KR102476907B1 - 항-ｃｇｒｐ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절 - Google Patents

항-ｃｇｒｐ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절 Download PDF

Info

Publication number
KR102476907B1
KR102476907B1 KR1020167002907A KR20167002907A KR102476907B1 KR 102476907 B1 KR102476907 B1 KR 102476907B1 KR 1020167002907 A KR1020167002907 A KR 1020167002907A KR 20167002907 A KR20167002907 A KR 20167002907A KR 102476907 B1 KR102476907 B1 KR 102476907B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
light chain
heavy chain
antibody
cgrp
Prior art date
Application number
KR1020167002907A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20160029822A (ko
Inventor
존 에이. 라탐
제프리 티.엘. 스미스
브라이언 베이커
Original Assignee
하. 룬드벡 아크티에셀스카브
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 filed Critical 하. 룬드벡 아크티에셀스카브
Publication of KR20160029822A publication Critical patent/KR20160029822A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102476907B1 publication Critical patent/KR102476907B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Developing Agents For Electrophotography (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 개시내용은 대사성 장애의 예방 또는 치료 방법을 제공하는, 방법. 예시적인 구현예에서, 항-CGRP 항체를 투여하는 방법은, 제2 제제와 함께 임의로 제공되고, 여기서 말초 및/또는 간 글루코오스 이용이 증가되고, 그렇게 함으로써 인슐린 내성과 연관된 질환 및 장애를 예방 또는 치료하는, 방법. 항-CGRP 항체를 포함하는 조성물이, 제2 제제와 함께 임의로 또한 제공되고, 상기 조성물은, 말초 및/또는 간 글루코오스 이용을 증가시키고 그렇게 함으로써 인슐린 내성과 연관된 질환 및 장애를 예방 또는 치료하기 위해 투여하는데 적합하다.

Description

항-ＣＧＲＰ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절{REGULATION OF GLUCOSE METABOLISM USING ANTI-CGRP ANTIBODIES}
관련 출원 개시내용
본원은 2014년 4월 22일자로 출원된 미국 가출원 번호 61/982,611(변리사 문서 번호 43257.3002) 및 2013년 7월 3일자로 출원된 미국 가출원 번호 61/842,745(변리사 문서 번호 43257.3001)의 이점을 특허청구하고, 이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다.
발명의 분야
본 발명은 CGRP에 특이적으로 결합하고 말초 조직에서 글루코오스 흡수 및 이용을 촉진시키고/시키거나 간 글루코오스 생산을 억제하는 인간 칼시토닌 유전자 관련된 펩타이드("CGRP")에 대한 항체 및 그것의 단편(Fab 단편 포함)의 사용에 관한 것이다. 상기 본 방법의 예시적인 구현예는 기능적 췌장 베타 세포를 유지시킴으로써 명백학 당뇨병으로의 진행을 늦출 수 있다. 본 발명은 또한 인슐린 내성에 연관된 질환 및 장애(글루코오스, 탄수화물 및 지방 대사의 장애 포함)의 스크리닝 방법, 및 상기한 항체 또는 그것의 단편을 투여함으로써 인슐린 내성과 연관된 질환 및 장애를 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다.
본원은 EFS-Web을 통해 ASCII 포맷으로 제출되고 이로써 그 전체가 참고로 편입된 생물학적 서열 목록을 함유한다. 2014년 7월 1일에 생성된 상기 ASCII 복사본은 "43257o3013.txt"로서 명명되고, 크기가 203,678바이트이다.
칼시토닌 유전자 관련 펩타이드(CGRP)는 길이 37 아미노산의 다작용성 뉴로펩타이드로서 생산된다. CGRP의 두 형태, CGRP-알파 및 CGRP-베타 형태는 인간에서 존재하고, 둘 다 유사한 활성을 갖는다. CGRP-알파 및 CGRP-베타는 인간에서 3개의 아미노산에 의해 상이하고, 상이한 유전자로부터 유도된다. 각각이 뚜렷이 다른 수용체 및 생물학적 활성을 갖지만, 펩타이드의 CGRP 패밀리는 또한 아밀린, 아드레노메둘린 및 칼시토닌을 포함한다[참조: Doods, H., Curr. Op. Invest. Drugs, 2(9):1261-68 (2001)]. CGRP 단백질 패밀리 내에서, 전체적인 상동성은 상이하지만, 추정 수용체 결합 부위의 아미노산 잔기가 보존된다. 예를 들면, 인간 CGRP 및 아밀린은 전체적인 46% 아미노산 서열 동일성을 공유하는 반면, 인간 칼시토닌 및 CGRP는 15% 아미노산 서열 동일성을 공유한다[참조: Wimalawansa, S.J., Endocrine Rev. 17(5):533-585 (1996)].
CGRP의 생물학적 효과는 수용체-연관된 막 단백질(RAMP)과 함께 7-막통과 성분으로 이루어진 CGRP 수용체(CGRP-R)를 통해 매개된다. CGRP-R은 추가로 G 단백질을 통해 아데닐레이트 사이클라제에 대한 효율적인 커플링 및 cAMP의 생산에 필수적인 수용체 성분 단백질(RCP)의 활성을 필요로 한다[참조: Doods, H., Curr . Op. Invest. Drugs, 2(9):1261-68 (2001)].
CGRP는 말초 및 중추신경계 전반에서 발견되고, 심혈관, 신경 및 내분비계에 영향을 미친다. CGRP가 조직, 예를 들면, 삼차 신경으로부터 방출되면, 이는 혈관 확장, 혈관 누출 및 비만 세포 분해를 특징으로 하는 신경성 염증을 매개하기 위해 순차적 활성화 및 수막내 뉴로펩타이드의 방출을 유도할 수 있다[참조: Durham, P.L., New Eng . J. Med ., 350 (11):1073-75 (2004)]. CGRP는 편두통의 발병에 두드러진 역할을 하는 것으로 간주된다. CGRP의 상승된 수준은 편두통의 두통 단계 동안 경정맥 정맥 혈액으로부터 다른 뉴로펩타이드의 배제까지 혈장에서 확인된다는 것을 보여주었다[참조: Arulmozhi, D.K., 등, Vas. Pharma., 43: 176-187 (2005)]. 추가로, CGRP 길항작용은 편두통의 치료에 효과적인 것으로 나타났다(참조: Olesen 등, N Engl J Med. 2004 Mar 11;350(11):1104-10).
신경 조직 이외에, CGRP 수용체는 심혈관 조직, 부신, 뇌하수체샘, 신장, 췌장 및 골에서 확인되었다[참조: Wimalawansa, S.J., Endocrine Rev. 17(5):533-585 (1996)]. 시험관내 연구에서, CGRP 및 아밀린은 모두 단리된 췌장 조직을 사용하여 인슐린 분비를 억제하고, 용량 의존 방식으로 글리코겐 합성의 인슐린 자극된 비율에 대항하고, 단리된 간세포에서 인슐린의 효과를 차단한다(참조: Gomez-Foix 등 Biochem . J. 276:607-610, 1991). 추가로, 레이턴 및 쿠퍼(참조: Leighton 및 Cooper (Nature, 335(6191):632-5, 1988))는 랫트 CGRP-1이 시험관내에서 줄무늬 랫트 가자미근에서 글리코겐 합성의 기저 및 인슐린 자극된 랫트를 억제했다고 보고한다.
글루코오스 항상성은 글리코겐 합성을 호르몬 글루카곤 및 글로코스 이용에 의한 글리코겐분해 및 호르몬 인슐에 의한 조직으로의 흡수와 균형화함으로써 유지된다. 글루코오스의 존재는 일반적으로 인슐린 생산을 자극하고, 이는 일반적으로 골격근, 근세포, 뇌 및 지방세포로의 글루코오스의 수송률을 증가시키는 기능을 한다. 인슐린은 또한 일반적으로 지방세포에서 지질 분해를 억제한다. 전당뇨병 또는 2형 당뇨병의 최초 단계에서, 조직은 인슐린 내성을 개발하지만, 췌장 베타 세포는 인슐린의 증가하는 수준을 분비함으로써 보상한다. 결국, 근육 및 간 인슐린 내성이 증가함에 따라 보상하는 췌장 베타 세포 능력은 소모되고 외인성 인슐인이 필요하다.
손상된 인슐린 합성 및 글루코오스 이용 결과로서 글루코오스 항상성을 엄격히 조절하는 무능력은 심오한 대사성 및 해로운 건강 효과를 가질 수 있다. 가장 통상적인 것은 지속적으로 고혈당(고혈당증)을 발병시켜 인슐린 내성 및 II형 당뇨병의 진단을 유도한다는 것이다. 2011년에, 미국에서 20세 이상의 25,600,000명이 당뇨병을 갖는 것으로서 진단되었고, 이중 95%는 2형 당뇨병이었다(참조: Centers for Disease Control and Prevention. National Diabetes Fact Sheet, 2011. Atlanta, GA: Centers for Disease Control and Prevention, US Department of Health and Human Services; 2011.). 당뇨병의 의료 비용은 심장마비, 뇌졸중, 신장 합병증 및 신경병증의 증가된 위험에 기인하여 비당뇨병 사람보다 평균적으로 2배 더 높다(참조: Imperatore 등 Am J Epidemiol. 160(6):531-539 (2004)). 유의미한 변화 없이, CDC는 2050까지 미국에서 3명의 성인 중 1명은 당뇨병을 가질 수 있다고 예측한다(참조: Boyle 등 Popul. Health Metr. 8:29 (2010)). 전세계적으로, 2011년 당뇨병을 진단받은 사람의 총 수는 366백만 명이고, 2030년까지 552백만 명으로 증가할 것으로 추정되었다(참조: International Diabetes Foundation, IDF Diabetes Atlas, Fifth Ed.)
글루코오스 대사에서 CGRP의 역할은 문헌에 명확히 정의되지 않는다. 단리된 간세포에서의 연구는, CGRP 및 아밀린이 글리코겐 합성의 인슐린 자극된 비율을 억제한다는 것을 입증했다(참조: Gomez-Foix 등 Biochem. J. 276:607-610, 1991). 문헌[참조: Beaumont 등 Br J Pharmacol. Jul;115(5):713-5 (1995)]은 CGRP 수용체가 근육 글루코오스 대사의 효과를 매개하지 않는다는 것을 발견했다. 문헌[참조: Tanaka 등 Exp . Clin Endocrinol Diabetes 121:280-285 (2013)]은 랫트 모델에서 항-CGRP 항체는 인슐린 분비에서 작은 변화와 함께 제1-단계 인슐린 분비의 약간의 확대를 생성했다고 말하지만, 연구는 항체가 잠재적으로 결과에 혼란을 주는 다른 칼시토닌 패밀리 펩타이드에 대해 교차-반응성이었는지를 보고하지 않았다. 최종적으로, 이전 미국 특허들은 CGRP가 아밀린 작용제이고, CGRP 폴리펩타이드(CGRP 길항제와 대조적으로)의 투여가 당뇨병을 치료할 수 있다는 것을 보여주고자 했다(참조: 예를 들면, 미국 특허 제5,641,744호 및 제5,175,145호).
발명의 요약
일 측면에서, 본 개시내용은 그것을 필요로 하는 대상체에서 말초 및/또는 간 글루코오스 이용을 증가시키는 방법을 제공하고, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편을 포함하는 효과적인 양의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 그것을 필요로 하는 대상체에서 인슐린 내성을 감소시키는 방법을 제공하고, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편을 포함하는 효과적인 양의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 그것을 필요로 하는 대상체에서 비만을 치료, 예방 또는 조절하는 방법을 제공하고, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편을 포함하는 효과적인 양의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 그것을 필요로 하는 대상체에서 지속된 정상혈당을 달성하는 방법을 제공하고, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편을 포함하는 효과적인 양의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 그것을 필요로 하는 대상체에서 제지방 조직 대 체지방의 비를 증가시키는 방법을 제공하고, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편을 포함하는 효과적인 양의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 방법은 II형 당뇨병 및/또는 비만을 치료하거나 그 개시를 지연하는데 효과적일 수 있다. 예를 들면, 외인성 인슐린을 투여하는 필요는 지연될 수 있다. 본 방법은 췌장 베타 세포의 손싱을 예방하거나 느리게 하는데 효과적일 수 있다. 예를 들면, 이론에 의해 제한되기를 의도하지 않으면서, 본 방법은 인슐린-내성있는 인간 또는 비-인간 동물의 췌장 베타 세포가 쉬도록 허용할 수 있고, 그렇게 함으로써 기능적 췌장 베타 세포의 손실을 예방하는 것으로 생각된다.
상기 대상체는 준당뇨병으로 진단될 수 있었고 II형 당뇨병의 발달에 대한 하나 이상의 위험 인자를 나타낼 수 있다.
상기 대상체는 전-폐경기, 폐경기 전후, 폐경기 또는 후-폐경기일 수 있다.
상기 대상체는 아래의 예와 같은 준당뇨병의 하나 이상의 증상을 나타낼 수 있다: 100 mg/dL 내지 125 mg/dl의 공복 혈당 수준; 75 그램의 글루코오스 용액 또는 1.75 그램 내지 최대 용량 75 그램의 글루코오스 / 체중 킬로그램의 글루코오스 용액 섭취 2 시간 후의 140 mg/dL 내지 199 mg/dL의 혈당 수준; 및/또는 5.7 퍼센트 내지 6.4 퍼센트의 당화 헤모글로빈.
상기 대상체는 아래의 예와 같은 당뇨병의 하나 이상의 증상을 나타낼 수 있다: 125 mg/dl 초과의 공복 혈당 수준; 75 그램의 글루코오스 용액 또는 1.75 그램 내지 최대 용량 75 그램의 글루코오스 / 체중 킬로그램의 글루코오스 용액 섭취 2 시간 후의 적어도 200 mg/dL의 혈당 수준; 및/또는 적어도 6.5 퍼센트의 당화 헤모글로빈.
상기 대상체는 하기를 나타낼 수 있다: II형 당뇨병의 발달에 대한 하나 이상의 위험 인자, 예컨대 II형 당뇨병의 가족력; II형 당뇨병으로 이전에 진단된 하나 이상의 부모 또는 형제자매; 이상지질혈증; 적어도 200 mg/dL의 총 혈액 트리글리세라이드 수준; 35 mg/dL 미만의 혈액 고밀도 지질단백질 수준; 비만; 25 kg/m2 초과의 체질량 지수; 임신성 당뇨병의 이력; 9 lb 초과의 출생 체중을 갖는 영아의 이전의 출생; 고혈압; 적어도 140 mmHg의 수축 혈압; 적어도 90 mmHg의 심장확장 혈압; 적어도 99 mg/dL의 공복 혈당의 이전의 측정; 혈관 질환; 다낭성 난소 증후군; 또는 흑색가시세포증.
상기 대상체는 II형 당뇨병으로 진단될 수 있었다.
상기 대상체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 화합물에 의한 치료에 대해 난치성일 수 있고: GLP-1, 엑세나타이드-1, 엑센딘, 엑센딘 유사체, 엑센딘 작용제, 리라글루타이드, 엑세나타이드 LAR, DPP-4 길항제, GLP-1 수용체 작용제, 및 또 하나의 GLP-1 작용제; 또는 그와 같은 화합물은 상기 대상체에 대한 투여에 사용금지될 수 있다.
본 방법은 상기 대상체에게 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편 이외의 항-당뇨제 또는 항-비만제를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 항-당뇨제 또는 항-비만제는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 아밀린, 아밀린 작용제, 설포닐우레아, 칼시토닌, 글루카곤, PPAR-감마 작용제, GPL-1 수용체 작용제, 디펩티딜 펩티다아제 IV 억제제, 아밀린 유사체, 바이구아나이드, 도파민 D2 수용체 작용제, 메글리티나이드, 알파-글루코시다제 억제제, 항이상지질혈증 담즙산 봉쇄제, 엑센딘, 엑센딘 유사체, 엑센딘 작용제, 가스트린 억제 펩타이드 (GIP), 인크레틴 펩타이드, 인슐린, SGLT2 억제제, 글루코오스 재흡수 억제제, 페노파이브레이트, 피브레이트, 항-그렐린 항체 또는 항체 단편, 섬유아세포 성장 인자 수용체 (FGFR)-1(IIIb), FGFR-1(IIIc), 항체 또는 항체 단편, 및/또는 FGFR-4(IIIc), 항-CD38 항체 또는 항체 단편, 항-MIC-1 항체, 또는 MIC-1 결합 단편, 메트포르민 또는 전술된 것 중 어떤 것의 조합.
예시적인 구현예에서, 상기 항-당뇨제는 메트포르민이다.
본 방법은 체중 손실을 일으키는데 효과적일 수 있다.
투여된 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 유의미하게 생체내 인슐린 분비를 증가시킬 수 없고, 예를 들면, 유의미하게, 생체내 정상 생리적 수준 초과의 인슐린 분지를 증가시킬 수 없거나, 유의미하게, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편의 투여 전의 인슐린 분비의 수준에 대해 인슐린 분비를 증가시킬 수 없다.
투여된 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 췌장염의 증가된 발생정도 또는 췌장 염증과 연관된 마커 또는 사이토카인의 발현을 야기하지 않을 수 있다.
상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 약 0.1 내지 100.0 mg/수령 대상체의 체중 kg의 투여량으로 상기 대상체에게 투여될 수 있다.
상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 인간 항체일 수 있다. 상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 비-천연 발생일 수 있다. 상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 비-천연 발생 항체 단편일 수 있다. 상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 인간화된 항체 또는 그것의 단편일 수 있다. 상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 키메라성 항체일 수 있다.
상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 특이적으로 결합할 수 있고/거나 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항-인간 CGRP 항체와, 온전한 CGRP 폴리펩타이드 또는 그것의 단편 상의 동일하거나 중첩되는 선형 또는 형태적 에피토프(들)에의 결합에 대해 경쟁적일 수 있다: (a) 서열식별번호:2의 VL 및 서열식별번호:4의 VH를 포함하는 Ab1; (b) 서열식별번호:12의 VL 및 서열식별번호:14의 VH를 포함하는 Ab2; (c) 서열식별번호:22의 VL 및 서열식별번호:24의 VH를 포함하는 Ab3; (d) 서열식별번호:32의 VL 및 서열식별번호:34의 VH를 포함하는 Ab4; (e) 서열식별번호:42의 VL 및 서열식별번호:44의 VH를 포함하는 Ab5; (f) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab6; (g) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab7; (h) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab8; (i) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab9; (j) 서열식별번호:72의 VL 및 서열식별번호:74의 VH를 포함하는 Ab10; (k) 서열식별번호:82의 VL 및 서열식별번호:84의 VH를 포함하는 Ab11; (l) 서열식별번호:92의 VL 및 서열식별번호:94의 VH를 포함하는 Ab12; (m) 서열식별번호:102의 VL 및 서열식별번호:104의 VH를 포함하는 Ab13; 및 (n) 서열식별번호:112의 VL 및 서열식별번호:114의 VH를 포함하는 Ab14.
상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체에 함유된 적어도 하나, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 모두 6개의 CDR을 포함할 수 있다: (a) 서열식별번호:2의 VL 및 서열식별번호:4의 VH를 포함하는 Ab1; (b) 서열식별번호:12의 VL 및 서열식별번호:14의 VH를 포함하는 Ab2; (c) 서열식별번호:22의 VL 및 서열식별번호:24의 VH를 포함하는 Ab3; (d) 서열식별번호:32의 VL 및 서열식별번호:34의 VH를 포함하는 Ab4; (e) 서열식별번호:42의 VL 및 서열식별번호:44의 VH를 포함하는 Ab5; (f) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab6; (g) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab7; (h) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab8; (i) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab9; (j) 서열식별번호:72의 VL 및 서열식별번호:74의 VH를 포함하는 Ab10; (k) 서열식별번호:82의 VL 및 서열식별번호:84의 VH를 포함하는 Ab11; (l) 서열식별번호:92의 VL 및 서열식별번호:94의 VH를 포함하는 Ab12; (m) 서열식별번호:102의 VL 및 서열식별번호:104의 VH를 포함하는 Ab13; 및 (n) 서열식별번호:112의 VL 및 서열식별번호:114의 VH를 포함하는 Ab14.
상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 폴리펩타이드를 가질 수 있다: (a) 서열식별번호:2의 VL 및 서열식별번호:4의 VH를 포함하는 Ab1; (b) 서열식별번호:12의 VL 및 서열식별번호:14의 VH를 포함하는 Ab2; (c) 서열식별번호:22의 VL 및 서열식별번호:24의 VH를 포함하는 Ab3; (d) 서열식별번호:32의 VL 및 서열식별번호:34의 VH를 포함하는 Ab4; (e) 서열식별번호:42의 VL 및 서열식별번호:44의 VH를 포함하는 Ab5; (f) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab6; (g) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab7; (h) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab8; (i) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab9; (j) 서열식별번호:72의 VL 및 서열식별번호:74의 VH를 포함하는 Ab10; (k) 서열식별번호:82의 VL 및 서열식별번호:84의 VH를 포함하는 Ab11; (l) 서열식별번호:92의 VL 및 서열식별번호:94의 VH를 포함하는 Ab12; (m) 서열식별번호:102의 VL 및 서열식별번호:104의 VH를 포함하는 Ab13; 및 (n) 서열식별번호:112의 VL 및 서열식별번호:114의 VH를 포함하는 Ab14.
상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체를 포함한다: (a) 서열식별번호:2의 VL 및 서열식별번호:4의 VH를 포함하는 Ab1; (b) 서열식별번호:12의 VL 및 서열식별번호:14의 VH를 포함하는 Ab2; (c) 서열식별번호:22의 VL 및 서열식별번호:24의 VH를 포함하는 Ab3; (d) 서열식별번호:32의 VL 및 서열식별번호:34의 VH를 포함하는 Ab4; (e) 서열식별번호:42의 VL 및 서열식별번호:44의 VH를 포함하는 Ab5; (f) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab6; (g) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab7; (h) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab8; (i) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab9; (j) 서열식별번호:72의 VL 및 서열식별번호:74의 VH를 포함하는 Ab10; (k) 서열식별번호:82의 VL 및 서열식별번호:84의 VH를 포함하는 Ab11; (l) 서열식별번호:92의 VL 및 서열식별번호:94의 VH를 포함하는 Ab12; (m) 서열식별번호:102의 VL 및 서열식별번호:104의 VH를 포함하는 Ab13; 및 (n) 서열식별번호:112의 VL 및 서열식별번호:114의 VH를 포함하는 Ab14.
항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 may comprise 인간, 키메라성 또는 인간화된 항체를 포함할 수 있다. 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 may comprise Fab, F(ab')2, scFv, IgNar, 또는 MetMab 또는 또 하나의 1가 항체 단편을 포함할 수 있다.
또 하나의 측면에서, 본 개시내용은, 예를 들면, 이전의 단락에서 인용된 바와 같이 본원에 기재된 바와 같은 방법에 사용하기에 적합한 조성물을 제공하고, 상기 조성물은 효과적인 양의 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편 및 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편 이외의 항-당뇨병제 또는 항-비만제를 포함할 수 있다. 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 본원에서 기재된 것일 수 있고, 예를 들면, 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 특이적으로 결합할 수 있고, 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항-인간 CGRP 항체와, 온전한 CGRP 폴리펩타이드 또는 그것의 단편 상의 동일하거나 중첩되는 선형 또는 형태적 에피토프(들)에의 결합에 대해 경쟁적일 수 있고, 상기 항-인간 CGRP 항체에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 폴리펩타이드를 가질 수 있거나, 또는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항-인간 CGRP 항체를 포함할 수 있다: (a) 서열식별번호:2의 VL 및 서열식별번호:4의 VH를 포함하는 Ab1; (b) 서열식별번호:12의 VL 및 서열식별번호:14의 VH를 포함하는 Ab2; (c) 서열식별번호:22의 VL 및 서열식별번호:24의 VH를 포함하는 Ab3; (d) 서열식별번호:32의 VL 및 서열식별번호:34의 VH를 포함하는 Ab4; (e) 서열식별번호:42의 VL 및 서열식별번호:44의 VH를 포함하는 Ab5; (f) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab6; (g) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab7; (h) 서열식별번호:52의 VL 및 서열식별번호:54의 VH를 포함하는 Ab8; (i) 서열식별번호:62의 VL 및 서열식별번호:64의 VH를 포함하는 Ab9; (j) 서열식별번호:72의 VL 및 서열식별번호:74의 VH를 포함하는 Ab10; (k) 서열식별번호:82의 VL 및 서열식별번호:84의 VH를 포함하는 Ab11; (l) 서열식별번호:92의 VL 및 서열식별번호:94의 VH를 포함하는 Ab12; (m) 서열식별번호:102의 VL 및 서열식별번호:104의 VH를 포함하는 Ab13; 및 (n) 서열식별번호:112의 VL 및 서열식별번호:114의 VH를 포함하는 Ab14.
상기 항-당뇨병제 또는 항-비만제는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 아밀린, 아밀린 작용제, 설포닐우레아, 칼시토닌, 글루카곤, PPAR-감마 작용제, GPL-1 수용체 작용제, 디펩티딜 펩티다아제 IV 억제제, 아밀린 유사체, 바이구아나이드, 도파민 D2 수용체 작용제, 메글리티나이드, 알파-글루코시다제 억제제, 항이상지질혈증 담즙산 봉쇄제, 엑센딘, 엑센딘 유사체, 엑센딘 작용제, 가스트린 억제 펩타이드 (GIP), 인크레틴 펩타이드, 인슐린, SGLT2 억제제, 글루코오스 재흡수 억제제, 페노파이브레이트, 피브레이트, 메트포르민, 항-그렐린 항체 또는 항체 단편, 섬유아세포 성장 인자 수용체 (FGFR)-1(IIIb), FGFR-1(IIIc), 항체 또는 항체 단편, 및/또는 FGFR-4(IIIc), 항-CD38 항체 또는 항체 단편, 항-MIC-1 항체 또는 MIC-1 결합 단편, 또는 전술된 것 중 어떤 것의 조합. 예를 들면, 상기 다른 항-당뇨병제 또는 항-비만제는 메트포르민을 포함할 수 있다.
도 1a 내지 1d. 치료 전후의 혈당 및 혈장 인슐린 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. ANOVA 일원 + 던넷(Dunnett) 후 시험을 사용하는 ##　p<0.01 대 비히클. A: 혈당은 치료전 공급 상태로, 비히클, Ab14 및 메트포르민으로 치료 후 18시간 및 비히클 및 Ab14로 치료 후 42시간에 측정했다. B: 혈장 인슐린은 치료전 공급 상태로, 메트포르민으로 치료 후 18시간 및 비히클 및 Ab14로 치료 후 42시간에 측정했다. C: HOMA-IR (인슐린 내성 지수 = 글루코오스(mM) X 인슐린(μU/mL)/22.5)은 치료 전, 메트포르민으로 치료 후 18시간 및 비히클 및 Ab14로 치료 후 42시간에 계산했다. D: 혈당은 클램프 직전(메트포르민으로 치료 후 24시간 및 비히클 및 Ab14로 치료 후 48시간)에 단식 상태로 측정했다. 범례: 각 그룹에서 가장 왼쪽 바, 비히클; 각 그룹에서 중간 바, Ab14 치료; 각 그룹에서 가장 오른쪽 바, 메트포르민 치료.
도 2a 내지 2c. 클램프 절차 동안 글루코오스 주입 속도 진화(A), 정상 상태 동안 혈당 평균(B) 및 클램프 말기에 혈장 인슐린 수준(C). 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 본페로니 후 시험(Bonferroni's post test)을 사용하는 ANOVA 이원을 사용하는 A: *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 비히클. 도 2a의 범례: 상부 라인, 메트포르민 치료; 중간 라인, Ab14 치료; 하부 라인, 비히클 치료(180분 시점에). 도 2b 내지 2c의 범례: 각 그룹에서 가장 왼쪽 바, 비히클; 각 그룹에서 중간 바, Ab14 치료; 각 그룹에서 가장 오른쪽 바, 메트포르민 치료.
도 3. 측정된 글루코오스 유량. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 던넷 후 시험을 사용하는 ANOVA 일원을 사용하는 #　p<0.05 대 비히클. 클램프는 6시간 단식하에 수행했다. 0.3U/Kg/h 인슐린 및 3H-글루코오스를 180분 동안 살포했다. 글루코오스 주입 속도, 전체 신체 턴 오버, 간 글루코오스 생산((HGP), 당분해 및 글리코겐 합성 평균은 정상 상태에 상응하는 140 내지 180분에 계산했다. 범례: 각 그룹에서 가장 왼쪽 바, 비히클; 각 그룹에서 중간 바, Ab14 치료; 각 그룹에서 가장 오른쪽 바, 메트포로민 치료.
도 4a 내지 4c. 생체내 조직 특이적 글루코오스 이용. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 던넷 후 시험과 함께 ANOVA 일원을 사용하는 #　p<0.05, ##　p<0.01 대 비히클. A: 정소상체 화이트 지방 조직(EWAT), 서혜 화이트 지방 조직(IWAT), 및 피부(음성 대조군으로서)에서 글루코오스 이용. B: 혼합된 광근 측면 근육(VL) 및 당분해 장지신근 근육(EDL)에 글루코오스 이용. C: 산화적 가자미근 및 심장 정점에서 글루코오스 이용. 범례: 각 그룹에서 가장 왼쪽 바, 비히클; 각 그룹에서 중간 바, Ab14 치료; 각 그룹에서 가장 오른쪽 바, 메트포르민 치료.
도 5. 고지방 푸룩토오스 식이를 공급한 동물 또는 정상 사료를 공급한 대조군 동물에 대한 경시적 평균 체중. 범례: 상부 라인, 고지방 고푸룩토오스 식이; 하부 라인, 대조군 사료.
도 6. 도 5에 제시된 동물 그룹에 대한 경시적 체중 증가. 상부 라인: 고지방 고푸룩토오스 식이; 하부 라인: 대조군 사료. 범례: 상부 라인, 고지방 고푸룩토오스 식이; 하부 라인, 대조군 사료.
도 7. Ab14(10, 30 또는 100mg/kg) 또는 메트포르민으로 치료 후 고지방 식이 공급 동물 뿐만 아니라 비히클 처리된 동물 및 정상 사료를 공급한 대조군 동물의 경시적 체중 증가. 치료는 0일째에 투여했다. 그래프 상의 라인은 7일에 최저로부터 최고 순으로 다음과 같다: 정상 사료(NC) + 비히클; 고지방 식이(HFD) + 메트포르민; HFD + Ab14 30mg/kg; HFD + Ab14 10mg/kg; HFD + 비히클; HFD + Ab14 100mg/kg.
도 8a. 도 7에 제시된 동물의 음식 섭취. 그래프 상의 라인은 7일에 최저로부터 최고 순으로 다음과 같다: 고지방 식이(HFD) + 메트포르민; HFD + Ab14 30mg/kg; HFD + Ab14 10mg/kg; HFD + Ab14 100mg/kg; HFD + 비히클; 정상 사료 (NC) + 비히클.
도 8b. 도 7에 제시된 동물의 누적 음식 섭취. 범례: 왼쪽으로부터 오른쪽으로 바의 순서는 다음과 같다: 정상 사료(NC) + 비히클; 고지방 식이(HFD) + 비히클; HFD + Ab14 10mg/kg; HFD + Ab14 30mg/kg; HFD + Ab14 100mg/kg; HFD + 메트포르민.
도 9. Ab14(10, 30 또는 100mg/kg) 또는 메트포르민으로 치료 후 고지방 식이 공급 동물 뿐만 아니라 비히클 처리된 동물 및 정상 사료 공급 대조군 동물의 단식 혈당. 치료는 0일째에 투여했다. 범례: 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 바의 순서는 도 8b에서와 같다.
도 10. Ab14(10, 30 또는 100mg/kg) 또는 메트포르민으로 치료 후 고지방 식이 공급 동물 뿐만 아니라 비히클 처리된 동물 및 정상 사료 공급 대조군 동물의 단식 혈장 인슐린. 치료는 0일째에 투여했다. 범례: 각 그룹에서 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 바의 순서는 도 8b에서와 같다.
도 11. Ab14 또는 메트포르민으로 치료 15일 후 수행된 글루코오스 클램프 전 및 동안 혈장 인슐린(상부 패널) 및 C 펩타이드(하부 왼쪽 및 오른쪽 패널). 동물은 치료 전 6주 동안 고지방 식이를 공급했다. 범례: 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 바의 순서는 도 8b에서와 같다.
도 12. Ab14(10, 30 또는 100mg/kg) 또는 메트포르민으로 치료 후 고지방 식이 공급 동물 뿐만 아니라 비히클 처리된 동물 및 정상 사료 공급 대조군 동물의 HOMA-IR. 치료는 0일째에 투여했다. 범례: 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 바의 순서는 도 8b에서와 같다.
도 13. Ab14 또는 메트포르민으로 치료 15일 후 뿐만 아니라 비히클 처리된 동물 및 정상 사료 공급 대조군 동물에 대해 수행된 글루코오스 클램프의 글루코오스 주입 속도. 동물은 치료 이전 6주 동안 고지방 식이를 공급했다. 글루코오스 클램프는 2개의 상이한 인슐린 주입 속도(5mU/kg/분, 약 70 내지 100분에 달성된 정상 상태, 및 15mU/kg/분, 약 170 내지 210분에 달성된 정상 상태)에서 수행되었다. 범례: 원형 마커, 정상 사료; 중간 정사각형 마커, 고지방 식이(HFD) + 비히클; 상향 삼각형, HFD + Ab14 10mg/kg; 하향 삼각형, HFD + Ab14 30mg/kg; 다이아몬드, HFD + Ab14 100mg/kg; 큰 정사각형, HFD + 메트포르민. 제시된 오차 바는 평균 ± SEM이다.
도 14. 도 13에 제시된 글루코오스 클램프 실험을 위한 정상 상태 동안 평균 글루코오스 주입 속도. 글루코오스 주입 속도는 낮은 및 높은 인슐린 주입 속도(5mU/kg/분, 약 70 내지 100분에 달성된 정상 상태, 및 15mU/kg/분, 약 170 내지 210분에 달성된 정상 상태)에 대해 제시된다. 각 그룹에서 바의 순서는 도 8b에서와 같다.
도 15. 도 13에 제시된 글루코오스 클램프 실험 동안 평균 글루코오스 유량. 결과는 약 70 내지 100분에 달성된 정상 상태인 낮은(5mU/kg/분) 인슐린 주입 속도에 대해 제시된다. 범례: 각 그룹에서 왼쪽으로부터 오른쪽으로의 바의 순서는 다음과 같다: 고지방 식이(HFD)+ 비히클; HFD + Ab14 10mg/kg; HFD + Ab14 30mg/kg; HFD + Ab14 100mg/kg; HFD + 메트포르민.
