EA035484B1 - Применение модифицированных t-клеток с химерными антигенными рецепторами для лечения злокачественных новообразований - Google Patents

Применение модифицированных t-клеток с химерными антигенными рецепторами для лечения злокачественных новообразований Download PDF

Info

Publication number
EA035484B1
EA035484B1 EA201790175A EA201790175A EA035484B1 EA 035484 B1 EA035484 B1 EA 035484B1 EA 201790175 A EA201790175 A EA 201790175A EA 201790175 A EA201790175 A EA 201790175A EA 035484 B1 EA035484 B1 EA 035484B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cells
cell
acid sequence
car
seq
Prior art date
Application number
EA201790175A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790175A1 (ru
Inventor
Карл Х. Джун
Дэвид Л. Портер
Майкл Д. Кейлос
Майкл С. Майлон
Original Assignee
Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46207528&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA035484(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания filed Critical Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания
Publication of EA201790175A1 publication Critical patent/EA201790175A1/ru
Publication of EA035484B1 publication Critical patent/EA035484B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/001112—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/01—DNA viruses
    • C07K14/075—Adenoviridae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70507—CD2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2815—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/861—Adenoviral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/80—Immunoglobulins specific features remaining in the (producing) cell, i.e. intracellular antibodies or intrabodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/51—B7 molecules, e.g. CD80, CD86, CD28 (ligand), CD152 (ligand)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15071—Demonstrated in vivo effect

Abstract

Изобретение относится к композициям и способам лечения злокачественных новообразований у человека. Изобретение относится к введению генетически модифицированной Т-клетки для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета.

