KR20230137402A - 면역요법 선택을 위한 유전자 마커 - Google Patents

면역요법 선택을 위한 유전자 마커 Download PDF

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KR20230137402A
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Abstract

본 개시내용은 진단 및 예후 방법, 면역요법을 위한 조성물, 상기 조성물의 개선 방법, 및 이를 사용한 면역요법(예를 들어, T 세포, 비-T 세포, TCR-기반 요법, CAR-기반 요법, 이중특이적 T-세포 인게이저(BiTE), 및/또는 면역 체크포인트 차단)에 관한 것이다.

Description

면역요법 선택을 위한 유전자 마커
관련 출원의 교차 참조
본 출원은 2021년 2월 20일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/151,710호, 2021년 6월 3일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/196,620호, 2021년 6월 15일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/210,962호, 2021년 6월 28일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/215,838호, 2021년 7월 30일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/227,733호, 2021년 9월 30일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/250,634호 및 2021년 11월 1일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/274,342호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 개시내용은 진단 및 예후 방법, 면역요법을 위한 조성물, 상기 조성물의 개선 방법, 및 이를 사용하는 면역요법에 관한 것이다.
인간 암은 본질적으로 비정상적인 암 세포가 되기 위해 유전적 또는 후생적 전환을 진행한 정상 세포로 구성된다. 그러므로, 암 세포는 정상 세포에 의해 발현된 단백질과 구별되는 단백질(항원을 포함하지만 이에 제한되지는 않음)을 발현하기 시작한다. 이러한 비정상적인 종양 항원은 신체의 선천적 면역계에 의해 암 세포를 특이적으로 표적화하고, 살해하기 위해 사용될 수 있다. 그러나, 암 세포는 T 및 B 림프구와 같은 면역 세포가 암 세포를 성공적으로 표적화하는 것을 방지하기 위해 다양한 메커니즘을 이용한다.
인간 T 세포 치료은 환자의 암 세포를 표적화하고 살해하기 위해 풍부하거나 변형된 인간 T 세포에 의존한다. 특정 암 세포를 표적화하고 살해하기 위한 T 세포의 능력을 증가시키기 위해, T 세포를 특정 표적 암 세포로 유도하는 구조체를 발현하도록 T 세포를 조작하는 방법이 개발되었다. 예를 들어, 특정 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR) 및 T 세포 수용체(TCR)는 T 세포가 특정 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 살해할 수 있도록 한다. 그러나, CAR-T 세포의 적절한 활성에 대한 주요 장애물은 면역억제 조절제로 구성되어 있는 적대적인 종양 미세환경이다.
CAR 양성 T 세포, TCR 양성 T 세포 및 기타 세포 기반 면역요법의 속성, 환자의 면역학적 상태, 및 종양 미세환경과 임상 결과의 상관관계를 이해할 필요가 있다.
본 개시내용은 하기 실시형태, 청구범위, 상세한 설명 및 도면에 설명된 세부사항에 이의 출원이 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 본 개시내용은 다른 실시형태가 가능하고, 다수의 다른 방식으로 실행 또는 수행될 수 있다.
일반적으로 암 또는 백혈병 또는 림프종과 같은 종양이거나 이를 포함하는, 질환 또는 병태를 갖는 대상체의 치료를 위한, 방법 및 세포(예를 들어, 조작된 T 세포)의 용도 및/또는 이의 조성물을 포함하는, 면역요법(예를 들어, T 세포, 비-T 세포, TCR-기반 요법, CAR-기반 요법, 이중특이적 T-세포 인게이저(BiTE), 및/또는 면역 체크포인트 차단)이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 방법과 용도는 특정한 대안적 방법과 비교하여, 일부 방법으로 치료된 대상체에서, 개선된 반응 및/또는 보다 지속적인 반응 또는 효능 및/또는 독성 또는 다른 부작용의 감소된 위험을 위해 제공되거나 이를 달성한다. 일부 실시형태에서, 방법은 지정된 수 또는 상대적 수의 조작된 세포의 투여를 포함하며, 정의된 비의 특정 유형의 세포, 특정 환자 집단, 예컨대 특정 위험 프로파일, 병기 결정, 및/또는 사전 치료 이력을 갖는 환자 집단의 치료, 및/또는 이의 조합을 포함한다.
또한, 세포 치료 투여 후, 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)과 같은 반응; 또는 독성의 발달, 예를 들어 신경독성 또는 CRS의 발달과 같은 안전성 결과를 포함하여, 치료적 결과와 같은 결과와 상관관계가 있을 수 있는 특정 파라미터, 예를 들어 특정 바이오마커 또는 분석물의 발현을 평가하는 단계를 수반하는 방법이 제공된다. 또한, 환자 및 종양 미세환경에서 바이오마커 또는 분석물의 발현과 같은 파라미터의 평가를 기반으로, 반응 가능성 및/또는 독성 위험 가능성을 평가하기 위한 방법이 제공된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 골수 관련 유전자 시그니처가 진행중 반응자에 비해 재발자 및 무반응자에서 상향조절된다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 보다 낮은 ARG2 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 ARG2 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 진행중 반응자가 재발자 및/또는 비반응자에 비해 치료전 종양에서 보다 낮은 수준의 ARG2를 발현한다는 것을 보여준다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 보다 낮은 TREM2 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 TREM2 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자에 비해 치료전 종양에서 보다 낮은 수준의 TREM2를 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 보다 낮은 IL8 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 IL8 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자에 비해 보다 낮은 수준의 IL8 치료전 종양을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 보다 낮은 IL13 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 IL13 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자에 비해 보다 낮은 수준의 IL13 치료전 종양을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 보다 낮은 CCL20 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 CCL20 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다는 것을 제공한다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자보다 치료전 종양에서 보다 낮은 수준의 CCL20을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 재발자 및 무반응자가 특히 보다 높은 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자에서 ARG2 및 TREM2의 보다 높은 발현을 보이는 반면, 지속성 반응의 환자는 ARG2 및 TREM2의 보다 낮은 발현을 보인다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-T 피크 확장이 특히 큰 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자에서, 진행중 반응과 양의 관련성을 갖는다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 T/골수 지수의 비가 특히 큰 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자에서, 진행중 반응과 양의 관련성을 갖는다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-T 피크 확장이 T 세포 지수 및 T/골수 비와 양의 관련성을 갖는다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 베이스라인 종양 부담에 관련된 CAR-T 세포의 피크 수준이 T 세포 지수 및 T/골수 비와 양의 관련성을 갖는다는 것을 제공한다.
하기는 본 개시내용의 비제한적인 실시형태이다.
본 개시내용의 일 실시형태는 하기를 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다: 환자의 종양에서 골수성 염증 수준을 평가하는 단계; 골수성 염증 수준으로부터 적어도 부분적으로 환자가 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 투여받아야 되는지를 결정하는 단계; 및 상기 결정 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 투여하는 단계. 이와 같은 일 실시형태에서, 환자는 골수성 염증의 수준이 기준 값 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 골수성 염증의 수준이 기준 값 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 환자의 종양에서 골수성 염증의 수준을 평가하는 것은 아르기나아제 2(ARG2), 골수성 세포 2 상에 발현된 유도성 수용체(TREM2), 인터류킨 8(IL8), 인터류킨 13(IL13), 보체 C8 감마 사슬(C8G), C-C 모티프 케모카인 리간드 20(CCL20), 인터페론 람다 2(IFNL2), 온코스타틴 M(OSM), 인터류킨 11 수용체 알파(IL11RA), C-C 모티프 케모카인 리간드 11(CCL11), 흑색종 세포 접착 분자(MCAM), 프로스타글란딘 D2 수용체 2(PTGDR2), 및 C-C 모티프 케모카인 리간드 16(CCL16)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하며, 골수성 염증의 수준은 유전자 발현 수준과 관련된다. 본 개시내용의 일 실시형태는 하기를 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다: ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정함으로써 환자의 종양에서 골수성 염증의 수준을 평가하는 단계; 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준 측정으로부터, 환자가 유효 용량의 조작된 림프구를 투여받아야 할지, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 적어도 부분적으로 투여받아야 되는지를 결정하는 단계; 및 상기 결정 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 투여하는 단계. 이와 같은 일 실시형태에서, 환자는 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준이 사전결정된 수준 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준이 사전결정된 수준 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 사전결정된 수준은 대표적인 종양 집단에서 적어도 하나의 유전자의 발현 수준 중앙값이다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 병용 요법은 T-세포 증식을 향상시키는 약제, 및 종양에서 골수 집단을 감소시키는 약제 중 적어도 하나를 포함한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 적어도 하나의 약제는 항-CD47 길항제, 인터페론 유전자 자극제(STING) 작용제, ARG1/2 억제제, CD73xTGFβ mAb, CD40 작용제, FLT3 작용제, CSF/CSF1R 억제제, IDO1 억제제, TLR 작용제, PD-1 억제제, 면역조절 이미드 약물, CD20xCD3 이중특이적 항체, 종양 또는 T-세포 공자극 작용제 내의 후생유전적 랜드스케이프(landscape)를 표적으로 하는 약제, 또는 이의 조합을 포함한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 추가로 환자에서 종양 부담을 결정하는 단계; 및 환자에서 종양 부담을 결정하는 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구 및 병용 요법을 투여하는 단계를 포함한다. 이와 같은 일 실시형태에서, 환자는 종양 부담이 기준 종양 부담 값 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 환자는 종양 부담이 기준 종양 부담 값 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 기준 종양 부담 값은 2500 mm2 초과의 베이스라인 종양 부담(SPD) 또는 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 초과의 종양 대사 부피를 포함한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 병용 요법은 T-세포 증식을 향상시키는 약제, 및 종양에서 골수 집단을 감소시키는 약제 중 적어도 하나를 포함한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 추가로 종양에서 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 단계; 및 종양에서 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구 및 병용 요법을 투여하는 단계를 포함한다. 이와 같은 일 실시형태에서, 환자는 종양에서 종양 골수 세포 밀도가 사전결정된 골수 세포 밀도 수준 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 환자는 종양에서 종양 골수 세포 밀도가 사전결정된 골수 세포 밀도 수준 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 종양 골수 세포 밀도는 CD14+ 세포, CD68+ 세포, CD68+CD163+ 세포, CD68+CD206+ 세포, CD11b+ CD15+ CD14- LOX-1+ 세포, 또는 CD11b+ CD15- CD14+ S100A9+ CD68- 세포의 수준을 측정하는 것을 포함하여 정량화된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서, 기준 값은 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값이다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 조작된 림프구는 키메라 항원 수용체 T-세포이다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 유효 용량의 조작된 림프구 또는 유효 용량의 조작된 림프구 및 병용 요법은 제1 라인 치료 또는 제2 라인 치료로서 투여된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 악성종양은 고형 종양, 육종, 암종, 림프종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종(NHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종(FL), 변형된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종(SMZL), 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL)(비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병(CLL), T-세포 림프종, 하나 이상의 B-세포 급성 림프성 백혈병("BALL"), T-세포 급성 림프성 백혈병("TALL"), 급성 림프성 백혈병(ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포형 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소세포 또는 거대 세포 여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, MALT 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 골수이형성 및 골수이형성 증후군, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 혈장 세포 증식성 장애, 의미 불명 단클론 감마병증(MGUS), 형질세포종, 전신성 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, POEMS 증후군, 두경부암, 자궁경부암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 간세포 암종, 전립선암, 유방암, 또는 이들의 조합이다.
본 개시내용의 일 실시형태는 하기를 포함하는 면역요법을 필요로 하는 환자에서 면역요법의 임상적 효능을 예측하는 방법에 관한 것이다: ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하여 환자의 종양에서 골수성 염증의 수준을 평가하는 단계; 및 유전자 발현 수준으로부터 적어도 부분적으로 환자에서 면역요법의 임상적 효능의 가능성을 결정하는 단계. 이와 같은 일 실시형태에서, 임상적 효능의 가능성은 유전자 발현 수준과 반비례한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 추가로 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T-세포의 비를 측정하는 것을 포함한다. 이와 같은 일 실시형태에서, 임상적 효능의 가능성은 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비와 관련되어, 더 높은 비의 종양에서 억제성 골수 세포 지수에 대한 활성화된 T 세포 지수가 임상적 효능의 증가된 가능성을 나타내도록 한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 활성화된 T-세포 지수는 종양에서 CD3D, CD8A, CTLA4, 및 TIGIT 중 하나 이상의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하여 결정된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 추가로 환자에서 종양 부담을 결정하는 것을 포함한다. 이와 같은 일 실시형태에서, 임상적 효능의 가능성은 환자의 종양 부담과 관련되어, 기준 종양 부담 값 초과의 종양 부담이 감소된 임상적 효능의 가능성을 나타내도록 하고, 기준 종양 부담 값 미만의 종양 부담은 증가된 임상적 효능의 가능성을 나타내도록 하며, 여기서 기준 종양 부담은 2500 mm2이다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 여기서 임상적 효능은 완전 반응률, 객관적 반응률, 진행중 반응률, 반응 지속성 중앙값, 무진행 생존율 중앙값, 전체 생존율 중앙값, 또는 이의 임의의 조합을 평가하는 것을 포함하여 평가된다.
본 개시내용의 일 실시형태는 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하여 환자의 종양에서 골수성 염증 수준을 평가하는 단계; 및 적어도 부분적으로 유전자 발현 수준으로부터의 종양 억제성 미세환경 수준을 결정하는 단계를 포함하는, 환자에서 억제성 종양 미세환경(TME)을 예측하는 방법과 관련된다. 이와 같은 일 실시형태에서, 종양 억제성 미세환경 수준은 유전자 발현 수준과 관련되어, 보다 높은 유전자 발현 수준이 보다 높은 억제성 종양 미세환경을 나타내도록 한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 추가로 종양에서 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 것을 포함한다. 이와 같은 일 실시형태에서, 종양 억제성 미세환경 수준은 종양 골수 세포 밀도와 관련되어, 보다 높은 종양 골수 세포 밀도가 보다 높은 억제성 종양 미세환경을 나타내도록 한다.
본 개시내용의 일 실시형태는 상기 방법과 관련되어 있고, 추가로 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T-세포의 비를 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 종양 억제성 미세환경 수준은 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T-세포의 비와 관련되어, 보다 낮은 비의 종양에서의 억제성 골수 세포 지수에 대한 활성화된 T-세포 지수가 보다 높은 억제성 종양 미세환경을 나타내도록 한다.
부가적인 비제한적 실시형태는 하기를 포함한다:
1. 암 환자의 종양에서 골수 세포에 의해 유도된 억제성 종양 미세환경(TME)을 예측하는 방법 및/또는 환자의 암을 치료하기 위한 면역요법의 임상적 효능을 예측하는 방법으로서, 방법은 종양에서 TME의 골수성 염증을 정량화하는 단계를 포함하며; 여기서
(i) 골수성 염증의 종양 수준이 더 높으면, 종양 미세환경이 더 억제성이고;
(ii) 종양 골수성 염증 수준이 더 높으면, 면역요법의 임상적 효능이 더 낮은 방법.
2. 실시형태 1에 있어서, 종양 골수성 염증 수준은 종양에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현 수준을 측정함으로써 추정되고; 여기서 이들 유전자 중 하나 이상의 발현이 더 높으면, 골수성 염증 수준이 더 높은, 방법.
3. 면역요법을 필요로 하는 암 환자에서 면역요법에 의한 암의 치료 방법으로서, ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현 수준에 의해 측정되는 것과 같은, 환자의 종양 미세환경의 골수성 염증 수준이 하기와 같은 경우, 환자가 치료를 위해 선택되는, 방법:
(i) 대표적 종양 집단에 대한 중앙값 미만임; 그리고/또는;
(ii) 각각의 해당 유전자에 대해 하기 값 이내임: 바람직하게는 Nanostring으로 측정된, 0 내지 27(ARG2), 0 내지 10(TREM2), 0 내지 42(IL8), 0 내지 9(IL13), 0 내지11 (C8G), 0 내지 1(CCL20), 0 내지 11(IFNL2), 0 내지 8(OSM), 0 내지 77(IL11RA), 0 내지 27(CCL11), 59 내지 132(MCAM), 0 내지 1(PTGDR2), 및 0 내지 1(CCL16), +/- 표준 편차 또는 +/- 20%.
4. 면역요법을 포함하는 병용 요법을 위해 TME로 종양을 갖는 환자를 등급화하는 방법으로서, 방법은 T 세포의 증식을 향상시키는 약제와 조합하여 면역요법을 투여하는 것을 포함하고, 병용 요법은 T 세포의 증식을 향상시키고/시키거나 병용 요법은 TME에서 억제성 골수 집단을 감소시키고, 환자는 환자가 높은 종양 부담, 낮은 억제성 골수 세포 마커에 대한 T-세포(T/M) 비, 및/또는 TME 골수성 염증의 높은 수준을 갖는 경우 병용 요법을 위해 선택되고, 바람직하게는 TME 골수성 염증 수준은 종양에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현 수준을 측정함으로써 추정되고; 선택적으로, 약제는 CAR-T 주입 전, CAR-T 확장 피크에서(예를 들어, 주입 후 7 내지 14일차), 및/또는 피크 CAR-T 확장 후(예를 들어, 14 내지 28일차) 환자에 투여되는, 방법.
5. 실시형태 4에 있어서, 약제는 항-CD47 길항제(예를 들어, 마그롤리맙), STING 작용제(예를 들어, GSK3745417), ARG1/2 억제제(예를 들어, INCB001158), CD73xTGFβ mAb(예를 들어, GS-1423), CD40 작용제(예를 들어, 셀리크렐루맙), FLT3 작용제(예를 들어, GS3583), CSF/CSF1R 억제제(예를 들어, 펙시다르티닙), IDO1 억제제(예를 들어, 에파카도스타트), TLR 작용제(예를 들어, GS9620), PD-1 억제제(예를 들어, 펨브롤리주맙), 면역조절 이미드 약물(예를 들어, 레날리도마이드), CD20xCD3 이중특이적 항체(예를 들어, 에프코리타맙), 및 T 세포 공자극 작용제(예를 들어, 우톨리우맙)로부터 선택되는, 방법.
6. 높은 종양 부담을 갖는 대상체에서 종양의 치료 방법으로서, 대상체에서 높은 종양 부담은 바람직한 면역 TME(예를 들어, 보다 높은 T/M 비 및/또는 보다 낮은 TME 골수성 염증)를 유도하는 하나 이상의 약제 또는 치료제를 투여함으로써 및/또는 CAR T 세포 확장을 증가시킴으로써 감소되는, 방법.
7. 실시형태 6에 있어서, 면역 TME는 면역요법을 이용한 치료를 선호하는, 방법.
8. 실시형태 6 또는 실시형태 7에 있어서, 대상체는 베이스라인 종양 부담(SPD)이 2500, 3000, 3500, 또는 4000 mm2 초과, 바람직하게는 3000 mm2 초과인 경우 및/또는 종양 대사 부피가 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값을 초과하는 경우(예를 들어, 100 ml 초과, 또는 150 ml 초과), 높은 종양 부담(SPD 및/또는 종양 대사 부피에 의해 평가됨)을 갖는, 방법.
9. 실시형태 6 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 면역 TME는 약제의 투여 전의 값에 비해, TME가 감소된 억제성 골수 세포 활성(예를 들어, 낮은 ARG2 및 TREM2 발현)과 증가된 T 세포/골수 세포 비(예를 들어, 1 내지 4)를 나타내는 경우 선호되는, 방법.
10. 실시형태 9에 있어서, 감소된 억제성 골수 활성은 TME가 낮은 ARG2 및/또는 낮은 TREM2 발현을 보이는 경우 존재하고, 바람직하게는 낮은의 의미는 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 미만인, 방법.
11. 실시형태 9에 있어서, ARG2 및/또는 TREM2 유전자 발현은 발현 수준이 NanoString에 의해 측정된 0 내지 27, +/- 표준 편차 또는 +/- 20%인 경우 낮은, 방법.
12. 실시형태 6 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 약제는 종양 골수 억제성 활성을 감소시키고/시키거나 종양 골수 세포 밀도를 감소시키는, 방법.
13. 실시형태 12에 있어서, 종양 골수 세포 밀도는 종양 생검에서 면역조직화학에 의해 CD14+ 세포, CD68+ 세포, CD68+CD163+ 세포, CD68+CD206+ 세포, CD11b+ CD15+ CD14- LOX-1+ 세포, 및/또는 CD11b+ CD15- CD14+ S100A9+ CD68- 세포를 측정함으로써 정량화되는, 방법.
14. 실시형태 6 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 약제는 항-CD47 길항제(예를 들어, 마그롤리맙), STING 작용제(예를 들어, GSK3745417), ARG1/2 억제제(예를 들어, INCB001158), CD73xTGFβ mAb(예를 들어, GS-1423), CD40 작용제(예를 들어, 셀리크렐루맙), FLT3 작용제(예를 들어, GS3583), CSF/CSF1R 억제제(예를 들어, 펙시다르티닙), IDO1 억제제(예를 들어, 에파카도스타트), TLR 작용제(예를 들어, GS9620) 및 이의 조합으로부터 선택되는, 방법.
15. 실시형태 6 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 약제 또는 치료제는 낮은 용량 방사선, 체크포인트 차단을 통한 T 세포 활성의 촉진, T 세포 작용제(예를 들어, 펨브롤리주맙, 레날리도마이드, 에프코리타맙, 및 우톨리우맙), 및 이의 조합으로부터 선택되는, 방법.
16. 실시형태 6 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 약제 또는 치료제는 면역요법 이전, 도중, 및/또는 이후에 투여되는, 방법.
17. 실시형태 16에 있어서, 면역요법은 CAR T-세포 치료인, 방법.
18. 실시형태 17에 있어서, CAR T 세포 확장은 약제 또는 치료제 없이 대표적인 CAR T 세포 확장 수준에 비해 증가되는, 방법.
19. 종양에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현을 측정하는 것을 포함하는 TME 골수성 염증을 정량화하는 방법으로서, 여기서 이들 유전자 중 하나 이상의 발현이 높을수록 TME 골수성 염증 수준이 더 높은, 방법.
20. TME에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현을 측정하는 것을 포함하는, 종양 면역요법을 필요로 하는 대상체에서 종양 면역요법의 반응/임상적 효능을 예측하는 방법으로서, 여기서 이들 유전자 중 하나 이상의 발현이 높을수록 임상적 효능은 더 낮은, 방법.
21. 면역요법 이전에 TME에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비, T/M 비를 측정하는 것을 포함하는, 높은 종양 부담을 갖는 환자에서 면역요법에 대한 반응/임상적 효능을 예측하는 방법으로서, TME에서 억제성 골수 세포 지수에 대한 활성화된 T 세포 지수의 비가 높을수록 반응은 더 양호한, 방법.
22. 실시형태 21에 있어서, T 세포 활성화는 TME에서 CD3D, CD8A, CTLA4, 및 TIGIT 중 하나 이상의 유전자 발현 수준을 측정함으로써 측정되며, 바람직하게는 여기서 활성화된 T 세포 지수는 바람직하게는 NanoString에 의해, CD3D, CD8A, CTLA4, TIGIT 유전자 발현 수준의 평균 제곱근으로 추정되는, 방법.
23. 실시형태 21 또는 22에 있어서, 골수 지수는 바람직하게는 NanoString에 의해, ARG2, TREM2 유전자 발현 수준의 평균 제곱근으로 추정되는, 방법.
24. 실시형태 22 또는 23에 있어서, T/M 비는 로그2((T-세포 지수+1)/(골수 지수+1))로서 추정되는, 방법.
25. 실시형태 21 내지 24 중 어느 하나에 있어서, TME에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비가 낮은 경우, 환자는 면역요법 전에 골수 컨디셔닝이 투여되고, 바람직하게는 낮은의 의미는 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 미만인, 방법.
26. 실시형태 25에 있어서, 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포(T/M)의 낮은 TME 비는 1 내지 4 이내의 비인, 방법.
27. 실시형태 25 또는 26에 있어서, 골수 컨디셔닝은 억제성 골수 TME의 억제를 포함하는, 방법.
28. 실시형태 27에 있어서, 골수 컨디셔닝은 항-CD47 길항제(예를 들어, 마그롤리맙), STING 작용제(예를 들어, GSK3745417), ARG1/2 억제제(예를 들어, INCB001158), CD73xTGFβ mAb(예를 들어, GS-1423), CD40 작용제(예를 들어, 셀리크렐루맙), FLT3 작용제(예를 들어, GS3583), CSF/CSF1R 억제제(예를 들어, 펙시다르티닙), IDO1 억제제(예를 들어, 에파카도스타트), TLR 작용제(예를 들어, GS9620) 또는 이의 조합의 투여에 의해 달성되는, 방법.
29. 실시형태 21 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 종양 부담은 베이스라인 종양 부담(SPD)이 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 초과, 선택적으로 2000 내지 3700 mm2인 경우 높은, 방법.
30. CAR 또는 TCR 피크 T 세포 확장 및/또는 종양 부담에 의해 정규화된 CAR 또는 TCR 피크 T 세포 확장을 예측하는 방법으로서, 방법은 T/M을 측정하는 것을 포함하고, T/M 비가 보다 높을수록, 종양 부담에 의해 정규화된 CAR 또는 TCR 피크 T 세포 확장은 더 높은, 방법.
31. 실시형태 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 반응/임상적 효능은 완전 반응률, 객관적 반응률, 진행중 반응률, 반응 지속성 중앙값, PFS 중앙값, 및/또는 OS 중앙값에 의해 평가되는, 방법.
32. 실시형태 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 면역요법은 CAR T 세포 치료, TCR T 세포 치료, 종양 침윤 림프구(TIL) 세포 치료, 및/또는 면역 체크포인트 억제제의 투여인, 방법.
33. 실시형태 32에 있어서, 면역 체크포인트 억제제는 T 세포 표면 상 면역 체크포인트 수용체, 예컨대 세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA-4), 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3), T 세포 면역글로불린 뮤신 도메인 3(TIM-3), B-림프구 및 T-림프구 감쇠자(BTLA), T-세포 면역글로불린 및 T-세포 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM) 도메인, 및 세포예정사 1(PD-1/PDL-1)을 차단하는 약제로부터 선택되는, 방법.
34. 실시형태 33에 있어서, 환자에 41BB, OX40, 및/또는 TLR의 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
35. 실시형태 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 약제, 조합제 및/또는 치료제는 면역요법 이전, 도중, 및/또는 이후에 투여되는, 방법.
36. 실시형태 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 면역요법은 자가유래 또는 동종이계인, 방법.
37. 실시형태 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 면역요법은 표적 항원을 인식하는 CAR T 또는 TCR T 세포 치료인, 방법.
38. 실시형태 37에 있어서, 표적 항원은 바람직하게는 종양-관련 표면 항원, 예컨대 5T4, 알파페토단백질(AFP), B7-1(CD80), B7-2(CD86), BCMA, B-인간 융모선 생식샘 자극호르몬, CA-125, 암배아 항원(CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD79a, CD79b, CD123, FLT3, BCMA, SLAMF7, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CS-1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, 디시알로갱글리오사이드GD2, 관상피 점액, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III(EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), 상피 세포 부착 분자(EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2(HER2/neu), 섬유아세포 관련 단백질(fap), FLT3, 엽산 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-관련 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 관련 항원(HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라아제 역전사효소, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 독감 바이러스-특이적 항원; CD38, 인슐린 성장 인자(IGFl)-l, 장내 카르복실 에스테라아제, 카파 사슬, LAGA-la, 람다 사슬, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원, 예컨대 CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-관련 항원, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이화 p53, 돌연변이화 ras, 호중구 엘라스타아제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타아제, 전립선 특이적 항원(PSA), 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), 전립선-특이적 항원 단백질, STEAP1, STEAP2, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2 (AS), 표면 부착 분자, 서바이빈 및 텔로머라아제, TAG-72, 피브로넥틴의 추가 도메인 A(EDA) 및 추가 도메인 B(EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인(TnC Al), 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2(VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원, 예컨대 HIV-특이적 항원(예컨대, HIV gpl20), GPC3(글리피칸 3)뿐만 아니라 이들 항원의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된 종양 항원인, 방법.
39. 실시형태 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 암/종양은 고형 종양, 육종, 암종, 림프종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종(NHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)(달리 지정되지 않음), 여포성 림프종(FL), 변형된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종(SMZL), 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL)(비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병(CLL), T-세포 림프종, 하나 이상의 B-세포 급성 림프성 백혈병("BALL"), T-세포 급성 림프성 백혈병("TALL"), 급성 림프성 백혈병(ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포형 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소세포 또는 거대 세포 여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, MALT 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 골수이형성 및 골수이형성 증후군, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 혈장 세포 증식성 장애(예를 들어, 무증상(asymptomatic) 골수종(무증상(smoldering) 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 의미 불명 단클론 감마병증(MGUS), 형질세포종(예를 들어, 혈장 세포 이상증, 고립 골수종, 고립 형질세포종, 골수외 형질세포종, 및 다발성 형질세포종), 전신성 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, POEMS 증후군(크로우-푸카아제 증후군, 타카츠키병, 및 PEP 증후군으로도 알려짐) 증후군, 두경부암, 자궁경부암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 간세포 암종, 전립선암, 유방암, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는, 방법.
40. 실시형태 39에 있어서, 암(재발성 또는 난치성)은 달리 특정되지 않은 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 여포성 림프종으로부터 발생하는 DLBCL, 또는 맨틀 세포 림프종인, 방법.
41. 실시형태 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 면역요법은 악시캅타젠 실로류셀, 브렉수캅타젠 오토류셀, 티사젠렉류셀, 리소캅타젠 마라류셀, 및 bb2121로부터 선택되는, 방법.
도 1. 진행중 반응자와 재발자 및 무반응자를 비교하는 별도 발현된 유전자의 볼케이노(volcano) 플롯. 배수 변경은 각각의 진행중 반응 그룹의 중앙값의 비에 의해 결정되었고, p-값은 Wilcoxon 테스트에서 유도되었다. 대수 변환에서 0을 피하기 위해 중앙값에 작은 상수 1을 추가하였다. ARG2, TREM2, IL8, C8G, 및 MASP2를 포함하는 재발자 및 무반응자 그룹에서의 상위 별도 발현된 유전자는 골수성 염증과 관련이 있다. 패널에 대한 모든 하우스키핑(housekeeping) 유전자의 기하 평균에 대한 발현 값의 비를 사용하여 유전자 수를 정규화한다. 하우스키퍼 정규화된 유전자 수를, 관찰된 데이터와 동일한 카트리지에서 실행된 패널 표준을 사용하여 추가로 정규화한다.
도 2. ARG2 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험(Log-Rank test)에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 ARG2 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 ARG2 유전자 수를 보여준다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 3. TREM2 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 TREM2 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 TREM2 유전자 수를 보여준다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 4. IL8 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 IL8 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 IL8 유전자 수를 보여준다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 5. IL13 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 IL13 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 IL13 유전자 수를 보여준다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 6. CCL20 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 CCL20 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 CCL20 유전자 수를 보여준다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 7. 높은(SPDhi)(대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 수준 초과) 또는 낮은(SPDlow)(대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 수준 미만) 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자 내에서 진행중 반응을 갖는 치료전 T 세포 및 골수 세포 유전자 시그니처 사이의 관련성. 붉은색 값은 상응하는 유전자의 평균 발현보다 큰 값을 나타내는 반면, 청색 값은 평균 발현보다 작은 값을 나타낸다. 주입된 CD8의 총 개수(NCD8), 주입된 나이브 생성물의 총 개수(NNV), CAR-T 세포의 피크 수준 및 베이스라인 종양 부담에 대한 이의 값(CAR-T 피크/SPD)은 비교로서 포함된다.
도 8. 높은(SPDhi) 또는 낮은(SPDlow) 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자 내에서 진행중 반응 그룹에 의한 피크 CAR-T 수준(세포/μL) 사이의 관련성. 진행중 반응자는 녹색으로 도시되고, 재발 환자는 주황색으로 도시되며, 비반응자는 청색으로 도시된다. 비모수 Kruskal-Wallis 테스트는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 9. 높은(SPDhi) 또는 낮은(SPDlow) 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자 내에서 진행중 반응 그룹에 의한 골수성 염증에 대한 T 세포의 비. 선별된 유전자를 사용하여 T 세포(CD3D, CD8A, CTLA4, TIGIT) 및 골수성 염증(ARG2 및 TREM2) 지수를 유도하였다. 진행중 반응자는 녹색으로 도시되고, 재발 환자는 주황색으로 도시되며, 비반응자는 청색으로 도시된다. 비모수 Kruskal-Wallis 테스트는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
도 10. T 세포를 갖는 CAR-T 세포의 피크 수준, 골수성 염증 지수, 및 골수성 염증에 대한 T 세포의 비 사이의 관련성. Spearman 랭크 계수(R) 및 p 값이 도시되어 있다.
도 11. T 세포와 베이스라인 종양 부담에 대한 CAR-T 세포의 피크 수준, 골수성 염증 지수, 및 골수성 염증에 대한 T 세포의 비 사이의 관련성. Spearman 랭크 계수(R) 및 p 값이 도시되어 있다.
도 12. 진행중 반응과 음의 관련성을 가진 유전자는 TME의 골수 집단과 양의 관련성을 가졌다. 데이터는 유전자 발현 분석 및 다중 면역조직화학 모두에 대한 평가가능한 샘플과 함께 ZUMA-1 코호트 1 내지 3으로부터의 12명의 환자에 대해 포함된다. 히트맵에 제시된 유전자는 도 1로부터의 결과에 기초하여 선택되었고; 구체적으로, 이러한 유전자는 진행중 반응자에 비해 치료 저항성이 있는 환자에서 상향조절되었다. 셀 값은 도시된 공변량들 사이의 Spearman 랭크 상관관계 값(R)을 나타낸다. 음영은 공변량들 사이에 각각 양의 관련성 및 음의 관련성을 나타낸다.ARG2, 아르기나아제 2; C8G, 보체 C8 감마 사슬; CCL, 케모카인 리간드; FoxP3, 포크헤드 박스 단백질 P3; IL, 인터류킨; LAG-3, 림프구-활성화 유전자 3; LOX-1, 렉틴-유형 산화 저밀도 지질단백질 수용체 1; max, 최대값; min, 최소값; M-MDSC, 단핵구 골수-유래 억제자 세포; PD-1, 세포예정사 단백질 1; PMN-MDSC, 다형핵 골수-유래 억제자 세포; S100A9, S100 칼슘-결합 단백질 A9; TIM-3, T-세포 면역글로불린 및 뮤신 도메인-함유 단백질 3; TME, 종양 미세환경; TREM2, 골수 세포 상에 발현된 유도 수용체 2.
도 13. 억제성 골수 유전자 시그니처는 암 고환 항원의 유전자 발현과 양의 관련성을 가졌다. 데이터는 유전자 발현 분석에 대한 평가가능한 샘플과 함께 ZUMA-1 코호트 1 내지 3으로부터의 30명의 환자에 대해 포함된다. 히트맵에 제시된 유전자는 도 1로부터의 결과에 기초하여 선택되었고; 구체적으로, 이러한 유전자는 진행중 반응자에 비해 치료 저항성이 있는 환자에서 상향조절되었다. 셀 값은 도시된 공변량들 사이의 Spearman 랭크 상관관계 값(R)을 나타낸다. 음영은 공변량들 사이에 각각 양의 관련성 및 음의 관련성을 나타낸다.ARG2, 아르기나아제 2; BTK, 버튼 티로신 키나아제; C8G, 보체 C8 감마 사슬; CCL, 케모카인 리간드; DDX43, DEAD-박스 헬리카아제 43; IL, 인터류킨; IRF, 인터페론-조절 인자; ITK, 인터류킨-2-유도성 T-세포 키나아제; MAGE, 흑색종 항원 유전자; MAP2K, 미토겐-활성화된 단백질 키나아제 키나아제; MAP3K, 미토겐-활성화된 단백질 키나아제 키나아제 키나아제; MAPK, 미토겐-활성화된 단백질 키나아제; MAPKAPK, 미토겐-활성화된 단백질 키나아제-활성화된 단백질 키나아제; max, 최대값; min, 최소값; PRAME, 우선적으로 발현되는 흑색종의 항원; SPA17, 정자 표면 단백질 Sp17; STAT, 신호 전달인자 및 전사 활성자; SYK, 비장 연관 티로신 키나아제; TREM2, 골수 세포 상에 발현된 유도 수용체 2.
도 14. CLINICAL TRIAL-1의 코호트 1+2 및 코호트 4에서 프로토콜-구체화된 AE 관리. "예" 또는 "아니오"는 토실리주맙 또는 코르티코스테로이드가 각각 투여되었는지 아닌지를 나타낸다. *동반이환 또는 고령의 경우에만. †토실리주맙으로 개선되지 않는 경우에만; 표준 용량을 사용. ‡3일 후에도 개선이 되지 않는 경우. AE, 이상 반응; CRS, 사이토카인 방출 증후군; HD, 고용량; NE, 신경학적 사건; Mgmt, 관리.
도 15. 환자 배치도. 도면은 CLINICAL TRIAL-1 코호트 4에 등록된 환자의 배치를 요약한다. 총 57명의 환자를 기관 프로토콜에 따라 스크리닝하였다. 11개의 스크린 오류가 있었다. *자살(n=1) 및 질환 진행(n=1)으로 인함. 악시캅타젠 실로류셀, 악시캅타젠 실로류셀.
도 16a 및 도 16b. ORR 및 반응 지속기간. (16a) 코호트 4 환자의 ORR 및 SD 및 PD의 비율. 반응은 2명의 환자에서 평가될 수 없었다: 1명의 환자는 1차 평가 전에 폐렴으로 사망하였고, 1명의 환자는 염증이 의심되는, 양전자 방출 단층촬영에서 양성 결과를 가졌다. (16b) 반응 지속기간의 Kaplan-Meier 곡선. CR, 완전 반응; NE, 추정 불가; NR, 미달; ORR, 객관적 반응률; PD, 진행성 질환; PR, 부분 반응; SD, 안정한 질환.
도 17. 코르티코스테로이드 사용에 의한 최상의 반응. 도면은 스테로이드를 받았거나 받지 않은 환자의 백분율과, 12개월에서 상응하는 ORR, CR, 및 진행중 반응을 보여준다. CR, 완전 반응; ORR, 객관적 반응률.
도 18. 코호트 4에서 무진행 생존율.
도 19a 및 도 19b. 시간에 따른 CAR T-세포 확장 및 주요 가용성 혈청 바이오마커 수준. (19a) 시간에 따른 CAR T 세포의 중앙값(Q1, Q3) 혈액 수준. (19b) 시간에 대해 플롯팅한 주요 가용성 혈청 염증 바이오마커의 중앙값(Q1, Q3) 수준. BL, 베이스라인; CAR, 키메라 항원 수용체; CRP, C-반응성 단백질; GM-CSF, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자; IFN, 인터페론; IL, 인터류킨.
도 20. 베이스라인 및 5일차에 선택된 CSF 분석 및 신경학적 사건과의 관련성. 도면은 신경학적 사건의 중증도에 의한, 베이스라인(점) 및 5일차(삼각형)로 코호트 4로부터의 CSF 샘플에서 염증성 마커의 수준을 보여준다. 신경학적 사건의 등급(0 내지 5) 및 사례 수는 각각 텍스트의 상단과 하단에 나타난다. 중간 선은 중앙값을 나타내고, 박스는 사분 범위를 나타내고; 위스커는 최소 값 및 최대 값을 나타낸다. CRP, C-반응성 단백질; CSF, 뇌척수액; IFN, 인터페론; IL, 인터류킨; R, 수용체.
도 21. 베이스라인 및 5일차에 선택된 혈청 분석 및 신경학적 사건의 관련성. 도면은 신경학적 사건의 중증도에 의해 베이스라인(점) 및 5일차(삼각형)로 코호트 4로부터의 혈청 샘플에서 염증성 마커의 수준을 보여준다. 신경학적 사건의 등급(0 내지 5) 및 사례 수는 각각 텍스트의 상단과 하단에 나타난다. 중간 선은 중앙값을 나타내고, 박스는 사분 범위를 나타내고; 위스커는 최소 값 및 최대 값을 나타낸다. CRP, C-반응성 단백질; IFN, 인터페론; IL, 인터류킨; R, 수용체.
본 개시내용은 성분채집술 물질 및 조작된 CAR T 세포의 주입전 속성(예를 들어, T 세포 적응도)뿐만 아니라 환자의 면역 인자 및 종양 부담의 치료전 특징이 지속적 반응, 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군, 및 등급 3 이상의 신경학적 사건을 포함하여 임상적 효능 및 독성과 관련될 수 있다는 발견에 부분적으로 기초한다.
정의
본 개시내용이 더 용이하게 이해되도록 하기 위해, 먼저 소정의 용어들이 하기 한정된다. 하기 용어들 및 다른 용어들에 대한 추가의 한정이 명세서 전체에 걸쳐 기술된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수 형태("a", "an", 및 "the")는 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다.
문맥에서 구체적으로 언급되지 않거나 명백하지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "또는"은 포괄적이며 "또는"과 "및"을 모두 포함하는 것으로 이해해야 한다.
본원에 사용된 경우에 용어 "및/또는"은 다른 것의 존재 또는 부재 하의 2개의 특정된 특징 또는 구성요소 각각의 특이적 개시내용으로서 이해되어야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 구문에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"은 A 및 B; A 또는 B; A(단독); 및 B(단독)를 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 구문에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"은 하기 양태 각각을 포함하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
본원에서 사용되는, 용어 "예를 들어," 및 "즉"은 단지 예로서, 의도된 제한 없이 사용되며, 본 명세서에 명시적으로 열거된 항목만을 지칭하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
용어 "~ 이상", "적어도", "~ 초과" 등, 예를 들어 "적어도 하나"는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 언급된 값 초과를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한 그 사이의 임의의 더 큰 수 또는 분수가 포함된다.
역으로, 용어 "~ 이하"는 언급된 값 미만의 각각의 값을 포함한다. 예를 들어 "100개 이하의 뉴클레오티드"는 100개, 99개, 98개, 97개, 96개, 95개, 94개, 93개, 92개, 91개, 90개, 89개, 88개, 87개, 86개, 85개, 84개, 83개, 82개, 81개, 80개, 79개, 78개, 77개, 76개, 75개, 74개, 73개, 72개, 71개, 70개, 69개, 68개, 67개, 66개, 65개, 64개, 63개, 62개, 61개, 60개, 59개, 58개, 57개, 56개, 55개, 54개, 53개, 52개, 51개, 50개, 49개, 48개, 47개, 46개, 45개, 44개, 43개, 42개, 41개, 40개, 39개, 38개, 37개, 36개, 35개, 34개, 33개, 32개, 31개, 30개, 29개, 28개, 27개, 26개, 25개, 24개, 23개, 22개, 21개, 20개, 19개, 18개, 17개, 16개, 15개, 14개, 13개, 12개, 11개, 10개, 9개, 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개, 2개, 1개 및 0개의 뉴클레오티드를 포함한다. 또한 그 사이의 임의의 더 작은 수 또는 분수가 포함된다.
용어 "복수", "적어도 2개", "둘 이상", "적어도 제2" 등은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 이상을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한 그 사이의 임의의 더 큰 수 또는 분수가 포함된다.
명세서 전체에 걸쳐, 단어 "포함하는", 또는 "포함한다" 또는 "포함하는"과 같은 변형은 언급된 요소, 정수, 또는 단계, 또는 요소들, 정수들, 또는 단계들의 군의 포함을 시사하지만, 임의의 다른 요소, 정수, 또는 단계, 또는 요소들, 정수들, 또는 단계들의 군의 배제를 시사하지 않는 것으로 이해될 것이다. 양태가 "포함하는"이라는 언어로 본원에 기재되는 경우에는 언제나, "~로 이루어진" 및/또는 "본질적으로 ~로 이루어진"이라는 용어로 기재된 다른 유사한 양태가 또한 제공되는 것으로 이해해야 한다. "~로 이루어진"이라는 용어는 청구범위에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. In re Grey, 53 F.2d 520, 11 USPQ 255(CCPA 1931); Ex parte Davis, 80 USPQ 448, 450(Bd. App. 1948)("이루어진"은 "일반적으로 이와 관련된 불순물을 제외하고 인용된 물질 이외의 물질을 포함한다는 주장을 종결하는" 것으로 정의됨). "본질적으로 ~ 로 이루어진"이라는 용어는, 청구범위의 범주를 명시된 물질 또는 단계, 및 청구된 개시내용의 "기본적인 및 신규한 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들"로 제한한다.
문맥에서 구체적으로 언급되거나 명백하지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "약"은 당업자에 의해 결정된 특정 값 또는 조성에 대한 허용가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성을 나타내며, 이는 이러한 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방식, 즉, 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "대략"은 당업계에서의 실시에 따라 하나 또는 하나 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. "약" 또는 "대략"은 최대 10%(즉, ±10%)의 범위를 의미할 수 있다. 따라서, "약"은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 또는 0.001% 초과 또는 상기 값 미만 내인 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어, 약 5 mg은 4.5 mg 내지 5.5 mg의 임의의 양을 포함할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 과정에 관련하여, 이 용어는 최대 한 자릿수 또는 최대 5-배의 값을 의미할 수 있다. 특정 값 또는 조성이 본 개시내용에 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "대략"의 의미는 해당 특정 값 또는 조성에 대한 허용가능한 오차 범위 이내에 있는 것으로 가정해야 한다.
본원에서 사용된 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는, 달리 지시되지 않는 한, 언급된 범위 내 임의의 정수 값, 및 적절한 경우, 이의 분수(예컨대, 정수의 1/10 및 1/100)를 포함하는 것으로 이해해야 한다.
본원에 사용된 단위, 접두어, 및 기호는 이들의 국제 단위 체계(
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) 허용 형태를 사용하여 제공된다. 수치 범위는 해당 범위를 한정하는 수치를 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련된 업계에서 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press]; ["The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press]; 및 ["The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press]은 본 개시내용에 사용되는 용어 중 다수에 대한 일반 사전적 의미를 당업자에게 제공한다.
"투여"는 당업자에게 알려진 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하는, 대상체에 대한 약제의 물리적 도입을 지칭한다. 본원에 개시된 제형에 대한 예시적인 투여 경로는 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입을 포함한다. 본원에 개시된 조성물에 대한 예시적인 투여 경로는 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입을 포함한다. 본원에서 사용되는, 구문 "비경구 투여"는 일반적으로 주사에 의한, 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 림프관내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외, 및 흉골내 주사 및 주입뿐만 아니라 생체내 전기천공을 비제한적으로 포함한다. 일부 실시형태에서, 제형은 비(non)-비경구 경로를 통해, 예를 들어 경구로 투여된다. 다른 비경구 외 경로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비강내, 질내, 직장, 설하 또는 국소를 포함한다. 투여는 또한 예를 들어 1회, 복수 회, 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다. 일 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 CAR T 세포를 포함하는 "주입 생성물(infusion product)"을 통해 투여된다.
용어 "항체"(Ab)는 비제한적으로 항원에 특이적으로 결합하는 당단백질 면역글로불린을 포함한다. 일반적으로, 항체는 이황화 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L), 또는 이들의 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약어화됨)과 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약어화됨)과 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 불변 도메인, CL을 포함한다. VH 영역과 VL 영역은 프레임워크 영역(FR: framework region)으로 지칭되는 더 보존되는 영역 사이에 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 지칭되는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH와 VL은 아미노 말단에서 카르복시 말단 방향으로 다음과 같은 순서로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 중쇄와 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. Ab의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적인 보체 시스템의 제1 성분(C1q)을 포함하는, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
항체는 예를 들어 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체(이중특이적 항체 포함), 인간 항체, 조작된 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 면역글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 분자와 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 항체 융합체(본원에서 때때로 "항체 접합체"로 지칭됨), 이종접합체 항체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단쇄 항체 또는 단쇄 Fv(scFv), 낙타과 항체, 아피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 이황화 결합된 Fv(sdFv), 항-개별특이형(항-Id) 항체(예를 들어, 항-항-Id 항체 포함), 미니바디, 도메인 항체, 합성 항체(본원에서 때때로 "항체 모방체"로 지칭됨), 및 상기 중 임의의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항체는 폴리클로날 항체 집단을 지칭한다.
"항원 결합 분자", "항원 결합 부분" 또는 "항체 단편"은 분자가 유래된 항체의 항원 결합 부분(예를 들어, CDR)을 포함하는 임의의 분자를 나타낸다. 항원 결합 분자는 항원 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예는 항원 결합 분자에서 형성된 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, dAb, 선형 항체, scFv 항체 및 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 펩티바디(peptibody)(즉, 펩티드 결합 도메인을 포함하는 Fc 융합 분자)는 적합한 항원 결합 분자의 또 다른 예이다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자는 종양 세포 상의 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자는 과증식성 질환에 관여하는 세포 상의 항원, 또는 바이러스 또는 박테리아 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자는 CD19에 결합한다. 추가의 실시형태에서, 항원 결합 분자는 이의 상보성 결정 영역(CDR) 중 하나 이상을 포함하는, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 단편이다. 추가의 실시형태에서, 항원 결합 분자는 단쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자는 아비머를 포함하거나 이로 이루어진다.
"항원"은 면역 반응을 유발하거나, 항체 또는 항원 결합 분자에 의해 결합될 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 면역 반응은 항체 생성 또는 특정 면역적격 세포(immunologically-competent cell)의 활성화, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 당업자는 사실상 모든 단백질 또는 펩티드를 포함하는 임의의 거대분자가 항원으로 작용할 수 있다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 항원은 내인성으로 즉 게놈 DNA에 의해 발현되거나 재조합적으로 발현될 수 있다. 항원은 암세포와 같은 특정한 조직에 특이적일 수 있거나, 광범위하게 발현될 수 있다. 또한, 더 큰 분자의 단편이 항원으로 작용할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항원은 종양 항원이다.
용어 "중화"는 리간드에 결합하여, 이러한 리간드의 생물학적 효과를 막거나 감소시키는 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 이의 단편을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 이의 단편은 직접적으로 리간드 상의 결합 부위를 차단하거나, 다르게는 간접적인 수단(예컨대, 리간드의 구조 또는 에너지 변경)을 통해 리간드의 결합 능력을 변경시킨다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 이의 단편은 이에 결합된 단백질이 생물학적 기능을 수행하는 것을 방지한다.
용어 "자가유래"는 이후에 재도입되게 되는 동일한 개체로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기재된 조작된 자가유래 세포 치료(eACT™) 방법은 환자로부터의 림프구의 수집을 포함하며, 이는 이어서 예를 들어 CAR 구조체를 발현하도록 조작된 후, 동일한 환자에게 다시 투여된다.
용어 "동종이계"는 하나의 개체로부터 유래되고, 이어서 동일한 종의 다른 개체에 도입되는 임의의 물질, 예를 들어, 동종이계 T 세포 이식을 지칭한다.
일 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 "악시캅타젠 실로류셀 치료"를 포함한다. "악시캅타젠 실로류셀 치료"는 2 × 106개의 항-CD19 CAR T 세포/kg의 표적 용량으로 정맥내 투여된 항-CD19 CAR 형질도입 자가유래 T 세포의 단일 주입으로 이루어진다. 체중이 100 kg 초과인 대상체의 경우, 2 × 108개의 항-CD19 CAR T 세포의 최대 균일 용량이 투여될 수 있다. 항-CD19 CAR T 세포는 국립 암 연구소(NCI, IND 13871)의 외과 분과에서 설계, 최적화 및 초기 테스트된 탠덤 항-CD19 CAR 벡터 구조체로 배열된 CD28 및 CD3ζ(CD3-제타) 분자로부터의 신호전달 도메인으로 구성된 세포내 신호전달 부분에 연결된 CD19에 특이성을 갖는 세포외 단쇄 가변 단편(scFv)을 발현하도록 조작된 자가유래 인간 T 세포이다(문헌[Kochenderfer et al, J Immunother. 2009;32(7):689-702; Kochenderfer et al, Blood. 2010;116(19):3875-86]). scFv는 항-CD19 모노클로날 항체 FMC63의 가변 영역으로부터 유래된다(문헌[Nicholson et al, Molecular Immunology. 1997;34(16-17):1157-65]). CD28 공자극 분자의 일부가 추가되는데, 이는 쥐 모델은 이것이 항종양 효과 및 항-CD19 CAR T 세포의 존속성(persistence)에 중요하다고 시사하기 때문이다(문헌[Kowolik et al, Cancer Res. 2006;66(22):10995-1004]). CD3-제타 사슬의 신호전달 도메인은 T 세포 활성화에 사용된다. 이러한 단편은 쥐 줄기 세포 바이러스-기반(MSGV1) 벡터로 클로닝되어, 자가유래 T 세포를 유전적으로 조작하는 데 이용하였다. CAR 구조체는 레트로바이러스 벡터 형질도입에 의해 T 세포의 게놈으로 삽입된다. 간략하게, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 백혈구성분채집술 및 Ficoll 분리에 의해 수득된다. 말초 혈액 단핵 세포는 재조합 인터류킨 2(IL-2)의 존재 하에서 항-CD3 항체와 함께 배양함으로써 활성화된다. 자극된 세포는 항-CD19 CAR 유전자를 함유하는 레트로바이러스 벡터로 형질도입되고, 배양물에서 번식되어 투여를 위해 충분히 조작된 T 세포를 생성한다. 악시캅타젠 실로류셀은 주제-특정 생성물이다.