도 16. 도 13에 제시된 글루코오스 클램프 실험 동안 평균 글루코오스 유량. 결과는 약 170 내지 210분에 달성된 정상 상태인 높은(15mU/kg/분) 인슐린 주입 속도에 대해 제시된다. 범례: 각 그룹에서 바의 순서는 도 15에서와 같다.
도 17. 수컷 스프래그-다우리 랫트에 i.v. 볼러스 주사 후 항-CGRP 항체(특이적으로, Ab6)의 평균 독성동력학 프로파일. 경시적 혈장 농도는 168시간(7일) 동안 제시되어 이하 실시예에서 수행된 바와 같이 매주 투여를 지지한다. 범례: 정사각형 마커, Ab14 10mg/kg/주; 상향 삼각형 마커, Ab14 30mg/kg/주; 다이아몬드 마커, Ab14 100mg/kg/주.
도 18a 내지 18d. 8-주령 ZDF 랫트에서 6시간 단식 HOMA-IR(A), 혈당(B), 혈장 인슐린(C) 및 체중(D). 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다.
# p<0.05; ### p<0.001 대 비히클 ZDF(맨 휘트니). 도 18a 내지 18d에서 (왼쪽으로부터 오른쪽으로의) 바의 순서는 다음과 같다: (1) 비히클 1 및 비히클 2 처리된 ZDF 마른 랫트; (2) 비히클 1 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; (3) Ab14 20mg/kg/주 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; (4) Ab14 60mg/kg/주 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; (5) 비히클 1 및 메트포르민("met") 200mg/kg/1일 처리된 ZDF 랫트; (6) 비히클 1 및 피오글리타존 10mg/kg/1일 처리된 ZDF 랫트; (7) Ab14 20mg/kg/주 및 메트포르민 200mg/kg/1일 처리된 ZDF 랫트; 및 (8) Ab14 60mg/kg/주 및 메트포르민 200mg/kg/1일 처리된 ZDF 랫트.
도 19a-19b. 체중(A) 및 체중 증가(B) 후속조치. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다.
$ p<0.05 (도 19a: 8일에 피오글리타존 처리된 랫트; 28일에 Ab14 60mg/kg/wk + 메트포르민 처리된 랫트; 도 19b: 22일 및 25일에 Ab14 60mg/kg/wk + 메트포르민 처리된 랫트); $$ p<0.01 (도 19b: 28일에 Ab14 60mg/kg/wk + 메트포르민 처리된 랫트); $$$ p<0.001 대 비히클 ZDF(도 19a: 11 내지 28일 사이 모든 시점에서 피오글리타존 처리된 랫트; 모든 시점에서 비히클 처리된 ZDF 마른 랫트)(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험).
도 20a-20b. 음식 섭취 후속조치(A) 및 누적 음식 소비(B). 결과는 평균 ±SEM으로서 표현된다. 도 20b에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
$ p<0.05 (도 20a: 20일 및 22일에 피오글리타존 처리된 랫트); $$ p<0.01(도 20a: 15일에 피오글리타존 처리된 랫트); $$$ p<0.001 대 비히클 ZDF(도 20a: 모든 시점에서 비히클 처리된 ZDF 마른 랫트)(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
## p<0.01 대 비히클 ZDF (맨 휘트니)
도 21a 내지 21d. 6시간(0일) 또는 밤새(12, 19, 26일) 단식 조건하에 혈당(A), 혈장 인슐린(B), HOMA-IR(C) 및 C 펩타이드(D). 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 21a 내지 21d의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
# p<0.05; ### p<0.001 대 비히클 ZDF (맨 휘트니)
* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 대 비히클 ZDF (크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) + 던(Dunn's) 후 시험)
++ p<0.01; 대 메트포르민 그룹 및 AB14 20mg/kg + 메트포르민 그룹(1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스(Newman-Keuls) 후 시험)
$ p<0.05; $$ p<0.01 대 비히클 ZDF(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 22. 프룩토사민 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 22의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
### p<0.001 대 비히클 ZDF (맨 휘트니)
** p<0.01 대 비히클 ZDF (크루스칼-왈리스 + 던 후 시험)
$$$ p<0.001 대 비히클 ZDF (2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 23. HbA1c 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 23의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
### p<0.001 대 비히클 ZDF (맨 휘트니)
*** p<0.001 대 비히클 ZDF (크루스칼-왈리스 + 던 후 시험)
+ p<0.05; 대 AB14 60mg/kg 그룹 (1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후 시험)
$ p<0.05; $$ p<0.01; $$$ p<0.001 대 비히클 ZDF (2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 24a 내지 24b. 6-시간(0일) 또는 밤새(12, 19 및 26일) 단식 조건하의 혈장 트리글리세라이드(A) 및 유리 지방산(B) 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 24a 내지 24d의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
### p<0.001 대 비히클 ZDF (맨 휘트니)
* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 대 비히클 ZDF (크루스칼-왈리스 + 던 후 시험)
+ p<0.05; ++ p<0.01; +++ p<0.001 대 메트포르민 그룹 또는 Ab14 60mg/kg + 메트포르민 그룹(1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후 시험)
$ p<0.05; $$ p<0.01; $$$ p<0.001 대 비히클 ZDF(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 25a 내지 25c. 혈장 총 콜레스테롤(A), HDL-콜레스테롤(B) 및 비 HDL-콜레스테롤(C) 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 25a 내지 25c의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
# p<0.05; ## p<0.01; ### p<0.001 대 비히클 ZDF (맨 휘트니)
* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 대 비히클 ZDF (1-원 ANOVA + 던넷 후 시험)
+ p<0.05; ++ p<0.01 대 메트포르민 그룹 또는 Ab14 + 메트포르민 그룹(1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후 시험)
$$ p<0.01 대 비히클 ZDF(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 26a 내지 26c. 0일째에 대한 혈장 총 콜레스테롤(A), HDL-콜레스테롤(B) 및 비 HDL-콜레스테롤(C) 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 26a 내지 26c의 각 그룹에서의 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
# p<0.05; ## p<0.01; ### p<0.001 대 비히클 ZDF (쌍으로 되지 않은 t-시험)
* p<0.05; ** p<0.01 대 비히클 ZDF(1-원 ANOVA + 던넷 후 시험)
+ p<0.05; 대 메트포르민 그룹(1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후 시험)
$ p<0.05; $$$ p<0.001 대 비히클 ZDF(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 27a 내지 27c. 밤새 단식 조건하에 26일째에 경구 당부하 검사(A), T0에서 측정된 혈당으로부터 계산된 곡선하 면적(AUC)(B) 및 상대 값 대 T0으로부터 계산된 곡선하 면적(AUC)(C). 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 27b 및 28c의 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
$$$ p<0.001 대 비히클 ZDF(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)(도 27a: 비히클-처리된 ZDF 마른 랫트 및 피오글리타존-처리된 랫트에 대해 제시된 모든 시점).
### p<0.001 대 비히클 ZDF(맨 휘트니)
*** p<0.001 대 비히클 ZDF(크루스칼-왈리스 + 던 후 시험)
도 28a 및 28b. 26일째에 경구 당부하 검사 동안 혈장 인슐린(A) 및 C 펩타이드(B) 수준. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 28a 및 28b의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
### p<0.001 대 비히클 ZDF(맨 휘트니)
* p<0.05 대 비히클 ZDF(크루스칼-왈리스 + 던 후 시험)
$$ p<0.01; $$$ p<0.001 대 비히클 ZDF(2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 29a 및 29b. 26일째에 경구 당부하 검사 동안 혈장 인슐린(A) 및 C 펩타이드(B) 수준의 T-60으로부터의 상대적 발현. 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 29a 및 29b의 각 그룹에서 바의 순서는 도 18a 내지 18d에서와 동일하다.
# p<0.05; ### p<0.001 대 비히클 ZDF(맨 휘트니)
* p<0.05 대 비히클 ZDF(1-원 ANOVA + 던넷 후 시험)
+ p<0.05; 대 메트포르민 그룹 (1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후 시험)
$ p<0.05; $$ p<0.01 대 비히클 ZDF (2-원 ANOVA + 본페로니 후 시험)
도 30a 내지 30c. 췌장 함량: 프로인슐린(A), 인슐린(B) 및 프로인슐린/인슐린 비(C). 결과는 평균 ± SEM으로서 표현된다. 도 30a 내지 30c에서 (왼쪽으로부터 오른쪽으로의) 바의 순서는 다음과 같다: 비히클 1 및 비히클 2 처리된 ZDF 마른 랫트; 비히클 1 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; Ab14 60mg/kg/주 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; 비히클 1 및 메트포르민 200mg/kg/1일 처리된 ZDF 랫트; 및 Ab14 60mg/kg/주 및 메트포르민 200mg/kg/1일 처리된 ZDF 랫트.
# p<0.05; ### p<0.001 대 비히클 ZDF(맨 휘트니)
* p<0.05 대 비히클 ZDF(1-원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후 시험)
도 31. 췌장 면역조직화학 분석: 인슐린 표지 정량화. 도 31에서 (왼쪽으로부터 오른쪽으로의) 바의 순서는 다음과 같다: 비히클 1 및 비히클 2 처리된 ZDF 마른 랫트; 비히클 1 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; Ab14 60mg/kg/주 및 비히클 2 처리된 ZDF 랫트; 비히클 1 및 메트포르민 200mg/kg/일 처리된 ZDF 랫트; 및 Ab14 60mg/kg/주 및 메트포르민 200mg/kg/일 처리된 ZDF 랫트.
본 발명자들은, 항-CGRP 항체가 화이트 지방 조직에서 글로코오스 이용률의 임의의 분명한 증가 없이 메트포르민과 비교시 말초 근육에서 글루코오스 이용을 유의미하게 증가시켰다는 것을 발견했다. 또한, 본원에 기재된 항-CGRP 항체는 심장에서 글루코오스 이용을 증가시킨 반면, 메트포르민은 심장에서 글로코오스 이용률을 감소시켰다. 추가로, 본원에 기재된 항-CGRP 항체는 메트포르민의 투여로부터 수득된 효과와 유사하게 간 글로코오스 생산을 억제했다.
강력한 기능적 길항제인 항-CGRP 항체, Ab14는 정상 랫트에서 인슐린 민감성 및 혈당 조절에 대한 이의 효과를 결정하기 위해 정상 및 변경된 글로코오스 대사의 임상전 동물 모델(실시예 1), 대사 증후군을 야기하기 위해 6주 동안 고지방/고푸룩토오스 식이가 공급된 고인슐린혈증이지만, 정상혈당성 식이-유도 비만(DIO) 랫트(실시예 2) 및 전당뇨병성(고인슐린혈증, 정상혈당) 상태에서 명백하게 당뇨병(저인슐린혈증, 고혈당) 상태로 진행중이었던 주커 당뇨병 지방(ZDF) 랫트(실시예 3)에서 평가했다.
실시예 1에서, 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 연구는 정상혈당, 정상인슐린혈증이고, 정상 전신 및 조직 특이적 인슐린 민감성을 갖는 정상 랫트에서 전신 인슐린 민감성 뿐만 아니라 특이적 조직의 인슐린 민감성에 대한 이의 효과를 결정하기 위해 Ab14로 수행했다. Ab14를 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 절차 직전 48시간에 정상 랫트에게 단일 100mg/kg 투여로서 정맥내 투여했다. 클램프 절차 직전에 측정된 혈장 글루코오스 및 인슐린 수준의 평가로부터의 결과는, Ab14가 혈장 글루코오스 수준을 변경하지 않고 비히클 처리된 대조군에 비해 혈장 인슐린 수준을 감소시켰다는 것을 나타냈다. HOMA-IR에서 생성되는 감소는 전신 인슐린 민감성의 개선을 나타냈다.
고인슐린혈증-정상혈당 클램프 절차는 CGRP 길항작용에 의한 전신 인슐린 민감성에서 이러한 개선을 확인했고, 이때, 정상 상태에서, 글루코오스 주입 속도 및 전신 글루코오스 턴오버 (이용) 속도 모두가 비히클 처리된 대조군에 비해 상승되었다. 일정한 인슐린 주입과 함께 증가된 글루코오스 주입 속도 및 전신 글루코오스 턴오버는 증가된 전신 인슐린 민감성의 지표였다.
글루코오스 주입 속도 및 전신 글루코오스 턴오버의 증가와 일치하여, 당분해 및 글리코겐 합성을 위한 간 글루코오스 이용은 비히클 처리된 대조군에 비해 Ab14에 의해 증가되었고, 간 글루코오스 생산은 감소되었다. 이러한 관찰은 에너지 생성 및 저장 둘 다를 위한 내재화된 글루코오스의 더 큰 공급의 증간된 간 이용을 생성하면서 동시에 드노보 간 글루코오스 생산을 억제하는 CGRP 길항작용에 의한 증가된 간 인슐린 민감성의 지표이다.
CGRP 길항작용은 또한 당분해 뿐만 아니라 산화적 골격근에서 글루코오스 이용을 증가시켰다(외측광근, 혼합된 당분해 + 산화성의 지표; 장지신근, 당분해의 지표, 및 가자미근, 산화성의 지표). 글루코오스 이용의 가장 큰 증가는 혼합된 대사성 외측광근에서 발생했다. 이러한 관찰은 CGRP 길항작용에 의해 야기된 증가된 골격근 인슐린 민감성의 지표이다. CGRP 길항작용은 또한 심장 글루코오스 이용을 증가시켰다. 대조적으로, 내장 또는 피하 지방 데포에서 글루코오스 이용 속도는 영향을 받지 않아 CGRP 길항작용이 실질적으로 화이트 지방 조직에서 인슐린 민감성을 증가시키지 않았음을 시사한다.
상기 언급된 바와 같이, 이 연구에 사용된 동물은 이러한 동물에서 인슐린 민감성의 개선을 증명하기 더 어렵게 하는 정상 전신 및 조직 특이적 인슐린 민감성을 갖는 정상혈당 랫트였다. 따라서, 이 연구에서 평가된 개별적 종점 중 일부에서 개선이 통계적 유의도에 달하지 않았지만, 그들이 했던 것과 동일한 방향으로 기울었다는 관찰은 증가된 연구력이 추가의 측정된 파라미터가 통계적 유의도에 도달하도록 한다는 것을 암시한다. 또한, 일반적으로 실험 동물에서 수행된 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 연구 대 임상 세트에서 수행된 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 연구의 결과의 고도의 번역이 존재했기 때문에, 이러한 관찰은 인간에서 전신 및 조직 특이적 인슐린 민감성을 향상시키는 CGRP 길항작용의 가능성을 시사한다.
실시예 2에서, 인슐린 내성 동물에서 간 및 말초 인슐린 민감성에 대한 Ab14의 만성 투여에 의한 CGRP 길항작용의 효과는 고인슐린혈증 및 인슐린 내성이지만 고지방/고푸룩토오스 식이의 장기간 공급에 의해 고혈당은 아니도록 한 랫트에서 평가했다. 랫트는 대사 증후군을 야기하기 위해 화합물 투여의 개시 전 7주 동안 69% 지방 및 14% 푸룩토오스를 함유하는 식이를 공급했다. 7주 식이 치료 기간 말기에, 랫트는 계속 고지방/고푸룩토오스 식이를 투여했고, 또한 Ab14를 0mg/kg(비히클), 10mg/kg, 30mg/kg, 또는 100mg/kg의 용량으로 2주 동안 1주일에 한번 정맥내 투여했다.
고지방 식이 공급 비히클 처리된 대조군 그룹과 비교할 때, CGRP 길항작용은 음식 소비 또는 체중에 대한 어떤 효과도 갖지 않아 이하 평가된 추가의 파라미터에 대한 CGRP 길항작용의 효과가 칼로리 제한 또는 체중 손실의 결과가 아니었다는 것을 나타낸다.
치료 기간 말기에, Ab14의 모든 용량은 비히클 처리된 대조군에 비해 HOMA-IR을 감소시키고, 이는 전신 인슐린 민감성 개선의 지표이다. 이러한 HOMA-IR의 감소는 주로 Ab14의 모든 용량에서 발생된 혈장 인슐린 수준의 감소에 기인했다. 혈장 인슐린의 감소는 증가된 인슐린 분해보다 감소된 인슐린 생산의 결과였는데, 이는 췌장 인슐린 합성의 바이-생성물인 혈장 C-펩타이드가 혈장 인슐린의 감소와 함께 감소되었기 때문이다. 혈장 글루코오스 수준은 Ab14의 낮은 두 용량에 의해 단지 약간 감소되었지만, Ab14의 100mg/kg 용량에 의해 비히클 처리된 대조군에 비해 실질적으로 감소되었다.
치료 최종일 직후, 2단계 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 절차를 첫째 생리학적 양의 인슐린의 주입, 둘째 과생리학적 인슐린 농도를 사용하여 수행했다. 모두 3개 용량의 Ab14는 생리학적 및 과생리학적 인슐린 주입 농도 둘 다 후에 비히클 처리된 대조군에 비해 정상 상태 글루코오스 주입 속도를 증가시켰다. 이는 전신 인슐린 민감성의 개선과 일치한다. 모두 3개 용량의 Ab14는 또한 전신 글루코오스 턴오버 (이용) 속도를 증가시키고, 당분해 및 글리코겐 합성을 위한 간 글루코오스 이용을 증가시키고, 전신 및 간 인슐린 민감성 둘 다의 개선과 일치하는 생리학적 인슐린 농도의 주입 후 비히클 처리된 대조군에 비해 간 글루코오스 생산을 억제했다. 간 글루코오스 생산은 또한 과생리학적 인슐린 농도의 주입 후 완전히 억제되었다.
정상 랫트에서 CGRP 길항작용의 급성 효과(실시예 1) 및 정상혈당, 고인슐린혈증 인슐린 내성 랫트에서 이의 만성 효과(실시예 2) 사이의 유사성은 확립된 인슐린 내성을 치료하기 위해 만성적으로 기능하는 CGRP 길항작용의 능력을 나타낸다. 또한, 상기에서 언급된 바와 같이, 실험 동물에서 수행된 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 연구 대 임상 세팅에서 수행된 고인슐린혈증-정상혈당 클램프 연구 결과의 고도의 번역이 존재하기 때문에, 이들 관찰은 전당뇨병 또는 대사 증후군을 갖는 인슐린 내성 인간에서 전신 및 조직 특이적 인슐린 민감성을 개선시키는 CGRP 길항작용의 가능성을 시사한다. 최종적으로, 이러한 정상혈당 동물에서 혈장 글루코오스 수준을 감소시키는 CGRP 길항작용의 능력은, 비록 단지 최고 용량에서 평가되었지만, 고혈당 환자에서 혈장 글루코오스 수준을 또한 감소시키는 CGRP 길항작용의 가능성을 시사한다.
실시예 3에서, 글루코오스 조절에 대한 Ab14의 만성 투여 효과는 전당뇨병(고인슐린혈증, 정상혈당) 상태로부터 명백히 당뇨병(저인슐린혈증, 고혈당) 상태로 진행중이었던 ZDF 랫트에서 평가했다. 이러한 동물은 전당뇨병을 발병시키고, 그들의 인슐린 내성의 발달을 보상하는 현저한 고인슐린혈증을 특징으로 하고, 7주령까지 고혈당증은 거의 또는 전혀 없었다. 이는 명백한 당뇨병으로 빠르게 진행하고, 췌장 베타 세포 부전의 결과로서 저인슐린혈증, 및 10 내지 12주령까지 현저한 고혈당증을 특징으로 했다.
8주령에, ZDF 랫트를 이들의 HOMA-IR에 따라서 스크리닝하고, 28일 동안 1주일에 한번 Ab14 20 또는 60mg/kg로 처리했다. 이 동물 모델에서 혈당 조절에 대한 CGRP 길항제 Ab14의 작용을 평가하는 것 이외에, 시판되는 약물 메트포르민(200mg/kg/일)과 함께 CGRP 길항작용의 효과도 또한 평가했다. 메트포르민 단독은 단식 혈당 상승의 부분적 예방, 혈장 인슐린 및 C-펩타이드 감소의 부분적 예방, 췌장 프로인슐린 수준 감소의 완전한 예방, 췌장 인슐린 수준 감소의 부분적 예방 및 고용량의 Ab14에 대해 상기한 것들과 유사한 정도의 췌장 소도 공포화, 과다형성 및 섬유증의 감소를 생성한다. 그러나, Ab14 및 메트포르민의 조합은 어느 하나의 화합물 단독보다 단식 혈당의 상승, 혈장 인슐린 및 C-펩타이드 수준의 감소, 췌장 프로인슐린 및 인슐린 수준의 감소, 및 췌장 소도 섬유증의 감소의 실질적으로 보다 큰 예방을 생성했다. 이는 메트포르민의 효과가 Ab14와 같은 CGRP 길항제에 의해 증대될 수 있다는 것을 시사한다.
추가로, Ab14 및 메트포르민의 조합은 치료 28일 후에 비히클 처리된 대조군에 비해 HbA1c 수준(헤모글로빈 당화반응의 마커)의 실질적인 감소 및 보다 적은 정도로 프룩토사민 수준(혈장 알부민 당화반응의 마커)의 감소를 유도했다. 이는 어느 하나의 제제 단독보다 Ab14 + 메트포르민의 조합에 의해 생성된 혈장 글루코오스 수준의 보다 큰 감소와 일치한다. 이러한 결과는, CGRP 길항제 및 메트포르민의 조합이 고혈당증-매개된 당뇨병성 합병증에 유리하게 영향을 미칠 수 있음을 시사한다.
유사하게, 고용량의 Ab14와 메트포르민의 조합은 연구 26일째에 수행된 경구 당부하 검사(oGTT) 동안 글루코오스 볼러스의 투여 후 비히클 처리된 동물에 비해 글루코오스 편위 및 글루코오스 AUC의 개선을 나타냈다. 또한, 연구 26일까지, 이러한 동물에서 베타 세포 파괴가 글루코오스 도전에 반응하여 인슐린 분비를 증가시키는 이들의 능력 지점을 지나 진행되었기 때문에, 2주 빨리 또는 완전 베타 세포 파괴 직전 또 하나의 시점에 수행된 oGTT보다 Ab14 + 메트포르민의 조합을 사용하여 글루코오스 편위 및 글루코오스 AUC의 더욱 더 실질적인 개선이 관찰될 수 있을 것으로 기대된다.
실시예 3에 사용된 ZDF 랫트는 인슐린 내성 전당뇨병성 상태에서 단지 수주의 시간 경과 동안 발생하는 완전 베타-세포 파괴를 갖는 명백한 당뇨병으로 빠르게 진행하는 매우 삼각한 당뇨병 진행 모델이다. 이는 질환 진행의 조절을 평가할 기회를 제한하여 이러한 동물에서 질환 진행의 화합물 관련 개선 및 베타-세포 보호를 증명하기 어렵게 한다. 따라서, 상기 개괄된 바와 같이 CGRP 길항제 Ab14에 의한 질환 진행에서 적당한 지연의 임의의 증명은 임상에서 질환의 진행에 또한 영향을 미칠 가능성을 시사한다. 또한, CGRP 길항제와 메트포르민의 조합을 통해 전반적인 치료 효능을 개선시키는 능력은 또한 임상에서 병용 요법의 개선된 효능을 지지한다.
본원에 제시된 실시예의 결과는, CGRP 길항작용이 전신 인슐린 민감성, 간 인슐린 민감성, 및 골격근 인슐린 민감성을 향상시키는 능력을 갖는다는 것을 나타낸다. 이러한 개선은 정상인슐린성 및 정상혈당이고 정상 인슐린 민감성을 갖는 정상 동물에서 뿐만 아니라 고인슐린성이지만 아직 고혈당은 아닌 인슐린 내성 동물에서 급성적으로 또는 만성적으로 관찰될 수 있다. 이러한 결과는, CGRP 길항작용이 대사 증후군, 전당뇨병 또는 다른 전당뇨병성 상태를 갖는 환자에서 존재하는 인슐린 내성을 감소시켜야 하고, 추가로 CGRP 길항작용이 이러한 질환의 명백한 당뇨병으로의 진행을 늦출 수 있다는 것을 나타낸다.
또한, 췌장 인슐린 분비를 감소시킴으로써 인슐린 내성 동물에 존재하는 고인슐린혈증을 감소시키는 CGRP 길항제 Ab14의 능력은, Ab14가 인슐린 내성 동물의 췌장을 휴지되도록 함으로써 췌장 베타-세포 스페어링 효과를 가질 수 있음을 시사한다. 이는 대사 증후군, 전당뇨병 및 다른 전당뇨병성 상태의 임상에서 명백한 당뇨병으로의 진행을 추가로 지연시킬 수 있다.
더욱이, 인슐린 내성 고인슐린혈증이지만 정상혈당인 랫트에서 혈장 글루코오스 수준을 감소시키고, ZDF 랫트에서 전당뇨병으로부터 명백한 당뇨병으로의 진행을 늦추고, 인슐린 생산을 증가시키는 잔여 능력을 거의 또는 전혀 갖지 않는 명백하게 당뇨병성 동물에서 혈장 글루코오스 수준의 감소를 유지시키는 Ab14의 능력은, CGRP 길항작용이 상기 개괄된 전당뇨병성 상태에서 뿐만 아니라 명백한 당뇨병에서 질환 진행에 영향을 미치는 능력을 가질 수 있음을 나타낸다.
따라서, 종합하면, 이러한 연구의 결과는 명백하게 Ab14와 같은 CGRP 길항제가 전당뇨병성 상태 환자 및 또한 발병성 또는 명백한 당뇨병 환자 모두에서 임상 세팅에서 인슐린 내성 및 비정상 글루코오스 조절에 유리하게 영향을 미칠 수 있다는 것을 나타낸다.
최종적으로, ZDF 랫트에서 메트포르민의 작용을 향상시키는 CGRP 길항제 Ab14의 능력은, Ab14-메트포르민 병용 요법이 전당뇨병성 상태 환자, 발병성 당뇨병 환자 및 명백한 당뇨병 환자를 치료하기 위한 Ab14 또는 메트포르민 단독에 비해 우수한 임상 효능일 가능성을 갖는다는 것을 시사한다.
정의
본 발명은 특정 방법, 프로토콜, 세포주, 동물 종 또는 속, 및 기재된 시약들에 제한되지 않으며, 따라서 이들은 달라질 수 있는 것으로 이해된다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 오로지 특정 구현예를 기술하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 제한하고자 한 것이 아니며, 본 발명의 범위는 첨부된 청구항에 의해서만 제한될 것으로 이해된다. 본원에 사용된 단수형("a", "및(and)" 및 "the")은 맥락상 명백하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 지시 대상들을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "세포"에 대한 참조는 복수의 이러한 세포들을 포함하고, "단백질"에 대한 참조는 하나 이상의 단백질 및 당업자에게 공지된 이의 등가물 등에 대한 참조를 포함한다. 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 명백히 달리 표현되지 않는 한, 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 나타낸다.
칼시토닌 유전자 관련된 펩타이드(CGRP): 본원에서 사용된 바와 같이, CGRP는 아메리칸 펩타이드스(American Peptides)(Sunnyvale CA) 및 바켐(Bachem)(Torrance, CA)에서 구입할 수 있는 다음 호모 사피엔스 CGRP-알파 및 호모 사피엔스 CGRP-베타 아미노산 서열을 포함한다:
CGRP -알파: ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2(서열식별번호: 281), 여기서 N-말단 페닐알라닌은 아미드화된다. 다르게 명시되는 경우를 제외하고, 일반적으로 "CGRP"에 대한 참조는 전형적으로 CGRP-알파를 의미한다. CGRP-알파는 αCGRP 또는 α-CGRP로서 상호교환적으로 지칭된다.
CGRP -베타: ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2(서열식별번호: 282), 여기서 N-말단 페닐알라닌은 아미드화된다; 그러나 또한 이러한 CGRP 아미노산 서열의 막-결합 형태, 아울러 이 서열의 돌연변이(뮤테인), 스플라이스 변이형, 아이소형, 오솔로그, 호모로그 및 변이형. CGRP-베타는 βCGRP 또는 β-CGRP로서 상호교환적으로 지칭된다.
정상혈당: 본 개시내용에서, 용어 정상혈당(normoglycemia 또는 euglycemia)은 정상 혈중 글루코오스 농도를 갖는 상태를 의미한다. 인간에서 예시적인 정상 혈당 농도는 단식 성인에서 70mg/dl 내지 99mg/dl이고, 식후 성인에서 70mg/dl 내지 140mg/dl이다. 지속된 정상혈당은 광범위한 기간 동안, 예를 들면, 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주일, 적어도 2주일, 적어도 1개월, 또는 그 이상 동안 정상혈당의 유지를 의미한다.
교배 적격(competent) 효모 종: 본 발명에서, 이는 배양에서 성장될 수 있는 임의의 2배체 또는 4배체 효모를 광범위하게 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 효모 종은 반수체, 2배체 또는 다른 다배체 형태로 존재할 수 있다. 주어진 배수성(ploidy)의 세포는 적절한 조건하에 그 형태로 무한대 세대 동안 증식할 수 있다. 2배체 세포는 또한 포자를 형성하여 반수체 세포를 형성시킬 수 있다. 순차적 교배는 2배체 균주의 추가의 교배 또는 융합을 통해 4배체 균주를 유도할 수 있다. 본 발명은 반수체 효모 뿐만 아니라, 예를 들면, 교배 또는 스페로플라스트(spheroplast) 융합에 의해 생성된 2배체 또는 다른 다배체 효모 세포의 사용을 고려한다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 교배 적격 효모는 아릭소지마 ( Arxiozyma ); 아스코보트리오지마(Ascobotryozyma); 씨테로마이세스(Citeromyces); 데바리오마이세스(Debaryomyces); 덱케라(Dekkera); 에레모테시움(Eremothecium); 이사트켄키아(Issatchenkia); 카자키스타니아(Kazachstania); 클루이베로마이세스(Kluyveromyces); 코다마에아(Kodamaea); 로데로마이세스(Lodderomyces); 파치솔렌(Pachysolen); 피치아(Pichia); 사카로마이세스(Saccharomyces); 사투르니스포라(Saturnispora); 테트라피시스포라(Tetrapisispora); 토루라스포라(Torulaspora); 윌리옵시스(Williopsis); 및 자이고사카로마이세스(Zygosaccharomyces) 속을 포함하는 사카로마이세타시애 ( Saccharomycetaceae ) 패밀리의 구성요소이다. 본 발명에 잠재적으로 유용한 다른 유형의 효모는 야로위아 (Yarrowia); 로도스포리디움 ( Rhodosporidium ); 칸디다(Candida ); 한세눌라(Hansenula); 필로바시움 ( Filobasium ); 스포리디오볼루스 ( Sporidiobolus ); 불레라(Bullera); 류코스포리디움 ( Leucosporidium ) 및 필로바시디엘라(Filobasidiella)를 포함한다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 상기 교배 적격 효모는 피치아(Pichia) 속의 구성원이다. 본 발명의 추가의 구현예에서, 피치아 ( Pichia ) 속의 교배 적격 효모는 하기 종 중의 하나이다: 피치아 파스토리스 ( Pichia pastoris ), 피치아 메타놀리카 (Pichia methanolica ) 및 한세눌라 폴리모르파 ( Hansenula polymorpha )(피치아 앙구스타 (Pichia angusta)). 본 발명의 예시된 구현예에서, 피치아 ( Pichia ) 속의 교배 적격 효모는 피치아 파스토리스 ( Pichia pastoris ) 종이다.
반수체 효모 세포: 이의 정상 게놈(염색체) 보체의 각 유전자의 단일 복사체를 갖는 세포
다배체 효모 세포: 이의 정상 게놈(염색체) 보체의 각 유전자의 하나 이상의 복사체를 갖는 세포
2배체 효모 세포: 전형적으로 2개의 반수체 세포의 융합 (교배) 과정에 의해 형성된, 이의 정상 게놈 보체의 필수적인 모든 유전자의 2개의 복사체(대립형질)를 갖는 세포
4배체 효모 세포: 전형적으로 2개의 반수체 세포의 융합 (교배) 과정에 의해 형성된, 이의 정상 게놈 보체의 필수적인 모든 유전자의 4개의 복사체(대립형질)를 갖는 세포. 4배체는 2, 3, 4개 또는 그 이상의 상이한 발현 카세트를 가질 수 있다. 이러한 4배체는 동종접합성 헤테로탈릭(heterothallic) a/a 및 알파/알파 2배체들의 선택성 교배에 의해 S. 세레비시애(S. cerevisiae)에서, 그리고 영양요구성 2배체들을 수득하기 위한 반수체의 순차적 교배에 의해 피치아(Pichia)에서 수득될 수 있다. 예를 들면, [met his] 반수체는 [ade his] 반수체와 교배되어 2배체 [his]를 수득할 수 있으며; [met arg] 반수체는 [ade arg] 반수체와 교배되어 2배체 [arg]를 수득할 수 있고; 그 다음 2배체 [his] x 2배체 [arg]에 의해 4배체 원영양체(prototroph)가 수득될 수 있다. 2배체 세포의 이점과 용도에 대한 기준은 4배체 세포에 또한 적용될 수 있음을 당업자는 인지할 것이다.
효모 교배: 2개의 반수체 효모 세포가 자연적으로 융합되어 하나의 2배체 효모 세포를 형성하는 과정.
감수분열: 2배체 효모 세포가 감축성(reductive) 분할을 하여 4개의 반수체 포자 생성물을 형성하는 과정. 각 포자는 그 다음 발아하여 반수체의 무성 성장 세포주를 형성할 수 있다.
