
６３、９１８６、９１８７、９１８８、９１８９、９１９０、９１９１、９１９２、９１
９３、９１９４、９１９５、９１９６、９１９７、９１９８、９１９９、９２００、９２
０１、９２０３を含み得るが、これらに限定されない。
睾丸癌
睾丸癌は１つまたは両方の精巣の組織で発生し、若年または中年の男性に最も多くみら
れる。ほとんどの睾丸癌は生殖細胞に発生し、精巣胚細胞腫瘍と呼ばれる。精巣胚細胞腫
瘍には、セミノーマおよび非セミノーマと呼ばれる２つの種類がある。一般的な睾丸癌の
症状は、いずれかの睾丸における無痛性のしこりまたは腫脹、睾丸の感じ方の変化、下腹
部または鼠蹊部の鈍痛、突然の陰嚢の液体の貯留および睾丸または陰嚢の痛みまたは不快
感を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、睾丸癌と診断されたまたは診断され得る対象
の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本
発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
は、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを
投与することにより、睾丸癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排
除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌク
レオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする
腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、睾丸
癌と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または
寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプ
チドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１
７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２
５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４
６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８
３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２
５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８５４、４８５
５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６
４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７
２、４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９
１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１
５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６
２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７
０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７
８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８
６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９
４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００
２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１
５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２
３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３
２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４
０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４
８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５
６、５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６
４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７
２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０
３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１
８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２
６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３
４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４
５、５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５
３、５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６
１、５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６
９、５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７
７、５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８
８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９
６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０
４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１
２、５２１３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５
６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６
４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９
１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９
９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０
７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１
５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２
３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３
１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３
９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４
７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５
５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６
３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７
１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７
９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８
７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５３９４、５３９
５、５３９６、５３９７、５３９８、５３９９、５４００、５４０１、５４０２、５４１
９、５４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４
７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５
５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６
３、５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８
０、５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９
５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、５５０
７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１
５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２
３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３
１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５
１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５
９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６
７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、５５８
０、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０
５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１
７、５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３
２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７
４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８
８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９
６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０
８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１
６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４５、５７４
６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５
８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６
６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７
６、５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８
６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９
４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０
２、５８０３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２
３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３
１、５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４
９、５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６
５、５８６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８
０、５８８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８
８、５８８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９
６、５８９７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１
２、５９１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２
０、５９２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５
４、５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、５９８
３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９
９、６０００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７
２、６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８
２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９
０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９
８、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０
８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１
６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２
４、６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４
７、６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５
６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７
５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８
５、６１８６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３
３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５
６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、６２７
９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６２９
０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０
５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１
３、６３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８
７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９
５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０
３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９
８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１
１
、６５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５４９
、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７
、６５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３
、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５
、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３
、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１
、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２
、６６４３、６６４４、６６５８、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８
、６６９９、６７００、６７０１、６７０２、６７０３、６７０４、６７０５、６７０６
、６７０７、６７０８、６７０９、６７１０、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４
、６７５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１
、６７６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００
、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６
、６８１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３
、６８３４、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１
、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９
、６８７２、６８７３、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５
、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５
、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３
、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１
、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９
、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７
、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５
、６９３６、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０
、６９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９
、６９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８
、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７
、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７
、７０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６
、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７
、７１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５
、７１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３
、７１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１
、７２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９
、７２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７
、７２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５
、７２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３
、７２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１
、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０
、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８
、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６
、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３
、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２９８、７３０５、７３０６、７３０７
、７３０８、７３０９、７３１０、７３１１、７３１２、７３１３、７３１４、７３１５
、７３１６、７３１７、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０
、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４
、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７
、７４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７
、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２
、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０
、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４
、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３
、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１
、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９
、７５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１
、７５９２、７５９３、７５９４、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００
、７６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３
、７６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５
、７６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８
、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６
、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４
、７７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２
、７７４３、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１
、７７５２、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３
、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５
、７８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０
、７８２１、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３
、７８５４、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５
、７８６６、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８
、７９１９、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２
、７９４３、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０
、７９５１、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９
、７９６０、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７
、７９６８、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６
、７９７７、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４
、７９８５、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２
、７９９３、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００
、８０１１、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８
、８０１９、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６
、８０２７、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１
、８０５２、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８
、８０８９、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８
、８０９９、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６
、８１０７、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６
、８１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４
、８１２５、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４
、８１３５、８１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１
、８１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９
、８１８０、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４
、８１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９
、８２１０、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２
、８２３３、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０
、８２４１、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８
、８２４９、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９
、８３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３５４、８３５５
、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６
、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１
、８４１２、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７４
、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１
、８５１２、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０
、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２
、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０
、８５８１、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７
、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６１８
、８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６
、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４
、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２
、８７３３、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１
、８７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９
、８８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０
、８８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３
、８８２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８
、８８４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８
、８８５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７
、８８６８、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９
、８８８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７
、８８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５
、８８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３
、８９０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８
、８９１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３
、８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１
、８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９
、８９５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４
、８９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２
、９００３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９
、９０２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７
、９０２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４
、９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２
、
９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、
９０６６、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、
９０９６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、
９１０８、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、
９１２８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、
９１３７、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、
９１６０、９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに
限定されない。
咽頭癌
咽頭癌は咽頭の組織で発生し、鼻咽頭（鼻咽頭癌）、中咽頭（中咽頭癌）、下咽頭（下
咽頭癌）、および喉頭（喉頭癌）の癌を含む。一般的な咽頭癌の症状は治らない喉の痛み
、耳痛、首のしこり、痛みを伴うまたは困難な嚥下、声の変化または嗄声、呼吸困難また
は発話困難、鼻出血、聴力障害、耳の痛みまたは耳鳴り、頭痛、胸骨の後ろの鈍痛、咳お
よび原因不明の体重減少を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または
腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単
離ポリヌクレオチドを投与することにより、咽頭癌と診断されたまたは診断され得る対象
の疾患、障害、および／または状態を治療するために使用され得る。一実施形態では、本
発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ
は、当該対象に目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを
投与することにより、咽頭癌と診断されたまたは診断され得る対象の腫瘍増殖を減少、排
除、または予防するために使用され得る。一実施形態では、本発明の腫瘍学関連ポリヌク
レオチド、腫瘍学関連一次構築物または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、当該対象に目的とする
腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを投与することにより、咽頭
癌と診断されたまたは診断され得る対象の少なくとも１つの癌症状を軽減および／または
寛解させるために使用され得る。さらなる実施形態では、目的とする腫瘍学関連ポリペプ
チドは配列番号４７１１、４７１２、４７１３、４７１４、４７１５、４７１６、４７１
７、４７１８、４７１９、４７２０、４７２１、４７２２、４７２３、４７２４、４７２
５、４７２６、４７２７、４７２８、４７４２、４７４３、４７４４、４７４５、４７４
６、４７４７、４７４８、４７４９、４７５０、４７５１、４７８１、４７８２、４７８
３、４７８４、４７８５、４７８６、４７８７、４７８８、４７８９、４７９０、４８２
５、４８２６、４８２７、４８２８、４８２９、４８３０、４８３２、４８５４、４８５
５、４８５６、４８５７、４８５８、４８５９、４８６０、４８６１、４８６３、４８６
４、４８６５、４８６６、４８６７、４８６８、４８６９、４８７０、４８７１、４８７
２、４８７３、４８８５、４８８６、４８８７、４８８８、４８８９、４８９０、４８９
１、４８９２、４８９３、４８９４、４９１１、４９１２、４９１３、４９１４、４９１
５、４９１６、４９１７、４９１８、４９１９、４９２０、４９６０、４９６１、４９６
２、４９６３、４９６４、４９６５、４９６６、４９６７、４９６８、４９６９、４９７
０、４９７１、４９７２、４９７３、４９７４、４９７５、４９７６、４９７７、４９７
８、４９７９、４９８０、４９８１、４９８２、４９８３、４９８４、４９８５、４９８
６、４９８７、４９８８、４９８９、４９９０、４９９１、４９９２、４９９３、４９９
４、４９９５、４９９６、４９９７、４９９８、４９９９、５０００、５００１、５００
２、５００８、５００９、５０１０、５０１１、５０１２、５０１３、５０１４、５０１
５、５０１６、５０１７、５０１８、５０１９、５０２０、５０２１、５０２２、５０２
３、５０２４、５０２５、５０２６、５０２７、５０２８、５０３０、５０３１、５０３
２、５０３３、５０３４、５０３５、５０３６、５０３７、５０３８、５０３９、５０４
０、５０４１、５０４２、５０４３、５０４４、５０４５、５０４６、５０４７、５０４
８、５０４９、５０５０、５０５１、５０５２、５０５３、５０５４、５０５５、５０５
６、５０５７、５０５８、５０５９、５０６０、５０６１、５０６２、５０６３、５０６
４、５０６５、５０６６、５０６７、５０６８、５０６９、５０７０、５０７１、５０７
２、５０７３、５０７４、５０７５、５０７６、５０７７、５０７８、５０７９、５１０
３、５１０４、５１０５、５１０６、５１０７、５１０８、５１０９、５１１０、５１１
８、５１１９、５１２０、５１２１、５１２２、５１２３、５１２４、５１２５、５１２
６、５１２７、５１２８、５１２９、５１３０、５１３１、５１３２、５１３３、５１３
４、５１３５、５１３６、５１３７、５１３８、５１３９、５１４０、５１４１、５１４
５、５１４６、５１４７、５１４８、５１４９、５１５０、５１５１、５１５２、５１５
３、５１５４、５１５５、５１５６、５１５７、５１５８、５１５９、５１６０、５１６
１、５１６２、５１６３、５１６４、５１６５、５１６６、５１６７、５１６８、５１６
９、５１７０、５１７１、５１７２、５１７３、５１７４、５１７５、５１７６、５１７
７、５１７８、５１８２、５１８３、５１８４、５１８５、５１８６、５１８７、５１８
８、５１８９、５１９０、５１９１、５１９２、５１９３、５１９４、５１９５、５１９
６、５１９７、５１９８、５１９９、５２００、５２０１、５２０２、５２０３、５２０
４、５２０５、５２０６、５２０７、５２０８、５２０９、５２１０、５２１１、５２１
２、５２１３、５２３０、５２３１、５２５２、５２５３、５２５４、５２５５、５２５
６、５２５７、５２５８、５２５９、５２６０、５２６１、５２６２、５２６３、５２６
４、５２６５、５２６６、５２６７、５２６８、５２６９、５２７０、５２７１、５２９
１、５２９２、５２９３、５２９４、５２９５、５２９６、５２９７、５２９８、５２９
９、５３００、５３０１、５３０２、５３０３、５３０４、５３０５、５３０６、５３０
７、５３０８、５３０９、５３１０、５３１１、５３１２、５３１３、５３１４、５３１
５、５３１６、５３１７、５３１８、５３１９、５３２０、５３２１、５３２２、５３２
３、５３２４、５３２５、５３２６、５３２７、５３２８、５３２９、５３３０、５３３
１、５３３２、５３３３、５３３４、５３３５、５３３６、５３３７、５３３８、５３３
９、５３４０、５３４１、５３４２、５３４３、５３４４、５３４５、５３４６、５３４
７、５３４８、５３４９、５３５０、５３５１、５３５２、５３５３、５３５４、５３５
５、５３５６、５３５７、５３５８、５３５９、５３６０、５３６１、５３６２、５３６
３、５３６４、５３６５、５３６６、５３６７、５３６８、５３６９、５３７０、５３７
１、５３７２、５３７３、５３７４、５３７５、５３７６、５３７７、５３７８、５３７
９、５３８０、５３８１、５３８２、５３８３、５３８４、５３８５、５３８６、５３８
７、５３８８、５３８９、５３９０、５３９１、５３９２、５３９３、５３９４、５３９
５、５３９６、５３９７、５３９８、５３９９、５４００、５４０１、５４０２、５４１
９、５４２０、５４２１、５４２６、５４２７、５４２８、５４２９、５４３８、５４４
７、５４４８、５４４９、５４５０、５４５１、５４５２、５４５３、５４５４、５４５
５、５４５６、５４５７、５４５８、５４５９、５４６０、５４６１、５４６２、５４６
３、５４６４、５４６５、５４６９、５４７０、５４７７、５４７８、５４７９、５４８
０、５４８１、５４８２、５４９０、５４９１、５４９２、５４９３、５４９４、５４９
５、５４９６、５４９７、５４９８、５４９９、５５０４、５５０５、５５０６、５５０
７、５５０８、５５０９、５５１０、５５１１、５５１２、５５１３、５５１４、５５１
５、５５１６、５５１７、５５１８、５５１９、５５２０、５５２１、５５２２、５５２
３、５５２４、５５２５、５５２６、５５２７、５５２８、５５２９、５５３０、５５３
１、５５３２、５５３３、５５３４、５５３５、５５３６、５５４８、５５４９、５５５
１、５５５２、５５５３、５５５４、５５５５、５５５６、５５５７、５５５８、５５５
９、５５６０、５５６１、５５６２、５５６３、５５６４、５５６５、５５６６、５５６
７、５５６８、５５６９、５５７０、５５７１、５５７７、５５７８、５５７９、５５８
０、５５９０、５５９１、５５９２、５５９３、５５９４、５５９５、５５９６、５６０
５、５６０６、５６０７、５６０８、５６０９、５６１０、５６１１、５６１６、５６１
７、５６１８、５６１９、５６２０、５６２１、５６２２、５６２３、５６３１、５６３
２、５６３３、５６３８、５６３９、５６４０、５６７１、５６７２、５６７３、５６７
４、５６７５、５６７６、５６７７、５６７８、５６７９、５６８０、５６８１、５６８
８、５６８９、５６９０、５６９１、５６９２、５６９３、５６９４、５６９５、５６９
６、５６９７、５６９８、５６９９、５７００、５７０１、５７０２、５７０３、５７０
８、５７０９、５７１０、５７１１、５７１２、５７１３、５７１４、５７１５、５７１
６、５７１７、５７２７、５７４０、５７４１、５７４３、５７４４、５７４５、５７４
６、５７４７、５７４８、５７４９、５７５０、５７５１、５７５５、５７５７、５７５
８、５７５９、５７６０、５７６１、５７６２、５７６３、５７６４、５７６５、５７６
６、５７６７、５７６８、５７６９、５７７０、５７７２、５７７３、５７７５、５７７
６、５７７７、５７７８、５７７９、５７８０、５７８３、５７８４、５７８５、５７８
６、５７８７、５７８８、５７８９、５７９０、５７９１、５７９２、５７９３、５７９
４、５７９５、５７９６、５７９７、５７９８、５７９９、５８００、５８０１、５８０
２、５８０３、５８１１、５８１２、５８１３、５８１４、５８２１、５８２２、５８２
３、５８２４、５８２５、５８２６、５８２７、５８２８、５８２９、５８３０、５８３
１、５８３３、５８３４、５８３６、５８３７、５８３８、５８３９、５８４８、５８４
９、５８５０、５８５１、５８５２、５８５３、５８５４、５８５５、５８６４、５８６
５、５８６６、５８６７、５８６８、５８７５、５８７６、５８７７、５８７８、５８８
０、５８８１、５８８２、５８８３、５８８４、５８８５、５８８６、５８８７、５８８
８、５８８９、５８９０、５８９１、５８９２、５８９３、５８９４、５８９５、５８９
６、５８９７、５８９８、５８９９、５９０７、５９０８、５９０９、５９１１、５９１
２、５９１３、５９１４、５９１５、５９１６、５９１７、５９１８、５９１９、５９２
０、５９２１、５９２２、５９２９、５９５０、５９５１、５９５２、５９５３、５９５
４、５９５５、５９５６、５９６３、５９６７、５９６９、５９７０、５９８２、５９８
３、５９８４、５９８５、５９８６、５９８７、５９８８、５９９７、５９９８、５９９
９、６０００、６００１、６００２、６０６８、６０６９、６０７０、６０７１、６０７
２、６０７４、６０７５、６０７６、６０７７、６０７８、６０８０、６０８１、６０８
２、６０８３、６０８４、６０８５、６０８６、６０８７、６０８８、６０８９、６０９
０、６０９１、６０９２、６０９３、６０９４、６０９５、６０９６、６０９７、６０９
８、６１００、６１０１、６１０２、６１０３、６１０５、６１０６、６１０７、６１０
８、６１０９、６１１０、６１１１、６１１２、６１１３、６１１４、６１１５、６１１
６、６１１７、６１１８、６１１９、６１２０、６１２１、６１２２、６１２３、６１２
４、６１２８、６１３０、６１４２、６１４３、６１４４、６１４５、６１４６、６１４
７、６１４８、６１４９、６１５１、６１５２、６１５３、６１５４、６１５５、６１５
６、６１５７、６１６９、６１７０、６１７１、６１７２、６１７３、６１７４、６１７
５、６１７６、６１７７、６１７８、６１７９、６１８０、６１８１、６１８２、６１８
５、６１８６、６１８７、６１９１、６２０８、６２０９、６２３１、６２３２、６２３
３、６２３４、６２３５、６２３６、６２３７、６２３８、６２３９、６２５１、６２５
６、６２５７、６２５８、６２５９、６２６０、６２６１、６２６２、６２７８、６２７
９、６２８０、６２８１、６２８２、６２８６、６２８７、６２８８、６２８９、６２９
０、６２９８、６２９９、６３００、６３０１、６３０２、６３０３、６３０４、６３０
５、６３０６、６３０７、６３０８、６３０９、６３１０、６３１１、６３１２、６３１
３、６３１４、６３１５、６３５６、６３５７、６３５８、６３７８、６３７９、６３８
７、６３８８、６３８９、６３９０、６３９１、６３９２、６３９３、６３９４、６３９
５、６３９６、６３９７、６３９８、６３９９、６４００、６４０１、６４０２、６４０
３、６４０５、６４０６、６４０７、６４５１、６４５２、６４５３、６４９７、６４９
８、６４９９、６５００、６５０１、６５０２、６５０３、６５０９、６５１０、６５１
１
、６５１２、６５１４、６５１９、６５２０、６５２１、６５２２、６５２３、６５４９
、６５５０、６５５１、６５５２、６５５３、６５５４、６５５５、６５５６、６５５７
、６５５８、６５８８、６５８９、６５９９、６６００、６６０１、６６０２、６６０３
、６６０４、６６０５、６６０６、６６１１、６６１２、６６１３、６６１４、６６１５
、６６１６、６６１７、６６１８、６６１９、６６２０、６６２１、６６２２、６６２３
、６６２４、６６２５、６６２６、６６２７、６６２８、６６２９、６６３０、６６３１
、６６３２、６６３３、６６３４、６６３８、６６３９、６６４０、６６４１、６６４２
、６６４３、６６４４、６６５８、６６８４、６６８５、６６８６、６６９７、６６９８
、６６９９、６７００、６７０１、６７０２、６７０３、６７０４、６７０５、６７０６
、６７０７、６７０８、６７０９、６７１０、６７１９、６７２１、６７２３、６７２４
、６７５４、６７５５、６７５６、６７５７、６７５８、６７５９、６７６０、６７６１
、６７６２、６７６３、６７６４、６７９６、６７９７、６７９８、６７９９、６８００
、６８０５、６８０６、６８０７、６８０８、６８０９、６８１４、６８１５、６８１６
、６８１７、６８１８、６８２４、６８２５、６８２６、６８３１、６８３２、６８３３
、６８３４、６８５３、６８５４、６８５５、６８５６、６８５７、６８６０、６８６１
、６８６２、６８６３、６８６４、６８６５、６８６６、６８６７、６８６８、６８６９
、６８７２、６８７３、６８７５、６８７６、６８７７、６８７８、６８７９、６８８５
、６８８８、６８８９、６８９０、６８９１、６８９２、６８９３、６８９４、６８９５
、６８９６、６８９７、６８９８、６８９９、６９００、６９０１、６９０２、６９０３
、６９０４、６９０５、６９０６、６９０７、６９０８、６９０９、６９１０、６９１１
、６９１２、６９１３、６９１４、６９１５、６９１６、６９１７、６９１８、６９１９
、６９２０、６９２１、６９２２、６９２３、６９２４、６９２５、６９２６、６９２７
、６９２８、６９２９、６９３０、６９３１、６９３２、６９３３、６９３４、６９３５
、６９３６、６９５３、６９５４、６９５５、６９５７、６９５８、６９５９、６９６０
、６９６２、６９６３、６９６４、６９６５、６９６６、６９６７、６９６８、６９６９
、６９７０、６９７１、６９７２、６９７３、６９８３、６９８４、６９８５、６９８８
、６９８９、６９９０、６９９１、６９９２、６９９３、６９９４、６９９５、７００７
、７００８、７００９、７０１０、７０１１、７０１２、７０１５、７０１６、７０１７
、７０１８、７０１９、７０２０、７０２１、７０３４、７０３５、７０８４、７０８６
、７０８７、７０８８、７０８９、７０９０、７０９１、７０９２、７１２８、７１３７
、７１３８、７１３９、７１４０、７１４１、７１４２、７１４３、７１４４、７１４５
、７１４６、７１４７、７１４８、７１４９、７１５０、７１５１、７１５２、７１５３
、７１５４、７１５５、７１９５、７１９６、７１９７、７１９８、７２００、７２０１
、７２０２、７２０３、７２０４、７２０５、７２０６、７２０７、７２０８、７２０９
、７２１０、７２１１、７２１２、７２１３、７２１４、７２１５、７２１６、７２１７
、７２１８、７２１９、７２２０、７２２１、７２２２、７２２３、７２２４、７２２５
、７２２６、７２２７、７２２８、７２２９、７２３０、７２３１、７２３２、７２３３
、７２３４、７２３５、７２３６、７２３７、７２３８、７２３９、７２４０、７２４１
、７２４３、７２４４、７２４５、７２４６、７２４７、７２４８、７２４９、７２５０
、７２５１、７２５２、７２５３、７２５４、７２５５、７２５６、７２５７、７２５８
、７２５９、７２６０、７２６１、７２６２、７２６３、７２６４、７２６５、７２６６
、７２６７、７２６８、７２６９、７２７０、７２７１、７２９１、７２９２、７２９３
、７２９４、７２９５、７２９６、７２９７、７２９８、７３０５、７３０６、７３０７
、７３０８、７３０９、７３１０、７３１１、７３１２、７３１３、７３１４、７３１５
、７３１６、７３１７、７３４７、７３４８、７３４９、７３５８、７３５９、７３６０
、７３６１、７３６２、７３６３、７３６４、７３６５、７３７２、７３７３、７３７４
、７３７５、７３７６、７３７７、７３７８、７３８３、７４１５、７４１６、７４１７
、７４３８、７４７１、７４７２、７４７３、７４７４、７４７５、７４７６、７４７７
、７４９０、７４９６、７４９７、７４９８、７４９９、７５００、７５０１、７５０２
、７５０３、７５０４、７５０５、７５０６、７５０７、７５０８、７５０９、７５１０
、７５１１、７５１２、７５１３、７５１４、７５１５、７５３２、７５３３、７５３４
、７５３５、７５３７、７５３８、７５３９、７５４０、７５４１、７５４２、７５４３
、７５４４、７５４５、７５４６、７５４７、７５４８、７５４９、７５５０、７５５１
、７５５２、７５５３、７５５４、７５５５、７５５６、７５５７、７５５８、７５５９
、７５６０、７５８５、７５８６、７５８７、７５８８、７５８９、７５９０、７５９１
、７５９２、７５９３、７５９４、７５９５、７５９６、７５９７、７５９９、７６００
、７６０１、７６１７、７６１８、７６１９、７６２０、７６２１、７６２２、７６２３
、７６３８、７６６８、７６６９、７６７０、７６７２、７６７３、７６７４、７６７５
、７６７６、７６８５、７６８７、７６９４、７６９５、７６９６、７７１７、７７１８
、７７１９、７７２０、７７２１、７７２２、７７２３、７７２４、７７２５、７７２６
、７７２７、７７２８、７７２９、７７３０、７７３１、７７３２、７７３３、７７３４
、７７３５、７７３６、７７３７、７７３８、７７３９、７７４０、７７４１、７７４２
、７７４３、７７４４、７７４６、７７４７、７７４８、７７４９、７７５０、７７５１
、７７５２、７７５７、７７５８、７７５９、７７６０、７７６１、７７６２、７７６３
、７７６４、７７６５、７７６６、７７６７、７７６８、７７９６、７７９７、７８０５
、７８１３、７８１４、７８１５、７８１６、７８１７、７８１８、７８１９、７８２０
、７８２１、７８２２、７８４８、７８４９、７８５０、７８５１、７８５２、７８５３
、７８５４、７８５９、７８６０、７８６１、７８６２、７８６３、７８６４、７８６５
、７８６６、７８６７、７８６９、７８７０、７８７４、７８７５、７９１７、７９１８
、７９１９、７９２５、７９２６、７９２７、７９２８、７９２９、７９４１、７９４２
、７９４３、７９４４、７９４５、７９４６、７９４７、７９４８、７９４９、７９５０
、７９５１、７９５２、７９５３、７９５５、７９５６、７９５７、７９５８、７９５９
、７９６０、７９６１、７９６２、７９６３、７９６４、７９６５、７９６６、７９６７
、７９６８、７９６９、７９７０、７９７１、７９７２、７９７４、７９７５、７９７６
、７９７７、７９７８、７９７９、７９８０、７９８１、７９８２、７９８３、７９８４
、７９８５、７９８６、７９８７、７９８８、７９８９、７９９０、７９９１、７９９２
、７９９３、７９９４、７９９５、７９９６、７９９７、７９９８、７９９９、８０００
、８０１１、８０１２、８０１３、８０１４、８０１５、８０１６、８０１７、８０１８
、８０１９、８０２０、８０２１、８０２２、８０２３、８０２４、８０２５、８０２６
、８０２７、８０２８、８０２９、８０３０、８０４８、８０４９、８０５０、８０５１
、８０５２、８０５３、８０５４、８０５５、８０５６、８０５７、８０８７、８０８８
、８０８９、８０９０、８０９１、８０９２、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８
、８０９９、８１００、８１０１、８１０２、８１０３、８１０４、８１０５、８１０６
、８１０７、８１１０、８１１１、８１１２、８１１３、８１１４、８１１５、８１１６
、８１１７、８１１８、８１１９、８１２０、８１２１、８１２２、８１２３、８１２４
、８１２５、８１２６、８１２７、８１３０、８１３１、８１３２、８１３３、８１３４
、８１３５、８１３６、８１４４、８１４５、８１６６、８１６９、８１７０、８１７１
、８１７２、８１７３、８１７４、８１７５、８１７６、８１７７、８１７８、８１７９
、８１８０、８１８１、８１８２、８１８８、８１９１、８１９２、８１９３、８１９４
、８１９５、８１９６、８１９７、８１９８、８１９９、８２００、８２０１、８２０９
、８２１０、８２１１、８２１２、８２１５、８２２７、８２３０、８２３１、８２３２
、８２３３、８２３４、８２３５、８２３６、８２３７、８２３８、８２３９、８２４０
、８２４１、８２４２、８２４３、８２４４、８２４５、８２４６、８２４７、８２４８
、８２４９、８２５０、８２５１、８２６０、８２６１、８２６２、８２６３、８２９９
、８３０２、８３０３、８３０４、８３０５、８３０６、８３５３、８３５４、８３５５
、８３５６、８３５７、８３５８、８３５９、８３６０、８３６１、８３７５、８３７６
、８３７７、８３７８、８３７９、８３８０、８３８１、８３８２、８４１０、８４１１
、８４１２、８４４０、８４５９、８４６０、８４６１、８４６２、８４６３、８４７４
、８４７５、８４７６、８４７７、８４７８、８５０８、８５０９、８５１０、８５１１
、８５１２、８５１４、８５１５、８５４６、８５４７、８５４８、８５４９、８５５０
、８５５１、８５５２、８５５３、８５５４、８５５５、８５７０、８５７１、８５７２
、８５７３、８５７４、８５７５、８５７６、８５７７、８５７８、８５７９、８５８０
、８５８１、８５８６、８５８７、８５９３、８５９４、８５９５、８５９６、８５９７
、８６０１、８６０２、８６０３、８６０４、８６０５、８６１５、８６１７、８６１８
、８６５５、８６８６、８７０９、８７１２、８７１３、８７１４、８７１５、８７１６
、８７１７、８７１８、８７１９、８７２０、８７２１、８７２２、８７２３、８７２４
、８７２５、８７２６、８７２７、８７２８、８７２９、８７３０、８７３１、８７３２
、８７３３、８７３４、８７７０、８７７１、８７８８、８７８９、８７９０、８７９１
、８７９２、８７９３、８７９４、８７９５、８７９６、８７９７、８７９８、８７９９
、８８００、８８０１、８８０２、８８０３、８８０４、８８０５、８８０６、８８１０
、８８１１、８８１７、８８１８、８８１９、８８２０、８８２１、８８２２、８８２３
、８８２９、８８３０、８８３７、８８３８、８８３９、８８４０、８８４１、８８４８
、８８４９、８８５０、８８５１、８８５４、８８５５、８８５６、８８５７、８８５８
、８８５９、８８６０、８８６１、８８６２、８８６３、８８６４、８８６５、８８６７
、８８６８、８８７２、８８７３、８８７４、８８７５、８８７６、８８７８、８８７９
、８８８０、８８８１、８８８２、８８８３、８８８４、８８８５、８８８６、８８８７
、８８８８、８８８９、８８９０、８８９１、８８９２、８８９３、８８９４、８８９５
、８８９６、８８９７、８８９８、８８９９、８９００、８９０１、８９０２、８９０３
、８９０４、８９０６、８９１３、８９１４、８９１５、８９１６、８９１７、８９１８
、８９１９、８９２０、８９２１、８９２５、８９２６、８９２７、８９２８、８９３３
、８９３４、８９３５、８９３６、８９３７、８９３８、８９３９、８９４０、８９４１
、８９４２、８９４３、８９４４、８９４５、８９４６、８９４７、８９４８、８９４９
、８９５０、８９５１、８９５４、８９５５、８９５６、８９９２、８９９３、８９９４
、８９９５、８９９６、８９９７、８９９８、８９９９、９０００、９００１、９００２
、９００３、９０１０、９０１１、９０１２、９０１３、９０１４、９０１８、９０１９
、９０２０、９０２１、９０２２、９０２３、９０２４、９０２５、９０２６、９０２７
、９０２８、９０２９、９０３０、９０３１、９０４１、９０４２、９０４３、９０４４
、９０４５、９０４６、９０４７、９０４８、９０４９、９０５０、９０５１、９０５２
、
９０５３、９０５４、９０５５、９０５６、９０５７、９０５８、９０５９、９０６５、
９０６６、９０８７、９０８８、９０９１、９０９２、９０９３、９０９４、９０９５、
９０９６、９０９７、９０９８、９１０３、９１０４、９１０５、９１０６、９１０７、
９１０８、９１０９、９１１０、９１２３、９１２４、９１２５、９１２６、９１２７、
９１２８、９１２９、９１３０、９１３１、９１３３、９１３４、９１３５、９１３６、
９１３７、９１４５、９１４６、９１４７、９１４８、９１４９、９１５０、９１５１、
９１６０、９１６１、９１６２、９１６３、９２０１、９２０３を含み得るが、これらに
限定されない。
免疫応答の調節
免疫応答の回避（ａｖｏｉｄａｎｃｅ）
本明細書に記載されるように、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、ま
たはｍｍＲＮＡの有用な特長は、細胞の自然免疫応答を低減させるか、逃れるか、または
回避する能力である。一態様において、細胞に送達されるとき、参照化合物、例えば、本
発明のポリヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡ、または本発明の異なるポリ
ヌクレオチド、一次構築物、もしくはｍｍＲＮＡに対応する未修飾ポリヌクレオチドによ
って誘起される応答と比較して、低減された宿主からの免疫応答をもたらす、目的とする
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが本明細書
に提供される。本明細書で使用されるとき、「参照化合物」は、哺乳動物に投与されると
き、既知の程度、レベル、または量の免疫刺激を有する自然免疫応答をもたらす任意の分
子または物質である。参照化合物は、核酸分子である必要はなく、本発明の腫瘍学関連ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡのいずれかである必要もない。よって、
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡによる免疫応答の誘起の回避（ａｖｏ
ｉｄａｎｃｅ）、回避（ｅｖａｓｉｏｎ）、または失敗の測定は、そのような応答を誘起
することが知られている任意の化合物または物質と比較することで示され得る。
「自然免疫応答」という用語は、一般的にはウイルス起源または細菌起源の外因性一本
鎖核酸に対する細胞応答を含み、これは、サイトカイン、特にインターフェロンの発現お
よび放出、ならびに細胞死の誘導を含む。本明細書で使用されるとき、自然免疫応答また
はインターフェロン応答は、サイトカイン発現、サイトカイン放出、タンパク質合成の全
般的阻害、細胞ＲＮＡの全般的破壊、主要な組織適合性分子の上方制御、および／または
アポトーシス死の誘導、アポトーシス、抗成長、ならびに自然および適応免疫細胞活性化
に関与する遺伝子の遺伝子転写の誘導を引き起こす単細胞レベルで機能する。Ｉ型ＩＦＮ
によって誘導されるいくつかの遺伝子には、ＰＫＲ、ＡＤＡＲ（ＲＮＡに作用するアデノ
シンデアミナーゼ）、ＯＡＳ（２’，５’−オリゴアデニル酸シンテターゼ）、ＲＮａｓ
ｅ Ｌ、およびＭｘタンパク質が挙げられる。ＰＫＲおよびＡＤＡＲは、それぞれ、翻訳
開始およびＲＮＡ編集の阻害をもたらす。ＯＡＳは、ｓｓＲＮＡを分解するためのエンド
リボヌクレアーゼＲＮａｓｅ Ｌを活性化するｄｓＲＮＡ依存性シンテターゼである。
いくつかの実施形態において、自然免疫応答は、Ｉ型またはＩＩ型インターフェロンの
発現を含み、そのＩ型またはＩＩ型インターフェロンの発現は、本発明のポリヌクレオチ
ド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと接触していない細胞からの参照と比較して２倍を超
えては増加されない。
いくつかの実施形態において、自然免疫応答は、１つ以上のＩＦＮシグネチャー遺伝子
の発現を含み、その１つ以上のＩＦＮシグネチャー遺伝子は、本発明のポリヌクレオチド
、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと接触していない細胞からの参照と比較して３倍を超え
ては増加しない。
いくつかの状況では、細胞内の自然免疫応答を排除することは利益であり得るが、本発
明は、投与すると、そのような応答を完全には排除することなく、実質的に低減された（
著しく低い）インターフェロンシグナル伝達を含む免疫応答をもたらすポリヌクレオチド
、一次構築物、およびｍｍＲＮＡを提供する。
いくつかの実施形態において、免疫応答は、参照化合物に誘導される免疫応答と比較し
て１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％
、９９％、９９．９％、または９９．９％超低い。免疫応答自体は、１型インターフェロ
ンの発現または活性のレベル、またはトール様受容体（例えば、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８
）等のインターフェロン制御遺伝子の発現を決定することにより測定され得る。自然免疫
応答の低減は、細胞集団への１つ以上の投与に従って減少された細胞死のレベルを測定す
ることによっても測定され得る。例えば、細胞死は、参照化合物で観察された細胞死頻度
よりも１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９５％超少な
い。さらに、細胞死は、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと接触した細
胞の５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％、０．１％、０．０１％、ま
たは０．０１％未満に影響し得る。
別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは
、同じ配列を有する未修飾インビトロ合成ＲＮＡ分子ポリヌクレオチドもしくは一次構築
物、または参照化合物よりも著しく低い免疫原性である。本明細書で使用されるとき、「
著しく低い免疫原性」とは、免疫原性の検出可能な減少を指す。別の実施形態では、本用
語は、免疫原性における倍数減少を指す。別の実施形態において、本用語は、有効量のポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが検出可能な免疫応答を誘起することな
く投与され得るような減少を指す。別の実施形態において、本用語は、ポリヌクレオチド
、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが、組換えタンパク質の発現を検出可能に低減させるの
に十分な免疫応答を誘発することなく繰り返し投与され得るような減少を指す。別の実施
形態において、この減少は、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが、組換
えタンパク質の検出可能な発現を排除するのに十分な免疫応答を誘発することなく繰り返
し投与され得るような減少である。
別の実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、その未
修飾対応物または参照化合物よりも２倍低い免疫原性である。別の実施形態において、免
疫原性は、３倍低減する。別の実施形態において、免疫原性は、５倍低減する。別の実施
形態において、免疫原性は、７倍低減する。別の実施形態において、免疫原性は、１０倍
低減する。別の実施形態において、免疫原性は、１５倍低減する。別の実施形態において
、免疫原性は、ある倍数だけ低減する。別の実施形態において、免疫原性は、５０倍低減
する。別の実施形態において、免疫原性は、１００倍低減する。別の実施形態において、
免疫原性は、２００倍低減する。別の実施形態において、免疫原性は、５００倍低減する
。別の実施形態において、免疫原性は、１０００倍低減する。別の実施形態において、免
疫原性は、２０００倍低減する。別の実施形態において、免疫原性は、別の倍数だけ低減
する。
免疫原性を決定する方法は、当技術分野でよく知られており、例えば、サイトカイン（
例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮα、ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１αもしくはβ、
ＩＬ−６、ＩＦＮ−β、またはＩＬ−８）の分泌を測定すること、ＤＣ活性化マーカー（
例えば、ＣＤ８３、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８０、およびＣＤ８６）の発現を測定すること、
または適応免疫応答のアジュバントとして作用する能力を測定すること、が挙げられる。
本明細書で教示される修飾の組み合わせを含む本発明のポリヌクレオチド、一次構築物
、またはｍｍＲＮＡは、それらを治療法としてより好適にする優れた特性を有し得る。
当技術分野における「全か無か」のモデルは、修飾ｍＲＮＡの治療有用性に関連した生
物学的現象を説明するのにひどく不十分であることが確定されている。本発明者らは、タ
ンパク質産生を改善するためには、特定の修飾ｍＲＮＡの効果およびリスクプロファイル
を判定するように、修飾もしくは修飾の組み合わせの性質、修飾の割合（％）を考慮し、
１つを超えるサイトカインもしくは測定基準を検査し得ることを確認した。
本発明の一態様において、未修飾と比較して修飾ｍＲＮＡの有効性を決定する方法は、
その発現が本発明の外因性核酸の投与によって誘起される１つ以上のサイトカインの測定
および分析を含む。これらの値は、未修飾核酸の投与と、またはサイトカイン応答、ポリ
ＩＣ、Ｒ−８４８等の標準的な測定基準もしくは当技術分野で既知の他の標準と比較され
る。
本明細書で開発される標準的な測定基準の１つの例は、細胞、組織、または生物内で産
生されるコードされたポリペプチド（タンパク質）のレベルまたは量の、修飾核酸の投与
または修飾核酸との接触の結果として、その発現が細胞、組織、または生物内で誘起され
るサイトカインの１つ以上のレベルまたは量（またはパネル）に対する比率の測定である
。そのような比率は、本明細書において、タンパク質：サイトカイン比または「ＰＣ」比
と称される。ＰＣ比が高いほど、修飾核酸（測定されるタンパク質をコードするポリヌク
レオチド）の効果がより高い。本発明のサイトカインによる好ましいＰＣ比は、１を超え
る、１０を超える、１００を超える、１０００を超える、１０，０００を超える、または
それ以上であり得る。異なるまたは未修飾の構築物の修飾核酸よりも高いＰＣ比を有する
修飾核酸が、好ましい。
ＰＣ比は、ポリヌクレオチドに存在する修飾の割合（％）によってさらに評価され得る
。例えば、１００％修飾された核酸に対して正規化され、サイトカイン（もしくはリスク
）の機能またはサイトカインプロファイルとしてのタンパク質産生が、判定され得る。
一実施形態において、本発明は、修飾核酸（ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍ
ｍＲＮＡ）のＰＣ比を比較することで、化学、サイトカイン、または修飾の割合（％）に
わたって、任意の特定の修飾ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの相対的
効果を決定するための方法を提供する。
増加したタンパク質産生および減少した免疫刺激可能性を維持する、様々なレベルの核
酸塩基置換を含有するｍｍＲＮＡが産生され得る。任意の修飾ヌクレオチドのその天然に
生じるヌクレオチド対応物に対する相対的割合（％）は、ＩＶＴ反応中に変化し得る（例
えば、１００、５０、２５、１０、５、２．５、１、０．１、０．０１％の５メチルシチ
ジン使用対シチジン；１００、５０、２５、１０、５、２．５、１、０．１、０．０１％
のシュードウリジンまたはＮ１−メチル−シュードウリジン使用対ウリジン）。また、２
つ以上の異なるヌクレオチドを同じ塩基に対して使用することによる異なる比率（例えば
、シュードウリジンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンの異なる比率）を利用するｍ
ｍＲＮＡを作製することもできる。ｍｍＲＮＡは、同時に、５メチルシチジン／シチジン
およびシュードウリジン／Ｎ１−メチル−シュードウリジン／ウリジンの比率等の１つを
超える「塩基」位置における混合した比率で作製されることもできる。修飾ヌクレオチド
の変化した比率で修飾ｍＲＮＡを使用することは、化学的修飾ヌクレオチドへの可能な曝
露の低減において、有益であり得る。最後に、タンパク質産生もしくは免疫刺激可能性の
いずれか、またはその両方を調節するｍｍＲＮＡへの修飾ヌクレオチドの位置的な導入も
また可能である。これらの改善された特性を実証するそのようなｍｍＲＮＡの能力を、（
本明細書に記載のＰＢＭＣアッセイ等のアッセイを用いて）インビトロで評価することが
でき、また、ｍｍＲＮＡでコードされたタンパク質の産生およびサイトカイン等の自然免
疫認識のメディエーターの両方の測定を通してインビボで評価することもできる。
別の実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと、その未
修飾対応物との相対的免疫原性は、未修飾ヌクレオチドまたは参照化合物の所与の量と同
じ程度の上記応答のうちの１つを誘発するのに必要とされるポリヌクレオチド、一次構築
物、またはｍｍＲＮＡの量を決定することによって、決定することができる。例えば、ポ
リヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡよりも２倍多いポリヌクレオチド、一次
構築物、またはｍｍＲＮＡが同じ応答を誘発するために必要とされる場合、そのポリヌク
レオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、未修飾ヌクレオチドまたは参照化合物より
も２倍低い免疫原性である。
別の実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと、その未
修飾対応物との相対的免疫原性は、同じ量の未修飾ヌクレオチドまたは参照化合物に対す
るポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの投与に応じて分泌されるサイトカ
イン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮα、ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１αもしく
はβ、ＩＬ−６、ＩＦＮ−β、またはＩＬ−８）の量を決定することによって、決定され
る。例えば、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの２分の１のサイトカイ
ンが分泌される場合、そのポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、未修飾
ヌクレオチドよりも２倍低い免疫原性である。別の実施形態において、刺激のバックグラ
ウンドレベルは、上記の方法において免疫原性を算出する前に減算する。
細胞内、または細胞の集団における免疫応答の滴定、低減、または排除を実施するため
の方法がまた本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、細胞は異なる用量の
同じポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと接触させられ、用量応答が評価
される。いくつかの実施形態において、細胞は、同じまたは異なる用量でいくつかの異な
るポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと接触させられ、所望の効果をもた
らすための最適な組成物を決定する。免疫応答に関して、所望の効果は、細胞の免疫応答
を回避すること、逃れること、または低減させることであり得る。所望の効果は、タンパ
ク質産生の効率を変化させることでもあり得る。
本発明のポリヌクレオチド、一時構築物および／またはｍｍＲＮＡは、参照により全体
が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１３００３４７５号に記載の方法を用いて
免疫応答を低減するために使用されてもよい。
免疫応答の活性化：ワクチン
さらに、ある特定の修飾ヌクレオシド、またはその組み合わせは、本発明の腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡに導入されると、自然免疫応答を活性
化する。そのような活性化分子は、ポリペプチドおよび／または他のワクチンと組み合わ
せられる場合、アジュバントとして有用である。ある特定の実施形態において、活性化分
子は、ワクチンとして有用であるポリペプチド配列をコードする翻訳可能領域を含有し、
このようにして、自己アジュバントとなる能力を提供する。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／ま
たはｍｍＲＮＡは、免疫原をコードし得る。免疫原をコードする腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、一次構築物、および／またはｍｍＲＮＡの送達は、免疫応答を活性化し得る。非限
定的な例として、免疫原をコードする腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および
／またはｍｍＲＮＡは、複数の自然応答経路を誘起するように細胞へ送達され得る（参照
により全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２００６３７７号を参照の
こと）。別の非限定的な例として、免疫原をコードする本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、脊椎動物に対する免疫原性となるのに十分に大
きい投与量で脊椎動物に送達され得る（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み
込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２００６３７２号および同第ＷＯ２０１２００６３６９
号を参照のこと）。
本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、ワクチンの
ためのポリペプチド配列をコードし得、それは阻害剤をさらに含んでもよい。阻害剤は、
抗原提示を損なうか、および／または当技術分野で既知の様々な経路を阻害し得る。非限
定的な例として、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ
は、抗原提示を損なうことができる阻害剤と組み合わせてワクチンに使用されてもよい（
各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０８
９２２５号および同第ＷＯ２０１２０８９３３８号を参照のこと）。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、自己複製ＲＮＡであり得る。自己複製ＲＮＡ分子は、ＲＮＡ送達の効率および
封入された遺伝子産物の発現を向上させることができる。一実施形態において、腫瘍学関
連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載され、かつ／ま
たは当技術分野で既知の少なくとも１つの修飾を含み得る。一実施形態において、自己複
製ＲＮＡは、自己複製ＲＮＡが感染性ウイルス粒子の産生を誘導しないように設計され得
る。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、各々が参照によりそれらの全体が本明細書
に組み込まれる、米国公開第ＵＳ２０１１０３００２０５号および国際公開第ＷＯ２０１
１００５７９９号に記載の方法によって設計されてもよい。
一実施形態において、本発明の自己複製ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲ
ＮＡは、免疫応答を生じさせ得るタンパク質をコードし得る。非限定的な例として、腫瘍
学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、少なくとも１つの抗原をコ
ードし得る自己複製ｍＲＮＡであり得る（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組
み込まれる、米国公開第ＵＳ２０１１０３００２０５号、ならびに国際公開第ＷＯ２０１
１００５７９９号、同第ＷＯ２０１３００６８３８号、および同第ＷＯ２０１３００６８
４２号を参照のこと）。
一実施形態において、本発明の自己複製ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲ
ＮＡは、本明細書に記載されるか、または当技術分野で既知の方法を用いて製剤化するこ
とができる。非限定的な例として、自己複製ＲＮＡは、Ｇｅａｌｌ ｅｔ ａｌ（Ｎｏｎ
ｖｉｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｅｌｆ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ＲＮＡ ｖａ
ｃｃｉｎｅｓ，ＰＮＡＳ ２０１２；ＰＭＩＤ：２２９０８２９４）に記載の方法によっ
て送達用に製剤化されてもよい。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、両親媒性および／または免疫原性の両親媒性ペプチドをコードし得る。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡの製剤は、両親媒性および／または免疫原性の両親媒性ペプチドをさらに含んでも
よい。非限定的な例として、両親媒性および／または免疫原性の両親媒性ペプチドを含む
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、各々が参照によりそれ
らの全体が本明細書に組み込まれる、米国公開第ＵＳ２０１１０２５０２３７号、ならび
に国際公開第ＷＯ２０１０００９２７７号および同第ＷＯ２０１０００９０６５号に記載
されるように製剤化されてもよい。
一実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、免疫刺激性であり得る。非限定的な例として、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、
一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、陽性センスまたは陰性センス鎖ＲＮＡウイルスゲノム
のすべてまたは一部をコードし得る（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込
まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０９２５６９号および米国公開第ＵＳ２０１２０１７７
７０１号を参照のこと）。別の非限定的な例において、本発明の免疫刺激性ポリヌクレオ
チド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡは、本明細書に記載され、かつ／または当技術分野
で既知の投与用賦形剤を用いて製剤化されてもよい（各々が参照によりそれらの全体が本
明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０６８２９５号および米国公開第ＵＳ２
０１２０２１３８１２号を参照のこと）。
一実施形態において、本明細書に記載の方法によって製剤化されたワクチンの応答は、
治療的効果を誘導するための様々な化合物の添加によって向上され得る。非限定的な例と
して、ワクチン製剤は、ＭＨＣＩＩ結合ペプチドまたはＭＨＣＩＩ結合ペプチドと類似の
配列を有するペプチドを含んでもよい（各々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み
込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０２７３６５号、同第ＷＯ２０１１０３１２９８号、
および米国公開第ＵＳ２０１２００７０４９３号、同第ＵＳ２０１１０１１０９６５号を
参照のこと）。別の例として、ワクチン製剤は、対象においてニコチン残基に対する抗体
応答を生成し得る修飾ニコチン化合物を含んでもよい（各々が参照によりそれらの全体が
本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１２０６１７１７号および米国公開第ＵＳ
２０１２０１１４６７７号を参照のこと）。
天然に生じる変異体
別の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、および／またはｍ
ｍＲＮＡを用いて、増加した生物学的活性、改善された患者予後、または保護機能等を含
む、改善された疾患修飾活性を有する天然に生じるタンパク質の変異形を発現することが
できる。多くのそのような修飾遺伝子が、哺乳動物において記載されている（すべてが参
照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｎａｄｅａｕ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏ
ｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２００３ １３：２９０−２９
５；Ｈａｍｉｌｔｏｎ ａｎｄ Ｙｕ，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ．２０１２；８：ｅ１００
２６４４；Ｃｏｒｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９９４
７：１８０−１８４）。ヒトにおける例には、アポＥ２タンパク質、アポＡ−Ｉ変異形タ
ンパク質（アポＡ−Ｉ Ｍｉｌａｎｏ、アポＡ−Ｉ Ｐａｒｉｓ）、機能亢進性第ＩＸ因
子タンパク質（第ＩＸ因子Ｐａｄｕａ Ａｒｇ３３８Ｌｙｓ）、トランスサイレチン変異
体（ＴＴＲ Ｔｈｒ１１９Ｍｅｔ）が挙げられる。アポＥ２（ｃｙｓ１１２、ｃｙｓ１５
８）の発現は、アルツハイマー病および心血管疾患等の可能性のある他の状態に対する易
罹患性を低減することによって、他のアポＥアイソフォーム（アポＥ３（ｃｙｓ１１２、
ａｒｇ１５８）およびアポＥ４（ａｒｇ１１２、ａｒｇ１５８））と比較して保護を与え
ることが示されている（すべてが参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｃ
ｏｒｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９９４ ７：１８０−
１８４、Ｓｅｒｉｐａ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．２０１１
１４：４９１−５００、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１３
９：１０６−１１８）。アポＡ−Ｉ変異形の発現は、低減されたコレステロールを伴っ
た（すべてが参照により全体が本明細書に組み込まれる、ｄｅＧｏｍａ ａｎｄ Ｒａｄ
ｅｒ，２０１１ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｌ ８：２６６−２７１、Ｎｉｓ
ｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００３ ＪＡＭＡ ２９０：２２９２−２３００）。ある特定
の集団におけるアポＡ−Ｉのアミノ酸配列は、アポＡ−Ｉ Ｍｉｌａｎｏにおいて（Ａｒ
ｇ１７３がＣｙｓに変更された）、およびアポＡ−Ｉ Ｐａｒｉｓにおいて（Ａｒｇ１５
１がＣｙｓに変更された）、システインに変更された。位置Ｒ３３８Ｌ（ＦＩＸ Ｐａｄ
ｕａ）における第ＩＸ因子突然変異は、約１０倍に増加された活性を有する第ＩＸ因子タ
ンパク質をもたらす（すべてが参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｉｍｉｏｎ
ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２００９ ３６１：１６７１−１６７５
、Ｆｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１２ １２０：４５２１−４５２３、Ｃａ
ｎｔｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１２ １２０：４５１７−２０）。位置１
０４または１１９（Ａｒｇ１０４Ｈｉｓ、Ｔｈｒ１１９Ｍｅｔ）におけるトランスサイレ
チンの突然変異は、疾患をもたらすＶａｌ３０Ｍｅｔ突然変異も有する患者に保護を提供
することも示されている（すべてが参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｓａｒａ
ｉｖａ，Ｈｕｍ Ｍｕｔａｔ．２００１ １７：４９３−５０３、ＤＡＴＡ ＢＡＳＥ
ＯＮ ＴＲＡＮＳＴＨＹＲＥＴＩＮ ＭＵＴＡＴＩＯＮＳ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｂ
ｍｃ．ｕｐ．ｐｔ／ｍｊｓａｒａｉｖａ／ｔｔｒｍｕｔ．ｈｔｍｌ）。それぞれ、Ｍｅｔ
１１９およびＨｉｓ１０４突然変異体を有するポルトガル人および日本人のＭｅｔ３０患
者における臨床所見および症状の重症度の差異が、分子にさらなる安定性を与える非病原
性変異体によって発現される明らかな保護作用を伴い観察される（すべてが参照により全
体が本明細書に組み込まれる、Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．１９９６ Ｎｅｕｒｏｍｕｓ
ｃｕｌａｒ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（Ｓｕｐｐｌ）６：Ｓ２０、Ｔｅｒａｚａｋｉ ｅｔ
ａｌ．１９９９．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２６４：３
６５−３７０）。これらの保護ＴＴＲ対立遺伝子をコードする修飾ｍＲＮＡは、ＴＴＲア
ミロイド症患者において発現され得、それにより病原性変異体ＴＴＲタンパク質の効果を
低減させる。
主溝相互作用パートナー
本明細書に記載されるように、「主溝相互作用パートナー」という表現は、ヌクレオチ
ドまたは核酸の主溝の面との相互作用、例えば結合を通して、ＲＮＡリガンドを検出し、
それに応答するＲＮＡ認識受容体を指す。したがって、本明細書に記載のポリヌクレオチ
ド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ等の修飾ヌクレオチドまたは核酸を含むＲＮＡリガン
ドは、主溝結合パートナーとの相互作用を減少させ、ゆえに、自然免疫応答を減少させる
。
例示の主溝相互作用、例えば結合パートナーには、以下のヌクレアーゼおよびヘリカー
ゼを含むが、これらに限定されない。膜内において、ＴＬＲ（トール様受容体（（Ｔｏｌ
ｌ−ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ））３、７、および８は、一本鎖および二重鎖ＲＮＡに
応答することができる。細胞質内において、ＤＥＸ（Ｄ／Ｈ）ヘリカーゼおよびＡＴＰア
ーゼのスーパーファミリー２クラスのメンバーは、抗ウイルス応答を開始するＲＮＡを感
知することができる。これらのヘリカーゼには、ＲＩＧ−Ｉ（レチノイン酸誘導性遺伝子
（ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｇｅｎｅ）Ｉ）およびＭＤＡ５（
メラノーマ分化関連遺伝子（ｍｅｌａｎｏｍａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ａｓ
ｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ）５）を含む。他の例には、遺伝学と生理学の研究所（ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）２（ＬＧＰ
２）、ＨＩＮ−２００ドメイン含有するタンパク質、またはヘリカーゼドメイン含有タン
パク質が挙げられる。
病原性生物または疾患細胞の標的化
細胞増殖抑制性または細胞傷害性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、一次構
築物、またはｍｍＲＮＡを用いて、細菌、酵母、原虫、蠕虫等の病原性微生物または癌細
胞等の疾患細胞を標的化するための方法が本明細書に提供される。好ましくは、導入され
るｍＲＮＡは、治療の見込まれるオフターゲット効果を低減させるために、標的病原性生
物において排他的または優先的に翻訳された修飾ヌクレオシドまたは他の核酸配列修飾を
含む。そのような方法は、血液、精液、卵子、ならびに胚、組織、および器官を含む移植
材料を含む任意の生体材料で見られる病原性生物を排除するか、または疾患細胞を死滅さ
せるのに有用である。
バイオプロセシング
本明細書に提供される方法は、細胞培養プロセスにおけるタンパク質産物収率を向上さ
せるのに有用であり得る。複数の宿主細胞を含有する細胞培養において、本明細書に記載
のポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの導入は、対応する未修飾核酸と比
べて増加したタンパク質産生効率をもたらす。そのような増加したタンパク質産生効率は
、例えば、増加した細胞トランスフェクション、ポリヌクレオチド、一次構築物、または
ｍｍＲＮＡからの増加したタンパク質翻訳、減少した核酸分解、および／または低減され
た宿主細胞の自然免疫応答を示すことによって実証することができる。タンパク質産生は
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定することができ、タンパク質活性
は当技術分野で既知の様々な機能的アッセイによって測定することができる。タンパク質
産生は、連続的または流加（ｂａｔｃｈ−ｆｅｄ）哺乳類プロセスにおいて生成され得る
。
さらに、潜在的対象の細胞株または細胞株の収集物において、特定のポリペプチド、特
に既知の活性を有する参照タンパク質のタンパク質変異形等の目的とするポリペプチドの
発現を最適化することは有用である。一実施形態において、複数の標的細胞型を提供する
ことによって、および独立して、その複数の標的細胞型のそれぞれと目的とするポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡとを接触させること
によって、標的細胞において目的とするポリペプチドの発現を最適化する方法が提供され
る。細胞は、同時にまたは順次に、２つ以上のポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍ
ｍＲＮＡでトランスフェクトされ得る。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法の複数ラウンドを用いて、目的と
する１つ以上の核酸またはタンパク質の増加した発現を有する細胞を得ることができる。
例えば、細胞は、目的とする核酸またはタンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオ
チド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡでトランスフェクトされてもよい。細胞は、再び単
離される前に目的とする核酸またはタンパク質をコードする１つ以上の他の核酸によるト
ランスフェクションのさらなるラウンドに供される前に、本明細書に記載の方法に従って
単離されてもよい。この方法は、タンパク質の複合体、同じまたは関連する生体経路中の
核酸またはタンパク質、互いの上流または下流で作用する核酸またはタンパク質、互いに
調節、活性化、または抑制機能を有する核酸またはタンパク質、機能または活性に関して
互いに依存する核酸またはタンパク質、あるいは相同性を共有する核酸またはタンパク質
の増加した発現を有する細胞を生成するのに有用であり得る。
さらに、培養条件を変化させ、タンパク質産生効率を増加させることができる。続いて
、複数の標的細胞型における目的とするポリペプチドの存在および／またはレベルを検出
および／または定量し、ポリペプチドの発現に関する効率的な標的細胞および細胞培養条
件の選択により、その最適化を可能にする。そのような方法は、しばしば効率的なタンパ
ク質産生を複雑化する状況である、ポリペプチドが１つ以上の翻訳後修飾を含有するか、
または実質的な三次構造を有する場合に、特に有用である。
一実施形態において、本発明の方法で用いられる細胞は、培養され得る。細胞は、懸濁
液中で、または接着培養物として培養され得る。細胞は、バイオリアクター、細胞バッグ
、ウェーブバッグ、培養プレート、フラスコ、および当業者に周知の他の容器を含むが、
これらに限定されない、様々な容器内で培養され得る。細胞は、ＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎ、カタログ番号１２４４０−５３）または既知組成培地配合物を含む、これらに
限定されない任意の他の好適な培地内で培養され得る。また、温度や大気組成等の細胞培
養に好適な周囲条件は、当業者によく知られている。本発明の方法は、タンパク質産生に
使用するのに好適な任意の細胞で使用することができる。
本発明は、例えば、インビトロ、エクスビボ、インサイツ、またはインビボで修飾核酸
の標的細胞集団への反復導入（例えば、トランスフェクション）を提供する。例えば、同
じ細胞集団への接触が、１回以上（２、３、４、５、または５回を超える等）反復され得
る。いくつかの実施形態において、細胞集団を腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物
、またはｍｍＲＮＡと接触するステップは、細胞集団におけるタンパク質翻訳の既定の効
率を達成するのに十分であるように数回反復される。標的細胞集団の頻繁に低減された細
胞傷害性を核酸修飾によって提供したと仮定すると、本明細書に提供されるように、反復
トランスフェクションが多様な一連の細胞型において、および多様な組織内で達成可能で
ある。
一実施形態において、本発明のバイオプロセシング方法を用いて、抗体またはその機能
的断片を産生することができる。機能的断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ
ｖドメイン、ｓｃＦｖ、または二特異性抗体を含み得る。それらは、相補性決定領域（Ｃ
ＤＲ）を含む任意の領域において可変であり得る。一実施形態において、ＣＤＲ３領域に
は完全な多様性がある。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲ３領域内を除いて実質的
に保存される。
起源がヒト病原性であるか非ヒトであるかにかかわらず、任意の生体分子に結合するか
、またはそれに会合する抗体が作製され得る。病原体は、非ヒト哺乳動物、臨床標本、ま
たは腫瘍学関連または医薬品材料等の市販製品に存在し得る。それらは、臨床標本または
任意の生物からの組織試料を含む任意の標本または試料にも結合し得る。
いくつかの実施形態において、接触ステップは、６時間時間、１２時間、２４時間、３
６時間、４８時間、７２時間、８４時間、９６時間、および１０８時間からなる群から選
択される頻度で、ならびに２０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、または１００ｎ
Ｍ未満の濃度で、複数回反復される。組成物は、１ｍＭ未満、５ｍＭ未満、１０ｍＭ未満
、１００ｍＭ未満、または５００ｍＭ未満でも投与され得る。
いくつかの実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍ
ＲＮＡは、細胞当たり５０分子、１００分子／細胞、２００分子／細胞、３００分子／細
胞、４００分子／細胞、５００分子／細胞、６００分子／細胞、７００分子／細胞、８０
０分子／細胞、９００分子／細胞、１０００分子／細胞、２０００分子／細胞、または５
０００分子／細胞の量で添加される。
他の実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ
は、０．０１ｆｍｏｌ／１０６細胞、０．１ｆｍｏｌ／１０６細胞、０．５ｆｍｏｌ／１
０６細胞、０．７５ｆｍｏｌ／１０６細胞、１ｆｍｏｌ／１０６細胞、２ｆｍｏｌ／１０
６細胞、５ｆｍｏｌ／１０６細胞、１０ｆｍｏｌ／１０６細胞、２０ｆｍｏｌ／１０６細
胞、３０ｆｍｏｌ／１０６細胞、４０ｆｍｏｌ／１０６細胞、５０ｆｍｏｌ／１０６細胞
、６０ｆｍｏｌ／１０６細胞、１００ｆｍｏｌ／１０６細胞、２００ｆｍｏｌ／１０６細
胞、３００ｆｍｏｌ／１０６細胞、４００ｆｍｏｌ／１０６細胞、５００ｆｍｏｌ／１０
６細胞、７００ｆｍｏｌ／１０６細胞、８００ｆｍｏｌ／１０６細胞、９００ｆｍｏｌ／
１０６細胞、および１ｐｍｏｌ／１０６細胞からなる群から選択される濃度で添加される
。
いくつかの実施形態において、そこでの生体産物の産生は、細胞密度、ｐＨ、酸素レベ
ル、グルコースレベル、乳酸レベル、温度、およびタンパク質産生からなる群から選択さ
れるパラメータ等の１つ以上の測定可能なバイオプロセスパラメータを監視することによ
って検出される。タンパク質産生を比生産性（ＳＰ）（溶液中で非相同的に発現されるポ
リペプチド等の産物の濃度）として測定することができ、ｍｇ／Ｌまたはｇ／Ｌで示すこ
とができ、別の方法として、比生産性をｐｇ／細胞／日で示してもよい。ＳＰの増加は、
２つの既定の条件下（例えば、修飾ｍＲＮＡ（複数可）で処理されていない対照と比較し
た場合）で産生される産物の濃度の絶対的または相対的増加を指すことができる。
細胞
一実施形態において、細胞は、哺乳類細胞、細菌性細胞、植物、微生物、藻類および真
菌細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、細胞は、ヒト、マウス
、ラット、ヤギ、ウマ、ウサギ、ハムスター、またはウシ細胞等であるが、これらに限定
されない、哺乳類細胞である。さらなる実施形態において、細胞は、ＨｅＬａ、ＮＳ０、
ＳＰ２／０、ＫＥＫ ２９３Ｔ、Ｖｅｒｏ、Ｃａｃｏ、Ｃａｃｏ−２、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ
−１、ＣＯＳ−７、Ｋ５６２、ジャーカット、ＣＨＯ−Ｋ１、ＤＧ４４、ＣＨＯＫ１ＳＶ
、ＣＨＯ−Ｓ、Ｈｕｖｅｃ、ＣＶ−１、Ｈｕｈ−７、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、２９
３、Ａ５４９、ＨｅｐＧ２、ＩＭＲ−９０、ＭＣＦ−７、Ｕ−２０Ｓ、Ｐｅｒ．Ｃ６、Ｓ
Ｆ９、ＳＦ２１、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられるが、こ
れらに限定されない株化細胞に由来し得る。
ある特定の実施形態において、細胞は、クリソスポリウム細胞、アスペルギルス細胞、
トリコデルマ細胞、ディクチオステリウム細胞、カンジダ細胞、サッカロミセス細胞、シ
ゾサッカロミセス細胞、およびペニシリウム細胞等であるが、これらに限定されない、真
菌細胞である。
ある特定の実施形態において、細胞は、大腸菌、枯草菌、またはＢＬ２１細胞等である
が、これらに限定されない、細菌性細胞である。本発明の方法によってトランスフェクト
される一次および二次細胞を多様な組織から得ることができ、培養下で維持され得るすべ
ての細胞型を含むが、これらに限定されない。例えば、本発明の方法によってトランスフ
ェクトされ得る一次および二次細胞には、線維芽細胞、ケラチノサイト、上皮細胞（例え
ば、乳腺上皮細胞、腸上皮細胞）、内皮細胞、グリア細胞、神経細胞、血液の形成要素（
例えば、リンパ球、骨髄細胞）、筋肉細胞、およびこれらの体細胞型の前駆体が挙げられ
るが、これらに限定されない。また、一次細胞を同種または別の種（例えば、マウス、ラ
ット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、トリ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）の供与体から得る
こともできる。
精製および単離
当業者であれば、培養細胞から目的とするタンパク質を精製または単離するために使用
する方法を決定できるはずである。一般に、これは、親和性結合または非親和性精製を使
用する捕獲法を通して行われる。目的とするタンパク質が培養細胞によって分泌されない
場合、次いで、精製または単離の前に培養細胞の溶解が行われるべきである。本発明中の
細胞培養培地構成成分ならびに消泡化合物および他の栄養剤および栄養補助剤等の細胞培
養添加物、細胞、細胞残屑、宿主細胞タンパク質、ＤＮＡ、ウイルス等とともに目的とす
るタンパク質を含有する清浄にされていない細胞培養液を用いてもよい。プロセスは、バ
イオリアクター自体において行われ得る。流体は、ｐＨ、温度、もしくは他の刺激特徴等
の所望の刺激に予め調整されるか、もしくは流体は、ポリマー（複数可）の添加に応じて
調整されるかのいずれかであってもよく、またはポリマー（複数可）が、ポリマーを流体
中で可溶化するために必要とされる刺激条件に必要なパラメータに適正に調整された担体
液体に添加されてもよい。流体を用いてポリマーを完全に循環させることができ、次いで
、刺激を適用し（ｐＨ、温度、塩濃度等の変化）、所望のタンパク質およびポリマー（複
数可）沈殿物を溶液中から取り出すことができる。ポリマーおよび所望のタンパク質（複
数可）を残りの流体から分離することができ、任意に１回以上洗浄し、任意の捕捉された
、または緩く結合された混入物質を除去してもよい。次いで、所望のタンパク質が、例え
ば溶出等によってポリマー（複数可）から回収される。好ましくは、溶出は、所望のタン
パク質の選択された溶出中、ポリマーがその沈殿形態中に残存し、任意の不純物をそこに
保持するような条件下で行われ得る。ポリマーおよびタンパク質ならびに任意の不純物は
、水または緩衝液等の新たな流体中に可溶化されてもよく、タンパク質は、ポリマーまた
は不純物のものを上回るタンパク質の優先性および選択性を有する親和性、イオン交換、
疎水性、またはいくつかの他の種類のクロマトグラフィー等によって回収され得る。次い
で、溶出されたタンパク質が回収され、適切な場合、バッチ様（ｂａｔｃｈ ｌｉｋｅ）
ステップまたは連続フロースルーステップのいずれかのさらなるプロセシングステップに
供され得る。
別の実施形態において、潜在的対象の細胞株または細胞株の収集物において、特定のポ
リペプチド、特に既知の活性を有する参照タンパク質のタンパク質変異形等の目的とする
ポリペプチドの発現を最適化することは有用であり得る。一実施形態において、複数の標
的細胞型を提供することによって、および独立して、その複数の標的細胞型のそれぞれと
ポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡとを接触させることによって、標的細胞において
目的とするポリペプチドの発現を最適化する方法が提供される。さらに、培養条件を変化
させ、タンパク質産生効率を増加させることができる。続いて、複数の標的細胞型におけ
る目的とするポリペプチドの存在および／またはレベルを検出および／または定量し、目
的とするポリペプチドの発現に関する効率的な標的細胞および細胞培養条件の選択により
、その最適化を可能にする。そのような方法は、しばしば効率的なタンパク質産生を複雑
化する、目的とするポリペプチドが１つ以上の翻訳後修飾を含有するか、または実質的な
三次構造を有する場合に、有用であり得る。
タンパク質回収
目的とするタンパク質は、好ましくは、分泌されるポリペプチドとして培養培地から回
収され得るか、または分泌シグナルを伴わずに発現される場合、宿主細胞ライセートから
回収され得る。目的とするタンパク質の実質的に均一の調節物が得られる方法で、目的と
するタンパク質を他の組換えタンパク質および宿主細胞タンパク質から精製しなければな
らない場合がある。細胞および／または粒状細胞残屑は、培養培地またはライセートから
除去され得る。次いで、例えば、免疫親和性またはイオン交換カラム上の分画、エタノー
ル沈殿、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）クロマトグラ
フィー、シリカ上またはＤＥＡＥ等のカチオン交換樹脂上でのクロマトグラフィーによっ
て、目的とする産物を混入物質可溶性タンパク質、ポリペプチドおよび核酸から精製する
ことができる。宿主細胞によって非相同的に発現されるタンパク質の精製方法は、当技術
分野でよく知られている。
本明細書に記載の方法および組成物を用いて、哺乳類対象において、内因性アゴニスト
生物応答を減弱するか、もしくは遮断する、および／または受容体もしくはシグナル伝達
分子を拮抗することができるタンパク質を産生することができる。例えば、ＩＬ−１２お
よびＩＬ−２３受容体シグナル伝達が、多発性硬化症等の慢性自己免疫障害ならびに関節
リウマチ、乾癬、狼瘡エリテマトーデス、強直性脊椎炎、およびクローン病（Ｃｈｒｏｎ
’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）等の炎症性疾患において増強され得る（Ｋｉｋｌｙ Ｋ，Ｌｉｕ
Ｌ，Ｎａ Ｓ，Ｓｅｄｇｗｉｃｈ ＪＤ（２００６）Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１８（６）：６７０−５）。別の実施形態において、核酸は、ケモカイン受容体のア
ンタゴニストをコードする。ケモカイン受容体ＣＸＣＲ−４およびＣＣＲ−５が、ＨＩＶ
が宿主細胞内に進入するために必要とされる（Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ
Ｆ ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ．Ｏｃｔ ３；３８３（６５９９）：４００
）。
遺伝子サイレンシング
本明細書に記載の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、細
胞集団における１つ以上の標的遺伝子の発現を発現停止させる（すなわち、予防するか、
または大幅に低減させる）ために有用である。配列特異的ヒストンＨ３メチル化を指示す
ることができる目的とするポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、一次構築物、ま
たはｍｍＲＮＡが、ポリペプチドが翻訳され、ヒストンＨ３メチル化および続ヘテロクロ
マチン形成を介して標的遺伝子の遺伝子転写が低減されるような条件下の集団における細
胞内に導入される。いくつかの実施形態において、サイレンシング機構は、哺乳類対象中
に存在する細胞集団上で行われる。非限定的な例として、有用な標的遺伝子は、その中で
哺乳類対象が、異常なキナーゼ活性の結果である骨髄増殖性疾患から被る変異体標的遺伝
子を発現する、変異ヤヌスキナーゼ−２ファミリーメンバーである。
腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡとＲＮＡｉ薬剤との同時
投与もまた、本明細書に提供される。
生体経路の調節
細胞内に導入される急速翻訳ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡは、標
的生体経路を調節する所望の機構を提供する。そのような調節には、所与の経路のアンタ
ゴニズムまたはアゴニズムが含まれる。一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチ
ド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡが細胞内に局在化され、ポリペプチドが、腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡから細胞内で翻訳されることができ、
そのポリペプチドが、生体経路におけるポリペプチド機能の活性を阻害するような条件下
で、細胞を目的とするポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、一次構築物、または
ｍｍＲＮＡを含む有効量の組成物と接触させることによって、細胞内の生体経路を拮抗す
るための方法が、提供される。例示の生体経路は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、
狼瘡エリテマトーデス、強直性脊椎炎、大腸炎、またはクローン病等の自己免疫または炎
症性障害において欠損しているものである。特に、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３シグナル
伝達経路のアンタゴニズムは、特に有用性がある（参照によりその全体が本明細書に組み
込まれる、Ｋｉｋｌｙ Ｋ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｎａ Ｓ，Ｓｅｄｇｗｉｃｋ ＪＤ（２００６
）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（６）：６７０−５）を参照のこと）。
さらに、ケモカイン受容体のアンタゴニストをコードする腫瘍学関連ポリヌクレオチド
、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが提供される。ケモカイン受容体ＣＸＣＲ−４およびＣ
ＣＲ−５は、例えば、ＨＩＶが宿主細胞内に進入するために必要とされる（参照によりそ
の全体が本明細書に組み込まれる、Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ Ｆ ｅｔ
ａｌ，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ．Ｏｃｔ ３；３８３（６５９９）：４００）。
あるいは、核酸が細胞内に局在化され、組換えポリペプチドが核酸から細胞内で翻訳さ
れることができ、その組換えポリペプチドが、生体経路におけるポリペプチド機能の活性
を誘導するような条件下で、細胞を組換えポリペプチドをコードする有効量の腫瘍学関連
ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡと接触させることによって、細胞内の
生体経路を刺激する方法が提供される。例示の刺激された生体経路には、細胞運命決定を
調節する経路を含む。そのような刺激化（ａｇｏｎｉｚａｔｉｏｎ）は、可逆性であるか
、または不可逆性である。
細胞表面上でのリガンドまたは受容体の発現
本明細書に記載のいくつかの態様および態様の実施形態において、本明細書に記載の腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡを用いて、細胞の表面上（例
えば、ホーミング部分）でリガンドまたはリガンド受容体を発現することができる。細胞
表面に結合されるリガンドまたはリガンド受容体部分は、細胞がインビボで組織または薬
剤との所望の生物相互作用を有することを可能にする。リガンドは、抗体、抗体断片、ア
プタマー、ペプチド、ビタミン、炭水化物、タンパク質またはポリペプチド、受容体、例
えば細胞表面受容体、接着分子、糖タンパク質、糖残基、治療剤、薬物、グリコサミノグ
リカン、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。例えば、リガンドは、癌細胞特異
的抗原を認識する抗体であってもよく、腫瘍細胞と優先的に相互作用することができる細
胞を与え、修飾細胞の腫瘍特異的局在化を可能にする。好ましいリガンドは治療される組
織の外側の面で標的分子と相互作用することができるため、リガンドは、細胞組成物の治
療される組織内で蓄積する能力を与えることができる。他の組織との制限された交差反応
性を有するリガンドが、一般的に好ましい。
いくつかの場合において、リガンドは、細胞が特定の組織を標的化するか、または特定
のリガンドと相互作用することを可能にするホーミング部分として作用することができる
。そのようなホーミング部分には、：Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ’
断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単一ドメイン抗体、ラクダ化抗体および抗体断片、ヒト化抗
体および抗体断片、および前述の多価の別形態が挙げられるが、これらに限定されない、
特異的結合ペア、抗体、モノクローナル抗体、または誘導体またはそれらの類似体の任意
のメンバー：ジスルフィド安定化Ｆｖ断片、ｓｃＦｖタンデム（（ＳＣＦＶ）２断片）等
の単一特異性または二重特異性抗体、典型的には、共有結合されるか、または安定化され
る（すなわち、ロイシンジッパーまたはヘリックス安定化されている）ｓｃＦｖ断片であ
る二特異性抗体、三特異性抗体（ｔｒｉｂｏｄｉｅｓ）、または四特異性抗体（ｔｅｔｒ
ａｂｏｄｉｅｓ）が挙げられるが、これらに限定されない、多価結合試薬；ならびに例え
ば、アプタマー、受容体、および融合タンパク質を含む、他のホーミング部分を含み得る
が、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ホーミング部分は、細胞標的化特異性の調整を可能にす
ることができる表面結合抗体であり得る。これは、高度特異的抗体が、所望の標的化部位
の目的とするエピトープに対して産生され得るため、特に有用である。一実施形態におい
て、複数の抗体が、細胞の表面上に発現され、各抗体は所望の標的に対する異なる特異性
を有することができる。そのような手法は、ホーミング相互作用の結合力および特異性を
増加させることができる。
当業者であれば、細胞の所望の局在化または機能に基づいて任意のホーミング部分を選
択することができ、例えば、タモキシフェン等のエストロゲン受容体リガンドは、細胞を
細胞表面上に増加したエストロゲン受容体数を有するエストロゲン依存乳癌細胞に標的化
することができる。リガンド／受容体相互作用の他の非限定的な例としては、ＣＣＲＩ（
例えば、関節リウマチおよび／または多発性硬化症における炎症した関節組織または脳の
治療のため）、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８（例えば、リンパ節組織を標的化する）、ＣＣＲ６、
ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０（例えば、腸組織に標的化するため）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ１０（例
えば、皮膚を標的化するため）、ＣＸＣＲ４（例えば、一般的に向上された遊出のため）
、ＨＣＥＬＬ（例えば、炎症および炎症性障害、骨髄の治療のため）、α４β７（例えば
、腸粘膜標的化のため）、ＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１（例えば、内皮を標的化する）が挙
げられる。一般に、標的化（例えば、癌転移）に関与する任意の受容体は、本明細書に記
載の方法および組成物の用途において利用され得る。
細胞系譜の調節
標的哺乳類細胞における細胞運命の変化を誘導する方法が提供される。標的哺乳類細胞
は前駆体細胞であってもよく、変化は分化を系譜内に推進すること、またはそのような分
化を遮断することを含み得る。あるいは、標的哺乳類細胞は分化細胞であってもよく、細
胞運命変化は、脱分化を多能性前駆体細胞内に推進すること、または癌幹細胞への癌細胞
の脱分化等のそのような脱分化を遮断することを含む。細胞運命の変化が望まれる状況に
おいて、細胞運命誘導性ポリペプチドをコードする有効量のｍＲＮＡが、細胞運命の変化
が誘導されるような条件下で標的細胞に導入される。いくつかの実施形態において、修飾
ｍＲＮＡは、第１の表現型から第２の表現型へ細胞の亜集団を再プログラムするのに有用
である。そのような再プログラミングは、一時的または永久的であってもよい。
任意に、再プログラミングは、中間表現型をとるように標的細胞を誘導する。
さらに、本発明の方法は、高い効率のトランスフェクション、細胞を再トランスフェク
トする能力、および標的細胞内で産生される組換えポリペプチドの量の妥当性によって、
人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）を生成するのに特に有用である。さらに、本明細書に記
載の方法を用いて生成されたｉＰＳ細胞の使用は、テラトーマ形成の低減された発生率を
有することが予期される。
標的細胞集団における細胞分化を低減する方法もまた提供される。例えば、ポリペプチ
ドが翻訳され、かつ前駆体細胞の分化を低減するような条件下で、１つ以上の前駆体細胞
型を含有する標的細胞集団を、ポリペプチドをコードする有効量のポリヌクレオチド、一
次構築物、およびｍｍＲＮＡを有する組成物と接触する。非限定的な実施形態において、
標的細胞集団は、哺乳類対象における損傷組織または外科的処置を受けた組織を含む。前
駆体細胞は、例えば、間質前駆体細胞、神経前駆体細胞、または間葉系前駆体細胞である
。
具体的な実施形態において、１つ以上の分化因子Ｇａｔａ４、Ｍｅｆ２ｃ、およびＴｂ
ｘ４をコードするポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが提供される。これ
らのｍＲＮＡ生成因子が、線維芽細胞内に導入され、再プログラミングを心筋細胞に推進
する。そのような再プログラミングは、ｍＲＮＡ含有パッチまたは他の材料を損傷された
心臓組織と接触することによってインビボで行われ、心臓の再分化を容易にすることがで
きる。そのようなプロセスは、線維症とは対照的に心筋細胞発生を促進する。
細胞死の媒介
一実施形態において、ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ組成物を用い
て、細胞死受容体、細胞死受容体リガンド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させ
ることによって、細胞（例えば、癌細胞）内のアポトーシスを誘導することができる。こ
の方法は、任意の所望の細胞における細胞死を誘導するために使用することができ、細胞
が天然のアポトーシスシグナルを逃れる癌の治療において特に有用性を有する。
アポトーシスは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体／リガンドスーパーファミリーに属す
る、いくつかの「細胞死受容体」とそれらのリガンドとの間の複数の相互作用からなる最
終エフェクター機構に応じて収束する複数の独立したシグナル伝達経路によって誘導され
得る。最もよく特徴がわかっている細胞死受容体は、ＣＤ９５（「Ｆａｓ」）、ＴＮＦＲ
Ｉ（ｐ５５）、細胞死受容体３（ＤＲ３またはアポ３／ＴＲＡＭＯ）、ＤＲ４、およびＤ
Ｒ５（アポ２−ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）である。アポトーシスの最終エフェクター機構は、カ
スパーゼとして設計された一連のプロテイナーゼの活性化であり得る。これらのカスパー
ゼの活性化は、一連の生命細胞タンパク質の切断および細胞死をもたらす。細胞死受容体
／リガンド誘導性アポトーシスの分子機構は、当技術分野でよく知られている。例えば、
Ｆａｓ／ＦａｓＬ媒介性アポトーシスは、Ｃ末端デスドメイン（ＤＤ）を介してＦａｓ受
容体の三量体形成を誘導する３つのＦａｓＬ分子の結合によって誘導され、それは次に、
アダプタータンパク質ＦＡＤＤ（デスドメインを持つＦａｓ関連タンパク質）およびカス
パーゼ−８を動員する。この三分子複合体、Ｆａｓ／ＦＡＩＤＤ／カスパーゼ８のオリゴ
マー形成は、酵素前駆体カスパーゼ８の活性カスパーゼ８へのタンパク質分解性切断をも
たらし、これは次に、タンパク質分解を通してカスパーゼ３を含む他の下流カスパーゼを
活性化することによって、アポトーシスプロセスを開始する。デスリガンドは、一般的に
は、三量体またはより高次の構造内に形成されるときに、アポトーシス性である。単量体
に関しては、それらは、細胞死受容体と結合するための三量体と競合することによって、
抗アポトーシス性薬剤として役立ち得る。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ組
成物は、細胞死受容体（例えば、Ｆａｓ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＭＯ、ＴＮＦＲ、ＴＬＲ等
）をコードする。腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡのトラン
スフェクションによって、細胞死受容体を発現するように作製される細胞は、その受容体
を活性化するリガンドによって誘導される細胞死の影響をうけやすくなる。同様に、例え
ば、その表面上にデスリガンドを発現するように作製される細胞は、トランスフェクトさ
れた細胞を標的細胞と接触するとき、受容体で細胞の死を誘導する。別の実施形態におい
て、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡ組成物は、細胞死受容
体リガンド（例えば、ＦａｓＬ、ＴＮＦ等）をコードする。別の実施形態において、腫瘍
学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡ組成物は、カスパーゼ（例えば
、カスパーゼ３、カスパーゼ８、カスパーゼ９等）をコードする。癌細胞が非増殖性また
は制御された増殖性形態への適正な分化の失敗をしばしば示す場合、別の実施形態におい
て、合成ポリヌクレオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡ組成物は、細胞死受容体およ
びその適切な活性化リガンドの両方をコードする。別の実施形態において、合成ポリヌク
レオチド、一次構築物、およびｍｍＲＮＡ組成物は、癌幹細胞等の癌細胞内で発現される
とき、細胞を非病原性もしくは非自己再生性表現型（例えば、低減された細胞成長速度、
低減された細胞分裂等）に分化するように誘導するか、または細胞を休眠細胞期（例えば
、Ｇ０休止期）に誘導する分化因子をコードする。
当業者であれば、アポトーシス誘導技術の使用は、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次
構築物、またはｍｍＲＮＡが、望ましくない広範囲に及ぶ細胞死を防ぐように、例えば腫
瘍細胞に適切に標的化されることを必要とし得ることを理解されよう。したがって、腫瘍
学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡが癌細胞内でのみ発現するよう
に、癌抗原を認識する送達機構（例えば、リポソーム等を標的とする結合リガンドまたは
抗体）を用いることができる。
ＶＩ． キットおよびデバイス
キット
本発明は、好都合におよび／または効果的に本発明の方法を行うための多様なキットを
提供する。典型的には、キットは、使用者が対象の（複数可）複数の治療を実施する、お
よび／または複数の実験を実施することを可能にするのに十分な量および／または数の構
成成分を含む。
一態様において、本発明は、本発明の分子（腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連
一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡ）を含むキットを提供する。一実施形態におい
て、キットは、１つ以上の機能的抗体またはその機能断片を含む。
そのキットは、翻訳可能領域を含む第１の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一
次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを含む、腫瘍学関連タンパク質産生のためのもの
であり得る。キットは、製剤組成物を形成するための包装および説明書ならびに／または
送達剤をさらに含んでもよい。送達剤は、本明細書で開示される食塩水、緩衝液、リピド
イド（ｌｉｐｉｄｏｉｄ）、または任意の送達剤を含んでもよい。
一実施形態において、緩衝液には、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸塩、およ
び／またはＥＤＴＡが含まれてもよい。別の実施形態において、緩衝液は、食塩水、２ｍ
Ｍカルシウムを含有する食塩水、５％ショ糖、２ｍＭカルシウムを含有する５％ショ糖、
５％マンニトール、２ｍＭカルシウムを含有する５％マンニトール、Ｒｉｎｇｅｒの乳酸
塩、塩化ナトリウム、２ｍＭカルシウムを含有する塩化ナトリウムを含み得るが、これら
に限定されない。さらなる実施形態において、緩衝液は沈殿されてもよく、または凍結乾
燥されてもよい。各構成成分の量は、一貫した、再現性のある高濃度食塩水または単純緩
衝製剤を可能にするように変更され得る。構成成分は、一定期間にわたって、および／ま
たは多様な条件下での緩衝液中における修飾ＲＮＡの安定性を増加させるようにも変更さ
れ得る。一態様において、本発明は、標的細胞内に導入されるとき、所望の量の翻訳可能
領域によってコードされる腫瘍学関連タンパク質を産生するのに有効な量で提供される、
翻訳可能領域を含む腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡと、細胞の自然免疫応答を実質的に阻害するのに有効な量で提供される、
阻害性核酸を含む第２の腫瘍学関連ポリヌクレオチドと、包装および説明書と、を含む、
腫瘍学関連タンパク質産生のためのキットを提供する。
一態様において、本発明は、腫瘍学関連ポリヌクレオチドが細胞ヌクレアーゼによる低
減された分解を示す、翻訳可能領域を含む腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次
構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡと、包装および説明書と、を含む、腫瘍学関連タン
パク質産生のためのキットを提供する。
一態様において、本発明は、その腫瘍学関連ポリヌクレオチドが細胞ヌクレアーゼによ
る低減された分解を示す、翻訳可能領域を含む腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連
一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡと、第１の核酸の翻訳可能領域の翻訳に適した
哺乳類細胞と、を含む、腫瘍学関連タンパク質産生のためのキットを提供する。
一実施形態において、プロテインＣのレベルは、イムノアッセイによって測定され得る
。アッセイは購入されてもよく、ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ，Ｉｎｃ．（Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ
）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）、Ｓｉ
ｅｍｅｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．（Ｍａｌｖｅｒｎ
，ＰＡ）、ＢＩＯＰＯＲＴＯ（登録商標）Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａ／Ｓ（Ｇｅｎｔｏ
ｆｔｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＵＳＣＮ（登録商標）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．
（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）、またはＲｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａ
ｔｉｏｎ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を含む、任意のいくつかの供給元から利用
可能である。この実施形態において、アッセイは、修飾ｍＲＮＡ分子として、もしくはそ
の投与に応答して、送達されるプロテインＣまたはその活性型もしくは変異形のレベルを
評価するために使用され得る。
デバイス
本発明は、目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする腫瘍学関連ポリヌクレオチ
ド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを組み込み得るデバイスを提供
する。これらのデバイスは、安定した製剤中に、ヒト患者等のそれを必要とする対象に即
時に送達されることができる製剤中に腫瘍学関連ポリヌクレオチドを合成するための試薬
を含有する。そのような目的とするポリペプチドの非限定的な例としては、創傷治癒のた
めの成長因子および／または血管形成刺激因子、感染制御を容易にするためのペプチド抗
細菌剤、ならびに新たに確認されたウイルスに対する免疫応答を急速に刺激するための抗
原が挙げられる。
デバイスを本発明とともに使用することもできる。一実施形態において、デバイスは、
修飾ｍＲＮＡの形態で投与されたタンパク質のレベルを評価するために使用される。デバ
イスは、血液、尿、または他の生物流体（ｂｉｏｆｌｕｉｄｉｃ）検査を含んでもよい。
それは自動化セントラルラボプラットフォームを含むほどの大型、または小分散化卓上デ
バイスであり得る。それはポイントオブケアまたは手持ち式デバイスであり得る。この実
施形態において、例えば、プロテインＣまたはＡＰＣは、プロテインＣ（そのチモーゲン
）、ＡＰＣ、またはそれらの任意の変異形をコードする修飾ｍＲＮＡを用いた治療の前、
治療中、または治療後に定量され得る。オートプロトロンビンＩＩＡおよび血液凝固第Ｘ
ＩＶ因子としても知られているプロテインＣは、血液凝固の制御およびインビボでの線維
素溶解活性の発生において重要な役割を果たすセリンプロテアーゼのチモーゲンまたは前
駆体である。それは一本鎖ポリペプチドとして肝臓で合成されるが、二本鎖中間体を生じ
させる翻訳後プロセシングを経る。プロテインＣのその中間形態は、重鎖のアミノ末端か
ら分子のアミノ末端に１２残基ペプチドのトロンビン媒介性切断を介して、「活性化タン
パク質Ｃ」（ＡＰＣ）として知られる活性型に変換される。デバイスは、敗血症または重
度の敗血症等のプロテインＣまたはＡＰＣ治療に関連したコンパニオン診断検査として、
創薬努力において有用であり得る。初期研究において、ＡＰＣが重度の敗血症における死
亡率を低下させる能力を有したことが示唆された。この研究路線に従って、臨床研究は、
１つの化合物、活性化ドロトレコギンアルファ（組換えタンパク質Ｃ）のＦＤＡ認可を導
いた。しかしながら、２０１１年の終わりに、敗血症性ショックの患者おける２８日間の
全死因死亡率において統計的に有意な低下の主要評価項目を満たなかったことを示したＰ
ＲＯＷＥＳＳ−ＳＨＯＣＫ試験の結果を受けて、この薬物はすべての市場から回収された
。本発明は、哺乳動物におけるタンパク質発現効率の増加に関連した先の課題または問題
を克服する、敗血症、重度の敗血症、および敗血症（ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）の診断およ
び治療に使用され得る修飾ｍＲＮＡ分子を提供する。
いくつかの実施形態において、デバイスは、自己完結型であり、任意に、生成された腫
瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの合成
および／または分析のための指示を得るための無線遠隔通信が可能である。デバイスは、
少なくとも１つの腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関
連ｍｍＲＮＡ、および好ましくは無制限の異なる腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関
連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡのモバイル合成が可能である。ある特定の実
施形態において、デバイスは、１または少数の個体によって輸送されることができる。他
の実施形態において、デバイスは、卓上または机に合うように調整される。他の実施形態
において、デバイスは、スーツケース、バックパック、または同様の大きさの対象に収ま
るように調整される。別の実施形態において、デバイスは、ポイントオブケアまたは手持
ち式デバイスであってもよい。さらなる実施形態において、デバイスは、乗用車、運搬車
、もしくは救急車等の自動車、または戦車もしくは兵員輸送車等の軍用車両に収まるよう
に調整される。目的とする腫瘍学関連ポリペプチドをコードする修飾腫瘍学関連ｍＲＮＡ
生成するために必要な情報は、デバイスに存在するコンピュータ可読媒体内に存在する。
一実施形態において、デバイスは、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築
物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡの形態で投与された腫瘍学関連タンパク質のレベルを評
価するために使用され得る。デバイスは、血液、尿、または他の生物流体（ｂｉｏｆｌｕ
ｉｄｉｃ）検査を含んでもよい。
いくつかの実施形態において、デバイスは、腫瘍学関連核酸および腫瘍学関連ポリペプ
チドであり得る核酸およびポリペプチド配列のデータベースを用いて通信（例えば、無線
通信）が可能である。デバイスは、１つ以上の試料容器を挿入するための少なくとも１つ
の試料ブロックを含む。そのような試料容器は、テンプレートＤＮＡ、ヌクレオチド、酵
素、緩衝剤、および他の試薬等の任意の数の材料の液体または他の形態を受け入れること
が可能である。試料容器は、試料ブロックとの接触によって加熱または冷却されることも
可能である。試料ブロックは、一般的に、少なくとも１つの試料ブロックのための１つ以
上の電子制御装置を有するデバイス基部と通信している。試料ブロックは、好ましくは、
試料容器およびその構成要素を約−２０Ｃ〜＋１００Ｃを超える温度に加熱および／また
は冷却することができるような加熱モジュールである、加熱モジュールを含む。デバイス
基部は、電池または外部電圧源等の電圧源と通信している。デバイスは、ＲＮＡ合成のた
めの材料を貯蔵および分配するための手段も含む。
任意に、試料ブロックは、合成された核酸を分離するためのモジュールを含む。あるい
は、デバイスは、試料ブロックに作動可能に連結される分離モジュールを含む。好ましく
は、デバイスは、合成された核酸を分析するための手段を含む。そのような分析には、配
列同一性（ハイブリダイゼーション等によって実証される）、望ましくない配列の不在、
合成されたｍＲＮＡの完全性の測定（分光光度法と組み合わせた微小流体粘度測定による
もの等）、ならびに修飾ＲＮＡの濃度および／または効力（分光光度法によるもの等）が
挙げられる。
ある特定の実施形態において、デバイスは、対象から得られた生物材料中に存在する病
原体の検出のための手段、例えば、微生物同定用のＩＢＩＳ ＰＬＥＸ−ＩＤシステム（
Ａｂｂｏｔｔ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）と組み合わせられる。
本明細書に記載の薬学的組成物を皮内送達する際に用いるのに適したデバイスには、各
々が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，８８６，４９９
号、同第５，１９０，５２１号、同第５，３２８，４８３号、同第５，５２７，２８８号
、同第４，２７０，５３７号、同第５，０１５，２３５号、同第５，１４１，４９６号、
および同第５，４１７，６６２号に記載のデバイス等の短針デバイスが挙げられる。皮内
組成物は、参照により全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開第ＷＯ９９／３４８５０
号に記載のデバイスおよびその機能的等価物等の皮膚の中への針の有効な貫通長さを制限
するデバイスによって投与され得る。液体ジェット式注入器を介して、および／または角
質層に穴を開ける針を介して、液体組成物を真皮に送達し、真皮に到達するジェットを生
じるジェット式注入デバイスが好適である。ジェット式注入デバイスは、例えば、各々が
参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，４８０，３８１号、
同第５，５９９，３０２号、同第５，３３４，１４４号、同第５，９９３，４１２号、同
第５，６４９，９１２号、同第５，５６９，１８９号、同第５，７０４，９１１号、同第
５，３８３，８５１号、同第５，８９３，３９７号、同第５，４６６，２２０号、同第５
，３３９，１６３号、同第５，３１２，３３５号、同第５，５０３，６２７号、同第５，
０６４，４１３号、同第５，５２０，６３９号、同第４，５９６，５５６号、同第４，７
９０，８２４号、同第４，９４１，８８０号、同第４，９４０，４６０号、ならびにＰＣ
Ｔ公開第ＷＯ９７／３７７０５号および同第ＷＯ９７／１３５３７号に記載されている。
圧縮ガスを用いて、粉末形態にあるワクチンを加速させ、皮膚の外層を通して真皮に到達
させる弾道粉末／粒子送達デバイスが、好適である。あるいは、またはさらに、従来のシ
リンジを皮内投与の古典的なマントゥー法で用いることができる。
いくつかの実施形態において、デバイスは、ポンプであってもよく、または血液脳関門
を横断する本発明の化合物または組成物の投与用のカテーテルを含む。そのようなデバイ
スには、加圧嗅覚送達デバイス、イオン泳動デバイス、多層微小流体デバイス等が挙げら
れるが、これらに限定されない。そのようなデバイスは、携帯型または固定型であっても
よい。それらは、身体に埋め込み可能であるか、または身体に外的に係留されるか、また
はそれらの組み合わせであってもよい。
投与用デバイスを用いて、本発明で教示される単回、複数回、または分割投薬レジメン
に従って、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学
関連ｍｍＲＮＡを送達してもよい。そのようなデバイスは、以下に記載される。
細胞、器官、および組織への複数回投与のための当技術分野で既知の方法およびデバイ
スは、本発明の実施形態として本明細書で開示される方法および組成物とともに使用され
ることが企図される。これらには、例えば、複数の針、例えば、ルーメンまたはカテーテ
ルを用いるハイブリッドデバイスならびに熱、電流、または放射線駆動機構を利用するデ
バイスを有する方法およびデバイスが挙げられる。
本発明に従って、これらの複数回投与デバイスを利用して、本明細書で企図される単回
用量、複数回用量、または分割された用量が送達されてもよい。
治療剤を固体組織に送達するための方法は、Ｂａｈｒａｍｉらによって説明されており
、例えば、米国特許公開第２０１１０２３０８３９号に教示され、この内容は、参照によ
りこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｂａｈｒａｍｉによると、一連の針はデバイ
ス内に組み込まれ、各針の長さに沿ってその固体組織内の任意の箇所で実質的に同量の流
体を送達する。
生物組織を横断して生物材料を送達するためのデバイスは、Ｋｏｄｇｕｌｅらによって
説明されており、例えば、米国特許公開第２０１１０１７２６１０号に教示され、この内
容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｋｏｄｇｕｌｅによると、１
つ以上の金属から作製され、かつ約２００ミクロン〜約３５０ミクロンの外径および少な
くとも１００ミクロンの長さを有する複数の中空型マイクロニードルがデバイス内に組み
込まれ、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸分子、脂質、および他の薬学的に有効な
成分またはそれらの組み合わせを送達する。
治療剤の組織への送達のための送達プローブは、Ｇｕｎｄａｙらによって説明されてお
り、例えば、米国特許公開第２０１１０２７０１８４号に教示され、この内容は、参照に
よりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｇｕｎｄａｙによると、複数の針がデバイ
ス内に組み込まれ、デバイスは、付加されたカプセルを作動位置と非作動位置との間で移
動させ、その針を通してカプセルの外に薬剤を出させる。
複数回注入医療器具が、Ａｓｓａｆによって説明されており、例えば、米国特許公開第
２０１１０２１８４９７号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書
に組み込まれる。Ａｓｓａｆによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、デバイスは
、その針のうちの１つ以上に接続するチャンバと、各注入の後、連続的にそのチャンバに
医療用流体を補充する手段と、を有する。
一実施形態において、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫
瘍学関連ｍｍＲＮＡは、少なくとも３つの針を介して皮下にまたは筋肉内に、同時または
６０分以内に３つの異なる、任意に隣接した部位へ投与される（例えば、同時または６０
以内に４、５、６、７、８、９、または１０個の部位への投与）。分割された用量は、各
々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１１０２３０８
３９号および同第２０１１０２１８４９７号に記載のデバイスを用いて、同時に隣接した
組織に投与され得る。
物質を患者の身体に注入するための少なくとも部分的に埋め込み可能なシステム、具体
的には陰茎勃起刺激システムが、Ｆｏｒｓｅｌｌによって説明されており、例えば、米国
特許公開第２０１１０１９６１９８号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体
が本明細書に組み込まれる。Ｆｏｒｓｅｌｌによると、複数の針がデバイス内に組み込ま
れ、デバイスは、患者の左および右の陰核海綿体に隣接する１つ以上の筐体とともに埋め
込まれる。また、針を通して薬物を供給するためにリザーバおよびポンプも埋め込まれる
。
治療的有効量の鉄分の経皮送達のための方法が、Ｂｅｒｅｎｓｏｎによって説明されて
おり、例えば、米国特許公開第２０１００１３０９１０号に教示され、この内容は、参照
によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｂｅｒｅｎｓｏｎによると、複数の針を
用いて、イオン泳動パッチ上のイオン性鉄分の経皮送達を強化するために角質層内に複数
のマイクロチャネルを作製することができる。
生物組織を横断する生物材料の送達のための方法が、Ｋｏｄｇｕｌｅらによって説明さ
れており、例えば、米国特許公開第２０１１０１９６３０８号に教示され、この内容は、
参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｋｏｄｇｕｌｅによると、治療的活
性成分を含む複数の生分解性マイクロニードルがデバイスに組み込まれ、タンパク質、炭
水化物、核酸分子、脂質、および他の薬学的活性成分、またはそれらの組み合わせを送達
する。
ボツリヌス毒素組成物を含む経皮パッチが、Ｄｏｎｏｖａｎによって説明されており、
例えば、米国特許公開第２００８０２２００２０号に教示され、この内容は、参照により
これらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｄｏｎｏｖａｎによると、複数の針がパッチ内
に組み込まれ、血液を破裂させることなく、皮膚の角質層を通して突出するその針を通し
てボツリヌス毒素を角質層下に送達する。
およそ０．２〜１５ｍＬの液体製剤を保持することができる小さい使い捨ての薬物リザ
ーバ、またはパッチポンプを皮膚上に配置し、製剤を細い針（例えば、２６〜３４ゲージ
）を用いて連続的に皮下に送達することができる。非限定的な例として、パッチポンプは
、３０〜３４ゲージ針を有するばね式の５０ｍｍ×７６ｍｍ×２０ｍｍ（ＢＤ（商標）Ｍ
ｉｃｒｏｉｎｆｕｓｅｒ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ ＮＪ）、インスリン等の薬物
送達に使用される２ｍＬリザーバを有する４１ｍｍ×６２ｍｍ×１７ｍｍ（ＯＭＮＩＰＯ
Ｄ（登録商標），Ｉｎｓｕｌｅｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）、
または０．５〜１０ｍＬリザーバを有する４３〜６０ｍｍ直径、１０ｍｍ厚（ＰＡＴＣＨ
ＰＵＭＰ（登録商標），ＳｔｅａｄｙＭｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｓａｎ Ｆｒ
ａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）であってもよい。さらに、パッチポンプは、電池式および／また
は充電式であり得る。
低温治療の箇所への活性剤の投与用の凍結探針が、Ｔｏｕｂｉａによって説明されてお
り、例えば、米国特許公開第２００８０１４００６１号に教示され、この内容は、参照に
よりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｔｏｕｂｉａによると、複数の針がプロー
ブ内に組み込まれ、プローブは、チャンバ内への活性剤を受容し、薬剤を組織に投与する
。
炎症を治療するか、もしくは予防し、または健常な関節を促進するための方法が、Ｓｔ
ｏｃｋらによって説明されており、例えば、米国特許公開第２００９０１５５１８６号に
教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｓｔｏｃｋ
によると、複数の針がデバイスに組み込まれ、シグナル伝達調節因子化合物を含有する組
成物を投与する。
多部位注入システムが、Ｋｉｍｍｅｌｌらによって説明されており、例えば、米国特許
公開第２０１００２５６５９４号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本
明細書に組み込まれる。Ｋｉｍｍｅｌｌによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、
その針を通して薬物を角質層内に送達する。
インターフェロンを皮内区画に送達するための方法が、Ｄｅｋｋｅｒらによって説明さ
れており、例えば、米国特許公開第２００５０１８１０３３号に教示され、この内容は、
参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｄｅｋｋｅｒによると、０〜１ｍｍ
の露出された高さを持つ放出口を有する複数の針がデバイス内に組み込まれ、それが０．
３ｍｍ〜２ｍｍの深さで物質を送達することによって、薬物動態およびバイオアベイラビ
リティを改善する。
遺伝子、酵素、および生物薬剤を組織細胞に送達するための方法が、Ｄｅｓａｉによっ
て説明されており、例えば、米国特許公開第２００３００７３９０８号に教示され、この
内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｄｅｓａｉによると、複数
の針が体内に挿入されるデバイス内に組み込まれ、その針を通して薬物流体を送達する。
線維芽細胞を用いて不整脈を治療するための方法が、Ｌｅｅらによって説明されており
、例えば、米国特許公開第２００４０００５２９５号に教示され、この内容は、参照によ
りこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｌｅｅによると、複数の針がデバイス内に組
み込まれ、線維芽細胞を組織の局所的領域に送達する。
磁力制御されたポンプ使用して脳腫瘍を治療するための方法が、Ｓｈａｃｈａｒらによ
って説明されており、例えば、米国特許第７７９９０１２号（方法）および同第７７９９
０１６号（デバイス）に教示され、それらの内容は、参照によりこれらの全体が本明細書
に組み込まれる。Ｓｈａｃｈａｒによると、複数の針がポンプに組み込まれ、ポンプは、
制御された速度でその針を通して薬物治療剤を押す。
雌哺乳類における膀胱の機能的障害を治療する方法が、Ｖｅｒｓｉらによって説明され
ており、例えば、米国特許第８，０２９，４９６号に教示され、この内容は、参照により
これらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｖｅｒｓｉによると、一連のマイクロニードル
がデバイス内に組み込まれ、その針を通して直接膀胱の膀胱三角部内に治療剤を送達する
。
マイクロニードル経皮輸送デバイスが、Ａｎｇｅｌらによって説明されており、例えば
、米国特許第７，３６４，５６８号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が
本明細書に組み込まれる。Ａｎｇｅｌによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、デ
バイスは、異なる方向から表面内に挿入されるその針を通して物質を体表内に輸送する。
マイクロそのニードル経皮輸送デバイスは、中実型マイクロニードルシステムまたは中空
型マイクロニードルシステムであってもよい。非限定的な例として、中実型マイクロニー
ドルシステムは、薬物で被覆された約１５０〜７００μｍの高さの、ｃｍ２当たり３００
〜１５００の中実マイクロニードルを伴う最大０．５ｍｇの容量を有し得る。マイクロニ
ードルは、角質層に透過し、短い持続期間（例えば、２０秒間〜１５分間）、皮膚に残存
する。別の例において、中空型マイクロニードルシステムは、最大３ｍＬの容量を有し、
およそ９５０μｍの高さであるｃｍ２当たり１５〜２０マイクロニードルを用いて液体製
剤を送達する。マイクロニードルは皮膚に透過し、液体製剤がデバイスから皮膚内に流れ
ることを可能にする。中空型マイクロニードルシステムは、製剤体積および粘度に応じて
、１〜３０分間で消耗し得る。
皮下輸注用デバイスが、Ｄａｌｔｏｎらによって説明されており、例えば、米国特許第
７，１５０，７２６号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組
み込まれる。Ｄａｌｔｏｎによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、その針を通し
て流体を皮下組織に送達する。
マイクロカニューレを通したワクチンおよび遺伝子治療剤の皮内送達用デバイスおよび
方法が、Ｍｉｋｓｚｔａらによって説明されており、例えば、米国特許第７，４７３，２
４７号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｍ
ｉｔｓｚｔａによると、少なくとも１つの中空型マイクロニードルがデバイス内に組み込
まれ、０．０２５ｍｍ〜２ｍｍの深さでワクチンを対象の皮膚に送達する。
インスリンを送達する方法が、Ｐｅｔｔｉｓらによって説明されており、例えば、米国
特許第７，７２２，５９５号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細
書に組み込まれる。Ｐｅｔｔｉｓによると、２つの針はデバイス内に組み込まれ、第１の
針はインスリンを皮内区画に送達するように２．５ｍｍ未満の深さで、第２の針はインス
リンを皮内区画に送達するように２．５ｍｍ超えかつ５．０ｍｍ未満の深さで、両方の針
は基本的に同時に皮膚内に挿入される。
吸引下での皮膚注入送達が、Ｋｏｃｈａｍｂａらによって説明されており、例えば、米
国特許第６，８９６，６６６号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明
細書に組み込まれる。Ｋｏｃｈａｍｂａによると、互いに比較的に隣接した複数の針がデ
バイス内に組み込まれ、皮膚層の下に流体を注入する。
皮膚を通して物質を取り除くか、または送達するためのデバイスが、Ｄｏｗｎらによっ
て説明されており、例えば、米国特許第６，６０７，５１３号に教示され、この内容は、
参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｄｏｗｎによると、複数の皮膚透過
メンバーがデバイス内に組み込まれ、約１００ミクロンから約２０００ミクロンの長さを
有し、約３０〜５０ゲージである。
物質を皮膚に送達するためのデバイスが、Ｐａｌｍｅｒらによって説明されており、例
えば、米国特許第６，５３７，２４２号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全
体が本明細書に組み込まれる。Ｐａｌｍｅｒによると、一連のマイクロニードルがデバイ
ス内に組み込まれ、その針と皮膚との接触を強化するために引っ張りアセンブリを使用し
、物質のより均一な送達をもたらす。
局所薬物送達のための灌流デバイスが、Ｚａｍｏｙｓｋｉによって説明されており、例
えば、米国特許第６，４６８，２４７号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全
体が本明細書に組み込まれる。Ｚａｍｏｙｓｋｉによると、複数の皮下針が、皮下注射器
が後退するときに皮下注射器の内容物を組織内に注入するデバイス内に組み込まれる。
マイクロニードルおよびヒト皮膚との間の相互作用を改善することによる組織を横断す
る薬物および生体分子の増強された輸送のための方法が、Ｐｒａｕｓｎｉｔｚらによって
説明されており、例えば、米国特許第６，７４３，２１１号に教示され、この内容は、参
照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｐｒａｕｓｎｉｔｚによると、複数の
マイクロニードルがデバイス内に組み込まれ、デバイスは、そこにマイクロニードルが適
用される、より強固で、より変形しにくい表面を示すことができる。
医薬剤の器官内投与のためのデバイスが、Ｔｉｎｇらによって説明されており、例えば
、米国特許第６，０７７，２５１号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が
本明細書に組み込まれる。Ｔｉｎｇによると、増強投与のための側面開口部を有する複数
の針がデバイス内に組み込まれ、デバイスは、その針を針チャンバからおよび針チャンバ
中へ伸長および後退することによって医薬剤をリザーバからその針の中へ押し進め、その
医薬剤を標的器官に注入する。
複数の持針器および皮下多重チャネル輸注ポートが、Ｂｒｏｗｎによって説明されてお
り、例えば、米国特許第４，６９５，２７３号に教示され、この内容は、参照によりこれ
らの全体が本明細書に組み込まれる。Ｂｒｏｗｎによると、持針器上の複数の針が輸注ポ
ートの中隔を通して挿入され、その輸注ポート内の単離されたチャンバと連通する。
二重皮下シリンジが、Ｈｏｒｎによって説明されており、例えば、米国特許第３，５５
２，３９４号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれ
る。Ｈｏｒｎによると、デバイス内に組み込まれる２つの針が、６８ｍｍ未満の間隔で離
間され、異なるスタイルおよび長さであってもよく、このため注入が異なる深さで行われ
ることを可能にする。
複数の針および複数の流体区画を有するシリンジが、Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇによって説明
されており、例えば、米国特許第３，５７２，３３６号に教示され、この内容は、参照に
よりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇによると、複数の針が
複数の流体区画を有するシリンジ内に組み込まれ、１つの注入に混合することができない
相性の悪い薬物を同時に投与することができる。
流体の皮内の注入のための外科用器具が、Ｅｌｉｓｃｕらによって説明されており、例
えば、米国特許第２，５８８，６２３号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全
体が本明細書に組み込まれる。Ｅｌｉｓｃｕによると、複数の針がその器具内に組み込ま
れ、流体を皮内により幅広い分散で注入する。
複数の乳房内の乳管への物質の同時送達のための装置が、Ｈｕｎｇによって説明されて
おり、例えば、欧州特許第１８１８０１７号に教示され、この内容は、参照によりこれら
の全体が本明細書に組み込まれる。Ｈｕｎｇによると、複数のルーメンがデバイス内に組
み込まれ、乳管網のオリフィスを通して挿入し、流体を乳管網に送達する。
心臓または他の器官の組織への薬物の導入のためのカテーテルが、Ｔｋｅｂｕｃｈａｖ
ａによって説明されており、例えば、国際公開第ＷＯ２００６１３８１０９号に教示され
、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｔｋｅｂｕｃｈａｖ
ａによると、平坦な軌道で器官壁に進入する２つの湾曲針が組み込まれる。
医薬剤を送達するためのデバイスが、Ｍｃｋａｙらによって説明されており、例えば、
国際公開第ＷＯ２００６１１８８０４号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全
体が本明細書に組み込まれる。Ｍｃｋａｙによると、各針上に複数のオリフィスを有する
複数の針がデバイス内に組み込まれ、脊髄円板の内部円板空間等の組織への局部送達を容
易にする。
哺乳類皮膚内の皮内空間内に免疫調節物質を直接送達するための方法が、Ｐｅｔｔｉｓ
によって説明されており、例えば、国際公開第ＷＯ２００４０２００１４号に教示され、
この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｐｅｔｔｉｓによると
、複数の針がデバイス内に組み込まれ、針を通して物質を０．３ｍｍ〜２ｍｍの深さに送
達する。
全身性吸収および改善された薬物動態のための皮膚の少なくとも２つの区画内へ物質を
投与するための方法およびデバイスが、Ｐｅｔｔｉｓらによって説明されており、例えば
、国際公開第ＷＯ２００３０９４９９５号に教示され、この内容は、参照によりこれらの
全体が本明細書に組み込まれる。Ｐｅｔｔｉｓによると、約３００μｍ〜約５ｍｍの長さ
を有する複数の針がデバイス内に組み込まれ、皮内および皮下組織区画へ同時に送達する
。
針およびローラーを有する薬物送達デバイスが、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎらによって説明さ
れており、例えば、国際公開第ＷＯ２０１２００６２５９号に教示され、この内容は、参
照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｚｉｍｍｅｒｍａｎによると、ローラ
ー内に位置する複数の中空針がデバイス内に組み込まれ、ローラーが回転すると、針を通
してリザーバ内の内容物を送達する。
当技術分野で既知のステント等の薬物送達デバイスが、例えば、米国特許第８，３３３
，７９９号、米国公開第ＵＳ２００６００２０３２９号、同第ＵＳ２００４０１７２１２
７号、および同第ＵＳ２０１００１６１０３２号に教示され、これらの各々の内容は、参
照によりこの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載のポリヌクレオチド、一次
構築物、ｍｍＲＮＡの製剤は、ステントを用いて送達され得る。さらに、本明細書で使用
されるステントは、同じか、または異なる送達速度で複数のポリヌクレオチド、一次構築
物、および／もしくはｍｍＲＮＡならびに／または製剤を送達することができる。ステン
トの製造業者の非限定的な例としては、ＣＯＲＤＩＳ（登録商標）（Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）
（ＣＹＰＨＥＲ（登録商標））、Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａ
ｔｉｏｎ（Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）（ＴＡＸＵＳ（登録商標））、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（Ｍ
ｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）（ＥＮＤＥＡＶＯＵＲ（登録商標））、およびＡｂｂｏｔ
ｔ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）（ＸＩＥＮＣＥ Ｖ（登録商標））が挙げられる。
カテーテルおよび／またはルーメンを利用する方法およびデバイス
カテーテルおよびルーメンを使用する方法およびデバイスを用いて、単回、複数回、ま
たは分割された投薬スケジュールにおいて本発明の腫瘍学関連ｍｍＲＮＡを投与すること
ができる。そのような方法およびデバイスを、以下に記載する。
骨格筋芽細胞から損傷された心臓の心筋へのカテーテルベースの送達が、Ｊａｃｏｂｙ
らによって説明されており、例えば、米国特許公開第２００６０２６３３３８号に教示さ
れ、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｊａｃｏｂｙによ
ると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、その少なくとも一部が血管内に挿入され、針
を通して細胞組成物を対象の心臓の局所領域に送達する。
神経毒素を用いて喘息を治療するための装置が、Ｄｅｅｍらによって説明されており、
例えば、米国特許公開第２００６０２２５７４２号に教示され、この内容は、参照により
これらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｄｅｅｍによると、複数の針がデバイス内に組
み込まれ、その針を通して神経毒素を気管支組織内に送達する。
複数成分療法を施すための方法が、Ｎａｙａｋによって説明されており、例えば、米国
特許第７，６９９，８０３号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細
書に組み込まれる。Ｎａｙａｋによると、複数の注入カニューレがデバイス内に組み込ま
れてもよく、深さを制御するための深度スロットが含まれてもよく、治療用物質はそこで
組織内に送達される。
チャネルを切断し、少なくとも１つの治療剤を組織の所望の領域内に送達するための外
科用デバイスが、ＭｃＩｎｔｙｒｅらによって説明されており、例えば、米国特許第８，
０１２，０９６号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込
まれる。ＭｃＩｎｔｙｒｅによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、これはチャネ
ルを取り囲む組織の領域内に治療剤を分注し、特に経心筋血行再建手術によく適している
。
雌哺乳類における膀胱の機能的障害を治療する方法が、Ｖｅｒｓｉらによって説明され
ており、例えば、米国特許第８，０２９，４９６号に教示され、この内容は、参照により
これらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｖｅｒｓｉによると、一連のマイクロニードル
がデバイス内に組み込まれ、その針を通して直接膀胱の膀胱三角部内に治療剤を送達する
。
流体を柔軟な生体バリアーに送達するためのデバイスおよび方法が、Ｙｅｓｈｕｒｕｎ
らによって説明されており、例えば、米国特許第７，９９８，１１９号（デバイス）およ
び同第８，００７，４６６（方法）号に教示され、それらの内容は、参照によりこれらの
全体が本明細書に組み込まれる。Ｙｅｓｈｕｒｕｎによると、デバイス上のマイクロニー
ドルが柔軟な生体バリアーに透過および伸長し、流体は中空型マイクロニードルの孔を通
して注入される。
心外膜表面を有し、心外膜を有する心臓の組織の領域に物質を介して注入するための、
胴体内に配置される方法が、Ｂｏｎｎｅｒらによって説明されており、例えば、米国特許
第７，６２８，７８０号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に
組み込まれる。Ｂｏｎｎｅｒによると、デバイスは、針を組織内に操縦し、その針を通し
て医薬剤を組織内に注入するための細長いシャフトおよび遠位注入ヘッドを有する。
穿刺創を密封するためのデバイスが、Ｎｉｅｌｓｅｎらによって説明されており、例え
ば、米国特許第７，９７２，３５８号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体
が本明細書に組み込まれる。Ｎｉｅｌｓｅｎによると、複数の針がデバイス内に組み込ま
れ、穿刺路を取り囲む組織内に閉鎖剤を送達する。
筋形成および血管形成のための方法が、Ｃｈｉｕらによって説明されており、例えば、
米国特許第６，５５１，３３８号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本
明細書に組み込まれる。Ｃｈｉｕによると、少なくとも１．２５ｍｍの最大直径と、６〜
２０ｍｍの穿刺深度を提供するのに有効な長さと、を有する５〜１５の針がデバイス内に
組み込まれ、心筋近くに挿入し、外因性血管新生または筋原性因子をその針の少なくとも
一部の中にある導管を通してその心筋に供給する。
前立腺組織の治療ための方法が、Ｂｏｌｍｓｊらによって説明されており、例えば、米
国特許第６，５２４，２７０号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明
細書に組み込まれる。Ｂｏｌｍｓｊによると、尿道を通して挿入されるカテーテルを含む
デバイスが、周囲の前立腺組織内に伸長可能な少なくとも１つの中空端を有する。収斂薬
および鎮痛薬は、その端部を通してその前立腺組織内に投与される。
流体を骨内部位に輸注する方法が、Ｆｉｎｄｌａｙらによって説明されており、例えば
、米国特許第６，７６１，７２６号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が
本明細書に組み込まれる。Ｆｉｎｄｌａｙによると、軟質材料の層で覆われた材料の硬質
殻を貫通することが可能な複数の針がデバイス内に組み込まれ、その材料の硬質殻から下
へ規定の距離で流体を送達する。
薬物を血管壁内に注入するためのデバイスが、Ｖｉｇｉｌらによって説明されており、
例えば、米国特許第５，７１３，８６３号に教示され、この内容は、参照によりこれらの
全体が本明細書に組み込まれる。Ｖｉｇｉｌによると、複数の注入器がデバイス内の可撓
管のそれぞれの上に設置され、血管壁内への輸注のためにマルチルーメンカテーテルを通
してその可撓管の中へ、およびその注入器の外へ薬物流体を導入する。
治療用および／または診断用薬剤を身体通路を取り囲む組織に送達するためのカテーテ
ルが、Ｆａｘｏｎらによって説明されており、例えば、米国特許第５，４６４，３９５号
に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｆａｘｏ
ｎによると、少なくとも１つの針カニューレがカテーテル内に組み込まれ、カテーテルの
外部へ突出するその針を通して所望の薬剤を組織に送達する。
治療剤を送達するためのバルーンカテーテルが、Ｏｒｒによって説明されており、例え
ば、国際公開第ＷＯ２０１００２４８７１号に教示され、この内容は、参照によりこれら
の全体が本明細書に組み込まれる。Ｏｒｒによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ
、治療剤を組織内の異なる深さに送達する。別の態様において、薬物溶出バルーンを用い
て、本明細書に記載の製剤を送達してもよい。薬物溶出バルーンは、蛇行血管内の病変、
分岐病変、大腿／膝窩病変、および膝の下の病変を治療するステント内再狭窄等であるが
、これらに限定されない標的病変への適用において使用され得る。
治療剤（例えば、腫瘍学関連ポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ）をル
ーメン周囲に配置された組織に送達するためのデバイスが、Ｐｅｒｒｙらによって説明さ
れており、例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１００１２５２３９号に教示され、これらの
内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｐｅｒｒｙによると、カテ
ーテルはバルーンを有し、それは当技術分野で既知の、およびＰｅｒｒｙによって記載さ
れる方法によって治療剤で被覆され得る。バルーンが膨張すると、治療剤が周辺組織に接
触する。デバイスは、治療剤（ｔｈｅｒｅａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ）を組織に放出す
るようにバルーン上のコーティングの温度を変化するための熱源をさらに有してもよい。
電流を利用する方法およびデバイス
本明細書に教示される単回、複数回、または分割された投薬レジメンに従って、電流を
利用する方法およびデバイスを用いて、本発明のｍｍＲＮＡを送達することができる。そ
のような方法およびデバイスが、以下に記載される。
電気コラーゲン誘導治療デバイスが、Ｍａｒｑｕｅｚによって説明されており、例えば
、米国特許公開第２００９０１３７９４５号に教示され、この内容は、参照によりこれら
の全体が本明細書に組み込まれる。Ｍａｒｑｕｅｚによると、複数の針がデバイス内に組
み込まれ、皮膚を繰り返し穿刺し、最初に皮膚に適用される物質の一部を皮膚部分に引き
込む。
動電システムが、Ｅｔｈｅｒｅｄｇｅらによって説明されており、例えば、米国特許公
開第２００７０１８５４３２号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明
細書に組み込まれる。Ｅｔｈｅｒｅｄｇｅによると、マイクロニードルがデバイス内に組
み込まれ、電流によって、針を通して薬物を標的とされる治療部位に推進する。
イオン泳動デバイスが、Ｍａｔｓｕｍｕｒａらによって説明されており、例えば、米国
特許第７，４３７，１８９号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細
書に組み込まれる。Ｍａｔｓｕｍｕｒａによると、複数の針がデバイス内に組み込まれ、
イオン化可能薬物をより速い速度で、またはより高効率で生体内に送達することができる
。
無針注入およびエレクトロポレーションによる生物活性剤の皮内送達が、Ｈｏｆｆｍａ
ｎｎらによって説明されており、例えば、米国特許第７，１７１，２６４号に教示され、
この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｈｏｆｆｍａｎｎによ
ると、１つ以上の無針注入器がエレクトロポレーションデバイスに組み込まれ、無針注入
とエレクトロポレーションとの組み合わせは、薬剤を皮膚、筋肉、または粘膜の細胞内に
導入するのに十分である。
電気透過化処理（ｅｌｅｃｔｒｏｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）を介した細胞内
送達のための方法が、Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔらによって説明されており、例えば、米国特許
第６，６２５，４８６号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全体が本明細書に
組み込まれる。Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔによると、一対の針電極がカテーテル内に組み込まれ
る。そのカテーテルは体内ルーメン内に位置し、そのルーメンを取り囲む組織内に透過さ
せるためのその針電極が続く。次いでデバイスは、その針電極のうちの少なくとも１つを
通して薬剤を導入し、その針電極で電界をかけ、その薬剤が細胞膜を通して治療部位の細
胞内へ通過することを可能にする。
経皮免疫化のための送達システムが、Ｌｅｖｉｎらによって説明されており、例えば、
国際公開第ＷＯ２００６００３６５９号に教示され、この内容は、参照によりこれらの全
体が本明細書に組み込まれる。Ｌｅｖｉｎによると、複数の電極がデバイス内に組み込ま
れ、電気エネルギーを電極間に印加し、経皮送達を容易にするためのマイクロチャネルを
皮膚内に生成する。
ＲＦエネルギーを皮膚の中へ送達するための方法が、Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｒによって説
明されており、例えば、国際公開第ＷＯ２０１１１６３２６４号に教示され、この内容は
、参照によりこれらの全体が本明細書に組み込まれる。Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｒによると、
複数の針がデバイス内に組み込まれ、針がＲＦエネルギーをプレート上の孔を通して皮膚
に挿入し、送達するように、皮膚をプレートとの接触に誘引するために減圧する。
ＶＩＩ． 定義
本明細書中の種々の箇所で、本開示の化合物の置換基が、群においてまたは範囲におい
て開示される。本開示は、そのような群および範囲のメンバーのありとあらゆる個々の部
分的組み合わせを含むことが具体的に意図される。例えば、「Ｃ１−６アルキル」という
用語は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、およびＣ６アル
キルを個々に開示することが具体的に意図される。
約： 本明細書で使用されるとき、「約」という用語は、列挙される値の＋／−１０％
を意味する。
組み合わせて投与される： 本明細書で使用されるとき、「組み合わせて投与される」
または「組み合わせた投与」という用語は、２つ以上の薬剤が、同時にまたは患者に対す
る各薬剤の効果の重複があるような間隔内で、対象に投与されることを意味する。いくつ
かの実施形態において、それらは、互いの約６０、３０、１５、１０、５、または１分以
内に投与される。いくつかの実施形態において、薬剤の投与は、組み合わせ（例えば、相
乗的）効果が達成されるように、互いに十分に近接して間隔を置かれる。
動物： 本明細書で使用されるとき、「動物」という用語は、動物界の任意のメンバー
を指す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発達段階にあるヒトを指す。
いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発達段階にある非ヒト動物を指す。あ
る特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、齧歯類、マウス、ラット
、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、またはブタ）である。いくつかの
実施形態において、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、サカナ、および蠕虫が
含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、トランスジ
ェニック動物、遺伝子操作動物、またはクローンである。
目的とする抗原または所望の抗原： 本明細書で使用されるとき、「目的とする抗原」
