KR20140128966A

KR20140128966A - 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법

Info

Publication number: KR20140128966A
Application number: KR20147020724A
Authority: KR
Inventors: 브라이언 애그뉴
Original assignee: 라이프 테크놀로지스 코포레이션
Priority date: 2012-01-26
Filing date: 2013-01-25
Publication date: 2014-11-06
Also published as: CN104220588A; SG11201404014PA; AU2013212066B2; WO2013112778A1; US20180201907A1; AU2013212066A1; EP2807251A1; EP2807251A4; US20150017703A1; EP2807251B1

Abstract

알킨-변형 생체분자, 예컨대 지방산, 탄수화물 및 지질로 표지된 바이러스를 사용하여, 바이러스로 감염된 식물, 곤충 또는 동물을 치료하거나 바이러스, 예컨대 인간 면역결핍 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이 제공된다. 또한, 바이러스, 예컨대 인간 면역결핍 바이러스를, 알킨-변형 생체분자, 예컨대 지방산, 탄수화물 또는 이소프레노이드 지질로 표지화하는 방법이 제공된다. 알킨-변형 생체분자로 표지된 바이러스를 제약상 허용되는 부형제와 조합하여 임의로 또 다른 항바이러스제 및/또는 전달제, 예컨대 리포솜을 함유하는 제약 조성물을 제조할 수 있다.

Description

바이러스의 감염성을 증가시키는 방법 {METHODS FOR INCREASING THE INFECTIVITY OF VIRUSES}

상호 참조

본 출원은 2012년 1월 26일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/591,023을 우선권 주장하며, 이 가출원은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

인간, 동물, 식물 및 곤충을 감염시키는 바이러스는 잘 알려져 있다. 적절한 면역 반응이 감염을 중화시키는데 이용될 수 없는 경우 바이러스에 의한 상기 숙주의 감염의 결과로 질환이 초래될 수 있다. 면역 반응에 필수적인 면역 성분을 도출해낼 수 있는 백신이 개발되어 인간 및 동물에서 바이러스에 의한 감염을 예방해 왔고, 주목할 만한 예는 각각 독감 백신 및 광견병 백신이다.

전형적으로 백신은 질환-유발 바이러스와 비슷한 작용제를 함유한다. 작용제는 바이러스의 약화된 (약독화된) 또는 사멸된 (불활성화된) 형태일 수 있다. 일반적으로 전체 바이러스 백신(whole virus vaccine)의 생산은 일차 세포에서 성장하는 바이러스 (예를 들어, 독감 바이러스)나 연속 세포주, 예컨대 배양된 인간 또는 동물 세포에서 성장하는 바이러스 (예를 들어, 소아마비 바이러스)로 시작된다. 이러한 세포에 바이러스를 번식시키기 위해, 바이러스는 먼저 세포를 감염시켜야 한다. 따라서, 백신 제조를 위해 바이러스의 감염성(infectivity)을 증가시키는 방법에 대한 필요성이 존재한다.

또한, 바이러스는 연구자들에 의해 사용되는 바이러스 벡터의 제조에서 사용되어 연구 또는 유전자 요법 환경(setting) 둘 다에서 세포 및 유기체에 유전 물질을 전달한다. 이러한 바이러스 벡터는 비-자연 발생 바이러스이다. 유전 물질을 세포에 전달하기 위해, 벡터는 세포를 감염시킬 필요가 있다. 따라서, 표적 세포 또는 유기체에 전달될 수 있는 유전 물질의 양을 증진시키기 위해 증가된 감염성을 갖는 바이러스 벡터에 대한 필요성이 존재한다.

개요

본 발명의 한 측면은 바이러스를 알킨-변형(modified) 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시켜 표지된 바이러스를 제조하는 것을 포함하는, 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스의 제조 방법이다.

또 다른 측면에서, 바이러스로 감염된 세포를 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시켜 표지된 바이러스를 제조하는 것을 포함하는, 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스의 제조 방법이 제공된다.

또 다른 측면에서, 바이러스로 감염된 세포를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 형질감염 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이 제공된다.

또 다른 측면에서, 바이러스로 감염된 세포를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 것인, 상기 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이 제공된다.

일부 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염은 하기 화학식 I을 갖는다:

<화학식 I>

Y-CH₂-X-CO₂H

상기 식에서, Y는 H 또는 에티닐 기이고; Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나; Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고, 여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, Y는 에티닐 기이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, X는 선형 탄소 쇄이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, X는 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 탄소 쇄이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, X는 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 모두는 탄소이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, X는 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두는 단일 결합이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, Y는 에티닐 기이고, X는 선형 탄소 쇄이고, 탄소 쇄는 8 내지 15개의 탄소를 포함한다. 이들 중 일부에서, 탄소 쇄의 탄소 모두는 탄소이다. 이들 중 일부에서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두는 단일 결합이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 15-에티닐펜타데칸산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 12-에티닐도데칸산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은

<화학식 II>

또는 그의 생리학상 허용되는 염이다.

<화학식 III>

또는 그의 생리학상 허용되는 염이다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 세포 내에 있다. 이들 중 일부에서, 세포는 인간 동물 세포, 비-인간 동물 세포, 곤충 세포 또는 식물 세포이다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 자연 발생 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 인간 면역결핍 바이러스는 HIV-1 바이러스이다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 비-자연 발생 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 또는 폭스바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 백시니아 바이러스 또는 카나리폭스 바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, 파라믹소바이러스, 레트로바이러스 또는 바큘로바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이(Sendai) 바이러스이다.

일부 실시양태에서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행한다.

본 발명의 또 다른 측면은 형질감염 바이러스를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 형질감염 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이다.

일부 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염은 화학식 I을 갖고, 그의 치환기는 상기에 기재되어 있다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 일부 실시양태에서, X는 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두는 단일 결합이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, Y는 에티닐 기이고, X는 선형 탄소 쇄이고, 탄소 쇄는 8 내지 15개의 탄소를 포함한다. 이들 중 일부에서, 탄소 쇄의 탄소 모두는 탄소이며, 한편 다른 실시양태에서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두는 단일 결합이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 II 또는 그의 생리학상 허용되는 염이다.

바이러스를 I과 접촉시키는 것을 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 III 또는 그의 생리학상 허용되는 염이다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 세포 내에 있다. 이들 중 일부에서, 세포는 곤충 세포이다. 이들 중 일부에서, 곤충 세포는 Sf9 세포 또는 Sf21 세포이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 BacMam 바이러스이다. 다른 실시양태에서, 세포는 비-인간 동물 세포이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 BacMam 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 비-자연 발생 아데노바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 비-자연 발생 렌티바이러스이며; 한편 다른 실시양태에서 바이러스는 비-자연 발생 센다이 바이러스이다.

본 발명의 또 다른 측면은 바이러스를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 것인, 상기 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이다.

특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염은 화학식 I을 갖고, 그의 치환기는 상기에 기재되어 있다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 자연 발생 바이러스이다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 비-자연 발생 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 또는 폭스바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 백시니아 바이러스 또는 카나리폭스 바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, 파라믹소바이러스, 레트로바이러스 또는 바큘로바이러스이고; 다른 실시양태에서, 바이러스는 BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스이다.

본 발명의 또 다른 측면은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하며, 여기서 모이어티는 비-자연 발생인, 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 바이러스이다.

일부 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 하기 화학식 IV를 갖는다:

<화학식 IV>

Y-CH₂-X-CO-

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, Y는 에티닐 기이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, X는 선형 탄소 쇄이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, X는 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 탄소 쇄이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, X는 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 모두는 탄소이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, X는 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두는 단일 결합이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 15-에티닐펜타데카닐이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 12-에티닐도데카닐이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는

<화학식 V>

이다.

<화학식 VI>

이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, Y는 에티닐 기이고, X는 선형 탄소 쇄이고, 선형 탄소 쇄는 8 내지 15개의 탄소를 포함한다. 이들 중 일부에서, 탄소 쇄의 탄소 모두는 탄소이며, 한편 다른 실시양태에서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두는 단일 결합이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 아미드 또는 티오에스테르 결합에 의해 바이러스에 부착된다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 자연 발생 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 불활성화되며, 한편 다른 것들 중에서, 바이러스는 약독화된다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 비-자연 발생 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 또는 폭스바이러스이다. 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 백시니아 바이러스 또는 카나리폭스 바이러스이다. 다른 실시양태에서, 바이러스는 아데노바이러스, 파라믹소바이러스, 레트로바이러스 또는 바큘로바이러스이다. 다른 실시양태에서, 바이러스는 BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스이다.

본 발명의 또 다른 측면은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하며, 여기서 모이어티는 비-자연 발생인, 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 바이러스를 포함하는 조성물이다.

일부 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 화학식 IV를 갖고, 그의 치환기는 상기에 기재되어 있다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, Y는 에티닐 기이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, X는 선형 탄소 쇄이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 V이다.

IV를 포함하는 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 VI이다.

IV의 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 아미드 또는 티오에스테르 결합에 의해 바이러스에 부착된다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 자연 발생 바이러스이다. 이들 중 일부에서, 바이러스는 불활성화되고, 한편 다른 것들 중에서, 바이러스는 약독화된다.

일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함한다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 전문 및 과학 용어는 본 발명이 관련된 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 이해된 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 추가 정의는 상세한 설명에 걸쳐 설명된다. 상충의 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 지배할 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "알킨-변형 지방산"은 알킨 기를 포함하고 하기 화학식, R-알킨 (여기서 R은 대개, 필수적이지는 않지만, 말단 위치에서 1개 이상의 카르복실산 관능기를 갖는 탄화수소 쇄를 포함함)을 갖는 지방산을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "알킨-변형 탄수화물"은 알킨 기를 포함하고 하기 화학식, R-알킨 (여기서 R은 탄수화물임)을 갖는 탄수화물을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "알킨-변형 이소프레노이드 지질"은 이소프렌-함유 지질 또는 그의 유도체를 지칭한다. 알킨-변형 이소프레노이드는 알킨 기를 포함하고 하기 화학식, R-알킨 (여기서 R은 이소프렌-함유 지질, 예컨대 C₁₅ 파르네실 이소프레노이드 지질 또는 C₂₀ 게라닐게라닐 이소프레노이드 지질 또는 이들의 유도체임)을 갖고, 에티닐 파르네실 디포스페이트, 에티닐 파르네실 알콜, 에티닐 게라닐게라닐 디포스페이트, 또는 에티닐 게라닐게라닐 알콜을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "동물 바이러스"는 비-인간 동물 또는 인간 동물 세포를 감염시키는 바이러스를 지칭한다. 비-인간 동물 바이러스는 비-인간 동물 세포를 감염시킨다. 특정 경우에, 비-인간 동물 세포를 감염시키는 바이러스는 또한 인간 동물 세포를 감염시키는 것이 가능하다. 인간 동물 바이러스는 인간 동물 세포를 감염시킨다. 특정 경우에, 인간 동물 세포를 감염시키는 바이러스는 또한 비-인간 동물 세포를 감염시키는 것이 가능하다.