선별 마커: 선별 마커는, 예를 들면, 형질전환 사건을 통하여 유전자를 제공받는 세포에서 성장 표현형(물리적 성장 특징)을 부여하는 유전자 또는 유전자 단편이다. 상기 선별 마커는 이 선별 마커 유전자를 제공받지 못한 세포는 성장할 수 없는 조건하에서 그 세포가 선택적 성장 배지에서 생존하고 성장할 수 있도록 한다. 선별 마커는 일반적으로 몇 가지 유형에 속하는데, 양성 선별 마커 유전자, 예를 들면, 항생제 또는 다른 약물, 2개의 온도 민감성 ("ts") 돌연변이체가 교배될 때 또는 ts 돌연변이체가 형질전환될 때 온도에 대한 내성을 세포에 부여하는 유전자; 음성 선별 마커 유전자, 예를 들면, 해당 생합성 유전자를 보유하지 않는 모든 세포가 필요로 하는 특정 영양분 없이 배지에서 성장할 수 있는 능력을 세포에 부여하는 생합성 유전자, 또는 야생형 유전자를 보유하지 않는 세포에 의해 성장하지 못하는 능력을 세포에 부여하는 돌연변이된 생합성 유전자 등을 포함한다. 적합한 마커는 ZEO; G418; LYS3; MET1; MET3a; ADE1; ADE3; URA3 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
발현 벡터: 이들 DNA 벡터는 표적 숙주 세포 내에서 외부 단백질의 발현을 위한 조작을 용이하게 하는 요소들을 함유한다. 편리하게는, 형질전환을 위한 서열의 조작 및 DNA의 생산이 먼저 박테리아 숙주, 예를 들면, E. 콜라이(E. coli)에서 실행되며, 일반적으로 벡터는 박테리아 복제 기점 및 적절한 박테리아 선별 마커를 포함하는, 이러한 조작을 용이하게 하기 위한 서열을 포함할 것이다. 선별 마커는 선택적 배양 배지에서 성장된 형질전환된 숙주 세포의 생존 또는 성장에 필요한 단백질을 코딩한다. 선택 유전자를 함유하는 벡터로 형질전환되지 않은 숙주 세포는 이 배양 배지에서 생존하지 못할 것이다. 전형적인 선택 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소에 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보완하거나, (c) 복합 배지로부터 이용할 수 없는 중요한 영양분을 공급하는 단백질을 코딩한다. 예시적인 벡터 및 효모의 형질전환 방법은, 예를 들면, 문헌[참조: Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000). "Methods in yeast genetics: A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual." Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press]에 기재되어 있다.
본 발명의 방법에 사용하기 위한 발현 벡터는 형질전환된 효모 균주를 식별하기 위한 선택가능한 영양요구성 또는 약물 마커를 포함하는 효모 특이적 서열을 추가로 포함할 것이다. 약물 마커는 효모 숙주 세포 내에서 벡터의 복사체 수를 증폭시키기 위해 추가로 사용될 수 있다.
관심 서열을 코딩하는 폴리펩타이드는 효모 세포에서 폴리펩타이드의 발현을 제공하는 전사 및 번역 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 이들 벡터 성분은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다: 인핸서 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열. 폴리펩타이드의 분비용 서열, 예를 들면, 신호 서열 등도 포함될 수 있다. 효모 복제 기점은 발현 벡터가 대개 효모 게놈 내로 통합되기 때문에 선택적이다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 관심의 폴리펩타이드는 효모 2배체 세포로부터 폴리펩타이드의 최적화된 분비를 제공하는 서열에 작동가능하게 연결되거나 융합된다.
핵산은 또다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때, "작동가능하게 연결된다". 예를 들면, 신호 서열의 DNA는 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전구단백질로 발현된다면, 폴리펩타이드의 DNA에 작동가능하게 연결되고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 주는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결된 DNA 서열이 연속적이고, 분비성 리더의 경우, 연속적이면서 리딩 프레임(reading frame) 내에 존재함을 의미한다. 그러나, 인핸서는 연속적일 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서 결찰에 의해 이루어지거나, 또는 대안으로 당업자들에게 친숙한 PCR/재조합 방법(Gateway® Technology; Invitrogen, Carlsbad California)에 의해 달성된다. 이러한 부위가 존재하지 않는다면, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커가 통상적인 실시에 따라 사용된다.
프로모터는 이들이 연결된 특정 핵산 서열의 전사 및 번역을 조절하는 구조적 유전자의 시작 코돈의 업스트림(5')(일반적으로 약 100 내지 1000bp 이내)에 위치한 미번역 서열이다. 이러한 프로모터는 몇 가지 부류에 속한다: 유도성, 항시성 및 억제성 프로모터(억제인자의 부재에 반응하여 전사 수준을 증가시킴). 유도성 프로모터는 배양 조건에서 일부 변화, 예를 들면, 영양분의 존재 또는 부재 또는 온도의 변화에 반응하여 이들의 조절하에 DNA로부터 증가된 전사 수준을 개시할 수 있다.
효모 프로모터 단편은 또한 상동성 재조합을 위한 부위 및 효모 게놈에서 동일한 부위로 발현 벡터를 통합시키기 위한 부위로서 작용할 수 있으며; 대안적으로 선별 마커가 상동성 재조합을 위한 부위로서 사용된다. 피치아 형질전환은 문헌[참조: Cregg 등 Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385,1985]에 기재되어 있다.
피치아로부터 적합한 프로모터의 예는 AOX1 및 프로모터(참조: Cregg 등 Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323 (1989)); ICL1 프로모터(참조: Menendez 등 Yeast 20(13):1097-108 (2003)); 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소 프로모터(GAP)(참조: Waterham 등 Gene 186(1):37-44 (1997)); 및 FLD1 프로모터(참조: Shen 등 Gene 216(1):93-102 (1998))를 포함한다. GAP 프로모터는 강력한 항시성 프로모터이고, AOX 및 FLD1 프로모터는 유도성이다.
다른 효모 프로모터는 ADH1, 알코올 탈수소효소 II, GAL4, PHO3, PHO5, Pyk, 및 이로부터 유도된 키메라 프로모터를 포함한다. 추가적으로, 비-효모 프로모터, 예를 들면, 포유동물, 곤충, 식물, 파충류, 양서류, 바이러스 및 조류 프로모터가 본 발명에서 사용될 수 있다. 가장 전형적으로 프로모터는 포유동물 프로모터(발현된 유전자에 잠재적으로 내인성임)를 포함하거나, 효모 시스템에서 효과적인 전사를 제공하는 효모 또는 바이러스 프로모터를 포함할 것이다.
관심 폴리펩타이드는 직접적으로 재조합에 의해 생성될 수 있을 뿐만 아니라 이종성 폴리펩타이드, 예를 들면, 신호 서열 또는 성숙 단백질 또는 폴리펩타이드의 N-말단에서 특이적 절단 부위를 보유하는 다른 폴리펩타이드와의 융합 폴리펩타이드로서 생성될 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있거나, 또는 이는 벡터에 삽입되는 폴리펩타이드 코딩 서열의 일부일 수 있다. 선택된 이종성 신호 서열은 바람직하게는 해당 숙주 세포 내에서 이용가능한 표준 경로 중 하나를 통하여 인식되고 처리되는 서열이다. S . 세레비시애 (S. cerevisiae ) 알파 인자 프레-프로(pre-pro) 신호는 P. 파스토리스(P. pastoris)의 다양한 재조합 단백질의 분비에 효과적인 것으로 증명되었다. 다른 효모 신호 서열은 알파 교배 인자 신호 서열, 인버타제 신호 서열, 및 다른 분비된 효모 폴리펩타이드로부터 유도된 신호 서열을 포함한다. 추가적으로, 이들 신호 펩타이드 서열은 2배체 효모 발현 시스템에서 강화된 분비를 제공하도록 조작될 수 있다. 관심의 다른 분비 신호는 포유동물 신호 서열을 포함할 수 있는데, 이는 분비되는 단백질에 이종성일 수 있거나, 또는 분비되는 단백질에 대한 천연 서열일 수 있다. 신호 서열은 전-펩타이드 서열을 포함하며, 일부 경우에서, 프로펩타이드 서열을 포함할 수 있다. 면역글로불린 쇄에서 발견되는 신호 서열, 예를 들면, K28 프레프로톡신 서열, PHA-E, FACE, 인간 MCP-1, 인간 혈청 알부민 신호 서열, 인간 Ig 중쇄, 인간 Ig 경쇄 등을 포함하는 많은 이러한 신호 서열이 당분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[Hashimoto 등 Protein Eng 11(2) 75 (1998); 및 Kobayashi 등 Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998)]을 참조한다.
전사는 전사 활성제 서열을 벡터에 삽입함으로써 증가시킬 수 있다. 이들 활성제는 DNA의 시스-작용 요소들이며, 보통 약 10 내지 300bp이며, 전사를 증가시키기 위하여 프로모터에 작용한다. 전사 인핸서는 상대적으로 방향 및 위치 독립적이며, 인트론 내에서, 전사 단위에 대해 5' 및 3'에서 발견되며, 뿐만 아니라 코딩 서열 자체 내에서도 발견되었다. 인핸서는 코딩 서열에 대해 5' 또는 3' 위치에서 발현 벡터 내로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5'부위에 위치된다.
또한, 진핵 숙주 세포에 사용되는 발현 벡터는 전사의 종결 및 mRNA의 안정화에 필요한 서열을 함유할 수 있다. 이러한 서열은 진핵 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 미번역된 영역에서 번역 종결 코돈에 대해 3'로부터 통상적으로 입수 가능하다. 이들 영역은 mRNA의 미번역된 영역에서 폴리아데닐화된 단편으로서 전사된 뉴클레오타이드 세그먼트를 함유한다.
하나 이상의 상기 열거된 성분을 함유하는 적절한 벡터의 작제는 표준 결찰 기술 또는 PCR/재조합 방법을 사용한다. 단리된 플라스미드 또는 DNA 단편은 필요한 플라스미드를 생성하기 위해 바람직한 형태로 또는 재조합 방법 또는 재조합 방법을 통해 절단되고, 적합화되고 재결찰된다. 작제된 플라스미드에서 정확한 서열을 확인하기 위한 분석을 위하여, 결찰 혼합물을 사용하여 숙주 세포를 형질전환시키고, 적절한 경우, 항생제 내성(예를 들면, 암피실린 또는 제오신)에 의해 성공적인 형질전환체가 선택된다. 형질전환체로부터 플라스미드를 제조하고, 제한 엔도뉴클레아제 소화에 의해 분석하고/분석하거나 시퀀싱한다.
단편의 제한 및 결찰에 대한 대안으로, att 부위 및 재조합 효소에 기초하는 재조합 방법을 사용하여 벡터 내로 DNA 서열을 삽입할 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들면, 문헌(참조: Landy Ann. Rev. Biochem. 58:913-949 (1989))에 기술되어 있으며, 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 방법은 람다 및 E. 콜라이 코딩된 재조합 단백질의 혼합물에 의해 매개되는 분자간 DNA 재조합을 이용한다. 재조합은 상호 작용하는 DNA 분자 상의 특이적 부착(att) 부위 사이에서 일어난다. att 부위에 대한 설명은 문헌[참조: Weisberg 및 Landy (1983) "Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda II", Weisberg, ed. (Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Press), pp. 211-250]을 참조한다. 재조합 부위를 플랭킹하는 DNA 세그먼트가 스위칭되어 재조합 후, att 부위가 각각의 모계 벡터에 의해 제공된 서열로 이루어진 하이브리드 서열이도록 한다. 재조합은 임의의 위상의 DNA 간에 발생할 수 있다.
Att 부위는 적절한 벡터 내로 관심 서열을 결찰시키고; 특정 프라이머를 사용함으로써 att B 부위를 함유하는 PCR 생성물을 생성하고; att 부위를 함유하는 적절한 벡터 내로 클로닝된 cDNA 라이브러리를 생성하고; 이와 유사한 것에 의해 관심 서열 내로 도입될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 폴딩은 폴리펩타이드와 단백질의 3-차원 구조를 지칭하는 것으로, 이때 아미노산 잔기 간의 상호작용이 구조를 안정화시키는 작용을 한다. 비-공유 상호작용은 구조를 결정하는데 중요하지만, 보통 관심 단백질은 2개의 시스테인 잔기에 의해 형성된 분자내- 및/또는 분자간 공유 디설파이드 결합을 가질 것이다. 천연 발생 단백질 및 폴리펩타이드 또는 이의 유도체 및 변이체의 경우, 적절한 폴딩은 전형적으로 최적의 생물학적 활성을 초래하는 배열이며, 활성, 예를 들면, 리간드 결합, 효소 활성 등에 대한 검정에 의해 편리하게 모니터링할 수 있다.
일부 경우에서, 예를 들면, 목적하는 생성물이 합성 기원의 생성물인 경우에, 생물학적 활성에 근거한 분석은 다소 의미가 적을 것이다. 이러한 분자의 적절한 폴딩은 물리적 특성, 활동적인 고려사항, 모델링 연구 등에 근거하여 결정될 수 있다.
발현 숙주는 폴딩 및 디설파이드 결합 형성을 강화시키는 하나 이상의 효소, 예를 들면, 폴다아제, 샤페로닌 등을 코딩하는 서열의 도입에 의해 추가로 변형될 수 있다. 이러한 서열은, 당분야에 공지된 바와 같이, 벡터, 마커 등을 사용하여 효모 숙주 세포에서 항시적으로 또는 유도적으로 발현될 수 있다. 바람직하게는, 원하는 발현 패턴에 충분한 전사 조절 요소를 포함하는 서열은 표적화된 방법론을 통하여 효모 게놈에 안정적으로 통합된다.
예를 들면, 진핵 PDI는 단백질 시스테인 산화 및 디설파이드 결합 이성체화의 효과적인 촉매일 뿐만 아니라, 차페론 활성을 나타낸다. PDI의 공-발현은 다중 디설파이드 결합을 보유한 활성 단백질의 생산을 용이하게 할 수 있다. BIP(면역글로불린 중쇄 결합 단백질); 사이클로필린 등의 발현이 또한 관심의 대상이다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 반수체 모계 균주 각각은 별개의 폴딩 효소를 발현시키고, 예를 들면, 하나의 균주는 BIP를 발현시킬 수 있고, 다른 균주는 PDI 또는 이의 조합을 발현시킬 수 있다.
용어 "원하는 단백질" 또는 "원하는 항체"는 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로 표적, 즉 CGRP에 특이적인 모계 항체 또는 키메라 또는 인간화된 항체 또는 본원에 기재된 바와 같이 이로부터 유도된 이의 결합 부분을 지칭한다. 용어 "항체"는 에피토프에 꼭 맞고 이를 인지하는 특이적 형상을 갖는 임의의 폴리펩타이드 쇄 함유 분자 구조를 포함하고자 하며, 이때 하나 이상의 비공유 결합 상호작용은 분자 구조와 에피토프 사이의 복합체를 안정화시킨다. 전형적인 항체 분자는 면역글로불린이며, 모든 공급원, 예를 들면, 인간, 설치류, 토끼, 소, 양, 돼지, 개, 다른 포유동물, 닭, 다른 조류 등으로부터의 모든 유형의 면역글로불린, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD 등이 "항체"로 간주된다. 본 발명에 따라 출발 물질로서 유용한 항체를 생산하기 위한 공급원은 토끼이다. 다수의 항체 코딩 서열이 기재되었고, 당해 분야에 익히 공지된 방법에 의해 다른 것들이 상승될 수 있다. 이의 예는 키메라 항체, 인간 항체 및 다른 비인간 포유동물 항체, 인간화된 항체, 단일 쇄 항체(예: scFv), 카멜바디(camelbody), 나노바디(nanobody), IgNAR(상어로부터 유래된 단일 쇄 항체), 작은 모듈의 면역약제(SMIP), 및 Fab, F(ab')2 등과 같은 항체 단편을 포함한다[참조: Streltsov VA, 등, Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an earlydevelopmental isotype, Protein Sci. Nov;14(11):2901-9 (2005), Epub 2005 Sep. 30; Greenberg AS, 등, A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature, Mar 9;374(6518):168-73 (1995); Nuttall SD, 등, Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol. Aug;38(4):313-26 (2001); Hamers-Casterman C, 등, Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun. 3; 363(6428):446-8); Gill DS, 등, Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. Dec;17(6):653-8 (2006), Epub 2006 Oct 19].
예를 들면, 항체 또는 항원 결합 단편은 유전자 조작에 의해 생성될 수 있다. 이 기술에서, 다른 방법들과 동일하게, 항체 생성 세포는 원하는 항원 또는 면역원으로 감작된다. 항체 생성 세포로부터 단리된 메신저 RNA는 PCR 증폭을 사용하여 cDNA를 제조하는데 주형으로서 사용된다. 각각이 초기 항원 특이성을 유지하는 하나의 중쇄 유전자와 하나의 경쇄 유전자를 함유하는 벡터의 라이브러리는 증폭된 면역글로불린 cDNA의 적절한 섹션을 발현 벡터 내로 삽입시킴으로써 생성된다. 조합 라이브러리는 중쇄 유전자 라이브러리와 경쇄 유전자 라이브러리를 조합함으로써 작제된다. 이로써 (항체 분자의 Fab 단편 또는 항원 결합 단편을 닮은) 중쇄 및 경쇄를 공-발현시키는 클론의 라이브러리가 얻어진다. 이들 유전자를 운반하는 벡터는 숙주 세포 내로 공동 형질감염된다. 항체 유전자 합성이 형질감염된 숙주에서 유도될 때, 중쇄 및 경쇄 단백질은 자가 조립하여 항원 또는 면역원으로 스크리닝함으로써 검출될 수 있는 활성 항체를 생성한다.
관심 서열을 코딩하는 항체는 천연 서열 뿐만 아니라 유전자 코드의 축퇴에 의해 개시된 핵산의 서열과는 동일하지 않는 핵산 및 이의 변이체에 의해 코딩된 것들을 포함한다. 변이체 폴리펩타이드는 아미노산("aa") 치환, 첨가 또는 결실을 포함할 수 있다. 아미노산 치환은 보존성 아미노산 치환 또는 비필수 아미노산을 제거하는 치환, 예를 들면, 당화 부위를 변경하거나, 또는 기능에 필수적이지 않은 하나 이상의 시스테인 잔기의 치환 또는 결실에 의해 미스폴딩을 최소화하기 위한 치환일 수 있다. 변이체는 단백질의 특정 영역(예: 기능적 도메인, 촉매성 아미노산 잔기 등)의 생물학적 활성을 유지 또는 강화시키도록 설계될 수 있다. 변이체는 또한 본원에 개시된 폴리펩타이드의 단편, 특히 생물학적 활성 단편 및/또는 기능적 도메인에 상응하는 단편을 포함한다. 클로닝된 유전자의 시험관내 돌연변이 생성을 위한 기술이 공지되어 있다. 단백질 분해에 대한 내성을 개선시키거나 용해도 특성을 최적화시키거나 이들을 치료제로서 더 적합할 수 있도록 하기 위해 통상적인 분자 생물학적 기술을 사용하여 변형된 폴리펩타이드도 본 발명에 또한 포함된다.
키메라 항체는 재조합 수단에 의해 한 종의 항체 생성 세포로부터 수득된 가변 경쇄 및 중쇄 영역(VL 및 VH)을 또 다른 종으로부터의 불변 경쇄 및 중쇄 영역과 조합함으로써 제조될 수 있다. 전형적으로 키메라 항체는 주로 인간 도메인을 갖는 항체를 생산하기 위하여 설치류 또는 토끼 가변 영역과 인간 불변 영역을 사용한다. 이러한 키메라 항체의 생산은 당해 분야에 익히 공지되어 있으며, 표준 수단(예를 들면, 그 전체가 본원에 참조로서 포함된 미국 특허 제5,624,659호에 기재된 바와 같이)에 의해 달성될 수 있다. 본 발명의 키메라 항체의 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 영역으로부터 선택될 수 있음이 추가로 고려된다.
인간화된 항체는 더욱 더 인간-유사 면역글로불린 도메인을 함유하도록 조작되며, 동물 유래된 항체의 상보성 결정 영역만을 통합한다. 이는 인간 항체 쇄의 구조에 이들을 맞추기 위한 단클론성 항체의 가변 영역의 과도-가변 루프의 서열의 시험에 의해 달성된다. 표면상으로는 복잡하지만, 이 공정은 실제로는 간단히 실행된다. 예를 들면, 전체가 본원에 참고로 편입된 미국 특허 제6,187,287호를 참조한다.
전체 면역글로불린(또는 이의 재조합 대응물) 외에도, 에피토프 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 단편(예: Fab, F(ab')2, 또는 다른 단편들)이 합성될 수 있다. "단편" 또는 최소 면역글로불린은 재조합 면역글로불린 기술을 사용하여 설계될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 사용하기 위한 "Fv" 면역글로불린은 융합된 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역을 합성함으로써 생성될 수 있다. 항체의 조합, 예를 들면, 2개의 상이한 Fv 특이성을 포함하는 디아바디도 또한 관심의 대상이다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, SMIP(소분자 면역약제), 카멜바디, 나노바디 및 IgNAR이 면역글로불린 단편에 포함된다.
면역글로불린 및 이의 단편은, 예를 들면, 본 발명의 방법 및 조성물에 사용될 수 있는 효과기 잔기, 예를 들면, 화학적 링커, 검출가능한 잔기, 예를 들면, 형광성 염료, 효소, 독소, 기질, 생물발광 물질, 방사상 물질, 화학발광 잔기 등,또는 특이적 결합 잔기, 예를 들면, 스트렙타비딘, 아비딘 또는 비오틴 등을 부가하기 위하여, 번역 후 변형될 수 있다. 추가적인 효과기 분자의 예는 하기에 제공된다.
폴리뉴클레오타이드 서열은 유전자 코드에 따르는 폴리뉴클레오타이드 서열의 번역이 폴리펩타이드 서열을 수득하면, 폴리펩타이드 서열에 "상응하고"(즉, 폴리뉴클레오타이드 서열은 폴리펩타이드 서열을 "코딩하고"), 2개 서열이 동일한 폴리펩타이드 서열을 코딩하면, 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열은 또다른 폴리뉴클레오타이드 서열에 "상응한다".
DNA 작제물의 "이종" 영역 또는 도메인은 본질적으로 더 큰 분자와 관련하여 발견되지 않는 더 큰 DNA 분자 내의 DAN의 식별가능한 세그먼트이다. 따라서, 이종 영역이 포유동물 유전자를 코딩할 때, 유전자는 보통 공급원 유기체의 게놈에서 포유동물 게놈 DNA를 플랭킹하지 않은 DNA에 의해 플랭킹될 것이다. 이종 영역의 또 다른 예는 코딩 서열 자체가 자연적으로 발견되지 않는 작제물(예: 게놈 코딩 서열이 천연 유전자와 상이한 코돈을 가지고 있는 합성 서열 또는 인트론을 함유하는 cDNA)이다. 대립유전자 변이 또는 천연 발생 돌연변이 사건은 본원에 정의된 바와 같은 DNA의 이종 영역을 발생시키지 않는다.
"코딩 서열"은 (유전적 코드 관점에서) 단백질 또는 펩타이드 서열에 상응하거나 이를 코딩하는 코돈의 인프레임 서열이다. 서열 또는 이들의 상보성 서열이 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 경우, 2개의 코딩 서열은 서로 상응한다. 적절한 조절 서열과 연관된 코딩 서열은 전사되어 폴리펩타이드로 번역될 수 있다. 폴리아데닐화 신호 및 전사 종결 서열은 일반적으로 코딩 서열에 대해 3'에 위치될 것이다. "프로모터 서열"은 세포 내에서 RNA 폴리머라제를 결합시킬 수 있고, 다운스트림(3' 방향) 코딩 서열의 전사를 개시할 수 있는 DNA 조절 영역이다. 프로모터 서열은 전형적으로 코딩 서열의 전사에 영향을 주는 조절 분자(예: 전사 인자들)의 결합을 위한 추가의 부위를 함유한다. RNA 폴리머라제가 세포 내에서 프로모터 서열에 결합하고, 이 코딩 서열을 mRNA로 전사시킨 다음, 다시 이 코딩 서열에 의해 코딩된 단백질로 번역될 때, 코딩 서열은 프로모터 서열의 "제어하에" 있거나 또는 프로모터에 "작동가능하게 연결된다".
벡터는 DNA, RNA 또는 단백질과 같은 외래 물질을 유기체 또는 숙주 세포 내로 도입하기 위하여 사용된다. 전형적인 벡터는 재조합 바이러스(폴리뉴클레오타이드의 경우)와 리포좀(폴리펩타이드의 경우)을 포함한다. "DNA 벡터"는 또 다른 폴리뉴클레오타이드 세그먼트가 부착될 수 있어 부착된 세그먼트의 복제를 야기하는 플라스미드, 파지 또는 코스미드와 같은 레플리콘이다. "발현 벡터"는 적합한 숙주 세포에 의한 폴리펩타이드 합성을 지시할 조절 서열을 함유하는 DNA 벡터이다. 이것은 일반적으로 RNA 폴리머라제에 결합하고, mRNA의 전사를 개시하는 프로모터 뿐만 아니라, mRNA의 폴리펩타이드(들)로의 번역을 지시하는 리보솜 결합 부위 및 개시 신호를 의미한다. 적절한 부위 및 정확한 리딩 프레임에서 폴리뉴클레오타이드 서열의 발현 벡터로의 삽입, 이후 벡터에 의한 적합한 숙주 세포의 형질전환은 상기 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 폴리펩타이드의 생산을 가능하게 한다.
폴리뉴클레오타이드 서열의 "증폭(amplification)"은 특정 핵산 서열의 다수 복사체의 시험관내 생산이다. 증폭된 서열은 일반적으로 DNA의 형태로 존재한다. 이러한 증폭을 실행하는 다양한 기술들이 다음 검토 논문에 기재되어 있다(참조: Van Brunt, Bio/Technol., 8(4):291-294 (1990)). 폴리머라제 연쇄 반응 또는 PCR은 핵산 증폭의 원형이며, 본원에서 PCR의 이용은 기타 적합한 증폭 기술의 예시로 간주되어야 한다.
척추동물에서 항체의 일반적인 구조는 현재 잘 이해되고 있다(참조: Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)). 항체는 분자량 대략 23,000달톤의 2개의 동일한 폴리펩타이드 경쇄("경쇄")와 분자량 53,000 내지 70,000의 2개의 동일한 중쇄("중쇄")로 이루어진다. 4개의 쇄는 "Y"자 형태로 디설파이드 결합에 의해 연결되며, 이때 경쇄는 "Y"자 형태의 입구에서 시작되는 중쇄를 떠받들고 있다. "Y"자 형태의 "분지" 부분은 Fab 영역으로 지정되고, "Y"자 형태의 줄기 부분은 FC 영역으로 지정된다. 아미노산 서열 방향은 "Y"자 형태의 상단의 N-말단으로부터 각 쇄의 바닥의 C-말단으로 이어진다. N-말단은 항원을 유도하는, 항원에 특이성을 나타내는 가변 영역을 포함하고, 길이가 대략 100개 아미노산이며, 경쇄와 중쇄 사이에 그리고 항체마다 약간의 변화가 있다.
가변 영역은 각 쇄에서 쇄의 나머지 길이까지 연장되고, 특정 항체 부류 내에서 항체의 특이성(즉, 이를 유발하는 항원)에 따라 달라지지 않는 불변 영역에 연결된다. 면역글로불린 분자의 부류를 결정하는 불변 영역의 5가지 공지된 주요 부류(γ, μ, α, δ 또는 ε(감마, 뮤, 알파, 델타 및 입실론) 중쇄 불변 영역에 상응하는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE)가 있다. 불변 영역 또는 부류는 보체의 활성화(참조: Kabat, E. A., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, Winston (1976)), 및 기타 세포 반응(참조: Andrews, D. W., 등, Clinical Immunobiology, pp 1-18, W. B. Sanders (1980); Kohl, S., 등, Immunology, 48: 187 (1983))을 포함하는 항체의 후속 효과기 기능을 결정하는 한편, 가변 영역은 반응하게 될 항원을 결정한다. 경쇄는 κ(카파) 또는 λ(람다)로서 분류된다. 각 중쇄 부류는 카파 또는 람다 경쇄를 사용하여 제조될 수 있다. 경쇄 및 중쇄는 서로 공유 결합되고, 두 중쇄의 "꼬리" 부분은, 면역글로불린이 하이브리도마 또는 B 세포에 의해 생성될 때, 공유 디설파이드 연결에 의해 서로 결합된다.
"가변 영역" 또는 "VR"이라는 표현은 항원에 항체를 결합시키는데 직접 관련되는 항체 내 경쇄 및 중쇄의 각 쌍 내의 도메인을 지칭한다. 각각의 중쇄는 하나의 말단에 하나의 가변 도메인(VH)에 이어, 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 하나의 말단에 하나의 가변 도메인(VL)을, 다른 말단에 하나의 불변 도메인을 갖고; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다.
"상보성 결정 영역", "초가변 영역" 또는 "CDR"이라는 표현은 항체의 경쇄 또는 중쇄의 가변 영역에서 발견된 초가변 또는 상보성 결정 영역(CDR) 중의 하나 이상을 지칭한다(참조: Kabat, E. A. 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). 이러한 표현은 카밧(Kabat) 등에 의해 정의된 초가변 영역(참조: "Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat E., 등, US Dept. of Health and Human Services, 1983) 또는 항체의 3차원 구조에서 초가변 루프(참조: Chothia 및 Lesk, J Mol. Biol. 196 901-917 (1987))를 포함한다. 각 쇄에서 CDR은 프레임워크 영역에 근접하도록 유지되며, 다른 쇄로부터의 CDR은 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR 내에는, 항체-항원 상호작용에서 CDR에 의해 사용되는 중요한 접촉 잔기를 나타내는 선택성 결정 영역(SDR)으로 기재된 선택 아미노산이 존재한다(참조: Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005)).
"프레임워크 영역" 또는 "FR"이라는 표현은 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역 내의 하나 이상의 프레임워크 영역을 지칭한다(참조: Kabat, E. A. 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). 이러한 표현은 항체의 경쇄 및 중쇄의 영역 내에서 CDR 사이에 개재된 아미노산 서열 영역을 포함한다.
CGRP에 대한 결합 활성을 갖는 항- CGRP 항체 및 그것의 결합 단편
본 방법의 예시적인 구현예는 항-CGRP 항체 및 그것의 단편을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 항-CGRP 항체 및 단편은 U.S. 특허 공개 번호 2012/0294797(이것은 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있음)에서 기재되어 있고, 본 단락에서 기재된 바와 같은 추가의 예시적인 항-CGRP 항체는 다음과 같다.
항체 Ab1
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR (서열식별번호: 1).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 2).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (서열식별번호: 3).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 4).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 1의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 2의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 5; 서열식별번호: 6; 및 서열식별번호: 7의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 3의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 4의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 8; 서열식별번호: 9; 및 서열식별번호: 10의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 2의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 4의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 1의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 2의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 5; 서열식별번호: 6; 및 서열식별번호: 7의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 3의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 4의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 8; 서열식별번호: 9; 및 서열식별번호: 10의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 1의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 3의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 1의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 5; 서열식별번호: 6; 및 서열식별번호: 7); 및 서열식별번호: 3의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 8; 서열식별번호: 9; 및 서열식별번호: 10).
본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 키메라성 항- CGRP 항체는 Ab1이고, 이것은 서열식별번호: 2 및 서열식별번호: 4를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
추가의 바람직한 본 발명의 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab1에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 1의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 3의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 1 및/또는 서열식별번호: 3의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab1의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab1 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab2
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 11).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 12).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 13).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 14).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 12의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 15; 서열식별번호: 16; 및 서열식별번호: 17의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 13의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 14의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 18; 서열식별번호: 19; 및 서열식별번호: 20의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 11 또는 서열식별번호: 12의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 14의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 12의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 15; 서열식별번호: 16; 및 서열식별번호: 17의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 서열식별번호: 13의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 14의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는18; 서열식별번호: 19; 및 서열식별번호: 20의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 13의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 15; 서열식별번호: 16; 및 서열식별번호: 17); 및 서열식별번호: 13의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 18; 서열식별번호: 19; 및 서열식별번호: 20).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항- CGRP 항체는 Ab2이고, 이것은 서열식별번호: 12 및 서열식별번호: 14를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab2에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 13의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 11 및/또는 서열식별번호: 13의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab2의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab2 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab3
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 21).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 22).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 23).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 24).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 서열식별번호: 21의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 22의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는25; 서열식별번호: 26; 및 서열식별번호: 27의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 28; 서열식별번호: 29; 및 서열식별번호: 23의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 24의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 30의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 21 또는 서열식별번호: 22의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 23 또는 서열식별번호: 24의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 21의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 22의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 25; 서열식별번호: 26; 및 서열식별번호: 27의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 23의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 24의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 28; 서열식별번호: 29; 및 서열식별번호: 30의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 21의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 23의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 21의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 25; 서열식별번호: 26; 및 서열식별번호: 27); 및 서열식별번호: 23의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 28; 서열식별번호: 29; 및 서열식별번호: 30).
본 발명의 구현예에서, 키메라성 항-CGRP 항체는 Ab3이고, 이것은 서열식별번호: 22 및 서열식별번호: 24를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab3에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 21의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 23의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 21 및/또는 서열식별번호: 23의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab3의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab3 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab4
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR (서열식별번호: 31).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 32).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (서열식별번호: 33).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 34).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 31의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 32의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 35; 서열식별번호: 36; 및 서열식별번호: 37의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 33의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 34의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 38; 서열식별번호: 39; 및 서열식별번호: 40의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 31 또는 서열식별번호: 32의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 33 또는 서열식별번호: 34의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 31의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 32의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 35; 서열식별번호: 36; 및 서열식별번호: 37의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 33의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 34의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 38; 서열식별번호: 39; 및 서열식별번호: 40의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 31의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 33의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 31의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 35; 서열식별번호: 36; 및 서열식별번호: 37); 및 서열식별번호: 33의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 38; 서열식별번호: 39; 및 서열식별번호: 40).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항-CGRP 항체는 Ab4이고, 이것은 서열식별번호: 32 및 서열식별번호: 34를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab4에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 31의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 33의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 31 및/또는 서열식별번호: 33의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab4의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab4 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab5
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 41).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 42).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 43).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 44).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 41의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 42의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 45; 서열식별번호: 46; 및 서열식별번호: 47의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 43의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 44의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 48; 서열식별번호: 49; 및 서열식별번호: 50의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 41 또는 서열식별번호: 42의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 43 또는 서열식별번호: 44의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 41의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 42의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 45; 서열식별번호: 46; 및 서열식별번호: 47의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 43의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 44의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 48; 서열식별번호: 49; 및 서열식별번호: 50의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 41의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 43의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 41의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 45; 서열식별번호: 46; 및 서열식별번호: 47); 및 서열식별번호: 43의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 48; 서열식별번호: 49; 및 서열식별번호: 50).