または「所望の抗原」という用語は、本明細書に記載の抗体、ならびにそれらの断片、変
異体、変異形、および改変体によって免疫特異的に結合される、本明細書に提供されるタ
ンパク質および他の生体分子を含む。目的とする抗原の例としては、インスリン、インス
リン様成長因子、ｈＧＨ、ｔＰＡ、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ
−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ
−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、インターフェロン（ＩＦＮ）α、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮ
ω、またはＩＦＮτ、ＴＮＦαおよびＴＮＦβ、ＴＮＦγ、ＴＲＡＩＬ等の腫瘍壊死因子
（ＴＮＦ）；Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、およびＶＥＧＦ等の
サイトカインが挙げられるが、これらに限定されない。
およそ： 本明細書で使用されるとき、目的とする１つ以上の値に適用される「およそ
」または「約」という用語は、定められる参照値と同様である値を指す。ある特定の実施
形態において、「およそ」または「約」という用語は、別途定められるか、または文脈か
ら別途明白でない限り、定められる参照値のいずれかの方向（それよりも大きいまたはそ
れよりも小さい）における、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％
、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３
％、２％、１％、またはそれ未満の内に該当する値の範囲を指す（そのような数字が可能
な値の１００％を超えるような場合を除く）。
と会合される： 本明細書で使用されるとき、２つ以上の部分に関して使用される際、
「と会合される」、「複合体化される」、「連結される」、「結合される」、および「係
留される」という用語は、直接、または連結剤としての役目を果たす１つ以上のさらなる
部分を介してのいずれかで、その部分が互いに物理的に会合されるか、または結合されて
、その部分が、構造が使用される条件下、例えば、生理的条件下で、物理的に会合された
ままであるように十分に安定した構造を形成することを意味する。「会合」は、厳密に直
接的な共有化学結合を経る必要はない。それは、「会合した」実体が物理的に会合したま
まであるように十分に安定したイオン結合もしくは水素結合またはハイブリダイゼーショ
ンベースの結合性も示唆し得る。
二機能性： 本明細書で使用されるとき、「二機能性」という用語は、少なくとも２つ
の機能を維持することが可能である任意の物質、分子、または部分を指す。この機能は、
同じ結果または異なる結果を達成してもよい。この機能をもたらす構造は、同じであるこ
とも、異なることもある。例えば、本発明の二機能性修飾ＲＮＡが、細胞傷害性ペプチド
（第１の機能）をコードし得る一方で、コードＲＮＡを含むヌクレオシドは、それ自体と
して、細胞傷害性（第２の機能）である。この例において、癌細胞への二機能性修飾ＲＮ
Ａの送達は、癌を寛解させ得るまたは治療し得るペプチドまたはタンパク質分子をもたら
すだけでなく、万一、修飾ＲＮＡの翻訳の代わりに分解が生じることがあった場合、ヌク
レオシドの細胞傷害性ペイロードを細胞に送達するであろう。
生体適合性： 本明細書で使用されるとき、「生体適合性」という用語は、損傷、毒性
、または免疫系による拒絶の危険性をほとんどもしくは全くもたらさず、生細胞、組織、
器官、または系と適合性であることを意味する。
生分解性： 本明細書で使用されるとき、「生分解性」という用語は、生き物の作用に
よって無害の生成物へと分解されることが可能であることを意味する。
生物学的に活性： 本明細書で使用されるとき、「生物学的に活性」という表現は、生
体系および／または生物において活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、生物に
投与されるときに、その生物に対して生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であ
ると見なされる。特定の実施形態において、本発明の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍
学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡは、その腫瘍学関連ポリヌクレオチド、
腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡのほんの一部分でも、生物学的に活
性であるか、生物学的に関連性があると見なされる活性を模倣する場合、生物学的に活性
であると見なされ得る。
癌： 本明細書で使用されるとき、対象の「癌」という用語は、無制限増殖、不死、転
移可能性、急速な成長および増殖率、および特定の特徴的な形態的特徴等の特徴を備えて
いる細胞の存在を意味する。しばしば、癌細胞は腫瘍の形であるであろうが、そのような
細胞は対象中で単独で存在し得り、または白血病細胞等の独立した細胞として血流中で循
環し得る。
細胞増殖： 本明細書で使用されるとき、「細胞増殖」という用語は、主に細胞数の増
殖と関連し、それは細胞繁殖（つまり増殖）の手段により生じ、後者の割合が細胞死(例
えばアポトーシスまたは壊死による)より高い場合に生じる。
化学用語： 以下は、「アシル」から「チオール」までの種々の化学用語の定義を提供
する。
本明細書で使用されるとき、「アシル」という用語は、本明細書に定義されるカルボニ
ル基を介して親分子基に結合される、本明細書に定義される水素またはアルキル基（例え
ば、ハロアルキル基）を表し、ホルミル（すなわち、カルボキシアルデヒド基）、アセチ
ル、プロピオニル、ブタノイル等により例として示される。例示の非置換アシル基は、１
〜７、１〜１１、または１〜２１個の炭素を含む。いくつかの実施形態において、アルキ
ル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換される。
本明細書で使用されるとき、「アシルアミノ」という用語は、本明細書に定義されるア
ミノ基を介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるアシル基を表す（すなわち
、−Ｎ（ＲＮ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒであり、式中、Ｒは、Ｈであるか、または任意に置換さ
れるＣ１−６、Ｃ１−１０、もしくはＣ１−２０アルキル基であり、ＲＮ１は、本明細書
に定義される通りである）。例示の非置換アシルアミノ基は、１〜４１個の炭素（例えば
、１〜７、１〜１３、１〜２１、２〜７、２〜１３、２〜２１、または２〜４１個の炭素
）を含む。いくつかの実施形態において、アルキル基は、本明細書に記載の１、２、３、
もしくは４個の置換基でさらに置換され、かつ／またはアミノ基は、−ＮＨ２もしくは−
ＮＨＲＮ１であり、式中、ＲＮ１は、独立して、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２ ２、Ｓ
Ｏ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、またはアリールであり、各ＲＮ２
は、Ｈ、アルキル、またはアリールであり得る。
本明細書で使用されるとき、「アシルオキシ」という用語は、酸素原子を介して親分子
基に結合される、本明細書に定義されるアシル基を表す（すなわち、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ
であり、式中、Ｒは、Ｈであるか、または任意に置換されるＣ１−６、Ｃ１−１０、もし
くはＣ１−２０アルキル基である）。例示の非置換アシルオキシ基は、１〜２１個の炭素
（例えば、１〜７または１〜１１個の炭素）を含む。いくつかの実施形態において、アル
キル基は、本明細書に記載の１、２、３、もしくは４個の置換基でさらに置換され、かつ
／またはアミノ基は、−ＮＨ２もしくは−ＮＨＲＮ１であり、式中、ＲＮ１は、独立して
、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２ ２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、ア
ルキル、またはアリールであり、各ＲＮ２は、Ｈ、アルキル、またはアリールであり得る
。
本明細書で使用されるとき、「アルカリール（ａｌｋａｒｙｌ）」という用語は、本明
細書に定義されるアルキレン基を介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるア
リール基を表す。例示の非置換アルカリール基は、７〜３０個の炭素（例えば、Ｃ１−６
アルク−Ｃ６−１０アリール、Ｃ１−１０アルク−Ｃ６−１０アリール、またはＣ１−２
０アルク−Ｃ６−１０アリール等の、７〜１６または７〜２０個の炭素）である。いくつ
かの実施形態において、アルキレンおよびアリールは各々、それぞれの基について本明細
書に定義される１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。接頭辞「アルク
−」に続く他の基は、同じように定義され、ここで「アルク」は、別途注記のない限り、
Ｃ１−６アルキレンを指し、結合される化学構造は、本明細書に定義される通りである。
「アルクシクロアルキル（ａｌｋｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）」という用語は、本明細書に
定義されるアルキレン基（例えば、１〜４、１〜６、１〜１０、または１〜２０個の炭素
のアルキレン基）を介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるシクロアルキル
基を表す。いくつかの実施形態において、アルキレンおよびシクロアルキルは各々、それ
ぞれの基について本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基でさらに置換さ
れ得る。
本明細書で使用されるとき、「アルケニル」という用語は、別途明記されない限り、１
つ以上の炭素−炭素二重結合を含有する、２〜２０個の炭素（例えば、２〜６または２〜
１０個の炭素）の、一価の直鎖または分岐鎖基を表し、エテニル、１−プロペニル、２−
プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル等により例とし
て示される。アルケニルは、シスおよびトランス異性体の両方を含む。アルケニル基は、
本明細書に定義されるアミノ、アリール、シクロアルキル、もしくはヘテロシクリル（例
えば、ヘテロアリール）から独立して選択される１、２、３、もしくは４個の置換基、ま
たは本明細書に記載の例示のアルキル置換基のうちのいずれかで、任意に置換されてもよ
い。
「アルケニルオキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒは、別途
明記されない限り、Ｃ２−２０アルケニル基（例えば、Ｃ２−６またはＣ２−１０アルケ
ニル）である。例示のアルケニルオキシ基には、エテニルオキシ、プロペニルオキシ等が
含まれる。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、本明細書に定義される１、２
、３、または４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換され得る。
「アルクヘテロアリール」という用語は、本明細書に定義されるアルキレン基を介して
親分子基に結合される、本明細書に定義されるヘテロアリール基を指す。例示の非置換ア
ルクヘテロアリール基は、２〜３２個の炭素（例えば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテ
ロアリール、Ｃ１−１０アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール、またはＣ１−２０アルク−
Ｃ１−１２ヘテロアリール等の、２〜２２、２〜１８、２〜１７、２〜１６、３〜１５、
２〜１４、２〜１３、または２〜１２個の炭素）である。いくつかの実施形態において、
アルキレンおよびヘテロアリールは各々、それぞれの基について本明細書に定義される１
、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。アルクヘテロアリール基は、アル
クヘテロシクリル基の部分集合である。
「アルクヘテロシクリル」という用語は、本明細書に定義されるアルキレン基を介して
親分子基に結合される、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。例示の非置換ア
ルクヘテロシクリル基は、２〜３２個の炭素（例えば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテ
ロシクリル、Ｃ１−１０アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル、またはＣ１−２０アルク−
Ｃ１−１２ヘテロシクリル等の、２〜２２、２〜１８、２〜１７、２〜１６、３〜１５、
２〜１４、２〜１３、または２〜１２個の炭素）である。いくつかの実施形態において、
アルキレンおよびヘテロシクリルは各々、それぞれの基について本明細書に定義される１
、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
「アルコキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒは、別途明記さ
れない限り、Ｃ１−２０アルキル基（例えば、Ｃ１−６またはＣ１−１０アルキル）であ
る。例示のアルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキ
シおよびイソプロポキシ）、ｔ−ブトキシ等が含まれる。いくつかの実施形態において、
アルキル基は、本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基（例えば、ヒドロ
キシまたはアルコキシ）でさらに置換され得る。
「アルコキシアルコキシ」という用語は、アルコキシ基で置換されるアルコキシ基を表
す。例示の非置換アルコキシアルコキシ基は、２〜４０個の炭素（例えば、Ｃ１−６アル
コキシ−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−１０アルコキシ−Ｃ１−１０アルコキシ、またはＣ
１−２０アルコキシ−Ｃ１−２０アルコキシ等の、２〜１２または２〜２０個の炭素）を
含む。いくつかの実施形態において、各アルコキシ基は、本明細書に定義される１、２、
３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
「アルコキシアルキル」という用語は、アルコキシ基で置換されるアルキル基を表す。
例示の非置換アルコキシアルキル基は、２〜４０個の炭素（例えば、Ｃ１−６アルコキシ
−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ−Ｃ１−１０アルキル、またはＣ１−２０ア
ルコキシ−Ｃ１−２０アルキル等の、２〜１２または２〜２０個の炭素）を含む。いくつ
かの実施形態において、アルキルおよびアルコキシは各々、それぞれの基について本明細
書に定義される１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニル」という用語は、カルボニル原子
を介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるアルコキシを表す（例えば、−Ｃ
（Ｏ）−ＯＲであり、式中、Ｒは、Ｈであるか、または任意に置換されるＣ１−６、Ｃ１
−１０、もしくはＣ１−２０アルキル基である）。例示の非置換アルコキシカルボニルは
、１〜２１個の炭素（例えば、１〜１１または１〜７個の炭素）を含む。いくつかの実施
形態において、アルコキシ基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさ
らに置換される。
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアルコキシ」という用語は、本明
細書に定義されるアルコキシカルボニル基で置換される、本明細書に定義されるアルコキ
シ基を表す（例えば、−Ｏ−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲであって、式中、Ｒは、任意に置
換されるＣ１−６、Ｃ１−１０、またはＣ１−２０アルキル基である）。例示の非置換ア
ルコキシカルボニルアルコキシは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１−６アルコキシカル
ボニル−Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−１０アルコキシカルボニル−Ｃ１−１０アルコキシ
、またはＣ１−２０アルコキシカルボニル−Ｃ１−２０アルコキシ等の、３〜１０、３〜
１３、３〜１７、３〜２１、または３〜３１個の炭素）を含む。いくつかの実施形態にお
いて、各アルコキシ基は、独立して、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基
（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
本明細書で使用されるとき、「アルコキシカルボニルアルキル」という用語は、本明細
書に定義されるアルコキシカルボニル基で置換される、本明細書に定義されるアルキル基
を表す（例えば、−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲであって、式中、Ｒは、任意に置換される
Ｃ１−２０、Ｃ１−１０、またはＣ１−６アルキル基である）。例示の非置換アルコキシ
カルボニルアルキルは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１−６アルコキシカルボニル−Ｃ
１−６アルキル、Ｃ１−１０アルコキシカルボニル−Ｃ１−１０アルキル、またはＣ１−
２０アルコキシカルボニル−Ｃ１−２０アルキル等の、３〜１０、３〜１３、３〜１７、
３〜２１、または３〜３１個の炭素）を含む。いくつかの実施形態において、各アルキル
およびアルコキシ基は、独立して、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基（
例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
本明細書で使用されるとき、「アルキル」という用語は、別途明記されない限り、１〜
２０個（例えば、１〜１０または１〜６個）の炭素の直鎖および分岐鎖両方の飽和基を含
む。アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−およびイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−、イソ
−、およびｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル等により例として示され、次のものからなる
群から独立して選択される１、２、３個の置換基で、または２個以上の炭素のアルキル基
の場合には４個の置換基で、任意に置換されてもよい：（１）Ｃ１−６アルコキシ；（２
）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（３）本明細書に定義されるアミノ（例えば、非置換
アミノ（すなわち、−ＮＨ２）または置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２、式中、
ＲＮ１は、アミノについて定義される通りである）；（４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−
６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２−９ヘテロシクリル）オキシ；
（８）ヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒドまた
はアシル）；（１１）Ｃ１−７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオ
ール；（１４）−ＣＯ２ＲＡ’（式中、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（例えば、
Ｃ１−６アルキル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル）、（
ｃ）Ｃ６−１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（
ｆ）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（Ｃ
Ｈ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６
または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、
０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ
１−２０アルキルである）、および（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）
ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１
０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、
０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、
各ＲＮ１は、独立して、水素であるか、または任意に置換されるＣ１−６アルキルである
）からなる群から選択される）；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’（式中、ＲＢ’およ
びＲＣ’の各々は、独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０
アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される
）；（１６）−ＳＯ２ＲＤ’（式中、ＲＤ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−
１０アリール、（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）ヒドロキシか
らなる群から選択される）；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’（式中、ＲＥ’およびＲＦ
’の各々は、独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリー
ル、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される）；（
１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ’（式中、ＲＧ’は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−
６アルキル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ
６−１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）ア
ミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）
ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または
１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４
、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１−２
０アルキルである）、および（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（
ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例
えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１
０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、各ＲＮ
１は、独立して、水素であるか、または任意に置換されるＣ１−６アルキルである）から
なる群から選択される）；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’（式中、ＲＨ’は、（ａ１
）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ’は、（ａ２）Ｃ
１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（例え
ば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１
−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（
ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（
式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３
の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜
１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１−２０アルキルである）、および（ｈ２）−
ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリ
エチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数で
あり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４
、１〜６、または１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立して、水素であるか、また
は任意に置換されるＣ１−６アルキルである）からなる群から選択される）；（２０）−
ＮＲＪ’Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ’（式中、ＲＪ’は、（ａ１）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アル
キルからなる群から選択され、ＲＫ’は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−
６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２
）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、
（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ
１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、
１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例
えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈま
たはＣ１−２０アルキルである）、および（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２Ｃ
Ｈ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（式中、ｓ１は
、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独
立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数
であり、各ＲＮ１は、独立して、水素であるか、または任意に置換されるＣ１−６アルキ
ルである）からなる群から選択される）；ならびに（２１）アミジン。いくつかの実施形
態において、これらの基の各々は、本明細書に記載されるようにさらに置換され得る。例
えば、Ｃ１−アルカリールのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換されて、それぞれの
アリーロイル（ａｒｙｌｏｙｌ）置換基をもたらすことができる。
本明細書で使用されるとき、「アルキレン」および接頭辞「アルク−」という用語は、
２つの水素原子の除去によって直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素に由来する、飽和二価炭
化水素基を表し、メチレン、エチレン、イソプロピレン等により例として示される。「Ｃ
ｘ−ｙアルキレン」および接頭辞「Ｃｘ−ｙアルク−」という用語は、ｘ〜ｙ個の炭素を
有するアルキレン基を表す。ｘに関する例示の値は、１、２、３、４、５、および６であ
り、ｙに関する例示の値は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６
、１８、または２０である（例えば、Ｃ１−６、Ｃ１−１０、Ｃ２−２０、Ｃ２−６、Ｃ
２−１０、またはＣ２−２０アルキレン）。いくつかの実施形態において、アルキレンは
、アルキル基について本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基でさらに置
換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アルキルスルフィニル」という用語は、−Ｓ（Ｏ）−基
を介して親分子基に結合されるアルキル基を表す。例示の非置換アルキルスルフィニル基
は、１〜６、１〜１０、または１〜２０個の炭素である。いくつかの実施形態において、
アルキル基は、本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され
得る。
本明細書で使用されるとき、「アルキルスルフィニルアルキル」という用語は、アルキ
ルスルフィニル基によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。例示の
非置換アルキルスルフィニルアルキル基は、２〜１２、２〜２０、または２〜４０個の炭
素である。いくつかの実施形態において、各アルキル基は、本明細書に定義される１、２
、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アルキニル」という用語は、炭素−炭素三重結合を含有
する、２〜２０個の炭素原子（例えば、２〜４、２〜６、または２〜１０個の炭素）の、
一価の直鎖または分岐鎖基を表し、エチニル、１−プロピニル等により例として示される
。アルキニル基は、本明細書に定義されるアリール、シクロアルキル、またはヘテロシク
リル（例えば、ヘテロアリール）から独立して選択される１、２、３、もしくは４個の置
換基、または本明細書に記載の例示のアルキル置換基のうちのいずれかで、任意に置換さ
れてもよい。
「アルキニルオキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒは、別途
明記されない限り、Ｃ２−２０アルキニル基（例えば、Ｃ２−６またはＣ２−１０アルキ
ニル）である。例示のアルキニルオキシ基には、エチニルオキシ、プロピニルオキシ等が
含まれる。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、本明細書に定義される１、２
、３、または４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アミジン」という用語は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２基を表
す。
本明細書で使用されるとき、「アミノ」という用語は、−Ｎ（ＲＮ１）２を表し、式中
、各ＲＮ１は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＮＯ２、Ｎ（ＲＮ２）２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２
ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、Ｎ−保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ア
リール、アルカリール、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、カルボキシアルキル、
スルホアルキル、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、またはアルクヘテロシク
リル（例えば、アルクヘテロアリール）であり、これらの列挙されるＲＮ１基の各々は、
各基について本明細書に定義されるように任意に置換され得るか、または２つのＲＮ１が
組み合わさって、ヘテロシクリルもしくはＮ保護基を形成し、各ＲＮ２は、独立して、Ｈ
、アルキル、またはアリールである。本発明のアミノ基は、非置換アミノ（すなわち、−
ＮＨ２）または置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２）であり得る。好ましい実施形
態において、アミノは、−ＮＨ２または−ＮＨＲＮ１であり、式中、ＲＮ１は、独立して
、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２ ２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、ア
ルキル、カルボキシアルキル、スルホアルキル、またはアリールであり、各ＲＮ２は、Ｈ
、Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル）、またはＣ６−１０アリールであり
得る。
本明細書に記載の「アミノ酸」という用語は、側鎖、アミノ基、および酸性基（例えば
、−ＣＯ２Ｈのカルボキシ基または−ＳＯ３Ｈのスルホ基）を有する分子を指し、このア
ミノ酸は、側鎖、アミノ基、または酸性基（例えば、側鎖）によって親分子基に結合され
る。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、カルボニル基によって親分子基に結合さ
れ、この側鎖またはアミノ基は、カルボニル基に結合される。例示の側鎖には、任意に置
換されるアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルカリール、アルクヘテロシクリル、
アミノアルキル、カルバモイルアルキル、およびカルボキシアルキルが含まれる。例示の
アミノ酸には、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グ
ルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシノルバリン、イソロイシン
、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリ
ン、ピロリジン、セレノシステイン、セリン、タウリン、スレオニン、トリプトファン、
チロシン、およびバリンが含まれる。アミノ酸基は、次のものからなる群から独立して選
択される１、２、３個の置換基で、または２個以上の炭素のアミノ酸基の場合には４個の
置換基で、任意に置換されてもよい：（１）Ｃ１−６アルコキシ；（２）Ｃ１−６アルキ
ルスルフィニル；（３）本明細書に定義されるアミノ（例えば、非置換アミノ（すなわち
、−ＮＨ２）または置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２（式中、ＲＮ１は、アミノ
について定義される通りである））；（４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ；
（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２−９ヘテロシクリル）オキシ；（８）ヒドロキ
シ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒドまたはアシル）；（
１１）Ｃ１−７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）
−ＣＯ２ＲＡ’（式中、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキ
ル）、（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６−１０
アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ
１−２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ
’のポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）
の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６
、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１−２０アルキ
ルである）、および（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）
ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１
〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例え
ば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独
立して、水素であるか、または任意に置換されるＣ１−６アルキルである）からなる群か
ら選択される）；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’（式中、ＲＢ’およびＲＣ’の各々
は、独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、およ
び（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される）；（１６）−
ＳＯ２ＲＤ’（式中、ＲＤ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、
（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）ヒドロキシからなる群から選
択される）；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’（式中、ＲＥ’およびＲＦ’の各々は、独
立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ
）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される）；（１８）−Ｃ（Ｏ
）ＲＧ’（式中、ＲＧ’は、（ａ）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル）、
（ｂ）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６−１０アリー
ル、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１−２
０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポ
リエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数
であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜
４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１−２０アルキルであ
る）、および（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３Ｎ
ＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６ま
たは１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０
〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立して
、水素であるか、または任意に置換されるＣ１−６アルキルである）からなる群から選択
される）；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’（式中、ＲＨ’は、（ａ１）水素および（
ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ’は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキ
ル（例えば、Ｃ１−６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６ア
ルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ
６−１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（
ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’のポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、
１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立
して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数で
あり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１−２０アルキルである）、および（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ
２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコ
ール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およ
びｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、また
は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立して、水素であるか、または任意に置換さ
れるＣ１−６アルキルである）からなる群から選択される）；（２０）−ＮＲＪ’Ｃ（Ｏ
）ＯＲＫ’（式中、ＲＪ’は、（ａ１）水素および（ｂ１）Ｃ１−６アルキルからなる群
から選択され、ＲＫ’は、（ａ２）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル）、
（ｂ２）Ｃ２−２０アルケニル（例えば、Ｃ２−６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６−１０ア
リール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、（ｆ２）アミノ
−Ｃ１−２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ
３ＯＲ’のポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６または１
〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１０（例えば、０〜４、
０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、ＨまたはＣ１−２０
アルキルである）、および（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（
ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１のアミノ−ポリエチレングリコール（式中、ｓ１は、１〜１０（例
えば、１〜６または１〜４）の整数であり、ｓ２およびｓ３の各々は、独立して、０〜１
０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、または１〜１０）の整数であり、各ＲＮ
１は、独立して、水素であるか、または任意に置換されるＣ１−６アルキルである）から
なる群から選択される）；ならびに（２１）アミジン。いくつかの実施形態において、こ
れらの基の各々は、本明細書に記載されるようにさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アミノアルコキシ」という用語は、本明細書に定義され
るアミノ基によって置換された、本明細書に定義されるアルコキシ基を表す。アルキルお
よびアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載の１、２、３、または４個の置
換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’（式中、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−
１０アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、例えば
、カルボキシからなる群から選択される））でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アミノアルキル」という用語は、本明細書に定義される
アミノ基によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。アルキルおよび
アミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基
（例えば、ＣＯ２ＲＡ’（式中、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０
アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール、例えば、カ
ルボキシからなる群から選択される））でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アリール」という用語は、１つまたは２つの芳香族環を
有する単環式、二環式、または多環式の炭素環式環系を表し、フェニル、ナフチル、１，
２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、アントラセニル、フェ
ナントレニル、フルオレニル、インダニル、インデニル等により例として示され、次のも
のからなる群から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で任意に置換
されてもよい：（１）Ｃ１−７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１−
２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ
１−６アルキルスルフィニル−Ｃ１−６アルキル、アミノ−Ｃ１−６アルキル、アジド−
Ｃ１−６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アル
キル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニトロ−Ｃ１
−６アルキル、またはＣ１−６チオアルコキシ−Ｃ１−６アルキル）；（３）Ｃ１−２０
アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシ等のＣ１−６アルコキシ）；（４）Ｃ１−
６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６−１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１−６ア
ルク−Ｃ６−１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３−８シクロアルキル；（１０）Ｃ
１−６アルク−Ｃ３−８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１−１２ヘテロシク
リル（例えば、Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１−１２ヘテロシクリル）オ
キシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１−２０チオアルコキシ（例え
ば、Ｃ１−６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’（式中、ｑは、０
〜４の整数であり、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（
ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される
）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’（式中、ｑは、０〜４の整数であり、Ｒ
Ｂ’およびＲＣ’は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール
、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から独立して選択される
）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’（式中、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は
、（ａ）アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、および（ｃ）アルク−Ｃ６−１０アリー
ルからなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’（式中、
ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’およびＲＦ’の各々は、独立して、（ａ）水素、（ｂ
）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−
１０アリールからなる群から選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６−１０アリ
ールオキシ；（２３）Ｃ３−８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−
６アルコキシ；（２５）Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１−６
アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（２６）Ｃ２−２０アルケニル；ならびに（２７
）Ｃ２−２０アルキニル。いくつかの実施形態において、これらの基の各々は、本明細書
に記載されるようにさらに置換され得る。例えば、Ｃ１−アルカリールまたはＣ１−アル
クヘテロシクリルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換されて、それぞれのアリーロ
イルおよび（ヘテロシクリル）オイル置換基をもたらすことができる。
本明細書で使用されるとき、「アリールアルコキシ」という用語は、酸素原子を介して
親分子基に結合される、本明細書に定義されるアルカリール基を表す。例示の非置換アル
コキシアルキル基は、７〜３０個の炭素（例えば、Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコ
キシ、Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−１０アルコキシ、またはＣ６−１０アリール−Ｃ１−
２０アルコキシ等の、７〜１６または７〜２０個の炭素）を含む。いくつかの実施形態に
おいて、アリールアルコキシ基は、本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換
基で置換され得る。
「アリールオキシ」という用語は、式−ＯＲ’の化学置換基を表し、式中、Ｒ’は、別
途明記されない限り、６〜１８個の炭素のアリール基である。いくつかの実施形態におい
て、アリール基は、本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基で置換され得
る。
本明細書で使用されるとき、「アリーロイル」という用語は、カルボニル基を介して親
分子基に結合される、本明細書に定義されるアリール基を表す。例示の非置換アリーロイ
ル基は、７〜１１個の炭素のものである。いくつかの実施形態において、アリール基は、
本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基で置換され得る。
「アジド」という用語は、−Ｎ３基を表し、それは、−Ｎ＝Ｎ＝Ｎとしても表され得る
。
本明細書で使用されるとき、「二環式」という用語は、芳香族でも非芳香族でもあり得
る２つの環を有する構造を指す。二環式構造には、本明細書に定義されるスピロシクリル
基、および１つ以上の架橋を共有する２つの環が含まれ、そのような架橋は、１個の原子
、または２個、３個、もしくはそれよりも多い原子を含む鎖を含むことができる。例示の
二環式基には、二環式カルボシクリル基（その第１および第２の環は、本明細書に定義さ
れるカルボシクリル基である）；二環式アリール基（その第１および第２の環は、本明細
書に定義されるアリール基である）；二環式ヘテロシクリル基（その第１の環は、ヘテロ
シクリル基であり、第２の環は、カルボシクリル（例えば、アリール）またはヘテロシク
リル（例えば、ヘテロアリール）基である）；および二環式ヘテロアリール基（その第１
の環は、ヘテロアリール基であり、第２の環は、カルボシクリル（例えば、アリール）ま
たはヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）基である）が含まれる。いくつかの実施
形態において、二環式基は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、およびアリール基につい
て本明細書に定義される１、２、３、または４個の置換基で置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「炭素環式」および「カルボシクリル」という用語は、芳
香族でも非芳香族でもあり得る環が炭素原子によって形成される、任意に置換されるＣ３
−１２単環式、二環式、または三環式構造を指す。炭素環式構造には、シクロアルキル、
シクロアルケニル、およびアリール基が含まれる。
本明細書で使用されるとき、「カルバモイル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲＮ１
）２を表し、式中、各ＲＮ１の意味は、本明細書に提供される「アミノ」の定義において
見出される。
本明細書で使用されるとき、「カルバモイルアルキル」という用語は、本明細書に定義
されるカルバモイル基によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。ア
ルキル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「カルバミル」という用語は、構造−ＮＲＮ１Ｃ（＝Ｏ）
ＯＲまたは−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＮ１）２を有するカルバメート基を指し、式中、各ＲＮ
１の意味は、本明細書に提供される「アミノ」の定義において見出され、Ｒは、本明細書
に定義されるアルキル、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、アリール、アルカリー
ル、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、またはアルクヘテロシクリル（例えば
、アルクヘテロアリール）である。
本明細書で使用されるとき、「カルボニル」という用語は、Ｃ（Ｏ）基を表し、それは
、Ｃ＝Ｏとしても表され得る。
「カルボキシアルデヒド」という用語は、構造−ＣＨＯを有するアシル基を表す。
本明細書で使用されるとき、「カルボキシ」という用語は、−ＣＯ２Ｈを意味する。
本明細書で使用されるとき、「カルボキシアルコキシ」という用語は、本明細書に定義
されるカルボキシ基によって置換された、本明細書に定義されるアルコキシ基を表す。ア
ルコキシ基は、アルキル基について本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基で
さらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「カルボキシアルキル」という用語は、本明細書に定義さ
れるカルボキシ基によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。アルキ
ル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「シアノ」という用語は、−ＣＮ基を表す。
「シクロアルコキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒは、別途
明記されない限り、本明細書に定義されるＣ３−８シクロアルキル基である。シクロアル
キル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。例
示の非置換シクロアルコキシ基は、３〜８個の炭素である。いくつかの実施形態において
、シクロアルキル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換
され得る。
本明細書で使用されるとき、「シクロアルキル」という用語は、別途明記されない限り
、３〜８個の炭素の一価の飽和または不飽和非芳香族環状炭化水素基を表し、シクロプロ
ピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロ［２
．２．１．］ヘプチル等により例として示される。シクロアルキル基が１つの炭素−炭素
二重結合を含むとき、シクロアルキル基は、「シクロアルケニル」基と称され得る。例示
のシクロアルケニル基には、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等が含まれる。本発明
のシクロアルキル基は、次のもので任意に置換され得る：（１）Ｃ１−７アシル（例えば
、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル、Ｃ
１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル−Ｃ１−６アルキ
ル、アミノ−Ｃ１−６アルキル、アジド−Ｃ１−６アルキル、（カルボキシアルデヒド）
−Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒド
ロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニトロ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６チオアルコキシ
−Ｃ１−６アルキル）；（３）Ｃ１−２０アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシ
等のＣ１−６アルコキシ）；（４）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６−１０ア
リール；（６）アミノ；（７）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール；（８）アジド；（
９）Ｃ３−８シクロアルキル；（１０）Ｃ１−６アルク−Ｃ３−８シクロアルキル；（１
１）ハロ；（１２）Ｃ１−１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１−１２ヘテロアリール）；
（１３）（Ｃ１−１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；
（１６）Ｃ１−２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１−６チオアルコキシ）；（１７）−（
ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’（式中、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−６
アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６
−１０アリールからなる群から選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ
’（式中、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’およびＲＣ’は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６
−１０アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０
アリールからなる群から独立して選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’（
式中、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、（ａ）Ｃ６−１０アルキル、（ｂ）Ｃ６−
１０アリール、および（ｃ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択さ
れる）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’（式中、ｑは、０〜４の整数であ
り、ＲＥ’およびＲＦ’の各々は、独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６−１０アルキル、
（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる
群から選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６−１０アリールオキシ；（２３）
Ｃ３−８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６−１０アリール−Ｃ１−６アルコキシ；（２５
）Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘ
テロアリール）；（２６）オキソ；（２７）Ｃ２−２０アルケニル；ならびに（２８）Ｃ
２−２０アルキニル。いくつかの実施形態において、これらの基の各々は、本明細書に記
載されるようにさらに置換され得る。例えば、Ｃ１−アルカリールまたはＣ１−アルクヘ
テロシクリルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換されて、それぞれのアリーロイル
および（ヘテロシクリル）オイル置換基をもたらすことができる。
本明細書で使用されるとき、「ジアステレオマー」という用語は、互いの鏡像でなく、
互いの上に重ね合わせ不可能である、立体異性体を意味する。
本明細書で使用されるとき、本明細書で使用される薬剤の「有効量」は、有益なまたは
所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、したがって、「有効量」
は、それが適用されている前後関係に依存する。例えば、癌を治療する薬剤を投与するこ
との前後関係において、有効量の薬剤は、例えば、薬剤の投与を伴わずに得られる反応と
比較して、本明細書に定義される癌の治療を達成するのに十分な量である。
本明細書で使用されるとき、「鏡像異性体」という用語は、少なくとも８０％（すなわ
ち、一方の鏡像異性体が少なくとも９０％および他方の鏡像異性体が多くても１０％）、
好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９８％の光学純度または鏡像異
性体過剰率（当技術分野で標準の方法によって決定するとき）を有する、本発明の化合物
の各個々の光学活性型を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ハロ」という用語は、臭素、塩素、ヨウ素、またはフッ
素から選択されるハロゲンを表す。
本明細書で使用されるとき、「ハロアルコキシ」という用語は、ハロゲン基（すなわち
、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）によって置換された、本明細書に定義されるアルコキシ基
を表す。ハロアルコキシは、１、２、３個のハロゲンで、または２個以上の炭素のアルキ
ル基の場合には４個のハロゲンで置換されてもよい。ハロアルコキシ基には、ペルフルオ
ロアルコキシ（例えば、−ＯＣＦ３）、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＣｌ３、−
ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、および−ＯＣＨＩＣ
Ｈ３が含まれる。いくつかの実施形態において、ハロアルコキシ基は、アルキル基につい
て本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「ハロアルキル」という用語は、ハロゲン基（すなわち、
Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表
す。ハロアルキルは、１、２、３個のハロゲンで、または２個以上の炭素のアルキル基の
場合には４個のハロゲンで置換されてもよい。ハロアルキル基には、ペルフルオロアルキ
ル（例えば、−ＣＦ３）、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、
−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、および−ＣＨＩＣＨ３が含まれる。いくつか
の実施形態において、ハロアルキル基は、アルキル基について本明細書に記載の１、２、
３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロアルキレン」という用語は、構成炭素原子のうち
の１個または２個が各々、窒素、酸素、または硫黄によって置き換えらた、本明細書に定
義されるアルキレン基を指す。いくつかの実施形態において、ヘテロアルキレン基は、ア
ルキレン基について本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され
得る。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロアリール」という用語は、芳香族である、本明細
書に定義されるヘテロシクリルの部分集合を表し、すなわち、それらは単環式または多環
式環系内に４ｎ＋２個のπ電子を含有する。例示の非置換ヘテロアリール基は、１〜１２
個（例えば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、または２〜
９個）の炭素のものである。いくつかの実施形態において、ヘテロアリールは、ヘテロシ
クリル基について定義される１、２、３、または４個の置換基で置換される。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロシクリル」という用語は、別途明記されない限り
、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１、２、３、または４個の
ヘテロ原子を含有する、５、６、または７員環を表す。５員環は、０〜２つの二重結合を
有し、６および７員環は、０〜３つの二重結合を有する。例示の非置換ヘテロシクリル基
は、１〜１２個（例えば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０
、または２〜９個）の炭素のものである。「ヘテロシクリル」という用語は、１個以上の
炭素および／またはヘテロ原子が単環式環の２つの隣接していない員を架橋する、架橋多
環式構造を有する複素環式化合物、例えば、キヌクリジニル基も表す。「ヘテロシクリル
」という用語は、上記の複素環式環のうちのいずれかが１、２、もしくは３つの炭素環式
環、例えば、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シ
クロペンテン環、またはインドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、
ベンゾフリル、ベンゾチエニル等の別の単環式の複素環式環に縮合される、二環式、三環
式、および四環式基を含む。縮合ヘテロシクリルの例としては、トロパンおよび１，２，
３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジンが挙げられる。複素環には、ピロリル、ピ
ロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、
イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピラ
ジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル
、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾ
リル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、インダゾリ
ル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニル、ジヒドロキノキサリニル、キナゾリニル
、シノリニル、フタラジニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾ
リル、ベンゾチアジアゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、ト
リアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル（例えば、１，２，３−オキサジアゾリル
）、プリニル、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾリル）、テトラヒドロ
フラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロイン
ドリル、ジヒドロキノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ジヒド
ロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、イソベ
ンゾフラニル、ベンゾチエニル等が含まれ、１つ以上の二重結合が還元され、水素と置き
換えられる、それらのジヒドロおよびテトラヒドロ形態を含む。さらに他の例示のヘテロ
シクリルには、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−オキサゾリル；２，３−ジ
ヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−イミダゾリル；２，３，４，５−テトラヒドロ−５−オキソ
−１Ｈ−ピラゾリル（例えば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−フェニル−５−オキ
ソ−１Ｈ−ピラゾリル）；２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−１Ｈ−イ
ミダゾリル（例えば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−５−メチル−
５−フェニル−１Ｈ−イミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−１，３，４−
オキサジアゾリル（例えば、２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−５−フェニル−１，３，
４−オキサジアゾリル）；４，５−ジヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル（例えば
、４，５−ジヒドロ−３−メチル−４−アミノ５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル）；１，
２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリジニル（例えば、１，２，３，４−テ
トラヒドロ−２，４−ジオキソ−３，３−ジエチルピリジニル）；２，６−ジオキソ−ピ
ペリジニル（例えば、２，６−ジオキソ−３−エチル−３−フェニルピペリジニル）；１
，６−ジヒドロ−６−オキソピリジミニル；１，６−ジヒドロ−４−オキソピリミジニル
（例えば、２−（メチルチオ）−１，６−ジヒドロ−４−オキソ−５−メチルピリミジン
−１−イル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリミジニル（例えば
、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３−エチルピリミジニル）；１，
６−ジヒドロ−６−オキソ−ピリダジニル（例えば、１，６−ジヒドロ−６−オキソ−３
−エチルピリダジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル（
例えば、１，６−ジヒドロ−５−イソプロピル−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル
）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル（例えば、３，３−ジメチル−２
，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリルおよび２，３−ジヒドロ−２−オキソ−
３，３’−スピロプロパン−１Ｈ−インドール−１−イル）；１，３−ジヒドロ−１−オ
キソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソ−イ
ンドリル；１Ｈ−ベンゾピラゾリル（例えば、１−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ベン
ゾピラゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル（例えば、
３−エチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル）；２，３−ジ
ヒドロ−２−オキソ−ベンゾオキサゾリル（例えば、５−クロロ−２，３−ジヒドロ−２
−オキソ−ベンゾオキサゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾオキサゾリル
；２−オキソ−２Ｈ−ベンゾピラニル；１，４−ベンゾジオキサニル；１，３−ベンゾジ
オキサニル；２，３−ジヒドロ−３−オキソ，４Ｈ−１，３−ベンゾチアジニル；３，４
−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル（例えば、２−メチル−３，４−ジヒドロ
−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキ
ソ−３Ｈ−キナゾリル（例えば、１−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−
ジオキソ−３Ｈ−キナゾリル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−７
Ｈ−プリニル（例えば、１，２，３，６−テトラヒドロ−１，３−ジメチル−２，６−ジ
オキソ−７Ｈ−プリニル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−１Ｈ−
プリニル（例えば、１，２，３，６−テトラヒドロ−３，７−ジメチル−２，６−ジオキ
ソ−１Ｈ−プリニル）；２−オキソベンズ［ｃ，ｄ］インドリル；１，１−ジオキソ−２
Ｈ−ナフト［１，８−ｃ，ｄ］イソチアゾリル；および１，８−ナフチレンジカルボキサ
ミドが含まれる。さらなる複素環には、３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロ−ピ
ロｌｏ［３，４−ｂ］ピロｌ−（２Ｈ）−イル、および２，５−ジアザビシクロ［２．２
．１］ヘプタン−２−イル、ホモピペラジニル（またはジアゼパニル）、テトラヒドロピ
ラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、オキセパニル、チエパニル、
アゾカニル、オキセカニル、およびチオカニルが含まれる。複素環基は、式：
の基も含み、式中、
Ｅ’は、−Ｎ−および−ＣＨ−からなる群から選択され、Ｆ’は、−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｎ
Ｈ−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ
（Ｏ）−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−Ｏ
ＣＨ２−、−Ｏ−、および−Ｓ−からなる群から選択され、Ｇ’は、−ＣＨ−および−Ｎ
−からなる群から選択される。本明細書で言及されるヘテロシクリル基のうちのいずれか
は、次のものからなる群から独立して選択される１、２、３、４、または５個の置換基で
任意に置換されてもよい：（１）Ｃ１−７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（
２）Ｃ１−２０アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６ア
ルキル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル−Ｃ１−６アルキル、アミノ−Ｃ１−６アルキル
、アジド−Ｃ１−６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ
１−６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニ
トロ−Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６チオアルコキシ−Ｃ１−６アルキル）；（３）
Ｃ１−２０アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシ等のＣ１−６アルコキシ）；（
４）Ｃ１−６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６−１０アリール；（６）アミノ；（７）
Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３−８シクロアルキル；
（１０）Ｃ１−６アルク−Ｃ３−８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１−１２
ヘテロシクリル（例えば、Ｃ２−１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１−１２ヘテロシ
クリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１−２０チオアルコ
キシ（例えば、Ｃ１−６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’（式中
、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０ア
リール、（ｃ）水素、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から
選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’（式中、ｑは、０〜４の整数
であり、ＲＢ’およびＲＣ’は、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１
０アリール、および（ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から独立して
選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’（式中、ｑは、０〜４の整数であり
、ＲＤ’は、（ａ）Ｃ１−６アルキル、（ｂ）Ｃ６−１０アリール、および（ｃ）Ｃ１−
６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳ
Ｏ２ＮＲＥ’ＲＦ’（式中、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’およびＲＦ’の各々は、
独立して、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル、（ｃ）Ｃ６−１０アリール、および（
ｄ）Ｃ１−６アルク−Ｃ６−１０アリールからなる群から選択される）；（２１）チオー
ル；（２２）Ｃ６−１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３−８シクロアルコキシ；（２４）
アリールアルコキシ；（２５）Ｃ１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ
１−６アルク−Ｃ１−１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）（Ｃ１−１２ヘ
テロシクリル）イミノ；（２８）Ｃ２−２０アルケニル；ならびに（２９）Ｃ２−２０ア
ルキニル。いくつかの実施形態において、これらの基の各々は、本明細書に記載されるよ
うにさらに置換され得る。例えば、Ｃ１−アルカリールまたはＣ１−アルクヘテロシクリ
ルのアルキレン基は、オキソ基でさらに置換されて、それぞれのアリーロイルおよび（ヘ
テロシクリル）オイル置換基をもたらすことができる。
本明細書で使用されるとき、「（ヘテロシクリル）イミノ」という用語は、イミノ基を
介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。いくつか
の実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義される１、２、３、または４
個の置換基で置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「（ヘテロシクリル）オキシ」という用語は、酸素原子を
介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。いくつか
の実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義される１、２、３、または４
個の置換基で置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「（ヘテロシクリル）オイル」という用語は、カルボニル
基を介して親分子基に結合される、本明細書に定義されるヘテロシクリル基を表す。いく
つかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義される１、２、３、また
は４個の置換基で置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「炭化水素」という用語は、炭素および水素原子のみから
なる基を表す。
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を表す。
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシアルケニル」という用語は、１〜３個のヒド
ロキシ基によって置換された、本明細書に定義されるアルケニル基を表すが、但し、１個
を超えるヒドロキシ基がアルキル基の単一の炭素原子に結合することはないことを条件と
し、それはジヒドロキシプロペニル、ヒドロキシイソペンテニル等により例として示され
る。
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシアルキル」という用語は、１〜３個のヒドロ
キシ基によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表すが、但し、１個を超
えるヒドロキシ基が、アルキル基の単一の炭素原子に結合することはないことを条件とし
、それはヒドロキシメチル、ジヒドロキシプロピル等により例として示される。
本明細書で使用されるとき、「異性体」という用語は、本発明の化合物のいずれかの任
意の互変異性体、立体異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本発明
の化合物は、１つ以上のキラル中心および／または二重結合を有することができ、したが
って、二重結合異性体（すなわち、幾何Ｅ／Ｚ異性体）またはジアステレオマー（例えば
、鏡像異性体（すなわち、（＋）または（−））またはシス／トランス異性体）等の立体
異性体として存在し得ることが認識される。本発明に従って、本明細書に描写される化学
構造、したがって本発明の化合物は、対応する立体異性体のすべて、つまり、立体異性的
に純粋な形態（例えば、幾何的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオマー的に
純粋）と、鏡像異性体混合物および立体異性体混合物、例えば、ラセミ体との両方を包含
する。本発明の化合物の鏡像異性体混合物および立体異性体混合物は、キラル相ガスクロ
マトグラフィー、キラル相高性能液体クロマトグラフィー、キラル塩錯体としての化合物
の結晶化、またはキラル溶媒中の化合物の結晶化等の周知の方法によって、典型的にそれ
らの構成要素の鏡像異性体または立体異性体へと分解することができる。鏡像異性体およ
び立体異性体は、周知の不斉合成法によって、立体異性的または鏡像異性的に純粋な中間
体、試薬、および触媒からも得ることができる。
本明細書で使用されるとき、「Ｎ保護アミノ」という用語は、本明細書に定義される１
つまたは２つのＮ保護基に結合している、本明細書に定義されるアミノ基を指す。
本明細書で使用されるとき、「Ｎ保護基」という用語は、合成手順中に、望ましくない
反応に対してアミノ基を保護するよう意図される基を表す。一般的に使用されるＮ保護基
は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒ
ｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，” ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（
Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９）に開示されている
。Ｎ保護基には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル
、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチ
ル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−
クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイル等の、アシル、アリー
ロイル、またはカルバミル基、および保護されたまたは保護されいないＤ、Ｌ、またはＤ
等のキラル助剤、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン等のＬ−アミノ酸；ベンゼンス
ルホニル、ｐ−トルエンスルホニル等のスルホニル含有基；ベンジルオキシカルボニル、
ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニ
トロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベン
ジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメト
キシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メ
トキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカル
ボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルｙ
ｌ）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジル
オキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジ
イソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル
、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２，−トリクロロエトキシカ
ルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９
−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニ
ル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル等のカルバメート形成基
、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル等のアルカリール基、ならびに
トリメチルシリル等のシリル基が含まれる。好ましいＮ保護基は、ホルミル、アセチル、
ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジ
ル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ
）である。
本明細書で使用されるとき、「ニトロ」という用語は、−ＮＯ２基を表す。
本明細書で使用されるとき、「オキソ」という用語、＝Ｏを表す。
本明細書で使用されるとき、「ペルフルオロアルキル」という用語は、アルキル基に結
合した各水素ラジカルがフッ化物ラジカルによって置き換えられた、本明細書に定義され
るアルキル基を表す。ペルフルオロアルキル基は、トリフルオロメチル、ペンタフルオロ
エチル等により例として示される。
本明細書で使用されるとき、「ペルフルオロアルコキシ」という用語は、アルコキシ基
に結合した各水素ラジカルがフッ化物ラジカルによって置き換えられた、本明細書に定義
されるアルコキシ基を表す。ペルフルオロアルコキシ基は、トリフルオロメトキシ、ペン
タフルオロエトキシ等により例として示される。
本明細書で使用されるとき、「スピロシクリル」という用語は、その両端が親基の同じ
炭素原子に結合してスピロ環式基を形成するＣ２−７アルキレンジラジカル、およびまた
、その両端が同じ炭素原子に結合するＣ１−６ヘテロアルキレンジラジカルを表す。スピ
ロシクリル基を形成するヘテロアルキレンラジカルは、窒素、酸素、および硫黄からなる
群から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含有することができる
。いくつかの実施形態において、スピロシクリル基は、そのジラジカルが結合する炭素原
子を除いて、１〜７個の炭素を含む。本発明のスピロシクリル基は、シクロアルキル基お
よび／またはヘテロシクリル基に対する任意の置換基として本明細書に提供される１、２
、３、または４個の置換基で任意に置換されてもよい。
本明細書で使用されるとき、「立体異性体」という用語は、化合物（例えば、本明細書
に記載の任意の式の化合物）が有し得るすべての可能性のある様々な異性型ならびに立体
配座型、特にすべての可能性のある立体化学的および立体配座的異性型、基本的な分子構
造のすべてのジアステレオマー、鏡像異性体、および／または配座異性体を指す。本発明
のいくつかの化合物は、異なる互変異性型として存在してもよく、後者のすべてが本発明
の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、「スルホアルキル」という用語は、−ＳＯ３Ｈのスルホ基
によって置換された、本明細書に定義されるアルキル基を表す。いくつかの実施形態にお
いて、アルキル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換さ
れ得る。
本明細書で使用されるとき、「スルホニル」という用語は、−Ｓ（Ｏ）２−基を表す。
本明細書で使用されるとき、「チオアルカリール」という用語は、式−ＳＲの化学置換
基を表し、式中、Ｒは、アルカリール基である。いくつかの実施形態において、アルカリ
ール基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「チオアルクヘテロシクリル」という用語は、式−ＳＲの
化学置換基を表し、式中、Ｒは、アルクヘテロシクリル基である。いくつかの実施形態に
おいて、アルクヘテロシクリル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基
でさらに置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「チオアルコキシ」という用語は、式−ＳＲの化学置換基
を表し、式中、Ｒは、本明細書に定義されるアルキル基である。いくつかの実施形態にお
いて、アルキル基は、本明細書に記載の１、２、３、または４個の置換基でさらに置換さ
れ得る。
「チオール」という用語は、−ＳＨ基を表す。
化合物： 本明細書で使用されるとき、「化合物」という用語は、描写される構造のす
べての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、および同位体を含むことが意図される。
本明細書に記載の化合物は、不斉であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有する）
。別途指定されない限り、鏡像異性体およびジアステレオマー等の、すべての立体異性体
が意図される。不斉置換炭素原子を含有する本開示の化合物は、光学活性型またはラセミ
型で単離することができる。光学活性型を光学活性の出発物質からどのように調製するか
に関する方法は、ラセミ混合物の分解によって、または立体選択的合成によって等、当技
術分野で知られている。オレフィンの多くの幾何異性体、Ｃ＝Ｎ二重結合等もまた、本発
明に記載の化合物中に存在することができ、すべてのそのような安定な異性体が本開示に
おいて企図される。本開示の化合物のシスおよびトランス幾何異性体が記載され、それは
異性体の混合物としてまたは分離した異性型として単離され得る。
本開示の化合物は、互変異性型も含む。互変異性型は、単結合の隣位二重結合との交換
、およびプロトンの付随する移動からもたらされる。互変異性型は、同じ実験式および総
電荷を有する異性体プロトン化状態である、プロトン互変異性体（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉ
ｃ ｔａｕｔｏｍｅｒｓ）を含む。例示のプロトン互変異性体には、ケトン−エノール対
、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、アミド−イミド酸対、エナミン−イミン
対、およびプロトンが複素環式系の２つ以上の位置を占有し得る環状型、例えば、１Ｈ−
および３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−、および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、
１Ｈ−および２Ｈ−イソインドール、ならびに１Ｈ−および２Ｈ−ピラゾールが含まれる
。互変異性型は、平衡し得るか、または適切な置換によって１つの形態へと立体的に固定
され得る。
本開示の化合物は、中間体または最終化合物中で生じる原子の同位体もすべて含む。「
同位体」は、同じ原子番号を有するが、核内の中性子の数が異なることに起因して異なる
質量数を有する、原子を指す。例えば、水素の同位体には、トリチウムおよびジュウテリ
ウムが含まれる。
本開示の化合物および塩は、通例の方法によって、溶媒または水分子と組み合わせて溶
媒和物および水和物を形成することにより調製することができる。
状態： 本明細書で使用されるとき、「状態」という用語は、観察可能な症状を示す障
害を意味する。
保存される： 本明細書で使用されるとき、「保存される」という用語は、比較されて
いる２つ以上の配列の同じ位置において変化することなく生じる残基である、それぞれ、
ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチド残基またはアミノ酸残基を
指す。比較的保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列内の他の箇所に現れる
ヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連した配列の間で保存されているものである。
いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である
場合、「完全に保存される」と言われる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列
は、それらが互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同
一、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存される」と言われる。いくつ
かの実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに約７０％同一、約８０％同一
、約９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存さ
れる」と言われる。いくつかの実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに少
なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％
同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少
なくとも９５％同一である場合、「保存される」と言われる。いくつかの実施形態におい
て、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約
６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一
、または約９９％同一である場合、「保存される」と言われる。配列の保存は、オリゴヌ
クレオチドまたはポリペプチドの全長に適用してもよく、またはその一部分、領域、また
は特長に適用してもよい。
環状または環化： 本明細書で使用されるとき、「環状」という用語は、連続ループの
存在を指す。環状分子は、円形である必要はなく、単に連結してサブユニットの途切れの
ない鎖を形成すればよい。本発明の操作されたＲＮＡまたはｍＲＮＡ等の環状分子は、単
一ユニットであっても多量体であってもよく、または複合体もしくは高次構造の１つ以上
の構成要素を含んでもよい。
細胞増殖抑制性： 本明細書で使用されるとき、「細胞増殖抑制性」は、細胞（例えば
、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞）、細菌、ウイルス、真菌、原虫、寄生虫、プリオン、
またはこれらの組み合わせの成長、分裂、または増殖を阻害する、低減する、抑制するこ
とを指す。
細胞傷害性： 本明細書で使用されるとき、「細胞傷害性」は、細胞（例えば、哺乳類
細胞（例えば、ヒト細胞）、細菌、ウイルス、真菌、原虫、寄生虫、プリオン、またはこ
れらの組み合わせを死滅させるか、あるいはそれらに有害、有毒、または致命的な影響を
引き起こすことを指す。
送達： 本明細書で使用されるとき、「送達」は、化合物、物質、実体、部分、積荷、
またはペイロードを送達する作用または様態を指す。
送達剤： 本明細書で使用されるとき、「送達剤」は、標的とされる細胞への腫瘍学関
連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡのインビボ送
達を少なくとも部分的に容易にする、任意の物質を指す。
不安定化される： 本明細書で使用されるとき、「不安定な」、「不安定化する」、ま
たは「不安定化領域」という用語は、同じ領域または分子の出発形態、野生型、または天
然型よりも安定性が低い領域または分子を意味する。
検出可能な標識： 本明細書で使用されるとき、「検出可能な標識」は、放射線写真撮
影、蛍光、化学発光、酵素的活性、吸光等を含む当技術分野で既知の方法によって容易に
検出される別の実体と結合されるか、それとともに組み込まれるか、またはそれと会合さ
れる１つ以上のマーカー、シグナル、または部分を指す。検出可能な標識には、放射性同
位体、フルオロフォア、発色団、酵素、色素、金属イオン、リガンド、例えば、ビオチン
、アビジン、ストレプトアビジンおよびハプテン、量子ドット等が含まれる。検出可能な
標識は、本明細書に開示のペプチドまたはタンパク質における任意の位置に位置してもよ
い。それらは、アミノ酸、ペプチド、もしくはタンパク質の内にあっても、またはＮ末端
もしくはＣ末端に位置してもよい。
疾患： 本明細書で使用されるとき、「疾患」という用語は、しばしば特異的な身体症
状を示す、生物の身体に影響する異常な状態を意味する。
障害： 本明細書で使用されるとき、「障害」という用語は、身体の正常な機能または
確立された組織の破壊または干渉を意味する。
消化： 本明細書で使用されるとき、「消化」という用語は、より小さい片または構成
成分へと分解することを意味する。ポリペプチドまたはタンパク質に言及するとき、消化
は、ペプチドの産生をもたらす。
遠位： 本明細書で使用されるとき、「遠位」という用語は、中心ら離れて、または目
的とする点もしくは領域から離れて位置することを意味する。
投薬レジメン： 本明細書で使用されるとき、「投薬レジメン」は、投与のスケジュー
ル、または医師によって決定された治療、予防、もしくは緩和ケアのレジメンである。
用量分割係数（ＤＳＦ）− 用量分割治療のＰＵＤを、総１日用量または単回単位用量
のＰＵＤで割った比率。値は、投薬レジメンの群の比較から導出される。
コードされたタンパク質の切断シグナル： 本明細書で使用されるとき、「コードされ
たタンパク質の切断シグナル」は、タンパク質切断シグナルをコードするヌクレオチド配
列を指す。
操作： 本明細書で使用されるとき、本発明の実施形態は、それらが、構造的であろう
と化学的であろうと、出発点分子、野生型分子、または天然分子から異なる特長または特
性を有するように設計されるとき、「操作」される。
エクソソーム： 本明細書で使用されるとき、「エクソソーム」は、哺乳類細胞によっ
て分泌される小胞、またはＲＮＡ分解に関与する複合体である。
発現： 本明細書で使用されるとき、核酸配列の「発現」は、次の事象のうちの１つ以
上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの生成（例えば、転写による）、
（２）ＲＮＡ転写のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、
および／または３’末端プロセシングによる）、（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタン
パク質への翻訳、および（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
特長： 本明細書で使用されるとき、「特長」は、特徴、特性、または特有の要素を指
す。
製剤： 本明細書で使用されるとき、「製剤」は、少なくとも腫瘍学関連ポリヌクレオ
チド、腫瘍学関連一次構築物、または腫瘍学関連ｍｍＲＮＡと、送達剤とを含む。
断片： 本明細書で使用されるとき、「断片」は、一部分を指す。例えば、タンパク質
の断片は、培養細胞から単離された完全長タンパク質を消化することによって得られる、
ポリペプチドを含み得る。
機能的： 本明細書で使用されるとき、「機能的」生体分子は、それが特徴付けられる
特性および／または活性を示す形態にある、生体分子である。
遺伝子型： 本明細書で使用されるとき、「遺伝子型」は対象、細胞、組織、器官、お
よび／または有機体の遺伝子型、すなわち遺伝的体質の変化を意味する。
相同性： 本明細書で使用されるとき、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例
えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、および／またはポ
リペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態において、ポリマー分子
は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５
％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％
同一または同様である場合、互いと「相同」であると見なされる。「相同」という用語は
必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較
を指す。本発明に従って、２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプ
チドが、少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも一続きにわたって少なくとも約５０％、
６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはさらに９９％である場合、相同である
と見なされる。いくつかの実施形態において、相同ポリヌクレオチド配列は、少なくとも
４〜５つの固有に指定されるアミノ酸の一続きをコードする能力によって特徴付けられる
。６０ヌクレオチド長未満のポリヌクレオチド配列について、相同性は、少なくとも４〜
５つの固有に指定されるアミノ酸の一続きをコードする能力によって特徴付けられる。本
発明に従って、２つのタンパク質配列は、タンパク質が、少なくとも約２０アミノ酸の少
なくとも一続きにわたって少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％
同一である場合、相同であると見なされる。
同一性： 本明細書で使用されるとき、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例
えば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、お
よび／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。２つのポリヌクレオチド配列
の同一性パーセントの算出は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列を整列させる
ことによって行うことができる（例えば、最適なアライメントのために第１および第２の
核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために非同一配
列を無視することができる）。ある特定の実施形態において、比較目的のために整列され
る配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５
０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少
なくとも９５％、または１００％である。対応するヌクレオチド位置におけるヌクレオチ
ドが次いで比較される。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じヌク
レオチドによって占有されるとき、その分子は、その位置で同一である。２つの配列間の
同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャ
ップの数および各ギャップの長さを考慮に入れながら、配列によって共有される同一位置
の数の関数である。２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学的
アルゴリズムを用いて遂行することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一
性パーセントは、各々が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａ
ｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕ
ｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉ
ｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３
、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７、Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆ
ｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４、およびＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，
Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１に記載の方法の等を用
いて決定することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、
ＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１−１７）のアルゴ
リズムを用いて決定することができ、それはＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長
ペナルティ、および４のギャップペナルティを用いてＡＬＩＧＮプログラム（第２．０版
）に組み込まれている。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、あるいは、Ｎ
ＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージにおけ
るＧＡＰプログラムを用いて決定することができる。配列間の同一性パーセントを決定す
るために一般的に用いられる方法には、参照により本明細書に組み込まれるＣａｒｉｌｌ
ｏ，Ｈ．，ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，
４８：１０７３（１９８８）に開示の方法が含まれるが、これらに限定されない。同一性
を決定するための技法は、公的に利用可能なコンピュータプログラムにおいて成文化され
ている。２つの配列間の相同性を決定するための例示のコンピュータソフトウェアには、
ＧＣＧプログラムパッケージ、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１），３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、
ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏ
ｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２１５、４０３（１９９０））が含まれるが、これらに限定されな
い。
遺伝子の発現を阻害する：本明細書で使用されるとき、「遺伝子の発現を阻害する」と
いう表現は、遺伝子の発現産物の量の低減を引き起こすことを意味する。発現産物は、遺
伝子から転写されたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、または遺伝子から転写されたｍＲＮＡ
から翻訳されたポリペプチドであり得る。典型的に、ｍＲＮＡのレベルの低減は、そこか
ら翻訳されたポリペプチドのレベルの低減をもたらす。発現のレベルは、ｍＲＮＡまたは
タンパク質を測定するための標準的な技法を用いて決定されてもよい。
インビトロ： 本明細書で使用されるとき、「インビトロ」という用語は、生物（例え
ば、動物、植物、または微生物）内ではなく、例えば、試験管または反応槽中、細胞培養
物中、ペトリ皿中等の、人工的な環境で生じる事象を指す。
インビボ： 本明細書で使用されるとき、「インビボ」という用語は、生物（例えば、
動物、植物、もしくは微生物、またはその細胞もしくは組織）内で生じる事象を指す。
単離された： 本明細書で使用されるとき、「単離された」という用語は、それが会合
された（自然にであるか、実験的設定であるかにかかわらず）構成成分のうちの少なくと
も一部から分離された物質または実体を指す。単離された物質は、それが会合した物質に
関して様々なレベルの純度を有し得る。単離された物質および／または実体は、それらが
最初に会合されたその他の構成成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０
％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれよりも多くから分
離され得る。いくつかの実施形態において、単離された薬剤は、約８０％超、約８５％超
、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６
％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、または約９９％超純粋である。本明細書で
使用されるとき、物質は、他の構成成分が実質的にない場合、「純粋」である。実質的に
単離される：「実質的に単離される」とは、化合物が、それが形成されたまたは検出され
た環境から実質的に分離されることを意味する。部分的分離には、例えば、本開示の化合
物を豊富に含んだ組成物が含まれ得る。実質的な分離には、少なくとも約５０重量％、少
なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも
約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約
９９重量％の本開示の化合物、またはその塩を含有する組成物が含まれ得る。化合物およ
びそれらの塩を単離するための方法は、当技術分野で通例である。
リンカー： 本明細書で使用されるとき、リンカーは、例えば、１０〜１，０００原子
の原子団を指し、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニ
ル、カルボニル、およびイミン等であるが、これらに限定されない、原子または群からな
り得る。リンカーは、第１の末端で核酸塩基または糖部分上の修飾ヌクレオシドまたはヌ
クレオチドに、および第２の末端でペイロード、例えば、検出可能な薬剤または治療剤に
、結合され得る。リンカーは、核酸配列への組み込みを干渉しないような十分な長さのも
のであり得る。リンカーは、任意の有用な目的のため、例えば、ｍｍＲＮＡ多量体（例え
ば、２つ以上の腫瘍学関連ポリヌクレオチド、腫瘍学関連一次構築物、もしくは腫瘍学関
連ｍｍＲＮＡ分子の連鎖を介して）またはｍｍＲＮＡ複合体を形成するため、かつ本明細
書に記載のペイロードを投与するために使用することができる。リンカーに組み込むこと
ができる化学基の例としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エ
ーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘ
テロシクリルが挙げられるが、これらに限定されず、これらの各々は、本明細書に記載さ
れるように任意に置換され得る。リンカーの例としては、不飽和アルカン、ポリエチレン
グリコール（例えば、エチレンまたはプロピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエ
チレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレン
グリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール）、ならびに
デキストランポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。他の例としては、還元剤
または光分解を用いて切断され得る、例えば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）またはア
ゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）等の、リンカー内の切断可能部分が挙げられるが、これらに限定さ
れない。選択的に切断可能な結合の非限定的な例としては、例えば、トリス（２−カルボ
キシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、または他の還元剤および／もしくは光分解の使用
によって切断され得る、アミド結合、ならびに例えば、酸性または塩基性加水分解によっ
て切断され得る、エステル結合が挙げられる。
転移： 本明細書で使用されるとき、「転移」という用語は、癌が原発腫瘍として最初
に発生した場所から身体中の離れた位置へ広がることを意味する。
治療の方法： 「治療の方法」という表現またはその同等の表現は、例えば癌に適用さ
れる場合、癌細胞の数を減少または排除し、癌細胞の数の増加を予防し、または対象の癌
の症状を緩和するために設計された手順または行動方針を意味する。癌または他の腫瘍学
関連の障害を治療する方法は、癌細胞または他の障害が実際に完全に排除されるであろう
こと、細胞または障害の数が実際に減少するであろうこと、または癌または他の障害の症
状が実際に緩和するであろうことを必ずしも意味しない。しばしば、癌を治療する方法は
、成功の可能性が低くても行われるであろうが、対象の病歴および推定される生存の見込
みを考慮すると、しかしながらそれは全面的に有益な行動方針と見なされる。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位： 本明細書で使用されるとき、マイクロＲＮ
Ａ（ｍｉＲＮＡ）結合部位は、ｍｉＲＮＡの少なくとも「シード」領域が結合する、核酸
転写物のヌクレオチド箇所または領域を表す。
修飾された： 本明細書で使用されるとき、「修飾された」とは、本発明の分子の変化
した状態または構造を指す。分子は、化学的、構造的、および機能的修飾を含む、多くの
方式で修飾されてもよい。一実施形態において、本発明のｍＲＮＡ分子は、例えば、それ
が天然リボヌクレオチドＡ、Ｕ、Ｇ、およびＣに関わるとき、非天然ヌクレオシドおよび
／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。キャップ構造等の非標準のヌクレオチ
ドは、それらがＡ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なっていても「修飾さ
れる」と見なされない。
粘液： 本明細書で使用されるとき、「粘液」は、粘性であり、ムチン糖タンパク質を
含む、天然物質を指す。
天然に生じる： 本明細書で使用されるとき、「天然に生じる」は、人工的補助を伴わ
ずに自然界に存在することを意味する。
非ヒト脊椎動物： 本明細書で使用されるとき、「非ヒト脊椎動物」には、野生種およ
び家畜化された種を含む、ホモサピエンスを除くすべての脊椎動物が含まれる。非ヒト脊
椎動物の例としては、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ
、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツ
ジ、水牛、およびヤク等の哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。
オフターゲット： 本明細書で使用されるとき、「オフターゲット」は、任意の１つ以
上の標的、遺伝子、または細胞転写物への任意の意図されない効果を指す。
腫瘍学関連： 本明細書で使用されるとき、「腫瘍学関連」という用語は、癌を含むが
これに限定されない１つ以上の過剰増殖性疾患、障害、および／または状態のいかなる側
面に関連するいかなる疾患、障害、状態、治療、方法、物質または化合物を意味する。
オープンリーディングフレーム： 本明細書で使用されるとき、「オープンリーディン
グフレーム」または「ＯＲＦ」は、所与のリーディングフレーム内に終止コドンを含有し
ない配列を指す。
作動可能に連結される： 本明細書で使用されるとき、「作動可能に連結される」とい
う表現は、２つ以上の分子、構築物、転写物、実体、部分等の間の機能的結合を指す。
パラトープ： 本明細書で使用されるとき、「パラトープ」は、抗体の抗原結合部位を
指す。
患者： 本明細書で使用されるとき、「患者」は、治療を求め得るもしくは治療を必要
とし得る、治療を要する、治療を受けている、治療を受けることになる、または特定の疾
患もしくは状態のために訓練を受けた専門家の看護下にある、対象を指す。
任意に置換される： 本明細書において、「任意に置換されるＸ」（例えば、任意に置
換されるアルキル）という形態の語句は、「Ｘであって、式中、Ｘは、任意に置換される
」（例えば、「アルキル、式中、該アルキルは、任意に置換される」）と同等であること
が意図される。特長「Ｘ」（例えば、アルキル）自体が任意であることを意味することは
意図されない。
ペプチド： 本明細書で使用されるとき、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例え
ば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長で
ある。
医薬組成物： 「医薬組成物」という表現は、疾患、障害、および／または状態のエチ
オロジーを変える組成物を意味する。
薬学的に許容される： 「薬学的に許容される」という表現は、本明細書で、健全な医
療判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症
を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに好適であり、妥当な便益／危険
性比率に見合った、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すように用いられる
。
薬学的に許容される賦形剤： 本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される賦形
剤」という表現は、本明細書に記載の化合物以外のものであり（例えば、活性化合物を懸
濁させるまたは溶解させることが可能なビヒクル）、かつ患者において実質的に非毒性お
よび非炎症性である特性を有する、任意の成分を指す。賦形剤には、例えば、粘着防止剤
（ａｎｔｉａｄｈｅｒｅｎｔｓ）、酸化防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤（ｃ
ｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｉｄｓ）、崩壊剤、色素（色）、軟化剤、乳化剤、充填剤（希
釈剤）、薄膜形成剤またはコーティング剤、香味剤、着香剤、流動促進剤（流動性促進剤
）、滑沢剤、防腐剤、印刷インキ、吸着剤、懸濁化剤または分散化剤、甘味剤、および水
和水が含まれてもよい。例示の賦形剤には、次のものが含まれるが、これらに限定されな
い：ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（第二
）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋結合ポリビニルピロリドン、ク
エン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネ
シウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン
、微小結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、α
化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カ
ルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナト
リウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、ショ糖、タルク、二
酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、およびキシリトール。
薬学的に許容される塩： 本開示は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩
も含む。本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される塩」は、既存の酸または塩基
部分をその塩形態に変換する（例えば、遊離塩基を好適な有機酸と反応させることによっ
て）ことによって親化合物が修飾される、開示される化合物の誘導体を指す。薬学的に許
容される塩の例としては、アミン等の塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸等
の酸性残基のアルカリ塩または有機塩等が挙げられるが、これらに限定されない。代表的
な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギ
ン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、
樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデ
シル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩
、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素、２−
ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリル酸塩、ラウリル
硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレン
スルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パ
モ酸塩、ペクチニン酸塩（ペクチンａｔｅ）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、
リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸、コハク酸塩、硫
酸塩、酒石酸塩、チオシアネート、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等
が含まれる。代表的なアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウ
ム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等、ならびにアンモニウム、テトラメチルアン
モニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミ
ン、トリエチルアミン、エチルアミン等を含むが、これらに限定されない、非毒性アンモ
ニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオンが含まれる。本開示の薬学的に許容
される塩には、例えば、非毒性無機酸または有機酸から形成される、親化合物の従来の非
毒性塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学方法によって、塩基性
または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は
、これらの化合物の遊離酸型または遊離塩基型を、化学量論的量の適切な塩基または酸と
、水中もしくは有機溶媒中で、またはその２つの混合物中で反応させることによって調製
することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、また
はブタノール）、またはアセトニトリル等の非水性媒体が好ましい。好適な塩の一覧は、
各々が参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８、Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ
Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌ
ｅｙ−ＶＣＨ，２００８、およびＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１−１９（１９７７）において見
出される。
薬学的に許容される溶媒和物： 本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される溶
媒和物」という用語は、好適な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれる、本発明の化合物を
意味する。好適な溶媒は、投与される投薬量で生理学的に耐性がある。例えば、溶媒和物
は、結晶化、再結晶化、または沈殿によって、有機溶媒、水、またはそれらの混合物を含
む溶液から調製されてもよい。好適な溶媒の例としては、エタノール、水（例えば、一、
二、および三水和物）、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（Ｄ
ＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルアセトアミ
ド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３−ジメ
チル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２−（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセ
トニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２−
ピロリドン、ベンジル安息香酸塩等が挙げられる。水が溶媒であるとき、その溶媒和物は
、「水和物」と称される。
薬物動態： 本明細書で使用されるとき、「薬物動態」は、生存生物に投与される物質
の運命の決定に関わるような、分子または化合物の任意の１つ以上の特性を指す。薬物動
態は、吸収、分布、代謝、および排泄の程度および速度を含む、いくつかの領域に分割さ
れる。これは、一般的に、ＡＤＭＥと称され、ここで（Ａ）吸収は、物質が血液循環に進
入するプロセスであり、（Ｄ）分布は、身体の流体および組織全体にわたる物質の分散ま
たは散布であり、（Ｍ）代謝（または生体内変換）は、親化合物の娘代謝産物への不可逆
的な変換であり、（Ｅ）排泄（または排除）は、身体からの物質の排除を指す。まれな場
合において、いくつかの薬物は、身体組織内に不可逆的に蓄積する。
表現型： 本明細書で使用されるとき、「表現型」は、対象、細胞、組織、器官および
／または有機体の観察可能な特徴のセットを意味する。
単位薬物当たりのポリペプチド（ＰＵＤ）： 本明細書で使用されるとき、ＰＵＤまた
は単位薬物当たり生成物は、通常は体液中の測定値で割ったｐｍｏｌ／ｍＬ、ｍｍｏｌ／
ｍＬ等の濃度単位で定義される、体液または組織内で測定するときの、生成物（ポリペプ
チド等）の総１日用量の細分割された部分（通常は１ｍｇ、ｐｇ、ｋｇ等）として定義さ
れる。
物理化学： 本明細書で使用されるとき、「物理化学」は、物理特性および／または化
学特性のものまたはそれに関わることを意味する。
予防する： 本明細書で使用されるとき、「予防する」という用語は、感染、疾患、障
害、および／もしくは状態の発症を部分的もしくは完全に遅延させること；特定の感染、
疾患、障害、および／もしくは状態の１つ以上の症状、特長、もしくは臨床徴候の発症を
部分的もしくは完全に遅延させること；特定の感染、疾患、障害、および／もしくは状態
の１つ以上の症状、特長、もしくは徴候の発症を部分的もしくは完全に遅延させること；
感染からの、特定の疾患、障害、および／もしくは状態の進行を部分的もしくは完全に遅
延させること；ならびに／または感染、疾患、障害、および／もしくは状態に関連した病
理を発症する危険性を減少さることを指す。
プロドラッグ： 本開示は、本明細書に記載の化合物のプロドラッグも含む。本明細書
で使用されるとき、「プロドラッグ」は、化学的または物理的変化を経ると治療薬として
作用する物質、分子、または実体に属する形態にある、任意の物質、分子、または実体を
指す。プロドラッグは、何らかの方式で共有結合されるかまたは隔離され得、哺乳類対象
に投与される前、投与されると、または投与された後に、活性薬物を放出するか、または
活性薬物部分に変換される。プロドラッグは、化合物中に存在する官能基を、修飾部分が
通例の操作でまたはインビボでのいずれかで親化合物へと切断されるような方式で修飾す
ることによって、調製することができる。プロドラッグは、ヒドロキシル、アミノ、スル
フヒドリル、またはカルボキシル基が任意の基に結合される化合物であり、それは哺乳類
対象に投与されると、切断されてそれぞれ遊離ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、
またはカルボキシル基を形成する。プロドラッグの調製および使用は、両方とも参照によ
りそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ ａｎｄ Ｖ．Ｓｔｅｌ
ｌａ，“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，
”Ｖｏｌ．１４ ｏｆ ｔｈｅ Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓに、お
よびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，
ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８７で論じ
られている。
増殖する： 本明細書で使用されるとき、「増殖する」という用語は、成長する、拡大
する、もしくは増加する、または急速な成長、拡大、もしくは増加を引き起こすことを意
味する。「増殖性」は、増殖する能力を有することを意味する。「抗増殖性」は、増殖特
性に反するか、または増殖特性に不適切である特性を有することを意味する。
タンパク質切断部位： 本明細書で使用されるとき、「タンパク質切断部位」は、化学
的、酵素的、または光化学的手段によってアミノ酸鎖の制御された切断が遂行される部位
を指す。
タンパク質切断シグナル： 本明細書で使用されるとき、「タンパク質切断シグナル」
は、切断のためにポリペプチドにフラグまたはマークを付ける少なくとも１つのアミノ酸
を指す。
進行： 本明細書で使用されるとき、「進行」(例えば癌進行)という用語は、疾患また
は状態の、またはそれらへの進行または悪化を意味する。
目的とするタンパク質： 本明細書で使用されるとき、「目的とするタンパク質」また
は「所望のタンパク質」という用語は、本明細書に提供されるもの、ならびにそれらの断
片、変異体、変異形、および改変体を含む。
近位： 本明細書で使用されるとき、「近位」という用語は、中心の、または目的とす
る点もしくは領域のより近くに位置することを意味する。
シュードウリジン： 本明細書で使用されるとき、シュードウリジンは、ヌクレオシド
ウリジンのＣ−グリコシド異性体を指す。「シュードウリジン類似体」は、シュードウリ
ジンの任意の修飾、変異形、アイソフォーム、または誘導体である。例えば、シュードウ
リジン類似体には、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、１−プロピニル−シュー
ドウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−
シュードウリジン、１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、１−メチル−４−チオ−シ
ュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル
−シュードウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル
−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジ
ン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウ
リジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メ
トキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−
３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、および
２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（ψｍ）が含まれるが、これらに限定されない。
精製される： 本明細書で使用されるとき、「精製する」、「精製される」、「精製」
は、実質的に純粋にするか、または望ましくない構成成分、汚染材料、混和物、もしくは
不完全性を取り除くことを意味する。
退縮： 本発明で使用されるとき、「退縮」または「退縮度」という用語は、表現型的
にであれ遺伝子型的にであれ、癌の進行の反転を意味する。癌の進行を減速するまたは止
めることは、退縮とみなされ得る。
影響の低減： 本明細書で使用されるとき、「影響の低減」という表現は、症状につい
て述べる場合、対象の症状を減少、排除、または緩和させることを意味する。それは、症
状が実際に完全に排除、減少または緩和されることを必ずしも意味しない。
試料： 本明細書で使用されるとき、「試料」または「生体試料」という用語は、その
組織、細胞、または構成部分の部分集合（例えば、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄
液、唾液、羊水、臍帯血、尿、膣液、および精液を含むが、これらに限定されない体液）
を指す。試料には、例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部切片、呼吸器管
、腸管、および尿生殖器管、涙液、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、器官を含むが、これらに
限定されない、全生物、またはその組織、細胞、もしくは構成部分の部分集合、またはそ
の画分もしくは一部分から調製される、ホモジネート、可溶化液、または抽出物がさらに
含まれ得る。試料はさらに、タンパク質または核酸分子等の細胞構成成分を含有し得る、
栄養ブロスまたはゲル等の培地を指す。
副作用： 本明細書で使用されるとき、「副作用」という表現は、治療の副次効果を意
味する。
シグナル配列： 本明細書で使用されるとき、「シグナル配列」という表現は、タンパ
ク質の輸送または局在化を指示することができる配列を指す。
単回単位用量： 本明細書で使用されるとき、「単回単位用量」は、１回用量／一度に
／単一経路／単一接触点、すなわち、単一の投与事象において投与される、任意の治療薬
の用量である。
類似性： 本明細書で使用されるとき、「類似性」という用語は、ポリマー分子間、例
えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、およ
び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。ポリマー分子の互いとの類似性
パーセントの算出は、同一性パーセントの算出と同様に行うことができるが、当技術分野
で理解されるように、類似性パーセントの算出が保存的置換を考慮に入れることを除く。
皮膚： 「皮膚」という用語は、対象の身体の自然の外側の覆いを形成する薄い層状の
組織で、表皮と真皮を含む。真皮は、皮膚の表面上皮である表皮より下の生体組織の厚層
である。
分割用量： 本明細書で使用されるとき、「分割用量」は、単回単位用量または総１日
用量の、２つ以上の用量への分割である。
安定した： 本明細書で使用されるとき、「安定した」は、反応混合物から有用な純度
で単離後に残存するのに十分に強固であり、好ましくは効果的な治療剤へと製剤可能であ
る、化合物を指す。
安定化される： 本明細書で使用されるとき、「安定化」、「安定化される」、「安定
化領域」という用語は、安定させるまたは安定となることを意味する。
対象： 本明細書で使用されるとき、「対象」または「患者」という用語は、本発明に
従う組成物が、例えば、実験、診断、予防、および／または治療目的のために投与され得
る、任意の生物を指す。典型的な対象には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非
ヒト霊長類、およびヒト等の哺乳動物）および／または植物が含まれる。
実質的に： 本明細書で使用されるとき、「実質的に」という用語は、目的とする特徴
または特性の全範囲もしくは程度またはほぼ全範囲もしくは程度を示す、定性的状態を指
す。生物学技術分野の専門家であれば、生物学的および化学的現象が、完了するかつ／も
しくは完了まで進行する、または絶対的な結果を達成するもしくはそれを回避することは
、あってもまれであることを理解するであろう。「実質的に」という用語は、したがって
、多くの生物学的および化学的現象に本来的に存在するの完全性の潜在的な欠如を捕捉す
るように本明細書で使用される。
実質的に等しい： それが用量間の時差に関するように本明細書で使用されるとき、こ
の用語は、プラス／マイナス２％を意味する。
実質的に同時に： 本明細書で使用され、かつそれが複数の用量に関するとき、この用
語は、２秒以内を意味する。
を患う： 疾患、障害、および／または状態「を患う」個体は、疾患、障害、および／
もしくは状態であると診断されているか、または疾患、障害、および／もしくは状態の１
つ以上の症状を呈する。
に罹患しやすい： 疾患、障害、および／または状態「に罹患しやすい」個体は、疾患
、障害、および／もしくは状態であると診断されておらず、かつ／または疾患、障害、お
よび／もしくは状態の症状を呈しないことがあるが、疾患もしくはその症状を発症する傾
向を内部に持つ。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態（例え
ば、癌）に罹患しやすい個体は、次のうちの１つ以上によって特徴付けられ得る：（１）
疾患、障害、および／または状態の発症に関連した遺伝子突然変異、（２）疾患、障害、
および／または状態の発症に関連した遺伝子多型、（３）疾患、障害、および／または状
態に関連したタンパク質および／または核酸の増加したおよび／または減少した発現およ
び／または活性、（４）疾患、障害、および／または状態の発症に関連した習慣および／
または生活様式、（５）疾患、障害、および／または状態の家族歴、ならびに（６）疾患
、障害、および／または状態の発症に関連した微生物への曝露および／またはその微生物
への感染。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹患しやす
い個体は、その疾患、障害、および／または状態を発症することになる。いくつかの実施
形態において、疾患、障害、および／または状態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害
、および／または状態を発症することにはならない。
症状： 本明細書で使用されるとき、「症状」という用語は、疾患、障害、および／ま
たは状態の兆候を意味する。例えば、症状はそれを持つ対象により感じられるまたは気づ
かれる可能性があるが、対象の外見または行動を見ることにより容易に到達されない可能
性がある。症状の例は衰弱、うずきと痛み、発熱、疲労、体重減少、血餅、血中カルシウ
ム濃度の上昇、白血球数の低下、息切れ、眩暈、頭痛、色素沈着過剰、黄疸、紅斑、掻痒
症、多毛症、排便習慣の変化、膀胱機能の変化、長続きするただれ、口腔内の白斑、舌の
白点、異常な出血または排出、身体部位の肥厚またはしこり、消化不良、嚥下困難、いぼ
またはほくろの変化、新しい皮膚の変化およびしつこい咳または嗄声を含むが、これらに
限定されない。
合成： 「合成」という用語は、人間の手によって生成される、調製される、および／
または製造されることを意味する。本発明のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドまた
は他の分子の合成は、化学的であっても酵素的であってもよい。
標的とされる細胞： 本明細書で使用されるとき、「標的とされる細胞」は、目的とす
る任意の１つ以上の細胞を指す。この細胞は、インビトロで、インビボで、インサイツで
、または生物の組織もしくは器官内で見つけられ得る。生物は、動物、好ましくは哺乳動
物、より好ましくはヒト、最も好ましくは患者であり得る。
治療剤： 「治療剤」という用語は、対象に投与されたときに、治療、診断、および／
もしくは予防効果を有し、かつ／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を
誘発する、任意の薬剤を指す。
治療上有効量： 本明細書で使用されるとき、「治療上有効量」という用語は、感染、
疾患、障害、および／または状態を患うか、またはそれらに罹患しやすい対象に投与され
たときに、感染、疾患、障害、および／または状態を治療する、その症状を改善する、診
断する、予防する、かつ／またはその発症を遅延させるのに十分である、送達対象の薬剤
（例えば、核酸、薬物、治療剤、診断剤、予防剤等）の量を意味する。
治療上有効成果： 本明細書で使用されるとき、「治療上有効成果」という用語は、感
染、疾患、障害、および／または状態を患うか、またはそれらに罹患しやすい対象におい
て、感染、疾患、障害、および／または状態を治療し、その症状を改善し、診断し、予防
し、かつ／またはその発症を遅延させるのに十分である成果を意味する。
総１日用量： 本明細書で使用されるとき、「総１日用量」は、２４時間の期間に与え
られるまたは処方される量である。それは、単回単位用量として投与されてもよい。
転写因子： 本明細書で使用されるとき、「転写因子」という用語は、例えば、転写の
活性化または抑制によって、ＤＮＡのＲＮＡへの転写を調節する、ＤＮＡ結合タンパク質
を指す。いくつかの転写因子は、転写の調節を単独でもたらす一方で、他の転写因子は、
他のタンパク質と協働して作用する。いくつかの転写因子は、ある特定の条件下で、転写
の活性化および抑制の両方を行うことができる。一般に、転写因子は、標的遺伝子の調節
領域内の特定のコンセンサス配列に非常に類似した、特定の標的配列（単数または複数）
に結合する。転写因子は、標的遺伝子の転写を単独でまたは他の分子と複合して調節し得
る。
治療する： 本明細書で使用されるとき、「治療する」という用語は、特定の感染、疾
患、障害、および／もしくは状態の１つ以上の症状または特徴を、部分的にまたは完全に
緩和すること、寛解させること、改善すること、軽減すること、その発症を遅延させるこ
と、その進行を阻害すること、その重症度を低減すること、および／またはその発生率を
低減することを指す。例えば、癌を「治療する」とは、腫瘍の生存、成長、および／また
は転移を阻害することを指し得る。治療は、疾患、障害、および／または状態に関連した
病理を発症する危険性を減少させる目的のために、疾患、障害、および／もしくは状態の
徴候を呈しない対象に、ならびに／または疾患、障害、および／もしくは状態の早期徴候
のみを呈する対象に投与されてもよい。
腫瘍： 本明細書で使用されるとき、「腫瘍」は良性であれ悪性であれ、組織の異常な
増殖を意味する。
腫瘍の増殖： 本明細書で使用されるとき、「腫瘍の増殖」または「腫瘍転移」という
用語は、腫瘍の増加した量または体積または腫瘍分布の拡大を意味する。
未修飾： 本明細書で使用されるとき、「未修飾」は、任意の方式で変化させられる前
の任意の物質、化合物、または分子を指す。未修飾は、生体分子の野生型または天然型を
指し得るが、必ずしもそうとは限らない。分子は、一連の修飾を経てもよく、それによっ
て各修飾分子は、その後の修飾のための「未修飾」出発分子としての役目を果たし得る。
均等物および範囲
当業者であれば、ほんの日常的な実験を用いて、本明細書に記載の本発明に従う具体的
な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、解明することができる。本発明の範囲は
、上記の説明に限定されるようには意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載され
るように限定されることが意図される。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」等の冠詞は、それとは
反対の指定があるか、または文脈から別途明白でない限り、１つまたは２つ以上を意味し
得る。群の１つ以上の構成員の間に「または」を含む特許請求項または記述は、それとは
反対の指定があるか、または文脈から別途明白でない限り、その群の構成員のうちの１つ
、２つ以上、またはすべてが、所与の生成物またはプロセスにおいて存在するか、それに
おいて用いられるか、あるいはそれと関連性がある場合、満たされると見なされる。本発
明は、群の厳密に１つの構成員が所与の生成物またはプロセスにおいて存在するか、それ
において用いられるか、あるいはそれと関連性のある実施形態を含む。本発明は、群の構
成員のうちの１つを超えるものまたはすべてが所与の生成物またはプロセスにおいて存在
するか、それにおいて用いられるか、あるいはそれと関連性のある実施形態を含む。
また、「含む」という用語は、制限がないことが意図され、さらなる要素またはステッ
プの組み込みを許容するが、それを必要とするわけではないことに留意する。「含む」と
いう用語が本明細書で使用されるとき、「からなる」という用語もそれ故に包含され、開
示される。
範囲が与えられる場合、端点が含まれる。さらに、別途指定されるか、または文脈およ
び当業者の理解から別途明白でない限り、範囲として表される値は、文脈上、そうでない
とする明確な指示がない限り、本発明の異なる実施形態において定められる範囲内で、そ
の範囲の下限の単位の１０分の１までの任意の具体的な値または部分範囲をとることがで
きることを理解されたい。
さらに、先行技術の範囲内に該当する本発明の任意の特定の実施形態が、請求項のうち
の任意の１つ以上から明示的に除外されてもよいことを理解されたい。そのような実施形
態は当業者に既知であるとされるため、その除外が本明細書に明示的に記載されないとし
ても、それらは除外されてもよい。本発明の組成物の任意の特定の実施形態（例えば、任
意の核酸またはそれによってコードされるタンパク質、任意の産生方法、任意の使用方法
等）が、先行技術の存在に関連するか否かに関わらず、任意の理由で、任意の１つ以上の
請求項から除外され得る。
すべての引用される情報源、例えば、参考文献、刊行物、データベース、データベース
エントリ、および本明細書に引用される技術は、引用文に明示的に述べられないとしても
、参照により本出願に組み込まれる。引用される情報源および本出願の相反する記述があ
る場合には、本出願における記述が優先されるものとする。
節および表の見出しは、限定するようには意図されない。
実施例１． 修飾ｍＲＮＡの産生
本発明に従う修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）は、標準的な実験室方法および材料を用いて
作製することができる。目的とする遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は
、ポリＡ尾部の鋳型付加のために、強力なコザック翻訳開始シグナルを含有し得る５’非
翻訳領域（ＵＴＲ）および／またはオリゴ（ｄＴ）配列を含み得るα−グロビン３’ＵＴ
Ｒに隣接し得る。修飾ｍＲＮＡは、細胞の自然免疫応答を低減させるように修飾され得る
。細胞の応答を低減させる修飾には、シュードウリジン（ψ）および５−メチル−シチジ
ン（５ｍｅＣ、５ｍｃ、またはｍ５Ｃ）が含まれ得る（それぞれ、参照により全体が本明
細書に組み込まれる、Ｋａｒｉｋｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２３：１６５
−７５（２００５）、Ｋａｒｉｋｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １６：１８３
３−４０（２００８）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＢＲ ｅｔ ａｌ．ＮＡＲ（２０１０）を参
照のこと）。
ＯＲＦは、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）等であるが、これに限定され
ない最適化サービスから購入することができる、様々な上流または下流付加（β−グロビ
ン、タグ等であるがこれらに限定されない）も含み得、ＸｂａＩ認識を有し得る複数のク
ローニング部位も含有し得る。構築物を受容すると、それが再構築され、化学的にコンピ
テントな大腸菌に変換され得る。
本明細書に記載の修飾ｍＲＮＡ作製方法を用いて、長い分子を含むすべての大きさの分
子を産生することができる。記載の方法を用いて、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）（３
．２ｋｂ）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）（４．７ｋｂ）、第Ｖ
ＩＩ因子（７．３ｋｂ）、リソソーム酸リパーゼ（４５．４ｋＤａ）、グルコセレブロシ
ダーゼ（５９．７ｋＤａ）、およびイズロン酸２−スルファターゼ（７６ｋＤａ）を含む
異なる大きさの分子の修飾ｍＲＮＡが作製された。
本発明には、ＮＥＢ ＤＨ５−αコンピテント大腸菌を使用する。変換は、ＮＥＢの指
示に従って、１００ｎｇのプラスミドを用いて行う。プロトコルは次の通りである。
１ 氷上のＮＥＢ ５−αコンピテント大腸菌細胞の管を１０分間解凍する。
２ １ｐｇ〜１００ｎｇのプラスミドＤＮＡを含有する１〜５μＬを細胞混合物に添加
する。管を慎重に４〜５回振り、細胞とＤＮＡを混合する。ボルテックスしないこと。
３ 混合物を３０分間氷上に置く。混ぜないこと。
４ ４２℃で正確に３０秒間熱ショックを与える。混ぜないこと。
５ ５分間氷上に置く。混ぜないこと。
６ 室温のＳＯＣを９５０μＬピペットで混合物に入れる。
７ ３７℃で６０分間置く。激しく振盪させる（２５０ｒｐｍ）か、または回転させる
。
８ 選択プレートを３７℃に温める。
９ 管を振り、逆さにすることによって完全に細胞を混合する。
５０〜１００μＬの各希釈物を選択プレートに広げ、３７℃で一晩インキュベートする
。あるいは、３０℃で２４〜３６時間または２５℃で４８時間インキュベートする。
次いで、単一コロニーを使用し、適切な抗生物質を用いて５ｍＬのＬＢ成長培地を接種
し、５時間成長させる（２５０ＲＰＭ、３７℃）。次いで、これを使用して、２００ｍＬ
の培養培地を接種し、同じ条件下で一晩成長させる。
プラスミドを単離するために（最大８５０μｇ）、製造業者の指示に従ってＩｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ ＰＵＲＥＬＩＮＫ（商標）ＨｉＰｕｒｅ Ｍａｘｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｃａ
ｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いてマキシプレップを行う。
インビトロ転写（ＩＶＴ）のためのｃＤＮＡを生成するために、プラスミド（この例は
図３に示される）を、ＸｂａＩ等の制限酵素を用いてまず線形化する。ＸｂａＩでの典型
的な制限消化には、以下が含まれる：プラスミド１．０μｇ；１０倍緩衝液１．０μＬ；
ＸｂａＩ１．５μＬ；ｄＨ２０最大１０μＬ；３７℃で１時間のインキュベーション。実
験室規模（５μｇ未満）で行う場合、製造業者の指示に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＰ
ＵＲＥＬＩＮＫ（商標）ＰＣＲ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用い
て、反応物を浄化する。より大規模な精製は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎの標準的ＰＵＲＥＬ
ＩＮＫ（商標）ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）等、より大きな充填容量を有
する製品を用いて行う必要があり得る。浄化した後、線形化されたベクターを、Ｎａｎｏ
Ｄｒｏｐを用いて定量化し、アガロースゲル電気泳動を用いて分析して線形化を確認する
。
非限定的な例として、Ｇ−ＣＳＦは、目的とするポリペプチドを表し得る。実施例１〜
５に概説されるステップに使用される配列を、表１２に示す。開始コドン（ＡＴＧ）は、
表１２の各配列中に下線で示されていることに留意されたい。
表１２． Ｇ−ＣＳＦの配列
実施例２： ｃＤＮＡ産生のためのＰＣＲ
ｃＤＮＡの調製のためのＰＣＲ手順を、Ｋａｐａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｗｏｂｕｒ
ｎ，ＭＡ）による２×ＫＡＰＡ ＨＩＦＩ（商標）ＨｏｔＳｔａｒｔ ＲｅａｄｙＭｉｘ
を用いて行う。このシステムには、２×ＫＡＰＡ ＲｅａｄｙＭｉｘ１２．５μＬ、順方
向プライマー（１０ｕＭ）０．７５μＬ、逆方向プライマー（１０ｕＭ）０．７５μＬ、
鋳型ｃＤＮＡ１００ｎｇ、および２５．０μＬに希釈したｄＨ２０が含まれる。反応条件
は、９５℃で５分間、９８℃で２０秒間を２５サイクル、その後５８℃で１５秒間、続い
て７２℃で４５秒間、次いで７２℃で５分間、次いで４℃で終了までである。
本発明の逆方向プライマーは、ｍＲＮＡにおけるポリＡ１２０のためのポリＴ１２０を
組み込む。より長いかまたは短いポリ（Ｔ）路を有する他の逆方向プライマーを使用して
、ｍＲＮＡにおけるポリ（Ａ）尾部の長さを調節することができる。
反応物を、製造業者の指示に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＰＵＲＥＬＩＮＫ（商標）
ＰＣＲ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて浄化する（５μｇまで
）。より大規模な反応は、より大容量の製品を用いて浄化する必要がある。浄化した後、
ｃＤＮＡを、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）を用いて定量化し、アガロースゲル電気泳動によ
って分析して、ｃＤＮＡが予測した大きさであることを確認する。次いで、ｃＤＮＡを、
シークエンシング分析に出した後に、インビトロ転写反応を進める。
実施例３． インビトロ転写（ＩＶＴ）
インビトロ転写反応により、修飾ヌクレオチドまたは修飾ＲＮＡを含有するｍＲＮＡを
生成する。投入するヌクレオチドトリホスフェート（ＮＴＰ）混合物は、天然および非天
然のＮＴＰを用いてで自家作製したものである。
典型的なインビトロ転写反応物には、次のものが含まれる。
１． 鋳型ｃＤＮＡ １．０μｇ
２． １０倍転写緩衝液（４００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８．０、１９０ｍＭ
ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭスペルミジン） ２．０μＬ
３． カスタムＮＴＰ（２５ｍＭずつ） ７．２μＬ
４． ＲＮａｓｅ阻害剤 ２０Ｕ
５． Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ ３０００Ｕ
６． ｄＨ２Ｏ 最大２０．０μＬ
７． ３７℃で３時間〜５時間のインキュベーション。
粗製ＩＶＴ混合物を、翌日の浄化のために４℃で一晩保管され得る。次いで、１ＵのＲ
Ｎａｓｅ不含ＤＮａｓｅを使用して、元の鋳型を消化させる。３７℃で１５分間のインキ
ュベーションの後、ｍＲＮＡを、製造業者の指示に従ってＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡＣＬＥ
ＡＲ（商標）Ｋｉｔ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いて精製する。このキットは、最大５０
０μｇのＲＮＡを精製することができる。浄化させた後、ＲＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐを
用いて定量化し、アガロースゲル電気泳動によって分析して、ＲＮＡが適正な大きさであ
ること、およびＲＮＡの分解が生じていないことを確認する。
実施例４． ｍＲＮＡの酵素キャッピング
ｍＲＮＡのキャッピングを、次のように行い、混合物には、ＩＶＴ ＲＮＡが６０μｇ
〜１８０μｇおよびｄＨ２０が最大７２μＬ含まれる。混合物を、６５℃で５分間インキ
ュベートしてＲＮＡを変性させ、その後すぐに氷上に移す。
このプロトコルは、次いで、１０倍キャッピング緩衝液（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ８．０）、６０ｍＭ ＫＣｌ、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２）（１０．０μＬ）、２
０ｍＭ ＧＴＰ（５．０μＬ）、２０ｍＭ Ｓ−アデノシルメチオニン（２．５μＬ）、
ＲＮａｓｅ阻害剤（１００Ｕ）、２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（４００Ｕ）、ワ
クシニアキャッピング酵素（グアニリルトランスフェラーゼ）（４０Ｕ）、ｄＨ２０（２
８μＬまで）、および６０μｇのＲＮＡについては３７℃で３０分間のインキュベーショ
ンまたは１８０μｇのＲＮＡでは最大２時間のインキュベーションを伴う。
次いで、ｍＲＮＡを、製造業者の指示に従ってＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡＣＬＥＡＲ（商
標）Ｋｉｔ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いて精製する。浄化させた後、ＲＮＡを、ＮＡＮ
ＯＤＲＯＰ（商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて定量
化し、アガロースゲル電気泳動によって分析して、ＲＮＡが適正な大きさであること、お
よびＲＮＡの分解が生じていないことを確認する。また、配列決定のためのｃＤＮＡを生
成するために、ＲＮＡ産物に、逆転写ＰＣＲを実行して配列決定を行ってもよい。
実施例５． ポリＡテーリング反応
ｃＤＮＡにポリＴがない場合、最終産物を浄化する前に、ポリＡテーリング反応を行う
必要がある。これは、キャップされたＩＶＴ ＲＮＡ（１００μＬ）、ＲＮａｓｅ阻害剤
（２０Ｕ）、１０倍テーリング緩衝液（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２
．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ ＭｇＣｌ２）（１２．０μＬ）、２０ｍＭ ＡＴＰ（６
．０μＬ）、ポリＡポリメラーゼ（２０Ｕ）、ｄＨ２０最大１２３．５μＬを混合し、３
７℃で３０分間インキュベートすることによって行う。ポリＡ尾部が既に転写物中に存在
する場合、テーリング反応を省略し、直接ＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡＣＬＥＡＲ（商標）ｋ
ｉｔ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）（最大５００μｇ）での浄化に進んでもよい。ポリＡポリメ
ラーゼは、好ましくは、酵母に発現される組み換え酵素である。
本明細書において実行および記載される研究においては、ポリＡ尾部は、１６０ヌクレ
オチド長を含むように、ＩＶＴ鋳型にコードされる。しかしながら、ポリＡテーリング反
応の進行性または完全性は、常に正確に１６０個のヌクレオチドをもたらすわけではない
ことを理解されたい。したがって、約１６０ヌクレオチド、例えば、約１５０〜１６５、
１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、
または１６５のポリＡ尾部は、本発明の範囲内である。
実施例６． 天然の５’キャップおよび５’キャップ類似体
修飾ＲＮＡの５’キャッピングは、製造業者のプロトコルに従って、次の化学的ＲＮＡ
キャップ類似体を用いたインビトロ転写反応の際に付随して完了し得、５’グアノシンキ
ャップ構造が生成される：３’−Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ［ＡＲＣＡ
キャップ］、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’
）ｐｐｐ（５’）Ａ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉ
ｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）。修飾ＲＮＡの５’キャッピングは、ワクシニアウ
イルスキャッピング酵素を用いて転写後に完了し、「キャップ０」構造：ｍ７Ｇ（５’）
ｐｐｐ（５’）Ｇ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）
を生成し得る。キャップ１構造は、ワクシニアウイルスキャッピング酵素および２’−Ｏ
メチルト−ランスフェラーゼの両方を用いて生成され得、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）
Ｇ−２’−Ｏ−メチルが得られる。キャップ２構造は、２’−Ｏメチル−トランスフェラ
ーゼを用いて、５’末端から３番目のヌクレオチドの２’−Ｏ−メチル化の後に、キャッ
プ１構造から生成され得る。キャップ３構造は、２’−Ｏメチル−トランスフェラーゼを
用いて、５’末端から４番目のヌクレオチドの２’−Ｏ−メチル化の後に、キャップ２構
造から生成され得る。酵素は、好ましくは組み換え源に由来する。
哺乳動物細胞にトランスフェクトする場合、修飾ｍＲＮＡは、１２〜１８時間、または
１８時間を超える、例えば、２４、３６、４８、６０、７２、もしくは７２時間を超える
安定性を有する。
実施例７． キャッピング
Ａ． タンパク質発現アッセイ
ＡＲＣＡ（３’Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ）キャップ類似体またはキ
ャップ１構造を含有する、ヒトＧ−ＣＳＦをコードする合成ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡは配列番
号３３８９４に示され、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位に
おけるシュードウリジン置換で完全に修飾されたｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示
され、約１６０ヌクレオチド（ｎｕｃｌｅｔｏｉｄｉｅ）長のポリＡ尾部は配列内には示
されない）を、等濃度でヒト初代ケラチノサイトにトランスフェクトすることができる。
トランスフェクションの６、１２、２４、および３６時間後に、培養培地に分泌されたＧ
−ＣＳＦの量を、ＥＬＩＳＡによってアッセイすることができる。培地中により高レベル
のＧ−ＣＳＦを分泌する合成ｍＲＮＡは、より高度は翻訳的にコンピテントなキャップ構
造を有する合成ｍＲＮＡに対応する。
Ｂ． 純度分析合成
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造の粗製合成産物を含有する、ヒトＧ−Ｃ
ＳＦをコードする合成ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡは配列番号３３８９４に示され、各シトシンに
おける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換で完全に
修飾されたｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示され、約１６０ヌクレオチドのポリＡ
尾部は配列内に示されない）を、変性アガロース−尿素ゲル電気泳動またはＨＰＬＣ分析
を用いて、純度について比較することができる。電気泳動により単一の集約された帯域を
有する合成ｍＲＮＡは、複数の帯域または筋状の帯域を有する合成ｍＲＮＡと比較して、
より高い純度の産物に対応する。単一のＨＰＬＣピークを有する合成ｍＲＮＡもより高い
純度の産物に対応する。より高効率のキャッピング反応により、より純粋なｍＲＮＡ集団
が得られる。
Ｃ． サイトカイン分析
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造を含有する、ヒトＧ−ＣＳＦをコードす
る合成ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡは配列番号３３８９４に示され、各シトシンにおける５−メチ
ルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換により完全に修飾された
ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示され、約１６０ヌクレオチド長のポリＡ尾部は配
列内に示されない）を、複数の濃度でヒト初代ケラチノサイトにトランスフェクトするこ
とができる。トランスフェクションの６、１２、２４、および３６時間後に、培養培地に
分泌されたＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−β等の炎症促進性サイトカインの量を、ＥＬＩＳＡ
によってアッセイすることができる。培地中により高レベルの炎症促進性サイトカインを
分泌する合成ｍＲＮＡは、免疫活性化キャップ構造を有する合成ｍＲＮＡに対応する。
Ｄ． キャッピング反応効率
ＡＲＣＡキャップ類似体またはキャップ１構造を含有する、ヒトＧ−ＣＳＦをコードす
る合成ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡは配列番号３３８９４に示される、５−メチルシトシンおよび
各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換により完全に修飾されたｍＲＮＡ配列は各
シトシンにおける配列番号３３８９７に示され、約１６０ヌクレオチド長のポリＡ尾部は
、配列内に示されない）を、キャップされたｍＲＮＡのヌクレアーゼ処理の後に、ＬＣ−
ＭＳによってキャッピング反応効率について分析することができる。キャップされたｍＲ
ＮＡのヌクレアーゼ処理により、ＬＣ−ＭＳによって検出可能な遊離ヌクレオチドとキャ
ップされた５’−５−トリホスフェートキャップ構造の混合物が得られる。ＬＣ−ＭＳス
ペクトル上のキャップされた生成物の量は、反応からの全ｍＲＮＡの割合として表すこと
ができ、キャッピング反応効率に対応するであろう。より高いキャッピング反応効率を有
するキャップ構造は、ＬＣ−ＭＳにより、より高い量のキャップされた生成物を有するで
あろう。
実施例８． 修飾ＲＮＡまたはＲＴ ＰＣＲ産物のアガロースゲル電気泳動
個々の修飾ＲＮＡ（２０μＬ体積中２００〜４００ｎｇ）または逆転写されたＰＣＲ産
物（２００〜４００ｎｇ）を、非変性１．２％アガロースＥ−ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のウェルに充填し、製造業者のプロトコルに従って１２〜
１５分間泳動させる。
実施例９． Ｎａｎｏｄｒｏｐ修飾ＲＮＡの定量化およびＵＶスペクトルデータ
ＴＥ緩衝液（１μＬ）中の修飾ＲＮＡを、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ＵＶ吸光読み取りに使用
して、インビトロ転写反応からの各ＲＮＡの収率を定量化する。
実施例１０． リピドイドを用いた修飾ｍＲＮＡの製剤化
修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）を、細胞に添加する前に、設定された比率でｍｍＲＮＡと
リピドイドとを混合することによってインビトロでの実験用に製剤化する。インビボ製剤
は、身体全体への循環を促進するために、追加の成分の添加を要する場合がある。インビ
ボでの働きに好適な粒子を形成するこれらのリピドイドの能力を試験するために、ｓｉＲ
ＮＡ−リピドイド製剤に使用される標準的な製剤化プロセスを、起始点として使用した。
初期ｍｍＲＮＡ−リピドイド製剤は、４２％リピドイド、４８％コレステロール、および
１０％ＰＥＧから構成される粒子からなり得、比率のさらなる最適化が可能である。粒子
の形成後にｍｍＲＮＡを添加し、複合体と一体化させる。カプセル封入効率を、標準的な
色素排除アッセイを用いて判定する。
実施例１１〜１５の材料および方法
Ａ． 脂質合成
６つの脂質、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、
９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、およびＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡを、修飾ＲＮＡとと
もに製剤化するために、当技術分野で概説される方法によって合成した。ＤＬｉｎ−ＤＭ
Ａおよび前駆体を、Ｈｅｙｅｓ ｅｔ．ａｌ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２
００５，１０７，２７６−２８７に記載されるように合成した。ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡお
よびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ならびに前駆体を、Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ．ａｌ，Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，２８，１７２−１７６に記載されるよ
うに合成した。９８Ｎ１２−５および前駆体を、Ａｋｉｎｃ ｅｔ．ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２６，５６１−５６９に記載されるように合
成した。
Ｃ１２−２００および前駆体を、Ｌｏｖｅ ｅｔ．ａｌ，ＰＮＡＳ，２０１０，１０７
，１８６４−１８６９に概説される方法に従って合成した。２−エポキシドデカン（５．
１０ｇ、２７．７ｍｍｏｌ、８．２当量）を、Ａｍｉｎｅ ２００（０．７２３ｇ、３．
３６ｍｍｏｌ、１当量）および撹拌子を含有するバイアルに添加した。バイアルを密封し
、８０℃に温めた。反応物を、８０℃で４日間撹拌した。次いで、混合物を、純粋ジクロ
ロメタン（ＤＣＭ）からＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９８：２の勾配を用いてシリカゲルクロマト
グラフィーによって精製した。標的化合物をＲＰ−ＨＰＬＣによってさらに精製して、所