"형질도입" 및 "형질도입된"이라는 용어는 외래 DNA가 바이러스 벡터를 통해 세포에 도입되는 과정을 나타낸다(문헌[Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)] 참조). 일부 실시형태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 엡스타인-바 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 우두 바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터, 아데노바이러스 관련 벡터, 렌티바이러스 벡터 또는 이들의 임의의 조합이다.
"암"은 신체 내 비정상 세포의 제어되지 않은 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 넓은 군을 지칭한다. 조절되지 않은 세포 분열 및 성장은 인접 조직에 침입하는 악성종양의 형성을 유발하며, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수 있다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다. 본 출원에서, 용어 암은 악성종양과 동의어이다. 본원에 개시된 방법에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 림프종, 백혈병, 골수종, 및 다른 백혈구 악성종양을 포함하는 면역계의 암을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 방법은 예를 들어 골암, 췌장암, 피부암, 두경부의 암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 영역의 암, 위암, 고환암, 자궁암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, [다른 고형 종양 추가] 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종(NHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBC), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종(FL), 형질전환된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종(SMZL), 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 갑상선의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병(ALL)(비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소아기의 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광의 암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추 신경계(CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 유상피암, 편평세포암, T 세포 림프종, 석면에 의해 유도된 것들을 포함하는 환경적으로 유도된 암, 다른 B 세포 악성종양, 및 상기 암의 조합으로부터 유래된 종양의 종양 크기를 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 암은 다발성 골수종이다. 일부 실시형태에서, 암은 NHL이다. 특정 암은 화학 요법 또는 방사선 요법에 반응성일 수 있거나, 암은 난치성일 수 있다. 난치성 암은 수술적 개입으로 교정할 수 없는 암을 나타내며, 암은 초기에 화학요법 또는 방사선요법에 반응하지 않거나 암은 시간에 따라 반응하지 않게 된다.
본원에서 사용되는, "항-종양 효과"는 종양 부피의 감소, 종양 세포의 수의 감소, 종양 세포 증식의 감소, 전이의 수의 감소, 전체 또는 무진행 생존의 증가, 기대 수명의 증가, 또는 종양과 관련된 다양한 생리학적 증상의 개선으로서 존재할 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. 항종양 효과는 또한 종양의 발생의 예방, 예를 들어 백신을 지칭할 수 있다.
본원에서 사용되는, "사이토카인"은 특정 항원과의 접촉에 반응하여 하나의 세포에 의해 방출되는 비(non)항체 단백질을 나타내며, 여기서 사이토카인은 제2 세포와 상호작용하여 제2 세포에서 반응을 매개한다. 본원에서 사용되는, "사이토카인"은 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질을 나타내는 것으로 여겨진다. 사이토카인은 세포에 의해 내인성으로 발현되거나, 대상체에게 투여될 수 있다. 사이토카인은 대식 세포, B 세포, T 세포 및 비만 세포를 포함하는 면역 세포에 의해 방출되어 면역 반응을 전파할 수 있다. 사이토카인은 수용 세포에서 다양한 반응을 유도할 수 있다. 사이토카인은 항상성 사이토카인, 케모카인, 전염증성 사이토카인, 효과기 및 급성기 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인터류킨(IL) 7 및 IL-15를 포함하는 항상성 사이토카인은 면역 세포 생존 및 증식을 촉진시키고, 전염증성 사이토카인은 염증 반응을 촉진시킬 수 있다. 항상성 사이토카인의 예는 IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15 및 인터페론(IFN) 감마를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전염증성 사이토카인의 예는 IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-13, IL-17a, 종양괴사인자(TNF)-알파, TNF-베타, 섬유모세포 성장인자(FGF) 2, 과립구 대식세포 콜로니-자극인자(GM-CSF), 가용성 세포간 부착분자 1(sICAM-1), 가용성 혈관 세포 부착 분자 1(sVCAM-1), 혈관내피성장인자(VEGF), VEGF-C, VEGF-D 및 태반성장인자(PLGF)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 효과기의 예는 그랜자임 A, 그랜자임 B, 가용성 Fas 리간드(sFasL) 및 퍼포린을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 급성기 단백질의 예는 C-반응성 단백질(CRP) 및 혈청 아밀로이드 A(SAA)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"케모카인"은 세포 화학주성 또는 방향성 이동을 매개하는 사이토카인의 한 유형이다. 케모카인의 예는 IL-8, IL-16, 에오탁신, 에오탁신-3, 대식 세포 유래 케모카인(MDC 또는 CCL22), 단핵구 화학주성 단백질 1(MCP-1 또는 CCL2), MCP-4, 대식 세포 염증성 단백질 1α(MIP-1α, MIP-1a), MIP-1β(MIP-1b), 감마 유도 단백질 10(IP-10), 흉선 및 활성화 조절 케모카인(TARC 또는 CCL17)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는, "키메라 수용체"는 특정 분자를 인식할 수 있는 조작된 표면 발현 분자를 지칭한다. 특정 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR) 및 조작된 T 세포 수용체(TCR)는 T 세포가 특정 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 살해하는 것을 가능하게 한다. 일 실시형태에서, T 세포 치료는 (i) 항원 결합 분자, (ii) 공자극 도메인, 및 (iii) 활성화 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포 수용체(TCR)를 발현하도록 조작된 T 세포를 기반으로 한다. 공자극 도메인은 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함할 수 있으며, 여기서 세포외 도메인은 절단될 수 있는 힌지 도메인을 포함한다.
"치료적 유효량", "유효 용량", "유효량", 또는 "치료적 유효 투여량"의 치료제, 예를 들어, 조작된 CAR T 세포, 소분자, 본 명세서에 기재된 "약제"는 단독으로 또는 다른 치료제와 병용하여 사용될 경우, 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방에 의해 입증된, 질환 퇴행 촉진 또는 질환의 발증에 대해 대상체를 보호하는 임의의 양이다. 상기 용어는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 당업자에게 알려진 다양한 방법을 사용하여, 예컨대 임상 시험 중에 인간 대상체에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 어세이에서 약제의 활성을 검정함으로써 평가될 수 있다. 치료적 유효량 및 투여 레지먼은 알려진 시험관내 또는 생체내(예를 들어, 동물 모델) 시스템에서 테스팅하여 경험적으로 결정될 수 있다.
용어 "병용"은 하나의 투여 단위 형태의 고정된 조합, 또는 본 개시내용의 화합물 및 병용 파트너(예를 들어, 하기 설명된 다른 약물, "치료제" 또는 "약제"로도 지칭됨)가 독립적으로 동시에 또는 개별적으로 시간 간격 내에서 투여될 수 있는 병용 투여 중 어느 것을 지칭하고, 특히 이러한 시간 간격은 병용 파트너가 협동성, 예를 들어 상승 효과를 보이도록 한다. 단일 성분은 키트 또는 별도로 포장될 수 있다. 성분(예를 들어, 분말 또는 액체) 중 하나 또는 둘 모두는 투여 전 목적하는 용량으로 재구성 또는 희석될 수 있다. 본원에서 이용된 바와 같은, 용어 "공동 투여" 또는 "조합된 투여" 등은 선택된 조합 파트너를 이를 필요로 하는 단일 대상체(예를 들어, 환자)에 투여하는 것을 포함하는 것을 의미하고, 약제가 반드시 동일한 투여 경로로 또는 동시에 투여될 필요가 없는 치료 레지먼을 포함하도록 의도된다.
용어 "생성물(product)" 또는 "주입 생성물(infusion product)"은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, T 세포 조성물을 필요로 하는 대상체에 투여되는 T 세포 조성물을 지칭한다. 일반적으로, CAR T-세포 치료에서, T 세포 조성물은 주입 생성물으로서 투여된다.
본원에서 사용되는, 용어 "림프구"는 자연 살해(NK) 세포, T 세포, 또는 B 세포를 포함한다. NK 세포는 선천성 면역계의 주요 성분을 나타내는 세포독성(세포 독성) 림프구의 한 유형이다. NK 세포는 바이러스에 감염된 세포와 종양을 거부한다. 이는 아폽토시스 또는 세포예정사의 과정을 통해 작용한다. 이는 세포를 사멸시키기 위한 활성화가 필요 없기 때문에 "자연 살해자"로 지칭된다. T 세포는 세포-매개-면역에서 주요 역할을 한다(항체 관여가 없음). 그의 T 세포 수용체(TCR)는 다른 림프구 유형으로부터 이들 자신을 구별되게 한다. 면역계의 특수 기관인 흉선은 주로 T 세포의 성숙을 담당한다. 6개 유형의 T 세포, 즉: 헬퍼 T 세포(예를 들어, CD4+ 세포), 세포독성 T 세포(TC, 세포독성 T 림프구, CTL, T-살해 세포, 세포용해성 T 세포, CD8+ T 세포, 또는 살해 T 세포로도 알려짐), 기억 T 세포((i) 나이브 세포와 같은 줄기 기억 TSCM 세포는 CD45RO―, CCR7+, CD45RA+, CD62L+(L-셀렉틴), CD27+, CD28+, 및 IL-7Rα+이지만, 이들은 또한 다량의 CD95, IL-2Rβ, CXCR3, 및 LFA-1을 발현하며, 기억 세포에 특징적인 다수의 기능적 속성을 나타냄); (ii) 중심 기억 TCM 세포는 L-셀렉틴 및 CCR7을 발현하고, 이들은 IL-2를 분비하지만, IFNγ 또는 IL-4는 분비하지 않으며, (iii) 그러나, 효과기 기억 TEM 세포는 L-셀렉틴 또는 CCR7을 발현하지 않지만 IFNγ 및 IL-4와 같은 효과기 사이토카인을 생성함), 조절 T 세포(Treg, 억제자 T 세포, 또는 CD4+CD25+ 조절 T 세포), 자연 살해 T 세포(NKT), 및 감마 델타 T 세포가 존재한다. 한편, B-세포는 체액성 면역(항체가 관여함)에서 중요한 역할을 담당한다. 이는 항체와 항원을 만들고, 항원 제시 세포(APC)의 역할을 수행하며, 항원 상호작용에 의한 활성화 후 기억 B-세포로 변한다. 포유류에서, 미성숙 B-세포는 골수에서 형성되는 데, 여기서 이의 명칭이 유래된 것이다.
본 개시내용의 맥락에서, 용어 "TN", "T 나이브 유사" 및 CCR7+CD45RA+는 실제로 정규 나이브 T 세포보다 줄기-유사 기억 세포와 더 유사한 세포를 지칭한다. 따라서, TN에 대한 모든 실시예 및 청구범위의 언급은 CCR7+CD45RA+ 세포로서 이들의 특징에 의해서만 실험적으로 선택되는 세포를 지칭하고, 이는 이에 따라 해석되어야 한다. 본 개시내용의 맥락에서 이들의 더 양호한 명칭은 줄기 유사 기억 세포이지만, 이들은 CCR7+CD45RA+ 세포로 지칭될 것이다. 예를 들어, 문헌[Arihara Y, Jacobsen CA, Armand P, et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 2019;7(1):P210]에 기재된 방법을 사용하여, 줄기 유사 기억 세포로의 추가 특징분석가 수행될 수 있다.
"유전적으로 조작된" 또는 "조작된"이라는 용어는 암호 또는 비암호 영역, 또는 이의 일부를 결실시키거나, 암호 영역 또는 이의 일부를 삽입하는 것을 포함하지만 이에 제한되지는 않는, 세포의 게놈을 변경시키는 방법을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 변형되는 세포는 림프구, 예를 들어 T 세포이며, 이는 환자 또는 공여자로부터 얻어질 수 있다. 예를 들어, 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포 수용체(TCR)와 같은 외인성 구조체를 발현하도록 세포가 변형될 수 있으며, 이는 세포의 게놈 내로 혼입된다.
"면역 반응"은 척추동물 신체에 침입한 병원체, 병원체에 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우, 정상 인간 세포 또는 조직의 선택적 표적화, 이에 대한 결합, 이에 대한 손상, 이의 파괴 및/또는 이의 제거를 유도하는, 면역계의 세포(예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상세포 및 호중구), 및 이러한 세포 중 임의의 하나 또는 간에 의해 생성된 가용성 거대분자(Ab, 사이토카인, 및 보체 포함)의 작용을 나타낸다.
용어 "면역요법"은 면역 반응을 유도, 향상, 억제 또는 달리 변형시키는 것을 포함하는 방법에 의해서 질환을 앓거나, 질환을 앓을 위험이 있거나 재발될 위험이 있는 대상체를 치료하는 것을 지칭한다. 면역요법의 예는 T 세포 치료를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. T 세포 치료은 입양 T 세포 치료, 종양-침윤 림프구(TIL) 면역요법, 자가유래 세포 치료, 조작된 자가유래 세포 치료(eACT™), 및 동종이계 T 세포 이식을 포함할 수 있다. 그러나, 당업자는 본원에 개시된 컨디셔닝 방법이 임의의 이식된 T 세포 치료의 효과를 증강시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. T 세포 치료의 예는 미국 특허출원공개 US 2014/0154228호 및 US 2002/0006409호, 미국 특허 제7,741,465호, 미국 특허 제6,319,494호, 미국 특허 제5,728,388호, 및 국제공개 WO 2008/081035호에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 면역요법은 CAR T 세포 치료를 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료 생성물은 주입을 통해 투여된다.
면역요법의 T 세포는 당업계에 알려진 임의의 공급원으로부터 유래할 수 있다. 예를 들어, T 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내에서 분화될 수 있거나, T 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는 예를 들어 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출물, 비장 조직, 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 또한, T 세포는 당업계에서 입수가능한 하나 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 FICOLL™ 분리 및/또는 성분채집술과 같은 당업자에게 알려진 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체에서 채취한 혈액 단위에서 얻을 수 있다. T 세포 치료를 위해 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허출원공개 US 2013/0287748호에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
입양 세포 전달로도 알려져 있는 용어 "조작된 자가유래 세포 치료" 또는 "eACT™"은 환자 자체의 T 세포가 수집되고, 후속적으로 하나 이상의 특정 종양 세포 또는 악성물의 세포 표면 상에서 발현된 하나 이상의 항원을 인식하고 표적화하도록 유전적으로 변경되는 과정이다. 예를 들어, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 T 세포가 조작될 수 있다. CAR 양성(+) T 세포는 적어도 하나의 공자극 도메인과 적어도 하나의 활성화 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 부분에 연결된 특정 종양 항원에 대해 특이성을 갖는 세포외 단쇄 가변 단편(scFv)을 발현하도록 조작된다. CAR scFv는 예를 들어 달리 특정되지 않은 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종, 및 여포성 림프종으로부터 발생하는 DLBCL, NHL, CLL, 및 비-T 세포 ALL을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 모든 정상 B 세포 및 B 세포 악성종양을 포함하는, B 세포 계통 내의 세포에 의해 발현된 막관통 단백질인 CD19를 표적화하도록 설계될 수 있다. CAR T 세포 치료과 구조체의 예는 미국 특허출원공개 US 2013/0287748호, US 2014/0227237호, US 2014/0099309호 및 US 2014/0050708호에 기재되어 있으며, 이들 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에서 사용되는, "환자" 또는 "대상체"는 암(예를 들어, 림프종 또는 백혈병)으로 고통 받는 임의의 인간을 포함한다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
본원에서 사용되는, 용어 "시험관내 세포"는 생체외에서 배양되는 임의의 세포를 지칭한다. 특히, 시험관내 세포는 T 세포를 포함할 수 있다. 용어 "생체내"는 환자 내를 의미한다.
"펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"이라는 용어는 상호교환적으로 사용되며, 펩티드 결합에 의해 공유결합으로 연결된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 나타낸다. 단백질 또는 펩티드는 적어도 2개의 아미노산을 함유하며, 단백질 또는 펩티드의 서열을 포함할 수 있는 아미노산의 최대 수는 제한이 없다. 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 둘 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어는 예를 들어 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머로서 당업계에서 또한 보편적으로 지칭되는 단쇄와, 많은 유형이 존재하는 일반적으로 당업계에서 또한 단백질로 지칭되는 장쇄를 둘 다 지칭한다. "폴리펩티드"는 특히 예를 들어 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동인 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드 또는 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는, "자극"은 자극 분자와 그의 동족 리간드의 결합에 의해 유도된 1차 반응 - 결합은 신호 전달 사건을 매개함 - 을 지칭한다. "자극 분자"는 항원 제시 세포 상에 존재하는 동족 자극 리간드와 특이적으로 결합하는 T 세포 상의 분자, 예를 들어 T 세포 수용체(TCR)/CD3 복합체이다. "자극 리간드"는 항원 제시 세포(예를 들어, APC, 수지상 세포, B-세포 등) 상에 존재할 경우에 T 세포 상의 자극 분자와 특이적으로 결합할 수 있는 리간드이며, 이에 의해 활성화, 면역 반응의 개시, 증식 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 T 세포에 의한 1차 반응을 매개한다. 자극 리간드는 항-CD3 항체, 펩티드가 로딩된 MHC 클래스 I 분자, 초작용제 항-CD2 항체, 및 초작용제 항-CD28 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 "공자극 신호"는 TCR/CD3 결찰과 같은 1차 신호와 조합되어, 비제한적으로, 주요 분자의 증식 및/또는 상향조절 또는 하향조절과 같은 T 세포 반응을 유발하는 신호를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "공자극 리간드"는 T 세포 상의 동족 공자극 분자와 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 상의 분자를 포함한다. 공자극 리간드의 결합은 증식, 활성화, 분화 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 T 세포 반응을 매개하는 신호를 제공한다. 공자극 리간드는 자극 분자에 의해 제공되는 1차 신호에 더하여 예를 들어 T 세포 수용체(TCR)/CD3 복합체와 펩티드가 로딩된 주요 조직적합 복합체(MHC) 분자의 결합에 의한 신호를 유도한다. 공자극 리간드는 3/TR6, 4-1BB 리간드, Toll 리간드 수용체에 결합하는 작용제 또는 항체, B7-1(CD80), B7-2(CD86), CD30 리간드, CD40, CD7, CD70, CD83, 헤르페스 바이러스 진입 매개체(HVEM), 인간 백혈구 항원 G(HLA-G), ILT4, 면역글로불린 유사 전사체(ILT) 3, 유도성 공자극 리간드(ICOS-L), 세포간 부착 분자(ICAM), B7-H3과 특이적으로 결합하는 리간드, 림포톡신 베타 수용체, MHC 클래스 I 사슬 관련 단백질 A(MICA), MHC 클래스 I 사슬 관련 단백질 B(MICB), OX40 리간드, PD-L2 또는 세포예정사(PD) L1을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 특정한 실시형태에서, 공자극 리간드는 비제한적으로 T 세포에 존재하는 공자극 분자, 예컨대 비제한적으로 4-1BB, B7-H3, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD7, ICOS, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), 자연 살해 세포 수용체 C(NKG2C), OX40, PD-1, 또는 종양 괴사 인자 슈퍼 패밀리 구성원 14(TNFSF14 또는 LIGHT)와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
"공자극 분자"는 공자극 리간드와 특이적으로 결합하여, 증식과 같지만 이에 제한되지는 않는 T 세포에 의한 공자극 반응을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. 공자극 분자는 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD33, CD45, CD100(SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3(알파; 베타; 델타; 엡실론; 감마; 제타), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, CD83 리간드, CD84, CD86, CD8알파, CD8베타, CD9, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICOS, Ig 알파(CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LIGHT(종양 괴사 인자 슈퍼계열 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-1(CD11a/CD18), MHC 클래스 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자, SLAM(SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4(CD244; 2B4), SLAMF6(NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, Toll 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 이들의 단편, 절단체, 또는 조합을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
용어 "감소시키는" 및 "감소하는"은 본원에서 상호교환하게 사용되며, 원래보다 더 작은 임의의 변화를 나타낸다. "감소시키는" 및 "감소하는"은 측정 전과 측정 후 사이의 비교를 필요로 하는 상대적인 용어이다. "감소시키는" 및 "감소하는"은 완전한 고갈을 포함한다. 유사하게, 용어 "증가하는"은 원래 값보다 큰 임의의 변경을 나타낸다. "증가하는", "보다 높은" 및 "보다 낮은"은 비교 용어이므로 측정 전후 및/또는 기준 표준 간의 비교가 필요하다. 일부 실시형태에서, 기준 값은 일반 환자 집단일 수 있는 일반 집단의 값으로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 기준 값은 일반 환자 집단의 사분위수 분석을 따른다.
대상체의 "치료" 또는 "치료하는"은 질환과 관련된 증상, 합병증 또는 병태, 또는 생화학적 지표의 발증, 진행, 발생, 중증도, 또는 재발의 역전, 경감, 개선, 억제, 지연, 또는 예방의 목적으로 대상체에 대해 수행되는 임의의 유형의 개입 또는 과정, 또는 활성제의 투여를 지칭한다. 일부 실시형태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 부분 관해를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 완전 관해를 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료는 예방적일 수 있고, 이 경우 치료는 병태의 임의의 증상이 관찰되기 전에 투여된다. 본원에서 사용되는, 용어 "예방"은 질환 또는 질환 상태에 대한 예방 또는 보호적 치료를 의미한다. 증상, 질환, 또는 질환 상태의 예방은 예를 들어 기준 수준(예를 들어, 치료가 투여되지 않은 유사한 대상체에서의 증상(들))에 비해 질환 또는 질환 상태의 하나 이상의 증상의 감소(예를 들어, 완화)를 포함할 수 있다. 예방은 또한 예를 들어 기준 수준(예를 들어, 치료가 투여되지 않은 유사한 대상체에서의 증상(들)의 발증시)에 비해 질환 또는 질환 상태의 하나 이상의 증상의 발증을 지연시키는 것을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 질환은 본원에 기재된 질환이다. 일부 실시형태에서, 질환은 암이다. 일부 실시형태에서, 질환 상태는 CRS 또는 신경독성이다. 일부 실시형태에서, 성공적인 치료 또는 개선의 지표는 독성 등급 척도(예를 들어, CRS 또는 신경독성 등급 척도)에서 적절한 스코어를 나타내지 못하는 확인, 예컨대 3 미만의 스코어, 또는 본원에 논의된 것과 같은 등급 척도의 등급화 또는 중증도의 변경, 예컨대 스코어 4에서 스코어 3으로의 변경, 또는 스코어 4에서 스코어 2, 1 또는 0으로의 변경을 포함한다.
본원에서 사용되는, "골수 세포"는 과립구, 단핵구, 대식세포, 및 수지상 세포를 포함하는 백혈구의 하위그룹이다.
일 실시형태에서, 용어 "높음" 및 "낮음"은 대표적인 종양 집단에 대한 중앙값 "초과" 및 "미만"을 의미한다. 일부 실시형태에서(예를 들어, 유전자 발현 분석을 위해 NanoString을 사용하는 맥락에서), 중앙값은 하기와 같을 수 있다:
Figure pct00002
본원에서 사용되는, 용어 "사분위수"는 데이터의 값과 전체 관찰 세트와 어떻게 이들을 비교하는지에 따라 4개의 정의된 간격으로 관찰을 나누는 것을 설명하는 통계적 용어이다.
본원에서 사용되는, 용어 "0일차 연구"는 대상체가 첫번째 CAR T 세포 주입을 받은 날로 정의된다. 0일차 연구 전날은 연구 -1일차일 것이다. 등록 후 그리고 연구 -1일차 전의 임의의 일자는 순차적일 것이고, 음의 정수 값일 것이다.
본원에서 사용되는, 용어 "진행중 반응"은 CAR T 세포 주입 후 적어도 1년의 추적관찰에서 진행중으로 반응한 대상체를 지칭한다. 일 실시형태에서, "반응의 지속기간"은 질환 재발로 인한 질환 진행 또는 사망에 대한 첫번째 객관적인 반응으로부터의 시간으로 정의된다.
본원에서 사용되는, 용어 "재발"은 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 달성한 후 질환 진행을 경험한 대상체를 지칭한다.
본원에서 사용되는, 용어 "비반응"은 안정한 질환(SD) 및 진행성 질환(PD)을 갖는 대상체를 포함하여, CAR T 세포 주입 후 CR 또는 PR을 경험한 적이 없는 대상체를 지칭한다.
본원에서 사용되는, 용어 "객관적 반응"은 완전 반응(CR), 부분 반응(PR), 또는 비반응을 지칭한다. 이는 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준에 따라 평가될 수 있다(문헌[Cheson et al., J Clin Oncol. 2007;25(5):579-86]).
본원에서 사용되는, 용어 "완전 반응"은 방사선 이미징 및 임상 실험실 평가에 의해 검출불가능하게 되는 질환의 완전한 해결을 지칭한다. 소정의 시점에서 암의 증거가 없다.
본원에서 사용되는, 용어 "부분 반응"은 완전히 해결되지 않고 30% 초과의 종양의 감소를 지칭한다.
본원에서 사용되는, "객관적 반응률"(ORR)은 국제 실무 그룹(IWG) 2007 기준에 따라 결정된다(문헌[Cheson et al. J Clin Oncol. 2007;25(5):579-86]).
본원에서 사용되는, "무진행 생존(PFS)"은 T 세포 주입일로부터 임의의 원인으로 인한 질환 진행일 또는 사망일까지의 시간으로 정의될 수 있다. 진행은 IWG 기준에 의해 정의된 것과 같은 시험자의 반응 평가에 따라 정의된다(문헌[Cheson et al., J Clin Oncol. 2007;25(5):579-86]).
용어 "전체 생존(OS)"은 T 세포 주입일로부터 임의의 원인으로 인한 사망일까지의 시간으로 정의될 수 있다.
본원에서 사용되는, 말초 혈액에서 CAR T 세포의 확장 및 존속성은, 예를 들어 CAR의 scFv 부분(예를 들어, CD19 결합 도메인의 중쇄) 및 이의 힌지/CD28 막관통 도메인에 대한 CAR-특이적 프라이머를 사용하여, qPCR 분석에 의해 모니터링될 수 있다. 대안적으로, 이는 CAR 세포/혈액 부피 단위를 나열함으로써 측정될 수 있다.
본원에서 사용되는, CAR T 세포에 대한 예정된 채혈은 CAR T 세포 주입 전, 7일차, 2주차(14일차), 4주차(28일차), 3개월차(90일차), 6개월차(180일차), 12개월차(360일차), 및 24개월차(720일차)일 수 있다.
본원에서 사용되는, "CAR T 세포의 피크"는 0일차 후에 달성된 혈청 내 CAR+ PBMC/μL 최대 절대 수로 정의된다.
본원에서 사용되는, "CAR T 세포의 피크까지의 시간"은 0일차부터 CAR T 세포의 피크가 달성되는 날까지의 일수로서 정의된다.
본원에서 사용되는, "0일차에서 28일차까지의 CAR T 세포 수준의 곡선하 면적(AUC)"은 0일차에서 28일차까지의 예정된 방문에 대한 CAR T 세포 수준의 플롯에서 곡선하 면적으로서 정의된다. 이러한 AUC는 시간에 따라 CAR T 세포의 전체 수준을 측정한다.
본원에서 사용되는, 사이토카인에 대한 예정된 채혈은 컨디셔닝 화학요법(-5일차)일 또는 이전, 0일차, 1일차, 3일차, 5일차, 7일차, 입원의 경우 격일, 2주차(14일차), 및 4주차(28일차)에 수행된다.
본원에서 사용되는, 사이토카인의 "베이스라인"은 컨디셔닝 화학요법 전에 측정된 마지막 값으로 정의된다.
본원에서 사용되는, X일차에 베이스라인으로부터의 배수 변경은
("X일차에서의 사이토카인 수준" - "베이스라인")/"베이스라인"으로서 정의된다.
본원에서 사용되는, "베이스라인 후 사이토카인 피크"는 베이스라인(-5일차) 후부터 28일차까지에 달성된 혈청 내 사이토카인의 최대 수준으로서 정의된다.
본원에서 사용되는, CAR T 세포 주입 후 "사이토카인의 피크까지의 시간"은 0일차부터 사이토카인의 피크가 달성되는 날까지의 일수로서 정의된다.
본원에서 사용되는, -5일차부터 28일차까지의 "사이토카인 수준의 곡선하 면적(AUC)"은 -5일차부터 28일차까지의 예정된 방문에 대한 사이토카인 수준의 플롯에서 곡선하 면적으로서 정의된다. 이러한 AUC는 시간에 따른 사이토카인의 총 수준을 측정한다. 사이토카인 및 CAR+ T 세포가 특정한 별도의 시점에서 측정되는 경우, 사다리꼴 규칙이 AUC를 추정하기 위해 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는, 투여후발생(treatment-emergent) 이상 반응(TEAE)은 컨디셔닝 화학요법의 첫번째 투여 시 또는 그 후에 발증된 이상 반응(AE)으로서 정의된다. 이상 반응은 국제의약용어(MedDRA: Medical Dictionary for Regulatory Activities) 버전 22.0으로 코딩될 수 있고, 미국 국립암연구소(NCI)의 이상 반응 표준 용어 기준(CTCAE: Common Terminology Criteria for Adverse Events) 버전 4.03을 사용하여 등급화될 수 있다. 사이토카인 방출 증후군(CRS) 사건은 Lee 연구팀에 따른 증후군 수준으로 등급화될 수 있다(문헌[Lee et al, 2014 Blood. 2014;124(2):188-95]). 개별 CRS 증상은 CTCAE 4.03에 따라 등급화될 수 있다. 신경학적 사건은 예를 들어 문헌[Topp, MS et al. Lancet Oncology. 2015;16(1):57-66]에 기재된 것과 같은, CAR T 면역요법과 관련된 알려진 신경학적 독성 기반의 검색 전략으로 확인될 수 있다.
본 개시내용의 다양한 양태가 하기 서브섹션에 추가로 상세하게 기재된다.
종양 미세환경(TME)의 특징분석
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 면역요법으로 치료하기 전 유전자 발현 프로파일링 및/또는 종양내 T 세포 밀도 및/또는 TME 골수 세포 밀도/골수 염증 상태 측정을 사용하여 종양 미세환경(TME)을 특징분석하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 이러한 측정은 종양 부담(TB)에 대해 정규화된다. 일 실시형태에서, 면역요법은 특히 키메라 수용체 요법(예를 들어, YESCARTA™ 악시캅타젠 실로류셀(axicabtagene ciloleucel), TECARTUS™ - 브렉수캅타젠 오토류셀/KTE-X19, KYMRIAH™(티사젠렉류셀) 등), TCR, TIL, 면역 체크포인트 억제제로의 치료로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 면역요법 생성물은 자가유래 또는 동종이계 CAR T 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 면역요법은 T-세포 수용체 변형된 T 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 면역요법은 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함한다. 일 실시형태에서, 면역요법 생성물은 유도 만능 줄기 세포(iPSC)를 포함한다. 본원에서 기재된 것과 같이, 미리 지정된 유전자 세트(예를 들어, Immunosign®21, Pan Cancer) 및 면역 스코어(예를 들어, Immunosign®21)를 이용하는 TME 특징, 종양내 T 세포 밀도 측정 또는 지수(예를 들어, Immunoscore®), TME 골수 세포 밀도, 및/또는 키메라 수용체 요법(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀)의 임상적 결과와 관련된 TME 골수성 염증은 모든 면역요법(예를 들어, T 세포, 비-T 세포, TCR-기반 요법, CAR-기반 요법, 이중특이적 T-세포 인게이저(BiTE) 및/또는 면역 체크포인트 차단)의 임상적 결과를 예측하기 위해 사용될 수 있다.
환자 종양 생검은 유전자 발현 프로파일링(예를 들어, NanoStringTM을 사용하는 디지털 유전자 발현) 및 면역조직화학(IHC)을 사용하여 종양 미세환경을 분석하기 위한 개시 물질로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 키메라 수용체 요법(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀) 또는 다른 면역요법으로 치료하기 전 환자 생검을 수득한다 . 일부 실시형태에서, 생검은 컨디셔닝 요법의 시작 직전에 수득된다.
생물정보학 및/또는 데이터 과학-기반 방법이 사용되어 TME를 특징분석하기 위한 면역 스코어(들)를 생성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역 스코어는 T 세포 독성, T 세포 분화, T 세포 유인, T 세포 부착 및 면역 배향, 혈관신생 억제, 면역 동시억제, 및 암 줄기 세포를 포함하는 면역 억제를 적응 면역에 관한 정보를 제공하는 면역 관련 유전자의 측정치이다. 생물정보학 방법은 또한 T 세포 특이적(효과기 T 세포, Th1) 유전자, 인터페론 경로 관련 유전자, 케모카인, 및 면역 체크포인트를 포함할 수 있다.
발현 프로파일링 어세이(예를 들어, The Immunosign® 임상 연구 어세이는 nCounter® 기술(NanoString)을 이용함)가 사용되어 다중 형식으로 다중 면역 유전자의 유전자 발현 수준을 측정할 수 있다. 일부 실시형태에서, 높은/낮은 면역 스코어(예를 들어, Immunosign®21 스코어) 컷 오프는 샘플들 중에서 관찰된 스코어의 25번째 백분위로서 정의될 수 있다. 일부 실시형태에서, 높은 스코어는 잠재적으로 종양 반응과 연관된 면역-관련 유전자의 발현을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 면역 스코어는 종양내 T 세포 밀도의 측정치이다. 종양내 T 세포 밀도는 예를 들어 종양 미세환경에서 T 세포, 예컨대 CD3+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포 검출 및 정량화에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 종양 생검은 CD3 및/또는 CD8과 같은 T 세포 마커에 대해 절편화 및 염색 또는 표지될 수 있고, T 세포의 상대적 및 절대적 존재비는 병리학자에 의해 정량화되거나 전용 디지털 병리학 소프트웨어를 사용하여 결정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 높은/낮은 면역 스코어(예를 들어, Immunoscore®)는 종양내 T 세포 밀도 기반으로 부여된다. 높은/낮은 면역 스코어 역치는 예를 들어 샘플들 중에서 관찰된 중앙값 스코어로서 정의될 수 있다. 일부 실시형태에서, 종양내 T 세포 밀도는 유세포 분석법 및/또는 웨스턴 블롯팅 및 ELISA와 같은 단백질 기반 어세이를 사용하여 결정된다.
TME 골수 세포 밀도 및 TME 골수 염증 수준, 발현 및 종양 침윤 T 림프구 분석 및 스코어링을 사용하여 TME 특징과 반응 사이의 관련성을 조사할 수 있다. 일부 실시형태에서, 객관적 반응(OR)은 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준에 따라 결정되고(문헌[Cheson, 2007]), 악성 림프종에 대한 IWG 반응 기준에 의해 결정된다(문헌[Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27(September 2014) 3059-3067]). 일부 실시형태에서, 반응의 지속기간이 평가된다. 일부 실시형태에서, Lugano 반응 분류 기준에 따라 시험자 평가에 의해 무진행 생존(PFS)이 평가된다.
일부 실시형태에서, CAR T 세포는 이전에 기재된 것과 같이 TaqMan-기반 정량적 폴리머라아제 연쇄 반응(qPCR; Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 정량화된다(문헌[Locke FL et al. Lancet Oncol. 2019;20(1):31-42]; [Neelapu SS et al. N Engl J Med. 2017;377(26):2531-2544]; [Locke FL et al. Mol Ther. 2017;25(1):285-295]). 혈중 CAR-양성 세포의 빈도를 보고하기 위해, 말초 혈액 단핵구 세포에서 액틴 발현에 대해 CAR 유전자 발현을 정규화한 후, 절대 림프구 수를 정규화함으로써 마이크로리터 당 CAR T 세포가 계산된다(문헌[Kochenderfer JN et al. J Clin Oncol. 2017;35(16):1803-1813]). 혈액 μL 당 측정된, CAR T의 최대 수준으로 정의된, 피크 CAR T 확장이 분석에 사용된다.
일 실시형태에서, 유전자 발현 분석은 NanoString에 의해 수행된다. 일 실시형태에서, 동결 또는 고정 생검으로부터의 RNA 추출은 각각 QIAGEN RNeasy 키트 및 QIAGEN FFPE RNeasy 추출 키트를 사용하여 수행된다. H&E 염색을 수행하는 병리학자의 주석은 RNA 추출 전과 조직 탈파라핀화 및 용해 후 마크로해부에 의해 슬라이드에서 정상 조직의 제거를 안내하기 위해 사용된다. 추출 후, RNA 정량화를 Nanodrop으로 수행하고, Agilent 바이오분석기로 적격성 분석을 수행한다. 하나의 RNA QC 샘플이 추출을 위한 양성 대조군으로 각 테스트 실행에 포함된다. RNA 발현 프로파일링은 3개의 NanoString 데이터세트를 사용하여 수행된다.
일 실시형태에서, 결과는 통계 분석에 적용된다. 일 실시형태에서, 볼케이노 플롯, 전사체 발현 히트맵은 Spotfire 7.12.0(TIBCO 소프트웨어)을 사용하여 생성된다. Kaplan-Meier 생존 곡선(전체 생존 및 무진행 생존), 박스플롯 및 회귀 곡선은 R Studio 3.4.1을 사용하여 플롯팅된다. 일 실시형태에서,
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 치료 전(예를 들어, 사전 컨디셔닝) 종양 미세환경 및 T 세포 치료 투여 후(예를 들어, 2주 후, 4주 후) 발생하는 변화를 분석함으로써, 면역요법(예를 들어, T 세포 치료)의 임상적 효능을 위한 예측 도구를 제공한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 억제성 골수 관련 활성(즉, 치료, 예를 들어 면역요법의 효과를 손상시키거나 이의 효과를 감소시키고; 치료에 대한 반응을 감소시키는 골수 세포 활성), 가장 현저하게는(그러나 이것만은 아님) ARG2, TREM2, 및 IL-8 유전자 발현에 관련된 치료전 면역 TME 특징이, CD19 발현의 기록된 손실 없이 반응하지 않았거나 재발했던 환자에서 상승하였음을 제공한다. 일 양태에서, 본 개시내용은 치료전 생검에서 ARG2 및 TREM2 수준이 CD8+ T-세포 밀도와 음의 관련성을 가졌음을 제공한다. 일 양태에서, 지속가능한 반응을 달성한 높은 TB 환자는 재발된 높은 TB 환자에 비해, 악시캅타젠 실로류셀 후, TME에서 낮은 치료전 ARG2 및 TREM2 수준과 향상된 CAR T-세포 확장을 가졌다. 일 양태에서, 높은 비의 치료전 생검에서 억제성 골수 세포 마커에 대한 T-세포(T/M 비)는 CAR T-세포 확장(피크 및 TB에 대해 정규화된 피크) 및 높은 TB 환자에서 지속적인 반응과 양의 관련성을 가졌다.
따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 암 환자의 종양에서, 종양 미세환경(TME)에서 골수성 염증을 정량화함으로써 환자의 암을 치료하기 위한 면역요법의 임상적 효능 및/또는 암 환자에서 골수 세포에 의해 유도된 억제성 TME를 예측하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 골수성 염증의 종양 수준이 높을수록, 암 환자의 TME는 보다 치료-억제성이다. 일 실시형태에서, 종양 골수성 염증 수준이 높을수록, 면역요법의 임상적 효능이 더 낮다. 일 실시형태에서, 면역요법은 CAR-T 세포, TCR-T 세포, 종양 침윤 림프구, 체크포인트 억제제 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일 실시형태에서, TME 골수성 염증 수준은 종양에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현을 측정함으로써 추정된다. 일 실시형태에서, TME에서 이러한 유전자 중 하나 이상의 발현이 높을수록, TME에서 골수성 염증 수준이 더 높다. 일 실시형태에서, 임상적 효능은 완전 반응률, 객관적 반응률, 진행중 반응률, 반응 지속성 중앙값, PFS 중앙값, 및/또는 OS 중앙값에 의해 평가된다.
다른 실시형태에서, 본 개시내용은 면역요법(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀)이 강력한 CAR T-세포 확장과 함께 유리한 면역 TME(치료에 대한 반응, 예를 들어 면역요법에 대한 반응에 유리하다는 점에서 유리함)를 갖는 환자에서 높은 TB를 극복할 수 있음을 제공한다. 일 실시형태에서, 강력한 CAR T-세포 확장은 일반 CAR T 세포 치료 집단에서 CAR T 세포 확장의 중앙값 수준을 포함하며, 중앙값은 0 내지 10, 10 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 60, 60 내지 70, 70 내지 80, 80 내지 90, 90 내지 100, 바람직하게는 40 내지 50이다. 따라서, 본 개시내용은 CAR T-세포 치료의 맥락에서 높은 TB를 극복하기 위한 실행가능한 전략을 제공한다. 일 실시형태에서, 유리한 면역 TME는 감소된 억제성 골수 세포 활성(낮은 ARG2 및 TREM2 발현) 및 증가된 T/M 비를 특징으로 한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 TME 골수성 염증의 수준이 기준 수준 초과/이내일 때 치료를 위해 환자를 선택하는, 면역요법(예를 들어, CAR 또는 TCR-T)을 필요로 하는 암 환자에서 면역요법으로의 암 치료 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, NanoString 단위 방법에 의해 측정된 것과 같이, TME 골수성 염증에 대한 대체물로서 언급된 유전자를 사용하여, TME 골수성 염증의 수준이 하기와 같은 경우 치료를 위해 환자를 선택한다: 0 내지 27(ARG2), 0 내지 10(TREM2), 0 내지 42(IL8), 0 내지 9(IL13), 0 내지 11(C8G), 0(CCL20), 0 내지 11(IFNL2), 0 내지 8(OSM), 0 내지 77(IL11RA), 0 내지 27(CCL11), 59 내지 132(MCAM), 0(PTGDR2), 및/또는 0(CCL16). 범위 및 사분위수 분포 표가 하기 제공된다. 일 실시형태에서, ARG2: 0 내지 27, 27 내지 40, 40 내지 75, 75 내지 120, 바람직하게는 0 내지 27이고; TREM2: 0 내지 10, 10 내지 35, 35 내지 100, 100 내지 500, 바람직하게는 0 내지 10이고; IL8: 0 내지 40, 40 내지 100, 100 내지 200, 200 내지 3000, 바람직하게는 0 내지 40이고; IL13: 0 내지 10, 10 내지 40, 40 내지 90, 90 내지 400, 바람직하게는 0-10이고; CCL20: 0 내지 44, 44 내지 100, 100 내지 500, 바람직하게는 0 내지 44이다.
일 실시형태에서, 증가된 T/M 비는 -0.5 내지 0.02, 0.02 내지 1, 1 내지 4, 4 내지 8, 8 내지 15 초과, 바람직하게는 1 내지 4 초과의 비이다. 일 실시형태에서, T 세포 지수는 NanoString에 따라 선택된 유전자(CD3D, CD8A, CTLA4, TIGIT)의 평균 제곱근으로서 추정된다. 다른 실시형태에서, 다른 동등한 방법이 당업자에 의해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 골수 지수는 선택된 유전자(ARG2, TREM2)의 평균 제곱근으로서 추정된다. 다른 실시형태에서, 다른 동등한 방법이 당업자에 의해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, T/M 비는 로그2((T-세포 지수+1)/(골수 지수+1))로서 추정된다. 다른 실시형태에서, 다른 동등한 방법이 당업자에 의해 사용될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 면역요법(예를 들어, CAR 또는 TCR-T) 및 또 다른 약제를 포함하는 병용 요법에 대해 (TME를 갖는) 종양을 갖는 환자를 등급화하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 CAR-T 주입 전, CAR-T 확장의 피크에서, 및/또는 피크 CAR-T 확장 후 환자에게 약제와 병용되어 면역요법(예를 들어, CAR 또는 TCR-T)을 투여하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, CAR-T 확장의 피크는 주입 후 7 내지 14일차이다. 일 실시형태에서, CAR-T 확장의 피크는 주입 후 1일차, 2일차, 3일차, 4일차, 5일차, 6일차, 7일차, 8일차, 9일차, 10일차, 11일차, 12일차, 13일차, 14일차, 15일차, 16일차, 17일차, 18일차, 19일차, 또는 20일차이다. 일 실시형태에서, 피크 CAR-T 확장 후 기간은 주입 후 14 내지 28일차 사이의 기간이다. 일 실시형태에서, 피크 CAR-T 확장 후 기간은 1일차 내지 5일차, 5일차 내지 10일차, 10일차 내지 15일차, 15일차 내지 20일차; 20일차 내지 25일차; 1일차 후, 2일차 후, 3일차 후, 4일차 후, 5일차 후, 6일차 후, 7일차 후, 8일차 후, 9일차 후, 10일차 후, 11일차 후, 12일차 후, 13일차 후, 14일차 후, 15일차 후, 16일차 후, 17일차 후, 18일차 후, 19일차 후, 20일차 후, 25일차 후, 30일차 후, 35일차 후, 40일차 후, 45일차 후, 50일차 후, 피크 확장 후 임의의 일차이다. 일 실시형태에서, 병용 요법은 T 세포의 증식을 향상시킨다. 일 실시형태에서, 상기 병용 요법은 펨브롤리주맙, 레날리도마이드, 엡코리타맙, 및 우톨리우맙으로의 치료를 포함한다. 일 실시형태에서, 병용 요법은 TME에서 억제성 골수 집단을 감소시킨다. 일 실시형태에서, 상기 요법은 마그롤리맙(항-CD47 길항제), GSK3745417(STING 작용제), INCB001158(ARG1/2 억제제), GS-1423(CD73xTGFβ mAb), 셀리크렐루맙(CD40 작용제), GS3583(FLT3 작용제), 펙시다르티닙(CSF1R 억제제), 에파카도스타트(IDO1 억제제), GS9620(TLR 작용제)을 포함한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 높은 종양 부담을 갖는 대상체에서 종양의 치료 방법을 제공하며, 대상체에서 높은 종양 부담은 바람직한 면역 TME를 유도하는 하나 이상의 약제를 투여함으로써 및/또는 CAR T 세포 확장을 증가시킴으로써, 감소된다. 일 실시형태에서, 대상체는 베이스라인 종양 부담(최장 수직 직경, SPD)이 3000 mm2 초과일 때 높은 종양 부담을 갖는다. 일 실시형태에서, 높은 종양 부담은 100 내지 2000, 2000 내지 3000, 3000 내지 6000, 6000 내지 40000, 바람직하게는 2000 내지 3000 mm2 초과의 베이스라인 종양 부담이다. 일 실시형태에서, 면역 TME는 TME가 감소된 억제성 골수 세포 활성 및/또는 증가된 T 세포/골수 세포 비를 나타낼 때 유리하다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M 비는 1 내지 4, 1, 2, 3, 또는 4이다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M은 1 내지 4의 비이다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M은 2 내지 5, 3 내지 6, 7 내지 10, 11 내지 14, 15 내지 18, 또는 19 내지 20의 비이다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M은 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 초과의 비이다. 일 실시형태에서, 감소된 골수 세포 활성은 낮은 ARG2 및/또는 낮은 TREM2 유전자 발현이다. 일 실시형태에서, 낮은 ARG2 및/또는 낮은 TREM2 유전자 발현은, 유전자 발현 수준이 Nanostring에 의해 측정된 것과 같이(실시예 참조) 0 내지 27 내에 속해있을 때, 또는 다른 유전자 발현 측정 방법에 의해 측정된 것과 같은 등가의 값 내에 속해있을 때이다. 일 실시형태에서, 수준은 이들이 당업자에 의해 평가된 것과 같이, 대표적인 종양 집단 중에서 수준의 제1 사분위수 내에 속해있을 때 낮다. 일 실시형태에서, 약제는 면역조직화학에 의해 CD14+ 세포, CD68+ 세포, CD68+CD163+ 세포, CD68+CD206+ 세포, CD11b+ CD15+ CD14- LOX-1+ 세포, 및/또는 CD11b+ CD15- CD14+ S100A9+ CD68- 세포를 측정함으로써 평가된 것과 같은 종양 골수 억제성 활성을 감소시키고/시키거나 종양 골수 세포 밀도를 감소시킨다. 일 실시형태에서, 약제는 항-CD47 길항제, CSF/CSF-1R 억제제, TLR 작용제, CD40 작용제, 아르기나아제 억제제, IDO 억제제, 및 TGF-베타 억제제로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 약제는 마그롤리맙(항-CD47 길항제), GSK3745417(STING 작용제), INCB001158(ARG1/2 억제제), GS-1423(CD73xTGFβ mAb), 셀리크렐루맙(CD40 작용제), GS3583(FLT3 작용제), 펙시다르티닙(CSF1R 억제제), 에파카도스타트(IDO1 억제제), 및/또는 GS9620(TLR 작용제)으로부터 선택된다.
일 실시형태에서, 약제는 하기로부터 선택된다: (i) 렌질루맙; 나밀루맙(AMG203); GSK3196165/MOR103/오틸리맙(GSK/MorphoSys); KB002 및 KB003(KaloBios); MT203(Micromet and Nycomed); MORAb-022/김실루맙(Morphotek); 또는 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러; E21R; 및 소분자로부터 선택된 GM-CSF 억제제; (ii) RG7155, PD-0360324, MCS110/라크노투주맙, 또는 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러 버전; 및 소분자로부터 선택된 CSF1 억제제; 및/또는 (iii) 마브릴리무맙(이전의 CAM-3001; MedImmune, Inc.); 카비랄리주맙(Five Prime Therapeutics); LY3022855(IMC-CS4)(Eli Lilly), RG7155 또는 RO5509554로도 알려진 에막투주맙; FPA008(Five Prime/BMS); AMG820(Amgen); ARRY-382(Array Biopharma); MCS110(Novartis); PLX3397(Plexxikon); ELB041/AFS98/TG3003(ElsaLys Bio, Transgene), SNDX-6352(Syndax); 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러 버전; 및 소분자로부터 선택된 CSF1R 억제제 및 GM-CSFR 억제제.
일 실시형태에서, 면역요법은 저용량 방사선, 면역 체크포인트 차단을 통한 T 세포 활성의 촉진, 및/또는 T 세포 작용제와 조합된다. 일 실시형태에서, T 세포 작용제는 펨브롤리주맙, 레날리도마이드, 엡코리타맙, 및 우톨리우맙으로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 병용제는 체크포인트 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체, 펨브롤리주맙(키트루다), 세미플리맙(립타요), 니볼루맙(옵디보); 항-PD-L1 항체, 아테졸리주맙(테센트릭), 아벨루맙(바벤시오), 두르발루맙(임핀지); 및/또는 항-CTLA-4 항체, 이필리무맙(여보이))로부터 선택된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 종양에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현을 측정하는 것을 포함하는 TME 골수성 염증의 정량화 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 이들 유전자 중 하나 이상의 발현이 높을수록 TME 골수성 염증 수준이 더 높다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 TME에서 ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16 중 하나 이상의 유전자 발현을 측정하는 것을 포함하는, 종양 면역요법(예를 들어, CAR 또는 TCR-T)을 필요로 하는 대상체에서 종양 면역요법의 임상적 효능을 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 이들 유전자 중 하나 이상의 발현이 높을수록 임상적 효능은 더 낮다. 일 실시형태에서, 임상적 효능은 PFS 및/또는 OS, 진행중 반응률, 완전 반응률, 및/또는 객관적 반응률에 의해 측정된다. 일 실시형태에서, T/M 비는 진행중 반응률에 대한 이의 영향에 기초하여, 높은 종양 부담 대상체 및 낮은 종양 부담 대상체 사이를 구별하기 위해 사용될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 TME에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비를 측정하는 것을 포함하는, 큰 종양 부담을 갖는 환자에서 면역요법(예를 들어, CAR 또는 TCR-T)에 대한 반응을 예측하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, TME에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비가 높을수록, 반응이 더 양호하다. 일 실시형태에서, T 세포 활성화는 TME에서 CD3D, CD8A, CTLA4, 및 TIGIT 중 하나 이상의 유전자 발현 수준을 측정함으로써 측정된다. 일 실시형태에서, TME에서 억제성 골수 세포의 수준은 log2 변환으로 골수 세포 지수(선택된 유전자의 평균 제곱근)에 대한 T 세포의 비를 측정함으로써 측정된다. 일 실시형태에서, 억제성 골수 세포의 수준은 TME에서 ARG2 및/또는 TREM2의 유전자 발현 수준을 측정함으로써 측정된다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 치료를 위한 암 환자를 선택하는 방법을 제공하며, TME에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비가 낮은 경우, 면역요법 전 환자는 골수 컨디셔닝이 투여된다. 일부 실시형태에서, 골수 컨디셔닝은 억제성 골수 TME의 억제를 포함한다. 일 실시형태에서, 골수 컨디셔닝 요법은 특정 골수 유전자(예를 들어, ARG2, TREM2, IL8, CD163, MRC1, MSR1) 및 공자극 유전자/경로(예를 들어, TLR, CD40, STING), 예컨대 마그롤리맙(항-CD47 길항제), GSK3745417(STING 작용제), INCB001158(ARG1/2 억제제), GS-1423(CD73xTGFβ mAb), 셀리크렐루맙(CD40 작용제), GS3583(FLT3 작용제), 펙시다르티닙(CSF1R 억제제), 에파카도스타트(IDO1 억제제), 및/또는 GS9620(TLR 작용제)을 표적화하는 약제로부터 선택된다. 다른 유용한 CSF/CSF1R 억제제는 상기 언급되어 있다. 일부 실시형태에서, 큰 종양 부담(최장 수직 직경, SPD)은 3000 내지 40000 mm2 이내의 종양 부담이다. 일부 실시형태에서, 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 -0.5 내지 4 이내의 낮은 T/M 비는 -0.5 내지 4 이내의 비이다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M 비는 1 내지 4 초과이다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M은 2 내지 5, 3 내지 6, 7 내지 10, 11 내지 14, 15 내지 18, 또는 19 내지 20의 비이다. 일 실시형태에서, 증가된 T/M은 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 초과의 비이다. 일 실시형태에서, 반응은 객관적 반응률, 완전 반응률, 진행중 반응률, 반응 지속성 중앙값, PFS 중앙값, 또는 OS 중앙값이다.
