DE69534530T2 - Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper - Google Patents

Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper Download PDF

Info

Publication number
DE69534530T2
DE69534530T2 DE69534530T DE69534530T DE69534530T2 DE 69534530 T2 DE69534530 T2 DE 69534530T2 DE 69534530 T DE69534530 T DE 69534530T DE 69534530 T DE69534530 T DE 69534530T DE 69534530 T2 DE69534530 T2 DE 69534530T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
mab
cell
monoclonal antibody
antibody
mll2
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE69534530T
Other languages
English (en)
Other versions
DE69534530D1 (de
Inventor
Shui-On Leung
Hans Hansen
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Immunomedics Inc
Original Assignee
Immunomedics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23112129&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DE69534530(T2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Immunomedics Inc filed Critical Immunomedics Inc
Application granted granted Critical
Publication of DE69534530D1 publication Critical patent/DE69534530D1/de
Publication of DE69534530T2 publication Critical patent/DE69534530T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6877—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the antibody being an immunoglobulin containing regions, domains or residues from different species
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

  • HINTERGRUND DER ERFINDUNG
  • Die Erfindung betrifft allgemein Immunkonjugate zur diagnostischen und therapeutischen Verwendung bei Krebs. Insbesondere betrifft die Erfindung rekombinant hergestellte chimäre und humanisierte monoklonale Antikörper, die gegen B-Zell-Lymphome und Leukämiezellen gerichtet sind, wobei die Antikörper kovalent an ein diagnostisches oder therapeutisches Reagens konjugiert werden können, ohne die Antikörperbinde- und Internalisierungsfunktion zu verlieren, und mit verminderter Produktion von humanen Anti-Maus-Antikörpern.
  • Non-Hodgkins-Lymphom (NHL) und chronische lymphocytische Leukämie sind B-Zell-Malignitäten, die nach wie vor einen wich tigen Beitrag zur Krebsmortalität liefern. Die Antwort dieser Malignitäten auf verschiedene Behandlungsformen ist konfus. Sie sprechen einigermaßen gut in der Chemotherapie an, und in Fällen, in denen eine adäquate klinische Einstufung von NHL möglich ist, sowie bei Patienten mit lokalisierter Krankheit, kann eine zufrieden stellende Behandlung unter Verwendung von Strahlenfeldtherapie (Hall et al., Radiology for the Radiologist, Lippincott, Philadelphia, 1989, Seiten 365–376) erfolgen. Allerdings schränken die toxischen Nebenwirkungen, die mit der Chemotherapie verbunden sind, und die Toxizität für das hämatopoetische System von einer lokalen als auch einer Ganzkörperradiotherapie die Verwendung dieser therapeutischen Methoden ein. Etwa die Hälfte der Patienten stirbt an der Krankheit (Posner et al., Blood, 61: 705 (1983)).
  • Die Verwendung von zielgerichteten monoklonalen Antikörpern, die mit Radionukliden oder anderen cytotoxischen Agenzien konjugiert sind, eröffnet die Möglichkeit, solche Agenzien direkt der Tumorstelle zuzuführen, wobei die Exposition von normalen Geweben an toxische Agenzien begrenzt wird (Goldenberg, Semin. Nucl. Med., 19: 332 (1989)). In den letzten Jahren wurde das Potenzial der Antikörper-basierten Therapie und deren Genauigkeit in der Lokalisierung von Tumor-assoziierten Antigenen sowohl im Labor als auch in klinischen Studien demonstriert (vgl. z.B. Thorpe, TIBTECH, 11: 42 (1993); Goldenberg, Scientific American, Science & Medicine, 1: 64 (1994); Baldwin et al., U.S. 4,925,922 und 4,916,213; Young, U.S. 4918163 ; U.S. 5,204,095 ; Irie et al., U.S. 5,196,337 ; Hellstrom et al., U.S. 5,134,075 und 5,171,665). Im Allgemeinen war die Verwendung von radiomarkierten Antikörpern und Antikörperfragmenten gegen Tumor-assoziierte Marker zur Lokalisierung von Tumoren erfolg reicher als für die Therapie, teilweise deshalb, da die Antikörperaufnahme durch den Tumor im Allgemeinen niedrig ist und sich bei lediglich 0,01% bis 0,001% der gesamten injizierten Dosis bewegt (Vaughan et al., Brit. J. Radiol., 60: 567 (1987)). Eine Erhöhung der Konzentration des Radiolabels, um die Dosis für den Tumor zu erhöhen, ist kontraproduktiv, da dadurch im Allgemeinen auch die Exposition des gesunden Gewebes an Radioaktivität erhöht wird.
  • LL-2 (EPB2) ist ein muriner monoklonaler Antikörper (mAb) gegen B-Zell-Lymphome und lymphocytische Leukämiezellen, der rasch von derartigen Zellen internalisiert wird, und der einige der zuvor erwähnten Schwierigkeiten überwinden kann (Shih et al., Int. J. Cancer, 56: 538 (1994)). LL2, der von dem IgG2a-Antikörpertyp ist, wurde unter Verwendung der Raji-B-Lymphomzelllinie als Antigenquelle entwickelt (Pawlak-Byczkowska et al., Cancer res., 49: 4568 (1989)). Für den murinen LL2 (mLL2) ist bekannt, dass dieser mit einem Epitop von CD22 reagiert (Belisle et al., Proc Amer. Assn. Clin. Res., 34: A2873 (1993)). CD22-Moleküle werden im Zytoplasma von Vorläufer- und frühen Pre-B-Zellen exprimiert und erscheinen auf der Zelloberfläche von reifen B-Zellen.
  • Über Immunfärbung von Gewebeschnitten konnte gezeigt werden, dass mLL2 mit 50 von 51 getesteten B-Zell-Lymphomen reagiert. mLL2 ist ein hochsensitives Mittel, um B-Zell-Lymphome in vivo zu detektieren, wie dies durch eine Radioimmundetektionsmethode festgestellt wurde (Murphy et al., Eur. J. Nucl. Med., 19: 394 (1992)). Das mit 99mTc-markierte Fab'-Fragment von mLL2 lokalisierte 63 von 65 bekannten Läsionen in Patienten aus Phase-II-Versuchen (Mills et al., Proc. Amer. Assn. Cancer Res., 14: A2857 (1993)). Außerdem war 131I-markierter LL2 therapeutisch wirksam in Patienten mit B-Zell-Lymphomen (Goldenberg et al., J. Clin. Oncol., 9: 548 (1991)). Ein mit dem Exotoxin PE38KDEL konjugierter mLL2-Fab' induzierte eine vollständige Remission von messbaren humanen Lymphom-Heterotransplantaten (CA-46), die in Nacktmäusen gewachsen sind (Kreitman et al., Cancer Res., 53: 819 (1993)).
  • Die klinische Verwendung von mLL2 ist wie auch mit den meisten anderen viel versprechenden murinen Antikörpern durch die Entwicklung einer HAMA-Antwort im Menschen limitiert. Obwohl nicht immer eine HAMA-Antwort als Folge einer Injektion von mLL2 beobachtet werden kann, entwickeln die Patienten in einer signifikanten Anzahl von Fällen eine HAMA als Folge einer einzigen Behandlung mit mLL2. Dies kann die diagnostische und therapeutische Nützlichkeit eines solchen Antikörperkonjugates nicht nur wegen des potenziellen anaphylaktischen Problems limitieren, sondern auch, da ein Großteil des zirkulierenden Konjugates durch die zirkulierenden Anti-Maus-Antikörper komplexiert und sequestriert werden kann. Es wird durch eine Studie veranschaulicht, in der etwa 30% der Patienten eine HAMA-Antwort auf niedrigem Niveau in Folge einer einzigen Injektion von etwa 6 mg von mLL2-131I-IgG und nahezu alle eine starke HAMA-Antwort bei zusätzlichen Injektionen entwickelten. Auf der anderen Seite wurde mit mLL2-Fab', der mit 99mTc markiert wurde, keine HAMA-Antwort beobachtet. Solche HAMA-Antworten stellen im Allgemeinen ein potenzielles Hindernis dar, um das volle diagnostische und therapeutische Potenzial des mLL2-Antikörpers zu realisieren.
  • Obwohl, wie oben dargestellt, die Verwendung von Fragmenten von mLL2, wie bspw. F(ab')2 und Fab', teilweise die Probleme der Immunogenität vermindert/verhindert, gibt es Umstände, in denen das gesamte IgG wünschenswerter wäre, bspw. wenn die Induktion der zellulären Immunität für die Therapie beabsichtigt ist, oder wenn ein Antikörper mit erhöhter Überlebenszeit erforderlich wäre.
  • Um den Wert des mLL2-IgG-Antikörpers hinsichlich seiner therapeutischen oder diagnostischen Modalität zu maximieren und dessen Nützlichkeit in multiplen und kontinuierlichen Verabreichungsmodalitäten zu erhöhen, ist es eine Aufgabe der Erfindung, einen Maus/humanen chimären mAb (cLL2) und einen humanisierten mAb (hLL2) zu produzieren, der verwandt ist mit mLL2 und die Antigenbindespezifität von mLL2 beibehält, in einem Subjekt jedoch eine reduzierte HAMA auslöst, das denselben erhält.
  • Eine andere Aufgabe der Erfindung ist es, DNA-Sequenzen bereitzustellen, die für die Aminosäuresequenzen der variablen Regionen der leichten und schweren Ketten der cLL2- und hLL2-mAbs einschließlich für die komplementaritätsbestimmenden Regionen (CDRs) codieren.
  • Es ist ferner eine Aufgabe dieser Erfindung, Konjugate der hLL2- und cLL2-mAbs bereitzustellen, die therapeutische oder diagnostische Modalitäten aufweisen.
  • Eine weitere Aufgabe dieser Erfindung ist es, Methoden zur Therapie und Diagnose bereitzustellen, bei denen die humanisierten und chimären mAbs der Erfindung eingesetzt werden.
  • Diese Aufgaben werden durch die Erfindung gelöst, die unten in der Beschreibung und den beigefügten Ansprüchen beschrieben ist.
  • ZUSAMMENFASSENDE DARSTELLUNG DER ERFINDUNG
  • Gemäß einem Aspekt der Erfindung wird ein cLL2-mAb bereitgestellt, der mit mLL2-mAb verwandt ist, bei dem die variablen Regionen der murinen leichten (VK) und schweren (VH) Kette mit den humanen konstanten leichten (kappa) und schweren (IgG1)-Ketten verbunden sind. Dieser chimäre mAb behält die B-Lymphomund Leukämiezell-Targeting- und -Internalisierung-Eigenschaften des parentalen mLL2 bei.
  • Gemäß einem anderen Aspekt der Erfindung wird ein hLL2-mAb bereitgestellt, der mit mLL2-mAb verwandt ist, bei dem die komplementaritätsbestimmenden Regionen (CDRs) der leichten und schweren Ketten des mLL2-mAb mit der Gerüst(FR)-Sequenz der humanen VK- bzw. VH-Regionen und folglich mit den humanen Kappa- bzw. IgG1-konstanten Regiondomänen verbunden sind. Dieser humanisierte Antikörper behält die B-Lymphom- und Leukämie-Zell-Targeting- und -Internalisierung-Eigenschaften des parentalen mLL2-mAb bei und übt eine erniedrigte HAMA-Reaktion aus.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt werden isolierte Polynucleotide bereitgestellt, die DNA-Sequenzen aufweisen, die für die Aminosäuresequenzen der variablen leichten bzw. schweren Ketten der hLL2- und cLL2-mAbs codieren.
  • Gemäß einem weitern Aspekt werden die Aminosäuresequenzen der CDRs der VK- und VH-Ketten bereitgestellt.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt werden Konjugate bereitgestellt, bei denen der hLL2- oder cLL2-mAb kovalent mit einem diagnostischen oder therapeutischen Reagens verbunden ist.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt werden Verfahren bereitgestellt, bei denen die zuvor erwähnten mAb-Konjugate zur Diagnose oder Behandlung von B-Zell-Lymphomen und lymphocytischen Leukämien verwendet werden können.
  • Diese und andere Aspekte und Ausführungsformen der Erfindung werden durch Bezugnahme auf die folgende Beschreibung und die anhängigen Ansprüche ersichtlich.
  • BESCHREIBUNG DER FIGUREN
  • 1 ist ein Vergleich der murinen mit der humanisierten LL2-VK- (1A, SEQ ID Nrn. 2 und 6) und -VH- (1B, SEQ ID Nrn. 4, 9 und 8) -Domänen. Es werden nur die hFR-Sequenzen (als REIHuVK und EUHuVH bezeichnet), die sich von den mFR-Sequenzen (als murin bezeichnet) unterscheiden, gezeigt, und mit Sternchen gekennzeichnet. In der humanisierten Struktur werden in diesen Positionen mehr Reste beibehalten. Die CDRs befinden sich in einem Kasten. Die FR-Reste, die im Computermodell CDR-Kontakte zeigen, sind unterstrichen.
  • 2 zeigt die Nachbarbeziehungen der LL2-CDRs in Bezug auf ihre Gerüstregionen (FRs). Es wurden separate Energieminimierungsmodelle für die VL- und VH-Domänen von mLL2 konstruiert, und sämtliche FR-Reste innerhalb eines Radius von –4,5 Å. oder jedes beliebige CDR-Atom wurde als potenzieller CDR-FR-Kontakt identifiziert. CDRs der leichen (L1, L2 und L3, 2A) und schweren (H1, H2 und H3, 2A) Ketten sind in „Kugelstab"-Darstellungen gezeigt, die an ihren entsprechenden raumfüllenden FRs überlagert sind.
  • 3 zeigt die leichte-Kette- (3a) -Staging-(VKpBR) und Säugetierexpressions-(pKH)-Vektoren und die schwere-Kette- (3b) -Staging- (VHpBS) und Säugetierexpression(pG1g)-Vektoren.
  • 4 zeigt die doppelsträngige DNA- und Aminosäuresequenzen der LL2-VK-Domäne (4a, SEQ ID Nrn. 1 und 2) und der LL2-VH-Domäne (4B, SEQ ID Nrn. 3 und 4). Die Aminosäuresequenzen, die durch die entsprechenden DNA-Sequenzen codiert werden, sind im Ein-Buchstaben-Code angegeben. Die CDR-Aminosäuresequenzen befinden sich in einem Kasten. Die Asn-Glykosylierungsstelle, die in FR1 von LL2VK (4A, SEQ ID Nr. 2) lokalisiert ist, ist als unterstrichene NVT-Sequenz gezeigt.
  • 5A zeigt die doppelsträngige DNA und entsprechende Aminosäurereste der hLL2-VK-Domäne (SEQ ID Nrn. 5 und 6). Die CDR-Aminosäuresequenzen befinden sich in einem Kasten. Die entsprechenden Daten für die VH-Domäne sind in 5B gezeigt (SEQ ID Nrn. 7 und 8).
  • 6 ist eine schematische Diagrammdarstellung der PCR/Gen-Synthese der humanisierten VH-Region und der Subklonierung in den Staging-Vektor, VHpBS.
  • 7 zeigt die SDS-PAGE-Analyse von mLL2- und cLL2-Antikörpern unter nicht-reduzierenden (Spuren 6 bis 8) und reduzierenden (Spuren 3 bis 5, leichte und schwere Ketten) Bedingungen. Die Spuren 3 und 6 umfassen einen Kontrollantikörper.
  • 8 zeigt eine SDS-PAGE-Analyse von verschiedenen Versionen von cLL2- und hLL2-Antikörpern unter reduzierenden (Spuren 3 bis 5) und nicht-reduzierenden (Spuren 6 bis 8) Bedingungen.
  • 9 zeigt eine SDS-PAGE-Analyse für „mix-and-match"-cLL2- und -hLL2-Antikörper unter reduzierenden (Spuren 3 bis 6) und nicht-reduzierenden (Spuren 7 bis 10) Bedingungen. cLL2 dient als Kontrolle.
  • 10 zeigt die Ergebnisse eines vergleichenden Raji-Zell-kompetitiven Antikörper-Bindeassays, der mLL2- und cLL2-Antikörper involviert, die gegen Tracer-radiomarkierten mLL2 um die Bindung an Zellen kompetitieren.
  • 11 zeigt die Ergebnisse eines vergleichenden Raji-Zell-kompetitiven Antikörper-Bindeassays, in dem gemischte humanisierte/chimäre LL2s mit cLL2 (11A) verglichen und zwei Versionen von hLL2 mit cLL2 (11B) verglichen werden.
  • 12 zeigt einen Vergleich der Antikörper-Internalisierung : Oberflächen-Bindungs-Verhältnisse als Funktion der Zeit für cLL2-, cLL2- (Q-nach-V-Mutagenese), hLL2- und mLL2-Antikörper.
  • 13 zeigt eine SDS-PAGE-Analyse von mLL2 und cLL2 nach der Deglykosylierung durch Endoglycosidase F.
  • 14 zeigt die Wirkung der Deglykosylierung von mLL2 auf die Bindeaffinität an Raji-Zellen.
  • DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
  • cDNAs, die für die VL- und VH-Regionen des mLL2-mAb codieren, wurden isoliert und separat rekombinant in Säugetierexpressionsvektoren subkloniert, die die Gene enthielten, die für die Kappa- bzw. IgG1-konstanten Regionen von humanen Antikörpern codieren. Cotransfektionen von Säugetierzellen mit diesen beiden rekombinanten DNAs exprimierten einen cLL2-mAb, der wie der parentale mLL2-mAb, sehr gut an B-Lymphomzellen bindet und rasch von diesen internalisiert wird.
  • Die CDRs der VK- und VH-DNAs wurden gleichermaßen rekombinant mit den Gerüst(FR)sequenzen der humanen VK- bzw. VH-Regionen verbunden, die anschließend entsprechend mit den humanen Kappa- und IgG1-konstanten Regionen verbunden wurden, so dass diese in Säugetierzellen, wie oben beschrieben, hLL2 exprimierten.
  • In dieser Beschreibung sind die Ausdrücke „cLL2" oder „cLL2-mAb" dazu vorgesehen, um auf den chimären monoklonalen Antikörper Bezug zu nehmen, der durch Verbindung oder Subklonierung der murinen VK- und VH-Regionen mit den humanen konstanten leichten bzw. schweren Ketten konstruiert wurde. Die Ausdrücke „hLL2" oder „hLL2-mAb" sind dazu vorgesehen, um auf die Humanisierung des chimären monoklonalen Antikörpers durch das Ersetzen der murinen FR-Sequenzen in cLL2 durch die der humanen Gerüstregionen Bezug zu nehmen.
  • Kovalente Konjugate zwischen cLL2- und hLL2-mAbs und einem diagnostischen oder chemotherapeutischen Reagens, formuliert in pharmazeutisch akzeptable Vehikel (siehe, z.B. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausgabe, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990) können hergestellt werden, die verglichen mit Antikörperkonjugaten aus dem Stand der Technik Vorteile haben, hinsichtlich des B-Zell-Lymphom-spezifischen und Leukämiezell-spezifischen Targetings, der raschen Internalisierung in Zielzellen, der raschen intrazellulären Freisetzung des diagnostischen oder chemotherapeutischen Reagens (wodurch die Effektivität des Reagens erhöht wird) und einer potenziellen Reduzierung der HAMA-Antwort im menschlichen Patienten.
  • Da hier gezeigt wird, dass der VK-angehangene Kohlenhydratteil des cLL2-mAb nicht in die Bindung an B-Lymphomzellen involviert ist, ist es bevorzugt, Konjugate zu verwenden, bei denen das Reagens an den Antikörper über solche Kohlenhydratteile gebunden ist, wie bspw. über oxidierte Kohlenhydratderivate. Verfahren zur Herstellung solcher Konjugate und deren Verwendung in der Diagnostik und Therapie werden bspw. bereitgestellt in Shih et al., U.S.-Patent Nr. 5,057,313, Shih et al., Int. J. Cancer, 41: 832 (1988) und der ebenfalls anhängigen USSN 08/162,912, die gemeinschaftlich von Hansen et al. gehalten wird. Eine direkte Verbindung des Reagens an ein oxidiertes Kohlenhydrat ohne Verwendung eines Polymerträgers ist beschrieben in McKearn et al., U.S.-Patent Nr. 5,156,840.
  • Vorzugsweise kann mit den Antikörpern der Erfindung eine große Vielfalt von diagnostischen und therapeutischen Reagenzien konjugiert werden. Diese umfassen: chemotherapeutische Medikamente, wie bspw. Doxorubicin, Methotrexat, Taxol, und ähnliche; Chelatoren, wie bspw. DTPA, mit denen detektierbare Marker, wie bspw. fluoreszierende Moleküle oder cytotoxische Agenzien, wie bspw. Schwermetalle oder Radionucleide, komplexiert werden können; und Toxine, wie bspw. das Pseudomonas-Endotoxin, und ähnliche. Einige Ausführungsbeispiele dieser Konjugate werden in den unten stehenden Beispielen beschrieben.