望の化合物を得た。
ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡおよび前駆体を、参照により全体が本明細書に組み込まれる
ＷＯ２０１００５４４０１号に記載の手順に従って合成した。１０ｍＬのＤＭＦ中のジリ
ノレイルメタノール（１．５ｇ、２．８ｍｍｏｌ、１当量）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ酪
酸（１．５ｇ、２．８ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＩＰＥＡ（０．７３ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ
、１．５当量）、およびＴＢＴＵ（１．３５ｇ、４．２ｍｍｏｌ、１．５当量）の混合物
を、室温で１０時間撹拌した。次いで、反応混合物をエーテル中に希釈し、水で洗浄した
。有機層を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を
、ＤＣＭからＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９８：２の勾配を用いてシリカゲルクロマトグラフィー
によって精製した。続いて、標的化合物を、さらなるＲＰ−ＨＰＬＣ精製に供し（これは
ＹＭＣ-Ｐａｃｋ Ｃ４カラムを用いて行った）、標的化合物を得た。
Ｂ． 修飾ＲＮＡナノ粒子の製剤化
合成脂質、１，２−ジステアロイル−３−ホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）（Ａｖａ
ｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）、コレステロール（Ｓ
ｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびα−［
３’−（１，２−ジミリストイル−３−プロパノキシ）−カルボキサミド−プロピル］−
ω−メトキシ−ポリオキシエチレン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）（ＮＯＦ，Ｂｏｕｗｅｌｖ
ｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）の溶液を、エタノール中５０ｍＭの濃度で調製し、−２０℃で保
管した。脂質を合わせて、５０：１０：３８．５：１．５（脂質：ＤＳＰＣ：コレステロ
ール：ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）のモル比を得、２５ｍＭの最終脂質濃度までエタノールで
希釈した。水中１〜２ｍｇ／ｍＬの濃度の修飾ｍＲＮＡの溶液を、ｐＨ３で５０ｍＭのク
エン酸ナトリウム緩衝液中に希釈して、修飾ｍＲＮＡのストック溶液を形成した。合成脂
質溶液と修飾ｍＲＮＡ溶液を、１０：１、１５：１、２０：１、および３０：１の総脂質
対修飾ｍＲＮＡの重量比で合わせることによって、脂質および修飾ｍＲＮＡの製剤を調製
した。脂質エタノール溶液を、修飾ｍＲＮＡ水溶液に迅速に注入して、３３％のエタノー
ルを含有する懸濁液を得た。溶液は、手動（ＭＩ）またはシリンジポンプ（ＳＰ）を用い
てのいずれかで注入した（Ｈａｒｖａｒｄ Ｐｕｍｐ ３３ Ｄｕａｌ Ｓｙｒｉｎｇｅ
Ｐｕｍｐ Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）。
エタノールを除去し、緩衝液交換を達成するために、製剤を、１０ｋＤの分子量カット
オフ（ＭＷＣＯ）で、Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒカセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅ
ｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いて、一次産物の２
００倍の体積でｐＨ７．４においてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に対して２回透析し
た。１回目の透析は、室温で３時間行い、次いで、製剤を４℃で一晩透析した。結果とし
て得られたナノ粒子懸濁液を、０．２μｍの滅菌フィルター（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｎuｍ
ｂｒｅｃｈｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を通して濾過してガラスバイアルに入れ、圧着密閉した
。
Ｃ． 製剤の特徴付け
Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌ
ｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用して、修飾ｍＲＮ
Ａナノ粒子の粒径、多分散指標（ＰＤＩ）、およびゼータ電位を、粒径の判定時は１倍Ｐ
ＢＳ中、およびゼータ電位の判定時は１５ｍＭのＰＢＳ中において、判定した。
紫外可視分光法を用いて、修飾ｍＲＮＡナノ粒子製剤の濃度を判定した。１倍ＰＢＳ中
に希釈した１００μＬの製剤を、９００μＬの４：１（ｖ／ｖ）のメタノールとクロロホ
ルムの混合物に添加した。混合した後、溶液の吸光度スペクトルを、ＤＵ ８００分光光
度計（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，
Ｂｒｅａ，ＣＡ）において、２３０ｎｍ〜３３０ｎｍで記録した。ナノ粒子製剤中の修飾
ＲＮＡの濃度を、製剤に使用した修飾ＲＮＡの減衰係数および２６０ｎｍの波長での吸光
度と３３０ｎｍの波長でのベースラインとの間の差に基づいて計算した。
ＱＵＡＮＴ−ＩＴ（商標）ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡアッセイ（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて、ナノ粒子
による修飾ＲＮＡのカプセル封入を評価した。試料を、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）中約５μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。５０μ
Ｌの希釈試料を、ポリスチレン９６ウェルプレートに移し、次いで、５０μＬのＴＥ緩衝
液または５０μＬの２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液のいずれかを添加した。プレート
を３７℃の温度で１５分間インキュベートした。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）試薬を
、ＴＥ緩衝液中１：１００で希釈し、１００μＬのこの溶液を、各ウェルに添加した。蛍
光強度を、約４８０ｎｍの励起波長および約５２０ｎｍの発光波長で、蛍光プレートリー
ダー（Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ １４２０ Ｍｕｌｔｉｌａｂｌｅｌ Ｃｏｕｎｔｅ
ｒ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて測定した。試薬ブラン
クの蛍光値を、各試料のそれぞれのものから差し引き、遊離修飾ＲＮＡの割合（％）は、
無傷な試料（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の添加なし）の蛍光強度を分断した試料（Ｔｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１０の添加によって引き起こされた）の蛍光値で除すことによって判定した
。
Ｄ． インビトロインキュベーション
ヒト胎児腎臓上皮（ＨＥＫ２９３）および肝細胞癌上皮（ＨｅｐＧ２）細胞（ＬＧＣ
ｓｔａｎｄａｒｄｓ ＧｍｂＨ，Ｗｅｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、９６−ウェルプレー
ト（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−ｏｎｅ ＧｍｂＨ，Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ）に播種し、ＨＥＫ２９３細胞のプレートは１型コラーゲンで事前コーティング
されていた。１００μＬの細胞培養培地中、ＨＥＫ２９３は１ウェル当たり３０，０００
細胞の密度で播種し、ＨｅｐＧ２は３５，０００細胞の密度で播種した。ＨＥＫ２９３に
ついては、細胞培養培地は、２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、
および１ｘ非必須アミノ酸（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）
、ならびに１．２ｍｇ／ｍＬの重炭酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｕｎ
ｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加した、ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳであり、ＨｅｐＧ２につ
いては、培養培地は、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、および
１ｘ非必須アミノ酸（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙを添加し
た、ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，
Ｇｅｒｍａｎｙ）、１０％ＦＣＳであった。ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は
配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されな
い；５’キャップ、キャップ１）を、細胞を播種した直後に四重に添加し、インキュベー
トした。インビトロ転写（ＩＶＴ）に使用される、Ｔ７プロモーター、５’非翻訳領域（
ＵＴＲ）、および３’ＵＴＲを有するｍＣｈｅｒｒｙ ｃＤＮＡを、配列番号３３８９９
に示す。ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡを、各シトシンにおける５ｍｅＣおよび各ウリジン部
位におけるシュードウリジン置換で修飾した。
培養培地上清を９６ウェルＰｒｏ−Ｂｉｎｄ Ｕ底プレート（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に移すことによって
、細胞を収集した。細胞を、半量のトリプシン／ＥＤＴＡ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂ
ｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でトリプシン化し、それぞれの上清とともにプールし、１
回量のＰＢＳ／２％ＦＣＳ（いずれもＢｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）／０．５％ホルムアルデヒド（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎ
ｙ）を添加することによって固定した。次いで、試料を、ＬＳＲＩＩサイトメーター（Ｂ
ｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ
）において、５３２ｎｍの励起レーザーおよびＰＥ−Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ用の６１０／２
０フィルターを用いてフローサイトメーター測定にかけた。すべてのイベントの平均蛍光
強度（ＭＦＩ）および４つの独立したウェルの標準偏差を、分析した試料について提示す
る。
実施例１１． ナノ粒子製剤の精製
ＨＥＫ２９３およびＨｅｐＧ２においてＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡおよび９８Ｎ１２−
５のナノ粒子製剤を試験し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）が脂質と修飾ＲＮＡの比、および／
または精製に依存するかどうかを判定した。ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡの３つの製剤と９
８Ｎ１２−５の２つの製剤を、シリンジポンプを用いて表１３に記載される仕様に生成し
た。精製試料は、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）Ｇ−２５ ＤＮＡグレード（ＧＥ Ｈｅａｌ
ｔｈｃａｒｅ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって精製した。精製の前および後（ａＰ）の各製剤を
、２４ウェルプレートにおいて、１ウェル当たり２５０ｎｇの修飾ＲＮＡの濃度で試験し
た。各製剤およびバックグラウンド試料についてフローサイトメーターによって分析した
ときにＦＬ４チャネルのマーカーが陽性である細胞の割合（ＦＬ４陽性％）、ならびに各
製剤およびバックグラウンド試料についてのＦＬ４チャネルのマーカーのＭＦＩを、表１
４に示す。精製されている製剤は、精製前に試験した製剤よりもわずかに高いＭＦＩを有
した。
表１３． 製剤
表１４． ＨＥＫ２９３およびＨｅｐＧ２、２４ウェル、２５０ｎｇの修飾ＲＮＡ／ウ
ェル
実施例１２． 濃度応答曲線
９８Ｎ１２−５（ＮＰＡ−００５）およびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ（ＮＰＡ−００３
）のナノ粒子製剤を、種々の濃度で試験して、広範な濃度にわたり、ＦＬ４またはｍＣｈ
ｅｒｒｙ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシ
ュードウリジンで完全に修飾）のＭＦＩを判定した。試験した製剤を表１５に概要説明す
る。９８Ｎ１２−５のナノ粒子製剤の最適な濃度を判定するために、様々な濃度の製剤化
された修飾ＲＮＡ（１ウェル当たり１００ｎｇ、１０ｎｇ、１．０ｎｇ、０．１ｎｇ、お
よび０．０１ｎｇ）を、２４ウェルプレートのＨＥＫ２９３において試験し、各用量のＦ
Ｌ４ ＭＦＩの結果を表１６に示す。同様に、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡのナノ粒子製剤
の最適な濃度を判定するために、様々な濃度の製剤化された修飾ＲＮＡ（１ウェル当たり
２５０ｎｇ １００ｎｇ、１０ｎｇ、１．０ｎｇ、０．１ｎｇ、および０．０１ｎｇ）を
、２４ウェルプレートのＨＥＫ２９３において試験し、各用量のＦＬ４ ＭＦＩの結果を
表１７に示す。ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡのナノ粒子製剤も、様々な濃度の製剤化された
修飾ＲＮＡ（１ウェル当たり２５０ｎｇ、１００ｎｇ、および３０ｎｇ）で２４ウェルプ
レートのＨＥＫ２９３において試験し、ＦＬ４ ＭＦＩの結果を表１８に示す。９８Ｎ１
２−５については１ｎｇ／ウェルの用量、およびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡについては１
０ｎｇ／ウェルの用量が、バックグランドのＦＬ４ ＭＦＩに類似していることがわかっ
た。
濃度がバックグラウンドにどの程度類似しているかを判定するために、ｍＣｈｅｒｒｙ
発現の検出用に最適化されたフィルターセットを有するフローサイトメーターを利用し、
バックグラウンドレベルと比較して増加した感受性で結果を得ることができた。２５ｎｇ
／ウェル、０．２５ｎｇ／ウェル、０．０２５ｎｇ／ウェル、および０．００２５ｎｇ／
ウェルの用量を、９８Ｎ１２−５（ＮＰＡ−００５）およびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ（
ＮＰＡ−００３）について分析して、ｍＣｈｅｒｒｙのＭＦＩを判定した。表１９に示さ
れるように、０．０２５ｎｇ／ウェルおよびそれ以下の濃度は、約３８６．１２５である
ｍＣｈｅｒｒｙのバックグラウンドＭＦＩレベルに類似している。
表１５． 製剤
表１６． ＨＥＫ２９３、ＮＰＡ−００５、２４ウェル、ｎ＝４
表１７． ＨＥＫ２９３、ＮＰＡ−００３、２４ウェル、ｎ＝４
表１８． ＨＥＫ２９３、ＮＰＡ−００３、２４ウェル、ｎ＝４
表１９． 濃度およびＭＦＩ
実施例１３． 手動注入およびシリンジポンプ製剤
ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡおよび９８Ｎ１２−５の２つの製剤を、手動注入（ＭＩ）お
よびシリンジポンプ注入（ＳＰ）によって調製し、バックグラウンド試料とともに分析し
て、異なる製剤のｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１
６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−
メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）のＭＦＩを比較した。表２０は、
シリンジポンプ製剤が、同じ脂質および脂質／ＲＮＡ比の手動注入製剤と比較して、高い
ＭＦＩを有したことを示す。
表２０． 製剤およびＭＦＩ
実施例１４． 脂質ナノ粒子製剤
ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−
５、Ｃ１２−２００、およびＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡの製剤を、ＨＥＫ２９３のプレー
トでは６０ｎｇ／ウェルまたは６２．５ｎｇ／ウェルの濃度で、ＨｅｐＧ２細胞のプレー
トでは６２．５ｎｇ／ウェルの濃度で、２４時間インキュベートして、各製剤についてｍ
Ｃｈｅｒｒｙ（配列番号３３８９８；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示さ
れない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全
に修飾）のＭＦＩを判定した。試験した製剤を、以下の表２１に概略説明する。６０ｎｇ
／ウェルについては表２２に、６２．５ｎｇ／ウェルについては表２３、２４、および２
５に示されるように、ＮＰＡ−００３およびＮＰＡ−０１８の製剤が、最も高いｍＣｈｅ
ｒｒｙ ＭＦＩを有し、ＮＰＡ−００８、ＮＰＡ−０１０、およびＮＰＡ−０１３の製剤
は、バックグラウンド試料のｍＣｈｅｒｒｙ ＭＦＩ値に最も類似している。
表２１． 製剤
表２２． ＨＥＫ２９３、９６ウェル、６０ｎｇの修飾ＲＮＡ／ウェル
表２３． ＨＥＫ２９３、６２．５ｎｇ／ウェル
表２４． ＨＥＫ２９３、６２．５ｎｇ／ウェル
表２５． ＨｅｐＧ２、６２．５ｎｇ／ウェル
実施例１５． インビボ製剤研究
齧歯動物（ｎ＝５）に、修飾ｍＲＮＡおよび脂質を含有する製剤の単回用量を、静脈内
、皮下、または筋肉内投与する。齧歯動物に投与する修飾ｍＲＮＡは、Ｇ−ＣＳＦ（ｍＲ
ＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内
に示されない；５’キャップ、キャップ１）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）（ｍＲＮＡ配
列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示さ
れない；５’キャップ、キャップ１）、第ＩＸ因子（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１
に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、
キャップ１）、またはｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；
約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）
から選択される。インビトロ転写（ＩＶＴ）に使用される、Ｔ７プロモーター、５’非翻
訳領域（ＵＴＲ）、および３’ＵＴＲを有するエリスロポエチンｃＤＮＡを、配列番号３
３９０２および配列番号３３９０３に示す。
各製剤はまた、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ
、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ｒｅＬＮＰ、ＡＴＵＰ
ＬＥＸ（登録商標）、ＤＡＣＣ、およびＤＢＴＣのうちの１つから選択される脂質を含有
する。齧歯動物に、１００μｇ、１０μｇ、または１μｇの製剤化された修飾ｍＲＮＡを
注入し、試料を指定時間間隔で採取する。
ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡを含有する製剤を投与した齧歯動物からの血清を、特異的
Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡによって測定し、ヒト第ＩＸ因子修飾ＲＮＡを投与したマウスか
らの血清を、特異的第ＩＸ因子ＥＬＩＳＡまたは発色アッセイによって分析する。ｍＣｈ
ｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡを投与したマウスからの肝臓および脾臓を、免疫組織化学（ＩＨＣ
）または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって分析する。対照として、１つのマウス
群にはいずれの製剤も注入せずに、それらの血清および組織を採取し、ＥＬＩＳＡ、ＦＡ
ＣＳ、および／またはＩＨＣによって分析する。
Ａ． 経時変化
齧歯動物に、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡを含有する製剤を投与して、投与した製剤
のタンパク質発現の経時変化を研究する。齧歯動物に、修飾ｍＲＮＡ製剤の投与の前後に
指定時間間隔で採血を行って、タンパク質発現および全血球数を判定する。試料を、修飾
ｍＲＮＡ製剤を皮下または筋肉内投与した齧歯動物の投与部位からも採取して、組織内の
タンパク質発現を判定する。
Ｂ． 用量応答
齧歯動物に、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡを含有する製剤を投与して、各製剤の用量
応答を判定する。齧歯動物に、修飾ｍＲＮＡ製剤の投与の前後に指定時間間隔で採血を行
って、タンパク質発現および全血球数を判定する。さらに、齧歯動物を屠殺して、修飾ｍ
ＲＮＡ製剤の内部組織への作用を分析する。試料を、修飾ｍＲＮＡ製剤を皮下または筋肉
内投与した齧歯動物の投与部位からも採取して、組織内のタンパク質発現を判定する。
Ｃ． 毒性
齧歯動物に、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡを含有する製剤を投与して、各製剤の毒性
を研究する。齧歯動物に、修飾ｍＲＮＡ製剤の投与の前後に指定時間間隔で採血を行って
、タンパク質発現および全血球数を判定する。さらに、齧歯動物を屠殺して、修飾ｍＲＮ
Ａ製剤の内部組織への作用を分析する。試料を、修飾ｍＲＮＡ製剤を皮下または筋肉内投
与した齧歯動物の投与部位からも採取して、組織内のタンパク質発現を判定する。
実施例１６． ＰＬＧＡマイクロスフェア製剤
ＰＬＧＡマイクロスフェアの製剤化に使用されるパラメータの最適化により、マイクロ
スフェアにカプセル封入された修飾ＲＮＡの完全性を維持すると同時に、調整可能な放出
速度および高いカプセル封入効率を可能にすることができる。粒径、回収率、およびカプ
セル封入効率等であるがこれらに限定されないパラメータを最適化して、最適な製剤を達
成することができる。
Ａ． ＰＬＧＡマイクロスフェアの合成
ポリ乳酸グリコール酸（ＰＬＧＡ）マイクロスフェアを、ＰＬＧＡ（Ｌａｃｔｅｌ、カ
タログ番号Ｂ６０１０−２、固有粘度０．５５〜０．７５、５０：５０のＬＡ：ＧＡ）、
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号３４８４０６−２５Ｇ、Ｍ
Ｗ １３−２３ｋ）、ジクロロメタン、および水を使用して、当技術分野で既知の水／油
／水の二重乳化法を用いて合成した。手短に、０．１ｍＬの水（Ｗ１）を、ＰＬＧＡの濃
度範囲５０〜２００ｍｇ／ｍＬで、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（Ｏ１）中に溶解させた２
ｍＬのＰＬＧＡに添加した。Ｗ１／Ｏ１エマルションを、速度４（約１５，０００ｒｐｍ
）で３０秒間均質化させた（ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅ
ｒ，Ｔ１８）。次いで、Ｗ１／Ｏ１エマルションを１００〜２００ｍＬの０．３〜１％の
ＰＶＡ（Ｗ２）に添加し、種々の速度で１分間均質化させた。製剤をそのまま３時間撹拌
させ、次いで、遠心分離により洗浄した（２０〜２５分間、４，０００ｒｐｍ、４℃）。
上清を廃棄し、ＰＬＧＡのペレットを５〜１０ｍＬの水に再懸濁させ、これを２回繰り返
した。各製剤の平均粒径（２０〜３０個の粒子を表す）を、洗浄後の顕微鏡検査により判
定した。表２６は、ＰＬＧＡ濃度の増加が、より大きな粒径のマイクロスフェアをもたら
したことを示す。２００ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ濃度は、１４．８μｍの平均粒径をもたら
し、１００ｍｇ／ｍＬでは８．７μｍであり、５０ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡでは４．０μｍ
の平均粒径をもたらした。
表２６． ＰＬＧＡ濃度の変化
表２７は、５（約２０，０００ｒｐｍ）から速度４（約１５，０００ｒｐｍ）への均質
化速度の減少により、１４．８μｍから２９．７μｍへの粒径増加がもたらされたことを
示す。
表２７． 均質化速度の変化
表２８は、Ｗ２の体積を増加させること（すなわち、Ｗ２：Ｏ１の比を５０：１から１
００：１に増加させること）により、平均粒径がわずかに減少したことを示す。０．３か
ら１重量％へのＰＶＡ濃度の変化は、ＰＬＧＡマイクロスフェアの大きさにほとんど影響
を及ぼさなかった。
表２８． Ｗ２の体積および濃度の変化
Ｂ． 修飾ｍＲＮＡのカプセル封入
修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチ
ルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）を、２ｍｇ／ｍＬ（Ｗ３）の濃度で水
中に溶解させた。３つのバッチのＰＬＧＡマイクロスフェア製剤を、次のパラメータに従
って上述のように作製した：２ｍｇ／ｍＬで０．１ｍＬのＷ３、２００ｍｇ／ｍＬで１．
６ｍＬのＯ１、１％で１６０ｍＬのＷ２、ならびに第１のエマルション（Ｗ３／Ｏ１）は
速度３で均質化、および第２のエマルション（Ｗ３／Ｏ１／Ｗ２）は速度５で均質化。遠
心分離によって洗浄した後、製剤を液体窒素中で凍結させ、次いで３日間凍結乾燥させた
。製剤のカプセル封入効率を試験するために、凍結乾燥材料を、ＤＣＭ中で６時間脱製剤
化（ｄｅｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）させた後、一晩水中に抽出した。次いで、試料中の修飾
ＲＮＡの濃度をＯＤ２６０によって判定した。カプセル封入効率は、修飾ＲＮＡの実際の
量を取得し、修飾ＲＮＡの開始時の量で除すことによって計算した。試験した３つのバッ
チでは、５９．２、４９．８、および６１．３のカプセル封入効率であった。
Ｃ． ＰＬＧＡマイクロスフェアにカプセル封入された修飾ｍＲＮＡの完全性
修飾第ＩＸ因子ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）を、種々の濃度で水中に溶解させて（Ｗ
４）製剤中の充填重量パーセント（ｍｇ 修飾ＲＮＡ／ｍｇ ＰＬＧＡ＊１００）を変化
させ、カプセル封入効率を判定した。表２８のパラメータを使用して、第１のエマルショ
ン（Ｗ４／Ｏ１）は均質化速度４で、第２のエマルション（Ｗ４／Ｏ１／Ｗ２）は均質化
速度５で、４つの異なるバッチのＰＬＧＡマイクロスフェア製剤を作製した。
表２８． 第ＩＸ因子ＰＬＧＡマイクロスフェア製剤のパラメータ
凍結乾燥させた後、ＰＬＧＡマイクロスフェアを、約１０μｇの修飾ＲＮＡに対応する
ように２ｍＬのエッペンドルフ管に計量した。凍結乾燥は、ＰＬＧＡマイクロスフェアの
全体的な構造を破壊しないことがわかった。ＰＬＧＡマイクロスフェアの充填重量パーセ
ント（重量％）を増加させるために、漸増量の修飾ＲＮＡを試料に添加した。１．０ｍＬ
のＤＣＭを各管に添加し、次いで試料を６時間振盪させることによって、ＰＬＧＡマイク
ロスフェアを脱製剤化した。修飾ＲＮＡの抽出のために、０．５ｍＬの水を各試料に添加
し、試料を一晩振盪させた後、試料中の修飾ＲＮＡの濃度をＯＤ２６０によって判定した
。抽出プロセスの回収率を判定するために、製剤化されていない第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡ
（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は
配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウ
リジンで完全に修飾）（脱製剤化対照）をＤＣＭ中に添加し、脱製剤化プロセスに供した
。表２９は、試料の充填およびカプセル封入効率を示す。すべてのカプセル封入効率試料
を、脱製剤化対照に対して正規化した。
表２９． 充填重量パーセントおよびカプセル封入効率
Ｄ． ＰＬＧＡマイクロスフェアにカプセル封入された修飾ｍＲＮＡの放出研究
第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）とともに製剤化したＰＬＧＡマイクロス
フェアを、上述のように脱製剤化し、抽出された修飾ＲＮＡの完全性を自動化電気泳動（
Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｅｘｐｅｒｉｏｎ）によって判定した。抽出した修飾ｍＲＮＡを、カプ
セル封入された修飾ｍＲＮＡの完全性を研究するために、製剤化されていない修飾ｍＲＮ
Ａおよび脱製剤化対照に対して比較した。図４に示されるように、修飾ＲＮＡの大半が、
バッチ識別子Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤ、脱製剤化した対照（脱製剤化対照）、ならびに製剤
化されていない対照（非製剤化対照）について、無傷であった。
Ｅ． ＰＬＧＡマイクロスフェアにカプセル封入された修飾ｍＲＮＡのタンパク質発現
第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）とともに製剤化されたＰＬＧＡマイクロ
スフェアを、上述のように脱製剤化し、抽出された修飾ＲＮＡのタンパク質発現をインビ
トロトランスフェクションアッセイによって判定した。ＨＥＫ２９３細胞に、ＲＮＡｉＭ
ＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と複合体形成した２５０ｎｇの第ＩＸ因子修飾ＲＮＡを、
三重に逆トランスフェクトした。
第ＩＸ因子修飾ＲＮＡをヌクレアーゼ不含水中で２５ｎｇ／μＬの濃度に希釈し、ＲＮ
ＡｉＭＡＸを血清不含ＥＭＥＭ中で１３．３倍希釈した。等体積の希釈修飾ＲＮＡおよび
希釈ＲＮＡｉＭＡＸを、一緒に混合し、２０〜３０分間室温に置いた。続いて、２５０ｎ
ｇの第ＩＸ因子修飾ＲＮＡを含有する２０μＬのトランスフェクション混合物を、３０，
０００の細胞を含有する８０μＬの細胞懸濁液に添加した。細胞を、加湿３７℃／５％Ｃ
Ｏ２の細胞培養インキュベーターで１６時間インキュベートした後、細胞培養上清を収集
した。細胞上清中の第ＩＸ因子のタンパク質発現を、特に第ＩＸ因子用のＥＬＩＳＡキッ
ト（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ、カタログ番号ＨＦＩＸＫＴ−ＴＯＴ
）によって分析し、タンパク質発現を表３０に示す。試験したすべてのＰＬＧＡマイクロ
スフェアバッチにおいて、第ＩＸ因子修飾ＲＮＡは活性なままであり、ＰＬＧＡマイクロ
スフェアへの製剤化および続く脱製剤化の後に、第ＩＸ因子タンパク質を発現した。
表３０． タンパク質発現
Ｆ． ＰＬＧＡマイクロスフェアにカプセル封入された修飾ｍＲＮＡの放出研究
第ＩＸ因子修飾ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌク
レオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシ
トシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）とともに製剤化されたＰＬＧＡマイクロス
フェアを、２４ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡマイクロスフェア濃度まで水中に再懸濁した。再懸
濁した後、１５０μＬのＰＬＧＡマイクロスフェア懸濁液を、エッペンドルフ管にアリコ
ート化した。試料を、研究過程の間、３７℃でインキュベートおよび振盪し続けた。三連
の試料を、０．２、１、２、８、１４、および２１日で取り出した。ＰＬＧＡマイクロス
フェアから放出された修飾ＲＮＡの量を判定するために、試料を遠心分離し、上清を除去
し、上清中の修飾ＲＮＡの濃度をＯＤ２６０によって判定した。表３１に示される放出パ
ーセントは、各試料中の総修飾ＲＮＡ量に基づいて計算した。３１日後、第ＩＸ因子修飾
ＲＮＡの９６％が、ＰＬＧＡマイクロスフェア製剤から放出された。
表３１． 放出パーセント
Ｇ． ＰＬＧＡマイクロスフェアの粒径再現性
３つのバッチの第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示され
る；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）ＰＬＧＡマイクロスフェ
アを、表２８に示されるバッチＤに関して記載のものと同じ条件を用いて作製した（４ｍ
ｇ／ｍＬで０．４ｍＬのＷ４、２００ｍｇ／ｍＬで２．０ｍＬのＯ１、１％で２００ｍＬ
のＷ２、およびＷ４／Ｏ１／Ｗ２エマルションは速度５で均質化）。ＰＬＧＡマイクロス
フェア懸濁液の均質性を改善するために、遠心分離の前に濾過を組み込んだ。３時間撹拌
した後、遠心分離の前に、すべての製剤化材料を１００μｍのナイロンメッシュ篩（Ｆｉ
ｓｈｅｒｂｒａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔｒａｉｎｅｒ、カタログ番号２２−３６３−５４９
）に通して大きな凝集物を取り除いた。水で洗浄し、再懸濁した後、１００〜２００μＬ
のＰＬＧＡマイクロスフェア試料を、レーザー回折による製剤の粒径測定に使用した（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ２０００）。試料の粒径を表３２に示す。
表３２． 粒径の概要
濾過を用いた３つのＰＬＧＡマイクロスフェアバッチの結果を、濾過なしの同じ条件下
で作製したＰＬＧＡマイクロスフェアバッチと比較した。洗浄前に濾過ステップを組み込
むことで、平均粒径が減少し、３つのＰＬＧＡマイクロスフェアバッチ間で一貫した粒径
分布が示された。
Ｈ． 第ＩＸ因子ＰＬＧＡマイクロスフェアの血清安定性
緩衝液（ＴＥ）もしくは９０％血清（Ｓｅ）中の第ＩＸ因子ｍＲＮＡ ｍＲＮＡ（ｍＲ
ＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内
に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジン
で完全に修飾）、または緩衝液、９０％血清、もしくは１％血清中のＰＬＧＡ中の第ＩＸ
因子ｍＲＮＡを、緩衝液、９０％血清、または１％血清中において、総体積７０μＬ中５
０ｎｇ／μＬのｍＲＮＡ濃度でインキュベートした。試料を、０、３０、６０、または１
２０分で取り出した。２５μＬの４倍プロテイナーゼＫ緩衝液（０．４ｍＬの１Ｍ ＴＲ
ＩＳ−ＨＣｌ ｐＨ７．５、０．１ｍＬの０．５Ｍ ＥＤＴＡ、０．１２ｍＬの５Ｍ Ｎ
ａＣｌ、および０．４ｍＬの１０％ＳＤＳ）および８μＬのプロテイナーゼＫを２０ｍｇ
／ｍＬで添加することによって、ＲＮａｓｅを５５℃で２０分間プロテイナーゼＫ消化に
より不活性化した。バイオアナライザーで分析する前に、第ＩＸ因子ｍＲＮＡを、沈殿さ
せた（２５０μＬの９５％エタノールを１時間添加し、１３ｋｒｐｍで１０分間遠心分離
し、上清を除去し、２００μＬの７０％エタノールをペレットに添加し、１３ｋｒｐｍで
５分間再度遠心分離し、上清を除去し、ペレットを７０μＬの水中に再懸濁させた）か、
またはＰＬＧＡマイクロスフェアから抽出した（１３ｋｒｐｍで５分間遠心分離し、上清
を除去し、ペレットを１ｍＬの水で洗浄し、１３ｋｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を除
去し、２８０μＬのジクロロメタンをペレットに添加し、１５分間振盪させ、７０μＬの
水を添加し、次いで２時間振盪させ、水相を除去した）。ＰＬＧＡマイクロスフェアは、
２時間にわたり、第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡを９０％および１％の血清中での分解から保護
する。第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡは、開始時点で９０％の血清中で完全に分解される。
実施例１７． 脂質ナノ粒子のインビボ研究
Ｇ−ＣＳＦ（インビトロ転写に使用される、Ｔ７プロモーター、５’非翻訳領域（ＵＴ
Ｒ）、および３’ＵＴＲを有するｃＤＮＡは配列番号３３８９６に示される。ｍＲＮＡ配
列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示さ
れない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全
に修飾）および第ＩＸ因子（インビトロ転写に使用される、Ｔ７プロモーター、５’ＵＴ
Ｒ、および３’ＵＴＲを有するｃＤＮＡは配列番号３３９０４に示される。ｍＲＮＡ配列
は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示され
ない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に
修飾）修飾ｍＲＮＡを、シリンジポンプ法を用いて脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化
した。ＬＮＰは、最終的な脂質モル比５０：１０：３８．５：１．５（ＤＬｉｎ−ＫＣ２
−ＤＭＡ：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）で、総脂質と修飾ｍＲＮ
Ａの重量比２０：１で製剤化した。表３３に列挙される製剤を、粒径、ゼータ電位、およ
びカプセル封入によって特徴付けた。
表３３． 製剤
ＬＮＰ製剤を、１００、１０、または１μｇの修飾ｍＲＮＡ用量でマウス（ｎ＝５）に
静脈内投与した。マウスを投薬の８時間後に屠殺した。血清を、心穿刺によってＧ−ＣＳ
Ｆまたは第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡ製剤を投与したマウスから採取した。タンパク質発現を
ＥＬＩＳＡによって判定した。
Ｇ−ＣＳＦまたは第ＩＸ因子の投与群に、有意な体重減少はなかった（５％未満）。Ｇ
−ＣＳＦまたは第ＩＸ因子の投与群のタンパク質発現を、ＥＬＩＳＡによって標準曲線か
ら判定した。血清試料を希釈して（Ｇ−ＣＳＦについては約２０〜２５００倍および第Ｉ
Ｘ因子については約１０〜２５０倍）、試料が確実に標準曲線の線形範囲内に入るように
した。表３４に示されるように、ＥＬＩＳＡによって判定されたＧ−ＣＳＦタンパク質発
現は、それぞれ、１、１０、および１００μｇの用量群について、約１７、１２００、お
よび４７００ｎｇ／ｍＬであった。表３５に示されるように、ＥＬＩＳＡによって判定さ
れた第ＩＸ因子タンパク質発現は、それぞれ、１、１０、および１００μｇの用量群につ
いて、約３６、３８０、および３０００〜１１０００ｎｇ／ｍＬであった。
表３４． Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現
表３５． 第ＩＸ因子タンパク質発現
表３６に示されるように、上述のＬＮＰ製剤は、同じ投薬量の修飾ｍＲＮＡの静脈内（
ＩＶ）リポプレックス製剤の投与、および生理食塩水中の同じ用量の修飾ｍＲＮＡの筋肉
内（ＩＭ）または皮下（ＳＣ）投与と比較して、タンパク質産生に約１０，０００〜１０
０，０００倍の増加を有する。表３６に使用される際、記号「約（〜）」は、約を意味す
る。
表３６． タンパク質産生
実施例１８〜２３の材料および方法
Ｇ−ＣＳＦ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチド（
ｎｕｌｃｅｏｔｉｄｅ）のポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１
；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）およびＥＰＯ（ｍＲＮＡ配
列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示さ
れない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全
に修飾）修飾ｍＲＮＡを、シリンジポンプ法を用いて脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）として製剤
化した。ＬＮＰは、最終的な脂質モル比５０：１０：３８．５：１．５（ＤＬｉｎ−ＫＣ
２−ＤＭＡ：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）で、総脂質と修飾ｍＲ
ＮＡの重量比２０：１で製剤化した。表３７に列挙される製剤を、粒径、ゼータ電位、お
よびカプセル封入によって特徴付けた。
表３７． 製剤
実施例１８． 修飾ｍＲＮＡを用いた脂質ナノ粒子のインビボ研究
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、０．０５ｍｇ／ｋｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量
で、ラット（ｎ＝５）に静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、または皮下（ＳＣ）投与した
。対照群のラット（ｎ＝４）は未処理であった。ラットに、２時間、８時間、２４時間、
４８時間、および９６時間、ならびにそれらにＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ製剤
を投与した後に採血を行って、ＥＬＩＳＡによってタンパク質発現を判定した。ＥＰＯ修
飾ｍＲＮＡを静脈内投与したラットを７日目にも採血した。
表３８に示されるように、修飾ＥＰＯｍＲＮＡを静脈内投与したラットにおけるＥＰＯ
タンパク質発現は、５日に達するまで検出可能であった。修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡを静
脈内投与したラットにおけるＧ−ＣＳＦは、７日まで検出可能であった。ＥＰＯ修飾ｍＲ
ＮＡの皮下および筋肉内投与は、少なくとも２４時間まで検出可能であり、Ｇ−ＣＳＦ修
飾ｍＲＮＡは、少なくとも８時間まで検出可能であった。表３８において、「ＯＳＣ」は
標準曲線の外側であった値を指し、「ＮＴ」は未試験を意味する。
表３８． Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯのタンパク質発現
実施例１９． 経時的インビボ研究
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、０．５、０．０５、または０．００５ｍｇ／
ｋｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量で、マウス（ｎ＝５）に静脈内（ＩＶ）投与した。マウスに
、Ｇ−ＣＳＦまたはＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ製剤を投与した８時間、２４時間、７２時間、お
よび６日後に採血を行って、ＥＬＩＳＡを用いてタンパク質発現を判定した。
表３９に示されるように、修飾ｍＲＮＡを静脈内投与したマウスにおけるＥＰＯおよび
Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現は、０．００５ｍｇ／ｋｇおよび０．０５ｍｇ／ｋｇの修飾ｍ
ＲＮＡを投与したマウスでは７２時間に達するまで、かつＥＰＯ修飾ｍＲＮＡを投与した
マウスでは６日に達するまで検出可能であった。表３９において、「＞」は、それよりも
大きいことを意味し、「ＮＤ」は検出されなかったことを意味する。
表３９． タンパク質発現
実施例２０． 齧歯動物におけるＬＮＰ製剤のインビボ研究
Ａ． マウスにおけるＬＮＰ製剤
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、０．０５ｍｇ／ｋｇまたは０．００５ｍｇ／
ｋｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量で、マウス（ｎ＝４）に静脈内（ＩＶ）投与した。未処理の
対照マウス群（ｎ＝４）も３つ存在した。マウスに、Ｇ−ＣＳＦまたはＥＰＯ修飾ｍＲＮ
Ａ製剤を投与した２時間、８時間、２４時間、４８時間、および７２時間後に採血を行っ
て、タンパク質発現を判定した。Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯのタンパク質発現を、ＥＬＩＳ
Ａを用いて判定した。
表４０に示されるように、マウスにおけるＥＰＯおよびＧ−ＣＳＦのタンパク質発現は
、０．００５ｍｇ／ｋｇの用量の修飾ＲＮＡを受容したマウスでは少なくとも４８時間に
達するまで、および０．０５ｍｇ／ｋｇの用量の修飾ＲＮＡを受容したマウスでは７２時
間まで、検出可能であった。表４０において、「ＯＳＣ」は標準曲線の外側であった値を
指し、「ＮＴ」は未試験を意味する。
表４０． マウスにおけるタンパク質発現
Ｂ． ラットにおけるＬＮＰ製剤
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、０．０５ｍｇ／ｋｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量
で、ラット（ｎ＝４）に静脈内（ＩＶ）投与する。未処理の対照ラット群（ｎ＝４）も存
在する。ラットに、Ｇ−ＣＳＦまたはＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ製剤を投与した２時間、８時間
、２４時間、４８時間、７２時間、および１４日後に採血を行って、タンパク質発現を判
定する。Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯのタンパク質発現を、ＥＬＩＳＡを用いて判定する。
実施例２１． ＬＮＰの早期経時的研究
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、ま
たは０．００５ｍｇ／ｋｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量で、哺乳動物に静脈内（ＩＶ）、筋肉
内（ＩＭ）、または皮下（ＳＣ）投与する。対照哺乳動物群は未処理である。哺乳動物に
、修飾ｍＲＮＡ ＬＮＰ製剤を投与した５分、１０分、２０分、３０分、４５分、１時間
、１．５時間、および／または２時間後に、採血を行って、ＥＬＩＳＡを用いてタンパク
質発現を判定する。さらに、哺乳動物に採血を行い、顆粒球レベルおよび赤血球数等の全
血球数を判定する。
実施例２２． 非ヒト霊長類のインビボ研究。
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、必要に応じてシリンジ／ａｂｂｏｃａｔｈま
たはバタフライに取り付けることができる皮下注射針を用いて約３０秒間にわたる静脈内
ボーラス注入（ＩＶ）として非ヒト霊長類（ＮＨＰ）（カニクイザル）（ｎ＝２）に投与
した。ＮＨＰに、０．５ｍＬ／ｋｇの投薬量で、０．０５ｍｇ／ｋｇのＥＰＯもしくはＧ
−ＣＳＦ、または０．００５ｍｇ／ｋｇのＥＰＯの単回修飾ｍＲＮＡ ＩＶ用量を投与し
た。ＮＨＰに、修飾ｍＲＮＡ ＬＮＰ製剤を投薬する５〜６日前に採血を行って、血清中
のタンパク質発現およびベースラインの全血球数を判定した。修飾ｍＲＮＡ製剤を投与し
た後、８、２４、４８、および７２時間でＮＨＰに採血を行い、タンパク質発現を判定し
た。投与の２４および７２時間後には、ＮＨＰの全血球数もまた判定した。Ｇ−ＣＳＦお
よびＥＰＯのタンパク質発現をＥＬＩＳＡによって判定した。ＮＨＰの尿を、実験の全過
程にわたり採取し、分析して臨床的安定性を評価した。ＮＨＰにＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯ
修飾ｍＲＮＡ製剤を投与した後に、それらから試料を採取して、ＥＬＩＳＡを用いてタン
パク質発現を判定した。非ヒト霊長類の臨床化学、血液学、尿検査、およびサイトカイン
についても分析した。
表４１に示されるように、０．０５ｍｇ／ｋｇを投与したＮＨＰにおけるＥＰＯタンパ
ク質発現は、７２時間に達するまで検出可能であり、０．００５ｍｇ／ｋｇのＥＰＯ製剤
の投薬では、４８時間に達するまで検出可能である。表４１において、「＜」は、所与の
値未満であることを意味する。Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現は、修飾ｍＲＮＡ製剤を投与し
た２４時間後まで見られた。予備的に、顆粒球および網状赤血球のレベルの増加が、修飾
ｍＲＮＡ製剤の投与後にＮＨＰに見られた。
表４１． 非ヒト霊長類におけるタンパク質発現
実施例２３． Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯに関する非ヒト霊長類のインビボ研究
表３７（上述）に示されるＬＮＰ製剤を、静脈内注入（ＩＶ）として、非ヒト霊長類（
ＮＨＰ）（カニクイザル）（ｎ＝２）に投与した。ＮＨＰに、０．５ｍＬ／ｋｇの投薬量
で、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、または０．００５ｍｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦ
またはＥＰＯの単回修飾ｍＲＮＡ ＩＶ用量を投与した。ＮＨＰに、修飾ｍＲＮＡ ＬＮ
Ｐ製剤を投薬する前に採血を行って、血清中のタンパク質発現およびベースラインの全血
球数を判定した。Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ製剤を投与した後、８、２４、４８、および７
２時間でＮＨＰに採血を行い、タンパク質発現を判定した。ＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ製剤を投
与した後、８、２４、４８、７２時間、および７日でＮＨＰに採血を行い、タンパク質発
現を判定した。
ＮＨＰにＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ製剤を投与した後に採取した試料を、Ｅ
ＬＩＳＡによって分析してタンパク質発現を判定した。好中球および網状赤血球の数も、
Ｇ−ＣＳＦまたはＥＰＯ製剤の投与前、投与の２４時間、３日、７日、１４日、および１
８日後に判定した。
表４２に示されるように、Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現は、７２時間を超えると検出され
なかった。表４２において、「＜３９」とは、検出下限である３９ｐｇ／ｍＬよりも低い
値を指す。
表４２． Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現
表４３に示されるように、ＥＰＯタンパク質発現は、７日を超えると検出されなかった
。表４３において、「＜７．８」とは、検出下限である７．８ｐｇ／ｍＬよりも低い値を
指す。
表４３． ＥＰＯタンパク質発現
表４４に示されるように、すべてのＧ−ＣＳＦ群で、投薬前のレベルと比較して、好中
球の増加があった。
表４４． ＮＨＰにおけるＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡの薬理学的効果
表４５に示されるように、すべてのＥＰＯ群で、投薬の２４時間後の網状赤血球レベル
と比較して、投薬の３日〜１４／１８日後の網状赤血球の増加があった。
表４５． 好中球数に対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効果
表４６〜表４８に示されるように、ＥＰＯ修飾ＲＮＡの投与は、ヘモグロビン（ＨＧＢ
）、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、および赤血球（ＲＢＣ）数を含む、他の赤血球形成パラ
メータに対して効果を有した。
表４６． ヘモグロビンに対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効果
表４７． ヘマトクリットに対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効果
表４８． 赤血球に対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効果
表４９および表５０に示されるように、修飾ＲＮＡの投与は、アラニントランスアミナ
ーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）を含む血清化学パラ
メータに対して効果を有した。
表４９． アラニントランスアミナーゼに対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効果
表５０． アスパラギン酸トランスアミナーゼに対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効
果
表５１に示されるように、高用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）での脂質ナノ粒子−製剤化修飾
ＲＮＡの投与は、修飾ｍＲＮＡの投与後に、サイトカインすなわちインターフェロンα（
ＩＦＮ−α）の増加を引き起こした。
表５１． アラニントランスアミナーゼに対するＥＰＯ ｍＲＮＡの薬理学的効果
実施例２４． 非ヒト霊長類における筋肉内および／または皮下投与の研究
生理食塩水中に修飾ＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される
；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１
；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）またはＧ−ＣＳＦ ｍＲＮ
Ａ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部
は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュード
ウリジンで完全に修飾）を含有する製剤を、非ヒト霊長類（カニクイザル）（ＮＨＰ）に
筋肉内（ＩＭ）または皮下（ＳＣ）投与した。０．０５ｍｇ／ｋｇまたは０．００５ｍｇ
／ｋｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量は、０．５ｍＬ／ｋｇの投薬量でのものであった。非ヒト
霊長類に、投薬の５〜６日前に採血を行って、血清タンパク質濃度およびベースラインの
全血球数を判定する。修飾ｍＲＮＡ製剤を投与した後、８時間、２４時間、４８時間、７
２時間、７日、および１４日でＮＨＰに採血を行い、タンパク質発現を判定する。Ｇ−Ｃ
ＳＦおよびＥＰＯのタンパク質発現を、ＥＬＩＳＡによって判定する。投与の２４時間、
７２時間、７日、および１４日後に、ＮＨＰの全血球数もまた判定する。全実験過程にわ
たってＮＨＰから尿を採取し、分析して臨床的安定性を評価する。注入部位付近の組織も
また採取し、分析してタンパク質発現を判定する。
実施例２５． 修飾ｍＲＮＡの輸送
修飾ｍＲＮＡの局在化および／または輸送を判定するために、次のように研究を行うこ
とができる。
ｓｉＲＮＡおよび修飾ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤を、当技術分野で既知および／または本明
細書に記載の方法に従って製剤化する。ＬＮＰ製剤には、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＰＯ、第ＶＩＩ
因子等のタンパク質、および／または本明細書に記載の任意のタンパク質をコードし得る
少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡが含まれ得る。製剤は、筋肉内または皮下注入を用いて、
哺乳動物の筋肉内に局所投与することができる。修飾ｍＲＮＡの用量およびＬＮＰの大き
さは、哺乳動物の身体への輸送を判定するため、および／または炎症等であるがこれに限
定されない生物学的反応に対する影響を評価するために、多様であり得る。哺乳動物に、
異なる時点で採血を行って、血清中に存在する投与されたｍＲＮＡによってコードされる
タンパク質の発現を判定する、および／または哺乳動物における全血球数を判定すること
ができる。
例えば、肝臓内で発現し血清中に分泌される第ＶＩＩ因子をコードする修飾ｍＲＮＡを
、筋肉内および／または皮下投与することができる。修飾ｍＲＮＡ投与と同時かまたはそ
の前に、ｓｉＲＮＡを投与して、内因性第ＶＩＩ因子をノックアウトする。血液中の修飾
ｍＲＮＡの筋肉内および／または皮下注入により生じる第ＶＩＩ因子を投与し、測定する
。さらに、注入部位付近の組織における第ＶＩＩ因子のレベルも測定する。第ＶＩＩ因子
が血液中に発現する場合、修飾ｍＲＮＡの輸送が存在する。第ＶＩＩ因子が組織中に発現
するが血液中には発現しない場合、第ＶＩＩ因子の局所発現のみが存在する。
実施例２６． 複数の修飾ｍＲＮＡの製剤
修飾ｍＲＮＡのＬＮＰ製剤を、当技術分野で既知および／または本明細書に記載もしく
は当技術分野で既知の方法に従って製剤化する。ＬＮＰ製剤には、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＰＯ、
トロンボポエチン等のタンパク質、および／または本明細書に記載の任意のタンパク質を
コードし得る、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡが含まれ得る。少なくとも１つの修飾ｍＲ
ＮＡには、１、２、３、４、または５つの修飾ｍＲＮＡ分子が含まれ得る。少なくとも１
つの修飾ｍＲＮＡを含有する製剤は、単回または複数回の投薬レジメンで、静脈内、筋肉
内、または皮下投与することができる。血液および／または血清等であるがこれらに限定
されない生体試料を、少なくとも１つの修飾ｍＲＮＡ製剤の投与の前および／後の様々な
時点で採取し、分析することができる。タンパク質をコードする少なくとも１つの修飾ｍ
ＲＮＡを含有する製剤を哺乳動物に投与した後、５０〜２００ｐｇ／ｍＬの生体試料にお
ける当該タンパク質の発現は、生物学的に有効であると考えられるであろう。
実施例２７． ポリエチレングリコール比の研究
Ａ． ＰＥＧ ＬＮＰの製剤化および特徴付け
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、シリンジポンプ法を用いて製剤化した。ＬＮＰを、総脂質
と修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチ
ルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）の重量比２０：１で製剤化した。製剤
のモル比範囲を、表５２に示す。
表５２． モル比
２種類のＰＥＧ脂質、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＮＯＦカタログ番号ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標
）ＧＭ−０２０）および１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ−ＤＳＧ、ＮＯＦカタログ番号ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ（登録商標
）ＧＳ−０２０）を、１．５または３．０ｍｏｌ％で試験した。ＬＮＰの形成および修飾
Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡのカプセル封入の後、ＬＮＰ製剤を、粒径、ゼータ電位、およびカ
プセル封入率によって特徴付けし、結果を表５３に示す。
表５３． ＬＮＰ製剤の特徴付け
Ｂ． ＰＥＧ ＬＮＰのインビボスクリーニング
表５４に記載のＰＥＧ ＬＮＰの製剤を、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、マウス（ｎ＝５
）に静脈内投与した。血清を、製剤を投与した２時間、８時間、２４時間、４８時間、７
２時間、および８日後にマウスから採取した。血清をＥＬＩＳＡによって分析してＧ−Ｃ
ＳＦのタンパク質発現を判定し、発現レベルを表５４に示す。ＰＥＧ−ＤＭＧを用いたＬ
ＮＰ製剤は、実質的にＰＥＧ−ＤＳＡを用いたＬＮＰ製剤よりも高いレベルのタンパク質
発現を呈した。
表５４． タンパク質発現
実施例２８． カチオン性脂質製剤研究
Ａ． カチオン性脂質ナノ粒子の製剤化および特徴付け
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、シリンジポンプ法を用いて製剤化した。ＬＮＰを、２０：
１の総脂質と修飾ｍＲＮＡの重量比で製剤化した。カチオン性脂質、ＤＳＰＣ、コレステ
ロール、およびＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧの最終的な脂質のモル比範囲を、表５５に概略説明
する。
表５５． モル比
エタノール中２５ｍＭの脂質溶液およびｐＨ３で５０ｍＭのクエン酸塩中の修飾ＲＮＡ
を混合して、自発的小胞形成をもたらした。小胞をエタノール中で安定化させた後に、エ
タノールを除去し、透析による緩衝液交換を行った。次いで、ＬＮＰを、粒径、ゼータ電
位、およびカプセル封入率によって特徴付けた。表５６は、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、
ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、またはＣ１２−２００をカチオン性脂質として使用して、ＥＰＯ修飾
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される約１６０ヌクレオチドのポリＡ
尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュ
ードウリジンで完全に修飾）またはＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３
３８９７に示される；約１６０ヌクレオチド（ｎｕｃｌｅｏｔｄｉｅ）のポリＡ尾部は配
列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリ
ジンで完全に修飾）をカプセル封入したＬＮＰの特徴付けについて記載する。
表５６． カチオン性脂質製剤の特徴付け
Ｂ． カチオン性ＬＮＰ製剤のインビボスクリーニング
表５６に記載されるカチオン性脂質製剤の製剤を、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、マウス
（ｎ＝５）に静脈内投与した。血清を、製剤を投与した２時間、２４時間、７２時間、お
よび／または７日後にマウスから採取した。血清をＥＬＩＳＡによって分析してＥＰＯま
たはＧ−ＣＳＦのタンパク質発現を判定し、発現レベルを表５７に示す。
表５７． タンパク質発現
カチオン性脂質Ｃ１２−２００（ＮＰＡ−０７５−１およびＮＰＡ−０７６−１）を用
いたＬＮＰ製剤を投与したマウスに毒性が確認され、これらは、矮小な被毛、萎縮挙動、
および１０％を上回る体重減少といった症状を示したため、２４時間で屠殺した。Ｃ１２
−２００は、より毒性であると予測されていたが、短期間で高レベルの発現も有した。カ
チオン性脂質ＤＬｉｎ−ＤＭＡ（ＮＰＡ−０７３−１およびＮＰＡ−０７４−１）は、試
験した３つのカチオン性脂質の中で最も低い発現を有した。ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ（
ＮＰＡ−０７１−１およびＮＰＡ−０７２−１）は、３日目まで良好な発現を示し、ＥＰ
Ｏ製剤については７日に達するまでバックグラウンド試料を上回った。
実施例２９． タンパク質発現のスクリーニング方法
Ａ． エレクトロスプレーイオン化
対象に投与した修飾ＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生体試料を調
製し、１、２、３、または４個の質量分析器を用いて、エレクトロスプレーイオン化（Ｅ
ＳＩ）のための製造業者のプロトコルに従って分析する。生体試料はまた、タンデムＥＳ
Ｉ質量分析システムを用いて分析することもできる。
タンパク質断片のパターン、または総タンパク質を、所与のタンパク質について既知の
対照と比較し、素性を比較により判定する。
Ｂ． マトリックス支援レーザー脱離／イオン化
対象に投与した修飾ＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生体試料を調
製し、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）のための製造業者のプロ
トコルに従って分析する。
タンパク質断片のパターン、または総タンパク質を、所与のタンパク質について既知の
対照と比較し、素性を比較により判定する。
Ｃ． 液体クロマトグラフィータンデム質量分析（Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ−Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ−Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒ
ｙ）
修飾ＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生体試料を、トリプシン酵素
で処理して、中に含有されるタンパク質を消化させる。結果として得られるペプチドを、
液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）によって分析する。ペプ
チドを断片化して質量分析計に入れ、コンピュータアルゴリズムを介してタンパク質配列
のデータベースとマッチさせることが可能な特徴的なパターンを生成する。消化した試料
を希釈して、所与のタンパク質について１ｎｇ以下の出発物質を得ることができる。単純
な緩衝液のバックグラウンド（例えば、水または揮発性塩）を含有する生体試料は、直接
的な溶液中での消化に適しており、より複雑なバックグラウンド（例えば、界面活性剤、
不揮発性塩、グリセロール）は、試料分析を容易にするための追加の浄化ステップを要す
る。
タンパク質断片のパターン、または総タンパク質を、所与のタンパク質について既知の
対照と比較し、素性を比較により判定する。
実施例３０． 脂質ナノ粒子のインビボ研究
ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０５に示される；約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチ
ルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）を、シリンジポンプ法を用いて脂質ナ
ノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化した。ＬＮＰは、最終的な脂質のモル比５０：１０：３８
．５：１．５（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ−ｃ−Ｄ
ＯＭＧ）で、総脂質と修飾ｍＲＮＡの重量比２０：１で製剤化した。表５８に列挙される
ｍＣｈｅｒｒｙ製剤を、粒径、ゼータ電位、およびカプセル封入によって特徴付けた。
表５８． ｍＣｈｅｒｒｙ製剤
ＬＮＰ製剤を、１００μｇの修飾ｍＲＮＡ用量で、マウス（ｎ＝５）に静脈内投与した
。マウスを投薬の２４時間後に屠殺した。ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡ製剤を投与したマ
ウスからの肝臓および脾臓を、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウエスタンブロット、または蛍
光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって分析した。
肝臓の組織学は、切片全体で均一なｍＣｈｅｒｒｙ発現を示したが、未処理の動物はｍ
Ｃｈｅｒｒｙを発現しなかった。また、ウエスタンブロットを使用して、処理動物におけ
るｍＣｈｅｒｒｙの発現を確認したが、ｍＣｈｅｒｒｙは未処理動物には検出されなかっ
た。チューブリンを対照マーカーとして使用し、これは処理および未処理の両方のマウス
に検出され、肝細胞における正常なタンパク質発現は影響を受けていなかったことが示さ
れた。
さらに、ＦＡＣＳおよびＩＨＣもｍＣｈｅｒｒｙおよび未処理のマウスの脾臓に行った
。ＦＡＣＳ分析により、すべての白血球細胞集団がｍＣｈｅｒｒｙ発現において陰性であ
った。また、ＩＨＣにより、ｍＣｈｅｒｒｙ処理マウスと未処理マウスとの間で、脾臓に
おいて脾臓において観察できる差は存在しなかった。
実施例３１． シリンジポンプインビボ研究
ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、シ
リンジポンプ法を用いて脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化する。ＬＮＰは、最終的な
脂質のモル比５０：１０：３８．５：１．５（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ：ＤＳＰＣ：コ
レステロール：ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）で、総脂質と修飾ｍＲＮＡの重量比２０：１で製
剤化する。ｍＣｈｅｒｒｙ製剤を、粒径、ゼータ電位、およびカプセル封入によって特徴
付ける。
ＬＮＰ製剤を、１０または１００μｇの修飾ｍＲＮＡ用量でマウス（ｎ＝５）に静脈内
投与する。マウスを投薬の２４時間後に屠殺する。ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡ製剤を投
与したマウスからの肝臓および脾臓を、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウエスタンブロット、
および／または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって分析する。
実施例３２． インビトロおよびインビボ発現
Ａ． リピドイド製剤を用いたヒト細胞におけるインビトロ発現
インビトロトランスフェクションについて試験するために使用されるｍｍＲＮＡとリピ
ドイドの比を、異なるリピドイド：ｍｍＲＮＡ比で実験的に試験する。ｓｉＲＮＡおよび
リピドイドを用いた以前の研究では、２．５：１、５：１、１０：１、および１５：１の
リピドイド：ｓｉＲＮＡの重量：重量比を用いていた。ｓｉＲＮＡと比較してｍｍＲＮＡ
の長さがより長いことを考慮すると、より低いリピドイドとｍｍＲＮＡの重量：重量比が
有効であり得る。さらに、比較のために、ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）またはＴＲＡＮＳＩＴ−ｍＲＮＡ（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ，
Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）カチオン性脂質送達ビヒクルを用いたｍｍＲＮＡもまた製剤化し
た。
所望のタンパク質産物を発現する、リピドイド製剤化したルシフェラーゼ（ＩＶＴ ｃ
ＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される通り；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に
示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キ
ャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュー
ドウリジン置換で完全に修飾）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列
は配列番号３３０８に示される通り；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０９に示される、約
１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１、各
シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置
換で完全に修飾）、Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示され
る；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１）、およびＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）の能力
を、ルシフェラーゼ発現については発光、ＧＦＰ発現についてはフローサイトメトリー、
ならびにＧ−ＣＳＦおよびエリスロポエチン（ＥＰＯ）の分泌についてはＥＬＩＳＡによ
って、確認することができる。
Ｂ． 静脈内注入後のインビボ発現
製剤の全身静脈内投与を、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、およびＭＤ１を含むがこ
れらに限定されない種々の異なるリピドイドを用いて行う。
ｍｍＲＮＡを含有するリピドイド製剤を、動物に静脈内注入する。修飾ｍＲＮＡ（ｍｍ
ＲＮＡ）によりコードされるタンパク質の発現を、動物から採取した血液ならびに／また
は肝臓および脾臓といった他の器官の試料において評価する。単回静脈内投与研究の実施
は、所望される生成物の発現の規模、用量応答性、および有効期間の評価を可能にするで
あろう。
一実施形態において、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＭＤ１、および他のリピドイ
ドのリピドイド系製剤を、動物へのルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ｍ
Ｃｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質、分泌されたアルカリホスファターゼ（ｓＡＰ）、ヒトＧ−
ＣＳＦ、ヒト第ＩＸ因子、またはヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）ｍｍＲＮＡの送達に使
用する。前述のように、脂質を用いてｍｍＲＮＡを製剤化した後、動物を群に分け、生理
食塩水製剤、またはルシフェラーゼ、ＧＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｓＡＰ、ヒトＧ−ＣＳＦ
、ヒト第ＩＸ因子、およびヒトＥＰＯから選択される様々なｍｍＲＮＡのうちの１つを含
有するリピドイド製剤のいずれかを受容させる。動物に注入する前に、ｍｍＲＮＡ含有リ
ピドイド製剤をＰＢＳ中に希釈する。次いで、動物に、１０ｍｇ／ｋｇの用量から１ｎｇ
／ｋｇと同程度に低い用量範囲、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｎｇ／ｋｇの範囲の
単回用量の製剤化ｍｍＲＮＡを投与し、ｍｍＲＮＡの用量は、２０グラムのマウスは最大
で０．２ｍＬの製剤を受容する等、動物の体重に依存する（投薬は、体重１ｋｇ当たりの
ｍｍＲＮＡに基づく）。ｍｍＲＮＡ−リピドイド製剤を投与した後に、血清、組織、およ
び／または組織ライセートを取得し、ｍｍＲＮＡによりコードされる生成物のレベルを、
単一および／またはある範囲の時間間隔で判定する。所望のタンパク質産物を発現するリ
ピドイド製剤化ルシフェラーゼ、ＧＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｓＡＰ、Ｇ−ＣＳＦ、第ＩＸ
因子、およびＥＰＯ ｍｍＲＮＡの能力を、ルシフェラーゼの発現については発光、ＧＦ
Ｐの発現およびｍＣｈｅｒｒｙ発現についてはフローサイトメトリー、ｓＡＰについては
酵素活性、またはＧ−ＣＳＦ、第ＩＸ因子、および／もしくはＥＰＯの分泌についてはＥ
ＬＩＳＡによって確認する。
また、複数回用量レジメンに関するさらなる研究を行って、ｍｍＲＮＡの最大発現を判
定し、ｍｍＲＮＡに駆動される発現の飽和性を評価し（対照および活性なｍｍＲＮＡ製剤
を同時または順次に与えることによって）、反復薬物投与の実行可能性を判定する（数週
または数ヶ月離れた投与でｍｍＲＮＡを与え、次いで、発現レベルが免疫原性等の要因に
よって影響を受けるかどうかを判定することによって）。Ｇ−ＣＳＦおよびＥＰＯ等のタ
ンパク質の生理学的機能の評価も、試験した動物に由来する試料の分析、ならびに顆粒球
および赤血球数それぞれの増加を検出することによって判定する。第ＩＸ因子等の発現し
たタンパク質産物の動物における活性も、第ＩＸ因子酵素活性（活性化部分トロンボプラ
スチン時間アッセイ）および凝固時間の影響の分析を介して評価することができる。
Ｃ． 筋肉内および／皮下注入後のインビトロ発現
ｍＲＮＡを含むオリゴヌクレオチドを筋肉内注入経路または皮下注入経路を介して送達
するためにリピドイド製剤を使用することは、これまでに報告されていないため、評価す
る必要がある。ｍｍＲＮＡの筋肉内および／または皮下注入を評価して、ｍｍＲＮＡ含有
リピドイド製剤が、所望されるタンパク質の局所的および全身的発現の両方をもたらすこ
とができるかどうかを判定する。
ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質、分
泌されたアルカリホスファターゼ（ｓＡＰ）、ヒトＧ−ＣＳＦ、ヒト第ＩＸ因子、または
ヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）ｍｍＲＮＡから選択されるｍｍＲＮＡを含有する、９８
Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、およびＭＤ１のリピドイド製剤を、動物に筋肉内および／
または皮下注入する。ｍｍＲＮＡによりコードされるタンパク質の発現を、筋肉または皮
下組織内、ならびに血液および他の組織、例えば肝臓および脾臓において全身的にの両方
で、評価する。単回投与研究は、所望される生成物の発現の規模、用量応答性、および有
効期間の評価を可能にする。
動物を群に分け、生理食塩水製剤または修飾ｍＲＮＡを含有する製剤のいずれかを受容
させる。注入の前に、ｍｍＲＮＡ含有リピドイド製剤をＰＢＳ中に希釈する。動物に、５
０ｍｇ／ｋｇから１ｎｇ／ｋｇという低い用量の範囲、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ〜１０
０ｎｇ／ｋｇの範囲の単回筋肉内用量の製剤化ｍｍＲＮＡを投与する。マウスの筋肉内投
与の最大用量は、マウスの後肢への筋肉内注入では概ね１ｍｇのｍｍＲＮＡまたは０．０
２ｎｇという低いｍｍＲＮＡである。皮下投与については、動物に、４００ｍｇ／ｋｇか
ら１ｎｇ／ｋｇという低い用量範囲、好ましくは８０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｎｇ／ｋｇの範
囲の単回皮下用量の製剤化ｍｍＲＮＡを投与する。マウスの皮下投与の最大用量は、概ね
８ｍｇのｍｍＲＮＡまたは０．０２ｎｇという低いｍｍＲＮＡである。
２０グラムのマウスでは、単回筋肉内注入の量は最大で０．０２５ｍＬであり、単回皮
下注入では最大で０．２ｍＬである。投与されるｍｍＲＮＡの最適な用量は、動物の体重
から計算する。ｍｍＲＮＡ−リピドイドを投与した後、種々の時点で、血清、組織、およ
び組織ライセートを取得し、ｍｍＲＮＡによりコードされる生成物のレベルを判定する。
所望のタンパク質産物を発現する、リピドイド製剤化ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク
質（ＧＦＰ）、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質、分泌されたアルカリホスファターゼ（ｓ
ＡＰ）、ヒトＧ−ＣＳＦ、ヒト第ＩＸ因子、またはヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）ｍｍ
ＲＮＡの能力を、ルシフェラーゼ発現については発光、ＧＦＰおよびｍＣｈｅｒｒｙ発現
についてはフローサイトメトリー、ｓＡＰについては酵素活性、ならびにＧ−ＣＳＦ、第
ＩＸ因子、およびエリスロポエチン（ＥＰＯ）の分泌についてはＥＬＩＳＡによって確認
する。
また、複数回用量レジメンに関するさらなる研究を行って、ｍｍＲＮＡを用いた最大発
現を判定し、ｍｍＲＮＡに駆動される発現の飽和性を評価し（対照および活性なｍｍＲＮ
Ａ製剤を同時または順次に与えることによって達成される）、反復薬物投与の実行可能性
を判定する（数週または数ヶ月離れた投与でｍｍＲＮＡを与え、次いで、発現レベルが免
疫原性等の要因によって影響を受けるかどうかを判定することによって）。１回で複数の
皮下または筋肉内注入を用いる研究も、さらにｍｍＲＮＡの薬物曝露を増加させ、タンパ
ク質産生を改善するために利用される。ＧＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｓＡＰ、ヒトＧ−ＣＳ
Ｆ、ヒト第ＩＸ因子、およびヒトＥＰＯ等のタンパク質の生理学的機能の評価を、試験し
た動物に由来する試料を分析し、顆粒球および／または赤血球数における変化を検出する
ことによって判定する。第ＩＸ因子等の発現したタンパク質産物の動物における活性も、
第ＩＸ因子酵素活性（活性化部分トロンボプラスチン時間アッセイ）および凝固時間の影
響の分析を介して評価することができる。
実施例３３． 二機能性ｍｍＲＮＡ
本明細書に記載の教示および合成方法を使用して、修飾ＲＮＡを、二機能性であり、そ
れによって１つ以上の細胞傷害性タンパク質分子をコードし、同様に細胞傷害性ヌクレオ
シドを用いて合成されるように、設計および合成する。
二機能性修飾ｍＲＮＡの投与は、生理食塩水または脂質担体のいずれかを用いて達成す
る。投与されると、二機能性修飾ｍＲＮＡは、翻訳されて、コードされた細胞傷害性ペプ
チドを産生する。送達された修飾ｍＲＮＡが分解されると、これもまた対象に治療的利益
をもたらす細胞傷害性ヌクレオシドが放出される。
実施例３４． 修飾ｍＲＮＡのトランスフェクション
Ａ． 逆トランスフェクション
２４ウェルのコラーゲンコーティング組織培養プレートで行われる実験については、ケ
ラチノサイトを１×１０５の細胞密度で播種する。９６ウェルのコラーゲンコーティング
組織培養プレートで行われる実験については、ケラチノサイトを０．５×１０５の細胞密
度で播種する。トランスフェクトする各修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）のために、記載され
るように修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）を調製し、細胞が組織培養プレートに付
着する前に、細胞番種期間内、例えば６時間以内に、マルチウェルプレートで細胞と混合
する。
Ｂ． 順トランスフェクション
２４ウェルのコラーゲンコーティング組織培養プレートにおいて、ケラチノサイトを０
．７×１０５の細胞密度で播種する。９６ウェルのコラーゲンコーティング組織培養プレ
ートについては、ケラチノサイトを０．３×１０５の細胞密度で播種する。ケラチノサイ
トを、２４時間にわたり、７０％を上回るコンフルエンシーに成長させる。トランスフェ
クトする各修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）のために、記載されるように修飾ｍＲＮＡ：ＲＮ
ＡＩＭＡＸ（商標）を調製し、細胞の播種および組織培養プレートへの付着後に、２４時
間にわたりマルチウェルプレートにおいて細胞にトランスフェクトする。
Ｃ． 修飾ｍＲＮＡの翻訳スクリーニング：Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡ
ケラチノサイトを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのＳｕｐｐ
ｌｅｍｅｎｔ Ｓ７を有するＥＰＩＬＩＦＥ培地において、７０％を上回るコンフルエン
スで成長させる。ケラチノサイトに、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＲＮＡＩＭＡＸ（商標
）と複合体形成した３００ｎｇの化学修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）を逆トランスフェクト
した。別のセットのケラチノサイトに、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＲＮＡＩＭＡＸ（商
標）と複合体形成した３００ｎｇの修飾ｍＲＮＡを順トランスフェクトした。修飾ｍＲＮ
Ａ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）の複合体は、まず、ＲＮＡを、５倍体積希釈物中、補充物質
不含のＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地とともに室温で１０分間インキュベートすること
によって形成する。
第２のバイアルにおいて、ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）試薬を、１０倍体積希釈物中、補充
物質不含のＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地とともに室温で１０分間インキュベートした
。次いで、ＲＮＡのバイアルをＲＮＡＩＭＡＸ（商標）のバイアルと混合し、室温で２０
〜３０分間インキュベートした後、滴下方式で細胞に添加した。培養培地中に分泌された
ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の濃度を、化学修飾ｍＲＮＡのそれぞれにつ
いて、トランスフェクションの１８時間後に三重に測定する。
トランスフェクトを行ったヒトケラチノサイトからのヒトＧ−ＣＳＦの分泌を、製造業
者が推奨する指示に従って、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたはＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉ
ｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）からのＥＬＩＳＡキットを用いて定量化する。
Ｄ． 修飾ｍＲＮＡの用量および持続期間：Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡ
ケラチノサイトを、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｓ７を有する
ＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地において、７０％を上回るコンフルエンスで成長させる
。ケラチノサイトに、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのＲＮＡＩ
ＭＡＸ（商標）と複合体形成した、０ｎｇ、４６．８７５ｎｇ、９３．７５ｎｇ、１８７
．５ｎｇ、３７５ｎｇ、７５０ｎｇ、または１５００ｎｇのいずれかの修飾ｍＲＮＡを逆
トランスフェクトする。修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体を、記載のように
形成する。培養培地中に分泌されたヒトＧ−ＣＳＦの濃度を、各修飾ｍＲＮＡの各濃度に
ついて、トランスフェクションの０、６、１２、２４、および４８時間後に三重に測定す
る。トランスフェクトを行ったヒトケラチノサイトからのヒトＧ−ＣＳＦの分泌を、製造
業者が推奨する指示に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたはＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからの
ＥＬＩＳＡキットを用いて定量化する。
実施例３５． 分割用量研究
１回で複数の皮下または筋肉内注入部位を用いる研究を設計して実行し、ｍｍＲＮＡの
薬物曝露を増加させ、タンパク質産生を改善する手段について調べた。発現したタンパク
質産物の検出に加えて、タンパク質の生理学的機能の評価も、試験した動物に由来する試
料の分析を介して判定した。
驚くべきことに、ｍｍＲＮＡの分割投薬は、単回単位投薬または複数回投薬スキームに
よりもたらされるものよりも高いタンパク質産生および表現型応答をもたらすことがわか
った。
単回単位用量、複数回用量、および分割用量実験の設計は、緩衝液単独中で投与される
ヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）ｍｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは配列番号３３９００に示される
；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１
）の使用を伴った。投薬ビヒクル（Ｆ緩衝液）は、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＣａ
Ｃｌ２、２ｍＭのＮａ＋−ホスフェート（１．４ｍＭの第一リン酸ナトリウム；０．６ｍ
Ｍの第二リン酸ナトリウム）、および０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ６．５からなった。ｐ
Ｈは水酸化ナトリウムを用いて調節し、最終的な溶液を濾過滅菌した。ｍｍＲＮＡを、各
シトシンにおける５ｍｅＣおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換で修飾し
た。
動物（ｎ＝５）に、１００μｇの単回単位用量をＩＭ（筋肉内）注入した。複数回投薬
については、１００μｇの３用量および１００μｇの６用量という２つのスケジュールを
用いた。分割投薬スキームについては、３３．３μｇで３用量、および１６．５μｇのｍ
ｍＲＮＡの６用量という２つのスケジュールを用いた。対照投薬は、６用量で緩衝液のみ
の使用を伴った。対照ｍｍＲＮＡは、１００μｇで６回投薬されるルシフェラーゼｍｍＲ
ＮＡ（ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号
３３９０７に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’
キャップ、キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位に
おけるシュードウリジン置換で完全に修飾）の使用を伴った。血液および筋肉組織を、注
入の１３時間後に評価した。
ヒトＥＰＯタンパク質を、緩衝液中のＥＰＯ ｍｍＲＮＡの単回、複数回、または分割
筋肉内投薬の１３時間後にマウス血清において測定した。７つの群のマウス（１群当たり
ｎ＝５マウス）に処理を行い、評価した。結果を表５９に示す。
表５９． 分割用量研究
分割係数は、単位薬物当たりの単回用量生成物（ＰＵＤ）で除した単位薬物当たりの生
成物として定義される。例えば、処理群２では、単位薬物（ｍｍＲＮＡ）当たりの生成物
（ＥＰＯ）の値０．２８を、単位薬物当たりの単回用量生成物０．１４で除す。結果は２
である。同様に、例えば、処理群４については、単位薬物（ｍｍＲＮＡ）当たりの生成物
（ＥＰＯ）の値１．１を、単位薬物当たりの単回用量生成物０．１４で除す。結果は７．
９である。結果として、用量分割係数（ＤＳＦ）は、分割用量レジメンの有効性の指標と
して使用することができる。総１日用量のいずれの単回投与についても、ＤＳＦは１と等
しくなるはずである。したがって、分割用量レジメンにおいてこの値よりも大きいいずれ
のＤＳＦも、向上した有効性を示す。
用量応答傾向、注入部位の影響、および注入のタイミングの影響を判定するために、研
究を行う。これらの研究において、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、お
よびこれら間の値である様々な用量を用いて、用量応答結果を判定する。１００μｇの総
用量の分割投薬には、１．６μｇ、４．２μｇ、８．３μｇ、１６．６μｇ、または選択
された総用量の投与に等しい値および総用量の３または６回用量が含まれる。
注入部位は、四肢または注入に好適な十分な面積を呈する任意の体表面から選択される
。これはまた、真皮（皮内）、上皮（表皮）、皮下組織（ＳＣ）、または筋肉（ＩＭ）を
標的とするための注入深度の選択も含み得る。注入角度は、標的とされる送達部位に基づ
いて多様であり、皮内部位を標的とする注入は皮膚表面の面から１０〜１５度の角度であ
り、皮下注入については皮膚表面の面から２０〜４５度であり、実質的に筋肉内への注入
については６０〜９０度の角度である。
実施例３６． エクソソームにおける定量化
本発明のｍｍＲＮＡの数および局在化は、単離エクソソーム中の量（初期、経時、また
は残留ベースで）を測定することによって判定することができる。この研究では、ｍｍＲ
ＮＡが、典型的にはコドン最適化されており、配列が内因性ｍＲＮＡとははっきりと異な
るため、ｍｍＲＮＡのレベルを、その内容が参照により全体が本明細書に組み込まれるＧ
ｉｂｂｉｎｇｓのＰＣＴ／ＩＢ２００９／００５８７８号の方法を用いて、天然または野
生型のｍＲＮＡの内因性レベルと比較して定量化する。
これらの研究において、この方法は、まず、エクソソームまたは小胞を、好ましくは既
に本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡの治療を受けた患者の体液
から単離し、次いで、ｍＲＮＡマイクロアレイ、ｑＲＴ−ＰＣＲ、または好適な抗体もし
くは免疫組織化学の方法を含む当技術分野におけるＲＮＡ測定のための他の方法のうちの
１つによって、当該エクソソーム中のポリヌクレオチド、一次構築物、またはｍｍＲＮＡ
のレベルを測定することによって行われる。
実施例３７． 細胞生存率、細胞傷害性、およびアポトーシスに対する修飾ｍＲＮＡの
効果
この実験により、ヒトケラチノサイト細胞にインビトロでトランスフェクトした、はっ
きりと異なる修飾ｍＲＮＡの細胞生存率、細胞傷害性、およびアポトーシスを示す。ケラ
チノサイトを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのヒドロコルチゾ
ンを含まないヒトケラチノサイト成長補充物質を有するＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地
において、７０％を上回るコンフルエンスで成長させる。ケラチノサイトに、Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎからのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体形成した０ｎｇ、４６．８７５ｎｇ、
９３．７５ｎｇ、１８７．５ｎｇ、３７５ｎｇ、７５０ｎｇ、１５００ｎｇ、３０００ｎ
ｇ、または６０００ｎｇの修飾ｍＲＮＡを逆トランスフェクトする。修飾ｍＲＮＡ：ＲＮ
ＡＩＭＡＸ（商標）複合体を形成する。培養培地中に分泌されたヒトＧ−ＣＳＦの濃度を
、各修飾ｍＲＮＡの各濃度について、トランスフェクションの０、６、１２、２４、およ
び４８時間後に三重に測定する。トランスフェクトを行ったヒトケラチノサイトからのヒ
トＧ−ＣＳＦの分泌を、製造業者が推奨する指示に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたはＲ
＆Ｄ ＳｙｓｔｅｍｓからのＥＬＩＳＡキットを用いて定量化する。
細胞生存率、細胞傷害性、およびアポトーシスを、製造業者の指示に従ってＰｒｏｍｅ
ｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）からのＡＰＯＴＯＸ−ＧＬＯ（商標）キットを用いて、ト
ランスフェクションの０、１２、４８、９６、および１９２時間後に測定する。
実施例３８． ＥＬＩＳＡアッセイを用いた修飾ｍＲＮＡに対する細胞の自然免疫応答
の検出
インビトロでトランスフェクションを行ったヒトケラチノサイト細胞から分泌されるヒ
ト腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、ヒトインターフェロンβ（ＩＦＮ−β）、およびヒト
顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を、
細胞の自然免疫応答の検出について試験する。ケラチノサイトを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのヒドロコルチゾンを含まないヒトケラチノサイト成長
補充物質を有するＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地において、７０％を上回るコンフルエ
ンスで成長させる。分泌されたＴＮＦ−αケラチノサイトに、記載されるように、Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎからのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体形成した０ｎｇ、９３．７５ｎｇ
、ｌ８７．５ｎｇ、３７５ｎｇ、７５０ｎｇ、１５００ｎｇ、または３０００ｎｇの化学
修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）を、三重に逆トランスフェクトする。培養培地中に分泌され
たＴＮＦ−αを、製造業者のプロトコルに従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＥＬＩＳＡ
キットを用いて、化学修飾ｍＲＮＡのそれぞれについて、トランスフェクションの２４時
間後に測定する。
同じ培養培地中に分泌されたＩＦＮ−βを、製造業者のプロトコルに従ってＩｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎからのＥＬＩＳＡキットを用いて、化学修飾ｍＲＮＡのそれぞれについて、ト
ランスフェクションの２４時間後に測定する。同じ培養培地中に分泌されたヒトＧ−ＣＳ
Ｆの濃度を、化学修飾ｍＲＮＡのそれぞれについて、トランスフェクションの２４時間後
に測定する。トランスフェクションを行ったヒトケラチノサイトからのヒトＧ−ＣＳＦの
分泌を、製造業者が推奨する指示に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたはＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔ
ｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）からのＥＬＩＳＡキットを用いて定量化する。
これらのデータは、例示的な１型サイトカインであるＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−βを測定
することによって、どの修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）が、天然および他の化学修飾ポリヌ
クレオチドまたは参照化合物と比較して、細胞の自然免疫応答の低下を誘発することがで
きるかを示す。
実施例３９． ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）修飾ｍＲＮＡに誘導される
細胞増殖のアッセイ
ヒトケラチノサイトを、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｓ７を有
するＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地において、２４ウェルのコラーゲンコーティングＴ
ＲＡＮＳＷＥＬＬ（登録商標）（Ｃｏｍｉｎｇ，Ｌｏｗｅｌｌ，ＭＡ）共培養組織培養プ
レート中で、７０％を上回るコンフルエンスで成長させる。ケラチノサイトに、記載され
るように、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＲＮＡＩＭＡＸと複合体形成した、７５０ｎｇの
示される化学修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）を逆トランスフェクトする。修飾ｍＲＮＡ：Ｒ
ＮＡＩＭＡＸ複合体を、記載のように形成する。ケラチノサイトの培地を、トランスフェ
クションの６〜８時間後に交換する。トランスフェクションの４２時間後に、０．４μｍ
細孔の半透過性ポリエステル膜を有する２４ウェルのＴＲＡＮＳＷＥＬＬ（登録商標）プ
レート挿入物を、ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡをトランスフェクトしたケラチノサイトを
含有する培養プレートに入れる。
ヒト骨髄芽球細胞であるＫａｓｕｍｉ−１細胞またはＫＧ−１（０．２×１０５細胞）
を挿入ウェルに播種し、細胞増殖を、９６ウェルプレートにおいて１００〜１２０μＬ体
積で、ＣｙＱｕａｎｔ Ｄｉｒｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓ
ａｙ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて共培養開始４２時間後
に定量化する。ヒトＧ−ＣＳＦをコードする修飾ｍＲＮＡに誘導される骨髄芽球細胞増殖
を、トランスフェクトされていないケラチノサイト／骨髄芽球の共培養対照ウェルに対し
て正規化した細胞増殖パーセントとして表す。ケラチノサイトおよび骨髄芽球の両方の挿
入共培養ウェルにおいて分泌されたヒトＧ−ＣＳＦの濃度を、各修飾ｍＲＮＡについて、
共培養開始４２時間後に二重に測定する。ヒトＧ−ＣＳＦの分泌を、製造業者が推奨する
指示に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＥＬＩＳＡキットを用いて定量化する。
ヒトケラチノサイトフィーダー細胞にトランスフェクトしたヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮ
Ａおよびトランスフェクトされていないヒト骨髄芽球細胞を、ＲＴ −ＰＣＲにより検出
する。試料細胞からの全ＲＮＡを、製造業者の指示に従ってＲＮＥＡＳＹ（登録商標）キ
ット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて抽出し、溶解する。抽出した全
ＲＮＡを、ヒトＧ−ＣＳＦ特異的プライマーを用いて、製造業者の指示に従ってＰＲＯＴ
ＯＳＣＲＩＰＴ（登録商標）Ｍ−ＭｕＬＶ Ｔａｑ ＲＴ−ＰＣＲキット（Ｎｅｗ Ｅｎ
ｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）を用いて、修飾ｍＲＮＡ−Ｇ−Ｃ
ＳＦの特異的増幅のためにＲＴ−ＰＣＲにかける。ＲＴ−ＰＣＲ産物を、１．２％アガロ
ースゲル電気泳動によって可視化させる。
実施例４０： 共培養アッセイ
ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）をコードする、化学的にはっきりと異なる
ヌクレオチドから構成される修飾ｍＲＮＡは、共培養環境においてトランスフェクション
非コンピテント細胞の細胞増殖を刺激することができる。共培養には、ヒトケラチノサイ
ト等の高度にトランスフェクト可能な細胞型と、白血球（ＷＢＣ）等のトランスフェクシ
ョン非コンピテントな細胞型とが含まれる。Ｇ−ＣＳＦをコードする修飾ｍＲＮＡを、高
度にトランスフェクト可能な細胞にトランスフェクトし、Ｇ−ＣＳＦタンパク質の産生お
よび細胞外環境への分泌を可能にし、ここで、Ｇ−ＣＳＦは、パラクリン様の方式で、Ｇ
−ＣＳＦ受容体を発現する白血球を刺激して増殖させるように作用する。拡大したＷＢＣ
集団を使用して、免疫が低下した患者を治療するか、または免疫抑制された患者のＷＢＣ
集団を部分的に再構築し、そうすることで日和見感染症の危険性を低減することができる
。
別の実施例では、線維芽細胞等の高度にトランスフェクト可能な細胞に、難トランスフ
ェクト性の胚幹細胞または誘導型多能性幹細胞の成長、維持、または分化を支持および刺
激する、ある特定の成長因子をトランスフェクトする。
実施例４１： ヒトＩｇＧ抗体の検出アッセイ
Ａ． ヒトＩｇＧ抗体のＥＬＩＳＡ検出
この実施例は、ヒトＩｇＧ修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）をトランスフェクトしたチャイ
ニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびヒト胎児腎臓（ＨＥＫ、ＨＥＲ−２陰性）２９３
細胞に由来するヒトＩｇＧのＥＬＩＳＡについて説明する。ヒト胎児胎児腎臓（ＨＥＫ）
２９３を、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＬ−グルタミンの補充物質を有するＣＤ２９３培
地において、８０〜９０％のコンフルエントに達するまで成長させる。ＣＨＯ細胞を、Ｌ
−グルタミン、ヒポキサンチン、およびチミジンの補充物質を有するＣＤ ＣＨＯ培地に
おいて成長させる。一態様において、２×１０６細胞に、７ｍＬの培地中、Ｃｏｒｎｉｎ
ｇからの７５ｃｍ２の培養フラスコにおいて、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＲＮＡＩＭＡ
Ｘ（商標）と複合体形成した２４μｇの修飾ｍＲＮＡをトランスフェクトする。別の態様
では、８０，０００の細胞に、２４ウェルプレートにおいて、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから
のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体形成した１μｇの修飾ｍＲＮＡをトランスフェクトす
る。修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体は、ｍｍＲＮＡを、５倍体積希釈物中
、ＣＤ２９３またはＣＤ ＣＨＯいずれかの培地とともに室温で１０分間バイアルにおい
てインキュベートすることによって形成する。第２のバイアルにおいて、ＲＮＡＩＭＡＸ
（商標）試薬を、１０倍体積希釈物中、ＣＤ２９３培地またはＣＤ ＣＨＯ培地とともに
室温で１０分間インキュベートする。次いで、ｍｍＲＮＡのバイアルをＲＮＡＩＭＡＸ（
商標）のバイアルと混合し、室温で２０〜３０分間インキュベートした後、滴下方式でＣ
ＨＯまたはＨＥＫ細胞に添加する。培養上清を摂氏４度で保管する。２４μｇのｍｍＲＮ
Ａトランスフェクションでは、培養培地中に分泌されたヒトＩｇＧの濃度をトランスフェ
クションの１２、２４、３６時間後に測定し、１μｇのｍｍＲＮＡトランスフェクション
は、３６時間で測定する。トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞からのトラスツズマブ
の分泌を、製造業者が推奨する指示に従ってＡｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）か
らのＥＬＩＳＡキットを用いて定量化する。データは、ヒト化ＩｇＧ抗体（トラスツズマ
ブ等）のｍｍＲＮＡがＨＥＫ細胞において翻訳され得ること、およびトラスツズマブが細
胞から分泌され、細胞外環境に放出されることを示す。さらに、データは、分泌タンパク
質の産生のためにトラスツズマブをコードするｍｍＲＮＡを細胞にトランスフェクトする
ことが、バイオリアクターまたは大規模な細胞培養条件に拡大可能であることを示す。
Ｂ． 修飾ｍＲＮＡにより産生されたヒトＩｇＧ抗体のウエスタン検出
ウエスタンブロットのＣＨＯ−Ｋ１細胞に、トラスツズマブ修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ
）の重鎖および軽鎖をそれぞれ１μｇずつ共トランスフェクトする。ＣＨＯ細胞を、２４
−ウェルプレートにおいて標準的なプロトコルを用いて増殖させる。細胞上清または細胞
ライセートを、トランスフェクションの２４時間後に採取し、１２％ＳＤＳ−Ｐａｇｅゲ
ルで分離させ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）によるＩＢＯＴ（登録
商標）を用いてニトロセルロース膜上に移す。細胞を、ウサギポリクローナル抗体とＤＹ
ＬＩＧＨＴ５９４（ａｂ９６９０４，ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に接合さ
れるヒトＩｇＧとの第１の複合体、およびヤギポリクローナル抗体とアルカリホスファタ
ーゼと接合されるＲｂ ＩｇＧとの第２の複合体とともにインキュベートする。インキュ
ベーションの後、抗体を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）によるＮｏ
ｖｅｘ（登録商標）アルカリホスファターゼ発色基質を用いて検出する。
Ｃ． 修飾ｍＲＮＡにより産生されるトラスツズマブおよびリツキシマブの細胞免疫染
色
ＣＨＯ−Ｋ１細胞に、トラスツズマブまたはリツキシマブいずれかの重鎖および軽鎖を
それぞれ１０ｎｇずつ共トランスフェクトする。細胞を、ＧＩＢＣＯ（登録商標）（Ｇｒ
ａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）からのＦ−１２Ｋ培地および１０％ＦＢＳにおいて増殖さ
せる。細胞を、ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで固定し、ＰＢＳ中の０．１％ Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で５〜１０分間室温で透過性にさせ、細胞を室温のＰＢＳで３回
洗浄する。トラスツズマブおよびリツキシマブの染色を、製造業者が推奨する希釈に従っ
てＤＹＬＩＧＨＴ（登録商標）５９４（ａｂ９６９０４，ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇ
ｅ，ＭＡ）に接合されたヒトＩｇＧに対するウサギポリクローナル抗体を用いて行う。核
ＤＮＡ染色を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのＤＡＰＩ色素を
用いて行う。トラスツズマブおよびリツキシマブのタンパク質は、修飾ｍＲＮＡのトラン
スフェクション後に翻訳され、細胞質に局在化される。トランスフェクションの１３時間
後に写真を撮影する。
Ｄ． 修飾ｍＲＮＡにより産生されるトラスツズマブおよびリツキシマブの結合免疫ブ
ロットアッセイ
トラスツズマブおよびリツキシマブを、結合免疫ブロット検出アッセイを用いて検出す
る。種々の濃度（１００ｎｇ／μＬ〜０ｎｇ／μＬ）のＥｒＢ２ペプチド（ａｂ４００４
８，ａｂｅａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、トラスツズマブおよびＣＤ２０ペプチド
の抗原（ａｂ９７３６０，ａｂｅａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、リツキシマブの抗
原を、１２％ＳＤＳ−Ｐａｇｅゲル上で泳動させ、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのｉＢｌｏ
ｔを用いて膜に移す。膜を、トラスツズマブまたはリツキシマブいずれかの重鎖および軽
鎖をそれぞれ５００ｎｇずつ共トランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１細胞からの、それぞれ
の細胞上清とともに１時間インキュベートする。膜を１％ＢＳＡでブロッキングし、アル
カリホスファターゼ（ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）と接合した二次抗ヒトＩ
ｇＧ抗体を添加する。抗体検出を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に
よるＮＯＶＥＸアルカリホスファターゼ発色基質を用いて行う。データは、修飾ｍＲＮＡ
から生成されたヒト化ＩｇＧ抗体が、それらのそれぞれの抗原を認識し、そこに結合する
ことができることを示す。
Ｅ． 細胞増殖アッセイ
ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を過剰発現する、ヒト乳腺癌由来の付着細胞であるＳＫ−ＢＲ
−３細胞株を使用して、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）により生成されたトラスツズマブの
抗増殖特性を比較することができる。修飾ｍＲＮＡから生成された種々の濃度の精製トラ
スツズマブおよびトラスツズマブを、細胞培養液に添加し、細胞増殖に及ぼすそれらの作
用を、三連の細胞傷害性および生存率アッセイで評価する。
実施例４２： 細胞培養液への修飾ｍＲＮＡのバルクトランスフェクション
Ａ． カチオン性脂質送達ビヒクル
ＲＮＡトランスフェクションを、ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃ
ａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）またはＴＲＡＮＳＩＴ−ｍＲＮＡ（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩ）カチオン性脂質送達ビヒクルを用いて実行する。ＲＮＡおよび試薬を、
まず、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ基本培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中
に希釈する。１００ｎｇ／μＬのＲＮＡを５倍希釈し、ＲＮＡ１μｇ当たり５μＬのＲＮ
ＡＩＭａｘを１０倍希釈する。希釈した成分をプールし、室温で１５分間インキュベート
した後、培養培地に分注する。ＴＲＡＮＳＩＴ−ｍＲＮＡのトランスフェクションについ
ては、１００ｎｇ／μＬのＲＮＡをＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に１０倍希釈し、ＢＯＯＳＴ試薬
を添加し（ＲＮＡ１μｇ当たり２μＬの濃度で）、ＴＲＡＮＳＩＴ−ｍＲＮＡを添加し（
ＲＮＡ１μｇ当たり２μＬの濃度で）、次いで、ＲＮＡ−脂質複合体を、室温で２分間イ
ンキュベートした後、培養培地に送達する。ＲＮＡのトランスフェクションは、ＲｉＰＳ
の誘導についてはＮｕｔｒｉｓｔｅｍ ｘｅｎｏｆｒｅｅ ｈＥＳ培地（Ｓｔｅｍｇｅｎ
ｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）において、ケラチノサイトの実験についてはＤｅｒｍａ
ｌ Ｃｅｌｌ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ ｐｌｕｓ Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ Ｇｒ
ｏｗｔｈ Ｋｉｔを加えたＤｅｒｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｂａｓａｌ培地（ＡＴＣＣ）におい
て、そしてすべての他の実験については２％ＦＢＳを加えたＯｐｔｉ−ＭＥＭにおいて行
う。宿主細胞への修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）の導入の成功は、蛍光マーカー、例えば緑
色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）等、様々な既知の方法を用いて監視することができる。修飾
ｍＲＮＡのトランスフェクションの成功はまた、例えば、ウエスタンブロットまたは免疫
細胞化学により標的ポリペプチドのタンパク質発現レベルを測定することによっても判定
することができる。同様の方法が、同様のＲＮＡ−脂質複合体比に従って複数リットル（
５〜１０，０００Ｌ）の培養形式に拡大した大規模なものにも適用され得る。
Ｂ． 外因性合成ｍＲＮＡ転写物のエレクトロポレーション送達
エレクトロポレーションのパラメータを、ＭＲＣ−５線維芽細胞にインビトロ合成修飾
ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）転写物をトランスフェクトし、特に外因性転写物を検出するよう
に設計されたプライマーを用いた定量的ＲＴ−ＰＣＲによりトランスフェクト効率を測定
することによって、最適化する。２ｍｍのギャップを有する標準的なエレクトロポレーシ
ョンキュベットにおいて、Ｆに蓄電した１５０μＦのコンデンサを５０μＬのＯｐｔｉ−
ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中に懸濁させた２．５ｘ１０
６の細胞に放電することは、高い生存率（７０％超）を維持しながら、標準曲線法を用い
て判定される細胞当たり１０，０００コピーを超える修飾ｍＲＮＡ転写物の反復送達に十
分である。さらなる実験により、細胞にｍｍＲＮＡ転写物を効率よくトランスフェクトす
るために必要な電圧が、エレクトロポレーション時の細胞密度に依存し得ることが明らか
になり得る。細胞密度は、１ｘ１０６細胞ｌ／５０μＬから２．５ｘ１０６細胞／５０μ
Ｌの密度まで多様であり、細胞当たりの転写物コピーで測定される同様の効率で細胞をト
ランスフェクトするには１１０Ｖ〜１４５Ｖが必要である。大規模な流動エレクトロポレ
ーション戦略に類似し、上述の制約で説明された方法に類似した大規模な複数リットル（
５〜１０，０００Ｌ）のエレクトロポレーションを行うことができる（Ｌｉ ｅｔ ａｌ
．２００２、Ｇｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。
実施例４３： リポプレックスを用いたインビボ送達
Ａ． ヒトＥＰＯ修飾ＲＮＡのリポプレックス
１００μｇの修飾ヒトエリスロポエチンｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは配列番号３３８９７に示
される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャ
ップ１）（ＥＰＯ；完全修飾５−メチルシトシン；Ｎ１−メチルシュードウリジン）を含
有する製剤を、５０〜７０μＬ中３０体積％のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス
形成させ（リポプレックス−ｈ−Ｅｐｏ−４６；２世代目またはＧｅｎ２）、４匹のＣ５
７／ＢＬ６マウスに筋肉内送達した。他の群は、１００μｇの修飾ルシフェラーゼｍＲＮ
Ａを含有する対照群として機能し、３０体積％のＲＮＡｉＭＡＸ（商標）とリポプレック
ス形成したリポプレックス化修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（リポプレックス−ｌｕｃ）（
ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９
０７に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャッ
プ、キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位における
シュードウリジン置換で完全に修飾）の注入を受容するマウス、または６５μＬの投薬量
で陰性対照として製剤緩衝液の注入を受容するマウスから構成された。筋肉内注入の１３
時間後、血清を各マウスから採取して、ヒトＥＰＯ ＥＬＩＳＡによりマウス血清中のヒ
トＥＰＯタンパク質の量を測定し、結果を表６０に示す。
表６０． ヒトＥＰＯ産生（筋肉内注入経路）
Ｂ． ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ＲＮＡリポプレックス
修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１
６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）（５
−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）
または５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾されたＧ
−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ−Ｎ１）の２つの型のうちの１つを１００μｇ含有する製剤を、３
０体積％のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成させ、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに
、１５０μＬを筋肉内（Ｉ．Ｍ）、１５０μＬを皮下（Ｓ．Ｃ）、および２２５μＬを静
脈内（Ｉ．Ｖ）送達した。３つの対照群に、１００μｇの修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（
ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９
０７に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャッ
プ、キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位における
シュードウリジン置換で完全に置換）を筋肉内（Ｌｕｃ−ｕｎｓｐ Ｉ．Ｍ．）、または
１５０μｇの修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡを静脈内（Ｌｕｃ−ｕｎｓｐ Ｉ．Ｖ．）、ま
たは１５０μＬの製剤緩衝液を筋肉内（緩衝液Ｉ．Ｍ．）のいずれかで、投与した。製剤
を投与した６時間後に、血清を各マウスから採取して、ヒトＧ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡによ
りマウス血清中のヒトＧ−ＣＳＦタンパク質を測定し、結果を表６１に示す。
これらの結果は、５−メチルシトシン／シュードウリジンおよび５−メチルシトシン／
Ｎ１−メチルシュードウリジンの両方の修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡが、リポプレック
ス製剤で静脈内または筋肉内の投与経路を介して送達した場合に、血清中で特異的なヒト
Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現をもたらし得ることを示す。
表６１． 血清中のヒトＧ−ＣＳＦ（Ｉ．Ｍ．、Ｉ．Ｖ．、Ｓ．Ｃ．注入経路）
Ｃ． ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ＲＮＡリポプレックスの比較
５−メチルシトシン（５ｍｃ）およびシュードウリジン（ψ）修飾を有する３０体積％
のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成した修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ
−ＣＳＦ−Ｇｅｎ１−リポプレックス）、生理食塩水中の５ｍｃおよびψ修飾を有する修
飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ−Ｇｅｎ１−生理食塩水）、３０体積％のＲＮ
ＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成したＮ１−５−メチルシトシン（Ｎ１−５ｍｃ
）およびψ修飾を有する修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ−Ｇｅｎ２−リポプ
レックス）、生理食塩水中のＮ１−５ｍｃおよびψ修飾を有する修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍ
ＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ−Ｇｅｎ２−生理食塩水）、３０体積％のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と
リポプレックス形成した５ｍｃおよびψ修飾を有する修飾ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ−リポ
プレックス）、または生理食塩水中の５ｍｃおよびψ修飾を有する修飾ルシフェラーゼｍ
ＲＮＡ（Ｌｕｃ−生理食塩水）のいずれかを１００μｇ含有する製剤を、筋肉内（Ｉ．Ｍ
．）または皮下（Ｓ．Ｃ．）送達し、各投与方法の対照群には、８０μＬの用量の製剤緩
衝液（Ｆ緩衝液）をＣ５７／ＢＬ６マウスに与えた。注入の１３時間後に、注入部位から
の血清および組織をマウスから採取し、Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡによって分析して、ヒト
Ｇ−ＣＳＦタンパク質レベルを比較した。筋肉内投与から得られたマウス血清中のヒトＧ
−ＣＳＦタンパク質の結果、および皮下投与の結果を、表６２に示す。
これらの結果は、５−メチルシトシン／シュードウリジンおよび５−メチルシトシン／
Ｎ１−メチルシュードウリジン修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡが、生理食塩水製剤かリポ
プレックス製剤かにかかわらず、筋肉内または皮下の投与経路で送達した場合に、血清中
に特異的なヒトＧ−ＣＳＦタンパク質発現をもたらし得ることを示す。表６２に示される
ように、５−メチルシトシン／Ｎ１−メチル−シュードウリジン修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍ
ＲＮＡは、概して、５−メチルシトシン／シュードウリジン修飾ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮ
Ａと比較して、増加したヒトＧ−ＣＳＦタンパク質産生を示す。
表６２． マウス血清におけるヒトＧ−ＣＳＦタンパク質
Ｄ． ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ＲＮＡリポプレックスの比較
筋肉内および皮下投与
３０体積％のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成した修飾ｍＣｈｅｒｒｙ
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）または生理食塩水中の修飾ｍ
Ｃｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡのいずれかを１００μｇ含有する製剤を、マウスに筋肉内および
皮下送達する。製剤緩衝液も、筋肉内または皮下のいずれかで対照マウス群に投与する。
マウスへの注入部位を、切片化のために注入の１７時間後に採取して、タンパク質の産生
に関与する細胞型（複数可）を判定する。
硝子体内投与
ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成した修飾ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ、製
剤緩衝液中の修飾ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ、ＲＮＡＭＡＸ（商標）とリポプレックス形
成した修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ、製剤緩衝液中の修飾ルシフェラーゼのいずれかを１
０μｇ含有する製剤を、５μＬ／眼の投薬量でラットに硝子体内注入（ＩＶＴ）により投
与することができる。製剤緩衝液も、５μＬ／眼の投薬量で対照ラット群にＩＶＴにより
投与する。処理を受けたラットの眼を、切片化および溶解のために注入の１８時間後に採
取して、ｍｍＲＮＡが、インビボで眼に効果的に送達され、タンパク質産生をもたらし得
るかどうかを判定し、さらに、インビボでのタンパク質の産生に関与する細胞型（複数可
）を判定することができる。
鼻腔内投与
３０体積％のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成した修飾ｍＣｈｅｒｒｙ
ｍＲＮＡ、生理食塩水中の修飾ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ、３０体積％のＲＮＡＩＭＡＸ
（商標）とリポプレックス形成した修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ、または生理食塩水中の
修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡのいずれかを１００μｇ含有する製剤を、鼻腔内送達する。
製剤緩衝液も対照群に鼻腔内投与する。点滴注入の約１３時間後に、切片化（ｍＣｈｅｒ
ｒｙ ｍＲＮＡを受容したものについて）または均質化（ルシフェラーゼｍＲＮＡを受容
したものについて）のために肺を採取することができる。これらの試料を用いて、ｍｍＲ
ＮＡが、インビボで肺に効果的に送達され、タンパク質産生をもたらし得るかどうかを判
定し、さらに、インビボでのタンパク質の産生に関与する細胞型（複数可）を判定するこ
とができる。
実施例４４： 種々の脂質比を使用したインビボ送達
修飾ｍＲＮＡを、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに送達して、種々の脂質比および結果として得
られるタンパク質発現を評価した。１０％、３０％、もしくは５０％のＲＮＡＩＭＡＸ（
商標）とリポプレックス形成した１００μｇの修飾ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは配
列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない
；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾
）、１０％、３０％、もしくは５０％のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）とリポプレックス形成し
た１００μｇの修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０
６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される、約１６０ヌクレオチドの
ポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１、各シトシンにおける５−
メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換で完全に修飾）、ま
たは製剤緩衝液の製剤を、単回７０μＬ用量で、マウスに筋肉内投与した。血清を、注入
の１３時間後に採取し、ヒトＥＰＯ ＥＬＩＳＡを行って、各マウスにおけるヒトＥＰＯ
タンパク質レベルを判定した。表６３に示されるヒトＥＰＯ ＥＬＩＳＡの結果は、筋肉
内で発現された修飾ヒトＥＰＯが、異なる割合のＲＮＡＩＭＡＸ（商標）のそれぞれにつ
いて、血清中に分泌されることを示す。
表６３． マウス血清中のヒトＥＰＯタンパク質（ＩＭ注入経路）
実施例４５： 哺乳動物における筋肉内および皮下インビボ送達
食塩水中に製剤化された修飾ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０
０に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ
、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）を、Ｃ５７／
ＢＬ６マウスまたはスプラーグドーリーラットのいずれかに送達して、ヒトＥＰＯ産生へ
の用量依存性を評価した。ラットに、表６４の投薬表に記載されるように、５０μＬの修
飾ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｈ−ＥＰＯ）、修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（Ｌｕｃ）（ＩＶ
Ｔ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７
に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、
キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュ
ードウリジン置換で完全に修飾）、または製剤緩衝液（Ｆ緩衝液）を筋肉内注入した。
マウスに、表６５の投薬表に記載されるように、５０μＬの修飾ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡ
（ｈ−ＥＰＯ）、修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（Ｌｕｃ）、または製剤緩衝液（Ｆ緩衝液
）を筋肉内または皮下注入した。注入した１３時間後に、血液を採取し、血清を分析して
、各マウスまたはラットのヒトＥＰＯ量を判定した。ラットの研究についてのｐｇ／ｍＬ
単位での平均および幾何平均も表６４に示す。
表６４． ラット研究
表６５． マウス研究
実施例４６： ラットにおける筋肉内インビボ送達後の活性持続期間
製剤緩衝液中に製剤化された修飾ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３
９００に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャ
ップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）を、スプ
ラーグドーリーラットに送達して、用量応答の持続期間を判定した。ラットに、表６６の
投薬表に記載されるように、５０μＬの修飾ヒトＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｈ−ＥＰＯ）、修飾
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲ
ＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内
に示されない、５’キャップ、キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよ
び各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換で完全に修飾）（Ｌｕｃ）、または製剤
緩衝液（Ｆ緩衝液）を筋肉内注入した。ラットに、筋肉内注入の２、６、１２、２４、４
８、および７２時間後に採血を行って、所与の時点での血清中のヒトＥＰＯの濃度を判定
した。この研究についてのｐｇ／ｍＬ単位での平均および幾何平均も表６６に示す。
表６６． 投薬表
実施例４７： 投与の経路
さらなる研究を行って、異なる投与経路を使用した投薬について調べた。実施例３５に
概説したプロトコルに従って、１群当たり４匹のマウスに、表６７に概説される投薬表に
従って筋肉内（Ｉ．Ｍ．）、静脈内（ＩＶ）、または皮下（Ｓ．Ｃ．）投薬を行った。血
清を注入の１３時間後にすべてのマウスから採取し、組織を筋肉内および皮下投与群の注
入部位から採取し、脾臓、肝臓、および腎臓を静脈内群から採取した。筋肉内群および皮
下群からの結果を、表６８に示す。
表６７． 投薬表
表６８． マウス血清中のヒトＥＰＯタンパク質（Ｉ．Ｍ．注入経路）
実施例４８． 急速排出脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）の研究
Ａ． 修飾ＲＮＡ ｒｅＬＮＰの製剤化
合成脂質、１，２−ジステアロイル−３−ホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）（Ａｖａ
ｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）、コレステロール（Ｓ
ｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｔａｕｆｋｉｒｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびα−［
３’−（１，２−ジミリストイル−３−プロパノキシ）−カルボキサミド−プロピル］−
ω−メトキシ−ポリオキシエチレン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）（ＮＯＦ，Ｂｏｕｗｅｌｖ
ｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）の溶液を調製し、−２０℃で保管する。合成脂質は、内部エステ
ルを有するＤＬｉｎ−ＤＭＡ、末端エステルを有するＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ
３−ＤＭＡ−内部エステル、および末端エステルを有するＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡから
選択される。ｒｅＬＮＰを、５０：１０：３８．５：１．５（ｒｅＬＮＰ：ＤＳＰＣ：コ
レステロール：ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）のモル比が得られるように合わせる。脂質溶液と
修飾ｍＲＮＡ溶液とを１０：１、１５：１、２０：１、および３０：１の総脂質対修飾ｍ
ＲＮＡの重量比で合わせることによって、ｒｅＬＮＰおよび修飾ｍＲＮＡの製剤を調製す
る。
Ｂ． 製剤の特徴付け
Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌ
ｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を用いて、修飾ｍＲＮＡ
ナノ粒子の粒径、多分散指標（ＰＤＩ）、およびゼータ電位を、粒径の判定時は１倍ＰＢ
Ｓ中、およびゼータ電位の判定時は１５ｍＭ ＰＢＳ中において、判定する。
紫外可視分光法を用いて、修飾ｍＲＮＡナノ粒子製剤の濃度を判定する。混合した後、
溶液の吸光度スペクトルを、ＤＵ ８００分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ
，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｂｒｅａ，ＣＡ）において、２３０ｎｍ
〜３３０ｎｍで記録する。ナノ粒子製剤中の修飾ＲＮＡの濃度を、製剤中に使用した修飾
ＲＮＡの減衰係数および２６０ｎｍの波長での吸光度と３３０ｎｍの波長でのベースライ
ンとの間の差に基づいて、計算する。
ＱＵＡＮＴ−ＩＴ（商標）ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡアッセイ（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて、ナノ粒子
による修飾ＲＮＡのカプセル封入を評価する。試料を希釈し、ポリスチレン９６ウェルプ
レートに移し、次いで、ＴＥ緩衝液または２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液のいずれか
を添加する。プレートをインキュベートし、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）試薬をＴＥ
緩衝液中に希釈し、この溶液を各ウェルに添加する。蛍光強度を、蛍光プレートリーダー
（Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ １４２０ Ｍｕｌｔｉｌａｂｌｅｌ Ｃｏｕｎｔｅｒ；
Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて測定する 試薬ブランクの
蛍光値を、試料のそれぞれから差し引き、遊離修飾ＲＮＡの割合を、無傷な試料の蛍光強
度を分断された試料の蛍光値で除すことによって判定する。
Ｃ． インビトロインキュベーション
ヒト胎児腎臓上皮（ＨＥＫ２９３）および肝細胞癌上皮（ＨｅｐＧ２）細胞（ＬＧＣ
ｓｔａｎｄａｒｄｓ ＧｍｂＨ，Ｗｅｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、９６ウェルプレート
（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−ｏｎｅ ＧｍｂＨ，Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）に播種し、ＨＥＫ２９３細胞のプレートを、１型コラーゲンで事前コーティング
する。１００μＬの細胞培養培地中、ＨＥＫ２９３は１ウェル当たり約３０，０００の細
胞密度、ＨｅｐＧ２は約３５，０００の細胞密度で、播種する。ｍＣｈｅｒｒｙ ｍＲＮ
Ａ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部
は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、細胞を播種した直後に添加し、
インキュベートする。インビトロ転写（ＩＶＴ）に使用される、Ｔ７プロモーター、５’
非翻訳領域（ＵＴＲ）、および３’ＵＴＲを有するｍＣｈｅｒｒｙ ｃＤＮＡを、配列番
号３３８９９に示す。
培養培地上清を９６ウェルＰｒｏ−Ｂｉｎｄ Ｕ底プレート（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に移すことによって
、細胞を収集する。細胞を、半量のトリプシン／ＥＤＴＡ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂ
ｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でトリプシン化し、それぞれの上清とともにプールし、１
回量のＰＢＳ／２％ＦＣＳ（いずれもＢｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）／０．５％ホルムアルデヒド（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎ
ｙ）を添加することによって固定する。次いで、試料を、ＬＳＲＩＩサイトメーター（Ｂ
ｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ
）において、励起レーザーおよびＰＥ−Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ用のフィルターを用いてフロ
ーサイトメーター測定にかける。すべてのイベントの平均蛍光強度（ＭＦＩ）および４つ
の独立したウェルの標準偏差を、分析した試料について提示する。
Ｄ． インビボ製剤研究
マウスに、修飾ｍＲＮＡおよびｒｅＬＮＰを含有する製剤の単回用量を静脈内投与する
。マウスに投与する修飾ｍＲＮＡは、Ｇ−ＣＳＦ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に
示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キ
ャップ１）、第ＩＸ因子（ｍＲＮＡは配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）、またはｍＣｈｅ
ｒｒｙ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ
尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）から選択される。
マウスに、１００μｇ、１０μｇ、または１μｇの製剤化修飾ｍＲＮＡを注入し、製剤
を投与した８時間後に屠殺する。ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡを含有する製剤を投与した
マウスからの血清を、特異的Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡによって測定し、ヒト第ＩＸ因子修
飾ＲＮＡを投与したマウスからの血清を、特異的第ＩＸ因子ＥＬＩＳＡまたは発色アッセ
イによって分析する。ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡを投与したマウスからの肝臓および脾
臓を、免疫組織化学（ＩＨＣ）または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって分析する
。対照として、１つのマウス群にはいずれの製剤も注入せずに、それらの血清および組織
を採取し、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、および／またはＩＨＣによって分析する。
実施例４９． ＶＥＧＦ−Ａのインビトロトランスフェクション
ヒト血管内皮成長因子アイソフォームＡ（ＶＥＧＦ−Ａ）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列
は配列番号３３９１０に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示され
ない；５’キャップ、キャップ１）を、２４マルチウェルプレートにおいて、逆トランス
フェクションを介してヒトケラチノサイト細胞にトランスフェクトした。ヒトケラチノサ
イト細胞を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのＳｕｐｐｌｅｍｅ
ｎｔ Ｓ７を有するＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地において、５０〜７０％のコンフル
エンスに達するまで増殖させた。細胞に、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃ
Ａ）からのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体形成した、０、４６．８７５、９３．７５、
１８７．５、３７５、７５０、および１５００ｎｇのＶＥＧＦ−Ａをコードする修飾ｍＲ
ＮＡ（ｍｍＲＮＡ）をトランスフェクトした。ＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体は
、まず、ＲＮＡを、５倍体積希釈物中、補充物質不含のＥＰＩＬＩＦＥ（登録商標）培地
とともに室温で１０分間インキュベートすることによって形成した。第２のバイアルにお
いて、ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）試薬を、１０倍体積希釈物中、補充物質不含のＥＰＩＬＩ
ＦＥ（登録商標）培地とともに室温で１０分間インキュベートした。次いで、ＲＮＡのバ
イアルをＲＮＡＩＭＡＸ（商標）のバイアルと混合し、室温で２０〜３０分間インキュベ
ートした後、滴下方式で細胞に添加した。
ヒトケラチノサイト細胞にトランスフェクトした、完全に最適化されたＶＥＧＦ−Ａを
コードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１０に示される；約１６０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）には、翻訳時の修
飾、例えば、天然ヌクレオシドトリホスフェート（ＮＴＰ）、各ウリジン部位におけるシ
ュードウリジンおよび各シトシン部位における５−メチルシトシン（シュード−Ｕ／５ｍ
Ｃ）、ならびに各ウリジン部位におけるＮ１−メチル−シュードウリジンおよび各シトシ
ン部位における５−メチルシトシン（Ｎ１−メチル−シュード−Ｕ／５ｍＣ）が含まれた
。細胞に、ＶＥＧＦ−ＡをコードするｍｍＲＮＡをトランスフェクトし、培養培地中に分
泌されたＶＥＧＦ−Ａの濃度（ρｇ／ｍＬ）を、製造業者が推奨する指示に従ってＩｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのＥＬＩＳＡキットを用いて、濃度のそ
れぞれについて、トランスフェクションの６、１２、２４、および４８時間後に測定した
。表６９に示されるこれらのデータは、ＶＥＧＦ−Ａをコードする修飾ｍＲＮＡがヒトケ
ラチノサイト細胞において翻訳され得ること、およびＶＥＧＦ−Ａが細胞から輸送され、
細胞外環境に放出されることを示す。
表６９． ＶＥＧＦ−Ａの投薬およびタンパク質の分泌
実施例５０． 第ＩＸ因子のインビボ研究
製剤緩衝液中に製剤化したヒト第ＩＸ因子ｍｍＲＮＡ（Ｇｅｎ１；５−メチルシトシン
およびシュードウリジンで完全に修飾）を、筋肉内注入を介してマウスに送達した。結果
は、投与の１３時間後に測定したとき、血清中の第ＩＸ因子タンパク質が上昇していたこ
とを示す。
この研究において、マウス（第ＩＸ因子についてはＮ＝５、ルシフェラーゼまたは緩衝
液対照についてはＮ＝３）に、２ｘ１００μｇ／マウスで、５０μＬの第ＩＸ因子ｍｍＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾
部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）、ルシフェラーゼ（ＩＶＴ ｃＤ
ＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示され
る、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ
１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリ
ジン置換で完全に修飾）、または製剤緩衝液（Ｆ緩衝液）を筋肉内注射した。マウスに、
筋肉内注射の１３時間後に採血を行って、ｐｇ／ｍＬ単位での血清中のヒトポリペプチド
の濃度を判定した。結果は、第ＩＸ因子ｍｍＲＮＡの投与が、ルシフェラーゼまたは緩衝
液対照のいずれかの投与による１００ｐｇ／ｍＬ未満の第ＩＸ因子と比較して、１３時間
で、１６００ｐｇ／ｍＬのレベルをもたらしたことを明らかにした。
実施例５１． 複数部位の投与：筋肉内および皮下
Ｇｅｎ１またはＧｅｎ２（５−メチルシトシン（５ｍｃ）およびシュードウリジン（ψ
）修飾、Ｇ−ＣＳＦ−Ｇｅｎ１；またはＮ１−５−メチルシトシン（Ｎ１−５ｍｃ）およ
びψ修飾、Ｇ−ＣＳＦ−Ｇｅｎ２）のいずれかとして修飾された、製剤緩衝液中に製剤化
されたヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約
１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を
、筋肉内（ＩＭ）または皮下（ＳＣ）注入を介してマウスに送達した。３日間（２４時間
間隔）、１日４用量または２×５０μｇ（２つの部位）の注入を行った。４用量は、血液
採取およびＣＢＣ分析の６時間前に投与した。対照には、ルシフェラーゼ（ＩＶＴ ｃＤ
ＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示され
る、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ
１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリ
ジン置換で完全に修飾）、または製剤緩衝液（Ｆ緩衝液）が含まれた。マウスに、１回目
のｍＲＮＡ注入の７２時間後（最後の修飾ｍＲＮＡ投薬の６時間後）に採血を行って、好
中球数に対するｍＲＮＡにコードされるヒトＧ−ＣＳＦの作用を判定した。投薬レジメン
を表７０に示し、結果として得られた好中球数も同様に示す（１０００単位／μＬ）。表
７０において、アスタリスク（＊）は、ｐ＜０．０５での統計的有意性を示す。筋肉内投
与については、データは、Ｇｅｎ１ Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡでは３日目の時点で対照を上
回る４倍、Ｇｅｎ２ Ｇ−ＣＳＦ ｍｍＲＮＡでは２倍の好中球数の増加を示す。皮下投
与については、データは、Ｇｅｎ２ Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡでは３日目の時点で対照を上
回る２倍の好中球数の増加を示す。
これらのデータは、５−メチルシチジン／シュードウリジンおよび５−メチルシチジン
／Ｎ１−メチルシュードウリジン−修飾ｍＲＮＡのいずれも、血中好中球数における特異
的な増加から明らかなように、生物学的に活性であり得ることを示す。
表７０． 投薬レジメン
実施例５２． 静脈内投与
５−メチルシトシン（５ｍｃ）およびシュードウリジン（ψ）修飾（Ｇｅｎ１）で修飾
されたか、または修飾を有さない、１０％リポプレックス（ＲＮＡｉＭａｘ）中に製剤化
されたヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約
１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を
、５０μｇのＲＮＡの用量および１００μＬ体積で静脈内（ＩＶ）注入を介して、０、２
、および４日目にマウスに送達した。好中球を、１、５、および８日目に測定した。対照
には、非特異的哺乳動物ＲＮＡまたは製剤緩衝液単独（Ｆ緩衝液）が含まれた。マウスに
、１、５、および８日目に採血を行って、好中球数を増加させる修飾ｍＲＮＡによりコー
ドされるヒトＧ−ＣＳＦの作用を判定した。投薬レジメンを表７１に示し、結果として得
られた好中球数も同様に示す（１０００単位／μＬ、Ｋ／μＬ）。
静脈内投与については、データは、Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡでは５日目の時点で対照を
上回る４〜５倍の好中球数の増加を示すが、未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡまたは非特異的
対照では示さない。血球数は、最後の注入の４日後にベースラインに戻った。白血球集団
に他の変化は観察されなかった。 表７１において、アスタリスク（＊）は、緩衝液と比
較して、ｐ＜０．００１での統計的有意性を示す。
これらのデータは、リポプレックス製剤化５−メチルシチジン／シュードウリジン−修
飾ｍＲＮＡが、血中好中球数における特異的な増加にから明らかなように、静脈内の投与
経路を通じて送達した場合に、生物学的に活性であり得ることを示す。他の細胞サブセッ
トは、有意に変化されなかった。同様に投与された未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡは、好中
球数に対する薬理学的効果を示さなかった。
表７１． 投薬レジメン
実施例５３． 生理食塩水製剤：筋肉内投与
Ａ． タンパク質産生
ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）とヒト
ＥＰＯ ｍｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）、Ｇ−ＣＳＦ修飾
ｍＲＮＡ（５−メチルシトシン（５ｍｃ）およびシュードウリジン（ψ）で修飾）とＥＰ
Ｏ修飾ｍＲＮＡ（Ｎ１−５−メチルシトシン（Ｎ１−５ｍｃ）およびψ修飾で修飾）を、
製剤緩衝液（１５０ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍＭの塩化カルシウム、２ｍＭのリン酸塩
、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ６．５で）中で製剤化し、１００μｇの用量で筋肉内（Ｉ
Ｍ）注入を介してマウスに送達した。
対照には、ルシフェラーゼ（ＩＶＴ ｃＤＮＡ 配列は配列番号３３９０６に示される
；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は
配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシ
ンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換で完全に修飾）または製剤緩衝液
（Ｆ緩衝液）が含まれた。マウスに、注入の１３時間後に採血を行って、ｐｇ／ｍＬ単位
で血清中のヒトポリペプチドの濃度を判定した。（Ｇ−ＣＳＦ群では、マウス血清中のヒ
トＧ−ＣＳＦを測定し、ＥＰＯ群では、マウス血清中のヒトＥＰＯを測定した）。データ
を表７２に示す。
表７２． 投薬レジメン
Ｂ． 用量応答
ヒトＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）を、製剤緩衝液中に製剤化し、筋肉内（
ＩＭ）注入を介してマウスに送達した。
対照には、ルシフェラーゼ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される、約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１、５−メチ
ルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）または製剤緩衝液（Ｆ緩衝液）が含ま
れた。マウスに、注入の１３時間後に採血を行って、ｐｇ／ｍＬ単位で血清中のヒトポリ
ペプチドの濃度を判定した。用量および発現を表７３に示す。
表７３． 投薬レジメンおよび発現
実施例５４． ＥＰＯ複数回用量／複数回投与
１回で複数の筋肉内注入部位を用いる研究を設計し、実行した。
単一の複数回用量実験の設計は、製剤緩衝液で投与されるヒトエリスロポエチン（ＥＰ
Ｏ）ｍｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオチド
のポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）またはＧ−ＣＳＦ ｍ
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）の使用を伴った。投薬ビヒク
ル（Ｆ緩衝液）を対照として用いた。ＥＰＯおよびＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡを、各シトシ
ンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン置換で修
飾した。
動物（ｎ＝５）、すなわちスプラーグドーリーラットに、１００μｇの単回単位用量（
１つの大腿に送達）をＩＭ（筋肉内）注射した。複数回投薬については、１００μｇの６
用量（２つの大腿に送達）を、ＥＰＯおよびＧ−ＣＳＦ ｍｍＲＮＡの両方に用いた。対
照への投薬には、単回用量で緩衝液の使用が含まれた。ヒトＥＰＯの血液レベルを、注入
の１３時間後に評価した。
ヒトＥＰＯタンパク質を、筋肉内注入の１３時間後にラットの血清において測定した。
５つの群のラットを処理し、評価した。結果を表７４に示す。
表７４． 複数回用量研究
実施例５５． シグナル配列交換研究
ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）をコードするｍｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は
配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されな
い；５’キャップ、キャップ１）の複数の変異体を、修飾ヌクレオチドシュードウリジン
および５−メチルシトシン（シュード−Ｕ／５ｍＣ）を用いて合成した。これらの変異体
には、野生型Ｎ末端分泌シグナルペプチド配列（ＭＡＧＰＡＴＱＳＰＭＫＬＭＡＬＱＬＬ
ＬＷＨＳＡＬＷＴＶＱＥＡ；配列番号９５）、または非分泌シグナルペプチド配列、また
は他のｍＲＮＡから得た分泌シグナルペプチド配列のいずれかをコードするＧ−ＣＳＦ構
築物が含まれた。これらは、野生型Ｇ−ＣＳＦシグナルペプチド配列がヒトα−１−抗ト
リプシン（ＡＡＴ）（ＭＭＰＳＳＶＳＷＧＩＬＬＬＡＧＬＣＣＬＶＰＶＳＬＡ；配列番号
９４）、ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）（ＭＱＲＶＮＭＩＭＡＥＳＰＳＬＩＴＩＣＬＬＧＹＬ
ＬＳＡＥＣＴＶＦＬＤＨＥＮＡＮＫＩＬＮＲＰＫＲ；配列番号９６）、ヒトプロラクチン
（Ｐｒｏｌａｃ）（ＭＫＧＳＬＬＬＬＬＶＳＮＬＬＬＣＱＳＶＡＰ；配列番号９７）、ま
たはヒトアルブミン（Ａｌｂ）（ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲ；
配列番号９８）のいずれかのシグナルペプチド配列で置換された配列を含んでいた。
各Ｇ−ＣＳＦ変異体をコードする２５０ｎｇの修飾ｍＲＮＡを、１μＬのＬｉｐｏｆｅ
ｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、各ウェル
が３００，０００の細胞を含有する２４ウェルプレートにおいてＨＥＫ２９３Ａ（表中２
９３Ａ）、マウス筋芽細胞（表中ＭＭ）（Ｃ２Ｃ１２、ＣＲＬ−１７７２、ＡＴＣＣ）、
およびラット筋芽細胞（表中ＲＭ）（Ｌ６株、ＣＲＬ−１４５８、ＡＴＣＣ）の細胞株に
トランスフェクトした。上清を２４時間後に収集し、分泌されたＧ−ＣＳＦタンパク質を
、ヒトＧ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて
ＥＬＩＳＡによって分析した。表７５に示されるデータは、アルブミンシグナルペプチド
をコードするＧ−ＣＳＦ ｍｍＲＮＡをトランスフェクトした細胞が、その野生型対応物
よりも少なくとも１２倍多くのＧ−ＣＳＦタンパク質を分泌することを示す。
表７５． シグナルペプチド交換
実施例５６． サイトカイン研究：ＰＢＭＣ
Ａ． ＰＢＭＣの単離および培養
２人のドナーに由来する５０ｍＬのヒト血液を、ヘパリンナトリウム管で、Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ロットＫＰ３０９２８およびＫＰ３０９３
１）から受容した。各ドナーについて、血液をプールし、ＤＰＢＳ（ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓ
ｃｉｅｎｃｅ ５９３３１Ｃ、ロット０７１Ｍ８４０８）で７０ｍＬに希釈し、２つの５
０ｍＬの円錐管に等分した。１０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ １７−５４４２−０３、ロット１００７４４００）を、血液層の下に静かに分
注した。管を２０００ｒｐｍで３０分間、低加速および制動で遠心分離した。管を除去し
、軟膜ＰＢＭＣ層を、新しい５０ｍＬの円錐管に静かに移し、ＤＰＢＳで洗浄した。管を
１４５０ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
上清を吸引し、ＰＢＭＣペレットを５０ｍＬのＤＰＢＳ中に再懸濁させ、洗浄した。管
を１２５０ｒｐｍで１０分間遠心分離した。この洗浄ステップを繰り返し、ＰＢＭＣペレ
ットを１９ｍＬのＯｐｔｉｍｅｍ Ｉ（Ｇｉｂｃｏ １１０５８、ロット１０７２０８８
）中に再懸濁させ、計数した。細胞懸濁液を３．０×１０＾６細胞／ｍＬの濃度の生細胞
に調節した。
次いで、これらの細胞を、１ウェル当たり５０μＬで１人のドナーにつき５つの９６ウ
ェル組織培養処理丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ ３７９９）に播種した。３０分以内に、
トランスフェクション混合物を１ウェル当たり５０μＬの量で各ウェルに添加した。トラ
ンスフェクションの４時間後、培地に１０μＬのウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ １００８２
、ロット１０１２３６８）を補充した。
Ｂ． トランスフェクション調製物
ヒトＧ−ＣＳＦをコードするｍｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示され
る；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１）（（１）天然のＮＴＰ、（２）５−メチルシチジンおよびシュードウリジンでの１０
０％置換、または（３）５−メチルシチジンおよびＮ１−メチルシュードウリジンでの１
００％置換いずれかを含有、ルシフェラーゼをコードするｍｍＲＮＡ（ＩＶＴ ｃＤＮＡ
配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される、
約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１、
各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジン
置換で完全に修飾）（（１）天然のＮＴＰまたは（２）５−メチルシチジンおよびシュー
ドウリジンでの１００％置換のいずれかを含有）、ならびにＴＬＲアゴニストＲ８４８（
Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ ｔｌｒｌ−ｒ８４８）を、最終体積２５００μＬのＯｐｔｉｍｅｍ
Ｉ中、３８．４ｎｇ／μＬに希釈した。
別個に、４３２μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
１１６６８−０２７、ロット１０７０９６２）を、１３．１ｍＬのＯｐｔｉｍｅｍ Ｉ
で希釈した。９６ウェルプレートにおいて、各ｍｍＲＮＡ、陽性対照（Ｒ−８４８）、ま
たは陰性対照（Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ）の９個の１３５μＬアリコートを、１３５μＬの希
釈Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００に添加した。トランスフェクトされる物質を含
有するプレートを２０分間インキュベートした。次いで、トランスフェクション混合物を
、１ウェル当たり５０μＬでそれぞれのヒトＰＢＭＣに移した。その後、プレートを３７
℃でインキュベートした。２、４、８、２０、および４４時間で、各プレートをインキュ
ベーターから取り出し、上清を凍結させた。
最後のプレートを取り出した後、上清を、ヒトＧ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡキット（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ ＫＨＣ２０３２）およびヒトＩＦＮ−α ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒ
ｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ４１１０５−２）を用いてアッセイした。各条件は、二重
に行われた。
Ｃ． 結果
コードされたタンパク質を産生する未修飾および修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）の能力を
経時的に評価し（Ｇ−ＣＳＦ産生）、インターフェロンα産生により測定される自然免疫
認識を引き起こすｍＲＮＡの能力も同様に評価した。インビトロＰＢＭＣ培養物の使用は
、オリゴヌクレオチドの免疫刺激能を測定する一般的な方法である（参照により全体が本
明細書に組み込まれる、Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ ２００９ １９：８９−１０２）。
結果を、４パラメータのロジスティック曲線適合を用いて、各ＥＬＩＳＡプレートの標
準曲線に対して補間した。特定のＥＬＩＳＡによって測定される経時的なＧ−ＣＳＦおよ
びＩＦＮ−α産生の２人の別個のＰＢＭＣドナーからの平均を表７６および表７７に示す
。
Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡでは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００未処理条件によ
るバックグラウンドシグナルを、各時点で差し引いた。データは、ヒト末梢血単核による
ヒトＧ−ＣＳＦタンパク質の特異的産生が、天然のＮＴＰ、５−メチルシチジンおよびシ
ュードウリジンでの１００％置換、または５−メチルシチジンおよびＮ１−メチル−シュ
ードウリジンでの１００％置換を含有するＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡで見られることを示した
。Ｇ−ＣＳＦの産生は、修飾ｍＲＮＡの使用により未修飾ｍＲＮＡと比較して有意に増加
し、５−メチルシチジンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンを含有するＧ−ＣＳＦ
ｍｍＲＮＡが、最も高いＧ−ＣＳＦ産生を示した。自然免疫認識に関して、未修飾ｍＲＮ
Ａは、かなりのＩＦＮ−α産生をもたらしたが、修飾ｍＲＮＡは、インターフェロンα産
生を大きく阻止した。５−メチルシチジンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全
に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡは、サイトカインを実質的に増加させなかったが、５
−メチルシチジンおよびシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡは、
ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、およびＩＰ１０を誘導した。多数の他のサイトカインは、いず
れの修飾にも影響を受けなかった。
表７６． Ｇ−ＣＳＦシグナル
表７７． ＩＦＮ−αシグナル
実施例５７． 修飾ｍＲＮＡの化学修飾の範囲
化学修飾５−メチルシトシンおよびシュードウリジン等であるがこれらに限定されない
修飾ヌクレオチドは、哺乳動物細胞において、自然免疫応答を低下させ、ＲＮＡの発現を
増加させることが示されている。驚くべきことであり、またこれまでに知られていないこ
とには、化学修飾の量が１００％未満である場合、化学修飾が呈する効果を滴定すること
ができる。以前は、完全な修飾が、化学修飾の有益な効果を誘発するのに必要かつ十分で
あり、ｍＲＮＡの１００％未満の修飾は、効果がほとんどないと考えられていた。しかし
ながら、今では、化学修飾の利益が、完全に満たない修飾により誘導され得、その効果は
、標的、濃度、および修飾に依存することが示された。
Ａ． ＰＢＭＣにトランスフェクトした修飾ＲＮＡ
９６０ｎｇの５−メチルシトシン（５ｍＣ）およびシュードウリジン（シュードＵ）で
修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡまたは未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡを、０．８μＬのＬ
ｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて３人の正常な血液ドナー（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ
３）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）にトランスフェクトした。Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ
（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は
配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、５ｍＣおよびシュードＵで完全に
修飾した（１００％修飾）、５ｍＣおよびシュードＵで修飾しなかった（０％修飾）、ま
たはｍＲＮＡが５０％修飾、２５％修飾、１０％修飾、５％修飾、１％修飾、もしくは０
．１％修飾を含有するように５ｍＣおよびシュードＵで部分的に修飾した。対照試料であ
るルシフェラーゼ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５ｍｅＣおよびシュ
ードＵで完全に修飾）もＧ−ＣＳＦ発現について分析した。ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−α
の対照試料であるＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００、ＬＰＳ、Ｒ−８４８、ルシフェ
ラーゼ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ
尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５ｍＣおよびシュードで完全に
修飾）、およびＰ（Ｉ）Ｐ（Ｃ）も分析した。上清を、トランスフェクションの２２時間
後に収集してＥＬＩＳＡを行い、タンパク質発現を判定した。Ｇ−ＣＳＦの発現を表７８
に示し、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αの発現を表７９に示す。ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−
αの発現は、Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡのトランスフェクションによる二次的影響であり得る
。表７８および表７９は、ｍＲＮＡが完全に修飾されていない場合に、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦ
Ｎ−α、およびＴＮＦ−αの化学修飾の量を滴定することができ、滴定可能傾向は各対象
で同じではないことを示す。
表７８． Ｇ−ＣＳＦ発現
表７８． ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αの発現
Ｂ． ＨＥＫ２９３にトランスフェクトした修飾ＲＮＡ
ヒト胎児腎臓上皮（ＨＥＫ２９３）細胞を、１００μＬの細胞培養培地中、１ウェル当
たり３０，０００細胞の密度で、９６ウェルプレートに播種した。ＲＮＡｉＭＡＸ（商標
）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて製剤化された２５０ｎｇ
の修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、ウェ
ルに添加した。Ｇ−ＣＳＦを、５ｍＣおよびシュードＵで完全に修飾した（１００％修飾
）、５ｍＣおよびシュードＵで修飾しなかった（０％修飾）、またはｍＲＮＡが７５％修
飾、５０％修飾、もしくは２５％修飾を含有するように、５ｍＣおよびシュードＵで部分
的に修飾した。対照試料（ＡＫ ５／２、ｍＣｈｅｒｒｙ（配列番号３３８９８；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５ｍＣ
およびシュードＵで完全に修飾）、ならびに未処理）もまた分析した。５−メチルシトシ
ンおよびシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡの半減期は、約８〜
１０時間である。上清を１６時間後に収集し、分泌されたタンパク質をＥＬＩＳＡによっ
て分析する。表８０は、ｍＲＮＡが完全に修飾されていない場合に、Ｇ−ＣＳＦの化学修
飾の量を滴定することができることを示す。
表８０． Ｇ−ＣＳＦ発現
実施例５８： 修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）のインビボ送達
修飾ＲＮＡを、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに筋肉内、皮下、または静脈内送達し、ルシフェ
ラーゼを用いて修飾ＲＮＡの生体分布を評価した。すべての送達方法で使用した製剤緩衝
液は、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、２ｍＭの塩化カルシウム、２ｍＭのＮａ＋−リン酸
塩（１．４ｍＭの一塩基リン酸ナトリウムおよび０．６ｍＭの二塩基リン酸ナトリウムを
