JPH1029952A

JPH1029952A - ヒト免疫不全ウイルス感染の制御用組成物および制御方法

Info

Publication number: JPH1029952A
Application number: JP8185893A
Authority: JP
Inventors: Toru Otake; 徹大竹
Original assignee: Takara Shuzo Co Ltd
Current assignee: Takara Shuzo Co Ltd
Priority date: 1996-07-16
Filing date: 1996-07-16
Publication date: 1998-02-03

Abstract

(57)【要約】【課題】細胞へのＨＩＶ感染に関与する機能性物質の
制御を介してＨＩＶ感染を制御する。【解決課題】細胞へのＨＩＶ感染に関与する、フィブ
ロネクチンまたはそのフラブメント等の機能性物質を制
御する抗体等の物質を使用する組成物および方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト免疫不全ウイ
ルス（ＨＩＶ）の細胞への感染を制御する組成物および
方法に関する。さらに詳しくは、ＨＩＶの細胞への感染
を促進する機能性物質、該機能性物質に特異的な結合性
物質を利用するＨＩＶの細胞への感染の制御用組成物お
よびその方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】エイズはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩ
Ｖ）のＴ細胞への感染により引き起こされる重篤な免疫
不全症である。エイズの臨床症状としては、Ｔ細胞の破
壊による免疫機能の低下に起因するものが主であり、カ
リニ肺炎、サイトメガロウイルス感染といった日和見感
染症や、悪性腫瘍（カポジ肉腫、悪性リンパ腫等）が代
表的である。このほかＨＩＶの感染が直接の原因である
と言われる神経症状（ＨＩＶ脳症）も観察される。ＨＩ
Ｖ感染の特徴は高い細胞特異性が見られることである。
ＨＩＶは免疫系に関与するＴ細胞（ヘルパーＴ細胞）や
マクロファージの細胞表面に発現されるＣＤ４分子をレ
セプターとして認識して感染することが知られており、
これが免疫不全発症の最も大きな原因と考えられてい
る。エイズを治療する薬剤としては、ＨＩＶ感染細胞に
作用し、ウイルスの逆転写酵素を阻害する、３′−アジ
ド−２′,３′−ジデオキシチミジンおよび２′,３′−
ジデオキシイノシンのみが国内で認可されている。国外
でも同様な作用メカニズムの薬剤が数種使用されている
が、これらの薬剤は、作用メカニズムの点からも当然で
あるが、いずれも重篤な副作用を示すため、その使用は
著しく制限されている。

【０００３】また、これらの薬剤に耐性を獲得した変異
ＨＩＶ株の出現も治療上の大きな問題となっている。作
用機作の異なるＨＩＶ治療薬としてウイルスを構成する
タンパクのプロセッシングに関与するプロテアーゼの阻
害剤も開発されているが、この場合も耐性株の出現とい
う問題を克服できていない。ワクチンは感染症に有効な
治療、予防法である。ＨＩＶの弱毒株や野生型のＨＩＶ
を人工的に不活化したものを取得することができればこ
れをワクチンとして利用することが期待される。しか
し、ＨＩＶの感染力は他のウイルスに比較して低く、大
量、かつ急速なＨＩＶの継代培養が困難なことがワクチ
ンの実用化の障害の一つとなっている。ＨＩＶの細胞特
異的な感染は、ＨＩＶを遺伝子導入のためのベクターと
して利用する場合には大きな利点となる。複製能を欠損
させて感染性ウイルス粒子の産生能力を除いたＨＩＶベ
クターはＣＤ４発現細胞に特異的に遺伝子を導入するこ
とが可能であり、エイズの他、リンパ球系の細胞の機能
異常が原因である白血病、免疫不全症のような疾病の遺
伝子治療手段として期待されている。さらに、ＨＩＶベ
クターは現在の主流であるレトロウイルスベクターとは
異なり、非分裂細胞の染色体中にも外来遺伝子を導入で
きるという性質も有している。

【０００４】上記したように、ＨＩＶの感染に関しては
細胞表面のＣＤ４分子が極めて重要な役割を果たしてい
るが、ＣＤ４の発現が認められない細胞においてもＨＩ
Ｖの感染が認められたという例が報告されている［マイ
クロバイオロジカル・レビュー（Microbiological Revi
ews）、第５７巻、第１８３〜２８９頁（１９９
３）］。また、その一方ではＣＤ４に加えて、それ以外
の細胞由来因子がＨＩＶの細胞への侵入に必須であるこ
とも示されてきている［ジャーナル・オブ・ウイロロジ
ー（Jounal of Virology）、第６７巻、第５９３９〜５
９４７頁（１９９３）］。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】ＨＩＶの細胞への感染
に関与する機能性物質の解明は、ＨＩＶ感染を人為的に
コントロールすることを可能にする。本発明は、ＨＩＶ
の細胞への感染に関与する機能性物質の制御を介してＨ
ＩＶ感染を制御する組成物および方法を提供することを
目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＨＩＶの
細胞への感染にある特定の機能性物質が関与しているこ
とを見出した。例えば、フィブロネクチン、線維芽細胞
増殖因子あるいはこれらと実質的に同等の機能を有する
機能性物質の存在下において、ＨＩＶの細胞への感染が
制御されること、さらに、これらの機能性物質の存在下
において複製能欠損ＨＩＶベクターによる細胞への遺伝
子導入が制御できることを見い出し、本発明を完成する
に至った。

【０００７】すなわち、本発明の第1の態様は、ＨＩＶ
による細胞感染の制御用組成物に関し、ＨＩＶの感染に
関与する機能性物質を有効成分としてなることを特徴と
する。

【０００８】感染に関与する機能性物質としては、フィ
ブロネクチンまたはフィブロネクチンのフラグメントが
使用でき、とりわけフィブロネクチンのヘパリン結合部
位を含有するポリペプチドが使用できる。例えば、配列
表の配列番号１で表されるポリペプチド、該ポリペプチ
ドの機能的同等物および該ポリペプチドまたは該ポリペ
プチドの機能的同等物を含有するポリペプチド等が好適
に使用できる。また、線維芽細胞増殖因子、該因子の機
能的同等物および該因子または該因子の機能的同等物を
含有するポリペプチドから選択される機能性物質も本発
明の方法に使用できる。例えば、配列表の配列番号４で
表されるポリペプチド、該ポリペプチドの機能的同等物
および該ポリペプチドまたは該ポリペプチドの機能的同
等物を含有するポリペプチド等が好適に使用できる。こ
れらの機能性物質は、実質的に純化された天然物を使用
しても良く、その酵素的、化学的分解物、また、これら
を遺伝子工学的に作製したものを使用してもよい。さら
に、これらの物質の機能を損なうことなく、改変された
もの（自体公知方法により化学的に修飾したもの等）も
使用することができる。

【０００９】本明細書において用いる「機能的同等物」
とは以下のようなものをいう。天然に存在するタンパク
にはそれをコードする遺伝子の多形や変異の他、生成後
のタンパクの生体内および精製中の修飾反応などによっ
てそのアミノ酸配列中にアミノ酸の欠失、挿入、付加、
置換等の変異が起こりうる。しかし、このような変異が
該タンパクの活性や構造の保持に関して重要でない部分
に存在する場合には、変異を有しないタンパクと実質的
に同等の生理、生物学的活性を示すものがあることが知
られている。このように構造的に若干の差違があっても
その機能については大きな違いが認められないものを本
明細書では「機能的同等物」と呼ぶ。

【００１０】上記のような変異を人為的に導入した場合
も同様であり、この場合にはさらに多種多様の変異タン
パクを作製することが可能である。例えば、ヒトインタ
ーロイキン２（ＩＬ−２）のアミノ酸配列中のあるシス
テイン残基をセリンに置換したポリペプチドがインター
ロイキン２活性を保持することが知られている［サイエ
ンス（Science）、第２２４巻、１４３１頁（１９８
４）］。また、ある種のタンパクは、活性には必須でな
いペプチド領域を有していることが知られている。例え
ば、細胞外に分泌されるタンパクに存在するシグナルペ
プチドや、プロテアーゼの前駆体等に見られるプロ配列
などがこれに当たり、これらの領域のほとんどは翻訳後
あるいは活性型タンパクへの転換に際して除去される。
このようなタンパクは一次構造上は異なった形で存在し
ているが、最終的には同等の機能を発現するタンパクで
ある。

【００１１】遺伝子工学的にタンパクの生産を行う場合
には、目的のタンパクのアミノ末端、あるいはカルボキ
シル末端に該タンパクの活性とは無関係のペプチド鎖が
付加されることがある。例えば、目的のタンパクの発現
量を上げるために、使用される宿主中で高発現されるタ
ンパクのアミノ末端領域の一部を目的のタンパクのアミ
ノ末端に付加した融合タンパクが作製されることがあ
る。また、発現されたタンパクの精製を容易にするため
に、特定の物質に親和性を有するペプチドを目的のタン
パクのアミノ末端あるいはカルボキシル末端に付加する
ことも行われている。これらの付加されたペプチドは目
的タンパクの活性に悪影響をおよぼさない場合には付加
されたままであってもよく、また、必要なら適当な処
理、例えば、プロテアーゼによる限定分解などによって
目的タンパクから除去できるようにすることもできる。
上記されたような、そのタンパクの機能には必須でない
ペプチドを保持した、あるいは付加されたものであって
も、同等の機能を発現できる限りにおいては「機能的同
等物」の範囲内に属するものである。

【００１２】本発明の第２の態様は、ＨＩＶによる細胞
感染の制御用組成物およびその方法に関し、上記のよう
なＨＩＶの感染に関与する機能性物質を制御することを
特徴とする。本発明においては、感染に関与する機能性
物質を制御するために、例えば、上記の感染に関与する
機能性物質に対して特異的な結合活性を有する物質を使
用する。このような結合性物質としては、例えば、上記
の機能性物質を抗原として認識する抗体が挙げられ、抗
フィブロネクチン抗体、配列表の配列番号２で表される
ポリペプチドあるいは配列表の配列番号３で表されるポ
リペプチドを特異的に認識する抗体、抗線維芽細胞増殖
因子抗体等を使用することができる。この他の特異的な
結合性物質としては、ヘパリンまたはヘパリン断片を使
用することも可能である。また、感染に関与する機能性
物質を制御するために、上記のＨＩＶ感染に関与する機
能性物質の断片であって、該機能性物質に拮抗作用を有
し、該機能性物質の感染への関与を妨げる機能性物質断
片を使用することもできる。

【００１３】本発明の第３の態様は、ＨＩＶによる感染
細胞の制御用組成物および方法に関し、上記の感染に関
与する機能性物質の存在下で、感染細胞に抗ＨＩＶ性物
質をコードする遺伝子を組み込んだ複製能欠損ＨＩＶウ
イルスベクターで感染させるための組成物およびそのよ
うな工程を含むことを特徴とする方法である。抗ＨＩＶ
物質としてはアンチセンス核酸、リボザイム、デコイ、
細胞内抗体またはトランスドミナントタンパク等の物質
が使用できる。

