CN112312930A - 磷脂酶a2受体嵌合自身抗体受体t细胞的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明包括组合物，所述组合物包括对基于抗磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗体的B细胞受体具有特异性的至少一种嵌合自身抗体受体(CAAR)、编码所述CAAR的多核苷酸、包括编码CAAR的多核苷酸的载体和包括CAAR的重组T细胞。本发明还包括制备表达PLA2R‑CAAR的基因修饰的细胞(例如基因修饰的T细胞)的方法，其中所述表达的CAAR包括PLA2R细胞外结构域。

Description

磷脂酶A2受体嵌合自身抗体受体T细胞的组合物和方法

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请享有2018年5月2日提交的美国临时专利申请号62/665,863的优先权，其通过引用以其整体并入本文。

背景技术

膜性肾病(MN)是成人肾病综合征最常见的主要病因之一(多达三分之一的病例)。大约15-25％的膜性肾病病例是由药物、感染、肿瘤或免疫性疾病引起的继发性膜性肾病。其余75-85％的膜性肾病病例是特发性的，也称为原发性膜性肾病。MN是由肾小球中免疫复合物形成引起的。免疫复合物是通过抗体与足细胞上的抗原结合形成的。免疫复合物起激活剂的作用，该激活剂触发补体介导的肾小球上皮细胞的裂解以及破坏毛细管壁的蛋白酶和氧化剂的释放。未接受免疫抑制治疗的原发性膜性肾病患者中多达40％会发展为需要透析或肾脏移植的终末期肾脏疾病。

M型磷脂酶A2受体(PLA2R)已被描述为原发性膜性肾病的主要自身抗原。针对PLA2R的自身抗体存在于70-80％的原发性膜性肾病病例中，并且可用于诊断和监测自体肾脏和移植肾后二者的原发性膜性肾病的治疗。

当前的指南(guideline)建议使用烷化剂或钙依赖磷酸酶抑制剂作为治疗严重的原发性膜性肾病的一线疗法。利妥昔单抗，一种抗CD20抗体，也显示是有希望的，并且评估其治疗MN。然而，由于这些治疗对产生血清抗PLA2R抗体的自身反应性B细胞缺乏特异性，因此它们可能与威胁生命的感染的风险相关。此外，在蛋白尿缓解的患者中可能发生复发，并且在肾脏移植后疾病可能复发。重要的是，复发通常与可检测的抗PLA2R自身抗体的复发有关，因此进一步支持了该抗体在疾病发病机理中的作用。

在本领域中迫切需要获得针对原发性膜性肾病的更具特异性和有效的治疗。本发明解决了这一需求。

发明内容

在一方面中，本发明包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中CAAR包括磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域。

在另一方面中，本发明包括包含本文公开的多核苷酸中的任一种的载体。

在仍另一方面中，本发明包括嵌合自身抗体受体(CAAR)，该CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域。

在仍另一方面中，本发明包括嵌合自身抗体受体(CAAR)，该CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域。

本发明的另一方面包括包含本文公开的CAAR中的任一种的基因修饰的细胞。

本发明的又另一方面包括基因修饰的细胞，该细胞包括：(a)嵌合自身抗体受体(CAAR)，该CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域；和(b)DAP12。

本发明的仍另一方面包括药物组合物，该药物组合物包括本文公开的多核苷酸中的任一种、本文公开的CAAR中的任一种或本文公开的细胞中的任一种，和药学上可接受的赋形剂。

在另一方面中，本发明包括用于治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病的方法。该方法包括向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，该T细胞包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中多核苷酸编码磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域，从而治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病。

在仍另一方面中，本发明包括用于预防或减少处于患自身抗体介导的肾脏疾病的风险中或患有自身抗体介导的肾脏疾病的受试者中的肾小球损害的方法，该方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，该T细胞包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中多核苷酸编码磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域，从而预防或减少受试者中的肾小球损害。

在仍另一方面中，本发明包括用于治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病的方法。该方法包括向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，该T细胞包括：(a)编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，该CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域；和(b)编码DAP12的多核苷酸，从而治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病。

在另一方面中，本发明包括用于预防或减少处于患自身抗体介导的肾脏疾病的风险中或患有自身抗体介导的肾脏疾病的受试者中的肾小球损害方法的方法，该方法包括向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，该T细胞包括：(a)编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，该CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域；和(b)编码DAP12的多核苷酸，从而预防或减少受试者中的肾小球损害。

在本文所述的本发明的上述方面或任何其他方面的各种实施方式中，PLA2R自身抗原或其片段选自：(a)包括CysR或蓖麻毒素B型凝集素结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2的细胞外结构域；和(b)包括CysR或蓖麻毒素B型凝集素结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3的细胞外结构域。

在某些实施方式中，PLA2R自身抗原或其片段选自：(a)包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域，(b)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域和C型凝集素结构域1的细胞外结构域，(c)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3的细胞外结构域，(d)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2、C型凝集素结构域3和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，(e)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，或(f)包括富含半胱氨酸的结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7的细胞外结构域。

在某些实施方式中，PLA2R细胞外结构域由包括SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：50或SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：52或SEQ IDNO：54或SEQ ID NO：56或SEQ ID NO：58的核酸序列编码。

在某些实施方式中，跨膜结构域包括CD8α链跨膜结构域。在某些实施方式中，CD8α链跨膜结构域由包括SEQ ID NO：20的核酸序列编码。在某些实施方式中，CD8α链跨膜结构域包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列。

在某些实施方式中，CAAR进一步包括铰链结构域。在某些实施方式中，铰链结构域由包括SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：42或SEQ ID NO：64的核酸序列编码。在某些实施方式中，铰链结构域包括SEQ ID NO：SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：44的氨基酸序列。

在某些实施方式中，CAAR进一步包括GS接头。在某些实施方式中，GS接头由包括SEQ ID NO：68的核酸序列编码。在某些实施方式中，GS接头包括SEQ ID NO：69。

在某些实施方式中，共刺激分子的细胞内结构域包括4-1BB。在某些实施方式中，4-1BB细胞内结构域由包括SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：66的核酸序列编码。在某些实施方式中，4-1BB细胞内结构域包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列。

在某些实施方式中，信号传导结构域包括CD3ζ信号传导结构域。在某些实施方式中，CD3ζ信号传导结构域由包括SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：72的核酸序列编码。在某些实施方式中，CD3ζ信号传导结构域包括SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：45的氨基酸序列。

在某些实施方式中，CAAR由选自SEQ ID NO：11、17、25、27、29、31、33、35、37和39的核酸序列编码。在某些实施方式中，CAAR包括选自SEQ ID NO：12、18、26、28、30、32、34、36、38和40的氨基酸序列。

在某些实施方式中，CAAR包括磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域。

在某些实施方式中，载体为慢病毒载体。在某些实施方式中，载体为RNA载体。

在某些实施方式中，细胞表达CAAR并且对B细胞上的基于自身抗体的BCR具有高亲和力。在某些实施方式中，细胞表达CAAR并诱导杀死表达自身抗体的B细胞。在某些实施方式中，细胞表达CAAR并且对健康细胞具有有限的毒性。

在某些实施方式中，细胞选自辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、γδT细胞、天然杀伤细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、其细胞系、T记忆干细胞、源自多能干细胞的T细胞和其他效应细胞。

在某些实施方式中，自身抗体介导的肾脏疾病选自肾小球疾病和原发性膜性肾病。

在某些实施方式中，受试者是人。

在某些实施方式中，修饰的T细胞靶向B细胞。

在某些实施方式中，KIR是KIRS2或KIR2DS2。

在某些实施方式中，载体包括与编码CAAR的多核苷酸可操作地连接的诱导型启动子。

在某些实施方式中，细胞包括编码与诱导型启动子可操作地连接的CAAR的多核苷酸。

附图说明

当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的优选实施方式的以下详细描述。出于图解本发明的目的，在附图中图解了目前优选的实施方式。然而，应当理解，本发明不限于附图中所显示的实施方式的精确布置和手段。

图1是显示天然PLA2R分子的示意图。N端富含半胱氨酸的(CysR)结构域(Ricin B型凝集素域)是可被患者血清抗体识别的免疫显性表位。在非还原条件下，据报道血清抗体识别依赖于前3个C型凝集素结构域(CTLD)。除了富含半胱氨酸的结构域之外，还报道了血清抗体对C型凝集素结构域1和7的免疫应答性。商业Novus单克隆抗体(mAb)和多克隆σ(Sigma)抗体与CTLD2结构域结合。

图2A-2G是图解本发明中描述的各种PLA2R CAAR构建体的一系列示意图。此处和全文的缩写：ECD：细胞外结构域；TMD：跨膜结构域；BBZ：细胞质串联41BB(CD137)和CD3-ζ信号传导结构域；CysR＝富含半胱氨酸的结构域；FNII＝纤连蛋白II型结构域；CTLD＝C型凝集素结构域。所有的构建体均使用CD8跨膜结构域和BBZ细胞质结构域，并且区别在于其细胞外组成如下：图2A描绘了构建体4025.C(或构建体C)，其细胞外结构域由PLA2R CysR结构域，随后CD8铰链结构域组成。图2B描绘了构建体4026.CF1(或构建体CF1)，其由CysR、FNII和CTLD1结构域，随后CD8铰链结构域组成。图2C描绘了构建体4027.CF12，其由CysR、FNII、CTLD1和CTLD2结构域，随后CD8铰链结构域组成。图2D描绘了构建体4028.CF123(或构建体CF123)，其由CysR、FNII、CTLD1、CTLD2和CTLD3结构域，随后CD8铰链(4028.CF123)或GS接头(CF123)组成。图2E描绘了构建体CF1237，其由CysR、FNII、CTLD1、CTLD2、CTLD3和CTLD7结构域，随后GS接头组成。图2F描绘了构建体CF17，其由CysR、FNII、CTLD1和CTLD7结构域，随后GS接头组成。图2G描绘了构建体C17，其由CysR、CTLD1和CTLD7结构域，随后GS接头组成。

图3A是显示包括4028.CF123 CAAR的质粒图的一部分的示意图。图3B是区分本发明中描述的CAAR构建体的组成的表。

图4是一系列流式细胞术图，显示了Jurkat NFAT-GFP细胞上PLA2R CAAR(4027.CF12和4028.CF123)的一个子集的表面表达。使用对PLA2R CTLD2结构域具有特异性的商业Novus单克隆抗体(mAb)测量了用不同PLA2R慢病毒构建体转导的Jurkat NFAT-GFP细胞对PLA2R CAAR的表达(MOI 5:1，48h)。表达构建体4027.CF12或4028.CF123的Jurkat T细胞，但不是携带不包括CTLD2结构域并且因此不能被所使用的mAb检测到的4025.C的T细胞，或未转导的Jurkat NFAT-GFP细胞，展现出CAAR的可检测的表面表达。

图5是一系列流式细胞术图，其显示使用同种型对照(上图，阴性对照)或PMA+离子霉素(下图，阳性对照)的PLA2R CAAR T细胞激活的阴性和阳性对照。

图6是一系列流式细胞术图，其显示了对PLA2R CTLD2结构域具有特异性的板结合单克隆或多克隆抗体对4027.CF12和4028.CF123 PLA2R CAAR T细胞的激活，其测量为Jurkat NFAT-GFP细胞的GFP表达(激活6小时)。在暴露于抗PLA2R单克隆抗体(mAb)或多克隆抗PLA2R抗体(Ab)后，在构建体4025.C和未转导的细胞中未见T细胞激活的证据，这正如预期的，因为该构建体4025.C不包含CTLD2结构域。观察到响应于单克隆抗PLA2R mAb但不是多克隆抗PLA2R Ab的PLA2R CAAR交联的特异性T细胞激活。

图7A-7B是图解PLA2R MN患者IgG检测到转导的Jurkat NFAT-GFP和原代人T细胞上的PLA2R CAAR表达的一系列图。流式细胞术图表明，对于评估的所有构建体(4025.C、4026.CF1、4027.CF12、4028.CF123、C、CF1、CF123、CF1237、CF17、C17)，在Jurkat NFAT-GFP细胞(图7A)和原代人T细胞(图7B)上均具有稳健的PLA2R CAAR表面表达。通过与MN患者IgG，然后与APC缀合的抗人IgG温育，检测Jurkat NFAT-GFP和用不同PLA2R慢病毒构建体转导的原代人T细胞(72小时)对PLA2R CAAR的表达。

图8是图解板结合的MN患者IgG激活PLA2R CAAR转导的Jurkat-NFAT-GFP细胞的一系列图。流式细胞术图显示了如通过Jurkat NFAT-GFP细胞的GFP表达所测量的MN患者IgG对PLA2R CAAR T细胞的激活(6小时激活)。通过板结合的抗PLA2R IgG交联后，所有评估的PLA2R CAAR T细胞(4025.C，4026.CF1，4027.CF12，4028.CF123，C，CF1，CF123，CF1237，CF17，C17)都转导信号。

图9是图解板结合的MN患者IgG刺激PLA2R CAAR转导的原代人T细胞的IFN-γ分泌的一组图。将5×10⁴个原代人T细胞在涂有10μg/ml MN患者IgG或对照人IgG的96孔板中培养24小时。然后收获培养物上清液用于通过ELISA检测IFN-γ。IFNγ产生在所有培养物上清液中均可检测到，并且相对于未转导的T细胞或用对照(Ctrl)人IgG刺激的PLA2R CAAR T细胞升高。

具体实施方式

本发明包括对抗磷脂酶A2受体(PLA2R)B细胞受体(BCR)具有特异性的嵌合自身抗体受体(CAAR)、包括CAAR的组合物、编码CAAR的多核苷酸、包括编码CAAR的多核苷酸的载体和包括CAAR的重组T细胞。本发明还包括用于制备表达PLA2R-CAAR的基因修饰的细胞，例如，基因修饰的T细胞的方法，其中表达的CAAR包括PLA2R细胞外结构域。

本发明通常还涉及工程化以表达CAAR的细胞，例如T细胞用于治疗与自体抗原(例如PLA2R)的靶向相关的自身抗体介导的肾脏疾病的用途。在一个实施方式中，本发明的表达CAAR的细胞，例如T细胞特异性结合并杀死表达抗PLA2RBCR的细胞，但是不结合和杀死表达正常BCR的细胞。

定义

除非另有定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料都可用于本发明的实践和/或用于测试本发明，但是本文描述了优选的材料和方法。在描述和要求保护本发明时，将根据定义的方式使用以下术语，其中提供了如下定义。

还应理解，本文所使用的术语仅出于描述具体实施方式的目的，并不意欲被限制。

冠词“一(a)”和“一(an)”在本文中用于指该冠词的语法对象中的一个或多个(即，至少一个)。举例来说，“一个元件”是指一个元件或多于一个元件。

如本文所使用的，“约”在涉及可测量值比如量、时间持续时间等时，意在涵盖与规定值±20％或±10％，在一些情况下±5％，在一些情况下±1％，和在一些情况下±0.1％的变量，因为这样的变量适合于执行所公开的方法。

如本文所使用的，术语“抗体”是指与抗原结合的免疫球蛋白分子。抗体可以是源自天然来源或重组来源的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫应答性部分。抗体通常是免疫球蛋白分子的四聚体。本发明中的抗体可以以多种形式存在，其中抗体表达为连续多肽链的一部分，包括例如单个结构域抗体片段(sdAb)、单链抗体(scFv)和人源化抗体(Harlow等人，1999,In:Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory Press,NY；Harlow等人，1989,In:Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York；Houston等人，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Bird等人，1988,Science 242:423-426)。

如本文所使用的，术语“高亲和力”是指结合分子与靶分子的结合或相互作用或吸引中的高特异性。例如，在一些实施方式中，结合分子对靶分子的亲和力可强于100nM、50nM、20nM、15nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM或1nM，例如，如通过表面等离子共振所确定的。

本文所使用的术语“抗原”或“Ag”定义为引起免疫应答的分子。这种免疫应答可能涉及抗体的产生，或特定免疫学上的感受态细胞的激活，或两者。技术人员将理解，任何大分子，包括事实上所有的蛋白质或肽都可以用作抗原。此外，抗原可以源自重组DNA或基因组DNA。因此，技术人员将理解，包括编码引发免疫应答的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA均编码本文所使用的术语“抗原”。此外，本领域技术人员将理解抗原不必仅由基因的全长核苷酸序列编码。容易显而易见的是，本发明包括但不限于使用一个以上基因的部分核苷酸序列，并且这些核苷酸序列以各种组合排列以编码引发期望的免疫应答的多肽。此外，技术人员将理解，抗原根本不需要由“基因”编码。容易显而易见的是，抗原可以合成产生或可以源自生物样品。这样的生物样品可以包括但不限于组织样品、肿瘤样品、细胞或生物流体。

“自身抗原”是指刺激产生自身免疫应答例如产生自身抗体的内源抗原。自身抗原还包括自体抗原或来自正常组织的抗原，其是细胞介导的或抗体介导的免疫应答的靶标，该免疫应答可能导致自身免疫疾病的发展。自身抗原的实例包括但不限于PLA2R及其片段。

如本文所使用的，术语“有限的毒性”是指本发明的肽、多核苷酸、细胞和/或抗体对体外或体内的健康细胞、非肿瘤细胞、非恶性细胞、非靶细胞或这种细胞群表现出缺乏基本上负面的生物学作用、抗肿瘤作用或基本上负面的生理症状。

“自身抗体”是指对自身抗原具有特异性的抗体。

如本文所使用的，术语“自身免疫疾病”定义为由抗体介导的针对自身抗原的自身免疫应答引起的障碍或病症。自身免疫性疾病导致不适当地产生和/或过度地产生自体抗原或自身抗原的自身抗体的产生。

如本文所使用的，术语“自体的(autologous)”是指源自相同个体的任何材料，随后将其重新引入该个体中。

“同种异体的(allogeneic)”是指源自相同物种的不同动物的任何材料。

“异种异体的(xenogeneic)”是指源自不同物种的动物的任何材料。

“嵌合自身抗体受体”或“CAAR”是指在细胞例如T细胞或任何其他效应细胞类型例如能够发生细胞介导的细胞毒性的效应细胞类型上表达的工程化受体。CAAR包括对自身抗体和/或BCR具有特异性的抗原或其片段，例如致病性自身抗体和/或BCR。CAAR任选地还包括跨膜结构域、细胞内结构域和/或信号传导结构域。

如本文所使用的，术语“保守序列修饰”是指不显著影响或改变含有该氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本发明的抗体中，比如定点诱变和PCR介导的诱变。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的氨基酸取代。已在本领域中定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β-支链侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，例如，本发明的CAAR的细胞外区域内的一个或多个氨基酸残基可以被具有相似侧链或电荷的其他氨基酸残基取代，并且可以使用本文描述的功能测定法测试改变的CAAR结合自身抗体的能力。

如本文所使用的，“共刺激配体”包括抗原呈递细胞(例如，aAPC、树突细胞、B细胞等)上的分子，该分子特异性结合T细胞上的关联共刺激分子，从而除了通过例如TCR/CD3复合物与载有肽的MHC分子结合提供的主要信号外，提供介导T细胞应答包括但不限于增殖、激活、分化等的信号。

“共刺激分子”是指T细胞上的特异性结合伴侣，其与共刺激配体特异性结合，从而介导T细胞的共刺激应答，比如但不限于增殖。共刺激分子包括但不限于I类MHC分子、BTLA和Toll配体受体。

“编码”是指多核苷酸中的特定核苷酸序列比如基因、cDNA或mRNA在生物过程中用作用于合成其他聚合物和大分子的模板的固有特性，该聚合物或大分子具有定义的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或定义的氨基酸序列，以及由此产生的生物学特性。因此，如果对应于该基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则该基因编码该蛋白质。编码链和非编码链二者都可以称为编码该基因或cDNA的蛋白质或其他产物，编码链的核苷酸序列与mRNA序列相同并且通常在序列表中提供，非编码链用作基因或cDNA转录的模板。

“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指如本文所描述的有效的实现特定生物学结果的化合物、制剂、材料或组合物的量。这样的结果可以包括但不限于通过本领域合适的任何手段所确定的病毒感染的抑制。

术语“效应子功能”是指细胞的专门功能。

如本文所使用的，“内源的(endogenous)”是指来自生物体、细胞、组织或系统内部或在生物体、细胞、组织或系统内部产生的任何材料。

如本文所使用的，术语“外源的(exogenous)”是指从生物体、细胞、组织或系统引入或在生物体、细胞、组织或系统外部产生的任何材料。

如本文所使用的，术语“表达”定义为由启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。

“表达载体”是指包括重组多核苷酸的载体，该重组多核苷酸包括可操作地连接至待表达的核苷酸序列的表达控制序列。表达载体包括足够的用于表达的顺式作用元件；用于表达的其他元件可以由宿主细胞供应或在体外表达系统中供应。表达载体包括本领域已知的所有载体，比如粘粒、质粒(例如，裸露或包含在脂质体中)、逆转录转座子(例如piggyback、睡美人(sleeping beauty))和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)，其并入重组多核苷酸。

如本文所使用的，“同源的”是指两个聚合物分子之间，例如两个核酸分子，比如两个DNA分子或两个RNA分子之间，或两个多肽分子之间的亚基序列同一性。当两个分子中两个亚基的位置都被相同的单体亚基占据时；例如，如果两个DNA分子中每个分子的位置被腺嘌呤占据，那么它们在该位置是同源的。两个序列之间的同源性是匹配数目或同源位置数目的直接函数；例如，如果两个序列中一半的位置(例如，长度为十个亚基的聚合物中的五个位置)是同源的，则两个序列是50％同源的；如果90％的位置(例如10个中的9个)是匹配的或同源的，则两个序列是90％同源的。

如本文所使用的，“同一性”是指两个聚合物分子之间，特别是两个氨基酸分子之间，比如两个多肽分子之间的亚基序列同一性。当两个氨基酸序列在相同位置具有相同残基时；例如，如果两个多肽分子的每一个中的一个位置被精氨酸占据，那么它们在那个位置是同一的。两个氨基酸序列在比对中的相同位置具有相同残基的同一性或程度通常用百分比表示。两个氨基酸序列之间的同一性是匹配数目或相同位置数目的直接函数；例如，如果两个序列中位置的一半(例如，长度为十个氨基酸的聚合物中的五个位置)同一，则两个序列为50％同一；如果90％的位置(例如10个中的9个)是匹配的或同一的，则两个氨基酸序列具有90％的同一性。

如本文所使用的，“说明材料”包括出版物、记录、图表或可用于传达本发明的组合物和方法的有用性的任何其他表达介质。本发明的试剂盒的说明材料可以例如贴附在装有本发明的核酸、肽和/或组合物的容器上，或者与含有核酸、肽和/或组合物的容器一起运输。可替代地，说明材料可以与容器分开地运输，以使说明材料和化合物由接受者协同使用。

“细胞内结构域”是指位于细胞内部的分子的一部分或区域。

术语“细胞内信号传导结构域”意思是包括足以转导效应子功能信号的细胞内结构域的任何全长或截短的部分。

“分离的(isolated)”是指从天然状态改变或去除。例如，没有“分离”天然存在于活体动物中的核酸或肽，而是“分离”与天然状态的共存材料部分或完全分开的相同核酸或肽。分离的核酸或蛋白质可以以基本上纯化的形式存在，或者可以存在于非天然环境，诸如例如宿主细胞中。

在本发明的背景中，对于常见的核酸碱基使用以下缩写。“A”是指腺苷，“C”是指胞嘧啶，“G”是指鸟苷，“T”是指胸苷，“U”是尿苷。

除非另有说明，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括彼此为简并形式并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。短语编码蛋白质或RNA的核苷酸序列还可以包括内含子，大意是说(to the extent that)，一些形式的编码蛋白质的核苷酸序列可以包含内含子(一个或多个)。

如本文所使用的，“慢病毒(lentivirus)”是指逆转录病毒科的属。慢病毒在能够感染非分裂细胞的逆转录病毒中是独特的；它们可以将大量遗传信息传递到宿主细胞的DNA中，因此它们是基因传递载体中最有效的方法之一。HIV、SIV和FIV都是慢病毒的实例。源自慢病毒的载体提供了在体内实现显著水平的基因转移的手段。

术语“可操作地连接”是指调控序列和异源核酸序列之间的功能性连接，导致后者表达。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列处于功能关系时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则将启动子与编码序列可操作地连接。通常，可操作地连接的DNA序列是连续的，并且在需要连接两个蛋白质编码区的地方处于同一阅读框中。

免疫原性组合物的“肠胃外”施用包括例如皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌肉内(i.m.)或胸骨内注射或输注技术。

如本文所使用的，“浆细胞”是指可以产生和分泌抗体的一类白细胞。浆细胞也称为浆细胞(plasmocyte)、浆细胞(plasmacyte)或效应B细胞。在一些实施方式中，这些细胞包含能够实现B细胞分化的B细胞前体或处于B细胞分化的早期阶段的B细胞，其将细胞表面的μ链表达为抗原受体；其中转录过程已经改变和IgM产生从膜型IgM变为分泌型IgMs的B细胞；具有完整的类别转换并分泌IgG、IgA和IgM的成熟B细胞；和处于分化的最后阶段的B细胞。

如本文使用的，术语“磷脂酶A2受体”或“M型磷脂酶A2受体”'(PLA2R)可互换使用，并且指原发性膜性肾病(MN)在肾小球中表达的主要靶抗原(Beck等人，2009N Engl J Med；361:11-21)。抗PLA2R自身抗体主要是IgG4亚类，但也代表了IgG1、IgG2和IgG3亚类。PLA2R的遗传变异也显示与MN相关(Stanescu等人2011N Engl J Med；364(7)：616-26)。

如本文所使用的，PLA2R片段是指缩短的或截短(truncated)的PLA2R蛋白。多肽可以具有N端或C端的截短和/或内部缺失。片段的实例是包括PLA2R的C型凝集素结构域(“CTLD”)的片段。在一个实施方式中，PLA2R片段包括PLA2R的外部结构域，其是人PLA2R的氨基酸残基21-1397(UniProtKB，Q13018)或氨基酸残基21-1397的任何较短部分。

如本文所使用的，术语“多核苷酸”定义为核苷酸链。此外，核酸是核苷酸的聚合物。因此，本文所使用的核酸和多核苷酸是可互换的。本领域技术人员具有核酸是可被水解成单体“核苷酸”的多核苷酸的常识。单体核苷酸可以被水解成核苷。如本文所使用的，多核苷酸包括但不限于通过本领域可用的任何手段获得的所有核酸序列，包括但不限于重组手段，即，使用普通克隆技术和PCR^TM等，并通过合成手段从重组文库或细胞基因组克隆核酸序列。在一些实施方式中，认为核酸序列与本文公开的任何核酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性或同源性。

如本文所使用的，术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用，并且是指由通过肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白质或肽必须包含至少两个氨基酸，并且对构成蛋白质或肽序列的氨基酸的最大数量没有限制。多肽包括包含通过肽键相互连接的两个或更多个氨基酸的任何肽或蛋白质。如本文使用的，该术语是指短链和长链，短链在本领域中通常也称为例如肽、寡肽和寡聚体，长链在本领域中通常称为蛋白质，其具有很多类型。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚体、异源二聚体、多肽变体、修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。在一些实施方式中，认为氨基酸序列与本文所述的任何氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的同一性或同源性。

术语“促炎细胞因子”是指促进炎症或炎性反应的细胞因子或因子。促炎细胞因子的实例包括但不限于趋化因子(CCL、CXCL、CX3CL、XCL)、白介素(例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9，IL10和IL-15)、干扰素(IFNγ)和肿瘤坏死因子(TNFα和TNFβ)。

如本文所使用的，术语“启动子”被定义为启动多核苷酸序列的特异性转录所需的细胞的合成机制或引入的合成机制识别的DNA序列。

如本文所使用的，术语“启动子/调控序列”是指可操作地连接至启动子/调控序列的基因产物的表达所需的核酸序列。在一些情况下，该序列可以是核心启动子序列，而在其他情况下，该序列还可以包括基因产物的表达所需的增强子序列和其他调控元件。启动子/调控序列可以是例如以组织特异性方式表达基因产物的启动子/调控序列。

“组成型(constitutive)”启动子是这样的核苷酸序列，当其与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作地连接时，在细胞的大多数或全部生理条件下引起该基因产物在细胞中产生。

“诱导型(inducible)”启动子是这样的核苷酸序列，当其与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作地连接时，基本上仅当对应于该启动子的诱导物存在于细胞中时，才引起该基因产物在细胞中产生。

“组织特异性”启动子是这样的核苷酸序列，当其与编码或指定基因的多核苷酸可操作地连接时，仅当该细胞是对应于该启动子的组织类型的细胞时，才引起该基因产物在细胞中产生。