含む）、ならびに０．５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有し、水酸化ナ
トリウムを用いて最終ｐＨ６．５に達するように調節した後、濾過して滅菌した。１倍濃
度を送達緩衝液として用いた。マウスに送達するリポプレックス化溶液を作製するために
、１つのバイアルにおいて、５０μｇのＲＮＡを室温で１０分間送達緩衝液中で平衡化さ
せ、２つ目のバイアルでは１０μＬのＲＮＡｉＭＡＸ（商標）を室温で１０分間送達緩衝
液中で平衡化させた。平衡化の後、バイアルを合わせ、１００μＬの最終体積に達するま
で送達緩衝液を添加し、これを、次いで室温で２０分間インキュベートした。ルシフェリ
ンを、１５０ｍｇ／ｋｇで各マウスに腹腔内注入（ＩＰ）で投与した後、ルシフェリン曝
露曲線のプラトー期の間に撮像し、これは１５〜３０分間であった。ルシフェリンを作製
するために、１ｇのＤ−ルシフェリンカリウムまたはナトリウム塩を、Ｍｇ２＋またはＣ
ａ２＋を含有しない６６．６ｍＬの蒸留リン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ）中に溶解して、１５
ｍｇ／ｍＬの溶液を得た。溶液を静かに混合し、０．２μｍのシリンジフィルタを通した
後、窒素パージを行い、アリコート化し、可能な限り光を遮断しながら−８０℃で保管し
た。投薬の日に、温浴を用いて溶液を解凍し、ルシフェリンが溶解されていなかった場合
は静かに混合し、氷上に保った。
投薬の２、８、および２４時間後に、各マウスの全身画像を撮影した。組織画像および
血清を、投薬の２４時間後にマウスから収集した。用量を静脈内投与されたマウスは、肝
臓、脾臓、腎臓、肺、心臓、腎周囲脂肪組織、および胸腺を撮像した。用量を筋肉内また
は皮下投与されたマウスは、肝臓、脾臓、腎臓、肺、腎周囲脂肪組織、および注入部位の
筋肉を有した。全身画像から、各投与経路および投薬レジメンについて、１秒当たりの光
子数単位で生物発光を測定した。
Ａ． 筋肉内投与
マウスに、５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された修飾ルシフ
ェラーゼｍＲＮＡ（ネイキッド−Ｌｕｃ）、５−メチルシトシンおよびシュードウリジン
で完全に修飾されたリポプレックス化修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（リポプレックス−ｌ
ｕｃ）（ＩＶＴ ｃＤＮＡ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番
号３３９０７に示される、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５
’キャップ、キャップ１、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位
におけるシュードウリジン置換で完全に修飾）、リポプレックス化修飾顆粒球コロニー刺
激因子（Ｇ−ＣＳＦ）ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メ
チルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）（リポプレックス−サイトカイン）
、または製剤緩衝液のいずれかを、各製剤について５０μＬの注入量で５０μｇの単回修
飾ＲＮＡ用量で右後肢に、５０μＬの注入量で５μｇの単回修飾ＲＮＡ用量で左後肢に、
筋肉内（Ｉ．Ｍ．）投与した。投薬の２、８、および２４時間後の各群のルシフェラーゼ
発現シグナルの生物発光平均を、表８１に示す。生物発光は、注入部位において、リポプ
レックス含有および非含有の５μｇおよび５０μｇの修飾ＲＮＡ製剤の陽性シグナルを示
した。
表８１． インビボ生物光子撮像（Ｉ．Ｍ．注入経路）
Ｂ． 皮下投与
マウスに、修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ネイキッド−Ｌｕｃ）、リポプレックス化修
飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（リポプレックス−ｌｕｃ）、リポプレックス化修飾Ｇ−ＣＳ
Ｆ ｍＲＮＡ（リポプレックス−Ｇ−ＣＳＦ）、または製剤緩衝液のいずれかを、各製剤
について１００μＬの注入量で５０μｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量で皮下（Ｓ．Ｃ．）投与
した。投薬の２、８、および２４時間後の各群のルシフェラーゼ発現シグナルの生物発光
平均を、表８２に示す。生物発光は、注入部位で、リポプレックス含有および非含有の５
μｇおよび５０μｇの修飾ｍＲＮＡ製剤の陽性シグナルを示した。
表８２． インビボ生物光子撮像（Ｓ．Ｃ．注入経路）
Ｃ． 静脈内投与
マウスに、修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ネイキッド−Ｌｕｃ）、リポプレックス化修
飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（リポプレックス−ｌｕｃ）、リポプレックス化修飾Ｇ−ＣＳ
Ｆ ｍＲＮＡ（リポプレックス−Ｇ−ＣＳＦ）、または製剤緩衝液のいずれかを、各製剤
について１００μＬの注入量で５０μｇの単回修飾ｍＲＮＡ用量で静脈内（Ｉ．Ｖ．）投
与した。投薬の２時間後の各群からの脾臓のルシフェラーゼ発現シグナルの生物発光平均
を、表８３に示す。生物発光は、脾臓において、リポプレックスを含有する５０μｇの修
飾ｍＲＮＡ製剤の陽性シグナルを示した。
表８３． インビボ生物光子撮像（Ｉ．Ｖ．注入経路）
実施例５９． 緩衝液製剤研究
緩衝溶液中のＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される
；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１
；Ｎ１−シュードウリジンおよび５−メチルシトシンで完全に修飾）または第ＩＸ因子修
飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレオチドのポ
リＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；Ｎ１−シュードウリジンお
よび５−メチルシトシンで完全に修飾）を、表８４に記載されるように、５０μＬの注入
量で、ラット１匹当たり２００μｇの修飾ｍＲＮＡ用量でラットに筋肉内投与する（ｎ＝
５）。修飾ｍＲＮＡは、１〜２日間水中で凍結乾燥させる。次いで、以下に列挙される緩
衝液中で６ｍｇ／ｍＬの目標濃度に再構築する。濃度は、ＯＤ ２６０によって判定する
。試料を、投薬前に適切な緩衝液中で４ｍｇ／ｍＬに希釈する。
修飾ｍＲＮＡを沈殿させるために、ｐＨ５．５の３Ｍの酢酸ナトリウムおよび純粋エタ
ノールを、それぞれ、修飾ｍＲＮＡの総体積の１／１０および４倍で添加する。材料を、
最低１時間−８０℃に置く。次いで、材料を、４０００ｒｐｍ、４℃で３０分間遠心分離
する。上清を除去し、ペレットを遠心分離し、７５％エタノールで３回洗浄する。最後に
、ペレットを緩衝液で６ｍｇ／ｍＬの目標濃度に再構築する。濃度は、ＯＤ ２６０によ
って判定する。試料を、投薬前に適切な緩衝液中で４ｍｇ／ｍＬに希釈する。すべての試
料は、以下に明記されない限り、凍結乾燥によって調製する。
表８４． 緩衝液投薬群
血清試料を、種々の時間間隔でラットから採取し、Ｇ−ＣＳＦおよび第ＩＸ因子ＥＬＩ
ＳＡを用いてＧ−ＣＳＦまたは第ＩＸ因子タンパク質発現について分析する。
実施例６０． 複数回用量研究
スプラーグドーリーラット（ｎ＝８）に、２８日間にわたり８回（週２回）静脈内注入
を行う。ラットに、脂質ナノ粒子中に製剤化された０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋ
ｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、または０．０００５ｍｇ／ｋｇのルシフェラーゼ修飾ｍＲＮ
ＡのヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ、生理食塩水中の０．５ｍｇ／ｋｇのヒトＧ−ＣＳＦ修
飾ｍＲＮＡ、脂質ナノ粒子中に製剤化された０．２ｍｇ／ｋｇのヒトＧ−ＣＳＦタンパク
質Ｎｅｕｐｏｇｅｎまたは翻訳可能でないヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡを、注入する。血
清を、既定の時間間隔で採取して、Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現（その週の１回目の投薬の
８、２４、および７２時間後）、全血球数および白血球数（その週の１回目の投薬の２４
および７２時間後）、ならびに臨床化学（その週の１回目の投薬の２４および７２時間後
）を評価する。ラットを、最後の投薬の４日後である２９日目に屠殺して、全血球数、白
血球数、臨床科学、タンパク質発現を評価し、組織病理学および解剖により主要器官への
作用を評価する。さらに、２９日目に、マウスに抗体アッセイを行った。
実施例６１． ＬＮＰインビボ研究
ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１；５−メ
チルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾を、シリンジポンプ法を用いて脂質ナ
ノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化した。ＬＮＰを、最終的な脂質のモル比５０：１０：３８
．５：１．５（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧ
）で、総脂質と修飾ｍＲＮＡの重量比２０：１で製剤化した。表８５に示されるように、
ルシフェラーゼＬＮＰ製剤を、粒径、ゼータ電位、およびカプセル封入によって特徴付け
た。
表８５． ルシフェラーゼ製剤
表８６に概要説明されるように、ルシフェラーゼＬＮＰ製剤を、Ｂａｌｂ−Ｃマウス（
ｎ＝３）に筋肉内、静脈内、および皮下投与し、ＰＢＳ中に製剤化されたルシフェラーゼ
修飾ＲＮＡを、マウスに静脈内投与した。
表８６． ルシフェラーゼ製剤
ルシフェラーゼＬＮＰ製剤を静脈内および筋肉内投与したマウスを、２、８、２４、４
８、１２０、および１９２時間で撮像し、ルシフェラーゼＬＮＰ製剤を皮下投与したマウ
スを、２、８、２４、４８、および１２０時間で撮像して、表８７に示されるルシフェラ
ーゼ発現を判定した。表８７において、「ＮＴ」は未試験を意味する。撮像の２０分前に
、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入した。次いで、動物に
麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）
を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒）として測定した。
表８７． ルシフェラーゼ発現
ＬＮＰ製剤を静脈内投与した１匹のマウスを、８時間で屠殺し、肝臓および脾臓におけ
るルシフェラーゼ発現を判定した。さらに、ＬＮＰ製剤を筋肉内投与した１匹のマウスを
、８時間で屠殺して、注入部位周辺の筋肉ならびに肝臓および膵臓におけるルシフェラー
ゼ発現を判定する。表８８に示されるように、静脈内および筋肉内投与後の肝臓および脾
臓の両方、ならびに筋肉内注入部位周辺の筋肉に、発現が見られた。
表８８． 組織のルシフェラーゼ発現
実施例６２． サイトカイン研究：ＰＢＭＣ
Ａ． ＰＢＭＣの単離および培養
２人のドナーに由来する５０ｍＬのヒト血液を、ヘパリンナトリウム管で、Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ロットＫＰ３０９２８およびＫＰ３０９３
１）から受容した。各ドナーについて、血液をプールし、ＤＰＢＳ（ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓ
ｃｉｅｎｃｅ ５９３３１Ｃ、ロット０７１Ｍ８４０８）で７０ｍＬに希釈し、２つの５
０ｍＬの円錐管に等分した。１０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ
ｃａｒｅ １７−５４４２−０３、ロット１００７４４００）を、血液層の下に静かに分
注した。管を２０００ｒｐｍで３０分間、低加速および制動で遠心分離した。管を除去し
、軟膜ＰＢＭＣ層を、新しい５０ｍＬの円錐管に静かに移し、ＤＰＢＳで洗浄した。管を
１４５０ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
上清を吸引し、ＰＢＭＣペレットを５０ｍＬのＤＰＢＳ中に再懸濁させ、洗浄した。管
を１２５０ｒｐｍで１０分間遠心分離した。この洗浄ステップを繰り返し、ＰＢＭＣペレ
ットを１９ｍＬのＯｐｔｉｍｅｍ Ｉ（Ｇｉｂｃｏ １１０５８、ロット１０７２０８８
）中に再懸濁させ、計数した。細胞懸濁液を３．０×１０＾６細胞／ｍＬの濃度の生細胞
に調節した。
次いで、これらの細胞を、１ウェル当たり５０μＬで１人のドナーにつき５つの９６ウ
ェル組織培養処理丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ ３７９９）に播種した。３０分以内に、
トランスフェクション混合物を１ウェル当たり５０μＬの量で各ウェルに添加した。トラ
ンスフェクションの４時間後、培地に１０μＬのウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ １００８２
、ロット１０１２３６８）を補充した。
Ｂ． トランスフェクション調製物
ヒトＧ−ＣＳＦをコードする修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示さ
れる；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャッ
プ１）（（１）天然のＮＴＰ、（２）５−メチルシチジンおよびシュードウリジンでの１
００％置換、または（３）５−メチルシチジンおよびＮ１−メチルシュードウリジンでの
１００％置換のいずれかを含有、ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（ＩＶＴ ｃＤＮ
Ａ配列は配列番号３３９０６に示される；ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される
、約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１
、各シトシンにおける５−メチルシトシンおよび各ウリジン部位におけるシュードウリジ
ン置換で完全に修飾）（（１）天然のＮＴＰまたは（２）５−メチルシチジンおよびシュ
ードウリジンで１００％置換のいずれかを含有）、ならびにＴＬＲアゴニストＲ８４８（
Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ ｔｌｒｌ−ｒ８４８）を、最終体積２５００μＬのＯｐｔｉｍｅｍ
Ｉ中、３８．４ｎｇ／μＬに希釈した。
別個に、１１０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
１１６６８−０２７、ロット１０７０９６２）を、６．７６ｍＬのＯｐｔｉｍｅｍ Ｉ
で希釈した。９６ウェルプレートにおいて、各ｍＲＮＡ、陽性対照（Ｒ−８４８）、また
は陰性対照（Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ）の９個の１３５μＬアリコートを、１３５μＬの希釈
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００に添加した。トランスフェクトされる物質を含有
するプレートを２０分間インキュベートした。次いで、トランスフェクション混合物を、
１ウェル当たり５０μＬでそれぞれのヒトＰＢＭＣに移した。その後、プレートを３７℃
でインキュベートした。２、４、８、２０、および４４時間で、各プレートをインキュベ
ーターから取り出し、上清を凍結させた。
最後のプレートを取り出した後、上清を、ヒトＧ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡキット（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ ＫＨＣ２０３２）およびヒトＩＦＮ−α ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒ
ｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ４１１０５−２）を用いてアッセイした。各条件は、二重
に行われた。
Ｃ． タンパク質および自然免疫応答分析
コードされたタンパク質を産生する未修飾および修飾ｍＲＮＡの能力を経時的に評価し
（Ｇ−ＣＳＦ産生）、インターフェロンα産生により測定される自然免疫認識を引き起こ
すｍＲＮＡの能力も同様に評価した。インビトロＰＢＭＣ培養物の使用は、オリゴヌクレ
オチドの免疫刺激能を測定する一般的な方法である（Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｏ
ｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ２００９ １９：８９−１０２）。
結果を、４パラメータのロジスティック曲線適合を用いて、各ＥＬＩＳＡプレートの標
準曲線に対して補間した。特異的ＥＬＩＳＡによって測定される経時的なＧ−ＣＳＦ、イ
ンターフェロンα（ＩＦＮ−α）、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）産生の３人の別
個のＰＢＭＣドナーの平均を表８９および表９０に示す。
Ｇ−ＣＳＦ ＥＬＩＳＡでは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＬＦ２０００
）未処理条件によるバックグラウンドシグナルを、各時点で差し引いた。データは、ヒト
末梢血単核によるヒトＧ−ＣＳＦタンパク質の特異的産生が、天然のＮＴＰ、５−メチル
シチジンおよびシュードウリジンでの１００％置換、または５−メチルシチジンおよびＮ
１−メチルシュードウリジンでの１００％置換を含有するＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡで見られ
ることを示した。Ｇ−ＣＳＦの産生は、５−メチルシチジンおよびＮ１−メチルシュード
ウリジン修飾ｍＲＮＡの使用により、５−メチルシチジンおよびシュードウリジン修飾ｍ
ＲＮＡと比較して有意に増加した。
自然免疫認識に関して、いずれの修飾ｍＲＮＡの化学組成も、陽性対照（Ｒ８４８、ｐ
（Ｉ）ｐ（Ｃ））と比較してＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α産生を大幅に阻止したが、化学
組成間の有意差は存在した。５−メチルシチジンおよびシュードウリジン修飾ｍＲＮＡは
、低いが検出可能なレベルのＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α産生をもたらしたが、一方で５
−メチルシチジンおよびＮ１−メチルシュードウリジン修飾ｍＲＮＡは、検出可能なＩＦ
Ｎ−αおよびＴＮＦ−α産生をもたらさなかった。
結果として、自然免疫応答の活性化の１つを上回るサイトカインマーカーを考察する必
要性に加えて、意外にも修飾の組み合わせにより異なるレベルの細胞応答（タンパク質産
生および免疫活性化）がもたらされることが見出されたことが断定されている。修飾、す
なわちＮ１−メチルシュードウリジンは、この研究において、標準的な５−メチルシチジ
ン／シュードウリジンの組み合わせよりも強化された保護をもたらし、結果として２倍多
いタンパク質およびほぼ１５０倍の免疫応答の低減（ＴＮＦ−α）をもたらしことが示さ
れた。
ＰＢＭＣが多数の自然免疫ＲＮＡ認識センサを含有し、さらにタンパク質翻訳が可能で
あることを考えると、これは、これらの２つの経路の相互依存性を試験するのに有用な系
を提供する。ｍＲＮＡ翻訳はそのような自然免疫経路の活性化によって悪影響を受ける可
能性があることが既知である（各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋ
ａｒｉｋｏ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００５）２３：１６５−１７５、Ｗａｒ
ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ（２０１０）７：６１８−６３０）
。ＰＢＭＣをインビトロアッセイ系として使用することで、翻訳（この場合、Ｇ−ＣＳＦ
タンパク質産生）とサイトカイン産生（この場合、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αのタンパ
ク質産生に例示される）との間の相関性を確立することが可能である。より良好なタンパ
ク質産生は、より低い自然免疫活性化経路の誘導と相関しており、新たな化学組成を、こ
の比率に基づいて有利に判断することができる（表９１）。
この研究において、いずれも５−メチルシトシンを伴う、シュードウリジンおよびＮ１
−メチルシュードウリジンという２つの化学修飾のＰＣ比は、サイトカインＩＦＮ−αの
９９４４／１＝９９４４と比較して、４７４２／１４１＝３４であった。サイトカインＴ
ＮＦ−αについては、２つの化学組成は、１５３および１２４３のＰＣ比を有し、それぞ
れ、いずれのサイトカインについても、Ｎ１−メチルシュードウリジンが、より優れた修
飾であることを示唆する。表８９および９０において、「ＮＴ」は未試験を意味する。
表８９． Ｇ−ＣＳＦ
表９０． ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α
表９１． Ｇ−ＣＳＦとサイトカインの比率
実施例６３． インビトロＰＢＭＣ研究：修飾パーセント
４８０ｎｇの５−メチルシトシン（５ｍＣ）およびシュードウリジン（シュードＵ）で
修飾したＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡまたは未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡを、０．４μＬのＬｉ
ｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて正常な血液ドナー（Ｄ１、Ｄ２、およびＤ３
）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）にトランスフェクトした。Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（
ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配
列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、５ｍＣおよびシュードＵで完全に修
飾した（１００％修飾）、５ｍＣおよびシュードＵで修飾しなかった（０％修飾）、また
はｍＲＮＡが７５％修飾、５０％修飾、もしくは２５％修飾を含有するように５ｍＣおよ
びシュードＵで部分的に修飾した。対照試料であるルシフェラーゼ（ｍＲＮＡ配列は配列
番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；
５’キャップ、キャップ１；５ｍｅＣおよびシュードＵで完全に修飾）もＧ−ＣＳＦ発現
について分析した。ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−αの対照試料であるＬｉｐｏｆｅｃｔａｍ
ｉｎｅ２０００、ＬＰＳ、Ｒ−８４８、ルシフェラーゼ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９
０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャッ
プ、キャップ１；５ｍＣおよびシュードで完全に修飾）、およびＰ（Ｉ）Ｐ（Ｃ）も分析
した。上清を、トランスフェクションの２２時間後に収集してＥＬＩＳＡを行い、タンパ
ク質発現を判定した。Ｇ−ＣＳＦの発現を表９４に示し、ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αの
発現を表９５に示す。ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αの発現は、Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡのト
ランスフェクションによる二次的影響であり得る。表９４および９５は、ｍＲＮＡが完全
に修飾されていない場合に、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、および腫
瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の化学修飾の量を滴定することができ、滴定可能傾向は、各
対象で同じではないことを示す。
ＰＢＭＣをインビトロアッセイ系として使用することにより、翻訳（この場合、Ｇ−Ｃ
ＳＦ タンパク質産生）とサイトカイン産生（この場合、ＩＦＮ−αタンパク質産生に例
示される）との間の相関性を確立することが可能である。より良好なンパク質産生は、よ
り低い自然免疫活性化経路の誘導と相関しており、化学組成の修飾率は、この比率に基づ
いて有利に判断することができる（表９６）。表９４および９５から計算され、表９６に
示されるように、５−メチルシチジンおよびシュードウリジンでの完全な修飾は、いずれ
の修飾も有さないもの（天然Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ）よりも良好なタンパク質／サイトカ
イン産生比を示す（ＩＦＮ−αについては１００倍、およびＴＮＦ−αについては２７倍
）。部分的修飾は、修飾がより少なくなるにつれてより低いタンパク質／サイトカイン比
がもたらされる、線形関係を示す。
表９４． Ｇ−ＣＳＦ発現
表９５． ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−αの発現
表９６． ＰＣ比および修飾率の影響
実施例６４． ＰＢＭＣにトランスフェクトした修飾ＲＮＡ
５００ｎｇの５−メチルシトシン（５ｍＣ）およびシュードウリジン（シュードＵ）で
修飾したＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡまたは未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡを、０．４μＬのＬｉ
ｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて正常な血液ドナー（Ｄ１、Ｄ２、およびＤ３
）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）にトランスフェクトした。Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（
ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配
列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、５ｍＣおよびシュードＵで完全に修
飾した（１００％修飾）、５ｍＣおよびシュードＵで修飾しなかった（０％修飾）、また
はｍＲＮＡが５０％修飾、２５％修飾、１０％修飾、５％修飾、１％修飾、もしくは０．
１％修飾を含有するように５ｍＣおよびシュードＵで部分的に修飾した。対照試料である
ｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレオチド
のポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５ｍｅＣおよびシュー
ドウリジンで完全に修飾）、５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾さ
れたＧ−ＣＳＦ（対照Ｇ−ＣＳＦ）、ならびに未処理対照も、Ｇ−ＣＳＦ、腫瘍壊死因子
α（ＴＮＦ−α）、およびインターフェロンα（ＩＦＮ−α）の発現について分析した。
上清を、トランスフェクションの６時間後および１８時間後に収集し、ＥＬＩＳＡを実行
してタンパク質発現を判定した。ドナー１のＧ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、およびＴＮＦ−α
の発現を表９７に示し、ドナー２を表９８に示し、ドナー３を表９９に示す。
５−メチルシチジンおよびシュードウリジンでの完全な１００％修飾は、３人すべての
ヒトＰＢＭＣドナーにわたり、最も高いタンパク質翻訳（Ｇ−ＣＳＦ）および産生される
最も少ない量のサイトカインをもたらした。修飾の量を減少させることにより、より高い
サイトカイン産生（ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α）がもたらされ、したがって、サイトカ
インを減少させ、タンパク質翻訳を向上させるためには、（本明細書においてＧ−ＣＳＦ
産生により証明されるように）完全な修飾が重要であることがさらに強調される。
表９７． ドナー１
表９８． ドナー２
表９９． ドナー３
実施例６５． ＢＪ線維芽細胞における自然免疫応答研究
Ａ． 単一のトランスフェクション
ヒト初代包皮線維芽細胞（ＢＪ線維芽細胞）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（カタログ番号ＣＲＬ−２５２２）から入
手し、５％ＣＯ２下、３７℃で、１０％ウシ胎児血清を補充したイーグル最小必須培地（
ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−２００３）において増殖させた。ＢＪ線維芽細胞を、０．
５ｍＬの培養培地中、１ウェル当たり３００，０００の細胞密度で２４ウェルプレートに
播種した。キャップ０を有するか、キャップ１を有するか、またはキャップを有さない５
−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された（Ｇｅｎ１）か、あるいは
５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された（Ｇｅｎ２
）、２５０ｎｇの修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示さ
れる；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャッ
プ１）を、製造業者のプロトコルに従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１１６６８−０１９）を用いてトランスフェクトした。
対照試料であるポリＩ：Ｃ（ＰＩＣ）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｌｉｐ
ｏ）、天然ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約
１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）、
および天然Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡもトランスフェクトした。細胞を１８時間後に収集し、
全ＲＮＡを単離し、製造業者のプロトコルに従ってＲＮｅａｓｙマイクロキット（カタロ
グ番号７４００４）を用いてＤＮＡＳＥ（登録商標）処理した。１００ｎｇの全ＲＮＡを
、製造業者のプロトコルに従ってＨｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓ
ｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（カタログ番号４３６８８１４）を用いてｃＤＮ
Ａ合成に使用した。次いで、ｃＤＮＡを、製造業者のプロトコルに従ってＢｉｏｒａｄ
ＣＦＸ ３８４機器においてＳｙｂｒＧｒｅｅｎを用いた定量的リアルタイムＰＣＲによ
って自然免疫応答遺伝子の発現について分析した。表１００は、ハウスキーピング遺伝子
ＨＰＲＴ（ヒポキサンチンホスホリボシトランスフェラーゼ（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ））と比較した自然免疫応答転写
物の発現レベルを示し、これは、ＨＰＲＴと比較した倍誘導として表される。この表で、
標準的測定基準のパネルには、次のものが含まれる：ＲＩＧ−Ｉはレチノイン酸誘導遺伝
子１であり、ＩＬ６はインターロイキン−６であり、ＯＡＳ−１はオリゴアデニル酸シン
ターゼ１であり、ＩＦＮｂはインターフェロンβであり、ＡＩＭ２はメラノーマ−２の不
在であり、ＩＦＩＴ−１はテトラリコペプチド反復を有するインターフェロン誘導型タン
パク質１であり、ＰＫＲはタンパク質キナーゼＲであり、ＴＮＦａは腫瘍壊死因子αであ
り、ＩＦＮａはインターフェロンαである。
表１００． 自然免疫応答転写物レベル
Ｂ． 反復トランスフェクション
ヒト初代包皮線維芽細胞（ＢＪ線維芽細胞）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（カタログ番号ＣＲＬ−２５２２）から入
手し、５％ＣＯ２下、３７℃で、１０％ウシ胎児血清を補充したイーグル最小必須培地（
ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−２００３）において増殖させた。ＢＪ線維芽細胞を、０．
５ｍＬの培養培地中、１ウェル当たり３００，０００の細胞密度で２４ウェルプレートに
播種した。未修飾、５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された（Ｇ
ｅｎ１）、または５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾
された（Ｇｅｎ２）、２５０ｎｇの修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号
３３８９７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’
キャップ、キャップ１）を、製造業者のプロトコルに従って５日間毎日トランスフェクト
した。対照試料であるＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｌ２０００）およびｍＣ
ｈｅｒｒｙ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６０ヌクレ
オチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシチ
ジンおよびシュードウリジンで完全に修飾）も５日間毎日トランスフェクトした。結果を
表１０１に示す。
未修飾ｍＲＮＡは、１日以降にインターフェロンβ（ＩＦＮ−β）およびインターロイ
キン−６（ＩＬ−６）においてサイトカイン応答を示した。少なくともシュードウリジン
で修飾されたｍＲＮＡは、２〜３日以降にサイトカイン応答を示したが、５−メチルシト
シンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで修飾されたｍＲＮＡは、３〜５日以降に応答
の低減を示した。
表１０１． サイトカイン応答
実施例６６． 自然免疫応答のインビボ検出
インビボタンパク質産生およびインビボサイトカイン応答に対するｍＲＮＡの様々な化
学修飾の重要性を区別する目的で、雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス（ｎ＝５）に、５’キャップが
キャップ１であるＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ未修飾）（ｍＲＮＡ配列
は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示され
ない）、５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍ
ＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ ５ｍｃ／ｐＵ）、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチ
ルシュードウリジンで完全に修飾された５’キャップありのＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−
ＣＳＦ ｍＲＮＡ ５ｍｃ／Ｎ１ｐＵ）もしくは５’キャップなしのＧ−ＣＳＦ ｍＲＮ
Ａ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ ５ｍｃ／Ｎ１ ｐＵキャップなし）、またはＲ８４８もしく
は５％ショ糖のいずれかである対照を、表１０２に記載されるように、筋肉内注入する。
表１０２． 投薬表
血液を、投薬の８時間後に採取する。ＥＬＩＳＡを用いて、Ｇ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、
およびＩＦＮ−αのタンパク質レベルをＥＬＩＳＡにより判定する。投薬の８時間後に、
筋肉を注射部位から採取し、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＱＰＣＲ）を用
いて、筋肉内のＲＩＧ−Ｉ、ＰＫＲ、ＡＩＭ−２、ＩＦＩＴ−１、ＯＡＳ−２、ＭＤＡ−
５、ＩＦＮ−β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＣＤ４５のｍＲＮＡレベルを判定
する。
実施例６７． 自然免疫応答のインビボ検出研究
雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス（ｎ＝５）に、５’キャップがキャップ１であるＧ−ＣＳＦ ｍ
ＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ未修飾）（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される
；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない）、５−メチルシトシンおよ
びシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ
５ｍｃ／ｐＵ）、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾
された５’キャップを有するＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ ５ｍｃ／Ｎ
１ｐＵ）もしくは５’キャップなしのＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ ５
ｍｃ／Ｎ１ ｐＵキャップなし）、またはＲ８４８もしくは５％ショ糖のいずれかである
対照を、表１０３に記載されるように、筋肉内注入した。血液を投薬の８時間後に採取し
、ＥＬＩＳＡを用いてＧ−ＣＳＦおよびインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）のタンパク
質レベルをＥＬＩＳＡによって判定し、表１０３に示す。
表１０３に示されるように、未修飾、５ｍｃ／ｐＵ、および５ｍｃ／Ｎ１ｐＵ修飾のＧ
−ＣＳＦ ｍＲＮＡは、マウス血清におけるヒトＧ−ＣＳＦ発現をもたらした。キャップ
なしの５ｍＣ／Ｎ１ｐＵ修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡは血清中にヒトＧ−ＣＳＦ発現を示さ
ず、５’キャップ構造を有することがタンパク質翻訳に重要であることを協調する。
予測した通り、Ｒ８４８、５％ショ糖のみ、および未処理の群ではヒトＧ−ＣＳＦタン
パク質は発現しなかった。重要なことに、血清中のマウスＩＦＮ−αによって測定される
サイトカイン産生に有意差が見られた。予測した通り、未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡは、
インビボで強固なサイトカイン応答を示した（Ｒ８４８陽性対照よりも高い）。５ｍｃ／
ｐＵの未修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡは、インビボで低いが検出可能なサイトカイン応答を
示したが、５ｍｃ／Ｎ１ｐＵ修飾ｍＲＮＡは、血清中に検出可能なＩＦＮ−αを示さなか
った（ビヒクルおよび未処理動物も同じであった）。
さらに、５ｍｃ／Ｎ１ｐＵ修飾ｍＲＮＡの応答は、キャップを有するかどうかにかかわ
らず、同じであった。これらのインビボ結果は、１）未修飾ｍＲＮＡが強固な自然免疫応
答を生成すること、２）これは、５ｍｃ／ｐＵ修飾の１００％組み込みにより低減される
が、廃止されないこと、および３）５ｍｃ／Ｎ１ｐＵ修飾の組み込みは、検出可能なサイ
トカイン応答をもたらさないこと、という結論を強める。
最後に、これらの注入が５％ショ糖（それ自体は作用を全く有さない）においてである
ことを考えると、これらの結果は、これらの修飾の免疫刺激能を正確に反映しているはず
である。
このデータから、Ｎ１ｐＵ修飾分子は、より多くのタンパク質を産生するが、ＩＦＮ−
α発現に対する作用をほとんど有さないか、または全く有さないことが明らかである。こ
の化学修飾については、キャッピングがタンパク質産生に必要であることもまた明らかで
ある。未修飾ｍＲＮＡのＰＣ比（ＰＣ＝９）と比較して７４８のタンパク質：サイトカイ
ン比は、この化学修飾が、ＩＦＮ−αに関連する作用または生物学的意義に関して、はる
かに優れていることを意味する。
表１０３． 血清中のヒトＧ−ＣＳＦおよびマウスＩＦＮ−α
実施例６８： 修飾ＲＮＡのインビボ送達
修飾ｍＲＮＡのタンパク質産生を、修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡまたは修飾第ＩＸ因子ｍ
ＲＮＡを雌スプラーグドーリーラット（ｎ＝６）に送達することによって評価した。ラッ
トに、５％ショ糖中の凍結乾燥形態から再構築した、１００μＬ中４００μｇの５−メチ
ルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ
配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示
されない；５’キャップ、キャップ１）（Ｇ−ＣＳＦ Ｇｅｎ１）、５−メチルシトシン
およびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾されたＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（Ｇ−Ｃ
ＳＦ Ｇｅｎ２）、または５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾され
た第ＩＸ因子ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌクレ
オチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）（第ＩＸ因子Ｇ
ｅｎ１）を注入した。血液を注入の８時間後に採取し、血清中のＧ−ＣＳＦタンパク質レ
ベルをＥＬＩＳＡによって測定した。表１０４は、８時間後の血清中のＧ−ＣＳＦタンパ
ク質レベルを示す。
これらの結果は、Ｇ−ＣＳＦ Ｇｅｎ１およびＧ−ＣＳＦ Ｇｅｎ２修飾ｍＲＮＡの両
方が、単回筋肉内注入後にラットにおいてヒトＧ−ＣＳＦタンパク質をもたらし得ること
、ならびにヒトＧ−ＣＳＦタンパク質産生が、Ｇｅｎ１化学組成よりもＧｅｎ２化学組成
を使用した場合に向上することを示す。
表１０４． ラット血清におけるＧ−ＣＳＦタンパク質（Ｉ．Ｍ．注入経路）
実施例６９． 化学修飾：インビトロ研究
Ａ． ＰＢＭＣにおけるインビトロスクリーニング
表１０５および１０６に概要説明される化学修飾で完全に修飾された、５００ｎｇのＧ
−ＣＳＦ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）ｍＲＮＡを、０．４μＬのＬ
ｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて３人の正常な血液ドナーからの末梢血単核
細胞（ＰＢＭＣ）にトランスフェクトした。対照試料であるＬＰＳ、Ｒ８４８、Ｐ（Ｉ）
Ｐ（Ｃ）、およびｍＣｈｅｒｒｙ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１
６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない、５’キャップ、キャップ１；５−
メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）もまた分析した。上清を収集し、
Ｇ−ＣＳＦタンパク質発現、ならびにサイトカインインターフェロンα（ＩＦＮ−α）お
よび腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の誘導を判定するためにＥＬＩＳＡによって分析する
まで凍結保存した。Ｇ−ＣＳＦのタンパク質発現を表１０５に示し、ＩＦＮ−αおよびＴ
ＮＦ−αの発現を表１０６に示す。
表１０５のデータは、すべてではないが多くの化学修飾が、ＰＢＭＣでのヒトＧ−ＣＳ
Ｆの生産的生成に使用可能であることを示す。注目すべきことに、１００％のＮ１−メチ
ルシュードウリジン置換が、最も高いレベルのヒトＧ−ＣＳＦ産生（シュードウリジン自
体よりもほぼ１０倍高い）を示す。Ｎ１−メチルシュードウリジンを、５−メチルシチジ
ンと組み合わせて用いることでも、高いレベルのヒトＧ−ＣＳＦタンパク質が産生される
（これもシュードウリジンを５メチルシチジンと組み合わせた場合よりも高い）。
ＰＢＭＣにおけるタンパク質産生とサイトカインとの逆相関を考慮すると、同様の傾向
が表１０６においても確認され、ここで、Ｎ１−メチルシュードウリジンでの１００％置
換は、サイトカイン誘導を全くもたらさず（トランスフェクションのみの対照に類似）、
シュードウリジンは、バックグラウンドよりも高い検出可能なサイトカイン誘導を見せる
。
Ｎ６−メチルアデノシンおよびα−チオシチジン等の他の修飾は、サイトカイン刺激を
増加させるようである。
表１０５． 化学修飾およびＧ−ＣＳＦタンパク質発現
表１０６． 化学修飾およびサイトカイン発現
Ｂ． ＨｅＬａ細胞におけるインビトロスクリーニング
トランスフェクションの前日に、２０，０００のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−
２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル細
胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体積
１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種し
た。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気下で一晩、３７ｏＧで成長させた。翌日、表１０７に記載
の化学修飾を有する８３ｎｇのルシフェラーゼ修飾ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３
９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャ
ップ、キャップ１）を、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に希釈した。
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａ
ｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトランスフェクション試薬として使用し、０．２μＬを、
１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ中に希釈した。室温で５分間のインキュベーショ
ンの後、両方の溶液を合わせ、室温でさらに１５分間インキュベートした。次いで、２０
μＬの合わせた溶液を、ＨｅＬａ細胞を含有する１００μＬの細胞培養培地に添加し、室
温でインキュベートした。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。ライセートの体積を、最も強いシグナルを生成する試料について１ウェル当たり
２百万を超える相対発光量（ＲＬＵ）が検出されなくなるまで調節または希釈し、試験し
た各化学組成を、表１０７に示す。プレートリーダーは、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ
Ｈ１（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。試薬を用いないプレートの
バックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２００の相対発光量であった。
これらの結果は、すべてではないが多くの化学修飾が、ＨｅＬａ細胞でのヒトＧ−ＣＳ
Ｆの生産的生成に使用可能であることを示す。注目すべきことに、１００％のＮ１−メチ
ル−シュードウリジン置換が、最も高いレベルのヒトＧ−ＣＳＦ産生を示す。
表１０７． ルシフェラーゼの相対発光量
Ｃ． ウサギ網状赤血球ライセートにおけるインビトロスクリーニング
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、表１０
８に列挙される化学修飾で修飾し、滅菌のヌクレアーゼ不含水中で１０μＬ中２５０ｎｇ
の最終量に希釈した。希釈したルシフェラーゼを、４０μＬの新たに調製したウサギ網状
赤血球ライセートに添加し、インビトロ翻訳反応を、乾式加熱ブロックにおいて３０℃で
標準的な１．５ｍＬのポリプロピレン反応管（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）中で行った。翻訳アッセイを、製造業者の指示に従
ってＲａｂｂｉｔ Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ（ヌクレアーゼ処理）キッ
ト（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて行った。反応緩衝液に、提供され
たロイシンまたはメチオニンのいずれかが欠けたアミノ酸ストック溶液の１対１混合物を
補充し、結果的に両方のアミノ酸を十分な量で含有する反応混合物が効果的なインビトロ
翻訳を行えるようにした。
６０分間のインキュベーションの後、反応管を氷上に置くことによって反応を停止させ
た。ルシフェラーゼ修飾ＲＮＡを含有するインビトロ翻訳反応物のアリコートを、白色不
透明ポリスチレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移
し、１００μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，
ＷＩ）と合わせた。インビトロ翻訳反応物の体積を、最も強いシグナルを生成する試料に
ついて１ウェル当たり２百万を超える相対発光量（ＲＬＵ）が検出されなくなるまで調節
または希釈し、試験した各化学組成のＲＬＵを表１０８に示す。プレートリーダーはＢｉ
ｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。
試薬を用いないプレートのバックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２００の相対
発光量であった。
これらの細胞不含翻訳の結果は、ＨｅＬａ細胞におけるタンパク質産生結果と非常によ
く相関し、同じ修飾が通常いずれの系においても機能するかまたは機能しない。１つの注
目すべき例外は、５−ホルミルシチジン修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡであり、これは、細
胞不含翻訳系では機能したが、ＨｅＬａ細胞に基づくトランスフェクション系では機能し
なかった。２つのアッセイ間の同様の差が、５−ホルミルシチジン修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲ
ＮＡでも見られた。
表１０８． ルシフェラーゼの相対発光量
実施例７０． 化学修飾：インビボ研究
Ａ． Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡのインビボスクリーニング
Ｂａｌｂ−Ｃマウス（ｎ＝４）に、表１０９に概要説明される化学修飾で完全に修飾さ
れた、１倍ＰＢＳ中に製剤化された修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号
３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’
キャップ、キャップ１）を、各脚に筋肉内注入する。対照であるルシフェラーゼ修飾ｍＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾
部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；シュードウリジンおよび５−メチ
ルシトシンで完全に修飾）およびＰＢＳ対照もまた試験する。８時間後に血清を採取して
、ＥＬＩＳＡによりＧ−ＣＳＦタンパク質レベル、サイトカインレベルを判する。
表１０９． Ｇ−ＣＳＦ
Ｂ． ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡのインビボスクリーニング
Ｂａｌｂ−Ｃマウス（ｎ＝４）に、表１１０に概説される化学修飾で完全に修飾された
、１倍ＰＢＳ中に製剤化された４２〜１０３μｇの修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮ
Ａ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に
示されない；５’キャップ、キャップ１）を含有する２００μＬを皮下注入した。ＰＢＳ
対照もまた試験した。修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡの投薬量も表１１０に概略説明する。
投薬の８時間後に、マウスを撮像してルシフェラーゼ発現を判定した。撮像の２０分前に
、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入した。次いで、動物に
麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）
を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒）として測定した。
表１１０に示されるように、２’−フルオロウリジンを例外として、すべてのルシフェ
ラーゼｍＲＮＡ修飾化学組成がインビボ活性を示した。さらに、１−メチルシュードウリ
ジン修飾ｍＲＮＡは、非常に高いルシフェラーゼ発現を示した（シュードウリジン含有ｍ
ＲＮＡよりも５倍高い発現）。
表１１０． ルシフェラーゼスクリーニング
実施例７１． 組み合わせルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡのインビボスクリーニング
Ｂａｌｂ−Ｃマウス（ｎ＝４）に、表１１１に概要説明される化学修飾で完全に修飾さ
れた、１倍ＰＢＳ中に製剤化された１００μｇの修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ
配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示
されない；５’キャップ、キャップ１）を２００μＬ皮下注入した。ＰＢＳ対照もまた試
験した。投薬の８時間後に、マウスを撮像してルシフェラーゼ発現を判定した。撮像の２
０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入した。次いで
、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌ
ｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒）として測
定した。
表１１１に示されるように、すべてのルシフェラーゼｍＲＮＡ修飾化学組成（組み合わ
せで）が、インビボ活性を示した。さらに、修飾ｍＲＮＡ（Ｎ４−アセチルシチジンまた
は５メチルシチジンを有する）におけるＮ１−メチル−シュードウリジンの存在は、シュ
ードウリジンを有するものを用いて試験した同じ組み合わせよりも高い発現を示した。総
合すると、これらのデータは、Ｎ１−メチル−シュードウリジン含有ルシフェラーゼｍＲ
ＮＡが、単独で使用される（表１１０）か、または他の修飾ヌクレオチドと組み合わせて
使用される（表１１１）かにかかわらず、インビボでのタンパク質発現の向上をもたらす
ことを示す。
表１１１． ルシフェラーゼスクリーニングの組み合わせ
実施例７２． ＢＪ線維芽細胞における自然免疫応答
ヒト初代包皮線維芽細胞（ＢＪ線維芽細胞）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（カタログ番号ＣＲＬ−２５２２）から入
手し、５％ＣＯ２下において３７℃で１０％ウシ胎児血清を補充したイーグル最小必須培
地（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−２００３）で成長させる。ＢＪ線維芽細胞を、０．５
ｍＬの培養培地中、１ウェル当たり１３０，０００の細胞密度で２４ウェルプレートに播
種する。５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された（Ｇｅｎ１）か
、または５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された（
Ｇｅｎ２）、２５０ｎｇの修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９
７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ
、キャップ１）を、製造業者のプロトコルに従ってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２００
０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１１６６８−０１９）を用いてトランスフェク
トする。対照試料であるＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００および未修飾Ｇ−ＣＳＦ
ｍＲＮＡ（天然のＧ−ＣＳＦ）もトランスフェクトする。細胞は、５日間連続でトラン
スフェクトする。トランスフェクション複合体を、各回のトランスフェクションの４時間
に取り出す。
培養上清を、製造業者のプロトコルに従って毎日ＥＬＩＳＡによりトランスフェクショ
ン後に、分泌されたＧ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログＤＣＳ５０）、腫瘍
壊死因子α（ＴＮＦ−α）、およびインターフェロンα（ＩＦＮ−αについてアッセイす
る。細胞を、初回トランスフェクションの６時間および１８時間後に、ならびにその後は
１日おきに、ＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番
号Ｇ７５７０）用いて生存率について分析する。収集した細胞と同時に、全ＲＮＡを単離
し、製造業者のプロトコルに従ってＲＮＡＥＡＳＹマイクロキット（カタログ番号７４０
０４）を用いてＤＮＡＳＥ（登録商標）で処理する。１００ｎｇの全ＲＮＡを、製造業者
のプロトコルに従ってＨｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａ
ｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４
３６８８１４）を用いてｃＤＮＡ合成に使用する。次いで、ｃＤＮＡを、製造業者のプロ
トコルに従ってＢｉｏｒａｄ ＣＦＸ ３８４機器においてＳｙｂｒＧｒｅｅｎを用いて
定量的リアルタイムＰＣＲによって自然免疫応答遺伝子の発現について分析する。
実施例７３． 野生型Ｔ７ポリメラーゼによるインビトロ転写
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）およびＧ−
ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、前述のように野
生型Ｔ７ポリメラーゼを用いて表１１２〜表１１５に列挙される異なる化学組成および化
学組成の組み合わせで完全に修飾した。
翻訳反応物質の収率を、分光光度測定（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅａｓ
ｕｒｅｍｅｎｔ）（ＯＤ２６０）によって判定し、ルシフェラーゼの収率を表１１２に示
し、Ｇ−ＣＳＦを表１１４に示す。
ルシフェラーゼおよびＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡを酵素キャッピング反応に供し、各修飾
ｍＲＮＡのキャッピング反応を分光光度測定（ＯＤ２６０）により収量を評価し、正確な
大きさを、バイオアナライザーを用いて評価した。ルシフェラーゼのキャッピング反応に
よる収率を表１１３に示し、Ｇ−ＣＳＦは表１１５に示す。
表１１２． ルシフェラーゼのインビトロ転写化学組成
表１１３． ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡのキャッピング化学組成および収量
表１１４． Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡのインビトロ転写化学組成および収量
表１１５． Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡのキャッピング化学組成および収量
実施例７４． 変異体Ｔ７ポリメラーゼによるインビトロ転写
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）およびＧ−
ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、変異体Ｔ７ポリ
メラーゼ（Ｄｕｒａｓｃｒｉｂｅ（登録商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット
（カタログ番号ＤＳ０１０９２５）（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍａｄｉｓｏｎ
，ＷＩ）を用いて表１１６〜１１９に列挙される異なる化学組成および化学組成の組み合
わせで完全に修飾した。
翻訳反応物質の収率を、分光光度測定（ＯＤ２６０）によって判定し、ルシフェラーゼ
の収量を表１１６に示し、Ｇ−ＣＳＦを表１１８に示す。
ルシフェラーゼおよびＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡを酵素キャッピング反応に供し、各修飾
ｍＲＮＡのキャッピング反応を分光光度測定（ＯＤ２６０）により収量を評価し、正確な
大きさを、バイオアナライザーを用いて評価した。ルシフェラーゼのキャッピング反応に
よる収量を表１１７に示し、Ｇ−ＣＳＦを表１１９に示す。
表１１６． ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡのインビトロ転写化学組成および収量
表１１７． ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡのキャッピング化学組成および収量
表１１８． Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡインビトロ転写化学組成および収量
表１１９． Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡのキャッピング化学組成および収量
実施例７５． ２’Ｏ−メチルおよび２’フルオロ化合物
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、表１２
０の化学組成で完全に修飾された形態として生成し、変異体Ｔ７ポリメラーゼ（Ｄｕｒａ
ｓｃｒｉｂｅ（登録商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（カタログ番号ＤＳ
０１０９２５）（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて転
写した。２’フルオロ含有ｍＲＮＡをＤｕｒａｓｃｒｉｂｅ Ｔ７を用いて作製したが、
２’Ｏメチル含有ｍＲＮＡはＤｕｒａｓｃｒｉｂｅ Ｔ７を用いて転写することができな
かった。
２’Ｏメチル修飾ｍＲＮＡの組み込みは、他の変異体Ｔ７ポリメラーゼを用いて達成す
ることが可能であり得る（それぞれの内容が参照によりそれらの全体が本明細書に組み込
まれる、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００４）２２：１１５５−１１６０、Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００２）３０：ｅ１３８）、または米国特許第７
，３０９，５７０号）。あるいは、２’ＯＭｅ修飾は、酵素的手段を用いて転写後に導入
することができる。
糖の２’基への修飾の導入は、多数の潜在的利点を有する。２’フルオロ置換のような
２’ＯＭｅ置換は、ヌクレアーゼから保護することが既知であり、また、ｓｉＲＮＡおよ
びアンチセンスといった他の核酸に組み込まれると、自然免疫認識を廃止することが示さ
れている（その全体が組み込まれる、Ｃｒｏｏｋｅ，ｅｄ．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕ
ｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ
ｐｒｅｓｓ）。
次いで、２’フルオロ修飾ｍＲＮＡをＨｅＬａ細胞にトランスフェクトして、細胞環境
におけるタンパク質産生を評価し、同じｍＲＮＡを細胞不含ウサギ網状赤血球系において
も評価した。未修飾ルシフェラーゼ（天然ルシフェラーゼ）対照を、両方の転写実験に使
用し、未処理または擬似トランスフェクト（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００単独
）対照もＨｅＬａトランスフェクションについて評価し、ＲＮＡなしの対照をウサギ網状
ライセート（ｒｅｔｉｃｕｌｙｓａｔｅ）について分析した。
ＨｅＬａトランスフェクション実験については、トランスフェクションの前日に、２０
，０００のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリ
プシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ
，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａ
ｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体積１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣ
Ｓおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種した。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気下で一晩
、３７ｏＧで成長させた。翌日、表１２０に記載の化学修飾を有する８３ｎｇの２’フル
オロ含有ルシフェラーゼ修飾ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約
１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を
、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａ
ｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）に希釈した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｌｉ
ｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトランスフェクシ
ョン試薬として使用し、０．２μＬを、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ中に希釈
した。室温で５分間のインキュベーションの後、両方の溶液を合わせ、室温でさらに１５
分間インキュベートした。次いで、２０μＬの合わせた溶液を、ＨｅＬａ細胞を含有する
１００μＬの細胞培養培地に添加し、室温でインキュベートした。１８〜２２時間のイン
キュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業者の指示に従って１００
μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，
ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリスチレン９６ウェルプレー
ト（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００μＬの完全ルシフェラー
ゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合わせた。ライセートの体
積を、最も強いシグナルを生成する試料について１ウェル当たり２百万を超える発光量が
検出されなくなるまで調節または希釈し、試験した各化学組成についてのＲＬＵを表１２
０に示す。プレートリーダーはＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗ
ｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。試薬を用いないプレートのバックグラウンドシグナル
は、１ウェル当たり約２００の相対発光量であった。
ウサギ網状赤血球ライセートアッセイについては、２’−フルオロ含有ルシフェラーゼ
ｍＲＮＡを、滅菌のヌクレアーゼ不含水中で１０μＬ中２５０ｎｇの最終量に希釈し、４
０μＬの新たに調製したウサギ網状赤血球ライセートに添加し、インビトロ翻訳反応を、
乾式加熱ブロックにおいて３０℃で標準的な１．５ｍＬのポリプロピレン反応管（Ｔｈｅ
ｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）中で行った。翻
訳アッセイを、製造業者の指示に従ってＲａｂｂｉｔ Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ Ｌｙ
ｓａｔｅ（ヌクレアーゼ処理）キット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用い
て行った。反応緩衝液に、提供されたロイシンまたはメチオニンのいずれかが欠けたアミ
ノ酸ストック溶液の１対１混合物を補充し、結果的に両方のアミノ酸を十分な量で含有す
る反応混合物が効果的なインビトロ翻訳を行えるようにした。６０分間のインキュベーシ
ョンの後、反応管を氷上に置くことによって反応を停止させた。
ルシフェラーゼ修飾ＲＮＡを含有するインビトロ翻訳反応物のアリコートを、白色不透
明ポリスチレン９６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移
し、１００μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，
ＷＩ）と合わせた。インビトロ翻訳反応物の量を、最も強いシグナルを生成する試料につ
いて１ウェル当たり２百万を超える相対発光量（ＲＬＵ）が検出されなくなるまで調節ま
たは希釈し、各化学組成に対するＲＬＵを表１２１に示す。プレートリーダーは、Ｂｉｏ
Ｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。試
薬を用いないプレートのバックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約１６０の相対発
光量であった。
表１２０および表１２１に見ることができるように、複数の２’フルオロ含有化合物が
、インビトロで活性であり、ルシフェラーゼタンパク質を産生する。
表１２０． ＨｅＬａ細胞
表１２１． ウサギ網状ライセート
実施例７６． 修飾の組み合わせを用いたＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼ
他の修飾と組み合わせた２’フルオロ修飾ｍＲＮＡの使用を評価するために、一連のｍ
ＲＮＡを、実施例７５に記載されるように、野生型Ｔ７ポリメラーゼ（フルオロ不含化合
物）または変異体Ｔ７ポリメラーゼ（フルオロ（ｆｌｕｙｏｒｏ）含有化合物）のいずれ
かを用いて転写した。すべての修飾ｍＲＮＡを、ＨｅＬａ細胞におけるインビトロトラン
スフェクションによって試験した。
トランスフェクションの前日に、２０，０００のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−
２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル細
胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体積
１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種し
た。細胞を、５％ＣＯ２雰囲気下で一晩、３７ｏＧで成長させた。翌日、表１２２に記載
の化学修飾を有する８３ｎｇのルシフェラーゼ修飾ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３
９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャ
ップ、キャップ１）を、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に希釈した。
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａ
ｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトランスフェクション試薬として使用し、０．２μＬを、
１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ中に希釈した。室温で５分間のインキュベーショ
ンの後、両方の溶液を合わせ、室温でさらに１５分間インキュベートした。次いで、２０
μＬの合わせた溶液を、ＨｅＬａ細胞を含有する１００μＬの細胞培養培地に添加し、室
温でインキュベートした。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。ライセートの体積を、最も強いシグナルを生成する試料について１ウェル当たり
２百万を超える発光量が検出されなくなるまで調節または希釈し、試験した各化学組成に
ついてのＲＬＵを表１２２に示す。プレートリーダーは、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ
Ｈ１（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。試薬を用いないプレートの
バックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２００の相対発光量であった。
表１２２から明らかなように、すべてのフルオロ不含化合物および多数の２’フルオロ
修飾を含有する組み合わせを含む、ほとんどの組み合わせの修飾が、ｍＲＮＡによる機能
的ルシフェラーゼタンパク質の産生をもたらした。
表１２２． ルシフェラーゼ
実施例７７． Ｇ−ＣＳＦインビトロ転写
第２のオープンリーディングフレームに関連して、すべての異なる化学修飾の活性を評
価するために、ルシフェラーゼｍＲＮＡ、ヒトＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡを用いて既に行った
実験を再現した。Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される
；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１
）を、野生型Ｔ７ポリメラーゼ（すべてのフルオロ不含化合物）または変異体Ｔ７ポリメ
ラーゼ（すべてのフルオロ含有化合物）を用いて、表１２４および１２５の化学組成で完
全に修飾した。変異体Ｔ７ポリメラーゼは、市販入手した（Ｄｕｒａｓｃｒｉｂｅ（登録
商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（カタログ番号ＤＳ０１０９２５）（Ｅ
ｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。
表１２４および表１２５の修飾ＲＮＡを、示されるように、ＨｅＬａ細胞にインビトロ
でトランスフェクトしたか、またはウサギ網状ライセート（２５０ｎｇの修飾ｍＲＮＡ）
に添加した。対照である未処理、擬似トランスフェクト（トランスフェクション試薬のみ
）、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾されたＧ−
ＣＳＦ、または５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾さ
れたルシフェラーゼ対照（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌク
レオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）も分析した。
Ｇ−ＣＳＦタンパク質の発現をＥＬＩＳＡによって判定し、値を表１２４および１２５に
示す。表１２４において、「ＮＴ」は未試験を意味する。
表１２４に示されるように、すべてではないが多数の化学修飾が、ヒトＧ−ＣＳＦタン
パク質産生をもたらした。細胞に基づく翻訳系および細胞不含の翻訳系によるこれらの結
果は、非常によく相関し、同じ修飾が通常いずれの系においても機能するかまたは機能し
ない。１つの注目すべき例外は、５−ホルミルシチジン修飾Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡであり
、これは、細胞不含の翻訳系では機能したが、ＨｅＬａ細胞に基づくトランスフェクショ
ン系では機能しなかった。２つのアッセイ間の同様の差異が、５−ホルミルシチジン修飾
ルシフェラーゼｍＲＮＡでも見られた。
表１２５に示されるように、すべてではないが多数のＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡ修飾化学組
成（組み合わせて使用する場合）が、インビボ活性を示した。さらに、修飾ｍＲＮＡ（Ｎ
４−アセチルシチジンまたは５メチルシチジンを有する）におけるＮ１−メチル−シュー
ドウリジンの存在は、シュードウリジンを有するものを用いて試験した同じ組み合わせよ
りも高い発現を示した。総合すると、これらのデータは、Ｎ１−メチル−シュードウリジ
ン含有Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮＡが、インビトロでのタンパク質発現の向上をもたらすことを
示す。
表１２４． Ｇ−ＣＳＦ発現
表１２５． ＨｅＬａ細胞における組み合わせ化学組成
実施例７８． 化学組成のスクリーニング
以下に列挙される表（表１２６〜１２８）は、前述の実施例に提示された様々な化合物
を用いたインビトロおよびインビトロのスクリーニングデータの大部分を要約する。良好
な相関性が、細胞に基づく翻訳アッセイと細胞不含の翻訳アッセイとの間に存在する。同
じ化学置換は、通常、ルシフェラーゼまたはＧ−ＣＳＦ ｍＲＮＡについて試験したかに
かかわらず、良好な一致性を示す。最後に、Ｎ１−メチル−シュードウリジン含有ｍＲＮ
Ａは、インビトロおよびインビボで、検出可能なサイトカイン刺激をほとんどまたは全く
伴わずに、非常に高いレベルのタンパク質発現を示し、インビトロおよびインビボの両方
で、シュードウリジンを含有するｍＲＮＡよりも優れている。
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）およびＧ−
ＣＳＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、表１２６および
１２７に記載の天然もしくは非天然の化学組成、または表１２８に記載の化学組成の組み
合わせで修飾し、本明細書に記載の方法を用いて試験した。
表１２６および表１２７において、「＊」は変異体Ｔ７ポリメラーゼ（Ｄｕｒａｓｃｒ
ｉｂｅ（登録商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（カタログ番号ＤＳ０１０
９２５）（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いたインビト
ロ転写反応を指す；「＊＊」は変異体Ｔ７ポリメラーゼ（Ｄｕｒａｓｃｒｉｂｅ（登録商
標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（カタログ番号ＤＳ０１０９２５）（Ｅｐ
ｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いたインビトロ転写反応の第
２の結果を指す；「＊＊＊」は細胞不含翻訳（ウサギ網状赤血球ライセート）で見られた
産生を指す；ＨｅＬａのタンパク質産生は、「＋」、「＋／−」、および「−」で判定す
る；Ｇ−ＣＳＦ ＰＢＭＣについて言及する場合、「＋＋＋＋」は、６，０００ｐｇ／ｍ
Ｌを上回るＧ−ＣＳＦを意味し、「＋＋＋」は、３，０００ｐｇ／ｍＬを上回るＧ−ＣＳ
Ｆを意味し、「＋＋」は１，５００ｐｇ／ｍＬを上回るＧ−ＣＳＦを意味し、「＋」は３
００ｐｇ／ｍＬを上回るＧ−ＣＳＦを意味し、「＋／−」は１５０〜３００ｐｇ／ｍＬの
Ｇ−ＣＳＦを意味し、バックグラウンドは、約１１０ｐｇ／ｍＬであった；サイトカイン
ＰＢＭＣについて言及する場合、「＋＋＋＋」は１，０００ｐｇ／ｍＬを上回るインター
フェロンα（ＩＦＮ−α）を意味し、「＋＋＋」は６００ｐｇ／ｍＬを上回るＩＦＮ−α
を意味し、「＋＋」は３００ｐｇ／ｍＬを上回るＩＦＮ−αを意味し、「＋」は１００ｐ
ｇ／ｍＬを上回るＩＦＮ−αを意味し、「−」は１００ｐｇ／ｍＬに満たないことを意味
し、バックグラウンドは約７０ｐｇ／ｍＬであった；ならびに「ＮＴ」は未試験を意味す
る。表１２７７において、タンパク質産生を、変異体Ｔ７ポリメラーゼ（Ｄｕｒａｓｃｒ
ｉｂｅ（登録商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（カタログ番号ＤＳ０１０
９２５）（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて評価した
。
表１２６． 天然
表１２７． 非天然
表１２８において、ＨｅＬａのタンパク質産生は「＋」、「＋／−」、および「−」に
よって判定する；Ｇ−ＣＳＦ ＰＢＭＣに言及する際、「＋＋＋＋」は６，０００ｐｇ／
ｍＬを上回るＧ−ＣＳＦを意味し、「＋＋＋」は３，０００ｐｇ／ｍＬを上回るＧ−ＣＳ
Ｆを意味し、「＋＋」は１，５００ｐｇ／ｍＬを上回るＧ−ＣＳＦを意味し、「＋」は３
００ｐｇ／ｍＬを上回るＧ−ＣＳＦを意味し、「＋／−」は１５０〜３００ｐｇ／ｍＬの
Ｇ−ＣＳＦを意味し、バックグラウンドは約１１０ｐｇ／ｍＬであった；サイトカインＰ
ＢＭＣに言及する際、「＋＋＋＋」は１，０００ｐｇ／ｍＬを上回るインターフェロンα
（ＩＦＮ−α）を意味し、「＋＋＋」は６００ｐｇ／ｍＬを上回るＩＦＮ−αを意味し、
「＋＋」は３００ｐｇ／ｍＬを上回るＩＦＮ−αを意味し、「＋」は１００ｐｇ／ｍＬを
上回るＩＦＮ−αを意味し、「−」は１００ｐｇ／ｍＬ未満を意味し、バックグラウンド
は約７０ｐｇ／ｍＬであった；「ＷＴ」は野生型Ｔ７ポリメラーゼをさし、「ＭＴ」は変
異体Ｔ７ポリメラーゼ（Ｄｕｒａｓｃｒｉｂｅ（登録商標）Ｔ７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ
ｉｏｎキット（カタログ番号ＤＳ０１０９２５）（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ（登録商標），Ｍ
ａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を指し、「ＮＴ」は未試験を意味する。
表１２８． 組み合わせの化学組成
実施例７９． ＰＢＭＣにおける２’フルオロ化学
Ｇ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１に示されない
）の自然免疫応答を誘起する能力を、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）および腫瘍壊
死因子−α（ＴＮＦ−α）産生を測定することによって判定した。インビトロＰＢＭＣ培
養の使用は、オリゴヌクレオチドの免疫刺激可能性を測定する一般的な方法であり（Ｒｏ
ｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ２００９ １９：８９
−１０２）、トランスフェクション方法を本明細書に記載する。特異的ＥＬＩＳＡによっ
て測定した経時的なインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ
−α）産生の２または３人の別個のＰＢＭＣドナーからの平均を表１２９に示す。対照の
Ｒ８４８、Ｐ（Ｉ）Ｐ（Ｃ）、ＬＰＳ、およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（
Ｌ２０００）も分析した。
自然免疫認識に関して、いずれの修飾ｍＲＮＡ化学組成も、陽性対照（Ｒ８４８、Ｐ（
Ｉ）Ｐ（Ｃ））と比較してＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α産生を大幅に阻止したが、２’フ
ルオロ化合物は、他の組み合わせと比べてもより低くＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α産生を
低減させ、Ｎ４−アセチルシチジンの組み合わせは、サイトカインプロファイルを上昇さ
せた。
表１２９． ＩＦＮ−αおよびＴＮＦ−α
実施例８０． タバコエッチ病ウイルス５’ＵＴＲを有する修飾ｍＲＮＡ
５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は、隣接領域として提供され得る。複数の５’ＵＴＲは、隣
接領域に含まれ得、同一または異なる配列であり得る。隣接領域の任意の部分（隣接領域
を含なまい任意の部分を含む）は、コドン最適化され得、それらのいずれかは、独立して
、コドン最適化の前および／または後に１つ以上の異なる構造または化学修飾を含有し得
る。
５’ＵＴＲは、タバコエッチ病ウイルス（ＴＥＶ）からの５’ＵＴＲを含み得る。Ａ、
Ｔ、Ｃ、もしくはＧを含む１つ以上のヌクレオチドが末端に付加されるか、または末端か
ら除去される５’ＵＴＲの変異形が利用され得る。
実施例８１． ＰＬＧＡ製剤化ｍＲＮＡの発現
Ａ． ルシフェラーゼＰＬＧＡマイクロスフェアの合成および特徴付け
５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾されたか、２−
チオウリジンで置換されたウリジンで２５％および５−メチルシトシンで置換されたシト
シンで２５％修飾されたか、Ｎ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾されたか、また
はシュードウリジンで完全に修飾された、ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列
番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；
５’キャップ、キャップ１）を、１倍ＴＥ緩衝液中で再構築し、次いでＰＬＧＡマイクロ
スフェア中で製剤化した。ＰＬＧＡマイクロスフェアを、ＰＬＧＡエステルキャップ（Ｌ
ａｃｔｅｌ、カタログ番号Ｂ６０１０−２、固有粘度０．５５〜０．７５、５０：５０の
ＬＡ：ＧＡ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号３４８４０
６−２５Ｇ、ＭＷ １３−２３ｋ）、ジクロロメタン、および水を使用して、当技術分野
で既知の水／油／水の二重乳化法を用いて合成した。手短に、４ｍｇ／ｍＬのＴＥ緩衝液
（Ｗ１）中の０．４ｍＬのｍＲＮＡを、２００ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡの濃度で、ジクロロ
メタン（ＤＣＭ）（Ｏ１）中に溶解させた２ｍＬのＰＬＧＡに添加した。Ｗ１／Ｏ１エマ
ルションを、速度５（約１９，０００ｒｐｍ）で３０秒間均質化させた（ＩＫＡ Ｕｌｔ
ｒａ−Ｔｕｒｒａｘ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ，Ｔ１８）。次いで、Ｗ１／Ｏ１エマルシ
ョンを２５０ｍＬの１％のＰＶＡ（Ｗ２）に添加し、速度５（約１９，０００ｒｐｍ）で
１分間均質化させた。製剤をそのまま３時間撹拌させ、次いで、１００μｍのナイロンメ
ッシュ篩（Ｆｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔｒａｉｎｅｒ、カタログ番号２２−
３６３−５４９）に通し、最後に遠心分離により洗浄した（１０分間、９，２５０ｒｐｍ
、４℃）。上清を廃棄し、ＰＬＧＡのペレットを５〜１０ｍＬの水に再懸濁させ、これを
２回繰り返した。水で洗浄し、再懸濁した後、１００〜２００μｌのＰＬＧＡマイクロス
フェア試料を、レーザー回折による製剤の粒径測定に使用した（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓ
ｔｅｒｓｉｚｅｒ２０００）。洗浄した製剤を液体窒素中で凍結させ、次いで２〜３日間
凍結乾燥させた。
凍結乾燥させた後、約１０ｍｇのＰＬＧＡ ＭＳを２ｍＬのエッペンドルフ管に計量し
、１ｍＬのＤＣＭを添加することにより脱製剤化し、試料を２〜６時間振盪させた。ｍＲ
ＮＡを０．５ｍＬの水を添加することによって脱製剤化ＰＬＧＡマイクロスフェアから抽
出し、試料を一晩振盪した。トランスフェクションアッセイにおける対照として使用する
ために、ＴＥ緩衝液中の製剤化していないルシフェラーゼｍＲＮＡ（非製剤化対照）をＤ
ＣＭ中に添加し、脱製剤化プロセスに供した（脱製剤化対照）。カプセル封入効率、充填
される重量パーセント、および粒径を表１３０に示す。カプセル封入効率を、製剤に添加
されるｍＲＮＡの初期量で除したＰＬＧＡマイクロスフェアの脱製剤からのｍＲＮＡのｍ
ｇとして計算した。製剤中に充填される重量パーセントを、製剤に添加されるＰＬＧＡの
初期量で除したＰＬＧＡマイクロスフェアの脱製剤からのｍＲＮＡのｍｇとして計算した
。
表１３０． ＰＬＧＡ特性
Ｂ． ＰＬＧＡマイクロスフェアにカプセル封入された修飾ｍＲＮＡのタンパク質発現
トランスフェクションの前日に、２０，０００個のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ
−２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル
細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体
積１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種
した。細胞を５％のＣＯ２雰囲気下で一晩、３７℃で成長させた。翌日、８３ｎｇの脱製
剤化ルシフェラーゼｍＲＮＡ ＰＬＧＡマイクロスフェア試料、脱製剤化ルシフェラーゼ
ｍＲＮＡ対照（脱製剤化対照）、または非製剤化ルシフェラーゼｍＲＮＡ対照（非製剤化
対照）を、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に希釈した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０
００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトラン
スフェクション試薬として使用し、０．２μＬを１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ
中に希釈した。室温で５分間のインキュベーションの後、両方の溶液を混合し、室温でさ
らに１５分間インキュベートした。次いで、２０μＬの合わせた溶液を、ＨｅＬａ細胞を
含有する１００μＬの細胞培養培地に添加した。次いで、プレートを前述のようにインキ
ュベートした。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。試薬を用いないプレートのバックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２０
０の相対発光量であった。プレートリーダーは、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（
ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。
細胞を収集し、各試料に対する（相対発光量、ＲＬＵにおける）生物発光を表１３１に
示す。これらの試料のトランスフェクションは、ルシフェラーゼｍＲＮＡの種々の化学組
成がＰＬＧＡマイクロスフェア製剤化の後に依然としてルシフェラーゼタンパク質を発現
できることを確認した。
表１３１． 化学修飾
実施例８２． 第ＩＸ因子のインビトロ研究
Ａ． 無血清培地
ヒト第ＩＸ因子ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０１に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）無血清培地内にトランスフェクト
した。細胞培養上清を採取し、ペプチドの二次元ＨＰＬＣ分離を経る前にトリプシン消化
に供した。マトリックス支援レーザー脱離／イオン化を使用して、ペプチドを検出した。
８個のペプチドが検出され、検出されたペプチドのうちの７個が第ＩＸ因子に特有である
。この結果は、無血清培地へトランスフェクトしたｍＲＮＡが完全長第ＩＸ因子タンパク
質を発現できたことを示す。
Ｂ． ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３Ａ細胞
２５０ｎｇのコドン最適化ヒト第ＩＸ因子ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０
１に示される；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、１
０％ＦＢＳの存在下でＤＭＥＭにおいてＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて
ＨＥＫ２９３Ａ細胞（１５０，０００細胞／ウェル）内にトランスフェクトした。トラン
スフェクションの３時間後、トランスフェクション複合体を取り出した。トランスフェク
ションの３、６、９、１２、２４、４８、および７２時間後、細胞を収集した。全ＲＮＡ
を単離し、ｃＤＮＡ合成に使用した。コドン最適化第ＩＸ因子特異的プライマーセットを
使用して、そのｃＤＮＡを定量的リアルタイムＰＣＲによる分析に供した。ヒトヒポキサ
ンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＰＲＴ）レベルを正規化に使用した。デ
ータは検出可能なｍＲＮＡの割合としてプロットされ、ｍＲＮＡレベルは３時間時点で１
００％と見なされる。ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞における５−メチルシト
シンおよびシュードウリジンで完全に修飾された第ＩＸ因子修飾ｍＲＮＡの半減期は、約
８〜１０時間である。
実施例８３． 生理食塩水製剤：皮下投与
ヒトＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メ
チルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾）ならびにヒトＥＰＯ修飾ｍＲＮＡ（
ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配
列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリ
ジンで完全に修飾）を、生理食塩水中で製剤化し、１００μｇの用量で筋肉内（ＩＭ）注
入を介してマウスに送達した。
対照には、ルシフェラーゼ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチ
ルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）またはその製剤緩衝液（Ｆ．Ｂ
ｕｆｆｅｒ）が含まれた。マウスに、注入の１３時間後に採血を行って、ｐｇ／ｍＬ単位
で血清中のヒトポリペプチドの濃度を判定した。（Ｇ−ＣＳＦ群では、マウス血清中のヒ
トＧ−ＣＳＦを測定し、ＥＰＯ群では、マウス血清中のヒトＥＰＯを測定した）。データ
を表１３２に示す。
製剤化されない場合、ｍＲＮＡは血清中で急速に分解し、それは系中でより長く持続す
るｍＲＮＡを送達する最良の方法が、ｍＲＮＡを製剤化することによるものであることを
示唆する。表１３２に示されるように、ｍＲＮＡは緩衝製剤のみを使用して皮下に送達さ
れてもよい。
表１３２． 投薬レジメン
実施例８４． 硝子体内送達
ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９８に示される；約１６
０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メ
チルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）、およびルシフェラーゼ修飾
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシ
ュードウリジンで完全に修飾された）を、生理食塩水中で製剤化し、表１３３に記載され
るようにラットの硝子体内に送達した。試料を硝子体内に送達された生理食塩水のみの対
照に対して比較した。
表１３３． 投薬チャート
１日目に、動物に麻酔をかけている間に各動物の左または右眼に製剤を投与する。投与
の前の日に、ゲンタマイシン眼内軟膏または溶液を両眼に２回適用した。ゲンタマイシン
眼内軟膏または溶液を、注入の直後および注入の翌日に適用した。投薬の前に、散瞳点眼
剤（１％トロピカミドおよび／または２．５％フェニレフリン）をそれぞれの眼に適用す
る。
投薬の１８時間後、ｍＣｈｅｒｒｙの用量および送達緩衝液を受容した眼を摘出し、室
温で一晩、組織固定のためにそれぞれの眼を１０ｍＬの４％パラホルムアルデヒドを含む
管に別々に置いた。その翌日、眼を１０ｍＬの３０％のショ糖（ｓｕｃｕｒｏｓｅ）を含
む管に別々に写し、それらが処理され、切片化されるまで２１℃で保管した。異なる切片
から作製されたスライドをＦ−顕微鏡検査で評価した。ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡを投
与された眼から作製されたスライドでは陽性発現が見られ、対照は発現を示さなかった。
実施例８５． インビボサイトカイン発現研究
５’キャップ、キャップ１で修飾されていないか（未修飾）、５−メチルシトシンおよ
びシュードウリジンならびに５’キャップ、キャップ１で完全に修飾されたか（Ｇｅｎ１
）、または５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンならびに５’キャッ
プ、キャップ１で完全に修飾されたか（Ｇｅｎ２キャップ）、あるいはキャップがない（
Ｇｅｎ２キャップされない）、２００μｇのＧ−ＣＳＦ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配
列番号３３８９７に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない
）をマウスに筋肉内注入した。対照のＲ−８４８、５％ショ糖、および未処理のマウスも
分析した。８時間後、マウスから血清を採取し、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）発
現について分析した。その結果を表１３４に示す。
表１３４． ＩＦＮ−α発現
実施例８６． ＶＥＧＦ修飾ｍＲＮＡのインビトロ発現
ＨＥＫ２９３細胞に、表１３５に示される濃度で、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓ
ｂａｄ，ＣＡ）のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００を用いて複合体形成している修飾
ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）ＶＥＧＦ−Ａ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１０に示される；
約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；
５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）をトランスフェクトし
た。タンパク質発現をＥＬＩＳＡによって検出し、そのタンパク質（ｐｇ／ｍＬ）を表１
３５に示す。
表１３５． タンパク質発現
実施例８７． ＧＦＰのＨｅＬａ細胞におけるインビトロスクリーニング
トランスフェクションの前日に、２０，０００個のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ
−２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル
細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体
積１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種
した。細胞を５％のＣＯ２雰囲気下で一晩、３７℃で成長させた。翌日、表１３６に記載
の化学修飾を有する、３７．５ｎｇまたは７５ｎｇの緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）修飾
ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０９に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ
尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を１０μＬの最終体積のＯＰＴ
Ｉ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中
に希釈した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトランスフェクション試薬として使用し、０．
２μＬを１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ中に希釈した。室温で５分間のインキュ
ベーションの後、両方の溶液を混合し、室温でさらに１５分間インキュベートした。次い
で、２０μＬの合わせた溶液を、ＨｅＬａ細胞を含有する１００μＬの細胞培養培地に添
加し、室温でインキュベートした。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。各化学組成に対する中央蛍光強度（ＭＦＩ）を判定し、表１３６に示す。
この結果は、Ｎ１−メチルシュードウリジンおよび５−メチルシトシンで完全に修飾さ
れたＧＦＰが、他の化学組成と比較してＨｅＬａ細胞中でよりタンパク質を産生すること
を実証する。加えて、細胞に投与されるより高用量のＧＦＰは、より高いＭＦＩ値をもた
らした。
表１３６． 平均蛍光強度
実施例８８． 均質化
異なるルシフェラーゼｍＲＮＡ溶液（表１３７に記載され、「Ｘ」は、その成分を含有
する溶液を指す）（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシン
およびシュードウリジンで完全に修飾された）を評価し、異なる溶液の収量パーセント、
バイオアナライザーによってｍＲＮＡの完全性、ならびにインビトロトランスフェクショ
ンによるｍＲＮＡのタンパク質発現を試験した。表１３７に示されるように、水、４ｍｇ
／ｍＬの１倍ＴＥ緩衝液中で、ｍＲＮＡ溶液を調製し、０．８ｍｇ／ｍＬの最終ｍＲＮＡ
濃度を実現するために、ジクロロメタン（ＤＣＭ）または２００ｍｇ／ｍＬのポリ（乳酸
−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）（Ｌａｃｔｅｌ、カタログ番号Ｂ６０１０−２、固有
粘度０．５５−０．７５、５０：５０のＬＡ：ＧＡ）を含有するＤＣＭのいずれかに添加
した。均質化を必要とする溶液を速度５（約１９，０００ｒｐｍ）で３０秒間均質化させ
た（ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ，Ｔ１８）。水、ジク
ロロメタン（ｄｉｃｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）、およびポリ（乳酸−コ−グリコール酸）
（ＰＬＧＡ）中のｍＲＮＡ試料は、回収不能（ＮＲ）であった。ＮＲ試料を除くすべての
試料が、バイオアナライザー（Ｂｉｏ−ｒａｄ Ｅｘｐｅｒｉｏｎ）で判定されるように
ｍＲＮＡの完全性を維持した。
トランスフェクションの前日に、２０，０００個のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ
−２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル
細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体
積１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種
した。細胞を５％のＣＯ２雰囲気下で一晩、３７℃で成長させた。翌日、回収可能な試料
からの２５０ｎｇのルシフェラーゼｍＲＮＡを１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（
ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に希釈した。
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎ
ｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトランスフェクション試薬として使用し、０．２μＬを１０
μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ中に希釈した。室温で５分間のインキュベーションの
後、両方の溶液を混合し、室温でさらに１５分間インキュベートした。次いで、２０μＬ
の合わせた溶液を、ＨｅＬａ細胞を含有する１００μＬの細胞培養培地に添加した。次い
で、プレートを前述のようにインキュベートした。対照ルシフェラーゼｍＲＮＡ（生理食
塩水中で製剤化されたルシフェラーゼｍＲＮＡ）（対照）および未処理細胞（未処理）も
評価した。細胞を収集し、各シグナルに対するその生物発光平均（光子／秒で）（生物発
光（ｐ／ｓ））もまた表１３７に示す。分析した際、回収可能な試料はすべて、ルシフェ
ラーゼｍＲＮＡの活性を示した。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。試薬を用いないプレートのバックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２０
０の相対発光量であった。プレートリーダーは、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（
ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。
細胞を収集し、その生物発光平均（相対発光量、ＲＬＵで）（生物発光（ＲＬＵ））も
また表１３７に示す。分析した際、回収可能な試料はすべて、ルシフェラーゼｍＲＮＡの
活性を示した。
表１３７． 溶液
実施例８９． ＴＥ緩衝液および水の評価
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）を、表１３８に概要説明されるよ
うに水またはＴＥ緩衝液中に再構築し、次いで、ＰＬＧＡマイクロスフェア中で製剤化し
た。ＰＬＧＡマイクロスフェアを、ＰＬＧＡ（Ｌａｃｔｅｌ、カタログ番号Ｂ６０１０−
２、固有粘度０．５５〜０．７５、５０：５０のＬＡ：ＧＡ）、ポリビニルアルコール（
ＰＶＡ）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号３４８４０６−２５Ｇ、ＭＷ １３−２３ｋ）、ジ
クロロメタン、および水を使用して、当技術分野で既知の水／油／水の二重乳化法を用い
て合成した。手短に、水または２〜６ｍｇ／ｍＬの濃度のＴＥ緩衝液（Ｗ１）中の０．２
〜０．６ｍＬのｍＲＮＡを、１００ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡの濃度でジクロロメタン（ＤＣ
Ｍ）（Ｏ１）中に溶解させた２ｍＬのＰＬＧＡに添加した。Ｗ１／Ｏ１エマルションを、
速度５（約１９，０００ｒｐｍ）で３０秒間均質化させた（ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒ
ｒａｘ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ，Ｔ１８）。次いで、Ｗ１／Ｏ１エマルションを２５０
ｍＬの１％のＰＶＡ（Ｗ２）に添加し、速度５（約１９，０００ｒｐｍ）で１分間均質化
させた。製剤をそのまま３時間撹拌させ、次いで、１００μｍのナイロンメッシュ篩（Ｆ
ｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔｒａｉｎｅｒ、カタログ番号２２−３６３−５４
９）に通し、最後に遠心分離により洗浄した（１０分間、９，２５０ｒｐｍ、４℃）。上
清を廃棄し、ＰＬＧＡのペレットを５〜１０ｍＬの水に再懸濁させ、これを２回繰り返し
た。洗浄した製剤を液体窒素中で凍結させ、次いで２〜３日間凍結乾燥させた。凍結乾燥
させた後、約１０ｍｇのＰＬＧＡ ＭＳを２ｍＬのエッペンドルフ管に計量し、１ｍＬの
ＤＣＭを添加することにより脱製剤化し、試料を２〜６時間振盪させた。ｍＲＮＡを０．
５ｍＬの水を添加することによって脱製剤化ＰＬＧＡマイクロスフェアから抽出し、試料
を一晩振盪した。トランスフェクションアッセイにおける対照として使用するために、水
またはＴＥ緩衝液中の製剤化していないルシフェラーゼｍＲＮＡ（脱製剤化対照）をＤＣ
Ｍ中に添加し、脱製剤化プロセスに供した。
トランスフェクションの前日に、２０，０００個のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ
−２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル
細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体
積１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種
した。細胞を５％のＣＯ２雰囲気下で一晩、３７℃で成長させた。翌日、１００ｎｇの脱
製剤化ルシフェラーゼｍＲＮＡ試料を、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｌｉｆ
ｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に希釈した。Ｌｉｐ
ｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉ
ｓｌａｎｄ，ＮＹ）をトランスフェクション試薬として使用し、０．２μＬを１０μＬの
最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ中に希釈した。室温で５分間のインキュベーションの後、両
方の溶液を混合し、室温でさらに１５分間インキュベートした。次いで、２０μＬの合わ
せた溶液を、ＨｅＬａ細胞を含有する１００μＬの細胞培養培地に添加した。次いで、プ
レートを前述のようにインキュベートした。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。試薬を用いないプレートのバックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２０
０の相対発光量であった。プレートリーダーは、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（
ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。各製剤からのルシフェラーゼｍＲＮ
Ａの活性度を判定するために、各製剤に対する相対発光量（ＲＬＵ）を適切なｍＲＮＡ脱
製剤化対照（水またはＴＥ緩衝液中のｍＲＮＡ）のＲＬＵで除した。表１３８は、ルシフ
ェラーゼｍＲＮＡの活性度を示す。ＰＬＧＡマイクロスフェア製剤（製剤）中のルシフェ
ラーゼｍＲＮＡの活性度は、水と比べて、ＴＥ緩衝液中で製剤化することによって大幅に
改善された。
表１３８． 製剤
実施例９０． ｍＲＮＡ上の化学修飾
トランスフェクションの前日に、２０，０００個のＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ
−２；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）での処理によって収集し、９６ウェル
細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）においてウェル毎に総体
積１００μＬのＥＭＥＭ培地（１０％ＦＣＳおよび１倍Ｇｌｕｔａｍａｘを補充）に播種
した。細胞を５％のＣＯ２雰囲気下で一晩、３７℃で成長させた。翌日、表１３９に記載
の化学修飾を有する８３ｎｇのルシフェラーゼ修飾ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３
９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャ
ップ、キャップ１）を、１０μＬの最終体積のＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に希釈した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍ
ｉｎｅ ２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ
Ｙ）をトランスフェクション試薬として使用し、０．２μＬを１０μＬの最終体積のＯＰ
ＴＩ−ＭＥＭ中に希釈した。室温で５分間のインキュベーションの後、両方の溶液を混合
し、室温でさらに１５分間インキュベートした。次いで、２０μＬの合わせた溶液を、Ｈ
ｅＬａ細胞を含有する１００μＬの細胞培養培地に添加し、室温でインキュベートした。
１８〜２２時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼを発現する細胞を、製造業
者の指示に従って１００μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）で溶解した。ライセートのアリコートを白色不透明ポリス
チレン９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）に移し、１００
μＬの完全ルシフェラーゼアッセイ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）と合
わせた。ライセートの体積を、最も強いシグナルを生成する試料について１ウェル当たり
２百万を超える相対発光量（ＲＬＵ）が検出されなくなるまで調節または希釈し、試験し
た各化学組成についてのＲＬＵを、表１３９に示す。プレートリーダーは、ＢｉｏＴｅｋ
Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）であった。試薬を用
いないプレートのバックグラウンドシグナルは、１ウェル当たり約２００の相対発光量で
あった。
表１３９． 化学修飾
実施例９１． 修飾ｍＲＮＡの筋肉内および皮下投与
ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で製剤化された、５−メチルシトシンおよびシュードウリジン
（５ｍＣ／ｐＵ）で完全に修飾されたか、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュ
ードウリジン（５ｍＣ／Ｎ１ｍｐＵ）で完全に修飾されたか、シュードウリジン（ｐＵ）
で完全に修飾されたか、Ｎ１−メチル−シュードウリジン（Ｎ１ｍｐＵ）で完全に修飾さ
れたか、または５−メチルシトシンで置換されたシトシンで２５％および２−チオウリジ
ンで置換されたウリジンで２５％修飾された（５ｍＣ／ｓ２Ｕ）、ルシフェラーゼ修飾ｍ
ＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ
尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、２．５ｍｇ／ｋｇの用量で
筋肉内または皮下にＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。マウスを、筋肉内送達の場合、２時
間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、および１４４時間
、ならびに皮下送達の場合、２時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間
、および１２０時間時点で撮像した。撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液
を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入した。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉ
ｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発
光を、全マウスの全光束（光子／秒）として測定した。筋肉内投与に対する平均全光束（
光子／秒）を表１４０に示し、皮下投与に対する平均全光束（光子／秒）を表１４１に示
す。バックグラウンドシグナルは、３．７９Ｅ＋０５（ｐ／ｓ）であった。筋肉内投与に
対するピーク発現は、すべての化学組成において２４時間から４８時間の間に見られ、発
現は１４４時間時点でも依然として検出された。皮下送達の場合、ピーク発現は２時間か
ら８時間の間に見られ、発現は７２時間時点でも検出された。
表１４０． 筋肉内投与
表１４１． 皮下投与
実施例９２． 浸透圧ポンプ研究
埋込の前に、浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴ（登録商標）浸透圧ポンプ２００１Ｄ，ＤＵＲ
ＥＣＴ Ｃｏｒｐ．Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ）を０．２ｍＬの１倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４
）（ＰＢＳ充填ポンプ）または１倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１ｍｇ／ｍＬで０．２ｍＬの
ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチ
ルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された）（ルシフェラーゼ
充填ポンプ）に充填し、３７℃で一晩、１倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中でインキュベートす
る。
Ｂａｌｂ−Ｃマウス（ｎ＝３）にＰＢＳ充填ポンプまたはルシフェラーゼ充填ポンプの
いずれかを皮下に埋め込み、２時間、８時間、２４時間時点で撮像する。対照として、Ｐ
ＢＳ充填ポンプを皮下に埋め込み、マウスに１倍ＰＢＳ中のルシフェラーゼ修飾を皮下に
注入するか（ＰＢＳ充填ポンプ；ＳＣルシフェラーゼ）か、または浸透圧ポンプを埋め込
まず、マウスに１倍ＰＢＳ中のルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡを皮下に注入する（ＳＣルシ
フェラーゼ）。ルシフェラーゼ製剤を表１４２に概略説明する。
表１４２． ルシフェラーゼ製剤
実施例９３． 外部浸透圧ポンプ研究
外部浸透圧ポンプ（ＡＬＺＥＴ（登録商標）浸透圧ポンプ２００１Ｄ、ＤＵＲＥＣＴ
Ｃｏｒｐ．Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ）を０．２ｍＬの１倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（ＰＢ
Ｓ充填ポンプ）または１倍ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１ｍｇ／ｍＬで０．２ｍＬのルシフェ
ラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシ
ンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された）（ルシフェラーゼ充填ポン
プ）に充填し、３７℃で一晩１倍、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中でインキュベートする。
外部ＰＢＳ充填ポンプまたはルシフェラーゼ充填ポンプに接続されたカテーテルを使用
して、Ｂａｌｂ−Ｃマウス（ｎ＝３）に製剤を投与する。マウスを、２時間、８時間、お
よび２４時間時点で撮像する。対照として、外部ＰＢＳ充填ポンプを使用し、マウスに１
倍ＰＢＳ中のルシフェラーゼ修飾を皮下に注入するか（ＰＢＳ充填ポンプ；ＳＣルシフェ
ラーゼ）か、または外部ポンプを使用せず、マウスに１倍ＰＢＳ中のルシフェラーゼ修飾
ｍＲＮＡを皮下に注入のみ行う（ＳＣルシフェラーゼ）。撮像の２０分前に、マウスにＤ
−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入する。次いで、動物に麻酔をかけ、
ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像
を取得する。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒）として測定する。ルシフェラー
ゼ製剤を表１４３に概説し、平均全光束（光子／秒）。
表１４３． ルシフェラーゼ製剤
実施例９４． フィブリンシーラント研究
Ｔｉｓｓｅｅｌ（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｄｅｅｒｆｉｅ
ｌｄ，ＩＬ）等のフィブリンシーラントは、二連式シリンジ中のフィブリノーゲンおよび
トロンビンからなる。混合されると、フィブリノーゲンはフィブリンに変換され、約１０
〜３０秒でフィブリン血餅を形成する。この血餅は、身体の天然の凝血機構を模倣するこ
とができる。加えて、フィブリンハイドロゲルは、持続放出送達において使用され得る可
能性のある三次元構造である。現在、フィブリンシーラントは、縫合、結紮、および焼灼
等の従来の外科技法に代わる止血および封着の用途として認められている。
トロンビンおよびフィブリノーゲン成分を二連式シリンジ中に別々に充填した。Ｂａｌ
ｂ−Ｃマウス（ｎ＝３）に５０μＬのフィブリノーゲン、５０μＬのトロンビンを皮下に
注入し、また同じ部位に修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０
７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ
、キャップ１；５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾さ
れた）（Ｔｉｓｓｅｅｌ＋ルシフェラーゼ）か、５０μＬのフィブリノーゲンおよび５０
μＬのトロンビン（Ｔｉｓｓｅｅｌ）か、または修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ルシフェ
ラーゼ）を注入した。フィブリノーゲンおよびトロンビンの注入は、二連式シリンジを使
用して同時に完了した。ルシフェラーゼのＳＣ注入は、フィブリンハイドロゲルが重合す
ることを可能にするように、フィブリノーゲン／トロンビン注入の１５分後に完了した（
Ｔｉｓｓｅｅｌ＋ルシフェラーゼ群）。未処理マウスの対照群も評価した。マウスを５時
間および２４時間時点で撮像した。撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を
１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入した。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎ
ａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光
を、全マウスの全光束（光子／秒）として測定した。ルシフェラーゼ製剤を表１４４に概
要説明し、平均全光束（光子／秒）を表１４５に示す。フィブリンシーラントは撮像を妨
げないことが見出され、ルシフェラーゼおよびＴｉｓｓｅｅｌの注入は、ルシフェラーゼ
の発現を示した。
表１４４． ルシフェラーゼ製剤
表１４５． 全光束
実施例９５． ｍＲＮＡ含有フィブリンシーラント研究
Ａ． 修飾ｍＲＮＡおよび塩化カルシウム
再構築の前に、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾
されたか、またはＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾された、ルシフェラーゼ
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を塩化カルシウムに添加する
。次いで、その塩化カルシウムを使用して、トロンビンを再構築する。フィブリノーゲン
を、製造業者の指示に従って線溶阻害剤溶液で再構築する。修飾ｍＲＮＡを含有する再構
築されたトロンビンおよびフィブリノーゲンを二連式シリンジ中に充填する。マウスに、
修飾ｍＲＮＡを含有する５０μＬのフィブリノーゲンおよび５０μＬのトロンビンを皮下
に注入するか、または等価用量の修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡを含有する５０μＬのＰＢ
Ｓを注入した。未処理マウスの対照群も評価する。平均全光束（光子／秒）を判定するた
めに、マウスを既定の間隔で撮像する。
Ｂ． 脂質ナノ粒子で製剤化される修飾ｍＲＮＡおよび塩化カルシウム
再構築の前に、脂質ナノ粒子中で製剤化される、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチ
ル−シュードウリジンで完全に修飾されたか、またはＮ１−メチルシュードウリジンで完
全に修飾された、ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示され
る；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１）を塩化カルシウムに添加する。次いで、その塩化カルシウムを使用して、トロンビン
を再構築する。フィブリノーゲンを、製造業者の指示に従って線溶阻害剤溶液で再構築す
る。修飾ｍＲＮＡを含有する再構築されたトロンビンおよびフィブリノーゲンを二連式シ
リンジ中に充填する。マウスに、５０μＬのフィブリノーゲンおよび修飾ｍＲＮＡを含有
する５０μＬのトロンビンを皮下に注入するか、または等価用量の修飾ルシフェラーゼｍ
ＲＮＡを含有する５０μＬのＰＢＳを注入した。未処理マウスの対照群も評価する。平均
全光束（光子／秒）を判定するために、マウスを既定の間隔で撮像する。
Ｃ． 修飾ｍＲＮＡおよびフィブリノーゲン
再構築の前に、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修
飾されたか、またはＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された、ルシフェラーゼ
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を線溶阻害剤溶液に添加する
。次いで、その線溶阻害剤溶液を使用して、フィブリノーゲンを再構築する。トロンビン
を、製造業者の指示に従って塩化カルシウム溶液で再構築する。修飾ｍＲＮＡを含有する
再構築されたフィブリノーゲンおよびトロンビンを二連式シリンジ中に充填する。マウス
に、５０μＬのトロンビンおよび修飾ｍＲＮＡを含有する５０μＬのフィブリノーゲンを
皮下に注入するか、または等価用量の修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡを含有する５０μＬの
ＰＢＳを注入した。未処理マウスの対照群も評価する。平均全光束（光子／秒）を判定す
るために、マウスを既定の間隔で撮像する。
Ｄ． 脂質ナノ粒子で製剤化される修飾ｍＲＮＡおよびフィブリノーゲン
再構築の前に、脂質ナノ粒子中で製剤化された、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチ
ル−シュードウリジンで完全に修飾されたか、またはＮ１−メチルシュードウリジンで完
全に修飾された、ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示され
る；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１）を線溶阻害剤溶液に添加する。次いで、その線溶阻害剤溶液を使用して、フィブリノ
ーゲンを再構築する。トロンビンを、製造業者の指示に従って塩化カルシウム溶液で再構
築する。修飾ｍＲＮＡを含有する再構築されたフィブリノーゲンおよびトロンビンを二連
式シリンジ中に充填する。マウスに、５０μＬのトロンビンおよび修飾ｍＲＮＡを含有す
る５０μＬのフィブリノーゲンを皮下に注入するか、または等価用量の修飾ルシフェラー
ゼｍＲＮＡを含有する５０μＬのＰＢＳを注入した。未処理マウスの対照群も評価する。
平均全光束（光子／秒）を判定するために、マウスを既定の間隔で撮像する。
Ｅ． 修飾ｍＲＮＡおよびトロンビン
再構築の前に、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾
されたか、またはＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾された、ルシフェラーゼ
ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリ
Ａ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、製造業者の指示に従って
塩化カルシウムで再構築された後の、その再構築されたトロンビンに添加する。次いで、
線溶阻害剤溶液を使用して、製造業者の指示に従ってフィブリノーゲンを再構築する。再
構築されたフィブリノーゲンおよび修飾ｍＲＮＡを含有するトロンビンを二連式シリンジ
中に充填する。マウスに、修飾ｍＲＮＡを含有する５０μＬのトロンビンおよび５０μＬ
のフィブリノーゲンを皮下に注入するか、または等価用量の修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡ
を含有する５０μＬのＰＢＳを注入した。未処理マウスの対照群も評価する。平均全光束
（光子／秒）を判定するために、マウスを既定の間隔で撮像する。
Ｆ． 脂質ナノ粒子で製剤化される修飾ｍＲＮＡおよびトロンビン
再構築の前に、脂質ナノ粒子中で製剤化された、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチ
ル−シュードウリジンで完全に修飾されたか、またはＮ１−メチルシュードウリジンで完
全に修飾された、ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示され
る；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１）を、製造業者の指示に従って塩化カルシウムで再構築された後のその再構築されたト
ロンビンに添加する。次いで、線溶阻害剤溶液を使用して、製造業者の指示に従ってフィ
ブリノーゲンを再構築する。再構築されたフィブリノーゲンおよび修飾ｍＲＮＡを含有す
るトロンビンを二連式シリンジ中に充填する。マウスに、修飾ｍＲＮＡを含有する５０μ
Ｌのトロンビンおよび５０μＬのフィブリノーゲンを皮下に注入するか、または等価用量
の修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡを含有する５０μＬのＰＢＳを注入した。未処理マウスの
対照群も評価する。平均全光束（光子／秒）を判定するために、マウスを既定の間隔で撮
像する。
実施例９６． ５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジン修飾ｍＲＮＡ
のカチオン性脂質製剤
５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾されたルシフ
ェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、表１４６に記載
されるようにカチオン性脂質中で製剤化した。その製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内
に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下に（Ｓ．Ｃ．）、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃ
マウスに投与した。
表１４６． カチオン性脂質製剤
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、および２４時間後に撮像し、平均全
光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質製剤について測定した。背景光束は
、約４．１７Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１４７に示す。表１４７において
、「ＮＴ」は、試験されなかったことを示す。
表１４７． 光束
実施例９７． 脂質ナノ粒子静脈内研究
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）を、表１４８に記載されるように
５０％のＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡまたはＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、３８．５％のコレ
ステロール、１０％のＤＳＰＣ、および１．５％のＰＥＧを含有する脂質ナノ粒子中で製
剤化した。製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．
００５ｍｇ／ｋｇ、または０．０００５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与し
た。撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入
した。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒ
ｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／
秒）として測定した。
表１４８． 製剤
ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡの場合、マウスを投薬の２時間、８時間、２４時間、７２時
間、９６時間、および１６８時間後に撮像し、平均全光束（光子／秒）を各投与経路およ
びカチオン性脂質製剤について測定した。背景光束は、約３．６６Ｅ＋０５ｐ／ｓであっ
た。撮像の結果を表１４９に示す。臓器を８時間時点で撮像し、平均全光束（光子／秒）
を肝臓、脾臓、肺、および腎臓について測定した。各臓器に対する対照も分析した。その
結果を表１５０に示す。すべての用量レベルに対するピークシグナルは、投与の８時間後
であった。種々の臓器（肝臓、脾臓、肺、および腎臓）への分布は、ＬＮＰ用量を増加さ
せるか、または減少させることによって制御され得る可能性もある。
表１４９． 光束
表１５０． 臓器の光束
ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡの場合、マウスを投薬の２時間、８時間、２４時間、４８時
間、７２時間、および１４４時間後に撮像し、平均全光束（光子／秒）を各投与経路およ
びカチオン性脂質製剤について測定した。背景光束は、約４．５１Ｅ＋０５ｐ／ｓであっ
た。撮像の結果を表１５１に示す。臓器を８時間時点で撮像し、平均全光束（光子／秒）
を肝臓、脾臓、肺、および腎臓について測定した。各臓器に対する対照も分析した。その
結果を表１５２に示す。すべての用量レベルに対するピークシグナルは、投与の８時間後
であった。種々の臓器（肝臓、脾臓、肺、および腎臓）への分布は、ＬＮＰ用量を増加さ
せるか、または減少させることによって制御され得る可能性もある。
表１５１． 光束
表１５２． 臓器の光束
実施例９８． 脂質ナノ粒子皮下研究
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）を、表１５３に記載されるように
５０％のＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、３８５％のコレステロール、１０％のＤＳＰＣ、お
よび１．５％のＰＥＧを含有する脂質ナノ粒子中で製剤化した。製剤を皮下に（Ｓ．Ｃ．
）０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、または０．００５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌ
ｂ−Ｃマウスに投与した。
表１５３． ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ製剤
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、お
よび１４４時間後に撮像し、平均全光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質
製剤について測定した。検出下限は、約３Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１５
４に示す。臓器を８時間時点で撮像し、平均全光束（光子／秒）を肝臓、脾臓、肺、およ
び腎臓について測定した。各臓器に対する対照も分析した。その結果を表１５５に示す。
すべての用量レベルに対するピークシグナルは、投与の８時間後であった。種々の臓器（
肝臓、脾臓、肺、および腎臓）への分布は、ＬＮＰ用量を増加させるか、または減少させ
ることによって制御され得る可能性もある。高用量では、高いレベルのルシフェラーゼ発
現が肝臓、脾臓、肺、および腎臓において検出されたので、ＬＮＰ製剤は皮下注入部位の
外側に移動する。
表１５４． 光束
表１５５． 臓器の光束
実施例９９． カチオン性脂質ナノ粒子皮下研究
ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）を、５０％のＤＬｉｎ−ＭＣ３−
ＤＭＡ、３８．５％のコレステロール、１０％のＤＳＰＣ、および１．５％のＰＥＧを含
有する脂質ナノ粒子中で製剤化する。製剤を皮下に（Ｓ．Ｃ．）０．５ｍｇ／ｋｇ、０．
０５ｍｇ／ｋｇ、または０．００５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与する。
マウスを投薬の２時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、および１４４時間後
に撮像し、平均全光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質製剤について測定
した。臓器を８時間時点で撮像し、平均全光束（光子／秒）を肝臓、脾臓、肺、および腎
臓について測定する。各臓器に対する対照も分析する。
実施例１００． ルシフェラーゼリポプレックス研究
リポプレックス形成したルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７
に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、
キャップ１）を、５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾したか（５ｍ
Ｃ／ｐＵ）、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾し
たか（５ｍＣ／Ｎ１ｍｐＵ）、または５−メチルシトシンで置換されたシトシンで２５％
および２−チオウリジンで置換されたウリジン（５ｍＣ／ｓ２Ｕ）で２５％修飾した。製
剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下に（Ｓ．Ｃ．）０．１０
ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の８時間、２４時間、および４８時間後に撮像し、平均
全光束（光子／秒）を各投与経路および化学修飾について測定した。バックグラウンドシ
グナルは、約３．９１Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１５６に示す。臓器を６
時間時点で撮像し、平均全光束（光子／秒）を肝臓、脾臓、肺、および腎臓について測定
した。各臓器に対する対照も分析した。その結果を表１５７に示す。
表１５６． 光束
表１５７． 臓器に対する光束
実施例１０１． 修飾ｍＲＮＡのカチオン性脂質製剤
５−メチルシトシンで置換されたシトシンで２５％および２−チオウリジンで置換され
たウリジンで２５％（５ｍＣ／ｓ２Ｕ）修飾された、ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ
配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示
されない；５’キャップ、キャップ１）を、表１５８に記載されるようにカチオン性脂質
中で製剤化した。その製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下
に（Ｓ．Ｃ．）、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。
表１５８． カチオン性脂質製剤
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、および２４時間後に撮像し、平均全
光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質製剤について測定した。背景光束は
、約３．３１Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１５９に示す。表１５９において
、「ＮＴ」は、試験されなかったことを示す。未処理マウスは、２時間時点で３．１４Ｅ
＋０５、８時間時点で３．３３Ｅ＋０５、および２４時間時点で３．４６Ｅ＋０５の平均
光束を示した。ピーク発現は、８時間時点で試験された３つの経路すべてにおいて見られ
た。ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡは、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡよりも優れた発現を有し、
ＤＯＤＭＡは評価された経路すべてにおいて発現を示した。
表１５９． 光束
実施例１０２． ５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジン修飾ｍＲ
ＮＡの製剤
５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾された、ルシ
フェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）をＰＢＳ（７．４
のｐＨ）中で製剤化した。その製剤を筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）または皮下に（Ｓ．Ｃ．）、
２．５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の５分、３０分、６０分、および１２０分後に撮像し、
平均全光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質製剤について測定した。背景
光束は、約３．７８Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１６０に示す。ルシフェラ
ーゼの発現は、送達の両経路において３０分時点で既に見られた。皮下投与からのピーク
発現は、３０分から６０分の間に出現する。筋肉内発現は、１２０分時点でも依然として
増加していた。
表１６０． 光束
実施例１０３． 化学修飾ｍＲＮＡの筋肉内および皮下投与
Ｎ４−アセチルシチジンで完全に修飾されたか、５−メトキシウリジンで完全に修飾さ
れたか、Ｎ４−アセチルシチジンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾さ
れたか、または５−メチルシトシンおよび５−メトキシウリジンで完全に修飾された、Ｐ
ＢＳ（ｐＨ７．４）中で製剤化されたルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列
番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；
５’キャップ、キャップ１）を、筋肉内または皮下に２．５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ
−Ｃマウスに投与した。撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ
／ｋｇで腹腔内注入した。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮
像システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウ
スの全光束（光子／秒）として測定した。マウスを２時間、８時間、および２４時間時点
で撮像した。筋肉内投与に対する平均全光束（光子／秒）を表１６１に示し、皮下投与に
対する平均全光束（光子／秒）を表１６２に示す。バックグラウンドシグナルは、３．８
４Ｅ＋０５（ｐ／ｓ）であった。筋肉内投与に対するピーク発現は、すべての化学組成に
おいて２４時間から４８時間の間に見られ、発現は１２０時間時点でも依然として検出さ
れた。皮下送達の場合、ピーク発現は２時間から８時間の間に見られ、発現は７２時間時
点でも検出された。
表１６１． 筋肉内投与
表１６２． 皮下投与
実施例１０４． インビボ研究
少なくとも１つの化学修飾を含むルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡをシリンジポンプ法を用
いて脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化し、粒径、ゼータ電位、およびカプセル封入に
よって特徴付ける。
表１６３に概要説明されるように、ルシフェラーゼＬＮＰ製剤を筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）
、静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、および皮下に（Ｓ．Ｃ．）、Ｂａｌｂ−Ｃマウスに投与する。
対照として、ＰＢＳ中で製剤化されるルシフェラーゼ修飾ＲＮＡを静脈内にマウスに投与
する。
表１６３． ルシフェラーゼ製剤
マウスを２、８、２４、４８、１２０、および１９２時間時点で撮像し、（全マウスの
全光束（光子／秒）として測定される）生物発光を判定する。８時間または１９２時間時
点で、肝臓、脾臓、腎臓、ならびに皮下および筋肉内投与の注入部位を撮像し、生物発光
を判定する。
実施例１０５． 化学修飾ｍＲＮＡのカチオン性脂質製剤研究
５−メチルシトシンおよびシュードウリジン（５ｍＣ／ｐＵ）、シュードウリジン（ｐ
Ｕ）、またはＮ１−メチル−シュードウリジン（Ｎ１ｍｐＵ）で完全に修飾された、ルシ
フェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を表１６４に記載
されるようにカチオン性脂質中で製剤化した。その製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内
に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下に（Ｓ．Ｃ．）、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃ
マウスに投与した。
表１６４． カチオン性脂質製剤
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、および２４時間後に撮像し、平均全
光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質製剤について測定した。背景光束は
、約４．１１Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１６５に示す。ピーク発現は、８
時間時点で試験された３つの経路すべてにおいて見られた。
表１６５． 光束
実施例１０６． 化学修飾ｍＲＮＡの研究
Ｎ４−アセチルシチジン（Ｎ４−アセチル）で完全に修飾されたか、５−メトキシウリ
ジン（５ｍｅｔｈ）で完全に修飾されたか、Ｎ４−アセチルシチジンおよびＮ１−メチル
−シュードウリジン（Ｎ４−アセチル／Ｎ１ｍｐＵ）で完全に修飾されたか、または５−
メチルシトシンおよび５−メトキシウリジン（５ｍＣ／５−ｍｅｔｈ）で完全に修飾され
た、ルシフェラーゼｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、表１
６６に記載されるようにＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ中で製剤化した。
製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下に（Ｓ．Ｃ．）０．
０５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。
表１６６． カチオン性脂質製剤
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、６時間、および２４時間後に撮像し、平均全
光束（光子／秒）を各投与経路およびカチオン性脂質製剤について測定した。背景光束は
、約２．７０Ｅ＋０５ｐ／ｓであった。撮像の結果を表１６７に示す。
表１６７． 光束
実施例１０７． 複数の修飾ｍＲＮＡを含有する脂質ナノ粒子
ＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１４０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシ
ンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾された）と、Ｇ−ＣＳＦ ｍＲＮ
Ａ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部
は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびＮ１−メ
チル−シュードウリジンで完全に修飾された）と、第ＩＸ因子ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は
配列番号３３９０１に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されな
い；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジ
ンで完全に修飾された）と、を表１６８に記載されるようにＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ中
で製剤化する。製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下に（Ｓ
．Ｃ．）０．０５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与する。１つのｍＲＮＡの
みを含有する対照ＬＮＰ製剤も等価用量で投与する。
表１６８． ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ製剤
血清を、製剤を投与した８時間、２４時間、７２時間、および／または７日後にマウス
から採取する。血清をＥＬＩＳＡによって分析し、ＥＰＯ、Ｇ−ＣＳＦ、および第ＩＸ因
子のタンパク質発現を判定する。
実施例１０８． ５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジン修飾ｍＲ
ＮＡのカチオン性脂質製剤研究
ＥＰＯ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１４０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシ
ンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾された）またはＧ−ＣＳＦ ｍＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３８９７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾
部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびＮ１−
メチルシュードウリジンで完全に修飾された）を、表１６９に記載されるようにＤＬｉｎ
−ＭＣ３−ＤＭＡおよびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ中で製剤化する。製剤を静脈内に（Ｉ
．Ｖ）、筋肉内に（Ｉ．Ｍ．）、または皮下に（Ｓ．Ｃ．）０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で
Ｂａｌｂ−Ｃマウスに投与する。
表１６９． ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡおよびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ製剤
血清を、製剤を投与した８時間、２４時間、７２時間、および／または７日後にマウス
から採取する。血清をＥＬＩＳＡによって分析し、ＥＰＯおよびＧ−ＣＳＦのタンパク質
発現を判定する。
実施例１０９． インビトロＶＥＧＦ ＰＢＭＣ研究
５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾されたか（ＶＥＧＦ ５ｍＣ
／ｐＵ）、５−メチルシトシンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンで完全に修飾され
たか（ＶＥＧＦ ５ｍＣ／Ｎ１ｍｐＵ）、または未修飾の（ＶＥＧＦ ｕｎｍｏｄ）、５
００ｎｇのＶＥＧＦ ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１０に示される約１６０
ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、Ｌｉ
ｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて正常な血液ドナー（Ｄ１、Ｄ２、およびＤ３
）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）にトランスフェクトした。細胞はまた、対照として
各ドナーに対して処理されなかった。上清を、トランスフェクションの２２時間後に収集
してＥＬＩＳＡを行い、タンパク質発現およびサイトカイン誘導を判定した。ＶＥＧＦの
発現およびＩＦＮ−α誘導を表１７０に示す。
表１７０． タンパク質およびサイトカインレベル
実施例１１０． 修飾ｍＲＮＡのインビトロ発現
ＨＥＫ２９３細胞に、ＶＥＧＦ−Ａ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１０
に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、
キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）またはＥ
ＰＯ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９００に示される；約１６０ヌクレオチ
ドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシン
およびシュードウリジンで完全に修飾された）をトランスフェクトし、ＨｅＬａ細胞に、
トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号
３３９１１に示される；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’
キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された
）を順方向トランスフェクトし、ならびにＨｅｐＧ２細胞に、殺菌性／透過性増強タンパ
ク質（ｒＢＰＩ−２１）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１２に示される；
約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；
５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）をトランスフェクトし
、それらは、本明細書に記載の手順を使用して、表１７１、１７２、および１７３に示さ
れる濃度で、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍ
ｉｎｅ２０００を用いて複合体形成していた。タンパク質発現をＥＬＩＳＡによって検出
し、そのタンパク質（ｐｇ／ｍＬ）も表１７１、１７２、および１７３に示す。表１７１
において、「＞」は、それよりも大きいことを意味する。ＴＧＦβの場合、対照の未処理
細胞およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の偽のトランスフェクションも試験した
。
表１７１． ＥＰＯタンパク質発現
表１７２． ＴＧＦβタンパク質発現
表１７３． ｒＢＰＩ−２１タンパク質発現
実施例１１１． バイシストロン性修飾ｍＲＮＡ
ヒト胎児腎臓上皮（ＨＥＫ２９３）を９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−
ｏｎｅ ＧｍｂＨ，Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種した、ＨＥＫ
２９３を１００μｌの細胞培養培地（２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナト
リウム、および１倍非必須アミノ酸（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）、ならびに１．２ｍｇ／ｍＬの重炭酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ
，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加したＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ）中に３０，００
０の密度で播種した、７５ｎｇのバイシストロン性修飾ｍＲＮＡ（ｍＣｈｅｒｒｙ−２Ａ
−ＧＦＰ）（配列番号３３９１３；約１６０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示され
ない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシンおよびシュードウリジンで完全に
修飾された）、ｍＣｈｅｒｒｙ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列番号３３８９８；約１６０ヌ
クレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチル
シトシンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）、または緑色蛍光タンパク質（Ｇ
ＦＰ）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０９に示される；約１６０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１；５−メチルシトシ
ンおよびシュードウリジンで完全に修飾された）を細胞を播種した後に添加し、インキュ
ベートした。対照の未処理細胞も評価した。ｍＣｈｅｒｒｙ−２Ａ−ＧＦＰは、ｍＣｈｅ
ｒｒｙのコード領域、２Ａペプチド、およびＧＦＰのコード領域を含む修飾ｍＲＮＡ配列
を指す。
培養培地上清を、９６ウェルＰｒｏ−Ｂｉｎｄ Ｕ底プレート（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉ
ｃｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に移すことによっ
て収集した。細胞を、半量のトリプシン／ＥＤＴＡ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌ
ｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でトリプシン化し、それぞれの上清とともにプールし、１回量の
ＰＢＳ／２％ＦＣＳ（いずれもＢｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ
）／０．５％ホルムアルデヒド（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を
添加することによって固定した。次いで、試料を、ＬＳＲＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｋ
ｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＧｍｂＨ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にお
いて、５３２ｎｍの励起レーザーおよびＰＥ−Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ用の６１０／２０フィ
ルターを用いてフローサイトメーター測定にかけた。全事象の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を
表１７４に示す。バイシストロン性修飾ｍＲＮＡをトランスフェクトした細胞は、ｍＣｈ
ｅｒｒｙおよびＧＦＰの両方を発現することが可能であった。
表１７４． 修飾ｍＲＮＡのＭＦＩ
実施例１１２． 抗体を産生するための５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュー
ドウリジン修飾ｍＲＮＡのカチオン性脂質製剤研究
ハーセプチン重鎖（ＨＣ）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１４に示され
る；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ
１；５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された）なら
びにハーセプチン軽鎖（ＬＣ）修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９１５に示さ
れる；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャッ
プ１；５−メチルシトシンおよびＮ１−メチルシュードウリジンで完全に修飾された）を
、表１７５に記載されるようにＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡおよびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭ
Ａ中で製剤化する。製剤を静脈内に（Ｉ．Ｖ）０．５００、０．０５０、および０．００
５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与する。
表１７５． ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡおよびＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ製剤
血清を、製剤を投与した８時間、２４時間、７２時間、および／または７日間後にマウ
スから採取した。血清をＥＬＩＳＡによって分析し、ハーセプチンのタンパク質発現を判
定した。
実施例１１３． シュードウリジンおよびＮ１−メチルシュードウリジンの対象のＳＡ
Ｒ
ピリミジンヌクレオシドシュードウリジンへの最近の注目に伴い、一連の構造活性研究
は、シュードウリジンまたはＮ１−メチル−シュードウリジン（ｐｓｅｕｄｏｕｒｄｉｎ
ｅ）への修飾を含むｍＲＮＡを研究するように設計された。
本研究は、Ｎ１位、Ｃ６位、２−位、４−位において、およびリン酸骨格上で修飾が行
われる場合の、鎖長の効果、増加した親油性、環構造の存在、および疎水性または親水性
相互作用の変化を調査するために設計された。安定性も研究する。
この目的のため、アルキル化、シクロアルキル化、アルキル−シクロアルキル化、アリ
ール化、アルキル−アリール化、アミノ基を有するアルキル化部分、カルボン酸基を有す
るアルキル化部分、ならびにアミノ酸荷電部分を含むアルキル化部分、を含む修飾を研究
する。アルキル化の程度は、概して、Ｃ１〜Ｃ６である。化学修飾の例には、表１７６お
よび表１７７に示されるものが挙げられる。
表１７６． シュードウリジンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンＳＡＲ
表１７７． シュードウリジンおよびＮ１−メチル−シュードウリジンＳＡＲ
実施例１１４． 天然および非天然ヌクレオシドの組み込み
天然および非天然ヌクレオシドを、目的とするポリペプチドをコードするｍＲＮＡ内に
組み込む。これらの例を表１７８および１７９に示す。ある特定の市販のヌクレオシドト
リホスフェート（ＮＴＰ）を本発明のポリヌクレオチド中で研究する。これらの選択肢を
表１７９に示す。次いで、結果として得られるｍＲＮＡを、タンパク質を産生する、サイ
トカインを誘導する、および／または治療的成果を生じるその能力について検査する。
表１７８． 天然および非天然ヌクレオシド
表１７９． 非天然ヌクレオシドトリホスフェート
実施例１１５． 核酸塩基および炭水化物（糖）に対する修飾の組み込み
天然および非天然ヌクレオシドを、目的とするポリペプチドをコードするｍＲＮＡ内に
組み込む。核酸塩基および炭水化物（糖）の両方に対する修飾を有する市販のヌクレオシ
ドおよびＮＴＰを、ｍＲＮＡ内に組み込まれ、タンパク質を産生し、サイトカインを誘導
し、かつ／または治療的成果を生み出すその能力について検査する。これらのヌクレオシ
ドの例を表１８０および表１８１に示す。
表１８０． 組み合わせ修飾
表１８１． 天然に生じる組み合わせ
これらの表において、「ＵＴＰ」はウリジントリホスフェートの略であり、「ＧＴＰ」
はグアノシントリホスフェートの略であり、「ＡＴＰ」はアデノシントリホスフェートの
略であり、「ＣＴＰ」はシトシントリホスフェートの略であり、「ＴＰ」はトリホスフェ
ートの略であり、「Ｂｚ」はベンジルの略である。
実施例１１６． 用量応答および注入部位の選択およびタイミング
用量応答傾向、注入部位の影響、および注入のタイミングの影響を判定するために、実
施例３５に概説したプロトコルに従って、研究を行う。これらの研究において、１μｇ、
５μｇ、１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、およびこれら間の値である様々な用量を用いて
、用量応答結果を判定する。１００μｇの総用量の分割投薬には、１．６μｇ、４．２μ
ｇ、８．３μｇ、１６．６μｇ、または選択された総用量の投与に等しい値および総用量
の３または６回用量が含まれる。
注入部位は、四肢または注入に好適な十分な面積を呈する任意の体表面から選択される
。これはまた、真皮（皮内）、上皮（表皮）、皮下組織（ＳＣ）、または筋肉（ＩＭ）を
標的とするための注入深度の選択も含み得る。注入角度は、標的とされる送達部位に基づ
いて多様であり、皮内部位を標的とする注入は皮膚表面の面から１０〜１５度の角度であ
り、皮下注入については皮膚表面の面から２０〜４５度であり、実質的に筋肉内への注入
については６０〜９０度の角度である。
実施例１１７． カチオン性脂質ナノ粒子中で製剤化された１−メチルシュードウリジ
ンまたは５−メチルシトシンおよび１−メチルシュードウリジン修飾ルシフェラーゼｍＲ
ＮＡの鼻腔内投与による肺送達
１−メチルシュードウリジンで完全に修飾されたか（Ｌｕｃ−Ｇ５−ＬＮＰ−ＫＣ２）
、または１−メチルシュードウリジンおよび５−メチルシトシンで完全に修飾された（Ｌ
ｕｃ−Ｇ２−ＬＮＰ−ＫＣ２）、ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号
３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’
キャップ、キャップ１）を、カチオン性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ−ＫＣ２）中で製剤化した
。製剤を鼻腔内に（Ｉ．Ｎ．）０．３ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した
。撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、４８、および７２時間後に撮像し、
平均全光束（光子／秒）を測定した。背景光束は、約６．３＋０５ｐ／ｓであった。Ｌｕ
ｃ−Ｇ５−ＬＮＰ−ＫＣ２またはＬｕｃ−Ｇ５−ＬＮＰ−ＫＣ２対ビヒクルの撮像の結果
を表１８２に示し、「ＮＴ」は、試験されなかったことを意味する。
表１８２． 鼻腔内投薬後のルシフェラーゼ発現
実施例１１８． Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００中でリポプレックス形成した
１−メチルシュードウリジンまたは５−メチルシトシンおよび１−メチルシュードウリジ
ン修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡの鼻腔内投与による肺送達
１−メチルシュードウリジンで完全に修飾されたか（Ｌｕｃ−Ｇ５−リポプレックス）
、または１−メチルシュードウリジンおよび５−メチルシトシンで完全に修飾された（Ｌ
ｕｃ−Ｇ２−リポプレックス）、ルシフェラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号
３３９０７に示される；約１４０ヌクレオチドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’
キャップ、キャップ１）を、第１のステップが、Ｇ５またはＧ２修飾ルシフェラーゼｍＲ
ＮＡを３ｍｇ／ｍＬから１６．６μＬに１０８．５μＬのＤＭＥＭ中への希釈することで
あり、第２のステップが、１００μＬのＬＦ２０００を２５μＬのＤＭＥＭ中に希釈し、
次いで両方を共に静かに混合して、合計２５０μＬのミキサーを作製することであった、
２ステップにおいてリポプレックス形成し、それは注入の前に脂質−ｍＲＮＡ複合体を形
成するように室温で５〜１０分インキュベートされた。１−メチルシュードウリジンまた
は１−メチルシュードウリジンおよび５−メチルシトシンで完全に修飾された両方のルシ
フェラーゼｍＲＮＡからのリポプレックスを、鼻腔内に（Ｉ．Ｎ．）０．５ｍｇ／ｋｇの
用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、および２４時間後に撮像し、平均全
光束（光子／秒）を測定した。バックグラウンドシグナルは、約４．８＋０５ｐ／ｓであ
った。背景光束は、約６．３＋０５ｐ／ｓであった。Ｌｕｃ−Ｇ５−リポプレックスまた
はＬｕｃ−Ｇ２−リポプレックス対ビヒクルの撮像の結果を表１８３に示す。
表１８３． 鼻腔内投薬後のルシフェラーゼ発現
実施例１１９． ＰＢＳ中で製剤化された１−メチルシュードウリジンまたは５−メチ
ルシトシンおよび１−メチルシュードウリジン修飾ルシフェラーゼｍＲＮＡの鼻腔内投与
による肺送達
ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で製剤化された、１−メチルシュードウリジンで完全に修飾さ
れたか（Ｌｕｃ−Ｇ５−緩衝液（ＰＢＳ））、または１−メチルシュードウリジンおよび
５−メチルシトシンで完全に修飾された（Ｌｕｃ−Ｇ２−緩衝液（ＰＢＳ））、ルシフェ
ラーゼ修飾ｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ配列は配列番号３３９０７に示される；約１４０ヌクレオ
チドのポリＡ尾部は配列内に示されない；５’キャップ、キャップ１）を、鼻腔内に（Ｉ
．Ｎ．）７．５ｍｇ／ｋｇの用量でＢａｌｂ−Ｃマウスに投与した。
撮像の２０分前に、マウスにＤ−ルシフェリン溶液を１５０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注入し
た。次いで、動物に麻酔をかけ、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ撮像システム（Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて画像を取得した。生物発光を、全マウスの全光束（光子／秒
）として測定した。マウスを投薬の２時間、８時間、および２４時間後に撮像し、平均全
光束（光子／秒）を測定した。背景光束は、約４．８＋０５ｐ／ｓであった。背景光束は
、約６．３＋０５ｐ／ｓであった。緩衝液中のＬｕｃ−Ｇ５対ビヒクルの撮像の結果を表
１８４に示す。
表１８４． 鼻腔内投薬後のルシフェラーゼ発現
使用した単語は、限定ではなく説明のための単語であり、その広範な態様において本発
明の真の範囲と精神から逸脱することなく、添付の特許請求の範囲内で変更が行われ得る
ことが理解される。
本発明は、いくつかの記載の実施形態に関してある程度詳しく具体的に記載されたが、
これが任意のそのような詳細もしくは実施形態、または任意の特定の実施形態に限定され
るべきであるようには意図されず、先行技術を考慮してそのような特許請求の範囲の可能
な限り広範な解釈を提供し、それにより本発明の意図される範囲を効果的に包含するよう
に、添付の特許請求の範囲を参照して解釈されるべきである。
本明細書に言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照
によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。矛盾が生じる場合、定義を含む本明細書
が優先されるものとする。加えて、節の見出し、材料、方法、および実施例は、例示に過
ぎず、限定するようには意図されない。