본원에서 사용된 바와 같이, "생체분자"는 생물에서 발견되는 분자의 전형적인 특징을 갖고, 자연 발생일 수 있거나 인공적 (천연으로 발견되지 않고 천연으로 발견되는 분자와 동일하지 않음)일 수 있는, 단백질, 펩티드, 아미노산, 당단백질, 핵산, 뉴클레오티드, 뉴클레오시드, 올리고뉴클레오티드, 당, 올리고사카라이드, 지질, 호르몬, 프로테오글리칸, 탄수화물, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 폴리사카라이드를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "클릭 화학(click chemistry)"은 1,2,4-트리아졸을 형성하는, 아지드와 말단 알킨 사이의 후이스겐 고리화첨가(Huisgen cycloaddition) 또는 1,3-쌍극성 고리화첨가의 구리(I)-촉매화 변형(catalyzed variant)을 지칭한다. 이러한 화학 반응은 간단한 헤테로원자 유기 반응물을 사용할 수 있지만 이에 제한되지는 않으며, 신뢰성 있고 선택적이고 입체특이적이고 발열성이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "고리화첨가"는 2개 이상의 π (파이)-전자 시스템 (예를 들어, 동일 분자의 불포화 분자 또는 불포화 부분)이 조합하여 결합 다중도의 순(net) 감소가 존재하는 시클릭 생성물을 형성하는 화학 반응을 지칭한다. 고리화첨가에서, π (파이) 전자를 사용하여 새로운 π (파이) 결합을 형성한다. 고리화첨가의 생성물은 "부가물" 또는 "고리화부가물"로 칭해진다. [3+2] 고리화첨가 및 딜스-알더(Diels-Alder) 반응을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 고리화첨가의 상이한 유형은 당업계에 알려져 있다. 1,3-쌍극성 고리화첨가로도 칭해지는 [3+2] 고리화첨가는 1,3-쌍극과 친쌍극자체 사이에서 일어나고 5-원 헤테로시클릭 고리의 구성에 전형적으로 사용된다. 용어 "[3+2] 고리화첨가"는 또한 아지드와 시클로옥틴과 디플루오로시클로옥틴 사이의 "구리 미사용(copperless)" [3+2] 고리화첨가 (문헌 [Bertozzi et al. J. Am. Chem. Soc, 2004, 126: 15046-15047]에 기재됨)를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "DNA 바이러스"는 그의 유전 물질로서 데옥시리보핵산 (DNA)을 갖는 바이러스를 지칭한다. DNA 바이러스는 대개 이중 가닥이지만 또한 단일 가닥일 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "유전자 요법"은 이러한 요법 또는 치료가 추구되는 장애 또는 병태를 갖는 인간 동물, 비-인간 동물, 식물 또는 곤충의 표적 세포로의 이종 핵산, 예컨대 DNA 또는 RNA의 이입을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 유전자 요법은 이러한 요법 또는 치료가 추구되는 장애 또는 병태를 갖는 인간 동물, 비-인간 동물, 식물 또는 곤충으로 이입될 수 있는, 바이러스로의 이종 핵산, 예컨대 DNA의 이입을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이종 핵산, 예컨대 DNA가 발현되고 그로 인해 코딩된 치료약(therapeutic product)이 제조되는 방식으로, 핵산, 예컨대 DNA를, 예컨대 직접 또는 간접적으로, 선택된 표적 세포에 도입한다. 대안으로, 이종 핵산, 예컨대 DNA는, 일부 방식으로 치료약을 코딩하는 DNA의 발현을 매개할 수 있거나, 이는 일부 방식으로 치료약이거나, 직접 또는 간접적으로, 치료약의 발현을 매개하는 산물, 예컨대 펩티드 또는 RNA를 코딩할 수 있다. 또한, 유전자 요법은, 결함 유전자를 대체하거나 인간 동물, 비-인간 동물, 식물, 곤충, 또는 그것이 도입되는 그의 세포에 의해 생산된 유전자 산물을 보충하는 유전자 산물을 코딩하는 핵산의 전달을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 도입된 핵산은 치료 화합물을 코딩하는 핵산을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 치료약을 코딩하는 이종 핵산, 예컨대 DNA는, 고통받는 숙주의 세포 내로의 도입 이전에 변형되어 그의 산물 또는 그의 발현을 증진시키거나 아니면 변경시킬 수 있다. 또한, 유전자 요법은 유전자 발현의 억제제 또는 리프레서(repressor) 또는 다른 조절제의 전달을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "당단백질"은 글리코실화된 단백질, 및 생체내 또는 시험관내에서, 효소적으로 변형되어 탄수화물 기를 포함하는 것들을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "HIV" 및 "인간 면역결핍 바이러스"는 인간 면역결핍 바이러스 1 및 2 (HIV-1 및 HIV-2)를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "감염성"은 세포에 출입하는 바이러스의 능력을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "곤충 바이러스"는 곤충 세포를 감염시키는 바이러스를 지칭한다. 특정 곤충 바이러스, 예를 들어 미변형 바큘로바이러스 또는 변형 바큘로바이러스 (BacMam) 등은, 또한 비-인간 동물 및/또는 인간 동물 세포를 감염시킬 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "식물 바이러스"는 식물 세포를 감염시키는 바이러스를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "제약상 허용되는 부형제"는 약제 투여에 적합한, 용매, 분산 매질, 희석제, 코팅물, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약상 활성 물질을 위한 이들 작용제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "생리학상 허용되는 염"은 무기 또는 유기 염을 지칭하며, 세포 건강 또는 완전성(integrity)에 유해하지 않은 완충염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 생리학상 허용되는 염을 위한 이들 염의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "단백질" 및 "폴리펩티드"는 포괄적 의미로 사용되어 임의의 길이의 아미노산 잔기의 중합체를 포함한다. 용어 "펩티드"는 본원에서 사용되어 100개 미만의 아미노산 잔기, 전형적으로 10개 미만의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 상기 용어는 1개 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공 화학 유사체인 아미노산 중합체뿐만 아니라, 자연 발생 아미노산 중합체에도 적용된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "리포터 분자"는 본 발명의 변형된 번역후 변형 단백질(modified post translationally modified protein)에 부착가능하며, 직접 또는 간접적으로 검출가능한 임의의 모이어티를 지칭한다. 리포터 분자는 제한 없이, 발색단, 형광단, 형광 단백질, 인광성 염료, 탠덤(tandem) 염료, 입자, 합텐, 효소 및 방사성동위원소를 포함한다. 바람직한 리포터 분자는 형광단, 형광 단백질, 합텐 및 효소를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "RNA 바이러스"는 리보핵산 (RNA)을 그의 유전 물질로서 갖는 바이러스를 지칭한다. RNA 바이러스는 대개 단일 가닥이지만 또한 이중 가닥일 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물, 식물, 및 곤충을 포함하는 것으로 의도된다. 대상체는 HIV 감염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 바이러스 감염 또는 다른 장애를 갖는 인간 환자를 포함할 수 있다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소, 염소, 말, 닭, 돼지, 양서류, 파충류 등을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는"은 치료적 또는 예방적 조치를 지칭한다. 대상체가 동물인 경우에 의학적 장애를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는 장애를 갖거나 궁극적으로 장애를 획득할 수 있는 대상체에게 치료를 실시하여, 장애 또는 재발성 장애를 예방하고/거나, 치유하고/거나, 지연시키고/거나, 중증도를 감소시키고/거나, 하나 이상의 증상을 개선시키거나, 이러한 치료의 부재하에 예상되는 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키도록 할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료 유효량" 또는 "유효량"은 비-인간 동물 또는 인간 동물, 식물, 곤충, 또는 질환을 치료하기 위한 다른 대상체에게 투여시, 질환에 대한 이러한 치료를 달성하는데 충분한 화합물의 양을 지칭한다. "유효량"은 화합물, 질환 및 그의 중증도 및 치료할 대상체의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "바이러스 벡터"는 그의 기술분야에서 인식된 의미에 따라 사용된다. 이는 바이러스 기원의 적어도 하나의 요소(element)를 포함하고 바이러스 벡터 입자로 패키징될 수 있는 핵산 벡터 구축물을 지칭한다. 바이러스 벡터 입자는 시험관내 또는 생체내에서 DNA, RNA 또는 다른 핵산을 세포 내로 이입하기 위한 목적으로 사용될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "바이러스"는 바이러스로서 지칭되는 실체의 대집단 중 어느 하나를 지칭한다. 전형적으로 바이러스는 유전 물질의 RNA 또는 DNA 코어를 포위하는 단백질 코트(coat)를 함유하지만, 반투과성 막을 함유하지는 않고, 생 세포(living cell)에서만 성장 및 증식이 가능하다. 본원에서 제공된 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 바이러스는 임의의 인간 동물 바이러스, 비-인간 동물 바이러스, 식물 또는 곤충 바이러스를 포함하지만, 이제 제한되지는 안된다. 용어 "바이러스"는 그의 범주 내에서, 본원에서 "자연 발생 바이러스"로서 지칭되는, 천연으로 발생하는 바이러스를 포함한다. 또한, 용어 "바이러스"는 그의 범주 내에서, 본원에서 "비-자연 발생 바이러스"로서 지칭되는, 유전자 조작된 자연 발생 바이러스를 포함한다. 바이러스 유전자 또는 유전자를 포위하는 핵산의 이러한 조작은, 바이러스 과정, 예를 들어 바이러스 감염성, 바이러스 DNA 복제, 바이러스 단백질 합성, 바이러스 입자 조립 및 성숙, 및 바이러스 입자 방출 등을 변경시킬 수 있는 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 이러한 조작은, 본원에서 "외인성 유전자"로서 지칭되는 비-바이러스 유전자를 포함할 수 있는, 이종 DNA 또는 RNA의 바이러스로의 삽입용 부위를 도입할 수 있다.

본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수형 관사 ("a", "an" 및 "the")는 문맥이 달리 지시하지 않는 한 복수형 지시 대상을 포함한다는 점을 주목하여야 한다. 따라서, 예를 들어 "바이러스"에 대한 언급은 문맥이 달리 지시하지 않는 한 복수의 바이러스를 포함한다.

본 발명은 그의 바람직한 실시양태를 참조로 하여 특히 나타내며 기재되었지만, 첨부된 특허청구범위에 의해 포함된 본 발명의 범주로부터 벗어남이 없이 거기서 형태 및 세부사항의 다양한 변화가 이루어질 수 있다는 점이 당업자에 의해 이해될 것이다. 게다가, 물질, 방법, 및 실시예는 단지 실례가 되는 것이고 제한하고자 하는 것은 아니다. 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 본원에서 언급된 다른 참조 문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.

상세한 설명

본 개시 내용은 바이러스 감염 치료용 백신을 제조하기 위한, 및 세포의 생체내 유전자 요법 및 시험관내 형질감염용 바이러스 벡터를 제조하기 위한, 알킨-변형 생체분자, 예컨대 지방산 또는 탄수화물의 용도뿐만 아니라, 알킨-변형 생체분자를 포함하는 바이러스를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 출원인은 예상외로 이들 알킨-변형 생체분자가 바이러스와 접촉시 바이러스의 감염성을 증가시키는 능력을 갖는다는 것을 발견하였다. 놀랍게도 이들 알킨-변형 생체분자로 표지된 바이러스가 바이러스 감염성에 대단히 영향을 미치고 이들 알킨-변형 생체분자를 사용한 바이러스의 표지화는 숙주 세포로의 바이러스 침입을 증가시킨다는 것을 발견하였다. 임의의 이론에 의해 구속시키고자 함이 없이, 미변형 생체분자, 예컨대 포화 지방산 (예를 들어, 미리스트산 및 팔미트산)에 의해 정상적으로 점유된 부위에서 알킨-변형 생체분자를 사용한 바이러스 단백질의 번역후 변형의 결과, 바이러스의 감염성이 증가되는 것으로 보인다.

클릭 화학

아지드와 말단 또는 내부 알킨은 1,3-쌍극성 고리화첨가 (후이스겐 고리화첨가) 반응을 겪어 1,2,3-트리아졸을 제공할 수 있다. 그러나, 이러한 반응은 긴 반응 시간 및 승온을 필요로 한다. 대안으로, 아지드와 말단 알킨은 실온에서 구리(I)-촉매화 아지드-알킨 고리화첨가 (CuAAC)를 겪을 수 있다. 클릭 화학으로도 알려진, 이러한 구리(I)-촉매화 아지드-알킨 고리화첨가는, 유기 아지드 및 말단 알킨이 반응하여 1,2,3-트리아졸의 1,4-위치이성질체를 제공하는 후이스겐 1,3-쌍극성 고리화첨가의 변형이다. 클릭 화학 반응의 예는 (샤플리스(Sharpless) 등의 미국 특허 출원 공개 번호 20050222427, PCT/US03/17311; 문헌 [Lewis W G, et al., Angewandte Chemie-Int'l Ed. 41 (6): 1053]; 문헌 [Kolb, H.C., et al., Angew. Chem. Inst. Ed. 2001, 40:2004-2021]에서 검토된 방법)에 의해 기재되어 있고, 이는 헤테로원자 연결 (탄소-탄소 결합과 대조적으로)에서 고 수율로 그리고 부 반응이 거의 없이 서로 반응하는 시약을 개발하여 화학적 화합물의 라이브러리를 창출하도록 하였다.

클릭 화학은 관심 단백질을 표지화하고 검출하기 위해 사용되어 왔다. 예를 들어, 클릭(CLICK)-IT^® (인비트로젠(Invitrogen), 캘리포니아주 칼스배드) 반응은 변형 대사 전구체, 예컨대 아지드-변형 지방산, 아지드-변형 탄수화물, 또는 아지드-변형 이소프레노이드 지질을, 화학적 "핸들(handle)"로서 단백질에 혼입한 후 아지드와 알킨 사이의 화학선택적 라이게이션 (또는 "클릭" 반응)을 포함하는 2-단계 표지화 기술이다. 클릭 반응에서, 변형 단백질은 상응하는 아지드- 또는 알킨-함유 염료 또는 합텐을 사용하여 검출된다. 클릭-IT^® 대사 표지화 시약은 단백질의 번역후 변형, 예컨대 아실화, 글리코실화, 및 프레닐화를 모니터링하기 위해 사용되어 왔고, 1) 팔미토일화 및 미리스토일화 단백질 각각을 표지화하기 위한, 아지드-변형 지방산, 예컨대 클릭-IT^® 팔미트산 아지드 (즉, 15-아지도펜타데칸산) 및 클릭-IT^® 미리스트산 아지드 (즉, 12-아지도도데칸산); 2) O-결합 당단백질을 표지화하기 위한 클릭-IT^® GalNAz (테트라아세틸화 N-아지도아세틸갈락토사민)를 포함한 아지드-변형 탄수화물, 시알산 변형 당단백질을 표지화하기 위한 클릭-IT^® ManNAz (테트라아세틸화 N-아지도아세틸-D-만노사민), 및 O-GlcNAz-변형 당단백질을 표지화하기 위한 클릭-IT^® GlcNAz (테트라아세틸화 N-아지도아세틸글루코사민); 및 3) 아지드-변형 이소프레노이드 지질, 예컨대 클릭-IT^® 파르네실 알콜 아지드 및 클릭-IT^® 게라닐게라닐 알콜 아지드를 포함한다. 상기 언급된 바와 같이, 출원인은, 예상외로 이들 알킨-변형 생체분자가 바이러스의 감염성을 증가시킨다는 것을 밝혀냈다.