【００１４】これら本発明の第１および第２の態様にお
いて、ＨＩＶが感染する細胞は、特に限定されるもので
はないが、ＣＤ４分子を発現する細胞が使用でき、特に
好ましくはＣＤ４陽性Ｔ細胞が使用できる。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明の１つの好ましい実施態様
は、ＨＩＶの感染に関与する機能性物質を介してＨＩＶ
の細胞への感染を制御する治療用、予防用、検査用、試
験用等の組成物および方法である。このような感染に関
与する機能性物質としては、例えば、フィブロネクチ
ン、フィブロネクチンのフラグメント、線維芽細胞増殖
因子、該因子を含有するポリペプチド、ならびにこれら
の機能性物質の機能的同等物が挙げられる。これらの機
能性物質は天然起源の物質から得ることができ、また、
人為的に作製する（例えば、組換えＤＮＡ技術や化学合
成技術によって作製する）ことができ、さらに、天然起
源の物質と人為的に作製された物質とを組み合せて作製
することができる。また、本発明に使用する機能性物質
には、本明細書中に示されるＨＩＶの感染に関与する天
然起源のポリペプチドのアミノ酸配列にアミノ酸の欠
失、置換、挿入および／または付加を生じた変異体を含
むポリペプチドの機能的同等物も包含される。機能的同
等物は、例えば、該機能的同等物をコードする遺伝子を
作製し、これを使用して得られた産物について所望の生
物活性を確認することにより、得ることができる。

【００１６】特定の理論によって限定されるものではな
いが、本発明においては、ＨＩＶと標的細胞とが特定の
機能性物質上の、それぞれの機能領域に結合し、ＨＩＶ
と標的細胞とが近接して配置されることによって機能性
物質がＨＩＶの細胞への感染に関与すると考えられる。
この点に関して、ＨＩＶと結合し、その結果、本発明で
有効に役立つ機能性物質の能力は、下記実施例に記載し
たような定型的な方法を使用して確認することができ
る。すなわち、これらの機能性物質の感染への関与は、
適当なマトリックス上に固定された該機能性物質とＨＩ
Ｖ粒子との結合の強さを、ＨＩＶがマトリックスからの
洗い流しに抵抗する程度として測定することによって確
認することができる。例えば、ＨＩＶ含有上清液は、各
種の機能性物質がその表面に固定された容器（例えば細
胞培養用プレート等）中でインキュベートされる。次
に、この容器を生理的食塩緩衝液等で徹底的に洗浄した
後、標的細胞を該容器に添加してインキュベートするこ
とにより容器内に残存しているウイルスの感染価（ＨＩ
Ｖ粒子数）を測定する。ウイルスの感染価は細胞に現れ
た細胞変性効果（cytopathic effect、ＣＰＥ）の観
察、あるいは細胞培養液上清中の逆転写酵素活性の測定
によって測定することができる。この結果を適当な対照
実験（例えば、ＢＳＡ被覆された容器を使用して）と比
較する。対照と比較して機能性物質で被覆されたウエル
内の残存感染価が高いことは、当該物質が本発明の機能
性物質として用いることができることを意味する。

【００１７】本明細書中に記載のフィブロネクチンおよ
びフィブロネクチンのフラグメントは天然より得られた
もの、あるいは人為的に作成されたもののいずれでもよ
く、例えば、ルオスラチ（Ruoslahti）ら［ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Che
m.）第２５６巻、第７２７７頁（１９８１）］；パテル
（Patel）およびロディッシュ（Lodish）［ジャーナル
・オブ・セルラー・バイオロジー（J. Cell. Biol.）第
１０２巻、第４４９頁（１９８６）］；およびベルナル
ディ（Bernardi）等［ジャーナル・オブ・セルラー・バ
イオロジー（J.Cell. Biol.）第１０５巻、第４８９頁
（１９８７）］によって報告された方法によって、天然
起源の物質から実質的に純粋な形態で製造することがで
きる。この点に関して、本明細書で実質的に純粋なフィ
ブロネクチンまたはフィブロネクチンフラグメントと称
しているのは、これらが天然においてフィブロネクチン
と共に存在する他のタンパク質を本質的に含有していな
いことを意味する。

【００１８】本明細書中に記載の実質的に純粋なフィブ
ロネクチンまたはフィブロネクチンフラグメントは、例
えば、米国特許第５,１９８,４２３号に記載されている
方法にしたがって、遺伝子工学的に製造することもでき
る。すなわち、下記実施例でＨ−２７１（配列表の配列
番号３にＨ−２７１のアミノ酸配列を示す）、ＣＨ−２
７１（配列表の配列番号４にＣＨ−２７１のアミノ酸配
列を示す）およびＣＨ−２９６（配列表の配列番号４に
ＣＨ−２９６のアミノ酸配列を示す）として記載された
組換えポリペプチドおよびこれらを取得する方法は、上
記の特許公報に詳細に記載されており、工業技術院生命
工学工業技術研究所にＦＥＲＭＢＰ−２７９９（ＣＨ
−２７１)、ＦＥＲＭＢＰ−２８００（ＣＨ−２９
６）およびＦＥＲＭＢＰ−２２６４（Ｈ−２７１）と
して寄託されたイー・コリ（E．coli）を培養すること
によって取得することができる。また、下記実施例で使
用したＣ−２７４（配列表の配列番号７にＣ−２７４の
アミノ酸配列を示す）は米国特許第５,１０２,９８８号
公報に記載の方法に従って得ることができる。

【００１９】本明細書に記載の線維芽細胞増殖因子は、
実質的に純化された天然物を使用しても良く、また、遺
伝子工学的に作製されたものを使用しても良い。さら
に、これらのポリペプチドの機能を損なうことなく改変
されたものも使用することができる。線維芽細胞増殖因
子の例としては、配列番号４で表される線維芽細胞増殖
因子を使用することができる。配列番号８で表されるポ
リペプチド（以下、Ｃ−ＦＧＦ・Ａと称する）は配列番
号４で表される線維芽細胞増殖因子のＮ末端にフィブロ
ネクチンの細胞接着部位ポリペプチドが結合したポリペ
プチドであり、米国特許第５,３０２,７０１号公報に記
載された方法にしたがって遺伝子工学的に製造すること
ができる。すなわち、該特許公報にＦＥＲＭＰ−１２
６３７として記載され、現在はＦＥＲＭＢＰ−５２７
８として工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託され
ているイー・コリを使用してＣ−ＦＧＦ・Ａを得ること
ができる。

【００２０】上記したように、本発明によってＨＩＶの
細胞への感染を制御する、すなわち、感染を促進する組
成物および方法が提供され、人為的なＨＩＶ感染細胞の
効率的な作製、ならびにＨＩＶの大量、かつ急速な人工
培養が可能となる。ＨＩＶの人工培養は、ＨＩＶ粒子の
工業的な製造と、それを原料とする不活化ＨＩＶワクチ
ンの製造を可能にする。なお、不活化ワクチンの製造を
可能にする。なお、不活化ワクチンは天然のままのウイ
ルスに比べて抗原性が低下す場合があるため、実用的に
は天然のウイルスの抗原性を保持し、かつ病原性の低下
した弱毒化ワクチンがより好ましい。このような弱毒化
ワクチンもまた本発明の組成物および方法を用いて効率
よく作製することが可能である。すなわち、ＨＩＶの継
代培養を繰り返すことによって、病原性が低下もしくは
消失した変異ＨＩＶ株を分離することができる。この
際、培養中にＨＩＶに変異原処理（変異原性化学物質の
添加や紫外線照射等）を行って変異株の出願頻度を増加
させてもよい。こうして得られた変異ＨＩＶ株を培養し
てウイルス粒子を調製し、これを弱毒化ワクチンとして
使用することができる。さらに、本発明はＨＩＶに関す
る基礎研究を進めるうえでの実験手法としても重要であ
る。上記したようにＨＩＶは高い宿主特異性を有してい
るため、これまでのＨＩＶの研究はＴ細胞由来細胞のよ
うな浮遊細胞を用いたものがほとんどであった。本発明
の方法によってＨＩＶを、例えば、ＨｅＬａ細胞のよう
な継代培養可能な付着細胞に感染させることにより、次
のような利点が得られる。

【００２１】容器に付着する細胞を材料にすることは、
細胞へのウイルス感染の有無の確認、ならびに感染細胞
数の計数を容易にする。ＨＩＶ感染の確認は細胞に生じ
た細胞変性効果の観察によって行われるが、浮遊細胞で
この観察を行うには非常な熟練を要する。付着細胞は容
器に付着した状態で生育するため、顕微鏡下での観察に
よって容易に感染の確認でき、かつ感染細胞数の正確な
計数ができる。このため多数の試料を同時に扱うことも
容易となり、中和抗体や抗ウイルス剤のスクリーニング
を効率よく行うことができる。また、抗ウイルス剤耐性
ウイルス株の出現等も容易に確認できる。このほか、付
着細胞は浮遊細胞に比べて取り扱いが容易であり、例え
ば、遠心分離を行うことなく培地を交換することができ
るなど、ウイルスによる汚染の危険性を減らすうえでも
効果がある。

【００２２】また、本発明の別の好ましい実施態様は、
ＨＩＶの感染に関与する機能性物質に特異的に結合する
物質を利用してＨＩＶの細胞への感染を制御する方法で
ある。上記の機能性物質は生体内においてもＨＩＶの感
染に一定の役割を果たしている。したがって、該機能性
物質に特異的に結合する物質の共存下では該機能性物質
の感染への関与が阻害され、ＨＩＶの細胞への感染が抑
制される。該機能性物質に特異的に結合する物質として
は、該機能性物質を認識する抗体が挙げられる。このよ
うな抗体としては、抗フィブロネクチン抗体、抗フィブ
ロネクチンフラグメント抗体、配列表の配列番号２で表
される細胞接着活性を有するポリペプチド（Ｃ−２７
７）、あるいは配列表の配列番号３で表されるヘパリン
結合活性を有するポリペプチド（Ｈ−２９６）を特異的
に認識する抗体、抗線維芽細胞増殖因子抗体等が挙げら
れる。これらの抗体はポリクローナルなものでも、モノ
クローナルなものでもよい。

【００２３】抗フィブロネクチンフラグメント抗体の例
としては、上記のＣ−２７７を認識するモノクローナル
抗体であるＦＮ１２−８（宝酒造社製）、あるいは上記
のＨ−２９６を認識するモノクローナル抗体であるフィ
ブロネクチンモノクローナル抗体クローン３Ｅ１（ベー
リンガー・マンハイム社製）がある。これらの抗体がＨ
ＩＶの細胞への感染を抑制する作用を示すかどうかは、
上記された機能性物質のＨＩＶ感染への関与を確認する
操作において、ＨＩＶの添加前に該機能性物質によって
被覆された容器を試験しようとする抗体で処理するか、
あるいは細胞の添加時に抗体を添加することによってＨ
ＩＶ感染への影響を調べ、確認することができる。ま
た、フィブロネクチン、および線維芽細胞増殖因子はと
もにヘパリン結合活性を有しており、また、フィブロネ
クチンが有するレトロウイルス結合活性はこのヘパリン
結合活性と関連していることが１９９５年１０月５日に
国際公開されたＷＯ９５／２６２００号公報に記載さ
れている。ヘパリン、およびヘパリン断片の存在下にお
いてはレトロウイルスに属するＨＩＶと上記の機能性物
質との結合が阻害され、この結果ＨＩＶの細胞への感染
が制御される。