Claims (45)

  1. 目的の腫瘍学関連ポリペプチドのレベルを高めることにより、疾患、障害、および／ま
    たは状態の治療を必要とする対象の前記疾患、障害、および／または状態を治療する方法
    であって、前記腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを前記対象に
    投与することを含む方法。
  2. 目的の腫瘍学関連ポリペプチドのレベルを高めることにより、少なくとも１つの癌症状
    の軽減および／または寛解を必要とする対象の前記少なくとも１つの癌症状を軽減および
    ／または寛解させる方法であって、前記腫瘍学関連ポリペプチドをコードする単離ポリヌ
    クレオチドを前記対象に投与することを含む方法。
  3. 前記少なくとも１つの癌症状は腫瘍の増殖である、請求項２に記載の方法。
  4. 前記疾患、障害、および／または状態は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧
    血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッ
    スルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、胆
    嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、ホジキン病、カポジ肉腫
    、腎細胞癌、喉頭癌と下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性
    白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、
    肺カルチノイド腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻
    腔癌と副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔癌と中咽頭癌、骨
    肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液
    腺癌、成人軟部組織肉腫、基底細胞癌と扁平上皮癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、睾丸癌
    、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクロ
    グロブリン血症、ウィルムス腫瘍、および癌治療に起因する二次癌からなる群から選択さ
    れる、請求項１に記載の方法。
  5. 前記腫瘍の増殖は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、
    骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌
    、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノ
    イド、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭癌と
    下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白
    血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、
    皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔癌と副鼻腔癌、鼻咽
    頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔癌と中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、
    陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織肉
    腫、基底細胞癌と扁平上皮癌、メラノーマ、小腸癌、胃癌、睾丸癌、咽頭癌、胸腺癌、甲
    状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ウィ
    ルムス腫瘍、および癌治療に起因する二次癌からなる群から選択される疾患、障害、およ
    び／または状態に起因する、請求項３に記載の方法。
  6. 前記単離ポリヌクレオチドの投与は、対象の癌細胞を減少させ、癌細胞を排除し、癌細
    胞の増加を予防し、および／または癌の症状を緩和する、請求項１または２のいずれかに
    記載の方法。
  7. 前記少なくとも１つの癌症状は、衰弱、うずきと痛み、発熱、疲労、体重減少、血餅、
    血中カルシウム濃度の上昇、白血球数の低下、息切れ、眩暈、頭痛、色素沈着過剰、黄疸
    、紅斑、掻痒症、多毛症、排便習慣の変化、膀胱機能の変化、長続きするただれ、口腔内
    の白斑、舌の白点、異常な出血または排出、身体部位の肥厚またはしこり、消化不良、嚥
    下困難、いぼまたはほくろの変化、新しい皮膚の変化およびしつこい咳、または嗄声から
    なる群から選択される、請求項２に記載の方法。
  8. 前記単離ポリヌクレオチドは製剤化される、請求項１または２に記載の方法。
  9. 前記製剤は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、
    ９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥ
    Ｇ−ＤＭＧ、ペグ化脂質、およびそれらの混合物のうちの１つから選択される脂質を含む
    、請求項８に記載の方法。
  10. 前記単離ポリヌクレオチドは、１日合計０．００１ｕｇないし１５０ｕｇの用量で投与
    される、請求項９に記載の方法。
  11. 注射、局所投与、眼投与および鼻腔内投与によって投与が行われる、請求項１０に記載
    の方法。
  12. 注射によって投与が行われ、前記注射は、皮内、皮下、および筋肉内からなる群から選
    択される、請求項１１に記載の方法。
  13. 投与が局所投与であり、前記局所投与は、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、スプレ
    ー、溶液等からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記局所投与は浸透促進剤をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記浸透促進剤は、界面活性物質、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、非キレート性非
    界面活性剤、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−
    セチルエーテル、胆汁酸および／または塩類を含有する脂肪酸および／または塩類、ラウ
    リン酸、カプリン酸およびＵＤＣＡを含有するナトリウム塩等からなる群から選択される
    、請求項１４に記載の方法。
  16. （ａ）結合ヌクレオシドの第１の領域であって、前記第１の領域は、配列番号４７０４
    〜９２０３からなる群から選択される目的の腫瘍学関連ポリペプチドをコードする、結合
    ヌクレオシドの第１の領域と、
    （ｂ）前記第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域であって、
    （ｉ）配列番号４７０４〜９２０３、配列番号１〜４、およびそれらの機能的変異形
    のうちのいずれかをコードする核酸のうちのいずれかの天然５’非翻訳領域（ＵＴＲ）か
    らなる群から選択される結合ヌクレオシドの配列を含む、第１の隣接領域と、
    （ｃ）前記第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域であって、
    （ｉ’）配列番号４７０４〜９２０３、配列番号５〜２１、およびそれらの機能的変
    異形のうちのいずれかをコードする核酸のうちのいずれかの天然３’ＵＴＲからなる群か
    ら選択される結合ヌクレオシドの配列と、
    （ｉｉ’）結合ヌクレオシドの３’尾部配列とを含む、第２の隣接領域と
    を含む単離ポリヌクレオチド。
  17. 前記結合ヌクレオシドの前記第１の領域は、核酸配列の少なくとも１つのオープンリー
    ディングフレームを含み、前記核酸配列は、配列番号４６６７〜４７０３および９２０４
    〜３３８８２からなる群から選択される、請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチド。
  18. 前記第１の領域は２つの停止コドンをさらに含む、請求項１６に記載の単離ポリヌクレ
    オチド。
  19. 前記第１の領域は、第１の停止コドン「ＴＧＡ」と、「ＴＡＡ」、「ＴＧＡ」および「
    ＴＡＧ」からなる群から選択される第２の停止コドンとをさらに含む、請求項１６に記載
    の単離ポリヌクレオチド。
  20. 前記結合ヌクレオシドの３’尾部配列は、約１６０個のヌクレオチドのポリＡ尾部と、
    ポリＡ〜Ｇ四重項とからなる群から選択される、請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチ
    ド。
  21. 第１の隣接領域は少なくとも１つの５’末端キャップをさらに含む、請求項１６に記載
    の単離ポリヌクレオチド。
  22. 前記少なくとも１つの５’末端キャップは、キャップ０、キャップ１、ＡＲＣＡ、イノ
    シン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン
    、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−
    アジド−グアノシンからなる群から選択される、請求項２１に記載の単離ポリヌクレオチ
    ド。
  23. 前記単離ポリヌクレオチドは実質的に精製される、請求項１６〜２２のいずれか一項に
    記載の単離ポリヌクレオチド。
  24. 前記ヌクレオチドは、少なくとも２つの修飾と、翻訳可能な領域とを含む、請求項１６
    〜２２のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチド。
  25. 前記修飾は、１つ以上のヌクレオシドおよび／または前記ヌクレオチドの骨格上に位置
    する、請求項２４に記載の単離ポリヌクレオチド。
  26. 前記修飾は、ヌクレオシドおよび骨格結合の両方の上に位置する、請求項２５に記載の
    単離ポリヌクレオチド。
  27. 前記修飾は骨格結合上に位置する、請求項２５に記載の単離ポリヌクレオチド。
  28. 前記骨格結合は、１つ以上の酸素原子の置換により修飾される、請求項２７に記載の単
    離ポリヌクレオチド。
  29. 前記修飾は、少なくとも１つのホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合に置換
    することを含む、請求項２７に記載の単離ポリヌクレオチド。
  30. 前記修飾はヌクレオシド上に位置する、請求項２５に記載の単離ポリヌクレオチド。
  31. 前記修飾は前記ヌクレオシドの糖に存在する、請求項２７に記載の単離ポリヌクレオチ
    ド。
  32. 前記修飾は、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−
    ５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュ
    ードウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−
    ウリジン、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−
    プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−シ
    ュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、１−タウリノメチル−４−チ
    オ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチルシュードウリジン、４−チオ−１−メ
    チルシュードウリジン、２−チオ−１−メチルシュードウリジン、１−メチル−１−デア
    ザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒド
    ロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒ
    ドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４
    −メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、５−アザ
    −シチジン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、
    ５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メ
    チル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−
    チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、
    ４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シ
    ュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５
    −アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−
    チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４
    −メトキシ−シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン
    、２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８
    −アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ
    プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミ
    ノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデ
    ノシン、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ
    ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイル
    アデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオ
    ニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、
    ２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、イノシン、１−メチル−イノシン
    、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノ
    シン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デア
    ザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシ
    ン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メ
    チルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチ
    ル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−
    チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンからなる群から
    選択される、請求項３０に記載の単離ポリヌクレオチド。
  33. 前記修飾は核酸塩基上に位置する、請求項２５に記載の単離ポリヌクレオチド。
  34. 前記核酸塩基上の前記修飾は、シトシン、グアニン、アデニン、チミンおよびウラシル
    からなる群から選択される、請求項３３に記載の単離ポリヌクレオチド。
  35. 前記単離ポリヌクレオチドは製剤化される、請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチド
    。
  36. 前記製剤は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、
    ９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥ
    Ｇ−ＤＭＧ、ペグ化脂質、およびそれらの混合物のうちの１つから選択される脂質を含む
    、請求項３５に記載の単離ポリヌクレオチド。
  37. 前記単離ポリヌクレオチドは、１日合計０．００１ｕｇないし１５０ｕｇの用量で投与
    される、請求項３６に記載の単離ポリヌクレオチド。
  38. 注射、局所投与、眼投与および鼻腔内投与によって投与が行われる、請求項３７に記載
    の単離ポリヌクレオチド。
  39. 注射によって投与が行われ、前記注射は、皮内、皮下、および筋肉内からなる群から選
    択される、請求項３８に記載の単離ポリヌクレオチド。
  40. 投与が局所投与であり、前記局所投与は、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、スプレ
    ー、溶液等からなる群から選択される、請求項３９に記載の単離ポリヌクレオチド。
  41. 前記局所投与は浸透促進剤をさらに含む、請求項４０に記載の単離ポリヌクレオチド。
  42. 前記浸透促進剤は、界面活性物質、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、非キレート性非
    界面活性剤、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−
    セチルエーテル、胆汁酸および／または塩類を含有する脂肪酸および／または塩類、ラウ
    リン酸、カプリン酸およびＵＤＣＡを含有するナトリウム塩等からなる群から選択される
    、請求項４１に記載の単離ポリヌクレオチド。
  43. 薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチド。
  44. 前記薬学的に許容される賦形剤は、溶媒、水性溶媒、非水溶媒、分散媒、希釈剤、分散
    剤、懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤、脂質、リピドイドリ
    ポソーム、脂質ナノ粒子、コアシェルナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、ペプチド、
    タンパク質、細胞、ヒアルロニダーゼ、およびこれらの混合物からなる群から選択される
    、請求項４３に記載の単離ポリヌクレオチド。
  45. 腫瘍学関連組成物は脂質をさらに含み、前記脂質は、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ
    −ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−Ｍ
    Ｃ３−ＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ペグ化脂質、およびそれらの混合物
    からなる群から選択される、請求項４４に記載の単離ポリヌクレオチド。
JP2020088048A 2012-04-02 2020-05-20 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド Withdrawn JP2020158508A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2022085185A JP2022122923A (ja) 2012-04-02 2022-05-25 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド

Applications Claiming Priority (102)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261618953P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618935P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618885P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618922P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618957P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618868P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618873P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618961P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618870P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618896P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618945P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618866P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618878P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618862P 2012-04-02 2012-04-02
US201261618911P 2012-04-02 2012-04-02
US61/618,870 2012-04-02
US61/618,953 2012-04-02
US61/618,922 2012-04-02
US61/618,885 2012-04-02
US61/618,862 2012-04-02
US61/618,878 2012-04-02
US61/618,911 2012-04-02
US61/618,961 2012-04-02
US61/618,957 2012-04-02
US61/618,945 2012-04-02
US61/618,896 2012-04-02
US61/618,868 2012-04-02
US61/618,873 2012-04-02
US61/618,866 2012-04-02
US61/618,935 2012-04-02
US201261648244P 2012-05-17 2012-05-17
US201261648286P 2012-05-17 2012-05-17
US61/648,244 2012-05-17
US61/648,286 2012-05-17
US201261668157P 2012-07-05 2012-07-05
US61/668,157 2012-07-05
US201261681647P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681648P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681720P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681658P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681687P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681712P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681661P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681650P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681742P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681654P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681667P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681696P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681675P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681704P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681645P 2012-08-10 2012-08-10
US201261681649P 2012-08-10 2012-08-10
US61/681,658 2012-08-10
US61/681,647 2012-08-10
US61/681,687 2012-08-10
US61/681,667 2012-08-10
US61/681,704 2012-08-10
US61/681,720 2012-08-10
US61/681,645 2012-08-10
US61/681,712 2012-08-10
US61/681,654 2012-08-10
US61/681,649 2012-08-10
US61/681,648 2012-08-10
US61/681,696 2012-08-10
US61/681,650 2012-08-10
US61/681,661 2012-08-10
US61/681,675 2012-08-10
US61/681,742 2012-08-10
US201261696381P 2012-09-04 2012-09-04
US61/696,381 2012-09-04
US201261709303P 2012-10-03 2012-10-03
US61/709,303 2012-10-03
US201261712490P 2012-10-11 2012-10-11
US61/712,490 2012-10-11
US201261737191P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737139P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737135P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737152P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737213P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737160P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737203P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737147P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737168P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737130P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737134P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737155P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737174P 2012-12-14 2012-12-14
US201261737184P 2012-12-14 2012-12-14
US61/737,191 2012-12-14
US61/737,184 2012-12-14
US61/737,174 2012-12-14
US61/737,152 2012-12-14
US61/737,168 2012-12-14
US61/737,213 2012-12-14
US61/737,134 2012-12-14
US61/737,139 2012-12-14
US61/737,155 2012-12-14
US61/737,130 2012-12-14
US61/737,147 2012-12-14
US61/737,160 2012-12-14
US61/737,203 2012-12-14
US61/737,135 2012-12-14