“信号转导途径”是指在信号从细胞的一部分传输到细胞的另一部分中起作用的多种信号转导分子之间的生化关系。短语“细胞表面受体”包括能够接收信号并跨细胞膜传输信号的分子和分子的复合物。

“信号传导结构域”是指响应于激活信号募集并与特定蛋白质相互作用的分子的一部分或区域。

术语“受试者”旨在包括可以引发免疫应答的活生物体(例如，哺乳动物)。

如本文所使用的，“基本上纯化的”细胞是基本上不含其他细胞类型的细胞。基本上纯化的细胞还指已经与通常以其天然存在的状态与其结合的其他细胞类型分离的细胞。在一些情况下，基本上纯化的细胞群是指同质的细胞群。在其他情况下，该术语仅指与以其天然状态与其天然结合的细胞分离的细胞。在一些实施方式中，细胞在体外培养。在其他实施方式中，细胞不在体外培养。

如本文所使用的，术语“治疗的(therapeutic)”是指治疗和/或预防。通过抑制、缓解或消除疾病状态可获得治疗效果。

如本文所使用的，术语“转染的(transfected)”或“转化的(transformed)”或“转导的(transduced)”是指将外源核酸转移或引入宿主细胞中的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”细胞是已经用外源核酸转染、转化或转导的细胞。该细胞包括原代受试者细胞及其子代。

“跨膜结构域”是指跨越脂质双层膜的分子的一部分或区域。

如本文所使用的，短语“在转录控制下”或“可操作地连接的”是指启动子相对于多核苷酸处于正确的位置和方向，以控制RNA聚合酶的转录起始和多核苷酸的表达。

“载体”是包括分离的核酸并且可用于将分离的核酸递送至细胞内部的物质组合物。许多载体是本领域已知的，包括但不限于线性多核苷酸、与离子或两亲性分子化合物相关的多核苷酸、质粒和病毒。因此，术语“载体”包括自主复制质粒或病毒。该术语还应解释为包括有助于将核酸转移到细胞中的非质粒和非病毒化合物，诸如例如聚赖氨酸化合物、脂质体等。病毒载体的实例包括但不限于腺病毒载体、腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体等。

如本文使用的，术语“特异性结合”意思是识别并结合样品中存在的关联结合伴侣(例如，T细胞上存在的刺激和/或共刺激分子)蛋白的抗体或配体，但是该抗体或配体基本上不识别或结合样品中的其他分子。

术语“刺激”是指通过刺激分子(例如，TCR/CD3复合物)与其关联配体结合，从而介导信号转导事件，比如但不限于经由TCR/CD3复合物。刺激可以介导某些分子改变的表达，例如TGF-β的下调和/或细胞骨架结构的重组等。

本文使用的术语“刺激分子”是指T细胞上与抗原呈递细胞上存在的关联刺激配体特异性结合的分子。

如本文所使用的，“刺激配体”是指当存在于抗原呈递细胞(例如，aAPC、树突细胞、B细胞等)上时可以与关联结合伴侣(在本文中称为“刺激分子”)特异性结合的配体，从而介导T细胞的初级应答，包括但不限于激活、免疫应答的起始、增殖等。刺激配体在本领域中是众所周知的，并且尤其包括装载有肽、抗CD3抗体、超激动剂抗CD28抗体和超激动剂抗CD2抗体的MHC I类分子。

范围：在整篇公开内容中，可以用范围格式来呈现本发明的各个方面。应当理解，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本发明的范围的僵化限制。因此，应该将范围的描述解释为已具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。例如，范围比如从1至6的描述应解释为具体地公开了子范围，比如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及该范围内的单个数字，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论该范围的广度如何，这都适用。

描述

嵌合自身抗体受体(CAAR)

本发明部分基于以下发现：嵌合自身抗体受体可用于靶向表达基于自身抗体的B细胞受体的B细胞，在激活和自身抗体分泌之后，该B细胞可能引起自身抗体介导的肾脏疾病。本发明包括对抗磷脂酶A2受体(PLA2R)B细胞受体(BCR)具有特异性的嵌合自身抗体受体(CAAR)、包括CAAR的组合物、编码CAAR的多核苷酸、包括编码CAAR的多核苷酸的载体和包括CAAR的重组T细胞。本发明还包括制备表达PLA2R-CAAR的基因修饰的细胞，例如基因修饰的T细胞的方法，其中表达的CAAR包括磷脂酶PLA2R细胞外结构域。

本发明包括用于治疗自身抗体介导的肾脏疾病的技术。特别地，靶向最终产生自身抗体并在其细胞表面展现自身抗体的B细胞的技术，将这些B细胞标记为用于治疗性干预的疾病特异性靶标。因此，本发明包括通过使用抗原特异性(例如，PLA2R)嵌合自身抗体受体(或CAAR)靶向引起疾病的B细胞，有效靶向和杀死自身抗体介导的肾脏疾病中的致病性B细胞的方法。在本发明的一个实施方式中，仅杀死特定的表达抗PLA2R BCR的B细胞，而使防止感染的有益B细胞和抗体保留完整。

在一方面中，本发明包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中多核苷酸编码磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域。

自身抗原部分

在一个实施方式中，本发明的CAAR包括自身抗体结合结构域，其也称为自身抗原或其片段。用于本发明的自身抗原的选择取决于靶向的自身抗体或BCR的类型(例如抗-PLA2R)。例如，可以选择自身抗原，因为它识别与特定自身抗体介导的肾脏疾病状态，例如肾小球疾病和原发性膜性肾病相关的靶细胞，比如表达BCR的B细胞上的BCR或自身抗体。

在一些情况下，有益的是自身抗体结合结构域源自最终将使用CAAR的相同物种。例如，对于在人类中使用，可能有益的是CAAR的自身抗体结合结构域包括结合人类BCR或自身抗体的人类自身抗原(或其片段)。

在一个示例性实施方式中，基因工程化的嵌合自身抗体受体包括PLA2R或其片段，其结合抗PLA2R BCR，例如受试者的B细胞上的抗PLA2R BCR。

在一个实施方式中，CAAR包括PLA2R的细胞外结构域。

在一些实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括N端富含半胱氨酸的结构域(蓖麻毒素B型凝集素结构域)、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2、C型凝集素结构域3、C型凝集素结构域7或上述的任何组合。

在一些实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括免疫显性表位、由SEQ ID NO：1编码的N端富含半胱氨酸的(CysR)结构域(蓖麻毒素B型凝集素结构域)、由SEQ ID NO：3编码的纤连蛋白II型结构域、由SEQ ID NO：5编码的C型凝集素结构域1和编码由SEQ ID NO：7编码的C型凝集素结构域2。PLA2R的该细胞外结构域是本文命名为构建体4027.CF12的构建体的细胞外结构域，并且由SEQ ID NO：8编码，其中免疫显性表位、N端富含半胱氨酸的结构域和纤连蛋白II型结构域之间的接头由SEQ ID NO：2编码，并且纤连蛋白II型结构域和C型凝集素结构域1之间的接头由SEQ ID NO：4编码，并且C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2之间的接头由SEQ ID NO：6编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括构建体4027.CF12的细胞外结构域和另外的由SEQ ID NO：14编码的C型凝集素结构域3。PLA2R的该后一细胞外结构域是本文命名为构建体4028.CF123的构建体的细胞外结构域，并且由SEQ ID NO：15编码，其中免疫显性表位、N端富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白型II、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2之间的接头与本文上述针对构建体4027.CF12列出的那些相同(SEQ ID NO：2、4和6)，并且进一步其中C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3之间的接头由SEQ ID NO：13编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体C的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域。在某些实施方式中，富含半胱氨酸的结构域包括SEQ ID NO：49，并且可以由SEQ ID NO：47编码。在某些实施方式中，富含半胱氨酸的结构域包括SEQ ID NO：1。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体CF1的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域和C型凝集素结构域1。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：51，并且可以由SEQ ID NO：50编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体CF123的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ IDNO：53，并且可以由SEQ ID NO：52编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体CF1237的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2、C型凝集素结构域3和C型凝集素结构域7。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：55，并且可以由SEQ ID NO：54编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体CF17的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：57，并且可以由SEQ ID NO：56编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体C17的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：59，并且可以由SEQ ID NO：58编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体4025.C的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：61，并且可以由SEQ ID NO：60编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体4026.CF1的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：40，并且可以由SEQ ID NO：39编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体4027.CF12的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：70，并且可以由SEQ ID NO：8编码。

在另一个实施方式中，PLA2R的细胞外结构域包括本文称为构建体4028.CF123的构建体的细胞外结构域，其包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3。在某些实施方式中，细胞外结构域包括SEQ ID NO：71，并且可以由SEQ ID NO：15编码。

自身抗原或其片段的可容许变化对本领域技术人员来说将是已知的。例如，在一些实施方式中，自身抗原或其片段包括与SEQ ID NO：49、51、53、55、57、59、61、63、70或71中所述的任何氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，自身抗原或其片段由与SEQ ID NO：8、15、47、50、52、54、56、58、60或62中所述的核酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的核酸序列编码。

跨膜结构域

在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括与PLA2R CAAR的细胞外结构域融合的跨膜结构域。在一个实施方式中，PLA2R CAAR包括天然与PLA2R CAAR的结构域中的一个相关的跨膜结构域。在一些情况下，通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域，以避免与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与受体复合物的其他成员的相互作用。

跨膜结构域可以源自天然或合成来源。当来源是天然的时，该结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。在一个实施方式中，跨膜结构域可以是合成的，在这种情况下，其将主要包括疏水性残基，例如亮氨酸和缬氨酸。在一方面中，将在合成的跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。任选地，长度在2至10个氨基酸之间的短寡核苷酸或多肽接头可形成PLA2R CAAR的跨膜结构域和细胞质信号传导结构域之间的连接。甘氨酸-丝氨酸二联体提供了特别合适的接头。

在一些情况下，还可以采用跨膜结构域之前的各种间隔结构域，包括铰链(例如CD8或人Ig(免疫球蛋白)铰链)或甘氨酸-丝氨酸(GS)接头。

铰链和/或跨膜结构域的实例包括但不限于T细胞受体、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)、OX40、CD2、CD27、LFA-1(CD11a、CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(触觉)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D和/或NKG2C的α、β或ζ链的铰链和/或跨膜结构域。

在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括跨膜结构域，比如但不限于CD8α跨膜结构域。在一些实施方式中，CD8α跨膜结构域包括氨基酸序列IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC(SEQ IDNO：19)。在一些实施方式中，CD8α跨膜结构域由核苷酸序列ATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGC(SEQ ID NO：20)编码。

在一些实施方式中，跨膜结构域包括与SEQ ID NO：19具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的氨基酸序列，或者由与SEQ ID NO：20具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的核酸序列编码。

在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括铰链结构域，比如但不限于CD8α铰链结构域。在一些实施方式中，铰链结构域包括氨基酸序列TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQ ID NO：43)。在一些实施方式中，铰链结构域包括氨基酸序列FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(SEQ ID NO：44)。在一些实施方式中，铰链结构域由SEQ ID NO：10的核苷酸序列编码。在一些实施方式中，铰链结构域由核苷酸序列ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT(SEQ ID NO：42)编码。在一些实施方式中，铰链结构域由核苷酸序列TTCGTGCCGGTCTTCCTGCCAGCGAAGCCAACCACGACGCCAGCACCGCGACCACCAACACCTGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCAGACCAGCAGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGAT(SEQ ID NO：64)编码。在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括跨膜结构域和铰链结构域。

在一些实施方式中，铰链结构域包括与SEQ ID NO:43或SEQ ID NO：44具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的氨基酸序列，或者由与SEQ ID NO：42或SEQ ID NO：64具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的核酸序列编码。

在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括甘氨酸丝氨酸(GS)接头。在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括GS接头和跨膜结构域。在一些实施方式中，GS接头由核苷酸序列：GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC(SEQ ID NO：68)编码。在一些实施方式中，GS接头包括氨基酸序列：GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：69)。当适合用于CAAR构建体时，本领域技术人员将能够选择合适的接头序列。

共刺激分子的细胞内结构域

在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括共刺激分子的细胞内结构域。本发明的PLA2RCAAR的共刺激分子的细胞内结构域是负责激活其中已经放置了PLA2R CAAR的免疫细胞的至少一种正常效应子功能的细胞质结构域。

T细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。因此，术语“共刺激分子的细胞内结构域”是指蛋白质的一部分，其转导效应子功能信号并指导细胞执行专门的功能。虽然可以使用共刺激分子的整个细胞内结构域，但是在许多情况下，不需要使用整个结构域。就使用共刺激分子的细胞内结构域的截短部分而言，只要该截短部分转导效应子功能信号，就可以代替完整结构域使用。

共刺激分子的细胞内结构域是指包括共刺激分子的细胞内结构域的CAAR的一部分。共刺激分子是淋巴细胞对抗原的有效应答所需的除抗原受体或其配体以外的细胞表面分子。这种分子的实例包括CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关的抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3，和与CD83、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD127、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(触觉)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D特异性结合的配体，本文所述的其他共刺激分子、其任何衍生物、变体或片段，具有相同功能能力的共刺激分子的任何合成序列及其任何组合。因此，虽然本发明主要以4-1BB(CD137)作为共刺激信号传导结构域来举例说明，但是其他共刺激结构域也在本发明的范围内。

在一个实施方式中，共刺激分子的细胞内结构域的核酸序列编码包括共刺激分子4-1BB(也已知并称为CD137)细胞内结构域的氨基酸序列：KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO：21)。在仍另一个实施方式中，编码4-1BB细胞内结构域的核酸序列包括：AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG(SEQ ID NO：22)。在仍另一个实施方式中，编码4-1BB细胞内结构域的核酸序列包括：SEQ ID NO：66。人细胞内4-1BB结构域在结合到细胞外自身抗原比如PLA2R或其片段之后提供共刺激细胞内信号传导，而无需其原始配体。

在一些实施方式中，共刺激分子的细胞内结构域包括与SEQ ID NO：21具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的氨基酸序列，或者由与SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：66具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的核酸序列编码。

众所周知，仅通过TCR产生的信号不足以完全激活T细胞，并且还需要次级或共刺激信号。因此，可以说T细胞激活是由两类不同的细胞质信号传导序列介导的：通过TCR启动抗原依赖性初级激活的那些(初级细胞质信号传导序列)和以抗原非依赖性方式起作用以提供次级或共刺激信号的那些(次级细胞质信号传导序列)。

信号传导结构域

在一些实施方式中，PLA2R CAAR包括信号传导结构域。初级细胞质信号传导序列以刺激方式或抑制方式调节TCR复合物的初级激活。以刺激方式起作用的初级细胞质信号转导序列可包含信号传导基序，这些基序被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。

在本发明中具体使用的包含ITAM的初级信号传导序列的实例包括源自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。特别优选地，本发明的CAAR的信号传导分子包括源自CD3-ζ的信号传导结构域。

在一个实施方式中，CAAR的信号传导结构域可以设计为单独包括CD3-ζ信号传导结构域，或者与本发明的CAAR的背景中有用的任何其他期望的细胞质结构域(一个或多个)组合。例如，CAAR的信号传导结构域可以包括CD3ζ链部分和共刺激信号传导结构域。

在一些实施方式中，PLA2R CAAR单独包括CD3-ζ信号传导结构域或与本发明的PLA2R CAAR的背景中有用的任何其他期望的细胞质结构域(一个或多个)组合。例如，PLA2RCAAR可以包括CD3ζ链部分和共刺激分子的细胞内结构域。在一些实施方式中，CD3ζ链部分是人T细胞表面糖蛋白CD3ζ链亚型3细胞内结构域(人CD247)。人细胞内CD3ζ结构域在结合至细胞外自身抗原，比如PLA2R或其片段之后提供刺激细胞内信号传导，没有HLA限制。

在一个实施方式中，信号传导结构域的核酸序列包括编码CD3ζ信号传导结构域的核酸序列。在另一个实施方式中，CD3ζ信号传导结构域的核酸序列编码包括RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR的氨基酸序列(SEQ ID NO：23)。在另一个实施方式中，CD3ζ信号传导结构域的核酸序列编码包括RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR的氨基酸序列(SEQ ID NO：45)。在另一个实施方式中，编码CD3ζ信号传导结构域的核酸序列包括：AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC(SEQ ID NO：24)。在另一个实施方式中，编码CD3ζ信号传导结构域的核酸序列包括SEQ ID NO：74。

在一些实施方式中，信号传导结构域包括与SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：45具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的氨基酸序列，或者由与SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：74具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的核酸序列编码。

其他结构域

在一些实施方式中，PLA2R CAAR和编码PLA2R CAAR的多核苷酸包括人T细胞表面糖蛋白CD8α链信号肽。人CD8α信号肽负责受体向T细胞表面的易位。

在一个实施方式中，编码PLA2R CAAR的多核苷酸包括肽接头的核酸序列。在另一个实施方式中，PLA2R CAAR包括肽接头。在又另一个实施方式中，PLA2R CAAR的细胞内信号传导结构域内的细胞质信号传导序列可以以随机或指定顺序彼此连接。任选地，例如，长度在2和10个氨基酸之间的短的寡肽或多肽接头可以形成连锁。甘氨酸-丝氨酸二联体是特别合适的接头。

在一些实施方式中，CAAR包括来自杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)家族蛋白质的跨膜结构域和/或细胞质(细胞内)结构域。KIR基因家族具有至少15个基因位点(KIR2DL1、KIR2DL2/L3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DL1/S1、KIR3DL2、KIR3DL3)和在位于19号染色体(19q13.4)上的白细胞受体复合物(LRC)的100-200Kb区域编码的两个假基因(KIR2DP1和KIR3DP1)。LRC构成大的，1Mb且密集的快速进化的免疫基因簇，其包含编码具有独特Ig样细胞外结构域的其他细胞表面分子的基因。此外，扩增的LRC包含编码跨膜衔接子分子DAP10和DAP12的基因。因此，包括包含KIR跨膜结构域和/或细胞质结构域的本发明的CAAR的细胞还可以包括编码DAP10或DAP12的多核苷酸。在某些实施方式中，KIR是KIRS2或KIR2DS2。

在某些实施方式中，CAAR由选自SEQ ID NO：11、17、25、27、29、31、33、35、37和39的核酸序列编码。在某些实施方式中，CAAR包括选自SEQ ID NO：12、18、26、28、30、32、34、36、38、40和42的氨基酸序列。

CAAR序列的可容许变化对本领域技术人员来说将是已知的。例如，在一些实施方式中，CAAR包括与SEQ ID NO：12和18、26、28、30、32、34、36、38或40中列出的任何氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，CAAR由与SEQ ID NO：11、17、25、27、29、31、33、35、37或39中列出的核酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的核酸序列编码。

包括PLA2R CAAR的载体

在一些实施方式中，可以使用第三代自灭活慢病毒载体质粒，其中CAR的表达由人延伸因子1α启动子调节。这导致CAR在宿主T细胞中稳定(永久)表达。作为一种替代方法，可以将编码的mRNA电穿孔到宿主细胞中，这将实现与病毒转导的T细胞相同的治疗效果，但不是永久的，因为mRNA会随细胞分裂而稀释。

在一方面中，本发明包括一种载体，该载体包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中多核苷酸包括包含人PLA2R自身抗原或其片段的细胞外结构域和任选地跨膜结构域和/或细胞内信号传导结构域。在一个实施方式中，载体包括如本文描述的编码CAAR的任何核酸序列。在另一个实施方式中，载体包括质粒载体、病毒载体、逆转录转座子(例如，piggyback、睡美人)、定点插入载体(例如CRISPR、锌指核酸酶、TALEN)或自杀表达载体或本领域其他已知的载体。

本文公开的所有构建体可以与被批准用于人细胞的第三代慢病毒载体质粒、其他病毒载体或RNA一起使用。在一个实施方式中，载体是病毒载体，例如慢病毒载体。在另一个实施方式中，载体是RNA载体。

可以通过测序验证PLA2R CAAR的表达。可以使用免疫印迹、免疫组织化学、流式细胞术或本领域熟知和可获得的其他技术来验证全长CAAR蛋白的表达。

本发明还提供了一种载体，其中插入了编码本发明的CAAR的DNA。载体，包括源自逆转录病毒比如慢病毒的载体，是实现长期基因转移的合适工具，因为它们允许转基因长期稳定地整合及其在子代细胞中的增殖(propagation)。慢病毒载体与源自癌逆转录病毒的载体比如鼠白血病病毒相比具有附加的优势，因为它们可以转导非增生细胞，比如肝细胞。它们还具有在引入它们的受试者中导致低免疫原性的附加优势。

简而言之，通常通过将编码CAAR多肽或其部分的核酸可操作地连接至启动子(例如EF1α启动子)，并将该构建体整合入表达载体中来实现编码CAAR的天然或合成多核苷酸的表达。该载体通常是一种能够在哺乳动物细胞中复制和/或也能够整合到哺乳动物细胞基因组中的载体。典型的载体包含用于调节期望的核酸序列的表达的转录和翻译终止子，初始序列和启动子。

可以将核酸克隆到许多不同类型的载体中。例如，可以将核酸克隆到载体中，该载体包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。

表达载体可以病毒载体的形式提供给细胞。病毒载体技术是本领域众所周知的，并且描述于例如Sambrook等人，2012，MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL，第1-4卷，Cold Spring Harbor Press,NY)，以及其他病毒学和分子学生物学手册。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体包含在至少一种生物中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性核酸内切酶位点和一种或多种选择标志物(例如，WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利号6,326,193)。

另外的启动子元件，例如增强子，调节转录初始的频率。通常，这些位于起始位点上游30-110bp的区域中，尽管最近已显示许多启动子在起始位点下游也包含功能元件。启动子元件之间的间隔通常是灵活的，使得当元件相对于彼此反转或移动时，启动子功能得以保留。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可在活性开始下降之前增加到相距50bp。取决于启动子，似乎单个元件可以协同地或独立地起作用以激活转录。

启动子的实例是立即早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是能够驱动与其可操作地连接的任何多核苷酸序列的高水平表达的强组成型启动子序列。然而，当适用于CAAR构建体时，还可以使用其他组成型启动子序列，包括但不限于猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、人免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽白血病病毒启动子、埃-巴二氏病毒立即早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、延伸因子-1α启动子以及人类基因启动子，比如，但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子。

此外，本发明不应限于组成型启动子的使用。诱导型启动子也被认为是本发明的一部分。诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，该分子开关能够开启多核苷酸序列的表达，当期望这种表达时，它可以可操作地连接，或者在不期望表达时关闭表达。诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫氨酸(metallothionine)启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。在一些实施方式中，诱导型启动子响应于细胞外配体而被激活。例如，在一些实施方式中，诱导型启动子通过结合至合成受体的细胞外配体被激活(并调节CAAR的表达)。例如，在一些实施方式中，可以将合成受体，例如合成Notch受体(即“synNotch”)用作结合触发的转录开关，当其与其配体结合时，其激活与编码CAAR的核酸序列可操作地连接的启动子。因此，作为非限制性实例，这种系统可能需要存在配体(例如，与synNotch结合)，以使免疫细胞对BCR或自身抗体(例如，与CAAR结合)进行应答。需要在分子电路中生成某些信号输出的特定组合导致逻辑门。参见，例如，Roybal等人，2016Cell 164(4)：770-9。

用于表达或调节嵌合受体表达的其他系统的实例包括在Wu等人，(2015)Science350:aab4077；Fedorov等人，(2014)Cancer Journal 20:160-165；Kloss等人，(2013)Nature Biotechnology 31:71-75；Sakemura等人，(2016)Cancer Immunol.Res.4:658-668；Hill等人，(2018)Nature Chemical Biology 14:112-117；Di Stasi等人，(2011)N.Engl.J.Med.365:1673-1683；Budde等人，(2013)PLoS One 8:e82742；Wei等人，(2012)Nature 488:384-388；Ma等人，(2016)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 113:E450-458；Rodgers等人，(2016)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 113:E459-468；Kudo等人，(2014)Cancer Res.74:93-103和Chen等人，(2010)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 107,8531-8536中描述的那些。

为了评估CAAR多肽或其部分的表达，要引入细胞中的表达载体还可以包含选择标志物基因或报道基因或两者，以促进从试图通过病毒载体转染或感染的细胞群中鉴定和选择表达细胞。在其他方面，选择标志物可以携带在分开的DNA片段上，并用于共转染程序中。选择标志物和报道基因的侧翼都可以带有合适的调控序列，以使其能够在宿主细胞中表达。有用的选择标志物包括例如抗生素抗性基因，例如新基因(neo)等。

报道基因用于鉴定潜在转染的细胞并且用于评估调控序列的功能。通常，报道基因是在受体生物体或组织中不存在或不表达并编码多肽的基因，该多肽的表达通过一些易于检测的特性例如酶活性来体现的基因。在将DNA引入受体细胞后的适当时间评估报道基因的表达。合适的报道基因可以包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌的碱性磷酸酶或绿色荧光蛋白基因的基因(例如，Ui-Tei等人，2000FEBS Letters 479：79-82)。合适的表达系统是众所周知的，并且可以使用已知技术制备或从商业上获得。通常，将显示最高水平的报道基因表达的具有最小5'侧翼区的构建体鉴定为启动子。这样的启动子区域可以与报道基因连接，并用于评估试剂调节启动子驱动的转录的能力。

将基因导入细胞中并在细胞中表达的方法是本领域已知的。在表达载体的情况下，可以通过本领域中的任何方法将载体容易地引入宿主细胞，例如哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞中。例如，表达载体可以通过物理、化学或生物学手段转移到宿主细胞中。

用于将多核苷酸引入宿主细胞中的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。产生包括载体和/或外源核酸的细胞的方法是本领域众所周知的。参见，例如，Sambrook等人，2012,MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,第1-4卷，ColdSpring Harbor Press,NY。

用于将感兴趣的多核苷酸引入宿主细胞中的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。RNA载体包括具有RNA启动子和/或用于产生RNA转录体的其他相关结构域的载体。病毒载体，并且特别是逆转录病毒载体，已成为用于将基因插入哺乳动物例如人细胞中的最广泛使用的方法。其他病毒载体可以源自慢病毒、痘病毒、单纯性疱疹病毒、腺病毒和腺伴随病毒等。参见，例如，美国专利号5,350,674和5,585,362。

用于将多核苷酸引入宿主细胞中的化学方法包括胶体分散系统，例如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠子和基于脂质的系统，该系统包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。在体外和体内用作递送媒介的示例性胶体系统是脂质体(例如人造膜囊泡)。

在使用非病毒递送系统的情况下，示例性的递送媒介是脂质体。考虑使用脂质制剂将核酸引入宿主细胞中(体外、离体或体内)。在另一方面中，核酸可以与脂质缔合。可以将与脂质缔合的核酸封装在脂质体的水性内部中、散布在脂质体的脂质双层中、通过与脂质体和寡核苷酸二者都结合的连接分子与脂质体连接、捕获在脂质体中、与脂质体复合、散布在含有脂质的溶液中、与脂质混合、与脂质结合、作为悬浮液包含在脂质中、与胶束一起包含或复合或以其他方式与脂质缔合。与脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体缔合的组合物不限于溶液中的任何具体结构。例如，它们可以双层结构、胶束或“塌陷”结构存在。它们也可以简单地散布在溶液中，可能形成大小或形状不均匀的聚集体。脂质是脂肪物质，其可以是天然存在的或合成的脂质。例如，脂质包括天然存在于细胞质中的脂肪滴(fatty droplet)以及包含长链脂族烃及其衍生物比如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛的一类化合物。

可以从商业来源获得适合使用的脂质。例如，二肉豆蔻基磷脂酰胆碱(“DMPC”)可以从Sigma,St.Louis,MO获得；磷酸二鲸蜡酯(“DCP”)可从K&K Laboratories(Plainview,NY)获得；胆固醇(“Choi”)可从Calbiochem-Behring获得；二肉豆蔻基磷脂酰甘油(“DMPG”)和其他脂质可以从Avanti Polar Lipids,Inc.(Birmingham,AL.)获得。脂质在氯仿或氯仿/甲醇中的储备溶液可以在-20℃下存储。氯仿用作唯一的溶剂，因为它比甲醇更容易蒸发。“脂质体”是通用术语，涵盖通过产生封闭的脂质双层或聚集体而形成的各种单层和多层脂质媒介。脂质体可以被表征为具有带有磷脂质双层膜和内部水性介质的囊泡结构。多层脂质体具有被水性介质分开的多个脂质层。当磷脂悬浮在过量的水溶液中时，它们会自发形成。脂质组分在形成闭合结构之前经历自我重排，并在脂质双层之间捕获水和溶解的溶质(Ghosh等人，1991Glycobiology 5：505-10)。然而，还包括在溶液中具有与正常囊泡结构不同的结构的组合物。例如，脂质可以设想为胶束结构或仅作为脂质分子的不均匀聚集体存在。还考虑了脂质转染胺-核酸复合物。