Description

По данной заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке США № 61/421470, зарегистрированной 9 декабря 2010 г., и предварительной заявке США № 61/502649, зарегистрированной 29 июня 2011 г., таким образом, включенным в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
Предпосылки изобретения
Подавляющее большинство пациентов, имеющих В-клеточные злокачественные новообразования, включая хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), будут умирать от этих заболеваний. Одним из подходов для лечения этих пациентов является генетическая модификация Т-клеток для воздействия на антигены-мишени, экспрессируемых на опухолевых клетках, посредством экспрессии химерных антигенных рецепторов (CAR). CAR являются антигенными рецепторами, сконструированными для распознавания поверхностных антигенов клетки независимо от лейкоцитарного антигена человека. Попытки использования генетически модифицированных клеток, экспрессирующих CAR, для лечения этих типов пациентов имели лишь ограниченный успех. См., например, Brentjens et al., 2010, Molecular Therapy, 18:4, 666-668; Morgan et. al., 2010, Molecular Therapy, опубликованную онлайн 23 февраля 2010 г., стр. 1-9; и Till et al., 2008, Blood, 112: 2261-2271.
В случае большинства злокачественных новообразований опухолеспецифичные антигены еще не определены, но в случае В-клеточных злокачественных новообразованиях CD19 является привлекательной опухолевой мишенью. Экспрессия CD19 ограничена нормальными и злокачественными В-клетками (Uckun, et al. Blood, 1988, 71: 13-29), таким образом, CD19 является общепризнанной мишенью для безопасного тестирования CAR. Хотя CAR могут запускать активацию Т-клеток способом, аналогичным эндогенному Т-клеточному рецептору, главное препятствие для клинического применения этой технологии на сегодняшний день заключается в экспансии CAR+ Т-клеток in vivo, быстром исчезновении клеток после введения и разочаровывающей клинической активности (Jena, et al., Blood;, 2010, 116: 1035-1044; Uckun, et al, Blood, 1988, 71: 13-29).
Таким образом, в этой области существует острая потребность в композициях и способах лечения злокачественных новообразований с использованием CAR, которые можно подвергать экспансии in vivo. Настоящее изобретение направлено на решение этой задачи.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к выделенной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей химерный антигенный рецептор (CAR), где CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, где сигнальный домен CD3-дзета содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты кодирует CAR, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CAR, содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 8.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий домен CAR является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. Предпочтительно антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab или scFv.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий домен CAR связывается с опухолевым антигеном. В одном из вариантов осуществления опухолевый антиген ассоциирован с гематологическим злокачественным новообразованием. В другом варианте осуществления опухолевый антиген ассоциирован с солидной опухолью. В еще одном варианте осуществления опухолевый антиген выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, ROR1, мезотелина, CD33/IL3Ra, с-Met, PSMA, гликолипида F77, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO-1 TCR, MAGE A3 TCR и любой их комбинации.
В одном из вариантов осуществления костимуляторная сигнальная область CAR содержит внутриклеточный домен костимуляторной молекулы, выбранной из группы, состоящей из CD27, CD28, 4-1ВВ, ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, функционально-ассоциированного антигена лимфоцитов-1 (LFA 1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, В7-Н3, лиганда, специфически связывающегося с CD83, и любой их комбинации.
В одном из вариантов осуществления сигнальный домен CD3-дзета CAR кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 18.
Изобретение также относится к выделенному CAR, содержащему антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, где сигнальный домен CD3-дзета содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
Изобретение также относится к клетке, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
В одном из вариантов осуществления клетка, содержащая CAR, выбрана из группы, состоящей из Т-клеток, естественных киллеров (NK-клеток), цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL) и регуляторных Тклеток.
В одном из вариантов осуществления клетка, содержащая CAR, проявляет противоопухолевый им- 1 035484 мунитет, когда антигенсвязывающий домен CAR связывается с соответствующим антигеном.
Изобретение также относится к вектору, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, где сигнальный домен CD3-дзета содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
Изобретение также относится к способу стимуляции опосредованного Т-клетками иммунного ответа на популяцию клеток-мишеней или ткань млекопитающего. В одном из вариантов осуществления способ включает введение млекопитающему эффективного количества клеток, генетически модифицированных для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, где антигенсвязывающий домен выбран для специфического распознавания популяции клеток-мишеней или ткани.
Изобретение также относится к способу обеспечения противоопухолевого иммунитета у млекопитающего. В одном из вариантов осуществления способ включает введение млекопитающему эффективного количества клеток, генетически модифицированных для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, таким образом, обеспечивают противоопухолевый иммунитет у млекопитающего.
Также изобретение относится к способу лечения млекопитающего с заболеванием, нарушением или состоянием, ассоциированным с повышенной экспрессией опухолевого антигена. В одном из вариантов осуществления способ включает введение млекопитающему эффективного количества клеток, генетически модифицированных для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, таким образом, млекопитающее подвергают лечению.
В одном из вариантов осуществления клетка представляет собой аутологичную Т-клетку.
В одном из вариантов осуществления опухолевый антиген выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, ROR1, мезотелина, CD33/IL3Ra, с-Met, PSMA, гликолипида F77, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO1 TCR, MAGE A3 TCR и любой их комбинации.
Изобретение также относится к способу лечения человека с хроническим лимфоцитарным лейкозом. В одном из вариантов осуществления способ включает введение человеку Т-клеток, генетически сконструированных для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.
В одном из вариантов осуществления человек является резистентным по меньшей мере к одному химиотерапевтическому средству.
В одном из вариантов осуществления хронический лимфоцитарный лейкоз является рефрактерным CD19+ лейкозом и лимфомой.
Также изобретение относится к способу получения персистирующей популяции генетически сконструированных Т-клеток у человека с диагнозом злокачественного новообразования. В одном из вариантов осуществления способ включает введение человеку Т-клеток, генетически сконструированных для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, где персистирующая популяция генетически сконструированных Т-клеток сохраняется у человека в течение по меньшей мере одного месяца после введения.
В одном из вариантов осуществления персистирующая популяция генетически сконструированных Т-клеток содержит по меньшей мере одну клетку, выбранную из группы, состоящей из Т-клеток, которые вводили человеку, потомства Т-клеток, которые вводили человеку, и их комбинации.
В одном из вариантов осуществления персистирующая популяция генетически сконструированных Т-клеток включает Т-клетки памяти.
В одном из вариантов осуществления персистирующая популяция генетически сконструированных Т-клеток сохраняется у человека в течение по меньшей мере трех месяцев после введения. В другом варианте осуществления персистирующая популяция генетически сконструированных Т-клеток сохраняется у человека в течение по меньшей мере четырех месяцев, пяти месяцев, шести месяцев, семи месяцев, восьми месяцев, девяти месяцев, десяти месяцев, одиннадцати месяцев, двенадцати месяцев, двух или трех лет после введения.
В одном из вариантов осуществления подвергают лечению хронический лимфоцитарный лейкоз.
Изобретение также относится к способу экспансии популяции генетически сконструированных Тклеток у человека с диагнозом злокачественного новообразования. В одном из вариантов осуществления способ включает введение человеку Т-клетки, генетически сконструированной для экспрессии CAR, где CAR содержит антигенсвязывающий домен, костимуляторную сигнальную область и сигнальный домен CD3-дзета, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, где вводимая генетически сконструированная Т-клетка дает начало популяции потомства Т-клетки у человека.
- 2 035484
В одном из вариантов осуществления потомство Т-клеток у человека включает Т-клетки памяти.
В одном из вариантов осуществления Т-клетка представляет собой аутологичную Т-клетку.
В другом варианте осуществления человек является резистентным по меньшей мере к одному химиотерапевтическому средству.
В одном из вариантов осуществления злокачественное новообразование представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз. В другом варианте осуществления хронический лимфоцитарный лейкоз является рефрактерным CD19+ лейкозом и лимфомой.
В одном из вариантов осуществления популяция потомства Т-клетки сохраняется у человека по меньшей мере в течение трех месяцев после введения. В другом варианте осуществления популяция потомства Т-клетки сохраняется у человека по меньшей мере в течение четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати месяцев, двух или трех лет после введения.
В одном из вариантов осуществления злокачественное новообразование подвергают лечению.
Следующее ниже подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения будет более понятным в комбинации с представленными чертежами. В целях иллюстрирования изобретения представлены чертежи к вариантам осуществления, предпочтительные в данный момент. Однако следует понимать, что изобретение не ограничено точными условиями и средствами в вариантах осуществления, представленных на чертежах.
Фиг. 1, включающая фиг. 1А-1С, представляет собой серию изображений схематического представления вектора для передачи генов и трансгена, получения генномодифицированных Т-клеток и дизайна клинического протокола. на фиг. 1А изображены лентивирусные векторы и трансген, показаны главные функциональные элементы. Получали псевдотипированные белком G вируса везикулярного стоматита лентивирусные векторы клинической категории (обозначаемые pELPs 19BBz), регулирующие экспрессию scFv против CD19, полученных из моноклонального антитела мыши FMC63, шарнирный и трансмембранный домен CD8a человека, и сигнальные домены 4-1ВВ и CD3-дзета человека. Конститутивную экспрессию трансгена регулировали включением EF-1a (промотора фактора элонгации-1а), длинного концевого повтора LTR, rev-чувствительного элемента RRE (сРРТ) и центральной терминирующей последовательности (CTS). Фигура не масштабирована, на фиг. 1В изображено получение Т-клеток. Аутологичные клетки получали аферезом, Т-клетки обогащали элютриацией мононуклеарных клеток, промывали и остаточные лейкозные клетки удаляли добавлением парамагнитных бус, покрытых антителами против CD3/CD2 8, для позитивной селекции и активации Т-клеток. Лентивирусные векторы добавляли во время активации клеток и промывали на 3 день после начала культивирования. Клетки подвергали экспансии на устройстве с качающейся платформой (WAVE Bioreactor System) в течение 8-12 дней. В последний день культивирования бусы удаляли пропусканием через магнитное поле, собирали Т-клетки CART-19 и осуществляли криоконсервацию в инфузируемой среде. На фиг. 1С изображен дизайн клинического протокола. Пациентам проводили химиотерапию, направленную на снижение количества лимфоцитов, как описано, с последующей внутривенной капельной инфузией CART-19 #1 в течение 15-20 мин. Инфузию осуществляли с использованием подхода дробных доз в течение 3 дней (10, 30, 60%), начиная с 1-5 дня после завершения химиотерапии. Анализы по конечной точке осуществляли на 4 неделе исследования. По результатам активного мониторинга индивидуумов переводили на конечный протокол для последующего длительного наблюдения в соответствии с инструкциями FDA.
Фиг. 2, включающая фиг. 2A-2F, представляет собой серию изображений, на которых показаны устойчивая экспансия in vivo и поддержание клеток CART-19 в крови и костном мозге. ДНК, выделенную из цельной крови, как показано на фиг. 2А-2С, или костного мозга, как показано на фиг. 2D-2F, образцы, полученные от UPN 01, как показано на фиг. 2А и 2D, UPN 02, как показано на фиг. 2В и 2Е, и UPN 03, как показано на фиг. 2С и 2F, в совокупности подвергали Q-ПЦР с использованием сертифицированного анализа для детекции и количественного определения последовательностей CART-19. Каждая точка данных представляет собой среднее для измерений в трех повторениях с использованием 100-200 нг геномной ДНК с максимальным % CV менее чем 1,56%. Параметры прохождения/непрохождения для анализа включали заранее установленные диапазоны угла наклона кривой и эффективности амплификации и амплификацию референсного образца. Нижний предел количественного анализа, установленный по диапазону для стандартной кривой, составлял 2 копии трансгена/микрограмм геномной ДНК; объемы образцов ниже этого количества считают приблизительными, и их представляют, если по меньшей мере в 2/3 повторов получали величину Ct с % CV для величин 15%. Осуществляли инфузию клеток CART-19 в день 0, 1 и 2 в случае UPN 01 и UPN 03 и дни 0, 1, 2 и 11 в случае UPN 02.
Фиг. 3, включающая фиг. 3A-3D, представляет собой серию изображений, на которых показаны уровни цитокинов в сыворотке и костном мозге до и после инфузии клеток CART; длительные измерения изменений цитокинов, хемокинов и цитокиновых рецепторов в сыворотке у UPN 01, как показано на фиг. 3А, UPN 02, как показано на фиг. 3В, и UPN 03, как показано на фиг. 3С, в один и тот же день после инфузии клеток CART-19 и серийные определения одних и тех же аналитов в костном мозге UPN 03, как показано на фиг. 3D. Образцы подвергали мультиплексному анализу с использованием технологии анализа с помощью шариков Luminex и предварительно собранных и утвержденных наборов для мультиплексного анализа. Указывали аналиты с >3-кратным изменением и строили графики в виде относитель- 3 035484 ного изменения по сравнению с начальным уровнем, как показано на фиг. 3А-3С, или в виде абсолютных значений, как показано на фиг. 3D. Абсолютные значения для каждого аналита в каждый момент времени получали с использованием стандартной кривой, построенной с помощью рекомбинантного белка по серии 3-кратных разведений из 8 точек с верхним и нижним пределами количественного анализа (ULOQ, LLOQ), определяемыми по 80-120% наблюдаемым/ожидаемым предельным значениям для стандартных кривых. Каждый образец оценивали в двух повторениях с вычислением средних значений и % CV, в большинстве случаев, менее 10%. Для удобства представления сводных данных в условиях широкого диапазона абсолютных значений данные представляют как кратное изменение относительно начального уровня для каждого аналита. В случаях, когда исходные значения являлись неопределяемыми, в качестве исходного значения использовали половину наименьшего значения на стандартной кривой. Диапазоны стандартной кривой для аналитов и исходных (день 0) значений (указаны в круглых скобках последовательно для UPN 01, 02 и 03), все в пг/мл: IL1-Pa: 35,5-29318 (689, 301, 287); IL-6: 2,7-4572 (7, 10,1, 8,7); IFNy: 11,2-23972 (2,8, ND, 4,2); CXCL10: 2,1-5319 (481, 115, 287); Μ№-1β: 3,3-7233 (99,7, 371, 174); MCP1: 4,8-3600 (403, 560, 828); CXCL9: 48,2-3700 (1412, 126, 177); IL2-Pa: 13,4-34210 (4319, 9477, 610); IL-8: 2,4-5278 (15,3, 14,5, 14,6); IL-10: 6,7-13874 (8,5, 5,4, 0,7); MIP-1a: 7,1-13778 (57,6, 57,3, 48,1).
Фиг. 4, включающая фиг. 4A-4D, представляет собой серию изображений, на которых представлена длительная поверхностная экспрессия CART-19 и появление функциональных CAR памяти in vivo. На фиг. 4А изображено определение экспрессирующих CAR CD3+ лимфоцитов и отсутствие В-клеток в периферической крови и костном мозге. Свежеобработанные мононуклеарные клетки периферической крови или костного мозга, полученные из UPN 03 в день 169 после инфузии клеток CART-19, оценивали посредством проточной цитометрии на предмет поверхностной экспрессии CAR19 (вверху) или наличия В-клеток (внизу); в качестве контроля окрашивали РВМС, полученные от здорового донора ND365. Стратегия гейтирования для CD3+ и В-клеточной популяций представлена на фиг. 9. Для оценки экспрессии CAR19 в CD3+ лимфоцитах образцы одновременно окрашивали с использованием антител к CD14-PE-Cy7 и CD16-PE-Cy7 (разгрузочный канал) и CD3-FITC, позитивно гейтированными на CD3+, и оценивали на предмет экспрессии CAR19 в CD8+ и CD8-популяциях лимфоцитов с помощью одновременного окрашивания с использованием CD8a-PE и идиотипического антитела против CAR19, конъюгированного с Alexa-647. Данные на графиках гейтируют по популяции клеток, негативной по маркерам разгрузочного канала/CD3-позитивной. Для оценки наличия В-клеток образцы одновременно окрашивали с использованием антител к CD14-APC и CD3-FITC (разгрузочные каналы) и оценивали на наличие В-клеток в негативной по маркерам разгрузочного канала фракции посредством одновременного окрашивания с использованием антител к CD20-PE и CD19-PE-Cy-7. Во всех случаях квадранты негативного гейтирования определяли на неокрашенных контролях, как показано на фиг. 4В и 4С. Представлено Тклеточное иммунофенотипирование CD4+ (фиг. 4В) и CD8+ (фиг. 4С) субпопуляций Т-клеток. Замороженные образцы периферической крови от UPN 03, полученные аферезом в день 56 и 169 после инфузии Т-клеток, хранили в течение ночи в среде для культивирования без дополнительных факторов, промывали и подвергали мультипараметрическому иммунофенотипированию на предмет экспрессии маркеров Тклеточной памяти, активации и истощения. Как показано на фиг. 8, стратегия гейтирования включала исходное гейтирование на негативные по маркерам разгрузочного канала (CD14, CD16, Live/Dead Aqua) и CD3-позитивные клетки с последующим позитивным гейтированием на CD4+ и CD8+ клетки. Дискриминационные окна и квадранты определяли с использованием контролей FMO (CAR, CD45RA, PD-1, CD25, CD127, CCR7) или посредством гейтирования на позитивные популяции клеток (CD3, CD4, CD8) и четко определяли субпопуляции (CD27, CD28, CD57); для объективной визуализации событий данные представляли после биэкспоненциального преобразования. на фиг. 4D изображена функциональная компетентность поддерживаемых клеток CAR. Замороженные образцы периферической крови от UPN 03, полученные аферезом в день 56 и 169 после инфузии Т-клеток, хранили в течение ночи в среде для культивирования без дополнительных факторов, промывали и оценивали непосредственно ex vivo на способность распознавать экспрессирующие CD19 клетки-мишени с использованием анализов дегрануляции с помощью CD107. После двухчасовой инкубации в присутствии антител против CD28, против CD49d и CD107-FITC смеси клеток собирали, промывали и подвергали мультипараметрическому анализу проточной цитометрией для оценки способности клеток CART-19 дегранулировать в ответ на экспрессирующие CD19 мишени. Стратегия гейтирования включает исходное гейтирование на негативные по маркерам разгрузочных каналов (CD14-PE-Cy7, CD16-PE-Cy7, Live/Dead Aqua) и CD3-PE-позитивные клетки с последующим гейтированием на окрашенные техасским красным CD8-РЕ-позитивные клетки; представлены данные для гейтированной по CD8+ популяции, во всех случаях квадранты негативного гейтирования определяли по неокрашенным контролям.
Фиг. 5, включающая фиг. 5А-5С, представляет собой серию изображений, на которых представлены результаты экспериментов по оценке клинических ответов после инфузии клеток CART-19. на фиг. 5А показано, что UPN 02 лечили двумя циклами ритуксимаба и бендамустина с минимальным ответом (R/B, показано стрелкой), инфузировали Т-клетки CART-19, начиная с 4 дней после лечения только бендамустином (В, показано стрелкой). Ритуксимаб и бендамустин-резистентные лейкозные клетки быстро вы
- 4 035484 водили из крови, на что указывает снижение абсолютного количества лимфоцитов (ALC) с 60600/мкл до 200/мкл в течение 18 дней после инфузии. Лечение кортикостероидами начинали в день 18 после инфузии по причине дискомфорта и неинфекционного фебрильного синдрома. Референсной линией (пунктиром) указывают верхний предел нормы ALC. на фиг. 5В изображены результаты примеров эксперимента по окрашиванию серийных срезов костного мозга или образцов тромбов от пациентов UPN 01 и 03 на CD20. Инфильтрация лейкозными клетками, присутствовавшая у обоих пациентов перед лечением, отсутствовала в образцах после лечения, что сочеталось с нормализацией насыщенности клетками и трехлинейного гемопоэза. UPN 01 не имел каких-либо определяемых клеток CLL при оценке посредством проточной цитометрии, цитогенетического исследования и флуоресценции при гибридизации in situ или нормальных В-клеток, определяемых посредством проточной цитометрии в костном мозге или крови. UPN 03 имел 5% остаточных нормальных CD5-негативных В-клеток, что подтверждали посредством проточной цитометрии в день +23, также показавшей их поликлональность; не определяли нормальные В-клетки в день +176. На фиг. 5С изображены результаты экспериментов с использованием серийного КТ-сканирования для оценки быстрого разрешения резистентной к химиотерапии генерализованной лимфаденопатии. Билатеральные подмышечные опухоли разрешались в день 83 (UPN 01) и 31 (UPN 03) после инфузии, что указано на фигуре стрелками и кругом.
Фиг. 6, включающая фиг. 6А-6С, представляет собой серию изображений, на которых показаны абсолютные количества лимфоцитов и общее количество циркулирующих клеток CART-19+ в случае UPN 01, 02, 03. Общее количество лимфоцитов (общее количество нормальных и CLL клеток) относительно общего количества циркулирующих CART-19+ клеток представлено в виде графика для 3 индивидуумов с использованием абсолютного количества лимфоцитов из значений СВС и с учетом объема крови 5,0 л. Общее количество циркулирующих клеток CART-19 вычисляли с использованием последовательных значений СВС с абсолютными количествами лимфоцитов и маркерными значениями при Q-ПЦР, как показано на фиг. 2, преобразуя копии/нг ДНК в средний % маркерного значения, как представлено в настоящем описании. Обнаруживали, что % маркерного значения Q-ПЦР близко коррелирует (<2-кратная разброс) с характеристиками продуктов для инфузии при проточной цитометрии и с данными для образцов, где с помощью сопутствующих данных проточной цитометрии можно напрямую подсчитывать клетки CART-19 посредством окрашивания.
Фиг. 7, включающая фиг. 7A-7D, представляет собой серию изображений, на которых показаны эксперименты, включающие прямое определение ex vivo CART-19-позитивных клеток в РВМС UPN 01 в день 71 после инфузии Т-клеток. РВМС UPN 01 собирали сразу после афереза в день 71 после инфузии, или замораживали во время афереза для получения Т-клеточного продукта (исходный уровень) и размораживали жизнеспособными перед окрашиванием, подвергали анализу проточной цитометрией для определения наличия клеток CART-19, экспрессирующих молекулу CAR19 на поверхности. Для оценки экспрессии CAR19 на лимфоцитах образцы одновременно окрашивали с использованием CD3-PE и идиотипического антитела против CAR19, конъюгированного с Alexa-647, или одновременно окрашивали только с использованием CD3-PE (FMO для CAR19). На фиг. 7А показано, что исходное гейтирование для лимфоцитов проводили на основе прямого и углового светорассеяния (FSC и SSC) с последующим гейтированием на CD3+ клетки. На фиг. 7В изображено дискриминационное окно для CD3+ лимфоцитов; на фиг. 7С изображено окрашивание с использованием идиотипических антител против CAR; на фиг. 7D изображено идиотипическое FMO к CAR. Проводили CAR19-позитивное гейтирование на образцы CAR19 FMO.
Фиг. 8, включающая фиг. 8А-8С, представляет собой серию изображений, на которых показана стратегия гейтирования для определения экспрессии CART-19 с использованием многоцветной проточной цитометрии образцов крови UPN 03. Стратегия гейтирования на фиг. 8С представлена для образца UPN 03 в день 56 и характерна для стратегии, используемой для образца UPN 03 в день 169. На фиг. 8А изображено первичное дискриминационное окно: негативное по маркерам разгрузочного канала (CD14, CD16, Live/Dead Aqua), CD3-позитивное. На фиг. 8В изображены вторичные дискриминационные окна: CD4-позитивное, CD8-позитивное. На фиг. 8С изображены третичные дискриминационные окна: CAR19-позитивное и CAR19-негативное, устанавливаемые на образцах CAR FMO (крайние правые панели).
На фиг. 9 изображена стратегия гейтирования для прямого определения экспрессии CART-19 и Вклеток в образцах крови и костного мозга. Стратегия гейтирования на фиг. 4А, на которой показано определение экспрессирующих CAR CD3+ лимфоцитов и отсутствие В-клеток в периферической крови и костном мозге: левый график: гейтирование для клеток; верхняя панель: позитивное гейтирование на CD3+ клетки, нижняя панель: негативное гейтирование (CD14-негативное, CD3-негативное) на В-клетки, NC365, контрольные клетки из периферической крови здорового донора.
Фиг. 10 представляет собой изображение, на котором приведены демографические данные пациентов и ответы.
На фиг. 11 изображен способ получения клеток CART-19.
Фиг. 12, включающая фиг. 12A-12D, представляет собой серию изображений, на которых показан клинический ответ пациента. На фиг. 12А представлен лентивирусный вектор, используемый для транс
- 5 035484 дукции Т-клеток от пациента. Получали псевдотипированные белком G вируса везикулярного стоматита лентивирусные векторы клинической категории (pELP 19-BB-z), регулирующие экспрессию scFv против CD19, получаемых из моноклонального антитела мыши FMC63, шарнирного и трансмембранного домена CD8a человека и сигнальных доменов 4-1ВВ и CD3Z человека. Элементы трансгена CAR19, в нижней части фиг. 12А представлены основные функциональные элементы. Фигура не масштабирована. 3'LTR означает длинный 3'-концевой повтор; 5'LTR - длинный 5'-концевой повтор; Amp R - ген резистентности к ампициллину; бычий GH поли-А - бычий гормон роста с полиадениновым хвостом; cPPT/CTS - центральный полипуриновый тракт с центральным стоп-кодоном; EF-1a - фактор элонгации 1-альфа; env оболочка; gag - группоспецифичный антиген; pol - ген ВИЧ, кодирующий полимеразу и обратную транскриптазу; R - повтор; RRE - rev-чувствительный элемент; scFv - одноцепочечный вариабельный фрагмент; ТМ трансмембранный домен; и WPRE - посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита лесного сурка. На фиг. 12В показаны уровни креатинина, мочевой кислоты и лактатдегидрогеназы (LDH) в сыворотке в дни 1-28 после первой инфузии клеток CART-19. Пиковые уровни совпадали с госпитализацией с синдромом распада опухоли. На фиг. 12С изображены биоптаты костного мозга, полученные через 3 дня после химиотерапии (день -1, до инфузии клеток CART-19) и через 23 дня и 6 месяцев после инфузии клеток CART-19 (гематоксилин и эозин). На исходном образце показан гиперпластический костный мозг (60%) с трехлинейным гемопоэзом, инфильтрированный, главным образом, интерстициальными агрегатами небольших зрелых лимфоцитов, на долю которых приходится 40% от общей клеточности. В образце, полученном в день 23, обнаруживали остаточные лимфоидные агрегаты (10%), являвшиеся негативными для хронического лимфоидного лейкоза (CLL), со смесью Т-клеток и CD5-негативных В-клеток. В образце, полученном через 6 месяцев после инфузии, обнаруживали трехлинейный гемопоэз без лимфоидных агрегатов и продолжительным отсутствием CLL. На фиг. 12D показаны срезы КТ с контрастным усилением, полученные до включения пациента в исследование и через 31 день и 104 дня после первой инфузии. На срезах КТ перед инфузией обнаруживали билатеральные опухоли размером 1-3 см. Ремиссия подмышечной лимфаденопатии происходила в течение 1 месяца после инфузии и являлась длительной. Стрелками указаны различные увеличенные лимфоузлы до терапии и ответы в лимфатических узлах на аналогичных срезах КТ после терапии.
Фиг. 13, включающая фиг. 13А-13Е, представляет собой серию изображений, на которых показаны уровни цитокинов в сыворотке и костном мозге до и после инфузии Т-клеток с химерным антигенным рецептором. Серийные измерения цитокина интерферона γ (фиг. 13А), интерферон-/-стимулированных хемокинов СХС-хемокина 10 (CXCL10) (фиг. 13В), СХС-хемокина 9 (CXCL9) (фиг. 13С) и интерлейкина-6 (фиг. 13D) проводили в указанные моменты времени. Повышения этих воспалительных цитокинов и хемокинов совпадали с началом синдрома распада опухоли. Низкие уровни интерлейкина-6 определяли на начальном уровне, в то время как исходные уровни интерферона γ, CXCL9 и CXCL10 находились ниже пределов определения. Диапазоны стандартной кривой для аналитов и исходные значения у пациента, указанные в круглых скобках, являлись следующими: интерферон γ - от 11,2 до 23972 пг на миллилитр (1,4 пг на миллилитр); CXCL10 - от 2,1 до 5319 пг на миллилитр (274 пг на миллилитр); CXCL9 - от 48,2 до 3700 пг на миллилитр (177 пг на миллилитр); интерлейкин-6- от 2,7 до 4 572 пг на миллилитр (8,3 пг на миллилитр); фактор некроза опухоли α (TNF-α) - от 1,9 до 4005 пг на миллилитр (неопределяемо) и растворимый рецептор интерлейкина-2 - от 13,4 до 34210 пг на миллилитр (644 пг на миллилитр). На фиг. 13Е показана индукция иммунного ответа в костном мозге. Уровни цитокинов TNF-α, интерлейкина-6, интерферона γ, хемокина CXCL9 и растворимого рецептора интерлейкина-2 измеряли в супернатантах, полученных из аспиратов костного мозга в указанные дни до и после инфузии клеток CART-19. Повышения уровней интерлейкина-6, интерферона γ, CXCL9 и растворимого рецептора интерлейкина-2 совпадали с синдромом распада опухоли, пиком инфильтрации Т-клетками с химерным антигенным рецептором и устранением лейкозного инфильтрата.
Фиг. 14, включающая фиг. 14А-14С, представляет собой серию изображений, на которых изображены экспансия и поддержание Т-клеток с химерным антигенным рецептором in vivo. Геномную ДНК (gDNA) выделяли из образцов цельной крови (фиг. 14А) и аспиратов костного мозга (фиг. 14В) пациента, собранных в последовательные моменты времени до и после инфузии Т-клеток с химерным антигенным рецептором, и использовали для анализа посредством количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР). По результатам оценки на основе трансгенной ДНК и процентной доли лимфоцитов, экспрессирующих CAR19, Т-клетки с химерным антигенным рецептором подвергались экспансии до уровней более чем в 1000 раз выше исходных уровней энграфтмента в периферической крови и костном мозге. Пиковые уровни Т-клеток с химерным антигенным рецептором коррелировали по времени с синдромом распада опухоли. Образец крови, полученный в день 0, и образец костного мозга, полученный в день 1, не демонстрировали сигнала при ПЦР на начальном уровне. Анализ проточной цитометрией аспиратов костного мозга на начальном уровне (фиг. 14С) показал преимущественную инфильтрацию CD19+CD5+ клетками, являющимися клонами по результатам оценки посредством окрашивания на легкую каппа-цепь иммуноглобулинов, с небольшим количеством Т-клеток. В день 31 после инфузии присутствовали CD5+ Т-клетки и не определяли нормальных или злокачественных В-клеток.
- 6 035484
Числами указана относительная частота клеток в каждом квадранте. И ось х, и ось у представлены в виде шкалы log10. Стратегия гейтирования включала исходное гейтирование на CD19+ и CD5+ клетки (квадраты слева) и последующее определение экспрессии каппа- и лямбда-цепей иммуноглобулина на субпопуляци CD19+CD5+ (квадраты справа).
Подробное описание
Изобретение относится к композициям и способам лечения злокачественного новообразования, включая, в качестве неограничивающих примеров, гематологические злокачественные новообразования и солидные опухоли. Настоящее изобретение относится к стратегии адоптивного переноса Т-клеток, трансдуцированных для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR). CAR являются молекулами, в которых комбинируют антительную специфичность к желаемому антигену (например, опухолевому антигену) с активирующим Т-клеточный рецептор внутриклеточным доменом для получения химерного белка, проявляющего специфичную противоопухолевую клеточную иммунную активность.
Настоящее изобретение, главным образом, относится к применению Т-клеток, генетически модифицированных для стабильной экспрессии желаемого CAR. Т-клетки, экспрессирующие CAR, в настоящем описании обозначают как клетки CART или модифицированные Т -клетки с CAR. Предпочтительно клетку можно генетически модифицировать для стабильной экспрессии антигенсвязывающего домена на ее поверхности, придающего новую антигенную специфичность, являющуюся МНС-независимой. В некоторых случаях Т-клетку генетически модифицируют для стабильной экспрессии CAR, в котором комбинируют антиген-распознающий домен конкретного антитела с внутриклеточным доменом CD3-дзетацепи или белка FcyRI в одном химерном белке.
В одном из вариантов осуществления CAR по изобретению содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-распознающий домен, трансмембранный домен и цитоплазматический домен. В одном из вариантов осуществления используют трансмембранный домен, который в природе ассоциирован с одним из доменов в CAR. В другом варианте осуществления трансмембранный домен можно выбирать или модифицировать посредством замены аминокислоты для избежания связывания таких доменов с трансмембранными доменами одинаковых или различных белков на поверхности мембраны для минимизации взаимодействий с другими компонентами рецепторного комплекса. Предпочтительно трансмембранный домен является шарнирным доменом ΟΟ8α.
Что касается цитоплазматического домена, CAR по изобретению можно конструировать содержащим сигнальный домен CD28 и/или 4-1ВВ сам по себе или в комбинации с любыми другими желаемыми цитоплазматическими доменами, применимыми в условиях CAR по изобретению. В одном из вариантов осуществления цитоплазматический домен CAR можно конструировать дополнительно содержащим сигнальный домен ОЭ3-дзета. Например, цитоплазматический домен CAR может включать, в качестве неограничивающих примеров, сигнальные модули ОЭ3-дзета, 4-1ВВ и CD28 и их комбинации. Таким образом, изобретение относится к клеткам CART и способам их применения для адоптивной терапии.
В одном из вариантов осуществления клетки CART по изобретению можно получать введением лентивирусных векторов, содержащих желаемый CAR, например CAR, содержащий антигенраспознающий домен против CD19, шарнирный и трансмембранный домен ΟΟ8α и сигнальные домены 4-1ВВ человека и ОЭ3-дзета, в клетки. Клетки CART по изобретению способны воспроизводиться in vivo, что приводит к длительному поддержанию, которое может приводить к длительному контролю опухоли.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к введению генетически модифицированной Т-клетки, экспрессирующей CAR, для лечения пациента, имеющего злокачественное новообразование или риск развития злокачественного новообразования, с использованием инфузии лимфоцитов.
Предпочтительно в лечении используют инфузию аутологичных лимфоцитов. Аутологичные РВМС забирают у пациента, нуждающегося в лечении, и активируют и экспансируют Т-клетки с использованием способов, представленных в настоящем описании и известных в этой области, и затем инфузируют обратно пациенту.
В еще одном варианте осуществления изобретение, главным образом, относится к лечению пациента с риском развития CLL. Изобретение также включает лечение злокачественного новообразования или аутоиммунного заболевания, при котором химиотерапия и/или иммунотерапия пациента приводит к значительной иммуносупрессии у пациента, таким образом, повышая риск развития CLL у пациента.
Изобретение включает применение Т-клеток, экспрессирующих CAR против CD19, включающих костимуляторный домен ОЭ3-дзета и 4-1ВВ, (также обозначаемых как Т-клетки CART-19). Т-клетки CART-19 по изобретению можно подвергать устойчивой экспансии in vivo, и они могут служить основой для ОО19-специфичных клеток памяти, высокие уровни которых сохраняются в течение продолжительного периода времени в крови и костном мозге. В некоторых случаях Т-клетки CART-19 по изобретению, инфузируемые пациенту, могут устранять лейкозные клетки in vivo у пациентов с резистентным к химиотерапии CLL на поздней стадии. Однако изобретение не ограничено Т-клетками CART-19. Т.е. изобретение включает любую антигенсвязывающую молекулу, подвергнутую слиянию с одним или несколькими внутриклеточными доменами, выбранными из группы сигнального домена CD137 (4-1ВВ), сигнального домена CD28, сигнального домена ОЭ3-дзета и любой их комбинации.
- 7 035484
Определения
Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют значение, общепринято понимаемое специалистами в той области, к которой относится изобретение. Хотя в практическом осуществлении для тестирования настоящего изобретения можно использовать любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные представленным в настоящем описании, предпочтительные материалы и способы представлены в настоящем описании. В описании и формуле настоящего изобретения будут использовать изложенную ниже терминологию.
Также следует понимать, что используемая в настоящем описании терминология предназначена исключительно для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения.
В настоящем описании единственное число применяют для обозначения одного или нескольких (т.е. по меньшей мере одного) грамматических объектов. В качестве примера, элемент означает один элемент или несколько элементов.
Как применяют в настоящем описании, приблизительно в отношении измеряемого значения, такого как количество, продолжительность времени и т.п., предназначено для включения вариантов ±20% или ±10%, более предпочтительно - ±5%, даже более предпочтительно - ±1% и еще более предпочтительно ±0,1% от указанного значения, т.к. такие варианты подходят для осуществления описываемых способов.
Как применяют в настоящем описании, активация относится к состоянию Т-клетки, которую в достаточной степени стимулировали для индукции определяемой клеточной пролиферации. Активация также может ассоциироваться с индуцируемой продукцией цитокинов и определяемыми эффекторными функциями. В частности, термин активированные Т-клетки относится к Т-клеткам, проходящим деление клеток.
Как применяют в настоящем описании, термин антитело относится к молекуле иммуноглобулина, специфически связывающейся с антигеном. Антитела могут являться интактными иммуноглобулинами, полученными из природных источников или из рекомбинантных источников, и могут являться иммунореактивными частями интактных иммуноглобулинов. Антитела, как правило, являются тетрамерами молекул иммуноглобулинов. В настоящем изобретении антитела могут существовать во многих формах, включая, например, поликлональные антитела, моноклональные антитела, Fv, Fab и F(ab)2, а также одноцепочечные антитела и гуманизированные антитела (Harlow et al., 1999, In: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al., 1989, in: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston et al., 1988, Proc. Natl, Acad. Sci. USA 85: 5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242: 423-426).
Термин фрагмент антитела относится к части интактного антитела и к антиген-распознающим вариабельным областям интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают, в качестве неограничивающих примеров, Fab-, Fab'-, F(ab')2- и Fv-фрагменты, линейные антитела, scFv-антитела и полиспецифичные антитела, образованные из фрагментов антител.
Как применяют в настоящем описании, тяжелая цепь антитела относится к большей из двух типов полипептидных цепей, присутствующих во всех молекулах антител в их природных конформациях.
Как применяют в настоящем описании, легкая цепь антитела относится к меньшей из двух типов полипептидных цепей, присутствующих во всех молекулах антител в их природных конформациях. к- и λ-легкие цепи относятся к двум основным изотипам легких цепей антитела.
Как применяют в настоящем описании, термин синтетическое антитело означает антитело, получаемое с использованием технологии рекомбинантных ДНК, такое как, например, антитело, экспрессируемое бактериофагом, как представлено в настоящем описании. Термин также необходимо интерпретировать как означающий антитело, получаемое синтезом молекулы ДНК, кодирующей антитело, и с помощью которой экспрессируется белок антитела или аминокислотная последовательность, определяющая антитело, где ДНК или аминокислотную последовательность получают с использованием технологии синтеза ДНК или аминокислотной последовательности, доступной и хорошо известной в этой области.
Как применяют в настоящем описании, термин антиген или Ag определяют как молекулу, провоцирующую иммунный ответ. Этот иммунный ответ может включать продукцию антител или активацию специфичных иммунологически компетентных Т-клеток, или и то, и другое. Специалистам в этой области будет понятно, что любая макромолекула, включая практически все белки или пептиды, может служить в качестве антигена. Кроме того, антигены можно получать из рекомбинантной или геномной ДНК. Специалистам в этой области будет понятно, что любая ДНК, содержащая нуклеотидные последовательности или неполную нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, вызывающий иммунный ответ, таким образом, кодирует антиген в том виде, в котором этот термин используют в настоящем описании. Кроме того, специалисту в этой области будет понятно, что антиген необязательно кодирует исключительно полноразмерная нуклеотидная последовательность гена. Вполне очевидно, что настоящее изобретение в качестве неограничивающих примеров относится к применению неполных нуклеотидных последовательностей нескольких генов, и что эти нуклеотидные последовательности рас- 8 035484 полагаются в различных комбинациях для стимуляции желаемого иммунного ответа. Кроме того, специалистам в этой области будет понятно, что антиген совершенно необязательно кодирует ген. Вполне очевидно, что антиген можно синтезировать или его можно получать из биологического образца. Такой биологический образец может включать, в качестве неограничивающих примеров, образец ткани, образец опухоли, клетку или биологическую жидкость.
Как применяют в настоящем описании, термин противоопухолевый эффект относится к биологическому эффекту, который может проявляться снижением объема опухоли, снижением количества опухолевых клеток, снижением количества метастазов, повышением продолжительности жизни или снижением различных физиологических симптомов, ассоциированных со злокачественным новообразованием. Противоопухолевый эффект также может проявляться в способности пептидов, полинуклеотидов, клеток и антител по изобретению в первую очередь участвовать в профилактике развития опухоли.
В соответствии с настоящим изобретением термин аутоантиген означает любой собственный антиген, который иммунная система ошибочно распознает как чужеродный. Аутоантигены включают, в качестве неограничивающих примеров, клеточные белки, фосфопротеины, поверхностные белки клетки, клеточные липиды, нуклеиновые кислоты, гликопротеины, включая поверхностные рецепторы клетки.
Как применяют в настоящем описании, термин аутоиммунное заболевание определяют как нарушение, являющееся результатом аутоиммунного ответа. Аутоиммунное заболевание является результатом неадекватного и избыточного ответа на собственный антиген. Примеры аутоиммунных заболеваний включают, в качестве неограничивающих примеров, среди прочего, болезнь Аддисона, очаговую алопецию, анкилозирующий спондилит, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный паротит, болезнь Крона, диабет (тип 1), дистрофический буллезный эпидермолиз, эпидидимит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, болезнь Хашимото, гемолитическую анемию, системную красную волчанку, рассеянный склероз, миастению, обыкновенную пузырчатку, псориаз, ревматическую лихорадку, ревматоидный артрит, саркоидоз, склеродермию, синдром Шегрена, спондилоартропатии, тиреоидит, васкулит, витилиго, микседему, пернициозную анемию, язвенный колит.
Как применяют в настоящем описании, термин аутологичный предназначен для обозначения любого материала, полученного от того же индивидуума, которому позже его вводят.
Аллогенный относится к трансплантату, полученному от другого животного того же вида.
Ксеногенный относится к трансплантату, полученному от животного другого вида.
Как применяют в настоящем описании, термин злокачественное новообразование определяют как заболевание, отличающееся быстрым и неконтролируемым ростом аномальных клеток. Злокачественные клетки могут распространяться местно или через кровоток и лимфатическую систему в другие части организма. Примеры различных злокачественных новообразований включают, в качестве неограничивающих примеров, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак яичников, рак шейки матки, рак кожи, рак поджелудочной железы, колоректальный рак, рак почки, рак печени, злокачественные новообразования головного мозга, лимфому, лейкоз, рак легких и т.п.
Как применяют в настоящем описании, термин костимуляторный лиганд включает молекулу на антигенпредставляющей клетке (например, аАРС, дендритной клетке, В-клетке и т.п.), специфически связывающую родственную костимуляторную молекулу на Т-клетке, таким образом, обеспечивая сигнал, который в дополнение к первичному сигналу, обеспечиваемому, например, связыванием комплекса TCR/CD3 с молекулой МНС, нагруженной пептидом, опосредует Т-клеточный ответ, включая, в качестве неограничивающих примеров, пролиферацию, активацию, дифференцировку и т.п. Костимуляторный лиганд может включать, в качестве неограничивающих примеров, CD7, В7-1 (CD80), В7-2 (CD86), PDL1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, индуцибельный костимуляторный лиганд (ICOS-L), внутриклеточную молекулу адгезии (ICAM), CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, MICB, HVEM, рецептор лимфотоксина бета, 3/TR6, ILT3, ILT4, агонист или антитело, связывающееся с Toll-подобным рецептором, и лиганд, специфически связывающийся с В7-Н3. Костимуляторный лиганд также включает, помимо прочего, антитело, специфически связывающееся с костимуляторной молекулой, присутствующей на Т-клетке, в качестве неограничивающих примеров, такой как Cd27, CD28, 4-1ВВ, ОХ40, Cd3o, CD40, PD-1, ICOS, функционально-ассоциированный антиген лимфоцитов-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, В7-Н3 и лиганд, специфически связывающийся с CD83.
Костимуляторная молекула относится к родственному партнеру по связыванию на Т-клетке, специфически связывающемуся с костимуляторным лигандом, таким образом, опосредующему костимуляторный ответ Т-клетки, в качестве неограничивающих примеров, такой как пролиферация. Костимуляторные молекулы включают, в качестве неограничивающих примеров, молекулу МНС класса I, BTLA и Toll-подобный рецептор.
Как применяют в настоящем описании, костимуляторный сигнал относится к сигналу, который в комбинации с первичным сигналом, таким как лигирование TCR/CD3, приводит к Т-клеточной пролиферации и/или позитивной регуляции или негативной регуляции ключевых молекул.
Заболевание является состоянием здоровья животного, где животное не может поддерживать гомеостаз и где, если заболевание не облегчают, то здоровье животного продолжает ухудшаться. Наоборот, нарушение у животного является состоянием здоровья, при котором животное способно поддерживать
- 9 035484 гомеостаз, но состояние здоровья животного является менее благоприятным, чем оно бы было в отсутствие нарушения. Если его не лечить, нарушение не обязательно приводит к ухудшению состояния здоровья животного.
Как применяют в настоящем описании, эффективное количество означает количество, обеспечивающее терапевтическую или профилактическую пользу.
Кодирующий относится к неотъемлемому свойству конкретных последовательностей нуклеотидов в полинуклеотиде, таком как ген, кДНК или мРНК, служить матрицами для синтеза других полимеров и макромолекул в биологических процессах, имеющих определенную последовательность нуклеотидов (т.е. рРНК, тРНК и мРНК) или определенную последовательность аминокислот и, в результате, биологические свойства. Таким образом, ген кодирует белок, если в результате транскрипции и трансляции мРНК, соответствующей этому гену, в клетке или другой биологической системе образуется белок. И кодирующая цепь, нуклеотидная последовательность которой является идентичной последовательности мРНК и которую, как правило, представляют в списках последовательностей, и некодирующую цепь, используемую в качестве матрицы для транскрипции гена или кДНК, можно обозначать как кодирующую белок или другой продукт этого гена или кДНК.
Как применяют в настоящем описании, эндогенный относится к любому материалу из организма, клетки, ткани или системы или материалу, продуцируемому в организме, клетке, ткани или системе.
Как применяют в настоящем описании, термин экзогенный относится к любому материалу, вводимому в организм, клетку, ткань или систему, или продуцируемому вне организма, клетки, ткани или системы.
Как применяют в настоящем описании, термин экспрессия определяют как транскрипцию и/или трансляцию конкретной нуклеотидной последовательности, запускаемую ее промотором.
Экспрессирующий вектор относится к вектору, содержащему рекомбинантный полинуклеотид, содержащий последовательности, контролирующие экспрессию, функционально связанные с подлежащей экспрессии нуклеотидной последовательностью. Экспрессирующий вектор содержит соответствующие цис-активные элементы для экспрессии; другие элементы для экспрессии можно восполнять элементами клетки-хозяина или в системе экспрессии in vitro. Экспрессирующие векторы включают все векторы, известные в этой области, такие как космиды, плазмиды (например, безоболочечные или содержащиеся в липосомах) и вирусы (например, лентивирусы, ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы), включающие рекомбинантный полинуклеотид.
Гомологичный относится к сходству последовательностей или идентичности последовательностей двух полипептидов или двух молекул нуклеиновой кислоты. Если положение в двух сравниваемых последовательностях занято одним и тем же основанием или аминокислотой, например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то молекулы являются гомологичными в этом положении, процент гомологии между двумя последовательностями является функцией количества совпадений или гомологичных положений для двух последовательностей, разделенного на количество сравниваемых положений, ^100. Например, если 6 из 10 положений в двух последовательностях совпадают или являются гомологичными, то две последовательности являются на 60% гомологичными. В качестве примера, последовательности ДНК ATTGCC и TATGGC имеют 50% гомологии. Как правило, сравнение осуществляют при выравнивании двух последовательностей для получения максимальной гомологии.
Как применяют в настоящем описании, термин иммуноглобулин или Ig определяют как класс белков, функционирующих как антитела. Антитела, экспрессируемые В-клетками, иногда обозначают как BCR (В-клеточный рецептор) или антигенный рецептор. Пятью членами этого класса белков являются IgA, IgG, IgM, IgD и IgE. IgA является первичным антителом, присутствующим в выделениях организма, таких как слюна, слезы, грудное молоко, желудочно-кишечные выделения и слизистые выделения дыхательных и мочеполовых путей. IgG является наиболее распространенным циркулирующим антителом. IgM является основным иммуноглобулином, продуцируемым при первичном иммунном ответе у большинства индивидуумов. Он является наиболее эффективным иммуноглобулином в агглютинации, связывании комплемента и других гуморальных ответах и важен в защите против бактерий и вирусов. IgD является иммуноглобулином, не обладающим известными функциями антител, но он может служить в качестве антигенного рецептора. IgE является иммуноглобулином, опосредующим гиперчувствительность немедленного типа, вызывая высвобождение медиаторов из тучных клеток и базофилов после воздействия аллергена.
Как применяют в настоящем описании, инструкция включает публикацию, запись, диаграмму или любое другое средство выражения, которое можно использовать для представления применимости композиций и способов по изобретению. Например, инструкцию к набору по изобретению можно прикреплять к контейнеру, содержащему нуклеиновую кислоту, пептид и/или композицию по изобретению, или транспортировать вместе с контейнером, содержащим нуклеиновую кислоту, пептид и/или композицию. Альтернативно, инструкцию можно транспортировать отдельно от контейнера с целью совместного использования инструкции и соединения получателем.
Выделенный означает измененный или удаленный из природного состояния. Например, нуклеиновая кислота или пептид, в природе присутствующие в животном, не являются выделенными, но те
- 10 035484 же нуклеиновая кислота или пептид, частично или полностью отделенные от материалов, сопутствующих им в их природном состоянии, являются выделенными. Выделенная нуклеиновая кислота или белок могут существовать, по-существу, в очищенной форме или могут существовать в неприродном окружении, таком как, например, клетка-хозяин.
В контексте настоящего изобретения используют следующие аббревиатуры для повсеместно встречающихся оснований нуклеиновых кислот. А относится к аденозину, С относится к цитозину, G относится к гуанозину, Т относится к тимидину и U относится к уридину.
Если не указано иначе, нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность включает все нуклеотидные последовательности, являющиеся вырожденными версиями друг друга и кодирующие одну и ту же аминокислотную последовательность. Фраза нуклеотидная последовательность, кодирующая белок или РНК также может включать интроны в случае, если нуклеотидная последовательность, кодирующая белок, в некоторых версиях может содержать интроны.
Как применяют в настоящем описании, лентивирус относится к роду семейства Retroviridae. Лентивирусы уникальны среди ретровирусов, т.к. способны инфицировать неделящиеся клетки; они могут доставлять значительное количество генетической информации в виде ДНК в клетку-хозяина, таким образом, они представляют собой один из наиболее эффективных способов реализации вектора для доставки гена. ВИЧ, SIV и FIV являются примерами лентивирусов. Векторы, полученные из лентивирусов, представляют средства достижения значительных уровней передачи генов in vivo.
Как применяют в настоящем описании, термин модуляция означает опосредование определяемого повышения или снижения уровня ответа у индивидуума по сравнению с уровнем ответа у индивидуума в отсутствие лечения или соединения и/или по сравнению с уровнем ответа у иным образом идентичного, но не подвергнутого лечению индивидуума. Термин включает возмущение сигнала и/или воздействие на нативный сигнал или ответ, таким образом, опосредующее благоприятный терапевтический ответ у индивидуума, предпочтительно, человека.
Если не указано иначе, нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность, включает все нуклеотидные последовательности, являющиеся вырожденными версиями друг друга и кодирующие одну и ту же аминокислотную последовательность. Нуклеотидные последовательности, кодирующие белки и РНК, могут включать интроны.
Термин функционально связанный относится к функциональной связи между регуляторной последовательностью и гетерологичной последовательностью нуклеиновой кислоты, приводящей к экспрессии последней. Например, первая последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, если первая последовательность нуклеиновой кислоты находится в функциональной связи со второй последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью, если промотор влияет на транскрипцию или экспрессию кодирующей последовательности. Как правило, функционально связанные последовательности ДНК являются смежными и, если необходимо соединять две кодирующие белок области, находятся в одной рамке считывания.
Термин гиперэкспрессированный опухолевый антиген или гиперэкспрессия опухолевого антигена предназначен для обозначения аномального уровня экспрессии опухолевого антигена в клетке из очага заболевания, такого как солидная опухоль в конкретной ткани или органе пациента, относительно уровня экспрессии в нормальной клетке из этой ткани или органа. Пациентов с солидными опухолями или гематологическими злокачественными новообразованиями, отличающимися гиперэкспрессией опухолевого антигена, можно определять стандартными анализами, известными в этой области.
Парентеральное введение иммуногенной композиции включает, например, подкожную (s.c), внутривенную (i.v.), внутримышечную (i.m.) или интрастернальную инъекцию или инфузионные способы.
Термины пациент, индивидуум и т.п. используют в настоящем описании взаимозаменяемо, и они относятся к любому животному или его клеткам in vitro или in situ, поддающимся воздействию способами, представленными в настоящем описании. В конкретных неограничивающих вариантах осуществления пациент или индивидуум является человеком.
Как применяют в настоящем описании, термин полинуклеотид определяют как цепь нуклеотидов. Кроме того, нуклеиновые кислоты являются полимерами нуклеотидов. Таким образом, как применяют в настоящем описании, термины нуклеиновые кислоты и полинуклеотиды являются взаимозаменяемыми. Специалист в этой области имеет общие знания о том, что нуклеиновые кислоты являются полинуклеотидами, которые можно гидролизовать до мономерных нуклеотидов. Мономерные нуклеотиды можно гидролизовать в нуклеозиды. Как применяют в настоящем описании, полинуклеотиды включают, в качестве неограничивающих примеров, все последовательности нуклеиновой кислоты, получаемые любыми способами, доступными в этой области, включая, в качестве неограничивающих примеров, рекомбинантные способы, т.е. клонирование последовательностей нуклеиновой кислоты из рекомбинантной библиотеки или генома клетки, использование обычной технологии клонирования и ПЦР и т.п., и способами синтеза.
Как применяют в настоящем описании, термины пептид, полипептид и белок используют вза- 11 035484 имозаменяемо, и они относятся к соединению, состоящему из аминокислотных остатков, ковалентно связанных пептидными связями. Белок или пептид должен содержать по меньшей мере две аминокислоты, и не существует ограничений по максимальному количеству аминокислот, которые может содержать последовательность белка или пептида. Полипептиды включают любой пептид или белок, содержащий две или более аминокислот, соединенных друг с другом пептидными связями. Как применяют в настоящем описании, термин относится и к коротким цепям, также общепринято обозначаемым в этой области, например, как пептиды, олигопептиды и олигомеры, и к более длинным цепям, как правило, обозначаемым в этой области как белки, множество типов которых существует. Полипептиды включают, помимо прочего, например, биологически активные фрагменты, по-существу, гомологичные полипептиды, олигопептиды, гомодимеры, гетеродимеры, варианты полипептидов, модифицированные полипептиды, производные, аналоги, слитные белки. Полипептиды включают природные пептиды, рекомбинантные пептиды, синтетические пептиды или их комбинацию.
Как применяют в настоящем описании, термин промотор определяют как последовательность ДНК, распознаваемую синтетическим аппаратом клетки или встраиваемым синтетическим аппаратом, необходимым для инициации конкретной транскрипции полинуклеотидной последовательности.
Как применяют в настоящем описании, термин промотор/регуляторная последовательность означает последовательность нуклеиновой кислоты, необходимую для экспрессии продукта гена, функционально связанного с промотором/регуляторной последовательностью. В некоторых случаях эта последовательность может являться коровой последовательностью промотора, а в других случаях эта последовательность также может включать энхансерную последовательность и другие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии продукта гена. Промотор/регуляторная последовательность, например, может являться последовательностью, экспрессирующей продукт гена тканеспецифическим образом.
Конститутивный промотор является нуклеотидной последовательностью, которая, если функционально связана с полинуклеотидом, кодирующим или определяющим продукт гена, вызывает продукцию продукта гена в клетке в большинстве или всех физиологических условиях в клетке.
Индуцибельный промотор является нуклеотидной последовательностью, которая, если функционально связана с полинуклеотидом, кодирующим или определяющим продукт гена, вызывает продукцию продукта гена в клетке, по-существу, только когда индуцирующий фактор, соответствующий промотору, присутствует в клетке.
Тканеспецифический промотор является нуклеотидной последовательностью, которая, если функционально связана с полинуклеотидом, кодирующим или определяющим продукт гена, вызывает продукцию продукта гена в клетке, по-существу, только когда клетка представляет собой клетку ткани типа, соответствующего промотору.
Как применяют в настоящем описании, термин специфически связывается в отношении антитела означает антитело, распознающее конкретный антиген, но, по-существу, не распознающее или связывающее другие молекулы в образце. Например, антитело, специфически связывающееся с антигеном одного вида, также может связываться с этим антигеном одного или нескольких видов. Но такая межвидовая реактивность сама по себе не изменяет классификацию антитела как специфичного. В другом примере антитело, специфически связывающееся с антигеном, также может связываться с различными аллельными формами антигена. Однако такая перекрестная реактивность сама по себе не изменяет классификацию антитела как специфичного. В некоторых случаях термины специфическое связывание или специфически связывающееся можно использовать по отношению к взаимодействию антитела, белка или пептида со вторым химическим веществом, обозначая, что это взаимодействие зависит от наличия конкретной структуры (например, антигенной детерминанты или эпитопа) в химическом веществе; например, антитело распознает и связывается с конкретной белковой структурой чаще, чем с белками в общем. Если антитело специфично для эпитопа А, наличие молекулы, содержащей эпитоп А (или свободного немеченого А), в реакции, включающей меченый А и антитело, будет снижать количество меченого А, связавшегося с антителом.
Термин стимуляция означает первичный ответ, индуцируемый связыванием стимулирующей молекулы (например, комплекса TCR/CD3) с ее родственным лигандом, таким образом, опосредуя передачу сигнала, в качестве неограничивающих примеров, такую как, передача сигнала через комплекс TCR/CD3. Стимуляция может опосредовать измененную экспрессию конкретных молекул, например негативную регуляцию TGF-β, и/или распознавание структур цитоскелета и т.п.
Как применяют в настоящем описании, термин стимулирующая молекула означает молекулу на Т-клетке, специфически связывающуюся с родственным стимулирующим лигандом, присутствующим на антигенпредставляющей клетке.
Как применяют в настоящем описании, стимулирующий лиганд означает лиганд, который при наличии на антигенпредставляющей клетке (например, аАРС, дендритной клетке, В-клетке и т.п.) может специфически связываться с родственным партнером по связыванию (обозначаемым в настоящем описании как стимулирующая молекула) на Т-клетке, таким образом, опосредуя первичный ответ Т-клетки, включая, в качестве неограничивающих примеров, активацию, инициацию иммунного ответа, пролиферацию и т.п. Стимулирующие лиганды хорошо известны в этой области и включают, помимо прочего,
- 12 035484 молекулу МНС класса I, нагруженную пептидом, антитело против CD3, суперагонист антитела против
CD28 и суперагонист антитела против CD2.
Термин индивидуум предназначен для включения живых организмов, в которых можно вызывать иммунный ответ (например, млекопитающих). Примеры индивидуумов включают людей, собак, кошек, мышей, крыс и их трансгенные особи.
Как применяют в настоящем описании, по-существу, очищенные клетки являются клетками, посуществу, не содержащими другие типы клеток. По-существу, очищенная клетка также относится к клетке, отделенной от других типов клеток, которые в норме ей сопутствуют в своем природном состоянии. В некоторых случаях популяция, по-существу, очищенных клеток относится к гомогенной популяции клеток. В других случаях этот термин относится просто к клетке, отделенной от клеток, которые в природе ей сопутствуют в своем природном состоянии. В некоторых вариантах осуществления клетки культивируют in vitro. В других вариантах осуществления клетки не культивируют in vitro.
Как применяют в настоящем описании, терминтерапевтический означает лечение и/или профилактику.
Терапевтического эффекта достигают супрессией, ремиссией или устранением состояния заболевания.
Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству заявленного соединения, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ ткани, системы или индивидуума, которого добивается исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист. Термин терапевтически эффективное количество включает количество соединения, которое при введении является достаточным для профилактики развития или, до некоторой степени, снижения одного или нескольких признаков или симптомов нарушения или заболевания, подвергаемого лечению. Терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от соединения, заболевания и его тяжести и возраста, массы и т.д. индивидуума, подлежащего лечению.
Как применяют в настоящем описании, термин лечить заболевание означает снижение частоты или тяжести по меньшей мере одного признака или симптома заболевания или нарушения, которым страдает индивидуум.
Как применяют в настоящем описании, термин трансфицированный, трансформированный или трансдуцированный относится к способу, которым экзогенную нуклеиновую кислоту переносят или встраивают в клетку-хозяина. Трансфицированная, трансформированная или трансдуцированная клетка представляет собой клетку, трансфицированную, трансформированную или трансдуцированную с использованием экзогенной нуклеиновой кислоты. Клетка включает первичную подвергаемую воздействию клетку и ее потомство.
Как применяют в настоящем описании, фраза под транскрипционным контролем или функционально связанный означает, что промотор находится в правильном положении и ориентации относительно полинуклеотида для контроля инициации транскрипции РНК-полимеразой и экспрессии полинуклеотида.
Вектор является интересующей композицией, содержащей выделенную нуклеиновую кислоту и которую можно использовать для доставки выделенной нуклеиновой кислоты внутрь клетки. В этой области известно множество векторов, включая, в качестве неограничивающих примеров, линейные полинуклеотиды, полинуклеотиды, ассоциированные с ионными или амфифильными соединениями, плазмиды и вирусы. Таким образом, термин вектор включает автономно реплицирующуюся плазмиду или вирус. Термин также необходимо интерпретировать как включающий неплазмидные и невирусные соединения, облегчающие перенос нуклеиновой кислоты в клетки, такие как, например, полилизиновые соединения, липосомы и т.п. Примеры вирусных векторов включают, в качестве неограничивающих примеров, аденовирусные векторы, векторы на основе аденоассоциированного вируса, ретровирусные векторы и т.п.
Диапазоны: на всем протяжении этого описания различные аспекты изобретения можно представлять в формате диапазона. Следует понимать, что описание в формате диапазона представлено исключительно для удобства и краткости, и их не следует интерпретировать как жесткие ограничения объема изобретения. Таким образом, описание диапазона следует рассматривать как содержащее все возможные конкретно описываемые поддиапазоны, а также отдельные численные значения в этом диапазоне. Например, описание диапазона, такого как от 1 до 6, следует рассматривать как содержащее конкретно описываемые поддиапазоны, такие как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 до 6 и т.д., а также отдельные количества в этом диапазоне, например 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 и 6. Это используют независимо от широты диапазона.
Описание
Настоящее изобретение относится к композициям и способам лечения злокачественного новообразования, помимо прочих заболеваний. Злокачественное новообразование может являться гематологическим злокачественным новообразованием, солидной опухолью, первичной или метастазирующей опухолью.
Предпочтительно злокачественное новообразование является гематологическим злокачественным
- 13 035484 новообразованием и более предпочтительно злокачественное новообразование представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL). Другие заболевания, поддающиеся лечению с использованием композиций и способов по изобретению, включают вирусные, бактериальные и паразитарные инфекции, а также аутоиммунные заболевания.
В одном из вариантов осуществления изобретение относится к клетке (например, Т-клетке), сконструированной для экспрессии CAR, где Т-клетка с CAR проявляет противоопухолевое свойство. CAR по изобретению можно конструировать содержащим внеклеточный домен, содержащий антигенсвязывающий домен, слитный с внутриклеточным сигнальным доменом дзета-цепи комплекса Т-клеточного антигенного рецепторного комплекса (например, CD3-дзета). CAR по изобретению при экспрессии в Тклетке способен перенаправлять распознавание антигена на основании специфичности связывания антигена. Примером антигена является CD19, т.к. этот антиген экспрессируется на злокачественных Вклетках. Однако изобретение не ограничено воздействием на CD19. Т.е. изобретение включает любую антигенсвязывающую молекулу, которая при связывании с ее родственным антигеном действует на опухолевую клетку таким образом, что опухолевая клетка прекращает расти, или вызывают ее гибель, или иначе влияют на нее таким образом, что снижают или удаляют опухолевую массу у пациента. Антигенсвязывающую молекулу предпочтительно подвергают слиянию с внутриклеточным доменом от одной или нескольких костимуляторных молекул и дзета-цепи.
Предпочтительно, антигенсвязывающую молекулу подвергают слиянию с одним или несколькими внутриклеточными доменами, выбранными из группы сигнального домена CD137 (4-1ВВ), сигнального домена CD28, сигнального домена CD3-дзета и любой их комбинации.
В одном из вариантов осуществления CAR по изобретению содержит сигнальный домен CD137 (41ВВ). Это является результатом того, что настоящее изобретение частично основано на обнаружении того, что CAR-опосредованные Т-клеточные ответы можно дополнительно усиливать добавлением костимуляторных доменов. Например, включение сигнального домена CD137 (4-1ВВ) значительно повышает противоопухолевую активность и поддержание Т-клеток с CAR in vivo по сравнению с идентичными в остальном Т-клетками с CAR, не сконструированными для экспрессии CD137 (4-1ВВ).
Композиция
Настоящее изобретение относится к химерному антигенному рецептору (CAR), содержащему внеклеточный и внутриклеточный домен. Внеклеточный домен содержит мишене-специфичный связывающий элемент, иначе обозначаемый как антигенсвязывающий фрагмент. Внутриклеточный домен или, иначе, цитоплазматический домен содержит костимуляторную сигнальную область и часть дзета-цепи. Костимуляторная сигнальная область относится к части CAR, содержащей внутриклеточный домен костимуляторной молекулы. Костимуляторные молекулы являются молекулами клеточной поверхности, иными, чем антигенные рецепторы или их лиганды, необходимые для эффективного ответа лимфоцитов на антиген.
Между внеклеточным доменом и трансмембранным доменом CAR или между цитоплазматическим доменом и трансмембранным доменом CAR можно встраивать спейсерный домен. Как применяют в настоящем описании, термин спейсерный домен, как правило, означает любой олиго- или полипептид, функционирующий, связывая трансмембранный домен с внеклеточным доменом или цитоплазматическим доменом в полипептидной цепи. Спейсерный домен может содержать до 300 аминокислот, предпочтительно - от 10 до 100 аминокислот и наиболее предпочтительно - от 25 до 50 аминокислот.
Антигенсвязывающий фрагмент
В одном из вариантов осуществления CAR по изобретению содержит мишене-специфичный связывающий элемент, иначе обозначаемый как антигенсвязывающий фрагмент. Выбор фрагмента зависит от типа и количества лигандов, определяющих поверхность клетки-мишени. Например, антигенсвязывающий домен можно выбирать для распознавания лиганда, действующего как поверхностный клеточный маркер на клетках-мишенях, ассоциированных с конкретным состоянием заболевания. Таким образом, примеры маркеров клеточной поверхности, которые могут действовать как лиганды для домена антигенсвязывающего фрагмента в CAR по изобретению, включают маркеры, ассоциированные с вирусными, бактериальными и паразитарными инфекциями, аутоиммунными заболеваниями и злокачественными клетками.
В одном из вариантов осуществления CAR по изобретению можно конструировать для воздействия на интересующий опухолевый антиген посредством конструирования желаемого антигенсвязывающего фрагмента, специфически связывающегося с антигеном на опухолевой клетке. В контексте настоящего изобретения опухолевый антиген, или антиген гиперпролиферативного нарушения, или антиген, ассоциированный с гиперпролиферативным нарушением относится к антигенам, типичным для конкретных гиперпролиферативных нарушений, таких как злокачественное новообразование. Антигены, представленные в настоящем описании, включают исключительно в качестве примера. Список не предназначен для ограничения, и дополнительные примеры будут очевидны специалистам в этой области.
Опухолевые антигены являются белками, продуцируемыми опухолевыми клетками, вызывающими иммунный ответ, конкретно, опосредуемые Т-клетками иммунные ответы. Выбор антигенсвязывающего фрагмента по изобретению будет зависеть от конкретного типа злокачественного новообразования, под- 14 035484 лежащего лечению. Опухолевые антигены хорошо известны в этой области и включают, например, глиома-ассоциированный антиген, карциноэмбриональный антиген (СЕА), β-хорионический гонадотропин человека, альфа-фетопротеин (AFP), лектин-реактивный AFP, тиреоглобулин, RAGE-1, MN-CA IX, теломеразная обратная транскриптаза человека, RU1, RU2 (AS), кишечная карбоксилэстераза, mut hsp702, M-CSF, простаза, простатический специфический антиген (PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-1a, p53, простеин, PSMA, Her2/neu, сурвивин и теломераза, антиген карциномы простаты-1 (РСТА-1), MAGE, ELF2M, эластаза нейтрофилов, эфрин В2, CD22, инсулиноподобный фактор роста (IGF)-I, IGF-II, рецептор IGF-I и мезотелин.
В одном из вариантов осуществления опухолевый антиген содержит один или несколько эпитопов опухолевых антигенов, ассоциированных со злокачественной опухолью. Злокачественные опухоли экспрессирует ряд белков, которые могут служить в качестве антигенов-мишеней для иммунного ответа. Эти молекулы включают, в качестве неограничивающих примеров, тканеспецифические антигены, такие как MART-1, тирозиназа и GP 100 при меланоме и простатическая кислая фосфатаза (РАР) и простатический специфический антиген (PSA) при раке предстательной железы. Другие молекулы-мишени принадлежат к группе участвующих в трансформации молекул, таких как онкоген HER-2/Neu/ErbB-2. Еще одной группой антигенов-мишеней являются онкофетальные антигены, такие как карциноэмбриональный антиген (СЕА). При В-клеточной лимфоме иммуноглобулин опухолеспецифичного идиотипа образует, в сущности, опухолеспецифичный иммуноглобулиновый антиген, уникальный для отдельной опухоли. Антигены В-клеточной дифференцировки, такие как CD19, CD20 и CD37 являются другими кандидатами для антигенов-мишеней при В-клеточной лимфоме. Некоторые из этих антигенов (СЕА, HER-2, CD19, CD20, идиотип) с ограниченным успехом используют в качестве мишеней для пассивной иммунотерапии с использованием моноклональных антител.
Тип опухолевого антигена, описываемого в изобретении, также может являться опухолеспецифичным антигеном (TSA) или ассоциированным с опухолью антигеном (ТАА). TSA является уникальным для опухолевых клеток и не присутствует на других клетках в организме. ТАА-антиген не является уникальным для опухолевых клеток и также экспрессируется на нормальных клетках в условиях, препятствующих индуцированию состояния иммунологической толерантности к антигену. Экспрессия антигена в опухоли может происходить в условиях, позволяющих иммунной системе отвечать на антиген. ТАА могут являться антигенами, экспрессируемыми на нормальных клетках при развитии плода, когда иммунная система является незрелой и не способна отвечать, или они могут являться антигенами, присутствующими в норме на крайне низких уровнях на нормальных клетках, но экспрессируемыми на гораздо более высоких уровнях на опухолевых клетках.
Неограничивающие примеры TSA- или ТАА-антигенов включают следующие: антигены дифференцировки, такие как MART-1/MelanA (MART-1), gp100 (Pmel 17), тирозиназа, TRP-1, TRP-2 и опухолеспецифичные мультилинейные антигены, такие как MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, р15; гиперэкспрессируемые эмбриональные антигены, такие как СЕА; гиперэкспрессируемые онкогены и мутантные гены опухолевых супрессоров, такие как р53, Ras, HER-2/neu; уникальные опухолевые антигены, образующиеся в результате хромосомных транслокаций, такие как BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR; и вирусные антигены, такие как антигены EBVA вируса Эпштейн-Барр и антигены Е6 и Е7 папилломавируса человека (HPV). Другие большие антигены на основе белков включают TSP180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, RAGE, NY-ESO, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG72, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, бета-катенин, CDK4, Mum-1, p15, p16, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, альфа-фетопротеин, бета-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3/CA 27.29/BCAA, CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68/P1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733/EpCAM, HTgp-175, M344, MA-50, MG7Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, ТА-90/Мас-2-связывающий белок/циклофилин Сассоциированный белок, TAAL6, TAG72, TLP и TPS.
В предпочтительном варианте осуществления антигенсвязывающий фрагмент CAR нацелен на антиген, включающий, в качестве неограничивающих примеров CD19, CD20, CD22, ROR1, мезотелин, CD33/IL3Ra, с-Met, PSMA, гликолипид F77, EGFRvIII, GD-2, MY-ESO-1 TCR, MAGE A3 TCR и т.п.
В зависимости от желаемого антигена-мишени CAR по изобретению можно конструировать включающим соответствующий антигенсвязывающий фрагмент, специфичный для желаемого антигенамишени. Например, если CD19 является желаемым антигеном-мишенью, в качестве антигенсвязывающего фрагмента для встраивания в CAR по изобретению можно использовать антитело против CD19.
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий фрагмент CAR по изобретению нацелен на CD19. Предпочтительно, антигенсвязывающий фрагмент в CAR по изобретению является scFv против CD19, где последовательность нуклеиновой кислоты scFv против CD19 содержит последовательность, приведенную в SEQ ID: 14. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты scFv против CD19 содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20. В другом варианте осуществления scFV-часть CAR против CD19 по изобретению содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 20.
Трансмембранный домен
Что касается трансмембранного домена, CAR можно конструировать содержащим трансмембран- 15 035484 ный домен, слитный с внеклеточным доменом CAR. В одном из вариантов осуществления используют трансмембранный домен, в природе ассоциированный с одним из доменов в CAR. В некоторых случаях трансмембранный домен можно выбирать или модифицировать заменой аминокислоты для избежания связывания таких доменов с трансмембранными доменами тех же или других белков на поверхности мембраны для минимизации взаимодействий с другими компонентами рецепторного комплекса.
Трансмембранный домен можно получать из природного или синтетического источника. Если источник является природным, домен можно получать из любого мембраносвязанного или трансмембранного белка. Трансмембранные области для конкретного использования в этом изобретении можно получать из (т.е. получать содержащими, по меньшей мере, трансмембранные области) альфа-, бета- или дзета-цепи Т-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD 16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154. Альтернативно, трансмембранный домен может являться синтетическим, в этом случае он будет содержать, преимущественно, гидрофобные остатки, такие как лейцин и валин. Предпочтительно на каждом конце синтетического трансмембранного домена будут обнаруживать триплет фенилаланина, триптофана и валина.
Необязательно, короткий олиго- или полипептидный линкер, предпочтительно от 2 до 10 аминокислот в длину может образовывать связь между трансмембранным доменом и цитоплазматическим сигнальным доменом CAR. В частности, глицин-сериновый дуплет представляет собой подходящий линкер.
Предпочтительно трансмембранным доменом в CAR по изобретению является трансмембранный домен CD8. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая трансмембранный домен CD8, содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 16. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая трансмембранный домен CD8, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22. В другом варианте осуществления трансмембранный домен CD8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
В некоторых случаях трансмембранный домен CAR по изобретению содержит шарнирный домен CD8. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая шарнирный домен CD8, содержит последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 15. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая шарнирный домен CD8, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21. В другом варианте осуществления шарнирный домен CD8 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
Цитоплазматический домен