일 실시형태에서, 이전의 실시형태에서의 용어 낮음, 높음, 증가됨, 감소됨 및 다른 관련 용어는 동일한 종류의 종양의 대표적인 그룹에서의 일반 분포와 관련이 있다. 일 실시형태에서, 용어는 사분위수, 중앙값, 평균, 최소값, 최대값, 및 하기 표의 범위 값의 분포에 관한 것이다.
일 실시형태에서, T/M 비, 골수 시그니처, 베이스라인 종양 부담(SPD), 및 TME에서의 바이오마커 유전자 발현은 하기와 같은 분포를 갖는다:
Figure pct00003
본 개시내용은 억제성 골수 세포 시그니처에 대한 활성화된 T 세포의 비가 반응과 양의 관련성을 갖고, 또한 CAR-T 피크 세포 확장/종양 부담과 양의 관련성을 가짐을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 T/M을 측정하는 것을 포함하는 CAR-T 피크 세포 확장/종양 부담의 추정 방법을 제공한다. 활성화된 T/골수 비가 낮은 환자는 면역요법으로 치료하기 전에 골수 컨디셔닝(특정 골수 유전자, 예를 들어 Arg2를 표적으로 하여 억제성 골수 TME 억제)의 이점을 얻을 수 있다.
일 실시형태에서, 이러한 방법은 면역요법에서 적용되고, 여기서 면역요법은 CAR-T 세포 치료이다. 일 실시형태에서, 면역요법은 TCR-T 세포, iPSC, 종양 침윤 림프구, 및 체크포인트 억제제로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 면역요법은 자가유래 면역요법이다. 일 실시형태에서, 면역요법은 동종이계성이다. 표적 종양 항원의 예는 본 명세서의 다른 부분에 나열되어 있다. 본 개시내용의 방법에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 또한 본 명세서의 다른 부분에 제공된다.
본 개시내용의 방법은 또한 병용하여 또는 순차적으로 사용된, 추가 요법이 특정한 종양 미세환경 특징을 갖는 대상체에서 보다 효과적일 것인지 여부를 알려주기 위한 동반 시험에서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 추가적인 치료는 사이토카인(예를 들어, IL-2, IL-15), 자극 항체(예를 들어, 항-41BB, OX-40), 체크포인트 차단(예를 들어, CTLA4, PD-1), 또는 선천성 면역 자극제(예를 들어, TLR, STING 작용제)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 추가적인 치료는 T 세포 모집 케모카인(예를 들어, CCL2, CCL1, CCL22, CCL17, 및 이의 조합) 및/또는 T 세포일 수 있다. 일부 실시형태에서, 추가 요법(들)은 전신적으로 또는 종양내로 투여된다.
본 개시내용의 일 양태는 CAR-T 세포 또는 외인성 TCR을 발현하는 T 세포의 투여(예를 들어, 적어도 1회의 주입) 전, 악성종양의 하나 이상의 부위(들)(즉, 종양 미세환경)에서 면역-관련 유전자 발현 및/또는 T 세포 밀도를 측정하는 것을 포함하는 악성종양의 치료 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 상기 측정은 화학요법 컨디셔닝 및 조작된 T 세포(예를 들어, CAR-T 세포) 투여 전에 수행된다.
일부 실시형태에서, 상기 측정은 ImmunoSign®21 또는 Immunosign®15 스코어와 같은 면역 관련 유전자 발현에 기초한 복합 면역 스코어를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 측정은 Immunoscore®와 같은 CD3+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함하는, T 세포의 종양내 밀도에 기초하여 면역 스코어를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 측정은 대상체의 면역 스코어(들)와 사전결정된 역치의 비교에 기초하여 높음 또는 낮음과 같은 상대 스코어(들)를 결정하고 부여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 사전결정된 역치는 조작된 T 세포로 악성종양을 치료하는 것과 관련하여 예후적 값을 갖는 것으로 결정되거나 결정되었다.
일부 실시형태에서, 개시된 방법은 상기 측정(들)을 기초로 하여 치료 최적화 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 조작된 T 세포(예를 들어, CAR-T 세포) 투여의 투여 및/또는 예정은 TME에서 골수 활성/염증 및 T/M 비에 기초하여 최적화된다. 일 실시형태에서, 유리한 면역 TME는 감소된 억제성 골수 세포 활성(낮은 ARG2 및 TREM2 발현) 및 증가된 T/M 비를 특징으로 한다. 예시적인 실시형태에서, 보다 높은 억제성 골수 활성 수준 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체는 보다 낮은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 증가된 T/M 비를 갖는 대상체에 비해 보다 높은 용량의 CAR-T 세포가 투여된다. 일부 실시형태에서, 보다 높은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체는 보다 낮은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 증가된 T/M 비를 갖는 대상체에 비해, 약 25% 더 높거나, 약 50% 더 높거나, 약 100% 더 높은 용량이 투여된다. 추가의 대안적인 예시적인 실시형태에서, 보다 높은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체는 하나 이상의 추가의 CAR-T 세포 주입을 받는다. 일부 실시형태에서, 보다 높은 억제성 골수 활성 수준 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체는 면역요법(예를 들어, CAR-T 세포)의 첫번째 용량이 투여되고, 치료 반응이 평가되고, 불완전 반응이 관찰되는 경우 억제성 골수 활성 수준 및/또는 T/M 비의 추가 측정이 실시된다. 일부 실시형태에서, 면역요법(예를 들어, CAR-T 세포)의 추가 투여는 대상체가 첫번째 투여 후 여전히 보다 높은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 경우 수행된다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 방법은 추가로 또는 대안적으로 보다 높은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체가 CAR-T 투여 전에 이들의 TME를 개선할 목적으로 치료되는 '사전-치료' 단계를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 보다 높은 수준의 억제성 골수 활성 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체는 사이토카인, 케모카인, 면역 작용제, 또는 면역 체크포인트 억제제와 같은 하나 이상의 면역자극제를 투여받는다. 일부 실시형태에서, 억제성 골수 활성 및/또는 T/M 비의 추가 측정은 치료 전에 수행된다.
일부 실시형태에서, 면역요법(예를 들어, CAR-T 요법)에 기초한 완전 반응에 관한 억제성 골수 활성 및/또는 T/M 비의 예후적 값은 치료 옵션이 평가될 때 고려된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 보다 높은 억제성 골수 활성 및/또는 감소된 T/M 비를 갖는 대상체는 보다 낮은 억제성 골수 활성 및/또는 보다 높은 T/M 비를 갖는 대상체에 비해 초기 치료법으로서 CAR-T를 투여받는다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 면역요법 전에 골수 컨디셔닝을 필요로 하는 종양을 갖는 대상체에 골수 컨디셔닝을 투여하는 것을 포함하는, 면역요법(예를 들어, CAR-T 세포 치료)에 대한 1차 내성의 감소 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 골수 컨디셔닝은 억제성 골수 TME의 억제를 포함한다. 일 실시형태에서, 골수 컨디셔닝 요법은 특정 골수 유전자(예를 들어, ARG2, TREM2, IL8, CD163, MRC1, MSR1) 및 공자극 유전자/경로(예를 들어, TLR, CD40, STING), 예컨대 마그롤리맙(항-CD47 길항제), GSK3745417(STING 작용제), INCB001158(ARG1/2 억제제), GS-1423(CD73xTGFβ mAb), 셀리크렐루맙(CD40 작용제), GS3583(FLT3 작용제), 펙시다르티닙(CSF1R 억제제), 에파카도스타트(IDO1 억제제), 및/또는 GS9620(TLR 작용제)을 표적화하는 약제로부터 선택된다. 다른 유용한 CSF/CSF1R 억제제는 상기 언급되어 있다. 일 실시형태에서, 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료의 투여 전, 투여 동안, 또는 투여 후, 종양의 메틸화 상태를 조절하는 약제(예를 들어, DNA 탈메틸화 억제제(DDMTi) 5-아자-2'-데옥시시티딘(데시타빈) 및 5-아자시티딘 또는 다른 시토신 유사체), 및/또는 종양의 아세틸화 상태를 조절하는 약제(예를 들어, HDAC 억제제)를 필요로 하는 종양을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)에 대한 1차 내성의 감소 방법을 제공한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료 투여 전, 투여 동안, 또는 투여 후, T 세포 표면 상 면역 체크포인트 수용체, 예컨대 세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA-4), 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3), T 세포 면역글로불린 뮤신 도메인 3(TIM-3), B-림프구 및 T-림프구 감쇠자(BTLA), T-세포 면역글로불린 및 T-세포 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM) 도메인, 및 세포예정사 1(PD-1/PDL-1)을 차단하는 약제와 같은 체크포인트 차단제를 필요로 하는 종양을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)에 대한 1차 내성의 감소 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙(키트루다), 니볼루맙(옵디보), 세미플리맙(립타요), 아테졸리주맙(테센트릭), 아벨루맙(바벤시오), 두르발루맙(임핀지); 및 이필리무맙(여보이)으로부터 선택된다.일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료 투여 전, 투여 동안, 또는 투여 후, 41BB, OX40, 및/또는 TLR의 작용제를 필요로 하는 종양을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료에 대한 1차 내성의 감소 방법을 제공한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 구성적 또는 유도성 프로모터 하에 감마 사슬 수용체 사이토카인을 공동 발현함으로써 CAR T 세포를 개선하는 것을 포함하는, 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)에 대한 1차 내성의 감소 또는 극복 방법을 제공한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 종양 미세환경을 보다 유리한 면역 허용 상태로 조정하기 위한 브릿징(bridging) 요법의 최적화에 의한 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)의 개선 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 최적화는 면역조절 이미드 약물(IMID)/세레블론 조절제(예를 들어, 레노알리도마이드, 포말리도마이드, 이베르도마이드, 및 아프레밀라스트)로 브릿징 요법을 투여하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, 최적화는 국소 방사선으로 브릿징 요법을 투여하는 것을 포함한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료) 투여 전, 종양 부담을 감소시키기 위한 브릿징 요법의 최적화에 의한 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)의 개선 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 최적화는 R-CHOP, 벤다무스틴, 알킬화제 및/또는 백금계 약제를 이용하여 브릿징 요법을 투여하는 것을 포함한다. 다른 예시적인 브릿징 요법은 본 출원의 다른 부분에 기재되어 있다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 종양 미세환경을 보다 유리한 면역 허용 상태(예를 들어, TME에서 적은 골수성 염증)로 조절하기 위한 컨디셔닝 치료의 최적화에 의한 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)의 개선 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 최적화는 사이클로포스파미드/플루다라빈 컨디셔닝에 대한 국소 조사의 추가를 포함한다. 일 실시형태에서, 최적화는 컨디셔닝제로서 백금계 약제의 투여를 포함한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 활성을 가능하게 하기 위한 생물학적 반응 개질제와의 공동투여 또는 후-면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)에 의한 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)의 개선 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 방법은 감마 사슬 사이토카인(예를 들어, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, 및 IL-21)의 투여를 포함한다. 일 실시형태에서, 방법은 체크포인트 차단제(예를 들어, 항-CTLA-4)의 투여를 포함한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 낮은 T/M 비, 높은 종양 부담, 높은 TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준을 포함하는, 유해한 종양 미세환경을 극복하기 위한 T 세포의 재프로그래밍에 의한 면역요법(예를 들어, CAR T 세포 치료)의 개선 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, T 세포는 감마 사슬 수용체 사이토카인을 발현하도록 조작된다. 일 실시형태에서, 감마 사슬 수용체 사이토카인은 구성적 또는 유도성 프로모터 하에 발현된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포가 유해한 종양 미세환경을 극복하는 것을 보조하기 위한 T 세포 제조의 최적화에 의한 CAR T 세포 치료의 개선 방법을 제공하고, 여기서 유해할 수 있는 종양 미세환경의 특징은 낮은 T/M 비, 높은 종양 부담, 높은 TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수 염증 수준을 포함한다. 일 실시형태에서, 유해할 수 있는 TME의 특징은 낮은 T/M 비(-0.5 내지 4 이내), 높은 종양 부담(3000 내지 40000 mm2 이내), 높은 골수 세포 밀도(1000 내지 4000 세포/mm2 이내) 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준(27 내지 2000 이내)을 포함한다. 일 실시형태에서, 방법은 감마 사슬 수용체 사이토카인을 발현하도록 CAR T 세포를 조작하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, 감마 사슬 수용체 사이토카인은 구성적 또는 유도성 프로모터 하에 발현된다. 일 실시형태에서, 방법은 IL-15와 같은 감마 사슬 사이토카인의 존재 하에서 T 세포를 성장시키는 것을 포함한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다:
(a) 종양 미세환경을 특징분석하기 위해 환자로부터 종양 생검을 분석하는 단계; 및
(b) 하나 이상의 키메라 수용체를 포함하는 유효 용량의 T 세포를 환자에게 투여하는 단계로서, 유효 용량은 종양 미세환경의 특징을 사용하여 결정되며, 종양 미세환경의 특징은 T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 TME 골수성 염증 수준, 예컨대 낮은 T/M 비(-0.5 내지 4 이내), 높은 종양 부담(3000 내지 40000 mm2 이내), 높은 골수 세포 밀도(1000 내지 4000 세포/mm2 이내) 및/또는 높은 골수성 염증 수준(27 내지 2000 이내)을 포함하는 단계.
일 실시형태에서, 종양 미세환경은 유전자 발현 프로파일링, 종양내 T 세포 밀도 측정, 또는 이의 조합을 사용하여 특징분석된다.
일 실시형태에서, 유전자 발현 프로파일링은 유전자의 지정된 패널(본원에서 바이오마커로서 사용됨) 및/또는 T 세포의 지정된 서브세트의 발현 수준을 결정하는 것을 포함하며, 이들 중 다수는 본 개시내용의 본 섹션과 실시예에서 예시된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 환자가 하기를 포함하는 키메라 수용체 치료에 반응할지 여부를 결정하는 방법을 제공한다:
(a) T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 TME 골수성 염증 수준, 예컨대 낮은 T/M 비(-0.5 내지 4 이내), 높은 종양 부담(3000 내지 40000 mm2 이내), 높은 TME 골수 세포 밀도(1000 내지 4000 세포/mm2 이내) 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준(27 내지 2000 이내)을 나타내는 유전자 발현 프로파일 또는 T 세포 프로파일을 사용하여 종양 미세환경을 특징분석하기 위해 환자로부터의 종양 생검(치료 전 및/또는 후)을 분석하는 단계;
(b) 유전자 발현 프로파일에 기초하여 면역 스코어를 결정하는 단계; 및
(c) 환자가 면역 스코어에 기초하여 키메라 수용체 치료에 반응할 것인지 결정하는 단계.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 환자가 하기를 포함하는 키메라 수용체 치료에 반응할지 여부를 결정하는 방법을 제공한다:
(a) 치료 전 및 치료 후에 환자로부터 종양 생검을 얻는 단계;
(b) 종양 미세환경을 특징분석하기 위해 종양 생검을 분석하는 단계; 및
(c) 환자가 종양 미세환경의 특징에 기초하여 키메라 수용체 치료에 반응할 것인지 결정하는 단계로서, 여기서 종양 미세환경의 특징은 T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 TME 골수성 염증 수준, 예컨대 낮은 T/M 비(-0.5 내지 4 이내), 높은 종양 부담(3000 내지 40000 mm2 이내), 높은 TME 골수 세포 밀도(1000 내지 4000 세포/mm2 이내) 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준(27 내지 2000 이내)을 포함하는 단계.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다:
(a) 종양 미세환경을 특징분석하기 위해 키메라 수용체 치료 전 환자로부터 종양 생검을 분석하는 단계;
(b) 환자가 종양 미세환경의 특징에 기초하여 키메라 수용체 치료에 반응할 것인지 결정하는 단계; 및
(c) 하나 이상의 키메라 수용체를 포함하는 유효 용량의 T 세포를 환자에게 투여하는 단계로서, 유효 용량은 종양 미세환경의 특징을 사용하여 결정되며, 종양 미세환경의 특징은 T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준, 예컨대 낮은 T/M 비(-0.5 내지 4 이내), 높은 종양 부담(3000 내지 40000 mm2 이내), 높은 TME 골수 세포 밀도(1000 내지 4000 세포/mm2 이내) 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준(27 내지 2000 이내)을 포함하는 단계.
일 실시형태에서, 종양 미세환경의 특징은 임의의 분석된 특징이고, 본 개시내용의 실시예 및 본 섹션에 기재되어 있다.
T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준을 기초로 조정되는 치료 방법과 치료전 속성 측정치의 병용
성분채집술 및 조작된 세포의 치료전 속성(T 세포 속성) 및 환자 샘플로부터 측정된 환자 면역 인자는, 반응 및 독성을 포함한 임상 결과의 가능성을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 임상 결과와 관련된 속성은 종양 관련 파라미터(예를 들어, 종양 부담, 저산소증/세포 사멸 마커로서의 혈청 LDH, 종양 부담 및 골수 세포 활성과 관련된 염증성 마커), T 세포 속성(예를 들어, T 세포 적합성, 기능성, 특히 T1 관련 IFN감마 생성, 및 주입된 CD8 T 세포의 총 수) 및 초기 시점에서 혈중 피크 CAR T 세포 수준으로 측정된 CAR T 세포 생착일 수 있다.
T 세포 속성 및 환자 치료전 속성으로부터 외삽된 정보는 악성종양(예를 들어, 암)을 치료하기에 적합한 치료적 유효량을 결정, 개선 또는 준비하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 일부 T 세포 속성 및 환자 치료전 속성은 조작된 키메라 항원 수용체(CAR) 면역요법으로의 치료 후, 이상 반응(예를 들어, 신경독성(NT), 사이토카인 방출 증후군(CRS))을 환자가 진행시킬지 결정하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 효과적인 이상 반응 관리 전략이 결정될 수 있다(예를 들어, 하나 이상의 속성의 측정된 수준에 기초하여 독성 예방을 위한 토실리주맙, 코르티코스테로이드 치료, 또는 항경련 의약의 투여).
일부 실시형태에서, 치료전 속성은 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 포함하는 조작된 T 세포의 속성이다. 일부 실시형태에서, 치료전 속성은 T 세포 형질도입 속도, 주요 T 세포 표현형, CAR T 세포 및 T 세포 서브세트의 수, CAR T 세포의 적합성, T 세포 작용성, T 세포 다작용성, 분화된 CAR+CD8+ T 세포의 수이다.
일부 실시형태에서, 치료전 속성은 환자로부터 얻은 샘플(예를 들어, 뇌척수액(CSF), 혈액, 혈청, 또는 조직 생검)로부터 측정된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 치료전 속성은 종양 부담, IL-6의 수준, 또는 LDH의 수준이다.
T 세포 표현형
본원에 기재된 것과 같이, 개시 물질 제조(성분채집술)에 있어서 T 세포 표현형은 T 세포 적합성(DT)과 관련될 수 있다. Tn 유사 및 Tcm 세포(CCR7+ 세포)의 총 %는 DT와 반비례한다. Tem(CCR7-CD45RA-) 세포의 %는 DT와 직접적으로 연관된다. 따라서, 일부 실시형태에서, 치료전 속성은 Tn-유사 및 Tcm 세포의 %이다. 일부 실시형태에서, Tn-유사 및 Tcm 세포의 %는 CCR7+ 세포의 백분율에 의해 결정된다. 일부 실시형태에서, CCR7+ 세포의 백분율은 유세포 분석법에 의해 측정된다.
일부 실시형태에서, 치료전 속성은 Tem(CCR7-CD45RA-) 세포의 %이다. 일부 실시형태에서, Tem 세포의 %는 CCR7- CD45RA- 세포의 백분율에 의해 결정된다. 일부 실시형태에서, CCR7- CD45RA- 세포의 백분율은 유세포 분석법에 의해 측정된다.
본원에 기재된 것과 같이, 제조 배가 시간 및 생성물 T-세포 적합성은 CAR T 세포 치료에 등록하기 전에 환자의 T 세포의 분화 상태와 직접적으로 연관된다. 따라서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료 전 환자의 T 세포(예를 들어, 성분채집술 생성물에서)의 분화 상태를 결정하는 것을 포함하는 제조된 생성물의 T-세포 적합성 예측 방법 및 분화 상태를 기반으로 한 제조 동안 T-세포 적합성의 예측 방법을 제공한다.
본원에 기재된 것과 같이, 총 CD3+ T 세포 또는 CD4 및 CD8 하위세트 내, 성분채집술 생성물에서 효과기 기억 T 세포의 비율이 클수록, 생성물 배가 시간이 더 높다. 본원에 기재된 것과 같이, 개시 물질에서 T-세포 표현형이 더 미숙할 수록 생성물 T-세포 적응도는 더 양호하다. 본원에 기재된 것과 같이, 주요 공자극 분자를 발현하는 TN 세포의 면역학적 적격 하위세트를 나타내는 CD27+CD28+ TN 세포는 생성물 배가 시간과 양의 관련성을 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 최종 생성물 표현형에 비해 성분채집술 생성물에서, CD3, CD4, 및 CD8 하위집단의 분화 마커에 의해 정의된 T-세포 하위세트의 비율을 포함하는 모든 주요 표현형 그룹에 걸쳐 직접적인 관련이 있다. 본원에 기재된 것과 같이, 가능하게는 성분채집술 물질에서 조절 T 세포를 나타내는 CD25hi CD4 발현을 갖는 T 세포의 비율은 생성물의 CD8 T-세포 아웃풋과 음의 상관관계를 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, CAR T 세포 치료 후 종양 부담은 최종 생성물의 분화 표현형과 양의 관련성을 갖는다.
본원에 기재된 것과 같이, 종양 부담으로 정규화된 주입된 CD8+ T 세포의 수는 지속적인 반응 및 종양 부담에 대한 CAR T 세포의 확장과 관련이 있다. 보다 구체적으로, 주입된 CD8 T 세포 수/치료전 종양 부담의 사분위수 분석은 최하위 사분위수에서 16% 대 최상위 사분위수에서 58%의 지속적인 반응률을 보였다.
본원에 기재된 것과 같이, 주입된 특화된 T 세포, 주로 CD8+ TN-세포 집단의 수는 CAR T-세포 치료에 의한 지속적인 임상적 효능에 대해 긍정적 영향을 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 보다 높은 수의 생성물 CD8+ T 세포가 높은 종양 부담을 갖는 환자에서 완전한 종양 해결을 달성하고, 지속적인 반응을 확립하는 데 필요하다. 본원에 기재된 것과 같이, 높은 종양 부담을 갖는 환자에서, 지속적 반응은 반응 후 재발하는 환자에 비해, 상당히 많은 수의 주입된 CD8 T 세포와 관련이 있다. 본원에 기재된 것과 같이, 종양 부담으로 정규화된 주입된 TN 세포의 수는 지속적 반응과 양의 관련성을 갖는다.본원에 기재된 것과 같이, CD4:CD8 비는 지속적 반응과 양의 관련성을 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 치료전 종양 부담으로 정규화된 생성물에서의 CD8 T 세포의 총 수는 지속적 반응과 양의 관련성을 갖는다. CD8 T 세포들 중에서, TN 세포의 수는 지속적 반응과 가장 유의하게 관련된다. 일 실시형태(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀)에서, CCR7+CD45RA+ 세포로서 확인되는 TN 세포는 실제로 표준 나이브 T 세포가 아닌 줄기 유사 기억 세포이다. 본 개시내용은 CAR T 세포 주입 생성물의 하나 이상의 개선, 유효 용량의 결정, 및/또는 하나 이상의 이러한 관련성에 기초한 지속적 반응의 예측 방법에 사용될 수 있는 일부 추가의 관련성을 제공한다. 표 1을 참조한다.
[표 1]
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따라서, 본 개시내용은 유효 용량의 CAR T-세포 치료를 환자에게 준비 및/또는 투여하는 것을 포함하는 환자에서 CAR T-세포 치료의 지속적 임상적 효능(예를 들어, 지속적 반응)의 개선 방법을 제공하고, 여기서 유효 용량은 T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준 및 주입 생성물의 특화된 T 세포 수 및/또는 CD4:CD8 비의 조합을 기초로 결정된다. 일부 실시형태에서, 특화된 T 세포는 CD8+ T 세포, 바람직하게는 TN 세포이다. 일 실시형태(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀)에서, TN으로 지칭된 세포는 CCR7+ CD45RA+ T-세포로서 확인되고, 추가로 줄기 유사 기억 세포로 특징분석되었다.
다른 실시형태에서, 본 개시내용은 (a) T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준 및 주입 생성물에서의 특화된 T 세포의 수를 특징분석하여 하나 이상의 값을 수득하는 단계 및 (b) 환자가 하나 이상의 값을 기초로 어떻게 반응할 것인지 결정하는 단계를 포함하는, 환자가 치료에 어떻게 반응할 것인지 결정하는 방법을 제공한다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준 등의 측정과 병용하여, 환자로부터 수득된 T 세포 집단(예를 들어, 성분채집술 물질) 중 T 세포 표현형을 측정하는 것을 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 특정 T 세포 유형의 측정된 백분율에 기초하여 환자가 키메라 항원 수용체 치료에 반응할지 여부를 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, T 세포 표현형은 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포(예를 들어, 성분채집술 물질)를 조작하기 전 측정된다. 일부 실시형태에서, T 세포 표현형은 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하기 위해 세포(예를 들어, CAR을 포함하는 조작된 T 세포)를 조작한 후 측정된다.
본원에 기재된 것과 같이, 생성물 주입 백 내 CCR7+CD45RA+ 세포의 수는 악시캅타젠 실로류셀 처리에 대한 ("신속한") 반응(대략 2주)과 양의 관련성을 갖는다. 따라서, T 세포 생성물 중 이러한 세포의 백분율 또는 총 수는 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하기 위해 조작될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 생성물 주입 백 내 CCR7+CD45RA+ T 세포의 빈도가 높을수록, 생성물 T-세포 적합성이 더 높다. 본원에 기재된 것과 같이, 생성물 주입 백 내 CCR7+CD45RA+ T 세포의 빈도가 높을수록, 생성물 배가 시간이 더 낮다. 따라서, T 세포 생성물 중 이러한 세포의 백분율 또는 총 수는 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하고, DT를 감소시키기 위해 조작될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 악시캅타젠 실로류셀 생성물 주입 백 내 대부분의 CCR7+CD45RA+ T 세포는 표준 나이브 T 세포가 아닌 줄기 유사 기억 세포였다. 본원에 기재된 것과 같이, 말초 혈액으로부터의 CCR7+ CD45RA+ T 세포는 시험관내에서 줄기 유사 기억 세포로 분화할 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, DT와 가장 연관이 있는 T 세포 하위집단은 CCR7+CD45RA+CD27+CD28+ T 세포였다. 따라서, T 세포 생성물 중 이러한 세포의 백분율 또는 총 수는 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하고, DT를 감소시키기 위해 조작될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, CCR7+ CD45RA+ T 세포는 T-세포 요법의 맥락에서 항종양 활성의 동인이다. 따라서, T 세포 생성물 중 이러한 세포의 백분율 또는 총 수는 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하기 위해 조작될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 치료전 종양 부담으로 정규화된 특화된 T 세포의 총 수는 CAR T 세포의 생성물 T 세포의 수에 비해 임상적 효능과 더 잘 연관된다. 따라서, T 세포 생성물 중 이러한 세포의 백분율 또는 총 수는 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하기 위해 조작될 수 있다.
T1 기능성
조작된 T 세포는 이들의 면역 기능 특징에 의해 특징분석될 수 있다. 본 개시내용의 방법은 생체외 사이토카인 생성 수준과 함께 T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 TME 골수성 염증 수준을 측정하는 것을 제공한다. 일부 실시형태에서, 사이토카인은 IFN감마, TNFa, IL-12, MIP1β, MIP1α, IL-2, IL-4, IL-5, 및 IL-13으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, T 세포 기능성은 Th1 사이토카인의 수준에 의해 측정된다.
일부 실시형태에서, Th1 사이토카인은 IFN감마, TNFa, 및 IL-12로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, T 세포 기능성은 IFN감마 생성 수준에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 과량의 T 세포 IFN감마(치료전 속성) 및 치료후 T1 활성은 환자가 이상 반응(예를 들어, 신경독성)을 발생시킬 것인지 여부를 결정하는 데 사용될 수 있는 속성이다. 일부 실시형태에서, 조작된 CAR T 세포에 의해 생성된 IFN감마 수준은 조작된 CAR T 세포의 투여 전에 공동 배양에 의해 측정된다.
일부 실시형태에서, 낮은 공동 배양 IFN감마를 갖는 조작된 CAR T 세포는 긍정적인 임상적 효능 결과 및 감소된 등급 3+ 신경독성을 초래한다. 일 양태에서, 본 개시내용은 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 조작된 T 세포 집단에 의해 생성된 IFN감마의 수준을 측정하는 것을 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 환자가 기준 수준과 비교한 IFN감마의 측정된 수준에 기초하여 키메라 항원 수용체 치료에 반응할 것인지 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 기준 수준은 약 1 ng/ml, 약 2 ng/ml, 약 3 ng/ml, 약 4 ng/ml, 약 5 ng/ml, 약 6 ng/ml, 약 7 ng/ml, 또는 약 8 ng/ml 미만이다.
일부 실시형태에서, 과량의 IFN감마 생성을 갖는 조작된 CAR T 세포는 등급 3+ 신경독성의 급속한 상승률 및 객관적 반응률의 감소를 보인다. 일 양태에서, 본 개시내용은 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 조작된 T 세포 집단에 의해 생성된 IFN감마의 수준을 측정하는 것을 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 환자가 기준 수준과 비교한 IFN감마의 측정된 수준에 기초하여 키메라 항원 수용체 치료에 대한 이상 반응을 진행시킬 것인지 여부를 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 기준 수준은 약 5 ng/ml, 약 6 ng/ml, 약 7 ng/ml, 또는 약 8 ng/ml, 약 9 ng/ml, 약 10 ng/ml, 또는 약 11 ng/ml 초과이다.
본원에 기재된 것과 같이, CAR T 세포 주입 후 혈청에서 IFN감마의 조기 상승과 등급 3+ 독성 비율의 직접적인 관련성이 존재한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 주입 후 혈청에서 IFN감마 상승(1일차/0일차 배수 변경)을 측정한다. 일부 실시형태에서, 약 25배 초과의 1일차/0일차 혈청 IFN감마 배수 변경은 등급 3+ 신경독성을 초래한다. 일부 실시형태에서, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 또는 약 50배 초과의 1일차/0일차 혈청 IFN감마 배수 변경은 등급 3+ 신경독성을 초래한다.
CAR T 세포 주입 후 혈청에서 IFN감마 관련 CXCL10(IP-10) 상승의 조기 상승과 등급 3+ 독성 비율의 직접적인 관련성이 존재한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 주입 후 혈청에서 IFN감마 관련 CXCL10(IP-10) 상승(1일차/0일차 배수 변경)을 측정한다. 일부 실시형태에서, 약 2.5배 초과의 1일차/0일차 혈청 IFN감마 관련 CXCL10(IP-10) 배수 변경은 등급 3+ 신경독성을 초래한다. 일부 실시형태에서, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 또는 약 5.0배 초과의 1일차/0일차 혈청 IFN감마 관련 CXCL10(IP-10) 배수 변경은 등급 3+ 신경독성을 초래한다.
본원에 기재된 것과 같이, 치료전 생성물 T-세포 IFNγ 생산은 주입 백 내 보다 분화된 T 세포와 관련되고, 심각한 신경학적 독성과 양의 관련성을 갖고, 보다 적은 정도로 감소된 효능을 갖는다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 치료전 생성물 T-세포 IFNγ 생산 수준을 측정하고, 상기 수준에 기초하여 신경학적 독성을 예측하는 것을 포함하는 신경학적 독성을 예측하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 방법은 CAR T 세포 치료의 효과 및/또는 독성을 개선하기 위해 치료전 생성물 T-세포 IFNγ 생산 수준을 조절하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 유효 용량의 CAR T 세포 치료를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 생성물 T-세포 IFNγ 생산 수준에 기초하여 결정된다.
전신성 염증 병태는 상승된 혈청 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), IL6, IL8, CCL2뿐만 아니라 감소된 혈청 알부민과 관련이 있으며, 일반화된 골수 활성화 상태를 나타내었다. 골수 유래 억제자 세포는 종양 내에서 IL8 및 CCL2에 의해 유도되고, 골수로부터 IL6에 의해 동원되는 것으로 알려져 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 컨디셔닝 전 측정된 혈청(베이스라인에서)에서 전염증성 및 골수 활성화 마커(예를 들어, IL6, 페리틴, CCL2)와 함께 낮은 T/M 비, 높은 종양 부담, 높은 TME 골수 세포 밀도 및/또는 높은 TME 골수성 염증 수준은 손상된 생체내 CAR T-세포 확장 및 감소된 비율의 지속적 반응과 상관관계를 갖는다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료 투여 전에 환자 혈청 및/또는 TME에서 전염증성 및 골수 활성화 마커의 베이스라인 수준을 감소시키는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료 후 지속적 반응률을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 전염증성 및 골수 활성화 마커의 베이스라인 수준과 조합하여, T/M 비, 종양 부담, TME 골수 세포 밀도 및/또는 TME 골수성 염증 수준을 측정하는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료에 대해 환자가 지속적 반응을 가질 것인지 여부를 결정하고, 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 유효 용량의 CAR T 세포 치료를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 전염증성 및 골수 활성화 마커의 베이스라인 수준을 기초로 결정된다. 본원에 기재된 것과 같이, CAR T-세포 주입 후 지속되는 전신성 염증은 CAR T 세포가 종양을 완전히 제거하지 못하는 것과 관련이 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 전염증성 마커의 컨디셔닝 전(베이스라인에서) 측정된 치료전 수준은 서로 양의 관련성을 갖고, 헤모글로빈 및 혈소판 수준과 음의 관련성을 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 치료전 종양 부담은 CCL2가 아닌 베이스라인 혈청 LDH, 페리틴, 및 IL6과 상관관계를 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 치료전 페리틴 및 LDH는 치료전 종양 부담으로 정규화된 CAR T-세포 확장(피크 CAR T 세포 확장/종양 부담)과 음의 관련성을 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 치료전 종양 부담 및 전신성 염증은 지속적 반응률과 음의 관련성을 갖고; 이러한 효과는 치료전 종양 부담에 비해 감소된 CAR-T 세포 확장에 의해 매개될 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료 투여 전에 환자에서 전신성 염증을 감소시키는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료 후 지속적 반응률을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 치료전 종양 부담 및 염증을 측정하여 이들의 수준을 수득하고, 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료에 대해 환자가 지속적 반응을 가질 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 유효 용량의 CAR T 세포 치료를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 상기 수준을 기초로 계산된다.
본원에 기재된 것과 같이, 상승된 LDH는 감소된 지속적 반응과 관련이 있다. 따라서, 본 개시내용은 또한 LDH의 베이스라인 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료에 대해 지속적 반응을 가질 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 유효 용량의 CAR T 세포 치료를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 LDH의 베이스라인 수준에 기초하여 결정된다.
본원에 기재된 것과 같이, 베이스라인 IL6 상승은 감소된 반응률 및 지속적 반응률 둘 모두와 관련이 있다. 따라서, 본 개시내용은 CAR T 세포 치료 투여 전에 IL6의 베이스라인 수준을 감소시키는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료 후 반응 및 지속적 반응을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 IL6의 베이스라인 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료에 대해 지속적 반응을 가질 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 유효 용량의 CAR T 세포 치료를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 IL6의 베이스라인 수준에 기초하여 결정된다. 일 실시형태에서, 베이스라인 IL6 활성화 또는 수준은 토실리주맙(또는 다른 항-IL6/IL6R 약제/길항제)과 같은 약제에 의해 감소된다.
본원에 기재된 것과 같이, 주입 후 처음 28일 이내에 높은 피크 및 누적 페리틴 수준은 보다 낮은 생체내 CAR T-세포 확장 및 보다 낮은 지속적 반응률과 관련이 있다. 따라서, 본 개시내용은 처음 28일 동안 CAR T 세포 치료 투여 후 높은 피크 및 누적 페리틴 수준을 감소시키는 것을 포함하는 CAR T 세포 치료 후 반응 및 지속적 반응을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 주입 후 처음 28일 이내 높은 피크 및 누적 페리틴 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료에 대해 지속적 반응을 가질 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다.
본원에 기재된 것과 같이, 처음 28일에 걸친 페리틴 수준과 종양 부담으로 정규화된 피크 CAR T-세포 수준 사이에는 관련성이 존재한다. 본원에 기재된 것과 같이, CAR T-세포 주입 후 대부분의 시점에서 보다 높은 수준의 혈청 페리틴이, 지속적 반응을 갖는 환자에 비해 반응이 없거나 재발하는 환자에서 확인된다. 따라서, 본 개시내용은 또한 CAR T-세포 주입 후 시점에서 혈청 페리틴 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로(예를 들어, 기준 값에 대해) 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료에 대해 반응을 하지 않거나 재발할 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다.
본원에 기재된 것과 같이, 상승된 치료전 또는 치료후 전염증성, 골수 관련 사이토카인(IL6, 페리틴, CCL2)뿐만 아니라 LDH는 등급 3 이상의 3 NE 또는 CRS와 양의 관련성을 갖는다. 따라서, 본 개시내용은 하나 이상의 전염증성, 골수 관련 사이토카인(예를 들어, IL6, 페리틴, CCL2) 및/또는 LDH의 치료전 및/또는 치료후 수준을 감소시키는 것을 포함하는 등급 3 이상의 3 NE 및/또는 CRS를 감소시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 전염증성, 골수 관련 사이토카인(IL6, 페리틴, CCL2) 및/또는 LDH의 베이스라인 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료 투여 후 3 이상의 NE 또는 CRS를 가질 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 유효 용량의 CAR T 세포 치료를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 전염증성, 골수 관련 사이토카인(IL6, 페리틴, CCL2)뿐만 아니라 LDH의 베이스라인 수준을 기초로 결정된다.
본원에 기재된 것과 같이, 초기 치료 후 측정된 IFNγ, CXCL10, 및 IL15의 혈청 수준은 신경독성과 양의 관련성을 갖지만 지속적 반응률과는 연관되지 않는다. 따라서, 본 개시내용은 IFNγ, CXCL10, 및/또는 IL15의 초기 치료 후 혈청 수준을 감소시키는 것을 포함하는 신경독성의 감소 방법을 제공한다. 본원에 기재된 것과 같이, 0일차 IL15 혈청 수준은 생성물 공동배양 IFNγ보다는 1일차 IFNγ 혈청 수준과 유의하게 관련된다.
본 개시내용은 또한 초기 치료 후 측정된 IFNγ, CXCL10, 및 IL15의 혈청 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료 투여 후 신경독성을 보일 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 신경독성을 감소시키는 유효 용량의 약제를 투여하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 유효 용량은 IFNγ, CXCL10, 및 IL15의 베이스라인 수준에 기초하여 결정된다. 일부 실시형태에서, 수준은 치료 후 0일차 및/또는 1일차에 측정된다. 일부 실시형태에서, 약제는 IFNγ, CXCL10, 및 IL15 및/또는 다른 사이토카인의 수준 또는 활성을 감소시키는 약제로부터 선택된다.
종양 관련 파라미터(예를 들어, 종양 부담, 저산소/세포 사멸 마커로서의 혈청 LDH, 종양 부담 및 골수 세포 활성과 관련된 염증성 마커)는 임상 결과와 관련될 수 있다. 일 양태에서, 본 개시내용은 T/M 비, TME 골수 세포 밀도 및/또는 TME 골수성 염증 수준의 측정과 병용하여, CAR T 세포 치료 투여 전에 환자에서 종양 부담을 측정하는 것을 포함하는 환자에서 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 환자가 기준 수준과 비교한 종양 부담의 수준에 기초하여 CAR T 세포 치료에 반응할 것인지 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 기준 수준은 약 1,000 mm2, 약 2,000 mm2, 약 3,000 mm2, 약 4,000 mm2 미만이다.
본원에 기재된 것과 같이, 종양 부담이 더 높을수록, OR을 달성한 대상체에서 치료 후 1년 이내 재발 확률이 높아지고, 등급 3+ 신경독성의 확률이 높아진다. 일부 실시형태에서, 종양 부담은, 치료전 종양 부담이 약 4,000 mm2, 약 5,000 mm2, 약 6,000 mm2, 약 7,000 mm2, 또는 약 8,000 mm2 초과인 경우, 반응하는 환자에서 재발 확률을 평가하기 위해 사용될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 낮은 종양 부담 전-CAR T 세포 치료은 지속적 반응의 양성 예측인자이다. 본원에 기재된 것과 같이, 최고 종양 부담 사분위수에서, 지속적 반응을 달성한 환자는 재발하거나 반응이 없는 환자에 비해 3배 더 높은 피크 CAR T-세포 확장을 가졌다. 본원에 기재된 것과 같이, 종양 부담이 보다 낮은 환자에 비해, 종양 부담이 더 높은 환자에서 유사한 피크 CAR T-세포 수준에서 지속적 반응률은 더 낮다. 본원에 기재된 것과 같이, 지속적 반응자는 치료 후 1년 이내에 후속적으로 재발한 무반응자 또는 반응자에 비해, 더 높은 피크 CAR T-세포/종양 부담 비를 가졌다. 본원에 기재된 것과 같이, 완전 반응자는 부분 반응자 또는 무반응자에 비해 더 높은 피크 CAR T-세포/종양 부담 비를 가졌다. 따라서, 본 개시내용은 또한 피크 CAR T-세포/종양 부담 비를 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료 투여 후 1년 이내에 무반응자이거나, 지속적 반응을 갖거나, 재발할 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 것과 같이, 객관적 및 지속적 반응률은 증가하는 피크 CAR T-세포 수준과 상관관계를 갖는다. 본원에 기재된 것과 같이, 최고 사분위수(50% 초과)에 비해 피크 CAR T-세포/종양 부담 비의 최저 사분위수에 속한 환자에서 지속적 반응률은 보다 낮다(12%). 본원에 기재된 것과 같이, CD28 공자극 도메인을 함유하는 항-CD19 CAR T-세포 치료로 처리된 난치성 거대세포 림프종에서의 지속적 반응은 종양 부담에 상응하는 초기 CAR T 세포 확장으로부터 이점을 얻는다.
본원에 기재된 것과 같이, 종양 부담은 중증 신경독성과 양의 관련성이 있고, 비율이 1사분위에서 3사분위로 증가하는 동안, 비율은 최고 사분위에서 감소하며, 일반적으로 이는 전체 집단에서 CAR T-세포 확장과 종양 부담 사이의 관련성을 반영한다.
본원에 기재된 것과 같이, 치료전 종양 부담 또는 체중으로 정규화되는 피크 CAR T-세포 수준은 효능과 강력히 연관되고, 후자는 등급 3 이상의 3 NE와 연관된다. 따라서, 본 개시내용은 또한 치료전 종양 부담 또는 체중으로 정규화된 피크 CAR T-세포 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료 투여 후 지속적 반응을 보일 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 또한, 본 개시내용은 또한 치료전 종양 체중으로 정규화된 피크 CAR T-세포 수준을 측정하고 상기 수준을 기초로 결정을 내리는 것을 포함하는 환자가 CAR T 세포 치료 투여 후 등급 3 이상의 NE를 보일 것인지 여부를 결정하는 방법을 제공한다.
본원에 기재된 것과 같이, 치료전 종양 부담에 상응하고, 내인성 생성물 T-세포 적합성, 특화된 T-세포 서브세트의 용량, 및 숙주 전신성 염증에 의해 영향을 받는 생체내 CAR T-세포 확장은 지속적 반응에 대한 결정 요인이었다. 따라서, 이러한 파라미터는 지속적 반응에 대한 바이오마커로서 사용될 수 있고, 또한 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하기 위해 실험적으로 조작될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 최적이 아닌 생성물 T 세포 적합성은 1차 치료 내성에 관련된 주요 요인이었고, 종양 부담에 비례하는 CCR7+CD45RA+ 또는 CD8 T 세포의 제한된 수는 지속적 반응의 달성 실패와 관련이 있다. 따라서, 이러한 파라미터는 지속적 반응에 대한 바이오마커로서 사용될 수 있고, 또한 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하기 위해 실험적으로 조작될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같이, 높은 종양 부담, 현저한 염증 상태(CAR T-세포 주입 전 및 후 골수 활성화 마커에 의해 반영됨), 및 과량의 1형 사이토카인은 지속적 효능과 음의 관련성을 갖고, 중증도 독성과 양의 관련성을 갖는다. 따라서, 이러한 파라미터는 지속적 반응에 대한 바이오마커로서 사용될 수 있고, 또한 T 세포 치료에 대한 반응을 개선하기 위해 실험적으로 조작될 수 있다.
임상 결과
일부 실시형태에서, 임상 결과는 완전 반응이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 지속적 반응이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 완전 반응이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 무반응이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 부분 반응이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 객관적 반응이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 생존이다. 일부 실시형태에서, 임상 결과는 재발이다.
일부 실시형태에서, 객관적 반응(OR)은 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준에 따라 결정되고(문헌[Cheson, 2007]), 악성 림프종에 대한 IWG 반응 기준에 의해 결정된다(문헌[Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27(September 2014) 3059-3067]). 반응 지속기간을 평가한다. Lugano 반응 분류 기준에 따라 시험자 평가에 의해 무진행 생존(PFS)이 평가된다.
일부 실시형태에서, 반응, 혈중 CAR T 세포의 수준, 또는 면역 관련 인자는 조작된 CAR T 세포 투여 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일 후의 추적관찰에 의해 결정된다. 일부 실시형태에서, 반응, 혈중 CAR T 세포의 수준, 또는 면역 관련 인자는 조작된 CAR T 세포의 투여 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 후의 추적관찰에 의해 결정된다. 일부 실시형태에서, 혈중 CAR T 세포의 수준, 및/또는 면역 관련 인자는 조작된 CAR T 세포의 투여 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 13개월, 약 14개월, 약 15개월, 약 16개월, 약 17개월, 약 18개월, 약 19개월, 약 20개월, 약 21개월, 약 22개월, 약 23개월, 또는 약 24개월 후의 추적관찰에 의해 결정된다. 일부 실시형태에서, 반응, 혈중 CAR T 세포의 수준, 및/또는 면역 관련 인자는 조작된 CAR T 세포 투여 약 1년, 약 1.5년, 약 2년, 약 2.5년, 약 3년, 약 4년, 또는 약 5년 후의 추적관찰에 의해 결정된다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 방법은 대상체에게 임상적 이점을 제공할 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자의 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%는 임상적 이점을 달성한다. 일부 실시형태에서, 환자의 대략 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 0%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 및 그 사이의 임의의 나열되지 않은 %는 임상적 이점을 달성한다. 일부 실시형태에서, 반응률은 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 9.5%, 10.5%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 25 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 또는 1% 내지 100%의 일부 다른 나열되지 않은 백분율 및 범위이다. 일부 실시형태에서, 반응률은 0% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90%, 또는 90% 내지 100%이다. 일부 실시형태에서, 반응률은 0% 내지 1%, 1% 내지 1.5%, 1.5% 내지 2%, 2% 내지 3%, 3% 내지 4%, 4% 내지 5%, 5% 내지 6%, 6% 내지 7%, 7% 내지 8%, 8% 내지 9%, 9% 내지 10%, 10% 내지 15%, 15% 내지 20%, 20% 내지 25%, 25% 내지 30%, 35% 내지 40%, 등에서 95% 내지 100%까지이다.
일 실시형태에서, 면역요법은 CAR-T 세포 면역요법이다. 키메라 항원 수용체(CAR)는 유전자 조작 수용체이다. 이러한 조작된 수용체는 당업계에 알려진 기술에 따라, T 세포 및 다른 림프구를 포함하는 면역세포에 삽입되어 이에 의해 발현될 수 있다. CAR의 경우, 단일 수용체는 특정 항원을 인식하고, 상기 항원에 결합될 때, 면역 세포를 활성화시켜 상기 항원을 보유하는 세포를 공격 및 파괴하도록 프로그래밍될 수 있다. 이러한 항원이 종양 세포 상에 존재하는 경우, CAR을 발현하는 면역 세포는 종양 세포를 표적화하여 이를 사멸시킬 수 있다. 키메라 항원 수용체는 그들의 효능을 증가시키기 위해 공자극(신호전달) 도메인을 혼입할 수 있다. 미국 특허 제7,741,465호, 및 제6,319,494호뿐만 아니라 문헌[Krause et al. and Finney et al. (supra)], [Song et al., Blood 119:696-706 (2012)]; [Kalos et al., Sci. Transl. Med. 3:95 (2011)]; [Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)], 및 [Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)]을 참조한다.
일부 실시형태에서, 절단된 힌지 도메인("THD")을 포함하는 공자극 도메인은 면역글로불린 계열의 구성원, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, IgM, 또는 이의 단편의 일부 또는 전부를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, THD는 인간 완전 힌지 도메인("CHD")으로부터 유래된다. 다른 실시형태에서, THD는 공자극 단백질의 설치류, 쥐, 또는 영장류(예를 들어, 비인간 영장류) CHD로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, THD는 공자극 단백질의 키메라 CHD로부터 유래된다.
본 개시내용의 CAR에 대한 공자극 도메인은 막관통 도메인 및/또는 세포내 신호전달 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 막관통 도메인은 CAR의 세포외 도메인에 융합될 수 있다. 공자극 도메인은 유사하게 CAR의 세포내 도메인에 융합될 수 있다. 일부 실시형태에서, CAR의 도메인 중 하나와 자연적으로 관련이 있는 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 아미노산 치환에 의해 선택 또는 변형되어 상기 도메인이 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 결합하는 것을 피하여 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화한다. 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 막결합 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 본 개시내용에서 특정 용도의 막관통 영역은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD3 제타, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1; CD11a/CD18), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4(CD244; 2B4), SLAMF6(NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 이의 단편, 절단체, 또는 조합으로부터 유래될 수 있다(즉, 포함할 수 있다).
선택적으로, 짧은 링커는 CAR의 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인 중 임의의 것 또는 일부 사이에 연결부를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 글리신-글리신-글리신-글리신-세린(서열 번호 2)(G4S)n 또는 GSTSGSGKPGSGEGSTKG(서열 번호 1)의 반복으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 3 내지 20개의 아미노산 및 GSTSGSGKPGSGEGSTKG(서열 번호 1)와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 링커가 또한 펩티드 태그로서 사용될 수 있다. 링커 펩티드 서열은 하나 이상의 관심 단백질을 연결하기에 적절한 임의의 길이일 수 있으며, 바람직하게는 이들이 연결하는 펩티드 중 하나 또는 둘 모두의 적절한 폴딩 및/또는 기능 및/또는 활성을 허용하도록 충분히 유연하도록 설계된다. 따라서, 링커 펩티드는 10개 이하, 11개 이하, 12개 이하, 13개 이하, 14개 이하, 15개 이하, 16개 이하, 17개 이하, 18개 이하, 19개 이하, 또는 20개 이하의 아미노산 길이를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커 펩티드는 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 적어도 19개, 또는 적어도 20개의 아미노산 길이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 적어도 7개 및 20개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 19개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 18개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 17개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 16개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 15개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 14개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 13개 이하의 아미노산, 적어도 7개 및 12개 이하의 아미노산 또는 적어도 7개 및 11개 이하의 아미노산을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 링커는 15 내지 17개의 아미노산을 포함하고, 특정 실시형태에서, 16개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 10 내지 20개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 14 내지 19개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 15 내지 17개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 15 및 16개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 16개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시형태에서, 스페이서 도메인이 사용된다. 일부 실시형태에서, 스페이서 도메인은 CD4, CD8a, CD8b, CD28, CD28T, 4-1BB, 또는 본원에 기재된 다른 분자로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 스페이서 도메인은 소분자의 첨가 시 발현을 제어하기 위해 화학적으로 유도된 이량체화체(dimerizer)를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 사용되지 않는다.