본 발명의 구현예에서, 키메라성 항-CGRP 항체는 Ab5이고, 이것은 서열식별번호: 42 및 서열식별번호: 44를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab5에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 41의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 43의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 41 및/또는 서열식별번호: 43의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab5의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab5 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab6
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 51).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 52).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 53).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 54).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 51의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 52의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 55; 서열식별번호: 56; 및 서열식별번호: 57의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 53의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 54의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 58; 서열식별번호: 59; 및 서열식별번호: 60의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 51 또는 서열식별번호: 52의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 53 또는 서열식별번호: 54의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 서열식별번호: 51의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 52의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 55; 서열식별번호: 56; 및 서열식별번호: 57의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 53의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 54의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 58; 서열식별번호: 59; 및 서열식별번호: 60의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 51의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 53의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 51의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 55; 서열식별번호: 56; 및 서열식별번호: 57); 및 서열식별번호: 53의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 58; 서열식별번호: 59; 및 서열식별번호: 60).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항- CGRP 항체는 Ab6이고, 이것은 서열식별번호: 52 및 서열식별번호: 54를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab6에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 51의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 53의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 51 및/또는 서열식별번호: 53의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab6의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab6 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab7
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR (서열식별번호: 61).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 62).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (서열식별번호: 63).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 64).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 61의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 62의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 65; 서열식별번호: 66; 및 서열식별번호: 67의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 63의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 64의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 68; 서열식별번호: 69; 및 서열식별번호: 70의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 61 또는 서열식별번호: 62의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 63 또는 서열식별번호: 64의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 61의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 62의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 65; 서열식별번호: 66; 및 서열식별번호: 67의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 63의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 64의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 68; 서열식별번호: 69; 및 서열식별번호: 70의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 61의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 63의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 61의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 65; 서열식별번호: 66; 및 서열식별번호: 67); 및 서열식별번호: 63의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 68; 서열식별번호: 69; 및 서열식별번호: 70).
본 발명의 구현예에서, 키메라성 항-CGRP 항체는 Ab7이고, 이것은 서열식별번호: 62 및 서열식별번호: 64를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab7에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 61의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 63의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 61 및/또는 서열식별번호: 63의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab7의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab7 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab8
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 71).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 72).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 73).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 74).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 71의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 72의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 75; 서열식별번호: 76; 및 서열식별번호: 77의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 73의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 74의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 78; 서열식별번호: 79; 및 서열식별번호: 80의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 71 또는 서열식별번호: 72의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 73 또는 서열식별번호: 74의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 71의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 72의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 75; 서열식별번호: 76; 및 서열식별번호: 77의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 73의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 74의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 78; 서열식별번호: 79; 및 서열식별번호: 80의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 71의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 73의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 71의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 75; 서열식별번호: 76; 및 서열식별번호: 77); 및 서열식별번호: 73의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 78; 서열식별번호: 79; 및 서열식별번호: 80).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항-CGRP 항체는 Ab8이고, 이것은 서열식별번호: 72 및 서열식별번호: 74를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab8에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 71의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 73의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 71 및/또는 서열식별번호: 73의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab8의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab8 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab9
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR (서열식별번호: 81).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 82).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS (서열식별번호: 83).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 84).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 81의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 82의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 85; 서열식별번호: 86; 및 서열식별번호: 87의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 83의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 84의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 88; 서열식별번호: 89; 및 서열식별번호: 90의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 81 또는 서열식별번호: 82의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 83 또는 서열식별번호: 84의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 81의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 82의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 85; 서열식별번호: 86; 및 서열식별번호: 87의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 83의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 84의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 88; 서열식별번호: 89; 및 서열식별번호: 90의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 81의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 83의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 81의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 85; 서열식별번호: 86; 및 서열식별번호: 87); 및 서열식별번호: 83의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 88; 서열식별번호: 89; 및 서열식별번호: 90).
본 발명의 구현예에서, 키메라성 항-CGRP 항체는 Ab9이고, 이것은 서열식별번호: 82 및 서열식별번호: 84를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab9에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 81의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 83의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 81 및/또는 서열식별번호: 83의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab9의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab9 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab10
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 91).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 92).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 93).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 94).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 91의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 92의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 95; 서열식별번호: 96; 및 서열식별번호: 97의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 93의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 94의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 98; 서열식별번호: 99; 및 서열식별번호: 100의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 91 또는 서열식별번호: 92의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 93 또는 서열식별번호: 94의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 91의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 92의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 95; 서열식별번호: 96; 및 서열식별번호: 97의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 93의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 94의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 98; 서열식별번호: 99; 및 서열식별번호: 100의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 91의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 93의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 91의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 95; 서열식별번호: 96; 및 서열식별번호: 97); 및 서열식별번호: 93의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 98; 서열식별번호: 99; 및 서열식별번호: 100).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항-CGRP 항체는 Ab10이고, 이것은 서열식별번호: 92 및 서열식별번호: 94를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab10에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 91의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 93의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 91 및/또는 서열식별번호: 93의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab10의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab10 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab11
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR (서열식별번호: 101).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 102).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (서열식별번호: 103).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 104).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 101의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 102의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 105; 서열식별번호: 106; 및 서열식별번호: 107의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 103의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 104의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 108; 서열식별번호: 109; 및 서열식별번호: 110의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 101 또는 서열식별번호: 102의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 103 또는 서열식별번호: 104의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 101의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 102의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 105; 서열식별번호: 106; 및 서열식별번호: 107의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 103의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 104의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 108; 서열식별번호: 109; 및 서열식별번호: 110의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 101의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 103의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 101의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 105; 서열식별번호: 106; 및 서열식별번호: 107); 및 서열식별번호: 103의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 108; 서열식별번호: 109; 및 서열식별번호: 110).
본 발명의 구현예에서, 키메라성 항-CGRP 항체는 Ab11이고, 이것은 서열식별번호: 102 및 서열식별번호: 104를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab11에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 101의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 103의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 101 및/또는 서열식별번호: 103의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab11의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab11 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab12
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 111).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 112).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 113).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 114).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 111의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 112의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 115; 서열식별번호: 116; 및 서열식별번호: 117의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 113의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 114의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 118; 서열식별번호: 119; 및 서열식별번호: 120의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 111 또는 서열식별번호: 112의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 113 또는 서열식별번호: 114의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 111의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 112의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 115; 서열식별번호: 116; 및 서열식별번호: 117의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 113의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 114의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 118; 서열식별번호: 119; 및 서열식별번호: 120의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 111의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 113의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 111의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 115; 서열식별번호: 116; 및 서열식별번호: 117); 및 서열식별번호: 113의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 118; 서열식별번호: 119; 및 서열식별번호: 120).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항-CGRP 항체는 Ab12이고, 이것은 서열식별번호: 112 및 서열식별번호: 114를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab12에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 111의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 113의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 111 및/또는 서열식별번호: 113의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab12의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab12 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab13
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR (서열식별번호: 121).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 122).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS (서열식별번호: 123).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 키메라성 항체를 포함한다: QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 124).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 121의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 122의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 125; 서열식별번호: 126; 및 서열식별번호: 127의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 123의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 124의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 128; 서열식별번호: 129; 및 서열식별번호: 130의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 121 또는 서열식별번호: 122의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 123 또는 서열식별번호: 124의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 121의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 122의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 125; 서열식별번호: 126; 및 서열식별번호: 127의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 123의 가변 중쇄 서열 또는 서열식별번호: 124의 중쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 128; 서열식별번호: 129; 및 서열식별번호: 130의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 121의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 123의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 121의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 125; 서열식별번호: 126; 및 서열식별번호: 127); 및 서열식별번호: 123의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 128; 서열식별번호: 129; 및 서열식별번호: 130).
본 발명의 구현예에서, 키메라성 항-CGRP 항체는 Ab13이고, 이것은 서열식별번호: 122 및 서열식별번호: 124를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab13에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 121의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 123의 가변 중쇄 서열. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 121 및/또는 서열식별번호: 123의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab13의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab13 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
항체 Ab14
일 구현예에서, 발명은 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR (서열식별번호: 131).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 경쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 132).
본 발명은 추가로, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS (서열식별번호: 133).
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 아래에서 제시된 서열을 포함하는 중쇄 서열을 보유하는 인간화된 항체를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 134).
본 발명은 또한, 하기를 포함하는 항체를 고려한다: 서열식별번호: 131의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 132의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 135; 서열식별번호: 136; 및 서열식별번호: 137의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열식별번호: 133의 가변 중쇄 영역 또는 서열식별번호: 134의 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 138; 서열식별번호: 139; 및 서열식별번호: 140의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상, 또는 이들 폴리펩타이드 서열의 조합. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 그것의 단편은 그것 중 모두를 포함하여 상기에서 제시된 CDR, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열, 및 중쇄 및 경쇄 서열 중 하나 이상의 조합을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다.
본 발명은 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 131 또는 서열식별번호: 132의 폴리펩타이드 서열. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명의 항체 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 133 또는 서열식별번호: 134의 폴리펩타이드 서열.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 131의 가변 경쇄 서열 또는 서열식별번호: 132의 경쇄 서열의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 135; 서열식별번호: 136; 및 서열식별번호: 137의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 133의 가변 중쇄 영역 또는 서열식별번호: 134의 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (CDR, 또는 초가변 영역)에 상응하는 서열식별번호: 138; 서열식별번호: 139; 및 서열식별번호: 140의 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 하기 항체 단편의 모두를 포함하여 1, 2, 3 또는 그 초과 개를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다: 서열식별번호: 131의 가변 경쇄 영역; 서열식별번호: 133의 가변 중쇄 영역; 서열식별번호: 131의 가변 경쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 135; 서열식별번호: 136; 및 서열식별번호: 137); 및 서열식별번호: 133의 가변 중쇄 영역의 상보성-결정 영역 (서열식별번호: 138; 서열식별번호: 139; 및 서열식별번호: 140).
본 발명의 구현예에서, 인간화된 항-CGRP 항체는 Ab14이고, 이것은 서열식별번호: 132 및 서열식별번호: 134를 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어지고, 본원에서 제시된 생물학적 활성 중 적어도 하나를 갖는다.
본 발명의 추가 구현예에서, 항체 단편은 CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 Fab (단편 항원 결합) 단편을 포함하거나, 대안적으로 그것으로 이루어진다. 항체 Ab14에 대해, Fab 단편은 하기를 포함한다: 서열식별번호: 131의 가변 경쇄 서열 및 서열식별번호: 133의 가변 중쇄 영역. 본 발명의 이러한 구현예는 또한, CGRP에 대한 결합 특이성을 보유하면서도 상기 Fab 중 서열식별번호: 131 및/또는 서열식별번호: 133의 부가, 결실, 및 변이체를 고려한다.
본원 (아래)에서 기재된 본 발명의 일 구현예에서, Fab 단편은 Ab14의 효소 (예를 들면, 파파인)에 의한 소화에 의해 생산될 수 있다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 예컨대 Ab14 또는 그것의 Fab 단편은 포유동물 세포 예컨대 CHO, NSO 또는 HEK 293 세포, 진균, 곤충, 또는 미생물 시스템 예컨대 효모 세포 (예를 들면 2배체 효모 예컨대 2배체 피치아) 및 다른 효모 균주 중 발현을 통해 생산될 수 있다. 적합한 피치아 종은, 비제한적으로, 피치아 패스토리스를 포함한다.
또 하나의 구현예에서, 항체 단편은 하기 비제한적인 형태 중 하나 이상으로 존재할 수 있다: Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 단일 사슬 Fv 항체 형태. 바람직한 구현예에서, 본원에서 기재된 항-CGRP 항체는 추가로, 아래에서 제시된 서열을 포함하는 카파 불변 경쇄 서열을 포함한다:
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 283).
또 하나의 바람직한 구현예에서, 본원에서 기재된 항-CGRP 항체는 추가로, 아래에서 제시된 서열을 포함하는 감마-1 불변 중쇄 폴리펩타이드 서열을 포함한다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 284).
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열식별번호: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123, 또는 133, 또는 그것의 변이체로부터 선택된 VH 폴리펩타이드 서열을 포함하고; 그리고 서열식별번호: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, 또는 131, 또는 그것의 변이체로부터 선택된 VL 폴리펩타이드 서열을 추가로 포함하는 단리된 항-CGRP 항체를 고려하고, 여기서 상기 VH 또는 VL 폴리펩타이드에서 프레임워크 잔기 (FR 잔기) 중 하나 이상은 CGRP에 특이적으로 결합하는 항-CGRP 항체가 생기는 또 하나의 아미노산 잔기로 치환되었다. 본 발명은 이들 항체의 인간화된 및 키메라 형태를 고려한다. 키메라성 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 또는 IgG19 불변 영역으로부터 유도된 Fc를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 항체 또는 VH 또는 VL 폴리펩타이드는 본원에서 언급된 인간화 과정의 개시 전의 하나 이상의 토끼 B 세포 집단에서 기원하거나 그것으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 및 그것의 단편은 CGRP-R에 대한 결합 특이성을 갖지 않는다. 본 발명의 추가 구현예에서, 항-CGRP 항체 및 그것의 단편은 CGRP와 CGRP-R과의 회합을 억제한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-CGRP 항체 및 그것의 단편은 CGRP와 CGRP-R 및/또는 추가의 단백질 및/또는 그것의 다량체와의 회합을 억제하고/거나, 그것의 생물학적 효과에 반대로 작용한다.
상기에서 언급된 바와 같이, 항체 및 그것의 단편은 하기를 부가하기 위해 번역후에 개질될 수 있다: 효과기 모이어티 예컨대 화학적 링커, 검출가능한 모이어티 예를 들면 형광성 염료, 효소, 기질, 생물발광 물질, 방사선활성 물질, 및 화학발광 모이어티, 또는 기능적 모이어티 예를 들면 스트렙타비딘, 아비딘, 바이오틴, 세포독소, 세포독성 약물, 및 방사선활성 물질.
항체 또는 그것의 단편은 추가의 이점 예컨대 폴리펩타이드의 증가된 용해도, 안정성 및 순환 시간 (생체내 반감기), 또는 감소된 면역원성 (참고 미국 특허 No. 4,179,337)를 제공하기 위해 화학적으로 또한 개질될 수 있다. 유도체화를 위한 화학적 모이어티는 하기로부터 선택될 수 있다: 수용성 폴리머 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올 등. 항체 및 그것의 단편은 분자 내의 래덤 위치에서, 또는 분자 내의 예정된 위치에서 개질될 수 있고 1, 2, 3 또는 그 초과의 부착된 화학적 모이어티를 포함할 수 있다.
폴리머는 임의의 분자량일 수 있고 분지형 또는 비분지형일 수 있다. For 폴리에틸렌 글리콜, 바람직한 분자량은 취급 및 제조를 용이하게 하기 위해 약 1 kDa 내지 약 100 kDa이다 (용어 "약"은 폴리에틸렌 글리콜의 제조에서, 일부 분자는 언급된 분자량보다 더 많고, 어느 정도 적을 것이라는 것을 나타낸다). 다른 크기가 원하는 치료적 프로파일 (예를 들면, 원하는 지속 방출의 지속 시간, 효과, 생물학적 활성에 대해 있다면, 취급 용이성, 항원성의 정도 및 부족 및 치료적 단백질 또는 유사체에 대한 폴리에틸렌 글리콜의 다른 공지된 효과)에 따라 사용될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜은 하기의 평균 분자량을 가질 수 있다: 약 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10,000, 10,500, 11,000, 11,500, 12,000, 12,500, 13,000, 13,500, 14,000, 14,500, 15,000, 15,500, 16,000, 16,500, 17,000, 17,500, 18,000, 18,500, 19,000, 19,500, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000, 50,000, 55,000, 60,000, 65,000, 70,000, 75,000, 80,000, 85,000, 90,000, 95,000, 또는 100,000 kDa. 분지형 폴리에틸렌 글리콜은, 예를 들면, 미국 특허 No. 5,643,575; Morpurgo 등, Appl . Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996); Vorobjev 등, Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999); 및 Caliceti 등, Bioconjug . Chem. 10:638-646 (1999)에서 기재되어 있고, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참고로 편입되어 있다.
당해분야의 숙련가에게 이용가능한 수많은 부착 방법이 있다, 참고 예를 들면, 본원에서 참고로 편입된 EP 0 401 384 (PEG의 G-CSF에의 커플링), 또한 하기를 참조한다: Malik 등, Exp . Hematol. 20:1028-1035 (1992) (트레실 클로라이드를 사용하는 GM-CSF의 페길화를 보고함). 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜은 반응성 그룹, 예컨대, 유리 아미노 또는 카복실 그룹을 통한 아미노산 잔기를 통해 공유 결합될 수 있다. 반응성 그룹은 활성화된 폴리에틸렌 글리콜 분자가 결합될 수 있는 것들이다. 유리 아미노 그룹을 갖는 아미노산 잔기는 라이신 잔기 및 N-말단 아미노산 잔기를 포함할 수 있고; 유리 카복실 그룹을 갖는 것들은 아스파르트산 잔기 글루탐산 잔기 및 C-말단 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 설프하이드릴 그룹은 폴리에틸렌 글리콜 분자에 부착하기 위해 반응성 그룹으로서 또한 사용될 수 있다. 치료적 목적에 바람직한 것은 아미노 그룹에서의 부착, 예컨대 N-말단 또는 라이신 그룹에서의 부착이다.
상기에서 제안한 바와 같이, 폴리에틸렌 글리콜은 임의의 수의 아미노산 잔기에 대한 연결을 통해 단백질에 부착될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜은 라이신, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 또는 시스테인 잔기에 대한 공유 결합을 통해 폴리펩타이드에 연결될 수 있다. 하나 이상의 반응 화학은 폴리에틸렌 글리콜을 특정 아미노산 잔기 (예를 들면, 라이신, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 또는 시스테인) 또는 1개 초과 유형의 아미노산 잔기 (예를 들면, 라이신, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 시스테인 및 이들의 조합)에 부착시키기 위해 이용될 수 있다.
대안적으로, 항체 또는 그것의 단편은 알부민 (재조합 인간 혈청 알부민 또는 그것의 단편 또는 변이체 (참고, 예를 들면, 1999년 3월 2일에 발행된 미국 특허 No. 5,876,969, EP 특허 0 413 622, 및 1998년 6월 16일 발행된 미국 특허 No. 5,766,883, 이들은 그 전체가 참고로 편입되어 있음)를 비제한적으로 포함함) 또는 다른 순환 혈액 단백질 예컨대 트랜스페린 또는 페리딘과의 융합을 통해 증가된 생체내 반감기를 가질 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드 및/또는 항체 (그것의 단편 또는 변이체를 포함함)은 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있는, 인간 혈청 알부민 (즉, EP 특허 0 322 094의 도 1 및 2에서 보여진 인간 혈청 알부민의 아미노산 1-585)의 성숙한 형태와 융합된다. 본 발명의 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 본 발명에 또한 포함된다.
검출가능한 모이어티에 관해서, 추가의 예시적인 효소는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 홀스래디쉬 페록시다아제, 아세틸콜린에스테라제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다아제 및 루시퍼라아제. 추가의 예시적인 형광성 물질은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 로다민, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 엄벨리페론, 디클로로트리아지닐아민, 파이코에리트린 및 단실 클로라이드. 추가의 예시적인 화학발광 모이어티은, 비제한적으로, 루미놀을 포함한다. 추가의 예시적인 생물발광 물질은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 루시페린 및 에쿼린. 추가의 예시적인 방사선활성 물질은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 요오드 125 (125I), 탄소 14 (14C), 황 35 (35S), 삼중수소 (3H) 및 인 32 (32P).
기능적 모이어티에 관해서, 예시적인 세포독성 약물은, 비제한적으로, 메토트렉세이트, 아미노프테린, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 사이타라빈, 5-플루오로우라실 다카르바진; 알킬화제 예컨대 메클로레타민, 티오테파 클로르암부실, 멜팔란, 카르무스틴 (BSNU), 미토마이신 C, 로무스틴 (CCNU), 1-메틸니트로소우레아, 사이클로포스파마이드, 메클로레타민, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 시스-디클로로디암민플래티넘 (II) (DDP), 시스플라틴, 카보플라틴 (파라플라틴); 안트라사이클린은 다우노루비신 (예전에 다우노마이신), 독소루비신 (아드리아마이신), 데토루비신, 카르미노마이신, 아이다루비신, 에피루비신, 미톡산트론 및 비스안트렌을 포함하고; 항생제는 닥티노마이신 (악티노마이신 D), 블레오마이신, 칼리키아마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신 (AMC); 및 항유사분열제 예컨대 빈카 알카로이드, 빈크리스틴 및 빈블라스틴을 포함한다. 다른 세포독성 약물은 하기를 포함한다: 파클리탁셀 (탁솔), 리신, 슈도모나스 외독소, 젬시타빈, 사이코칼라신 B, 그라마이시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 에토포사이드, 테니포사이드, 콜히친, 디하이드록시 안트라신 디온, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 프로카바진, 하이드록시우레아, 아스파라기나제, 코르티코스테로이드, 미토탄 (O,P'-(DDD)), 인터페론, 및 이들 세포독성 약물의 혼합물.
추가의 세포독성 약물은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 화학치료제 예컨대 카보플라틴, 시스플라틴, 파클리탁셀, 젬시타빈, 칼리키아마이신, 독소루비신, 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 악티노마이신 D, 사이클로포스파마이드, 빈크리스틴 및 블레오마이신. 식물 및 박테리아로부터의 독성 효소 예컨대 리신, 디프테리아 독소 및 슈도모나스 독소는 세포형 특이적 사멸 시약을 생성하기 위해 인간화된 또는 키메라성 항체, 또는 그것의 결합 단편에 접합될 수 있다 (Youle, 등, Proc. Nat'l Acad . Sci . USA 77:5483 (1980); Gilliland, 등, Proc . Nat'l Acad . Sci. USA 77:4539 (1980); Krolick, 등, Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 77:5419 (1980)).
다른 세포독성 약물은 Goldenberg(미국 특허 No. 6,653,104)에 의해 기재된 세포독성 리보뉴클레아제르르 포함한다. 본 발명의 구현예는 또한, 방사선면역접합체에 관한 것이고, 여기서 알파 또는 베타 입자를 방출하는 방사선핵종은 착물-형성제의 사용과 함께 또는 없이 항체, 또는 그것의 결합 단편에 안정되게 커플링된다. 그와 같은 방사선핵종은 하기를 포함한다: 베타-에미터 예컨대 인-32 (32P), 스칸듐-47 (47Sc), 구리-67 (67Cu), 갈륨-67 (67Ga), 이트륨-88 (88Y), 이트륨-90 (90Y), 요오드-125 (125I), 요오드-131 (131I), 사마륨-153 (153Sm), 루테튬-177 (177Lu), 레늄-186 (186Re) 또는 레늄-188 (188Re), 및 알파-에미터 예컨대 아스타틴-211 (211At), 납-212 (212Pb), 비스무트-212 (212Bi) 또는 -213 (213Bi) 또는 악티늄-225 (225Ac).
본 방법은 항체 또는 그것의 결합 단편을 검출가능한 모이어티 등에 콘주게이션하기 위한 당해기술, 예를 들면 하기에 의해 기재된 방법들에 공지되어 있다: Hunter 등, Nature 144:945 (1962); David 등, Biochemistry 13:1014 (1974); 통증 등, J. Immunol . Meth. 40:219 (1981); 및 Nygren, J., Histochem . 및 Cytochem. 30:407 (1982).
본원에서 기재된 구현예는 추가로 본원에서 제시된 항체, 항체 단편, 디아바디, SMIPs, 카멜바디, 나노바디, IgNAR, 폴리펩타이드, 가변 영역 및 CDR에 대해 실질적으로 상동성인 변이체 및 동등물을 포함한다. 이들은, 예를 들면, 보존적 치환 돌연변이, (즉, 유사한 아미노산에 의한 하나 이상의 아미노산의 치환)을 함유할 수 있다. 예를 들면, 보존적 치환은 동일한 일반적인 부류 내의 또 하나에 의한 아미노산의 치환, 예를 들면, 또 하나의 산성 아미노산에 의한 하나의 산성 아미노산의 치환, 또 하나의 염기성 아미노산에 의한 하나의 염기성 아미노산의 치환, 또는 또 하나의 중성 아미노산에 의한 하나의 중성 아미노산의 치환을 의미한다. 보존적 아미노산 치환에 의해 의된 것은 당해분야에 공지되어 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 본원에서 제시된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 폴리펩타이드 서열 중 임의의 하나 이상에 대해 적어도 90% 또는 그 초과 서열 상동성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 고려한다. 더 바람직하게는, 본 발명은 본원에서 제시된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 폴리펩타이드 서열 중 임의의 하나 이상에 대해 적어도 95% 또는 그 초과 서열 상동성, 더욱더 바람직하게는 적어도 98% 또는 그 초과 서열 상동성, 및 더욱더 바람직하게는 적어도 99% 또는 그 초과 서열 상동성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 고려한다. 핵산과 아미노산 서열 사이의 상동성을 결정하는 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 또한, 항-CGRP 활성을 추가로 갖는 본원에서 제시된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 상기-인용된 폴리펩타이드 동족체를 고려한다. 항-CGRP 활성의 비-제한적인 예는 본원에서 제시되어 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 또한, 전술된 서열 중 임의의 것에 결합하는 항-이디오타입 항체의 발생 및 사용을 고려한다. 예시적인 구현예에서, 그와 같은 항-이디오타입 항체는 항-CGRP 항체의 효과를 조절, 감소, 또는 중화시키기 위해 항-CGRP 항체를 수용한 대상체에게 투여될 수 있다. 그와 같은 항-이디오타입 항체는 항-CGRP 항체의 존재를 특징으로 하는 자가면역 질환의 치료에 또한 유용할 수 있다. 그와 같은 항-이디오타입 항체의 추가의 예시적인 사용은, 예를 들면 대상체의 혈액 또는 다른 체액에 존재하는 항-CGRP 항체의 수준을 모니터링하기 위해 본 발명의 항-CGRP 항체의 검출을 위한 것이다.
본 발명은 또한, 본원에서 기재된 다른 폴리뉴클레오타이드 서열 중 어떤 것에 대해 치환된 본원에서 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열의 어떤 것을 포함하는 항-CGRP 항체를 고려한다. 예를 들면, 비제한적으로, 본 발명은 본원에서 기재된 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열 중 어떤 것의 조합을 포함하는 항체를 고려하고, 본원에서 기재된 다른 CDR 서열 중 어떤 것에 대한 본원에서 기재된 CDR 서열의 어떤 것의 치환으로부터 얻은 항체를 추가로 고려한다.
본 발명의 추가의 예시적인 구현예
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 특이적으로 결합하고/거나 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, 또는 Ab14로부터 선택된 항-인간 CGRP 항체와, 온전한 인간 CGRP 폴리펩타이드 또는 그것의 단편 상의 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에의 결합에 대해 경쟁적인 하나 이상의 항-인간 CGRP 항체 또는 그것의 항체 단편을 고려한다. 상기 하나 이상의 항-인간 CGRP 항체 또는 그것의 항체 단편은 비-천연 발생, 예컨대 인간화된 또는 키메라성 항체, 비-천연 발생 항체 단편, 태그 또는 표지를 포함하는 항체, 등일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 항-인간 CGRP 항체 또는 그것의 단편은 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에 결합하고/거나 Ab3, Ab6, Ab13, 또는 Ab14와, 온전한 인간 CGRP 폴리펩타이드 또는 그것의 단편 상의 동일한 선형 또는 형태적 에피토프(들)에의 결합에 대해 경쟁적이다.
본 발명의 바람직한 구현예는 CGRP에 대한 결합 특이성을 가지며 CGRP의 CGRP 수용체에의 결합에 의해 매개된 생물학적 활성을 억제하는 키메라성 또는 인간화된 항체 및 그것의 단편 (Fab 단편 포함)에 관한 것이다. 본 발명의 구현예에서, 키메라성 또는 인간화된 항-CGRP 항체는 Ab3, Ab6, Ab13, 또는 Ab14 로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항-인간 CGRP 항체는 원상태 인간 CGRP 폴리펩타이드의 전장을 스패닝하는 중첩 선형 펩타이드 단편을 사용하여 에피토프 맵핑에 의해 확인된 바와 같이, Ab3, Ab6, Ab13, 또는 Ab14에 의해 특이적으로 결합된 온전한 CGRP 폴리펩타이드 또는 그것의 단편 상의 동일한 선형 또는 형태적 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체이다.
본 발명은 또한, 동일한 CGRP 에피토프와 결합하거/거나 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, 또는 Ab14로부터 선택된 항-CGRP 항체를 비제한적으로 포함하는 본원에서 개시된 항체 또는 항체 단편으로서 CGRP에 결합하기 위한 항-CGRP 항체와 경쟁하는 항-CGRP 항체에 관한 것이다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 또한, 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123, 또는 133, 또는 그것의 변이체로부터 선택된 VH 폴리펩타이드 서열에 함유된 CDR 중 하나 이상, 및/또는 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, 또는 131, 또는 그것의 변이체로부터 선택된 VL 폴리펩타이드 서열에 함유된 CDR 중 하나 이상을 포함하는 단리된 항-CGRP 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 상기에서 논의된 하나 이상의 항-인간 CGRP 항체는 비당화되거나 당화된 것이 만노스 잔기만을 함유한다면; 효과기 기능, 반감기, 단백질분해, 및/또는 당화를 변경하기 위해 개질된 Fc 영역을 함유하고; 인간, 인간화된, 단일 사슬 또는 키메라성이고; 그리고 토끼 (모) 항-인간 CGRP 항체로부터 유도된 인간화된 항체이라는 것을 고려한다.
본 발명은 또한, 하나 이상의 항-인간 CGRP 항체를 고려하고, 여기서 상기 항체 각각의 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역 중 상기 프레임워크 영역 (FR)는 비변형되거나 모 토끼 항체의 상응하는 FR 잔기에 의한 가변 경쇄 또는 중쇄 영역 중 하나 이상의 인간 FR 잔기의 치환에 의해 개질된 인간 FR이고, 상기 인간 FR은 라이브러리에 함유된 다른 인간 생식계열 항체 서열에 대해 상응하는 토끼 가변 중쇄 또는 경쇄 영역에 대한 그것의 고수준의 상동성을 기반으로 하는 인간 생식계열 항체 서열의 라이브러리로부터 선택된 인간 가변 중쇄 및 경쇄 항체 서열로부터 유도되었다.
본 발명의 일 구현예에서, 항-인간 CGRP 항체 또는 단편은, CGRP를 발현시키는 세포와 연관된 질환을 갖는 환자에서 인간 세포 상에서 또는 그것에 의해 발현된 CGRP를 포함하는, CGRP 발현 인간 세포 및/또는 순환 가용성 CGRP 분자에 생체내에서 특이적으로 결합한다 .
본 발명은 또한, 항-인간 CGRP 항체 또는 단편이 검출가능한 표지 또는 치료제에 직접적으로 또는 간접적으로 부착된다는 것을 고려한다.
본 발명은 또한, 효모 또는 인간 바람직한 코돈을 포함하거나 대안적으로 그것으로 이루어진 것들을 포함하는, 상기에서 제시된 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편의 발현을 야기하는 하나 이상의 핵산 서열을 고려한다. 본 발명은 또한, 상기 핵산 서열(들)을 포함한다 벡터 (플라스미드 또는 재조합 바이러스 벡터 포함)를 고려한다. 본 발명은 또한, 포유동물, 효모, 박테리아, 및 곤충 세포를 포함하는 상기에서 제시된 항체 중 하나 이상을 발현시키는 숙주세포 또는 재조합 숙주세포를 고려한다. 바람직한 구현예에서, 숙주세포는 효모 세포이다. 추가의 바람직한 구현예에서, 효모 세포는 2배체 효모 세포이다. 예시된 구현예에서, 효모 세포는 피치아 효모이다.
본 발명은 또한, CGRP 발현 세포와 연관된 질환 또는 병태를 갖는 환자에게 치료적으로 효과적인 양의 본원에서 기재된 적어도 하나의 항-인간 CGRP 항체 또는 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법을 고려한다. 본 발명은 또한, 치료 방법이 본원에서 개시된 2 이상의 항-CGRP 항체 또는 그것의 단편의 투여를 수반할 수 있다는 것을 고려한다. 1 초과 개의 항체가 환자에게 투여되면, 다중 항체는 동시에 또는 동반하여 투여될 수 있거나, 그것의 투여가 엇갈릴 수 있다.
CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항-CGRP 항체, 및 그것의 단편의 항-CGRP 활성은, CGRP에 대한 결합 강도 또는 그것의 친화성에 의해 또한 기재될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항-CGRP 항체, 및 그것의 단편은, 5x10-7 M, 10-7 M, 5x10-8 M, 10-8 M, 5x10-9 M, 10-9 M, 5x10-10 M, 10-10 M, 5x10-11 M, 10-11 M, 5x10-12 M, 10-12 M, 5x10-13 M, 또는 10-13 M 이하의 해리 상수 (KD)로 CGRP에 결합한다. 바람직하게는, 항-CGRP 항체 및 그것의 단편은 10-11 M, 5x10-12 M, 또는 10-12 M 이하의 해리 상수로 CGRP에 결합한다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항-CGRP 항체, 및 그것의 단편은, 선형 또는 형태적 CGRP 에피토프에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항-CGRP 항체, 및 그것의 단편의 항-CGRP 활성은, 10-4 S-1, 5x10-5 S-1, 10-5 S-1, 5x10-6 S-1, 10-6 S-1, 5x10-7 S-1, 또는 10-7 S- 1 이하의 해리속도상수로 CGRP에 결합한다.
본 발명의 추가 구현예에서, CGRP에 대한 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항-CGRP 항체, 및 그것의 단편의 항-CGRP 활성은, CGRP와 연관된 질환 및 장애를 예방, 개선 또는 그것의 증상을 감소시키거나, 대안적으로 그것을 치료하여 항-CGRP 활성을 나타낸다. CGRP와 연관된 질환 및 장애의 비제한적인 예는 본원에서 제시되어 있다.
항- CGRP 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드
예시적인 구현예에서, 항-CGRP 항체는 본원에서 함유된 생물학적 서열목록에서 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열, 또는 당해분야의 숙련가에 의해 쉽게 확인될 수 있는 바와 같이 다른 인코딩 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩될 수 있다. 그것의 예는 하기를 포함한다: 서열식별번호: 141의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 1의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 142의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 2의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 143의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 3의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 144의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 4의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 151의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 11의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 152의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 12의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 153의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 13의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 154의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 14의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 161의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 21의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 162의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 22의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 163의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 23의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 164의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 24의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 171의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 31의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 172의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 32의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 173의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 33의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 174의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 34의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 181의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 41의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 182의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 42의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 183의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 43의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 184의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 44의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 191의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 51의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 192의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 52의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 193의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 53의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 194의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 54의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 201의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 61의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 202의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 62의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 203의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 63의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 204의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 64의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 211의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 71의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 212의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 72의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 213의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 73의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 214의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 74의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 221의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 81의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 222의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 82의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 223의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 83의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 224의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 84의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 231의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 91의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 232의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 92의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 233의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 93의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 234의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 94의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 241의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 101의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 242의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 102의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 243의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 103의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 244의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 104의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 251의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 111의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 252의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 112의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 253의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 113의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 254의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 114의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 261의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 121의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 262의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 122의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 263의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 123의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 264의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 124의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 271의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 131의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 272의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 132의 폴리펩타이드를 인코딩함), 서열식별번호: 273의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 133의 폴리펩타이드를 인코딩함), 또는 서열식별번호: 274의 폴리뉴클레오타이드 (서열식별번호: 134의 폴리펩타이드를 인코딩함).
