CN108348606A - 用于治疗癌症的抗趋除剂的局部递送 - Google Patents

用于治疗癌症的抗趋除剂的局部递送 Download PDF

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Abstract

本文描述的发明涉及用于治疗患者中的癌症或肿瘤细胞的方法和组合物，其通过施用有效量的抗体‑抗趋除剂复合物进行。

Description

用于治疗癌症的抗趋除剂的局部递送
对相关申请的交叉引用
基于35U.S.C.§119(e)，本申请要求2015年9月18日提交的美国临时申请号62/220912的优先权权益，其通过引用整体结合于此。
发明背景
在原核生物和真核生物两者中发生应答于特定刺激的细胞运动。细胞运动已被分为三种类型：趋化性(chemotaxis)，或细胞沿着化学品浓度增加的梯度运动；负趋化性(negative chemotaxis)，其被定义为沿着化学刺激的梯度下降的运动；和化动性(chemokinesis)，或由化学试剂诱导的细胞随机运动的增加。
趋化性和化动性应答于称为趋化因子的一类蛋白质而发生在哺乳动物细胞中。另外，在哺乳动物细胞中已经观察到化学排斥物(chemorepellent)或趋除性(fugetactic)活性。例如，一些肿瘤细胞分泌足以从肿瘤部位排斥免疫细胞的趋化因子浓度，从而降低免疫系统靶向和根除肿瘤的能力。转移癌细胞可以使用类似的机制来逃避免疫系统。
已经描述了抗趋除剂抑制肿瘤细胞的趋除活性并且允许患者的免疫系统靶向肿瘤(参见US 2008/0300165，其通过引用整体结合于此)。然而，取决于肿瘤的类型、肿瘤的大小、转移的数量、转移的部位、患者的健康等，单独使用这种药剂进行治疗可能不足以根除所有患者中的肿瘤。
仍然需要靶向肿瘤的治疗和组合物以有效地杀死肿瘤和/或转移癌细胞。
发明概述
本发明涉及用抗体-抗趋除剂复合物治疗肿瘤。
可以任选地施用一种或多种另外的癌症疗法，例如化学疗法、放射疗法、免疫疗法和/或疫苗疗法。免疫疗法(免疫治疗剂)包括但不限于可以施用至患者的任何活的免疫细胞，和/或对靶细胞(例如肿瘤细胞)具有特异性的抗体。优选地，免疫治疗剂是NK细胞或T细胞，或其修饰或衍生物(例如CAR T细胞)。在一些实施方案中，另外的抗癌疗法不与用抗趋除剂和抗体的治疗同时施用。
例如从表达高水平CXCL12或白细胞介素8的肿瘤排斥肿瘤抗原特异性T细胞允许肿瘤细胞逃避免疫控制。本发明依据于这样的发现：用有效量的抗体-抗趋除剂复合物治疗足以减弱趋化因子的趋除效应的时间段会恢复针对肿瘤的免疫防御，并且还允许抗癌剂(例如，化学治疗剂、免疫治疗剂、放射治疗剂等)更好地接近肿瘤以减少或根除肿瘤。
不受理论束缚，据信抗体-抗趋除剂复合物与如本文所描述的另外的抗癌剂的共同施用将导致患有肿瘤的患者中的协同反应，使得患者具有比单独的任何一种治疗都更好的结果。抗癌剂包括但不限于已知的癌症治疗，例如，化学疗法、放射疗法、免疫疗法和/或疫苗疗法。在优选的实施方案中，另外的药剂是疫苗疗法、细胞疗法、抗体疗法或检查点抑制剂。不受理论束缚，据信作为非限制性实例，如果肿瘤体积大、患者中存在多种肿瘤、患者的免疫系统受损等，则这些方法是特别有益的。
多达85％的实体瘤和白血病以足以具有趋除效应(例如，从肿瘤排斥免疫细胞)的水平表达CXCL12。以这种水平表达CXCL12的癌症包括但不限于前列腺癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、胃癌、食道癌、胶质瘤和白血病。
本发明的一个方面涉及用于将抗体-抗趋除剂复合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应。在一个实施方案中，施用多于一种抗体-抗趋除剂复合物，其中每种复合物的抗体对相同或不同的肿瘤抗原具有特异性。
在一些实施方案中，趋化因子是CXCL12或白细胞介素8。在一些实施方案中，肿瘤是实体瘤。在一些实施方案中，抗趋除剂是AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺或GF109230X。
在一些实施方案中，所述方法还包括使所述肿瘤与抗癌剂接触。在一些实施方案中，抗癌剂是化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂或抗癌疫苗。在一些实施方案中，抗癌剂在施用抗体-抗趋除剂复合物的三天内施用。在一些实施方案中，抗癌剂在抗体-抗趋除剂复合物施用完成后的那天施用。在一些实施方案中，抗癌剂在施用抗体-抗趋除剂复合物之前施用。在一些实施方案中，抗癌剂在施用抗体-抗趋除剂复合物同时施用。
在一些实施方案中，免疫治疗剂是天然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，NK细胞是修饰的NK细胞、自体NK细胞、或NK细胞系(例如NK-92)。在一些实施方案中，免疫治疗剂是T细胞。在一些实施方案中，T细胞是修饰的T细胞、细胞系、CAR-T(嵌合抗原受体T细胞)或T-ALL细胞。
本发明的一个方面涉及用于将抗体-抗趋除剂复合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
本发明的一个方面涉及用于治疗有需要的患者中的转移肿瘤的方法，所述方法包括向患者全身施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物，随后施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制由肿瘤表达的趋化因子产生的趋除效应，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
在一些实施方案中，所述方法包括使所述细胞与抗癌剂接触。在一些实施方案中，抗癌剂选自由化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂和抗癌疫苗组成的组。
在一些实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物皮下、动脉内或静脉内施用。在一些实施方案中，将免疫治疗剂静脉内施用或直接施用至肿瘤。
本发明的一个方面涉及已经与抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂接触的表达CXCL12的肿瘤细胞。
在一些实施方案中，抗趋除剂是AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺或GF 109230X。
本发明的一个方面涉及用于将组合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的组合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述组合物包含对肿瘤抗原具有特异性的抗体、抗趋除剂和免疫治疗剂，其中所述抗趋除剂与免疫治疗剂缔合。例如，免疫治疗剂可以包括具有与细胞表面受体结合的抗趋除剂的免疫细胞。在优选的实施方案中，受体包括CXCR4。
本发明的一个方面涉及用于将组合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的组合物，其中所述组合物包含从患有癌瘤的哺乳动物患者获得的离体自体T细胞群，所述群具有不同浓度的经由受体与个体T细胞结合的抗体-抗趋除剂复合物，其中所述群在体内相对于所述癌瘤展现出整体抗趋除特性。在一个实施方案中，受体是CXCR4。在一个实施方案中，T细胞表达嵌合抗原受体。
本发明的一个方面涉及具有多个部分的试剂盒，所述试剂盒包括：包含抗体-抗趋除剂复合物的第一容器和包含抗癌剂的第二容器。
本发明的一个方面涉及具有多个部分的试剂盒，所述试剂盒包括：包含抗趋除剂-免疫治疗剂复合物的第一容器和包含抗体的第二容器。
在一些实施方案中，抗趋除剂是AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺或GF 109230X。
在一些实施方案中，抗体对待靶向/治疗的肿瘤所表达的抗原具有特异性。
本发明的一个方面涉及用于治疗有需要的患者中的癌症的方法，所述方法包括向患者施用抗体-抗趋除剂复合物。任选地，向患者施用至少一种另外的抗癌剂。
本发明的一个方面涉及增加免疫细胞向患有癌症的患者中的肿瘤部位迁移的方法，所述方法包括向患者施用抗体-抗趋除剂复合物。在一个实施方案中，所述方法增加患者自己的免疫细胞向肿瘤部位的迁移。任选地，向患者施用至少一种另外的抗癌剂。在一个实施方案中，所述方法增加抗癌剂向肿瘤部位的迁移。
本发明的一个实施方案涉及用于抑制有需要的患者中的肿瘤细胞转移的方法，所述方法包括向患者施用抗体-抗趋除剂复合物。任选地，向患者施用至少一种另外的抗癌剂。
本发明的一个实施方案涉及用于局部治疗哺乳动物中的实体瘤的方法，所述方法包括向患者施用抗体-抗趋除剂复合物。任选地，向患者施用至少一种另外的抗癌剂。
本发明的一个实施方案涉及用于杀死癌细胞的方法，所述方法包括向患者施用抗体-抗趋除剂。任选地，向患者施用至少一种另外的抗癌剂。
在优选的实施方案中，癌症、肿瘤或细胞表达足以产生趋除效应的一定量的趋化因子。在一个实施方案中，趋化因子由细胞或肿瘤分泌，使得趋除效应存在于肿瘤微环境中。在一个实施方案中，在用抗体-抗趋除剂复合物治疗之前，趋化因子在肿瘤微环境中的浓度大于约100nM。在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12或IL-8。在优选的实施方案中，趋化因子是CXCL12。
在一个实施方案中，肿瘤是实体瘤。在一个实施方案中，肿瘤是非实体瘤。在一个实施方案中，肿瘤是白血病。
在一个实施方案中，至少一种另外的抗癌剂是化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂和/或抗癌疫苗。
不受理论束缚，据信如本文描述的疗法将允许通过患者自己的免疫细胞和任选地通过另外的抗癌剂靶向肿瘤。例如，患者的免疫系统与免疫治疗剂组合能够用于靶向靶向肿瘤或转移肿瘤细胞。在一个实施方案中，减少肿瘤的趋除活性防止肿瘤的化学排斥物作用抑制免疫治疗剂(例如NK细胞或T细胞)的有效靶向。在一个实施方案中，患者是免疫受损的。
抗趋除剂可以是本领域已知的任何此种药剂。在一个实施方案中，抗趋除剂是如美国专利申请公开号2008/0300165中描述的抗趋除剂，其全部内容通过引用结合于此。在优选的实施方案中，抗趋除剂是AMD3100(mozobil/普乐沙福(plerixa(or))或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺(thalidomide)、GF 109230X、干扰趋除性趋化因子二聚化的抗体、或干扰趋除性趋化因子受体二聚化的抗体。例如，抗体可以抑制CXCL12、IL-8、CXCR3或CXCR4的二聚化。在一个实施方案中，抗趋除剂是干扰趋化因子结合其受体的抗体。在一个实施方案中，抗趋除剂是与CXCL12结合的抗体或凝集素，或者与CXCR4结合并阻断来自其的信号传导的抗体或凝集素。在优选的实施方案中，抗趋除剂是AMD3100。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞是自体NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞是非自体NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞是修饰的NK细胞。在优选的实施方案中，NK细胞是人NK细胞。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是NK细胞系。在一个实施方案中，免疫治疗剂是修饰的NK细胞系。在一个实施方案中，NK细胞系是NK-92。在一个实施方案中，修饰的NK细胞系与对待治疗的癌症具有特异性的抗体一起施用。在一个实施方案中，NK细胞系与细胞因子(例如IL-2)一起施用。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是T细胞。在一个实施方案中，T细胞是自体T细胞。在一个实施方案中，T细胞是非自体T细胞。在一个实施方案中，T细胞是修饰的T细胞。在一个实施方案中，T细胞是T细胞系。在优选的实施方案中，T细胞是人T细胞或人T细胞系。
抗体-抗趋除剂任选地与抗癌剂组合施用。“组合”是指任何组合，包括顺序或同时施用。在优选的实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物与抗癌剂分开施用。在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物与抗癌剂以单一组合物施用。
在一个实施方案中，将抗癌剂静脉内施用。
在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物静脉内、皮下、经口或腹膜内施用。在优选的实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物在肿瘤的近端(例如，接近肿瘤或在与其相同的体腔内)施用。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物直接施用至肿瘤或施用至供给肿瘤的血管中。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物全身施用。在另外的实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物通过微导管或植入装置和植入剂型施用。
在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物以连续方式施用限定的时间段。在另一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物以脉动方式施用。例如，抗体-抗趋除剂复合物可以在一段时间内间歇施用。
在一个实施方案中，至少一种另外的抗癌剂与抗体-抗趋除剂复合物和免疫治疗剂组合施用。抗癌剂可以与抗体-抗趋除剂复合物以任何次序(顺序地或同时地)施用。在优选的实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂顺序施用。在特别优选的实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物在施用抗癌剂之前施用。
在优选的实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂顺序施用。例如，抗体-抗趋除剂复合物可以施用足以减少或减弱肿瘤的趋除效应的时间段，例如使得抗体-抗趋除剂复合物具有抗趋除效应；然后可以将抗癌剂施用一段时间，在此期间肿瘤的趋除效应降低或减弱。在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂以交替方式顺序施用，至少直至患者的状况得以改善。患者的状况的改善包括但不限于减小肿瘤大小，减轻癌症的至少一种症状，消除肿瘤和/或其转移，增加患者的存活等。
不受理论束缚，据信抗体-抗趋除剂复合物将降低分泌趋化因子的肿瘤或癌细胞的趋除效应，从而允许另外的药剂和免疫细胞更好地接近肿瘤或细胞。随后，抗癌剂可以在其间肿瘤或细胞的趋除效应降低的时间段内施用。进一步预期施用一些抗癌剂将在肿瘤大小已经减小后对肿瘤更有效。因此，在优选的实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物首先以足以降低肿瘤趋除效应的量和时间段施用；在施用抗体-抗趋除剂复合物的时间段之后，以足以提供针对肿瘤的治疗效应(例如，减小肿瘤大小，消除或减少转移，延迟肿瘤生长)的量和时间段施用抗癌剂。在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物与抗癌剂同时(例如，分开地或同时地)施用。
在优选的实施方案中，重复抗体-抗趋除剂复合物、抗癌剂和/或免疫治疗剂的顺序施用，至少直至患者的状况得以改善。在一个实施方案中，重复药剂的顺序施用，直至根除肿瘤。
在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和/或抗癌剂直接施用至肿瘤部位。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和/或抗癌剂通过直接注射施用至肿瘤中。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和/或抗癌剂施用至肿瘤部位的近端。在优选的实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和/或抗癌剂直接施用至与肿瘤相关的血管中(例如，通过微导管注射到位于、接近或供给到肿瘤的血管中)。
本发明还涉及用于治疗患者中的癌症的具有多个部分的试剂盒，所述具有多个部分的试剂盒包含有效量的抗体-抗趋除剂复合物和任选的如本文描述的抗癌剂。任选地，试剂盒包含用于给药抗体-抗趋除剂复合物和/或抗癌剂的说明书。
本发明还涉及来自表达趋化因子的肿瘤的肿瘤细胞，所述细胞已经与抗体-抗趋除剂复合物和任选地抗癌剂接触。在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12。在一个实施方案中，趋化因子是IL-8。
附图简述
图1证明了AMD3100对人T细胞趋化性具有双峰效应。
图2证明了AMD3100对人T细胞趋除性具有双峰效应。在特定范围内观察到抗趋除特性。
发明详述
在阅读本说明书之后，对于本领域技术人员，如何在各种替代实施方案和替代应用中实现本发明将变得显而易见。然而，在本文中并非描述了本发明的所有实施方案。应当理解本文呈现的实施方案仅通过实例的方式而不是限制的方式来呈现。因此，各种替代实施方案的这种详细描述不应被解释为限制如下所述的本发明的范围或广度。
在公开和描述本发明之前，应当理解，下面描述的方面不限于具体的组合物，同样地，制备这种组合物的方法或其用途当然可以变化。还应当理解，本文中使用的术语仅用于描述特定方面的目的，并且不旨在是限制性的。
定义
除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属的技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
在本说明书和随后的权利要求书中，将提及许多术语，所述术语应被定义为具有以下含义：
本文中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不旨在限制本发明。如本文中使用的，除非另有明确指明，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”还旨在包括复数形式。
在适当的情况下，所有数字格式，例如pH、温度、时间、浓度、量和分子量(包括范围)都是近似值，其可以改变(+)或(-)10％、1％或0.1％。应当理解，尽管并不总是明确指出，但是所有数字格式之前可以存在术语“约”。还应当理解，尽管并不总是明确指出，但是本文描述的试剂仅是实例，并且它们的等价物是本领域已知的。
“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况能够发生或者不能够发生，并且该描述包括事件或情况发生的情形和其不发生的情形。
如本文所使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分(即，含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子)。该术语还指由两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链组成的抗体以及包括全场抗体及其部分的多种形式；包括，例如，免疫球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、人源化抗体、Fab、Fab’、F(ab′)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体(dAb)、双抗体(diabody)、多特异性抗体、双重特异性抗体、抗独特型抗体、双特异性抗体、其功能活性表位结合片段、双功能性杂合抗体(例如Lanzavecchia等人，Eur.J.Immunol.17，105(1987))、和单链(例如Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，85，5879-5883(1988)和Bird等人，Science 242，423-426(1988)，其通过引用结合于此)。(通常参见Hood等人，Immunology，Benjamin，N.Y.，第2版(1984)；Harlow和Lane，Antibodies.A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory(1988)；Hunkapiller和Hood，Nature，323，15-16(1986)，其通过引用结合于此)。抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgA、IgM、IgE或IgD)。优选地，抗体是IgG。
术语“嵌合抗体”是指这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替代或交换，使得抗原结合位点(可变区)连接至不同或改变的类型、效应子功能和/或种类的恒定区，或者将新特性赋予嵌合抗体的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或者(b)将可变区或其部分用具有不同或改变的抗原特异性的可变区改变、替代或交换。
术语“包含”或“包括”旨在表示组合物和方法包括所列举的要素，但是不排除其它要素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由...组成”应意指排除对组合存在任何本质影响的其它要素。例如，基本上由本文定义的要素组成的组合物将不排除不会实质上影响要求保护的本发明的基本和新颖特征的其它要素。“由...组成”应意指排除痕量的其它成分和所记载的实质方法步骤以外的要素。由这些转换术语中的每一个定义的实施方案都在本发明的范围内。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗体与之结合的抗原上的位点。表位可以由连续氨基酸形成，或者由并置有蛋白质的三级折叠的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。表位通常包含至少3个并且通常更多个(例如5或8-10个)呈独特空间构象的氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括例如X射线晶体学和2维核磁共振。参见例如“EpitopeMapping Protocols”，于Morris(1996年编著)Methods in Molecular Biology，Vol.66。
术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中可互换地使用，并且是指任何动物或其体外或原位的细胞，其可接受本文描述的方法。在优选的实施方案中，患者、受试者或个体是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是小鼠、大鼠、豚鼠、非人灵长类动物、狗、猫或驯养动物(例如马、牛、猪、山羊、羊)。在特别优选的实施方案中，患者、受试者或个体是人。
术语“治疗”涵盖了治疗受试者(诸如人)中的本文所述的疾病或病症，并且包括：(i)抑制疾病或病症，即阻止其发展；(ii)缓解疾病或病症，即导致疾病或病症消退；(iii)减缓疾病或病症的进展；和/或(iv)抑制、缓解疾病或病症的一种或多种症状或减缓其进展。例如，治疗癌症或肿瘤包括，但不限于，减小肿瘤大小，消除肿瘤和/或其转移，抑制肿瘤转移，缓解癌症，减少或消除癌症的至少一种症状等。
术语“肿瘤细胞”是指肿瘤中的癌前细胞、癌性细胞和正常细胞。在一些实施方案中，肿瘤细胞是自体的或内源性的。在备选的实施方案中，修饰的肿瘤细胞是同种异体的。因此，同种异体肿瘤细胞可以维持在细胞系中。在此情况下，肿瘤细胞可以选自细胞系，被照射，并且引入至患者。实体瘤的非限制性实例包括：肾上腺癌，肛门癌，胆管癌，膀胱癌，骨癌，脑/CNS肿瘤，乳腺癌(包括炎性乳腺癌)，未知的原发性癌(Cancer of UnknownPrimary)，卡斯尔曼病(Castleman Disease)，宫颈癌，结肠/直肠癌，子宫内膜癌，食管癌症，尤因肿瘤家族(Ewing Family OfTumors)，眼癌，胆囊癌，胃肠类癌瘤(Gastrointestinal Carcinoid Tumors)，胃肠间质瘤(Gastrointestinal Stromal Tumor(GIST))，妊娠滋养细胞病(Gestational Trophoblastic Disease)，霍奇金病(HodgkinDisease)，卡波西肉瘤(Kaposi Sarcoma)，肾癌，喉和下咽癌(Laryngeal andHypopharyngeal Cancer)，肝癌，肺癌，肺癌-非小细胞肺癌，肺癌-小细胞肺癌，肺类癌瘤(Lung Carcinoid Tumor)，皮肤淋巴瘤(Lymphoma of the Skin)，恶性间皮瘤(MalignantMesothelioma)，鼻腔和鼻旁窦癌(Nasal Cavity and Paranasal Sinus Cancer)，鼻咽癌，神经母细胞瘤(Neuroblastoma)，非霍奇金淋巴瘤(Non-HodgkinLymphoma)，口腔和口咽癌(Oral Cavity and Oropharyngeal Cancer)，骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，阴茎癌，垂体瘤，前列腺癌，视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma)，横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma)，唾液腺癌(Salivary Gland Cancer)，肉瘤-成人软组织癌，皮肤癌，皮肤癌-基底癌和鳞状细胞癌，皮肤癌-黑素瘤，皮肤癌-梅克尔细胞癌(Merkel Cell)，小肠癌，胃癌，睾丸癌，胸腺癌，甲状腺癌，子宫肉瘤，阴道癌，外阴癌，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WaldenstromMacroglobulinemia)，和肾母细胞瘤(Wilms tumor)。
非实体瘤的非限制性实例包括：白血病，白血病-成人急性淋巴细胞性白血病(ALL)，白血病-急性骨髓性白血病(AML)，白血病-慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，白血病-慢性骨髓性白血病(CML)，白血病-慢性骨髓单核细胞性淋巴瘤(CMML)，多发性骨髓瘤，和骨髓增生异常综合症(Myelodysplastic Syndrome)。
术语“肿瘤抗原”是肿瘤细胞中产生的抗原性物质，即其引发宿主中的免疫应答。肿瘤抗原可用于鉴定肿瘤细胞，并且是用于癌症治疗的潜在候选物。身体中正常蛋白质不是抗原性的。然而，某些蛋白质在肿瘤发生期间产生或过表达，并且因此对身体是“外来的”。这可能包括从免疫系统中充分隔离的正常蛋白质、通常以极小量产生的蛋白质、通常仅在发育的某些阶段产生的蛋白质、或由于突变而结构被修饰的蛋白质。肿瘤抗原的非限制性实例包括：EGFR、Her2、EpCAM、CD20、CD30、CD33、CD47、CD52、CD133、CEA、gpA33、粘蛋白(Mucin)、TAG-72、CIX、PSMA、叶酸盐结合蛋白(folate-binding protein)、GD2、GD3、GM2、VEGF、VEGFR、整联蛋白(Integrin)αVβ3、整联蛋白α5β1、ERBB2、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP、间皮素和肌腱蛋白(Tenascin)。在一些实施方案中，与相应非肿瘤细胞相比，抗体对肿瘤细胞上过表达的蛋白质或肽具有特异性。
术语向受试者“施用”药剂、药物或天然杀伤细胞包括向受试者引入或递送化合物以执行其预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行施用，包括经口、鼻内、肠胃外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)或局部施用。施用包括自我施用和通过另一者施用。
还应理解，所描述的治疗或预防医学疾病和病症的各种模式旨在表示“实质性的”，其包括总体治疗或预防，但也包括少于总体治疗或预防，并且其中得到一些生物学或医学上相关的结果。
术语“分开”施用是指通过不同途径同时或基本上同时施用至少两种活性成分。
术语“顺序”施用是指在不同时间施用至少两种活性成分，其中施用途径相同或不同。更特别地，顺序使用是指在开始施用另一种或其它活性成分之前施用活性成分中的一种的整体施用。因此，可以在施用其它活性成分或多种活性成分之前的数分钟、数小时或数天内施用活性成分中的一种；在此情形下不存在同时治疗。
术语“同时”治疗用途是指通过相同途径并且同时或基本上同时施用至少两种活性成分。
如本文所使用的术语“治疗”是指治疗和/或预防。治疗效果通过抑制、缓解或根除疾病状态获得。
术语“治疗有效量”或“有效量”是指当施用时足以引起所需效果的药剂的量。例如，有效量的抗体-抗趋除剂复合物可以是足以对癌细胞或肿瘤具有抗趋除效果的量(例如减弱来自肿瘤或癌细胞的趋除效应)。作为另外的实例，有效量的一种或多种免疫细胞可以导致至少一部分肿瘤细胞溶解。药剂的治疗有效量将根据待治疗的肿瘤及其严重程度以及待治疗的患者的年龄、体重等而变化。技术人员将能够根据这些和其它因素确定合适的剂量。组合物还可以与一种或多种另外的治疗性化合物组合施用。在本文描述的方法中，治疗性化合物可以施用至具有疾病或病症的一种或多种体征或症状的受试者。