본 개시내용의 조작된 T 세포의 세포내(신호전달) 도메인은 활성화 도메인에 신호전달을 제공할 수 있으며, 이는 이후 면역 세포의 정상 효과기 기능 중 적어도 하나를 활성화시킨다. T 세포의 효과기 기능은 예를 들어 사이토카인의 분비를 포함하는 세포용해성 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다.
특정한 실시형태에서, 적합한 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공자극제(ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Lyl08), 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1; CD11a/CD18), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4(CD244; 2B4), SLAMF6(NTB-A, SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 이의 단편, 절단체, 또는 조합을 포함(즉, 포함)하지만 이에 제한되지는 않는다.
항원 결합 분자
적합한 CAR 및 TCR은 표적화된 항원과 상호작용하는 항원 결합 분자를 혼입함으로써 항원(예컨대, 세포 표면 항원)에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자는 이의 항체 단편, 예를 들어 하나 이상의 단쇄 항체 단편("scFv")이다. scFv는 함께 연결된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 단쇄 항체 단편이다. 미국 특허 제7,741,465호 및 제6,319,494호뿐만 아니라 문헌[Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136]을 참조한다. scFv는 표적 항원과 특이적으로 상호작용하는 모 항체의 능력을 보유한다. scFv는 다른 CAR 성분과 함께 단쇄의 일부로서 발현되도록 조작될 수 있기 때문에 키메라 항원 수용체에서 유용하다. Id. 또한, 문헌[Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626)]; [Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797]을 참조한다. 항원 결합 분자가 일반적으로 관심 항원을 인식할 수 있고 이에 결합할 수 있도록 CAR 또는 TCR의 세포외 부분 내에 함유된다는 것이 인식될 것이다. 이중특이적 및 다중특이적 CAR 및 TCR은 하나 초과의 관심 표적에 대한 특이성과 함께 본 개시내용의 범위 내에서 고려된다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오티드는 (절단된) 힌지 도메인 및 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 포함하는 CAR 또는 TCR을 인코딩한다. 일부 실시형태에서, 표적 항원은 종양 항원이다. 일부 실시형태에서, 항원은 종양-관련 표면 항원, 예컨대 5T4, 알파페토단백질(AFP), B7-1(CD80), B7-2(CD86), BCMA, B-인간 융모선 생식샘 자극호르몬, CA-125, 암배아 항원(CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CS-1, CSPG4, CTLA-4, DLL3, 디시알로갱글리오사이드GD2, 관상피 점액, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III(EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), 상피 세포 부착 분자(EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2(HER2/neu), 섬유아세포 관련 단백질(fap), FLT3, 엽산 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-관련 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 관련 항원(HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라아제 역전사효소, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 독감 바이러스-특이적 항원; CD38, 인슐린 성장 인자(IGFl)-l, 장내 카르복실 에스테라아제, 카파 사슬, LAGA-la, 람다 사슬, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원, 예컨대 CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-관련 항원, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이화 p53, 돌연변이화 ras, 호중구 엘라스타아제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타아제, 전립선 특이적 항원(PSA), 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), 전립선-특이적 항원 단백질, STEAP1, STEAP2, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2 (AS), 표면 부착 분자, 서바이빈 및 텔로머라아제, TAG-72, 피브로넥틴의 추가 도메인 A(EDA) 및 추가 도메인 B(EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인(TnC Al), 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2(VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원, 예컨대 HIV-특이적 항원(예컨대, HIV gpl20)뿐만 아니라 이들 표면 항원의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된다.
일 실시형태에서, 면역요법은 T 세포 치료이다. 일 실시형태에서, 세포는 대상체로부터이다. 일 실시형태에서, 세포는 유도 만능 줄기 세포(iPSC)이다. T 세포는 예를 들어 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위 조직, 복수, 흉막 삼출물, 비장 조직, 종양으로부터 수득될 수 있거나, 시험관내에서 분화될 수 있다. 또한, T 세포는 당업계에서 입수가능한 하나 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 FICOLL™ 분리 및/또는 성분채집술과 같은 당업자에게 알려진 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체에서 채취한 혈액 단위에서 얻을 수 있다. 일부 실시형태에서, 성분채집술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고 후속 처리를 위해 적절한 완충제 또는 배지에 넣는다. 일부 실시형태에서, 세포는 PBS로 세척된다. 인식될 것과 같이, 원심분리기, 예를 들어 CobeTM 2991 세포 처리기, Baxter CytoMate™ 등을 통한 반자동화 유동을 사용하는 것과 같은 세척 단계가 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 세척된 세포는 하나 이상의 생체적합성 완충제, 또는 완충제가 존재하거나 부재하는 다른 식염수 용액에 재현탁된다. 일부 실시형태에서, 성분채집술 샘플의 원치 않는 성분이 제거된다. T 세포 치료를 위해 T 세포를 단리하는 추가의 방법이 미국 특허출원공개 제2013/0287748호에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시형태에서, T 세포는 예를 들어 PERCOLL™ 구배를 통한 원심분리를 사용하여, 적혈구 세포를 용해시키고 단핵구를 고갈시키는 방식으로 PBMC로부터 단리된다. 일부 실시형태에서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD28+ T 세포, CD45RA+ T 세포 및 CD45RO+ T 세포와 같은 T 세포의 특정 하위집단이 당업계에 알려진 양성 또는 음성 선택 기법을 통해 추가로 단리된다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 T 세포 집단의 농축은 음성으로 선택된 세포에 고유한 표면 마커에 대한 항체의 조합을 이용하여 달성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 음성으로 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커에 대한 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음자성 면역부착(negative magnetic immunoadherence) 또는 유세포 분석법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이 사용될 수 있다. 예를 들어, 음성 선택으로 CD4+ 세포를 농축시키기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 일반적으로 CD8, CD11b, CD14, CD16, CD20 및 HLA-DR에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 사용하기 위한 관심 세포 집단을 단리하기 위해 유세포 분석법과 세포 분류가 사용된다.
일부 실시형태에서, PBMC는 본원에 기재된 방법을 사용하여 면역 세포(예컨대, CAR)를 이용한 유전자 변형에 직접 사용된다. 일부 실시형태에서, PBMC를 단리한 후, T 림프구를 추가로 단리하고, 유전자 변형 및/또는 확장 전 또는 후에 세포독성 및 헬퍼 T 림프구 둘 모두를 나이브 세포, 기억 세포, 및 효과기 T 세포 하위집단으로 분류한다.
일부 실시형태에서, CD8+ 세포의 이들 유형 각각과 관련되는 세포 표면 항원을 확인함으로써 CD8+ 세포를 나이브 세포, 중심 기억 세포, 및 효과기 세포로 추가로 분류한다. 일부 실시형태에서, 중추 기억 T 세포의 표현형 마커의 발현은 CCR7, CD3, CD28, CD45RO, CD62L, 및 CD127의 발현을 포함하고, 그랜자임 B에 대해 음성이다. 일부 실시형태에서, 중심 기억 T 세포는 CD8+, CD45RO+, 및 CD62L+ T 세포이다. 일부 실시형태에서, 효과기 T 세포는 CCR7, CD28, CD62L, 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다. 일부 실시형태에서, CD4+ T 세포는 추가로 하위집단으로 분류된다. 예를 들어, CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인함으로써 나이브 세포, 중심 기억 세포 및 효과기 세포로 분류될 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역 세포, 예를 들어 T 세포는 알려진 방법을 사용하여 단리 후에 유전자 변형되거나, 면역 세포는 유전자 변형되기 전에 시험관내에서 활성화 및 확장된다(또는 선조세포의 경우에 분화됨). 다른 실시형태에서, 면역 세포, 예를 들어 T 세포는 본원에 기재된 키메라 항원 수용체로 유전자 변형되고(예를 들어, CAR을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 바이러스 벡터로 형질도입됨), 이어서 시험관내에서 활성화 및/또는 확장된다. T 세포를 활성화 및 확장시키는 방법은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어 미국 특허 제6,905,874호; 제6,867,041호; 및 제6,797,514호; 및 국제공개 WO 2012/079000호에 기재되어 있으며, 이들의 내용 전체는 본원에 참조로 포함된다. 일반적으로, 상기 방법은 IL-2와 같은 적절한 사이토카인을 갖는 배양 배지 중에 일반적으로 비드 또는 다른 표면에 부착된, 자극제 및 공자극제, 예컨대 항-CD3 및 항-CD28 항체와 PBMC 또는 단리된 T 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 동일한 비드에 부착된 항-CD3 및 항-CD28 항체는 "대용" 항원 제시 세포(APC)로서의 역할을 한다. 하나의 예는 인간 T 세포의 생리학적 활성화를 위한 CD3/CD28 활성화제/자극제 시스템인, Dynabeads® 시스템이다. 다른 실시형태에서, 미국 특허 제6,040,177호 및 제5,827,642호 및 국제공개 WO 2012/129514호에 기재된 것들과 같은 방법을 사용하여 피더 세포 및 적절한 항체 및 사이토카인으로 T 세포를 활성화하고 자극하여 증식시키며, 이들의 내용 전체는 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시형태에서, T 세포는 공여자 대상체로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양으로 고통 받는 인간 환자이다. 일부 실시형태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양으로 고통 받고 있지 않은 인간 환자이다.
일부 실시형태에서, 조작된 T 세포를 포함하는 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 가용화제, 에멀젼화제, 보존제, 및/또는 아쥬반트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 부형제를 포함한다. "약학적으로 허용가능한 담체"는 대상체에게 비독성인 활성 성분 이외의 약학적 제형 중 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시형태에서, 조성물은 비경구 전달, 흡입, 또는 경구 전달과 같은 소화관을 통한 전달을 위해 선택된다. 상기 약학적으로 허용가능한 조성물의 제조는 당업자의 능력 내에 있다. 일부 실시형태에서, 완충제는 생리학적 pH에서, 또는 약간 더 낮은 pH에서, 일반적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 이내에서 조성물을 유지하기 위해 사용된다. 일부 실시형태에서, 비경구 투여가 고려되는 경우, 조성물은 약학적으로 허용가능한 비히클 중에, 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에서 본원에 기재된 조성물을 포함하는 발열성 물질이 없는 비경구로 허용가능한 수용액 형태이다. 일부 실시형태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 멸균 증류수이며, 그 안에 본원에 기재된 조성물이 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에서 적절하게 보존된 멸균 등장성 용액으로서 제형화된다. 일부 실시형태에서, 제제는 생성물의 제어 방출 또는 지속 방출을 제공하는, 중합체성 화합물(예컨대, 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드, 또는 리포좀을 갖는 원하는 분자의 제형을 포함하며, 이는 이후 데포 주사를 통해 전달된다. 일부 실시형태에서는, 이식가능한 약물 전달 디바이스를 사용하여 원하는 분자를 도입한다.
일부 실시형태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법은 T 세포 치료를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 T 세포 치료은 조작된 자가유래 세포 치료(eACT™)이다. 이러한 실시형태에 따라, 본 방법은 환자로부터 혈구를 수집하는 단계를 포함할 수 있다. 이후, 단리된 혈액 세포(예를 들어, T 세포)는 본원에 개시된 CAR을 발현하도록 조작될 수 있다. 특정 실시형태에서, CAR T 세포는 환자에게 투여된다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포는 환자에서 종양 또는 암을 치료한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포는 종양 또는 암의 크기를 감소시킨다.
일부 실시형태에서, T 세포 치료에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자에서 수득한 것이다(예를 들어, 자가유래 T 세포 치료의 경우). 다른 실시형태에서, T 세포 치료에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자가 아닌 대상체에서 수득한 것이다. 특정한 실시형태에서, T 세포는 종양 침윤 림프구(TIL), 조작된 자가유래 T 세포(eACT™), 동종이계 T 세포, 이종 T 세포 또는 이의 임의의 조합이다.
일부 실시형태에서, 조작된 T 세포는 치료적 유효량으로 투여된다. 예를 들어, 조작된 T 세포의 치료적 유효량은 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개의 세포 또는 적어도 약 1010개의 세포일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포 또는 약 108개의 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 약 2 × 106개의 세포/kg, 약 3 × 106개의 세포/kg, 약 4 × 106개의 세포/kg, 약 5 × 106개의 세포/kg, 약 6 × 106개의 세포/kg, 약 7 × 106개의 세포/kg, 약 8 × 106개의 세포/kg, 약 9 × 106개의 세포/kg, 약 1 × 107개의 세포/kg, 약 2 × 107개의 세포/kg, 약 3 × 107개의 세포/kg, 약 4 × 107개의 세포/kg, 약 5 × 107개의 세포/kg, 약 6 × 107개의 세포/kg, 약 7 × 107개의 세포/kg, 약 8 × 107개의 세포/kg 또는 약 9 × 107개의 세포/kg이다.
일부 실시형태에서, 조작된 생존가능 T 세포의 치료적 유효량은 체중 1 kg 당 약 1 × 106개 내지 약 2 × 106개의 조작된 생존가능 T 세포이며, 약 1 × 108개의 조작된 생존가능 T 세포의 최대 용량까지이다.
일부 실시형태에서, 조작된 T 세포는 항-CD19 CART T 세포이다. 일부 실시형태에서, 항-CD19 CAR T 세포는 악시캅타젠 실로류셀 생성물, YESCARTATM 악시캅타젠 실로류셀(악시캅타젠 실로류셀), TECARTUS™ - 브렉수캅타젠 오토류셀/KTE-X19, KYMRIAH™(티사젠렉류셀) 등이다. 일부 실시형태에서, 생성물은 상업적 사양을 충족한다. 일부 실시형태에서, 생성물은 상업적 사양을 충족하지 않는다(사양 외 생성물, OOS(out-of-specification)). 일부 실시형태에서, OOS 생성물은 상업적 사양을 충족하는 악시캅타젠 실로류셀 생성물보다 더 적고, 덜 분화된 CCR7+ TN 및 TCM과 더 큰 비율의 더 분화된 CCR7― TEM + TEFF 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, OOS 생성물은 상업적 생성물보다 더 낮은 투여 후 중앙값 피크 CAR T 세포 수준을 초래한다. 일부 실시형태에서, OOS 생성물은 여전히 관리가능한 안전성 프로파일 및 의미있는 임상적 이점을 보였다.
본원에 개시된 방법은 대상체에서 암을 치료하고, 종양의 크기를 감소시키고, 종양세포를 사멸시키고, 종양 세포 증식을 방지하고, 종양의 성장을 방지하고, 환자로부터 종양을 제거하고, 종양의 재발을 예방하고, 종양 전이를 예방하고, 환자에서 관해를 유도하거나, 또는 이의 임의의 조합을 유도하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 완전 반응을 유도한다. 다른 실시형태에서, 본 방법은 부분 반응을 유도한다.
치료될 수 있는 암은 혈관신생화되지 않은 종양, 아직 실질적으로 혈관신생화되지 않은 종양 또는 혈관신생화된 종양을 포함한다. 암은 또한 고형 종양 또는 비고형 종양을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 암은 혈액학적 암이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈구의 암이다. 다른 실시형태에서, 암은 혈장 세포의 암이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈병, 림프종, 또는 골수종이다. 일부 실시형태에서, 암은 급성 림프아구성 백혈병(ALL)(비 T 세포 ALL 포함), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 및 혈구탐식성 림프조직구증(HLH), B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프구성 백혈병("BALL"), 모구 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수구성 백혈병(CML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 또는 급성 육아종성 질환, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종, 여포성 림프종(FL), 모발상 세포 백혈병, 혈구탐식 증후군(대식세포 활성화 증후군(MAS)), 호지킨병, 거대 세포 육아종, 백혈구 부착 결핍증, 악성 림프증식성 병태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 미결정 유의성의 모노클로날 감마병증(MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군(MDS), 골수성 질환, 비제한적으로 급성 골수성 백혈병(AML), 비-호지킨 림프종(NHL), 형질 세포 증식성 장애(예를 들어, 무증상 골수종(무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종)), 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종(예를 들어, 형질 세포 질환; 고립성 골수종; 고립성 형질세포종; 골수외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종), POEMS 증후군(크로우-후카세 증후군; 타카츠키병; PEP 증후군), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBC), 소세포-또는 거대 세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종(SMZL), 전신성 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T 세포 급성 림프구성 백혈병("TALL"), T 세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 또는 이의 조합이다.
일부 실시형태에서, 암은 골수종이다. 일부 실시형태에서, 암은 다발성 골수종이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈병이다. 일부 실시형태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다.
일부 실시형태에서, 암은 비-호지킨 림프종이다. 일부 실시형태에서, 암은 재발성/난치성 NHL이다. 일부 실시형태에서, 암은 맨틀 세포 림프종이다.
일부 실시형태에서, 암은 여포성 림프종(FL) 및 변연부 림프종(MZL)을 포함하는 진행성 무통성 비-호지킨 림프종(iNHL)이다. 일부 실시형태에서, 환자는 알킬화제와 항-CD20 모노클로날 항체를 포함하는, 2개 라인 이상의 사전 치료 후 재발성/난치성 질환을 가졌다. 일부 실시형태에서, 환자는 PI3K 억제제를 받았을 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자는 (또한) 자가 줄기 세포 이식을 받았을 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자는 CAR T 세포 제조를 위한 T 세포를 수득하기 위해 백혈구성분채집술을 수행한 후 -5, -4, 및 -3일차에 투여된 500 mg/m2/일로 사이클로포스파미드 및 30 mg/m2/일로 플루다라빈으로의 컨디셔닝 화학요법을 수행하고; 0일차에, 환자는 2×106 CAR T 세포/kg의 표적 용량으로 CAR T 세포 치료(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀)의 단일 정맥내 주입을 받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 추가의 주입이 나중에 주어질 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자가 초기 투여 후 3개월차 평가에서 반응 후 진행하는 경우, 환자는 CAR T 세포 치료(예를 들어, 악시캅타젠 실로류셀)에 의해 재치료를 받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자는 브릿징 요법을 받을 수 있다. 브릿징 요법의 예는 실시예를 포함한 명세서의 다른 곳에서 제공된다. 일부 실시형태에서, 환자는 CRS를 경험한다. 일부 실시형태에서, CRS는 실시예를 포함하여 본 출원에 기재된 프로토콜 중 어느 하나를 사용하여 관리된다. 일부 실시형태에서, CRS는 토실리주맙, 코르티코스테로이드 및/또는 승압제로 관리된다.
일부 실시형태에서, 암은 재발성/난치성 무통성 비-호지킨 림프종이고, 치료를 필요로 하는 대상체의 치료 방법은 재치료로서 치료적 유효량의 CAR T 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 이전에 CAR T 세포에 의한 첫번째 치료를 받았다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포에 의한 첫번째 치료는 제1 라인 치료 또는 제2 라인 치료로서 투여되었을 수 있으며, 선택적으로 림프종은 R/R 여포성 림프종(FL) 또는 변연부 림프종(MZL)이고, 선택적으로 사전 치료 라인은 알킬화제와 조합된 항-CD20 모노클로날 항체를 포함하였다. 일부 실시형태에서, 컨디셔닝 요법은 -5, -4, 및 -3일차에 플루다라빈 30 mg/m2 IV 및 사이클로포스파미드 500 mg/m2 IV를 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 0일차에 2 × 106 CAR T 세포/kg의 단일 IV 주입물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개, 또는 적어도 약 1010개의 CAR T 세포가 투여된다. 또 다른 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포 또는 약 108개의 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 약 2 × 106개의 세포/kg, 약 3 × 106개의 세포/kg, 약 4 × 106개의 세포/kg, 약 5 × 106개의 세포/kg, 약 6 × 106개의 세포/kg, 약 7 × 106개의 세포/kg, 약 8 × 106개의 세포/kg, 약 9 × 106개의 세포/kg, 약 1 × 107개의 세포/kg, 약 2 × 107개의 세포/kg, 약 3 × 107개의 세포/kg, 약 4 × 107개의 세포/kg, 약 5 × 107개의 세포/kg, 약 6 × 107개의 세포/kg, 약 7 × 107개의 세포/kg, 약 8 × 107개의 세포/kg 또는 약 9 × 107개의 세포/kg이다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포는 항-CD19 CAR T 세포이다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포는 악시캅타젠 실로류셀 CAR T 세포이다. 일부 실시형태에서, 재치료 적격성 기준은 후속 진행과 함께 3개월 질환 평가에서 CR 또는 PR의 반응; 현지 검토에 의한 진행성 생검에서 CD19 손실 증거 부재; 및/또는 등급 4 CRS 또는 신경학적 사건, 또는 생명을 위협하는 독성 부재를 포함하며, 이때 첫번째 치료는 CAR T 세포에 의한 것이다. 일부 실시형태에서, 치료 방법은 CLINICAL TRIAL-5의 임상 시험(NCT03105336) 이후이다.
일부 실시형태에서, 암은 NHL이고, 면역요법(예를 들어, CAR T 또는 TCR T 세포 치료)은 제1 라인 치료로서 투여된다. 일부 실시형태에서, 암은 LBCL이다. 일부 실시형태에서, LBCL은 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 전좌를 갖는 고위험/고등급 LBCL이거나 등록 전 임의의 시점에서 3 이상의 IPI 스코어를 갖는 DLBCL이다. 일부 실시형태에서, 제1 라인 치료는 항-CD20 모노클로날 항체 및 안트라사이클린-함유 레지먼과 조합된 CAR T 세포 치료를 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료가 먼저 투여된다. 일부 실시형태에서, 항-CD20 모노클로날 항체/안트라사이클린-함유 레지먼이 먼저 투여된다. 일부 실시형태에서, 치료는 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 6주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 1년 미만의 간격 등으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 방법은 백혈구성분채집술 후 투여되고 컨디셔닝 화학요법 개시 전 완료된 브릿징 요법을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 추가적 포함 기준은 18세 이상 연령과 0 내지 1의 ECOG PS를 포함한다. 일부 실시형태에서, 컨디셔닝 요법은 -5, -4, 및 -3일차에 플루다라빈 30 mg/m2 IV 및 사이클로포스파미드 500 mg/m2 IV를 포함한다. 다른 예시적인 유익한 사전컨디셔닝 치료 레지먼은 미국 임시 특허 출원 제62/262,143호 및 제62/167,750호 및 미국 특허 제9,855,298호 및 제10,322,146호에 기재되어 있고, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 이러한 문헌은, 예를 들어 지정된 유리한 용량의 사이클로포스파미드(1일 200 mg/m2 내지 1일 2000 mg/m2) 및 지정된 용량의 플루다라빈(1일 20 mg/m2 내지 1일 900 mg/m2)을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 T 세포 치료를 필요로 하는 환자를 컨디셔닝하는 방법을 설명하고 있다. 하나의 상기 투여 레지먼은 치료적 유효량의 조작된 T 세포를 환자에게 투여하기 전 3일 동안 하루에 사이클로포스파미드 약 500 mg/m2 및 하루에 플루다라빈 약 60 mg/m2를 환자에게 매일 투여하는 것을 포함하여 환자를 치료하는 것을 포함한다. 또 다른 실시형태는 하루에 사이클로포스파미드의 500 mg/체표면적 m2의 용량과 상기 기간 동안 1일당 플루다라빈의 30 mg/체표면적 m2의 용량으로 T 세포 투여 전 -4, -3, 및 -2일차에 혈청 사이클로포스파미드와 플루다라빈을 포함한다. 또 다른 실시형태는 1일당 사이클로포스파미드의 900 mg/체표면적 m2의 용량과 상기 기간 동안 플루다라빈의 25 mg/체표면적 m2의 용량으로 T 세포 투여 전 -2일차에 사이클로포스파미드 및 -4, -3, 및 -2일차에 플루다라빈을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 컨디셔닝은 1일당 사이클로포스파미드의 500 mg/체표면적 m2의 용량과 상기 기간 동안 1일당 플루다라빈의 30 mg/체표면적 m2의 용량으로 T 세포 투여 전 -5, -4, 및 -3일차에 사이클로포스파미드와 플루다라빈을 포함한다. 다른 사전컨디셔닝 실시형태는 1일당 사이클로포스파미드의 200 내지 300 mg/체표면적 m2와 3일 동안 1일당 플루다라빈의 20 내지 50 mg/체표면적 m2의 용량을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 0일차에 2 × 106 CAR T 세포/kg의 단일 IV 주입물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개, 또는 적어도 약 1010개의 CAR T 세포가 투여된다. 또 다른 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포 또는 약 108개의 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 약 2 × 106개의 세포/kg, 약 3 × 106개의 세포/kg, 약 4 × 106개의 세포/kg, 약 5 × 106개의 세포/kg, 약 6 × 106개의 세포/kg, 약 7 × 106개의 세포/kg, 약 8 × 106개의 세포/kg, 약 9 × 106개의 세포/kg, 약 1 × 107개의 세포/kg, 약 2 × 107개의 세포/kg, 약 3 × 107개의 세포/kg, 약 4 × 107개의 세포/kg, 약 5 × 107개의 세포/kg, 약 6 × 107개의 세포/kg, 약 7 × 107개의 세포/kg, 약 8 × 107개의 세포/kg 또는 약 9 × 107개의 세포/kg이다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포는 항-CD19 CAR T 세포이다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 항-CD19 CAR T 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 악시캅타젠 실로류셀 또는 YESCARTA™을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 TECARTUS™ - 브렉수캅타젠 오토류셀/KTE-X19 또는 KYMRIAH™(티사젠렉류셀) 등을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료 방법은 당업계에 잘 기술되어 있는 ZUMA-1 내지 ZUMA-19, KITE-585, KITE-222, KITE-037, KITE-363, KITE-439, 또는 KITE-718 임상 시험 중 어느 하나에서 사용된 방법이다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 사전 치료 라인의 수가 1 내지 2; 3; 4; 또는 5 이상인 대상체에 치료적 유효량의 CD19 CAR-T 치료를 투여하는 것을 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 사전 치료 라인의 수가 1 내지 2인 대상체에 치료적 유효량의 CD19 CAR-T 치료를 투여하는 것을 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법을 제공한다. 암은 상기 나열된 암 중 어느 하나일 수 있다. CD19 CAR-T 치료는 상기 나열된 CD19 CAR-T 치료 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시형태에서, CD19 CAR-T 치료는 제1 라인 치료로 사용된다. 일부 실시형태에서, CD19 CAR-T 치료는 제2 라인 치료로 사용된다.
일 실시형태에서 CD19 CAR-T 치료는 상기 기재된 CD19 CAR-T 치료 중 어느 것이다. 일 실시형태에서, CD19 CAR-T 치료는 악시캅타젠 실로류셀 치료를 포함한다. 일 실시형태에서, 암은 달리 명시되지 않은 난치성 DLBCL(ABC/GCB), MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있거나 없는 HGBL, FL로부터 발생하는 DLBCL, T-세포/조직구 풍부 거대 B-세포 림프종, 만성 염증과 관련된 DLBCL, 원발성 피부 DLBCL, leg 유형, 및/또는 엡스타인-바 바이러스(EBV) + DLBCL이다. 일 실시형태에서, 악시캅타젠 실로류셀 치료를 위해 선택된 대상체는 달리 명시되지 않은 난치성 DLBCL(ABC/GCB), MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있거나 없는 HGBL, FL로부터 발생하는 DLBCL, T-세포/조직구 풍부 거대 B-세포 림프종, 만성 염증과 관련된 DLBCL, 원발성 피부 DLBCL, leg 유형, 및/또는 엡스타인-바 바이러스(EBV) + DLBCL을 갖는다. 일부 실시형태에서, 악시캅타젠 실로류셀 치료는 제2 라인 치료로서 사용되며, 여기서 제1 라인 치료는 CHOP, 즉 사이클로포스파미드(Cytoxan®), 독소루비신(히드록시독소루비신), 빈크리스틴(Oncovin®) 및 프레드니손이다. 일부 실시형태에서, 악시캅타젠 실로류셀 치료는 제2 라인 치료로서 사용되며, 여기서 제1 라인 치료는 R-CHOP(CHOP + 리툭시맙)이다.
일 실시형태에서, 환자는 제1 라인 면역화학요법 후 재발되거나 난치성 질환을 갖는 제2 라인 악시캅타젠 실로류셀 치료를 위해 선택된다. 일 실시형태에서, 난치성 질환은 제1 라인 치료에 대해 완전 관해가 없는 것으로 정의되고; 제1 라인 치료에 내성이 없는 개체는 배제된다. 제1 라인 치료에 대한 최상의 반응으로서 진행성 질환(PD), 제1 라인 치료의 적어도 4 사이클(예를 들어, R-CHOP의 4 사이클) 후 최상의 반응으로서 안정한 질환(SD), 요법의 적어도 6 사이클 후 최상의 반응으로서 부분 반응(PR) 및 12개월 이내의 생검-입증 잔류 질환 또는 질환 진행, 및/또는 재발된 질환은 제1 라인 치료에 대한 완전 관해 후 제1 라인 치료 12개월 이내의 생검-입증 재발로서 정의되었다. 일부 실시형태에서, 제1 라인 치료는 R-GDP(1일차(또는 8일차) 리툭시맙 375 mg/m2, 1일 및 8일차에서 젬시타빈 1 g/m2, 1내지 4일차에 덱사메타손 40 mg, 1일차에서 시스플라틴 75 mg/m2(또는 카르보플라틴 AUC=5)), R-ICE(화학요법 전 리툭시맙 375 mg/m2, 메스나와 함께 2일차에 이포스파미드 5 g/m2 24h-CI, 2일차에 카르보플라틴 AUC=5, 최대 용량 800 mg, 1 내지 3일차에 에토포시드 100 mg/m2/d), 또는 R-ESHAP(리툭시맙 1일차에 375 mg/m2, 1 내지 4일차에 에토포시드 40 mg/m2/d IV, 1 내지 4 또는 5일차에 메틸프레드니솔론 500 mg/d IV, 1 내지 4일차에 시스플라틴 25 mg/m2/d CI, 5일차에 시타라빈 2 g/m2)를 포함한다.
일부 실시형태에서, 제2 라인 악시캅타젠 실로류셀 치료를 위해 선택된 환자는 -5, -4, 및 -3일차에 플루다라빈 30 mg/m2 IV 및 사이클로포스파미드 500 mg/m2 IV를 포함하는 컨디셔닝 요법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 악시캅타젠 실로류셀 치료는 제2 라인 치료로서 사용되며, 여기서 제1 라인 치료 실시형태, 본원에 개시된 CAR-발현 면역 효과기 세포를 포함하는 조성물은 임의의 수의 화학요법제와 함께(T 세포 투여 전, 투여 후, 및/또는 동시에) 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 분자, 형질도입된(또는 달리 조작된) 세포(예컨대 CAR), 및 화학요법제는 각각 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하기 위한 유효량으로 투여된다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이클로포스파미드(CYTOXAN™); 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보퀀, 메투레도파 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸올 멜라민 수지를 포함한 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴과 같은 니트로스우레아; 항생제, 예컨대 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리키아마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항아드레날, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지퀀; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; 다당류 K(PSK); 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀(TAXOL™, Bristol-Myers Squibb) 및 독세탁셀(TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer); 클로람부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라아제 억제제 RFS2000; 디플루오로메틸로미틴(DMFO); 레틴산 유도체, 예컨대 Targretin™(벡사로텐), Panretin™, (알리트레티노인); ONTAK™(데닐류킨 디프티톡스); 에스페라마이신; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 하나의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 CAR-발현 면역 효과기 세포를 포함하는 조성물은, 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타아제 저해 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜(Fareston)과 같은 항에스트로겐류; 및 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린과 같은 항안드로겐류; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체와 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 항호르몬제와 함께 투여될 수 있다. 적절한 경우, CHOP, 즉, 사이클로포스파미드(Cytoxan®), 독소루비신(히드록시독소루비신), 빈크리스틴(Oncovin®) 및 프레드니손, R-CHOP(CHOP + 리툭시맙), 및 G-CHOP(CHOP + 오비누투주맙)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 화학요법제의 조합이 또한 투여된다.
일부 실시형태에서, 화학요법제는 조작된 세포의 투여 후 1주 이내에 또는 동시에 투여된다. 다른 실시형태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산의 투여 후 1 내지 4주 또는 1주 내지 1개월, 1주 내지 2개월, 1주 내지 3개월, 1주 내지 6개월, 1주 내지 9개월, 또는 1주 내지 12개월에 투여된다. 일부 실시형태에서, 화학요법제는 세포 또는 핵산을 투여하기 적어도 1개월 전에 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 둘 이상의 화학요법제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
여러 가지 추가 치료제는 본원에 기재된 조성물과 함께 사용될 수 있다(T 세포 투여 전, 투여 후, 및/또는 동시에). 예를 들어, 잠재적으로 유용한 추가의 치료제는 PD-1 억제제, 예컨대 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®), 세미플리맙(Libtayo), 피딜리주맙(CureTech), 및 아테졸리주맙(Roche), 및 PD-L1 억제제, 예컨대 아테졸리주맙, 두르발루맙, 및 아벨루맙을 포함한다.
본원에 개시된 조성물 및 방법과 병용하여(T 세포 투여 전, 투여 후 및/또는 동시에) 사용하기에 적합한 추가의 치료제는 이브루티닙(IMBRUVICA®), 오파투무맙(ARZERRA®), 리툭시맙(RITUXAN®), 베바시주맙(AVASTIN®), 트라스투주맙(HERCEPTIN®), 트라스투주맙 엠탄신(KADCYLA®), 이마티닙(GLEEVEC®), 세툭시맙(ERBITUX®), 파니투무맙(VECTIBIX®), 카투막소맙, 이브리투모맙, 오파투무맙, 토시투모맙, 브렌툭시맙, 알렘투주맙, 젬투주맙, 에를로티닙, 게피티닙, 반데타닙, 아파티닙, 라파티닙, 네라티닙, 악시티닙, 마시티닙, 파조파닙, 서니티닙, 소라페닙, 토세라닙, 레스타우르티닙, 악시티닙, 세디라닙, 렌바티닙, 닌테다닙, 파조파닙, 레고라페닙, 세막사닙, 소라페닙, 서니티닙, 티보자닙, 토세라닙, 반데타닙, 엔트렉티닙, 카보잔티닙, 이마티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 포나티닙, 라도티닙, 보수티닙, 레스타우르티닙, 룩솔리티닙, 파크리티닙, 코비메티닙, 셀루메티닙, 트라메티닙, 비니메티닙, 알렉티닙, 세리티닙, 크리조티닙, 아플리베르셉트, 아디포티드, 데닐류킨 디프티톡스, mTOR 억제제, 예컨대 에베롤리무스 및 템시롤리무스, 헤지호그 억제제, 예컨대 소니데깁 및 비스모데깁, CDK 억제제, 예컨대 CDK 억제제(팔보시클립), GM-CSF, CSF1, GM-CSFR, 또는 CSF1R의 억제제에 더불어 항-흉선세포 글로불린, 렌질루맙 및 마브릴리무맙을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일 실시형태에서, GM-CSF 억제제는 렌질루맙; 나밀루맙(AMG203); GSK3196165/MOR103/ 오틸리맙(GSK/MorphoSys); KB002 및 KB003(KaloBios); MT203(Micromet 및 Nycomed); MORAb-022/김실루맙(Morphotek); 또는 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러; E21R; 및 소분자로부터 선택된다. 일 실시형태에서, CSF1 억제제는 RG7155, PD-0360324, MCS110/라크노투주맙, 또는 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러 버전, 및 소분자로부터 선택된다. 일 실시형태에서, GM-CSFR 억제제 및 CSF1R 억제제는 마브릴리무맙(구 CAM-3001; MedImmune, Inc.); 카비랄리주맙(Five Prime Therapeutics); LY3022855(IMC-CS4)(Eli Lilly), RG7155 또는 RO5509554로도 알려진 에막투주맙; FPA008(Five Prime/BMS); AMG820(Amgen); ARRY-382(Array Biopharma); MCS110(Novartis); PLX3397(Plexxikon); ELB041/AFS98/TG3003(ElsaLys Bio, Transgene), SNDX-6352(Syndax); 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러 버전; 및 소분자로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 약제는 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내 주사, 안주위 주사, 망막하 주사, 유리체강내 주사, 경중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전안방내 주사, 결막하 주사(subconjectval injection), 결막하 주사(subconjuntival injection), 테논낭밑(sub-Tenon's) 주사, 안구뒤 주사, 안구주위 주사 또는 공막뒤 전달에 의해 투여된다. 일부 실시형태에서, 이들은 비경구, 폐내, 및 비강내로 투여되며, 국소 치료가 목적되는 경우, 병변내 투여로 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다.
일부 실시형태에서, 치료는 컨디셔닝과 본원에 개시된 조성물 사이의 요법 또는 백혈구성분채집술 후에 투여되고, 컨디셔닝 화학요법 개시 전 완료된 요법인 요법을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 브릿징 요법은 CHOP, G-CHOP, R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니솔론), 코르티코스테로이드, 벤다무스틴, 백금 화합물, 안트라사이클린, 및/또는 포스포이노시티드 3-키나아제(PI3K) 억제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, PI3K 억제제는 듀벨리십, 이델라리십, 베네토클락스, 픽틸리십(GDC-0941), 코판리십, PX-866, 부팔리십(BKM120), 필라라리십(XL-147), GNE-317, 알펠리십(BYL719), INK1117, GSK2636771, AZD8186, SAR260301 및 타셀리십(GDC-0032)으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, AKT 억제제는 페리포신, MK-2206이다. 일 실시형태에서, mTOR 억제제는 에베롤리무스, 시롤리무스, 템시롤리무스, 리다포롤리무스로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 이중 PI3K/mTOR 억제제는 BEZ235, XL765, 및 GDC-0980으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, PI3K 억제제는 듀벨리십, 이델라리십, 베네토클락스, 픽틸리십(GDC-0941), 코판리십, PX-866, 부팔리십(BKM120), 필라라리십(XL-147), GNE-317, 알펠리십(BYL719), INK1117, GSK2636771, AZD8186, SAR260301 및 타셀리십(GDC-0032)으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 브릿징 요법은 아칼라브루티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 코판리십 히드로클로라이드, 넬라라빈, 벨리노스타트, 벤다무스틴 히드로클로라이드, 카르무스틴, 블레오마이신 설페이트, 보르테조밉, 자누브루티닙, 카르무스틴, 클로람부실, 코판리십 히드로클로라이드, 데닐류킨 디프티톡스, 덱사메타손, 독소루비신 히드로클로라이드, 듀벨리십, 프랄라트렉세이트, 오비누투주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이브루티닙, 이델라리십, 재조합 인터페론 알파-2b, 로미뎁신, 레날리도마이드, 메클로레타민 히드로클로라이드, 메토트렉세이트, 모가물리주맙-kpc, 프리릭사포르, 넬라라빈, 오비누투주맙, 데닐류킨 디프티톡스, 펨브롤리주맙, 플레릭사포르, 폴라투주맙 베도틴-piiq, 모가물리주맙-kpc, 프레드니손, 리툭시맙, 히알루로니다아제, 로미뎁신, 보르테조밉, 베네토클락스, 빈블라스틴 설페이트, 보리노스타트, 자누브루티닙, CHOP, COPP, CVP, EPOCH, R-EPOCH, HYPER-CVAD, ICE, R-ICE, R-CHOP, R-CVP, 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포 면역요법은 종양 부담을 감소시킬 목적으로 사용되는 감량(debulking) 요법과 병용하여 투여된다. 일 실시형태에서, 감량 요법은 백혈구성분채집술 후 및 컨디셔닝 화학요법 투여 또는 세포 주입의 투여의 전에 투여되어야 한다. 감량 요법의 예는 하기를 포함한다:
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일부 실시형태에서, 면역요법(예를 들어, 조작된 CAR T 세포)을 포함하는 조성물은 항염증제와 함께(T 세포 투여 전, 투여 후, 및/또는 동시에) 투여된다. 항염증제 또는 약물은 스테로이드 및 글루코코르티코이드(베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론 포함), 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 메토트렉세이트, 설파살라진, 레플루노미드를 포함한 비스테로이드 항염증 약물(NSAIDS), 항-TNF 약제, 사이클로포스파미드, 및 마이코페놀레이트를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 억제제 및 시알릴레이트를 포함한다. 예시적인 진통제는 아세트아미노펜, 옥시코돈, 트라마돌 또는 프로폭시펜 히드로클로라이드를 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 또는 프레드니손을 포함한다. 예시적인 생물학적 반응 변형제는 세포 표면 마커에 대해 유도된 분자(예를 들어, CD4, CD5 등), TNF 길항제(예를 들어, 에타네르셉트(ENBREL®), 아달리무맙(HUMIRA®) 및 인플릭시맙(REMICADE®)과 같은 사이토카인 억제제, 케모카인 억제제 및 부착 분자 억제제가 포함된다. 생물학적 반응 변형제는 모노클로날 항체뿐만 아니라 분자의 재조합 형태를 포함한다. 예시적인 DMARD는 아자티오프린, 사이클로포스파미드, 사이클로스포린, 메토트렉세이트, 페니실라민, 레플루노미드, 설파살라진, 히드록사이클로로퀸, 금(경구(아우라노핀) 및 근육내) 및 미노사이클린을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 조성물은 사이토카인과 함께(T 세포 투여 전, 투여 후, 또는 동시에) 투여된다. 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전형적인 폴리펩티드 호르몬이다. 사이토카인들 중에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 여포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 황체 형성 호르몬(LH)과 같은 당단백질 호르몬; 간 성장 인자(HGF); 섬유아세포 성장 인자(FGF); 프로락틴; 태반 락토겐; 뮬러관-저해 성분; 마우스 고나도트로핀-관련 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(TPO); 신경 성장 인자(NGF), 예컨대 NGF-베타; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자(TGF), 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리스로포이에틴(EPO, Epogen®, Procrit®); 골유도 인자; 인터페론, 예컨대 인터페론-알파, 베타, 및 -감마; 콜로니 자극 인자(CSF), 예컨대 대식 세포-CSF(M-CSF); 과립구-대식 세포-CSF(GM-CSF); 및 과립구-CSF(G-CSF); 인터류킨(IL), 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, 종양 괴사 인자, 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 LIF 및 kit 리간드(KL)를 포함하는 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본원에서 사용되는, 용어 사이토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물에서 유래한 단백질, 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포의 투여 및 추가 치료제의 투여는 동일자에 수행되고, 36시간 이하의 간격으로, 24시간 이하의 간격으로, 12시간 이하의 간격으로, 6시간 이하의 간격으로, 4시간 이하의 간격으로, 2시간 이하의 간격으로, 또는 1시간 이하의 간격으로 또는 30분 이하의 간격으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 세포의 투여 및 추가 치료제의 투여는 약 0 내지 약 48시간, 약 0 내지 약 36시간, 약 0 내지 약 24시간, 약 0 내지 약 12시간, 약 0 내지 약 6시간, 약 0 내지 약 2시간, 약 0 내지 약 1시간, 약 0 내지 약 30분, 약 30분 내지 약 48시간, 약 30분 내지 약 36시간, 약 30분 내지 약 24시간, 약 30분 내지 약 12시간, 약 30분 내지 약 6시간, 약 30분 내지 약 4시간, 약 30분 내지 약 2시간, 약 30분 내지 약 1시간, 약 1시간 내지 약 48시간, 약 1시간 내지 약 36시간, 약 1시간 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 1시간 내지 약 6시간, 약 1시간 내지 약 4시간, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 2시간 내지 약 48시간, 약 2시간 내지 약 36시간, 약 2시간 내지 약 24시간, 약 2시간 내지 약 12시간, 약 2시간 내지 약 6시간, 약 2시간 내지 약 4시간, 약 4시간 내지 약 48시간, 약 4시간 내지 약 36시간, 약 4시간 내지 약 24시간, 약 4시간 내지 약 12시간, 약 4시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 48시간, 약 6시간 내지 약 36시간, 약 6시간 내지 약 24시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 48시간, 약 12시간 내지 약 36시간, 약 12시간 내지 약 24시간, 약 24시간 내지 약 48시간, 약 24시간 내지 약 36시간 또는 약 36시간 내지 약 48시간에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 세포 및 추가의 치료제는 동시에 투여된다.
일부 실시형태에서, 약제는 약 30 mg 내지 5000 mg, 예컨대 50 mg 내지 1000 mg, 50 mg 내지 500 mg, 50 mg 내지 200 mg, 50 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 1000 mg, 100 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 1000 mg, 200 mg 내지 500 mg 또는 500 mg 내지 1000 mg의 투여량으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 약제는 0.5 mg/kg 내지 100 mg/kg, 1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 1 mg/kg 내지 25 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 5 mg/kg 내지 100 mg/kg, 5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 5 mg/kg 내지 25 mg/kg, 5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 10 mg/kg 내지 100 mg/kg, 10 mg/kg 내지 50 mg/kg, 10 mg/kg 내지 25 mg/kg, 25 mg/kg 내지 100 mg/kg, 25 mg/kg 내지 50 mg/kg 내지 50 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 약제는 각각 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 2 mg/kg 내지 8 mg/kg, 2 mg/kg 내지 6 mg/kg, 2 mg/kg 내지 4 mg/kg 또는 6 mg/kg 내지 8 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 약제는 적어도 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg 이상의 투여량으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 키메라 수용체 T 세포 면역요법의 투여는 공인 의료 시설에서 발생한다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 방법은 주입 후 공인 의료 시설에서 7일 동안 적어도 매일 CRS 및 신경학적 독성 및 CAR T 세포 치료에 대한 다른 이상 반응의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신경학적 독성의 증상은 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 실어증, 섬망, 불면증 및 불안에서 선택된다. 일부 실시형태에서, 이상 반응의 증상은 발열, 저혈압, 빈맥, 저산소증 및 오한으로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 이는 심장부정맥(심방세동 및 심실성 빈맥 포함), 심장정지, 심부전, 신기능부전, 모세관누출 증후군, 저혈압, 저산소증, 장기 독성, 식혈세포성 림프조직구증/대식세포 활성화 증후군(HLH/MAS), 발작, 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 실어증, 섬망, 불면증, 불안, 아나필락시스, 발열성 호중구감소증, 저혈소판증, 호중구감소증 및 빈혈을 포함한다. 일부 실시형태에서, 환자는 주입 후 적어도 4주 동안 공인 의료 시설 인근에 잔류하도록 지시받는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하나 이상의 속성의 수준을 기반으로 이상 반응의 발달을 예방하거나 이의 중증도를 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 세포 치료은 사이토카인 방출 증후군 및 신경학적 독성을 포함하는 이상 반응을 예방하고, 이의 발증을 지연시키고, 이의 증상을 감소시키고, 이를 치료하는 하나 이상의 약제와 투여된다. 일 실시형태에서, 약제는 상기 기재되었다. 다른 실시형태에서, 약제는 하기 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 약제는 세포의 투여 전, 투여 후, 또는 동시에, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 방법 및 용량 중 하나에 의해 투여된다. 일 실시형태에서, 약제(들)는 질환에 대해 취약할 수 있지만 아직 질환으로 진단되지 않은 대상체에 투여된다.
이에 관해, 본원에 개시된 방법은 "예방적 유효량"의 토실리주맙, 코르티코스테로이드 치료 및/또는 독성 예방용 항발작 약물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 방법은 GM-CSF, CSF1, GM-CSFR, 또는 CSF1R의 억제제, 렌질루맙, 마브릴리무맙, 사이토카인, 및/또는 항염증제를 투여하는 것을 포함한다. 약리학적 및/또는 생리학적 효과는 예방적일 수 있으며, 즉 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다. "예방적 유효량"은 목적하는 예방적 결과(예를 들어, 이상 반응의 발증 예방)를 달성하는 데 필요한 기간 동안 및 필요한 투여량으로의 효과적인 양을 지칭할 수 있다.
일부 실시형태에서, 방법은 임의의 대상체에서 이상 반응을 관리하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이상 반응은 사이토카인 방출 증후군(CRS), 신경학적 독성, 과민 반응, 중증 감염, 혈구감소증 및 저감마글로불린혈증으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 이상 반응의 징후 및 증상은 발열, 저혈압, 빈맥, 저산소증 및 오한으로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 이는 심장부정맥(심방세동 및 심실성 빈맥 포함), 심장정지, 심부전, 신기능부전, 모세관누출 증후군, 저혈압, 저산소증, 장기 독성, 식혈세포성 림프조직구증/대식세포 활성화 증후군(HLH/MAS), 발작, 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 실어증, 섬망, 불면증, 불안, 아나필락시스, 발열성 호중구감소증, 저혈소판증, 호중구감소증 및 빈혈을 포함한다.
일부 실시형태에서, 환자는 본 출원에 기재된 바이오마커 중 하나 이상에 기반하여 식별되고 선택되었다. 일부 실시형태에서, 환자는 임상 표현(예를 들어, 독성 증상의 존재와 등급)에 의해 간단히 식별되고 선택되었다.
일부 실시형태에서, 방법은 키메라 수용체 치료에서 CRS를 예방하거나 이의 중증도를 감소시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조작된 CAR T 세포는 환자에의 투여 후 비활성화된다.
일부 실시형태에서, 방법은 임상 표현을 기반으로 CRS를 식별하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 발열, 저산소증, 및 저혈압의 다른 원인을 평가하고 치료하는 것을 포함한다. 등급 2 이상의 CRS(예를 들어, 수액에 반응하지 않는 저혈압, 또는 보충 산소첨가를 필요로 하는 저산소증)를 경험한 환자는 지속적인 심장 원격 측정과 맥박 산소측정을 이용하여 모니터링되어야 한다. 일부 실시형태에서, 중증 CRS를 경험한 환자의 경우, 심장 기능을 평가하기 위해 심장초음파도를 수행하는 것을 고려한다. 중증 CRS 또는 생명을 위협하는 CRS의 경우, 집중 케어 지지적 요법이 고려될 수 있다.
일부 실시형태에서, 방법은 CRS의 징후 및 증상에 대한 주입 후 환자를 7일 동안 적어도 매일 검증 의료 시설에서 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 주입 후 4주 동안 CRS의 징후 또는 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 즉각적인 의료 관찰이 CRS의 징후 또는 증상이 언제든지 발생하는 것을 확인하도록 환자와 상담하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 CRS의 첫 번째 징후에 제시된 바에 따라 지지적 케어, 토실리주맙 또는 토실리주맙과 코르티코스테로이드를 이용한 치료를 도입하는 것을 포함한다.
일부 실시형태에서, 방법은 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 신경학적 증상의 다른 원인을 배제시키는 단계를 포함한다. 등급 2 이상의 신경학적 독성을 경험하는 환자는 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소측정을 이용하여 모니터링되어야 한다. 중증 또는 생명을 위협하는 신경학적 독성에 대한 집중 케어 지지적 요법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 신경학적 독성의 증상은 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 실어증, 섬망, 불면증 및 불안에서 선택된다.
일부 실시형태에서, 세포 치료는 이상 반응의 하나 이상의 증상을 치료 및/또는 예방하는(예방적인) 하나 이상의 약제(예를 들어, 스테로이드) 또는 치료(예를 들어, 감량)의 투여 전, 투여 동안/동시에, 및/또는 투여 후 투여된다. "예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해, 필요한 투여량에서 및 필요한 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 일 실시형태에서, 예방적 유효량은 질환의 초기 단계에서 또는 그 전에 대상체에 사용된다. 일 실시형태에서, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다. 일부 실시형태에서, 환자는 본 명세서에서 본원에 기재된 하나 이상의 마커의 발현을 기반으로 한 이상 반응의 관리를 위해 선택된다. 일 실시형태에서, 이상 반응 치료 또는 예방은 세포 치료를 받게 될, 받는, 또는 받았던 임의의 환자에게 투여된다.