  • Zelllinien und Kulturmedien, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, umfassen LL2-(EPB-2)-Hybridomzellen (Pawlak-Byczkowska et al., 1989, siehe oben), Sp2/0-Ag14-Myelomzellen (ATTC, Rockville, MD) und Raji-Zellen. Diese Zellen werden vorzugsweise in Dulbecco's modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) kultiviert, das mit 10% FCS (Gibco/BRL, Gaithersburg, MA), 2 mM L-Glutamin und 75 μg/ml Gentamicin versetzt wurde (vollständiges DMEM). Transfektome werden in Hybridoma-Serum-Free-Medium, HSFM (Gibco/BRL, Gaithersburg, MA), enthaltend 10% FCS und 75 μg/ml Gentamicin (vollständiges HSFM), oder, wo angegeben, in HSFM, enthaltend lediglich Antikörper, wachsen gelassen. Die Selektion der Transfektome kann in vollständigem HSFM enthaltend 500 μg/ml von Hygromycin (Calbiochem, San Diego, CA) durchgeführt werden. Sämtliche Zelllinien werden vorzugsweise bei 37°C in 5% CO2 gehalten.
  • Ein wichtiger Aspekt dieser Erfindung ist, dass die variablen Domänen der Antikörper über Computermodelle modelliert werden können (siehe, z.B. Dion, in Goldenberg et al. Hrsg., Cancer Therapy With Radiolabeled Antibodies, CRC Press, Boca Rabon, FL, 1994). Im Allgemeinen wird die 3D-Struktur sowohl für den mLL22- als auch den hLL2-mAb am besten durch Homologie modelliert. Die hohe Häufigkeit der Identitäten der Reste (75,0 bis 92,3%) zwischen den abgeleiteten Primärsequenzen der FR- Regionen der mLL2-leichten-Kette und humanem REI (VK) erleichtert diesen Ansatz auf Grund der Verfügbarkeit von kristallografischen Daten aus der Proteindatenbank (Protein Data Bank, PDR Code 1REI, Bernstein et al., J. Mol. Biol., 112: 535 (1977). Gleichermaßen können die Antikörper-EU(VH)-Sequenzen als Computergegenstücke für FR1 bis FR3 der mLL2-schweren-Kette selektiert werden; FR4 basierte auf NEWM. Da die Röntgenkoordinaten-Daten für die EU-Sequenz gegenwärtig fehlen, können NEWM-Strukturdaten (PDR Code 3FAB) für FRs 1 bis 4 verwendet werden, und die Aminosäureseitengruppen können ersetzt werden, um mLL2 oder EU (hLL2) zu entsprechen, sofern erforderlich. Die CDR der leichten Kette kann aus der entsprechenden Sequenz von 1MCP (L1 und L2) und 1REI (L3) modelliert werden. Für die CDRs der schweren Kette können H1 und H2 auf 2HFL bzw. 1MCP basieren, während H3 de novo modelliert werden kann. Wann immer dies möglich ist, sollte ein Ersatz der Seitengruppe durchgeführt werden, so dass der Torsionswinkel zwischen Cα und Cβ beibehalten bleibt. Die Energieminimierung kann durch das AMBER-Kraftfeld (Weiner et al., J. Amer. Chem. Soc. 106: 765 (1984) bewerkstelligt werden, welches die konvergente Methode verwendet. Potenzielle kritische FR-CDR-Interaktionen können durch initiale Modellierung der leichten und schweren variablen Ketten von mLL2 bestimmt werden. Sämtliche FR-Reste innerhalb eines 4,5 Å-Radius sämtlicher Atome innerhalb jeder CDR können dadurch identifiziert und in dem endgültigen Konstruktionsmodell von hLL2 beibehalten werden.
  • Wenn einmal die Sequenzen für die hLL2-VK- und -VH-Domänen konstruiert sind, kann das CDR-Aufpfropfen durch Gensynthese bewerkstelligt werden, bei der lange synthetische DNA-Oligonucleotide als Templates und kurze Oligonucleotide als Primer in einer PCR-Reaktion verwendet werden. In den meisten Fällen wird die DNA, die für die VK- oder VH-Domäne codiert, ungefähr 350 bp lang sein. Unter Ausnutzung der Codondegeneriertheit kann eine einzige Restriktionsstelle einfach an Regionen ohne Austausch der codierenden Aminosäuren eingebracht werden, die sich in der Nähe der Mitte der V-Gen-DNA-Sequenz befinden. Bspw. kann für die hLL2-VH-Domäne an den DNA-Nucleotid-Positionen 157 bis 162 (Aminosäureposition 53 und 54) eine einzige AvrII-Stelle eingebracht werden, während die original konstruierte Aminosäuresequenz beibehalten wird (4B). Zwei lange, nicht-überlappende, einzelsträngige DNA-Oligonucleotide (~150 bp) stromaufwärts und stromabwärts der AvrII-Stelle (siehe, bspw. Oligo A und Oligo B, Beispiel 3, unten) können durch einen automatisierten DNA-Oligonucleotid-Synthesizer (Cyclone Plus DNA Synthesizer, Milligen-Biosearch) hergestellt werden. Da erwartet wird, dass die Ausbeuten der DNA-Oligonucleotide mit voller Länge, wie bspw. Oligos A und B, niedrig sind, können diese durch zwei Paare von flankierenden Oligonucleotiden (Oligo SEQ ID Nrn. 10 und 11 für Oligo A; Oligo SEQ ID Nrn. 12 und 13 für Oligo B, Beispiel 3) in einer PCR-Reaktion amplifiziert werden. Die Primer können mit den notwendigen Restriktionsstellen konstruiert werden, um die folgende Subklonierung zu erleichtern. Die Primer für Oligo A und für Oligo B sollen eine überlappende Sequenz an der AvrII-Stelle enthalten, so dass das resultierende PCR-Produkt für Oligo A bzw. B im Leseraster mit der AvrII-Stelle verbunden werden kann, um eine DNA-Sequenz mit voller Länge (ca. 350 bp) zu bilden, die für die hLL2-VH-Domäne codiert. Die Ligation der PCR-Produkte für Oligo A (restriktionsverdaut mit PstI und AvrII) und B (restriktionsverdaut mit AvrII und BstEII) an der AvrII-Stelle und deren Subklonierung in die PstII/BstEII- Stellen des Stagingvektors, VHpBS, kann in einem einzigen 3-Fragmente-Ligationsschritt vervollständigt werden (siehe, bspw. Beispiel 3). Die Subklonierung der korrekten Sequenz in VHpBS kann zuerst durch Restriktionsverdauanalyse analysiert und anschließend durch Sequenzierungsreaktion gemäß Sanger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463 (1977) bestätigt werden.
  • Das HindIII/BamHI-Fragment, das den Ig-Promotor, die Leadersequenz und die hLL2-VH-Sequenz enthält, kann aus dem Stagingvektor ausgeschnitten und an die entsprechenden Stellen in einem pSVgpt-basierenden Vektor, pG1g, kloniert werden, der die genomische Sequenz der humanen IgG-konstanten Region, einen IgG-Enhancer und einen gpt-Selektionsmarker enthält, wodurch der finale Expressionsvektor hLL2pG1g gebildet wird. Entsprechende Strategien können für die Konstruktion der hLL2-VK-Sequenz genutzt werden. Die Restriktionsstelle, die für die Ligation der PCR-Produkte für die langen Oligonucleotide (Oligos C und D, siehe Beispiele unten) ausgesucht werden, können in diesem Fall NruI sein.
  • Die DNA-Sequenz, die den Ig-Promotor, die Leadersequenz und die hLL2-VK-Sequenz enthält, kann aus dem Stagingvektor VKpBR durch Behandlung mit BamHI/HindIII ausgeschnitten werden und in die entsprechenden Stellen eines pSVhyg-basierenden Vektors, pKh, subkloniert werden, der die genomische Sequenz der konstanten Region der humanen Kappa-Kette, einen Hygromycin-Selektionsmarker, einen Ig- und einen Kappa-Enhancer, enthält, wodurch der finale Expressionsvektor hLL2pKh gebildet wird.
  • Da die Humanisierung gelegentlich in einer Verringerung oder sogar dem Verlust der Antikörperaffinität resultiert, können zusätzliche Modifizierungen erforderlich sein, um die ursprüngliche Affinität wieder herzustellen (siehe, z.B. Tempest et al., Bio/Technology 9: 266 (1991); Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988)). Da bekannt ist, dass cLL2 eine Bindeaffinität aufweist, die vergleichbar ist mit der seines murinen Gegenstücks (siehe Beispiel 5, unten), können unbrauchbare Konstrukte, falls solche auftreten, in der ursprünglichen Version von hLL2 durch „Mixing-and-Matching" der leichten und schweren Kette von cLL2 gegenüber solchen der humanisierten Version identifiziert werden. SDS-PAGE-Analysen der verschiedenen „mix-and-match"-humanisierten chimären LL2 unter nicht-reduzierenden (die Disulfid L-H-Kettenverbindungen bleiben intakt) und reduzierenden Bedingungen (die Ketten werden getrennt) ermöglichen Analysen der Verhältnisse der verschiedenen Typen von leichten und schweren Ketten hinsichtlich der Eigenschaften des Moleküls. Bspw. kann die Migration in Form von multiplen Banden oder bei einer höheren apparenten molekularen Größe auf dem Vorhandensein einer Glykangruppe an der N-gekoppelten Glykosylierungsstelle beruhen, die in der FR1-Region der murinen VK-Domäne von LL2 gefunden wird. In einem anderen Beispiel weist eine diskrete Bande, die bei etwa 25 kDa migriert, die erwartete molekulare Größe für eine nicht-glykosylierte leichte Kette auf.
  • Im Allgemeinen können zur Herstellung von cLL2-mAb VH- und VK-Ketten vom mLL2 durch PCR-Klonierung unter Verwendung von DNA-Produkten und Primern erhalten werden, Orlandi et al., infra, und Leung et al., infra. Die VK-PCR-Primer können in einen pBR327-basierenden Stagingvektor (VHpBR) subkloniert werden, wie oben beschrieben. Die VH-PCR-Produkte können in einen entsprechenden pBluescript-basierenden Stagingvektor (VHpBS) subkloniert werden, wie oben beschrieben. Die Fragmente, die die VK- und VH-Sequenzen enthalten, zusammen mit den Promotor- und Signalpeptidsequenzen, können aus dem Stagingvektor unter Verwendung von HindIII- und BamHI-Restriktionsendonucleasen ausgeschnitten werden. Die VK-Fragmente (etwa 600 bp) können in einen Säugetierexpressionsvektor (bspw. pKh) auf konventionelle Art und Weise subkloniert werden. pKh ist ein pSVhyg-basierender Expressionsvektor, der die genomische Sequenz der humanen Kappa-konstanten Region, einen Ig-Enhancer, einen Kappa-Enhancer und das Hygromycin-Resistenzgen enthält. Entsprechend können die VH-Fragmente von etwa 800 bp in pG1g subkloniert werden, einen pSVgpt-basierenden Expressionsvektor, der die genomische Sequenz der humanen IgG1-konstanten Region, einen Ig-Enhancer und das Xanthin-Guanin-Phosphoribosyl-Transferase(gpt)-Gen enthält. Die beiden Plasmide können in Säugetierexpressionszellen, wie bspw. Sp2/0-Ag14-Zellen, durch Elektroporation transfiziert und auf Hygromycinresistenz selektiert werden. Kolonien, die die Selektion überleben, werden expandiert, und die Überstandflüssigkeiten werden auf die Produktion von cLL2-mAb durch ELISA-Methoden kontrolliert. Eine Transfektionseffizienz von etwa 1–10 × 106-Zellen ist wünschenswert. Mit diesem System kann ein Antikörperexpressionsspiegel von 0,10 bis 2,5 μg/ml erwartet werden.
  • Die RNA-Isolierung, die cDNR-Synthese und die Amplifizierung kann wie folgt ausgeführt werden. Die Gesamtzell-RNA kann aus einer LL2-Hybridomzelllinie präpariert werden, wobei insgesamt etwa 107 Zellen verwendet werden, gemäß Sambrook et al., (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Zweite Ed., Cold Spring Harbor Press, 1989). Die Erststrang-cDNA kann von der Gesamt-RNA auf konventionelle Art und Weise revers transcribiert werden, wie bspw. durch Verwendung des SuperScript-Preamplification-Systems (Gibco/BRL., Gaithersburg, MD). Kurz gesagt können in einem Reaktionsvolumen von 20 μl 50 ng von randomisierten Primern an 5 μg RNA in Gegenwart von 2 μl von 10 × Synthesepuffer [200 mM Tris-HCl (pH 8,4), 500 mM KCl, 25 mM MgCl2, 1 mg/ml BSA], 1 μl von 10 mM dNTP-Mix, 2 μl von 0,1 M DTT und 200 Einheiten von SuperScript reverser Transcriptase angelagert werden. Der Verlängerungsschritt wird initiiert, wobei bei Raumtemperatur für 10 min fortgefahren wird, gefolgt von einer Inkubation bei 42°C für 50 min. Die Reaktion kann durch Erhitzung des Reaktionsmixes auf 90°C für 5 min beendet werden.
  • Die VK- und VH-Sequenzen für cLL2 oder hLL2 können durch PCR amplifiziert werden, wie beschrieben durch Orlandi et al., (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86: 3833 (1989)). VK-Sequenzen können unter Verwendung der Primer CK3BH und VK5-3 (Leung et al., BioTechniques, 15: 286 (1993), durch Bezugnahme inkorporiert), amplifiziert werden, während VH-Sequenzen unter Verwendung des Primers CH1B, der an die CH1-Region von murinem 1gG anlagert und VHIBACK (Orlandi et al., 1989, siehe oben), amplifiziert werden können. Die PCR-Reaktionsmischungen enthalten 10 μl des Erststrang-cDNA-Produktes, 9 μl des 10 × PCR-Puffers [500 mM KCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,3), 15 mM MgCl2 und 0,01% (Gewicht pro Volumen) Gelatine] (Perkin Elmer Cetus, Norwalk, CT), können 30 PCR-Zyklen unterworfen werden. Jeder PCR-Zyklus besteht vorzugsweise aus einer Denaturierung bei 94°C für 1 min, einer Anlagerung bei 50°C für 1,5 min und der Polymerisierung bei 72°C für 1,5 min. Die amplifizierten. VK- und VH- Fragmente können auf 2% Agarose (BioRad, Richmond, CA) gereinigt werden. Siehe Beispiel 3 für ein Verfahren zur Synthese eines Oligo A (149-mer) und eines Oligo B (140-mer) auf einem automatisierten Cyclon Plus DNA-Synthesizer (Milligan-Biosearch) zur Verwendung in der Konstruktion von humanisierten V-Genen.
  • Die PCR-Produkte für VK können in einen Stagingvektor subkloniert werden, wie bspw. einen pBR327-basierenden Stagingvektor VKpBR, der einen Ig-Promotor, eine Signalpeptidsequenz und geeignete Restriktionsstellen zur Erleichterung der Ligation der VK-PCR-Produkte im Leseraster enthält. Die PCR-Produkte für VK können in einen entsprechenden Stagingvektor subkloniert werden, wie bspw. den pBluescript-basierenden VHpBS. Individuelle Klone, die die entsprechenden PCR-Produkte enthalten, können sequenziert werden, bspw. durch das Verfahren von Sanger et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 74: 5463 (1977).
  • Die hier beschriebenen DNA-Sequenzen sind so zu verstehen, als dass diese sämtliche Allele, Mutanten und Varianten hiervon umfassen, gleich ob diese natürlich vorkommen oder induziert werden.
  • Die beiden Plasmide können in eine geeignete Zelle, bspw. das Myelom Sp2/0Ag14, cotransfiziert werden, Kolonien werden auf Hygromycinresistenz selektiert und Überstandflüssigkeiten werden auf die Produktion von cLL2- oder hLL2-Antikörper mittels, bspw. eines ELISA-Assays, überwacht, wie unten beschrieben.
  • Die Transfektion und der Assay auf Antikörpersekretierende Klone mittels ELISA können wie folgt ausgeführt werden. Etwa 10 μg von hLL2pKh (Leichte-Kette-Expressionsvektor) und 20 μg von hLL2pG1g (Schwere-Kette-Expressionsvektor) können für die Transfektion von 5 × 106 SP2/0-Myelomzellen durch Elektroporation (BioRad, Richmond, CA) gemäß Co et al., J. Immunol., 148: 1149 (1992), verwendet werden. Nach der Transfektion können die Zellen in 96-Vertiefungen-Mikrotiterplatten in vollständigem HSFM-Medium (GIBCO, Gaithersburg, MD) bei 37°C, 5% CO2, wachsen gelassen werden. Der Selektionsprozess kann nach zwei Tagen durch Zugabe von Hygromycin-Selektionsmedium (Calbiochem, San Diego, CA) mit einer Endkonzentration von 500 μg/ml Hygromycin initiiert werden. Typischerweise tauchen Kolonien 2–3 Wochen nach der Elektroporation auf. Die Kulturen können dann für weitere Analysen expandiert werden.
  • Transfektom-Klone, die positiv hinsichtlich der Selektion auf die chimäre oder humanisierte schwere Kette sind, können mittels ELISA-Assays identifiziert werden. Kurz gesagt, Proben aus dem Überstand (100 μl) aus den Transfektom-Kulturen werden in dreifachen Ansätzen in ELISA-Mikrotiterplatten gegeben, die zuvor mit Ziegen-anti-humanem(GAH)-IgG, F(ab')2-Fragment-spezifischem Antikörper (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) beschichtet wurden. Die Platten werden für 1 h bei Raumtemperatur inkubiert. Ungebundene Proteine werden durch dreimaliges Waschen mit Waschpuffer (PBS, enthaltend 0,05% Polysorbat 20) entfernt. Meerrettichperoxidase(HRP)-konjugierte GAH-IgG, Fc-Fragment-spezifische Antikörper (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) werden in die Vertiefungen gegeben, (100 μl der Antikörperstammlösung, verdünnt × 104, versetzt mit dem unkonjugierten Antikörper auf eine Endkonzentration von 1,0 μg/ml). Nach einer Inkubation von 1 h werden die Platten gewaschen, typischerweise drei Mal. Eine Reaktionslösung [100 μl, enthaltend 167 μg von Orthophenylen-Diamin (OPD) (Sigma, St. Louis, MO), 0,025% Wasserstoffperoxidase in PBS] wird in die Vertiefungen gegeben. Die Farbentwicklung im Dunkeln wird über einen Zeitraum von 30 Minuten ermöglicht. Die Reaktion wird durch die Zugabe von 50 μl einer 4 N HCl-Lösung in jede Vertiefung abgestoppt, bevor die Absorption bei 490 nm in einem automatisierten ELISA-Lesegerät (Bio-Tek Instruments, Winooski, VT) gemessen wird. Gebundene chimäre Antikörper werden dann relativ zu einem irrelevanten Antikörperstandard (erhältlich bei Scotgen, Ltd., Edinburg, Schottland) bestimmt.
  • Antikörper können aus Zellkulturmedium wie folgt isoliert werden. Transfektomkulturen werden an serumfreies Medium gewöhnt. Zur Herstellung von chimärem Antikörper werden die Zellen in einer 500 ml-Kultur in Rollerflaschen unter Verwendung von HSFM wachsen gelassen. Die Kulturen werden zentrifugiert und der Überstand wird durch eine 0,2 μm-Membran filtriert. Das filtrierte Medium wird über eine Protein-A-Säule (1 × 3 cm) mit einer Flussrate von 1 ml/min gegeben. Das Harz wird dann mit etwa 10 Säulenvolumen von PBS gewaschen und Protein-A-gebundener Antikörper wird von der Säule mit 0,1 M Glycinpuffer (pH 3,5) enthaltend 10 mM EDTA eluiert. Fraktionen von 1,0 ml werden in Röhrchen gesammelt, die 10 μl von 3 M Tris (pH 8,6) enthalten, und die Proteinkonzentrationen werden über die Absorption bei 280/260 nm bestimmt. Die Peakfraktionen werden gepoolt, gegen PBS dialysiert, und der Antikörper wird konzentriert, bspw. mit Centricon 30 (Amicon, Beverly, MA). Die Antikörperkonzentration wird mittels ELISA bestimmt, wie zuvor, und dessen Konzentration wird auf etwa 1 mg/ml unter Verwendung von PBS eingestellt. Natriumazid, 0,01% (w/v), wird auf geeignete Art und Weise der Probe als Konservierungsmittel zugegeben.
