KR102114880B1 - 코돈 최적화된 TIF1γ 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 TIF1γ유전자의 N 말단 부위를 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터, 이의 용도 등에 관한 것이다.

Description

코돈 최적화된 TIF1γ 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 용도{Recombinant vector comprising codon-optimized TIF1γ polynucleotide, and use the same}
본 발명은 코돈 최적화된 TIF1γ 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 용도 등에 관한 것이다.
섬유화 질환(fibrotic disease), 즉, 섬유증(fibrosis)은 재생(reparative) 또는 반응 과정에서 콜라겐 매트릭스의 비정상적인 축적으로 인하여, 과도한 섬유성 결합조직이 형성되는 질환을 총칭하며, 그 형태는 정상적인 섬유조직의 형성과는 매우 대조적이다. 섬유증이 발생하는 대표적인 조직으로는 심장, 신장, 간, 지방, 폐, 심장, 골, 골수, 피부 등이 있다. 심장 섬유증은 다수의 심장 질환에 공통적으로 나타나는 현상으로서, 대치성(반흔) 섬유증, 간질(반응성) 섬유증 등이 있으며, 이 외에도 섬유증이 발생되는 위치에 따른 신장 섬유증, 간 섬유증, 경피증 등이 있다. 경피증은 피부 또는 다른 장기에서 콜라겐의 과다 침착을 특징으로 하는 만성 질환으로서, 심각할 경우 혈관 및 내장 기관에도 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 골격근 섬유증은 손상된 근육에서 주로 유도되는 현상으로서, 주로 손상으로부터 회복하려는 신체의 시도로부터 기인하는 섬유 조직의 과다 성장을 특징으로 한다. 특별히, 최근에는 가습기 살균제에 포함되는 폴리헥사메틸렌 구아디닌(Polyhexamethylene guanidine; PHMG) 및 염화에톡시에틸구아디닌(Oligo(2-)ethoxy ethoxyethyl guanidine chloride; PGH)에 의하여 폐 섬유증이 발생되어, 이로 인하여 사망하게 되는 사건들이 발생하며 사회적 이슈가 된 바 있다.
대부분의 섬유증은 발병 요인과 경로가 매우 다양할 뿐만 아니라, 반복 작용에 의해 나타나는 질병으로 기전 자체가 명확하게 밝혀져 있지 않아 치료를 위한 효과적인 약물의 개발이 부족한 실정이다.
현재 섬유증의 치료에 일부 도움이 되는 것으로 알려져 있는 항염제로는 프레드니손(prednisone), 글루코코르티코이드(glucocorticoid) 등이 있으나, 그 치료 효과나 안정성에 대해서는 검증되어 있지 않으며, 높은 증식 능력을 가지고 있는 줄기세포로부터 분화시킨 세포들을 조직 이식 대신 사용하고자 하는 시도들도 있으나, 이 또한 생체 내에서의 세포 생존율이 낮거나 면역거부반응을 일으킬 수 있는 위험성들이 존재하기 때문에 아직은 직접적인 치료에 적용하기는 어려운 실정이다. 이 외에는 섬유증 치료를 위해서는 섬유화 인자 활성 억제, 그리고 세포외기질 분해 등의 방법이 알려져 있으나, 아직 직접적인 치료에 사용되고 있는 방법은 드물 뿐만 아니라, 섬유화 과정이 만성적으로 진행되기 때문에 완벽한 치료가 어려운 실정이다.
따라서, 다양한 섬유화 질환에 대하여 현저한 치료 효과를 나타내는, 실질적으로 상업화가 가능한 치료제의 개발이 절실히 필요한 실정이다.