CAAR、载体和启动子的任何结构域和/或片段可以是通过PCR或本领域已知的任何其他手段扩增的合成基因片段。

包括CAAR的细胞

在另一方面中，本发明包括包含本文公开的PLA2R嵌合自身抗体受体(CAAR)的基因修饰的细胞。

在另一个实施方式中，基因修饰的细胞表达PLA2R CAAR。在该实施方式中，该细胞对B细胞上或很少对已经分化为尚未下调其BCR的浆细胞的B细胞上的基于PLA2R自身抗体的B细胞受体(BCR)具有高亲和力。结果，基因修饰的细胞可以诱导抗PLA2RB细胞的直接杀伤或表达PLA2R自身抗体的浆细胞的间接杀伤。在又一个实施方式中，基因修饰的细胞对与Fc受体结合的抗体具有低亲和力。

在一个实施方式中，基因修饰的细胞为T细胞，比如辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、γδT细胞、天然杀伤细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、其细胞系、T记忆干细胞或其他T效应细胞。对健康细胞具有有限的毒性以及对表达自身抗体的细胞具有特异性的T细胞也是有用的。这样的特异性防止或减少了在对自身抗体不具有特异性的当前疗法中普遍存在的脱靶毒性。在一个实施方式中，T细胞对健康细胞具有有限的毒性。在一个实施方式中，T细胞是自体细胞。在另一个实施方式中，T细胞是同种异体的细胞。

在一些实施方式中，本发明包括源自体外分化的多能干细胞的基因修饰的免疫细胞。在其他实施方式中，本发明包括T细胞，比如原代细胞、源自原代T细胞的扩增T细胞、源自体外分化的干细胞的T细胞、T细胞系比如Jurkat细胞、其他来源的T细胞、其组合以及其他效应细胞。例如，具有NFAT应答元件接着是GFP的转导的Jurkat细胞系可用于检测和分离PLA2R特异性B细胞，并以全面且公正的方式克隆PLA2R特异性抗体库。相互作用的B细胞和Jurkat细胞可以检测为GFP阳性二联体或多聚体，并通过流式细胞术进行分类。编码B细胞受体的基因的表达克隆将提供有关自身抗体介导的肾脏疾病比如肾小球疾病和原发性膜性肾病中自身免疫性和自身抗体如何发展的进一步信息。

可以在Jurkat报道细胞系中评估CAAR特异性结合自身抗体和血清例如原发性膜性肾病血清的功能能力，这取决于CAAR通过结合至板结合的自身抗体来激活(激活的细胞由于其中包含NFAT-GFP报道基因构建体而发出绿色荧光)。这样的方法对于功能结合能力是有用且可靠的定性措施。细胞表面上自身抗原的正确加工也是重要的，并且可以使用单克隆抗体进行测量。此外，基于主要疾病表位的PLA2R的截短也是有用的并且包括在本文中。使用不同长度的铰链区或GS接头的形式也是有用的。关于安全性，优选防止或减少转导的细胞之间或对足细胞的可能亲同种抗原和异嗜性相互作用以及激活(例如PLA2R-PLA2R)。

例如，可以对CAAR的效力和安全性进行进一步评估，如下：

可以将构建体瞬时转染到人类细胞比如293T/17中。表面表达可用单克隆抗体(IgG或ScFv)或来自PLA2R MN患者的血清抗体检测，该血清抗体对上述细胞外结构域、结构域之间的接头或CAAR中包括的其他结构具有特异性。可以用特异性二抗验证结合，并通过流式细胞术定量。

任何同种型的人抗PLA2R抗体的膜表达构建体的生产都可以用作测试不同的PLA2R-CAAR的靶细胞。通过在细胞系(例如Nalm6或K562细胞)的表面上表达人单克隆抗体，可以根据需要产生另外的靶细胞系。

自身免疫性疾病

本发明还提供了在自身抗体介导的肾脏疾病的背景下预防、治疗和/或控制与表达自身抗体的细胞相关的病症或自身免疫疾病的方法。该方法包括向有需要的受试者施用包括与表达自身抗体的细胞结合的本发明的CAAR的基因修饰的T细胞。一方面，受试者是人。自身抗体介导的肾脏疾病的非限制性实例包括肾小球疾病和原发性膜性肾病。

在治疗方法中，可以修饰从受试者分离的T细胞以表达合适的CAAR，离体扩增，并且然后重新注入相同的受试者中(例如，T细胞是自体T细胞)。在一些实施方式中，将T细胞重新输注到与原始T细胞的供体不同的受试者中(例如，T细胞是同种异体的T细胞)。修饰的T细胞识别靶细胞，比如抗PLA2R B细胞或产生PLA2R自身抗体的B细胞或浆细胞，并且被激活，导致自身免疫靶细胞被杀死。

自身免疫性疾病患者例如原发性膜性肾病患者也可能发生复发。在用利妥昔单抗治疗的患者中，复发可能由相同自身抗体B细胞克隆的持续存在(persistence)介导，而缓解与这些克隆的消失有关。通过注入PLA2R CAART细胞，自身免疫细胞被耗尽以诱导长期缓解，这可能是由于PLA2R CAART细胞的寿命长(longevity)和/或自身抗原反应性克隆未再出现。

为了在体外、原位或体内监测表达PLA2R CAAR的细胞，PLA2R CAAR细胞可以进一步表达可检测的标志物。当PLA2R CAAR结合靶标时，可检测的标志物被激活并表达，这可以通过本领域已知的测定法比如流式细胞术进行检测。在一个实施方式中，PLA2R CAAR包括NFAT应答元件和可检测标志物，例如绿色荧光蛋白(GFP)，以检测和定量表达PLA2R CAAR的细胞。

T细胞的来源

在扩增和遗传修饰之前，从受试者获得T细胞(例如自体或同种异体的T细胞)。受试者的实例包括人、狗、猫、小鼠、大鼠及其转基因物种。T细胞可从多种来源获得，包括皮肤、外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在本发明的某些实施方式中，可以使用本领域可获得的任何数量的T细胞系。在本发明的某些实施方式中，可以使用本领域技术人员已知的多种技术，例如FicollTM分离，从受试者收集的单位血液中获得T细胞。在一个优选的实施方式中，通过单采血液成分法(apheresis)从个体的循环血液中获得细胞。单采血液成分法产物通常包含淋巴细胞，其包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他成核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方式中，可以洗涤通过单采血液成分法收集的细胞以除去血浆部分并将细胞置于适当的缓冲液或培养基中以用于随后的加工步骤。在本发明的一个实施方式中，将细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤。在可替代的实施方式中，洗涤溶液缺少钙，并且可能缺少镁，或者可能缺少许多(如果不是全部的话)二价阳离子。再次，令人惊讶地，在不存在钙的情况下的初始激活步骤导致放大的激活。如本领域普通技术人员将容易理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法来完成，比如按照制造商的说明通过使用半自动“流通式”离心机(例如Cobe 2991细胞处理器、Baxter CytoMate或Haemonetics Cell Saver5)。在洗涤后，可将细胞重悬于多种生物相容的缓冲液中，诸如例如无钙、无镁的PBS，浆细胞A(PlasmaLyte A)或其他含或不含缓冲液的盐溶液。可替代地，可以去除单采血液成分法样品的不良成分，并将细胞直接重悬浮在培养基中。

在另一个实施方式中，例如通过PERCOLL^TM梯度离心或通过逆流离心淘析，通过裂解红细胞并消耗单核细胞从外周血淋巴细胞分离T细胞。可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离T细胞的特定亚群，例如CD3⁺、CD28⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD45RA⁺和CD45RO⁺T细胞。例如，在一个实施方式中，通过与抗CD3/抗CD28(即3x28)缀合珠子，比如

M-450CD3/CD28 T一起温育足以阳性选择期望的T细胞的时间段来分离T细胞。在一个实施方式中，该时间段是大约30分钟。在进一步的实施方式中，该时间段的范围是从30分钟到36小时或更长，以及介于其间的所有整数值。在进一步的实施方式中，该时间段是至少1、2、3、4、5或6小时。在又另一个优选的实施方式中，该时间段是10至24小时。在一个优选的实施方式中，温育时间段是24小时。为了从白血病患者中分离T细胞，使用更长的温育时间(比如24小时)可以提高细胞产量。在与其他细胞类型相比T细胞很少的任何情况下，可以使用更长的温育时间来分离T细胞，以从肿瘤组织或免疫受损的个体中分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。此外，使用更长的温育时间可以提高捕获CD8+T细胞的效率。因此，通过简单地缩短或延长允许T细胞结合CD3/CD28珠子的时间和/或通过增加或降低珠子与T细胞的比例(如本文进一步所述)，可以在培养初始时或过程中的其他时间点对于(for)或针对(against)T细胞的亚群优先选择。另外，通过增加或降低珠子或其他表面上的抗CD3和/或抗CD28抗体的比例，可以在培养初始时或在其他期望的时间点对于或针对T细胞的亚群优先选择。技术人员将认识到，在本发明的背景中还可以使用多轮选择。在某些实施方式中，可能期望执行选择过程并在激活和扩增过程中使用“未选择”的细胞。“未选择”的细胞也可以经历下一轮的选择。

通过阴性选择富集T细胞群可以通过针对阴性选择细胞特有的表面标志物的抗体组合来完成。一种方法是经由负磁免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择，其使用针对存在于阴性选择的细胞上的细胞表面标志物的单克隆抗体混合物(cocktail)。例如，为了通过阴性选择富集CD4⁺细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在某些实施方式中，可能需要富集或阳性选择通常表达CD4⁺、CD25⁺、CD62L⁺、GITR⁺和FoxP3⁺的调节性T细胞。可替代地，在某些实施方式中，T调节性细胞被抗CD25缀合的珠子或其他类似的选择方法耗尽。在其他实施方式中，T细胞的亚群，比如，但不限于可以通过阳性或阴性选择技术分离的阳性或表达高水平的一种或多种表面标志物的细胞，例如，CD28+、CD8+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD45RA+和/或CD45RO+T细胞。

为了通过阳性或阴性选择分离期望的细胞群，可以改变细胞和表面(例如，颗粒比如珠子)的浓度。在某些实施方式中，可能期望的是显著减小珠子和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞的浓度)，以确保细胞和珠子的最大接触。例如，在一个实施方式中，使用了20亿个细胞/ml的浓度。在一个实施方式中，使用10亿个细胞/ml的浓度。在进一步的实施方式中，使用大于1亿个细胞/ml。在另一个实施方式中，使用的细胞浓度为1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000万个细胞/ml。在又另一个实施方式中，使用7500、8000、8500、9000、9500万个或1亿个细胞/ml的细胞浓度。在进一步的实施方式中，可以使用1.25或1.5亿个细胞/ml的浓度。使用高浓度可以导致增加的细胞产量、细胞激活和细胞扩增。此外，使用高细胞浓度允许更有效地捕获可能弱表达感兴趣的靶抗原的细胞比如CD28阴性T细胞，或者从存在许多肿瘤细胞(即，白血病血液、肿瘤组织等)的样品中捕获。这样的细胞群可能具有治疗价值并且将是期望获得的。例如，使用高浓度的细胞可以更有效地选择通常具有较弱的CD28表达的CD8⁺T细胞。

在相关的实施方式中，可能期望的是使用较低浓度的细胞。通过显著稀释T细胞和表面(例如颗粒，比如珠子)的混合物，颗粒和细胞之间的相互作用被最小化。这选择了表达待结合至颗粒的大量的期望抗原的细胞。例如，在稀释浓度下，CD4⁺T细胞比CD8⁺T细胞表达更高水平的CD28，并且更有效地被捕获。在一个实施方式中，所使用的细胞浓度为5×10⁶/ml。在其他实施方式中，所使用的浓度可以为约1×10⁵/ml至1×10⁶/ml，和其间的任何整数值。

在其他实施方式中，可以在2-10℃或在室温下在旋转器上以不同的速度将细胞温育不同的时间长度。

用于刺激的T细胞还可以在洗涤步骤后冷冻。希望不受理论的束缚，冷冻和随后的解冻步骤通过去除细胞群中的粒细胞和某种程度上的单核细胞而提供了更均匀的产物。在去除血浆和血小板的洗涤步骤之后，可以将细胞悬浮在冷冻溶液中。尽管许多冷冻溶液和参数是本领域已知的，并且在此背景下将是有用的，一种方法涉及使用包含20％DMSO和8％人血清白蛋白的PBS、或包含10％葡聚糖40和5％葡萄糖的培养基、20％人血清白蛋白和7.5％DMSO或31.25％浆细胞-A、31.25％葡萄糖5％、0.45％NaCl、10％葡聚糖40和5％葡萄糖、20％人血清白蛋白和7.5％DMSO或含有例如羟乙基淀粉(Hespan)和浆细胞A的其他合适的细胞冷冻培养基，然后将细胞以每分钟1°的速度冷冻至-80℃，并储存在液氮储罐的气相中。可以使用其他控制冷冻的方法，以及在-20℃或在液氮中立即进行非控制冷冻。

在某些实施方式中，如本文所述将冷冻保存的细胞解冻并洗涤，并在使用本发明的方法激活之前使其在室温下静置一小时。

在本发明的背景中还考虑了在可能需要如本文所述的扩增细胞之前的时间段收集来自受试者的血液样品或单采血液成分法产物。这样，可以在任何必要的时间点收集待扩增细胞的来源，并将期望的细胞比如T细胞分离并冷冻，以用于以后的T细胞疗法中，用于受益于T细胞疗法的多种疾病或病症，比如本文描述的那些。在一个实施方式中，血液样品或单采血液成分法是从总体健康的受试者中获取的。在某些实施方式中，血液样品或单采血液成分法从具有发展为疾病的风险但尚未发展为疾病的总体健康的受试者中获取，并分离和冷冻感兴趣的细胞以备后用。在某些实施方式中，可以将T细胞扩增、冷冻并在以后使用。在某些实施方式中，在如本文所述诊断特定疾病之后不久但在任何治疗之前从患者收集样品。在进一步的实施方式中，在许多相关治疗方式之前，从受试者的血样或单采血液成分法中分离细胞，包括但不限于用以下试剂处理，比如那他珠单抗、依法珠单抗、抗病毒剂、化疗、放射、免疫抑制剂比如环孢霉素、咪唑硫嘌呤、甲氨蝶呤、霉酚酸酯和FK506、抗体或其他免疫消融剂比如CAMPATH、抗CD3抗体、环磷酰胺、氟达拉滨、环孢霉素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸、类固醇、FR901228和放射。这些药物可抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶(环孢霉素和FK506)或抑制对生长因子诱导的信号传导重要的p70S6激酶(雷帕霉素)。(Liu等人，Cell66:807-815,1991；Henderson等人，Immun.73:316-321,1991；Bierer等人，Curr.Opin.Immun.5:763-773,1993)。在另一个实施方式中，细胞先被分离并且可以被冷冻以用于在B细胞消融疗法例如利妥昔单抗之后的以后治疗。

在本发明的另一个实施方式中，在治疗后直接从患者获得T细胞。在这方面，已经观察到，在某些治疗之后，特别是在损害免疫系统的药物治疗之后，在患者通常会从治疗中恢复的时期内治疗后不久，获得的T细胞的质量可能是最佳的或提高了其离体扩增的能力。同样，在使用本文描述的方法进行离体操作后，这些细胞可以处于增强移植和体内扩增的优选状态。因此，预期在本发明的背景中在该恢复阶段期间收集血细胞，包括T细胞、树突细胞或造血谱系的其他细胞。此外，在某些实施方式中，活动化(mobilization)(例如，用GM-CSF活动化)和调理方案可用于在受试者中产生其中特定细胞类型的再增、再循环、再生和/或扩增是有利的状态，特别是在治疗后限定的时间窗口内。示例性的细胞类型包括T细胞、B细胞、树突细胞和免疫系统的其他细胞。

T细胞的激活和扩增

通常使用例如在美国专利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；和美国专利申请公开号20060121005中描述的方法激活和扩增T细胞。

通常，本发明的T细胞通过与其上附着有刺激CD3/TCR复合物相关信号的试剂和刺激T细胞表面上的共刺激分子的配体的表面接触而扩增。特别地，可以如本文所描述的刺激T细胞群，例如通过与抗CD3抗体或其抗原结合片段或固定在表面上的抗CD2抗体接触，或者通过与结合钙离子载体的蛋白激酶C激活剂(例如，苔藓抑素)接触。为了共同刺激T细胞表面上的辅助分子，使用结合辅助分子的配体。例如，可以在适于刺激T细胞增殖的条件下使T细胞群与抗CD3抗体和抗CD28抗体接触。为了刺激CD4⁺T细胞或CD8⁺T细胞的增殖，抗CD3抗体和抗CD28抗体。抗CD28抗体的实例包括9.3、B-T3、XR-CD28(Diaclone，

法国)，其可用作本领域通常已知的其他方法(Berg等人，Transplant Proc.30(8):3975-3977,1998；Haanen等人，J.Exp.Med.190(9):13191328,1999；Garland等人，J.Immunol Meth.227(1-2):53-63,1999)。

在某些实施方式中，可以通过不同的方案提供T细胞的初级刺激信号和共刺激信号。例如，提供每个信号的试剂可以在溶液中或者偶联至表面。当偶联至表面时，试剂可以偶联至相同的表面(即，以“顺式”形式)或偶联至分开的表面(即，以“反式”形式)。可替代地，可以将一种试剂偶联至表面，而将另一种试剂偶联至溶液中。在一个实施方式中，提供共刺激信号的试剂与细胞表面结合，并且提供初级激活信号的试剂在溶液中或偶联至表面。在某些实施方式中，两种试剂都可以在溶液中。在另一个实施方式中，试剂可以是可溶形式，并且然后交联到表面，比如表达Fc受体的细胞或将结合试剂的抗体或其他结合剂。在这方面，参见例如美国专利申请公开号20040101519和20060034810的人工抗原呈递细胞(aAPC)，预期该人工抗原呈递细胞用于激活和扩增本发明中的T细胞。

在一个实施方式中，将两种试剂固定在珠子上，或者固定在同一珠子上，即“顺式”，或者分开的珠子上，即“反式”。例如，提供初级激活信号的试剂是抗CD3抗体或其抗原结合片段，并且提供共刺激信号的试剂是抗CD28抗体或其抗原结合片段；并将两种试剂以等价的分子量共同固定在同一珠子上。在一个实施方式中，针对CD4⁺T细胞扩增和T细胞生长，使用1：1比例的与珠子结合的每种抗体。在本发明的某些方面中，使用与珠子结合的抗CD3：CD28抗体的比例，使得与使用1：1的比例观察到的扩增相比，观察到T细胞扩增的增加。在一个具体实施方式中，与使用1∶1的比例观察到的扩增相比，观察到约1至约3倍的增加。在一个实施方式中，CD3：CD28抗体与珠子结合的比例在100：1至1：100的范围内，以及其间的所有整数值。在本发明的一方面中，与抗CD3抗体相比，更多的抗CD28抗体与颗粒结合，即，CD3∶CD28的比例小于1。在本发明的某些实施方式中，与珠子结合的抗CD28抗体与抗CD3抗体的比例大于2：1。在一个具体实施方式中，使用比例为1：100的与珠子结合的抗体CD3：CD28。在进一步的实施方式中，使用比例为1:75的与珠子结合的抗体CD3：CD28。在进一步的实施方式中，使用比例为1:50的与珠子结合的抗体CD3：CD28。在另一个实施方式中，使用比例为1∶30的与珠子结合的抗体CD30∶CD28。在一个优选的实施方式中，使用比例为1∶10的与珠子结合的抗体CD3∶CD28。在另一个实施方式中，使用比例为1：3的与珠子结合的抗体CD3：CD28。在又另一个实施方式中，使用比例为3∶1的与珠子结合的抗体CD3∶CD28。

比例为1：500至500：1以及在两者之间的任何整数值的颗粒与细胞可用于刺激T细胞或其他靶细胞。如本领域普通技术人员可以容易地理解的，颗粒与细胞的比例可以取决于相对于靶细胞的粒径。例如，小尺寸的珠子只能结合几个细胞，而大珠子可以结合许多细胞。在某些实施方式中，比例为1：100至100：1和在其间的任何整数值；和在进一步的实施方式中，比例为1：9至9：1和其间的任何整数值的细胞与颗粒也可用于刺激T细胞。如上所述，导致T细胞刺激的抗CD3和抗CD28偶联颗粒与T细胞的比例可以变化，然而，某些优选值包括1:100、1:50、1:40、1:30、1:20、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1和15:1，一个优选的比例是颗粒与T细胞为至少1：1。在一个实施方式中，使用的颗粒与细胞的比例为1：1或更小。在一个具体实施方式中，优选的颗粒：细胞比例为1：5。在进一步的实施方式中，颗粒与细胞的比例可以根据刺激日期而变化。例如，在一个实施方式中，第一天颗粒与细胞的比例为1：1至10：1，并且之后每天或每隔一天将另外的颗粒以1：1到1:10(基于添加当天的细胞计数)的最终比例添加到细胞中，最多10天。在一个具体实施方式中，在刺激的第一天颗粒与细胞的比例为1：1，并且在刺激的第三天和第五天将其调整为1：5。在另一个实施方式中，基于每天或每隔一天添加颗粒，在刺激的第一天至1：1的最终比例，而在刺激的第三天和第五天至1：5的最终比例。在另一个实施方式中，颗粒与细胞的比例在刺激的第一天为2：1，并且在刺激的第三天和第五天调整为1:10。在另一个实施方式中，基于每天或每隔一天添加颗粒，在刺激的第一天至1：1的最终比例，而在刺激的第三天和第五天至1:10的最终比例。本领域技术人员将认识到，各种其他比例可能适用于本发明。具体地，比例将根据颗粒大小以及细胞大小和类型而变化。

在本发明的进一步的实施方式中，将细胞，比如T细胞与包被有试剂的珠子组合，随后分离珠子和细胞，并且然后培养细胞。在可选的实施方式中，在培养之前，不分离包被有试剂的珠子和细胞，而是在一起培养。在进一步的实施方式中，首先通过施加力比如磁力来浓缩珠子和细胞，从而导致细胞表面标志物的连接增加，从而诱导细胞刺激。

举例来说，可以通过使附着有抗CD3和抗CD28的顺磁珠子(3×28珠子)接触T细胞来连接细胞表面蛋白。在一个实施方式中，将细胞(例如，10⁴至10⁹个T细胞)和珠子(例如，比例为1：1的

M-450CD3/CD28 T顺磁性珠子)在缓冲液，例如PBS(不含二价阳离子，比如钙和镁)中组合。此外，本领域普通技术人员可以容易地认识到可以使用任何细胞浓度。例如，靶细胞在样品中可能非常稀少，并且仅占样品的0.01％，或者整个样品(即100％)可以包括感兴趣的靶细胞。因此，任何细胞数目都在本发明的背景内。在某些实施方式中，可能期望的是显著减小颗粒和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞的浓度)，以确保细胞和颗粒的最大接触。例如，在一个实施方式中，使用约20亿个细胞/ml的浓度。在另一个实施方式中，使用大于1亿个细胞/ml。在进一步的实施方式中，使用1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000万个细胞/ml的细胞浓度。在又另一个实施方式中，使用7500、8000、8500、9000、9500万个或1亿个细胞/ml的细胞浓度。在进一步的实施方式中，可以使用1.25或1.5亿个细胞/ml的浓度。使用高浓度可导致增加的细胞产量、细胞激活和细胞扩增。此外，使用高细胞浓度可以更有效地捕获可能弱表达感兴趣的靶抗原的细胞，例如CD28阴性T细胞。这样的细胞群可能具有治疗价值，并且在某些实施方式中是期望的。例如，使用高浓度的细胞可以更有效地选择通常具有较弱的CD28表达的CD8+T细胞。

在本发明的一个实施方式中，可将混合物培养数小时(约3小时)至约14天或介于两者之间的任何小时整数值。在另一个实施方式中，可以将混合物培养21天。在本发明的一个实施方式中，将珠子和T细胞一起培养约八天。在另一个实施方式中，将珠子和T细胞一起培养2-3天。还可能期望若干刺激周期，以使T细胞的培养时间可以是60天或更长。适用于T细胞培养的条件包括适当的培养基(例如，最小必需培养基或RPMI培养基1640或，X-vivo15，(Lonza))，该培养基可能包含增殖和活力所必需的因子，包括血清(例如，胎牛或人血清)、白细胞介素-2(IL-2)、胰岛素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ和TNF-α或技术人员已知的用于细胞生长的任何其他添加剂。用于细胞生长的其他添加剂包括但不限于表面活性剂、人血浆蛋白粉和还原剂，比如N-乙酰基-半胱氨酸和2-巯基乙醇。培养基可以包括RPMI 1640、AIM-V、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo 20，Optimizer，添加氨基酸、丙酮酸钠和维生素，其为无血清或补充适量的血清(或血浆)或一组限定的激素，和/或足以使T细胞生长和扩增的一定量的细胞因子(一种或多种)。抗生素，例如青霉素和链霉素仅包括在实验培养物中，而未包括在要注入受试者的细胞培养物中。将靶细胞维持在支持生长所必需的条件下，例如合适的温度(例如37℃)和大气(例如空气加5％CO₂)。

暴露于不同刺激时间的T细胞可能展现出不同的特征。例如，典型的血液或去血的(apheresed)外周血单核细胞产物具有的辅助T细胞群(T_H，CD4⁺)大于细胞毒性或抑制性T细胞群(TC，CD8⁺)。通过刺激CD3和CD28受体进行T细胞的离体扩增产生T细胞群，在大约8-9天之前该细胞群主要由T_H细胞组成，而在大约8-9天之后，该T细胞群包括越来越多的T_C细胞。因此，取决于治疗的目的，向受试者输注主要包括T_C细胞或T_H细胞的T细胞群可能是有利的。类似地，如果已经分离了T_C细胞的抗原特异性亚组，则将该亚组更大程度地扩增可能是有益的。

此外，除了CD4和CD8标志物外，其他表型标志物在细胞扩增过程中也有显著的变化，但大部分是可重复的。因此，这种再现性使得能够针对特定目的定制激活的T细胞产物。

治疗应用

在一方面中，本发明包括一种用于治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病的方法。该方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，该T细胞包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸——其中该多核苷酸编码磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段——和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域，从而治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病。

在另一方面中，本发明包括用于在处于患自身抗体介导的肾脏疾病的风险中或患有自身抗体介导的肾脏疾病的受试者中用于预防或减少肾小球损害的方法。该方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，该T细胞包括编码CAAR的多核苷酸——其中多核苷酸编码aPLA2R自身抗原或其片段——和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域，从而预防或减少受试者中的肾小球损害。

在一个实施方式中，自身抗体介导的肾脏疾病选自肾小球疾病和原发性膜性肾病，例如，由已知的抗PLA2R自身抗体和/或BCR介导或以其他方式与其相关的原发性膜性肾病。在另一个实施方式中，受试者是人。

不希望受任何具体理论的束缚，由CAAR修饰的T细胞引起的抗自身抗体免疫应答可以是主动或被动的免疫应答。在另一个实施方式中，修饰的T细胞靶向B细胞。例如，表达自身抗体的B细胞可能易于被先前已与相邻表达自身抗体的细胞反应的CAAR重定向的T细胞间接破坏。

在一个实施方式中，本发明的基因修饰的T细胞被完全人CAAR修饰。在一个实施方式中，完全人CAAR基因修饰的T细胞可以是用于哺乳动物的离体免疫和/或体内治疗的一种疫苗。在一个实施方式中，哺乳动物是人。

关于离体免疫，在将细胞施用于哺乳动物之前在体外至少发生以下之一：i)细胞扩增，ii)将编码CAAR的多核苷酸引入细胞中，iii)冷冻保存所述细胞。

离体方法在本领域中是众所周知的，并在下面更全面地讨论。简而言之，将细胞从哺乳动物(例如人)分离，并用表达本文公开的CAAR的载体遗传修饰(即体外转导或转染)。可以将CAAR修饰的细胞给予哺乳动物受体以提供治疗益处。哺乳动物受体可以是人类，并且相对于受体，CAAR修饰的细胞可以是自体的。可替代地，相对于受体，细胞可以是同种异体的、同基因的或异种异体的。

可以将在美国专利号5,199,942(通过引用并入本文)中描述的离体扩增造血干细胞和祖细胞的方法应用于本发明的细胞。其他合适的方法是本领域已知的，因此本发明不限于细胞离体扩增的任何具体方法。简而言之，T细胞的离体培养和扩增包括：(1)从外周血收获物或骨髓外植体中收集来自哺乳动物的CD34+造血干细胞和祖细胞；(2)离体扩增这类细胞。除了在美国专利号5,199,942中描述的细胞生长因子以外，可以使用其他因子比如flt3-L、IL-1、IL-3和c-kit配体来培养和扩增细胞。

除了在离体免疫方面使用基于细胞的疫苗之外，本发明还包括用于体内免疫以在患者中引发针对抗原的免疫应答的组合物和方法。

通常，如本文所述激活和扩增的细胞可用于治疗和预防免疫受损的个体中出现的疾病。具体地，本发明的PLA2R CAAR修饰的T细胞用于治疗与自身抗体表达相关的疾病、障碍和病症。在某些实施方式中，本发明的细胞用于治疗处于发展与自身抗体表达相关的自身免疫性肾脏疾病、障碍和病症的风险的患者。因此，本发明提供了用于治疗或预防与自身抗体(PLA2R)表达相关的自身免疫性肾脏疾病、障碍和病症的方法，包括向需要其的受试者施用治疗有效量的本发明的CAAR修饰的T细胞。

本发明的CAAR修饰的T细胞可以单独施用，或者作为药物组合物与稀释剂和/或与其他成分比如IL-2或其他细胞因子或细胞群组合施用。简而言之，本发明的药物组合物可以包括如本文所描述的靶细胞群，其与一种或多种药学上或生理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合。这样的组合物可以包括缓冲液，比如中性缓冲盐溶液、磷酸盐缓冲盐溶液等；碳水化合物，比如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸比如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，比如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。在一方面中，本发明的组合物被配制用于静脉内施用。

本发明的药物组合物可以以适合于待治疗(或预防)的疾病的方式施用。尽管合适的剂量可以通过临床试验确定，但是施用的量和频率将由患者的病情、患者疾病的类型和严重性等因素决定。

当指示“免疫学有效量”、“抗BCR有效量”、“自体免疫疾病抑制有效量”或“治疗量”时，待施用的本发明的组合物的精确量可以由医生考虑到年龄、体重、肿瘤大小、感染或转移的程度以及患者(受试者)的病情的个体差异来确定。通常可以指出，包含本文所述的T细胞的药物组合物可以以10⁴至10⁹个细胞/kg体重，在一些情况下以10⁵至10⁶个细胞/kg体重的剂量施用，包括那些范围内的所有整数值。T细胞组合物也可以以这些剂量多次施用。可以通过使用免疫疗法中公知的输注技术来施用细胞(参见，例如，Rosenberg等人，NewEng.J.Med.319：1676，1988)。通过监测患者的疾病征兆并相应地调整治疗，医学领域的技术人员可以容易地确定针对特定患者的最佳剂量和治疗方案。

在某些实施方式中，将激活的T细胞施用至受试者。在施用之后，使用本文描述的方法重新抽血，或进行单采血液成分法，并且激活T细胞和从其扩增，并且然后将其重新注入患者体内。该过程可以每几周进行多次。在某些实施方式中，可以从抽取的10cc至400cc的血液激活T细胞。在某些实施方式中，从抽取的20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc或100cc的血液激活T细胞。不受理论的束缚，使用这种多次抽血/多次再输注方案可以挑选某些T细胞群。

相对于接受治疗的受试者，待施用的本发明的细胞可以是自体的、同种异体的或异种异体的。

本发明细胞的施用可以使用任何方便的方式进行，包括通过气雾吸入、注射、吞咽、输血、植入或移植。本文所述的组合物可以经动脉、经皮下、皮内、结节内、髓内、肌肉内、经静脉内(i.v.)注射或经腹膜内施用至患者。在一个实施方式中，本发明的T细胞组合物通过皮内或皮下注射施用至患者。在另一个实施方式中，通过静脉内注射施用本发明的T细胞组合物。T细胞的组合物可以直接注射到淋巴结中或其他病理生理活性部位。

在本发明的某些实施方式中，结合(例如，在此之前、同时或在此之后)任何数量的相关治疗方式，向患者施用使用本文描述的方法或本领域已知的将T细胞扩增至治疗水平的其他方法激活和扩增的细胞，相关治疗方式包括但不限于用试剂比如免疫抑制剂比如咪唑硫嘌呤、甲氨蝶呤、霉酚酸酯、抗体，或者其他免疫消融剂比如CAMPATH、抗CD3抗体或其他抗体疗法，环磷酰胺、氟达拉滨、霉酚酸、类固醇、FR901228、细胞因子和放射来处理。这些药物可能会抑制例如钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶(环孢霉素和FK506)或抑制对于生长因子诱导的信号传导重要的p70S6激酶(雷帕霉素)。(Liu等人，Cell 66:807-815,1991；Henderson等人，Immun.73:316-321,1991；Bierer等人，Curr.Opin.Immun.5:763-773,1993)。在进一步的实施方式中，使用化疗剂比如氟达拉滨、外束放射疗法(XRT)、环磷酰胺，或者抗体比如OKT3或CAMPATH，结合(例如，在此之前、同时或在此之后)T细胞消融疗法，将本发明的细胞组合物施用至患者。在另一个实施方式中，本发明的细胞组合物在B-细胞消融疗法之后施用，比如与CD20反应的试剂，例如，利妥昔单抗。在进一步的实施方式中，本发明的T细胞可以与补体抑制剂联合使用以降低补体介导的细胞毒性或抗体抗FcRn、IVIg或血浆置换的风险，以便在治疗前降低抗PLA2R抗体的浓度。在其他实施方式中，温和的淋巴清除方案(例如低剂量的氟达拉滨或细胞毒素)可能在用本发明的T细胞治疗之前。

待施用至患者的上述治疗的剂量将随所治疗病症的确切性质和治疗接受者而变化。可以根据本领域公认的实践来缩放用于人类施用的剂量。对于成年患者，例如，CAMPATH的剂量通常将在1至约100mg的范围内，通常每天施用，持续的时间段为1至30天。优选的每日剂量是每天1至10mg，尽管在一些情况下可以使用每天最多40mg的较大剂量(在美国专利号6,120,766中描述)。

实验实施例

参考以下实验实施例进一步详细描述了本发明。提供这些实施例仅出于说明的目的，并且除非另有说明，否则它们不意图构成限制。因此，本发明决不应解释为限于以下实施例，而应解释为涵盖由于本文提供的教导而变得显而易见的任何和所有变型。

无需进一步描述，相信本领域普通技术人员可以使用前面的描述和以下说明性实施例来制备和利用本发明的化合物并实践所要求保护的方法。因此，以下工作实施例具体指出了本发明的优选实施方式，并且不应解释为以任何方式限制本公开内容的其余部分。

现在描述用于进行本文公开的实验的材料和方法。

-CAAR构建体

A)包括在PLA2R-CAAR构建体4027.CF12中的结构域

富含半胱氨酸的(CysR)结构域(蓖麻毒素B型凝集素结构域)(SEQ ID NO：1)AAGGGCATCTTCGTGATCCAGAGCGAGAGCCTGAAGAAGTGCATCCAGGCCGGCAAGAGCGTGCTGACCCTGGAAAATTGCAAGCAGGCCAACAAGCACATGCTGTGGAAATGGGTGTCCAACCACGGCCTGTTCAACATCGGCGGCTCTGGATGTCTGGGCCTGAATTTCTCTGCCCCTGAGCAGCCTCTGAGCCTGTACGAGTGTGATAGCACCCTGGTGTCCCTGAGATGGCGGTGCAACCGGAAGATGATCACAGGCCCTCTGCAGTACTCTGTGCAGGTCGCCCACGACAATACCGTGGTGGCCAGCAGAAAGTACATCCACAAGTGGATCAGCTACGGCAGCGGCGGAGGCGACATCTGTGAATAC

蓖麻毒素B型凝集素结构域和纤连蛋白II型结构域之间的接头(SEQ ID NO：2)

CTGCACAAGGATCTGCACACCATCAAGGGCAAC

纤连蛋白2型结构域(SEQ ID NO：3)

ACCCACGGAATGCCCTGCATGTTCCCGTTTCAGTACAACCACCAGTGGCACCACGAGTGCACCAGAGAAGGCAGAGAGGACGACCTGCTTTGGTGCGCCACAACCAGCAGATACGAGCGGGATGAGAAGTGGGGCTTCTGCCCTGAT

纤连蛋白II型结构域和C型凝集素结构域1之间的接头(SEQ ID NO：4)

CCTACCTCTGCCGAAGTGGGCTGCGATACCATCTGGGAGAAAGACCTG

C型凝集素结构域1(SEQ ID NO：5)

AACAGCCACATCTGCTACCAGTTCAACCTGCTGTCCAGCCTGTCTTGGAGCGAGGCCCACAGCAGCTGTCAAATGCAAGGCGGCACACTGCTGAGCATCACCGACGAGACAGAGGAAAACTTCATCCGCGAGCACATGAGCAGCAAGACCGTGGAAGTGTGGATGGGACTGAACCAGCTGGATGAGCATGCCGGATGGCAGTGGAGTGATGGCACCCCTCTGAACTACCTGAACTGGTCCCCTGAAGTGAACTTCGAGCCCTTCGTGGAAGATCACTGCGGCACCTTCAGCAGCTTCATGCCCAGCGCTTGGAGAAGCAGAGACTGCGAGAGCACCCTGCCTTACATCTGCAAG

C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2之间的接头(SEQ ID NO：6)

AAGTACCTGAACCACATCGACCACGAGATCGTGGAAAAGGACGCCTGGAAGTACTACGCCACACACTGCGAGCCTGGCTGGAACCCC

C型凝集素结构域2(SEQ ID NO：7)

TACAACCGGAACTGCTACAAGCTGCAGAAAGAGGAAAAGACCTGGCACGAGGCCCTGAGAAGCTGCCAGGCCGATAATAGCGCCCTGATCGACATCACAAGCCTGGCCGAGGTGGAATTTCTGGTCACTCTGCTGGGCGACGAGAACGCCTCTGAGACATGGATCGGCCTGTCCAGCAACAAGATCCCCGTGTCCTTCGAGTGGTCCAACGACAGCAGCGTGATCTTCACCAACTGGCACACCCTGGAACCTCACATCTTCCCCAACAGATCCCAGCTGTGTGTGTCCGCCGAGCAGTCTGAAGGCCACTGGAAAGTGAAGAACTGCGAGGAACGGCTGTTCTACATCTGTAAA

PLA2R CAAR构建体4027.CF12的细胞外结构域(SEQ ID NO：8；参见图2D)

AAGGGCATCTTCGTGATCCAGAGCGAGAGCCTGAAGAAGTGCATCCAGGCCGGCAAGAGCGTGCTGACCCTGGAAAATTGCAAGCAGGCCAACAAGCACATGCTGTGGAAATGGGTGTCCAACCACGGCCTGTTCAACATCGGCGGCTCTGGATGTCTGGGCCTGAATTTCTCTGCCCCTGAGCAGCCTCTGAGCCTGTACGAGTGTGATAGCACCCTGGTGTCCCTGAGATGGCGGTGCAACCGGAAGATGATCACAGGCCCTCTGCAGTACTCTGTGCAGGTCGCCCACGACAATACCGTGGTGGCCAGCAGAAAGTACATCCACAAGTGGATCAGCTACGGCAGCGGCGGAGGCGACATCTGTGAATACCTGCACAAGGATCTGCACACCATCAAGGGCAACACCCACGGAATGCCCTGCATGTTCCCGTTTCAGTACAACCACCAGTGGCACCACGAGTGCACCAGAGAAGGCAGAGAGGACGACCTGCTTTGGTGCGCCACAACCAGCAGATACGAGCGGGATGAGAAGTGGGGCTTCTGCCCTGATCCTACCTCTGCCGAAGTGGGCTGCGATACCATCTGGGAGAAAGACCTGAACAGCCACATCTGCTACCAGTTCAACCTGCTGTCCAGCCTGTCTTGGAGCGAGGCCCACAGCAGCTGTCAAATGCAAGGCGGCACACTGCTGAGCATCACCGACGAGACAGAGGAAAACTTCATCCGCGAGCACATGAGCAGCAAGACCGTGGAAGTGTGGATGGGACTGAACCAGCTGGATGAGCATGCCGGATGGCAGTGGAGTGATGGCACCCCTCTGAACTACCTGAACTGGTCCCCTGAAGTGAACTTCGAGCCCTTCGTGGAAGATCACTGCGGCACCTTCAGCAGCTTCATGCCCAGCGCTTGGAGAAGCAGAGACTGCGAGAGCACCCTGCCTTACATCTGCAAGAAGTACCTGAACCACATCGACCACGAGATCGTGGAAAAGGACGCCTGGAAGTACTACGCCACACACTGCGAGCCTGGCTGGAACCCCTACAACCGGAACTGCTACAAGCTGCAGAAAGAGGAAAAGACCTGGCACGAGGCCCTGAGAAGCTGCCAGGCCGATAATAGCGCCCTGATCGACATCACAAGCCTGGCCGAGGTGGAATTTCTGGTCACTCTGCTGGGCGACGAGAACGCCTCTGAGACATGGATCGGCCTGTCCAGCAACAAGATCCCCGTGTCCTTCGAGTGGTCCAACGACAGCAGCGTGATCTTCACCAACTGGCACACCCTGGAACCTCACATCTTCCCCAACAGATCCCAGCTGTGTGTGTCCGCCGAGCAGTCTGAAGGCCACTGGAAAGTGAAGAACTGCGAGGAACGGCTGTTCTACATCTGTAAA

构建体4027.CF12的细胞外结构域(SEQ ID NO：70)

KGIFVIQSESLKKCIQAGKSVLTLENCKQANKHMLWKWVSNHGLFNIGGSGCLGLNFSAPEQPLSLYECDSTLVSLRWRCNRKMITGPLQYSVQVAHDNTVVASRKYIHKWISYGSGGGDICEYLHKDLHTIKGNTHGMPCMFPFQYNHQWHHECTREGREDDLLWCATTSRYERDEKWGFCPDPTSAEVGCDTIWEKDLNSHICYQFNLLSSLSWSEAHSSCQMQGGTLLSITDETEENFIREHMSSKTVEVWMGLNQLDEHAGWQWSDGTPLNYLNWSPEVNFEPFVEDHCGTFSSFMPSAWRSRDCESTLPYICKKYLNHIDHEIVEKDAWKYYATHCEPGWNPYNRNCYKLQKEEKTWHEALRSCQADNSALIDITSLAEVEFLVTLLGDENASETWIGLSSNKIPVSFEWSNDSSVIFTNWHTLEPHIFPNRSQLCVSAEQSEGHWKVKNCEERLFYICKKAGHVLSDAESGCQ

C型凝集素结构域2和CD8铰链之间的接头(SEQ ID NO：9)

AAGGCCGGCCACGTGCTGTCCGATGCCGAGAGTGGATGTCAATCCGGA

CD8铰链(SEQ ID NO：10)

ACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGT

PLA2R-CAAR构建体4027.CF12的核酸序列(SEQ ID NO：11)

ATGCTGCTGAGCCCTAGCCTGCTGCTGCTCCTGCTTCTTGGAGCCCCTAGAGGATGTGCCGGATCTGAAGGTGTTGCCGCCGCTCTGACACCCGAGAGACTGCTGGAATGGCAGGACAAGGGCATCTTCGTGATCCAGAGCGAGAGCCTGAAGAAGTGCATCCAGGCCGGCAAGAGCGTGCTGACCCTGGAAAATTGCAAGCAGGCCAACAAGCACATGCTGTGGAAATGGGTGTCCAACCACGGCCTGTTCAACATCGGCGGCTCTGGATGTCTGGGCCTGAATTTCTCTGCCCCTGAGCAGCCTCTGAGCCTGTACGAGTGTGATAGCACCCTGGTGTCCCTGAGATGGCGGTGCAACCGGAAGATGATCACAGGCCCTCTGCAGTACTCTGTGCAGGTCGCCCACGACAATACCGTGGTGGCCAGCAGAAAGTACATCCACAAGTGGATCAGCTACGGCAGCGGCGGAGGCGACATCTGTGAATACCTGCACAAGGATCTGCACACCATCAAGGGCAACACCCACGGAATGCCCTGCATGTTCCCGTTTCAGTACAACCACCAGTGGCACCACGAGTGCACCAGAGAAGGCAGAGAGGACGACCTGCTTTGGTGCGCCACAACCAGCAGATACGAGCGGGATGAGAAGTGGGGCTTCTGCCCTGATCCTACCTCTGCCGAAGTGGGCTGCGATACCATCTGGGAGAAAGACCTGAACAGCCACATCTGCTACCAGTTCAACCTGCTGTCCAGCCTGTCTTGGAGCGAGGCCCACAGCAGCTGTCAAATGCAAGGCGGCACACTGCTGAGCATCACCGACGAGACAGAGGAAAACTTCATCCGCGAGCACATGAGCAGCAAGACCGTGGAAGTGTGGATGGGACTGAACCAGCTGGATGAGCATGCCGGATGGCAGTGGAGTGATGGCACCCCTCTGAACTACCTGAACTGGTCCCCTGAAGTGAACTTCGAGCCCTTCGTGGAAGATCACTGCGGCACCTTCAGCAGCTTCATGCCCAGCGCTTGGAGAAGCAGAGACTGCGAGAGCACCCTGCCTTACATCTGCAAGAAGTACCTGAACCACATCGACCACGAGATCGTGGAAAAGGACGCCTGGAAGTACTACGCCACACACTGCGAGCCTGGCTGGAACCCCTACAACCGGAACTGCTACAAGCTGCAGAAAGAGGAAAAGACCTGGCACGAGGCCCTGAGAAGCTGCCAGGCCGATAATAGCGCCCTGATCGACATCACAAGCCTGGCCGAGGTGGAATTTCTGGTCACTCTGCTGGGCGACGAGAACGCCTCTGAGACATGGATCGGCCTGTCCAGCAACAAGATCCCCGTGTCCTTCGAGTGGTCCAACGACAGCAGCGTGATCTTCACCAACTGGCACACCCTGGAACCTCACATCTTCCCCAACAGATCCCAGCTGTGTGTGTCCGCCGAGCAGTCTGAAGGCCACTGGAAAGTGAAGAACTGCGAGGAACGGCTGTTCTACATCTGTAAAAAGGCCGGCCACGTGCTGTCCGATGCCGAGAGTGGATGTCAATCCGGAACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA

PLA2R-CAAR的氨基酸序列(构建体4027.CF12；SEQ ID NO：12)

MLLSPSLLLLLLLGAPRGCAGSEGVAAALTPERLLEWQDKGIFVIQSESLKKCIQAGKSVLTLENCKQANKHMLWKWVSNHGLFNIGGSGCLGLNFSAPEQPLSLYECDSTLVSLRWRCNRKMITGPLQYSVQVAHDNTVVASRKYIHKWISYGSGGGDICEYLHKDLHTIKGNTHGMPCMFPFQYNHQWHHECTREGREDDLLWCATTSRYERDEKWGFCPDPTSAEVGCDTIWEKDLNSHICYQFNLLSSLSWSEAHSSCQMQGGTLLSITDETEENFIREHMSSKTVEVWMGLNQLDEHAGWQWSDGTPLNYLNWSPEVNFEPFVEDHCGTFSSFMPSAWRSRDCESTLPYICKKYLNHIDHEIVEKDAWKYYATHCEPGWNPYNRNCYKLQKEEKTWHEALRSCQADNSALIDITSLAEVEFLVTLLGDENASETWIGLSSNKIPVSFEWSNDSSVIFTNWHTLEPHIFPNRSQLCVSAEQSEGHWKVKNCEERLFYICKKAGHVLSDAESGCQSGTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

B)包括在PLA2R-CAAR构建体4028.CF123中的结构域

富含半胱氨酸的(CysR)结构域(蓖麻毒素B型凝集素结构域)(SEQ ID NO：1)

蓖麻毒素B型凝集素结构域和纤连蛋白II型结构域之间的接头(SEQ ID NO：2)

纤连蛋白II型结构域(SEQ ID NO：3)

纤连蛋白型II结构域和C型凝集素结构域1之间的接头(SEQ ID NO：4)

C型凝集素1结构域(SEQ ID NO：5)

C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2之间的接头(SEQ ID NO：6)

C型凝集素结构域2(SEQ ID NO：7)

C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3之间的接头(SEQ ID NO：13)

AAGGCCGGCCACGTGCTGTCCGATGCCGAGAGTGGATGTCAAGAAGGCTGGGAGAGA

C型凝集素结构域3(SEQ ID NO：14)

CACGGCGGCTTTTGCTACAAGATCGACACCGTGCTGCGGAGCTTCGATCAGGCCAGCAGCGGCTACTATTGCCCTCCTGCTCTGGTCACCATCACCAACAGATTCGAGCAGGCCTTCATCACCAGCCTGATCAGCAGCGTCGTGAAGATGAAGGACAGCTACTTCTGGATCGCCCTGCAGGACCAGAACGACACCGGCGAGTACACATGGAAGCCCGTGGGACAGAAACCCGAGCCTGTGCAGTACACCCACTGGAACACACACCAGCCTAGATACTCCGGCGGCTGCGTGGCAATGAGAGGCAGACATCCTCTCGGCAGATGGGAAGTGAAGCACTGTCGGCACTTCAAGGCCATGTCTCTGTGC

PLA2R的细胞外结构域(SEQ ID NO：15；参见图2D，构建体4028.CF123)

AAGGGCATCTTCGTGATCCAGAGCGAGAGCCTGAAGAAGTGCATCCAGGCCGGCAAGAGCGTGCTGACCCTGGAAAATTGCAAGCAGGCCAACAAGCACATGCTGTGGAAATGGGTGTCCAACCACGGCCTGTTCAACATCGGCGGCTCTGGATGTCTGGGCCTGAATTTCTCTGCCCCTGAGCAGCCTCTGAGCCTGTACGAGTGTGATAGCACCCTGGTGTCCCTGAGATGGCGGTGCAACCGGAAGATGATCACAGGCCCTCTGCAGTACTCTGTGCAGGTCGCCCACGACAATACCGTGGTGGCCAGCAGAAAGTACATCCACAAGTGGATCAGCTACGGCAGCGGCGGAGGCGACATCTGTGAATACCTGCACAAGGATCTGCACACCATCAAGGGCAACACCCACGGAATGCCCTGCATGTTCCCGTTTCAGTACAACCACCAGTGGCACCACGAGTGCACCAGAGAAGGCAGAGAGGACGACCTGCTTTGGTGCGCCACAACCAGCAGATACGAGCGGGATGAGAAGTGGGGCTTCTGCCCTGATCCTACCTCTGCCGAAGTGGGCTGCGATACCATCTGGGAGAAAGACCTGAACAGCCACATCTGCTACCAGTTCAACCTGCTGTCCAGCCTGTCTTGGAGCGAGGCCCACAGCAGCTGTCAAATGCAAGGCGGCACACTGCTGAGCATCACCGACGAGACAGAGGAAAACTTCATCCGCGAGCACATGAGCAGCAAGACCGTGGAAGTGTGGATGGGACTGAACCAGCTGGATGAGCATGCCGGATGGCAGTGGAGTGATGGCACCCCTCTGAACTACCTGAACTGGTCCCCTGAAGTGAACTTCGAGCCCTTCGTGGAAGATCACTGCGGCACCTTCAGCAGCTTCATGCCCAGCGCTTGGAGAAGCAGAGACTGCGAGAGCACCCTGCCTTACATCTGCAAGAAGTACCTGAACCACATCGACCACGAGATCGTGGAAAAGGACGCCTGGAAGTACTACGCCACACACTGCGAGCCTGGCTGGAACCCCTACAACCGGAACTGCTACAAGCTGCAGAAAGAGGAAAAGACCTGGCACGAGGCCCTGAGAAGCTGCCAGGCCGATAATAGCGCCCTGATCGACATCACAAGCCTGGCCGAGGTGGAATTTCTGGTCACTCTGCTGGGCGACGAGAACGCCTCTGAGACATGGATCGGCCTGTCCAGCAACAAGATCCCCGTGTCCTTCGAGTGGTCCAACGACAGCAGCGTGATCTTCACCAACTGGCACACCCTGGAACCTCACATCTTCCCCAACAGATCCCAGCTGTGTGTGTCCGCCGAGCAGTCTGAAGGCCACTGGAAAGTGAAGAACTGCGAGGAACGGCTGTTCTACATCTGTAAAAAGGCCGGCCACGTGCTGTCCGATGCCGAGAGTGGATGTCAAGAAGGCTGGGAGAGACACGGCGGCTTTTGCTACAAGATCGACACCGTGCTGCGGAGCTTCGATCAGGCCAGCAGCGGCTACTATTGCCCTCCTGCTCTGGTCACCATCACCAACAGATTCGAGCAGGCCTTCATCACCAGCCTGATCAGCAGCGTCGTGAAGATGAAGGACAGCTACTTCTGGATCGCCCTGCAGGACCAGAACGACACCGGCGAGTACACATGGAAGCCCGTGGGACAGAAACCCGAGCCTGTGCAGTACACCCACTGGAACACACACCAGCCTAGATACTCCGGCGGCTGCGTGGCAATGAGAGGCAGACATCCTCTCGGCAGATGGGAAGTGAAGCACTGTCGGCACTTCAAGGCCATGTCTCTGTGC

构建体4028.CF123的细胞外结构域(SEQ ID NO：71)

KGIFVIQSESLKKCIQAGKSVLTLENCKQANKHMLWKWVSNHGLFNIGGSGCLGLNFSAPEQPLSLYECDSTLVSLRWRCNRKMITGPLQYSVQVAHDNTVVASRKYIHKWISYGSGGGDICEYLHKDLHTIKGNTHGMPCMFPFQYNHQWHHECTREGREDDLLWCATTSRYERDEKWGFCPDPTSAEVGCDTIWEKDLNSHICYQFNLLSSLSWSEAHSSCQMQGGTLLSITDETEENFIREHMSSKTVEVWMGLNQLDEHAGWQWSDGTPLNYLNWSPEVNFEPFVEDHCGTFSSFMPSAWRSRDCESTLPYICKKYLNHIDHEIVEKDAWKYYATHCEPGWNPYNRNCYKLQKEEKTWHEALRSCQADNSALIDITSLAEVEFLVTLLGDENASETWIGLSSNKIPVSFEWSNDSSVIFTNWHTLEPHIFPNRSQLCVSAEQSEGHWKVKNCEERLFYICKKAGHVLSDAESGCQEGWERHGGFCYKIDTVLRSFDQASSGYYCPPALVTITNRFEQAFITSLISSVVKMKDSYFWIALQDQNDTGEYTWKPVGQKPEPVQYTHWNTHQPRYSGGCVAMRGRHPLGRWEVKHCRHFKAMSLCKQPVENQEKAEYEERWPFHPCYL

C型凝集素结构域3和CD8铰链之间的接头(SEQ ID NO：16)

AAGCAGCCCGTGGAAAATCAAGAGAAGGCCGAGTACGAGGAACGCTGGCCTTTTCACCCTTGCTACCTGTCCGGA

CD8铰链(SEQ ID NO：10)

PLA2R-CAAR的核酸序列(构建体4028.CF123；SEQ ID NO：17)

ATGCTGCTGAGCCCTAGCCTGCTGCTGCTCCTGCTTCTTGGAGCCCCTAGAGGATGTGCCGGATCTGAAGGTGTTGCCGCCGCTCTGACACCCGAGAGACTGCTGGAATGGCAGGACAAGGGCATCTTCGTGATCCAGAGCGAGAGCCTGAAGAAGTGCATCCAGGCCGGCAAGAGCGTGCTGACCCTGGAAAATTGCAAGCAGGCCAACAAGCACATGCTGTGGAAATGGGTGTCCAACCACGGCCTGTTCAACATCGGCGGCTCTGGATGTCTGGGCCTGAATTTCTCTGCCCCTGAGCAGCCTCTGAGCCTGTACGAGTGTGATAGCACCCTGGTGTCCCTGAGATGGCGGTGCAACCGGAAGATGATCACAGGCCCTCTGCAGTACTCTGTGCAGGTCGCCCACGACAATACCGTGGTGGCCAGCAGAAAGTACATCCACAAGTGGATCAGCTACGGCAGCGGCGGAGGCGACATCTGTGAATACCTGCACAAGGATCTGCACACCATCAAGGGCAACACCCACGGAATGCCCTGCATGTTCCCGTTTCAGTACAACCACCAGTGGCACCACGAGTGCACCAGAGAAGGCAGAGAGGACGACCTGCTTTGGTGCGCCACAACCAGCAGATACGAGCGGGATGAGAAGTGGGGCTTCTGCCCTGATCCTACCTCTGCCGAAGTGGGCTGCGATACCATCTGGGAGAAAGACCTGAACAGCCACATCTGCTACCAGTTCAACCTGCTGTCCAGCCTGTCTTGGAGCGAGGCCCACAGCAGCTGTCAAATGCAAGGCGGCACACTGCTGAGCATCACCGACGAGACAGAGGAAAACTTCATCCGCGAGCACATGAGCAGCAAGACCGTGGAAGTGTGGATGGGACTGAACCAGCTGGATGAGCATGCCGGATGGCAGTGGAGTGATGGCACCCCTCTGAACTACCTGAACTGGTCCCCTGAAGTGAACTTCGAGCCCTTCGTGGAAGATCACTGCGGCACCTTCAGCAGCTTCATGCCCAGCGCTTGGAGAAGCAGAGACTGCGAGAGCACCCTGCCTTACATCTGCAAGAAGTACCTGAACCACATCGACCACGAGATCGTGGAAAAGGACGCCTGGAAGTACTACGCCACACACTGCGAGCCTGGCTGGAACCCCTACAACCGGAACTGCTACAAGCTGCAGAAAGAGGAAAAGACCTGGCACGAGGCCCTGAGAAGCTGCCAGGCCGATAATAGCGCCCTGATCGACATCACAAGCCTGGCCGAGGTGGAATTTCTGGTCACTCTGCTGGGCGACGAGAACGCCTCTGAGACATGGATCGGCCTGTCCAGCAACAAGATCCCCGTGTCCTTCGAGTGGTCCAACGACAGCAGCGTGATCTTCACCAACTGGCACACCCTGGAACCTCACATCTTCCCCAACAGATCCCAGCTGTGTGTGTCCGCCGAGCAGTCTGAAGGCCACTGGAAAGTGAAGAACTGCGAGGAACGGCTGTTCTACATCTGTAAAAAGGCCGGCCACGTGCTGTCCGATGCCGAGAGTGGATGTCAAGAAGGCTGGGAGAGACACGGCGGCTTTTGCTACAAGATCGACACCGTGCTGCGGAGCTTCGATCAGGCCAGCAGCGGCTACTATTGCCCTCCTGCTCTGGTCACCATCACCAACAGATTCGAGCAGGCCTTCATCACCAGCCTGATCAGCAGCGTCGTGAAGATGAAGGACAGCTACTTCTGGATCGCCCTGCAGGACCAGAACGACACCGGCGAGTACACATGGAAGCCCGTGGGACAGAAACCCGAGCCTGTGCAGTACACCCACTGGAACACACACCAGCCTAGATACTCCGGCGGCTGCGTGGCAATGAGAGGCAGACATCCTCTCGGCAGATGGGAAGTGAAGCACTGTCGGCACTTCAAGGCCATGTCTCTGTGCAAGCAGCCCGTGGAAAATCAAGAGAAGGCCGAGTACGAGGAACGCTGGCCTTTTCACCCTTGCTACCTGTCCGGAACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA

PLA2R-CAAR的氨基酸序列(构建体4028.CF123；SEQ ID NO：18)

MLLSPSLLLLLLLGAPRGCAGSEGVAAALTPERLLEWQDKGIFVIQSESLKKCIQAGKSVLTLENCKQANKHMLWKWVSNHGLFNIGGSGCLGLNFSAPEQPLSLYECDSTLVSLRWRCNRKMITGPLQYSVQVAHDNTVVASRKYIHKWISYGSGGGDICEYLHKDLHTIKGNTHGMPCMFPFQYNHQWHHECTREGREDDLLWCATTSRYERDEKWGFCPDPTSAEVGCDTIWEKDLNSHICYQFNLLSSLSWSEAHSSCQMQGGTLLSITDETEENFIREHMSSKTVEVWMGLNQLDEHAGWQWSDGTPLNYLNWSPEVNFEPFVEDHCGTFSSFMPSAWRSRDCESTLPYICKKYLNHIDHEIVEKDAWKYYATHCEPGWNPYNRNCYKLQKEEKTWHEALRSCQADNSALIDITSLAEVEFLVTLLGDENASETWIGLSSNKIPVSFEWSNDSSVIFTNWHTLEPHIFPNRSQLCVSAEQSEGHWKVKNCEERLFYICKKAGHVLSDAESGCQEGWERHGGFCYKIDTVLRSFDQASSGYYCPPALVTITNRFEQAFITSLISSVVKMKDSYFWIALQDQNDTGEYTWKPVGQKPEPVQYTHWNTHQPRYSGGCVAMRGRHPLGRWEVKHCRHFKAMSLCKQPVENQEKAEYEERWPFHPCYLSGTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

pTRPE.CysR.CD8H.BBzCAAR(构建体C)的核苷酸序列(SEQ ID NO：25)

IgG信号肽 1-57(SEQ ID NO：46)

CysR 64-459(SEQ ID NO：47)

CD8铰链区 466-630(SEQ ID NO：64)

CD8 TMD 631-702(SEQ ID NO：20)

703-828(SEQ ID NO：66)

CD3ζ细胞内结构域 829-1164(SEQ ID NO：24)

终止密码子 1165-1167

pTRPE.CysR.CD8H.BBz CAAR(构建体C)的氨基酸序列(SEQ ID NO:26)

IgG信号肽 1-19(SEQ ID NO：48)

CysR 22-153(SEQ ID NO：49)

CD8铰链区 156-210(SEQ ID NO：44)

CD8 TMD 211-234(SEQ ID NO：19)

235-276(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 277-388(SEQ ID NO：45)

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1.CD8H.BBzCAAR(构建体CF1)的核苷酸序列(SEQ ID NO：27)

IgG信号肽 1-57(SEQ ID NO：46)

CysR-FNII-CTLD1 64-1053(SEQ ID NO：50)

CD8铰链区 1060-1224(SEQ ID NO：64)

CD8 TMD 1225-1296(SEQ ID NO：20)

1297-1422(SEQ ID NO：66)

CD3ζ细胞内结构域 1423-1758(SEQ ID NO：24)

终止密码子 1759-1761

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1.CD8H.BBzCAAR(构建体CF1)的氨基酸序列(SEQ ID NO：28)

IgG信号肽 1-19(SEQ ID NO：48)

CysR-FNII-CTLD1 22-351(SEQ ID NO：51)

CD8铰链区 354-408(SEQ ID NO：43)

CD8 TMD 409-432(SEQ ID NO：19)

433-474(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 475-586(SEQ ID NO：45)

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1-3.GS接头.BBz CAAR(构建体CF123)的核苷酸序列(SEQID NO：29)

IgG信号肽 1-57(SEQ ID NO：46)

CysR-FNII-CTLD1-3 64-1911(SEQ ID NO：52)

GS接头 1918-1947(SEQ ID NO：68)

CD8 TMD 1954-2025(SEQ ID NO：20)

2026-2151(SEQ ID NO：66)

CD3ζ细胞内结构域 2152-2487(SEQ ID NO：24)

终止密码子 2488-2490

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1-3.GS接头.BBz CAAR(构建体CF123)的氨基酸序列(SEQID NO：30)

IgG信号肽 1-19(SEQ ID NO：48)

CysR-FNII-CTLD1-3 22-637(SEQ ID NO：53)

GS接头 640-649(SEQ ID NO：69)

CD8 TMD 652-675(SEQ ID NO：19)

676-717(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 718-829(SEQ ID NO：45)

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1-3 7.GS接头.BBz CAAR(构建体CF1237)的核苷酸序列(SEQ ID NO：31)

IgG信号肽 1-57(SEQ ID NO：46)

CysR-FNII-CTLD1-3 7 64-2331(SEQ ID NO：54)

GS接头 2338-2367(SEQ ID NO：68)

CD8 TMD 2374-2445(SEQ ID NO：20)

2446-2571(SEQ ID NO：66)

CD3ζ细胞内结构域 2572-2907(SEQ ID NO：24)

终止密码子 2908-2910

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1-3 7.GS接头.BBz CAAR(构建体CF1237)的氨基酸序列(SEQ ID NO：32)

IgG信号肽 1-19(SEQ ID NO：48)

CysR-FNII-CTLD1-3 7 22-777(SEQ ID NO：55)

GS接头 780-789(SEQ ID NO：69)

CD8 TMD 792-815(SEQ ID NO：19)

816-857(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 858-969(SEQ ID NO：45)

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1 7.GS接头.BBzCAAR(构建体CF17)的核苷酸序列(SEQ IDNO：33)

IgG信号肽 1-57(SEQ ID NO：46)

CysR-FNII-CTLD1 7 64-1473(SEQ ID NO：56)

GS接头 1480-1509(SEQ ID NO：68)

CD8 TMD 1516-1587(SEQ ID NO：20)

1588-1713(SEQ ID NO：66)

CD3ζ细胞内结构域 1714-2049(SEQ ID NO：24)

终止密码子 2050-2052

pTRPE.CysR-FNII-CTLD1 7.GS接头.BBzCAAR(构建体CF17)的氨基酸序列(SEQ IDNO：34)

IgG信号肽 1-19(SEQ ID NO：48)

CysR-FNII-CTLD1 7 22-491(SEQ ID NO：57)

GS接头 494-503(SEQ ID NO：69)

CD8 TMD 506-529(SEQ ID NO：19)

530-571(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 572-683(SEQ ID NO：45)

pTRPE.CysR-CTLD1 7.GS接头.BBz CAAR(构建体C17)的核苷酸序列(SEQ ID NO：35)

IgG信号肽 1-57(SEQ ID NO：46)

CysR-CTLD1 7 64-1314(SEQ ID NO：58)

GS接头 1321-1350(SEQ ID NO：68)

CD8 TMD 1357-1428(SEQ ID NO：20)

4-1BB细胞内结构域 1429-1554(SEQ ID NO：66)

CD3ζ细胞内结构域 1555-1890(SEQ ID NO：24)

终止密码子 1891-1893

pTRPE.CysR-CTLD1 7.GS接头.BBz CAAR(构建体C17)的氨基酸序列(SEQ ID NO：36)

IgG信号肽 1-19(SEQ ID NO：48)

CysR-CTLD1 7 22-438(SEQ ID NO：59)

GS接头 441-450(SEQ ID NO：69)

CD8 TMD 453-476(SEQ ID NO：19)

477-518(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 519-630(SEQ ID NO：45)

4025pTRPE.CysR.CD8H.BBzCAAR(构建体4025.C)的核苷酸序列(SEQ ID NO：37)

PLA2R信号肽 1-60(SEQ ID NO：65)

PLA2R前肽 61-117(SEQ ID NO：67)

CysR 118-504(SEQ ID NO：60)

CD8铰链区 511-645(SEQ ID NO：42)

CD8 TMD 646-717(SEQ ID NO：20)

718-843(SEQ ID NO：22)

CD3ζ细胞内结构域 844-1179(SEQ ID NO：72)

终止密码子 1180-1182

4025pTRPE.CysR.CD8H.BBzCAAR(构建体4025.C)的氨基酸序列(SEQ ID NO：38)

PLA2R信号肽 1-20

CysR 40-168(SEQ ID NO：61)

CD8铰链区 171-215(SEQ ID NO：43)

CD8 TMD 216-239(SEQ ID NO：19)

240-281(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 282-393(SEQ ID NO：23)

4026pTRPE.CysR-FNII-CTLD1.CD8H.BBz CAAR(构建体4026.CF1)的核苷酸序列(SEQ ID NO：39)

PLA2R信号肽 1-60(SEQ ID NO：65)

PLA2R前肽 61-117

CysR-FNII-CTLD1 118-1143(SEQ ID NO：62)

CD8铰链区 1149-1284(SEQ ID NO：42)

CD8 TMD 1285-1356(SEQ ID NO：20)

1357-1482(SEQ ID NO：22)

CD3ζ细胞内结构域 1483-1818(SEQ ID NO：72)

终止密码子 1819-1821

4026pTRPE.CysR-FNII-CTLD1.CD8H.BBz CAAR(构建体4026.CF1)的氨基酸序列(SEQ ID NO：40)

PLA2R信号肽 1-20

CysR-FNII-CTLD1 40-381(SEQ ID NO：63)

CD8铰链区 384-428(SEQ ID NO：43)

CD8 TMD 429-452(SEQ ID NO：19)

453-494(SEQ ID NO：21)

CD3ζ细胞内结构域 495-606(SEQ ID NO：23)

>BC144631.1智人磷脂酶A2受体1，180kDa，mRNA(cDNA克隆MGC:178179IMAGE:9053162)，完整cds(SEQ ID NO：41)

-生产基于HIV-1的自灭活慢病毒

在含有Lipofectamine 2000的复合物中用感兴趣的pTRPE基因、包装质粒pGAG-Pol和pRSV-Rev以及包膜质粒pCIVSVg的混合物以90％的融合率转染293T细胞。在24和48小时后收获含有上清液的慢病毒，通过0.45微米的聚醚砜(PES)膜过滤，在12,000×g下于4℃浓缩24小时，并且在-80℃下存储。

-原代人T细胞的刺激、转导和扩增

将原代人T细胞在含有5％HSAB、2.6％补充剂、1％青霉素/链霉素和1％glutamax的CTS OpTmizer T细胞扩增SFM中培养。用抗CD3和抗CD28珠子以3：1的珠子：细胞比例刺激大部分(bulk)T细胞(CD4⁺和CD8⁺)。在培养基中补充100IU/ml白介素2。在刺激后24小时，用CAAR转导或模拟转导10⁶个T细胞。监测T细胞的扩增，持续8-12天。通过从患有原发性膜性肾病的患者血浆和同种型对照抗体中纯化的IgG的流式细胞术验证CAAR构建体的细胞表面表达。

-使用NFAT-GFP Jurkat T细胞进行报道基因测定

在10％下使用RPMI1640、HEPES 10mM和FBS在完全潮湿的环境中用5％CO₂在37℃下培养Jurkat细胞。为了测试通过CAAR-靶标相互作用的信号转导，将CAAR构建体在Jurkat报道细胞系中表达，该细胞系已选择(G418)用于在NFAT响应元件的控制下稳定表达GFP，促进CAAR参与后以及PLCγ和IP3介导的细胞内钙释放后的GFP表达。用CAAR慢病毒以感染重复数为3转导Jurkat细胞，并且在>72小时后通过流式细胞术用抗PLA2R单克隆抗体

和从原发性膜性肾病患者血浆中纯化的IgG验证了CAAR构建体的表达。为了表征CAAR-靶标相互作用，如下所述将CAAR Jurkat细胞与板结合的抗PLA2R单克隆抗体在37℃下温育6小时。通过流式细胞术验证GFP表达。

-刺激

用编码PLA2R CAAR构建体C、CF1、CF123、CF1237、CD17、C17、4025.C、4026.CF1、4027.CF12、4028.CF123的每种慢病毒转导100万个Jurkat-NFAT-GFP细胞，并使用未转导的Jurkat细胞作为阴性对照。将转导的和未转导的细胞以在100μl细胞培养基中2×10⁵个细胞/孔接种于96孔板中。

刺激条件如下：

–Novus单克隆抗体(mAb)抗PLA2R，0.5μg/孔或1μg/孔；克隆12-6-5

–Sigma多克隆抗体抗PLA2R 0.5μg/孔；

–Novus mAb抗PLA2R的同种型抗体(0.5μg/染色)

–仅培养基(无刺激)

–PMA/离子霉素(最大激活)

或者，将转导的和未转导的细胞以在100μl细胞培养基中5×10⁴个细胞/孔接种在96孔板中。

将细胞和抗体在37℃下温育6小时。在6小时结束时，通过流式细胞术检查细胞中NFAT-GFP的表达，作为T细胞激活的指示。

-体外IFNγ细胞因子测定

将PLA2R CAAR或模拟转导的原代人T细胞在以10μg/ml涂有从原发性膜性肾病患者血浆中纯化的IgG或对照人IgG的96孔板中以5×10⁴/孔培养24小时。然后收获培养上清液以通过ELISA检测IFN-γ。

-CAAR T细胞的体内效力测试

为了测试体内效力，产生靶向人PLA2R的表达抗PLA2R BCR的细胞，例如杂交瘤细胞或人细胞系。用表达磕头虫(click-beetle)绿色或磕头虫红色荧光素酶和GFP的慢病毒载体转导表达PLA2R BCR的细胞。为了测试CAAR-T细胞对PLA2R特异性靶细胞的效力，在每天用600mg/kg静脉内免疫球蛋白预处理小鼠，持续2天，以最小化FcγR-介导的对表达BCR的细胞的毒性之后，将约2×10⁵抗PLA2R细胞静脉注射到NSG小鼠中(6-8周龄)。在4-5天之后，静脉注射PLA2R CAAR T细胞(每只小鼠约10⁷个细胞)。在注射后每2-3天对生物发光和/或血清自身抗体进行定量，以监测CAAR T细胞的效力。

现在描述实验结果。

实施例1：

将代表PLA2R不同结构域的四个PLA2R构建体克隆到CAAR表达系统中(4025.C、4026.CF1、构建体4027.CF12和4028.CF123)。在图1中图解了本发明中特别感兴趣的PLA2R的细胞外结构域的一般示意图。N端结构域是被患者血清抗体识别的免疫显性表位。CysR和CTLD3结构域相互作用以形成可以更好地呈现免疫显性表位的环状结构；因此产生包括CysR至CTLD3结构域的构建体。除了富含半胱氨酸的结构域以外，还报告了血清抗体对C型凝集素结构域1和7的免疫反应性。

在图2A-2G中图解了PLA2R CAAR构建体。所有的构建体均使用CD8跨膜结构域和BBZ细胞内结构域，并且区别在于其细胞外组成。

构建体4025.C由富含半胱氨酸的细胞外结构域、CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域组成(图2A，SEQ ID NO：37&38)。

构建体4026.CF1由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域和C型凝集素1结构域组成。构建体4026.CF1还包括CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图2B，SEQ ID NO：39&40)。

构建体4027.CF12由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域、C型凝集素1结构域和C型凝集素2结构域组成。构建体4027.CF12还包括CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图2C，SEQ ID NO：11&12)。

构建体4028.CF123由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域、C型凝集素1结构域、C型凝集素2结构域和C型凝集素3结构域组成。构建体4028.CF123还包括CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图2D，SEQID NO：17&18)。在图3A中显示了PLA2R CAAR构建体4028.CF123的详细图谱。

为了测试CAAR分子是否具有功能，进行了以下实验：

用编码4025.C、4027.CF12、4028.CF123的每种慢病毒转导100万Jurkat-NFAT-GFP细胞，并将未转导的Jurkat细胞用作阴性对照。将转导的和未转导的细胞以在100ul细胞培养基中2x10⁵个细胞/孔接种在96孔板中。图4显示了PLA2R CAAR表达。通过用与PE缀合的可溶性抗PLA2R单克隆抗体染色来测量由不同PLA2R慢病毒构建体转导的Jurkat NFAT-GFP细胞对PLA2R CAAR的表达。携带构建体4027.CF12或4028.CF123的Jurkat T细胞，而不是携带构建体4025.C的T细胞(其不包括CTLD2结构域，并且因此无法通过所使用的mAb检测)展现出CAAR的可检测的表面表达。

图5和6显示了通过用指示的构建体转导的Jurkat细胞的GFP表达来激活T细胞。在图5中显示了阴性和阳性对照。在图6中显示了测试样品。

将细胞和抗体在37℃下温育6小时。在6小时结束时，检查细胞中NFAT-GFP的表达，作为T细胞激活的指示。

图5描绘了使用同种型对照(上图，阴性对照)或PMA+离子霉素(下图，阳性对照)的PLA2R CAAR T细胞激活的阴性和阳性对照。

图6图解了通过Jurkat NFAT-GFP细胞的GFP表达测量的特异性抗体对PLA2R CAART细胞的激活(6小时激活)。在暴露于单克隆抗PLA2R Mab或多克隆抗PLA2R Ab后，在构建体4025.C和未转导的细胞中均未见T细胞激活的证据。使用构建体4027.CF12和4028.CF123观察到响应于单克隆抗PLA2R Ab的交联而不是多克隆抗PLA2R Ab的交联的特异性T细胞激活。

实施例2：

本文设计并产生了六个另外的PLA2R CAAR构建体。构建体C由富含半胱氨酸的结构域、CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域组成(图2A，SEQ ID NO：25&26)。

构建体CF1由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域和C型凝集素1结构域组成。构建体CF1还包括CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图2B，SEQ ID NO：27&28)。

构建体CF123由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域、C型凝集素1结构域、C型凝集素2结构域和C型凝集素3结构域组成。构建体CF123中还包括GS接头、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图2C，SEQ ID NO：29&30)。

构建体CF1237由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域、C型凝集素1结构域、C型凝集素2结构域、C型凝集素3结构域和C型凝集素7结构域组成。构建体CF1237中另外包括GS接头、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图2D，SEQ ID NO：31&32)。

构建体CF17由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、纤连蛋白II结构域、C型凝集素1结构域和C型凝集素7结构域组成。构建体CF17还包括GS接头、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图7E，SEQ ID NO：33&34)。

构建体C17由包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域、C型凝集素1结构域和C型凝集素7结构域组成。构建体C17还包括GS接头、CD8跨膜结构域、4-1BB细胞内结构域和CD3ζ信号传导结构域(图7F，SEQ ID NO：35&36)。

将各种PLA2R CAAR构建体转导至Jurkat细胞和原代人T细胞中。使用MN患者IgG，随后使用APC标记的抗人IgG二抗，通过流式细胞术评估PLA2R CAAR的表面表达。所有转导的Jurkat(图7A)和原代人T细胞(图7B)但不包括未转导的对照细胞，均展现出可检测到的CAAR构建体的表面表达。

为了评估模拟抗PLA2R B细胞的表面的结合板的抗PLA2R IgG是否会导致CAAR T细胞激活，将5×10⁴个JurkatNFAT-GFP报道基因细胞在涂有10μg/ml MN患者IgG或对照人IgG的96孔板上培养6小时。然后收获细胞用于流式细胞术分析。MN患者的IgG激活用10种构建体中的每一种转导的Jurkat细胞，但对照的人IgG未激活(图8)。在暴露于MN患者IgG或对照人IgG后，在未转导的Jurkat细胞中未见T细胞激活的证据(图8)。这些研究表明，在遇到靶标之后CAAR信号传导被激活。

为了评估原代人PLA2R CAAR T细胞是否可以被板结合的抗PLA2R IgG激活，将PLA2R CAAR T细胞暴露于板结合的MN患者IgG或对照人IgG中24小时。通过培养上清液的ELISA测量IFN-γ的分泌。与对照人IgG相比，MN患者的IgG刺激出明显更高的IFN-γ产生，反映了在靶向参与后原代人CAAR T细胞的激活(图9)。

本文引用的每篇专利、专利申请和出版物的公开内容通过引用以其整体并入本文。尽管已经参考具体实施方式公开了本发明，但是显然，本领域的其他技术人员可以设计出本发明的其他实施方式和变型而不背离本发明的真实精神和范围。所附权利要求旨在被解释为包括所有这样的实施方式和等同变型。

序列表

<110> 宾夕法尼亚大学董事会

S•吉尔

J•霍

A•S•佩

B•王

<120> 磷脂酶A2受体嵌合自身抗体受体T细胞的组合物和方法

<130> 046483-7207WO1(02014)

<150> 62/665,863

<151> 2018-05-02

<160> 72

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR(蓖麻毒素B型凝集素)结构域

<400> 1

aagggcatct tcgtgatcca gagcgagagc ctgaagaagt gcatccaggc cggcaagagc 60

gtgctgaccc tggaaaattg caagcaggcc aacaagcaca tgctgtggaa atgggtgtcc 120

aaccacggcc tgttcaacat cggcggctct ggatgtctgg gcctgaattt ctctgcccct 180

gagcagcctc tgagcctgta cgagtgtgat agcaccctgg tgtccctgag atggcggtgc 240

aaccggaaga tgatcacagg ccctctgcag tactctgtgc aggtcgccca cgacaatacc 300

gtggtggcca gcagaaagta catccacaag tggatcagct acggcagcgg cggaggcgac 360

atctgtgaat ac 372

<210> 2

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 2

ctgcacaagg atctgcacac catcaagggc aac 33

<210> 3

<211> 147

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 纤连蛋白2型结构域

<400> 3

acccacggaa tgccctgcat gttcccgttt cagtacaacc accagtggca ccacgagtgc 60

accagagaag gcagagagga cgacctgctt tggtgcgcca caaccagcag atacgagcgg 120

gatgagaagt ggggcttctg ccctgat 147

<210> 4

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 4

cctacctctg ccgaagtggg ctgcgatacc atctgggaga aagacctg 48

<210> 5

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> C型凝集素结构域1

<400> 5

aacagccaca tctgctacca gttcaacctg ctgtccagcc tgtcttggag cgaggcccac 60

agcagctgtc aaatgcaagg cggcacactg ctgagcatca ccgacgagac agaggaaaac 120

ttcatccgcg agcacatgag cagcaagacc gtggaagtgt ggatgggact gaaccagctg 180

gatgagcatg ccggatggca gtggagtgat ggcacccctc tgaactacct gaactggtcc 240

cctgaagtga acttcgagcc cttcgtggaa gatcactgcg gcaccttcag cagcttcatg 300

cccagcgctt ggagaagcag agactgcgag agcaccctgc cttacatctg caag 354

<210> 6

<211> 87

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 6

aagtacctga accacatcga ccacgagatc gtggaaaagg acgcctggaa gtactacgcc 60

acacactgcg agcctggctg gaacccc 87

<210> 7

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> C型凝集素结构域2

<400> 7

tacaaccgga actgctacaa gctgcagaaa gaggaaaaga cctggcacga ggccctgaga 60

agctgccagg ccgataatag cgccctgatc gacatcacaa gcctggccga ggtggaattt 120

ctggtcactc tgctgggcga cgagaacgcc tctgagacat ggatcggcct gtccagcaac 180

aagatccccg tgtccttcga gtggtccaac gacagcagcg tgatcttcac caactggcac 240

accctggaac ctcacatctt ccccaacaga tcccagctgt gtgtgtccgc cgagcagtct 300

gaaggccact ggaaagtgaa gaactgcgag gaacggctgt tctacatctg taaa 354

<210> 8

<211> 1395

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 构建体4027.CF12的细胞外结构域

<400> 8

aagggcatct tcgtgatcca gagcgagagc ctgaagaagt gcatccaggc cggcaagagc 60

gtgctgaccc tggaaaattg caagcaggcc aacaagcaca tgctgtggaa atgggtgtcc 120

aaccacggcc tgttcaacat cggcggctct ggatgtctgg gcctgaattt ctctgcccct 180

gagcagcctc tgagcctgta cgagtgtgat agcaccctgg tgtccctgag atggcggtgc 240

aaccggaaga tgatcacagg ccctctgcag tactctgtgc aggtcgccca cgacaatacc 300

gtggtggcca gcagaaagta catccacaag tggatcagct acggcagcgg cggaggcgac 360

atctgtgaat acctgcacaa ggatctgcac accatcaagg gcaacaccca cggaatgccc 420

tgcatgttcc cgtttcagta caaccaccag tggcaccacg agtgcaccag agaaggcaga 480

gaggacgacc tgctttggtg cgccacaacc agcagatacg agcgggatga gaagtggggc 540

ttctgccctg atcctacctc tgccgaagtg ggctgcgata ccatctggga gaaagacctg 600

aacagccaca tctgctacca gttcaacctg ctgtccagcc tgtcttggag cgaggcccac 660

agcagctgtc aaatgcaagg cggcacactg ctgagcatca ccgacgagac agaggaaaac 720

ttcatccgcg agcacatgag cagcaagacc gtggaagtgt ggatgggact gaaccagctg 780

gatgagcatg ccggatggca gtggagtgat ggcacccctc tgaactacct gaactggtcc 840

cctgaagtga acttcgagcc cttcgtggaa gatcactgcg gcaccttcag cagcttcatg 900

cccagcgctt ggagaagcag agactgcgag agcaccctgc cttacatctg caagaagtac 960

ctgaaccaca tcgaccacga gatcgtggaa aaggacgcct ggaagtacta cgccacacac 1020

tgcgagcctg gctggaaccc ctacaaccgg aactgctaca agctgcagaa agaggaaaag 1080

acctggcacg aggccctgag aagctgccag gccgataata gcgccctgat cgacatcaca 1140

agcctggccg aggtggaatt tctggtcact ctgctgggcg acgagaacgc ctctgagaca 1200

tggatcggcc tgtccagcaa caagatcccc gtgtccttcg agtggtccaa cgacagcagc 1260

gtgatcttca ccaactggca caccctggaa cctcacatct tccccaacag atcccagctg 1320

tgtgtgtccg ccgagcagtc tgaaggccac tggaaagtga agaactgcga ggaacggctg 1380

ttctacatct gtaaa 1395

<210> 9

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 9

aaggccggcc acgtgctgtc cgatgccgag agtggatgtc aatccgga 48

<210> 10

<211> 132

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8铰链结构域

<400> 10

accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60

tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120

gacttcgcct gt 132

<210> 11

<211> 2232

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4027.CF12

<400> 11

atgctgctga gccctagcct gctgctgctc ctgcttcttg gagcccctag aggatgtgcc 60

ggatctgaag gtgttgccgc cgctctgaca cccgagagac tgctggaatg gcaggacaag 120

ggcatcttcg tgatccagag cgagagcctg aagaagtgca tccaggccgg caagagcgtg 180

ctgaccctgg aaaattgcaa gcaggccaac aagcacatgc tgtggaaatg ggtgtccaac 240

cacggcctgt tcaacatcgg cggctctgga tgtctgggcc tgaatttctc tgcccctgag 300

cagcctctga gcctgtacga gtgtgatagc accctggtgt ccctgagatg gcggtgcaac 360

cggaagatga tcacaggccc tctgcagtac tctgtgcagg tcgcccacga caataccgtg 420

gtggccagca gaaagtacat ccacaagtgg atcagctacg gcagcggcgg aggcgacatc 480

tgtgaatacc tgcacaagga tctgcacacc atcaagggca acacccacgg aatgccctgc 540

atgttcccgt ttcagtacaa ccaccagtgg caccacgagt gcaccagaga aggcagagag 600

gacgacctgc tttggtgcgc cacaaccagc agatacgagc gggatgagaa gtggggcttc 660

tgccctgatc ctacctctgc cgaagtgggc tgcgatacca tctgggagaa agacctgaac 720

agccacatct gctaccagtt caacctgctg tccagcctgt cttggagcga ggcccacagc 780

agctgtcaaa tgcaaggcgg cacactgctg agcatcaccg acgagacaga ggaaaacttc 840

atccgcgagc acatgagcag caagaccgtg gaagtgtgga tgggactgaa ccagctggat 900

gagcatgccg gatggcagtg gagtgatggc acccctctga actacctgaa ctggtcccct 960

gaagtgaact tcgagccctt cgtggaagat cactgcggca ccttcagcag cttcatgccc 1020

agcgcttgga gaagcagaga ctgcgagagc accctgcctt acatctgcaa gaagtacctg 1080

aaccacatcg accacgagat cgtggaaaag gacgcctgga agtactacgc cacacactgc 1140

gagcctggct ggaaccccta caaccggaac tgctacaagc tgcagaaaga ggaaaagacc 1200

tggcacgagg ccctgagaag ctgccaggcc gataatagcg ccctgatcga catcacaagc 1260

ctggccgagg tggaatttct ggtcactctg ctgggcgacg agaacgcctc tgagacatgg 1320

atcggcctgt ccagcaacaa gatccccgtg tccttcgagt ggtccaacga cagcagcgtg 1380

atcttcacca actggcacac cctggaacct cacatcttcc ccaacagatc ccagctgtgt 1440

gtgtccgccg agcagtctga aggccactgg aaagtgaaga actgcgagga acggctgttc 1500

tacatctgta aaaaggccgg ccacgtgctg tccgatgccg agagtggatg tcaatccgga 1560

accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 1620

tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 1680

gacttcgcct gtgatatcta catctgggcg cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc 1740

ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa cggggcagaa agaaactcct gtatatattc 1800

aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact actcaagagg aagatggctg tagctgccga 1860

tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac 1920

gcccccgcgt acaagcaggg ccagaaccag ctctataacg agctcaatct aggacgaaga 1980

gaggagtacg atgttttgga caagagacgt ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg 2040

agaaggaaga accctcagga aggcctgtac aatgaactgc agaaagataa gatggcggag 2100

gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt 2160

taccagggtc tcagtacagc caccaaggac acctacgacg cccttcacat gcaggccctg 2220

ccccctcgct aa 2232

<210> 12

<211> 743

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4027.CF12

<400> 12

Met Leu Leu Ser Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Pro

1 5 10 15

Arg Gly Cys Ala Gly Ser Glu Gly Val Ala Ala Ala Leu Thr Pro Glu

20 25 30

Arg Leu Leu Glu Trp Gln Asp Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu

35 40 45

Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu

50 55 60

Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn

65 70 75 80

His Gly Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe

85 90 95

Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu

100 105 110

Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu

115 120 125

Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg

130 135 140

Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile

145 150 155 160

Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His

165 170 175

Gly Met Pro Cys Met Phe Pro Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His

180 185 190

Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr

195 200 205

Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro

210 215 220

Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn

225 230 235 240

Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser

245 250 255

Glu Ala His Ser Ser Cys Gln Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile

260 265 270

Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys

275 280 285

Thr Val Glu Val Trp Met Gly Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly

290 295 300

Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro

305 310 315 320

Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser

325 330 335

Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu

340 345 350

Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val

355 360 365

Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp

370 375 380

Asn Pro Tyr Asn Arg Asn Cys Tyr Lys Leu Gln Lys Glu Glu Lys Thr

385 390 395 400

Trp His Glu Ala Leu Arg Ser Cys Gln Ala Asp Asn Ser Ala Leu Ile

405 410 415

Asp Ile Thr Ser Leu Ala Glu Val Glu Phe Leu Val Thr Leu Leu Gly

420 425 430

Asp Glu Asn Ala Ser Glu Thr Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile

435 440 445

Pro Val Ser Phe Glu Trp Ser Asn Asp Ser Ser Val Ile Phe Thr Asn

450 455 460

Trp His Thr Leu Glu Pro His Ile Phe Pro Asn Arg Ser Gln Leu Cys

465 470 475 480

Val Ser Ala Glu Gln Ser Glu Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu

485 490 495

Glu Arg Leu Phe Tyr Ile Cys Lys Lys Ala Gly His Val Leu Ser Asp

500 505 510

Ala Glu Ser Gly Cys Gln Ser Gly Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro

515 520 525

Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro

530 535 540

Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu

545 550 555 560

Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys

565 570 575

Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly

580 585 590

Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val

595 600 605

Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu

610 615 620

Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

625 630 635 640

Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

645 650 655

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

660 665 670

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

675 680 685

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

690 695 700

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

725 730 735

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

740

<210> 13

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 13

aaggccggcc acgtgctgtc cgatgccgag agtggatgtc aagaaggctg ggagaga 57

<210> 14

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CC型凝集素结构域3

<400> 14

cacggcggct tttgctacaa gatcgacacc gtgctgcgga gcttcgatca ggccagcagc 60

ggctactatt gccctcctgc tctggtcacc atcaccaaca gattcgagca ggccttcatc 120

accagcctga tcagcagcgt cgtgaagatg aaggacagct acttctggat cgccctgcag 180

gaccagaacg acaccggcga gtacacatgg aagcccgtgg gacagaaacc cgagcctgtg 240

cagtacaccc actggaacac acaccagcct agatactccg gcggctgcgt ggcaatgaga 300

ggcagacatc ctctcggcag atgggaagtg aagcactgtc ggcacttcaa ggccatgtct 360

ctgtgc 366

<210> 15

<211> 1818

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R构建体4028.CF123的细胞外结构域

<400> 15

aagggcatct tcgtgatcca gagcgagagc ctgaagaagt gcatccaggc cggcaagagc 60

gtgctgaccc tggaaaattg caagcaggcc aacaagcaca tgctgtggaa atgggtgtcc 120

aaccacggcc tgttcaacat cggcggctct ggatgtctgg gcctgaattt ctctgcccct 180

gagcagcctc tgagcctgta cgagtgtgat agcaccctgg tgtccctgag atggcggtgc 240

aaccggaaga tgatcacagg ccctctgcag tactctgtgc aggtcgccca cgacaatacc 300

gtggtggcca gcagaaagta catccacaag tggatcagct acggcagcgg cggaggcgac 360

atctgtgaat acctgcacaa ggatctgcac accatcaagg gcaacaccca cggaatgccc 420

tgcatgttcc cgtttcagta caaccaccag tggcaccacg agtgcaccag agaaggcaga 480

gaggacgacc tgctttggtg cgccacaacc agcagatacg agcgggatga gaagtggggc 540

ttctgccctg atcctacctc tgccgaagtg ggctgcgata ccatctggga gaaagacctg 600

aacagccaca tctgctacca gttcaacctg ctgtccagcc tgtcttggag cgaggcccac 660

agcagctgtc aaatgcaagg cggcacactg ctgagcatca ccgacgagac agaggaaaac 720

ttcatccgcg agcacatgag cagcaagacc gtggaagtgt ggatgggact gaaccagctg 780

gatgagcatg ccggatggca gtggagtgat ggcacccctc tgaactacct gaactggtcc 840

cctgaagtga acttcgagcc cttcgtggaa gatcactgcg gcaccttcag cagcttcatg 900

cccagcgctt ggagaagcag agactgcgag agcaccctgc cttacatctg caagaagtac 960

ctgaaccaca tcgaccacga gatcgtggaa aaggacgcct ggaagtacta cgccacacac 1020

tgcgagcctg gctggaaccc ctacaaccgg aactgctaca agctgcagaa agaggaaaag 1080

acctggcacg aggccctgag aagctgccag gccgataata gcgccctgat cgacatcaca 1140

agcctggccg aggtggaatt tctggtcact ctgctgggcg acgagaacgc ctctgagaca 1200

tggatcggcc tgtccagcaa caagatcccc gtgtccttcg agtggtccaa cgacagcagc 1260

gtgatcttca ccaactggca caccctggaa cctcacatct tccccaacag atcccagctg 1320

tgtgtgtccg ccgagcagtc tgaaggccac tggaaagtga agaactgcga ggaacggctg 1380

ttctacatct gtaaaaaggc cggccacgtg ctgtccgatg ccgagagtgg atgtcaagaa 1440

ggctgggaga gacacggcgg cttttgctac aagatcgaca ccgtgctgcg gagcttcgat 1500

caggccagca gcggctacta ttgccctcct gctctggtca ccatcaccaa cagattcgag 1560

caggccttca tcaccagcct gatcagcagc gtcgtgaaga tgaaggacag ctacttctgg 1620

atcgccctgc aggaccagaa cgacaccggc gagtacacat ggaagcccgt gggacagaaa 1680

cccgagcctg tgcagtacac ccactggaac acacaccagc ctagatactc cggcggctgc 1740

gtggcaatga gaggcagaca tcctctcggc agatgggaag tgaagcactg tcggcacttc 1800

aaggccatgt ctctgtgc 1818

<210> 16

<211> 75

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 16

aagcagcccg tggaaaatca agagaaggcc gagtacgagg aacgctggcc ttttcaccct 60

tgctacctgt ccgga 75

<210> 17

<211> 2682

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4028.CF123

<400> 17

atgctgctga gccctagcct gctgctgctc ctgcttcttg gagcccctag aggatgtgcc 60

ggatctgaag gtgttgccgc cgctctgaca cccgagagac tgctggaatg gcaggacaag 120

ggcatcttcg tgatccagag cgagagcctg aagaagtgca tccaggccgg caagagcgtg 180

ctgaccctgg aaaattgcaa gcaggccaac aagcacatgc tgtggaaatg ggtgtccaac 240

cacggcctgt tcaacatcgg cggctctgga tgtctgggcc tgaatttctc tgcccctgag 300

cagcctctga gcctgtacga gtgtgatagc accctggtgt ccctgagatg gcggtgcaac 360

cggaagatga tcacaggccc tctgcagtac tctgtgcagg tcgcccacga caataccgtg 420

gtggccagca gaaagtacat ccacaagtgg atcagctacg gcagcggcgg aggcgacatc 480

tgtgaatacc tgcacaagga tctgcacacc atcaagggca acacccacgg aatgccctgc 540

atgttcccgt ttcagtacaa ccaccagtgg caccacgagt gcaccagaga aggcagagag 600

gacgacctgc tttggtgcgc cacaaccagc agatacgagc gggatgagaa gtggggcttc 660

tgccctgatc ctacctctgc cgaagtgggc tgcgatacca tctgggagaa agacctgaac 720

agccacatct gctaccagtt caacctgctg tccagcctgt cttggagcga ggcccacagc 780

agctgtcaaa tgcaaggcgg cacactgctg agcatcaccg acgagacaga ggaaaacttc 840

atccgcgagc acatgagcag caagaccgtg gaagtgtgga tgggactgaa ccagctggat 900

gagcatgccg gatggcagtg gagtgatggc acccctctga actacctgaa ctggtcccct 960

gaagtgaact tcgagccctt cgtggaagat cactgcggca ccttcagcag cttcatgccc 1020

agcgcttgga gaagcagaga ctgcgagagc accctgcctt acatctgcaa gaagtacctg 1080

aaccacatcg accacgagat cgtggaaaag gacgcctgga agtactacgc cacacactgc 1140

gagcctggct ggaaccccta caaccggaac tgctacaagc tgcagaaaga ggaaaagacc 1200

tggcacgagg ccctgagaag ctgccaggcc gataatagcg ccctgatcga catcacaagc 1260

ctggccgagg tggaatttct ggtcactctg ctgggcgacg agaacgcctc tgagacatgg 1320

atcggcctgt ccagcaacaa gatccccgtg tccttcgagt ggtccaacga cagcagcgtg 1380

atcttcacca actggcacac cctggaacct cacatcttcc ccaacagatc ccagctgtgt 1440

gtgtccgccg agcagtctga aggccactgg aaagtgaaga actgcgagga acggctgttc 1500

tacatctgta aaaaggccgg ccacgtgctg tccgatgccg agagtggatg tcaagaaggc 1560

tgggagagac acggcggctt ttgctacaag atcgacaccg tgctgcggag cttcgatcag 1620

gccagcagcg gctactattg ccctcctgct ctggtcacca tcaccaacag attcgagcag 1680

gccttcatca ccagcctgat cagcagcgtc gtgaagatga aggacagcta cttctggatc 1740

gccctgcagg accagaacga caccggcgag tacacatgga agcccgtggg acagaaaccc 1800

gagcctgtgc agtacaccca ctggaacaca caccagccta gatactccgg cggctgcgtg 1860

gcaatgagag gcagacatcc tctcggcaga tgggaagtga agcactgtcg gcacttcaag 1920

gccatgtctc tgtgcaagca gcccgtggaa aatcaagaga aggccgagta cgaggaacgc 1980

tggccttttc acccttgcta cctgtccgga accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca 2040

ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg 2100

gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgatatcta catctgggcg 2160

cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa 2220

cggggcagaa agaaactcct gtatatattc aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact 2280

actcaagagg aagatggctg tagctgccga tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa 2340

ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt acaagcaggg ccagaaccag 2400

ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt 2460

ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 2520

aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 2580

cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 2640

acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgct aa 2682

<210> 18

<211> 893

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4028.CF123

<400> 18

Met Leu Leu Ser Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Pro

1 5 10 15

Arg Gly Cys Ala Gly Ser Glu Gly Val Ala Ala Ala Leu Thr Pro Glu

20 25 30

Arg Leu Leu Glu Trp Gln Asp Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu

35 40 45

Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu

50 55 60

Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn

65 70 75 80

His Gly Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe

85 90 95

Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu

100 105 110

Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu

115 120 125

Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg

130 135 140

Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile

145 150 155 160

Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His

165 170 175

Gly Met Pro Cys Met Phe Pro Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His

180 185 190

Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr

195 200 205

Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro

210 215 220

Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn

225 230 235 240

Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser

245 250 255

Glu Ala His Ser Ser Cys Gln Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile

260 265 270

Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys

275 280 285

Thr Val Glu Val Trp Met Gly Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly

290 295 300

Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro

305 310 315 320

Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser

325 330 335

Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu

340 345 350

Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val

355 360 365

Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp

370 375 380

Asn Pro Tyr Asn Arg Asn Cys Tyr Lys Leu Gln Lys Glu Glu Lys Thr

385 390 395 400

Trp His Glu Ala Leu Arg Ser Cys Gln Ala Asp Asn Ser Ala Leu Ile

405 410 415

Asp Ile Thr Ser Leu Ala Glu Val Glu Phe Leu Val Thr Leu Leu Gly

420 425 430

Asp Glu Asn Ala Ser Glu Thr Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile

435 440 445

Pro Val Ser Phe Glu Trp Ser Asn Asp Ser Ser Val Ile Phe Thr Asn

450 455 460

Trp His Thr Leu Glu Pro His Ile Phe Pro Asn Arg Ser Gln Leu Cys

465 470 475 480

Val Ser Ala Glu Gln Ser Glu Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu

485 490 495

Glu Arg Leu Phe Tyr Ile Cys Lys Lys Ala Gly His Val Leu Ser Asp

500 505 510

Ala Glu Ser Gly Cys Gln Glu Gly Trp Glu Arg His Gly Gly Phe Cys

515 520 525

Tyr Lys Ile Asp Thr Val Leu Arg Ser Phe Asp Gln Ala Ser Ser Gly

530 535 540

Tyr Tyr Cys Pro Pro Ala Leu Val Thr Ile Thr Asn Arg Phe Glu Gln

545 550 555 560

Ala Phe Ile Thr Ser Leu Ile Ser Ser Val Val Lys Met Lys Asp Ser

565 570 575

Tyr Phe Trp Ile Ala Leu Gln Asp Gln Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Thr

580 585 590

Trp Lys Pro Val Gly Gln Lys Pro Glu Pro Val Gln Tyr Thr His Trp

595 600 605

Asn Thr His Gln Pro Arg Tyr Ser Gly Gly Cys Val Ala Met Arg Gly

610 615 620

Arg His Pro Leu Gly Arg Trp Glu Val Lys His Cys Arg His Phe Lys

625 630 635 640

Ala Met Ser Leu Cys Lys Gln Pro Val Glu Asn Gln Glu Lys Ala Glu

645 650 655

Tyr Glu Glu Arg Trp Pro Phe His Pro Cys Tyr Leu Ser Gly Thr Thr

660 665 670

Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln

675 680 685

Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala

690 695 700

Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala

705 710 715 720

Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr

725 730 735

Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

740 745 750

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

755 760 765

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

770 775 780

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

785 790 795 800

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

805 810 815

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

820 825 830

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

835 840 845

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

850 855 860

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

865 870 875 880

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

885 890

<210> 19

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 α跨膜结构域

<400> 19

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 20

<211> 72

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 α跨膜结构域

<400> 20

atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60

accctttact gc 72

<210> 21

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 4-1BB

<400> 21

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 22

<211> 126

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 4-1BB

<400> 22

aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60

actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120

gaactg 126

<210> 23

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3 ζ信号传导结构域

<400> 23

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 24

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3 ζ信号传导结构域

<400> 24

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336

<210> 25

<211> 1167

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体C

<400> 25

atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgcgga 60

tccaaaggaa tatttgtcat tcagtcagag tctttgaaaa agtgcataca ggctggaaaa 120

agcgtgctta ccctggagaa ctgcaagcaa gctaataagc atatgctttg gaaatgggtt 180

agcaaccacg gactctttaa tatcggaggc tccggctgtc tgggcctgaa cttcagtgca 240

ccggagcaac cgctttctct gtacgaatgt gatagcacac ttgttagtct tcggtggcgg 300

tgtaaccgaa aaatgattac aggccctctg caatatagtg ttcaagtggc ccacgacaat 360

acagttgtgg cgtctagaaa atatattcac aagtggattt cctacgggag cggcggaggg 420

gatatatgtg aatatcttca caaagacttg catacaatcg ctagcttcgt gccggtcttc 480

ctgccagcga agccaaccac gacgccagca ccgcgaccac caacacctgc gcccaccatc 540

gcgtcgcagc ccctgtccct gcgcccagag gcgtgcagac cagcagcggg gggcgcagtg 600

cacacgaggg ggctggactt cgcctgtgat atctacatct gggcgccctt ggccgggact 660

tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc accctttact gcaagcgcgg tcgcaagaaa 720

ctgctctata tttttaaaca gccattcatg agacctgtcc agaccactca agaggaggac 780

ggatgttcct gtagatttcc tgaagaggaa gagggggggt gcgagctgag agtgaagttc 840

agcaggagcg cagacgcccc cgcgtaccag cagggccaga accagctcta taacgagctc 900

aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag 960

atggggggaa agccgagaag gaagaaccct caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa 1020

gataagatgg cggaggccta cagtgagatt gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag 1080

gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt acagccacca aggacaccta cgacgccctt 1140

cacatgcagg ccctgccccc tcgctaa 1167

<210> 26

<211> 388

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体C

<400> 26

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gly Ser Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu

20 25 30

Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys

35 40 45

Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly

50 55 60

Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala

65 70 75 80

Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser

85 90 95

Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr

100 105 110

Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr

115 120 125

Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu

130 135 140

Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Ala Ser Phe Val Pro Val Phe

145 150 155 160

Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro

165 170 175

Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys

180 185 190

Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala

195 200 205

Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu

210 215 220

Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys

225 230 235 240

Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr

245 250 255

Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly

260 265 270

Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala

275 280 285

Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg

290 295 300

Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu

305 310 315 320

Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn

325 330 335

Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

340 345 350

Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly

355 360 365

Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala

370 375 380

Leu Pro Pro Arg

385

<210> 27

<211> 1761

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体CF1

<400> 27

atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgcgga 60

tccaaaggga tctttgttat acaaagtgag agcttgaaaa aatgtataca ggctggcaaa 120

agtgtactga ctcttgaaaa ttgcaaacaa gccaacaaac acatgctgtg gaaatgggtg 180

tctaatcacg gtctcttcaa tattggggga agtggatgcc tcggcctgaa tttctccgct 240

cccgaacagc ccctctcact ttatgagtgt gattcaactc tggtgtcctt gaggtggcga 300

tgtaaccgca agatgataac cggccccctc cagtattccg tccaagtagc acacgacaat 360

accgtggtgg catctaggaa atacattcat aagtggatat cttatggcag tggtggcggt 420

gacatatgcg agtacctgca caaggacctc cacacaataa aggggaacac gcacgggatg 480

ccgtgtatgt tcccgttcca atataatcat caatggcacc atgagtgtac gagagagggg 540

cgagaagacg acctcctgtg gtgtgcgacc acctcaagat atgaacggga tgagaagtgg 600

ggcttttgcc ccgacccaac ctccgccgag gttggttgcg acactatttg ggaaaaagat 660

ttgaacagtc atatatgcta tcaatttaat ttgttgagtt cactctcctg gagcgaagcg 720

cacagctctt gtcagatgca aggtggtaca ttgcttagca ttactgatga aactgaggag 780

aatttcatta gggagcatat gtcctcaaag acagtagagg tgtggatggg tctgaaccag 840

ctcgacgaac acgccggttg gcagtggtca gatggaacgc ctctgaatta tctcaactgg 900

tcccctgagg tcaactttga accgtttgtg gaagatcatt gtggtacttt ttccagtttt 960

atgccaagcg cctggcgaag ccgagactgc gagtctacgt tgccctatat ctgcaagaag 1020

tatttgaatc acatagatca tgaaattgtt gaagctagct tcgtgccggt cttcctgcca 1080

gcgaagccaa ccacgacgcc agcaccgcga ccaccaacac ctgcgcccac catcgcgtcg 1140

cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc agaccagcag cggggggcgc agtgcacacg 1200

agggggctgg acttcgcctg tgatatctac atctgggcgc ccttggccgg gacttgtggg 1260

gtccttctcc tgtcactggt tatcaccctt tactgcaagc gcggtcgcaa gaaactgctc 1320

tatattttta aacagccatt catgagacct gtccagacca ctcaagagga ggacggatgt 1380

tcctgtagat ttcctgaaga ggaagagggg gggtgcgagc tgagagtgaa gttcagcagg 1440

agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc cagaaccagc tctataacga gctcaatcta 1500

ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg 1560

ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag 1620

atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac 1680

gatggccttt accagggtct cagtacagcc accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg 1740

caggccctgc cccctcgcta a 1761

<210> 28

<211> 586

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体CF1

<400> 28

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gly Ser Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu

20 25 30

Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys

35 40 45

Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly

50 55 60

Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala

65 70 75 80

Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser

85 90 95

Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr

100 105 110

Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr

115 120 125

Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu

130 135 140

Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met

145 150 155 160

Pro Cys Met Phe Pro Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys

165 170 175

Thr Arg Glu Gly Arg Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser

180 185 190

Arg Tyr Glu Arg Asp Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser

195 200 205

Ala Glu Val Gly Cys Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His

210 215 220

Ile Cys Tyr Gln Phe Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala

225 230 235 240

His Ser Ser Cys Gln Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp

245 250 255

Glu Thr Glu Glu Asn Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val

260 265 270

Glu Val Trp Met Gly Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln

275 280 285

Trp Ser Asp Gly Thr Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val

290 295 300

Asn Phe Glu Pro Phe Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe

305 310 315 320

Met Pro Ser Ala Trp Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr

325 330 335

Ile Cys Lys Lys Tyr Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Ala

340 345 350

Ser Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala

355 360 365

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

370 375 380

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

385 390 395 400

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

405 410 415

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

420 425 430

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

435 440 445

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

450 455 460

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

465 470 475 480

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

485 490 495

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

500 505 510

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

515 520 525

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

530 535 540

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

545 550 555 560

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

565 570 575

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

580 585

<210> 29

<211> 2490

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体CF123

<400> 29

atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgcgga 60

tccaaaggga ttttcgtgat acagtccgag agtctcaaaa agtgtatcca ggcaggcaaa 120

agtgttctca ctctggaaaa ctgcaaacaa gcgaacaagc acatgttgtg gaagtgggtt 180

agtaaccatg gactgttcaa catcggaggt agtggatgcc ttggtctcaa tttctctgct 240

ccggaacagc ctttgtcact gtacgaatgc gactccactc tcgttagtct tagatggcga 300

tgcaatcgca aaatgattac gggaccactt caatattcag ttcaagtggc acatgataac 360

accgtagtgg cctcacggaa atacatccat aaatggattt cttatggtag cgggggcggc 420

gatatatgtg aatacctcca taaggatctc cacaccatta agggtaatac tcacggtatg 480

ccgtgtatgt ttccttttca gtacaatcat cagtggcatc atgaatgcac gagggaagga 540

cgcgaggacg atttgctctg gtgcgcaacc acctcacgct acgagagaga cgaaaaatgg 600

ggcttttgcc cggaccccac tagtgctgag gtaggatgtg atacgatttg ggaaaaggat 660

ttgaattctc atatttgcta ccagtttaat cttctttcat ccctgtcctg gtctgaggct 720

cattctagtt gccagatgca aggtgggact ttgctttcaa ttactgacga gactgaggaa 780

aattttatcc gagagcatat gtcttctaaa accgtagagg tatggatggg cctgaaccaa 840

ttggacgaac acgcgggctg gcagtggagc gacgggacac ctctcaacta ccttaattgg 900

agccctgagg taaactttga accgtttgtc gaggatcact gcggaacttt cagcagcttc 960

atgcctagtg catggcggtc ccgagactgt gagagcaccc ttccatacat atgtaaaaaa 1020

tacctcaatc acatagacca cgagatcgta gagaaggatg catggaaata ttatgctacg 1080

cactgtgagc cgggatggaa tccttataac cgcaactgtt acaagctgca aaaagaagag 1140

aagacatggc atgaggcgct gcgctcatgt caagcggaca attctgcact tatagatata 1200

actagtttgg cggaggtaga atttttggtt acgcttctcg gcgatgagaa tgcgtccgag 1260

acgtggatag ggttgtcaag caataaaatt cctgtaagtt ttgaatggtc aaatgactct 1320

tctgtcatct tcaccaattg gcacacactc gaaccccata tcttcccaaa ccgaagccag 1380

ttgtgtgtca gcgctgagca atcagaagga cattggaaag ttaaaaactg tgaagaaaga 1440

ctgttctaca tctgtaagaa ggcaggacat gtgctttcag atgcggaaag cggctgtcaa 1500

gaaggttggg agcgccatgg aggtttctgt tataaaatcg acacagtttt gcgatctttc 1560

gatcaggctt caagcgggta ctattgtcct cctgcactgg ttacaatcac gaaccggttt 1620

gaacaggctt ttataacttc tttgatttcc agcgtggtta aaatgaagga ctcttatttc 1680

tggatagccc tgcaagacca aaatgatacc ggtgagtaca catggaaacc ggtaggtcaa 1740

aagccagagc cagtccagta cactcattgg aatacccacc agcctaggta ctccggcggg 1800

tgtgtggcga tgcggggtcg ccaccctctc ggacgctggg aggtgaagca ttgccgccac 1860

ttcaaggcga tgagcttgtg taaacagccc gtcgaaaatc aggaaaaggc agctagcggt 1920

ggcggaggtt ctggaggtgg aggttcctcc ggaatctaca tctgggcgcc cttggccggg 1980

acttgtgggg tccttctcct gtcactggtt atcacccttt actgcaagcg cggtcgcaag 2040

aaactgctct atatttttaa acagccattc atgagacctg tccagaccac tcaagaggag 2100

gacggatgtt cctgtagatt tcctgaagag gaagaggggg ggtgcgagct gagagtgaag 2160

ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct ctataacgag 2220

ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct 2280

gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag 2340

aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc 2400

aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc 2460

cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa 2490

<210> 30

<211> 829

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体CF123

<400> 30

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gly Ser Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu

20 25 30

Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys

35 40 45

Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly

50 55 60

Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala

65 70 75 80

Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser

85 90 95

Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr

100 105 110

Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr

115 120 125

Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu

130 135 140

Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met

145 150 155 160

Pro Cys Met Phe Pro Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys

165 170 175

Thr Arg Glu Gly Arg Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser

180 185 190

Arg Tyr Glu Arg Asp Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser

195 200 205

Ala Glu Val Gly Cys Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His

210 215 220

Ile Cys Tyr Gln Phe Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala

225 230 235 240

His Ser Ser Cys Gln Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp

245 250 255

Glu Thr Glu Glu Asn Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val

260 265 270

Glu Val Trp Met Gly Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln

275 280 285

Trp Ser Asp Gly Thr Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val

290 295 300

Asn Phe Glu Pro Phe Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe

305 310 315 320

Met Pro Ser Ala Trp Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr

325 330 335

Ile Cys Lys Lys Tyr Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Lys

340 345 350

Asp Ala Trp Lys Tyr Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp Asn Pro

355 360 365

Tyr Asn Arg Asn Cys Tyr Lys Leu Gln Lys Glu Glu Lys Thr Trp His

370 375 380

Glu Ala Leu Arg Ser Cys Gln Ala Asp Asn Ser Ala Leu Ile Asp Ile

385 390 395 400

Thr Ser Leu Ala Glu Val Glu Phe Leu Val Thr Leu Leu Gly Asp Glu

405 410 415

Asn Ala Ser Glu Thr Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile Pro Val

420 425 430

Ser Phe Glu Trp Ser Asn Asp Ser Ser Val Ile Phe Thr Asn Trp His

435 440 445

Thr Leu Glu Pro His Ile Phe Pro Asn Arg Ser Gln Leu Cys Val Ser

450 455 460

Ala Glu Gln Ser Glu Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu Glu Arg

465 470 475 480

Leu Phe Tyr Ile Cys Lys Lys Ala Gly His Val Leu Ser Asp Ala Glu

485 490 495

Ser Gly Cys Gln Glu Gly Trp Glu Arg His Gly Gly Phe Cys Tyr Lys

500 505 510

Ile Asp Thr Val Leu Arg Ser Phe Asp Gln Ala Ser Ser Gly Tyr Tyr

515 520 525

Cys Pro Pro Ala Leu Val Thr Ile Thr Asn Arg Phe Glu Gln Ala Phe

530 535 540

Ile Thr Ser Leu Ile Ser Ser Val Val Lys Met Lys Asp Ser Tyr Phe

545 550 555 560

Trp Ile Ala Leu Gln Asp Gln Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Thr Trp Lys

565 570 575

Pro Val Gly Gln Lys Pro Glu Pro Val Gln Tyr Thr His Trp Asn Thr

580 585 590

His Gln Pro Arg Tyr Ser Gly Gly Cys Val Ala Met Arg Gly Arg His

595 600 605

Pro Leu Gly Arg Trp Glu Val Lys His Cys Arg His Phe Lys Ala Met

610 615 620

Ser Leu Cys Lys Gln Pro Val Glu Asn Gln Glu Lys Ala Ala Ser Gly

625 630 635 640

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Ile Tyr Ile Trp Ala

645 650 655

Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr

660 665 670

Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

675 680 685

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

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Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

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Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

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Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

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Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

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Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

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<212> DNA

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<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体CF1237

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gatatatgtg aatacctcca taaggatctc cacaccatta agggtaatac tcacggtatg 480

ccgtgtatgt ttccttttca gtacaatcat cagtggcatc atgaatgcac gagggaagga 540

cgcgaggacg atttgctctg gtgcgcaacc acctcacgct acgagagaga cgaaaaatgg 600

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aattttatcc gagagcatat gtcttctaaa accgtagagg tatggatggg cctgaaccaa 840

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gatcaggctt caagcgggta ctattgtcct cctgcactgg ttacaatcac gaaccggttt 1620

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<210> 32

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体CF1237

<400> 32

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675 680 685

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770 775 780

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<210> 33

<211> 2052

<212> DNA

<213> 人工序列

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<400> 33

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<210> 36

<211> 630

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体C17

<400> 36

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1 5 10 15

Val Gln Cys Gly Ser Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu

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Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys

35 40 45

Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly

50 55 60

Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala

65 70 75 80

Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser

85 90 95

Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr

100 105 110

Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr

115 120 125

Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu

130 135 140

Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

145 150 155 160

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

165 170 175

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

180 185 190

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

195 200 205

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

210 215 220

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

225 230 235 240

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

245 250 255

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

260 265 270

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

275 280 285

Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Val Asn Thr Ser Asp Met

290 295 300

Tyr Pro Met Pro Asn Thr Leu Glu Tyr Gly Asn Arg Thr Tyr Lys Ile

305 310 315 320

Ile Asn Ala Asn Met Thr Trp Tyr Ala Ala Ile Lys Thr Cys Leu Met

325 330 335

His Lys Ala Gln Leu Val Ser Ile Thr Asp Gln Tyr His Gln Ser Phe

340 345 350

Leu Thr Val Val Leu Asn Arg Leu Gly Tyr Ala His Trp Ile Gly Leu

355 360 365

Phe Thr Thr Asp Asn Gly Leu Asn Phe Asp Trp Ser Asp Gly Thr Lys

370 375 380

Ser Ser Phe Thr Phe Trp Lys Asp Glu Glu Ser Ser Leu Leu Gly Asp

385 390 395 400

Cys Val Phe Ala Asp Ser Asn Gly Arg Trp His Ser Thr Ala Cys Glu

405 410 415

Ser Phe Leu Gln Gly Ala Ile Cys His Val Pro Pro Glu Thr Arg Gln

420 425 430

Ser Glu His Pro Glu Leu Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

435 440 445

Gly Ser Ser Gly Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

450 455 460

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg

465 470 475 480

Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln

485 490 495

Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu

500 505 510

Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

515 520 525

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

530 535 540

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

545 550 555 560

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

565 570 575

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

580 585 590

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

595 600 605

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

610 615 620

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

625 630

<210> 37

<211> 1182

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4025.C

<400> 37

atgctgctga gccctagcct gctgctgctc ctgcttcttg gagcccctag aggatgtgcc 60

ggatctgaag gtgttgccgc cgctctgaca cccgagagac tgctggaatg gcaggacaag 120

ggcatcttcg tgatccagag cgagagcctg aagaagtgca tccaggccgg caagagcgtg 180

ctgaccctgg aaaattgcaa gcaggccaac aagcacatgc tgtggaaatg ggtgtccaac 240

cacggcctgt tcaacatcgg cggctctgga tgtctgggcc tgaatttctc tgcccctgag 300

cagcctctga gcctgtacga gtgtgatagc accctggtgt ccctgagatg gcggtgcaac 360

cggaagatga tcacaggccc tctgcagtac tctgtgcagg tcgcccacga caataccgtg 420

gtggccagca gaaagtacat ccacaagtgg atcagctacg gcagcggcgg aggcgacatc 480

tgtgaatacc tgcacaagga tctgtccgga accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca 540

ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg 600

gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgatatcta catctgggcg 660

cccttggccg ggacttgtgg ggtccttctc ctgtcactgg ttatcaccct ttactgcaaa 720

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actcaagagg aagatggctg tagctgccga tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa 840

ctgagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt acaagcaggg ccagaaccag 900

ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt 960

ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 1020

aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 1080

cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 1140

acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgct aa 1182

<210> 38

<211> 393

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4025.C

<400> 38

Met Leu Leu Ser Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Pro

1 5 10 15

Arg Gly Cys Ala Gly Ser Glu Gly Val Ala Ala Ala Leu Thr Pro Glu

20 25 30

Arg Leu Leu Glu Trp Gln Asp Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu

35 40 45

Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu

50 55 60

Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn

65 70 75 80

His Gly Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe

85 90 95

Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu

100 105 110

Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu

115 120 125

Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg

130 135 140

Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile

145 150 155 160

Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp Leu Ser Gly Thr Thr Thr Pro Ala Pro

165 170 175

Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

180 185 190

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg

195 200 205

Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly

210 215 220

Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys

225 230 235 240

Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg

245 250 255

Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro

260 265 270

Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

275 280 285

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

290 295 300

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

305 310 315 320

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

325 330 335

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

340 345 350

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

355 360 365

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

370 375 380

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

385 390

<210> 39

<211> 1821

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4026.CF1

<400> 39

atgctgctga gccctagcct gctgctgctc ctgcttcttg gagcccctag aggatgtgcc 60

ggatctgaag gtgttgccgc cgctctgaca cccgagagac tgctggaatg gcaggacaag 120

ggcatcttcg tgatccagag cgagagcctg aagaagtgca tccaggccgg caagagcgtg 180

ctgaccctgg aaaattgcaa gcaggccaac aagcacatgc tgtggaaatg ggtgtccaac 240

cacggcctgt tcaacatcgg cggctctgga tgtctgggcc tgaatttctc tgcccctgag 300

cagcctctga gcctgtacga gtgtgatagc accctggtgt ccctgagatg gcggtgcaac 360

cggaagatga tcacaggccc tctgcagtac tctgtgcagg tcgcccacga caataccgtg 420

gtggccagca gaaagtacat ccacaagtgg atcagctacg gcagcggcgg aggcgacatc 480

tgtgaatacc tgcacaagga tctgcacacc atcaagggca acacccacgg aatgccctgc 540

atgttcccgt ttcagtacaa ccaccagtgg caccacgagt gcaccagaga aggcagagag 600

gacgacctgc tttggtgcgc cacaaccagc agatacgagc gggatgagaa gtggggcttc 660

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agcgcttgga gaagcagaga ctgcgagagc accctgcctt acatctgcaa gaagtacctg 1080

aaccacatcg accacgagat cgtggaaaag gacgcctgga agtactacgc cacacactgc 1140

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agcgcagacg cccccgcgta caagcagggc cagaaccagc tctataacga gctcaatcta 1560

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caggccctgc cccctcgcta a 1821

<210> 40

<211> 606

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R-CAAR构建体4026.CF1

<400> 40

Met Leu Leu Ser Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Pro

1 5 10 15

Arg Gly Cys Ala Gly Ser Glu Gly Val Ala Ala Ala Leu Thr Pro Glu

20 25 30

Arg Leu Leu Glu Trp Gln Asp Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu

35 40 45

Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu

50 55 60

Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn

65 70 75 80

His Gly Leu Phe Asn Ile Gly Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe

85 90 95

Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu

100 105 110

Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu

115 120 125

Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg

130 135 140

Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile

145 150 155 160

Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His

165 170 175

Gly Met Pro Cys Met Phe Pro Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His

180 185 190

Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr

195 200 205

Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro

210 215 220

Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn

225 230 235 240

Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser

245 250 255

Glu Ala His Ser Ser Cys Gln Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile

260 265 270

Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys

275 280 285

Thr Val Glu Val Trp Met Gly Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly

290 295 300

Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro

305 310 315 320

Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser

325 330 335

Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu

340 345 350

Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val

355 360 365

Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr Tyr Ala Thr His Cys Glu Ser Gly Thr

370 375 380

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

385 390 395 400

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

405 410 415

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

420 425 430

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

435 440 445

Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

450 455 460

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

465 470 475 480

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

485 490 495

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

500 505 510

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

515 520 525

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

530 535 540

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

545 550 555 560

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

565 570 575

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

580 585 590

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

595 600 605

<210> 41

<211> 4441

<212> DNA

<213> 智人

<400> 41

ccggagagcc cagtggttag cgatgctgct gtcgccgtcg ctgctgctgc tgctgctgct 60

gggggcgccg cggggctgcg ccgagggtgt ggcggcggcg cttacccccg agcggctcct 120

ggagtggcag gataaaggaa tatttgttat ccaaagtgag agtctcaaga aatgcattca 180

agcaggtaaa tcggttctga ccctggagaa ctgcaagcaa gcaaacaagc acatgctgtg 240

gaaatgggtt tcaaaccatg gcctctttaa cataggaggc agcggttgcc tgggcctgaa 300

tttctccgcc ccagagcagc cattaagctt atatgaatgt gactccaccc tcgtttcctt 360

acggtggcgc tgtaacagga agatgatcac aggcccgctg cagtactctg tccaggtggc 420

gcatgacaac acagtggtgg cctcacggaa gtatattcat aagtggattt cttatgggtc 480

aggtggtgga gacatttgtg aatatctaca caaagatttg catacaatca aagggaacac 540

ccacgggatg ccgtgtatgt ttcccttcca gtataaccat cagtggcatc atgaatgtac 600

ccgtgaaggt cgggaagatg acttactgtg gtgtgccacg acaagccgtt atgaaagaga 660

tgaaaagtgg ggattttgcc ctgatcccac ctctgcagaa gtaggttgtg atactatttg 720

ggagaaggac ctcaattcac acatttgcta ccagttcaac ctgctttcat ctctctcttg 780

gagtgaggca cattcttcat gccagatgca aggaggtacg ctgttaagta ttacagatga 840

aactgaagaa aatttcataa gggagcacat gagcagtaaa acagtggagg tgtggatggg 900

cctcaatcag ctggatgaac acgctggctg gcagtggtct gatggaacgc cgctcaacta 960

tctgaattgg agcccagagg taaattttga gccatttgtt gaagatcact gtggaacatt 1020

tagttcattt atgccaagtg cctggaggag tcgggattgt gagtccacct tgccatatat 1080

atgtaaaaaa tatctaaacc acattgatca tgaaatagtt gaaaaagatg cgtggaaata 1140

ttatgctacc cactgtgagc ctggctggaa tccctacaat cgtaattgct acaaacttca 1200

gaaagaagaa aagacctggc atgaggctct gcgttcttgt caggctgata acagtgcatt 1260

aatagacata acctcattag cagaggtgga gtttcttgta accctccttg gagatgaaaa 1320

tgcatcagaa acatggattg gtttgagcag caataaaatt ccagtttcct ttgaatggtc 1380

taatgactct tcagtcatct ttactaattg gcacacactt gagccccaca tttttccaaa 1440

tagaagccag ctgtgtgtct cagcagagca gtctgaggga cactggaaag tcaaaaattg 1500

tgaagaaaga cttttttaca tttgtaaaaa agcaggccat gtcctctctg atgctgaatc 1560

aggatgtcaa gagggatggg agagacatgg tggattctgt tacaaaattg acacagtcct 1620

tcgaagcttt gaccaagctt ccagcggtta ttactgtcct cctgcacttg taaccattac 1680

aaacaggttt gaacaggctt ttattaccag tttgatcagt agtgtggtaa aaatgaagga 1740

cagttatttt tggatagctc ttcaggacca aaatgatacg ggagaataca cttggaagcc 1800

agtagggcag aaacccgagc cggtgcagta cacacactgg aacacacacc agccgcgcta 1860

cagtggtggc tgtgttgcca tgcgaggaag gcatccactt ggtcgctggg aagtgaagca 1920

ctgtcggcac tttaaggcaa tgtccttgtg caagcagcca gttgaaaatc aggaaaaagc 1980

agagtatgaa gagagatggc cctttcaccc ctgctatttg gactgggagt cagagcctgg 2040

tctggccagt tgcttcaagg tatttcatag tgaaaaagtt ctgatgaaaa gaacatggag 2100

agaagctgaa gcattttgcg aagaatttgg agctcatctt gcaagctttg cccatattga 2160

ggaagagaat tttgtgaatg agctcttaca ttcaaaattt aattggacag aagaaaggca 2220

gttctggatt ggatttaata aaagaaaccc actgaatgcc ggctcatggg agtggtctga 2280

tagaactcct gttgtctctt cgtttttaga caacacttat tttggagaag atgcaagaaa 2340

ctgtgctgtt tataaggcaa acaaaacatt gctgccctta cactgtggtt ccaaacgtga 2400

atggatatgc aaaatcccaa gagatgtgaa acccaagatt ccgttctggt accagtacga 2460

tgtaccctgg ctcttttatc aggatgcaga ataccttttt catacctttg cctcagaatg 2520

gttgaacttt gagtttgtct gtagctggct gcacagtgat cttctcacaa ttcattctgc 2580

acatgagcaa gaattcatcc acagcaaaat aaaagcgcta tcaaagtatg gtgcaagttg 2640

gtggattgga cttcaagaag aaagagccaa tgatgaattt cgctggagag atggaacacc 2700

agtgatatac cagaactggg acacaggaag agaaagaact gtgaataatc agagccagag 2760

atgtggcttt atttcttcta taacaggact ctggggtagt gaagagtgtt cagtttctat 2820

gcctagtatc tgtaagcgaa aaaaggtttg gctcatagag aaaaagaaag atacaccaaa 2880

acaacatgga acgtgtccca aaggatggct atattttaac tataagtgcc ttctgctgaa 2940

tatccccaaa gacccaagca gttggaagaa ctggacgcat gctcaacatt tctgtgctga 3000

agaagggggg accctggtcg ccattgaaag tgaggtggag caagctttca ttactatgaa 3060

tctttttggc cagaccacca gtgtgtggat aggtttacaa aatgatgatt atgaaacatg 3120

gctaaatgga aagcctgtgg tatattctaa ctggtctcca tttgatataa taaatattcc 3180

aagtcacaat accactgaag ttcagaaaca cattcctctc tgtgccttac tctcaagtaa 3240

tcctaatttt catttcactg gaaaatggta ttttgaagac tgtggaaagg aaggctatgg 3300

gtttgtttgt gaaaaaatgc aagatacttc tggacacggt gtaaatacat ctgatatgta 3360

tccaatgccc aataccttag aatatggaaa cagaacttac aaaataatta atgcaaatat 3420

gacttggtat gcagcaataa aaacctgcct gatgcacaaa gcacaactgg tcagcatcac 3480

agaccagtat caccagtcct tcctcactgt tgtcctcaac cggctaggat atgcccactg 3540

gattggactg ttcaccacag ataatggtct taattttgac tggtctgatg gcaccaaatc 3600

ttctttcact ttttggaaag atgaggagtc ctccctcctt ggtgactgcg tttttgccga 3660

cagcaacgga cgctggcata gcacagcctg cgagtcattt ctgcaaggtg ccatttgtca 3720

tgtgccacct gaaacaagac aatctgaaca cccagagttg tgctcagaaa catctattcc 3780

ctggataaaa tttaaaagta attgctacag tttttctaca gtcctagaca gtatgagttt 3840

tgaggctgct catgaatttt gcaaaaagga aggttctaat cttttaacaa tcaaggatga 3900

ggctgaaaat gcatttctcc tagaagagct gtttgctttt ggttcttctg tccagatggt 3960

ttggttgaat gctcaatttg atgatgaaac cataaagtgg tttgatggaa ctcccacaga 4020

ccagtcaaac tggggcattc ggaagccaga cacagactac ttcaagcccc atcattgtgt 4080

tgccttgagg atccctgaag gattatggca gctatccccg tgtcaagaaa aaaaaggctt 4140

tatatgtaaa atggaggcag atattcacac tgcagaggcg ctgccagaaa aaggaccaag 4200

tcacagcatc attcctcttg cggttgtact gacactgata gtcattgtgg ccatttgcac 4260

actttccttc tgcatataca agcataacgg tggcttcttc aggagacttg cagggtttcg 4320

gaatccttac tatcctgcaa ccaactttag tacagtatat ttagaagaaa atattctcat 4380

ttctgatctt gagaagagtg accaataata atgaggtcag agaatgccac agacaccagg 4440

g 4441

<210> 42

<211> 135

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 α铰链结构域

<400> 42

accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60

tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120

gacttcgcct gtgat 135

<210> 43

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 α铰链结构域

<400> 43

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 44

<211> 55

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 α铰链结构域

<400> 44

Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

20 25 30

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg

35 40 45

Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

50 55

<210> 45

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3 ζ信号传导结构域

<400> 45

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 46

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG信号肽

<400> 46

atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgc 57

<210> 47

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR

<400> 47

aaaggaatat ttgtcattca gtcagagtct ttgaaaaagt gcatacaggc tggaaaaagc 60

gtgcttaccc tggagaactg caagcaagct aataagcata tgctttggaa atgggttagc 120

aaccacggac tctttaatat cggaggctcc ggctgtctgg gcctgaactt cagtgcaccg 180

gagcaaccgc tttctctgta cgaatgtgat agcacacttg ttagtcttcg gtggcggtgt 240

aaccgaaaaa tgattacagg ccctctgcaa tatagtgttc aagtggccca cgacaataca 300

gttgtggcgt ctagaaaata tattcacaag tggatttcct acgggagcgg cggaggggat 360

atatgtgaat atcttcacaa agacttgcat acaatc 396

<210> 48

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IgG信号肽

<400> 48

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys

<210> 49

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR

<400> 49

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile

130

<210> 50

<211> 990

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1

<400> 50

aaagggatct ttgttataca aagtgagagc ttgaaaaaat gtatacaggc tggcaaaagt 60

gtactgactc ttgaaaattg caaacaagcc aacaaacaca tgctgtggaa atgggtgtct 120

aatcacggtc tcttcaatat tgggggaagt ggatgcctcg gcctgaattt ctccgctccc 180

gaacagcccc tctcacttta tgagtgtgat tcaactctgg tgtccttgag gtggcgatgt 240

aaccgcaaga tgataaccgg ccccctccag tattccgtcc aagtagcaca cgacaatacc 300

gtggtggcat ctaggaaata cattcataag tggatatctt atggcagtgg tggcggtgac 360

atatgcgagt acctgcacaa ggacctccac acaataaagg ggaacacgca cgggatgccg 420

tgtatgttcc cgttccaata taatcatcaa tggcaccatg agtgtacgag agaggggcga 480

gaagacgacc tcctgtggtg tgcgaccacc tcaagatatg aacgggatga gaagtggggc 540

ttttgccccg acccaacctc cgccgaggtt ggttgcgaca ctatttggga aaaagatttg 600

aacagtcata tatgctatca atttaatttg ttgagttcac tctcctggag cgaagcgcac 660

agctcttgtc agatgcaagg tggtacattg cttagcatta ctgatgaaac tgaggagaat 720

ttcattaggg agcatatgtc ctcaaagaca gtagaggtgt ggatgggtct gaaccagctc 780

gacgaacacg ccggttggca gtggtcagat ggaacgcctc tgaattatct caactggtcc 840

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<210> 51

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1

<400> 51

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

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Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

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Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu

325 330

<210> 52

<211> 1848

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1-3

<400> 52

aaagggattt tcgtgataca gtccgagagt ctcaaaaagt gtatccaggc aggcaaaagt 60

gttctcactc tggaaaactg caaacaagcg aacaagcaca tgttgtggaa gtgggttagt 120

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gaacagcctt tgtcactgta cgaatgcgac tccactctcg ttagtcttag atggcgatgc 240

aatcgcaaaa tgattacggg accacttcaa tattcagttc aagtggcaca tgataacacc 300

gtagtggcct cacggaaata catccataaa tggatttctt atggtagcgg gggcggcgat 360

atatgtgaat acctccataa ggatctccac accattaagg gtaatactca cggtatgccg 420

tgtatgtttc cttttcagta caatcatcag tggcatcatg aatgcacgag ggaaggacgc 480

gaggacgatt tgctctggtg cgcaaccacc tcacgctacg agagagacga aaaatggggc 540

ttttgcccgg accccactag tgctgaggta ggatgtgata cgatttggga aaaggatttg 600

aattctcata tttgctacca gtttaatctt ctttcatccc tgtcctggtc tgaggctcat 660

tctagttgcc agatgcaagg tgggactttg ctttcaatta ctgacgagac tgaggaaaat 720

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gacgaacacg cgggctggca gtggagcgac gggacacctc tcaactacct taattggagc 840

cctgaggtaa actttgaacc gtttgtcgag gatcactgcg gaactttcag cagcttcatg 900

cctagtgcat ggcggtcccg agactgtgag agcacccttc catacatatg taaaaaatac 960

ctcaatcaca tagaccacga gatcgtagag aaggatgcat ggaaatatta tgctacgcac 1020

tgtgagccgg gatggaatcc ttataaccgc aactgttaca agctgcaaaa agaagagaag 1080

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<210> 53

<211> 616

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1-3

<400> 53

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

290 295 300

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

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Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr

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Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp Asn Pro Tyr Asn Arg Asn Cys

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Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile Pro Val Ser Phe Glu Trp Ser

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Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu Glu Arg Leu Phe Tyr Ile Cys

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Gly Trp Glu Arg His Gly Gly Phe Cys Tyr Lys Ile Asp Thr Val Leu

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Ser Ser Val Val Lys Met Lys Asp Ser Tyr Phe Trp Ile Ala Leu Gln

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Asp Gln Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Thr Trp Lys Pro Val Gly Gln Lys

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565 570 575

Ser Gly Gly Cys Val Ala Met Arg Gly Arg His Pro Leu Gly Arg Trp

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Pro Val Glu Asn Gln Glu Lys Ala

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<210> 54

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1-3 7

<400> 54

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aaccatggac tgttcaacat cggaggtagt ggatgccttg gtctcaattt ctctgctccg 180

gaacagcctt tgtcactgta cgaatgcgac tccactctcg ttagtcttag atggcgatgc 240

aatcgcaaaa tgattacggg accacttcaa tattcagttc aagtggcaca tgataacacc 300

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atatgtgaat acctccataa ggatctccac accattaagg gtaatactca cggtatgccg 420

tgtatgtttc cttttcagta caatcatcag tggcatcatg aatgcacgag ggaaggacgc 480

gaggacgatt tgctctggtg cgcaaccacc tcacgctacg agagagacga aaaatggggc 540

ttttgcccgg accccactag tgctgaggta ggatgtgata cgatttggga aaaggatttg 600

aattctcata tttgctacca gtttaatctt ctttcatccc tgtcctggtc tgaggctcat 660

tctagttgcc agatgcaagg tgggactttg ctttcaatta ctgacgagac tgaggaaaat 720

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acatggcatg aggcgctgcg ctcatgtcaa gcggacaatt ctgcacttat agatataact 1140

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caggcttcaa gcgggtacta ttgtcctcct gcactggtta caatcacgaa ccggtttgaa 1560

caggctttta taacttcttt gatttccagc gtggttaaaa tgaaggactc ttatttctgg 1620

atagccctgc aagaccaaaa tgataccggt gagtacacat ggaaaccggt aggtcaaaag 1680

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gtggcgatgc ggggtcgcca ccctctcgga cgctgggagg tgaagcattg ccgccacttc 1800

aaggcgatga gcttgtgtaa acagcccgtc gaaaatcagg aaaaggcagt taacacatct 1860

gatatgtacc ctatgcctaa cacactcgaa tatgggaata ggacgtacaa gattataaac 1920

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<210> 55

<211> 756

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1-3 7

<400> 55

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

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Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

290 295 300

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

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Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr

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Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp Asn Pro Tyr Asn Arg Asn Cys

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355 360 365

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370 375 380

Val Glu Phe Leu Val Thr Leu Leu Gly Asp Glu Asn Ala Ser Glu Thr

385 390 395 400

Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile Pro Val Ser Phe Glu Trp Ser

405 410 415

Asn Asp Ser Ser Val Ile Phe Thr Asn Trp His Thr Leu Glu Pro His

420 425 430

Ile Phe Pro Asn Arg Ser Gln Leu Cys Val Ser Ala Glu Gln Ser Glu

435 440 445

Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu Glu Arg Leu Phe Tyr Ile Cys

450 455 460

Lys Lys Ala Gly His Val Leu Ser Asp Ala Glu Ser Gly Cys Gln Glu

465 470 475 480

Gly Trp Glu Arg His Gly Gly Phe Cys Tyr Lys Ile Asp Thr Val Leu

485 490 495

Arg Ser Phe Asp Gln Ala Ser Ser Gly Tyr Tyr Cys Pro Pro Ala Leu

500 505 510

Val Thr Ile Thr Asn Arg Phe Glu Gln Ala Phe Ile Thr Ser Leu Ile

515 520 525

Ser Ser Val Val Lys Met Lys Asp Ser Tyr Phe Trp Ile Ala Leu Gln

530 535 540

Asp Gln Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Thr Trp Lys Pro Val Gly Gln Lys