Цитоплазматический домен или, иначе, внутриклеточный сигнальный домен CAR по изобретению отвечает за активацию по меньшей мере одной нормальной эффекторной функции клетки иммунной системы, в которую помещают CAR. Термин эффекторная функция относится к специализированной функции клетки. Эффекторная функция Т-клетки, например, может являться цитолитической активностью или хелперной активностью, включая секрецию цитокинов. Таким образом, термин внутриклеточный сигнальный домен относится к части белка, передающей сигнал эффекторной функции и заставляющей клетку осуществлять специализированную функцию. Хотя, как правило, можно использовать целый внутриклеточный сигнальный домен, во многих случаях использование целой цепи не является необходимым. В случае если используют укороченную часть внутриклеточного сигнального домена, такую укороченную часть можно использовать вместо интактной цепи при условии, что она передает сигнал эффекторной функции. Таким образом, термин внутриклеточный сигнальный домен предназначен для включения любой укороченной части внутриклеточного сигнального домена, достаточной для передачи сигнала эффекторной функции.
Предпочтительные примеры внутриклеточных сигнальных доменов для применения в CAR по изобретению включают цитоплазматические последовательности Т-клеточного рецептора (TCR) и сорецепторов, действующих совместно для инициации передачи сигнала после связывания антигенного рецептора, а также любое производное или вариант этих последовательностей и любую синтетическую последовательность, обладающую той же функциональной способностью.
Известно, что сигналов, генерируемых только через TCR, недостаточно для полной активации Тклетки, и что также необходим вторичный или костимуляторный сигнал. Таким образом, можно сказать, что активацию Т-клетки опосредуют два различных класса цитоплазматических последовательностей, опосредующих передачу сигнала: инициирующие антиген-зависимую первичную активацию через TCR (первичные цитоплазматические последовательности, опосредующие передачу сигнала) и действующие антиген-независимым образом для обеспечения вторичного или костимуляторного сигнала (вторичные цитоплазматические последовательности, опосредующие передачу сигнала).
Первичные цитоплазматические последовательности, опосредующие передачу сигнала, регулируют первичную активацию комплекса TCR стимулирующим или ингибиторным образом. Первичные цитоплазматические последовательности, опосредующие передачу сигнала, действующие стимулирующим образом, могут содержать сигнальные мотивы, известные как иммунорецепторные тирозиновые активационные мотивы или ITAM.
- 16 035484
Примеры ITAM, включающие первичные цитоплазматические последовательности, опосредующие передачу сигнала, имеющие конкретное применение в изобретении, включают полученные из TCR-дзета, FcR-гамма, FcR-бета, CD3-гамма, CD3-дельта, СОЗ-эпсилон. CD8, CD22, CD79a, CD79b и CD66d. Особенно предпочтительно, если цитоплазматическая молекула, опосредующая передачу сигнала, в CAR по изобретению содержит цитоплазматическую последовательность, опосредующую передачу сигнала, полученную из СОЗ-дзета.
В предпочтительном варианте осуществления цитоплазматический домен CAR можно конструировать содержащим сигнальный домен СОЗ-дзета сам по себе или в комбинации с любыми другими желаемыми цитоплазматическими доменами, применимыми в условиях CAR по изобретению. Например, цитоплазматический домен CAR может содержать часть СОЗ-дзета-цепи и костимуляторную сигнальную область. Костимуляторная сигнальная область относится к части CAR, содержащей внутриклеточный домен костимуляторной молекулы. Костимуляторная молекула является молекулой клеточной поверхности, иной, чем антигенный рецептор или его лиганды, необходимые для эффективного ответа лимфоцитов на антиген. Примеры таких молекул включают CD27, CD28, 4-1ВВ (CO137), ОХ40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, функционально-ассоциированный антиген лимфоцитов-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, В7-Н3 и лиганд, специфически связывающийся с CD8 3, и т.п. Таким образом, хотя в примере изобретения в качестве костимуляторного сигнального элемента описывают, главным образом, 4-1ВВ, в объем изобретения также входят другие костимуляторные элементы.
Цитоплазматические последовательности, опосредующие передачу сигнала, в цитоплазматической сигнальной части CAR по изобретению, можно соединять друг с другом в случайном или специальном порядке. Необязательно, соединение может образовывать короткий олиго- или полипептидный линкер, предпочтительно от 2 до 10 аминокислот в длину. В частности, глицин-сериновый дуплет является подходящим линкером.
В одном из вариантов осуществления цитоплазматический домен конструируют содержащим сигнальный домен СОЗ-дзета и сигнальный домен CD28. В другом варианте осуществления цитоплазматический домен конструируют содержащим сигнальный домен СОЗ-дзета и сигнальный домен 4-1ВВ. В еще одном варианте осуществления цитоплазматический домен конструируют содержащим сигнальный домен СОЗ-дзета и сигнальный домен CD28 и 4-1ВВ.
В одном из вариантов осуществления цитоплазматический домен в CAR по изобретению конструируют содержащим сигнальный домен 4-1ВВ и сигнальный домен СОЗ-дзета, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сигнальный домен 4-1ВВ, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ TD NO: 17, и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сигнальный домен CO3 -дзета, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ IO NO: 18.
В одном из вариантов осуществления цитоплазматический домен в CAR по изобретению конструируют содержащим сигнальный домен 4-1ВВ и сигнальный домен СОЗ-дзета, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сигнальный домен 4-1ВВ, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ IO NO: 23, и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая сигнальный домен СОЗ-дзета, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ IO NO: 24.
В одном из вариантов осуществления цитоплазматический домен в CAR по изобретению конструируют содержащим сигнальный домен 4-1ВВ и сигнальный домен СОЗ-дзета, где сигнальный домен 41ВВ содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ IO NO: 23, и сигнальный домен СОЗ-дзета содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ IO NO: 24.
Векторы
Настоящее изобретение относится к конструкции ДНК, содержащей последовательности CAR, где последовательность содержит последовательность нуклеиновой кислоты антигенсвязывающего фрагмента, функционально связанного с последовательностью нуклеиновой кислоты внутриклеточного домена. Пример внутриклеточного домена, который можно использовать в CAR по изобретению, включает, в качестве неограничивающих примеров, внутриклеточный домен СОЗ-дзета, CO28, 4-1ВВ и т.п., в некоторых случаях CAR может содержать любую комбинацию СОЗ-дзета, CO28, 4-1ВВ и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR по изобретению содержит scFv против CO 19, шарнирный и трансмембранный домен CO8 человека и сигнальные домены 4-1ВВ и СОЗ-дзета человека. В одном из вариантов осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CAR по изобретению, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, приведенную в SEQ IO NO: 8. В другом варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CAR по изобретению, содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ IO NO: 12. В другом варианте осуществления CAR по изобретению содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ IO NO: 12.
Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие желаемые молекулы, можно получать с использованием известных в этой области рекомбинантных способов, таких как, например, с помощью скрининга библиотек из клеток, экспрессирующих ген, выделяя ген из вектора, о котором известно, что
- 17 035484 он его включает, или выделяя его напрямую из содержащих его клеток и тканей с использованием стандартных способов. Альтернативно, интересующий ген чаще можно получать синтетически, чем клонировать.
Настоящее изобретение также относится к векторам, в которые встраивают ДНК по настоящему изобретению. Векторы, полученные из ретровирусов, таких как лентивирус, являются подходящими инструментами для достижения длительной передачи генов, т.к. они делают возможной длительную стабильную интеграцию трансгена и его размножение в дочерних клетках. Лентивирусные векторы обладают дополнительным преимуществом по сравнению с векторами, полученными из онкоретровирусов, таких как вирусы лейкемии мышей, состоящим в том, что ими можно трансдуцировать непролиферирующие клетки, такие как гепатоциты. Они также обладают дополнительным преимуществом низкой иммуногенностью.
Вкратце, экспрессии природных или синтетических нуклеиновых кислот, кодирующих CAR, как правило, достигают функциональным соединением нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид CAR или его части, с промотором, и встраиванием конструкции в экспрессирующий вектор. Векторы могут подходить для репликации и интеграции в эукариоты. Типичные клонирующие векторы содержат терминаторы транскрипции и трансляции, инициирующие последовательности и промоторы, применимые для регуляции экспрессии желаемой последовательности нуклеиновой кислоты.
Экспрессирующие конструкции по настоящему изобретению также можно использовать для иммунизации нуклеиновыми кислотами и генной терапии с использованием стандартных способов доставки генов. В этой области известны способы доставки генов. См., например, патенты США №№ 5399346, 5580859, 5589466, включенные в настоящее описании в качестве ссылки в полном объеме. В другом варианте осуществления изобретение относится к вектору для генной терапии.
Нуклеиновую кислоту можно клонировать в некоторые типы векторов. Например, нуклеиновую кислоту можно клонировать в вектор, включая, в качестве неограничивающих примеров, плазмиду, фагмиду, фаговое производное, вирус животных и космиду. Конкретные интересующие векторы включают экспрессирующие векторы, реплицирующиеся векторы, векторы для получения зондов и векторы для секвенирования.
Кроме того, экспрессирующий вектор можно доставлять в клетку в форме вирусного вектора. Технология вирусных векторов хорошо известна в этой области, и ее описывают, например, в Sambrook et. al., (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York) и других руководствах по вирусологии и молекулярной биологии. Вирусы, применимые в качестве векторов, включают, в качестве неограничивающих примеров, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, вирус герпеса и лентивирусы. В основном, подходящий вектор содержит участок начала репликации, функциональный по меньшей мере в одном организме, промоторную последовательность, подходящие участки эндонуклеаз рестрикции и один или несколько селективных маркеров (например, WO 01/96584; WO 01/29058 и патент США № 6326193).
Для передачи генов в клетки млекопитающих разрабатывают ряд систем на основе вирусов. Например, ретровирусы представляют собой подходящую платформу для систем доставки генов. Выбранный ген можно встраивать в вектор и упаковывать в ретровирусные частицы с использованием известных в этой области способов. Затем рекомбинантный вирус можно выделять и доставлять в клетки индивидуума in vivo или ex vivo. В этой области известен ряд ретровирусных систем. В некоторых вариантах осуществления используют аденовирусные векторы. В этой области известен ряд аденовирусных векторов. В одном из вариантов осуществления используют лентивирусные векторы.
Дополнительные промоторные элементы, например энхансеры, регулируют частоту инициации транскрипции. Как правило, они локализуются в области на 30-110 п.н. выше стартового участка, хотя недавно показано, что ряд промоторов содержит функциональные элементы ниже стартового участка. Часто спейсинг между промоторными элементами является гибким таким образом, что предотвращают функционирование промотора, когда элементы инвертированы или перемещены относительно друг друга. В промоторе тимидинкиназы (tk) спейсинг между промоторными элементами можно повышать до 50 п.н. до начала снижения активности. Считают, что в зависимости от промотора отдельные элементы могут функционировать совместно или независимо, активируя транскрипцию.
Одним из примеров подходящего промотора является промоторная последовательность предраннего цитомегаловируса (CMV). Эта промоторная последовательность является сильной конститутивной промоторной последовательностью, способной запускать высокие уровни экспрессии любой полинуклеотидной последовательности, функционально с ней связанной. Другим примером подходящего промотора является промотор фактора элонгации-1ц (EF-Io). Однако также можно использовать другие конститутивные промоторные последовательности, включая, в качестве неограничивающих примеров, ранний промотор вируса обезьян 40 (SV40), вирус опухоли молочной железы мыши (MMTV), промотор в области длинных концевых повторов (LTR) вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), промотор MoMuLV, промотор вируса лейкоза птиц, предранний промотор вируса Эпштейна-Барр, промотор вируса саркомы Рауса, а также промоторы генов человека, в качестве неограничивающих примеров, такие как промотор гена актина, промотор гена миозина, промотор гена гемоглобина и промотор гена креатинки- 18 035484 назы. Кроме того, изобретение не должно ограничиваться использованием конститутивных промоторов. Индуцибельные промоторы также включены как часть изобретения. Использование индуцибельного промотора представляет молекулярный переключатель, способный запускать экспрессию полинуклеотидной последовательности, с которой он функционально связан, если такая экспрессия является желательной, или прекращать экспрессию, если экспрессия нежелательна. Примеры индуцибельных промоторов включают, в качестве неограничивающих примеров, промотор металлотионеинов, промоторы генов глюкокортикоидов, промотор гена прогестерона и промотор гена тетрациклина.
В целях оценки экспрессии полипептида CAR или его частей экспрессирующий вектор для встраивания в клетку также может содержать ген селективного маркера или репортерный ген, или оба для облегчения определения и селекции экспрессирующих клеток из популяции клеток, которые необходимо трансфицировать или инфицировать с помощью вирусных векторов. В других аспектах селективный маркер может нести отдельный фрагмент ДНК и его можно использовать в способе котрансфекции. И селективные маркеры, и репортерные гены можно фланкировать соответствующими регуляторными последовательностями, делая возможной экспрессию в клетках-хозяевах. Применимые селективные маркеры включают, например, гены устойчивости к антибиотикам, такие как neo и т.п.
Для определения потенциально трансфицированных клеток и для оценки функциональности регуляторных последовательностей используют репортерные гены. В основном, репортерный ген является геном, не присутствующим или экспрессируемым в организме или ткани и кодирующим полипептид, экспрессия которых проявляется в некотором легко определяемом свойстве, например ферментативной активности. Экспрессию репортерного гена анализируют в подходящий момент времени после встраивания ДНК в клетки-реципиенты. Подходящие репортерные гены могут включать гены, кодирующие люциферазу, бета-галактозидазу, хлорамфеникол ацетилтрансферазу, секретируемую щелочную фосфатазу, или ген зеленого флуоресцентного белка (например, Ui-Tei et. al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82). Подходящие системы экспрессии хорошо известны и их можно получать с использованием известных способов или из коммерческого источника. В основном, конструкцию с минимальной 5'-фланкирующей областью, демонстрирующую наибольший уровень экспрессии репортерного гена, определяют как промотор. Такие промоторные области можно соединять с репортерным геном и использовать для оценки средств на способность модулировать запускаемую промотором транскрипцию.
В этой области известны способы встраивания и экспрессии генов в клетке. Что касается экспрессирующего вектора, вектор легко можно встраивать в клетку-хозяина, например клетку млекопитающего, бактерии, дрожжей или насекомых, любым способом, известным в этой области. Например, экспрессирующий вектор можно трансфицировать в клетку-хозяина физическими, химическими или биологическими способами.
Физические способы введения полинуклеотида в клетку-хозяина включают осаждение фосфатом кальция, липофекцию, бомбардировку частицами, микроинъекции, электропорацию и т.п. Способы получения клеток, содержащих векторы и/или экзогенные нуклеиновые кислоты, хорошо известны в этой области. См., например, Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York). Предпочтительным способом введения полинуклеотида в клетку-хозяина является трансфекция с помощью фосфата кальция.
Биологические способы введения интересующего полинуклеотида в клетку-хозяина включают использование ДНК- и РНК-векторов. Вирусные векторы и, особенно, ретровирусные векторы стали наиболее широко используемым способом встраивания генов в клетки млекопитающих, например клетки человека. Другие вирусные векторы можно получать из лентивируса, поксвирусов, вируса простого герпеса I, аденовирусов и аденоассоциированных вирусов, и т.п. См., например, патенты США №№ 5350674 и 5585362.
Химические способы введения полинуклеотида в клетку-хозяина включают системы коллоидных дисперсий, такие как комплексы макромолекул, нанокапсулы, микросферы, бусы и системы на основе липидов, включая эмульсии масло-в-воде, мицеллы, смешанные мицеллы и липосомы. Примером коллоидной системы для применения в качестве средства доставки in vitro и in vivo является липосома (например, искусственное мембранное средство).
В случае если используют невирусные системы доставки, примером средства доставки является липосома. Использование липидных составов предназначено для введения нуклеиновых кислот в клеткухозяина (in vitro, ex vivo или in vivo). В другом аспекте нуклеиновую кислоту можно соединять с липидом. Нуклеиновую кислоту, соединенную с липидом, можно инкапсулировать в водной внутренней части липосомы, можно распределять внутри липидного бислоя липосомы, прикреплять к липосоме с помощью линкерной молекулы, соединенной и с липосомой, и с олигонуклеотидом, заключать в липосому, получать ее комплекс с липосомой, диспергировать в растворе, содержащем липид, смешивать с липидом, комбинировать с липидом, она может содержаться в виде суспензии в липиде, содержаться или образовывать комплекс с мицеллой, или ее можно иначе соединять с липидом. Композиции, ассоциированные с липидами, липидами/ДНК или липидами/экспрессирующим вектором, не ограничены любой конкретной структурой в растворе. Например, они могут присутствовать в бислойной структуре, в виде мицеллы или со сложенной структурой. Они также могут просто распределяться в растворе, возможно,
- 19 035484 образуя агрегаты, не являющиеся однородными по размеру или форме. Липиды являются жирными веществами, которые могут представлять собой природные или синтетические липиды. Например, липиды включают жировые капли, в природе присутствующие в цитоплазме, а также класс соединений, содержащих длинноцепочечные алифатические углеводороды и их производные, такие как жирные кислоты, спирты, амины, аминоспирты и альдегиды.
Пригодные для использования липиды можно получать из коммерческих источников. Например, димиристилфосфатидилхолин (DMPC) можно приобретать в Sigma, St. Louis, МО; дицетил фосфат (DCP) можно приобретать в К & К Laboratories (Plainview, NY); холестерин (Choi) можно приобретать в Calbiochem-Behring; димиристил фосфатидилглицерин (DMPG) и другие липиды можно приобретать в Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL). Стоковые растворы липидов в хлороформе или хлороформ/метаноле можно хранить приблизительно при -20°С. В качестве растворителя используют исключительно хлороформ, т.к. он испаряется легче, чем метанол. Липосома представляет собой общий термин, включающий множество одно- и многослойных липидных средств, получения посредством образования замкнутых липидных бислоев или агрегатов. Липосомы можно охарактеризовать как имеющие везикулярную структуру с фосфолипидной бислойной мембраной и внутренней водной средой. Многослойные липосомы имеют многочисленные липидные слои, разделенные водной средой. Они образуются спонтанно, когда фосфолипиды суспендируют в избытке водного раствора. Липидные компоненты подвергаются самоперестройке до образования замкнутых структур и удерживают воду и растворенные вещества между липидными бислоями (Ghosh et al., 191 Glycobiology 5; 505-10). Однако также включают композиции, имеющие в растворе структуры, иные, чем нормальная везикулярная структура. Например, липиды могут иметь мицеллярную структуру или просто существовать как неоднородные агрегаты молекул липидов. Также включают комплексы липофектамин-нуклеиновая кислота.
Независимо от способа, используемого для введения экзогенных нуклеиновых кислот в клеткухозяина или иного воздействия на клетку ингибитора по настоящему изобретению, для подтверждения наличия рекомбинантной последовательности ДНК в клетке-хозяине можно осуществлять множество анализов. Такие анализы включают, например, молекулярно-биологические анализы, хорошо известные специалистам в этой области, такие как Саузерн- и нозерн-блоттинг, RT-ПЦР и ПЦР; биохимические анализы, такие как определение наличия или отсутствия конкретного пептида, например, иммунологическими способами (ELISA и вестерн-блоттингом), или посредством анализов, представленных в настоящем описании, для определения средств, включенных в объем изобретения.
Источники Т-клеток
До экспансии и генетической модификации Т-клеток по изобретению из индивидуума получают источник Т-клеток. Т-клетки можно получать из ряда источников, включая мононуклеарные клетки периферической крови, костный мозг, ткань лимфоузла, пуповинную кровь, ткань тимуса, ткань из места инфекции, асцитическую жидкость, плевральный выпот, ткань селезенки и опухоли. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения можно использовать любое количество Т-клеточных линий, доступных в этой области. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения Тклетки можно получать из единицы крови, забранной у индивидуума, с использованием любого количества способов, известных специалистам в этой области, таких как разделение с использованием фиколла. В одном из предпочтительных вариантов осуществления клетки из циркулирующей крови индивидуума получают аферезом. Как правило, продукт афереза содержит лимфоциты, включая Т-клетки, моноциты, гранулоциты, В-клетки, другие ядерные лейкоциты, эритроциты и тромбоциты. В одном из вариантов осуществления клетки, собранные аферезом, можно промывать для удаления фракции плазмы и для помещения клеток в соответствующий буфер или среду для последующих этапов обработки. В одном из вариантов осуществления изобретения клетки промывают фосфатно-солевым буфером (PBS). В альтернативном варианте осуществления промывочный раствор не содержит кальций и может не содержать магний или может не содержать многие, если не все, бивалентные катионы. Кроме того, неожиданно, исходные этапы активации в отсутствие кальция приводят к усиленной активации. Как будет очевидно специалистам в этой области, этап промывания можно осуществлять известными в этой области способами, такими как использование полуавтоматической проточной центрифуги (например, клеточного процессора Cobe 2991, Baxter CytoMate или Haemonetics Cell Saver 5) по инструкциям производителя. После промывания клетки можно ресуспендировать во множестве биосовместимых буферов, таких как, например, несодержащий Са2+, несодержащий Mg2+ PBS, плазмалита А или другой физиологический раствор с буфером или без него. Альтернативно, можно удалять нежелательные компоненты образца после афереза и напрямую ресуспендировать клетки в средах для культивирования.
В другом варианте осуществления Т-клетки выделяют из периферической крови лизисом эритроцитов и удалением моноцитов, например, центрифугированием с помощью градиента PERCOLL™ или противоточной центрифужной элютриации. Конкретные субпопуляции Т-клеток, такие как CD3+, CD28'. CD4+, CD8+, CD45RA+ и CD45RO+T-клетки, дополнительно можно выделять способами позитивной или негативной селекции. Например, в одном из вариантов осуществления Т-клетки выделяют инкубацией с бусами, конъюгированными с антителами против CD3/CD28 (т.е. 3*28), такими как DYNABEADS® M450 CD3/CD28 Т, в течение периода времени, достаточного для позитивной селекции желаемых Т- 20 035484 клеток. В одном из вариантов осуществления период времени составляет приблизительно 30 мин. В дополнительном варианте осуществления период времени находится в диапазоне от 30 мин до 36 ч или более, включая все целочисленные значения между ними. В дополнительном варианте осуществления период времени составляет по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или 6 ч. В другом предпочтительном варианте осуществления период времени составляет от 10 до 24 ч. В одном из предпочтительных вариантов осуществления время инкубации составляет 24 ч.
Для выделения Т-клеток пациентов с лейкозом использование большего времени инкубации, такого как 24 ч, может повышать выход клеток. Большее время инкубации можно использовать для выделения Т-клеток в любой ситуации, когда Т-клеток меньше по сравнению с другими типами клеток, например при выделении лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (TIL), из ткани опухоли или у иммунологически компрометированных индивидуумов. Кроме того, использование большего времени инкубации может повышать эффективность захвата CD8+ Т-клеток. Таким образом, просто укорачивая или увеличивая время, Т-клеткам позволяют связываться с CD3/CD28-бусами, и/или, повышая или снижая соотношение бус и Т-клеток (как представлено далее в настоящем описании), субпопуляции Т-клеток предпочтительно можно подвергать позитивной или негативной селекции в начале культивирования или в другие моменты времени во время осуществления способа. Дополнительно, повышая или снижая соотношение антител против CD3 и/или против CD28 на бусах или другой поверхности, субпопуляции Т-клеток предпочтительно можно подвергать позитивной или негативной селекции в начале культивирования или в другие желаемые моменты времени. Специалистам в этой области следует понимать, что в условиях настоящего изобретения также можно использовать многочисленные этапы селекции. В определенных вариантах осуществления желательным может являться осуществление способа селекции и использование неселектированных клеток в активации и экспансии. Неселектированные клетки также можно подвергать дополнительным этапам селекции.
Обогащение популяции Т-клеток посредством негативной селекции можно осуществлять с помощью комбинации антител против поверхностных маркеров, уникальных для негативно селектируемых клеток. Одним из способов является клеточный сортинг и/или селекция с помощью способа негативной магнитной иммуноадгезии или проточной цитометрии, в которой используют смесь моноклональных антител против поверхностных клеточных маркеров, присутствующих на негативно селектируемых клетках. Например, для обогащения CD4+-клеток с помощью негативной селекции смесь моноклональных антител, как правило, включает антитела против CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR и CD8. В определенных вариантах осуществления желательным может являться обогащение или позитивная селекция регуляторных Т-клеток, как правило, экспрессирующих CD4+, CD25'. CD62Lh1, GITR+ и FoxP3+. Альтернативно, в определенных вариантах осуществления регуляторные Т-клетки удаляют с помощью бус, конъюгированных с антителами против CD25, или другими аналогичными способами селекции.
Для выделения желаемой популяции клеток с помощью позитивной или негативной селекции можно варьировать концентрацию клеток и площадь поверхности (например, частиц, таких как бусы). В определенных вариантах осуществления желательным может являться значительное снижение объема, в котором смешивают бусы и клетки (т.е. повышение концентрации клеток), для обеспечения максимального контакта клеток и бус. Например, в одном из вариантов осуществления используют концентрацию 2 млрд клеток/мл. В одном из вариантов осуществления используют концентрацию 1 млрд клеток/мл. В дополнительном варианте осуществления используют больше 100 млн клеток/мл. В дополнительном варианте осуществления используют концентрацию клеток 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 млн клеток/мл. В еще одном варианте осуществления используют концентрацию клеток от 75, 80, 85, 90, 95 или 100 млн клеток/мл. В дополнительных вариантах осуществления можно использовать концентрации 125 или 150 млн клеток/мл. Использованием высоких концентраций может приводить к повышению выхода клеток, активации клеток и экспансии клеток. Кроме того, использование высоких концентраций клеток делает возможным более эффективный захват клеток, которые могут слабо экспрессировать интересующие антигены-мишени, таких как CD28-негативные Т-клетки, или захват из образцов, где присутствует много опухолевых клеток (т.е. крови больного лейкозом, ткани опухоли и т.д.). Такие популяции клеток могут иметь терапевтическое значение, и их получение может являться желательным. Например, использование высокой концентрации клеток делает возможной более эффективную селекцию CD8+Т-клеток, в норме слабее экспрессирующих CD28.
В родственном варианте осуществления желательным может являться использование более низких концентраций клеток. Значительно разбавляя смесь Т-клеток, приводимых в контакт с поверхностью (например, частицами, таких как бусы), минимизируют взаимодействия между частицами и клетками. Это позволяет осуществлять селекцию клеток, экспрессирующих большое количество желаемых антигенов, подлежащих связыванию с частицами. Например, CD4+ Т-клетки экспрессируют высокие уровни CD28 и подвергаются более эффективному захвату, чем CD8+ Т-клетки в меньших концентрациях. В одном из вариантов осуществления используемая концентрация клеток составляет 5^106/мл. В других вариантах осуществления используемая концентрация может составлять приблизительно от 1*105/мл до 1^106/мл, включая любое целочисленное значение между ними.
В других вариантах осуществления клетки можно инкубировать на ротаторе в течение различных
- 21 035484 периодов времени при различных скоростях при 2-10°С или при комнатной температуре.
Т-клетки для стимуляции также можно замораживать после этапа промывания. Не желая быть связанными теорией, этап замораживания и последующий этап размораживания обеспечивает получение более однородного продукта посредством удаления гранулоцитов и до некоторой степени моноцитов из популяции клеток. После этапа промывания, на котором удаляют плазму и тромбоциты, клетки можно суспендировать в охлаждающем растворе. Хотя многие охлаждающие растворы и параметры известны в этой области и будут применимыми в этом контексте, один из способов включает использование PBS, содержащего 20% DMSO и 8% сывороточный альбумин человека, или сред для культивирования, содержащих 10% декстран 40 и 5% декстрозу, 20% сывороточный альбумин человека и 7,5% DMSO, или 31,25% плазмалита-А, 31,25% декстрозы (5%), 0,45% NaCl, 10% декстран 40 и 5% декстрозу, 20% сывороточный альбумин человека и 7,5% DMSO или других подходящих для замораживания клеток сред, содержащих, например, Hespan и плазмалит А, затем клетки замораживают до -80°С при скорости 1° в минуту и хранят в газовой фазе в резервуаре для хранения жидкого азота. Можно использовать другие способы контролируемого замораживания, а также неконтролируемого замораживания непосредственно при -20°С или в жидком азоте.
В определенных вариантах осуществления криоконсервированные клетки размораживают и промывают, как представлено в настоящем описании, и позволяют им отстаиваться в течение одного часа при комнатной температуре до активации с использованием способов по настоящему изобретению.
Также в контекст изобретения включают забор образцов крови или продукта афереза у индивидуума в период времени перед тем, как могут понадобиться экспансированные клетки, как представлено в настоящем описании. В связи с этим источник клеток для экспансии можно собирать в любой необходимый момент времени, и желаемые клетки, такие как Т-клетки, можно выделять и замораживать для позднейшего использования в Т-клеточной терапии для любого количества заболеваний или состояний, для которых Т-клеточная терапия может являться благоприятной, таких как представленные в настоящем описании.
В одном из вариантов осуществления образец крови или продукт афереза, как правило, забирают у здорового индивидуума. В определенных вариантах осуществления образец крови или продукт афереза, как правило, забирают у здорового индивидуума, имеющего риск развития заболевания, но у которого заболевание еще не развилось, и интересующие клетки выделяют и замораживают для позднейшего использования. В определенных вариантах осуществления Т-клетки можно экспансировать, замораживать и использовать позднее. В определенных вариантах осуществления образцы забирают у пациента вскоре после постановки диагноза конкретного заболевания, как представлено в настоящем описании, но перед любым лечением. В дополнительном варианте осуществления клетки выделяют из образца крови или продукта афереза от индивидуума до любого количества родственных способов лечения, включая, в качестве неограничивающих примеров, лечение средствами, такими как натализумаб, эфализумаб, противовирусными средствами, химиотерапию, лучевую терапию, лечение иммуносупрессирующими средствами, такими как циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолат и FK506, антителами или другими иммунодеструктивными средствами, такими как САМРАТН, антитела против CD3, цитоксан, флударабин, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофеноловая кислота, стероиды, FR901228 и лучевая терапия. Эти лекарственные средства ингибируют кальций-зависимую фосфатазу кальциневрин (циклоспорин и FK506) или ингибируют киназу p70S6, важную для индуцируемой факторами роста передачи сигнала, (рапамицин) (Liu et. al., Cell 66:807-815, 1991; Henderson et. al., Immun, 73:316-321, 1991; Bierer et. al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993). В дополнительном варианте осуществления клетки выделяют для пациента и замораживают для дальнейшего использования в комбинации (например, до, одновременно или после) с трансплантацией костного мозга или стволовых клеток, подавляющей Т-клетки терапией с использованием химиотерапевтических средств, таких как флударабин, наружная дистанционная лучевая терапия (XRT), циклофосфамид или антитела, такие как OKT3 или САМРАТН. В другом варианте осуществления клетки выделяют до лечения и их можно замораживать для позднейшего использования для лечения после подавляющей В-клетки терапии, например, средствами, реагирующими с CD20, например ритуксаном.
В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения Т-клетки получают от пациента непосредственно после лечения. В связи с этим наблюдают, что после конкретного лечения злокачественных новообразований, в частности лечения лекарственными средствами, повреждающими иммунную систему, вскоре после лечения в течение периода, когда пациенты в норме восстанавливались после лечения, качество получаемых Т-клеток может являться оптимальным или улучшенным по их способности к экспансии ex vivo. Аналогично, после манипуляций ex vivo с использованием способов, описываемых в настоящем описании, эти клетки могут находиться в предпочтительном состоянии для повышенного энграфтмента и экспансии in vivo. Таким образом, в контекст настоящего изобретения включают сбор клеток крови, включая Т-клетки, дендритные клетки или другие клетки гематопоэтического ростка, в течение этой фазы восстановления. Кроме того, в определенных вариантах осуществления можно использовать мобилизацию (например, мобилизацию с использованием GM-CSF) и схемы симптоматического
- 22 035484 лечения для достижения состояния индивидуума, где предпочтительна репопуляция, рециркуляция, регенерация и/или пролиферация конкретных типов клеток, особенно в течение определенного временного окна после терапии. Иллюстративные типы клеток включают Т-клетки, В-клетки, дендритные клетки и другие клетки иммунной системы.
Активация и экспансия Т-клеток
До или после генетической модификации Т-клеток для экспрессии желаемого CART-клетки можно активировать и экспансировать, как правило, с использованием способов, описываемых, например, в патентах США №№ 6352694, 6534055, 6905680, 6692964, 5858358, 6887466, 6905681, 7144575, 7067318, 7172869, 7232566, 7175843, 5883223, 6905874, 6797514, 6867041 и публикации патентной заявки США № 20060121005.
Как правило, Т-клетки по изобретению экспансируют посредством приведения в контакт с поверхностью, к которой прикреплено средство, стимулирующее ассоциированный с комплексом CD3/TCR сигнал, и лиганд, стимулирующий костимуляторную молекулу на поверхности Т-клеток. В частности, популяции Т-клеток можно стимулировать, как представлено в настоящем описании, например приведением в контакт с антителом против CD3, или его антигенсвязывающим фрагментом или антителом против CD2, иммобилизованным на поверхности, или приведением в контакт с активатором протеинкиназы С (например, бриостатином) в комбинации с кальциевым ионофором. Для костимуляции дополнительной молекулы на поверхности Т-клеток используют лиганд, связывающийся с дополнительной молекулой. Например, популяцию Т-клеток можно приводить в контакт с антителом против CD3 и антителом против CD28 в условиях, подходящих для стимуляции пролиферации Т-клеток. Для стимуляции пролиферации CD4+ Т-клеток или CD8+ Т-клеток можно использовать антитело против CD3 и антитело против CD28. Можно использовать примеры антител против CD28, включающие 9.3, В-Т3, XR-CD28 (Diacione, Besancon, France), как используют в других способах, общеизвестных в этой области (Berg et al., Transplant Proc. 30 (8): 3975-3977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9): 13191328, 1999; Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2): 53-63, 1999).
В определенных вариантах осуществления первичный стимулирующий сигнал и костимуляторный сигнал для Т-клетки можно получать с помощью разных протоколов. Например, средства, обеспечивающие каждый сигнал, могут находиться в растворе или их можно присоединять к поверхности. При присоединении к поверхности средства можно присоединять к той же поверхности (т.е. в цис-положении) или к разным поверхностям (т.е. в транс-положении). Альтернативно, одно средство можно присоединять к поверхности, а другое средство может находиться в растворе. В одном из вариантов осуществления средство, обеспечивающее костимуляторный сигнал, соединяют с поверхностью клетки, а средство, обеспечивающее первичный сигнал активации находится в растворе, или его присоединяют к поверхности. В определенных вариантах осуществления оба средства могут находиться в растворе. В другом варианте осуществления средства могут находиться в растворимой форме, и затем их можно перекрестно сшивать с поверхностью, такой как клетка, экспрессирующая Fc-рецепторы, или антитело или другое связывающее средство, которое будет связываться со средствами. В связи с этим см., например, публикации патентных заявок США №№ 20040101519 и 20060034810 на предмет искусственных антигенпредставляющих клеток (аАРС), которые предлагают для применения в активации и экспансии Т-клеток в настоящем изобретении.
В одном из вариантов осуществления два средства иммобилизуют на бусах - на одной бусине, т.е. в цис-положении, или на разных бусинах, т.е. в транс-положении. В качестве примера, средство, обеспечивающее первичный сигнал активации, является антителом против CD3 или его антигенсвязывающим фрагментом, и средство, обеспечивающее костимуляторный сигнал, является антителом против CD28 или его антигенсвязывающим фрагментом; и оба средства совместно иммобилизуют на одной бусине в эквивалентных молекулярных количествах. В одном из вариантов осуществления используют соотношение 1:1 каждого антитела, связанного с бусами, для экспансии CD4+ Т-клеток и роста Т-клеток. В определенных аспектах настоящего изобретения используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, для повышения наблюдаемой экспансии Т-клеток по сравнению экспансией, наблюдаемой с использованием соотношения 1:1. В одном конкретном варианте осуществления наблюдают повышение приблизительно в 1-3 раза по сравнению с экспансией, наблюдаемой с использованием соотношения 1:1. В одном из вариантов осуществления соотношение антител CD3:CD28, связанных с бусами, находится в диапазоне от 100:1 до 1:100, включая все целочисленные значения между ними. В одном из аспектов настоящего изобретения с частицами связывают больше антитела против CD28, чем антитела против CD3, т.е. соотношение CD3:CD28 составляет менее одного. В определенных вариантах осуществления соотношение антитела против CD28 и антитела против CD3, связанных с бусами, составляет более 2:1. В одном конкретном варианте осуществления используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, 1:100. В другом варианте осуществления используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, 1:75. В дополнительном варианте осуществления используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, 1:50. В другом варианте осуществления используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, 1:30. В одном из предпочтительных вариантов осуществления используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с
- 23 035484 бусами, 1:10. В другом варианте осуществления используют соотношение антител против CD3:CD28, связанных с бусами, 1:3. В еще одном варианте осуществления используют соотношение антител против
CD3:CD28, связанных с бусами, 3:1.
Для стимуляции Т-клеток или других клеток-мишеней можно использовать соотношения частиц к клеткам от 1:500 до 500:1, включая любые целочисленные значения между ними. Специалистам в этой области будет понятно, что соотношение частиц к клеткам может зависеть от размера частиц относительно клетки-мишени. Например, бусы небольшого размера могут связывать лишь несколько клеток, в то время как бусы большего размера могут связывать много клеток. В определенных вариантах осуществления соотношение клеток к частицам находится в диапазоне от 1:100 до 100:1, включая любые целочисленные значения между ними, и в дополнительных вариантах осуществления для стимуляции Тклеток также можно использовать соотношение от 1:9 до 9:1, включая любые целочисленные значения между ними. Соотношение частиц, к которым присоединены антитела против CD3 и против CD28, и Тклеток, приводящее к стимуляции Т-клеток, как указано выше, может варьироваться, однако конкретные предпочтительные значения включают 1:100, 1:50, 1:40, 1:30, 1:20, 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 и 15:1 с одним предпочтительным соотношением частиц и Тклеток, составляющим, по меньшей мере, 1:1. В одном из вариантов осуществления используют соотношение частиц и клеток 1:1 или менее. В одном конкретном варианте осуществления предпочтительное соотношение частица:клетка составляет 1:5. В дополнительных вариантах осуществления соотношение частиц и клеток может варьироваться в зависимости от дня стимуляции. Например, в одном из вариантов осуществления соотношение частиц и клеток составляет от 1:1 до 10:1 в первый день, и каждый день или в дальнейшем через день в течение до 10 дней к клеткам добавляют дополнительные частицы при конечных соотношениях от 1:1 до 1:10 (в зависимости от количества клеток в день добавления). В одном конкретном варианте осуществления соотношение частиц и клеток составляет 1:1 в первый день стимуляции и его доводят до 1:5 в третий и пятый дни стимуляции. В другом варианте осуществления частицы добавляют ежедневно или через день до конечного соотношения 1:1 в первый день и 1:5 в третий и пятый дни стимуляции. В другом варианте осуществления соотношение частиц и клеток составляет 2:1 в первый день стимуляции и его доводят до 1:10 в третий и пятый дни стимуляции. В другом варианте осуществления частицы добавляют ежедневно или через день до конечного соотношения 1:1 в первый день и 1:10 в третий и пятый дни стимуляции. Специалистам в этой области будет понятно, что множество других соотношений может подходить для использования в настоящем изобретении. В частности, соотношения будут варьироваться в зависимости от размера частиц и размера и типа клеток.
В дополнительных вариантах осуществления настоящего изобретения клетки, такие как Т-клетки, комбинируют с покрытыми средством бусами, затем бусы и клетки разделяют, а затем клетки культивируют. В альтернативном варианте осуществления перед культивированием покрытые средством бусы и клетки не разделяют, а культивируют совместно. В дополнительном варианте осуществления бусы и клетки сначала концентрируют, используя силу, такую как сила магнитного поля, что приводит к повышению лигирования поверхностных клеточных маркеров, таким образом, индуцируя стимуляцию клетки.
В качестве примера, белки поверхности клетки можно соединять с лигандами, позволяя парамагнитным бусам, к которым прикреплены антитела против CD3 и против CD28 (бусы 3 х28), контактировать с Т-клетками. В одном из вариантов осуществления клетки (например, от 104 до 109 Т-клеток) и бусы (например, парамагнитные бусы DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 Т в соотношении 1:1) комбинируют в буфере, предпочтительно PBS (без бивалентных катионов, таких как кальций и магний). Снова, специалистам в этой области будет понятно, что можно использовать любую концентрацию клеток. Например, клетки-мишени могут редко встречаться в образце и составлять только 0,01% образца, или целый образец (т.е. 100%) может содержать интересующие клетки-мишени. Таким образом, любое количество клеток включают в контекст настоящего изобретения. В определенных вариантах осуществления желательным может являться значительное снижение объема, в котором смешивают частицы и клетки (т.е. повышают концентрацию клеток), для обеспечения максимального контакта клеток и частиц. Например, в одном из вариантов осуществления используют концентрацию приблизительно 2 млрд клеток/мл. В другом варианте осуществления используют более 100 млн клеток/мл. В дополнительном варианте осуществления используют концентрации клеток 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 млн клеток/мл. В еще одном варианте осуществления используют концентрацию клеток от 75, 80, 85, 90, 95 или 100 млн клеток/мл. В дополнительных вариантах осуществления можно использовать концентрации 125 или 150 млн клеток/мл. Использование высоких концентраций может приводить к повышению выхода клеток, активации клеток и экспансии клеток. Кроме того, использование высоких концентраций клеток делает возможным более эффективный захват клеток, которые могут слабо экспрессировать интересующие антигены-мишени, таких как CD28-негативные Т-клетки. Такие популяции клеток могут иметь терапевтическое значение, и в определенных вариантах осуществления желательным может являться их получение. Например, использование высокой концентрации клеток делает возможной более эффективную селекцию CD8+ Т-клеток, которые в норме имеют более слабую экспрессию CD28.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения смесь можно культивировать в тече- 24 035484 ние периода от нескольких часов (приблизительно 3 ч) до приблизительно 14 дней, включая любое целочисленное значение между ними. В другом варианте осуществления смесь можно культивировать в течение 21 дней. В одном из вариантов осуществления изобретения бусы и Т-клетки культивируют совместно в течение приблизительно восьми дней. В другом варианте осуществления бусы и Т-клетки культивируют совместно в течение 2-3 дней. Желательными также могут являться несколько циклов стимуляции таким образом, что время культивирования Т-клеток может составлять 60 дней или более. Условия, подходящие для культивирования Т-клеток, включают соответствующие среды (например, минимальные поддерживающие среды, или среды RPMI 1640 или X-vivo 15 (Lonza)), которые могут содержать факторы, необходимые для пролиферации и жизнеспособности, включая сыворотку (например, эмбриональную бычью сыворотку или сыворотку человека), интерлейкин-2 (IL-2), инсулин, ZFNy, IL-4, IL-7, GMCSF, IL-10, IL-12, IL-15, TGFβ и TNF-α, или любые другие добавки для роста клеток, известные специалистам в этой области. Другие добавки для роста клеток включают, в качестве неограничивающих примеров, поверхностно-активное вещество, плазманат и восстановители, такие как N-ацетилцистеин и 2меркаптоэтанол. Среды могут включать RPMI 1640, AIM-V, DMEM, MEM, α-MEM, F-12, X-Vivo 15 и XVivo 20, Optimizer с добавлением аминокислот, пирувата натрия и витаминов, не содержащие сыворотку или дополненные соответствующим количеством сыворотки (или плазмы), или определенным набором гормонов и/или количеством цитокинов, достаточным для роста и экспансии Т-клеток. Антибиотики, например пенициллин и стрептомицин, включают только в экспериментальные культуры, но не в культуры клеток для инфузии индивидууму. Клетки-мишени поддерживают в условиях, необходимых для поддержания роста, например, при соответствующей температуре (например, 37°С) и атмосфере (например, воздух с 5% СО2).
Т-клетки, подвергаемые стимуляции в течение разных периодов времени, могут проявлять разные свойства. Например, типичные мононуклеарные клетки крови или продукты мононуклеарных клеток периферической крови после афереза содержат популяцию хелперных Т-клеток (TH, CD4'). большую, чем популяции цитотоксических или супрессорных Т-клеток (TC, CD8+). Экспансия Т-клеток ex vivo посредством стимуляции рецепторов CD3 и CD28 приводит к образованию популяции Т-клеток, которая до приблизительно 8-9 дней состоит, главным образом, из TH-клеток, в то время как после приблизительно 8-9 дней популяция Т-клеток содержит все большую популяцию Тс-клеток. Таким образом, в зависимости от цели лечения предпочтительной может являться инфузия индивидууму популяции Т-клеток, содержащей, главным образом, TH-клетки. Аналогично, если выделяют антиген-специфичную субпопуляцию TC-клеток, благоприятной может являться экспансия этой субпопуляции до большего количества.
Кроме того, в дополнение к маркерам CD4 и CD8, в течение экспансии клеток значительно варьируются другие фенотипические маркеры, но по большей части, воспроизводимо. Таким образом, такая воспроизводимость делает возможной адаптацию активированного Т-клеточного продукта для конкретных целей.
Терапевтическое применение
Настоящее изобретение относится к клетке (например, Т-клетке), трансдуцированной с использованием лентивирусных векторов (LV). Например, LV кодирует CAR, в котором комбинируют антигенраспознающий домен специфического антитела с внутриклеточным доменом CD3-дзета, CD28, 4-1ВВ или любых их комбинаций. Таким образом, в некоторых случаях трансдуцированная Т-клетка может вызывать CAR-опосредованный Т-клеточный ответ.
Изобретение относится к применению CAR для перенаправления специфичности первичной Тклетки на опухолевый антиген. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу стимуляции опосредуемого Т-клетками иммунного ответа на популяцию клеток-мишеней или ткань у млекопитающего, включающему этап введения млекопитающему Т-клетки, экспрессирующей CAR, где CAR содержит связывающий фрагмент, специфически взаимодействующий с заранее определенной мишенью, часть дзета-цепи, содержащую, например, внутриклеточный домен CD3-дзета человека, и костимуляторную сигнальную область.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к типу клеточной терапии, где Т-клетки генетически модифицируют для экспрессии CAR и осуществляют инфузию Т-клеток с CAR нуждающемуся в этом реципиенту. Инфузируемые клетки способны уничтожать опухолевые клетки у реципиента. В отличие от терапии антителами, Т-клетки с CAR способны к экспансии in vivo, приводя к длительному поддержанию, которое может приводить к длительному контролю опухоли.
В одном из вариантов осуществления Т-клетки с CAR по изобретению можно подвергать устойчивой экспансии in vivo и их можно поддерживать в течение продолжительного периода времени. В другом варианте осуществления Т-клетки с CAR по изобретению развиваются в специфичные Т-клетки памяти, которые можно реактивировать для ингибирования образования или роста любой дополнительной опухоли. Например, не ожидали того, что клетки CART-19 по изобретению можно подвергать устойчивой экспансии in vivo, их можно поддерживать на высоких уровнях в течение продолжительного периода времени в крови и костном мозге, и они могут образовывать специфические Т-клетки памяти. Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, Т-клетки с CAR могут дифференцироваться in vivo
- 25 035484 в подобное центральной памяти состояние после контакта с клетками-мишенями, экспрессирующими антиген-имитатор, и последующего их устранения.
Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, противоопухолевый иммунный ответ, вызываемый CAR-модифицированными Т-клетками, может являться активным или пассивным иммунным ответом. Кроме того, CAR-опосредованный иммунный ответ может являться частью подхода адоптивной иммунотерапии, при котором CAR-модифицированные Т-клетки индуцируют иммунный ответ, специфичный для антигенсвязывающей части CAR. Например, клетки CART-19 вызывают иммунный ответ, специфичный против клеток, экспрессирующих CD19.
Хотя в данных, представленных в настоящем описании, конкретно описывают лентивирусные векторы, содержащие последовательности scFv против CD19, полученных из моноклонального антитела мыши FMC63, шарнирный и трансмембранный домен CD8u человека и сигнальные домены 4-1ВВ и CD3-дзета человека, изобретение следует интерпретировать как включающее любое количество вариантов для каждого из компонентов конструкции, как представлено в настоящем описании. Т.е. изобретение включает применение любого антигенсвязывающего фрагмента CAR для получения CARопосредованного Т-клеточного ответа, специфичного для антигенсвязывающей части. Например, в целях лечения злокачественного новообразования антигенсвязывающий фрагмент CAR по изобретению может быть направлен на опухолевый антиген.
Злокачественные новообразования, которые можно лечить, включают опухоли, не васкуляризованные или, по-существу, не васкуляризованные, а также васкуляризованные опухоли.
Злокачественные новообразования могут включать несолидные опухоли (такие как гематологические опухоли, например, лейкозы и лимфомы) или могут включать солидные опухоли. Типы злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CAR по изобретению, включают, в качестве неограничивающих примеров, карциному, бластому и саркому, и конкретные лейкозы или лимфоидные злокачественные новообразования, доброкачественные и злокачественные опухоли и злокачественные новообразования, например саркомы, карциномы и меланомы. Также включены опухоли/злокачественные новообразования взрослых и опухоли/злокачественные новообразования детей.
Гематологическими злокачественными новообразованиями являются злокачественные новообразования крови или костного мозга. Примеры гематологических (или гематогеных) злокачественных новообразований включают лейкозы, включая острые лейкозы (такие как острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, острый миелогенный лейкоз и миелобластный, промиелоцитарный, миеломоноцитарный, моноцитарный и эритролейкоз), хронические лейкозы (такие как хронический миелоцитарный (гранулоцитарный) лейкоз, хронический миелогенный лейкоз и хронический лимфоцитарный лейкоз), истинную полицитемию, лимфому, болезнь Ходжкина, неходжкинскую лимфому (медленно растущую и высокозлокачественную формы), множественную миелому, макроглобулинемия Вальденстрема, болезнь тяжелых цепей, миелодиспластический синдром, волосатоклеточный лейкоз и миелодисплазию.
Солидные опухоли являются аномальными опухолями ткани, как правило, не содержащими кисты или области жидкости. Солидные опухоли могут являться доброкачественными или злокачественными. Различные типы солидных опухолей называют по типу образующих их клеток (например, саркомы, карциномы и лимфомы). Примеры солидных опухолей, таких как саркомы и карциномы, включают фибросаркому, миксосаркому, липосаркому, хондросаркому, остеосаркому и другие саркомы, синовиому, мезотелиому, опухоль Юинга, лейомиосаркому, рабдомиосаркому, карциному толстого кишечника, лимфолейкоз, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, рак предстательной железы, печеночноклеточную карциному, плоскоклеточную карциному, базальноклеточную карциному, аденокарциному, карциному потовых желез, медуллярный рак щитовидной железы, папиллярный рак щитовидной железы, феохромоцитому, карциному сальных желез, папиллярную карциному, папиллярные аденокарциномы, медуллярную карциному, бронхогенную карциному, почечноклеточную карциному, гепатому, карциному желчных протоков, хориокарциному, опухоль Вильмса, рак шейки матки, опухоль яичка, семиному, карциному мочевого пузыря, меланому и опухоли ЦНС (такие как глиома (такая как глиома ствола головного мозга и смешанная глиома), глиобластома (также известная как мультиформная глиобластома) астроцитома, лимфома ЦНС, герминома, медуллобластома, шваннома, краниофарингиома, эпендимома, пинеалома, гемангиобластома, невринома слухового нерва, олигодендроглиома, менингиома, нейробластома, ретинобластома и метастазы в головном мозге).
В одном из вариантов осуществления антигенсвязывающий фрагмент CAR по изобретению конструируют для лечения конкретного злокачественного новообразования. Например, CAR, сконструированный против CD19, можно использовать для лечения злокачественных новообразований и нарушений, включая, в качестве неограничивающих примеров, пре-В ALL (применение в педиатрии), ALL взрослых, лимфому из клеток зоны мантии, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, и для повышения выживаемости после аллотрансплантации костного мозга и т.п.
В другом варианте осуществления CAR можно конструировать направленным против CD22 для лечения диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы.
В одном из вариантов осуществления злокачественные новообразования и нарушения включают, в
- 26 035484 качестве неограничивающих примеров, пре-В ALL (применение в педиатрии), ALL взрослых, лимфому из клеток зоны мантии, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, выживаемость после аллотрансплантации костного мозга и т.п., можно лечить с использованием комбинации CAR, направленных против CD19, CD20, CD22 и ROR1.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против мезотелина для лечения мезотелиома, рака поджелудочной железы, рака яичников и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против CD33/IL3Ra для лечения острого миелогенного лейкоза и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против с-Met для лечения тройного негативного рака молочной железы, немелкоклеточного рака легких и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против PSMA для лечения рака предстательной железы и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против гликолипида F77 для лечения рака предстательной железы и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против EGFRvIII для лечения глиобластомы и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против GD-2 для лечения нейробластомы, меланомы и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против NY-ESO-1 TCR для лечения миеломы, саркомы, меланомы и т.п.
В одном из вариантов осуществления CAR можно конструировать направленным против MAGE A3 TCR для лечения миеломы, саркомы, меланомы и т.п.
Однако изобретение нельзя интерпретировать как ограниченное исключительно антигенамимишенями и заболеваниями, представленными в настоящем описании. Т.е. изобретение необходимо интерпретировать, как включающее любую антигенную мишень, ассоциированную с заболеванием, где CAR можно использовать для лечения заболевания.
CAR-модифицированные Т-клетки по изобретению также могут служить в качестве вакцины для иммунизации ex vivo и/или терапии in vivo у млекопитающего. Предпочтительно млекопитающее является человеком.
Что касается иммунизации ex vivo, по меньшей мере одно из следующего происходит in vitro до введения клеток млекопитающим: i) экспансия клеток, ii) введение нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, в клетки, и/или iii) криоконсервация клеток.
Способы ex vivo хорошо известны в этой области и полностью описаны ниже. В кратком изложении, клетки выделяют из млекопитающего (предпочтительно, человека) и генетически модифицируют (т.е. трансфицируют in vitro) с помощью вектора, экспрессирующего CAR, представленного в настоящем описании. CAR-модифицированную клетку можно вводить млекопитающему-реципиенту для получения благоприятного терапевтического эффекта. Млекопитающее-реципиент может являться человеком, и CAR-модифицированная клетка может являться аутологичной для реципиента. Альтернативно, клетки могут являться аллогенными, изогенными или ксеногенными в для реципиента.
Способ экспансии гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников ex vivo описывают в патенте США № 5199942, включенном в настоящее описание в качестве ссылки, и его можно использовать для клеток по настоящему изобретению. В этой области известны другие подходящие способы, таким образом, настоящее изобретение не ограничено любым конкретным способом экспансии клеток ex vivo. В кратком изложении, культивирование и экспансия Т-клеток ex vivo включает: (1) получение CD34+ гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников от млекопитающего из образцов периферической крови или эксплантатов костного мозга и (2) экспансию таких клеток ех vivo. В дополнение к клеточным факторам, описываемым в патенте США № 5199942, для культивирования и экспансии клеток можно использовать другие факторы, такие как flt3-L, IL-1, IL-3 и лиганд c-kit.
В дополнение к использованию вакцины на основе клеток для иммунизации ex vivo настоящее изобретение также относится к композициям и способам иммунизации in vivo для вызывания у пациента иммунного ответа, направленного против антигена.
Как правило, клетки, активированные и экспансированные, как представлено в настоящем описании, можно использовать в лечении и профилактике заболеваний, возникающих у иммунокомпрометированных индивидуумов. В частности, CAR-модифицированные Т-клетки по изобретению используют в лечении CCL. В определенных вариантах осуществления клетки по изобретению используют в лечении пациентов с риском развития CCL. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики CCL, включающим введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтически эффективного количества CAR-модифицированных Т-клеток по изобретению.
CAR-модифицированные Т-клетки по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в виде фармацевтической композиции в комбинации с разбавителями и/или другими компонентами, такими как IL-2 или другие цитокины или популяции клеток. В кратком изложении фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержать популяцию клеток-мишеней, как представлено в на- 27 035484 стоящем описании, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически или физиологически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. Такие композиции могут содержать буферы, такие как нейтральный забуференный физиологический раствор, фосфатно-солевой буфер и т.п.; углеводы, такие как глюкоза, манноза, сахароза или декстраны, маннит; белки; полипептиды или аминокислоты, такие как глицин; антиоксиданты; хелатирующие средства, такие как ЭДТА или глутатион; адъюванты (например, гидроксид алюминия) и консерванты. Композиции по настоящему изобретению предпочтительно составляют для внутривенного введения.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить способом, соответствующим заболеванию, подлежащему лечению (или профилактике). Количество и частоту введений будут определять в зависимости от таких факторов, как состояние пациента и тип и тяжесть заболевания пациента, хотя соответствующие дозировки можно определять с помощью клинических испытаний.
Если указывают иммунологически эффективное количество, противоопухолевое эффективное количество, ингибирующее опухоль эффективное количество или терапевтическое количество, точное количество композиций по настоящему изобретению для введения может определять врач с учетом индивидуальных различий в возрасте, массе, размере опухоли, масштабе инфекции или метастазирования и состояния пациента (индивидуума). Как правило, можно сказать, что фармацевтическую композицию, содержащую Т-клетки, представленные в настоящем описании, можно вводить в дозировке от 104 до 109 клеток/кг массы тела, предпочтительно от 105 до 106 клеток/кг массы тела, включая все целочисленные значения, находящиеся в этом диапазоне. Также композиции Т-клеток можно вводить множество раз в этих дозировках. Клетки можно вводить с использованием способов инфузии, общеизвестных в области иммунотерапии (см., например, Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319: 1676, 1988). Специалист в области медицины легко может определять оптимальную дозировку и схему лечения конкретного пациента посредством мониторинга пациента на предмет признаков заболевания и, таким образом, корректировать лечение.
В определенных вариантах осуществления желательным может являться введение активированных Т-клеток индивидууму и затем повторный забор крови (или проведение афереза), активация Т-клеток по настоящему изобретению и реинфузия пациенту этих активированных и экспансированных Т-клеток. Эту процедуру можно осуществлять множество раз в течение нескольких недель. В определенных вариантах осуществления можно активировать Т-клетки из образцов крови от 10 до 400 см3. В определенных вариантах осуществления активируют Т-клетки из образцов крови 20, 30, 40, 50 см3, 60, 70, 80, 90 или 100 см3. Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, использование этого протокола многочисленных заборов крови/многочисленных реинфузий можно использовать для исключения конкретных популяций Т-клеток.
Введение заявленных композиций можно осуществлять любым удобным способом, включая ингаляцию аэрозоля, инъекцию, пероральное введение, переливание, имплантацию или трансплантацию. Композиции, представленные в настоящем описании, можно вводить пациенту подкожно, внутрикожно, внутриопухолево, внутрь узла, интрамедуллярно, внутримышечно, внутривенной (i.v.) инъекцией или интраперитонеально. В одном из вариантов осуществления композиции Т-клеток по настоящему изобретению вводят пациенту внутрикожной или подкожной инъекцией. В другом варианте осуществления композиции Т-клеток по настоящему изобретению предпочтительно вводят i.v. инъекцией. Композиции Т-клеток можно инъецировать непосредственно в опухоль, лимфоузел или очаг инфекции.
В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения клетки, активированные и экспансированные с использованием способов, представленных в настоящем описании, или других известных в этой области способов, где Т-клетки экспансируют до терапевтических уровней, вводят пациенту в комбинации с (например, до, одновременно или после) любым количеством подходящих способов лечения, включая, в качестве неограничивающих примеров, лечение средствами, такими как противовирусная терапия, цидофовир и интерлейкин-2, лечение цитарабином (также известным как ARA-C) или натализумабом в случае пациентов с MS, или лечение эфализумабом в случае пациентов с псориазом или другие способы лечения в случае пациентов с PML. В дополнительных вариантах осуществления Тклетки по изобретению можно использовать в комбинации с химиотерапией, лучевой терапией, иммуносупрессирующими средствами, такими как циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, микофенолат и FK506, антителами или другими иммунодеструктивными средствами, такими как САМРАТН, антитела против CD3 или другие антитела, цитоксин, флударабин, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофеноловая кислота, стероиды, FR901228, цитокины и лучевая терапия. Эти лекарственные средства ингибируют кальций-зависимую фосфатазу кальциневрин (циклоспорин и FK506) или ингибируют киназу p70S6, важную для индуцируемой факторами роста передачи сигнала (рапамицин) (Liu et al., Cell 66:807-815, 1991; Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991; Bierer et. al, Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993). В дополнительном варианте осуществления композиции клеток по настоящему изобретению вводят пациенту в комбинации (например, до, одновременно или после) с трансплантацией костного мозга, подавляющей Т-клетки терапией с использованием химиотерапевтических средств, таких как, флударабин, наружная дистанционная лучевая терапия (XRT), циклофосфамид или антитела, такие как OKT3 или САМРАТН. В другом варианте осуществления композиции клеток по настоящему изобретению вводят после подав
- 28 035484 ляющей В-клетки терапии, такой как терапия средствами, взаимодействующими с CD20, например, ритуксаном. Например, в одном из вариантов осуществления индивидуумов можно подвергать стандартному лечению химиотерапией высокими дозами после трансплантации стволовых клеток периферической крови. В определенных вариантах осуществления после трансплантации индивидуумам проводят инфузию экспансированных иммунных клеток по настоящему изобретению. В дополнительном варианте осуществления экспансированные клетки вводят до или после хирургической операции.
Дозировка указанных выше терапевтических средств, подлежащих введению пациенту, будет варьироваться в зависимости от конкретной природы состояния, подвергаемого лечению, и реципиента. Коррекцию дозировок для введения человеку можно осуществлять согласно общепринятой в этой области практике. Например, доза САМРАТН будет находиться в диапазоне от 1 до приблизительно 100 мг для взрослого пациента, как правило, ее вводят ежедневно в течение периода времени от 1 до 30 дней. Предпочтительная суточная доза составляет от 1 до 10 мг в сутки, хотя в некоторых случаях можно использовать большие дозы до 40 мг в сутки (как описано в патенте США № 6120766).
Экспериментальные примеры
Далее изобретение подробно описывают со ссылкой на следующие экспериментальные примеры. Эти примеры представлены исключительно в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения изобретения, если не указано иначе. Таким образом, изобретение ни в коем случае нельзя интерпретировать как ограниченное следующими примерами, скорее его необходимо интерпретировать как включающее любой и все варианты, становящиеся очевидными из идеи, представленной в настоящем описании.
Без дальнейшего описания полагают, что специалист в этой области с использованием представленного выше описания и следующих иллюстративных примеров может получать и использовать соединения по настоящему изобретению и практиковать заявленные способы. Таким образом, в следующих демонстрационных примерах, главным образом, указывают предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, и их нельзя интерпретировать как каким-либо образом ограничивающие остальную часть изобретения.
Пример 1. Т-клетки, экспрессирующие химерные рецепторы, создают иммунологическую память и сильные противоопухолевые эффекты у пациентов с лейкозом на поздней стадии
Лимфоциты, сконструированные для экспрессии химерных антигенных рецепторов (CAR), демонстрируют минимальную экспансию in vivo и противоопухолевые эффекты в предшествующих клинических испытаниях. Результаты, представленные в настоящем описании, демонстрируют, что Т-клетки с CAR, содержащие CD137, обладают сильной клинической активностью, не связанной с перекрестным иммунитетом, после инфузии у трех из трех подвергнутых лечению пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом на поздней стадии (CLL). Сконструированные Т-клетки экспансировались in vivo более чем в тысячу раз, перемещались в костный мозг и продолжали экспрессировать функциональные CAR на высоких уровнях по меньшей мере в течение 6 месяцев. В среднем, каждая инфузированная CAR+ Тклетка устраняла по меньшей мере 1000 клеток CLL. Демонстрировали CD19-специфичный иммунный ответ в крови и костном мозге, сопровождаемый полной ремиссией у двух из трех пациентов. Часть клеток сохраняется как CAR+ Т-клетки памяти, что свидетельствует о потенциале этого подхода без рестрикции по МНС для эффективного лечения В-клеточных злокачественных новообразований.
Далее описывают материалы и способы, используемые в этих экспериментах.
Материалы и способы Общий лабораторный отчет
Обработку исследуемого образца, замораживание и лабораторные анализы осуществляли в Translational and Correlative Studies Laboratory в University of Pennsylvania, действующей в соответствии с принципами Good Laboratory Practice, установленными SOP, и/или протоколами получения образцов, их обработки, замораживания и анализа. Осуществление анализа и предоставление данных соответствует руководствам MIATA (Janetzki et al., 2009, Immunity 31: 527-528).
Дизайн протокола
Клиническое испытание (NCT01029366) осуществляли, как представлено на фиг. 1. Для исследования подходили пациенты с CD19-позитивным гематологическим злокачественным новообразованием с персистирующим заболеванием после по меньшей мере двух предшествующих схем лечения, не подходящие для аллотрансплантации стволовых клеток. После рестадирования опухоли Т-клетки периферической крови собирали аферезом для получения CART-19 и индивидуумам проводили однократный курс химиотерапии, как показано на фиг. 10, в течение недели перед инфузией, клетки CART-19 вводили внутривенной инфузией с использованием 3-дневной схемы лечения дробными дозами (10, 30 и 60%) при дозе, указанной фиг. 10, и, если возможно, вторую дозу вводили в день 10; только пациент UPN 02 имел достаточно клеток для второй инфузии. Индивидуумов оценивали на наличие токсических эффектов и ответ через короткие промежутки времени в течение по меньшей мере 6 месяцев. Протокол одобрен Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США, Recombinant DNA Advisory Committee и Institutional Review Board of the University of Pennsylvania. Первый день инфузии указывали как день исследования 0.
- 29 035484
Индивидуумы: резюме клинических данных
Резюме клинических данных представлено на фиг. 10 и в настоящем описании подробно представлены анамнезы. У пациента UPN 01 впервые диагностировали В-клеточный CLL стадии II в возрасте 55 лет. У пациента не наблюдали симптомов и его наблюдали в течение приблизительно 1-1/2 лет до возникновения необходимости в терапии прогрессирующего лимфоцитоза, тромбоцитопении, аденопатии и спленомегалии. С течением времени пациенту проводили терапию предыдущих линий. Последней терапией являлись 2 цикла терапии пентостатином, циклофосфамидом и ритуксимабом за 2 месяца до инфузии клеток CART-19 с минимальным ответом. Затем пациенту проводили один цикл терапии бендамустином в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, до инфузии клеток CART-19.
У пациента UPN 02 впервые диагностировали CLL в возрасте 68 лет, когда у пациента развивались утомляемость и лейкоцитоз. Пациент являлся относительно стабильным в течение 4 лет, когда у него развивался прогрессирующий лейкоцитоз (195000/мкл), анемия и тромбоцитопения, требующие терапии. Кариотипический анализ показал, что клетки CLL имеют делецию в хромосомном локусе 17р. По причине прогрессирующего заболевания пациента лечили алемтузумабом с частичным ответом, но в течение полутора лет пациент имел прогрессирующее заболевание. Пациента повторно лечили алемтузумабом в течение 18 недель с частичным ответом и периодом без прогрессирования 1 год. Затем пациенту проводили 2 цикла терапии бендамустином с ритуксимабом без значимого ответа (фиг. 5А). Пациенту проводили лечение только бендамустином в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, до инфузии клеток CART-19.
Пациента UPN 03 наблюдали в возрасте 50 лет с бессимптомным CLL стадии I и затем в течение многих лет. Пациент имел прогрессирующий лейкоцитоз (лейкоцитарная формула 92000/мкл) и прогрессирующую аденопатию, требующие терапии. Пациенту проводили 2 цикла терапии ритуксимабом с флударабином, приведшие к нормализации лейкоцитарной формулы и значимому улучшению, хотя и не к полному разрешению аденопатии. У пациента наблюдали период без прогрессирования приблизительно 3 года. Кариотипический анализ показал наличие клеток, содержащих делецию в хромосомном локусе 17р, с использованием FISH показали наличие делеции ТР53 в 170 из 200 клеток. В течение последующих лет пациенту проводили лечение с использованием 3 различных линий терапии (фиг. 10) прогрессирующего лейкоцитоза и аденопатии, последним использовали алемтузумаб с частичным ответом за 6 месяцев до инфузии клеток CART-19. Пациенту проводили лечение пентостатином и циклофосфамидом в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов до инфузии клеток CART19.
Получение вектора
Трансген CD19-BB-Z (GeMCRIS 0607-793) конструировали, как описано в (Milone et. al., 2009, Mol Ther. 17: 1453-1464). Лентивирусные векторы получали согласно текущим рекомендациям Good Manufacturing Practice с использованием трехплазмидного подхода в Lentigen Corporation, как описано в (Zufferey et al., 1997, Nature biotechnol 15:871-875).
Получение CART-19-клеточного продукта
Способы получения Т-клеток с использованием парамагнитных полистирольных бус, покрытых моноклональными антителами против CD3 и против CD28, описывают в (Laport et al., 2003, Blood 102: 2004-2013). Лентивирусную трансдукцию осуществляли, как описано в (Levine et al., 2006, Proc Natl Acad Sci USA 103: 17372-17377) .
Способы вычисления опухолевой массы
Опухолевую массу CLL на начальном уровне оценивали, как показано на фиг. 10. Количество клеток CLL вычисляли в костном мозге, крови и вторичных лимфоидных тканях, как описано ниже.
Костный мозг: у здоровых взрослых костный мозг представляет собой приблизительно 5% общей массы тела (Woodard et al., 1960, Phys Med Biol, 5:57-59; Bigle et al., 1976, Health Phys 31: 213-218). Костный мозг в образцах подвздошного гребня имеет повышающуюся с возрастом процентную долю неактивного (жирного) костного мозга, увеличивающуюся от 20% общего костного мозга в возрасте 5 лет до приблизительно 50% в возрасте 35 лет, когда он остается стабильным до возраста 65 лет, и затем повышается до приблизительно 67% неактивного костного мозга в возрасте 75 лет (Hartsock et al., 1965, Am J Clin Path 43: 326-331). Международное референсное значение общей массы скелета активного (красного) и неактивного (жирного) костного мозга для мужчин в возрасте 35 лет в настоящее время составляет 1170 г и 2480 г соответственно (Basic anatomical and physiological data for use in radiological protection: The Skeleton in Annals of the ICRP, Vol, 25 (ed. Smith, H.) 58-68 (A report of a Task Group of Committee 2 of the International Commission on Radiological Protection, Oxford, 1995)). Взрослые мужчины в возрасте от 35 до 65 лет имеют костный мозг, представляющий 5,0% общей массы тела, состоящий из 1,6% активного (красного) костного мозга и 3,4% неактивного (жирного) костного мозга (Basic anatomical and physiological data for use in radiological protection: The Skeleton in Annals of the TCRP, vol. 25 (ed, Smith, H.) 58-68 (A report of a Task Group of Committee 2 of the International Commission on Radiological Protection, Oxford, 1995)). На основе биопсии костного мозга и аспирации образцов вычисляли массу клеток CLL для трех пациентов на начальном уровне, как показано
- 30 035484 в табл. 1. Затем эти показатели общей массы CLL костного мозга преобразовывали в общее количество клеток CLL в костном мозге с использованием равенства 1 кг = 1012 клеток, полученные количества представлены на фиг. 10. Эти вычисления основаны на условии, что CLL имеет однородное распределение в костном мозге. В случае пациента UPN 01 вычисления представлены для биопсии костного мозга, полученной до химиотерапии бендамустином, и для аспиратов, полученных после терапии бендамустином и перед инфузией клеток CART-19. Количества являлись менее точными для аспиратов в день -1 по сравнению с биоптатами в день -14 в результате технических ограничений аспирации в день -1. Пациент UPN 02 имел один биоптат до лечения, демонстрирующий полное замещение костного мозга CLL. Этот пациент имел неизмененный образец в день 30 после инфузии CART-19. Опухолевую массу в костном мозге в случае пациента UPN 03 вычисляли на основе биопсии после химиотерапии и перед инфузией CART-19.
Таблица 1. Масса костного мозга
Масса активного костного мозга (кг) Масса неактивного костного мозга (КГ) Общая масса костного мозга (кг)
Мужчины в норме (референсный стандарт ICRP) 1/ 17 2,48 3, 65
UPN 01 день -14 (95% клеток) 3, 47 0,18 3, 65
UPN 02 день -47 (95% клеток) / 3, 47 0,18 3, 65
UPN 03 день -1 (60% клеток) 2, 19 1,46 3, 65
Масса CLL (кг)
UPN 01 день -14 (70% CLL) 2, 43
UPN 01 день -1 (50% CLL сгустком) 1,73
UPN 02 день -47 (>95% CLL) 3, 29
UPN 03 день -1 (40% CLL) 0, 88
Кровь: Только пациент UPN 02 имел значительную опухолевую массу CLL в крови перед инфузией CART-19. Проточная цитометрия показала, что клетки имели типичный фенотип, как клональная популяция каппа-рестрицированная CD5+CD10-CD19+CD20(dim)+CD23(переменная)+IgM-В-клеток с поверхностью с низкой флуоресценцией (dim). Приблизительно 35% клеток CLL коэкспрессировали CD38. Опухолевую массу CLL не устраняли с использованием 3 циклов химиотерапии бендамустином, и она присутствовала во время инфузий клеток CART-19. Во время инфузии CART-19 количество CLL в крови составляло 55000 клеток/мкл. Учитывая объем крови 5,0 л, пациент UPN 02 имел 2,75x1011 клеток CLL в крови в день 0. Учитывая нормальную общую WBC у пациентов UPN 01 и 03, не вычисляли циркулирующую опухолевую массу заболевания у этих пациентов, что приведет к небольшому занижению общей опухолевой массы организма.
Вторичные лимфоидные ткани: Объем лимфаденопатии и спленомегалии количественно оценивали на продольных срезах КТ с использованием одобренного FDA программного обеспечения. Определяли объемы только для грудной, брюшной и тазовой полости. Массы от уровня тела позвонка Т1 до уровня бифуркации общей бедренной артерии измеряли у всех пациентов и в некоторых случаях также включали узлы в паховой области. Узлы в области головы/шеи и конечностей исключали из анализа и исключали из исходного количества клеток-мишеней CLL, что также приведет к небольшому занижению общей опухолевой массы организма. Пациенты UPN 01 и 03 имели длительные полные ремиссии более 6 месяцев, и, таким образом, для определения снижения опухолевой массы относительно исходного уровня использовали формулу (исходный объем - объем через 3 месяца); пациент UPN 02 имел стабильную аденопатию, и, таким образом, исходную опухолевую массу оценивали, вычитая референсный объем селезенки подходящих по возрасту здоровых мужчин (Harris et al., 2010, Eur J Radiol 75:e97-e101). Исходную опухолевую массу преобразовывали в клетки CLL с использованием подхода определения плотности клеток (плотность 1 кг/л, и 1 кг = 1012 клетки) или объемного подхода (клетки CLL имели диаметр 10 мкм или 600 фл, учитывая сферическую форму), и оба значения представлены на фиг. 10. Объемы опухолей во вторичных лимфоидных тканях у трех пациентов, вычисленные с использованием доступных срезов КТ, представлены ниже в табл.2.
- 31 035484
Таблица 2. Объемы опухолей
Пациент День исследования Объем LN (мм3) Объем селезенки (мм3) Общий объем (мм3)
URN 01 -37 239655 1619180 1858835