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017093750A Division JP2017197545A (ja) 2012-04-02 2017-05-10 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022085185A Division JP2022122923A (ja) 2012-04-02 2022-05-25 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2020158508A true JP2020158508A (ja) 2020-10-01

Family

ID=49235350

Family Applications (33)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015504564A Pending JP2015516143A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504563A Pending JP2015513912A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504570A Pending JP2015517995A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 美容タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504571A Pending JP2015518816A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504562A Pending JP2015518704A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 膜タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504567A Pending JP2015513914A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504568A Active JP6189415B2 (ja) 2012-04-02 2013-03-09 細胞質および細胞骨格タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504569A Active JP6424156B2 (ja) 2012-04-02 2013-03-09 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504566A Pending JP2015513913A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 修飾ポリヌクレオチド
JP2015504587A Active JP6348482B2 (ja) 2012-04-02 2013-03-15 タンパク質のインビボ産生
JP2017012947A Active JP6953135B6 (ja) 2012-04-02 2017-01-27 タンパク質のインビボ産生
JP2017012971A Pending JP2017121240A (ja) 2012-04-02 2017-01-27 膜タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017016747A Active JP6449356B2 (ja) 2012-04-02 2017-02-01 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017017429A Active JP6553104B2 (ja) 2012-04-02 2017-02-02 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017018385A Active JP6426217B2 (ja) 2012-04-02 2017-02-03 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017023027A Withdrawn JP2017123853A (ja) 2012-04-02 2017-02-10 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017034565A Pending JP2017141230A (ja) 2012-04-02 2017-02-27 美容タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017093750A Withdrawn JP2017197545A (ja) 2012-04-02 2017-05-10 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017149905A Pending JP2018023373A (ja) 2012-04-02 2017-08-02 細胞質および細胞骨格タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2018199617A Pending JP2019033757A (ja) 2012-04-02 2018-10-24 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2018227745A Active JP6971953B6 (ja) 2012-04-02 2018-12-05 修飾ポリヌクレオチドを封入する脂質ナノ粒子を含む組成物
JP2019039425A Pending JP2019107022A (ja) 2012-04-02 2019-03-05 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2019145982A Active JP6946384B2 (ja) 2012-04-02 2019-08-08 脂質ナノ粒子を含む医薬組成物
JP2019225097A Withdrawn JP2020072670A (ja) 2012-04-02 2019-12-13 タンパク質のインビボ産生
JP2020088048A Withdrawn JP2020158508A (ja) 2012-04-02 2020-05-20 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2020204863A Pending JP2021045163A (ja) 2012-04-02 2020-12-10 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2021149858A Pending JP2022023036A (ja) 2012-04-02 2021-09-15 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2021179217A Pending JP2022036938A (ja) 2012-04-02 2021-11-02 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2022020499A Withdrawn JP2022078081A (ja) 2012-04-02 2022-02-14 タンパク質のインビボ産生
JP2022085185A Pending JP2022122923A (ja) 2012-04-02 2022-05-25 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2022191512A Pending JP2023021215A (ja) 2012-04-02 2022-11-30 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2023121563A Pending JP2023145599A (ja) 2012-04-02 2023-07-26 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2023169292A Pending JP2023175888A (ja) 2012-04-02 2023-09-29 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド

Family Applications Before (24)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015504564A Pending JP2015516143A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504563A Pending JP2015513912A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504570A Pending JP2015517995A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 美容タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504571A Pending JP2015518816A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504562A Pending JP2015518704A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 膜タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504567A Pending JP2015513914A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504568A Active JP6189415B2 (ja) 2012-04-02 2013-03-09 細胞質および細胞骨格タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504569A Active JP6424156B2 (ja) 2012-04-02 2013-03-09 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2015504566A Pending JP2015513913A (ja) 2012-04-02 2013-03-09 修飾ポリヌクレオチド
JP2015504587A Active JP6348482B2 (ja) 2012-04-02 2013-03-15 タンパク質のインビボ産生
JP2017012947A Active JP6953135B6 (ja) 2012-04-02 2017-01-27 タンパク質のインビボ産生
JP2017012971A Pending JP2017121240A (ja) 2012-04-02 2017-01-27 膜タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017016747A Active JP6449356B2 (ja) 2012-04-02 2017-02-01 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017017429A Active JP6553104B2 (ja) 2012-04-02 2017-02-02 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017018385A Active JP6426217B2 (ja) 2012-04-02 2017-02-03 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017023027A Withdrawn JP2017123853A (ja) 2012-04-02 2017-02-10 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017034565A Pending JP2017141230A (ja) 2012-04-02 2017-02-27 美容タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017093750A Withdrawn JP2017197545A (ja) 2012-04-02 2017-05-10 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2017149905A Pending JP2018023373A (ja) 2012-04-02 2017-08-02 細胞質および細胞骨格タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2018199617A Pending JP2019033757A (ja) 2012-04-02 2018-10-24 核タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2018227745A Active JP6971953B6 (ja) 2012-04-02 2018-12-05 修飾ポリヌクレオチドを封入する脂質ナノ粒子を含む組成物
JP2019039425A Pending JP2019107022A (ja) 2012-04-02 2019-03-05 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2019145982A Active JP6946384B2 (ja) 2012-04-02 2019-08-08 脂質ナノ粒子を含む医薬組成物
JP2019225097A Withdrawn JP2020072670A (ja) 2012-04-02 2019-12-13 タンパク質のインビボ産生

Family Applications After (8)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020204863A Pending JP2021045163A (ja) 2012-04-02 2020-12-10 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2021149858A Pending JP2022023036A (ja) 2012-04-02 2021-09-15 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2021179217A Pending JP2022036938A (ja) 2012-04-02 2021-11-02 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2022020499A Withdrawn JP2022078081A (ja) 2012-04-02 2022-02-14 タンパク質のインビボ産生
JP2022085185A Pending JP2022122923A (ja) 2012-04-02 2022-05-25 腫瘍学関連タンパク質およびペプチドの産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2022191512A Pending JP2023021215A (ja) 2012-04-02 2022-11-30 タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2023121563A Pending JP2023145599A (ja) 2012-04-02 2023-07-26 分泌タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
JP2023169292A Pending JP2023175888A (ja) 2012-04-02 2023-09-29 ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド

Country Status (9)

Country Link
US (38) US9192651B2 (ja)
EP (16) EP2834259A4 (ja)
JP (33) JP2015516143A (ja)
CN (2) CN104870022A (ja)
AU (22) AU2013243954A1 (ja)
CA (10) CA2868398A1 (ja)
DE (2) DE18203666T1 (ja)
HK (9) HK1206748A1 (ja)
WO (10) WO2013151667A1 (ja)

Families Citing this family (638)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9879266B2 (en) 2002-11-14 2018-01-30 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
DE10254601A1 (de) 2002-11-22 2004-06-03 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
DE102004024617A1 (de) 2004-05-18 2005-12-29 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
EP1790664A1 (en) 2005-11-24 2007-05-30 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer
US9308181B2 (en) 2006-03-06 2016-04-12 Nuvo Research Inc. Topical formulations, systems and methods
US9642912B2 (en) 2006-03-06 2017-05-09 Crescita Therapeutics Inc. Topical formulations for treating skin conditions
WO2009158035A2 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Acceleron Pharma Inc. Methods for dosing an activin-actriia antagonist and monitoring of treated patients
ES2713852T3 (es) 2009-12-01 2019-05-24 Translate Bio Inc Derivado de esteroides para la administración de ARNm en enfermedades genéticas humanas
BR112013000244A2 (pt) 2010-07-06 2016-05-17 Novartis Ag lipossomas com lipídeos apresentando pka vantajoso para administração de rna
SI2591114T1 (sl) 2010-07-06 2016-10-28 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Imunizacija velikih sesalcev z majhnimi odmerki RNA
LT3243526T (lt) 2010-07-06 2020-02-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Rnr pristatymas, skirtas keleto imuninio atsako paleidimui
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
SI3970742T1 (sl) 2010-08-31 2022-08-31 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Pegilirani liposomi za dostavo RNA, ki kodira imunogen
EP3536337A1 (en) 2010-09-22 2019-09-11 The Regents of the University of Colorado, a body corporate Therapeutic applications of smad7
DK3590949T3 (da) 2010-10-01 2022-07-11 Modernatx Inc Ribonukleinsyrer indeholdende n1-methyl-pseudouracil og anvendelse heraf
EP3520813B1 (en) 2010-10-11 2023-04-19 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Antigen delivery platforms
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
US9364414B2 (en) 2011-02-01 2016-06-14 Isp Investments Inc. Method to protect skin from ultraviolet radiation using novel peptides involved in the improvement of microparasol organization in keratinocytes
FR2970968A1 (fr) * 2011-02-01 2012-08-03 Isp Investments Inc Nouveaux peptides intervenant dans la voie de signalisation scf c-kit et compositions les comprenant
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
RS64230B1 (sr) 2011-05-24 2023-06-30 BioNTech SE Individualizovane vakcine protiv kancera
CA2838063C (en) 2011-06-08 2023-07-11 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cleavable lipids
KR20200084048A (ko) 2011-06-08 2020-07-09 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. Mrna 전달을 위한 지질 나노입자 조성물 및 방법
PL2717898T3 (pl) 2011-06-10 2019-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Związki o działaniu prokoagulacyjnym i sposoby ich stosowania
US9442092B2 (en) 2011-06-20 2016-09-13 Kerry Lane Methods for treatment of autism
EP4306165A3 (en) 2011-07-01 2024-04-17 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions, uses and methods for treatment of metabolic disorders and diseases
CA2840989A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic combination compositions and uses thereof
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
SG10201602654SA (en) 2011-10-03 2016-05-30 Moderna Therapeutics Inc Modified nucleosides,nucleotides,and nucleic acids,and uses thereof
WO2013053076A1 (en) 2011-10-10 2013-04-18 Zensun （Shanghai）Science & Technology Limited Compositions and methods for treating heart failure
WO2013075008A1 (en) 2011-11-16 2013-05-23 University Of Florida Research Foundation Inc. Aav dual vector systems for gene therapy
AU2012347919B2 (en) 2011-12-05 2017-02-02 Factor Bioscience Inc. Methods and products for transfecting cells
WO2013090648A1 (en) * 2011-12-16 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
MX2014009289A (es) 2012-02-01 2015-09-08 Compugen Ltd Anticuerpos c1orf32 y usos de los mismos para el tratamiento del cancer.
US9950282B2 (en) 2012-03-15 2018-04-24 Flodesign Sonics, Inc. Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation
US9458450B2 (en) 2012-03-15 2016-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves
US9745548B2 (en) 2012-03-15 2017-08-29 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
US10967298B2 (en) 2012-03-15 2021-04-06 Flodesign Sonics, Inc. Driver and control for variable impedence load
US10689609B2 (en) 2012-03-15 2020-06-23 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic bioreactor processes
US10322949B2 (en) 2012-03-15 2019-06-18 Flodesign Sonics, Inc. Transducer and reflector configurations for an acoustophoretic device
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
US9752113B2 (en) 2012-03-15 2017-09-05 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
US9877919B2 (en) 2012-03-29 2018-01-30 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
WO2013149140A1 (en) 2012-03-29 2013-10-03 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Ionizable cationic lipids
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
JP2015516143A (ja) 2012-04-02 2015-06-08 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US10501513B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US10737953B2 (en) 2012-04-20 2020-08-11 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoretic method for use in bioreactors
WO2013167153A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Ganymed Pharmaceuticals Ag Antibodies useful in cancer diagnosis
EP3884949A1 (en) 2012-06-08 2021-09-29 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
EP2859102A4 (en) 2012-06-08 2016-05-11 Shire Human Genetic Therapies NUCLEASE RESISTANT POLYNUCLEOTIDES AND USES THEREOF
WO2013191997A1 (en) * 2012-06-18 2013-12-27 Dow Agrosciences Llc Expression of maize codon optimized proteins in pseudomonas fluorescens
US9512456B2 (en) 2012-08-14 2016-12-06 Modernatx, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of RNA
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
CN104955942B (zh) 2012-10-29 2018-10-02 学校法人埼玉医科大学 分化多能性干细胞的制造方法
BR122019025681B1 (pt) 2012-11-01 2023-04-18 Factor Bioscience Inc Método para inserir uma sequência de ácido nucleico em uma localização segura de um genoma de uma célula
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
EP2925775B1 (en) 2012-11-28 2020-09-16 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of metabolic disorders and diseases
US9290557B2 (en) 2012-11-28 2016-03-22 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides
WO2014082729A1 (en) 2012-11-28 2014-06-05 Biontech Ag Individualized vaccines for cancer
EP2931319B1 (en) * 2012-12-13 2019-08-21 ModernaTX, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
SG11201503526UA (en) 2012-12-21 2015-06-29 Sanofi Sa Dual glp1/gip or trigonal glp1/gip/glucagon agonists
US9273107B2 (en) 2012-12-27 2016-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
ES2915851T3 (es) 2012-12-27 2022-06-27 Ngm Biopharmaceuticals Inc Péptidos quiméricos de FGF19 para usar en el tratamiento de trastornos de ácidos biliares
EP2749569A1 (en) 2012-12-28 2014-07-02 Annibale Alessandro Puca Variant of BPIFB4 protein
EP2946014A2 (en) * 2013-01-17 2015-11-25 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
HUE063051T2 (hu) 2013-02-15 2023-12-28 Bioverativ Therapeutics Inc Optimalizált VIII. faktor gén
US10456448B2 (en) * 2013-03-08 2019-10-29 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate PTD-SMAD7 therapeutics
US20160024181A1 (en) 2013-03-13 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
KR20150128687A (ko) 2013-03-14 2015-11-18 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. 메신저 rna의 정제 방법
US10526655B2 (en) 2013-03-14 2020-01-07 Veracyte, Inc. Methods for evaluating COPD status
LT2970456T (lt) 2013-03-14 2021-08-10 Translate Bio, Inc. Būdai ir kompozicijos, skirti mrnr koduojamų antikūnų pristatymui
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
KR20210122917A (ko) 2013-03-14 2021-10-12 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. Cftr mrna 조성물 및 관련 방법 및 사용
RS57316B1 (sr) 2013-03-15 2018-08-31 Translate Bio Inc Sinergističko poboljšanje isporuke nukleinskih kiselina pomoću mešavina formulacija
EP3524618B1 (en) 2013-03-15 2023-03-08 GLAdiator Biosciences, Inc. Gla domains as targeting agents
US9944918B2 (en) 2013-03-15 2018-04-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health & Human Services Synthetic methylmalonyl-CoA mutase transgene for the treatment of MUT class methylmalonic acidemia (MMA)
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
WO2014144767A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
DK2968602T3 (en) * 2013-03-15 2017-10-30 Us Health SYNTHETIC METHYLMALONYL-COA MUTASE TRANSGEN TO TREAT MUT-CLASS METHYLMALONACIDEMIA (MMA)
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10077439B2 (en) * 2013-03-15 2018-09-18 Modernatx, Inc. Removal of DNA fragments in mRNA production process
WO2014180490A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Biontech Ag Predicting immunogenicity of t cell epitopes
CN105611955A (zh) 2013-05-22 2016-05-25 上海泽生科技开发有限公司 缓释纽兰格林治疗心力衰竭
US20160120893A1 (en) * 2013-06-21 2016-05-05 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions relating to modulation of the permeability of the blood brain barrier
RS62529B1 (sr) 2013-07-11 2021-11-30 Modernatx Inc Kompozicije koje sadrže sintetičke polinukleotide koji kodiraju proteine povezane sa crispr i sintetičke sgrnk i postupci upotrebe
AU2014296278C1 (en) 2013-07-30 2023-02-02 Genevant Sciences Gmbh Block copolymers and their conjugates or complexes with oligonucleotides
CN105451779A (zh) * 2013-08-21 2016-03-30 库瑞瓦格股份公司 增加rna编码蛋白表达的方法
WO2015034928A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US9745569B2 (en) 2013-09-13 2017-08-29 Flodesign Sonics, Inc. System for generating high concentration factors for low cell density suspensions
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
US20160264614A1 (en) * 2013-10-02 2016-09-15 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
AU2014329452B2 (en) * 2013-10-03 2019-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
JP6893785B2 (ja) 2013-10-22 2021-06-23 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ｍＲＮＡのＣＮＳ送達及びその使用方法
EA201690576A1 (ru) 2013-10-22 2016-10-31 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. Липидные композиции для доставки матричной рнк
EA201992208A1 (ru) 2013-10-22 2020-07-31 Транслейт Био, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ФЕНИЛКЕТОНУРИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ мРНК
MX2016005237A (es) 2013-10-22 2016-08-12 Shire Human Genetic Therapies Terapia de acido ribonucleico mensajero para la deficiencia de argininosuccinato sintetasa.
NZ718962A (en) 2013-10-28 2019-12-20 Ngm Biopharmaceuticals Inc Cancer models and associated methods
WO2015073579A1 (en) * 2013-11-12 2015-05-21 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Random copolymer therapeutic agent carriers and assemblies thereof
WO2015074010A2 (en) 2013-11-18 2015-05-21 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Compositions and methods for cardiac regeneration
US9480731B2 (en) * 2013-12-12 2016-11-01 Medy-Tox, Inc. Long lasting effect of new botulinum toxin formulations
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
WO2015086733A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP2918275B1 (en) * 2013-12-13 2016-05-18 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
WO2015086728A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
GB201322574D0 (en) * 2013-12-19 2014-02-05 Equigerminal Sa Retroviral peptides
CN104758922A (zh) * 2014-01-03 2015-07-08 上海泽生科技开发有限公司 纽兰格林制剂的配方
CA2935960C (en) 2014-01-08 2023-01-10 Bart Lipkens Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber
CN106413738B (zh) * 2014-01-17 2020-12-29 席德-西奈医疗中心 受体靶向构造物和其使用
BR112016017248A8 (pt) 2014-01-24 2018-04-17 Ngm Biopharmaceuticals Inc anticorpo ou fragmento seu, agente de ligação, animal transgênico, hibridoma, vetor, composição farmacêutica, método de indução de sinalização de semelhantes a fgf19 e/ou fgf21, método para ativar um complexo klotho beta/receptor de fgf, método para melhorar o metabolismo da glicose em um indivíduo, método de detecção da presença de klotho beta, uso do anticorpo ou fragmento seu, uso da composição farmacêutica, método de tratamento e método para melhorar parâmetros metabólicos
CN105940110A (zh) 2014-01-31 2016-09-14 菲克特生物科学股份有限公司 用于核酸产生和递送的方法和产品
WO2015130832A1 (en) * 2014-02-25 2015-09-03 The Regents Of The University Of California Agents for enhancement of production of biofuel precursors in microalgae
BR112016020688B1 (pt) * 2014-03-09 2024-01-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vetores virais recombinantes, vírus adenoassociado recombinante, composição farmacêutica, bem como uso dos mesmos
MX2016012201A (es) * 2014-03-21 2017-01-19 Genzyme Corp Terapia genica para la retinitis pigmentaria.
ME03314B (me) * 2014-03-24 2019-10-20 Translate Bio Inc Irnk terapija za liječenje očnih oboljenja
KR102294483B1 (ko) * 2014-04-07 2021-08-27 미네르바 바이오테크놀로지 코포레이션 항-ｎｍｅ 항체
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
JP6635942B2 (ja) * 2014-04-15 2020-01-29 アプライド ジェネティック テクノロジーズ コーポレイション 網膜色素変性症ｇｔｐアーゼレギュレーター（ｒｐｇｒ）をコードするコドン最適化核酸
KR101791296B1 (ko) * 2014-04-17 2017-10-27 제주대학교 산학협력단 알츠하이머병 관련 돌연변이 유전자를 포함하는 발현 카세트, 벡터, 및 이를 이용하여 형질전환된 세포주
CN106659803A (zh) 2014-04-23 2017-05-10 摩登纳特斯有限公司 核酸疫苗
WO2015164773A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Methods for purification of messenger rna
KR102092225B1 (ko) * 2014-04-30 2020-03-23 주식회사 엘지화학 고효율 분비능을 가지는 단백질 분비 인자 및 이를 포함하는 발현 벡터
ES2823948T3 (es) * 2014-05-14 2021-05-10 Esteve Pharmaceuticals Sa Vectores de virus adenoasociados para el tratamiento de trastornos de almacenamiento lisosómico
WO2015175748A1 (en) * 2014-05-14 2015-11-19 Evorx Technologies, Inc. Methods and compositions for controlling gene expression and treating cancer
US10398758B2 (en) 2014-05-28 2019-09-03 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants of FGF19 polypeptides and uses thereof for the treatment of hyperglycemic conditions
CA2949106C (en) 2014-05-30 2023-10-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Biodegradable lipids for delivery of nucleic acids
JP6313478B2 (ja) * 2014-05-30 2018-04-18 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ Ｍａｇｅ−ａ３ペプチド標的アプタマー及びその使用
US10010498B2 (en) 2014-06-04 2018-07-03 Acceleron Pharma Inc. Methods for treatment of amyotrophic lateral sclerosis with follistatin fusion proteins
MA51074A (fr) 2014-06-04 2020-10-14 Acceleron Pharma Inc Procédés et compositions pour traiter des troubles à l'aide de polypeptides de follistatine
EP3521456B1 (en) * 2014-06-10 2023-01-04 CureVac Manufacturing GmbH Methods and means for enhancing rna production
WO2015191693A2 (en) * 2014-06-10 2015-12-17 Massachusetts Institute Of Technology Method for gene editing
AU2015277438B2 (en) 2014-06-16 2020-02-27 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods and uses for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
EP3157573A4 (en) * 2014-06-19 2018-02-21 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
WO2015196130A2 (en) * 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
CN106795142B (zh) 2014-06-24 2022-11-04 川斯勒佰尔公司 用于递送核酸的立体化学富集组合物
EP3160478A4 (en) 2014-06-30 2018-05-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor ix gene
JP6782171B2 (ja) 2014-07-02 2020-11-11 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａのカプセル化
US9744483B2 (en) 2014-07-02 2017-08-29 Flodesign Sonics, Inc. Large scale acoustic separation device
EP3169335B8 (en) 2014-07-16 2019-10-09 ModernaTX, Inc. Circular polynucleotides
CA2955250A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3172226B1 (en) * 2014-07-25 2019-01-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Crystal structure of human four-phosphate adaptor protein 2 glycolipid transfer protein like domain
WO2016027842A1 (ja) 2014-08-20 2016-02-25 和光純薬工業株式会社 幹細胞の分化状態の判定方法及びこれに用いられる新規な分化マーカー
EP2990416B1 (en) 2014-08-29 2018-06-20 GEMoaB Monoclonals GmbH Universal chimeric antigen receptor expressing immune cells for targeting of diverse multiple antigens and method of manufacturing the same and use of the same for treatment of cancer, infections and autoimmune disorders
KR20170093780A (ko) 2014-09-02 2017-08-16 아메리칸 실버, 엘엘씨 보툴리눔 톡신 및 콜로이드 은 입자
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
WO2016045732A1 (en) 2014-09-25 2016-03-31 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stable formulations of lipids and liposomes
WO2016049487A1 (en) * 2014-09-26 2016-03-31 Dow Agrosciences Llc Heterologous expression of glycine n-acyltransferase proteins
JP6737778B2 (ja) * 2014-10-01 2020-08-12 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア 抗原およびアジュバントとしてのインターロイキン−２１を有するワクチン
US10385380B2 (en) 2014-10-02 2019-08-20 The Regents Of The University Of California Personalized protease assay to measure protease activity in neoplasms
US10370432B2 (en) 2014-10-03 2019-08-06 University Of Massachusetts Heterologous targeting peptide grafted AAVS
JP6842410B2 (ja) 2014-10-03 2021-03-17 ユニバーシティ オブ マサチューセッツ 新規の高効率ライブラリーにより同定されるａａｖベクター
JOP20200115A1 (ar) 2014-10-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات))
CN105561298A (zh) 2014-10-17 2016-05-11 上海泽生科技开发有限公司 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟射血分数保留的心力衰竭的方法和组合物
JP6949711B2 (ja) 2014-10-23 2021-10-20 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ペプチドバリアントを含む医薬組成物及びその使用方法
JP6384863B2 (ja) * 2014-10-24 2018-09-05 国立大学法人北海道大学 脂質膜構造体
EP3212793B1 (en) * 2014-11-02 2020-01-08 Arcturus Therapeutics, Inc. Messenger una molecules and uses thereof
US20170335396A1 (en) 2014-11-05 2017-11-23 Veracyte, Inc. Systems and methods of diagnosing idiopathic pulmonary fibrosis on transbronchial biopsies using machine learning and high dimensional transcriptional data
US11827680B2 (en) * 2014-11-06 2023-11-28 Case Western Reserve University Compounds and methods of treating usher syndrome III
US10434144B2 (en) 2014-11-07 2019-10-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of bile acid-related disorders and prediction of clinical sensitivity to treatment of bile acid-related disorders
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
US20170362627A1 (en) 2014-11-10 2017-12-21 Modernatx, Inc. Multiparametric nucleic acid optimization
RU2718590C2 (ru) * 2014-11-10 2020-04-08 Этрис Гмбх Индукция остеогенеза путем внедрения рнк, кодирующей костный морфогенетический белок (кмб)
RU2597789C2 (ru) * 2014-11-10 2016-09-20 Илья Владимирович Духовлинов Анальгетическое средство на основе плазмидной днк, кодирующей hnp-1, либо hnp-2, либо hnp-3 (варианты)
WO2016077625A1 (en) 2014-11-12 2016-05-19 Stayton Patrick S Stabilized polymeric carriers for therapeutic agent delivery
WO2016086088A2 (en) * 2014-11-25 2016-06-02 Northwestern University Wound healing through sirt1 overexpression
US9943595B2 (en) 2014-12-05 2018-04-17 Translate Bio, Inc. Messenger RNA therapy for treatment of articular disease
CN106413739B (zh) * 2014-12-09 2019-09-17 张文涛 Nbp158及其用途
EP3236995A4 (en) 2014-12-23 2018-07-18 University of Maryland, Baltimore Muc1 decoy peptides for treatment and prevention of bacterial infections
RU2709778C2 (ru) 2014-12-23 2019-12-20 Эйвон Продактс, Инк. Пептиды и их применение в уходе за кожей
US10335498B2 (en) * 2014-12-29 2019-07-02 University Of Iowa Research Foundation RNA based biomaterial for tissue engineering applications
AU2016209295B2 (en) 2015-01-21 2021-08-12 Genevant Sciences Gmbh Methods, compositions, and systems for delivering therapeutic and diagnostic agents into cells
MA41414A (fr) 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
WO2016128060A1 (en) 2015-02-12 2016-08-18 Biontech Ag Predicting t cell epitopes useful for vaccination
EP3256585A4 (en) * 2015-02-13 2018-08-15 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
WO2016131009A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 University Of Massachusetts Compositions and methods for transient delivery of nucleases
WO2016138387A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority D/B/A Carolinas Healthcare System Methods and compositions for treating dystroglycanopathy disorders
US10781489B2 (en) * 2015-03-04 2020-09-22 Wayne State University Systems and methods to diagnose sarcoidosis and identify markers of the condition
AU2016233135B2 (en) 2015-03-19 2021-07-08 Translate Bio, Inc. mRNA therapy for pompe disease
AU2016235533B2 (en) * 2015-03-20 2019-08-15 Inovio Pharmaceuticals, Inc. Vaccines with CD40 ligand as an adjuvant
CA2980757A1 (en) 2015-03-26 2016-09-29 Acceleron Pharma Inc. Follistatin-related fusion proteins and uses thereof
HUE063627T2 (hu) 2015-03-27 2024-01-28 Immatics Biotechnologies Gmbh Új peptidek és peptidkombináció többféle tumor elleni immunterápiában
GB201505305D0 (en) 2015-03-27 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel Peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against various tumors
GB201505585D0 (en) 2015-03-31 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapy against renal cell carinoma (RCC) and other cancers
PT3286209T (pt) 2015-04-24 2020-12-04 Ferring Bv Método de produção de gonadotrofina
US11377651B2 (en) 2016-10-19 2022-07-05 Flodesign Sonics, Inc. Cell therapy processes utilizing acoustophoresis
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
US11021699B2 (en) 2015-04-29 2021-06-01 FioDesign Sonics, Inc. Separation using angled acoustic waves
CN104878091B (zh) * 2015-04-30 2019-05-17 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9978的核酸序列及其检测方法
WO2016179222A1 (en) * 2015-05-04 2016-11-10 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Znf532 for diagnosis and treatment of cancer
GB201508025D0 (en) 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Fabry disease gene therapy
AU2016261927B2 (en) 2015-05-12 2022-04-07 Sangamo Therapeutics, Inc. Nuclease-mediated regulation of gene expression
WO2016197132A1 (en) * 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Treating hepatitis b virus infection using crispr
WO2016197133A1 (en) 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Delivering crispr therapeutics with lipid nanoparticles
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
JP6854246B2 (ja) 2015-06-08 2021-04-07 アーケア ダイアグノスティクス リミテッド 尿サンプルの分析方法
WO2016198835A1 (en) 2015-06-08 2016-12-15 Arquer Diagnostics Limited Methods and kits
US11084852B2 (en) 2015-06-15 2021-08-10 Oklahoma Medical Research Foundation Ubiquitin interacting motif peptides as therapeutics
US9597274B2 (en) * 2015-06-17 2017-03-21 Avon Products, Inc. Peptides and their use in the treatment of skin
GB201510771D0 (en) 2015-06-19 2015-08-05 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy and methods for generating scaffolds for the use against pancreatic cancer
TWI772907B (zh) 2015-06-19 2022-08-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於免疫治療的新穎胜肽及胜肽組合物與產生用於抗胰臟癌及其他癌症的支架的方法
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
US20170044608A1 (en) * 2015-07-17 2017-02-16 Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. Methods of selecting antibodies and antibody fragments
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
US11007260B2 (en) 2015-07-21 2021-05-18 Modernatx, Inc. Infectious disease vaccines
US11474085B2 (en) 2015-07-28 2022-10-18 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
US11459540B2 (en) 2015-07-28 2022-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
JP7028761B2 (ja) * 2015-07-28 2022-03-02 ランケナー インスティテュート フォー メディカル リサーチ 免疫調節疾患および障害の治療方法および組成物
US10800843B2 (en) 2015-07-29 2020-10-13 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Beta klotho-binding proteins
WO2017031232A1 (en) 2015-08-17 2017-02-23 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
TWI782433B (zh) 2015-08-28 2022-11-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於多種癌症之免疫治療的新穎胜肽、胜肽的組合物及支架
GB201515321D0 (en) 2015-08-28 2015-10-14 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides, combination of peptides and scaffolds for use in immunotherapeutic treatment of various cancers
WO2017036580A1 (en) * 2015-08-28 2017-03-09 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
US10808242B2 (en) 2015-08-28 2020-10-20 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Method for reducing immunogenicity of RNA
US20190248905A1 (en) * 2015-09-07 2019-08-15 Helmholtz Zentrum Muenchen-Deutsches Forschungszentrum Fuer Gesundheit Und Umwelt (Gmbh) Novel igfr-like receptor and uses thereof
GB201516066D0 (en) 2015-09-10 2015-10-28 Young & Co Llp D Treatment of retinitis pigmentosa
US11434486B2 (en) 2015-09-17 2022-09-06 Modernatx, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
DK3350333T3 (da) 2015-09-17 2022-01-31 Modernatx Inc Polynukleotider, der indeholder en stabiliserende haleregion
US20190054112A1 (en) * 2015-09-18 2019-02-21 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide formulations for use in the treatment of renal diseases
ES2940360T3 (es) * 2015-09-22 2023-05-05 Inst Nat Sante Rech Med Polipéptidos capaces de inhibir la unión entre leptina y neuropilina-1
EP3356413B1 (en) 2015-10-01 2022-01-05 Potenza Therapeutics, Inc. Anti-tigit antigen-binding proteins and methods of use thereof
EP3359670B2 (en) 2015-10-05 2024-02-14 ModernaTX, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
WO2017059902A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh 3' utr sequences for stabilization of rna
SG10202111233SA (en) * 2015-10-09 2021-11-29 Genzyme Corp Improved flare (flow cytometry attenuated reporter expression) technology for rapid bulk sorting
EP3362555B1 (en) 2015-10-14 2021-01-13 Translate Bio, Inc. Modification of rna-related enzymes for enhanced production
KR20180066237A (ko) 2015-10-19 2018-06-18 유니버시티 오브 매사추세츠 항-암 및 항-염증 치료제 및 이의 방법
WO2017070472A1 (en) 2015-10-21 2017-04-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Codon-optimized reduced-size atp7a cdna and uses for treatment of copper transport disorders
KR20180096592A (ko) * 2015-10-22 2018-08-29 모더나티엑스, 인크. 호흡기 세포융합 바이러스 백신
RS63381B1 (sr) 2015-10-22 2022-08-31 Modernatx Inc Vakcine protiv respiratornih virusa
JP2018531290A (ja) 2015-10-22 2018-10-25 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド 性感染症ワクチン
CA3002922A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
CA3003090A1 (en) * 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Cancer vaccines
SG11201803360UA (en) 2015-10-22 2018-05-30 Modernatx Inc Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
WO2017070624A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Tropical disease vaccines
GB201518792D0 (en) * 2015-10-23 2015-12-09 Univ Manchester Production of proteins
CA3041130A1 (en) * 2015-10-30 2017-05-04 The University Of Melbourne Methods and compositions for improving glucose metabolism
MX2018005689A (es) * 2015-11-05 2018-08-01 Massachusetts Gen Hospital Administracion intratecal de secuencias de acido nucleico que codifican abcd1 para el tratamiento de la adrenomieloneuropatia.
EP3888672A1 (en) 2015-11-09 2021-10-06 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of bile acid-related disorders
IL259178B (en) 2015-11-12 2022-08-01 Res Inst Nationwide Childrens Hospital A vector encoding ano5 for the treatment of muscular dystrophy
US20190307857A1 (en) 2015-12-09 2019-10-10 Modernatx, Inc. MODIFIED mRNA ENCODING A URIDINE DIPHOPSPHATE GLUCURONOSYL TRANSFERASE AND USES THEREOF
AU2016366978B2 (en) 2015-12-10 2022-07-28 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
EP3389724B1 (en) 2015-12-14 2020-07-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
US11241506B2 (en) 2015-12-14 2022-02-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Composition for treatment of Crigler-Najjar syndrome
GB201522243D0 (en) * 2015-12-16 2016-01-27 Ucl Business Plc Treatment
JP7065036B2 (ja) 2015-12-17 2022-05-11 モダーナティエックス・インコーポレイテッド メチルマロニルＣｏＡムターゼをコードするポリヌクレオチド
JOP20200228A1 (ar) 2015-12-21 2017-06-16 Novartis Ag تركيبات وطرق لخفض تعبير البروتين tau
RS63135B1 (sr) 2015-12-23 2022-05-31 Modernatx Inc Postupci upotrebe polinukleotida koji kodiraju ox40 ligand
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
EP3400023A1 (en) 2016-01-10 2018-11-14 ModernaTX, Inc. Therapeutic mrnas encoding anti ctla-4 antibodies
WO2017123934A1 (en) * 2016-01-13 2017-07-20 Merial, Inc. Recombinant aav vectors expressing osteoprotective genes, including has2 and lubricin, useful in the treatment of osteoarthritis and related joint conditions in mammals
WO2017127750A1 (en) * 2016-01-22 2017-07-27 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
SG10201913278PA (en) 2016-02-01 2020-02-27 Bioverativ Therapeutics Inc Optimized factor viii genes
WO2017136399A1 (en) * 2016-02-02 2017-08-10 Idera Pharmaceuticals, Inc. POTENTIATION OF mmRNA THERAPEUTICS
WO2017134265A1 (en) 2016-02-05 2017-08-10 Institut Pasteur Use of inhibitors of adam12 as adjuvants in tumor therapies
JP7064665B2 (ja) 2016-03-07 2022-05-11 ファーザー フラナガンズ ボーイズ ホーム ドゥーイング ビジネス アズ ボーイズ タウン ナショナル リサーチ ホスピタル 非侵襲的分子対照
BR112018070183A2 (pt) * 2016-03-31 2019-04-16 Neon Therapeutics, Inc. neoantígenos e métodos de seu uso
IL261941B2 (en) * 2016-04-01 2023-11-01 Kite Pharma Inc Chimeric antigen and T cell receptors and methods of use
CN109641008B (zh) 2016-04-01 2021-03-23 凯德药业股份有限公司 嵌合受体及其方法和用途
TWI761831B (zh) 2016-04-01 2022-04-21 美商凱特製藥公司 嵌合抗原受體（ｃａｒ）和ｔ細胞受體（ｔｃｒ）及彼等之用途
WO2017177169A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Rana Therapeutics, Inc. Multimeric coding nucleic acid and uses thereof
US20230071283A1 (en) * 2016-04-15 2023-03-09 Aimee S. Payne Compositions and methods for selective protein expression
BR112018071167A2 (pt) 2016-04-15 2019-02-05 Research Institute At Nationwide Children's Hospital entrega de beta-sarcoglicano e microrna-29 por vírus adenoassociado e tratamento de distrofia muscular
DK3445406T3 (da) 2016-04-20 2021-08-30 Centro De Investig Energeticas Medioambientales Y Tecnologicas O A M P Sammensætninger og fremgangsmåder til forøget genekspression af pklr
MX2018012758A (es) 2016-04-21 2019-01-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Inmunoterapia contra el melanoma y otros tipos de cancer.
EA201892333A1 (ru) 2016-04-21 2019-03-29 Имматикс Байотекнолоджиз Гмбх Иммунотерапия меланомы и других видов рака
WO2017186928A1 (en) * 2016-04-29 2017-11-02 Curevac Ag Rna encoding an antibody
GB2549798A (en) * 2016-04-29 2017-11-01 Univ Bradford Peptides and nanoparticle formulations thereof
US11085035B2 (en) 2016-05-03 2021-08-10 Flodesign Sonics, Inc. Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
US20180126003A1 (en) * 2016-05-04 2018-05-10 Curevac Ag New targets for rna therapeutics
US11078247B2 (en) 2016-05-04 2021-08-03 Curevac Ag RNA encoding a therapeutic protein
WO2017201325A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Combinations of mrnas encoding immune modulating polypeptides and uses thereof
MA45050A (fr) * 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour la lipoprotéine lipase destinés au traitement de l'hyperlipidémie
EP3458107B1 (en) 2016-05-18 2024-03-13 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome
CN109640962B (zh) 2016-05-18 2022-07-19 摩登纳特斯有限公司 编码松弛素的多核苷酸
EP3458105B1 (en) 2016-05-18 2024-01-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding galactose-1-phosphate uridylyltransferase for the treatment of galactosemia type 1
ES2941411T3 (es) 2016-05-18 2023-05-22 Modernatx Inc Polinucleótidos que codifican interleucina-12 (IL12) y usos de los mismos
WO2017201332A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding acyl-coa dehydrogenase, very long-chain for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
AU2017266948A1 (en) 2016-05-18 2018-12-06 Fundacion Para La Investigacion Medica Aplicada Polynucleotides encoding porphobilinogen deaminase for the treatment of acute intermittent porphyria
EP3458108A4 (en) 2016-05-18 2020-04-22 ModernaTX, Inc. POLYNUCLEOTIDES FOR CODING THE TRANSMEMBRANE CONDUCTIVE REGULATOR OF CYSTIC FIBROSE FOR TREATING CYSTIC FIBROSE
US10993918B2 (en) 2016-05-18 2021-05-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding citrin for the treatment of Citrullinemia type 2
CA3024507A1 (en) * 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding .alpha.-galactosidase a for the treatment of fabry disease
MA45032A (fr) * 2016-05-18 2019-03-27 Fundacion Para La Investig Medica Aplicada Polynucléotides codant pour la porphobilinogène désaminase destinés au traitement de la porphyrie intermittente aiguë
CN109843378B (zh) 2016-05-26 2022-06-10 匹兹堡大学联邦高等教育系统 用于治疗肺血管疾病的组合物和方法
EP4316588A2 (en) 2016-05-27 2024-02-07 Transcriptx, Inc. Treatment of primary ciliary dyskinesia with synthetic messenger rna
CN116606861A (zh) 2016-06-07 2023-08-18 摩登纳特斯有限公司 编码vegf-a多肽的经修饰的rna、配制品和关于它们的用途
JP2019522047A (ja) 2016-06-13 2019-08-08 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症治療のためのメッセンジャーｒｎａ療法
US11235036B2 (en) 2016-06-17 2022-02-01 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Lysosomal acid lipase deficiency compositions and methods
CA2971303A1 (en) 2016-06-21 2017-12-21 Bamboo Therapeutics, Inc. Optimized mini-dystrophin genes and expression cassettes and their use
PT109480B (pt) 2016-06-22 2020-03-13 Inst Superior Tecnico Polímero de polibenzimidazolo com cadeia espaçadora funcionalizada e seu método de obtenção para remoção de impurezas genotóxicas
US10927383B2 (en) * 2016-06-30 2021-02-23 Ethris Gmbh Cas9 mRNAs
JP7086870B2 (ja) 2016-06-30 2022-06-20 アルブータス・バイオファーマー・コーポレイション メッセンジャーｒｎａを送達するための組成物及び方法
EP3481943A1 (en) 2016-07-07 2019-05-15 Rubius Therapeutics, Inc. Compositions and methods related to therapeutic cell systems expressing exogenous rna
EP3372693B1 (en) 2016-07-08 2020-02-12 Kao Corporation Method for preparing nucleic acid sample
KR102526506B1 (ko) * 2016-07-08 2023-05-03 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 Rdh12가 연루된 장애 및 질환의 치료를 위한 방법 및 조성물
US11141463B2 (en) * 2016-07-11 2021-10-12 The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. Fusion proteins with extended serum half life
JP7027401B2 (ja) 2016-07-14 2022-03-01 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｔｉｍ３に対する抗体およびその使用
US11883470B2 (en) 2016-07-25 2024-01-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions comprising a lecithin cholesterol acyltransferase variant and uses thereof
JP2019528312A (ja) * 2016-08-07 2019-10-10 ノバルティス アーゲー ｍＲＮＡ媒介性の免疫化方法
US10576167B2 (en) 2016-08-17 2020-03-03 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
EP3500278A4 (en) 2016-08-19 2020-04-01 Calimmune, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CONDITIONS USING A RECOMBINANT SELF-COMPLEMENTARY ADENO-ASSOCIATED VIRUS
TW202304970A (zh) * 2016-08-26 2023-02-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於頭頸鱗狀細胞癌和其他癌症免疫治療的新型肽和支架
US11370841B2 (en) 2016-08-26 2022-06-28 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating fibroblast growth factor 19-mediated cancers and tumors
EP3562299A4 (en) 2016-09-09 2020-05-13 Syngenta Participations AG INSECTICIDE PROTEINS
EP3293259A1 (en) * 2016-09-12 2018-03-14 Genethon Acid-alpha glucosidase variants and uses thereof
AU2017322376B2 (en) 2016-09-12 2023-08-17 Genethon Acid-alpha glucosidase variants and uses thereof
ES2928475T3 (es) 2016-09-14 2022-11-18 Modernatx Inc Composiciones de ARN de alta pureza y métodos para su preparación
CA3037682A1 (en) * 2016-09-21 2018-03-29 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Optimized synthetic consensus inmunogenic compositions targeting fibroblast activation protein
WO2018067869A1 (en) * 2016-10-07 2018-04-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Hla-restricted vgll1 peptides and use thereof
SG10202103545PA (en) 2016-10-07 2021-05-28 Genzyme Corp Early post-transfection isolation of cells (epic) for biologics production
US10633705B2 (en) 2016-10-14 2020-04-28 Alexion Pharmaceuticals, Inc. N-acetyl-alpha-D-glucosaminidase deficiency compositions and methods
KR101837856B1 (ko) 2016-10-18 2018-03-13 단국대학교 산학협력단 뎅기바이러스 혈청형 2 및 3의 메틸트랜스퍼라제 활성을 억제하는 rna 앱타머
CN110494543A (zh) 2016-10-19 2019-11-22 弗洛设计声能学公司 通过声学的亲和细胞提取
WO2018075980A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
RU2765874C2 (ru) * 2016-10-26 2022-02-04 МОДЕРНАТиЭкс, ИНК. Матричные рибонуклеиновые кислоты для усиления иммунных ответов и способы их применения
AR109844A1 (es) * 2016-10-27 2019-01-30 Syngenta Participations Ag Proteínas insecticidas
CN110167587A (zh) 2016-11-11 2019-08-23 摩登纳特斯有限公司 流感疫苗
EP3323827A1 (en) * 2016-11-21 2018-05-23 Christian-Albrechts-Universität zu Kiel Cationic intrinsically disordered antimicrobial peptides
EP3973955A3 (en) * 2016-11-23 2022-06-15 Mayo Foundation for Medical Education and Research Particle-mediated delivery of inhibitory rna
WO2018102317A1 (en) * 2016-11-29 2018-06-07 The Regents Of The University Of California Modulation of p53 for the treatment of cancer
US10558661B2 (en) 2016-11-29 2020-02-11 Sap Se Query plan generation based on table adapter
EP3551650A4 (en) * 2016-12-07 2020-07-08 The University of Florida Research Foundation Incorporated IL-1RA-CDNAS
WO2018104540A1 (en) * 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
EP3551193A4 (en) 2016-12-08 2020-08-19 Modernatx, Inc. NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUSES
CN110582304A (zh) * 2016-12-08 2019-12-17 库尔维科公司 用于治疗或预防肝脏疾病的rna
US11384352B2 (en) 2016-12-13 2022-07-12 Modernatx, Inc. RNA affinity purification
CN108531497B (zh) * 2016-12-26 2021-06-15 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种重组蛋白p35的制备方法
KR20230160411A (ko) 2016-12-30 2023-11-23 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 윌슨병을 치료하기 위한 유전자 치료
EP3562510A4 (en) 2016-12-30 2021-01-06 Genevant Sciences GmbH BRANCHED PEG MOLECULES AND ASSOCIATED COMPOSITIONS AND PROCEDURES
BR112019013576A2 (pt) 2016-12-30 2020-02-04 Univ Pennsylvania terapia genica para o tratamento da fenilcetonuria
WO2018144775A1 (en) 2017-02-01 2018-08-09 Modernatx, Inc. Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides
AU2017397458A1 (en) * 2017-02-01 2019-08-15 Modernatx, Inc. RNA cancer vaccines
MA47515A (fr) 2017-02-16 2019-12-25 Modernatx Inc Compositions immunogènes très puissantes
BR112019016374A2 (pt) 2017-02-17 2020-04-07 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos para alfa-sinucleína e usos dos mesmos
WO2018157009A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Modernatx, Inc. Nucleic acid-based therapy of muscular dystrophies
EP3585417B1 (en) 2017-02-27 2023-02-22 Translate Bio, Inc. Method of making a codon-optimized cftr mrna
JOP20190200A1 (ar) * 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
UY37621A (es) 2017-02-28 2018-09-28 Sanofi Sa Arn terapéutico que codifica citoquinas
WO2018160592A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Arcturus Therapeutics, Inc. Translatable molecules and synthesis thereof
WO2018165482A1 (en) * 2017-03-10 2018-09-13 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods for treatment or prevention of leukemia
IL308112A (en) 2017-03-14 2023-12-01 Baylor College Medicine An active dominant YAP gene, which activates HIPPO, causes chromatin accessibility and cardiac muscle cell renewal
US11576961B2 (en) 2017-03-15 2023-02-14 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
WO2018170260A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Respiratory syncytial virus vaccine
WO2018170270A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (vzv) vaccine
US11752206B2 (en) 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
GB201704192D0 (en) * 2017-03-16 2017-05-03 Nightstarx Ltd Treatment of Retinitis Pigmentosa
WO2018170347A1 (en) 2017-03-17 2018-09-20 Modernatx, Inc. Zoonotic disease rna vaccines
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
AU2018246292A1 (en) * 2017-03-31 2019-10-10 Accanis Biotech F&E Gmbh & Co Kg Prevention and treatment of non-melanoma skin cancer (NMSC)
JP2020512815A (ja) 2017-04-03 2020-04-30 アメリカン ジーン テクノロジーズ インターナショナル インコーポレイテッド フェニルケトン尿症を処置するための組成物および方法
WO2018187590A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Modernatx, Inc. Reduction or elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
US10640766B2 (en) 2017-04-12 2020-05-05 Tempo Bioscience, Inc. Biosensors for chloride ions
US10571480B2 (en) 2017-04-12 2020-02-25 Tempo Bioscience, Inc. Biosensors for cellular osmolarity
EA038300B1 (ru) * 2017-04-18 2021-08-06 Юниверсити Оф Флорида Рисерч Фаундейшен, Инкорпорейтед Кднк il-1ra
SG10201912401QA (en) * 2017-05-11 2020-02-27 Univ Pennsylvania Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
WO2018209182A2 (en) * 2017-05-11 2018-11-15 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for loading extracellular vesicles with chemical and biological agents/molecules
WO2018213476A1 (en) 2017-05-16 2018-11-22 Translate Bio, Inc. Treatment of cystic fibrosis by delivery of codon-optimized mrna encoding cftr
WO2018213618A1 (en) * 2017-05-17 2018-11-22 The General Hospital Corporation Gene therapy for tuberous sclerosis
CA3063723A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (il12) polypeptides and uses thereof
US20180338929A1 (en) * 2017-05-23 2018-11-29 Soon Kap Hahn Method and Compounds for Treating Peripheral Neuropathy
CA3064890A1 (en) * 2017-05-26 2018-11-29 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Dtert vaccines and methods of treatment using the same
EP3630200A4 (en) 2017-05-31 2021-02-24 Arcturus Therapeutics, Inc. THERAPEUTICS FOR PHENYLKETONURIA
US11377643B2 (en) 2017-05-31 2022-07-05 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Therapeutics for glycogen storage disease type III
US11015204B2 (en) 2017-05-31 2021-05-25 Arcturus Therapeutics, Inc. Synthesis and structure of high potency RNA therapeutics
US11945851B2 (en) 2017-06-07 2024-04-02 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology MAGE-A vaccines and methods of treatment using the same
EP3638292A1 (en) 2017-06-14 2020-04-22 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding coagulation factor viii
WO2018232149A1 (en) * 2017-06-14 2018-12-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
WO2018231990A2 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase
EP3638215A4 (en) * 2017-06-15 2021-03-24 Modernatx, Inc. RNA FORMULATIONS
GB201709551D0 (en) * 2017-06-15 2017-08-02 Ucl Business Plc Expression vectors comprising engineered genes
US10034951B1 (en) 2017-06-21 2018-07-31 New England Biolabs, Inc. Use of thermostable RNA polymerases to produce RNAs having reduced immunogenicity
SG10202110492YA (en) 2017-06-22 2021-11-29 Catalyst Biosciences Inc Modified membrane type serine protease 1 (mtsp-1) polypeptides and methods of use
CN111032074A (zh) * 2017-07-03 2020-04-17 斯特拉斯堡大学 用于治疗肌病的用途的mtmr2-s多肽
CN107333755B (zh) * 2017-07-04 2021-03-16 南开大学 具有g-四链体结构的水凝胶制备方法及其在杀灭金黄色葡萄球菌和大肠杆菌中的应用
US11628227B2 (en) * 2017-07-05 2023-04-18 Wisconsin Alumni Research Foundation Mineral coated microparticles for gene delivery in chronic wound therapy
US11597917B2 (en) 2017-07-06 2023-03-07 The Medical College Of Wisconsin, Inc. In vitro and in vivo enrichment strategy targeting lymphocytes derived from vector transduced HSCs for therapy of disorders
WO2019007974A1 (en) 2017-07-07 2019-01-10 Immatics Biotechnologies Gmbh NOVEL PEPTIDES AND COMBINATION OF PEPTIDES FOR USE IN IMMUNOTHERAPY OF LUNG CANCER, INCLUDING NSCLC, CPPC AND OTHER CANCERS
PE20200693A1 (es) * 2017-07-07 2020-06-11 Immatics Biotechnologies Gmbh Nuevos peptidos y nuevas combinaciones de peptidos para el uso en la inmunoterapia contra el cancer de pulmon, incluyendo el nsclc, el sclc y otros canceres
JP7337044B2 (ja) 2017-07-13 2023-09-01 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｈａｏ１（ヒドロキシ酸オキシダーゼ１（グリコール酸オキシダーゼ））遺伝子発現の阻害方法
US11639508B2 (en) 2017-07-14 2023-05-02 The Johns Hopkins University Engineered TSC2
MA49634A (fr) 2017-07-21 2020-05-27 Modernatx Inc Arnm modifié codant pour une propionyl-coa-carboxylase et utilisations associées
US20200179494A1 (en) 2017-07-24 2020-06-11 Modernatx, Inc. Modified mRNA Encoding a Glucose 6 Phosphatase and Uses Thereof
MX2020000960A (es) 2017-07-27 2020-07-22 iTeos Belgium SA Anticuerpos anti-tigit.
US11299515B2 (en) 2017-08-02 2022-04-12 The Regents Of The University Of California Optimized peptides for targeting human nerves and their use in image guided surgery, diagnostics and therapeutic
WO2019036484A1 (en) * 2017-08-15 2019-02-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF ARGININOSUCCINIC ACIDURIA
WO2019036685A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. METHODS FOR HPLC ANALYSIS
US11866696B2 (en) 2017-08-18 2024-01-09 Modernatx, Inc. Analytical HPLC methods
EP3668971B1 (en) 2017-08-18 2024-04-10 ModernaTX, Inc. Rna polymerase variants
WO2019040367A1 (en) * 2017-08-19 2019-02-28 Ohio State Innovation Foundation NEW CANCER IMAGING AGENTS BASED ON PEPTIDES
JP6633777B2 (ja) 2017-08-24 2020-01-22 ノヴォ ノルディスク アー／エス Ｇｌｐ−１組成物及びその使用
JP7275111B2 (ja) 2017-08-31 2023-05-17 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子の生成方法
US11788093B2 (en) 2017-09-07 2023-10-17 University Of Florida Research Foundation, Inc. Chimeric antigen receptor t-cells expressing interleukin-8 receptor
WO2019055807A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS
KR20220015499A (ko) * 2017-10-03 2022-02-08 프리베일 테라퓨틱스, 인크. 리소좀 장애를 위한 유전자 요법
US11642422B2 (en) 2017-10-16 2023-05-09 Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas, O.A, M.P. Lentiviral vectors for delivery of PKLR to treat pyruvate kinase deficiency
JP7367988B2 (ja) * 2017-10-18 2023-10-24 ワシントン・ユニバーシティ 神経変性の疾患または障害のための治療戦略としてのドミナントネガティブｓａｒｍ１分子
KR20200081420A (ko) * 2017-10-31 2020-07-07 모더나티엑스, 인크. Vegf-a 폴리펩타이드를 인코딩하는 변형된 rna를 운반하기 위한 지질 나노입자
US11859215B2 (en) * 2017-11-22 2024-01-02 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of urea cycle disorders
EP3714047A2 (en) 2017-11-22 2020-09-30 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding phenylalanine hydroxylase for the treatment of phenylketonuria
WO2019104038A1 (en) * 2017-11-22 2019-05-31 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Compositions and methods for administering a yap1/wwrt1 inhibiting composition and a gls1 inhibiting composition
WO2019104195A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits for the treatment of propionic acidemia
WO2019113123A1 (en) * 2017-12-04 2019-06-13 Precithera, Inc. TGF-ß RECEPTOR FUSION PROTEINS AND OTHER TGF-ß ANTAGONISTS FOR REDUCING TGF-ß SIGNALING
WO2019112982A1 (en) * 2017-12-05 2019-06-13 Synthetic Genomics, Inc Improving algal lipid productivity via genetic modification of a signaling protein
GB201720224D0 (en) * 2017-12-05 2018-01-17 Royal Holloway & Bedford New College Treatment of muscular dystrophies
AU2018383658B2 (en) * 2017-12-13 2022-02-10 Inovio Pharmaceuticals, Inc. Cancer vaccines targeting mesothelin and uses thereof
RU2751253C1 (ru) * 2017-12-13 2021-07-12 Иновио Фармасьютикалз, Инк. Противораковые вакцины, нацеленные на сурвивин, и их применения
CN111479822A (zh) 2017-12-13 2020-07-31 艾诺奥医药品有限公司 靶向lemd1的癌症疫苗和其用途
AU2018385759B2 (en) 2017-12-14 2021-10-21 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic transducer driver and controller
MX2020006150A (es) 2017-12-15 2020-11-11 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Composiciones que comprenden polirribonucleotidos circulares y usos de las mismas.
WO2019126186A1 (en) 2017-12-18 2019-06-27 Neon Therapeutics, Inc. Neoantigens and uses thereof
US11167043B2 (en) 2017-12-20 2021-11-09 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
MA51523A (fr) 2018-01-05 2020-11-11 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour des anticorps anti-virus du chikungunya
EP3746090A4 (en) 2018-01-29 2021-11-17 ModernaTX, Inc. RSV RNA Vaccines
SG11202006722RA (en) * 2018-01-31 2020-08-28 Res Inst Nationwide Childrens Hospital Gene therapy for limb-girdle muscular dystrophy type 2c
CN111971397A (zh) * 2018-02-14 2020-11-20 耶鲁大学 用于调节trem或treml蛋白的组合物及其使用方法
US11707510B2 (en) * 2018-02-16 2023-07-25 Preclinics Discovery Gmbh Nucleic acid-based botulinum neurotoxin for therapeutic use
TW202000238A (zh) * 2018-02-26 2020-01-01 比利時商艾伯林克斯公司 編碼肽連接子之經改良核苷酸序列
US20210000975A1 (en) * 2018-03-07 2021-01-07 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Modrna encoding sphingolipid-metabolizing proteins
WO2019173615A1 (en) * 2018-03-07 2019-09-12 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Sphingolipid-metabolizing proteins enhance the efficiency of gene editing in cells
EP3775053B1 (en) * 2018-04-04 2023-09-06 North Carolina State University Fibrin-specific materials and methods of using thereof
US20210163556A1 (en) * 2018-04-06 2021-06-03 Northwestern University Bdnf mimetic peptide amphiphiles
PL3773689T3 (pl) 2018-04-11 2023-03-13 Enterome S.A. Peptydy antygenowe do zapobiegania i leczenia raka
MX2020011386A (es) * 2018-04-27 2021-01-29 Spacecraft Seven Llc Terapia genica para la degeneracion del snc.
US10786438B2 (en) * 2018-04-27 2020-09-29 Krystal Biotech, Inc. Recombinant nucleic acids encoding cosmetic protein(s) for aesthetic applications
JP2021522790A (ja) 2018-05-02 2021-09-02 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア ホスホリパーゼａ２受容体キメラ自己受容体ｔ細胞の組成物および方法
GB201807831D0 (en) * 2018-05-15 2018-06-27 Univ College Cardiff Consultants Ltd Cancer Vaccine
PE20210337A1 (es) * 2018-05-16 2021-02-19 Spark Therapeutics Inc CASETES DE EXPRESION DE alfa-GLUCOSIDASA DE ACIDO OPTIMIZADO CON CODON Y METODOS DE USO DEL MISMO
WO2019236593A1 (en) * 2018-06-05 2019-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of muscle specific kinase chimeric autoantibody receptor cells
CN111073899B (zh) * 2018-10-19 2021-01-01 武汉纽福斯生物科技有限公司 一种编码人nadh脱氢酶亚单位4蛋白的核酸及其应用
EP3813871A4 (en) 2018-06-29 2022-10-12 Icahn School of Medicine at Mount Sinai SPHINGOLIPID METABOLIZING PROTEINS ENCODING FOR ANC80
EP3814492A4 (en) * 2018-06-29 2022-02-23 Wuhan Neurophth Biotechnology Limited Company COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING LEBER'S HEREDITARY OPTIC NEUROPATHY
WO2020010007A1 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Novel thyroid peroxidase autoantibody immunoassay
SG11202101067XA (en) * 2018-07-04 2021-03-30 Cytoimmune Therapeutics Inc Compositions and methods for immunotherapy targeting flt3, pd-1, and/or pd-l1
CN110699367B (zh) * 2018-07-09 2021-06-11 武汉纽福斯生物科技有限公司 编码人nadh脱氢酶亚单位4蛋白的核酸及其应用
US11524986B2 (en) 2018-07-11 2022-12-13 Ohio University Peptide-based inhibitors of growth hormone action and methods of use thereof
US20220184185A1 (en) 2018-07-25 2022-06-16 Modernatx, Inc. Mrna based enzyme replacement therapy combined with a pharmacological chaperone for the treatment of lysosomal storage disorders
KR102653878B1 (ko) 2018-08-01 2024-04-01 난트퀘스트, 인크. 면역 요법의 안정한 유전적 변형을 위한 귀소 수용체 또는 사이토카인, 및 키메라 항원 수용체를 포함하는 4 시스트론 시스템 (a quadricistronic system comprising a homing receptor or a cytokine, and chimeric antigen receptor for genetic modification of immunotherapies)
US20210315980A1 (en) * 2018-08-21 2021-10-14 Georgia State University Research Foundation, Inc. Treatment of flavivirus infections in humans using mus musculus resistant 2'-5' oligoadenylate synthetase 1b
WO2020041474A1 (en) * 2018-08-22 2020-02-27 Blueallele, Llc Methods for delivering gene editing reagents to cells within organs
SG11202101429YA (en) 2018-08-23 2021-03-30 Seagen Inc Anti-tigit antibodies
CA3110309A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-27 Rutgers, The State University Of New Jersey Treating spinal cord injury (sci) and brain injury using gsx1
CN112930396A (zh) 2018-08-24 2021-06-08 川斯勒佰尔公司 用于纯化信使rna的方法
WO2020047476A1 (en) * 2018-08-31 2020-03-05 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Adeno-associated viral vectors for the treatment of best disease
US20220110966A1 (en) 2018-09-02 2022-04-14 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding very long-chain acyl-coa dehydrogenase for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
CN109385487B (zh) * 2018-09-11 2022-04-01 浙江省食品药品检验研究院 贵细中草药西洋参的重组酶介导扩增恒温检测方法及试剂盒
EP3849594A2 (en) 2018-09-13 2021-07-21 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding branched-chain alpha-ketoacid dehydrogenase complex e1-alpha, e1-beta, and e2 subunits for the treatment of maple syrup urine disease
CN113164561A (zh) 2018-09-13 2021-07-23 摩登纳特斯有限公司 用于治疗糖原贮积病的编码葡萄糖-6-磷酸酶的多核苷酸
US20220401584A1 (en) 2018-09-14 2022-12-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide a1 for the treatment of crigler-najjar syndrome
KR20210070305A (ko) 2018-09-18 2021-06-14 브이엔브이 뉴코 인크. Arc 기반 캡시드 및 이의 용도
CN109106948B (zh) * 2018-09-19 2022-03-29 天康制药(苏州)有限公司 一种口蹄疫抗原保护剂及其应用
EP3856233A1 (en) 2018-09-27 2021-08-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding arginase 1 for the treatment of arginase deficiency
WO2020072914A1 (en) 2018-10-04 2020-04-09 New England Biolabs, Inc. Methods and compositions for increasing capping efficiency of transcribed rna
US11072808B2 (en) 2018-10-04 2021-07-27 New England Biolabs, Inc. Methods and compositions for increasing capping efficiency of transcribed RNA
KR20210093232A (ko) 2018-10-09 2021-07-27 더 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아 유기용매와 세제가 없는 형질감염 적격 소포를 포함하는 조성물과 시스템 및 관련 방법
WO2020074690A1 (en) * 2018-10-12 2020-04-16 Vivet Therapeutics Codon-optimized transgene for the treatment of progressive familiar intrahepatic cholestasis type 3 (pfic3)
CN111118016B (zh) * 2018-10-30 2022-04-15 上海朗昇生物科技有限公司 治疗视网膜色素变性疾病的基因治疗载体
US20210395778A1 (en) * 2018-11-01 2021-12-23 University Of Florida Research Foundation, Incorporated A codon optimized otoferlin aav dual vector gene therapy
US20210371837A1 (en) * 2018-11-05 2021-12-02 The University Of North Carolina At Chapel Hill Optimized fig4 genes and expression cassettes and their use
US20220016265A1 (en) * 2018-11-09 2022-01-20 Translate Bio, Inc. Messenger rna therapy for treatment of ocular diseases
AU2019381329A1 (en) 2018-11-14 2021-05-06 Urovant Sciences Gmbh Compositions and methods for the treatment of smooth muscle dysfunction
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
WO2020132385A1 (en) * 2018-12-21 2020-06-25 The University Of North Carolina At Chapel Hill Optimized galc genes and expression cassettes and their use
US11562809B2 (en) * 2018-12-25 2023-01-24 Shenzhen Jingtai Technology Co., Ltd. Method for automatically generating universal set of stereoisomers of organic molecule
US20220118017A1 (en) * 2019-01-09 2022-04-21 The Johns Hopkins University Engineered tuberous sclerosis complex 2 polypeptides
TW202043256A (zh) 2019-01-10 2020-12-01 美商健生生物科技公司 前列腺新抗原及其用途
US20220119478A1 (en) * 2019-01-15 2022-04-21 Caerus Therapeutics, Corp. Advanced chimeric antigen receptor vectors for targeting solid tumors
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
CA3130888A1 (en) 2019-02-20 2020-08-27 Modernatx, Inc. Rna polymerase variants for co-transcriptional capping
US11851694B1 (en) 2019-02-20 2023-12-26 Modernatx, Inc. High fidelity in vitro transcription
EP3927380A1 (en) * 2019-02-22 2021-12-29 University of Massachusetts Oxr1 gene therapy
KR20220023962A (ko) * 2019-03-27 2022-03-03 시질론 테라퓨틱스, 인크. 파브리병을 치료하기 위한 조성물, 디바이스 및 방법
CA3133357A1 (en) * 2019-03-27 2020-10-01 Sigilon Therapeutics, Inc. Compositions, devices and methods for factor vii therapy
US10967119B1 (en) 2019-04-01 2021-04-06 Azizi Bilal Wearable medication injecting device
CN109998055B (zh) * 2019-04-09 2022-03-25 黑龙江省科学院大庆分院 一种汉麻籽抗氧化多肽咀嚼片及其制备方法
US20220162639A1 (en) * 2019-04-15 2022-05-26 The Regents Of The University Of California Treatment for restoring ureagenesis in carbamoyl phosphate synthetase 1 deficiency
SG11202111279QA (en) * 2019-04-24 2021-11-29 Univ Pennsylvania Compositions useful in treatment of rett syndrome
JP2022530845A (ja) * 2019-04-27 2022-07-04 オクジェン アイエヌシー． 眼疾患に対するａｄｅｎｏ随伴ウイルス連ウイルスベクター媒介遺伝子治療
US20220220168A1 (en) * 2019-05-08 2022-07-14 The Feinstein Institues For Medical Research Interferon regulatory factor 5 inhibitors and uses thereof
US20220220503A1 (en) * 2019-05-08 2022-07-14 The Regents Of The University Of California A method to prevent the myelin abnormalites associated with arginase deficiency
EP3965797A1 (en) 2019-05-08 2022-03-16 AstraZeneca AB Compositions for skin and wounds and methods of use thereof
AU2020274200A1 (en) * 2019-05-14 2021-11-25 Duke University Compositions and methods for the treatment of ATPase-mediated diseases
EA202193198A1 (ru) * 2019-05-21 2022-02-24 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способы идентификации и количественного определения белка клетки-хозяина
JP2022535745A (ja) * 2019-05-31 2022-08-10 アメリカン ジーン テクノロジーズ インターナショナル インコーポレイテッド 最適化されたフェニルアラニンヒドロキシラーゼ発現
US20220370638A1 (en) * 2019-06-20 2022-11-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of maple syrup urine disease
CN110256578B (zh) * 2019-06-24 2021-04-23 王跃驹 植物生产人霍乱毒素b亚基(ctb)与胰岛素原的融合蛋白速效口服降糖胶囊的应用
US20210052776A1 (en) 2019-07-02 2021-02-25 Nevin Witman Mesenchymal stem cells or stromal cells harboring modified rnas encoding vegf and bmp polypeptides
US20220257725A1 (en) * 2019-07-11 2022-08-18 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods for treating peroxisomal biogenesis disorders
US11377655B2 (en) 2019-07-16 2022-07-05 Pacific Biosciences Of California, Inc. Synthetic nucleic acids having non-natural structures
US10501404B1 (en) 2019-07-30 2019-12-10 Factor Bioscience Inc. Cationic lipids and transfection methods
WO2021038508A1 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa Jet mixing lipid nanoparticle manufacturing process
US11644463B2 (en) * 2019-08-30 2023-05-09 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika Ag Detection of an autoantibody
WO2021050940A1 (en) * 2019-09-13 2021-03-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Transcription modulation in animals using crispr/cas systems delivered by lipid nanoparticles
WO2021067687A1 (en) * 2019-10-03 2021-04-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Vcx/y peptides and use thereof
WO2021076811A1 (en) * 2019-10-15 2021-04-22 Moderna TX, Inc. Mrnas encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for treating parkinson's disease
MX2022004812A (es) * 2019-10-22 2023-02-23 Applied Genetic Tech Corporation Sistemas de virus adeno-asociados (aav) para el tratamiento de enfermedades o trastornos neurodegenerativos asociados a la progranulina.
JP2022553406A (ja) * 2019-10-23 2022-12-22 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 導入遺伝子発現のｄｒｇ特異的低減のための組成物
CN110684751B (zh) * 2019-10-23 2021-06-25 江南大学 一种催化能力提高的淀粉分支酶突变体
CN110669104B (zh) * 2019-10-30 2021-11-05 上海交通大学 一组来源于人外周血单核细胞的标志物及其应用
CN114901802A (zh) * 2019-10-30 2022-08-12 阿米库斯治疗学公司 重组cdkl5蛋白、基因疗法和生产方法
WO2021092440A1 (en) * 2019-11-07 2021-05-14 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Synthetic modified rna and uses thereof
US20220401580A1 (en) * 2019-11-12 2022-12-22 University Of Virginia Patent Foundation Optidicer construct for age-related macular degeneration
WO2021094562A2 (en) 2019-11-15 2021-05-20 Enterome S.A. Antigenic peptides for prevention and treatment of b-cell malignancy
US20230026791A1 (en) * 2019-11-22 2023-01-26 Critical Outcome Technologies Inc. Peptides, compounds, compositions and methods for inhibiting sox9
CN113025633A (zh) * 2019-12-09 2021-06-25 武汉纽福斯生物科技有限公司 编码人nadh脱氢酶亚单位1蛋白的核酸及其应用
US11904006B2 (en) 2019-12-11 2024-02-20 University Of Iowa Research Foundation Poly(diaminosulfide) particle-based vaccine
KR20220119085A (ko) 2019-12-20 2022-08-26 남미 테라퓨틱스, 인크. 암의 치료에 유용한 톨-유사 수용체 (“tlr”) 효능제 전구약물을 함유하는 제제화된 및/또는 공동-제제화된 리포솜 조성물 및 그의 방법
CN111004787B (zh) * 2020-01-06 2022-05-10 江南大学 一种链霉菌磷脂酶d突变体、改造方法及其应用
WO2021146327A1 (en) * 2020-01-13 2021-07-22 University Of Kentucky Research Foundation Inhibition of dennd5b expression for treating hepatic steatosis
CN111166884B (zh) * 2020-01-15 2021-12-03 广州中医药大学第一附属医院 Foxf1基因在制备用于骨质疏松症药物中的应用
KR102114880B1 (ko) * 2020-01-15 2020-05-26 서울대학교병원 코돈 최적화된 TIF1γ 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 용도
WO2021151001A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Outpace Bio, Inc. Chimeric polypeptides
US11230699B2 (en) 2020-01-28 2022-01-25 Immunitybio, Inc. Chimeric antigen receptor-modified NK-92 cells targeting EGFR super-family receptors
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
WO2021163695A2 (en) * 2020-02-14 2021-08-19 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Novel t cell receptors (tcrs) that react to neoantigens
US11318191B2 (en) 2020-02-18 2022-05-03 Novo Nordisk A/S GLP-1 compositions and uses thereof
EP4117735A4 (en) * 2020-03-09 2024-04-10 Univ Massachusetts GENE REPLACEMENT THERAPY FOR FOXG1 SYNDROME
JP2021147353A (ja) * 2020-03-19 2021-09-27 国立大学法人信州大学 組成物、脂質粒子製造用キット、物質送達方法及び検出方法
BR112022019182A2 (pt) * 2020-04-06 2022-11-29 Homology Medicines Inc Composições de vírus adeno-associadas para transferência do gene ids e métodos de uso da mesma
US20210324410A1 (en) * 2020-04-14 2021-10-21 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav-based gene therapies for treatment of autoimmune diseases
IL297419A (en) 2020-04-22 2022-12-01 BioNTech SE Vaccine against the corona virus
KR20210131855A (ko) * 2020-04-23 2021-11-03 런엑스 주식회사 R-point 조절 단백질 복합체를 유효성분으로 포함하는 폐암 치료용 약학적 조성물, 상기 복합체의 형성 여부를 이용한 폐암 치료제 스크리닝 방법 및 폐암 진단 방법
CN115885040A (zh) * 2020-04-27 2023-03-31 宾夕法尼亚州大学信托人 可用于治疗cdkl5缺乏症（cdd）的组合物
CN111665361B (zh) * 2020-04-29 2023-02-28 中南林业科技大学 一种溶酶体标记磁性荧光淀粉纳米颗粒及其制备方法
AU2021263590A1 (en) * 2020-05-01 2023-01-19 Arcturus Therapeutics, Inc. Nucleic acids and methods of treatment for cystic fibrosis
EP4146801A2 (en) * 2020-05-04 2023-03-15 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Compositions, systems, and methods for the generation, identification, and characterization of effector domains for activating and silencing gene expression
EP4149565A2 (en) * 2020-05-11 2023-03-22 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Systems and methods for enhancing gene expression
US11129892B1 (en) 2020-05-18 2021-09-28 Vnv Newco Inc. Vaccine compositions comprising endogenous Gag polypeptides
JP2023527441A (ja) * 2020-05-29 2023-06-28 ベッソール ファルマ、エルエルシー レナラーゼアゴニスト活性を有する安定なペプチド
US20230235298A1 (en) 2020-06-01 2023-07-27 Modernatx, Inc. Phenylalanine hydroxylase variants and uses thereof
CN116194755A (zh) * 2020-06-23 2023-05-30 总医院公司 隧道纳米管细胞及其用于递送生物分子的方法
US20230024133A1 (en) * 2020-07-06 2023-01-26 Janssen Biotech, Inc. Prostate Neoantigens And Their Uses
WO2022020114A2 (en) 2020-07-10 2022-01-27 Ting Therapeutics Llc Methods for the prevention and treatment of hearing loss
WO2022026516A1 (en) * 2020-07-29 2022-02-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Transgene cassettes, aav vectors, and aav viral vectors for expression of human codon-optimized cstb
CA3190720A1 (en) * 2020-08-03 2022-02-10 Prevail Therapeutics, Inc. Aav vectors encoding parkin and uses thereof
TWI784298B (zh) * 2020-08-06 2022-11-21 大江生醫股份有限公司 生物活性物質用於製備促進肌膚膠原蛋白質生成及提升肌膚膠原蛋白質密度的組合物的用途
CN114053165B (zh) * 2020-08-06 2023-10-20 大江生医股份有限公司 生物活性物质用于制备改善皮肤状态的组合物的用途
WO2022040275A1 (en) * 2020-08-19 2022-02-24 University Of Massachusetts Development of novel gene therapeutics inflammation-induced bone loss
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
US20230302135A1 (en) * 2020-08-26 2023-09-28 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Hybrid allosteric receptor-engineered stem cells
EP4211468A2 (en) * 2020-09-11 2023-07-19 Glympse Bio, Inc. Ex vivo protease activity detection for disease detection/diagnostic, staging, monitoring and treatment
CN112063625A (zh) * 2020-09-24 2020-12-11 武汉纽福斯生物科技有限公司 编码arl2bp的核酸及其应用
AU2021353867A1 (en) * 2020-09-29 2023-05-11 NeuExcell Therapeutics Inc. Neurod1 combination vector
TW202233232A (zh) 2020-11-06 2022-09-01 法商賽諾菲公司 遞送mRNA疫苗的脂質奈米顆粒
US20220145302A1 (en) * 2020-11-09 2022-05-12 Battle Biotech, LLC Targets and methods for treating epstein-barr virus mediated neurodegeneration
WO2022104131A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis
CN112402592B (zh) * 2020-12-04 2023-06-02 中国人民解放军陆军军医大学 Spink7蛋白在制备促进过度炎症创面愈合的药物中的应用
CN112480242B (zh) * 2020-12-04 2023-06-06 中国人民解放军陆军军医大学 Spink7蛋白在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用
CN112552375B (zh) * 2020-12-11 2022-12-23 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种罗非鱼副产物抗菌肽及其筛选方法和应用
CN112592902B (zh) * 2020-12-16 2022-03-29 熊猫乳品集团股份有限公司 一种生物活性肽aseppvldvkrpflc及其制备方法和应用
KR20230164648A (ko) 2020-12-22 2023-12-04 큐어백 에스이 SARS-CoV-2 변이체에 대한 RNA 백신
EP4271390A1 (en) * 2020-12-30 2023-11-08 Mayo Foundation for Medical Education and Research Suppression-replacement gene therapy
WO2022155665A1 (en) * 2021-01-14 2022-07-21 Spark Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating fabry disease
CN112725346A (zh) * 2021-01-22 2021-04-30 青岛大学 一种增加尿酸排泄的修饰mRNA序列及其应用
EP4284417A2 (en) * 2021-01-27 2023-12-06 Spark Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating hereditary angioedema
JP2024508620A (ja) * 2021-02-05 2024-02-28 シギロン セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｍｐｓ ｖｉ疾患を治療するための組成物、デバイス及び方法
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
WO2022178093A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 New England Biolabs, Inc. Compositions and methods for labeling modified nucleotides in nucleic acids
EP4298230A1 (en) * 2021-02-25 2024-01-03 Lyell Immunopharma, Inc. Codon-optimized nucleotide sequences encoding an ap-1 transcription factor
US20240123087A1 (en) * 2021-03-19 2024-04-18 Recode Therapeutics, Inc. Polynucleotide compositions, related formulations, and methods of use thereof
CA3211687A1 (en) * 2021-03-19 2022-09-22 Ozan ALKAN Non-viral dna vectors and uses thereof for expressing pfic therapeutics
EP4313110A1 (en) * 2021-03-22 2024-02-07 The Johns Hopkins University K-ras inhibitor
WO2022204380A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits and uses thereof
WO2022204369A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase for the treatment of methylmalonic acidemia
WO2022204390A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding phenylalanine hydroxylase and uses thereof
WO2022204370A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
WO2022204371A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding glucose-6-phosphatase and uses thereof
US20220325255A1 (en) * 2021-03-31 2022-10-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for treating viral infections targeting trim7
WO2022217037A1 (en) * 2021-04-09 2022-10-13 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for treatment of chronic lung diseases
BR112023021037A2 (pt) * 2021-04-12 2023-12-19 Univ California Terapia gênica para cardiomiopatia ventricular direita arritmogênica
AU2022261885A1 (en) * 2021-04-20 2023-11-09 Walking Fish Therapeutics, Inc. Engineering b cell-based protein factories to treat serious diseases
CN115025247A (zh) * 2021-04-23 2022-09-09 上海交通大学医学院 包载促血小板生成素mRNA的组合物及其用途
TWI828126B (zh) * 2021-04-27 2024-01-01 中央研究院 用以治療高三酸甘油脂血症或其相關疾病的方法
EP4085932A1 (en) * 2021-05-03 2022-11-09 H.M.Z. Privatstiftung Stabilized, modified rna for use in the treatment of a disease associated with the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (cftr) gene
WO2022235566A1 (en) * 2021-05-03 2022-11-10 North Carolina State University Compositions and methods related to the treatment of ocular diseases in equines
WO2022251096A1 (en) * 2021-05-23 2022-12-01 Oregon Health & Science University Promoter sequence and related products and uses thereof
WO2022251644A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Lyell Immunopharma, Inc. Nr4a3-deficient immune cells and uses thereof
US20230052243A1 (en) 2021-06-02 2023-02-16 Lyell Immunopharma, Inc. Nr4a-deficient cells expressing c-jun and uses thereof
WO2022271776A1 (en) 2021-06-22 2022-12-29 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide a1 for the treatment of crigler-najjar syndrome
CN113577303B (zh) * 2021-07-05 2023-06-02 四川大学 三分枝rgd修饰的脑胶质瘤靶向脂质材料的制备和应用
WO2023288325A2 (en) * 2021-07-16 2023-01-19 Ptc Therapeutics Inc. Recombinant reelin gene therapy
KR20240046878A (ko) * 2021-08-11 2024-04-11 더 트러스티즈 오브 인디애나 유니버시티 조직 리프로그래밍용 후성적 조절인자
CA3230004A1 (en) * 2021-08-25 2023-03-02 Yunxiang Zhu Aav particles comprising liver-tropic capsid protein and acid alpha-glucosidase and use to treat pompe disease
IL309505A (en) 2021-09-03 2024-02-01 CureVac SE Lipid nanoparticles for nucleic acid delivery
BR102021018527A2 (pt) * 2021-09-17 2023-03-28 Fundação Oswaldo Cruz Aptâmero de ácido nucleico, composição, uso de um aptâmero, kit diagnóstico, método para detectar ou diagnosticar um tumor, e, método para tratamento de câncer
WO2023049846A1 (en) * 2021-09-24 2023-03-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful for treatment of charcot-marie-tooth disease
WO2023053123A1 (en) * 2021-09-29 2023-04-06 Sirt 6 Research And Development (2020) Ltd A method for treating a disease
WO2023056044A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding relaxin for the treatment of fibrosis and/or cardiovascular disease
WO2023060059A2 (en) * 2021-10-05 2023-04-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Treatment of polycythemia vera via cr1spr/aav6 genome editing
CA3233987A1 (en) * 2021-10-06 2023-04-13 Carl NOVINA Engineered cytokine receptors for tunable adoptive cell therapy
WO2023061985A2 (en) 2021-10-12 2023-04-20 Modernatx, Inc. Compositions comprising modified rna encoding vegf-a and methods of use
WO2023069423A2 (en) * 2021-10-18 2023-04-27 Logicbio Therapeutics, Inc. Gene therapy for the treatment of ht1
WO2023069498A1 (en) 2021-10-22 2023-04-27 Senda Biosciences, Inc. Mrna vaccine composition
WO2023073228A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
WO2023077170A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding integrin beta-6 and methods of use thereof
WO2023086830A1 (en) * 2021-11-09 2023-05-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Intraspinal delivery of therapeutic agents
WO2023084013A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 Modernatx, Inc. Compositions comprising modified rna encoding vegf-a and methods of use
WO2023096858A1 (en) 2021-11-23 2023-06-01 Senda Biosciences, Inc. A bacteria-derived lipid composition and use thereof
WO2023122080A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Senda Biosciences, Inc. Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs
WO2023122632A1 (en) * 2021-12-21 2023-06-29 Sri International Dual targeting for cell-specific delivery to the central nervous system
WO2023133575A2 (en) * 2022-01-10 2023-07-13 Mahana Therapeutics, Inc. Methods and systems for treating chronic itch conditions using digital therapeutics in combination with other therapies
WO2023141376A2 (en) * 2022-01-20 2023-07-27 Mahana Therapeutics, Inc. Methods and systems for treating respiratory conditions using digital therapeutics in combination with other therapies
WO2023144330A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
WO2023144798A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Genevant Sciences Gmbh Ionizable cationic lipids for lipid nanoparticles
WO2023150743A2 (en) * 2022-02-07 2023-08-10 Aavogen Inc. Codon-optimized smad7 gene therapy to treat and prevent muscle wasting and to enhance muscle mass
CN114533569B (zh) * 2022-02-16 2023-08-25 杭州诺莘科技有限责任公司 适用于眼部皮肤的细胞穿膜肽/磷脂聚合物修饰的脂质体乳液及其制备和应用
TW202345864A (zh) 2022-02-18 2023-12-01 美商現代公司 編碼檢查點癌症疫苗之ｍＲＮＡ及其用途
WO2023177904A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Modernatx, Inc. Sterile filtration of lipid nanoparticles and filtration analysis thereof for biological applications
WO2023183909A2 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding fanconi anemia, complementation group proteins for the treatment of fanconi anemia
WO2023187127A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Enterome S.A. Antigenic peptides for prevention and treatment of cancer
WO2023196399A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding argininosuccinate lyase for the treatment of argininosuccinic aciduria
WO2023197001A2 (en) * 2022-04-07 2023-10-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for treating liver diseases with sirnas targeting cideb
WO2023196539A2 (en) * 2022-04-07 2023-10-12 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for treatment of cancer
WO2023212654A2 (en) * 2022-04-27 2023-11-02 The Regents Of The University Of Colorado A Body Corporate Non-endogenous protein production in plant systems
WO2023218278A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Urovant Sciences Gmbh Long-term gene therapy for overactive bladder
WO2023220428A1 (en) * 2022-05-12 2023-11-16 Wave Life Sciences Ltd. Compositions for editing ass1 transcripts and methods thereof
WO2023225665A1 (en) 2022-05-19 2023-11-23 Lyell Immunopharma, Inc. Polynucleotides targeting nr4a3 and uses thereof
WO2023230003A1 (en) * 2022-05-23 2023-11-30 Yale University Compositions and methods for treating liver disease
WO2023227608A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
CN114920806B (zh) * 2022-06-07 2023-09-12 中南大学 多肽及其抗体、以及检测它们的试剂在制备鼻咽癌诊断、预后或治疗制剂中的应用
WO2024002985A1 (en) 2022-06-26 2024-01-04 BioNTech SE Coronavirus vaccine
PT118087A (pt) 2022-07-06 2024-01-08 I3S Instituto De Investig E Inovacao Em Saude Associacao Supressores de ttl e mcak para uso no tratamento do cancro através da sensibilização à resposta ao taxol
WO2024026295A1 (en) * 2022-07-27 2024-02-01 Aera Therapeutics, Inc. Endogenous gag-based and pnma family capsids and uses thereof
WO2024044147A1 (en) 2022-08-23 2024-02-29 Modernatx, Inc. Methods for purification of ionizable lipids
EP4327829A1 (en) 2022-08-26 2024-02-28 Ethris GmbH Stabilization of lipid or lipidoid nanoparticle suspensions
WO2024042236A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Ethris Gmbh Stable lipid or lipidoid nanoparticle suspensions
AU2023274159A1 (en) * 2022-09-07 2024-03-21 Eyegene Inc. COMPOSITION FOR IN-VIVO DELIVERING mRNA CONTAINING MODIFIED NUCLEOTIDE