국내공개특허 10-2019-0003422
본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 코돈 최적화된 TIF1γ를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터, 상기 재조합 벡터의 용도 등을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 TIF1γ(transcriptional intermediary factor 1 gamma) 유전자의 N 말단 부위를 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 상기 N 말단은 TIF1γ 유전자의 359 bp 내지 1670 bp에 해당되는 유전자 부위를 의미할 수 있으며, 상기 코돈 최적화는 인간 세포에서 최적화된 서열을 의미한다. 바람직하게는 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2의 염기서열을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 서열번호 2 및 3의 염기서열을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 서열번호 1의 염기서열을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 변이체가 본 발명의 범위에 포함된다. 구체적으로, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 염기서열과 90 % 이상, 더욱 바람직하게는 95 % 이상, 가장 바람직하게는 98 % 이상의 서열 상동성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 “서열 상동성의 %”는 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 더 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 상기 TIF1γ 재조합 단백질 생산 용도로 사용될 수도 있다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 벡터를 포함하는 섬유화 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 섬유화 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는 조성물의 섬유화 질환의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 섬유화 질환은 바람직하게는 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 췌장 섬유증, 전신성 강피증, 황반 변성, 심장 섬유증, 췌장과 폐의 낭포성 섬유증, 주사 섬유증, 심내막심근 섬유증, 전신성 특발성 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 종격막 섬유증, 골수섬유증, 복막후 섬유증, 진행성 종괴성 섬유증, 신원성 전신 섬유증, 결절성 상피하 섬유증, 유방 섬유증, 림프절 섬유증, 반흔, 피부경화증, 피부 섬유증, 방광 섬유증, 근 섬유증, 동맥 섬유증, 만성 폐쇄성 폐질환, 갑상선 섬유증, 관절 섬유증, 늑막 섬유증, 외과시술의 결과로서의 섬유증, 증식성 섬유증, 파이프스템 섬유증, 섬유소후섬유증 등이며, 더욱 바람직하게는 간 섬유증이나 TIF1γ 단백질의 발현에 의하여 치료될 수 있는 섬유화 질환이라면 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 TIF1γ 유전자의 N 말단 부위를 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드는 N 말단 부위를 인간 세포에 적합하게 변형시킴으로써 TIF1γ 재조합 단백질의 생산량을 현저히 증가시킬 수 있기 때문에, 이를 이용함으로써 TIF1γ 재조합 단백질을 생산하는데 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 상기 폴리뉴클레오티드를 삽입한 재조합 벡터를 이용하여 섬유화 질환의 치료 효과 또한 증가되는 것을 확인하였으므로 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 TIF1γ 재조합 단백질을 이용할 수 있는 다양한 분야에 폭넓게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, TIF1γ 단백질의 발현량을 증가시켜 섬유화 질환을 예방 및 치료할 수 있기 때문에 다양한 섬유화 질환의 치료에 안정적이며 효과적인 치료제로 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 TIF1γ유전자의 코돈 최적화에 따른 단백질 발현량을 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 TIF1γ유전자의 부위별 코돈 최적화에 따른 단백질 발현량을 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 TIF1γ유전자의 코돈 최적화를 통하여 생산된 재조합 단백질의 섬유화 질환 치료 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
본 발명의 TIF1γ 유전자의 N 말단 부위를 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드를 이용하여 TIF1γ 재조합 단백질을 생산한다면 동량의 벡터를 이용하여 재조합 단백질의 생산량을 증가시킬 수 있을 뿐만 아니라, 이로 인하여 섬유화 질환의 치료 효과 또한 증가되는 것을 확인하였으므로 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 TIF1γ 재조합 단백질을 이용하는 다양한 분야에 적용 가능할 것으로 기대된다.
본 명세서에 있어서, “섬유화(fibrosis)”란 조직 내에 콜라겐 매트릭스의 비정상적인 축적 또는 과도한 섬유성 결합조직의 형성이 일어난 모든 증상을 총칭하며, 이러한 섬유화로 인하여 섬유화 질환(섬유증)이 발생될 수 있으며, 발생 위치에는 제한이 없다.
본 명세서에 있어서, “TIF1γ(transcriptional intermediary factor 1 gamma)”란 세포의 분화(cell differentiation) 및 발달(development)에 관여하는 전사 인자로 알려져 있는 유전자이다.