1 месяц 105005 1258575 1363580
3 месяца 65060 1176625 1241685
UP 02 -24 115990 1166800 1282790
1 месяц 111755 940960 1052715
UPN 03 -10 239160 435825 674985
1 месяц 111525 371200 482725
3 месяца 47245 299860 347105
КТ-сканирование на начальном уровне для пациента UPN 01 осуществляли через 8 дней после 2 циклов пентостатина/циклофосфамида/ритуксимаба, и оно не показало ответа на эту химиотерапевтическую схему лечения по сравнению с предыдущим КТ-сканированием. Пациенту проводили один цикл бендамустина перед инфузией CART-19, и, таким образом, изменение объема опухоли со дня -37 до дня +31 для UPN 01 не может исключать потенциального влияния бендамустина, а также CART-19. Аналогично, изменение объема опухоли для UPN 03 отражает комбинированный эффект 1 цикла пентостатина/циклофосфамида и CART-19.
Способ оценки эффективного соотношения Е:Т in vivo у пациентов
Соотношение Е:Т инфузированных CART-клеток и количества уничтоженных опухолевых клеток вычисляли с использованием количества опухолевых клеток, присутствующих на момент инъекции Тклеток с CAR, и количества инъецируемых Т-клеток с CAR (Carpenito et. al., 2009, Proc Natl Acad Sci USA 106:3360-3365). В случае настоящего изобретения использовали количество инъецируемых CART19+ Т-клеток, показанное на фиг. 10, поскольку невозможно с достаточной точностью определять абсолютное количество присутствующих in vivo CART-19+ Т-клеток. Доступные данные свидетельствуют о том, что экспансия клеток CART-19 в крови и костном мозге является устойчивой, как показано на фиг. 2 и фиг. 6. Однако невозможно определить миграцию клеток CART-19 в другие участки, такие как вторичные лимфоидные ткани, что создает значительную неопределенность в отношении общего количества клеток CART-19, доступных in vivo на момент максимального уменьшения опухоли. Для получения эффективного соотношения Е:Т использовали вычисленные значения из табл. 3.
Таблица 3. Вычисленные соотношения Е:Т CART-19, полученные in vivo
Пациент Опухолевая масса (исходный уровень и дельта) Инфузированные CART-19+ клетки In Vivo Е:Т
Исходный уровень в костном мозге Исходный уровень в крови Исходный уровень в узлах/ селезенке Общее изменение опухолевой массы CLL
UPN01 1,70Е+12 Нет данных 8,1Е+11 2.51Е+12 1.13Е+09 1:2200
UPN02 3,20Е+12 2.75Е+11 1.6Е+12 2.74Е+111 2 5.80Е+08 1:1000
UPN03 8.80Е+11 Нет данных 4.4Е4-11 1.32Е+12 1.42Е+07 1:93000
Диапазон 1000-93000
= среднее по способу определения плотности клеток и объемному способу = у пациента UPN 02 не наблюдали ответа в костном мозге, но наблюдали частичное снижение аденопатии (3,1Е+11 клеток) в опухолевых массах, измеряемых с помощью КТ в селезенке и лимфоузлах. Ответ в крови см. на фиг. 5А.
Обработка и замораживание образцов
Образцы (периферическую кровь, костный мозг) собирали в вакутейнеры с лиловыми крышками (K2EDTA) или красными крышками (без добавок) (Becton Dickinson) и доставляли в TCSL в течение 2 ч после забора. Образцы обрабатывали в течение 30 мин регистрации образцов согласно установленной лабораторной SOP. Мононуклеарные клетки периферической крови и костного мозга выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла с использованием фиколл-пака (GE Healthcare, 17-1440-03) и замораживали в RPMI (Gibco 11875-135), дополненной 4% сывороточным альбумином человека (Gemini Bio-Products, 800-120), 2% гидроксиэтилкрахмалом (Novaplus, NDC0409-7248-49) и 10% DMSO (Sigma, D2650) с использованием контейнеров для замораживания 5100 Cryo 1°; после 24-72 ч при температуре -80°С клетки переносили в жидкий азот для длительного хранения. Аферезные образцы
- 32 035484 получали из Hospital of the University of Pennsylvania Blood Bank и обрабатывали в CVPF с помощью очистки в градиенте фиколла и замораживали, как указано выше. Непосредственно после размораживания жизнеспособность при оценке составляла более 85%. Для выделения сыворотки образцам позволяли коагулировать в течение 1,5-2 ч при комнатной температуре; сыворотку выделяли посредством центрифугирования и замораживали аликвоты 100 мкл для однократного использования при температуре -80°С.
Клеточные линии
К562 (CML, СБ19-негативные) получали из АТСС (CCL-243), K.562/CD19 получали в качестве дара от Carmine Carpenito, и они являлись трансдуцированной лентивирусом К562 при 100% частоте для экспрессии молекулы CD19. NALM-6, CD19-позитивную не-Т, не-В ALL клеточную линию предшественников В-клеток (Hurwitz et al., 1979, Tnt J Cancer 23: 174-180) с подтвержденной экспрессией антигена CD19 получали в дар от Laurence Cooper. Указанные выше клеточные линии поддерживали в среде R10 (RPMI 1640 (Gibco, 11875)), дополненной 10% эмбриональной телячьей сывороткой (Hycione) и 1% PenStrep (Gibco, 1140-122). Мононуклеарные клетки периферической крови (ND365) от здорового донора получали аферезом в Human Immunology Core в University of Pennsylvania, обрабатывали и замораживали, как указано выше.
Выделение ДНК и анализ с помощью Q-ПЦР
Образцы цельной крови или костного мозга собирали в вакутейнеры BD с лиловыми крышками (K3EDTA) (Becton Dickinson). Геномную ДНК выделяли непосредственно из цельной крови с использованием наборов QIAamp DNA blood midi kit (Qiagen) и установленной лабораторной SOP, количественно оценивали с помощью спектрофотометра и хранили при температуре -80°С. Анализ образцов геномной ДНК с помощью Q-ПЦР осуществляли в совокупности с использованием 123-200 нг геномной ДНК/момент времени и технологии ABI Taqman и валидированного анализа для определения встроенной последовательности трансгена CD19 CAR. С использованием квалификационных исследований и заранее установленных диапазонов принятия вычисляли диапазоны параметра прохождение/непрохождение, включая угол наклона стандартной кривой и значения r2, способность точно количественно анализировать референсный образец (пик 1000 копий/плазмиду) и не определяли амплификацию в образце ДНК здорового донора. Праймер/зонды для трансгена CAR против CD19 описаны в (Milone et al., 2009, Mol Ther 17: 1453-1464). Для определения количества копий/единицу ДНК строили 8-точечную стандартную кривую, с использованием 106-5 копий лентивирусной плазмиды, содержащихся в 100 нг нетрансдуцированной контрольной геномной ДНК. Каждую точку данных (образцы, стандартная кривая, референсные образцы) оценивали в трех повторениях с указанием средних значений. В случае пациента UPN 01 все приведенные значения получали из положительного значения Ct в 3/3 повторений с % CV менее 0,46%. В случае пациента UPN 02, за исключением образца в день +177 (2/3 повторений положительные, высокий % CV), все приведенные значения получали из положительного значения Ct в 3/3 повторениях с % CV менее 0,72%. В случае пациента UPN 03, за исключением образца в день +1 (2/3 повторений положительные, 0,8% CV) и образца в день +3 (2/3 повторений положительные, 0,67% CV), все приведенные значения получали из положительного значения Ct в 3/3 повторений с % CV менее 1,56%. Нижний предел количественных колебаний (LLOQ) для анализа определяли по стандартной кривой при 2 копиях/микрограмм ДНК (10 копий/200 нг внесенной ДНК); средние значения ниже LLOQ (т.е. определяемые, но не поддающиеся количественному анализу) считали приблизительными. Параллельную реакцию амплификации для контроля качества встроенной ДНК осуществляли с использованием 12-20 нг внесенной геномной ДНК, комбинации праймера/зонда, специфичной для нетранскрибируемой геномной последовательности выше гена CDKN1A (GENEBANK: Z85996) (прямой праймер: GAAAGCTGACTGCCCCTATTTG; SEQ ID NO: 25, обратный праймер: GAGAGGAAGTGCTGGGAACAAT; SEQ ID NO: 26, зонд: VIC-CTC CCC AGT CTC TTT; SEQ ID NO: 27) и 8-точечной стандартной кривой, полученной с помощью разведения контрольной геномной ДНК; с помощью этих реакций амплификации получали поправочный коэффициент (CF) (нг определенной ДНК/нг внесенной ДНК).
Копии трансгена/микрограмм ДНК вычисляли по формуле:
копии, вычисленные из стандартной кривой для CDW/внесенную ДНК (нг) χ CF χ 1000 нг.
Точность этого анализа определяли по способности количественно анализировать мечение инфузированного клеточного продукта с помощью Q-PCR по формуле: Среднее мечение = определяемые копии/внесенную ДНК χ 6,3 пг ДНК/соответствующие соматические клетки χ CF по сравнению трансгенпозитивностью, определяемой с помощью проточной цитометрии с использованием CAR-специфичных реагентов для определения. С помощью этого слепого определения получали 22,68% мечение для инфузируемого продукта UPN 01 (22,6% по данным проточной цитометрии), 32,33% мечение для инфузируемого продукта UPN 02 (23% по данным проточной цитометрии) и 4,3% мечение для инфузируемого продукта UPN 03 (4,7% мечение по данным проточной цитометрии).
Анализы цитокинов
Количественный анализ растворимых цитокинов осуществляли с использованием технологии анализа Luminex bead и наборов, приобретенных в Life technologies (Invitrogen). Анализы осуществляли по инструкциям производителя с использованием 8-точечной стандартной кривой, построенной с использо- 33 035484 ванием серии 3-кратных разведений. Каждую точку стандартной кривой и образец оценивали в двух повторениях при разведении 1:3; вычисленный % CV для измерений в двух повторениях составлял менее 15%. Данные получали с использованием Bioplex 200 и анализировали с помощью программного обеспечения Bioplex Manager версии 5.0 с использованием анализа 5-параметрической логистической регрессией. Диапазоны количественного анализа стандартной кривой определяли как диапазон 80-120% (наблюдаемое/ожидаемое значение). Диапазоны количественного анализа отдельных аналитов представлены на легендах фигур.
Клеточный анализ для определения функции CAR
Клетки оценивали по функциональности после размораживания и отстаивания в течение ночи в ТСМ посредством измерения дегрануляции с помощью CD107 в ответ на клетки-мишени. Анализы дегрануляции осуществляли с использованием 1/106 РВМС и 0.25/106 клеток-мишеней в конечном объеме 500 мкл в 48-луночных планшетах в течение 2 ч при 37°С в присутствие CD49d (Becton Dickinson), антитела против CD28, монензина (eBioscience) и антитела против CD107a-FITC (eBiosciences), по-существу, как описано в (Berts et. al., 2003, J Immunol Methods 281:6578).
Антитела-реагенты
Для этих исследований использовали следующие антитела: MDA-CAR, антитело мыши против CD19CAR, конъюгированное с Alexa 647, представляющее собой даром от Drs. Bipulendu Jena и Laurence Cooper (MD Anderson Cancer Center). Для мультипараметрического иммунофенотипирования и функциональных анализов: антитела против CD3-A700, против CD8-PE-Cy7, против PD-1-FITC, против CD25AF488, против CD28-PercP-Cy5.5, против CD57-eF450, против CD27-APC-eF780, против CD17-APCeF780, против CD45RA-eF605NC, CD107a-FITC (все от e-Bioscience), против CD4-PE-Texas Red и Live/Dead Aqua (от Life Technologies) и против CD 14-V500, против CD 16-V500 (от Becton Dickinson). Для общего иммунофенотипирования: CD3-PE, CD M-APC, CD14-PE-Су7, CD16-FITC, CD16PE-Cy7, CD19-PE-Cy7, CD20-PE, все от Becton Dickinson.
Мультипараметрическая проточная цитометрия
Клетки оценивали с помощью проточной цитометрии как свежими после обработки фиколл-паком или, если их замораживали, после отстаивания в течение ночи при плотности 2/106 клеток/мл в Тклеточной среде (ТСМ) (X-vivo 15 (Lonza, 04-418Q), дополненной 5% АВ сыворотки человека (GemCall, 100-512), 1% Hepes (Gibco, 15630-080), 1% Pen-Strep (Gibco, 15140-122), 1% Glutamax (Gibco, 35050-061) и 0,2% N-ацетилцистеином (American Regent, NDC05 17-7610-03). Мультипараметрическое иммунофенотипирование осуществляли для клеток общим количеством 4/106 клеток/условие с использованием FMO-красителей, как описано в тексте. Клетки окрашивали при плотности 1/106 клеток/100 мкл PBS в течение 30 минут на льду с использованием концентраций антитела и реагента, рекомендованных производителем, промывали, ресуспендировали в 0,5% параформальдегиде и определяли с использованием модифицированного LSRII (BD Immunocytometry systems), оборудованного синим (488 нм), фиолетовым (405 нм), зеленым (532) и красным (633 нм) лазерами и соответствующими наборами фильтров для определения и разделения указанных выше комбинаций антител. Для каждого красителя определяли минимум 100000 CD3+ клеток. Для функциональных анализов клетки промывали, окрашивали на поверхностные маркеры, ресуспендировали в 0,5% параформальдегиде и определяли, как указано выше; для каждого условия окрашивания собирали минимум 50000 CD3+ клеток. Значения компенсации устанавливали с использованием красителей для отдельных антител и бус BD для анализа компенсации (Becton Dickinson), и вычисляли и автоматически использовали с помощью инструмента. Данные анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo (версии 8.8.4, Treestar). Для общего иммунофенотипирования клетки определяли с использованием цитометра Accuri C6, оборудованного синим (488) и красным (633 нм) лазером. Значения компенсации устанавливали с использованием красителей отдельных антител и бус BD для анализа компенсации (Becton Dickinson) и вычисляли вручную. Данные анализировали с использованием аналитического пакета программ C-Flow (версии 1.0.2 64.9, цитометры Accuri).
Анамнез пациентов и ответ на терапию
Обобщенные результаты клинического лечения представлены на фиг. 10. У пациента UPN 01 впервые диагностировали В-клеточного CLL стадии II в возрасте 55 лет. У пациента не наблюдали симптомов, и его наблюдали в течение приблизительно 1-1/2 лет до возникновения необходимости терапии прогрессирующего лимфоцитоза, тромбоцитопении, аденопатии и спленомегалии. После 4 циклов флударабина у пациента наблюдали полную нормализацию формулы крови и полный ответ по результатам КТсканирования. Отмечали прогрессирование в течение 5 месяцев с бессимптомным лимфоцитозом, тромбоцитопенией и повышенной аденопатией. У пациента не наблюдали симптомов в течение приблизительно 3 лет, и затем ему понадобилось лечение ритуксимабом и флударабином по поводу прогрессирующего лейкоцитоза, анемии и тромбоцитопении. Пациента лечили 4 циклами ритуксимаба с флударабином с частичным улучшением формулы крови. У пациента снова наблюдали прогрессирование в течение одного года, потребовавшее терапии и проявившееся лейкоцитозом (WBC 150000/мкл) и тромбоцитопенией (тромбоциты 30000/мкл), и его лечили алемтузумабом с нормализацией формулы крови. Отмечали прогрессирование в течение 13 месяцев. Затем пациенту проводили монотерапию ритуксимабом без
- 34 035484 значимого ответа, и затем ритуксимабом, циклофосфамидом, винкристином и преднизоном (R-CVP) в течение 2 циклов с минимальным ответом, а затем леналидомидом. По причине токсичности прерывали терапию леналидомидом. Пациенту проводили 2 цикла пентостатина, циклофосфамида и ритуксимаба с минимальным ответом.
Позднее пациенту проводили лечение бендамустином в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, за 4 дня до инфузии клеток CART-19. Перед терапией, WBC составляли 14200/мкл, гемоглобин - 11,4 г/дл, количество тромбоцитов - 78000/мкл, и ALC составляло 8000/мкл. КТ-сканирование показало диффузную аденопатию и интенсивную инфильтрацию костного мозга CLL (67% клеток). Пациенту вводили 1,6*107 клеток CART-19/кг (общее количество клеток CART-19 1,13*109, оцениваемое с помощью FACS). Не наблюдали токсичности при инфузии. У пациента развивалась нейтропения приблизительно через 10 дней после бендамустина и через 6 дней после инфузии клеток CART-19, и через 10 дней после первой инфузии CART-19 у пациента развивалась лихорадка, озноб и преходящая гипотензия. В то же время, рентген и КТ-сканирование грудной клетки показали пневмонию верхней левой доли, которую лечили антибиотиками. Лихорадка сохранялась в течение приблизительно 2 недель и разрешалась при восстановлении нейтрофилов. У пациента не наблюдали дальнейших инфекций или системных симптомов.
Пациент достигал быстрого и полного ответа, как показано на фиг. 5. Между 1 и 6 месяцем после инфузии с помощью проточной цитометрии не определяли циркулирующих клеток CLL в крови. По данным морфологического анализа и тестирования с помощью проточной цитометрии наблюдали длительное отсутствие лимфоцитарного инфильтрата в костном мозге через 1, 3 и 6 месяцев после инфузии клеток CART-19. КТ-сканирование через 1 и 3 месяца после инфузии показали полное разрешение аномальной аденопатии. У пациента сохранялась лейкопения (WBC 1000-3900/мкл), тромбоцитопения (тромбоциты ~100000/мкл) и умеренная гипогаммаглобулинемия (IgG 525 мг/дл, в норме 650-2000 мг/дл), но не наблюдали инфекционных осложнений.
Пациента UPN 02 лечили с использованием клеток CART-19 в возрасте 77 лет. В анамнезе пациент имел ишемическую болезнь сердца, и впервые диагностировали CLL в 2000 году в возрасте 68 лет, когда у пациента развивались утомляемость и лейкоцитоз. Пациент являлся относительно стабильным в течение 4 лет, когда у него развивался прогрессирующий лейкоцитоз (195000/мкл), анемия и тромбоцитопения, требующие терапии. В это время генетическое тестирование показало, что клетки CLL имеют делецию в хромосомном локусе 17р. По причине прогрессирующего заболевания пациенту проводили 12недельный курс терапии алемтузумабом с частичным ответом и улучшением формулы крови. В течение полутора лет пациент имел прогрессирующий лейкоцитоз, анемию, тромбоцитопению и спленомегалию. С помощью кариотипического анализа подтверждали наличие делеции хромосомного локуса 17р, теперь с делецией хромосомного локуса 13q. Пациента повторно лечили алемтузумабом в течение 18 недель с улучшением лейкоцитоза и стабилизацией анемии и спленомегалии. У пациента наблюдали признаки прогрессирующего лейкоцитоза, анемии и тромбоцитопении в течение одного года. Лечение включало 2 цикла бендамустина с ритуксимабом, приведшие к стабильному заболеванию, но без значимого улучшения, как показано на фиг. 5А.
Пациенту проводили лечение только бендамустином в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, перед инфузии клеток CART-19. Пациенту вводили 4,3*106 клеток CART-19/кг (общее количество клеток 4,1*108) в 3 отдельных инфузиях, осложненных транзиторной лихорадкой до 102°F в течение 24 ч. В 11 день после первой инфузии пациенту проводили повторную инфузию 4,1*108 (4,3*106/кг) клеток CART-19, и эта инфузия осложнялась лихорадкой, ознобом и одышкой без гипоксии, что потребовало госпитализации на 24 ч. Не наблюдали признаков ишемии сердца, и симптомы разрешились. В день 15 после первой инфузии клеток CART-19 и в день 4 после повторной инфузии клеток CART-19 пациент поступил в больницу с высокой температурой (до 40°С) и ознобом. С помощью обширного тестирования с использованием посевов крови и мочи и CXR не смогли идентифицировать источник инфекции. Пациент жаловался на одышку, но не имел гипоксии. Электрокардиограмма показала выраженный гипокинез. Фракция выброса составляла 20%. Пациенту вводили преднизон в дозе 1 мг на килограмм в течение одного дня и 0,3 мг на килограмм в течение приблизительно одной недели. Это приводило к быстрому разрешению лихорадки и дисфункции сердца.
Одновременно с развитием высокой температуры у пациента наблюдали резкое снижение количества лимфоцитов в периферической крови, как показано на фиг. 5А. Хотя у пациента наблюдали нормализацию лейкоцитарной формулы, у него сохранялись циркулирующие клетки CLL, стабильная умеренная анемия и тромбоцитопения. В костном мозге обнаруживали сохраняющуюся интенсивную инфильтрацию CLL через месяц после терапии, несмотря на значительную редукцию клеток в периферической крови, и КТ-сканирование показало частичное снижение аденопатии и спленомегалии. Через пять месяцев после инфузии клеток CART-19 у пациента развивался прогрессирующий лимфоцитоз. Через девять месяцев после инфузии у пациента наблюдали лимфоцитоз (16500/мкл) со стабильной умеренной анемией и тромбоцитопенией и со стабильной аденопатией. У пациента не наблюдали симптомов и не проводили дальнейшую терапию.
- 35 035484
У пациента UPN 03 диагностировали бессимптомный CLL стадии I в возрасте 50 лет и затем наблюдали его в течение 6 лет. Позднее у пациента наблюдали прогрессирующий лейкоцитоз (лейкоцитарная формула 92000/мкл) и прогрессирующую аденопатию, требующие терапии. Пациенту проводили 2 цикла терапии ритуксимабом с флударабином, приведшие к нормализации формулы крови и значимому улучшению, хотя и не к полному разрешению аденопатии. У пациента был период без прогрессирования приблизительно 3 года, а затем в течение следующих 6 месяцев наблюдали быстро прогрессирующий лейкоцитоз (WBC 165000/мкл) и прогрессирующую аденопатию, требующую терапии. Пациенту проводили один цикл терапии флударабином и 3 цикла терапии ритуксимабом с флударабином с нормализацией формулы крови и разрешением пальпируемой аденопатии. У пациента был период без прогрессирования приблизительно 20 месяцев, пока у него снова не начал быстро развиваться прогрессирующий лейкоцитоз и аденопатия. В это время костный мозг подвергался интенсивной инфильтрации клетками CLL, и кариотипический анализ показал наличие клеток, содержащих делецию в хромосомном локусе 17р, и анализ FISH показал наличие делеции ТР53 в 170/200 клеток. Пациенту проводили один цикл терапии ритуксимабом с бендамустином, а затем 4 цикла терапии только бендамустином (по причине тяжелой аллергической реакции на ритуксимаб). У пациента наблюдали начальную нормализацию формулы крови, но вскоре после прекращения терапии наблюдали прогрессирующий лейкоцитоз и аденопатию.
У пациента UPN 03 аферезом собирали аутологичные Т-клетки и осуществляли криоконсервацию. Затем пациента лечили алемтузумабом в течение 11 недель с исключительным гематологическим ответом. Наблюдали улучшение, хотя и не полное разрешение аденопатии. У пациента наблюдали активное, но стабильное заболевание в течение следующих 6 месяцев. Позднее пациенту проводили лечение пентостатином и циклофосфамидом в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, перед инфузией клеток CART-19.
Через три для после химиотерапии, но перед инфузией клеток, костный мозг являлся гиперпластичным (60%) с приблизительно 40% поражением CLL. По причине производственных ограничений, свойственных аферезным образцам от пациентов с CLL, как показано в табл. 3 и (Bonyhadi et al., 2005, J Immunol 174:2366-2375), пациентам проводили инфузии с использованием в общей сложности 1,46*105 CART-19+ клеток на кг (общее количество CART-19+ клеток 1,42*107) в течение 3 дней. Не наблюдали инфузионной токсичности. Через четырнадцать дней после первой инфузии у пациента развивался озноб, лихорадка до 39°С, тошнота и диарея, которые лечили симптоматически. У пациента не наблюдали респираторных или сердечных симптомов. Ко дню 22 после инфузии диагностировали синдром распада опухоли, проявлявшийся повышением LDH, мочевой кислоты и осложненный почечной недостаточностью. Пациента госпитализировали и лечили жидкостной реанимацией и расбуриказой с быстрой нормализацией уровня мочевой кислоты и функции почек. Осуществляли подробный клинический анализ CXR, посевов крови, мочи и кала, и все они являлись негативными или нормальными.
В течение 1 месяца инфузии CART-19 у пациента наблюдали выведение циркулирующих клеток CLL из крови и костного мозга по данным морфологического исследования, проточной цитометрии, цитогенетического анализа и анализа FISH, и КТ-сканирование показало разрешение аномальной аденопатии (фиг. 5С). Ремиссия у пациента являлась длительной - более 8 месяцев от начальной инфузии клеток CART-19.
Далее описывают результаты экспериментов.
Клинический протокол
Три пациента с резистентным к химиотерапии CLL на поздней стадии включали в пилотное клиническое исследование, как показано на фиг. 1. Всех пациентов предварительно интенсивно лечили с использованием различных химиотерапевтических и биологических схем лечения, как показано на фиг. 10. Двое из пациентов имели р53-дефицитный CLL, делецию, учитывая которую, можно прогнозировать плохой ответ на общепринятую терапию и быстрое прогрессирование (Dohner et al, 1995, Blood, 851580189). Каждый из пациентов имел большую опухолевую массу после предварительной химиотерапии, включая интенсивную инфильтрацию костного мозга (от 40 до 95%) и лимфаденопатию; также у пациента UPN 02 наблюдали значительный периферический лимфоцитоз. Т-клетки CART-19 получали, как показано на фиг. 1В, и подробности получения клеток и описание продукта для каждого пациента представлены в табл.4. Всех пациентов предварительно лечили в течение 1-4 дней перед инфузиями Т-клеток CART-19 с использованием химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов. Использовали дробный режим инфузии клеток для пробного тестирования CAR, включающего костимуляторный сигнальный домен 4-1ВВ, как показано на фиг. 1 А.
- 36 035484
Таблица 4. Критерии выпуска продуктов афереза и продукта CART-19
Анализ Описание UPN 01 UPN 02 UPN 03
Продукт афереза
Проточная цитометрия для CD3+ или CD45 + Нет данных 4,46% 2,29% 2,67%
Продукт CART-19
Общее количество инфузируемых клеток -2-5^109 5*10’ 1,275x10’ l,275«10s (2,55x10’ всего) 3x10’
Жизнеспособность клеток >=70% 96,2% 95, 3 (90,5)1 90,3
% CD3+ клеток >=80% 88,9% 98, 8 98,9
Количество оставшихся бусин <=100 бус/3*106 клеток 3, 95 1 4
Эндотоксин <=3,5 ЭЕ/мл <0,5 ЭЕ/мл <0,5 ЭЕ/мл <0,5 ЭЕ/мл
Микоплазма Негативный Негативный Негативный Негативный
Стерильность (Bactec) Отсутствие роста Отсутствие роста Отсутствие роста Отсутствие роста
Культура грибов Отсутствие роста Отсутствие роста Отсутствие роста Отсутствие роста
BSA ELISA <=1 мкг/мл <0,5 нг/мл <0,5 нг/мл <0,5 нг/мл
Репликационно-компетентный лентивирус (RCL) Неопределяемый RCL Неопределяемый Недостаточ- ный2 Недостаточ- ный2
Эффективность трансдукции (экспрессия ScFv) >=20% 22,6% 23% 4,74%'
Последовательность ДНК вектора (CART19 PGR) 0,2-3 копий/ клетку 0, 153 4 * 6 0,275 0,101
= Доза #2.
= Результат анализа в день 12 ниже LOQ, снижающийся относительно более раннего при экспансии, соответствовал переносу плазмидой ДНК из векторного поколения.
Передано в FDA в качестве корректировки информации.
= высвобождение продукта на основе окрашивания поверхности посредством FACS.
= Исключение из лечения при условии критерия исключения внешними DSMC и IRB.
Экспансия и поддержание клеток CART-19 in vivo и их миграция в костный мозг
CAR+ Т-клетки экспансировали с использованием бус CD3/CD28, и считали, что экспрессия сигнального домена 4-1ВВ является улучшением CAR без 4-1ВВ. Разрабатывали анализ на основе Q-ПЦР, делающий возможным количественное отслеживание клеток CART-19 в крови и костном мозге. Все пациенты демонстрировали экспансию и поддержание клеток CART-19 в крови в течение по меньшей мере месяцев, как показано на фиг. 2А и 2С. В частности, пациенты UPN 01 и UPN 03 демонстрировали 1000-10000-кратную экспансию CAR+ Т-клеток в крови в течение первого месяца после инфузии. Пиковые уровни экспансии совпадали с началом постинфузионных клинических симптомов у пациента UPN 01 (день 15) и пациента UPN 03 (день 23). Кроме того, после начальной задержки, которую можно моде- 37 035484 лировать с использованием кинетики первого порядка, уровни Т-клеток CART-19 стабилизировались у всех 3 пациентов в дни 90-180 после инфузии. В немалой степени, у всех пациентов Т-клетки CART-19 также мигрировали в костный мозг, хотя и на уровнях в 5-10 раз ниже наблюдаемых в крови, как показано на фигурах 2D-2F. У пациентов UPN 01 и 03 наблюдали прямо пропорциональную задержку в костном мозге с потерей T1/2 -35 дней.
Индукция специфического иммунного ответа в крови и компартментах костного мозга после инфузии клеток CART-19
Собирали образцы сыворотки от всех пациентов и анализировали серию образцов для количественного определения уровней цитокинов, оценивая панель цитокинов, хемокинов и других растворимых факторов для оценки потенциальной токсичности и получения доказательств функционирования клеток CART-19, как показано на фиг. 3. Из тридцати тестируемых аналитов одиннадцать имели 3-кратное или большее изменение по сравнению с исходным уровнем, включая 4 цитокина (IL-6, IFN γ, IL-8 и IL-10), 5 хемокинов (MIP-Icl ΜΙΡ-1β, MCP-1, CXCL9, CXCL10) и растворимые рецепторы IL-IRa и IL-2Ra. Из них интерферон γ имел наибольшее относительное изменение по сравнению с исходным уровнем. Примечательно, что время пика повышения уровня цитокина у UPN 01 и UPN 03 коррелировало во времени с описываемыми ранее клиническими симптомами и пиковыми уровнями клеток CART-19 в крови каждого пациента. У пациента UPN 02 отмечали только умеренные измерения, возможно, в результате лечения кортикостероидами, вводимыми этому пациенту. В сыворотке пациентов не определяли повышение уровня растворимого рецептора IL-2, даже если одной из доклинических причин разработки CAR+ Тклеток с сигнальными доменами 4-1ВВ являлась сниженная предрасположенность к запуску секреции IL-2 по сравнению с сигнальными доменами CD28 (Milone et al, 2009, Mol Ther. 17: 1453-1464). Это может иметь отношение к длительной клинической активности, т.к., как показали предыдущие исследования, CAR+ Т-клетки потенциально супрессированы регуляторными Т-клетками (Lee et al., 2 011, Cancer Res 71:2871-2881), клетками, которые можно стимулировать CAR, секретирующими значительные количества IL-2, или введением экзогенного IL-2 после инфузии. В конечном итоге, наблюдали значительную индукцию секреции цитокинов в супернатантах аспиратов костного мозга UPN 03, как показано на фиг. 3D, что также совпадало с развитием синдрома распада опухоли и полной ремиссией.
Длительная экспрессия и появление популяции клеток памяти CART-19 в крови
Центральным вопросом CAR-опосредованной иммунотерапии злокачественных новообразований является следующий: повышают ли оптимизированное получение клеток и костимулирующие домены поддержание генетически модифицированных Т-клеток и делают ли возможным установление CAR+ Тклеток памяти у пациентов. Предыдущие исследования не показали устойчивой экспансии, длительного поддержания и/или экспрессии CAR на Т-клетках после инфузии (Kershaw et al., 2006, Clin Cancer Res 12:6106-6115; Lamers et al., 2006, J Clin Oncol 24:e20-e22; Till et al., 2008, Blood, 112, 2261-2271; Savoldo et al., 2011, J Clin Invest doi: 10.1172/JCI46110). Анализ образцов крови и костного мозга с помощью проточной цитометрии в день 169 после инфузии позволил определить наличие экспрессирующих CAR19 клеток у UPN 03 (фиг. 4А и 4В) и отсутствие В-клеток, как показано на фиг. 4А. В частности, анализ с помощью Q-ПЦР показал, что все три пациента имели поддерживающиеся CAR+ клетки через 4 месяца и больше, как показано на фиг. 2 и 6. По данным проточной цитометрии частота CAR+ клеток in vivo близко соответствовала значениям, полученным при ПЦР-анализе для трансгена CART-19. Важно, что у пациента UPN 03 только CD3+ клетки экспрессировали CAR19, т.к. CAR 19+ клетки являлись неопределяемыми в CD16- или CD14-позитивных субпопуляциях, как показано на фиг. 4А. Экспрессию CAR также определяли на поверхности 4,2% Т-клеток в крови пациента UPN 01 в день 71 после инфузии, как показано на фиг. 7.
Затем для осуществления подробных исследований для дальнейшего описания экспрессии, фенотипа и функции клеток CART-19 у UPN 0 3 использовали многоцветную проточную цитометрию с использованием идиотипического антитела против CAR (MDA-647) и стратегии гейтирования, представленной на фиг. 8. Наблюдали значимые различия экспрессии маркеров памяти и активации в CD8+ и CD4+клетки на основе экспрессии CAR19. В день 56 CART-19 CD8+ клетки демонстрировали, главным образом, эффекторный фенотип памяти (CCR7-CD27-CD28-), соответствующий длительному и сильному воздействию антигена, как показано на фиг. 4С. Наоборот, CAR-негативные CD8+ клетки состояли из смесей эффекторных клеток и клеток центральной памяти с экспрессией CCR7 в субпопуляции клеток и значительными количествами CD27+/CD28-H CD27+/CD28+ фракций. В то время как CART-19 и CARнегативные популяции клеток значительно экспрессировали CD57, эта молекула равномерно коэкспрессировалась с PD-1 в клетках CART-19, что является возможным отражением обширной репликативной истории этих клеток. В отличие от популяции CAR-негативных клеток, во всей популяции CART-19 CD8+ клеток нет экспрессии CD25 и CD127. В то время как ко дню 169 фенотип популяции CARнегативных клеток остается аналогичным образцу в день 56, популяция CART-19 развивалась в популяцию, содержащую минорную субпопуляцию со свойствами клеток центральной памяти, в частности, экспрессией CCR7, более высокими уровнями CD27 и CD28, а также CAR+ клетки, являвшиеся PD-1негативными, CD57-негативными и CD127-позитивными.
- 38 035484
В компартменте CD4+ в день 56 клетки CART-19 отличались равномерным отсутствием CCR7 и преобладанием CD27+/CD28+/PD-1+ клеток, распределенных по CD57+ и -компартментам, и значительным отсутствием экспрессии CD25 и CD127, как показано на фиг. 4В. Наоборот, в этот момент времени CAR-негативные клетки являлись гетерогенными по экспрессии CCR7, CD27 и PD-1, экспрессировали CD127 и также содержали значительную популяцию CD25+/CD127-клеток (потенциальных регуляторных Т-клеток). В то время как экспрессия CD28 ко дню 169 оставалась равномерно позитивной во всех CAR+CD4+-клетках, фракция CART-19 CD4+-клеток развивалась в сторону фенотипа центральной памяти с экспрессией CCR7, более высокой процентной долей CD27-клеток, наличием PD-1-негативной субпопуляции и приобретением экспрессии CD127. CAR-негативные клетки оставались в достаточной степени соответствующими эквивалентным им клеткам в день 56, за исключением снижения экспрессии CD27 и снижения процентной доли CD25+/CD127-клеток.
Клетки CART-19 могут сохранять эффекторную функцию после 6 месяцев в крови. В дополнение к кратковременному поддержанию и недостаточной пролиферации in vivo, ограничением предыдущих исследований с использованием CAR+ Т-клеток является быстрая потеря функциональной активности инфузированных Т-клеток in vivo. Высокий уровень поддержания клеток CART-19 и поверхностная экспрессия молекулы CAR19 у пациентов UPN 01 и 03 предоставляли возможность непосредственно тестировать анти-CD19-специфичные эффекторные функции в клетках, восстановленных из подвергнутых криоконсервации образцов периферической крови. РВМС от пациента UPN 03 культивировали с клетками-мишенями, являвшимися позитивными или негативными по экспрессии CD19 (фиг. 4d). Сильную CD19-специфичную эффекторную функцию Т-клеток CART-19 демонстрировали с помощью специфической дегрануляции в ответ на CD19-позитивные, но не CD19-негативные клетки-мишени, что оценивали по поверхностной экспрессии CD107a. В частности, воздействие CD19-позитивных мишеней на популяцию клеток CART-19 индуцировало быструю интернализацию поверхностного CAR19, как показано на фиг. 8 для поверхностной экспрессии CAR19 в тех же эффекторных клетках при стандартном окрашивании при проточной цитометрии. Наличие костимуляторных молекул на клетках-мишенях не являлось необходимым для запуска дегрануляции клеток CART-19, т.к. линия NALM-6 не экспрессирует CD80 или CD86 (Brentjens et al., 2007, Clin Cancer Res 1: 5426-5435). Эффекторная функция являлась очевидной в день 56 после инфузии и сохранялась ко дню 19. Выраженную эффекторную функцию CAR+ и CAR- Т-клеток также можно продемонстрировать с помощью фармакологической стимуляции.
Клиническая активность клеток CART-19
У любого пациента в течение четырех дней после инфузии не наблюдали значимую токсичность, иную, чем транзиторные лихорадочные реакции. Однако затем у всех пациентов развивалась значительная клиническая и лабораторная токсичность между днем 7 и днем 21 после первой инфузии. Эта токсичность являлась кратковременной и обратимой. Из трех пациентов, подвергнутых лечению к настоящему времени, согласно стандартным критериям 2 представляли собой CR и 1 представлял собой PR через >6 месяцев после инфузии CART-19 (Hallek et al., 2008, Blood 111: 5446). Подробности анамнеза и ответа на терапию для каждого пациента представлены на фиг. 10.
Вкратце у пациента UPN 01 развивался фебрильный синдром с ознобом и преходящей гипотензией, начиная со дня 10 после инфузии. Лихорадка сохранялась в течение приблизительно 2 недель и разрешалась; у пациента не наблюдали дальнейших системных симптомов. Пациент достигал быстрого и полного ответа, как показано на фиг. 5. Между 1 и 6 месяцем после инфузии с помощью проточной цитометрии не определяли циркулирующих клеток CLL в крови. В костном мозге через 1, 3 и 6 месяцев после инфузии клеток CART-19 наблюдали длительное отсутствие лимфоцитарной инфильтрации по данным морфологического исследования и проточной цитометрии, как показано на фиг. 5В. Через 1 и 3 месяца после инфузии при КТ-сканировании наблюдали разрешение аденопатии, как показано на фиг. 5С. Полная ремиссия являлась длительной в течение 10+ месяцев на момент публикации этой заявки.
Пациента UPN 02 лечили 2 циклами терапии бендамустином с ритуксимабом, что приводило к стабилизации заболевания, как показано на фиг. 5А. Пациенту вводили третью дозу бендамустина в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, перед инфузией Т-клеток CART19. У пациента развивалась лихорадка до 40°С, озноб и одышка, потребовавшие 24-часовой госпитализации в день 11 после первой инфузии и в день второй повторной инфузии клеток CART-19. Лихорадка и системные симптомы сохранялись и в 15 день, у пациента наблюдали временную дисфункцию сердца; все симптомы разрешались после терапии кортикостероидами, начатой в 18 день.
После инфузии клеток CART-19 и соответственно с началом повышения температуры у пациента наблюдали быстрое выведение р53-дефицитных клеток CLL из периферической крови, как показано на фиг. 5А, и частичное снижение аденопатии, через один месяц после терапии в костном мозге наблюдали сохраняющуюся интенсивную инфильтрацию клетками CLL, несмотря на значительную редукцию клеток в периферической крови. Пациент оставался бессимптомным.
Пациенту UPN 03 проводили лечение пентостатином и циклофосфамидом в качестве химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов, перед инфузией клеток CART-19. Через три дня после химиотерапии, но перед инфузией клеток, костный мозг являлся гиперпластичным (60%) с
- 39 035484 приблизительно 50% поражением CLL. Пациенту вводили низкую дозу клеток CART-19 (1,5*105 CAR+ Т-клеток/кг, разделенные на 3 дня). Снова не наблюдали острой инфузионной токсичности. Однако через 14 дней после первой инфузии у пациента начал развиваться озноб, лихорадка, тошнота и диарея. Ко дню 22 после инфузии диагностировали синдром распада опухоли, требующий госпитализации. У пациента наблюдали разрешение системных симптомов и в течение 1 месяца инфузии CART-19 у пациента наблюдали выведение циркулирующих клеток CLL из крови и костного мозга по данным морфологического исследования, проточной цитометрии, цитогенетического анализа и анализа FISH. При КТсканировании наблюдали разрешение аномальной аденопатии, как показано на фиг. 5В и 5С. Полная ремиссия длилась более 8 месяцев после начальной инфузии клеток CART-19.
Обсуждение соотношения in vivo эффекторных клеток CART-19 и клеток-мишеней CLL
Доклинические исследования показали, что можно удалять большие опухоли и что с помощью инфузии 2,2*107 клеток с CAR можно осуществлять устранение опухолей, содержащих 1*109 клеток, для соотношения Е:Т in vivo 1:42 у гуманизированных мышей (Carpenito et al., 2009, Proc Natl Acad Sci USA 106: 3360-3365), хотя в этих вычислениях не принимали во внимание экспансию Т-клеток после инъекции. В оценке опухолевой массы CLL с течением времени допускали вычисление уменьшения опухоли и получали приблизительные соотношения CART-19 Е:Т in vivo у трех индивидуумов на основании количества инфузированных CAR+ Т-клеток. Общие опухолевые массы вычисляли измерением опухолевой массы CLL в костном мозге, крови и вторичных лимфоидных тканях. Опухолевые массы на начальном уровне, как показано на фиг. 10, свидетельствуют о том, что каждый пациент имел порядка 1012 клеток CLL (т.е. опухолевая масса 1 килограмм) до инфузии CART-19. Пациент UPN 03 на начальном уровне имел приблизительную опухолевую массу 8,8*1011 клеток CLL в костном мозге в день -1 (т.е. после химиотерапии и перед инфузией CART-19) и измеряемую опухолевую массу во вторичных лимфоидных тканях 3,3-5,5*1011 клеток CLL в зависимости от способа волюметрического анализа срезов КТ. С учетом того, что UPN 03 инфузировали только l,4*107 клеток CART-19, использовали оценку исходной общей опухолевой массы (1,3*1012 клеток CLL) и того, что не определяли клетки CLL после лечения, достигали исключительного соотношения Е:Т 1:93000. С помощью аналогичных вычислений вычисляли эффективное соотношение Е:Т in vivo 1:2200 и 1:1000 для UPN 01 и UPN 02 (как показано в табл.3). В конечном итоге, вероятно, что в мощных противолейкозных эффектах, опосредуемых клетками CART19, задействовано последовательное уничтожение Т-клетками CART-19 в комбинации с экспансией CART-19 in vivo в >1000-раз.
Т-клетки, экспрессирующие химерные рецепторы, служат основой для иммунологической памяти и выраженных противоопухолевых эффектов у пациентов с лейкозом на поздней стадии
Ограниченная экспрессия in vivo и эффекторная функция CAR являются основными ограничениями в пробных исследованиях CAR первого поколения (Kershaw et al, 2006, Clin Cancer Res 12:6106-6115; Lamers et al., 2006, J Clin Oncol 24:e20-e22; Till et al., 2008, Blood, 112, 2261-2271; Park et al., 2007, Mol Ther 15:825833; Pule et al., 2008, Nat Med 14: 1264-1270). На основе доклинического моделирования, демонстрирующего повышенное поддержание CAR, содержащего сигнальный модуль 4-1ВВ (Milone et al., 2009, Mol Ther. 17: 1453-1464; Carpenito et al., 2009, Proc Natl Acad Sci USA 106: 3360-3365), осуществляли дизайн экспериментов для разработки второго поколения CAR, сконструированных с использованием технологии лентивирусных векторов. Обнаруживали, что это второе поколение CAR является безопасным в условиях хронической ВИЧ-инфекции (Levine et al., 2006, Proc Natl Acad Sci USA 103: 1737217377). Настоящие результаты показали, что, когда это второе поколение CAR экспрессируется в Тклетках, и их культивируют в условиях, подобранных для увеличения энграфтмента Т-клеток центральной памяти (Rapoport et al., 2005, Nat Med 11:1230-1237; Bondanza et al., 2006, Blood 107: 1828-1836), наблюдали улучшенную экспансию Т-клеток с CAR после инфузии по сравнению с предыдущими данными. Клетки CART-19 являлись основой для CD19-специфичной клеточной памяти и уничтожали опухолевые клетки в соотношениях Е:Т in vivo, которых ранее не достигали.
CART-19 является первым исследуемым CAR, включающим сигнальный домен 4-1ВВ, и первым, для которого используют технологию лентивирусных векторов. Настоящие результаты демонстрируют эффективную миграцию клеток с CAR в участки опухоли с появлением de facto инфильтрирующих опухоль лимфоцитов, проявляющих CD19-специфичность. Выраженная экспансия in vivo позволила впервые продемонстрировать, что клетки с CAR, выделенные непосредственно у пациентов, могут сохранять эффекторную функцию in vivo в течение месяцев. Результаты предыдущего исследования позволяли предполагать, что введение первого поколения CAR в вирус-специфичные Т-клетки является предпочтительным для первичных Т-клеток (Pule et al., 2008, Nat Med 14:1264-1270), однако результаты для второго поколения CAR, встроенных в оптимально костимулированные первичные Т-клетки, ставит этот вывод под вопрос. Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, возникает сомнение, что клинические эффекты являлись полными и беспрецедентными с лизисом опухолевых масс весом в килограмм у всех трех пациентов, сопровождающимся отсроченным высвобождением потенциально опасных цитокинов на высоких уровнях у двух из пациентов. Классических эффектов цитокиновой бури не наблюдали. Однако настоящее исследование планировали для снижения этой возможности посредством намеренной инфузии CART-19 в течение трех дней.
- 40 035484
Обнаруживали, что очень низкие дозы CAR могут вызывать выраженные клинические ответы. В пилотном исследовании демонстрировали безопасность сконструированного вектора CART-19. Данные о том, что дозы клеток CART-19 на несколько порядков ниже тестируемых в предыдущих исследованиях могут обладать клиническим преимуществом, могут иметь важное значение для будущего осуществления терапии CAR в более широком масштабе и для дизайна пробных исследований CAR, направленных против мишеней, иных, чем CD 19.
Кроме того, настоящее исследование показало, что CART-19 экспрессируется и в Т-клетках центральной памяти, и эффекторных Т-клетках, и, вероятно, вносит вклад в их длительное выживание по сравнению с предыдущими исследованиями. Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, Т-клетки с CAR могут дифференцироваться in vivo в подобное центральной памяти состояние после контакта с клетками-мишенями (например, опухолевыми клетками CLL или нормальными В-клетками), экспрессирующими антиген-имитатор, и последующего их устранения. Как сообщают, фактически передача сигнала 4-1ВВ усиливает развитие памяти в отношении передачи сигнала TCR (Sabbagh et al., 2007, Trends Immunol 28: 333-339).
Длительная пролиферация и выживание клеток CART-19 позволили выявить аспекты фармакокинетики Т-клеток с CAR, о которых ранее не сообщали. Наблюдали, что кинетика высвобождения цитокинов в сыворотке и костном мозге коррелировала с пиковыми уровнями CART-19, таким образом, возможно, задержка инициируется, когда клетки-мишени, экспрессирующие CD19, становятся ограниченными. Механизм длительного выживания CART-19 может относится к указанному выше встраиванию домена 4-1ВВ или к передаче сигнала через природный TCR и/или CAR. Любопытной возможностью является то, что длительное выживание относится к популяции CART-19, идентифицированной в образцах костного мозга, давая начало гипотезе, что CD19 CAR могут поддерживаться посредством контакта с предшественниками В-клеток в костном мозге. В связи с этим возникает вопрос, что запускает исходную экспансию клеток CART-19 in vivo? За редким исключением (Savoldo et al., 2011, J Clin Invest doi: 10,1 172/JCI461 10; Pule et al., 2008, Nat Med 14: 1264-1270) настоящее исследование является единственным, в котором пренебрегали инфузией IL-2, таким образом, клетки CART-19, вероятно, пролиферируют в ответ на гомеостатические цитокины или, что более вероятно, на CD19, экспрессируемый на лейкозных мишенях и/или нормальных В-клетках. В последнем случае это может являться привлекательным свойством для CAR, направленных против мишеней на нормальных АПК, таких как CD19 и CD20, если возможно осуществление самообновления CART-19 на нормальных клетках, обеспечивающее механизм памяти CAR посредством самовакцинации/повторной вакцинации и, таким образом, длительный опухолевый иммунологический надзор. Механизмы гомеостаза CART-19 могут требовать дополнительных исследований для выявления внутренних и внешних механизмов поддержания клеток. До этих результатов большинство исследователей рассматривали терапию CAR как временную форму иммунотерапии, однако CAR с оптимизированными сигнальными доменами могут играть роль и в индукции ремиссии и восстановления, а также в длительном иммунологическом надзоре.
Выраженные противолейкозные эффекты наблюдали у вех трех пациентов, включая двух пациентов с р53-дефектным лейкозом. Предыдущие исследования с использованием CAR столкнулись с трудностями разделения эффектов CAR и противоопухолевых эффектов химиотерапии, направленной на снижение количества лимфоцитов. Однако задержанное высвобождение цитокинов в комбинации с кинетикой одновременного распада опухоли у флударабин-рефрактерных пациентов, возможно, зависящего от экспансии клеток с CAR in vivo в настоящем исследовании, свидетельствуют о том, что CART-19 опосредует выраженные противоопухолевые эффекты. Настоящие результаты не исключают роли химиотерапии в потенцировании эффектов CAR.
Тщательное сравнение вектора, трансгена и способов получения клеток с результатами продолжающихся исследований в других центрах может потребовать полного понимания ключевых свойств, необходимых для достижения длительного функционирования Т-клеток с CAR in vivo. В отличие от терапии антителами CAR-модифицированные Т-клетки обладают потенциалом для пролиферации in vivo, и их длительное поддержание может приводить к длительному контролю опухоли. Доступность готового терапевтического средства, состоящего из цитотоксических Т-клеток без перекрестной резистентности, обладает потенциалом в улучшении исхода у пациентов с В-клеточными злокачественными новообразованиями. Ограничение терапии антителами, например, с использованием средств, таких как ритуксимаб и бевацизумаб, состоит в том, что терапия требует повторных инфузий антител, что является неудобным и дорогостоящим. Осуществление длительной (в этом случае в течение по меньшей мере 6 месяцев у 3 из 3 пациентов, подвергнутых лечению к настоящему времени) терапии антителами с использованием scFv против CD19, экспрессируемых на Т-клетках после однократной инфузии клеток CART-19, обладает рядом практических преимуществ, включая удобство и экономию затрат.
Пример 2. Модифицированные Т-клетки с химерным антигенным рецептором при хроническом лимфоидном лейкозе
Конструировали лентивирусные векторы, экспрессирующие химерный антигенный рецептор со специфичностью для В-клеточного антигена CD19, соединенный с CD137 (костимуляторным рецептором в Т-клетках [4-1ВВ]) и сигнальными доменами CD3-дзетa (компонент передачи сигнала Т- 41 035484 клеточного антигенного рецептора). Наблюдали, что низкая доза (приблизительно 1,5*105 клеток на килограмм массы тела) модифицированных аутологичных Т-клеток с химерным антигенным рецептором, реинфузированных пациенту с рефрактерным хроническим лимфоцитарным лейкозом (CLL), экспансировалась до уровня, более чем в 1000 раз большего исходного уровня энграфтмента in vivo. Также наблюдали, что пациент проявлял задержанное развитие синдрома распада опухоли с полной ремиссией.
Помимо синдрома распада опухоли единственным другим токсическим эффектом степени 3/4, связанным с Т-клетками с химерным антигенным рецептором, являлась лимфопения.
Сконструированные клетки сохранялись на высоких уровнях в течение по меньшей мере 6 месяцев в крови и костном мозге и продолжали экспрессировать химерный антигенный рецептор. В костном мозге определяли специфический иммунный ответ, которому сопутствовала потеря нормальных В-клеток и лейкозных клеток, экспрессирующих CD19. Ремиссия продолжалась 10 месяцев после лечения. Гипогаммаглобулинемия являлась ожидаемым хроническим токсическим эффектом.
Далее описывают материалы и способы, используемые в этих экспериментах.
Материалы и способы Способы исследования
Конструировали самоинактивирующиеся лентивирусные векторы (GeMCRTS 0607-793), которые подвергали доклиническому тестированию на безопасность, как сообщали ранее (Milone et al., 2009, Mol Ther, 17: 1453-64). Способы получения Т-клеток также описывали ранее (Porter et al., 2006, Blood, 107: 1325-31). Осуществляли анализ с помощью количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения Т-клеток с химерным антигенным рецептором в крови и костном мозге. Нижний предел количественного анализа определяли по стандартной кривой; средние значения ниже нижнего предела количественного анализа (т.е. определяемые, но не поддающиеся количественному анализу) считали приблизительными. Нижний предел количественного анализа составлял 25 копий на микрограмм геномной ДНК.
Анализ растворимых факторов осуществляли с использованием сыворотки из цельной крови и костного мозга, разделенной на аликвоты для однократного использования, и хранили при температуре 80°С. Количественный анализ растворимых цитокинов осуществляли с использованием технологии и реагентов Luminex bead-array (Life Technologies).
Аферез № 1.
В аферезном центре осуществляли аферез 12-15 л. В течение этой процедуры получают мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) для получения Т-клеток CART-19. При однократном лейкоферезе собирали по меньшей мере 50/109 лейкоцитов для получения Т-клеток CART-19. Также на начальном уровне получали лейкоциты крови и подвергали криоконсервации.
Цитостатическая химиотерапия
Химиотерапию начинают приблизительно за 5-10 дней до инфузии таким образом, что клетки CART-19 можно вводить через 1-2 дня после завершения химиотерапии. Таким образом, время начала химиотерапии зависит от длительности схемы лечения. Целью химиотерапии является индукция лимфопении для облегчения энграфтмента и гомеостатической экспансии клеток CART-19. Также химиотерапию можно выбирать для снижения опухолевой массы при заболевании. Цитостатическую химиотерапию выбирают и проводят онкологи. Выбор химиотерапии зависит от заболевания, которым страдает пациент, и предшествующей терапии. Флударабин (30 мг/м2/день * 3 дня) и циклофосфамид (300 мг/м2/день * 3 дня) являются средствами выбора, т.к. в этой области накоплен большой опыт использования этих средств в проведении адоптивной иммунотерапии. Подходящими являются несколько других приемлемых схем лечения с использованием одобренных FDA лекарственных средств, включая CHOP, HyperCVAD, EPOCH, DHAP, ICE или другие схемы лечения.
Оценка рестадирования
По завершении химиотерапии осуществляют ограниченное рестадирование для проведения измерений исходного уровня опухолевой массы. Оно включает визуализацию, физикальное обследование и оценку минимального остаточного заболевания (MRD). Индивидуумов подвергали следующему преинфузионному тестированию: физикальному обследованию, документации побочных эффектов и заборам крови для гематологического анализа, биохимического анализа и тестирования на беременность (в случае необходимости).
Получение Т-клеток CART-19
Аутологичные Т-клетки конструировали для экспрессии внеклеточного одноцепочечного антитела (scFv) со специфичностью к CD19. Внеклеточное scFv может перенаправлять специфичность трансдуцированных Т-клеток на клетки, экспрессирующие CD19, молекулу, рестрицированную по экспрессии на поверхности злокачественных клеток и нормальных В-клеток. В дополнение к scFv против CD19 клетки трансдуцировали для экспрессии внутриклеточной сигнальной молекулы, состоящей из TCRZ-цепи или тандемного сигнального домена, состоящего из сигнальных модулей 4-1ВВ и TCRZ. scFv получают из моноклонального антитела мыши, и, таким образом, оно содержит последовательности мыши, но сигнальные домены полностью происходят из нативных последовательностей человека. Т-клетки CART-19
- 42 035484 получают выделением Т-клеток аферезом и с использованием технологии лентивирусных векторов (Dropulic et al., 2006, Human Gene Therapy, 17: 577-88; Naldini et al., 1996, Science, 272: 263-7; Dull et al., 1998, J Virol, 72: 8463-71) для введения scFv:TCRZ: 4-1BB в CD4 и CD8 Т-клетки. У некоторых пациентов в часть клеток вводили контрольные scFv:TCR для сравнительного эксперимента по репопуляции. Эти рецепторы являются универсальными, т.к. они связывают антиген МНС-независимым образом, таким образом, одну конструкцию рецептора можно использовать для лечения популяции пациентов с позитивными по антигену CD19 опухолями.
Конструкции CAR разрабатывали в University of Pennsylvania, и вектор клинической категории получали в Lentigen Corporation. Клетки CART-19 получали в Clinical Cell and Vaccine Production Facility в University of Pennsylvania способом, представленным на фиг. 11. В конце культивирования клетки подвергали криоконсервации в инфузируемых средах для криоконсервации. Однократную дозу трансдуцированных Т-клеток CART-19, состоящую из дозы для инфузии в общей сложности от 2,5*109 до 5*109 клеток, вводят в 1 или 2 мешка. Каждый мешок содержит аликвоту (объем зависит от дозы) сред для криоконсервации, содержащих следующие инфузируемые реагенты (% об./об.): 31,25 плазмалита-А, 31,25 декстрозы (5%), 0,45 NaCl, до 7,50 DMSO, 1,00 декстрана 40, 5,00 сывороточного альбумина человека с приблизительно 2,5-5*109 аутологичными Т-клетками на мешок. Для повышения безопасности первую дозу вводили как дробную дозу в дни 0, 1 и 2, с использованием ~10% клеток в день 0, 30% в день 1 и 60% в день 2.
Хранение
Мешки (емкостью от 10 до 100 мл), содержащие трансдуцированные Т-клетки CART-19, хранили в условиях банка крови в контролируемой морозильной камере при температуре 135°С. Мешки для инфузии хранили в морозильной камере до возникновения необходимости.
Размораживание клеток
После регистрации клеток в исследовательском аптечном пункте замороженные клетки перемещали на сухом льду к постели пациента. Клетки размораживали с использованием водяной бани, поддерживаемой при температуре от 36 до 38°С, у постели пациента в количестве одного мешка за один раз. Мешок осторожно переворачивали до момента окончания размораживания клеток. В контейнере не должно оставаться замороженных комочков. Если клеточный продукт CART-19, по-видимому, имеет поврежденный или протекающий мешок или иные нарушения, нельзя проводить инфузию.
Премедикация
Побочные эффекты после инфузий Т-клеток могут включать временную лихорадку, озноб и/или тошноту. Рекомендуют премедикацию индивидуума с использованием 650 мг ацетаминофена перорально и 25-50 мг гидрохлорида дифенгидрамина перорально или i.v. перед инфузией клеток CART-19. Введение этих лекарств можно повторять каждые шесть часов по мере необходимости. Можно прописывать курс нестероидных противовоспалительных средств, если у пациента продолжается лихорадка, необлегчаемая ацетаминофеном. Рекомендуют в любое время не вводить пациентам системные кортикостероиды, такие как гидрокортизон, преднизон, преднизолон (Solu-Medrol) или дексаметазон (Decadron), за исключением случаев, опасных для жизни, т.к. они могут оказывать неблагоприятное воздействие на Тклетки. Если кортикостероиды необходимы при острой инфузионной реакции, рекомендуют начальную дозу гидрокортизона 100 мг.
Введение/Инфузия
Инфузии начинают через 1-2 дня после завершения химиотерапии. В день первых инфузий пациентам проводят общий анализ крови с подсчетом лейкоцитарной формулы и оценку количества CD3, CD4 и CD8, т.к. химиотерапию проводили, частично, для индукции лимфопении. Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, полагают, что начальная i.v. доза 2,5-5*109 клеток CART-19 является оптимальной для этого протокола. Т.к. у здорового взрослого человека существует приблизительно 1*1012 Т-клеток, предполагаемая общая доза Т-клеток эквивалентна приблизительно 0,5% общей массы тела (Roederer, 1995, Nat Med, 1: 621-7; Macallan et al., 2003, Eur J Immunol, 33; 2316-26). Первую дозу вводят как дробную дозу в дни 0 (10%), 1 (30%) и 2 (60%). Индивидуумам проводят инфузии в отдельной комнате. Клетки размораживают у постели пациента, как представлено в настоящем описании. Размороженные клетки вводят так быстро, как это переносит пациент, таким образом, что продолжительность инфузии составляет приблизительно 10-15 мин. Трансдуцированные Т-клетки вводят быстрой внутривенной инфузией при скорости приблизительно от 10 до 20 мл в минуту через систему калибра 18 без латекса Y-типа с трехходовым краном. Продолжительность инфузии составляет приблизительно 15 мин. Один или два мешка модифицированных клеток CART-19 доставляют на льду и клетки вводят индивидууму холодными. У индивидуумов, которым вводят смеси клеток CART-19, для облегчения смешивания клетки вводят одновременно с использованием Y-адаптера. Индивидуумам проводят инфузию и премедикацию, как представлено в настоящем описании. Оценивают основные показатели жизнедеятельности индивидуумов и проводят пульсоксиметрию перед введением дозы, в конце инфузии, затем каждые 15 мин в течение 1 ч и пока они не станут стабильными и удовлетворительными. Образец крови для определения исходного уровня CART-19 получают перед инфузией и через 20 мин после инфузии. В
- 43 035484 случае пациентов, у которых наблюдали токсичность при предшествующей цитостатической химиотерапии, задерживали проведение инфузий до разрешения этих токсических явлений. Конкретные токсические явления, требующие задержки инфузий Т-клеток, включают: 1) легочные: потребность в дополнительном кислороде для сохранения насыщенности более 95% или наличие прогрессирующих аномалий по данным рентгенографического исследования грудной клетки; 2) сердечные: возникшая сердечная аритмия, не контролируемая с использованием лекарственных средств; 3) гипотензия, требующая введения лекарственных средств, повышающих артериальное давление; 4) активная инфекция: положительные посевы крови на бактерии, грибы или вирусы в течение 48 ч после инфузий Т-клеток. Образец сыворотки на калий и мочевую кислоту забирали перед первой инфузией, а также через два часа после каждой последующей инфузий.
Лабораторные исследования после инфузий для оценки энграфтмента и поддержания
Индивидуумы возвращались в день 4 и 10 после начальной инфузий клеток CART-19 для забора крови на уровни цитокинов в сыворотке и ПЦР CART-19 для оценки наличия клеток CART-19. Индивидуумы возвращались раз в неделю в течение трех недель для следующего: физикального обследования, документации побочных эффектов и заборов крови для гематологического анализа, биохимического анализа, анализа энграфтмента и поддержания клеток CART-19 и лабораторных исследований.
Вторая инфузия
Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, полагают, что вторую дозу клеток CART-19 можно вводить пациентам в день 11 при условии, что они проявляют соответствующую толерантность к первой дозе и получено достаточно клеток CART-19. Доза составляет в общей сложности 25*109' клеток. Образец сыворотки на калий и мочевую кислоту можно собирать через два часа после инфузий.
Второй аферез
В аферезном центре осуществляли аферез 2 л. Получали РВМС для исследования и подвергали их криоконсервации. Индивидуумов подвергали следующему: физикальному обследованию, документации побочных эффектов и заборам крови для гематологического анализа, биохимического анализа, анализа энграфтмента и поддержания клеток CART-19 и лабораторных анализов. Кроме того, осуществляли рестадирование для проведения измерений опухолевой массы. Тестирование для рестадирования определяли по типу заболевания, и оно включало визуализацию, оценку MRD, аспирацию и биопсию костного мозга и/или биопсию лимфоузлов.
Ежемесячные обследования в течение от 2 до 6 месяцев после инфузии
Индивидуумы возвращались ежемесячно в течение от 2 до 6 месяцев после инфузий клеток CART19. В эти визиты индивидуумов подвергали следующему: введению средств комплексной терапии, физикальному обследованию, документации побочных эффектов и заборам крови для гематологического анализа, биохимического анализа, анализа энграфтмента и поддержания клеток CART-19 и лабораторным исследованиям. Анализ ДНК на ВИЧ осуществляют через 2-6 месяцев после инфузии клеток CART-19 для исключения наличия определяемого RCL.
Ежеквартальные обследования в течение периода до 2 лет после инфузий
Индивидуумов обследовали ежеквартально до достижения 2 лет после инфузий. В эти визиты индивидуумов подвергали следующему: введению средств комплексной терапии, физикальному обследованию, документации побочных эффектов и заборам крови для гематологического анализа, биохимического анализа, анализа энграфтмента и поддержания клеток CART-19 и лабораторных анализов. Анализ ДНК на ВИЧ осуществляли через 3 и 6 месяцев после инфузий клеток CART-19 для исключения наличия определяемого RCL.
Далее описывают результаты экспериментов.
Анамнез пациента
У пациента диагностировали CLL стадии I в 1996 г. Через 6 лет наблюдения ему впервые понадобилось лечение по причине прогрессирующего лейкоцитоза и аденопатии. В 2002 г. ему проводили два цикла терапии ритуксимабом и флударабином; это лечение привело к нормализации формулы крови и частичному разрешению аденопатии. В 2006 г. ему проводили четыре цикла терапии ритуксимабом и флударабином по причине прогрессирования заболевания, снова с нормализацией формулы крови и частичной ремиссией аденопатии. За этим ответом последовал 20-месячный промежуток времени без прогрессирования и 2-летний промежуток времени без лечения. В феврале 2009 г. у него развился быстро прогрессирующий лейкоцитоз и рецидивирующая аденопатия. Его костный мозг подвергся интенсивной инфильтрации клетками CLL. Цитогенетический анализ показал, что 3 из 15 клеток содержали делецию в хромосомном локусе 17р, и анализ флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) показал, что 170 из 200 клеток имели делецию, включающую ТР53 в хромосомном локусе 17р. Ему вводили ритуксимаб с бендамустином в течение одного цикла терапии и проводили три дополнительных цикла терапии бендамустином без ритуксимаба (по причине тяжелой аллергической реакции). Это лечение приводило только к временному улучшению лимфоцитоза. С помощью компьютерной томографии (КТ) после терапии определяли прогрессирующую аденопатию.
Аутологичные Т-клетки собирали с помощью лейкофереза и подвергали криоконсервации. Затем
- 44 035484 пациенту вводили алемтузумаб (антитело против CD52, маркера зрелых лимфоцитов, поверхностного антигена клетки) в течение 11 недель с улучшением гемопоэза и частичным разрешением аденопатии. В течение следующих 6 месяцев у него наблюдали стабильное заболевание с сохраняющимся интенсивным вовлечением костного мозга и диффузной аденопатией, затрагивающей многочисленные лимфоузлы размером от 1 до 3 см. В июле 2010 г. пациента включали в клиническое испытание фазы 1 модифицированных Т-клеток с химерным антигенным рецептором.
Инфузии клеток
Аутологичные Т-клетки пациента размораживали и трансдуцировали лентивирусом для экспрессии CD19-специфuчного химерного антигенного рецептора (фиг. 1А); идентификаторы последовательности из лентивирусных векторов и родственные последовательности представлены в табл. 5. За четыре дня до инфузии клеток пациенту проводили химиотерапию, направленную на снижение количества лимфоцитов (пентостатин в дозе 4 мг на квадратный метр поверхности тела и циклофосфамид в дозе 600 мг на квадратный метр) без ритуксимаба (Lamanna et al, 2006, J Clin Oncol, 24: 1575-81). Через три дня после химиотерапии, но перед инфузией клеток, костный мозг являлся гиперпластичным с приблизительно 40% поражением CLL. Лейкозные клетки экспрессировали легкую каппа-цепь и CD5, CD19, CD20 и CD23. Цитогенетический анализ показал наличие двух отдельных клонов с потерей хромосомного локуса 17р и локуса ТР53 (46JXY,del(17)(р12)[5]/46,XY,der(17)t(17;21)(q10;q10)[5]/46,XY[14]). Через четыре дня после химиотерапии пациенту вводили, в общей сложности, 3χ108 Т-клеток, из которых 5% являлись трансдуцированными - в общей сложности, 1,42χ107 трансдуцированных клеток (1,46χ105 клеток на килограмм), разделенных на три последовательные ежедневные внутривенные инфузии (10% в день 1, 30% в день 2 и 60% в день 3). После инфузии не вводили цитокины. Не отмечали токсических эффектов после инфузии.
Таблица 5. Идентификаторы последовательности для вектора pELPS-CD19-BBz для передачи генов
SEQ ID NO: № ИДЕНТИЧНОСТЬ
SEQ ID NO: 1 Вектор pELPS-CDl9-ΒΒΣ (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 2 U3 RSV (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 3 R-повтор ВИЧ (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ TD NO: 4 US-повтор ВИЧ (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ TD NO: 5 Часть Gag/Pol (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ TD NO: 6 сРРТ (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 7 Промотор EF1 альфа (последовательность нуклеиновой кислоты)
- 45 035484
SEQ ID NO: 8 CD19-BBZ CAR (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 9 Hu Woodchuck PRE (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 10 R-повтор (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 11 и5-повтор (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 12 CD19-BBZ CAR (аминокислотная последовательность)
SEQ ID NO: 13 Лидерная последовательность CD8 (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 14 scFv против CD19 (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 15 Шарнирный домен CD8 (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 16 Трансмембранный домен CD8 (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 17 4-1ВВ (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 18 CDS-дзета (последовательность нуклеиновой кислоты)
SEQ ID NO: 19 Лидерная последовательность CD8 (аминокислотная последовательность)
SEQ ID NO: 20 scFv против CD19 (аминокислотная последовательность)
SEQ ID NO: 21 Шарнирный домен CD8 (аминокислотная последовательность)
SEQ ID NO: 22 Трансмембранный домен CD8 (аминокислотная последовательность)
SEQ ID NO: 23 4-1ВВ (аминокислотная последовательность)
SEQ ID NO: 24 СЕЗ-дзета (аминокислотная последовательность)
Клинический ответ и оценка
Через четырнадцать дней после первой инфузии пациент начал испытывать озноб и субфебрилитет, ассоциированный с утомляемостью степени 2. В течение следующих 5 дней озноб усиливался и температура повышалась до 39,2°С (102,5°F), сопровождаясь ознобом, повышенным потоотделением, потерей аппетита, тошнотой и диареей. У него не наблюдали респираторных или сердечных симптомов. По причине лихорадки осуществляли рентгенографию грудной клетки и посевы крови, мочи и кала, и все они являлись негативными или нормальными. Синдром распада опухоли диагностировали в день 22 после инфузии (фиг. 12В). Уровень мочевой кислоты составлял 10,6 мг на децилитр (630,5 ммоль на литр), уровень фосфора составлял 4,7 мг на децилитр (1,5 ммоль на литр) (нормальный диапазон: 2,4 до 4,7 мг на децилитр [от 0,8 до 1,5 ммоль на литр]) и уровень лактатдегидрогеназы составлял 1130 Е на литр (нормальный диапазон: от 98 до 192). Наблюдали признаки острой почечной недостаточности с уровнем креатинина 2,60 мг на децилитр (229,8 ммоль на литр) (начальный уровень: <1,0 мг на децилитр [<88,4 ммоль на литр]). Пациента госпитализировали и лечили с использованием жидкостной реанимации и расбуриказы. Уровень мочевой кислоты возвращался к нормальному диапазону в течение 24 ч, а уровень креатинина - в течение 3 дней; его выписывали из больницы в день 4. Уровень лактатдегидрогеназы снижался постепенно, становясь нормальным в течение следующего месяца.
Ко дню 28 после инфузии клеток CART-19 аденопатия больше не являлась пальпируемой, и в день 23 не наблюдали признаков CLL в костном мозге (фиг. 12С). Кариотип становился нормальным в 15 из 15 клеток (46,XY), и тестирование с помощью FISH показывало негативный результат по делеции ТР53 в 198 из 200 исследуемых клеток; этот результат считают находящимся в нормальных пределах у отрицательных контролей. Анализ с помощью проточной цитометрии не показал остаточного CLL, и не определяли В-клетки (<1% клеток в дискриминационном окне CD5+CD10-CD19+CD23+ лимфоцитов). КТ, проведенная в день 31 после инфузии, показала разрешение аденопатии (фиг. 2D).
Через 3 и 6 месяцев после инфузии клеток CART-19 физикальное исследование проходило без особенностей, без определения пальпируемой аденопатии, и через 3 месяца после инфузии клеток CART-19 проводили КТ, показавшую длительную ремиссию (фиг. 12D). Исследования костного мозга после 3 и 6 месяцев также не показали наличия признаков CLL по данным морфологического анализа, кариотипического анализа (46,XY) или анализа с помощью проточной цитометрии, что сопровождалось длительным
- 46 035484 отсутствием нормальных В-клеток. Ремиссия длилась в течение по меньшей мере 10 месяцев.
Токсичные эффекты клеток CART-19
Инфузии клеток не оказывали острых токсических эффектов. Единственным отмеченным значительным (степени 3 или 4) побочным эффектом являлся синдром распада опухоли степени 3, описываемый выше. У пациента наблюдали лимфопению степени 1 на начальном уровне и лимфопению степени 2 или 3, начиная со дня 1 и затем в течение по меньшей мере 10 месяцев после терапии. Лимфопению степени 4 с абсолютным количеством лимфоцитов 140 клеток на кубический миллиметр регистрировали в день 19, но со дня 22 в течение по меньшей мере 10 месяцев абсолютное количество лимфоцитов находилось в диапазоне от 390 до 780 клеток на кубический миллиметр (лимфопения степени 2 или 3). У пациента наблюдали транзиторную тромбоцитопению степени 1 (количество тромбоцитов от 98000 до 131000 на кубический миллиметр) со дня 19 по день 26 и нейтропению степени 1 или 2 (абсолютное количество нейтрофилов от 1090 до 1630 на кубический миллиметр) со дня 17 по день 33. Другие симптомы, возможно, относящиеся к исследуемому лечению, включали повышения уровней аминотрансферазы и щелочной фосфатазы степени 1 и 2, развивавшиеся в течение 17 дней после первой инфузии и разрешавшиеся в день 33. Системные симптомы степени 1 и 2 включали лихорадку, озноб, повышенное потоотделение, миалгии, головные боли и тошноту. Гипогаммаглобулинемию степени 2 корректировали внутривенными инфузиями иммуноглобулина.
Анализ цитокинов в сыворотке и костном мозге
Клинический ответ пациента сопровождался замедленным повышением уровней воспалительных цитокинов (фиг. 13A-13D), где уровни интерферона γ, интерферон γ-чувствительных хемокинов CXCL9 и CXCL10 и интерлейкина-6 являлись в 160 раз более высокими, чем начальные уровни. По времени повышение уровней цитокинов сопровождало клинические симптомы, достигая пика с 17 по 23 дни после первой инфузии клеток CART-19.
Измеряли уровни цитокинов в супернатантах серии аспиратов костного мозга и наблюдали признаки активации иммунной системы (фиг. 13Е). Отмечали значимое повышение интерферона γ, CXCL9, интерлейкина-6 и растворимого рецептора интерлейкина-2 по сравнению с начальными уровнями за день до инфузии Т-клеток; значения достигали пика в день 23 после первой инфузии клеток CART-19. Повышение цитокинов в костном мозге совпадало с повышением уровня лейкозных клеток из костного мозга. Уровень фактора некроза опухоли в сыворотке и костном мозге оставался неизменным.
Экспансия и поддержание Т-клеток с химерным антигенным рецептором
С помощью ПЦР в реальном времени определяли ДНК, кодирующую химерный антигенный рецептор против CD19 (CAR19), начиная со дня 1 после первой инфузии (фиг. 14А). Отмечали экспансию клеток in vivo более чем на 3 порядка ко дню 21 после инфузии. На пиковых уровнях клетки CART-19 в крови составляли более 20% циркулирующих лимфоцитов; эти пиковые уровни совпадали с развитием системных симптомов, синдрома распада опухоли (фиг. 12В) и повышением уровней цитокинов в сыворотке (фигура 13A-13D). Клетки CART-19 оставались определяемыми при высоких уровнях через 6 месяцев после инфузии, хотя значения снижались на порядок относительно пиковых уровней. Время удвоения Т-клеток с химерным антигенным рецептором в крови составляло приблизительно 1,2 дня со временем полувыведения 31 день.
Т-клетки с химерным антигенным рецептором в костном мозге
Клетки CART-19 определяли в образцах костного мозга, начиная со дня 23 после первой инфузии (фиг. 14В), и они сохранялись в течение по меньшей мере 6 месяцев со временем полувыведения 34 дня. Наиболее высокие уровни клеток CART-19 в костном мозге определяли при первом обследовании через 23 дня после первой инфузии, что совпадало с индукцией иммунного ответа, на что указывают профили секреции цитокинов (фиг. 13Е). Анализ аспиратов костного мозга с помощью проточной цитометрии свидетельствует о клональной экспансии CD5+CD19+ клеток на начальном уровне, отсутствующих через 1 месяц после инфузии и в образце, полученном через 3 месяца после инфузии (данные не представлены). После лечения не определяли наличия нормальных В-клеток (фиг. 14С).
Лечение аутологичными генетически модифицированными клетками CART-19
В настоящем описании представлено замедленное развитие синдрома распада опухоли и полный ответ через 3 недели после лечения аутологичными Т-клетками, генетически модифицированными для воздействия на CD19 посредством трансдукции лентивирусным вектором, экспрессирующим scFv против CD19, соединенное с сигнальными доменами CD3-дзета и CD137 (4-1ВВ). Генетически модифицированные клетки присутствовали в костном мозге при высоких уровнях в течение по меньшей мере 6 месяцев после инфузии. Возникновение CD19-специфичного иммунного ответа в костном мозге демонстрировали посредством временной динамики высвобождения цитокинов и уничтожения лейкозных клеток, совпадающего с пиковой инфильтрацией Т-клетками с химерным антигенным рецептором. Ранее не сообщали о развитии синдрома распада опухоли после клеточной иммунотерапии (Baeksgaard et al., 2003, Cancer Chemother Pharmacol, 51: 187-92).
Генетические манипуляции с аутологичными Т-клетками для воздействия на специфические опухолевые антигены является привлекательной стратегией для терапии злокачественных новообразований
- 47 035484 (Sadelain et al., 2009, Curr Opin Immunol, 21: 215-23; Jena et al., 2010, Blood, 116: 1035-44). Важной характеристикой подхода, представленного в настоящем описании, является то, что Т-клетки с химерным антигенным рецептором могут распознавать опухолевые мишени без рестрикции по HLA таким образом, что можно конструировать готовые химерные антигенные рецепторы для опухолей с широким спектром гистологических характеристик. Для терапии злокачественных новообразований использовали лентивирусные векторы на основе ВИЧ, подход, который может обладать некоторыми преимуществами по сравнению с использованием ретровирусных векторов (June et al., 2009, Nat Rev Immunol, 9: 704-16).
В предыдущих исследованиях Т-клеток с химерными антигенными рецепторами объективные ответы опухоли являлись умеренными, и пролиферация модифицированных клеток in vivo не являлась длительной (Kershaw et al., 2006, Clin Cancer Res, 12: 6106-15; Till et al., 2008, Blood, 112: 2261-71; Pule et al., 2008, Nat Med, 14: 1264-70). Brentjens с соавт. опубликовали предварительные результаты клинического испытания химерных антигенных рецепторов против CD19, соединенных с сигнальным доменом CD28, и обнаруживали транзиторные ответы опухоли у двух из трех пациентов с CLL на поздней стадии (Brentjens et al., 2010, Mol Ther, 18: 666-8); однако химерные антигенные рецепторы быстро исчезали из циркуляции.
Неожиданным являлось то, что очень низкая доза инфузированных Т-клеток с химерными антигенными рецепторами может приводить к клинически выраженному противоопухолевому ответу. Фактически, доза инфузированных Т-клеток с химерными антигенными рецепторами 1,5*105 на килограмм являлась на несколько порядков более низкой, чем дозы, используемые в предыдущих исследованиях Тклеток, модифицированных для экспрессии химерных антигенных рецепторов или трансгенных Тклеточных рецепторов (Kershaw et al., 2006, Clin Cancer Res, 12: 6106-15; Brentjens et al., 2010, Mol Ther, 18: 666-8; Morgan et al., 2010, Mol Ther, 18: 843-51; Johnson et al., 2009, Blood, 114: 535-46). Без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, предполагают, что химиотерапия может усиливать эффекты химерного антигенного рецептора.
Длительное поддержание клеток CART-19 в крови и костном мозге пациента является результатом включения сигнального домена 4-1ВВ. Вероятно, опосредованная клетками CART-19 элиминация нормальных В-клеток облегчала индукцию иммунологической толерантности к химерному антигенному рецептору, т.к. клетки CART-19, экспрессирующие одноцепочечный фрагмент антитела Fv, содержащий последовательности мыши, не отторгались. Учитывая отсутствие определяемых CD19-позитивных лейкозных клеток у этого пациента, и без желания быть связанным какой-либо конкретной теорией, можно предполагать, что гомеостаза Т-клеток с химерными антигенными рецепторами достигали, по меньшей мере, частично в результате стимуляции, осуществляемой ранними предшественниками В-клеток, т.к. они начинают появляться в костном мозге. Изобретение относится к обнаружению того, что может существовать новый механизм поддержания Т-клеток памяти с химерными антигенными рецепторами.
Хотя CD19 является привлекательной опухолевой мишенью с экспрессией, ограниченной нормальными и злокачественными В-клетками, существуют сомнения, что поддержание Т-клеток с химерными антигенными рецепторами может опосредовать длительный дефицит В-клеток. Фактически, у пациента В-клетки отсутствуют в крови и костном мозге в течение по меньшей мере 6 месяцев после инфузии. У этого пациента не наблюдали рецидивирующих инфекций. Воздействие на В-клетки через CD20 с использованием ритуксимаба является эффективной и относительно безопасной стратегией для пациентов с В-клеточными неоплазиями, и длительная В-клеточная лимфопения поддается лечению (Molina, 2008, Ann Rev Med, 59: 237-50). Сообщали о том, что у пациентов, подвергаемых лечению ритуксимабом, Вклетки возвращаются в течение 6 месяцев после прекращения терапии. До сих пор не известно, происходит ли такое восстановление у пациентов, у которых in vivo сохраняются Т-клетки против В-клеток.
Пациенты, страдающие CLL с делециями ТР53, имели короткие ремиссии после стандартных способов терапии (Dohner et al, 1995, Blood, 85: 1580-9). Аллотрансплантация костного мозга является единственным подходом, вызывающим длительные ремиссии у пациентов с CLL на поздней стадии (Gribben et al., 2011, Biol Blood Marrow Transplant, 17: Suppl:S63-S70). Однако полученный выраженный эффект трансплантат против опухоли ассоциирован со значительной смертностью по причине высокой частоты хронической реакции трансплантат против хозяина, являющейся особенно тяжелой у пожилых пациентов - тех, кто, как правило, страдает CLL (Gribben et al., 2011, Biol Blood Marrow Transplant, 17: Suppl:S63-S70; Sorror et.al., 2008, Blood, 111: 446-52). Данные, представленные в настоящем описании, позволяют предполагать, что генетически модифицированные аутологичные Т-клетки могут преодолевать это ограничение.
Замедленное начало синдрома распада опухоли и секреции цитокинов в комбинации с интенсивной экспансией Т-клеток с химерными антигенными рецепторами in vivo и значительной противолейкозной активностью указывают на значительные и длительные эффекторные функции клеток CART-19. Эксперименты, представленные в настоящем описании, указывают на активность этой терапии и являются основой для подробных исследований аутологичных Т-клеток, генетически модифицированных для воздействия на CD19 (и другие мишени) посредством трансдукции химерного антигенного рецептора, соединенного с активными сигнальными доменами. В отличие от антитело-опосредованной терапии модифицированные Т-клетки с химерными антигенными рецепторами обладают потенциалом воспроизведе- 48 035484 ния in vivo, и их длительное поддержание может приводить к длительному контролю опухоли. Двум другим пациентам с CLL на поздней стадии также проводили инфузии CART-19 по этому протоколу, и у всех трех развивались ответы опухоли. Эти результаты требуют продолжения исследований CD19перенаправляющих Т-клеток в отношении В-клеточных неоплазий.
Таким образом, описания каждого патента, патентной заявки и публикации, процитированные в настоящем описании, включают в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Хотя это изобретение описывают со ссылкой на конкретные варианты осуществления, очевидно, что другие специалисты в этой области могут разрабатывать другие варианты осуществления и варианты этого изобретения без отклонения от сущности и объема изобретения. Формула изобретения предназначена для включения всех таких вариантов осуществления и эквивалентных вариантов.