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002508299A (ja) * 1997-09-19 2002-03-19 セクイター， インク． センスｍＲＮＡ治療
US20070037148A1 (en) * 2000-03-31 2007-02-15 Sherman Fong Compositions and methods for the treatmetn of natural killer cell related diseases
US20120065252A1 (en) * 2010-08-06 2012-03-15 Jason Schrum Engineered nucleic acids and methods of use thereof

Family Cites Families (1464)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2008526A (en) 1932-11-03 1935-07-16 Wappler Frederick Charles Method and means for treating living tissue
US3467096A (en) 1966-04-12 1969-09-16 Ferrell S Horn Multiple hypodermic syringe arrangement
BE757653A (fr) 1969-10-21 1971-04-16 Ugine Kuhlmann Nouveaux medicaments derives d'acides nucleiques et procedes pour leur preparation
BE786542A (fr) 1971-07-22 1973-01-22 Dow Corning Dispositif d'aspiration permettant d'obtenir des echantillons de cellules
US3906092A (en) 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4411657A (en) 1980-05-19 1983-10-25 Anibal Galindo Hypodermic needle
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4401796A (en) 1981-04-30 1983-08-30 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4373071A (en) 1981-04-30 1983-02-08 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4474569A (en) 1982-06-28 1984-10-02 Denver Surgical Developments, Inc. Antenatal shunt
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4737462A (en) 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US4579849A (en) 1984-04-06 1986-04-01 Merck & Co., Inc. N-alkylguanine acyclonucleosides as antiviral agents
US4957735A (en) 1984-06-12 1990-09-18 The University Of Tennessee Research Corporation Target-sensitive immunoliposomes- preparation and characterization
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
US4959314A (en) 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US5036006A (en) 1984-11-13 1991-07-30 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5116943A (en) 1985-01-18 1992-05-26 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein
CA1288073C (en) 1985-03-07 1991-08-27 Paul G. Ahlquist Rna transformation vector
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
EP0204401A1 (en) 1985-04-09 1986-12-10 Biogen, Inc. Method of improving the yield of polypeptides produced in a host cell by stabilizing mRNA
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US5017691A (en) 1986-07-03 1991-05-21 Schering Corporation Mammalian interleukin-4
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
US5153319A (en) 1986-03-31 1992-10-06 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4879111A (en) 1986-04-17 1989-11-07 Cetus Corporation Treatment of infections with lymphokines
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
US6090591A (en) 1987-07-31 2000-07-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective amplification of target polynucleotide sequences
WO1989001050A1 (en) 1987-07-31 1989-02-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective amplification of target polynucleotide sequences
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
CA1327358C (en) 1987-11-17 1994-03-01 Morio Fujiu Fluoro cytidine derivatives
AU624601B2 (en) 1988-01-21 1992-06-18 Genentech Inc. Amplification and detection of nucleic acid sequences
JP2650159B2 (ja) 1988-02-24 1997-09-03 アクゾ・ノベル・エヌ・ベー 核酸増幅方法
CA1340807C (en) 1988-02-24 1999-11-02 Lawrence T. Malek Nucleic acid amplification process
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
EP0403559A1 (en) 1988-03-04 1990-12-27 Cancer Research Campaign Technology Limited Improvements relating to antigens
JPH02503867A (ja) 1988-04-15 1990-11-15 プロテイン　デザイン　ラブズ　インコーポレーテッド Ｉｌ‐２レセプター特異的キメラ抗体
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5021335A (en) 1988-06-17 1991-06-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5168038A (en) 1988-06-17 1992-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5759802A (en) 1988-10-26 1998-06-02 Tonen Corporation Production of human serum alubumin A
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5221732A (en) 1988-12-06 1993-06-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Antimicrobial magainin modified peptides
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US6214804B1 (en) 1989-03-21 2001-04-10 Vical Incorporated Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5693622A (en) 1989-03-21 1997-12-02 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences cardiac muscle of a mammal
US6673776B1 (en) 1989-03-21 2004-01-06 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate, mammal, fish, bird or human
US6867195B1 (en) 1989-03-21 2005-03-15 Vical Incorporated Lipid-mediated polynucleotide administration to reduce likelihood of subject's becoming infected
EP0737750B1 (en) 1989-03-21 2003-05-14 Vical, Inc. Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
US5012818A (en) 1989-05-04 1991-05-07 Joishy Suresh K Two in one bone marrow surgical needle
IE66597B1 (en) 1989-05-10 1996-01-24 Akzo Nv Method for the synthesis of ribonucleic acid (RNA)
US5240855A (en) 1989-05-12 1993-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Particle gun
US5332671A (en) 1989-05-12 1994-07-26 Genetech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
CA2020958C (en) 1989-07-11 2005-01-11 Daniel L. Kacian Nucleic acid sequence amplification methods
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5545522A (en) 1989-09-22 1996-08-13 Van Gelder; Russell N. Process for amplifying a target polynucleotide sequence using a single primer-promoter complex
KR0185192B1 (ko) 1989-10-05 1999-04-01 제임스 더블유. 데이비 신규의 유전자 및 폴리펩티드의 무세포 합성 및 분리
DK0497875T3 (da) 1989-10-24 2000-07-03 Gilead Sciences Inc 2'-modificerede oligonukleotider
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5215899A (en) 1989-11-09 1993-06-01 Miles Inc. Nucleic acid amplification employing ligatable hairpin probe and transcription
NO904633L (no) 1989-11-09 1991-05-10 Molecular Diagnostics Inc Amplifikasjon av nukleinsyrer ved transkriberbar haarnaalsprobe.
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US5697901A (en) 1989-12-14 1997-12-16 Elof Eriksson Gene delivery by microneedle injection
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US7037646B1 (en) 1990-01-11 2006-05-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US6783931B1 (en) 1990-01-11 2004-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
AU7579991A (en) 1990-02-20 1991-09-18 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
CA2028849A1 (en) 1990-03-08 1991-09-09 Michinao Mizugaki Monoclonal antibodies, assay method, reagent kit, sarching method and drug missiles using them
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DE69032425T2 (de) 1990-05-11 1998-11-26 Microprobe Corp Teststreifen zum Eintauchen für Nukleinsäure-Hybridisierungsassays und Verfahren zur kovalenten Immobilisierung von Oligonucleotiden
US5194370A (en) 1990-05-16 1993-03-16 Life Technologies, Inc. Promoter ligation activated transcription amplification of nucleic acid sequences
CA2042448A1 (en) 1990-06-05 1991-12-06 Jonathan P. Duvick Antimicrobial peptides and plant disease resistance based thereon
US5637459A (en) 1990-06-11 1997-06-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: chimeric selex
US5447914A (en) 1990-06-21 1995-09-05 Emory University Antimicrobial peptides
WO1992001813A1 (en) 1990-07-25 1992-02-06 Syngene, Inc. Circular extension for generating multiple nucleic acid complements
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US6140496A (en) 1990-10-09 2000-10-31 Benner; Steven Albert Precursors for deoxyribonucleotides containing non-standard nucleosides
WO1992008728A1 (en) 1990-11-08 1992-05-29 Hybridon, Inc. Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
US5527288A (en) 1990-12-13 1996-06-18 Elan Medical Technologies Limited Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs
AU648140B2 (en) 1991-02-01 1994-04-14 Virtual Drug Development, Inc. Reverse antimicrobial peptides and antimicrobial compositions
US6100024A (en) 1991-02-08 2000-08-08 Promega Corporation Methods and compositions for nucleic acid detection by target extension and probe amplification
DE69231828T3 (de) 1991-03-18 2008-06-19 New York University Spezifisch gegen menschlichen Tumornekrosefaktor gerichtete monoklonale und chimäre Antikörper
US5426180A (en) 1991-03-27 1995-06-20 Research Corporation Technologies, Inc. Methods of making single-stranded circular oligonucleotides
TW205553B (ja) 1991-04-25 1993-05-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5169766A (en) 1991-06-14 1992-12-08 Life Technologies, Inc. Amplification of nucleic acid molecules
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5199441A (en) 1991-08-20 1993-04-06 Hogle Hugh H Fine needle aspiration biopsy apparatus and method
ES2103918T3 (es) 1991-10-17 1997-10-01 Ciba Geigy Ag Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios.
US5298422A (en) 1991-11-06 1994-03-29 Baylor College Of Medicine Myogenic vector systems
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
JPH07503372A (ja) 1992-01-23 1995-04-13 バイカル・インコーポレイテッド 生体外遺伝子導入
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
JP3368603B2 (ja) 1992-02-28 2003-01-20 オリンパス光学工業株式会社 遺伝子治療用処置具
DE69231123T2 (de) 1992-03-25 2001-02-15 Immunogen Inc Konjugaten von Zell-bindender Mittel und Derivaten von CC-1065
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6132419A (en) 1992-05-22 2000-10-17 Genetronics, Inc. Electroporetic gene and drug therapy
US5514545A (en) 1992-06-11 1996-05-07 Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for characterizing single cells based on RNA amplification for diagnostics and therapeutics
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US6670178B1 (en) 1992-07-10 2003-12-30 Transkaryotic Therapies, Inc. In Vivo production and delivery of insulinotropin for gene therapy
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
ATE152180T1 (de) 1992-07-31 1997-05-15 Behringwerke Ag Verfahren zur einführung von definierten sequenzen am 3' ende von polynukleotiden
US5273525A (en) 1992-08-13 1993-12-28 Btx Inc. Injection and electroporation apparatus for drug and gene delivery
US5240885A (en) 1992-09-21 1993-08-31 Corning Incorporated Rare earth-doped, stabilized cadmium halide glasses
AU5665694A (en) 1992-11-04 1994-05-24 Denver Biomaterials Inc. Apparatus for removal of pleural effusion fluid
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
JP3095175B2 (ja) 1992-11-13 2000-10-03 アイデック ファーマシューティカルズ コーポレイション Ｂ細胞リンパ腫の治療のためのヒトｂリンパ球限定分化抗原に対するキメラ抗体と放射能標識抗体の療法利用
US5429923A (en) * 1992-12-11 1995-07-04 President And Fellows Of Harvard College Method for detecting hypertrophic cardiomyophathy associated mutations
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
ATE182625T1 (de) 1993-01-12 1999-08-15 Biogen Inc Rekombinante anti-vla4 antikörpermoleküle
US5607914A (en) 1993-01-13 1997-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic antimicrobial peptides
US5459235A (en) 1993-03-19 1995-10-17 The Regents Of The University Of California Antimicrobial peptides antibodies and nucleic acid molecules from bovine neutrophils
ES2107205T3 (es) 1993-03-30 1997-11-16 Sanofi Sa Analogos de nucleosidos aciclicos y secuencias oligonucleotidas que los contienen.
FR2703253B1 (fr) 1993-03-30 1995-06-23 Centre Nat Rech Scient Applicateur d'impulsions electriques pour traitement de tissus biologiques.
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US7135312B2 (en) 1993-04-15 2006-11-14 University Of Rochester Circular DNA vectors for synthesis of RNA and DNA
US5773244A (en) 1993-05-19 1998-06-30 Regents Of The University Of California Methods of making circular RNA
US6541498B2 (en) 1993-05-20 2003-04-01 Texas Biotechnology Benzenesulfonamides and the use thereof to modulate the activity of endothelin
US5851829A (en) 1993-07-16 1998-12-22 Dana-Farber Cancer Institute Method of intracellular binding of target molecules
US6294664B1 (en) 1993-07-29 2001-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5672491A (en) 1993-09-20 1997-09-30 The Leland Stanford Junior University Recombinant production of novel polyketides
US6432711B1 (en) 1993-11-03 2002-08-13 Diacrin, Inc. Embryonic stem cells capable of differentiating into desired cell lines
US6096503A (en) 1993-11-12 2000-08-01 The Scripps Research Institute Method for simultaneous identification of differentially expresses mRNAs and measurement of relative concentrations
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US7435802B2 (en) 1994-01-25 2008-10-14 Elan Pharaceuticals, Inc. Humanized anti-VLA4 immunoglobulins
US5840299A (en) 1994-01-25 1998-11-24 Athena Neurosciences, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule VLA-4
ES2224113T5 (es) 1994-02-16 2009-05-01 The Government Of The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Polipeptido antigenico asociado al melanoma, epitopos del mismo y vacunas contra melanoma.
IL112820A0 (en) 1994-03-07 1995-05-26 Merck & Co Inc Coordinate in vivo gene expression
JP3482209B2 (ja) 1994-03-18 2003-12-22 ジェロン・コーポレーション オリゴヌクレオチドｎ３’→ｐ５’ホスホルアミデート：合成および化合物；ハイブリダイゼーションおよびヌクレアーゼ耐性特性
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5457041A (en) 1994-03-25 1995-10-10 Science Applications International Corporation Needle array and method of introducing biological substances into living cells using the needle array
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
CA2190149C (en) 1994-05-18 2011-01-04 Jens Kossmann Dna sequences coding for enzymes capable of facilitating the synthesis of linear .alpha.-1,4 glucans in plants, fungi and microorganisms
US5550109A (en) 1994-05-24 1996-08-27 Magainin Pharmaceuticals Inc. Inducible defensin peptide from mammalian epithelia
WO1995033835A1 (en) 1994-06-02 1995-12-14 Chiron Corporation Nucleic acid immunization using a virus-based infection/transfection system
GB9412230D0 (en) 1994-06-17 1994-08-10 Celltech Ltd Interleukin-5 specific recombiant antibodies
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
DE69534530T2 (de) 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5641665A (en) 1994-11-28 1997-06-24 Vical Incorporated Plasmids suitable for IL-2 expression
US5665545A (en) 1994-11-28 1997-09-09 Akzo Nobel N.V. Terminal repeat amplification method
US5588960A (en) 1994-12-01 1996-12-31 Vidamed, Inc. Transurethral needle delivery device with cystoscope and method for treatment of urinary incontinence
US5807718A (en) 1994-12-02 1998-09-15 The Scripps Research Institute Enzymatic DNA molecules
US5585108A (en) 1994-12-30 1996-12-17 Nanosystems L.L.C. Formulations of oral gastrointestinal therapeutic agents in combination with pharmaceutically acceptable clays
EP0795018B1 (en) 1995-01-06 2007-09-12 Plant Research International B.V. Dna sequences encoding carbohydrate polymer synthesizing enzymes and method for producing transgenic plants
US5795587A (en) 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US5824497A (en) 1995-02-10 1998-10-20 Mcmaster University High efficiency translation of mRNA molecules
DE69629326D1 (de) 1995-02-15 2003-09-11 Joseph Eldor Spinalnadel mit mehreren Löchern
EP0735144B1 (en) 1995-03-28 2002-06-05 Japan Science and Technology Corporation Method for molecular indexing of genes using restriction enzymes
US5869230A (en) 1995-03-30 1999-02-09 Beth Israel Hospital Association Gene transfer into the kidney
US5986054A (en) 1995-04-28 1999-11-16 The Hospital For Sick Children, Hsc Research And Development Limited Partnership Genetic sequences and proteins related to alzheimer's disease
FR2733762B1 (fr) 1995-05-02 1997-08-01 Genset Sa Methode de couplage specifique de la coiffe de l'extremite 5' d'un fragment d'arnm et preparation d'arnm et d'adnc complet
US5700642A (en) 1995-05-22 1997-12-23 Sri International Oligonucleotide sizing using immobilized cleavable primers
US6057291A (en) 1995-06-02 2000-05-02 University Of British Columbia Antimicrobial cationic peptides
US6051429A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US6111095A (en) 1995-06-07 2000-08-29 Merck & Co., Inc. Capped synthetic RNA, analogs, and aptamers
US5889136A (en) 1995-06-09 1999-03-30 The Regents Of The University Of Colorado Orthoester protecting groups in RNA synthesis
US5734015A (en) 1995-06-19 1998-03-31 Magainin Pharmaceuticals Inc. Family of linear antimicrobial peptides from hagfish intestine
CA2230160A1 (en) 1995-08-23 1997-03-06 The University Of British Columbia Antimicrobial cationic peptides and methods of screening for the same
US5766903A (en) 1995-08-23 1998-06-16 University Technology Corporation Circular RNA and uses thereof
US6265389B1 (en) 1995-08-31 2001-07-24 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides
WO1997011085A1 (en) 1995-09-19 1997-03-27 University Of Massachusetts Inhibited biological degradation of oligodeoxynucleotides
US5830879A (en) 1995-10-02 1998-11-03 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. Treatment of vascular injury using vascular endothelial growth factor
US6265387B1 (en) 1995-10-11 2001-07-24 Mirus, Inc. Process of delivering naked DNA into a hepatocyte via bile duct
US5871697A (en) 1995-10-24 1999-02-16 Curagen Corporation Method and apparatus for identifying, classifying, or quantifying DNA sequences in a sample without sequencing
EP0771873A3 (en) 1995-10-27 1998-03-04 Takeda Chemical Industries, Ltd. Neuronal cell-specific receptor protein
CU22584A1 (es) 1995-11-17 1999-11-03 Centro Inmunologia Molecular Composiciones farmacéuticas que contienen un anticuerpo monoclonal que reconoce el antígeno de diferenciación leucocitario humano cd6 y sus usos para el diagnóstico y tratamiento de la psoriasis
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
AU724158B2 (en) 1995-12-13 2000-09-14 Syngenta Limited Antifungal proteins
US5962271A (en) 1996-01-03 1999-10-05 Cloutech Laboratories, Inc. Methods and compositions for generating full-length cDNA having arbitrary nucleotide sequence at the 3'-end
US5789578A (en) 1996-01-11 1998-08-04 Massey University Methods for the preparation of resins with ligands attached thereto through a linking group comprising sulfide, sulfoxide or sulfone functionality
US7291463B2 (en) 1996-01-23 2007-11-06 Affymetrix, Inc. Nucleic acid labeling compounds
US5714577A (en) 1996-01-26 1998-02-03 University Of Pittsburgh Antimicrobial peptides
US6261584B1 (en) 1996-02-02 2001-07-17 Alza Corporation Sustained delivery of an active agent using an implantable system
US6395292B2 (en) 1996-02-02 2002-05-28 Alza Corporation Sustained delivery of an active agent using an implantable system
WO1997030064A1 (en) 1996-02-16 1997-08-21 Stichting Rega Vzw Hexitol containing oligonucleotides and their use in antisense strategies
US6534312B1 (en) 1996-02-22 2003-03-18 Merck & Co., Inc. Vaccines comprising synthetic genes
US6090391A (en) 1996-02-23 2000-07-18 Aviron Recombinant tryptophan mutants of influenza
US5994308A (en) 1996-02-28 1999-11-30 Board Of Trustees Of Southern Illinois University Broad spectrum antimicrobial peptides containing a tryptophan triplet and methods of use
SE9601245D0 (sv) 1996-03-29 1996-03-29 Pharmacia Ab Chimeric superantigens and their use
US6300487B1 (en) 1996-03-19 2001-10-09 Cell Therapuetics, Inc. Mammalian lysophosphatidic acid acyltransferase
TW517061B (en) 1996-03-29 2003-01-11 Pharmacia & Amp Upjohn Ab Modified/chimeric superantigens and their use
US5773696A (en) 1996-03-29 1998-06-30 Monsanto Company Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi
JPH09278726A (ja) * 1996-04-11 1997-10-28 Takeshi Imanishi 新規リポソーム
US5712127A (en) 1996-04-29 1998-01-27 Genescape Inc. Subtractive amplification
US5853719A (en) 1996-04-30 1998-12-29 Duke University Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA
ATE438717T1 (de) 1996-06-05 2009-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Dp-75 kodierende dna und verfahren zu ihrer verwendung
US7329741B2 (en) 1996-06-05 2008-02-12 Chiron Corporation Polynucleotides that hybridize to DP-75 and their use
CA2258568A1 (en) 1996-06-21 1997-12-24 Merck & Co., Inc. Vaccines comprising synthetic genes
WO1998000194A2 (en) 1996-06-28 1998-01-08 Sontra Medical, L.P. Ultrasound enhancement of transdermal transport
US5939262A (en) 1996-07-03 1999-08-17 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant RNA preparation and utilization
US5677124A (en) 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US5856127A (en) 1996-07-26 1999-01-05 The Research Foundation Of State University Of New York Antimicrobial peptides
US7288266B2 (en) 1996-08-19 2007-10-30 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Liposome complexes for increased systemic delivery
AU741663B2 (en) 1996-08-22 2001-12-06 Magainin Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for use of defensin
US5849546A (en) 1996-09-13 1998-12-15 Epicentre Technologies Corporation Methods for using mutant RNA polymerases with reduced discrimination between non-canonical and canonical nucleoside triphosphates
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
JP4299886B2 (ja) 1996-09-24 2009-07-22 タノックス インコーポレイテッド アポトーシス関連ペプチドをコードする遺伝子ファミリー、それによってコードされるペプチド、およびそれらの使用方法
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
EP0839912A1 (en) 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
GB9623051D0 (en) 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems
US5980887A (en) 1996-11-08 1999-11-09 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston Methods for enhancing angiogenesis with endothelial progenitor cells
US6121436A (en) 1996-12-13 2000-09-19 Monsanto Company Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi
US5759179A (en) 1996-12-31 1998-06-02 Johnson & Johnson Medical, Inc. Needle and valve assembly for use with a catheter
ES2373110T3 (es) 1997-01-21 2012-01-31 The General Hospital Corporation Selección de proteínas usando fusiones de arn-proteína.
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
US6228640B1 (en) 1997-02-07 2001-05-08 Cem Cezayirli Programmable antigen presenting cell of CD34 lineage
US6696291B2 (en) 1997-02-07 2004-02-24 Merck & Co., Inc. Synthetic HIV gag genes
US6251665B1 (en) 1997-02-07 2001-06-26 Cem Cezayirli Directed maturation of stem cells and production of programmable antigen presenting dentritic cells therefrom
CA2280195A1 (en) 1997-02-07 1998-08-13 Merck & Co., Inc. Synthetic hiv gag genes
US6576752B1 (en) 1997-02-14 2003-06-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy functionalized oligomers
US5998374A (en) 1997-02-28 1999-12-07 The Regents Of University Of California Clavaspirins
US5837860A (en) 1997-03-05 1998-11-17 Molecular Tool, Inc. Covalent attachment of nucleic acid molecules onto solid-phases via disulfide bonds
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6261281B1 (en) 1997-04-03 2001-07-17 Electrofect As Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells
US5914269A (en) 1997-04-04 1999-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide inhibition of epidermal growth factor receptor expression
GB2324370B (en) 1997-04-14 1999-03-03 Stuart Harbron Detection of hybrid double-stranded DNA with antibody after enzyme degradation of excess single-standed DNA
WO1998047913A2 (en) 1997-04-18 1998-10-29 The University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Inhibition of hiv-1 replication by a tat rna-binding domain peptide analog
US5958688A (en) 1997-04-28 1999-09-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Characterization of mRNA patterns in neurites and single cells for medical diagnosis and therapeutics
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5989911A (en) 1997-05-09 1999-11-23 University Of Massachusetts Site-specific synthesis of pseudouridine in RNA
EP2113247A3 (en) * 1997-05-14 2010-05-05 The University Of British Columbia High efficiency encapsulation of nucleic acids in lipid vesicles
WO1998054302A2 (en) * 1997-05-27 1998-12-03 Icos Corporation Human lysophosphatidic acid acyltransferase
NL1006164C2 (nl) 1997-05-29 1998-12-01 Univ Leiden Antimicrobiële peptiden.
US6124091A (en) 1997-05-30 2000-09-26 Research Corporation Technologies, Inc. Cell growth-controlling oligonucleotides
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
EP1003850B1 (en) 1997-06-06 2009-05-27 The Regents of the University of California Inhibitors of dna immunostimulatory sequence activity
DE19726167B4 (de) * 1997-06-20 2008-01-24 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung
ATE321882T1 (de) 1997-07-01 2006-04-15 Isis Pharmaceuticals Inc Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von oligonukleotiden über die speiseröhre
US5994511A (en) 1997-07-02 1999-11-30 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides
WO1999004820A2 (en) 1997-07-21 1999-02-04 Pharmacia & Upjohn Ab Cytolysis of target cells by superantigen conjugates inducing t-cell activation
FR2766191B1 (fr) 1997-07-21 2000-11-10 Ifremer Peptides anti-microbiens de crustaces
US20030073640A1 (en) 1997-07-23 2003-04-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Novel compositions for the delivery of negatively charged molecules
CA2298101A1 (en) 1997-07-31 1999-02-11 Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam Novel synthetic peptides with antimicrobial and endotoxin neutralizing properties for management of the sepsis syndrome
EP1009441A1 (en) 1997-07-31 2000-06-21 St. Elizabeth's Medical Center of Boston, Inc. Method for the treatment of grafts
US6576755B1 (en) 1997-09-10 2003-06-10 Zymogenetics, Inc. Beta-defensins
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
EP1015009A4 (en) 1997-09-18 2001-11-07 Univ Pennsylvania attenuated VIF DNA immunization cassettes as genetic vaccines
WO1999015548A2 (en) 1997-09-25 1999-04-01 Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam Isolated and recombinant antimicrobial peptides thrombocidin-1 (tc-1) and thrombocidin-2 (tc-2) or variants thereof
US6004573A (en) 1997-10-03 1999-12-21 Macromed, Inc. Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co-glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties
CA2305785A1 (en) 1997-10-07 1999-04-15 University Of Maryland Biotechnology Institute Method for introducing and expressing rna in animal cells
AU1108799A (en) 1997-10-20 1999-05-10 Gtc Biotherapeutics, Inc. Novel modified nucleic acid sequences and methods for increasing mRNA levels and protein expression in cell systems
US6019747A (en) 1997-10-21 2000-02-01 I-Flow Corporation Spring-actuated infusion syringe
JP2001520889A (ja) 1997-10-24 2001-11-06 バレンティス，インコーポレイティド ポリヌクレオチドトランスフェクション複合体を調製する方法
CA2309344A1 (en) 1997-11-12 1999-05-20 Valentis, Inc. Expression plasmids for multiepitope nucleic acid-based vaccines
US6548633B1 (en) 1998-12-22 2003-04-15 Genset, S.A. Complementary DNA's encoding proteins with signal peptides
EP1987845B1 (en) 1997-11-20 2012-03-21 Vical Incorporated Treatment of cancer using cytokine-expressing polynucleotides and compositions therefor.
US7655777B2 (en) 1997-11-24 2010-02-02 Monsanto Technology Llc Nucleic acid molecules associated with the tocopherol pathway
US6517869B1 (en) 1997-12-12 2003-02-11 Expression Genetics, Inc. Positively charged poly(alpha-(omega-aminoalkyl)lycolic acid) for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake
US6267987B1 (en) 1997-12-12 2001-07-31 Samyang Corporation Positively charged poly[alpha-(omega-aminoalkyl) glycolic acid] for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
JP2002500010A (ja) 1997-12-23 2002-01-08 カイロン コーポレイション ヒト遺伝子および遺伝子発現産物ｉ
US6383811B2 (en) 1997-12-30 2002-05-07 Mirus Corporation Polyampholytes for delivering polyions to a cell
WO1999034831A1 (en) 1998-01-05 1999-07-15 University Of Washington Enhanced transport using membrane disruptive agents
US8287483B2 (en) 1998-01-08 2012-10-16 Echo Therapeutics, Inc. Method and apparatus for enhancement of transdermal transport
EP1045714A1 (en) 1998-01-08 2000-10-25 Sontra Medical, L.P. Sonophoretic enhanced transdermal transport
NL1008139C2 (nl) 1998-01-27 1999-07-28 Stichting Tech Wetenschapp Antimicrobiële peptiden.
US6365346B1 (en) 1998-02-18 2002-04-02 Dade Behring Inc. Quantitative determination of nucleic acid amplification products
WO1999042119A1 (en) 1998-02-18 1999-08-26 Harbor-Ucla Research And Education Institute Antimicrobial peptides and derived metapeptides
US5888793A (en) * 1998-02-25 1999-03-30 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human lysophosphatidic acid acyltransferase
US5955310A (en) 1998-02-26 1999-09-21 Novo Nordisk Biotech, Inc. Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell
US6849417B1 (en) * 1998-04-06 2005-02-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Mammalian selenoprotein differentially expressed in tumor cells
AU3549799A (en) * 1998-04-06 1999-10-25 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Mammalian selenoprotein differentially expressed in tumor cells
US6432925B1 (en) 1998-04-16 2002-08-13 John Wayne Cancer Institute RNA cancer vaccine and methods for its use
US6429301B1 (en) 1998-04-17 2002-08-06 Whitehead Institute For Biomedical Research Use of a ribozyme to join nucleic acids and peptides
GB9808327D0 (en) 1998-04-20 1998-06-17 Chiron Spa Antidiotypic compounds
US6395253B2 (en) 1998-04-23 2002-05-28 The Regents Of The University Of Michigan Microspheres containing condensed polyanionic bioactive agents and methods for their production
KR100519895B1 (ko) 1998-04-23 2005-10-13 다카라 바이오 가부시키가이샤 Ｄｎａ 의 합성방법
US20020064517A1 (en) 1998-04-30 2002-05-30 Stewart A. Cederholm-Williams Fibrin sealant as a transfection/transformation vehicle for gene therapy
US20090208418A1 (en) 2005-04-29 2009-08-20 Innexus Biotechnology Internaltional Ltd. Superantibody synthesis and use in detection, prevention and treatment of disease
ATE411049T1 (de) 1998-05-20 2008-10-15 Expression Genetics Inc Laktose oder galaktose-polyethylen glykol- gepfropfte poly-l-lysin als genträger
US6503231B1 (en) 1998-06-10 2003-01-07 Georgia Tech Research Corporation Microneedle device for transport of molecules across tissue
US7091192B1 (en) 1998-07-01 2006-08-15 California Institute Of Technology Linear cyclodextrin copolymers
IL140785A0 (en) 1998-07-13 2002-02-10 Expression Genetics Inc Polyester analogue of poly-l-lysine as a soluble, biodegradable gene delivery carrier
US6222030B1 (en) 1998-08-03 2001-04-24 Agilent Technologies, Inc. Solid phase synthesis of oligonucleotides using carbonate protecting groups and alpha-effect nucleophile deprotection
NZ573838A (en) 1998-08-11 2011-01-28 Biogen Idec Inc Combination therapies for b-cell lymphomas comprising administration of anti-cd20 antibody
US6476189B1 (en) 1998-08-12 2002-11-05 National Institute Of Agrobiological Sciences Antibacterial peptides and antibacterial agents containing such peptides as an effective ingredient
GB9817662D0 (en) 1998-08-13 1998-10-07 Crocker Peter J Substance delivery
US6288212B1 (en) 1998-08-28 2001-09-11 The University Of British Columbia Anti-endotoxic, antimicrobial cationic peptides and methods of use therefor
US20020065236A1 (en) * 1998-09-09 2002-05-30 Yew Nelson S. CpG reduced plasmids and viral vectors
US6924365B1 (en) 1998-09-29 2005-08-02 Transkaryotic Therapies, Inc. Optimized messenger RNA
US20090042283A1 (en) 1998-09-29 2009-02-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc., A Delaware Corporation Optimized messenger rna
WO2000026226A1 (en) 1998-11-03 2000-05-11 Yale University Multidomain polynucleotide molecular sensors
EP1949912A3 (en) 1998-11-09 2008-08-13 Biogen Idec, Inc. Treatment of chronic lymphcytic leukemia (CLL) using chimeric anti-CD20 antibody
AU761516B2 (en) 1998-11-09 2003-06-05 Biogen Inc. Chimeric anti-CD20 antibody treatment of patients receiving BMT or PBSC transplants
WO2000027340A2 (en) 1998-11-12 2000-05-18 The Children's Medical Center Corporation USE OF t-RNA AND FRAGMENTS FOR INHIBITING ANGIOGENESIS AND COMPOSITIONS THEREOF
US6248268B1 (en) 1998-11-16 2001-06-19 Xc Corporation Process of making microparticles of a thermally-gelled polysaccharide
JP3141107B2 (ja) 1998-11-16 2001-03-05 工業技術院長 ヒト由来ブラディオン蛋白質、それをコードするｄｎａ及びそれらの使用
US6210931B1 (en) 1998-11-30 2001-04-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Ribozyme-mediated synthesis of circular RNA
JP2000175684A (ja) * 1998-12-14 2000-06-27 Eiken Chem Co Ltd 新規アシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子
US20040171980A1 (en) 1998-12-18 2004-09-02 Sontra Medical, Inc. Method and apparatus for enhancement of transdermal transport
CA2356542A1 (en) 1998-12-23 2000-07-06 Human Genome Sciences, Inc. Peptidoglycan recognition proteins
WO2000044914A1 (en) 1999-01-28 2000-08-03 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna
GB9902000D0 (en) * 1999-01-30 1999-03-17 Delta Biotechnology Ltd Process
WO2000050586A2 (en) 1999-02-22 2000-08-31 European Molecular Biology Laboratory In vitro translation system
US6255476B1 (en) 1999-02-22 2001-07-03 Pe Corporation (Ny) Methods and compositions for synthesis of labelled oligonucleotides and analogs on solid-supports
US7629311B2 (en) 1999-02-24 2009-12-08 Edward Lewis Tobinick Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers
CA2689696C (en) 1999-02-26 2013-08-06 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Microemulsions with adsorbed macromolecules and microparticles
US6107460A (en) 1999-03-01 2000-08-22 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Antimicrobial peptides and methods of use thereof
US8410248B2 (en) 1999-03-12 2013-04-02 Human Genome Sciences Inc. HWBAO62 polypeptides
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US7244710B2 (en) 2002-05-21 2007-07-17 Zengen, Inc. Treatment of ophthalmic infections using antimicrobial peptides
EP1165798A2 (en) 1999-03-29 2002-01-02 Statens Serum Institut Nucleotide construct with optimised codons for an hiv genetic vaccine based on a primary, early hiv isolate and synthetic envelope
CN1189495C (zh) 1999-04-09 2005-02-16 迪纳尔生物技术公司 用于制备单分散聚合物颗粒的方法
EP1178999B1 (en) 1999-05-04 2007-03-14 Santaris Pharma A/S L-ribo-lna analogues
MXPA01011279A (es) 1999-05-07 2002-07-02 Genentech Inc Tratamiento de enfermedades autoinmunes con antagonistas que se unene a los marcadores de superficie, de celulas b.
US8663692B1 (en) 1999-05-07 2014-03-04 Pharmasol Gmbh Lipid particles on the basis of mixtures of liquid and solid lipids and method for producing same
DE60043021D1 (de) 1999-05-17 2009-11-05 Conjuchem Biotechnologies Inc Lang wirkende Peptidinhibitoren der Virusfusion mit Körperzellen bei viralen Infektionen
US6346382B1 (en) 1999-06-01 2002-02-12 Vanderbilt University Human carbamyl phosphate synthetase I polymorphism and diagnostic methods related thereto
US6611707B1 (en) 1999-06-04 2003-08-26 Georgia Tech Research Corporation Microneedle drug delivery device
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
AU4332399A (en) 1999-06-04 2000-12-28 Cheng-Ming Chuong Rna polymerase chain reaction
US6303573B1 (en) 1999-06-07 2001-10-16 The Burnham Institute Heart homing peptides and methods of using same
AU776268B2 (en) 1999-06-08 2004-09-02 Aventis Pasteur Immunostimulant oligonucleotide
JP4286483B2 (ja) 1999-06-09 2009-07-01 イムノメディクス， インコーポレイテッド Ｂ細胞をターゲットとする抗体を使用する自己免疫疾患に対する免疫療法
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US20030153050A1 (en) 1999-06-28 2003-08-14 Conklin Darrell C. Helical polypeptide zalpha29
CN1362965A (zh) 1999-06-30 2002-08-07 先进细胞技术公司 细胞质转移使受体细胞去分化
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
FR2796072B1 (fr) 1999-07-08 2003-09-19 Centre Nat Rech Scient Peptides anti-microbiens de mollusques
CA2378653A1 (en) 1999-07-09 2001-01-18 American Home Products Corporation Methods and compositions for preventing the formation of aberrant rna during transcription of a plasmid sequence
CA2311201A1 (en) 1999-08-05 2001-02-05 Genset S.A. Ests and encoded human proteins
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
US7071293B1 (en) 1999-08-18 2006-07-04 The University Of Iowa Research Foundation Alpha helical peptides with broad spectrum antimicrobial activity that are insensitive to salt
JP2002300878A (ja) 1999-08-19 2002-10-15 Chugai Pharmaceut Co Ltd 新規ｂＨＬＨ型転写因子遺伝子、ＤＥＣ２
CN1371416B (zh) 1999-08-24 2012-10-10 梅达里克斯公司 人ctla-4抗体及其应用
US20050112141A1 (en) 2000-08-30 2005-05-26 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
US20040106567A1 (en) 1999-09-07 2004-06-03 Hagstrom James E. Intravascular delivery of non-viral nucleic acid
ES2238799T3 (es) 1999-09-09 2005-09-01 Curevac Gmbh Transferencia de arn-m.
AU7398200A (en) 1999-09-17 2001-04-24 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
US6623457B1 (en) 1999-09-22 2003-09-23 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for the transdermal administration of a substance
WO2002064799A2 (en) 1999-09-28 2002-08-22 Transkaryotic Therapies, Inc. Optimized messenger rna
AU7863200A (en) 1999-10-06 2001-05-10 Quark Biotech, Inc. Method for enrichment of natural antisense messenger rna
US6511832B1 (en) 1999-10-06 2003-01-28 Texas A&M University System In vitro synthesis of capped and polyadenylated mRNAs using baculovirus RNA polymerase
EP1101771A1 (en) 1999-11-15 2001-05-23 Korea Kumho Petrochemical Co. Ltd. Pathogen-induced genes from Capsicum annuum
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
US6573361B1 (en) 1999-12-06 2003-06-03 Monsanto Technology Llc Antifungal proteins and methods for their use
US6613026B1 (en) 1999-12-08 2003-09-02 Scimed Life Systems, Inc. Lateral needle-less injection apparatus and method
US6277974B1 (en) 1999-12-14 2001-08-21 Cogent Neuroscience, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating conditions, disorders, or diseases involving cell death
KR20020063230A (ko) 1999-12-15 2002-08-01 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드 항균제로서의 신규한 리포펩티드
US6245929B1 (en) 1999-12-20 2001-06-12 General Electric Company Catalyst composition and method for producing diaryl carbonates, using bisphosphines
ATE280188T1 (de) 1999-12-22 2004-11-15 Basell Poliolefine Spa Alpha-olefin enthaltendes polymerisationskatalysatorsystem, das ein aromatisches silan enthält
AU2764801A (en) 2000-01-07 2001-07-24 University Of Washington Enhanced transport of agents using membrane disruptive agents
EP1276901A2 (en) 2000-01-13 2003-01-22 Amsterdam Support Diagnostics B.V. A universal nucleic acid amplification system for nucleic acids in a sample
DE10001377A1 (de) * 2000-01-14 2001-08-02 Univ Mainz Johannes Gutenberg bHLH-Transkriptionsfaktor ASCL3 und diesen enthaltendes Arzneimittel
US6552006B2 (en) 2000-01-31 2003-04-22 The Regents Of The University Of California Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen
WO2001055306A2 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
WO2001062827A2 (en) 2000-02-22 2001-08-30 Shearwater Corporation N-maleimidyl polymer derivatives
KR100767146B1 (ko) 2000-02-24 2007-10-15 워싱톤 유니버시티 Ａβ 펩티드를 격리시키는 인간화 항체
US6936432B2 (en) 2000-03-01 2005-08-30 Message Pharmaceuticals Bacterial RNase P proteins and their use in identifying antibacterial compounds
AU2001245427A1 (en) 2000-03-03 2001-09-17 Valentis, Inc. Nucleic acid formulations for gene delivery and methods of use
GB0006572D0 (en) 2000-03-17 2000-05-10 Isis Innovation Novel transcription transactivator protein
JP2004500412A (ja) 2000-03-31 2004-01-08 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞リンパ腫の治療のための抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストおよび抗ｃｄ２０の併用
US6565572B2 (en) 2000-04-10 2003-05-20 Sdgi Holdings, Inc. Fenestrated surgical screw and method
EP1274720A4 (en) 2000-04-12 2004-08-18 Human Genome Sciences Inc ALBUMIN FUSED PROTEINS
US6368801B1 (en) 2000-04-12 2002-04-09 Molecular Staging, Inc. Detection and amplification of RNA using target-mediated ligation of DNA by RNA ligase
US20010046496A1 (en) 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
US6375972B1 (en) 2000-04-26 2002-04-23 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices, methods of use, and methods of manufacturing thereof
US7871598B1 (en) 2000-05-10 2011-01-18 Novartis Ag Stable metal ion-lipid powdered pharmaceutical compositions for drug delivery and methods of use
US20040229271A1 (en) 2000-05-19 2004-11-18 Williams Richard B. Compositions and methods for the identification and selection of nucleic acids and polypeptides
WO2001092523A2 (en) 2000-05-30 2001-12-06 Curagen Corporation Human polynucleotides and polypeptides encoded thereby
AU2001275294A1 (en) 2000-06-07 2001-12-17 Biosynexus Incorporated. Immunostimulatory RNA/DNA hybrid molecules
BR0111827A (pt) 2000-06-23 2003-05-20 American Cyanamid Co Vìrus de rna isolado, recombinantemente gerado, não segmentado, de sentido negativo, de filamento único do gênero morbillivìrus, composição imunogênica, método para imunizar um indivìduo para induzir proteção contra o dito vìrus, método para reduzir a repressão causada por uma proteìna v do gênero morbillivìrus, sequência de nucleotìdeos isolada, composição, e, método para produzir um morbillivìrus infeccioso
US6337317B1 (en) 2000-06-27 2002-01-08 The University Of British Columbia Antimicrobial peptides and methods of use thereof
US6492328B2 (en) 2000-06-28 2002-12-10 The University Of Iowa Research Foundation Novispirins: antimicrobial peptides
ATE440861T1 (de) 2000-07-03 2009-09-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae
US6440096B1 (en) 2000-07-14 2002-08-27 Becton, Dickinson And Co. Microdevice and method of manufacturing a microdevice
ES2277605T3 (es) 2000-07-21 2007-07-16 Glaxo Group Limited Secuencias de papilomavirus de codones optimizados.
US6696238B2 (en) 2000-07-28 2004-02-24 Christopher J. Murphy Transplant media
US6727066B2 (en) 2000-07-28 2004-04-27 Incyte Corporation Genes expressed in treated human C3A liver cell cultures
US6902734B2 (en) 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
EP1320591B1 (en) * 2000-08-21 2008-12-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Atcr-1, a human acyltransferase and uses thereof
US6875907B2 (en) 2000-09-13 2005-04-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Antimicrobial peptides and methods of use
US6696038B1 (en) 2000-09-14 2004-02-24 Expression Genetics, Inc. Cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent
US20040142474A1 (en) 2000-09-14 2004-07-22 Expression Genetics, Inc. Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent
WO2002024873A1 (en) 2000-09-20 2002-03-28 Christopher Ralph Franks Stem cell therapy
EP1334109B1 (en) 2000-10-04 2006-05-10 Santaris Pharma A/S Improved synthesis of purine locked nucleic acid analogues
US20020164349A1 (en) 2000-10-04 2002-11-07 Weiner David B. Compositions and methods of using capsid protein from Flaviviruses and Pestiviruses
DE10050274A1 (de) * 2000-10-09 2002-04-18 Henkel Kgaa Verfahren zur in vitro Bestimmung der Hautalterung
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US6649138B2 (en) 2000-10-13 2003-11-18 Quantum Dot Corporation Surface-modified semiconductive and metallic nanoparticles having enhanced dispersibility in aqueous media
US7202226B2 (en) 2000-10-23 2007-04-10 Detroit R & D Augmentation of wound healing by elF-4E mRNA and EGF mRNA
US20030077604A1 (en) 2000-10-27 2003-04-24 Yongming Sun Compositions and methods relating to breast specific genes and proteins
GB0026924D0 (en) 2000-11-03 2000-12-20 Univ Cambridge Tech Antibacterial agents
US20020132788A1 (en) 2000-11-06 2002-09-19 David Lewis Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo
AU2002226930A1 (en) 2000-11-17 2002-05-27 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Reduction of the nonspecific animal toxicity of immunotoxins by mutating the framework regions of the fv to lower the isoelectric point
US7229765B2 (en) 2000-11-28 2007-06-12 Rosetta Inpharmatics Llc Random-primed reverse transcriptase-in vitro transcription method for RNA amplification
US7776523B2 (en) 2000-12-07 2010-08-17 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Endogenous retroviruses up-regulated in prostate cancer
US7708915B2 (en) 2004-05-06 2010-05-04 Castor Trevor P Polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins therein
US20020130430A1 (en) 2000-12-29 2002-09-19 Castor Trevor Percival Methods for making polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins and other products
CA2435180C (en) 2001-01-19 2019-04-09 Vironovative B.V. A virus causing respiratory tract illness in susceptible mammals
EP1224943A1 (en) 2001-01-19 2002-07-24 Crucell Holland B.V. Fibronectin as a tumor marker detected by phage antibodies
US20040110191A1 (en) 2001-01-31 2004-06-10 Winkler Matthew M. Comparative analysis of nucleic acids using population tagging
US20040142433A1 (en) 2001-02-02 2004-07-22 Padgett Hal S. Polynucleotide sequence variants
WO2002065093A2 (en) 2001-02-14 2002-08-22 Baylor College Of Medicine Methods and compositions of amplifying rna
US6835713B2 (en) 2001-02-16 2004-12-28 University Of Pittsburgh Virus derived antimicrobial peptides
US6887847B2 (en) 2001-02-16 2005-05-03 University Of Pittsburgh Virus derived antimicrobial peptides
US6652886B2 (en) 2001-02-16 2003-11-25 Expression Genetics Biodegradable cationic copolymers of poly (alkylenimine) and poly (ethylene glycol) for the delivery of bioactive agents
DE10109897A1 (de) 2001-02-21 2002-11-07 Novosom Ag Fakultativ kationische Liposomen und Verwendung dieser
US7232425B2 (en) 2001-03-02 2007-06-19 Sorenson Development, Inc. Apparatus and method for specific interstitial or subcutaneous diffusion and dispersion of medication
IL157756A0 (en) 2001-03-09 2004-03-28 Gene Stream Pty Ltd Novel expression vectors
JP2002262882A (ja) 2001-03-12 2002-09-17 Nisshinbo Ind Inc Ｒｎａの増幅法
FR2822164B1 (fr) 2001-03-19 2004-06-18 Centre Nat Rech Scient Polypeptides derives des arn polymerases, et leurs utilisations
US6520949B2 (en) 2001-04-02 2003-02-18 Martin St. Germain Method and apparatus for administering fluid to animals subcutaneously
WO2003008537A2 (en) * 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US7314858B2 (en) 2001-04-18 2008-01-01 The Regents Of The University Of California Retrocyclins: antiviral and antimicrobial peptides
DE10119005A1 (de) 2001-04-18 2002-10-24 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Proteinexpression ausgehend von stabilisierter linearer kurzer DNA in zellfreien in vitro-Transkription/Translations-Systemen mit Exonuklease-haltigen Lysaten oder in einem zellulären System enthaltend Exonukleasen
US20030171253A1 (en) 2001-04-19 2003-09-11 Averil Ma Methods and compositions relating to modulation of A20
ATE376434T1 (de) 2001-04-21 2007-11-15 Curevac Gmbh Injektionsgerät für mrna applikation
EP1390518B1 (de) 2001-04-23 2004-10-06 Amaxa GmbH Pufferlössung für die elektroporation und verfahren umfassend die verwendung derselben
US7560424B2 (en) 2001-04-30 2009-07-14 Zystor Therapeutics, Inc. Targeted therapeutic proteins
US6777187B2 (en) 2001-05-02 2004-08-17 Rubicon Genomics, Inc. Genome walking by selective amplification of nick-translate DNA library and amplification from complex mixtures of templates
AU2002308623A1 (en) 2001-05-08 2002-11-18 Magnatech International, L.P. Electronic length control wire pay-off system and method
US7514099B2 (en) 2005-02-14 2009-04-07 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
US20050137155A1 (en) 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US8137911B2 (en) 2001-05-22 2012-03-20 Cellscript, Inc. Preparation and use of single-stranded transcription substrates for synthesis of transcription products corresponding to target sequences
JP4323949B2 (ja) 2001-05-30 2009-09-02 ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート 核酸用送達系
EP2842964A1 (de) 2001-06-05 2015-03-04 Curevac GmbH Virtuelles Verfahren zur Ermittlung einer modifzierten mRNA-Sequenz
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US20040175787A1 (en) 2001-06-18 2004-09-09 Klemens Kaupmann Novel g-protein coupled receptors and dna sequences thereof
US7547551B2 (en) 2001-06-21 2009-06-16 University Of Antwerp. Transfection of eukaryontic cells with linear polynucleotides by electroporation
US7785610B2 (en) 2001-06-21 2010-08-31 Dynavax Technologies Corporation Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same—III
EP1270732A1 (en) 2001-06-21 2003-01-02 Schuler, Gerold Improved transfection of eukaryontic cells with linear polynucleotides by electroporation
EP1404716A2 (en) 2001-06-26 2004-04-07 Novartis AG Novel g protein-coupled receptors and dna sequences thereof
SE0102327D0 (sv) 2001-06-28 2001-06-28 Active Biotech Ab A novel engineered superantigen for human therapy
AU2002359236A1 (en) * 2001-07-13 2003-04-14 Advanced Research And Technology Institute Peptidoglycan recognition protein encoding nucleic acids and methods of use thereof
US6872705B2 (en) 2001-07-13 2005-03-29 Allergan, Inc. Use of antimicrobial peptides as preservatives in ophthalmic preparations, including solutions, emulsions, and suspensions
US6586524B2 (en) 2001-07-19 2003-07-01 Expression Genetics, Inc. Cellular targeting poly(ethylene glycol)-grafted polymeric gene carrier
IL159895A0 (en) * 2001-07-20 2004-06-20 Technion Res & Dev Foundation Methods of generating human cardiac cells and tissues and uses thereof
EP1421215B1 (en) * 2001-07-25 2011-03-16 Oncomedx Inc. Methods for evaluating pathologic conditions using extracellular rna
US7169750B2 (en) 2001-07-31 2007-01-30 Anormed, Inc. Methods to mobilize progenitor/stem cells
US20030158133A1 (en) 2001-08-01 2003-08-21 Movsesian Matthew A. Isoform-selective inhibitors and activators of PDE3 cyclic nucleotide phosphodiesterases
WO2003014078A2 (en) 2001-08-08 2003-02-20 The Research Foundation Of The State University Of New York Muc7d1 peptides as antifungal and antibacterial agents
US6743598B2 (en) 2001-08-10 2004-06-01 Mycologics, Inc. Methods for the identification of fungal glucose utilization inhibitors and antifungal agents
US6835536B2 (en) 2001-08-21 2004-12-28 Micrologix Biotech Inc. Antimicrobial cationic peptides and formulations thereof
JP2005502344A (ja) 2001-08-27 2005-01-27 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 新規ｇタンパク質共役受容体およびそのｄｎａ配列
US7456335B2 (en) * 2001-09-03 2008-11-25 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid sequences and their use in methods for achieving pathogen resistance in plants
US20040142325A1 (en) * 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
EP1435932A4 (en) 2001-09-21 2006-12-06 Message Pharmaceuticals Inc INHIBITORS OF RNASE P PROTEINS AS ANTIBACTERIAL COMPOUNDS
EP2390330B1 (en) 2001-09-28 2018-04-25 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. MicroRNA molecules
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
US20060051424A1 (en) 2001-10-03 2006-03-09 Johns Hopkins University Compositions of oral gene therapy and methods of using same
DE10148886A1 (de) 2001-10-04 2003-04-30 Avontec Gmbh Inhibition von STAT-1
US7276489B2 (en) 2002-10-24 2007-10-02 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends
JP4463554B2 (ja) 2001-11-05 2010-05-19 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ 短い二本鎖ＲＮＡのｉｎｖｉｔｒｏ合成方法
US20040076978A1 (en) 2001-11-14 2004-04-22 Catherine Verfaillie Method to identify genes associated with chronic myelogenous leukemia
EP1452593B1 (en) 2001-11-14 2009-04-08 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Dna synthesis promoters, dna polymerase-associated factors and utilization thereof
AU2002361642A1 (en) 2001-11-16 2003-06-10 The University Of Tennessee Research Corporation Recombinant antibody fusion proteins and methods for detection of apoptotic cells
US6478825B1 (en) 2001-11-28 2002-11-12 Osteotech, Inc. Implant, method of making same and use of the implant for the treatment of bone defects
JP2005510251A (ja) 2001-11-29 2005-04-21 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト サルコイドーシスの評価法と予後判定法
CA2409775C (en) 2001-12-03 2010-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Reversibly modified thermostable enzymes for dna synthesis and amplification in vitro
US20060275747A1 (en) 2001-12-07 2006-12-07 Hardy Stephen F Endogenous retrovirus up-regulated in prostate cancer
EP2208736A3 (en) 2001-12-07 2010-10-27 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Endogenous retrovirus up-regulated in prostate cancer
WO2003050258A2 (en) 2001-12-07 2003-06-19 Chiron Corporation Endogenous retrovirus polypeptides linked to oncogenic transformation
US20050107589A1 (en) 2001-12-17 2005-05-19 Gung-Wei Chirn Novel g-protein coupled receptors and dna sequences thereof
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
CA2467763C (en) 2001-12-21 2011-09-13 Alcon, Inc. Use of synthetic inorganic nanoparticles as carriers for ophthalmic and otic drugs
WO2003059381A2 (en) 2002-01-18 2003-07-24 Curevac Gmbh Immunogenic preparations and vaccines on the basis of mrna
EP3020413A1 (en) 2002-01-30 2016-05-18 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Compositions and methods related to TIM-3, a TH1-specific cell surface molecule
EP1474432A1 (en) 2002-02-04 2004-11-10 Biomira Inc. Immunostimulatory, covalently lipidated oligonucleotides
WO2003066662A2 (en) 2002-02-05 2003-08-14 Genentech, Inc. Protein purification
FR2835749B1 (fr) 2002-02-08 2006-04-14 Inst Nat Sante Rech Med Composition pharmaceutique ameliorant le transfert de gene in vivo
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
US20050222064A1 (en) 2002-02-20 2005-10-06 Sirna Therapeutics, Inc. Polycationic compositions for cellular delivery of polynucleotides
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US7354742B2 (en) 2002-02-22 2008-04-08 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Method for generating amplified RNA
CA2481479C (en) 2002-02-26 2012-12-11 Maxygen, Inc. Novel flavivirus antigens
JP2005526506A (ja) 2002-03-04 2005-09-08 イムクローン システムズ インコーポレイティド Ｋｄｒに特異的なヒト抗体及びその利用
JP2005536186A (ja) * 2002-03-07 2005-12-02 ルードビッヒ、インスティテュート、フォー、キャンサー、リサーチ リンパ管および血管内皮細胞遺伝子
JP4679822B2 (ja) 2002-03-13 2011-05-11 ノバルティス アーゲー 医薬微粒子
US7285394B2 (en) 2002-03-15 2007-10-23 Epigenomics Ag Discovery and diagnostic methods using 5-methylcytosine DNA glycosylase
US7074596B2 (en) 2002-03-25 2006-07-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Synthesis and use of anti-reverse mRNA cap analogues
IL164376A0 (en) * 2002-04-03 2005-12-18 Applied Research Systems Ox4or binding agents, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
ES2734652T3 (es) 2002-04-04 2019-12-11 Zoetis Belgium S A Oligorribonucleótidos inmunoestimulantes que contienen G y U
US7718776B2 (en) * 2002-04-05 2010-05-18 Amgen Inc. Human anti-OPGL neutralizing antibodies as selective OPGL pathway inhibitors
US7399583B2 (en) 2002-04-17 2008-07-15 Novartis Ag Method for the identification of inhibitors of the binding of ARE-containing mRNA and a HuR protein
GB0209539D0 (en) 2002-04-26 2002-06-05 Avecia Ltd Monomer Polymer and process
EP1361277A1 (en) 2002-04-30 2003-11-12 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Optimization of transgene expression in mammalian cells
AU2003217531A1 (en) 2002-05-02 2003-11-17 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Ocular drug delivery systems and use thereof
AU2003231293A1 (en) 2002-05-02 2003-11-17 Wyeth Holdings Corporation Calicheamicin derivative-carrier conjugates
US20040018525A1 (en) 2002-05-21 2004-01-29 Bayer Aktiengesellschaft Methods and compositions for the prediction, diagnosis, prognosis, prevention and treatment of malignant neoplasma
US7374930B2 (en) 2002-05-21 2008-05-20 Expression Genetics, Inc. GLP-1 gene delivery for the treatment of type 2 diabetes
DE10224200C1 (de) 2002-05-31 2003-08-21 Artus Ges Fuer Molekularbiolog Vermehrung von Ribonukleinsäuren
WO2003101401A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Chiron Corporation Use of nrg4, or inhibitors thereof, in the treatment of colon and pancreatic cancer
SE0201907D0 (sv) 2002-06-19 2002-06-19 Atos Medical Ab Plaster for tracheostoma valves
DE60327775D1 (de) 2002-06-24 2009-07-09 Exiqon As Methoden und systeme zur detektion und isolation von nucleinsäuresequenzen
JP4722481B2 (ja) 2002-06-28 2011-07-13 プロティバ バイオセラピューティクス リミテッド リポソーム製造方法および装置
PL374580A1 (en) 2002-07-01 2005-10-31 The Kenneth S.Warren Institute, Inc. Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
GB0215509D0 (en) 2002-07-04 2002-08-14 Novartis Ag Marker genes
ATE505476T1 (de) 2002-07-16 2011-04-15 VGX Pharmaceuticals LLC Codon-optimierte synthetische plasmide
US7927791B2 (en) 2002-07-24 2011-04-19 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for identifying small molecules that modulate premature translation termination and nonsense mediated mRNA decay
EP1393745A1 (en) 2002-07-29 2004-03-03 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5'ends
US6653468B1 (en) 2002-07-31 2003-11-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Universal support media for synthesis of oligomeric compounds
EP1386925A1 (en) 2002-07-31 2004-02-04 Girindus AG Method for preparing oligonucleotides
AU2003264041A1 (en) 2002-08-09 2004-02-25 California Institute Of Technology Method and compositions relating to 5'-chimeric ribonucleic acids
EP1873180B1 (en) 2002-08-14 2014-05-07 Novartis AG Ophthalmic device made from a radiation-curable prepolymer
PT2277551E (pt) 2002-09-06 2013-08-22 Cerulean Pharma Inc Polímeros à base de ciclodextrina para a administração de medicamentos ligados por ligação covalente
ATE412684T1 (de) 2002-09-09 2008-11-15 Nektar Therapeutics Al Corp Verfahren zur herstellung von wasserlöslichen polymerderivaten mit terminalen carboxylgruppen
US7534872B2 (en) 2002-09-27 2009-05-19 Syngen, Inc. Compositions and methods for the use of FMOC derivatives in DNA/RNA synthesis
PL216630B1 (pl) 2002-10-17 2014-04-30 Genmab As Izolowane ludzkie przeciwciało monoklonalne wiążące ludzki CD20, związane z tym przeciwciałem transfektoma, komórka gospodarza, transgeniczne zwierzę lub roślina, kompozycja, immunokoniugat, cząsteczka bispecyficzna, wektor ekspresyjny, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie medyczne, zestaw oraz przeciwciało antyidiotypowe i jego zastosowanie
CN1891826B (zh) 2002-10-22 2011-09-14 卫材R&D管理有限公司 在分裂停止后的产多巴胺型神经元前体细胞中特异性表达的基因
WO2004041203A2 (en) 2002-11-04 2004-05-21 Xenoport, Inc. Gemcitabine prodrugs, pharmaceutical compositions and uses thereof
WO2004048594A2 (en) 2002-11-21 2004-06-10 Epicentre Technologies Preparation and use of single-stranded transcription substrates for synthesis of transcription products corresponding to target sequences
US7491234B2 (en) 2002-12-03 2009-02-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices for delivery of therapeutic agents
ES2347241T3 (es) 2002-12-16 2010-10-27 Genentech, Inc. Variantes de inmunoglobulina y sus utilizaciones.
WO2004058159A2 (en) 2002-12-23 2004-07-15 Dynavax Technologies Corporation Branched immunomodulatory compounds and methods of using the same
US7169892B2 (en) 2003-01-10 2007-01-30 Astellas Pharma Inc. Lipid-peptide-polymer conjugates for long blood circulation and tumor specific drug delivery systems
JP4726630B2 (ja) 2003-01-16 2011-07-20 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 修飾された免疫賦活性ジヌクレオチドを用いることによるオリゴヌクレオチドに基づく化合物の免疫賦活特性の調節
WO2004067728A2 (en) 2003-01-17 2004-08-12 Ptc Therapeutics Methods and systems for the identification of rna regulatory sequences and compounds that modulate their function
EP2500437B1 (en) 2003-01-21 2016-11-30 PTC Therapeutics, Inc. Methods for identifying compounds that modulate untranslated region-dependent gene expression and methods of using same
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
US8426194B2 (en) 2003-01-21 2013-04-23 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating VEGF expression
US20040147027A1 (en) 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
KR20050110628A (ko) 2003-02-10 2005-11-23 엘란 파마슈티칼스, 인크. 면역글로불린 제제 및 이의 제조방법
US20040167090A1 (en) 2003-02-21 2004-08-26 Monahan Sean D. Covalent modification of RNA for in vitro and in vivo delivery
US7091185B2 (en) 2003-02-24 2006-08-15 Dow Global Technologies Inc. Periodic antimicrobial peptides
ATE435278T1 (de) * 2003-02-27 2009-07-15 Basf Se Modifizierte nitrilasen und deren verwendung in verfahren zur herstellung von carbonsäuren
CA2450289A1 (en) 2003-03-20 2005-05-19 Imclone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
US7320961B2 (en) 2003-03-24 2008-01-22 Abbott Laboratories Method for treating a disease, disorder or adverse effect caused by an elevated serum concentration of an UGT1A1 substrate
CA2519309A1 (en) 2003-03-25 2004-10-14 Stratagene California Dna polymerase fusions and uses thereof
WO2004092329A2 (en) 2003-04-08 2004-10-28 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines
UA99933C2 (ru) 2003-04-09 2012-10-25 Дженентек, Инк. Лечение аутоиммунных заболеваний у пациента с неадекватным ответом на ингибитор tnf-альфа
CA2522349A1 (en) 2003-04-17 2004-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Protected monomers
ES2440654T3 (es) 2003-05-05 2014-01-29 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Preparaciones poliméricas reticuladas inyectables y usos de las mismas
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
PT1624891E (pt) 2003-05-06 2010-01-05 Syntonix Pharmaceuticals Inc Proteínas quiméricas de factor de coagulação-fc destinadas ao tratamento da hemofilia
US9567591B2 (en) 2003-05-15 2017-02-14 Mello Biotechnology, Inc. Generation of human embryonic stem-like cells using intronic RNA
GB0313132D0 (en) 2003-06-06 2003-07-09 Ich Productions Ltd Peptide ligands
CN1836048A (zh) * 2003-06-10 2006-09-20 图尔金株式会社 可转导的dna结合蛋白
EP1636385A4 (en) 2003-06-24 2010-06-02 Mirus Bio Corp INHIBITION OF GENE FUNCTION BY IN VIVO DISTRIBUTION OF GENE EXPRESSION INHIBITORS BASED ON POLYNUCLEOTIDES IN MAMMALIAN CELLS
GB0316089D0 (en) 2003-07-09 2003-08-13 Xo Bioscience Ltd Differentiation method
KR100992646B1 (ko) 2003-07-09 2010-11-05 제이에스알 가부시끼가이샤 파장판
US8592197B2 (en) 2003-07-11 2013-11-26 Novavax, Inc. Functional influenza virus-like particles (VLPs)
US7575572B2 (en) 2003-07-15 2009-08-18 Spinal Generations, Llc Method and device for delivering medicine to bone
US20050013870A1 (en) 2003-07-17 2005-01-20 Toby Freyman Decellularized extracellular matrix of conditioned body tissues and uses thereof
MEP31408A (en) 2003-07-18 2010-10-10 Abgenix Inc Specific binding agents to hepatocyte growth factor
DE10334371A1 (de) 2003-07-25 2005-02-17 Bavarian Nordic A/S Reaktorboden eines Reaktors
WO2005013901A2 (en) 2003-07-31 2005-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding rnas
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
CL2004001996A1 (es) 2003-08-08 2005-05-06 Eyetech Pharmaceuticals Inc Aptameros anti-vegf (factor de crecimiento endotelial vascular) con bloqueo nucleotidico 5'-5' o 3'-3' invertido, composicion que lo contiene, util para trastornos de neovascularizacion.
US8668926B1 (en) 2003-09-15 2014-03-11 Shaker A. Mousa Nanoparticle and polymer formulations for thyroid hormone analogs, antagonists, and formulations thereof
US7135010B2 (en) 2003-09-30 2006-11-14 Damage Control Surgical Technologies, Inc. Method and apparatus for rapid deployment chest drainage
US20070155772A1 (en) 2003-10-06 2007-07-05 Susan Ide Use of genetic polymorphisms that associate with efficacy of treatment of inflammatory disease
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US20050130201A1 (en) 2003-10-14 2005-06-16 Dharmacon, Inc. Splint-assisted enzymatic synthesis of polyribounucleotides
US9296820B2 (en) 2003-11-05 2016-03-29 Roche Glycart Ag Polynucleotides encoding anti-CD20 antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
WO2005047536A2 (en) 2003-11-13 2005-05-26 Novartis Ag Detection of genomic amplification and deletion in cancer
US20070054278A1 (en) * 2003-11-18 2007-03-08 Applera Corporation Polymorphisms in nucleic acid molecules encoding human enzyme proteins, methods of detection and uses thereof
US7699852B2 (en) 2003-11-19 2010-04-20 Zimmer Spine, Inc. Fenestrated bone tap and method
WO2007062495A1 (en) 2005-11-30 2007-06-07 Roy Rabindranauth Sooknanan Selective terminal tagging of nucleic acids
US20050153333A1 (en) 2003-12-02 2005-07-14 Sooknanan Roy R. Selective terminal tagging of nucleic acids
WO2005055945A2 (en) 2003-12-08 2005-06-23 Gel-Del Technologies, Inc. Mucoadhesive drug delivery devices and methods of making and using thereof
US7674884B2 (en) 2003-12-10 2010-03-09 Novimmune S.A. Neutralizing antibodies and methods of use thereof
JP2005179268A (ja) 2003-12-19 2005-07-07 Gc Corp 口腔用組成物
WO2005062854A2 (en) * 2003-12-19 2005-07-14 University Of Cincinnati Polyamides for nucleic acid delivery
DK1711528T3 (da) 2003-12-23 2012-08-20 Genentech Inc Behandling af cancer med hidtil ukendte anti-il 13 monoklonale antistoffer
WO2005065721A2 (en) * 2003-12-30 2005-07-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Use of an anti-inflammatory compound for the reduction of inflammation secondary to the administration of a lipid-nucleic acid complex
WO2005072710A2 (en) 2004-01-28 2005-08-11 Johns Hopkins University Drugs and gene carrier particles that rapidly move through mucous barriers
DK1716233T3 (da) * 2004-01-30 2009-10-26 Maxygen Holdings Ltd Reguleret stopkodongennemlæsning
US7309487B2 (en) * 2004-02-09 2007-12-18 George Inana Methods and compositions for detecting and treating retinal diseases
US20050232919A1 (en) 2004-02-12 2005-10-20 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically block biological activity of a tumor antigen
US20070265220A1 (en) 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
EP3736295A1 (en) 2004-03-24 2020-11-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor
WO2005098433A2 (en) 2004-04-01 2005-10-20 Novartis Ag Diagnostic assays for alzheimer’s disease
WO2006097793A2 (en) 2004-04-15 2006-09-21 Chiasma, Ltd. Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
EP1740946B1 (en) 2004-04-20 2013-11-06 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
ES2246694B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Nanoparticulas pegiladas.
WO2005108411A2 (en) 2004-05-05 2005-11-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted pixyl protecting groups for oligonucleotide synthesis
US7815941B2 (en) 2004-05-12 2010-10-19 Baxter Healthcare S.A. Nucleic acid microspheres, production and delivery thereof
US20080103053A1 (en) 2005-11-22 2008-05-01 Helicos Biosciences Corporation Methods and compositions for sequencing a nucleic acid
CA2568772A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 San Diego State University Foundation Expression system based on recombinant vesicular stomatitis virus synthesizing t7 rna polymerase
NZ551782A (en) * 2004-06-03 2010-03-26 Athlomics Pty Ltd Agents and methods for diagnosing stress
WO2005120152A2 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
EP1766035B1 (en) * 2004-06-07 2011-12-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid encapsulated interfering rna
CA2608862C (en) 2004-06-11 2020-05-05 Trustees Of Tufts College Silk-based drug delivery system
US7527947B2 (en) 2004-06-14 2009-05-05 Novozymes A/S Signal peptide for producing a polypeptide
WO2006046978A2 (en) 2004-06-28 2006-05-04 Argos Therapeutics, Inc. Cationic peptide-mediated transformation
KR101100059B1 (ko) 2004-06-30 2011-12-29 넥타르 테라퓨틱스 중합체­인자 ｉｘ 부분의 접합체
US7700555B2 (en) 2004-07-15 2010-04-20 Joslin Diabetes Center, Inc. Methods of treating diabetes
DE102004035227A1 (de) 2004-07-21 2006-02-16 Curevac Gmbh mRNA-Gemisch zur Vakzinierung gegen Tumorerkrankungen
CA2574088C (en) 2004-07-21 2013-09-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
US7603349B1 (en) 2004-07-29 2009-10-13 Yahoo! Inc. User interfaces for search systems using in-line contextual queries
GB0417487D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
US7291208B2 (en) 2004-08-13 2007-11-06 Gore Enterprise Holdings, Inc. Grooved active and passive adsorbent filters
EP1789094B1 (en) 2004-08-13 2014-12-10 MARSHALL, Barry J. Bacterial delivery system
SE0402025D0 (sv) 2004-08-13 2004-08-13 Active Biotech Ab Treatment of hyperproliferative disease with superantigens in combination with another anticancer agent
CA2478458A1 (en) 2004-08-20 2006-02-20 Michael Panzara Treatment of pediatric multiple sclerosis
MX2007002294A (es) 2004-08-26 2007-10-19 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Suministro de acidos nucleicos funcionales a celulas mamiferas via minicelulas intactas, derivadas bacterialmente.
EP1789460B1 (en) 2004-09-02 2013-01-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polymeric beads for oligonucleotide synthesis
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
US7501486B2 (en) 2004-09-07 2009-03-10 Burnham Institute For Medical Research Peptides that selectively home to heart vasculature and related conjugates and methods
JP2008513513A (ja) * 2004-09-21 2008-05-01 アネシヴァ， インコーポレイテッド ポリヌクレオチドの送達
GB0421639D0 (en) * 2004-09-29 2004-10-27 Proteome Sciences Plc Methods and compositions relating to alzheimer's disease
US8663599B1 (en) 2004-10-05 2014-03-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
JPWO2006041088A1 (ja) 2004-10-12 2008-05-15 株式会社ティッシュターゲティングジャパン 脳移行性骨髄前駆細胞
BRPI0516110A (pt) 2004-10-13 2008-08-26 Ptc Therapeutics Inc compostos para supressão sem sentido e métodos para seu uso
US8057821B2 (en) 2004-11-03 2011-11-15 Egen, Inc. Biodegradable cross-linked cationic multi-block copolymers for gene delivery and methods of making thereof
US20080261905A1 (en) 2004-11-08 2008-10-23 K.U. Leuven Research And Development Modified Nucleosides for Rna Interference
US8143257B2 (en) 2004-11-23 2012-03-27 Ptc Therapeutics, Inc. Substituted phenols as active agents inhibiting VEGF production
US7964571B2 (en) 2004-12-09 2011-06-21 Egen, Inc. Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
US8354476B2 (en) 2004-12-10 2013-01-15 Kala Pharmaceuticals, Inc. Functionalized poly(ether-anhydride) block copolymers
US9068969B2 (en) 2004-12-28 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Cell based methods and systems for the identification of RNA regulatory sequences and compounds that modulate their functions
US8192718B1 (en) 2005-01-04 2012-06-05 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
US8187570B1 (en) 2005-01-04 2012-05-29 Gp Medical, Inc. Nanoparticles for protein drug delivery
BRPI0606432A2 (pt) * 2005-01-07 2009-06-30 Lexicon Pharmaceuticals Inc anticorpos monoclonais contra angptl4
US8535702B2 (en) 2005-02-01 2013-09-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices having porous polymeric regions for controlled drug delivery and regulated biocompatibility
US7404969B2 (en) 2005-02-14 2008-07-29 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
EP1910825B1 (en) 2005-03-11 2012-08-08 Firalis SAS Biomarkers for cardiovascular side-effects induced by cox-2 inhibitory compounds
WO2006110314A2 (en) * 2005-03-25 2006-10-19 Ambion, Inc. Methods and compositions for depleting abundant rna transcripts
US8415325B2 (en) 2005-03-31 2013-04-09 University Of Delaware Cell-mediated delivery and targeted erosion of noncovalently crosslinked hydrogels
WO2006107903A2 (en) 2005-04-01 2006-10-12 Intezyne Technologies, Incorporated Polymeric micelles for drug delivery
AU2006235276A1 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. CACNA1E in cancer diagnosis, detection and treatment
AU2006235258A1 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Cancer-related genes
EP1885403B1 (en) 2005-04-12 2013-05-08 Nektar Therapeutics Poly(ethyleneglycol) conjugates of Lysostaphin
CA2609788A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity
KR101498834B1 (ko) 2005-05-09 2015-03-05 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 예정 사멸 인자 1(ｐｄ-1)에 대한 인간 모노클로날 항체, 및 항-ｐｄ-1 항체를 단독 사용하거나 기타 면역 요법제와 병용한 암 치료 방법
US8246995B2 (en) 2005-05-10 2012-08-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Hydrophobic nanotubes and nanoparticles as transporters for the delivery of drugs into cells
US20070072175A1 (en) 2005-05-13 2007-03-29 Biogen Idec Ma Inc. Nucleotide array containing polynucleotide probes complementary to, or fragments of, cynomolgus monkey genes and the use thereof
US20060265771A1 (en) 2005-05-17 2006-11-23 Lewis David L Monitoring microrna expression and function
DE102005023170A1 (de) 2005-05-19 2006-11-23 Curevac Gmbh Optimierte Formulierung für mRNA
CA2609142C (en) 2005-05-27 2016-02-09 Fondazione Centro San Raffaele Del Monte Tabor Therapeutic gene vectors comprising mirna target sequences
MX2007015107A (es) 2005-06-03 2008-02-15 Genentech Inc Metodo para producir anticuerpos con funcion mejorada.
US7550264B2 (en) 2005-06-10 2009-06-23 Datascope Investment Corporation Methods and kits for sense RNA synthesis
RS53968B1 (en) 2005-06-16 2015-08-31 Nektar Therapeutics CONJUGATES WHICH HAVE A COUPLING WHICH MAY BE DEGRADED AND POLYMER REAGENTS USED FOR THE PREPARATION OF SUCH CONJUGATES
EP1904932A4 (en) 2005-06-17 2013-02-27 Univ North Carolina METHODS, SYSTEMS AND MATERIALS FOR MANUFACTURING NANOPARTICLES
US8202835B2 (en) 2005-06-17 2012-06-19 Yitzchak Hillman Disease treatment via antimicrobial peptides or their inhibitors
MX2007016561A (es) 2005-06-30 2008-03-10 Archemix Corp Materiales y metodos para la generacion de transcriptos de acido nucleico completamente modificados en la posicion 2.
US8101385B2 (en) 2005-06-30 2012-01-24 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides
US20080220471A1 (en) 2005-07-27 2008-09-11 Genentech, Inc. Vectors and Methods Using Same
PT2573114T (pt) 2005-08-10 2016-07-13 Macrogenics Inc Identificação e manipulação de anticorpos com regiões fc variantes e métodos de utilização dos mesmos
ES2937245T3 (es) 2005-08-23 2023-03-27 Univ Pennsylvania ARN que contiene nucleósidos modificados y métodos de uso del mismo
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
US20070048741A1 (en) 2005-08-24 2007-03-01 Getts Robert C Methods and kits for sense RNA synthesis
US8007807B2 (en) 2005-09-01 2011-08-30 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh Multiple vaccination including serogroup C meningococcus
DK1928492T3 (da) 2005-09-01 2011-06-06 Celgene Corp Immunologiske anvendelser af immunmodulatoriske forbindelser til vaccine og terapi mod infektionssygdomme
US8420605B2 (en) 2005-09-07 2013-04-16 The University Of Strathclyde Hydrogel compositions
US20120021042A1 (en) 2005-09-15 2012-01-26 Steffen Panzner Efficient Method For Loading Amphoteric Liposomes With Nucleic Acid Active Substances
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
US20070087437A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Jifan Hu Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo
EP1951299B1 (en) 2005-11-04 2012-01-04 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
US20070105124A1 (en) 2005-11-08 2007-05-10 Getts Robert C Methods and kits for nucleic acid amplification
AU2006314757A1 (en) 2005-11-18 2007-05-24 Bioline Limited A method for enhancing enzymatic DNA polymerase reactions
US10155816B2 (en) 2005-11-28 2018-12-18 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
TWI389709B (zh) 2005-12-01 2013-03-21 Novartis Ag 經皮治療系統
WO2008051245A2 (en) 2005-12-02 2008-05-02 Novartis Ag Nanoparticles for use in immunogenic compositions
US8603457B2 (en) 2005-12-02 2013-12-10 University Of Rochester Nonsense suppression and genetic codon alteration by targeted modification
US7579318B2 (en) 2005-12-06 2009-08-25 Centre De La Recherche De La Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
US8242081B2 (en) 2005-12-06 2012-08-14 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
CA2630597A1 (en) 2005-12-08 2007-06-14 Novartis Ag Effects of inhibitors of fgfr3 on gene transcription
EP1795599A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-13 Schuler, Gerold, Prof. Dr. Methods for generating antigen-specific effector T cells
EP4223769A3 (en) 2005-12-13 2023-11-01 Kyoto University Nuclear reprogramming factor
JP2009519033A (ja) 2005-12-16 2009-05-14 ディアト 核酸を細胞に送達するための細胞貫通ペプチド結合体
AU2007204617A1 (en) 2006-01-12 2007-07-19 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable elastomers
ATE533782T1 (de) 2006-01-13 2011-12-15 Univ Pennsylvania Impfstoffe und immuntherapeutika mit codon- optimiertem il-15 und verwendungsverfahren dafür
ES2550099T3 (es) 2006-01-27 2015-11-04 Biogen Ma Inc. Antagonistas del receptor Nogo
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
US20070178103A1 (en) 2006-01-30 2007-08-02 Fey Georg H CD19-specific immunotoxin and treatment method
US8476234B2 (en) 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
JP5295785B2 (ja) 2006-02-20 2013-09-18 エファ・ユニバーシティ・インダストリー・コラボレイション・ファウンデイション 細胞膜透過性ペプチド
JP5312050B2 (ja) 2006-02-21 2013-10-09 ネクター セラピューティクス 分割型の分解性重合体とそれから生成される複合体
EP1991204A2 (en) 2006-02-24 2008-11-19 Novartis AG Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
US20080038278A1 (en) 2006-02-24 2008-02-14 Jingsong Cao GPAT3 encodes a mammalian, microsomal acyl-coa:glycerol 3- phosphate acyltransferase
PL2676967T3 (pl) 2006-02-28 2019-12-31 Biogen Ma Inc. Metody leczenia chorób zapalnych i autoimmunologicznych za pomocą natalizumabu
US7910152B2 (en) 2006-02-28 2011-03-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester amide)-based drug delivery systems with controlled release rate and morphology
GB0605217D0 (en) 2006-03-15 2006-04-26 Novartis Ag Method and compositions for assessing acute rejection
US8231907B2 (en) 2006-03-21 2012-07-31 Morehouse School Of Medicine Nanoparticles for delivery of active agents
EP2007435B1 (en) 2006-03-31 2019-12-18 Massachusetts Institute Of Technology System for targeted delivery of therapeutic agents
JP2009532466A (ja) 2006-04-04 2009-09-10 エスティーシー．ユーエヌエム 薬物送達用の膨潤性粒子
EP2010659B1 (en) 2006-04-14 2014-06-18 CellScript, Inc. Kits and methods for generating 5' capped RNA
WO2007118939A1 (fr) 2006-04-19 2007-10-25 Arcelor France Procede de fabrication d'une piece soudee a tres hautes caracteristiques mecaniques a partir d'une tole laminee et revetue
EP1852127A1 (en) 2006-05-02 2007-11-07 Charité - Universitätsmedizin Berlin Use of a B-cell-depleting antibody for treatment of polyoma virus infections
JP5630998B2 (ja) 2006-05-15 2014-11-26 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 機能的粒子のためのポリマー
US9925151B2 (en) 2006-05-24 2018-03-27 Merck Serono Sa Cladribine regimen for treating multiple sclerosis
EP2030015B1 (en) 2006-06-02 2016-02-17 President and Fellows of Harvard College Protein surface remodeling
US20110028688A1 (en) * 2006-06-21 2011-02-03 Genentech, Inc. Crystal structure of ox40l and ox40l complexed with ox40 receptor
WO2008003319A1 (en) 2006-07-04 2008-01-10 Genmab A/S Cd20 binding molecules for the treatment of copd
EP2397123A1 (en) 2006-07-07 2011-12-21 Aarhus Universitet Nanoparticles for nucleic acid delivery
PL2038310T3 (pl) 2006-07-12 2010-11-30 Novartis Ag Aktynicznie sieciowalne kopolimery do wytwarzania soczewek kontaktowych
JP2009544287A (ja) 2006-07-20 2009-12-17 ノバルティス アーゲー 癌を処置、診断、または検出するためのａｍｉｇｏ−２インヒビター
JP5571380B2 (ja) 2006-07-24 2014-08-13 ルミナス バイオサイエンシズ，インコーポレイテッド オストワルド熟成を減少させた水不溶性の医薬品物質の固体ナノ粒子処方物
JP2009544754A (ja) * 2006-07-28 2009-12-17 アプライド バイオシステムズ， エルエルシー ジヌクレオチドｍｒｎａキャップアナログ
JP2010507361A (ja) 2006-07-31 2010-03-11 キュアバック ゲーエムベーハー 具体的には免疫刺激剤／アジュバントとしての、一般式（Ｉ）：ＧｌＸｍＧｎ、または一般式（ＩＩ）：ＣｌＸｍＣｎで表される核酸
DE102006035618A1 (de) 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz
JP2010507567A (ja) 2006-08-07 2010-03-11 ジェンザイム・コーポレーション 併用療法
AU2007284651B2 (en) 2006-08-09 2014-03-20 Institute For Systems Biology Organ-specific proteins and methods of their use
WO2008022046A2 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Dicer substrate rna peptide conjugates and methods for rna therapeutics
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
EP2061488B1 (en) 2006-09-06 2014-07-30 The Regents of the University of California Selectively targeted antimicrobial peptides and the use thereof
MY170607A (en) 2006-09-07 2019-08-20 Crucell Holland Bv Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus h5n1 and uses thereof
ES2360538T3 (es) 2006-09-08 2011-06-06 Johns Hopkins University Composiciones para aumentar el transporte a través de moco.
US8454948B2 (en) 2006-09-14 2013-06-04 Medgenics Medical Israel Ltd. Long lasting drug formulations
GB0619182D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Leuven K U Res & Dev Oligonucleotide arrays
CN101616677B (zh) 2006-10-03 2015-07-22 阿尔尼拉姆医药品有限公司 含脂质的制品
WO2008073558A2 (en) 2006-10-05 2008-06-19 The Johns Hopkins University Water-dispersible oral, parenteral, and topical formulations for poorly water soluble drugs using smart polymeric nanoparticles
GB0619816D0 (en) * 2006-10-06 2006-11-15 Viragen Inc Novel interferon-alpha constructs for use in the treatment of cancer
DE102006051516A1 (de) * 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
US8414927B2 (en) 2006-11-03 2013-04-09 Boston Scientific Scimed, Inc. Cross-linked polymer particles
CA2669696A1 (en) 2006-11-15 2008-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized maml peptides and uses thereof
US7999087B2 (en) 2006-11-15 2011-08-16 Agilent Technologies, Inc. 2′-silyl containing thiocarbonate protecting groups for RNA synthesis
US8242258B2 (en) 2006-12-03 2012-08-14 Agilent Technologies, Inc. Protecting groups for RNA synthesis
US8399007B2 (en) 2006-12-05 2013-03-19 Landec Corporation Method for formulating a controlled-release pharmaceutical formulation
WO2008068631A2 (en) 2006-12-06 2008-06-12 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
US9034348B2 (en) 2006-12-11 2015-05-19 Chi2Gel Ltd. Injectable chitosan mixtures forming hydrogels
KR20180019768A (ko) 2006-12-18 2018-02-26 악셀레론 파마 인코포레이티드 액티빈-ａｃｔｒｉｉ 길항물질과 적혈구 수준을 증가시키기 위한 이의 용도
JP5452230B2 (ja) 2006-12-21 2014-03-26 ストライカー コーポレイション 生物学的因子の結晶、高分子ゲルおよび粒子懸濁液を含む持続放出処方物
EP2104739B1 (en) 2006-12-21 2013-06-19 Novozymes Inc. Modified messenger rna stabilizing sequences for expressing genes in bacterial cells
AU2007337810B2 (en) 2006-12-22 2014-02-13 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides
DE102006061015A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Curevac Gmbh Verfahren zur Reinigung von RNA im präparativen Maßstab mittels HPLC
US8338166B2 (en) 2007-01-04 2012-12-25 Lawrence Livermore National Security, Llc Sorting, amplification, detection, and identification of nucleic acid subsequences in a complex mixture
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2008091799A2 (en) 2007-01-22 2008-07-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Cell-based methods for identifying inhibitors of parkinson's disease-associated lrrk2 mutants
AU2008211227B2 (en) 2007-01-30 2014-04-17 Epivax, Inc. Regulatory T cell epitopes, compositions and uses thereof
TWI782836B (zh) 2007-02-02 2022-11-01 美商艾瑟勒朗法瑪公司 衍生自ActRIIB的變體與其用途
US8859229B2 (en) 2007-02-02 2014-10-14 Yale University Transient transfection with RNA
WO2008096370A2 (en) 2007-02-05 2008-08-14 Natco Pharma Limited An efficient and novel purification method of recombinant hg-csf
US8333799B2 (en) 2007-02-12 2012-12-18 C. R. Bard, Inc. Highly flexible stent and method of manufacture
US20100015218A1 (en) 2007-02-16 2010-01-21 Vasant Jadhav Compositions and methods for potentiated activity of biologically active molecules
WO2008104294A1 (en) * 2007-02-27 2008-09-04 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Myh7 as a biomarker for ppara modulators
US8242087B2 (en) 2007-02-27 2012-08-14 K.U.Leuven Research & Development Phosphate modified nucleosides useful as substrates for polymerases and as antiviral agents
MX2009009156A (es) 2007-03-02 2009-09-04 Boehringer Ingelheim Pharma Mejora de la produccion de proteina.
EP1964922A1 (en) 2007-03-02 2008-09-03 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Improvement of protein production
US7943168B2 (en) 2007-03-05 2011-05-17 Washington University Nanoparticle delivery systems comprising a hydrophobic core and a lipid/surfactant layer comprising a membrane-lytic peptide
US20100297699A1 (en) 2007-03-20 2010-11-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic Acids Encoding Humanized Immunoglobulin That Binds Alpha4Beta7 Integrin
SI2152358T1 (sl) 2007-04-27 2011-08-31 Echo Therapeutics Inc Naprava za prodiranje skozi koĺ˝o za analizno merjenje ali za transdermalni prenos zdravil
SI2152290T1 (sl) 2007-04-30 2014-09-30 Glaxosmithkline Llc Postopki za dajanje anti-IL-5 protiteles
US8703204B2 (en) 2007-05-03 2014-04-22 Bend Research, Inc. Nanoparticles comprising a cholesteryl ester transfer protein inhibitor and anon-ionizable polymer
ES2531520T3 (es) 2007-05-04 2015-03-16 Marina Biotech, Inc. Lipoaminoácidos y usos de los mismos
US7682789B2 (en) 2007-05-04 2010-03-23 Ventana Medical Systems, Inc. Method for quantifying biomolecules conjugated to a nanoparticle
WO2009023311A2 (en) 2007-05-07 2009-02-19 Alba Therapeutics Corporation Transcutaneous delivery of therapeutic agents
JP5296328B2 (ja) 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
WO2008141248A2 (en) 2007-05-10 2008-11-20 Agilent Technologies, Inc. Thiocarbon-protecting groups for rna synthesis
AU2008255027B2 (en) 2007-05-14 2013-10-03 Astrazeneca Ab Methods of reducing eosinophil levels
WO2008144365A2 (en) 2007-05-17 2008-11-27 Novartis Ag Method for making dry powder compositions containing ds-rna based on supercritical fluid technology
DK2162538T3 (en) * 2007-05-22 2016-06-06 Arcturus Therapeutics Inc Oligomers for THERAPY
CA2687746A1 (en) 2007-05-22 2008-12-18 Novartis Ag Methods of treating, diagnosing and detecting fgf21-associated disorders
DK2826863T3 (en) 2007-05-30 2017-12-04 Univ Northwestern NUCLEIC ACID FUNCTIONALIZED NANOPARTICLES FOR THERAPEUTIC APPLICATIONS
US20100184051A1 (en) 2007-05-30 2010-07-22 The General Hospital Corporation Methods of generating pluripotent cells from somatic cells
CN107501370B (zh) 2007-06-19 2021-06-18 路易斯安那州州立大学及农业机械学院管理委员会 信使rna帽的抗-反向硫代磷酸类似物的合成和用途
CA2707436C (en) 2007-06-29 2014-01-28 Epicentre Technologies Corporation Copy dna and sense rna
WO2009015071A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Dharmacon, Inc. Screening of micro-rna cluster inhibitor pools
US9144546B2 (en) 2007-08-06 2015-09-29 Clsn Laboratories, Inc. Nucleic acid-lipopolymer compositions
US20090042825A1 (en) 2007-08-06 2009-02-12 Majed Matar Composition, method of preparation & application of concentrated formulations of condensed nucleic acids with a cationic lipopolymer
CN101835903A (zh) 2007-08-23 2010-09-15 诺瓦提斯公司 检测寡核苷酸的方法
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
CN101821292B (zh) 2007-09-05 2014-03-26 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Ⅰ型和ⅱ型抗-cd20抗体的组合疗法
US8506928B2 (en) 2007-09-07 2013-08-13 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for targeting tissues
WO2009039198A2 (en) 2007-09-17 2009-03-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Generation of hyperstable mrnas
DK3156414T3 (da) 2007-09-26 2020-03-09 Intrexon Corp Syntetisk 5'utrs ekspressionsvektorer og fremgangsmåder til øgning af transgen ekspression
EP2195009B1 (en) 2007-09-26 2014-07-30 Oregon Health and Science University Cyclic undecapeptides and derivatives as multiple sclerosis therapies
CA2891005A1 (en) 2007-09-28 2008-10-09 Bind Therapeutics, Inc. Cancer cell targeting using nanoparticles
EP2042193A1 (en) 2007-09-28 2009-04-01 Biomay AG RNA Vaccines
US8470560B2 (en) 2007-10-03 2013-06-25 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army CR-2 binding peptide P28 as molecular adjuvant for DNA vaccines
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009046738A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
MX2010003642A (es) 2007-10-12 2010-08-09 Massachusetts Inst Technology Nanotecnologia de vacuna.
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
CN101903018B (zh) * 2007-10-17 2012-09-05 韩国科学技术院 用于递送核酸基因的ldl样阳离子纳米微粒、其制备方法以及使用其递送核酸基因的方法
GB0720486D0 (en) * 2007-10-19 2007-11-28 Univ Edinburgh Cationic lipids
WO2009052830A1 (en) 2007-10-22 2009-04-30 Genmab A/S Novel antibody therapies
WO2009058911A2 (en) 2007-10-31 2009-05-07 Applied Biosystems Inc. Preparation and isolation of 5' capped mrna
CN101965409A (zh) 2007-11-01 2011-02-02 罗切斯特大学 具有增加的稳定性的重组因子viii
RU2491095C2 (ru) 2007-11-09 2013-08-27 Новартис Аг Применения анти-cd40-антител
WO2009062348A1 (fr) 2007-11-14 2009-05-22 Institute Of Microbiology, Chinese Academy Of Sciences Procédés d'inhibition d'une infection par le virus de la grippe et leurs médicaments
EP2277124B1 (en) * 2007-11-21 2016-11-09 Medizinische Hochschule Hannover Means for treating myosin-related diseases
UY31504A1 (es) 2007-11-30 2009-07-17 Construcciones de union de antigenos
EP2617828B1 (en) 2007-12-10 2014-09-24 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor VII gene
EP2231859B1 (en) 2007-12-11 2013-01-23 The Scripps Research Institute Compositions and methods related to mrna translational enhancer elements
AU2008334948B2 (en) 2007-12-13 2014-11-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of RSV infection
EP2072618A1 (en) 2007-12-14 2009-06-24 Johannes Gutenberg-Universität Mainz Use of RNA for reprogramming somatic cells
AU2008342956A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
JP5645044B2 (ja) 2008-01-22 2014-12-24 独立行政法人医薬基盤研究所 遺伝子発現制御機構を含む新規Ａｄベクター
BRPI0906795A2 (pt) 2008-01-23 2015-08-18 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido
EP2246422A4 (en) 2008-01-24 2012-07-25 Nat Inst Of Advanced Ind Scien POLYNUCLEOTIDE OR ITS ANALOGUE, AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION USING THE POLYNUCLEOTIDE OR ITS ANALOGUE
PT2176408E (pt) 2008-01-31 2015-04-23 Curevac Gmbh Ácidos nucleicos compreendendo a fórmula (nuglxmgnnv)a e os seus derivados como agentes/adjuvantes imunoestimuladores
US20100330677A1 (en) 2008-02-11 2010-12-30 Cambridge Enterprise Limited Improved Reprogramming of Mammalian Cells, and Cells Obtained
EP2240155B1 (en) 2008-02-13 2012-06-06 Intarcia Therapeutics, Inc Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents
DE102008009920A1 (de) 2008-02-15 2009-08-20 Aj Innuscreen Gmbh Mobiles Gerät für die Nukleinsäureisolierung
US20120027813A1 (en) 2008-02-22 2012-02-02 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
US8506966B2 (en) 2008-02-22 2013-08-13 Novartis Ag Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
WO2009108891A2 (en) 2008-02-29 2009-09-03 Egen, Inc. Modified poloxamers for gene expression and associated methods
PL2993186T3 (pl) 2008-03-14 2020-02-28 Biocon Limited Przeciwciało monoklonalne i sposób jego otrzymywania
WO2009114854A1 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Egen, Inc. Biodegradable cross-linked branched poly (alkylene imines)
US9834600B2 (en) 2008-03-28 2017-12-05 Glaxosmithkline Llc Methods of treatment of eosinophilic bronchitis with an anti-IL-5 antibody
NZ588583A (en) 2008-04-15 2012-08-31 Protiva Biotherapeutics Inc Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
JP5539962B2 (ja) 2008-04-25 2014-07-02 ノースウェスタン、ユニバーシティ コレステロールを隔離するのに適したナノ構造体
US20110112040A1 (en) 2008-04-28 2011-05-12 President And Fellows Of Harvard College Supercharged proteins for cell penetration
US8715689B2 (en) 2008-04-30 2014-05-06 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Chimeric west nile/dengue viruses
US9394538B2 (en) 2008-05-07 2016-07-19 Shi-Lung Lin Development of universal cancer drugs and vaccines
US8486278B2 (en) 2008-05-08 2013-07-16 Minipumps, Llc Drug-delivery pumps and methods of manufacture
US8697098B2 (en) 2011-02-25 2014-04-15 South Dakota State University Polymer conjugated protein micelles
US9476063B2 (en) 2008-05-13 2016-10-25 University Of Washington Diblock copolymers and polynucleotide complexes thereof for delivery into cells
JP5689413B2 (ja) * 2008-05-21 2015-03-25 ライニッシュ フリードリッヒ−ウィルヘルムズ−ユニバーシタット ボン 平滑末端を有する５’三リン酸オリゴヌクレオチドおよびその使用
AU2009253160B2 (en) 2008-05-26 2015-03-05 Universitat Zurich Protamine/RNA nanoparticles for immunostimulation
KR101275950B1 (ko) 2008-05-29 2013-06-25 한올바이오파마주식회사 증가된 단백질분해효소 저항성을 나타내는 변형된 에리스로포이에틴（ｅｐｏ） 폴리펩티드 및 이의 약제학적 조성물
FR2931824B1 (fr) 2008-05-29 2014-11-28 Centre Nat Rech Scient Procede de synthese d'arn par voie chimique.
US20100086922A1 (en) * 2008-05-30 2010-04-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Assessment of chromosomal alterations to predict clinical outcome of bortezomib treatment
US20110070298A1 (en) * 2008-06-05 2011-03-24 Immunovaccine Technologies Inc. Compositions Comprising Liposomes, An Antigen, A Polynucleotide and A Carrier Comprising a Continuous Phase of a Hydrophobic Substance
PL215513B1 (pl) 2008-06-06 2013-12-31 Univ Warszawski Nowe boranofosforanowe analogi dinukleotydów, ich zastosowanie, czasteczka RNA, sposób otrzymywania RNA oraz sposób otrzymywania peptydów lub bialka
TWI451876B (zh) 2008-06-13 2014-09-11 Lilly Co Eli 聚乙二醇化之離脯胰島素化合物
WO2010005726A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mtor inhibitors and methods of making and using same
JP2012501965A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 薬剤を装填したポリマーナノ粒子及びその製造方法と使用方法
JP2012501966A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド ビンカアルカロイド含有治療用ポリマーナノ粒子並びにその製造方法及び使用方法
EP2285350B1 (en) 2008-06-16 2017-11-15 Pfizer Inc Methods for the preparation of targeting agent functionalized diblock copolymers for use in fabrication of therapeutic nanoparticles
CA2729554C (en) * 2008-06-27 2018-03-06 Centre National De La Recherche Scientifique Molecular signature of liver tumor grade and use to evaluate prognosis and therapeutic regimen
EP2320925B1 (en) * 2008-07-10 2015-12-23 Regenesance B.V. Complement antagonists and uses thereof
US20100009424A1 (en) 2008-07-14 2010-01-14 Natasha Forde Sonoporation systems and methods
WO2010009277A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Immunogenic amphipathic peptide compositions
WO2010009065A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Amphipathic peptide compositions
JP2011528910A (ja) * 2008-07-25 2011-12-01 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド センス鎖中の一般塩基またはミスマッチを使用したｓｉＲＮＡサイレンシング活性の亢進
EP2326331A4 (en) 2008-08-18 2013-05-15 Merck Sharp & Dohme NOVEL LIPID NANOPARTICLES AND NEW COMPONENTS FOR NUCLEIC ACID ADMINISTRATION
WO2010022961A1 (en) * 2008-08-28 2010-03-04 Novartis Ag Cell surface display of polypeptide isoforms by stop codon readthrough
WO2010025510A1 (en) 2008-09-03 2010-03-11 Xenome Ltd Libraries of peptide conjugates and methods for making them
CN102439025B (zh) 2008-09-06 2017-08-01 坎姆根公司 Rna合成－用于反向合成rna的亚磷酰胺，以及在3’‑末端合成rna的配体、发色团和修饰物的方便引入中的应用
WO2010027903A2 (en) 2008-09-08 2010-03-11 Fred Hutchinson Cancer Research Center Lung cancer diagnosis
US20100087337A1 (en) 2008-09-10 2010-04-08 Bind Biosciences, Inc. High Throughput Fabrication of Nanoparticles
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 Genentech Inc 治療進展型多發性硬化症之方法
US20120021519A1 (en) 2008-09-19 2012-01-26 Presidents And Fellows Of Harvard College Efficient induction of pluripotent stem cells using small molecule compounds
WO2010039548A2 (en) * 2008-09-23 2010-04-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
WO2010042490A1 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Boston Medical Center Corporation A single lentiviral vector system for induced pluripotent (ips) stem cells derivation
ES2475065T3 (es) * 2008-10-09 2014-07-10 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Aminol�pidos mejorados y métodos para la administración de ácidos nucleicos
US8535655B2 (en) 2008-10-10 2013-09-17 Polyactiva Pty Ltd. Biodegradable polymer—bioactive moiety conjugates
US8343498B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8603532B2 (en) 2008-10-20 2013-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Nanostructures for drug delivery
WO2010047839A1 (en) 2008-10-25 2010-04-29 Aura Biosciences Modified plant virus particles and uses therefor
CA3006395C (en) 2008-11-07 2022-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
KR20220150995A (ko) 2008-11-10 2022-11-11 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물
WO2010057203A2 (en) 2008-11-17 2010-05-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Hdl particles for delivery of nucleic acids
KR101073875B1 (ko) * 2008-11-28 2011-10-14 한국생명공학연구원 대장암 진단 마커 및 이를 이용한 대장암 진단방법
EP2191840A1 (en) 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and melphalan
JP5855462B2 (ja) 2008-12-10 2016-02-09 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ＧＮＡＱを標的としたｄｓＲＮＡ組成物および発現を阻害するための方法
EP2196476A1 (en) 2008-12-10 2010-06-16 Novartis Ag Antibody formulation
EP2376091A4 (en) 2008-12-12 2012-08-01 Univ California NEW TARGETS FOR THE TREATMENT OF HYPERCHOLESTEROLEMIA
WO2010068866A2 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Bind Biosciences Therapeutic particles suitable for parenteral administration and methods of making and using same
ES2776126T3 (es) 2008-12-15 2020-07-29 Pfizer Nanopartículas de circulación prolongada para la liberación sostenida de agentes terapéuticos
WO2010080724A1 (en) 2009-01-12 2010-07-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids
SG172792A1 (en) 2009-01-16 2011-08-29 Glaxosmithkline Llc Treatment of a cancer using a combination of bendamustine and an anti-cd20 antibody
WO2010084371A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Mitoprod Novel circular interfering rna molecules
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
US8669085B2 (en) 2009-02-05 2014-03-11 Ut-Battelle, Llc Transformation of gram positive bacteria by sonoporation
WO2010088927A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Curevac Gmbh Use of pei for the improvement of endosomal release and expression of transfected nucleic acids, complexed with cationic or polycationic compounds
US20140141089A1 (en) 2009-02-11 2014-05-22 Colorado School Of Mines Nanoparticles, Compositions Thereof, and Methods of Use, and Methods of Making the Same
AU2010218388B2 (en) 2009-02-24 2015-03-26 The Scripps Research Institute Reengineering mRNA primary structure for enhanced protein production
WO2010102066A1 (en) 2009-03-05 2010-09-10 Bend Research, Inc. Dextran polymer powder for inhalation administration of pharmaceuticals
WO2010141135A2 (en) 2009-03-05 2010-12-09 Trustees Of Boston University Bacteriophages expressing antimicrobial peptides and uses thereof
JP5596712B2 (ja) 2009-03-12 2014-09-24 イリノイ トゥール ワークス インコーポレイティド 給油ミス防止装置
CN102625842A (zh) 2009-03-13 2012-08-01 艾根股份有限公司 用于输送生物活性rna的组合物和方法
JP5782602B2 (ja) 2009-03-20 2015-09-24 シーエルエスエヌ ラボラトリーズ、インコーポレイテッド ポリアミン誘導体
WO2010111290A1 (en) 2009-03-23 2010-09-30 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to modified guanine bases for controlling off-target effects in rna interference
AU2010229490B2 (en) 2009-03-24 2015-02-12 University Of Chicago Slip chip device and methods
WO2010109289A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Council Of Scientific & Industrial Research Process for the preparation of agarose polymer from seaweed extractive
JP5622254B2 (ja) 2009-03-31 2014-11-12 国立大学法人東京大学 二本鎖リボ核酸ポリイオンコンプレックス
WO2011127032A1 (en) 2010-04-05 2011-10-13 University Of Chicago Compositions and methods related to protein a (spa) antibodies as an enhancer of immune response
PL2414387T3 (pl) 2009-04-03 2016-06-30 Univ Chicago Kompozycje i sposoby związane z wariantami białka A (SpA)
EP2419143B8 (en) 2009-04-13 2018-06-27 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Hpv particles and uses thereof
EP2419137A4 (en) 2009-04-17 2013-01-09 Biogen Idec Inc COMPOSITIONS AND METHOD FOR TREATING ACUTE MYELOGENIC LEUKEMIA
WO2010123569A2 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Selecta Biosciences, Inc. Immunonanotherapeutics providing a th1-biased response
EP2421563B1 (en) 2009-04-22 2017-04-12 Massachusetts Institute of Technology Innate immune suppression enables repeated delivery of long rna molecules
EP3275900A1 (en) 2009-04-27 2018-01-31 Novartis AG Compositions and methods for increasing muscle growth
US8715736B2 (en) 2009-04-30 2014-05-06 Florida Agricultural And Mechanical University Nanoparticle formulations for skin delivery
US8287910B2 (en) 2009-04-30 2012-10-16 Intezyne Technologies, Inc. Polymeric micelles for polynucleotide encapsulation
EP3165606A1 (en) 2009-05-01 2017-05-10 Ophthotech Corporation Methods for treating or preventing ophthalmological diseases
CA3042927C (en) 2009-05-05 2022-05-17 Arbutus Biopharma Corporation Lipid compositions for the delivery of therapeutic agents
DE202009007116U1 (de) 2009-05-18 2010-10-14 Amoena Medizin-Orthopädie-Technik GmbH Antidekubituskissen
EP2435094A2 (en) 2009-05-27 2012-04-04 Selecta Biosciences, Inc. Targeted synthetic nanocarriers with ph sensitive release of immunomodulatory agents
US8574835B2 (en) 2009-05-29 2013-11-05 Life Technologies Corporation Scaffolded nucleic acid polymer particles and methods of making and using
EP2440556A1 (en) 2009-06-10 2012-04-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
KR102205886B1 (ko) 2009-06-10 2021-01-21 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
US8765370B2 (en) 2009-06-11 2014-07-01 Scinopharm Taiwan, Ltd Inhibition-based high-throughput screen strategy for cell clones
KR20120050429A (ko) 2009-06-15 2012-05-18 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｐｃｓｋ9 유전자를 표적으로 하는 지질 제형된 ｄｓｒｎａ
WO2010151664A2 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for treating cancer and modulating stress granule formation
WO2011000107A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
WO2011000106A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Improved cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
CA2766907A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Novartis Ag Self replicating rna molecules and uses thereof
DE102009033507A1 (de) * 2009-07-15 2011-01-20 Niro-Plan Ag Vorrichtung und Verfahren zum Erzeugen von gekühltem Kaffee
EP2460140B1 (en) 2009-07-30 2013-09-11 TP Vision Holding B.V. Distributed image retargeting
WO2011012316A2 (de) 2009-07-31 2011-02-03 Ludwig-Maximilians-Universität Rna mit einer kombination aus unmodifizierten und modifizierten nucleotiden zur proteinexpression
EP2281579A1 (en) 2009-08-05 2011-02-09 BioNTech AG Vaccine composition comprising 5'-Cap modified RNA
EP3072881A1 (en) 2009-08-20 2016-09-28 Sirna Therapeutics, Inc. Novel cationic lipids with various head groups for oligonucleotide delivery
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
WO2011043913A2 (en) 2009-10-08 2011-04-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel cationic lipids with short lipid chains for oligonucleotide delivery
US8859284B2 (en) 2009-10-22 2014-10-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Delivery of nanoparticles to neurons
CA2816925C (en) 2009-11-04 2023-01-10 The University Of British Columbia Nucleic acid-containing lipid particles and related methods
US8449916B1 (en) 2009-11-06 2013-05-28 Iowa State University Research Foundation, Inc. Antimicrobial compositions and methods
WO2011060250A1 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Bend Research, Inc. Cationic dextran polymer derivatives
US9415113B2 (en) 2009-11-18 2016-08-16 University Of Washington Targeting monomers and polymers having targeting blocks
US8530429B2 (en) 2009-11-24 2013-09-10 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
ES2713852T3 (es) 2009-12-01 2019-05-24 Translate Bio Inc Derivado de esteroides para la administración de ARNm en enfermedades genéticas humanas
DE102009056884B4 (de) 2009-12-03 2021-03-18 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
US20110245756A1 (en) 2009-12-03 2011-10-06 Rishi Arora Devices for material delivery, electroporation, sonoporation, and/or monitoring electrophysiological activity
PT2506868T (pt) 2009-12-06 2018-02-23 Bioverativ Therapeutics Inc Polipéptidos quiméricos e hibridos de factor viii-fc, e métodos de utilização dos mesmos
WO2011071860A2 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions for nucleic acid delivery
US20130189741A1 (en) 2009-12-07 2013-07-25 Cellscript, Inc. Compositions and methods for reprogramming mammalian cells
DK3112467T3 (en) 2009-12-07 2018-04-23 Univ Pennsylvania RNA PREPARATIONS COMPREHENSIVE PURIFIED MODIFIED RNA FOR CELL PROGRAMMING
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
WO2011069528A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Lyophilization of nucleic acids in lactate-containing solutions
EP2509634B1 (en) 2009-12-11 2019-03-06 Pfizer Inc Stable formulations for lyophilizing therapeutic particles
EA201290498A1 (ru) 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Терапевтические полимерные наночастицы, включающие эпотилон, и способы их получения и применения
ES2780156T3 (es) 2009-12-15 2020-08-24 Pfizer Composiciones terapéuticas de nanopartículas poliméricas con alta temperatura de transición vítrea o copolímeros de alto peso molecular
EP2512487A4 (en) 2009-12-15 2013-08-07 THERAPEUTIC POLYMERNANOPARTICLES WITH CORTICOSTEROIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
DE102009058769A1 (de) 2009-12-16 2011-06-22 MagForce Nanotechnologies AG, 10589 Temperaturabhängige Aktivierung von katalytischen Nukleinsäuren zur kontrollierten Wirkstofffreisetzung
CN102791294A (zh) 2009-12-16 2012-11-21 布里格姆妇女医院股份有限公司 用于多种药物递送的粒子
WO2011075656A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 The University Of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
WO2011076807A2 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
US20110171248A1 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic virus-like particles conjugated to human papillomavirus capsid peptides for use as vaccines
US8846631B2 (en) 2010-01-14 2014-09-30 Regulus Therapeutics Inc. MicroRNA compositions and methods
WO2011090965A1 (en) 2010-01-22 2011-07-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel cationic lipids for oligonucleotide delivery
PT2525815E (pt) 2010-01-24 2015-03-05 Novartis Ag Micropartículas de polímero biodegradável irradiadas
EP2354247A1 (en) * 2010-02-11 2011-08-10 Academisch Medisch Centrum bij de Universiteit van Amsterdam Means and methods for typing a sample for rheumatoid arthritis or spondyloarthritis
AP3284A (en) 2010-02-24 2015-05-31 Arrowhead Res Corp Compositions for targeted delivery of SIRNA
US8889193B2 (en) 2010-02-25 2014-11-18 The Johns Hopkins University Sustained delivery of therapeutic agents to an eye compartment
JP6204664B2 (ja) 2010-02-26 2017-09-27 キアゲン ゲーエムベーハー Ｒｎａおよびｄｎａの並行単離および／または並行精製のためのプロセス
US20110218170A1 (en) 2010-03-02 2011-09-08 Southern Research Institute Use of 2'-deoxy-4'-thiocytidine and its analogues as dna hypomethylating anticancer agents
US20130133483A1 (en) 2010-03-08 2013-05-30 University Of Rochester Synthesis of Nanoparticles Using Reducing Gases
WO2011116072A1 (en) 2010-03-16 2011-09-22 Escape Therapeutics, Inc. Hybrid hydrogel scaffold compositions and methods of use
US20130149783A1 (en) 2010-03-16 2013-06-13 James William Yockman Cleavable modifications to reducible poly (amido ethylenimines)s to enhance nucleotide delivery
US20110230816A1 (en) 2010-03-18 2011-09-22 Tyco Healthcare Group Lp Gels for Transdermal Delivery
US20130005797A1 (en) 2010-03-18 2013-01-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Endosomolytic poly(amidoamine) disulfide polymers for the delivery of oligonucleotides
US9149432B2 (en) 2010-03-19 2015-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Lipid vesicle compositions and methods of use
GB201005005D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Angeletti P Ist Richerche Bio New vaccine
CA2794307A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US8207290B2 (en) 2010-03-26 2012-06-26 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for generating nanoparticles
US20110247090A1 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Intrexon Corporation Synthetic 5'UTRs, Expression Vectors, and Methods for Increasing Transgene Expression
EP2556151A1 (en) 2010-04-07 2013-02-13 Novartis AG Method for generating a parvovirus b19 virus-like particle
WO2011127255A1 (en) 2010-04-08 2011-10-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Preparation of lipid nanoparticles
EP2813220A3 (en) 2010-04-09 2015-06-17 Pacira Pharmaceuticals, Inc. Method for formulating large diameter synthetic membrane vesicles
JP5652830B2 (ja) 2010-04-09 2015-01-14 国立大学法人 東京大学 マイクロｒｎａ制御組換えワクシニアウイルス及びその使用
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
KR101196667B1 (ko) 2010-04-15 2012-11-02 포항공과대학교 산학협력단 피에이치 민감성 금속 나노 입자를 이용한 항암제 전달 시스템
WO2011130624A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Immune Disease Institute, Inc. Sustained polypeptide expression from synthetic, modified rnas and uses thereof
WO2011127933A1 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Nuevolution A/S Bi-functional complexes and methods for making and using such complexes
EP2377938A1 (en) 2010-04-16 2011-10-19 Eukarys Capping-prone RNA polymerase enzymes and their applications
WO2011133868A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
DK2561073T3 (en) 2010-04-23 2016-12-12 Univ Massachusetts Aav vectors targeted to central nervous system and methods of use thereof
CA2796965C (en) 2010-04-28 2019-04-16 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method for increasing permeability of an epithelial barrier
US20130156845A1 (en) 2010-04-29 2013-06-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated single stranded rna
JP2013524840A (ja) 2010-04-30 2013-06-20 ノバルティス アーゲー 脆弱ｘ症候群（ｆｘｓ）の治療において有用な予測マーカー
US9254327B2 (en) 2010-05-10 2016-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
US10077232B2 (en) 2010-05-12 2018-09-18 Arbutus Biopharma Corporation Cyclic cationic lipids and methods of use
WO2011141705A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
EP2387999A1 (en) 2010-05-21 2011-11-23 CureVac GmbH Histidine-containing solution for transfection and/or injection of nucleic acids and uses thereof
WO2011149733A2 (en) 2010-05-24 2011-12-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel amino alcohol cationic lipids for oligonucleotide delivery
BR112012029912A2 (pt) 2010-05-26 2016-11-16 Selecta Biosciences Inc vácinas de combinação de nanotransportadores sintéticos
CN103096875B (zh) 2010-06-03 2016-08-17 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于递送活性剂的生物可降解脂质
DK2575767T3 (en) 2010-06-04 2017-03-13 Sirna Therapeutics Inc HOWEVER UNKNOWN LOW MOLECULAR CATIONIC LIPIDS TO PROCESS OIGONUCLEOTIDES
WO2011157715A1 (en) 2010-06-14 2011-12-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Cell-penetrating peptides and uses therof
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
WO2011161653A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding proteins
WO2012002760A2 (ko) 2010-07-01 2012-01-05 포항공과대학교 산학협력단 세균유래 마이크로베시클을 이용한 암치료 및 암진단 방법
KR101130137B1 (ko) 2010-07-02 2012-03-28 연세대학교 산학협력단 발광다이오드 모듈
KR20130093084A (ko) 2010-07-02 2013-08-21 더 유니버시티 오브 시카고 단백질 Ａ(ＳｐＡ) 변이체와 관련된 조성물 및 방법
LT3243526T (lt) 2010-07-06 2020-02-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Rnr pristatymas, skirtas keleto imuninio atsako paleidimui
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
WO2012004276A2 (en) * 2010-07-06 2012-01-12 Fondazione Telethon Multiprotein biomarkers of amyotrophic lateral sclerosis in peripheral blood mononuclear cells, diagnostic methods and kits
BR112013000244A2 (pt) 2010-07-06 2016-05-17 Novartis Ag lipossomas com lipídeos apresentando pka vantajoso para administração de rna
CN108042799A (zh) 2010-07-06 2018-05-18 诺华股份有限公司 阳离子水包油乳液
SI2591114T1 (sl) 2010-07-06 2016-10-28 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Imunizacija velikih sesalcev z majhnimi odmerki RNA
HRP20221522T1 (hr) 2010-07-06 2023-02-17 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Čestice za dostavljanje nalik virionu za samo-replicirajuće rna molekule
US9192661B2 (en) 2010-07-06 2015-11-24 Novartis Ag Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
MY192639A (en) 2010-07-09 2022-08-29 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
EP3508573A1 (en) 2010-07-09 2019-07-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
US20130177523A1 (en) 2010-07-13 2013-07-11 University Of Utah Research Foundation Gold particles and methods of making and using the same in cancer treatment
GB201012410D0 (en) 2010-07-23 2010-09-08 Medical Res Council Intracellular immunity
DE102010032758B4 (de) 2010-07-29 2012-02-23 Fujitsu Technology Solutions Intellectual Property Gmbh Computersystem, Verfahren zum Programmieren einer Echtzeituhr und Computerprogrammprodukt
DK2449113T3 (en) 2010-07-30 2016-01-11 Curevac Ag Complex formation of nucleic acids with the disulfide cross-linked cationic components for transfection and immunostimulation
US20130190626A1 (en) 2010-08-02 2013-07-25 Curtin University Of Technology Determining location of, and imaging, a subsurface boundary
US9121065B2 (en) 2010-08-09 2015-09-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nanoparticle-oligonucleotide hybrid structures and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
US8829329B2 (en) 2010-08-18 2014-09-09 International Business Machines Corporation Solar cell and battery 3D integration
EP2605792B1 (en) 2010-08-20 2014-12-10 Novartis AG Soluble needle arrays for delivery of influenza vaccines
US20120058153A1 (en) 2010-08-20 2012-03-08 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising proteins obtained or derived from human influenza a virus hemagglutinin
CN103080313A (zh) 2010-08-20 2013-05-01 天蓝制药公司 缀合物、粒子、组合物以及相关方法
EP2605816B1 (en) 2010-08-20 2019-01-23 University Of Washington Circumferential aerosol device for delivering drugs to olfactory epithelium and brain
JP2013541510A (ja) 2010-08-31 2013-11-14 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 新規の単一の化学物質、およびオリゴヌクレオチドの送達方法
AU2011295938B2 (en) * 2010-08-31 2016-01-14 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Lipids suitable for liposomal delivery of protein-coding RNA
SI3970742T1 (sl) 2010-08-31 2022-08-31 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Pegilirani liposomi za dostavo RNA, ki kodira imunogen
ES2923634T3 (es) 2010-08-31 2022-09-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas pequeños para la administración de ARN que codifica para inmunógeno
PT3556396T (pt) 2010-08-31 2022-07-04 Scripps Research Inst Anticorpos neutralizantes do vírus da imunodeficiência humana (vih)
WO2012031205A2 (en) 2010-09-03 2012-03-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Lipid-polymer hybrid particles
US20130236419A1 (en) 2010-09-09 2013-09-12 The University Of Chicago Compositions and methods related to attenuated staphylococcal strains
US9095540B2 (en) 2010-09-09 2015-08-04 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens
US10307372B2 (en) 2010-09-10 2019-06-04 The Johns Hopkins University Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain
US8466122B2 (en) 2010-09-17 2013-06-18 Protiva Biotherapeutics, Inc. Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
CN103167866B (zh) 2010-09-20 2015-09-23 瑟纳治疗公司 用于寡核苷酸递送的新型低分子量阳离子脂质
US20130183718A1 (en) 2010-09-21 2013-07-18 RibpxX GmbH Method for Synthesizing RNA using DNA Template
EP3412279B1 (en) 2010-09-24 2021-02-17 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Nanostructured gels capable of controlled release of encapsulated agents
WO2012050975A2 (en) 2010-09-29 2012-04-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Novel circular mammalian rna molecules and uses thereof
US9029604B2 (en) 2010-09-30 2015-05-12 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
DK3590949T3 (da) 2010-10-01 2022-07-11 Modernatx Inc Ribonukleinsyrer indeholdende n1-methyl-pseudouracil og anvendelse heraf
US10078075B2 (en) 2011-12-09 2018-09-18 Vanderbilt University Integrated organ-on-chip systems and applications of the same
US8898864B1 (en) 2010-10-08 2014-12-02 David Porter Integrated rockably released leverage snap fastening system
EP3520813B1 (en) 2010-10-11 2023-04-19 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Antigen delivery platforms
US9782342B2 (en) 2010-10-11 2017-10-10 Wichita State University Composite magnetic nanoparticle drug delivery system
US9029590B2 (en) 2010-10-21 2015-05-12 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
WO2012054923A2 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Bind Biosciences, Inc. Therapeutic nanoparticles with high molecular weight copolymers
AU2011367817B2 (en) 2010-10-29 2015-05-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Recombinant subunit dengue virus vaccine
US9067882B2 (en) 2010-11-05 2015-06-30 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cyclic amine containing cationic lipids for oligonucleotide delivery
US20120121718A1 (en) 2010-11-05 2012-05-17 The Johns Hopkins University Compositions and methods relating to reduced mucoadhesion
US8518871B2 (en) 2010-11-09 2013-08-27 The Regents Of The University Of California Skin permeating and cell entering (SPACE) peptides and methods of use thereof
KR102557275B1 (ko) 2010-11-12 2023-07-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 공통 전립선 항원, 이것을 암호화하는 핵산 분자, 그리고 이것을 포함하는 백신 및 용도
MX344972B (es) 2010-11-16 2017-01-12 Selecta Biosciences Inc Oligonucleotidos inmunoestimulantes.
CA2818353A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Aduro Biotech Methods and compositions for inducing an immune response to egfrviii
AU2011331917A1 (en) * 2010-11-19 2013-06-20 The University Of Queensland Pongamia genetic markers and method of use
KR102100110B1 (ko) 2010-11-19 2020-04-14 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 톨-유사 수용체 기반 면역 반응을 조절하기 위한 면역 조절 올리고뉴클레오타이드(ｉｒｏ) 화합물
US8987377B2 (en) 2010-11-19 2015-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
WO2012072096A1 (en) 2010-12-03 2012-06-07 Biontech Ag Method for cellular rna expression
AU2011358150B2 (en) 2010-12-16 2016-11-03 Sprna Gmbh Pharmaceutical composition consisting of RNA having alkali metal as counter ion and formulated with dications
US8901101B2 (en) 2010-12-17 2014-12-02 Sirna Therapeutics, Inc. Membrane lytic poly(amido amine) polymers for the delivery of oligonucleotides
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
JP6088438B2 (ja) 2010-12-22 2017-03-01 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 連続的定向進化
WO2012089225A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of mhc class i restricted antigen presentation
RU2582235C2 (ru) 2010-12-29 2016-04-20 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Низкомолекулярные конъюгаты для внутриклеточной доставки нуклеиновых кислот
US20120171229A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
CA2862765A1 (en) 2011-01-04 2012-07-12 Brown University Nanotubes as carriers of nucleic acids into cells
WO2012094574A2 (en) 2011-01-06 2012-07-12 The Johns Hopkins University Stabilized polyribonucleotide nanoparticles
WO2012094653A2 (en) 2011-01-07 2012-07-12 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for macromolecular drug delivery
AU2012207606B2 (en) 2011-01-11 2017-02-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
DE102011002640B4 (de) 2011-01-13 2021-10-07 Evonik Operations Gmbh Verfahren zur Aufreinigung von Biphephos
US20120189700A1 (en) 2011-01-19 2012-07-26 Zoraida Aguilar Nanoparticle Based Immunological Stimulation
CA2825023A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Cenix Bioscience Gmbh Delivery system and conjugates for compound delivery via naturally occurring intracellular transport routes
US10363309B2 (en) 2011-02-04 2019-07-30 Case Western Reserve University Targeted nanoparticle conjugates
US20140066363A1 (en) 2011-02-07 2014-03-06 Arun K. Bhunia Carbohydrate nanoparticles for prolonged efficacy of antimicrobial peptide
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
US20120207840A1 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment Of Non-Melanoma Skin Cancer
EP2675921A4 (en) 2011-02-14 2014-12-03 Swift Biosciences Inc POLYNUCLEOTIDE PRIMERS AND SOLIDS
JP6054308B2 (ja) 2011-02-15 2016-12-27 メリマック ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｅｒｒｉｍａｃｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 核酸を細胞へ送達する組成物及び方法
WO2012112689A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 The University Of North Carolina At Chapel Hill Nanoparticle, liposomes, polymers, agents and proteins modified with reversible linkers
EP2489371A1 (en) 2011-02-18 2012-08-22 Instituto Nacional de Investigacion y Tecnologia Agraria y Alimentaria Carrier peptides for drug delivery
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
EP2678433B1 (en) 2011-02-22 2017-05-03 California Institute of Technology Delivery of proteins using adeno-associated virus (aav) vectors
US8696637B2 (en) 2011-02-28 2014-04-15 Kimberly-Clark Worldwide Transdermal patch containing microneedles
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
TR201811280T4 (tr) 2011-03-02 2018-08-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Düşük antijen ve/ veya adjuvan dozları olan karma aşılar.
CA2832807A1 (en) 2011-03-07 2012-09-13 Massachusetts Institute Of Technology Methods for transfecting cells with nucleic acids
US20120237565A1 (en) 2011-03-14 2012-09-20 Intezyne Technologies, Incorporated Pegylated polyplexes containing two or more different polymers for polynucleotide delivery
WO2012125680A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Novartis Ag Methods of treating vasculitis using an il-17 binding molecule
US20140212503A1 (en) 2011-03-17 2014-07-31 Hyukjin Lee Delivery system
RU2013146242A (ru) 2011-03-17 2015-04-27 Новартис Аг Fgfr и его лиганды в качестве биомаркеров рака молочной железы у hr-положительных индивидуумов
US10357568B2 (en) 2011-03-24 2019-07-23 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvant nanoemulsions with phospholipids
WO2012135010A2 (en) 2011-03-25 2012-10-04 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
WO2012129648A1 (en) 2011-03-25 2012-10-04 University Of Guelph Enhancing protein expression of adeno-associated virus vectors
WO2012135025A2 (en) 2011-03-28 2012-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
JP2014510533A (ja) 2011-03-28 2014-05-01 ノバルティス アーゲー サイクリン依存性キナーゼ阻害剤に関連するマーカー
US20140065223A1 (en) 2011-03-31 2014-03-06 Jeanette Libera-Koerner Perfluorinated compounds for the non-viral transfer of nucleic acids
CA2831469C (en) 2011-03-31 2020-02-18 Ingell Technologies Holding B.V. Biodegradable compositions suitable for controlled release
US9795679B2 (en) 2011-03-31 2017-10-24 Ingell Technologies Holding B.V. Biodegradable compositions suitable for controlled release
CA2831613A1 (en) * 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
JP6047142B2 (ja) * 2011-04-01 2016-12-21 ウニヴェルズィテート シュトゥットガルト 抗体結合ドメインを有する組換えｔｎｆリガンドファミリーメンバーポリペプチドおよびそれらの使用
EP2694660B1 (en) 2011-04-03 2018-08-08 The General Hospital Corporation Efficient protein expression in vivo using modified rna (mod-rna)
EP2694524B1 (en) 2011-04-04 2016-05-18 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services 2'-o-aminooxymethyl nucleoside derivatives for use in the synthesis and modification of nucleosides, nucleotides and oligonucleotides
WO2012142132A1 (en) 2011-04-11 2012-10-18 Life Technologies Corporation Polymer particles and methods of making and using same
US11135174B2 (en) 2011-04-13 2021-10-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Coated mesoporous nanoparticles
WO2013158127A1 (en) 2012-04-16 2013-10-24 Molecular Transfer, Inc. Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells
US20140178894A1 (en) 2011-04-20 2014-06-26 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Culture medium suitable for the culture of undifferentiated cells
US20140287022A1 (en) 2011-04-26 2014-09-25 Molecular Express, Inc. Liposomal formulations
EP2701753B1 (en) 2011-04-27 2018-12-26 President and Fellows of Harvard College Cell-friendly inverse opal hydrogels for cell encapsulation, drug and protein delivery, and functional nanoparticle encapsulation
WO2012149376A2 (en) 2011-04-28 2012-11-01 Stc.Unm Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery and methods of using same
EP2702075A4 (en) 2011-04-28 2015-04-22 Jackson H M Found Military Med NEUTRALIZING ANTIBODIES TO NIPAH AND HENDRA VIRUSES
EP2702408A1 (en) 2011-04-29 2014-03-05 Novartis AG Methods of treating squamous cell carcinoma related applications
EP2704715B1 (en) 2011-04-29 2020-04-01 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers for generating cd8+regulatory t cells for use in inducing tolerogenesis
US20120283503A1 (en) 2011-04-29 2012-11-08 The Johns Hopkins University Nanoparticle loaded stem cells and their use in mri guided hyperthermia
UA116189C2 (uk) 2011-05-02 2018-02-26 Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА
US9816076B2 (en) 2011-05-02 2017-11-14 Wayne State University Protein-induced pluripotent cell technology and uses thereof
US9981068B2 (en) 2011-05-04 2018-05-29 The University Of Nottingham Polymers which resist bacterial attachment
US9327029B2 (en) 2011-05-05 2016-05-03 Celacare Technologies, Llc Antimicrobial silver hydrogel composition for the treatment of burns and wounds
US8945588B2 (en) 2011-05-06 2015-02-03 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides
CN103547350A (zh) 2011-05-10 2014-01-29 巴斯夫欧洲公司 水包油乳液
US9283279B2 (en) 2011-05-11 2016-03-15 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Targeted polymeric conjugates and uses thereof
CA2835492A1 (en) 2011-05-12 2012-11-15 Helmut Vockner Novel pharmaceutical formulation
CA2834918C (en) 2011-05-12 2020-03-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusam Ltd. Liposomes comprising polymer-conjugated lipids and related uses
ES2782119T3 (es) 2011-05-13 2020-09-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antígenos de F de prefusión del VRS
CN103687957A (zh) 2011-05-17 2014-03-26 现代治疗公司 工程化核酸及其用于非人类脊椎动物的方法
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
EP2710196A1 (en) 2011-05-20 2014-03-26 Kohler Co. Toilet installation system and method
RS64230B1 (sr) 2011-05-24 2023-06-30 BioNTech SE Individualizovane vakcine protiv kancera
PL2714926T3 (pl) 2011-05-25 2015-12-31 Novartis Ag Biomarkery raka płuca
US20120302940A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Jackson State University Popcorn Shape Gold Nanoparticle For Targeted Diagnosis, Photothermal Treatment and In-Situ Monitoring Therapy Response for Cancer and Multiple Drug Resistance Bacteria
US20140308363A1 (en) 2011-05-31 2014-10-16 Bind Therapeutics, Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
CA2837852A1 (en) 2011-06-02 2012-12-06 Novartis Ag Biomarkers for hedgehog inhibitor therapy
DK2714017T3 (en) 2011-06-02 2018-09-03 Univ California MEMBRANE-WRAPPED NANOPARTICLES AND METHOD OF USE
US9181553B2 (en) 2011-06-06 2015-11-10 Novartis Forschungsstiftung Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Method of treatment of breast cancers over-expressing the SHP2 signature genes
CA2838063C (en) * 2011-06-08 2023-07-11 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cleavable lipids
KR20200084048A (ko) 2011-06-08 2020-07-09 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. Mrna 전달을 위한 지질 나노입자 조성물 및 방법
US8636696B2 (en) 2011-06-10 2014-01-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Transdermal device containing microneedles
WO2012168491A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Pharmaceutical formulations of pcsk9 antagonists
WO2012170607A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Use of pcsk9 antagonists
CA2836805C (en) 2011-06-10 2023-03-07 Novartis Ag Bovine vaccines and methods
US8916696B2 (en) 2011-06-12 2014-12-23 City Of Hope Aptamer-mRNA conjugates for targeted protein or peptide expression and methods for their use
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
CA2839196A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 Chrontech Pharma Ab Injection needle and device
BR112013031762A2 (pt) 2011-06-16 2016-09-13 Novartis Ag proteínas solúveis para utilização como terapêuticos
KR20140047069A (ko) 2011-06-20 2014-04-21 유니버시티 오브 피츠버그 - 오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 계산에 최적화된 광범위 반응을 나타내는 ｈ１ｎ１ 인플루엔자를 위한 항원
WO2013003475A1 (en) 2011-06-27 2013-01-03 Cellscript, Inc. Inhibition of innate immune response
EP3473296B1 (en) 2011-06-28 2020-08-05 Inovio Pharmaceuticals, Inc. A minimally invasive dermal electroporation device
US9365651B2 (en) 2011-07-01 2016-06-14 Novartis Ag Method for treating metabolic disorders by administration of an anti-ActRIIB antibody
JP2014520506A (ja) 2011-07-04 2014-08-25 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション 核酸複合体
ES2861428T3 (es) 2011-07-06 2021-10-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas que presentan una relación N:P útil para suministro de moléculas de ARN
ES2657547T3 (es) 2011-07-06 2018-03-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Emulsiones aceite en agua que contienen ácidos nucleicos
CA2840989A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic combination compositions and uses thereof
CA2841047A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic compositions and uses thereof
EP3456316A1 (en) 2011-07-06 2019-03-20 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Cationic oil-in-water emulsions
EP2729501A2 (en) 2011-07-07 2014-05-14 Life Technologies Corporation Polymer particles, nucleic acid polymer particles and methods of making and using the same
WO2013009717A1 (en) 2011-07-10 2013-01-17 Elisabet De Los Pinos Virion derived protein nanoparticles for delivering diagnostic or therapeutic agents for the treatment of skin-related diseases
EP2758458A4 (en) 2011-07-10 2015-10-21 Harvard College COMPOSITIONS AND METHODS FOR SELF-ASSEMBLING POLYMERS WITH COMPLEMENTARY MACROSCOPIC AND MICROSCOPIC SCALE UNITS
US20130012566A1 (en) 2011-07-10 2013-01-10 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment of Alopecia
US20140148503A1 (en) 2011-07-20 2014-05-29 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid aptamers
GB2492999A (en) 2011-07-20 2013-01-23 Univ Central Lancashire Neutron detector
BR112014001050B1 (pt) 2011-07-21 2017-12-05 Croda International Plc Polyester polyester block polymer, method for the preparation of the same, composition, controlled release and personal care products, and method for preparing a gel composition
US9493549B2 (en) 2011-07-25 2016-11-15 The Rockefeller University Antibodies directed toward the HIV-1 GP120 CD4 binding site with increased potency and breadth
EP2736921B1 (en) 2011-07-25 2018-06-27 GlaxoSmithKline Biologicals SA Compositions and methods for assessing functional immunogenicity of parvovirus vaccines
WO2013019669A2 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers that generate humoral and cytotoxic t lymphocyte (ctl) immune responses
CA2845259A1 (en) 2011-08-15 2013-02-21 The University Of Chicago Compositions and methods related to antibodies to staphylococcal protein a
BR112014004585A2 (pt) 2011-08-26 2017-06-13 Arrowhead Res Corp polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo
US9126966B2 (en) 2011-08-31 2015-09-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use thereof
US8889657B2 (en) 2011-08-31 2014-11-18 Mallinckrodt Llc Nanoparticle PEG modification with H-phosphonates
DK2750707T3 (en) 2011-08-31 2019-02-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa PEGYLED LIPOSOMES FOR DELIVERING IMMUNOGEN-CODING RNA
KR20140105433A (ko) 2011-09-01 2014-09-01 아이알엠 엘엘씨 Pdgfr 키나제 억제제로서의 화합물 및 조성물
CA3185394A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Organic compositions to treat hsf1-related diseases
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3384938A1 (en) 2011-09-12 2018-10-10 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013039857A1 (en) * 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ES2732708T3 (es) 2011-09-14 2019-11-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de fabricación de glucoconjugados de sacárido-proteína
MX2014003176A (es) 2011-09-16 2015-08-05 Univ Pennsylvania Celulas t diseñadas mediante arn para el tratamiento de cancer.
JP2014531456A (ja) 2011-09-22 2014-11-27 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド 治療用ナノ粒子と癌を治療する方法
US9375388B2 (en) 2011-09-23 2016-06-28 Indian Institute Of Technology, Bombay Nanoparticle based cosmetic composition
UY34346A (es) 2011-09-26 2013-04-30 Novartis Ag Proteínas de fusión para tratar trastornos metabólicos
TW201315742A (zh) 2011-09-26 2013-04-16 Novartis Ag 治療代謝病症之雙功能蛋白質
JP6250543B2 (ja) 2011-09-27 2017-12-20 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド ジ脂肪族置換ｐｅｇ化脂質
WO2013049389A1 (en) 2011-09-27 2013-04-04 Yale University Compositions and methods for transient expression of recombinant rna
WO2013045505A1 (en) 2011-09-28 2013-04-04 Novartis Ag Biomarkers for raas combination therapy
SG10201602654SA (en) 2011-10-03 2016-05-30 Moderna Therapeutics Inc Modified nucleosides,nucleotides,and nucleic acids,and uses thereof
GB201117279D0 (en) * 2011-10-06 2011-11-16 Nexeon Ltd Etched silicon structures, method of forming etched silicon structures and uses thereof
WO2013055971A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Polymers for delivering a substance into a cell
RU2014118727A (ru) 2011-10-11 2015-11-20 Новартис Аг Рекомбинантные самореплицирующиеся полицистронные молекулы рнк
WO2013055331A1 (en) 2011-10-12 2013-04-18 The Curators Of The University Of Missouri Pentablock polymers
WO2014066811A1 (en) 2012-10-25 2014-05-01 The Johns Hopkins University Bioreducible poly (b-amino ester)s for sirna delivery
US8673184B2 (en) * 2011-10-13 2014-03-18 Flexcon Company, Inc. Systems and methods for providing overcharge protection in capacitive coupled biomedical electrodes
CN104023711A (zh) 2011-10-14 2014-09-03 Stc.Unm公司 用于靶向递送(包括负载物的透皮递送)的多孔纳米颗粒支撑的脂质双层(原始细胞)及其方法
JP2014530816A (ja) 2011-10-14 2014-11-20 ノバルティスアーゲー Ｗｎｔ経路関連疾患のための抗体および方法
EP2768571B1 (en) 2011-10-18 2023-02-22 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
ES2897565T3 (es) 2011-10-18 2022-03-01 Dicerna Pharmaceuticals Inc Lípidos catiónicos de amina y uso de los mismos
JO3766B1 (ar) 2011-10-20 2021-01-31 Novartis Ag منشط مستقبل أسيتيل كولين الفا - 7 النيكوتيني
EP2768528A1 (en) 2011-10-20 2014-08-27 Novartis AG Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming
JP2015502337A (ja) 2011-10-25 2015-01-22 ザ ユニバーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア 限界サイズ脂質ナノ粒子および関連方法
WO2013061290A1 (en) 2011-10-26 2013-05-02 Nanopass Technologies Ltd. Microneedle intradermal drug delivery device with auto-disable functionality
MX363734B (es) 2011-10-27 2019-03-29 Massachusetts Inst Technology Derivados de aminoacidos funcionalizados en la terminal n capaces de formar microesferas encapsuladoras de farmaco.
AU2012328037B2 (en) 2011-10-27 2017-11-02 Sorrento Therapeutics, Inc. Transdermal delivery of high viscosity bioactive agents
WO2013062140A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Kyoto University Method for efficiently inducing differentiation of pluripotent stem cells into hepatic lineage cells
WO2013063530A2 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Presage Biosciences, Inc. Methods for drug delivery
MX352823B (es) 2011-10-28 2017-12-04 Integritybio Inc Formulaciones de proteinas que contienen aminoacidos.
KR101994809B1 (ko) 2011-10-31 2019-07-01 제넨테크, 인크. 항체 제제
KR20140097215A (ko) 2011-10-31 2014-08-06 말린크로트 엘엘씨 암 치료를 위한 조합 리포좀 조성물
JP2015502741A (ja) 2011-11-04 2015-01-29 ノバルティス アーゲー 低比重リポタンパク質関連タンパク質６（ｌｒｐ６）−半減期延長構築物
LT2773326T (lt) 2011-11-04 2019-04-25 Nitto Denko Corporation Lipidų-nukleorūgščių dalelių sterilios gamybos būdas
WO2013067537A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Univertiy Of Notre Dame Du Lac Nanoparticle-based drug delivery
SG11201401964TA (en) 2011-11-04 2014-05-29 Agency Science Tech & Res Self-assembled composite ultrasmall peptide-polymer hydrogels
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
US20130115247A1 (en) 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
US20130116408A1 (en) 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
WO2013068431A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research New treatment for neurodegenerative diseases
EP2776013B8 (en) 2011-11-08 2023-08-30 The Board of Trustees of the University of Arkansas Methods and compositions for x-ray induced release from ph sensitive liposomes
US20140294732A1 (en) 2011-11-08 2014-10-02 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Early diagnostic of neurodegenerative diseases
US20140287510A1 (en) 2011-11-08 2014-09-25 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute Rod cell-specific promoter
US10203325B2 (en) 2011-11-09 2019-02-12 Board Of Trustees Of Michigan State University Metallic nanoparticle synthesis with carbohydrate capping agent
EP2776567B1 (en) 2011-11-11 2021-01-20 Variation Biotechnologies Inc. Compositions and methods for treatment of cytomegalovirus
WO2013071047A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for in vitro transcription of rna
BR112014011560A2 (pt) 2011-11-14 2017-05-09 Novartis Ag complexos imunogênicos de carbômeros polianiônicos e polipeptídeos env, e métodos de fabricação e uso dos mesmos
US20140343128A1 (en) 2011-11-15 2014-11-20 Novartis Ag Combination of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor and a modulator of the Janus Kinase 2 - Signal Transducer and Activator of Transcription 5 pathway
ES2909777T3 (es) 2011-11-18 2022-05-10 Regeneron Pharma Formulación de liberación prolongada que comprende micropartículas para su uso en el humor vítreo del ojo para tratar trastornos oculares vasculares
MX2014006158A (es) 2011-11-21 2014-06-19 Novartis Ag Metodos para el tratamiento de artritis psoriasica (psa) utilizando antagonistas de il-17 y alelos con respuesta o sin respuesta a la psa.
WO2013078199A2 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Children's Medical Center Corporation Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas
WO2013078416A2 (en) * 2011-11-23 2013-05-30 Proteus Digital Health, Inc. Apparatus, system, and method to promote behavior change based on mindfulness methodologies
US8930541B2 (en) * 2011-11-25 2015-01-06 International Business Machines Corporation System, method and program product for cost-aware selection of templates for provisioning shared resources
CA2856887C (en) * 2011-11-28 2021-06-15 Expanergy, Llc Energy search engine with autonomous control
CN103136247B (zh) * 2011-11-29 2015-12-02 阿里巴巴集团控股有限公司 属性数据区间划分方法及装置
EP2785326A2 (en) 2011-11-29 2014-10-08 The University of North Carolina at Chapel Hill Geometrically engineered particles and methods for modulating macrophage or immune responses
CN104080441B (zh) 2011-11-30 2020-02-28 3M创新有限公司 包括肽治疗剂和氨基酸的微针装置、制备和使用其的方法
US9364549B2 (en) 2011-11-30 2016-06-14 Andreas Voigt Hydrophobic drug-delivery material, method for manufacturing thereof and methods for delivery of a drug-delivery composition
DE102011087509A1 (de) * 2011-12-01 2013-06-06 Robert Bosch Gmbh Sensorübertragungsvorrichtung und Verfahren zur Übertragung von Nutzdaten von einer Mehrzahl von Sensoren an eine Bussteuervorrichtung für ein Fahrzeug
WO2013082590A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Invivo Therapeutics Corporation Peg based hydrogel for peripheral nerve injury applications and compositions and method of use of synthetic hydrogel sealants
JP2015500241A (ja) 2011-12-02 2015-01-05 ペガサス ラボラトリーズ インコーポレイテッド 両親媒性脂質をベースとする徐放性組成物
WO2013082529A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Yale University Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
JP6564187B2 (ja) 2011-12-05 2019-08-21 ナノ プレシジョン メディカル インコーポレイテッドＮａｎｏ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ， Ｉｎｃ． チタニアナノチューブ膜を有する、薬物送達用デバイス
AU2012347919B2 (en) 2011-12-05 2017-02-02 Factor Bioscience Inc. Methods and products for transfecting cells
US8497124B2 (en) 2011-12-05 2013-07-30 Factor Bioscience Inc. Methods and products for reprogramming cells to a less differentiated state
GB201121070D0 (en) 2011-12-07 2012-01-18 Isis Innovation composition for delivery of biotherapeutics
JP6305343B2 (ja) 2011-12-07 2018-04-04 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 活性薬剤の送達のための分岐アルキルおよびシクロアルキルを末端とする生分解性脂質
DK3988537T1 (da) 2011-12-07 2022-05-23 Alnylam Pharmaceuticals Inc Bionedbrydelige lipider til afgivelse af aktive midler
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2013086486A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 President And Fellows Of Harvard College Integrated human organ-on-chip microphysiological systems
WO2013086502A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 President And Fellows Of Harvard College Organ chips and uses thereof
WO2013086526A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 The Regents Of The University Of California Liposomal drug encapsulation
KR20140111272A (ko) 2011-12-12 2014-09-18 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 양이온성 지질의 조합을 함유하는 지질 나노 입자
TWI594767B (zh) 2011-12-12 2017-08-11 協和醱酵麒麟有限公司 含有陽離子性脂質之藥物傳遞系統用脂質奈米粒子
CA2858884A1 (en) 2011-12-12 2013-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Proteins comprising mrsa pbp2a and fragments thereof, nucleic acids encoding the same, and compositions and their use to prevent and treat mrsa infections
US20150000936A1 (en) 2011-12-13 2015-01-01 Schlumberger Technology Corporation Energization of an element with a thermally expandable material
EP2604253A1 (en) 2011-12-13 2013-06-19 Otto Glatter Water-in-oil emulsions and methods for their preparation
MX359410B (es) 2011-12-13 2018-09-27 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Minicélulas intactas derivadas bacterialmente para suministro de agentes terapéuticos a tumores cerebrales.
WO2013090186A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleic acids, and acute care uses thereof
US20140378538A1 (en) 2011-12-14 2014-12-25 Moderma Therapeutics, Inc. Methods of responding to a biothreat
WO2013087083A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 Biontech Ag Particles comprising single stranded rna and double stranded rna for immunomodulation
WO2013090897A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Using adaptive immunity to detect drug resistance
AU2012351967A1 (en) 2011-12-16 2014-07-17 Massachusetts Institute Of Technology Alpha-aminoamidine polymers and uses thereof
WO2013090601A2 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Massachusetts Institute Of Technology Compact nanoparticles for biological applications
US9573996B2 (en) 2011-12-16 2017-02-21 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Monoclonal antibodies to human proinflammatory cytokines and methods for treating inflammatory diseases
BR112014014399A2 (pt) 2011-12-16 2017-06-13 Novartis Ag aparelho de aerolização para administração de medicamento independente do perfil de inalação
JP6150079B2 (ja) 2011-12-16 2017-06-21 アラーガン、インコーポレイテッドＡｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ ポリビニルカプロラクタム−ポリビニルアセテート−ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含む眼用組成物
WO2013090648A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
ES2627856T3 (es) 2011-12-19 2017-07-31 The University Of Sydney Material compuesto de péptido-hidrogel
US9241829B2 (en) 2011-12-20 2016-01-26 Abbott Medical Optics Inc. Implantable intraocular drug delivery apparatus, system and method
CA2859691A1 (en) * 2011-12-21 2013-06-27 Moderna Therapeutics, Inc. Methods of increasing the viability or longevity of an organ or organ explant
EP2793941A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Articles of manufacture and methods for co-administration of antibodies
US10814115B2 (en) 2011-12-27 2020-10-27 Massachusetts Institute Of Technology Microneedle devices and uses thereof
WO2013101690A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 modeRNA Therapeutics Modified mrnas encoding cell-penetrating polypeptides
WO2013098589A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor h binding proteins
DK3421601T3 (da) 2011-12-30 2020-02-24 Cellscript Llc Fremstilling og anvendelse af in-vitro-syntetiseret ssRNA til indføring i pattedyrceller med henblik på at inducere en biologisk eller biokemisk effekt
AU2013207423B2 (en) 2012-01-06 2017-10-12 Gemphire Therapeutics Inc. Methods of reducing risk of cardiovascular disease
US20150030576A1 (en) 2012-01-10 2015-01-29 Moderna Therapeutics, Inc. Methods and compositions for targeting agents into and across the blood-brain barrier
US9890361B2 (en) 2012-01-26 2018-02-13 Life Technologies Corporation Methods for increasing the infectivity of viruses utilizing alkyne-modified fatty acids
KR20140128966A (ko) 2012-01-26 2014-11-06 라이프 테크놀로지스 코포레이션 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법
WO2013113325A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
EP2623121A1 (en) 2012-01-31 2013-08-07 Bayer Innovation GmbH Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and an antigen
WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
CN106883334B (zh) 2012-02-09 2019-06-18 生命技术公司 亲水性聚合物颗粒及其制备方法
WO2013120497A1 (en) * 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
WO2013126564A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 Cerulean Pharma Inc. Conjugates, particles, compositions, and related methods
US20130243867A1 (en) 2012-02-23 2013-09-19 University Of South Florida (A Florida Non-Profit Corporation) Micelle compositions and methods for their use
US20130224268A1 (en) 2012-02-27 2013-08-29 Newgen Biopharma Corp. Topical delivery of hormonal and non hormonal nano formulations, methods of making and using the same
EP2820047B1 (en) 2012-03-01 2018-04-25 Amgen Research (Munich) GmbH Long life polypeptide binding molecules
CN104271149B (zh) 2012-03-13 2016-03-16 夸祖鲁-纳塔尔大学 经皮递送装置
US10322089B2 (en) 2012-03-14 2019-06-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nanoparticles, nanoparticle delivery methods, and systems of delivery
US8962577B2 (en) 2012-03-16 2015-02-24 The Johns Hopkins University Controlled release formulations for the delivery of HIF-1 inhibitors
RU2654210C2 (ru) 2012-03-16 2018-05-17 Мерк Патент Гмбх Нацеливающие аминокислотные липиды
US10159743B2 (en) 2012-03-16 2018-12-25 The Johns Hopkins University Non-linear multiblock copolymer-drug conjugates for the delivery of active agents
CN103325662B (zh) 2012-03-21 2016-03-30 清华大学 半导体性单壁碳纳米管的制备方法
US9610346B2 (en) 2012-03-23 2017-04-04 International Aids Vaccine Initiative Recombinant viral vectors
WO2013142349A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 University Of Chicago Compositions and methods related to staphylococcal sbi
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
US9717685B2 (en) 2012-03-26 2017-08-01 President And Fellows Of Harvard College Lipid-coated nucleic acid nanostructures of defined shape
WO2013143700A2 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules comprising a 5'top utr
ES2742473T3 (es) 2012-03-27 2020-02-14 Curevac Ag Moléculas artificiales de ácido nucleico para la expresión mejorada de proteínas o péptidos
AU2013242403B2 (en) 2012-03-27 2018-10-18 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
US9446132B2 (en) 2012-03-27 2016-09-20 Sima Therapeutics, Inc. Diether based biodegradable cationic lipids for siRNA delivery
US9877919B2 (en) 2012-03-29 2018-01-30 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
JP2015518705A (ja) * 2012-04-02 2015-07-06 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ヒト疾患に関連する生物製剤およびタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US10501513B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
JP2015516143A (ja) 2012-04-02 2015-06-08 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9107904B2 (en) 2012-04-05 2015-08-18 Massachusetts Institute Of Technology Immunostimulatory compositions and methods of use thereof
US20150064115A1 (en) 2012-04-05 2015-03-05 University Of Florida Research Foundation, Inc. Neurophilic nanoparticles
WO2013152351A2 (en) 2012-04-06 2013-10-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fusion polypeptides and methods of use thereof
EP2836200B1 (en) 2012-04-08 2020-07-15 Urogen Pharma Ltd. Reverse thermal hydrogel preparations for use in the treatment of disorders of the urothelium
JP5927338B2 (ja) 2012-04-11 2016-06-01 インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド 安定なミセルのためのブロックコポリマー
EP3939572B1 (en) 2012-04-12 2024-03-27 Yale University Vehicles for controlled delivery of different pharmaceutical agents
WO2013154766A1 (en) 2012-04-13 2013-10-17 New York University Microrna control of ldl receptor pathway
WO2013155513A1 (en) 2012-04-13 2013-10-17 President And Fellows Of Harvard College Devices and methods for in vitro aerosol delivery
US8933047B2 (en) 2012-04-18 2015-01-13 Arrowhead Madison Inc. Poly(acrylate) polymers for in vivo nucleic acid delivery
CA2870941C (en) 2012-04-19 2021-05-25 Sirna Therapeutics, Inc. Diester and triester based low molecular weight, biodegradable cationic lipids for oligonucleotide delivery
US10278927B2 (en) 2012-04-23 2019-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Stable layer-by-layer coated particles
CA2869639A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 Regulus Therapeutics Inc. Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
US9056057B2 (en) 2012-05-03 2015-06-16 Kala Pharmaceuticals, Inc. Nanocrystals, compositions, and methods that aid particle transport in mucus
JP6392209B2 (ja) 2012-05-04 2018-09-19 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 粘液内層を通過する迅速な透過のための脂質ベース薬物キャリア
WO2013173657A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Micell Technologies, Inc. Low burst sustained release lipophilic and biologic agent compositions
WO2013173582A1 (en) 2012-05-17 2013-11-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hepatitis c virus neutralizing antibody
WO2013173693A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Nanoparticles with enhanced entry into cancer cells
AU2013266232B2 (en) 2012-05-23 2017-08-03 The Ohio State University Lipid nanoparticle compositions for antisense oligonucleotides delivery
EP2854857B1 (en) 2012-05-25 2018-11-28 CureVac AG Reversible immobilization and/or controlled release of nucleic acid containing nanoparticles by (biodegradable) polymer coatings
EP2858708B1 (en) 2012-06-06 2020-07-29 Loma Vista Medical, Inc. Inflatable medical devices
EP3884949A1 (en) 2012-06-08 2021-09-29 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
AU2013270685B2 (en) 2012-06-08 2017-11-30 Nitto Denko Corporation Lipids for therapeutic agent delivery formulations
WO2013182683A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Ethris Gmbh Pulmonary delivery of messenger rna
US20150218252A1 (en) 2012-06-20 2015-08-06 President And Fellows Of Harvard College Self-assembling peptides, peptide nanostructures and uses thereof
ES2658972T3 (es) 2012-06-20 2018-03-13 University Of Waterloo Sistema de administración de nanopartículas mucoadhesivas
ES2729603T3 (es) 2012-06-27 2019-11-05 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos IL-23 antihumanos cristalinos
US9150841B2 (en) 2012-06-29 2015-10-06 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cells for producing recombinant iduronate-2-sulfatase
US9956291B2 (en) 2012-07-10 2018-05-01 Shaker A. Mousa Nanoformulation and methods of use of thyroid receptor beta1 agonists for liver targeting
WO2014014890A1 (en) 2012-07-16 2014-01-23 Nanoderm Sciences, Inc. Targeted therapeutic nanoparticles
EP2687252A1 (en) 2012-07-17 2014-01-22 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Drug delivery device
EP2687251A1 (en) 2012-07-17 2014-01-22 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Drug delivery device
CN112587658A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
WO2014015334A1 (en) 2012-07-20 2014-01-23 Brown University System and methods for nanostructure protected delivery of treatment agent and selective release thereof
US10604543B2 (en) 2012-07-24 2020-03-31 President And Fellows Of Harvard College Self-assembly of nucleic acid nanostructures
GB201213624D0 (en) 2012-07-27 2012-09-12 Univ Ulster The Method and system for production of conjugated nanoparticles
WO2014015422A1 (en) 2012-07-27 2014-01-30 Ontario Institute For Cancer Research Cellulose-based nanoparticles for drug delivery
WO2014024193A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Prodel Pharma Ltd. Compositions and methods for rapid transmucosal delivery of pharmaceutical ingredients
WO2014025795A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Northeastern University Compositions for the delivery of rna and drugs into cells
SG10201700973YA (en) 2012-08-08 2017-04-27 Univ Nanyang Tech Methods of manufacturing hydrogel microparticles having living cells, and compositions for manufacturing a scaffold for tissue engineering
AU2013299537A1 (en) 2012-08-08 2015-02-19 Presage Biosciences, Inc. Extrusion methods and devices for drug delivery
US9314532B2 (en) 2012-08-10 2016-04-19 University Of North Texas Health Science Center Drug delivery vehicle
EP2882706A1 (en) 2012-08-13 2015-06-17 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
WO2014027006A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Edko Pazarlama Tanitim Ticaret Limited Sirketi Bioadhesive formulations for use in drug delivery
US9775804B2 (en) 2012-08-14 2017-10-03 Aaron Froese Internal structured self assembling liposomes
US9512456B2 (en) 2012-08-14 2016-12-06 Modernatx, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of RNA
WO2014028209A1 (en) 2012-08-14 2014-02-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Stabilizing shear-thinning hydrogels
US10231997B2 (en) 2012-08-15 2019-03-19 The University Of Chicago Exosome-based therapeutics against neurodegenerative disorders
US10179134B2 (en) 2012-09-05 2019-01-15 Creighton University Polymeric nanoparticles in a thermosensitive gel for coital-independent vaginal prophylaxis of HIV
US8703197B2 (en) 2012-09-13 2014-04-22 International Business Machines Corporation Branched polyamines for delivery of biologically active materials
EA032943B1 (ru) 2012-09-17 2019-08-30 Пфайзер Инк. Способ получения терапевтических наночастиц (варианты) и терапевтическая наночастица (варианты)
CA2885022A1 (en) 2012-09-17 2014-03-20 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic nanoparticles comprising a therapeutic agent and methods of making and using same
WO2014047649A1 (en) 2012-09-24 2014-03-27 The Regents Of The University Of California Methods for arranging and packing nucleic acids for unusual resistance to nucleases and targeted delivery for gene therapy
US20150246137A1 (en) 2012-09-27 2015-09-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Lipid coated nanoparticles containing agents having low aqueous and lipid solubilities and methods thereof
WO2014053880A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
CN104812372A (zh) 2012-10-04 2015-07-29 约翰内斯堡金山大学 脂质体药物递送系统
US20140100178A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Aslam Ansari Composition and methods for site-specific drug delivery to treat malaria and other liver diseases
EP2716655A1 (en) 2012-10-04 2014-04-09 Institut Pasteur Neutralizing antibodies directed against Hepatitis C virus ectodomain glycoprotein E2
WO2014053879A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2014053881A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2014053882A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
EP2716689A1 (en) 2012-10-05 2014-04-09 National University of Ireland, Galway Polymer comprising a plurality of branches having at least one disulfide group and/or at least one vinyl group
WO2014064534A2 (en) 2012-10-05 2014-05-01 Chrontech Pharma Ab Injection needle, device, immunogenic compositions and method of use
WO2014059022A1 (en) 2012-10-09 2014-04-17 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nanoparticles for targeted delivery of multiple therapeutic agents and methods of use
US20140106260A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Core-shell nanoparticulate compositions and methods
EA201590622A1 (ru) 2012-10-16 2015-10-30 Эндосайт, Инк. Конъюгаты для доставки лекарственного средства, содержащие не встречающиеся в природе аминокислоты, и способы применения
DK2908912T3 (da) 2012-10-18 2020-10-26 Univ Rockefeller Bredt neutraliserende anti-hiv-antistoffer
AU2013336237A1 (en) 2012-10-22 2015-06-11 Sabag-Rfa Ltd A system for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
WO2014066898A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The Johns Hopkins University A layer-by-layer approach to co-deliver dna and sirna via aunps: a potential platform for modifying release kinetics
US9938525B2 (en) 2012-10-26 2018-04-10 Nlife Therapeutics, S.L. Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to cell types
WO2014066912A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 Vanderbilt University Polymeric nanoparticles
US20150376581A1 (en) 2012-10-29 2015-12-31 Technische Universitaet Dortmund T7 rna polymerase variants and methods of using the same
WO2014067110A1 (zh) * 2012-10-31 2014-05-08 华为终端有限公司 绘图控制方法、装置及移动终端
BR122019025681B1 (pt) 2012-11-01 2023-04-18 Factor Bioscience Inc Método para inserir uma sequência de ácido nucleico em uma localização segura de um genoma de uma célula
US9444624B2 (en) 2012-11-02 2016-09-13 Facebook, Inc. Providing user authentication
WO2014071072A2 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Pungente Michael D Novel cationic carotenoid-based lipids for cellular nucleic acid uptake
WO2014068542A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Fondazione Centro San Raffaele Novel targets in multiple myeloma and other disorders
AU2013341646B2 (en) 2012-11-06 2017-08-31 Rochal Technologies, Llc Delivery of biologically-active agents using volatile, hydrophobic solvents
US9975916B2 (en) 2012-11-06 2018-05-22 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods relating to complex nucleic acid nanostructures
US9572893B2 (en) 2012-11-07 2017-02-21 Council Of Scientific And Industrial Research Nanocomplex containing cationic peptide for biomolecule delivery
WO2014072997A1 (en) 2012-11-07 2014-05-15 Council Of Scientific & Industrial Research Nanocomplex containing amphipathic peptide useful for efficient transfection of biomolecules
CN104903349B (zh) 2012-11-08 2018-10-19 十一生物治疗股份有限公司 Il-6拮抗剂及其应用
KR20150082422A (ko) 2012-11-08 2015-07-15 노보자임스 바이오파마 디케이 에이/에스 알부민 변이체
TW201920677A (zh) 2012-11-08 2019-06-01 美商武田疫苗股份有限公司 登革熱病毒血清型４型之建構物的組成物、方法及用途
EA034963B1 (ru) 2012-11-08 2020-04-13 Клиасайд Байомедикал, Инк. Способ лечения расстройства заднего сегмента глаза
WO2014072468A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Velin-Pharma A/S Compositions for pulmonary delivery
US9200119B2 (en) 2012-11-09 2015-12-01 Momentive Performance Materials Inc. Silicon-containing zwitterionic linear copolymer composition
WO2014071963A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Biontech Ag Method for cellular rna expression
CA2890529C (en) 2012-11-09 2020-07-28 Biontech Ag Method for modification of cellular rna expression comprising interferon (ifn) receptors and signalling
WO2014075047A2 (en) 2012-11-12 2014-05-15 Genvec, Inc. Malaria antigens and methods of use
GB201220354D0 (en) 2012-11-12 2012-12-26 Medpharm Ltd Dermal compositions
CA2890190A1 (en) 2012-11-12 2014-05-15 Redwood Bioscience, Inc. Compounds and methods for producing a conjugate
WO2014078399A1 (en) 2012-11-13 2014-05-22 Baylor College Of Medicine Multi-arm biodegradable polymers for nucleic acid delivery
WO2014078636A1 (en) 2012-11-16 2014-05-22 President And Fellows Of Harvard College Nucleic acid hydrogel self-assembly
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
WO2014076709A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Technion Research And Development Foundation Ltd. Liposomes for in-vivo delivery
EP2732825B1 (en) 2012-11-19 2015-07-01 Invivogen Conjugates of a TLR7 and/or TLR8 agonist and a TLR2 agonist
US20150290328A1 (en) 2012-11-20 2015-10-15 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Formulations of active agents for sustained release
US20140141037A1 (en) 2012-11-20 2014-05-22 Novartis Ag Rsv f prefusion trimers
WO2014081299A1 (en) 2012-11-22 2014-05-30 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Activatable liposomes
FI2922574T3 (fi) 2012-11-22 2023-08-11 Tagworks Pharmaceuticals B V Kemiallisesti pilkkoutuva ryhmä
WO2014081300A1 (en) 2012-11-22 2014-05-30 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Channel protein activatable liposomes
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
EP2931319B1 (en) 2012-12-13 2019-08-21 ModernaTX, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
WO2014093574A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
AU2014204826A1 (en) 2013-01-10 2015-07-09 Seqirus UK Limited Influenza virus immunogenic compositions and uses thereof
EP2946014A2 (en) 2013-01-17 2015-11-25 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
WO2014164253A1 (en) 2013-03-09 2014-10-09 Moderna Therapeutics, Inc. Heterologous untranslated regions for mrna
EP2968397A4 (en) 2013-03-12 2016-12-28 Moderna Therapeutics Inc DIAGNOSIS AND TREATMENT OF FIBROSIS
US20160024181A1 (en) 2013-03-13 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
BR112015022507A2 (pt) 2013-03-14 2017-10-24 Shire Human Genetic Therapies ácidos ribonucleicos com nucleotídeos 4'-tio-modificados, composição compreendendo o mesmo e usos relacionados
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
WO2014144767A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
WO2014144711A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
US20160032273A1 (en) 2013-03-15 2016-02-04 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10077439B2 (en) 2013-03-15 2018-09-18 Modernatx, Inc. Removal of DNA fragments in mRNA production process
RS62529B1 (sr) 2013-07-11 2021-11-30 Modernatx Inc Kompozicije koje sadrže sintetičke polinukleotide koji kodiraju proteine povezane sa crispr i sintetičke sgrnk i postupci upotrebe
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
WO2015034928A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
US9925277B2 (en) 2013-09-13 2018-03-27 Modernatx, Inc. Polynucleotide compositions containing amino acids
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
US20160264614A1 (en) 2013-10-02 2016-09-15 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
AU2014329452B2 (en) 2013-10-03 2019-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
EP3058082A4 (en) 2013-10-18 2017-04-26 ModernaTX, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
EP3076994A4 (en) 2013-12-06 2017-06-07 Modernatx, Inc. Targeted adaptive vaccines
EP2918275B1 (en) 2013-12-13 2016-05-18 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
WO2015105926A1 (en) 2014-01-08 2015-07-16 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides for the in vivo production of antibodies
CN106659803A (zh) 2014-04-23 2017-05-10 摩登纳特斯有限公司 核酸疫苗
ES2627220T3 (es) 2014-05-09 2017-07-27 Gestamp Hardtech Ab Métodos para la unión de dos formatos y los formatos y los productos obtenidos
WO2015196130A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
EP3157573A4 (en) 2014-06-19 2018-02-21 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
US20170136132A1 (en) 2014-06-19 2017-05-18 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
CA2955250A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3169335B8 (en) 2014-07-16 2019-10-09 ModernaTX, Inc. Circular polynucleotides
WO2016016676A1 (fr) 2014-07-30 2016-02-04 ArcelorMittal Investigación y Desarrollo, S.L. Procédé de fabrication de tôles d'acier, pour durcissement sous presse, et pièces obtenues par ce procédé
US20170348415A1 (en) 2014-09-03 2017-12-07 Moderna Therapeutics, Inc. Tolerogenic compositions and methods
CN107002191B (zh) 2014-11-19 2018-10-09 新日铁住金株式会社 激光焊接接头、汽车部件、激光焊接接头的制造方法及汽车部件的制造方法
EP3247363A4 (en) 2015-01-21 2018-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
US20180085474A1 (en) 2015-01-23 2018-03-29 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
US10729830B2 (en) 2015-11-12 2020-08-04 Koninklijke Philips N.V. Breast shield arrangement for breast pump, breast pump and method of operation
EP3386391B1 (en) 2015-12-11 2020-11-25 Babson Diagnostics, Inc. Specimen container and method for separating serum or plasma from whole blood
US10563897B2 (en) 2018-02-13 2020-02-18 Carrier Corporation Transport refrigeration unit with a renewable energy source and method of operation

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002508299A (ja) * 1997-09-19 2002-03-19 セクイター， インク． センスｍＲＮＡ治療
US20070037148A1 (en) * 2000-03-31 2007-02-15 Sherman Fong Compositions and methods for the treatmetn of natural killer cell related diseases
US20120065252A1 (en) * 2010-08-06 2012-03-15 Jason Schrum Engineered nucleic acids and methods of use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROC.NATL.ACAD.SCI.USA, vol. 107, JPN6015052972, 2010, pages 1864 - 1869, ISSN: 0004528580 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018200381A1 (en) 2018-02-01
US20210077634A1 (en) 2021-03-18
AU2018200375B2 (en) 2020-11-19
AU2018200377A1 (en) 2018-03-22
US20140141067A1 (en) 2014-05-22
JP2015518816A (ja) 2015-07-06
JP2023021215A (ja) 2023-02-10
JP2021045163A (ja) 2021-03-25
US20140255467A1 (en) 2014-09-11
JP6971953B6 (ja) 2022-01-17
US9301993B2 (en) 2016-04-05
US20140155475A1 (en) 2014-06-05
AU2018200375A1 (en) 2018-03-22
JP2022023036A (ja) 2022-02-07
US20140221465A1 (en) 2014-08-07
US20140249208A1 (en) 2014-09-04
WO2013151664A1 (en) 2013-10-10
JP6348482B2 (ja) 2018-06-27
AU2019202835A1 (en) 2019-05-16
US9050297B2 (en) 2015-06-09
JP6953135B6 (ja) 2022-01-14
WO2013151665A2 (en) 2013-10-10
JP6971953B2 (ja) 2021-11-24
CA2868418A1 (en) 2013-10-10
HK1207306A1 (en) 2016-01-29
WO2013151672A2 (en) 2013-10-10
EP3978030A1 (en) 2022-04-06
CA2868996A1 (en) 2013-10-10
US20140155474A1 (en) 2014-06-05
WO2013151668A2 (en) 2013-10-10
AU2013243947A1 (en) 2014-10-30
EP2833922A2 (en) 2015-02-11
EP3505176A1 (en) 2019-07-03
JP2015518704A (ja) 2015-07-06
EP3520820A1 (en) 2019-08-07
US9675668B2 (en) 2017-06-13
CN104870022A (zh) 2015-08-26
AU2020257150A1 (en) 2020-11-19
JP2023145599A (ja) 2023-10-11
CA2868422A1 (en) 2013-10-10
EP2834259A1 (en) 2015-02-11
WO2013151663A1 (en) 2013-10-10
JP2017121243A (ja) 2017-07-13
AU2013243953A1 (en) 2014-10-30
WO2013151736A3 (en) 2013-12-19
US20170348436A1 (en) 2017-12-07
JP6953135B2 (ja) 2021-10-27
US20190314527A1 (en) 2019-10-17
AU2017232121A1 (en) 2017-10-12
US10493167B2 (en) 2019-12-03
US20140200263A1 (en) 2014-07-17
HK1206780A1 (en) 2016-02-12
HK1206635A1 (en) 2016-01-15
AU2013243952A1 (en) 2014-10-30
JP2017121241A (ja) 2017-07-13
US20140105964A1 (en) 2014-04-17
EP2833892A2 (en) 2015-02-11
US20140186432A1 (en) 2014-07-03
US20140194494A1 (en) 2014-07-10
DE18200782T1 (de) 2021-10-21
EP2834358A2 (en) 2015-02-11
US20140105966A1 (en) 2014-04-17
JP6946384B2 (ja) 2021-10-06
US20140161873A1 (en) 2014-06-12
US9095552B2 (en) 2015-08-04
US20140010861A1 (en) 2014-01-09
US20140200262A1 (en) 2014-07-17
JP2015516143A (ja) 2015-06-08
US9220792B2 (en) 2015-12-29
US20140171485A1 (en) 2014-06-19
CA2868438A1 (en) 2013-10-10
AU2023263451A1 (en) 2023-11-30
JP2017123853A (ja) 2017-07-20
JP6426217B2 (ja) 2018-11-21
JP2015513912A (ja) 2015-05-18
AU2017232121B2 (en) 2019-05-09
US9149506B2 (en) 2015-10-06
US20140179771A1 (en) 2014-06-26
CA2868440A1 (en) 2013-10-10
EP3520821A1 (en) 2019-08-07
US20140105965A1 (en) 2014-04-17
JP2017123847A (ja) 2017-07-20
US20140193482A1 (en) 2014-07-10
CA2869005A1 (en) 2013-10-10
AU2013243951A1 (en) 2014-10-30
US20140107189A1 (en) 2014-04-17
AU2018247318A1 (en) 2018-11-08
WO2013151669A1 (en) 2013-10-10
US20140113959A1 (en) 2014-04-24
JP2020072670A (ja) 2020-05-14
US20160075733A1 (en) 2016-03-17
EP3501550A1 (en) 2019-06-26
EP2833923A4 (en) 2016-02-24
JP6449356B2 (ja) 2019-01-09
JP2019033757A (ja) 2019-03-07
US20140255468A1 (en) 2014-09-11
EP2833892A4 (en) 2016-07-20
JP2023175888A (ja) 2023-12-12
US10463751B2 (en) 2019-11-05
WO2013151736A2 (en) 2013-10-10
JP2017121240A (ja) 2017-07-13
CN112390871A (zh) 2021-02-23
US20140206755A1 (en) 2014-07-24
AU2013243946A1 (en) 2014-10-30
AU2018200379A1 (en) 2018-03-22
US20140155472A1 (en) 2014-06-05
US9233141B2 (en) 2016-01-12
WO2013151667A1 (en) 2013-10-10
US20150044277A1 (en) 2015-02-12
US20140148502A1 (en) 2014-05-29
AU2013243955A1 (en) 2014-10-30
US9114113B2 (en) 2015-08-25
HK1206639A1 (en) 2016-01-15
US9192651B2 (en) 2015-11-24
AU2018260928A1 (en) 2018-12-06
HK1206601A1 (en) 2016-01-15
US20200155706A1 (en) 2020-05-21
EP2833922B1 (en) 2018-12-05
AU2013243950A1 (en) 2014-10-30
EP2833923A1 (en) 2015-02-11
JP2015519040A (ja) 2015-07-09
JP2019216733A (ja) 2019-12-26
EP2834358A4 (en) 2016-03-09
JP2019054813A (ja) 2019-04-11
WO2013151668A3 (en) 2013-12-19
EP2847329A4 (en) 2016-08-10
US20180311381A1 (en) 2018-11-01
AU2013243948A1 (en) 2014-10-30
JP2015519881A (ja) 2015-07-16
EP2833894A1 (en) 2015-02-11
EP2833920A2 (en) 2015-02-11
JP6553104B2 (ja) 2019-07-31
WO2013151670A3 (en) 2014-02-27
US10583203B2 (en) 2020-03-10
EP2834260A1 (en) 2015-02-11
JP2015517995A (ja) 2015-06-25
AU2018200380A1 (en) 2018-03-22
AU2013243834A1 (en) 2014-10-30
JP2015513916A (ja) 2015-05-18
JP2017197545A (ja) 2017-11-02
US10772975B2 (en) 2020-09-15
WO2013151671A1 (en) 2013-10-10
JP6189415B2 (ja) 2017-08-30
EP2833894A4 (en) 2016-08-17
JP2015513914A (ja) 2015-05-18
HK1206748A1 (en) 2016-01-15
HK1206638A1 (en) 2016-01-15
EP2834260A4 (en) 2016-08-10
JP2017121239A (ja) 2017-07-13
US9814760B2 (en) 2017-11-14
JP2022122923A (ja) 2022-08-23
WO2013151672A3 (en) 2014-03-13
US8999380B2 (en) 2015-04-07
US20140200264A1 (en) 2014-07-17
WO2013151665A3 (en) 2014-02-20
US20190240351A1 (en) 2019-08-08
EP2847329A1 (en) 2015-03-18
US20130259923A1 (en) 2013-10-03
JP2019107022A (ja) 2019-07-04
JP2018023373A (ja) 2018-02-15
AU2013243954A1 (en) 2014-10-30
JP2022036938A (ja) 2022-03-08
US9089604B2 (en) 2015-07-28
HK1206636A1 (en) 2016-01-15
DE18203666T1 (de) 2021-10-07
HK1206779A1 (en) 2016-01-15
AU2018200373A1 (en) 2018-03-22
US20210299278A1 (en) 2021-09-30
US9061059B2 (en) 2015-06-23
CA2868429A1 (en) 2013-10-10
EP2833921A2 (en) 2015-02-11
WO2013151670A2 (en) 2013-10-10
EP2849799A2 (en) 2015-03-25
US11564998B2 (en) 2023-01-31
US20140155473A1 (en) 2014-06-05
AU2013243955B2 (en) 2018-02-22
CA2868398A1 (en) 2013-10-10
JP2022078081A (ja) 2022-05-24
JP2017141230A (ja) 2017-08-17
US20170368200A1 (en) 2017-12-28
JP2015513913A (ja) 2015-05-18
JP6424156B2 (ja) 2018-11-14
CA2868393A1 (en) 2013-10-10
CA2868434A1 (en) 2013-10-10
US20130259924A1 (en) 2013-10-03
EP2834259A4 (en) 2016-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6971953B2 (ja) 修飾ポリヌクレオチドを封入する脂質ナノ粒子を含む組成物
JP6921797B2 (ja) ヒト疾患に関連する生物製剤およびタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US10501513B2 (en) Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US9587003B2 (en) Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US9255129B2 (en) Modified polynucleotides encoding SIAH E3 ubiquitin protein ligase 1
JP2019059793A (ja) 修飾ヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸組成物
JP2015516143A6 (ja) ヒト疾患に関連するタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20200619

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20200619

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20210615

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20210910

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20220125

C60 Trial request (containing other claim documents, opposition documents)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60

Effective date: 20220525

C116 Written invitation by the chief administrative judge to file amendments

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C116

Effective date: 20220607

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20220607

A761 Written withdrawal of application

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761

Effective date: 20220609