  • Vergleichbare Bindeaffinitäten der so isolierten mLL2-, cLL2- und hcLL2-Antikörper können durch einen direkten Radioimmunassay bestimmt werden. mLL2 kann mit 131I oder 125I unter Verwendung der Chloramin-T-Methode (siehe, bspw. Greenwood et al., Biochem. J., 89: 123 (1963)) markiert werden. Die spezifische Aktivität des iodierten Antikörpers ist typischerweise auf etwa 10 μCi/μg eingestellt. Unmarkierte und markierte Antikörper werden unter Verwendung von Reaktionsmedium (HSFM, versetzt mit 1% Pferdeserum und 100 μg/ml Gentamicin) auf die geeigneten Konzentrationen eingestellt. Die geeigneten Konzentrationen von sowohl markierten als auch unmarkierten Antikörpern werden zusammen zu den Reaktionsröhrchen in einem Gesamtvolumen von 100 μl zugegeben. Eine Kultur von Raji-Zellen wird getestet und die Zellkonzentration bestimmt. Die Kultur wird zentrifugiert und die gesammelten Zellen werden einmal in Reaktionsmedium gewaschen, gefolgt von einer Resuspendierung in Reaktionsmedium auf eine Endkonzentration von etwa 107 Zellen/ml. Sämtliche Verfahren werden in der Kälte bei 4°C durchgeführt. Die Zellsuspension, 100 μl, wird in die Reaktionsröhrchen gegeben. Die Reaktion wird bei 4°C für 2 h mit periodischem vorsichtigem Schütteln der Reaktionsröhrchen durchgeführt, um die Zellen zu resuspendieren. Nach der Reaktionsperiode werden 5 ml Waschpuffer (PBS, enthaltend 1% BSA) zu jedem Röhrchen zugegeben. Die Suspension wird zentrifugiert und das Zellpellet wird ein zweites Mal mit weiteren 5 ml Waschpuffer gewaschen. Nach der Zentrifugation wird die Menge von verbleibender Radioaktivität, die in dem Zellpellet zurückbleibt, in einem Gammazähler (Minaxi, Packard Instruments, Sterling, VA) bestimmt.
  • Die Bindeaffinitäten der „mix-and-match"- und vollständig humanisierten Antikörper an das Antigen der Raji-Zelloberfläche können mit denen von cLL2 unter Verwendung von verschiedenen Konzentrationen von mLL2 F(ab')2-Fragmenten ohne den Fc-Teil als Kompetitoren verglichen werden, wie dies mittels eines Durchflusszytometrieassays evaluiert werden kann. Reste von oberflächengebundenen LL2-Antikörpern, die die humanen Fc-Teile tragen (cLL2 und „mix-and-match"-LL2) können durch einen FITC-markierten anti-humanen-Fc-spezifischen Antikörper in einem Durchflusszytometrieassay detektiert werden. Wo die „mix-and-match"-LL2-Antikörper Antigenbindeaffinitäten aufweisen, die denen von cLL2 entsprechen, kann geschlussfolgert werden, dass die ursprünglichen Konstruktionen für die Humanisierung sowohl der leichten als auch schweren Kette die mLL2-Immunreaktivität beibehalten.
  • Die Internalisierung von mLL2-, cLL2- und hLL2-Antikörpern in Zielzellen kann durch Fluoreszenzmarkierung verfolgt werden, im Wesentlichen gemäß dem Verfahren von Pirker et al., J. Clin. Invest., 76: 1261 (1985). Kultivierte Raji-Zellen werden zentrifugiert und die Zellen werden in frischem Medium in einer Konzentration von etwa 5 × 106 Zellen/ml resuspendiert. Zu jeder Vertiefung einer 96-Vertiefungen-Mikrotiterplatte werden 100 μl der Zellsuspension zugegeben. Die Antikörper, 40 μg/ml, in einem Volumen von 100 μl werden in die Reaktionsvertiefungen in zeitlich abgestimmten Intervallen zugegeben, so dass sämtliche Reaktionen gleichzeitig beendet werden. Die Platte wird bei 37°C in einem CO2-Zellkultur-Inkubator inkubiert. Ungebundene Antikörper werden entfernt, indem die Zellen dreimal mit kaltem 1 %igem FCS/PBS am Ende der Inkubation gewaschen werden. Die Zellen werden dann mit 1 ml von Formaid-Fresh [10%ige Forma linlösung (Fisher, Fair Lawn, NJ)] für 15 min bei 4°C behandelt. Nach dem Waschen werden Antikörper, die entweder auf der Zelloberfläche oder in den Zellen vorhanden sind, durch Behandlung mit FITC-markiertem Ziege-anti-Maus-Antikörper (Tago, Burlingame, CA) oder einem FITC-markierten Ziege-anti-human-Antikörper (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) detektiert, in Abhängigkeit davon, ob der getestete Antikörper murin, chimär, bzw. humanisiert ist. Die Fluoreszenzverteilungen werden unter Verwendung eines BH-2-Fluoreszenzmikroskops (Olympus, Lake Success, NY) evaluiert.
  • Die Rate der Antikörperinternalisierung kann gemäß Opresko et al., (J. Biol. Chem., 262: 4116 (1987)) bestimmt werden, unter Verwendung von radioiodierten Antikörpern als Tracer. Kurz gesagt, radiomarkierte Antikörper (1 × 104 cpm) werden mit Raji-Zellen (1 × 106 Zellen/ml) bei 4°C für 2 h in 0,5 ml DMEM-Medium enthaltend 1% humanes Serum inkubiert. Nach dem Reaktionsintervall werden nicht-spezifisch gebundene Antikörper durch dreimaliges Waschen mit 0,5 ml von DMEM-Medium entfernt. Zu jedem der Reaktionsröhrchen werden 0,5 ml von DMEM-Medium hinzugegeben und die Suspension wird bei 37°C zur Bestimmung der Internalisierung inkubiert. Zu zeitlich abgestimmten Intervallen werden Zellen in drei parallelen Ansätzen entfernt und unmittelbar in einem Eisbad abgekühlt, um die weitere Internalisierung zu stoppen. Die Zellen werden bei 1000 × g für 5 min bei 4°C zentrifugiert. Der Überstand wird entfernt und die Radioaktivität hiervon wird gezählt. Die oberflächengebundene Radioaktivität wird durch Behandlung mit 1 ml von 0,1 M Acetat/0,1 M Glycinpuffer bei pH 3,0 für 8 min in der Kälte entfernt. Die durch die Säurebehandlung entfernte und die mit den Zellen assoziiert verbleibende Radioaktivität wird bestimmt. Das Verhältnis von CPMInternalisierung/CPMOberfläche wird gegen die Zeit aufgetragen, um die Rate der Internalisierung aus der Neigung zu bestimmen.
  • Detaillierte Protokolle zur Oligonucleotid-gerichteten Mutagenese und verwandte Techniken zur Mutagenese von klonierter DNA sind wohl bekannt. Siehe bspw. Sambrook et al. und Ausubel et al., oben.
  • Asn-gekoppelte Glykosylierungsstellen können in die Antikörper unter Verwendung von konventionellen ortsspezifischen Oligonucleotidmutagenesereaktionen eingebracht werden. Zur Einführung eines Asn in Position 18 eines Kappa-Proteins kann bspw. das Codon 18 von AGG in AAC geändert werden. Um dies zu erreichen, wird ein Einzelstrang-DNA-Template, das die Sequenz der leichten Kette des Antikörper enthält, aus einem geeigneten Strang von E. coli (z.B. dut–ung–) präpariert, um ein DNA-Molekül zu erhalten, das eine kleine Anzahl von Uracils anstelle von Thymidins enthält. Solch ein DNA-Template kann durch M13-Klonierung oder durch in vitro-Transkription unter Verwendung eines SP6-Promotors erhalten werden, siehe, z.B. Ausubel et al., Hrsg., CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, NY, 1987. Ein Oligonucleotid, das die mutierte Sequenz enthält, wird auf konventionelle Art und Weise synthetisiert, an das einzelsträngige Template angelagert und das Produkt wird mit T4-DNA-Polymerase und T4-DNA-Ligase behandelt, um ein doppelsträngiges DNA-Molekül herzustellen. Die Transformation von Wildtyp-E. coli(dut+ung+)-Zellen mit der doppelsträngigen DNA liefert eine effiziente Wiederherstellung von mutierter DNA.
  • Alternativ kann eine Asn-gekoppelte Glykosylierungsstelle in eine leichte Kette eines Antikörpers eingebracht werden, in dem ein Oligonucleotid, das die gewünschte Mutation enthält, als Primer, und DNA-Klone der variablen Regionen für die VL-Kette verwendet werden, oder durch Verwendung von RNA aus Zellen, die den interessierenden Antikörper produzieren, als Template; siehe ebenfalls Huse, in ANTIBODY ENGINEERING: A PRACTICAL GUIDE, Boerrebaeck, Hrsg., E. H. Freeman & Co., Seiten 103–120, 1992. Eine ortsspezifische Mutagenese kann bspw. unter Verwendung des TRANSFORMERTM-Kits (Clontech, Palo Alto, CA) gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt werden.
  • Alternativ kann eine Glykosylierungsstelle durch Synthetisierung einer Antikörperkette mit gegenseitig primenden Oligonucleotiden eingebracht werden, wobei eines die gewünschte Mutation enthält; siehe bspw. Uhlmann, Gene 71: 29 (1988); Wosnick et al., Gene 60: 115 (1988); Ausubel et al., oben, die durch Inbezugnahme inkorporiert werden.
  • Obwohl die obige allgemeine Beschreibung auf das Einbringen einer Asn-Glykosylierungsstelle in Position 18 der leichten Kette eines Antikörpers Bezug nimmt, ist es dem Fachmann klar, dass es möglich ist, Asn-gekoppelte Glykosylierungsstellen überall in der leichten Kette, oder sogar in die variable Region der schweren Kette einzubringen.
  • Die unten beschriebenen repräsentativen Ausführungsformen dienen lediglich dazu, die Erfindung zu illustrieren. Für den Fachmann ist ersichtlich, dass Variationen der vorliegenden Materialien in den breiten generischen Bereich der beanspruchten Erfindung fallen.
  • Beispiel 1
  • Wahl der humanen Gerüstregionen und Sequenzkonstruktion für die Humanisierung des LL2-monoklonalen Antikörpers
  • Durch Vergleich der murinen variablen (V) Gerüstregion-(FR)-Sequenzen von LL2 mit denen von humanen Antikörpern in der Kabat-Datenbank (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. Ed., U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.), die durch Inbezugnahme inkorporiert ist, wurden die humanen REI- (1A, Sequenz ID Nr. 6) und EU- (1B, Sequenz ID Nrn. 9 und 10) -Sequenzen als diejenigen gefunden, die den höchsten Grad an Sequenzhomologie mit den FRs von VK- bzw. VH-Domänen von LL2 aufweisen. Deshalb wurden die REI- und EU-FRs als die humanen Gerüstregionen selektiert, auf die die CDRs für LL2-VK bzw. -VH aufgepfropft wurden. Anstelle der EU-Sequenz wurde jedoch die FR4-Sequenz von NEWM verwendet, um die EU-FR4-Sequenz für die Humanisierung der LL2-schweren-Kette zu ersetzen. Basierend auf den Ergebnissen von Computermodellstudien (2A und 2B) wurden die murinen FR-Reste, die potenzielle CDR-Kontakte haben, die die Affinität und Spezifität des resultierenden Antikörpers beeinflussen könnten, in der Konstruktion der humanisierten FR-Sequenzen beibehalten (1).
  • Es wurden zwei Versionen von humanisierter schwerer Kette konstruiert. In der ersten Version (hLL2-1, SEQ ID Nr. 9), wurde Glutamin (Q) an Aminosäureposition 5 (Kabat-Zählweise) eingebracht, um eine PstI-Restriktionsstelle einzubringen, um deren Subklonierung in den Stagingvektor zu erleichtern (3). Dieser murine Rest wurde durch Oligo-gerichtete Mutagenese in den humanen EU-Rest Valin (V) in hLL2-2 (SEQ ID Nr. 8) konvertiert. Es ist zu bemerken, dass in der originalen murinen Kabat-kettenvariablen Sequenz eine potenzielle N-gekoppelte Glykosylierungsstelle an den Positionen 18 bis 20 (1, SEQ ID Nr. 2) identifiziert und zur Addition von Kohlenhydrat verwendet wurde. Diese Glykosylierungsstelle war nicht in der REI-FR-Sequenz enthalten, die für die LL2-leichte-Kette-Humanisierung verwendet wurde.
  • Siehe Beispiel 3 für mehr Details bezüglich des Oligonucleotids.
  • Beispiel 2
  • PCR-Klonierung und Sequenzaufklärung für die variablen Regionen der schweren und leichten Kette von LL2
  • Die variablen Regionen für sowohl die schwere (VH) und leichte (VK) Kette von mLL2 (IgG2a) wurden durch PCR-Klonierung unter Verwendung von DNA-Primer erhalten, wie oben allgemein und im Detail im Beispiel 3 unten beschrieben. Da die PCR anfällig ist für Mutationen, wurde vor der Verwendung für die Konstruktion des chimären Antikörpers die Sequenz der variablen Region von parallelen individuellen Klonen entweder von der schweren oder der leichten Kette für sechs Klone bestimmt und bestätigt, dass diese identisch sind.
  • Die PCR-Produkte für VK wurden in einen pBR327-basierenden Stagingvektor, VKpBR, subkloniert, der einen Ig-Promotor, eine Signalpeptidsequenz und geeignete Restriktionsstellen enthält, um die Ligation der VK-PCR-Produkte im Leseraster zu erleich tern (3A). Die PCR-Produkte für VH wurden in einen entsprechenden pBluescript-basierenden Stagingvektor, VHpBS, subkloniert (3B).
  • Wie oben erwähnt, wurden zumindest sechs individuelle Klone, die die jeweiligen PCR-Produkte enthielten, gemäß der Methode von Sanger et al., 1977, oben, sequenziert. Für alle wurde gezeigt, dass diese identische Sequenzen trugen, und deren entsprechende Sequenzen wurden aufgeklärt, wie in 4A für LL2-VK (SEQ ID Nr. 1) und in 4B für LL2-VH (SEQ ID Nr. 3) gezeigt. Innerhalb der Sequenzen, die für die VK- und VH-Regionen codieren, wurden keine fehlerhaften Mutationen identifiziert. Ein Vergleich der Sequenzen der PCR-amplifizierten variablen Region von LL2 mit der Kabat-Datenbank (Kabat et al., oben) deutet darauf hin, dass die VK- und VH-Sequenzen von LL2 zu der Untergruppe 5 bzw. 2B gehören. Wichtige Reste, wie bspw. Cys für die Disulfidbindung innerhalb der Domäne, wurden an geeigneten Positionen beibehalten.
  • In der FR1-Gerüstregion von VK wurde eine N-gekoppelte Kohlenhydratanbringungsstelle, Asn-Val-Thr, an Position 18 bis 20 identifiziert (4A, SEQ ID Nr. 2), was darauf hindeutet, dass VK von LL2 glycosyliert sein könnte. Wie dies unten im Detail erläutert wird, demonstrierte die SDS-PAGE-Analyse unter reduzierenden Bedingungen, dass diese Asn-Glycosylierungsstelle in der Tat zur Kohlenhydratanbringung verwendet wird. Das Vorhandensein der Glycosylierungsstelle in der variablen Region scheint jedoch die Immunreaktivität des Antikörpers nicht zu beeinflussen. Ein Vergleich der Immunreaktivität von mLL2 mit der von cLL2 in einem kompetitiven RIA zeigte, dass die beiden Antikörper nahezu identische Aktivitäten haben.
  • Beispiel 3
  • PCR/Gen-Synthese der humanisierten V-Gene
  • Die konstruierte Sequenz für die hLL2-VH-Domäne, die Konstruktion der hLL2-VH-Domäne durch lange Oligonucleotide und durch PCR, und der Stagingvektor VHpBS, der die hLL2-VH-Domäne enthält, werden in der Skizze, die in 6 gezeigt ist, zusammengefasst.
  • Zur Konstruktion der hLL2-VH-Domäne wurde Oligo A (149-mer) und Oligo B (140-mer) auf einem automatisierten CYCLONE PLUSTM-DNA-Synthesizer (Milligan Bioresearch) synthetisiert.
  • Oligo A (SEQ ID Nr. 10, unten) repräsentiert den Minusstrang der hLL2-VH-Domäne, komplementär zu nt 24 bis 172.
  • Sequenz ID Nr. 10
    Figure 00300001
  • Oligo B (Sequenz ID Nr. 11, unten) repräsentiert den Minusstrang der hLL2-VH-Domäne, komplementär zu nt 180 bis 320.
  • Sequenz ID Nr. 11
    Figure 00310001
  • Oligos A und B wurden von dem Träger abgespalten und durch Behandlung mit konzentriertem Ammoniumhydroxid deprotektiert. Nachdem die Proben vakuumgetrocknet (SpeedVac, Savant, Farmingdale, NY) und in 100 μl Wasser resuspendiert wurden, wurden die unvollständigen Oligomere (kleiner als 100-mer) durch Zentrifugation über eine CHROMOSPIN-100TM-Säule (Clonetech, Palo Alto, CA) entfernt, bevor die DNA-Oligomere durch PCR amplifiziert wurden. Sämtliche flankierenden Primer für die separaten Amplifikationen und PCR-Klonierung von Oligos A und B wurden durch SDS-PAGE gereinigt, im Wesentlichen gemäß der Methoden von Sambrook et al., 1989, oben. Von dem CHROMASPIN-gereinigten Oligo A wurde 1 μl der Probenstammlösung in einem Reaktionsvolumen von 100 μl PCR-amplifiziert durch Zugabe von 5 μl von 5 μM der Oligosequenz ID Nr. 12:
    Figure 00310002
    und der Oligo-Sequenz ID Nr. 13:
    Figure 00310003
    in Gegenwart von 10 μl an 10 × PCR-Puffer (500 mM KCl, 100 mM Tris.HCL-Puffer, pH 8.3, 15 mM MgCl2) und 5 Einheiten von AMPLITAQTM-DNA-Polymerase (Perkin Elmer Cetus, Norwalk, Ct). Diese Reaktionsmischung wurde 13 Zyklen einer PCR-Reaktion unterworfen, bestehend aus Denaturierung bei 94°C für 1 Minute, Anlagerung bei 50°C für 1,5 Minuten, und Polymerisierung bei 72°C für 1,5 Minuten.
  • Das Oligo 8 wurde PCR-amplifiziert, wobei die Primerpaare mit der Sequenz ID Nr. 14:
    Figure 00320001
    und der Sequenz ID Nr. 15:
    Figure 00320002
    unter entsprechenden Bedingungen verwendet wurden.
  • Die doppelsträngigen PCR-amplifizierten Produkte für die Oligos A und B wurden gelgereinigt, restriktionsverdaut mit PstI/AvrII (PCR-Produkt von Oligo A) und BstEII/AvrII (PCR-Produkt von Oligo B) und in die komplementären PstI/BstEII-Stellen des Schwere-Kette-Stagingvektors, VHpBS, subkloniert. Die humanisierte VH-Sequenz wurde in den pG1g-Vektor subkloniert, was in dem finalen Humanen-IgG1-schwere-Kette-Expressionsvektor, hLL2pG1g, resultiert.
  • Zur Konstruktion der Volllängen-DNA der humanisierten VK-Sequenz wurden Oligo E (150-mer) und Oligo F (121-mer) synthetisiert, wie oben beschrieben. Oligo-E-Sequenz ID Nr. 16:
    Figure 00330001
    repräsentiert den Minusstrang der humanisierten VK-Domäne, komplementär zu nt 31 bis 180, und diese Sequenz wurde PCR-amplifiziert durch Verwendung der Oligo-Sequenz ID Nr. 17:
    Figure 00330002
    und Oligo-Sequenz ID Nr. 18:
    Figure 00330003
    Oligo-F-Sequenz ID Nr. 19:
    Figure 00330004
    repräsentiert den Minusstrang der humanisierten LL2-VK-Domäne, komplementär zu nt 208 bis 328, und wurde PCR-amplifiziert unter Verwendung der Oligo Sequenz ID Nr. 20:
    Figure 00330005
    und Oligo-Sequenz ID Nr. 21:
    Figure 00340001
  • Die gelgereinigten PCR-Produkte für die Oligos E und F wurden restriktionsverdaut mit PvuII/NruI bzw. NruI/BglIII. Die beiden PCR-Fragmente E und F wurden dann an der NruI-Stelle verbunden und an die komplementären PvuI/BcII-Stellen des Leichte-Kette-Stagingvektors, VKpBR, ligiert. Die humanisierte VK-Sequenz wurde in den Vektor pKh subkloniert, um den finalen Humane-Kappa-Kette-Expressionsvektor, hLL2pKh, zu bilden.
  • Um die humanisierten Antikörper zu exprimieren, wurden etwa 10 μg von liniarisiertem hLL2pKh und 20 μg von linearisiertem hLL2pG1g verwendet, um 5 × 106 SP2/0-Zellen durch Elektroporation zu transfizieren. Die Transfektome wurden mit Hygromycin bei 500 μg/ml selektiert und sekretierter Antikörper wurde auf eine 1 × 3 cm-Säule von Protein A gereinigt. Nach der Konzentrierung des gereinigten Antikörpers durch Centricon 30-Zentrifugation wurde die Antikörperkonzentration mittels ELISA bestimmt. Die Endkonzentration des Antikörpers wurde auf 1 mg/ml in PBS-Puffer enthaltend 0,01% (w/v) Natriumazid als Konservierungsmittel eingestellt.
  • In 1 wird die Aminosäuresequenz zwischen den murinen und humanisierten LL2-VK-Domänen (1A, SEQ ID Nrn. 2 und 6) und zwischen den murinen und humanisierten LL2-VH-Domänen (1B, SEQ ID Nr. 4, 9 und 8) verglichen. In der VK-Kette wurden humane REI-Gerüstsequenzen für alle FRs verwendet. In der VH-Kette wurden humane EU-Gerüstregionensequenzen für FR 1 bis 3 verwendet, und NEWM-Sequenzen wurden verwendet für FR-4. Es sind nur FR-Sequenzen gezeigt, die sich von denen der Maus unterscheiden. Sternchen zeigen murine FR-Sequenzen an, die an entsprechenden Positionen unterschiedlich sind von humanen FR. Murine Reste an diesen Positionen wurden in der humanisierten Struktur beibehalten. CDRs sind in Kästen dargestellt.