본 명세서에 있어서, "벡터(vector)"는 세포 내로 전달되는 DNA 단편, 핵산 분자 등을 의미하며, 상기 벡터는 DNA를 복제시키고, 숙주세포에서 독립적으로 재제조될 수 있다. 용어 "전달체"와 호환하여 사용될 수 있다. "발현 벡터"는 목적한 코딩 서열과, 특정 숙주 생물에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 발현하는데 필수적인 적정 핵산 서열을 포함하는 재조합 DNA 분자를 의미한다. 본 발명의 재조합 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 박테리오파아지 벡터, 바이러스 벡터 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 적합한 재조합 벡터는 프로모터, 오퍼레이터, 개시코돈, 종결코돈, 폴리아데닐화 시그널 및 인핸서 같은 발현 조절 엘리먼트 등을 포함할 수 있으며, 목적에 따라 다양하게 제조될 수 있다. 상기 프로모터는 바람직하게는 인간 세포에서 단백질을 발현하는데 사용되는 프로모터일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 섬유화가 유도된 지역에서 발현이 유도되는 특정 프로모터, 예를 들어, TGF-beta 프로모터 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에 있어서, “작동가능하게 연결된(operably linked)”이란 일반적 기능을 수행하도록 핵산 발현조절 서열과 목적하는 단백질 또는 RNA를 코딩하는 핵산 서열이 기능적으로 연결(functional linkage)되어 있는 상태를 의미한다. 예를 들어 프로모터와 단백질 또는 RNA를 코딩하는 핵산 서열이 작동가능하게 연결되어 코딩서열의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 발현 벡터와의 작동적 연결은 당해 기술분야에서 잘 알려진 유전자 재조합 기술을 이용하여 제조할 수 있으며, 부위-특이적 DNA 절단 및 연결은 당해 기술 분야에서 일반적으로 알려진 효소 등을 사용할 수 있다.
본 명세서에 있어서, “예방(prevention)”이란 섬유화의 발생을 차단하는 광의의 개념을 말하며, 바람직하게는 발생 이전에 미리 방지하는 1차 예방과, 발생을 조기에 발견하고 적시에 치료하는 2차 예방을 모두 포함하나, 섬유화 발생 이전에 대처하는 과정 및/또는 활동이라면 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에 있어서, “치료(treating)”란 섬유화의 발생에 대처하는 광의의 개념을 말하며, 섬유화의 치료, 치유, 완화, 감소 등을 시키기 위한 과정 및/또는 활동이라면 제한이 없다.
본 명세서에 있어서, “개체(individual)”란 본 발명의 조성물이 투여될 수 있는 대상을 말하며, 그 대상에는 제한이 없다.
본 명세서에 있어서, “약학적 조성물(pharmaceutical composition)”이란 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학적 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 약학적 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 약제적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구투여시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여시간, 투여경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 500 mg/kg 또는 0.001 내지 500 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형화될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: TIF1γ 코돈 최적화
TIF1γ 재조합 단백질의 발현을 최대화하기 위하여, TIF1γ의 코돈 최적화(codon optimization)을 실시하였다. 코돈 최적화에 따른 재조합 단백질 생산량의 차이를 확인하기 위하여, TIF1γ의 뉴클레오티드 서열(Sequence ID: NM_015906)의 전체를 특별히 인간 세포에서 발현 빈도가 높은 유전자 코돈으로 최적화시킨 세 종류의 서열을 준비하였다. 그리고 각각의 TIF1γ 유전자를 pVAX1(ThermoFisher)에 삽입하여 293T 세포주에서 발현시켰다. 대조군으로는 TIF1γ의 원 서열을 사용하였다. 또한, CMV-emGFP 벡터를 함께 형질주입(transfection)하여 형질주입 효율을 비교하였다. 그리고 발현된 TIF1γ 재조합 단백질은 웨스턴 블롯팅으로 확인하였다. 웨스턴 블롯팅을 위하여, 회수된 세포를 protein lysis buffer(50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.5% deoxycholate, 1% NP40 및 rotease inhibitor cocktail(Roche))가 포함된 0.1% sodium dodecyl sulfate에 용해시키고, 단백질 추출물 25 내지 30 μg을 5 분 동안 95 ℃에서 가열시킨 후에, SDS-page를 실시하였다. 그리고 SDS-page가 완료된 후, 크기에 따라 분리된 단백질을 BioRad transfer unit(BioRad)을 사용하여 polyvinylidene fluoride membranes(Millipore)으로 이동시켰다. 그리고 5% skim milk를 이용하여 블록킹시킨 후에, TIF1γ(TRIM33) 항체(ThermoFisher Scientific)를 이용하여 반응시켰으며, anti-GAPDH antibody(Abcam)는 내부 대조군으로 사용하였다. 항체를 이용하여 반응시킨 멤브레인은 세척하여 결합되지 않은 항체를 제거해준 후에 HRP 복합 2차 항체(horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies)를 이용하여 반응시키고, Enhanced chemiluminescence(ThermoFisher)를 이용하여 밴드를 확인하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이, 원 서열(+)과 비교하여 코돈 최적화된 세 종류의 서열 중 서열번호 1의 TIF1γ 재조합 단백질(opti)은 원 서열과 비교하여 10배 이상 단백질 생산량이 증가되는 것을 확인하였다.