B-세포 스크리닝 및 단리
하나의 구현예에서, 본 발명은 목적하는 CGRP 항원에 특이적인 CGRP에 대한 단클론성 항체 또는 이러한 항체에 상응하는 핵산 서열을 생성하기 위해 사용될 수 있는 적어도 하나의 CGRP 항원-특이적 세포를 단리시키는데 사용될 수 있는 항원-특이적 B 세포 클론 집단의 제조 및 단리를 고려한다. 상기한 항원-특이적 B 세포의 클론 집단의 제조 방법 및 단리 방법은, 예를 들면, 카르발호-젠슨 등(Carvalho-Jensen 등)의 U.S. 특허 공보 제US 2007/0269868호에 교시되며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참고로 편입된다. 상기한 항원-특이적 B 세포의 클론 집단의 제조 방법 및 단리 방법은 또한 본원의 실시예에서 교시된다. 세포 집단을 크기 또는 밀도에 따라 "농축(enriching)"시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다(참조: 예를 들면, U.S. 특허 제5,627,052호). 이들 단계는 또한 항원-특이성에 의해 세포 집단을 농축시키는데 사용될 수 있다.
항체의 인간화 방법
또 하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 중쇄와 경쇄를 인간화시키는 방법을 고려한다. 항-CGRP 항체에 적용시킬 수 있는 항체 중쇄와 경쇄를 인간화시키는 방법들은, 예를 들면, 올슨 등(Olson 등)의 U.S. 특허 출원 공개 번호 제US 2009/0022659호 및 가르시아-마르티네즈 등(Garcia-Martinez 등)의 U.S. 특허 제7,935,340호에 교시되며, 이들 각각의 개시내용은 전체가 본원에 참고로 편입된다.
스크리닝 검정
본 발명은 CGRP 연관된 질환 또는 장애의 증상을 나타내는 환자에서 CGRP와 연관된 질환 및 장애의 식별을 지원하도록 설계된 스크리닝 검정을 또한 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 대상체에서 인슐린 무감각 (내성) 또는 글루코오스 이용을 검출하는 검정을 포함한다. 상기 대상체는 임의로 단식 상태 또는 식사후 상태일 수 있다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-CGRP 항체 또는 이의 CGRP 결합 단편은 CGRP 연관된 질환 또는 장애의 증상을 나타내는 환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서 CGRP의 존재를 검출하기 위해 사용된다. CGRP 또는 이의 상승된 수준의 존재는 비교할만한 생물학적 샘플 중의 CGRP의 전-질환 수준과 비교하여 CGRP 연관된 질환 또는 장애를 진단하는데 유익할 수 있다.
본 발명의 또 하나의 구현예는 번역후 개질된 항-CGRP 항체 또는 이의 결합 단편을 사용하여 상기 환자로부터의 생물학적 샘플에서 CGRP 발현 수준을 검정함을 포함하는, 본원에서 식별된 CGRP 연관된 질환 또는 장애의 증상을 나타내는 환자에서 CGRP 연관된 질환 또는 장애의 진단을 지원하기 위한 진단 또는 스크리닝 검정을 제공한다. 항-CGRP 항체 또는 이의 결합 단편은 본 개시내용에서 이전에 나타낸 바와 같은 검출가능한 잔기를 포함하도록 번역후 개질될 수 있다.
생물학적 샘플 중의 CGRP의 수준은 본원에 나타낸 바와 같은 개질된 항-CGRP 항체 또는 이의 결합 단편을 사용하고 CGRP의 표준 수준(예: 정상적인 생물학적 샘플 중의 수준)에 대한 생물학적 샘플 중의 CGRP의 수준을 비교하여 결정할 수 있다. 숙련된 임상의는 일부 가변성이 정상적인 생물학적 샘플 사이에 존재할 수 있음을 이해하고, 결과를 평가할 때 그것을 고려할 것이다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 본 발명의 항-CGRP 항체를 사용하여 CGRP 발현 수준을 손상된 글루코오스 대사의 특정한 단계와 관련시킬 수 있다. 예를 들면, 순환성 CGRP의 수준을 글루코오스 및/또는 인슐린 수준과 관련시키면 인슐린 무감각 또는 고혈당증의 수준을 설정하도록 한다. 인슐린 민감성은, 예를 들면, 전문이 본원에 참고로 편입된 문헌(참조: Muniyappa 등 (Am J Physiol Endocrinol Metab 294:E15-E26, 2008))에 기재된 바와 같이, 당해 기술 분야에 공지된 방법을 사용하여 대상체에서 추가로 측정될 수 있다. 간단히 말해서, 인슐린 민감성은 고인슐린혈증-정상혈당 글루코오스 클램프, 인슐린 억제 시험, QUICKI, HOMA, 1/인슐린 또는 마츠다 지수(Matusda index)를 포함하는 다양한 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 당업자는 임상적으로 정의된 당뇨병 발병 단계 또는 전-당뇨병에 상응하는 CGRP 발현 범위를 확립하기 위해 수많은 대상체에서 CGRP를 측정할 수 있을 것이다.
상기 인용된 검정은 또한 질환 또는 장애를 모니터링하는데 유용할 수 있고, 이때 CGRP 연관된 질환 또는 장애를 갖는 것으로 간주되는 환자로부터의 생물학적 샘플에서 수득된 CGRP의 수준을, 상기 환자에서 CGRP 수준이, 예를 들면, 치료 섭생으로 변화되었지를 확인하기 위해, 동일한 환자로부터 이전 생물학적 샘플에서 CGRP의 수준과 비교한다. 당업자는 상이한 간격으로 환자의 CGRP를 측정함으로써, 글루코오스를 대사시키는 개인의 능력에 대한 손상의 진행이 결정될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
본 발명은 또한 진단 조성물의 진단적 유효량을 투여함을 포함하는, CGRP를 발현시키는 세포의 존재를 검출하는 생체내 영상화 방법에 관한 것이다. 상기한 검출은 당뇨병 또는 당뇨병을 발병시킬 위험이 있는 환자를 위한 효과적인 치료 프로토콜을 설계하기 위한 계획 섭생의 일부로서 유용할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명의 방법은 본원에 개시된 항-CGRP 항체와 조합하여 손상된 글루코오스 대사, 예를 들면, 인슐린 내성, 손상된 인슐린 분비 또는 고혈당증 치료용으로 사용된 하나 이상의 조성물을 포함한다. 예를 들면, 하나 이상의 설포닐 우레아, PPAR-감마 작용제, GPL-1 수용체 작용제, 디펩티딜 펩티다제 IV 억제제, 아밀린 유사체, 바이구아나이드, 도파민 D2 수용체 작용제, 메티글리티나이드, 알파-글루코시다제 억제제, 항이상지질혈증 담즙산 봉쇄제, 인슐린, 사이토카인 요법, 유전자 요법, 및 항체 요법, 뿐만 아니라 항-CGRP 항체 또는 이의 단편이 특히 관심이 있다. 바이구아나이드의 예는 메트포르민, 예를 들면, 글루코파아지 및 글루코파이지 XR(Bristol Myers Squibb/Merck Serono), 포르타메트(Watson), 글루멧자(Biovail/Depomed/Santarus) 및 일반 약품(generics)을 포함한다. 설포닐우레아의 예는 글리메피라이드, 예를 들면, 아마릴(Sanofi) 및 일반 약품; 글리피자이드, 예를 들면, 글루코트롤 및 글루코트롤 XL(Pfizer) 및 및 일반 약품; 글리부라이드/글리벤클라마이드, 예를 들면, 디아베타(Sanofi), 마이크로나제/글리나제(Pfizer) 및 일반 약품; 메트포르민 + 글리부라이드, 예를 들면, 글루코반스(Bristol Myers Squibb), 수구안 M(Sanofi-Aventis), 글리코레스트, 글루코노름(Abiogen), 바이-유글루콘(Roche) 및 일반 약품; 메트포르민 + 글리피자이드, 예를 들면, 메타글립(Bristol Myers Squibb), 및 일반 약품을 포함한다. PPAR-감마 작용제의 예는 로시글리타존, 예를 들면, 아반디아(GlaxoSmithKline); 피오글리타존, 예를 들면, 악토스Pioglitazone such as Actos (Takeda) 및 일반 약품; 스로시글리타존 + 메트포르민, 예를 들면, 아반다멧(GlaxoSmithKline); 피오글리타존 + 메트포르민, 예를 들면, 악토플러스 멧 XR(Takeda); 피오글리타존 + 글리메피라이드, 예를 들면, 아반다릴/아바글림(GlaxoSmithKline); 피오글리타존 + 글리메피라이드, 예를 들면, 두에택트/탄데막트/소니아스(Takeda)를 포함한다. GLP-1 수용체 작용제의 예는 엑세나타이드, 예를 들면, 바이엣타(Bristol Myers Squibb/AstraZeneca); 리라글루타이드, 예를 들면, 빅토자(Novo Nordisk); 엑세나타이드 LAR, 예를 들면, 바이두레온(Bristol Myers Squibb/AstraZeneca)을 포함한다. 디펩티딜 펩티다제 IV(DPP-IV 또는 DPP4) 억제제의 예는 시타글립틴, 예를 들면, 자누비아(Merck); 빌다글립틴, 예를 들면, 갈부스(Novartis); 삭사글립틴, 예를 들면, 올글리자(Bristol Myers Squibb/AstraZeneca); 알로글립틴, 예를 들면, 네시나(Takeda/Furiex); 리나글립틴, 예를 들면, 트라젠타(Boehringer Ingelheim/Eli Lilly); 테넬리글립틴, 예를 들면, 테넬리아(Mitsubishi Tanabe/Daiichi Sankyo); 시타글립틴 + 메트포르민, 예를 들면, 자누멧(Merck) 및 자누멧 XR(Merck); 시타글립틴 + 심바스타틴, 예를 들면, 주비신크(Merck); 빌다글립틴 + 메트포르민, 예를 들면, 우르크레아스(Novartis); 삭사글립틴 + 메트포르민, 예를 들면, 콤비글리제/콤비글리제 XR(AstraZeneca/Bristol Myers Squibb); 알로글립틴 + 피오글리타존, 예를 들면, 리오벨(Takeda/Furiex); 리나글립틴 + 메트포르민, 예를 들면, 젠타두에토(Boehringer Ingelheim/Eli Lilly)를 포함한다. 메글리티나이드의 예는 레파글리나이드, 예를 들면, 글루코노름/프란딘/노보노름(Daiichi Sankyo/Fournier Pharma/Novo Nordisk); 나테글리나이드, 예를 들면, 스타릭스(Novartis), 파스틱(Daiichi Sankyo), 스타시스(Astellas) 및 일반 약품; 미티글리나이드, 예를 들면, 글루패스트(Kissei/Takeda)를 포함한다. 알파-글루코시다제 억제제의 예는 아카르보스, 예를 들면, 프레코스/글루코베이(Bayer) 및 일반 약품; 미글리톨, 예를 들면, 글리셋(Pfizer), 디아스타볼(Sanofi), 세이불레(Sanwa Kagaku) 및 일반 약품; 보글리보스, 예를 들면, 바센(Takeda) 및 일반 약품을 포함한다. 답즙산 봉쇄제의 예는 콜레세벨람, 예를 들면, 콜레스타겔(Sanofi), 웰콜(Daiichi Sankyo)을 포함한다. 도파민 D2 수용체 작용제의 예는 브로모크립틴, 예를 들면, 사이클로셋(Santarus)을 포함한다. 아밀린 유사체의 예는 프람린타이드, 예를 들면, 심린(Bristol Myers Squibb/AstraZeneca)을 포함한다. 속효형 인슐린의 예는 인슐린 리스프로, 예를 들면, 후말로그(Eli Lilly); 인슐린 아스파르트, 예를 들면, 노보로그(Novo Nordisk), 노보라피드(Novo Nordisk), 인슐린 글루리신, 예를 들면, 아피드라(Sanofi)를 포함한다. 일반 인간 인슐린의 예는 휴물린/유물린 라피드(Eli Lilly), 노볼린 R(Novo Nordisk), 액트라피드(Sanofi)를 포함한다. 중간체 작용 인슐린의 예는 휴물린 N(Eli Lilly), 노볼린 N(Novo Nordisk)을 포함한다. 장기간 지속되는 예는 인슐린 글라르긴, 예를 들면, 란투스(Sanofi) 및 인슐린 데테미르, 예를 들면, 레베미르(Novo Nordisk)를 포함한다.
본 발명은 CGRP에 대한 본 발명의 항-CGRP 항체의 결합을 검출하기 위한 키트를 추가로 제공한다. 특히, 키트는 본 발명의 항-CGRP 항체 또는 이의 면역반응성 단편과 특이적으로 반응성인 CGRP의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 키트는 또한 기질에 결합된 항체, 항원과 반응성인 2차 항체 및 2차 항체와 항원의 반응을 검출하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 이러한 키트는 ELISA 키트일 수 있으며, 기질, 적절할 경우 1차 및 2차 항체, 및, 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같이, 검출가능한 잔기, 효소 기질, 및 발색 시약과 같은 임의의 다른 필수 시약을 포함할 수 있다. 진단 키트는 면역블랏 키트 형태일 수도 있다. 진단 키트는 화학발광성 키트 형태일 수도 있다(참조: Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD). 진단 키트는 란탄족-기반 검출 키트일 수도 있다(참조: PerkinElmer, San Jose, CA).
숙련된 임상의는 생물학적 샘플이 혈청, 혈장, 소변, 타액, 점액, 흉막액, 활액 및 척수액이 포함되나, 이에 한정되지 않음을 이해할 것이다.
CGRP와 연관된 질환 및 장애의 증상을 개선 또는 감소, 또는 치료 또는 예방하는 방법
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 단편은 CGRP와 연관된 질환 및 장애의 증상을 개선 또는 감소시키거나 치료 또는 예방하는데 유용하다. 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 단편 뿐만 아니라 조합은 이하 보다 상세히 기재된 바와 같이 약제학적 조성물의 형태로 CGRP와 연관된 질환 및 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료학적 유효량으로 투여될 수도 있다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 단편은 당뇨병, 전-당뇨병, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병 또는 임신성 당뇨병의 결과로서 손상된 글루코오스 내성, 인슐린 내성(무감각), 손상된 인슐린 분비, 지방독성, 고혈당증, 췌장 베타 세포 부전의 증상을 개선 또는 감소시키거나 치료 또는 예방하는데 유용하다.
예시적 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 단편은 당뇨병이 발병할 위험이 있는 개인, 예를 들면, 전-당뇨병을 진단받은 개인에게 투여될 수 있다. 이론으로 제한하고자 하지 않고, 인슐린 민감성을 회복함으로써, 대상체 항-CGRP 항체는 당뇨병으로의 진행을 지연시키거나 방지할 수 있을 것으로 간주된다.
추가의 예시적 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 단편은 또 하나의 치료, 예를 들면, 메트포르민, 피오글리타존, 설포닐우레아, 글리나이드, 경구 티아졸리딘디온(TZD), 예를 들면, 피오글리타존, 글리카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 작용제, 예를 들면, 엑세나타이드, DPP4 억제제, 예를 들면, 시타글립틴, 빌다글립틴, 삭사글립틴, 알로글립틴, 리나글립틴 또는 테넬리글립틴, 또는 병용 요법, 예를 들면, 메트포르민 및 피오글리타존, 메트포르민 및 설포닐우레아, 메트포르민 및 글리나이드, 메트포르민 및 TZD, 메트포르민 및 피오글리타존, 메트포르민 및 GLP-1 작용제, 메트포르민 및 엑세나타이드, 시타글립틴 및 메트포르민, 시타글립틴 및 심바스타틴, 빌다글립틴 및 메트포르민, 삭사글립틴 및 메트포르민, 알로글립틴 및 피오글리타존, 또는 리나글립틴 및 메트포르민에 의한 치료로 정상혈당을 달성하지 못하는 환자에게 투여될 수 있다.
추가의 예시적 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 단편은 비만의 예방 또는 치료를 위해, 예를 들면, 적어도 25의 체질량 지수를 갖는 개인에게 투여된다. 이론에 의해 제한하고자 하지 않고, 대상체 항-CGRP 항체는 말초 및/또는 간 글루코오스 이용을 증가시키고, 이에 의해 대사율을 증가시키고 체중 손실에 기여할 수 있다. 상기한 항-CGRP 항체는 또 하나의 항-비만제, 예를 들면, 오를리스타트, 리모나반트, 시부트라민, 펩타이드 YY(PYY, 식욕을 감소시키는 36 아미노산 펩타이드), PYY 유사체, CB-1 길항제, 리모나반트, 렙틴, 렙틴 유사체 또는 펜테르민과 함께 투여될 수 있다.
투여
본 발명의 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 CGRP 결합 단편 뿐만 아니라 상기한 항체 또는 항체 단편의 조합은 수령 대상체의 체중 1kg 당 약 0.1 내지 100.0mg의 농도로 대상체에게 투여된다. 본 발명의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 CGRP 결합 단편 뿐만 아니라 상기한 항체 또는 항체 단편의 조합은 수령 대상체의 체중 1kg 당 약 0.4mg의 농도로 대상체에게 투여된다. 본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 CGRP 결합 단편 뿐만 아니라 상기한 항체 또는 항체 단편의 조합은 26주 이하 마다 1회의 빈도, 예를 들면, 16주 이하 마다 1회, 8주 이하 마다 1회, 4주 이하 마다 1회, 2주 이하마다 1회, 1주 이하마다 1회 또는 1일 1회 이하의 빈도로 수령 대상체에게 투여된다.
Fab 단편은 2주 이하 마다, 1주 이하 마다, 1일 1회 이하, 1일 수회 및/또는 몇 시간 마다 투여될 수 있다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 환자는 1일 1 내지 6회의 분할 용량으로 또는 목적하는 결과를 수득하기에 효과적인 지속 방출 형태로 주어진 0.1mg/kg 내지 40mg/kg의 Fab 단편을 수용한다.
주어진 환자에게 투여된 항체 또는 Fab의 농도는 두 개의 선행 단락에서 상기 제시된 예시적 투여 농도보다 크거나 작을 수 있다.
당업자는, 예를 들면, 본원의 개시내용 및 문헌(참조: Goodman, L. S., Gilman, A., Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. (2006). Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. New York: McGraw-Hill; Howland, R. D., Mycek, M. J., Harvey, R. A., Champe, P. C., & Mycek, M. J. (2006). Pharmacology. Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 및 Golan, D. E. (2008). Principles of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Philadelphia, Pa., [etc.]: Lippincott Williams & Wilkins)의 교시에 의해 유도되는 통상적인 실험을 통하여 효과적인 투여량 및 투여 빈도를 결정할 수 있다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 CGRP 결합 단편 뿐만 아니라 상기한 항체 또는 항체 단편의 조합은 대상체에게 약제학적 제형으로 투여된다.
"약제학적 조성물"은 포유동물에게 투여하기에 적합한 화학적 또는 생물학적 조성물을 의미한다. 이러한 조성물은 구강, 표피, 경막외, 흡입, 동맥내, 심장내, 뇌심실내, 진피내, 근육내, 비강내, 안구내, 복강내, 척수내, 척추강내, 정맥내, 경구, 비경구, 관장 또는 좌약을 통한 직장내, 피하(subcutaneous), 피하(subdermal), 설하, 경피 및 경점막을 포함하나, 이에 한정되지 않는 하나 이상의 수많은 경로를 통한 투여용으로 특이적으로 제형화될 수 있다. 또한, 투여는 주사, 분말, 액체, 겔, 액적 또는 다른 투여 수단에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-CGRP 항체 또는 이의 CGRP 결합 단편 뿐만 아니라 상기한 항체 또는 항체 단편의 조합은 임의로 하나 이상의 활성제와 함께 투여될 수 있다. 이러한 활성제는 진통제, 항히스타민제, 해열제, 항염증제, 항생제, 항바이러스제 및 항-사이토카인 제제를 포함한다. 활성제는 TNF-α, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-α, IFN-γ, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, 간세포 성장 인자(HGF), 헵시딘의 작용제, 길항제 및 조절물질을 포함하고, 상기한 것 중의 임의의 것에 대해 반응성인 항체 및 이들의 수용체 중의 임의의 것에 대해 반응성인 항체를 포함한다. 활성제는 또한 2-아릴프로피온산, 아세클로페낙, 아세메타신, 아세틸살리실산 (아스피린), 알클로페낙, 알미노프로펜, 암모시프린, 암파이론, 아릴알칸산, 아자프로파존, 베노릴레이트/베로릴레이트, 베녹사프로펜, 브롬페낙, 카프로펜, 셀레콕십, 콜린 마그네슘 살리실레이트, 클로페존, COX-2 억제제, 덱시부프로펜, 덱스케토프로펜, 디클로페낙, 디플루니살, 드록시캄, 에텐자마이드, 에토돌락, 에토리콕십, 파이슬라민, 페남산, 펜부펜, 페노프로펜, 플루페남산, 플루녹사프로펜, 플루르바이프로펜, 이부프로펜, 이부프록삼, 인도메타신, 인도프로펜, 케부존, 케토프로펜, 케토롤락, 로르녹시캄, 록소프로펜, 루미라콕십, 마그네슘 살리실레이트, 메클로페남산, 메페남산, 멜록시캄, 메타미졸, 메틸 살리실레이트, 모페부타존, 나부메톤, 나프록센, N-아릴안트라닐산, 신경 성장 인자(NGF), 옥사메타신, 옥사프로진, 옥시캄, 옥시펜부타존, 파레콕십, 페나존, 페닐부타존, 페닐부타존, 피록시캄, 피르프로펜, 프로펜스, 프로글루메타신, 피라졸리딘 유도체, 로페콕십, 살리실 살리실레이트, 살리실아미드, 살리실레이트, 서브스턴스 P, 설핀파이라존, 설린닥, 수프로펜, 테녹시캄, 티아프로펜산, 톨페남산, 톨메틴 및 발데콕십을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
항히스타민제는 히스타민의 작용 또는 세포(예: 비만 세포)로부터 이의 방출에 대향하는 임의의 화합물일 수 있다. 항히스타민제는 아크리바스틴, 아스테미졸, 아자타딘, 아젤라스틴, 베타타스틴, 브롬페니라민, 부클리진, 세티리진, 세티리진 유사체, 클로르페니라민, 클레마스틴, CS 560, 사이프로헵타딘, 데슬로라타딘, 덱스클로르페니라민, 에바스틴, 에피나스틴, 펙소페나딘, HSR 609, 하이드록시진, 레보카바스틴, 로라티딘, 메트스모폴라민, 미졸라스틴, 노라스테미졸, 펜인다민, 프로메타진, 피릴아민, 테르페나딘, 및 트라닐라스트를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
항생제는 아미카신, 아미노글리코사이드, 아목시실린, 암피실린, 안사마이신, 아르스페나민, 아지트로마이신, 아즐로실린, 아즈트레오남, 바시트라신, 카바세펨, 케바페넴, 카르베니실린, 세파클로르, 세파드록실, 세팔렉신, 카팔로틴, 세팔로틴, 세파만돌, 세파졸린, 세프디니르, 세프디토렌, 세페핌, 세픽심, 세포페라존, 세포탁심, 세폭시틴, 세프포독심, 세프프로질, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세팔로스포린, 클로르암페니콜, 실라스타틴, 시프로플록사신, 클라리트로마이신, 클린다마이신, 클록사실린, 콜리스틴, Co-트리목사졸, 달포프리스틴, 데메클로사이클린, 디클록사실린, 디리트로마이신, 도리페넴, 독시사이클린, 에녹사신, 에르타페넴, 에리트로마이신, 에탐부톨, 플루클록사실린, 포스포마이신, 푸라졸리돈, 푸시드산, 가티플록사신, 젤다나마이신, 겐타미신, 글리코펩타이드, 허비마이신, 이미페넴, 이소니아지드, 카나마이신, 레보플록사신, 린코마이신, 리네졸라이드, 로메플록사신, 로라카르베프, 매크롤라이드, 마페나이드, 메로페넴, 메티실린, 메트로니다졸, 메즐로실린, 미노사이클린, 모노박탐, 목시플록사신, 무피로신, 나프실린, 네오마이신, 네틸미신, 니트로푸란토인, 노르플록사신, 오플록사신, 옥사실린, 옥시테트라사이클린, 파로모마이신, 페니실린, 페니실린, 피페라실린, 플라텐시마이신, 폴리믹신 B, 폴리펩타이드, 프론토실, 피라진아미드, 퀴놀론, 퀴누프리스틴, 리팜피신, 리팜핀, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 설파세트아미드, 설파메티졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 설폰아미드, 테이코플라닌, 텔리트로마이신, 테트라사이클린, 테트라사이클린, 티카실린, 티니다졸, 토브라마이신, 트리메토프림, 트리메토프림-설파메톡사졸, 트롤레안도마이신, 트로바플록사신, 및 반코마이신을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
활성제는 또한 알도스테론, 베클로메타손, 베타메타손, 코르티코스테로이드, 코르티솔, 코르티손 아세테이트, 데옥시코르티코스테론 아세테이트, 덱사메타존, 플루드로코르티손 아세테이트, 글루코코르티코이드, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 스테로이드, 및 트리암시놀론을 포함한다. 이러한 활성제의 임의의 적합한 조합도 또한 고려된다.
"약제학적 부형제" 또는 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 담체, 보통 액체이며, 여기서 활성 치료제가 제형화된다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 활성제는 본원에서 기재된 인간화된 항체 또는 이의 하나 이상의 단편이다. 부형제는 화학적 및/또는 생물학적 안정성, 및 방출 특성을 제공할 수 있지만, 제형에 임의의 약리학적 활성을 제공하지 않는다. 예시적인 제형은, 예를 들면, 참고로 편입된 문헌(참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed., Grennaro, A., Ed., 1995)에서 찾아볼 수 있다.
본원에 사용된 "약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "부형제"는 생리학적으로 양립가능한 임의의 및 모든 용매, 분산 배지, 코팅물, 항균제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제를 포함한다. 하나의 구현예에서, 담체는 비경구 투여용으로 적합하다. 대안적으로, 담체는 정맥내, 복강내, 근육내 또는 설하 투여용으로 적합할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 멸균 주사가능한 용액 또는 분산물의 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 이러한 배지 및 제제의 사용은 당해 기술 분야에 익히 공지되어 있다. 임의의 종래의 배지 또는 제제가 활성 화합물과 불양립성인 한을 제외하고, 본 발명의 약제학적 조성물에서 이의 사용이 고려된다. 보충 활성 화합물도 또한 조성물에 편입될 수 있다.
약제학적 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건하에 멸균성이고 안정성이어야 한다. 본 발명은 약제학적 조성물이 동결건조된 형태로 존재한다는 것을 고려한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제형화될 수 있다. 담체는, 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 배지일 수 있다. 본 발명은 약제학적 조성물에 안정제의 포함을 고려한다. 적절한 유체성은, 예를 들면, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지시킬 수 있다.
많은 경우에, 조성물에 등장성 제제, 예를 들면, 당, 폴리알코올, 예를 들면, 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 모노스테아레이트 염 및 젤라틴과 같은 제제를 포함시킴으로써, 주사가능한 조성물의 흡수가 연장될 수 있다. 또한, 알칼리성 폴리펩타이드는 적기 방출 제형으로, 예를 들면, 서방출 중합체를 포함하는 조성물로 제형화될 수 있다. 활성 화합물은 빠른 방출로부터 화합물을 보호하는 담체, 예를 들면, 이식물 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형으로 제조할 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예를 들면, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산 및 폴리락트산, 폴리글리콜 공중합체(PLG)가 사용될 수 있다. 이러한 제형을 제조하기 위한 다수의 방법이 당업자에게 공지되어 있다.
인용된 구현예 각각에 대해, 화합물은 다양한 투여 형태로 투여될 수 있다. 당해 기술 분야의 숙련가에게 공지된 임의의 생물학적으로 허용가능한 투여 형태 및 이의 조합이 고려된다. 이러한 투여 형태의 예는, 비제한적으로, 재구성가능한 분말, 엘릭시르, 액체, 용액, 현탁액, 에멀젼, 분말, 과립, 입자, 극미립자, 분산성 과립, 카셰, 흡입제, 에어로졸 흡입제, 패치, 입자 흡입제, 이식물, 데포 이식물, 주사제(피하, 근육내, 정맥내, 및 진피내 포함), 주입물 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 다양한 예시된 구현예의 상기한 설명은 총망라하거나 본 발명을 개시된 정확한 형태로 제한하고자 하지 않는다. 본 발명의 특정 구현예 및 실시예는 예시 목적으로 본원에 기재되는 반면, 관련 기술 분야의 숙련가가 인지하는 바와 같이, 다양한 등가의 변형이 본 발명의 범위 내에서 가능하다. 본원에 제공된 본 발명의 교시를 상기한 실시예 이외의 다른 목적에 적용할 수 있다.
이들 및 다른 변화가 상기한 상세한 설명에 비추어 본 발명에 이루어질 수 있다. 일반적으로, 하기 특허청구범위에서, 사용된 용어는 본 발명을 명세서 및 특허청구범위에 개시된 특정 구현예에 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 따라서, 본 발명은 개시내용에 의해 제한되지 않고, 대신 본 발명의 범위는 다음 특허청구범위에 의해 전적으로 결정되어야 한다.
본 발명은 상기 설명 및 실시예에 특별히 기재된 것들 이외의 방식으로 실시될 수 있다. 본 발명의 수많은 변형 및 변화가 상기 교시에 비추어 가능하고, 따라서 첨부된 특허청구범위의 범위내이다.
항원-특이적 B 세포의 클론 집단을 수득하는 방법에 관련된 특정 교시는 개시내용이 본원에 전적으로 참고로 편입된 미국 가특허 출원 번호 제60/801,412호(2006년 5월 19일 출원)에 개시되어 있다.
토끼 유도된 단클론성 항체의 인간화 및 항원 결합 친화도를 유지시키기 위한 바람직한 서열 변형에 관련된 특정 교시는 개시내용이 전체로 본원에 침고로 편입된, 2008년 5월 21일자로 출원된 "신규한 토끼 항체 인간화 방법 및 인간화된 토끼 항체"란 명칭의 국제 공보 번호 제WO/2008/144757호에 상응하는 국제 출원 번호 제PCT/US2008/064421호에 개시되어 있다.
교배 적격 효모를 사용하여 항체 또는 이의 단편을 생성하는 방법 및 상응하는 방법에 관련된 특정 교시는 개시내용이 전체로 본원에 참고로 편입된, 2006년 5월 8일자로 출원된 미국 특허 출원 번호 제11/429,053호(U.S. 특허 출원 공개 번호 제US2006/0270045호)에 개시되어 있다.
특정 CGRP 항체 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드는 본 특허 출원에 수반되는 서열 목록에 개시되어 있고, 상기 서열 목록의 개시내용은 전체가 본원에 참고로 편입된다.
발명의 배경, 상세한 설명 및 실시예에서 인용된 각각의 문서(특허들, 특허 출원, 학술 논문, 요약, 매뉴얼, 서적 또는 다른 개시내용을 포함)의 전체 개시내용은 전체가 본원에 참고로 편입된다.
하기 실시예는 본 발명의 제조방법 및 사용 방법에 대한 완전한 개시내용 및 설명을 당업자에게 제공하기 위해 기재되어 있고, 본 발명으로서 간주되는 범위를 제한하고자 하지 않는다. 사용된 수치(예: 양, 온도, 농도 등)에 대한 정확성을 입증하기 위한 노력이 이루어졌지만, 실험적 오차 및 편차는 허용되어야 한다. 다르게 지적되지 않으면, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨온도이고, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다.
실시예
실시예 1
정상 랫트를 Ab14 100mg/kg(정맥내 경로에 의해, 클램프 절차 48시간 전에 단일 투여)으로 처리하고, 효과를 메트포르민 500mg/kg(경구 경로에 의해, 클램프 절차 24시간 및 4시간 전에 2회 투여)와 비교했다. 이 실시예에서 사용된 항체는 서열식별번호 132 및 134의 경쇄 및 폴리펩타이드 중쇄로 구성되었다.
혈당은 처리전, 메트포르민 및 Ab14로 처리후 18시간, 및 Ab14로 처리후 42시간에서 측정했다. 2개 화합물은 이들 조건에서 혈당에 영향을 미치지 않았다. 혈당은 클램프 직전에 단식 상태에서 측정하고, 단지 메트포르민만이 유의미한 감소 효과(17%)를 가졌다. 처리전, 및 메트로모르핀으로 처리후 18시간, 및 Ab14로 처리후 42시간에서 섭식 상태에서 혈장 인슐린은 인슐린 내성 지수 HOMA-IR(유의미하지 않음) 뿐만 아니라 2개 화합물에 의해 약간 감소했다.
혈장 샘플은 클램프 절차 직전, 처리후 48시간에서 Ab14 처리된 동물로부터 수득하고, Ab14 농도를 결정했다. 이러한 분석의 결과는 클램프 절차를 수행한 랫트에서 642 내지 797㎍/mL Ab14 범위의 전신 노출을 확인시켰다.
전신 인슐린 민감성을 평가하기 위해, 클램프 절차는 0.3U/kg/h 인슐린 및 3H-글루코오스를 사용하여 수행했다. 랫트는 관류 180분 전에 6시간 동안 단식시켰다. 정상 상태는 주입 140분 후에 도달했고, 글루코오스 주입 속도(GIR)의 평균, 전신 글루코오스 턴오버(GTO), 간 글루코오스 생산(HGP), 당분해 및 글리코겐 합성을 140분 내지 180분으로부터 계산했다. 14-C-2-데옥시글루코오스의 볼러스를 클램프 종료전 1시간에서 투여하여 조직 특이적 글루코오스 이용을 측정했다. 예상대로, 메트포르민은 당분해 및 글리코겐 합성을 증가시킴으로써 GIR(27%) 및 GTO(30%)를 유의미하게 증가시켰다. 메트포르민은 혼합된 외측 근육(VL, 49% p<0.05)에서, 당분해 장지신근 근육(EDL, 19% NS)에서 글루코오스 이용을 증가시켰고, 짐작컨대 심근 지방산 산화1의 자극에 기인하여 심장(-39%, p<0.01)에서 글루코오스 이용을 감소시켰다. Ab14는 GIR 및 GTO(NS)를 증가시키는 경향이 있었고, VL(70%, p<0.01), EDL(26%, NS) 및 산화적 가자미근(27%, NS)에서 글루코오스 이용에 대한 메트포르민보다 강력한 효과를 가졌다. 또한, 심장(21%, NS)에서 글루코오스 이용을 증가시키는 경향이 있었다. 메트포르민과 유사하게, Ab14는 화이트 지방 조직(신근 및 피하)에서 글루코오스 이용율에 영향을 미치지 않았다.
결론적으로, Ab14는 근육(VL)에서 글루코오스 이용율에 대한 유의미한 효과와 함께 급성 처리후 정상 랫트에서 전신 글루코오스 이용을 개선시키는 우수한 경향을 가졌다.
방법
수컷 스프래그 다우리 랫트는 실험 단계 전체에 걸쳐 샤육 케이지(1500cm2 × 21cm)에 수용했다. 동물 케이지 리터는 1주 1회 교환시켰다. 이들은 순응 기간 동안 3 내지 4마리 동물 그룹으로 수용하고, 클램프 절차까지 수술후 개별적으로 수용했다. 역전된 12시간 광 주기(08:00에 소등), 22±2℃ 및 55±10% 상대 습도. 표준 식이(RM1(E)801492, SDS) 및 수돗물은 자유 섭취로 제공했다.
순응 기간 2주 후, 랫트를 마취(이소플루란)시키고, 카테터를 대퇴 정맥으로 실장했다. 회복 기간은 클램프 절차전 5 내지 6일째에 수행했다.
혈당(BG)은 혈당측정기로 꼬리 선단으로부터 07:30 내지 08:00(소등 직전)에 측정하고, 채혈(EDTA)은 혈장 인슐린을 측정한 직후에 수행했다. 하기 표는 조건을 기재한다:
Figure 112016010991102-pct00001
혈장 샘플은 인슐린 측정(ELISA 방법 사용) 때까지 -80℃에서 유지시켰다.
혈액 샘플(약 200μL)은 각 그룹 2 동물에 대해 클램프 절차 직전에 수득하고, 혈장(약 60μL)로 처리하고, 메소 스케일 디스커버리(MSD) ELISA 플랫폼을 사용하여 Ab14 농도의 후속 측정을 위해 -80℃에서 유지했다.
비히클 및 Ab14는 클램프 절차 T0의 48시간 전에 정맥내 경로에 의해 투여했다(클램프 2일전 02:00에서).
메트포르민은 클램프 절차 T0의 24시간 및 4시간 전에 경구 경로에 의해 투여했다(클램프 당일전 02:00 및 클램프 당일 10:00에서).
랫트는 클램프 개시 6시간 전에 단식시켰다(약 8시간, 채혈 직전).
고인슐린성-정상혈당 클램프는 추적자로서 3H-글루코오스0.3U/kg/h 인슐린 주입을 사용하여 02:00 pm(T0) 내지 05:00 pm(T+3h)에서 수행했다. 글루코오스 용액을 평행하게 주입하고, 주입 속도는 정상 상태(약 100 +/- 10mg/dL)에 도달하도록 조정했다. 혈당은 10분마다 혈당측정기를 사용하여 꼬리의 선단으로부터 측정했다. 혈액은 최후 시간(정상 상태) 동안 꼬리의 선단으로부터 수집하고(10μL), 하기 파라미터를 평가했다: 글루코오스 주입 속도; 전신 글루코오스 이용율; 간 글루코오스 생산 속도; 전신 글리코겐 및 당분해 속도.
개개 조직 글루코오스 이용율을 결정하기 위해, 대퇴 정맥을 통해 데옥시-D-글루코오스 2-14C(14C-2-DOG)의 랫트당 100μCi의 볼러스 주사를 D-[3-3H]-글루코오스 주입의 종료 60분 전에 수행했다. 혈장 14C-2-DOG 소실 및 글루코오스 농도는 주사후 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 45 및 60분에서 꼬리 정맥의 선단으로부터 샘플링된 혈액의 10μL 액적에서 측정했다. 실험의 종료시에, 외측 광근(VL), 장지신근(EDL) 및 가자미근, 정소상체 및 서혜 화이트 지방 조직, 심첨 및 피부(음성 대조군으로서)를 해부하고, 플래시 냉동시키고, -80℃에서 유지시켰다. 각 조직의 피스를 1M NaOH에 용해시키고, 그 다음 1M HCl로 중화시켰다. D-2-14C 데옥시글루코오스 6-포스페이트. D-2-14C 데옥시글로코오스는 아연 하이드록사이드(0.3M) 용액 또는 과염소산 용액(6%)의 사용에 의해 차별적으로 침전시켰다. 방사능 내용물 둘 다는 ng/mg/min으로 표현된 글루코오스 흡수를 평가하기 위해 측정했다.
혈장 인슐린 수준은 클램프의 종료시에 측정했다.
통계적 분석은 GraphPad 프리즘 소프트웨어를 사용하여 수행했다. 히스토그램은 던넷(Dunnet) 후 시험과 함께 일원 ANOVA를 사용하여 분석하고, 곡선은 본페로니 후 시험을 사용하여 이원 ANOVA를 사용하여 분석했다. 차이는 p 값이 <0.05인 경우에 유의미한 것으로 간주했다. NS: 유의미하지 않음.
결과 및 논의
혈당 및 인슐린 측정. 섭식 조건에서, 혈액 글루코오스 수준은 비히클 그룹(도 1a)과 비교하여 Ab14 100mg/kg으로 처리후 42시간 및 메트포르민 500mg/kg으로 처리후 18시간에서 영향을 미치지 않았다. 동시에, Ab14 및 메트포르민은 혈장 인슐린 수준을 각각 11% 및 18%(유의미하지 않음, 도 1b) 감소시켰다. 이어서, 인슐린 내성 HOMA-IR의 지수는 비히클 그룹(도 1c)과 비교하여 유사한 방식으로 감소되었다. 다른 한편으로, 6시간 단식 상태에서, 메트포르민은 처리후 30시간에서 혈당을 유의미하게 17% 감소시켰다(도 1d).
전신 글루코오스 유량. 고인슐린성 정상혈당 클램프는 Ab14 100mg/kg의 단일 투여후 48시간 및 메트포르민 500mg/kg의 최종 투여후 4시간에서 6시간 단식 상태하에 수행했다.
메트포르민은 비히클 그룹과 비교하여 주입 개시후 60분부터 GIR 진화를 증가시켰다. Ab14는 130분 주입후 주로 GIR 진화를 증가시키는 경향을 가졌다(도 2a).
글루코오스 주입 속도의 안정기는 모든 그룹에서 140분부터 도달했다. 혈당 수준은 이러한 정상 상태 동안 모든 그룹에서 유사했다(도 2b). 클램프 종료시에 혈장 인슐린 수준은 또한 모든 그룹에서 유사했다(도 2c). 클램프 종료시에 도달된 혈장 인슐린 수준은 섭식 상태에서 측정된 것과 거의 동일했고, 즉, 고인슐린혈증을 수득하기 위해 사용된 인슐린의 용량은 생리적이었다.
이어서, 글루코오스 유량은 주입 140분 내지 180분으로부터 계산했다(도 3). Ab14 및 메트포르민은 글루코오스 주입 속도를 각각 18%(NS) 및 27%(p<0.05) 증가시켰을 뿐만 아니라, 글루코오스 턴오버를 각각 18%(NS) 및 30%(p<0.05) 증가시켰다. 간 글루코오스 생산은 3개 그룹에서 인슐린의 어러한 과생리적 용량에 의해 완전히 억제되었다. Ab14는 당분해 속도에 영향을 미치지 않은 반면, 메트포르민은 이를 43%(NS) 증가시켰다. Ab14는 메트포르민(NS)과 유사하게 글리코겐 합성 속도를 23% 증가시켰다.
개개 조직 글루코오스 이용율은 또한 D-[3-3H)-글루코오스 주입의 종료전 60분에 도입된 대퇴 정맥을 통한 데옥시-D-글루코오스 2-14C(14C-2-DOG)의 랫트당 100μCi의 볼러스 주사를 사용하여 결정했다. 방사능 내용물 둘 다는 ng/mg/min로 표현된 글루코오스 흡수를 평가하기 위해 측정했다. 도 4a 내지 4c에 제시된 바와 같이, 혼합된 외측 근육(VL, 49% p<0.05), 당분해 장지신근 근육(EDL, 19% NS)에서 글루코오스 이용을 증가시켰고, 심장(-39%, p<0.01)에서 글루코오스 이용을 감소시켰으며, 이는 심근 지방산 산화의 자극에 기인하는 것으로 생각되는 메트포르민의 공지된 효과이다. Ab14는 글루코오스 주입 속도 및 전신 글루코오스 턴오버(NS)를 증가시키는 경향이 있었고, VL(70%, p<0.01), EDL(26%, NS) 및 산화적 가자미근(27%, NS)에서 글루코오스 이용에 대한 메트포르민보다 강력한 효과를 가졌다. 이는 또한 심장(21%, NS)에서 글루코오스 이용을 증가시키는 경향이 있었다. 메트포르민과 유사하게, Ab14는 화이트 지방 조직(심근 및 피하)에서 글루코오스 이용율에 영향을 미치지 않았다.
Ab14 혈장 농도 분석. 클램프 절차를 수행한 그룹 2 동물에 대한 Ab14 혈장 농도는 642 내지 797μg/mL 범위였고, 전신 노출의 최대 48시간을 지지했다.
결론. Ab14를 사용한 급성 처리는 혈장 인슐린을 약간 감소시켰고, 글리코겐 합성 및 근육 글루코오스 이용을 증가시킴으로써 전신 글루코오스 이용을 증가시키는 경향이 있었다.
실시예 2
본 실시예는 인슐린 내성의 랫트 모델에서 인슐린 민감성을 개선시키는 Ab14의 능력을 평가한다. 이 모델에서, 랫트는 포도당 과민증을 유도하기 위해 6주 동안 고지방(69%) 및 고푸룩토오스(14%) 식이(HFD)로 섭식시켰고, 이때 혈장 인슐린 수준은 통상의 음식을 섭식한 대조군 동물과 비교하여 유의미하게 증가되고 혈당은 약간 증가된다. 본 실시예에서 사용된 항체는 서열식별번호 132 및 134의 경쇄 및 폴리펩타이드 중쇄로 구성되었다.
6주 HFD 섭식 랫트는 Ab14로 2주 동안 처리하고, 2단계 고인슐린성 정상혈당 클램프는 인슐린 민감성을 평가하기 위해 수행했다. 인슐린의 생리적 용량을 제1 단계 동안 사용하고 인슐린의 약리적 용량을 제2 단계 동안 사용하여, 이들 2개 조건하에 각각 말초 및 간 인슐린 민감성의 효과를 평가했다.
요약
6주 후, HFD 랫트를 이의 포도당 과민증(경구 당부하 검사(OGTT) 동안 AUC 계산) 및 이의 HOMA-IR(인슐린 내성 지수)에 따라 치료 그룹으로 랜덤화했다. HFD 랫트는 음료수에서 10, 30 및 100mg/kg/주의 Ab14로 15일(정맥내, 1주 간격으로 2회 투여) 동안 또는 200mg/kg/1일의 메트포르민으로 매일 처리했다.
체중 및 음식 소비는 처리 10일까지 주당 3회 측정했다. HOMA-IR은 10일째 및 15일째에 측정했다. 2단계 클램프(5mU/kg/분 및 그 다음 15mU/kg/분 인슐린)는 15일째 또는 16일째에 수행했다. 글루코오스 턴오버(GTO)는 클램프 절차 동안 3H-글루코오스 추적자 주입을 사용하여 평가했다.
연구 종료시에, 정상 사료를 섭식한 대조군 랫트와 비교하는 경우, HFD 랫트는 체중, 단식 혈당, 혈장 인슐린 및 C 펩타이드의 유의미한 증가를 나타낼 뿐만 아니라, 2단계 고인슐린성 정상혈당 클램프 동안 글루코오스 주입 속도(GIR)의 유의미한 감소를 나타내는 것으로 관측되었다.
HFD + 비히클 대조군 그룹과 비교하는 경우, Ab14 처리는 체중 또는 음식 소비에 대해 어떠한 효과도 갖지 않은 반면, 메트포르민 그룹은 양 파라미터에서 유의미하게 감소되었다.
100mg/kg의 Ab14는 처리후 15일째에서 HOMA-IR을 38%까지 유의미하게 감소시켰다(단식 혈당 뿐만 아니라 혈장 인슐린을 감소시킴으로써). 메트포르민은 15일째에 HOMA-IR에 대한 비-유의미한(ns) 감소 효과를 가졌다. C-펩타이드는 또한 Ab14 처리에 의해 유의미하게 감소되었다(10mg/kg으로 30% 및 100mg/kg으로 29%).
증가된 GIR(ns)는 클램프의 제1 단계 동안 HFD 비히클 대조군 그룹과 비교하는 경우에 Ab14 처리된 그룹에서 관측된 반면, 메트포르민은 규모가 비교적 작은 GIR에 대해 증가 효과를 가졌다. 30 또는 100mg/kg의 Ab14 및 메트포르민 처리는 클램프의 2단계 동안 GIR을 유의미하게 증가시켰다(각각 36, 28 및 27%).
30mg/kg의 Ab14는 클램프 절차의 제1 단계(17%, ns) 동안 HFD 비히클 대조군 그룹과 비교하는 경우에 GTO를 증가시키는 경향이 있었다. 30mg/kg의 Ab14는 양 클램프 단계 동안 당분해 및 글리코겐 합성에 대해 약간 증가하는 효과(ns)를 가졌다.
간 글루코오스 생산(HGP)은 제1 클램프 단계(11 내지 20%) 동안 Ab14 또는 메트포르민 처리에 의해 약간, 그러나 유의미하지 않게 감소되었다. 제2 단계 동안, HGP는 HFD 비히클 대조군 그룹과 비교하는 경우에 10mg/kg(78%)의 Ab14에 의해 유의미하지 않게 감소되었고, HGP는 30 또는 100mg/kg의 Ab14에 의해 및 메트포르민에 의해 완전히 억제되었다.
결론적으로, 개선된 인슐린 내성(주로 간)은 HFD 랫트 모델에서 Ab14를 사용한 정맥내 투여 후에 관측되었다.
방법
82마리 스프래그 다우리 랫트(연구 개시시에 8주령, 평균 중량 약 250그램)은 실험 단계 전체에 걸쳐 사용 케이지(904cm2 × 23cm)에 수용했다. 동물 케이지 리터는 주당 3회 교환했다. 이들은 순응, HFD 및 치료 기간 동안 2 내지 3마리 동물 그룹으로 수용했다. 이어서, 랫트를 클램프 절차 때까지 수술후 개별적으로 수용했다. 랫트는 22±2℃에서 유지된 온도 및 55±10% 상대 습도와 함께 역전된 12시간 광 주기(8:00 am 소등)로 사육했다. 적어도 5일의 순응 기간을 HFD 섭식의 개시 전에 제공했다. 순응 단계 동안, 표준 식이(RM1(E) 801492, SDS) 및 수돗물을 임의로 제공했다.
순응 단계 후, 10마리 랫트는 정상 사료(NC)를 제공한 반면, 72마리 랫트는 실험 전체에 걸쳐 HFD(RD1, SAFE)를 제공했다.
고지방 식이 조성물은 다음과 같다(Kcal%): 단백질: 17.3%; 탄수화물(푸룩토오스): 14%; 지방(라드)): 68.7%; 콜레스테롤 1.65%, 콜산 0.65%.
HFD 섭식 6주 후, 랫트는 6시간 동안 단식시키고, 당부하 검사를 수행했다. 최저 AUC(약 17%)를 나타내는 랫트는 연구로부터 제외했다. 이어서, 잔여 랫트는 이의 AUC(글루코오스 내성 지수) 및 HOMA-IR(인슐린 내성 지수)에 따라 상이한 그룹으로 무작위 할당시켰다.
Ab14(10, 30, 100mg/kg) 및 비히클은 정맥내 경로에 의해 처리 아침, 1일째 및 8일째에 매주 투여했다(꼬리의 정맥을 통해, 이소플루란 마취하).
메트포르민(200mg/kg/1일)은 클램프 절차 때까지 약 2주 동안 음료수에 투여했다. 메트포르민으로 처리한 랫트는 1일째 및 8일째(꼬리의 정맥을 통해)에 비히클로 처리했다.
시험 그룹은 다음과 같다:
그룹 1: NC + 비히클 정맥내(n=10)
그룹 2: HFD + 비히클 정맥내(n=10)
그룹 3: HFD + Ab14 10mg/kg 정맥내(n=10)
그룹 4: HFD + Ab14 30mg/kg 정맥내(n=10)
그룹 5: HFD + Ab14 100mg/kg 정맥내(n=10)
그룹 6: HFD + 메트포르민 200mg/kg 음료수 중 + 비히클 정맥내(n=10)
HFD 섭식의 마지막 주 동안, 스크리닝 전에, 물 소비는 수돗물에 희석된 메트포르민을 평가하기 위해 당해 주 내에 3회 측정했다.
정상 사료 및 HFD의 6주 후, 82마리 랫트는 08:00 am 내지 02:00 pm(6시간) 단식시켰다. 글루코오스 볼러스는 02:00 pm(t0)에서 투여했다(2.5g/kg). 혈당은 t-30, 0, 15, 30, 60, 90, 120, 150분에 측정했다(혈당측정기 사용, 꼬리 선단으로부터 수집된 혈액 액적에서). 혈액은 혈장 인슐린(ELISA 방법)을 측정하기 위해 t-30에 꼬리 선단(EDTA 상에 40μL)으로부터 수집했다.
곡선하 면적(AUC)를 계산했다. 최고 AUC를 나타내는 12마리 HFD 섭식 랫트는 덜 글루코오스 불내성인 것으로 간주되었고, 연구로부터 제외되었다. 잔류 60마리 랫트는 균질 AUC, HOMA-IR 및 체중에 따라 6개 그룹으로 무작위 할당했다.
체중은 HFD의 처음 6주 동안 1주 1회 측정했다. 체중은 치료의 처음 10일 동안 1주 3회 측정했다. 음식 소비는 48시간 또는 72시간, 치료 직전 및 수술 절차(11일째) 때까지 치료 동안 1주 3회 측정했다.
치료 개시전(OGTT의 당일) 및 치료 10일째, 모든 랫트는 08:00 am부터 단식시켰다. 01:30 pm에서, 혈액을 꼬리 선단(EDTA 상에 40μL)으로부터 수집했다. 혈액 글루코오스(혈당측정기 사용) 및 혈장 인슐린(ELISA 방법)을 측정했다.
11일째에, 랫트를 마취시키고(이소플루란), 카테터를 대퇴 정맥에 이식했다. 회복 기간은 클램프 절차 4일 전에 수행했다.
클램프의 아침에, 랫트는 6시간(8:00 am부터 02:00 pm까지) 단식시켰다. 혈액의 샘플(약 160μL, EDTA 상에)을 꼬리의 선단으로부터 수집하고, 그룹 3, 4, 5 및 6의 각 랫트로부터 클램프 절차(-01:00 pm에서) 직전에, 혈장(약 60μL)으로 처리하고, Ab14 농도의 평가 때까지 -80℃에서 유지시켰다. 대조군 및 메트포르민 그룹은 항체 농도에 대해 분석되지 않았지만, 유사한 양의 혈액을 그룹 1, 2 및 7의 랫트로부터 수집했다(및 버렸다).
15일 또는 16일째에, 2단계 고인슐린성-정상혈당 클램프는 추적자(정상 사료 그룹 제외)로서 3H-글루코오스, 및 02:00 pm(T0)으로부터 04:00 pm(T+2h)까지 5mU/kg/분 인슐린 주입, 그 다음 04:00 pm으로부터 05:30 pm(T+3.5h)까지 15mU/kg/분 인슐린 주입을 사용하여 수행했다. 글루코오스 용액은 평행하게 주입하고, 주입 속도는 정상 상태(100 +/-10mg/dL)에 도달하도록 조정했다. 혈당은 혈당측정기를 사용하여 매 10분마다 꼬리의 선단으로부터 측정했다. 혈액은 각 단계의 정상 상태 동안 꼬리의 선단으로부터 규칙적으로 수집했다(10μL).
하기 파라미터를 평가했다: 글루코오스 주입 속도(모든 그룹에서); 전신 글루코오스 이용율(정상 사료 그룹 제외); 간 글루코오스 생산 속도(정상 사료 그룹 제외); 전신 글리코겐 및 당분해 속도(정상 사료 그룹 제외).
게다가, 정상 사료 그룹을 제외하고, 클램프 실험의 종료전 1시간에서, 14C-2DOG의 볼러스 주사를 수행하고, 하기 조직의 샘플을 클램프의 말기에 수집하고, 추가 평가를 위해 유지시켰다:
외측(VL) 근육; 장지신근(EDL) 근육; 가자미근 심첨; 정소상체 화이트 지방 조직 서혜 화이트 지방 조직 피부(음성 대조군).
혈장 인슐린 및 C 펩타이드 수준은 주입 개시 직전(약 T-30min.), 단계 1(T2h) 및 단계 2(T3.5h)의 정상 상태 종료시에 측정했다. 이를 위해, 채혈을 꼬리의 선단으로부터 수행했다(약 100μL, EDTA 상에서).
통계적 분석은 GraphPad 프리즘 소프트웨어를 사용하여 수행했다. 곡선은 본페로니 후-시험으로 ANOVA 이원을 사용하여 분석했다. 히스토그램은 HFD + 비히클 대조군 그룹 및 정상 사료 + 비히클 대조군 그룹을 비교하기 위해 t-시험을 사용하여 분석했다. 히스토그램은 HFD + 비히클 대조군 그룹에 대한 Ab14 및 메트포르민 그룹을 비교하기 위해 던넷 후-시험으로 ANOVA 일원을 사용하여 분석했다. 차이는, p-값이 <0.05인 경우, 유의미한 것으로 간주했다. NS: 유의미하지 않음.
결과
동물 모델 및 스크리닝. 8주령 랫트는 치료 개시전 7주 동안 푸룩토오스 농축된 고지방 식이(HFD, 69% 지방 및 16% 푸룩토오스)를 제공했다. 체중은 HFD 그룹에서 522±5g 대 정상 사료 제공한 대조군 그룹에서 448±13g이었다. 이어서, 체중의 16% 증가가 있었다(HFD하에 42일째에 t-시험으로 p<0.001, 도 5). 7주 후, 체중은 HFD 집단에서 187±3g까지 증가된 반면, 정상 사료를 제공한 대조군 그룹에서 158±9g까지 증가했다(42일째에 t-시험으로 p<0.001, 도 6).
HFD의 7주차 동안, 경구 당부하 검사를 수행하여 HFD 집단에서 포도당 과민증을 평가했다. 혈당 수준은 HFD 집단(에서 글루코오스 투여후 150분 때까지 보다 높게 유지되었다(도시되지 않음). T0에 대해 상대적으로 계산된 AUC는 대조군 사료-제공 랫트(도시되지 않음)와 비교하여 HFD 랫트에서 유의미하게 높았다(9%).
HOMA-IR(인슐린 내성 지수)은 OGTT의 t-30에 대해 계산했다. 보다 높은 AUC 및 보다 높은 HOMA-IR을 나타내는 랫트는 6개 그룹으로 무작위 할당했다. HOMA-IR(34%, 도시되지 않음) 및 체중(약 17%, p<0.001, 도 17) 뿐만 아니라 AUC는 대조군 사료-제공 그룹과 비교하여 HFD 그룹에서 보다 높았다(~9%, 도시되지 않음).
체중 및 음식 섭취 후속조치. 체중은 10일 치료 동안 추적했다. Ab14 처리는 체중에 대해 어떠한 효과도 없었다. 대조군 사료-제공 랫트의 체중은 HFD 비히클 랫트(도 7)보다 유의미하게 낮게 유지했다. Ab14(30mg/kg)은 약간 감소했고(ns), 메트포르민 200mg/kg은 치료 개시의 2일째로부터 체중 증가를 유의미하게 감소시켰다.
음식 소비는 예상대로 대조군 사료-제공 그룹보다 HFD 비히클에서 보다 낮았다. Ab14 처리는 후속조치 음식 섭취(도 8a) 또는 누적 음식 섭취(도 8b, 도시되지 않음)에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. 메트포르민은 누적 음식 소비를 25%까지 유의미하게 감소시켰다. 수술 과정 전에 동물의 단식은 9일째 및 10일째 사이에 음식 소비 측정을 파괴했다.
생화학적 파라미터. 단식 혈당은 각각 0일, 10일 및 15일째에 대조군 사료-제공 그룹과 비교하는 경우에 HFD 비히클 그룹에서 5%(ns), 11%(ns) 및 20%(p<0.001) 증가했다. Ab14 또는 메트포르민을 사용한 처리는 10일째에 어떠한 효과도 갖지 않았다. 100mg/kg의 Ab14를 사용한 처리는 HFD 비히클 그룹(도 9)과 비교하는 경우에 15일째에 단식 혈당에 대해 유의미한 감소 효과를 가졌다.
단식 혈장 인슐린은, 각각 0일, 10일 및 15일째에 대조군 사료-제공 그룹과 비교하는 경우, HFD 비히클 그룹에서 33%(ns), 49%(ns) 및 67%(p<0.01)까지 증가했다. Ab14 처리는 10일째에 어떠한 효과도 갖지 않는 반면, 메트포르민은 혈장 인슐린을 37%(ns)까지 감소시켰다. 10, 30 또는 100mg/kg의 Ab14 처리는 처리 15일 후에 혈장 인슐린을 각각 26, 16 또는 18%(ns) 감소시켰고, 메트포르민은 혈장 인슐린을 11%(ns, 도 10) 감소시켰다.
예상대로, 15일째에 혈장 C-펩타이드 수준 프로파일은 혈장 인슐린 수준과 유사했지만, 그 효과는 보다 현저하고 덜 가변적이었다. C-펩타이드는 대조군 사료-제공 그룹과 비교하여 HFD 비히클 그룹에서 67%까지 유의미하게 증가했다. 10, 30 또는 100mg/kg의 Ab14 처리는 C-펩타이드 수준을 각각 30%(p<0.05), 23%(ns) 및 29%(p<0.05) 감소시켰고, 메트포르민은 C-펩타이드를 13%(ns) 감소시켰다(도 11, 좌하측 패널).
HOMA-IR, 인슐린 내성 지수는 대조군 사료-제공 그룹과 비교하여 HFD 비히클 그룹에서 0일째에 36%(ns), 10일째에 42%(ns) 및 15일째에 98%(p<0.01) 증가했다. HFD 비히클과 비교하여, Ab14는 치료 10일 후에 어떠한 효과도 갖지 않은 반면, 메트포르민은 36%까지 감소 효과(ns)를 가졌다. 처리 15일 후, 10, 30 또는 100mg/kg의 Ab14는 HOMA-IR을 33%(ns), 17%(ns) 및 38%(p<0.05) 감소시킨 반면, 메트포르민은 HOMA-IR을 18%(ns, 도 12) 감소시키는 경향이 있었다.
과인슐린혈증 클램프. 도 13은 2단계 과인슐린혈증 클램프 동안 경시적으로 글루코오스 주입 속도(GIR)를 나타낸다. 제1 단계(5mU/kg/분 인슐린) 동안, 간 글루코오스 생산(HGP)은 불완전하게 억제되었고, 간 글루코오스 생산이 억제되는 경우, 글루코오스 주입 속도(GIR)는 제2 단계(15mU/kg/분 인슐린) 동안보다 낮았다.
대조군 사료-제공 그룹에 대한 GIR은 클램프 단계 둘 다 동안 HFD 비히클 그룹보다 높았고, HFD 랫트가 8 내지 9주의 식이 후에 인슐린-내성 표현형을 가졌음을 확인시켜 준다. 메트포르민은 제1 클램프 단계 동안 GIR에 대해 어떠한 효과도 없는 반면, GIR 안정기는 Ab14 처리된 그룹에서 약간 더 높았다(ns). 모든 처리된 그룹은 제2 클램프 단계 동안 HFD 비히클 그룹보다 높은 GIR 안정기로 관측되었고, 이때 유의미한 차이는 메트포르민 및 30 또는 100mg/kg의 Ab14에 대해 관측되었다(도 13). 통계적 유의성은 본페로니 후 시험 대 HFD로 이원 ANOVA를 사용하여 평가했다. 제1 클램프 단계 동안 GIR은 정상 사료 대조군, 비히클 처리된 랫트에 대해서만 50 및 60분 시점에서 유의미하게 상이했다(각각 p<0.01 및 p<0.05). 제2 클램프 단계 동안, GIR은 30mg/kg Ab14로 처리한 HFD 랫트의 경우에 160 내지 210분 시점에서(160분에서 p<0.05 및 170 내지 210분 시점에 있어서 p<0.01), 100mg/kg Ab14로 처리한 HFD 랫트의 경우에 170 내지 210분 시점(190분에서 p<0.01 및 170 내지 180분 및 200 내지 210분 시점에 있어서 p<0.05)에서, 및 메트포르민으로 처리한 HFD 랫트의 경우에 170 내지 210분 시점(180 및 190분에서 p<0.01, 및 170 및 200 내지 210분 시점에서 p<0.05)에서 유의미하게 상이했다.
GIR 평균은 각각의 안정기(도 14)에 대해 계산했다. GIR은 대조군 사료-제공 그룹과 비교하여 HFD 비히클 그룹에서 제1 및 제2 단계 동안 각각 32%(p<0.05) 및 17%(p<0.01) 감소했다. 10, 30, 또는 100mg/kg의 Ab14는 제1 단계 동안 GIR(ns)을 (각각 26, 37 및 29%) 증가시켰고, 메트포르민은 또한 11%까지 증가 효과를 가졌다. 제2 단계 동안, 모든 처리는 HFD 비히클 그룹과 비교하여 GIR을 증가시켰다: 10, 30 또는 100mg/kg의 Ab14, 각각 19%(ns), 36%(p<0.01) 및 28%(p<0.05), 및 메트포르민 27%(p<0.05).
2개의 클램프 단계 동안 혈당 평균은 예상한 바와 같이 정상혈당 상태에 상응한다. 제1 클램프 단계 동안 대조군 사료-제공 및 HFD 비히클 그룹 사이에는 유의미한 차이가 있지만, 혈당은 정상 범위로 유지되고, 생물학적 상태는 두 그룹에서 동일했다(도 14).
혈장 인슐린은 클램프 절차 동안 측정했다. 예상대로, 인슐린 수준은 2개 클램프 단계의 종료시에 모든 그룹 사이에서 유사했다. 제1 클램프 단계 동안, 인슐린 농도는 대략 140μU/mL이었고, 섭식 상태 동안 기대된 생리적 수준이었다. 제2 클램프 단계 후의 인슐린 농도는 대략 490μU/mL이었고, 이는 약리적 수준이었다(도 11, 상부 패널).
C-펩타이드는 또한 클램프 절차 동안 측정했다(도 11, 우하측 패널). 정상혈당 상태 동안, 베타 세포에 의한 인슐린 분비는 억제되었고, 따라서 혈장 C-펩타이드 수준은 낮거나 해석가능하지 않았다.
3H-글루코오스는 모든 HFD 그룹(대조군 사료-제공 그룹은 아님)에서 클램프 절차 동안 인슐린을 주입했다. 이어서, 전신 글루코오스 유량을 계산했다. 제1 클램프 단계 동안, 글루코오스 턴오버(GTO)는 모든 그룹에서 유사했고, 단 30mg/kg의 Ab14는 HFD 비히클 그룹(17%, ns)과 비교하여 GTO를 증가시키는 경향이 있었다. 당분해 및 글리코겐 합성은 30mg/kg의 Ab14로 처리한 후에 각각 15 및 16%(ns, 도 15) 증가시키는 경향이 있었다.
제2 클램프 단계 동안, GTO, 당분해 및 글리코겐 합성은 모든 처리된 그룹에서 유사했고, HFD 비히클 그룹(10%, ns)와 비교하는 경우에 30mg/kg 처리된 Ab14 그룹에서 글리코겐 합성의 약간의 증가가 관측되었다. 30mg/kg(p<0.05) 및 100mg/kg(ns)의 Ab14는 메트포르민(ns)과 같이 HGP를 완전히 억제시켰고, 10mg/kg의 Ab14 처리는 HGP를 78% 감소시켰다(ns, 도 16).
결론. Ab14를 사용한 처리는 HFD 랫트 모델에서 단식 혈당 뿐만 아니라 혈장 인슐린 수준을 감소시킴으로써 HOMA-IR을 감소시켰다. 더욱이, 간 인슐린 민감성은 Ab14에 의해 현저하게 개선된 반면, 전신 말초 인슐린 민감성에 대한 효과는 명확하게 관측되지 않았다. 예상대로, 메트포르민 처리는 또한 간 인슐린 민감성을 개선시켰다.
실시예 3
본 실시예는 당뇨병의 랫트 모델, 쥬커 당뇨병성 지방(ZDF) 랫트 모델에서 글루코오스 대사 및 혈당 조절에 대한 Ab14의 효과를 평가한다. 글루코오스 조절에 대한 Ab14의 만성 투여의 효과는 전당뇨병성(고인슐린성, 정상혈당) 상태로부터 명백하게 당뇨병성(저인슐린혈증, 고혈당) 상태로 진행하고 있는 ZDF 랫트에서 평가했다. 이들 동물은 전당뇨병을 발병하고, 7주령까지 이의 발달 인슐린 내성을 보상하기 위해 현저한 고인슐린혈증을 특징으로 하지만, 고혈당증이 거의 없거나 전혀 없었다. 이는 명백한 당뇨병으로 빠르게 진행하고, 10 내지 12주령까지 췌장 베타 세포 부전의 결과로서 저인슐린혈증, 및 현저한 고혈당증을 특징으로 한다. 이 실시예에서 사용된 항체는 서열식별번호 132 및 134의 경쇄 및 폴리펩타이드 중쇄로 구성되었다.
방법
81마리 ZDF fa/fa 랫트(Charles River Laboratories, France) 및 10마리 마른(lean) ZDF ?/+ 랫트(대조군)은 정상 12시간 광 주기(08:00 pm 소등), 22 ±2℃ 및 50±10% 상대 습도로 1 내지 2마리 동물 그룹에서 환기된 및 농축된 사육 케이지에 수용했다. 랫트는 전달시에 7주령이었고, 연구 개시 전에 1주 동안 순응시켰다. 랫트는 ZDF 랫트(Purina 5008, Charles River)의 경우에 표준 식이를 제공했고, 수돗물은 임의로 제공했다. 모든 동물은 연구 전체에 걸쳐 질병 건강, 처리에 대한 역반응 또는 이환율의 모든 징후에 대해 매일 적어도 1회 모니터링했다.
8주령 암컷 ZDF fa/fa 랫트는 고인슐린성 및 온건한 당뇨병성이었다. 이 상태에서 혈당 및 인슐린 수준의 가변성에 기인하여, ZDF 랫트는 이의 HOMA-IR에 따라 스크리닝하고 선택했다.