  • In 4A (Sequenz ID Nrn. 1 und 2) sind doppelsträngige DNA und entsprechende Aminosäuresequenzen (gezeigt im Einbuchstabencode) der murinen LL2-VK-Domäne gezeigt. Die CDR1-3-Aminosäuresequenzen sind in Kästen dargestellt. Die entsprechende Darstellung für VH ist in 4B gezeigt (Sequenz ID Nrn. 3 und 4).
  • In 5A (Sequenz ID Nrn. 5 und 6) und 5B (Sequenz ID Nrn. 7 und 8) sind doppelsträngige DNA-Sequenzen und Aminosäuresequenzen von humanisierter LL2-VK bzw. LL2-VH gezeigt. Die Aminosäuresequenzen sind im Einbuchstabencode dargestellt, und CDR-Aminosäuresequenzen sind in einem Kasten dargestellt.
  • Beispiel 4
  • Konstruktion, Expression und Reinigung von chimären LL2-Antikörpern
  • Fragmente, die die VK- und VH-Sequenzen von LL2 zusammen mit den Promotor- und Signalpeptidsequenzen enthalten, wurden aus LL2VKpBR bzw. LL2VHpBS durch doppelten Restriktionsverdau mit HindIII und BamHI ausgeschnitten. Die VK-Fragmente von etwa 600 bp wurden in die HindIII/BamHI-Stelle des Säugetierexpressionsvektors, pKh, subkloniert (3A). pKh ist ein pSVhyg-basierender Expressionsvektor, der die genomische Sequenz der humanen Kappa-konstanten Region, ein Ig-Enhancer, ein Kappa-Enhancer und das Hygromycinresistenzgen enthält. Entsprechend wurden VH-Fragmente von von ca. 800 bp in die entsprechende HindIII/BamHI-Stelle von pG1g subkloniert (3B), einem pSVgpt-basierenden Expressionsvektor, der die genomische Sequenz von der humanen IgG1-konstanten Region, einen Ig-Enhancer und das Xanthin-Guanin-Phosphoribosyltransferase(gpt)-Gen trägt. Die finalen Expressionsvektoren werden als LL2pKh bzw. LL2pG1g bezeichnet.
  • Die beiden Plasmide wurden in SP2/0-Ag14-Zellen durch Elektroporation kotransfiziert und auf Hygromycinresistenz selektiert. Die Überstände aus Kolonien, die die Selektion überlebten, wurden auf die Sekretion von chimären Antikörpern mittels ELISA-Assay überprüft (siehe oben). Die Transfektionseffizienz war ungefähr 1–10 × 106 Zellen. Es wurde festgestellt, dass das Niveau der Antikörperexpression in einer Endkultur in einem Bereich von > 0,10 bis 2,5 μg/ml variiert.
  • 7 zeigt die Ergebnisse der Analyse von Protein-A-gereinigtem mLL2 (Spuren 4 und 7) und cLL2 (Spuren 5 und 8) durch SDS-PAGE unter reduzierenden bzw. nicht-reduzierenden Bedingungen. HMW steht für „high molecular weight"-Proteinmarker, und LMW für „light molecular weight"-Marker. Die leichten Ketten für sowohl mLL2 als auch cLL2 (Spuren 4 und 5) migrieren hauptsächlich als Doppelbande mit einem apparenten Molekulargewicht, das höher ist als erwartet. Da bekannt ist, dass die humane Kappa-konstante Region von cLL2 keine potenzielle Glykosylierungsstelle enthält, kann daraus geschlossen werden, dass die potenzielle Glykosylierungsstelle, die in der FR1-Region der LL2-VK-Domäne identifiziert wurde, verwendet wurde.
  • 8 zeigt die Ergebnisse der Analyse verschiedener Versionen von hLL2- und cLL2-Antikörpern durch SDS-PAGE unter reduzierenden und nicht-reduzierenden Bedingungen. Wie zuvor sind LMW und HMW Molekulargewichtsmarker. Spuren 3 und 6 sind cLL2-Antikörper. Spuren 4 und 7 sind hLL2 mit sieben murinen FR-Resten in der VH-Domäne (hLL2-1). Die Spuren 5 und 8 sind hLL2 mit sechs murinen FR-Resten in der VH-Domäne (hLL2-2). Die humanisierten leichten Ketten migrieren schneller und eher als diskrete Banden verglichen mit den chimären leichten Ketten.
  • 9 zeigt das Ergebnis einer SDS-PAGE-Analyse für „mix-and-match"- und cLL2- und hLL2-Antikörper unter sowohl reduzierenden als auch nicht-reduzierenden Bedingungen. Die Spuren 1 und 2 sind Molekulargewichtsmarker. Die Spuren 3 und 7 sind cLL2. Die Spuren 4 und 8 sind „mix-and-match" mit einer humanisierten leichten und schweren Kette [(hL/cH)LL2]. Die Spuren 5 und 9 sind chimäre leichte und humanisierte schwere (Version 1)-Ketten [(cL/hH)LL2-1]. Die Spuren 6 und 10 sind chimäre leichte und eine humanisierte schwere (Version 2)-Ketten [(hL/cH)LL2-2]. Die humanisierte LL2-Version 1 enthält 7 murine FR-Reste in der VH-Domäne, während Version 2 6 murine FR-Reste in der VH-Domäne enthält. Es ist bemerkenswert, dass die Position der leichten Kette von (hL/cH)LL2 (Spur 4) sich von den anderen unterscheidet, was darauf hindeutet, dass dort keine Kohlenhydratanbringung an die humanisierte LL2 leichte Kette erfolgt.
  • Beispiel 5
  • Bindung von cLL2-Antikörpern an Oberflächenantigene von Raji-Zellen
  • Ein kompetitiver Zellbindungsassay wurde durchgeführt, um die Immunreaktivität von cLL2 relativ zu dem parentalen mLL2 zu bewerten. Unter Verwendung von 131I-markiertem mLL2 (0,025 μg/ml) als Sonde wurden Raji-Zellen mit den Antikörpern inkubiert und die relative Bindung an Zellen wurde aus dem Anteil von zellgebundenem markiertem mLL2 bestimmt (siehe oben). wie durch die kompetitiven Assays, die in 10 beschrieben sind, gezeigt, wiesen sowohl der mLL2- als auch der cLL2-Antikörper vergleichbare Bindungsaktivitäten auf.
  • Die Ergebnisse wurden durch einen zweiten Kompetitionsassay. basierend auf Durchflusszytometrie, bestätigt. Kurz gesagt, unter Verwendung von Raji-Zellen, wie zuvor, und der Variierung der Konzentration von einem der Antikörper relativ zu dem anderen, wie zuvor, wurde die Menge von gebundenem mLL2 oder cLL2 mit FITC-markiertem Anti-Maus-Fc- oder Anti-humanen-Fc-Antikörper gefolgt durch eine Analyse unter Verwendung der Durchflusszytometrie bestimmt.
  • Beispiel 6
  • Bindung von hLL2-Antikörpern an Raji-Zellen
  • In Experimenten, die denen aus Beispiel 5 entsprechen, wurden die Antigenbindeaffinitäten der drei verschiedenen Kom binationen von „mix-and-match"- oder humanisiertem LL2 mit denen von cLL2 in dem Durchflusszytometrieassay verglichen.
  • Kurz gesagt wurde 1 μg von cLL2-, „mix-and match"-LL2-, hLL2-1- oder hLL2-2-Antikörpern mit 108 Raji-Zellen in Gegenwart von variierenden Konzentrationen von mLL2-F(ab')2-Fragmenten (als Kompetitor) in einem Endvolumen von 100 μl von PBS-Puffer, versetzt mit 1% FCS und 0,01% Natriumazid, inkubiert. Die Mischung wurde für 30 Minuten bei 4°C inkubiert und dreimal mit PBS gewaschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Unter Ausnutzung der Gegenwart von humanen Fc-Anteilen in den Antikörpern wurden die Bindungsspiegel der Antikörper durch Zugabe eines 20 × verdünnten FITC-markierten Ziege-anti-humanem-IgG1, Fc-Fragment-spezifischen Antikörpern (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) bewertet. Die Zellen wurden dreimal mit PBS gewaschen und die Fluoreszenzintensitäten wurden durch einen FACSCAN-Fluoreszenz-aktivierten Zellsorter (Becton-Dickinson, Bedford, MA) gemessen. Die Ergebnisse sind in 11A gezeigt.
  • Unter Verwendung der gleichen Methoden wurde cLL2 mit zwei Versionen von hLL2 verglichen (11B).
  • Die Ergebnisse, die in den 11A und B gezeigt sind, demonstrieren, dass die Immunreaktivität von cLL2 ähnlich oder identisch ist mit der von humanisierten oder „mix-and-match"-Antikörpern. In Zusammenschau mit dem Vergleich von cLL2 mit mLL2 (10) wurde die Authentizität der Sequenzen für den erhaltenen chimären und humanisierten VK und VH etabliert und die Funktionalität von cLL2 und hLL2 bestätigt.
  • Beispiel 7
  • Internalisierung von mLL2 und cLL2 durch Raji-Zellen
  • Eine der einzigartigen Eigenschaften des LL2-Antikörpers ist dessen rasche Internalisierung nach der Bindung an Raji-Zellen (Shih et al., 1994, oben). Muriner LL2 wird nach der Internalisierung wahrscheinlich rasch zu dem Golgi-Apparat und von dort zu den Lysosomen, der Organelle, die für die Degration einer großen Vielfalt von Biochemikalien verantwortlich ist (Keisari et al., Immunochem., 10: 565 (1973)), transferiert.
  • Die Raten der Antikörperinternalisierung wurden gemäß Opresko et al., 1987, oben, bestimmt. Das Verhältnis von CPMintrazellulär/CPMOberfläche wurde als Funktion der Zeit bestimmt.
  • Die Raten der LL2-Antikörperinternalisierung wurde durch Inkubation von radiomarkiertem LL2-Antikörper (1 × 106 cpm) mit 0,5 × 106 Raju-Zellen in 0,5 ml von DMEM-Puffer enthaltend 1% humanes Serum für 2 h bei 4°C bestimmt. Überschüssiges humanes Serum wurde einbezogen, um die Fc-Rezeptoren auf der Oberfläche von Raji-Zellen abzusättigen, um nicht-Antigen-spezifische Internalisierung, die durch die Fc-Rezeptoren vermittelt wird, auszuschließen oder zu minimieren. Ungebundene radiomarkierte LL2-Antikörper wurden von den Zellen durch dreimaliges Waschen mit 0,5 ml-Anteilen von DMEM bei 4°C entfernt. Die Zellen wurden dann bei 37°C inkubiert und, zu zeitlich abgestimmten Intervallen, wurden Aliqote der Zellsuspension auf Eis transferiert, um die Internalisierung zu stoppen. Die Zellen in diesen Aliquoten wurden durch Zentrifugation bei 1000 × g für 5 min bei 4°C isoliert und oberflächengebundener radiomarkierter LL2 wurde von den Zellen mit 1 ml von 0,1 M Glycinacetatpuffer, pH 3, für 8 min bei 4°C abgelöst. Die so erhaltene Radioaktivität (CPM Oberfläche) und die in den Zellen verbleibende Radioaktivität (CPM intrazellulär) wurden bestimmt. Die Raten der Internalisierung wurden aus der Neigung der Kurve der Verhältnisse von Radioaktivität intrazellulär : Oberfläche als Funktion der Zeit berechnet.
  • Wie in 12 gezeigt, wurden die mLL2-, cLL2-, cLL2Q- und hLL2-Antikörper mit vergleichbaren Raten internalisiert (Ke = 0,107 (mLL2) bis 0,1221 (cLL2Q, NVT-nach-QVT-Mutation). Diese Zahlen deuten darauf hin, dass ungefähr 50% des oberflächengebundenen Antikörpers in 10 min internalisiert werden können. Die Ergebnisse zeigen, dass weder die Chimärisierung, die Humanisierung noch die Deglykosylierung durch Mutagenese von mLL2-Antikörpern die Raten der Internalisierung beeinträchtigen.
  • Die Muster der Internalisierung für mLL2, cLL2 und hLL2 wurde ferner über Fluoreszenzmikroskopie über die Zeit hinweg unter Verwendung einer FITC-markierten zweiten Antikörpersonde, wie in der Beschreibung beschrieben, verfolgt. Die Internalisierung von beiden Antikörpern wurde zum frühesten messbaren Zeitpunkt beobachtet. Nach 5 Minuten wurden die Antikörper sowohl auf der Zelloberfläche als auch internalisiert in Bereiche, die unmittelbar an der Membran als cytoplasmatische Mikrovesikel anliegen, gesehen. Nach 15 min nach der Inkubation beginnen die feinen Punkte, die um die Intramembran herum verteilt sind, in eine Gruppe von Körnchen an Orten zu verschmelzen, von denen angenommen wird, dass diese dem Golgi-Apparat entsprechen. Nachdem nach 30 min mehr Antikörper internalisiert wurden, wurde die Rückverteilung der gruppierten Antikörper in diffuse Lokalisierungen, wahrscheinlich in die Lysosomen, in denen die Antikörper degradiert werden, beobachtet. 2 h nach der Inkubation wurden die meisten der Antikörper innerhalb der Zelle gefunden. Eine starke Oberflächenfärbung wurde nur dann beobachtet, wenn der LL2 für 20 min auf Eis inkubiert wurde. Sowohl mLL2 als auch cLL2 wurden mit einem vergleichbaren Muster internalisiert. Die Internalisierung von LL2 war spezifisch mit der Antigen-Antikörper-Bindung assoziiert, da der irrelevante humanisierte Kontrollantikörper lediglich eine schwache Oberflächenfärbung demonstrierte.
  • Der A103-Antikörper (ein IgG2a-Antikörper, der an die Oberfläche sämtlicher humaner Epithelzellen bindet, jedoch nicht effizient internalisiert (Mattes et al., Hybridoma, 2: 253 (1983)), zeigte eine starke Membranfärbung nach bis zu 2 h, während der Anti-Transferin-Rezeptor-Antikörper (5F9) rasch internalisiert, wie dies auch LL2 tat.
  • Beispiel 8
  • Die Rolle der Glycosylierungsstelle in der FR1-Region der LL2-VK-Sequenz
  • Von besonderem erfinderischem Interesse ist die Identifizierung der Asn-Glykosylierungsstelle an Position 18 bis 20 innerhalb der FR1-Region der Sequenz der LL2-NVT-leichen Kette (4A, SEQ ID Nr. 2). Wie oben gezeigt, weist die SDS-PAGE-Analyse unter reduzierenden Bedingungen darauf hin, dass die Asn-Glykosylierungsstelle zur Anbringung von Kohlenhydraten verwendet wird.
  • In diesem Beispiel wurde der Einfluss des Kohlenhydratteils an Position 18 bis 20 auf die funktionellen Aktivitäten der leichten Ketten untersucht.
  • Die murinen und chimären LL2-leichten-Ketten wurden mit (+) oder ohne (–) Endoglykosidase F auf konventionelle Art und Weise behandelt, und die Antikörperprodukte wurden mittels SDS-PAGE unter reduzierenden und nicht-reduzierenden Bedingungen untersucht (13). Die Antikörpertypen haben sich in ihrem elektrophoretischen Verhalten nicht unterschieden. In beiden Fällen reduzierte die Deglykosylierung die Migrationsrate der leichten Kette.
  • Der Effekt der Deglykosylierung auf die Bindeaktivität des mLL2-Antikörpers an Raji-Zellen ist in 14 gezeigt. Die Entfernung des Kohlenhydrates durch Endoglykosidase F hatte keinen Einfluss auf die Bindeaktivität.
  • An Position 18 der leichten Kette wurde eine Mutation eingebracht, so dass Asn durch Gln ersetzt wurde, um LL2Q-VK-FR1 herzustellen. SDS-PAGE-Analysen demonstrierten, dass die NVT-nach-QVT-Mutation die Glykosylierung des Antikörpers aufhob. Der Vergleich der Raji-Zell-Bindeaffinität von cLL2 mit oder ohne der Leichte-Kette-VK-Glykosylierung demonstrierte, dass der Kohlenhydratteil ohne Einfluss auf die Bindung des Antikörpers an diese Zellen war.
  • Es kann schlussgefolgert werden, dass das Vorhandensein der Kohlenhydratstelle in der variablen Region die Immunreaktivität des Antikörpers nicht beeinflusst. Computermodellstudien deuten darauf hin, dass der VK-Kohlenhydrat-Teil in dem LL2 von den CDRs entfernt positioniert ist und eine „Kappe" über die unteren Schleifen der FR-assoziierten β-Fässer, die die CDRs tragen, ausbildet.
  • Die Humanisierung ohne den Einschluss der ursprünglichen Glykosylierungsstelle resultierte in einem CDR-aufgepfropften LL2-Antikörper mit einer Immunreaktivität, die vergleichbar ist mit jener von dessen murinen Gegenstück.
  • Diese Eigenschaften weisen darauf hin, dass die Glykosylierungsstelle dazu verwendet werden kann, um therapeutische oder diagnostische Agenzien mit dem LL2 zu konjugieren, ohne die Fähigkeit des Antikörpers zu gefährden, B-Lymphome oder Leukämiezellen zu binden und in diese zu internalisieren.
  • Beispiel 9
  • Konjugation von LL2 an dessen Kohlenhydrat-tragende Stelle
  • Die ersichtlich fehlende Involvierung des Kohlenhydratteils der variablen Region in die funktionellen Aktivitäten von mLL2-, cLL2- und hLL2-mAbs deuten darauf hin, dass dieser Teil nutzbringend als Anbringungsstelle für cytotoxische oder Detektionsagenzien, wie bspw. Radionuclide oder Toxine, verwendet werden kann, und dadurch potenzielle Interferenzen mit der Bindung des Konjugates an eine Zelloberfläche vermieden werden können.
  • Unter Verwendung von Verfahren, die in Shih et al., U.S.-Patent Nr. 5,057,313 (das durch Inbezugnahme inkorporiert ist), wurde zur Herstellung von Antikörperkonjugaten über einen oxi dierten Kohlenhydratteil des Antikörpers und eine primäre Alkylaminogruppe eines polymeren Trägers, an dem kovalent ein oder mehrere einer Vielfalt von Medikamenten, Toxinen, Chelatoren und detektierbaren Markern gebunden ist, ein Doxorubicin-Dextran-LL2-Antikörper-Fragment ohne angebrachte Glycane hergestellt, das mehrere Kopien des Medikamentes enthielt. Die involvierten Kohlenhydratteile der cLL2-VK-FR1-Region waren jene, die kovalent an die Asn-Glykosylierungsstelle gebunden waren.
  • In einer Synthese wurde Dextran (18–40 kDa) in ein Aminodextran durch Oxidation des Dextrans mit NaIO4, einer Schiff'schen Basenbildung mit NH2-CH2-CHOH-CH2-NH2, und einer Reduktion mit NaBH4, konvertiert. Das Aminodextran wurde dann mit Dexorubicin (DOX) in Gegenwart von Bernsteinanhydrid und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid kondensiert, um DOX-Aminodextran herzustellen. Das letztere wurde dann mit einer Aldehydgruppe von LL2-VK-FR1 kondensiert, die durch Oxidation des Kohlenhydratteils des Antikörperfragmentes mit NaIO4 hergestellt wurde.
  • In einer Präparation von DOX-LL2 war die Anzahl von Molen von DOX, die an das Dextran angebracht waren, 14 Mol pro Mol Dextran, und die Anzahl von Molen von Doxorubicin pro Mol F(ab')2 war 8,9. Die Immunreaktivität in dem obigen Raji-Zell-Bindeassay lag bei etwa 80% der Kontrollwerte.
  • Dieses Konjugationssystem ist nicht auf den mLL2-Antikörper beschränkt. In einer vergleichenden Studie wurden 15–19 Mole von DOX/mol von cLL2 gebunden.
  • Die Konjugationsmöglichkeiten sind nicht auf die Verwendung eines Trägerdextrans wie in dem obigen Beispiel beschränkt. Bspw. kann der Kohlenhydratteil der LL2-VK-FR1-Region oxidiert werden, um Aldehydgruppen herzustellen. Diese wiederum können mit einer Aminogruppe an einem beliebigen Medikament reagieren, um eine Schiff'sche Base herzustellen, die nach der Reduktion multiple Kopien des Medikamentes liefert, die stabil mit dem Antikörper über Alkylamingruppen verbunden sind.
  • Wenn es sich bei dem Medikament bspw. um Aminohexyl-DTPA handelt (ein chelierendes Agens), wird ein LL2 hergestellt, der kovalent an einen Chelator gebunden ist. Der Chelator kann dazu verwendet werden, um in Zielgewebe bspw. ein Radionuclid oder ein paramagnetisches Metallion mit einem Potenzial für diagnostische oder therapeutische Verwendungen zu bringen. Es wurden DTPA-LL2-Konjugate hergestellt, die 5,5 mol des Chelators/mol von Antikörper enthielten, die wiederum 47,3% von Y-90 und 97,4% In-111 chelierten.
  • Es wird betont, dass die oben beschriebenen Beispiele lediglich verschiedene spezifische Ausführungsformen der Erfindung beschreiben, und dass die Anmelder nicht beabsichtigen, durch diese spezifischen Beispiele den Umfang der Ansprüche zu begrenzen.
  • SEQUENZPROTOKOLL
    Figure 00470001
  • Figure 00480001
  • Figure 00490001
  • Figure 00500001
  • Figure 00510001
  • Figure 00520001
  • Figure 00530001
  • Figure 00540001
  • Figure 00550001