글리코실화

글리코실화는 탄수화물이 세포 내에서 단백질, 지질, 또는 다른 유기 분자에 부착되는 효소 과정이다. 당단백질은 탄수화물에 공유 결합된 단백질로 구성된 생체분자이다. 특정 번역후 변형으로 당 모이어티 (탄수화물)가 단백질 상에 부가되고, 그로 인해 당단백질이 형성된다. 당단백질에서 발견되는 흔한 모노사카라이드는 글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 크실로스, N-아세틸갈락토사민 (GalNAc), N-아세틸글루코사민 (GlcNAc) 및 N-아세틸뉴라민산 (NANA, 시알산으로도 알려짐)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. N-아세틸-D-만노사민 (ManNAc)은 NANA를 포함한, 뉴라민산의 전구체이다. 동일하거나 상이한 모노사카라이드 중 둘이 함께 결합하여 디사카라이드를 형성한다. 보다 많은 양의 모노사카라이드의 첨가의 결과로 길이가 증가된 올리고사카라이드가 형성된다. 게다가, 당 모이어티는 글리코실 기일 수 있다.

당단백질에서, 탄수화물은 N-글리코실화나 O-글리코실화에 의해 단백질 성분에 결합될 수 있다. N-글리코실화는 통상 아스파라긴 또는 아르기닌 측쇄 상에 질소를 통해 일어나서, 아미드 기를 통해 N-글리코시드 결합을 형성한다. O-글리코실화는 통상 히드록시리신, 히드록시프롤린, 세린, 티로신 또는 트레오닌 측쇄의 히드록시 산소에서 일어나서, O-글리코시드 결합을 형성한다. GalNAc 및 GlcNAc는 둘 다 O-결합 탄수화물이다. 시알산은 N- 및 O-결합 탄수화물 둘 다에서 발견된다.

단백질 글리코실화는 가장 풍부한 번역후 변형 중 하나이고 생물계의 제어에서 근본적인 역할을 한다. 예를 들어, 글리코실화는 단백질 폴딩에 영향을 미치고 단백질을 안정화시키고 그의 분해를 저지하는데 도움을 줄 수 있다. 또한, 글리코실화는 다른 단백질에 결합하고 세포내- 또는 세포간- 신호전달 경로를 매개하는 단백질의 능력에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 탄수화물 변형은 숙주-병원체 상호작용, 염증, 발생, 및 악성종양에 중요하다 (문헌 [Varki, A. Glycobiology 1993, 3, 97-130]; [Lasky, L. A. Annu . Rev . Biochem. 1995, 64, 113-139]. [(c) Capila, I.; Linhardt, R. J. Angew . Chem ., Int . Ed . 2002, 41, 391-412]; [Rudd, P. M.; Elliott, T.; Cresswell, P.; Wilson, I. A.; Dwek, R. A. Science 2001, 291, 2370-2376]). 한 이러한 공유 변형은 O-GlcNAc 글리코실화이고, 이는 D-N-아세틸글루코사민에 의한 세린 및 트레오닌 잔기의 공유 변형이다 (문헌 [Wells, L.; Vosseller, K.; Hart, G. W. Science 2001, 291, 2376-2378]; [Zachara, N. E.; Hart, G. W. Chem . Rev . 2002, 102, 431]). O-GlcNAc 변형은 모든 고등 진핵 생물 -씨. 엘레간스(C. elegans)에서 인간까지-에서 발견되고 어디에나 있으며, 유도성, 및 매우 동적인 것으로 확인되었고, 이는 포스포릴화에 유사한 조절 역할을 시사하는 것이다.

지방산 아실화

지방산 아실화는 지방산이 세포 내에서 단백질에 부착되는 효소 과정이다. 이러한 과정은 단백질의 기능뿐만 아니라 그의 세포 위치에도 영향을 미칠 수 있고 세포 및 바이러스 기원 둘 다의 단백질에 공통된다 (문헌 [Towler et al ., Proc Natl Acad Sci USA 1986, 83:2812-16]). 미리스트산 및 팔미트산은 단백질에 부착되는 2종의 가장 흔한 지방산이다 (문헌 [Olson et al ., J Biol Chem 261(5):2458-66]). 일반적으로 미리스트산은 N-메티오닌 잔기의 제거 동안 노출된 아미노 말단 글리신에 아미드 결합을 통해 가용성인 막 단백질에 부착되지만, 이는 또한 다른 아미노산에 부착될 수 있다. 또한, 미리스토일화는, 예를 들어 프로테아제가 폴리펩티드를 분해하고 글리신 잔기에 노출시, 번역후 일어날 수 있다. 팔미트산은 에스테르 또는 티오에스테르 결합을 통해 막 단백질에 부착된다. 미리스토일화 및 팔미토일화는 막 구획 사이의 단백질의 세포내 수송(subcellular trafficking)뿐만 아니라, 단백질-단백질 상호작용의 조절에도 중요한 역할을 하는 것으로 보인다.

지방산은 2개의 구별되는 영역, 긴 소수성 탄화수소 쇄 및 카르복실산 기를 갖고, 이는 일반적으로 용액에서 이온화되고 (COO-), 극히 친수성이며 에스테르 및 아미드를 용이하게 형성한다. 천연 지방산은 통상 4 내지 28개의 탄소의 쇄 (대개 비분지형 및 짝수)를 갖고 포화 또는 불포화될 수 있다. 포화 지방산은 탄화수소 쇄 내에 이중 결합을 전혀 갖지 않으며 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산 및 아라키드산을 포함한다. 불포화 지방산은 탄화수소 쇄 내에 1개 이상의 이중 결합을 함유하며 미리스톨레산, 팔미톨레산, 사피엔산, 올레산, 리놀레산, α-리놀레산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 에루스산 및 도코사헥산산을 포함한다.

프레닐화

단백질 프레닐화는 이소프레노이드 지질, 예컨대 파르네실 또는 게라닐-게라닐 모이어티를 표적 단백질의 C-말단 시스테인(들)에 부착하는 것을 포함한다 (문헌 [McTaggert, Cell Mol Life Sci 2006, 63:255-67]). 이들 반응은 파르네실트랜스퍼라제, 게라닐게라닐트랜스퍼라제, 및 Rab 게라닐게라닐트랜스퍼라제 (문헌 [Magee and Seabra, Biochem J 2003, 376:e3-4])에 의해 촉매화된다. 이소프레노이드 지질의 소수성으로 인해, 대부분의 프레닐화 단백질은 막과 결합된다. 대부분의 파르네실화 단백질은 막 결합성이 기능에 중요한 세포 신호전달에 관여한다. 또한, 이소프레노이드 지질은 특수 프레닐-결합 도메인을 통해 단백질-단백질 결합을 매개하는데 중요하다.

바이러스 내에서 번역후 변형

많은 바이러스 단백질은 글리코실화, 아실화 및 프레닐화를 포함하지만 이에 제한되지 않는 번역후 변형으로 광범위하게 변형된다. 많은 경우에, 이들 번역후 변형은 바이러스가 숙주 세포를 감염시키고/거나 면역계를 회피하는데 필요하다. 번역후 변형은 바이러스학에서 특히 중요한데, 그 이유는 일반적으로 바이러스 게놈은 작고 따라서 코딩 절약(coding frugality)을 위한 고조된 압박이 존재하기 때문이다. 숙주의 번역후 기구(machinery)를 이용함으로써, 바이러스는 다중 경로를 활용하고 최소 게놈으로 기능할 수 있으며, 단일 번역후 변형으로 단백질 기능 또는 세포 위치를 변경시킬 수 있다.

예를 들어, HIV 및 원숭이 면역결핍 바이러스 (Simian Immunodeficiency Virus: SIV)에서, 글리코실화는 감염성 주기의 다단계 동안 중요한 역할을 한다. 감염 동안, 바이러스 당단백질은 바이러스 단백질 gp120 및 gp41의 숙주 세포 CD4 수용체 및 CXCR4 및 CCR5 공-수용체로의 결합에 영향을 미친다 (문헌 [Chen et al., Virus Res 2001, 79:91-101]). 글리코실화는 gp160 (gp 120 및 gp41에 대한 전구체)의 적절한 폴딩 및 프로세싱의 원인이 되고 (문헌 [Land et al ., Biochimie 2001, 83: 783-90]) 수지상 세포를 포함한, 상이한 세포 유형과 HIV 및 SIV의 상호 작용을 증진시킬 수 있다 (문헌 [Geijtenbeek et al ., Curr Top Microbiol Immunol 2003, 276:31-54]). HIV 생물학에서 gp120의 정상적인 역할은 표적 세포 상에서 발현된 CD4 수용체 및 CXCR4 및 CCR5 공-수용체를 통해 세포에 대한 바이러스 결합을 개시하는 것이다. gp120이 CD4와 연관되는 경우, gp41에서 공-수용체 결합 부위를 노출시키고 구조적 변화를 촉발하는 구조적 변화가 gp120에서 일어난다. gp41에서의 구조적 변화는, 결국, 바이러스 외피(viral envelope) 및 표적 세포 사이의 융합을 매개하는, gp41에서 융합 단백질을 노출시킨다 (문헌 [Chen et al., Virus Res 2001, 79:91-101]). gp120에서 단일 잔기 (N197)에서 한 탄수화물의 변화는 바이러스 친화성을 CD4 굴성(tropic)에서 CD4 독립성으로 완전히 변화시킨다 (문헌 [Kolchinksy et al ., J Virol 2001, 75:3435-43]). gp120에 존재하는 복합형 탄수화물 (시알산 함유)과 비교하여 높은 만노스의 전체 비율을 변화시키는 것은 표적 세포에 대한 바이러스 결합의 정도에 영향을 미친다 (문헌 [Fenouillet et al., J Gen Virol 1991, 1919-26]). 감염 후, 글리코실화는 막 전구체 단백질 (gp160)의 gp120 및 gp41로의 분해에 필요하다. 감염된 세포로부터 바이러스의 방출시, 막 글리코실화에서의 변화가 바이러스에 대한 체액성 면역 반응을 상당히 변경시킴에 따라 글리코실화는 또한 면역 회피에 중요하다 (문헌 [Kwong et al ., Nature 2002, 420:678-82]; [Shi et al ., J Gen Virol 2005, 86:3385-96]).

바이러스 단백질의 아실화는 또한 HIV 생물학에 중요하다. HIV 출아(budding)는 많은 세포 및 바이러스 단백질의 배위를 포함한 복잡한 과정이다 (문헌 [Resh, Trends Microbiol 2001, 9:57]; [Freed, J Virol 2002, 76:4679-87]). HIV 출아는 캡시드(capsid) 단백질 다단백질 전구체 (pr55 gag)의 N-말단 글리신의 미리스토일화 (문헌 [Lindwasser et al ., J Virol 2001, 75:7913-24]; [Nguyen et al ., J Virol 2000, 74:3264-72]; [Ono et al ., Proc Natl Acad Sci USA 2001, 98: 13925-30])에 의해 이전에 지질 라프트(raft)로 칭해지는 (문헌 [Pike et al ., J Lipid Res 2006, 47: 1597-98]), 막 라프트가 풍부한 혈장 막의 영역으로 지향한다 (문헌 [Lindwasser et al ., J Virol 2001, 75:7913-24]; [Nguyen et al ., J Virol 2000, 74:3264-72]; [Ono et al ., Proc Natl Acad Sci USA 2001, 98: 13925-30]; [Hermida-Matsumoto et al ., J Virol 2000, 74:8670-79]). gp120 단백질은 팔미토일화에 의해 막 라프트로 지향한다 (문헌 [Yang et al., Proc Natl Acad Sci USA 1995, 92:9871-75]). 막 라프트는 세포내이입, 소포 수송, 콜레스테롤 선별, 아폽토시스, 및 T 세포 수용체를 통한 신호전달을 포함한 몇몇 세포 과정에서 중요한 역할을 한다 (문헌 [Jordan et al ., J Immunol 2003, 171 :78-87]; [Viola et al ., Apmis 1999, 107:615-23]; [Viola et al ., Science 1999, 283:680-82]; [Bezombes et al ., Curr Med Chem Anti - Canc Agents 2002, 3:263-70]; [Kabouridis et al ., Eur J Immunol 2000, 30:954-63]). HIV 단백질의 이들 영역으로의 지향으로 비리온이 이들 경로를 보다 효율적으로 장악할 수 있게 되고, 따라서 AIDS에서 질환 진행과 연관된 복잡한 병원성을 잠재적으로 설명할 수 있게 된다. 사실상, HIV 입자로부터, 중요한 막 라프트 성분인 콜레스테롤의 제거의 결과로 적어도 2개의 메카니즘에 의한 불활성화, 표적 세포에 융합하는 능력의 상실 및 바이러스의 투과화를 초래하는 비리온 완전성의 상실이 초래된다 (문헌 [Guyader et al, J Virol 2002, 76: 10356-64]; [Campbell et al., J Virol 2004, 78: 10556-65]; [Viard et al., J Virol 2002, 76: 11584-595]; [Campbell et al., Aids 2002, 16:2253-61]; [Liao et al, AIDS Res Hum Retroviruses 2003, 19:675-87]; [Graham et al., J Virol 2003, 77:8237-48]).