【００２４】上記のように感染に関与する機能性物質に
特異的に結合する物質を利用するほか、該機能性物質の
断片を利用することによってもＨＩＶの細胞への感染を
抑制することが可能である。このような断片としては上
記の機能性物質の有するＨＩＶおよび細胞への結合活性
に関与する領域のうちの一方のみを失った断片が使用で
きる。該断片はＨＩＶと感染に関与する機能性物質との
結合、あるいは感染に関与する機能性物質と標的細胞と
の結合に対してそれぞれ拮抗作用を示し、ＨＩＶの細胞
への感染を抑制する。これらの断片の製造にあたっては
上記の機能性物質の構造と機能に関する情報を利用する
ことができる。例えば、フィブロネクチンの細胞との結
合に関与する領域についてはジャーナル・オブ・バイオ
ロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）第２５８
巻、第１０１９３〜１０１９６頁（１９８３）に、また
フィブロネクチンのヘパリンとの結合に関与する領域に
ついてはＷＯ８９／０１９４２号公報にそれぞれ記載
されている。また、線維芽細胞増殖因子の細胞、および
ヘパリンとの結合に関与する領域に関してはプロシーデ
ィングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンス・オブ・ザ・ＵＳＡ（Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA）、第８５巻、第２３２４〜２３２８頁（１９８
８）にそれぞれ記載されている。

【００２５】本発明に使用される上記の機能性物質の断
片は、これらの情報をもとに天然より得られた該機能性
物質より作製するか、あるいはそれをコードする遺伝子
を利用して遺伝子工学的に作製することができる。ま
た、本発明の別の好ましい実施態様は、複製能を欠損し
たＨＩＶベクターを用いた細胞への遺伝子導入を上記の
機能性物質の存在下に行い、遺伝子導入効率を上昇させ
るというものである。複製能欠損ＨＩＶベクターとして
は、例えば、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベス
ティゲーション（Jounal of ClinicalInvestigatio
n）、第８８巻、第１０４３〜１０４７頁（１９９１）
に記載のベクター等が使用できる。該ベクターは複製
能、すなわち感染性ウイルス粒子の生産能を欠損してい
るために安全性が高く、またＣＤ４発現細胞に高い親和
性を有しており、特にＨＩＶ感染症であるエイズの遺伝
子治療に有望である。

【００２６】本発明により細胞に導入される遺伝子とし
ては、特に限定するものではないが、エイズの治療を目
的とする場合には、抗ＨＩＶ物質をコードするものが使
用でき、アンチセンス核酸、リボザイム、デコイ等の核
酸をコードする遺伝子、あるいはトランスドミナントタ
ンパク（transdominant protein)、細胞内抗体（intrac
ellular antibody）等のタンパクをコードする遺伝子が
使用できる。

【００２７】本明細書に記載の「アンチセンス核酸」と
は、ＨＩＶ由来のＲＮＡ（ゲノムＲＮＡおよびｍＲＮ
Ａ）と相補的な塩基配列を有し、これらと２本鎖を形成
することによって該ＲＮＡにコードされる遺伝子情報の
発現（転写、翻訳）を抑制するものを言う。ＨＩＶの増
殖抑制に有効なアンチセンス核酸としてはｔａｔ遺伝子
［ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Nucl. Acids Re
s.）第１９巻、第３３５９〜３３６８頁（１９９
１）］、あるいはｒｅｖ遺伝子［プロシーディングス・
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス
・オブ・ザ・ＵＳＡ（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）、
第８６巻、第４２４４〜４２４８頁（１９８９）］に関
するものが知られている。

【００２８】また、「リボザイム」とは、特定のＲＮＡ
塩基配列を認識して切断する活性を有するＲＮＡ分子を
言い、該配列を有するＲＮＡにコードされる遺伝情報の
発現を阻害する。リボザイムは標的とするＲＮＡの塩基
配列より設計可能であり、例えば、ハンマ−ヘッド型リ
ボザイムの場合にはフェブス・レターズ（FEBS Letter
s）、第２２８巻、第２２８−２３０頁（１９８８）に
記載の方法によって設計することができる。また、ハン
マ−ヘッド型リボザイムに限らず、ヘアピン型、デルタ
型リボザイム等、特定の塩基配列を有するＲＮＡを切断
し、そこにコードされる遺伝情報の発現を阻害するもの
であれば本明細書で言うリボザイムに含まれる。抗ＨＩ
Ｖ活性を有するリボザイムとしてはｇａｇ遺伝子に対す
るハンマ−ヘッド型リボザイム［サイエンス（Scienc
e）、第２４７巻、第１２２２〜１２２５頁（１９９
０）］や５'リーダー配列に対するヘアピン型リボザイ
ム［プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ＵＳＡ（Proc.
Natl. Acad. Sci. USA）、第８９巻、第１０８０２〜１
０８０６頁（１９９２）］について抗ＨＩＶ活性が報告
されている。

【００２９】「デコイ」とは、ＲＮＡ上に存在する活性
化タンパク結合部位と同じ塩基配列を有し、この活性化
タンパクに対して「おとり」として働くＲＮＡ分子であ
る。ＨＩＶの遺伝子発現においてはＲＮＡ上のＴＡＲ部
位にＴａｔタンパクが、またＲＲＥ部位にＲｅｖタンパ
クが結合することが重要であり、ＴＡＲ配列［セル（Ce
ll）、第６３巻、第６０１〜６０８頁（１９９０）］あ
るいはＲＲＥ配列［ニュー・バイオロジスト（New Biol
ogist）、第４巻、第６６〜７４頁（１９９２）］を有
するデコイが抗ＨＩＶ活性を示すことが知られている。
「トランスドミナントタンパク」とはＲＮＡ上の特定の
塩基配列を認識して結合する活性化タンパク（上記Ｔａ
ｔタンパクやＲｅｖタンパク等）の変異タンパクであ
り、ＲＮＡへの結合能力は有するが遺伝子の発現を活性
化する能力を失ったものである。該タンパクがＨＩＶ由
来のＲＮＡの活性化タンパク結合部位（上記のＴＡＲ部
位やＲＲＥ部位等）に結合することにより、正常な活性
化タンパクの結合を妨げ、ＨＩＶ遺伝子の発現を抑制す
る。Ｒｅｖタンパクの変異タンパクを利用して感染性Ｈ
ＩＶ粒子の産生を抑制する例がジャーナル・オブ・エク
スペリメンタル・メディシン（Jounal of Experimental
Medicine）、第１７６巻、第１１９７〜１２０１頁
（１９９２）に報告されている。

【００３０】「細胞内抗体」とは細胞内に発現される１
本鎖ペプチドからなる抗体分子であり、ＨＩＶの構成タ
ンパクを特異的に認識するものを発現させることでＨＩ
Ｖ遺伝子の発現や感染性ウイルス粒子の産生を阻害する
ことができる。ＨＩＶのエンベロープタンパクであるｇ
ｐ１２０に対する細胞内抗体は感染性ウイルス粒子の産
生抑制効果を有している［プロシーディングス・オブ・
ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ
・ザ・ＵＳＡ（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）、第９０
巻、第７８８９〜７８９３頁（１９９３）］。

【００３１】上記した種々の抗ＨＩＶ物質をコードする
遺伝子は、これらの遺伝子の発現を制御するのに適当な
プロモーター、典型的には外来プロモーターの制御下
で、組換えＨＩＶベクター内に導入することができる。
また必要に応じてプロモーター以外の発現制御因子、例
えばターミネーター配列やエンハンサー配列を付加して
もよい。さらに遺伝子が導入された細胞の選択を可能と
するようなマーカー遺伝子を同時に導入することも可能
である。該ベクターに導入される遺伝子は天然由来のも
の、人為的に作製されたもの（化学的合成、遺伝子増幅
等）、あるいはこれらの遺伝子がライゲーションや当該
技術分野で知られている他の手段によって結合されたも
ののいずれであってもかまわない。

【００３２】本発明の、ＨＩＶ感染に関与する機能性物
質または該機能性物質を制御する物質を有効成分とする
細胞のＨＩＶ感染制御用組成物は、自体公知の方法によ
り、上記したような当該機能物質または当該機能性物質
を制御する物質を、適当な液体ないしは固体の担体、例
えば、デンプン、乳糖、白糖、マンニト、カルボキシメ
チルセルロース、無機塩等や、これらの溶液、生理食塩
水、注射用蒸留水と合し、液体ないしは固体の組成物と
して調製することができる。該組成物を製剤とする場合
には、経口剤や、注射剤、点滴用剤等の非経口剤とする
ことができる。その調製にあたっては、必要に応じて、
溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、
粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳
剤等の液剤とする。また、これを使用前に適当な担体の
添加によって液状となし得る乾燥品とすることもでき
る。また、組成物における機能性物質を制御する物質の
量は、特に限定するものではなく、その用途に応じで適
宜選択できる。

【００３３】また、本発明の、ＨＩＶの細胞への感染に
関与する機能性物質と、複製能欠損ＨＩＶウイルスベク
ターとを組み合わせてなるＨＩＶ感染細胞制御用組成物
も、自体公知の方法により、例えば、これらの物質を、
各々、液体ないしは固体の組成物とし、キットとして組
み合わせることにより調製できる。

【００３４】本発明のＨＩＶ感染に関与する機能性物質
の存在下で組換えＨＩＶベクターを標的細胞に感染させ
ることにより、該遺伝子が導入された細胞を効率よく取
得することができる。該ベクター中に導入されている遺
伝子は標的細胞の染色体ＤＮＡ中に組み込まれ、該細胞
中で安定に発現することができる。こうして得られた遺
伝子導入細胞を生体に移植することによって、その生体
が罹患している疾病の治療を行う「遺伝子治療」が可能
である。この方法が適用可能な疾病としては、例えば、
血液細胞、特にＴ細胞の機能に異常を伴う疾病が挙げら
れ、上記した理由からエイズの治療への適用が最も期待
される。

【００３５】本発明の組成物および方法を利用してエイ
ズの遺伝子治療を行う場合には次のような方法が使用で
きる。まず、患者あるいは適当なドナーの血液を採取
し、細胞画分を調製する。この際、必要に応じて血液中
のＴ細胞、特に好ましくはＣＤ４陽性Ｔ細胞を精製する
か、あるいはその含有率が高くなるよう濃縮操作を施し
てもよい。上記のＨＩＶ感染に関与する機能性物質の存
在下、得られた細胞集団に抗ＨＩＶ物質をコードする遺
伝子を含有するＨＩＶベクターを感染させ、目的の遺伝
子が導入された細胞を取得することができる。この細胞
は、例えば、静脈内投与のような慣用的な方法によって
患者体内に移植され、導入された抗ＨＩＶ物質の発現に
よってエイズが治癒し、またはその病状が緩和される。

【００３６】本発明においてＨＩＶ感染を制御される細
胞は、ＨＩＶが感染可能な細胞であれば特に限定される
ものではない。ＨＩＶは血液系の細胞の他、血管内皮細
胞、樹枝状突起細胞等に感染すると言われている。ＨＩ
Ｖが高い親和性を有するＣＤ４分子を発現する細胞、特
にＣＤ４陽性のＴ細胞は本発明の方法の実施に適してい
る。ＣＤ４分子を発現する細胞としては、公知方法によ
りＣＤ４分子をコードする遺伝子を導入された細胞も含
有される。また、上記したように、付着細胞も本発明の
方法の適用が望まれる細胞である。このほか上記の機能
性物質が親和性を有する種々の細胞に対して本発明の方
法を適用することが可能であり、さらに、細胞特異的な
親和性を有するリガンドを導入することによって該機能
性物質に細胞選択性を付与することも可能である。

【００３７】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はこれらの実施例の範囲に限定され
るものではない。実施例１ウイルス上清液の調製ＨＩＶ−１を産生する、ＨＴＬＶ−IIIB株に持続感染し
ているＭＯＬＴ−４細胞は１０％ウシ胎児血清（ＦＣ
Ｓ、ギブコ社製）ならびに１００単位／mlのペニシリン
および１００μg／mlのストレプトマイシン（共にギブ
コ社製）を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（フローラ
ボラトリー社製）中で培養した。なお、以降の操作に使
用したＲＰＭＩ−１６４０培地はすべて１００単位／ml
のペニシリンおよび１００μg／mlのストレプトマイシ
ンを含んだものである。ＨＩＶ−１を含有する上清液
は、１０％ＦＣＳを含有する５０mlのＲＰＭＩ−１６
４０培地を入れた培養用フラスコに上記の細胞を接種
し、ＣＯ₂インキュベーター中で５日間培養した後に採
集して調製した。採集した培地上清を０．４５μｍのフ
ィルター（ミリポア社製）でろ過してウイルス上清液ス
トックとし、使用するまでは−８０℃で保存した。

【００３８】上清液のウイルス感染価はＭＴ−４細胞
［サイエンス（Science）、第２２９巻、第５６３〜５
６６頁（１９８５）］を使用して測定した。すなわち、
９６ウエルの組織培養プレート（ファルコン社製）中に
１ウエルあたりに３×１０⁴個のＭＴ−４細胞を含むＲ
ＰＭＩ−１６４０培地１００μlを添加し、さらに、系
列希釈したウイルス上清液１００μlずつを各ウエルに
加えた。これをＣＯ₂インキュベーター中、３７℃で５
日間インキュベートした後、各ウエルにおける細胞変性
効果（ＣＰＥ）を観察し、Ｂｅｈｒｅｎｓ−Ｋａｒｂｅ
ｒ法により上清液中のウイルス感染価（ＴＣＩＤ₅₀／m
l）を算出した。本発明において使用されたＨＩＶ−
１ウイルス上清液のストックは１×１０^5.5ＴＣＩＤ₅₀
／mlの力価を有していた。

【００３９】実施例２フィブロネクチン由来ポリペプチドの調製ヒトフィブロネクチン由来のポリペプチド、Ｈ−２７１
（配列表の配列番号５にそのアミノ酸配列を示す）は該
ポリペプチドをコードするＤＮＡを含む組換えプラスミ
ド、ｐＨＤ１０１を含有する、Escherichia coli Ｈ
Ｂ１０１／ｐＨＤ１０１（ＦＥＲＭＢＰ−２２６４）
より、米国特許第５,１９８,４２３号に記載の方法によ
り調製した。また、ポリペプチドＣＨ−２７１（配列表
の配列番号６にそのアミノ酸配列を示す）は以下に示す
方法により調製した。すなわち、Escherichia coli
ＨＢ１０１／ｐＣＨ１０１（ＦＥＲＭＢＰ−２７９
９）を上記の公報に記載の方法で培養し、該培養物より
ＣＨ−２７１を得た。また、ポリペプチドＣＨ−２９６
（配列表の配列番号１にそのアミノ酸配列を示す）は以
下に示す方法により調製した。すなわち、Escherichia
coli ＨＢ１０１／ｐＣＨ１０２（ＦＥＲＭＢＰ−
２８００）を上記の公報に記載の方法で培養し、該培養
物よりＣＨ−２９６を得た。さらに、ポリペプチドＣ−
２７４（配列表の配列番号７にそのアミノ酸配列を示
す）は以下に示す方法により調製した。すなわち、Esch
erichia coli ＪＭ１０９／ｐＴＦ７２２１（ＦＥＲ
ＭＢＰ−１９１５）を用い、米国特許第５,１０２,９
８８号に記載の方法で培養し、該培養物よりＣ−２７４
を得た。

【００４０】実施例３Ｃ−ＦＧＦ・Ａの調製ポリペプチドＣ−ＦＧＦ・Ａ（配列表の配列番号８にそ
のアミノ酸配列を示す）は以下に示す方法に従って調製
した。すなわち、上記ポリペプチドをコードするＤＮＡ
を含有する組み換えプラスミド、ｐＹＭＨ−ＣＦ・Ａを
含む、Escherichia coli ＪＭ１０９／ｐＹＭＨ−Ｃ
Ｆ・Ａ（ＦＥＲＭＢＰ−５２７８）を１００μg／ml
のアンピシリンを含むＬ−培地５ml中、３７℃で８時間
培養した。この前培養液を１００μg／mlのアンピシリ
ン、１mＭのＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオガ
ラクトピラノシド）を含むＬ−培地５００mlに接種し、
３７℃で一夜培養した後集菌した。得られた菌体を１m
ＭＰＭＳＦ（フェニルメタンスルホニウムフルオリ
ド）、０．０５％ノニデットＰ−４０を含む１０mlの
ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）に懸濁し、超音波処理
を行って菌体を破砕した後、遠心分離を行って上清を得
た。この上清の２６０nmの吸収４０００に対して１mlの
５％ポリエチレンイミンを加えた後、遠心分離して上
清を得た。この上清をあらかじめＰＢＳで平衡化したヘ
パリン−ハイトラップカラム（ファルマシア社製）にか
け、ＰＢＳで非吸着の画分を洗浄した後、０．５Ｍから
２ＭのＮａＣｌ濃度勾配を持つＰＢＳで吸着画分の溶出
を行った。溶出液をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分析すると約４７kd
のポリペプチドを含む２つの画分が存在していたが、こ
のうちの高ＮａＣｌ濃度で溶出された方の画分を集めて
１．５ＭＮａＣｌを含むＰＢＳで平衡化したスーパー
ロース６カラム（ファルマシア社製）にかけた。溶出液
をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、約４７kdのポリペプ
チドを含む画分を集めて精製Ｃ−ＦＧＦ・Ａを調製し、
以下の操作に使用した。

【００４１】実施例４Ｃ２７７−ＣｏｌＶの調製ポリペプチドＣ２７７−ＣｏｌＶ（配列表の配列番号９
にそのアミノ酸配列を示す）は以下に示す操作によって
精製した。すなわち、上記ポリペプチドをコードするＤ
ＮＡを含有する組み換えプラスミド、ｐＴＦ７５２０Ｃ
ｏｌＶを含む、Escherichia coli ＪＭ１０９／ｐＴ
Ｆ７５２０ＣｏｌＶ（ＦＥＲＭＢＰ−５２７７）を１
００μg／mlのアンピシリンを含むＬ−培地５ml中、３
７℃で６．５時間培養した。この前培養液を１００μg
／mlのアンピシリンを含むＬ−培地５００mlに接種し、
３７℃で培養した。６６０nmにおける吸光度が０．６に
達した時点でＩＰＴＧを終濃度１mＭになるように添加
して一夜培養した後に集菌した。得られた菌体を１mＭ
ＥＤＴＡ、０．０５％ノニデットＰ−４０、２mＭ
ＰＭＳＦを含む１０mlのＰＢＳに懸濁し、超音波処理
を１０分間行って菌体を破砕した。この菌体破砕液を遠
心分離して得た上清をＰＢＳで平衡化したリソースＱカ
ラム（ファルマシア社製）にかけ、目的のポリペプチド
を含む非吸着画分を得た。この画分をＰＢＳで平衡化し
たヘパリン−ハイトラップカラムにかけ、ＰＢＳで非吸
着の画分を洗浄した後、０Ｍから０．５ＭのＮａＣｌ濃
度勾配を持つＰＢＳで吸着画分の溶出を行った。溶出液
をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、４８kdのポリペプチ
ドを含む画分を集めて精製Ｃ２７７−ＣｏｌＶを調製
し、以下の操作に使用した。

【００４２】実施例５ＣｏｌＶの調製まず、ポリペプチドＣｏｌＶ（配列表の配列番号１０に
そのアミノ酸配列を示す）をイー・コリを宿主として発
現するためのプラスミドを構築した。Escherichia col
i ＨＢ１０１／ｐＴＦ７５２０ＣｏｌＶ（ＦＥＲＭ
ＢＰ−５２７７）を培養し、得られた菌体よりアルカリ
−ＳＤＳ法によってプラスミドｐＴＦ７５２０ＣｏｌＶ
を調製した。このプラスミドをＮｃｏＩ、ＢａｍＨＩ
（ともに宝酒造社製）で消化後、アガロースゲル電気泳
動を行い、約０．５８kbのＤＮＡ断片をゲルより回収し
た。これをあらかじめＮｃｏＩとＢａｍＨＩで消化して
おいたプラスミドベクターｐＥＴ８Ｃ（ノバジェン社
製）と混合してライゲーションを行った。得られた組換
えプラスミドをイー・コリＢＬ２１に導入して得られた
形質転換体よりプラスミドを調製し、上記の約０．５８
kbＤＮＡ断片１分子のみが含まれたものを選び、これを
プラスミドｐＥＴＣｏｌＶと命名した。

【００４３】上記のプラスミドｐＥＴＣｏｌＶで形質転
換されたイー・コリＢＬ２１、Escherichia coli Ｂ
Ｌ−２１／ｐＥＴＣｏｌＶを５０μg／mlのアンピシリ
ンを含むＬ−培地１０ml中、３７℃で一夜培養した。こ
の前培養液０．２mlを５０μg/mlのアンピシリン、を含
むＬ−培地１００mlに接種し、３７℃で培養した。６０
０nmの吸光度が０．４に達した時点でＩＰＴＧを終濃度
１mＭとなるように添加し、一夜培養した後に集菌し
た。得られた菌体を１mＭＥＤＴＡ、０．０５％ノ
ニデットＰ−４０、１０μg／ml アプロチニン（aprot
inin）、１０μg／ml ロイペプチン（leupeptin）、２
mＭＰＭＳＦを含む５mlのＰＢＳ（リン酸緩衝生理食
塩水）に懸濁し、超音波処理を行って菌体を破砕した
後、遠心分離を行って上清を得た。この上清をＰＢＳで
平衡化したヘパリン−５ＰＷＨＰＬＣカラムにかけ、
ＰＢＳで非吸着の画分を洗浄した後、０．５ＭのＮａＣ
ｌを含むＰＢＳで吸着画分の溶出を行った。溶出液をＳ
ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分析した
結果、ほぼ単一な約１８kdのポリペプチドが確認され
た。こうして得られた精製ＣｏｌＶを以下の操作に使用
した。