일부 실시형태에서, 이상 반응의 관리 방법은 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대한 주입 후 공인 의료 시설에서 7일 동안 적어도 매일 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 주입 후 4주 동안 신경학적 독성 및/또는 CRS의 징후 또는 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 스테로이드와 항-IL6/항-IL-6R 항체(들)를 이용한 CAR T 세포 치료를 받고 있는 대상체에서 이상 반응의 두 가지 관리 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 코호트 4에서 초기 스테로이드 개입이 코호트 1+2에서 관찰된 것보다 더 낮은 비율의 중증 CRS 및 신경학적 사건과 연관된다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 코호트 4에서 스테로이드의 초기 사용이 코호트 1+2에서 대략 15%의 중앙값의 누적 코르티손-등가 용량 연관되었음을 제공하고, 이는 초기 스테로이드 사용이 전체 스테로이드 노출 감소를 허용할 수 있음을 시사한다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 3일 후에도 개선이 없는 경우 등급 1 CRS의 모든 경우 및 모든 등급 1 이상의 신경학적 사건의 관리를 위해 코르티코스테로이드 치료가 개시되는 이상 반응 관리 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 토실리주맙은 3일 후에도 개선이 없는 경우 등급 1 CRS의 모든 경우 및 모든 등급 2 이상의 신경학적 사건에 대해 개시된다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 투여 후 이상 반응 관리를 받는 환자에서 전체 스테로이드 노출을 감소시키는 방법을 제공하고, 방법은 3일 후에도 개선이 없는 경우 등급 1 CRS의 모든 경우의 관리 및 3일 후에도 개선이 없는 경우 모든 등급 1 이상의 신경학적 사건의 관리 및/또는 등급 1 CRS의 모든 경우에 대한 토실리주맙의 개시 및 모든 등급 2 이상의 신경학적 사건을 위한 코르티코스테로이드 치료의 개시를 포함한다. 일 실시형태에서, 코르티코스테로이드와 토실리주맙은 프로토콜 A 내지 C에 예시된 것으로부터 선택된 레지먼으로 투여된다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 초기 스테로이드 사용이 중증 감염의 위험 증가, CAR T-세포 확장의 감소, 또는 종양 반응의 감소와 관련이 없음을 제공한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR T 세포 암 치료에서 레베티라세탐 예방의 안전성을 시사한다. 일 실시형태에서, 암은 NHL이다. 일 실시형태에서, 암은 R/R LBCL이고, 환자는 악시캅타젠 실로류셀을 받는다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 환자에게 예방적 투여량의 항발작 의약을 투여하는 것을 포함하는, CAR T 세포로 치료된 환자에서 이상 반응을 관리하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 환자는 CAR T 세포 치료 0일차에서 개시하여(컨디셔닝 후), 또한 신경학적 사건이 예방적 레베티라세탐의 중단 후 발생하는 경우 등급 2 이상의 신경학적 독성의 발증 시 레베티라세탐(예를 들어, 1일 2회 750 mg 경구 또는 정맥내)을 받는다. 일 실시형태에서, 환자가 등급 2 이상의 임의의 신경학적 독성을 경험하지 않는 경우, 레베티라세탐은 임상적으로 지시된 바에 따라 감량되고 중단된다. 일 실시형태에서, 레베티라세탐 예방은 임의의 다른 이상 반응 관리 프로토콜과 조합된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 코호트 4의 불리한 관리 프로토콜을 받는 환자에서 CAR T-세포 수준이 코호트 1+2와 유사하였음을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 CAR-관련 염증 사건과 관련된 주요 염증성 사이토카인(예를 들어, IFNγ, IL-2 및 GM-CSF)의 수치적 수준이 코호트 1+2에서보다 코호트 4에서 더 낮다는 것을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 코호트 4의 이상 반응 관리 프로토콜을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, CAR T 세포 수준에 영향을 미치지 않으면서 CAR T 세포 치료 관련 염증성 사건을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 코호트 4의 이상 반응 관리 프로토콜을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, CAR T 세포 치료 후 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 이러한 효과는 CAR T 세포 확장 및 반응률에 영향을 미치지 않고 수득된다. 일 실시형태에서, 환자는 R/R LBCL을 갖는다. 일 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 항-CD19 CAR T 세포 치료가다. 일 실시형태에서, CAR T 세포 치료는 악시캅타젠 실로류셀을 포함한다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 이상 반응 관리를 위한 악시캅타젠 실로류셀 이후 토실리주맙의 초기 또는 예방적 사용이 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군을 감소시켰지만 등급 3 이상의 신경학적 사건을 증가시켰음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 CAR T-세포 치료에서 이상 반응 관리를 위한 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 환자는 0일차부터 레베티라세탐(1일 2회 750 mg 경구 또는 정맥내)을 받는다. 등급 2 이상의 신경학적 사건 발증 시, 레베티라세탐 용량은 1일 2회 1000 mg까지 증가된다. 환자가 임의의 등급 2 이상의 신경학적 사건을 경험하지 않는 경우, 레베티라세탐은 임상적으로 지시된 바에 따라 감량되고 중단된다. 환자는 또한 2일차에 토실리주맙(8 mg/kg을 IV로 1시간에 걸쳐[800 mg을 초과하지 않음])을 받는다. 동반이환 또는 고령의 환자에서 등급 2 CRS의 발증 시, 또는 그렇지 않으면 등급 3 이상의 CRS의 경우, 추가의 토실리주맙(±코르티코스테로이드)이 권장될 수 있다. 등급 2 이상의 신경학적 사건을 경험한 환자의 경우에는 토실리주맙이 개시되고, 동반이환 또는 고령의 환자의 경우, 또는 토실리주맙 사용에도 불구하고 증상이 악화되는 임의의 등급 3 이상의 신경학적 사건이 발생하는 경우에는 코르티코스테로이드가 추가된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 예방적 스테로이드 사용이 악시캅타젠 실로류셀 투여 후 조기 스테로이드 사용으로서 유사한 정도로 중증 CRS 및 NE의 비율을 감소시키는 것으로 나타남을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, 환자가 0일차(악시캅타젠 실로류셀 주입 전), 1일차 및 2일차에 덱사메타손 10 mg PO를 투여받는, CAR T-세포 치료에서의 이상 반응 관리 방법을 제공한다. 스테로이드는 또한 등급 1 NE에서부터, 및 3일의 지지적 케어 후 개선이 관찰되지 않는 경우 등급 1 CRS에 대해 투여된다. 토실리주맙은 또한 24시간의 지지적 케어 후 개선이 관찰되지 않는 경우 등급 1 이상의 CRS에 대해 투여된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 GM-CSF를 중화시키고/시키거나 고갈시키는 항체를 이용한 CAR T-세포 치료의 이상 반응 관리가 치료 환자에서 치료 관련 CRS 및/또는 NE를 예방하거나 감소시킨다는 것을 제공한다. 일 실시형태에서, 항체는 렌질루맙이다.
일부 실시형태에서, 이상 반응은 IL-6 또는 IL-6 수용체(IL-6R)의 길항제 또는 억제제인 약제(들)의 투여를 통해 관리된다. 일부 실시형태에서, 약제는 IL-6 또는 IL-6R에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 IL-6 활성을 중화시키는 항체이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 약제는 토실리주맙(아틀리주맙) 또는 사릴루맙, 항-IL-6R 항체이거나 이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제는 미국 특허 제8,562,991호에 기재된 항-IL-6R 항체이다. 일부 경우에, IL-6을 표적화하는 약제는 항-TL-6 항체, 예컨대 실툭시맙, 엘실리모맙, ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX 109, FE301, FM101, 또는 올로키주맙(CDP6038), 및 이의 조합이다. 일부 실시형태에서, 약제는 리간드 수용체 상호작용을 억제함으로써 IL-6 활성을 중화시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, IL-6/IL-6R 길항제 또는 억제제는 미국 특허 제5591827호에 기재된 것과 같은 IL-6 뮤테인이다. 일부 실시형태에서, IL-6/IL-6R 길항제 또는 억제제인 약제는 소분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 실시형태에서, 이상 반응 및 이의 증상을 관리하기 위해 사용될 수 있는 다른 약제는 사이토카인 수용체 또는 사이토카인의 길항제 또는 억제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 사이토카인 또는 수용체는 IL-10, TL-6, TL-6 수용체, IFNy, IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP13, CCR5, TNF알파, TNFR1, 예컨대 TL-6 수용체(IL-6R), IL-2 수용체(IL-2R/CD25), MCP-1(CCL2) 수용체(CCR2 또는 CCR4), TGF-베타 수용체(TGF-베타 I, II 또는 III), IFN-감마 수용체(IFNGR), MIP1P 수용체(예를 들어, CCR5), TNF 알파 수용체(예를 들어, TNFR1), IL-1 수용체(IL1-Ra/IL-1RP) 또는 IL-10 수용체(IL-10R), IL-1, 및 IL-1R알파/IL-1베타이다. 일부 실시형태에서, 약제는 시툭시맙, 사릴루맙, 올로키주맙(CDP6038), 엘실리모맙, ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX 109, FE301, 또는 FM101을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제는 형질전환 성장 인자 베타(TGF-베타), 인터류킨 6(TL-6), 인터류킨 10(IL-10), IL-2, MIP13(CCL4), TNF 알파, IL-1, 인터페론 감마(IFN-감마), 또는 단핵구 화학주성 단백질-I(MCP-1)과 같은 사이토카인의 길항제 또는 억제제이다. 일부 실시형태에서, 약제는 TL-6 수용체(IL-6R), IL-2 수용체(IL-2R/CD25), MCP-1(CCL2) 수용체(CCR2 또는 CCR4), TGF-베타 수용체(TGF-베타 I, II 또는 III), IFN-감마 수용체(IFNGR), MIP1P 수용체(예를 들어, CCR5), TNF 알파 수용체(예를 들어, TNFR1), IL-1 수용체(IL1-Ra/IL-1RP) 또는 IL-10 수용체(IL-10R), 및 이의 조합과 같은, 사이토카인 수용체를 표적으로 하는(예를 들어, 이를 억제하거나 이의 길항제인) 것이다. 일부 실시형태에서, 약제는 세포의 투여 전, 투여 후, 또는 동시에, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 방법 및 용량 중 하나에 의해 투여된다.
일부 실시형태에서, 약제는 약 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 2 mg/kg 내지 8 mg/kg, 2 mg/kg 내지 6 mg/kg, 2 mg/kg 내지 4 mg/kg 또는 6 mg/kg 내지 8 mg/kg(각각의 값 포함)의 투여량으로 투여되거나, 약제는 적어도 또는 적어도 약 또는 약 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg 또는 8 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 약제는 약 1 mg/kg 내지 12 mg/kg, 예컨대 (약) 10 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 약제는 정맥내 주입으로 투여된다. 일 실시형태에서, 약제는 토실리주맙이다. 일부 실시형태에서, 약제(들)(예를 들어, 구체적으로 토실리주맙)는 세포의 투여 전, 투여 후 또는 동시에, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 방법 및 용량 중 하나에 의해 투여된다.
일부 실시형태에서, 방법은 임상 표현을 기반으로 CRS를 식별하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 발열, 저산소증, 및 저혈압의 다른 원인을 평가하고 치료하는 것을 포함한다. CRS가 관찰되거나 의심되는 경우, 이는 프로토콜 A의 권고에 따라 관리될 수 있으며, CSF/CSFR1 축의 중화 또는 감소를 포함하는 본 개시내용의 다른 치료와 조합으로 또한 사용될 수 있다. 등급 2 이상의 CRS(예를 들어, 수액에 반응하지 않는 저혈압, 또는 보충 산소첨가를 필요로 하는 저산소증)를 경험한 환자는 지속적인 심장 원격 측정과 맥박 산소측정을 이용하여 모니터링되어야 한다. 일부 실시형태에서, 중증 CRS를 경험한 환자의 경우, 심장 기능을 평가하기 위해 심장초음파도를 수행하는 것을 고려한다. 중증 CRS 또는 생명을 위협하는 CRS의 경우, 집중 케어 지지적 요법이 고려될 수 있다. 일부 실시형태에서, 토실리주맙의 바이오시밀러 또는 등가물이 본원에 개시된 방법에서 토실리주맙 대신 사용될 수 있다. 다른 실시형태에서, 또 다른 항-IL6R이 토실리주맙 대신 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 이상 반응은 하기 프로토콜(프로토콜 A)에 따라 관리된다:
Figure pct00006
일부 실시형태에서, 방법은 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 신경학적 증상의 다른 원인을 배제시키는 단계를 포함한다. 등급 2 이상의 신경학적 독성을 경험하는 환자는 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소측정을 이용하여 모니터링되어야 한다. 중증 또는 생명을 위협하는 신경학적 독성에 대한 집중 케어 지지적 요법이 제공된다. 임의의 등급 2 이상의 신경학적 독성에 대한 발작 예방의 경우에는 비진정성 항발작제(예를 들어, 레베티라세탐)를 고려한다. 하기 치료는 CSF/CSFR1 축의 중화 또는 감소를 포함하는 본 개시내용의 다른 치료와 조합으로 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 이상 반응은 하기 프로토콜(프로토콜 B)에 따라 관리된다:
Figure pct00007
코르티코스테로이드를 이용한 추가 안전 관리 전략
등급 1에서 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙의 투여는 예방적인 것으로 간주될 수 있다. 지지적 케어는 모든 CRS 및 NE 중증도 등급에서 모든 프로토콜로 제공될 수 있다.
CRS에 관련된 이상 반응의 관리를 위한 프로토콜의 일 실시형태에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 등급 1 CRS: 토실리주맙 없음; 코르티코스테로이드 없음;등급 2 CRS: 토실리주맙(동반이환 또는 고령의 경우에만); 및/또는 코르티코스테로이드(동반이환 또는 고령의 경우에만);등급 3 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 등급 4 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드. CRS에 관련된 이상 반응의 관리를 위한 프로토콜의 다른 실시형태에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 등급 1 CRS: 토실리주맙(3일 후에 개선이 없는 경우); 및/또는 코르티코스테로이드(3일 후에 개선이 없는 경우); 등급 2 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 등급 3 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 등급 4 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드, 고용량.
NE에 관련된 이상 반응의 관리를 위한 프로토콜의 일 실시형태에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 등급 1 NE: 토실리주맙 없음; 코르티코스테로이드 없음;
등급 2 NE: 토실리주맙 없음; 코르티코스테로이드 없음; 등급 3 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드(토실리주맙에 대한 개선이 없는 경우에만, 표준 용량); 등급 4 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드.
NE에 관련된 이상 반응의 관리를 위한 프로토콜의 다른 실시형태에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 등급 1 NE: 토실리주맙 없음; 및/또는 코르티코스테로이드; 등급 2 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 등급 3 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드, 고용량; 등급 4 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드, 고용량.
일 실시형태에서, 코르티코스테로이드 치료는 등급 2 이상의 CRS에서 개시되고, 토실리주맙은 등급 2 이상의 CRS에서 개시된다. 일 실시형태에서, 코르티코스테로이드 치료는 등급 1 이상의 CRS에서 개시되고, 토실리주맙은 등급 1 이상의 CRS에서 개시된다. 일 실시형태에서, 코르티코스테로이드 치료는 등급 3 이상의 NE에서 개시되고, 토실리주맙은 등급 3 이상의 CRS에서 개시된다. 일 실시형태에서, 코르티코스테로이드 치료는 등급 1 이상의 CRS에서 개시되고, 토실리주맙은 등급 2 이상의 CRS에서 개시된다. 일부 실시형태에서, 2일차에 투여된 토실리주맙의 예방적 사용은 등급 3 이상의 CRS의 비율을 감소시킬 수 있다.
일 실시형태에서, 이상 반응의 치료를 위한 프로토콜은 하기와 같은 프로토콜 C를 포함한다:
Figure pct00008
임의의 코르티코스테로이드가 이러한 용도에 적합할 수 있다. 일 실시형태에서, 코르티코스테로이드는 덱사메타손이다. 일부 실시형태에서, 코르티코스테로이드는 메틸프레드니솔론이다. 일부 실시형태에서, 두 가지가 병용하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 글루코코르티코이드는 합성 및 비합성 글루코코르티코이드를 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 알클로메타손, 알제스톤, 베클로메타손(예를 들어, 베클로메타손 디프로피오네이트), 베타메타손(예를 들어, 베타메타손 17 발레레이트, 베타메타손 소듐 아세테이트, 베타메타손 소듐 포스페이트, 베타메타손 발레레이트), 부데소니드, 클로베타솔(예를 들어, 클로베타솔 프로피오네이트), 클로베타손, 클로코르톨론(예를 들어, 클로코르톨론 피발레이트), 클로프레드놀, 코르티코스테론, 코르티손 및 히드로코르티손(예를 들어, 히드로코르티손 아세테이트), 코르티바졸, 데플라자코르트, 데소니드, 데속시메타손, 덱사메타손(예를 들어, 덱사메타손 21-포스페이트, 덱사메타손 아세테이트, 덱사메타손 소듐 포스페이트), 디플로라손(예를 들어, 디플로라손 디아세테이트), 디플루코르톨론, 디플루프레드네이트, 에녹솔론, 플루아자코르트, 플루클로로니드, 플루드로코르티손(예를 들어, 플루드로코르티손 아세테이트), 플루메타손(예를 들어, 플루메타손 피발레이트), 플루니솔리드, 플루오시놀론(예를 들어, 플루오시놀론 아세토나이드), 플루오시노니드, 플루오코르틴, 플루오코르톨론, 플루오로메톨론(예를 들어, 플루오로메톨론 아세테이트), 플루페롤론(예를 들어, 플루페롤론 아세테이트), 플루프레드니덴, 플루프레드니 솔론, 플루란드레놀리드, 플루티카손(예를 들어, 플루티카손 프로피오네이트), 포르모코르탈, 할시노니드, 할로베타솔, 할로메타손, 할로프레돈, 히드로코르타메이트, 히드로코르티손(예를 들어, 히드로코르티손 21-부티레이트, 히드로코르티손 아세포네이트, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손 부테프레이트, 히드로코르티손 부티레이트, 히드로코르티손 사이피오네이트, 히드로코르티손 헤미석시네이트, 히드로코르티손 프로부테이트, 히드로코르티손 소듐 포스페이트, 히드로코르티손 소듐 석시네이트, 히드로코르티손 발레레이트), 로테프레드놀 에타보네이트, 마지프레돈, 메드리손, 메프레드니손, 메틸프레드니 솔론(메틸프레드니솔론 아세포네이트, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 헤미석시네이트, 메틸프레드니솔론 소듐 석시네이트), 모메타손(예를 들어, 모메타손 푸로에이트), 파라메타손(예를 들어, 파라메타손 아세테이트), 프레드니카르베이트, 프레드니솔론(예를 들어, 프레드니솔론 25-디에틸아미노아세테이트, 프레드니솔론 소듐 포스페이트, 프레드니솔론 21-헤미석시네이트, 프레드니솔론 아세테이트; 프레드니솔론 파르네실레이트, 프레드니솔론 헤미석시네이트, 프레드니솔론-21(베타-D-글루쿠로나이드), 프레드니솔론 메타설포벤조에이트, 프레드니솔론 스테아글레이트, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니솔론 테트라히드로프탈레이트), 프레드니손, 프레드니발, 프레드닐리덴, 리멕솔론, 틱소코르톨, 트리암시놀론(예를 들어, 트리암시놀론 아세토나이드, 트리암시놀론 베네토나이드, 트리암시놀론 헥사세토나이드, 트리암시놀론 아세토나이드 21 팔미테이트, 트리암시놀론 디아세테이트)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 이들 글루코코르티코이드 및 이의 염은 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980)] 및 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa. (2013)] 및 임의의 다른 에디션에 상세하게 논의되어 있으며, 이들은 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시형태에서, 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손 중에서 선택된다. 일 실시형태에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다. 다른 실시형태에서, 스테로이드는 광질코르티코이드(mineralcorticoid)이다. 임의의 다른 스테로이드가 본원에 제공된 방법에 사용될 수 있다.
하나 이상의 코르티코스테로이드가 임의의 용량 및 투여 빈도로 투여될 수 있으며, 이는 이상 반응(예를 들어, CRS 및 NE)의 중증도/등급에 따라 조정될 수 있다. 표 1 및 2는 각각 CRS 및 NE의 관리를 위한 투여 레지먼의 예를 제공한다. 또 다른 실시형태에서, 코르티코스테로이드 투여는 경구 또는 IV 덱사메타손 10 mg, 1일당 1 내지 4회를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 때때로 "고용량" 코르티코스테로이드로 지칭된 것은 1일당 IV 메틸프레드니손 1 g 투여, 또는 덱사메타손과의 병용 투여를 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 코르티코스테로이드가 1일당 1 mg 내지 2 mg/kg의 용량으로 투여된다.
코르티코스테로이드는 CRS 또는 신경독성과 같은 이상 반응과 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키는 데 효과적인 임의의 양으로 투여될 수 있다. 코르티코스테로이드, 예를 들어 글루코코르티코이드는 예를 들어 70 kg 성인 인간 대상체에게, 용량 당 (약) 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 80 mg, 0.1 mg 내지 60 mg, 0.1 mg 내지 40 mg, 0.1 mg 내지 30 mg, 0.1 mg 내지 20 mg, 0.1 mg 내지 15 mg, 0.1 mg 내지 10 mg, 0.1 mg 내지 5 mg, 0.2 mg 내지 40 mg, 0.2 mg 내지 30 mg, 0.2 mg 내지 20 mg, 0.2 mg 내지 15 mg, 0.2 mg 내지 10 mg, 0.2 mg 내지 5 mg, 0.4 mg 내지 40 mg, 0.4 mg 내지 30 mg, 0.4 mg 내지 20 mg, 0.4 mg 내지 15 mg, 0.4 mg 내지 10 mg, 0.4 mg 내지 5 mg, 0.4 mg 내지 4 mg, 1 mg 내지 20 mg, 1 mg 내지 15 mg 또는 1 mg 내지 10 mg의 양으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 글루코코르티코이드와 같은 코르티코스테로이드는 평균 성인 인간 대상체에게, 용량 당 (약) 0.4 mg 내지 20 mg의 양으로, 예를 들어 (약) 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.75 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg 또는 20 mg의 양으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 코르티코스테로이드는 일반적으로 체중이 약 70 kg 내지 75 kg인 평균 성인 인간 대상체에게, 예를 들어 (대상체의) (약) 0.001 mg/kg, 0.002 mg/kg, 0.003 mg/kg, 0.004 mg/kg, 0.005 mg/kg, 0.006 mg/kg, 0.007 mg/kg, 0.008 mg/kg, 0.009 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.015 mg/kg, 0.02 mg/kg, 0.025 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.035 mg/kg, 0.04 mg/kg, 0.045 mg/kg, 0.05 mg/kg, 0.055 mg/kg, 0.06 mg/kg, 0.065 mg/kg, 0.07 mg/kg, 0.075 mg/kg, 0.08 mg/kg, 0.085 mg/kg, 0.09 mg/kg, 0.095 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.15 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.25 mg/kg, 0.30 mg/kg, 0.35 mg/kg, 0.40 mg/kg, 0.45 mg/kg, 0.50 mg/kg, 0.55 mg/kg, 0.60 mg/kg, 0.65 mg/kg, 0.70 mg/kg, 0.75 mg/kg, 0.80 mg/kg, 0.85 mg/kg, 0.90 mg/kg, 0.95 mg/kg, 1 mg/kg, 1.05 mg/kg, 1.1 mg/kg, 1.15 mg/kg, 1.20 mg/kg, 1.25 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.35 mg/kg 또는 1.4 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다.
일반적으로, 투여된 코르티코스테로이드의 용량은 상이한 코르티코스테로이드 간에 효능의 차이가 존재하기 때문에, 특정 코르티코스테로이드에 따라 달라진다. 일반적으로, 약물마다 효능이 다양하기 때문에, 동등한 효과를 얻기 위한 해당 용량이 다를 수 있다는 것을 이해해야 한다. 다양한 글루코코르티코이드에 대한 효능 및 투여 경로의 관점에서의 동등성은 공지되어 있다. 등가의 스테로이드 투여와 관련된 정보(비(non)경시요법 방식으로)는 문헌[British National Formulary (BNF) 37, March 1999]에서 확인할 수 있다.
일부 실시형태에서, 이상 반응은 하기 프로토콜에 의해 관리된다: 환자는 T 세포 치료의 투여 0일차에 개시하여 레베티라세탐(750 mg 경구 또는 정맥내 1일 2회)을 받고; 등급 2 이상의 신경학적 사건의 발증 시, 레베티라세탐 용량은 1일 2회 1000 mg까지 증가하고; 환자가 임의의 등급 2 이상의 신경학적 사건을 경험하지 않는 경우, 레베티라세탐은 임상적으로 지시된 바에 따라 감량 및 중단되고; 환자는 또한 2일차에 토실리주맙(8 mg/kg을 IV로 1시간에 걸쳐[800 mg을 초과하지 않음])을 받고; 동반이환 또는 고령의 환자에서 등급 2 CRS의 발증 시, 또는 그렇지 않으면 등급 3 이상의 CRS의 경우, 추가의 토실리주맙(±코르티코스테로이드)이 권장될 수 있고; 등급 2 이상의 신경학적 사건을 경험한 환자의 경우에는 토실리주맙이 개시되고, 동반이환 또는 고령의 환자의 경우, 또는 토실리주맙 사용에도 불구하고 증상이 악화되는 임의의 등급 3 이상의 신경학적 사건이 발생하는 경우에는 코르티코스테로이드가 추가된다. 일부 실시형태에서, 예방적 레베티라세탐의 중단 후 신경학적 사건이 발생하는 경우 레베티라세탐은 예방을 위해, 등급 2 이상의 신경학적 독성의 발증 시 투여되고/되거나 환자가 임의의 등급 2 이상의 신경학적 독성을 경험하지 않는 경우 레베티라세탐은 감량 및 중단된다.
일부 실시형태에서, 이상 반응은 하기 프로토콜에 의해 관리된다: 환자는 0일차(T 세포 치료 주입 전), 1일차, 및 2일차에 덱사메타손 10 mg PO를 받고; 스테로이드는 또한 등급 1 NE에서부터, 및 3일의 지지적 케어 후 개선이 관찰되지 않는 경우 등급 1 CRS에 대해서 투여되고; 토실리주맙은 또한 24시간의 지지적 케어 후 개선이 관찰되지 않는 경우 등급 1 이상의 CRS에 대해 투여된다.
일부 실시형태에서, CAR T 세포(예를 들어 CD19-유도된) 또는 기타 유전자 변형된 자가유래 T 세포 면역요법으로 치료된 환자는 2차 악성종양이 발생할 수 있다. 특정한 실시형태에서, CAR T 세포(예를 들어 CD19-유도된) 또는 기타 유전자 변형된 동종이계 T 세포 면역요법으로 치료된 환자는 2차 악성종양이 발생할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 2차 악성종양에 대해 평생 모니터링하는 단계를 포함한다.
본원에서 언급된 모든 공개 문헌, 특허, 및 특허 출원은 각각의 개별 공개, 특허, 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 제시된 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다. 그러나, 본원의 참조 문헌의 인용은 이러한 참조 문헌이 본 개시내용에 대한 종래 기술임을 인정하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 참조로 포함된 참조 문헌에 제공된 임의의 정의 또는 용어가 본원에 제공된 용어 및 논의와 상이한 경우, 본 용어 및 정의가 좌우한다.
본 개시내용은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 이는 추가로 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참조문헌의 내용은 명시적으로 본원에 참조로서 인용된다.
본 출원에 의해 제공된 개시내용은 상기 기재된 방법에 추가로 또는 이의 조합으로서 다양한 방법으로 사용될 수 있다. 하기는 본 출원에 제공된 본 개시내용으로부터 유래될 수 있는 예시적인 방법의 모음이다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 개선된 임상적 효능 및/또는 감소된 독성을 갖는 면역요법 생성물을 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 면역요법 생성물은 혈액 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는 세척되어, 예를 들어 혈장 분획이 제거되고, 후속 처리 단계를 위해 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 놓여진다. 일부 실시형태에서, 세포는 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 세척된다. 일부 실시형태에서, 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 부족하다. 일부 실시형태에서, 세척 단계는 제조자의 지시에 따라 반자동 "유동식" 원심분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포처리기, Baxter)로 달성된다. 일부 실시형태에서, 세척 단계는 제조사의 지시에 따라 접선 흐름 여과(TFF)로 달성된다. 일부 실시형태에서, 세포는 예를 들어 무 Ca++Mg++ PBS와 같은 세척 후 다양한 생체적합성 완충액에서 재현탁된다. 특정한 실시형태에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고, 세포는 배양 배지에서 바로 재현탁된다.
일부 실시형태에서, 방법은 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심분리 및 적혈구 용해에 의한 말초 혈액으로부터 백혈구의 제조와 같은 밀도-기반 세포 분리법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 백혈구성분채집술을 포함한다.
일부 실시형태에서, 선택 단계의 적어도 일부는 선택 시약으로의 세포의 인큐베이션을 포함한다. 예를 들어 하나 이상의 상이한 세포 유형의 선택을 위해 하나 이상의 선택 시약을 사용하여 수행될 수 있는 선택 방법의 일부로서의 선택 시약(들)으로의 인큐베이션은 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포내 마커, 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포 내 또는 세포 상의 존재 또는 발현을 기반으로 한다. 일부 실시형태에서, 상기 마커를 기반으로 분리를 위한 선택 시약(들)을 사용하는 임의의 알려진 방법이 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 선택 시약(들)은 친화성 또는 면역친화성-기반 분리를 초래한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서 선택은 하나 이상의 마커, 일반적으로 세포 표현 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준을 기반으로 세포 및 세포 집단의 분리를 위한 시약(들)으로의 인큐베이션, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너로의 인큐베이션 이후 일반적으로 세척 단계와 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터의 항체 또는 결합 파트너에 결합한 세포의 분리 단계를 포함한다.
상기 처리의 일부 실시형태에서, 일정 부피의 세포는 목적하는 친화성-기반 선택 시약의 양과 혼합된다. 면역친화성-기반 선택은 분리되는 세포와 세포 상의 마커에 특이적으로 결합하는 분자, 예를 들어 고체 표면, 예를 들어 입자 상의 항체 또는 다른 결합 파트너 사이의 유리한 에너지 상호작용을 초래하는 임의의 시스템 또는 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시형태에서, 방법은 세포의 마커에 특이적인 선택제(예를 들어, 항체)로 코팅되는 비드, 예를 들어 자성 비드와 같은 입자를 사용하여 수행된다. 에너지적으로 유리한 상호작용을 촉진하는 것을 보조하도록 일정한 세포 밀도 대 입자(예를 들어, 비드) 비로, 셰이킹 또는 혼합과 함께, 입자(예를 들어, 비드)는 튜브 또는 백과 같은 용기에서 세포와 인큐베이션 또는 혼합될 수 있다. 다른 경우에, 방법은 선택의 전부 또는 일부가 예를 들어 원심분리 회전 하에서 챔버의 내부 공동에서 수행되는 세포의 선택을 포함한다. 일부 실시형태에서, 선택 시약, 예컨대 면역친화성-기반 선택 시약으로의 세포의 인큐베이션은 챔버에서 수행된다.
일부 실시형태에서, 챔버의 공동에서 상기 선택 단계 또는 이의 일부(예를 들어, 항체-코팅된 입자, 예를 들어 자성 비드로의 인큐베이션)를 실시함으로써, 사용자는 다양한 용액의 부피와 같은 특정한 파라미터, 처리 동안 용액의 첨가와 이의 타이밍을 제어할 수 있고, 이는 다른 사용가능한 방법에 비해 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 인큐베이션 동안 공동의 액체 부피를 감소시키는 능력은 선택에서 사용된 입자(예를 들어, 비드 시약)의 농도를 증가시킬 수 있으며, 이에 따라 공동의 세포의 총 수에 영향을 미치지 않으면서 용액의 화학적 포텐셜을 증가시킬 수 있다. 이는 결과적으로 처리되는 세포와 선택을 위해 사용된 입자 사이의 쌍별 상호작용을 향상시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, 본원에 기재된 시스템, 회로 및 제어와 관련될 때 챔버에서 인큐베이션 단계를 수행하는 것은, 인큐베이션 동안 사용자가 목적하는 시간(들)에서 용액의 진탕을 실시하는 것을 허용하며, 이는 상호작용을 개선시킬 수도 있다.
일부 실시형태에서, 선택 단계의 적어도 일부는 챔버에서 수행되고, 이는 선택 시약으로의 세포의 인큐베이션을 포함한다. 상기 처리의 일부 실시형태에서, 일정 부피의 세포는, 제조사의 지시에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 일정 부피의 세포의 선택을 위해 튜브 또는 용기에서 유사한 선택을 수행한 경우 일반적으로 이용되는 것보다 훨씬 적은 목적하는 소정량의 친화성-기반 선택 시약과 혼합된다. 일부 실시형태에서, 선택 시약(들)의 양은, 제조사의 지시에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 동일한 부피의 세포에 대한 튜브 또는 용기-기반 인큐베이션에서 세포 선택에 이용된 동일한 선택 시약(들)의 양의 5% 이하, 10% 이하, 15% 이하, 20% 이하, 25% 이하, 50% 이하, 60% 이하, 70% 이하, 또는 80% 이하이다.
일부 실시형태에서, 선택, 예를 들어 세포의 면역친화성-기반 선택을 위해, 세포는 농축 및/또는 고갈되고자 하는 세포 상의 표면 마커에 특이적으로 결합하지만 조성물의 다른 세포 상의 표면 마커에는 결합하지 않는 분자, 예컨대 항체와 같은 선택 시약을 갖는 선택 완충액을 또한 함유하는 조성물의 챔버에서 인큐베이션되고, 이는 스캐폴드, 예컨대 중합체 또는 표면, 예를 들어 비드, 예를 들어 CD4 및 CD8에 특이적인 모노클로날 항체에 결합된 자성 비드와 같은 자성 비드에 선택적으로 결합된다. 일부 실시형태에서, 기재된 것과 같이, 선택이 쉐이킹 또는 회전과 함께 수행되는 경우, 거의 동일 또는 유사한 효율의 동일한 수의 세포 또는 동일한 부피의 세포의 선택을 달성하기에 일반적으로 필요할 수 있거나 달성하는 데 사용되는 선택 시약의 양에 비해 그 양 미만의 양(예를 들어, 실질적으로 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이하의 양)으로 챔버의 공동 내 세포에 첨가된다. 일부 실시형태에서, 인큐베이션은 예를 들어 10 mL 내지 200 mL, 예컨대 적어도 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL의 시약의 인큐베이션으로, 목적 부피를 달성하기 위해 세포에 선택 완충액 및 선택 시약을 첨가하여 수행된다. 일부 실시형태에서, 선택 완충액과 선택 시약은 세포에 첨가하기 전에 사전 혼합된다. 일부 실시형태에서, 선택 완충액과 선택 시약은 세포에 별도로 첨가된다. 일부 실시형태에서, 선택 인큐베이션은 주기적인 온건 혼합 조건으로 수행되며, 이는 에너지적으로 유리한 상호작용을 촉진하는 것을 보조하며, 이로써 높은 선택 효율을 달성하면서 적은 전체 선택 시약의 사용을 허용할 수 있다.
일부 실시형태에서, 선택 시약에 의한 인큐베이션의 총 지속기간은 약 5분 내지 6시간, 예컨대 30분 내지 3시간, 예를 들어 적어도 약 30분, 60분, 120분 또는 180분이다.
일부 실시형태에서, 인큐베이션은 일반적으로 예컨대 (약) 80 g 내지 100 g(예를 들어, 적어도 (약) 80 g, 85 g, 90 g, 95 g, 또는 100 g)의 챔버 또는 다른 용기의 벽 또는 샘플에서의 RCF에서와 같이, 일반적으로 상대적으로 낮은 힘 또는 속도에서, 예컨대 세포를 펠렛화하기 위해 사용된 것보다 낮은 속도, 예컨대 약 600 rpm 내지 1700 rpm(예를 들어, 적어도 (약) 600 rpm, 1000 rpm, 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm에서), 회전하는 것과 같은 혼합 조건 하에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 회전은 회전 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10초 동안의 휴지, 예컨대 대략 1 또는 2초의 회전 후 대략 5, 6, 7, 또는 8초 동안의 휴지와 같은 상기 낮은 속도에서의 회전 후 휴지 시간으로 반복된 간격을 사용하여 수행된다.
일부 실시형태에서, 상기 처리는 챔버가 통합된 완전 밀폐 시스템 내에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 이러한 처리(및 일부 실시형태에서, 또한 성분채집술 샘플과 같은 세포를 함유하는 샘플을 세척하는 이전의 세척 단계와 같은 하나 이상의 추가 단계)는 자동화 방식으로 수행되어, 세포, 시약, 및 다른 성분이 적절한 시점에 챔버로 끌어당겨지고 외부로 밀려나고 원심분리가 실시되어 자동화된 프로그램을 사용하여 단일 밀폐 시스템에서 세척과 결합 단계가 완료되도록 한다.
일부 실시형태에서, 세포 및 선택 시약 및/또는 시약들의 인큐베이션 및/또는 혼합 후, 인큐베이션된 세포는 특정 시약(들)의 존재 또는 부재에 기초하여 세포를 선택하기 위해 분리된다. 일부 실시형태에서, 분리는 선택 시약으로의 세포의 인큐베이션이 수행된 동일한 밀폐 시스템에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 선택 시약으로 인큐베이션한 후, 선택 시약이 결합된 세포를 포함하는 인큐베이션된 세포는 세포의 면역친화성-기반 분리를 위한 시스템으로 옮겨진다. 일부 실시형태에서, 면역친화성-기반 분리를 위한 시스템은 자기 분리(magnetic separation) 컬럼이거나 이를 함유한다.
일부 실시형태에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포내 마커, 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재를 기반으로 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 마커를 기반으로 분리를 위한 임의의 알려진 방법이 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 분리는 친화성 또는 면역친화성-기반 분리이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서 단리는 하나 이상의 마커, 일반적으로 세포 표현 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준을 기반으로 하는 세포 및 세포 집단의 분리, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너로의 인큐베이션 이후 일반적으로 세척 단계와 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터의 항체 또는 결합 파트너에 결합한 세포의 분리 단계를 포함한다.
상기 분리 단계는 시약이 결합된 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택, 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합되지 않은 세포가 유지되는 음성 선택을 기반으로 할 수 있다. 일부 예에서, 두 분획은 모두 추가 사용을 위해 유지된다.
일부 실시형태에서, 음성 선택은 목적하는 집단 이외에 세포에 의해 발현된 마커를 기반으로 분리가 최상으로 수행되도록 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 이용가능한 항체가 이용가능하지 않는 경우에 특히 유용할 수 있다.
분리는 특정 세포 집단 또는 특정 마커를 발현하는 세포의 100% 풍부화 또는 제거를 초래할 필요는 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 양성 선택 또는 이에 대한 풍부화는 상기 세포의 수 또는 백분율이 증가하지만 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재를 초래할 필요는 없다는 것을 의미한다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택 또는 이에 대한 제거, 또는 고갈은 상기 세포의 수 또는 백분율이 감소하지만 모든 상기 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다는 것을 의미한다.
일부 예에서, 다회의 분리 단계가 수행되고, 여기서 하나의 단계로부터의 양성 선택 분획 또는 음성 선택 분획은 후속 양성 선택 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계에 적용된다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는 예컨대 각각 음성 선택에 표적화된 마커에 특이적인 복수의 항체 또는 결합 파트너로 세포를 인큐베이팅하는 것과 같이, 동시에 다중 마커를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다중 세포 유형은 다양한 세포 유형에서 발현된 복수의 항체 또는 결합 파트너로 세포를 인큐베이팅함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 실시형태에서, 높은 수준의 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및/또는 CD45RO+T 세포를 발현하거나 양성 세포와 같은 T 세포의 특정 하위집단이 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, CD3+, CD28+T 세포는 항-CD3/항-CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T 세포 확장제)를 사용하여 양성 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포의 집단은 나이브 표현형(CD45RA+ CCR7+)을 갖는 T 세포에 대해 풍부화된다.
일부 실시형태에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포 집단에 대한 풍부화, 또는 음성 선택에 의한 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 실시형태에서, 양성 또는 음성 선택은 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 상대적으로 높은 수준(markerhlgh)으로 발현된(마커+) 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제로 세포를 인큐베이팅함으로써 달성된다.
특정 실시형태에서, 생물학적 샘플, 예를 들어 PBMC 또는 다른 백혈구 샘플은 CD4+ T 세포의 선택에 적용되며, 여기서 음성 및 양성 분획 둘 모두가 유지된다. 특정한 실시형태에서, CD8+ T 세포는 음성 분획으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 생물학적 샘플은 CD8+ T 세포의 선택에 적용되며, 여기서 음성 및 양성 분획 둘 모두가 유지된다. 특정한 실시형태에서, CD4+ T 세포는 음성 분획으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, T 세포는 비(non)-T 세포, 예컨대 B 세포, 단핵구, 또는 다른 백혈구 세포, 예컨대 CD14 상에 발현된 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 실시형태에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계는 CD4+헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포를 분리하기 위해 사용된다. 상기 CD4+ 및 CD8+집단은 하나 이상의 나이브, 기억, 및/또는 효과기 T 세포 하위집단에서 상대적으로 높은 정도로 발현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위집단으로 추가 분류될 수 있다.
일부 실시형태에서, CD8+세포는 각각의 하위집단과 관련된 표면 항원을 기반으로 한 양성 또는 음성 선택에 의한 것과 같이 나이브, 중추 기억, 효과기 기억, 및/또는 중추 기억 줄기 세포로 추가로 풍부화되거나 고갈된다. 일부 실시형태에서, 중추 기억 T(TCM) 세포에 대한 풍부화는 효능을 증가시키기 위해 수행되어, 예컨대 투여 후 장기간 생존, 확장, 및/또는 생착을 개선하며, 이는 일부 실시형태에서 상기 하위집단에서 특히 강력하다. 일부 실시형태에서, TcM-풍부 CD8+T 세포 및 CD4+T 세포를 조합하는 것은 추가로 효능을 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 나이브 표현형(CD45RA+ CCR7+)을 갖는 T 세포에 대한 풍부화는 효능을 향상시킨다.
일 실시형태에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L 하위세트 모두에 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하는 것과 같이 CD62L CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+분획이 풍부화되거나 고갈될 수 있다.
일부 실시형태에서, 중추 기억 T(TCM) 세포에 대한 풍부화는 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및/또는 CD127의 양성 또는 높은 표면 발현을 기반으로 하고; 일부 실시형태에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택을 기반으로 한다. 일부 실시형태에서, TCM 세포에 대해 풍부화된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD 14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈, 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 풍부화에 의해 수행된다. 일 실시형태에서, 중추 기억 T(TCM) 세포에 대한 풍부화는 CD4 발현을 기반으로 선택된 세포의 음성 분획으로 개시하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현을 기반으로 한 음성 선택 및 CD62L을 기반으로 한 양성 선택에 적용된다. 일부 실시형태에서, 상기 선택은 동시에 수행되고, 다른 실시형태에서는 어느 순서로든 순차적으로 수행된다. 일부 실시형태에서, CD8+세포 집단 또는 하위집단의 제조에 사용된 동일한 CD4 발현-기반 선택 단계는 또한 CD4+세포 집단 또는 하위집단을 생성하도록 선택되어, CD4-기반 분리로부터의 양성 분획 및 음성 분획 둘 모두가 선택적으로 하나 이상의 추가 양성 선택 단계 또는 음성 선택 단계 후 방법의 후속 단계에서 유지되고 사용된다.
특정 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 CD4+ 세포의 선택에 적용되며, 여기서 음성 분획 및 양성 분획 둘 모두가 유지된다. 이후, 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현을 기반으로 하는 음성 선택과 CD62L 또는 CCR7과 같은 중추 기억 T 세포의 마커 특징을 기반으로 하는 양성 선택에 적용되며, 여기서 양성 선택 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 식별하는 방식으로 나이브 세포, 중추 기억 세포 및 효과기 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 실시형태에서, 나이브 CD4+T 림프구는 CD45RO, CD45RA+, CD62L+, CD4+T 세포이다. 일부 실시형태에서, 중추 기억 CD4+세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 실시형태에서, 효과기 CD4+세포는 CD62L 및 CD45RO이다. 일부 실시형태에서, 나이브 표현형을 갖는 T 세포는 CD45RA+ CCR7+이다.
일 예에서, 음성 선택으로 CD4+ 세포를 농축시키기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 일반적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리를 허용하기 위해, 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 세포 및 세포 집단은 면역자기(또는 친화성 자기) 분리 기술을 사용하여 분리 또는 단리된다.
일부 실시형태에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 상자성 비드(예를 들어, Dynalbeads 또는 MACS 비드와 같음)와 같은 자기 반응성 입자 또는 마이크로입자와 같은 작은 자화가능 또는 자기 반응성 물질로 인큐베이션된다. 자기 반응성 물질, 예를 들어 입자는 일반적으로 분리되기 위한, 예를 들어 음성 선택 또는 양성 선택되기 위한 세포(들), 또는 세포 집단 상에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너, 예를 들어 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 부착된다.
일부 실시형태에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특정 결합 구성원에 결합된 자기 반응성 물질을 포함한다. 자기 분리 방법에 사용된 잘 알려진 자기 반응 물질이 다수 존재한다.
인큐베이션은 일반적으로 항체 또는 결합 파트너, 또는 분자, 예컨대 자성 입자 또는 비드에 부착되어 있는 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는, 2차 항체 또는 다른 시약이 샘플 내 세포 상에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건 하에서 수행된다.
일부 실시형태에서, 샘플은 자기장에 배치되고, 자기 반응성 또는 자화가능 입자가 부착된 세포는 자석에 유인되어 미표지 세포로부터 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 유인되는 세포가 유지되고; 음성 선택의 경우, 유인되지 않은 세포(미표지 세포)가 유지된다. 일부 실시형태에서, 양성 선택 및 음성 선택의 조합은 동일한 선택 단계 동안 수행되며, 여기서 양성 분획 및 음성 분획은 유지되고 추가로 처리되거나 추가 분리 단계를 거친다.
일부 실시형태에서, 자기 반응성 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소, 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정한 실시형태에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정한 실시형태에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지된 후, 세포-유형 특이적 2차 항체 또는 다른 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정한 실시형태에서, 스트렙타비딘-코팅된 자성 입자는 비오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 실시형태에서, 자기 반응성 입자는 후속적으로 인큐베이션, 배양 및/또는 조작되는 세포에 부착된 채 유지되며; 일부 실시형태에서, 입자는 환자에 투여를 위해 세포에 부착된 채 유지된다. 일부 실시형태에서, 자화가능 또는 자기 반응성 입자는 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화가능한 입자의 제거 방법은 알려져 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체, 및 자화가능 입자 또는 절단가능 링커에 접합된 항체의 사용을 포함한다. 일부 실시형태에서, 자화가능 입자는 생분해성이다.
일부 실시형태에서, 친화성-기반 선택은 자기 활성화 세포 분류(MACS)(Miltenyi Biotec, 미국 캘리포니아주 오번 소재)를 통한다. 자기 활성화 세포 분류(MACS) 시스템은 자화된 입자가 부착된 세포의 고순도 선택이 가능하다. 특정한 실시형태에서, MACS는 외부 자기장의 인가 후 비표적 및 표적 종을 순차적으로 용출하는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 그 자리에서 유지되고, 부착되지 않은 종이 용출된다. 이후, 이러한 첫번째 용출 단계가 완료된 후, 자기장에 갇혀 용출되지 못한 종은 이들이 용출 및 회수될 수 있도록 하는 어떠한 방식으로 통제받지 않는다. 특정한 실시형태에서, 비-표적 세포는 표지되고, 이종 세포 집단으로부터 고갈된다.
일부 실시형태에서, 단리 또는 분리는 방법의 단리, 세포 제조, 분리, 처리, 인큐베이션, 배양, 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스, 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 실시형태에서, 시스템은 예를 들어 오류, 사용자 핸들링 및/또는 오염을 최소화하기 위해 밀폐 또는 멸균 환경에서 이러한 단계 각각을 수행하는 데 사용된다. 일 예에서, 시스템은 국제공개 WO 2009/072003호 또는 미국 특허출원공개 US 20110003380 A1호에 기재된 시스템이다.
일부 실시형태에서, 시스템 또는 장치는 예를 들어 통합 또는 자급식 시스템, 및/또는 자동화 또는 프로그래밍 가능 방식으로 단리, 처리, 조작, 및 제형화 단계 중 하나 이상을 수행한다. 일부 실시형태에서, 시스템 또는 장치는 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함하고, 이는 사용자가 처리, 단리, 조작, 및 제형화 단계의 다양한 실시형태의 프로그래밍, 제어, 결과 평가 및/또는 조정을 가능하게 하도록 한다.
일부 실시형태에서, 분리 및/또는 다른 단계는 예를 들어 밀폐 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준으로 세포의 자동 분리를 위해 CliniMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성요소는 통합된 마이크로컴퓨터, 자기 분리 장치, 연동 펌프, 및 다양한 핀치 밸브를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 통합 컴퓨터는 기기의 구성 요소를 제어하고 시스템이 표준화된 순서로 반복 절차를 수행하도록 유도한다. 일부 실시형태에서, 자기 분리 장치는 이동가능한 영구 자석과 선택 컬럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜빙 세트 전체의 유속을 제어하고 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 제어된 흐름과 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.
일부 실시형태에서, CliniMACS 시스템은 멸균, 비-발열성 용액으로 공급되는 항체-결합 자화가능 입자를 사용한다. 일부 실시형태에서, 자성 입자로의 세포 표지 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이후, 세포 제조 백을 튜빙 세트에 연결하고, 이를 차례로 완충액 함유 백과 세포 수집 백에 연결한다. 튜빙 세트는 사전 컬럼과 분리 컬럼을 포함하여 사전 조립된 멸균 튜빙으로 이루어지며 일회용이다. 분리 프로그램 개시 후, 시스템은 자동으로 세포 샘플을 분리 컬럼 상에 적용한다. 표지 세포는 컬럼 내에 유지되는 반면, 미표지 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 컬럼에 유지되지 않는다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 컬럼에 유지된다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장 제거 후 컬럼으로부터 용출되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정한 실시형태에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 실시형태에서 CliniMACS Prodigy 시스템은 원심분리에 의한 세포의 자동 세척 및 분획화를 허용하는 세포 처리 장치를 갖추고 있다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 온보드 카메라와 원본 세포 생성물의 거시적 층을 식별하여 최적의 세포 분획 평가변수를 결정하는 이미지 인식 소프트웨어를 포함할 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 자동으로 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 예를 들어 세포 분화 및 확장, 항원 로딩, 및 장기간 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 배지의 무균 제거와 보충을 허용할 수 있고, 세포는 통합 현미경을 사용하여 모니터링될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 세포 집단은 다수의 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포가 유체 스트림으로 운반되는 유세포 분석법을 통해 수집 및 풍부화(또는 고갈)된다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 세포 집단은 분취용 규모(FACS)-분류를 통해 수집 및 풍부화(또는 고갈)된다.특정한 실시형태에서, 본원에 기재된 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 조합하여 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩의 사용에 의해 수집 및 풍부화(또는 고갈)된다(예를 들어, 국제공개 WO 2010/033140호, 문헌[Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573]; 및 [Godin et al. (2008) J Biophoton. l(5):355-376] 참조). 두 경우 모두에서, 세포는 여러 마커로 표지되어 잘 정의된 T 세포 하위세트를 고순도로 단리할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 하기 위해 하나 이상의 검출가능한 마커로 표지된다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합을 기반으로 할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 대해 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 예를 들어 유세포 분석 검출 시스템과 병용하여, 유체 스트림, 예컨대 분취용 규모(FACS)를 포함하는 형광-활성화 세포 분류(FACS), 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩에 의해 수행된다. 상기 방법은 동시에 여러 마커를 기반으로 양성 선택 및 음성 선택을 허용한다.
일부 실시형태에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션 및/또는 조작 전 또는 후에, 세포를 동결, 예를 들어 동결보존하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 실시형태에서, 세포는 예를 들어 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 후 동결 용액에 현탁된다. 임의의 다양한 알려진 동결 용액과 파라미터가 일부 실시형태에서 사용될 수 있다. 일 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS, 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 수반한다. 이는 이후 각각 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 10% 및 4%가 되도록 배지와 1:1 희석된다. 이후 세포는 일반적으로 분당 1°의 속도로 -80℃로 동결되고, 액체 질소 저장 탱크의 증기상으로 저장된다.
일부 실시형태에서, 단리 및/또는 선택은 풍부한 T 세포, 예를 들어 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, 및/또는 CD8+ T 세포의 하나 이상의 주입 조성물을 유도한다. 일부 실시형태에서, 둘 이상의 별도의 주입 조성물은 단일 생물학적 샘플로부터 단리, 선택, 풍부화, 또는 수득된다. 일부 실시형태에서, 별도의 주입 조성물은 동일한 대상체로부터 수집, 채취, 및/또는 수득된 별도의 생물학적 샘플로부터 단리, 선택, 풍부화 및/또는 수득된다.
특정한 실시형태에서, 하나 이상의 주입 조성물은 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 (약) 100% CD3+ T 세포를 포함하는 풍부 T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 일 실시형태에서, 풍부 T 세포의 주입 조성물은 본질적으로 CD3+ T 세포로 이루어진다.
특정한 실시형태에서, 하나 이상의 주입 조성물은 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 (약) 100% CD4+ T 세포를 포함하는 풍부 CD4+ T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정한 실시형태에서, CD4+ T 세포의 주입 조성물은 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD8+ T 세포를 포함하고/하거나 CD8+ T 세포를 함유하지 않고/않거나 CD8+ T 세포를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 풍부 T 세포의 조성물은 본질적으로 CD4+ T 세포로 이루어진다.
특정한 실시형태에서, 하나 이상의 조성물은 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 (약) 100% CD8+ T 세포이거나 이를 포함하는 CD8+ T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정한 실시형태에서, CD8+ T 세포의 조성물은 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD4+ T 세포를 함유하고/하거나 CD4+ T 세포를 함유하지 않고/않거나 CD4+ T 세포를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 풍부 T 세포의 조성물은 본질적으로 CD8+ T 세포로 이루어진다.
일부 실시형태에서, 세포는 유전자 조작 이전에 또는 이와 관련하여 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양(culture), 배양(cultivation), 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 배양 또는 세포 배양을 위한 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙 세트, 밸브, 바이알, 배양 디쉬, 백, 또는 다른 용기에서 수행될 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에서 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단에서 세포의 증식, 확장, 활성화, 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고/하거나, 재조합 항원 수용체의 도입에 대한 것과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 것을 포함한다. 조건은 하나 이상의 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 약제, 예를 들어 영양물질, 아미노산, 항생제, 이온, 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체, 및 세포를 활성화하도록 설계된 임의의 다른 약제를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 자극 조건 또는 약제는 TCR 복합체의 세포내 신호전달 도메인을 자극 또는 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 약제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 신호 캐스케이드를 시작 또는 개시한다. 상기 약제는 TCR에 특이적인 것과 같은 항체, 예를 들어 항-CD3를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 자극 조건은 하나 이상의 약제, 예를 들어 공자극 수용체를 자극할 수 있는 리간드, 예를 들어 항-CD28을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 약제 및/또는 리간드는 비드 및/또는 하나 이상의 사이토카인과 같은 고체 지지체에 결합될 수 있다. 선택적으로, 확장 방법은 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 배양 배지에 첨가하는 단계(예를 들어, 적어도 약 0.5 ng/mL의 농도에서)를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 자극제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 실시형태에서, IL-2 농도는 적어도 약 10 유닛/mL이다. 일부 실시형태에서, 인큐베이션은 문헌[Riddell et al., Klebanoff et al.(2012) J Immunother. 35(9): 651― 660]에 대한 미국 특허 제6,040,177호, [Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82], 및/또는 [Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701]에 기재된 것과 같은 기술에 따라 수행된다.
일부 실시형태에서, T 세포는 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)와 같은 배양-개시 조성물에 피더 세포를 첨가하고(예를 들어, 생성된 세포 집단이 확장될 초기 집단의 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20, 또는 40개 이상의 PBMC 피더 세포를 함유하도록); 및 배양물을 인큐베이션(예를 들어, T 세포의 수를 확장시키기에 충분한 시간 동안)함으로써 확장된다. 일부 실시형태에서, 비분할 피더 세포는 감마-방사 PBMC 피더 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, PBMC는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rad 범위의 감마선으로 조사된다. 일부 실시형태에서, 피더 세포는 T 세포 집단의 첨가 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 실시형태에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어 적어도 약 25℃, 일반적으로 적어도 약 30℃, 일반적으로 (약) 37℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 비분열 EBV-형질전환 림프모세포양 세포(LCL)를 피더 세포로서 첨가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 실시형태에서, LCL 피더 세포는 적어도 약 10:1의 개시 T 림프구에 대한 LCL 피더 세포의 비와 같은 임의의 적합한 양으로 제공된다.
일 실시형태에서, 항원-특이적 T 세포, 예컨대 항원-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+T 세포는 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 항원으로 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원-특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고 동일한 항원으로 시험관내에서 세포를 자극함으로써 사이토메갈로바이러스 항원에 대해 생성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에서 인큐베이션의 적어도 일부는 원심분리 챔버의 내부 공동에서 수행되고, 예를 들어 국제공개 WO 2016/073602호에 기재된 것과 같은 원심분리 회전 하에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 원심분리 챔버에서 수행된 인큐베이션의 적어도 일부는 자극 및/또는 활성화를 유도하기 위해 시약(들)과의 혼합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 선택된 세포와 같은 세포는 원심분리 챔버에서 자극 조건 또는 자극제와 혼합된다. 상기 처리의 일부 실시형태에서, 일정 부피의 세포는 세포 배양 플레이트 또는 다른 시스템에서 유사한 자극을 수행할 때 일반적으로 이용되는 것보다 훨씬 적은 소정량의 하나 이상의 자극 조건 또는 약제와 혼합된다.
일부 실시형태에서, 자극제는 선택이 주기적 쉐이킹 또는 회전과 챔버, 예를 들어 튜브 또는 백에서 혼합 없이 수행되는 경우, 거의 동일 또는 유사한 효율의 동일한 수의 세포 또는 동일한 부피의 세포의 선택을 달성하기에 필요할 수 있거나 일반적으로 달성하는 데 사용되는 자극제의 양에 비해, 실질적으로 그 양 미만의 양(예를 들어, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이하의 양)으로 챔버의 공동 내 세포에 첨가된다. 일부 실시형태에서, 인큐베이션은 예를 들어 10 mL 내지 200 mL, 예컨대 적어도 (약) 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL의 시약의 인큐베이션으로, 목적 부피를 달성하기 위해 세포에 인큐베이션 완충액 및 자극제를 첨가하여 수행된다. 일부 실시형태에서, 인큐베이션 완충액과 자극제는 세포에 첨가하기 전에 사전 혼합된다. 일부 실시형태에서, 인큐베이션 완충액과 자극제는 세포에 별도로 첨가된다. 일부 실시형태에서, 자극 인큐베이션은 주기적인 온건 혼합 조건으로 수행되며, 이는 에너지적으로 유리한 상호작용을 촉진하는 것을 보조하며, 이로써 자극 및 세포 활성화를 달성하면서 총 자극제를 덜 사용하는 것을 허용할 수 있다.
일부 실시형태에서, 인큐베이션은 일반적으로 예컨대 (약) 80 g 내지 100 g(예를 들어, 적어도 (약) 80 g, 85 g, 90 g, 95 g, 또는 100 g)의 챔버 또는 다른 용기의 벽 또는 샘플에서 RCF에서, 일반적으로 상대적으로 낮은 힘 또는 속도에서, 예컨대 세포를 펠렛화하기 위해 사용된 것보다 낮은 속도, 예컨대 (약) 600 rpm 내지 1700 rpm에서(예를 들어, 적어도 (약) 600 rpm, 1000 rpm, 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm에서), 회전하는 것과 같은 혼합 조건 하에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 회전은 회전 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10초 동안의 휴지, 예컨대 대략 1 또는 2초의 회전 후 대략 5, 6, 7, 또는 8초 동안의 휴지와 같은 상기 낮은 속도에서의 회전 후 휴지 시간으로 반복된 간격을 사용하여 수행된다.
일부 실시형태에서, 예를 들어 자극제와의 인큐베이션 총 지속기간은 약 1시간 내지 96시간, 1시간 내지 72시간, 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간, 예컨대 적어도 (약) 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간 또는 72시간이다. 일부 실시형태에서, 추가 인큐베이션은 약 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간(경계 포함) 동안이다.
일부 실시형태에서, 자극 조건은 하나 이상의 사이토카인과 함께 및/또는 이의 존재 하에서 풍부한 T 세포의 조성물을 인큐베이팅, 배양(culturing), 및/또는 배양(cultivating)하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 사이토카인이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 사이토카인이다. 특정한 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 T 세포에 의해 발현되고/되거나 T 세포에 내인성인 수용체에 결합하고/하거나 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 사이토카인의 4-알파-나선 다발 패밀리의 구성원이거나 이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 사이토카인의 4-알파-나선 다발 패밀리의 구성원은 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-4(IL-4), 인터류킨-7(IL-7), 인터류킨-9(IL-9), 인터류킨 12(IL-12), 인터류킨 15(IL-15), 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF), 및 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시형태에서, 자극은 예를 들어 형질도입 전에 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래한다.
일부 실시형태에서, 제공된 방법, 용도, 제조품 또는 조성물과 관련하여 사용된 T 세포와 같은 조작된 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 본원에 기재된 CAR 또는 TCR을 발현하도록 유전적으로 조작된 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 재조합 수용체 및/또는 다른 분자를 인코딩하는 핵산 서열의 도입, 전달 또는 이동에 의해 조작된다.
일부 실시형태에서, 조작된 세포의 제조 방법은 재조합 수용체(예를 들어, 항-CD19 CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 예를 들어 자극 또는 활성화 세포와 같은 세포로 도입하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 재조합 단백질은 임의의 기재된 것과 같은 재조합 수용체이다. 세포에서 재조합 수용체와 같은 재조합 단백질을 인코딩하는 핵산 분자의 도입은 다수의 알려진 벡터 중 임의의 것을 사용하여 수행될 수 있다. 상기 벡터는 렌티바이러스 및 감마레트로바이러스 시스템을 포함하는 바이러스 및 비바이러스 시스템뿐 아니라 PiggyBac 또는 Sleeping Beauty-기반 유전자 전달 시스템과 같은 트랜스포존-기반 시스템을 포함한다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질도입, 트랜스포존, 및 전기천공을 통한 것을 포함하는 수용체를 인코딩하는 핵산의 전달 방법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조작은 풍부 T 세포의 하나 이상의 조작된 조성물을 생성한다.
특정한 실시형태에서, 자극된 T 세포의 하나 이상의 조성물은 풍부 T 세포의 2개의 개별 자극된 조성물이거나 이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 풍부화된 T 세포의 2개의 개별 조성물, 예를 들어 동일한 생물학적 샘플로부터 선택, 단리, 및/또는 풍부화된 풍부 T 세포의 2개의 개별 조성물은 개별적으로 조작된다. 특정한 실시형태에서, 2개의 개별 조성물은 풍부 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 2개의 개별 조성물은 풍부 CD8+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 풍부 CD4+ T 세포 및 풍부 CD8+ T 세포의 2개의 개별 조성물은 개별적으로 유전자 조작된다. 일부 실시형태에서, 동일한 조성물은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 둘 모두에 대해 풍부화되고, 이들은 함께 유전자 조작된다.
일 실시형태에서, T 림프구의 샘플은 대상체로부터의 PBMC의 백혈구성분채집술에 의해 준비된다. 일 실시형태에서, 백혈구성분채집술 샘플은 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포에 대한 양성 선택을 통해 추가로 T 림프구 풍부화된다. 일 실시형태에서, 림프구는 CAR 또는 외인성 TCR을 포함하도록 추가로 조작된다. CAR 및 TCR의 예 및 림프구 조작 방법은 본 개시내용의 다른 곳에 기재되어 있다. 일 실시형태에서, 방법은 IL-2의 존재 하에서 T 세포 주입 생성물을 생성하기 위해 조작된 림프구를 확장하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, 조작된 림프구는 IL-2의 존재 하에서 약 2 내지 7일 동안 확장된다.
대상체가 초기에 반응하고 이후에 재발하는 상황 하에서, 대상체는 컨디셔닝 화학요법 및 악시캅타젠 실로류셀의 두번째 과정에 적합할 수 있다. 재치료는 다음과 같은 조건 하에서 투여될 수 있다: 대상체가 PR 또는 CR을 가짐; 대상체의 질환이 후속 진행됨; 질환 진행 후 및 재치료 전에 생검에 의해 국소적으로 확인된 CD19 종양 발현; 대상체는 사전 악시캅타젠 실로류셀 사용을 제외하고, 원래 연구 적격성 기준을 계속하여 충족함. 적격성을 확인하기 위해 시험자가 결정한 것과 같이, 임상적으로 제시된 경우, 선별 평가를 반복해야 하고; 대상체는 림프종 치료에 대한 후속 치료를 받지 않았고; 탈모증을 제외한, 컨디셔닝 화학요법(플루다라빈 및 사이클로포스파미드)과 관련된 독성은 등급 1 이하로 해결되었거나 재치료 전 베이스라인으로 돌아왔고; 대상체는 알려진 중화 항체를 갖지 않는다(예외: 비-중화 항체가 발생하는 경우, 대상체는 원래 연구 적격성 기준을 충족하는 경우 재치료될 수 있음).
실시예
실시예 1
CLINICAL TRIAL-1은 재발성/난치성 NHL 환자를 악시캅타젠 실로류셀로 치료한 임상 연구이다. 악시캅타젠 실로류셀은 CD19-유도 유전자 변형된 자가유래 T 세포 면역요법이고, 이는 채취되고, CD28 및 CD3-제타 공자극 도메인에 연결된 항-CD19 단쇄 가변 단편(scFv)을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 레트로바이러스 형질도입에 의해 생체외에서 유전자 변형시킨 환자 자체의 T 세포를 포함한다. 환자는 권장된 사전 치료를 받았음에도 미만성 거대 B-세포 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종, 또는 난치성 질환과 변형된 여포성 림프종을 앓았을 수 있다. 환자는 저용량 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 컨디셔닝 레지먼을 받은 후 체중 킬로그램당 2×106개의 항-CD19 CAR T 세포의 표적 용량을 받았다. (문헌[Neelapu, SS et al. 2017, N Engl J Med 2017;377(26):2531-44]).
CLINICAL TRIAL-1 환자로부터의 바이오마커 데이터를 확장된 통계 분석 계획에 따라 치료 효능 및 독성뿐만 아니라 생성물 적합성과 차등적으로 관련된 반응 및 파라미터의 상관관계에 대해 분석했다. 여러 상관관계가 밝혀졌다. CLINICAL TRIAL-1(NCT02348216)의 환자로부터의 이용가능한 샘플을 분석하였다. 안전성 및 효능 결과는 이전에 보고되었다. (문헌[Neelapu, SS et al. 2017, N Engl JMed 2017;377(26):2531-44]; [Locke FL et al. 2019]; [Lancet Oncol. 2019 Jan;20(1):31-42. doi:10.1016/S1470 -2045(18)30864-7. Epub 2018 12월 2일]). 지속가능한 반응은 데이터 컷오프 시점에 진행중 반응을 보인 환자를 지칭한다. 재발은 CR 또는 PR을 달성한 후 질환 진행을 경험한 환자를 지칭한다. 최상의 반응으로 안정 또는 진행성 질환을 달성한 환자는 비반응 범주에 포함된다.
LBCL에 대한 기존의 예후 인자는 탐색 CLINICAL TRIAL-1 연구(문헌[Neelapu et al. NEJM. 2017])의 결과와 관련이 없었지만, 다른 속성들, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 적합성 및 조성(CCR7+CD45RA+ T 세포), 치료전 종양 부담 감소, 활성화된 CD8+PD-1+LAG-3+/-TIM-3-T 세포의 존재에 따른 면역 종양 미세환경(TME)은 효능과 관련되었다(문헌[Locke et al., Blood Advances, 2020https://doi.org/10.1182/bloodadvances.2020002394] 및 [Galon et al., ASCO, 2020https://ascopubs.org/doi/abs/10.1200/JCO.2020.38.15_suppl.3022]). 보다 큰 베이스라인 종양 부담(SPD 3721 mm2 이상)을 갖는 환자에서 종양 면역 상황(TIC)(예를 들어, 면역 세포의 밀도, 조성, 및 기능)을 추가로 조사하고, 이를 작은 베이스라인 종양 부담(SPD 3721 mm2 미만)과 비교함으로써, 특히 보다 큰 종양과 치료가 현저히 어려운 환자에서, 치료전 TIC에서의 골수성 염증과 반응의 지속성에 영향을 미치는 CAR-T 확장 사이의 관련성이 밝혀졌다.
상기 기재된 것과 같이 다중 면역조직화학(n=18) 및 유전자 발현 분석(N=30)에 의해 치료전 TIC 분석을 수행하였다(문헌[Rossi et al, Cancer Res July 1 2018 (78) (13 Supplement) LB-016; DOI: 10.1158/1538-7445.AM2018-LB-016], [Galon et al, Journal of Clinical Oncology 2020 (38) (15_suppl), 3022-3022 DOI: 10.1200/JCO.2020.38.15_suppl.3022 Journal of Clinical Oncology 38, no. 15_suppl (May 20, 2020) 3022-3022]). 활성화된 T 세포와 억제성 골수 시그니처를 추가로 조사하기 위해, T 세포(CD3D, CD8A, CTLA4, TIGIT) 및 골수 세포(ARG2, TREM2)에 대해 선택된 유전자의 평균 제곱근으로 지수를 유도하였다. 활성화된 T 세포와 억제성 골수 세포 지수 사이의 비는 Log2((T-세포 지수 +1)/골수 지수 +1))에 의해 결정되었다.
억제성 골수-관련 활성, 가장 현저하게는 ARG2, TREM2, 및 IL-8 유전자 발현과 관련된 치료전 면역 TME 특징이, CD19 발현의 기록된 손실 없이 반응하지 않았거나 재발했던 환자에서 상승하였다. 치료전 생검에서 ARG2 및 TREM2 수준은 CD8+ T-세포 밀도와 음의 관련성이 있었다. 지속가능한 반응을 달성한 높은 종양 부담을 갖는 환자는 재발된 높은 종양 부담을 갖는 환자에 비해, 악시캅타젠 실로류셀 이후, TME에서 낮은 치료전 ARG2 및 TREM2 수준과 향상된 CAR T-세포 확장을 가졌다. 치료전 생검에서 억제성 골수 세포 마커에 대한 T 세포의 높은 비는 CAR T-세포 확장(피크 및 종양 부담에 대해 정규화된 피크) 및 높은 종양 부담을 갖는 환자에서 지속적인 반응과 양의 관련성을 가졌다.
악시캅타젠 실로류셀은 강력한 CAR T-세포 확장과 함께 유리한 면역 TIC를 갖는 환자에서 높은 종양 부담을 극복할 수 있다. 유리한 면역 TME는 감소된 억제성 골수 세포 활성(낮은 ARG2 및 TREM2 발현) 및 증가된 T/M 비를 특징으로 한다. 이러한 데이터는 CAR T-세포 치료의 맥락에서 높은 TB를 극복하기 위한 가능한 실행가능한 전략을 제안한다.
골수 관련 유전자 시그니처는 재발 및 무반응자에서 진행중 반응자에 비해 상향조절된다. 도 1. 진행중 반응자와 재발자 및 무반응자를 비교하는 별도 발현된 유전자의 볼케이노 플롯. 배수 변경은 각각의 진행중 반응 그룹의 중앙값의 비에 의해 결정되었고, p-값은 Wilcoxon 테스트에서 유도되었다. 대수 변환에서 0을 피하기 위해 중앙값에 작은 상수 1을 추가하였다. ARG2, TREM2, IL8, C8G, 및 MASP2를 포함하는 재발자 및 무반응자 그룹에서의 상위 별도 발현된 유전자는 TME 골수성 염증과 관련이 있다. 패널에 대한 모든 하우스키핑 유전자의 기하 평균에 대한 발현 값의 비를 사용하여 유전자 수를 정규화한다. 하우스키퍼 정규화된 유전자 수는 관찰된 데이터와 동일한 카트리지에서 실행된 패널 표준을 사용하여 추가로 정규화된다.
보다 낮은 ARG2 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 ARG2 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 진행중 반응자가 재발자 및/또는 비반응자에 비해 치료전 종양에서 보다 낮은 수준의 ARG2를 발현한다는 것을 보여준다. 도 2. ARG2 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 ARG2 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 ARG2 유전자 수를 보여준다. 진행중 반응자는 녹색으로, 재발 환자는 주황색으로, 비반응자는 청색으로 도시하고, 재발된 비반응자(기타)는 황색으로 도시된다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
보다 낮은 TREM2 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 TREM2 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자에 비해 보다 낮은 수준의 TREM2in 치료전 종양을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 도 3. TREM2 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 TREM2 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 TREM2 유전자 수를 보여준다. 진행중 반응자는 녹색으로, 재발 환자는 주황색으로, 비반응자는 청색으로 도시하고, 재발된 비반응자(기타)는 황색으로 도시된다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
보다 낮은 IL8 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 IL8 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자에 비해 보다 낮은 수준의 IL8 치료전 종양을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 도 4. IL8 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 IL8 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 IL8 유전자 수를 보여준다. 진행중 반응자는 녹색으로, 재발 환자는 주황색으로, 비반응자는 청색으로 도시하고, 재발된 비반응자(기타)는 황색으로 도시된다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
보다 낮은 IL13 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 IL13 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자에 비해 보다 낮은 수준의 IL13 치료전 종양을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 도 5. IL13 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 IL13 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 IL13 유전자 수를 보여준다. 진행중 반응자는 녹색으로, 재발 환자는 주황색으로, 비반응자는 청색으로 도시하고, 재발된 비반응자(기타)는 황색으로 도시된다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
보다 낮은 CCL20 발현을 갖는 환자에 비해 치료전 종양에서 보다 높은 CCL20 발현(30명의 환자의 중앙값에 의해 결정됨)을 갖는 환자가 더 불량한 전체 생존율 및 무진행 생존율을 갖는다. 박스플롯은 재발자 및/또는 비반응자보다 치료전 종양에서 보다 낮은 수준의 CCL20을 발현하는 진행중 반응자를 보여준다. 도 6. CCL20 유전자 수로 그룹화된 CLINICAL TRIAL-1 대상체의 전체 및 무진행 생존 곡선. 로그-랭크 시험에 의해 결정된 유의성을 갖는 치료전 종양 샘플에서 CCL20 유전자 수에 대한 컷오프 중앙값 선택을 이용한 Kaplan-Meier 전체 및 무진행 생존 곡선. 박스플롯은 진행중 반응 그룹에 의한 CCL20 유전자 수를 보여준다. 진행중 반응자는 녹색으로, 재발 환자는 주황색으로, 비반응자는 청색으로 도시하고, 재발된 비반응자(기타)는 황색으로 도시된다. 비모수 Wilcoxon 테스트와 Kruskal-Wallis 테스트는 각각 2개 또는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
재발자 및 무반응자가 특히 보다 높은 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자에서 ARG2 및 TREM2의 보다 높은 발현을 보이는 반면, 지속성 반응의 환자는 ARG2 및 TREM2의 보다 낮은 발현을 보인다. 도 7. 베이스라인 종양 부담이 높은(SPDhi) 또는 낮은(SPDlow) 환자 내에서 진행중 반응과 치료전 T 세포 및 골수 세포 유전자 시그니처 사이의 관련성. 붉은색 값은 상응하는 유전자의 평균 발현보다 큰 값을 나타내는 반면, 청색 값은 상응하는 유전자의 평균 발현보다 작은 값을 나타낸다. 주입된 CD8의 총 개수(NCD8), 주입된 나이브 생성물의 총 개수(NNV), CAR-T 세포의 피크 수준 및 베이스라인 종양 부담에 대한 이의 값(CAR-T 피크/SPD)은 비교로서 포함된다.
CAR-T 피크 확장이 특히 큰 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자에서, 진행중 반응과 양의 관련성을 갖는다. 도 8. 높은(SPDhi) 또는 낮은(SPDlow) 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자 내에서 진행중 반응 그룹에 의한 피크 CAR-T 수준(세포/μL) 사이의 관련성. 진행중 반응자는 녹색으로 도시되고, 재발 환자는 주황색으로 도시되며, 비반응자는 청색으로 도시된다. 비모수 Kruskal-Wallis 테스트는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
T/골수 지수의 비가 특히 큰 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자에서, 진행중 반응과 양의 관련성을 갖는다. 도 9. 높은(SPDhi) 또는 낮은(SPDlow) 베이스라인 종양 부담을 갖는 환자 내에서 진행중 반응 그룹에 의한 TME 골수성 염증에 대한 T 세포의 비. 선택된 유전자를 사용하여 T 세포(CD3D, CD8A, CTLA4, TIGIT) 및 TME 골수성 염증(ARG2 및 TREM2) 지수를 유도하였다. 진행중 반응자는 녹색으로 도시되고, 재발 환자는 주황색으로 도시되며, 비반응자는 청색으로 도시된다. 비모수 Kruskal-Wallis 테스트는 3개 그룹의 비교를 위해 실시된다.
CAR-T 피크 확장은 T 세포 지수 및 T/골수 비와 양의 관련성을 갖는다. 도 10. T 세포를 갖는 CAR-T 세포의 피크 수준, TME 골수성 염증 지수, 및 TME 골수성 염증에 대한 T 세포의 비 사이의 관련성. Spearman 랭크 계수(R) 및 p 값이 도시되어 있다.
베이스라인 종양 부담에 대한 CAR-T 세포의 피크 수준은 T 세포 지수 및 T/골수 비와 양의 관련성을 갖는다. 도 11. T 세포를 갖는 베이스라인 종양 부담에 대한 CAR-T 세포의 피크 수준, TME 골수성 염증 지수, 및 TME 골수성 염증에 대한 T 세포의 비 사이의 관련성. Spearman 랭크 계수(R) 및 p 값이 도시되어 있다.
[표 2]
Figure pct00009
실시예 2
본 실시예는 실시예 1의 연속이며, 데이터는 동일한 환자 집단으로부터 및 동일한 방법에 의해 수득되었다. 목표는 Clinical trial-1로부터의 LBCL 환자, 특히 보다 높은 종양 부담과 보다 낮은 진행중 반응률을 갖는 환자에서 CAR T-세포 성능에 영향을 미칠 수 있는 치료전 종양 미세환경(TME) 특징을 체계적으로 분석하는 것이었다. 이 사후 분석에서는, clinical trial-1의 제1상 및 제2상 코호트 1 내지 3의 환자로부터의 평가가능한 샘플을 분석하였다. 이에 따라, n 값은 어세이 유형에 의해 변경될 수 있고, 코호트 1 및 2는 탐색 코호트를 나타낸다. (문헌[Locke FL, et al. Lancet Oncol. 2019;20:31-42]; [Neelapu SS, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544]). ZUMA-1에 추가된 여러 탐색적 안전 관리 코호트 중 하나인 코호트 3은 CAR T-세포 치료-관련 독성을 최소화하기 위해, 항경련제 레베티라세탐과 항-인터류킨-6 수용체 항체 토실리주맙의 예방적 사용을 평가하였다. (문헌[Locke FL, et al. Blood. 2017;130(suppl, abstr):1547]). 제1상 및 제2상 코호트 1 및 2의 환자는 2년 이상의 추적 관찰을 받았다(중앙값, 27.1개월). 코호트 3의 환자는 6개월 이상의 추적 관찰을 받았다(중앙값, 9.8개월). 치료전 면역 TME는 이전에 기재된 것과 같은, 다중 면역조직화학 및 유전자 발현 프로파일링(NanoString)에 의해 분석되었다. (문헌[Galon J, et al. J Clin Oncol. 2020;38(suppl, abstr):3022]; [Rossi JM, et al. Cancer Res. 2018;78(suppl, abstr):LB-016]). 베이스라인 종양 부담(SPD에 의한)은 이전에 기재된 것과 같이 평가되었다.(문헌[Locke FL, et al. Blood Adv. 2020;4:4898-4911]). 상기 공변량과 임상 결과의 상관 분석은 Spearman 순위 상관 또는 Wilcoxon 또는 Kruskal-Wallis 테스트에 의해 수행되었다. clinical trial-1의 제1상 및 제2상 코호트 1+2로부터의 (SPD에 의한) 중앙 종양 부담은 높은(3721 mm2 초과) 대 낮은(3721 mm2 이하) 종양 부담에 대한 컷오프로서 사용되었다. 반응 정의는 데이터 컷오프 시점의 반응에 따르고, 이는 다음과 같았다: 진행중/진행 중 반응자는 완전 반응 또는 부분 반응을 달성하고, 반응을 유지한 환자였고; 무반응자는 최상의 반응으로 안정적인 또는 진행성 질환을 경험한 환자였고; 재발자는 완전 반응 또는 부분 반응을 달성한 후 질환 진행을 경험한 환자였다.
Nanostring에 의해 발생된, 도 1로부터 수득된 골수 시그니처(실시예 1 참조)는 멀티플렉스 IHC를 이용하여 생성된 데이터를 사용하여 도시된 주요 TME 면역 세포 하위세트와 연관되었다. 도 12. 진행중 반응과 음의 관련성을 갖는 유전자(예를 들어, ARG2, IL13, IL8, C8G, CCL20, 및 TREM2)는 TME 이내의 골수 세포 집단과 양의 관련성을 가졌다. 반대로, 재발 환자와 비반응자에서 차등적으로 발현된 상위 유전자는 골수 세포(과립구, 호중구 및 M-MDSC)와 양의 관련성 및 TME 내에서 T 세포(예를 들어, CD8+ T 세포; FoxP3+CD9+ T 세포)와 음의 관련성을 보였다. 도 12. 억제성 골수 유전자 시그니처는 또한 암 고환 항원(CTA)과 양의 관련성을 갖는 것으로 나타났다. 도 13. CTA 유전자는 이전에 최상의 반응과 음의 관련성을 갖는 것으로 나타났다(문헌[Rossi JM, et al. Cancer Res. 2018;78(suppl, abstr):LB-016]). 유리한 면역 TME는 억제성 골수 세포 유전자 발현 시그니처에 비해 더욱 현저한 T 세포 유전자 발현 시그니처를 포함하였다. 상대적으로 더 높은 CAR T-세포 확장을 보인 치료전 TME에서 ARG2 및 TREM2 유전자 발현이 낮은 환자는 지속적 반응을 달성한 종양 부담에 상응한다. 이러한 데이터는 높은 종양 부담을 갖는 환자에서 지속적인 임상적 이점을 최대화하는 고기능성 CAR T 세포 생성물을 이용하는 것과 함께 이상 조절 장애 골수 관련 TME를 극복하는 것을 시사한다. 악시캅타젠 실로류셀은 유리한 면역 TME 및 높은 CAR T 세포 확장과 함께 환자에서 높은 치료전 종양 부담을 극복할 수 있다.
실시예 3
자가유래 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 치료인 악시캅타젠 실로류셀은 2 이상의 사전 전신성 요법 후 재발성/난치성 거대 B-세포 림프종(R/R LBCL)의 치료에 대해 승인된다(YESCARTA®(악시캅타젠 실로류셀)[생성물 특징 요약]. 네덜란드 암스테르담 소재: Kite Pharma EU B.V.; 2018; YESCARTA®(악시캅타젠 실로류셀)[패키지 삽입물]. 미국 캘리포니아주 산타모니카 소재: Kite Pharma, Inc; 2017). 악시캅타젠 실로류셀 관련 독성을 감소시키기 위해, 여러 탐색적 안전 관리 코호트가 CLINICAL TRIAL-1(NCT02348216), 난치성 LBCL에서 악시캅타젠 실로류셀의 탐색 제1상/제2상 연구에 추가되었다. 코호트 4는 초기 코르티코스테로이드 및 토실리주맙 사용으로 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사건(NE)의 중증도와 비율을 평가하였다. 1차 평가변수는 CRS 및 NE의 발생률 및 중증도였다. 환자는 컨디셔닝 요법 후 2×106개의 항-CD19 CAR T 세포/kg을 받았다. 41명의 환자는 악시캅타젠 실로류셀을 받았다. 임의의 등급의 CRS 및 NE의 발생률은 각각 93% 및 61%였다(등급 3 이상, 2% 및 17%). 등급 4 또는 5 CRS 또는 NE는 없었다. 초기 투여에도 불구하고, 코르티코스테로이드 치료를 필요로 하는 환자에서 누적 코르티손 등가 코르티코스테로이드 용량은 탐색 CLINICAL TRIAL-1 코호트에서 보고된 것보다 낮았다. 14.8개월의 추적관찰 중앙값에 따라, 객관적 반응률 및 완전 반응률은 각각 73% 및 51%였고, 치료 환자 중 51%는 진행중 반응을 보였다. 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙의 초기 및 측정된 용도는 악시캅타젠 실로류셀을 받는 R/R LBCL을 갖는 환자에서 등급 3 이상의 CRS 및 NE 발생률을 감소시킬 가능성이 있다.
CLINICAL TRIAL-1은 미국, 유럽, 캐나다, 및 이스라엘에서 실시되는 R/R LBCL에서 악시캅타젠 실로류셀의 단일-아암, 다기관, 등록 연구이다. 코호트 4 절차는 코호트 1+2에 대해 기재된 절차와 유사하였다. (문헌[Neelapu et al., N Engl J Med. 2017;377(26):2531-44]). 코호트 4의 주요 차이점은 CRS 및 NE 관리를 위한 레비티라세탐 예방의 사용과 초기 코르티코스테로이드 및 토실리주맙 개입이었다(도 14).
코호트 4의 적합한 환자는 2개 라인 이상의 전신 치료 후 R/R LBCL을 가졌거나 제1 라인 치료에 대해 난치성이었다(즉, 진행성 질환(PD) 또는 안정한 질환(6개월 이하의 기간 동안 안정한 질환을 갖는 최소 4 사이클 이상의 제1 라인 치료에 대해)의 최상의 반응). 이전 요법은 항-CD20 모노클로날 항체(종양이 CD20 음성이 아닌 경우)와 안트라사이클린 함유 화학요법 레지먼이 포함되어야 했다. 환자는 0 또는 1의 동부 종양학 협력 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group) 수행성 상태(performance status)를 갖도록 요구되었다. 추가적 포함 기준은 절대 호중구 수가 1,000 세포/μL 초과, 절대 림프구 수가 100 세포/μL 초과, 혈소판 수 75,000 세포/μL 초과, 적절한 장기 기능, 중추신경계 관여 없음, 및 활성 감염 없음이었다.
코호트 4 환자는 -5 내지 -3일차에 사이클로포스파미드(500 mg/m2/일) 및 플루다라빈(30 mg/m2/일)의 컨디셔닝 레지먼을 받았고, 0일차에 1회 용량의 악시캅타젠 실로류셀(표적 용량, 2×106개의 CAR T 세포/kg)을 받았다. 컨디셔닝 화학요법의 개시 전 브릿징 요법(표 3)을 시험자의 재량에 따라 허용했다(예를 들어, 선별 또는 베이스라인에서 벌키한 질환 또는 신속하게 진행하는 질환).
[표 3]
Figure pct00010
환자는 NE가 예방적 레베티라세탐의 중단 후 발생하는 경우, 등급 2 이상의 신경학적 독성의 발생 시 및 0일차에 개시하여 레베티라세탐(750 mg 1일 2회 경구 또는 정맥내)을 받았다. 환자가 임의의 등급 2 이상의 신경학적 독성을 경험하지 않는 경우, 레베티라세탐은 임상적으로 지시된 바에 따라 감량 및 중단되었다. 코르티코스테로이드 치료은 3일 후 및 등급 1 이상의 모든 등급 NE에 대해 개선이 없는 경우, 모든 등급 1 CRS를 관리하도록 개시되었다(도 14; 표 4). 토실리주맙은 등급 2 이상의 CRS, 및 등급 2 이상의 NE에서, 3일 후 개선이 없는 경우, 등급 1 CRS에서 개시되었다(표 4).
[표 4]
Figure pct00011
정식 가설은 시험되지 않았고, 모든 평가변수를 기술적으로 분석하였다. 코호트 4에서 1차 평가변수는 CRS 및 NE의 발생률 및 중증도였다. CRS는 수정된 Lee 등의 기준(문헌[Lee et al., Blood. 2014;124(2):188-95])에 따라 등급화되었고, NE는 이상 반응 표준 용어 기준 버전 4.03(문헌[U.S. Department of Health and Human Services. Common Terminology Criteria for Adverse Events(CTCAE) Version 4.03. 2010])에 따라 등급화되었다. 주요 안정성 관련 2차 평가변수는 다른 이상 반응의 발생과 안전성 실험실 값의 임상적으로 유의한 변화를 포함하였다. 주요 효능 관련 2차 평가변수는 시험자 평가에 따른 ORR, 반응 지속기간, PFS, OS, 혈중 항-CD19 CAR T-세포 수준, 및 혈청 내 사이토카인 수준을 포함하였다.
변형된 치료 의향 집단은 등록되고 1×106개 이상의 항-CD19 CAR T 세포/kg의 악시캅타젠 실로류셀 용량으로 처리된 환자를 포함하였다. 이러한 분석 세트는 모든 객관적 반응 분석 및 객관적 반응을 기반으로 한 평가변수에 대해 사용되었다. 안전성 분석 세트는 임의의 용량의 악시캅타젠 실로류셀로 처리된 모든 환자를 포함하였다. 코호트 4에서 종양 부담은 브릿징 후 컨디셔닝 화학요법 전 측정되었다. 누적 코르티코스테로이드 용량을 초기 입원 기간 동안 전신성 코르티손-등가 용량으로의 전환에 의해 계산하였다.
혈중 유전자-표시된 CAR T 세포를 나열하는 검증된 폴리머라아제 연쇄 반응을 사용하여 약동학 분석을 수행하였다(문헌[Neelapu et al., N Engl J Med. 2017;377(26):2531-44]; [Kochenderfer et al., J Clin Oncol. 2015;33(6):540-9]). 사이토카인을 포함하는 가용성 마커의 정량화를 위해 여러 시점에서 혈청을 수득하였다. 뇌척수액(CSF)은 적격성 확인 후, 컨디셔닝 화학요법 전, 악시캅타젠 실로류셀 주입 후 5일차(±3일), 및 4주차 방문(±3일)에 수집하였다. Meso Scale Discovery 또는 Luminex, the ProteinSimple Simple Plex, 또는 R&D Systems Quantikine® 효소-결합 면역흡착 어세이 키트로부터의 다중 어세이 키트를 사용하여 혈청 및 CSF에서 최대 46개의 가용성 마커를 측정했다. 생성물 세포를 유세포 분석법으로 특징분석하고, CD19-발현 표적 세포와의 공배양 후 효소 결합 면역흡착 어세이 또는 Meso Scale Discovery를 수행하였다.
하기 베이스라인 특징에 대한 균형을 맞춘 후 코호트 1+2(추적관찰 중앙값, 15.4개월)에 대한 코호트 4의 환자에 대한 결과의 기술적인 비교를 허용하기 위해, 탐색적(경향 스코어 매칭 분석) PSM 분석(문헌[Rosenbaum and Rubin, Biometriks. 1983;70(1):41-55]; [Austin, Multivariate Behav Res. 2011;46(3):399-424])을 수행하였다: 연령, 동부 종양학 협력 그룹(ECOG) 수행성 상태, 종양 부담, 국제 예후 지수 스코어, 사전 화학요법 라인의 수, 사전 백금 사용, 질환 단계, 및 락테이트 데히드로게나아제(LDH) 수준(보충 방법). 코호트 4와 매칭된 코호트 1+2의 사이에서, ±0.2 이내의 표준화된 평균차(문헌[Austin, Stat Med. 2008;27(12):2037-49]; [Imai et al., J R Statist Soc A. 2008;171:481-502])를 PSM 후 공변량의 밸런스를 평가하는 기준으로서 사용하였다. PSM 분석은 관찰 데이터를 사용할 때 그룹 간에 존재할 수 있는 측정되거나 측정되지 않은 베이스라인 특징의 잠재적 교란 효과를 최소화함으로써 두 그룹 간의 비교에서 편향을 감소시키는 통계적 방법을 나타낸다(문헌[Rosenbaum and Rubin, Biometriks. 1983;70(1):41-55]; [Austin, Multivariate Behav Res. 2011;46(3):399-424]). 이러한 접근법을 사용하여, 두 개별 그룹 간의 결과에 대한 치료 효과는 무작위 배정 시험 없이 추정될 수 있다(문헌[Rosenbaum and Rubin, Biometriks. 1983;70(1):41-55]; [Austin, Multivariate Behav Res. 2011;46(3):399-424]). 여기서, 사후 성향 스코어 매칭 분석을 수행하여 CLINICAL TRIAL-1의 코호트 4와 탐색 코호트 1+2를 기술적으로 비교하였다. 매칭 전후의 공변량 밸런스를 표준화된 평균차(SMD), 또는 표준 편차에 의해 나뉘어진 2개의 그룹 사이의 평균의 계산된 차이에 의해 평가하였다(문헌[Austin, Stat Med. 2008;27(12):2037-49]; [Imai et al., J R Statist Soc A. 2008;171:481-502]). 이러한 통계적 방법은 성향 스코어 매칭 분석에 대해 가장 널리 사용된 진단 측정기준이고, 이는 개선된 밸런스 이외의 인자에 의해 영향을 받지 않는다(예를 들어, 매칭된 하위그룹의 샘플 크기)(문헌[Austin, Stat Med. 2008;27(12):2037-49]; [Imai et al., J R Statist Soc A. 2008;171:481-502]). 이러한 이유로, 성향 스코어 매칭 비교의 타당성은 매칭 후 SMD 공변량 밸런스 진단을 통해 확립된다.
코호트 4 등록은 2018년 2월에 시작했다. 46명의 환자가 코호트 4에 등록하였고, 백혈구성분채집술을 시행하고, 41명의 환자가 악시캅타젠 실로류셀의 최소 표적 용량을 받았다. 후자 그룹은 변형된 치료 의향 및 안전성 분석 세트를 모두 포함하였다(도 15). 68%의 환자(n=28/41)는 악시캅타젠 실로류셀 수여 전 브릿징 요법을 받았고, 이때 17명의 평가가능한 환자 중에서 종양 부담의 중앙값 감소는 10%였다. 2019년 11월 6일자 데이터 컷오프 기준으로, 추적관찰 중앙값은 14.8개월이었다(8.9개월 내지 19.9개월 범위). 치료 환자 중에서, 연령 중앙값은 61세였다(19 내지 77세 범위, 표 5).
[표 5]
Figure pct00012
가장 일반적인 질환 하위유형은 미만성 LBCL(63%)이었다. 대부분의 환자(71%)는 질환 III기 또는 IV기였고, 63%는 3회 이상의 사전 치료를 받았고, 37%는 가장 최근의 화학요법에 대한 진행성 질환의 최상의 반응을 보였다. 생성물 특징은 CLINICAL TRIAL-1에서 이전에 보고된 것과 크게 유사하였다(표 6).
[표 6]
Figure pct00013
악시캅타젠 실로류셀을 받은 모든 환자는 AE를 경험했고, 이때 98%는 적어도 1개의 등급 3 이상의 사건을 경험하였다 - 가장 빈번하게 호중구감소증(39%), 감소된 호중구 수(29%), 빈혈(24%), 및 발열(24%; 표 7). 임의의 등급의 감염이 25(61%)명의 환자에서 보고되었고, 이때 최악 등급 3, 4, 및 5는 각각 8(20%)명, 1(2%)명, 및 1(2%)명의 환자에서 발생하였다.
[표 7]
Figure pct00014
AE로 인한 사망은 2건이었으며 둘 모두는 컨디셔닝 화학요법(13일차 폐렴) 또는 이전 화학요법(354일차 급성 골수성 백혈병; 후향적 분석에 의해 백혈구성분채집술 시 존재하는 기저 골수이형성 증후군으로부터 변형된 것으로 나타남)과 관련이 있는 것으로 보고되었다. 30일차 또는 이후에 존재하는 등급 3 이상의 혈구감수증은 환자의 39%에서 보고되었다(표 8).
[표 8]
Figure pct00015
CRS의 전체 발생률은 93%였고, 등급 3 CRS는 환자의 2%에서 발생했으며(표 9), CRS 상황에서 등급 4 CRS 사건 또는 사망은 없었다. 가장 일반적인 등급 3 이상의 CRS 증상은 발열(24%), 저혈압(8%) 및 저산소증(5%)이었다. CRS 발증까지의 시간 중앙값은 2일이었고, 이때 지속기간 중앙값은 6.5일이고, 모든 CRS 사건은 데이터 컷오프에 의해 해결되었다. NE는 환자의 61%에서 발생했으며, 이때 등급 3 이상의 NE 발생률은 17%였다(표 9).
[표 9]
Figure pct00016
코호트 4에서 가장 일반적인 등급 3 이상의 NE는 기면(7%), 착란 상태(7%), 및 뇌병증(5%)이었다. 등급 4 또는 5 NE는 없었다. 특히, 등급 3 이상의 NE는 브릿징 요법을 받은 환자에 제한되었다. NE 발증까지의 시간 중앙값은 6일이었고, 지속기간 중앙값은 8일이었다. 3명의 환자는 데이터 컷오프 시점에서 진행중 NE를 가졌다(표 10).
[표 10]
Figure pct00017
브릿징 요법은 코호트 4에서 등급 3 이상의 CRS 발생률 감소에 기여하지 않았다(브릿징, 1/28 [4%]; 브릿징 없음, 0/13 [0%]) 또는 NE(브릿징, 7/28 [25%]; 브릿징 없음, 0/13 [0%]). 총 73%의 환자가 코호트 4에서 코르티코스테로이드를 받았다. 코르티코스테로이드를 받은 환자 중에서, 누적 코르티손 등가 코르티코스테로이드 용량은 939 mg이었고, 43%는 5회 이상의 용량을 받았다(표 11). 토실리주맙은 환자의 76%에게 투여되었다.
[표 11]
Figure pct00018
코호트 4의 시험자가 평가한 객관적 반응률(ORR)은 73%였으며, 이때 CR 비율은 51%였다(도 16). 연구가 브릿징 요법의 효과를 평가하도록 설계되지는 않았지만, CR 비율이 브릿징 요법을 받은 환자에서 수치적으로 낮았음에도 불구하고(46% 대 62%), 브릿징 요법을 받았거나 받지 않은 코호트 4 환자에서 유사한 ORR이 관찰되었다(각각 71% 대 77%). 반응률의 12개월 지속기간의 KM 추정치는 71%였으며, 치료 환자의 51%는 데이터 컷오프 날짜에 반응을 유지하였다. 반응은 코르티코스테로이드 사용에 의해 영향을 받는 것으로 보이지 않았다(도 17). 코호트 4에서, 최소 1년간의 추적관찰에서 PFS 중앙값(도 18)과 OS 중앙값 둘 모두에 미달했다(PFS: 95% CI, 3.0개월 내지 추정 불가; OS: 95% CI, 15.8개월 내지 추정 불가). 12개월 PFS 및 OS 비율의 KM 추정치는 각각 57% 및 68%였다.
코호트 4에 대한 중앙값 피크 CAR T-세포 확장은 52.9 세포/혈액 μL였고, 악시캅타젠 실로류셀 주입 후 14일 이내에 관찰되었다(도 19a). CRS 및/또는 NE - IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-15, GM-CSF, 및 페리틴 포함 - 와 연관된 주요 염증성 혈청 바이오마커의 치료후 중앙값 수준은 악시캅타젠 실로류셀 주입 후 첫주 동안 피크에 달했다(도 19b; 표 12).
[표 12]
Figure pct00019
평가가능한 샘플과 등급 3 이상의 NE를 갖는 코호트 4 환자는 코호트 4에 걸쳐 낮고 유사한 베이스라인 수준에도 불구하고, 등급 0 내지 1의 NE를 갖는 환자보다 IFN-γ, IL-15, IL-2Rα, IL-6, 및 IL-8의 주입 후(5일차) 수치적으로 더 큰 뇌척수액 수준을 가졌다(도 20). 혈청 바이오마커에 대해 유사한 패턴이 관찰되었다(도 21).
코호트 4에서 관찰된 등급 3 이상의 CRS 및 등급 3 이상의 NE의 발생률(각각 2% 및 17%)은 코호트 1+2에서보다 수치적으로 낮았다(각각 12% 및 29%).3 코호트 4는 코호트 1+2와의 통계적 비교를 위해 설계되지 않았기 때문에, 탐색적 PSM 분석을 사용하여 주요 베이스라인 특징과 관련하여 이러한 코호트를 매칭하였다. PSM 후, 베이스라인 질환 및 생성물 특징은 일반적으로 더 적은 코호트 4 환자가 베이스라인 ECOG 수행성 상태가 1임에도 불구하고, 코호트 4 및 코호트 1+2의 환자 간에 유사하였다(49% 대 68%; 표 13).
[표 13]
Figure pct00020
특히, PSM 전에 코호트 1+2 및 코호트 4의 환자 간에 관찰된 등급 3 이상의 CRS 및 NE의 차이는 매칭 후 유지되었다. PSM 후 CR 비율은 코호트 1+2에 비해 코호트 4에서 수치적으로 더 낮았지만, 진행중 반응률은 유사하게 유지되었다. 임상 결과는 CAR 관련 염증 사건(예를 들어, IFN-γ, IL-2, IL-8, C-반응성 단백질, 페리틴, GM-CSF)과 연관된 주요 염증성 가용성 바이오마커의 보다 낮은 수준,3, 10 및 일반적으로 PSM 전후에 코호트 1+2에 대해 코호트 4에서의 유사한 피크 CAR T-세포 수준에 의해 입증되었다. CRS 또는 NE를 관리하는 데 필요한 중앙값의 누적 코르티손-등가 코르티코스테로이드 용량은 매칭된 코호트 1+2(6886 mg; 표 14)보다 코호트 4(939 mg)에서 더 낮게 유지되었다.
[표 14]
Figure pct00021
CAR T-세포 치료에서 AE 관리는 지속적인 임상적 이점을 손상시키지 않으면서 이러한 치료 방식의 안전성 프로파일을 개선하도록 지속적인 노력에 의해 발달하는 분야이다. 이를 위해, CLINICAL TRIAL-1 코호트 4 환자들은 탐색 코호트 1+2보다 조기에 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙 개입을 받았다(문헌[Neelapu et al., N Engl J Med. 2017;377(26):2531-44]; [Locke FL, Ghobadi A, Jacobson CA, Miklos DB, Lekakis LJ, Oluwole OO, et al., Lancet Oncol. 2019;20(1):31-42]). 등급 3 이상의 CRS 및 NE의 수치적으로 더 낮은 비율은 코호트 1+2(12% 및 29%)보다 코호트 4(각각 2% 및 17%)에서 관찰되었고, 이는 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙을 사용한 조기 개입이 R/R LBCL 환자에서 악시캅타젠 실로류셀의 안전성 프로파일을 변경할 가능성이 있을 수 있음을 시사한다. 코르티코스테로이드로 치료된 환자에서, 누적 코르티손 등가 용량 중앙값은 코호트 4에서 939 mg이었고, 코호트 1+2에서 보고된 6388 mg이었으며, 이는 조기 코르티코스테로이드 사용이 누적 코르티코스테로이드 용량을 증가시키지 않음을 시사한다. 또한, 이러한 개정된 안전성 관리 레지먼은 1년에서 진행중 반응률에 부정적인 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다(코호트 4: 51%; 코호트 1+2: 42%).
베이스라인 특징과 코호트 크기의 차이는 탐색 코호트 1+2와 코호트 4를 비교할 때 고려되어야 한다. 코호트 4 환자는 베이스라인에서 보다 낮은 수준의 염증성 혈청 바이오마커(예를 들어, 페리틴 또는 LDH)를 가졌고, 보다 낮은 비율의 환자는 가장 최근 치료 라인에 대한 반응으로 진행성 질환을 가졌다(문헌[Locke et al., Lancet Oncol. 2019;20(1):31-42; Topp et al., Blood. 2019;134(Suppl 1):243-]). 코호트 4는 또한 종양 부담이 더 낮았는데, 이는 이전에는 보다 낮은 비율의 NE 및 증가된 효능과 관련되었다(문헌[Locke et al., Blood Adv. 2020;4(19):4898-911]; [Dean et al., Blood Adv. 2020;4(14):3268-76]). 이러한 한계를 극복하고, 무작위 배정 시험 부재 하에 편향을 감소시키기 위해, PSM(문헌[Rosenbaum and Rubin, Biometriks. 1983;70(1):41-55]; [Austin, Multivariate Behav Res. 2011;46(3):399-424])을 코호트 1+2 및 코호트 4에 적용하였다. 이러한 통계적 방법은 코호트 간의 베이스라인 질환 특징의 잠재적 불균형을 조정하여, 보다 균형있고 강력한 비교를 제공한다(문헌[Austin, Stat Med. 2008;27(12):2037-49]; [Zhang et al., Ann Transl Med. 2019;7(1):16]). 매칭 후 치료전 특징의 작은 차이가 남아있지만, PSM 이전의 코호트 4와 코호트 1+2의 환자에서 관찰된 상기 언급된 독성 결과의 차이는 매칭 후 유지되었고, 이는 조기 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙의 이점을 지지한다. 또한, PSM은 피크 CAR T-세포 수준에 거의 영향을 미치지 않았으며, 1년에서 진행중 반응률은 유사하게 유지되었다.
본원에 제시된 결과는 ORR에 대해 코르티코스테로이드 사용의 실질적인 영향이 없음을 시사하는 CLINICAL TRIAL-1(코호트 1+2)의 1차 분석과 일치한다(코르티코스테로이드, 78% [58-91%]; 코르티코스테로이드 없음, 84% [73-91%]). 실제 데이터의 후향적 분석은 R/R LBCL에서 악시캅타젠 실로류셀 후 임상 결과에 대한 코르티코스테로이드 사용의 영향에 관한 다양한 결과를 제공했다(문헌[Strati et al., Blood. 2021, Nastoupil et al., J Clin Oncol. 2020:[online ahead of print]]). 그러나, 이러한 2개의 연구(N=298) 중 더 큰 규모에서, 다변량 분석은 코르티코스테로이드로 치료된 환자 대 코르티코스테로이드를 제외하고 치료된 환자에서 PFS, CR 비율, 또는 OS에서 유의한 차이가 없음을 입증하였다(문헌[Nastoupil et al., J Clin Oncol. 2020:[online ahead of print]]). 이러한 연구의 임상적 적용가능성은 코르티코스테로이드가 필요한 환자 대 코르티코스테로이드가 필요하지 않은 환자에서 베이스라인 특징(예를 들어, 종양 부담)의 잠재적인 불균형과 후향적 성질을 고려할 때 불분명하다는 것을 주목하는 것이 중요하다(문헌[Locke et al., Blood Adv. 2020;4(19):4898-911]; [Dean et al., Blood Adv. 2020;4(14):3268-76]; [Gauthier et al., J Clin Oncol. 2018;36(15_suppl):7567-]; [Jacobson et al., Blood. 2018;132:abstract 92]). B-세포 급성 림프구성 백혈병에서 다른 CAR T-세포 생성물의 연구가 코르티코스테로이드 사용의 영향을 평가하기 위해 고안되지는 않았지만, 발표된 분석은 CAR T-세포 확장 또는 종양 반응에 대한 코르티코스테로이드 사용의 실질적인 효과가 없음을 보였다(문헌[Gardner et al., Blood. 2019;134(24):2149-58]; [Liu et al., Blood Cancer J. 2020;10(2):15]).
실시예 4
오픈-라벨, 글로벌, 다기관, 제3상 연구를 실시하여, 재발성 또는 난치성 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)을 갖는 성인 환자에서, 악시캅타젠 실로류셀의 안정성과 효능 대 제2 라인 치료(백금 기반 구제(salvage) 병용 화학요법 레지먼 이후 구제 화학요법에 대해 반응한 환자에서 고용량 치료 및 자가유래 줄기 세포 이식)에 대한 현재 치료 표준을 평가하였다. 본 연구에서, 359명의 환자는 무작위 배정(1:1)되어, 악시캅타젠 실로류셀의 단일 주입 또는 제2 라인 치료의 치료 표준을 받았다. 1차 평가변수는 Lugano 분류(문헌[Cheson et al, J Clin Oncol. 2014 Sep 20;32(27):3059-68] 참조)에 따라 무작위 배정에서 질환 진행의 가장 빠른 날짜까지의 시간으로 정의된 무-사건 생존(EFS), 신규 림프종 치료의 개시, 또는 임의의 원인으로 인한 사망이었다. 주요 2차 평가변수는 객관적 반응률(ORR) 및 전체 생존(OS)을 포함한다. 다른 2차 평가변수는 변형된 무-사건 생존, 무진행 생존(PFS) 및 반응 지속 기간(DOR)을 포함한다. 본 연구에 등록한 환자는 22세 내지 81세 범위 연령이었고, 환자의 30%는 65세 이상이었다. 본 실시예에서 기재된 연구는 재발성 또는 난치성 LBCL을 갖는 성인 환자에서 제2 라인 치료 표준(SOC)에 비해 세포 치료 악시캅타젠 실로류셀의 1회 주입을 평가하였다. 본 연구 SOC 아암은 2단계 과정이었다: 초기 재발 후, 면역화학요법을 재도입하고, 환자가 반응하고 추가 치료를 용인할 수 있는 경우, 고용량 화학요법과 줄기 세포 이식으로 전환한다.
주요 포함 기준:
1. WHO 2016(문헌[Swerdlow et al Blood. 2016 May 19;127(20):2375-90. doi: 10.1182/blood-2016-01-643569. Epub 2016 Mar 15. Review.] 참조)에 의해 정의된 하기 유형을 포함하는, 조직학적으로 입증된 거대 B-세포 림프종
달리 지정되지 않은 DLBCL(ABC/GCB)
MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있거나 없는 HGBL
FL에서 발생하는 DLBCL
T-세포/조직구 풍부 거대 B-세포 림프종
만성 염증과 관련된 DLBCL
원발성 피부 DLBCL, leg 유형
엡스타인-바 바이러스(EBV) + DLBCL
2. 제1 라인 화학면역요법 후의 재발 또는 난치성 질환
제1 라인 치료에 대한 완전 관해가 없는 것으로 정의된 난치성 질환; 제1 라인 치료에 내성이 없는 개체는 제외됨.
제1 라인 치료에 대한 최상의 반응으로서의 진행성 질환(PD)
적어도 4 사이클의 제1 라인 치료 후(예를 들어, 4 사이클의 R-CHOP) 최상의 반응으로서 안정한 질환(SD)
치료의 적어도 6 사이클 후 최상의 반응으로서 부분 반응(PR) 및 12개월 이내의 생검 입증 잔류 질환 또는 질환 진행
재발 질환은 제1 라인 치료에 대한 완전 관해 후, 제1 라인 치료의 12개월 이내의 생검-입증 재발로서 정의됨
3. 개체는 최소한 하기를 포함하는 적절한 제1 라인 치료를 받았어야 함:
종양이 CD20 음성인 것으로 시험자가 결정하지 않는 한 항-CD20 모노클로날 항체, 및
안트라사이클린 함유 화학요법 레지먼
4. 림프종에 의한 중추 신경계 침범의 알려진 이력 또는 의심이 없음
5. 0 또는 1의 동부 종양학 협력 그룹 (ECOG) 수행성 상태
6. 하기에 의해 입증된 바와 같은 적절한 골수 기능:
절대 호중구 수(ANC) 1000/uL 이상
혈소판 75,000/uL 이상
절대 림프구 수 100/uL 이상
7. 하기에 의해 입증된 바와 같은 적절한 신장, 간, 심장, 및 폐 기능:
크레아티닌 청소율(콕크로프트 굴트(Cockcroft Gault)) 60 mL/분 이상
혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라아제/아스파르테이트 아미노트랜스퍼라아제(ALT/AST) 2.5 정상범위상한치(ULN) 이하
총 빌리루빈 1.5 mg/dl 이하
심박출률 50% 이상, 심초음파(ECHO)에 의해 결정된 심낭 삼출의 증거 없음, 및 임상적으로 유의한 심전도(ECG) 소견 없음
임상적으로 유의한 흉막 삼출물 없음
실내 공기 상에서 92% 초과의 베이스라인 산소 포화도
주요 배제 기준:
1. 적어도 3년 동안 무질환인 경우를 제외하고 비흑색종 피부암 또는 상피내암(예를 들어, 자궁경부암, 방광암, 유방암) 이외의 악성종양 이력
2. DLBCL에 대해 하나 초과의 치료를 받음
3. 자가유래 또는 동종이계 줄기 세포 이식 이력
4. 진균, 세균, 바이러스, 또는 제어되지 않거나 관리를 위해 정맥내 항균제가 필요한 다른 감염의 존재.
5. 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 또는 B형 간염(HBsAg 양성) 또는 C형 간염 바이러스(항-HCV 양성)를 갖는 감염의 알려진 이력. 치료받은 B형 간염 또는 C형 간염의 양성 이력이 있는 경우, 정량적 폴리머라아제 연쇄 반응(PCR) 및/또는 핵산 테스팅에 따라 바이러스 존재량은 검출불가능해야 함.
6. 검출가능한 뇌척수액 악성종양 세포 또는 알려진 뇌 전이가 있거나 뇌척수액 악성종양 세포 또는 뇌 전이의 이력이 있는 개체.
7. 발작 장애, 뇌혈관 허혈/출혈, 치매, 소뇌 질환, 또는 CNS 침범을 갖는 임의의 자가면역 질환과 같은 비-악성종양 중추신경계(CNS) 장애의 이력 또는 존재
8. 유치 라인(indwelling line) 또는 드레인(drain)의 존재. Port-a-Cath 또는 Hickman 카테터와 같은 전용 중앙 정맥 액세스 카테터가 허용됨.
9. 등록 후 12개월 이내에 심근경색, 심장 혈관성형술 또는 스텐트 삽입술, 불안정 협심증, 뉴욕 심장협회 클래스 II 이상의 울혈성 심부전, 또는 다른 임상적으로 중요한 심장 질환의 이력
10. 등록 6개월 이내에 증상이 있는 심부 정맥 혈전증 또는 폐색전증의 이력
11. 지난 2년 이내 전신 면역억제제 및/또는 전신 질환 개질제가 필요한 자가면역 질환의 이력
12. 항-CD19 또는 CAR-T 치료의 이력 또는 사전 무작위 배정 이력
본 연구의 1차 분석은 제2 라인 재발성 또는 난치성 거대 B세포 림프종(LBCL)에서 치료 표준(SOC)에 비해 악시캅타젠 실로류셀의 우수성을 보였다. 본 연구는 무-사건 생존(EFS; 위험 비 0.398, p <0.0001)의 1차 평가변수, 및 객관적 반응률(ORR)의 주요 2차 평가변수를 충족하였다. 전체 생존(OS)의 중간 분석은 악시캅타젠 실로류셀을 선호하는 경향을 보였지만, 데이터는 미흡하고, 추가 분석 및/또는 연구가 정당화될 수 있다.
본 연구의 안전성 결과는 3차 세팅에서 LBCL 치료에 대한 악시캅타젠 실로류셀의 알려진 안전성 프로파일과 일치하였다. 환자의 6%가 등급 3 이상의 CRS를 경험하였고, 21%는 등급 3 이상의 신경학적 사건을 경험하였다. 본 제2 라인 세팅에서 신규한 안전성 문제는 확인되지 않았다.
실시예 5
본 실시예는 실시예 4와 관련되며 그것에서 확장된다. 오픈-라벨, 글로벌, 다기관, 제3상 연구를 실시하여, 재발성 또는 난치성 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)을 갖는 성인 환자에서, 악시캅타젠 실로류셀의 안정성과 효능 대 제2 라인 치료(백금 기반 구제 병용 화학요법 레지먼 이후 구제 화학요법에 대해 반응한 환자에서 고용량 치료 및 자가유래 줄기 세포 이식)에 대한 현재 치료 표준(SOC)을 평가하였다. 일반적 레지먼은 리툭시맙 + 젬시타빈, 덱사메타손 및 시스플라틴/카르보플라틴(R-GDP), 리툭시맙 + 덱사메타손, 고용량 시타라빈 및 시스플라틴(R-DHAP), 리툭시맙 + 이포스파미드, 카르보플라틴, 및 에토포시드(R-ICE), 및 리툭시맙 + 에토포시드, 메틸프레드니손, 시타라빈, 시스플라틴(R-ESHAP)을 포함하였다. 어떠한 단일 구제 레지먼도 우수성을 입증하지 못했기 때문에(문헌[Crump, et al. J Clin Oncol. 2014;32:3490-6]; [Gisselbrecht, et al. J Clin Oncol. 2012;30:4462-9]), 환자를 위한 SOC 레지먼이 선택된 경우, 제도적 선호도와 독성 프로파일이 고려되었다. SOC에 대한 일반적 레지먼의 제안된 투여가 표 15에 도시되어 있다.
[표 15]
Figure pct00022
본 연구는 전 세계 77개 기관에서 실시되었다. 항-CD20 모노클로날 항체 및 안트라사이클린-함유 레지먼을 포함하는 제1 라인 화학면역요법의 12개월 이내의 R/R인, 세계보건기구 2016 분류 기준(문헌[Swerdlow, et al. Blood. 2016;127:2375-90.])에 따라, 적합한 환자는 조직학적으로 확인된 LBCL을 갖는 18세 이상이었고, HDT-ASCT로 진행하고자 하였다. 난치성 질환은 제1 라인 치료에 대해 CR이 없음으로 정의되었고; 재발 질환은 CR 이후 생검 입증 질환 재발이 제1 라인 치료의 12개월 이내임으로 정의되었다. 본 연구에 포함시키기 위해 시험자가 적합하다고 간주한 임의의 환자는 등록할 수 있었다.
추가적 포함 기준:
Figure pct00023
2016년 세계보건기구(문헌[Swerdlow, et al. Blood. 2016;127:2375-90.])에 정의된 하기 유형을 포함하는 조직학적으로 입증된 거대 B-세포 림프종
Figure pct00024
달리 명시되지 않은 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)(활성화된 B-세포 유사[ABC]/배중심 B-세포 유사[GCB] 포함)
MYC 원발암유전자, BHLH 전사 인자(MYC) 및 BCL2 아폽토시스 조절제 및/또는 BCL6 전사 억제자 재배열이 있거나 없는 고등급 B-세포 림프종
여포성 림프종에서 발생하는 DLBCL
T-세포/조직구 풍부 거대 B-세포 림프종
만성 염증과 관련된 DLBCL
원발성 피부 DLBCL, leg 유형
엡스타인-바 바이러스 + DLBCL
제1 라인 화학면역요법 후의 재발 또는 난치성 질환
제1 라인 치료에 대한 완전 관해가 없는 것으로 정의된 난치성 질환; 제1 라인 치료에 내성이 없는 환자는 제외됨
Figure pct00033
제1 라인 치료에 대한 최상의 반응으로서의 진행성 질환(PD)
적어도 4 사이클의 제1 라인 치료 후(예를 들어, 4 사이클의 사이클로포스파미드/독소루비신/프레드니손/리툭시맙/빈크리스틴) 최상의 반응으로서 안정한 질환(SD)
치료의 적어도 6 사이클 후 최상의 반응으로서 부분 반응(PR) 및 12개월 이내의 생검 입증 잔류 질환 또는 질환 진행
재발 질환은 제1 라인 치료에 대한 완전 관해 후 제1 라인 치료 12개월 이내의 생검-입증 재발로서 정의됨
환자는 최소한 하기를 포함하는 적절한 제1 라인 치료를 받았어야 함:
종양이 CD20 음성인 것으로 시험자가 결정하지 않는 한 항-CD20 모노클로날 항체, 및
안트라사이클린 함유 화학요법 레지먼
제2 라인 치료에 대해 반응하는 경우 자가유래 줄기 세포 복원(HDT-ASCT)에 의한 고용량 치료를 진행하고자 함
환자는 방사선학적으로 기록된 질환을 가져야 함
림프종에 의한 중추신경계(CNS) 침범의 알려진 이력 또는 의심이 없음
환자가 동의한 시점에 임의의 사전 전신 암 요법 이후 적어도 2주 또는 5회 반감기 중 더 짧은 기간이 경과해야 함
시험대상자 동의 시점에 18세 이상
0 또는 1의 동부 종양학 협력 그룹 (ECOG) 수행성 상태
하기와 같이 정의된 적절한 골수, 신장, 간, 폐 및 심장 기능:
절대 호중구 수 1000/μL 이상
혈소판 수 75,000/μL 이상
절대 림프구 수 ≥100/μL
크레아티닌 청소율(콕크로프트 굴트에 의해 추정된 것과 같음) 60 mL/분 이상
혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라아제/아스파르테이트 아미노트랜스퍼라아제 2.5 정상범위 상한치 이하
길버트 증후군을 갖는 환자를 제외하고, 1.5 mg/dl 이하의 총 빌리루빈
50% 이상의 심박출률, 심초음파에 의해 결정된 심낭 삼출의 증거 없음, 및 임상적으로 유의한 심전도 소견 없음
임상적으로 유의한 흉막 삼출 없음
실내 공기에 대해 92% 초과의 베이스라인 산소 포화도
가임 여성은 혈청 또는 소변 임신 검사에서 음성이어야 함(외과적 불임 수술을 받았거나 폐경 후 적어도 2년 동안의 여성은 가임 여성으로 간주되지 않음).
추가 배제 기준:
적어도 3년 동안 무질환인 경우를 제외하고 비흑색종 피부암 또는 상피내암(예를 들어, 자궁경부암, 방광암, 유방암) 이외의 악성종양 이력
만성 림프구성 백혈병 또는 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종의 Richter 변이 이력
자가유래 또는 동종이계 줄기 세포 이식 이력
DLBCL에 대해 하나 초과의 치료를 받음
사전 CD19 표적화 치료
악시캅타젠 실로류셀 또는 치료 표준(SOC)의 첫번째 투여 전 6주 이내 또는 약물의 5 반감기 중 더 짧은 기간 이내에 전신성 면역자극제(인터페론 및 IL-2를 포함하지만 이에 제한되지는 않음)로의 치료
사전 키메라 항원 수용체(CAR) 치료 또는 다른 유전자 변형 T-세포 치료 또는 사전 무작위 배정
아미노글리코시드에 기인하는 중증의 즉각 과민성 반응의 이력
진균, 세균, 바이러스, 또는 제어되지 않거나 관리를 위해 정맥내(IV) 항균제가 필요한 다른 감염의 존재. 단순 요로 감염증 및 단순 세균성 인두염은 적극 치료에 반응하는 경우 허용됨
인간 면역결핍 바이러스(HIV) 또는 B형 간염(HBsAg 양성) 또는 C형 간염 바이러스(항-HCV 양성)를 갖는 감염의 알려진 이력. 치료받은 B형 간염 또는 C형 간염의 양성 이력이 있는 경우, 정량적 폴리머라아제 연쇄 반응(PCR) 및/또는 핵산 테스팅에 따라 바이러스 존재량은 검출불가능해야 함
활성 결핵
임의의 유치 라인 또는 드레인(예를 들어, 경피 신루관, 유치 폴리 카테터, 담도 배액관 또는 흉막/복막/심낭 카테터)의 존재. Port-a-Cath 또는 Hickman 카테터와 같은 전용 중앙 정맥 액세스 카테터가 허용됨.
검출가능한 뇌척수액 악성종양 세포 또는 알려진 뇌 전이가 있거나 뇌척수액 악성종양 세포 또는 뇌 전이의 이력이 있는 환자
발작 장애, 뇌혈관 허혈/출혈, 치매, 소뇌 질환, 또는 CNS 침범을 갖는 임의의 자가면역 질환과 같은 비-악성종양 CNS 장애의 이력 또는 존재
심장 심방 또는 심장 심실 림프종이 침범된 환자
등록 후 12개월 이내에 심근경색, 심장 혈관성형술 또는 스텐트 삽입술, 불안정 협심증, 뉴욕 심장협회 클래스 II 이상의 울혈성 심부전, 또는 다른 임상적으로 중요한 심장 질환의 이력
장 폐색 또는 혈관 압박과 같은 종양 덩어리 영향으로 인한 긴급 치료가 필요한 경우
지난 2년 이내 전신 면역억제제 및/또는 전신 질환 개질제가 필요한 자가면역 질환의 이력
특발성 폐 섬유증, 조직성 폐렴(예를 들어, 밀폐성 세기관지염), 약물 유도성 폐렴, 특발성 폐렴 또는 선별 시 흉부 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캔에 따른 활성 폐렴의 증거의 이력. 방사선장에서 방사선 폐렴(섬유증) 이력은 허용된다.
등록 6개월 이내에 증상이 있는 심부 정맥 혈전증 또는 폐색전증의 이력
연구 치료제의 안전성 또는 효능 평가를 방해할 가능성이 있는 임의의 의학적 병태
토실리주맙 또는 본 연구에 사용된 임의의 약제에 대한 중증의 즉각 과민성 반응의 이력
연구 치료 개시 전 6주 이내 또는 연구 과정 동안 이와 같은 백신의 필요성이 예상되는 경우에 약독화 생백신을 사용한 치료
태아 또는 유아에 대한 화학요법의 잠재적으로 위험한 영향으로 인해 임신 중이거나 모유 수유 중인 가임 여성. 동의 시점부터 그리고 악시캅타젠 실로류셀 또는 SOC 화학요법의 마지막 투여 후 적어도 6개월이 지난 시점부터 피임을 할 의향이 없는 성별의 환자
시험자의 판단에 따라, 환자는 추적관찰을 포함하여 프로토콜이 요구하는 모든 연구 방문 또는 절차를 완료하거나, 참여에 요구된 연구를 준수할 가능성이 없었음.
원래의 프로토콜에 따라, 제1 라인 치료에 대한 CR의 재발 질환 후 생검 입증 질환 재발에 대한 기간은 제1 라인 치료 개시의 12개월 이내였다. 이는 제1 라인 치료의 12개월 이내로 확대되었다. 원래의 프로토콜에 따라, 무작위 배정은 제1 라인 치료 개시의 6개월 이내 재발, 및 제1 라인 치료 개시의 6개월 초과 12개월 이내의 재발에 의해 등급화되었다. 이는 제1 라인 치료의 6개월 이내의 재발, 및 제1 라인 치료의 6개월 초과 12개월 이내의 재발로 확대되었다. 선별 시 평가된 것과 같이 무작위 배정은 제1 라인 치료에 대한 반응(1차 난치성 대 제1 라인 치료의 6개월 이내의 재발, 대 제1 라인 치료의 6개월 초과 및 12개월 이내의 재발) 및 제2 라인 연령-조정 IPI(sAAIPI; 0 내지 1 대 2 내지 3)에 의해 등급화되었다. 환자는 무작위 배정 대략 5일 이내에 백혈구성분채집술(악시캅타젠 실로류셀 코호트용) 또는 SOC 요법(SOC 코호트용) 중 어느 것을 개시하였다.
선별 후, 환자는 악시캅타젠 실로류셀 또는 시험자가 선택한 SOC 화학요법으로 1:1로 무작위 배정되었으며, 선별 시 제1 라인 치료에 대한 반응과 제2 라인 연령-조정 IPI(sAAIPI)에 의해 등급화되었다. 악시캅타젠 실로류셀 환자는 백혈구성분채집술 후 컨디셔닝 화학요법을 진행하였다. 0일차에, 환자는 단일 악시캅타젠 실로류셀 주입을 받았다. 브릿징 요법은 시험자의 재량에 따라 코르티코스테로이드로만 제한되었다. SOC 환자는 현장에서 공급된 프로토콜 정의된, 시험자가 선택한 백금-기반 화학면역요법 레지먼의 2 내지 3 사이클을 받았다. CR 또는 부분 반응(PR)을 달성한 환자는 HDT-ASCT로 진행하였다. 아암 사이에 계획된 교차는 없었지만, SOC에 대해 반응하지 않는 성인 환자는 프로토콜에서 벗어난 세포 면역요법(치료 스위칭)을 받을 수 있었다. 독성 관리는 문헌[Neelapu, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544]을 따랐다. 사이토카인 방출 증후군(CRS)은 수정된 Lee 기준에 따라 등급화되었다. (문헌[Lee, et al. Blood. 2014;124:188-95.]) 이상 반응(AE) 및 CRS 및 신경학적 사건 증상은 미국 국립암연구소의 이상 반응 표준 용어 기준 버전 4.03에 따라 등급화하였다.
1차 평가변수는 맹검 중앙 검토에 의해 무-사건 생존(EFS; Lugano 분류(문헌[Cheson, et al. J Clin Oncol. 2014;32:3059-68])에 따라 무작위 배정에서 질환 진행의 가장 빠른 날짜까지의 시간, 신규 림프종 치료의 개시, 또는 임의의 원인으로 인한 사망)이었다. 주요 2차 평가변수는 ORR 및 OS였다. 2차 평가변수는 시험자 평가 EFS, 무진행 생존(PFS), 및 AE 발생률을 포함하였다.
질환 평가는 Lugano 분류 반응 기준에 따라 평가되었다. (문헌[Cheson, et al. J Clin Oncol. 2014;32:3059-68.]) 다른 모든 질환 부위의 적절한 영상과 함께, 두개골 기저부에서 허벅지 중간까지 플루오로데옥시글루코오스(FDG)-양전자 방출 단층촬영(PET) 선별, 및 두개골 기저부에서 소전자부까지의 진단 품질 대비 향상 전산화 단층촬영(CT) 선별은, 무작위 배정 전 28일 이내에 베이스라인을 설정하고, 적격성을 확인하기 위해 필요했다(PET-CT). 환자는 50일 평가 기간(무작위 배정 날짜로부터 계산) 이내에 이들의 첫번째 치료후 계획된 PET-CT 종양 평가를 받았다. 무작위 배정으로부터 50일차, 100일차 및 150일차에 질환 평가를 실시하였다. PET-CT는 9개월까지 또는 림프종 치료 또는 질환 진행의 변경까지 먼저 도래하는 시점까지 계속되었다. 환자의 질환이 9개월까지 진행되지 않은 경우, 완전 반응이 의심되는 경우 질환 평가를 CT 스캔에 따라 평가하고, PR이 의심된 경우 PET-CT에 따라 평가했다. 질환 진행을 시사하는 증상이 있는 환자는 증상 시점의 진행에 대해 평가되었다. PET-CT는 질환 진행이 의심되는 경우 언제든지 수행될 수 있다. FDG-PET 평가는 둘 다 이용가능한 시점의 경우 CT 평가보다 우선되었다. 단지 CT만이 특정 시점에 이용가능하였다면, 평가는 이전 시점에서의 PET-CT 평가에 영향을 받았을 수 있다. 시험자의 평가 이외에, 치료 코호트에 맹검인 독립적인 중앙 검토자에게 PET-CT 스캔을 제출하고, 검토하였다. 환자의 골수 침범은 PET-CT 또는 골수 생검으로 확인되었고 무작위 배정 전에 흡인되었다.
효능 분석은 치료 의향 기반의 모든 무작위 배정된 환자를 포함하였다. 안전성 분석은 프로토콜에서 악시캅타젠 실로류셀 또는 SOC의 1회 이상 용량을 받은 모든 무작위 배정된 환자를 포함하였고; 환자는 받은 프로토콜 요법에 의해 분석되었다. Kaplan-Meier 추정치는 사건 평가변수까지의 시간에 대해 제공되었다. 양측 95% CI 및 추정된 위험 비(HR)는 무작위 배정 등급화 요인에 의해 등급화된 Cox 비례 위험 모델에서 계산되었다. 등급화된 로그 순위 P 값은 사건 평가변수까지의 시간에 대해 계산되었다. 등급화된 Cochran-Mantel-Haenszel 테스트를 ORR에 대해 수행하였다.
437명의 환자가 선별되었고, 359명이 악시캅타젠 실로류셀(N=180) 또는 SOC(N=179)로 무작위 배정되었다. 무작위 배정으로부터 데이터 컷오프까지 추적관찰 시간 중앙값은 24.9개월이었다. 전체적으로, 연령 중앙값은 59세이고, 이때 30%는 65세 이상이고, 환자의 74%는 원발성 난치성 질환을 가졌고, 46%는 시험자 평가에 따라 높은 sAAIPI(2 내지 3)를 가졌고, 19%는 HGBL(이중/삼중-히트(hit) 림프종 포함)을 가졌다(표 16). 베이스라인 특징은 2개의 치료 코호트 간에 균형을 이루었다.
[표 16]
Figure pct00082
악시캅타젠 실로류셀 환자 중에서, 178명/180명(99%)은 백혈구성분채집술을 받았고, 170명/180명(94%)은 악시캅타젠 실로류셀을 받았으며; 60명/180명(33%)의 환자는 브릿징 코르티코스테로이드를 받았다. 악시캅타젠 실로류셀은 백혈구성분채집술을 진행한 모든 환자에 대해 성공적으로 제조되었다. 백혈구성분채집술에서 생성물 방출까지의 시간 중앙값(생성물이 품질 테스트를 통과하고, 시험자에게 제공되었을 때)은 13일(범위, 10 내지 24일)이었다. SOC 환자 중에서, 168명/179명(94%)은 백금 기반 SOC 화학요법을 받았고, 64명/179명(36%)은 HDT-ASCT를 받았다(프로토콜을 벗어난 ASCT를 받은 2명의 환자 포함; 표 17).
[표 17]
Figure pct00083
EFS의 1차 평가변수가 충족되었으며, 이는 악시캅타젠 실로류셀으로의 치료가 SOC보다 우수함을 입증했다(HR, 0.398; 95% CI, 0.308 내지 0.514; P<.0001). 맹검 중앙 검토에 의한 EFS 중앙값은 SOC 코호트에 비해 악시캅타젠 실로류셀에서 유의하게 더 길었다(각각 8.3개월[95% CI, 4.5 내지 15.8] 대 2.0[95% CI, 1.6 내지 2.8]). 24개월 추정된 EFS 비율은 SOC 코호트에 비해 악시캅타젠 실로류셀에서 각각 40.5(95% CI, 33.2 내지 47.7) 대 16.3%(95% CI, 11.1 내지 22.2)였다(표 18). 악시캅타젠 실로류셀 대 SOC의 EFS 개선은 모든 주요 환자 하위그룹에서 일관되었다(표 19). 시험자가 평가한 EFS는 맹검 중앙 검토에 의한 EFS와 유사했다.
[표 18]
Figure pct00084
[표 19]
Figure pct00085
SOC 환자에 비해 ORR은 악시캅타젠 실로류셀(각각 83% 대 50%; 교차 비, 5.31[95% CI, 3.1 내지 8.9; P <.0001])에서 유의하게 더 컸고, CR 비율은 65% 대 32%였다. OS의 중간 분석은 SOC(중앙값, 35.1개월[HR, 0.730; P =.0270])에 비해 악시캅타젠 실로류셀(중앙값에 미달[NR])을 선호하였다. 후속 세포 면역요법을 받은 SOC 환자의 비율은 56%(HR, 0.695; 95% CI, 0.461 내지 1.049)였다. SOC 코호트에서 후속 세포 면역요법으로 전환하는 치료의 교란 효과를 다루기 위해 실시된 사전계획된 OS 민감도 분석은, RPSFT(Rank Preserving Structural Failure Time) 모델을 사용하여 0.580(95% CI, 0.416 내지 0.809; 기술적 로그-랭크 P=.0006)의 등급화된 HR로, 악시캅타젠 실로류셀에 유리한 OS에서 통계적으로 유의한 차이를 입증하였다. 검증된 일반적으로 사용된 RPSFT 모델은 SOC 환자가 후속 세포 면역요법을 받지 않은 경우 치료 효과의 차이를 나타내는 무작위 배정을 유지한다(문헌[Danner and Sarkar. PharmaSUG. 2018;EP-04.]).
PFS 중앙값은 SOC 환자에 비해 악시캅타젠 실로류셀에서 더 길었다(3.7개월[95% CI, 2.9 내지 5.3]에 비해 14.7개월[95% CI, 5.4 내지 NE]); HR, 0.490; P <.0001). 추정된 24개월 PFS 비율은 악시캅타젠 실로류셀 코호트에서 45.7%(95% CI, 38.1 내지 53.0)였고, SOC 코호트에서 27.4%(95% CI, 20.0 내지 35.3)였다. 반응 지속기간(DOR) 중앙값은 수치적으로 SOC보다 악시캅타젠 실로류셀을 선호했지만 통계적 유의성에 미달했다(8.9개월[95% CI, 5.7 내지 NE]에 비해 26.9개월[95% CI, 13.6 내지 NE]; HR, 0.769; P=.0695).
악시캅타젠 실로류셀 치료와 연관된 위험으로 인해, 주입은 지연되었고, 환자가 하기 조건 중 임의의 것을 갖는 경우 적절한 평가가 수행되었다:
이전 화학요법으로 인한 부작용을 포함하여, 해결되지 않은 중대한 이상 반응(특히 폐 반응, 심장 반응, 또는 저혈압)
활성 미제어 감염
활성 이식편대숙주병
항-CD19 CAR T-세포 치료에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 관리는 항종양 효과의 이점을 유지하면서, 생명을 위협하는 병태를 예방하고자 하였다. 환자는 CRS의 징후 및 증상에 대해 모니터링되었다. CRS의 진단은 전신 염증 반응, 특히 감염의 다른 원인을 배제하는 것을 요구하였다. 등급 2 이상의 CRS를 경험한 환자는 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소측정을 모니터링하였다. 중증 CRS를 경험한 환자에 대해, 심장 기능을 평가하기 위해 심초음파 검사를 고려하였다. 중증 CRS 또는 생명을 위협하는 CRS의 경우, 집중 케어 지지적 치료를 고려하였다. 표 20은 악시캅타젠 실로류셀 치료와 연관된 CRS의 권장된 관리를 개괄한 것이다.
[표 20]
Figure pct00089
환자는 신경학적 사건의 징후 및 증상에 대해 신중히 모니터링되었다. 등급 2 이상의 신경학적 사건을 경험한 환자는 뇌 영상, 요추 천자(개방 압력 평가 포함), 정기적인 신경학적 검사를 받았으며, 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소 측정으로 모니터링되었다. 집중 케어 유닛으로의 이송은 잠재적으로 중증이거나 생명을 위협하는 신경학적 사건에 대해 고려되었다. 발작 예방을 위한 비진정, 항경련제(예를 들어, 레베티라세탐)는 사용금지사유가 없는 등급 2 이상의 신경학적 사건에 대해 고려되었다. 레베티라세탐에 대한 감량은 신경학적 사건이 등급 1 이하인 경우에만 수행되었다. 중증의 경우 기도 보호를 위해 기관내 삽관이 요구되었을 수 있다. 일부 경우에, 여러 항경련제 의약이 발작을 제어하기 위해 필요할 수 있었다. 진정 특성을 갖는 의약은 필요한 경우를 제외하고는 회피되었다. 백질뇌증(Leukoencephalopathy)의 사례는 임상적 증상을 기반으로 관리되었고, 모니터링을 위해 추적관찰의 자기 공명 영상이 권고되었다. 표 21은 악시캅타젠 실로류셀 치료와 연관된 신경학적 사건의 권장된 관리를 개괄한 것이다.
[표 21]
Figure pct00090
Figure pct00091
임의의 등급의 신경학적 사건에서의 진행성 신경학적 증상을 갖는 환자에서 뇌부종이 고려되었다. 진단은 일련의 신경학적 검사를 포함하였다. 의심되는 뇌부종 관리 가이드라인은 표 22에 포함되어 있다.
[표 22]
Figure pct00092
연장된 혈구감소증을 포함한 혈구감소증은 감염원에 대한 철저한 평가와 기관 실행 가이드라인에 따른 예방적 광역 항생제 투여로 관리되었다. 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF)를 공개된 가이드라인에 따라 제공하였다. 발열은 지지적 조치와 해열제로 치료하였다. 수분 균형(euvolemia)은 제도적 실행 가이드라인 및 임상적으로 제시된 바에 따라 등장성 정맥내 유체(예를 들어, 정질액)를 첨가하여 유지되었다. 악시캅타젠 실로류셀 투여 후 30일 이상 연장된 혈구감소증은 골수 생검을 포함한 임상 조사를 필요로 할 수 있다. 환자는 빈혈과 저혈소판증에 필요한 만큼 혈소판과 패킹된 적혈구를 받았다.
감염의 징후와 증상에 대해 환자를 모니터링하고, 감염이 의심되거나 확인된 경우 항생제 치료가 권장되었다. 환자는 National Comprehensive Cancer Network 가이드라인 또는 표준 기관 실행 가이드라인에 따라 폐포자충 폐렴, 헤르페스 바이러스, 및 진균 감염에 의한 감염에 대한 예방을 받았다. 발열은 아세트아미노펜과 휴식 조치로 치료되었고, 코르티코스테로이드는 회피하였다. 호중구감소증과 발열(febrile) 환자는 광범위한 항생제를 받았고, 고열이 있는 대부분에 환자에서 유지 정맥 수액을 시작하였다. G-CSF는 공개된 가이드라인(예를 들어, Infectious Disease Society of America)에 따라 제공되었다. 저감마글로불린혈증을 유도하는 B-세포 무형성증 환자는 기관 실행 가이드라인에 따라 정맥내 면역글로불린을 받았다. B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 및 HIV에 대한 선별은 제조를 위한 세포 수집 전 임상적 가이드라인에 따라 수행되었다.
모든 환자는 1 이상의 임의의 등급의 AE를 경험하였다. 등급 3 이상의 AE는 각각 악시캅타젠 실로류셀과 SOC 치료를 받은 환자의 91%(155명/170명) 및 83%(140명/168명)에서 발생하였다. 가장 일반적으로 보고된 등급 3 이상의 AE는 호중구감소증(69% 악시캅타젠 실로류셀; 41% SOC; 표 23)이었다. 임의의 등급의 중대한 AE는 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 코호트에서 각각 환자의 50% 및 46%에서 발생하였고(표 24); 임의의 등급의 감염은 환자의 41% 및 30%에서 발생하였고, 이때 등급 3 이상의 감염은 14% 및 11%에서 발생하였다.
[표 23]
Figure pct00093
[표 24]
Figure pct00094
혈구감소증의 빈도는 표 22에 요약되어 있다. 치료 개시로부터 30일차 또는 그 후에 존재하는 장기간의 등급 3 이상의 혈구감소증은 각각 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 코호트에서 49명(29%) 및 101명(60%)의 환자에서 발생하였다(표 25). 복제 가능 레트로바이러스 또는 악시캅타젠 실로류셀 치료 관련 이차 악성종양의 사례는 보고되지 않았다.
[표 25]
Figure pct00095
악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 코호트에서 각각 64명(38%) 및 78명(46%)의 환자가 사망하였다. 이들 중에서, 47명(28%)과 64명(38%)의 환자가 진행성 질환으로 사망하였다. 등급 5 AE는 악시캅타젠 실로류셀 코호트 중 7명(4%)의 환자(이 중 단지 1명만 악시캅타젠 실로류셀 관련됨: B형 간염 재활성화)에서, SOC 코호트에서 2명(1%)(이 둘 모두는 SOC 관련됨: 심정지 및 급성 호흡 곤란 증후군; 표 26)에서 발생하였다.
[표 26]
Figure pct00096
CRS는 악시캅타젠 실로류셀 환자의 92%(157명/170명)에서 발생하였다(표 22). 등급 3 이상의 CRS는 환자의 6%(11명/170명)에서 발생하였다. 등급 5의 CRS 사건은 발생하지 않았다. CRS 관리를 위해 토실리주맙, 코르티코스테로이드, 및 승압제를 각각 환자의 65%, 24%, 및 6%에 투여하였다. 적응증 관계 없이 누적 토실리주맙 사용 중앙값은 1396 mg(범위, 430 내지 7200)이었고; 대부분의 환자는 토실리주맙을 4회 이하의 용량으로 받았다(102명/170명; 60%). CRS 발증까지의 시간 중앙값은 주입 후 3일(범위, 1 내지 10)이었고, CRS 지속기간 중앙값은 7일(범위, 2 내지 43)이었다. CRS 세팅에서 모든 사건이 해결되었다.
각각 악시캅타젠 실로류셀과 SOC 코호트의 환자의 60%(102명/170명) 및 20%(33명/168명)에서 신경학적 사건이 발생하였고; 등급 3 이상의 신경학적 사건은 각각 환자의 21%(36명/170명) 및 1%(1명/168명)에서 발생하였다. 등급 5 신경학적 사건은 발생하지 않았다. 악시캅타젠 실로류셀 코호트에서, 코르티코스테로이드는 신경학적 사건의 관리를 위해 환자 중 32%에서 사용되었다. 신경학적 사건의 발증까지의 시간 중앙값은 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 코호트에서 각각 5일(범위, 1 내지 133) 및 10일(범위, 1 내지 146)이었다. 신경학적 사건의 지속기간 중앙값은 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 코호트에서 각각 14일(범위, 1 내지 817) 및 26일(범위, 1 내지 588)이었다. 데이터 컷오프에서, 2명의 환자는 진행중 신경학적 사건을 가졌다(등급 2의 감각 이상 및 등급 1의 기억 장애를 갖는 1명의 악시캅타젠 실로류셀 환자; 등급 1의 감각 이상을 갖는 1명의 SOC 환자).
악시캅타젠 실로류셀 주입 후 피크 CAR T-세포 수준까지의 시간 중앙값은 8일(범위, 2 내지 233; 표 27)이었다. 피크 CAR T-세포 수준 중앙값은 25.84개의 세포/μL(범위, 0.04 내지 1173)였고, 이때 CAR T 세포는 24개월까지 평가가능한 환자 12명/30명(40%)에서 검출가능하게 유지되었다. 치료 후 처음 28일 이내에 CAR T-세포 피크 및 곡선하 면적은 객관적 반응률(도시되지 않음)과 상관관계가 있었고, 이는 문헌[Locke, et al. Mol Ther. 2017;25:285-295]와 일치했다. 항-악시캅타젠 실로류셀 항체의 출현은 검출되지 않았다.
[표 27]
Figure pct00097
혈중 측정된 항-CD19 CAR T 세포에 대한 요약 통계가 제공되었다. CAR T 세포의 존재, 확장 및 존속성은 이전에 보고된 바와 같이 말초 혈액 단핵 세포에서 측정되었다. (문헌[Locke, et al. Mol Ther. 2017;25:285-295.]) 간략히, 혈액 유래 및 동결보존된 말초 혈액 단핵 세포를 정량적 PCR(qPCR)로 분석하여 시간에 따른 항-CD19 CAR-T 세포 수준을 평가하였다. qPCR 값은 세포/혈액의 uL로 변환되었다. 주입 후 피크, 피크까지의 시간, 0일차 내지 28일차 곡선하 면적(AUC)(AUC0-28), 및 평가가능한 샘플을 이용한 환자에서 최대 24개월의 항-CD19 CAR T 세포의 존속성이 본원에 제시된다.
전통적 샌드위치 기반 효소 결합 면역흡착 어세이(ELISA)로 측정된 것과 같이, 잠재적 면역원성은 쥐 모노클로날 항체 FMC63(악시캅타젠 실로류셀에서 항-CD19 CAR의 생산에 사용된 단쇄 가변 영역 단편[scFv]에 대한 모 항체)에 대한 반응성에 양성으로 테스트된 항체의 개발에 의해 초기에 확인되었다. 양성 샘플은 초기 선별 어세이(ELISA)에서 관찰된 신호가 항-CD19 CAR T 세포 표면에서 발현된 적절하게 폴딩된 scFv에 대한 항체 결합으로 인한 것인지를 결정하기 위해 확증적 유세포 분석 세포 기반 어세이로 추가 테스트를 거쳤다.
현재 연구에서 OS 결과는 미흡하지만, 중간 분석은 악시캅타젠 실로류셀을 선호하는 경향이 있다. SOC 코호트에서 진행된 환자는 프로토콜외 CAR T-세포 치료를 받을 수 있었는데, 이는 전통적인 치료 의향 분석이 치료 전환 후 OS에 대한 치료 효과를 과소평가할 수 있기 때문에 생존율 차이를 둔화시켰을 수 있다. (문헌[Danner and Sarkar. PharmaSUG. 2018;EP-04]) 무작위 배정-기반 RPSFT 모델을 사용하여 SOC 환자 중에서 후속 세포 면역요법의 생존 이점에 대해 조정한 후(문헌[Danner and Sarkar. PharmaSUG. 2018;EP-04]), 악시캅타젠 실로류셀은 OS 대 SOC에서 통계적으로 유의한 개선을 입증하였다.
본 연구에서 악시캅타젠 실로류셀의 안전성 프로파일은 다루기 쉬웠고, 난치성 LBCL에서의 이전 연구와 일치했다. (문헌[Neelapu, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544]; [Locke, et al. Blood. 2017;130:2826-2826.]) 등급 3 이상의 AE는 예측한 대로 CRS 및 신경학적 사건을 제외하고, 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 코호트(각각 91% 및 83%)의 환자 간에 수치적으로 유사하였다. 등급 3 이상의 CRS 및 신경학적 사건은 일반적으로 3차로 보고된 것과 일치하는데(문헌[Neelapu, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544.]), 본 연구에서 특히 등급 5의 CRS 또는 신경학적 사건은 없었다.
중요하게도, SOC 환자에 비해 거의 3배의 악시캅타젠 실로류셀 환자가 결정적 치료를 받았다. 악시캅타젠 실로류셀로 무작위 배정된 거의 모든 환자가 악시캅타젠 실로류셀을 주입받았지만(문헌[Neelapu, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544.]), 단지 SOC 코호트에서 소수의 환자만이 병력 연구와 일치한 프로토콜 정의된 HDT-ASCT(36%)를 받았다. (문헌[Gisselbrecht, et al. J Clin Oncol. 2010;28:4184-90]; [van Imhoff, et al. J Clin Oncol. 2017;35:544-551]; [Crump, et al. J Clin Oncol. 2014;32:3490-6.]) 어떤 환자가 구제 요법에 반응할지 선험적으로 알려지지 않았고, 대다수의 환자가 절대 HDT-ASCT 결정적 치료에 미달하기 때문에, 현재 SOC 치료의 결과는 차선적이다.
본 연구에서, 브릿징 요법은 선별 시, 질환 부담(disease burden)이 높은 환자에 대한 시험자의 재량에 따라, 1 내지 4일 동안 매일 os 또는 IV로 20 내지 40 mg 또는 등가 용량의 덱사메타손과 같은 코르티코스테로이드로 제한되었고, 백혈구성분채집술 후 투여되고, 악시캅타젠 실로류셀 전 5일 이상 완료되었다. 코르티코스테로이드 및 투여량의 선택은 연령/동반 질환에 대해 또는 임상적 판단에 따라 조정되었다. 응급 치료가 필요한 환자의 등록이 잠재적으로 제한되었지만, 환자 중 74%는 원발성 난치성이었다. 단독으로 40 내지 50%의 반응률을 초래할 수 있는, 화학요법 브릿징의 사용 억제(문헌[Gisselbrecht, et al. J Clin Oncol. 2010;28:4184-90]; [van Imhoff, et al. J Clin Oncol. 2017;35:544-551]; [Crump, et al. J Clin Oncol. 2014;32:3490-6.])는 악시캅타젠 실로류셀 코호트의 결과가 혼동되지 않도록 보장하였다. 그러나, 일부 경우에, 브릿징 화학요법은 긴급히 개시되어야 한다. 환자가 구제 화학면역요법을 받고 이에 반응한 경우, 본 연구에서 SOC에 대한 악시캅타젠 실로류셀에 의한 결과의 개선은 적용되지 않을 수 있다. 이는 DOR이 수치적으로 상이하지만 통계적으로는 유의하지 않는다는 사실에 의해 제안된다. 구제 화학요법을 이용한 반응이 달성되면, HDT-ASCT로 진행하는 환자는 구제 없이 악시캅타젠 실로류셀로 직접적으로 진행된 환자와 유사한 이점을 가질 것으로 예측할 수 있었다. 그러나, 화학 감응성이 치료 개시 전에 알려지지 않았으므로, 제2 라인 악시캅타젠 실로류셀의 사용은 궁극적으로 이식을 받지 않을 환자에서 추가 화학요법을 회피할 수 있고, 결정적 치료까지의 시간을 단축할 수 있고, 보다 큰 사전 치료 라인과 CAR T-세포 적응도에 대한 잠재적 영향을 회피할 수 있었다. (문헌[Neelapu, et al. ASH Annual Meeting. 2020.]).
LBCL 환자의 대다수가 포스트-리툭시맙 시대(era) 유도 후 12개월 미만에 재발하는 반면(문헌[Vannata, et al. Br J Haematol. 2019;187:478-487]; [Hamadani, et al. Biology of Blood and Marrow Transplantation. 2014;20:1729-1736.]) 유도 후 12개월 초과에 발생하는 LBCL 재발 환자는 등록되지 않았다. 그러나, 40.5%의 악시캅타젠 실로류셀을 이용한 2년 EFS는 사전 리툭시맙 이후 CORAL에서 SOC를 받았고, 진단으로부터 12개월 초과에 질환이 재발된 환자와 유리하게는 비교되고(문헌[Gisselbrecht, et al. J Clin Oncol. 2010;28:4184-90.]), 이는 일반적으로 더 큰 가능성의 제2 라인 반응과 연관된다. 따라서, 제1 라인 치료의 12개월 초과에 재발하는 환자는 또한 제1 라인 치료 후 재발 타이밍과 관계 없이 치료 옵션으로서 악시캅타젠 실로류셀로부터 이익을 얻을 수 있다.
실시예 6
본 연구는 결과가 난치성 LBCL를 갖는 환자에서, 악시캅타젠 실로류셀의 동일한 CLINICAL TRIAL-1 등록 제1상/제2상 연구에서 수득되었으므로 이전 실시예와 관련이 있다. CLINICAL TRIAL-1 코호트 1+2(C1+2; N=101)에서, 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사건(NE)의 비율은 6개월 1차 분석에서, 각각 13% 및 28%였고; ORR은 82%(54% CR; 문헌[Neelapu et al. NEJM. 2017])였다. CLINICAL TRIAL-1 안전성 관리 코호트 6(C6)은 예방적 및 초기 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙이 CRS 및 NE의 발생률과 중증도를 감소시킬 수 있는지를 평가하였다. C6에 대한 8.9개월의 추적관찰 중앙값(N=40)으로, 등급 3 이상의 CRS는 없었고, 낮은 비율의 등급 3 이상의 NE(13%)와 높은 반응률이 존재하였다(문헌[Oluwole et al. BJH. 2021]). 여기서, C6 대 C1+2의 환자에 대한 결과를 비교하기 위해 성향 스코어 매칭(PSM) 분석에 의해 지지된 C6의 1년 업데이트 분석 결과가 제시된다. 적합한 환자는 백혈구성분채집술 후 선택적 브릿징 요법을 받을 수 있었다. 단일 악시캅타젠 실로류셀 주입 전 3일 동안 환자는 컨디셔닝 화학요법을 받았다. 환자는 AE 관리를 위해 0일(악시캅타젠 실로류셀 전), 1일 및 2일차에 1일 1회 경구 덱사메타손 10 mg을 받았고, 초기 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙을 받았다. 1차 평가변수는 CRS 및 NE의 발생률 및 중증도였다. 다른 평가변수는 효능 결과와 바이오마커 분석을 포함하였다. C6 및 C1+2 환자에 대한 결과를 정확하게 비교하기 위해, 주요 베이스라인 질환 특징(종양 부담, IPI 스코어, 사전 화학요법 라인의 수, 질환 단계 및 LDH 수준)에 대해 균형을 맞춘 후 탐색적 PSM 분석을 수행하였다.
2020년 12월 16일자로, 추적관찰 시간 중앙값은 14.9개월이었다. 누적 코르티손-등가 코르티코스테로이드 용량 중앙값은 예방(N=40)을 포함하여 1252 mg이었고, 예방을 제외하고 2504 mg이었다(n=25; AE 관리의 경우 15명의 환자는 코르티코스테로이드를 받지 않음). 모든 40명의 치료 환자에서 등급 3 이상의 AE가 보고되었으며, 가장 일반적인 것은 호중구감소증(45%), 호중구 수 감소(33%), 및 백혈구 수 감소(23%)였다. 등급 3 이상의 CRS는 발생하지 않았다. 등급 3 이상의 NE는 15%의 환자에서 보고되었다. 악시캅타젠 실로류셀 주입 후, CRS 및 NE 발증까지의 시간의 중앙값은 각각 5일 및 6일이었다. 임의의 등급의 감염은 50%의 환자에서 발생하였다(등급 3 이상 20%). 6개월의 분석으로부터, 새로운 CRS 사례는 관찰되지 않았다. 4개의 신규한 악시캅타젠 실로류셀-관련 NE는 2명의 환자에서 발생하였다(환자 1: 등급 2 정신 상태 변화 및 발작 유사 현상; 환자 2: 등급 1 치매[93일차에 발생했으나 늦게 보고됨] 및 등급 5의 독성 뇌병증). 등급 2 폐렴과 등급 1 기관지염의 2개의 신규한 감염이 관찰되었고; 후자는 악시캅타젠 실로류셀-관련되었다. 진행성 질환으로 인한 사망 1건이 발생하였다. 시험자가 평가한 ORR은 95%였다(80% CR). DOR, PFS, 및 OS 중앙값에 미달했다. 12개월 DOR, PFS, 및 OS 비율의 Kaplan-Meier 추정치는 각각 60%, 63% 및 82%였다. 데이터 컷오프에서, 53%의 환자는 진행중 반응을 보였다. 피크 CAR T-세포 수준 중앙값은 12개월에 진행중 반응과 재발(각각 64개의 세포/μL[n=21] 및 66개의 세포/μL[n=15])이 있는 환자에서 비교적 높았고, 무반응자에서는 상당히 낮았다(18개의 세포/μL[n=2]).
총 32명의 환자가 각각 C6에서 확인되었고, PSM 분석 중 C1+2와 일치하였다. C6(각각 0% 및 해당 없음) 대 C1+2(13% 및 6d)에서 등급 3 이상의 CRS의 보다 낮은 발생률 및 발증까지 더 긴 시간 중앙값이 관찰되었다. 등급 3 이상의 NE의 발생률 및 발증까지 시간 중앙값은 각각 C6에서 19% 및 12일이었고, C1+2에서 22% 및 7일이었다. ORR은 C6 및 매칭된 C1+2 둘 모두에서 94%였고(각각 75% 및 78%, CR 비율); 환자 중 47% 및 59%는 각각 진행중 반응을 보였다. 피크 CAR T-세포 수준 중앙값은 각각 C6 및 C1+2에서 65 및 43개의 세포/μL였다. CAR T-세포 치료 관련 AE(IFN-γ, IL-2, GM-CSF, 및 페리틴)와 관련된 염증성 바이오마커의 혈청 수준은 C1+2에 비해 C6에서 더 낮았다. 예방을 포함한 누적 코르티코스테로이드 용량 중앙값은 C6(n=32)에서 1252 mg, C1+2(n=6)에서 7418 mg이었다.
1년 이상의 추적관찰에 의해, 예방적 및 조기의 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙 개입은 PSM 분석에 의해 확증된 관리가능한 안전성 프로파일, 새로운 안전성 신호 없음, 및 높고 지속적인 반응률을 계속 입증하였다. 매칭 후 C1+2에서 더 적은 환자가 코르티코스테로이드를 받았지만, 누적 코르티코스테로이드 용량 중앙값은 C1+2에 비해 C6에서 4배 더 낮았다.
실시예 7
이전 실시예에 기재된 것과 같이, 악시캅타젠 실로류셀 자가유래 항-CD19 CAR T-세포 치료는 2회 이상 사전 전신 치료를 받은 재발성/난치성 LBCL을 갖는 환자의 치료용으로 승인되었다. CLINICAL TRIAL-1(NCT02348216)의 2년간의 분석에서, 난치성 LBCL을 갖는 환자에서 악시캅타젠 실로류셀을 평가하는 다기관, 단일 아암 제1상/제2상 연구에서, 58%의 CR 비율을 포함하여 ORR은 83%였고, 환자 중 39%는 27.1개월의 추적관찰 중앙값으로 진행중 반응을 보였다(문헌[Locke et al. Lancet Oncol. 2019]). 무-사건 생존(EFS)은 혈액 악성종양의 OS에 대해 강력한 대리 평가변수로 나타난다. 최근의 체계적 분석은 면역화학요법 후 미만성 LBCL을 갖는 환자에서 EFS와 OS 사이의 선형 상관관계를 입증하였다(문헌[Zhu et al. Leukemia. 2020]). 여기서, OS와 EFS의 관련성 평가를 포함하여, 4년의 추적관찰 후 CLINICAL TRIAL-1로부터의 업데이트된 생존 결과가 제공된다. 적합한 환자는 난치성 LBCL(미만성 LBCL, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 변형된 여포성 림프종)을 가졌다. 등록 시 백혈구성분채집술 후, 환자는 저용량의 컨디셔닝 화학요법(플루다라빈 및 사이클로포스파미드)에 이어 2 × 106 항-CD19 CAR T 세포/kg의 표적 용량을 받았다(문헌[Neelapu et al. N Engl J Med. 2017]). 1차 평가변수는 ORR이었고, 이때 첫번째 반응 평가는 주입 4주 후에 발생하였다. 추가의 평가변수는 안전성과 전환 평가를 포함하였다. 12 및 24개월에 EFS에 의한 OS의 탐색적 분석이 수행되었다. EFS는 악시캅타젠 실로류셀 주입에서 질환 진행, 새로운 림프종 치료(줄기 세포 이식 제외) 개시, 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로서 정의되었다. EFS 결과에 의한 OS의 비교는 Kaplan-Meier 추정치를 통해 분석되었다.
2년간의 분석(문헌[Locke et al. Lancet Oncol. 2019]) 이후, 신규한 중대한 이상 반응 없음, 악시캅타젠 실로류셀 관련 2차 악성종양 없음, 및 복제 가능 레트로바이러스 확인 사례 없음을 포함하여 신규한 안전성 신호는 보고되지 않았다. 26명의 환자가 후속 항암 치료를 받았고; 다음 치료까지의 시간 중앙값은 8.7개월이었다(범위, 0.3 내지 53.8). 악시캅타젠 실로류셀 유도된 관해 상태의 2명의 환자는 동종이계 줄기 세포 이식을 받았다. 총 66명의 환자는 주로 진행성 질환(47%; n=52), 이어 다른 원인(7%; n=8), 이상 반응(5%; n=5), 및 악시캅타젠 실로류셀과 관련되지 않은 2차 악성종양(1%; n=1)으로 인해 사망하였다(59%).
실시예 8
CLINICAL TRIAL-5는 R/R iNHL(FL 및 변연부 림프종[MZL] 포함)을 갖는 환자에서 악시캅타젠 실로류셀을 평가하는 제2상 다기관 단일 아암 연구이다. CLINICAL TRIAL-5(N=104)의 1차 분석에서, ORR은 92%(76% CR 비율)였고, 피크 CAR T-세포 수준 중앙값은 재발된 환자에서보다 12개월에 진행중 반응을 보인 FL을 갖는 환자에서 수치적으로 더 컸다(문헌[Jacobson et al. ASH 2020. Abstract 700]). 여기서, CLINICAL TRIAL-5로부터 업데이트된 임상 및 약리학적 결과가 제시된다. 2개 라인 이상의 치료(항-CD20 mAb + 알킬화제 포함) 후 FL 또는 MZL 및 R/R 질환을 갖는 적합한 환자는 백혈구성분채집술 및 컨디셔닝 화학요법 후 2×106 CAR T 세포/kg의 단일 악시캅타젠 실로류셀 주입을 진행하였다. 1차 평가변수는 Lugano 분류에 따라 주요하게 평가된 ORR이었다(문헌[Cheson, et al. J Clin Oncol. 2014]). 업데이트된 효능 분석은 80명 이상의 연속 치료된 FL을 갖는 환자가 주입 후 2년 이상의 추적관찰를 가진 경우 발생했으며, 주입 후 4주 이상의 추적관찰를 받은 MZL을 갖는 환자를 포함하였다.
2021년 3월 31일자로, iNHL(124명 FL; 25명 MZL)을 갖는 환자 149명은 악시캅타젠 실로류셀로 치료되었다. 이 중, 110명의 환자(86명 FL; 24명 MZL)는 효능 분석에 적합했고, 이때 추적관찰 중앙값은 29.7개월이었다(범위, 7.4 내지 44.3). ORR은 1차 분석과 일치하였고(문헌[Jacobson et al. ASH 2020. Abstract 700]), FL을 갖는 환자에서 94% ORR였고(79% CR 비율), MZL을 갖는 환자에서 83% ORR이었다(63% CR 비율). 데이터 컷오프에서, FL을 갖는 효능 적격 환자 중 57% 및 MZL을 갖는 환자 중 50%는 진행중 반응을 보였고; CR을 달성한 환자 중, FL을 갖는 환자 중 68% 및 MZL을 갖는 환자 중 73%는 진행중 반응을 보였다. DOR 중앙값은 FL을 갖는 환자에서 38.6개월이었고, MZL을 갖는 환자에서는 미달했다. FL을 갖는 환자 중에서, 초기 화학면역요법(POD24; n=62) 후 2년 미만으로 진행한 환자는 38.6개월의 DOR 중앙값을 가진 반면, POD24를 갖지 않는 환자에 대해서는 DOR 중앙값은 미달했다(n=37). 무진행 생존 중앙값은 FL에서 39.6개월이었고, MZL에서 17.3개월이었으며; 다음 치료까지의 시간 중앙값은 FL에서는 39.6개월이었고, MZL에서는 미달했다. OS 중앙값은 두 질환 유형 모두에서 미달했고, 이때 24개월에서 추정된 OS는 각각 FL에서 81% 및 MZL에서 70%였다. iNHL로 모든 치료 환자에서 일반적인 등급 3 이상의 AE는 이전 보고와 일치하였다: 호중구감소증(33%), 호중구 수 감소(28%), 및 빈혈(25%). 주입 후 30일 이상에서 존재한 등급 3 이상의 혈구감소증이 iNHL을 갖는 환자 중 34%에서 보고되었다(33% FL; 36% MZL). 이전 보고와 같이, 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사건(NE)이 각각 iNHL을 갖는 환자 중 7%(6% FL; 8% MZL) 및 환자 중 19%(15% FL; 36% MZL)에서 발생하였다. 임의의 등급의 대부분의 CRS 사례(120명/121명) 및 NE(82명/87명)는 데이터 컷오프로 해결되었다. 평가가능한 샘플을 갖는 FL을 갖는 환자 중, 76%(65명/86명)는 주입 후 12개월까지 낮은 수준으로 검출가능한 CAR 유전자-표시 세포를 가졌고; 53%(23명/43명)는 주입 후 24개월에 검출가능한 세포를 가졌다. MZL을 갖는 평가가능한 환자 중에, 67%(8명/12명)는 주입 후 12개월에 검출가능한 CAR 유전자 표시 세포를 가졌고; 60%(3명/5명)는 주입 후 24개월에 검출가능한 세포를 가졌다. 주입 후 12개월까지 평가가능한 FL(49명/83명) 환자 중 59%와 MZL(5명/7명) 환자 중 71%에서 B 세포가 검출되었다.
CLINICAL TRIAL-5에서 약 30개월의 추적관찰 중앙값에 따라, 악시캅타젠 실로류셀은 iNHL을 갖는 환자에서 실질적이고 지속적인 장기적 이점을 입증하였다. FL에서, 높은 반응률은 지속성으로 전환되었고, 이때 DOR 중앙값은 38.6개월이었고, 데이터 컷오프에서 진행중의 반응률은 57%였다. MZL에서, 효능 결과는 추적관찰이 길어질 수록 개선되는 것으로 나타났고, 이때 DOR 및 OS 중앙값에는 아직 미달했다.
실시예 9
제1 라인(1L) 화학면역요법(CIT) 후 재발성/난치성(R/R) 거대 B-세포 림프종(LBCL)을 갖는 환자를 위한 치료 세팅에서 치료 표준(SOC) 치료(Tx)는, 제2 라인(2L) CIT에 반응성인 경우, 자가유래 줄기 세포 구제를 갖는 고용량 치료(HDT-ASCT)지만; 그러나, 다수의 환자가 2L CIT에 반응하지 않거나, 견딜 수 없거나, HDT-ASCT를 의도하지 않기 때문에, 결과는 여전히 불량하다. 악시캅타젠 실로류셀은 2회 이상의 사전 전신 치료 후 R/R LBCL에 대해 승인되었다. CAR T-세포 치료가 초기 라인의 치료의 환자에 유익할 수 있기 때문에, 2L R/R LBCL을 갖는 환자에서 악시캅타젠 실로류셀 대 SOC의 글로벌, 무작위 배정된, 제3상 시험이 실시되었고, 1차 분석(PA)의 결과를 여기에 보고한다. 적합한 환자는 18세 이상, LBCL, ECOG PS 0 내지 1, 적절한 1L CIT의 12개월 이하의 R/R 질환(항-CD20 모노클로날 항체 및 안트라사이클린 포함)을 갖는 환자였고, HDT-ASCT로 진행하고자 했다. 환자는 악시캅타젠 실로류셀 또는 SOC로 1:1로 무작위 배정되었고, 1L Tx 반응과 2L 연령-조정된 IPI(sAAIPI)에 의해 등급화되었다. 악시캅타젠 실로류셀 아암에서, 환자는 컨디셔닝(3일; 사이클로포스파미드 500 mg/m2/일 및 플루다라빈 30 mg/m2/일) 후 2×106 CAR T 세포/kg의 단일 주입을 받았다. 선택적 브릿징 Tx는 코르티코스테로이드로 제한되었다(CIT는 허용되지 않음). SOC 아암에서, 환자는 2 내지 3 사이클의 시험자 선택된, 프로토콜 정의된, 백금-기반 CIT 레지먼을 받았고; 부분 반응 또는 CR을 갖는 환자는 HDT-ASCT로 진행하였다. Lugano 분류에 따른 PET-CT에 의한 질환 평가는 무작위 배정에서 지정된 시점에 발생하였다. 아암 간에 계획된 교차 시험은 없었지만, SOC에 반응하지 않는 환자는 프로토콜외 CAR T-세포 치료를 받을 수 있었다. 악시캅타젠 실로류셀은 SOC에 비해 무-사건 생존(EFS: 질환 진행, 임의의 원인으로 인한 사망, 또는 신규한 림프종 Tx의 가장 이른 일자까지의 시간)에서 50% 개선을 유도하는 것으로 가정되었다. PA는 사건에서 유도되고, 1차 평가변수는 맹검 중앙 검토에 의한 EFS였다. 등급에 따라 테스트된 주요 2차 평가변수는 객관적 반응률(ORR) 및 전체 생존(OS; 중간 분석)이었고; 안정성도 2차 평가변수였다.
2021년 3월 18일자로 전 세계적으로 359명의 환자가 등록되었다. 환자 연령 중앙값은 59세(범위, 21 내지 81; 65세 이상 30%)였다. 총 환자 중 74%는 원발성 난치성 질환을 가졌고, 46%는 높은 sAAIPI(2 내지 3)를 가졌다. 악시캅타젠 실로류셀로 무작위 배정된 180명 환자 중에서 170명(94%)에 주입하였다. SOC로 무작위 배정된 179명의 환자 중에서 168명(94%)이 2L CIT를 개시하였고, 90명(50%)이 반응했으며, 64명(36%)이 HDT-ASCT에 도달하였다. 24.9개월의 추적관찰 중앙값에서, EFS 중앙값은 SOC에 비해 악시캅타젠 실로류셀에 의해 유의하게 더 길었고(각각 8.3개월[95% CI: 4.5 내지 15.8] 대 2개월[95% CI: 1.6 내지 2.8]; HR: 0.398; P<.0001), 24개월 EFS 비율의 Kaplan-Meier 추정치는 악시캅타젠 실로류셀에 의해 유의하게 더 높았다(41% 대 16%). 무작위 배정된 환자 중에서, ORR 및 CR 비율은 SOC에 비해 악시캅타젠 실로류셀에 의해 더 높았다(ORR: 83% 대 50%, 교차 비: 5.31[95% CI: 3.1 내지 8.9; P<.0001]; CR: 65% 대 32%). 여기에서 사전계획된 중간 분석으로서 평가된 OS 중앙값은 SOC에 비해 악시캅타젠 실로류셀이 통계적 유의성을 충족시키지 못했음에도 불구하고 선호되었다(각각, 미달 대 35.1개월; HR: 0.730; P=.027). SOC 환자의 경우, 100명(56%)이 후속 Tx로서 상업적으로 이용가능하거나 연구용 프로토콜외 CAR T-세포 치료를 받았다. 등급 3 이상의 투여후발생 이상 반응은 155명(91%)과 140명(83%)의 환자에서 발생하였고, Tx-관련 사망은 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 아암 각각에서 1 및 2명의 환자에서 발생하였다. 악시캅타젠 실로류셀로 치료된 환자에서, 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS)이 11명(6%)의 환자에서 발생했고(발증까지의 시간 중앙값 3일; 지속기간 중앙값 7일) 및 등급 3 이상의 신경학적 사건(NE)이 36명(21%)의 환자에서 발생하였다(발증까지의 시간 중앙값 7일; 지속기간 중앙값 8.5일). 등급 5의 CRS 또는 NE는 발생하지 않았다. 피크 CAR T-세포 수준 중앙값은 25.8개의 세포/μL였고; 피크까지의 시간 중앙값은 주입 후 8일이었다.
실시예 10
고위험 LBCL은 제1 라인 항-CD20 mAb 함유 레지먼 후 불량한 예후와 연관되어 신규한 치료에 대한 필요성을 강조한다. 악시캅타젠 실로류셀은 2개 라인 이상의 전신 치료 후 재발성/난치성(R/R) LBCL 치료용으로 승인된다. 여기서, 2개 라인 이상의 전신 치료 후 고위험 R/R LBCL을 갖는 환자에서 제1 라인 치료의 일부로서, 악시캅타젠 실로류셀의 제2상, 다기관, 단일-아암 연구의 1차 분석이 보고된다. 적합한 성인은 항-CD20 mAb 및 안트라사이클린 함유 레지먼시험자의 2 사이클 후, 조직학(에 따라 이중- 또는 삼중-히트 상태[MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 전좌]) 또는 3 이상의 IPI 스코어 + Lugano 분류에 따른 양성 중간 PET(도빌(Deauville) 스코어 [DS] 4/5)로 정의된, 고위험 LBCL을 가졌다. 환자는 백혈구성분채집술을 받았고, 컨디셔닝 화학요법(사이클로포스파미드 및 플루다라빈)을 받은 후 2×106 CAR T 세포/kg로 단일 악시캅타젠 실로류셀을 주입받았다. 비-화학요법 브릿징은 시험자의 재량에 따라 컨디셔닝 전 투여될 수 있다. 1차 평가변수는 시험자가 평가한 Lugano에 따른 완전 반응(CR)률이었다. 2차 평가변수는 객관적 반응률(ORR; CR + 부분 반응), 반응 지속기간(DOR), 무-사건 생존(EFS), 무진행 생존(PFS), 전체 생존(OS), 이상 반응(AE) 발생률, 및 혈중 CAR T 세포 수준 및 혈청 중 사이토카인 수준을 포함하였다. 1차 분석은 모든 치료 환자가 6개월 이상의 추적관찰을 받은 후 수행되었다.
2021년 5월 17일자로, 42명의 환자가 등록하였고, 40명은 악시캅타젠 실로류셀로 치료되었다. 연령 중앙값은 61세(범위, 23 내지 86)였고; 환자 중 68%는 남성이었고, 63%는 ECOG 1을 가졌고, 95%는 III/IV기 질환을 가졌고, 48%/53%는 DS 4/5를 가졌으며; 25%는 중앙 평가에 따라 이중- 또는 삼중-히트 상태를 가졌고, 78%는 IPI 스코어가 3 이상이었다. 총 37명의 환자를 이중- 또는 삼중-히트 조직학 또는 3 이상의 IPI 스코어를 중심적으로 확인하였고, 이는 반응에 대해 평가가능하였고, 이때 추적관찰 중앙값은 15.9개월이었다(범위, 6.0 내지 26.7). CR 비율은 78%(n=29; 95% CI, 62 내지 90)였고; 89%는 객관적 반응을 가졌고, 초기 반응까지의 시간의 중앙값은 1개월이었다. 모든 40명의 치료 환자 중에서, 90%는 객관적 반응을 가졌다(80% CR 비율). 데이터 컷오프에서, 73%의 반응 평가가능 환자는 진행중 반응을 보였다. DOR, EFS, 및 PFS에 대한 중앙값에 미달했고; 12개월 추정치는 각각 81%, 73%, 및 75%였다. 12개월에서 추정된 OS는 91%였다. 모든 40명의 치료 환자는 임의의 등급의 AE를 가졌고; 환자 중 85%는 등급 3 이상의 AE를 가졌고, 가장 일반적으로는 혈구감소증(68%)이었다. 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사건(NE)은 각각 3명의 환자(8%) 및 9명의 환자(23%)에서 발생하였다. CRS 및 NE 발증까지의 시간 중앙값은 각각 4일(범위, 1 내지 10) 및 9일(범위, 2 내지 44)이었고, 이때 지속기간의 중앙값은 6일 및 7일이었다. 모든 임의의 등급의 CRS 및 대부분의 NE(28/29)는 데이터 컷오프(지속적 떨림 등급 1 1)에 의해 해결되었고; 39/40의 CRS 사건은 주입 후 14일까지 해결되었고, 19/29 NE는 주입 후 21일까지 해결되었다. 토실리주맙은 각각 CRS 또는 NE 관리를 위해 63% 및 3%의 환자에게 투여되었고; 코르티코스테로이드는 CRS 및 NE 관리를 위해 35% 및 33%의 환자에 투여되었다. 등급 5 COVID-19 사건이 1건 발생하였다(350일차). 모든 치료 환자에서 피크 CAR T-세포 수준 중앙값은 36개의 세포/μL(범위, 7 내지 560)였고, AUC0-28에 의한 확장 중앙값은 495개의 세포/μL × 일(범위, 74 내지 4288)이었다. 주입 후 8일의 중앙값(범위, 8 내지 37)에서 CAR T-세포 수준은 최고조였다. R/R LBCL의 CLINICAL TRIAL-1 연구와 비교하여(문헌[Neelapu et al, New Engl J Med. 2017]), 이전에 CAR T 세포의 더 큰 확장과 관련되었던, 악시캅타젠 실로류셀 생성물에서 보다 높은 빈도의 CCR7+CD45RA+ T 세포가 관찰되었다(문헌[Locke et al. Blood Adv. 2020]).
1차 분석에서 악시캅타젠 실로류셀은 고위험 LBCL의, 미충족 요구가 많은 집단의 환자에서 높은 비율의 신속 반응 및 완전 반응을 보였다. 15.9개월의 추적관찰 중앙값에 따라, DOR, EFS 및 PFS의 중앙값에는 아직 미달했고, 70% 초과의 환자가 데이터 컷오프에서 반응을 유지하였으므로, 반응은 지속적이었다. 악시캅타젠 실로류셀에 의한 신규한 안전성 신호는 이전 라인에서 보고되지 않았다.
실시예 11
본 실시예는 실시예 10과 관련되며 그것에서 확장된다. 2019년 2월 6일부터 2020년 10월 22일 사이에, 총 42명의 환자가 등록하였고, 백혈구성분채집술을 수행하였다(표 28). 악시캅타젠 실로류셀을 42명의 모든 환자에 대해 제조하고, 40명에게 투여하였다. 한 환자는 그의 요청에 따라 치료를 받지 않았고, 한 환자는 2차 원발성 악성종양이 발견됨에 따라 치료 전 연구에서 철회되었다. 백혈구성분채집술로부터 악시캅타젠 실로류셀 생성물의 치료 설비로의 전달까지의 시간 중앙값은 18일(범위, 14 내지 32; 표 29)이었다. 1차 분석의 데이터 컷오프 날짜는 2021년 5월 17일이었다. 1차 효능 분석에 포함된 환자(N=37) 중 추적관찰 시간의 중앙값은 15.9개월(범위, 6.0 내지 26.7)이었고, 악시캅타젠 실로류셀로 모든 치료된 환자(N=40) 중 추적관찰 시간의 중앙값은 17.4개월(범위, 6.0 내지 26.7)이었다.
[표 28]
Figure pct00098
[표 29]
Figure pct00099
악시캅타젠 실로류셀로 치료된 40명의 환자 중에서, 연령 중앙값은 61세였다(범위, 23 내지 86, 표 30). 환자는 미만성 LBCL(DLBCL)이 23명(58%), 이중- 또는 삼중-히트 림프종이 12명(30%), 달리 명시되지 않은 고등급 B-세포 림프종이 2명(5%), 및 기타로 분류된 질환 3명(8명)이 포함되었다(표 30). 대부분의 환자(95%)는 III 또는 IV기 질환을 가졌고, 78%는 3 이상의 IPI 스코어를 가졌다(표 30). 모든 환자는 하나의 사전 전신 요법 - 가장 일반적으로는 R-CHOP(48%) 또는 DA-EPOCH-R(45%) - 의 2 사이클을 받았다. 사전 치료의 마지막 투여부터 백혈구성분채집술까지의 시간 중앙값은 1개월이었다. 모든 환자는 이중- 또는 삼중-히트 상태 중 어느 하나 및/또는 초기 진단과 등록 사이에 어떤 시점에 3 이상의 IPI 스코어를 갖는 경우 고위험으로 간주되었고, 모든 환자는 도빌 PET 스코어가 4(48%) 또는 5(53%)이면서 현지 검토에 따라 PET2+였다. 7명의 환자는 백혈구성분채집술 후와 컨디셔닝 화학요법 전에 비화학요법 브릿징 요법을 받았다. 5명의 환자는 중추신경계(CNS) 예방제를 받았다.
[표 30]
Figure pct00100
프로토콜에 따라, 1차 효능 분석은 중심적으로 확인된 질환 유형(이중- 또는 삼중-히트 림프종)을 갖거나 IPI 스코어가 3 이상이고, 1×106개 이상의 CAR T 세포/kg을 받은 환자를 포함하였다. 1차 효능 분석에 포함된 37명의 환자 중, 완전 반응률은 78%(95% CI, 62 내지 90)였다. 첫번째 완전 반응까지의 시간 중앙값은 30일(범위, 27 내지 207)이었다. 객관적 반응률은 89%(95% CI, 75 내지 97)였으며, 첫번째 객관적 반응까지의 시간의 중앙값은 29일(범위, 27 내지 207)이었다. 데이터 컷오프 일자에서, 25명의 환자(완전 반응자의 86%; 1차 효능 분석 환자의 68%)가 진행중 완전 반응을 보였고, 1차 효능 분석 27명의 환자(1차 효능 분석에서 82%의 객관적 반응자; 73%의 환자)가 진행중 객관적 반응을 보였다.
주요 하위그룹 간의 완전 반응률 및 객관적 반응률은 일반적으로 전체 환자 집단과 일치했다. 이중-히트 또는 삼중-히트 림프종과 IPI 스코어 3 이상을 갖는 4명의 모든 환자들은 완전 반응을 달성하였고; 65세 이상의 13명의 모든 환자는 객관적 반응을 달성하였다. 이중-히트 또는 삼중-히트 림프종과 IPI 스코어가 2 이하인 6명의 환자에 대한 완전 반응률은 샘플 크기가 작았음에도 불구하고, 전체 집단보다 더 낮았다(50% 대 78%).
데이터 컷오프 시점에서 15.9개월의 추적관찰 중앙값에 따라, 지속기간, 무진행 생존, 및 무사건 생존에 대한 중앙값에는 아직 미달했다. 12개월에서 반응 지속기간, 무진행 생존, 및 무사건 생존에 대한 추정된 비율은 각각 81%, 75%, 및 73%였다. 12개월 추정된 전체 생존율은 91%였다. 1차 효능 분석에 포함된 37명의 환자 중, 32명(86%)은 데이터 컷오프 시점에 여전히 생존하였다. 효능 결과는 악시캅타젠 실로류셀로 모든 치료된 환자에서 유사하였다(N=40; 표 31).
[표 31]
Figure pct00101
5명의 환자는 데이터 컷오프 시점에서 악시캅타젠 실로류셀에 대한 초기 반응 후 질환 진행을 경험하였고: 한 명의 환자는 악시캅타젠 실로류셀로 재치료되었고, 부분 반응을 달성했으며; 두 명의 환자는 후속 치료를 받았으나 반응하지 않았고; 한 명의 환자는 악시캅타젠 실로류셀 재치료를 위해 선별되었고, 치료를 대기하였고; 한 명의 환자는 알려지지 않은 후속 치료과 데이터 컷오프 일자에 여전히 생존한다. 어떤 환자도 CNS 재발을 경험하지 않았다. 한 명의 환자는 악시캅타젠 실로류셀에 대한 최상의 반응으로서 부분 반응을 달성한 후 자가유래 줄기 세포 이식을 포함한 후속 치료를 진행하였고, 이후 환자는 완전 반응을 달성하였다. 3명의 환자들은 악시캅타젠 실로류셀에 대한 안정한 질환의 최상의 반응을 달성하였다. 데이터 컷오프 시점에, 한 명의 환자는 후속 치료를 받지 않았지만 여전히 생존하였고, 두 명의 환자는 후속 치료를 받았지만 진행성 질환으로 인해 사망하였다. 악시캅타젠 실로류셀에 대한 최상의 반응으로서 진행성 질환을 가진 환자는 후속 치료를 지속하고자 했지만 진행성 질환으로 인해 사망하였다.
40명의 모든 치료 환자는 임의의 등급의 적어도 하나의 이상 반응을 경험하였고, 이때 등급 3 이상의 이상 반응은 34명(85%)의 환자에서 경험되었다. 임의의 등급의 가장 일반적인 투여후발생 이상 반응은 발열(100%), 두통(70%), 및 호중구 수 감소(55%)였다. 등급 3 이상의 가장 일반적인 투여후발생 이상 반응은 호중구 수 감소(53%), 백혈구 감소증(43%), 및 빈혈(30%; 표 32)이었다.
[표 32]
Figure pct00102
임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군(CRS)이 40명 환자 모두에서 발생하였다(표 3). 대부분의 CRS 사례는 등급 1 또는 2(93%)이었고, 이때 3명(8%)은 등급 3 이상이었고 CRS로 사망한 환자는 없었다. 임의의 등급의 가장 일반적인 CRS 증상은 발열(100%), 저혈압(30%), 오한(25%) 및 저산소증(23%)이었다. 악시캅타젠 실로류셀 주입 후 CRS에 대한 발증까지 시간 중앙값은 4일(범위, 1 내지 10; 표 33)이었다. 40명의 환자 모두(100%)는 데이터 컷오프에 의해 이들의 CRS가 해결되었고, 이때 사건 지속기간 중앙값은 6일이었다. CRS는 25명의 환자(63%)에서 토실리주맙, 14명의 환자(35%)에서 스테로이드, 1명의 환자(3%)에서 승압제로 관리되었다.
[표 33]
Figure pct00103
임의의 등급의 신경학적 사건은 29명(73%)의 환자에 의해 경험되었으며, 이때 9명(23%)의 사례는 등급 3 이상이다. 신경학적 사건으로 인해 사망한 환자는 없었다. 임의의 등급의 가장 일반적인 신경학적 사건은 착란 상태(28%), 뇌병증(25%) 및 떨림(25%)이었다. 뇌병증의 등급 4의 중대한 이상 반응은 2명의 환자(5%)에서 경험되었고; 둘 모두는 데이터 컷오프에 의해 완전 해결되었다. 신경학적 사건의 발증까지의 시간 중앙값은 9일(범위, 2 내지 44)이었고, 사건 지속기간의 중앙값은 7일이었다. 데이터 컷오프 시점에서, 28명의 환자에서 신경학적 사건이 해결되었으며, 이때 1명의 환자가 등급 1 떨림의 진행중 신경학적 사건을 경험하였다. 신경학적 사건은 13명의 환자(33%)에서 스테로이드로 관리되었고, 1명의 환자(3%)에서 토실리주맙으로 관리되었다. 추가적으로, 신경학적 사건 관리를 위해 기계적 환기가 필요한 환자는 없었고 신경학적 독성으로 사망한 환자도 없었다.
임의의 등급의 중대한 이상 반응은 18명의 환자(45%; 표 34)에 의해 경험되었다. 총 13명의 환자(33%)는 임의의 등급의 감염을 경험하였고(표 35); 이러한 사건 중 3건은 COVID-19 감염이었으며, 이는 하나의 등급 2 및 등급 5 COVID-19 감염(환자가 COVID-19에 대한 백신 접종을 받은 것으로 보고되지 않음) 및 하나의 등급 3 COVID-19 폐렴(환자가 COVID-19에 대한 백신을 완전히 접종받았음)을 포함한다. 나머지 10건의 감염 이상 반응은 등급 3(n=4), 등급 2(n=3), 또는 등급 1(n=3)이었으며, 등급 1의 사건은 사이토메갈로바이러스 감염을 포함하였다. 총 4명의 환자(10%)는 저감마글로불린혈증의 이상 반응을 가졌고; 모든 4건의 사건은 등급 2이었다. 등급 3 이상의 혈구감소증은 환자의 68%(n=27)에서 나타났다. 30일차 또는 이후에 존재한 등급 3 이상의 혈구감수증은 8명의 환자(20%)에 의해 경험되었다. 임의의 등급의 모든 혈구감소증은 데이터 컷오프에 의해 해결되었으며, 이때 지속기간 중앙값은 0.5개월이었다. 종양 용해 증후군, 복제 가능 레트로바이러스, 또는 악시캅타젠 실로류셀 관련 이차 악성종양의 사례는 보고되지 않았다.
[표 34]
Figure pct00104
[표 35]
Figure pct00105
악시캅타젠 실로류셀로 치료된 환자 중 총 6명의 환자(15%)가 사망하였고, 이 중 4명(10%)은 후속 치료 진행 후 진행성 질환으로 사망하였다. 다른 2건의 사망은 COVID-19(주입 후 350일차) 및 패혈성 쇼크(주입 후 287일차)로 인한 것이었다. COVID-19로 인한 사망만 부작용으로 보고되었다. 환자가 후속 치료를 진행한 후에 패혈성 쇼크가 보고되었다.
CAR T-세포 확장은 모든 40명의 환자의 말초 혈액에서 관찰되었다. 피크 CAR T 세포 수준의 중앙값은 36.27 세포/μL였고, 0일 내지 28일차에서 예정된 방문에 대한 혈중 CAR T 세포의 플롯의 곡선하 면적의 중앙값(AUC0-28)은 495.38 세포/μL × 일이었다. 혈 중 피크 항-CD19 CAR T-세포 수준까지의 시간 중앙값은 8일(범위, 8 내지 37; 표 S6)이었다. 약동학적 프로파일은 이중- 또는 삼중-히트 림프종 및 3 이상의 IPI 스코어를 갖는 환자를 포함하여, 상이한 진단 범주의 환자 간에 유사하였다(표 36). 주입 후 6개월에, 평가가능한 샘플에 의해 21명 환자 중 13명(62%)은 낮지만 혈중 CAR 유전자 표시 세포의 검출가능한 수준을 유지하였다. 3명의 환자는 대략적인 재발 시점에 평가가능한 샘플을 가졌고, 이 중 2명은 혈중 검출가능한 CAR 유전자 표시 세포를 가졌다. 재발한 2명의 추가 환자는 재발 시 평가가능한 샘플을 갖지 않았으나; 그러나 이들은 재발 전 평가된 마지막 시점에 혈중 검출가능한 CAR 유전자 표시 세포를 가졌다(85일 및 145일차).
[표 36]
Figure pct00106
재발 또는 비반응 환자 중 CAR T 세포 및 AUC0-28의 중앙값 피크 수준은 더 높은 경향을 보였지만, 데이터 컷오프 날짜에 진행중 반응을 갖는 환자와 유의하게 다르지 않았다. CAR T-세포 존속성은 재발 질환을 갖거나 악시캅타젠 실로류셀에 반응하지 않은 환자에 비해 진행중 반응을 갖는 환자에서 유사하게 감소하였다. 추가적으로, 피크 또는 AUC0-28 및 반응 사이의 경향성은 확인되지 않았다.
중앙값 베이스라인 종양 부담 값(2778 mm2) 미만의 직경의 곱의 합에 따라 종양 부담을 갖는 환자는, 베이스라인 종양 부담이 2778 mm2초과인 환자에 비해(차이는 통계적으로 유의하지 않았지만), CAR T 세포의 중앙값 피크 수준이 더 낮았고, AUC0-28이 더 낮았으며, 피크까지 평균 시간이 더 낮았다. 등급 3 이상의 CRS(n=3)를 경험한 환자는 등급 2, 등급 1을 경험하거나 CRS가 없는 환자보다 중앙값 비가 4.0x 및 2.2x인 혈중 CAR T 세포의 피크 수준 및 AUC0-28을 가졌다. 등급 3 이상의 신경학적 사건을 경험한 환자는, 두 그룹 사이의 차이가 유의하게 다르지 않았음에도 불구하고, 등급 2, 등급 1을 경험하거나 신경학적 사건을 경험하지 않은 환자보다 중앙값 비가 2.1x 및 2.3x인 혈중 CAR T 세포의 피크 수준 및 AUC0-28을 가졌다.
대부분의 혈청 사이토카인의 피크까지의 시간의 중앙값은 8일 이내였다. 등급 2, 등급 1을 가졌거나, CRS 또는 신경학적 사건을 경험하지 않은 환자에 비해, 등급 3 이상의 CRS 또는 신경학적 사건을 경험한 환자에서 여러 혈청 분석물이 상승하였다. 등급 3 이상의 신경학적 사건을 경험한 환자들 중에서 그렇지 않은 환자에 비해 피크에서 적어도 2배 높은 혈청 분석물들 중 인터류킨(IL)-5, MIP-1α, IFN-γ, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), 페리틴, TNF-α, IL-10, IL-8, 및 PDL1은 모두 유의하게 더 높은 것으로 결정되었다(P<0.05). 그렇지 않은 환자에 비해 등급 3 이상의 CRS를 경험한 환자들 중에서 적어도 4배 높은 혈청 사이토카인 피크 값이 분석되었지만, 등급 3 이상의 CRS를 경험한 환자 집단의 작은 규모로 인해, 유의성에 대해서는 평가되지 않았다(n=3). 등급 3 이상의 CRS를 경험한 환자들 중에서 가장 높게 상승된 혈청 사이토카인은 IL-6, IL-8, 및 GM-CSF였다.
실시예 12
2L R/R LBCL에서 제3상 무작위 배정된 임상 시험은 무사건 생존에서의 표준 치료(SOC) 구제 화학요법 및 자가유래 이식과 고용량 화학요법에 대한 악시캅타젠 실로류셀 우수성을 입증하였다(EFS; 위험 비[HR], 0.398; P<.0001; 문헌[Locke et al. N Eng J Med. 2021]). 본원에 개시된 것은 preTx 종양 부담(TB), 조직 저산소증-관련 락테이트 데히드로게나아제(LDH) 수준 및 종양 미세환경(TME)을 포함한 종양 특징의 탐색적 평가변수이다.
방법: TB는 6 이하의 기준 병변의 직경의 곱의 합(SPD)으로서 계산되었다. 혈청 LDH를 평가하였다. 두 치료 아암에서 PreTx 종양 샘플을 분자 평가에 사용하였다. NanoString IO 360™ 패널과 T-세포 관여와 관련된 사전지정된 면역 상황 지수(Immunosign 15[IS15] 및 21[IS21])에 의해 종양 RNA 발현을 분석하였다. 이전의 임상 연구로부터의 종양 RNA 발현 데이터는 3L R/R LBCL을 갖는 환자와 비교하기 위해 사용되었다. CD19 단백질 발현의 H-스코어는 면역조직화학법으로 평가되었다. 종양-관련 분자 시그니처와 임상 결과 사이의 관련성이 평가되었다. 기술적 통계를 수행하였다(P<.05는 유의성을 나타냄).
결과: 악시캅타젠 실로류셀 환자의 EFS는 preTx TB(HR 1.01[95% CI, 0.88 내지 1.16]; P=.89) 또는 LDH(HR, 0.98[95% CI, 0.74 내지 1.29]; P=.86)와 연관되지 않지만, 더 높은 preTx TB(HR, 1.17[95% CI, 1.03 내지 1.32]; P=.01) 또는 더 높은 LDH(HR, 1.29[95% CI, 1.02 내지 1.63], P=.03)를 갖는 SOC 환자에서 불량하였다. PreTx TB는 무반응자 또는 재발한 SOC 환자에 비해 진행중 반응을 갖는 환자에서 더 낮았지만(P =.16), 악시캅타젠 실로류셀 환자에서는 그렇지 않았다(P =1). 비-GCB 기원 세포 아형은 SOC에서 EFS에 대한 불량한 예후 인자이지만 악시캅타젠 실로류셀에서는 아니다. EFS는 GCB에 비해 비-GCB의 SOC 환자에서 유의하게 더 불량하였다(HR, 1.82 [95% CI, 1.12 내지 2.96]; P=.02). IO360 분석은 B-세포 계통 항원(CD19, CD20 및 BCMA) 및 종양 세포에 의해 고도로 발현된 마커(CD45RA, IRF8 및 BTLA)의 유전자 발현이 악시캅타젠 실로류셀에 대한 객관적 및 지속적 반응과 양의 관련성을 가짐을 보였다. 악시캅타젠 실로류셀이 CD19 발현 수준에 관계 없이 SOC보다 우수했지만, 진행중 반응 가능성은 보다 높은 CD19 H-스코어에 따라 증가하였다. PreTx TME IS15 및 IS21 스코어는 일반적으로 3L에 비해 2L에서 더 높았다.
결론: R/R LBCL을 갖는 환자에서, 악시캅타젠 실로류셀은 더 높은 TB 및 LDH와 같이, 주요 예후 그룹에 걸쳐 SOC보다 우수하였다. 악시캅타젠 실로류셀은 현저한 B-세포 특징을 갖는 종양에서 지속적 반응에 대한 가장 큰 잠재성을 보였지만, 이러한 특징들에도 불구하고 SOC에 대해 우수하였다. 악시캅타젠 실로류셀에 의한 조기 개입은 3L 세팅에 비해 2L에서 면역 침윤이 보다 높은 TME에 의해 추가로 지지되며, 이는 높은 TB를 갖는 환자에서 2L 악시캅타젠 실로류셀에 대한 더 깊은 반응이 더 유리한 면역 상황에 기인할 수 있음을 시사한다.
실시예 13
배경: R/R LBCL을 갖는 노인 환자는 열등한 결과, 독성 증가, 및 제2 라인(2L) SOC 치료(Tx)를 견딜 수 없는 위험이 있다. 추가로, 2L SOC Tx는 흔히 건강과 연관된 삶의 질 저하와 관련이 있다. 임상 연구에서, R/R LBCL을 갖는 노인 환자에서 2L 악시캅타젠 실로류셀 대 SOC의, PRO를 포함한 결과를 평가하였다.
방법: 65세 이상의 환자를 계획된 하위그룹 분석에서 평가하였다. 1L 화학면역요법(CIT) 후 12개월 이내에 ECOG PS 0 내지 1 및 R/R LBCL을 갖는 환자를 악시캅타젠 실로류셀 또는 SOC에 대해 1:1로 무작위 배정하였다(백금-기반 CIT의 2 내지 3 사이클; 부분 또는 완전 반응(CR)을 갖는 환자는 HDT-ASCT로 진행함). EORTC QLQ-C30(Global Health[GH] 및 Physical Functioning [PF]) 및 EQ-5D-5L VAS를 포함하는, PRO 기기를 베이스라인(BL; Tx 전) 포함, 일(D) 50, D100, D150, 및 개월(M)9, 이후 최대 24개월까지 매 3개월마다 또는 무사건 생존 사건(EFS) 시점 중 먼저 발생한 시점에 투여하였다. QoL 분석 세트는 D50, D100, 또는 D150에서 1회 이상 측정이 완료된 BL PRO를 갖는 모든 환자를 포함하였다. 임상적으로 유의미한 변화를 각각 EORTC QLQ-C30 스코어에 대해 10점, EQ-5D-5L VAS 스코어에 대해 7점으로 정의하였다.
결과: 51명과 58명의 노인 환자를 각각 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 아암에 대해 무작위 배정하였고, 이때 연령 중앙값(범위)은 70세(65 내지 80) 및 69세(65 내지 81)였다. BL에서, SOC 환자에 비해 더 많은 악시캅타젠 실로류셀은 2L 연령-조정된 IPI 2 내지 3(53% 대 31%) 및 상승된 LDH(61% 대 41%)를 포함하는 고위험 특징을 가졌다. EFS는 SOC에 비해 악시캅타젠 실로류셀(HR, 0.276, P<0.0001)에서 우수하였고, CR 비율은 보다 높았다(75% 대 33%). 등급 3 이상의 Tx-관련 이상 반응(AE)은 각각 악시캅타젠 실로류셀 및 SOC 환자 중 94% 및 82%에서 발생하였고, 등급 5 Tx 관련 AE는 0 및 1명의 환자에서 발생하였다. 46명의 악시캅타젠 실로류셀 및 42명의 SOC 환자를 포함하는 QoL 분석 세트에서, D100에서 BL로부터 스코어의 평균 변화에서 통계적으로 유의하고 임상적으로 유의미한 차이가 존재하여 EORTC QLQ-C30 GH(P<0.0001) 및 PF(P=0.0019) 및 EQ-5D-5L VAS(P<0.0001)에 대해 악시캅타젠 실로류셀을 선호했다. 3개의 모든 도메인에 대해, 스코어는 또한 D150에서 SOC에 비해 악시캅타젠 실로류셀을 선호하였다(P<0.05). 평균 추정 스코어는 악시캅타젠 실로류셀 아암(D150까지)에서 더 초기에 BL 스코어로 수치적으로 돌아가거나 이를 초과했지만, SOC 아암에서 M15까지 BL 스코어와 같거나 초과하지는 않았다.
결론: 악시캅타젠 실로류셀은 65세 이상의 환자에서 유의하게 개선된 EFS와 관리가능한 안전성 프로파일과 함께 2L SOC보다 우수함을 입증하였다. SOC에 비해, 악시캅타젠 실로류셀은 또한 여러 검증된 PRO 기기로 측정한 바에 따라 SOC보다 QoL에서 유의미한 개선을 보였으며, 이때 pre-Tx QoL로의 보다 신속한 회복이 시사되었다. SOC에 비해 악시캅타젠 실로류셀로의 우수한 임상 결과 및 환자 경험은 65세 이상의 환자에 대해 2L R/R LBCL에서 Tx 선택을 알리는 것을 보조해야 한다.
본 출원에 인용된 모든 간행물, 특허, 특허출원 및 기타 문헌은, 이들 각각의 간행물, 특허, 특허출원 또는 기타 문헌이 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함되는 바와 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
다양한 특정 실시형태/양태가 예시되고 기재되었지만, 본 개시내용의 사상 및 범주를 벗어나지 않는 한 다양한 변경이 이루어질 수 있다는 것을 이해할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> KITE PHARMA, INC. <120> IMMUNOTHERAPIES <130> K-1108-WO-PCT <140> PCT/US2022/016961 <141> 2022-02-18 <150> 63/274,342 <151> 2021-11-01 <150> 63/250,634 <151> 2021-09-30 <150> 63/227,733 <151> 2021-07-30 <150> 63/215,838 <151> 2021-06-28 <150> 63/210,962 <151> 2021-06-15 <150> 63/196,620 <151> 2021-06-03 <150> 63/151,710 <151> 2021-02-20 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5

Claims (20)

  1. 환자에서의 악성종양의 치료 방법으로서,
    ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는, 환자의 종양에서 골수성 염증 수준을 평가하는 단계;
    적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준 측정으로부터, 환자가 유효 용량의 조작된 림프구를 투여받아야 할지, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 적어도 부분적으로 투여받아야 되는지를 결정하는 단계; 및
    상기 결정 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 투여하는 단계를 포함하며,
    환자는 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준이 사전결정된 수준 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 환자는 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준이 사전결정된 수준 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여되는, 악성종양의 치료 방법.
  2. 제1항에 있어서, 병용 요법은 T-세포 증식을 향상시키는 약제, 및 종양에서 골수 집단을 감소시키는 약제 중 적어도 하나를 포함하는, 악성종양의 치료 방법.
  3. 제2항에 있어서, 적어도 하나의 약제는 항-CD47 길항제, STING 작용제, ARG1/2 억제제, CD73xTGFβ mAb, CD40 작용제, FLT3 작용제, CSF/CSF1R 억제제, IDO1 억제제, TLR 작용제, PD-1 억제제, 면역조절 이미드 약물, CD20xCD3 이중특이적 항체, 종양 또는 T-세포 공자극 작용제 내 후생유전적 지형을 표적화하는 약제, 또는 이의 조합을 포함하는, 악성종양의 치료 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    환자에서 종양 부담을 결정하는 단계; 및
    상기 환자에서 종양 부담 결정 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하며,
    환자는 종양 부담이 기준 종양 부담 값 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 환자는 종양 부담이 기준 종양 부담 값 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여되는, 악성종양의 치료 방법.
  5. 제4항에 있어서, 기준 종양 부담 값은 2500 mm2 초과의 베이스라인 종양 부담(SPD) 또는 대표 종양 집단에 대한 중앙값 초과의 종양 대사 부피를 포함하는, 악성종양의 치료 방법.
  6. 제4항에 있어서, 병용 요법은 T-세포 증식을 향상시키는 약제, 및 종양에서 골수 집단을 감소시키는 약제 중 적어도 하나를 포함하는, 악성종양의 치료 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    종양에서의 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 단계; 및
    종양에서의 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 단계를 기반으로 유효 용량의 조작된 림프구, 또는 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하며,
    환자는 종양에서의 종양 골수 세포 밀도가 사전결정된 골수 세포 밀도 수준 미만인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구가 투여되고, 환자는 종양에서의 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 단계를 기반으로 종양 골수 세포 밀도가 사전결정된 골수 세포 밀도 수준 초과인 경우, 유효 용량의 조작된 림프구와 병용 요법이 투여되는, 악성종양의 치료 방법.
  8. 제7항에 있어서, 종양 골수 세포 밀도는 CD14+ 세포, CD68+ 세포, CD68+CD163+ 세포, CD68+CD206+ 세포, CD11b+ CD15+ CD14- LOX-1+ 세포, 또는 CD11b+ CD15- CD14+ S100A9+ CD68- 세포의 수준을 측정하는 것을 포함하여 정량화되는, 악성종양의 치료 방법.
  9. 제1항에 있어서, 사전결정된 수준은 대표적인 종양 집단에서 적어도 하나의 유전자의 발현 수준 중앙값인, 악성종양의 치료 방법.
  10. 제1항에 있어서, 조작된 림프구는 키메라 항원 수용체 T-세포인, 악성종양의 치료 방법.
  11. 제1항에 있어서, 유효 용량의 조작된 림프구 또는 유효 용량의 조작된 림프구 및 병용 요법은 제1 라인 치료 또는 제2 라인 치료로서 투여되는, 악성종양의 치료 방법.
  12. 제1항에 있어서, 악성종양은 고형 종양, 육종, 암종, 림프종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종(NHL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종(FL), 변형된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종(SMZL), 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL)(비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병(CLL), T-세포 림프종, 하나 이상의 B-세포 급성 림프성 백혈병("BALL"), T-세포 급성 림프성 백혈병("TALL"), 급성 림프성 백혈병(ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포형 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소세포 또는 거대 세포 여포성 림프종, 악성 림프증식성 병태, MALT 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 골수이형성 및 골수이형성 증후군, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 혈장 세포 증식성 장애, 의미 불명 단클론 감마병증(MGUS), 형질세포종, 전신성 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, POEMS 증후군, 두경부암, 자궁경부암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 간세포 암종, 전립선암, 유방암, 또는 이들의 조합인, 악성종양의 치료 방법.
  13. 면역요법을 필요로 하는 환자에서의 면역요법의 임상적 효능의 예측 방법으로서,
    ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는 환자의 종양에서의 골수성 염증의 수준을 평가하는 단계; 및
    유전자 발현 수준으로부터 적어도 부분적으로 환자에서 면역요법의 임상적 효능의 가능성을 결정하는 단계를 포함하며,
    임상적 효능의 가능성은 유전자 발현 수준과 반비례 관계에 있는, 면역요법의 임상적 효능의 예측 방법.
  14. 제13항에 있어서, 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T-세포의 비를 측정하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 임상적 효능의 가능성은 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T 세포의 비와 관련되어 종양에서 억제성 골수 세포 지수에 대한 활성화된 T 세포 지수의 보다 높은 비가 임상적 효능의 증가된 가능성을 나타내도록 하는, 면역요법의 임상적 효능의 예측 방법.
  15. 제14항에 있어서, 활성화된 T-세포 지수는 종양에서 CD3D, CD8A, CTLA4, 및 TIGIT 중 하나 이상의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하여 결정되는, 면역요법의 임상적 효능의 예측 방법.
  16. 제13항에 있어서, 환자의 종양 부담을 결정하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 임상적 효능의 가능성은 기준 종양 부담 값 초과의 종양 부담이 임상적 효능의 감소된 가능성을 나타내고, 기준 종양 부담 값 미만의 종양 부담이 임상적 효능의 증가된 가능성을 나타내도록 환자의 종양 부담과 관련되고, 기준 종양 부담은 2500 mm2인, 면역요법의 임상적 효능의 예측 방법.
  17. 제13항에 있어서, 임상적 효능은 완전 반응률, 객관적 반응률, 진행중 반응률, 반응 지속성 중앙값, 무진행 생존율 중앙값, 전체 생존율 중앙값, 또는 이의 임의의 조합을 평가하는 것을 포함하여 평가되는, 면역요법의 임상적 효능의 예측 방법.
  18. 환자에서의 억제성 종양 미세환경(TME)의 예측 방법으로서,
    ARG2, TREM2, IL8, IL13, C8G, CCL20, IFNL2, OSM, IL11RA, CCL11, MCAM, PTGDR2, 및 CCL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 유전자의 유전자 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는 환자의 종양에서의 골수성 염증의 수준을 평가하는 단계; 및
    유전자 발현 수준으로부터 적어도 부분적으로 종양 억제성 미세환경의 수준을 결정하는 단계를 포함하며,
    종양 억제성 미세환경의 수준은 보다 높은 유전자 발현 수준이 보다 높은 억제성 종양 미세환경을 나타내도록 유전자 발현 수준과 관련된, 억제성 종양 미세환경(TME)의 예측 방법.
  19. 제18항에 있어서, 종양에서 종양 골수 세포 밀도를 정량화하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 종양 억제성 미세환경의 수준은 보다 높은 종양 골수 세포 밀도가 보다 높은 억제성 종양 미세환경을 나타내도록 종양 골수 세포 밀도와 관련된, 억제성 종양 미세환경(TME)의 예측 방법.
  20. 제18항에 있어서, 종양에서 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T-세포의 비를 측정하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 종양 억제성 미세환경의 수준은 종양에서의 억제성 골수 세포 지수에 대한 활성화된 T-세포 지수의 보다 낮은 비가 보다 높은 억제성 종양 미세환경을 나타내도록 종양에서의 억제성 골수 세포에 대한 활성화된 T-세포의 비와 관련된, 억제성 종양 미세환경(TME)의 예측 방법.
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