바이러스는 또한 이소프레노이드 지질, 예컨대 파르네실 및 게라닐게라닐 기를 첨가함으로써 바이러스 단백질을 변형하기 위해 숙주 세포 절차를 사용할 수 있다. 예를 들어, 프레닐화는 B형 간염 바이러스와 연관된 급성 및 만성 간 질환의 병인체(etiologic agent), 델타형 간염 바이러스 (HDV)의 생활 주기(life cycle)에서 중요한 역할을 한다 (문헌 [Einav and Glenn, J Antimicrobial Chemotherapy 2003, 52:883-86]). HDV 단백질 중 하나, 델타형 대형 항원 (LHDAg)은 바이러스 조립에서 중대하며 시험관내 번역 시스템(translation system) 및 무손상(intact) 세포 둘 다에서 파르네실화를 겪는다 (문헌 [Einav and Glenn, J Antimicrobial Chemotherapy 2003, 52:883-86]). 파르네실트랜스퍼라제 억제제를 사용함으로써 프레닐화를 억제함으로 인해 HDV 조립체를 저지하고, HDV의 마우스 모델에서 HDV 바이러스혈증을 소거하며, 따라서 특정 바이러스의 생활 주기에서 프레닐화의 중요성을 강조하는 것이다 (문헌 [Einav and Glenn, J Antimicrobial Chemotherapy 2003, 52:883-86]).

HIV, SIV, 및 HDV와 유사하게, 다른 바이러스는 숙주 세포로의 침입을 매개하고/거나 숙주 면역계를 회피하기 위해 바이러스 단백질의 번역후 변형에 의존한다. 따라서, 본원에서 기재된 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 및 알킨-변형 이소프레노이드 지질은, 세포 배양물에서의 바이러스의 보다 높은 역가는 세포를 감염시키는 바이러스의 증가된 수로 인해 달성되는 결과로, 광범위한 활성 (예컨대 바이러스의 감염성 증가)을 갖는 것으로 예상된다. 배양된 바이러스는 바이러스에 대한 백신의 제조에서 사용될 수 있다.

사용 방법

1. 표지된 바이러스의 제조 방법

본 개시 내용은 바이러스를 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 생리학상 허용되는 염과 접촉시켜 표지된 바이러스를 제조하는 것을 포함하는, 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스의 제조 방법을 제공한다.

일부 실시양태에서, 바이러스를 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키며, 한편 다른 실시양태에서, 바이러스가 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시 바이러스는 세포 내에 있다. 특정 실시양태에서, 알킨-변형 지방산, 탄수화물 또는 지질, 또는 이들의 생리학상 허용되는 염을 바이러스로 감염되는 세포와 접촉시킨다. 한 실시양태에서, 지방산은 세포 내에서 아실화 반응 (예를 들어, 팔미토일화 또는 미리스토일화)을 통해 단백질에 부착되는 것이다.

이론에 의해 구속되는 것을 바라지 않으면서, 일단 알킨-함유 종(species)이 세포와 접촉된 후, 이는 세포에 의해, 바이러스 단백질, 예를 들어 탄수화물 또는 지방산 측쇄 변형제(modifier)에 혼입될 수 있게 된다. 그 다음, 세포는 세포에 의해 생산된 알킨-변형 단백질로부터 바이러스를 조립할 수 있다.

한 실시양태에서, 알킨-변형 지방산의 지방산 부분은 포화 또는 불포화되고 짝수의 탄소 원자, 예컨대 4 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖는다. 적합한 불포화 유리 지방산은 12 내지 24개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖고 팔미톨레산, 올레산, 리놀레산, 알파 및 감마 리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜탄산 및 테트라코세노산을 포함한다. 적합한 포화 지방산은 4 내지 28개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖고 바람직하게는 부티르산 또는 이소부티르산, 숙신산, 카프로산, 아디프산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산 및 아라키드산으로부터 선택된다. 알킨-변형 지방산은, 자연 발생이든 아니든, 단쇄 알킬화, 예컨대 메틸화 또는 아세틸화, 에스테르화뿐만 아니라, 바이러스 감염성을 증가시키는 그의 능력을 유지하는 다른 유도체화를 포함하지만 이에 제한되지 않는 화학적 치환에 의해 변형될 수 있는 것으로 이해된다.

한 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 포화 지방산, 예컨대 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염이다. 또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 포화 지방산, 예컨대

또는 이들의 생리학상 허용되는 염이다.

또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물은 N-결합 탄수화물 또는 O-결합 탄수화물이다. 또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물은 N-에티닐아세틸갈락토사민, N-에티닐아세틸-D-만노사민, 또는 N-에티닐아세틸글루코사민이다. 알킨-변형 탄수화물은 임의로, 테트라아세틸 모이어티를 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포로의 침입을 용이하게 하는 모이어티를 포함한다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물은 테트라아세틸화 N-에티닐아세틸갈락토사민, 테트라아세틸화 N-에티닐아세틸-D-만노사민, 또는 테트라아세틸화 N-에티닐아세틸글루코사민이다.

또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 이소프레노이드 지질은 파르네실 기 또는 게라닐게라닐 기를 포함하고, 에티닐 파르네실 디포스페이트, 에티닐 파르네실 알콜, 에티닐 게라닐게라닐 디포스페이트, 또는 에티닐 게라닐게라닐 알콜을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

바이러스는 임의의 인간 동물 바이러스, 비-인간 동물 바이러스, 식물 바이러스, 곤충 바이러스일 수 있다. 한 실시양태에서, 동물은 인간이고 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스이며, 한편 특정 실시양태에서, 인간 면역결핍 바이러스는 HIV-1이다.

2. 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법

또한, 바이러스를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이 제공된다.

일부 실시양태에서, 바이러스를 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키며, 한편 다른 실시양태에서, 바이러스가 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시 바이러스는 세포 내에 있다 (예를 들어, 세포는 바이러스로 감염됨).

알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물 및 알킨-변형 이소프레노이드 지질; 및 이 방법에서 사용될 수 있는 바이러스의 특정 실시양태가 본원에서 논의된다.

알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질, 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스가 대상체에서 바이러스 감염 또는 다른 장애를 치료하는데 효과적인지의 여부는 당업계에 알려진 다양한 검정 중 어느 하나를 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 바이러스 감염의 기존 동물 모델 또는 시험관내 모델을 사용하여 소정의 화합물이 바이러스 부하를 감소시키는데 효과적인지의 여부를 결정할 수 있다.

본 발명의 표지된 바이러스는 생(live), 약독화된 형태로 백신으로서 사용될 수 있지만, 전형적으로는 불활성화된다.

백신은 감염성이 불활성화된 전체 바이러스를 포함할 수 있다. 불활성화된 백신은 세포 배양물에서 바이러스를 번식시키고 이를 수크로스 또는 다른 고밀도 매질에 의해 형성된 밀도 구배로 고속 원심분리에 의해 감염된 세포 및 배양 배지로부터 정제함으로써 제조될 수 있다. 대안으로, 바이러스를 크로마토그래피에 의해 정제시킬 수 있다. 정제 바이러스의 감염성은 바이러스를 화학적 처리 (예를 들어 불활성화된 소아마비 바이러스 백신을 제조하기 위해 사용되는 포르말린 불활성화 등), 조사(irradiation) 또는 열 처리에 의해 불활성화시킴으로써 파괴된다.

약독화된 바이러스는 병독성(virulence)이 감소된 바이러스이다. 성장 거동은 바이러스 약독화의 지표로서 인식된다. 일반적으로, 바이러스 균주가 숙주 세포에서 생식적으로 복제하는 능력이 단지 감소되었거나 그의 능력을 상실한 경우 바이러스 균주는 약독화된 것으로서 간주된다. 약독화는 세포 배양물에서의 바이러스의 연속 계대, 화학적 처리에 의한 항원성 변형, 재조합 또는 키메라 바이러스의 구축, 바이러스 게놈의 돌연변이유발화(mutagenization), 특정 유전자 영역의 결실 또는 삽입, 온도 감수성 돌연변이체의 선택 또는 조사를 포함한 상이한 방법에 의해 수행될 수 있다. 대안으로, 본 발명의 표지된 바이러스는 임상 질환을 유발하는 능력이 감소된 감염성 cDNA 또는 RNA 또는 약독화된 바이러스 단리체(isolate)일 수 있다.

본 발명의 표지된 바이러스는 백신으로서 사용시 세포 배양 시스템에서 번식될 수 있다. 바이러스/백신 제조에 사용된 세포는 세포주, 예를 들어 생물 반응기에서 단일-세포 현탁액 배양물로서 또는 조직 배양 플라스크 또는 롤러-병(roller-bottle)의 세포-지지 표면 상에서 단층으로서, 시험관내에서 연속 성장하는 세포일 수 있다. 바이러스의 제조에 사용된 세포주에 관한 일부 예는: 소아마비 바이러스의 제조에 사용된 인간 태아 폐 세포주 MRC-5 및 디스템퍼 바이러스의 제조, 볼거리 바이러스 및 풍진 바이러스 (MMR II)의 제조에 사용된 인간 태아 폐 세포주 WI-38 (머크 샤프 앤드 돔(Merck Sharp & Dohme))이다.

일차 동물 세포는 또한 백신의 제조에 사용될 수 있다. 바이러스 제조에 사용되는 일차 세포의 예는 닭 배아 섬유모세포 (CEF)이다. 이들 세포는 홍역 및 일본 뇌염 바이러스 (파스퇴르 메리유(Pasteur Merieux)), 볼거리 바이러스 (프로백신(Provaccine)에 의해 제조), 광견병 바이러스 (키론 베링 게엠베하 운트 코.(Chiron Berhing GmbH & Co.)에 의해 제조), 황열 바이러스 (에이프릴백스(Aprilvax)에 의해 제조), 인플루엔자 바이러스 (와이어쓰 랩스(Wyeth Labs) 및 스미스클라인 앤드 비첨(SmithKline & Beecham)에 의해 제조) 및 변형 백시니아 바이러스 앙카라(Vaccinia virus Ankara: MVA)의 제조에 사용된다.

많은 바이러스 백신이 CEF 세포에서 연속 계대함으로써 악성 질환(virulent disease)-유발 바이러스를 약독화함으로써 제조되기 때문에 CEF 세포가 흔히 사용된다. 약독화 바이러스는 바람직하게는 인간 세포 상에서 번식되지 않으며 그 이유는 바이러스는 인간 기원의 세포에서 복제가 뛰어나게 될 수 있는 우려가 있기 때문이다. 인간 세포에서 복제하는 능력을 회복한 바이러스는 인간에게 투여되는 경우, 특히 개체가 면역이 제대로 반응되지 못하는 경우 건강 위기를 나타낸다.

3. 시험관내 형질감염 및 생체내 유전자 요법에서 사용하기 위한 바이러스의 감염성의 증가 방법

또한, 형질감염 바이러스를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 형질감염 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 바이러스를 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키며, 한편 다른 실시양태에서, 바이러스가 알킨-변형 지방산, 알킨 변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시 바이러스는 세포 내에 있다 (예를 들어, 세포는 바이러스로 감염됨).

알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스가 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인지의 여부는 당업계에 알려진 다양한 검정 중 어느 하나를 사용하여 결정될 수 있다.

본 발명의 표지된 바이러스는 그의 증가된 감염성 때문에 외인성 유전자를 전체 생물, 예컨대 인간 동물, 비-인간 동물, 곤충 또는 식물에 도입하기 위해 유전자 요법을 위한 바이러스 벡터로서 생체내에서 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 표지된 바이러스는 형질감염을 위한 바이러스 벡터로서, 즉 인간 동물, 비-인간 동물, 곤충 또는 식물 세포에서 발현을 위한 외래 유전자를 세포에 도입하기 위해, 시험관내에서 사용될 수 있다.

분자 생물학에서의 표준 기술을 사용하여 비-바이러스성 유전자를 발현할 수 있는 본원에서 제공된 표지된 바이러스를 생성시킬 수 있다. 이러한 기술은 다양한 핵산 조작 기술, 핵산 전이 프로토콜, 핵산 증폭 프로토콜, 및 당업계에 알려진 다른 분자 생물학 기술을 포함한다. 예를 들어, 점 돌연변이가 올리고뉴클레오티드 매개된 부위-지정 돌연변이유발의 사용을 통해 관심 유전자에 도입될 수 있다.

본 발명의 방법을 사용하여 외인성 유전자의 바이러스로의 도입 전 또는 후에, 본 발명의 표지된 바이러스를 제공할 수 있다. 예시적인 외인성 유전자는 단백질 및 RNA 분자를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 표지된 바이러스는 숙주 세포에서 검출가능한 유전자 산물, 치료 유전자 산물, 제조 또는 수확을 위한 유전자 산물, 또는 항체 수확을 위한 항원성 유전자 산물을 발현할 수 있다.

이러한 숙주 세포는 단일 유형의 세포의 군 또는 상이한 유형의 세포의 혼합물일 수 있다. 숙주 세포는 배양된 세포주, 일차 세포 및 증식성 세포를 포함할 수 있다. 이들 숙주 세포는 본 발명의 표지된 바이러스에 의해 감염되지 쉬운, 다양한 인간 동물 세포 또는 비-인간 동물 세포, 예컨대 포유동물, 조류 및 곤충 세포 및 조직, 예를 들어 닭 배아, 토끼, 햄스터 및 원숭이 신장 세포 등 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 적합한 숙주 세포는 조혈 세포 (전능, 줄기 세포, 백혈구, 림프구, 단핵구, 대식세포, APC, 수지상 세포, 비-인간 세포 등), 폐 세포, 기관 세포, 간 세포, 상피 세포, 내피 세포, 근육 세포 (예를 들어, 골격근, 심근 또는 평활근), 섬유모세포, 및 세포주 (예를 들어, CV-1, BSC40, 베로(Vero), BSC40 및 BSC-1 포함), 및 인간 헬라(HeLa) 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 숙주 세포를 형질감염시키는 방법, 형질전환체를 표현형으로 선택하는 방법, 및 다른 이러한 방법은 당업계에 알려져 있다.