Claims (30)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество популяции человеческих Т-клеток, где клетки указанной популяции включают клетки, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует химерный антигенный рецептор (CAR), где указанный CAR содержит домен, связывающий антиген CD19, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; трансмембранный домен CD8o; костимуляторную сигнальную область 4-1ВВ и сигнальный домен CD3-дзета, где указанные Т-клетки представляют собой Т-клетки человека, имеющего злокачественное новообразование.
  2. 2. Композиция по п.1, где трансмембранный домен CD8a содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
  3. 3. Композиция по п.1, где CAR дополнительно содержит шарнирный домен CD8o и где указанный шарнирный домен CD8o содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
  4. 4. Композиция по п.1, где костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
  5. 5. Композиция по п.1, где домен, связывающий антиген CD19, кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 14.
  6. 6. Композиция по п.4, где трансмембранный домен CD8a кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 16.
  7. 7. Композиция по п.3, где шарнирный домен CD8a кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 15.
  8. 8. Композиция по п.4, где костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 17.
  9. 9. Композиция по п.2, где костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
  10. 10. Композиция по п.9, где костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 17.
  11. 11. Композиция по п.3, где костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.
  12. 12. Композиция по п.11, где костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 17.
  13. 13. Композиция по п.5, где CAR дополнительно содержит шарнирный домен CD8o и где указанный шарнирный домен CD8o содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
  14. 14. Композиция по п.13, где шарнирный домен CD8a кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 15.
  15. 15. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество популяции человеческих Т-клеток, где клетки указанной популяции включают клетки, которые содержат последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует химерный антигенный рецептор (CAR), где указанный CAR содержит домен, связывающий антиген CD19, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; шарнирный домен CD8a, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:21; трансмембранный домен CD8o, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:22; костимуляторную сигнальную область 4-1ВВ, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:23; и сигнальный домен CD3-дзета, где указанные Т-клетки представляют собой Тклетки человека, страдающего раком.
  16. 16. Композиция по п.15, где домен CAR, связывающий антиген CD19, кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:14, шарнирный домен CD8a CAR кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:15, трансмембранный домен CD8a CAR кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:16, и костимуляторная сигнальная область 4-1ВВ CAR кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO:17.
  17. 17. Композиция по п.1 или 15, где указанное эффективное количество Т-клеток составляет от 104 до
    - 49 035484
    109 клеток/кг массы тела человека, нуждающегося в таких клетках.
  18. 18. Композиция по п.1 или 15, где указанное эффективное количество Т-клеток составляет от 105 до
    106 клеток/кг массы тела человека, нуждающегося в таких клетках.
  19. 19. Композиция по п.1 или 15, где указанные Т-клетки представляют собой Т-клетки человека, имеющего гематологическое злокачественное новообразование.
  20. 20. Композиция по п.19, где указанное гематологическое злокачественное новообразование представляет собой лейкоз или лимфому.
  21. 21. Композиция по п.20, где указанный лейкоз представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL) или острый лимфоцитарный лейкоз (ALL).
  22. 22. Композиция по п.20, где указанная лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL), лимфому из клеток зоны мантии, неходжкинскую лимфому или ходжкинскую лимфому.
  23. 23. Композиция по п.19, где указанное гематологическое злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому.
  24. 24. Способ лечения гематологического злокачественного новообразования у пациента-человека, где указанный способ включает введение указанному пациенту-человеку противоопухолевой фармацевтической композиции по любому из пп.1-16.
  25. 25. Способ по п.24, где указанная противоопухолевая фармацевтическая композиция содержит эффективное количество популяции человеческих Т-клеток, составляющее от 104 до 109 клеток/кг массы тела указанного пациента-человека.
  26. 26. Способ по п.24, где указанная противоопухолевая фармацевтическая композиция содержит эффективное количество популяции человеческих Т-клеток, составляющее от 105 до 106 клеток/кг массы тела указанного пациента-человека.
  27. 27. Способ по п.24, где указанное гематологическое злокачественное новообразование представляет собой лейкоз или лимфому.
  28. 28. Способ по п.27, где указанный лейкоз представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL) или острый лимфоцитарный лейкоз (ALL).
  29. 29. Способ по п.27, где указанная лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную Вклеточную лимфому (DLBCL), лимфому из клеток зоны мантии, неходжкинскую лимфому или ходжкинскую лимфому.
  30. 30. Способ по п.24, где указанное гематологическое злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому.
EA201790175A 2010-12-09 2011-12-09 Применение модифицированных t-клеток с химерными антигенными рецепторами для лечения злокачественных новообразований EA035484B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US42147010P 2010-12-09 2010-12-09
US201161502649P 2011-06-29 2011-06-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790175A1 EA201790175A1 (ru) 2017-09-29
EA035484B1 true EA035484B1 (ru) 2020-06-23