또한, TIF1γ의 전체 서열이 아닌 부분 서열의 코돈 최적화에 따라 단백질 발현량이 차이를 나타내는지 확인하기 위하여, 서열번호 1의 코돈 최적화된 서열을 기준으로 하여 359 bp 내지 1670 bp에 해당되는 N 말단(N terminus) 부분 중 일부를 최적화시킨 서열(서열번호 2)로 대체한 TIF1γ의 전체 서열, 2560 bp 내지 3382bp에 해당되는 C 말단(C terminus) 부분 중 일부를 최적화시킨 서열(서열번호 3)로 대체한 TIF1γ의 전체 서열, 그리고 서열번호 2 및 3을 최적화시킨 서열(서열번호 4)로 대체한 TIF1γ의 전체 서열을 각각 준비하여 pVAX1에 삽입하여 293T 세포주에서 24 시간 동안 발현시켰다. 그리고 발현된 TIF1γ 재조합 단백질은 웨스턴 블롯팅으로 확인하고, 각각의 band를 ImageJ 소프트웨어를 이용하여 정량하였다. 그 결과는 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타난 바와 같이, TIF1γ의 전체 서열을 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드(1)의 단백질 발현량이 가장 높았으며, N 말단 만을 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드(2)와 N 말단 및 C 말단을 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드(4) 또한, TIF1γ 유전자의 원 서열을 사용한 대조군(contl)과 비교하여 4 배 이상 단백질 발현량이 증가된 것을 확인하였다. 그러나, C 말단 만을 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드(3)의 경우에는 원 서열과 거의 동일한 발현량을 나타내는 것을 확인하였다. 상기 결과를 통하여, N 말단의 코돈 최적화가 TIF1γ 재조합 단백질의 발현량에 중요한 역할을 하는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 2: TIF1γ 재조합 단백질의 섬유화 질환의 치료 효과 확인
코돈 최적화를 통하여 생산된 TIF1γ 재조합 단백질의 섬유화 질환 치료 효과를 확인하기 위하여, 실시예 1과 동일한 방법으로 제조한 벡터를 인간 간 성상세포주인 LX2에 형질주입하였다. 그리고 형질주입된 세포에 5 ng/mL의 농도로 TGFβ를 7 일간 매일 처리하였다. 그리고 세포를 회수하여 단백질 발현량을 웨스턴 블롯팅으로 확인하였다. 웨스턴 블롯팅은 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하였으며, 1차 항체로는 α-SMA(Abcam) 또는 Col1A(Abcam) 항체를 이용하였다. 그 결과는 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타난 바와 같이, TGFβ를 처리한 경우 섬유화 인자로 알려져 있는 SMA 및 Col1A의 발현량이 증가되며, TIF1γ 유전자의 원 서열을 이용한 벡터(+)를 형질주입시킨 경우에는 SMA 및 Col1A의 발현량이 약간 감소되며, TIF1γ의 전체 서열을 코돈 최적화시킨 폴리뉴클레오티드를 이용한 벡터(Opti)를 형질주입시킨 경우에는 원 서열을 이용한 벡터와 비교하여 더 효과적으로 SMA 및 Col1A의 발현량이 감소되는 것을 확인하였다. 상기 결과들을 통하여, 코돈 최적화를 통하여 생산된 TIF1γ 재조합 단백질은 TIF1γ 유전자 원 서열을 이용한 경우와 마찬가지로 섬유화 억제 효과를 나타내며, 동일한 양의 벡터를 형질주입할 경우 코돈 최적화된 TIF1γ 재조합 단백질은 단백질 발현량이 증가되어 섬유화 치료 효과도 증가되는 것으로 확인하였습니다.