본 발명의 표지된 바이러스를 사용하여 유기체를 변형시켜, 외인성 유전자를 발현할 수 있으며, 그 변형이 또한 1개 이상의 조절 서열을 함유하여 외인성 유전자의 발현을 조절할 수 있다. 당업계에 알려진 바와 같이, 조절 서열로 인해 외인성 유전자의 구성적 발현이 가능해질 수 있거나 외인성 유전자의 유도성 발현이 가능해질 수 있다. 추가로, 조절 서열로 인해 외인성 유전자의 발현 수준을 제어하는 것이 가능해질 수 있다.

표지된 바이러스

또한, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 표지된 바이러스가 제공된다. 일부 실시양태에서, 이들 모이어티는 비-자연 발생이다.

일부 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물 모이어티는 상업적으로 입수가능하고/거나 당업자에게 널리 알려진 다양한 탄수화물로부터 선택될 수 있는 탄수화물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 탄수화물은 자연 발생일 수 있다. 알킨-변형 탄수화물 모이어티는, 자연 발생이든 아니든, 단쇄 알킬화, 예컨대 메틸화 또는 아세틸화, 에스테르화뿐만 아니라, 바이러스 감염성을 증가시키는 능력을 유지하는 다른 유도체화에 의해 변형될 수 있는 것으로 이해된다.

한 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물 모이어티는 1개 이상의 아세틸 모이어티를 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포로의 침입을 용이하게 하는 또 다른 모이어티를 함유한다. 따라서, 한 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물 모이어티의 탄수화물은 N-결합 탄수화물 또는 O-결합 탄수화물의 테트라아세틸화 형태이다. 또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물 모이어티는 테트라아세틸화 N-아지도아세틸갈락토사민, 테트라아세틸화 N-아지도아세틸-D-만노사민, 또는 테트라아세틸화 N-아지도아세틸글루코사민으로 구성될 수 있다.

한 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물 모이어티는 세포 내에서 글리코실화 반응을 통해 단백질로 직접 또는 간접적으로 부착되는 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 알킨-변형 탄수화물은 N-결합 탄수화물 또는 O-결합 탄수화물 모이어티일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 알킨 변형 탄수화물은 N-에티닐아세틸갈락토사민 모이어티, N-에티닐아세틸-D-만노사민 모이어티, 또는 N-에티닐아세틸글루코사민 모이어티일 수 있다.

일부 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 지방산을 포함한다. 지방산은 상업적으로 입수가능하고/거나 당업자에게 널리 알려진 다양한 지방산으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 지방산을 선택하여 세포의 바이러스 감염을 예방, 억제 및/또는 지연시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 지방산은 자연 발생일 수 있다.

한 실시양태에서, 지방산은 포화 또는 불포화될 수 있고 짝수의 탄소 원자, 예컨대 4 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖는다. 적합한 불포화 지방산은 12 내지 24개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖고 팔미톨레산, 올레산, 리놀레산, 알파 및 감마 리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜탄산 및 테트라코세노산으로부터 선택될 수 있다. 적합한 포화 지방산은 4 내지 28개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖고 부티르산 또는 이소부티르산, 숙신산, 카프로산, 아디프산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산으로부터 선택될 수 있다. 게다가, 알킨-변형 모이어티에서의 지방산을 알킨, 케톤, 또는 대사적으로 적합한 팔미트산, 스테아르산 및 아라키드산인 것으로 확인된 다른 소분자로 대체하는 것이 가능하다. 알킨-함유 지방산 모이어티는, 자연 발생이든 아니든, 단쇄 알킬화, 예컨대 메틸화 또는 아세틸화, 에스테르화뿐만 아니라, 바이러스의 감염성을 증가시키는 능력을 유지하는 다른 유도체화를 포함하지만 이에 제한되지 않는 화학적 치환에 의해 변형될 수 있는 것으로 이해된다.

한 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티는 포화 지방산 모이어티, 예컨대 15-에티닐펜타데카닐 또는 12-에티닐도데카닐이다. 또 다른 실시양태에서, 알킨-변형 지방산은 포화 지방산 모이어티, 예컨대

이다.

한 실시양태에서, 알킨 변형 지방산 모이어티는 세포 내에서 아실화 반응 (예를 들어, 팔미토일화 또는 미리스토일화)을 통해 바이러스의 단백질에 부착될 수 있는 것이다.

일부 실시양태에서, 바이러스는 임의의 인간 동물 바이러스, 비-인간 동물 바이러스, 식물 바이러스, 곤충 바이러스일 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스이다. 특정 실시양태에서, 인간 면역결핍 바이러스는 HIV-1이다.

바이러스

알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질은 대부분의 바이러스에 공통인 번역후 변형을 표적으로 하고 따라서 광범위한 바이러스의 감염성을 증가시키는 가능성을 갖는 신규 부류의 작용제를 나타낸다. 원칙적으로, 이들 화합물을 사용하여 인간 동물 바이러스, 비-인간 동물 바이러스, 식물 바이러스 또는 곤충 바이러스의 감염성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 식물 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 곤충 바이러스이다. 다른 실시양태에서, 바이러스는 비-인간 동물 바이러스이다. 또 다른 실시양태에서, 바이러스는 인간 동물 바이러스이다. 한 실시양태에서, 바이러스는 비-인간 포유동물, 예컨대 소, 말, 돼지, 염소 또는 양을 포함하지만 이에 제한되지 않는 포유동물 가축을 감염시키는 것이다.

다른 실시양태에서, 바이러스는 DNA 바이러스이다. DNA 바이러스는 하기 패밀리 중 하나에 속하는 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 아데노바이러스, 아스트로바이러스, 헤파드나바이러스, 헤르페스바이러스, 파포바바이러스, 및 폭스바이러스. 다른 실시양태에서, 바이러스는 RNA 바이러스이다. RNA 바이러스는 하기 패밀리 중 하나에 속하는 바이러스를 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 아레나바이러스, 분야바이러스, 칼시바이러스, 코로나바이러스, 필로바이러스, 플라비바이러스, 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 피코르나바이러스, 레오바이러스, 레트로바이러스, 랍도바이러스, 및 토가바이러스.

1. 비-인간 동물 바이러스

비-인간 동물에 관한 본 발명의 방법에서, 비-인간 동물 바이러스는 피코르나바이러스, 예컨대 소 엔테로바이러스, 돼지 엔테로바이러스 B, 구제역 바이러스, 말 A형 비염 바이러스, 소 B형 비염 바이러스, 르준간(ljungan) 바이러스, 말 B형 비염 바이러스, 아이치(aichi) 바이러스, 소 코부바이러스(kobuvirus), 돼지 테스초바이러스(teschovirus), 돼지 사펠로바이러스(sapelovirus), 원숭이 사펠로바이러스, 조류 사펠로바이러스, 조류 뇌척수염 바이러스, 오리 A형 간염 바이러스, 또는 원숭이 엔테로바이러스 A; 페스티바이러스, 예컨대 보더병(border disease) 바이러스, 소 바이러스 설사, 또는 돼지 콜레라 바이러스(classical swine fever virus); 아테리바이러스(arterivirus), 예컨대 말 동맥염 바이러스, 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스, 락테이트 데히드로게나제 상승 바이러스, 또는 원숭이 출혈열 바이러스; 코로나바이러스, 예컨대 소 코로나바이러스, 돼지 코로나바이러스, 고양이 코로나바이러스, 또는 개 코로나바이러스; 파라믹소바이러스, 예컨대 헨드라 바이러스, 니파 바이러스, 개 디스템퍼 바이러스(canine distemper virus), 우역 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스, 및 소 호흡기 세포융합 바이러스(bovine respiratory syncytial virus); 오르토믹소바이러스, 예컨대 A형 인플루엔자, B형 인플루엔자, 또는 C형 인플루엔자; 레오바이러스, 예컨대 블루텅(bluetongue) 바이러스; 돼지 써코바이러스(circovirus), 헤르페스바이러스, 예컨대 가성광견병(pseudorabies) 바이러스 또는 소 헤르페스바이러스 1; 아스파르바이러스(asfarvirus), 예컨대 아프리카 돼지 열(African swine fever) 바이러스; 레트로바이러스, 예컨대 원숭이 면역결핍 바이러스, 고양이 면역결핍 바이러스, 소 면역결핍 바이러스, 소 백혈병 바이러스, 고양이 백혈병 바이러스, 야그지그테(Jaagsiekte) 양 레트로바이러스, 또는 염소 관절염 뇌염 바이러스; 플라비바이러스, 예컨대 황열 바이러스, 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 뎅기열 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 또는 소 바이러스 설사; 또는 랍도바이러스, 예컨대 광견병 바이러스로부터 선택될 수 있다.

2. 인간 동물 바이러스

인간 동물에 관한 본 발명의 방법에서, 인간 동물 바이러스는 아데노바이러스, 아스트로바이러스, 헤파드나바이러스, 헤르페스바이러스, 파포바바이러스, 폭스바이러스, 아레나바이러스, 분야바이러스, 칼시바이러스, 코로나바이러스, 필로바이러스, 플라비바이러스, 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 피코르나바이러스, 레오바이러스, 레트로바이러스, 랍도바이러스, 또는 토가바이러스로부터 선택될 수 있다.

일부 실시양태에서, 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 아스트로바이러스는 마마스트로바이러스(mamastrovirus)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 헤파드나바이러스는 B형 간염 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 헤르페스바이러스는 I형 단순 헤르페스 바이러스, 2형 단순 헤르페스 바이러스, 인간 시토메갈로바이러스(cytomegalovirus), 엡스타인-바르 바이러스(Epstein-Barr virus), 수두 바이러스, 로세올로바이러스(roseolovirus), 및 카포시 육종(Kaposi's sarcoma)-연관 헤르페스바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 파포바바이러스는 인간 유두종 바이러스 및 인간 폴리오마 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 폭스바이러스는 두창 바이러스, 백시니아 바이러스, 우두 바이러스, 원두(monkeypox) 바이러스, 천연두 바이러스, 가성우두(pseudocowpox) 바이러스, 구진성 구내염 바이러스, 타나폭스(tanapox) 바이러스, 야바 원숭이 종양 바이러스(yaba monkey tumor virus), 및 전염성 연속종 바이러스(molluscum contagiosum virus)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 아레나바이러스는 림프구성 맥락수막염(lymphocytic choriomeningitis) 바이러스, 라사(lassa) 바이러스, 마추포(machupo) 바이러스, 및 주닌(junin) 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 분야바이러스는 한타 바이러스(hanta virus), 나이로바이러스(nairovirus), 오르토분야바이러스, 및 플레보바이러스(phlebovirus)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 칼시바이러스는 베시바이러스, 노로바이러스, 예컨대 노르워크(Norwalk) 바이러스 및 사포바이러스(sapovirus)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 코로나바이러스는 인간 코로나바이러스 (중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)의 병인체)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 필로바이러스는 에볼라 바이러스(Ebola virus) 및 마르부르크 바이러스(Marburg virus)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 플라비바이러스는 황열 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 뎅기열 바이러스, C형 간염 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 머레이 밸리 뇌염(Murray Valley encephalitis) 바이러스, 세인트루이스(St. Louis) 뇌염 바이러스, 러시아 춘하(Russian spring-summer) 뇌염 바이러스, 옴스크(Omsk) 출혈열 바이러스, 소 바이러스성 설사 바이러스, 키아사누르 삼림병(Kyasanur Forest disease) 바이러스, 및 포와산(Powassan) 뇌염 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 오르토믹소바이러스는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, 및 C형 인플루엔자 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 파라믹소바이러스는 파라인플루엔자(parainfluenza) 바이러스, 이하선염 바이러스 (볼거리), 모르빌리바이러스 (홍역), 뉴모바이러스(pneumovirus), 예컨대 인간 호흡기 세포융합 바이러스, 및 아급성 경화성 범뇌염 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 피코르나바이러스는 폴리오바이러스, 코감기 바이러스(rhinovirus), A형 콕사키바이러스, B형 콕사키바이러스, A형 간염 바이러스, 에코바이러스, 및 장내바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 레오바이러스는 콜로라도 진드기열(Colorado tick fever) 바이러스 및 로타바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 레트로바이러스는 렌티바이러스, 예컨대 인간 면역결핍 바이러스, 및 인간 T-림프구향성 바이러스(human T-lymphotrophic virus: HTLV)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 랍도바이러스는 리사바이러스, 예컨대 광견병 바이러스, 수포성 구내염 바이러스 및 감염성 조혈 괴사 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 토가바이러스는 알파바이러스, 예컨대 로스 리버(Ross river) 바이러스, 오니옹니옹(O'nyong'nyong) 바이러스, 신드비스(Sindbis) 바이러스, 베네수엘라형(Venezuelan) 말 뇌염 바이러스, 동부형(Eastern) 말 뇌염 바이러스, 및 서부형(Western) 말 뇌염 바이러스, 및 풍진 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

3. 식물 바이러스

식물에 관한 본 발명의 방법에서, 식물 바이러스는 알파모바이러스(alfamovirus), 알렉시바이러스(allexivirus), 알파크립토(alphacrypto) 바이러스, 아눌라바이러스(anulavirus), 아프스카비로이드(apscaviroid), 아우레우스바이러스(aureusvirus), 아베나바이러스(avenavirus), 아브선비로이드(avsunviroid), 배드나바이러스(badnavirus), 베고모바이러스(begomovirus), 베니바이러스(benyvirus), 베타크립토바이러스(betacryptovirus), 베타플렉시비리다에(betaflexiviridae), 브로모바이러스(bromovirus), 비모바이러스(bymovirus), 카필로바이러스(capillovirus), 카를라바이러스(carlavirus), 카르모바이러스(carmovirus), 카울리모바이러스(caulimovirus), 카베모바이러스(cavemovirus), 체라바이러스(cheravirus), 클로스테로바이러스(closterovirus), 코카드비로이드(cocadviroid), 콜레비로이드(coleviroid), 코모바이러스(comovirus), 크리니바이러스(crinivirus), 쿠쿠모바이러스(cucumovirus), 쿠르토바이러스(curtovirus), 시토랍도바이러스(cytorhabdovirus), 디안토바이러스(dianthovirus), 에나모바이러스(enamovirus), 움브라바이러스(umbravirus)와 B-형 위성(satellite) 바이러스, 파바바이러스(fabavirus), 피지바이러스(fijivirus), 푸로바이러스(furovirus), 호르데이바이러스(hordeivirus), 호스투비로이드(hostuviroid), 이다에오바이러스(idaeovirus), 일라르바이러스(ilarvirus), 이포모바이러스(ipomovirus), 루테오바이러스(luteovirus), 마클로모바이러스(machlomovirus), 마클루라바이러스(macluravirus), 마라피바이러스(marafivirus), 마스트레바이러스(mastrevirus), 나노바이러스(nanovirus), 네크로바이러스(necrovirus), 네포바이러스(nepovirus), 뉴클레오랍도바이러스(nucleorhabdovirus), 올레아바이러스(oleavirus), 오피오바이러스(ophiovirus), 오리자바이러스(oryzavirus), 파니코바이러스(panicovirus), 페클루바이러스(pecluvirus), 페투바이러스(petuvirus), 피토레오바이러스(phytoreovirus), 폴레로바이러스(polerovirus), 포모바이러스(pomovirus), 포스피비로이드(pospiviroid), 포텍스바이러스(potexvirus), 포티바이러스(potyvirus), 레오바이러스, 랍도바이러스, 리모바이러스(rymovirus), 새드와바이러스(sadwavirus), SbCMV-유사 바이러스, 세퀴바이러스(sequivirus), 소베모바이러스(sobemovirus), 테누이바이러스(tenuivirus), TNsatV-유사 위성 바이러스, 토바모바이러스(tobamovirus), 토포쿠바이러스(topocuvirus), 토스포바이러스(tospovirus), 트리코바이러스(trichovirus), 트리티모바이러스(tritimovirus), 텅그로바이러스(tungrovirus), 티모바이러스(tymovirus), 움브라바이러스(umbravirus), 바리코사바이러스(varicosavirus), 비티바이러스(vitivirus), 또는 와이카바이러스(waikavirus)로부터 선택될 수 있다.

4. 곤충 바이러스

곤충 바이러스에 관한 본 발명의 방법에서, 곤충 바이러스는 덴소바이러스(densovirus), 예컨대 주노니아 코에니아(Junonia coenia) 덴소바이러스, 누에나방 (Bombyx mori) 덴소바이러스, 아에데스 아에깁티(Aedes aegypti) 덴소바이러스, 또는 페리플란타 풀리기노사(Periplanta fuliginosa) 덴소바이러스; 이리도바이러스(iridovirus), 예컨대 무지개(iridescent) 바이러스 6; 클로르이리도바이러스(chloriridovirus), 바큘로바이러스, 예컨대 핵 다면체 바이러스 또는 그래뉼로바이러스(granulovirus); 폴리드나바이러스(polydnavirus), 예컨대 이크노바이러스(ichnovirus) 또는 브라코바이러스(bracovirus); 곤충폭스 바이러스(entomopox virus), 예컨대 A형 곤충폭스 바이러스, B형 곤충폭스 바이러스, 또는 C형 곤충폭스 바이러스; 아스코바이러스(ascovirus), 예컨대 스포도프테라 프루기페르다 아스코바이러스(Spodoptera frugiperda ascovirus) 1a, 트리코플루시아 니 아스코바이러스(Trichoplusia ni ascovirus) 2a, 또는 다이아드로무스 풀첼루스 아스코바이러스(Diadromus pulchellus ascovirus) 4a; 곤충 피코르나바이러스, 예컨대 벌 급성 마비 바이러스, P, C, 또는 A형 초파리(Drosophila) 바이러스, X형 벌 바이러스, 또는 누에 무름병(silkworm flacherie) 바이러스; 칼리시바이러스(calicivirus); 노다바이러스(nodavirus), 예컨대 잔날개바퀴(black beetle) 바이러스, 플록 하우스(flock house) 바이러스, 노다무라(nodamura) 바이러스, 파리아코토(pariacoto) 바이러스, 또는 매미나방(gypsy moth) 바이러스로부터 선택될 수 있다.

조합 요법( combination therapy )

한 실시양태에서, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하는 제약 조성물, 및 1종 이상의 항바이러스제를 조합 요법으로 투여할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표지된 바이러스는 불활성화되거나 약독화될 수 있다. 요법은 HIV 감염을 포함하지만 이에 제한되지 않는 바이러스 감염을 치료하는데 유용하다. 본 맥락에서 용어 "조합하여"는 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 조합을 포함하는 바이러스, 및 항바이러스제가 동시에든 순차적으로든 실질적으로 병행하여 제공됨을 의미한다. 한 실시양태에서, 제2의 투여의 개시에서, 순차적으로 제공되는 경우, 그 둘 중 제1의 것은 치료 부위에서 효과적인 농도로 여전히 검출가능하다. 또 다른 실시양태에서, 제2의 투여의 개시에서, 순차적으로 제공되는 경우, 그 둘 중 제1의 것은 치료 부위에서 효과적인 농도로 검출 불가능하다.

예를 들어, 조합 요법은 1종 이상의 추가 항바이러스제와 동시-제제화되고/거나, 동시-투여되는, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함할 수 있다. 비록 항바이러스제의 구체적 예가 제공되지만, 원칙적으로, 표지된 바이러스는 바이러스 감염을 치료하기에 유용한 임의의 제약 조성물과 조합될 수 있다. 이러한 조합 요법은 유리하게는 투여된 작용제의 보다 낮은 투여량을 사용할 수 있고, 따라서 다양한 단독요법과 연관된 가능한 독성 또는 합병증을 피한다. 더욱이, 본원에서 개시된 추가 항바이러스제는 표지된 바이러스에 의해 발병된 바이러스 감염의 경로 단계 이외에도 또는 그와 상이한 것에서 바이러스 감염의 경로 또는 단계에 대해 작용하고, 따라서 표지된 바이러스의 영향을 증진시키고/거나 상승작용을 부여하는 것으로 예상된다. 추가 항바이러스제는 1종 이상의 역전사효소 억제제, 바이러스 프로테아제 억제제, 바이러스 융합 억제제, 바이러스 인테그라제 억제제, 글리코시다제 억제제, 바이러스 뉴라미니다제 억제제, M2 단백질 억제제, 암포테리신 B, 히드록시우레아, α-인터페론, β-인터페론, γ-인터페론, 및 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

1종 이상의 역전사효소 억제제는 하나 이상의 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 지도부딘(Zidovudine) (AZT), 디다노신(Didanosine) (ddI), 잘시타빈(Zalcitabine) (ddC), 스타부딘(Stavudine) (d4T), 라미부딘(Lamivudine) (3TC), 아바카비르(Abacavir) (ABC), 엠트리시타빈(Emtricitabine) (FTC), 엔테카비르(Entecavir) (INN), 아프리시타빈(Apricitabine) (ATC), 아테비라핀(Atevirapine), 리바비린(ribavirin), 아시클로비르(acyclovir), 팜시클로비르(famciclovir), 발아시클로비르(valacyclovir), 간시클로비르(ganciclovir), 및 발간시클로비르(valganciclovir); 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체, 예컨대 테노포비르(Tenofovir) (테노포비르 디소프록실 푸마레이트), 아데포비르(Adefovir) (비스-POM PMPA), PMPA, 및 시도포비르; 또는 하나 이상의 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 예컨대 에파비렌즈(Efavirenz), 네비라핀(Nevirapine), 델라비르딘(Delavirdine), 및 에트라비린(Etravirine)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

1종 이상의 바이러스 프로테아제 억제제는 티프라나비르(tipranavir), 다루나비르(darunavir), 인디나비르(indinavir), 로피나비르(lopinavir), 포삼프레나비르(fosamprenavir), 아타자나비르(atazanavir), 사퀴나비르(saquinavir), 리토나비르(ritonavir), 인디나비르, 넬피나비르(nelfinavir), 및 암프레나비르(amprenavir)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

1종 이상의 바이러스 융합 억제제는 CD4 길항제, 예컨대 가용성 CD4 또는 CD4에 결합하는 항체, 예컨대 TNX-355, BMS-806; CCR5 길항제, 예컨대 SCH-C, SCH-D, UK-427,857, 마라비록(maraviroc), 비크리비록(vicriviroc), 또는 CCR5에 결합하는 항체, 예컨대 PRO-140; CXCR4 길항제, 예컨대 AMD3100 또는 AMD070; 또는gp41의 길항제, 예컨대 엔푸비르티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

1종 이상의 바이러스 인테그라제 억제제는 랄테그라비르(raltegravir)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

1종 이상의 글리코시다제 억제제는 SC-48334 또는 MDL-28574를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

1종 이상의 바이러스 뉴라미니다제 억제제는 오셀타미비르(oseltamivir), 페라미비르(peramivir), 자나미비르(zanamivir), 및 라니나미비르(laninamivir)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 뉴라미니다제는 감염된 세포로부터 바이러스의 방출을 매개하는 인플루엔자 바이러스의 표면 상의 단백질이다. (문헌 [Bossart-Whitaker et al., J Mol Biol, 1993, 232:1069-83]). 인플루엔자 바이러스는 바이러스 혈구응집소 단백질을 사용하여 세포막에 부착한다. 혈구응집소 단백질은 숙주 세포의 막에서 당단백질 상에서 발견되는 시알산 잔기에 결합한다. 바이러스가 세포로부터 방출되기 위해, 뉴라미니다제는 숙주 당단백질로부터 시알산 기를 효소적으로 분해하여야 한다. 따라서, 뉴라미니다제를 억제하는 것은 감염된 세포로부터 인플루엔자 바이러스가 방출되지 못하도록한다.

1종 이상의 M2 억제제는 아만타딘(amantadine) 및 리만티딘(rimantidine)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. M2는 인플루엔자 바이러스의 바이러스 외피에서 발견되는 이온 채널 단백질이다 (문헌 [Henckel et al., J Biol Chem, 1998, 273:6518-24]). M2 단백질은 인플루엔자 바이러스의 탈각(uncoating)을 제어하는데 중요한 역할을 하여, 이로써 비리온 함량이 숙주 세포 세포질 내로 방출하게 된다. M2를 차단하는 것은 바이러스 복제를 억제한다.

본원에서 개시된 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스는 하기에서 더 상세히 논의된 바와 같이 특정의 바이러스 감염을 치료하기 위해 다른 치료제와 조합하여 사용될 수 있다.

HIV 감염의 치료제의 비제한적 예는, 이러한 바이러스가 하기 중 적어도 하나와 조합된, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하도록 변형된 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 지도부딘 (AZT), 디다노신 (ddI), 잘시타빈 (ddC), 스타부딘 (d4T), 라미부딘 (3TC), 아바카비르 (ABC), 엠트리시타빈 (FTC), 엔테카비르 (INN), 아프리시타빈 (ATC), 테노포비르 (테노포비르 디소프록실 푸마레이트), 아데포비르 (비스-POM PMPA) 에파비렌즈, 네비라핀, 델라비르딘, 에트라비린, 티프라나비르, 다루나비르, 인디나비르, 로피나비르, 포삼프레나비르, 아타자나비르, 사퀴나비르, 리토나비르, 인디나비르, 넬피나비르, 암프레나비르, CD4 길항제, 예컨대 가용성 CD4 또는 CD4에 결합하는 항체, 예컨대 TNX-355, BMS-806, CCR5 길항제, 예컨대 SCH-C, SCH-D, UK-427,857, 마라비록, 비크리비록, 또는 CCR5에 결합하는 항체, 예컨대 PRO-140, CXCR4 길항제, 예컨대 AMD3100 또는 AMD070, 또는 gp41의 길항제, 예컨대 엔푸비르티드.

HIV 감염을 치료하기 위해 사용될 수 있는 조합 요법의 구체적 예는, 이러한 바이러스가 1) 테노포비르, 엠트리시타빈, 및 에파비렌즈; 2) 로피나비르 및 리토나비르; 3) 라미부딘 및 지도부딘; 4) 아바카비르, 라미부딘, 및 지도부딘; 5) 라미부딘 및 아바카비르; 또는 6) 테노포비르 및 엠트리시타빈과 조합된, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하도록 변형된 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

헤르페스바이러스 감염의 치료제의 비제한적 예는, 이러한 바이러스가 아시클로비르, 팜시클로비르, 발아시클로비르, 시도포비르, 포스카르넷(foscarnet), 간시클로비르 및 발간시클로비르와 조합된, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하도록 변형된 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

인플루엔자 바이러스 감염의 치료제의 비제한적 예는, 이러한 바이러스가 아만타딘, 리만티딘, 오셀타미비르, 페라미비르, 자나미비르 및 라니나미비르와 조합된, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하도록 변형된 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

호흡기 세포융합 바이러스 감염의 치료제의 비제한적 예는 이러한 바이러스가 리바비린과 조합된, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하도록 변형된 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

따라서 본 발명의 또 다른 측면은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 다른 치료제와 함께 조합 투여를 수행하기 위한 키트에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 키트는, 적절한 경우 하나 이상의 별개의 제약 제제로 제제화된, 1종 이상의 항바이러스제, 및 제약 부형제에서 제제화된, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함한다.

조성물 및 투여 방법

또한, 제약 용도 및 환자에게 투여하기에 적합한 조성물이 제공된다. 조성물은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스, 또는 본원에서의 바이러스 중 어느 하나를 포함한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하며, 여기서 바이러스는 불활성화된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하며, 여기서 바이러스는 약독화된다.

일부 실시양태에서, 조성물은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하며, 여기서 바이러스는 자연 발생 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하며, 여기서 바이러스는 비-자연 발생 바이러스이다.

한 실시양태에서, 알킨 변형 지방산 모이어티는 포화 또는 불포화될 수 있는 지방산을 포함하고 짝수의 탄소 원자, 예컨대 4 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖는다. 적합한 불포화 지방산은 12 내지 24개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖고 팔미톨레산, 올레산, 리놀레산, 알파 및 감마 리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜탄산 및 테트라코세노산으로부터 선택될 수 있다. 적합한 포화 지방산은 6 내지 28개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 갖고 부티르산 또는 이소부티르산, 숙신산, 카프로산, 아디프산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산으로부터 선택될 수 있다. 게다가, 알킨-변형 모이어티에서의 지방산을 알킨, 케톤, 또는 대사적으로 적합한 팔미트산, 스테아르산 및 아라키드산인 것으로 확인된 다른 소분자로 대체하는 것이 가능하다. 알킨-함유 지방산 모이어티는, 자연 발생이든 아니든, 단쇄 알킬화, 예컨대 메틸화 또는 아세틸화, 에스테르화뿐만 아니라, 바이러스 감염성을 증가시키는 능력을 유지하는 다른 유도체화를 포함하지만 이에 제한되지 않는 화학적 치환에 의해 변형될 수 있는 것으로 이해된다.

이다.

제약 조성물은 또한 용기, 팩, 또는 디스펜서에, 투여를 위한 사용 지침서와 함께 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 그의 의도된 투여 경로에 적합하도록 제제화될 수 있다. 투여를 완수하는 방법은 당업자에게 알려져 있다. 조성물은 국소 또는 경구 투여될 수 있거나, 점막을 걸쳐 전달가능할 수 있다. 조성물의 투여의 예는 경구 섭취 또는 흡입을 포함한다. 또한, 정맥내, 복강내, 근육내, 강내(intracavity), 피하, 피부에, 또는 경피 투여될 수 있다.

피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 전형적으로 하기 성분 중 적어도 1종 이상을 포함한다: 멸균 희석제, 예컨대 물, 염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨; 킬레이트제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA); 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트, 또는 포스페이트; 및 등장화제(tonicity agent), 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기로 조정될 수 있다. 이러한 제제는 앰플, 1회용 시린지, 또는 주사액 병에 봉입될 수 있다.

정맥내 투여에 사용되는 용액 또는 현탁액은 담체, 예컨대 생리 염수, 정박테리아수(bacteriostatic water), 크레모포르 이엘(CREMOPHOR EL) (바스프(BASF), 뉴저지주 파시패니), 에탄올, 또는 폴리올을 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균성이고 용이하게 주사가능하도록 유동성이어야 한다. 적당한 유동성은 흔히 레시틴 또는 계면활성제를 사용하여 수득될 수 있다. 조성물은 또한 제조 및 보관의 조건하에 안정하여야 한다. 미생물의 저지는 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등을 사용하여 달성될 수 있다. 많은 경우에, 등장제(isotonic agent) (당), 폴리알콜 (만니톨 및 소르비톨), 또는 염화나트륨을 조성물에 포함시킬 수 있다. 조성물의 연장된 흡수는 흡수 지연제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 첨가함으로써 완수될 수 있다.

경구 조성물은 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 조성물은 젤라틴 내로 봉입되거나 정제로 압축될 수 있다. 경구 투여를 목적으로, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하는 조성물에 부형제를 혼입시킬 수 있고 정제, 트로키제, 또는 캡슐에 위치시킬 수 있다. 제약상 적합한 결합제 또는 아주반트 물질이 조성물에 포함될 수 있다. 정제, 트로키제, 및 캡슐은, (1) 결합제, 미세결정질 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴; (2) 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스, (3) 붕해제, 예컨대 알긴산, 프리모겔(Primogel), 또는 옥수수 전분; (4) 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트; (5) 활택제, 콜로이드상 이산화규소; 또는 (6) 감미제 또는 향미제를 함유할 수 있다.

조성물은 또한 경점막 또는 경피 경로에 의해 투여될 수 있다. 경점막 투여는 로젠지, 비강 스프레이, 흡입기, 또는 좌제를 사용함으로써 완수될 수 있다. 경피 투여는 또한 당업계에 알려진 연고, 고약(salve), 겔, 또는 크림을 함유하는 조성물을 사용함으로써 완수될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 침투될 장벽(barrier)에 적절한 침투제가 사용된다.

흡입에 의한 투여를 위해, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스는 추진제 (예를 들어, 액체 또는 기체)를 함유하는, 압축 용기 또는 디스펜서로부터 에어로졸 분무기나 네뷸라이저로 전달된다. 특정 실시양태에서, 바이러스는 화합물이 신체로부터 급속히 제거되지 못하도록 하는 담체를 사용하여 제거된다. 생체분해성 중합체 (예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물(polyanhydride), 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산)이 흔히 사용된다. 이러한 제제의 제조 방법은 당업자에 의해 알려져 있다.

다른 실시양태에서, 조성물은 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 리포솜을 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포에 전달하기 위한 전달제를 포함한다. 리포솜 (지질 소포로도 알려짐)은 천연 공급원 또는 화학적 합성으로부터 유래된 극성 지질 분자로부터 제조되는 콜로이드상 입자이다. 만곡된 지질 이중층으로 구성된 이러한 구형, 폐쇄 구조는, 흔히 세포독성인 약물을 봉입하는데 전형적으로 사용되어, 독성을 감소시키고/거나 효능을 증가시키도록 한다. 리포솜-봉입 약물 제제는 흔히 건조 (예를 들어 동결-건조) 형태로 제공되고, 이는 후속적으로 투여 직전에 수용액을 사용하여 복원된다. 이는 예를 들어 세포독성 약물이 수용액 내로 누출되는 가능성을 최소화하고 그로 인해 리포솜의 봉입 효과를 감소시키기 위해 행해진다.

그 중에서도 리포솜-캡슐화 활성 성분을 포함하는 제제의 예는 미국 특허 번호 4,427,649, 미국 특허 번호 4,522,811, 미국 특허 번호 4,839,175, 미국 특허 번호 5,569,464, EP 249 561, WO 00/38681, WO 88/01862, WO 98/58629, WO 98/00111, WO 03/105805, 미국 특허 번호 5,049,388, 미국 특허 번호 5,141,674, 미국 특허 번호 5,498,420, 미국 특허 번호 5,422,120, WO 87/01586, WO 2005/039533, US 2005/0112199 및 미국 특허 번호 6,228,393에서 논의되어 있고, 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스 함유 조성물은 기재된 바와 같이 치료 유효량으로 투여된다. 치료 유효량은 대상체의 연령, 병태, 성별, 및 의학적 병태의 중증도에 따라 달라질 수 있다. 적절한 투여량은 임상적 징후를 기반으로 의사에 의해 결정될 수 있다. 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스 함유 조성물은 볼루스 용량(bolus dose)으로서 제공되어 최대 시간의 길이 동안 바이러스의 순환 수준(circulating level)을 최대화한다. 볼루스 용량 후 지속 주입이 또한 사용될 수 있다.

알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하며 불활성화된 바이러스를 포함하는 조성물은 주사에 의해 비경구로, 경구로, 피내로, 경피로, 설하로, 비강내로, 흡입으로서, 또는 경직장으로 제공될 수 있다. 각각의 면역화 용량(immunizing dose)은 역가에서 바이러스 구조를 포함하고, 이는 인간 동물 또는 비-인간 동물에서 적당한 면역 반응을 유도하는 것이 가능하다. 이러한 용량은 각각의 용량당 1.8 - 2 ㎍의 바이러스 단백질 및 폴리오바이러스 유형 1의 20 내지 40개의 항원 D-유닛, 폴리오바이러스 유형 2의 4 내지 8개의 항원 D-유닛 및 폴리오바이러스 유형 3의 16 내지 32개의 항원 D-유닛을 포함하는 소크-유형(Salk-type) 불활성화된 폴리오바이러스 백신에서 사용되는 것과 상응할 수 있다. 또한, 용량은 그것이 안전하고 면역원성이거나 면역계를 자극하는 것이 가능한 것으로 확인된 경우, 또 다른 것일 수 있다.

알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하며 약독화된 바이러스를 포함하는 조성물은 편리하게는 점막 조성물로 제제화될 수 있고, 이는 경구로, 설하로, 비강내로, 흡입으로서, 또는 경직장으로 제공될 것이다. 일부 실시양태에서, 이는 경구로 투여된다. 각각의 면역화 용량은 역가에서 감염성 바이러스 또는 감염성 RNA 또는 cDNA를 포함하고, 이는 선천적 또는 적응 면역계의 감염 또는 활성화를 초래하거나 인간에서 조절성 T-세포 또는 조절성 시토카인을 유도하는 것이 가능하다. 이러한 용량은 약독화된 폴리오바이러스의 생 사빈(Sabin) 균주, 폴리오바이러스 유형 1의 경우 최소 10^5.5 - 10⁶ TCID₅₀, 폴리오바이러스 유형 2의 경우 10⁵ TCID₅₀ 및 폴리오바이러스 유형 3의 경우 10^5.5- 10^5.8 TCID₅₀을 포함하는 종래의 사빈-유형 생 경구 폴리오바이러스 백신에서 사용되는 것과 상응할 수 있다. 또한, 용량은 그것이 안전하고 감염성이거나 선천적 또는 적응 면역계를 자극하는 것이 가능한 것으로 확인된 경우, 또 다른 것일 수 있다. (TCID = 조직 배양 감염 용량; TCID₅₀= 배양물의 50%를 감염시키는 용량.)

특정 경우에, 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 본 발명의 조성물을 제제화하는 것이 유리할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 환자에게 적합화된 물리적으로 이산된 단위를 지칭한다. 각각의 투여 단위는 담체와 회합하여 치료 효과를 초래하도록 계산된, 예정된 양의, 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 함유한다. 투여 단위는 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스의 특징 및 특히 달성되는 치료 효과에 따라 달라진다.

본 발명의 조성물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 제약 절차에 의해, 예를 들어 LD₅₀ (집단의 50%를 치사시키는 용량) 및 ED₅₀ (집단의 50%에 치료 유효한 용량)을 측정함으로써 측정될 수 있다. 독성 및 치료 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고 이는 비 LD₅₀/ED₅₀으로서 표기될 수 있다.

세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터를 사용하여 인간에서 투여량 범위를 제제화할 수 있다. 본 발명의 이들 조성물의 투여량은 혈액에서 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스의 혈중 농도 범위 내에 있을 것이고, 이는 거의 또는 전혀 독성 없이 ED₅₀을 포함한다. 투여량은 사용된 투여량 조성물 형태 및 투여의 경로에 따라 상기 범위 내에서 달라질 수 있다. 본원에 기재된 방법에서 사용되는 알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨 변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하는 바이러스를 포함하는 임의의 조성물의 경우, 치료 유효 용량은 세포 배양 검정을 사용하여 초기에 평가될 수 있다. 용량은 동물 모델에서 제제화되어 IC₅₀ (즉, 증상의 절반-최대 억제를 달성하는 이러한 바이러스의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성할 수 있다. 임의의 특정의 투여량의 효과는 적합한 생물학적 검정에 의해 모니터링할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 보충적, 추가적, 또는 증진된 치료 기능을 제공하는 다른 활성 화합물을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 추가로 1종 이상의 항바이러스제, 예컨대 역전사효소 억제제, 바이러스 프로테아제 억제제, 바이러스 융합 억제제, 바이러스 인테그라제 억제제, 글리코시다제 억제제, 암포테리신 B, 히드록시우레아, α-인터페론, β-인터페론, γ-인터페론, 및 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

한 실시양태에서, 1종 이상의 역전사효소 억제제는 하나 이상의 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 지도부딘 (AZT), 디다노신 (ddI), 잘시타빈 (ddC), 스타부딘 (d4T), 라미부딘 (3TC), 아바카비르 (ABC), 엠트리시타빈 (FTC), 엔테카비르 (INN), 아프리시타빈 (ATC), 아테비라핀, 리바비린, 아시클로비르, 팜시클로비르, 발아시클로비르, 간시클로비르 및 발간시클로비르; 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체, 예컨대 테노포비르 (테노포비르 디소프록실 푸마레이트), 아데포비르 (비스-POM PMPA), PMPA, 및 시도포비르; 또는 하나 이상의 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 예컨대 에파비렌즈, 네비라핀, 델라비르딘, 및 에트라비린을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

다른 실시양태에서, 1종 이상의 바이러스 프로테아제 억제제는 티프라나비르, 다루나비르, 인디나비르, 로피나비르, 포삼프레나비르, 아타자나비르, 사퀴나비르, 리토나비르, 인디나비르, 넬피나비르 및 암프레나비르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

다른 실시양태에서, 1종 이상의 바이러스 융합 억제제는 CD4 길항제, 예컨대 가용성 CD4 또는 CD4에 결합하는 항체, 예컨대 TNX-355, BMS-806; CCR5 길항제, 예컨대 SCH-C, SCH-D, UK-427,857, 마라비록, 비크리비록, 또는 CCR5에 결합하는 항체, 예컨대 PRO-140; CXCR4 길항제, 예컨대 AMD3100 또는 AMD070; 또는 gp41의 길항제, 예컨대 엔푸비르티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

다른 실시양태에서, 1종 이상의 바이러스 인테그라제 억제제는 랄테그라비르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

다른 실시양태에서, 1종 이상의 글리코시다제 억제제는 SC-48334 또는 MDL-28574를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

Claims

바이러스를 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시켜 표지된 바이러스를 제조하는 것을 포함하는, 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스의 제조 방법.
제1항에 있어서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이 하기 화학식을 갖는 것인 방법:
Y-CH₂-X-CO₂H
상기 식에서,
Y는 H 또는 에티닐 기이고;
Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나;
Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고,
여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.
제2항에 있어서, Y가 에티닐 기인 방법.
제2항에 있어서, X가 선형 탄소 쇄인 방법.
제2항에 있어서, X가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 탄소 쇄인 방법.
제2항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 방법.
제2항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 방법.
제2항에 있어서, Y가 에티닐 기이고, X가 선형 탄소 쇄이고, 탄소 쇄가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 것인 방법.
제8항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 방법.
제9항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 방법.
제2항에 있어서, 알킨-변형 지방산이 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제2항에 있어서, 알킨-변형 지방산이

또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제1항에 있어서, 바이러스가 세포 내에 있는 것인 방법.
제13항에 있어서, 세포가 인간 동물 세포, 비-인간 동물 세포, 곤충 세포 또는 식물 세포인 방법.
제1항에 있어서, 바이러스가 자연 발생 바이러스인 방법.
제15항에 있어서, 바이러스가 인간 면역결핍 바이러스인 방법.
제16항에 있어서, 인간 면역결핍 바이러스가 HIV-1 바이러스인 방법.
제1항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 바이러스인 방법.
제18항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 또는 폭스바이러스인 방법.
제18항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 백시니아 바이러스 또는 카나리폭스 바이러스인 방법.
제18항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 파라믹소바이러스, 레트로바이러스 또는 바큘로바이러스인 방법.
제18항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스인 방법.
제1항에 있어서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행하는 것인 방법.
형질감염 바이러스를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 형질감염 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법.
제24항에 있어서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이 하기 화학식을 갖는 것인 방법:
Y-CH₂-X-CO₂H
상기 식에서,
Y는 H 또는 에티닐 기이고;
Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나;
Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고,
여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.
제25항에 있어서, Y가 에티닐 기인 방법.
제25항에 있어서, X가 선형 탄소 쇄인 방법.
제25항에 있어서, X가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 탄소 쇄인 방법.
제25항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 방법.
제25항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 방법.
제25항에 있어서, Y가 에티닐 기이고, X가 선형 탄소 쇄이고, 탄소 쇄가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 것인 방법.
제31항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 방법.
제31항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 방법.
제25항에 있어서, 알킨-변형 지방산이 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제25항에 있어서, 알킨-변형 지방산이

또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제24항에 있어서, 바이러스가 세포 내에 있는 것인 방법.
제36항에 있어서 세포가 곤충 세포인 방법.
제37항에 있어서, 곤충 세포가 Sf9 세포 또는 Sf21 세포인 방법.
제38항에 있어서, 바이러스가 BacMam 바이러스인 방법.
제36항에 있어서, 세포가 비-인간 동물 세포인 방법.
제40항에 있어서, 바이러스가 BacMam 바이러스인 방법.
제40항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 아데노바이러스인 방법.
제40항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 렌티바이러스인 방법.
제40항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 센다이 바이러스인 방법.
제24항에 있어서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행하는 것인 방법.
바이러스를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 것인, 상기 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법.
제46항에 있어서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이 하기 화학식을 갖는 것인 방법:
Y-CH₂-X-CO₂H
상기 식에서,
Y는 H 또는 에티닐 기이고;
Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나;
Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고,
여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.
제47항에 있어서, Y가 에티닐 기인 방법.
제47항에 있어서, X가 선형 탄소 쇄인 방법.
제47항에 있어서, X가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 탄소 쇄인 방법.
제47항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 방법.
제47항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 방법.
제47항에 있어서, Y가 에티닐 기이고, X가 선형 탄소 쇄이고, 탄소 쇄가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 것인 방법.
제53항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 방법.
제54항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 방법.
제47항에 있어서, 알킨-변형 지방산이 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제47항에 있어서, 알킨-변형 지방산이

또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제46항에 있어서, 바이러스가 세포 내에 있는 것인 방법.
제58항에 있어서, 세포가 인간 동물 세포, 비-인간 동물 세포, 곤충 세포 또는 식물 세포인 방법.
제46항에 있어서, 바이러스가 자연 발생 바이러스인 방법.
제46항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 바이러스인 방법.
제61항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 또는 폭스바이러스인 방법.
제61항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 백시니아 바이러스 또는 카나리폭스 바이러스인 방법.
제61항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 파라믹소바이러스, 레트로바이러스 또는 바큘로바이러스인 방법.
제61항에 있어서, 바이러스가 BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스인 방법.
제46항에 있어서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행하는 것인 방법.
알킨-변형 지방산 모이어티, 알킨-변형 탄수화물 모이어티 또는 알킨-변형 이소프레노이드 지질 모이어티를 포함하며, 여기서 모이어티는 비-자연 발생인, 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 바이러스.
제67항에 있어서, 알킨-변형 지방산 모이어티가 하기 화학식을 갖는 것인 바이러스:
Y-CH₂-X-CO-
상기 식에서,
Y는 H 또는 에티닐 기이고;
Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나;
Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고,
여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.
제68항에 있어서, Y가 에티닐 기인 바이러스.
제68항에 있어서, X가 선형 탄소 쇄인 바이러스.
제68항에 있어서, X가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 탄소 쇄인 바이러스.
제68항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 바이러스.
제68항에 있어서, X가 탄소 쇄이고, 여기서 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 바이러스.
제68항에 있어서, 알킨-변형 지방산 모이어티가 15-에티닐펜타데카닐 또는 12-에티닐도데카닐인 바이러스.
제68항에 있어서, 알킨-변형 지방산 모이어티가

인 바이러스.
제68항에 있어서, Y가 에티닐 기이고, X가 선형 탄소 쇄이고, 선형 탄소 쇄가 8 내지 15개의 탄소를 포함하는 것인 바이러스.
제76항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 모두가 탄소인 바이러스.
제76항에 있어서, 탄소 쇄의 탄소 간의 결합 모두가 단일 결합인 바이러스.
제68항에 있어서, 알킨-변형 지방산 모이어티가 아미드 또는 티오에스테르 결합에 의해 바이러스에 부착되는 것인 바이러스.
제67항에 있어서, 자연 발생 바이러스인 바이러스.
제80항에 있어서, 불활성화되는 바이러스.
제80항에 있어서, 약독화되는 바이러스.
제67항에 있어서, 비-자연 발생 바이러스인 바이러스.
제83항에 있어서, 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 또는 폭스바이러스인 바이러스.
제83항에 있어서, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 백시니아 바이러스 또는 카나리폭스 바이러스인 바이러스.
제83항에 있어서, 아데노바이러스, 파라믹소바이러스, 레트로바이러스 또는 바큘로바이러스인 바이러스.
제83항에 있어서, BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스인 바이러스.
제67항의 바이러스를 포함하는 조성물.
제88항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 조성물.
바이러스로 감염된 세포를 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시켜 표지된 바이러스를 제조하는 것을 포함하는, 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염으로 표지된 바이러스의 제조 방법.
제90항에 있어서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이 하기 화학식을 갖는 것인 방법:
Y-CH₂-X-CO₂H
상기 식에서,
Y는 H 또는 에티닐 기이고;
Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나;
Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고,
여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.
제90항에 있어서, 알킨-변형 지방산이 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제90항에 있어서, 알킨-변형 지방산이

또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제90항에 있어서, 바이러스가 세포 내에 있는 것인 방법.
제90항에 있어서, 세포가 인간 동물 세포, 비-인간 동물 세포, 곤충 세포 또는 식물 세포인 방법.
제90항에 있어서, 바이러스가 자연 발생 바이러스인 방법.
제90항에 있어서, 바이러스가 인간 면역결핍 바이러스인 방법.
제97항에 있어서, 인간 면역결핍 바이러스가 HIV-1 바이러스인 방법.
제90항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 바이러스인 방법.
제90항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 백시니아 바이러스, 카나리폭스 바이러스, 파라믹소바이러스, 바큘로바이러스, BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스인 방법.
제90항에 있어서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행하는 것인 방법.
바이러스로 감염된 세포를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 형질감염 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법.
제102항에 있어서, 알킨-변형 지방산 또는 그의 생리학상 허용되는 염이 하기 화학식을 갖는 것인 방법:
Y-CH₂-X-CO₂H
상기 식에서,
Y는 H 또는 에티닐 기이고;
Y가 에티닐 기인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접한 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있거나;
Y가 H인 경우, X는 6 내지 28개의 탄소를 포함하는 선형 또는 분지형 탄소 쇄이고, 여기서 상기 탄소 중 1개 상에 적어도 1개의 수소는 에티닐 기로 대체되고, 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상은 독립적으로 산소, 셀레늄, 규소, 황, SO, SO₂ 또는 NR₁에 의해 대체될 수 있거나, 서로 인접하며 에티닐 기가 부착되지 않은 상기 탄소 중 1개 이상의 쌍은 이중 또는 삼중 결합에 의해 서로 부착될 수 있고,
여기서 R₁은 H이거나 1 내지 6개의 탄소를 포함하는 알킬이다.
제102항에 있어서, 알킨-변형 지방산이 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제102항에 있어서, 알킨-변형 지방산이

또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제102항에 있어서, 바이러스가 세포 내에 있는 것인 방법.
제102항에 있어서, 세포가 비-인간 동물 세포 또는 곤충 세포인 방법.
제107항에 있어서, 곤충 세포가 Sf9 세포 또는 Sf21 세포인 방법.
제102항에 있어서, 바이러스가 BacMam 바이러스 또는 비-자연 발생 아데노바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스인 방법.
제102항에 있어서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행하는 것인 방법.
바이러스로 감염된 세포를 바이러스의 감염성을 증가시키는데 효과적인 양의 알킨-변형 지방산, 알킨-변형 탄수화물, 알킨-변형 이소프레노이드 지질 또는 이들의 생리학상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스가 아닌 것인, 상기 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법.
제111항에 있어서, 알킨-변형 지방산이 15-에티닐펜타데칸산, 12-에티닐도데칸산 또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제111항에 있어서, 알킨-변형 지방산이

또는 이들의 생리학상 허용되는 염인 방법.
제111항에 있어서, 바이러스가 세포 내에 있는 것인 방법.
제111항에 있어서, 세포가 인간 동물 세포, 비-인간 동물 세포, 곤충 세포 또는 식물 세포인 방법.
제111항에 있어서, 바이러스가 자연 발생 바이러스인 방법.
제111항에 있어서, 바이러스가 비-자연 발생 바이러스인 방법.
제111항에 있어서, 바이러스가 아데노바이러스, 파르보바이러스, 토가바이러스, 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 아데노-연관 바이러스, 알파바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 백시니아 바이러스, 카나리폭스 바이러스, 파라믹소바이러스, 바큘로바이러스, BacMam 바이러스, 렌티바이러스 또는 센다이 바이러스인 방법.
제111항에 있어서, 접촉을 동물 혈청, 아미노산, 완충제, 지방산, 글루코스, 호르몬, 무기 염, 지질, 금속 이온 킬레이트화제, 펩티드, 계면활성제, 미량 금속 및 비타민 중 적어도 하나를 포함하는 용액 중에서 수행하는 것인 방법.