Ab14로 처리된 그룹에 있어서, 항체는 2개의 상이한 용량 20mg/kg/주(그룹 3 및 7) 또는 60mg/kg/주(그룹 4 및 8)로 1, 8, 15 및 22일째에 꼬리 정맥(정맥내, 5mL/kg)을 통해 매주 1회 투여했다. 모든 다른 그룹은 비히클 1(정맥내, 5mL/kg)로 매주 1회 처리했다. 정맥내 처리는 이소플루란 마취하에 1, 8, 15 및 22일째 아침에 수행했다. 투여 용적은 가장 최근의 체중에 따라 개별적으로 적응했다.
메트포르민(Met) 및 피오글리타존(PIO)은 8:00 내지 10:00 am 사이에 경구 경로(경구내, 5mL/kg)에 의해 28일 동안 1일 1회 투여했고, 단 OGTT 당일 또는 정맥내 처리 후에 일부 경구 처리는 10:00 am 후에 완료했다. 그룹 5, 7 및 8은 200mg/kg/1일 메트포르민으로 처리하고, 그룹 6은 10mg/kg/1일 피오글리타존으로 처리했다. 모든 다른 그룹은 28일 동안 매일 비히클 2(경구내, 5mL/kg)로 처리했다. 가장 최근의 체중은 각 그룹에서 평균 투여 용적을 계산하기 위해 사용했다.
시험 그룹은 하기 표에 요약되어 있다. Met: 메트포르민.
Figure 112016010991102-pct00002
1주의 순응 기간 후, 모든 랫트를 칭량하고, 6시간 동안 단식시켰다(약 8:00 am으로부터 약 2:00 pm까지). 약 2:00 pm에서, 혈액은 꼬리 선단으로부터 수집했다(약 150μL, EDTA). 혈당(혈당측정기) 및 혈장 인슐린(ELISA)을 측정하고, HOMA-IR(인슐린 내성 지수)을 계산했다. 극단적 HOMA-IR 값을 나타내는 11마리 ZDF fa/fa 랫트는 연구로부터 제외했지만, 연구 종료시에 혈장 수집을 위해 28일 동안 수용했다. 이어서, 나머지 70마리 랫트는 이의 HOMA-IR 및 체중에 따라 7개 처리 그룹으로 무작위 할당했다. 마른 랫트는 모두 그룹 1에 유지시켰고, 비히클 단독으로 처리했다.
체중은 처리 4주 동안 매주 2회 측정했다.
음식 소비는 스크리닝 절차 직전에 측정한 다음, 제1 3주 처리 동안 24시간에 걸쳐 매주 2회 측정했다. 음식 소비는 OGTT의 주(4주) 동안 매주 1회 측정했다.
단식(0일째에 8:00 am으로부터 02:00 pm까지 6시간, 및 12일, 19일 및 26일째 약 6:00 pm으로부터 약 8:00 am까지 밤새)은 각각의 채혈 전에 수행했다. 혈액은 0일째에 꼬리의 선단으로부터 약 2:00 pm(스크리닝 전, 150μL, 칼륨 EDTA), 및 12일(110μL, 칼륨 EDTA), 19일(150μL, 칼륨 EDTA) 및 26일(110μL, 칼륨 EDTA)째에 투여 직전에 약 8:00 am에서 수집했다.
단식 혈당(혈당측정기)은 0, 12, 19 및 26일째에 측정했다. 단식 혈장 인슐린, 펩타이드-C(ELISA 방법), 유리 지방산, 트리글리세라이드, 총 콜레스테롤(비색 방법) 및 HDL-콜레스테롤(포스포텅스테이트 침전, 비색 방법)은 0일째, 및 12, 19 및 26일째의 투여 전에 측정했다. 비 HDL-콜레스테롤은 총 콜레스테롤 HDL-콜레스테롤로서 계산했다. 프룩토스아민은 0, 19 및 28일째에 측정했다. HbA1c(DCA 2000)은 0 및 28일째에 측정했다.
경구 당부하 검사(OGTT)는 다음과 같이 수행했다. 25일째에, 랫트는 약 6:00 pm에 단식시키고, 경구 당부하 검사는 당일 후(26일째)에 수행했다. 약 8:00 am(T-60)에서 채혈(110μL, EDTA)은 생화학적 파라미터 측정을 위해 수행했다. 1시간후(약 09:00 am), 경구 글루코오스 볼러스(1.5g/kg)을 투여했다(TO). 혈당은 T-60, T0, T15, T30, T60, T90, T120 및 T180분에서 측정했다(혈당측정기 또는 고혈당증의 경우에 비색 방법). 곡선하 면적(AUC)은 T0에 측정된 혈당 값에 기반하여 계산했다. 인슐린 및 C-펩타이드는 T-60, T15(약 40μL의 혈액, EDTA) 및 T30분(약 40μL의 혈액, EDTA)에 측정했다(ELISA 방법).
음식 제한 2시간 후(8:00 am으로부터 10:00 am까지), 연구로부터의 80마리 랫트는 28일째에 이소플루란으로 마취시켰다. 혈액은 Ab14 혈장 농도의 측정을 위해 수집했다(복부 정맥으로부터 약 3000μL, K2-EDTA 상에). 혈장(약 200μL의 3개 분취량)은 시험 때까지 -80℃에서 유지시켰다. 이어서, 췌장 조직을 분해시켰다. 랫트는 복부 정맥 및 대동맥의 절개에 의해 안락사시켰다.
각각의 췌장은 2개 부분(세로 절단)으로 분할했다. 1개 피스는 조직병리적 처리를 위해 10% 포르말린 용액에 고정시켰다. 다른 피스의 췌장은 플래시 냉동시키고, 인슐린 및 프로인슐린 수준을 측정하기 위해 -80℃에 유지시켰다.
연구로부터 제외된 11마리 ZDF fa/fa 랫트는 28일 사육 후에 희생시켰다. 이들은 이소플루란으로 마취시켰다. 혈액은 복부 정맥(칼륨 EDTA 상에 최대 용적)으로부터 수집했다. 혈장 샘플(각각 1mL의 2개 분취량)은 추가 시험을 위해 냉동시켰다. 랫트는 복부 정맥 및 대동맥의 절개에 의해 안락사시켰다.
각각의 췌장 샘플은 산 버퍼에서 균질화시키고, 인슐린 및 프로인슐린 함량은 하기 그룹으로 ELISA 키트를 사용하여 측정했다:
그룹 1: 마른 랫트 + 비히클 (n=10)
그룹 2: ZDF 랫트 + 비히클 (n=10)
그룹 4: ZDF 랫트 + AB14 60mg/kg/주 (n=10)
그룹 5: ZDF 랫트 + 메트포르민 200mg/kg/1일 (n=10)
그룹 8: ZDF 랫트 + AB14 60mg/kg/주 + 메트포르민 200mg/kg/1일 (n=10)
각각의 췌장 샘플은 최대 24 내지 48시간 동안 4% 포르말린에서 고정시키고; 포르말린의 용적은 적절한 고착을 보장하기 위해 샘플 용적보다 5 내지 10배 높았다. 48시간 후, 샘플은 70% 에탄올에 넣었다. 이어서, 샘플은 하기 그룹으로 조직학적 공정을 위해 파라핀에 포함시켰다:
그룹 1: 마른 랫트 + 비히클 (n=10)
그룹 2: ZDF 랫트 + 비히클 (n=10)
그룹 4: ZDF 랫트 + AB14 60mg/kg/주 (n=10)
그룹 5: ZDF 랫트 + 메트포르민 200mg/kg/1일 (n=10)
그룹 8: ZDF 랫트 + AB14 60mg/kg/주 + 메트포르민 200mg/kg/1일 (n=10)
랑게르한스섬을 묘사한 후, 표면 및 인슐린 라벨링의 세기는 라벨링(브라운) 및 비-라벨링(블루) 부분의 이미지 분석에 의해 정량화했다.
비히클 ZDF 랫트 및 마른 랫트의 평균은, 피셔 시험이 편차의 유의미한 차이를 나타내지 않는 경우, 스튜던트 시험을 사용하여 비교했다. 그렇지 않은 경우, 비-매개변수 맨 휘트니 시험을 사용했다.
처리된 ZDF 랫트의 평균은 1원 ANOVA + 던넷 후-시험을 사용하여 비히클 ZDF 랫트와 비교했다. 바렛 시험이 편차의 유의미한 차이를 나타내는 경우, 비-매개변수 크루스칼 왈리스 + 던 후-시험을 사용했다.
AB14 20mg/kg 단독의 평균은 1원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후-시험을 사용하여 메트포르민 200mg/kg 단독 또는 AB14 20mg/kg과 병용하여 비교했다.
AB14 60mg/kg 단독의 평균은 1원 ANOVA + 뉴만-쿨스 후-시험을 사용하여 메트포르민 200mg/kg 단독 또는 AB14 60mg/kg과 병용하여 비교했다.
곡선은 2원 ANOVA + 본페로니 후-시험을 사용하여 분석했다.
랫트는, 이들이 모든 또는 거의 모든 파라미터에서 이상치인 경우, 분석으로부터 제외했다. 이는 각각 상이한 그룹으로부터 4개 랫트의 배제를 제공했다.
결과
8주령 ZDF 랫트에서 예상한 바와 같이, HOMA-IR은 마른 랫트와 비교하여 강력하게 증가했다(약 111 대 3.5, 도 18a). ZDF 랫트는 온건한 고혈당(약 180 대 113mg/dL, 도 18b) 및 고인슐린성(약 250 대 12.6μL/mL, 도 18c)였다. 체중은 ZDF 랫트에서 약간 증가했다(도 18d).
마른 랫트와 비교하면, ZDF 랫트의 체중은 전체 치료 기간에 걸쳐 높게 유지된 반면(도 19a), 체중 증가는 마른 및 ZDF 랫트에서 유사했다(도 19b).
피오글리타존은 처리 8일로부터 ZDF 비히클 랫트와 비교하여 체중을 유의미하게 증가시켰고, 체중 증가는 처리 종료시에 3배 높았다(도 19a 및 b). 모든 다른 약물은 비히클 ZDF 랫트와 비교하여 체중에 대해 유의미한 효과를 갖지 않았다. AB14 60mg/kg + 메트포르민 200mg/kg 조합은 처리 22일로부터 체중을 유의미하게 증가시켰다(도 19b).
음식 섭취는 마른 랫트와 비교하여 비히클 ZDF 랫트에서 약 2배 증가했다(13일째에 유의미함). 피오글리타존으로 처리한 랫트는 ZDF 비히클 랫트와 비교하여 보다 높은 음식 섭취의 경향을 나타냈다(15, 20 및 22일째에 유의미함, 도 20a). 누적 음식 섭취는 마른 그룹과 비교하여 비히클 ZDF 그룹에서 94%(p<0.01) 증가했고, 비히클 ZDF 그룹(NS, 도 20b)와 비교하여 피오글리타존 그룹에서 14% 증가했다. 다른 치료는 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여 음식 섭취에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다.
단식 혈당은 6시간 또는 하룻밤 단식 후에 마른 랫트에서 처리 26일 동안 정상 범위를 유지했다(도 21a). 이는 정상 인슐린 수준과 상관되었다(도 21b). 비히클 ZDF 랫트에서, 밤새 단식 혈당은 12일째(약 10주령)에 362 ± 32mg/dL에 도달했고, 치료 종료 때까지 마른 랫트보다 유의미하게 높게 유지했다(도 21a). 이는 12, 19 및 26일에 측정된 감소하는 혈장 인슐린 수준(49.2 ± 6.7, 41.2 ± 4.8, 및 36.6 ± 2.7 μU/mL p<0.001 대 마른 랫트, 도 21b) 및 감소하는 혈장 C-펩타이드 수준(2813 ± 249, 2472 ± 195, 2156 ± 165 pM - <p<0.001 대 마른 랫트, 도 21d)와 상관되었다. 마른 및 비히클 ZDF 랫트에서 HOMA-IR의 진화는 혈당 및 혈장 인슐린 수준의 변화를 반영했다(도 21c).
피오글리타존은 처리 12일부터 밤새 단식 혈당 수준을 정상 수준으로 유의미하게 감소시켰다(p<0.001, 도 21a). 두 용량에서 AB14는 처리 12, 19 또는 26일 후에 혈당을 15%까지 감소시켰다(n.s, 도 21a). AB14와 비교하여, 메트포르민 200mg/kg은 12일째에 유사한 효과를 갖지면, 이 효과는 19일 및 26일째에 관측되지 않았다. 비히클로 처리된 ZDF 랫트와 비교하여, AB14 20 mg/kg + 메트포르민 조합은 12일째에 혈당을 약간 감소시켰고(12%, ns), 19일 및 26일째에 어떠한 효과도 나타내지 않았다(도 21a). 그에 반해서, 메트포르민과의 AB14 60 mg/kg 조합은 12일째에 혈당 수준을 유의미하게 감소시켰다(38%, p<0.01 대 비히클 처리된 ZDF 랫트). 통계적으로 유의미하지 않지만, 혈액 감소는 19일 및 26일째에 여전히 관측되었다(각각 22% 및 27%, 도 21a).
피오글리타존은 비히클 ZDF 랫트와 비교하여 12, 19 및 26일째에 혈장 인슐린 및 C-펩타이드 수준에 대해 어떠한 효과를 나타내지 않는 것과 마찬가지로 인슐린 분비에 대해 어떠한 보호 효과도 갖지 않는 것처럼 보인다(도 21b 및 d). 따라서, 혈당 수준의 감소는 피오글리타존의 인슐린 감작 효과와 관련되었고, 이는 비히클 ZDF 랫트(도 21c)와 비교하여 각각 12, 19 및 26일째에 HOMA-IR을 67%, 62% 및 54% 감소시켰다.
비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, AB14 20mg/kg은 12, 19 및 26일째(도 21b-21d)에 HOMA-IR 뿐만 아니라 혈장 인슐린 및 C-펩타이드 수준을 변화시키지 않았다. 그 동안, AB14 60mg/kg은 12, 19 및 26일째에 혈장 인슐린 수준을 각각 74%, 21% 및 19% 증가시켰다(ns 대 비히클 ZDF 랫트, 도 21b).
AB14 60mg/kg은 12일째에 혈장 C-펩타이드 수준을 10%(ns) 증가시켰고, 19일 및 26일째에 어떠한 효과도 갖지 않았다(도 21d).
비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, 메트포르민은 12, 19 및 26일째에 혈장 인슐린 수준을 각각 79%, 55% 및 48% 증가시켰다(ns, 도 21b). 메트포르민은 12, 19 및 26일째에 혈장 C-펩타이드 수준을 23%, 21% 및 9% 증가시켰다(NS 대 비히클로 처리한 ZDF 랫트, 도 21d).
비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, AB14 20mg/kg + 메트포르민 조합은 12, 19 및 26일째에 혈장 인슐린 수준을 2배 증가시켰다(NS, 도 21b). AB14 20mg/kg + 메트포르민 조합은 12, 19 및 26일째에 혈장 C-펩타이드 수준을 각각 21%, 23% 및 25% 증가시켰다(NS, 도 21d).
비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, AB14 60mg/kg + 메트포르민 조합은 12, 19 및 26일째에 혈장 인슐린 수준을 각각 인자 2.5, 2.3 및 2.7로 유의미하게 증가시켯다. AB14 60mg/kg + 메트포르민 조합은 12일째부터 혈장 C-펩타이드 수준을 45%(12일째), 48%(19일째) 및 52%(26일째) 유의미하게 증가시켰다(p<0.05 대 비히클-처리된 ZDF 랫트, 도 21d).
인슐린 분비가 경시적으로 감소되는 이러한 모델에서, HOMA-IR의 증가는 인슐린 분비의 개선을 반영했다. 따라서, HOMA-IR의 증가는 비히클 ZDF 그룹과 비교하여 메트포르민 단독 또는 AB14 처리된 그룹과 병용하여 관측되었고, 이러한 증가는 12, 19 및 26일째에 유지되었다(도 21c).
마른 랫트와 비교하여, 프룩토스아민은 8주령 비히클-처리된 ZDF 랫트에서 유의미하게 높았다(66%)(208 ± 6 대 144 ± 2 μM, p<0.001). 프룩토스아민 수준은 치료 기간 동안 마른 랫트에서 유사한 범위로 잔류했지만, 치료 19일(253 ± 5 μM, p<0.001) 및 28일(234 ± 6 μM, p<0.001) 후에 비히클 ZDF 랫트에서 증가했다(도 22). 예상대로, 피오글리타존은 19일째부터 프룩토스아민 수준을 유의미하게 감소시켰다(19일째에 30% 및 28일째에 25%, p<0.001). AB14 20 및 60mg/kg은 프룩토스아민 수준에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. 비히클-처리된 랫트와 비교하여, 메트포르민은 단지 19일째(6%, ns)에 프룩토스아민 수준을 저하시키는 경향을 나타냈다. 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, AB14 20mg/kg + 메트포르민 조합은 프룩토스아민 수준을 19일 및 28일째에 각각 10% 및 8% 저하시키는 유의미하지 않은 경향을 나타냈다. 또한, AB14 60mg/kg + 메트포르민 조합은 28일째에 프룩토스아민 수준(9%)을 저하시키는 유의미하지 않은 경향을 나타냈다(도 22).
마른 랫트와 비교하여, HbA1c는, 이들 값이 정상 범위 내에 존재했지만, 8주령 ZDF 랫트에서 보다 높았다(4.3 ± 0.1% 대 3.1 ± 0.04%).
12주령 ZDF 랫트에서, HbA1c는 28일째에 8.8 ± 0.2%의 병리적 값에 도달했다(p<0.001 ZDF 대 마른 랫트, 도 23). 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, AB14 20 및 60mg/kg은 처리 28일 후에 HbA1c 수준에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. 처리 28일 후, 피오글리타존 및 메트포르민은 HbA1c를 각각 44 및 15% 유의미하게 감소시켰다(도 23). 메트포르민과 AB14 20mg/kg 및 60mg/kg의 조합은 HbA1c를 각각 11 및 19% 유의미하게 감소시켰다(도 23).
마른 랫트와 비교하여, 혈장 트리글리세라이드 수준은 8주령 ZDF 랫트에서 강력하게 증가했다(약 8mM 대 약 0.7mM, 도 24a).
비히클과 비교하여, 피오글리타존은 12일째 치료일로부터 혈장 트리글리세라이드 수준을 강력하게 감소시켰다. AB14 20mg/kg은 12 및 19일째(각각 15% 및 7%, ns)에 혈장 트리글리세라이드 수준을 약간 감소시켰고, 26일째에 어떠한 효과도 갖지 않았다. AB14 60mg/kg은 12, 19 및 26일째에 혈장 트리글리세라이드 수준을 각각 14%, 9% 및 12%까지 약간 감소시켰다(ns). 메트포르민은 혈장 트리글리세라이드 수준을 12, 19 및 26일째에 각각 26%, 40% 및 49% 증가시켰다(19일째부터 유의미함). 메트포르민 + AB14 20mg/kg 조합은 비히클 ZDF 그룹과 비교하여 19일 및 26일째(각각 13% 및 23%, ns)에 보다 높은 혈장 트리글리세라이드의 경향을 나타냈다. 메트포르민 + AB14 60mg/kg 조합은 12, 19 및 26일째(각각 9%, 48% 및 43%, 19일째부터 유의미함, 도 24a)에 보다 높은 혈장 트리글리세라이드의 경향을 나타냈다.
6시간의 단식 후, 혈장 유리 지방산 수준은 마른 랫트보다 8주령 ZDF 랫트에서 보다 높았다(약 0.85mM 대 약 0.59mM). 밤새 단식(최대 지방분해 상태) 후, 유리 지방산 수준은 10 및 11주에서 유사했다(약 1.3mM). 처리 12주에서, ZDF 랫트의 지방분해 능력은 마른 랫트와 비교하여 보다 낮은 유리 지방산 수준에 의해 나타난 바와 같이 감소했다(1.05 ± 0.06 대 1.38 ± 0.03mM, 도 24b). 비히클 ZDF 랫트와 비교하여, 피오글리타존으로 처리한 랫트는 12일째에 35%(p<0.001), 19일째에 17%(ns) 및 26일째에 30%(p<0.05)까지 보다 낮은 혈장 유리 지방산 수준을 나타냈다. AB14 20 및 60mg/kg은 어떠한 효과도 갖지 않았다. 메트포르민은 유리 지방산 수준을 12, 19 및 26일째에 14%, 25% 및 8% 증가시켰지만, 비히클 ZDF 랫트와 비교하는 경우에 유의미하지 않았다. 메트포르민 단독 또는 AB14 20mg/kg와 병용한 효과는 유사했다. 다른 한편으로, AB14 60mg/kg와 조합하는 경우, 메트포르민은 비히클 ZDF 그룹과 비교하는 경우에 단지 19일째만 증가하는 효과를 나타냈다(20%, NS, 도 24b).
마른 랫트와 비교하여, 혈장 총 콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤 수준은 8주령 ZDF 랫트에서 보다 높았고, 후속 4주에 걸쳐 서서히 증가했다(도 25a 및 25b, 도 26a 및 26b). 혈장 비-HDL 콜레스테롤 수준은 8주령의 마른 및 ZDF 랫트에서 유사했지만, 10주째부터 ZDF 랫트 대 마른 랫트에서 경시적으로 증가했다(도 25c 및 도 26c). 0일째에 ZDF 그룹 사이에는 총 콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤의 유의미한 차이가 있기 때문에(도 25), 이 결과는 0일째로부터의 상대적 값으로 나타낸다(도 26). 도 26a에 나타낸 바와 같이, 피오글리타존은 경시적으로 혈장 총 콜레스테롤 수준의 증가를 방지하는 경향이 있었다. AB14 20mg/kg 및 메트포르민은 어떠한 효과도 없었다. AB14 60mg/kg은 비히클 ZDF 그룹과 비교하여 12, 19 및 26일째에 총 콜레스테롤을 각각 8%, 14% 및 15% 증가시켰다. 메트포르민과 조합하는 경우, AB14 20mg/kg은 12 및 26일째에 총 콜레스테롤을 각각 15% 및 10% 증가시킨 반면, AB14 60mg/kg은 비히클 ZDF 그룹과 비교하여 12, 19 및 26일째에 총 콜레스테롤을 각각 24%, 21% 및 13% 증가시켰다. 비히클과 비교하여, 피오글리타존은 12, 19 및 26일째에 혈장 HDL-콜레스테롤을 각각 38%, 17% 및 19% 증가시켰다. 메트포르민 단독은 어떠한 효과도 없었다. AB14 20mg/kg 및 60mg/kg은, 단독으로 또는 메트포르민과 병용하여, 처리 12, 19 및 26일 후에 혈장 HDL-콜레스테롤 수준을 11 내지 22% 증가시켰다. 혈장 비 HDL-콜레스테롤 수준(도 26c)은 처리 12일 후에 모든 ZDF 그룹에서 유사했다. 비히클과 비교하여, AB14 20mg/kg, AB14 60mg/kg, 메트포르민은, 단독으로 또는 AB14와 병용하여, 비 HDL-콜레스테롤 수준에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. 피오글리타존 단독은 19일 및 26일째에 혈장 비 HDL-콜레스테롤 수준을 각각 49% 및 47% 유의미하게 감소시켰다.
경구 당부하 검사는 처리 26일 후에 수행했다. 비히클-처리된 마른 랫트와 비교하여, 혈당 수준은 글루코오스 부하 전후에 비히클-처리된 ZDF 랫트에서 예상대로 보다 높았다(도 27a). 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, 피오글리타존 단독-처리된 ZDF 랫트는 모든 시점에서 유의미하게 감소된 혈당 수준을 나타냈다. 비히클과 비교하여, AB14 60mg/kg 및 메트포르민 조합은 t-60분에서 감소된 혈당 수준의 경향이 있는 반면(도 27a), 다른 약물 처리는 유의미하지 않은 효과를 나타냈다. 마른 랫트와 비교하여, 혈당 곡선하 면적(AUC)은 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여 3.7배까지 유의미하게 증가했다. 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하여, 피오글리타존으로 처리한 랫트는 혈당 AUC에서 유의미한 54% 감소를 나타냈다. AB14 20mg/kg, AB14 60mg/kg 및 메트포르민은, 단독으로 또는 20mg/kg 또는 60mg/kg AB14와 병용하여, AUC에 대한 유의미하지 않은 감소를 나타냈다(각각 7%, 11%, 6%, 7% 및 17%). AB14 60mg/kg + 메트포르민 조합은 AB14 또는 메트포르민 단독과 비교하여 감소하는 AUC에 약간 더 효과적이었다(도 27b).
혈장 인슐린 및 C-펩타이드 수준은 글루코오스 부하후 15분 및 30분에서 측정했다. 농도 대 시간 프로파일은 인슐린 및 C-펩타이드 둘 모두에 대해 유사했다. 인슐린 및 C-펩타이드 수준은 비히클, AB14 20mg/kg 및 AB14 60mg/kg 처리된 그룹 사이에서 유사했고, 메트포르민 및 피오글리타존 처리된 그룹에서 약간 증가했고, 메트포르민과 조합된 AB14 20mg/kg 및 AB14 60mg/kg으로 처리한 그룹에서 용량-의존 방식으로 보다 증가했다(도 28a 및 28b). 글루코오스 충전에 대한 반응으로 인슐린 또는 C-펩타이드 분비의 능력은 T-60분으로부터 계산된 상대적 값의 결과를 나타냄으로써 평가했다. 예상대로, 비히클 ZDF 랫트는 마른 랫트와 비교하여 글루코오스 충전에 대한 반응으로서 인슐린 및 C-펩타이드를 분비하는 이의 능력을 유의미하게 상실했다(도 29a 및 29b). 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하는 경우, 피오글리타존으로 처리한 랫트는 T15 및 T30에서 인슐린 분비를 각각 20%(p<0.05) 및 5% 증가시켰다. 다른 모든 처리는 시간 T15에서 인슐린 분비에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. 메트포르민은 시간 T30에서 인슐린 분비를 26%(p<0.01) 감소시켰다. AB14 20mg/kg 단독은 시간 T30에서 어떠한 효과도 갖지 않았고, 메트포르민과 조합하여 인슐린 분비를 감소시키는 경향을 나타냈다(14%, ns). AB14 60mg/kg은, 단독 또는 메트포르민과 조합하여, 인슐린 분비를 각각 19% 및 18% 감소시키는 경향을 나타냈다(도 29a). 마른 랫트와 비교하여, 글루코오스 부하에 대한 반응으로 C-펩타이드 분비(도 29b)는 시간 T15 및 T30에서 비히클-처리된 ZDF 랫트에서 약 40% 유의미하게 감소했다. 비히클-처리된 ZDF 랫트와 비교하는 경우, 피오글리타존 단독은 시간 T15 및 T30에서 C-펩타이드 분비를 각각 21% 및 22% 유의미하게 증가시켰다.
예상대로, 췌장 프로인슐린(도 30a) 및 인슐린(도 30b) 수준은, 마른 랫트와 비교하는 경우, 12주령 ZDF 랫트에서 유의미하게 보다 낮았다. AB14 60mg/kg 및 메트포르민은 프로인슐린의 감소를 완전히 예방했고, 메트포르민과 조합된 AB14 60mg/kg은 프로인슐린 수준을 유의미하게 증가시켰다(p<0.05 대 비히클)(도 30a). AB14 60mg/kg은 췌장 인슐린 수준을 약간 증가시켰고, 메트포르민 또는 메트포르민과 조합된 AB14 60mg/kg은 인슐린 수준을 유의미하게 증가시켰다(p<0.05 대 비히클)(도 30b). 마른 랫트와 비교하여, 프로인슐린/인슐린 비는 ZDF 랫트에서 유의미하게 증가한 반면, 약물 치료로 어떠한 변화도 관측되지 않았다(도 30c).
비히클, AB14, 메트포르민 또는 AB14/메트포르민 조합으로 처리한 마른 또는 ZDF 랫트의 췌장에서 현미경적 변화에 초점을 맞춘 이러한 연구에서 어떠한 독성 증거도 보고되지 않았다.
소도 과다형성 및 소도 섬유증에 상응하는 초점 내지 다초점 거대/대 소도(들)의 보다 높은 발생정도 및 중증도는 비히클 대조군 제공된 ZDF 랫트에서 주목되었다(표 1 및 표 2).
표 1. 조직병리학적 소견의 발생정도. 모든 치료 그룹은 달리 명시된 경우를 제외하고는 ZDF 랫트였다. Met.: 메트포르민 200mg/kg/1일.
Figure 112016010991102-pct00003
Figure 112016010991102-pct00004
표 2. 조직병리적 분석: 기본적 조사결과의 그룹 평균 스코어. 모든 치료 그룹은 달리 명시된 경우를 제외하고는 ZDF 랫트였다. Met.: 메트포르민 200mg/kg/1일.
Figure 112016010991102-pct00005
마른 랫트와 비교하여, 비히클 처리된 ZDF 랫트는 약간 소도세포 공포화 및 증가된 발생정도 및 중증도의 소도 섬유증을 가졌다. 모든 약물 처리, AB14 60mg/kg, 메트포르민, 또는 메트포르민과 AB14와의 조합에서 감소 공포화 및 소도 섬유증 중증도에 대한 일치된 경향이 있었다. 이들 효과는 AB14 및 메트포르민이 조합되는 경우에 보다 확연했다.
예상대로, 면역조직화학에 의해 측정된 췌장 인슐린은 ZDF 랫트에서 인슐린 라벨링의 감소를 나타냈다. 인슐린 함량 측정으로부터 관측된 바와 같이(도 30b), 약물 처리는, AB14 및 메트포르민이 조합되는 경우에 더 나은 효과와 함께 이러한 인슐린 라벨링 감소를 약간 예방했다(도 31).
논의
현저하게 인슐린-내성이고 중증의 고인슐린성이지만 단지 완만하게 고혈당인 8주령 ZDF 랫트는 4주 동안 1주 1회 0mg/kg(비히클), 20mg/kg 또는 60mg/kg의 용량으로 Ab14를 정맥내 제공했다. 이 시간 동안, 비히클-처리된 대조군은 명백한 당뇨병으로 진행했고, 10주령까지 완료된 췌장 베타 세포 부전과 일치하게, 12일까지 중증의 저인슐린혈증 및 현저한 고혈당이었다. 이는 췌장 인슐린 및 프로인슐린 수준의 직접 측정에 의해 연구 종료시에 확인되었고, 이 둘 모두는 실질적으로 감소했고, 췌장 인슐린 라벨링의 면역조직화학 평가를 통해, 이는 또한 극적으로 낮았다. 또한, 연구 종료시에 수행된 조직학적 분석은, 당뇨병성 췌장 소도 병리학과 일치하게, 이들 동물에서 증가된 발생정도 및 소도 공포화의 중증도, 소도 과다형성(거대/대 소도(들)) 및 소도 섬유증을 실증했다.
반대로, 연구 12일째에 비히클-처리된 대조군에서 단식 혈당의 상승은 Ab14의 두 용량에 의해 부분적으로 예방되었고, 이러한 부분 예방은 또한 연구 19 및 26일째에 관찰되었다. 또한, 고용량의 Ab14는 또한 연구 12일째에 비히클-처리된 대조군에서 관측된 혈장 인슐린 및 C-펩타이드 수준의 감소를 부분적으로 예방했다. 이러한 부분 예방은 또한 연구 19 및 26일째에 관측되었지만 보다 낮은 정도였고, 이는 질환 진행(췌장 베타 세포 부전)의 보통의 지연 및 당해 화합물에 의한 부분 췌장 베타 세포 보호를 나타내는 것이다. 사실상, 고용량의 Ab14는 또한, 췌장 조직이 연구 종료(28일)시에 수득되는 경우에 비히클-처리된 대조군에서 관측된 췌장 프로인슐린 수준의 감소를 완전히 예방했고, 직접적으로 또는 면역조직화학 분석을 통해 측정하는 경우에 췌장 인슐린 수준의 감소를 부분적으로 예방했다. 더욱이, Ab14는 연구 종료시에 조직학적 평가에 의해 비히클-처리된 동물에서 주목된 소도 공포화, 소도 섬유증 및 소도 과다형성을 일관되게 감소시켰고, 이는 당뇨병성 췌장 소도 병리학에 대한 호의적 영향을 추가로 나타낸다.
실시예 2에서 실증된 바와 같이, 비히클-처리된 대조군 그룹과 비교하는 경우, Ab14는 음식 소비 또는 체중에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았고, 이는 상기 평가된 파라미터에 대한 Ab14의 효과가 칼로리 제한 또는 체중 손실의 결과가 아닌 것을 나타낸다.
<110> ALDER BIOPHARMACEUTICALS, INC. <120> REGULATION OF GLUCOSE METABOLISM USING ANTI-CGRP ANTIBODIES <130> 43257.3013 <150> 61/982,611 <151> 2014-04-22 <150> 61/842,745 <151> 2013-07-03 <160> 284 <170> KopatentIn 3.0 <210> 1 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu 65 70 75 80 Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg <210> 2 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu 65 70 75 80 Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 3 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr 20 25 30 Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 <210> 4 <211> 439 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr 20 25 30 Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 100 105 110 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 115 120 125 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 130 135 140 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 145 150 155 160 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 180 185 190 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 195 200 205 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 210 215 220 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 225 230 235 240 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 245 250 255 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 260 265 270 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 275 280 285 Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 290 295 300 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 305 310 315 320 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 325 330 335 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 340 345 350 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 355 360 365 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 370 375 380 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 385 390 395 400 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 405 410 415 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 420 425 430 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 5 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 6 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 7 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 8 Ser Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 9 Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 10 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 10 Gly Asp Ile 1 <210> 11 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 11 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 12 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 12 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 13 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 13 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 14 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 15 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 16 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 17 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 17 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 18 Ser Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 19 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 19 Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 20 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 20 Gly Asp Ile 1 <210> 21 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 22 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 22 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 23 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 24 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 25 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 25 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 26 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 27 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 27 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 28 Ser Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 29 Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 30 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 30 Gly Asp Ile 1 <210> 31 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 31 Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln 65 70 75 80 Cys Asn Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg <210> 32 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 32 Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln 65 70 75 80 Cys Asn Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 33 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr Tyr 20 25 30 Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 <210> 34 <211> 439 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 34 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr Tyr 20 25 30 Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 100 105 110 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 115 120 125 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 130 135 140 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 145 150 155 160 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 180 185 190 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 195 200 205 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 210 215 220 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 225 230 235 240 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 245 250 255 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 260 265 270 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 275 280 285 Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 290 295 300 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 305 310 315 320 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 325 330 335 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 340 345 350 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 355 360 365 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 370 375 380 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 385 390 395 400 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 405 410 415 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 420 425 430 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 <210> 35 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 35 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 36 Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 37 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 37 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 38 Gly Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 39 Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 40 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 40 Gly Asp Ile 1 <210> 41 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 41 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 42 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 42 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 43 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 44 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 44 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 45 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 46 Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 47 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 47 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 48 Gly Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 49 <211> 15 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 49 Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 50 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 50 Gly Asp Ile 1 <210> 51 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 51 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 52 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 52 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 53 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 53 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 54 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 55 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 55 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 56 Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 57 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 57 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 58 Gly Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 59 <211> 15 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 59 Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 60 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 60 Gly Asp Ile 1 <210> 61 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 61 Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln 65 70 75 80 Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg <210> 62 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 62 Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln 65 70 75 80 Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 63 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 63 Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys 65 70 75 80 Met Thr Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 64 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 64 Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys 65 70 75 80 Met Thr Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 100 105 110 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 115 120 125 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 130 135 140 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 145 150 155 160 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 180 185 190 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 195 200 205 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 210 215 220 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 275 280 285 Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 290 295 300 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 305 310 315 320 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 325 330 335 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 340 345 350 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 405 410 415 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 420 425 430 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 65 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 65 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 66 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 67 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 67 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 68 Asn His Tyr Met Gln 1 5 <210> 69 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 69 Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 70 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 70 Gly Asp Ile 1 <210> 71 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 71 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 72 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 72 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 73 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 73 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 74 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 74 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 75 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 75 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 76 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 76 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 77 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 77 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 78 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 78 Asn His Tyr Met Gln 1 5 <210> 79 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 79 Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 80 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 80 Gly Asp Ile 1 <210> 81 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 81 Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln 65 70 75 80 Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg <210> 82 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 82 Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln 65 70 75 80 Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 83 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr 20 25 30 Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met 65 70 75 80 Ala Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 <210> 84 <211> 439 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 84 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr 20 25 30 Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met 65 70 75 80 Ala Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 100 105 110 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 115 120 125 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 130 135 140 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 145 150 155 160 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 180 185 190 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 195 200 205 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 210 215 220 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 225 230 235 240 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 245 250 255 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 260 265 270 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 275 280 285 Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 290 295 300 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 305 310 315 320 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 325 330 335 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 340 345 350 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 355 360 365 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 370 375 380 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 385 390 395 400 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 405 410 415 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 420 425 430 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 <210> 85 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 85 Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 86 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 87 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 87 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 88 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 88 Ser Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 89 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 89 Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 90 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 90 Gly Asp Ile 1 <210> 91 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 91 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 92 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 92 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 93 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 93 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 94 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 95 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 95 Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 96 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 96 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 97 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 97 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 98 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 98 Ser Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 99 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 99 Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 100 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 100 Gly Asp Ile 1 <210> 101 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 101 Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Pro Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln 65 70 75 80 Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg <210> 102 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 102 Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Pro Ala Val Gly Ser 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln 65 70 75 80 Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 103 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 103 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr Tyr 20 25 30 Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 <210> 104 <211> 439 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 104 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr Tyr 20 25 30 Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 100 105 110 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 115 120 125 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 130 135 140 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 145 150 155 160 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 180 185 190 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 195 200 205 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 210 215 220 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 225 230 235 240 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 245 250 255 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 260 265 270 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 275 280 285 Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 290 295 300 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 305 310 315 320 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 325 330 335 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 340 345 350 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 355 360 365 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 370 375 380 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 385 390 395 400 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 405 410 415 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 420 425 430 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 <210> 105 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 105 Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 106 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 106 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 107 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 107 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 108 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 108 Asn Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 109 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 109 Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 110 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 110 Gly Asp Ile 1 <210> 111 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 111 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 112 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 112 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 113 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 113 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 114 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 114 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 115 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 115 Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 116 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 117 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 117 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 118 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 118 Asn Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 119 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 119 Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 120 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 120 Gly Asp Ile 1 <210> 121 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 121 Ala Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly 1 5 10 15 Asp Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Ala Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg 35 40 45 Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Arg Ser Asp 85 90 95 Ser Val Asp Gly Val Ala Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg <210> 122 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 122 Ala Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly 1 5 10 15 Asp Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Ala Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg 35 40 45 Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Arg Ser Asp 85 90 95 Ser Val Asp Gly Val Ala Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 123 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 123 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn Ala 20 25 30 Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn 50 55 60 Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln 65 70 75 80 Leu Asn Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Asp Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 124 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 124 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn Ala 20 25 30 Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn 50 55 60 Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln 65 70 75 80 Leu Asn Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Asp Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 125 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 125 Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn Asn Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 126 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 126 Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 127 <211> 12 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 127 Gly Gly Tyr Arg Ser Asp Ser Val Asp Gly Val Ala 1 5 10 <210> 128 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 128 Ser Asn Ala Met Trp 1 5 <210> 129 <211> 17 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 129 Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn 1 5 10 15 Gly <210> 130 <211> 4 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 130 Asp Leu Asp Leu 1 <210> 131 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 131 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 132 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 132 Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser 85 90 95 Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 133 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 133 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 134 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 134 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 100 105 110 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 115 120 125 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 130 135 140 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 145 150 155 160 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 180 185 190 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg 195 200 205 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 225 230 235 240 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 245 250 255 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 260 265 270 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 275 280 285 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 290 295 300 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 305 310 315 320 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 325 330 335 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 340 345 350 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 355 360 365 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 370 375 380 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 385 390 395 400 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 405 410 415 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 420 425 430 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 135 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 135 Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 136 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 136 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 137 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 137 Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val 1 5 10 <210> 138 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 138 Ser Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 139 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 139 Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 140 <211> 3 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 140 Gly Asp Ile 1 <210> 141 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 141 caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240 tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 142 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 142 caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240 tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 143 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 143 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggactcga cctcagtagc tactacatgc aatgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg ataacacata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaga gcctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300 ccaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 144 <211> 1320 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 144 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggactcga cctcagtagc tactacatgc aatgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg ataacacata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaga gcctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300 ccaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360 gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420 tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480 accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540 ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600 accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660 tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720 gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780 gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840 acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900 ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960 ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020 tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080 gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140 aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200 aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260 catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320 1320 <210> 145 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 145 caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39 <210> 146 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 146 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 147 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 147 ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39 <210> 148 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 148 agctactaca tgcaa 15 <210> 149 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 149 gtcattggta ttaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 150 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 150 ggggacatc 9 <210> 151 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 151 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 152 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 152 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 153 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 153 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 154 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 154 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 155 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 155 caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39 <210> 156 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 156 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 157 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 157 ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39 <210> 158 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 158 agctactaca tgcaa 15 <210> 159 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 159 gtcattggta tcaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 160 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 160 ggggacatc 9 <210> 161 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 161 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 162 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 162 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 163 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 163 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 164 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 164 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 165 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 165 caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39 <210> 166 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 166 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 167 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 167 ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39 <210> 168 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 168 agctactaca tgcaa 15 <210> 169 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 169 gtcattggta tcaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 170 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 170 ggggacatc 9 <210> 171 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 171 caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaaaca actgatctat gatgcatcca ctctggcgtc tggggtccca 180 tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240 tgtaacgatg ctgccgctta ctactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 172 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 172 caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaaaca actgatctat gatgcatcca ctctggcgtc tggggtccca 180 tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240 tgtaacgatg ctgccgctta ctactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 173 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 173 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgttccgtct ctggcatcga cctcagtggc tactacatga actgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg gtgccacata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300 ccgggcaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 174 <211> 1320 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 174 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgttccgtct ctggcatcga cctcagtggc tactacatga actgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg gtgccacata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300 ccgggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360 gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420 tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480 accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540 ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600 accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660 tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720 gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780 gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840 acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900 ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960 ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020 tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080 gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140 aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200 aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260 catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320 1320 <210> 175 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 175 caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39 <210> 176 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 176 gatgcatcca ctctggcgtc t 21 <210> 177 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 177 ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39 <210> 178 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 178 ggctactaca tgaac 15 <210> 179 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 179 gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 180 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 180 ggggacatc 9 <210> 181 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 181 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 182 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 182 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 183 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 183 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 184 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 184 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 185 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 185 caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39 <210> 186 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 186 gatgcatcca ctctggcatc t 21 <210> 187 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 187 ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39 <210> 188 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 188 ggctactaca tgaac 15 <210> 189 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 189 gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 190 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 190 ggggacatc 9 <210> 191 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 191 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 192 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 192 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 193 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 193 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 194 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 194 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 195 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 195 caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39 <210> 196 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 196 gatgcatcca ctctggcatc t 21 <210> 197 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 197 ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39 <210> 198 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 198 ggctactaca tgaac 15 <210> 199 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 199 gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 200 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 200 ggggacatc 9 <210> 201 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 201 caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttataat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcgattca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg actgtagtac tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 202 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 202 caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttataat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcgattca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg actgtagtac tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 203 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 203 caggagcagc tgaaggagtc cgggggtcgc ctggtcacgc ctgggacatc cctgacactc 60 acctgcaccg tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gatcggagtc gttggtatta atggtcgcac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agaacctcgt cgaccacggt ggatctgaaa 240 atgaccaggc tgacaaccga ggacacggcc acctatttct gtgccagagg ggacatctgg 300 ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc 330 <210> 204 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 204 caggagcagc tgaaggagtc cgggggtcgc ctggtcacgc ctgggacatc cctgacactc 60 acctgcaccg tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gatcggagtc gttggtatta atggtcgcac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agaacctcgt cgaccacggt ggatctgaaa 240 atgaccaggc tgacaaccga ggacacggcc acctatttct gtgccagagg ggacatctgg 300 ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc 360 ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag 420 gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg 480 cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc 540 gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc 600 aacaccaagg tggacaagag agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca 660 ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 720 aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 780 cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 840 aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 900 gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 960 ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1020 gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1080 ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1140 gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1200 agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1260 atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1320 tga 1323 <210> 205 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 205 caggccagtc agagtgttta taattacaac taccttgcc 39 <210> 206 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 206 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 207 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 207 ctaggcagtt atgactgtag tactggtgat tgttttgtt 39 <210> 208 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 208 aaccactaca tgcaa 15 <210> 209 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 209 gtcgttggta ttaatggtcg cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 210 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 210 ggggacatc 9 <210> 211 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 211 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttacaat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtac tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 212 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 212 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttacaat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtac tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 213 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 213 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc gttggtatca atggtcgcac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 214 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 214 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc gttggtatca atggtcgcac atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 215 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 215 caggccagtc agagtgttta caattacaac taccttgcc 39 <210> 216 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 216 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 217 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 217 ctgggcagtt atgattgtag tactggtgat tgttttgtt 39 <210> 218 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 218 aaccactaca tgcaa 15 <210> 219 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 219 gtcgttggta tcaatggtcg cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 220 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 220 ggggacatc 9 <210> 221 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 221 caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttataat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacgtcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcgattca gaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 222 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 222 caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttataat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacgtcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcgattca gaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 223 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 223 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggaatcgg cctcagtagc tactacatgc agtgggtccg ccagtctcca 120 gggagggggc tggaatggat cggagtcatt ggtagtgatg gtaagacata ctacgcgacc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaag acctcgtcga ccacggtgga tctgagaatg 240 gccagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgta ccagagggga catctggggc 300 ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 224 <211> 1320 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 224 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggaatcgg cctcagtagc tactacatgc agtgggtccg ccagtctcca 120 gggagggggc tggaatggat cggagtcatt ggtagtgatg gtaagacata ctacgcgacc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaag acctcgtcga ccacggtgga tctgagaatg 240 gccagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgta ccagagggga catctggggc 300 ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360 gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420 tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480 accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540 ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600 accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660 tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720 gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780 gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840 acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900 ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960 ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020 tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080 gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140 aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200 aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260 catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320 1320 <210> 225 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 225 caggccagtc agaatgttta taataacaac tacctagcc 39 <210> 226 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 226 tctacgtcca ctctggcatc t 21 <210> 227 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 227 ctaggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39 <210> 228 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 228 agctactaca tgcag 15 <210> 229 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 229 gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc 48 <210> 230 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 230 ggggacatc 9 <210> 231 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 231 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 232 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 232 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 233 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 233 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180 acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 234 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 234 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180 acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 235 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 235 caggccagtc agaatgttta caataacaac tacctagcc 39 <210> 236 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 236 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 237 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 237 ctgggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39 <210> 238 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 238 agctactaca tgcaa 15 <210> 239 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 239 gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc 48 <210> 240 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 240 ggggacatc 9 <210> 241 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 241 caggtgctga cccagactgc atcccccgtg tctccagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccggg ccagtcagag tgtttattat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 242 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 242 caggtgctga cccagactgc atcccccgtg tctccagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccggg ccagtcagag tgtttattat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 243 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 243 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggaatcga cgtcactaac tactatatgc aatgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtgtgaatg gtaagagata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagaggcga catctggggc 300 ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 244 <211> 1320 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 244 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggaatcga cgtcactaac tactatatgc aatgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtgtgaatg gtaagagata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagaggcga catctggggc 300 ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360 gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420 tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480 accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540 ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600 accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660 tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720 gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780 gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840 acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900 ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960 ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020 tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080 gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140 aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200 aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260 catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320 1320 <210> 245 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 245 cgggccagtc agagtgttta ttataacaac tacctagcc 39 <210> 246 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 246 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 247 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 247 ctaggcagtt atgattgtag taatggtgat tgttttgtt 39 <210> 248 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 248 aactactata tgcaa 15 <210> 249 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 249 gtcattggtg tgaatggtaa gagatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 250 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 250 ggcgacatc 9 <210> 251 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 251 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccggg ccagtcagag tgtttactat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 252 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 252 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccggg ccagtcagag tgtttactat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 253 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 253 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacgtcact aactactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtgtga atggtaagag atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgccag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 254 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 254 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cgacgtcact aactactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtgtga atggtaagag atactacgcg 180 agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgccag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 255 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 255 cgggccagtc agagtgttta ctataacaac tacctagcc 39 <210> 256 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 256 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 257 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 257 ctgggcagtt atgattgtag taatggtgat tgttttgtt 39 <210> 258 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 258 aactactaca tgcaa 15 <210> 259 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 259 gtcattggtg tgaatggtaa gagatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 260 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 260 ggggacatc 9 <210> 261 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 261 gccatcgtga tgacccagac tccatcttcc aagtctgtcc ctgtgggaga cacagtcacc 60 atcaattgcc aggccagtga gagtctttat aataacaacg ccttggcctg gtttcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gcgcctgatc tatgatgcat ccaaactggc atctggggtc 180 ccatcgcggt tcagtggcgg tgggtctggg acacagttca ctctcaccat cagtggcgtg 240 cagtgtgacg atgctgccac ttactactgt ggaggctaca gaagtgatag tgttgatggt 300 gttgctttcg ccggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 262 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 262 gccatcgtga tgacccagac tccatcttcc aagtctgtcc ctgtgggaga cacagtcacc 60 atcaattgcc aggccagtga gagtctttat aataacaacg ccttggcctg gtttcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gcgcctgatc tatgatgcat ccaaactggc atctggggtc 180 ccatcgcggt tcagtggcgg tgggtctggg acacagttca ctctcaccat cagtggcgtg 240 cagtgtgacg atgctgccac ttactactgt ggaggctaca gaagtgatag tgttgatggt 300 gttgctttcg ccggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 263 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 263 cagtcggtgg aggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60 tgcacagcct ctggattcga cttcagtagc aatgcaatgt ggtgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggagtggat cggatgcatt tacaatggtg atggcagcac atactacgcg 180 agctgggtga atggccgatt ctccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gactctgcaa 240 ctgaatagtc tgacagtcgc ggacacggcc acgtattatt gtgcgagaga tcttgacttg 300 tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 264 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 264 cagtcggtgg aggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60 tgcacagcct ctggattcga cttcagtagc aatgcaatgt ggtgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggagtggat cggatgcatt tacaatggtg atggcagcac atactacgcg 180 agctgggtga atggccgatt ctccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gactctgcaa 240 ctgaatagtc tgacagtcgc ggacacggcc acgtattatt gtgcgagaga tcttgacttg 300 tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 265 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 265 caggccagtg agagtcttta taataacaac gccttggcc 39 <210> 266 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 266 gatgcatcca aactggcatc t 21 <210> 267 <211> 36 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 267 ggaggctaca gaagtgatag tgttgatggt gttgct 36 <210> 268 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 268 agcaatgcaa tgtgg 15 <210> 269 <211> 51 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 269 tgcatttaca atggtgatgg cagcacatac tacgcgagct gggtgaatgg c 51 <210> 270 <211> 12 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 270 gatcttgact tg 12 <210> 271 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 271 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 272 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 272 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 660 <210> 273 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 273 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180 acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 274 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 274 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180 acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300 tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480 gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540 accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600 agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660 ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720 cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840 gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900 accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960 gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020 caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080 tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320 aaatga 1326 <210> 275 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 275 caggccagtc agaatgttta caataacaac tacctagcc 39 <210> 276 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 276 tctacatcca ctctggcatc t 21 <210> 277 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 277 ctgggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39 <210> 278 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 278 agctactaca tgcaa 15 <210> 279 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 279 gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc 48 <210> 280 <211> 9 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 280 ggggacatc 9 <210> 281 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 281 Ala Cys Asp Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Ser Gly Gly Val Val Lys Asn Asn Phe Val Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Ala Phe 35 <210> 282 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 282 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Ser Gly Gly Met Val Lys Ser Asn Phe Val Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Ala Phe 35 <210> 283 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 283 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 1 5 10 15 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 20 25 30 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 35 40 45 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 50 55 60 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 65 70 75 80 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 85 90 95 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 284 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 284 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330

Claims (47)

  1. 대상체에서 당뇨병 또는 전당뇨병(pre-diabetes)을 치료하기 위한 조성물로서, 상기 조성물은 VL 및 VH를 포함하는 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편을 포함하고,
    상기 VL 및 VH는 하기 서열을 포함하는 것으로부터 선택된 항체의 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR 각각과 동일한 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR을 각각 포함하는 조성물:
    a. 서열식별번호:2의 경쇄 및 서열식별번호:4의 중쇄;
    b. 서열식별번호:12의 경쇄 및 서열식별번호:14의 중쇄;
    c. 서열식별번호:22의 경쇄 및 서열식별번호:24의 중쇄;
    d. 서열식별번호:32의 경쇄 및 서열식별번호:34의 중쇄;
    e. 서열식별번호:42의 경쇄 및 서열식별번호:44의 중쇄;
    f. 서열식별번호:52의 경쇄 및 서열식별번호:54의 중쇄;
    g. 서열식별번호:62의 경쇄 및 서열식별번호:64의 중쇄;
    h. 서열식별번호:72의 경쇄 및 서열식별번호:74의 중쇄;
    i. 서열식별번호:82의 경쇄 및 서열식별번호:84의 중쇄;
    j. 서열식별번호:92의 경쇄 및 서열식별번호:94의 중쇄;
    k. 서열식별번호:102의 경쇄 및 서열식별번호:104의 중쇄;
    l. 서열식별번호:112의 경쇄 및 서열식별번호:114의 중쇄; 및
    m. 서열식별번호:132의 경쇄 및 서열식별번호:134의 중쇄 또는 서열식별번호:131의 VL 및 서열식별번호:133의 VH.
  2. 제1항에 있어서,
    a.에서 VL이 각각 서열식별번호:5, 6, 및 7의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:8, 9, 및 10의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    b.에서 VL이 각각 서열식별번호:15, 16, 및 17의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:18, 19, 및 20의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    c.에서 VL이 각각 서열식별번호:25, 26, 및 27의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:28, 29, 및 30의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    d.에서 VL이 각각 서열식별번호:35, 36, 및 37의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:38, 39, 및 40의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    e.에서 VL이 각각 서열식별번호:45, 46, 및 47의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:48, 49, 및 50의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    f.에서 VL이 각각 서열식별번호:55, 56, 및 57의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:58, 59, 및 60의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    g.에서 VL이 각각 서열식별번호:65, 66, 및 67의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:68, 69, 및 70의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    h.에서 VL이 각각 서열식별번호:75, 76, 및 77의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:78, 79, 및 80의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    i.에서 VL이 각각 서열식별번호:85, 86, 및 87의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:88, 89, 및 90의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    j.에서 VL이 각각 서열식별번호:95, 96, 및 97의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:98, 99, 및 100의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    k.에서 VL이 각각 서열식별번호:105, 106, 및 107의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:108, 109, 및 110의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나;
    l.에서 VL이 각각 서열식별번호:115, 116, 및 117의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:118, 119, 및 120의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하거나; 또는
    m.에서 VL이 각각 서열식별번호:135, 136, 및 137의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:138, 139, 및 140의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서, VL 및 VH 폴리펩타이드 서열이
    a.에서 각각 서열식별번호:1 및 서열식별번호:3;
    b.에서 각각 서열식별번호:11 및 서열식별번호:13;
    c.에서 각각 서열식별번호:21 및 서열식별번호:23;
    d.에서 각각 서열식별번호:31 및 서열식별번호:33;
    e.에서 각각 서열식별번호:41 및 서열식별번호:43;
    f.에서 각각 서열식별번호:51 및 서열식별번호:53;
    g.에서 각각 서열식별번호:61 및 서열식별번호:63;
    h.에서 각각 서열식별번호:71 및 서열식별번호:73;
    i.에서 각각 서열식별번호:81 및 서열식별번호:83;
    j.에서 각각 서열식별번호:91 및 서열식별번호:93;
    k.에서 각각 서열식별번호:101 및 서열식별번호:103;
    l.에서 각각 서열식별번호:111 및 서열식별번호:113; 또는
    m.에서 각각 서열식별번호:131 및 서열식별번호:133을 포함하는 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편이
    a.에서 서열식별번호:2의 경쇄 및 서열식별번호:4의 중쇄;
    b.에서 서열식별번호:12의 경쇄 및 서열식별번호:14의 중쇄;
    c.에서 서열식별번호:22의 경쇄 및 서열식별번호:24의 중쇄;
    d.에서 서열식별번호:32의 경쇄 및 서열식별번호:34의 중쇄;
    e.에서 서열식별번호:42의 경쇄 및 서열식별번호:44의 중쇄;
    f.에서 서열식별번호:52의 경쇄 및 서열식별번호:54의 중쇄;
    g.에서 서열식별번호:62의 경쇄 및 서열식별번호:64의 중쇄;
    h.에서 서열식별번호:72의 경쇄 및 서열식별번호:74의 중쇄;
    i.에서 서열식별번호:82의 경쇄 및 서열식별번호:84의 중쇄;
    j.에서 서열식별번호:92의 경쇄 및 서열식별번호:94의 중쇄;
    k.에서 서열식별번호:102의 경쇄 및 서열식별번호:104의 중쇄;
    l.에서 서열식별번호:112의 경쇄 및 서열식별번호:114의 중쇄; 또는
    m.에서 서열식별번호:132의 경쇄 및 서열식별번호:134의 중쇄를 포함하는 조성물.
  5. 제1항에 있어서, VL 및 VH가 각각 서열식별번호:52의 경쇄 및 서열식별번호:54의 중쇄를 포함하는 항체의 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR과 각각 동일한 경쇄 CDR 및 중쇄 CDR을 포함하는 조성물.
  6. 제2항에 있어서, VL이 각각 서열식별번호:55, 56, 및 57의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, VH가 각각 서열식별번호:58, 59, 및 60의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 조성물.
  7. 제3항에 있어서,VL 및 VH 폴리펩타이드 서열이 각각 서열식별번호:51 및 서열식별번호:53을 포함하는 조성물.
  8. 제4항에 있어서, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편이 서열식별번호:52의 경쇄 및 서열식별번호:54의 중쇄를 포함하는 조성물.
  9. 제1항 내지 제3항 및 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편이 Fab, F(ab')2, scFv, 또는 또 다른 1가 항체 단편을 포함하는 조성물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 특징 중 하나 이상을 포함하는 조성물:
    (i) 상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하고;
    (ii) 항체 투여량은 0.1 내지 100.0 mg/수령 대상체의 체중 kg이고; 및
    (iii) 상기 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편은 인간화된 또는 키메라성 항체인 조성물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 특징 중 하나 이상을 포함하는 조성물:
    (i) II형 당뇨병의 개시를 치료 또는 지연시키데 효과적이거나;
    (ii) 기능적 췌장 베타 세포의 손실을 예방하는데 효과적이거나;
    (iii) 외인성 인슐린의 투여에 대한 필요가 지연되거나;
    (iv) 상기 대상체는 전당뇨병으로 진단되었거나, 또는 II형 당뇨병의 발달에 대한 위험 인자를 하나 이상 나타내거나;
    (v) 상기 대상체는 전-폐경기, 폐경기 전후, 폐경기 또는 후-폐경기에 있거나;
    (vi) 상기 대상체는 100 mg/dL 내지 125 mg/dl의 공복 혈당 수준; 75 그램의 글루코오스 용액 또는 75 그램의 최대 용량까지의 1.75 그램의 글루코오스/체중 킬로그램의 글루코오스 용액 섭취 2 시간 후의 140 mg/dL 내지 199 mg/dL의 혈당 수준; 및 5.7 퍼센트 내지 6.4 퍼센트의 당화 헤모글로빈 중 하나 이상을 포함하는 전당뇨병의 증상을 하나 이상 나타내거나;
    (vii) 상기 대상체는 125 mg/dl 초과의 공복 혈당 수준; 75 그램의 글루코오스 용액 또는 75 그램의 최대 용량까지의 1.75 그램의 글루코오스/체중 킬로그램의 글루코오스 용액 섭취 2 시간 후의 적어도 200 mg/dL의 혈당 수준; 및 적어도 6.5 퍼센트의 당화 헤모글로빈 중 하나 이상을 포함하는 당뇨병의 증상을 하나 이상 나타내거나;
    (viii) 상기 대상체는 II형 당뇨병의 가족력; II형 당뇨병으로 이전에 진단된 하나 이상의 부모 또는 형제자매; 이상지질혈증; 적어도 200 mg/dL의 총 혈액 트리글리세라이드 수준; 35 mg/dL 미만의 혈액 고밀도 지질단백질 수준; 비만; 25 kg/m2 초과의 체질량 지수; 임신성 당뇨병의 이력; 이전의 9 lb 초과의 출생 체중을 갖는 영아의 출산; 고혈압; 적어도 140 mmHg의 수축기 혈압; 적어도 90 mmHg의 확장기 혈압; 적어도 99 mg/dL의 공복 혈당의 이전의 측정; 혈관 질환; 다낭성 난소 증후군; 또는 흑색가시세포증을 포함하는 II형 당뇨병의 발달에 대한 위험 인자를 하나 이상 나타내거나;
    (ix) 상기 대상체는 II형 당뇨병으로 진단되었거나; 또는
    (x) 상기 대상체는 GLP-1, 엑세나타이드-1, 엑센딘, 엑센딘 유사체, 엑센딘 작용제, 리라글루타이드, 엑세나타이드 LAR, DPP-4 길항제, GLP-1 수용체 작용제, 또는 또 다른 GLP-1 작용제에 의한 치료에 대해 난치성인 조성물.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인간 CGRP 항체 또는 항체 단편 이외의 항-당뇨제 또는 항-비만제와 조합하여 사용하기 위한 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항-당뇨제는 하나 이상의 바이구아나이드를 포함하고, 이는 메트포르민을 포함할 수 있는 조성물.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
KR1020167002907A 2013-07-03 2014-07-03 항-ｃｇｒｐ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절 KR102476907B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361842745P 2013-07-03 2013-07-03
US61/842,745 2013-07-03
US201461982611P 2014-04-22 2014-04-22
US61/982,611 2014-04-22
PCT/US2014/045389 WO2015003122A2 (en) 2013-07-03 2014-07-03 Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160029822A KR20160029822A (ko) 2016-03-15
KR102476907B1 true KR102476907B1 (ko) 2022-12-13

Family

ID=52144290

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167002907A KR102476907B1 (ko) 2013-07-03 2014-07-03 항-ｃｇｒｐ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20150017166A1 (ko)
EP (1) EP3016684B1 (ko)
JP (4) JP6502337B2 (ko)
KR (1) KR102476907B1 (ko)
CN (1) CN105492026A (ko)
AU (2) AU2014285052B2 (ko)
CA (1) CA2916980C (ko)
ES (1) ES2911690T3 (ko)
IL (1) IL243355A0 (ko)
MX (1) MX2016000220A (ko)
NZ (1) NZ754427A (ko)
SG (2) SG11201510618YA (ko)
TW (2) TWI753471B (ko)
WO (1) WO2015003122A2 (ko)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105492026A (zh) * 2013-07-03 2016-04-13 奥尔德生物制药公司 使用抗cgrp抗体的葡萄糖代谢的调节
KR20200126018A (ko) 2014-03-21 2020-11-05 테바 파마슈티컬스 인터내셔널 게엠베하 칼시토닌 유전자-관련 펩티드에 대한 길항제 항체 및 그의 사용 방법
US10556945B2 (en) 2014-03-21 2020-02-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
JP6937368B2 (ja) 2016-09-23 2021-09-22 テバ・ファーマシューティカルズ・インターナショナル・ゲー・エム・ベー・ハー 難治性片頭痛の治療方法
BR102020007149A8 (pt) 2020-04-06 2023-09-26 H Lundbeck As Usos de um anticorpo anti-cgrp ou anti-cgrp-r ou um fragmento dos mesmos para melhorar o sintoma mais incômodo (mbs) e a impressão global de mudança (pgic) associados com enxaqueca
CA3229059A1 (en) 2021-08-27 2023-03-02 H. Lundbeck A/S Treatment of cluster headache using anti-cgrp antibodies

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120294797A1 (en) * 2011-05-20 2012-11-22 Brian Robert Kovacevich Anti-cgrp compositions and use thereof

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
GB8720115D0 (en) 1987-08-26 1987-09-30 Cooper G J S Treatment of diabetes mellitus
GB8725529D0 (en) 1987-10-30 1987-12-02 Delta Biotechnology Ltd Polypeptides
DE68924372T2 (de) * 1988-01-11 1996-05-09 Amylin Pharmaceuticals Inc Behandlung von diabetes mellitus typ 2.
US5364841A (en) * 1988-01-11 1994-11-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and essential hypertension and related disorders
US5266561A (en) * 1988-01-11 1993-11-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
US5175145A (en) 1988-08-26 1992-12-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of diabetes mellitus with amylin agonists
ATE135370T1 (de) 1988-12-22 1996-03-15 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
JPH03504064A (ja) * 1989-01-03 1991-09-05 モトローラ・インコーポレーテッド 高密度ソルダ・バンプの製造方法と高密度ソルダ・バンプ用基板ソケット
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
DE69022501T2 (de) * 1989-07-10 1996-02-01 Amylin Pharmaceuticals Inc Verwendung eines Amylinantagonisten zur Herstellung eines Artzneimittels zur Behandlung von Fettsucht und essentieller Hypertonie und damit zusammenhängenden Krankheiten.
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
AU6445894A (en) 1993-03-19 1994-10-11 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
DE69534530T2 (de) 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
AU2002356469A1 (en) * 2001-11-26 2003-06-10 Protemix Corp Ltd Methods of compositions for normalizing lipid levels in mammalian tissues
ES2630224T3 (es) 2003-10-22 2017-08-18 Keck Graduate Institute Métodos para sintetizar polipéptidos heteromultiméricos en levadura con el uso de una estrategia de apareamiento haploide
DK2021463T3 (en) 2006-05-19 2017-01-16 Alder Biopharmaceuticals Inc Culture method to obtain a cloned population of antigen-specific B cells
WO2008144753A2 (en) 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies to tnf alpha and use thereof
MX343879B (es) 2007-05-21 2016-11-25 Alderbio Holdings Llc Metodo de humanizacion de anticuerpo de conejo novedoso y anticuerpos de conejo humanizados.
TWI561530B (en) 2007-05-21 2016-12-11 Alderbio Holdings Llc Antibodies to il-6 and use thereof
BR112013029951B1 (pt) * 2011-05-20 2020-10-20 Alderbio Holdings Llc composição farmacêutica e uso de anticorpos ou fragmentos de anticorpos anti-cgrp para tratar ou prevenir formas de diarreia crônicas e agudas
CN105492026A (zh) * 2013-07-03 2016-04-13 奥尔德生物制药公司 使用抗cgrp抗体的葡萄糖代谢的调节

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120294797A1 (en) * 2011-05-20 2012-11-22 Brian Robert Kovacevich Anti-cgrp compositions and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015003122A2 (en) 2015-01-08
TW201536316A (zh) 2015-10-01
WO2015003122A3 (en) 2015-03-19
JP2020158525A (ja) 2020-10-01
SG11201510618YA (en) 2016-03-30
EP3016684A4 (en) 2017-06-07
CN105492026A (zh) 2016-04-13
AU2019279945B2 (en) 2022-01-20
JP6502337B2 (ja) 2019-04-17
EP3016684A2 (en) 2016-05-11
EP3016684B1 (en) 2022-02-23
AU2014285052A1 (en) 2016-02-11
ES2911690T3 (es) 2022-05-20
US20150017166A1 (en) 2015-01-15
TWI712419B (zh) 2020-12-11
MX2016000220A (es) 2016-08-18
TW202106335A (zh) 2021-02-16
JP2016528198A (ja) 2016-09-15
CA2916980A1 (en) 2015-01-08
KR20160029822A (ko) 2016-03-15
NZ754427A (en) 2021-12-24
AU2014285052B2 (en) 2019-09-12
AU2019279945A1 (en) 2020-01-16
CA2916980C (en) 2023-02-21
SG10201906172XA (en) 2019-08-27
NZ715834A (en) 2021-11-26
JP2018168186A (ja) 2018-11-01
IL243355A0 (en) 2016-03-31
JP2019112455A (ja) 2019-07-11
TWI753471B (zh) 2022-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019226231B2 (en) Anti-CGRP compositions and use thereof
KR102476907B1 (ko) 항-ｃｇｒｐ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절
CN108359008B (zh) 抗cgrp或抗cgrp-r抗体或抗体片段用于治疗或预防慢性和急性形式的腹泻的用途
CN108014334B (zh) 抗cgrp抗体和抗体片段用于在有需要的受试者中预防或抑制畏光或厌光的用途
KR20210113597A (ko) 항-cgrp 항체를 사용한 두통의 급성 치료 및 신속 치료
KR20210114002A (ko) 항-cgrp 또는 항-cgrp-r 항체를 사용한 약물 남용 두통의 치료
US20200010537A1 (en) Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies
KR20220004053A (ko) 항-cgrp 항체를 사용하는 두통의 치료
KR20210124867A (ko) 항-cgrp 항체를 사용하는 편두통 관련 성가심 증상 (mbs) 의 치료
NZ715834B2 (en) Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E90F Notification of reason for final refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant