KR20220084006A - 세포성 및 체액성 면역을 유도하는 동종이계 t-세포 기반 hiv 백신 - Google Patents

세포성 및 체액성 면역을 유도하는 동종이계 t-세포 기반 hiv 백신 Download PDF

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Abstract

본 발명은 CD4+ T-세포와 같은 재조합 동종이계 세포를 포함하는 세포 조성물 투여를 포함하는 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)를 가진 환자를 치료하는 방법을 제시한다. 나아가 본 발명은 세포성 면역 및 체액성 면역 모두를 유도하는 동종이계 T-세포 기반 예방 HIV 백신을 만드는 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

세포성 및 체액성 면역을 유도하는 동종이계 T-세포 기반 HIV 백신
[0001] 본 출원은 2019년 6월 17일 출원된 미국 가출원번호 62/862,432의 우선권을 주장한다. 상기의 출원의 내용은 참조로서 본 출원에 포함된다.
[0002] 본 발명은 CD4+ T-세포와 같은 재조합 동종이계 세포를 추가로 포함하는 세포 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)에 걸린 환자를 치료에 관한 방법이다. 또한, 본 발명은 세포성 및 체액성 면역 모두를 유도하는 동종이계(allogeneic) T-세포 기반 예방 HIV 백신을 제조하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.
[0003] HIV 전염병에 대해 상당한 진전이 있었다. 그러나 현재 전 세계적으로 매년 170만 명의 새로운 감염이 발생하고 770,000명이 사망한다. 가장 성공적인 치료 방법인 항레트로바이러스요법(ART)은 연간 $18,000~$40,000의 비용이 들 수 있다. 2000년부터 2016년까지 HIV에 지출된 총 금액은 5,620억 달러였으며 연간 거의 500억 달러이다. 따라서 백신과 치료제가 절실히 필요하다.
요약
[0004] 본 발명의 일 구체예에서, CD40L 및 CXCL13을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 이종 핵산 분자를 포함하는 세포가 제공된다.
[0005] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 CD40L은 SEQ ID NO: 4에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 CXCL13은 SEQ ID NO: 3에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0006] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 세포는 T-세포이다.
[0007] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 세포는 이종 단백질을 인코딩하는 제2 및/또는 제3 핵산으로 형질도입되거나(transduced) 형질감염된다(transfected).
[0008] 본 발명의 일 구체예에서, 제2 핵산은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하고, 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 역전사효소의 돌연변이를 포함하고, 나아가 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아 비활성화된 HIV 게놈 작제물(construct)을 생성한다.
[0009] 본 발명의 일 구체예에서, CD40L 및 CXCL13을 인코딩하는 하나 이상의 이종 핵산 분자를 포함하는 CD4+ 세포가 제공된다.
[0010] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 CD40L은 SEQ ID: 4에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 CXCL13은 SEQ ID: 3에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0011] 본 발명의 일 구체예에서, 이종 CD40L 단백질 및 이종 CXCL13 단백질을 포함하는 CD4+ 세포가 제공된다.
[0012] 본 발명의 일 구체예에서, CD4+ 세포는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 게놈을 포함하는 이종 핵산 분자를 포함하고, 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 역전사효소의 돌연변이를 포함하고, 나아가 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아, 비활성화된 HIV 게놈 작제물을 생성한다.
[0013] 본 발명의 일 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 HIV를 치료하는 방법이 제공된다.
[0014] 본 발명의 일 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 면역 반응 증가를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법이 제공된다.
[0015] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 세포는 대상체에 대한 동종이계(allogeneic)이다.
[0016] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 세포는 환자와 인간 백혈구 항원(HLA)-매칭이 되지 않는다.
[0017] 본 발명의 일 구체예에서, 세포의 투여량은 약 1-5 x 106의 범위이다.
[0018] 본 발명의 일 구체예에서, 바이러스 감염은 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)에 의해 유발된다.
[0019] 본 발명의 일 구체예에서, 이식편대숙주병(GVHD)은 감소되거나 제거되는 반면, 이식편대바이러스(GVV)는 대상체에서 증가된다.
[0020] 본 발명의 일 구체예에서, 치료 또는 면역 반응 증가는 대상체가 개선, 감소 또는 탐지불가 바이러스 역가 또는 안정/비진행 질병을 나타내는 한 유지치료로서 다음의 시간 프레임에 따라 주기적으로 반복된다: 매주 마다 1회에서, 2주마다 1회로, 3주마다 1회로, 한 달마다 1회로, 2개월마다 1회로, 3개월마다 1회로, 4개월에 1회로, 5개월에 1회로, 6개월에 1회로, 또는 7개월마다 1회로, 8개월마다 1회로, 9개월마다 1회로, 10개월마다 1회로, 11개월마다 1회로 또는 매년마다 1회로.
[0021] 본 발명의 일 구체예에서, 세포성 및 체액성 면역이 대상체에서 유도된다.
도면의 간단한 설명
[0022] 도 1a는 인간 및 마카크(macaque) 작제물(construct)를 생성하기 위한 비제한적인 벡터 맵을 도시한다.
[0023] 도 1b는 인간 및 마카크(macaque) 작제물을 생성하기 위한 비제한적인 벡터 지도를 도시한다.
[0024] 도 2는 본원에 제공된 구체예의 마카크를 사용하기 위한 방식을 예시한다.
[0025] 도 3은 본원에 제공된 구체예를 사용하기 위한 방식을 예시한다.
[0026] 도 4는 본원에 제공된 구체예를 사용하기 위한 방식을 예시한다.
[0027] 도 5는 본원에 제공된 면역세포 구성(composition)의 강화된 세포독성을 나타내는 데이터이다.
[0028] 도 6은 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 NK세포의 증가를 예시한다.
[0029] 도 7은 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 NKT세포의 증가를 예시한다.
[0030] 도 8은 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 NK세포의 증가를 예시한다.
[0031] 도 9는 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 NK세포 활성화 체액성 반응의 증가를 예시한다.
[0032] 도 10은 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 B세포 활성화 증가를 예시한다.
[0033] 도 11은 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 T세포 활성화 증가를 예시한다.
[0034] 도 12는 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 T세포 활성화 증가를 예시한다.
[0035] 도 13은 본원에 제공된 세포를 포함한 말초 혈액 단핵세포(PBMCs)의 백신접종 후 CD8 T세포 활성화 증가를 예시한다.
약어 설명:
[0036] 항체 의존적 세포독성: ADCC
[0037] 클러스터 분화 3: CD3
[0038] 이식편대종양 효과: CVT
[0039] 이식편대숙주 질환: GVHD
[0040] 이식편대바이러스: GVV
[0041] 감마 델타 T세포: GDT 세포 및 γδT세포.
[0042] 인간면역결핍바이러스(HIV): 후천성 면역결핍증을 유발하는 렌티바이러스.
[0043] 불변 자연 살해 T세포: iNKT세포(I형 또는 고전적 NKT세포로 알려짐)는 불변 βT-세포 수용체(TCR) 및 자연 살해(NK)세포와 공통적인 다수의 세포 표면 분자를 발현하는 별개의 T세포 집단이다.
[0044] 자연 살해 세포: NK세포
[0045] HIV로부터 보호하기 위해 충분한 면역 반응을 효과적으로 유도를 위한 노력은 한계가 있었다. 중화항체의 상당한 역가를 달성하고 인간이 아닌 영장류의 감염을 예방할 수는 있지만, 지금까지 체액 백신을 인간에 전환하는 것은 어려움이 있어왔다. 세포반응을 촉진하는 백신은 동물에게서 가능성을 보여주었는데, 몇몇 백신들은 현재 임상시험에 있다. 그러나 현재까지의 데이터에 따르면, 그 효능에 한계가 있다.
[0046] 강력한 체액성 및 세포성 반응을 효과적으로 결합할 수 있는 백신은 효과적인 방법이 될 것이다. 이러한 백신이 예방 백신으로서는 실패하더라도 치료 백신으로서는 유효성이 있을 수 있다.
[0047] 본 발명은 세포성 및 체액성 면역 모두를 유도하는 동종이계(또는 특정 구체예에서 자가 유래) T-세포 기반 예방 HIV 백신을 제조하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 이러한 방법 및 조성물의 일반적인 개요는 다음과 같다:
[0048] 공여자 또는 세포주의 T세포는 복제불능 또는 약독화된 HIV의 균주에 의해 감염된다.
[0049] 숙주에 주입될 때, 주입된 세포 수가 매우 많지 않다면, 숙주 면역 체계는 거부반응 동안 체액성 면역 체계에 allo-T세포와 결합할 기회를 주지 않고, 세포독성 면역 반응을 통해서만 모든 살아있는 약독화 HIV에 감염된 T세포 집단을 쉽게 거부할 것이다. 따라서, 체액성 면역이 유도되지 않을 것이다. 숙주 B세포가 거부반응으로 동원되도록 하기 위해, 감염된 allo-T세포는 인간 CD40L 및 인간 CXCL13을 발현하도록 바이러스 또는 비바이러스 유전자 변형 도구를 사용하여 유전적으로 변형된다(도 1a, hCD40L 및 hCXCL13 발현벡터 맵의 예 참조).
[0050] hCD40L 및 hCXCL13 분자의 발현은 allo-T세포의 B세포 특이적 거부를 촉진하고 allo-T세포 및 allo-T세포에 의해 운반되는 HIV 게놈뿐만 아니라 allo-T세포에 대한 체액성 면역 시스템의 활성화를 보장한다.
[0051] 따라서, 이러한 작제물(construct)은 동종 T세포에서 HIV 게놈을 빼내어 HIV에 대한 체액성 및 세포성 면역을 유도하는 역할을 할 것이며, 이의 거부는 일치하지 않는 숙주에 주입될 때 확실하다.
[0052] 최종 allo-T세포 생산물은 HIV에 대한 예방 백신으로 사용될 것이다. 세포는 여러 번 주입될 것인데, 첫 번째 주사는 프라이머 역할을 하고 그에 뒤 따르는 하나 이상의 주사는 부스터 샷으로 사용된다. 투여 옵션, 주입된 세포의 안전한 투여량/수 최적화뿐만 아니라 주입 횟수 및 시기는 추가 안전성/유효성 연구에 의해 결정될 것으로 예상된다.
[0053] 본 발명이 보다 쉽게 이해될 수 있도록, 특정 기술 및 과학 용어는 아래에서 구체적으로 정의된다. 본원의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 여기에 사용된 다른 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다.
[0054] 본원에 사용된 바와 같이 달리 명시되지 않는 한, 용어 “약”은 수정하는 값의 ±5%를 의미한다. 따라서, 약 100은 95에서 105를 의미한다. 또한, 용어 “약”은 “약 1, 2, 3, 4 또는 5”와 같은 일련의 용어로 용어를 수정한다. “약”은 “약 1, 2, 3, 4 또는 5”를 “약 1, 약 2, 약 3, 약 4 또는 약 5”의 의미하는 것으로 이해될 수 있도록 목록의 각 구성을 수정하는 것으로 이해하여야 한다. “적어도”라는 용어 또는 “보다 작음”, “보다 큼” 등으로 제한되지 않는 것처럼 기타 수량화 수식어에 의해 수정된 목록의 경우에도 마찬가지이다.
[0055] 본원 및 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 “a”, “an” 및 “the”는 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수 참조를 포함한다.
[0056] 본원에 사용된 용어 “포함하다(comprise)”, “갖다(have)”, “가지다(has)” 및 “포함하다(include)” 및 본원에 사용된 이들의 접합체는 “포함하지만 제한되지 않는”을 의미한다. 다양한 구성요소와 방법을 다양한 구성요소 또는 단계를 포함하는 것(포함하지만 이에 국한되지 않음)이라는 용어로 설명되는 반면, 구성요소, 방법 및 장치 또한 다양한 구성요소와 단계를 “필수적으로 구성하는” 또는 “구성하는”으로 해석될 수 있으며, 그러한 용어는 본질적으로 폐쇄형 그룹을 정의하는 것으로 해석되어야 한다.
[0057] 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 13(CXCL 13)은 B림프구 화학 유인 물질(BLC) 또는 B세포 유인 케모카인 1(BCA-1)이라고도 하며 인간에서 CXCL13 유전자에 의해 인코딩되는 단백질 리간드이다. CXCR5는 CXCL13에 대한 수용체이다. 케모카인 발현은 림프구 모집 및 자극의 양성 고리(positive loop)를 시작한다. 장 상피 세포 내 CXCL13의 과발현은 고유판(lamina propria)의 B 세포 수의 현저한 증가와 소장의 림프 여포의 크기와 수의 증가가 촉진되었다. 이러한 결과는 염증 상태 동안 장에서 CXCL13의 과발현이 면역조절 및 회복 기능을 갖는 B 세포 및 LTi 및 NK 세포의 동원을 선호함을 시사한다. 일부 구체예에서 CXCL13은 하기 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 인코딩된다:
Figure pct00001
[0058] 핵산 서열에 대한 Genbank 수탁 번호는 NM_006419.2이며, 이는 그 전체가 참고로 본원에 포함된다. 일부 구체예에서, CXCL13의 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00002
[0059] 유전자 코드의 축퇴성으로 인해 SEQ ID NO: 1의 서열은 단순히 비제한적인 예이고 다른 핵산 서열을 사용하여 CXCL13을 발현할 수 있다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO: 3을 인코딩하는 핵산 서열은 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% SEQ ID NO: 1과 동일하다. 일부 구체예에서, CXCL13의 단백질은 SEQ ID NO: 3과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다. 서열은 CXCL13의 활성에 영향을 미치지 않는 보존적 치환(돌연변이)을 포함할 수 있다.
[0060] CD154라고도 하는 CD40 리간드(CD40L)는 분자의 TNF 슈퍼패밀리(superfamily)의 구성원인 단백질이다. 항원제시세포(APC)의 CD40에 결합하여 표적세포의 유형에 따라 다양한 효과를 나타낸다. 전체적으로 CD40L에는 CD40, αα5β1 인테그린 및 αIlβ3의 3가지 결합 파트너가 있다. CD154는 공자극(costimulatory) 분자로 작용하며 T 여포 보조 세포(TFH 세포)라고 하는 T 세포의 하위 집합에서 특히 중요하다. TFH 세포에서 CD40L은 CD40을 B 세포 표면에 결합시킴으로써 B 세포의 성숙과 기능을 촉진하여 세포와 세포 간의 소통을 용이하게 한다. CD40L의 안정적인 발현은 재조합 동종이계 CD4+가 IL-12를 생성하여 면역억제를 극복하고 기억 T 세포 분화를 촉발할 수 있게 한다. 일부 구체예에서 CXCL13은 하기 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 인코딩된다:
Figure pct00003
[0061] 핵산 서열에 대한 Genbank 수탁 번호는 NM_000074.2이며, 이는 그 전체가 참고로 본원에 포함된다. 일부 구체예에서, CD40L의 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00004
[0062] 유전자 코드의 축퇴성으로 인해 SEQ ID NO: 2의 서열은 단순히 비제한적인 예이고 다른 핵산 서열을 사용하여 CD40L을 발현할 수 있다. 일부 구체예에서, SEQ ID NO: 4를 인코딩하는 핵산 서열은 적어도 SEQ ID NO: 2와 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구체예에서, CD40L의 단백질은 SEQ ID NO: 4와 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 서열은 CD40L의 활성에 영향을 미치지 않는 보존적 치환(돌연변이)을 포함할 수 있다.
[0063] 본원에 사용된 바와 같이, 세포 내 핵산 분자를 언급할 때 "비상동(heterologous)"이라는 용어는 세포가 동일한 단백질 또는 서열을 암호화하는 유사한 서열 또는 유전적 서열을 가지고 있더라도 핵산 분자가 자연 발생 세포의 게놈에 고유하지 않음을 의미한다. 예를 들어, CD40L 및/또는 CXCL13을 인코딩하는 비상동 핵산 분자를 포함하는 세포는 CD40L 및/또는 CXCL13을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하도록 변형된 세포를 의미한다. 이것은 형질주입(transfection) 또는 형질도입(transduction) 또는 CRISPR 등과 같은(이에 국한되지 않음) 다른 게놈 편집 기술에 의해 수행될 수 있다. "비상동"이라는 용어가 세포 내 단백질과 관련하여 사용될 때, 이는 비상동 핵산 분자에 의해 암호화되는 단백질을 지칭한다. 따라서 세포는 핵산 분자에 의해 인코딩 되지 않은 단백질인 세포에 고유한 단백질이고 비상동 핵산 분자에 의해 인코딩된 단백질인 세포에 비상동인 단백질과 동일한 단백질을 포함할 수 있다. 비상동 핵산 분자는 세포의 게놈에 삽입되거나 세포에 에피솜 플라스미드(episomal plasmid)가 존재함으로써 세포에 일시적으로 존재하거나 세포에 안정적으로 존재할 수 있다. 또한, 비상동 핵산 분자는 세포의 게놈에 안정적으로 통합될 수 있는 바이러스 형질도입을 통해 세포 내로 도입될 수 있다.
비상동 단백질을 발현하는 재조합 세포는 또한 면역 반응이 생성되기를 원하는 표적 항원을 발현하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 표적 항원은 HIV 단백질 또는 그의 항원 단편일 수 있다. 일부 구체예에서, CD40L 및/또는 CXCL13을 비상동적으로 발현하는 T-세포 또는 CD4+ T-세포와 같은 세포는 또한 표적 항원을 비상동적으로 발현한다. 일부 구체예에서, 추가 핵산 분자는 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함한다. 일부 구체예에서, HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아 비활성화된 HIV 게놈 작제물을 생성한다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu, Vif 등, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 임의의 HIV 단백질이다. 일부 구체예에서, CD40L 및/또는 CXCL13을 비상동적으로 발현하는 세포는 각각의 HIV 단백질을 발현한다. 일부 구체예에서, 세포는 적어도 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 HIV 단백질 또는 그의 단편을 비상동적으로 발현한다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체)이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Rev이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Pol이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV GP120이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV GP160이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV GP41이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV env이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Gag이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Gag-Pol이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Nef이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Vpr이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Vpu이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV Vif이다. 이들 항원 중 임의의 것은 CD40L 및/또는 CXCL13을 비상동적으로 발현하는 세포에서 비상동적으로 발현될 수 있다. 일부 구체예에서, HIV 항원 대신 SHIV 항원이 사용되며 등가물 항원은 본원에 제공된 항원 대신에 사용될 수 있다.
[0064] HIV 게놈이 사용되는 경우 HIV 게놈 플라스미드는 상업적으로 이용 가능하며 예시적인 돌연변이 및 시스템은 예를 들어, Mol Ther, 2017 Aug 2;25(8):1790-1804에 기재되어 있다. 마찬가지로, 하나의 플라스미드에 중국 HIV-1 서브타입 C/B=env 및 gag 유전자 그리고 플라스미드가 1:1 비율로 혼합된 두 번째 플라스미드에서 융합 단백질을 발현하도록 설계된 pol 및 nef/tat 작제물을 나르는 상용 플라스미드 백본 pVAX1 또한 이용 가능하다(Advax, San Diego, CA and Clinical and Vaccine Immunology, Volume 20 Number 3, March 2013, p. 397-408 참조). 이것은 비제한적인 예이며 다른 작제물이 사용될 수 있다.
[0065] 재조합 동종이계 CD4+ 세포를 제조하기 위해 사용된 예시적인 작제물의 벡터 맵은 도 1 및 도 1b에 도시되어 있고, 이들 작제물을 시험하기 위한 개요 및 개략도가 도 2, 도 3 및 도 4에 도시되어 있다.
[0066] "공동 투여" 등의 용어는 선택된 치료제를 단일 환자에게 투여하는 것으로, 치료제가 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 또는 동일하거나 상이한 시간에 투여되는 치료 요법을 포함하는 것으로 의도된다.
[0067] 본원에 사용된 바와 같이, "작용제(agonist)"라는 용어는 그 존재가 단백질에 대한 천연 발생 리간드의 존재로부터 야기되는 생물학적 활성과 동일한 단백질의 생물학적 활성을 초래하는 화합물을 지칭한다.
[0068] 본원에 사용된 바와 같이, "부분 작용제"라는 용어는 그 존재가 단백질에 대한 자연 발생 리간드의 존재로 인한 것과 동일한 유형이지만 더 낮은 크기(magnitude)인 단백질의 생물학적 활성을 초래하는 화합물을 가리킨다.
[0069] 본원에 사용된 바와 같이, "길항제(antahonist)"라는 용어는 그 존재가 단백질의 생물학적 활성의 크기를 감소시키는 화합물을 지칭한다. 일부 구체예에서, 길항제는 단백질의 생물학적 활성을 완전히 억제한다. 일부 구체예에서, 길항제는 억제제이다.
[0070] 치료 조성물(예: 동종이형 T 세포 기반 예방 HIV 백신, 재조합 동종이형 CD4+ 기반 백신 및 이러한 제품을 포함하는 조성물)과 함께 사용되는 경우 “투여”는 치료제를 표적 조직 내로 또는 표적 조직 상에 직접 투여하거나 치료제를 환자에게 투여하여 치료제가 표적 조직에 긍정적인 영향을 미치는 것을 의미한다.
[0071] 본원에 사용된 용어 "대상체" 또는 "환자"는 야생 동물, 가축 및 농장 동물과 같은 인간 및 인간이 아닌 척추동물을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 상호교환가능하게 사용될 수 있는 대상체 또는 환자는 비인간 영장류일 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 대상체 또는 환자는 동물이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 포유동물이다. 일부 구체예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 비인간 동물이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 비인간 포유동물이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 개, 고양이, 소, 돼지, 말, 양 또는 염소와 같은 가축이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 개 또는 고양이와 같은 반려 동물이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 소, 돼지, 말, 양 또는 염소와 같은 가축 동물이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 동물원 동물이다. 다른 구체예에서, 대상체 또는 환자는 설치류, 개, 또는 인간이 아닌 영장류와 같은 연구 동물이다. 일부 구체예에서, 대상체 또는 환자는 유전자 이식(transgenic) 마우스 또는 유전자 이식 돼지와 같은 비인간 유전자 이식 동물이다.
[0072] "억제"라는 용어는 증상 발생을 방지하고, 증상을 완화하거나 질병, 상태 또는 장애를 제거하기 위해 본원의 구체예에 따른 치료제를 투여하는 것을 포함한다.
[0073] "약제학적으로 허용되는"이라는 것은 담체(carrier), 희석제 또는 부형제가 치료제의 다른 성분과 호환되어야 하며 대상체에게 유해하지 않아야 한다는 것을 의미한다.
[0074] 본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료된" 또는 "치료하는"은 치료적 처치 및 예방적 또는 예비적 조치 모두를 의미하며, 치료의 목적은 원치 않는 생리적 상태, 장애 또는 질병을 억제, 예방 또는 감속(경감)시키거나, 또는 유익하거나 원하는 임상 결과를 개선, 억제 또는 얻는 것이다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 원하는 임상 결과는 증상의 개선 또는 완화; 상태, 장애 또는 질병의 정도 감소; 상태, 장애 또는 질병 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음); 상태, 장애 또는 질병의 발병 지연 또는 진행 지연; 상태, 장애 또는 질병 상태의 개선; 및 발견 가능 여부, 또는 상태, 장애 또는 질병의 개선 여부 불문 차도(부분적이든 전체적이든)를 포함한다. 치료에는 과도한 수준의 부작용 없이 임상적으로 유의한 반응을 이끌어내는 것이 포함된다. 치료에는 치료를 받지 않는 경우의 예상 생존 기간과 비교하여 생존 기간이 연장되는 것도 포함된다.
[0075] 본원에 사용된 "항체"라는 용어는 항원과 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 의미한다. 항체는 천연 공급원 또는 재조합 공급원으로부터 유래된 온전한 면역글로불린일 수 있고 온전한 면역글로불린의 면역반응성 부분일 수 있다. 예를 들어, 항체는 다클론 항체, 단클론 항체, Fv, Fab 및 F(ab)2 뿐만 아니라 단일 사슬 항체 및 인간화 항체를 비롯한 다양한 형태로 존재할 수 있다.
[0076] "항체 단편"이라는 용어는 온전한 항체의 일부를 말하며, 온전한 항체의 항원 결정 가변 영역을 말한다. 항체 단편은 그 예로 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 선형 항체, scFv 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
[0077] 본원에 사용된 "항원"라는 용어는 면역 반응을 유발하는 분자로 정의된다. 이 면역 반응은 항체 생성 또는 면역학적으로 발달된 특정 세포의 활성화 또는 둘 다 포함할 수 있다. 통상의 기술자는 사실상 모든 단백질이나 펩티드를 포함하는 어떤 고분자가 항원의 역할을 할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 나아가, 항원은 재조합 또는 유전체 DNA로부터 유래될 수 있다. 통상의 기술자는 뉴클레오티드 서열 또는 면역 반응을 유발하는 단백질을 인코딩하는 부분적 뉴클레오티드 서열을 포함하는 어떤 DNA가 본원에서 사용된 용어로서의 “항원”을 인코딩한다는 것을 이해할 것이다. 또한, 통상의 기술자는 항원이 유전자의 전장 뉴클레오티드 서열에 의해서만 암호화될 필요는 없다는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 구체예에서, 하나 이상의 유전자의 부분적 뉴클레오티드 서열의 사용을 포함하지만 이에 제한되지 않는 것과 이러한 뉴클레오티드 서열이 원하는 면역 반응을 이끌어내는 다양한 조합으로 배열된다는 것을 쉽게 알 수 있다. 더욱이, 통상의 기술자는 항원이 "유전자"에 의해 코딩될 필요가 전혀 없다는 것을 이해할 것이다. 항원이 합성되거나 생물학적 샘플로부터 유래될 수 있다는 것은 쉽게 알 수 있다. 이러한 생물학적 샘플은 바이러스, 세포 또는 생물학적 유체를 포함하는 것으로 의심되는 조직 샘플을 포함할 수 있지만 이에 국한되지는 않는다.
[0078] “자기항원(auto-antigen)”이란 면역체계가 외래물질로 잘못 인식한 자기항원(self-antigen)을 말한다. 자기항원은 세포 표면 수용체를 포함하는 세포 단백질, 인단백질, 세포 표면 단백질, 세포 지질, 핵산, 당단백질을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
[0079] 본원에 사용된 바와 같이, "자가조직의(자기유래의: autologous)"이라는 용어는 동일한 개인으로부터 파생되어 나중에 개인에게 재도입되는 모든 임의의 물질을 지칭하는 것을 의미한다.
[0080] 본원에 사용된 "동종이계의(allogeneic)"라는 용어는 항원적으로 구별되는 HLA 또는 MHC 위치(loci)를 가리킨다. 따라서 동일한 종에서 옮겨진 세포나 조직은 항원적으로 구별될 수 있다. 동계 마우스(Syngeneic mice)는 하나 이상의 유전자 위치(선천적)가 다를 수 있으며 동종이계 마우스는 동일한 배경을 가질 수 있다.
[0081] 본원에 사용된 "항원"라는 용어는 면역 반응을 유발하는 분자로 정의된다. 이 면역 반응은 항체 생성 또는 면역학적으로 발달된 특정 세포의 활성화 또는 둘 다 포함할 수 있다.
[0082] "이종(Xenogenieic)"은 다른 종의 동물에서 파생된 이식편(graft)을 의미한다.
[0083] "공여자"라는 용어는 환자 수용자가 아닌 인간과 같은 포유동물을 지칭한다. 예를 들어, 공여자는 수용자와 HLA 동일성을 가질 수 있거나 수용자와 부분적으로 또는 더 큰 HLA 불일치를 가질 수 있다.
[0084] 본원에서 세포, 세포 유형 및/또는 세포 계통과 관련하여 사용되는 용어 "홑배수동종(haploidentical)"은 하나의 염색체 상의 밀접하게 연결된 유전자집합에서 홑배수동종을 공유하는 세포 또는 실질적으로 동일한 대립유전자(allele)를 갖는 세포를 지칭한다. 홑배수동종 공여자는 수용자와 완전한 HLA 동일성을 갖지 않으며 부분적인 HLA 불일치가 있다.
[0085] T 세포 및 활성화된 T 세포(CD3+ 세포 포함): T 세포(T 림프구라고도 함)는 림프구라고 하는 백혈구 그룹에 속한다. 림프구는 일반적으로 세포 매개성 면역에 관여한다. "T 세포"에서 "T"는 흉선에서 유래하거나 그 성숙이 흉선의 영향을 받는 세포를 의미한다. T 세포는 T 세포 수용체로 알려진 세포 표면 단백질의 존재에 의해 B 세포와 NK 세포와 같은 다른 유형의 림프구와 구별될 수 있다. 본원에 사용된 "활성화된 T 세포"라는 용어는 클래스 II 주요 조직적합성(MHC) 마커의 맥락에서 제시된 항원 결정기의 인식에 의해 면역 반응(예: 활성화된 T 세포의 클론 확장)을 생성하도록 자극된 T 세포를 지칭한다. T-세포는 항원 결정기, 사이토카인 및/또는 림포카인의 존재 및 분화 세포 표면 단백질 클러스터(예: CD3, CD4, CDS 등 및 이들의 조합)에 의해 활성화된다. 차동 단백질 클러스터를 발현하는 세포는 T-세포 표면에 있는 단백질의 발현에 대해 “양성(positive)”이라고 한다(예: CD3 또는 CD4 발현에 대해 양성인 세포는 CD3+ 또는 CD4+로 지칭됨). CD3 및 CD4 단백질은 T-세포의 신호 전달에 직접 및/또는 간접적으로 관여할 수 있는 세포 표면 수용체 또는 공동 수용체이다.
[0086] 본원에 사용된 "말초혈액"이라는 용어는 혈액의 세포 성분(적혈구, 백혈구, 혈소판)을 말하며, 혈액의 순환 풀에서 얻거나 준비되며 림프계, 비장, 간 또는 골수 내에 격리되지 않는다.
[0087] "말초혈액 단핵 세포", "PBMCs" 또는 "단핵 세포“는 항암면역요법에 사용되는 말초혈액과 분리된 단핵세포를 말한다. 말초혈액 단핵 세포는 Ficoll-Hypaque 밀도 구배법과 같은 공지된 방법을 사용하여 수집된 인간 혈액에서 얻을 수 있다.
[0088] 본 발명의 일 구체예에 따르면, "말초혈액 단핵 세포"는 임의의 적합한 사람으로부터 수득될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 말초혈액 단핵 세포와 같은 공급원을 포함하는 공여자 림프구 세포의 공급원은 다음을 포함하는 바람직한 림프구 세포의 분리를 위해 수용 환자에 대해 동종이계 또는 자가조직일 수 있다: 본 발명에 따른 항-HIV, 보호 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 CD4+ 세포, NK 세포, γδ세포, iNKT 세포, CD3 T 세포, 또는 기타 조합. 특정 구체예에서, 재조합 세포는 동종이계(allogeneic)이고, 그리고 다른 구체예에서는 자가(autologous)일 수 있다.
[0089] 본원에 사용된 용어 "ex vivo"는 신체 "외부"를 지칭한다.
[0090] "질병"은 대상자가 항상성을 유지할 수 없고, 질병이 개선되지 않으면 동물의 건강이 계속 악화되는 상태를 말한다. 대조적으로, 대상자의 장애(disorder)는 대상자가 항상성을 유지할 수 있지만 대상자의 건강 상태가 장애가 없는 경우보다 덜 좋은 상태를 말한다. 치료를 받지 않고 방치한다고 해서 반드시 대상자의 건강 상태가 더 나빠지는 것은 아니다.
[0091] 본원에 사용된 "유효량"은 치료적 또는 예방적 이점을 제공하는 양을 의미한다.
[0092] "인코딩"은 정의된 뉴클레오티드(즉, rRNA, tRNA, mRNA)들의 서열 또는 정의된 아미노산서열 및 여기서 비롯된 생물학적 성질을 가진 생물학적 과정에서 다른 고분자와 고분자의 합성을 위한 템플릿 역할을 하는 유전자, cDNA, 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오티드에서 뉴클레오티드들의 특정한 서열의 고유한 특성을 말한다.
[0093] 본원에 사용된 "내인성(endogenous)"은 유기체, 세포, 조직 또는 시스템 내부로부터 또는 생산되는 모든 물질을 가리킨다.
[0094] 본원에 사용된 용어 "외인성(exogenous)"은 유기체, 세포, 조직 또는 시스템 외부로부터 도입되거나 외부에서 생성된 모든 물질을 지칭한다. 세포의 이종 핵산 분자는 외인성 핵산 분자이다.
[0095] 본원에 사용된 용어 "발현(expression)"은 그의 프로모터에 의해 구동되는 특정 뉴클레오티드 서열의 전사 및/또는 번역으로 정의된다.
[0096] "발현 벡터"는 발현될 뉴클레오티드 서열에 조작적으로 연결된 발현 조절 서열로 구성된 재조합 폴리뉴클레오티드을 포함하는 벡터를 가리킨다. 발현 벡터는 발현을 위한 충분한 시스 작용 요소를 포함하고; 발현을 위한 다른 요소는 숙주 세포에 의해 또는 체외 발현 시스템에 의해 공급될 수 있다. 발현 벡터는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 코스미드, 플라스미드(예: 네이키드 또는 리포솜에 포함된) 및 바이러스(예: 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스)와 같은 기술에서 알려진 모든 것을 포함한다.
[0097] "상동성(homologous)"은 두 폴리펩티드 또는 두 핵산 분자 사이의 서열 유사성 또는 서열 정체성을 가리킨다. 두 개의 비교 서열의 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 서브 유닛에 의해 점유될 때, 예를 들어, 두 DNA 분자의 각 위치가 아데닌에 의해 점유되면, 분자는 그 위치에서 상동성이 된다. 두 서열 사이의 상동성 백분율은 두 서열이 공유하는 일치 위치 또는 상동 위치의 수를 비교한 위치의 수로 나눈 값에 100을 곱한 함수이다. 예를 들어, 두 서열에서 10개의 위치 중 6개 일치하거나 상동이면 두 서열은 60% 상동이다. 예로써, DNA 서열은 ATTGCC 및 TATGGC는 50% 상동이다. 일반적으로, 두 서열이 최대 상동성을 제공하기 위해 정렬될 때 비교가 이루어진다.
[0098] 본원에 사용된 "면역글로불린" 또는 "Ig"라는 용어는 항체 역할을 하는 단백질의 한 종류로 정의된다. B 세포에 의해 발현되는 항체를 때때로 BCR(B 세포 수용체) 또는 항원 수용체라고도 한다. 이 부류의 단백질에 포함된 5가지 구성원은 IgA, IgG, IgM, IgD 및 IgE이다.
[0099] "분리된(isolated)"은 자연 상태에서 변경되거나 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 자연적으로 존재하는 핵산 또는 펩티드는 "분리된" 것이 아니지만, 자연 상태의 공존 물질로부터 부분적으로 또는 완전히 분리된 동일한 핵산 또는 펩티드는 “분리된” 것이다. 분리된 핵산 또는 단백질은 상당히 정제된 형태로 존재할 수 있으며, 또는 예를 들어 숙주 세포와 같은 비-자연 환경에 존재할 수 있다. "분리된" 생물학적 성분(예: 핵산, 단백질 또는 세포)가 다른 생물학적 성분(세포 잔해, 다른 단백질, 핵산 또는 세포 종류)로부터 상당히 분리되거나 정제되었다. “분리”된 생물학적 성분에는 표준 정화 방법에 의해 정제된 성분들이 포함된다.
[00100] 질병 예방, 치료 또는 개선: 질병 "예방"은 질병의 완전한 발달을 억제하는 것을 의미한다. "치료"는 질병 또는 병리학적 상태의 징후 또는 증상이 시작된 후 이를 개선하는 치료적 개입을 의미한다. "개선"은 질병의 징후 또는 증상의 수 또는 중증도의 감소를 의미한다.
[00101] 본원에 사용된 바와 같이, 재조합체는 일반적으로 하기와 같이 설명된다: 재조합 핵산 또는 단백질은 자연적으로 발생하지 않는 서열을 가지거나 서열의 달리 분리된 2개의 세그먼트의 인공 조합에 의해 만들어진 서열을 갖는 것이다. 이 인공적인 조합은 종종 화학적 합성 또는 유전 공학 기술과 같은 분리된 핵산 세그먼트의 인공 조작에 의해 수행된다.
[00102] 본원에 사용된 바와 같이, 일반적으로 발생하는 핵산 염기에 대해 하기 약어가 사용된다. "A"는 아데노신, "C"는 시토신, "G"는 구아노신, "T"는 티미딘, "U"는 우리딘을 나타낸다.
[00103] 본원에 사용된 용어 "백혈구" 또는 "백혈구"는 단핵구(monocyte), 호중구(neutrophil), 호산구(eosinophil), 호염기구(basophil) 및 림프구(lymphocyte)를 포함한 면역 세포를 가리킨다. 본원에서 사용되는 용어 "림프구"라는 용어는 림프에서 흔히 발견되는 세포를 가리키며, 자연살해세포(NK 세포), T 세포 및 B 세포를 포함한다. 위에 열거된 면역세포의 종류가 더 많은 부분집합으로 나눌 수 있다는 것은 기술력 중 하나로 인정받을 것이다.
[00104] 본원에 사용된 용어 "종양 침윤 백혈구(tumor infiltrating leukocytes)"는 고형 종양에 존재하는 백혈구를 가리킨다.
[00105] 본원에 사용된 용어 "혈액 시료"는 혈장, 혈액에서 분리된 혈액 세포 등과 같은 혈액에서 제조된 임의의 시료를 지칭한다.
[00106] 본원에 사용된 용어 "정제 샘플"은 하나 이상의 세포 하위 집합이 농축된 샘플을 나타낸다. 샘플은 크기, 단백질 발현 등의 특성에 따라 세포를 제거하거나 분리함으로써 정제될 수 있다.
[00107] 본원에서 유용한 약학적으로 허용가능한 담체(비히클)는 종래의 기술이다. Remington‘s Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 15th Edition(1975)은 하나 이상의 치료 조성물과 추가 약제의 약제학적 전달에 적합한 조성물 및 제형을 기술한다.
[00108] 본원에 제공된 조성물 및 세포는 임의의 적합한 방법에 의해 투여될 수 있다. 본원에 제공된 구체예의 조성물 및 세포는 다양한 형태일 수 있다. 예를 들어, 액체 용액(예: 주사 가능한 용액 및 불용성 용액)과 같은 액체 및 반고체, 분산액 또는 현탁액, 리포솜 및 좌제(suppository)가 포함된다. 형태는 의도된 투여 방식 및 치료 적용 방식에 따라 다르다. 일부 구체예에서, 조성물은 주사가능한 또는 주입가능한 용액의 형태이다. 일부 구체예에서, 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 일부 구체예에서, 치료 조성물(약제학적 조성물)은 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 치료 분자는 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 치료 조성물은 예를 들어 표적 부위에 주사에 의해 국부적으로 투여된다. 본원에 사용된 "비경구 투여" 및 "비경구 투여되는"이라는 문구는 일반적으로 주사에 의한 경장(enteral) 및 국소(topical) 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관간, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
[00109] 일반적으로, 전달에 적합한 담체 또는 비히클의 성질은 사용되는 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 비경구 제형은 일반적으로 비히클로서 물, 생리 식염수, 균형 염 용액, 수성 덱스트로스, 글리세롤 등과 같은 약제학적 및 생리학적으로 허용되는 유체를 포함하는 주사 가능한 유체를 포함한다. 고체 조성물(예를 들어, 분말, 알약, 정제 또는 캡슐 형태)의 경우, 종래의 무독성 고체 담체는 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분 또는 마그네슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 생물학적으로 중성인 담체에 더하여, 투여될 약학 조성물은 습윤제 또는 유화제, 방부제, 및 pH 완충제 등과 같은 무독성 보조 물질, 예를 들어 아세트산나트륨 또는 소르비탄 모노라우레이트(sorbitan monolaurate)를 소량 함유할 수 있다.
[00110] 일부 구체예에서, 조성물, 그것이 용액이든 현탁액이든 또는 기타 유사한 형태이든 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: DMSO, 주사용수와 같은 멸균 희석제, 식염수, 바람직하게는 생리 식염수, 링거액, 등장성(isotonic) 염화나트륨, 용매 또는 현수 매질로 사용될 수 있는 합성 모노 또는 다이글리세라이드와 같은 고정유, 폴리에틸렌글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 용매; 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르브산 또는 비황산 나트륨과 같은 산화방지제; 에틸렌디아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid)과 같은 킬레이트제; 아세테이트, 구연산염 또는 인산염과 같은 완충제와 염화나트륨 또는 덱스트로스 같은 긴장성 조절제.
[00111] 본원에 기재된 조성물 및 방법이 치료할 수 있는 질병은 바이러스 감염과 같은 미생물 감염을 포함한다.
[00112] 본원에 사용된 "바이러스 감염"은 체내에 바이러스가 존재함에 따라 발생하는 감염을 의미한다. 바이러스 감염은 만성 또는 지속적인 바이러스 감염을 포함하며, 이는 숙주를 감염시킬 수 있고 숙주의 세포 내에서 치명적임을 입증하기 전에 장기간(보통 몇 주, 몇 달 또는 몇 년)에 걸쳐 번식할 수 있는 바이러스 감염이다. 만성 감염을 일으키는 바이러스로는 인유두종 바이러스(HPV), 헤르페스 심플렉스 및 기타 헤르페스 바이러스, B형 간염 및 C형 간염 바이러스, 기타 간염 바이러스, 인간 면역결핍증 바이러스 및 홍역 바이러스가 포함되는데, 이 바이러스들은 모두 중요한 임상 질환을 일으킬 수 있다. 장기간의 감염은 궁극적으로 예를 들어 C형 간염 바이러스 간암의 경우 환자에게 치명적일 수 있는 질병의 유도로 이어질 수 있다. 본원발명에 따라 치료될 수 있는 다른 만성 바이러스 감염에는 엡스타인 바 바이러스(EBV) 뿐만 아니라 종양과 관련될 수 있는 바이러스와 같은 다른 바이러스를 포함한다.
[00113] 재조합 동종이형 CD4+ HIV 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물 및 본원에 기재된 방법으로 치료 또는 예방할 수 있는 바이러스 감염의 예는 레트로 바이러스(예: 인간 T-세포 림프영양 바이러스(HTLV) ), 특히 유형 I 및 II 그리고 인간 면역결핍 바이러스(HIV))에 의한 바이러스 감염이 포함된다. 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에는 상기 감염과 관련된 하나 이상의 증상 완화, 바이러스 복제 및/또는 바이러스 부하의 억제, 감소 또는 억제, 및/또는 면역 반응의 향상을 포함하나 이에 국한되지는 않는다.
[00114] 본원에 사용된 바와 같이, "면역결핍"은 면역계의 적어도 하나의 필수 기능이 결여된 것을 의미한다. 본원에 사용된 "면역결핍 대상체"(예: 인간)는 면역계의 특정 구성요소가 결여되어 있거나 면역계의 특정 구성요소(예: B 세포, T 세포, NK 세포 또는 대식세포)의 기능이 결여된 것을 말한다. 어떤 경우에는 면역결핍 대상체는 기능 면역 세포(예: B 세포, T 세포 또는 NK 세포)의 발달을 막거나 억제하는 하나 이상의 유전적 변형을 포함한다. 일부 예에서, 유전적 변형은 IL17 또는 IL17수용체에 있다.
[00115] 본원에 사용된 "면역억제된(immunosuppressed)"은 면역계의 활동이나 기능의 감소를 나타낸다. 예를 들어, 대상체는 면역억제 화합물을 사용한 치료나 질병이나 장애(예를 들어, HIV 감염이나 유전적 결함으로 인한 면역억제)의 결과로 면역억제를 받을 수 있다. 어떤 경우에는 T 세포와 같은 기능적 면역 세포의 발달을 막거나 억제하는 유전적 돌연변이의 결과로 면역 억제가 발생한다.
[00116] 본 발명의 일부 구체예에서, "치료 유효량"은 HIV 단백질, 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물과 같은 표적 항원과 함께 CD4+와 같은 재조합 동종이계 또는 자가 T세포의 양으로, 본원에 기술된 바와 같이 재조합 T-세포(예를 들어, CD4+ T 세포) 백신 세포 또는 본 발명의 이러한 세포를 포함하는 조성물이 투여되지 않은 동물 또는 동물의 그룹(예를 들어, 2, 3, 5, 10 또는 그 이상의 동물들)에서바이러스 역가 또는 미생물 역가 대비, 재조합 동유전자 CD4+ HIV 백신 세포 또는 그러한 세포를 포함하는 조성물이 투여되고 본원에 기재된 관련방법으로 처리된 대상체/환자/동물에서 바이러스 역가가 적어도 2.5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 25%, 적어도 35%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90까지 %, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 감소시키는 결과를 초래한다.
[00117] 특정 구체예에서, 재조합 동종이계 또는 자가 CD4+ HIV 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물은 항미생물제, 항바이러스제 및/또는 기타 치료제와 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로, 재조합 동종이계 또는 자가 CD4+ HIV 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물은 항미생물제, 항바이러스제 및 기타 치료제가 투여되는 시간보다 앞서 선택된 시간에 투여될 수 있다.
[00118] 본원에 제공된 바와 같이, 재조합 T-세포(예를 들어, CD4+ 세포)는 일부 구체예에서 세포가 투여되는 환자와 비교하여 동종이계일 수 있거나, 자가조직이거나 HLA 일치될 수 있다.
세포 근원(Cell Sources)
[00119] 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 폐기되고 식별되지 않은 백혈구 감소 필터(American Red Cross)에서 얻은 샘플의 Ficoll-Hypaque 밀도 구배 원심분리 또는 사전 동의 하에 건강한 지원자의 헌혈로 분리될 수 있다. 원하는 세포 유형에 대한 세포 모집단, 원하는 세포 유형을 선택하거나 풍부하게 하는 방법에 대한 설명은 예를 들어 미국특허번호 9,347,044에서 확인할 수 있다. 포유류를 치료하는 본원에 기술된 방법에 사용하기 위한 세포 집단은 인간 세포와 같이 종이 일치해야 한다. 세포는 동물, 예를 들어 인간 환자로부터 얻을 수 있다. 세포를 동물에서 얻은 경우 형질전환과 같은 배양에서 먼저 확립되었을지도 모른다. 또는 더 바람직하게는 예비 정제 방법을 거칠 수 있다. 예를 들어, 세포 집단은 세포 표면 마커의 발현에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해 조작될 수 있고; 시험관내 또는 생체 내에서 하나 이상의 항원으로 자극되고; 시험관내 또는 생체 내에서 하나 이상의 생물학적 변형제로 처리되고; 또는 이들 중 일부 또는 전부의 조합. 예시적인 구체예에서, 세포 집단은 비-T 세포 및/또는 특정 T 세포 서브세트의 감소(depletion)를 위해 음성 선택을 받는다. 음성 선택은 CD19 및 CD20; 단핵구 마커 CD14; NK 세포 마커 CD56와 같은 B 세포 마커를 포함한 다양한 분자의 세포 표면 발현에 기초하여 수행될 수 있다. 대안적으로, 세포 집단은 CD34.sup,+가 아닌 조혈 세포 및/또는 특정 조혈 세포 서브세트의 감소에 대해 음성 선택을 받을 수 있다. 음성 선택은 예를 들어, MACS 또는 컬럼 분리를 통한 다른 세포 유형의 분리에 사용될 수 있는 항체 칵테일(예: CD2, CD3, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD19, CD56, CD123 및 CD235a)과 같은 다양한 분자의 세포 표면 발현을 기반으로 수행될 수 있다.
[00120] 세포 모집단은 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 혼합 집단을 함유하는 전혈 또는 이의 분획, 비장 세포, 골수 세포, 종양 침윤 림프구, 백혈구 성분채집술(leukapheresis)에 의해 수득된 세포, 생검 조직, 림프절, 예를 들어, 종양에서 배출되는 림프절을 포함한다. 적합한 공여자는 면역된 공여자, 면역되지 않은 공여자, 치료되거나 치료되지 않은 공여자가 포함된다. “치료된” 공여자는 하나 이상의 생물학적 변형제에 노출된 공여자이다. “미처리” 공여자는 하나 이상의 생물학적 변형제에 노출되지 않은 공여자이다.
[00121] T 세포를 포함하는 세포 집단을 얻는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 당업계에 공지된 방법에 따라 기재된 바와 같이 수득될 수 있다. 이러한 방법의 예는 실시예에 제시되어 있으며 Kim et al. (1992); Biswas et al. (1990); Biswas et al. (1991)이 논하고 있다.
[00122] 대상체로부터 세포 샘플을 얻은 다음 원하는 세포 유형에 맞게 농축(enrich)할 수 있다. 예를 들어, PBMC는 본원에 기재된 바와 같이 혈액으로부터 분리될 수 있다. 역류 원심분리(elutriation)를 사용하여 PBMC에서 T 세포를 농축할 수 있다. 세포는 또한 원하는 세포 유형의 세포 표면에 있는 에피토프에 결합하는 항체를 사용한 분리 및/또는 활성화와 같은 다양한 기술을 사용하여 다른 세포로부터 분리될 수 있다. 예를 들어 일부 T-세포 분리 키트는 항체 결합 비드를 사용하여 세포를 활성화한 다음 같은 비드로 컬럼을 분리할 수 있다. 사용될 수 있는 또 다른 방법은 수용체 결합에 의해 세포를 활성화하지 않고 특정 세포 유형을 선택적으로 농축하기 위해 세포 표면 마커에 대한 항체를 사용하는 음성 선택을 포함한다.
[00123] 골수 세포는 장골능, 대퇴골, 경골, 척추, 늑골 또는 기타 골수강(madullary space)에서 얻을 수 있다. 골수는 환자에게서 채취하여 다양한 분리 및 세척 절차를 통해 분리할 수 있다. 골수 세포의 공지된 분리 절차는 다음 단계를 포함한다: a) 골수 현탁액을 3개의 분획으로 원심 분리하고 중간 분획 또는 버피 코트를 수집하는 단계; b) (a)단계의 버피 코트 단편을 분리 유체, 일반적으로 Ficoll(Pharmacia Fine Chemicals AB의 상표)에서 한 번 더 원심분리하고 골수 세포를 포함하는 중간 단편이 수집되는 단계 및 c) 재융해성(transfusable) 골수 세포의 회수를 위해 (b)단계로부터 수집된 단편을 세척하는 단계.
[00124] T 세포가 풍부한(enriched) 세포 모집단을 사용하려는 경우, 연속 유동 세포 분리기를 사용하여 백혈구 성분채집법(leukapheresis)과 기계적 성분채집법(mechanical apheresis)에 의해 혼합된 세포 모집단으로부터 이러한 세포 모집단을 얻을 수 있다. 예를 들어, T 세포는 Ficoll-HypaqueTM 구배를 통한 분리, Percoll 구배를 통한 분리 또는 용리(elutriation)를 포함하여 공지된 방법을 통해 버피 코트로부터 분리될 수 있다.
바이러스 벡터 매개 전달 방법
[00125] 특정 구체예에서, 이식유전자(transgene)는 세포로의 유전자 전달을 매개하기 위해 바이러스 입자에 혼입된다. 일반적으로 바이러스는 생리학적 조건에서 적절한 숙주 세포에 노출되어 바이러스를 흡수할 수 있다(미국특허번호 9,089,520 참조). 본 방법은 하기 논의되는 바와 같이 다양한 바이러스 벡터를 사용하고 렌티바이러스 벡터도 포함하여 유리하게 사용된다.
1. 아데노바이러스
[00126] 아데노바이러스는 중간 크기의 DNA 게놈, 조작 용이성, 높은 역가, 넓은 표적 세포 범위 및 높은 감염성으로 인해 유전자 전달 벡터로 사용하기에 특히 적합하다. 대략 36kb 바이러스 게놈은 100-200개의 염기쌍(bp) 역 말단 반복부(ITR)로 둘러싸여 있으며, 여기에는 바이러스 DNA 복제 및 패키징에 필요한 시스 작용 요소가 포함되어 있다. 다른 전사 단위를 포함하는 게놈의 초기(E) 및 후기(L) 영역은 바이러스 DNA 복제의 시작에 따라 구분된다.
[00127] E1 영역(E1A 및 E1B)은 바이러스 게놈 및 몇몇 세포 유전자의 전사 조절을 담당하는 단백질을 인코딩한다. E2 영역(E2A 및 E2B)의 발현은 바이러스 DNA 복제를 위한 단백질 합성을 초래한다. 이들 단백질은 DNA 복제, 후기유전자 발현 및 숙주 세포 차단에 관여한다(Renan, M. J. (1990) Radiother Oncol., 19, 197-218). 대부분의 바이러스 캡시드(capsid) 단백질을 포함하는 후기유전자(L1, L2, L3, L4 및 L5)의 산물은 주요 후기 프로모터(MLP)에 의해 발행된 단일 1차 전사체의 상당한 처리 후에만 발현된다. MLP(16.8 map unit에 위치)는 감염 후기 단계에서 특히 효과적이며 이 프로모터에서 발행된 모든 mRNA는 5‘tripartite leader(TL) 서열을 가지고 있어 번역에 유용하다.
[00128] 아데노바이러스가 유전자 치료에 최적화되기 위해서는 큰 부분의 DNA가 포함될 수 있도록 운반 능력을 극대화하는 것이 필요하다. 또한 특정 아데노바이러스 산물과 관련된 독성 및 면역 반응을 줄이는 것이 매우 바람직하다. 두 가지 목표는 아데노바이러스 유전자의 제거가 양쪽 끝에 모두 기여한다는 점에서 어느 정도 동일하다. 본 방법의 실행에 의해, 상대적으로 용이하게 치료 작제물을 조작하는 능력을 유지하면서 이들 목표를 모두 달성하는 것이 가능하다.
[00129] DNA의 큰 변위는 바이러스 DNA 복제에 필요한 시스 요소가 모두 선형 바이러스 게놈의 양쪽 끝에 있는 역 말단 반복부(ITR)(100-200bp)에 국한되기 때문에 가능하다. ITR을 포함하는 플라스미드는 결함이 없는 아데노바이러스가 있는 상태에서 복제할 수 있다(Hay, R. T., et al., J Mol. Biol. 1984 Jun. 5; 175(4):493-510). 따라서 아데노바이러스 벡터에 이러한 요소를 포함하면 복제가 허용될 수 있다.
[00130] 또한, 바이러스 캡슐화를 위한 패키징 신호는 바이러스 게놈의 왼쪽 끝에 194-385 bp(0.5-1.1 map units) 사이에 국한된다(Hearing et al., J. (1987) Virol., 67, 2555-2558). 이 신호는 박테리오파지 람다 DNA의 단백질 인식 부위를 모방하는데, 여기서 특정 서열이 왼쪽 말단에 가깝지만, 돌출말단서열(cohesive end sequence) 외부는 DNA를 머리 구조에 삽입하는 데 필요한 단백질에 대한 결합을 매개한다. Ad의 E1 치환 벡터는 바이러스 게놈의 왼쪽 말단에 있는 450 bp(0-1.25 map units) 단편이 293개 세포에서 패키징을 지시할 수 있음을 입증했다(Levrero et al., Gene, 101:195-202, 1991).
[00131] 이전에는 아데노바이러스 게놈의 특정 영역이 포유류 세포의 게놈에 통합될 수 있고 이에 의해 인코딩되는 유전자가 발현될 수 있다는 것이 밝혀졌다. 이들 세포주는 세포주에 의해 인코딩된 아데노바이러스 기능이 결핍된 아데노바이러스 벡터의 복제를 지원할 수 있다. 야생형 바이러스나 조건부 결함이 있는 돌연변이와 같은 벡터를 “도움”으로써 복제 결핍 아데노바이러스 벡터를 보완하는 보고도 있었다.
[00132] 복제-결핍 아데노바이러스 벡터는 헬퍼 바이러스에 의해 트랜스 형태로 보완될 수 있다. 그러나, 복제 기능을 제공하는 데 필요한 헬퍼 바이러스의 존재는 모든 제제를 오염시킬 수 있기 때문에 이 관찰만으로는 복제 결함 벡터를 분리할 수 없다. 따라서, 복제-결함 벡터의 복제 및/또는 패키징에 특이성을 추가할 추가 요소가 필요했다. 그 요소는 아데노바이러스의 패키징 기능에서 파생된다.
[00133] 아데노바이러스에 대한 패키징 신호는 기존의 아데노바이러스 맵의 왼쪽 끝에 존재하는 것으로 나타났다(Tibbetts et. al.(1977) Cell, 12, 243-249). 이후 연구에서 게놈의 E1A(194-358 bp) 영역이 결실(deletion)된 돌연변이는 초기(ElA) 기능을 보완하는 세포주에서도 제대로 성장하지 못했다는 것을 보여주었다(Hearing and Shenk, (1983) J. Mol. Biol. 167, 809-822). 보상(compensating) 아데노바이러스 DNA(0-353 bp)가 돌연변이체의 우측 말단에 재조합되었을 때 바이러스는 정상적으로 패키징되었다. 추가 돌연변이 분석은 Ad5 게놈의 왼쪽 끝에 있는 짧고 반복적인 위치 의존적 요소를 확인했다. 반복체의 한 사본은 게놈의 양쪽 끝에 존재하는 경우 효율적인 패키징에 충분한 것으로 밝혀졌지만 Ad5 DNA 분자의 내부로 이동할 때는 그렇지 않은 것으로 밝혀졌다(Hearing et al., J. (1987) Virol., 67, 2555-2558).
[00134] 패키징 신호의 돌연변이 버전을 사용하여 다양한 효율성으로 패키징된 헬퍼 바이러스를 생성할 수 있다. 일반적으로 돌연변이는 점 돌연변이 또는 결실 돌연변이이다. 저효율 패키징을 하는 헬퍼 바이러스가 헬퍼 세포에서 성장할 때, 바이러스는 비록 야생형 바이러스에 비해 감소된 비율이지만 패키징되어 헬퍼의 증식을 허용한다. 그러나 이러한 헬퍼 바이러스가 야생형 패키징 신호를 포함하는 바이러스와 함께 세포에서 성장하면 돌연변이 버전보다 야생형 패키징 신호가 우선적으로 인식된다. 제한된 양의 패키징 인자를 감안할 때 야생형 신호를 포함하는 바이러스는 헬퍼와 비교할 때 선택적으로 패키징된다. 선호도가 충분히 크면 동질성에 가까운 스톡(stocks)이 달성될 수 있다.
[00135] 특정 조직 또는 종에 대한 ADV 구성의 친화성(tropism)을 개선하기 위해 수용체 결합 섬유 서열을 종종 아데노바이러스 분리체 사이에서 대체할 수 있다. 예를 들어, 아데노바이러스 5에서 발견되는 콕사키-아데노바이러스 수용체(CAR) 리간드는 아데노바이러스 35의 CD46-결합 섬유 서열을 대체할 수 있어, 인간 조혈세포에 대한 결합 친화력이 크게 향상된 바이러스를 만들 수 있다. 결과적으로 위형(pseudotyped) 바이러스인 Ad5f35는 임상적으로 개발된 여러 바이러스 분리체(isolates)에 기초가 되었다. 더욱이, 표적 세포에 대한 바이러스의 재표적화를 허용하도록 섬유를 변형시키는 다양한 생화학적 방법이 존재한다. 방법에는 이기능성 항체(한 쪽 끝은 CAR 리간드에 결합하고 한 쪽 끝은 표적 서열에 결합)의 사용과 맞춤형 아비딘 기반 키메라 리간드와의 결합을 허용하는 섬유의 대사 비오틴화(biotinylation)가 포함된다. 대안적으로, 리간드(예: 이종이작용성 링커(예: PEG 함유)에 의한 항 CD205)를 아데노바이러스 입자에 부착할 수 있다.
2. 레트로바이러스
[00136] 레트로바이러스는 역전사 과정에 의해 감염된 세포에서 그들의 RNA를 이중 가닥 DNA로 전환시키는 능력을 특징으로 하는 단일 가닥 RNA 바이러스 그룹이다(Coffin, (1990) In: Virology, ed., New York: Raven Press , pp. 1437-1500). 생성된 DNA는 프로바이러스로서 세포 염색체에 안정적으로 통합되고 바이러스 단백질의 합성을 지시한다. 이 통합은 수용 세포와 그 후에 따라오는 세포(descendants)에 바이러스 유전자 서열을 보존하게 한다. 레트로바이러스 게놈에는 각각 캡시드 단백질, 폴리머라제 효소 및 외피 성분을 코딩하는 세 가지 유전자(gag, pol 및 env)가 포함되어 있다. psi라고 하는 gag 유전자의 상류에서 발견된 염기서열은 게놈을 비리온(virion)으로 패키징하는 신호로 기능한다. 바이러스 게놈의 5‘ 끝과 3’ 끝에는 두 개의 긴 말단 반복(LTR) 서열이 존재한다. 이들은 강력한 프로모터 및 인핸서 서열을 포함하며 숙주 세포 게놈에 통합하는 데에도 필요하다(Coffin, 1990).
[00137] 레트로바이러스 벡터를 구성하기 위해 특정 바이러스 서열 대신에 프로모터를 인코딩하는 핵산을 바이러스 게놈에 삽입하여 복제 결함이 있는 바이러스를 생성한다. 비리온을 생산하기 위해, gag, pol 및 env 유전자를 함유하지만 LTR 및 psi 성분이 없는 패키징 세포주가 구축된다(Mann et al., (1983) Cell, 33, 153-159). 인간 cDNA를 함유하는 재조합 플라스미드가 레트로바이러스 LTR 및 psi 서열과 함께 이 세포주에 도입될 때(예: 인산칼슘 침전에 의해), psi 서열은 재조합 플라스미드의 RNA 전사체가 바이러스 입자로 패키징되도록 하고, 이후 배양 배지로 분비된다(Nicolas, J.F., and Rubenstein, J.L.R., (1988) In: Vectors: a Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Rodriquez and Denhardt, Eds.). Nicolas and Rubenstein; Temin et al., (1986) In: Gene Transfer, Kucherlapati (ed.), New York: Plenum Press, pp. 149-188; Mann et al., 1983). 재조합 레트로바이러스를 포함하는 배지를 수집하고, 선택적으로 농축하고, 유전자 전달에 사용한다. 레트로바이러스 벡터는 다양한 세포 유형을 감염시킬 수 있습니다. 그러나, 많은 유형의 레트로바이러스의 통합 및 안정적인 발현은 숙주 세포의 분열을 필요로 한다(Paskind et al., (1975) Virology, 67, 242-248). 최근 레트로바이러스 벡터의 특정 타겟팅이 가능하도록 설계된 접근법이 바이러스막에 갈락토스 잔기를 화학적으로 추가하여 레트로바이러스의 화학적 변형을 기반으로 개발되었다. 이러한 변형은 아시알로당 단백질(asialoglycoprotein) 수용체를 통한 간세포와 같은 세포의 특정 감염을 허용할 수 있으며, 이것이 바람직할 것이다.
[00138] 재조합 레트로바이러스의 표적화에 대한 다른 접근법은 레트로바이러스 외피 단백질과 특정 세포 수용체에 대한 바이오티닐화된(biotinylated) 항체를 사용하는 것으로 설계되었다. 항체는 스트렙트아비딘(streptavidin)을 사용하여 비오틴 성분을 통해 결합되었다(Roux et al., (1989) Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, 86, 9079-9083). 주요 조직적합성 복합체 클래스 I 및 클래스 II 항원에 대한 항체를 사용하여 표면 항원을 보유한 다양한 인간 세포의 감염이 시험관내 동종지향성(ecotropic) 바이러스로 입증되었다(Roux et al., 1989).
3. 아데노 관련 바이러스
[00139] AAV는 약 4700개 염기쌍의 선형 단일 가닥 DNA를 이용한다. 역반복서열은 게놈의 측면에 있다. 두 개의 유전자가 게놈 내에 존재하며, 다수의 별개의 유전자 산물을 생성한다. 첫 번째, cap 유전자는 VP-1, VP-2 및 VP-3의 세 가지 비리온 단백질(VP)을 생성한다. 두 번째, rep 유전자는 4개의 비구조 단백질(NS)을 인코딩한다. 이러한 rep 유전자 산물 중 하나 이상이 AAV 전사의 전사 활성화를 담당한다.
[00140] AAV에 있는 3개의 프로모터는 게놈에서 맵 단위의 위치에 따라 지정된다. 왼쪽에서 오른쪽으로 p5, p19 및 p40이다. 전사는 6개의 전사체를 생성하며, 2개는 3개의 프로모터 각각에서 시작되고 각 쌍 중 1개는 스플라이싱(splice)된다. 맵 유닛 42-46에서 파생된 스플라이스 사이트는 각 전사에 대해 동일하다. 4개의 비구조 단백질은 분명히 더 긴 전사체로부터 유래되고 3개의 비리온 단백질은 모두 가장 작은 전사체로부터 유래된다.
[00141] AAV는 인간의 병리학적 상태와 관련이 없다. 흥미롭게도, 효율적인 복제를 위해 AAV는 단순 헤르페스 바이러스 I 및 II, 거대세포바이러스(cytomegalo virus), 가성광견병바이러스(pseudorabies virus), 그리고 물론 아데노바이러스와 같은 바이러스의 "헬핑" 기능을 필요로 한다. 헬퍼 중 가장 큰 특징은 아데노바이러스이며, 이 바이러스의 많은 “초기” 기능은 AAV 복제를 돕는 것으로 나타났다. AAV rep 단백질의 낮은 수준의 발현은 AAV 구조 발현을 억제하는 것으로 여겨지며, 헬퍼 바이러스 감염은 이 차단을 제거하는 것으로 생각된다.
[00142] AAV 벡터의 말단 반복부는 변형된 AAV 게놈을 포함하는 AAV 또는 p201과 같은 플라스미드의 제한 엔도뉴클레아제 소화에 의해 또는 공지된 AAV 서열에 기초한 말단 반복부의 화학적 또는 효소적 합성을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 방법을 통해 얻을 수 있다(Samulski et al., J. Virol., 61:3096-3101 (1987)). 예를 들어, 결실 분석을 통해 기능(즉, 안정적이고 부위 특이적 통합)을 허용하는 데 필요한 AAV ITRs의 최소 서열 또는 부분을 결정할 수 있다. 또한 안정적인 부위 특이적 통합을 지시하는 말단 반복부의 능력을 유지하면서 서열의 사소한 변형이 허용될 수 있는지 결정할 수 있다.
[00143] AAV 기반 벡터는 시험관 내 유전자 전달을 위한 안전하고 효과적인 매개체로 입증되었으며 이러한 벡터는 생체 외 및 생체 내 모두에서 잠재적인 유전자 요법의 광범위한 적용을 위해 전임상 및 임상 단계에서 개발 및 테스트되고 있다. (Carter and Flotte, (1995) Ann. NY Acad. Sci., 770; 79-90; Chatteijee, et al., (1995) Ann. NY Acad. Sci., 770, 79-90; Ferrari et al., (1996) J. Virol., 70, 3227-3234; Fisher et al., (1996) J. Virol., 70, 520-532; Flotte et al., Proc. Nat'l Acad. Sci USA, 90, 10613-10617, (1993); Goodman et al. (1994), Blood, 84, 1492-1500; Kaplitt et al., (1994) Nat 'l Genet., 8, 148-153; Kaplitt, M.G., et al., Ann Thorac Surg. 1996 December; 62(6):1669-76; Kessler et al., (1996) Proc. Nat 'l Acad. Sci. USA, 93, 14082-14087; Koeberl et al., (1997) Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, 94, 1426-1431; Mizukami et al., (1996) Virology, 217, 124-130).
[00144] AAV-매개된 효율적인 유전자 전달 및 폐에서의 발현은 낭포성 섬유증의 치료를 위한 임상 시험으로 이어졌다(Carter and Flotte, 1995; Flotte et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, 90, 10613-10617, (1992)). 유사하게, 골격근에 디스트로핀 유전자의 AAV 매개 유전자 전달에 의한 근이영양증, 뇌에 티로신 하이드록실라제 유전자 전달에 의한 파킨슨병, 간으로의 인자 IX 유전자 전달에 의한 혈우병 B 및 심장으로의 혈관 내피 성장 인자 유전자에 의한 잠재적 심근경색증의 치료에 대한 전망은 이들 기관에서 AAV-매개 이식유전자 발현이 최근에 매우 효율적인 것으로 나타났기 때문에 유망한 것으로 보인다(Fisher et al., (1996) J. Virol., 70, 520-532; Flotte et al., 1993; Kaplitt et al., 1994; 1996; Koeberl et al., 1997; McCown et al., (1996) Brain Res., 713, 99-107; Ping et al., (1996) Microcirculation, 3, 225-228; Xiao et al., (1996) J. Virol., 70, 8098-8108).
4. 렌티바이러스 벡터
[00145] 특정 구체예에서, CXCL13 및 CD40L은 전기천공에 의해, 또는 핵산, 단백질, 부위 특정 형질감염, 자가 복제 RNA 바이러스 또는 통합-결핍 렌티바이러스 벡터에 의해 렌티바이러스, 감마-레트로바이러스, 알파 레트로바이러스 또는 아데노바이러스를 갖는 CD4 T 세포, T 세포 서브세트 및/또는 T 세포 전구체 내로 형질도입된다(이러한 벡터에 대해서는 미국특허번호 10,131,876 참조).
[00146] 특정 구체예에서, CD4 T 세포, T 세포 서브세트 및/또는 T 세포 전구체의 재조합 변형은 형질도입, 형질감염 또는 전기천공에 의해 수행될 수 있다.
[00147] 바람직하게는, 형질도입은 렌티바이러스, 감마-, 알파-레트로바이러스 또는 아데노바이러스로 또는 핵산(DNA, mRNA, miRNA, 안타고미르, ODNs), 단백질, 부위-특이적 뉴클레아제(아연 핑거 뉴클레아제, TALENs, CRISP/R), 자가 복제 RNA 바이러스(예: 말 뇌병증 바이러스) 또는 통합-결핍 렌티바이러스 벡터에 의한 전기천공 또는 형질감염으로 수행된다.
[00148] 보다 우선적으로, CD4 T 세포, T 세포 서브세트 및/또는 T 세포 전구체의 재조합 변형은 상기 세포를 렌티바이러스 벡터로 형질도입함으로써 수행될 수 있다(Cockrell Adam S et al., "Lentivirus 벡터에 의한 유전자 전달", Molecular Biotechnology, vol. 36, No. 3, Jul. 2007. 참조).
[00149] VSVG 위형(pseudotype)을 가진 렌티바이러스 벡터는 자동화된 제조 방법에서 효율적인 형질도입을 가능하게 한다. 그러나, 현재의 방법은 모든 유형의 렌티바이러스 벡터(예: 홍역 바이러스 (ML-LV), 긴팔원숭이 백혈병 바이러스(GALV), 고양이 내인성 레트로바이러스(RD114), 개코원숭이 내인성 레트로바이러스(BaEV) 유래 유사형 외피 포함)의 사용에 전적으로 적합하다. 감마 또는 알파 레트로바이러스 벡터와 같은 다른 바이러스 벡터를 사용할 수 있다. 본 발명에 기술된 자동화 제조를 사용하여 필요시 형질도입 인핸서 시약을 첨가할 수 있다.
5. 기타 바이러스 벡터
[00150] 다른 바이러스 벡터가 본 방법 및 조성물에서 발현 구성체로서 사용될 수 있다. 백시니아 바이러스(Ridgeway, (1988) In: Vector: A survey of molecule cloning vectors and their uses, pp. 467-492; Baichwal and Sugden, (1986) In, Gene Transfer, pp. 117-148; Coupar et al., Gene, 68:1-10, 1988) 카나리아 폭스바이러스 및 헤르페스 바이러스와 같은 바이러스 유래 벡터가 사용된다. 이러한 바이러스는 다양한 포유동물 세포로 유전자를 전달하는 데 사용하기 위한 몇 가지 기능을 제공한다.
[00151] 일단 구성물이 세포 내로 전달되면, 전이유전자를 인코딩하는 핵산은 다른 부위에 위치하고 발현된다. 특정 구체예에서, 전이유전자를 인코딩하는 핵산은 세포의 게놈 내로 안정적으로 통합된다. 이러한 통합은 상동 재조합(유전자 대체)을 통한 동족 위치 및 방향에 있거나 무작위, 비특이적 위치(유전자 증대)에 통합된다. 그러나 추가적인 구체예에서, 핵산은 DNA의 분리된 에피솜 세그먼트로 세포에서 안정적으로 유지된다. 이러한 핵산 세그먼트 또는 에피솜은 숙주 세포 주기와 무관하거나 동기화된 상태에서 유지 및 복제를 허용하기에 충분한 서열을 인코딩한다. 발현 구조가 세포에 어떻게 전달되고 세포에서 핵산이 어디에 남아 있는지는 사용된 발현 구조의 유형에 따라 달라진다.
[00152] 이종 핵산 분자를 세포에 도입하는 이러한 방법은 비제한적이며 임의의 방법을 사용할 수 있다. 이들은 CD40L, CXCL13, 및/또는 본원에 제공된 바와 같은 HIV 단백질일 수 있는 표적 항원을 이종적으로 발현하는데 사용될 수 있다.
질병 치료 방법
[00153] 본 발명의 방법은 또한 예를 들어 주입에 의한 세포 투여가 유익할 수 있는 질병의 치료 또는 예방 방법을 포함한다. 일부 구체예에서, 질환은 바이러스 감염이다. 일부 구체예에서, 감염은 HIV 감염이다. 일부 구체예에서, 방법은 본원에 제공된 바와 같은 조성물 또는 세포를 바이러스 감염이 있는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 체액성 및/또는 세포성 면역 반응과 같은 면역 반응을 증가시킨다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 HIV 감염에 대한 것이다.
[00154] 일부 구체예에서, 대상체의 HIV를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 본원에 제공된 임의의 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 제약 조성물을 지칭할 수 있다. 본원에 제공된 바와 같이, 조성물은 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 정맥내로 또는 주입에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 세포는 대상체와 동종이계이거나 HLA-매칭되지 않는다. 일부 구체예에서, 세포는 대상체의 자가조직이다. 일부 구체예에서, 조성물 중 세포의 투여량은 약 1 x 106내지 약 5 x 106이다.
[00155] 일부 구체예에서, 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 본원에 제공된 임의의 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 표적 항원에 대한 것이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 체액성 및/또는 세포성 면역 반응이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 NK 세포에서 증가된 것이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 NKT 세포에서 증가된 것이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 활성화된 NK 세포의 증가이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 활성화된 B 세포의 증가이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 활성화된 CDS T 세포의 증가이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 CD3+ 및 CD38+ 세포의 백분율로 측정되는 활성화된 T 세포의 증가이다. 일부 구체예에서, 증가된 면역 반응은 CD3+ 및 CD25+ 세포의 백분율로 측정되는 활성화된 T 세포의 증가이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 HIV 단백질이다. 일부 구체예에서, HIV 단백질은 HIV Tat(길이가 72개 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu 또는 Vif 또는 이들의 조합 중 하나 이상이다. 일부 구체예에서, 표적 항원은 예를 들어 이종 핵산 분자로부터의 전체 HIV 게놈으로서 발현된다. 일부 구체예에서, HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아 비활성화된 HIV 게놈 작제물을 생성한다. 일부 구체예에서, HIV 게놈은 복제할 수 있는 HIV 바이러스 입자를 생성하지 않는다. 일부 구체예에서, HIV 게놈은 T-세포를 감염시킬 수 있는 HIV 바이러스 입자를 생성하지 않는다. 일부 구체예에서, 세포는 대상체에 대해 동종이계이다. 일부 구체예에서, 세포는 환자와 HLA-매칭되지 않는다. 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 약 1 x 106 내지 약 5 x 106세포이다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 바이러스 감염에 대한 것이고, 여기서 바이러스 감염은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염일 수 있다.
[00156] 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 조성물을 1회 이상 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 매주 1회부터 2주마다 1회, 3주마다 1회, 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회 또는 7개월마다 1회 또는 8개월마다 1회 또는 9개월마다 1회 또는 10개월마다 1회 또는 11개월마다 1회 또는 유지 치료로서 매년 1회까지 투여된다. 예를 들어, 상기 조성물은, 대상체가 치료되고 있는 개선, 감소되거나 검출할 수 없는 바이러스 역가, 또는 안정한/비진행성 질환을 나타내는 한 투여될 수 있다.
[00157] 예를 들어, 세포 재조합 동종 또는 자가 CD4+ HIV 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물과 같은 세포가 세포 치료에 사용될 수 있다. 세포는 기증자로부터 얻을 수 있거나 환자로부터 얻은 세포일 수 있다. 예를 들어, 상기 세포는 재생에 사용될 수 있으며, 예를 들어 비활성화된 세포의 기능을 대체할 수 있다. 세포는 또한 생물학적 제제가 예를 들어, 병든 골수 또는 전이성 침착물(metastatic deposit)과 같은 특정 미세환경에 전달될 수 있도록 이종 유전자를 발현하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 중간엽 기질 세포 또한 면역억제 활성을 제공하는 데 사용되어 왔으며 이식편 대 숙주 질환 및 자가면역 장애의 치료에 사용될 수 있다.
[00158] 다른 예에서, 재조합 동종 또는 자가 CD4+ HIV 백신세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물은 다양한 질병 및 상태를 치료하는 데 사용된다.
[00159] 접종과 관련된 "단위 용량"이라는 용어는 포유류에 대한 단일 용량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 말하며, 각 단위는 필요한 희석제와 관련하여 바람직한 면역 유발 효과를 산출하기 위해 미리 결정된 양의 제약 성분을 포함한다. 접종물(inoculum)의 단위 투여량에 대한 사양은 제약 조성물의 고유한 특성 및 달성되는 특정 면역학적 효과에 의해 지시되고 좌우된다.
[00160] 재조합 동종 또는 자가 CD4+ HIV의 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물을 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은 HIV 감염 세포의 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 97% 이상이 사멸되도록 하는 양일 것이다. 이 용어는 또한 "충분한 양"과 동의어이다.
[00161] 임의의 특정 적용을 위한 유효량은 치료되는 질환 또는 상태, 투여되는 특정 조성물, 대상체의 크기, 및/또는 질환 또는 상태의 중증도와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 과도한 실험을 필요로 하지 않고 여기에 제시된 특정 조성물의 유효량을 경험적으로 결정할 수 있다.
[00162] 세포, 조직 또는 유기체에 적용될 때, "접촉된" 및 "노출된"이라는 용어는 예를 들어 화학요법제 또는 방사선요법제와 같은 약제학적 조성물 및/또는 다른 약제가 표적 세포, 조직 또는 유기체에 전달되거나 표적 세포, 조직 또는 유기체와 직접 병치되는 과정을 설명하기 위해 본원에 사용된다. 세포 사멸 또는 정지를 달성하기 위해, 약제학적 조성물 및/또는 추가 제제(들)이 세포를 사멸시키거나 분열을 방지하는데 효과적인 조합된 양으로 하나 이상의 세포에 전달된다. 약제학적 조성물의 투여는 수분 내지 수주 범위의 간격으로 다른 제제(들)에 선행하거나, 동시 진행 및/또는 후속할 수 있다. 제약 조성물과 다른 제제가 세포, 조직 또는 유기체에 별도로 적용되는 구체예에서 일반적으로 각 전달 시간 사이에 상당한 기간이 만료되지 않도록 보장하여 제약 조성물과 제제가 여전히 세포, 조직 또는 유기체에 효과적으로 결합된 효과를 발휘할 수 있을 것이다. 예를 들어, 이러한 경우에, 세포, 조직 또는 유기체를 약제학적 조성물과 실질적으로 동시에(즉, 약 1분 이내), 2, 3, 4 또는 그 이상의 양상으로 접촉시킬 수 있는 것으로 고려된다. 다른 측면에서, 발현 벡터를 투여하기 전 및/또는 후에, 하나 이상의 제제는 실질적으로 동시에, 약 1분 내지 약 24시간 내지 약 7일 내지 약 1 내지 약 8주 또는 그 이상, 및/또는 그 전 및/또는 그 안에서 유도 가능한 임의의 범위 내에서 투여될 수 있다. 또한, 본원에 제공된 약제학적 조성물 및 하나 이상의 제제의 다양한 조합 요법이 사용될 수 있다.
환자에게 투여하기 위한 제형 및 경로
[00163] 임상 적용이 고려되는 경우, 의도된 적용에 적합한 형태로 약제학적 조성물(발현 작제물, 발현 벡터, 융합 단백질, 형질감염 또는 형질도입 세포)을 제조하는 것이 필요할 것이다. 일반적으로, 이것은 본질적으로 발연인자(pyrogen) 뿐만 아니라 인간이나 동물에 해로울 수 있는 기타 불순물이 없는 조성물의 제조를 수반할 것이다.
[00164] 재조합 동종이계 또는 자가 CD4+ HIV 백신 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물은, 예를 들어 용량당 약 1-500만 세포의 용량으로 전달될 수 있다. 바이알 또는 기타 용기는 예를 들어 약 0.25 ml 내지 약 10 ml의 바이알 당 부피가 예를 들어, 약 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10 ml의 바이알 당 예를 들어 약 2 ml의 재조합 세포를 포함하는 상태로 제공될 수 있다.
[00165] 일반적으로 재조합 세포가 환자에게 주입될 때 적절한 염분과 완충제를 사용하기를 원할 수 있다. "약제학적으로 또는 약리학적으로 허용되는"이라는 문구는 동물 또는 인간에게 투여될 때 부작용, 알레르기 또는 기타 이상 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 이러한 배지와 작용제를 약학적으로 활성 물질에 사용하는 것이 알려져 있다. 임의의 통상적인 배지 또는 제제가 벡터 또는 세포와 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 보조 활성 성분이 또한 조성물에 포함될 수 있다.
[00166] 제형화 시, 용액은 투여 제제와 양립할 수 있는 방식으로 치료적으로 효과적인 양으로 투여된다. 제형은 주사용 용액, 약물 방출 캡슐 등과 같은 다양한 제형으로 용이하게 투여된다. 예를 들어, 수용액에서 비경구 투여의 경우, 용액은 필요에 따라 적절하게 완충될 수 있고 액체 희석제는 먼저 충분한 식염수 또는 포도당과 등장성(isotonic)이 된다. 이러한 특정 수용액은 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 투여에 특히 적합하다. 이와 관련하여, 멸균 수성 매체를 사용할 수 있다. 예를 들어, 1회 복용량은 등장성 NaCl 용액 1ml에 용해될 수 있고 피하분해액(hypodermoclysis fluid) 1000ml에 첨가되거나 제안된 주입 부위에 주입될 수 있다(예: “Remington’s Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, pages 1035-1038 and 1570-1580 참조). 치료 대상자의 상태에 따라 일부 투여량의 변화가 불가피하게 발생한다. 투여 책임자는 어떤 경우에도 개별 대상체에 대한 적절한 용량을 결정할 것이다. 더욱이, 인간 투여의 경우, 제제는 FDA 생물 제제 표준에서 요구하는 무균, 발열성 및 일반 안전 및 순도 표준을 충족할 수 있다.
[00167] 또한 특정 환자의 경우 이 치료를 주기적으로 반복하여 남아 있는 바이러스/비리온에 대한 면역계 반응을 높일 것으로 예상된다. 이러한 주기적 치료는 환자가 안정형이거나 감지할 수 없는 질병을 얻기 위해 필요로 하는 한 유지 치료로서 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 월 1회 부터, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 7개월에 1회, 8개월에 1회, 9개월에 1회, 10개월에 1회, 11개월에 한 번, 또는 1년에 1회 까지 다양할 수 있다.
[00168] 일부 구체예에서, CD40L 및 CXCL13을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산으로 형질감염되거나 형질도입된 분리된 세포가 본원에 제공된다.
[00169] 일부 구체예에서, CD40L은 다음을 갖는 아미노산 서열을 포함한다:
SEQ ID NO: 2에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖고, 여기서 CXCL13은 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00170] 일부 구체예에서, 세포는 T 세포이다.
[00171] 일부 구체예에서, 세포는 이종 단백질을 인코딩하는 제2 및/또는 제3 핵산으로 형질도입되거나 형질감염된다.
[00172] 일부 구체예에서, 제2 핵산은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하고, 여기서 HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 여기서 HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않고, HIV 게놈 작제물을 비활성화한다.
[00173] 일부 구체예에서, CD40L 및 CXCL13을 인코딩하는 하나 이상의 이종 핵산 분자를 포함하는 CD4+ 세포가 본원에 제공된다.
[00174] 일부 구체예에서, CD40L은 SEQ ID NO: 2에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CXCL13은 SEQ ID NO: 1에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00175] 일부 구체예에서, 이종 CD40L 단백질 및 이종 CXCL13 단백질을 포함하는 CD4+ 세포가 본원에서 제공된다.
[00176] 일부 구체예에서, CD4+ 세포는 인간 면역 결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하는 이종 핵산 분자를 추가로 포함하고, 여기서 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈 핵산은 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 HIV 게놈 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아 HIV 게놈 작제물을 비활성화한다.
[00177] 일부 구체예에서, 본원에 제공된 방법은 상술한 임의의 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체의 HIV를 치료하는 방법이다.
[00178] 일부 구체예에서, 본원에 제공된 방법은 필요한 대상체의 면역반응을 증가시키는 것으로, 상기 설명된 세포의 효과적인 양을 투여하는 것을 포함한다. [00179] 일부 구체예에서, 세포는 대상체에 대해 동종이계이다.
[00180] 일부 구체예에서, 세포는 환자와 HLA-매칭되지 않는다.
[00181] 일부 구체예에서, 세포의 투여량은 약 1-5 x 106의 범위이다.
[00182] 일부 구체예에서, 바이러스 감염은 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)이다.
[00183] 일부 구체예에서, 대상체의이식편 대 바이러스(GVV)가 증가하는 동안 이식편 대 숙주 질환(GVHD)이 감소되거나 제거된다.
[00184] 일부 구체예에서, 면역 반응의 치료 또는 증가는 대상체가 개선, 감소되거나 검출할 수 없는 바이러스 역가, 또는 안정/비진행 질병을 나타내는 한 매주 1회부터 2주마다 1회, 3주마다 1회, 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월에 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회 또는 1년마다 1회까지 유지 치료로서 일정기간 동안 주기적으로 반복된다.
[00185] 일부 구체예에서, 세포성 및 체액성 면역이 대상체에서 유도된다
[00186] 일부 구체예에서, 본원에 제공된 구체예는 또한 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다:
1. CD40L 및 CXCL13을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 비상동 핵산 분자를 포함하는 세포.
2. 구체예 1에 있어서, 상기 CD40L이 SEQ ID NO: 4에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 CXCL13이 SEQ ID NO: 3에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 세포.
3. 구체예 1에 있어서, 상기 세포가 CD40L 및 CXCL13을 비상동적으로 발현하는 것인 세포.
4. 구체예 1에 있어서, 상기 세포가 분리된 세포인 세포.
5. 구체예 1에 있어서, 상기 세포는 CD4+ T 세포와 같은 T 세포인 세포.
6. 구체예 1에 있어서, 상기 세포가 비상동 단백질 또는 표적 항원을 인코딩하는 제2 및/또는 제3 핵산으로 형질도입되거나(transduced) 형질감염된(transfected) 것인 세포.
7. 구체예 6에 있어서, 상기 제2 핵산이 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하고, 상기 HIV 게놈의 핵산이 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 상기 HIV 게놈의 핵산이 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않고, 비활성화된 HIV 게놈의 작제물을 생성하는 세포.
8. 구체예 6에 있어서, 상기 표적 항원은 HIV 단백질인 세포.
9. 구체예 8에 있어서, 상기 HIV 단백질이 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu, 또는 Vif 또는 이들의 임의의 조합인 세포.
10. 구체예 1-9 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포가 CD4+ T 세포인 세포.
11. SEQ ID NO: 3에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 및/또는 SEQ ID NO: 4에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 하나 이상의 비상동 핵산 분자를 포함하는 CD4+ T-세포.
12. 구체예 11에 있어서, 상기 세포가 CD40L을 발현하는 CD4+ T-세포.
13. 구체예 11 및 12에 있어서, 상기 세포가 CXCL13을 발현하는 것인 CD4+ T-세포.
14. 구체예 11에 있어서, 상기 세포가 CD40L 및 CXCL13을 발현하는 것인 CD4+ T-세포.
15. 구체예 11에 있어서, 상기 세포가 분리된 CD4+ T-세포인 CD4+ T-세포.
16. 비상동 CD40L 단백질 및 비상동 CXCL13 단백질을 포함하는 CD4+ T-세포.
17. 구현예 16에 있어서, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하는 비상동 핵산 분자를 더 포함하고, 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아 비활성화된 HIV 게놈의 작제물을 생성하는 CD4+ T-세포.
18. 구체예 16에 있어서, 표적 항원을 인코딩하는 비상동 핵산 분자를 더 포함하는 CD4+ T-세포.
19. 구체예 18에 있어서, 상기 표적 항원이 HIV 단백질인 CD4+ T-세포.
20. 구체예 19에 있어서, HIV 단백질이 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu, 또는 Vif 또는 이들의 임의의 조합인 CD4+ T-세포.
21. 구체예 1-20 중 어느 하나의 임의의 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 대상체에서 HIV를 치료하는 방법.
22. 구체예 22에 있어서, 상기 조성물이 약제학적 조성물인 방법.
23. 구체예 21에 있어서, 상기 조성물이 정맥내로 또는 주입에 의해 투여되는 것인 방법.
24. 구체예 21-23 중 어느 한 구체예에 있어서, 상기 세포가 대상체와 동종이계이거나 HLA-매칭되지 않는 것인 방법.
25. 구체예 21-23 중 어느 한 구체예에 있어서, 상기 세포가 대상체에 자가조직인 방법.
26. 구체예 21-25 중 어느 한 구체예에 있어서, 상기 조성물 중 세포의 투여량이 약 1 x 106 내지 약 5 x 106인 방법.
27. 면역 반응을 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법으로서, 구체예 1-20 중 어느 하나의 임의의 세포의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
28. 구체예 27에 있어서, 상기 증가된 면역 반응이 표적 항원에 대항하는 것인 방법.
29. 구체예 28에 있어서, 상기 표적 항원이 HIV 단백질인 방법.
30. 구체예 29에 있어서, 상기 HIV 단백질이 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu, 또는 Vif 또는 이들의 임의의 조합인 방법.
31. 구체예 27-29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 대상체에 대해 동종이계인 방법.
32. 구체예 27-29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 환자와 HLA-매칭되지 않는 것인 방법.
33. 구체예 27-32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 투여량이 약 1-5 x 106의 범위인 방법.
34. 구체예 27-33 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 반응이 바이러스 감염에 대항하고, 상기 바이러스 감염은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염일 수 있는 것인 방법.
35. 구체예 21-34 중 어느 한 구체예에 있어서, 상기 면역 반응의 치료 또는 증가는 대상체가 개선, 감소되거나 검출할 수 없는 바이러스 역가, 또는 안정/비진행 질병을 나타내는 한 매주 1회부터 2주마다 1회, 3주마다 1회, 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월에 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회 또는 1년마다 1회까지 유지 치료로서 일정기간 동안 주기적으로 반복되는 방법.
36. 구체예 21-35 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 세포성 및 체액성 면역이 유도되는 것인 방법.
하기 실시예는 본원에 설명된 구성요소와 방법을 설명하지만 제한하지는 않는다. 당업자에게 알려진 다른 적절한 수정과 개조는 다음의 실시예의 범위 내에 있다.
[00187] 실시예
[00188] 실시예 1
[00189] CD40L 및 CXCL13으로 형질도입된 CD4+ 세포 구축 및 HIV 게놈 추가 로딩
[00190] 단계 1: CD40L 및 CXCL13(B 세포 유인 분자)을 과발현하는 렌티바이러스/아데노바이러스로 CD4 세포(또는 기타 T 세포)를 형질도입하여 CD40L 및 CXCL13을 발현하는 재조합 동종 CD4+ T 세포를 생성한다. 이 재조합 동종이형 CD4+ 세포는 숙주에서 기능하여 B 세포를 CD4 세포 앞의 영역으로 유인한다.
[00191] 단계 2: CD4+ CD40L + CXCL13+ 세포에 HIV 게놈의 플라스미드 트랜스포슨 및/또는 트랜스포존 전달. CD4+ CD40L + CXCL13+ 세포는 불능화 HIV- 복제 불능 또는 살아있는 약독화된(attenuated) 게놈으로 로드된다. 바람직한 구체예에서, 전체 HIV 게놈이 이용되고, 역전사효소(RT)가 비-기능적으로 만드는 적어도 1개의 돌연변이(또는 결실)를 포함하고, 패키징 신호에 추가 돌연변이(또는 완전한 결실)가 존재한다(복제 불능화 HIV 게놈을 생성하지만 그렇지 않으면 전체 게놈을 생성).
[00192] 복제 불능 HIV 게놈 작제물을 생성하기 위해 다음과 같은 근거와 옵션이 활용된다. 활용된-RT 돌연변이 및 패키징 신호 돌연변이-
Figure pct00005
RT는 감염을 불가능하게 만든다.
Figure pct00006
패키징 신호 돌연변이 - 패키징 신호 돌연변이가 없는 경우 CD4는 여전히 비리온을 생성한다. 재조합 CD4 세포는 비어있는 비리온을 싹트게 할 것이다 - 외피 당단백질은 중화 항체를 유도하는 게놈의 일부이다(체액 반응 생성).
Figure pct00007
특정 구체예에서, 작제물은 상이한 외피 단백질의 상이한 균주를 인코딩하는 핵산을 추가로 포함할 수 있다;
Figure pct00008
특정 구체예에서, 작제물은 다중 가변 외피 영역을 보유할 수 있으며; 다중 당단백질(gp) 구조를 생성하는 것은 당단백질의 다양성을 생성한다.
Figure pct00009
따라서 CD4+ CD40L + CXCL13+ 세포에는 다음이 로드된다:
o HIV 플라스미드, RT 돌연변이가 있거나 없거나 비활성화된 패키징 신호, 다중 외피 단백질, CD40L + CXCL13+를 발현하는 CD4+ 세포를 생성하고 HIV 외피 및 당단백질을 발현하여 환자에 의한 체액성 면역 반응 생성.
o HIV 백신 매개체로 동종이계 CD4 세포 생성.
[00193] 실시예 2
[00194] 예방 차원의 짧은꼬리원숭이의 ENOB HV-11 및 ENOB HV-12 평가
및 HIV에 대한 치료 백신 후보
[00195] 개념의 증명으로서, 비인간 영장류(마카크)에 대한 ENOB HV-11 예방 HIV 백신과 ENOB HV-12 치료용 HIV 백신의 생물학적 활동을 조사하고 개념 증명 데이터를 제공하기 위해 2개의 발현 카세트(CD40L 및 CXCL13)의 인간 및 비인간 영장류(NHP) 서열 모두 렌티바이러스 벡터(LV)를 사용하여 테스트될 것이다.
[00196] 동종이계 세포는 면역 반응의 강력한 자극이다. 높은 수준의 B 세포 프로모터 CD40L 및 CXCL13을 발현하도록 유전적으로 변형된 HIV 항원을 발현하는 동종이계 T 세포는 강력한 세포성 및 체액성 반응을 유도하여 예방 또는 치료 백신으로서 효과적일 것으로 예상된다. 그러한 재조합 동종이계 세포는 숙주 면역계에 의해 빠르게 사멸될 것이며, 충분히 적은 수로 제공된다면 그래프 대 숙주 질병을 유발하지 않아야 한다.
[00197] 개념 증명(proof of concept, POC)으로 본원에 기술된 예에서, 인간이 아닌 영장류는 복제되지 않고 약독화된 SHIV를 포함하는 플라스미드로 형질감염된 인간 또는 유인원 서열 CD40L 및 CXCL13으로 유전적으로 변형된 수백만(예: 1-5 x 106) 동종이계 T세포를 연속적으로 피하 주사한다. 유인원/인간 면역결핍 바이러스(SHIV)는 유전 물질이 유인원 면역결핍 바이러스(SIV) 유전자와 HIV 유전자의 조합인 실험실에서 생성된 일련의 키메라이다. SIV에 감염될 수 있는 거의 모든 유형의 비인간 영장류를 감염시킬 수 있다.
[00198] 중화 항체 역가가 측정될 것이다. 보호 수준에 도달하면 동물은 SHIV로 점막 공격을 받게 된다. 감염으로부터 보호되지 않으면 정맥주사를 맞을 것이다. 대조군을 포함하여 감염된 모든 마카크는 비복제, 약독화된 SHIV에 감염된 동일한 카세트로 변형된 T세포로 치료용 예방접종을 받을 것이다. HV-11의 대한 벡터 작제물(인간 CXCL13 및 인간 CD40L 형질도입용)은 도 1a에 도시되어 있다. HV-12의 벡터 작제물(마카크 CXCL13 및 마카크 CD40L 변환용)은 도 1b에 나와 있다.
설계 투여량 및 일정 세부사항 연구 (도. 2-4 참조):
9마리의 마카크; n = 그룹당 3개; ENOB HV-11 및 ENOB HV-12에 걸쳐 잠재적으로 2단계 조사:
Figure pct00010
3마리는 약독화된 복제 불능 SHIV를 함유하는 플라스미드로 형질감염되고 인간 벡터(코호트 A)로 형질도입된 완전히 MLA/HLA 불일치 (CD4+) T-세포를 받을 것이다(도 1a).
Figure pct00011
3마리는 약독화된 복제 불능 SHIV를 포함하는 플라스미드로 형질감염되고 마카크 벡터(코호트 B)로 형질도입된 완전히 일치하지 않는 CD4+ T-세포를 받을 것이다(도 1b).
Figure pct00012
3마리는 대조군(제품을 받지 못함)(코호트 C)이 된다.
ENOB HV-11(도. 3)
주사/투약/평가 일정(코호트 A 및 B)
Figure pct00013
4주 동안 매주 500만 세포를 피하 주사한다; 1차 주사 후 반응이 있을 경우 매주 200만 세포로 투입량을 감량한다.
Figure pct00014
4차 접종 후 7일째에 중화항체역가를 측정한다.
Figure pct00015
원하는 역가에 도달하지 못한 경우, 10일마다 2백만 개의 세포로 두 번째 주기를 4회 피하로 투여한다, 그런 다음 필요한 경우 15일마다 2백만 개의 세포의 세 번째 주기를 4회 피하로 투여한다.
Figure pct00016
원하는 역가에 도달하면, 점막 바이러스 감염 SHIV를 수행한다. 점막염으로 인한 감염이 없는 경우, 정맥주사를 투여한다.
Figure pct00017
각 대상체에 대해 매주 모니터링, 항체가 및 안전 실험실이 있다.
ENOB HV-12(도. 4)
[00199] 고호트 A, B 및 C의 감염된 마카크는 3개월 동안 바이러스 억제(<50카피/ml)를 달성할 때까지 ART를 받을 것이다. 억제된 후, 마카크는 도. 2-4 및 하기에 기재된 바와 같이 복제 불능, 약독화된 SHIV 및 일치하는 벡터로 펄스된 완전 MLA 불일치 CD4+ T 세포로 치료 백신 접종을 받을 것이다(즉, 코호트 A는 인간 벡터를, 코호트 B는 마카크 벡터를 받을 것이다).
[00200] 코호트 A와 B의 경우, T 세포는 예방 백신과 일치하지 않는 서로 다른 기증자의 T 세포일 것이다.
● 주사/투여/평가 일정(코호트 A, B 및 C)
o 1차 주사 후 반응이 있는 경우 4주 동안 매주 500만 개의 세포를 피하주사하고 주당 200만 개의 세포로 용량을 줄인다. 하나의 옵션은 최대 바이러스 혈증에서 투여를 시작하는 것이다. (예: n-3 대조군 동물에서 바이러스 혈증이 최고조에 달함, 예방 백신은 없으나 접종됨).
o 4차 주사 후 7일째에 혈장 바이러스 혈증을 측정한다. 혈증이 <1 copy/ml가 아닌 경우 4주마다 200만 개의 세포의 피하 주사 시작한다.
o 4회(총 8회) 주사 후 혈장 바이러스 혈증을 측정한다. 혈증이 <copy/ml가 아닌 경우 4주 동안 매주 200만 개의 세포 주기를 반복한다.
o 6개월간 주간 모니터링
o 혈장 바이러스혈증, 림프구 하위 집합 및 안전 실험실
o 각 주기의 마지막 피하 주사 후 7일
o 혈장 바이러스혈증, 림프구 하위 집합, 안전 실험실, GALT 조직검사
후속 조치 기간
HV-11 또는 HV-12를 마지막으로 주사한 후 1년. 마카크는 SHIV의 존재와 독성에 대한 전신 평가를 위해 희생될 것이다 (예: 림프종).
개념 증명(POC) 연구 중 독성 모니터링
o 사용된 ROA로 인한 독성.
o 주입된 제품 및 관련 발현의 지속성.
o 주입된 제품의 생체 분포.
o 주입된 제품에 대한 면역 반응(체액성 및 세포성)
o 종양원성.
o 체중 및 행동과 같은 거시적 관찰.
o 현미경 조직 병리학.
o 기타
[00201] 실시예 3: CD40L 및 CXCL13으로 형질도입된 T 세포는 세포독성을 강화하고 면역 세포 활성화를 증가시킨다. 표적 항원, CD40L 및 CXCL13을 발현하는 조작된 동종이형 이펙터 세포와 결합된 백신접종은 항원에 대한 세포독성 활성을 향상시킨다. 생체 내 세포독성을 모방하기 위해 시험관 내 모델이 개발되었다. Jurkat-GFP 발현 라인은 이펙터의 특정 사멸 활성을 정량적으로 측정하기 위해 세포독성의 표적으로 사용하기 위해 만들어졌다. 그런 다음 Jurkat 세포에 대한 특정 면역 반응을 생성하기 위해 3세트의 세포로 백신 접종을 위해 정상 공여자 PBMC를 획득하였다. 간단히 말해서, PBMC는 재조합으로 "백신 접종"된다. (a) PBMC는 형질도입되지 않은 Jurkat 세포("UTD Jurkat")로 백신 접종되었고, (b) PBMC에 GFP 형질도입된 Jurkat 세포(비특이적 벡터 형질도입 대조군으로 작용)로 백신 접종받았고; 그리고 (c) PBMC는 CD40L 및 CXCL13(HV II)으로 형질도입된 Jurkat 세포로 백신 접종하였다. 이 예에서 "백신 접종"은 위에서 언급한 Jurkat 세포와 PBMC의 혼합을 의미한다. 이는 재조합 CD4 T 세포에 CD40L 및 CXCL13을 주입하는 것과 유사하며, GFP가 PBMC에 대한 훈련 항원이 될 HIV 단백질로 대체되는 HIV가 있거나 HIV 위험이 있는 환자에게 주입한다. Jurkat 특이적 T 세포의 확장을 허용하는 PBMC 백신 접종 9일 후, Jurkat-GFP 발현 표적 세포를 18시간 동안 "백신 접종된" PBMC 세포(이펙터 세포)와 공동 배양하여 특이적 세포용해 활성을 분석했다. 세포융해 기능은 공동 배양 후 GFP 양성 세포의 변화를 확인하기 위해 유세포(flow cytometry, FACS) 분석으로 측정되었다. 데이터는 GFP 발현 세포가 형질도입되지 않은 Jurkat 및 GFP 단독 형질도입된 Jurkat T 세포 둘 다에 비해 GFP 및 CD40L 및 CXCL13을 발현하는 T 세포로 백신 접종된 PBMC로 더 효과적으로 사멸되었음을 입증한다. 이 데이터는 도 5에 도시되어 있다. 5. 데이터는 향상된 세포용해 기능을 보여주며 용량에 따라 달라지는 것으로 밝혀졌다. 즉, PBMCs에 CD40 및 CXCL13 세포의 증가하는 양을 접종함에 따라 PBMCs의 세포독성이 증가했다. 다른 유형의 면역 세포에 대한 영향도 측정되었다. 도 6에 도시된 바와 같이. 도 6에 도시된 바와 같이, CD40L 및 CXCL13을 이종적으로 발현하는 T 세포로 백신 접종된 PBMCs는 NK 세포(도 6), NKT 세포(도 7), NK 세포 활성화(도 8), NK 세포 체액 활성화(도 9), B세포 활성화(도 10), CD3+ 및 CD38+ 세포의 백분율로 측정한 T 세포 활성화(도 11), CD3+ 및 CD25+ 세포의 백분율로 측정한 T 세포 활성화(도 12), 및 CDS T 세포 활성화(도 13)가 유의미하고 상당한 증가를 보였다. 세포와 활성화는 도면에 표시된 표면 마커를 사용하여 유세포 분석에 의해 측정되었다. 따라서, 이들 구체예 및 데이터는 T 세포가 CD40L 및 CXCL13 또는 그의 활성 단편과 함께 항원을 발현하게 함으로써 특정 항원에 대한 세포독성을 높일 수 있는 T 세포를 생성하는 능력의 놀랍고 예상치 못한 결과를 입증한다.
실시예 4: 표준 방법
[00202] 분자 생물학의 표준 방법은 Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook 및 Russell(2001) Molecular Cloning, 3판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) 재조합 DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)에 기재되어 있다. 표준 방법은 박테리아 세포 및 DNA 돌연변이 생성에서의 클로닝(Vol. 1), 포유류 세포 및 효모에서의 클로닝(Vol. 2), 당접합체와 단백질 발현(Vol. 3), 생물정보학(Vol. 4)을 기술하는 Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY에도 나와 있다.
[00203] 면역침전, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리 및 결정화를 포함하는 단백질 정제 방법이 기술되어 있다(Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). 화학 분석, 화학적 변형, 번역 후 변형, 융합 단백질의 생산, 단백질의 글리코실화가 기술되어 있다(예를 들어, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York, Ausubel, et al.(2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17, Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO, pp. 45-89, Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, NJ, pp. 384-391 참조). 다클론 및 단클론 항체의 생산, 정제 및 단편화가 기술되어 있다(Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, supra). 리간드/수용체 상호작용을 특성화하기 위한 표준 기술이 이용 가능하다(예를 들어, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York 참조).
[00204] 본원에 인용된 모든 참고문헌은 각각의 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예: Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원 또는 특허가 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 동일한 정도로 참조로서 포함된다. 참조로서 통합된 본 진술은 37 C.F.R. §1.57(b)(l)에 따라 출원인이 각각의 간행물, 데이터베이스 항목(예: Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허출원 또는 특허와 관련되도록 의도한 것이다. 그러한 인용이 참조로서 통합된 진술에 바록 인접하지 않더라도, 이들 각각은 37 C.F.R. §1.57(b)(2)에 따라 명확하게 식별된다. 명세서 내에 참조로서 통합된 진술이 포함되어 있다고 해서 이 참조에 의해 통합된 일반적인 진술이 약화되지는 않는다. 본원에 참조의 인용은 그 참조가 관련 선행기술임을 인정하기 위한 것이 아니며, 이러한 간행물이나 문서의 내용이나 날짜에 대한 어떠한 인정도 의미하지 않는다.
[00205] 본 구체예는 여기에 기재된 특정 구체예에 의해 범위가 제한되지 않는다. 실제로, 본원에 기술된 것 이외에 본 발명의 다양한 수정은 전술한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 수정은 여기에 제공된 구체예 및 첨부된 청구범위에 속하는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Enochian BioSciences, Inc. Gumrukcu, Serhat <120> ALLOGENEIC T-CELL-BASED HIV VACCINE TO INDUCE CELLULAR AND HUMORAL IMMUNITY <130> 146616.00202 <150> 62/862432 <151> 2019-06-17 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 327 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atgaagttca tctcgacatc tctgcttctc atgctgctgg tcagcagcct ctctccagtc 60 caaggtgttc tggaggtcta ttacacaagc ttgaggtgta gatgtgtcca agagagctca 120 gtctttatcc ctagacgctt cattgatcga attcaaatct tgccccgtgg gaatggttgt 180 ccaagaaaag aaatcatagt ctggaagaag aacaagtcaa ttgtgtgtgt ggaccctcaa 240 gctgaatgga tacaaagaat gatggaagta ttgagaaaaa gaagttcttc aactctacca 300 gttccagtgt ttaagagaaa gattccc 327 <210> 2 <211> 783 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 atgatcgaaa catacaacca aacttctccc cgatctgcgg ccactggact gcccatcagc 60 atgaaaattt ttatgtattt acttactgtt tttcttatca cccagatgat tgggtcagca 120 ctttttgctg tgtatcttca tagaaggttg gacaagatag aagatgaaag gaatcttcat 180 gaagattttg tattcatgaa aacgatacag agatgcaaca caggagaaag atccttatcc 240 ttactgaact gtgaggagat taaaagccag tttgaaggct ttgtgaagga tataatgtta 300 aacaaagagg agacgaagaa agaaaacagc tttgaaatgc aaaaaggtga tcagaatcct 360 caaattgcgg cacatgtcat aagtgaggcc agcagtaaaa caacatctgt gttacagtgg 420 gctgaaaaag gatactacac catgagcaac aacttggtaa ccctggaaaa tgggaaacag 480 ctgaccgtta aaagacaagg actctattat atctatgccc aagtcacctt ctgttccaat 540 cgggaagctt cgagtcaagc tccatttata gccagcctct gcctaaagtc ccccggtaga 600 ttcgagagaa tcttactcag agctgcaaat acccacagtt ccgccaaacc ttgcgggcaa 660 caatccattc acttgggagg agtatttgaa ttgcaaccag gtgcttcggt gtttgtcaat 720 gtgactgatc caagccaagt gagccatggc actggcttca cgtcctttgg cttactcaaa 780 ctc 783 <210> 3 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Lys Phe Ile Ser Thr Ser Leu Leu Leu Met Leu Leu Val Ser Ser 1 5 10 15 Leu Ser Pro Val Gln Gly Val Leu Glu Val Tyr Tyr Thr Ser Leu Arg 20 25 30 Cys Arg Cys Val Gln Glu Ser Ser Val Phe Ile Pro Arg Arg Phe Ile 35 40 45 Asp Arg Ile Gln Ile Leu Pro Arg Gly Asn Gly Cys Pro Arg Lys Glu 50 55 60 Ile Ile Val Trp Lys Lys Asn Lys Ser Ile Val Cys Val Asp Pro Gln 65 70 75 80 Ala Glu Trp Ile Gln Arg Met Met Glu Val Leu Arg Lys Arg Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Leu Pro Val Pro Val Phe Lys Arg Lys Ile Pro 100 105 <210> 4 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Leu Pro Ile Ser Met Lys Ile Phe Met Tyr Leu Leu Thr Val Phe Leu 20 25 30 Ile Thr Gln Met Ile Gly Ser Ala Leu Phe Ala Val Tyr Leu His Arg 35 40 45 Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp Phe Val 50 55 60 Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser Leu Ser 65 70 75 80 Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe Val Lys 85 90 95 Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu 100 105 110 Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser 115 120 125 Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly 130 135 140 Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln 145 150 155 160 Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr 165 170 175 Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser 180 185 190 Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala 195 200 205 Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His 210 215 220 Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn 225 230 235 240 Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe 245 250 255 Gly Leu Leu Lys Leu 260

Claims (36)

  1. CD40L 및 CXCL13을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 비상동 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 세포.
  2. 제1항에 있어서, 상기 CD40L이 SEQ ID NO: 4에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 CXCL13이 SEQ ID NO: 3에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 세포.
  3. 제1항에 있어서, 상기 세포가 CD40L 및 CXCL13을 비상동적으로 발현하는 것을 특징으로 하는 세포.
  4. 제1항에 있어서, 상기 세포가 분리된 세포인 것을 특징으로 하는 세포.
  5. 제1항에 있어서, 상기 세포가 CD4+ T-세포와 같은 T-세포인 것을 특징으로 하는 세포.
  6. 제1항에 있어서, 상기 세포가 비상동 단백질 또는 표적 항원을 인코딩하는 제2 및/또는 제3 핵산으로 형질도입되거나(transduced) 형질감염된(transfected) 것을 특징으로 하는 세포.
  7. 제6항에 있어서, 상기 제2 핵산이 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하고, 상기 HIV 게놈의 핵산이 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 HIV 게놈의 핵산이 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않고, 비활성화된 HIV 게놈의 작제물(construct)을 생성하는 것을 특징으로 하는 세포.
  8. 제6항에 있어서, 상기 표적 항원이 HIV 단백질인 것을 특징으로 하는 세포.
  9. 제8항에 있어서, 상기 HIV 단백질이 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu 또는 Vif 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 세포.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 CD4+ T-세포인 것을 특징으로 하는 세포.
  11. SEQ ID NO: 3에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 및/또는 SEQ ID NO: 4에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 하나 이상의 비상동 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  12. 제11항에 있어서, 상기 세포가 CD40L을 발현하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  13. 제11항 및 제12항에 있어서, 상기 세포가 CXCL13을 발현하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  14. 제11항에 있어서, 상기 세포가 CD40L 및 CXCL13을 발현하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  15. 제11항에 있어서, 상기 세포가 분리된 CD4+ T 세포인 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  16. 비상동 CD40L 단백질 및 비상동 CXCL13 단백질을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  17. 제16항에 있어서, CD4+ T-세포가 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 게놈을 포함하는 비상동 핵산 분자를 더 포함하고, 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 역전사효소에 돌연변이를 포함하고, 추가로 상기 HIV 게놈의 핵산은 레트로바이러스 패키징 신호를 인코딩하지 않아 비활성화된 HIV 게놈의 작제물 생성하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  18. 제16항에 있어서, 표적 항원을 인코딩하는 비상동 핵산 분자를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  19. 제18항에 있어서, 상기 표적 항원이 HIV 단백질인 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  20. 제19항에 있어서, 상기 HIV 단백질이 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag-Pol, Nef, Vpr, Vpu, 또는 Vif 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 CD4+ T-세포.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 임의의 세포의 유효량을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 대상체에서 HIV를 치료하는 방법.
  22. 제22항에 있어서, 상기 조성물이 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제21항에 있어서, 상기 조성물이 정맥내로 또는 주입에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 대상체와 동종이계이거나 HLA-매칭되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 대상체에 자가조직인 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 중 세포의 투여량이 약 1 x 106내지 약 5 x 106인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 면역 반응을 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 임의의 세포의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 증가된 면역 반응이 표적 항원에 대항하는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 표적 항원이 HIV 단백질인 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, HIV 단백질이 HIV Tat(길이가 72 및 101인 아미노산의 전체 길이 또는 동형체), Rev, Pol, GP120, GP160, GP41, env, Gag, Gag- Pol, Nef, Vpr, Vpu, 또는 Vif 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 대상체에 대해 동종이계인 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 환자와 HLA-매칭되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제27항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 투여량이 약 1-5 x 106의 범위인 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제27항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 반응이 바이러스 감염에 대항하고, 상기 바이러스 감염은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염일 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제21항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 반응의 치료 또는 증가는 대상체가 개선, 감소되거나 검출할 수 없는 바이러스 역가, 또는 안정/비진행 질병을 나타내는 한 매주 1회부터 2주마다 1회, 3주마다 1회, 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월에 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회 또는 1년마다 1회까지 유지 치료로서 일정기간 동안 주기적으로 반복되는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제21항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 세포성 및 체액성 면역이 유도되는 것을 특징으로 하는 방법.
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Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6080408A (en) * 1994-08-22 2000-06-27 Connaught Laboratories Limited Human immunodeficiency virus type 1 nucleic acids devoid of long terminal repeats capable of encoding for non-infectious, immunogenic, retrovirus-like particles
US6139832A (en) * 1995-02-08 2000-10-31 Human Genome Sciences, Inc. Leukocyte adhesion inhibitor-1 (LAI-1) Polypeptides
US6569418B1 (en) * 1997-12-11 2003-05-27 University Of Maryland Biotechnology Institute Immuno-modulating effects of chemokines in DNA vaccination
EP1276501B9 (en) * 2000-04-25 2007-01-24 Immunex Corporation Method for treatment of tumors using photodynamic therapy
WO2006089045A2 (en) * 2005-02-18 2006-08-24 Monogram Biosciences, Inc. Methods and compositions for determining hypersusceptibility of hiv-1 to non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
WO2008055354A1 (en) * 2006-11-10 2008-05-15 Université de Montréal Rna-loaded dendritic cell compositions for eliciting cd4+ t cell help and related methods
US9234175B2 (en) * 2009-11-17 2016-01-12 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Creating bioengineered lymph nodes
KR20170129804A (ko) * 2015-03-20 2017-11-27 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 Cd40 리간드를 어쥬번트로서 갖는 백신
SG11202100315TA (en) * 2018-07-15 2021-02-25 Enochian Biopharma Inc Methods and compositions using recombinant dendritic cells for cancer therapy
WO2021034982A1 (en) * 2019-08-21 2021-02-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immune cells for adoptive cell therapies

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