Claims (22)

  1. Isoliertes Polynucleotid codierend die Aminosäuresequenz einer variablen Region einer schweren Kette eines gegen Lymphom/Leukämie-Zellen (LL2) gerichteten monoklonalen Antikörpers (mAb), das Folgendes aufweist: i) die komplementaritätsbestimmenden Regionen (CDRs) der schweren Kette eines Maus-LL2 (mLL2), wobei CDR1 die Aminosäuren 31 bis 35 von SEQ ID Nr. 4, CDR2 die Aminosäuren 50 bis 66 von SEQ ID Nr. 4 und CDR3 99 bis 105 von SEQ ID Nr. 4 aufweist, wobei der LL2-mAb die Immunreaktivität des mLL2 beibehält; und ii) Gerüstregionen (FRs) einer variablen Region einer schweren Kette von zumindest einem humanen Antikörper; wobei der LL2-mAb die Immunreaktivität von mLL2 beibehält.
  2. Isoliertes Polynucleotid nach Anspruch 1 codierend die Aminosäuresequenz SEQ ID Nr. 8 oder 9.
  3. Isoliertes Polynucleotid nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, das die Nucleinsäuresequenz SEQ ID Nr. 7 aufweist.
  4. Isoliertes Polynucleotid codierend die Aminosäuresequenz einer variablen Region einer leichten Kette eines gegen Lymphom/Leukämie-Zellen (LL2) gerichteten monoklonalen Antikörpers (mAb); das Folgendes aufweist: i) die komplementaritätsbestimmenden Regionen (CDRs) der leichten Kette eines Maus-LL2 (mLL2) mAb, wobei CDR1 die Aminosäuren 24 bis 40 von SEQ ID Nr. 2, CDR2 die Aminosäuren 56 bis 62 von SEQ ID Nr. 2 und CDR3 95 bis 102 von SEQ ID Nr. 2 aufweist; und iii) Gerüstregionen (FRs) einer variablen Region einer leichten Kette von zumindest einem humanen Antikörper; wobei der LL2-mAb die Immunreaktivität von mLL2 beibehält.
  5. Isoliertes Polynucleotid nach Anspruch 4 codierend die Aminosäuresequenz SEQ ID Nr. 6.
  6. Isoliertes Polynucleotid nach Anspruch 4 oder Anspruch 5, das die Nucleinsäuresequenz SEQ ID Nr. 5 aufweist.
  7. Isoliertes Polynucleotid, das ein Polynucleotid gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 und ein Polynucleotid gemäß einem der Ansprüche 4 bis 6 aufweist.
  8. Expressionsvektor, der ein Polynucleotid gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 aufweist.
  9. Wirtszelle, die ein Polynucleotid gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 aufweist.
  10. Wirtszelle nach Anspruch 9, wobei die Zelle eine Säugetierzelle ist.
  11. Wirtszelle nach Anspruch 10, wobei die Säugetierzelle eine Myelomzelle ist.
  12. Verfahren zur Expression einer variablen Region einer schweren Kette eines LL2-monoklonalen Antikörpers (mAb), das Folgendes aufweist: (a) Transfizieren einer Säugetierzelle mit einem Polynucleotid, das ein Polynucleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 3 aufweist; und (b) Kultivieren der Zelle, die die variable Region der schweren Kette eines LL2-mAb oder des Fragmentes davon sekretiert.
  13. Verfahren zur Expression einer variablen Region einer leichten Kette eines LL2-monoklonalen Antikörpers (mAb), das Folgendes aufweist: (a) Transfizieren einer Säugetierzelle mit einem Polynucleotid, das ein Polynucleotid nach einem der Ansprüche 4 bis 6 aufweist; und (b) Kultivieren der Zelle, die die variable Region der schweren Kette eines LL2-mAb oder des Fragmentes davon sekretiert.
  14. Verfahren zur Expression eines LL2-monoklonalen Antikörpers (mAb), das Folgendes aufweist: (a) Transfizieren einer Säugetierzelle mit einem Polynucleotid, das ein Polynucleotid nach Anspruch 7 aufweist; und (b) Kultivieren der Zelle, die den LL2-mAb oder das Fragment davon sekretiert.
  15. Schwere Kette eines LL2-monoklonalen Antikörpers (mAb), die eine variable Region aufweist, die von einem Polynucleotid gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 codiert ist.
  16. Leichte Kette eines LL2-monoklonalen Antikörpers (mAb), die eine variable Region aufweist, die von einem Polynucleotid gemäß einem der Ansprüche 4 bis 6 codiert ist.
  17. LL2-monoklonaler Antikörper (mAb) oder ein Antigenbindefragment davon, der bzw. das eine schwere Kette eines LL2-monoklonalen Antikörpers (mAb) gemäß Anspruch 15 und eine leichte Kette eines LL2-monoklonalen Antikörpers gemäß Anspruch 16 aufweist.
  18. Diagnostisches oder therapeutisches Konjugat, das zielgerichtet ist gegen eine B-Lymphomzelle und eine Leukämiezelle, und das den LL2-mAb nach Anspruch 17 aufweist, der an die Zellen bindet, wobei der LL2-mAb oder das Fragment davon an ein diagnostisches oder therapeutisches Reagens gebunden ist.
  19. Konjugat nach Anspruch 18, wobei das diagnostische oder therapeutische Reagens ein chemotherapeutisches Medikament aufweist, wie z.B. Doxorubicin, Methothrexat, Taxol, einen detektierbaren Marker, wie z.B. ein fluoreszierendes Molekül, oder ein cytotoxisches Agens, wie z.B. ein Schwermetall, ein Radionuclid oder ein Toxin, wie z.B. Pseudomonas-Exotoxin.
  20. Konjugat nach Anspruch 18, wobei das Agens an den mAb oder das Fragment davon mittels eines Kohlenhydratteils des mAb oder Fragments davon gebunden ist.
  21. Monoklonaler Antikörper nach Anspruch 17 oder Konjugat gemäß einem der Ansprüche 18 bis 20 zur therapeutischen Verwendung.
  22. Verwendung eines monoklonalen Antikörpers gemäß Anspruch 17 oder eines Konjugates gemäß einem der Ansprüche 18 bis 20 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnose oder Behandlung eines B-Zell-Lymphoms oder einer Lymphom/Leukämie.
DE69534530T 1994-08-12 1995-08-11 Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper Expired - Lifetime DE69534530T2 (de)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28957694A 1994-08-12 1994-08-12
US289576 1994-08-12
PCT/US1995/009641 WO1996004925A1 (en) 1994-08-12 1995-08-11 Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE69534530D1 DE69534530D1 (de) 2006-03-02
DE69534530T2 true DE69534530T2 (de) 2006-07-06

Family

ID=23112129

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69534530T Expired - Lifetime DE69534530T2 (de) 1994-08-12 1995-08-11 Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper

Country Status (10)

Country Link
US (6) US5789554A (de)
EP (1) EP0771208B1 (de)
JP (1) JP3053873B2 (de)
AT (1) ATE306930T1 (de)
AU (1) AU3272695A (de)
CA (1) CA2195557C (de)
DE (1) DE69534530T2 (de)
ES (1) ES2251723T3 (de)
IL (1) IL114909A (de)
WO (1) WO1996004925A1 (de)

Families Citing this family (401)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69534530T2 (de) * 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US8771694B2 (en) * 1994-08-12 2014-07-08 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates and humanized antibodies specific for B-cell lymphoma and leukemia cells
US5874540A (en) * 1994-10-05 1999-02-23 Immunomedics, Inc. CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies
ATE267610T1 (de) 1996-03-20 2004-06-15 Immunomedics Inc Glykosylierte igg antikörper
ATE264871T1 (de) * 1996-07-26 2004-05-15 Aventis Pharma Gmbh Insulinderivate mit erhöhter zinkbindung
UA76934C2 (en) 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
ATE427966T1 (de) * 1997-02-11 2009-04-15 Immunomedics Inc Stimulation einer immunantwort durch antikírper, welche mit dem alpha-galaktosylepitop markiert sind
US6183744B1 (en) * 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
EP0975674B1 (de) * 1997-05-02 2005-08-17 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Immuntoxine, die ein onc protein enthalten, gegen bösartige zellen
AU732306B2 (en) 1997-10-14 2001-04-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Potentiator for antibody against lymphoid tumor
US20010033839A1 (en) * 1999-10-04 2001-10-25 Emilio Barbera-Guillem Vaccine and immunotherapy for solid nonlymphoid tumor and related immune dysregulation
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
US7696325B2 (en) 1999-03-10 2010-04-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide inducing apoptosis
US20030099629A1 (en) * 1999-03-11 2003-05-29 Immunomedics, Inc. Recombinant onconase and chemical conjugates and fusion proteins of recombinant onconase
WO2000066155A1 (en) 1999-04-30 2000-11-09 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Methods for preventing reactivation of latent virus and controlling virus replication
US7829064B2 (en) 1999-05-10 2010-11-09 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods
US8119101B2 (en) 1999-05-10 2012-02-21 The Ohio State University Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
US8383081B2 (en) 1999-05-10 2013-02-26 Immunomedics, Inc. Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use
US6221597B1 (en) 1999-05-21 2001-04-24 Rosetta Inpharmatics, Inc. Essential genes of yeast as targets for antifungal agents, herbicides, insecticides and anti-proliferative drugs
US6197517B1 (en) 1999-05-21 2001-03-06 Rosetta Inpharmatics, Inc. Essential genes of yeast as targets for antifungal agents, herbicides, insecticides and anti-proliferative drugs
US6200803B1 (en) 1999-05-21 2001-03-13 Rosetta Inpharmatics, Inc. Essential genes of yeast as targets for antifungal agents, herbicides, insecticides and anti-proliferative drugs
US6451284B1 (en) * 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
TWI248365B (en) 1999-08-23 2006-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd HM1.24 antigen expression potentiators
AU1190101A (en) * 1999-09-27 2001-04-30 Regents Of The University Of California, The Engineering antibodies that bind irreversibly
US7118745B1 (en) 1999-09-27 2006-10-10 The Regents Of The University Of California Engineering antibodies that bind irreversibly
US20020028178A1 (en) * 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
EP1283722A1 (de) 2000-03-31 2003-02-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Kombinierte verwendung von anti-zytokin-antikörpern oder antagonisten und anti-cd20 zur behandlung von b-zell-lymphomen
AU2001268363B2 (en) 2000-06-20 2006-08-17 Biogen Idec Inc. Treatment of B cell associated diseases
AU2001271614B2 (en) 2000-07-03 2007-05-31 Catalent Pharma Solutions, Llc Host cells containing multiple integrating vectors
US20040235173A1 (en) * 2000-07-03 2004-11-25 Gala Design, Inc. Production of host cells containing multiple integrating vectors by serial transduction
US20030224415A1 (en) * 2001-06-29 2003-12-04 Gala Design, Inc. Selection free growth of host cells containing multiple integrating vectors
AU7025201A (en) * 2000-07-03 2002-01-14 Gala Design Inc Expression vectors
KR20030055274A (ko) 2000-10-20 2003-07-02 츄가이 세이야꾸 가부시키가이샤 저분자화 트롬보포에틴 아고니스트 항체
US7090843B1 (en) * 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002060485A2 (en) 2001-01-31 2002-08-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Use of immunoregulatory antibodies in the treatment of neoplastic disorders
US20020159996A1 (en) 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030211107A1 (en) * 2002-01-31 2003-11-13 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030103971A1 (en) * 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
US20070065436A1 (en) * 2001-01-31 2007-03-22 Biogen Idec Inc. Anti-cd80 antibody having adcc activity for adcc mediated killing of b cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
US7931897B2 (en) 2001-02-07 2011-04-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agent for hematopoietic tumors
US20030118585A1 (en) * 2001-10-17 2003-06-26 Agy Therapeutics Use of protein biomolecular targets in the treatment and visualization of brain tumors
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
AU2003208415B2 (en) * 2002-02-14 2009-05-28 Immunomedics, Inc. Anti-CD20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US8287864B2 (en) * 2002-02-14 2012-10-16 Immunomedics, Inc. Structural variants of antibodies for improved therapeutic characteristics
AU2003224624B2 (en) * 2002-02-21 2008-08-28 Duke University Reagents and treatment methods for autoimmune diseases
US20160279239A1 (en) 2011-05-02 2016-09-29 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of anti-cd74 antibody for systemic lupus erythematosus and autoimmune disease
JP2006502091A (ja) 2002-03-01 2006-01-19 イミューノメディクス、インコーポレイテッド クリアランス速度を高めるための二重特異性抗体点変異
PT3483183T (pt) 2002-03-01 2021-06-02 Immunomedics Inc Imunoconjugado compreendendo anticorpos rs7 humanizados
JP4472351B2 (ja) 2002-03-01 2010-06-02 イミューノメディクス、インコーポレイテッド インターナライジング抗ｃｄ７４抗体およびその使用方法
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
WO2003076651A2 (en) * 2002-03-14 2003-09-18 Qlt Inc. Cancer associated araf1 protein kinase and its uses
US7384738B2 (en) * 2002-03-28 2008-06-10 Bremel Robert D Retrovirus-based genomic screening
US20040038304A1 (en) * 2002-03-28 2004-02-26 Gala Design, Inc. Antibody libraries
PL224001B1 (pl) 2002-05-02 2016-11-30 Wyeth Corp Sposób wytwarzania stabilnej liofilizowanej kompozycji obejmującej monomeryczne koniugaty pochodna kalicheamycyny/przeciwciało anty-CD22, kompozycja otrzymana tym sposobem oraz jej zastosowanie
GB0210121D0 (en) * 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
AU2003250367A1 (en) * 2002-06-14 2003-12-31 Immunomedics, Inc. Monoclonal antibody pam4 and its use for diagnosis and therapy of pancreatic cancer
ES2524767T3 (es) * 2002-06-14 2014-12-12 Immunomedics, Inc. Anticuerpo monoclonal humanizado HPAM4
US7939304B2 (en) * 2002-10-02 2011-05-10 Catalyst Biosciences, Inc. Mutant MT-SP1 proteases with altered substrate specificity or activity
US20060024289A1 (en) * 2002-10-02 2006-02-02 Ruggles Sandra W Cleavage of VEGF and VEGF receptor by wild-type and mutant proteases
DE60324700D1 (de) 2002-10-11 2008-12-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Zelltod-induzierender wirkstoff
CN101812134A (zh) 2002-10-16 2010-08-25 欧洲凯尔特公司 结合细胞缔合的ca125/o772p的抗体及其使用方法
US7563810B2 (en) * 2002-11-06 2009-07-21 Celgene Corporation Methods of using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myeloproliferative diseases
US8034831B2 (en) * 2002-11-06 2011-10-11 Celgene Corporation Methods for the treatment and management of myeloproliferative diseases using 4-(amino)-2-(2,6-Dioxo(3-piperidyl)-isoindoline-1,3-dione in combination with other therapies
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
US7534427B2 (en) * 2002-12-31 2009-05-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B cell malignancies and autoimmune diseases using unconjugated antibodies and conjugated antibodies and antibody combinations and fusion proteins
US7820787B2 (en) * 2003-01-23 2010-10-26 The Regents Of The University Of California Multi-functional antibodies
CA2514277C (en) * 2003-01-31 2015-01-20 Immunomedics, Inc. Methods and compositions for administering therapeutic and diagnostic agents
JP2004279086A (ja) 2003-03-13 2004-10-07 Konica Minolta Holdings Inc 放射線画像変換パネル及び放射線画像変換パネルの製造方法
EP1609803A4 (de) * 2003-03-31 2006-05-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modifizierter antikörper gegen cd22 und anwendungen dafür
JP5026072B2 (ja) 2003-07-01 2012-09-12 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 二重特異性抗体の多価キャリヤー
EP2216342B1 (de) 2003-07-31 2015-04-22 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 Antikörper
US7902338B2 (en) 2003-07-31 2011-03-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 antibodies
HUE033349T2 (en) 2003-10-22 2017-11-28 Keck Graduate Inst Procedures for the Synthesis of Heteromultimer Polypeptides in Yeast Using an Hagloid Mating Strategy
CA2542886A1 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 Neelima M. Bhat Enhanced b cell cytotoxicity of cdim binding antibody
US7259249B2 (en) 2003-12-01 2007-08-21 Immunomedics, Inc. Method for preparing conjugates of proteins and chelating agents
TW200530269A (en) 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Mpl antibodies
US20070281327A1 (en) * 2003-12-12 2007-12-06 Kiyotaka Nakano Methods of Screening for Modified Antibodies With Agonistic Activities
KR20060130606A (ko) * 2003-12-12 2006-12-19 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 세포사 유도제
TW200530266A (en) * 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method of reinforcing antibody activity
US20050221429A1 (en) * 2004-01-16 2005-10-06 Cardinal Health Pts, Llc Host cells containing multiple integrating vectors comprising an amplifiable marker
US9481878B2 (en) 2004-02-13 2016-11-01 Immunomedics, Inc. Compositions and methods of use of immunotoxins comprising ranpirnase (Rap) show potent cytotoxic activity
US8652484B2 (en) 2004-02-13 2014-02-18 Immunomedics, Inc. Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting
US8435539B2 (en) * 2004-02-13 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting
US8883160B2 (en) 2004-02-13 2014-11-11 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dock-and-lock (DNL) complexes for therapeutic and diagnostic use
US20110064754A1 (en) * 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
US20110171126A1 (en) * 2010-01-11 2011-07-14 Center For Molecular Medicine And Immunology Enhanced Cytotoxicity of Anti-CD74 and Anti-HLA-DR Antibodies with Interferon-Gamma
US8491914B2 (en) * 2004-02-13 2013-07-23 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dock-and-lock (DNL) complexes for delivery of interference RNA
US20110020273A1 (en) * 2005-04-06 2011-01-27 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Bispecific Immunocytokine Dock-and-Lock (DNL) Complexes and Therapeutic Use Thereof
US9550838B2 (en) 2004-02-13 2017-01-24 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Dock-and-lock (DNL) complexes for therapeutic and diagnostic use
US8551480B2 (en) 2004-02-13 2013-10-08 Immunomedics, Inc. Compositions and methods of use of immunotoxins comprising ranpirnase (Rap) show potent cytotoxic activity
DK2447375T3 (da) 2004-03-31 2019-07-29 Massachusetts Gen Hospital Fremgangsmåde til bestemmelse af responsiviteten af en tumor på behandlinger med den epidermale vækstfaktor-receptor som mål
EP1757686A4 (de) * 2004-04-09 2008-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Zelltodinduzierer
AU2005244271B2 (en) * 2004-04-12 2010-04-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Cleavage of VEGF and VEGF receptor by wildtype and mutant MT-SP1
AU2005251764A1 (en) * 2004-06-04 2005-12-22 Genentech, Inc. Method for treating lupus
MXPA06014069A (es) * 2004-06-04 2007-04-25 Genentech Inc Metodo para tratar esclerosis multiple.
ATE486610T1 (de) * 2004-07-09 2010-11-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-glypican-3-antikörper
MX2007000748A (es) * 2004-07-22 2007-03-28 Genentech Inc Metodos para tratar el sindrome de sjogren.
DK2213683T3 (da) 2004-08-04 2013-09-02 Mentrik Biotech Llc VARIANT-Fc-REGIONER
EP1812060A2 (de) * 2004-10-05 2007-08-01 Genentech, Inc. Verfahren zur behandlung von vaskulitis
JP5328156B2 (ja) * 2005-02-03 2013-10-30 マクロジェニックス ウエスト， インコーポレイテッド オンコスタチンｍレセプターに対する抗体
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
CN101171034B (zh) 2005-03-03 2014-06-18 免疫医疗公司 人源化l243抗体
US20160355591A1 (en) 2011-05-02 2016-12-08 Immunomedics, Inc. Subcutaneous anti-hla-dr monoclonal antibody for treatment of hematologic malignancies
JP5057967B2 (ja) 2005-03-31 2012-10-24 中外製薬株式会社 ｓｃ（Ｆｖ）２構造異性体
WO2006106905A1 (ja) 2005-03-31 2006-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 会合制御によるポリペプチド製造方法
US8349332B2 (en) 2005-04-06 2013-01-08 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Multiple signaling pathways induced by hexavalent, monospecific and bispecific antibodies for enhanced toxicity to B-cell lymphomas and other diseases
US8475794B2 (en) 2005-04-06 2013-07-02 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with anti-CD74 antibodies provides enhanced toxicity to malignancies, Autoimmune disease and other diseases
WO2006123724A1 (ja) * 2005-05-18 2006-11-23 The University Of Tokushima 抗hla抗体を利用した新規医薬品
ATE460672T1 (de) * 2005-05-20 2010-03-15 Genentech Inc Vorbehandlung einer biologischen probe aus einem individuum mit autoimmunkrankheit
AU2006256041B2 (en) 2005-06-10 2012-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilizer for protein preparation comprising meglumine and use thereof
CN101262885B (zh) 2005-06-10 2015-04-01 中外制药株式会社 含有sc(Fv)2的药物组合物
MX2007015476A (es) * 2005-06-14 2008-02-25 Amgen Inc Formulaciones de proteina autoamortiguadoras.
AU2006261920A1 (en) 2005-06-23 2007-01-04 Medimmune, Llc Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles
US20070190047A1 (en) * 2005-07-29 2007-08-16 Amgen, Inc. Formulations that inhibit protein aggregation
US20070087005A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Lazar Gregory A Anti-glypican-3 antibody
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
EP2674440B1 (de) 2005-12-16 2019-07-03 IBC Pharmaceuticals, Inc. Polyvalente bioaktive anordnungen auf immunglobulinbasis
EP2540741A1 (de) 2006-03-06 2013-01-02 Aeres Biomedical Limited Humanisierte Anti-CD22-Antikörper und ihre Verwendung bei der Behandlung von Krebs, Transplantationen und Autoimmunerkrankungen
CA2644906C (en) 2006-03-06 2016-05-10 Medimmune, Inc. Humanized anti-cd22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
KR100701923B1 (ko) 2006-03-15 2007-03-30 주식회사 녹십자 항- ｂ림프종 단일클론항체 및 이를 생산하는 하이브리도마세포주
CN105177091A (zh) 2006-03-31 2015-12-23 中外制药株式会社 用于纯化双特异性抗体的抗体修饰方法
CN103030696B (zh) * 2006-05-30 2016-09-28 健泰科生物技术公司 抗体和免疫偶联物及其用途
KR20170014023A (ko) 2006-07-05 2017-02-07 카탈리스트 바이오사이언시즈, 인코포레이티드 프로테아제 스크리닝 방법 및 이에 의해 확인된 프로테아제
AR061986A1 (es) * 2006-07-13 2008-08-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes inductores de muerte celular
ES2678060T3 (es) 2006-12-01 2018-08-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos, en particular, anticuerpos humanos, que se unen a CD22 y usos de los mismos
ES2374330T3 (es) 2007-01-22 2012-02-15 Genentech, Inc. Precipitación con polielectrolito y purificación de anticuerpos.
US9023352B2 (en) 2007-02-20 2015-05-05 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant heteromultimeric neutralizing binding protein
CL2008000719A1 (es) * 2007-03-12 2008-09-05 Univ Tokushima Chugai Seiyaku Agente terapeutico para cancer resistente a agentes quimioterapeuticos que comprende un anticuerpo que reconoce hla de clase i como ingrediente activo; composicion farmaceutica que comprende dicho anticuerpo; y metodo para tratar cancer resistente a
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
ES2610607T3 (es) 2007-05-21 2017-04-28 Alderbio Holdings Llc Anticuerpos contra IL-6 y usos de los mismos
WO2009029795A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Amgen Inc. Solid-state protein formulation
CA2701032C (en) 2007-09-27 2021-01-26 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
EP2219602A1 (de) 2007-11-15 2010-08-25 Amgen, Inc Wässrige formulierung von mit antioxidantien stabilisiertem erythropoese-stimulierendem protein zur parenteralen verabreichung
KR20100102172A (ko) * 2007-12-21 2010-09-20 제넨테크, 인크. 리툭시마브-난치성 류마티스성 관절염 환자의 요법
US20090269339A1 (en) * 2008-04-29 2009-10-29 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
BRPI0910482A2 (pt) 2008-04-29 2019-09-24 Abbott Lab imunoglobinas de domínio variável duplo e usos das mesmas
JP2011523853A (ja) 2008-06-03 2011-08-25 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
NZ589436A (en) 2008-06-03 2012-12-21 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
JP5674654B2 (ja) 2008-07-08 2015-02-25 アッヴィ・インコーポレイテッド プロスタグランジンｅ２二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
WO2010009271A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
JP6049163B2 (ja) * 2008-07-21 2016-12-21 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 改善された治療上の特徴のための抗体の構造変異体
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
JP5230344B2 (ja) * 2008-10-14 2013-07-10 日機装株式会社 熱交換装置
KR20110091780A (ko) 2008-11-25 2011-08-12 앨더 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 악액질, 쇠약, 피로 및／또는 발열을 예방하거나 치료하는 ｉｌ­６의 길항제
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
ES2738700T3 (es) 2009-02-13 2020-01-24 Immunomedics Inc Inmunoconjugados con un enlace escindible intracelularmente
WO2010096394A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
PE20160653A1 (es) 2009-03-05 2016-07-24 Abbvie Inc Proteinas de union a il-17
UY32870A (es) * 2009-09-01 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
ES2927646T3 (es) 2009-09-15 2022-11-08 Univ Leland Stanford Junior Terapia anti-CD47 sinérgica para cánceres hematológicos
WO2011034660A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Immunomedics, Inc. Class i anti-cea antibodies and uses thereof
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
BR112012008833A2 (pt) * 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
CA2778105C (en) 2009-10-23 2019-04-02 Amgen Inc. Vial adapter and system
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
CA2782194C (en) 2009-12-02 2018-01-16 Immunomedics, Inc. Combination of radiolabelled antibodies (rait) and antibody-drug conjugates (adc) for treatment of pancreatic cancer
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
KR20130009760A (ko) 2010-02-10 2013-01-23 이뮤노젠 아이엔씨 Ｃｄ２０ 항체 및 이의 용도
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US9631018B2 (en) 2010-03-26 2017-04-25 The Trustees Of Dartmouth College Vista regulatory T cell mediator protein, vista binding agents and use thereof
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
KR101745386B1 (ko) 2010-05-10 2017-06-09 아카데미아 시니카 항-인플루엔자 활성을 가진 자나미비르 포스포네이트 동족체 및 인플루엔자 바이러스의 오셀타미비르 감수성을 확인하는 방법
BR112012031071B1 (pt) 2010-05-14 2021-08-10 Abbvie Inc Proteínas de ligação à il-1 e composição farmacêutica compreendendo as referidas proteínas de ligação
EA024052B1 (ru) 2010-06-07 2016-08-31 Эмджен Инк. Устройство для доставки лекарственного средства
CA2803391C (en) 2010-06-22 2021-11-09 Neogenix Oncology, Inc. Npc1 antibodies that bind a muc5ac epitope
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US8735546B2 (en) 2010-08-03 2014-05-27 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2600901B1 (de) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. Pharmazeutische zusammensetzungen enthaltenbearbeitete nukleinsäuren und ihre medizinische verwendung
CA2809433A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
ES2719624T3 (es) 2010-09-23 2019-07-11 Prec Biologics Inc Peptidomiméticos de cáncer de colon y de páncreas
DE19177059T1 (de) 2010-10-01 2021-10-07 Modernatx, Inc. N1-methyl-pseudouracile enthältendes ribonucleinsäuren sowie ihre verwendungen
CN104998254A (zh) 2010-11-08 2015-10-28 基因技术公司 皮下施用的抗-il-6受体抗体
AU2011332817A1 (en) 2010-11-23 2013-06-13 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-IL-6 antibodies for the treatment of anemia
AU2011336470B8 (en) 2010-12-01 2017-09-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
SG191312A1 (en) 2010-12-21 2013-07-31 Abbvie Inc Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
WO2012097333A2 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof
WO2012135805A2 (en) 2011-03-31 2012-10-04 modeRNA Therapeutics Delivery and formulation of engineered nucleic acids
CA2831100C (en) 2011-03-31 2020-02-18 Mark Dominis Holt Vial adapter and system
PT2699293T (pt) 2011-04-20 2019-05-21 Amgen Inc Aparelho de autoinjeção
WO2012151199A1 (en) 2011-05-02 2012-11-08 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