545 550 555 560

Pro Glu Pro Val Gln Tyr Thr His Trp Asn Thr His Gln Pro Arg Tyr

565 570 575

Ser Gly Gly Cys Val Ala Met Arg Gly Arg His Pro Leu Gly Arg Trp

580 585 590

Glu Val Lys His Cys Arg His Phe Lys Ala Met Ser Leu Cys Lys Gln

595 600 605

Pro Val Glu Asn Gln Glu Lys Ala Val Asn Thr Ser Asp Met Tyr Pro

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755

<210> 56

<211> 1410

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1 7

<400> 56

aaaggcatct tcgtaatcca gtcagaaagt ttgaaaaaat gtatccaagc tggcaaatca 60

gtacttaccc ttgagaactg caagcaagcc aataaacata tgctgtggaa atgggtctca 120

aaccacggcc tcttcaatat tggtgggtca ggttgcttgg ggttgaattt ctccgcccca 180

gagcaaccac tcagccttta cgagtgtgat tccacacttg tctctttgcg atggcgctgc 240

aataggaaaa tgatcacagg cccccttcag tactctgtgc aagttgctca tgataacaca 300

gtcgtggcga gtcggaaata tattcacaaa tggatttctt atgggagtgg tggaggagat 360

atatgcgagt atttgcataa ggacttgcac accatcaagg gaaacactca cggtatgcca 420

tgtatgtttc cgttccaata taatcatcaa tggcaccacg aatgtacccg agagggacgc 480

gaggacgatc ttctttggtg cgccacaacc tctcgatatg aacgagatga gaagtggggg 540

ttttgtcctg acccaaccag tgcagaagta gggtgcgata ccatctggga gaaagacttg 600

aactcacaca tatgctatca gtttaatttg ttgtcttctt tgtcatggag cgaagctcat 660

tcatcatgcc agatgcaggg cgggacactg ctttctatca ccgacgagac tgaggaaaat 720

tttatccgcg agcacatgtc aagcaagaca gttgaggttt ggatggggct caatcaactg 780

gacgaacacg cagggtggca gtggtccgat ggcactccgc tcaactacct taactggagc 840

ccagaggtga actttgagcc gtttgtcgaa gatcactgtg gtacttttag ctccttcatg 900

ccgtccgcat ggagaagtcg cgactgcgag tcaaccctcc cttacatctg taagaaatac 960

ctcaaccaca tagatcacga aatcgtagag gtcaatacgt ccgacatgta cccaatgcca 1020

aatacgttgg aatatgggaa taggacatac aagataatta acgcaaatat gacgtggtat 1080

gccgcaatca aaacgtgcct catgcacaag gcacagctcg tgtcaattac ggaccagtac 1140

caccaatcat ttctcacagt cgttcttaat cgattgggtt atgcacactg gataggcttg 1200

ttcacgacgg acaatggttt gaactttgac tggtccgatg gaactaaaag ttctttcact 1260

ttttggaagg atgaggagtc ctccttgctc ggggactgcg tcttcgcaga ttcaaacggg 1320

cgctggcact caacggcatg tgagtccttc ctgcagggag ctatatgcca tgtgccacca 1380

gaaacacgcc agtctgagca ccctgagttg 1410

<210> 57

<211> 470

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1 7

<400> 57

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

290 295 300

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

305 310 315 320

Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Val Asn Thr Ser Asp Met

325 330 335

Tyr Pro Met Pro Asn Thr Leu Glu Tyr Gly Asn Arg Thr Tyr Lys Ile

340 345 350

Ile Asn Ala Asn Met Thr Trp Tyr Ala Ala Ile Lys Thr Cys Leu Met

355 360 365

His Lys Ala Gln Leu Val Ser Ile Thr Asp Gln Tyr His Gln Ser Phe

370 375 380

Leu Thr Val Val Leu Asn Arg Leu Gly Tyr Ala His Trp Ile Gly Leu

385 390 395 400

Phe Thr Thr Asp Asn Gly Leu Asn Phe Asp Trp Ser Asp Gly Thr Lys

405 410 415

Ser Ser Phe Thr Phe Trp Lys Asp Glu Glu Ser Ser Leu Leu Gly Asp

420 425 430

Cys Val Phe Ala Asp Ser Asn Gly Arg Trp His Ser Thr Ala Cys Glu

435 440 445

Ser Phe Leu Gln Gly Ala Ile Cys His Val Pro Pro Glu Thr Arg Gln

450 455 460

Ser Glu His Pro Glu Leu

465 470

<210> 58

<211> 1251

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-CTLD1 7

<400> 58

aaaggaatct tcgtaattca atctgagagt ctgaaaaaat gtattcaggc cggtaagagc 60

gtactcacgc ttgaaaattg caaacaggcc aacaaacaca tgctttggaa atgggtttca 120

aatcacgggt tgtttaacat agggggatca ggatgtctgg gccttaactt ttccgcacct 180

gaacaacctc ttagtctgta tgagtgtgac tcaacgctgg tctccttgcg ctggagatgc 240

aatcggaaga tgataaccgg gcccctccag tattccgttc aggtcgccca cgataatact 300

gttgttgcat cccgaaaata tattcataag tggatctcct acgggagtgg agggggcgat 360

atttgtgaat acctccacaa ggatctgcac actatcactt ctgcggaagt aggctgtgac 420

acaatctggg agaaagatct gaattcacac atttgctatc agttcaatct tctgagttct 480

ttgagctggt ccgaagcaca ttcatcctgt cagatgcaag gtggaacact cttgtcaata 540

acagatgaaa cggaagagaa ctttattaga gaacatatgt cctcaaagac tgtggaggtg 600

tggatgggac ttaaccagct cgatgaacat gcaggatggc agtggagtga cggaacgcca 660

ctgaactacc tgaattggag cccagaggtg aatttcgagc ctttcgtaga ggaccattgc 720

ggtacttttt catcttttat gcccagcgca tggagatccc gagattgtga aagcacgctg 780

ccctatattt gtaaaaagta cctgaaccac atagatcatg agatagttga ggtaaataca 840

agtgatatgt accccatgcc gaacacactc gagtacggaa atagaaccta caagataatc 900

aacgctaaca tgacctggta cgcggccatt aagacctgcc tcatgcacaa ggctcaactc 960

gtcagtatta ctgaccaata tcaccagtca tttctcaccg tcgtgttgaa tcgcctcggt 1020

tacgcccact ggatcggttt gtttacaacg gacaatggac tcaatttcga ttggtcagac 1080

ggaaccaaat ctagttttac cttctggaaa gacgaggaat caagcctgct tggggactgc 1140

gtatttgcgg actctaatgg ccgatggcat agtacagcgt gtgagagctt tttgcagggg 1200

gcgatttgtc atgttccgcc ggaaacccgc caaagcgagc atccagaatt g 1251

<210> 59

<211> 417

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-CTLD1 7

<400> 59

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys Asp Thr Ile Trp Glu

130 135 140

Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe Asn Leu Leu Ser Ser

145 150 155 160

Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln Met Gln Gly Gly Thr

165 170 175

Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn Phe Ile Arg Glu His

180 185 190

Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly Leu Asn Gln Leu Asp

195 200 205

Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr Pro Leu Asn Tyr Leu

210 215 220

Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe Val Glu Asp His Cys

225 230 235 240

Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp Arg Ser Arg Asp Cys

245 250 255

Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr Leu Asn His Ile Asp

260 265 270

His Glu Ile Val Glu Val Asn Thr Ser Asp Met Tyr Pro Met Pro Asn

275 280 285

Thr Leu Glu Tyr Gly Asn Arg Thr Tyr Lys Ile Ile Asn Ala Asn Met

290 295 300

Thr Trp Tyr Ala Ala Ile Lys Thr Cys Leu Met His Lys Ala Gln Leu

305 310 315 320

Val Ser Ile Thr Asp Gln Tyr His Gln Ser Phe Leu Thr Val Val Leu

325 330 335

Asn Arg Leu Gly Tyr Ala His Trp Ile Gly Leu Phe Thr Thr Asp Asn

340 345 350

Gly Leu Asn Phe Asp Trp Ser Asp Gly Thr Lys Ser Ser Phe Thr Phe

355 360 365

Trp Lys Asp Glu Glu Ser Ser Leu Leu Gly Asp Cys Val Phe Ala Asp

370 375 380

Ser Asn Gly Arg Trp His Ser Thr Ala Cys Glu Ser Phe Leu Gln Gly

385 390 395 400

Ala Ile Cys His Val Pro Pro Glu Thr Arg Gln Ser Glu His Pro Glu

405 410 415

Leu

<210> 60

<211> 387

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR

<400> 60

aagggcatct tcgtgatcca gagcgagagc ctgaagaagt gcatccaggc cggcaagagc 60

gtgctgaccc tggaaaattg caagcaggcc aacaagcaca tgctgtggaa atgggtgtcc 120

aaccacggcc tgttcaacat cggcggctct ggatgtctgg gcctgaattt ctctgcccct 180

gagcagcctc tgagcctgta cgagtgtgat agcaccctgg tgtccctgag atggcggtgc 240

aaccggaaga tgatcacagg ccctctgcag tactctgtgc aggtcgccca cgacaatacc 300

gtggtggcca gcagaaagta catccacaag tggatcagct acggcagcgg cggaggcgac 360

atctgtgaat acctgcacaa ggatctg 387

<210> 61

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR

<400> 61

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu

<210> 62

<211> 1026

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1

<400> 62

aagggcatct tcgtgatcca gagcgagagc ctgaagaagt gcatccaggc cggcaagagc 60

gtgctgaccc tggaaaattg caagcaggcc aacaagcaca tgctgtggaa atgggtgtcc 120

aaccacggcc tgttcaacat cggcggctct ggatgtctgg gcctgaattt ctctgcccct 180

gagcagcctc tgagcctgta cgagtgtgat agcaccctgg tgtccctgag atggcggtgc 240

aaccggaaga tgatcacagg ccctctgcag tactctgtgc aggtcgccca cgacaatacc 300

gtggtggcca gcagaaagta catccacaag tggatcagct acggcagcgg cggaggcgac 360

atctgtgaat acctgcacaa ggatctgcac accatcaagg gcaacaccca cggaatgccc 420

tgcatgttcc cgtttcagta caaccaccag tggcaccacg agtgcaccag agaaggcaga 480

gaggacgacc tgctttggtg cgccacaacc agcagatacg agcgggatga gaagtggggc 540

ttctgccctg atcctacctc tgccgaagtg ggctgcgata ccatctggga gaaagacctg 600

aacagccaca tctgctacca gttcaacctg ctgtccagcc tgtcttggag cgaggcccac 660

agcagctgtc aaatgcaagg cggcacactg ctgagcatca ccgacgagac agaggaaaac 720

ttcatccgcg agcacatgag cagcaagacc gtggaagtgt ggatgggact gaaccagctg 780

gatgagcatg ccggatggca gtggagtgat ggcacccctc tgaactacct gaactggtcc 840

cctgaagtga acttcgagcc cttcgtggaa gatcactgcg gcaccttcag cagcttcatg 900

cccagcgctt ggagaagcag agactgcgag agcaccctgc cttacatctg caagaagtac 960

ctgaaccaca tcgaccacga gatcgtggaa aaggacgcct ggaagtacta cgccacacac 1020

tgcgag 1026

<210> 63

<211> 342

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CysR-FNII-CTLD1

<400> 63

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

290 295 300

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

305 310 315 320

Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr

325 330 335

Tyr Ala Thr His Cys Glu

340

<210> 64

<211> 165

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 α铰链结构域

<400> 64

ttcgtgccgg tcttcctgcc agcgaagcca accacgacgc cagcaccgcg accaccaaca 60

cctgcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg cagaccagca 120

gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgat 165

<210> 65

<211> 60

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R信号肽

<400> 65

atgctgctga gccctagcct gctgctgctc ctgcttcttg gagcccctag aggatgtgcc 60

<210> 66

<211> 126

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 4-1BB细胞内结构域

<400> 66

aagcgcggtc gcaagaaact gctctatatt tttaaacagc cattcatgag acctgtccag 60

accactcaag aggaggacgg atgttcctgt agatttcctg aagaggaaga gggggggtgc 120

gagctg 126

<210> 67

<211> 57

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PLA2R pro-peptide

<400> 67

ggatctgaag gtgttgccgc cgctctgaca cccgagagac tgctggaatg gcaggac 57

<210> 68

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GS 接头

<400> 68

ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc 30

<210> 69

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GS 接头

<400> 69

ggggsggggs 10

<210> 70

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 构建体4027.CF12的细胞外结构域

<400> 70

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

290 295 300

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

305 310 315 320

Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr

325 330 335

Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp Asn Pro Tyr Asn Arg Asn Cys

340 345 350

Tyr Lys Leu Gln Lys Glu Glu Lys Thr Trp His Glu Ala Leu Arg Ser

355 360 365

Cys Gln Ala Asp Asn Ser Ala Leu Ile Asp Ile Thr Ser Leu Ala Glu

370 375 380

Val Glu Phe Leu Val Thr Leu Leu Gly Asp Glu Asn Ala Ser Glu Thr

385 390 395 400

Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile Pro Val Ser Phe Glu Trp Ser

405 410 415

Asn Asp Ser Ser Val Ile Phe Thr Asn Trp His Thr Leu Glu Pro His

420 425 430

Ile Phe Pro Asn Arg Ser Gln Leu Cys Val Ser Ala Glu Gln Ser Glu

435 440 445

Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu Glu Arg Leu Phe Tyr Ile Cys

450 455 460

Lys Lys Ala Gly His Val Leu Ser Asp Ala Glu Ser Gly Cys Gln

465 470 475

<210> 71

<211> 629

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 构建体4028.CF123的细胞外结构域

<400> 71

Lys Gly Ile Phe Val Ile Gln Ser Glu Ser Leu Lys Lys Cys Ile Gln

1 5 10 15

Ala Gly Lys Ser Val Leu Thr Leu Glu Asn Cys Lys Gln Ala Asn Lys

20 25 30

His Met Leu Trp Lys Trp Val Ser Asn His Gly Leu Phe Asn Ile Gly

35 40 45

Gly Ser Gly Cys Leu Gly Leu Asn Phe Ser Ala Pro Glu Gln Pro Leu

50 55 60

Ser Leu Tyr Glu Cys Asp Ser Thr Leu Val Ser Leu Arg Trp Arg Cys

65 70 75 80

Asn Arg Lys Met Ile Thr Gly Pro Leu Gln Tyr Ser Val Gln Val Ala

85 90 95

His Asp Asn Thr Val Val Ala Ser Arg Lys Tyr Ile His Lys Trp Ile

100 105 110

Ser Tyr Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Cys Glu Tyr Leu His Lys Asp

115 120 125

Leu His Thr Ile Lys Gly Asn Thr His Gly Met Pro Cys Met Phe Pro

130 135 140

Phe Gln Tyr Asn His Gln Trp His His Glu Cys Thr Arg Glu Gly Arg

145 150 155 160

Glu Asp Asp Leu Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Arg Tyr Glu Arg Asp

165 170 175

Glu Lys Trp Gly Phe Cys Pro Asp Pro Thr Ser Ala Glu Val Gly Cys

180 185 190

Asp Thr Ile Trp Glu Lys Asp Leu Asn Ser His Ile Cys Tyr Gln Phe

195 200 205

Asn Leu Leu Ser Ser Leu Ser Trp Ser Glu Ala His Ser Ser Cys Gln

210 215 220

Met Gln Gly Gly Thr Leu Leu Ser Ile Thr Asp Glu Thr Glu Glu Asn

225 230 235 240

Phe Ile Arg Glu His Met Ser Ser Lys Thr Val Glu Val Trp Met Gly

245 250 255

Leu Asn Gln Leu Asp Glu His Ala Gly Trp Gln Trp Ser Asp Gly Thr

260 265 270

Pro Leu Asn Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Val Asn Phe Glu Pro Phe

275 280 285

Val Glu Asp His Cys Gly Thr Phe Ser Ser Phe Met Pro Ser Ala Trp

290 295 300

Arg Ser Arg Asp Cys Glu Ser Thr Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Lys Tyr

305 310 315 320

Leu Asn His Ile Asp His Glu Ile Val Glu Lys Asp Ala Trp Lys Tyr

325 330 335

Tyr Ala Thr His Cys Glu Pro Gly Trp Asn Pro Tyr Asn Arg Asn Cys

340 345 350

Tyr Lys Leu Gln Lys Glu Glu Lys Thr Trp His Glu Ala Leu Arg Ser

355 360 365

Cys Gln Ala Asp Asn Ser Ala Leu Ile Asp Ile Thr Ser Leu Ala Glu

370 375 380

Val Glu Phe Leu Val Thr Leu Leu Gly Asp Glu Asn Ala Ser Glu Thr

385 390 395 400

Trp Ile Gly Leu Ser Ser Asn Lys Ile Pro Val Ser Phe Glu Trp Ser

405 410 415

Asn Asp Ser Ser Val Ile Phe Thr Asn Trp His Thr Leu Glu Pro His

420 425 430

Ile Phe Pro Asn Arg Ser Gln Leu Cys Val Ser Ala Glu Gln Ser Glu

435 440 445

Gly His Trp Lys Val Lys Asn Cys Glu Glu Arg Leu Phe Tyr Ile Cys

450 455 460

Lys Lys Ala Gly His Val Leu Ser Asp Ala Glu Ser Gly Cys Gln Glu

465 470 475 480

Gly Trp Glu Arg His Gly Gly Phe Cys Tyr Lys Ile Asp Thr Val Leu

485 490 495

Arg Ser Phe Asp Gln Ala Ser Ser Gly Tyr Tyr Cys Pro Pro Ala Leu

500 505 510

Val Thr Ile Thr Asn Arg Phe Glu Gln Ala Phe Ile Thr Ser Leu Ile

515 520 525

Ser Ser Val Val Lys Met Lys Asp Ser Tyr Phe Trp Ile Ala Leu Gln

530 535 540

Asp Gln Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Thr Trp Lys Pro Val Gly Gln Lys

545 550 555 560

Pro Glu Pro Val Gln Tyr Thr His Trp Asn Thr His Gln Pro Arg Tyr

565 570 575

Ser Gly Gly Cys Val Ala Met Arg Gly Arg His Pro Leu Gly Arg Trp

580 585 590

Glu Val Lys His Cys Arg His Phe Lys Ala Met Ser Leu Cys Lys Gln

595 600 605

Pro Val Glu Asn Gln Glu Lys Ala Glu Tyr Glu Glu Arg Trp Pro Phe

610 615 620

His Pro Cys Tyr Leu

625

<210> 72

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3 ζ细胞内结构域

<400> 72

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336

Claims (69)

1.一种编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中所述CAAR包括磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述PLA2R自身抗原或其片段选自：

(a)包括CysR或蓖麻毒素B型凝集素结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2的细胞外结构域；和，

(b)包括CysR或蓖麻毒素B型凝集素结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3的细胞外结构域。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中

所述PLA2R细胞外结构域(a)由包括SEQ ID NO：8的核酸序列编码，或

所述PLA2R细胞外结构域(b)由包括SEQ ID NO：15的核酸序列编码。

4.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述PLA2R自身抗原或其片段选自：

(a)包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域，

(b)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域和C型凝集素结构域1的细胞外结构域，

(c)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3的细胞外结构域，

(d)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2、C型凝集素结构域3和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，

(e)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，和

(f)包括富含半胱氨酸的结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7的细胞外结构域。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中

所述PLA2R细胞外结构域(a)由包括SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：60的核酸序列编码，

所述PLA2R细胞外结构域(b)由包括SEQ ID NO：50或SEQ ID NO：62的核酸序列编码，

所述PLA2R细胞外结构域(c)由包括SEQ ID NO：52的核酸序列编码，

所述PLA2R细胞外结构域(d)由包括SEQ ID NO：54的核酸序列编码，

所述PLA2R细胞外结构域(e)由包括SEQ ID NO：56的核酸序列编码，或

所述PLA2R细胞外结构域(f)由包括SEQ ID NO：58的核酸序列编码。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包括CD8α链跨膜结构域。

7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述CD8α链跨膜结构域由包括SEQ ID NO：20的核酸序列编码。

8.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述CD8α链跨膜结构域包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAAR进一步包括铰链结构域。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述铰链结构域由包括SEQ ID NO：10或SEQID NO：42或SEQ ID NO：64的核酸序列编码。

11.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述铰链结构域包括SEQ ID NO：SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：44的氨基酸序列。

12.根据权利要求1-8中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAAR进一步包括GS接头。

13.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述GS接头由包括SEQ ID NO：68的核酸序列编码。

14.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述GS接头包括SEQ ID NO：69。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的多核苷酸，其中共刺激分子的细胞内结构域包括4-1BB。

16.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述4-1BB细胞内结构域由包括SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：66的核酸序列编码。

17.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述4-1BB细胞内结构域包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的多核苷酸，其中所述信号传导结构域包括CD3ζ信号传导结构域。

19.根据权利要求18所述的多核苷酸，其中所述CD3ζ信号传导结构域由包括SEQ IDNO：24或SEQ ID NO：72的核酸序列编码。

20.根据权利要求18所述的多核苷酸，其中所述CD3ζ信号传导结构域包括SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：45的氨基酸序列。

21.根据权利要求1-20中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAAR由选自SEQ ID NO：11、17、25、27、29、31、33、35、37和39的核酸序列编码。

22.根据权利要求1-20中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAAR包括选自SEQ ID NO：12、18、26、28、30、32、34、36、38和40的氨基酸序列。

23.根据权利要求1-5中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAAR包括磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域。

24.一种载体，其包括根据权利要求1-23中任一项所述的多核苷酸。

25.根据权利要求24所述的载体，其中所述载体为慢病毒载体。

26.根据权利要求24所述的载体，其中所述载体为RNA载体。

27.一种嵌合自身抗体受体(CAAR)，其包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域。

28.一种嵌合自身抗体受体(CAAR)，其包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域。

29.根据权利要求27或28所述的CAAR，其中所述PLA2R自身抗原或其片段选自：

(a)包括蓖麻毒素B型凝集素结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域2的细胞外结构域；和，

(b)包括蓖麻毒素B型凝集素结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2和C型凝集素结构域3的细胞外结构域。

30.根据权利要求29所述的CAAR，其中

所述PLA2R细胞外结构域(a)由包括SEQ ID NO：8的核酸序列编码，或

所述PLA2R细胞外结构域(b)由包括SEQ ID NO：15的核酸序列编码。

31.根据权利要求27或28所述的CAAR，其中所述PLA2R自身抗原或其片段选自：

(a)包括富含半胱氨酸的结构域的细胞外结构域，

(b)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域和C型凝集素结构域1的细胞外结构域，

(c)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2、C型凝集素结构域3和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，

(d)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1、C型凝集素结构域2、C型凝集素结构域3和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，

(e)包括富含半胱氨酸的结构域、纤连蛋白II型结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7的细胞外结构域，和

(f)包括富含半胱氨酸的结构域、C型凝集素结构域1和C型凝集素结构域7的细胞外结构域。

32.根据权利要求31所述的CAAR，其中

所述PLA2R细胞外结构域(a)包括SEQ ID NO：49或SEQ ID NO：61，

所述PLA2R细胞外结构域(b)包括SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：63的氨基酸序列，

所述PLA2R细胞外结构域(c)包括SEQ ID NO：53的氨基酸序列，

所述PLA2R细胞外结构域(d)包括SEQ ID NO：55的氨基酸序列，或

所述PLA2R细胞外结构域(e)包括SEQ ID NO：57的氨基酸序列，或

所述PLA2R细胞外结构域(f)包括SEQ ID NO：59的氨基酸序列。

33.根据权利要求28-32中任一项所述的CAAR，其中所述跨膜结构域包括CD8α链跨膜结构域。

34.根据权利要求33所述的CAAR，其中所述CD8α链跨膜结构域由包括SEQ ID NO:20的核酸序列编码。

35.根据权利要求33所述的CAAR，其中所述CD8α链跨膜结构域包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列。

36.根据权利要求27-35中任一项所述的CAAR，其中所述CAAR进一步包括铰链结构域。

37.根据权利要求36所述的CAAR，其中所述铰链结构域由包括SEQ ID NO:10或SEQ IDNO：42或SEQ ID NO：64的核酸序列编码。

38.根据权利要求36所述的CAAR，其中所述铰链结构域包括SEQ ID NO:SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：44的氨基酸序列。

39.根据权利要求27-35中任一项所述的CAAR，其中所述CAAR进一步包括GS接头。

40.根据权利要求39所述的CAAR，其中所述GS接头由包括SEQ ID NO：68的核酸序列编码。

41.根据权利要求39所述的CAAR，其中所述GS接头包括SEQ ID NO：69。

42.根据权利要求28-41中任一项所述的CAAR，其中共刺激分子的细胞内结构域包括4-1BB。

43.根据权利要求42所述的CAAR，其中所述4-1BB细胞内结构域由包括SEQ ID NO:22或SEQ ID NO：66的核酸序列编码。

44.根据权利要求42所述的CAAR，其中所述4-1BB细胞内结构域包括SEQ ID NO:21的氨基酸序列。

45.根据权利要求28-44中任一项所述的CAAR，其中所述信号传导结构域包括CD3ζ信号传导结构域。

46.根据权利要求45所述的CAAR，其中所述CD3ζ信号传导结构域由包括SEQ ID NO:24或SEQ ID NO：72的核酸序列编码。

47.根据权利要求45所述的CAAR，其中所述CD3ζ信号传导结构域包括SEQ ID NO:23或SEQ ID NO：45的氨基酸序列。

48.根据权利要求28-47中任一项所述的CAAR，其中所述CAAR由选自SEQ ID NO：11、17、25、27、29、31、33、35、37和39的核酸序列编码。

49.根据权利要求28-47中任一项所述的CAAR，其中所述CAAR包括选自SEQ ID NO：12、18、26、28、30、32、34、36、38和40的氨基酸序列。

50.根据权利要求27-32中任一项所述的CAAR，其中所述CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域的细胞外结构域。

51.一种基因修饰的细胞，其包括根据权利要求27-50中任一项所述的CAAR。

52.根据权利要求51所述的细胞，其中所述细胞表达CAAR，并且对B细胞上基于自身抗体的BCR具有高亲和力。

53.根据权利要求51或52所述的细胞，其中所述细胞表达CAAR并诱导杀死表达自身抗体的B细胞。

54.根据权利要求51-53中任一项所述的细胞，其中所述细胞表达CAAR并且对健康细胞具有有限的毒性。

55.根据权利要求51-54中任一项所述的细胞，其中所述细胞选自辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、γδT细胞、天然杀伤细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、其细胞系、T记忆干细胞、源自多能干细胞的T细胞和其他效应细胞。

56.一种基因修饰的细胞，其包括：(a)嵌合自身抗体受体(CAAR)，其包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域；和(b)DAP12。

57.一种药物组合物，其包括根据权利要求1-23中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求27-50中任一项所述的CAAR或根据权利要求51-57中任一项所述的细胞，和药学上可接受的赋形剂。

58.一种用于治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，所述T细胞包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段、以及任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域，从而治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病。

59.一种用于预防或减少处于患自身抗体介导的肾脏疾病的风险中或患有自身抗体介导的肾脏疾病的受试者中的肾小球损害的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，所述T细胞包括编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段，和任选地跨膜结构域、共刺激分子的细胞内结构域和/或信号传导结构域，从而预防或减少受试者中的肾小球损害。

60.根据权利要求58-59中任一项所述的方法，其中所述自身抗体介导的肾脏疾病选自肾小球疾病和原发性膜性肾病。

61.根据权利要求58-60中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

62.根据权利要求58-61中任一项所述的方法，其中所述修饰的T细胞靶向B细胞。

63.一种用于治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，所述T细胞包括：(a)编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，所述CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域；和(b)编码DAP12的多核苷酸，从而治疗受试者中自身抗体介导的肾脏疾病。

64.一种用于预防或减少处于患自身抗体介导的肾脏疾病的风险中或患有自身抗体介导的肾脏疾病的受试者中的肾小球损害的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的基因修饰的T细胞，所述T细胞包括：(a)编码嵌合自身抗体受体(CAAR)的多核苷酸，所述CAAR包括包含磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗原或其片段的细胞外结构域、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)跨膜结构域和KIR细胞质结构域；和(b)编码DAP12的多核苷酸，从而预防或减少受试者中的肾小球损害。

65.根据权利要求58-64中任一项所述的方法，其中所述多核苷酸是根据权利要求1-23中任一项所述的多核苷酸。

66.根据权利要求58-65中任一项所述的方法，其中所述基因修饰的细胞是根据权利要求52-56中任一项所述的细胞。

67.根据权利要求23所述的多核苷酸，根据权利要求50所述的CAAR，根据权利要求56所述的基因修饰的细胞，或根据权利要求63或64所述的方法，其中所述KIR是KIRS2或KIR2DS2。

68.根据权利要求24-26中任一项所述的载体，其中所述载体包括与编码CAAR的多核苷酸可操作地连接的诱导型启动子。

69.根据权利要求51-56中任一项所述的细胞，其中所述细胞包括与诱导型启动子可操作地连接的编码CAAR的多核苷酸。

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