상기 결과들을 통하여, 본 발명의 코돈 최적화된 TIF1γ 폴리뉴클레오티드를 사용할 경우, TIF1γ 재조합 단백질의 생산량을 증가시킬 수 있을 뿐만 아니라, 코돈 최적화된 TIF1γ 폴리뉴클레오티드가 포함되어 있는 벡터를 사용함으로써 적은 양의 벡터를 주입하여도 단백질 발현량이 증가되어 섬유화 질환의 치료 효과를 현저히 증가시킬 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
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cctggctaca cccctaatgt ggtcgttgga caggtgccac ctggcaccaa 1500 ccacatctct aagacccctg gccagatcaa cctggctcag ctcagactgc agcacatgca 1560 gcagcaagtg tacgcccaga aacaccagca gctgcagcag atgcggatgc agcaacctcc 1620 tgctccagtg cctaccacca ccacaaccac acagcagcac cctagacagg ccgctcctca 1680 gatgctgcaa cagcagcctc caagactgat cagcgtgcag actatgcagc ggggcaacat 1740 gaactgcgga gcctttcagg cccatcagat gagactggcc cagaacgccg ctagaatccc 1800 tggcatccct agacacagcg gccctcagta cagcatgatg cagccccatc tgcagagaca 1860 gcacagcaat cctggacacg ccggaccttt tccagtggtg tctgtgcaca ataccacgat 1920 caaccctaca agccccacca ccgccacaat ggccaatgcc aatagaggcc caacaagccc 1980 tagcgtgaca gccatcgagc tgatccccag cgtgacaaac cccgagaatc tgcctagcct 2040 gcctgacatc cctcctatcc agctcgagga tgccggctct agcagcctgg ataatctgct 2100 gagccggtac atcagcggct cccatcttcc acctcagcct accagcacaa tgaacccatc 2160 tccaggacca agcgctctga gccctggatc tagcggactg agcaacagcc acacacctgt 2220 gcggcctcca agcacaagca gcacaggctc tagaggaagc tgtggcagca gcggaagaac 2280 cgccgaaaag 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gaaccggatc aaagaagtga acgagacaaa caagcgggtc gagcaagaga 540 tcaaggtggc catcttcacc ctgatcaacg agatcaacaa gaagggcaag agcctcctgc 600 agcagctcga gaacgtgacc aaagaacggc agatgaagct gctccagcag cagaacgata 660 tcaccggcct gagccggcaa gtgaagcacg tgatgaattt caccaactgg gccattgcca 720 gcggctctag cacagccctg ctgtactcca agcggctgat caccttccag ctgcggcaca 780 tcctggccat ccggttccac tgcgacccta ccttttgggc caagaacgtg gtcaacctgg 840 gcaacctggt catcgag 857 <210> 3 <211> 411 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> codon optimization of TIF1gamma C term sequence <400> 3 tgcgccgtct gccagaacgg cggagatctg ctgtgttgcg agaagtgccc caaggtgttc 60 cacctgacct gccacgttcc aacactgctg agcttcccta gcggcgactg gatctgcacc 120 ttctgccagg gactgagccc cgtggatcag agaaagtgcg agagactgct gctctacctg 180 tactgccacg agctgagcat cgagttccaa gagcctgtgc ctgccagcat tcccaactac 240 tacaagatca tcaagaaacc catggacctg agcaccgtga agaagaagct gcagaagaag 300 cacagccagc actatcagat ccccgacgac ttcgtggctg acgtgcggct gatcttcaag 360 aactgcgagc ggttcaacga gatgatgaag gtggtgcagg tctacgccga c 411 <210> 4 <211> 2778 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> codon optimization of TIF1gamma N and C term sequence <400> 4 tgtgctgttt gtcagcagag cctgcagagc agaagagagg ccgagcctaa gctgctgcct 60 tgcctgcaca gcttctgcct gagatgtctg cccgagcctg agagacagct gagcgttcca 120 attcctggcg gcagcaacgg cgacattcag caagtgggcg tgatcagatg ccccgtgtgc 180 agacaagagt gccggcagat tgacctggtg gacaactact tcgtgaagga caccagcgag 240 gcccctagca gctctgacga gaagtctgag caagtgtgca