ES2899381T3 (es) 2011-05-20 2022-03-11 H Lundbeck As Producción de alta pureza de proteínas de múltiples subunidades, tales como anticuerpos en microbios transformados, tal como Pichia pastoris
EP3662932B1 (de) 2011-05-20 2021-04-07 H. Lundbeck A/S Anti-cgrp-zusammensetzungen und verwendung davon
EP2709662B1 (de) 2011-05-20 2019-07-31 AlderBio Holdings LLC Verwendung von anti-cgrp- oder anti-cgrp-r-antikörpern oder antikörperfragmenten zur behandlung oder prävention chronischer und akuter formen von diarrhöe
BR112013029959A8 (pt) 2011-05-20 2021-09-08 Alderbio Holdings Llc Anticorpos anti-cgrp e anti-cgrpr e seu uso para prevenir ou inibir fotofobia ou aversão à luz, composição farmacêutica compreendendo os referidos anticorpos, bem como sequência de ácido nucleico e célula recombinante
EP2714738B1 (de) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalente und monovalente multispezifische komplexe und ihre verwendungen
MX347514B (es) 2011-05-25 2017-04-28 Innate Pharma Sa Anticuerpos anti-receptores tipo inmunoglobulina citoliticos (kir) para el tratamiento de trastornos inflamatorios.
MX355890B (es) 2011-08-19 2018-05-03 Alderbio Holdings Llc Estrategia de múltiples copias para producción de alto título y alta pureza de proteínas de multi-subunidades tales como anticuerpos en microbios transformados tal como pichia pastoris.
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
LT3682905T (lt) 2011-10-03 2022-02-25 Modernatx, Inc. Modifikuoti nukleozidai, nukleotidai ir nukleorūgštys bei jų naudojimas
EA030868B1 (ru) 2011-10-14 2018-10-31 Эмджен Инк. Инжектор и способ его сборки
SG11201401791WA (en) 2011-10-24 2014-08-28 Abbvie Inc Immunobinders directed against sclerostin
EP2788020A4 (de) 2011-12-05 2015-04-29 Immunomedics Inc Therapeutische verwendung von anti-cd22-antikörpern zur induktion von trogozytose
US9757458B2 (en) 2011-12-05 2017-09-12 Immunomedics, Inc. Crosslinking of CD22 by epratuzumab triggers BCR signaling and caspase-dependent apoptosis in hematopoietic cancer cells
PL2791160T3 (pl) 2011-12-16 2022-06-20 Modernatx, Inc. Kompozycje zmodyfikowanego mrna
WO2013096455A1 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for diagnosing and treating oncogenic kras-associated cancer
US9120870B2 (en) 2011-12-30 2015-09-01 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-13 and IL-17
DE18200782T1 (de) 2012-04-02 2021-10-21 Modernatx, Inc. Modifizierte polynukleotide zur herstellung von proteinen im zusammenhang mit erkrankungen beim menschen
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
BR112014026744A8 (pt) * 2012-04-26 2018-01-16 Bioatla Llc anticorpo isolado ou fragmento de anticorpo, composição de anticorpo ou composição de fragmento de anticorpo, uso de modulação imune, uso de pelo menos uma composição de anticorpo ou fragmento de anticorpo, dispositivo médico, formulação, kit, artigo de fabricação para uso farmacêutico humano, método para produzir um anticorpo ou fragmento, animal ou planta transgênica, e, anticorpo ou porção ou variante especificada.
EP2855698A4 (de) 2012-05-24 2016-03-30 Dana Farber Cancer Inst Inc Abzielung auf den glutamin-zu-pyruvat-signalweg zur behandlung von mit dem kras-onkogen assoziierten krebs
BR112014030278A2 (pt) 2012-06-08 2017-06-27 Sutro Biopharma Inc anticorpo, e, composição.
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
FI3421486T3 (fi) 2012-06-22 2023-12-15 Dartmouth College Uusia vista-ig-rakenteita ja vista-ig:n käyttö autoimmuuni-, allergia- ja tulehdushäiriöiden hoitamiseksi
TW201402608A (zh) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie Inc Ｉｌ－１結合蛋白質
WO2014014518A1 (en) 2012-07-18 2014-01-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating, preventing and predicting risk of developing breast cancer
CN104582717B (zh) 2012-07-19 2018-03-13 雷德伍德生物科技股份有限公司 对cd22有特异性的抗体及其使用方法
WO2014028560A2 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Ibc Pharmaceuticals, Inc. T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease
EP2885311B1 (de) 2012-08-18 2020-01-01 Academia Sinica Zelldurchlässige sonden zur identifikation und abbildung von sialidasen
US9547009B2 (en) 2012-08-21 2017-01-17 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
AU2013308494B2 (en) 2012-08-31 2018-03-01 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
CN109793893B (zh) 2012-09-07 2023-05-26 达特茅斯大学理事会 用于诊断和治疗癌症的vista调节剂
EA029215B1 (ru) 2012-09-07 2018-02-28 Кохерус Байосайенсис, Инк. Стабильные водные составы адалимумаба
EP2906251B1 (de) 2012-10-12 2017-09-27 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepin-anti-cd22-antikörperkonjugate
KR101820699B1 (ko) 2012-11-01 2018-01-22 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
JP2015535464A (ja) 2012-11-21 2015-12-14 アムジエン・インコーポレーテツド 薬剤送達装置
RS63237B1 (sr) 2012-11-26 2022-06-30 Modernatx Inc Terminalno modifikovana rnk
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
HRP20220399T1 (hr) 2012-12-13 2022-05-13 Immunomedics, Inc. Režim doziranja imunokonjugata protutijela i sn-38 za poboljšanu učinkovitost i smanjenu toksičnost
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
US9107960B2 (en) 2012-12-13 2015-08-18 Immunimedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US9943610B2 (en) 2012-12-21 2018-04-17 Bioalliance C.V. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
CA2896723C (en) 2012-12-28 2024-02-13 Precision Biologics, Inc. Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
ES2973257T3 (es) 2013-03-15 2024-06-19 Amgen Inc Casete de fármaco, autoinyector y sistema de autoinyector
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
SG11201506034TA (en) 2013-03-15 2015-09-29 Alder Biopharmaceuticals Inc Temperature shift for high yield expression of polypeptides in yeast and other transformed cells
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
JP6768501B2 (ja) 2013-03-15 2020-10-14 アムゲン・インコーポレーテッド 薬物カセット、自動注入機、および自動注入機システム
MX2015013163A (es) 2013-03-15 2016-04-04 Zyngenia Inc Complejos multiespecificos multivalente y monovalentes y sus usos.
BR112015022042B1 (pt) 2013-03-15 2023-01-10 Amgen Inc Injetor para injetar um produto terapêutico
AR095615A1 (es) 2013-03-15 2015-10-28 Alder Biopharmaceuticals Inc Purificación de anticuerpos y monitoreo de pureza
SG11201507878SA (en) 2013-03-22 2015-10-29 Amgen Inc Injector and method of assembly
US10086054B2 (en) 2013-06-26 2018-10-02 Academia Sinica RM2 antigens and use thereof
WO2014210564A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
US20150017166A1 (en) 2013-07-03 2015-01-15 Alderbio Holdings Llc Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
JP6486368B2 (ja) 2013-09-06 2019-03-20 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 改変されたグリコシル基を含む糖脂質を用いたヒトｉＮＫＴ細胞の活性化
RU2730594C2 (ru) 2013-09-27 2020-08-24 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Способ получения полипептидного гетеромультимера
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015050844A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods of treating cancer with atovaquone-related compounds
EA201690675A1 (ru) 2013-10-03 2016-08-31 Модерна Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
ES2744837T3 (es) 2013-10-24 2020-02-26 Amgen Inc Inyector y procedimiento de ensamblaje
JP7051293B2 (ja) 2013-10-24 2022-04-11 アムジエン・インコーポレーテツド 温度感知制御を伴う薬剤送達システム
MX369173B (es) 2013-12-24 2019-10-30 Janssen Pharmaceutica Nv Anticuerpos y fragmentos anti-vista.
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
CA2935774C (en) 2014-01-08 2023-06-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Targeted therapy for small cell lung cancer
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
CA2937123A1 (en) 2014-01-16 2015-07-23 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
WO2015126548A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to trop-2 expressing cells
CA2935748A1 (en) 2014-02-25 2015-09-03 Immunomedics, Inc. Humanized rfb4 anti-cd22 antibody
JP6682498B2 (ja) 2014-03-24 2020-04-15 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッドＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ アゴニストまたはアンタゴニスト性を誘発する修飾されたＩｇＧ２ドメインを含む修飾された抗体及びその使用
WO2015149006A2 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for modulating ncoa4-mediated autophagic targeting of ferritin
JP6562942B2 (ja) 2014-03-27 2019-08-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 反応性標識化合物およびその使用
SG11201608084TA (en) 2014-04-17 2016-10-28 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh Recombinant host cell engineered to overexpress helper proteins
CN106604986B (zh) 2014-04-17 2021-01-12 贝林格尔·英格海姆Rcv两合公司 用于表达目标蛋白的重组宿主细胞
BR112016025852B1 (pt) 2014-05-07 2022-11-01 Amgen Inc Dispositivo de injeção para aplicação de fármaco
CN113933504A (zh) 2014-05-08 2022-01-14 中外制药株式会社 对gpc3靶向治疗剂疗法有效的患者施用的gpc3靶向治疗剂
CA2950440A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Academia Sinica Anti-her2 glycoantibodies and uses thereof
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
KR20240096599A (ko) 2014-05-27 2024-06-26 아카데미아 시니카 항-ｃｄ20 글리코항체 및 이의 용도
KR20230033737A (ko) 2014-05-27 2023-03-08 아카데미아 시니카 증진된 항체 효능을 위한 범용 당형태에 관한 조성물 및 방법
JP7063538B2 (ja) 2014-05-28 2022-05-09 アカデミア シニカ 抗ＴＮＦα糖操作抗体群およびその使用
KR102416904B1 (ko) 2014-06-03 2022-07-04 암겐 인코포레이티드 약물 전달 디바이스에 의해 수집된 데이터를 원격으로 프로세싱하기 위한 시스템들 및 방법들
EP2952584A1 (de) 2014-06-04 2015-12-09 Boehringer Ingelheim RCV GmbH & Co KG Verbesserte Proteinherstellung
WO2015191881A2 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Green Kathy A Use of vista agonists and antagonists to suppress or enhance humoral immunity
AU2015276924A1 (en) * 2014-06-20 2017-01-05 Abgenomics International Inc. Anti-CD22 antibody-drug conjugates and methods of using thereof
JP2017528418A (ja) 2014-06-20 2017-09-28 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 抗葉酸受容体アルファ（ｆｒａ）抗体−薬物コンジュゲート及びその使用方法
WO2015200260A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Immunomedics, Inc. Anti-histone therapy for vascular necrosis in severe glomerulonephritis
US9879042B2 (en) 2014-09-08 2018-01-30 Academia Sinica Human iNKT cell activation using glycolipids
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
CA2961774C (en) 2014-10-07 2023-05-23 Immunomedics, Inc. Neoadjuvant use of antibody-drug conjugates
WO2016061220A2 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audio indicators
JP2018505911A (ja) 2014-12-05 2018-03-01 イミュネクスト，インコーポレーテッド 推定上のｖｉｓｔａ受容体としてのｖｓｉｇ８の同定と、ｖｉｓｔａ／ｖｓｉｇ８調節剤を産生するためのその使用
WO2016094602A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Tufts University Vhh based binding antibodies for anthrax and botulinum toxins and methods of making and using therefor
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
IL284291B1 (en) 2014-12-19 2024-10-01 Lundbeck Seattle Biopharmaceuticals Inc Human anti-ACTH antibodies and their use
US11357916B2 (en) 2014-12-19 2022-06-14 Amgen Inc. Drug delivery device with live button or user interface field
US10799630B2 (en) 2014-12-19 2020-10-13 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
EP4019040A1 (de) 2015-01-21 2022-06-29 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Verwendung von tlr agonisten und anti-cd47 mitteln zur stimulierung der phagozytose von krebszellen
KR102691114B1 (ko) 2015-01-24 2024-08-01 아카데미아 시니카 신규한 글리칸 콘주게이트 및 이를 사용하는 방법
CA3069716C (en) 2015-02-17 2021-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
ES2905870T3 (es) 2015-02-27 2022-04-12 Amgen Inc Dispositivo de suministro de fármacos que tiene un mecanismo de protección de aguja con un umbral de resistencia ajustable al movimiento de la protección de aguja
CA2981543A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
US11009509B2 (en) 2015-06-24 2021-05-18 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-VISTA antibodies and fragments
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
CN114796501A (zh) 2015-06-25 2022-07-29 免疫医疗公司 抗体与治疗剂的组合治疗癌症的方法
EP3316885B1 (de) 2015-07-01 2021-06-23 Immunomedics, Inc. Antikörper-sn-38-immunkonjugate mit einem cl2a-linker
EP3318879B1 (de) 2015-07-01 2020-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Verabreichung eines gegen gpc3 gerichteten therapeutikums an einen patienten mit bestätigter wirksamkeit des gegen gpc3 gerichteten therapeutikums
ES2964640T3 (es) 2015-08-13 2024-04-08 Amgen Inc Filtración en profundidad cargada de proteínas de unión al antígeno
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
BR112018009225A2 (pt) 2015-11-09 2019-02-05 Scherer Technologies Llc R P conjugados de anticorpo anti-cd22-maitansina e métodos de uso dos mesmos
WO2017100501A1 (en) 2015-12-09 2017-06-15 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
EP3398965A4 (de) 2015-12-28 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Verfahren zur förderung der effizienz der reinigung von polypeptid mit fc-region
WO2017120178A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
NZ743815A (en) 2016-01-08 2023-06-30 Altrubio Inc Tetravalent anti-psgl-1 antibodies and uses thereof
CA3011372A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Immunomedics, Inc. Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers
MX2018009800A (es) 2016-02-12 2018-11-09 Janssen Pharmaceutica Nv Anticuerpos y fragmentos anti-vista, usos de los mismos y procedimientos de identificacion de los mismos.
KR20180114210A (ko) 2016-03-08 2018-10-17 아카데미아 시니카 N-글리칸의 모듈 합성 방법 및 그의 어레이
DK3429663T3 (da) 2016-03-15 2020-09-28 Amgen Inc Reduktion af sandsynligheden for glasbrud i anordninger til indgivelse af lægemidler
MA44776A (fr) 2016-04-15 2019-03-06 Immunext Inc Anticorps anti-vista humain et leur utilisation
SG10202109689QA (en) 2016-04-15 2021-10-28 Alder Biopharmaceuticals Inc Humanized anti-pacap antibodies and uses thereof
WO2017184880A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Coherus Biosciences, Inc. A method of filling a container with no headspace
AU2017257504A1 (en) 2016-04-26 2018-10-25 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
CN109310385A (zh) 2016-04-27 2019-02-05 免疫医疗公司 抗trop-2-sn-38抗体药物缀合物用于检查点抑制剂复发/难治的肿瘤的疗法的功效
WO2017189089A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
AU2017263558B2 (en) 2016-05-13 2022-12-22 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
WO2017200989A1 (en) 2016-05-16 2017-11-23 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
EP3465124A1 (de) 2016-06-03 2019-04-10 Amgen Inc. Wirkungstestvorrichtungen und verfahren für wirkstofffreisetzungsvorrichtungen
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
US11285266B2 (en) 2016-07-01 2022-03-29 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
US10538592B2 (en) 2016-08-22 2020-01-21 Cho Pharma, Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
BR112019007858A2 (pt) 2016-10-21 2019-07-02 Amgen Inc formulações farmacêuticas e métodos para produzir as mesmas
WO2018081234A1 (en) 2016-10-25 2018-05-03 Amgen Inc. On-body injector
CN110248668B (zh) 2016-12-15 2023-05-30 杜克大学 用于消耗调节性b10细胞的抗体和方法以及与免疫检查点抑制剂的联用
MX2019008432A (es) 2017-01-17 2019-11-18 Amgen Inc Dispositivos de inyeccion y metodos relacionados de uso y ensamblaje.
WO2018137705A1 (en) 2017-01-26 2018-08-02 Zai Lab (Shanghai) Co., Ltd. Cd47 antigen binding unit and uses thereof
US11752258B2 (en) 2017-02-17 2023-09-12 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
AU2018221351B2 (en) 2017-02-17 2023-02-23 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
CA3050927A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Brian Stonecipher Drug delivery device with activation prevention feature
US11571511B2 (en) 2017-03-07 2023-02-07 Amgen Inc. Insertion mechanism and method of inserting a needle of a drug delivery device
AU2018230486B2 (en) 2017-03-09 2023-05-11 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
US10918734B2 (en) 2017-03-27 2021-02-16 Immunomedics, Inc. Treatment of high Trop-2 expressing triple negative breast cancer (TNBC) with sacituzumab govitecan (IMMU-132) overcomes homologous recombination repair (HRR) rescue mediated by Rad51
HUE063805T2 (hu) 2017-03-28 2024-01-28 Amgen Inc Dugattyúrúd és fecskendõ összeállító rendszer és eljárás
WO2018187074A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of antibody-drug conjugates for cancer therapy
JP7200134B2 (ja) 2017-06-08 2023-01-06 アムジエン・インコーポレーテツド トルク駆動式薬物送達デバイス
EP3634539A1 (de) 2017-06-08 2020-04-15 Amgen Inc. Spritzenanordnung für eine wirkstofffreisetzungsvorrichtung und verfahren zur montage
MX2019015472A (es) 2017-06-22 2020-02-19 Amgen Inc Reduccion del impacto/choque de la activacion del mecanismo.
JP7475860B2 (ja) 2017-06-23 2024-04-30 アムジエン・インコーポレーテツド スイッチアセンブリにより起動されるキャップを含む電子薬物送達デバイス
JP7408398B2 (ja) 2017-07-14 2024-01-05 アムジエン・インコーポレーテツド 二重ねじりばねシステムを有する針挿入後退システム
EP3655063A1 (de) 2017-07-21 2020-05-27 Amgen Inc. Gasdurchlässiges dichtelement für arzneimittelbehälter und verfahren zur montage
MA49676A (fr) 2017-07-25 2020-06-03 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament doté d'un système d'accès à un récipient et procédé d'assemblage associé
US11617837B2 (en) 2017-07-25 2023-04-04 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
MA49838A (fr) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre
MA49897A (fr) 2017-08-18 2020-06-24 Amgen Inc Injecteur sur-corps avec patch adhésif stérile
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
ES2939292T3 (es) 2017-10-04 2023-04-20 Amgen Inc Adaptador de flujo para dispositivo de administración de fármacos
CN111132711B (zh) 2017-10-06 2022-07-01 安进公司 带有联锁组件的药物递送装置及相关组装方法
US11464903B2 (en) 2017-10-09 2022-10-11 Amgen Inc. Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly
WO2019090079A1 (en) 2017-11-03 2019-05-09 Amgen Inc. System and approaches for sterilizing a drug delivery device
CA3079197A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
EP3707075A1 (de) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc. Füllabschlussanordnungen und zugehörige verfahren
CN111225696B (zh) 2017-11-10 2023-07-18 安进公司 用于药物递送装置的柱塞
IL273638B2 (en) 2017-11-16 2024-10-01 Amgen Inc Door lock mechanism for drug delivery device
AU2018368338B2 (en) 2017-11-16 2024-07-25 Amgen Inc. Autoinjector with stall and end point detection
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
WO2020023451A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
MA53379A (fr) 2018-07-24 2021-06-02 Amgen Inc Dispositifs d'administration pour l'administration de médicaments
WO2020023220A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation
CA3103105A1 (en) 2018-07-31 2020-02-06 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
US20210346601A1 (en) 2018-09-24 2021-11-11 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
SG11202101982RA (en) 2018-09-26 2021-03-30 Ascendis Pharma As Degradable hyaluronic acid hydrogels
EP3856283A1 (de) 2018-09-28 2021-08-04 Amgen Inc. Anordnung zur aktivierung des muskeldrahtvorschubs für eine medikamentenabgabevorrichtung
WO2020072577A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Amgen Inc. Injection systems for drug delivery with internal force transmission
TWI824026B (zh) 2018-10-05 2023-12-01 美商安進公司 具有劑量指示器之藥物遞送裝置
SG11202101824VA (en) 2018-10-15 2021-03-30 Amgen Inc Platform assembly process for drug delivery device
KR20210076935A (ko) 2018-10-15 2021-06-24 암젠 인크 댐핑 메커니즘을 갖는 약물 전달 장치
WO2020091956A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
CA3113076A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
CN116063520A (zh) 2019-01-30 2023-05-05 真和制药有限公司 抗gal3抗体及其用途
WO2020219482A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Amgen Inc. Syringe sterilization verification assemblies and methods
EP4004044A1 (de) 2019-07-24 2022-06-01 H. Lundbeck A/S Anti-mglur5-antikörper und verwendungen davon
EP4017560A2 (de) 2019-08-23 2022-06-29 Amgen, Inc Arzneimittelabgabevorrichtung mit konfigurierbaren nadelschutzeingriffskomponenten und zugehörige verfahren
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
AU2020202454A1 (en) 2020-04-06 2021-10-21 H. Lundbeck A/S Treatment of most bothersome symptom (MBS) associated with migraine using anti-CGRP antibodies
US12077576B2 (en) 2020-07-02 2024-09-03 Trustees Of Tufts College VHH polypeptides that bind to Clostridium difficile toxin b and methods of use thereof
US20240141363A1 (en) 2021-02-12 2024-05-02 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Signal peptides for increased protein secretion
MX2023012703A (es) 2021-05-07 2023-11-21 Viela Bio Inc Uso de un anticuerpo de cumulo de diferenciacion 19 (anti-cd19) para tratar la miastenia grave.
EP4342497A1 (de) 2021-05-10 2024-03-27 Kawasaki Institute of Industrial Promotion Antikörper mit reduzierter bindungsaffinität für antigen
MX2023013640A (es) 2021-05-21 2023-11-30 Amgen Inc Metodo de optimizacion de una receta de llenado para un contenedor de medicamento.
WO2023288252A1 (en) 2021-07-13 2023-01-19 Truebinding, Inc. Methods of preventing protein aggregation
KR20240038773A (ko) 2021-07-27 2024-03-25 아스트라제네카 아베 루푸스의 치료
JP2024531258A (ja) 2021-08-13 2024-08-29 クンシャン シンユンター バイオテック カンパニー，リミティド 微小管阻害剤に基づく抗体薬物複合体
EP4393514A1 (de) 2021-08-24 2024-07-03 Kunshan Xinyunda Biotech Co., Ltd. Über einen brechbaren linker konjugiertes antikörper-wirkstoff-konjugat
IL310885A (en) 2021-08-27 2024-04-01 H Lundbeck As Treatment of cluster headache using anti-CGRP antibodies
CN118401258A (zh) 2021-12-09 2024-07-26 昆山新蕴达生物科技有限公司 一种亲和力改善的抗体-药物偶联物、其制备方法及应用
WO2024171078A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 H. Lundbeck A/S Treatment of opiod-induced pain

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) * 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) * 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5057313A (en) * 1986-02-25 1991-10-15 The Center For Molecular Medicine And Immunology Diagnostic and therapeutic antibody conjugates
GB8607679D0 (en) * 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5258498A (en) * 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
DE69534530T2 (de) * 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US6083477A (en) * 1996-10-17 2000-07-04 Immunomedics, Inc. Non-antigenic toxin-conjugate and fusion protein of internalizing receptor system
US7321026B2 (en) * 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins

Also Published As

Publication number Publication date
ATE306930T1 (de) 2005-11-15
US20070172920A1 (en) 2007-07-26
EP0771208A4 (de) 2000-01-19
US20040013607A1 (en) 2004-01-22
JPH10505231A (ja) 1998-05-26
ES2251723T3 (es) 2006-05-01
CA2195557A1 (en) 1996-02-22
DE69534530D1 (de) 2006-03-02
CA2195557C (en) 2006-10-17
US5789554A (en) 1998-08-04
JP3053873B2 (ja) 2000-06-19
EP0771208B1 (de) 2005-10-19
US20050106108A1 (en) 2005-05-19
IL114909A0 (en) 1995-12-08
US20020102254A1 (en) 2002-08-01
AU3272695A (en) 1996-03-07
WO1996004925A1 (en) 1996-02-22
EP0771208A1 (de) 1997-05-07
IL114909A (en) 1999-10-28
US6187287B1 (en) 2001-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69534530T2 (de) Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
DE69729283T2 (de) GLYKOSYLIERTE IgG ANTIKÖRPER
US8771694B2 (en) Immunoconjugates and humanized antibodies specific for B-cell lymphoma and leukemia cells
DE69734109T2 (de) Humanisierung von anti-carcinoembryonalen Antigen anti-idiotypischen Antikörper und dessen Verwendung als Tumorvakzin und zur Markierung
DE69724428T2 (de) Humanisierte antikörper die an das gleiche antigen wie antikörper nr-lu-13 binden und deren verwendung in "pretargeting" verfahren
DE3751908T2 (de) Chimärisches Murine-Mensch-Immunoglobulin, spezifisch für tumorassoziertes 17-1A Antigen
DE69632333T2 (de) Monoklonaler antikörper br110 und dessen anwendung
DE69737188T2 (de) Monoklonaler antikoerper gegen cea, konjugate die dieses antikoerper enthalten und deren therapeutische verwendung in einem adept-system
EP1736163B1 (de) CDR-ausgetauschte Typ III Anti-CEA humanisierte monoklonale Mausantikörper
DE69719529T2 (de) Nichtantigenes toxinkonjugat und fusionsprotein eines internalisierendes rezeptorsystems
DE69532889T2 (de) Interleukin-5-spezifische rekombinante antikörper
DE69710911T2 (de) Monoklonale Antikörper gegen Endoglin und ihre Verwendung in der anti-Angiogenese-Therapie
DE69431602T2 (de) Monoklonale antikörper zur diagnose und behandlung von kolorektalkrebs
WO1997034632A9 (en) Glycosylated humanized b-cell specific antibodies
DE69331735T2 (de) Gegen das A33 Antigen gerichtete Humanisierte Antikörper
EP0585570B1 (de) Granulozytenbindende Antikörperkonstrukte, ihre Herstellung und Verwendung
DE69829001T2 (de) Humanisierte monoklonale antikörper mit hoher affinität gegen tag-72
AU689331C (en) CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition
8328 Change in the person/name/address of the agent

Representative=s name: WITTE, WELLER & PARTNER, 70178 STUTTGART