如用于描述本发明的，“天然杀伤(NK)细胞”是免疫系统的细胞，其在不存在特异性抗原刺激的情况下杀死靶细胞，并且不受到MHC类的限制。NK细胞包括NK细胞系，例如NK-92。靶细胞可以是肿瘤细胞或携带病毒的细胞。NK细胞的特征在于CD56的存在和CD3表面标志物的缺失。
术语“内源性NK细胞”用于指来源于供体(或患者)的NK细胞，其区别于外源性细胞系。内源性NK细胞通常是在其中已经富集了NK细胞的异质细胞群。内源性NK细胞可以用于患者的自体或同种异体治疗。
如本文所使用的，“T细胞”是在细胞介导的免疫中起作用的免疫系统的细胞。T细胞在细胞表面表达T细胞受体(TCR)。存在T细胞的几个子集，每一个都有独特的功能。T细胞包括辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、抑制性(调节性)T细胞、天然杀伤T细胞和γδT细胞。本文中考虑任何T细胞。在优选的实施方案中，T细胞适用于过继性细胞转移(ACT)。在一个实施方案中，T细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。T细胞包括T细胞系，例如T-ALL。
涉及细胞/细胞群的术语“杀死”涉及包括将导致该细胞/细胞群死亡的任何类型的操作。
“细胞因子”是非抗体可溶性蛋白质的总称，其从一个细胞亚群中释放并且充当细胞间介质，例如在产生或调解免疫应答中充当细胞间介质。参见Human Cytokines：Handbook for Basic&Clinical Research(Aggrawal等人编著，Blackwell Scientific，Boston，Mass.1991)(其通过引用整体结合于此用于全部目的)。
“CXCR4/CXCL12拮抗剂”是指拮抗CXCL12结合CXCR4或以其它方式降低CXCL12的趋除效应的化合物。
“趋除活性”或“趋除效应”意指药剂排斥(或化学排斥)具有迁移能力的真核细胞(即可以远离排斥刺激的细胞)的能力以及由细胞(例如肿瘤细胞)分泌的趋化因子的化学排斥物效应。通常，趋除效应存在于细胞周围的区域中，其中趋化因子的浓度足以提供趋除效应。一些趋化因子(包括白细胞介素8和CXCL12)在高浓度(例如超过约100nM)可以发挥趋除活性，而较低浓度不表现出趋除效应，并且甚至可能是化学引诱物。
因此，具有趋除活性的药剂是“趋除剂”。这种活性可以使用本领域熟知的多种系统中的任何一种进行检测(参见例如美国专利号5,514,555和美国专利申请公开号2008/0300165，其中每一个都通过引用整体结合于此)。美国专利6,448,054中描述了用于本文的优选系统，其通过引用整体结合于此。
术语“抗趋除效应”是指抗趋除剂减弱或消除趋化因子的趋除效应的效应。
如本文所使用的术语“抗癌疗法”是指已知的癌症治疗，包括化学疗法和放射疗法，以及免疫疗法和疫苗疗法。
如本文所使用的“免疫细胞”是参与抗原的特异性识别的造血源细胞。免疫细胞包括抗原呈递细胞(APC)，诸如树突细胞或巨噬细胞、B细胞、T细胞等。
术语“免疫疗法”或“免疫治疗剂”是指来源于免疫系统或使用免疫系统对抗癌症的细胞和其它产品(例如抗体)。非限制性实例包括NK细胞、T细胞、NK或T细胞细胞系、其它来源于免疫的细胞、抗体(例如肿瘤特异性抗体)和免疫细胞激活剂(例如细胞因子)。
针对肿瘤抗原的抗体
本发明的一个方面涉及用于将抗体-抗趋除剂复合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的多于一种抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中每个复合物的抗体对相同或不同的肿瘤抗原具有特异性。
本发明的一个方面涉及用于将抗体-抗趋除剂复合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
本发明的一个方面涉及用于治疗有需要的患者中的转移肿瘤的方法，所述方法包括向患者全身施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物，随后向肿瘤施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制由肿瘤表达的趋化因子产生的趋除效应，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
本发明的一个方面涉及用于将组合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向肿瘤施用有效量的组合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述组合物包含对肿瘤抗原具有特异性的抗体、抗趋除剂和免疫治疗剂，其中所述抗趋除剂与免疫治疗剂缔合。
在一个实施方案中，针对肿瘤抗原的抗体是抗癌抗体。非限制性实例包括曲妥珠单抗(trastuzumab)贝伐单抗(bevacizumab)西妥昔单抗(cetuximab)帕尼单抗(panitumumab)伊匹单抗(ipilimumab)利妥昔单抗(rituximab)阿仑单抗(alemtuzumab)奥法木单抗(ofatumumab)吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)色瑞替尼单抗(brentuximab vedotin)90Y-替伊莫单抗泰泽坦(90Y-ibritumomab tiuxetan)和131I-托西莫单抗(131I-tositumomab)
另外的抗体在表1中提供。
表1.抗癌抗体
在一些实施方案中，抗体是识别目标抗原(例如肿瘤抗原)的抗体片段。抗体例如作为完整免疫球蛋白存在或作为通过用各种肽酶消化产生的许多充分表征的片段存在。因此，例如，胃蛋白酶在铰链区中的二硫键下方消化抗体以产生F(ab′)2(Fab的二聚体，其本身是通过二硫键连接到VH-CH1的轻链)。F(ab′)2可以在温和条件下被还原以打断铰链区中的二硫键，由此将F(ab′)2二聚体转化为Fab′单体。Fab′单体实质上是具有铰链区部分的Fab(参见Fundamental Immunology(Paul编著，第3版.1993)。尽管根据完整抗体的消化来定义各种抗体片段，但是本领域技术人员将会理解，这种片段可以通过化学方法或通过使用重组DNA方法从头合成。因此，如本文所使用的，术语抗体还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的那些(例如，单链Fv)或使用噬菌体展示文库鉴定的那些(参见例如McCafferty等人(1990)Nature 348：552-554)。
对于制备抗体(例如，重组、单克隆或多克隆抗体)，可以使用本领域已知的许多技术(参见例如Kohler&Milstein(1975)Nature 256：495-497；Kozbor等人(1983)ImmunologyToday 4：72；Cole等人，pp.77-96，于Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(1985)；Coligan(1991)Current Protocols in Immunology；Harlow&Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual；和Goding(1986)Monoclonal Antibodies：Principlesand Practice(第2版)。用于产生单链抗体的技术(美国专利号4,946,778)可以适用于产生针对本发明多肽的抗体。此外，转基因小鼠或其它生物体(诸如其它哺乳动物)可以用于表达人源化抗体。备选地，噬菌体展示技术可以用于鉴定与所选抗原特异性结合的抗体和异数Fab片段(参见例如McCafferty等人(1990)Nature 348：552-554；Marks等人(1992)Biotechnology 10∶779-783)。
一旦确定了靶肿瘤抗原，将其用于产生抗体，例如用于免疫疗法的抗体。特定抗体识别与另一抗体相同的表位的能力通常由一种抗体竞争性抑制第二种抗体结合抗原的能力确定。一些竞争性结合测定中的许多测定可以用于测量两种抗体之间对相同抗原的竞争。实例测定包括Biacore测定、夹心ELISA等。
制备多克隆抗体的方法是本领域技术人员已知的(例如，Coligan，参上；和Harlow&Lane，参上)。可以在哺乳动物中产生多克隆抗体，例如通过一次或多次注射免疫剂和佐剂(如有需要)。通常，免疫剂和/或佐剂将通过多次皮下或腹膜内注射注射到哺乳动物中。免疫剂可以包括由附图的核酸编码的蛋白质或其片段或其融合蛋白。将免疫剂与已知在免疫的哺乳动物中具有免疫原性的蛋白质缀合可能是有用的。这种免疫原性蛋白质的实例包括但不限于匙孔戚血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂。可以使用的佐剂的实例包括弗氏(Freund’s)完全佐剂和MPL-TDM佐剂(单磷酰基脂质A，合成的海藻糖二棒分枝菌酸酯(trehalose dicorynomycolate)。免疫方案可以由本领域技术人员选择，无需过度的实验。
备选地，抗体可以是单克隆抗体。单克隆抗体可以使用杂交瘤方法制备，诸如Kohler&Milstein(1975)Nature 256：495描述的那些方法。在杂交瘤方法中，通常用免疫剂免疫小鼠、仓鼠或其它合适的宿主动物以引发产生或能够产生将特异性结合免疫剂的抗体的淋巴细胞。备选地，可以在体外免疫淋巴细胞。免疫剂将通常包括由核酸编码的多肽、其片段或其融合蛋白。通常，如果需要人源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，或如果需要废人哺乳动物来源的细胞，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂(诸如聚乙二醇)将淋巴细胞与永生化细胞系融合以形成杂交瘤细胞(pp.59-103，于Goding(1986)Monoclonal Antibodies：Principles and Practice)。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿动物、牛和人源的骨髓瘤细胞。通常使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中培养，所述培养基优选含有一种或多种抑制未融合的永生化细胞的生长或存活的物质。
在一个实施方案中，抗体是双特异性抗体。双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性或对同一抗原上的两个表位具有结合特异性的单克隆抗体，优选人抗体或人源化抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体的结合特异性中的一种针对肿瘤抗原，另一个针对不同的肿瘤抗原。在一个实施方案中，双特异性抗体的结合特异性中的一种针对肿瘤抗原，另一种针对免疫治疗剂表达的蛋白质。在一个实施方案中，双特异性抗体的结合特异性中的一种针对肿瘤抗原，另一个针对抗趋除剂。
在一些实施方案中，针对肿瘤抗原的抗体是人源化抗体(例如，XenerexBiosciences，Medarex，Inc.，Abgenix，Inc.，Protein Design Labs，Inc.)。非人(例如，鼠)抗体的人源化形式是含有来源于非人免疫球蛋白的最小序列的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab’、F(ab′)2或抗体的其它抗原结合子序列)的嵌合分子。人源化抗体包括人免疫球蛋白(接受体抗体)，其中来自接受体互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(诸如小鼠、大鼠或兔)的具有所需特异性、选择性、亲和力和能力的CDR的残基替代。在一些情形中，人免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人残基替代。人源化抗体还可以包含这样的残基，其既未发现于接受体抗体中，也未发现于输入的CDR或框架序列。通常，人源化抗体将包含基本上全部的至少1个、并且典型2个可变结构域，其中全部或基本上全部的CDR区与非人免疫球蛋白的那些对应，并且全部或基本上全部的框架(FR)区与人免疫球蛋白共有序列的那些对应。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地包含人免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分(Jones等人(1986)Nature 321：522-525；Riechmann等人(1988)Nature332：323-329；和Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596)。人源化可以基本上遵循Winter及同事(Jones等人(1986)Nature 321：522-525；Riechmann等人(1988)Nature 332：323-327；Verhoeyen等人(1988)Science239：1534-1536)的方法，通过用啮齿动物CDR或CDR序列置换人抗体的相应序列进行。因此，这种“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上少于完整人可变结构域被来自非人物种的相应序列置换。
人抗体还可以使用本领域已知的各种方法产生，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom&Winter(1991)J.Mol.Biol.227：381；Marks等人(1991)J.Mol.Biol.222：581)。Cole等人和Boerner等人的技术还可用于制备人单克隆抗体(p.77，于Cole等人(1985)Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy；和Boerner等人(1991)J.Immunol.147(1)：86-95)。类似地，通过将人免疫球蛋白基因座引入转基因动物，例如其中内源性免疫球蛋白基因已经部分或完全失活的小鼠，可以制备人抗体。攻击时，观察到人抗体产生，其在所有方面都非常类似于人中所观察到的，包括基因重排、组装和抗体库。该方法描述于例如美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016中，以及以下科学出版物中：Marks等人(1992)Bio/Technology 10：779-783；Lonberg等人(1994)Nature 368：856-859；Morrison(1994)Nature 368：812-13；Fishwild等人(1996)Nature Biotechnology 14：845-51；Neuberger(1996)Nature Biotechnology14：826；和Lonberg&Huszar(1995)Intern.Rev.Immunol.13：65-93。
在某些优选实施方案中，抗体是scFv分子。scFv分子可以例如如Smith等人GeneTher.2003August；10(15)1248-57所描述的产生。类似地，scFv抗体可以如Wang等人，JImmunol Methods，2000233(1-2)：167-77所描述的产生，其通过引用整体结合于此。
能够体内表达抗体的系统是本领域已知的。作为实例而非限制，所述系统可以使用Fang等人，Nature Biotech.23(5)2005和U.S.Patent Publication 2005/0003508中公开的介导抗体表达系统，其公开内容明确地通过引用整体结合于此。考虑本领域已知的其它系统，并且也可以适用于如本文所描述的在体内产生抗体。
抗体-抗趋除剂复合物
在一些实施方案中，抗体与效应子部分缀合。效应子部分可以是任何数量的分子，包括标记部分诸如放射性标记或荧光标记，或者可以是治疗性部分。在一个方面，治疗性部分是调节肿瘤抗原活性的小分子。在另一个方面，治疗性部分调节与肿瘤抗原相关或紧邻肿瘤抗原的分子的活性。
在其它实施方案中，治疗性部分是细胞毒性剂或抗癌剂。细胞毒性剂是多种多样的，并且包括但不限于细胞毒性药物或毒素或此类毒素的活性片段。合适的毒素及其相应的片段包括白喉A链、外毒素A链、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、酚霉素、伊诺霉素、auristatin等。细胞毒性剂还包括通过将放射性同位素与针对肿瘤抗原产生的抗体缀合而制得的放射化学物质，或者通过将放射性核素与已经共价连接至抗体的螯合剂结合的放射性同位素。
抗体的结合亲和力
对靶肿瘤抗原的结合亲和力通常通过标准抗体-抗原测定法，诸如Biacore竞争性测定法、饱和测定法或免疫测定法如ELISA或RIA来测量或确定。
这种测定可以用于确定抗体的解离常数。短语“解离常数”是指抗体对抗原的亲和力。如果抗体的解离常数(KD＝1/K，其中K是亲和常数)＜1μM、优选＜100nM并且最优选＜0.1nM，则存在抗体与抗原之间结合特异性。抗体分子将通常具有较低范围内的KD。KD[Ab-Ag]/[Ab][Ag]，其中[Ab]是抗体平衡时的浓度，[Ag]是抗原平衡时的浓度，并且[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物平衡时的浓度。通常，抗原和抗体之间的结合相互作用包括可逆的非共价缔合，诸如静电吸引力、范德华力和氢键。
在一些实施方案中，抗体以至少约0.1mM、更通常至少约1μM、优选至少约0.1μM以下、并且最优选0.01μM以下的KD与肿瘤抗原结合。
抗趋除剂
许多肿瘤对例如免疫细胞具有趋除效应，其由肿瘤细胞分泌的趋化因子引起。肿瘤细胞分泌的高浓度趋化因子可以对细胞具有趋除(化学排斥物)效应，而较低浓度不具有这种效应或者甚至导致趋化作用。例如，T细胞通过浓度依赖性和CXCR4介导的机制被CXCL12(SDF-1)排斥。本发明部分地基于如下令人惊讶的发现：本文描述的抗趋除剂降低了肿瘤的趋除效应，从而允许免疫细胞和其它抗癌剂更好地接近和杀死肿瘤细胞，并且抗趋除剂与针对肿瘤抗原的抗体的复合可以导致药剂靶向肿瘤的增加。
抗趋除剂可以是本领域中已知的任何此类药剂，例如如美国专利申请公开号2008/0300165中描述的抗趋除剂，其通过引用整体结合于此。
抗趋除剂包括特异性抑制趋化因子和/或趋化因子受体二聚化的任何药剂，由此阻断对趋除剂的化学排斥物应答。某些趋化因子，包括IL-8和CXCL12，还能够充当高浓度(例如高于100nM)(其中许多趋化因子作为二聚体存在)下的化学排斥物。趋化因子的二聚化在细胞中引发不同的应答，导致趋化因子受体的二聚化，这是被解释为化学排斥物信号的活性。阻断肿瘤分泌的高浓度趋化因子的化学排斥物效应可以例如通过抑制趋化因子二聚体形成或趋化因子受体二聚体形成的抗趋除剂完成。例如，靶向和阻断趋化因子受体二聚化的抗体(例如，通过干扰二聚化结构域或配体结合)可以是抗趋除剂。通过其它作用机制起作用的抗趋除剂，例如减少由细胞分泌的趋除性细胞因子的量、抑制二聚化和/或抑制趋化因子结合靶受体的抗趋除剂，也涵盖在本发明中。在需要时，可以在不抑制单体趋化因子的趋化作用的情况下实现这种效果。
在其它实施方案中，抗趋除剂是CXCR4拮抗剂、CXCR3拮抗剂、CXCR4/CXCL12拮抗剂或选择性PKC抑制剂。
CXCR4拮抗剂可以是但不限于AMD3100(普乐沙福)、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012或TN14003或它们的衍生物，或者干扰CXCR4二聚化的抗体。另外的CXCR4拮抗剂描述于例如美国专利公开号2014/0219952和Debnath等人Theranostics，2013；3(1)：47-75中(其中每一个都通过引用整体结合于此)，并且包括TG-0054(布利沙福(burixafor))、AMD3465、NIBR1816、AMD070及其衍生物。
CXCR3拮抗剂可以是但不限于TAK-779、AK602或SCH-351125，或干扰CXCR3二聚化的抗体。
CXCR4/CXCL12拮抗剂可以是但不限于丹宁酸、NSC 651016或干扰CXCR4和/或CXCL12二聚化的抗体。
选择性PKC抑制剂可以是但不限于沙利度胺或GF 109230X。
在优选的实施方案中，抗趋除剂是AMD3100(普乐沙福)。美国专利号5,583,131中描述了AMD3100，其通过引用整体结合于此。
在一个实施方案中，抗趋除剂是AMD3100衍生物。AMD3100衍生物包括但不限于美国专利号7,935,692和5,583,131(USRE42152)中发现的那些，其中每一个都通过引用整体结合于此。
在一个实施方案中，抗趋除剂与允许靶向肿瘤的分子偶联。在一个实施方案中，抗趋除剂与对待靶向的肿瘤具有特异性的抗体偶联(例如，结合或复合)。在一个实施方案中，将与允许靶向肿瘤的分子偶联的抗趋除剂全身施用。
在一个实施方案中，抗趋除剂与另外的化合物组合使用，所述另外的化合物增强药剂的抗趋除活性。在一个实施方案中，另外的化合物是粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。在个实施方案中，不施用G-CSF。
抗体-抗趋除剂复合物
根据本发明的方法，抗体-抗趋除剂复合物由连接至抗趋除剂的肿瘤特异性抗体组成。当引入至患者时，与肿瘤细胞上发现的抗原具有反应性的复合物的抗体祖坟将复合物引向肿瘤部位并与肿瘤细胞结合。因此，抗体可以视为将抗趋除剂递送至肿瘤部位。复合物可以到达该部位处的肿瘤细胞，即携带复合物的抗体对其具有特异性的特定肿瘤抗原的那些细胞。
此外，本发明的方法不需要抗趋除剂直接与抗体结合，并且由此限制可以递送的抗趋除剂的量。此外，本方法能够在肿瘤部位特异性地释放抗趋除剂而不是在其它组织处释放。这是因为抗趋除剂在肿瘤部位的浓度高于其在其它组织的浓度，这是由于肿瘤细胞与抗体-抗趋除剂复合物的缔合。
本发明的抗体包括特异性结合肿瘤相关抗原的任何抗体。这种抗体的实例包括但不限于与癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤和骨和软组织肉瘤以及其它肿瘤上发现的抗原特异性结合的那些抗体。
这些抗体可以是多克隆的或优选单克隆的，可以是完整的抗体分子或含有抗体活性结合区(例如Fab或F(ab’)2)的片段，并且可以使用本领域完全建立的技术产生。(参见例如R.A.DeWeger等人，“Eradication Of Murine Lymphoma And Melanoma Cells ByChlorambucil-Antibody Complexes，Immunological Rev.，62，pp.29-45(1982)(缀合物中产生和使用的肿瘤特异性多克隆抗体)；M.Yeh等人，“Cell Surface Antigens Of HumanMelanoma Identified By Monoclonal Antibody，”Proc.Natl.Acad.Sci.，76，p.2927(1979)；J.P.Brown等人“Structural Characterization Of Human Melanoma-AssociatedAntigen p97With Monoclonal Antibodies，”J.Immunol.，127(No.2)，pp.539-546(1981)(产生的肿瘤特异性单克隆抗体)；和J.P.Mach等人，“Improvement Of Colon CarcinomaImaging：From Polyclonal Anti-CEA Antibodies And Static PhotoscanningToMonoclonal Fab Fragments And ECT”，于Monoclonal Antibodies For CancerDetection And Therapy，R.W.Baldwin等人(ed.s)，pp.53-64(Academic Press 1985)(产生和用于定位至肿瘤细胞的抗体片段))。另外，如果使用单克隆抗体，则抗体可以是小鼠或人源的或者嵌合抗体(参见例如V.T.Oi，“Chimeric Antibodies，”BioTechniques 4(No.3)，pp.214-221(1986))。在一些实施方案中，抗体保持长时间与细胞表面结合或非常缓慢地内化。
抗体-抗趋除剂复合物中的抗体和抗趋除剂的缔合可以通过共价键、非共价键、载体系统或其它相互作用或缔合机制。
非共价连接
在抗原结合区域外(可变结构域外)与抗体分子连接的备选方法可以涉及使用针对抗体分子恒定结构域的抗体，或使用已知特异性结合恒定区上的位点的葡萄球菌蛋白A。
非共价连接包括，例如但不限于，离子相互作用、氢键、范德华力和疏水相互作用。优选地，非共价连接经由疏水相互作用，例如抗趋除剂和抗体之间的疏水相互作用，任选地通过介导相互作用的另一个分子(例如载体分子)。
共价连接
本发明包括用于将化合物连接至抗体分子的几种方法：(1)连接至抗体分子的碳水化合物部分，(2)连接至抗体分子的巯基，和(3)连接至抗体分子的Fc区的氨基或羧基。无论使用哪种方法，连接都必须不显著改变抗体的基本特征，诸如免疫特异性和免疫反应性。另外的考虑包括反应的简单性和所产生的抗体缀合物的稳定性。在一些实施方案中，接头分子(例如接头多肽)用于连接药剂和抗体。
抗体的碳水化合物侧链可以被选择性地氧化以产生醛。然后，可以将得到的醛与胺基(例如氨衍生物，诸如羟胺、肼、苯肼或氨基脲)反应以形成席夫碱(例如，分别为肟、腙、苯腙或缩氨基脲)。
备选地，抗体的碳水化合物部分可以通过酶促技术进行修饰，以便能够与其它化学基团连接或反应。这种酶的一个实例是半乳糖氧化酶，其在氧气的存在下氧化半乳糖。
抗体分子的碳水化合物部分或结构部分的氧化导致形成醛基。可以使用多种氧化剂，诸如高碘酸、仲高碘酸、偏高碘酸钠和偏高碘酸钾。在这些中，由于二次或不希望的副反应不太频繁，所以优选含氧酸及其盐。对于一般讨论，参见Jackson，1944，OrganicReactions 2，p.341；Bunton，1965，Oxidation in Organic Chemistry，Vol.1(Wiberg，ed.)，Academic Press，New York，p.367。
游离巯基可以从免疫球蛋白分子的二硫键产生。这是通过抗体分子的温和还原而实现的。通常对还原最敏感的IgG的二硫键是连接两条重链的那些二硫键。位于抗体分子的抗原结合区附近的二硫键保持相对不受影响。这种减少导致固定补体的能力丧失，但是不干扰抗体-抗原结合能力(Karush等人，1979，Biochem.18：2226-2232)。然后，在重链内区域中产生的游离巯基可以与含有羧基或氨基的任何化合物的碘代烷基衍生物(例如与化合物连接的接头基团的碘代烷基衍生物)反应以形成共价键。这种连接不干扰免疫球蛋白的抗原结合位点。
通过将化合物连接至还原的免疫球蛋白的游离巯基或还原的抗体片段产生的抗体缀合物不激活补体。因此，这些缀合物可以用于体外分离或体内成像系统，其中化合物的切割和释放是不需要的。当需要非补体介导的释放时，也可以使用这种缀合物。在这种实施方案中，化合物可以与还原的免疫球蛋白上的巯基连接，或者通过易受血清蛋白酶切割的接头与还原的抗体片段连接。
虽然化合物与抗体分子的巯基的连接破坏了补体固定能力，但是这种连接方法可以用于制备用于补体介导的释放系统的抗体缀合物。在这种实施方案中，连接至补体敏感性底物接头的化合物可以与还原的Ig分子或抗体片段的巯基连接，并且在与具有能够激活补体的完整抗体分子的混合物中递送至靶标。后者将激活补体，其将由前者切割化合物。使用作为补体介导的释放系统中的载体分子的抗体片段将允许治疗怀孕的雌性，并且提供了缀合物更快地穿透靶标部位的优点。
用于将化合物连接至抗体分子的常规方法也可以用于本发明的目的。这些常规方法将化合物连接至抗体分子的氨基或羧基。常规方法的缺点是抗体分子对抗原的结合亲和力降低(即降低的免疫特异性活性)，这是由于接头或化合物与抗体分子的Fab区(抗原结合臂)的非特异性结合。因此，为了利用常规连接方法，应当将底物接头导向抗体分子上更优化的位置以允许免疫复合物形成和补体切割。为此，免疫球蛋白或半分子的抗原结合臂(Fab区)被保护，而Fc区的氨基或羧基与底物接头反应。
载体系统
许多药剂已被用作载体分子，其在药物递送系统中具有有限的成功。实际上，载体应该是无毒的并且具有靶标部位特异性。理想地，应该存在用于在靶标部位从载体释放化合物的活性形式的机制。载体分子，诸如白蛋白(例如人血清白蛋白[HSA]，包括重组HSA)、DNA、脂质体、蛋白质、类固醇激素等，已经与广谱的药学药剂或细胞毒性剂共同使用，所述药学药剂或细胞毒性剂诸如：放射性化合物；结合DNA的药剂，例如烷化剂或各种抗生素(例如，道诺霉素(daunomycin)、阿霉素(adriamycin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil))；抗代谢药，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)；作用于细胞表面的药剂(例如，蛇毒磷脂酶和微生物毒素)；和蛋白质合成抑制剂(例如，白喉毒素和毒性植物蛋白质)。对于该主题的综述，参见Bale等人，1980，Cancer Research 40∶2965-2972；Ghose和Blair，1978，J.Natl.CancerInst.61(3)：657-676；Gregoriadis，1977，Nature 265∶407-411；Gregoriadis，1980，Pharmac.Ther.10∶103-118；Trouet等人，1980，Recent Results Cancer Res.75∶229-235。
药学药剂的脂质体介导的递送由于其靶标特异性的缺乏而具有主要缺点。最近，研究人员试图通过将完整抗体或Fab片段共价连接至含有药学试剂的脂质体来克服该问题(Heath等人，1981，Biochim.Biophys.Acta 640：66-81；Huang等人，1980，J.Biol.Chem.255(17)：8015-8018；Jansons和Mallet，1981，Anal.Biochem.111：54-59，Martin等人，1981，Biochem.20：4229-4238)。其他人已经报道了蛋白A(葡萄球菌A蛋白)与脂质体的偶联，以便将制备物导向先前已经与抗体结合的多个特异性靶标。这种靶标仅受所使用的抗体的限制(Leserman等人，1980，Nature 288：602-604)。
在其它实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物包含载体系统。例如，抗体与含有抗趋除剂的脂质体或颗粒结合。在一些实施方案中，载体系统包含白蛋白复合物，任选地包括化学治疗剂(例如紫杉醇)。白蛋白-抗体复合物和制备方法的非限制性实例和制造方法可以发现于PCT公开2012/154861、2014/055415和2016/057554，其每一个都通过引用整体结合于此。
抗癌剂(癌症治疗剂)
表2显示了一列癌症治疗剂的非限制性清单。
表2：抗癌剂(癌症治疗剂)
免疫治疗剂
天然杀伤(NK)细胞
在一些实施方案中，免疫治疗剂包括天然杀伤细胞。天然杀伤(NK)细胞是一类淋巴细胞，其通常包含人体中大约10％的淋巴细胞。NK细胞提供针对肿瘤和感染的(靶)细胞的先天细胞免疫应答。特征在于具有CD3-/CD56+表型的NK细胞展现多种激活性和抑制性细胞表面受体。NK细胞抑制性受体主要与正常细胞表面上的主要组织相容性复合物I类(“MHC-1”)蛋白结合以防止NK细胞激活。MHC-I分子将细胞定义为“属于”特定个体。据认为，只有通过这些“自我”MHC-I分子缺失或缺陷的细胞(诸如对于肿瘤或病毒感染的细胞通常是这种情况)才可以激活NK细胞。
在激活的NK细胞受体与靶细胞上的相应配体结合或连接时，触发NK细胞直接针对靶细胞发挥细胞毒性作用。细胞毒效应通过NK细胞分泌各种细胞因子介导，其反过来刺激并募集其它免疫系统因子以对抗靶标。激活的NK细胞还经由分泌酶(穿孔素和粒酶)、刺激凋亡启动受体和其它机制来裂解靶细胞。
NK细胞已被评价为治疗某些癌症中的免疫治疗剂。用于此目的的NK细胞可以是自体的或非自体的(即，来自供体)。
在一个实施方案中，本文的组合物和方法中使用的NK细胞是自体NK细胞。在一个实施方案中，本文的组合物和方法中使用的NK细胞是非自体NK细胞。
在一个实施方案中，本文的组合物和方法中使用的NK细胞是修饰的NK细胞。NK细胞可以通过将基因或RNA插入细胞中进行修饰，使得细胞表达一种或多种不被野生型NK细胞表达的蛋白质。在一个实施方案中，NK细胞被修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)。在优选的实施方案中，CAR对于所述方法或组合物靶向的癌症具有特异性。
修饰的NK细胞的非限制性实例可以见于例如Glienke等人2015，Advantages andapplications of CAR-expressing natural killer cells，Frontiers in Pharmacol.6，第21章；PCT专利公开号WO 2013154760和WO 2014055668中；其中每一个通过引用整体结合于此。
NK-92细胞
在一些实施方案中，NK细胞是NK-92细胞。在患有非霍奇金淋巴瘤的受试者的血液中发现了NK-92细胞系。NK-92细胞缺少正常NK细胞展现的主要抑制性受体，但是保留了大部分激活性受体。与NK细胞相比，NK-92细胞对显著更广谱的肿瘤和感染细胞类型具有细胞毒性，并且通常对这些靶标展现出更高水平的细胞毒性。然而，NK-92细胞既不攻击正常细胞，也不引发免疫排斥反应。另外，NK-92细胞可以容易且稳定地生长并保持连续的细胞培养，并且因此可以在符合c-GMP的质量控制下大量制备。这种特征组合已经导致NK-92进入目前正在进行的用于治疗多种类型癌症的临床试验。
本文描述的组合物和方法中使用的NK-92细胞可以是野生型(即未经遗传修饰的)NK-92细胞或遗传修饰的NK-92细胞。NK-92细胞可以通过将基因或RNA插入细胞中进行遗传修饰，使得细胞表达一种或多种不被野生型NK-92细胞表达的蛋白质。在一个实施方案中，NK-92细胞被遗传修饰以在细胞表面上表达嵌合抗原受体(CAR)。在优选的实施方案中，CAR对于所述方法或组合物靶向的癌症具有特异性。在一个实施方案中，NK-92细胞被遗传修饰以在细胞表面上表达Fc受体。在优选的实施方案中，表达Fc受体的NK-92细胞可以介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。在一个实施方案中，Fc受体是CD16。在一个实施方案中，NK-92细胞被遗传修饰以表达细胞因子(例如IL-2)。
在一个实施方案中，修饰的NK-92细胞与对待治疗的癌症具有特异性的抗体组合施用。在优选的实施方案中，与抗体组合施用的修饰的NK-92细胞有能力介导ADCC。NK-92细胞的实例可作为ATCC CRL-2407获自美国模式培养物保藏所(American Type CultureCollection(ATCC))。
修饰的NK-92细胞的非限制性实例描述于例如美国专利号7,618,817和8,034,332；和美国专利公开号2002/0068044和2008/0247990中，其中每一个都通过引用整体结合于此。修饰的NK-92细胞的实例可获自ATCC，其为ATCC CRL-2408、ATCC CRL-2409、PTA-6670、PTA-6967、PTA-8837和PTA-8836。CAR-修饰的NK-92细胞的非限制性实例可以见于例如Glienke等人2015，Advantages and applications of CAR-expressing naturalkiller cells，Frontiers in Pharmacol.6，第21章；其通过引用整体结合于此。
T细胞
在一个实施方案中，免疫治疗剂包括T细胞。T细胞是在细胞表面具有T细胞受体的淋巴细胞。T细胞通过使身体的免疫应答适用于特定病原体而在细胞介导的免疫中发挥核心作用。T细胞(尤其是修饰的T细胞)已经在临床试验中显示出减少或消除肿瘤的希望。通常，这种T细胞被修饰和/或进行过继性细胞转移(ACT)。ACT及其变体是本领域熟知的。参见，例如，美国专利号8,383,099和8,034,334，其通过引用整体结合于此。
美国专利申请号2014/0065096和2012/0321666(其通过引用结合于此)描述了用于癌症的T细胞或NK细胞治疗的方法和组合物。通常可以使用例如美国专利号6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；和美国专利申请公开号2006/0121005(其中每一个都通过引用整体结合于此)中所描述的方法激活和扩增T细胞。
在一个实施方案中，本文的组合物和方法中使用的T细胞是自体T细胞(即，来源于患者)。在一个实施方案中，本文的组合物和方法中使用的NT细胞是非自体(异源的或同种异体的；例如，来自供体或细胞系)T细胞。在一个实施方案中，T细胞是来源于T细胞或者癌性/转化的T细胞的细胞系。
在优选的实施方案中，本文描述的方法和组合物中使用的T细胞是修饰的T细胞。在一个实施方案中，T细胞被修饰以在T细胞表面上表达CAR。在优选的实施方案中，CAR对于所述方法或组合物靶向的癌症具有特异性。在一个实施方案中，T细胞被修饰以表达细胞表面蛋白或细胞因子。修饰的T细胞的非限制性实例描述于美国专利号8,906,682；PCT专利公开号WO 2013154760和WO 2014055668中；其中每一个通过引用整体结合于此。
在一个实施方案中，T细胞是T细胞系。T细胞系包括T-ALL细胞系，如美国专利号5,272,082中所描述的，其通过引用整体结合于此。
在另一个备选实施方案中，免疫治疗剂是T细胞。在一些实施方案中，T细胞是CART细胞。
在一个实施方案中，对特定肿瘤抗原具有特异性的T细胞可以离体转化和扩增，并且重新输注到患者中。不受特定理论或作用模式束缚，相对于患者中的肿瘤，从具有癌瘤的哺乳动物患者获得的离体自体T细胞群在体内展现出整体抗趋除特性，所述离体自体T细胞群具有通过其CXCR4受体与个体T细胞结合的不同浓度的抗趋除剂(例如AMD3100)。
抗体
免疫疗法还指用抗肿瘤抗体进行治疗。换言之，可以将对特定类型的癌症(例如，由目标癌细胞表达的细胞表面蛋白)具有特异性的抗体施用至患有癌症的患者。抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、抗体片段、人抗体、人源化抗体或非人抗体(例如，鼠、山羊、灵长类动物等)。治疗性抗体可以对任何肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原具有特异性。参见例如Scott等人，CancerImmunity 2012，12：14，其通过引用整体结合于此。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是抗癌抗体。非限制性实例包括曲妥珠单抗(trastuzumab)贝伐单抗(bevacizumab)西妥昔单抗(cetuximab)帕尼单抗(panitumumab)伊匹单抗(ipilimumab)利妥昔单抗(rituximab)阿仑单抗(alemtuzumab)奥法木单抗(ofatumumab)吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)色瑞替尼单抗(brentuximab vedotin) 90Y-替伊莫单抗泰泽坦(90Y-ibritumomab tiuxetan)和131I-托西莫单抗(131I-tositumomab)另外的抗体在表1中提供。
免疫检查点抑制剂
在一个实施方案中，免疫治疗剂是检查点抑制剂。免疫检查点蛋白由某些类型的免疫系统细胞(诸如T细胞）和一些癌细胞制成。可以阻止T细胞杀死癌细胞的这些蛋白被检查点抑制剂靶向。检查点抑制剂增加T细胞杀死癌细胞的能力。在T细胞或癌细胞上发现的检查点蛋白的实例包括PD-1/PD-L1和CTLA-4/B7-1/B7-2。
在一个实施方案中，检查点抑制剂是针对检查点蛋白(例如，PD-1、PDL-1或CTLA-4)的抗体。检查点抑制剂抗体包括但不限于BMS-936559、MPDL3280A、MedI-4736、Lambrolizumab、阿仑单抗、阿特珠单抗(Atezolizumab)、伊匹单抗、纳武单抗、奥法木单抗、派姆单抗和利妥昔单抗。
细胞因子
在一个实施方案中，免疫治疗剂是细胞因子。细胞因子刺激患者的免疫应答。细胞因子包括干扰素和白细胞介素。在一个实施方案中，细胞因子是白细胞介素-2。在一个实施方案中，细胞因子是干扰素-α。
化学治疗剂
在本发明的一个方面，抗趋除剂与化学治疗剂组合施用。化学治疗剂可以是对一种或多种类型的癌症具有治疗效果的任何药剂。本领域目前已知许多化学治疗剂。作为非限制性实例，化学治疗药物的类型包括烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、皮质类固醇等。
化学治疗药物的非限制性实例列于表1并且包括：氮芥类，诸如二氯甲二乙胺(氮芥)、苯丁酸氮芥、环磷酰胺异环磷酰胺和美法仑(melphalan)；亚硝基脲类，诸如链佐星(streptozocin)、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)和洛莫司汀(lomustine)；烷基磺酸盐，诸如白消安(busulfan)；三嗪类，诸如达卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)和替莫唑胺(temozolomide)乙烯亚胺类，诸如噻替派(thiotepa)和六甲蜜胺(altretamine)(六甲基蜜胺)；铂类药物，诸如顺铂、卡铂和奥沙利铂(oxalaplatin)；5-氟尿嘧啶(5-FU)；6-巯基嘌呤(6-MP)；卡培他滨(Capecitabine)阿糖胞苷(Cytarabine)氟尿苷；氟达拉滨(Fludarabine)；吉西他滨(Gemcitabine)羟基脲；甲氨蝶呤(Methotrexate)；培美曲塞(Pemetrexed)蒽环类，诸如柔红霉素(Daunorubicin)、多柔比星(Doxorubicin)表柔比星(Epirubicin)、伊达比星(Idarubicin)；放线菌素-D；博来霉素(Bleomycin)；丝裂霉素-C；米托蒽醌(Mitoxantrone)；拓扑替康(Topotecan)；伊立替康(Irinotecan)(CPT-11)；依托泊苷(Etoposide)(VP-16)；替尼泊苷(Teniposide)；米托蒽醌；紫杉烷类：紫杉醇和多西他赛埃博霉素类(Epothilones)：伊沙匹隆(ixabepilone)长春花生物碱类：长春花碱长春新碱(vincristine)和长春瑞滨(vinorelbine)雌氮芥(Estramustine)泼尼松；甲泼尼龙(Methylprednisolone)地塞米松(Dexamethasone)L-天冬酰胺酶；硼替佐米(bortezomib)另外的化学治疗剂列于例如美国专利申请公开号2008/0300165中，其通过引用整体结合于此。
化学治疗药物的剂量和施用方案是本领域熟知的。熟练的临床医生可以基于包括所施用的化学治疗剂、所治疗的癌症类型、癌症的阶段、患者的年龄和状况、患者大小、肿瘤位置等因素，容易地确定待使用的合适的给药方案。
放射治疗剂
在本发明的一个方面，抗趋除剂与放射治疗剂组合施用。放射治疗剂可以是对一种或多种类型的癌症具有治疗效果的任何此种药剂。本领域目前已知许多放射治疗剂。作为非限制性实例，放射治疗药物的类型包括X射线、γ射线和带电粒子。在一个实施方案中，放射治疗剂由身体外部的机器递送(外粒子束放射疗法)。在优选的实施方案中，将放射治疗剂在肿瘤/癌细胞附近置于体内(近距离放射治疗)或者是系统性放射疗法。
外粒子束放射疗法可以通过任何手段施用。外粒子束放射疗法的非限制性实例包括线性加速器施用放射疗法，三维适形放射疗法(3D-CRT)，调强放射疗法(IMRT)，图像引导放射疗法(IGRT)，断层放疗，立体定向放射手术，光子疗法，立体定向放射疗法，质子束疗法，和电子束疗法。
内部放射疗法(近距离放射疗法)可以通过任何技术或药剂。内部放射疗法的非限制性实例包括可以置于肿瘤近端或肿瘤内的任何放射性药剂，诸如镭-226(Ra-226)、钴-60(Co-60)、铯-137(Cs-137)、铯-131、铱-192(Ir-192)、金-198(Au-198)、碘-125(I-125)、钯-103、钇-90等。这种药剂可以通过种、针或任何其它施用途径施用，而且可以是临时的或永久的。
系统性放射疗法可以通过任何技术或药剂。系统性放射疗法的非限制性实例包括放射性碘、替伊莫单抗泰泽坦(Ibritumomab tiuxetan)、托西莫单抗(Tositumomab)和碘I131托西莫单抗钐-153-lexidronam、锶-89氯化物间碘苯甲胍、镥-177、钇-90、锶-89等。
在一个实施方案中，还将放射增敏剂施用至患者。放射增敏剂增加辐射对癌细胞的破坏作用。
放射治疗剂的剂量和施用方案是本领域熟知的。熟练的临床医生可以基于包括所施用的一种或多种药剂、所治疗的癌症类型、癌症的阶段、肿瘤的位置、患者的年龄和状况、患者大小等因素，容易地确定待使用的合适的给药方案。
抗癌疫苗
在本发明的一个方面，抗趋除剂与抗癌疫苗(也称为癌症疫苗)组合施用。抗癌疫苗是通过刺激免疫反应杀死癌细胞来治疗现有癌症或预防癌症发展的疫苗。在优选的实施方案中，抗癌疫苗治疗现有的癌症。
抗癌疫苗可以是对一种或多种类型的癌症具有治疗效果的任何此类疫苗。本领域目前已知许多抗癌疫苗。这种疫苗包括但不限于dasiprotimut-T、Sipuleucel-T、talimogene laherparepvec、HSPPC-96复合物(Vitespen)、L-BLP25、gp100黑素瘤疫苗以及在施用至患者时刺激免疫应答的任何其它疫苗。
癌症
可以通过本文描述的化合物和方法治疗的癌症或肿瘤包括但不限于：胆管癌；脑癌，包括成胶质细胞瘤和成神经管细胞瘤(medulloblastomas)；乳腺癌(包括炎性乳腺癌)；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠癌；子宫内膜癌；食管癌，胃癌；血液肿瘤，包括急性淋巴细胞性和骨髓性白血病；多发性骨髓瘤；AIDS相关白血病和成人T细胞白血病淋巴瘤；上皮内肿瘤，包括博温病(Bowen’s disease)和佩吉特病(Paget’s disease)；肝癌(肝癌)；肺癌；淋巴瘤，包括霍奇金病和淋巴细胞性淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌，包括来自上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞的那些；胰腺癌；前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤，纤维肉瘤和骨肉瘤；皮肤癌，包括黑素瘤、卡波西肉瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌；睾丸癌，包括生殖细胞肿瘤(精原细胞瘤、非精原细胞瘤[畸胎瘤、绒毛膜癌])、间质瘤和生殖细胞瘤；甲状腺癌，包括甲状腺腺癌和髓样癌；和肾癌，包括腺癌和肾母细胞瘤。在重要的实施方案中，逃避免疫识别的癌症或肿瘤包括胶质瘤、结肠癌、结肠直肠癌、淋巴样细胞衍生的白血病、绒毛膜癌和黑素瘤。
在优选的实施方案中，肿瘤是实体瘤。在一个实施方案中，肿瘤是白血病。在特别优选的实施方案中，肿瘤对例如免疫细胞具有趋除效应。在一个实施方案中，通过肿瘤/肿瘤细胞过表达CXCL12来介导趋除效应。在一个实施方案中，可以在施用如本文描述的组合物之前评价CXCL12的肿瘤表达。例如，患有被确定为表达或过表达CXCL12的肿瘤的患者将使用本文描述的方法和/或组合物进行治疗。
在一个实施方案中，肿瘤是脑肿瘤。考虑可以用本文描述的组合物注射的脑肿瘤，例如不可手术的脑肿瘤。在一个实施方案中，抗趋除剂通过进入脑肿瘤内或近端的血管的导管直接施用至脑肿瘤。下面描述导管或微导管施用的进一步讨论。
全身施用
在一个实施方案中，可以系统地提供本文描述的组合物或复合物或细胞(即，可以通过循环提供至患者)，其提供至所有组织。全身施用的本文描述的组合物或复合物或细胞不限于患者中的特定位置，而是在整个患者中表达。
本文描述的组合物或复合物或细胞可以以几种不同方法以方便的方式施用，诸如通过注射(皮下、静脉内、肌内等)、经口施用、吸入、透皮施用或直肠施用。本文描述的组合物或复合物或细胞还可以肠胃外或腹膜内施用。取决于施用途径，本文描述的组合物或复合物或细胞可以包被于材料中以保护它们免受可能杀死它们或以其它方式使它们失活的酸和其它自然条件。
在某些实施方案中，本文描述的组合物或复合物或细胞被配制成适于可注射用途。本文描述的这种组合物或复合物或细胞可以包括无菌水溶液(其中是水溶性的)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。优选地，本文描述的组合物或复合物或细胞尽可能地是无菌的和流体的。本文描述的组合物或复合物或细胞将优选在制备和储存条件下是稳定的，并且必须防止微生物(诸如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)以及它们的合适混合物的溶剂或分散介质。例如，通过使用包衣(诸如卵磷脂)、通过在分散体的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金(paraben)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，可以实现阻止微生物的作用。在许多情况下，在组合物将优选包含等张剂，例如，糖、多元醇(诸如甘露醇)、山梨醇、氯化钠。可以大约通过在组合物中包含延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长的吸收。
无菌可注射溶液可以通过以下方法制备：以所需量将本文描述的一种或多种组合物或复合物或细胞与另外的免疫应答刺激剂或免疫抑制剂一起或分开并入具有上面列出的成分中的一种或组合(根据需要)的合适的溶剂中，然后过滤灭菌。通常，通过将细胞或组合物并入无菌载体中制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面列出的那些的所需的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，一些制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其从其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何额外的所需成分的粉末。
有利的是以易于施用和剂量均一性的剂量单位形式配制肠胃外组合物。如本文所使用的剂量单位形式是指适合作为治疗患者的单一剂量的物理分离单位；每个单位含有预定量的细胞、组合物或复合物，其经计算与所需药物载体结合产生所需治疗效果。本发明的剂量单位形式的规格取决于(a)细胞、复合物或组合物的独特特征和待实现的特定治疗效果，以及(b)配制这种药剂的本领域固有限制，用于治疗个体的敏感性。
本领域普通技术人员可以容易地计算具体剂量，例如根据患者的近似体重或身体表面积或者待占据的身体空间的体积。剂量也将根据所选择的特定施用途径来计算。本领域普通技术人员通常做出确定适当治疗剂量所必需的计算的进一步改进。根据靶细胞测定制备中的本文公开的活性，本领域技术人员可以在不进行过度实验的情况下进行这种计算。确切的剂量与标准剂量反应研究共同确定。应当理解，实际施用的细胞、复合物或组合物的量将由医师根据相关情况确定，包括待治疗的病症或病况、待施用的组合物的选择、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度以及所选择的施用途径。
本文描述的组合物或复合物或细胞的毒性和治疗功效可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序来确定，例如用于确定LD50(对50％群体致死的剂量)和ED50(对50％群体治疗有效的剂量)的程序。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且它可以表示为比率LD50/ED50。展现大治疗指数的化合物是优选的。尽管可以使用展现毒副作用的组合物或复合物或细胞，但是应注意设计使本文描述的这种组合物或复合物或细胞靶向受影响组织部位的递送系统，从而最小化对未感染细胞的潜在损害，并且由此减少副作用。
在一个实施方案中，将治疗有效量的本文描述的组合物或复合物或细胞施用至患者。本文描述的组合物或复合物或细胞的最佳剂量甚至可以在同一患者中变化，这取决于其施用的时间。
本领域技术人员将理解，某些因素可以影响有效治疗患者所需的剂量，包括但不限于疾病或病症的严重程度、先前的治疗、患者的一般健康状况和/或年龄以及存在的其它疾病。此外，用治疗有效量的本文描述的组合物或复合物或细胞治疗患者可以包括单一治疗，或者优选地可以包括一系列治疗。还应理解的是，用于治疗的细胞、组合物或复合物产生的细胞、复合物或组合物的有效剂量可以在特定治疗过程中增加或减少。正如本领域所熟知的，剂量的变化可以由设计用于监测肿瘤状态的测定结果引起。
用于制备肠胃外可施用的组合物或复合物或细胞的实际方法对于本领域技术人员是已知的或明显的，并且更详细地描述于例如Remington’s Pharmaceutical Science，第15版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1980)中，其通过引用结合于此。
可以施用本文描述的组合物或复合物或细胞用于预防性和/或治疗性治疗。在治疗性应用中，可以将组合物以足以减少或至少暂时限制肿瘤生长和相关并发症的量施用至已经患有疾病的患者。足以实现这一点的量被定义为“治疗有效剂量”。
对这种用途有效的量取决于临床情况和患者自身免疫系统的一般状态。例如，用于预防移植排斥的剂量可能低于患者出现排斥反应的临床症状时给予的剂量。组合物的单次或多次施用可以由治疗医师选择的剂量水平和模式进行。在任何情况下，药物制剂应该提供一定量的本文描述的组合物或复合物或细胞，其足以有效地治疗患者。
肿瘤部位处的施用
在一些实施方案中，本文描述的组合物或复合物或细胞可以提供于例如在肿瘤组织内或接触肿瘤组织，或者肿瘤位置的近端。“近端”意指在肿瘤细胞的有效距离内，使得本文描述的组合物或复合物或细胞将直接到达肿瘤组织。因此，在肿瘤部位处提供或产生细胞、复合物或组合物的主题方法将本文描述的组合物或复合物或细胞局部提供至肿瘤，同时使本文描述的组合物或复合物或细胞向周围非肿瘤细胞的暴露最小化。不限于特定的活性模式，将本文描述的组合物或复合物或细胞直接施用至肿瘤为肿瘤提供了直接和持续的益处，同时减少了全身施用中可以观察到的自身免疫和免疫抑制副作用。
在其它情况下，已经完成了将细胞或组合物直接施用至肿瘤的方法。例如，通过注射已经将细胞施用至肿瘤部位，Rodriguez-Madoz等人，Molecular Therapy(2005)12，153-163，其通过引用整体结合于此。
肿瘤附近的淋巴结处的施用
在其它实施方案中，本文描述的组合物或复合物或细胞可以直接施用至肿瘤附近的淋巴结或者施用至肿瘤附近的淋巴结的近端。可以通过本文公开的任何手段将细胞、组合物或复合物施用至淋巴结。
剂量和施用
如本文描述的组合物以有效量施用。有效量将取决于施用模式、待治疗的特定病症和所需结果。如上所讨论的，它还将取决于病症的阶段、受试者的年龄和身体状况、并行疗法的本质(如果存在的话)以及医师熟知的类似因素。对于治疗性应用，其量足以实现医学上需要的结果。
本文描述的药剂可以通过任何适合的方法施用。抗癌剂(包括化学治疗剂、放射治疗剂和抗癌疫苗以及免疫治疗剂)的剂量、治疗方案和施用途径是本领域已知的和/或在熟练的临床医师基于治疗类型、癌症类型等进行确定的能力范围内。
通常，本发明的抗趋除剂的剂量为每天约5mg/kg体重至每天约50mg/kg，其间的所有值和范围(包括端点)包含在内。在一个实施方案中，剂量为每天约10mg/kg至每天约50mg/kg。在一个实施方案中，剂量为每天约10mg/kg至每天约40mg/kg。在一个实施方案中，剂量为每天约10mg/kg至每天约30mg/kg。在优选的实施方案中，剂量为每天约10mg/kg至每天约20mg/kg。在一个实施方案中，剂量不超过约50mg/天。
在一个实施方案中，修饰的抗趋除剂的剂量为每周约70mg/kg至每周约350mg/kg，其间的所有值和范围(包括端点)包含在内。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约70mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约80mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约90mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约100mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约110mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约120mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约130mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约140mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约150mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约160mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约170mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约180mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约190mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约200mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约210mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约220mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约230mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约240mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约250mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约260mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约270mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约280mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约290mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约300mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约310mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约320mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约330mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约340mg/kg/周。在一个实施方案中，抗趋除剂的剂量是约350mg/kg/周。
在本发明的一个方面，抗体-抗趋除剂复合物的施用是脉动的。在一个实施方案中，每1小时至每24小时，例如每1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时或24小时施用一定量的抗体-抗趋除剂复合物。在一个实施方案中，每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天施用一定量的抗体-抗趋除剂复合物。
在本发明的一个方面，使抗体-抗趋除剂复合物的剂量以脉动的方式施用足以具有抗趋除效应(例如，减弱肿瘤细胞的趋除效应)的时间段。在一个实施方案中，所述时间段为约1天至约10天。例如，所述时间段可以使1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、或10天。
在本发明的一个方面，施用至少一种抗癌剂。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂顺序施用。换言之，可以将抗体-抗趋除剂复合物施用足以具有抗趋除效应的时间段，并且随后施用抗癌剂。在一个实施方案中，将抗癌剂施用足以治疗肿瘤(例如，减小肿瘤大小)的时间段，并且随后施用抗趋除剂。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂同时或几乎同时施用。
在本发明的一个方面，抗癌剂在施用抗体-抗趋除剂复合物的一段时间之后施用。在一个实施方案中，抗癌剂在其中癌细胞/肿瘤的趋除效应被抗体-抗趋除剂复合物减弱的一段时间内施用。抗癌剂的施用时长和模式将根据所使用的抗癌剂、所治疗的肿瘤类型、患者的状况等变化。这些参数的确定在熟练的临床医生的能力范围内。
在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂的施用是交替的。在优选的实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物和抗癌剂的施用交替进行直至患者的状况得到改善。改善包括但不限于减小肿瘤和/或其转移的大小，消除肿瘤和/或其转移，缓解癌症，和/或减弱至少一种癌症症状。
各种施用途径是可用的。一般而言，本发明的方法可以使用医学上可接受的任何施用模式来实施，其意指产生有效水平的活性化合物而不导致临床上不可接受的副作用的任何方式。
施用方式包括经口、直肠、局部、经鼻、皮内或肠胃外途径。术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内或输注。在一些实施方案中，将本文描述的组合物和/或复合物腹膜内施用。当在治疗上使用肽时，在某些实施方案中，理想的施用途径是通过肺气溶胶。用于制备含有肽的气溶胶递送系统的技术是本领域技术人员所熟知的。通常，这种系统应该利用不显著损害抗体的生物特性(诸如互补位结合能力)的组分(参见例如Sciarra和Cutie，“Aerosols，”于Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，1990，pp1694-1712；通过引用结合)。本领域技术人员可以容易地确定用于产生抗体或肽气溶胶的各种参数和条件，而不需要借助过度的实验。
适用于经口施用的组合物可以作为离散单位提供，诸如胶囊、片剂、锭剂，每一个都含有预定量的活性剂。其它组合物包括含水性液体或非水性液体(诸如糖浆、酏剂或乳剂)中的混悬剂。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液或非水溶液、混悬剂和乳剂。非水溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(诸如橄榄油）和可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)。水性载体包括水、酒精/水溶液、乳剂或混悬剂，包括盐水和缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏(Ringer’s)右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液(lactated Ringer’s)或固定的25种油。静脉内载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(诸如基于林格氏葡萄糖的那些)等。还可以存在防腐剂和其它添加剂，诸如例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。较低的剂量将来自其它形式的施用，诸如静脉内施用。在所应用的初始剂量下受试者的应答不足的情况下，在患者耐受性允许的程度上，可以采用较高的剂量(或者通过不同的、更局部的递送途径的有效的更高剂量)。考虑每天多次剂量以实现化合物的适当系统水平。
在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物肠胃外施用。在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物通过微导管施用至肿瘤近端的血管中。在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物通过微导管施用至肿瘤内的血管中。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物皮下施用。在一个实施方案中，将抗体-抗趋除剂复合物皮内施用。
其它递送系统可以包括随时间释放、延迟释放或持续释放递送系统。这种系统可以避免重复使用抗体-抗趋除剂复合物，这为受试者和医生增加了便利性。许多类型的释放递送系统是可用的并且是本领域普通技术人员已知的。它们包括聚合物基础系统，诸如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己内酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羟丁酸和聚酸酐。含有药物的上述聚合物的微囊描述于例如美国专利号5，075，109。递送系统还包括非聚合物系统，它们是：脂质，包括甾醇，诸如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪(诸如甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯)；水凝胶释放系统；sylastic系统；基于肽的系统；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压制片剂；部分融合植入物；等等。
在一个实施方案中，以随时间释放、延迟释放或持续释放递送全身施用抗体-抗趋除剂。在一个实施方案中，将包含抗体-抗趋除剂复合物的随时间释放、延迟释放或持续释放递送系统直接插入到肿瘤中。在一个实施方案中，将包含抗体-抗趋除剂复合物的随时间释放、延迟释放或持续释放递送系统在肿瘤近端植入患者中。另外的可植入制剂描述于例如美国专利申请公开号2008/0300165中，其通过引用整体结合于此。
本发明的一些实施方案包括基于泵的硬件递送系统，其中一些适用于植入。这种可植入泵包括控释微芯片。优选的控释微芯片描述于Santini，J T Jr.等人，Nature，1999，397：335-338，其内容通过引用明确结合于此。
当施用时，本发明的药物制剂以药用量和药用组合物施用。这种制剂可以常规地含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体和任选的其它治疗剂。当在医学上使用时时，盐应该是药用的，但是非药用盐可以方便地用于制备其药用盐，并且不排除在本发明的范围之外。这种药理学上和药学上可接受的盐包括但不限于由以下酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。另外，药用盐可以制备为碱金属或碱土金属盐，诸如钠盐、钾盐或钙盐。
可以施用含有抗体-抗趋除剂复合物和任选的本发明抗癌剂的组合物用于预防性或治疗性治疗。在治疗性应用中，将组合物以足以治愈或至少部分阻止疾病及其并发症的量施用至患有疾病(例如癌症)的患者。足以实现这一点的量被定义为“治疗有效剂量”。对这种用途有效的量将取决于疾病的严重程度以及患者健康的一般状态。根据患者所需要和耐受的剂量和频率，可以施用组合物的单次或多次施用。在任何情况下，组合物应该提供足够量的本发明药剂以有效地治疗患者。能够预防或减缓哺乳动物癌症发展的调节剂的量被称为“预防有效剂量”。预防性治疗所需的特定剂量将取决于哺乳动物的医疗状况和病史、待预防的特定癌症以及其它因素，诸如年龄、体重、性别、施用途径、效率等。这种预防性治疗可以用于例如先前患有癌症的哺乳动物以预防癌症复发，或者用于疑似哺乳具有发展癌症的显著可能性的哺乳动物(例如人)。
包含本文描述的抗体-抗趋除剂复合物的组合物可以作为药物组合物和多种其它药用组分施用。参见Remington’s Pharmaceutical Science(第15版，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.(1980))。优选的形式取决于预期的施用模式和治疗应用。取决于所需制剂，组合物还可以包括药用无毒载体或稀释剂，其被定义为通常用于配制用于动物或人类施用的载体。选择稀释剂以免不利地影响抗体的生物活性。这种稀释剂的实例是蒸馏水、磷酸盐缓冲的生理盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、右旋糖溶液和汉克氏溶液(Hank’s solution)。另外，药物组合物或制剂还可以包含其它载体，佐剂，或无毒、非治疗性、非免疫原性的稳定剂等。
药物组合物还可以包括大的、缓慢代谢的大分子，诸如蛋白质、多糖(诸如壳聚糖)、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(诸如乳胶官能化的SEPHAROSETM(GE Healthcare Bio-Sciences Ltd.)、琼脂糖、纤维素等)、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和脂质聚集体(诸如油滴或脂质体)。
药物组合物可以是可注射组合物。可注射组合物包括溶液、混悬剂、分散体等。根据本领域熟知的技术(参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第43章，第14版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.)，使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂，诸如无菌油(包括合成的甘油一酯或甘油二酯)和脂肪酸(包括油酸)，可以配制可注射溶液、混悬剂、分散体等。
可注射组合物可以在水、盐水、等渗盐水、磷酸盐缓冲盐水、柠檬酸慧缓冲盐水等中制备，并且可以任选地与无毒表面活性剂混合。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇、二醇、DNA、植物油、三乙酸甘油酯等及其混合物中制备。在普通的储存和使用条件下，这些制剂可以含有防腐剂以防止微生物的生长。适用于注射或输注的药物剂型包括无菌水溶液或分散体或者包含活性成分的无菌粉末，所述粉末适用于临时制备无菌可注射或可输注溶液或分散体。优选地，最终剂型是无菌流体，并且在制备和储存条件下稳定。溶液、混悬剂或分散体的液体载体或载体可以是溶剂或液体分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇或液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其合适的混合物。溶液、混悬剂或分散体的适当流动性可以例如通过形成脂质体、通过维持所需粒度(在分散体的情况下)、或通过使用无毒表面活性剂得以保持。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，可以实现阻止微生物的作用。可以包括等渗剂，诸如糖、缓冲剂或氯化钠。可以大约通过在组合物中包含延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝水凝胶和明胶)来实现可注射组合物的延长的吸收。可以添加溶解性增强剂。
治疗方法
在本发明的一个方面提供了通过施用抗体-抗趋除剂复合物治疗有需要的患者的癌症的方法。在一个实施方案中，抗体-抗趋除剂复合物与抗癌剂组合施用。
在一个方面，本发明涉及通过施用抗体-抗趋除剂复合物来抑制有需要的患者中肿瘤的转移。不受理论束缚，据信本文描述的抗体-抗趋除剂复合物可以将癌细胞从其中癌细胞以其它方式不可接近于治疗和/或免疫细胞的小生境中调动出来，并且进入循环，在循环中细胞可以被抗癌剂和/或免疫细胞靶向。令人惊讶地，这种调动不会导致肿瘤转移增加，而是转移减少。
在一个方面，本发明涉及用于杀死癌细胞的方法，所述癌细胞表达一定量的足以产生趋除效应的趋化因子，所述方法包括使所述细胞与有效量的抗体-抗趋除剂复合物周期性地接触足够的时间段以减弱所述趋除效应。
在一个方面，本发明涉及用于杀死癌细胞的方法，所述癌细胞表达一定量的足以产生趋除效应的趋化因子，所述方法包括：
a)使所述细胞与有效量的抗体-抗趋除剂复合物周期性地接触足够的时间段以减弱所述趋除效应；
b)任选地使所述细胞与至少一种抗癌剂接触；和
c)必要时任选地重复a)和b)以杀死所述细胞。
在一个方面，本发明涉及用于杀死癌细胞的方法，所述癌细胞表达一定量的足以产生趋除效应的趋化因子，所述方法包括：
a)使所述细胞与有效量的抗体-抗趋除剂复合物周期性地接触足够的时间段以抑制所述趋除效应；
b)任选地使所述细胞与抗癌剂接触；和
c)任选地使所述细胞与至少一种免疫治疗剂接触；和
d)必要时任选地重复a)、b)和/或c)以杀死所述细胞。
在一个方面，本发明涉及用于治疗哺乳动物中的肿瘤的方法，所述肿瘤表达一定量的足以产生趋除效应的趋化因子，所述方法包括：
a)向所述哺乳动物周期性地施用有效量的抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以减弱所述趋除效应；
b)任选地向所述哺乳动物施用至少一种抗癌剂；和
c)必要时任选地重复a)和b)以改善哺乳动物的状态。
在一个实施方案中，抗癌剂在施用抗体-抗趋除剂复合物的一段时间之后施用。在一个实施方案中，免疫治疗剂在趋除效应减弱的时间段内施用。
在一个实施方案中，任选地施用抗癌剂。抗癌剂可以在抗体-抗趋除剂复合物之后施用、与抗体-抗趋除剂复合物一起施用、在抗体-抗趋除剂复合物之前施用、或者以其任意组合施用。在一个实施方案中，施用多于一种抗癌剂。可以同时或顺序地施用多个抗癌剂。
在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12。
在一个实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞。在一个实施方案中，癌细胞是白血病细胞。在一个实施方案中，抗癌剂在完成细胞与抗体-抗趋除剂复合物接触的约3天内施用。在一个实施方案中，抗癌剂在完成细胞与抗体-抗趋除剂复合物接触的约1天内施用。在一个实施方案中，抗癌剂在施用抗体-抗趋除剂复合物几乎同时施用。在一个实施方案中，抗癌剂在细胞与抗体-抗趋除剂复合物接触之前施用。在一个实施方案中，抗癌剂在细胞与抗体-抗趋除剂复合物接触之前、同时和/或之后施用。
在一个方面，本发明涉及治疗哺乳动物中的实体瘤的方法，其中肿瘤以足以产生趋除效应的浓度表达CXCL12，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应。在一个实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞。在一个实施方案中，癌细胞是白血病细胞。
在一个方面，本发明涉及表达趋化因子的实体瘤细胞，所述细胞已经与抗体-抗趋除剂复合物和任选地抗癌剂接触。在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12。在一个实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞。在一个实施方案中，癌细胞是白血病细胞。
在一个方面，本发明涉及局部治疗实体瘤的方法，所述实体瘤在患者中以足以产生趋除效应的浓度表达CXCL12，所述方法包括：
a)鉴定供给所述肿瘤的动脉或微动脉；
b)在所述动脉或微动脉中于进入所述肿瘤的血流近端动脉内放置导管或微导管，其中所述导管或微导管包含用于通过其递送流体和管腔和用于递送所述流体的装置；
c)将有效量的抗体-抗趋除剂复合物通过所述导管或所述微导管周期性地施用至供给所述肿瘤的动脉或微动脉，以抑制由所述肿瘤诱导的所述趋除效应趋除性；和
d)任选地，随后将有效量的抗癌剂施用至患者。
在一个实施方案中，抗癌剂使用导管、微导管、外部辐射源施用，或者注射或植入肿瘤近端或肿瘤内。在一个实施方案中，所述方法还包括重复步骤a、b、c和/或d，直至患者的状况得以改善。在一个实施方案中，抗癌剂是放射治疗剂，使得放射治疗剂引起供给所述肿瘤的至少一个血管的消融。
具有多个部分的试剂盒
本发明还涉及具有多个部分的试剂盒，所述具有多个部分的试剂盒包含有效量的抗体-抗趋除剂复合物和任选的如本文描述的至少一种抗癌剂。在一个实施方案中，具有多个部分的试剂盒包括：包含抗体-抗趋除剂复合物的第一容器和任选的包含抗癌剂的第二容器。在一个实施方案中，具有多个部分的试剂盒还包括用于给药和/或施用抗趋除剂和/或抗癌剂的可读介质中的说明书。
如本文所使用的术语“可读介质”是指可以例如由人或机器读取的数据表示方法。人类可读格式的非限制性实例包括小册子、插页或其它书面形式。机器可读格式的非限制性实例包括以机器(例如，计算机、平板电脑和/或智能手机)可读形式提供(即存储和/或传输)信息的任何机制。例如，机器可读介质包括只读存储器(ROM)；随机存取存储器(RAM)；磁盘存储介质；光存储介质；和闪存设备。在一个实施例中，机器可读介质是CD-ROM。在一个实施例中，机器可读介质是USB驱动器。在一个实施例中，机器可读介质是快速响应码(QR码)或其它矩阵条码。
实施例
以下实施例仅用于说明性目的，并且不应被解释为限制要求保护的发明。存在本领域技术人员可获得的各种替代技术和程序，这些技术和程序将同样允许本领域技术人员成功地实施所需发明。
实施例1：
向小鼠注射肿瘤细胞(皮下注射)，所述肿瘤细胞来自表达高水平CXCL12的肿瘤和允许进展的肿瘤。一旦形成肿瘤，向小鼠注射AMD3100和抗肿瘤抗原抗体复合物或载体小鼠注射(在肿瘤的同一侧进行皮下注射)，每天一次，注射5天。
在最终剂量的AMD3100和抗肿瘤抗原抗体复合物之后的一至三天，在测定肿瘤生长之前18小时通过腹膜内注射将NK细胞或T细胞或载体注射到小鼠。NK细胞或T细胞治疗延缓了小鼠中的肿瘤生长，但是在未施用AMD3100的小鼠中停止治疗后不久即恢复生长。预期在用NK细胞或T细胞治疗之前用AMD3100和抗肿瘤抗原抗体复合物治疗将具有协同效应，使得与单独的NK细胞或T细胞相比，共同治疗导致更长的肿瘤生长延迟。
实施例2：确定AMD3100的抗趋除量比上趋除量
从健康供体外周血制备新鲜制备和纯化的人CD3+T细胞。在对照、趋化性或趋除性设置(AMD3100浓度为0.1μM至10μM)中，将20,000个T细胞装载到Transwell的上部室中。在下部室中对迁移的细胞进行计数，并且如先前所描述的定量迁移。Vianello等人TheJournal of Immunology，2006，176：2902-2914；Righi等人，Cancer Res.；71(16)；5522-34，其中每一个都整体结合于此。
观察到人CD3+T细胞对AMD3100的二元或双峰趋化性(图1；CI 2.3，于1μM)和趋除性(图2；CI＝1.6，于0.1μM)应答的明显证据(其中CI或趋化指数为1.0是对照)。所有孔一式三份地进行。
实施例3：确定AMD3100的局部抗趋除量
对于定量移行测定，将纯化的人CD3+T细胞(大约2×104个细胞)添加到每个孔中的插入物的上部室中，至总体积为150μl的Iscove’s改良培养基。将含有0.5％FCS的DMEM中的肿瘤细胞(从哺乳动物肿瘤中分离)添加到Transwell的下部室、上部室或者下部室和上部室两者中以产生细胞迁移的标准“棋盘格”分析，包括趋化性、趋除性和化动性。
为了确定AMD3100的抗趋除浓度，在添加至所述室之前，将T细胞与0.01μM至10mMAMD3100温育。
3小时后从下部室收获细胞，并且使用血细胞计数器进行细胞计数。
预计用一定浓度的AMD3100预温育的T细胞将表现出双峰效应，其中在较低浓度观察到抗趋除效应并且在较高浓度观察到趋除效应。

Claims (53)

1.一种将抗体-抗趋除剂复合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向所述肿瘤施用有效量的抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述抗体识别与所述肿瘤相关的抗原。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述趋化因子是CXCL12或白细胞介素8。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是实体瘤。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗趋除剂选自由以下组成的组：AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺和GF 109230X。
5.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括使所述肿瘤与抗癌剂接触。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述抗癌剂选自由化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂和抗癌疫苗组成的组。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述免疫治疗剂是天然杀伤(NK)细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述NK细胞是修饰的NK细胞、NK-92细胞或自体NK细胞。
9.根据权利要求6所述的方法，其中所述免疫治疗剂是T细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述T细胞是修饰的T细胞、细胞系或T-ALL细胞。
11.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗癌剂在施用所述抗体-抗趋除剂复合物的三天内施用。
12.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗癌剂在所述抗体-抗趋除剂复合物施用完成后的那天施用。
13.一种用于将抗体-抗趋除剂复合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向所述肿瘤施用有效量的至少一种抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述趋化因子是CXCL12或白细胞介素8。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述肿瘤是实体瘤。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗趋除剂选自由以下组成的组：AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺和GF 109230X。
17.根据权利要求13所述的方法，所述方法还包括使所述肿瘤与抗癌剂接触。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述抗癌剂选自由化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂和抗癌疫苗组成的组。
19.根据权利要求13所述的方法，其中所述免疫治疗剂是天然杀伤(NK)细胞。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述NK细胞是修饰的NK细胞、NK-92细胞或自体NK细胞。
21.根据权利要求13所述的方法，其中所述免疫治疗剂是T细胞。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述T细胞是修饰的T细胞、细胞系或T-ALL细胞。
23.根据权利要求18所述的方法，其中所述免疫治疗剂在施用所述抗体-抗趋除剂复合物的三天内施用。
24.根据权利要求18所述的方法，其中所述免疫治疗剂在所述抗体-抗趋除剂复合物施用完成后的那天施用。
25.一种用于治疗有需要的患者中的转移肿瘤的方法，所述方法包括向所述患者全身施用有效量的抗体-抗趋除剂复合物达足够的时间段以抑制由所述肿瘤表达的趋化因子产生的趋除效应，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
26.根据权利要求25所述的方法，所述方法还包括向所述肿瘤施用有效量的所述抗体-抗趋除剂复合物。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述趋化因子是CXCL12或白细胞介素8。
28.根据权利要求25所述的方法，其中所述肿瘤是实体瘤。
29.根据权利要求25所述的方法，其中所述抗趋除剂选自由以下组成的组：AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺和GF 109230X。
30.根据权利要求25所述的方法，所述方法还包括使所述肿瘤与抗癌剂接触。
31.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗癌剂选自由化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂和抗癌疫苗组成的组。
32.根据权利要求30所述的方法，其中所述免疫治疗剂是天然杀伤(NK)细胞。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述NK细胞是修饰的NK细胞、NK-92细胞或自体NK细胞。
34.根据权利要求30所述的方法，其中所述免疫治疗剂是T细胞。
35.根据权利要求33所述的方法，其中所述T细胞是修饰的T细胞、细胞系或T-ALL细胞。
36.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗癌剂在施用所述抗体-抗趋除剂复合物的3天内施用。
37.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗癌剂在所述抗体-抗趋除剂复合物施用完成后的那天施用。
38.根据权利要求25所述的方法，其中抑制来自所述肿瘤的细胞的转移。
39.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，其中将所述抗体-抗趋除剂复合物皮下、动脉内或静脉内施用。
40.根据权利要求1-38中任一项所述的方法，其中将所述免疫治疗剂静脉内施用或直接施用至所述肿瘤。
41.已经与抗体-抗趋除剂复合物接触的表达CXCL12的实体瘤细胞。
42.根据权利要求40所述的细胞，其中所述抗趋除剂选自由以下组成的组：AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺和GF 109230X。
43.一种用于将组合物递送至肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生趋除效应的量的趋化因子，所述方法包括向所述肿瘤施用有效量的所述组合物达足够的时间段以抑制所述趋除效应，其中所述组合物包含对肿瘤抗原具有特异性的抗体、抗趋除剂和免疫治疗剂，其中所述抗趋除剂与所述免疫治疗剂缔合。
44.一种具有多个部分的试剂盒，所述试剂盒包括：包含抗体-抗趋除剂复合物的第一容器和包含抗癌剂的第二容器。
45.一种具有多个部分的试剂盒，所述试剂盒包括：包含抗趋除剂-免疫治疗剂复合物的第一容器和包含抗体的第二容器。
46.根据权利要求43或44所述的具有多个部分的试剂盒，其中所述抗趋除剂选自由以下组成的组：AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺和GF 109230X。
47.根据权利要求43或44所述的具有多个部分的试剂盒，其中所述免疫治疗剂是T细胞或NK细胞。
48.根据权利要求43或44所述的具有多个部分的试剂盒，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
49.包含与抗体复合的抗趋除剂的组合物。
50.根据权利要求48所述的组合物，其中所述抗趋除剂和所述抗体通过共价键、非共价键或与载体分子的相互作用复合。
51.根据权利要求48或49所述的组合物，其中所述抗体对肿瘤抗原具有特异性。
52.根据权利要求48-50中任一项所述的组合物，其中所述抗趋除剂选自由以下组成的组：AMD3100或其衍生物、KRH-1636、T-20、T-22、T-140、TE-14011、T-14012、TN14003、TAK-779、AK602、SCH-351125、丹宁酸、NSC 651016、沙利度胺和GF 109230X。
53.根据权利要求51所述的组合物，其中所述抗趋除剂是AMD3100。
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