cctcctgcga ggacaatgcc 300 tctgccgtgg gcttctgtgt ggaatgtggc gagtggctgt gcaagacctg tatcgaggcc 360 caccagagag tgaagttcac caaggaccac ctgatccgga agaaagaaga tgtgtccgag 420 agcgtgggcg cctctggaca aagacctgtg ttctgccccg tgcacaagca agagcagctg 480 aagctgttct gcgagacatg cgaccggctg acctgcagag attgccagct gctcgaacac 540 aaagagcaca gataccagtt tctggaagag gcctttcaga accagaaggg cgccatcgag 600 aacctgctgg ccaaactgct ggaaaagaaa aactacgtgc acttcgccgc cacacaggtg 660 cagaaccgga tcaaagaagt gaacgagaca aacaagcggg tcgagcaaga gatcaaggtg 720 gccatcttca ccctgatcaa cgagatcaac aagaagggca agagcctcct gcagcagctg 780 gaaaacgtga ccaaagaacg gcagatgaag ctgcttcagc agcagaacga catcaccggc 840 ctgagcagac aagtgaagca cgtgatgaat ttcaccaact gggccattgc cagcggcagc 900 tctacagccc tgctgtactc caagcggctg atcaccttcc agctgagaca catcctgaag 960 gccagatgcg atcctgtgcc tgccgccaat ggcgctatca gattccactg cgaccccacc 1020 ttttgggcca agaacgtcgt gaacctgggc aacctggtca tcgagagcaa gcctgctcct 1080 ggctacaccc ctaatgtggt cgttggacag gtgccacctg gcaccaacca catctctaag 1140 acccctggcc agatcaacct ggctcagctc agactgcagc acatgcagca gcaagtgtac 1200 gcccagaaac accagcagct gcagcagatg cggatgcagc aacctcctgc tccagtgcct 1260 accaccacca caaccacaca gcagcaccct agacaggccg ctcctcagat gctgcaacag 1320 cagcctccaa gactgatcag cgtgcagact atgcagcggg gcaacatgaa ctgcggagcc 1380 tttcaggccc atcagatgag actggcccag aacgccgcta gaatccctgg catccctaga 1440 cacagcggcc ctcagtacag catgatgcag ccccatctgc agagacagca cagcaatcct 1500 ggacacgccg gaccttttcc agtggtgtct gtgcacaata ccacgatcaa ccctacaagc 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gactggatct gtaccttctg tagagacatc ggcaagcccg aggtggaata cgactgcgac 2460 aatctgcagc actccaaaaa gggcaaaaca gcccagggac tgagccccgt ggatcagaga 2520 aagtgcgaga gactgctgct gtacctgtac tgccacgagc tgagcatcga gttccaagag 2580 ccagtgcctg ccagcattcc caactactac aagatcatca agaaaccgat ggacctgagc 2640 accgtcaaga agaagctgca gaagaagcac tcccagcact atcagatccc cgacgacttc 2700 gtggctgacg tgcgcctgat ctttaagaac tgcgagcggt tcaatgagat gatgaaggtg 2760 gtgcaggtct acgccgac 2778

Claims (6)

  1. TIF1γ(transcriptional intermediary factor 1 gamma) 유전자의 N 말단 부위를 코돈 최적화한 폴리뉴클레오티드로서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2 및 3의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 재조합 벡터.
  5. 제 4 항의 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는, 섬유화 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 섬유화 질환은 간 섬유증, 신장 섬유증, 폐 섬유증, 췌장 섬유증, 전신성 강피증, 황반 변성, 심장 섬유증, 췌장과 폐의 낭포성 섬유증, 주사 섬유증, 심내막심근 섬유증, 전신성 특발성 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 종격막 섬유증, 골수섬유증, 복막후 섬유증, 진행성 종괴성 섬유증, 신원성 전신 섬유증, 결절성 상피하 섬유증, 유방 섬유증, 림프절 섬유증, 반흔, 피부경화증, 피부 섬유증, 방광 섬유증, 근 섬유증, 동맥 섬유증, 만성 폐쇄성 폐질환, 갑상선 섬유증, 관절 섬유증, 늑막 섬유증, 외과시술의 결과로서의 섬유증, 증식성 섬유증, 파이프스템 섬유증 및 섬유소후섬유증으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  6. 삭제
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