Family

ID=46207528

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201390847A EA027153B1 (ru) 2010-12-09 2011-12-09 Применение модифицированных t-клеток с химерными антигенными рецепторами для лечения злокачественных новообразований
EA201790175A EA035484B1 (ru) 2010-12-09 2011-12-09 Применение модифицированных t-клеток с химерными антигенными рецепторами для лечения злокачественных новообразований

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201390847A EA027153B1 (ru) 2010-12-09 2011-12-09 Применение модифицированных t-клеток с химерными антигенными рецепторами для лечения злокачественных новообразований

Country Status (42)

Country Link
US (15) US9499629B2 (ru)
EP (4) EP3660029A1 (ru)
JP (6) JP5947311B2 (ru)
KR (5) KR102417796B1 (ru)
CN (5) CN107699585A (ru)
AP (1) AP2013006918A0 (ru)
AU (5) AU2011338200B2 (ru)
BR (3) BR122021026169B1 (ru)
CA (1) CA2820681C (ru)
CL (1) CL2013001645A1 (ru)
CO (1) CO6801633A2 (ru)
CR (1) CR20130269A (ru)
CY (3) CY1119760T1 (ru)
DK (2) DK3214091T3 (ru)
DO (1) DOP2013000128A (ru)
EA (2) EA027153B1 (ru)
EC (1) ECSP13012739A (ru)
ES (2) ES2700966T3 (ru)
FR (1) FR19C1006I2 (ru)
GT (1) GT201300150A (ru)
HK (2) HK1243082B (ru)
HR (2) HRP20171577T1 (ru)
HU (4) HUE042207T2 (ru)
IL (1) IL226694B (ru)
LT (4) LT2649086T (ru)
LU (1) LUC00104I2 (ru)
MA (1) MA34813B1 (ru)
MX (2) MX347078B (ru)
MY (2) MY191313A (ru)
NI (1) NI201300051A (ru)
NL (1) NL300967I2 (ru)
NO (2) NO2019006I1 (ru)
NZ (1) NZ612512A (ru)
PE (1) PE20140178A1 (ru)
PL (2) PL3214091T3 (ru)
PT (2) PT2649086T (ru)
RS (2) RS58100B1 (ru)
SG (2) SG10201510092QA (ru)
SI (2) SI3214091T1 (ru)
TR (1) TR201820015T4 (ru)
WO (1) WO2012079000A1 (ru)
ZA (1) ZA201304470B (ru)