【００４４】実施例６プレートのポリペプチドによる被覆レトロウイルスの細胞への感染実験に使用するプレート
（９６ウエルの組織培養プレート、ファルコン社製）は
以下に示す操作にしたがってポリペプチドで被覆した。
すなわち、上記の実施例に記載の各種ポリペプチドを２
５．６μg／mlとなるようにＰＢＳに溶解した溶液を１
ウエルあたり５０μlずつ添加し、室温で２．５時間イ
ンキュベートした。次にポリペプチド溶液を２％ウシ
血清アルブミン（ＢＳＡ、ベーリンガー・マンハイム社
製）を含むＰＢＳ１００μlに交換してさらに１時間、
室温でインキュベートした後、ＰＢＳ２００μlでウエ
ルを３回洗浄した。ＢＳＡで被覆した対照プレートは、
上記の操作のうちポリペプチド溶液とのインキュベーシ
ョンを省略して作製した。なお、以降に示す実施例での
ウイルス感染実験においては、特に断らない限り上記の
９６ウエルの組織培養プレートを使用した。

【００４５】実施例７ポリペプチドでコートされたプレート上でのＨＩＶ−１
の感染（１）ＣＨ−２９６、Ｈ−２７１、Ｃ−２７４でそれぞれ被覆
されたプレート中でのＨＩＶ−１ウイルスの感染を以下
に示す方法によって調べた。すなわち、上記のポリペプ
チド被覆プレート、ＢＳＡで被覆した対照プレート、な
らびにポリペプチドで被覆しないプレートのそれぞれに
正確に段階希釈したＨＩＶ−１ウイルス上清液を５０μ
l／ウエルずつ加え、ＣＯ₂インキュベーター中で３７
℃、３０分間プレインキュベーションした後、２００μ
lのＰＢＳでウエルを３回洗浄した。このプレートに
１．５×１０⁵ｃｅｌｌ/mlに調製したＭＴ−４細胞を２
００μl／ウエルずつ加え、ＣＯ₂インキュベーター中で
３７℃、５日間培養した。培養終了後、各プレートにつ
いて、ＨＩＶ−１の増殖によるＣＰＥ（細胞変性効果）
を顕微鏡下で観察し、ウイルスの感染効率を評価した。
表１に実験結果を示す。表中、−はＣＰＥが観察されな
いことを、±はわずかなＣＰＥが認められることを、＋
は中程度のＣＰＥが認められることを、また＋＋は強い
ＣＰＥが認められることをそれぞれ示す。また、表中Ｎ
Ｔはポリペプチドで被覆されていないプレートでの実験
結果を示す。

【００４６】

【表１】

【００４７】表１に示されるように、ＣＨ−２９６で被
覆されたプレートでは対照プレート（ＢＳＡ被覆プレー
ト）に比べて低濃度のウイルスで感染が起こっており、
該ポリペプチドがＨＩＶの感染を促進する作用を有する
ことが確認された。また、Ｈ−２７１、Ｃ−２７４でも
ごくわずかな感染の促進が認められた。

【００４８】実施例８ポリペプチドでコートされたプレート上でのＨＩＶ−１
の感染（２）実施例７で使用されたポリペプチドに加え、ＣＨ−２７
４、ＦＧＦ（ベクトンディッキンソン社製）、Ｃ−ＦＧ
Ｆ・Ａ、ＣｏｌＶ、Ｃ277−ＣｏｌＶの各ポリペプチド
で被覆されたプレート中でのＨＩＶ−１ウイルスの感染
を実施例７同様の方法で調べた。また、１０^-1倍希釈、
１０^-2倍希釈のウイルス上清液を添加したウエルより培
養液を採取し、その上清中の逆転写酵素活性を感染症学
雑誌、第６８巻、第９２３〜９３１頁に記載の方法で測
定した。表２にＣＰＥ観察の結果を、また、表３に逆転
写酵素活性測定の結果をそれぞれ示す。

【００４９】

【表２】

【００５０】

【表３】

【００５１】表２よりＣＨ−２９６、ＦＧＦ、Ｃ−ＦＧ
Ｆ・ＡにＨＩＶ感染促進作用が認められた。また、Ｈ−
２７１、Ｃ−２７４もわずかながら同様の作用を有して
いるように思われる。一方、表３に示された逆転写酵素
活性はＣＨ−２９６、ＦＧＦ、Ｃ−ＦＧＦ・Ａの３つの
ポリペプチド被覆プレートで顕著に高く、これらのポリ
ペプチドがＨＩＶ感染促進作用を有していることが確認
された。

【００５２】

【発明の効果】本発明により、ＨＩＶ感染を人為的に制
御する方法が提供される。また複製能欠損ＨＩＶベクタ
ーによる細胞への遺伝子導入を制御する方法が提供され
る。特に抗ＨＩＶ性物質をコードする遺伝子を組み込ん
だベクターの使用により、ＨＩＶ感染細胞の制御が可能
となり、効率的なＨＩＶ感染症の治療方法が提供され
た。

【００５３】

【配列表】

【００５４】配列番号：１配列の長さ：５７４配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列：ＰｒｏＴｈｒＡｓｐＬｅｕＡｒｇＰｈｅＴｈｒＡｓｎＩｌｅ
ＧｌｙＰｒｏＡｓｐＴｈｒＭｅｔＡｒｇ１５
１０１５ＶａｌＴｈｒＴｒｐＡｌａＰｒｏＰｒｏＰｒｏＳｅｒＩｌｅ
ＡｓｐＬｅｕＴｈｒＡｓｎＰｈｅＬｅｕ２０
２５３０ＶａｌＡｒｇＴｙｒＳｅｒＰｒｏＶａｌＬｙｓＡｓｎＧｌｕ
ＧｌｕＡｓｐＶａｌＡｌａＧｌｕＬｅｕ３５
４０４５ＳｅｒＩｌｅＳｅｒＰｒｏＳｅｒＡｓｐＡｓｎＡｌａＶａｌ
ＶａｌＬｅｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕ５０
５５６０ＰｒｏＧｌｙＴｈｒＧｌｕＴｙｒＶａｌＶａｌＳｅｒＶａｌ
ＳｅｒＳｅｒＶａｌＴｙｒＧｌｕＧｌｎ６５
７０７５ＨｉｓＧｌｕＳｅｒＴｈｒＰｒｏＬｅｕＡｒｇＧｌｙＡｒｇ
ＧｌｎＬｙｓＴｈｒＧｌｙＬｅｕＡｓｐ８０
８５９０ＳｅｒＰｒｏＴｈｒＧｌｙＩｌｅＡｓｐＰｈｅＳｅｒＡｓｐ
ＩｌｅＴｈｒＡｌａＡｓｎＳｅｒＰｈｅ９５
１００１０５ＴｈｒＶａｌＨｉｓＴｒｐＩｌｅＡｌａＰｒｏＡｒｇＡｌａ
ＴｈｒＩｌｅＴｈｒＧｌｙＴｙｒＡｒｇ１１０
１１５１２０ＩｌｅＡｒｇＨｉｓＨｉｓＰｒｏＧｌｕＨｉｓＰｈｅＳｅｒ
ＧｌｙＡｒｇＰｒｏＡｒｇＧｌｕＡｓｐ１２５
１３０１３５ＡｒｇＶａｌＰｒｏＨｉｓＳｅｒＡｒｇＡｓｎＳｅｒＩｌｅ
ＴｈｒＬｅｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＴｈｒ１４０
１４５１５０ＰｒｏＧｌｙＴｈｒＧｌｕＴｙｒＶａｌＶａｌＳｅｒＩｌｅ
ＶａｌＡｌａＬｅｕＡｓｎＧｌｙＡｒｇ１５５
１６０１６５ＧｌｕＧｌｕＳｅｒＰｒｏＬｅｕＬｅｕＩｌｅＧｌｙＧｌｎ
ＧｌｎＳｅｒＴｈｒＶａｌＳｅｒＡｓｐ１７０
１７５１８０ＶａｌＰｒｏＡｒｇＡｓｐＬｅｕＧｌｕＶａｌＶａｌＡｌａ
ＡｌａＴｈｒＰｒｏＴｈｒＳｅｒＬｅｕ１８５
１９０１９５ＬｅｕＩｌｅＳｅｒＴｒｐＡｓｐＡｌａＰｒｏＡｌａＶａｌ
ＴｈｒＶａｌＡｒｇＴｙｒＴｙｒＡｒｇ２００
２０５２１０ＩｌｅＴｈｒＴｙｒＧｌｙＧｌｕＴｈｒＧｌｙＧｌｙＡｓｎ
ＳｅｒＰｒｏＶａｌＧｌｎＧｌｕＰｈｅ２１５
２２０２２５ＴｈｒＶａｌＰｒｏＧｌｙＳｅｒＬｙｓＳｅｒＴｈｒＡｌａ
ＴｈｒＩｌｅＳｅｒＧｌｙＬｅｕＬｙｓ２３０
２３５２４０ＰｒｏＧｌｙＶａｌＡｓｐＴｙｒＴｈｒＩｌｅＴｈｒＶａｌ
ＴｙｒＡｌａＶａｌＴｈｒＧｌｙＡｒｇ２４５
２５０２５５ＧｌｙＡｓｐＳｅｒＰｒｏＡｌａＳｅｒＳｅｒＬｙｓＰｒｏ
ＩｌｅＳｅｒＩｌｅＡｓｎＴｙｒＡｒｇ２６０
２６５２７０ＴｈｒＧｌｕＩｌｅＡｓｐＬｙｓＰｒｏＳｅｒＭｅｔＡｌａ
ＩｌｅＰｒｏＡｌａＰｒｏＴｈｒＡｓｐ２７５
２８０２８５ＬｅｕＬｙｓＰｈｅＴｈｒＧｌｎＶａｌＴｈｒＰｒｏＴｈｒ
ＳｅｒＬｅｕＳｅｒＡｌａＧｌｎＴｒｐ２９０
２９５３００ＴｈｒＰｒｏＰｒｏＡｓｎＶａｌＧｌｎＬｅｕＴｈｒＧｌｙ
ＴｙｒＡｒｇＶａｌＡｒｇＶａｌＴｈｒ３０５
３１０３１５ＰｒｏＬｙｓＧｌｕＬｙｓＴｈｒＧｌｙＰｒｏＭｅｔＬｙｓ
ＧｌｕＩｌｅＡｓｎＬｅｕＡｌａＰｒｏ３２０
３２５３３０ＡｓｐＳｅｒＳｅｒＳｅｒＶａｌＶａｌＶａｌＳｅｒＧｌｙ
ＬｅｕＭｅｔＶａｌＡｌａＴｈｒＬｙｓ３３５
３４０３４５ＴｙｒＧｌｕＶａｌＳｅｒＶａｌＴｙｒＡｌａＬｅｕＬｙｓ
ＡｓｐＴｈｒＬｅｕＴｈｒＳｅｒＡｒｇ３５０
３５５３６０ＰｒｏＡｌａＧｌｎＧｌｙＶａｌＶａｌＴｈｒＴｈｒＬｅｕ
ＧｌｕＡｓｎＶａｌＳｅｒＰｒｏＰｒｏ３６５
３７０３７５ＡｒｇＡｒｇＡｌａＡｒｇＶａｌＴｈｒＡｓｐＡｌａＴｈｒ
ＧｌｕＴｈｒＴｈｒＩｌｅＴｈｒＩｌｅ３８０
３８５３９０ＳｅｒＴｒｐＡｒｇＴｈｒＬｙｓＴｈｒＧｌｕＴｈｒＩｌｅ
ＴｈｒＧｌｙＰｈｅＧｌｎＶａｌＡｓｐ３９５
４００４０５ＡｌａＶａｌＰｒｏＡｌａＡｓｎＧｌｙＧｌｎＴｈｒＰｒｏ
ＩｌｅＧｌｎＡｒｇＴｈｒＩｌｅＬｙｓ４１０
４１５４２０ＰｒｏＡｓｐＶａｌＡｒｇＳｅｒＴｙｒＴｈｒＩｌｅＴｈｒ
ＧｌｙＬｅｕＧｌｎＰｒｏＧｌｙＴｈｒ４２５
４３０４３５ＡｓｐＴｙｒＬｙｓＩｌｅＴｙｒＬｅｕＴｙｒＴｈｒＬｅｕ
ＡｓｎＡｓｐＡｓｎＡｌａＡｒｇＳｅｒ４４０
４４５４５０ＳｅｒＰｒｏＶａｌＶａｌＩｌｅＡｓｐＡｌａＳｅｒＴｈｒ
ＡｌａＩｌｅＡｓｐＡｌａＰｒｏＳｅｒ４５５
４６０４６５ＡｓｎＬｅｕＡｒｇＰｈｅＬｅｕＡｌａＴｈｒＴｈｒＰｒｏ
ＡｓｎＳｅｒＬｅｕＬｅｕＶａｌＳｅｒ４７０
４７５４８０ＴｒｐＧｌｎＰｒｏＰｒｏＡｒｇＡｌａＡｒｇＩｌｅＴｈｒ
ＧｌｙＴｙｒＩｌｅＩｌｅＬｙｓＴｙｒ４８５
４９０４９５ＧｌｕＬｙｓＰｒｏＧｌｙＳｅｒＰｒｏＰｒｏＡｒｇＧｌｕ
ＶａｌＶａｌＰｒｏＡｒｇＰｒｏＡｒｇ５００
５０５５１０ＰｒｏＧｌｙＶａｌＴｈｒＧｌｕＡｌａＴｈｒＩｌｅＴｈｒ
ＧｌｙＬｅｕＧｌｕＰｒｏＧｌｙＴｈｒ５１５
５２０５２５ＧｌｕＴｙｒＴｈｒＩｌｅＴｙｒＶａｌＩｌｅＡｌａＬｅｕ
ＬｙｓＡｓｎＡｓｎＧｌｎＬｙｓＳｅｒ５３０
５３５５４０ＧｌｕＰｒｏＬｅｕＩｌｅＧｌｙＡｒｇＬｙｓＬｙｓＴｈｒ
ＡｓｐＧｌｕＬｅｕＰｒｏＧｌｎＬｅｕ５４５
５５０５５５ＶａｌＴｈｒＬｅｕＰｒｏＨｉｓＰｒｏＡｓｎＬｅｕＨｉｓ
ＧｌｙＰｒｏＧｌｕＩｌｅＬｅｕＡｓｐ５６０
５６５５７０ＶａｌＰｒｏＳｅｒＴｈｒ

【００５５】配列番号：２配列の長さ：２７７配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列：ＰｒｏＴｈｒＡｓｐＬｅｕＡｒｇＰｈｅＴｈｒＡｓｎＩｌｅ
ＧｌｙＰｒｏＡｓｐＴｈｒＭｅｔＡｒｇ１５
１０１５ＶａｌＴｈｒＴｒｐＡｌａＰｒｏＰｒｏＰｒｏＳｅｒＩｌｅ
ＡｓｐＬｅｕＴｈｒＡｓｎＰｈｅＬｅｕ２０
２５３０ＶａｌＡｒｇＴｙｒＳｅｒＰｒｏＶａｌＬｙｓＡｓｎＧｌｕ
ＧｌｕＡｓｐＶａｌＡｌａＧｌｕＬｅｕ３５
４０４５ＳｅｒＩｌｅＳｅｒＰｒｏＳｅｒＡｓｐＡｓｎＡｌａＶａｌ
ＶａｌＬｅｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＬｅｕ５０
５５６０ＰｒｏＧｌｙＴｈｒＧｌｕＴｙｒＶａｌＶａｌＳｅｒＶａｌ
ＳｅｒＳｅｒＶａｌＴｙｒＧｌｕＧｌｎ６５
７０７５ＨｉｓＧｌｕＳｅｒＴｈｒＰｒｏＬｅｕＡｒｇＧｌｙＡｒｇ
ＧｌｎＬｙｓＴｈｒＧｌｙＬｅｕＡｓｐ８０
８５９０ＳｅｒＰｒｏＴｈｒＧｌｙＩｌｅＡｓｐＰｈｅＳｅｒＡｓｐ
ＩｌｅＴｈｒＡｌａＡｓｎＳｅｒＰｈｅ９５
１００１０５ＴｈｒＶａｌＨｉｓＴｒｐＩｌｅＡｌａＰｒｏＡｒｇＡｌａ
ＴｈｒＩｌｅＴｈｒＧｌｙＴｙｒＡｒｇ１１０
１１５１２０ＩｌｅＡｒｇＨｉｓＨｉｓＰｒｏＧｌｕＨｉｓＰｈｅＳｅｒ
ＧｌｙＡｒｇＰｒｏＡｒｇＧｌｕＡｓｐ１２５
１３０１３５ＡｒｇＶａｌＰｒｏＨｉｓＳｅｒＡｒｇＡｓｎＳｅｒＩｌｅ
ＴｈｒＬｅｕＴｈｒＡｓｎＬｅｕＴｈｒ１４０
１４５１５０ＰｒｏＧｌｙＴｈｒＧｌｕＴｙｒＶａｌＶａｌＳｅｒＩｌｅ
ＶａｌＡｌａＬｅｕＡｓｎＧｌｙＡｒｇ１５５
１６０１６５ＧｌｕＧｌｕＳｅｒＰｒｏＬｅｕＬｅｕＩｌｅＧｌｙＧｌｎ
ＧｌｎＳｅｒＴｈｒＶａｌＳｅｒＡｓｐ１７０
１７５１８０ＶａｌＰｒｏＡｒｇＡｓｐＬｅｕＧｌｕＶａｌＶａｌＡｌａ
ＡｌａＴｈｒＰｒｏＴｈｒＳｅｒＬｅｕ１８５
１９０１９５ＬｅｕＩｌｅＳｅｒＴｒｐＡｓｐＡｌａＰｒｏＡｌａＶａｌ
ＴｈｒＶａｌＡｒｇＴｙｒＴｙｒＡｒｇ２００
２０５２１０ＩｌｅＴｈｒＴｙｒＧｌｙＧｌｕＴｈｒＧｌｙＧｌｙＡｓｎ
ＳｅｒＰｒｏＶａｌＧｌｎＧｌｕＰｈｅ２１５
２２０２２５ＴｈｒＶａｌＰｒｏＧｌｙＳｅｒＬｙｓＳｅｒＴｈｒＡｌａ
ＴｈｒＩｌｅＳｅｒＧｌｙＬｅｕＬｙｓ２３０
２３５２４０ＰｒｏＧｌｙＶａｌＡｓｐＴｙｒＴｈｒＩｌｅＴｈｒＶａｌ
ＴｙｒＡｌａＶａｌＴｈｒＧｌｙＡｒｇ２４５
２５０２５５ＧｌｙＡｓｐＳｅｒＰｒｏＡｌａＳｅｒＳｅｒＬｙｓＰｒｏ
ＩｌｅＳｅｒＩｌｅＡｓｎＴｙｒＡｒｇ２６０
２６５２７０ＴｈｒＧｌｕＩｌｅＡｓｐＬｙｓＰｒｏＳｅｒ２７５

【００５６】配列番号：３配列の長さ：２９６配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro 1 5 10 15 Thr Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr 20 25 30 Gly Tyr Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met 35 40 45 Lys Glu Ile Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser 50 55 60 Gly Leu Met Val Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu 65 70 75 Lys Asp Thr Leu Thr Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr 80 85 90 Leu Glu Asn Val Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala 95 100 105 Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr 110 115 120 Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr 125 130 135 Pro Ile Gln Arg Thr Ile Lys Pro Asp Val Arg Ser Tyr Thr Ile 140 145 150 Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys Ile Tyr Leu Tyr Thr 155 160 165 Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val Ile Asp Ala Ser 170 175 180 Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu Ala Thr Thr 185 190 195 Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile 200 205 210 Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Lys Pro Gly Ser Pro Pro Arg 215 220 225 Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile 230 235 240 Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala 245 250 255 Leu Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys 260 265 270 Thr Asp Glu Leu Pro Gln Leu Val Thr Leu Pro His Pro Asn Leu 275 280 285 His Gly Pro Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser Thr 290 295

【００５７】配列番号：４配列の長さ：１５５配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ala Ala Gly Ser Ile Thr Thr Leu Pro Ala Leu Pro Glu Asp 1 5 10 15 Gly Gly Ser Gly Ala Phe Pro Pro Gly His Phe Lys Asp Pro Lys 20 25 30 Arg Leu Tyr Cys Lys Asn Gly Gly Phe Phe Leu Arg Ile His Pro 35 40 45 Asp Gly Arg Val Asp Gly Val Arg Glu Lys Ser Asp Pro His Ile 50 55 60 Lys Leu Gln Leu Gln Ala Glu Glu Arg Gly Val Val Ser Ile Lys 65 70 75 Gly Val Cys Ala Asn Arg Tyr Leu Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg 80 85 90 Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr Asp Glu Cys Phe Phe Phe Glu 95 100 105 Arg Leu Glu Ser Asn Asn Tyr Asn Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr 110 115 120 Thr Ser Trp Tyr Val Ala Leu Lys Arg Thr Gly Gln Tyr Lys Leu 125 130 135 Gly Ser Lys Thr Gly Pro Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro 140 145 150 Met Ser Ala Lys Ser 155

【００５８】配列番号：５配列の長さ：２７１配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro 1 5 10 15 Thr Ser Leu Ser Ala Gln Trp Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr 20 25 30 Gly Tyr Arg Val Arg Val Thr Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met 35 40 45 Lys Glu Ile Asn Leu Ala Pro Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser 50 55 60 Gly Leu Met Val Ala Thr Lys Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu 65 70 75 Lys Asp Thr Leu Thr Ser Arg Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr 80 85 90 Leu Glu Asn Val Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala 95 100 105 Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr 110 115 120 Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp Ala Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr 125 130 135 Pro Ile Gln Arg Thr Ile Lys Pro Asp Val Arg Ser Tyr Thr Ile 140 145 150 Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr Asp Tyr Lys Ile Tyr Leu Tyr Thr 155 160 165 Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser Ser Pro Val Val Ile Asp Ala Ser 170 175 180 Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser Asn Leu Arg Phe Leu Ala Thr Thr 185 190 195 Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile 200 205 210 Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr Glu Lys Pro Gly Ser Pro Pro Arg 215 220 225 Glu Val Val Pro Arg Pro Arg Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile 230 235 240 Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala 245 250 255 Leu Lys Asn Asn Gln Lys Ser Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys 260 265 270 Thr

【００５９】配列番号：６配列の長さ：５４９配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Pro Thr Asp Leu Arg Phe Thr Asn Ile Gly Pro Asp Thr Met Arg 1 5 10 15 Val Thr Trp Ala Pro Pro Pro Ser Ile Asp Leu Thr Asn Phe Leu 20 25 30 Val Arg Tyr Ser Pro Val Lys Asn Glu Glu Asp Val Ala Glu Leu 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Ser Asp Asn Ala Val Val Leu Thr Asn Leu Leu 50 55 60 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Val Ser Ser Val Tyr Glu Gln 65 70 75 His Glu Ser Thr Pro Leu Arg Gly Arg Gln Lys Thr Gly Leu Asp 80 85 90 Ser Pro Thr Gly Ile Asp Phe Ser Asp Ile Thr Ala Asn Ser Phe 95 100 105 Thr Val His Trp Ile Ala Pro Arg Ala Thr Ile Thr Gly Tyr Arg 110 115 120 Ile Arg His His Pro Glu His Phe Ser Gly Arg Pro Arg Glu Asp 125 130 135 Arg Val Pro His Ser Arg Asn Ser Ile Thr Leu Thr Asn Leu Thr 140 145 150 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Ile Val Ala Leu Asn Gly Arg 155 160 165 Glu Glu Ser Pro Leu Leu Ile Gly Gln Gln Ser Thr Val Ser Asp 170 175 180 Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu 185 190 195 Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg 200 205 210 Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe 215 220 225 Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys 230 235 240 Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg 245 250 255 Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg 260 265 270 Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Met Ala Ile Pro Ala Pro Thr Asp 275 280 285 Leu Lys Phe Thr Gln Val Thr Pro Thr Ser Leu Ser Ala Gln Trp 290 295 300 Thr Pro Pro Asn Val Gln Leu Thr Gly Tyr Arg Val Arg Val Thr 305 310 315 Pro Lys Glu Lys Thr Gly Pro Met Lys Glu Ile Asn Leu Ala Pro 320 325 330 Asp Ser Ser Ser Val Val Val Ser Gly Leu Met Val Ala Thr Lys 335 340 345 Tyr Glu Val Ser Val Tyr Ala Leu Lys Asp Thr Leu Thr Ser Arg 350 355 360 Pro Ala Gln Gly Val Val Thr Thr Leu Glu Asn Val Ser Pro Pro 365 370 375 Arg Arg Ala Arg Val Thr Asp Ala Thr Glu Thr Thr Ile Thr Ile 380 385 390 Ser Trp Arg Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Gly Phe Gln Val Asp 395 400 405 Ala Val Pro Ala Asn Gly Gln Thr Pro Ile Gln Arg Thr Ile Lys 410 415 420 Pro Asp Val Arg Ser Tyr Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Gly Thr 425 430 435 Asp Tyr Lys Ile Tyr Leu Tyr Thr Leu Asn Asp Asn Ala Arg Ser 440 445 450 Ser Pro Val Val Ile Asp Ala Ser Thr Ala Ile Asp Ala Pro Ser 455 460 465 Asn Leu Arg Phe Leu Ala Thr Thr Pro Asn Ser Leu Leu Val Ser 470 475 480 Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile Thr Gly Tyr Ile Ile Lys Tyr 485 490 495 Glu Lys Pro Gly Ser Pro Pro Arg Glu Val Val Pro Arg Pro Arg 500 505 510 Pro Gly Val Thr Glu Ala Thr Ile Thr Gly Leu Glu Pro Gly Thr 515 520 525 Glu Tyr Thr Ile Tyr Val Ile Ala Leu Lys Asn Asn Gln Lys Ser 530 535 540 Glu Pro Leu Ile Gly Arg Lys Lys Thr 545

【００６０】配列番号：７配列の長さ：２７４配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Pro Thr Asp Leu Arg Phe Thr Asn Ile Gly Pro Asp Thr Met Arg 1 5 10 15 Val Thr Trp Ala Pro Pro Pro Ser Ile Asp Leu Thr Asn Phe Leu 20 25 30 Val Arg Tyr Ser Pro Val Lys Asn Glu Glu Asp Val Ala Glu Leu 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Ser Asp Asn Ala Val Val Leu Thr Asn Leu Leu 50 55 60 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Val Ser Ser Val Tyr Glu Gln 65 70 75 His Glu Ser Thr Pro Leu Arg Gly Arg Gln Lys Thr Gly Leu Asp 80 85 90 Ser Pro Thr Gly Ile Asp Phe Ser Asp Ile Thr Ala Asn Ser Phe 95 100 105 Thr Val His Trp Ile Ala Pro Arg Ala Thr Ile Thr Gly Tyr Arg 110 115 120 Ile Arg His His Pro Glu His Phe Ser Gly Arg Pro Arg Glu Asp 125 130 135 Arg Val Pro His Ser Arg Asn Ser Ile Thr Leu Thr Asn Leu Thr 140 145 150 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Ile Val Ala Leu Asn Gly Arg 155 160 165 Glu Glu Ser Pro Leu Leu Ile Gly Gln Gln Ser Thr Val Ser Asp 170 175 180 Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu 185 190 195 Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg 200 205 210 Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe 215 220 225 Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys 230 235 240 Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg 245 250 255 Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg 260 265 270 Thr Glu Ile Asp

【００６１】配列番号：８配列の長さ：４３２配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Pro Thr Asp Leu Arg Phe Thr Asn Ile Gly Pro Asp Thr Met Arg 1 5 10 15 Val Thr Trp Ala Pro Pro Pro Ser Ile Asp Leu Thr Asn Phe Leu 20 25 30 Val Arg Tyr Ser Pro Val Lys Asn Glu Glu Asp Val Ala Glu Leu 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Ser Asp Asn Ala Val Val Leu Thr Asn Leu Leu 50 55 60 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Val Ser Ser Val Tyr Glu Gln 65 70 75 His Glu Ser Thr Pro Leu Arg Gly Arg Gln Lys Thr Gly Leu Asp 80 85 90 Ser Pro Thr Gly Ile Asp Phe Ser Asp Ile Thr Ala Asn Ser Phe 95 100 105 Thr Val His Trp Ile Ala Pro Arg Ala Thr Ile Thr Gly Tyr Arg 110 115 120 Ile Arg His His Pro Glu His Phe Ser Gly Arg Pro Arg Glu Asp 125 130 135 Arg Val Pro His Ser Arg Asn Ser Ile Thr Leu Thr Asn Leu Thr 140 145 150 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Ile Val Ala Leu Asn Gly Arg 155 160 165 Glu Glu Ser Pro Leu Leu Ile Gly Gln Gln Ser Thr Val Ser Asp 170 175 180 Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu 185 190 195 Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg 200 205 210 Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe 215 220 225 Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys 230 235 240 Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg 245 250 255 Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg 260 265 270 Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Met Ala Ala Gly Ser Ile Thr Thr 275 280 285 Leu Pro Ala Leu Pro Glu Asp Gly Gly Ser Gly Ala Phe Pro Pro 290 295 300 Gly His Phe Lys Asp Pro Lys Arg Leu Tyr Cys Lys Asn Gly Gly 305 310 315 Phe Phe Leu Arg Ile His Pro Asp Gly Arg Val Asp Gly Val Arg 320 325 330 Glu Lys Ser Asp Pro His Ile Lys Leu Gln Leu Gln Ala Glu Glu 335 340 345 Arg Gly Val Val Ser Ile Lys Gly Val Cys Ala Asn Arg Tyr Leu 350 355 360 Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr 365 370 375 Asp Glu Cys Phe Phe Phe Glu Arg Leu Glu Ser Asn Asn Tyr Asn 380 385 390 Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Val Ala Leu Lys 395 400 405 Arg Thr Gly Gln Tyr Lys Leu Gly Ser Lys Thr Gly Pro Gly Gln 410 415 420 Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Met Ser Ala Lys Ser 425 430

【００６２】配列番号：９配列の長さ：４６４配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジ−：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Pro Thr Asp Leu Arg Phe Thr Asn Ile Gly Pro Asp Thr Met Arg 1 5 10 15 Val Thr Trp Ala Pro Pro Pro Ser Ile Asp Leu Thr Asn Phe Leu 20 25 30 Val Arg Tyr Ser Pro Val Lys Asn Glu Glu Asp Val Ala Glu Leu 35 40 45 Ser Ile Ser Pro Ser Asp Asn Ala Val Val Leu Thr Asn Leu Leu 50 55 60 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Val Ser Ser Val Tyr Glu Gln 65 70 75 His Glu Ser Thr Pro Leu Arg Gly Arg Gln Lys Thr Gly Leu Asp 80 85 90 Ser Pro Thr Gly Ile Asp Phe Ser Asp Ile Thr Ala Asn Ser Phe 95 100 105 Thr Val His Trp Ile Ala Pro Arg Ala Thr Ile Thr Gly Tyr Arg 110 115 120 Ile Arg His His Pro Glu His Phe Ser Gly Arg Pro Arg Glu Asp 125 130 135 Arg Val Pro His Ser Arg Asn Ser Ile Thr Leu Thr Asn Leu Thr 140 145 150 Pro Gly Thr Glu Tyr Val Val Ser Ile Val Ala Leu Asn Gly Arg 155 160 165 Glu Glu Ser Pro Leu Leu Ile Gly Gln Gln Ser Thr Val Ser Asp 170 175 180 Val Pro Arg Asp Leu Glu Val Val Ala Ala Thr Pro Thr Ser Leu 185 190 195 Leu Ile Ser Trp Asp Ala Pro Ala Val Thr Val Arg Tyr Tyr Arg 200 205 210 Ile Thr Tyr Gly Glu Thr Gly Gly Asn Ser Pro Val Gln Glu Phe 215 220 225 Thr Val Pro Gly Ser Lys Ser Thr Ala Thr Ile Ser Gly Leu Lys 230 235 240 Pro Gly Val Asp Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg 245 250 255 Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Ile Ser Ile Asn Tyr Arg 260 265 270 Thr Glu Ile Asp Lys Pro Ser Met Gly Ile Arg Gly Leu Lys Gly 275 280 285 Thr Lys Gly Glu Lys Gly Glu Asp Gly Phe Pro Gly Phe Lys Gly 290 295 300 Asp Met Gly Ile Lys Gly Asp Arg Gly Glu Ile Gly Pro Pro Gly 305 310 315 Pro Arg Gly Glu Asp Gly Pro Glu Gly Pro Lys Gly Arg Gly Gly 320 325 330 Pro Asn Gly Asp Pro Gly Pro Leu Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly 335 340 345 Lys Leu Gly Val Pro Gly Leu Pro Gly Tyr Pro Gly Arg Gln Gly 350 355 360 Pro Lys Gly Ser Ile Gly Phe Pro Gly Phe Pro Gly Ala Asn Gly 365 370 375 Glu Lys Gly Gly Arg Gly Thr Pro Gly Lys Pro Gly Pro Arg Gly 380 385 390 Gln Arg Gly Pro Thr Gly Pro Arg Gly Glu Arg Gly Pro Arg Gly 395 400 405 Ile Thr Gly Lys Pro Gly Pro Lys Gly Asn Ser Gly Gly Asp Gly 410 415 420 Pro Ala Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Pro Asn Gly Pro Gln Gly 425 430 435 Pro Thr Gly Phe Pro Gly Pro Lys Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 440 445 450 Lys Asp Gly Leu Pro Gly His Pro Gly Gln Arg Gly Glu Thr 455 460

【００６３】配列番号：１０配列の長さ：１８６配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列：ＧｌｙＩｌｅＡｒｇＧｌｙＬｅｕＬｙｓＧｌｙＴｈｒＬｙｓ
ＧｌｙＧｌｕＬｙｓＧｌｙＧｌｕＡｓｐ１５
１０１５ＧｌｙＰｈｅＰｒｏＧｌｙＰｈｅＬｙｓＧｌｙＡｓｐＭｅｔ
ＧｌｙＩｌｅＬｙｓＧｌｙＡｓｐＡｒｇ２０
２５３０ＧｌｙＧｌｕＩｌｅＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｙＰｒｏＡｒｇ
ＧｌｙＧｌｕＡｓｐＧｌｙＰｒｏＧｌｕ３５
４０４５ＧｌｙＰｒｏＬｙｓＧｌｙＡｒｇＧｌｙＧｌｙＰｒｏＡｓｎ
ＧｌｙＡｓｐＰｒｏＧｌｙＰｒｏＬｅｕ５０
５５６０ＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｙＧｌｕＬｙｓＧｌｙＬｙｓＬｅｕ
ＧｌｙＶａｌＰｒｏＧｌｙＬｅｕＰｒｏ６５
７０７５ＧｌｙＴｙｒＰｒｏＧｌｙＡｒｇＧｌｎＧｌｙＰｒｏＬｙｓ
ＧｌｙＳｅｒＩｌｅＧｌｙＰｈｅＰｒｏ８０
８５９０ＧｌｙＰｈｅＰｒｏＧｌｙＡｌａＡｓｎＧｌｙＧｌｕＬｙｓ
ＧｌｙＧｌｙＡｒｇＧｌｙＴｈｒＰｒｏ９５
１００１０５ＧｌｙＬｙｓＰｒｏＧｌｙＰｒｏＡｒｇＧｌｙＧｌｎＡｒｇ
ＧｌｙＰｒｏＴｈｒＧｌｙＰｒｏＡｒｇ１１０
１１５１２０ＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｒｏＡｒｇＧｌｙＩｌｅＴｈｒ
ＧｌｙＬｙｓＰｒｏＧｌｙＰｒｏＬｙｓ１２５
１３０１３５ＧｌｙＡｓｎＳｅｒＧｌｙＧｌｙＡｓｐＧｌｙＰｒｏＡｌａ
ＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｙＧｌｕＡｒｇ１４０
１４５１５０ＧｌｙＰｒｏＡｓｎＧｌｙＰｒｏＧｌｎＧｌｙＰｒｏＴｈｒ
ＧｌｙＰｈｅＰｒｏＧｌｙＰｒｏＬｙｓ１５５
１６０１６５ＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｙＰｒｏＰｒｏＧｌｙＬｙｓＡｓｐ
ＧｌｙＬｅｕＰｒｏＧｌｙＨｉｓＰｒｏ１７０
１７５１８０ＧｌｙＧｌｎＡｒｇＧｌｙＧｌｕＴｈｒ１８５

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｋ 14/78 ＺＮＡＣ０７Ｋ 16/18 16/18 16/22 16/22 16/44 16/44 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＹＣ１２Ｐ 21/02 9282−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】細胞へのヒト免疫不全ウイルス（ＨＩ
Ｖ）の感染に関与する機能性物質を有効成分としてなる
細胞へのＨＩＶ感染の制御用組成物。
【請求項２】機能性物質が、フィブロネクチンまたは
フィブロネクチンのフラグメントである請求項１記載の
組成物。
【請求項３】フィブロネクチンのフラグメントが配列
表の配列番号１で表されるポリペプチド、該ポリペプチ
ドの機能的同等物および該ポリペプチドまたは該ポリペ
プチドの機能的同等物を含有するポリペプチドから選択
される機能性物質である請求項２記載の組成物。
【請求項４】機能性物質が線維芽細胞増殖因子、該因
子の機能的同等物および該因子または該因子の機能的同
等物を含有するポリペプチドから選択される機能性物質
である請求項１記載の組成物。
【請求項５】細胞へのＨＩＶの感染に関与する機能性
物質を制御する物質を有効成分としてなる細胞へのＨＩ
Ｖ感染の制御用組成物。
【請求項６】機能性物質が、フィブロネクチンまたは
フィブロネクチンのフラグメントである請求項５記載の
組成物。
【請求項７】フィブロネクチンのフラグメントが配列
表の配列番号１で表されるポリペプチド、該ポリペプチ
ドの機能的同等物および該ポリペプチドまたは該ポリペ
プチドの機能的同等物を含有するポリペプチドから選択
される機能性物質である請求項６記載の組成物。
【請求項８】機能性物質が線維芽細胞増殖因子、該因
子の機能的同等物および該因子または該因子の機能的同
等物を含有するポリペプチドから選択される機能性物質
である請求項５記載の組成物。
【請求項９】機能性物質を制御する物質が、ＨＩＶ感
染に関与する機能性物質に特異的な結合性物質である請
求項５記載の組成物。
【請求項１０】結合性物質が抗体である請求項９記載
の組成物。
【請求項１１】抗体が抗フィブロネクチン抗体である
請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】抗体が配列表の配列番号２で表される
ポリペプチドを特異的に認識する抗体である請求項１１
記載の組成物。
【請求項１３】抗体が配列表の配列番号３で表される
ポリペプチドを特異的に認識する抗体である請求項１１
記載の組成物。
【請求項１４】抗体が抗線維芽細胞増殖因子抗体であ
る請求項１０記載の組成物。
【請求項１５】結合性物質がヘパリンまたはヘパリン
断片である請求項９記載の組成物。
【請求項１６】機能性物質を制御する物質が、請求項
６、７または８記載の感染に関与する機能性物質の断片
であって、該機能性物質に拮抗作用を有し、該機能性物
質の感染への関与を妨げる断片である請求項５記載の組
成物。
【請求項１７】ＨＩＶの細胞への感染に関与する機能
性物質と、複製能欠損ＨＩＶウイルスベクターとを組み
合わせてなるＨＩＶ感染細胞制御用組成物。
【請求項１８】複製能欠損ＨＩＶウイルスベクター
が、抗ＨＩＶ性物質をコードする遺伝子を組み込んだ複
製能欠損ＨＩＶウイルスベクターである請求項１７記載
の組成物。
【請求項１９】抗ＨＩＶ物質がアンチセンス核酸、リ
ボザイム、デコイ、細胞内抗体あるいはトランスドミナ
ントタンパクから選択される物質である請求項１８記載
の組成物。
【請求項２０】感染に関与する機能性物質が請求項
６、７または８記載の物質である請求項１７〜１９いず
れか１項に記載の組成物。
【請求項２１】細胞がＣＤ４分子を発現する細胞であ
る請求項１〜２０いずれが１項に記載の組成物。
【請求項２２】細胞がＣＤ４陽性Ｔ細胞である請求項
２１に記載の組成物。
【請求項２３】細胞へのＨＩＶの感染を制御する方法
において、感染に関与する機能性物質を制御することを
特徴とする細胞へのＨＩＶ感染制御方法。
【請求項２４】機能性物質が、フィブロネクチンまた
はフィブロネクチンのフラグメントである請求項２３記
載の方法。
【請求項２５】フィブロネクチンのフラグメントが配
列表の配列番号１で表されるポリペプチド、該ポリペプ
チドの機能的同等物および該ポリペプチドまたは該ポリ
ペプチドの機能的同等物を含有するポリペプチドから選
択される機能性物質である請求項２４記載の方法。
【請求項２６】機能性物質が線維芽細胞増殖因子、該
因子の機能的同等物および該因子または該因子の機能的
同等物を含有するポリペプチドから選択される機能性物
質である請求項２５記載の方法。
【請求項２７】ＨＩＶ感染に関与する機能性物質に特
異的な結合性物質を使用することを特徴とする請求項２
３記載の方法。
【請求項２８】結合性物質が抗体である請求項２７記
載の方法。
【請求項２９】抗体が抗フィブロネクチン抗体である
請求項２８記載の方法。
【請求項３０】抗体が配列表の配列番号２で表される
ポリペプチドを特異的に認識する抗体である請求項２９
記載の方法。
【請求項３１】抗体が配列表の配列番号３で表される
ポリペプチドを特異的に認識する抗体である請求項２９
記載の方法。
【請求項３２】抗体が抗線維芽細胞増殖因子抗体であ
る請求項２８記載の方法。
【請求項３３】結合性物質がヘパリンまたはヘパリン
断片である請求項２７記載の方法。
【請求項３４】請求項２４、２５または２６記載の感
染に関与する機能性物質の断片であって、該機能性物質
に拮抗作用を有し、該機能性物質の感染への関与を妨げ
る断片を使用することを特徴とする請求項２３記載の方
法。
【請求項３５】ＨＩＶの感染細胞を制御する方法にお
いて、感染に関与する機能性物質の存在下で、感染細胞
に複製能欠損ＨＩＶウイルスベクターを導入することを
含むＨＩＶ感染細胞の制御方法。
【請求項３６】抗ＨＩＶ性物質をコードする遺伝子を
組み込んだ複製能欠損ＨＩＶウイルスベクターを使用す
る請求項３５記載の方法。
【請求項３７】抗ＨＩＶ物質がアンチセンス核酸、リ
ボザイム、デコイ、細胞内抗体あるいはトランスドミナ
ントタンパクから選択される物質である請求項３６記載
の方法。
【請求項３８】感染に関与する機能性物質が請求項
２、３または４記載の物質である請求項３５から３７い
ずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】細胞がＣＤ４分子を発現する細胞であ
る請求項２３〜３８いずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】細胞がＣＤ４陽性Ｔ細胞である請求項
３９に記載の方法。