Families Citing this family (1090)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2543084T3 (es) 2003-02-18 2015-08-14 Baylor College Of Medicine Activación inducida en células dendríticas
US20130266551A1 (en) 2003-11-05 2013-10-10 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
CA2700573C (en) 2006-09-26 2016-11-22 Cedars-Sinai Medical Center Cancer stem cell antigen vaccines and methods
WO2008039969A2 (en) 2006-09-28 2008-04-03 Cedars-Sinai Medical Center Cancer vaccines and vaccination methods
EP2279253B1 (en) 2008-04-09 2016-11-16 Maxcyte, Inc. Engineering and delivery of therapeutic compositions of freshly isolated cells
EP2328923B1 (en) 2008-09-02 2016-01-13 Cedars-Sinai Medical Center Cd133 epitopes
US8415150B2 (en) * 2009-02-24 2013-04-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods for treating progressive multifocal leukoencephalopathy (PML)
US10426740B1 (en) 2010-08-18 2019-10-01 Avm Biotechnology, Llc Compositions and methods to inhibit stem cell and progenitor cell binding to lymphoid tissue and for regenerating germinal centers in lymphatic tissues
CA2815000A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Discovery of regulatory t cells programmed to suppress an immune response
NZ612512A (en) * 2010-12-09 2015-03-27 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
US9476095B2 (en) 2011-04-15 2016-10-25 The Johns Hopkins University Safe sequencing system
CA2851795C (en) * 2011-10-20 2018-11-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-cd22 chimeric antigen receptors
WO2013063419A2 (en) * 2011-10-28 2013-05-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania A fully human, anti-mesothelin specific chimeric immune receptor for redirected mesothelin-expressing cell targeting
SG11201404284SA (en) * 2012-02-22 2014-10-30 Univ Pennsylvania Use of the cd2 signaling domain in second-generation chimeric antigen receptors
WO2013126712A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for generating a persisting population of t cells useful for the treatment of cancer
PT2817338T (pt) 2012-02-24 2017-11-13 Abbvie Stemcentrx Llc Moduladores de dll3 e métodos de utilização
EP2828290B1 (en) 2012-03-23 2018-08-15 The United States of America, represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Anti-mesothelin chimeric antigen receptors
EP3689383A1 (en) 2012-04-11 2020-08-05 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen
EP2855667B1 (en) 2012-05-25 2023-08-09 Cellectis Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy
CN104884095A (zh) * 2012-07-13 2015-09-02 宾夕法尼亚大学董事会 Cart19用于耗减正常b细胞以诱导耐受的用途
US9765156B2 (en) 2012-07-13 2017-09-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Enhancing activity of CAR T cells by co-introducing a bispecific antibody
AU2013289979A1 (en) * 2012-07-13 2015-01-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of assessing the suitability of transduced T cells for administration
AU2013289967B2 (en) 2012-07-13 2018-03-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Toxicity management for anti-tumor activity of CARs
US20160235787A1 (en) * 2012-07-13 2016-08-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Epitope Spreading Associated with CAR T-Cells
MX2015000428A (es) * 2012-07-13 2015-03-12 Univ Pennsylvania Composiciones y metodos para regular celulas t car.
CA3177394A1 (en) * 2012-08-20 2014-02-27 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
PT2893004T (pt) * 2012-09-04 2019-01-21 Cellectis Recetor de antígeno quimérico de cadeia múltipla e utilizações do mesmo
EP2900695B1 (en) * 2012-09-27 2018-01-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Mesothelin antibodies and methods for eliciting potent antitumor activity
US10548957B2 (en) 2012-09-28 2020-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Targeted expansion of Qa-1-peptide-specific regulatory CD8 T cells to ameliorate arthritis
WO2014055442A2 (en) * 2012-10-01 2014-04-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for targeting stromal cells for the treatment of cancer
WO2014055657A1 (en) 2012-10-05 2014-04-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors
US9598489B2 (en) 2012-10-05 2017-03-21 The Trustees Of The Univeristy Of Pennsylvania Human alpha-folate receptor chimeric antigen receptor
CA2889055C (en) * 2012-10-24 2024-01-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services M971 chimeric antigen receptors
EP3447495B2 (en) 2012-10-29 2024-03-13 The Johns Hopkins University Papanicolaou test for ovarian and endometrial cancers
AU2013204922B2 (en) * 2012-12-20 2015-05-14 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors
AU2015210373B2 (en) * 2012-12-20 2017-04-06 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors
CA3115383A1 (en) * 2013-02-06 2014-08-14 Celgene Corporation Modified t lymphocytes having improved specificity
US10137182B2 (en) 2013-02-14 2018-11-27 Immunocellular Therapeutics, Ltd. Cancer vaccines and vaccination methods
KR20210147101A (ko) 2013-02-15 2021-12-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 키메라 항원 수용체 및 이의 이용 방법
EP3626741A1 (en) 2013-02-20 2020-03-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of cancer using humanized anti-egfrviii chimeric antigen receptor
US9573988B2 (en) 2013-02-20 2017-02-21 Novartis Ag Effective targeting of primary human leukemia using anti-CD123 chimeric antigen receptor engineered T cells
US9968687B2 (en) 2013-02-22 2018-05-15 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibody drug conjugates
CN113699114A (zh) 2013-02-26 2021-11-26 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 用于免疫疗法的组合物和方法
CA2904230A1 (en) * 2013-03-05 2014-09-12 Baylor College Of Medicine Engager cells for immunotherapy
US9499855B2 (en) * 2013-03-14 2016-11-22 Elwha Llc Compositions, methods, and computer systems related to making and administering modified T cells
US9587237B2 (en) 2013-03-14 2017-03-07 Elwha Llc Compositions, methods, and computer systems related to making and administering modified T cells
EP2970985A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to modify cells for therapeutic objectives
WO2014151960A2 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for controlling t cell proliferation
US9657105B2 (en) * 2013-03-15 2017-05-23 City Of Hope CD123-specific chimeric antigen receptor redirected T cells and methods of their use
JP6493692B2 (ja) 2013-03-15 2019-04-10 セルジーン コーポレイション 修飾されたｔリンパ球
WO2014145152A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Gpb Scientific, Llc On-chip microfluidic processing of particles
CN113512522A (zh) 2013-03-15 2021-10-19 普林斯顿大学理事会 用于高通量纯化的方法和设备
US9745368B2 (en) 2013-03-15 2017-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
US20150064153A1 (en) 2013-03-15 2015-03-05 The Trustees Of Princeton University High efficiency microfluidic purification of stem cells to improve transplants
NZ712693A (en) 2013-03-15 2021-07-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
UY35468A (es) * 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
US9790282B2 (en) 2013-03-25 2017-10-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-CD276 polypeptides, proteins, and chimeric antigen receptors
BR112015027567B1 (pt) * 2013-05-03 2024-02-20 Ohio State Innovation Foundation Polipeptídeo, sequência de ácido nucleico isolada, vetor, método de obtenção de célula, uso de uma célula
JP6603209B2 (ja) 2013-05-10 2019-11-06 ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ ソルターゼ（Ｓｏｒｔａｓｅ）を用いた生存細胞のタンパク質修飾
US11077144B2 (en) 2013-05-13 2021-08-03 Cellectis CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
US11311575B2 (en) * 2013-05-13 2022-04-26 Cellectis Methods for engineering highly active T cell for immunotherapy
TWI636992B (zh) * 2013-05-13 2018-10-01 瑟勒提斯公司 Ｃｄ１９特異性嵌合抗原受體及其用途
WO2014186469A2 (en) 2013-05-14 2014-11-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Human application of engineered chimeric antigen receptor (car) t-cells
SG11201509609SA (en) * 2013-05-24 2015-12-30 Univ Texas Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
MX2015016963A (es) 2013-06-10 2016-08-08 Dana Farber Cancer Inst Inc Metodos y composiciones para reducir la inmunosupresion por celulas de tumor.
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
JP2016531915A (ja) 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 部位特異的抗体コンジュゲーション方法および組成物
CN113957061A (zh) 2013-08-30 2022-01-21 得克萨斯大学体系董事会 用于肿瘤疗法的犬尿氨酸耗竭酶的施用
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
CN105813654B (zh) 2013-10-11 2019-05-31 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Tem8抗体及其用途
CN105814083A (zh) * 2013-10-15 2016-07-27 加州生物医学研究所 嵌合抗原受体t细胞开关和其用途
WO2015057834A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 The California Institute For Biomedical Research Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
KR102308597B1 (ko) * 2013-10-17 2021-10-01 내셔널 유니버시티 오브 싱가포르 다중 종양에 대항하여 항체-의존성 세포 세포독성을 촉발시키는 키메라 수용체
US10144770B2 (en) * 2013-10-17 2018-12-04 National University Of Singapore Chimeric receptors and uses thereof in immune therapy
CN104561069A (zh) * 2013-10-23 2015-04-29 深圳先进技术研究院 含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环dna重组母质粒、含该表达盒的微环dna及应用
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
BR112016010716A8 (pt) 2013-11-13 2020-04-22 Novartis Ag dose de reforço imunológico, baixa, de um inibidor de mtor, seu uso, e adjuvante de vacina
WO2015077717A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status
CA2930587A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors to control hiv infection
WO2015085147A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 The Broad Institute Inc. Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data
CA2932424C (en) 2013-12-06 2023-10-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Thymic stromal lymphopoietin receptor-specific chimeric antigen receptors and methods using same
WO2015090230A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Novartis Ag Human mesothelin chimeric antigen receptors and uses thereof
NZ721908A (en) 2013-12-20 2022-12-23 Massachusetts Gen Hospital Combination therapy with neoantigen vaccine
CA2934436A1 (en) * 2013-12-20 2015-06-25 Cellectis Method of engineering multi-input signal sensitive t cell for immunotherapy
US10287354B2 (en) 2013-12-20 2019-05-14 Novartis Ag Regulatable chimeric antigen receptor
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
AU2014376328A1 (en) * 2014-01-13 2016-07-21 Christine E. BROWN Chimeric antigen receptors (CARs) having mutations in the Fc spacer region and methods for their use
EP3097117B1 (en) 2014-01-21 2023-10-04 Novartis Ag Enhanced antigen presenting ability of car t cells by co-introduction of costimulatory molecules
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
EP3105333B1 (en) 2014-02-10 2020-04-08 Emory University Expression of chimeric polypeptide with variable lymphocyte receptors on immune cells and uses for treating cancer
BR112016017806B1 (pt) * 2014-02-14 2023-05-02 Cellectis Uso de células t engenheiradas para imunoterapia contra células patológicas, e método ex vivo para preparação das mesmas
BR112016018521A2 (pt) 2014-02-14 2017-10-17 Immune Design Corp composição, e, kit.
US10934346B2 (en) 2014-02-14 2021-03-02 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Modified T cell comprising a polynucleotide encoding an inducible stimulating molecule comprising MyD88, CD40 and FKBP12
SG10201811816RA (en) * 2014-02-14 2019-02-27 Univ Texas Chimeric antigen receptors and methods of making
CN106550593A (zh) 2014-02-21 2017-03-29 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 用于黑素瘤的抗‑dll3抗体和药物缀合物
EP3107552B1 (en) * 2014-02-21 2018-03-28 Cellectis Method for in situ inhibition of regulatory t cells
CN103820393B (zh) * 2014-02-24 2016-09-07 西比曼生物科技（上海）有限公司 工程化cd20靶向性的nkt细胞及其制备方法和应用
CA2939305A1 (en) 2014-02-27 2015-09-03 Lycera Corporation Adoptive cellular therapy using an agonist of retinoic acid receptor-related orphan receptor gamma & related therapeutic methods
CN104877028A (zh) * 2014-02-28 2015-09-02 百奥迈科生物技术有限公司 抗dota嵌合抗原受体修饰的t细胞及其抗肿瘤的应用
US11385233B2 (en) 2015-03-05 2022-07-12 Autolus Limited Methods of depleting malignant T-cells
US20230027993A1 (en) 2014-03-05 2023-01-26 Autolus Limited Methods
KR102235202B1 (ko) * 2014-03-05 2021-04-05 유씨엘 비즈니스 리미티드 T 세포 수용체 베타 불변 영역에 대한 항원 결합 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체(car)
GB201403972D0 (en) 2014-03-06 2014-04-23 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
EP3119423B1 (en) 2014-03-15 2022-12-14 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
WO2015143224A1 (en) * 2014-03-19 2015-09-24 Ambrx, Inc. Chimeric antigen receptor-modified t-cells
PL3119807T3 (pl) * 2014-03-19 2019-09-30 Cellectis Specyficzne wobec cd123 chimeryczne receptory antygenowe do immunoterapii nowotworów
CN110845615B (zh) 2014-03-21 2023-10-20 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
KR102170533B1 (ko) 2014-04-03 2020-10-27 셀렉티스 암 면역요법을 위한 cd33 특이적 키메라 항원 수용체들
CN106414726A (zh) * 2014-04-07 2017-02-15 米纳瓦生物技术公司 抗nme抗体
IL280215B (en) * 2014-04-07 2022-07-01 Novartis Ag Cancer treatment using a chimeric receptor antigen (car) against cd19
BR112016023500A2 (pt) 2014-04-10 2017-10-17 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst método e composições para imunoterapia celular
EP3131927B8 (en) 2014-04-14 2020-12-23 Cellectis Bcma (cd269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
WO2015164675A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Juno Therapeutics, Inc. Methods for isolating, culturing, and genetically engineering immune cell populations for adoptive therapy
EP3134434A4 (en) * 2014-04-25 2017-10-25 Bluebird Bio, Inc. Kappa/lambda chimeric antigen receptors
LT3134095T (lt) 2014-04-25 2020-06-10 Bluebird Bio, Inc. Patobulinti adaptyviųjų ląstelių gydymo priemonės gamybos būdai
DK3689899T3 (da) 2014-04-25 2021-11-22 2Seventy Bio Inc Kimære mnd-promotor-antigenreceptorer
US10494422B2 (en) * 2014-04-29 2019-12-03 Seattle Children's Hospital CCR5 disruption of cells expressing anti-HIV chimeric antigen receptor (CAR) derived from broadly neutralizing antibodies
US10167330B2 (en) 2014-05-02 2019-01-01 Emory University Modified recombinant variable lymphocyte receptors (VLR)
CA2984484C (en) 2014-05-02 2024-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor t cells
GB201407852D0 (en) 2014-05-02 2014-06-18 Iontas Ltd Preparation of libraries od protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
AU2015256190B2 (en) 2014-05-05 2019-08-15 Lycera Corporation Tetrahydroquinoline sulfonamide and related compounds for use as agonists of rory and the treatment of disease
US10189777B2 (en) 2014-05-05 2019-01-29 Lycera Corporation Benzenesulfonamido and related compounds for use as agonists of RORγ and the treatment of disease
JP6682509B2 (ja) * 2014-05-14 2020-04-15 カースゲン セラピューティクス リミテッドＣａｒｓｇｅｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ キメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸およびキメラ抗原受容体タンパク質を発現するｔリンパ球
CN112175911B (zh) 2014-05-15 2023-10-13 新加坡国立大学 经修饰的自然杀伤细胞及其用途
SG11201609960QA (en) 2014-06-02 2016-12-29 Us Health Chimeric antigen receptors targeting cd-19
SG10201810723VA (en) * 2014-06-06 2018-12-28 Bluebird Bio Inc Improved t cell compositions
EP3158064A1 (en) * 2014-06-17 2017-04-26 Cellectis Cd123 specific multi-chain chimeric antigen receptor
GB201506423D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Tc Biopharm Ltd Gamma delta T cells and uses thereof
MA40253A (fr) 2014-07-15 2017-05-24 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
EP3172237A2 (en) 2014-07-21 2017-05-31 Novartis AG Treatment of cancer using humanized anti-bcma chimeric antigen receptor
WO2016014553A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
EP3193915A1 (en) 2014-07-21 2017-07-26 Novartis AG Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars
KR20170037625A (ko) * 2014-07-21 2017-04-04 노파르티스 아게 Cll-1 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
ES2805475T3 (es) 2014-07-21 2021-02-12 Novartis Ag Tratamiento del cáncer utilizando un receptor antigénico quimérico de CD33
JP6721568B2 (ja) * 2014-07-29 2020-07-15 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ がん免疫療法のためのｒｏｒ１（ｎｔｒｋｒ１）特異的キメラ抗原レセプター
AU2015295346A1 (en) * 2014-07-29 2017-02-16 Allogene Therapeutics, Inc. EGFRvlll specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
EP3660042B1 (en) 2014-07-31 2023-01-11 Novartis AG Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing t-cells
US10544201B2 (en) 2014-07-31 2020-01-28 Cellectis ROR1 specific multi-chain chimeric antigen receptor
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
EP3712171A1 (en) 2014-08-19 2020-09-23 Novartis AG Treatment of cancer using a cd123 chimeric antigen receptor
CA2957958C (en) 2014-08-27 2023-10-17 Harvey Cantor Intracellular osteopontin regulates the lineage commitment of lymphoid subsets
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
CA2959508A1 (en) 2014-08-29 2016-03-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Administration of kynurenine depleting enzymes for tumor therapy
EP2990416B1 (en) * 2014-08-29 2018-06-20 GEMoaB Monoclonals GmbH Universal chimeric antigen receptor expressing immune cells for targeting of diverse multiple antigens and method of manufacturing the same and use of the same for treatment of cancer, infections and autoimmune disorders
JP6868554B2 (ja) * 2014-09-02 2021-05-12 ベリカム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ＭｙＤ８８およびＣＤ４０ポリペプチドによるキメラ抗原受容体の共刺激
EP3699188A1 (en) * 2014-09-04 2020-08-26 Cellectis 5t4 (tpbg) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
US20180133252A9 (en) 2014-09-09 2018-05-17 Unum Therapeutics Inc. Chimeric receptors and uses thereof in immune therapy
EP3659621A1 (en) 2014-09-13 2020-06-03 Novartis AG Combination therapies for cancer
ES2875057T3 (es) 2014-09-17 2021-11-08 Us Health Anticuerpos anti-CD276 (B7H3)
MX2017003645A (es) 2014-09-17 2017-05-30 Novartis Ag Direccion de celulas citotoxicas con receptores quimericos para inmunoterapia adoptiva.
IL292650B2 (en) * 2014-09-19 2024-04-01 Hope City IL13RA2-targeted chimeric antigen receptor T cells
DK3200815T3 (da) 2014-10-02 2021-05-10 Wistar Inst Fremgangsmåder og sammensætninger til behandling af cancer
US20170209574A1 (en) 2014-10-03 2017-07-27 Novartis Ag Combination therapies
CN107109368A (zh) * 2014-10-07 2017-08-29 塞勒克提斯公司 用于调节car诱导的免疫细胞活性的方法
WO2016057705A1 (en) 2014-10-08 2016-04-14 Novartis Ag Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof
WO2016056228A1 (ja) * 2014-10-09 2016-04-14 国立大学法人山口大学 Ｃａｒ発現ベクター及びｃａｒ発現ｔ細胞
KR102122463B1 (ko) 2014-10-14 2020-06-15 할로자임, 아이엔씨 아데노신 디아미네이즈-2(ada2)의 조성물, 이의 변이체 및 이를 사용하는 방법
IL293714A (en) 2014-10-20 2022-08-01 Juno Therapeutics Inc Methods and preparations for dosing in stress cell therapy
KR20230098910A (ko) * 2014-10-31 2023-07-04 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 변형된 t 세포에서 유전자 발현의 변경 및 그의 용도
WO2016069993A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of stimulating and expanding t cells
CA2964785A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Gene modified immune effector cells and engineered cells for expansion of immune effector cells
CA2964783C (en) 2014-11-05 2024-01-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptors (car) to selectively target protein complexes
WO2016073748A1 (en) * 2014-11-05 2016-05-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Biomarkers and targets for cancer immunotherapy
TWI787903B (zh) 2014-11-05 2022-12-21 美商奇諾治療有限公司 用於轉導作用及細胞處理之方法
US9879087B2 (en) 2014-11-12 2018-01-30 Siamab Therapeutics, Inc. Glycan-interacting compounds and methods of use
PL3218005T3 (pl) 2014-11-12 2023-05-02 Seagen Inc. Związki oddziałujące z glikanami i sposoby ich zastosowania
CN105601746B (zh) * 2014-11-21 2021-02-19 三生国健药业（上海）股份有限公司 一种嵌合Fc受体的融合蛋白及其制备方法和应用
WO2016090034A2 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Novartis Ag Methods for b cell preconditioning in car therapy
JP7068820B2 (ja) 2014-12-03 2022-05-17 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 養子細胞療法のための方法および組成物
CN113698497A (zh) 2014-12-05 2021-11-26 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 靶向b-细胞成熟抗原的嵌合抗原受体及其用途
EP4015534A1 (en) 2014-12-05 2022-06-22 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof
CN107429253B (zh) 2014-12-05 2021-11-05 希望之城公司 Cs1靶向性嵌合抗原受体修饰的t细胞
EP3227324A4 (en) 2014-12-05 2018-08-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies targeting g-protein coupled receptor and methods of use
AU2015357533B2 (en) 2014-12-05 2021-10-07 Eureka Therapeutics, Inc. Antibodies targeting B-cell maturation antigen and methods of use
PL3230310T3 (pl) * 2014-12-08 2020-02-28 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeryczne receptory antygenowe anty-cd70
WO2016094783A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scaav
LT3628687T (lt) 2014-12-12 2021-11-10 2Seventy Bio, Inc. Chimeriniai bcma antigeno receptoriai
WO2016100233A1 (en) 2014-12-15 2016-06-23 The Regents Of The University Of California Cytotoxic molecules responsive to intracellular ligands for selective t cell mediated killing
CA3008162A1 (en) 2014-12-15 2016-06-23 The Regents Of The University Of California Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
WO2016100975A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Massachsetts Institute Ot Technology Molecular biomarkers for cancer immunotherapy
US10993997B2 (en) 2014-12-19 2021-05-04 The Broad Institute, Inc. Methods for profiling the t cell repertoire
FI3560953T3 (fi) * 2014-12-24 2024-03-21 Autolus Ltd Solu
SG11201705293WA (en) 2014-12-29 2017-07-28 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
MA41346A (fr) 2015-01-12 2017-11-21 Juno Therapeutics Inc Eléments régulateurs post-transcriptionnels d'hépatite modifiée
US11459390B2 (en) 2015-01-16 2022-10-04 Novartis Ag Phosphoglycerate kinase 1 (PGK) promoters and methods of use for expressing chimeric antigen receptor
AR103442A1 (es) 2015-01-16 2017-05-10 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores de antígenos quiméricos específicos de ror1
WO2016120220A1 (en) 2015-01-26 2016-08-04 Cellectis T cell receptor knock out engineered immune cells, endowed with chimeric antigen receptors binding to cd123 for the treatment of relapsed/refractory acute myeloid lymphoma or blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm
EP3250587B1 (en) * 2015-01-29 2020-03-25 Regents of the University of Minnesota Chimeric antigen receptors, compositions, and methods
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
US10765699B2 (en) 2015-02-06 2020-09-08 National University Of Singapore Methods for enhancing efficacy of therapeutic immune cells
US10457737B2 (en) 2015-02-09 2019-10-29 Research Development Foundation Engineered immunoglobulin Fc polypeptides displaying improved complement activation
US20160228544A1 (en) * 2015-02-11 2016-08-11 Ensysce Biosciences, Inc. Single Walled Carbon Nanotube Polynucleotide Complexes and Methods Related Thereto
WO2016134371A2 (en) 2015-02-20 2016-08-25 Ohio State Innovation Foundation Bivalent antibody directed against nkg2d and tumor associated antigens
MA41613A (fr) * 2015-02-23 2018-01-02 Abbvie Stemcentrx Llc Récepteurs antigéniques chimériques anti-dll3 et procédés d'utilisation desdits récepteurs
EP3261656B1 (en) 2015-02-24 2020-08-19 Board of Regents, The University of Texas System Selection methods for genetically-modified t cells
CN108064283B (zh) 2015-02-24 2024-01-09 加利福尼亚大学董事会 结合触发的转录开关及其使用方法
CA2977106A1 (en) * 2015-02-27 2016-09-01 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptors (cars) targeting hematologic malignancies, compositions and methods of use thereof
US10195272B2 (en) 2015-03-02 2019-02-05 The Nemours Foundation Adoptive t-cell therapy using FcεRI-based chimeric antigen receptors for treating IgE-mediated allergic diseases
EP3089761B1 (en) 2015-03-02 2019-06-12 Innovative Cellular Therapeutics Co., Ltd. Reducing immune tolerance induced by pd l1
SG10201908203SA (en) * 2015-03-05 2019-10-30 Hutchinson Fred Cancer Res Immunomodulatory Fusion Proteins And Uses Thereof
WO2016145298A1 (en) 2015-03-12 2016-09-15 The Regents Of The University Of California METHODS FOR TREATING CANCER WITH RORgamma INHIBITORS
WO2016149578A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Dual specific anti-cd22-anti-cd19 chimeric antigen receptors
PL3271389T3 (pl) 2015-03-20 2020-08-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizujące przeciwciała wiążące się z gp120 i ich stosowanie
US10800828B2 (en) 2015-03-26 2020-10-13 The Scripps Research Institute Switchable non-scFv chimeric receptors, switches, and methods of use thereof to treat cancer
WO2016160622A2 (en) * 2015-03-27 2016-10-06 University Of Southern California Hla-g as a novel target for car t-cell immunotherapy
JP2018518152A (ja) * 2015-03-27 2018-07-12 ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア 充実性腫瘍を処置するためのｌｈｒに指向されたｃａｒ ｔ細胞治療
KR20170134525A (ko) * 2015-04-02 2017-12-06 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 Tnfrsf14 / hvem 단백질 및 이의 이용 방법
AU2016243026B2 (en) 2015-04-03 2022-03-31 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting AFP peptide/MHC complexes and uses thereof
RS61907B1 (sr) 2015-04-06 2021-06-30 Subdomain Llc Polipeptidi koji sadrže de novo vezujući domen i njihova primena
AU2016246457B2 (en) 2015-04-06 2020-10-15 Cytoimmune Therapeutics, Inc. EGFR-directed car therapy for glioblastoma
US10253086B2 (en) 2015-04-08 2019-04-09 Novartis Ag CD20 therapies, CD22 therapies, and combination therapies with a CD19 chimeric antigen receptor (CAR)-expressing cell
WO2016168773A2 (en) 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Optimized pne-based chimeric receptor t cell switches and uses thereof
WO2016166568A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Juno Therapeutics Gmbh Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
CN108473957A (zh) 2015-04-17 2018-08-31 诺华股份有限公司 改善嵌合抗原受体表达细胞的功效和扩增的方法
EP3286211A1 (en) 2015-04-23 2018-02-28 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
KR20180021685A (ko) 2015-04-25 2018-03-05 더 제너럴 하스피털 코포레이션 암 치료용 항-기피주성제와 항암제 조합 요법 및 조성물
JP6985934B2 (ja) * 2015-04-29 2021-12-22 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 操作された造血幹細胞／前駆細胞及び非ｔエフェクター細胞、ならびにその使用
WO2016176652A2 (en) 2015-04-29 2016-11-03 Fred Hutchinson Cancer Research Center Modified stem cells and uses thereof
EP3288568A4 (en) * 2015-04-30 2019-01-02 University of Southern California Secretory tnt car cell immunotherapy
WO2016174652A1 (en) 2015-04-30 2016-11-03 Technion Research & Development Foundation Limited Chimeric antigen receptors and methods of their use
EP4088732A1 (en) 2015-05-01 2022-11-16 The Regents of The University of California Glycan-dependent immunotherapeutic molecules
WO2016179343A1 (en) 2015-05-05 2016-11-10 Lycera Corporation DIHYDRO-2H-BENZO[b][1,4]OXAZINE SULFONAMIDE AND RELATED COMPOUNDS FOR USE AS AGONISTS OF RORy AND THE TREATMENT OF DISEASE
KR20200091499A (ko) 2015-05-06 2020-07-30 스니프르 테크놀로지스 리미티드 미생물 개체군 변경 및 미생물군 변형
JP2018515139A (ja) 2015-05-08 2018-06-14 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 万能ドナー幹細胞および関連する方法
US20200316231A1 (en) * 2015-05-10 2020-10-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions And Methods For Imaging Immune Cells
US11253616B2 (en) 2017-09-06 2022-02-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Small molecules for dual function positron emission tomography (PET) and cell suicide switches
WO2016180467A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh Enhancing the effect of car-engineered t cells by means of nucleic acid vaccination
DK3447075T3 (da) 2015-05-15 2023-11-13 Massachusetts Gen Hospital Antagonistiske antistoffer af antitumornekrosefaktorreceptor-superfamilien
CN108137669B (zh) * 2015-05-18 2023-02-17 优瑞科生物技术公司 抗ror1嵌合抗原受体
SG10201914069SA (en) 2015-05-18 2020-03-30 Tcr2 Therapeutics Inc Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
US10434153B1 (en) 2015-05-20 2019-10-08 Kim Leslie O'Neill Use of car and bite technology coupled with an scFv from an antibody against human thymidine kinase 1 to specifically target tumors
AU2016263513A1 (en) * 2015-05-20 2017-11-23 Cellectis Anti-GD3 specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
IL294183B2 (en) 2015-05-20 2023-10-01 Dana Farber Cancer Inst Inc shared neoantigens
KR20180058659A (ko) 2015-05-20 2018-06-01 노파르티스 아게 에베롤리무스와 닥톨리십의 약제학적 병용물
KR20180020141A (ko) * 2015-05-28 2018-02-27 아르모 바이오사이언시스 인코포레이티드 암 치료에 사용되는 peg화된 인터류킨-10
US9855298B2 (en) * 2015-05-28 2018-01-02 Kite Pharma, Inc. Methods of conditioning patients for T cell therapy
JP6917903B2 (ja) 2015-05-28 2021-08-11 カイト ファーマ インコーポレイテッドＫｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ， Ｉｎｃ Ｔ細胞療法のための診断方法
MA43344A (fr) 2015-05-29 2018-04-11 Juno Therapeutics Inc Composition et procédés de régulation des interactions inhibitrices dans les cellules génétiquement modifiées
US20180161369A1 (en) 2015-05-29 2018-06-14 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions for cellular immunotherapy
CN114656573A (zh) 2015-05-30 2022-06-24 分子模板公司 去免疫化的志贺毒素a亚基支架和包含它们的细胞靶向分子
JP7010473B2 (ja) 2015-06-04 2022-02-10 ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア Ｌｙｍ－１およびｌｙｍ－２標的化ｃａｒ細胞免疫療法
SG10202110399WA (en) 2015-06-05 2021-11-29 Novartis Ag Flow-through paramagnetic particle-based cell separation and paramagnetic particle removal
JP7000162B2 (ja) 2015-06-09 2022-02-10 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター ヒトｈｌａにより提示されるｅｂｖ潜伏感染膜タンパク質２ａペプチドに特異的なｔ細胞受容体様抗体剤
ES2958720T3 (es) 2015-06-10 2024-02-13 Immunitybio Inc Células NK-92 modificadas para tratar el cáncer
EP3307738B1 (en) 2015-06-11 2022-04-20 The Regents of the University of Michigan Aryl dihydro-2h-benzo[b][1,4]oxazine sulfonamide and related compounds for use as agonists of rory and the treatment of disease
CN105177031B (zh) * 2015-06-12 2018-04-24 北京艺妙神州医疗科技有限公司 嵌合抗原受体修饰的t细胞及其用途
ES2961346T3 (es) 2015-06-12 2024-03-11 Lentigen Tech Inc Procedimiento para tratar cáncer con células T modificadas genéticamente
EP3307282A4 (en) * 2015-06-12 2019-05-01 Immunomedics, Inc. TREATMENT OF DISEASES WITH CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (CAR) AND T-CELL (T-CAR) OR NK (CAR-NK) CELL EXPRESSION CONSTRUCTIONS CAR CONSTRUCTIONS
CA3012607A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Crispr enzymes and systems
PT3310805T (pt) * 2015-06-19 2021-05-19 Kobold Sebastian Proteínas de fusão pd-1-cd28 e a sua utilização em medicina
SG10201913682QA (en) 2015-06-25 2020-03-30 Icell Gene Therapeutics Llc CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (CARs), COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
US11173179B2 (en) 2015-06-25 2021-11-16 Icell Gene Therapeutics Llc Chimeric antigen receptor (CAR) targeting multiple antigens, compositions and methods of use thereof
WO2017004252A1 (en) 2015-06-30 2017-01-05 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Redirected cells with mhc chimeric receptors and methods of use in immunotherapy
MA42902A (fr) * 2015-07-08 2018-05-16 Univ Johns Hopkins Lymphocytes infiltrant la moelle (mil) en tant que source de lymphocytes t pour une thérapie par des récepteurs chimériques d'un antigène (car)
US11116795B2 (en) * 2015-07-10 2021-09-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of a canine CD20 positive disease or condition using a canine CD20-specific chimeric antigen receptor
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
AR105433A1 (es) 2015-07-21 2017-10-04 Novartis Ag Métodos para mejorar la eficacia y expansión de las células inmunes
US10493139B2 (en) 2015-07-24 2019-12-03 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Humanized anti-CD19 antibody and use thereof with chimeric antigen receptor
KR20180028533A (ko) 2015-07-28 2018-03-16 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 키메릭 항원 수용체를 발현하는 변형된 단핵세포/대식세포 및 그의 용도
EP3328399B1 (en) 2015-07-31 2023-12-27 Regents of the University of Minnesota Modified cells and methods of therapy
ES2877090T3 (es) * 2015-08-05 2021-11-16 Cellabmed Inc Receptor de antígenos quiméricos y células T en las que se expresa el receptor de antígenos quiméricos
US11667691B2 (en) 2015-08-07 2023-06-06 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric CD3 receptor proteins
CA2994829A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Bispecific car t-cells for solid tumor targeting
WO2017027653A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 The Johns Hopkins University Assaying ovarian cyst fluid
US11352439B2 (en) 2015-08-13 2022-06-07 Kim Leslie O'Neill Macrophage CAR (MOTO-CAR) in immunotherapy
CN106467906B (zh) * 2015-08-20 2019-09-27 北京马力喏生物科技有限公司 构建体、转基因淋巴细胞及其制备方法和用途
US10976232B2 (en) 2015-08-24 2021-04-13 Gpb Scientific, Inc. Methods and devices for multi-step cell purification and concentration
WO2017040380A2 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Research Development Foundation Engineered antibody fc variants
EP4218777A3 (en) * 2015-08-28 2023-08-23 The Trustees of the University of Pennsylvania Methods and compositions for cells expressing a chimeric intracellular signaling molecule
WO2017040324A1 (en) 2015-08-28 2017-03-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for cells expressing a chimeric intracellular signaling molecule
KR20180037294A (ko) * 2015-08-31 2018-04-11 블루버드 바이오, 인코포레이티드. 항-시알릴 Tn 키메라 항원 수용체
EP3344996A2 (en) 2015-09-03 2018-07-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Biomarkers predictive of cytokine release syndrome
KR20180043841A (ko) * 2015-09-11 2018-04-30 카리나 바이오테크 피티와이 엘티디 키메라 항원 수용체 및 이의 용도
MA44909A (fr) 2015-09-15 2018-07-25 Acerta Pharma Bv Association thérapeutique d'un inhibiteur du cd19 et d'un inhibiteur de la btk
JP2018527010A (ja) * 2015-09-18 2018-09-20 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション ドゥーイング ビジネス アズ マサチューセッツ ジェネラル ホスピタル 抗ｆｕｇｅｔａｃｔｉｃ特性を有する改変されたＴ細胞およびその使用
CN108348606A (zh) 2015-09-18 2018-07-31 综合医院公司以麻省总医院名义经营 用于治疗癌症的抗趋除剂的局部递送
US10738099B2 (en) * 2015-09-22 2020-08-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of redirecting T cells to treat HIV infection
BR112018005931A2 (pt) 2015-09-24 2018-10-09 Abvitro Llc composições de anticorpo para hiv e métodos de uso
EP3353550A1 (en) 2015-09-25 2018-08-01 AbVitro LLC High throughput process for t cell receptor target identification of natively-paired t cell receptor sequences
EP3858388A1 (en) 2015-09-28 2021-08-04 Regents of the University of Minnesota Chimeric antigen receptor (car) t cells as therapeutic interventions for auto- and allo-immunity
US11365391B2 (en) 2015-09-28 2022-06-21 Trustees Of Dartmouth College Chimeric antigen receptor anti-inflammatory cells and methods of use
BR112018006991A2 (pt) * 2015-10-06 2018-10-16 Hope City receptores de antígeno quiméricos direcionados ao psca
WO2017062748A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
EP4289944A3 (en) * 2015-10-08 2024-03-13 National University Corporation Tokai National Higher Education and Research System Method for preparing genetically-modified t cells which express chimeric antigen receptor
CN108138148B (zh) 2015-10-08 2021-10-29 上海斯丹赛生物技术有限公司 T细胞的激活和扩增
CN105153315B (zh) * 2015-10-09 2019-04-02 重庆精准生物技术有限公司 免疫抑制受体联合肿瘤抗原嵌合受体及其应用
CN108779162B (zh) * 2015-10-09 2021-12-07 美天施生物科技有限公司 嵌合抗原受体和使用方法
CN116640849A (zh) * 2015-10-09 2023-08-25 夸登特健康公司 使用无细胞dna的基于群体的治疗推荐
WO2017069958A2 (en) 2015-10-09 2017-04-27 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modulation of novel immune checkpoint targets
CN105924530B (zh) * 2015-10-13 2019-08-06 中国人民解放军总医院 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、car20-nkt细胞及其制备方法和应用
CN106755023A (zh) * 2015-10-15 2017-05-31 中国人民解放军军事医学科学院附属医院 带安全开关的嵌合抗原受体免疫细胞及其制备方法与应用
US11723922B2 (en) 2015-10-16 2023-08-15 Ludwig-Maximilians-Universität München CXCR6-transduced T cells for targeted tumor therapy
CA3001859A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for inhibition of lineage specific antigens
AU2016341131A1 (en) 2015-10-19 2018-05-10 University Of Massachusetts Anti-cancer and anti-inflammatory therapeutics and methods thereof
IL305306A (en) 2015-10-20 2023-10-01 Us Health Methods of preparing T cells for T cell therapy
MA45488A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés, kits et appareil de culture de cellules
WO2017068419A2 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Juno Therapeutics Gmbh Methods, kits, agents and apparatuses for transduction
MA45489A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés de culture de cellules, kits et appareil associés
AU2016341321A1 (en) * 2015-10-23 2018-06-07 Sorrento Therapeutics, Inc. Programmable universal cell receptors and methods of using the same
CN105132445B (zh) * 2015-10-23 2018-10-02 马健颖 一种特异识别肿瘤细胞的受体蛋白、t淋巴细胞及nk细胞
EP3368075B1 (en) 2015-10-27 2020-01-29 Board of Regents, The University of Texas System Chimeric antigen receptor molecules and uses thereof
WO2017075465A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting gata3
WO2017075451A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting pou2af1
WO2017075478A2 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by use of immune cell gene signatures
MA44314A (fr) * 2015-11-05 2018-09-12 Juno Therapeutics Inc Récepteurs chimériques contenant des domaines induisant traf, et compositions et méthodes associées
US11020429B2 (en) 2015-11-05 2021-06-01 Juno Therapeutics, Inc. Vectors and genetically engineered immune cells expressing metabolic pathway modulators and uses in adoptive cell therapy
IL302822A (en) 2015-11-12 2023-07-01 Seagen Inc Compounds interacting with glycans and methods of use
CN105331585A (zh) * 2015-11-13 2016-02-17 科济生物医药（上海）有限公司 携带pd-l1阻断剂的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞
CN105384826A (zh) * 2015-11-19 2016-03-09 广州熙帝生物科技有限公司 表达嵌合抗原受体的脐血有核细胞及其应用
AU2016355178B9 (en) 2015-11-19 2019-05-30 Massachusetts Institute Of Technology Lymphocyte antigen CD5-like (CD5L)-interleukin 12B (p40) heterodimers in immunity
ES2862907T3 (es) * 2015-11-27 2021-10-08 Cartherics Pty Ltd Células genéticamente modificadas y usos de las mismas
AU2016363025B2 (en) 2015-12-03 2021-04-08 Juno Therapeutics, Inc. Modified chimeric receptors and related compositions and methods
ES2928167T3 (es) 2015-12-03 2022-11-15 Juno Therapeutics Inc Composiciones y métodos para reducir las respuestas inmunitarias contra receptores de antígenos quiméricos
EP3384027A1 (en) 2015-12-04 2018-10-10 Novartis AG Compositions and methods for immunooncology
WO2017095525A1 (en) * 2015-12-04 2017-06-08 David Scott Antigen-specific t cells for inducing immune tolerance
EP4012415A3 (en) 2015-12-04 2022-12-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions related to toxicity associated with cell therapy
WO2017099712A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Bluebird Bio, Inc. Improved t cell compositions
EP3389634B1 (en) 2015-12-14 2021-10-06 X4 Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer
US11357742B2 (en) 2015-12-14 2022-06-14 X4 Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer
WO2017112894A1 (en) 2015-12-22 2017-06-29 X4 Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating immunodeficiency disease
US11413340B2 (en) 2015-12-22 2022-08-16 Novartis Ag Mesothelin chimeric antigen receptor (CAR) and antibody against PD-L1 inhibitor for combined use in anticancer therapy
JP2019500394A (ja) 2015-12-30 2019-01-10 ノバルティス アーゲー 有効性が増強された免疫エフェクター細胞治療
SG11201804038VA (en) 2016-01-08 2018-06-28 Univ California Conditionally active heterodimeric polypeptides and methods of use thereof
GB201600328D0 (en) 2016-01-08 2016-02-24 Univ Oslo Hf Anti-CD37 chimeric antigen receptors and immune cells expressing them
CN105950645A (zh) * 2016-01-11 2016-09-21 灏灵赛奥（天津）生物科技有限公司 Car-cd19抗原受体的人源化融合基因片段、其构建方法及应用
CN109069627A (zh) * 2016-01-14 2018-12-21 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 对foxp3衍生肽特异性的t细胞受体样抗体
JP2019504071A (ja) * 2016-01-15 2019-02-14 ザ・ウイスター・インステイテユート・オブ・アナトミー・アンド・バイオロジー がんを処置するための方法及び組成物
TWI755547B (zh) 2016-01-21 2022-02-21 美商輝瑞股份有限公司 靶向表皮生長因子受體變異體iii之嵌合型抗原受體
TW201936640A (zh) 2016-01-21 2019-09-16 美商輝瑞股份有限公司 對表皮生長因子受體變異體ｉｉｉ具特異性之抗體類及彼等之用途
CN105567640A (zh) * 2016-01-27 2016-05-11 苏州佰通生物科技有限公司 一种嵌合抗原受体脂肪干细胞及其制备方法
US10179919B2 (en) 2016-02-23 2019-01-15 Immune Design Corp. Multigenome retroviral vector preparations and methods and systems for producing and using same
WO2017151860A1 (en) 2016-03-02 2017-09-08 Broard Of Regents, The University Of Texas System Human kynureninase enzyme variants having improved pharmacological properties
RU2018134771A (ru) 2016-03-04 2020-04-06 Новартис Аг Клетки, экспрессирующие множество молекул химерных антигенных рецепторов (car), и их применение
CA3017603A1 (en) * 2016-03-14 2017-09-21 Wisconsin Alumni Research Foundation Methods of t cell expansion and activation
US20190355459A1 (en) 2016-03-16 2019-11-21 Juno Therapeutics, Inc. Methods for adaptive design of a treatment regimen and related treatments
MA43758A (fr) 2016-03-16 2018-11-28 Yuan Ji Procédés pour déterminer le dosage d'un agent thérapeutique et traitements associés
RU2770812C2 (ru) 2016-03-17 2022-04-22 Ямагути Университи Иммунокомпетентная клетка и экспрессирующий вектор, экспрессирующие регуляторные факторы иммунной функции
EP3939994A3 (en) 2016-03-18 2022-04-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for cd20 immunotherapy
ES2907557T3 (es) 2016-03-22 2022-04-25 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst Métodos de intervención temprana para prevenir o mejorar la toxicidad
WO2017165683A1 (en) 2016-03-23 2017-09-28 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
CN113082201A (zh) * 2016-04-01 2021-07-09 上海斯丹赛生物技术有限公司 刺激t细胞介导的对表达抗原的细胞群的免疫应答的方法
BR112018070073A2 (pt) 2016-04-01 2019-02-12 Kite Pharma, Inc. receptores de antígeno quimérico e célula t e métodos de uso
MA44507A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Amgen Inc Récepteurs chimères de flt3 et leurs procédés d'utilisation
US10654934B2 (en) 2016-04-01 2020-05-19 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Use of chimeric antigen receptor modified cells to treat cancer
AU2017240150C1 (en) 2016-04-01 2022-10-27 Kite Pharma, Inc. BCMA binding molecules and methods of use thereof
CR20210084A (es) 2016-04-01 2021-03-26 Amgen Inc Receptores quiméricos y métodos de uso de los mismos (divisional 2018-0480)
EP3439685B1 (en) 2016-04-08 2023-07-05 Emory University Methods of treating cancer and infectious diseases using cell based therapies
CA3019394A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 X4 Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer
US11446398B2 (en) 2016-04-11 2022-09-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
CN106399255B (zh) * 2016-04-13 2019-10-18 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 Pd-1 car-t细胞及其制备方法和应用
US10188749B2 (en) 2016-04-14 2019-01-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to program therapeutic cells using targeted nucleic acid nanocarriers
SG11201808783XA (en) 2016-04-15 2018-11-29 Alpine Immune Sciences Inc Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
ES2944607T3 (es) 2016-04-15 2023-06-22 Novartis Ag Composiciones y métodos para la expresión selectiva de receptores quiméricos para el antígeno
US20190346442A1 (en) 2016-04-18 2019-11-14 The Broad Institute, Inc. Improved hla epitope prediction
CN105907719B (zh) * 2016-04-18 2019-10-18 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 Anti ROBO1 CAR-T细胞及其制备和应用
ES2937699T3 (es) 2016-04-22 2023-03-30 Crage Medical Co Ltd Composiciones y métodos de inmunoterapia celular
WO2017192536A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 University Of Kansas Eliminating mhc restriction from the t cell receptor as a strategy for immunotherapy
CN116850305A (zh) 2016-05-06 2023-10-10 朱诺治疗学股份有限公司 基因工程化细胞及其制备方法
WO2017195153A1 (en) * 2016-05-11 2017-11-16 The University Of Chicago Methods of treating cancers with ct45 targeted therapies
EP3464366A1 (en) * 2016-05-27 2019-04-10 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Flt3-specific chimeric antigen receptors and methods using same
EP3464323B1 (en) 2016-05-27 2021-09-22 Aadigen, LLC Peptides and nanoparticles for intracellular delivery of genome-editing molecules
CN105837693A (zh) * 2016-05-30 2016-08-10 李斯文 一种基于bcma的抗原嵌合受体及其制备方法和应用
WO2017210617A2 (en) 2016-06-02 2017-12-07 Porter, David, L. Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells
EP4011381A1 (en) 2016-06-03 2022-06-15 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Adoptive cell therapies as early treatment options
GB201609811D0 (en) 2016-06-05 2016-07-20 Snipr Technologies Ltd Methods, cells, systems, arrays, RNA and kits
US11390658B2 (en) 2016-06-06 2022-07-19 St. Jude Children's Research Hospital Anti-CD7 chimeric antigen receptor and method of use thereof
MA45341A (fr) 2016-06-06 2019-04-10 Hutchinson Fred Cancer Res Procédés de traitement de malignités de lymphocytes b au moyen d'une thérapie cellulaire adoptive
TW202304996A (zh) 2016-06-08 2023-02-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
US20200121803A1 (en) 2016-06-08 2020-04-23 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
US20200002421A1 (en) 2016-06-08 2020-01-02 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
EP3469000A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CA3025667A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Intrexon Corporation Cd33 specific chimeric antigen receptors
MX2018015274A (es) 2016-06-08 2019-10-07 Abbvie Inc Anticuerpos anti-cd98 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
BR112018075644A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de anticorpo e fármaco
WO2017223229A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 X4 Pharmaceuticals, Inc. Cxcr4 inhibitors and uses thereof
CN109641838A (zh) 2016-06-21 2019-04-16 X4 制药有限公司 Cxcr4抑制剂及其用途
EP3808748A1 (en) 2016-06-21 2021-04-21 X4 Pharmaceuticals, Inc. Substituted piperidines as cxcr4-inhibitors
JP7114490B2 (ja) 2016-06-24 2022-08-08 アイセル・ジーン・セラピューティクス・エルエルシー キメラ抗体受容体（ＣＡＲｓ）の構成およびその使用方法
CN106117367B (zh) * 2016-06-24 2020-02-11 安徽未名细胞治疗有限公司 一种her-3特异性嵌合抗原受体及其应用
MA45491A (fr) 2016-06-27 2019-05-01 Juno Therapeutics Inc Épitopes à restriction cmh-e, molécules de liaison et procédés et utilisations associés
CN110291402B (zh) 2016-06-27 2023-09-01 朱诺治疗学股份有限公司 鉴定肽表位的方法、结合此类表位的分子和相关用途
CN109476749A (zh) 2016-06-30 2019-03-15 豪夫迈·罗氏有限公司 改良的过继性t细胞疗法
US10501775B2 (en) 2016-07-12 2019-12-10 Kite Pharma, Inc. Antigen binding molecules and methods of use thereof
JP2018035137A (ja) 2016-07-13 2018-03-08 マブイミューン ダイアグノスティックス エイジーＭａｂｉｍｍｕｎｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｇ 新規な抗線維芽細胞活性化タンパク質（ｆａｐ）結合薬剤およびその使用
JP7219376B2 (ja) 2016-07-15 2023-02-08 ノバルティス アーゲー キメラ抗原受容体をキナーゼ阻害薬と併用して使用したサイトカイン放出症候群の治療及び予防
US11242386B2 (en) * 2016-07-18 2022-02-08 Helix Biopharma Corp. CEACAM6 CAR immune cells to treat cancers
WO2018017708A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 University Of Utah Research Foundation Cd229 car t cells and methods of use thereof
US11384156B2 (en) 2016-07-25 2022-07-12 The Nemours Foundation Adoptive T-cell therapy using EMPD-specific chimeric antigen receptors for treating IgE-mediated allergic diseases
CA3032120A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20190034588A (ko) 2016-07-28 2019-04-02 노파르티스 아게 키메라 항원 수용체 및 pd-1 억제제의 조합 요법
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
MA45784A (fr) 2016-07-29 2019-06-05 Juno Therapeutics Inc Anticorps anti-idiotypes dirigés contre anti-cd19 anticorps
CN109804089A (zh) 2016-07-29 2019-05-24 朱诺治疗学股份有限公司 用于评估复制型病毒存在或不存在的方法
MA45779A (fr) 2016-07-29 2019-06-05 Juno Therapeutics Inc Polypeptides immunomdulateurs et compositions et procédés associés
CN110267677A (zh) 2016-08-01 2019-09-20 诺华股份有限公司 使用与原m2巨噬细胞分子抑制剂组合的嵌合抗原受体治疗癌症
AU2017306432A1 (en) 2016-08-02 2019-03-21 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins
US11078481B1 (en) 2016-08-03 2021-08-03 KSQ Therapeutics, Inc. Methods for screening for cancer targets
WO2018035364A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 The Broad Institute Inc. Product and methods useful for modulating and evaluating immune responses
CN110121352B (zh) 2016-09-01 2020-12-11 嵌合体生物工程公司 Gold优化的car t-细胞
US11078483B1 (en) 2016-09-02 2021-08-03 KSQ Therapeutics, Inc. Methods for measuring and improving CRISPR reagent function
WO2018045325A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
US11701384B2 (en) 2016-09-02 2023-07-18 The Regents Of The University Of California Methods and compositions involving interleukin-6 receptor alpha-binding single chain variable fragments
US20190262399A1 (en) 2016-09-07 2019-08-29 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses
US20190211292A1 (en) 2016-09-12 2019-07-11 Juno Therapeutics, Inc. Perfusion bioreactor bag assemblies
AU2017332161A1 (en) * 2016-09-21 2019-04-04 The United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs Chimeric antigen receptor (car) that targets chemokine receptor CCR4 and its use
WO2018057904A1 (en) * 2016-09-23 2018-03-29 University Of Southern California Chimeric antigen receptors and compositions and methods of use thereof
TWI695010B (zh) 2016-09-28 2020-06-01 美商凱特製藥公司 抗原結合分子類和使用彼等之方法
WO2018063985A1 (en) 2016-09-28 2018-04-05 Atossa Genetics Inc. Methods of adoptive cell therapy
WO2018067618A1 (en) 2016-10-03 2018-04-12 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
WO2018067991A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modulation of novel immune checkpoint targets
EP3445787B1 (en) 2016-10-07 2020-12-02 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for t-cell receptors reprogramming using fusion proteins
EP3523331A1 (en) 2016-10-07 2019-08-14 Novartis AG Chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN107151654B (zh) * 2016-10-11 2020-05-05 深圳宾德生物技术有限公司 一种人源t淋巴细胞的培养基及其制备方法和应用
CN107936120B (zh) * 2016-10-13 2021-03-09 上海赛比曼生物科技有限公司 Cd19靶向性的嵌合抗原受体及其制法和应用
AU2017343780B2 (en) 2016-10-13 2023-08-31 Juno Therapeutics, Inc. Immunotherapy methods and compositions involving tryptophan metabolic pathway modulators
WO2018075664A1 (en) 2016-10-18 2018-04-26 Regents Of The University Of Minnesota Tumor infiltrating lymphocytes and methods of therapy
EP3529268A1 (en) * 2016-10-19 2019-08-28 The Scripps Research Institute Chimeric antigen receptor effector cell switches with humanized targeting moieties and/or optimized chimeric antigen receptor interacting domains and uses thereof
CN110352245A (zh) 2016-10-20 2019-10-18 高山免疫科学股份有限公司 可分泌变体免疫调节蛋白和工程化细胞疗法
WO2018075820A2 (en) 2016-10-20 2018-04-26 Celgene Corporation Cereblon-based heterodimerizable chimeric antigen receptors
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
MX2019005029A (es) 2016-11-03 2019-10-24 Juno Therapeutics Inc Terapia de combinación de una terapia de células t y un inhibidor de tirosina cinasa de bruton (btk).
MA46716A (fr) 2016-11-03 2019-09-11 Juno Therapeutics Inc Polythérapie de thérapie cellulaire et d'inhibiteur de la microglie
US11332713B2 (en) 2016-11-16 2022-05-17 KSQ Therapeutics, Inc. Gene-regulating compositions and methods for improved immunotherapy
WO2018094143A1 (en) 2016-11-17 2018-05-24 Siamab Therapeutics, Inc. Glycan-interacting compounds and methods of use
US10550183B2 (en) * 2016-11-22 2020-02-04 National University Of Singapore Blockade of CD7 expression and chimeric antigen receptors for immunotherapy of T-cell malignancies
AU2017363311A1 (en) 2016-11-22 2019-06-13 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins
JP2020500930A (ja) 2016-11-23 2020-01-16 ノバルティス アーゲー エベロリムス、ダクトリシブまたは両方で免疫応答を増強する方法
CA3040533A1 (en) * 2016-12-02 2018-06-07 Cartesian Therapeutics, Inc. Cancer immunotherapy with highly enriched cd8+ chimeric antigen receptor t cells
AU2017368333A1 (en) 2016-12-03 2019-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Methods for determining CAR-T cells dosing
CN110248678A (zh) 2016-12-03 2019-09-17 朱诺治疗学股份有限公司 调节car-t细胞的方法
US11590167B2 (en) 2016-12-03 2023-02-28 Juno Therapeutic, Inc. Methods and compositions for use of therapeutic T cells in combination with kinase inhibitors
WO2018106732A1 (en) 2016-12-05 2018-06-14 Juno Therapeutics, Inc. Production of engineered cells for adoptive cell therapy
CN108165568B (zh) * 2016-12-07 2020-12-08 上海恒润达生生物科技有限公司 一种培养CD19CAR-iNKT细胞方法及用途
CN107058315B (zh) * 2016-12-08 2019-11-08 上海优卡迪生物医药科技有限公司 敲减人PD-1的siRNA、重组表达CAR-T载体及其构建方法和应用
EP3551197B1 (en) 2016-12-12 2023-11-22 Seattle Children's Hospital (DBA Seattle Children's Research Institute) Chimeric transcription factor variants with augmented sensitivity to drug ligand induction of transgene expression in mammalian cells
CN108218994A (zh) * 2016-12-14 2018-06-29 上海恒润达生生物科技有限公司 一种方法培养t记忆干细胞
US11278570B2 (en) 2016-12-16 2022-03-22 B-Mogen Biotechnologies, Inc. Enhanced hAT family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods
CN110730821B (zh) 2016-12-16 2023-12-08 比莫根生物科技公司 增强的hAT家族转座子介导的基因转移及相关组合物、系统和方法
CN108276493B (zh) * 2016-12-30 2023-11-14 南京传奇生物科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用
US11447562B2 (en) 2017-01-01 2022-09-20 Chi-Yu Gregory Lee RP215 chimeric antigen receptor construct and methods of making and using same
EP3609536B1 (en) 2017-01-05 2022-03-09 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Humanized anti-cd19 antibody and use thereof with chimeric antigen receptor
CN110121336A (zh) 2017-01-05 2019-08-13 弗莱德哈钦森癌症研究中心 改善疫苗功效的系统和方法
WO2018127699A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Bicyclerd Limited Compounds for treating cancer
EP3346001A1 (en) * 2017-01-06 2018-07-11 TXCell Monospecific regulatory t cell population with cytotoxicity for b cells
US11357841B2 (en) 2017-01-06 2022-06-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes with potassium channel agonists and therapeutic uses thereof
WO2018129332A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists and therapeutic combinations of tils and tnfrsf agonists
CN108285920A (zh) * 2017-01-09 2018-07-17 上海恒润达生生物科技有限公司 一种体内检测cart细胞表达的技术及其用途
WO2018132518A1 (en) 2017-01-10 2018-07-19 Juno Therapeutics, Inc. Epigenetic analysis of cell therapy and related methods
GB201700553D0 (en) 2017-01-12 2017-03-01 Genagon Therapeutics Ab Therapeutic agents
WO2018132695A1 (en) * 2017-01-13 2018-07-19 Celdara Medical, Llc Chimeric antigen receptors targeting tim-1
EP3571221A2 (en) 2017-01-20 2019-11-27 Juno Therapeutics GmbH Cell surface conjugates and related cell compositions and methods
US11549149B2 (en) 2017-01-24 2023-01-10 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide
CN108342363B (zh) * 2017-01-25 2021-02-12 北京马力喏生物科技有限公司 共表达抗msln嵌合抗原受体和免疫检查点抑制分子的转基因淋巴细胞及其用途
US11535662B2 (en) 2017-01-26 2022-12-27 Novartis Ag CD28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
RU2674894C2 (ru) * 2017-01-30 2018-12-13 Общество с ограниченной ответственностью "ПЛАНТА" Новые люциферазы и способы их использования
CN110582509A (zh) 2017-01-31 2019-12-17 诺华股份有限公司 使用具有多特异性的嵌合t细胞受体蛋白治疗癌症
WO2018144597A1 (en) * 2017-01-31 2018-08-09 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods of sensitizing cancer cells to immune cell killing
EP3579870A4 (en) 2017-02-07 2020-12-30 Seattle Children's Hospital (DBA Seattle Children's Research Institute) PHOSPHOLIPID ETHER (PLE) T CAR-LYMPHOCYTE TUMOR (CTCT) TARGETING AGENTS
ES2965475T3 (es) 2017-02-12 2024-04-15 Biontech Us Inc Métodos y composiciones basados en HLA y usos de los mismos
WO2018152181A1 (en) 2017-02-14 2018-08-23 Kite Pharma, Inc. Cd70 binding molecules and methods of use thereof
CN110461335A (zh) 2017-02-17 2019-11-15 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于治疗bcma相关癌症和自身免疫性失调的联合疗法
EP4353818A2 (en) 2017-02-27 2024-04-17 Juno Therapeutics, Inc. Compositions, articles of manufacture and methods related to dosing in cell therapy
WO2018157072A1 (en) 2017-02-27 2018-08-30 Life Technologies Corporation Expansion of populations of t cells by the use of modified serum free media
JP7178355B2 (ja) 2017-02-28 2022-11-25 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞療法のための組成物および方法
EP3589647A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 Novartis AG Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy
BR112019018043A2 (pt) 2017-03-03 2020-04-07 Seattle Genetics Inc método de tratamento de câncer, e, conjugado de anticorpo-fármaco
SG10202001869VA (en) * 2017-03-03 2020-04-29 Obsidian Therapeutics Inc Cd19 compositions and methods for immunotherapy
US11629340B2 (en) 2017-03-03 2023-04-18 Obsidian Therapeutics, Inc. DHFR tunable protein regulation
WO2018169922A2 (en) 2017-03-13 2018-09-20 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen receptors for melanoma and uses thereof
WO2018170188A2 (en) 2017-03-14 2018-09-20 Juno Therapeutics, Inc. Methods for cryogenic storage
JP2020509776A (ja) 2017-03-16 2020-04-02 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｐｄ−ｌ１バリアント免疫調節タンパク質及びその使用
CA3053812A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-l2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
BR112019018747A2 (pt) 2017-03-16 2020-05-05 Alpine Immune Sciences Inc proteínas imunomoduladoras variantes de cd80 e usos das mesmas
CN110621335A (zh) 2017-03-17 2019-12-27 弗雷德哈钦森癌症研究中心 免疫调节融合蛋白及其用途
KR20190130608A (ko) 2017-03-22 2019-11-22 노파르티스 아게 면역종양학을 위한 조성물 및 방법
MX2019011324A (es) 2017-03-23 2020-01-21 Massachusetts Gen Hospital Bloqueo de cxcr4/cxcr7 y tratamiento de enfermedad asociada con el virus del papiloma humano.
WO2018175988A1 (en) * 2017-03-24 2018-09-27 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd33 immunotherapy
US11896616B2 (en) 2017-03-27 2024-02-13 National University Of Singapore Stimulatory cell lines for ex vivo expansion and activation of natural killer cells
SG11201908492PA (en) 2017-03-27 2019-10-30 Nat Univ Singapore Truncated nkg2d chimeric receptors and uses thereof in natural killer cell immunotherapy
AU2018243664B2 (en) 2017-03-31 2024-02-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of treating T cell exhaustion by inhibiting or modulating T cell receptor signaling
EP3490605B1 (en) 2017-04-01 2023-06-07 AVM Biotechnology, LLC Replacement of cytotoxic preconditioning before cellular immunotherapy
EP3606518A4 (en) 2017-04-01 2021-04-07 The Broad Institute, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR DETECTION AND MODULATION OF IMMUNOTHERAPY RESISTANCE GENE SIGNATURE IN CANCER
SG11201908980PA (en) 2017-04-03 2019-10-30 Kite Pharma Inc Treatment using chimeric receptor t cells incorporating optimized polyfunctional t cells
JP7284707B2 (ja) 2017-04-07 2023-05-31 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 前立腺特異的膜抗原（ｐｓｍａ）またはその改変型を発現する操作された細胞および関連方法
US20200071773A1 (en) 2017-04-12 2020-03-05 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Tumor signature for metastasis, compositions of matter methods of use thereof
AU2018251188A1 (en) 2017-04-14 2019-10-31 Juno Therapeutics, Inc. Methods for assessing cell surface glycosylation
CA3057394A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for transient gene therapy with enhanced stability
CN108727497A (zh) * 2017-04-17 2018-11-02 沈阳美达博生物科技有限公司 一种cd19抗体及其应用
BR112019021745A2 (pt) 2017-04-18 2020-05-05 Fujifilm Cellular Dynamics Inc células efetoras imunológicas antígeno-específicas
US20210293783A1 (en) 2017-04-18 2021-09-23 The General Hospital Corporation Compositions for detecting secretion and methods of use
CN110753555A (zh) 2017-04-19 2020-02-04 得克萨斯州大学系统董事会 表达工程化抗原受体的免疫细胞
JOP20180040A1 (ar) 2017-04-20 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مثبطات pd-1/pd-l1
TWI778050B (zh) 2017-04-21 2022-09-21 美商醫肯納腫瘤學公司 吲哚ahr抑制劑及其用途
JOP20180042A1 (ar) 2017-04-24 2019-01-30 Kite Pharma Inc نطاقات ربط مولد ضد متوافقة مع البشر وطرق الاستخدام
WO2018197949A1 (en) 2017-04-27 2018-11-01 Juno Therapeutics Gmbh Oligomeric particle reagents and methods of use thereof
US20200055948A1 (en) 2017-04-28 2020-02-20 Novartis Ag Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
JP7299841B2 (ja) 2017-05-01 2023-06-28 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 細胞療法と免疫調節化合物の併用
CN107226867B (zh) * 2017-07-25 2018-02-06 重庆精准生物技术有限公司 抗人cd19抗原的嵌合抗原受体及其应用
SG11201910127XA (en) * 2017-05-02 2019-11-28 Chongqing Prec Biotech Company Limited Chimeric antigen receptor against human cd19 antigen and its application
WO2018209115A1 (en) * 2017-05-10 2018-11-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
AU2018367896B2 (en) 2017-05-12 2023-06-01 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
US10415017B2 (en) 2017-05-17 2019-09-17 Thunder Biotech, Inc. Transgenic macrophages, chimeric antigen receptors, and associated methods
EP3406733A1 (en) 2017-05-24 2018-11-28 SIB Swiss Institute of Bioinformatics Kinase mutants and uses thereof
KR102641269B1 (ko) 2017-05-24 2024-02-26 이펙터 테라퓨틱스, 인크. 개선된 항종양 면역 반응을 위한 조성물 및 방법
AU2018273958B2 (en) 2017-05-25 2022-07-21 Leidos, Inc. PD-1 and CTLA-4 dual inhibitor peptides
TW201900870A (zh) 2017-05-26 2019-01-01 美商凱特製藥公司 製備和使用胚胎間充質先驅細胞的方法
WO2018219278A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Chimeric antigen receptor cell preparation and uses thereof
WO2018222898A1 (en) * 2017-06-02 2018-12-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research System and method for providing clinical outcomes driven expertise for disease treatment
MA48781A (fr) 2017-06-02 2020-04-08 Juno Therapeutics Inc Articles de fabrication et procédés liés à la toxicité associée à la thérapie cellulaire
BR112019025403A2 (pt) 2017-06-02 2020-08-18 Juno Therapeutics Inc artigos de fabricação e métodos para tratamento usando terapia celular adotiva
US11897953B2 (en) 2017-06-14 2024-02-13 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods targeting complement component 3 for inhibiting tumor growth
CN114350613A (zh) 2017-06-20 2022-04-15 居里研究所 Suv39h1缺陷的免疫细胞
AU2018289428A1 (en) 2017-06-21 2020-02-06 The General Hospital Corporation Methods and compositions for chimeric antigen receptor targeting cancer cells
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
PE20200717A1 (es) 2017-06-22 2020-07-21 Novartis Ag Moleculas de anticuerpo que se unen a cd73 y usos de las mismas
CA3068286A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing regulatory immune cells and uses thereof
US10806780B2 (en) 2017-06-28 2020-10-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-human papillomavirus (HPV) antigen-binding proteins and methods of use thereof
JP2020526194A (ja) 2017-06-29 2020-08-31 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 免疫療法薬と関連する毒性を評価するためのマウスモデル
WO2019006418A2 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Intima Bioscience, Inc. ADENO-ASSOCIATED VIRAL VECTORS FOR GENE THERAPY
AU2018292181A1 (en) 2017-06-30 2020-01-23 Cellectis Cellular immunotherapy for repetitive administration
US11235004B2 (en) 2017-06-30 2022-02-01 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Lymphocyte cell lines and uses thereof
CN107287164A (zh) * 2017-07-07 2017-10-24 青岛协和华美医学诊断技术有限公司 靶向cd19的嵌合抗原受体t细胞、制备方法及应用
CN107365798B (zh) * 2017-07-13 2020-07-14 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司 一种携带iCasp9自杀基因的CD19-CAR-T细胞及其应用
CN111093696B (zh) * 2017-07-17 2023-10-27 詹森生物科技公司 抗iii型纤连蛋白结构域的抗原结合区及其使用方法
SG11202000606TA (en) 2017-07-29 2020-02-27 Juno Therapeutics Inc Reagents for expanding cells expressing recombinant receptors
US10442867B2 (en) 2017-07-31 2019-10-15 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD20 immunotherapy
CN111868260A (zh) 2017-08-07 2020-10-30 约翰斯霍普金斯大学 用于评估和治疗癌症的方法和材料
US20200239910A1 (en) 2017-08-09 2020-07-30 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions for preparing genetically engineered cells
KR20200054178A (ko) 2017-08-09 2020-05-19 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 유전자 조작된 세포 조성물 및 관련 조성물의 제조 방법
US11648269B2 (en) 2017-08-10 2023-05-16 National University Of Singapore T cell receptor-deficient chimeric antigen receptor T-cells and methods of use thereof
MX2020001793A (es) 2017-08-17 2020-07-22 Ikena Oncology Inc Inhibidores del receptor de hidrocarburos de arilo (ahr) y usos de los mismos.
US10844353B2 (en) 2017-09-01 2020-11-24 Gpb Scientific, Inc. Methods for preparing therapeutically active cells using microfluidics
US20210071258A1 (en) 2017-09-01 2021-03-11 Juno Therapeutics, Inc. Gene expression and assessment of risk of developing toxicity following cell therapy
MA50079A (fr) 2017-09-07 2020-07-15 Juno Therapeutics Inc Procédés d'identification de caractéristiques cellulaires relatives à des réponses associées à une thérapie cellulaire
CN107557337B (zh) * 2017-09-15 2020-06-26 山东兴瑞生物科技有限公司 一种抗ror1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用
JP2020533986A (ja) 2017-09-15 2020-11-26 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 細胞を培養および増殖させるための組成物および方法
WO2019055896A1 (en) 2017-09-15 2019-03-21 Kite Pharma, Inc. METHODS AND SYSTEMS FOR PERFORMING A PATIENT-CLEAN IMMUNOTHERAPY PROCEDURE WITH FOLLOW-UP OF BIOLOGICAL SAMPLE CHAIN OF CONTROL AND IDENTITY CHAIN
AU2018336791A1 (en) 2017-09-19 2020-03-12 Massachusetts Institute Of Technology Compositions for chimeric antigen receptor T cell therapy and uses thereof
MX2020003046A (es) * 2017-09-19 2020-10-12 Univ British Columbia Anticuerpos anti-hla-a2 y metodos para utilizar los mismos.
CN109517820B (zh) 2017-09-20 2021-09-24 北京宇繁生物科技有限公司 一种靶向HPK1的gRNA以及HPK1基因编辑方法
CN111448216B (zh) 2017-09-20 2023-11-07 英属哥伦比亚大学 新的抗hla-a2抗体及其用途
EP3684397A4 (en) 2017-09-21 2021-08-18 The Broad Institute, Inc. SYSTEMS, METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETED EDITION OF NUCLEIC ACIDS
WO2019060693A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND USES THEREOF
JP7366031B2 (ja) 2017-09-22 2023-10-20 カイメラ セラピューティクス， インコーポレイテッド タンパク質分解剤およびそれらの使用
EP3684803A1 (en) 2017-09-22 2020-07-29 Kite Pharma, Inc. Antigen binding molecules and methods of use thereof
EP3684816A1 (en) 2017-09-22 2020-07-29 Kite Pharma, Inc. Chimeric polypeptides and uses thereof
JP2020536531A (ja) * 2017-09-26 2020-12-17 ロングウッド ユニバーシティーＬｏｎｇｗｏｏｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 免疫療法としてのｐｄ１特異的キメラ抗原受容体
CN109554349B (zh) * 2017-09-27 2022-06-24 亘喜生物科技（上海）有限公司 Pd-1基因表达沉默的工程化免疫细胞
WO2019068066A1 (en) * 2017-09-29 2019-04-04 National Health Research Institutes METHODS AND COMPOSITIONS FOR IMPROVING THE SURVIVAL AND FUNCTIONALITY OF ANTI-TUMOR AND ANTI-VIRAL CELL LYMPHOCYTES
KR20200104284A (ko) 2017-10-03 2020-09-03 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Hpv-특이적 결합 분자
EP3694875A1 (en) 2017-10-09 2020-08-19 Wisconsin Alumni Research Foundation Antibodies targeting glioblastoma stem-like cells and methods of use thereof
JP2020536552A (ja) 2017-10-10 2020-12-17 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｔｌａ−４変異型免疫調節タンパク質およびそれらの使用
CA3084470A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Kite Pharma, Inc. Methods of administering chimeric antigen receptor immunotherapy
TW201925223A (zh) 2017-10-18 2019-07-01 美商艾爾潘免疫科學有限公司 變異型icos 配位體免疫調節蛋白及相關組合物及方法
US20200339704A1 (en) 2017-10-18 2020-10-29 James E. Bradner Compositions and methods for selective protein degradation
CN109694854B (zh) * 2017-10-20 2023-11-21 亘喜生物科技（上海）有限公司 通用型嵌合抗原受体t细胞制备技术
US11732257B2 (en) 2017-10-23 2023-08-22 Massachusetts Institute Of Technology Single cell sequencing libraries of genomic transcript regions of interest in proximity to barcodes, and genotyping of said libraries
WO2019084234A1 (en) * 2017-10-26 2019-05-02 St. Jude Childen's Research Hospital, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING CD33 + CANCERS AND IMPROVING IN VIVO PERSISTENCE OF CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR T CELLS
WO2019084427A1 (en) 2017-10-27 2019-05-02 Kite Pharma, Inc. T-LYMPHOCYTE RECEPTOR ANTIGEN BINDING MOLECULES AND METHODS OF USE THEREOF
US20210179709A1 (en) 2017-10-31 2021-06-17 Novartis Ag Anti-car compositions and methods
AU2018358250A1 (en) 2017-11-01 2020-05-14 Editas Medicine, Inc. Methods, compositions and components for CRISPR-CAS9 editing of TGFBR2 in T cells for immunotherapy
MX2020004239A (es) 2017-11-01 2020-09-09 Juno Therapeutics Inc Proceso para producir una composicion de celulas t.
US20210132042A1 (en) 2017-11-01 2021-05-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
KR20200116077A (ko) 2017-11-01 2020-10-08 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
WO2019089982A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Method of assessing activity of recombinant antigen receptors
CN111542596A (zh) 2017-11-01 2020-08-14 朱诺治疗学股份有限公司 产生工程化细胞的治疗性组合物的方法
BR112020008323A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-03 Juno Therapeutics Inc anticorpos e receptores de antígenos quiméricos específicos para antígeno de maturação de células b
US11564946B2 (en) 2017-11-01 2023-01-31 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
EP3703711A4 (en) * 2017-11-03 2021-01-13 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF CANCER WITH ANTI-ROR1 IMMUNOTHERAPY
US20200289565A1 (en) 2017-11-06 2020-09-17 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a cell therapy and a gamma secretase inhibitor
WO2019090202A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Editas Medicine, Inc. Methods, compositions and components for crispr-cas9 editing of cblb in t cells for immunotherapy
WO2019094360A1 (en) * 2017-11-07 2019-05-16 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Targeting lilrb4 with car-t or car-nk cells in the treatment of cancer
MA50571A (fr) 2017-11-10 2020-09-16 Juno Therapeutics Inc Réservoirs cryogéniques à système fermé
US11802163B2 (en) 2017-11-10 2023-10-31 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting glypican-3 or mesothelin
US20210363260A1 (en) 2017-11-13 2021-11-25 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for treating cancer by targeting the clec2d-klrb1 pathway
AU2018368431B2 (en) 2017-11-14 2024-03-21 Arcellx, Inc. Multifunctional immune cell therapies
CA3082406A1 (en) 2017-11-14 2019-05-23 Arcellx, Inc. D-domain containing polypeptides and uses thereof
WO2019099639A1 (en) 2017-11-15 2019-05-23 Navartis Ag Bcma-targeting chimeric antigen receptor, cd19-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapies
WO2019099707A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Kite Pharma, Inc Modified chimeric antigen receptors and methods of use
EP3714041A1 (en) 2017-11-22 2020-09-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of peripheral blood lymphocytes (pbls) from peripheral blood
CN109837244A (zh) * 2017-11-25 2019-06-04 深圳宾德生物技术有限公司 一种敲除pd1的靶向cd19的嵌合抗原受体t细胞及其制备方法和应用
TW201925782A (zh) 2017-11-30 2019-07-01 瑞士商諾華公司 靶向bcma之嵌合抗原受體及其用途
EP3716980A1 (en) 2017-12-01 2020-10-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and for modulation of genetically engineered cells
CA3122010A1 (en) * 2017-12-04 2019-06-13 Coare Holdings, Inc. Anti-dclk1 antibodies and chimeric antigen receptors, and compositions and methods of use thereof
SG11202005217VA (en) 2017-12-08 2020-07-29 Juno Therapeutics Inc Phenotypic markers for cell therapy and related methods
SG11202005272SA (en) 2017-12-08 2020-07-29 Juno Therapeutics Inc Process for producing a composition of engineered t cells
US20210207080A1 (en) 2017-12-08 2021-07-08 Juno Therapeutics, Inc. Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof
WO2019118937A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
JP2021508104A (ja) 2017-12-15 2021-02-25 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の有益な投与を決定するシステム及び方法並びにその使用方法、並びに腫瘍浸潤リンパ球の有益な投与及びその使用方法
US11661439B2 (en) 2017-12-17 2023-05-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide hydrogels and use thereof
WO2019126186A1 (en) 2017-12-18 2019-06-27 Neon Therapeutics, Inc. Neoantigens and uses thereof
CN108018312B (zh) * 2017-12-20 2019-09-10 上海优卡迪生物医药科技有限公司 一种t淋巴细胞白血病的car-t治疗载体及其构建方法和应用
WO2019123340A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
KR102492115B1 (ko) 2017-12-20 2023-01-27 인스티튜트 오브 오가닉 케미스트리 앤드 바이오케미스트리 에이에스 씨알 브이.브이.아이. Sting 어댑터 단백질을 활성화하는 포스포네이트 결합을 가진 2'3' 사이클릭 다이뉴클레오티드
GB201721833D0 (en) * 2017-12-22 2018-02-07 Cancer Research Tech Ltd Fusion proteins
BR112020012997A2 (pt) 2017-12-26 2020-12-01 Kymera Therapeutics, Inc. degradadores de irak e usos dos mesmos
CN109971712B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 特异性靶向cd19抗原且高水平稳定表达pd-1抗体的car-t细胞及用途
CN109970864A (zh) * 2017-12-28 2019-07-05 上海细胞治疗研究院 一种双向激活共刺激分子受体及其用途
CN109970866B (zh) * 2017-12-28 2022-10-04 上海细胞治疗研究院 一种cd28双向激活共刺激分子受体及其用途
AU2019205315A1 (en) * 2018-01-05 2020-07-16 Maxcyte, Inc. Chronic car treatment for cancer
EP3737408A1 (en) 2018-01-08 2020-11-18 Novartis AG Immune-enhancing rnas for combination with chimeric antigen receptor therapy
US11919937B2 (en) 2018-01-09 2024-03-05 Board Of Regents, The University Of Texas System T cell receptors for immunotherapy
US10561686B2 (en) 2018-01-12 2020-02-18 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
WO2019140100A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Innovative Cellular Therapeutics Inc. Modified cell expansion and uses thereof
US11485743B2 (en) 2018-01-12 2022-11-01 Kymera Therapeutics, Inc. Protein degraders and uses thereof
WO2019140387A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Kymera Therapeutics, Inc. Crbn ligands and uses thereof
SG11202006416TA (en) 2018-01-15 2020-08-28 Pfizer Methods of administering chimeric antigen receptor immunotherapy in combination with 4-1bb agonist
SG11202006886VA (en) 2018-01-22 2020-08-28 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst Methods of use for car t cells
CA3089769A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 Merck Patent Gmbh Gcn2 inhibitors and uses thereof
SG11202006701TA (en) 2018-01-29 2020-08-28 Merck Patent Gmbh Gcn2 inhibitors and uses thereof
KR102115236B1 (ko) * 2018-01-29 2020-05-27 (주)에스엠티바이오 췌장 또는 담관계암 치료를 위한 키메라 항원 수용체
JP7383620B2 (ja) 2018-01-31 2023-11-20 セルジーン コーポレイション 養子細胞療法およびチェックポイント阻害剤を使用する併用療法
CN111918972A (zh) 2018-01-31 2020-11-10 朱诺治疗学股份有限公司 评估存在或不存在有复制能力的病毒的方法和试剂
EP3746116A1 (en) 2018-01-31 2020-12-09 Novartis AG Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20200390814A1 (en) 2018-02-02 2020-12-17 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Dna-chimeric antigen receptor t cells for immunotherapy
US20210087511A1 (en) * 2018-02-09 2021-03-25 Global Life Sciences Solutions Usa Llc Bioprocessing methods for cell therapy
EP3757133A4 (en) * 2018-02-11 2021-12-01 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. ISOLATED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR, THIS MODIFIED T-CELL CONTAINED AND USES
CN110157677A (zh) * 2018-02-12 2019-08-23 深圳宾德生物技术有限公司 一种靶向性t淋巴细胞及其制备方法和应用
WO2019157516A1 (en) 2018-02-12 2019-08-15 resTORbio, Inc. Combination therapies
EP3752203A1 (en) 2018-02-13 2020-12-23 Novartis AG Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
IL300572A (en) 2018-02-13 2023-04-01 Gilead Sciences Inc PD–1/PD–L1 inhibitors
EP3752531A1 (en) 2018-02-14 2020-12-23 Kite Pharma, Inc. Anti-idiotypic antibodies directed to the antigen-binding portion of an bcma-binding molecule
KR102618231B1 (ko) 2018-02-16 2023-12-28 카이트 파마 인코포레이티드 변형된 만능성 줄기 세포, 및 제조 및 사용 방법
SG11202007606QA (en) 2018-02-17 2020-09-29 Flagship Pioneering Innovations V Inc Compositions and methods for membrane protein delivery
KR20200130709A (ko) 2018-03-06 2020-11-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 전립선-특이 막 항원 car 및 이의 사용 방법
EP3762012A1 (en) 2018-03-09 2021-01-13 Ospedale San Raffaele S.r.l. Il-1 antagonist and toxicity induced by cell therapy
WO2019175328A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Imba - Institut Für Molekulare Biotechnologie Gmbh Bh4pathwayactivationandusethereoffortreatingcancer
EP3765094A4 (en) 2018-03-15 2021-12-22 KSQ Therapeutics, Inc. GENE REGULATION COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVING IMMUNOTHERAPY
CA3093915A1 (en) 2018-03-15 2019-09-19 KSQ Therapeutics, Inc. Gene-regulating compositions and methods for improved immunotherapy
DE102018108612A1 (de) 2018-03-21 2019-09-26 Immatics US, Inc. Verfahren zur erhöhung der persistenz von adoptiv infundierten t-zellen
US10760075B2 (en) 2018-04-30 2020-09-01 Snipr Biome Aps Treating and preventing microbial infections
US11471489B2 (en) 2018-04-05 2022-10-18 Juno Therapeutics, Inc. T cell receptors and engineered cells expressing same
CA3094468A1 (en) 2018-04-05 2019-10-10 Juno Therapeutics, Inc. Methods of producing cells expressing a recombinant receptor and related compositions
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
AU2019247905B2 (en) 2018-04-06 2023-10-05 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides
US20210163621A1 (en) 2018-04-10 2021-06-03 Amgen Inc. Chimeric receptors to dll3 and methods of use thereof
US20190314410A1 (en) 2018-04-12 2019-10-17 Kite Pharma, Inc. Chimeric receptor t cell treatment using characteristics of the tumor microenvironment
US20210155986A1 (en) 2018-04-13 2021-05-27 The Johns Hopkins University Non-invasive detection of response to immunotherapy
WO2019200250A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Velculescu Victor E Non-invasive detection of response to a targeted therapy
WO2019204257A1 (en) 2018-04-16 2019-10-24 Arrys Therapeutics, Inc. Ep4 inhibitors and use thereof
BR112020020772A2 (pt) 2018-04-16 2021-02-02 Board Of Regents, The University Of Texas System enzimas quinureninase humana e usos das mesmas
US10869888B2 (en) * 2018-04-17 2020-12-22 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
EP3783026A4 (en) 2018-04-18 2021-08-11 AbClon Inc. SWITCHING MOLECULE AND CHEMERICAL ANTIGENIC RECEIVER
JP7242702B2 (ja) 2018-04-19 2023-03-20 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｐｄ－１／ｐｄ－ｌ１阻害剤
WO2019204496A1 (en) * 2018-04-19 2019-10-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating melanoma with a chimeric antigen receptor
WO2019209757A1 (en) 2018-04-24 2019-10-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pteridinone compounds and uses thereof
HUE058746T2 (hu) 2018-04-24 2022-09-28 Merck Patent Gmbh Antiproliferációs vegyületek és felhasználásuk
EP3784351A1 (en) 2018-04-27 2021-03-03 Novartis AG Car t cell therapies with enhanced efficacy
EP3788369A1 (en) 2018-05-01 2021-03-10 Novartis Ag Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome
CN112312930A (zh) * 2018-05-02 2021-02-02 宾夕法尼亚大学董事会 磷脂酶a2受体嵌合自身抗体受体t细胞的组合物和方法
TW202014193A (zh) 2018-05-03 2020-04-16 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 包含碳環核苷酸之2’3’－環二核苷酸
CN108753774B (zh) * 2018-05-03 2021-03-30 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司 干扰il-6表达的cd19-car-t细胞及其应用
AU2019261986A1 (en) 2018-05-03 2020-11-26 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy and a kinase inhibitor
EP3790958A1 (en) 2018-05-08 2021-03-17 Life Technologies Corporation Compositions and methods for culturing and expanding cells
JP2021522820A (ja) 2018-05-11 2021-09-02 クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 癌を治療するための方法及び組成物
ES2907923T3 (es) 2018-05-14 2022-04-27 Gilead Sciences Inc Inhibidores de MCL-1
CA3100345A1 (en) 2018-05-18 2019-11-21 The Johns Hopkins University Cell-free dna for assessing and/or treating cancer
WO2019227003A1 (en) 2018-05-25 2019-11-28 Novartis Ag Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
CN108715859B (zh) * 2018-05-31 2021-08-03 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) 靶向cd22的嵌合抗原受体及其应用
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
KR20230093066A (ko) 2018-06-01 2023-06-26 카이트 파마 인코포레이티드 키메라 항원 수용체 t 세포 요법
EP3801563B1 (en) * 2018-06-01 2023-07-12 Mayo Foundation for Medical Education and Research Materials and methods for treating cancer
WO2019232542A2 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for detecting and modulating microenvironment gene signatures from the csf of metastasis patients
TW202016136A (zh) 2018-06-01 2020-05-01 瑞士商諾華公司 針對ｂｃｍａ之結合分子及其用途
WO2019237035A1 (en) 2018-06-08 2019-12-12 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunooncology
WO2019241315A1 (en) 2018-06-12 2019-12-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
MX2020013443A (es) 2018-06-13 2021-02-26 Novartis Ag Receptores de antigeno quimerico de bcma y usos de los mismos.
KR20190141511A (ko) * 2018-06-14 2019-12-24 주식회사 녹십자랩셀 신규 펩티드, 이를 포함하는 키메라 항원 수용체 및 이를 발현하는 면역 세포
WO2019241758A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CA3104288A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 B-Mogen Biotechnologies, Inc. Enhanced hat family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods
US20210155941A1 (en) 2018-06-22 2021-05-27 Kite Pharma Eu B.V. Compositions and methods for making engineered t cells
US11180531B2 (en) 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
WO2020010177A1 (en) 2018-07-06 2020-01-09 Kymera Therapeutics, Inc. Tricyclic crbn ligands and uses thereof
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
PT3820572T (pt) 2018-07-13 2023-11-10 Gilead Sciences Inc Inibidores pd-1/pd-l1
EP3825404A4 (en) 2018-07-17 2022-04-13 Noile-Immune Biotech, Inc. CAR CONTAINING ANTI-GPC3 SINGLE STRAND ANTIBODY
PE20210315A1 (es) 2018-07-18 2021-02-16 Amgen Inc Receptores quimericos de steap1 y metodos de uso de los mismos
AU2019308290A1 (en) 2018-07-19 2021-02-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors with BCMA specificity and uses thereof
CN108949759B (zh) * 2018-07-23 2021-06-01 合肥一兮生物科技有限公司 敲减人IL-15的siRNA、CD19 CAR表达载体、CAR-T细胞及构建方法和应用
CA3170491A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen receptor therapy t cell expansion kinetics and uses thereof
KR20210059715A (ko) 2018-08-09 2021-05-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 통합된 핵산 평가 방법
JP2021533746A (ja) 2018-08-09 2021-12-09 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 操作された細胞およびその組成物を生成するための方法
BR112021002487A2 (pt) * 2018-08-10 2021-07-27 Eutilex Co., Ltd. receptor de antígeno quimérico que se liga a hla-dr e célula car-t
US20210177832A1 (en) 2018-08-20 2021-06-17 The Broad Institute, Inc. Inhibitors of rna-guided nuclease target binding and uses thereof
US20210355522A1 (en) 2018-08-20 2021-11-18 The Broad Institute, Inc. Inhibitors of rna-guided nuclease activity and uses thereof
US20210324357A1 (en) 2018-08-20 2021-10-21 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Degradation domain modifications for spatio-temporal control of rna-guided nucleases
CN110856724B (zh) * 2018-08-24 2022-05-27 杭州康万达医药科技有限公司 包含核酸及car修饰的免疫细胞的治疗剂及其应用
AU2019329984A1 (en) 2018-08-28 2021-03-11 Fred Hutchinson Cancer Center Methods and compositions for adoptive T cell therapy incorporating induced notch signaling
KR20220036908A (ko) 2018-08-28 2022-03-23 보르 바이오파마 인크. 유전자 조작된 조혈 줄기 세포 및 그의 용도
US20220348682A1 (en) 2018-08-30 2022-11-03 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Chimeric antigen receptor cells for treating solid tumor
WO2020047449A2 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
US11866494B2 (en) * 2018-08-31 2024-01-09 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. CAR T therapy through uses of co-stimulation
US10548889B1 (en) 2018-08-31 2020-02-04 X4 Pharmaceuticals, Inc. Compositions of CXCR4 inhibitors and methods of preparation and use
SG11202101825QA (en) 2018-08-31 2021-03-30 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
EP3846793B1 (en) 2018-09-07 2024-01-24 PIC Therapeutics, Inc. Eif4e inhibitors and uses thereof
BR112021004261A2 (pt) 2018-09-11 2021-05-25 Juno Therapeutics Inc métodos para análise por espectrometria de massas de composições de células geneticamente modificadas
MA53651A (fr) 2018-09-19 2021-07-28 Alpine Immune Sciences Inc Méthodes et utilisations de protéines de fusion de variant cd80 et constructions associées
US11584799B2 (en) 2018-09-24 2023-02-21 Medical College Of Wisconsin, Inc. Anti-CD30 antibodies and methods for treating CD30+ cancer
US20220047633A1 (en) 2018-09-28 2022-02-17 Novartis Ag Cd22 chimeric antigen receptor (car) therapies
US20210347851A1 (en) * 2018-09-28 2021-11-11 Novartis Ag Cd19 chimeric antigen receptor (car) and cd22 car combination therapies
CA3113618A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Massachusetts Institute Of Technology Collagen-localized immunomodulatory molecules and methods thereof
SG11202103235PA (en) 2018-10-01 2021-04-29 Adicet Bio Inc COMPOSITIONS AND METHODS REGARDING ENGINEERED AND NON- ENGINEERED γδ-Τ CELLS FOR TREATMENT OF HEMATOLOGICAL TUMORS
WO2020072700A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hla single allele lines
EP3860717A1 (en) 2018-10-03 2021-08-11 Gilead Sciences, Inc. Imidozopyrimidine derivatives
EP3488851A1 (en) 2018-10-03 2019-05-29 AVM Biotechnology, LLC Immunoablative therapies
US11851663B2 (en) 2018-10-14 2023-12-26 Snipr Biome Aps Single-vector type I vectors
WO2020081730A2 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for modulating microenvironment
CN112912396B (zh) 2018-10-22 2023-03-14 上海吉倍生物技术有限公司 抗cldn18.2抗体及其用途
EA202191107A1 (ru) 2018-10-23 2021-09-17 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. T-клеточные рецепторы ny-eso-1 и способы их применения
AU2019366355B2 (en) 2018-10-24 2022-10-13 Gilead Sciences, Inc. PD-1/PD-L1 inhibitors
WO2020086742A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Obsidian Therapeutics, Inc. Er tunable protein regulation
US20210379149A1 (en) * 2018-10-25 2021-12-09 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Increasing or Maintaining T-Cell Subpopulations in Adoptive T-Cell Therapy
WO2020092455A2 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Car t cell transcriptional atlas
US20210388389A1 (en) 2018-10-30 2021-12-16 Yale University Compositions and methods for rapid and modular generation of chimeric antigen receptor t cells
EP3874024A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Juno Therapeutics GmbH Methods for selection and stimulation of cells and apparatus for same
JP7460644B2 (ja) 2018-10-31 2024-04-02 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｐｋ１阻害剤としての置換６－アザベンゾイミダゾール化合物
EP3873608A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds having hpk1 inhibitory activity
JP2022512917A (ja) 2018-11-01 2022-02-07 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｂ細胞成熟抗原に特異的なキメラ抗原受容体を使用する処置方法
CN113272018A (zh) 2018-11-06 2021-08-17 朱诺治疗学股份有限公司 产生基因工程化t细胞的方法
CN109503717A (zh) * 2018-11-07 2019-03-22 南京卡提医学科技有限公司 嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scfv-NKp44及其用途
CN109467604A (zh) * 2018-11-07 2019-03-15 南京卡提医学科技有限公司 嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-CD19scFv-TREM1及其用途
CA3118889A1 (en) * 2018-11-07 2020-05-14 Sotio, LLC Anti-gpc3 chimeric antigen receptors (cars) in combination with trans co-stimulatory molecules and therapeutic uses thereof
CA3117978A1 (en) 2018-11-08 2020-05-14 Juno Therapeutics, Inc. Methods and combinations for treatment and t cell modulation
AU2019378883A1 (en) 2018-11-14 2021-06-03 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Fusosome compositions for T cell delivery
KR20210104713A (ko) 2018-11-16 2021-08-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ｂ 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 ｔ 세포 투약 방법
EP3883955A1 (en) 2018-11-19 2021-09-29 Board of Regents, The University of Texas System A modular, polycistronic vector for car and tcr transduction
US10918667B2 (en) 2018-11-20 2021-02-16 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expressing therapeutic agent and uses thereof
EA202191463A1 (ru) 2018-11-28 2021-10-13 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Мультиплексное редактирование генома иммунных клеток для повышения функциональности и устойчивости к подавляющей среде
BR112021010248A2 (pt) 2018-11-29 2021-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System métodos para expansão ex vivo de células naturais killer e uso dos mesmos
US20220031746A1 (en) 2018-11-30 2022-02-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment of b cell malignancies in adoptive cell therapy
KR20210117260A (ko) 2018-11-30 2021-09-28 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 세포 요법을 사용한 치료방법
WO2020113233A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Kymera Therapeutics, Inc. Irak degraders and uses thereof
JP2022511502A (ja) 2018-12-05 2022-01-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの免疫療法のための診断方法及び診断用組成物
AU2019393243A1 (en) * 2018-12-07 2021-07-01 Gracell Biotechnologies (Shanghai) Co., Ltd. Compositions and methods for immunotherapy
WO2020123327A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Amgen Inc. Mutated piggybac transposase
EP3894011A1 (en) 2018-12-11 2021-10-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Membrane bound il12 compositions and methods for tunable regulation
SG11202106302WA (en) 2018-12-12 2021-07-29 Kite Pharma Inc Chimeric antigen receptors and car-t cells and methods of use
WO2020131586A2 (en) 2018-12-17 2020-06-25 The Broad Institute, Inc. Methods for identifying neoantigens
EP3670530A1 (en) 2018-12-18 2020-06-24 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin in der Helmholtz-Gemeinschaft Cd22-specific t cell receptors and adoptive t cell therapy for treatment of b cell malignancies
EP3670659A1 (en) 2018-12-20 2020-06-24 Abivax Biomarkers, and uses in treatment of viral infections, inflammations, or cancer
EP3897637A1 (en) 2018-12-20 2021-10-27 Novartis AG Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
CN113474840A (zh) 2018-12-21 2021-10-01 百欧恩泰美国公司 用于预测hla ii类特异性表位及表征cd4+ t细胞的方法和系统
US11739156B2 (en) 2019-01-06 2023-08-29 The Broad Institute, Inc. Massachusetts Institute of Technology Methods and compositions for overcoming immunosuppression
US20220090132A1 (en) * 2019-01-06 2022-03-24 Abintus Bio, Inc. Car t cell methods and constructs
MA54863A (fr) 2019-01-29 2021-12-08 Juno Therapeutics Inc Anticorps et récepteurs antigéniques chimériques spécifiques du récepteur orphelin-1 de type récepteur à tyrosine kinase (ror1)
WO2020168298A2 (en) 2019-02-15 2020-08-20 University Of Southern California Lym-1 and lym-2 antibody compositions and improved car constructs
CN113329792A (zh) 2019-02-15 2021-08-31 诺华股份有限公司 取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
EA202192019A1 (ru) 2019-02-15 2021-11-02 Новартис Аг Производные 3-(1-оксо-5-(пиперидин-4-ил)изоиндолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона и пути их применения
CA3126087A1 (en) 2019-02-25 2020-09-03 Novartis Ag Mesoporous silica particles compositions for viral delivery
JP2022522473A (ja) 2019-03-01 2022-04-19 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 液性腫瘍からの腫瘍浸潤リンパ球の拡大培養及びその治療的使用
CA3131908A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Allogene Therapeutics, Inc. Dll3 targeting chimeric antigen receptors and binding agents
JP2021528048A (ja) 2019-03-05 2021-10-21 ンカルタ・インコーポレイテッドＮｋａｒｔａ， Ｉｎｃ． Ｃｄ１９指向性キメラ抗原受容体および免疫療法におけるその使用
KR20210137518A (ko) 2019-03-07 2021-11-17 인스티튜트 오브 오가닉 케미스트리 앤드 바이오케미스트리 에이에스 씨알 브이.브이.아이. 3'3'-사이클릭 다이뉴클레오티드 및 이의 프로드럭
US11766447B2 (en) 2019-03-07 2023-09-26 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3′3′-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
CN113543851A (zh) 2019-03-07 2021-10-22 捷克共和国有机化学与生物化学研究所 2’3’-环二核苷酸及其前药
AU2020237633A1 (en) 2019-03-08 2021-08-05 Klinikum Der Universität München CCR8 expressing lymphocytes for targeted tumor therapy
EP3935159A1 (en) 2019-03-08 2022-01-12 Obsidian Therapeutics, Inc. Human carbonic anhydrase 2 compositions and methods for tunable regulation
US20220154282A1 (en) 2019-03-12 2022-05-19 The Broad Institute, Inc. Detection means, compositions and methods for modulating synovial sarcoma cells
US20220142948A1 (en) 2019-03-18 2022-05-12 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for modulating metabolic regulators of t cell pathogenicity
WO2020187998A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Fundació Privada Institut D'investigació Oncològica De Vall Hebron Combination therapy with omomyc and an antibody binding pd-1 or ctla-4 for the treatment of cancer
EP3942025A1 (en) 2019-03-21 2022-01-26 Novartis AG Car-t cell therapies with enhanced efficacy
EP3946462A1 (en) 2019-04-02 2022-02-09 BicycleTX Limited Bicycle toxin conjugates and uses thereof
SG11202110829YA (en) 2019-04-05 2021-10-28 Kymera Therapeutics Inc Stat degraders and uses thereof
US20220168389A1 (en) 2019-04-12 2022-06-02 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
TW202210480A (zh) 2019-04-17 2022-03-16 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TW202212339A (zh) 2019-04-17 2022-04-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
WO2020219742A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Novartis Ag Compositions and methods for selective protein degradation
MX2021013005A (es) 2019-04-26 2021-12-10 Allogene Therapeutics Inc Metodos de fabricacion de celulas car-t alogenicas.
SG11202111031RA (en) 2019-04-26 2021-11-29 Allogene Therapeutics Inc Rituximab-resistant chimeric antigen receptors and uses thereof
BR112021021542A2 (pt) 2019-04-30 2022-04-19 Crispr Therapeutics Ag Terapia celular alogênica de malignidades de células b com o uso de células t geneticamente modificadas que têm como alvo cd19
CA3136742A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified cd247 locus, related polynucleotides and methods
SG11202111360YA (en) 2019-05-01 2021-11-29 Juno Therapeutics Inc Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods
SG11202112123RA (en) 2019-05-03 2021-11-29 Kite Pharma Inc Methods of administering chimeric antigen receptor immunotherapy
CA3139346A1 (en) 2019-05-07 2020-11-12 Gracell Biotechnologies (Shanghai) Co., Ltd. Engineered immune cell targeting bcma and use thereof
WO2020236967A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 The Broad Institute, Inc. Random crispr-cas deletion mutant
US11407829B2 (en) 2019-05-22 2022-08-09 Leidos, Inc. LAG3 binding peptides
EP3973072A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 Vogelsang, Matjaz Method for removal of nucleic acids impurities from liquid composition comprising genetically engineered particles or proteins
TWI826690B (zh) 2019-05-23 2023-12-21 美商基利科學股份有限公司 經取代之烯吲哚酮化物及其用途
US20220226464A1 (en) 2019-05-28 2022-07-21 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for modulating immune responses
CA3141826A1 (en) 2019-05-31 2020-12-03 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
EP4023230A4 (en) * 2019-06-05 2023-11-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIBODY CLEAVAGE SITE BINDING MOLECULE
AU2020287882A1 (en) 2019-06-07 2022-01-20 Juno Therapeutics, Inc. Automated T cell culture
EP3983006A1 (en) 2019-06-12 2022-04-20 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a cell-mediated cytotoxic therapy and an inhibitor of a prosurvival bcl2 family protein
WO2020252404A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 Obsidian Therapeutics, Inc. Ca2 compositions and methods for tunable regulation
BR112021025022A2 (pt) 2019-06-12 2022-02-22 Obsidian Therapeutics Inc Composições de ca2 e métodos para regulação ajustáveis
EP3986922A2 (en) 2019-06-21 2022-04-27 Kite Pharma, Inc. Tgf-beta receptors and methods of use
KR20220042353A (ko) 2019-06-24 2022-04-05 칠드런＇스 하스피틀 로스 앤젤레스 사람 흉선 세포 생성 및 t 세포 기능을 증진시키기 위한 bcl11b 과발현
JP7295283B2 (ja) 2019-06-25 2023-06-20 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｆｌｔ３ｌ－ｆｃ融合タンパク質及び使用方法
US11642409B2 (en) 2019-06-26 2023-05-09 Massachusetts Insttute of Technology Immunomodulatory fusion protein-metal hydroxide complexes and methods thereof
AU2020299382A1 (en) 2019-07-02 2022-01-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind EGFRvIII and their use
AU2020298572A1 (en) 2019-07-02 2021-11-18 Fred Hutchinson Cancer Center Recombinant Ad35 vectors and related gene therapy improvements
GB201909573D0 (en) 2019-07-03 2019-08-14 Cancer Research Tech Ltd Modulation of T cell cytotoxicity and related therapy
US20220267452A1 (en) 2019-07-12 2022-08-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-mutation type fgfr3 antibody and use therefor
WO2021011907A1 (en) 2019-07-18 2021-01-21 Gpb Scientific, Inc. Ordered processing of blood products to produce therapeutically active cells
KR20220042161A (ko) 2019-07-23 2022-04-04 엥스띠뛰 퀴리 Suv39h1에 결함이 있는 면역 세포
CN114174345A (zh) 2019-07-24 2022-03-11 瑞泽恩制药公司 具有mage-a4特异性的嵌合抗原受体和其用途
CN110305849B (zh) * 2019-08-01 2021-03-30 广东万海细胞生物科技有限公司 稳定表达car的t细胞及其制备方法与应用
GB201911066D0 (en) 2019-08-02 2019-09-18 Achilles Therapeutics Ltd T cell therapy
CN114585645A (zh) * 2019-08-09 2022-06-03 A2生物治疗公司 对杂合性丧失作出响应的细胞表面受体
WO2021030627A1 (en) 2019-08-13 2021-02-18 The General Hospital Corporation Methods for predicting outcomes of checkpoint inhibition and treatment thereof
WO2021035194A1 (en) 2019-08-22 2021-02-25 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a t cell therapy and an enhancer of zeste homolog 2 (ezh2) inhibitor and related methods
WO2021041994A2 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Juno Therapeutics, Inc. Machine learning methods for classifying cells
US20220298501A1 (en) 2019-08-30 2022-09-22 The Broad Institute, Inc. Crispr-associated mu transposase systems
WO2021040736A1 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Obsidian Therapeutics, Inc. Tandem cd19 car-based compositions and methods for immunotherapy
CN114746109A (zh) 2019-09-02 2022-07-12 居里研究所 靶向肿瘤新抗原性肽的免疫疗法
WO2021046134A1 (en) 2019-09-03 2021-03-11 Allogene Therapeutics, Inc. Methods of preparing t cells for t cell therapy
AU2020341454A1 (en) 2019-09-03 2022-03-10 Sana Biotechnology, Inc. CD24-associated particles and related methods and uses thereof
WO2021046451A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for dhfr tunable protein regulation
AU2020344553A1 (en) 2019-09-09 2022-04-07 Scribe Therapeutics Inc. Compositions and methods for use in immunotherapy
US11058725B2 (en) 2019-09-10 2021-07-13 Obsidian Therapeutics, Inc. CA2 compositions and methods for tunable regulation
WO2021051088A1 (en) * 2019-09-13 2021-03-18 Ohio State Innovation Foundation Nk cell immunotherapy compositions, methods of making and methods of using same
WO2021050964A1 (en) 2019-09-13 2021-03-18 Nimbus Saturn, Inc. Hpk1 antagonists and uses thereof
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
EP4031654A4 (en) * 2019-09-20 2023-11-22 The University of North Carolina at Chapel Hill MODIFIED T CELLS AND METHOD FOR PRODUCING THEREOF
WO2021051390A1 (zh) 2019-09-20 2021-03-25 上海吉倍生物技术有限公司 靶向bcma的抗体及嵌合抗原受体
WO2021061648A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for stimulation of endogenous t cell responses
KR102287180B1 (ko) * 2019-10-01 2021-08-09 충북대학교 산학협력단 Cd138에 특이적으로 결합하는 키메릭 항원 수용체, 이를 발현하는 면역세포 및 이의 항암 용도
EP4038190A1 (en) 2019-10-03 2022-08-10 Artisan Development Labs, Inc. Crispr systems with engineered dual guide nucleic acids
US11793787B2 (en) 2019-10-07 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for enhancing anti-tumor immunity by targeting steroidogenesis
CN114555123B (zh) 2019-10-18 2024-04-02 四十七公司 用于治疗骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病的联合疗法
WO2021078910A1 (en) 2019-10-22 2021-04-29 Institut Curie Immunotherapy targeting tumor neoantigenic peptides
CN110679588A (zh) * 2019-10-23 2020-01-14 厦门生命互联科技有限公司 一种嵌合抗原受体t细胞冻存介质及用途
WO2021081330A1 (en) 2019-10-23 2021-04-29 Kite Pharma, Inc. Anti-idiotypic antigen binding molecules and methods of use thereof
TWI717880B (zh) 2019-10-24 2021-02-01 中國醫藥大學附設醫院 Hla-g特異性嵌合抗原受體、核酸、hla-g特異性嵌合抗原受體表達質體、表達hla-g特異性嵌合抗原受體細胞、其用途以及用於治療癌症之醫藥組合物
US11844800B2 (en) 2019-10-30 2023-12-19 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for predicting and preventing relapse of acute lymphoblastic leukemia
WO2021084050A1 (en) 2019-10-30 2021-05-06 Juno Therapeutics Gmbh Cell selection and/or stimulation devices and methods of use
WO2021087064A1 (en) 2019-10-31 2021-05-06 Forty Seven, Inc. Anti-cd47 and anti-cd20 based treatment of blood cancer
WO2021085504A1 (ja) 2019-11-01 2021-05-06 京都府公立大学法人 Ｂ細胞抗体受容体、及びその利用
EP4054623A1 (en) 2019-11-07 2022-09-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and (s)-3-[4-(4-morpholin-4 ylmethyl-benzyloxy)-l-oxo-l,3-dihydro-isoindol-2-yl]- piperidine-2,6-dione
TWI778443B (zh) 2019-11-12 2022-09-21 美商基利科學股份有限公司 Mcl1抑制劑
BR112022009521A2 (pt) 2019-11-20 2022-08-16 Gi Cell Inc Composição de meio para cultura de células t e método para cultura de células t usando a mesma
EP4065158A2 (en) 2019-11-26 2022-10-05 Novartis AG Chimeric antigen receptors binding bcma and cd19 and uses thereof
CN115279764A (zh) 2019-11-26 2022-11-01 医肯纳肿瘤学公司 多晶型咔唑衍生物及其用途
WO2021113780A1 (en) 2019-12-06 2021-06-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to gprc5d-targeted binding domains and related compositions and methods
JP2023504740A (ja) 2019-12-06 2023-02-06 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｂｃｍａ標的結合ドメインに対する抗イディオタイプ抗体ならびに関連する組成物および方法
CN115398231A (zh) 2019-12-06 2022-11-25 朱诺治疗学股份有限公司 与治疗b细胞恶性肿瘤的细胞疗法相关的毒性和反应的相关方法
JP2023509366A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 カイメラ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｉｒａｋ分解剤およびそれらの使用
WO2021127283A2 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Kymera Therapeutics, Inc. Irak degraders and uses thereof
BR112022011902A2 (pt) 2019-12-20 2022-09-06 Novartis Ag Terapias de combinação
JP2023509394A (ja) 2019-12-23 2023-03-08 カイメラ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｓｍａｒｃａ分解剤およびそれらの使用
WO2021130638A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 Carna Biosciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
JP7088902B2 (ja) * 2019-12-27 2022-06-21 クレージュ メディカル カンパニー，リミテッド キメラ抗原受容体タンパク質をコードする核酸およびキメラ抗原受容体タンパク質を発現するｔリンパ球
CA3166192A1 (en) 2019-12-28 2021-07-01 Gpb Scientific, Inc. Microfluidic cartridges for processing particles and cells
CN113150167A (zh) * 2020-01-22 2021-07-23 中国人民解放军总医院第五医学中心 一种能够反转pd-1免疫抑制信号的car t细胞结构em1设计
IL294715A (en) 2020-01-23 2022-09-01 Childrens Medical Ct Corp Inducible t-cell differentiation from human pluripotent stem cells
EP4093753A1 (en) 2020-01-24 2022-11-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Preferentially expressed antigen in melanoma (prame) t cell receptors and methods of use thereof
MX2022009041A (es) 2020-01-24 2022-10-07 Juno Therapeutics Inc Metodos de dosificacion y tratamiento de linfoma folicular y linfoma de zona marginal en terapia celular adoptiva.
JP2023512209A (ja) 2020-01-28 2023-03-24 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｔ細胞形質導入のための方法
EP4100422A1 (en) 2020-02-03 2022-12-14 MVZ Prof. Niendorf Pathologie Hamburg-West GmbH Marker set for the diagnosis and treatment of cancer
US20230087953A1 (en) 2020-02-12 2023-03-23 Juno Therapeutics, Inc. Bcma-directed chimeric antigen receptor t cell compositions and methods and uses thereof
EP4103204A1 (en) 2020-02-12 2022-12-21 Juno Therapeutics, Inc. Cd19-directed chimeric antigen receptor t cell compositions and methods and uses thereof
US11692038B2 (en) 2020-02-14 2023-07-04 Gilead Sciences, Inc. Antibodies that bind chemokine (C-C motif) receptor 8 (CCR8)
WO2021167908A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
CN115397460A (zh) 2020-02-27 2022-11-25 诺华股份有限公司 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
US20230256017A1 (en) 2020-02-27 2023-08-17 Jennifer Brogdon Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
CN111269326A (zh) 2020-02-28 2020-06-12 南京北恒生物科技有限公司 新型嵌合抗原受体及其用途
AR121506A1 (es) 2020-03-03 2022-06-08 Pic Therapeutics Inc Inhibidores del eif4e y sus usos
KR20220150353A (ko) 2020-03-05 2022-11-10 네오티엑스 테라퓨틱스 엘티디. 면역 세포를 사용하여 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
AU2021236145A1 (en) 2020-03-10 2022-09-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for generating engineered memory-like NK cells and compositions thereof
AU2021232853A1 (en) 2020-03-10 2022-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for immunotherapy of NPM1c-positive cancer
CN113402612A (zh) 2020-03-17 2021-09-17 西比曼生物科技（香港）有限公司 靶向cd19和cd20的联合嵌合抗原受体及其应用
IL296451A (en) 2020-03-19 2022-11-01 Kymera Therapeutics Inc mdm2 joints and their uses
WO2021202604A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Sana Biotechnology, Inc. Targeted lipid particles and compositions and uses thereof
EP3892720A1 (en) 2020-04-06 2021-10-13 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Presenting cell and use thereof in cell therapy
WO2021207689A2 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting b-cell maturation antigen
WO2021211663A1 (en) * 2020-04-14 2021-10-21 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Chimeric myd88 receptors
US20210324331A1 (en) * 2020-04-15 2021-10-21 Amgen Inc. Process for generating genetically engineered autologous t cells
GB202005599D0 (en) 2020-04-17 2020-06-03 Univ London Modulation of t cell cytotoxicity and related therapy
GB202006254D0 (en) 2020-04-28 2020-06-10 Institute Of Cancer Res Anti-cancer vaccines and related therapy
WO2021222330A2 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Juno Therapeutics, Inc. Combination of bcma-directed t cell therapy and an immunomodulatory compound
CA3176654A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Karl PEGGS T cell therapy
WO2021222522A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 inhibiting 2,4-dioxopyrimidine compounds
WO2021221782A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Massachusetts Institute Of Technology Chimeric antigen receptor-targeting ligands and uses thereof
US20210340524A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Massachusetts Institute Of Technology Methods for identifying chimeric antigen receptor-targeting ligands and uses thereof
CA3175491A1 (en) 2020-05-05 2021-11-11 David DILILLO Car comprising cd28 zeta and cd3 zeta
US20230212243A1 (en) 2020-05-12 2023-07-06 Institut Curie Neoantigenic Epitopes Associated with SF3B1 Mutations
WO2021231657A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
EP4150057A2 (en) 2020-05-13 2023-03-22 Juno Therapeutics, Inc. Process for producing donor-batched cells expressing a recombinant receptor
US20230190780A1 (en) * 2020-05-15 2023-06-22 Precision Biosciences, Inc. Methods for immunotherapy
TW202208418A (zh) 2020-05-21 2022-03-01 美國德州系統大學評議委員會 具有vgll1特異性之t細胞受體及其用途
IL298558A (en) 2020-05-27 2023-01-01 Antion Biosciences Sa Adapter molecules redirect CAR T cells to the antigen of interest
TW202210483A (zh) 2020-06-03 2022-03-16 美商凱麥拉醫療公司 Irak降解劑之結晶型
AU2021285992A1 (en) 2020-06-04 2023-01-05 Carisma Therapeutics Inc. Novel constructs for chimeric antigen receptors
WO2021244654A1 (en) * 2020-06-05 2021-12-09 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Activation induced cytokine production in immune cells
JP2023530238A (ja) 2020-06-08 2023-07-14 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド キメラ抗原発現免疫細胞のインビトロ腫瘍殺傷活性を決定するための細胞ベースのアッセイ
AU2021288224A1 (en) 2020-06-11 2023-01-05 Novartis Ag ZBTB32 inhibitors and uses thereof
MX2022015852A (es) 2020-06-23 2023-01-24 Novartis Ag Regimen de dosificacion que comprende derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona.
WO2021260675A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Yeda Research And Development Co. Ltd. Agents for sensitizing solid tumors to treatment
CN116234558A (zh) 2020-06-26 2023-06-06 朱诺治疗学有限公司 条件性地表达重组受体的工程化t细胞、相关多核苷酸和方法
AU2021308078A1 (en) 2020-07-17 2023-02-09 Children's Hospital Los Angeles Chimeric MyD88 receptors for redirecting immunosuppressive signaling and related compositions and methods
KR102297396B1 (ko) 2020-07-29 2021-09-06 (주)티카로스 면역시냅스를 안정화시키는 키메라 항원 수용체(car) t 세포
EP4188395A1 (en) 2020-07-30 2023-06-07 Institut Curie Immune cells defective for socs1
WO2022026496A2 (en) 2020-07-31 2022-02-03 Leidos, Inc. Lag3 binding peptides
EP4188549A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Novartis AG Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
WO2022029660A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
IL300516A (en) 2020-08-13 2023-04-01 Sana Biotechnology Inc Methods for treating susceptible patients with hypoimmunogenic cells, and related methods and compounds
JP2023538303A (ja) 2020-08-13 2023-09-07 イェール ユニバーシティー 所望の表現型を有するｃａｒ ｔ細胞の操作および選択のための組成物および方法
KR20230084470A (ko) 2020-08-14 2023-06-13 카이트 파마 인코포레이티드 면역 세포 기능의 향상
AU2021327130A1 (en) 2020-08-17 2023-03-02 Bicycletx Limited Bicycle conjugates specific for Nectin-4 and uses thereof
CN116724052A (zh) 2020-08-20 2023-09-08 A2生物治疗股份有限公司 用于治疗ceacam阳性癌症的组合物和方法
MX2023002041A (es) 2020-08-20 2023-04-27 A2 Biotherapeutics Inc Composiciones y métodos para tratar cánceres positivos para mesotelina.
TW202227124A (zh) 2020-08-21 2022-07-16 瑞士商諾華公司 用於體內產生ｃａｒ表現細胞的組成物和方法
WO2022046760A2 (en) 2020-08-25 2022-03-03 Kite Pharma, Inc. T cells with improved functionality
US20230302135A1 (en) * 2020-08-26 2023-09-28 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Hybrid allosteric receptor-engineered stem cells
AU2021361844A1 (en) 2020-10-12 2023-06-15 Leidos, Inc. Immunomodulatory peptides
WO2022082093A1 (en) * 2020-10-16 2022-04-21 Neonc Technologies, Inc. Combination of poh and remdesivir for treatment of cns infections
WO2022093925A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Kite Pharma, Inc. Flow cytometric method for characterization of t-cell impurities
WO2022097061A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Anti-cd19 agent and b cell targeting agent combination therapy for treating b cell malignancies
CA3201499A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
CA3198447A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Novartis Ag Combination therapies with chimeric antigen receptor (car)-expressing cells
CN112195250A (zh) * 2020-11-20 2021-01-08 山东省医学科学院附属医院 一种qPCR试剂盒及应用
WO2022120353A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
US11661459B2 (en) 2020-12-03 2023-05-30 Century Therapeutics, Inc. Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof
WO2022133030A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a cell therapy and a bcl2 inhibitor
US11883432B2 (en) 2020-12-18 2024-01-30 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity
US20220204930A1 (en) 2020-12-24 2022-06-30 Kite Pharma, Inc. Prostate cancer chimeric antigen receptors
CA3203531A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Simon Olivares Recombinant vectors comprising polycistronic expression cassettes and methods of use thereof
TW202302841A (zh) 2020-12-31 2023-01-16 美商薩那生物科技公司 用於調變ｃａｒ－ｔ活性之方法與組成物
JP2024502599A (ja) 2021-01-10 2024-01-22 カイト ファーマ インコーポレイテッド Ｔ細胞療法
WO2022150731A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 Sana Biotechnology, Inc. Use of cd8-targeted viral vectors
KR20230146528A (ko) 2021-01-11 2023-10-19 바이사이클티엑스 리미티드 암을 치료하기 위한 방법
IL304031A (en) 2021-01-14 2023-08-01 Inst Curie Variants of single-domain HER2 antibodies and their chimeric antigenic receptors
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CN117062611A (zh) 2021-01-26 2023-11-14 惠和生物技术(上海)有限公司 嵌合抗原受体（car）构建体和表达car构建体的nk细胞
CA3209218A1 (en) * 2021-01-27 2022-08-04 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Bi-specific car t cells for b cell malignancies
CA3202891A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Kara Olson Compositions and methods for treating cytokine release syndrome
CA3204357A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Todd LUMAN Methods for transducing immune cells
WO2022167445A1 (en) 2021-02-02 2022-08-11 Liminal Biosciences Limited Gpr84 antagonists and uses thereof
TW202245789A (zh) 2021-02-15 2022-12-01 美商凱麥拉醫療公司 Irak4降解劑及其用途
KR20230137402A (ko) 2021-02-20 2023-10-04 카이트 파마 인코포레이티드 면역요법 선택을 위한 유전자 마커
JP2024509853A (ja) 2021-03-03 2024-03-05 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｔ細胞療法およびｄｇｋ阻害剤の組合せ
JP2024512337A (ja) 2021-03-05 2024-03-19 シャンハイ、ケンパーソー、バイオテクノロジー、カンパニー、リミテッド 抗ｃｌｄｎ６抗体およびその使用
JP2024509192A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 ニンバス サターン， インコーポレイテッド Ｈｐｋ１アンタゴニスト及びその使用
CA3212950A1 (en) 2021-03-11 2022-09-15 Kite Pharma, Inc. Improving immune cell function
CA3212964A1 (en) 2021-03-11 2022-09-15 Mnemo Therapeutics Tumor neoantigenic peptides
EP4304635A1 (en) 2021-03-11 2024-01-17 Mnemo Therapeutics Tumor neoantigenic peptides and uses thereof
WO2022189620A1 (en) 2021-03-11 2022-09-15 Institut Curie Transmembrane neoantigenic peptides
CN116997654A (zh) 2021-03-17 2023-11-03 第一三共株式会社 编码抗乙酰胆碱受体自身抗体的嵌合受体的基因
CA3208944A1 (en) 2021-03-22 2022-09-29 Edith NALBANDIAN Method to assess potency of viral vector particles
AU2022241654A1 (en) 2021-03-22 2023-09-28 Juno Therapeutics, Inc. Methods of determining potency of a therapeutic cell composition
IL307257A (en) 2021-03-29 2023-11-01 Juno Therapeutics Inc A combination of car cell therapy and an immunomodulatory compound for the treatment of lymphoma
IL307262A (en) 2021-03-29 2023-11-01 Juno Therapeutics Inc METHODS FOR DOSAGE AND THERAPY IN COMBINATION OF CHECKPOINT INHIBITOR AND CAR T CELL THERAPY
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
GB202109886D0 (en) 2021-07-08 2021-08-25 Achilles Therapeutics Uk Ltd Assay
EP4320435A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Achilles Therapeutics UK Limited Batch release assay for pharmaceutical products relating to t cell therapies
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
KR20230172548A (ko) 2021-04-16 2023-12-22 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Mek 억제제 및 이의 용도
EP4322991A1 (en) 2021-04-16 2024-02-21 Celgene Corporation T cell therapy in patients who have had prior stem cell transplant
US20220336087A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Kite Pharma, Inc. Methods and systems for scheduling a patient-specific immunotherapy procedure
JP2024514163A (ja) 2021-04-16 2024-03-28 セルジーン コーポレーション Ｂｃｍａ指向性ｔ細胞療法を用いた併用療法
AU2022259428A1 (en) 2021-04-16 2023-10-26 Kite Pharma, Inc. Taci/bcma dual binding molecules
EP4326286A2 (en) * 2021-04-23 2024-02-28 Myeloid Therapeutics, Inc. Compositions and methods for conditioning patients for cell therapy
WO2022229884A2 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Recombinant antigen presenting cells
CA3218362A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Novartis Ag Viral vector production system
WO2022235662A1 (en) 2021-05-04 2022-11-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors with mage-a4 specificity and uses thereof
KR20240018454A (ko) 2021-05-06 2024-02-13 주노 테라퓨틱스 게엠베하 T 세포의 자극 및 형질도입 방법
US20220378830A1 (en) 2021-05-14 2022-12-01 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen receptor t cell therapy
US20220389394A1 (en) 2021-05-18 2022-12-08 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF USING FLT3L-Fc FUSION PROTEINS
EP4340851A1 (en) 2021-05-19 2024-03-27 Sana Biotechnology, Inc. Hypoimmunogenic rhd negative primary t cells
CA3221231A1 (en) 2021-05-24 2022-12-01 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen receptor
WO2022251434A1 (en) * 2021-05-26 2022-12-01 Emory University Jak inhibitors for managing conditions in patients with down's syndrome or other trisomy
AU2022283291A1 (en) 2021-05-27 2023-11-02 Sana Biotechnology, Inc. Hypoimmunogenic cells comprising engineered hla-e or hla-g
CA3219487A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Richard C. Mulligan Lipid particles containing a truncated baboon endogenous retrovirus (baev) envelope glycoprotein and related methods and uses
WO2022256448A2 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Artisan Development Labs, Inc. Compositions and methods for targeting, editing, or modifying genes
CA3218590A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 Providence Health & Services - Oregon Cxcr5, pd-1, and icos expressing tumor reactive cd4 t cells and their use
WO2022261061A1 (en) 2021-06-08 2022-12-15 Kite Pharma, Inc. Gpc3 binding molecules
WO2022266538A2 (en) 2021-06-18 2022-12-22 Artisan Development Labs, Inc. Compositions and methods for targeting, editing or modifying human genes
WO2022269250A1 (en) 2021-06-22 2022-12-29 Achilles Therapeutics Uk Limited A method for producing antigen-specific t cells
KR20240005901A (ko) 2021-06-23 2024-01-12 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 디아실글리세롤 키나제 조절 화합물
AU2022298639A1 (en) 2021-06-23 2023-12-07 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CR20230585A (es) 2021-06-23 2024-02-19 Gilead Sciences Inc Compuestos Moduladores de Diacilglicerol Quinasa.
AU2022299051A1 (en) 2021-06-23 2023-12-07 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
KR20240026507A (ko) 2021-06-29 2024-02-28 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 타노트랜스미션을 촉진시키도록 엔지니어링된 면역 세포 및 이의 용도
US20230027004A1 (en) 2021-07-01 2023-01-26 Kite Pharma, Inc. Closed-system and method for autologous and allogeneic cell therapy manufacturing
AU2022301302A1 (en) 2021-07-01 2024-01-25 Indapta Therapeutics, Inc. Engineered natural killer (nk) cells and related methods
IL309431A (en) 2021-07-02 2024-02-01 Kite Pharma Inc A method for identifying variants in gene products from gene constructs used in cell therapy applications
WO2023281097A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Immunic Ag Methods for treating cancer
IL310089A (en) 2021-07-14 2024-03-01 Sana Biotechnology Inc Differential expression of Y-linked antigens in hypoimmunogenic cells
IL310099A (en) * 2021-07-16 2024-03-01 Sana Biotechnology Inc Polycistronic vectors for cell-based therapies
WO2023004300A2 (en) * 2021-07-19 2023-01-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Chimeric antigen receptor (car)-t signaling optimization for tuning antigen activation threshold
US20230190799A1 (en) * 2021-07-21 2023-06-22 City Of Hope Chimeric antigen receptor t cells targeting cea and anti-cea-il2 immunocytokines for cancer therapy
KR20240027077A (ko) 2021-07-30 2024-02-29 카이트 파마 인코포레이티드 세포 요법-유도 독성의 모니터링 및 관리
TW202321457A (zh) 2021-08-04 2023-06-01 美商薩那生物科技公司 靶向ｃｄ４之病毒載體之用途
WO2023014922A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
WO2023019128A1 (en) * 2021-08-09 2023-02-16 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Optimizing t cell differentiation state with micrornas
CA3227613A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 William Dowdle Inducible systems for altering gene expression in hypoimmunogenic cells
WO2023019226A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy
WO2023019227A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce complement-mediated inflammatory reactions
WO2023019229A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified primary cells for allogeneic cell therapy
AU2022325955A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce instant blood mediated inflammatory reactions
WO2023021113A1 (en) 2021-08-18 2023-02-23 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Hybrid tumor/cancer therapy based on targeting the resolution of or inducing transcription-replication conflicts (trcs)
CN117858901A (zh) 2021-08-20 2024-04-09 诺华股份有限公司 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
WO2023025788A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Il-10 expressing cells for enhanced cancer immunotherapies
WO2023028238A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 PIC Therapeutics, Inc. Eif4e inhibitors and uses thereof
IL310924A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Pic Therapeutics Inc EIF4E inhibitors and their uses
CA3232833A1 (en) 2021-09-27 2023-03-30 Kathleen Mcginness Chimeric receptor polypeptides in combination with trans metabolism molecules that re-direct glucose metabolites out of the glycolysis pathway and therapeutic uses thereof
WO2023069936A1 (en) 2021-10-18 2023-04-27 Kite Pharma, Inc. Signaling domains for chimeric antigen receptors
US20230183216A1 (en) 2021-10-28 2023-06-15 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
US11919869B2 (en) 2021-10-29 2024-03-05 Gilead Sciences, Inc. CD73 compounds
WO2023081715A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Viracta Therapeutics, Inc. Combination of car t-cell therapy with btk inhibitors and methods of use thereof
WO2023081735A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen for use in treating myeloma
WO2023091909A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Sotio Biotech Inc. Treatment of myxoid/round cell liposarcoma patients
WO2023092119A2 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd Methods for predicting responsiveness to a cancer therapy
WO2023105000A1 (en) 2021-12-09 2023-06-15 Zygosity Limited Vector
WO2023115041A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Modified paramyxoviridae attachment glycoproteins
TW202342498A (zh) 2021-12-17 2023-11-01 美商薩那生物科技公司 經修飾副黏液病毒科融合醣蛋白
WO2023114984A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2023122615A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023122581A2 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023122337A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Sana Biotechnology, Inc. Chimeric antigen receptor (car) t cells for treating autoimmune disease and associated methods
WO2023126458A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Mnemo Therapeutics Immune cells with inactivated suv39h1 and modified tcr
TW202334400A (zh) 2021-12-30 2023-09-01 美商Ｔｒ１Ｘ股份有限公司 表現il-10及嵌合抗原受體之cd4+ t細胞及其用途
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023137472A2 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for programming t cell phenotypes through targeted gene repression
WO2023137471A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for programming t cell phenotypes through targeted gene activation
US20230227779A1 (en) 2022-01-19 2023-07-20 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Enhanced Chimeric Antigen Receptor Cells in Hypoxic Tumor Microenvironment
WO2023139269A1 (en) 2022-01-21 2023-07-27 Mnemo Therapeutics Modulation of suv39h1 expression by rnas
WO2023147515A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing cellular compositions
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
WO2023150181A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for treating cancer
WO2023150518A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023154890A2 (en) * 2022-02-11 2023-08-17 Fred Hutchinson Cancer Center Chimeric antigen receptors binding steap1
WO2023154578A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Sana Biotechnology, Inc. Methods of treating patients exhibiting a prior failed therapy with hypoimmunogenic cells
US20230296610A1 (en) 2022-02-15 2023-09-21 Kite Pharma, Inc. Predicting adverse events from immunotherapy
WO2023158836A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Sana Biotechnology, Inc. Engineered cd47 proteins and uses thereof
WO2023164440A1 (en) 2022-02-22 2023-08-31 Juno Therapeutics, Inc. Proteinase 3 (pr3) chimeric autoantibody receptor t cells and related methods and uses
TW202340457A (zh) 2022-02-28 2023-10-16 美商凱特製藥公司 同種異體治療細胞
WO2023167882A1 (en) 2022-03-01 2023-09-07 Artisan Development Labs, Inc. Composition and methods for transgene insertion
WO2023172883A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies thereof and related methods and uses
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023173057A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023173053A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023173123A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells and compositions and uses thereof
WO2023173137A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Yale University Compositions and methods for efficient and stable genetic modification of eukaryotic cells
US20230373950A1 (en) 2022-03-17 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023178348A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Genetically engineered t-cell co-receptors and methods of use thereof
WO2023180552A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Institut Curie Immunotherapy targeting tumor transposable element derived neoantigenic peptides in glioblastoma
US20230355796A1 (en) 2022-03-24 2023-11-09 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
GB202204386D0 (en) 2022-03-28 2022-05-11 Cambridge Entpr Ltd Engineered immune cell platform
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
WO2023196921A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Granzyme expressing t cells and methods of use
WO2023196933A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
TW202400138A (zh) 2022-04-21 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 Ｋｒａｓ ｇ１２ｄ調節化合物
WO2023211889A1 (en) 2022-04-25 2023-11-02 Ikena Oncology, Inc. Polymorphic compounds and uses thereof
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023220644A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Yale University Compositions and methods of synthetic ctla-4 tails for reprogramming of car-t cells and enhancement of anti-tumor efficacy
WO2023220641A2 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to t cell therapy and production of same
WO2023220655A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
EP4279085A1 (en) 2022-05-20 2023-11-22 Mnemo Therapeutics Compositions and methods for treating a refractory or relapsed cancer or a chronic infectious disease
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
WO2023230205A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
US20240000844A1 (en) 2022-05-27 2024-01-04 Kite Pharma, Inc. Non-viral delivery of cell therapy constructs
US20230392119A1 (en) 2022-05-27 2023-12-07 Kite Pharma, Inc. Compositions and methods for preparing engineered lymphocytes for cell therapy
US20230399614A1 (en) 2022-06-09 2023-12-14 Kite Pharma, Inc. Methods of preparing lymphocytes for cell therapy
WO2023239940A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Research Development Foundation Engineered fcriib selective igg1 fc variants and uses thereof
WO2023242343A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Immunoscape Pte. Ltd. Human t cell receptors specific for antigenic peptides derived from mitogen-activated protein kinase 8 interacting protein 2 (mapk8ip2), epstein-barr virus or human endogenous retrovirus, and uses thereof
WO2023250400A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Juno Therapeutics, Inc. Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells
WO2024006960A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Juno Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
WO2024007020A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Indapta Therapeutics, Inc. Combination of engineered natural killer (nk) cells and antibody therapy and related methods
WO2024006929A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
WO2024028363A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Heteroaryl carboxamide and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028364A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Aryl-triazolyl and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028365A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Substituted pyridone gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024030441A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 National University Corporation Hokkaido University Methods of improving cellular therapy with organelle complexes
WO2024033879A1 (en) 2022-08-10 2024-02-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Hypoimmunogenic modified cells
WO2024040207A1 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Sotio Biotech Inc. Genetically engineered natural killer (nk) cells with chimeric receptor polypeptides in combination with trans metabolism molecules and therapeutic uses thereof
WO2024040208A1 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Sotio Biotech Inc. Genetically engineered immune cells with chimeric receptor polypeptides in combination with multiple trans metabolism molecules and therapeutic uses thereof
WO2024044670A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Kite Pharma, Inc. Improving immune cell function
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024054944A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
WO2024056809A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Novartis Ag Treatment of autoimmune disorders using chimeric antigen receptor therapy
WO2024064642A2 (en) 2022-09-19 2024-03-28 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for modulating t cell function
US20240091351A1 (en) 2022-09-21 2024-03-21 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPa DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY
WO2024064824A2 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Yale University Compositions and methods for identification of membrane targets for enhancement of nk cell therapy
WO2024062138A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Mnemo Therapeutics Immune cells comprising a modified suv39h1 gene
WO2024073583A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Caribou Biosciences, Inc. Anti-ror1 chimeric antigen receptors (cars), car-nk cells and related methods
WO2024077256A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 The General Hospital Corporation Methods and compositions for high-throughput discovery ofpeptide-mhc targeting binding proteins

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002077029A2 (en) * 2000-11-07 2002-10-03 City Of Hope Cd19-specific redirected immune cells
US20040043401A1 (en) * 2002-05-28 2004-03-04 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Chimeric T cell receotors
WO2008045437A2 (en) * 2006-10-09 2008-04-17 The General Hospital Corporation Chimeric t-cell receptors and t-cells targeting egfrviii on tumors

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
US4882282A (en) * 1985-08-16 1989-11-21 Immunex Corporation DNA sequences encoding bovine interleukin-2
US5906936A (en) 1988-05-04 1999-05-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Endowing lymphocytes with antibody specificity
US6303121B1 (en) 1992-07-30 2001-10-16 Advanced Research And Technology Method of using human receptor protein 4-1BB
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
ATE145428T1 (de) 1990-12-14 1996-12-15 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
US6319494B1 (en) 1990-12-14 2001-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
US7049136B2 (en) 1991-03-07 2006-05-23 The General Hospital Corporation Redirection of cellular immunity by receptor chimeras
US6004811A (en) 1991-03-07 1999-12-21 The Massachussetts General Hospital Redirection of cellular immunity by protein tyrosine kinase chimeras
IL101147A (en) 1991-03-07 2004-06-20 Gen Hospital Corp Change of direction of cellular immunity by chimera receptors
US5199942A (en) 1991-06-07 1993-04-06 Immunex Corporation Method for improving autologous transplantation
GB9125768D0 (en) 1991-12-04 1992-02-05 Hale Geoffrey Therapeutic method
US8211422B2 (en) 1992-03-18 2012-07-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
US5350674A (en) 1992-09-04 1994-09-27 Becton, Dickinson And Company Intrinsic factor - horse peroxidase conjugates and a method for increasing the stability thereof
US7211259B1 (en) 1993-05-07 2007-05-01 Immunex Corporation 4-1BB polypeptides and DNA encoding 4-1BB polypeptides
NZ273838A (en) * 1993-09-16 1997-09-22 Indiana University Foundation Human receptor protein h4-1bb
NZ285395A (en) 1994-05-02 1998-10-28 Novartis Ag Chimeric antibody, cancer treatment
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5712149A (en) 1995-02-03 1998-01-27 Cell Genesys, Inc. Chimeric receptor molecules for delivery of co-stimulatory signals
US6103521A (en) 1995-02-06 2000-08-15 Cell Genesys, Inc. Multispecific chimeric receptors
PT871495E (pt) 1995-02-24 2005-10-31 Gen Hospital Corp Redireccionamento de imunidade celular atraves de receptores quimericos
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
GB9526131D0 (en) 1995-12-21 1996-02-21 Celltech Therapeutics Ltd Recombinant chimeric receptors
US5874240A (en) 1996-03-15 1999-02-23 Human Genome Sciences, Inc. Human 4-1BB receptor splicing variant
CA2269738A1 (en) 1996-10-25 1998-05-07 Mitchell H. Finer Targeted cytolysis of cancer cells
US20030060444A1 (en) 1997-06-25 2003-03-27 Celltech Therapeutics, Ltd. Cell activation process and reagents therefor
GB9713473D0 (en) 1997-06-25 1997-09-03 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
GB9722779D0 (en) * 1997-10-28 1997-12-24 Isis Innovation Human CD8 as an inhibitor of the cellular immune system
JP2001521008A (ja) * 1997-10-28 2001-11-06 ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア 哺乳類の中枢神経系ミエリンを一過的に変えて神経再生を促進する免疫組成物及びその使用方法
GB9809658D0 (en) 1998-05-06 1998-07-01 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
JP2002524081A (ja) 1998-09-04 2002-08-06 スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 前立腺−特異的膜抗原に特異的な融合受容体およびその使用
US6410319B1 (en) * 1998-10-20 2002-06-25 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
EP1171596A1 (en) 1999-04-16 2002-01-16 Celltech Therapeutics Limited Synthetic transmembrane components
CA2386270A1 (en) 1999-10-15 2001-04-26 University Of Massachusetts Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference
GB9925848D0 (en) 1999-11-01 1999-12-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
CA2391129A1 (en) 1999-11-10 2001-05-17 The Uab Research Foundation Lentiviral vector transduction of hematopoietic stem cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
AU4328801A (en) 2000-02-24 2001-09-03 Xcyte Therapies Inc Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
IL136511A0 (en) 2000-06-01 2001-06-14 Gavish Galilee Bio Appl Ltd Genetically engineered mhc molecules
WO2001096584A2 (en) 2000-06-12 2001-12-20 Akkadix Corporation Materials and methods for the control of nematodes
GB0025307D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
US7070995B2 (en) * 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7514537B2 (en) * 2001-04-30 2009-04-07 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas
US20030171546A1 (en) 2001-04-30 2003-09-11 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US20030148982A1 (en) 2001-11-13 2003-08-07 Brenner Malcolm K. Bi-spcific chimeric T cells
US7745140B2 (en) 2002-01-03 2010-06-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool
JP3878522B2 (ja) * 2002-07-18 2007-02-07 株式会社日立製作所 ベンチュリ式燃料供給装置を備えたエンジンの空燃比制御方法及びその方法を備えた燃料制御装置
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
US7402431B2 (en) * 2004-03-01 2008-07-22 Immunovative Therapies, Ltd. T-cell therapy formulation
US8198020B2 (en) 2003-08-22 2012-06-12 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhancing phagocytosis or phagocyte activity
US20050113564A1 (en) 2003-11-05 2005-05-26 St. Jude Children's Research Hospital Chimeric receptors with 4-1BB stimulatory signaling domain
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
AU2005250408B2 (en) 2004-05-27 2010-09-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel artificial antigen presenting cells and uses therefor
US7994298B2 (en) 2004-09-24 2011-08-09 Trustees Of Dartmouth College Chimeric NK receptor and methods for treating cancer
ES2766123T3 (es) 2004-12-10 2020-06-11 Peter Maccallum Cancer Inst Métodos y composiciones para inmunoterapia adoptiva
US7581948B2 (en) * 2005-12-21 2009-09-01 Johns Manville Burner apparatus and methods for making inorganic fibers
US7551486B2 (en) * 2006-05-15 2009-06-23 Apple Inc. Iterative memory cell charging based on reference cell value
EP1916259A1 (en) * 2006-10-26 2008-04-30 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Anti-glycoprotein VI SCFV fragment for treatment of thrombosis
US20080131415A1 (en) 2006-11-30 2008-06-05 Riddell Stanley R Adoptive transfer of cd8 + t cell clones derived from central memory cells
US7448191B2 (en) * 2007-02-14 2008-11-11 Deere & Company Mower deck lift system with transport lock
US20080311098A1 (en) * 2007-02-14 2008-12-18 Lapointe Rejean Compounds and methods for modulating the immune response against antigens
CA2584494A1 (en) * 2007-03-27 2008-09-27 Jeffrey A. Medin Vector encoding therapeutic polypeptide and safety elements to clear transduced cells
US8389282B2 (en) 2007-03-30 2013-03-05 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred T lymphocytes
WO2009091826A2 (en) * 2008-01-14 2009-07-23 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to a human cd19-specific chimeric antigen receptor (h-car)
US10059923B2 (en) 2008-01-30 2018-08-28 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods for off-the-shelf tumor immunotherapy using allogeneic T-cell precursors
EP2279253B1 (en) * 2008-04-09 2016-11-16 Maxcyte, Inc. Engineering and delivery of therapeutic compositions of freshly isolated cells
PT3006459T (pt) 2008-08-26 2021-11-26 Hope City Método e composições para funcionamento melhorado de efetores antitumorais de células t
CN101348525B (zh) * 2008-08-28 2011-11-16 南京医科大学 抗血吸虫单克隆抗体np11-4单链抗体及其制备方法、应用
EP2389443B1 (en) * 2009-01-23 2018-11-14 Roger Williams Hospital Retroviral vectors encoding multiple highly homologous non-viral polypeptides and the use of same
WO2011041093A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-vascular endothelial growth factor receptor-2 chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer
US9181527B2 (en) 2009-10-29 2015-11-10 The Trustees Of Dartmouth College T cell receptor-deficient T cell compositions
WO2012033885A1 (en) 2010-09-08 2012-03-15 Baylor College Of Medicine Immunotherapy of cancer using genetically engineered gd2-specific t cells
CA2816379A1 (en) 2010-10-27 2012-05-03 Baylor College Of Medicine Chimeric cd27 receptors for redirecting t cells to cd70-positive malignancies
NZ612512A (en) * 2010-12-09 2015-03-27 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
EP3693017A1 (en) 2010-12-14 2020-08-12 University of Maryland, Baltimore Universal anti-tag chimeric antigen receptor-expressing t cells and methods of treating cancer
WO2012127464A2 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Gavish-Galilee Bio Applications Ltd Constitutively activated t cells for use in adoptive cell therapy
EA201391449A1 (ru) 2011-04-01 2014-03-31 Мемориал Слоан-Кеттеринг Кэнсер Сентер Антитела против пептидов цитозоля
AU2012240135B2 (en) 2011-04-08 2016-09-08 Baylor College Of Medicine Reversing the effects of the tumor microenvironment using chimeric cytokine receptors
US20130071414A1 (en) 2011-04-27 2013-03-21 Gianpietro Dotti Engineered cd19-specific t lymphocytes that coexpress il-15 and an inducible caspase-9 based suicide gene for the treatment of b-cell malignancies
US9833476B2 (en) 2011-08-31 2017-12-05 The Trustees Of Dartmouth College NKP30 receptor targeted therapeutics
ES2716298T3 (es) 2011-09-16 2019-06-11 Baylor College Medicine El microentorno tumoral como diana mediante el uso de células NKT manipuladas
CA2851795C (en) 2011-10-20 2018-11-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-cd22 chimeric antigen receptors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002077029A2 (en) * 2000-11-07 2002-10-03 City Of Hope Cd19-specific redirected immune cells
US20040043401A1 (en) * 2002-05-28 2004-03-04 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Chimeric T cell receotors
WO2008045437A2 (en) * 2006-10-09 2008-04-17 The General Hospital Corporation Chimeric t-cell receptors and t-cells targeting egfrviii on tumors

Also Published As

Publication number Publication date
HK1253052A1 (zh) 2019-06-06
ZA201304470B (en) 2014-08-27
US20140370017A1 (en) 2014-12-18
CL2013001645A1 (es) 2014-02-14
AU2017203087A1 (en) 2017-06-08
HUE036872T2 (hu) 2018-08-28
AP2013006918A0 (en) 2013-06-30
LTPA2019502I1 (lt) 2019-03-12
EP3214091A1 (en) 2017-09-06
NO2019007I1 (no) 2019-02-15
US9102761B2 (en) 2015-08-11
JP6293194B2 (ja) 2018-03-14
CA2820681A1 (en) 2012-06-14
US8906682B2 (en) 2014-12-09
EP2649086A4 (en) 2014-12-31
US20160208012A1 (en) 2016-07-21
PT2649086T (pt) 2017-10-19
US9499629B2 (en) 2016-11-22
US8975071B1 (en) 2015-03-10
JP2018029594A (ja) 2018-03-01
LTC2649086I2 (lt) 2020-12-28
HUS1900007I1 (hu) 2019-04-29
NO2019006I1 (no) 2019-02-15
BR112013014265B8 (pt) 2023-12-19
KR20200014343A (ko) 2020-02-10
SI2649086T1 (en) 2018-01-31
MY191313A (en) 2022-06-15
US8911993B2 (en) 2014-12-16
NL300967I1 (nl) 2019-02-20
US20140106449A1 (en) 2014-04-17
LT2649086T (lt) 2017-11-10
FR19C1006I2 (fr) 2020-03-20
CY2019007I1 (el) 2019-11-27
DK3214091T3 (en) 2019-01-07
NZ612512A (en) 2015-03-27
MX2020005143A (es) 2020-08-17
EA027153B1 (ru) 2017-06-30
JP5947311B2 (ja) 2016-07-06
WO2012079000A4 (en) 2012-08-23
PE20140178A1 (es) 2014-02-20
AU2017225161C1 (en) 2021-07-29
HRP20182202T1 (hr) 2019-03-08
JP7426361B2 (ja) 2024-02-01
KR20210059762A (ko) 2021-05-25
CY1119760T1 (el) 2018-06-27
AU2017225161B2 (en) 2019-11-21
AU2017203087B2 (en) 2019-06-20
US20160159907A1 (en) 2016-06-09
KR102243575B1 (ko) 2021-04-22
KR20130124521A (ko) 2013-11-14
AU2022201895A1 (en) 2022-04-07
HUS1900006I1 (hu) 2019-04-29
KR102417796B9 (ko) 2024-03-06
HUE042207T2 (hu) 2019-06-28
MY169644A (en) 2019-04-24
KR102243575B9 (ko) 2023-05-24
JP2020022456A (ja) 2020-02-13
US20150118202A1 (en) 2015-04-30
AU2017225161A1 (en) 2017-11-09
US20130309258A1 (en) 2013-11-21
ES2641870T3 (es) 2017-11-14
CN110452882A (zh) 2019-11-15
JP6588060B2 (ja) 2019-10-09
CN103492406B (zh) 2022-07-26
HRP20171577T1 (hr) 2017-12-01
CY2019007I2 (el) 2019-11-27
AU2020200767A1 (en) 2020-02-27
US9518123B2 (en) 2016-12-13
KR102417796B1 (ko) 2022-07-07
US20150050729A1 (en) 2015-02-19
RS56453B1 (sr) 2018-01-31
EA201390847A1 (ru) 2013-12-30
LUC00104I1 (ru) 2019-02-21
JP2014507118A (ja) 2014-03-27
CN108103085A (zh) 2018-06-01
IL226694B (en) 2020-10-29
AU2011338200A1 (en) 2013-07-04
ECSP13012739A (es) 2013-10-31
CN107699585A (zh) 2018-02-16
HK1243082B (zh) 2019-09-13
RS58100B1 (sr) 2019-02-28
US20160130355A1 (en) 2016-05-12
BR112013014265B1 (pt) 2023-05-16
EP3214091B1 (en) 2018-10-03
BR112013014265A2 (pt) 2017-12-19
US9101584B2 (en) 2015-08-11
PL2649086T3 (pl) 2018-03-30
US20160194404A1 (en) 2016-07-07
US9481728B2 (en) 2016-11-01
CY2019008I1 (el) 2019-11-27
US9540445B2 (en) 2017-01-10
LUC00104I2 (ru) 2019-12-27
MX2013006570A (es) 2013-08-26
CR20130269A (es) 2013-09-03
SG190997A1 (en) 2013-07-31
US20180258391A1 (en) 2018-09-13
SG10201510092QA (en) 2016-01-28
EP2649086A1 (en) 2013-10-16
EP3660029A1 (en) 2020-06-03
AU2011338200B2 (en) 2017-02-23
CN103492406A (zh) 2014-01-01
TR201820015T4 (tr) 2019-01-21
US9464140B2 (en) 2016-10-11
NI201300051A (es) 2014-01-07
US20170283775A1 (en) 2017-10-05
US9102760B2 (en) 2015-08-11
JP2018029595A (ja) 2018-03-01
GT201300150A (es) 2014-06-10
DK2649086T3 (en) 2017-09-18
NL300967I2 (nl) 2019-08-20
KR20220101745A (ko) 2022-07-19
KR102062407B1 (ko) 2020-01-03
LT3214091T (lt) 2018-12-10
CN106220739A (zh) 2016-12-14
JP6943933B2 (ja) 2021-10-06
US20130287748A1 (en) 2013-10-31
MA34813B1 (fr) 2014-01-02
CO6801633A2 (es) 2013-11-29
PL3214091T3 (pl) 2019-03-29
KR20230133410A (ko) 2023-09-19
AU2020200767B2 (en) 2021-12-23
WO2012079000A1 (en) 2012-06-14
BR122021026169B1 (pt) 2023-12-12
DOP2013000128A (es) 2014-03-16
EP2649086B1 (en) 2017-07-19
US8916381B1 (en) 2014-12-23
JP2022002516A (ja) 2022-01-11
AU2020200767C1 (en) 2024-01-18
CA2820681C (en) 2018-10-23
JP6588514B2 (ja) 2019-10-09
JP2016174607A (ja) 2016-10-06
BR122021026173B1 (pt) 2023-12-05
US9328156B2 (en) 2016-05-03
EA201790175A1 (ru) 2017-09-29
EP3305798A1 (en) 2018-04-11
US20150093822A1 (en) 2015-04-02
PT3214091T (pt) 2019-01-11
ES2700966T3 (es) 2019-02-20
US20130288368A1 (en) 2013-10-31
LTPA2019503I1 (lt) 2019-03-12
SI3214091T1 (sl) 2019-02-28
BR112013014265A8 (pt) 2018-04-17
MX347078B (es) 2017-04-10
US20150099299A1 (en) 2015-04-09
FR19C1006I1 (ru) 2019-04-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020200767B2 (en) Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM