KR20220098184A - 키메라 항원 수용체 t세포 요법 - Google Patents

키메라 항원 수용체 t세포 요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20220098184A
KR20220098184A KR1020227018999A KR20227018999A KR20220098184A KR 20220098184 A KR20220098184 A KR 20220098184A KR 1020227018999 A KR1020227018999 A KR 1020227018999A KR 20227018999 A KR20227018999 A KR 20227018999A KR 20220098184 A KR20220098184 A KR 20220098184A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cells
cell
car
grade
subject
Prior art date
Application number
KR1020227018999A
Other languages
English (en)
Inventor
애드리안 봇
존 로시
Original Assignee
카이트 파마 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 카이트 파마 인코포레이티드 filed Critical 카이트 파마 인코포레이티드
Publication of KR20220098184A publication Critical patent/KR20220098184A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/001112—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/804—Blood cells [leukemia, lymphoma]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/505—CD4; CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
    • C12N2506/11—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from blood or immune system cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Abstract

면역 또는 세포 요법에, 그리고 세포 요법에서의 사용에 적합한 세포를 제조, 생산, 처리, 배양, 단리 또는 제작하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

키메라 항원 수용체 T세포 요법
본 출원은 CAR-T세포, 이를 제조하는 방법, 및 암을 치료하는 데 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.
인간 암은 본질적으로 정상세포가 유전적 또는 후성적 전환을 거쳐 비정상 암세포가 된 것으로 구성되어 있다. 암세포는 정상세포에 의해 발현되는 것과 구별되는 단백질 및 기타 항원을 발현한다. 신체의 선천성 면역계는 이러한 비정상 종양 항원을 사용하여 암세포를 특이적으로 표적화하고 사멸시킬 수 있다. 하지만, 암세포는 T림프구 및 B림프구와 같은 면역세포가 암세포를 성공적으로 표적화하는 것을 막기 위해 다양한 메커니즘을 이용한다. 인간 T세포 요법은 대상, 예를 들어 환자에서 암세포를 표적화하고 사멸시키기 위해 생체외에서 농축 또는 변형된 인간 T세포에 의존한다. 종양 항원을 표적화할 수 있는 자연 발생 T세포의 농도가 농축된 T세포 집단을 제조하고, 순환 종양세포를 제거하고/하거나, 알려진 암 항원을 특이적으로 표적화하도록 T세포를 유전적으로 변형시켜 암 치료법을 위한 키메라 항원 수용체(CAR: chimeric antigen receptor)-T세포 집단을 생산하는 다양한 기술이 개발되었다. 이러한 치료법 중 일부는 종양 크기 및 환자 생존에 있어 유망한 효과를 나타냈다.
본원에 기재된 임의의 양태 또는 구현예는 본원에 개시된 바와 같은 임의의 다른 양태 또는 구현예와 조합될 수 있다. 본 발명이 이의 상세화 설명과 함께 기재되었지만, 이러한 설명은 첨부된 청구범위의 범주에 의해 부분적으로 한정되는 본 발명의 범주를 제한하는 것이 아니라 예시하기 위한 것으로 의도된다. 다른 양태, 이점 및 변형은 하기 구현예/청구범위의 범주 내에 속한다.
구현예 1. 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 자가유래 T세포를 포함하는 T세포 생성물의 치료적 유효량을 외투세포림프종(MCL: mantle cell lymphoma) 또는 B세포 ALL의 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 외투세포림프종(MCL) 또는 B세포 ALL을 치료하는 방법.
구현예 2. 구현예 1에 있어서, 상기 MCL 및 B세포 ALL이 재발된 또는 불응성 MCL 및 B세포 ALL이며, 선택적으로 MCL이 전형적(classical), 모세포형(blastoid), 및 다형성(pleomorphic) MCL인, 방법.
구현예 3. 구현예 1 또는 2에 있어서, 상기 MCL 및 B세포 ALL이 화학요법, 방사선요법, 면역요법(T세포 요법, 및/또는 항체 또는 항체-약물 접합체를 이용한 치료 포함), 자가유래 줄기세포 이식, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상 이후에 재발된 것이거나, 이에 대해 불응성인, 방법.
구현예 4. 구현예 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상이 1회 내지 5회의 선행 치료를 받았고, 선택적으로 선행 치료 중 적어도 하나가 자가유래 SCT, 항-CD20 항체, 안트라시클린(anthracycline) 또는 벤다무스틴(bendamustine) 함유 화학요법, 및/또는 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTKi: Bruton Tyrosine Kinase inhibitor)에서 선택되는, 방법.
구현예 5. 구현예 4에 있어서, 상기 BTKi가 이브루티닙(ibrutinib) 또는 아칼라브루티닙(acalabrutinib)인, 방법.
구현예 6. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 재발된/불응성(R/R) B세포 ALL이 1차 치료에 대해 불응성(즉, 원발성 불응성)이거나, 첫 번째 관해 후 12개월 이내 재발된 것이거나, 2회 이상의 선행 전신 요법 후 재발된 것 또는 불응성이거나, 또는 동종이계 줄기세포 이식(SCT: allogeneic stem cell transplant) 후 재발된 것으로 정의되며, 선택적으로 상기 대상이 골수 모세포 ≥5%, ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group, 미동부 종양학 협력 그룹) 전신활동도 0 또는 1, 및/또는 적절한 신장, 간 및 심장 기능을 가지고 있어야 하는, 방법.
구현예 7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 이전에 블리나투모맙(blinatumomab)을 투여받은 경우, 상기 대상이 CD19 발현이 90% 이상인 백혈병 모세포를 가지고 있어야 하는, 방법.
구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상이 백혈구성분채집술(leukapheresis) 후 그리고 조건화/림프구제거(lymphodepleting) 화학요법 전에 가교요법(bridging therapy)을 받는, 방법.
구현예 9. 구현예 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 MCL 대상이 시클로포스파미드(cyclophosphamide) 정맥내 500 mg/m2 및 플루다라빈(fludarabine) 정맥내 30 mg/m2의 림프구제거 화학요법을 받고, 두 가지 모두 T세포 주입 전 5일차, 4일차 및 3일차에 각각 제공되는, 방법.
구현예 10. 구현예 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 T세포 주입 전 4일차, 3일차, 2일차에 각각 플루다라빈 정맥내(IV) 1일 25 mg/m2, 및 주입 전 2일차에 시클로포스파미드 IV 1일 900 mg/m2의 림프구제거 요법을 받는, 방법.
구현예 11. 구현예 8 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 MCL 가교요법이 덱사메타손(dexamethasone)(예를 들어, 1일 내지 4일 동안 매일 20 mg 내지 40 mg, 또는 등가량 PO 또는 IV); 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 이브루티닙(예를 들어, 매일 560 mg PO), 및/또는 아칼라브루티닙(예를 들어, 1일 2회 100 mg PO); 면역조절제; R-CHOP, 벤다무스틴; 알킬화제; 및/또는 백금계 작용제(platinum-based agent)에서 선택되며, 상기 가교요법이 백혈구성분채집술 후 투여되고, 예를 들어 조건화 화학요법 전 5일 이내에 완료되는, 방법.
구현예 12. 구현예 8 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 하기 가교 화학요법 중 임의의 하나 이상을 받을 수 있는, 방법:
Figure pct00001
구현예 13. 구현예 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 T세포 생성물이 순환 암세포의 양성 농축, 및 결과적인 부분 또는 완전 고갈을 통해 말초혈액 단핵세포(PBMC)에서 제조되는 CD4+ CAR T세포와 CD8+ CAR T세포를 포함하는, 방법.
구현예 14. 구현예 13에 있어서, 상기 PBMC가 CD4+ 세포와 CD8+ 세포에 대한 양성 선택에 의해 T세포에 대해 농축되고, IL-2 존재 하에서 항-CD3 항체와 항-CD28 항체로 활성화된 후, 항-CD19 단일 사슬 가변 단편(scFv), CD28 및 CD3-제타 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)인 FMC63-28Z CAR을 함유하는 복제 불능 바이러스 벡터로 형질도입되는, 방법.
구현예 15. 구현예 13 또는 14에 있어서, 상기 T세포 생성물이 CD4+ T세포와 CD8+ T세포에 대해 양성으로 선택되지 않은 백혈구성분채집술 생성물로부터의 T세포를 포함하는 T세포 생성물보다 더 적은 암세포를 포함하는, 방법.
구현예 16. 구현예 13 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 T세포 생성물이 CD4+ T세포와 CD8+ T세포에 대해 양성으로 선택/농축되지 않은 백혈구성분채집술 생성물로부터의 T세포를 포함하는 T세포 생성물에 비해 다른 우수한 생성물 속성을 갖는, 방법.
구현예 17. 구현예 16에 있어서, 상기 우수한 생성물 속성이 CDRA45+CCR7+(나이브(
Figure pct00002
) 유사) T세포의 증가된 백분율, 분화된 T세포의 감소된 백분율, CD3+ 세포의 증가된 백분율, 감소된 IFN-감마 생산 및 CD3- 세포의 감소된 백분율에서 선택되는, 방법.
구현예 18. 구현예 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 MCL 대상이 체중 1 ㎏ 당 1.8×106개, 1.9×106개 또는 2×106개의 CAR 양성 생존 T세포, 최대 2×108개의 CAR 양성 생존 T세포(100 ㎏ 이상 환자의 경우)의 1회 이상의 용량으로 투여받고, 상기 B세포 ALL 대상이 체중 1 ㎏ 당 0.5×106개, 1×106개 또는 2×106개의 CAR 양성 생존 T세포, 최대 2×108개의 CAR 양성 생존 T세포(100 ㎏ 이상 환자의 경우)로 투여받는, 방법.
구현예 19. 구현예 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상이 첫 번째 주입에 대해 완전 반응을 달성한 경우, 3개월 초과의 관해 후에 진행되는 경우에는, 단, CD19 발현이 유지되고, CAR에 대한 중화 항체가 의심되지 않는다면, 상기 대상이 항-CD19 CAR T세포의 두 번째 주입을 받을 수 있으며, 여기서 반응은 루가노 분류(Lugano classification)를 사용하여 평가되는, 방법.
구현예 20. 구현예 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상이 T세포 투여 후 사이토카인 방출 증후군(CRS: cytokine release syndrome) 및 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 모니터링되는, 방법.
구현예 21. 구현예 20에 있어서, 상기 대상이 CRS 및 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 주입 후 적어도 7일 동안, 바람직하게는 4주 동안 매일 모니터링되는, 방법.
구현예 22. 구현예 20 또는 21에 있어서, 상기 CRS와 관련된 징후 또는 증상이 발열, 오한, 피로, 빈맥, 구역, 저산소증 및 저혈압을 포함하고, 신경학적 사례와 관련된 징후 또는 증상이 뇌병증, 발작, 의식 수준의 변화, 언어장애, 떨림 및 착란을 포함하는, 방법.
구현예 23. 구현예 20 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 MCL 대상에서의 사이토카인 방출 증후군이 하기 프로토콜에 따라 관리되는, 방법:
Figure pct00003
구현예 24. 구현예 20 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 MCL 대상에서의 신경학적 독성이 하기 프로토콜에 따라 관리되는, 방법:
Figure pct00004
구현예 25. 구현예 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 MCL 대상이 Ki-67 종양 증식 지수 ≥50% 및/또는 TP53 돌연변이의 존재에 따라 결정된 고위험 환자인, 방법.
구현예 26. 구현예 20 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상에서의 CRS가 하기 프로토콜에 따라 관리되는, 방법:
Figure pct00005
구현예 27. 구현예 20 내지 22 및 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상에서의 신경학적 독성이 하기 2가지 프로토콜 중 하나에 따라 관리되는, 방법:
Figure pct00006
Figure pct00007
구현예 28. 구현예 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 하기 가교 화학요법 중 임의의 하나 이상을 받을 수 있는, 방법:
Figure pct00008
구현예 29. 구현예 1 내지 28 중 어느 하나에 따른 외투세포림프종(MCL) 또는 B세포 ALL을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-CD19 CAR을 발현하는 자가유래 T세포.
구현예 30. 구현예 1 내지 28 중 어느 하나에 따른 외투세포림프종(MCL) 또는 B세포 ALL을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 항-CD19 CAR을 발현하는 자가유래 T세포의 용도.
구현예 31. 하기와 같은 예측 방법:
(i) 피크 CAR T세포 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료에 대한 대상의 객관적 반응을 예측하는 방법으로서, 여기서 객관적 반응은 피크 CAR T세포 수준과 양의 상관관계가 있고, 완전 반응과 부분 반응을 모두 포함하며, 모든 반응은 루가노 분류를 사용하여 평가되는 예측 방법.
(ii) 피크 CAR T세포 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료에 대한 반응으로 (예를 들어, 4주차에서의) 최소 잔류 질환을 예측하는 방법으로서, 여기서 음성 최소 잔류 질환은 더 높은 피크 CAR T세포 수준과 관련이 있는 예측 방법.
(iii) 치료 후 피크 CAR T세포 증식을 측정하고 이의 수준을 참조 값과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료를 받는 대상에서 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 신경학적 사례(NE)를 예측하는 방법으로서, 여기서 CAR T세포 증식이 높을수록, 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE 사례에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
(iv) (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료 후 GM-CSF 및 IL-6의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 예측하는 방법으로서, 여기서 이러한 사이토카인의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
(v) CAR T세포 치료 후 혈청 페리틴의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료를 받는 대상에서 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 페리틴의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 CRS에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
(vi) (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의) CAR T세포 치료 후 혈청 IL-2 및 IFN-감마의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-2 및 IFN-감마의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
(vii) (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의) CAR T세포 치료 후 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및/또는 혈관 세포 부착 분자(VCAM: vascular cell adhesion molecule)의 뇌척수액 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는, 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및/또는 혈관 세포 부착 분자(VCAM)의 뇌척수액 수준이 높을수록, 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
(viii) 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및/또는 퍼포린의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료 후 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및/또는 퍼포린의 피크 혈청 수준은 3등급 이상의 CRS와 양의 상관관계가 있는 예측 방법.
(ix) 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-15의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) B세포 ALL의 CAR T세포 치료 후 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-15의 피크 혈청 수준은 3등급 이상의 CRS와 음의 상관관계가 있는 예측 방법.
(x) 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 방법에 따른) CAR T세포 치료 후 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B의 피크 혈청 수준은 3등급 이상의 CRS 및 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있는 예측 방법.
(xi) 치료 후 IFN-γ, IL-6 및/또는 IL-2의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의) CAR T세포 치료 후, 환자가 4주/1개월차에 MRD(10-5 민감도) 음성이 될 것인지 여부를 예측하는 방법으로서, 여기서 IFN-γ, IL-6 및/또는 IL-2의 피크 혈청 수준은 1개월차에 MRD 음성인 것과 양의 상관관계가 있는 예측 방법.
구현예 32. 구현예 20 내지 24, 26, 27, 30 및 31 중 어느 하나에 있어서, 상기 CRS 및 NE가 문헌[Lee et al., Blood 2014; 124: 188-195]에 기재된 방법에 따라 등급화되는, 방법.
구현예 33. 구현예 31에 있어서, 상기 참조 표준이 알려진 반응, 독성 등급 및 MRD 수준에 따른 환자 집단의 사분위 분석과 같은 바이오마커 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 방법에 의해 확립되는, 방법.
구현예 34. 구현예 31에 있어서, 상기 CAR T세포 수준이 혈중 DNA 1 마이크로그램 당 CAR 유전자 카피 수로 측정되는, 방법.
구현예 35. 구현예 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 감소시키기 위해, CAR T세포 주입 후 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있는 사이토카인의 수준/활성을 감소시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 36. CAR T세포 치료를 필요로 하는 대상에서 상기 대상에게 투여된 T세포 생성물의 T세포 표현형을 조작하는 것을 포함하는, (예를 들어, 전형적, 모세포형, 및 다형성 MCL, 및 B세포 ALL에 대한) CAR T세포 치료의 효과를 개선시키는 방법으로서, 선택적으로 상기 조작은 CD3+ T세포의 수를 증가시키는 것, CD3- 세포의 수를 감소시키는 것, CDRA45+CCR7+(나이브 유사) T세포의 수/백분율을 증가시키는 것 및/또는 생산 동안 T세포 생성물에서 분화된 세포의 수/백분율을 감소시키는 것, T세포에 의한 IFN-감마 생산 수준을 감소시키는 것을 포함하며, 여기서 개선은 CDRA45+CCR7+(나이브 유사) T세포의 수/백분율 및/또는 T세포 생성물 중 분화된 세포의 수/백분율의 임의의 의도적인 조작 없이 제조된 T세포 생성물의 효과와 비교하여 관찰되는 것인, CAR T세포 치료의 효과를 개선시키는 방법.
도 1a 내지 도 1f: Ki-67 증식 지수에 의해 정의된 예후군에서의 유사한 약력학적 프로파일, 및 돌연변이된 TP53을 갖는 환자에서 증가된 사이토카인 수준에 대한 경향.
도 2a 내지 도 2i: MRD 음성 상태가 달성된 환자 중 혈청 내 선택된 사이토카인의 증가된 피크 수준.
도 3: ZUMA-3 연구 설계. CAR, 키메라 항원 수용체; DLT, 용량 제한 독성.
도 4: ZUMA-3 CONSORT 다이어그램. * AE는 3등급 폐종괴(pulmonary mass)(n = 1), 1등급 경막하혈종(n = 1) 및 3등급 발열성 호중구감소증(n = 1)이었고; † AE는 4등급 패혈증(n = 1) 및 5등급 패혈증(n = 1)이었고; ‡ 1명의 환자는 심부 정맥 혈전증으로 인해 동정적 사용(compassionate use) 하에 KTE-X19를 투여받았음(연구 배제 기준). AE, 이상사례.
도 5: 완전 반응률의 하위군 분석. BM, 골수; ORR, 전체 관해율; SCT, 줄기세포 이식.
도 6: 용량 수준에 따른 반응 지속기간, 무재발 생존기간 및 전체 생존기간.
도 7: 피크 CAR T세포 증식, 및 반응, 최소 잔류 질환 및 독성과의 연관성.
도 8: CAR T세포 곡선하면적과, 반응, 최소 잔류 질환 및 독성과의 연관성. AE, 이상사례; AUC, 곡선하면적; CAR, 키메라 항원 수용체; CRS, 사이토카인 방출 증후군; MRD, 최소 잔류 질환.
도 9: 시간 경과에 따른 피크 사이토카인 수준.
도 10: 기준선 및 주입 후 피크에서의 혈청 샘플 내 염증 마커. * 값은 사용된 검정에서 정량화의 하한을 나타냄. † 값은 사용된 검정에서 정량화의 상한을 나타냄. AE, 이상사례; CAR, 키메라 항원 수용체; CCL, C-C 모티프 리간드; CRP, C-반응성 단백질; CXCL, C-X-C 모티프 케모카인 리간드; FGFBF, 섬유모세포 성장인자 염기성 형태; FLT-1, fms 관련 수용체 티로신 키나아제 1; GM-CSF, 과립구 대식세포 집락자극인자; ICAM-1, 세포간 부착분자 1; IFN, 인터페론; IL, 인터류킨; MCP, 단핵구 화학주성 단백질-1; MDC, 대식세포 유래 케모카인; MIP, 대식세포 염증성 단백질; PDL1, 세포 예정사 리간드 1; PLGF, 태반성장인자; Rα, 수용체 알파; RA, 수용체 안타고니스트; SAA, 혈청 아밀로이드 A; SFASL, 가용성 Fas 리간드; TARC, 흉선 및 활성화 조절 사이토카인; TNF, 종양괴사인자; VCAM, 혈관세포 부착 단백질; VEGF, 혈관내피성장인자; VEGFC, 혈관내피성장인자 C; VEGFD, 혈관내피성장인자 D.
도 11: 혈청 바이오마커와, 사이토카인 방출 증후군 및 신경학적 사례와의 연관성. * 값은 사용된 검정에서 정량화의 하한을 나타냄. † 값은 사용된 검정에서 정량화의 상한을 나타냄. CRP, C-반응성 단백질; CXCL, C-X-C 모티프 케모카인 리간드; GM-CSF, 과립구 대식세포 집락자극인자; IFNγ, 인터페론 감마; IL, 인터류킨; IP, 인터페론 γ 유도 단백질; MCP, 단핵구 화학주성 단백질; Rα, 수용체 알파; RA, 수용체 안타고니스트; SAA, 혈청 아밀로이드 A.
도 12: MCL 형태 하위군에 걸친 KTE-X19의 약력학적 프로파일. AUC, 곡선하면적; CAR, 키메라 항원 수용체; CXCL10, C-X-C 모티프 케모카인 리간드 10; IFN-g, 인터페론 감마; IL, 인터류킨; MCL, 외투세포림프종; MCP-1, 단핵구 화학주성 단백질-1; MIP-1β, 대식세포 염증성 단백질-1 베타; PD-L1, 세포 예정사 리간드 1; PRF, 퍼포린; Rα, 수용체 알파; TNF-α, 종양괴사인자 알파.
도 13: MCL 형태 하위군에 걸친 KTE-X19의 약리학적 프로파일.
도 14: 이전 BTKi 하위군에 걸친 KTE-X19의 약력학적 프로파일. AUC, 곡선하면적; CAR, 키메라 항원 수용체; CXCL10, C-X-C 모티프 케모카인 리간드 10; IFN-g, 인터페론 감마; IL, 인터류킨; MCL, 외투세포림프종; MCP-1, 단핵구 화학주성 단백질-1; MIP-1β, 대식세포 염증성 단백질-1 베타; PD-L1, 세포 예정사 리간드 1; PRF, 퍼포린; Rα, 수용체 알파; TNF-α, 종양괴사인자 알파.
도 15: 이전 BTKi 하위군에 걸친 KTE-X19의 약리학적 프로파일.
도 16: 하위군에 걸친 지속 반응률.
본원에서 달리 명시적으로 제공된 경우를 제외하고, 하기 용어는 각각 하기 제시된 의미를 가질 것이다. 추가의 정의는 본 출원 전반에 걸쳐 제시되어 있다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 같은 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press]; 문헌[The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press]; 및 문헌[Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]는, 당업자에게 본 출원에 사용된 다수의 용어의 일반 사전을 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 국제단위계(Syst
Figure pct00009
me International de Unites, SI) 허용 형식으로 표시된다. 수치 범위는 해당 범위를 한정하는 수치를 포함한다. 본원에 제공된 개시내용은, 본 명세서 전체를 참조할 수 있는, 본 출원의 다양한 양태에 대한 제한이 아니다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련된 업계에서 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press]; 문헌["The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press]; 및 문헌["The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press]는, 당업자에게 본 개시내용에 사용된 다수의 용어의 일반 사전을 제공한다.
단수 형태의 표현은 임의의 인용되거나 열거된 구성요소 "하나 이상"을 나타낸다.
"약" 또는 "본질적으로 포함하는"이라는 용어는, 당업자에 의해 결정된 특정 값 또는 조성에 대한 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성을 나타내며, 이는 이러한 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방식, 즉, 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 업계의 관행에 따라 1 또는 1 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 최대 10%(즉, ±10%)의 범위를 의미할 수 있다. 예를 들어, 약 3 mg은 (10%의 경우) 2.7 mg과 3.3 mg 사이의 임의의 숫자를 포함할 수 있다. 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여, 상기 용어는 최대 10배 또는 최대 5배의 값을 의미할 수 있다. 특정 값 또는 조성이 본 출원 및 청구범위에 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"의 의미는 해당 값 또는 조성에 대한 허용 가능한 오차 범위를 포함한다. 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는, 달리 지시되지 않는 한, 언급된 범위 내 임의의 정수 값, 및 적절한 경우, 이의 분수(예컨대, 정수의 1/10 및 1/100)를 포함한다.
문맥에서 구체적으로 언급되지 않거나 명백하지 않는 한, 본원에 사용된 "또는"이라는 용어는, 포괄적이며 "또는"과 "및"을 모두 포함하는 것으로 이해해야 한다. "및/또는"이라는 용어는, 다른 것의 존재 또는 부재 하의 2개의 명시된 특징 또는 구성요소 각각을 나타낸다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 구절에 사용된 "및/또는"이라는 용어는, "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독) 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 유사하게, "A, B 및/또는 C"와 같은 구절에 사용된 "및/또는"이라는 용어는, 하기 양태 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
"예를 들어" 및 "즉"이라는 용어는, 단지 예로서, 비제한적으로 사용되며, 본 명세서에 명시적으로 열거된 항목만을 참조하는 것으로 해석되어서는 안된다.
"~ 이상", "적어도", "~ 초과" 등과 같은 용어, 예를 들어 "적어도 하나"는, 비제한적으로, 언급된 값보다 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 이상을 포함한다. 그 사이에 있는 임의의 더 큰 수 또는 분수도 포함된다. "~ 이하"라는 용어는, 언급된 값보다 작은 각각의 값을 포함한다. 예를 들어 "100개 이하의 뉴클레오타이드"는, 100개, 99개, 98개, 97개, 96개, 95개, 94개, 93개, 92개, 91개, 90개, 89개, 88개, 87개, 86개, 85개, 84개, 83개, 82개, 81개, 80개, 79개, 78개, 77개, 76개, 75개, 74개, 73개, 72개, 71개, 70개, 69개, 68개, 67개, 66개, 65개, 64개, 63개, 62개, 61개, 60개, 59개, 58개, 57개, 56개, 55개, 54개, 53개, 52개, 51개, 50개, 49개, 48개, 47개, 46개, 45개, 44개, 43개, 42개, 41개, 40개, 39개, 38개, 37개, 36개, 35개, 34개, 33개, 32개, 31개, 30개, 29개, 28개, 27개, 26개, 25개, 24개, 23개, 22개, 21개, 20개, 19개, 18개, 17개, 16개, 15개, 14개, 13개, 12개, 11개, 10개, 9개, 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개, 2개, 1개 및 0개의 뉴클레오타이드를 포함한다. 그 사이에 있는 임의의 더 작은 수 또는 분수도 포함된다.
"복수", "적어도 2개", "둘 이상", "적어도 두 번째" 등과 같은 용어는, 비제한적으로, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 이상을 포함한다. 그 사이에 있는 임의의 더 큰 수 또는 분수도 포함된다.
본 명세서 전반에 걸쳐, "포함하는"이라는 단어, 또는 "포함하다" 또는 "포함하는"이라는 변형은, 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 포함한다는 것을 의미하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 배제하지 않는 것으로 이해된다. 양태가 "포함하는"이라는 언어로 본원에 기재되는 경우에는 언제나, "~ 로 이루어진" 및/또는 "본질적으로 ~ 로 이루어진"이라는 용어로 기재된 다른 유사한 양태가 또한 제공되는 것으로 이해해야 한다. "~ 로 이루어진"이라는 용어는, 청구범위에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. In re Gray, 53 F.2d 520, 11 USPQ 255 (CCPA 1931); Ex parte Davis, 80 USPQ 448, 450 (Bd. App. 1948)("~ 로 이루어진"은 "통상적으로 이와 관련된 불순물을 제외하고 언급된 것들 이외의 물질을 포함한다는 주장을 종결하는 것"으로 정의됨). "본질적으로 ~ 로 이루어진"이라는 용어는, 청구범위의 범주를 명시된 물질 또는 단계, 및 청구된 발명의 "기본적인 및 신규한 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들"로 제한한다.
문맥에서 구체적으로 언급되거나 명백하지 않는 한, 본원에 사용된 "약"이라는 용어는, 당업자에 의해 결정된 특정 값 또는 조성에 대한 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성을 나타내며, 이는 이러한 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방식, 즉, 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "대략"은 업계의 관행에 따라 1 또는 1 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. "약" 또는 "대략"은 최대 10%(즉, ±10%)의 범위를 의미할 수 있다. 따라서, "약"은 언급된 값보다 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01% 또는 0.001% 내에서 더 크거나 더 작은 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어, 약 5 mg은 4.5 mg과 5.5 mg 사이의 임의의 양을 포함할 수 있다. 나아가, 특히 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여, 상기 용어는 최대 10배 또는 최대 5배의 값을 의미할 수 있다. 특정 값 또는 조성이 본 개시내용에 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "대략"의 의미는 해당 특정 값 또는 조성에 대한 허용 가능한 오차 범위 이내에 있는 것으로 가정해야 한다.
본원에 사용된 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는, 달리 지시되지 않는 한, 언급된 범위 내 임의의 정수 값, 및 적절한 경우, 이의 분수(예컨대, 정수의 1/10 및 1/100)를 포함하는 것으로 이해해야 한다.
"활성화", "활성화된" 등의 용어는, 비제한적으로, 검출 가능한 세포 증식을 유도하도록 충분히 자극된 면역세포(예를 들어, T세포)를 포함하는 세포의 상태를 나타낸다. 활성화는 유도된 사이토카인 생산 및 검출 가능한 이펙터 기능과 관련이 있을 수 있다. "활성화된 T세포"라는 용어는, 특히, 세포 분열 중인 T세포를 나타낸다. T세포 활성화는, 비제한적으로, CD57, PD1, CD107a, CD25, CD137, CD69 및/또는 CD71을 포함하는 1종 이상의 바이오마커의 증가된 T세포 발현을 특징으로 할 수 있다. T세포를 활성화시키고 증식시키는 방법은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어 미국 특허 제6,905,874호; 제6,867,041호; 및 제6,797,514호; 및 PCT 출원공개 WO 2012/079000호에 기재되어 있으며, 상기 문헌들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다. 일반적으로, 이러한 방법은, 세포(예컨대, T세포)를, 특정 사이토카인(예컨대, IL-2, IL-7 및/또는 IL-15)이 포함된 용액(예컨대, 급이, 배양 및/또는 성장 배지) 중에서, 비드 또는 다른 표면에 부착, 코팅 또는 결합될 수 있는 활성화제, 자극제 또는 공동자극제(예컨대, 항-CD3 항체 및/또는 항-CD28 항체)와 접촉시키는 단계를 포함한다. 동일한 비드에 부착된 활성화제(예컨대, 항-CD3 항체 및/또는 항-CD28 항체)는 "대용" 항원 제시 세포(APC)로서의 역할을 한다. 하나의 예는, 인간 T세포의 생리학적 활성화를 위한 CD3/CD28 활성화제/자극제 시스템인, The Dynabeads® 시스템이다. 하나의 구현예에서, T세포는 미국 특허 제6,040,177호 및 제5,827,642호, 및 PCT 출원공개 WO 2012/129514호에 기재된 방법을 사용하여 활성화되고 자극되어 특정 항체 및/또는 사이토카인과 함께 증식하게 되며, 상기 문헌들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
"투여", "투여하는" 등의 용어는, 당업자에게 알려진 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하여 대상에게 작용제를 물리적으로 도입하는 것을 나타낸다. 본원에 개시된 방법에 따라 제조된 면역세포의 예시적인 투여 경로에는, 정맥내(i.v. 또는 IV), 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입이 포함된다. 비경구 투여 경로는 통상적으로 주사에 의한, 장관내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 나타내며, 이에는, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 임파선내, 병변내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관내, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척추내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입뿐 아니라, 생체내 전기천공이 포함된다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 면역세포(예를 들어, T세포)는 주사 또는 주입을 통해 투여된다. 비비경구(non-parenteral) 경로에는, 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비강내, 질내, 직장, 설하 또는 국소가 포함된다. 투여는 또한, 1회 이상의 연장된 기간에 걸쳐 1회, 2회 또는 다회 이루어질 수 있다. 1종 이상의 치료제(예를 들어, 세포)가 투여되는 경우, 투여는 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있다. 순차적 투여는, 하나의 작용제를 다른 작용제 또는 작용제들의 투여가 완결된 후에야 투여하는 것을 포함한다.
"항체"(Ab)라는 용어는, 비제한적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린을 포함한다. 일반적으로, 항체는 다이설파이드(disulfide) 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H)와 2개의 경쇄(L)를 포함할 수 있다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약어화됨)과 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개 또는 4개의 불변 도메인인, CH1, CH2, CH3 및/또는 CH4를 포함할 수 있다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약어화됨)과 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 불변 도메인인, CL을 포함할 수 있다. VH 영역과 VL 영역은 프레임워크 영역(FR: framework region)으로 지칭되는 더 보존되는 영역 사이에 배치된, 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)으로 지칭되는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH와 VL은 아미노 말단에서 카르복시 말단 방향으로 다음과 같은 순서로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 면역글로불린은, 비제한적으로, IgA, 분비형 IgA, IgG 및 IgM을 포함하는, 통상적으로 알려진 아이소타입(isotype) 중 임의의 것에서 유래할 수 있다. IgG 서브클래스는 또한 당업계에 공지되어 있으며, 이에는, 비제한적으로, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4가 포함된다. "아이소타입"은, 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 인코딩되는 Ab 클래스 또는 서브클래스(예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 나타낸다. "항체"라는 용어는, 예로서, 자연 발생 및 비자연 발생 Ab; 단클론 및 다클론 Ab; 키메라 및 인간화 Ab; 인간 또는 비인간 Ab; 완전 합성 Ab; 및 단일 사슬 Ab를 모두 포함한다. 비인간 Ab는 인간에서 이의 면역원성을 감소시키기 위해 재조합 방법에 의해 인간화될 수 있다. 명시적으로 언급되지 않은 경우, 및 문맥이 달리 지시하지 않는 한, "항체"라는 용어는 또한 상기 언급된 면역글로불린 중 임의의 것의 항원 결합 단편 또는 항원 결합 부분, 1가 및 2가 단편 또는 부분, 및 단일 사슬 Ab를 포함한다.
"항원 결합 분자", "항체 단편" 등은 전체보다 적은 항체의 임의의 부분을 나타낸다. 항원 결합 분자는 항원 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예에는, 비제한적으로, 항원 결합 분자에서 형성된 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, dAb, 선형 항체, scFv 항체 및 다중특이적 항체가 포함된다. 하나의 양태에서, CD19 CAR 구조체는 항-CD19 단일 사슬 Fv를 포함한다. "단일 사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 결합 단편은 항체의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 도메인을 포함하며, 이러한 도메인은 단일 폴리펩타이드 사슬에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함하며, 이러한 링커는 scFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성할 수 있게 한다. 본원에 사용된 모든 항체 관련 용어는 당업계에서 통상적인 의미를 가지며, 이는 당업자에게 잘 이해된다.
"항원"은 면역반응을 유발하거나, 항체 또는 항원 결합 분자에 의해 결합될 수 있는 임의의 분자를 나타낸다. 면역반응은 항체 생산 또는 특정 면역적격세포(immunologically-competent cell)의 활성화, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다. 당업자는, 사실상 모든 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 임의의 거대분자가 항원으로 작용할 수 있다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 항원은 내인성으로, 즉 게놈 DNA에 의해 발현되거나, 재조합적으로 발현될 수 있다. 항원은 암세포와 같은 특정 조직에 특이적일 수 있거나, 광범위하게 발현될 수 있다. 또한, 더 큰 분자의 단편이 항원으로 작용할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원은 종양 항원이다.
"중화"라는 용어는, 리간드에 결합하여, 이러한 리간드의 생물학적 효과를 막거나 감소시키는 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 이의 단편을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 이의 단편은 직접적으로 리간드 상의 결합 부위를 차단하거나, 다르게는 간접적인 수단(예컨대, 리간드의 구조 또는 에너지 변경)을 통해 리간드의 결합 능력을 변경시킨다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 이의 단편은 이것이 결합된 단백질이 생물학적 기능을 수행하는 것을 막는다.
"자가유래"라는 용어는, 동일한 개체에서 유도된 임의의 물질로서, 이후에 이러한 개체에게 재도입되게 되는 물질을 나타낸다. 예를 들어, 본원에 기재된 조작된 자가유래 세포 요법은, 개체(예컨대, 공여자 또는 환자)에서 림프구를 채취하고, 이를 CAR 구조체를 발현하도록 조작한 후, 동일한 개체에게 다시 투여하는 것을 포함한다.
"동종이계(allogeneic)"이라는 용어는, 하나의 개체에서 유도된 임의의 물질이 이후에 동일한 종의 또 다른 개체에 도입되는 것, 예를 들어 동종이계 T세포 이식을 나타낸다.
"암"은, 신체에서 비정상 세포의 제어되지 않은 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 군을 나타낸다. 조절되지 않은 세포 분열 및 성장은 인접 조직에 침범하여, 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수도 있는 악성종양의 형성을 초래한다. "암" 또는 "암 조직"은 다양한 단계의 종양을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 암 또는 종양은, 예를 들어 암 또는 종양이 발달의 극초기 상태이며, 전이되지 않은 0기이다. 또 다른 구현예에서, 암 또는 종양은, 예를 들어 암 또는 종양이 비교적 크기가 작으며, 인근 조직으로 확산되지 않고, 전이되지 않은 I기이다. 다른 구현예에서, 암 또는 종양은, 예를 들어 암 또는 종양이 0기 또는 I기보다 크며, 인접 조직으로 성장했지만, 잠재적으로 림프절을 제외하고 전이되지 않은 II기 또는 III기이다. 추가의 구현예에서, 암 또는 종양은, 예를 들어 암 또는 종양이 전이된 IV기이다. IV기는 또한 진행암 또는 전이암으로 지칭될 수 있다.
본원에 사용된 "항종양 효과"는, 비제한적으로, 종양 부피의 감소, 종양 성장의 저해, 종양세포 수의 감소, 종양세포 증식의 감소, 전이의 수/정도의 감소, 전체 생존기간 또는 무진행 생존기간의 증가, 기대 수명 증가, 및/또는 종양과 관련된 다양한 생리학적 증상의 개선으로 나타날 수 있는 생물학적 효과를 나타낸다. 항종양 효과는 또한 종양 발생의 예방, 예를 들어 백신을 나타낼 수 있다.
"무진행 생존기간"(PFS: progression-free survival)이라는 용어는, 치료일로부터 질환 진행(일반 지침, 예컨대 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준(revised IWG Response Criteria for Malignant Lymphoma)에 따라) 또는 임의의 원인으로 인한 사망일까지의 시간을 나타낸다. "질환 진행"이라는 용어는 방사선사진 상의 악성 병변 측정으로 평가될 수 있거나, 다른 방법은 이상사례로 보고되어서는 안된다. 징후 및 증상 없이 질환 진행으로 인한 사망은 원발성 종양 유형(예를 들어, DLBCL)으로 보고될 수 있다. "반응 지속기간"(DOR)이라는 용어는, 확인된 질환 진행(일반 지침, 예컨대 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준에 따라) 또는 사망일까지 대상의 첫 번째 객관적 반응 사이의 기간을 나타낸다. "전체 생존기간"(OS)이라는 용어는, 치료일로부터 사망일까지의 시간을 나타낸다.
"사이토카인"은, 대식세포, B세포, T세포 및 비만세포를 포함하는 면역세포에 의해 방출되어 면역반응을 전파할 수 있는 비항체 단백질을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 1종 이상의 사이토카인이 요법에 반응하여 방출된다. 다른 구현예에서, 요법에 반응하여 분비된 이러한 사이토카인은 효과적인 요법을 나타내거나 시사할 수 있다. 하나의 구현예에서, "사이토카인"은 특정 항원과의 접촉에 반응하여 하나의 세포에 의해 방출된 비항체 단백질을 나타내며, 여기서 사이토카인은 제2 세포와 상호작용하여 제2 세포에서 반응을 매개한다. 본원에 사용된 "사이토카인"은, 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질을 나타내는 것으로 여겨진다. 사이토카인은 세포에 의해 내인성으로 발현되거나, 대상에게 투여될 수 있다. 사이토카인은 대식세포, B세포, T세포 및 비만세포를 포함하는 면역세포에 의해 방출되어 면역반응을 전파할 수 있다. 사이토카인은 수용세포에서 다양한 반응을 유도할 수 있다. 사이토카인은 항상성 사이토카인, 케모카인, 전염증성 사이토카인, 이펙터 및 급성기 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인터류킨(IL) 7 및 IL-15를 포함하는 항상성 사이토카인은 면역세포 생존 및 증식을 촉진시키고, 전염증성 사이토카인은 염증반응을 촉진시킬 수 있다. 항상성 사이토카인의 예에는, 비제한적으로, IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15 및 인터페론(IFN) 감마가 포함된다. 전염증성 사이토카인의 예에는, 비제한적으로, IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-13, IL-17a, 종양괴사인자(TNF)-알파, TNF-베타, 섬유모세포 성장인자(FGF) 2, 과립구 대식세포 집락자극인자(GM-CSF), 가용성 세포간 부착분자 1(sICAM-1), 가용성 혈관 세포 부착 분자 1(sVCAM-1), 혈관내피성장인자(VEGF), VEGF-C, VEGF-D 및 태반성장인자(PLGF)가 포함된다. 이펙터의 예에는, 비제한적으로, 그랜자임 A, 그랜자임 B, 가용성 Fas 리간드(sFasL) 및 퍼포린이 포함된다. 급성기 단백질의 예에는, 비제한적으로, C-반응성 단백질(CRP) 및 혈청 아밀로이드 A(SAA)가 포함된다.
"케모카인"은, 세포 화학주성 또는 방향성 이동을 매개하는 사이토카인의 한 유형이다. 케모카인의 예에는, 비제한적으로, IL-8, IL-16, 에오탁신, 에오탁신-3, 대식세포 유래 케모카인(MDC 또는 CCL22), 단핵구 화학주성 단백질 1(MCP-1 또는 CCL2), MCP-4, 대식세포 염증성 단백질 1α(MIP-1α, MIP-1a), MIP-1β(MIP-1b), 감마 유도 단백질 10(IP-10), 흉선 및 활성화 조절 케모카인(TARC 또는 CCL17)이 포함된다.
"치료적 유효량", "치료적 유효 투여량" 등은, 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합으로 사용되는 경우, 질환 발병에 대해 대상을 보호 또는 치료하거나, 질환 증상 중증도의 감소, 무증상질환기간의 빈도 및 지속기간 증가, 및/또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방으로 입증되는 질환 퇴행을 촉진시키는, (T세포 생성물을 생성하는) 본 발명의 방법에 따라 생산되는 세포(예컨대, 면역세포 또는 조작된 T세포)의 양을 나타낸다. 질환 퇴행을 촉진시키는 능력은 당업자에게 알려진 다양한 방법을 사용하여, 예컨대 임상 시험 동안 대상에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 검정에서 작용제의 활성을 검정하는 방식으로 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, T세포 요법에 사용되는 공여자 T세포는 환자에서 얻은 것이다(예를 들어, 자가유래 T세포 요법의 경우). 다른 구현예에서, T세포 요법에 사용되는 공여자 T세포는 환자가 아닌 대상에서 얻은 것이다. T세포는 치료적 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T세포의 치료적 유효량은 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개의 세포 또는 적어도 약 1010개의 세포일 수 있다. 또 다른 구현예에서, T세포의 치료적 유효량은 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포 또는 약 108개의 세포이다. 일부 구현예에서, CAR T세포의 치료적 유효량은 약 2 × 106개의 세포/㎏, 약 3 × 106개의 세포/㎏, 약 4 × 106개의 세포/㎏, 약 5 × 106개의 세포/㎏, 약 6 × 106개의 세포/㎏, 약 7 × 106개의 세포/㎏, 약 8 × 106개의 세포/㎏, 약 9 × 106개의 세포/㎏, 약 1 × 107개의 세포/㎏, 약 2 × 107개의 세포/㎏, 약 3 × 107개의 세포/㎏, 약 4 × 107개의 세포/㎏, 약 5 × 107개의 세포/㎏, 약 6 × 107개의 세포/㎏, 약 7 × 107개의 세포/㎏, 약 8 × 107개의 세포/㎏ 또는 약 9 × 107개의 세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 생존 T세포의 치료적 유효량은 체중 1 ㎏ 당 약 1 × 106개 내지 약 2 × 106개의 CAR 양성 생존 T세포이며, 약 1 × 108개의 CAR 양성 생존 T세포의 최대 용량까지이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 생존 T세포의 치료적 유효량은 약 0.4 × 108개 내지 약 2 × 108개의 CAR 양성 생존 T세포이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 생존 T세포의 치료적 유효량은 약 0.4 × 108개, 약 0.5 × 108개, 약 0.6 × 108개, 약 0.7 × 108개, 약 0.8 × 108개, 약 0.9 × 108개, 약 1.0 × 108개, 약 1.1 × 108개, 약 1.2 × 108개, 약 1.3 × 108개, 약 1.4 × 108개, 약 1.5 × 108개, 약 1.6 × 108개, 약 1.7 × 108개, 약 1.8 × 108개, 약 1.9 × 108개 또는 약 2.0 × 108개의 CAR 양성 생존 T세포이다.
본원에 사용된 "림프구"라는 용어는, 자연 살해(NK)세포, T세포, NK-T세포 또는 B세포를 포함할 수 있다. NK 세포는 선천성 면역계의 주요 구성요소를 나타내는 세포독성(세포 독성) 림프구의 한 유형이다. NK 세포는 세포자멸사 또는 세포 예정사의 과정을 통해 바이러스에 의해 감염된 종양 및 세포를 거부한다. 이들은 세포를 사멸시키는 활성화가 필요하지 않기 때문에, "자연 살해자"로 지칭된다. T세포는 세포 매개 면역(항체가 관여하지 않음)에서 중요한 역할을 담당한다. T세포 수용체(TCR)는 T세포를 다른 림프구 유형과 구별한다. 면역계의 특수 기관인 흉선은 주로 T세포의 성숙을 담당한다.
비제한적으로, 대식세포(예를 들어, 종양 관련 대식세포), 호중구, 호염기구, 호산구, 과립구, 자연살해세포(NK 세포), B세포, T세포, NK-T세포, 비만세포, 종양 침윤 림프구(TIL), 골수 유래 억제세포(MDSC) 및 수지상세포를 포함하는 "면역세포"의 여러 유형이 존재한다. 이러한 용어는 또한 이러한 면역세포의 전구체를 포함한다. 조혈줄기세포 및/또는 조혈선구세포(hematopoietic progenitor cell)는 당업계에 알려진 방법에 따라 골수, 제대혈, 사이토카인 동원 후 성체 말초혈액 등에서 유도될 수 있다. 일부 전구세포(precursor cell)는 림프계통으로 분화할 수 있는 세포, 예를 들어 림프계통의 조혈줄기세포 또는 조혈선구세포이다. 면역요법에 사용될 수 있는 면역세포의 추가의 예는, 미국 출원공개 제20180273601호에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
또한, 다음과 같은 여러 유형의 T세포가 존재한다: 즉, 헬퍼 T세포(예를 들어, CD4+ 세포, 이펙터 TEFF 세포), 세포독성 T세포(TC, 세포독성 T림프구, CTL, T-살해 세포, 세포용해 T세포, CD8+ T세포 또는 살해 T세포로도 공지됨), 기억 T세포((i) 나이브 세포와 같은 줄기 기억 TSCM 세포는 CD45RO-, CCR7+, CD45RA+, CD62L+(L-셀렉틴), CD27+, CD28+ 및 IL-7Rα+이지만, 이들은 또한 다량의 CD95, IL-2Rβ, CXCR3 및 LFA-1을 발현하고, 기억세포 특유의 다수의 기능적 속성을 나타냄; (ii) 중추 기억 TCM 세포는 L-셀렉틴을 발현하는 CCR7+ 및 CD45RO+이며, 이들은 IL-2를 분비하지만, IFNγ 또는 IL-4를 분비하지 않음; 그리고 (iii) 이펙터 기억 TEM 세포는 L-셀렉틴 또는 CCR7을 발현하지 않지만, CD45RO를 발현하고, IFNγ 및 IL-4와 같은 이펙터 사이토카인을 생산함), 조절 T세포(Treg, 억제 T세포 또는 CD4+CD25+ 조절 T세포), 자연살해 T세포(NKT) 및 감마델타 T세포. 종양 내에서 발견되는 T세포는 "종양 침윤 림프구"(TIL)로 지칭된다. 한편, B세포는 체액성 면역(항체가 관여함)에서 중요한 역할을 담당한다. 이는 항체와 항원을 만들고, 항원 제시 세포(APC)의 역할을 수행하며, 항원 상호작용에 의한 활성화 후 기억 B세포로 변한다. 포유류에서, 미성숙 B세포는 골수에서 형성되는 데, 여기서 이의 명칭이 유래된 것이다.
"나이브" T세포는 면역학적으로 분화되지 않은 채로 남아있는 성숙 T세포를 나타낸다. 흉선에서의 양성 및 음성 선택 후, T세포는 CD4+ 나이브 T세포 또는 CD8+ 나이브 T세포로 나타난다. 나이브 상태에서, T세포는 L-셀렉틴(CD62L+), IL-7 수용체-α(IL-7R-α) 및 CD132를 발현하지만, CD25, CD44, CD69 또는 CD45RO는 발현하지 않는다. 본원에 사용된 "미성숙"은, 또한 TSCM 세포 또는 TCM 세포와 같은 나이브 T세포 또는 미성항원 제시 세포 T세포의 표현형 특징을 나타내는 T세포를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 미성숙 T세포는 L-셀렉틴(CD62L+), IL-7Rα, CD132, CCR7, CD45RA, CD45RO, CD27, CD28, CD95, IL-2Rβ, CXCR3 및 LFA-1 중 하나 이상을 발현할 수 있다. 나이브 또는 미성숙 T세포는 TEM 세포 및 TEFF 세포와 같은 말단 분화된 이펙터 T세포와 대조될 수 있다.
본원에 언급된 "T세포 기능"은, 건강한 T세포의 정상적인 특징을 나타낸다. T세포 기능은 T세포 증식, T세포 활성 및/또는 세포용해 활성을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 특정 산소 및/또는 압력 조건 하에서 T세포를 제조하는 본 출원의 방법은, 하나 이상의 T세포 기능을 증가시켜, T세포를 치료 목적에 더 적합하고/하거나 더 강력하게 만들 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 T세포는 특정 산소 및/또는 압력이 결여된 조건 하에서 제조된 T세포와 비교하여 증가된 T세포 기능을 갖는다. 다른 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 T세포는 특정 산소 및/또는 압력이 결여된 조건 하에서 배양된 T세포와 비교하여 증가된 T세포 증식을 나타낼 것이다. 추가의 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 T세포는 특정 산소 및/또는 압력이 결여된 조건 하에서 배양된 T세포와 비교하여 증가된 T세포 활성을 나타낸다. 추가의 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 T세포는 특정 산소 및/또는 압력이 결여된 조건 하에서 배양된 T세포와 비교하여 증가된 세포용해 활성을 나타낸다.
세포 "증식", "증식하는" 등의 용어는, 세포 분열을 통해 수를 증가시키는 세포의 능력을 나타낸다. 증식은 세포를 카르복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 염색하는 방식으로 측정될 수 있다. 세포 증식은, 예를 들어 T세포 배양 동안 시험관내에서, 또는 예를 들어 면역세포요법(예를 들어, T세포 요법)의 투여 후 생체내에서 일어날 수 있다. 세포 증식은 본원에 기재된 또는 당업계에 알려진 방법에 따라 측정되거나 결정될 수 있다. 예를 들어, 세포 증식은 생존 세포 밀도(VCD) 또는 총 생존 세포(TVC)로 측정되거나 결정될 수 있다. VCD 또는 TVC는 이론적(분취액 또는 샘플을 특정 시점에 배양액에서 제거하여 세포 수를 결정하고, 이러한 세포 수에 연구 시작 시 배양 부피를 곱함) 또는 실제(분취액 또는 샘플을 특정 시점에 배양액에서 제거하여 세포 수를 결정하고, 이러한 세포 수에 특정 시점에서의 실제 배양 부피를 곱함) 값일 수 있다. "T세포 활성"이라는 용어는, 건강한 T세포에 통상적인 임의의 활성을 나타낸다. 하나의 구현예에서, T세포 활성은 사이토카인(예컨대, INFγ, IL-2, 및/또는 TNFα) 생산을 포함한다. 다른 구현예에서, T세포 활성은 인터페론 감마(IFNγ 또는 IFNγ), 조직괴사인자 알파(TNFα 또는 IFNα) 및 둘 모두에서 선택되는 1종 이상의 사이토카인의 생산을 포함한다. "세포용해 활성", "세포독성" 등의 용어는, 표적세포를 파괴하는 T세포의 능력을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 표적세포는 암세포, 예를 들어 종양세포이다. 다른 구현예에서, T세포는 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T세포 수용체(TCR)를 발현하고, 표적세포는 표적 항원을 발현한다.
"유전자 조작된", "유전자 편집" 또는 "조작된"이라는 용어는, 비제한적으로, 코딩 또는 비코딩 영역, 또는 이의 일부를 결실시키거나, 코딩 영역 또는 이의 일부를 삽입하는 것을 포함하는, 세포의 게놈을 변형시키는 방법을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 변형되는 세포는 림프구, 예를 들어 T세포이며, 이는 환자 또는 공여자로부터 얻을 수 있다. 세포는, 예를 들어 세포의 게놈에 혼입되는 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T세포 수용체(TCR)와 같은 외인성 구조체를 발현하도록 변형될 수 있다.
"형질도입" 및 "형질도입된"이라는 용어는, 외래 DNA가 바이러스 벡터를 통해 세포에 도입되는 과정을 나타낸다(문헌[Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)] 참조). 일부 구현예에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큐로바이러스 벡터, 엡스타인-바(Epstein Barr) 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 우두바이러스 벡터, 단순헤르페스바이러스 벡터, 아데노바이러스 연관 벡터, 렌티바이러스 벡터 또는 이들의 임의의 조합이다.
본 출원의 "키메라 항원 수용체"(CAR 또는 CAR-T) 및 T세포 수용체(TCR)는 유전자 조작된 수용체이다. 이러한 조작된 수용체는 당업계에 알려진 기술에 따라, T세포를 포함하는 면역세포에 용이하게 삽입되어 이에 의해 발현될 수 있다. CAR의 경우, 단일 수용체는 특정 항원을 인식하고, 이러한 항원에 결합될 때, 면역세포를 활성화시켜 이러한 항원을 보유하거나 발현하는 세포를 공격 및 파괴하도록 프로그래밍될 수 있다. 이러한 항원이 종양세포 상에 존재하는 경우, CAR을 발현하는 면역세포는 종양세포를 표적화하여 이를 사멸시킬 수 있다. 하나의 구현예에서, 본 출원에 따라 제조된 세포는, 항원 결합 분자, 공동자극 도메인 및 활성화 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T세포 수용체를 갖는 세포이다. 공동자극 도메인은 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 세포외 도메인은 힌지 또는 절단된 힌지 도메인을 포함한다.
"면역반응"은, 병원체가 침입한 척추동물의 신체, 병원체에 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우, 정상 인간 세포 또는 조직의 선택적 표적화, 이에 대한 결합, 이에 대한 손상, 이의 파괴 및/또는 이의 제거를 유도하는, 면역계의 세포(예를 들어, T림프구, B 림프구, 자연살해(NK)세포, 대식세포, 호산구, 비만세포, 수지상세포 및 호중구), 및 이러한 세포 중 임의의 것 또는 간에 의해 생산된 가용성 거대분자(Ab, 사이토카인 및 보체 포함)의 작용을 나타낸다.
"면역요법", "면역 요법" 등의 용어는, 면역반응을 유도, 증강, 억제 또는 다르게는 변경시키는 것을 포함하는 방법에 의한, 질환으로 고통받거나, 질환에 걸릴 위험이 있거나 또는 질환이 재발할 위험이 있는 대상의 치료를 나타낸다. 면역요법의 예에는, 비제한적으로, T세포 요법과 NK 세포 요법이 포함된다. T세포 요법은 입양 T세포 요법, 종양 침윤 림프구(TIL) 면역요법, 자가유래 세포 요법, 조작된 자가유래 세포 요법 및 동종이계 T세포 이식을 포함할 수 있다. 당업자는, 본원에 개시된 면역세포를 제조하는 방법이 임의의 암 또는 이식된 T세포 요법의 효과를 증강시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. T세포 요법의 예는, 미국 특허출원공개 제2014/0154228호 및 제2002/0006409호; 미국 특허 제7,741,465호; 제6,319,494호; 및 제5,728,388호; 및 PCT 출원공개 WO 2008/081035호에 기재되어 있으며, 상기 문헌들은 그 전문이 참조로서 인용된다.
"eACT™"로 약어화될 수 있고, 입양세포전달로도 알려져 있는 "조작된 자가유래 세포 요법"이라는 용어는, 환자 자체의 T세포를 채취하고, 이어서 하나 이상의 특정 종양세포 또는 악성종양의 세포 표면에서 발현된 하나 이상의 항원을 인식하고 표적화하도록 이를 유전적으로 변경시키는 과정이다. T세포는, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T세포 수용체(TCR)를 발현하도록 조작될 수 있다. CAR 양성(+) T세포는 공동자극 도메인과 활성화 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 부분에 연결된 특정 종양 항원에 대해 특이성을 갖는 세포외 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 발현하도록 조작된다. 공동자극 도메인은, 예를 들어 CD28, CTLA4, CD16, OX-40, 4-1BB/CD137, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, 세포 예정사-1(PD-1), 세포 예정사 리간드-1(PD-L1), 유도성 T세포 공동자극제(ICOS), ICOS-L, 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1(CD1 la/CD18), CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD247, CD276(B7-H3), LIGHT(종양괴사인자 슈퍼패밀리 멤버 14; TNFSF14), NKG2C, Ig 알파(CD79a), DAP-10, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 I 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), 활성화 NK 세포 수용체, BTLA, Toll 리간드 수용체, ICAM-1, B7-H3, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM(LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8, CD8알파, CD8베타, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD1 ld, ITGAE, CD103, ITGAL, CD1 la, LFA-1, ITGAM, CD1 lb, ITGAX, CD1 lc, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 또는 이들의 임의의 조합에서 유도된 신호전달 영역일 수 있다. 활성화 도메인은, 예를 들어 CD3 제타, 엡실론, 델타, 감마 등과 같은 CD3에서 유도될 수 있다. 하나의 구현예에서, CAR은 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 공동자극 도메인을 갖도록 설계된다. CAR scFv는, 예를 들어 모든 정상 B세포 및 B세포 악성종양(비제한적으로, NHL, CLL 및 비T세포 ALL을 포함함)을 포함하는 B세포 계통의 세포에 의해 발현되는 막관통 단백질인 CD19를 표적화하도록 설계될 수 있다. CAR+ T세포 요법 및 구조체의 예는, 미국 특허출원공개 제2013/0287748호, 제2014/0227237호, 제2014/0099309호 및 제2014/0050708호에 기재되어 있으며, 상기 문헌들은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
본원에 사용된 "공동자극 신호"는, TCR/CD3 결찰과 같은 1차 신호와 조합되어, 비제한적으로, 주요 분자의 증식 및/또는 상향조절 또는 하향조절과 같은 T세포 반응을 유도하는 신호를 나타낸다.
본원에 사용된 "공동자극 리간드"는, T세포 상의 동족 공동자극 분자와 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 상의 분자를 포함한다. 공동자극 리간드의 결합은, 비제한적으로, 증식, 활성화, 분화 등을 포함하는 T세포 반응을 매개하는 신호를 제공한다. 공동자극 리간드는, 자극 분자에 의해 제공되는 1차 신호에 더하여, 예를 들어 T세포 수용체(TCR)/CD3 복합체와 펩타이드가 로딩된 주조직적합복합체(MHC) 분자의 결합에 의한 신호를 유도한다. 공동자극 리간드는, 비제한적으로, 3/TR6, 4-1BB 리간드, Toll 리간드 수용체에 결합하는 아고니스트 또는 항체, B7-1(CD80), B7-2(CD86), CD30 리간드, CD40, CD7, CD70, CD83, 헤르페스바이러스 유입 매개체(HVEM), 인간 백혈구 항원 G(HLA-G), ILT4, 면역글로불린 유사 전사체(ILT) 3, 유도성 공동자극 리간드(ICOS-L), 세포간 부착분자(ICAM), B7-H3과 특이적으로 결합하는 리간드, 림포톡신 베타 수용체, MHC 클래스 I 사슬 관련 단백질 A(MICA), MHC 클래스 I 사슬 관련 단백질 B(MICB), OX40 리간드, PD-L2 또는 세포 예정사(PD) L1을 포함할 수 있다. 공동자극 리간드는, 비제한적으로, 4-1BB, B7-H3, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD7, ICOS, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1), 자연살해세포 수용체 C(NKG2C), OX40, PD-1 또는 종양괴사인자 슈퍼패밀리 멤버 14(TNFSF14 또는 LIGHT)와 같은, T세포 상에 존재하는 공동자극 분자와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
"공동자극 분자"는, 공동자극 리간드와 특이적으로 결합하여, 비제한적으로, 증식과 같은 T세포에 의한 공동자극 반응을 매개하는 T세포 상의 동족 결합 파트너이다. 공동자극 분자에는, 비제한적으로, 공동자극 리간드와 특이적으로 결합하여, 비제한적으로, 증식과 같은 T세포에 의한 공동자극 반응을 매개하는 T세포 상의 동족 결합 파트너인 "공동자극 분자"가 포함된다. 공동자극 분자에는, 비제한적으로, 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD33, CD45, CD100(SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3(알파; 베타; 델타; 엡실론; 감마; 제타), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, CD83 리간드, CD84, CD86, CD8알파, CD8베타, CD9, CD96(Tactile), CD1-la, CD1-lb, CD1-lc, CD1-ld, CDS, CEACAM1, CRTAM, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, ICOS, Ig 알파(CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, LIGHT, LIGHT(종양괴사인자 슈퍼패밀리 멤버 14; TNFSF14), LTBR, Ly9(CD229), 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1(CD1 la/CD18), MHC 클래스 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자, SLAM(SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4(CD244; 2B4), SLAMF6(NTB-A; Ly108), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, Toll 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1 또는 VLA-6, 또는 이들의 단편, 절단물 또는 조합이 포함된다.
일부 양태에서, 본 출원의 세포는 대상에서 얻은 T세포를 통해 얻을 수 있다. 하나의 양태에서, T세포는, 예를 들어 말초혈액단핵세포(PBMC), 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위 조직, 복수, 흉막 삼출물, 비장 조직 및 종양에서 얻을 수 있다. 또한, T세포는 당업계에서 입수 가능한 1종 이상의 T세포주에서 유도될 수 있다. T세포는 또한 FICOLL™ 분리 및/또는 성분채집술과 같은 당업자에게 알려진 임의의 수의 기술을 사용하여 대상에서 채취한 혈액 단위에서 얻을 수 있다. 일부 양태에서, 성분채집술을 통해 채취된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 후속 처리를 위해 적절한 완충액 또는 배지에 위치시킨다. 일부 양태에서, 세포를 임의의 용액(예를 들어, 중성화된 pH 값을 갖는 용액 또는 PBS) 또는 배양 배지로 세척한다. 이해되는 바와 같이, 원심분리기, 예를 들어 CobeTM 2991 세포 처리기, Baxter CytoMateTM 등을 통한 반자동화된 흐름을 사용하는 것과 같은 세척 단계가 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 세척된 세포를 1종 이상의 생체적합성 완충액, 또는 완충제 존재 유무 하의 기타 식염수 중에 재현탁시킨다. 일부 양태에서, 성분채집술 샘플의 바람직하지 않은 구성요소를 제거한다. T세포 요법을 위해 T세포를 단리하는 추가의 방법은, 미국 특허출원공개 제2013/0287748호에 개시되어 있으며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
일부 구현예에서, T세포는, 예를 들어 PERCOLLTM 구배를 통한 원심분리를 사용하여, 적혈구 세포를 용해시키고 단핵구를 고갈시키는 방식으로 PBMC에서 단리된다. 일부 구현예에서, CD4+ T세포, CD8+ T세포, CD28+ T세포, CD45RA+ T세포 및 CD45RO+ T세포와 같은 T세포의 특정 하위집단이 당업계에 알려진 양성 또는 음성 선택 기술을 통해 추가로 단리된다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 T세포 집단의 농축은 음성으로 선택된 세포에 고유한 표면 마커에 대한 항체의 조합을 이용하여 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 음성으로 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커에 대한 단클론 항체의 칵테일을 사용하는 음자성 면역부착(negative magnetic immunoadherence) 또는 유세포분석을 통한 세포 분류 및/또는 선택이 사용될 수 있다. 예를 들어, 음성 선택으로 CD4+ 세포를 농축시키기 위해, 단클론 항체 칵테일은 전형적으로 CD8, CD11b, CD14, CD16, CD20 및 HLA-DR에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용에 사용하기 위한 관심 세포 집단을 단리하기 위해 유세포분석과 세포 분류가 사용된다.
하나의 구현예에서, CD3+ T세포는 항-CD3 항체로 코팅된 Dynabead를 사용하여 PBMC에서 단리된다. CD8+ T세포와 CD4+ T세포는 CD8 마이크로비드(예를 들어, Miltenyi Biotec) 또는 CD4 마이크로비드(예를 들어, Miltenyi Biotec)를 사용하는 양성 선택에 의해 추가로 별도로 단리된다.
일부 구현예에서, PBMC는 본원에 기재된 방법을 사용하여 면역세포(예컨대, CAR)를 이용한 유전자 변형에 직접 사용된다. 일부 구현예에서, PBMC의 단리 후, T림프구가 추가로 단리되고, 유전자 변형 및/또는 증식 전 또는 후에, 세포독성 T림프구와 헬퍼 T림프구가 모두 나이브 T세포, 기억 T세포 및 이펙터 T세포 하위집단으로 분류된다.
본원에 기재된 1종 이상의 면역세포는, 예를 들어 인간 공여자를 포함하는 임의의 공급원에서 얻을 수 있다. 공여자는 항암치료, 예를 들어 본원에 기재된 방법에 따라 생성된 1종의 면역세포를 이용한 치료를 필요로 하는 대상(즉, 자가 공여자)일 수 있거나, 본원에 기재된 방법에 따라 생성되는 세포 집단의 생성 시, 상이한 개체 또는 암 환자를 치료하는 데 사용되게 되는 림프구 샘플을 공여하는 개체(즉, 동종이계 공여자)일 수 있다. 면역세포는 조혈줄기세포 집단에서 시험관내 분화될 수 있거나, 면역세포는 공여자로부터 얻을 수 있다. 면역세포 집단은 당업계에서 사용되는 임의의 적합한 방법을 통해 공여자로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 림프구 집단은 임의의 적합한 체외 방법, 정맥천자, 또는 림프구 존재 유무 하의 혈액 샘플이 수득되는 기타 혈액 채취 방법을 통해 얻을 수 있다. 림프구 집단은 성분채집술을 통해 얻는다. 1종 이상의 면역세포는, 비제한적으로, 종양을 포함하는, 1종 이상의 면역세포를 포함하는 임의의 조직에서 채취될 수 있다. 대상에서 종양 또는 이의 일부가 채취되고, 종양 조직에서 1종 이상의 면역세포가 단리된다. T세포 요법에 적합한 임의의 면역세포를 포함하는 임의의 T세포가, 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 출원에 유용한 1종 이상의 세포는 종양 침윤 림프구(TIL), 세포독성 T세포, CAR T세포, 조작된 TCR T세포, 자연살해 T세포, 수지상세포 및 말초혈액림프구로 이루어지는 군에서 선택될 수 있다. T세포는, 예를 들어 말초혈액 단핵세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위 조직, 복수, 흉막 삼출물, 비장 조직 및 종양에서 얻을 수 있다. 또한, T세포는 당업계에서 입수 가능한 1종 이상의 T세포주에서 유도될 수 있다. T세포는 또한 FICOLL™ 분리 및/또는 성분채집술과 같은 당업자에게 알려진 임의의 수의 기술을 사용하여 대상에서 채취한 혈액 단위에서 얻을 수 있다. T세포는 또한 1차 및 재프로그래밍된 다능성 줄기세포에서 T세포의 효율적인 생체외 분화를 지원하기 위해 인간 흉선 환경을 복제한, 인공 흉선 오르가노이드(ATO: artificial thymic organoid) 세포 배양 시스템에서 얻을 수 있다. T세포 요법을 위해 T세포를 단리하는 추가의 방법은, 미국 특허출원공개 제2013/0287748호, PCT 출원공개 WO2015/120096호 및 WO2017/070395호에 개시되어 있으며, 상기 문헌들은 모두 이러한 방법 및 그 전체를 설명하기 위한 목적으로 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다. 하나의 구현예에서, T세포는 종양침윤백혈구이다. 특정 구현예에서, 1종 이상의 T세포는 CD8을 발현하며, 예를 들어 CD8+ T세포이다. 다른 구현예에서, 1종 이상의 T세포는 CD4를 발현하며, 예를 들어 CD4+ T세포이다. T세포 요법을 위해 T세포를 단리하는 추가의 방법은, 미국 특허출원공개 제2013/0287748호, PCT 출원공개 WO2015/120096호 및 WO2017/070395호에 개시되어 있으며, 상기 문헌들은 모두 이러한 방법 및 그 전체를 설명하기 위한 목적으로 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
면역세포 및 이의 전구세포는 이용 가능한 방법을 통해 단리될 수 있다(예를 들어, 문헌[Rowland-Jones et al., Lymphocytes: A Practical Approach, Oxford University Press, New York (1999)] 참조). 면역세포 또는 이의 전구세포에 대한 공급원에는, 비제한적으로, 말초혈액, 제대혈, 골수, 또는 다른 조혈세포 공급원이 포함된다. 음성 선택 방법은 목적하는 면역세포가 아닌 세포를 제거하는 데 사용될 수 있다. 또한, 양성 선택 방법은 목적하는 면역세포 또는 이의 전구세포를 단리 또는 농축시킬 수 있거나, 양성 선택 방법과 음성 선택 방법의 조합이 이용될 수 있다. 단클론 항체(MAb)는 양성 선택과 음성 선택 둘 모두에 대한 특정 세포 계통 및/또는 분화 단계와 관련된 마커를 식별하는 데 유용하다. 특정 유형의 세포, 예를 들어 특정 유형의 T세포가 단리되는 경우, 비제한적으로, CD3, CD4, CD8, CD34(조혈줄기세포 및 조혈선구세포의 경우) 등을 포함하는 다양한 세포 표면 마커 또는 마커들의 조합이, 당업계에 공지된 바와 같이 세포를 단리하는 데 사용될 수 있다(문헌[Kearse, T Cell Protocols: Development and Activation, Humana Press, Totowa N.J. (2000)]; 문헌[De Libero, T Cell Protocols, Vol. 514 of Methods in Molecular Biology, Humana Press, Totowa N.J. (2009)] 참조)
PBMC는 면역세포(예컨대, CAR)를 이용한 유전자 변형에 직접 사용될 수 있다. PBMC의 단리 후, T림프구가 추가로 단리되고, 유전자 변형 및/또는 증식 전 또는 후에, 세포독성 T림프구와 헬퍼 T림프구가 모두 나이브 T세포, 기억 T세포 및 이펙터 T세포 하위집단으로 분류된다. 하나의 구현예에서, CD8+ 세포는 이러한 유형의 CD8+ 세포 각각과 관련된 세포 표면 항원을 식별하는 방식으로 나이브 세포, 중추 기억 세포 및 이펙터 세포로 추가로 분류될 수 있다. 다른 구현예에서, 중추 기억 T세포의 표현형 마커의 발현은, CCR7, CD3, CD28, CD45RO, CD62L 및 CD127을 포함하며, 그랜자임 B에 대해 음성이다. 일부 구현예에서, 중추 기억 T세포는 CD8+ T세포, CD45RO+ T세포 및 CD62L+ T세포이다. 특정 구현예에서, 이펙터 T세포는 CCR7, CD28, CD62L 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다. 추가의 구현예에서, CD4+ T세포는 하위집단으로 추가로 분류될 수 있다. 예를 들어, CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 식별하는 방식으로 나이브 세포, 중추 기억 세포 및 이펙터 세포로 분류될 수 있다.
본원에 기재된 방법은 공여자로부터 면역세포 집단을 채취하는 단계와 공여자 대상에서 얻은 1종 이상의 세포를 노출시키는 단계 사이에, 공여자로부터 얻은 면역세포 집단을 농축시키거나 제조하는 것을 추가로 포함한다. 면역세포 집단, 예를 들어 1종 이상의 T세포의 농축은, 비제한적으로, 분리 배지(예를 들어, FICOLL-PAQUETM, ROSETTESEP™ HLA Total Lymphocyte Enrichment Cocktail, Lymphocyte Separation Medium(LSA)(MP Biomedical Cat. No. 0850494X) 등)의 사용, 여과 또는 용출에 의한 세포 크기, 형상 또는 밀도 분리, 면역자기성 분리(예를 들어, 자기 활성화 세포 분류 시스템(magnetic-activated cell sorting system, MACS)), 형광 분리(예를 들어, 형광 활성화 세포 분류 시스템(fluorescence activated cell sorting system, FACS)), 또는 비드 기반 컬럼 분리를 포함하는 임의의 적합한 분리 방법을 통해 달성될 수 있다.
하나의 구현예에서, T세포는 공여자 대상에서 얻는다. 다른 구현예에서, 공여자 대상은 암 또는 종양으로 고통받는 인간 환자이다. 추가의 구현예에서, 공여자 대상은 암 또는 종양으로 고통받지 않는 인간 환자이다. 본 출원은 또한 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아쥬반트를 포함하는 조성물 또는 제형을 제공한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물 또는 제형은 부형제를 포함한다. 조성물과 제형이라는 용어는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 조성물, 치료용 조성물, 치료적으로 유효한 조성물, 약학적 조성물, 약학적으로 유효한 조성물 및 약학적으로 허용 가능한 조성물이라는 용어는, 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 상기 조성물은 비경구 전달, 흡입, 또는 경구와 같은 소화관을 통한 전달을 위해 선택될 수 있다. 상기 조성물은 당업자에 의해 알려진 방법을 통해 제조될 수 있다. 상기 조성물을 생리학적 pH 또는 약간 낮은 pH, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 이내로 유지시키기 위해 완충액이 사용된다. 비경구 투여가 고려되는 경우, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 비히클 중, 추가 치료제 존재 유무 하의, 본원에 기재된 조성물을 포함하는 무발열원(pyrogen-free)의 비경구적으로 허용 가능한 수용액의 형태이다. 예로서, 비경구 주사용 비히클은, 본원에 기재된 조성물이, 적어도 1종의 추가 치료제의 존재 유무 하에, 적절하게 보존된 멸균 등장성 용액으로 제형화되는 멸균 증류수이다. 상기 제제는 생성물의 제어된 또는 지속된 방출을 제공하는 중합체 화합물(예컨대, 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포좀을 갖는 목적하는 작용제의 제형을 포함하며, 이는 이후에 데포 주사를 통해 전달된다. 또한, 이식 가능한 약물 전달 장치가 목적하는 치료제를 도입하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, T세포 요법에 사용되는 공여자 T세포는 환자에서 얻은 것이다(예를 들어, 자가유래 T세포 요법의 경우). 다른 구현예에서, T세포 요법에 사용되는 공여자 T세포는 환자가 아닌 대상에서 얻은 것이다. T세포는 치료적 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T세포의 치료적 유효량은 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개의 세포 또는 적어도 약 1010개의 세포일 수 있다. 또 다른 구현예에서, T세포의 치료적 유효량은 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포 또는 약 108개의 세포이다. 일부 구현예에서, CAR T세포의 치료적 유효량은 약 2 × 106개의 세포/㎏, 약 3 × 106개의 세포/㎏, 약 4 × 106개의 세포/㎏, 약 5 × 106개의 세포/㎏, 약 6 × 106개의 세포/㎏, 약 7 × 106개의 세포/㎏, 약 8 × 106개의 세포/㎏, 약 9 × 106개의 세포/㎏, 약 1 × 107개의 세포/㎏, 약 2 × 107개의 세포/㎏, 약 3 × 107개의 세포/㎏, 약 4 × 107개의 세포/㎏, 약 5 × 107개의 세포/㎏, 약 6 × 107개의 세포/㎏, 약 7 × 107개의 세포/㎏, 약 8 × 107개의 세포/㎏ 또는 약 9 × 107개의 세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CAR-양성 생존 T세포의 치료적 유효량은 체중 1 ㎏ 당 약 1 × 106개 내지 약 2 × 106개의 CAR-양성 생존 T세포이며, 약 1 × 108개의 CAR-양성 생존 T세포의 최대 용량까지이다.
본원에 사용된 "환자"에는, 암(예를 들어, 림프종 또는 백혈병)을 비롯한 질환 또는 장애로 고통받는 임의의 인간이 포함된다. "대상" 및 "환자"라는 용어는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. "공여자 대상"이라는 용어는, 본원에서 추가적인 시험관내 조작을 위해 세포를 얻는 대상을 나타낸다. 공여자 대상은 본원에 기재된 방법에 따라 생성된 세포 집단으로 치료되게 되는 암 환자(즉, 자가 공여자)이거나, 본원에 기재된 방법에 따라 생성되는 세포 집단의 생성 시, 상이한 개체 또는 암 환자를 치료하는 데 사용되게 되는 림프구 샘플을 공여하는 개체(즉, 동종이계 공여자)일 수 있다. 본 발명의 방법에 따라 제조된 세포를 투여받는 이러한 대상은, "수용자 대상"으로 지칭될 수 있다.
"자극", "자극하는" 등의 용어는, 자극 분자와 이의 동족 리간드의 결합에 의해 유도된 1차 반응을 나타내며, 여기서 이러한 결합은 신호전달 사건을 매개한다. "자극 분자"는, 항원 제시 세포 상에 존재하는 동족 자극 리간드와 특이적으로 결합하는 T세포 상의 분자, 예를 들어 T세포 수용체(TCR)/CD3 복합체이다. "자극 리간드"는, 항원 제시 세포(예를 들어, 인공 항원 제시 세포(aAPC), 수지상세포, B세포 등) 상에 존재할 때, T세포 상의 자극 분자와 특이적으로 결합하여, 비제한적으로, 활성화, 면역반응의 개시, 증식 등을 포함하는 T세포에 의한 1차 반응을 매개할 수 있는 리간드이다. 자극 리간드에는, 비제한적으로, 펩타이드가 로딩된 MHC 클래스 I 분자, 항-CD3 항체, 슈퍼아고니스트(superagonist) 항-CD28 항체 및 슈퍼아고니스트 항-CD2 항체가 포함된다. 본원에 사용된 "활성화된" 또는 "활성"은, 자극된 T세포를 나타낸다. 활성 T세포는 CD137, CD25, CD71, CD26, CD27, CD28, CD30, CD154, CD40L 및 CD134에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현을 특징으로 할 수 있다.
"외인성 활성화 물질"이라는 용어는, 외부 공급원에서 유도된 임의의 활성화 물질을 나타낸다. 예를 들어, 외인성 항-CD3 항체, 항-CD28 항체, IL-2, 외인성 IL-7 또는 외인성 IL-15는 상업적으로 입수되거나 재조합적으로 생산될 수 있다. 1종 이상의 T세포에 부가되거나 이와 접촉될 때, "외인성 IL-2", "외인성 IL-7" 또는 "외인성 IL-15"는, 이러한 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15가 T세포에 의해 생산되지 않음을 나타낸다. "외인성" IL-2, IL-7 또는 IL-15와 혼합되기 전 T세포는, T세포에 의해 생산되거나, T세포를 갖는 대상으로부터 단리된 것을 미량 함유할 수 있다(즉, 내인성 "외인성" IL-2, IL-7 또는 IL-15). 단리된 "외인성" IL-2, IL-7 및/또는 IL-15를 배양액에 부가하거나, 배양 배지 중에 항-CD3 항체, 항-CD28 항체, "외인성" IL-2, IL-7 및/또는 IL-15를 포함시키거나, 또는 배양액에서 1종 이상의 T세포 이외의 1종 이상의 세포, 예컨대 피더층(feeder layer)으로 "외인성" IL-2, IL-7 및/또는 IL-15를 발현시키는 것을 포함하는 당업계에 알려진 임의의 수단을 통해, 본원에 기재된 1종 이상의 T세포를 외인성 항-CD3 항체, 항-CD28 항체, "외인성" IL-2, IL-7 및/또는 IL-15와 접촉시킬 수 있다.
본원에 사용된 "시험관내 세포"라는 용어는, 생체외에서 배양된 임의의 세포를 나타낸다. 하나의 구현예에서, 시험관내 세포는 T세포를 포함한다.
"존속(persistence)"이라는 용어는, 예를 들어 대상에게 투여된 1종 이상의 이식된 면역세포 또는 이의 자손(예를 들어, 분화된 또는 성숙된 T세포)이 일정 기간 동안 대상에서 검출 가능한 수준으로 남아있는 능력을 나타낸다. 본원에 사용된 바와 같이, 1종 이상의 이식된 면역세포 또는 이의 자손(예를 들어, 분화된 또는 성숙된 T세포)의 존속을 증가시키는 것은, 투여 후 대상에서 이식된 면역세포가 검출 가능한 시간의 양을 증가시키는 것을 나타낸다. 예를 들어, 1종 이상의 이식된 면역세포의 생체내 존속은, 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 3주, 적어도 약 4주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월 또는 적어도 약 6개월만큼 증가될 수 있다. 또한, 1종 이상의 이식된 면역세포의 생체내 존속은, 본원에 개시된 본 발명의 방법에 따라 제조되지 않은 1종 이상의 이식된 면역세포와 비교하여, 적어도 약 1.5배, 적어도 약 2배, 적어도 약 2.5배, 적어도 약 3배, 적어도 약 3.5배, 적어도 약 4배, 적어도 약 4.5배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배 또는 적어도 약 10배만큼 증가될 수 있다.
"감소시키는" 및 "감소하는"이라는 용어는, 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 본래의 것보다 적은 임의의 변화를 나타낸다. "감소시키는" 및 "감소하는"은 측정 전과 측정 후 사이의 비교를 필요로 하는 상대적인 용어이다. "감소시키는" 및 "감소하는"은 완전한 고갈을 포함한다. 본원에 사용된 T세포 성숙을 "조절하는"이라는 용어는, T세포와 같은 1종 이상의 세포의 성숙 및/또는 분화를 제어하기 위한 본원에 기재된 임의의 개입의 사용을 나타낸다. 예를 들어, 조절하는 것은 T세포 성숙을 불활성화시키거나, 지연시키거나 또는 저해하는 것을 나타낸다. 또 다른 예에서, 조절하는 것은 T세포 성숙을 가속화하거나 촉진시키는 것을 나타낸다. "T세포 성숙을 지연시키거나 저해하는"이라는 용어는, 1종 이상의 T세포를 미성숙 또는 미분화된 상태로 유지하는 것을 나타낸다. 예를 들어, "T세포 성숙을 지연시키거나 저해하는" 것은 T세포를 TEM 또는 TEFF 상태로 진행시키는 것이 아니라, 나이브 또는 TCM 상태로 유지하는 것을 나타낼 수 있다. 또한, "T세포 성숙을 지연시키거나 저해하는" 것은 T세포의 혼합 집단 내 미성숙 또는 미분화된 T세포(예를 들어, 나이브 T세포 및/또는 TCM 세포)의 전체 백분율을 증가시키거나 강화시키는 것을 나타낼 수 있다. T세포의 상태(예를 들어, 성숙 또는 미성숙)는, 예를 들어 다양한 유전자의 발현 및 T세포의 표면에서 발현되는 다양한 단백질의 존재를 스크리닝하는 방식으로 결정될 수 있다. 예를 들어, L-셀렉틴(CD62L+), IL-7R-α, CD132, CR7, CD45RA, CD45RO, CD27, CD28, CD95, IL-2Rβ, CXCR3, LFA-1 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상의 마커의 존재는, 덜 성숙되고 미분화된 T세포를 나타낼 수 있다.
대상/환자의 "치료" 또는 "치료하는"은, 질환과 관련된 증상, 합병증 또는 병태, 또는 생화학적 징후의 발병, 진행, 발달, 중증도 또는 재발을 역전시키거나, 완화시키거나, 개선시키거나, 저해하거나, 감속시키거나 또는 예방하기 위한 목적으로, 대상/환자에 대해 수행되는 임의의 유형의 개입 또는 과정, 또는 본 출원에 따라 제조된 1종 이상의 T세포를 대상/환자에게 투여하는 것을 나타낸다. 하나의 양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 부분 관해를 포함한다. 또 다른 양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 완전 관해를 포함한다.
본 출원의 다양한 양태는 하기 하위섹션에 보다 상세하게 기재되어 있다.
순환하는 CD19 발현 종양세포를 높은 수준으로 보유하는 B세포 악성종양 환자는, 충족되지 않은 요구가 매우 높은 집단을 나타낸다. 예를 들어, 외투세포림프종(MCL)은 재발된 또는 불응성 환경에서 치료가 어렵고, 여전히 불치성으로 남아있다. 2차 이상의 화학요법에 대한 표준 치료는 존재하지 않는다. 치료 옵션에는, 세포독성 화학요법, 프로테아좀 저해제, 면역조절 약물, 티로신 키나아제 저해제 및 줄기세포 이식(자가유래 줄기세포 이식[ASCT] 및 동종이계 줄기세포 이식[allo-SCT] 둘 모두)이 포함된다. 요법의 선택은 선행 요법, 동반이환 및 종양 화학민감성에 영향을 받는다. 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTK 저해제)를 이용하여 관찰된 높은 초기 반응률에도 불구하고, 대부분의 환자는 결국 진행성 질환으로 발달하게 된다. 화학면역요법, 줄기세포 이식 및 BTK 저해제로 질환이 효과적으로 제어되지 않는 r/r MCL 환자의 참담한 예후를 개선시키기 위한 신규한 치료 전략이 필요하다.
CD19 CAR-T에 사용되는 항-CD19 CAR T세포 요법 또는 생성물은, 최종 생성물에서 CD19 발현 종양세포를 최소화하기 위해 순환 종양세포 부담을 갖는 B세포 악성종양에 적합한 백혈구성분채집술을 통해 환자 자체의 T세포로부터 제조될 수 있다. 백혈구성분채집술 생성물에서 채취된 백혈구로부터의 T세포는, CD4+/CD8+ T세포에 대한 선택에 의해 농축되고/되거나, 항-CD3 항체와 항-CD28 항체로 활성화되고/되거나, 항-CD19 CAR 유전자를 함유하는 바이러스 벡터로 형질도입될 수 있다. 상기 방법에 대한 추가의 세부사항은 PCT/US2015/014520(WO2015/120096으로 공개됨) 및 PCT/US2016/057983(WO2017/070395로 공개됨)에서 확인할 수 있다. 하나의 구현예에서, 세포는 AKT 저해제, IL-7 및 IL-15로 처리되지 않는다. 이러한 조작된 T세포는 치료 효과를 달성하는데 충분한 수의 세포를 생성하도록 증식될 수 있다. 이러한 과정은 CD19 발현 악성 및 정상 B세포를 제거하여, 항-CD19 CAR T세포의 활성화, 증식 및 고갈을 감소시킬 수 있다.
면역세포의 활성화, 형질도입 및/또는 증식은, (i) 환자에게의 투여를 위한 적어도 1회 용량을 위한 조작된 면역세포 집단 내 충분한 수의 세포, (ii) 전형적인 더 긴 과정과 비교하여 유리한 비율의 유약세포(juvenile cell)를 갖는 조작된 면역세포 집단, 또는 (iii) (i)과 (ii) 둘 모두의 생산을 가능하게 하는 임의의 적합한 시간에 수행될 수 있다. 적합한 시간은 1종 이상의 세포의 집단, 면역세포에 의해 발현되는 세포 표면 수용체, 사용되는 벡터, 치료 효과를 나타내는 데 필요한 용량, 및/또는 다른 변수를 포함하는 여러 매개변수를 고려할 수 있다. 활성화 시간은 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 또는 21일 초과일 수 있다. 본 출원의 방법에 따른 활성화 시간은 당업계에 알려진 증식 방법에 비해 단축될 수 있다. 예를 들어, 활성화 시간은 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 만큼 단축될 수 있거나, 75% 초과만큼 단축될 수 있다. 나아가, 증식 시간은 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 또는 21일 초과일 수 있다. 본 출원의 방법에 따른 증식 시간은 당업계에 알려진 증식 방법에 비해 단축될 수 있다. 예를 들어, 증식 시간은 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 만큼 단축될 수 있거나, 75% 초과만큼 단축될 수 있다. 하나의 구현예에서, 세포 증식 시간은 약 3일이고, 세포 집단의 농축에서 조작된 면역세포 생산까지의 시간은 약 6일이다.
1종 이상의 T세포 또는 DC세포의 성숙 또는 분화의 지연 또는 저해는 당업계에 알려진 임의의 방법에 따라 측정될 수 있다. 예를 들어, 1종 이상의 T세포 또는 DC세포의 성숙 또는 분화의 지연 또는 저해는 1종 이상의 바이오마커의 존재를 검출하는 방식으로 측정될 수 있다. 1종 이상의 바이오마커의 존재는, 비제한적으로, 면역조직화학 및/또는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 포함하는 당업계에 알려진 임의의 방법을 통해 검출될 수 있다. 1종 이상의 바이오마커는 L-셀렉틴(CD62L+), IL-7Rα, CD132, CCR7, CD45RA, CD45RO, CD27, CD28, CD95, IL-2Rβ, CXCR3, LFA-1, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다. 특정 양태에서, 1종 이상의 T세포 또는 DC세포의 성숙 또는 분화의 지연 또는 저해는 L-셀렉틴(CD62L+), IL-7Rα 및 CD132 중 1종 이상의 존재를 검출하는 방식으로 측정될 수 있다. 당업자는, 본 발명의 방법이 채취된 세포 집단 내 미성숙 및 미분화된 T세포 또는 DC세포의 상대적인 비율을 증가시킬 수 있지만, 일부 성숙 및 분화된 세포가 여전히 존재할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 그 결과, 1종 이상의 T세포 또는 DC세포의 성숙 또는 분화의 지연 또는 저해는, 공여자 대상에서 얻은 1종 이상의 세포를 대기압보다 높은 압력의 존재 유무 하의 저산소 배양 조건에 노출시키기 전후에 세포 집단 내 미성숙 및 미분화된 세포의 총%를 계산하는 방식으로 측정될 수 있다. 본원에 개시된 방법은 T세포 집단 내 미성숙 및 미분화된 T세포의 백분율을 증가시킬 수 있다.
본원에 기재된 방법은 적합한 조건 하에서 림프구와 같은 세포의 집단을 1종 이상의 T세포 자극제로 자극시켜 활성화된 T세포 집단을 생산하는 것을 추가로 포함한다. 비제한적으로, T세포 자극 또는 공동자극 분자를 표적으로 하는 항체 또는 이의 기능성 단편(예를 들어, 항-CD2 항체, 항-CD3 항체(예컨대, OKT-3), 항-CD28 항체, 또는 이의 기능성 단편), 또는 임의의 다른 적합한 미토겐(예를 들어, 테트라데카노일 포르볼 아세테이트(TPA: tetradecanoyl phorbol acetate), 피토헤마글루티닌(PHA: phytohaemagglutinin), 콘카나발린 A(conA: concanavalin A), 지질다당류(LPS), 억새풀 미토겐(PWM: pokeweed mitogen)), 또는 T세포 자극 또는 공동자극 분자에 대한 천연 리간드를 포함하는 1종 이상의 적합한 T세포 자극제의 임의의 조합이, 활성화된 T세포의 집단을 생산하는 데 사용될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 면역세포 집단을 자극 또는 활성화시키는 데 적합한 조건은, 온도, 시간의 양 및/또는 CO2 수준의 존재를 추가로 포함한다. 자극 온도는 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 또는 약 38℃, 약 34℃ 내지 38℃, 약 35℃ 내지 37℃, 약 36℃ 내지 38℃, 약 36℃ 내지 37℃ 또는 약 37℃일 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 면역세포 집단을 자극 또는 활성화시키기 위한 또 다른 조건은, 자극 또는 활성화 시간을 추가로 포함할 수 있다. 자극 시간은 약 24시간 내지 72시간, 약 24시간 내지 36시간, 약 30시간 내지 42시간, 약 36시간 내지 48시간, 약 40시간 내지 52시간, 약 42시간 내지 54시간, 약 44시간 내지 56시간, 약 46시간 내지 58시간, 약 48시간 내지 60시간, 약 54시간 내지 66시간, 또는 약 60시간 내지 72시간, 약 44시간 내지 52시간, 약 40시간 내지 44시간, 약 40시간 내지 48시간, 약 40시간 내지 52시간, 또는 약 40시간 내지 56시간이다. 하나의 구현예에서, 자극 시간은 약 48시간 또는 적어도 약 48시간이다.
본원에 기재된 바와 같은 면역세포 집단을 자극 또는 활성화시키기 위한 다른 조건은 CO2 수준을 추가로 포함할 수 있다. 자극을 위한 CO2 수준은 약 1.0% 내지 10% CO2, 약 1.0% CO2, 약 2.0% CO2, 약 3.0% CO2, 약 4.0% CO2, 약 5.0% CO2, 약 6.0% CO2, 약 7.0% CO2, 약 8.0% CO2, 약 9.0% CO2, 또는 약 10.0% CO2, 약 3% 내지 7% CO2, 약 4% 내지 6% CO2, 약 4.5% 내지 5.5% CO2이다. 하나의 구현예에서, 자극을 위한 CO2 수준은 약 5% CO2이다.
면역세포 집단을 자극 또는 활성화시키기 위한 조건은 임의의 조합으로의, 온도, 자극 시간의 양 및/또는 CO2 수준의 존재를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역세포 집단을 자극시키는 단계는, 면역세포 집단을 약 36℃ 내지 38℃의 온도에서, 약 44시간 내지 52시간 동안, 약 4.5% 내지 5.5% CO2의 CO2 수준 존재 하에서 1종 이상의 면역세포 자극제로 자극시키는 것을 포함할 수 있다. 본 출원의 1종 이상의 면역세포가 면역 또는 세포 요법에 사용되는 대상에 투여될 수 있다. 따라서, 1종 이상의 면역세포는 면역 또는 세포 요법을 필요로 하는 대상에서 채취될 수 있다. 채취된 후, 1종 이상의 면역세포는 대상에게의 투여 전 임의의 적합한 시간 동안 처리될 수 있다.
본원의 방법에 따라 제조된 림프구 또는 생성된 생성물의 농도, 양 또는 집단은, 1 mL 당 약 1.0 × 106개 내지 10.0 × 106개의 세포이다. 특정 양태에서, 상기 농도는 1 mL 당 약 1.0 × 106개 내지 2.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 3.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 4.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 5.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 6.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 7.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 8.0 × 106개의 세포, 1.0 × 106개 내지 9.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 10.0 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 1.2 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 1.4 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 1.6 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 1.8 × 106개의 세포, 약 1.0 × 106개 내지 2.0 × 106개의 세포, 적어도 약 1.0 × 106개의 세포, 적어도 약 1.1 × 106개의 세포, 적어도 약 1.2 × 106개의 세포, 적어도 약 1.3 × 106개의 세포, 적어도 약 1.4 × 106개의 세포, 적어도 약 1.5 × 106개의 세포, 적어도 약 1.6 × 106개의 세포, 적어도 약 1.7 × 106개의 세포, 적어도 약 1.8 × 106개의 세포, 적어도 약 1.9 × 106개의 세포, 적어도 약 2.0 × 106개의 세포, 적어도 약 4.0 × 106개의 세포, 적어도 약 6.0 × 106개의 세포, 적어도 약 8.0 × 106개의 세포, 또는 적어도 약 10.0 × 106개의 세포이다.
항-CD3 항체(또는 이의 기능성 단편), 항-CD28 항체(또는 이의 기능성 단편), 또는 항-CD3 항체와 항-CD28 항체의 조합은, 공여자 대상에서 얻은 1종 이상의 세포를 대기압 초과의 압력 존재 유무 하의 저산소 배양 조건에 노출시키는 단계와 함께 또는 독립적으로, 림프구 집단을 자극시키는 단계에 따라 사용될 수 있다. 임의의 가용성 또는 고정화된 항-CD2 항체, 항-CD3 항체 및/또는 항-CD28 항체, 또는 이의 기능성 단편이 사용될 수 있다(예를 들어, 클론 OKT3(항-CD3), 클론 145-2C11(항-CD3), 클론 UCHT1(항-CD3), 클론 L293(항-CD28), 클론 15E8(항-CD28)). 일부 양태에서, 상기 항체는, 비제한적으로, Miltenyi Biotec, BD Biosciences(예를 들어, MACS GMP CD3 순수 1 mg/mL, Part No. 170-076-116) 및 eBioscience, Inc.를 포함하는 당업계에 알려진 공급업체로부터 상업적으로 구입할 수 있다. 나아가, 당업자는 표준 방법에 따라 항-CD3 항체 및/또는 항-CD28 항체를 생산하는 방법을 이해할 것이다. 일부 양태에서, 림프구 집단을 자극시키는 단계에 따라 사용되는 1종 이상의 T세포 자극제는, T세포 사이토카인의 존재 하에서 T세포 자극 또는 공동자극 분자를 표적으로 하는 항체 또는 이의 기능성 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 1종 이상의 T세포 자극제는 항-CD3 항체 및 IL-2를 포함한다. 특정 구현예에서, T세포 자극제는 항-CD3 항체를 50 ng/mL 농도로 포함한다. 항-CD3 항체의 농도는 약 20 ng/mL 내지 100 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL 또는 약 100 ng/mL이다. 대안적인 양태에서, T세포 활성화는 필요하지 않다.
본원에 기재된 방법은, 단일 사이클 또는 그 이상의 바이러스 형질도입을 사용하여, 세포 표면 수용체를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 바이러스 벡터를 이용하여 활성화된 면역세포 집단에 형질을 도입하여, 형질도입된 면역세포 집단을 생산하는 것을 추가로 포함한다. 몇 가지 재조합 바이러스는 세포에 유전 물질을 전달하는 바이러스 벡터로 사용되었다. 형질도입 단계에 따라 사용될 수 있는 바이러스 벡터는, 비제한적으로, 재조합 레트로바이러스 벡터, 재조합 렌티바이러스 벡터, 재조합 아데노바이러스 벡터 및 재조합 아데노연관바이러스(AAV) 벡터를 포함하는, 임의의 동종숙주역(ecotropic) 또는 양생(amphotropic) 바이러스 벡터일 수 있다. 상기 방법은 레트로바이러스를 이용하여 1종 이상의 면역세포에 형질을 도입하는 것을 추가로 포함한다. 하나의 양태에서, 활성화된 면역세포 집단에 형질을 도입하는 데 사용되는 바이러스 벡터는 MSGV1 감마 레트로바이러스 벡터이다. 하나의 구현예에서, 활성화된 면역세포 집단에 형질을 도입하는 데 사용되는 바이러스 벡터는, 문헌[Kochenderfer, J. Immunother. 32(7): 689-702 (2009)]에 기재된 PG13-CD19-H3 벡터이다. 이러한 양태의 하나의 양태에 따르면, 바이러스 벡터는, 본원에서 바이러스 벡터 접종물로 지칭되는 바이러스 벡터 제조에 특정한 배지 중에서 현탁 배양으로 성장된다. 바이러스 벡터를 성장시키는 임의의 적합한 성장 배지 및/또는 보충물이 본원에 기재된 방법에 따라 바이러스 벡터 접종물에 사용될 수 있다. 일부 양태에 따르면, 바이러스 벡터 접종물은 형질도입 단계 동안 하기 기재되는 무혈청 배양 배지에 첨가된다. 일부 양태에서, 1종 이상의 면역세포는 레트로바이러스로 형질도입될 수 있다. 하나의 구현예에서, 레트로바이러스는 세포 표면 수용체를 인코딩하는 이종 유전자를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 세포 표면 수용체는 표적세포의 표면, 예를 들어 종양세포의 표면 상에서 항원에 결합할 수 있다. 선택적으로 공여자 대상에서 얻은 1종 이상의 세포를 대기압 초과의 압력 존재 유무 하의 저산소 배양 조건에 노출시키는 단계에 더하여, 본원에 기재된 활성화된 면역세포 집단에 형질을 도입하기 위한 조건은, 특정 시간, 특정 온도 및/또는 특정 CO2 수준의 존재를 포함할 수 있다. 형질도입 온도는 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 또는 약 38℃, 약 34℃ 내지 38℃, 약 35℃ 내지 37℃, 약 36℃ 내지 38℃, 약 36℃ 내지 37℃이다. 하나의 구현예에서, 형질도입 온도는 약 37℃이다. 선결된 형질도입 온도는 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 약 38℃, 또는 약 39℃, 약 34℃ 내지 39℃, 약 35℃ 내지 37℃일 수 있다. 하나의 구현예에서, 선결된 형질도입 온도는 약 36℃ 내지 38℃, 약 36℃ 내지 37℃ 또는 약 37℃일 수 있다. 형질도입 시간은 약 12시간 내지 36시간, 약 12시간 내지 16시간, 약 12시간 내지 20시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 12시간 내지 28시간, 약 12시간 내지 32시간, 약 20시간 또는 적어도 약 20시간이며, 약 16시간 내지 24시간, 약 14시간, 적어도 약 16시간, 적어도 약 18시간, 적어도 약 20시간, 적어도 약 22시간, 적어도 약 24시간, 또는 적어도 약 26시간이다. 형질도입을 위한 CO2 수준은 약 1.0% 내지 10% CO2, 약 1.0% CO2, 약 2.0% CO2, 약 3.0% CO2, 약 4.0% CO2, 약 5.0% CO2, 약 6.0% CO2, 약 7.0% CO2, 약 8.0% CO2, 약 9.0% CO2, 약 10.0% CO2, 약 3% 내지 7% CO2, 약 4% 내지 6% CO2, 약 4.5% 내지 5.5% CO2, 또는 약 5% CO2이다.
본원에 기재된 바와 같은 활성화된 면역세포 집단에 형질을 도입하는 단계는, 임의의 조합으로의, 일정 시간 동안, 특정 온도에서 및/또는 특정 CO2 수준의 존재 하에 수행될 수 있다: 약 36℃ 내지 38℃의 온도, 약 16시간 내지 24시간의 시간의 양, 및 약 4.5% 내지 5.5% CO2의 CO2 수준의 존재. 면역세포는 본 출원의 방법 중 어느 하나와, 비제한적으로, PCT 출원공개 WO2015/120096호 및 WO2017/070395호에 기재된 것들을 포함하는 면역요법용 T세포를 제조하는 임의의 제조 방법(상기 문헌들은 이러한 방법을 설명하기 위한 목적으로 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨); 악시캅타진 실로류셀(axicabtagene ciloleucel) 또는 Yescarta®의 제조에 사용되는 임의의 및 모든 방법; 티사젠렉류셀(tisagenlecleucel)/KymriahTM의 제조에 사용되는 임의의 및 모든 방법; 면역요법을 위한 "기성품(off-the-shelf)" T세포의 제조에 사용되는 임의의 및 모든 방법; 및 인간에게의 투여를 위한 림프구를 제조하는 임의의 다른 방법의 조합에 의해 제조될 수 있다. 상기 제조 방법은 환자에서 얻은 세포에서 순환 종양세포를 제거하기 위해 조정될 수 있다.
CAR-T세포는 다른 분자를 발현하도록 조작될 수 있으며, 하기 예시적인 유형 또는 당업계에서 입수 가능한 다른 유형 중 어느 하나일 수 있다: 제1세대, 제2세대, 제3세대, 제4세대, 제5세대 또는 그 이상의 CAR-T세포; 강화된(armored) CAR-T세포, 운동성(motile) CAR-T세포, TRUCK T세포, 스위치 수용체 CAR-T세포; 유전자 편집된 CAR T세포; 이중 수용체 CAR T세포; 자살 CAR T세포, 약물 유도성 CAR-T세포, 신노치(synNotch) 유도성 CAR T세포; 및 저해성 CAR T세포. 하나의 양태에서, T세포는 자가유래 T세포이다. 하나의 양태에서, T세포는 자가유래 줄기세포이다(자가유래 줄기세포 요법 또는 ASCT의 경우). 하나의 양태에서, T세포는 비자가유래 T세포이다.
상기 세포(예컨대, 면역세포 또는 T세포)는 알려진 방법을 사용한 단리 또는 선택 후 유전자 변형되거나, 유전자 변형되기 전 시험관내에서 활성화되고/되거나 증식하게 된다(또는 선구체의 경우 분화됨). 면역세포, 예를 들어 T세포는 본원에 기재된 키메라 항원 수용체로 유전자 변형되고(예를 들어, CAR을 인코딩하는 1종 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 바이러스 벡터로 형질도입됨), 시험관내에서 활성화되고/되거나 증식하게 된다. T세포를 활성화시키고 증식시키는 방법은 미국 특허 제6,905,874호; 제6,867,041호; 및 제6,797,514호; 및 PCT 출원공개 WO 2012/079000호에서 확인할 수 있으며, 상기 문헌들은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다. 일반적으로, 이러한 방법은 PBMC 또는 단리된 T세포를, IL-2와 같은 특정 사이토카인이 함유된 배양 배지 중에서, 비드 또는 다른 표면에 부착될 수 있는 항-CD3 항체 및/또는 항-CD28 항체와 같은 자극제 및 공동자극제와 접촉시키는 단계를 포함할 수 있다. 인간 T세포의 생리학적 활성화를 위한 CD3/CD28 활성화제/자극제 시스템인 Dynabeads® 시스템이 사용될 수 있다. T세포는 미국 특허 제6,040,177호 및 제5,827,642호, 및 PCT 출원공개 WO 2012/129514호에 기재된 바와 같이 활성화되고 자극되어 적합한 피더세포(feeder cell), 항체 및/또는 사이토카인과 함께 증식하게 될 수 있으며, 상기 문헌들은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
조작된 면역세포에 의해 발현되는 세포 표면 수용체는 항-CD19 CAR, FMC63-28Z CAR 또는 FMC63-CD828BBZ CAR과 같은 CAR에 의해 표적화되게 되는 임의의 항원 또는 분자일 수 있다(문헌[Kochenderfer et al., J Immunother. 2009, 32(7): 689]; 문헌[Locke et al., Blood 2010, 116(20):4099], 상기 문헌들은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨). 특정 양태에서, 조작된 면역세포의 선결된 용량은 약 100만개 초과 내지 약 300만개 미만의 형질도입된 조작된 T세포/㎏일 수 있다. 하나의 구현예에서, 조작된 T세포의 선결된 용량은 체중 1 ㎏ 당 약 100만개 초과 내지 약 200만개의 형질도입된 조작된 T세포(세포/㎏)일 수 있다. 조작된 T세포의 선결된 용량은 체중 1 ㎏ 당 100만개 초과 내지 약 200만개, 적어도 약 200만개 내지 약 300만개 미만의 형질도입된 조작된 T세포(세포/㎏)일 수 있다. 하나의 구현예에서, 조작된 T세포의 선결된 용량은 약 200만개의 형질도입된 조작된 T세포/㎏일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 조작된 T세포의 선결된 용량은 적어도 약 200만개의 형질도입된 조작된 T세포/㎏일 수 있다. 조작된 T세포의 선결된 용량의 예는, 약 200만개, 약 210만개, 약 220만개, 약 230만개, 약 240만개, 약 250만개, 약 260만개, 약 270만개, 약 280만개 또는 약 290만개의 형질도입된 조작된 T세포/㎏일 수 있다.
본원에 기재된 방법은 일정 기간 동안 형질도입된 1종 이상의 면역세포 집단을 증가시키거나 농축시켜 조작된 면역세포 집단을 생산하는 것을 포함한다. 증식 시간은 (i) 환자에게의 투여를 위한 적어도 1회 용량을 위한 조작된 면역세포 집단 내 충분한 수의 세포, (ii) 전형적인 더 긴 과정과 비교하여 유리한 비율의 유약세포를 갖는 조작된 면역세포 집단, 또는 (iii) (i)과 (ii) 둘 모두의 생산을 가능하게 하는 임의의 적합한 시간일 수 있다. 이러한 시간은 면역세포에 의해 발현되는 세포 표면 수용체, 사용되는 벡터, 치료 효과를 나타내는 데 필요한 용량 및 다른 변수에 따라 달라질 것이다. 선결된 증식 시간은 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 또는 21일 초과일 수 있다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 증식 시간은 당업계에 알려진 것에 비해 단축된다. 예를 들어, 선결된 증식 시간은 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 만큼 단축될 수 있거나, 75% 초과만큼 단축될 수 있다. 하나의 예에서, 증식 시간은 약 3일이고, 림프구 집단의 농축에서 조작된 면역세포 생산까지의 시간은 약 6일이다.
형질도입된 면역세포 집단을 증식시키기 위한 조건은 온도 및/또는 CO2 수준의 존재를 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 상기 온도는 약 34℃, 약 35℃, 약 36℃, 약 37℃, 또는 약 38℃, 약 35℃ 내지 37℃, 약 36℃ 내지 37℃, 또는 약 37℃이다. 상기 CO2 수준은 1.0% 내지 10% CO2, 약 1.0% CO2, 약 2.0% CO2, 약 3.0% CO2, 약 4.0% CO2, 약 5.0% CO2, 약 6.0% CO2, 약 7.0% CO2, 약 8.0% CO2, 약 9.0% CO2, 약 10.0% CO2, 약 4.5% 내지 5.5% CO2, 약 5% CO2, 약 3.5% CO2, 약 4.0% CO2, 약 4.5% CO2, 약 5.0% CO2, 약 5.5% CO2 또는 약 6.5% CO2이다.
본원에 기재된 방법의 각 단계는 폐쇄형 시스템으로 수행될 수 있다. 폐쇄형 시스템은 임의의 적합한 세포 배양 백(예를 들어, Miltenyi Biotec MACS® GMP Cell Differentiation Bags, Origen Biomedical PermaLife Cell Culture bags)을 사용하는 폐쇄된 백 배양 시스템(closed bag culture system)일 수 있다. 폐쇄된 백 배양 시스템에 사용되는 세포 배양 백은 형질도입 단계 동안 재조합 인간 피브로넥틴 단편으로 코팅될 수 있다. 재조합 인간 피브로넥틴 단편은 3개의 기능성 도메인, 즉, 중심 세포 결합 도메인, 헤파린 결합 도메인 II 및 CS1 서열을 포함할 수 있다. 재조합 인간 피브로넥틴 단편은 표적세포와 바이러스 벡터의 공동 국소화를 보조하는 방식으로 면역세포의 레트로바이러스 형질도입의 유전자 효율을 증가시키는 데 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 재조합 인간 피브로넥틴 단편은 RETRONECTIN®(Takara Bio, Japan)이다. 세포 배양 백은 약 1 ㎍/mL 내지 60 ㎍/mL 또는 약 1 ㎍/mL 내지 40 ㎍/mL, 약 1 ㎍/mL 내지 20 ㎍/mL, 20 ㎍/mL 내지 40 ㎍/mL, 40 ㎍/mL 내지 60 ㎍/mL, 약 1 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL, 약 3 ㎍/mL, 약 4 ㎍/mL, 약 5 ㎍/mL, 약 6 ㎍/mL, 약 7 ㎍/mL, 약 8 ㎍/mL, 약 9 ㎍/mL, 약 10 ㎍/mL, 약 11 ㎍/mL, 약 12 ㎍/mL, 약 13 ㎍/mL, 약 14 ㎍/mL, 약 15 ㎍/mL, 약 16 ㎍/mL, 약 17 ㎍/mL, 약 18 ㎍/mL, 약 19 ㎍/mL, 약 20 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 5 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 10 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 20 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 25 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 30 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 35 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 40 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 50 ㎍/mL, 약 2 ㎍/mL 내지 60 ㎍/mL, 적어도 약 2 ㎍/mL, 적어도 약 5 ㎍/mL, 적어도 약 10 ㎍/mL, 적어도 약 15 ㎍/mL, 적어도 약 20 ㎍/mL, 적어도 약 25 ㎍/mL, 적어도 약 30 ㎍/mL, 적어도 약 40 ㎍/mL, 적어도 약 50 ㎍/mL, 또는 적어도 약 60 ㎍/mL 농도의 재조합 인간 피브로넥틴 단편으로 코팅된다. 하나의 구현예에서, 세포 배양 백은 적어도 약 10 ㎍/mL의 재조합 인간 피브로넥틴 단편으로 코팅된다. 폐쇄된 백 배양 시스템에 사용되는 세포 배양 백은 형질도입 단계 동안 선택적으로 인간 알부민 혈청(HSA)으로 차단될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 세포 배양 백은 형질도입 단계 동안 HSA로 차단되지 않는다.
상기 기재된 방법에 따라 생산된 조작된 면역세포 집단은 상기 세포가 이후에 사용될 수 있도록 선택적으로 저온보존될 수 있다. 조작된 면역세포 집단의 저온보존 방법이 또한 본원에 제공된다. 이러한 방법은 조작된 면역세포 집단을 희석액으로 세척하고 농축시키는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 희석액은 생리식염수, 0.9% 식염수, PlasmaLyte A(PL), 5% 덱스트로오스/0.45% NaCl 식염수(D5), 인간 혈청 알부민(HSA), 또는 이들의 조합이다. 또한, 해동 후 개선된 세포 생존능 및 세포 회복을 위해 세척되고 농축된 세포에 HSA가 첨가될 수 있다. 또 다른 양태에서, 세척액은 생리식염수이고, 세척되고 농축된 세포에는 HSA(5%)가 보충되어 있다. 상기 방법은 또한 저온보존 혼합물을 생성하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 저온보존 혼합물은 희석액 및 적합한 저온보존 용액 중에 희석된 세포 집단을 포함한다. 저온보존 용액은, 비제한적으로, 조작된 면역세포 희석액과 1:1 또는 2:1의 비로 혼합된 CryoStor10(BioLife Solution)을 포함하는 임의의 적합한 저온보존 용액일 수 있다. HSA는 저온보존된 혼합물 중 약 1.0% 내지 10% HSA, 약 1.0% HSA, 약 2.0% HSA, 약 3.0% HSA, 약 4.0% HSA, 약 5.0% HSA, 약 6.0% HSA, 약 7.0% HSA, 약 8.0% HSA, 약 9.0% HSA, 약 10.0% HSA, 약 1% 내지 3% HSA, 약 1% 내지 4% HSA, 약 1% 내지 5% HSA, 약 1% 내지 7% HSA, 약 2% 내지 4% HSA, 약 2% 내지 5% HSA, 약 2% 내지 6% HSA, 약 2% 내지 7% HAS 또는 약 2.5% HSA의 최종 농도를 제공하도록 첨가될 수 있다. 조작된 면역세포 집단의 저온보존은 세포를 0.9% 생리식염수로 세척하고, 세척된 세포에 5%의 최종 농도로 HSA를 첨가하고, (최종 저온보존 혼합물 중 2.5% HSA의 최종 농도를 위해) 세포를 CryoStorTM CS10을 이용하여 1:1로 희석하는 것을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 상기 방법은 또한 저온보존 혼합물을 동결시키는 단계를 포함한다. 또한, 저온보존 혼합물은 저온보존 혼합물 1 mL 당 약 1×106개 내지 약 1.5×107개 세포의 세포 농도로 정의된 동결 사이클을 사용하여 제어된 속도의 냉동고에서 동결된다. 상기 방법은 또한 증기상 액체 질소 중에 저온보존 혼합물을 보관하는 단계를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 방법에 따라 생산된 조작된 면역세포 집단은 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 선결된 용량은 하기 제공되는 바와 같은 임의의 치료적 유효 용량일 수 있는 치료적 유효 용량일 수 있다. 조작된 면역세포의 선결된 용량은 면역세포에 의해 발현되는 세포 표면 수용체(예를 들어, 세포 상에서 발현되는 세포 표면 수용체의 친화성 및 밀도), 표적세포의 유형, 치료하고자 하는 질환 또는 병리학적 병태의 특성, 또는 이들의 조합에 따라 달라질 수 있다.
하나의 구현예에서, 조작된 T세포 집단은 체중 1 ㎏ 당 약 100만개의 조작된 T세포(세포/㎏)의 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 특정 구현예에서, 조작된 T세포 집단은 약 50만개 내지 약 100만개의 조작된 T세포/㎏의 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 특정 구현예에서, 조작된 T세포 집단은 적어도 약 100만개, 적어도 약 200만개, 적어도 약 300만개, 적어도 약 400만개, 적어도 약 500만개, 적어도 약 600만개, 적어도 약 700만개, 적어도 약 800만개, 적어도 약 900만개, 적어도 약 1천만개의 조작된 T세포/㎏의 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 다른 양태에서, 조작된 T세포 집단은 100만개 미만의 세포/㎏, 100만개의 세포/㎏, 200만개의 세포/㎏, 300만개의 세포/㎏, 400만개의 세포/㎏, 500만개의 세포/㎏, 600만개의 세포/㎏, 700만개의 세포/㎏, 800만개의 세포/㎏, 900만개의 세포/㎏, 1천만개의 세포/㎏, 1천만개 초과의 세포/㎏, 2천만개 초과의 세포/㎏, 3천만개 초과의 세포/㎏, 4천만개 초과의 세포/㎏, 5천만개 초과의 세포/㎏, 6천만개 초과의 세포/㎏, 7천만개 초과의 세포/㎏, 8천만개 초과의 세포/㎏, 9천만개 초과의 세포/㎏ 또는 1억개 초과의 세포/㎏의 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 특정 양태에서, 조작된 T세포 집단은 약 100만개 내지 약 200만개의 조작된 T세포/㎏의 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 조작된 T세포 집단은 약 100만개의 세포 내지 약 200만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 300만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 400만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 500만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 600만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 700만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 800만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 900만개의 세포/㎏, 약 100만개의 세포 내지 약 1천만개의 세포/㎏의 선결된 용량으로 저온보존될 수 있다. 조작된 T세포 집단의 선결된 용량은 대상의 체중을 기준으로 계산될 수 있다. 하나의 예에서, 조작된 T세포 집단은 약 0.5 mL 내지 200 mL의 저온보존 배지 중에 저온보존될 수 있다. 추가로, 조작된 T세포 집단은 약 0.5 mL, 약 1.0 mL, 약 5.0 mL, 약 10.0 mL, 약 20 mL, 약 30 mL, 약 40 mL, 약 50 mL, 약 60 mL, 약 70 mL, 약 80 mL, 약 90 mL, 또는 약 100 mL, 약 10 mL 내지 30 mL, 약 10 mL 내지 50 mL, 약 10 mL 내지 70 mL, 약 10 mL 내지 90 mL, 약 50 mL 내지 70 mL, 약 50 mL 내지 90 mL, 약 50 mL 내지 110 mL, 약 50 mL 내지 150 mL, 또는 약 100 mL 내지 200 mL의 저온보존 배지 중에 저온보존될 수 있다. 특정 양태에서, 조작된 T세포 집단은 바람직하게는 약 50 mL 내지 70 mL의 저온보존 배지 중에 저온보존될 수 있다.
하나의 구현예에서, (a) 면역세포 집단을 외인성 IL-2, 외인성 IL-7, 외인성 IL-15 및/또는 다른 사이토카인(들)과 접촉시키는 단계, (b) 면역세포 집단을 자극시키는 단계, (c) 활성화된 면역세포 집단에 형질을 도입시키는 단계, 및 (d) 형질도입된 면역세포 집단을 증식시키는 단계 중 적어도 하나는, 혈청이 첨가되지 않은 무혈청 배양 배지를 사용하여 수행된다. 일부 양태에서, (a) 내지 (d)는 각각 혈청이 첨가되지 않은 무혈청 배양 배지를 사용하여 수행된다. 본원에 언급된 "무혈청 배지" 또는 "무혈청 배양 배지"라는 용어는, 사용되는 성장 배지에 혈청(예를 들어, 인간 혈청 또는 소 혈청)이 보충되지 않았음을 의미한다. 다시 말해서, 배양된 세포의 생존능, 활성화 및 성장을 지원하기 위한 목적으로 혈청이 개별적으로 별도의 구별된 구성성분으로 배양 배지에 첨가되지 않는다. 임의의 적합한 면역세포 성장 배지는 본원에 기재된 방법에 따라 현탁액 중에서 세포를 배양시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역세포 성장 배지는, 비제한적으로, 적합한 양의 완충제, 마그네슘, 칼슘, 소듐 피루베이트 및 소듐 바이카르보네이트가 포함된 멸균 저 글루코오스 용액을 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, T세포 성장 배지는 OPTMIZER™(Life Technologies)이다. 조작된 면역세포를 생산하는 전형적인 방법과 대조적으로, 본원에 기재된 방법은 혈청(예를 들어, 인간 또는 소)이 보충되지 않은 배양 배지를 사용할 수 있다.
본 출원은 T세포를 이용한 다양한 암 치료 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, T세포는 CD19에 대한 CAR-T세포이며, 이는 본 출원의 방법 중 어느 하나와, 비제한적으로, PCT 출원공개 WO2015/120096호 및 WO2017/070395호에 기재된 것들을 포함하는 면역요법용 T세포를 제조하는 제조 방법의 임의의 단계(상기 문헌들은 이러한 방법을 설명하기 위한 목적으로 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨); 악시캅타진 실로류셀 또는 Yescarta®의 제조에 사용되는 임의의 및 모든 방법; 티사젠렉류셀/KymriahTM의 제조에 사용되는 임의의 및 모든 방법; 면역요법을 위한 "기성품" T세포의 제조에 사용되는 임의의 및 모든 방법; 및 인간에게의 투여를 위한 림프구를 제조하는 임의의 다른 방법의 조합에 의해 제조될 수 있다. 일부 양태에서, 상기 제조 방법은 환자에서 얻은 세포에서 순환 종양세포를 특이적으로 제거하기 위해 조정된다.
하나의 양태에서, T세포는 PCT/US2016/057983에 기재된 방법에 따라 제조된 CD19 CAR-T세포이다. 하나의 구현예에서, 순환 종양세포가 고갈된 T세포 집단은 백혈구성분채집술 생성물로부터 제조된다. 이러한 세포는 PCT/US2016/057983에 기재된 바와 같이 제조될 수 있으며, CD19 CAR-T세포로 본원에 추가로 기재되어 있다. 간략하게, CD19 CAR-T는, 대상의 T세포가 CD28 및 CD3ζ 활성화 도메인에 연결된 CD19에 대한 단일 사슬 항체 단편으로 이루어진 수용체를 발현하도록 조작되어 CD19 발현 세포를 제거하는, 자가유래 CAR T세포 생성물이다. CD19+ 표적세포와 CAR의 결합 후, CD3ζ 도메인은 T세포 활성화, 증식, 및 세포독성과 같은 이펙터 기능의 획득으로 이어지는 다운스트림 신호전달 캐스케이드를 활성화시킨다. CD28의 세포내 신호전달 도메인은 인터류킨(IL)-2 생산을 포함하는 T세포 기능을 증강시키기 위해 1차 CD3ζ 신호와 함께 기능하는 공동자극 신호를 제공한다. 이러한 신호들은 함께 CAR T세포의 증식을 자극하고, 표적세포의 사멸을 유도할 수 있다. 또한, 활성화된 T세포는 추가의 항종양 면역세포를 동원하고 활성화시킬 수 있는 사이토카인, 케모카인 및 다른 분자를 분비할 수 있다. CD19 CAR-T세포 내 항-CD19 CAR은 FMC63-28Z를 포함할 수 있다.
특정 암에서 순환 종양세포의 존재로 인해, CD19 CAR-T의 제조는 CD4+ T세포와 CD8+ T세포를 농축시키는 단계를 포함한다. T세포 농축 또는 단리 단계는 백혈구성분채집 물질에서 순환하는 CD19 발현 종양세포를 감소시킬 수 있고, 제조 동안 항-CD19 CAR T세포의 활성화, 증식 및 고갈과 관련이 있을 수 있다.
본원에 기재된 방법은 종양 침윤 림프구(TIL) 면역요법, 자가유래 세포 요법, 조작된 자가유래 세포 요법(eACT™), 동종이계 T세포 이식, 비T세포 이식 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 입양 T세포 요법일 수 있는, 면역 또는 세포 요법의 치료 결과 또는 효과를 증강시킬 수 있다. 입양 T세포 요법은 광범위하게 종양세포를 인식하고 이와 결합할 수 있는 자가유래 또는 동종이계 T세포를 선택하고, 시험관내에서 농축시키고, 이를 환자에게 투여하는 임의의 방법을 포함한다. TIL 면역요법은 종양 조직에 침투할 수 있는 림프구를 단리하고, 시험관내에서 농축시키고, 이를 환자에게 투여하는 입양 T세포 요법의 한 유형이다. TIL개의 세포는 자가유래 또는 동종이계일 수 있다. 자가유래 세포 요법은 환자로부터 종양세포를 표적화할 수 있는 T세포를 단리하고, 시험관내에서 T세포를 농축시키고, T세포를 다시 동일한 환자에게 투여하는 것을 포함하는 입양 T세포 요법이다. 동종이계 T세포 이식은 생체외에서 증식된 자연 발생 T세포 또는 유전자 조작된 T세포의 이식을 포함할 수 있다. 상기에 보다 상세하게 기재된 바와 같은 조작된 자가유래 세포 요법은, 환자 자체의 림프구를 단리하고, 종양 표적화 분자를 발현하도록 유전자 변형시키고, 시험관내에서 증식시키고, 환자에게 다시 투여하는 입양 T세포 요법이다. 비T세포 이식은, 비제한적으로, 자연살해(NK)세포와 같은 비T세포를 이용한 자가유래 또는 동종이계 요법을 포함할 수 있다.
본 출원의 면역세포 요법은 조작된 자가유래 세포 요법(eACT™)이다. 이러한 양태에 따르면, 상기 방법은 공여자로부터 면역세포를 채취하는 것을 포함할 수 있다. 이어서, 단리된 면역세포를 외인성 활성화제(예를 들어, 사이토카인)와 접촉시키고, 증식시키고, 키메라 항원 수용체("조작된 CAR T세포") 또는 T세포 수용체("조작된 TCR T세포")를 발현하도록 조작할 수 있다. 일부 양태에서, 조작된 면역세포는 대상에서 종양을 치료한다. 예를 들어, 세포 표면 수용체를 인코딩하는 이종 유전자를 포함하는 레트로바이러스를 이용하여 1종 이상의 면역세포에 형질을 도입한다. 하나의 구현예에서, 세포 표면 수용체는 표적세포의 표면, 예를 들어 종양세포의 표면 상에서 항원에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 표면 수용체는 키메라 항원 수용체 또는 T세포 수용체이다. 또 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체를 발현하도록 1종 이상의 면역세포가 조작될 수 있다. 키메라 항원 수용체는 종양 항원에 대한 결합 분자를 포함할 수 있다. 결합 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 분자일 수 있다. 예를 들어, 항원 결합 분자는 scFv, Fab, Fab', Fv, F(ab')2 및 dAb, 및 이들의 임의의 단편 또는 조합에서 선택될 수 있다. 키메라 항원 수용체는 힌지 영역을 추가로 포함할 수 있다. 힌지 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, IgM, CD28 또는 CD8 알파의 힌지 영역에서 유도될 수 있다. 하나의 구현예에서, 힌지 영역은 IgG4의 힌지 영역에서 유도된다. 키메라 항원 수용체는 또한 막관통 도메인을 포함할 수 있다. 막관통 도메인은 면역세포 상의 공동수용체인 임의의 막관통 분자의 막관통 도메인, 또는 면역글로불린 슈퍼패밀리 멤버의 막관통 도메인일 수 있다. 특정 구현예에서, 막관통 도메인은 CD28, CD28T, CD8 알파, CD4 또는 CD19의 막관통 도메인에서 유도된다. 또 다른 구현예에서, 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인에서 유도된 도메인을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 막관통 도메인은 CD28T 막관통 도메인에서 유도된 도메인을 포함한다. 키메라 항원 수용체는 1종 이상의 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 공동자극 신호전달 영역은 CD28, CD28T, OX-40, 41BB, CD27, 유도성 T세포 공동자극제(ICOS), CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD247, Ig 알파(CD79a) 또는 Fc 감마 수용체의 신호전달 영역일 수 있다. 추가의 구현예에서, 공동자극 신호전달 영역은 CD28 신호전달 영역이다. 또 다른 구현예에서, 공동자극 신호전달 영역은 CD28T 신호전달 영역이다. 추가의 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 CD3 제타 신호전달 도메인을 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 종양 항원은 707-AP(707 알라닌 프롤린), AFP(알파 (a)-태아단백질), ART-4(T4 세포에 의해 인식되는 선암종 항원), BAGE(B 항원; b-카테닌/m, b-카테닌/돌연변이된 것), BCMA(B세포 성숙 항원), Bcr-abl(절단점군영역(breakpoint cluster region)-Abelson), CAIX(탄산탈수효소 IX), CD19(분화 클러스터 19), CD20(분화 클러스터 20), CD22(분화 클러스터 22), CD30(분화 클러스터 30), CD33(분화 클러스터 33), CD44v7/8(분화 클러스터 44, 엑손 7/8), CAMEL(흑색종 상의 CTL 인식된 항원), CAP-1(암배아 항원 펩타이드-1), CASP-8(카파아제-8), CDC27m(돌연변이된 세포 분열 사이클 27), CDK4/m(돌연변이된 시클린 의존성 키나아제 4), CEA(암배아 항원), CT(암/고환(항원)), Cyp-B(시클로필린 B), DAM(흑색종 분화 항원), EGFR(표피성장인자 수용체), EGFRvIII(표피성장인자 수용체, 변이형 III), EGP-2(상피 당단백질 2), EGP-40(상피 당단백질 40), Erbb2, 3, 4(적모구성 백혈병 바이러스 종양유전자 동족체 -2, -3, 4), ELF2M(돌연변이된 연장인자 2), ETV6-AML1(Ets 변이형 유전자 6/급성 골수성 백혈병 1 유전자 ETS), FBP(폴레이트 결합 단백질), fAchR(태아 아세틸콜린 수용체), G250(당단백질 250), GAGE(G 항원), GD2(디시알로강글리오시드 2), GD3(디시알로강글리오시드 3), GnT-V(N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라아제 V), Gp100(당단백질 100kD), HAGE(헬리코오스 항원), HER-2/neu(인간 상피 수용체-2/신경학적; EGFR2로도 알려져 있음), HLA-A(인간 백혈구 항원-A), HPV(인간 유두종바이러스), HSP70-2M(돌연변이된 열충격 단백질 70-2), HST-2(인간 인환세포 종양-2), hTERT 또는 hTRT(인간 텔로머라아제 역전사효소), iCE(장내 카르복실 에스테라아제), IL-13R-a2(인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2), KIAA0205, KDR(키나아제 삽입 도메인 수용체), κ-경쇄, LAGE(L 항원), LDLR/FUT(저밀도 지질 수용체/GDP-L-푸코오스: b-D-갈락토시다아제 2-a-L-푸코실트랜스퍼라아제), LeY(루이스-Y 항체), L1CAM(L1 세포부착분자), MAGE(흑색종 항원), MAGE-A1(흑색종 관련 항원 1), MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, 쥣과 CMV 감염된 세포, MART-1/Melan-A(T세포-1에 의해 인식되는 흑색종 항원/흑색종 항원 A), MC1R(멜라노코르틴 1 수용체), 미오신/m(돌연변이된 미오신), MUC1(뮤신 1), MUM-1, -2, -3(돌연변이된 흑색종 편재 항원 1, 2, 3), NA88-A(환자 M88의 NA cDNA 클론), NKG2D(자연살해 군 2, 멤버 D) 리간드, NY-BR-1(뉴욕 유방 분화 항원 1), NY-ESO-1(뉴욕 식도 편평세포 암종-1), 종양태아 항원(h5T4), P15(단백질 15), p190 마이너 bcr-abl(190KD bcr-abl의 단백질), Pml/RARa(전골수구성 백혈병/레티노산 수용체 a), PRAME(우선적으로 발현된 흑색종 항원), PSA(전립선 특이적 항원), PSCA(전립선 줄기세포 항원), PSMA(전립선 특이적 막 항원), RAGE(신장 항원), RU1 또는 RU2(신장 편재 항원 1 또는 2), SAGE(육종 항원), SART-1 또는 SART-3(종양 거부 편평세포 항원 1 또는 3), SSX-1, -2, -3, -4(윤활막육종X1, -2, -3, -4), TAA(종양 관련 항원), TAG-72(종양 관련 당단백질 72), TEL/AML1(전좌 Ets-패밀리 백혈병/급성 골수성 백혈병 1), TPI/m(돌연변이된 트리오세포스페이트 이소머라아제), TRP-1(티로시나아제 관련 단백질 1, 또는 gp75), TRP-2(티로시나아제 관련 단백질 2), TRP-2/INT2(TRP-2/인트론 2), VEGF-R2(혈관내피성장인자 수용체 2), WT1(윌름 종양 유전자) 및 이들의 임의의 조합에서 선택된다. 하나의 구현예에서, 종양 항원은 CD19이다.
T세포 요법은 환자에게 T세포 수용체를 발현하는 조작된 T세포("조작된 TCR T세포")를 투여하는 것을 포함한다. T세포 수용체(TCR)는 종양 항원에 대한 결합 분자를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 종양 항원은 707-AP, AFP, ART-4, BAGE, BCMA, Bcr-abl, CAIX, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD44v7/8, CAMEL, CAP-1, CASP-8, CDC27m, CDK4/m, CEA, CT, Cyp-B, DAM, EGFR, EGFRvIII, EGP-2, EGP-40, Erbb2, 3, 4, ELF2M, ETV6-AML1, FBP, fAchR, G250, GAGE, GD2, GD3, GnT-V, Gp100, HAGE, HER-2/neu, HLA-A, HPV, HSP70-2M, HST-2, hTERT 또는 hTRT, iCE, IL-13R-a2, KIAA0205, KDR, κ-경쇄, LAGE, LDLR/FUT, LeY, L1CAM, MAGE, MAGE-A1, 메소텔린, 쥣과 CMV 감염된 세포, MART-1/Melan-A, MC1R, 미오신/m, MUC1, MUM-1, -2, -3, NA88-A, NKG2D 리간드, NY-BR-1, NY-ESO-1, 종양태아 항원, P15, p190 마이너 bcr-abl, Pml/RARa, PRAME, PSA, PSCA, PSMA, RAGE, RU1 또는 RU2, SAGE, SART-1 또는 SART-3, SSX-1, -2, -3, -4, TAA, TAG-72, TEL/AML1, TPI/m, TRP-1, TRP-2, TRP-2/INT2, VEGF-R2, WT1, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다.
"CD19 지향 유전자 변형된 자가유래 T세포 면역요법"은, 키메라 항원 수용체(CAR) 양성 면역세포의 현탁액을 나타낸다. 이러한 면역요법의 예는, 순환 종양세포가 없고, CD4+/CD8+ T세포가 농축된 CAR-T세포를 사용하는 Clear CAR-T 요법이다. 또 다른 예는, 악시캅타진 실로류셀(Axi-cel™, YESCARTA®로도 알려져 있음)이다.문헌[Kochenderfer, et al., (J Immunother 2009;32:689 702)] 참조. 다른 비제한적인 예에는, JCAR017, JCAR015, JCAR014, Kymriah(티사젠렉류셀), Uppsala U. 항-CD19 CAR(NCT02132624) 및 UCART19(Celectis)가 포함된다. 문헌[Sadelain et al. Nature Rev. Cancer Vol. 3 (2003)], 문헌[Ruella et al., Curr Hematol Malig Rep., Springer, NY (2016)] 및 문헌[Sadelain et al. Cancer Discovery (Apr 2013)] 참조. CD19 지향 유전자 변형된 자가유래 T세포 면역요법을 준비하기 위해, 환자 자체의 T세포를 채취하고, CD28 및 CD3-제타 공동자극 도메인에 연결된 쥣과 항-CD19 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 레트로바이러스 형질도입에 의해 생체외에서 유전자 변형시킬 수 있다. 일부 구현예에서, CAR은 4-1BB 및 CD3-제타 공동자극 도메인에 연결된 쥣과 항-CD19 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한다. 항-CD19 CAR T세포를 증식시키고 환자에게 다시 주입할 수 있으며, 여기서 항-CD19 CAR T세포는 CD19 발현 표적세포를 인식하고 이를 제거할 수 있다.
하나의 양태에서, TCR은 바이러스 종양유전자에 대한 결합 분자를 포함한다. 하나의 구현예에서, 바이러스 종양유전자는 인간 유두종바이러스(HPV), 엡스타인바 바이러스(EBV) 및 인간 T세포림프친화바이러스(HTLV)에서 선택된다. 다른 구현예에서, TCR은 고환, 태반 또는 태아 종양 항원에 대한 결합 분자를 포함한다. 하나의 구현예에서, 고환, 태반 또는 태아 종양 항원은 NY-ESO-1, 윤활막육종 × 절단점 2(SSX2), 흑색종 항원(MAGE) 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다. 또 다른 구현예에서, TCR은 계통 특이적 항원에 대한 결합 분자를 포함한다. 추가의 구현예에서, 계통 특이적 항원은 T세포에 인식되는 흑색종 항원 1(MART-1), gp100, 전립선 특이적 항원(PSA), 전립선 특이적 막 항원(PSMA), 전립선 줄기세포 항원(PSCA) 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다. 특정 구현예에서, T세포 요법은 CD19에 결합하고 CD28 공동자극 도메인과 CD3-제타 신호전달 영역을 추가로 포함하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 조작된 CAR T세포를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 추가의 구현예에서, T세포 요법은 환자에게 KTE-C19를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 양태에서, 항원 모이어티에는, 비제한적으로, 엡스타인바 바이러스(EBV) 항원(예를 들어, EBNA-1, EBNA-2, EBNA-3, LMP-1, LMP-2), A형간염바이러스 항원(예를 들어, VP1, VP2, VP3), B형간염바이러스 항원(예를 들어, HBsAg, HBcAg, HBeAg), C형간염바이러스 항원(예를 들어, 외피 당단백질 E1 및 E2), 단순헤르페스바이러스 1형, 2형 또는 8형(HSV1, HSV2 또는 HSV8) 바이러스 항원(예를 들어, 당단백질 gB, gC, gC, gE, gG, gH, gI, gJ, gK, gL, gM, UL20, UL32, US43, UL45, UL49A), 거대세포바이러스(CMV) 바이러스 항원(예를 들어, 당단백질 gB, gC, gC, gE, gG, gH, gI, gJ, gK, gL, gM 또는 다른 외피 단백질), 인간 면역결핍바이러스(HIV) 바이러스 항원 (당단백질 gp120, gp41 또는 p24), 인플루엔자바이러스 항원(예를 들어, 헤마글루티닌(HA) 또는 뉴라미니다아제(NA)), 홍역 또는 볼거리 바이러스 항원, 인간 유두종바이러스(HPV) 바이러스 항원(예를 들어, L1, L2), 파라인플루엔자바이러스 바이러스 항원, 풍진바이러스 바이러스 항원, 호흡기세포융합바이러스(RSV) 바이러스 항원, 또는 수두-대상포진바이러스 바이러스 항원이 포함된다. 이러한 양태에서, 세포 표면 수용체는 임의의 TCR, 또는 표적 바이러스로 감염된 세포에서 상기 언급된 바이러스 항원 중 임의의 것을 인식하는 임의의 CAR일 수 있다. 다른 양태에서, 항원 모이어티는 면역 또는 염증성 기능장애를 갖는 세포와 관련이 있다. 이러한 항원 모이어티는, 비제한적으로, 미엘린 염기성 단백질(MBP), 미엘린 단백질지질 단백질(PLP), 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG), 암배아항원(CEA), 전구인슐린, 글루타민 데카르복실라아제(GAD65, GAD67), 열충격 단백질(HSP), 또는 병원성 자가면역 과정에 관여하거나 이와 관련이 있는 임의의 다른 조직 특이적 항원을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 방법은 1종 이상의 T세포를 환자에게 전달하는 것을 포함하는 T세포 요법을 포함할 수 있다. T세포는 치료적 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T세포, 예를 들어 조작된 CAR+ T세포 또는 조작된 TCR+ T세포의 치료적 유효량은 적어도 약 104개의 세포, 적어도 약 105개의 세포, 적어도 약 106개의 세포, 적어도 약 107개의 세포, 적어도 약 108개의 세포, 적어도 약 109개의 세포 또는 적어도 약 1010개의 세포일 수 있다. 또 다른 양태에서, T세포, 예를 들어 조작된 CAR+ T세포 또는 조작된 TCR+ T세포의 치료적 유효량은 약 104개의 세포, 약 105개의 세포, 약 106개의 세포, 약 107개의 세포 또는 약 108개의 세포이다. 하나의 구현예에서, T세포, 예를 들어 조작된 CAR+ T세포 또는 조작된 TCR+ T세포의 치료적 유효량은, 약 2 × 106개의 세포/㎏, 약 3 × 106개의 세포/㎏, 약 4 × 106개의 세포/㎏, 약 5 × 106개의 세포/㎏, 약 6 × 106개의 세포/㎏, 약 7 × 106개의 세포/㎏, 약 8 × 106개의 세포/㎏, 약 9 × 106개의 세포/㎏, 약 1 × 107개의 세포/㎏, 약 2 × 107개의 세포/㎏, 약 3 × 107개의 세포/㎏, 약 4 × 107개의 세포/㎏, 약 5 × 107개의 세포/㎏, 약 6 × 107개의 세포/㎏, 약 7 × 107개의 세포/㎏, 약 8 × 107개의 세포/㎏, 또는 약 9 × 107개의 세포/㎏이다. 하나의 구현예에서, CD19 CAR-T세포의 양은 2 × 106개의 세포/㎏이며, 100 ㎏ 이상의 대상의 경우 최대 용량은 2 × 108개의 세포이다. 또 다른 구현예에서, CD19 CAR-T세포의 양은 0.5 × 106개의 세포/㎏이며, 100 ㎏ 이상의 대상의 경우 최대 용량은 0.5 × 108개의 세포이다.
환자는 T세포 요법의 투여 전에 사전 조건화되거나 림프구제거 요법을 받을 수 있다. 환자는, 비제한적으로, 1종 이상의 화학요법 약물 및/또는 방사선요법으로의 치료를 포함하는 당업계에 알려진 임의의 방법에 따라 사전 조건화될 수 있다. 일부 양태에서, 사전 조건화는, T세포 요법 이전에, 내인성 림프구의 수를 감소시키거나, 사이토카인 침전물을 제거하거나, 1종 이상의 항상성 사이토카인 또는 전염증성 인자의 혈청 수준을 증가시키거나, 조건화 후 투여되는 T세포의 이펙터 기능을 증강시키거나, 항원 제시 세포 활성화 및/또는 이용 가능성을 증강시키거나, 또는 이들의 임의의 조합을 유도하는 임의의 처리를 포함할 수 있다. 사전 조건화는 대상에서 1종 이상의 사이토카인의 혈청 수준을 증가시키는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법은 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 화학요법제는 림프구제거(사전 조건화) 화학요법제일 수 있다. 유익한 사전 조건화 처리 요법은, 상호 유익한 바이오마커와 함께 미국 특허 제9,855,298호에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다. 이러한 문헌은, 예를 들어 특정 유익한 용량의 시클로포스파미드(1일 200 mg/m2 내지 1일 2000 mg/m2) 및 특정 용량의 플루다라빈(1일 20 mg/m2 내지 1일 900 mg/m2)을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 T세포 요법을 필요로 하는 환자를 조건화하는 방법을 설명하고 있다. 하나의 이러한 용량 요법은 치료적 유효량의 조작된 T세포를 환자에게 투여하기 전 3일 동안 시클로포스파미드 1일 약 500 mg/m2 및 플루다라빈 1일 약 60 mg/m2을 환자에게 매일 투여하는 것을 포함하여 환자를 치료하는 것을 포함한다. 하나의 양태에서, 조건화 요법은 3일 동안의 시클로포스파미드 500 mg/m2 + 플루다라빈 30 mg/m2을 포함한다. 이들은 -4일차, -3일차 및 -2일차, 또는 -5일차, -4일차 및 -3일차(0일차는 세포 투여일임)에 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 조건화 요법은 2일, 3일 또는 4일 동안 매일 시클로포스파미드 200 mg/m2, 250 mg/m2, 300 mg/m2, 400v, 500 mg/m2, 및 2일, 3일 또는 4일 동안 플루다라빈 20 mg/m2, 25 mg/m2 또는 30 mg/m2을 포함한다. 하나의 구현예에서, 백혈구성분채집술 후, CD19 CAR-T세포의 현탁액을 정맥내 주입하기 전, -5일차, -4일차 및 -3일차에 조건화 화학요법(플루다라빈 1일 30 mg/m2 및 시클로포스파미드 1일 500 mg/m2)이 투여된다. 일부 구현예에서, 정맥내 주입 시간은 15분 내지 120분이다. 하나의 구현예에서, 정맥내 주입 시간은 1분 내지 240분이다. 일부 구현예에서, 정맥내 주입 시간은 최대 30분이다. 일부 구현예에서, 정맥내 주입 시간은 최대 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 35분, 40분, 45분, 50분, 55분, 60분, 65분, 70분, 75분, 80분, 85분, 90분, 95분, 또는 최대 100분이다. 일부 구현예에서, 주입 부피는 50 mL 내지 100 mL이다. 일부 구현예에서, 주입 부피는 20 mL 내지 100 mL이다. 일부 구현예에서, 주입 부피는 약 30 mL, 35 mL, 40 mL, 45 mL, 50 mL, 55 mL, 60 mL 또는 약 65 mL이다. 일부 구현예에서, 주입 부피는 약 68 mL이다. 일부 구현예에서, 상기 현탁액은 동결된 것이며, 해동 6시간, 5시간, 4시간, 3시간, 2시간, 1시간 이내에 사용된다. 일부 구현예에서, 상기 현탁액은 동결된 것이 아니다. 일부 구현예에서, 면역요법은 주입 백으로부터 주입된다. 일부 구현예에서, 주입 백은 주입 동안 교반된다. 일부 구현예에서, 면역요법은 해동 후 3시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 현탁액은 알부민을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 알부민은 약 2% 내지 3%(v/v)의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 알부민은 약 2.5%(v/v)의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 알부민은 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5%(v/v)의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 알부민은 인간 알부민이다. 일부 구현예에서, 상기 현탁액은 DMSO를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, DMSO는 약 4% 내지 6%(v/v)의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, DMSO는 약 5%(v/v)의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, DMSO는 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 또는 10%(v/v)의 양으로 존재한다.
본원에 개시된 방법은 대상에서 암을 치료하거나, 종양의 크기를 감소시키거나, 종양세포를 사멸시키거나, 종양세포 증식을 방지하거나, 종양의 성장을 방지하거나, 환자로부터 종양을 제거하거나, 종양의 재발을 예방하거나, 종양 전이를 예방하거나, 환자에서 관해를 유도하거나, 또는 이들의 임의의 조합을 유도하는 데 사용될 수 있다. 특정 양태에서, 상기 방법은 완전 반응을 유도할 수 있다. 다른 양태에서, 상기 방법은 부분 반응을 유도할 수 있다.
치료될 수 있는 암에는, 혈관이 분포되지 않았거나, 아직 실질적으로 혈관이 분포되지 않았거나 또는 혈관이 분포된 종양이 포함된다. 암은 또한 고형종양 또는 비고형종양을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 상기 방법은 순환하는 CD19 발현 종양세포를 높은 수준으로 보유하는 B세포 악성종양을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 충족되지 않은 요구가 높은 별개의 환자 집단에 대해 권고될 수 있다.
MCL의 예시적인 치료
일부 구현예에서, 악성종양은 외투세포림프종(MCL)일 수 있다. MCL은 비호지킨림프종(NHL)의 공격성 하위유형이다. MCL은 미국(US)에서 NHL의 전체 신규 사례의 대략 6%를 차지하고, 서유럽에서 악성림프종의 5% 내지 7%를 차지한다. MCL의 연간 추정 발병률은 미국과 유럽에서 100,000명 당 대략 1명 내지 2명이다. MCL은 여성보다 남성에게 영향을 미칠 가능성이 높고, 진단 시 중간값 연령은 68세이다. 일부 구현예에서, r/r MCL은 동종이계 줄기세포 이식(allo-SCT)을 이용한 치료에 대해 재발된 것 또는 불응성(r/r)이며, 이는 이식 전에 이러한 질환이 화학민감성인 것으로 나타난 경우, 그 자체로 재발된 또는 불응성(r/r) MCL 환자의 대략 25%에 대해 지속적인 관해를 유도할 수 있지만, allo-SCT는 또한 최대 40%의 치료 관련 사망률과도 관련이 있다.
일부 구현예에서, r/r MCL은 보르테조밉(bortezomib), 레날리도미드(lenalidomide) 및 템시롤리무스(temsirolimus)를 이용한 치료에 대해 r/r이며, 그 자체로 22% 내지 32% 범위의 ORR을 유도한다. 이브루티닙 및 아칼라브루티닙과 같은 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 저해제는 r/r MCL 환자에서, 각각, 68% 및 81%의 ORR을 유도한다. 하지만, 대부분의 환자는 BTK 저해제 치료 후 진행하게 되며, ORR 20% 내지 42% 범위, 반응 지속기간 중앙값(DOR) 3개월 내지 5.4개월 범위, 및 OS 중앙값 2.5개월 내지 9개월 범위로 나타나는 바와 같이 구제요법에 대한 반응 결과가 불량하다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, CAR T세포 개입이 높은 Ki67 종양 증식 지수 발현(≥30% 또는 ≥50%)과 돌연변이된 TP53과 같은 불량한 예후 인자를 갖는 암을 치료하는 데 사용될 수 있음을 제공한다. 일부 구현예에서, 암은 MCL이다. 일부 구현예에서, MCL 형태는 전형적, 다형성, 또는 모세포형이다. 일부 구현예에서, Ki-67 지수는 5% 내지 80%일 수 있다. 일부 구현예에서, Ki-67 지수는 약 38%이다. 일부 구현예에서, 고위험 환자는 차세대 시퀀싱에 따라 Ki-67 ≥50% 및/또는 TP53 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 18세 이상이다. 일부 구현예에서, MCL은 시클린 D1 과발현 및/또는 t(11:14)의 존재에 대한 문서화를 통해 병리학적으로 확인된다.
일부 구현예에서, CAR T세포 개입은, 순환 림프종 세포가 고갈되어 있고, IL-2의 존재 하에서 항-CD3 항체와 항-CD28 항체로 활성화된 백혈구성분채집술 샘플에서의 단핵세포 양성 선택에 의해 CD4+/CD8+ T세포가 농축된 T세포 집단에서 증식된 후, 항-CD19 CAR 구조체를 함유하는 복제 불능 바이러스 벡터로 형질도입된 T세포를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR 구조체는 FMC63-28Z CAR이다. 이러한 방법을 사용하여 생성된 CAR T세포는 KTE-X19로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 자가유래이다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 이종유래이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 T세포의 용량은 2 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 T세포의 용량은 1 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 T세포의 용량은 1.6 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏, 1.8 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏ 또는 1.9 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CD19 CAR 구조체는 CD3ζ T세포 활성화 도메인과 CD28 신호전달 도메인을 함유한다.
일부 구현예에서, CAR T세포는 백혈구성분채집술 후, -5일차, -4일차 및 -3일차에 플루다라빈 1일 25 mg/m2 및 -2일차에 시클로포스파미드 1일 900 mg/m2을 이용한 조건화 요법 후, 0일차에 단일 주입으로 투여된다. 일부 구현예에서, 조건화 요법은 3일 동안 시클로포스파미드 1일 300 mg/m2 및 플루다라빈 1일 30 mg/m2을 포함한다. 일부 구현예에서, 조건화 화학요법은 -5일차, -4일차 및 -3일차에 플루다라빈 1일 30 mg/m2 및 시클로포스파미드 1일 500 mg/m2를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 또한 항-CD19 CAR T세포의 주입 대략 30분 내지 60분 전에, 아세트아미노펜(acetaminophen)과 디펜히드라민(diphenhydramine) 또는 또 다른 H1-항히스타민제를 투여받을 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 1회 이상의 추가 용량의 항-CD19 CAR T세포를 투여받는다.
일부 구현예에서, MCL 암은 재발된/불응성 MCL(r/r MCL)이다. 일부 구현예에서, 환자는 1회 이상의 선행 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 환자는 1회 내지 5회의 선행 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 선행 치료는 자가유래 SCT, 항-CD20 항체, 안트라시클린 또는 벤다무스틴 함유 화학요법, 및/또는 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTKi)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, BTKi는 이브루티닙(Ibr)이다. 일부 구현예에서, BTKi는 아칼라브루티닙(Acala)이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 이브루티닙으로 이전에 치료받은 MCL 환자가 아칼라브루티닙으로 이전에 치료받은 환자와 비교하여 항-CD19 CAR T세포 요법에 대해 더 현저한 반응을 나타냈음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 환자가 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙으로 이전에 치료받았고, 암이, 바람직하게는, 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙에 대해 재발된/불응성인 환자에서 항-CD19 CAR T세포 요법으로 r/r MCL을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, BTKi는 티라브루티닙(tirabrutinib)(ONO-4059), 자누브루티닙(zanubrutinib)(BGB-3111), CGI-1746 또는 스페브루티닙(spebrutinib)(AVL-292, CC-292)이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 이전에 Ibr, Acala 또는 둘 모두로 치료받은 환자의 피크 CAR T세포 수준 중앙값(범위)이, 각각, 95.9(0.4 내지 2589.5), 13.7(0.2 내지 182.4) 또는 115.9(17.2 내지 1753.6)였음을 제공한다. 일부 구현예에서, MCL 환자에서 항-CD19 CAR T세포 요법에 대한 ORR/CR 비율은 Ibr로 이전에 치료받은 환자에서 94%/65%, Acala로 이전에 치료받은 환자에서 80%/40%, 및 두 가지 BTKi로 이전에 치료받은 환자에서 100%/100%였다. 일부 구현예에서, Ibr, Acala 또는 둘 모두로 이전에 치료받은 환자에서 12개월 생존률은, 각각, 81%, 80% 또는 100%였다. 일부 구현예에서, CAR T세포 증식은 Ibr 및/또는 Acala로 이전에 치료받은 환자에서의 ORR/CR 비율과 관련이 있다. 따라서, 하나의 구현예에서, 환자를 Ibr과 Acala 둘 모두로 치료한다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용은, Ibr 및/또는 Acala로 이전에 치료받은 MCL 환자에서 피크 CAR T세포 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 방식으로 ORR/CR을 예측하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용은 CAR T세포 피크 수준/기준선 종양 부담(CEN 및 INV) 측정치에 기반하여 지속적인 반응을 예측하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 상기 비율이 높을수록, 12개월에서/까지 지속적인 반응 가능성이 더 높다. 하나의 구현예에서, 0.00001 내지 0.005의 비율은 12개월에서/까지 비반응성인 것으로 예측된다. 하나의 구현예에서, 0.006 내지 0.3의 비율은 12개월에서/까지 재발성인 것으로 예측된다. 하나의 구현예에서, 0.4 내지 1의 비율은 12개월에서/까지 지속적인 반응인 것으로 예측된다. 하나의 구현예에서, 상기 비율은 평균 집단에서 당업자에 의해 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 포함 기준에는 실시예 2에 열거된 것들이 포함된다. 일부 구현예에서, 추가 배제 기준에는 실시예 2에 열거된 것들이 포함된다.
일부 구현예에서, 환자는 백혈구성분채집술 후(백혈구성분채집술 후 및 화학요법 전) 덱사메타손(예를 들어, 1일 내지 4일 동안 매일 20 mg 내지 40 mg, 또는 등가량, PO 또는 IV), 메틸프레드니솔론, 이브루티닙(예를 들어, 매일 560 mg PO), 및/또는 아칼라브루티닙(예를 들어, 1일 2회 100 mg PO)을 이용한 가교요법을 받을 수 있으며, 이는, 예를 들어 조건화 화학요법 전 5일 이하 이내에 완료될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 환자는 높은 질환 부담을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 가교요법은 면역조절제, R-CHOP, 벤다무스틴, 알킬화제 및/또는 백금계 작용제에서 선택된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, CAR T세포 주입에 반응했던 모든 MCL 환자가 T세포 증식을 달성했지만, 비반응성 환자에서는 증식이 관찰되지 않았음을 제공한다. 일부 구현예에서, 반응은 객관적 반응(완전 반응 + 부분 반응)이다. 본 개시내용은, 0일차 내지 28일차의 곡선하면적(AUC0-28)과 피크 수준이 비반응자에 비해 반응자에서 >200배 더 높았던 것과 같이 CAR T세포 수준이 처음 28일 이내에 ORR과 상관관계가 있었으며, 이는 최소 잔류 질환(MRD, 10-5 민감도) 양성 환자(4주차에)와 비교하여 MRD 음성 환자에서 >80배 더 높은 피크/AUC CAR T세포 수준으로 또한 나타난 바와 같이 증식률이 높을수록, 더 우수하고 아마도 더 깊은 반응을 유도했음을 시사한다. 따라서, 본 개시내용은, 피크/AUC CAR T세포 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 MCL의 CAR T세포 치료에 대한 환자 반응 및 MRD를 예측하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 피크 CAR T세포 증식은 CAR T세포 투여 후 8일차 내지 15일차에 관찰된다. 일부 구현예에서, CAR T세포 수준은 qPCR로 측정된다. 일부 구현예에서, 피크 CAR T세포 수준, AUC0-28 및/또는 MRD는 차세대 시퀀싱을 통해 모니터링된다. 일부 예에서, CAR T세포 수는 혈액 1 μL 당 세포의 수로 측정된다. 일부 예에서, CAR T세포 수는 숙주 DNA 1 ㎍ 당 CAR 유전자 카피 수로 측정된다. 일부 예에서, CAR T세포 수는 문헌[Kochenderfer J.N et al. J. Clin. Oncol. 2015;33:540-549]에 기재된 바와 같이 측정된다. 하나의 구현예에서, CAR T세포 수준은 문헌[Locke FL et al. Mol Ther. 2017;25(1):285-295]에 기재된 바와 같이 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 반응자와 비반응자 사이의 T세포 증식에 차이가 있음을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 반응자(완전 관해 및 부분 관해를 나타낸 반응자)에서의 피크 항-CD19 CAR T세포 수준 중앙값이 1 μL 당 102.4개의 세포(범위: 1 μL 당 0.2개 내지 2589.5개의 세포; n=51)였고, 비반응자에서는 1 μL 당 12.0개의 세포(범위: 1 μL 당 0.2개 내지 1364.0개의 세포, n=8)였음을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 객관적 반응을 나타낸 환자에서 0일차 내지 28일차의 AUC(AUC0-28) 중앙값이 1 μL 당 1487.0개의 세포 × 일수(범위: 1 μL 당 3.8 × 104개 내지 2.77 × 104개의 세포 × 일수; n=51)였고, 비반응자에서는 1 μL 당 169.5개의 세포 × 일수(범위: 1 μL 당 1.8 × 104개 내지 1.17 × 104개의 세포 × 일수; n=8)였음을 제공한다. 코르티코스테로이드도 토실리주맙도 투여받지 않은 환자(n=18)에서 피크 항-CD19 CAR T세포 중앙값(피크: 1 μL 당 24.7개의 세포; AUC0-28 수준: 1 μL 당 360.4개의 세포 × 일수)은, 코르티코스테로이드만 투여받은 환자(n=2)와 유사하였다(피크: 1 μL 당 24.2개의 세포; AUC0-28: 1 μL 당 367.8개의 세포 × 일수). 토실리주맙만 투여받은 환자(n=10)에서, 평균 피크 항-CD19 CAR T세포는 1 μL 당 86.5개의 세포였고, AUC0-28은 1 μL 당 1188.9개의 세포 × 일수였다. 코르티코스테로이드와 토실리주맙을 모두 투여받은 환자(n=37)에서, 평균 피크는 1 μL 당 167.2개의 세포였고, AUC0-28은 1 μL 당 1996.0개의 세포 × 일수였다. 피크 항-CD19 CAR T세포 값의 중앙값은 65세 이상의 환자(n=39)에서 1 μL 당 74.1개의 세포였고, 65세 미만의 환자(n=28)에서 1 μL 당 112.5개의 세포였다. 항-CD19 CAR T세포 AUC0-28 값의 중앙값은 65세 이상의 환자에서 1 μL 당 876.5개의 세포 × 일수였고, 65세 미만의 환자에서 1 μL 당 1640.2개의 세포 × 일수였다. 성별은 항-CD19 CAR T세포의 AUC 0-28와 Cmax에 유의한 영향을 미치지 않았다. 따라서, 본 개시내용은, 항-CD19 CAR T 치료 후 T세포 증식을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 MCL에서 반응을 예측하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 CAR T세포 증식이 3등급 이하의 CRS 및 NE 사례를 나타내는 경우보다 3등급 이상의 CRS를 나타내는 MCL 환자에서 더 컸음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, CAR T세포 치료 후 CAR T세포 증식을 측정하고 이의 수준을 참조 값과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS 및 NE 사례를 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 CAR T세포 증식이 높을수록, 3등급 이상의 CRS 및 NE 사례에 대한 가능성이 더 높다.
일부 구현예에서, 사이토카인 수준은 단백질 또는 mRNA 수준(이 중 하나)에 의해 측정되며, 이러한 수준이다. 일부 구현예에서, 사이토카인 수준은 문헌[Locke FL et al. Mol Ther. 2017;25(1):285-295]에 기재된 바와 같이 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 혈청 GM-CSF 및 IL-6 피크 수준(CAR T세포를 투여하고 약 8일 후에 도달함)이 MCL 환자에서 3등급 이상의 CRS 및 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있었음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, CAR T세포 투여 후 GM-CSF 및 IL-6의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS 및 3등급 이상의 NE를 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 이러한 사이토카인의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 CRS 및 NE에 대한 가능성이 더 높다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 혈청 페리틴이 MCL 환자에서 3등급 이상의 CRS와 양의 상관관계가 있었음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, CAR T세포 투여 후 혈청 페리틴의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 페리틴의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 CRS에 대한 가능성이 더 높다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 혈청 IL-2 및 IFN-감마가 MCL 환자에서 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있었음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, CAR T세포 투여 후 혈청 IL-2 및 IFN-감마의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 IL-2 및 IFN-감마의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및 혈관 세포 부착 분자(VCAM)의 뇌척수액 수준이 MCL 환자에서 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있었음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, CAR T세포 투여 후 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및/또는 혈관 세포 부착 분자(VCAM)의 뇌척수액 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및/또는 혈관 세포 부착 분자(VCAM)의 뇌척수액 수준이 높을수록, 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 이상사례는 표 13 및/또는 표 14에 따라 관리되었다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 3등급 이상의 CRS와 양의 상관관계가 있는 사이토카인의 피크 혈청 수준에는 IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및 퍼포린이 포함되어 있음을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 3등급 이상의 NE와 관련이 있는 사이토카인의 피크 혈청 수준에는 IL-2, IL-1 Ra, IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-12p40, IFN-γ, IL-10, MCP-4, MIP-1b 및 그랜자임 B가 포함되어 있음을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 3등급 이상의 CRS와 NE 둘 모두와 관련이 있는 사이토카인에는 IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B가 포함되어 있음을 제공한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 혈청 수준은 CAR T세포 투여 후 7일 이내에 피크에 도달한다. 따라서, 본 개시내용은, 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및/또는 퍼포린의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 CAR T세포 투여 후 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 또한, 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 MCL에서 3등급 이상의 CRS 및 3등급 이상의 NE를 예측하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 야생형 TP53을 갖는 MCL 환자에 비해 돌연변이된 TP53을 갖는 MCL 환자에서 증식성(IL-15, IL-2) 및 염증성(IL-6, IL-2Rα, sPD-L1 및 VCAM-1) 피크 사이토카인 수준이 증가하는 경향이 있었음을 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 개시내용은, CAR T세포 투여 후 증식성 및/또는 염증성 사이토카인의 수준을 조작하는 것을 포함하는 MCL에서 CAR T세포 치료에 대한 반응을 개선시키는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, CAR T세포 투여 후 1개월차에 MRD 음성이었던 환자가 1개월차에 MRD 양성이었던 환자와 비교하여, IFN-감마 및 IL-6의 피크 수준이 증가되었고, IL-2가 증가하는 경향이 있었음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, 항-CD19 CAR T 치료 후 IFN-감마, IL-6 및/또는 IL-2의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 환자가 MCL에서 MRD 음성인지 여부를 예측하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 T세포 생성물 표현형이 MCL 유형에 따라 다양했음을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 제조된 항-CD19 CAR T 생성물에서, 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL 환자에 대한 CD4+/CD8+ T세포 비의 중앙값(범위)이, 각각, 0.7(0.04 내지 2.8), 0.6(0.2 내지 1.1) 또는 0.7(0.5 내지 2.0)이었음을 제공한다. 생성물 T세포 표현형(중앙값[범위])에는, 덜 분화된 CCR7+ T세포(전형적 40.0%[2.6% 내지 88.8%]; 모세포형 35.3%[14.3% 내지 73.4%]; 다형성 80.8%[57.3% 내지 88.8%])와, 이펙터 및 이펙터 기억 CCR7- T세포(전형적 59.9%[11.1% 내지 97.4%]; 모세포형 64.8%[26.6% 내지 85.7%]; 다형성 19.2%[11.1% 내지 42.7%])가 포함되었다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL 환자에서 12개월 생존율이, 각각, 86.7%, 67.9% 또는 100%였음을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 환자에게 투여되는 T세포 생성물 표현형을 조작하는 방식으로 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL의 치료를 개선시키는 방법을 제공한다.
B세포 ALL의 예시적인 치료
B-ALL 세포는 전형적으로 CD19를 발현하며, CD19를 표적으로 하는 CAR T세포 요법은 R/R B-ALL에서의 치료 접근법이다. 문헌[Pehlivan K.C. et al. Curr Hematol Malig Rep. 2018;13(5):396-406]. 국립 암 연구소(National Cancer Institute)에서 개발된 CD3ζ 및 CD28 공동자극 도메인을 함유하는 항-CD19 CAR T세포 요법(문헌[Kochenderfer JN et al. J Immunother. 2009;32(7):689-702]; 문헌[Kochenderfer JN et al. Blood. 2010;116(19):3875-3886])은, R/R B-ALL을 앓고 있는 아동 및 30세 이하의 성인을 대상으로 한 1상 시험에서 중앙값 10개월의 추적조사 후 70%의 전체 관해율을 나타냈다. 문헌[Lee DW et al. Lancet. 2015;385(9967):517-528]. R/R B-ALL을 앓고 있는 성인을 대상으로 한 1상 시험에서 평가된 유사한 CAR 구조체는, 중앙값 29개월의 추적조사에서 83% 완전 관해(CR) 비율과 OS 중앙값 12.9개월을 나타냈다. 문헌[Park JH et al. N Engl J Med. 2018;378(5):449-459]. 이러한 연구에서, CAR T세포는 CD4+/CD8+ T세포가 농축되지 않았던 백혈구성분채집술 샘플로부터 제조되었다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 순환 림프종 세포가 고갈되어 있고, IL-2의 존재 하에서 항-CD3 항체와 항-CD28 항체로 활성화된 백혈구성분채집술 샘플에서의 단핵세포 양성 선택에 의해 CD4+/CD8+ T세포가 농축된 T세포 집단에서 증식된 후, 항-CD19 CAR 구조체를 함유하는 복제 불능 바이러스 벡터로 형질도입된 T세포에 대한 T세포 생성물에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 이러한 T세포 생성물은 ALL, CLL, AML을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAR 구조체는 FMC63-28Z CAR이다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 자가유래이다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 이종유래이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 T세포의 용량은 2 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 T세포의 용량은 1 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CAR 양성 T세포의 용량은 1.6 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏, 1.8 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏ 또는 1.9 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏이다. 일부 구현예에서, CD19 CAR 구조체는 CD3ζ T세포 활성화 도메인과 CD28 신호전달 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, T세포 생성물은 KTE-X19이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 이전 단락에 기재된 바와 같이 제조된 항-CAR T세포 생성물이 B세포 ALL 및 B세포 NHL에 사용될 수 있음을 제공한다. 하나의 구현예에서, T세포 생성물은 표 23의 생성물의 특징을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 생성물 특징은 특정 서브세트의 T세포(나이브(
Figure pct00010
), 중추 기억, 이펙터 및 이펙터 기억 T세포)의 백분율, CD4+ 세포의 백분율, CD8+ 세포의 백분율 및 CD4/CD8 비에서 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 생성물 특징은 항-CD19 CAR T 생성물 세포와 1:1 비로 혼합된 표적 CD19 발현 암세포(예를 들어, Toledo)와의 공동 배양물 중 IFNγ 생성물의 수준(pg/mL)이다. 하나의 구현예에서, IFNγ는 적격한 ELISA를 사용하여 인큐베이션 24시간 후 세포 배양 배지에서 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 생성물 특징 중 하나 이상은 CD4+/CD8+ 양성 세포 농축 없이 백혈구성분채집술로부터 제조된 항-CAR T세포의 생성물 특징보다 우수하다. 일부 구현예에서, 이러한 우수한 생성물 특징은 나이브 표현형을 갖는 세포(CD45RA+CCR7+)의 증가된 백분율, 분화된 표현형을 갖는 세포(CCR7-)의 감소된 백분율, IFNγ-생산 세포의 감소된 수준 및 CD8+ 세포의 증가된 수준에서 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD19 T세포 생성물은 TCM, 중추 기억 T세포(CD45RA-CCR7+); TEFF, 이펙터 T세포(CD45RA+CCR7-); TEM, 이펙터 기억 T세포(CD45RA-CCR7-); 및/또는 TN, 나이브 유사 T세포(CD45RA+CCR7+)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 생성물은 CD45RA+CCR7+인 T세포를 의미하는 TN 나이브 유사 T세포를 포함하고, 줄기 유사 기억세포를 포함한다. 일부 구현예에서, T세포 생성물은 KTE-X19이다. 일부 구현예에서, KTE-X19의 IFN-± 생산은 190 pg/mL 이상이다. 특정 구현예에서, KTE-X19는 90% 이상의 CD3+ 세포를 갖는다. 일부 다른 구현예에서, KTE-X19 내 NK 세포의 백분율은 0.1%(범위 0.0% 내지 2.8%)이다. 일부 추가의 구현예에서, KTE-X19 내 CD3- 세포 불순물의 백분율은 0.5%(범위 0.3% 내지 3.9%)이다.
일부 구현예에서, 암은 재발된/불응성 B세포 ALL이다. 일부 구현예에서, 환자는 21세 이하이다. 일부 구현예에서, 환자는 21세 이하이고, 10 ㎏ 이상이며, 원발성 불응성이거나, 최초 진단 18개월 이내 재발되었거나, 2회 이상의 전신 요법 후 R/R, 또는 적어도 등록 100일 전에 동종이계 줄기세포 이식 후 R/R인 B세포 ALL을 앓고 있다. 하나의 구현예에서, 암은 무활동성 림프종 또는 백혈병이다. 하나의 구현예에서, 암은, 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL)의 다수의 유형, 하위유형 및 변이형, 버킷림프종(BL), 외투세포림프종 및 이의 모세포형 변이형, 및 B세포 림프모구성 림프종을 포함하는 공격성 B세포 림프종이다. DLBCL은 DLBCL NOS, T세포/조직구 풍부 거대 B세포 림프종, CNS의 원발성 DLBCL, 원발성 피부 DLBCL, 다리 유형, 노인의 EBV 양성 DLBCL일 수 있다. 거대 B세포의 다른 림프종에는, 원발성 종격동(흉선) LBCL, 만성 염증 관련 DLBCL, 림프종모양육아종증, ALK 양성 LBCL, 형질모세포형 림프종, HHV8 관련 다중심성 캐슬만병(Castleman disease)에서 유래한 거대 B세포 림프종 및 원발성 삼출 림프종이 포함된다. 다른 유형의 림프종에는, DLBCL과 버킷림프종 사이의 중간 특징을 갖는 미분류된 B세포 림프종, 및 DLBCL과 전형적 호지킨림프종 사이에 중간 특징을 갖는 미분류된 B세포 림프종, 비장 변연부 B세포 림프종, MALT의 림프절외 변연부 B세포 림프종, 방실결절 변연부 B세포 림프종, 모발상세포 백혈병, 림프형질세포성 림프종(발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia)), 및 원발성 삼출 림프종이 포함된다. 암은 1기 내지 4기의 임의의 병기일 수 있다.
ALL은 소아 백혈병의 대략 80% 및 전체 소아 암의 대략 25%를 차지하는 흔한 소아 악성종양이다. 소아 환자의 대략 20%는 초기 요법 후 장기 관해를 달성하지 못하며, 5년 OS 비율은 대략 55%이다. 문헌[Hunger SP, et al. N Engl J Med. 2015;373:1541-1552; Sun W, et al. Leukemia. 2018;32:2316-2325]; 문헌[Rheingold SR, et al. J Clin Oncol. 2019;37(suppl, abstr):10008] 및 문헌[Oskarsson T, et al. Haematologica. 2016;101:68-76]. 초기 치료 후 조기에 재발하거나 원발성 불응성 질환을 나타내는 환자; 줄기세포 이식 후 R/R 질환을 나타내는 환자; 및 복합적으로 재발한 환자의 경우 결과가 불량하다. 문헌[Sun W, et al. Leukemia. 2018;32:2316-2325]; 문헌[Rheingold SR, et al. J Clin Oncol. 2019;37(suppl, abstr):10008]; 문헌[Oskarsson T, et al. Haematologica. 2016;101:68-76]; 문헌[Nguyen K, et al. Leukemia. 2008;22:2142-2150]; 문헌[Crotta A, et al. Curr Med Res Opin. 2018;34:435-440]; 문헌[Schrappe M, et al. N Engl J Med. 2012;366:1371-1381]. 초기 진단 후18개월 이내에 재발한 환자는 일반적으로 5년 OS 비율이 21% 내지 28%이다. 문헌[Rheingold SR, et al. J Clin Oncol. 2019;37(suppl, abstr):10008]; 문헌[Nguyen K, et al. Leukemia. 2008;22:2142-2150]. 관해에 도달할 가능성 및 EFS의 지속기간은 각 후속 구제요법에 따라 감소한다. 문헌[Sun W, et al. Leukemia. 2018;32:2316-2325]. 신규한 요법인 블리나투모맙과 이노투주맙 오조가마이신(inotuzumab ozogamicin)을 이용한 치료 후 R/R ALL을 앓고 있는 소아 및 청소년 환자에서의 결과가 1년 OS 비율 대략 36%로 여전히 불량하였기 때문에, 보다 효과적인 치료 옵션에 대한 필요성이 강조된다. 문헌[von Stackelberg A, et al. J Clin Oncol. 2016;34:4381-4389. 10]; 문헌[Bhojwani D, et al. Leukemia. 2019;33:884-892].
일부 구현예에서, 암은 B세포 NHL이고, 주요 등록 기준은 18세 미만, 10 ㎏ 이상이며, 측정 가능한 병변이 1개 이상인, 달리 명시되지 않은 조직학적으로 확인된 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL NOS), 원발성 종격동 거대 B세포 림프종, 버킷림프종(BL), 버킷 유사 림프종, 또는 DLBCL과 BL 사이의 중간에 있는 미분류된 B세포 림프종을 포함한다. 하나의 구현예에서, NHL 치료의 경우, 상기 질환은 원발성 불응성이거나, 2회 이상의 전신 요법 후 R/R이거나, 또는 등록 100일 이상 전 자가유래 또는 동종이계 줄기세포 이식 후 R/R일 수 있다. 등록 후 4주 이내에 치료를 필요로 하는 급성 이식편대숙주병 또는 만성 이식편대숙주병을 앓는 환자는 적격하지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 이러한 B세포 ALL 및/또는 B세포 NHL 환자는 -4일차, -3일차 및 -2일차에 플루다라빈 1일 25 mg/m2 및 -2일차에 시클로포스파미드 1일 900 mg/m2을 이용한 조건화 화학요법을 투여받고, 0일차에 1 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 목표 용량으로 CD4+/CD8+ 농축된 항-CD19 CAR T세포(바로 위에 기재된 바와 같이 제조됨)의 단일 주입을 투여받는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 B세포 ALL을 성공적으로 치료하기 위한 CD4+/CD8+ 농축된/암세포 고갈된 항-CD19 CAR T세포의 용도를 제공하며, 여기서 환자는 1차 치료에 대해 불응성(즉, 원발성 불응성)이거나, 첫 번째 관해 후 12개월 이내에 재발된 것이거나, 2회 이상의 선행 전신 요법 후 재발된 것 또는 불응성이거나, 또는 동종이계 줄기세포 이식(SCT) 후 재발된 것으로 정의된 R/R B세포 ALL을 앓고 있는 18세 이상의 환자이다. 일부 구현예에서, 환자는 골수 모세포 ≥5%, ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group) 전신활동도 0 또는 1, 및 적절한 신장, 간 및 심장 기능을 갖도록 요구되었다. 이전에 블리나투모맙을 투여받았던 환자의 경우, CD19 발현이 90% 이상인 백혈병 모세포가 요구되었다. 필라델피아 염색체 양성(Ph+) 질환, 수반되는 골수외 질환, 신경학적 변화가 없는 중추신경계(CNS)-2 질환(1 ㎣ 당 5개 미만의 백혈구 세포를 갖는 뇌척수액[CSF] 모세포)을 앓고 있는 환자와, 다운증후군(Down syndrome) 환자는 적격하였다. 신경학적 변화와 무관한 CNS-3 질환(1 ㎣ 당 5개 이상의 백혈구 세포를 갖는CSF 모세포)과 CNS 장애의 병력은 배제되었다. 일부 구현예에서, 추가 포함 및 배제 기준은 실시예 9에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 환자는 원발성 불응성인 암을 앓고 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 SCT 후 재발된 암을 앓고 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 블리나투모맙을 이전에 투여받았을 수 있으며, 블리나투모맙은 항-CD19 CAR T세포 요법 전에 사용된 마지막 요법일 수 있다. 일부 구현예에서, 환자 기준선 특징은 표 18에 기재된 환자 중 어느 한 환자의 특징이다.
일부 구현예에서, 이러한 B세포 ALL 환자는 2 × 106개, 1 × 106개 또는 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏를 투여받는다. 일부 구현예에서, 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏는 총 부피 40 mL의 제형으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏는 총 부피 68 mL의 제형으로 투여된다. 일부 구현예에서, CAR T세포 생성물은 총 부피 20 mL, 25 mL, 30 mL, 35 mL, 40 mL, 45 mL, 50 mL, 55 mL, 60 mL, 65 mL, 70 mL, 75 mL, 80 mL, 85 mL, 90 mL, 95 mL, 100 mL, 200 mL, 300 mL, 400 mL, 500 mL, 500 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL 또는 1000 mL로 제형화된다. 일부 구현예에서, 40 mL 제형은 동결/해동 공정 동안 세포 밀도와 세포 생존능을 유지하도록 의도된다.
일부 구현예에서, 상기 치료는 이상사례와 관련이 있다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 이상사례는 표 13, 표 14, 표 16, 또는 이들의 조합 중 임의의 것에 따라 관리된다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 이상사례는 표 16의 기존 관리 지침에 따라 관리된다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 이상사례는 표 16의 개정된 관리 지침에 따라 관리된다. 일부 구현예에서, 혈압상승제가 CRS를 치료하기 위해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, CRS와 관련된 징후 또는 증상에는, 발열, 오한, 피로, 빈맥, 구역, 저산소증 및 저혈압이 포함된다. 일부 구현예에서, 신경학적 사례와 관련된 징후 또는 증상에는, 뇌병증, 발작, 의식 수준의 변화, 언어장애, 떨림 및 착란이 포함된다.
일부 구현예에서, 환자는 기준선에서 높은 질환 부담을 나타낼 수 있으며, 이는 국소 검토에 따라 골수에서 25% 초과의 백혈병 모세포 또는 말초 순환에서 1 ㎣ 당 1,000개 이상의 모세포를 갖는 것으로 정의된다. 일부 구현예에서, 환자는 백혈구성분채집술 후 그리고 조건화 화학요법 전에 가교 화학요법을 받을 수 있다. 일부 구현예에서, 가교 화학요법은 표 17의 사전 정의된 가교 화학요법 중 하나에 따른다.
일부 구현예에서, 조건화 화학요법/림프구제거 요법은 가교 화학요법으로부터 7일 이상 또는 5회 반감기(더 짧은 경우) 휴약 후 투여된다. 일부 구현예에서, 조건화 화학요법/림프구제거 요법은 -4일차, -3일차 및 -2일차에 플루다라빈 정맥내(IV) 1일 25 mg/m2 및 -2일차에 시클로포스파미드 IV 1일 900 mg/m2로 이루어진다. 0일차에, 항-CD19 CAR T세포의 단일 주입이 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD19 CAR T세포의 추가 주입이 이후에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 첫 번째 주입에 대해 완전 반응을 달성한 환자는, 3개월 초과의 관해 후에 진행되는 경우, 단, CD19 발현이 유지되고, CAR에 대한 중화 항체가 의심되지 않는다면, 항-CD19 CAR T세포의 두 번째 주입을 받을 수 있다.
일부 구현예에서, 액적 디지털 중합효소 연쇄반응(droplet digital polymerase chain reaction)을 사용하여 혈액 내 형질도입된 항-CD19 CAR+ T세포의 존재, 증식 및 존속을 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 절차는 문헌[Locke F.L. et al. Mol Ther. 2017;25(1):285-295]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 CAR T세포 수준이 표 22에 기재된 바와 같은 치료 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 CAR T세포가 재발 시 검출 가능하지 않을 수 있음을 제공한다. 피크 CAR T세포 수준 중앙값은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏에서 최고일 수 있으며, 이는 기존 AE 관리를 받은 환자와 개정된 AE 관리를 받은 환자에서 유사할 수 있다. 일부 구현예에서, CR/CRi를 달성한 환자는, 검출 가능하지 않은 MRD와 검출 가능한 MRD가 있는 환자에서와 마찬가지로, 비반응자보다 더 큰 피크 증식 중앙값을 나타냈다. 또한, 2 등급 이하의 NE를 나타내는 환자보다 3 등급 이상의 NE를 나타내는 환자에서 더 높은 피크 증식 중앙값이 관찰되었다. 재발하는 일부 환자는 재발 시 CD19 양성 세포가 검출 가능하거나, CD19 양성 세포가 검출 가능하지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 10,000개의 생존 세포 당 1개 미만의 백혈병 세포로 정의되는 검출 가능하지 않은 MRD는, 문헌[Borowitz MJ, Wood BL, Devidas M, et al. Blood. 2015;126(8):964-971]; 문헌[Bruggemann M. et al. Blood Adv. 2017;1(25):2456-2466]; 또는 문헌[Gupta S. et al. Leukemia. 2018;32(6):1370-1379]에 기재된 방법에 따라 유세포분석(NeoGenomics, Fort Myers, FL)을 사용하여 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 일부 사이토카인, 케모카인 및 전염증 마커의 피크 수준이 7일까지 나타났음을 제공한다. 일부 구현예에서, 이들 중 일부는 1 × 106개의 CAR T세포/㎏와 비교하여 2 × 106개의 CAR T세포/㎏가 투여된 환자에서 더 높은 경향을 나타내거나(IL-15, CRP, SAA, CXCL10, IFNγ), 기존 AE 관리에 비해 개정된 AE 관리를 이용한 경우 더 낮은 경향을 나타냈다(IL-6, 페리틴, IL-1RA, IFNγ, IL-8, CXCL10, MCP-1). 일부 구현예에서, 이러한 단백질/바이오마커의 수준은 도 9; 도 10; 및 도 11에 기재된 바와 같이 변한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 개시내용은 이러한 단백질 수준을 3등급 이상 및/또는 0등급 내지 2등급 CRS에 대한 바이오마커로 사용하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 이러한 단백질 수준을 도 11의 값에 따라, 3등급 이상의 및/또는 0등급 내지 2등급 CRS에 대한 바이오마커로 사용하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은, 피크 IL-15 혈청 수준이 3등급 이상의 CRS를 나타내는 환자에서 더 낮음을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 몇몇 전염증 마커의 피크 수준 중앙값이 도 11에 기재된 바와 같이 3등급 이상의 CRS를 나타내는 환자와 3등급 이상의 NE를 나타내는 환자에서 더 높은 경향을 나타냈음(IFNγ, IL-8, GM-CSF, IL-1RA, CXCL10, MCP-1, 그랜자임 B)을 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 개시내용은, 혈청 IL-15의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 방식으로 환자가 3등급 이상의 CRS를 나타낼지 여부를 예측하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은, IFNγ, IL-8, GM-CSF, IL-1RA, CXCL10, MCP-1 및/또는 그랜자임 B의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 방식으로 환자가 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 나타낼지 여부를 예측하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 이러한 바이오마커 중 1종 이상의 수준을 감소시키는 작용제를 투여하는 방식으로 항-CD19 CAR T세포 요법을 개선시키는 방법을 제공한다.
참조 수준/표준 값은 당업자에게 알려진 임의의 방법에 따라 확립될 수 있다. 이는 임계값 또는 값의 그룹(예를 들어, 사분위수)을 식별하여 이들이 어느 군에 속하는 지, 또는 각 대상에 대해 측정된 값(사이토카인 수준, CAR T세포 수 등)이 임계값 초과 또는 미만에 해당하는 지를 비교할 수 있는 역할을 한다. 이러한 군은 당업계에서 전형적으로 선택되는 상이한 집단의 비교를 통해 확립된다. 측정된 값이 어디에 속하는 지에 따라, 객관적 반응, CRS 등급, NE 등급 등과 같은 다수의 치료 특징을 예측할 수 있다.
특정 구현예에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 샘낭암종, 부신피질 암종, AIDS 관련 암, 항문암, 충수암, 성상세포종, 중추신경계 비정형 기형/횡문근양 종양, B세포 백혈병, 림프종 또는 기타 B세포 악성종양, 기저세포 암종, 담관암, 방광암, 골암, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 뇌간 신경교종, 뇌종양, 유방암, 기관지 종양, 버킷림프종, 카르시노이드 종양, 중추신경계 암, 자궁경부암, 척색종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 골수증식성 장애, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 피부 T세포 림프종, 중추신경계 배아 종양, 자궁내막암, 뇌실막모세포종, 뇌실막세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 유잉육종 종양 군, 두개외 생식세포 종양, 생식샘외 생식세포 종양, 간외 담관암, 눈암, 뼈의 악성 섬유성 조직구종 및 골육종, 담낭암, 위암, 위장관 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양(GIST), 연조직 육종, 생식세포 종양, 임신영양막종양, 신경교종, 모발상세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간세포(간) 암, 조직구증, 호지킨림프종, 하인두암, 안내 흑색종, 췌도세포 종양(내분비 췌장), 카포시육종, 신장암, 랑게르한스세포 조직구증, 후두암, 백혈병, 입술 및 구강암, 간암(원발성), 소엽상 제자리 암종(LCIS), 폐암, 림프종, 마크로글로불린혈증, 남성 유방암, 뼈의 악성 섬유성 조직구증 및 골육종, 수모세포종, 수질상피종, 흑색종, 메르켈세포 암종, 중피종, NUT 유전자와 관련된 잠재성 원발성 정준선 암종을 동반한 전이성 경부 편평상피세포암, 구강암(mouth cancer), 다발성 내분비 종양증, 다발골수종/형질세포 종양, 균상식육종, 골수형성이상 증후군, 골수형성이상/골수증식성 종양, 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 골수증식성 장애, 비강 및 부비동 암, 비인두암, 신경모세포종, 비호지킨림프종, 비소세포폐암, 구강암(oral cancer), 구강암(oral cavity cancer), 구인두암, 뼈의 골육종 및 악성 섬유성 조직구증, 난소암, 췌장암, 유두종증, 부신경절종, 부비강 및 비강 암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 중간 분화의 송과체 실질 종양, 송과체모세포종 및 천막상 원시신경외배엽 종양, 뇌하수체 종양, 형질세포 종양/다발골수종, 흉막폐모세포종, 임신 및 유방암, 원발성 중추신경계(CNS) 림프종, 전립선암, 직장암, 신장세포(신장) 암, 신우 및 요관의 이행세포암, 망막모세포종, 횡문근육종, 침샘암, 육종, 세자리증후군(
Figure pct00011
syndrome), 소세포폐암, 소장암, 연조직 육종, 편평상피세포 암종, 경부의 편평상피세포암, 위암, 천막상 원시신경외배엽 종양, 피부 T세포 림프종, 고환암, 인후암, 흉선종 및 흉선암, 갑상선암, 신장 및 요관의 이행세포암, 영양막 종양, 요관 및 신우 암, 요도암, 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 윌름 종양에서 유도되는 종양에서 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 암은 KTE-X19로 치료된다.
하나의 구현예에서, 상기 방법은 종양을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 종양은 림프종 또는 백혈병이다. 림프종과 백혈병은 특히 림프구에 영향을 미치는 혈액암이다. 혈액 내 모든 백혈구는 골수에서 발견되는 단일 유형의 다능성 조혈줄기세포에서 유래한다. 이러한 줄기세포는 골수성 선구세포와 림프계 선구세포 둘 모두를 생산하며, 이들은 이후에 신체에서 발견되는 다양한 유형의 백혈구를 생성한다. 골수성 선구세포에서 생성되는 백혈구에는, T림프구(T세포), B 림프구(B세포), 자연살해세포 및 형질세포가 포함된다. 림프계 선구세포에서 생성되는 백혈구에는, 거핵구, 비만세포, 호염기구, 호중구, 호산구, 단핵구 및 대식세포가 포함된다. 림프종과 백혈병은 환자에서 이러한 세포 유형 중 1종 이상에 영향을 미칠 수 있다. 특정 구현예에서, 종양은 KTE-X19로 치료된다.
일반적으로, 림프종은 호지킨림프종과 비호지킨림프종의 적어도 2가지 하위군으로 분류될 수 있다. 비호지킨림프종(NHL)은 B 림프구, T림프구 또는 자연살해세포에서 유래하는 이질적인 암의 군이다. 미국에서, B세포 림프종은 보고된 사례의 80% 내지 85%를 차지한다. 2013년에, 대략 69,740건의 NHL의 신규 사례와 이러한 질환과 관련된 19,000건이 넘는 사망이 발생한 것으로 추정되었다. 비호지킨림프종은 가장 널리퍼진 혈액학적 악성종양이며, 남성 및 여성에서 신규 암 중 7번째로 높은 순위이며, 모든 신규 암 사례의 4%와 암과 관련된 사망의 3%를 차지한다. 특정 구현예에서, 림프종은 KTE-X19로 치료된다.
미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL)은 NHL 사례의 대략 30%를 차지하는 가장 흔한 NHL의 하위유형이다. 미국에서 매년 대략 22,000건의 신규한 DLBCL 진단이 이루어진다. 이는 대부분의 환자가 통상의 화학요법으로 치유되는 공격성 림프종으로 분류된다(NCCN 지침 NHL 2014). DLBCL에 대한 1차 치료에는, 전형적으로 리툭시맙(rituximab)을 이용한 안트라시클린 함유 요법, 예컨대 R-CHOP(리툭시맙, 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니손)가 포함되며, 이는 객관적 반응률 약 80%와 완전 반응률 약 50%를 나타내고, 여기서 환자의 약 1/3은 초기 요법에 대해 불응성 질환이거나 R-CHOP 후에 재발한 환자이다. 1차 치료에 대한 반응 후 재발한 환자의 경우, 환자의 대략 40% 내지 60%는 추가 화학요법을 이용하여 2차 반응을 달성할 수 있다. 자가유래 줄기세포 이식(ASCT) 적격 환자에 대한 2차 치료의 치료 표준에는, 리툭시맙과, R-ICE(리툭시맙, 이포스파미드(ifosfamide), 카르보플라틴(carboplatin) 및 에토포시드(etoposide)) 및 R-DHAP(리툭시맙, 덱사메타손, 시타라빈 및 시스플라틴(cisplatin))와 같은 조합 화학요법이 포함되며, 이는 각각 객관적 반응률 약 63%와 완전 반응률 약 26%를 나타낸다. 2차 요법에 대해 반응하고 이식에 충분히 적합한 것으로 간주되는 환자는 고용량 화학요법과 ASCT의 통합 치료를 투여받으며, 이식된 환자의 약 절반에서 치유 효과가 있다. ASCT에 실패한 환자는 매우 불량한 예후를 나타내며, 치유 옵션이 없다. 원발성 종격동 거대 B세포 림프종(PMBCL)은 DLBCL과 비교하여 뚜렷한 임상적, 병리학적 및 분자적 특징을 나타낸다. PMBCL은 흉선(수질) B세포에서 발생한 것으로 여겨지며, DLBCL로 진단된 환자의 대략 3%를 나타낸다. PMBCL은 전형적으로 40대의 젊은 성인 집단에서 여성이 약간 우세하게 확인된다. 유전자 발현 프로파일링은, PMBCL에서 조절되지 않은 경로가 호지킨림프종과 중첩됨을 시사한다. PMBCL의 초기 요법에는, 일반적으로 관련 현장 방사선요법의 존재 유무 하의, 주입 용량 조정된 에토포시드, 독소루비신 및 시클로포스파미드와 빈크리스틴, 프레드니손 및 리툭시맙(DA-EPOCH-R)과 같은, 리툭시맙을 포함하는 안트라시클린 함유 요법이 포함된다. B세포 림프종인 여포성 림프종(FL)은 모든 NHL의 대략 20% 내지 30%를 차지하는 NHL의 가장 흔한 무활동성(느린 성장) 형태이다. 일부 FL 환자는 조직학적으로 DLBCL로 변형(TFL)될 것이며, 이는 더 공격성이고 불량한 결과와 관련이 있다. DLBCL로의 조직학적 변형은 15년 동안 연간 대략 3%의 비율로 발생하며, 변형 위험은 다음 해에 지속적으로 감소한다. 조직학적 변형의 생물학적 메커니즘은 알려져 있지 않다. TFL의 초기 치료는 여포성 림프종에 대한 선행 요법의 영향을 받지만, 일반적으로 질환의 공격적 요소를 제거하기 위해 리툭시맙을 포함하는 안트라시클린 함유 요법을 포함한다. 재발된/불응성 PMBCL 및 TFL에 대한 치료 옵션은 DLBCL에서와 유사하다. 이러한 질환의 낮은 유병율을 고려하여, 이러한 환자 집단에 대한 대규모 전향적 무작위 연구는 수행되지 않았다. 화학요법 불응성 질환을 앓고 있는 환자는 불응성 DLBCL을 앓고 있는 환자와 유사하거나 이러한 환자보다 더 불량한 예후를 나타낸다. 일례로서, 불응성 공격성 NHL(예를 들어, DLBCL, PMBCL 및 TFL)을 앓고 있는 대상은 주요한 충족되지 않은 의학적 요구가 있으며, 이러한 집단에서 신규한 치료에 대한 추가의 연구가 필요하다. 특정 구현예에서, DLBCL은 KTE-X19로 치료된다.
본 개시내용의 CAR T세포 치료는 1차 치료, 또는 2차 또는 더 고차의 치료로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, CAR T세포 치료는 3차, 4차, 5차 및 등으로 투여된다. 일련의 선행 요법은, 비제한적으로, 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTKi), 체크포인트 저해제(예를 들어, 항-PD1 항체, 펨브롤리주맙(pembrolizumab)(Keytruda), 세미플리맙(cemiplimab)(Libtayo), 니볼루맙(nivolumab)(Opdivo); 항-PD-L1 항체, 아테졸리주맙(atezolizumab)(Tecentriq), 아벨루맙(avelumab)(Bavencio), 두르발루맙(durvalumab)(Imfinzi); 항-CTLA-4 항체, 이필리무맙(ipilimumab)(Yervoy)), 항-CD19 항체(예를 들어, 블리나투모맙), 항-CD52 항체(예를 들어, 알렘투주맙); 동종이계 줄기세포 이식, 항-CD20 항체(예를 들어, 리툭시맙), 전신 화학요법, 리툭시맙, 안트라시클린, 오파투무맙(ofatumumab) 및 이들의 조합을 포함하는 임의의 선행 항암 치료법일 수 있다. 선행 요법은 또한 본 출원의 CD19 CAR T 요법과 조합으로 사용될 수 있다. 하나의 양태에서, 적격한 환자는 가장 최근의 요법에 대해 불응성 질환이거나, 자가유래 조혈줄기세포 이식(HSCT/ASCT) 후 1년 이내에 재발을 나타낼 수 있다. CAR T세포 치료는 선행 요법 중 하나 이상에 대해 불응성 및/또는 재발된 암을 앓고 있거나 앓고 있는 것으로 의심되는 환자에게 투여될 수 있다. 암은 1차 치료에 대해 불응성(즉, 원발성 불응성)이거나, 1회 이상의 요법에 대해 불응성일 수 있다. 암은 첫 번째 관해 후 12개월에 재발된 것이거나, 2회 이상의 선행 요법 후 불응성 또는 재발된 것이거나, HSCT/ASCT 후 재발된 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙에 대해 불응성이다. 일부 구현예에서, 암은 NHL이며, 이러한 질환은 원발성 불응성이거나, 2회 이상의 전신 요법 후 R/R이거나, 또는 CAR T세포 요법에 등록하기 100일 이상 전 4주 이상 동안 면역억제 약물을 중단하고 자가유래 또는 동종이계 줄기세포 이식 후 R/R이어야 한다. 특정 구현예에서, CAR T세포 요법은 KTE-X19이다.
따라서, 상기 방법은 림프종 또는 백혈병을 치료하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 림프종 또는 백혈병은 B세포 악성종양이다. B세포 악성종양의 예에는, 비제한적으로, 비호지킨림프종(NHL), 소 림프구 림프종(SLL/CLL), 외투세포림프종(MCL), FL, 변연부 림프종(MZL), 림프절외 림프종(MALT 림프종), 결절성 림프종(단핵구모양 B세포 림프종), 비장 림프종, 미만성 거대 B세포 림프종, B세포 만성 림프구 백혈병/림프종, 버킷림프종, 및 림프모구성 림프종이 포함된다. 일부 양태에서, 림프종 또는 백혈병은 B세포 만성 림프구 백혈병/소세포 림프종, B세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종(예를 들어, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증), 비장 변연부 림프종, 모발상세포 백혈병, 형질세포 종양(예를 들어, 형질세포 골수종(즉, 다발골수종) 또는 형질세포종), 림프절외 변연부 B세포 림프종(예를 들어, MALT 림프종), 방실결절 변연부 B세포 림프종, 여포성 림프종(FL), 형질전환된 여포성 림프종(TFL), 원발성 피부 소포 중심 림프종, 외투세포림프종, 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 엡스타인바 바이러스 양성 DLBCL, 림프종모양육아종증, 원발성 종격동(흉선) 거대 B세포 림프종(PMBCL), 혈관내 거대 B세포 림프종, ALK+ 거대 B세포 림프종, 형질모세포형 림프종, 원발성 삼출 림프종, HHV8 관련 다중심성 캐슬만병에서 유래한 거대 B세포 림프종, 버킷림프종/백혈병, T세포 전림프구성 백혈병, T세포 거대 과립구 림프구 백혈병, 공격성 NK 세포 백혈병, 성인 T세포 백혈병/림프종, 림프절외 NK/T세포 림프종, 장병증 관련 T세포 림프종, 간비장 T세포 림프종, 모세포형 NK 세포 림프종, 균상식육종/세자리증후군, 원발성 피부 역형성 거대세포 림프종, 림프종양구진증, 말초 T세포 림프종, 혈관면역모세포형 T세포 림프종, 역형성 거대세포 림프종, B림프모구성 백혈병/림프종, 재발성 유전자 이상을 갖는 B림프모구성 백혈병/림프종, T림프모구성 백혈병/림프종, 및 호지킨림프종에서 선택된다. 일부 양태에서, 암은 1회 이상의 선행 치료에 대해 불응성이고/이거나, 암은 1회 이상의 선행 치료 후 재발된 것이다. 특정 구현예에서, 백혈병 또는 림프종은 KTE-X19로 치료된다.
하나의 구현예에서, 암은 여포성 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 미만성 거대 B세포 림프종 및 원발성 종격동(흉선) 거대 B세포 림프종에서 선택된다. 또 다른 구현예에서, 암은 미만성 거대 B세포 림프종이다. 일부 구현예에서, 암은 화학요법, 방사선요법, 면역요법(T세포 요법, 및/또는 항체 또는 항체-약물 접합체를 이용한 치료 포함), 자가유래 줄기세포 이식, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상 이후에 재발된 것이거나, 이에 대해 불응성이다. 하나의 구현예에서, 암은 불응성 미만성 거대 B세포 림프종이다. 특정 구현예에서, 암은 KTE-X19로 치료된다.
일부 구현예에서, CAR T세포 치료는 KTE-X19이며, 암은 MCL, ALL, CLL 및 SLL에서 선택된다. 일부 구현예에서, CAR T세포 치료는 KTE-X19이며, 암은 NHL이다. 일부 구현예에서, 암은 달리 명시되지 않은 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL NOS), 원발성 종격동 거대 B세포 림프종, 버킷림프종(BL), 버킷 유사 림프종, 또는 DLBCL과 BL 사이의 중간에 있는 미분류된 B세포 림프종에서 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 재발/불응성이다. 일부 구현예에서, KTE-X19 치료제는 1차 치료, 2차 치료로, 또는 1회 이상의 선행 요법 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 환자는 소아 환자, 청소년 환자, 성인 환자, 65세 미만의 환자, 65세 초과의 환자 또는 임의의 다른 연령 군이다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 면역세포를 포함하는 조성물은 임의의 수의 추가 치료제와 함께 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 추가 치료제는 T세포 요법과 동시에 투여된다. 하나의 구현예에서, 추가 치료제는 T세포 요법 이전, 동안 및/또는 이후에 투여된다. 하나의 구현예에서, 1종 이상의 추가 치료제가 예방적으로 투여된다. 하나의 양태에서, 면역세포를 포함하는 조성물은 이상사례의 관리를 위한 작용제(이들 중 다수는 실시예 섹션을 포함하여 본 출원의 다른 곳에 기재되어 있음)와 함께 투여된다. 이러한 작용제는 심장부정맥(심방세동 및 심실성 빈맥 포함), 심장정지, 심부전, 신기능부전, 모세관누출 증후군, 저혈압, 저산소증, 기관 독성, 식혈세포성 림프조직구증/대식세포 활성화 증후군(HLH/MAS), 발작, 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 언어상실증, 섬망, 불면증, 불안, 아나필락시스, 발열성 호중구감소증, 저혈소판증, 호중성백혈구감소증 및 빈혈을 포함하는, 발열, 저혈압, 빈맥, 저산소증 및 오한과 같은 이상반응(adverse reaction)의 징후 및 증상 중 하나 이상을 관리할 수 있다.
이러한 작용제의 예에는, 비제한적으로, 토실리주맙, 스테로이드(예를 들어, 메틸프레드니솔론), 토끼 항흉선세포 글로불린이 포함된다. 일부 양태에서, 반코마이신(vancomycin)과 아즈트레오남(aztreonam)(각각 1일 2회 1 gm IV)이 비호중성백혈구감소증 발열을 위해 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 상기 방법은 발작 예방을 위한 비진정성 항발작 약물을 투여하는 단계; 에리트로포이에틴(erythropoietin), 다르베포에틴 알파(darbepoetin alfa), 혈소판 수혈, 필그라스팀(filgrastim) 또는 페그필그라스팀(pegfilgrastim) 중 적어도 1종을 투여하는 단계 및/또는; 토실리주맙, 실툭시맙(siltuximab)을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 하나의 양태에서, 상기 작용제는 GM-CSF(과립구 대식세포 집락자극인자, CSF2로도 알려져 있음)와 같은 CSF 패밀리 멤버이다. GM-CSF는 자극 시 다수의 조혈 및 비조혈 세포 유형에 의해 생산될 수 있으며, 골수 집단을 활성화/'프라이밍'시켜 TNF 및 인터류킨 1β(IL1β)와 같은 염증성 매개체를 생산할 수 있다. 일부 구현예에서, GM-CSF 저해제는 순환하는 GM-CSF에 결합하여 이를 중화시키는 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 렌질루맙(lenzilumab); 나밀루맙(namilumab)(AMG203); GSK3196165/MOR103/오틸리맙(otilimab)(GSK/MorphoSys), KB002 및 KB003(KaloBios), MT203(Micromet and Nycomed), 및 MORAb-022/김실루맙(gimsilumab)(Morphotek)에서 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 이러한 것들의 바이오시밀러(biosimilar)이다. 일부 구현예에서, 상기 안타고니스트는 GM-CSF의 기능을 길항시키는 GM-CSF의 변형된 형태인 E21R이다. 일부 구현예에서, 상기 저해제/안타고니스트는 소분자이다. 하나의 구현예에서, CSF 패밀리 멤버는 M-CSF(대식세포 집락자극인자 또는 CSF1로도 알려져 있음)이다. CSF1을 저해하거나 길항시키는 작용제의 비제한적인 예에는, 소분자, 항체, 키메라 항원 수용체, 융합 단백질 및 기타 작용제가 포함된다. 하나의 구현예에서, CSF1 저해제 또는 안타고니스트는 항-CSF1 항체이다. 하나의 구현예에서, 항-CSF1 항체는 Roche(예를 들어, RG7155), Pfizer(PD-0360324), Novartis(MCS110/라크노투주맙(lacnotuzumab)), 또는 이들 중 어느 하나의 바이오시밀러 버전에서 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 저해제 또는 안타고니스트는 GM-CSF-R-알파(CSF2R로도 공지되어 있음) 또는 CSF1R 수용체의 활성을 불활성화시킨다. 일부 구현예에서, 상기 저해제는 현재 MedImmune, Inc.에서 개발 중인 완전 인간 GM-CSF 수용체 α 단클론 항체인 마브릴리무맙(mavrilimumab)(이전에는 CAM-3001); 카비랄리주맙(cabiralizumab)(Five Prime Therapeutics); LY3022855(IMC-CS4)(Eli Lilly), 에막투주맙(emactuzumab), RG7155 또는 RO5509554로도 알려져 있음; FPA008, 인간화 mAb(Five Prime/BMS); AMG820(Amgen); ARRY-382(Array Biopharma); MCS110(Novartis); PLX3397(Plexxikon); ELB041/AFS98/TG3003(ElsaLys Bio, Transgene), SNDX-6352(Syndax)에서 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 저해제 또는 안타고니스트는 CAR-T세포에서 발현된다. 일부 구현예에서, 상기 저해제는 소분자(예를 들어, 헤테로아릴 아미드, 퀴놀리논 시리즈, 피리도-피리미드 시리즈); BLZ945(Novartis), PLX7486, ARRY-382, 펙시다르티닙(PLX3397로도 알려져 있음) 또는 5-((5-클로로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N-06-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)메틸)피리딘-2-아민; GW 2580(CAS 870483-87-7),
Figure pct00012
(CAS 623142-96-1), AC708(Ambit Siosciences), 또는 문헌[Cannarile et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer 2017, 5:53] 및 US20180371093호에 열거된 임의의 CSF1R 저해제(상기 문헌들은 이들에 개시되어 있는 저해제에 대해 본 발명에 참조로서 인용됨)이다. GM-CSF 또는 이의 수용체에 대한 추가의 중화 항체는, 예를 들어 문헌["GM-CSF as a target in inflammatory/autoimmune disease: current evidence and future therapeutic potential" Hamilton, J. A. Expert Rev. Clin. Immunol., 2015]; 및 문헌["Targeting GM-CSF in inflammatory diseases" Wicks, I. P., Roberts, A. W. Nat. Rev. Rheumatol., 2016]을 포함하여, 당업계에 기재되어 있다. 다른 구현예에서, 상기 작용제는 토실리주맙 및 실툭시맙을 포함하는 항-IL6 또는 항-IL-6 수용체 차단제이다.
하나의 양태에서, 상기 치료제는 화학치료제이다. 화학치료제의 예에는, 티오테파(thiotepa) 및 시클로포스파미드(CYTOXANTM)와 같은 알킬화제; 부설판(busulfan), 임프로설판(improsulfan) 및 피포설판(piposulfan)과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파(benzodopa), 카르보퀀(carboquone), 메투레도파(meturedopa) 및 우레도파(uredopa)와 같은 아지리딘류; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민(triethylenemelamine), 트리에틸렌포스포르아미드(trietylenephosphoramide), 트리에틸렌티오포스포르아미드(triethylenethiophosphaoramide) 및 트리메틸올멜라민 레줌(resume)을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민(methylamelamine)류; 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 클로로포스파미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스파미드, 메클로레타민(mechlorethamine), 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드(mechlorethamine oxide hydrochloride), 멜팔란(melphalan), 노벰비킨(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide), 우라실 머스타드(uracil mustard)와 같은 질소 머스타드류; 카르무스틴(carmustine), 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine), 라니무스틴(ranimustine)과 같은 니트로소우레아류; 아클라시노마이신(aclacinomysin), 악티노마이신(actinomycin), 아우트라마이신(authramycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신(bleomycin), 칵티노마이신(cactinomycin), 칼리케아마이신(calicheamicin), 카라비신(carabicin), 카르미노마이신(carminomycin), 카르지노필린(carzinophilin), 크로모마이신(chromomycin), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데토루비신(detorubicin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 이다루비신(idarubicin), 마르셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신(mitomycin), 마이코페놀산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycin), 페플로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 퓨로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토니그린(streptonigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin)과 같은 항생제; 메토트렉세이트 및 5-플로오로우라실(5-FU)과 같은 항대사산물; 데노프테린(denopterin), 메토트렉세이트, 프테로프테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate)와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈(fludarabine), 6-메르캅토퓨린, 티아미프린(thiamiprine), 티오구아닌(thioguanine)과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacytidine), 6-아자우리딘(6-azauridine), 카르모푸르(carmofur), 시타라빈, 디데옥시우리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플록수리딘(floxuridine), 5-FU와 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate), 에피티오스탄올(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 테스토락톤(testolactone)과 같은 안드로겐류; 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 미토탄(mitotane), 트릴로스탄(trilostane)과 같은 항아드레날린성 약물; 프롤린산(frolinic acid)과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤(aceglatone); 알도포스파미드 글리코시드(aldophosphamide glycoside); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 비산트렌(bisantrene); 에다트렉세이트(edatrexate); 데포파민(defofamine); 데메콜신(demecolcine); 디아지퀀(diaziquone); 엘포르미틴(elformithine); 엘립티늄 아세테이트(elliptinium acetate); 에토글루시드(etoglucid); 갈륨 니트레이트(gallium nitrate); 히드록시우레아; 렌티난(lentinan); 로니다민(lonidamine); 미토구아존(mitoguazone); 미톡산트론(mitoxantrone); 모피다몰(mopidamol); 니트라크린(nitracrine); 펜토스타틴(pentostatin); 페나메트(phenamet); 피라루비신(pirarubicin); 포도필린산(podophyllinic acid); 2-에틸히드라지드; 프로카르바진(procarbazine); PSK®; 라족산(razoxane); 시조피란(sizofiran); 스피로게르마늄(spirogermanium); 테누아존산(tenuazonic acid); 트리아지퀀(triaziquone); 2, 2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄(urethan); 빈데신(vindesine); 다카르바진(dacarbazine); 마노무스틴(mannomustine); 미토브로니톨(mitobronitol); 미토락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가시토신(gacytosine); 아라비노시드(arabinoside)("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드(taxoid), 예를 들어 파클리탁셀(paclitaxel)(TAXOLTM, Bristol-Myers Squibb) 및 도세탁셀(doxetaxel)(TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer); 클로람부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴(vinblastine); 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈(navelbine); 노반트론(novantrone); 테니포시드(teniposide); 다우노마이신(daunomycin); 아미노프테린(aminopterin); 젤로다(xeloda); 이반드로네이트(ibandronate); CPT-11; 토포이소머라아제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸로미틴(difluoromethylomithine)(DMFO); TargretinTM(벡사로텐(bexarotene)), PanretinTM(알리트레티노인(alitretinoin))과 같은 레티노산 유도체; ONTAKTM(데니류킨 디프티톡스(denileukin diftitox)); 에스페라마이신(esperamicin); 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체가 포함된다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 CAR 및/또는 TCR 발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은, 예를 들어 타목시펜(tamoxifen), 랄록시펜(raloxifene), 아로마타아제 저해 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜(trioxifene), 케옥시펜(keoxifene), LY117018, 오나프리스톤(onapristone) 및 토레미펜(toremifene)(Fareston)과 같은 항에스트로겐류; 및 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide), 비칼루타미드(bicalutamide), 류프롤리드(leuprolide) 및 고세렐린(goserelin)과 같은 항안드로겐류; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체와 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 항호르몬제와 함께 투여될 수 있다. 적절한 경우, 비제한적으로 CHOP, 즉, 시클로포스파미드(Cytoxan®), 독소루비신(히드록시독소루비신), 빈크리스틴(Oncovin®) 및 프레드니손을 포함하는 화학치료제들의 조합이 또한 투여된다.
(화학)치료제는 조작된 세포 또는 핵산의 투여와 동시에 또는 이의 투여 후 1주 이내에 투여될 수 있다. 다른 양태에서, (화학)치료제는 조작된 세포 또는 핵산의 투여 후 1주 내지 4주 또는 1주 내지 1개월, 1주 내지 2개월, 1주 내지 3개월, 1주 내지 6개월, 1주 내지 9개월, 또는 1주 내지 12개월에 투여된다. 일부 양태에서, (화학)치료제는 상기 세포 또는 핵산을 투여하기 적어도 1개월 이전에 투여된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 2종 이상의 화학치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
다양한 추가 치료제가 본원에 기재된 조성물 또는 작용제/치료와 함께/조합으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 잠재적으로 유용한 추가 치료제에는, PD-1 저해제, 예컨대 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®), 펨브롤리주맙, 피딜리주맙(pidilizumab)(CureTech) 및 아테졸리주맙(Roche), 토실리주맙(코르티코스테로이드 포함 또는 미포함); GM-CSF, CSF1, GM-CSFR 또는 CSF1R, GM-CSF, CSF1, GM-CSFR, 또는 CSF1R의 저해제(항-CSF1 항체는 Roche(예를 들어, RG7155), Pfizer(PD-0360324), Novartis(MCS110/라크노투주맙)에서 제조된 것들에서 선택됨), 현재 MedImmune, Inc.에서 개발 중인 완전 인간 GM-CSF 수용체 α 단클론 항체인 마브릴리무맙(이전에 CAM-3001); 카비랄리주맙(Five Prime Therapeutics); LY3022855(IMC-CS4)(Eli Lilly), 에막투주맙, RG7155 또는 RO5509554로도 알려져 있음; FPA008, 인간화 mAb(Five Prime/BMS); AMG820(Amgen); ARRY-382(Array Biopharma); MCS110(Novartis); PLX3397(Plexxikon); ELB041/AFS98/TG3003(ElsaLys Bio, Transgene), SNDX-6352(Syndax)가 포함된다. 일부 양태에서, 상기 저해제 또는 안타고니스트는 CAR-T세포에서 발현된다. 일부 양태에서, 상기 저해제는 소분자(예를 들어, 헤테로아릴 아미드, 퀴놀리논 시리즈, 피리도-피리미드 시리즈); BLZ945(Novartis), PLX7486, ARRY-382, 펙시다르티닙(PLX3397로도 알려져 있음) 또는 5-((5-클로로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N-06-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)메틸)피리딘-2-아민; GW 2580(CAS 870483-87-7),
Figure pct00013
(CAS 623142-96-1), AC708(Ambit Siosciences), 또는 문헌[Cannarile et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer 2017, 5:53] 및 US20180371093호에 열거된 임의의 CSF1R 저해제(상기 문헌들은 이들에 개시되어 있는 저해제에 대해 본 발명에 참조로서 인용됨)이다. GM-CSF 또는 이의 수용체에 대한 추가의 중화 항체는 당업계에 기재되어 있다. 본원에 개시된 조성물 또는 작용제/치료 및 방법과 조합으로 사용하기에 적합한 추가 치료제에는, 비제한적으로, 이브루티닙(IMBRUVICA®), 오파투무맙(ARZERRA®), 리툭시맙(RITUXAN®), 베바시주맙(bevacizumab)(AVASTIN®), 트라스투주맙(trastuzumab)(HERCEPTIN®), 트라스투주맙 엠탄신(KADCYLA®), 이마티닙(imatinib)(GLEEVEC®), 세툭시맙(cetuximab)(ERBITUX®), 파니투무맙(panitumumab)(VECTIBIX®), 카투막소맙(catumaxomab), 이브리투모맙(ibritumomab), 오파투무맙, 토시투모맙(tositumomab), 브렌툭시맙(brentuximab), 알렘투주맙, 젬투주맙(gemtuzumab), 엘로티닙(erlotinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 아파티닙(afatinib), 라파티닙(lapatinib), 네라티닙(neratinib), 레날리도미드, 악시티닙(axitinib), 마시티닙(masitinib), 파조파닙(pazopanib), 수니티닙(sunitinib), 소라페닙(sorafenib), 토실리주맙, 토세라닙(toceranib), 레스타우르티닙(lestaurtinib), 악시티닙, 세디라닙(cediranib), 렌바티닙(lenvatinib), 닌테다닙(nintedanib), 파조파닙(pazopanib), 레고라페닙(regorafenib), 세막사닙(semaxanib), 소라페닙, 수니티닙(sunitinib), 티보자닙(tivozanib), 토세라닙(toceranib), 반데타닙(vandetanib), 엔트렉티닙(entrectinib), 카보잔티닙(cabozantinib), 이마티닙, 다사티닙(dasatinib), 닐로티닙(nilotinib), 포나티닙(ponatinib), 라도티닙(radotinib), 보수티닙(bosutinib), 레스타우르티닙, 룩솔리티닙(ruxolitinib), 파크리티닙(pacritinib), 코비메티닙(cobimetinib), 셀루메티닙(selumetinib), 트라메티닙(trametinib), 비니메티닙(binimetinib), 알렉티닙(alectinib), 세리티닙(ceritinib), 크리조티닙(crizotinib), 아플리베르셉트(aflibercept), 아디포티드(adipotide), 데니류킨 디프티톡스(denileukin diftitox), 에베롤리무스(everolimus) 및 템시롤리무스와 같은 mTOR 저해제, 소니데깁(sonidegib) 및 비스모데깁(vismodegib)과 같은 헤지호그(hedgehog) 저해제, CDK 저해제(팔보시클립(palbociclib))과 같은 CDK 저해제가 포함된다.
면역세포를 포함하는 조성물 또는 작용제/치료는 항염증제와 함께 투여되거나, 투여될 수 있다. 항염증제 또는 항염증 약물에는, 비제한적으로, 스테로이드 및 글루코코르티코이드(베타메타손, 부데소니드(budesonide), 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 코르티코스테로이드, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론(triamcinolone) 포함), 비스테로이드성 항염증 약물(NSAIDS), 예컨대 아스피린(aspirin), 이부프로펜(ibuprofen), 나프록센(naproxen), 메토트렉세이트, 설파살라진(sulfasalazine), 레플루노미드(leflunomide), 항-TNF 약물, 시클로포스파미드 및 마이코페놀레이트(mycophenolate)가 포함된다. 예시적인 NSAID에는, 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 저해제 및 시알릴레이트가 포함된다. 예시적인 진통제에는, 아세트아미노펜, 옥시코돈(oxycodone), 트라마돌(tramadol) 또는 프로폭시펜 히드로클로라이드가 포함된다. 예시적인 글루코코르티코이드에는, 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 또는 프레드니손이 포함된다. 예시적인 생물학적 반응 개질제에는, 세포 표면 마커에 대한 분자(예를 들어, CD4, CD5 등), TNF 안타고니스트(예를 들어, 에타네르셉트(etanercept)(ENBREL®), 아달리무맙(adalimumab)(HUMIRA®) 및 인플릭시맙(infliximab)(REMICADE®))와 같은 사이토카인 저해제, 케모카인 저해제 및 부착분자 저해제가 포함된다. 생물학적 반응 개질제에는 단클론 항체뿐 아니라, 분자의 재조합 형태가 포함된다. 예시적인 DMARD에는, 아자티오프린(azathioprine), 시클로포스파미드, 시클로스포린(cyclosporine), 메토트렉세이트, 페니실라민(penicillamine), 레플루노미드, 설파살라진, 히드록시클로로퀸, 금(경구(아우라노핀(auranofin)) 및 근육내) 및 미노시클린(minocycline)이 포함된다.
본원에 기재된 조성물 또는 작용제/치료는 추가 치료제로서 사이토카인 및/또는 사이토카인 조절제와 함께 투여될 수 있다. 사이토카인의 예에는, 림포카인, 모노카인 및 전형적인 폴리펩타이드 호르몬이 있다. 사이토카인에는, 인간 성장호르몬, N-메티오닐 인간 성장호르몬 및 소 성장호르몬과 같은 성장호르몬; 부갑상선호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 난포자극호르몬(FSH), 갑상선자극호르몬(TSH) 및 황체형성호르몬(LH)과 같은 당단백질 호르몬; 간성장인자(HGF); 섬유모세포 성장인자(FGF); 프로락틴; 태반 락토겐; 뮬러관 저해 물질; 마우스 성선자극호르몬 관련 펩타이드; 인히빈(inhibin); 액티빈(activin); 혈관내피성장인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(TPO); NGF-베타와 같은 신경성장인자(NGF); 혈소판성장인자; TGF-알파 및 TGF-베타와 같은 형질전환성장인자(TGF); 인슐린 유사 성장인자 I 및 II; 에리트로포이에틴(EPO, Epogen®, Procrit®); 골유도성 인자; 인터페론-알파, 베타 및 감마와 같은 인터페론; 대식세포-CSF (M-CSF), 과립구-대식세포-CSF(GM-CSF) 및 과립구-CSF(G-CSF)와 같은 집락자극인자(CSF); IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15와 같은 인터류킨(IL), TNF-알파 또는 TNF-베타와 같은 종양괴사인자; 및 LIF 및 kit 리간드(KL)를 포함하는 기타 폴리펩타이드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 사이토카인이라는 용어는, 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물에서 유래한 단백질, 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 스테로이드 또는 코르티코스테로이드와 함께 투여된다.
코르티코스테로이드 치료는 이상사례의 치료에 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드(또는 임의의 다른 스테로이드뿐 아니라, 이상사례 치료를 위한 임의의 다른 치료)는 임의의 이상사례 증상이 검출되기 전에 예방적으로 및/또는 이상사례의 검출 후에 사용될 수 있다. 이들은 T세포를 투여하기 1일 이상 전에, T세포 투여일에(T세포 투여 전, 후 및/또는 동안) 및/또는 T세포 투여 후에 투여될 수 있다. 이들은 조건화 요법 전, 동안 또는 후에 투여될 수 있다. 임의의 코르티코스테로이드가 이러한 용도에 적합할 수 있다. 하나의 구현예에서, 코르티코스테로이드는 덱사메타손이다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 메틸프레드니솔론이다. 일부 구현예에서, 2종이 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드에는 합성 및 비합성 글루코코르티코이드가 포함된다. 예시적인 글루코코르티코이드에는, 비제한적으로, 알클로메타손(alclomethasone), 알게스톤(algestone), 베클로메타손(beclomethasone)(예를 들어, 베클로메타손 디프로피오네이트), 베타메타손(예를 들어, 베타메타손 17 발레레이트, 베타메타손 소듐 아세테이트, 베타메타손 소듐 포스페이트, 베타메타손 발레레이트), 부데소니드, 클로베타솔(clobetasol)(예를 들어, 클로베타솔 프로피오네이트), 클로베타손, 클로코르톨론(clocortolone)(예를 들어, 클로코르톨론 피발레이트), 클로프레드놀(cloprednol), 코르티코스테론(corticosterone), 코르티손 및 히드로코르티손(예를 들어, 히드로코르티손 아세테이트), 코르티바졸(cortivazol), 데플라자코르트(deflazacort), 데소니드(desonide), 데속시메타손(desoximethasone), 덱사메타손(예를 들어, 덱사메타손 21-포스페이트, 덱사메타손 아세테이트, 덱사메타손 소듐 포스페이트), 디플로라손(diflorasone)(예를 들어, 디플로라손 디아세테이트), 디플루코르톨론(diflucortolone), 디플루프레드네이트(difluprednate), 에녹솔론(enoxolone), 플루아자코르트, 플루클로로니드(flucloronide), 플루드로코르티손(fludrocortisone)(예를 들어, 플루드로코르티손 아세테이트), 플루메타손(flumethasone)(예를 들어, 플루메타손 피발레이트), 플루니솔리드(flunisolide), 플루오시놀론(fluocinolone)(예를 들어, 플루오시놀론 아세토니드), 플루오시노니드(fluocinonide), 플루오코르틴(fluocortin), 플루오코르톨론(fluocortolone), 플루오로메톨론(fluorometholone)(예를 들어, 플루오로메톨론 아세테이트), 플루페롤론(fluperolone)(예를 들어, 플루페롤론 아세테이트), 플루프레드니덴(fluprednidene), 플루프레드니솔론(fluprednisolone), 플루란드레놀리드(flurandrenolid), 플루티카손(fluticasone)(예를 들어, 플루티카손 프로피오네이트), 포르모코르탈(formocortal), 할시노니드(halcinonide), 할로베타솔(halobetasol), 할로메타손(halometasone), 할로프레돈(halopredone), 히드로코르타메이트(hydrocortamate), 히드로코르티손(예를 들어, 히드로코르티손 21-부티레이트, 히드로코르티손 아세포네이트, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손 부테프레이트, 히드로코르티손 부티레이트, 히드로코르티손 시피오네이트, 히드로코르티손 헤미숙시네이트, 히드로코르티손 프로부테이트, 히드로코르티손 소듐 포스페이트, 히드로코르티손 소듐 숙시네이트, 히드로코르티손 발레레이트), 로테프레드놀 에타보네이트(loteprednol etabonate), 마지프레돈(mazipredone), 메드리손(medrysone), 메프레드니손(meprednisone), 메틸프레드니솔론(메틸프레드니솔론 아세포네이트, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 헤미숙시네이트, 메틸프레드니솔론 소듐 숙시네이트), 모메타손(mometasone)(예를 들어, 모메타손 프로에이트), 파라메타손(paramethasone)(예를 들어, 파라메타손 아세테이트), 프레드니카르베이트(prednicarbate), 프레드니솔론(예를 들어, 프레드니솔론 25-디에틸아미노아세테이트, 프레드니솔론 소듐 포스페이트, 프레드니솔론 21-헤미숙시네이트, 프레드니솔론 아세테이트; 프레드니솔론 파르네실레이트, 프레드니솔론 헤미숙시네이트, 프레드니솔론-21(베타-D-글루쿠로니드), 프레드니솔론 메타설포벤조에이트, 프레드니솔론 스테아글레이트, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니솔론 테트라히드로프탈레이트), 프레드니손, 프레드니발(prednival), 프레드닐리덴(prednylidene), 리멕솔론(rimexolone), 틱소코르톨(tixocortol), 트리암시놀론(예를 들어, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 베네토니드, 트리암시놀론 헥사세토니드, 트리암시놀론 아세토니드 21 팔미테이트, 트리암시놀론 디아세테이트)가 포함된다. 이러한 글루코코르티코이드 및 이들의 염은, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980)] 및 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa. (2013)] 및 임의의 기타 판에 상세하게 논의되어 있으며, 상기 문헌들은 본원에 참조로서 인용된다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손 중에서 선택된다. 일 구현예에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다. 다른 구현예에서, 스테로이드는 광질코르티코이드(mineralcorticoid)이다. 임의의 다른 스테로이드가 본원에 제공된 방법에 사용될 수 있다.
1종 이상의 코르티코스테로이드가 임의의 용량 및 투여 빈도로 투여될 수 있으며, 이는 이상사례(예를 들어, CRS 및 NE)의 중증도/등급에 따라 조정될 수 있다. 표 13, 표 14 및 표 16에는, CRS 및 NE의 관리를 위한 투여 요법의 예시가 제공되어 있다. 또 다른 구현예에서, 코르티코스테로이드 투여는 경구 또는 IV 덱사메타손 10 mg, 1일 1회 내지 4회이다. 때때로 "고용량" 코르티코스테로이드로 지칭되는 또 다른 구현예는, 메틸프레드니손 1 g을 IV로 1일 1회, 단독으로 또는 덱사메타손과 조합으로, 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 코르티코스테로이드가 1일 1 mg 내지 2 mg/㎏의 용량으로 투여된다.
코르티코스테로이드는 CRS 또는 신경독성과 같은 이상사례와 관련된 하나 이상의 증상을 개선시키는 데 효과적인 임의의 양으로 투여될 수 있다. 코르티코스테로이드, 예를 들어 글루코코르티코이드는, 예를 들어 70 ㎏ 성인 인간 대상에게, 용량 당 (약) 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 80 mg, 0.1 mg 내지 60 mg, 0.1 mg 내지 40 mg, 0.1 mg 내지 30 mg, 0.1 mg 내지 20 mg, 0.1 mg 내지 15 mg, 0.1 mg 내지 10 mg, 0.1 mg 내지 5 mg, 0.2 mg 내지 40 mg, 0.2 mg 내지 30 mg, 0.2 mg 내지 20 mg, 0.2 mg 내지 15 mg, 0.2 mg 내지 10 mg, 0.2 mg 내지 5 mg, 0.4 mg 내지 40 mg, 0.4 mg 내지 30 mg, 0.4 mg 내지 20 mg, 0.4 mg 내지 15 mg, 0.4 mg 내지 10 mg, 0.4 mg 내지 5 mg, 0.4 mg 내지 4 mg, 1 mg 내지 20 mg, 1 mg 내지 15 mg 또는 1 mg 내지 10 mg의 양으로 투여될 수 있다. 전형적으로, 글루코코르티코이드와 같은 코르티코스테로이드는 평균 성인 인간 대상에게, 용량 당 (약) 0.4 mg 내지 20 mg의 양으로, 예를 들어 (약) 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.75 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg 또는 20 mg의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는, 예를 들어 전형적으로 체중이 약 70 ㎏ 내지 75 ㎏인 평균 성인 인간 대상에게, (약) 0.001 mg/㎏, 0.002 mg/㎏, 0.003 mg/㎏, 0.004 mg/㎏, 0.005 mg/㎏, 0.006 mg/㎏, 0.007 mg/㎏, 0.008 mg/㎏, 0.009 mg/㎏, 0.01 mg/㎏, 0.015 mg/㎏, 0.02 mg/㎏, 0.025 mg/㎏, 0.03 mg/㎏, 0.035 mg/㎏, 0.04 mg/㎏, 0.045 mg/㎏, 0.05 mg/㎏, 0.055 mg/㎏, 0.06 mg/㎏, 0.065 mg/㎏, 0.07 mg/㎏, 0.075 mg/㎏, 0.08 mg/㎏, 0.085 mg/㎏, 0.09 mg/㎏, 0.095 mg/㎏, 0.1 mg/㎏, 0.15 mg/㎏, 0.2 mg/㎏, 0.25 mg/㎏, 0.30 mg/㎏, 0.35 mg/㎏, 0.40 mg/㎏, 0.45 mg/㎏, 0.50 mg/㎏, 0.55 mg/㎏, 0.60 mg/㎏, 0.65 mg/㎏, 0.70 mg/㎏, 0.75 mg/㎏, 0.80 mg/㎏, 0.85 mg/㎏, 0.90 mg/㎏, 0.95 mg/㎏, 1 mg/㎏, 1.05 mg/㎏, 1.1 mg/㎏, 1.15 mg/㎏, 1.20 mg/㎏, 1.25 mg/㎏, 1.3 mg/㎏, 1.35 mg/㎏ 또는 1.4 mg/㎏의 투여량으로 투여될 수 있다.
일반적으로, 투여되는 코르티코스테로이드의 용량은, 상이한 코르티코스테로이드 간에 효능의 차이가 존재하기 때문에, 특정 코르티코스테로이드에 따라 달라진다. 전형적으로, 약물마다 효능이 다르기 때문에, 동등한 효과를 얻기 위한 해당 용량이 다를 수 있다는 것을 이해해야 한다. 다양한 글루코코르티코이드에 대한 효능 및 투여 경로의 관점에서의 동등성은 공지되어 있다. 등가의 스테로이드 투약과 관련된 정보(비시간요법 방식으로)는 문헌[British National Formulary (BNF) 37, March 1999]에서 확인할 수 있다.
일부 구현예에서, 이상사례/이상반응은 하기 중 하나 이상에서 선택될 수 있다:
Figure pct00014
기타 이상반응에는, 위장관 장애: 입안건조; 감염 및 침습 장애: 진균 감염; 대사 및 영양 장애: 탈수; 신경계 장애: 운동실조증, 발작, 두개내압 증가; 호흡기, 흉부 및 종격동 장애: 호흡부전, 폐부종; 피부 및 피하조직 장애: 발진; 혈관 장애: 출혈이 포함된다.
하나의 구현예에서, 사이토카인 방출 증후군 증상에는, 비제한적으로, 발열, 강직, 피로, 식욕부진, 근육통, 관절통, 구역, 구토, 두통, 발진, 설사, 빈호흡, 저산소혈증, 빈맥, 저혈압, 확장된 맥압, 심박출량의 조기 증가, 심박출량의 늦은 감소, 환각, 떨림, 변형된 보행, 발작 및 사망이 포함된다. 하나의 구현예에서, CRS의 등급화 방법은 문헌[Neelapu et al., Nat Rev Clin Oncol. 15(1):47-62 (2018)] 및 문헌[Lee, et al., Blood 2014; 124:188-195]에 기재되어 있다. 하나의 구현예에서, 신경독성/신경학적 사례는 문헌[Lee, et al, Blood 2014; 124: 188-195]에 기재된 방법에 따라 등급화될 수 있다.
일부 구현예에서, 이상사례는 토실리주맙(또는 또 다른 항-IL6/IL6R 작용제/안타고니스트), 코르티코스테로이드 요법, 또는 독성 예방용 항발작 약물로 관리된다. 일부 구현예에서, 이상사례는 GM-CSF, CSF1, GM-CSFR 또는 CSF1R의 저해제, 항흉선세포 글로불린, 렌질루맙, 마브릴리무맙, 사이토카인, 및 항염증제에서 선택되는 1종 이상의 작용제(들)로 관리된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 T세포 치료에 대한 이상반응의 발달을 예방하거나 이의 중증도를 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 사이토카인 방출 증후군 및 신경학적 독성을 포함하는 이상사례를 예방하고, 이의 발병을 지연시키고, 이의 증상을 감소시키고, 이를 치료하는 1종 이상의 작용제와 함께 투여된다. 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 상기 기재되어 있다. 다른 구현예에서, 상기 작용제는 하기에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 세포의 투여 전에, 후에 또는 이와 동시에, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 방법 및 용량 중 하나에 따라 투여된다. 하나의 구현예에서, 상기 작용제(들)는 해당 질환에 대한 성향이 있을 수 있지만, 아직 해당 질환으로 진단되지 않은 대상에게 투여된다.
이러한 양태에서, 상기 개시된 방법은 "예방적 유효량"의 토실리주맙, 코르티코스테로이드 요법 및/또는 독성 예방용 항발작 약물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 GM-CSF, CSF1, GM-CSFR 또는 CSF1R의 저해제, 렌질루맙, 마브릴리무맙, 사이토카인, 및/또는 항염증제를 투여하는 것을 포함한다. 약리학적 및/또는 생리학적 효과는 예방적일 수 있으며, 즉, 이러한 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다. "예방적 유효량"은 목적하는 예방적 결과(예를 들어, 이상반응의 발생 예방)를 달성하는 데 필요한 기간 동안 투여량으로의 효과적인 양을 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 임의의 대상에서 이상반응을 관리하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 이상반응은 사이토카인 방출 증후군(CRS), 신경학적 독성, 과민반응, 중증 감염, 혈구감소증 및 저감마글로불린혈증으로 이루어지는 군에서 선택된다. 일부 구현예에서, 이상반응의 징후 및 증상은 발열, 저혈압, 빈맥, 저산소증 및 오한으로 이루어지는 군에서 선택되며, 이에는 심장부정맥(심방세동 및 심실성 빈맥 포함), 심장정지, 심부전, 신기능부전, 모세관누출 증후군, 저혈압, 저산소증, 기관 독성, 식혈세포성 림프조직구증/대식세포 활성화 증후군(HLH/MAS), 발작, 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 언어상실증, 섬망, 불면증, 불안, 아나필락시스, 발열성 호중구감소증, 저혈소판증, 호중성백혈구감소증 및 빈혈이 포함된다. 일부 구현예에서, 환자는 이상사례의 바이오마커 중 하나 이상에 기반하여 식별되고 선택되었다. 일부 구현예에서, 환자는 임상 표현(예를 들어, 독성 증상의 존재 및 등급)에 따라 간단하게 식별되고 선택되었다. 일부 구현예에서, 이상사례는 표 13, 표 14, 표 16 및 표 17의 프로토콜 중 어느 하나에 따라 관리된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 키메라 수용체 치료에서 CRS를 예방하거나 이의 중증도를 감소시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 조작된 CAR T세포는 환자에게의 투여 후 비활성화된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 임상 표현에 기반하여 CRS를 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 발열, 저산소증 및 저혈압의 다른 원인을 평가하고, 이를 치료하는 것을 포함한다. 2등급 이상의 CRS(예를 들어, 수액에 대해 반응하지 않는 저혈압, 또는 보충 산소첨가를 필요로 하는 저산소증)를 경험하는 환자는, 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소 측정으로 모니터링되어야 한다. 일부 구현예에서, 중증 CRS를 경험하는 환자의 경우, 심장 기능을 평가하기 위해 심장초음파도를 수행하는 것을 고려한다. 중증 또는 생명을 위협하는 CRS의 경우, 집중 치료 지지요법이 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 CRS의 징후 및 증상에 대한 주입 후, 환자를 7일 동안 적어도 매일 인증된 의료 시설에서 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 주입 후 4주 동안 CRS의 징후 또는 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 CRS의 징후 또는 증상이 발생하는 경우 언제든지 즉각적인 치료를 찾을 수 있도록 환자와 상담하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 CRS의 첫 번째 징후에 지시된 바에 따라 지지요법인, 토실리주맙, 또는 토실리주맙과 코르티코스테로이드를 이용한 치료를 도입하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 신경학적 증상의 다른 원인을 배제시키는 단계를 포함한다. 2등급 이상의 신경학적 독성을 경험하는 환자는, 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소 측정으로 모니터링되어야 한다. 중증 또는 생명을 위협하는 신경학적 독성에 대한 집중 치료 지지요법이 제공된다. 일부 구현예에서, 신경학적 독성의 증상은 뇌병증, 두통, 떨림, 어지럼증, 언어상실증, 섬망, 불면증 및 불안에서 선택된다.
일부 구현예에서, 세포 치료제는 이상사례의 하나 이상의 증상을 치료하고/하거나 예방하는(예방적) 1종 이상의 작용제(예를 들어, 스테로이드) 또는 치료(예를 들어, 감량수술)의 투여 전, 동안/동시에, 및/또는 이후에 투여된다. "예방적 유효량"은, 목적하는 예방적 결과를 달성하는 데 필요한 기간 동안 투여량으로의 효과적인 양을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 예방적 유효량은 질환의 초기 단계에서 또는 그 이전에 대상에게 사용된다. 하나의 구현예에서, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다. 하나의 구현예에서, 이상사례 치료 또는 예방은 세포 요법을 받게되는, 받고 있는 또는 받은 임의의 환자에게 투여된다. 일부 구현예에서, 이상사례를 관리하는 방법은 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대한 주입 후, 환자를 7일 동안 적어도 매일 인증된 의료 시설에서 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 주입 후 4주 동안 신경학적 독성 및/또는 CRS의 징후 또는 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 스테로이드와 항-IL6/항-IL-6R 항체/항체들을 이용한 CAR T세포 치료를 받고 있는 대상에서 이상사례를 관리하는 2가지 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용은, 3일 후에도 개선이 없는 1등급 CRS의 모든 경우 및 모든 1등급 이상의 신경학적 사례의 관리를 위해 코르티코스테로이드 요법이 개시되는 이상사례 관리 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 3일 후에도 개선이 없는 1등급 CRS의 모든 경우 및 모든 2등급 이상의 신경학적 사례에 대해 토실리주맙이 개시된다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용은 CAR T세포 투여 후 이상사례 관리를 받는 환자에서 전체 스테로이드 노출을 감소시키는 방법으로서, 3일 후에도 개선이 없는 1등급 CRS의 모든 경우 및 모든 1등급 이상의 신경학적 사례의 관리를 위한 코르티코스테로이드 요법의 개시, 및/또는 3일 후에도 개선이 없는 1등급 CRS의 모든 경우 및 모든 2등급 이상의 신경학적 사례에 대한 토실리주맙의 개시를 포함하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 코르티코스테로이드와 토실리주맙은 실시예 섹션에 예시된 것들에서 선택되는 요법으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용은 초기 스테로이드 사용이 중증 감염의 위험 증가, CAR T세포 증식의 감소 또는 종양 반응의 감소와 관련이 없음을 제공한다.
하나의 구현예에서, 본 개시내용은 CAR T세포 암 치료에서 레베티라세탐 예방의 안전성을 시사한다. 하나의 구현예에서, 암은 NHL이다. 하나의 구현예에서, 암은 R/R LBCL이고, 환자는 KTE-X19를 투여받는다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 개시내용은 환자에게 예방적 투여량의 항발작 약물을 투여하는 것을 포함하는, CAR T세포로 치료받은 환자에서 이상사례를 관리하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 환자는 레베티라세탐(예를 들어, 1일 2회 750 mg 경구 또는 정맥내)을 (조건화 후) CAR T세포 치료 0일차부터, 및 또한 예방적 레베티라세탐의 중단 후 신경학적 사례가 발생하는 경우 2등급 이상의 신경학적 독성의 발생 시에 투여받는다. 하나의 구현예에서, 환자가 임의의 2등급 이상의 신경학적 독성을 경험하지 않는 경우, 레베티라세탐은 임상적으로 지시된 바에 따라 감량되고 중단된다. 하나의 구현예에서, 레베티라세탐 예방은 임의의 다른 이상사례 관리 프로토콜과 조합된다.
하나의 구현예에서, 환자는 0일차부터 레베티라세탐(1일 2회 750 mg 경구 또는 정맥내)을 투여받을 수 있다. 2등급 이상의 신경학적 사례의 발병 시, 레베티라세탐 용량은 1일 2회 1000 mg까지 증가된다. 환자가 임의의 2등급 이상의 신경학적 사례를 경험하지 않는 경우, 레베티라세탐은 임상적으로 지시된 바에 따라 감량되고 중단된다. 환자는 또한 2일차에 토실리주맙(8 mg/㎏을 IV로 1시간에 걸쳐[800 mg을 초과하지 않음])을 투여받는다. 동반이환 또는 고령의 환자에서 2등급 CRS의 발병 시, 또는 그렇지 않으면 3등급 이상의 CRS의 경우 추가의 토실리주맙(±코르티코스테로이드)이 권장될 수 있다. 2등급 이상의 신경학적 사례를 경험한 환자의 경우에는 토실리주맙이 개시되고, 동반이환 또는 고령의 환자의 경우, 또는 토실리주맙 사용에도 불구하고 증상이 악화되는 임의의 3등급 이상의 신경학적 사례가 발생하는 경우에는 코르티코스테로이드가 추가된다.
하나의 구현예에서, 본 개시내용은, 예방적 스테로이드 사용이 조기 스테로이드 사용 투여에서와 유사한 정도로 중증 CRS 및 NE의 비율을 감소시키는 것으로 나타남을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은, 환자가 0일차(주입 전), 1일차 및 2일차에 덱사메타손 10 mg PO를 투여받는, CAR T세포 요법에서의 이상사례 관리 방법을 제공한다. 스테로이드는 또한 1등급 NE에서부터, 및 3일간의 지지요법 후 개선이 관찰되지 않는 1등급 CRS에 대해서 투여될 수 있다. 토실리주맙은 또한 24시간의 지지요법 후 개선이 관찰되지 않는 1등급 이상의 CRS에 대해 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용은, GM-CSF를 중화시키고/시키거나 고갈시키는 항체를 이용한 CAR T세포 요법의 이상사례 관리가 치료받은 환자에서 치료 관련 CRS 및/또는 NE를 예방하거나 감소시킴을 제공한다. 하나의 구현예에서, 항체는 렌질루맙이다.
일부 구현예에서, 이상사례는 IL-6 또는 IL-6 수용체(IL-6R)의 안타고니스트 또는 저해제인 작용제/작용제들의 투여를 통해 관리된다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 IL-6 활성을 중화시키는 항체, 예컨대 IL-6 또는 IL-6R에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 작용제는 항-IL-6R 항체인 토실리주맙(아틀리주맙(atlizumab)) 또는 사릴루맙(sarilumab)이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 미국 특허 제8,562,991호에 기재된 항-IL-6R 항체이다. 일부 경우에, IL-6을 표적으로 하는 작용제는 항-TL-6 항체, 예컨대 실툭시맙, 엘실리모맙(elsilimomab), ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(sirukumab)(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX 109, FE301, FM101 또는 올로키주맙(olokizumab)(CDP6038), 및 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 리간드-수용체 상호작용을 저해하는 방식으로 IL-6 활성을 중화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, IL-6/IL-6R 안타고니스트 또는 저해제는 미국 특허 제5591827호에 기재된 바와 같은 IL-6 뮤테인(mutein)이다. 일부 구현예에서, IL-6/IL-6R의 안타고니스트 또는 저해제인 작용제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 이상반응과 이의 증상을 관리하는 데 사용될 수 있는 다른 작용제에는, 사이토카인 수용체 또는 사이토카인의 안타고니스트 또는 저해제가 포함된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 수용체는 IL-10, TL-6, TL-6 수용체, IFNy, IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP13, CCR5, TNF알파, TNFR1, 예컨대 TL-6 수용체(IL-6R), IL-2 수용체(IL-2R/CD25), MCP-1(CCL2) 수용체(CCR2 또는 CCR4), TGF-베타 수용체(TGF-베타 I, II 또는 III), IFN-감마 수용체(IFNGR), MIP1P 수용체(예를 들어, CCR5), TNF 알파 수용체(예를 들어, TNFR1), IL-1 수용체(IL1-Ra/IL-1RP) 또는 IL-10 수용체(IL-10R), IL-1, 및 IL-1R알파/IL-1베타이다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 시툭시맙(situximab), 사릴루맙, 올로키주맙(CDP6038), 엘실리모맙, ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX 109, FE301 또는 FM101을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 형질전환성장인자 베타(TGF-베타), 인터류킨 6(TL-6), 인터류킨 10(IL-10), IL-2, MIP13(CCL4), TNF 알파, IL-1, 인터페론 감마(IFN-감마) 또는 단핵구 화학주성 단백질-I(MCP-1)과 같은 사이토카인의 안타고니스트 또는 저해제이다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 TL-6 수용체(IL-6R), IL-2 수용체(IL-2R/CD25), MCP-1(CCL2) 수용체(CCR2 또는 CCR4), TGF-베타 수용체(TGF-베타 I, II 또는 III), IFN-감마 수용체(IFNGR), MIP1P 수용체(예를 들어, CCR5), TNF 알파 수용체(예를 들어, TNFR1), IL-1 수용체(IL1-Ra/IL-1RP) 또는 IL-10 수용체(IL-10R), 및 이들의 조합과 같은, 사이토카인 수용체를 표적으로 하는(예를 들어, 이를 저해하거나, 이의 안타고니스트인) 것이다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 세포의 투여 전에, 후에 또는 이와 동시에, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 방법 및 용량 중 하나에 따라 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 작용제는 약 1 mg/㎏ 내지 10 mg/㎏, 2 mg/㎏ 내지 8 mg/㎏, 2 mg/㎏ 내지 6 mg/㎏, 2 mg/㎏ 내지 4 mg/㎏ 또는 6 mg/㎏ 내지 8 mg/㎏(각각의 종점 포함)의 투여량으로 투여되거나, 상기 작용제는 적어도 또는 적어도 약 2 mg/㎏, 4 mg/㎏, 6 mg/㎏ 또는 8 mg/㎏의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 약 1 mg/㎏ 내지 12 mg/㎏, 예컨대 10 mg/㎏ 또는 약 10 mg/㎏의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 작용제는 정맥내 주입으로 투여된다. 하나의 구현예에서, 상기 작용제는 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 상기 작용제(들)(예를 들어, 구체적으로 토실리주맙)는 세포의 투여 전에, 후에 또는 이와 동시에, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 방법 및 용량 중 하나에 따라 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 임상 표현에 기반하여 CRS를 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 발열, 저산소증 및 저혈압의 다른 원인을 평가하고, 이를 치료하는 것을 포함한다. CRS가 관찰되거나 의심되는 경우, 프로토콜 A의 권고에 따라 관리될 수 있으며, CSF/CSFR1 축의 중화 또는 감소를 포함하는 본 개시내용의 다른 치료와 조합으로 또한 사용될 수 있다. 2등급 이상의 CRS(예를 들어, 수액에 대해 반응하지 않는 저혈압, 또는 보충 산소첨가를 필요로 하는 저산소증)를 경험하는 환자는, 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소 측정으로 모니터링되어야 한다. 일부 구현예에서, 중증 CRS를 경험하는 환자의 경우, 심장 기능을 평가하기 위해 심장초음파도를 수행하는 것을 고려한다. 중증 또는 생명을 위협하는 CRS의 경우, 집중 치료 지지요법이 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 토실리주맙의 바이오시밀러 또는 등가물이 본원에 개시된 방법에서 토실리주맙 대신 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 또 다른 항-IL6R이 토실리주맙 대신 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 이상사례는 하기 프로토콜(프로토콜 A)에 따라 관리된다:
Figure pct00015
신경학적 독성
일부 구현예에서, 상기 방법은 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 환자를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 신경학적 증상의 다른 원인을 배제시키는 단계를 포함한다. 2등급 이상의 신경학적 독성을 경험하는 환자는, 지속적인 심장 원격 측정 및 맥박 산소 측정으로 모니터링되어야 한다. 중증 또는 생명을 위협하는 신경학적 독성에 대한 집중 치료 지지요법이 제공된다. 임의의 2등급 이상의 신경학적 독성에 대한 발작 예방의 경우에는 비진정성 항발작제(예를 들어, 레베티라세탐)를 고려한다. 하기 치료는 CSF/CSFR1 축의 중화 또는 감소를 포함하는 본 개시내용의 다른 치료와 조합으로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 이상사례는 하기 프로토콜(프로토콜 B)에 따라 관리된다:
Figure pct00016
코르티코스테로이드를 이용한 추가 안전 관리 전략
1등급에서 코르티코스테로이드 및/또는 토실리주맙의 투여는 예방적인 것으로 간주될 수 있다. 지지요법은 모든 CRS 및 NE 중증도 등급에서 모든 프로토콜로 제공될 수 있다. CRS와 관련된 이상사례의 관리를 위한 프로토콜의 하나의 구현예에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 1등급 CRS: 토실리주맙 없음; 코르티코스테로이드 없음; 2등급 CRS: 토실리주맙(동반이환 또는 고령의 경우에만); 및/또는 코르티코스테로이드(동반이환 또는 고령의 경우에만); 3등급 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 4등급 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드. CRS와 관련된 이상사례의 관리를 위한 프로토콜의 또 다른 구현예에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 1등급 CRS: 토실리주맙(3일 후에도 개선이 없는 경우); 및/또는 코르티코스테로이드(3일 후에도 개선이 없는 경우); 2등급 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 3등급 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 4등급 CRS: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드, 고용량.
NE와 관련된 이상사례의 관리를 위한 프로토콜의 하나의 구현예에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 1등급 NE: 토실리주맙 없음; 코르티코스테로이드 없음; 2등급 NE: 토실리주맙 없음; 코르티코스테로이드 없음; 3등급 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드(토실리주맙에 대한 개선이 없는 경우에만, 표준 용량); 4등급 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드. NE와 관련된 이상사례의 관리를 위한 프로토콜의 또 다른 구현예에서, 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드는 하기와 같이 투여된다: 1등급 NE: 토실리주맙 없음; 및/또는 코르티코스테로이드; 2등급 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드; 3등급 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드, 고용량; 4등급 NE: 토실리주맙; 및/또는 코르티코스테로이드, 고용량. 하나의 구현예에서, 코르티코스테로이드 치료는 2등급 이상의 CRS에서 개시되고, 토실리주맙은 2등급 이상의 CRS에서 개시된다. 하나의 구현예에서, 코르티코스테로이드 치료는 1등급 이상의 CRS에서 개시되고, 토실리주맙은 1등급 이상의 CRS에서 개시된다. 하나의 구현예에서, 코르티코스테로이드 치료는 3등급 이상의 NE에서 개시되고, 토실리주맙은 3등급 이상의 CRS에서 개시된다. 하나의 구현예에서, 코르티코스테로이드 치료는 1등급 이상의 CRS에서 개시되고, 토실리주맙은 2등급 이상의 CRS에서 개시된다. 일부 구현예에서, 2일차에 투여되는 토실리주맙의 예방적 사용은 3등급 이상의 CRS의 비율을 감소시킬 수 있다. 1종 이상의 코르티코스테로이드가 임의의 용량 및 투여 빈도로 투여될 수 있으며, 이는 이상사례(예를 들어, CRS 및 NE)의 중증도/등급에 따라 조정될 수 있다. 표 1 및 표 2에는, 각각, CRS 및 NE의 관리를 위한 투여 요법의 예시가 제공되어 있다. 또 다른 구현예에서, 코르티코스테로이드 투여는 경구 또는 IV 덱사메타손 10 mg, 1일 1회 내지 4회이다. 때때로 "고용량" 코르티코스테로이드로 지칭되는 또 다른 구현예는, 메틸프레드니손 1 g을 IV로 1일 1회, 단독으로 또는 덱사메타손과 조합으로, 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 1종 이상의 코르티코스테로이드가 1일 1 mg 내지 2 mg/㎏의 용량으로 투여된다. 일반적으로, 투여되는 코르티코스테로이드의 용량은, 상이한 코르티코스테로이드 간에 효능의 차이가 존재하기 때문에, 특정 코르티코스테로이드에 따라 달라진다. 전형적으로, 약물마다 효능이 다양하기 때문에, 동등한 효과를 얻기 위한 해당 용량이 다를 수 있다는 것을 이해해야 한다. 다양한 글루코코르티코이드에 대한 효능 및 투여 경로의 관점에서의 동등성은 공지되어 있다. 등가의 스테로이드 투약과 관련된 정보(비시간요법 방식으로)는 문헌[British National Formulary (BNF) 37, March 1999]에서 확인할 수 있다. 본 출원은 또한 본 출원의 방법에 따라 제조된 세포의 투여량 및 투여를 제공하며, 예를 들어 CD19 지향 유전자 변형된 자가유래 T세포 면역요법의 주입 백은 주입을 위해 대략 68 mL로 키메라 항원 수용체(CAR) 양성 T세포 현탁액을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR T세포는 주입을 위해 대략 40 mL로 제형화된다. 일부 구현예에서, CAR T세포 생성물은 총 부피 35 mL, 40 mL, 45 mL, 50 mL, 55 mL, 60 mL, 65 mL, 70 mL, 75 mL, 80 mL, 85 mL, 90 mL, 95 mL, 100 mL, 200 mL, 300 mL, 400 mL, 500 mL, 500 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL, 1000 mL로 제형화된다. 하나의 양태에서, 본 출원의 방법에 따라 제조된 세포의 투여량 및 투여, 예를 들어 CD19 지향 유전자 변형된 자가유래 T세포 면역요법 주입 백은, 대략 40 mL로 1 × 106개의 CAR-T 양성 세포의 현탁액을 포함한다. 목표 용량은 체중 1 ㎏ 당 약 1 × 106개 내지 약 2 × 106개의 CAR 양성 생존 T세포이며, 최대 2 × 108개의 CAR 양성 생존 T세포일 수 있다.
일부 구현예에서, 투여 형태는 1회용 환자 특이적 주입 백으로 주입용 세포 현탁액을 포함하고; 투여 경로는 정맥내이며; 각각의 1회용 환자 특이적 주입 백의 전체 내용물은 30분에 걸쳐 중력 또는 연동 펌프를 통해 주입된다. 하나의 구현예에서, 투약 요법은 체중 1 ㎏ 당 2.0 × 106개의 항-CD19 CAR T세포(± 20%)로 이루어진 단일 주입이며, 최대 용량은 2 × 108개의 항-CD19 CAR T세포(100 ㎏ 이상의 대상의 경우)이다. 일부 구현예에서, 이러한 용량을 구성하는 T세포는 CD19 CAR-T세포이다.
일부 구현예에서, CD19 지향 T세포 면역요법은 본 출원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 제조된 KTE-X19이다. 하나의 구현예에서, KTE-X19는 MCL, ALL, CLL, SLL 및 임의의 다른 B세포 악성종양의 치료에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CD19 지향 유전자 변형된 자가유래 T세포 면역요법은 본 출원의 방법 중 하나에 따라 제조된 Axi-cel™(YESCARTA®, 악시캅타진 실로류셀)이다. 이러한 방법의 범주에 속하는 CAR T세포의 양, 투여 요법, 투여 방법, 대상, 암은, 단독으로 또는 또 다른 화학치료제와 조합으로, 사전 조건화의 존재 또는 부재 하에, 본 출원의 다른 곳에 기재된 임의의 환자에 대하여 본 출원의 다른 곳에 기재되어 있다.
하기 실시예는 본 출원의 다양한 양태를 예시하기 위한 것으로 의도된다. 이와 같이, 논의된 특정 양태는 본 출원의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 하기 실시예는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)로 형질도입된 T세포에 대한 것이지만, 당업자는, 본원에 기재된 방법이 임의의 CAR로 형질도입된 면역세포에 적용될 수 있음을 이해할 것이다. 본 출원의 범위를 벗어나지 않는 한 다양한 등가물, 변화 및 변형이 이루어질 수 있음이 당업자에게 명백할 것이며, 이러한 등가의 양태는 본원에 포함됨을 이해해야 한다. 나아가, 본 출원에 인용된 모든 참고문헌은 본원에 완전히 설명된 바와 같이 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
본원에 언급된 특허 및 과학 문헌은 당업자가 이용할 수 있는 지식을 확립한다. 본원에 인용된 모든 미국 특허, 및 공개 또는 미공개 미국 특허출원은 본원에 참조로서 인용된다. 본원에 인용된 모든 공개된 해외 특허 및 특허출원은 본원에 참조로서 인용된다. 본원에 인용된 모든 다른 공개된 참고문헌, 사전, 문서, 원고, 게놈 데이터베이스 서열 및 과학 문헌은 본원에 참고로서 인용된다.
본 개시내용의 다른 특징 및 이점은 실시예를 비롯한 하기 도면 및 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다.
실시예
실시예 1
본 연구에서, 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTKi)를 포함하여 1회 내지 5회의 선행 요법을 투여받은 R/R MCL 환자를, 자가유래 항-CD19 CAR-T세포로 치료하였다.
적격한 R/R MCL 환자(18세 이상)는 ECOG 점수가 0 내지 1이고, 화학요법, 항-CD20 항체 및 BTK 저해제(BTKi)를 포함하여 5회 이하의 선행 요법을 받았다. 환자는 백혈구성분채집술과 화학요법(3일 동안 시클로포스파미드 1일 300 mg/m2 및 플루다라빈 1일 30 mg/m2)을 받은 후, 2 × 106개의 CAR T세포/㎏의 목표 용량으로 CD19 CAR-T의 주입을 받았다. 환자는 백혈구성분채집술 후 그리고 화학요법 전에 덱사메타손, 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙을 이용한 가교요법을 받았을 수 있다. 1차 평가변수는 루가노 분류에 따른 객관적 반응률(ORR[완전 반응(CR) + 부분 반응(PR)])이었다. 중간 효능 평가변수는 악성림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준을 사용하여 시험자가 평가하였다. 주요 2차 평가변수는 반응 지속기간(DOR), 무진행 생존기간(PFS), OS, 이상사례(AE) 빈도, 혈중 CAR T세포 수준 및 혈청 내 사이토카인 수준이었다.
28명의 환자가 CD19 CAR-T세포를 투여받고, 1년 이상의 추적조사(중앙값 13.2개월[범위, 11.5개월 내지 18.5개월])를 받았다. 환자의 43%는 ECOG 점수가 1이었고, 21%는 모세포형 형태를 나타냈고, 82%는 IV기 질환이었고, 50%는 중간/고위험 MIPI였고, 86%는 중앙값 4회(범위, 1회 내지 5회)의 선행 요법을 받았고, 57%는 마지막 선행 요법에 대해 불응성이었다. 28명의 환자 중 20명에서, Ki-67 지수 중앙값은 38%(범위, 5% 내지 80%)였다. 8명의 환자는 가교요법을 받았고; 모두 가교요법 후 질환을 나타냈다. ORR은 86%(95% CI, 67% 내지 96%)였고, CR 비율은 57%(95% CI, 37% 내지 76%)였다. 반응자의 75%는 반응을 유지하였고, 치료받은 환자의 64%는 지속적인 반응을 나타냈다. DOR, PFS 및 OS의 12개월 추정치는, 각각, 83%(95% CI, 60% 내지 93%), 71%(95% CI, 50% 내지 84%), 86%(95% CI, 66% 내지 94%)였고, 중앙값에는 도달하지 못했다. 3등급 이상의 AE(환자의 20% 이상)는 빈혈(54%), 혈소판 수 감소(39%), 호중성백혈구감소증(36%), 호중구 수 감소(32%), 백혈구 수 감소(29%), 뇌병증(25%) 및 고혈압(21%)이었다.문헌[Lee DW, et al. Blood 2014;124:188]에 따라 평가된 3/4등급 사이토카인 방출 증후군(CRS)은, 환자의 18%에서 보고되었으며, 저혈압(14%), 저산소증(14%) 및 발열(11%)로 나타났다. 3/4등급 신경학적 사례(NE)는 환자의 46%에서 보고되었으며, 이에는 뇌병증(25%), 착란 상태(14%) 및 언어상실증(11%)이 포함되었다. 5등급의 CRS 또는 NE는 발생하지 않았다. 모든 CRS 사례 및 대부분의 NE(17명의 환자 중 15명)는 가역적이었다. CRS의 발병 및 CRS의 해소까지의 시간 중앙값은, 각각, 2일(범위, 1일 내지 7일) 및 13일(범위, 4일 내지 60일)이었다. NE의 발병까지의 시간 중앙값은 6일(범위, 1일 내지 15일)이었고, 해소까지의 시간 중앙값은 20일(범위, 9일 내지 99일)이었다. 피크 및 곡선하면적으로 측정된 CAR T세포 수준 중앙값은, 각각, 1 μL 당 99개의 세포(범위, 1 μL 당 0.4개 내지 2589개의 세포) 및 1 μL 당 1542개의 세포(범위, 1 μL 당 5.5개 내지 27239개의 세포)였다. 피크 CAR T세포 증식은 8일차 내지 15일차에 관찰되었으며, 시간 경과에 따라 감소하였다.
실시예 2
본 실시예는 상기 기재된 연구에 대한 추가의 분석을 제공한다.적격한 환자는 시클린 D1 과발현 또는 t(11;14)의 존재에 대한 문서화를 통해 병리학적으로 확인된 MCL을 갖는 18세 이상이었으며, MCL에 대한 1회 내지 5회의 선행 요법에 대해 재발/불응성이었다. 선행 요법에는 안트라시클린 또는 벤다무스틴 함유 화학요법, 항-CD20 단클론 항체, 및 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙이 포함되어 있어야 했다. 모든 환자는 사전에 BTKi를 투여받았다. 환자는 선행 BTKi 요법을 받은 적이 있어야 하지만, 이것이 연구 시작 전 마지막 회차의 요법일 필요는 없었으며, 환자가 BTKi 요법에 대해 불응성일 필요도 없었다. 적격한 환자의 절대 림프구 수는 100/μL 이상이었다. 6주간의 CD19 CAR-T 주입 이내에 자가유래 SCT를 받았거나, 이전에 CD19 표적화 요법 또는 동종이계 SCT를 받았던 환자는 배제시켰다.
추가 포함 기준에는 하기가 포함되었다: 적어도 하나의 측정 가능한 병변. 이전에 방사선조사되었던 병변은 방사선요법의 완료 후 진행이 이루어진 것으로 문서화된 경우에만 측정 가능한 것으로 간주되었음; 측정 가능한 유일한 질환이 림프절 질환인 경우, 적어도 하나의 림프절은 2 cm 이상이어야 했음; 뇌의 자기공명영상(MRI)은 중추신경계(CNS) 림프종의 증거가 없어야 했음; 전신 저해/자극 면역 체크포인트 요법을 제외하고 환자에게 백혈구성분채집술이 계획된 시점에 임의의 선행 전신 요법 또는 BTKi(이브루티닙 또는 아칼라브루티닙) 이후 적어도 2주 또는 5회 반감기(둘 중 짧은 것)가 경과했어야 했음; 환자에게 백혈구성분채집술이 계획된 시점에 임의의 선행 전신 저해/자극 면역 체크포인트 분자 요법(예를 들어, 이필리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, OX40 아고니스트, 4-1BB 아고니스트)으로부터 적어도 3회의 반감기가 경과했어야 했음; 선행 요법으로 인한 독성이 안정적이고, (탈모증과 같은 임상적으로 관련이 없는 독성을 제외하고) 1등급 이하로 회복되었어야 했음; ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group) 전신활동도 0 또는 1; 절대 호중구 수(ANC) ≥ 1,000/uL; 혈소판 수 ≥ 75,000/uL; 절대 림프구 수 ≥ 100/uL; 크레아티닌 청소율(Cockcroft Gault 방정식에 따라 추정됨)이 ≥ 60 cc/분으로 정의된 적절한 신장, 간, 폐 및 심장 기능; 혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라아제/아스파르테이트 아미노트랜스퍼라아제가 정상 상한(ULN)의 2.5배 이하였음; 길버트증후군(Gilbert's syndrome) 환자를 제외하고, 총 빌리루빈 ≤ 1.5 mg/dl; 심박출률 ≥ 50%, 심장초음파도(ECHO)에 따라 결정된 심낭삼출의 증거가 없고, 임상적으로 관련된 심전도(ECG) 소견이 없고; 임상적으로 관련된 흉막삼출이 없어야 했음; 실내 공기에서의 기준선 산소 포화도 > 92%; 가임 여성은 혈청 또는 소변 임신 검사에서 음성이어야 했음. 외과적 불임술을 받았거나 적어도 2년 동안 폐경이었던 여성은 가임 여성으로 간주되지 않았음.
추가 배제 기준에는 하기가 포함되었다: 적어도 3년 동안 질환이 없는 경우를 제외하고 비흑색종성 피부암 또는 상피내암종(예를 들어, 자궁경부, 방광, 유방) 이외의 악성종양의 병력; 동종이계 줄기세포 이식의 이력; 선행 CAR 요법 또는 다른 유전자 변형된 T세포 요법; 아미노글리코시드로 인한 중증의 즉각적인 과민반응 병력; 진균, 박테리아, 바이러스, 또는 제어되지 않거나 관리를 위해 정맥내(IV) 항균제를 필요로 하는 기타 감염의 존재. 단순 요로 감염(UTI)과 합병증을 수반하지 않는 세균성 인두염은 적극 치료에 반응하고, 의료 모니터 요원과의 상담 후에 허용되었음; 인간면역결핍바이러스(HIV) 감염, 또는 급성 또는 만성 활동성 B형 또는 C형 간염의 감염 병력. 간염 감염의 병력이 있는 환자는 표준 혈청학적 및 유전자 검사를 통해 결정 시 감염이 없어야 했음; 임의의 유치관(in-dwelling line) 또는 배출관(예를 들어, 경피적 신루관, 내재된 폴리 카테터(Foley catheter), 담즙 배출관, 또는 흉막/복막/심막 카테터)의 존재. Port-a-Cath 또는 히크만(Hickman) 카테터와 같은 오마야 저장소(Ommaya reservoir) 및 전용 중심 정맥 접근 카테터는 허용되었음; 검출 가능한 뇌척수액 악성세포 또는 뇌 전이가 있거나, CNS 림프종, 뇌척수액 악성세포 또는 뇌 전이의 병력이 있는 환자; CNS 장애, 예컨대 발작 장애, 뇌혈관 허혈/출혈, 치매, 소뇌질환, 뇌부종, 후두부 가역적 뇌병증 증후군, 또는 임의의 CNS 관련 자가면역 질환의 병력 또는 존재; 심근경색증, 심혈관성형술 또는 스텐트 삽입술, 불안정 협심증, 활동성 부정맥, 또는 등록 12개월 이내의 다른 임상적으로 관련된 심장 질환의 병력; 심방 또는 심실 림프종 관련 환자; 등록 후 지난 6개월 이내의 증상이 있는 심부 정맥 혈전증 또는 폐색전증의 병력; 진행중이거나 임박한 종양학적 응급상황(예를 들어, 종양 덩어리 효과, 종양 용해 증후군)으로 인한 긴급 요법에 대한 가능한 요구사항; 원발성 면역결핍증; 연구 치료의 안전성 또는 효능의 평가를 방해할 가능성이 있는 임의의 의학적 병태; 본 연구에 사용된 작용제 중 임의의 것에 대한 중증의 즉각적인 과민반응의 병력; 조건화 요법의 계획을 시작하기 6주 이하 전의 생백신; 태아 또는 유아에 대한 예비 화학요법의 잠재적으로 위험한 영향으로 인해 임신 중이거나 모유 수유 중인 가임기 여성; 동의 시점부터 CD19 CAR-T세포 치료 완료 후 6개월까지 피임할 의사가 없는 남성 및 여성 환자; 시험자의 판단에 따라, 추적조사 방문을 포함하여 모든 프로토콜에 필요한 연구 방문 또는 절차를 완료하거나, 연구 참여 요건을 준수할 가능성이 낮은 환자; 및 지난 2년 이내 말단 기관 손상을 초래하거나 전신 면역억제/전신 질환 변형제를 필요로 하는 자가면역질환(예를 들어, 크론병(Crohn's disease), 류마티스관절염, 전신홍반루푸스)의 병력.
모든 환자는 CD19 CAR-T세포 치료제 제조용 세포를 얻기 위해 백혈구성분채집술을 받았다. CD4+/CD8+ 세포의 양성 농축을 통해 순환 림프종 세포를 제거하기 위해 악시캅타진 실로류셀의 제조 공정과 비교하여 제조 공정을 변형시켰다. 0일차에 2 × 106개의 CAR T세포/㎏로 CD19 CAR-T세포를 단일 정맥내 주입하기 전, -5일차, -4일차 및 -3일차에 플루다라빈(1일 30 mg/m2) 및 시클로포스파미드(1일 500 mg/m2)를 이용한 조건화 화학요법을 투여하였다. 상기 용량은 거대 B세포 림프종에서 악시캅타진 실로류셀의 연구 및 급성 림프모구성 백혈병에서 CD19 CAR-T세포의 연구로부터 정보를 얻었다. 문헌[Neelapu SS et al. The New England journal of medicine 2017;377:2531]; 문헌[Locke FL et al. Mol Ther 2017;25:285]; 문헌[Shah BD et al. Journal of Clinical Oncology 2019;37:(suppl; abstr 7006)]; 및 문헌[Lee DW et al. Annals of oncology : official journal of the European Society for Medical Oncology / ESMO 2017;28:1008PD](상기 문헌은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨). 백혈구성분채집술 후 및 조건화 요법 전, 질환 부담이 높은 환자는 시험자의 재량에 따라 덱사메타손, 또는 등가의 코르티코스테로이드, 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙을 이용한 가교요법을 받을 수 있었으며, 그 후 기준선 양전자 방출 단층촬영-전산화 단층촬영(PET-CT) 스캔을 반복 수행하였다. 가교요법의 목적은 치유가 아니라, 제조 기간 동안 환자를 안정적으로 유지하지 위한 것이었다. CD19 CAR-T세포 주입 후 7일차까지 입원이 필요하였다.
1차 평가변수는 루가노 분류를 사용하여 독립적인 방사선 검토 위원회(Independent Radiology Review Committee, IRRC)에 의해 평가된 바와 같은 객관적 반응률(ORR[완전 반응(CR) + 부분 반응(PR)])이었다.문헌[Cheson et al., J Clin Oncol 2014; 32:3059-68]. CR을 확인하기 위해, PET-CT에 더하여 골수 평가가 필요하였다.2차 평가변수에는, 반응 지속기간(DOR), 무진행 생존기간(PFS), OS, 문헌[Cheson, et al, J Clin Oncol 2007;25:579-86]에 따른 시험자 평가 ORR, 이상사례(AE) 발생률, 혈중 CAR T세포 및 혈청 내 사이토카인 수준, 및 차원 당 5가지 수준이 있는 유럽 삶의 질 5차원(EQ-5D-5L) 측정에서 시간 경과에 따른 점수의 변화가 포함되었다. CAR T세포 존재, 증식 및 존속, 및 혈청 사이토카인뿐 아니라, 임상 결과와의 연관성은 이전에 보고된 바와 같이 평가하였다. 문헌[Kochenderfer JN et al. J Clin Oncol 2017;35:1803-13]; 문헌[Locke FL et al. Mol Ther 2017;25:285-95](상기 문헌은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨).
기준선에서 6개월차까지의 EQ-5D-5L 점수의 변화를 평가하였다.사이토카인 방출 증후군(CRS)은 문헌[Lee et al. Blood 2014;124:188](이는 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨)에 따라 등급화하였다. 신경학적 사례 및 CRS의 증상을 포함하는 AE의 중증도는, 이상사례에 대한 미국 국립암연구소 표준 용어 기준(National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events)(버전 4.03)을 사용하여 등급화하였다. 최소 잔류 질환(MRD; 10-5 민감도)은 기준선, 및 1개월차, 3개월차 및 6개월차에 저온보존된 말초혈액 단핵세포에서 평가된 탐색적 분석으로, clonoSEQ 검정(Adaptive Biotechnologies, Seattle, WA)을 사용하는 차세대 시퀀싱을 통해 분석하였다.
모든 환자에 대해, 질환 특이적 부위의 양전자 방출 단층촬영-전산화 단층촬영(PET-CT) 스캔이 기준선에서, 주입 4주 후, 및 후처리 기간 동안 규칙적인 간격으로 필요하였다. 골수 흡인/생검은 기준선에서 골수 질환과 관련이 있는 환자와 기준선에서 뚜렷하지 않은 골수 침범이 있는 환자에 대해, 또는 기준선 골수 생검이 수행되지 않았거나 결과가 이용 가능하지 않았던 경우에 완전 반응을 확인하기 위해 필요하였다. CNS 악성종양의 증상이 있는 환자는 뇌척수액(CSF) 검사를 위한 스크리닝 시 요추천자를 받았다. 또한, 항-CD19 CAR T세포 주입 후 2등급 이상의 신경학적 독성이 새로 발생한 환자에 대해 적용 가능한 경우 요추천자를 수행하였다. 또한, 동의서의 선택적 부분에 서명한 환자의 경우, 항-CD19 CAR T세포 주입 전 기준선에서 및 항-CD19 CAR T세포 주입 후(5일차 ± 3일) CSF 채취를 위한 요추천자를 수행하였고; 샘플을 중앙 실험실에 제공하여 사이토카인 수준 변화를 분석하였다.
효능에 대한 1차 분석은 프로토콜에서 요구하는 대로, 60명의 환자를 등록시키고, 치료하고, 4주차 질환 평가 후 6개월 반응에 대해 평가하는 방식으로 수행되었다. 이러한 분석은 단측 알파 수준 0.025에서 참 반응률이 50%인 활성 요법과, 반응률이 25% 이하인 요법을 구별하는 검정력이 96% 이상이었다. 정확한 이항 검정을 사용하여 ORR을 분석하였다. 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 추정치를 사용하여 평가된 사례까지의 시간 평가변수를 포함하는 모든 효능 평가변수를, 상기 기재된 60명의 효능 평가 가능한 환자에서 분석하였다. 안전성 분석은 모든 치료받은 환자(n=68)에 대해 수행하였다. 결과와, CAR T세포 및 사이토카인 수준 사이의 연관성은 윌콕슨 순위합 검정(Wilcoxon rank-sum test)을 사용하여 측정하였으며; P값은 홈 절차(Holm's procedure)를 사용하여 조정하였다. 전체 분석 세트(n = 74): 모든 등록된/백혈구성분채집술을 받은 환자로 이루어져 있으며, 환자 성향 요약에 사용하였음. 안전성 분석 세트(n = 68): 임의의 용량의 항-CD19 CAR T세포로 치료받은 모든 환자로 정의됨. 이러한 분석 세트는 인구통계 및 기준선 특징의 요약과 모든 안전성 분석에 사용하였다. 추론 분석(평가 가능한 효능) 세트(n = 60): 처음 60명의 CD19 CAR-T세포 치료받은 환자로 이루어져 있음. 이러한 분석 세트는 1차 분석뿐 아니라 모든 다른 효능 분석 시 객관적 반응률의 1차 평가변수에 대한 가설 검정에 사용하였다. 1차 평가변수에 대한 가설은, 중앙 평가를 사용한 CD19 CAR-T세포에 대한 ORR이 정확한 이항 검정을 사용한 단측 유의 수준 0.025에서의 사전 지정된 과거 대조군 비율인 25%보다 더 클 것이라는 것이다. 이러한 가설은 추론 분석 세트로 시험하였다. ORR에 대한 과거 대조군 비율은 연구 프로토콜 개발 시 확립된 2가지 후향적 연구에 기반하여 선험적으로 결정하였다. 이러한 2가지 연구에서, BTKi로의 치료(연구 적격성에 필요한 선행 요법) 후 진행되었던 재발된/불응성 MCL 환자에서 구제요법 후 결과를 평가하였다. 이러한 연구는, BTKi를 투여받기 전 3회 이상의 선행 요법을 받은 재발된/불응성 MCL 환자의 구제요법에 대한 ORR이 대략 25%임을 보여주었다. 문헌[Wang M et al. Lancet 2018;391:659]; 문헌[Martin P et al. Blood 2016;127:1559](상기 문헌은 모두 그 전문이 본원에 참조로서 인용됨).
74명의 환자를 등록시키고; 71명에 대해 CD19 CAR-T세포를 제조하고, 68명에게 투여하였다. 60명의 환자를 치료한 후 수행된 1차 효능 분석은, 93%의 ORR(67% 완전 반응)을 나타냈다. 중앙값 12.3개월(범위, 7.0개월 내지 32.3개월)의 추적조사 시, 환자의 57%는 관해를 유지했으며, 반응 지속기간 중앙값에 도달하지 못했다. 추정된 12개월 무진행 생존률 및 전체 생존률은, 각각, 61% 및 83%였다. 일반적인 3등급 이상의 이상사례는 혈구감소증(94%)과 감염(32%)이었다. 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 및 신경학적 사례가, 각각, 환자의 15% 및 31%에서 발생하였으며, 둘 다 치명적이지 않았다. 2건의 5등급 감염성 이상사례가 발병하였다.
CD19 CAR-T세포를 71명의 환자(96%)에 대해 제조하고, 68명(92%)에게 투여하였다. 백혈구성분채집술로부터 연구 부위로의 CD19 CAR-T세포의 전달까지의 시간 중앙값은 16일(범위, 11일 내지 128일)이었다. 제조된 CD19 CAR-T세포를 투여받은 1명의 환자가 백혈구성분채집술 후 급속한 PD로 인해 벤다무스틴-리툭시맙으로 치료받았으며, 이 환자는 연구에 부적격하였다. 이후에 PD가 발생한 후, 환자의 원래 생성물은 초기 백혈구성분채집일로부터 127일 후에 제조 시설에서 출하되어, 1일 후에 치료 현장에 도착하였다. 제조 문제가 있는 3명의 환자에 대해서는 AE(n=1; 심부 정맥 혈전증), 진행성 질환으로 인한 사망(PD; n=1), 또는 동의 철회(n=1)로 인해 추가의 성분채집술을 진행하지 않았다. 2명의 추가의 환자가 PD로 인한 사망으로 인해 조건화 화학요법 전에 중단하였다. 조건화 화학요법을 받은 후, 배제 기준인 심방세동이 진행중인 1명의 환자를 CD19 CAR-T세포 주입에 부적격한 것으로 간주하였다. 효능 평가 가능한 환자에 대한 추적조사 기간 중앙값은 12.3개월(범위, 7.0개월 내지 32.3개월)이었으며; 28명의 환자가 24개월 이상의 추적조사를 받았다.
중앙값 연령은 65세(범위, 38세 내지 79세)였고, 57명의 환자(84%)가 남성이었다. (표 1) 65%는 ECOG 전신활동도 점수가 0이었고, 35%는 1이었다.환자들은, IV기 질환(85%), 모세포형 또는 다형성 형태(31%), Ki-67 증식 지수 ≥30%(49명 중 40명[82%])(문헌[Wang ML et al. The Lancet Oncology 2016;17:48]), 및 TP53 돌연변이(36명 중 6명[17%])를 포함하여 기준선에서 고위험 특징이 있었다. 환자의 81%는 3회 이상의 선행 요법(중앙값, 3회[범위 1회 내지 5회])을 받았다.
[표 1]
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
모든 환자는 BTKi(이브루티닙 n=58; 아칼라브루티닙 n=16; 둘 모두 n=6)에 대해 진행되었으며, 43%는 선행 자가유래 SCT를 받았다(표 2). 가교요법을 제외한 마지막 BTKi 요법의 종결로부터 CD19 CAR-T세포 주입까지의 시간 중앙값은 88일(범위, 25일 내지 1047일)이었다. 환자의 40%는 마지막 요법 후 진행이 확인되었던 3명의 이브루티닙 불내성 환자를 포함하여 마지막 요법에 대해 불응성이었다. 25명의 환자(37%)는 이브루티닙(n=14), 아칼라브루티닙(n=5), 덱사메타손(n=12) 및/또는 메틸프레드니솔론(n=2)을 이용한 가교요법을 받았다. 가교요법 후 스캔은, 대부분의 환자가 스크리닝 시 중앙값보다 큰 종양 부담을 나타냈음을 보여주었다.
[표 2]
Figure pct00020
CD19 CAR-T로 치료받은 프로토콜 지정된 60명의 환자 중에서 최소 7개월의 추적조사로 IRRC 평가된 ORR은, 93%(95% CI, 84% 내지 98%)였으며, CR 비율은 67%였고, PR 비율은 27%였다. IRRC 평가 ORR과 시험자 평가 ORR 간에 높은 일치율(95%)이 관찰되었다(표 3).
[표 3]
Figure pct00021
모든 등록 환자(n=74)에 대한 IRRC 평가 ORR은 85%(95% CI, 75% 내지 92%)였으며, CR 비율은 59%였다. ORR은 연령, 재발된/불응성 하위군, 선행 요법의 수, MCL 형태, 병기, 림프절외 질환, 골수 침범, 단순화된 MIPI, CD19 양성, 종양 부담, 혈청 락테이트 데히드로게나아제 수준, TP53 돌연변이 상태, Ki-67 지수, AE 관리를 위한 토실리주맙 또는 스테로이드의 사용, 및 가교요법의 사용을 포함하는 주요 하위군에 걸쳐 일치하였다. 초기 반응까지의 시간 중앙값은 1.0개월(범위, 0.8개월 내지 3.1개월)이었고, CR까지의 시간 중앙값은 3.0개월(범위, 0.9개월 내지 9.3개월)이었다. 초기에 PR 또는 SD를 달성한 42명의 환자 중에서, 초기 PR 반응을 나타낸 21명과 초기 SD 반응을 나타낸 3명을 포함하는 24명의 환자(57%)는 초기 반응 후 중앙값 2.2개월(범위, 1.8개월 내지 8.3개월) 후에 CR로 전환되었으며; 이러한 24명의 환자 중 18명은 관해 상태로 남아있었다. MRD 분석은 60명의 환자 중 29명(48%)에서 수행되었으며; 29명 중 환자 중 24명(83%[19명 CR; 5명 PR])은 4주차에 MRD 음성이었고, 이용 가능한 데이터가 있는 19명의 환자 중 15명(79%)은 6개월차에 MRD 음성인 상태로 남아있었다. 방법론에 따라 필요하고, 혈중에서 시간 경과에 따라 추적되는 지배적인 재배열된 IgH(VDJ 또는 DJ), IgK 또는 IgL 수용체 유전자 서열을 확립하는 데 사용되는, 보정을 위한 포르말린 고정 파라핀 포매 종양 생검 샘플의 이용 가능성 결여로 인해, MRD는 모든 환자에서 평가할 수 없었다. CD19 CAR-T세포에 반응한 후 진행한 2명의 환자는 초기 주입 대략 1년 및 2.6년 후에 두 번째 주입을 받았으며; 이러한 환자의 분석은 진행중이다.
중앙값 12.3개월의 추적조사 후 DOR 중앙값에 도달하지 못했다(중앙값(95% CI); 도달하지 못함(8.6, NE)). 무진행 생존기간 중앙값(95% CI)에 도달하지 못했다(9.2, NE). 전체 생존기간 중앙값(95% CI)에도 도달하지 못했다(24.0, NE). 모든 환자의 57%와 CR 환자의 78%는 관해를 유지하였다. 하지만, 치료받은 처음 28명의 환자는 중앙값 27.0개월(범위; 25.3개월 내지 32.3개월)의 추적조사를 받았으며, 43%는 추가 요법 없이 관해 상태가 지속되었다. 지속 반응률은 연령, MCL 형태, 재발된/불응성 하위군, Ki-67 지수, 병기, 림프절외 질환, 골수 침범, 단순화된 MIPI, TP53 돌연변이, CD19 양성, 가교요법, 종양 부담, 및 토실리주맙 또는 스테로이드의 사용을 포함하는 주요 공변량에 걸쳐 일치하였다. 기준선에서 CD19 종양이 있었던 3명의 환자는 CR을 달성하였고, 데이터 컷오프(cutoff) 시점에서 지속적인 반응을 유지하였다. PFS 중앙값과 OS 중앙값에는 도달하지 못했고, 추정된 12개월 비율은, 각각, 61%(95% CI, 45% 내지 74%) 및 83%(95% CI, 71% 내지 91%)였다. 샘플 크기가 제한적임에도 불구하고, PFS의 하위군 분석은, 모세포형 또는 다형성 형태, TP53 돌연변이, 또는 Ki-67 지수 ≥50%을 갖는 환자들 사이에서 6개월 PFS 비율이 일치하였음을 보여주었다. 이러한 분석 시, 모든 환자의 76%는 살아있었다. 반응을 나타낸 환자 중에서, 14명은 PD를 나타냈다. PR을 나타낸 1명의 환자는 동종이계 SCT 받은 환자였다.
본 연구는, 재발된/불응성 MCL을 앓고 있는 프로토콜 지정된 60명의 환자에서 93%의 ORR을 보여주었으며, 이들은 모두 BTKi 요법 후 재발했거나 BTKi 요법에 대해 불응성이었다. 이러한 ORR에는 단일 주입 후 CR 비율 67%가 포함되었다. 중앙값 12.3개월의 추적조사 후, DOR 중앙값에 도달하지 못했으며; 모든 환자의 57%와 CR 환자의 78%는 반응을 유지하였다. CD19 CAR-T세포로 치료받은 28명의 환자는 더 긴 중앙값 27개월(범위, 25.3개월 내지 32.3개월)의 추적조사를 받았으며, 43%는 추가 요법 없이 관해 상태가 지속되었다. 지속적인 반응을 포함하는 반응률은 일반적으로 고위험 특성이 있는 환자를 포함하는 주요 하위군들 사이에서 유사하였다. Ki-67 ≥50%인 환자뿐 아니라, 모세포형/다형성 형태 또는 TP53 돌연변이를 갖는 환자는, 전체 집단과 유사한 높은 ORR 및 6개월 PFS 비율을 나타냈으며, 이는 CD19 CAR-T세포 치료가 전형적으로 더 불량한 예후를 가진 환자에게 유익했음을 시사한다.
CAR T세포 주입 후 반응을 나타낸 모든 환자는 T세포 증식을 달성하였다. 이러한 증식은 비반응성 환자에서 관찰되지 않았으며, 이는, 반응이 충분한 CAR T세포 증식과 관련이 있었음을 시사한다. 선행 연구와 유사하게, CAR T세포 수준은 처음 28일 이내에 ORR과 상관관계가 있었으며, 이는 증식이 높을수록 MRD 양성 환자에 비해 MRD 음성 환자에서 >80배 더 높은 피크/AUC CAR T세포 수준으로 지시되는 바와 같이 더 양호하고, 아마도 더 깊은 반응을 유도했음을 시사한다. 반응률 또한 가교요법이 투여되는지 여부에 관계없이 유사하였으며, 가교요법 후 스캔을 받은 대부분의 환자(87%)는 가교요법 전 스캔과 비교하여 SPD가 증가되었다.
모든 치료받은 환자는 임의의 등급의 AE를 1회 이상 경험하였으며, 3등급 이상의 AE가 99%였다(표 2). 가장 흔한 임의의 등급의 AE는 발열(94%), 호중성백혈구감소증(87%), 저혈소판증(74%) 및 빈혈(68%)이었다. 가장 흔한 3등급 이상의 AE는 호중성백혈구감소증(85%), 저혈소판증(51%), 빈혈(50%) 및 감염(32%)이었다. 환자의 26%는 CD19 CAR-T세포 후 90일 넘게 경과한 3등급 이상의 혈구감소증을 나타냈고, 이에는 호중성백혈구감소증(16%), 저혈소판증(16%) 및 빈혈(12%)이 포함되었다. CRS는 환자의 91%에서 발생하였다(표 4). CRS로 인해 사망한 환자는 없었다. 대부분의 경우 1/2등급(76%)이었으며, 3등급 이상의 CRS는 환자의 15%에서 발생하였다. 가장 흔한 3등급 이상의 CRS 증상은 저혈압(22%), 저산소증(18%) 및 발열(11%)이었다. CRS 관리를 위해, 환자의 59%는 토실리주맙을 투여받았고, 22%는 스테로이드를 투여받았고, 16%는 혈압상승제가 필요하였다. 주입 후 임의의 등급의 CRS의 발병 및 3등급 이상의 CRS의 발병까지의 시간 중앙값은, 각각, 2일(범위, 1일 내지 13일) 및 4일(범위, 1일 내지 9일)이었으며; 모든 사례는 중앙값 11일 이내에 해소되었다.
[표 4]
Figure pct00022
Figure pct00023
환자의 63%는 NE를 경험하였다(표 4). NE로 인해 사망한 환자는 없었다. 1/2등급 NE는 환자의 32%에서 발생하였고, 3등급 이상의 NE는 환자의 31%에서 발생하였다. 흔한 3등급 이상의 NE는 뇌병증(19%), 착란 상태(12%) 및 언어상실증(4%)이었다. 1명의 환자에서 4등급 뇌부종이 발생하였고, 뇌실창냄술(ventriculostomy)을 포함하는 공격적 다양식 요법으로 완전히 회복되었다. 토실리주맙 및 스테로이드가, 각각, 환자의 26% 및 38%에서 NE를 치료하는 데 사용되었다. 임의의 등급의 NE의 발병 및 3등급 이상의 NE의 발병까지의 시간 중앙값은, 각각, 7일(범위, 1일 내지 32일) 및 8일(범위, 5일 내지 24일)이었다. NE의 지속기간 중앙값은 12일이었고, 43명의 환자 중 37명(86%)에서 이러한 사례가 완전히 해소되었다. 이러한 분석에서, 4명의 환자는 1등급 떨림(n=3), 2등급 집중력 결함(n=1) 및 1등급 이상감각(n=1)을 포함하여 사례가 진행중이었다. 중증 AE는 환자의 68%에서 발생하였다(표 5).
[표 5]
Figure pct00024
환자의 32%는 3등급 이상의 감염을 경험하였다. 가장 흔한 것은 폐렴(9%)이었다(표 6).
[표 6]
Figure pct00025
2등급 거대세포바이러스 감염의 2건의 사례가 발생하였다(3%). 3등급 저감마글로불린혈증과 3등급 종양 용해 증후군은, 각각, 1명의 환자에서 발생하였다(1%). 22명의 환자(32%)는 정맥내 면역글로불린 요법을 받았다. 복제 가능 레트로바이러스, EBV 관련 림프증식, 식혈세포성 림프조직구증 또는 CD19 CAR-T세포 관련 속발성 암의 사례는 보고되지 않았다. EQ-5D 점수는 4주차에 환자가 보고한 건강 관련 삶의 질이 기준선보다 감소한 것으로 나타났지만, 이동성, 자기관리, 일상 활동 및 전반적인 건강(EQ-5D 시각적 아날로그 척도)에서의 개선이 3개월까지 관찰되었으며, 전반적인 건강은 6개월차까지 대부분의 환자에서 기준선 또는 그 이상으로 회복되었다(표 7).
[표 7]
Figure pct00026
CD19 CAR-T세포를 투여받은 16명의 환자(24%)가 사망했으며, 주로 PD(n=14 [21%])로 사망하였다. 조건화 화학요법과 관련된 기질성 폐렴 환자 1명과, 조건화 화학요법 및 CD19 CAR-T세포 치료와 관련된 포도구균혈증 환자 1명을 포함하여, 2명의 환자가 5등급 AE(3%)를 나타냈다.
피크 항-CD19 CAR T세포 수준까지의 시간 중앙값은 CD19 CAR-T세포 주입 후 15일(범위, 8일 내지 31일)이었고, 정상 B세포 수준 중앙값 존재 하에 데이터 컷오프 시점에서 평가 가능한 샘플이 있는 일부 환자(10명 중 6명[60%])에서는 24개월차에도 세포가 여전히 검출 가능하였다. qPCR로 측정된 시간 경과에 따른 혈중 CAR T세포 존속은, 반응이 지속적인 환자와 재발한 환자에서 시간 경과에 따라 감소하는 것으로 나타났다.
신속한 증식, 기준선으로의 분해 및 시간 경과에 따른 제거는 CD28 및 CD3ζ 공동자극 도메인을 보유하는 항-CD19 CAR T세포의 알려진 작용 메커니즘과 일치한다. CD19 CAR-T세포 치료에 대해 반응하지 않은 4명의 환자는 모두 기준선에서 검출 가능한 B세포를 가지고 있었으며; 연구의 어느 시점에서도 B세포 무형성을 경험한 환자는 없었다. 기준선 종양 부담과 관련이 없었지만, 증식은 반응과 관련이 있었으며(P=0.0036), 곡선하면적(AUC)과 피크는 비반응자에 비해 반응자에서 200배 초과로 더 높았고, 4주차에 MRD 음성 환자와 MRD 양성 환자 사이에서는 유사한 경향을 나타냈다. CRS와 NE 둘 모두에서, 증식은 2등급 이하의 사례가 나타난 환자에 비해 3등급 이상의 사례가 나타난 환자에서 더 컸으며, 최고 피크 및 AUC는 CD19 CAR-T세포 주입 후 토실리주맙 ± 스테로이드를 투여받았던 환자에서 나타났다. 평가된 사이토카인의 피크까지의 시간 중앙값은 8일이었고; 대부분은 28일 이내에 기준선 수준으로 해소되었다. 혈청 과립구 대식세포 집락자극인자와 인터류킨(IL)-6은 3등급 이상의 CRS 및 NE와 관련이 있었다. 혈청 페리틴은 3등급 이상의 CRS에 대해서만 관련이 있었지만, 혈청 IL-2와 인터페론-γ는 3등급 이상의 NE에 대해서만 관련이 있었다. 또한, 뇌척수액 사이토카인 분석을 통해 3등급 이상의 NE를 나타낸 환자에서 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및 혈관 세포 부착 분자 1의 수준이 더 높다는 것이 밝혀졌다. 항-CAR 항체의 유도는 어떠한 환자에서도 관찰되지 않았다.
3등급 이상의 CRS 및 NE의 비율은 공격성 NHL에서 항-CD19 CAR T세포 요법에 대해 이전에 보고된 바와 유사하였다. 문헌[Neelapu SS et al. The New England journal of medicine 2017;377:2531]; 문헌[Schuster SJ et al. The New England journal of medicine 2019;380:45]. CRS 또는 NE로 인한 사망은 없었으며, 대부분의 증상은 치료 초기에 발생하였고, 일반적으로 가역적이었으며, 일상 생활에 지장을 주는 장기 임상 후유증은 없었다. 피크 혈청 사이토카인과 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 신경학적 사례 사이에서 관찰된 관련성은, 이것이 혈중 CAR T세포의 증가 및 피크 수준에 비례하여 관찰되었다는 점을 고려할 때, 이러한 독성에서 CD19 CAR-T세포의 역할을 시사한다. CAR의 피크 수준과, 골수세포 관련 혈청 사이토카인, 케모카인 및 독성이 있는 이펙터 분자 사이의 관련성은, NHL 설정에서 유사한 CAR 구조체를 사용한 이전에 공개된 데이터와 일치한다.10,13 4등급 뇌부종의 한 사례가 발생하였으나, 이러한 환자는 완전히 회복되었고, 해소되지 않은 신경학적 후유증 없이 24개월 추적조사에서 CR 상태를 유지하였다. 환자자기평가결과도 유사하게 CD19 CAR-T세포 요법 후 장기 삶의 질 결함이 없음을 시사한다.
실시예 3
본 실시예는 상기 기재된 연구에 대한 추가의 분석을 제공한다. 적격한 R/R MCL 환자(18세 이상)는 ECOG 점수가 0 내지 1이고, 화학요법, 항-CD20 항체 및 BTKi를 포함하여 5회 이하의 선행 요법을 받았다. 환자는 백혈구성분채집술과 조건화 화학요법(-5일차, -4일차, -3일차의 3일 동안 시클로포스파미드 1일 300 mg/m2 및 플루다라빈 1일 30 mg/m2)을 받은 후, 0일차에 단일 IV 주입을 통해 2 × 106개의 CAR T세포/㎏의 목표 용량으로 CD19 CAR-T세포의 단일 주입을 받았다. CD19 CAR 구조체는 CD3ζ T세포 활성화 도메인과 CD28 신호전달 도메인을 함유한다. 제조 공정은 백혈구성분채집술 생성물에서 순환하는 CD19 발현 백혈병 세포를 제거하였다. 문헌[Sabatino M, et al. Blood 2016;128:1227].
일부 환자는 덱사메타손(1일 내지 4일 동안 매일 20 mg 내지 40 mg, 또는 등가량, PO 또는 IV), 이브루티닙(매일 560 mg PO) 또는 아칼라브루티닙(1일 2회 100 mg PO)을 이용한 가교요법을 받았으며, 이는 백혈구성분채집술 후 투여되어 조건화 화학요법의 개시 전 5일 이내에 완료되었고; 가교요법 후 PET-CT가 필요하였다. 1차 평가변수는 객관적 반응률(ORR[완전 반응(CR) + 부분 반응])이었다. 주요 2차 평가변수는 반응 지속기간(DOR), 무진행 생존기간(PFS), OS, 이상사례(AE) 빈도, 혈중 CAR T세포 수준 및 혈청 내 사이토카인 수준이었다. 효능 및 안전성 분석에는 CD19 CAR-T세포 요법을 받은 모든 환자가 포함되었다.
주요 포함 기준에는, 마지막 요법 후 질환 진행, 또는 마지막 요법에 대해 CR 또는 PR을 나타내지 못하는 것으로 정의된 R/R MCL; 안트라시클린 또는 벤다무스틴 함유 화학요법, 및 항-CD20 단클론 항체 요법, 및 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙을 포함해야 하는 1회 내지 5회의 선행 요법; 하나 이상의 측정 가능한 병변; 18세 이상의 연령; ECOG 0 또는 1; 및 적절한 골수, 신장, 간, 폐 및 심장 기능이 포함되었다. 주요 배제 기준에는, 선행 자가유래 줄기세포 이식(alloSCT); 선행 CD19 표적화 요법; 선행 CAR T세포 요법; 임상적으로 관련된 감염; 및 MCL 또는 다른 CNS 장애로 인한 CNS 침범의 병력 또는 현재 CNS 침범이 포함되었다.
총 68명의 환자가 CD19 CAR-T세포 요법을 받았다. 여기에 업데이트된 안전성(68명의 환자) 및 효능(60명의 환자) 결과가 제시되어 있으며, 추적조사 기간 중앙값은 12.3개월[범위, 7.0개월 내지 32.3개월]이었다. 총 28명의 환자(47%)는 24개월 이상의 추적조사를 받았다. 초기 반응까지의 시간 중앙값은 1.0개월[범위, 0.8개월 내지 3.1개월]이었고, 완전 반응까지의 시간 중앙값은 3.0개월[범위, 0.9개월 내지 9.3개월]이었다. 총 24명의 환자(40%)가 PR/SD에서 CR로 전환되었으며, 21명(35%)은 PR에서 Cr로 전환되었고, 3명의 환자(5%)는 SD에서 CR로 전환되었다.
중앙값 연령은 65세(범위, 38세 내지 79세)였고, 39명(57%)의 환자는 남성이었다. 환자의 100%는 ECOG 점수가 0/1이었고, 25%는 모세포형 형태를 나타냈고, 85%는 IV기 질환이었고, 56%는 중간/고위험 MIPI였고, 81%는 3회 이상의 선행 요법을 받았으며, 중앙값은 3회(범위, 1회 내지 5회) 선행 요법이었고, 99%는 이전에 안트라시클린 또는 벤다무스틴을 투여받았고, 100%는 이전에 항-CD20 단클론 항체를 투여받았고, 100%는 이전에 BTKi(85% 이브루티닙, 24% 아칼라브루티닙 및 9% 둘 모두)를 투여받았다. 환자의 43%는 자가 SCT 후 재발되었고, 56%는 이브루티닙에 대해 불응성이었고, 12%는 아칼라브루티닙에 대해 불응성이었다. 이용 가능한 데이터가 있는 49명의 환자 중 34명에서, Ki-67 지수는 50% 이상이었다. 25명의 환자(37%)는 가교요법(21% 이브루티닙, 7% 아칼라브루티닙, 18% 덱사메타손, 3% 메틸프레드니솔론, 9% BTKi와 스테로이드 둘 모두, 6% 이브루티닙과 스테로이드, 3% 아칼라브루티닙과 스테로이드)을 받았고; 25명의 환자 중 23명은 CD19 CAR-T세포 주입 전 측정 가능한 질환을 문서화하기 위해 가교 후 PET-CT를 받았다(23명 중 20명은 스크리닝 이후 SPD ㎟의 증가를 나타냈고; 23명 중 3명은 스크리닝 이후 SPD ㎟의 약간 감소를 나타냈음).
효능 평가 가능한 환자와 ITT 환자 모두에서 높은 ORR이 관찰되었다. ORR에 대해 95% 일치하였고; CR에 대해 90% 일치하였다. 60명의 효능 평가 가능한 환자에서 시험자 평가 ORR은 88%(95% CI, 77% 내지 95%)였고, CR 비율은 70%(95% CI, 57% 내지 81%)였고, PR 비율은 18%(95% CI, 10% 내지 30%)였다. 60명의 효능 평가 가능한 환자에서 IRRC 평가에 의한 ORR은 93%(95% CI, 84% 내지 98%)였고, CR 비율은 67%(95% CI, 53% 내지 78%)였고, PR 비율은 27%(95% CI, 16% 내지 40%)였다. ORR은 주요 하위군(연령, MCL 형태, Ki-67 지수, 병기, 단순화된 MIPI, AE 관리를 위한 스테로이드 사용, 토실리주맙 사용 및 가교요법 사용)에 걸쳐 일치하였다. ITT 환자에서 시험자 평가 ORR은 80%(95% CI, 69% 내지 88%)였고, CR 비율은 59%(95% CI, 47% 내지 71%)였고, PR 비율은 20%(95% CI, 12% 내지 31%)였다. ITT 환자에서 IRRC 평가에 의한 ORR은 85%(95% CI, 75% 내지 92%)였고, CR 비율은 59%(95% CI, 47% 내지 71%)였고, PR 비율은 26%(95% CI, 16% 내지 37%)였다.
중앙값 12.3개월의 추적조사 후 DOR 중앙값에 도달하지 못했다. 모든 환자의 57%와 CR 환자의 78%는 관해를 유지하였다. 치료받은 처음 28명의 환자는 중앙값 27.0개월(범위, 25.3개월 내지 32.3개월)의 추적조사를 받았고, 이 중 43%는 추가 요법 없이 지속적인 관해를 유지하였다. 중앙값 12.3개월의 추적조사 후 PFS 중앙값과 OS 중앙값에 도달하지 못했다. 12개월 PFS 비율(95% CI)은 61%(45% 내지 74%)였다. 12개월 OS 비율(95% CI)은 83%(71% 내지 91%)였다.
환자의 35% 초과는 치료로 인한 응급 이상사례를 나타냈다(0% 1등급; 1% 2등급; 16% 3등급; 76% 4등급 및 3% 5등급). 가장 흔한 3등급 이상의 AE(환자의 20% 이상)는 호중성백혈구감소증(69%, 4등급), 저혈소판증(35%, 4등급), 빈혈(50%, 3등급), 저인산혈증(22%, 3등급)이었다. 사이토카인 방출 증후군(CRS)으로 인해 사망한 환자는 없었다. 문헌[Lee DW, et al. Blood. 2014, 124:188]에 따라 평가된 3등급 이상의 CRS는 환자의 15%에서 보고되었다. 임의의 등급의 CRS의 가장 흔한 증상은 저혈압(51%), 저산소증(34%) 및 발열(91%)이었다. 이상사례 관리에는 토실리주맙(59%)과 코르티코스테로이드(22%)가 포함되었다. 발병까지의 시간 중앙값은 2일(범위, 1일 내지 13일)이었고, 지속기간 중앙값은 11일이었고, 임의의 등급의 CRS를 나타낸 62명의 환자 중 62명(100%)은 사례가 해소되었다.
임의의 등급의 신경학적 사례(NE)가 환자의 63%에서 보고되었으며(31%는 3등급 이상의 NE였음), 이에는 뇌병증(31%), 착란 상태(21%) 및 떨림(35%)이 포함되었다. 신경학적 사례로 인해 사망한 환자는 없었다. 1명의 환자는 4등급 뇌부종을 나타냈는데, 이는 뇌실창냄술과 IV 토끼 항흉선세포 글로불린(ATG)을 포함하는 공격적 다양식 요법으로 완전히 해소되었다. 모든 CRS 사례 및 대부분의 NE(43명의 환자 중 37명)는 가역적이었다. NE 발병까지의 시간 중앙값 및 NE 지속기간 중앙값은, 각각, 7일(범위, 1일 내지 32일) 및 12일이었다.
CAR T세포의 더 높은 피크 수준은 비반응자보다 반응자와 관련이 있었다(객관적 반응). CAR T세포의 더 높은 피크 수준은 4주차에 양성 MRD보다 음성 MRD와 관련이 있었다. CD19 CAR-T세포 주입 후 피크 항-CD19 CAR T세포 수준까지의 시간 중앙값은 15일(범위, 8일 내지 31일)이었다. 항-CD19 CAR T세포는 평가 가능한 샘플이 있는 대부분의 환자(10명 중 6명[60%])에서 24개월차에 검출 가능하였다. 증식은 반응 및 MRD 상태와 관련이 있었다. 증식은 2등급 이하의 CRS 및 신경학적 사례가 나타난 환자에 비해 3등급 이상의 CRS 및 신경학적 사례가 나타난 환자에서 더 컸다.
피크 혈청 바이오마커 수준과 독성 사이에서 몇 가지 관련성이 관찰되었다. 3등급 이상의 CRS와 관련된 분석물에는, IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및 퍼포린이 포함되었다. 3등급 이상의 신경학적 사례와 관련된 분석물에는, IL-2, IL-1 Ra, IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-12p40, IFN-γ, IL-10, MCP-4, MIP-1b 및 그랜자임 B가 포함되었다. 3등급 이상의 CRS 및 신경학적 사례 둘 모두와 관련된 분석물에는, IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B가 포함되었다.
단일 주입으로 투여된 본원에 기재된 CD19 CAR-T세포 치료는 R/R MCL에서 높은 비율의 지속적인 반응을 나타냈다. 67% CR 비율을 포함한 93% ORR은, 선행 BTKi가 실패한 환자에서 보고된 가장 높은 질환 제어율이다. 초기 치료받은 28명의 환자 중에서, 43%가 24개월 이상의 추적조사 후 관해를 유지하였다. 안전성 프로파일은 공격성 NHL에서 항-CD19 CAR T세포 요법의 이전 연구에 보고된 바와 일치한다. CRS 또는 신경학적 사례로 인한 사망은 없었으며; 대부분의 증상은 치료 초기에 발생하였고, 일반적으로 가역적이었다. 효능, 신뢰할 수 있는 신속한 제조, 및 관리 가능한 독성은, 충족되지 않은 의학적 요구가 있는 R/R MCL 환자를 치료하는 데 있어 본원에 기재된 CD19 CAR-T세포 치료의 역할을 확인시켜 준다.
실시예 4
본 실시예는 상기 기재된 임상 연구에 대한 추가의 분석을 제공한다.적격한 환자는 시클린 D1 과발현 또는 t(11;14)의 존재에 대한 문서화를 통해 병리학적으로 확인된 MCL을 갖는 18세 이상이었으며, MCL에 대한 1회 내지 5회의 선행 요법에 대해 재발/불응성이었다. 선행 요법에는 안트라시클린 또는 벤다무스틴 함유 화학요법, 항-CD20 단클론 항체, 및 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙이 포함되어 있어야 했다. 모든 환자는 사전에 BTKi를 투여받았다. 환자는 선행 BTKi 요법을 받은 적이 있어야 하지만, 이것이 연구 시작 전 마지막 회차의 요법일 필요는 없었으며, 환자가 BTKi 요법에 대해 불응성일 필요도 없었다. 적격한 환자의 절대 림프구 수는 100/μL 이상이었다. 6주간의 CD19 CAR-T 주입 이내에 자가유래 SCT를 받았거나, 이전에 CD19 표적화 요법 또는 동종이계 SCT를 받았던 환자는 배제시켰다. 모든 환자는 CD19 CAR-T세포 치료제 제조용 세포를 얻기 위해 백혈구성분채집술을 받았다. 환자는 덱사메타손(1일 내지 4일 동안 매일 20 mg 내지 40 mg, 또는 등가량, PO 또는 IV), 이브루티닙(매일 경구로(PO) 560 mg) 또는 아칼라브루티닙(1일 2회 100 mg PO)을 포함하는 선택적 가교요법을 받았다. CD4+/CD8+ 세포의 양성 농축을 통해 순환 림프종 세포를 제거하기 위해 악시캅타진 실로류셀의 제조 공정과 비교하여 제조 공정을 변형시켰다. 이러한 생성물은 본원에서 "CAR T세포"로 지칭된다. 이러한 생성물은 또한 KTE-X19로도 식별될 수 있다. 0일차에 2 × 106개의 CAR T세포/㎏로 CD19 CAR-T세포를 단일 정맥내 주입하기 전, -5일차, -4일차 및 -3일차에 플루다라빈(1일 30 mg/m2) 및 시클로포스파미드(1일 500 mg/m2)를 이용한 조건화 화학요법을 투여하였다. 환자 치료에 대한 보다 상세한 사항은 실시예 2에서 확인할 수 있다.
본 연구의 목표는 2가지였다. 첫 번째로, TP53(종양 단백질 p53) 유전자 돌연변이 상태와 Ki-67 종양 증식 지수로 정의되는, 임상 시험 ZUMA-2의 저위험 및 고위험 환자에서 CAR T 생성물의 약리학적 프로파일을 비교하는 것이었다. 종양 단백질 p53 유전자(TP53) 돌연변이와 높은 Ki-67 증식 지수를 포함하여 고위험 MCL 특징을 갖는 환자는, 전형적으로 현재 표준 요법을 이용한 경우 불량한 예후를 보인다. 문헌[Cheah CY, et al. J Clin Oncol. 2016;34:1256-1269]. 이러한 분석에서 저위험 환자는 Ki-67 증식 지수가 50% 미만(중앙 평가를 통해 확인)이었거나 야생형 TP53을 가지고 있었으며; 고위험 환자는 Ki-67가 50% 이상이었거나 TP53 돌연변이(차세대 시퀀싱을 통해 확인)를 가지고 있었다. ZUMA-2(N =60)의 1차 효능 분석에서, ORR은 중앙값 12.3개월의 추적조사 후 93%(67% CR)였다. 모든 환자의 57%와 CR 환자의 78%는 지속적인 반응을 나타냈다. ORR은 일반적으로 50% 미만의 Ki-67 증식 지수 또는 50% 이상의 Ki-67 증식 지수, 및 돌연변이되지 않은 TP53과 돌연변이된 TP53을 갖는 환자를 포함하는, ZUMA-2의 저위험 환자와 고위험 환자 사이에서 비슷하였다. 문헌[Wang M, et al. New Engl J Med. 2020;382:1331-1342].
두 번째 목표는, 최소 잔류 질환(MRD) 음성 상태를 조기에(28일차)에 달성하고 4등급 신경독성을 나타낸 환자에서 약력학적 프로파일을 특징분석하는 것이었다. ZUMA-2 결과의 이전 분석에서, 0일차 내지 28일차에서의 피크 및 곡선하면적(AUC)에 따른 혈중 CAR T세포 수준은 ORR(검출 가능하지 않은 MRD 포함)과, 3등급 이상의 CRS 및 신경학적 사례와 관련이 있었다. 문헌[Wang M, et al. New Engl J Med. 2020;382:1331-1342]. 이러한 분석에서, CRS와 신경학적 사례는 대부분 가역적이었으며(N = 68명의 치료받은 환자): 15%는 3등급 이상의 CRS를 나타냈고; 31%는 3등급 이상의 신경학적 사례를 나타냈고; 2명은 5등급 AE(이 중 1명은 CAR T 생성물 관련이었음)를 나타냈다. MRD(10-5 민감도)는 이전에 보고된 바와 같이 차세대 시퀀싱을 통해 평가하였다. 문헌[Wang M, et al. New Engl J Med. 2020;382:1331-1342].
이러한 업데이트는 ZUMA-2에서 치료받은 모든 68명의 환자에 대한 약리학적 데이터를 보고하며, 여기서 CAR T세포 생성물 속성, 혈중 CAR T세포 수준 및 혈청 내 사이토카인 수준, 및 임상 결과와의 관련성은 이전에 기재된 방법을 사용하여 분석하였다. 문헌[Locke FL, et al. Mol Ther. 2017;25:285-295]. 윌콕슨 순위합 검정을 사용하여 하위군 결과와, CAR T세포 및 사이토카인 수준 사이의 관련성을 측정하였다. P값은 다중 검정에 대해 조정되지 않았다.
CAR T세포 생성물 속성은 일반적으로 Ki-67 증식 지수 및 TP53 돌연변이 상태로 정의되는 예후군에 걸쳐 비슷하였다. 고 Ki-67 하위군에서는 더 분화된 표현형이 나타나고, TP53 돌연변이를 갖는 환자에서는 CD4 기반 표현형이 나타나는 경향이 있었다. (표 8).
[표 8]
Figure pct00027
또한, Ki-67 증식 지수와 TP53 돌연변이 상태로 정의되는 상이한 예후 인자를 갖는 군에서 CAR T세포 증식이 비슷하였다. 투여 후 혈중 CAR T세포의 피크 수준과 AUC는 야생형 대 돌연변이된 TP53을 갖거나, Ki-67 증식 지수가 <50% 대 ≥50%인 환자에서 비슷하였으며, 이는 이들 하위군에서의 비슷한 효능과 일치하였다. 환자에서 객관적 반응률(ORR)의 1차 평가변수는 표 9에 제시되어 있다. 반응까지의 시간 중앙값은 28일(범위: 24일 내지 92일)이었고, 추적조사 기간 중앙값은 12.3개월이었다. 28명의 환자는 24개월 이상의 잠재적인 추적조사를 받았고, 이러한 환자 중 12명은 관해를 유지하였다. 효능은 완전 반응과 반응 지속기간(DOR)을 기반으로 확립하였다.
ORR은 Ki-67 증식 지수가 <50% 대 ≥50%인 환자에서 100% 대 94%였지만, CR 비율은 Ki-67 증식 지수가 <50% 대 ≥50%인 환자에서 64% 대 78%였다. 표 9. Ki-67 증식 지수에 대해 이용 가능한 데이터가 있는 환자의 수는 49명이었다.
[표 9]
Figure pct00028
ORR은 야생형 TP53과 돌연변이된 TP53을 갖는 환자 모두에서 100%였지만, CR 비율은 야생형 TP53을 갖는 환자 대 돌연변이된 TP53을 갖는 환자에서 67% 대 100%였다. 표 10. TP53에 대해 이용 가능한 데이터가 있는 환자의 수는 36명이었다. TP53 돌연변이가 있는 6명의 환자 모두와 돌연변이가 없는 30명의 환자 모두 반응하였다. TP53 돌연변이가 있는 6명의 환자 중에서, 3명은 3등급 이상의 신경독성을 나타냈고, 2명은 3등급 이상의 CRS를 나타냈다.
[표 10]
Figure pct00029
IL(인터류킨); INF-γ(인터페론 감마), MCP-1(단핵구 화학주성 단백질-1), IL-2Rα(IL-2 수용체 알파), sPD-L1(가용성 세포 예정사 리간드 1) 및 sVCAM(가용성 혈관 세포 부착 분자)를 포함하는 혈청 내 최대 44개의 바이오마커를, 치료전, 0일차, 및 CAR T세포 주입 후 28일까지의 다양한 시점에서 측정하였다. Ki-67 증식 지수가 <50% 대 ≥50%인 2가지 예후군에 대한 약력학적 프로파일은, 증식성(IL-15, IL-2), 염증성(IL-6, IL-2Rα, sPD-L1 및 VCAM-1), 면역조절성(IFN-γ, IL-10), 케모카인(IL-8 및 MCP-1) 및 이펙터 사이토카인(그랜자임 B)에 대해 비슷하였다. 또한, 야생형 TP53을 갖는 환자에 비해 돌연변이된 TP53을 갖는 환자에서 증식성(IL-15, IL-2) 및 염증성(IL-6, IL-2Rα, sPD-L1 및 VCAM-1) 사이토카인 수준이 증가하는 경향이 있었다. 도 1a 내지 도 1f.
MRD 음성 상태가 달성된 환자에서 혈청 내 선택된 사이토카인의 피크 수준도 증가하였다. MRD는 68명의 환자 중 29명(43%)에서 분석하였고; 이러한 환자 중 24명(83%[완전 반응을 나타낸 19명의 환자와 부분 반응을 나타낸 5명의 환자])은 CAR T세포 투여 후 1개월차에 MRD 음성이었다. CAR T세포 투여 후 1개월차에, 인터페론(IFN)-γ와 인터류킨(IL)-6의 피크 수준 중앙값이 양성 환자(n = 5/29)에 비해 MRD 음성 환자(n = 24/29)에서 증가했으며, IL-2가 증가하는 경향이 있었다. 혈청 내 사이토카인 수준은 치료 7일 이내에 피크에 도달하였다. PD-L1과 그랜자임 B에 대해서도 일관된 경향이 나타났다. 치료 후 14일 이내에 측정된 증가된 피크 CAR T세포 수준은, 1개월차에 MRD 음성이었던 환자에서도 확인하였다. 도 2a 내지 도 2i.
6명의 환자가 4등급 신경학적 사례를 나타냈으며, 이 중 1명은 뇌부종이었다. 3명의 환자는 동시에 4등급 CRS를 나타냈다. 4등급 신경학적 사례가 나타난 환자는, 신경학적 사례가 나타나지 않은 환자와 비교하여 전염증성 혈청 바이오마커(예를 들어, IFNγ, MCP-1, TNF-α, IL-2 및 IL-6)의 피크 수준이 증가한 것으로 나타났다.
뇌부종은 공격적 다양식 요법 후 완전히 해소되었다. 문헌[Wang M, et al. New Engl J Med. 2020;382:1331-1342]. 이러한 환자에서 CAR T세포의 증식과 IL-2의 피크 혈청 수준이 가장 높았으며; 다중 사이토카인의 증가는 다른 연구/ZUMA-2 환자에서의 중앙값과 비교하여 이러한 환자에서 몇배 더 높았다. 표 11.
[표 11]
Figure pct00030
CAR T세포 약동학적 및 약력학적 프로파일은 저위험 및 고위험과 관련된 상이한 예후 마커 상태(Ki-67 및 돌연변이된 TP53으로 정의됨)를 갖는 MCL 환자 군에 걸쳐 비슷하였으며, 이는 비슷한 임상 반응률과 일치하였다. 돌연변이된 TP53을 갖는 환자에서 전염증 마커의 수준이 더 높은 경향이 있었다.
CAR T세포 투여의 약력학적 프로파일은 효능(1개월차 MRD 상태) 및 4등급의 치료로 인한 응급 신경학적 사례와 관련이 있었다. 뇌부종이 발생한 환자는 치료후 최고 피크 CAR T세포 수준 및 혈청 IL-2뿐 아니라, 상승된 전염증 마커를 나타냈다.
실시예 5
1회 이상의 선행 치료(이에는 항-CD20 항체, 안트라시클린 또는 벤다무스틴 함유 화학요법, 및/또는 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙과 같은 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTKi)가 포함될 수 있음)를 받았던 재발된 또는 불응성 외투세포림프종(MCL) 환자를 치료하는 CD19 지향 유전자 변형된 자가유래 T세포 면역요법에 대한 2상 단일군 임상 연구를 수행하였다. 적격한 환자는 또한 마지막 치료 후 질환이 진행되었거나, 가장 최근의 치료에 대해 불응성 질환이 있었다. 본 연구에서 활동성 또는 중증 감염, 선행 동종이계 조혈줄기세포 이식(HSCT), 검출 가능한 뇌척수액 악성 세포 또는 뇌 전이, 및 중추신경계(CNS) 림프종 또는 CNS 장애의 임의의 병력이 있는 환자는 배제시켰다.
환자의 말초혈액 단핵세포는 백혈구성분채집술 절차를 통해 수득하였다. 단핵세포를 CD4+ 세포와 CD8+ 세포에 대한 선택에 의해 T세포에 대해 농축시키고, IL-2 존재 하에서 항-CD3 항체와 항-CD28 항체로 활성화시킨 후, 항-CD19 단일 사슬 가변 단편(scFv), CD28 및 CD3-제타 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)인 FMC63-28Z CAR을 함유하는 복제 불능 바이러스 벡터를 이용하여 형질을 도입하였다. 임의의 가설에 구애됨 없이, CD4+ 세포와 CD8+ 세포에 대한 선택은 생체외 제조 공정 동안 포함되게 되는 환자의 백혈구성분채집술 물질 내 잠재적인 순환 CD19 발현 종양세포를 감소시킬 수 있었다. 이러한 공정의 T세포 생성물은 KTE-X19로 식별될 수 있다. 항-CD19 CAR T세포를 증식시키고, 세척하고, 현탁액으로 제형화하고, 저온 보관하였다. 항-CD19 CAR T세포 요법을 받기 전, 환자는, CAR T세포 주입 전 5일차, 4일차 및 3일차에 각각, 시클로포스파미드 정맥내 500 mg/m2 및 플루다라빈 정맥내 30 mg/m2의 림프구제거 화학요법으로 치료받았고; 환자는 또한 항-CD19 CAR T세포 주입 대략 30분 내지 60분 전에 아세트아미노펜과 디펜히드라민 또는 또 다른 H1-항히스타민을 투여받을 수 있었다. 전신 코르티코스테로이드의 예방적 사용은, 이것이 CAR T세포의 활성을 방해할 수 있기 때문에 회피하였다.
목표 용량은 체중 1 ㎏ 당, 2×106개의 CAR 양성 생존 T세포 또는 항-CD19 CAR T세포였으며, 최대 용량은 2×108개의 항-CD19 CAR T세포(100 ㎏ 이상 환자의 경우)였다. 68명의 환자는 항-CD19 CAR T세포의 단일 주입(대략 30분 동안 중력 또는 연동 펌프를 통해)을 받았고, 이러한 환자 중 60명은 4주차 질환 평가 후 적어도 6개월 동안 추적조사를 받아 효능 평가 가능한 것으로 자격을 부여받았다. 56명의 환자는 2×106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏를 투여받았고; 1명의 환자는 1×106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 용량을 투여받았고, 1명의 환자는 1.6×106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 용량을 투여받았고, 2명의 환자는 1.8×106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 용량을 투여받았고, 2명의 환자는 1.9×106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 용량을 투여받았다. 이들 60명의 환자 중에서, 중앙값 연령은 65세(범위: 38세 내지 79세)였고, 51명은 남성이었으며, 56명은 백인이었다. 50명의 환자는 IV기 질환을 나타냈다. 단순화된 외투세포림프종 국제 예후 인자(simplified Mantle Cell Lymphoma International Prognostic Index, s-MIPI)에 기반하여, 25명의 환자는 저위험으로 분류하고, 25명의 환자는 중간위험으로 분류하고, 8명의 환자는 고위험으로 분류하고, 2명의 환자는 미지 위험 상태로 분류하였다. 20명의 환자는 프로토콜에 따라 수행된 기준선 골수 검사를 받았으며; 이 중 10명의 환자는 음성이었고, 8명은 양성이었고, 2명은 뚜렷하지 않았다. 모든 60명의 효능 평가 가능한 환자에서 선행 요법의 수 중앙값은 3(범위: 2 내지 5)이었다. 26명의 환자는 자가유래 HSCT 후 재발되었거나, 자가유래 HSCT에 대해 불응성이었다. 21명의 환자는 MCL에 대한 마지막 요법 후 재발되었으며, 36명의 환자는 MCL에 대한 마지막 요법에 대해 불응성이었다. 14명의 환자는 모세포형 MCL을 나타냈다. 백혈구성분채집술 후 및 항-CD19 CAR T세포의 주입 전, 21명의 환자는 가교요법을 받았다. 19명은 BTKi로 치료받았고, 14명의 환자는 코르티코스테로이드로 치료받았고, 6명의 환자는 BTKi와 코르티코스테로이드 둘 모두로 치료받았다. 53명의 환자는 시클로포스파미드 정맥내 500 mg/m2 및 플루다라빈 정맥내 30 mg/m2의 림프구제거 화학요법을 받았고, 두 가지는 모두 항-CD19 CAR T 요법(0일차) 전 5일차, 4일차 및 3일차에 각각 제공되었다. 남은 7명의 환자는 CAR T 요법 전 4일 이상에 걸쳐 동일한 투여량의 림프구제거 화학요법을 받았다. 환자에서 객관적 반응률(ORR)의 1차 평가변수는 표 12에 제시되어 있다. 반응까지의 시간 중앙값은 28일(범위: 24일 내지 92일)이었고, 추적조사 기간 중앙값은 12.3개월이었다. 28명의 환자는 24개월 이상의 잠재적인 추적조사를 받았고, 이러한 환자 중 12명은 관해를 유지하였다. 효능은 완전 반응과 반응 지속기간(DOR)을 기반으로 확립하였다.
[표 12]
Figure pct00031
CRS(사이토카인 방출 증후군)는 82명의 환자 중 75명에서 관찰되었으며, 82명의 환자 중 15명은 3등급 이상(Lee 등급화 시스템(Lee grading system) 1)의 CRS였다. CRS 발병까지의 시간 중앙값은 3일(범위: 1일 내지 13일)이었고, CRS 지속기간 중앙값은 10일(범위: 1일 내지 50일)이었다. CRS 환자 중에서, 주요 증상(즉, 환자의 10% 초과에서 발생한 증상)에는, 발열(환자의 99%), 저혈압(환자의 60%), 저산소증(환자의 37%), 오한(환자의 33%), 빈맥(환자의 37%), 두통(환자의 24%), 피로(환자의 19%), 구역(환자의 13%), 알라닌 아미노트랜스퍼라아제 증가(환자의 13%), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라아제 증가(환자의 12%) 및 설사(환자의 11%)가 포함되었다. CRS와 관련된 중증 사례에는, 저혈압, 발열, 저산소증, 급성 신손상 및 빈맥이 포함되었다. CRS에 대한 반응으로, 환자는 표 13의 지시에 따라 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드를 투여받을 수 있었다.
[표 13]
Figure pct00032
신경학적 사례는 53명의 환자에서 관찰되었으며, 이 중 20명은 3등급 이상(중증 또는 생명 위협) 이상반응을 경험하였다. 신경학적 사례의 발병까지의 시간 중앙값은 6일(범위: 1일 내지 32일)이었다. 신경학적 사례는 66명의 환자 중 52명에 대해 해소되었으며, 지속기간 중앙값은 21일(범위: 2일 내지 454일)이었다. 3명의 환자는 사망 시 신경학적 사례가 진행중이었고, 이 중 1명의 환자는 중증 뇌병증이었다. 나머지 해소되지 않은 신경학적 사례는 1등급 또는 2등급이었다. 54명의 환자는 신경학적 사례의 발병 시까지 CRS를 경험하였다. 5명의 환자는 CRS와 신경학적 사례를 함께 경험하지 않았으며, 8명의 환자에서는 CRS의 해소 후 신경학적 사례가 발병하였다. 56명의 환자는 항-CD19 CAR T세포 주입 후 7일 이내에 첫 번째 CRS 또는 신경학적 사례를 경험하였다.
가장 흔한 신경학적 사례(환자의 10% 초과에서 발생함)에는, 뇌병증(환자의 51%), 두통 (환자의 35%), 떨림 (환자의 38%), 언어상실증(환자의 23%) 및 섬망(환자의 16%)이 포함되었다. 뇌병증, 언어상실증 및 발작을 포함하는 중증 사례가 치료 후에 발생하였다. 치료받은 환자의 적어도 10%에서 관찰된 일부 이상반응에는, 하기가 포함되어 있었다: 혈액 및 림프계 장애(응고병증, 심장 장애, 빈맥, 서맥, 비심실부정맥); 위장관 장애(구역, 변비, 설사, 복통, 구강 통증, 구토, 연하곤란); 일반 장애 및 투여 부위 병태(발열, 피로, 오한, 부종, 통증); 면역계 장애(사이토카인 방출 증후군, 저감마글로불린혈증); 감염 및 침습(병원체 미상 감염, 바이러스 감염, 박테리아 감염); 대사 및 영양 장애(식욕 감소), 근골격계 및 결합조직 장애(근골격계 통증, 운동 기능장애); 신경계 장애(뇌병증, 떨림; 두통, 언어상실증, 어지럼증, 신경병증); 정신과 장애(불면증, 섬망, 불안); 신장 및 비뇨기 장애(신기능부전, 소변량 감소); 호흡기, 흉부 및 종격동 장애(저산소증, 기침, 호흡곤란, 흉막삼출); 피부 및 피하조직 장애(발진); 및 혈관 장애(저혈압, 고혈압, 혈전증). 2등급 이상의 신경학적 독성을 경험한 환자는 표 14에 제시된 지시에 따라 치료를 받았을 수 있다.
[표 14]
Figure pct00033
항-CD19 CAR T세포의 주입 후, 혈중 사이토카인, 케모카인 및 다른 분자의 일시적인 상승을 측정하는 방식으로 약력학적 반응을 4주 간격에 걸쳐 평가하였다. IL-6, IL-8, IL-10, IL-15, TNF-α, IFN-γ 및/또는 sIL2Rα의 수준을 분석하였다. 이러한 사이토카인 수준의 피크 상승은 일반적으로 주입 후 4일차 내지 8일차에 관찰되었으며, 수준은 일반적으로 28일 이내에 기준선 수준으로 되돌아갔다. B세포 무형성 기간을 예측하였다. 주입 후, 항-CD19 CAR T세포의 초기 증식은 3개월까지 기준선 수준 근처로 감소하였다. 항-CD19 CAR T세포의 피크 수준은 주입 후 처음 7일 내지 15일 이내에 발생하였다. 결과는, 혈중 항-CD19 CAR T세포의 수준이 객관적 반응(즉, 완전 관해(CR) 또는 부분 관해(PR))과 관련이 있었음을 보여주었다. 반응자(완전 관해 및 부분 관해를 나타냄)에서의 피크 항-CD19 CAR T세포 수준 중앙값은 1 μL 당 102.4개의 세포(범위: 1 μL 당 0.2개 내지 2589.5개의 세포; n=51)였고, 비반응자에서는 1 μL 당 12.0개의 세포(범위: 1 μL 당 0.2개 내지 1364.0개의 세포, n=8)였다. 객관적 반응을 나타낸 환자에서 0일차 내지 28일차의 AUC(AUC0-28) 중앙값은 1 μL 당 1487.0개의 세포 × 일수(범위: 1 μL 당 3.8 × 104개 내지 2.77 × 104개의 세포 × 일수; n=51)였고, 비반응자에서는 1 μL 당 169.5개의 세포 × 일수(범위: 1 μL 당 1.8 × 104개 내지 1.17 × 104개의 세포 × 일수; n=8)였다. 코르티코스테로이드도 토실리주맙도 투여받지 않은 환자(n=18)에서 피크 항-CD19 CAR T세포 중앙값(피크: 1 μL 당 24.7개의 세포; AUC0-28 수준: 1 μL 당 360.4개의 세포 × 일수)은, 코르티코스테로이드만 투여받은 환자(n=2)와 유사하였다(피크: 1 μL 당 24.2개의 세포; AUC0-28: 1 μL 당 367.8개의 세포 × 일수). 토실리주맙만 투여받은 환자(n=10)에서, 평균 피크 항-CD19 CAR T세포는 1 μL 당 86.5개의 세포였고, AUC0-28은 1 μL 당 1188.9개의 세포 × 일수였다. 코르티코스테로이드와 토실리주맙을 모두 투여받은 환자(n=37)에서, 평균 피크는 1 μL 당 167.2개의 세포였고, AUC0-28은 1 μL 당 1996.0개의 세포 × 일수였다. 피크 항-CD19 CAR T세포 값의 중앙값은 65세 이상의 환자(n=39)에서 1 μL 당 74.1개의 세포였고, 65세 미만의 환자(n=28)에서 1 μL 당 112.5개의 세포였다. 항-CD19 CAR T세포 AUC0-28 값의 중앙값은 65세 이상의 환자에서 1 μL 당 876.5개의 세포 × 일수였고, 65세 미만의 환자에서 1 μL 당 1640.2개의 세포 × 일수였다. 성별은 항-CD19 CAR T세포의 AUC 0-28와 Cmax에 유의한 영향을 미치지 않았다.
실시예 6
BTKi 요법 후 진행한 MCL 환자는 구제요법을 이용한 경우 전체 생존기간 중앙값이 단지 5.8개월이었다. ZUMA-2(ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02601313)는 BTKi를 포함하는 1회 내지 5회의 선행 요법 후 R/R MCL 환자의 2상, 등록, 다기관 연구이다. 환자는 실시예 5에 기재된 바와 같이 제조되고 투여되는 자가유래 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR) T세포 요법을 투여받았다. 이러한 항-CD19 CAR T세포 생성물은 KTE-X19로 지칭될 수 있다. ZUMA-2(N = 60)의 1차 분석에서, 항-CD19 CAR T세포 치료(중앙값 12.3개월의 추적조사)를 이용한 경우의 객관적 반응률(ORR)은 93%(67% 완전 반응[CR] 비율)였다. 본 실시예는 실시예 5에 기재된 바와 같이 제조된 항-CD19 CAR T세포 치료의 약리학적 프로파일과, 기본적인 생성물 속성 특징분석과 함께 MCL 형태 및 선행 BTKi 노출(이브루티닙[Ibr] 및/또는 아칼라브루티닙[Acala])에 따른 결과의 비교 분석을 설명한다.
적격한 R/R MCL 환자는 백혈구성분채집술과 조건화 화학요법을 받은 후, 2 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 단일 주입을 받았다. 생성물 속성(예를 들어, CD19+ 세포와의 공동배양 시 항-CD19 CAR T세포에 의한 IFNγ 생산), 혈중 CAR T세포 수준 및 혈청 내 사이토카인 수준을 상기 기재된 방법(이전 실시예 참조)을 사용하여 평가하였다. 임상 결과는 60명의 효능 평가 가능한 환자에 대해 보고되었으며; 생성물 속성 및 약리학적 데이터는 모든 68명의 치료받은 환자에 대해 보고되었다.
기준선에서, 시험자에 의한 평가 시, 40명의 환자(59%)는 전형적 MCL을 나타냈고, 17명(25%)은 모세포형 MCL을 나타냈고, 4명(6%)은 다형성 MCL을 나타냈다. 연구 시작 전, 52명의 환자(76%)는 이전에 Ibr을 투여받았고, 10명(15%)은 이전에 Acala를 투여받았고, 6명(9%)은 둘 모두를 투여받았으며; 88%는 BTKi 불응성 질환을 나타냈다. 제조된 항-CD19 CAR T 생성물에서, 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL 환자에 대한 CD4+/CD8+ T세포 비의 중앙값(범위)은, 각각, 0.7(0.04 내지 2.8), 0.6(0.2 내지 1.1) 또는 0.7(0.5 내지 2.0)이었다. 생성물 T세포 표현형(중앙값[범위])에는, 덜 분화된 CCR7+ T세포(전형적 40.0%[2.6% 내지 88.8%]; 모세포형 35.3%[14.3% 내지 73.4%]; 다형성 80.8%[57.3% 내지 88.8%])와, 이펙터 및 이펙터 기억 CCR7- T세포(전형적 59.9%[11.1% 내지 97.4%]; 모세포형 64.8%[26.6% 내지 85.7%]; 다형성 19.2%[11.1% 내지 42.7%])가 포함되었다. 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL 환자에서 공동배양에 의한 인터페론(IFN)-γ 수준 중앙값(범위)은, 각각, 6309.5 pg/mL(424.0 pg/mL 내지 20,000 pg/mL), 6510.0 pg/mL(2709.0 pg/mL 내지 18,000 pg/mL) 또는 7687.5 pg/mL(424.0 pg/mL 내지 12,000 pg/mL)였다. 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL 환자에서, 피크 CAR T세포 수준의 중앙값(범위)은, 각각, 1 μL 당 77.6개의 세포(1 μL 당 0.2개 내지 2241.6개의 세포), 1 μL 당 35.0개의 세포(1 μL 당 0.2개 내지 2589.5개의 세포) 또는 1 μL 당 144.9개의 세포(1 μL 당 39.2개 내지 431.3개의 세포)였다. ORR/CR 비율은 전형적 MCL 환자에서 93%/65%였고, 모세포형 MCL 환자에서 88%/53%였고, 다형성 MCL 환자에서 100%/75%였다. 전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL 환자에서 12개월 생존율은, 각각, 86.7%, 67.9% 또는 100%였다. 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사례는 전형적 MCL 환자의 15% 및 38%에서 발생하였고, 모세포형 MCL 환자의 6% 및 8%에서 발생하였고, 다형성 MCL 환자의 25% 및 50%에서 발생하였다.
이전에 Ibr, Acala 또는 둘 모두를 투여받은 환자의 경우, 제조된 항-CD19 CAR T세포 생성물 중 CD4+/CD8+ T세포 비의 중앙값은, 각각, 0.7(범위, 0.04 - 3.7), 0.6(범위, 0.3 - 1.2) 또는 1.0(범위, 0.7 - 1.9)이었다. 생성물 T세포 표현형(중앙값[범위])에는, 덜 분화된 CCR7+ T세포(Ibr 39.3%[2.6% 내지 86.4%]; Acala 42.7%[16.3% 내지 88.8%]; 둘 모두 49.5%[14.3% 내지 83.0%])와, CCR7- 이펙터 및 이펙터 기억 T세포(Ibr 60.6%[13.7% 내지 97.4%]; Acala 57.3%[11.1% 내지 83.8%]; 둘 모두 50.6%[17.0% 내지 85.7%])가 포함되었다. 이전에 Ibr, Acala 또는 둘 모두를 투여받은 환자에서 공동배양에 의한 IFN-γ 수준의 중앙값(범위)은, 각각, 6496.0 pg/mL(424.0 pg/mL 내지 20,000 pg/mL), 5972.5 pg/mL(2502.0 pg/mL 내지 18,000 pg/mL) 또는 7985.5 pg/mL(2709.0 pg/mL 내지 12,000 pg/mL)였다. 이전에 Ibr, Acala 또는 둘 모두로 치료받은 환자의 피크 CAR T세포 수준 중앙값(범위)은, 각각, 95.9(0.4 내지 2589.5), 13.7(0.2 내지 182.4) 또는 115.9(17.2 내지 1753.6)였다. ORR/CR 비율은 Ibr로 이전에 치료받은 환자에서 94%/65%, Acala로 이전에 치료받은 환자에서 80%/40%, 및 두 가지 BTKi로 이전에 치료받은 환자에서 100%/100%였다. Ibr, Acala 또는 둘 모두로 이전에 치료받은 환자에서 12개월 생존률은, 각각, 81%, 80% 또는 100%였다. 3등급 이상의 CRS 및 신경학적 사례는 이전에 Ibr을 투여받은 환자의 17% 및 31%에서 발생하였고, Acala을 투여받은 환자의 10% 및 10%에서 발생하였고, 두 가지 BTKi를 투여받은 환자의 0% 및 67%에서 발생하였다. 치료 후 CAR T세포 수준은 모세포형 형태를 갖거나, 이전에 Acala 단독으로 치료받은 환자에서 더 낮았고, 이는 임상 결과에서도 유사한 경향이 반영되었지만, MCL 형태 또는 선행 BTKi로 정의된 모든 하위군은 항-CD19 CAR T세포 치료로부터 임상 유익을 얻었다.
실시예 7
본 실시예는 최소 1년의 추적조사를 통해 ZUMA-2의 모든 환자에 대한 효능, 안전성 및 약리학의 업데이트된 분석을 제공한다. 적격한 R/R MCL 환자는 백혈구성분채집술과 조건화 화학요법을 받은 후, 이전 실시예에 기재된 바와 같이 항-CD19 CAR T세포 요법(2 × 106개의 CAR T세포/㎏)의 단일 주입을 받았다. 1차 평가변수는 루가노 분류에 따라 독립적인 검토 위원회(Independent Review Committee)를 통해 평가된 ORR(CR + 부분 반응)이었다. 효능 데이터는 1년 이상의 추적조사를 통해 60명의 치료받은 환자에 대해 보고되었으며; 안전성 데이터는 모든 68명의 치료받은 환자에 대해 제시되었다.
추적조사 기간 중앙값은 17.5개월(범위, 12.3개월 내지 37.6개월)이었다. ORR은 92%(95% CI, 81.6% 내지 97.2%)였고, CR 비율은 67%(95% CI, 53.3% 내지 78.3%)였다. 모든 효능 평가 가능한 환자 중에서, 48%는 데이터 컷오프 시점에서 지속적인 반응을 나타냈다. 반응 지속기간, 무진행 생존기간(PFS) 또는 전체 생존기간에 대한 중앙값에 도달하지 못했으며; 15개월 추정치는, 각각, 58.6%(95% CI, 42.5% 내지 71.7%), 59.2%(95% CI, 44.6% 내지 71.2%) 또는 76.0%(95% CI, 62.8% 내지 85.1%)였다. CR을 달성한 환자에서, PFS 중앙값에 도달하지 못했으며(15개월 비율, 75.1%[95% CI, 56.8% 내지 86.5%]); 부분 반응을 달성한 환자에서, PFS 중앙값은 3.1개월(95% CI, 2.3개월 내지 5.2개월)이었다. PFS 중앙값은 비반응 환자에서 1.1개월(95% CI, 0.9개월 내지 3.0개월)이었다. 치료받은 처음 28명의 환자는 중앙값 32.3개월(범위, 30.6개월 내지 37.6개월)의 추적조사를 받았고; 이러한 환자 중 39.3%는 추가 요법 없이 지속적인 관해를 유지하였다.
흔한 3등급 이상의 이상사례는 호중성백혈구감소증(85%), 저혈소판증(53%), 빈혈(53%) 및 감염(34%)이었다. 3등급 이상의 혈구감소증은 주입하고 30일 이상 경과한 환자의 60%에서 보고되었다. 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군은 환자의 15%에서 발생하였고; 59%는 CRS의 관리를 위해 토실리주맙을 투여받았다. 3등급 이상의 신경학적 사례(NE)는 환자의 31%에서 보고되었고, 38%는 NE 관리를 위해 스테로이드를 투여받았다. 모든 CRS 사례 및 대부분의 NE(43명 중 37명)는 해소되었다. 5등급 CRS 사례 또는 NE는 없었으며, 추가 추적조사에서도 새로운 5등급 사례는 없었다. 2건의 2등급 거대세포바이러스 감염이 있었고, 이는 각각 1건의 3등급 이상의 저감마글로불린혈증과 3등급 이상의 종양 용해 증후군이었으며, 엡스타인바 바이러스 관련 림프증식, 복제 가능 레트로바이러스, 식혈세포성 림프조직구증 또는 항-CD19 CAR T세포 관련 속발성 암의 사례는 없었다.
피크 CAR T세포 수준 중앙값 및 곡선하면적(0일차 내지 28일차) 중앙값은, 12개월차에 반응이 지속적인 환자에서 1 μL 당 98.9개의 세포(범위, 1 μL 당 0.2개 내지 2565.8개의 세포) 및 1 μL 당 1394.9개의 세포(범위, 1 μL 당 3.8개 내지 27,700개의 세포)였고, 12개월차에 재발한 환자에서 1 μL 당 202.6개의 세포(범위, 1 μL 당 1.6개 내지 2589.5개의 세포) 및 1 μL 당 2312.3개의 세포(범위, 1 μL 당 19.0개 내지27,200개의 세포)였고, 비반응자에서 1 μL 당 0.4개의 세포(범위, 1 μL 당 0.2개 내지 95.9개의 세포) 및 1 μL 당 5.5개의 세포(범위, 1 μL 당 1.8개 내지 1089.1개의 세포)였다. 이용 가능한 데이터가 있는 57명의 효능 평가 가능한 환자 중에서, 84%는 기준선에서 유세포분석을 통해 검출 가능한 B세포를 가지고 있었다. 12개월차에 반응이 지속적인 환자에서, 평가 가능한 샘플이 있는 26명의 환자 중 10명(38%)은 3개월차에 검출 가능한 B세포를 가지고 있었고, 18명 중 10명(56%)은 12개월차에 검출 가능한 B세포를 가지고 있었으며; 유전자 마킹된 CAR T세포는 28명의 평가 가능한 환자 중 5명(17%)에서 12개월차에 더 이상 검출 가능하지 않았다. ZUMA-2 연구는 R/R MCL 환자에서 관리 가능한 안전성과 함께, 항-CD19 CAR T세포 요법의 실질적이고 지속적인 임상 유익을 계속해서 보여준다. 치유적 치료 옵션이 결여된 이러한 환자 집단 내에서, 대부분의 환자는 지속적인 CR을 달성했으며, 새로운 안전성 신호는 보고되지 않았다. 초기 CAR T세포 증식은 객관적 반응을 달성한 환자에서 더 높았지만, 이후에 재발한 환자는 MCL에서 2차 치료의 실패에 대한 대안적인 메커니즘을 가리키는 상승된 CAR T세포 수준을 나타냈다.
실시예 8
ALL 환자의 대략 80% 내지 85%가 초기 치료 후 지속적인 완전 관해(CR)를 달성했지만, 재발 또는 불응성(R/R) ALL 환자의 나머지 15% 내지 20%는 질환이 재발한 환자에서 2년 무사건생존률이 40% 이하로 좋지 않은 결과를 나타냈다. 상기 기재된 바와 같이 제조된 항-CD19 CAR T세포 요법은 성인 R/R B세포 림프종 환자에 대해 관리 가능한 안전성 프로파일(이전 실시예 참조)과 함께 높은 완전 반응률을 나타냈다. 특히, 예를 들어 실시예 5를 참조한다. ZUMA-4(ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02625480)는 소아 및 청소년 R/R B세포 ALL 또는 NHL 환자에서 이러한 항-CD19 CAR T세포 요법을 평가하는 1/2상 연구이다. ZUMA-4의 1상 말기 중간 분석은, 소아 R/R ALL 환자의 치료를 위한 최적화된 투약 및 이상사례(AE) 관리 전략으로 항-CD19 CAR T세포 요법의 실행 가능성을 보여주었다. ZUMA-4의 2상 프로토콜은 불량한 결과와 관련이 있는 조기 재발 환자에 초점을 맞춘 광범위한 B세포 ALL 등록 기준을 포함하도록 수정되었으며, NHL 코호트가 추가되었다.
주요 B세포 ALL 등록 기준에는, 21세 이하, 체중 10 ㎏ 이상, 및 원발성 불응성이거나, 최초 진단 18개월 이내 재발되었거나, 2회 이상의 전신 요법 후 R/R, 또는 적어도 등록 100일 전에 동종이계 줄기세포 이식 후 R/R인 B세포 ALL이 포함되었다. B세포 ALL은 또한 적어도 등록 100일 전 자가유래 줄기세포 이식 후 및 4주 이상의 면역억제 약물 중단 후 B전구세포 ALL R/R이었다. Lansky(16세 미만) 또는 Karnofsky(16세 이상) 전신활동도는 PS ≥ 80이었고, 체중은 6 ㎏ 이상이었다. 적격한 환자에는, CNS-1 질환 환자, 임상적으로 명백한 신경학적 변화가 없는 CNS-2 질환 환자, 및 BM 모세포가 5% 초과이거나 MRD 양성 질환(유세포분석 또는 PCR에 따른 임계값 10-4)이 있는 환자가 포함되었다. CNS-1 질환은 CSF에서 검출 가능한 림프모세포가 없는 것으로 정의되고; CNS-2 질환은 검출 가능한 질환과 CSF에서 백혈구 수가 5/μL 미만인 것으로 정의되었다. CNS-3 질환은 CSF에서 WBC가 5/μL 이상인 것으로 정의되었다. 질환 부담 기준은 등록 시 최소 잔류 질환 양성 질환 환자도 포함하도록 수정되었다. 필라델피아 염색체 양성 ALL 환자는 티로신 키나아제 저해제 요법에 대해 불내성이거나, 2가지 이상의 티로신 키나아제 저해제 요법 후 R/R인 경우에 적격하였다. 이전에 블리나투모맙을 투여받은 환자 또한 포함되었다. 만성 골수성 백혈병 림프 모세포 위기 또는 임상적으로 유의한 감염이 있는 환자는 적격하지 않았다. 버킷 백혈병/림프종 환자 또한 적격하지 않았다.
B세포 NHL의 경우, 주요 등록 기준에는, 18세 미만, 체중 10 ㎏ 이상, 및 측정 가능한 병변이 1개 이상인, 달리 명시되지 않은 조직학적으로 확인된 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL NOS), 원발성 종격동 거대 B세포 림프종, 버킷림프종(BL), 버킷 유사 림프종, 또는 DLBCL과 BL 사이의 중간에 있는 미분류된 B세포 림프종이 포함되었다. NHL의 경우, 질환은 원발성 불응성이거나, 2회 이상의 전신 요법 후 R/R이거나, 또는 등록 100일 이상 전 자가유래 또는 동종이계 줄기세포 이식 후 R/R이어야 했다. 환자는 4주 이상 동안 면역억제 약물을 중단해야 했다. Lansky(16세 미만) 또는 Karnofsky(16세 이상) 전신활동도는 PS ≥ 80이었고, 체중은 6 ㎏ 이상이었다. 이전에 블리나투모맙을 투여받은 환자 또한 포함되었다. 환자는 최소 항-CD20 mAb 및 안트라시클린 함유 화학요법으로 적절한 선행 요법을 받아야 했으며, 하나 이상의 측정 가능한 병변이 있어야 했다. 등록 후 4주 이내에 치료를 필요로 하는 급성 이식편대숙주병 또는 만성 이식편대숙주병을 앓는 환자는 적격하지 않았다. 이전에 CAR T세포 요법 또는 다른 유전자 변형된 T세포 요법을 받은 환자는 배제되었지만, KTE-X19를 투여받은 환자는 본 연구에서 재치료에 적격하였다. 심장 림프종 침범이 있거나, 종양 덩어리 효과로 인해 긴급 요법이 필요한 환자도 배제되었다. ALL 및 NHL 코호트에 대한 추가의 배제 기준에는 하기가 포함되었다: 임상적으로 유의한 감염이 있는 환자; 등록 후 4주 이내에 치료가 필요한 급성 또는 만성 GVHD 환자, 지난 6개월 이내에 알렘투주맙(또는 다른 항-CD52 항체), 지난 3개월 이내에 클로파라빈(clofarabine) 또는 클라드리빈(cladribine), 지난 3주 이내에 PEG-아스파라기나아제, 또는 지난 28일 이내에 공여자 백혈구 주입(DLI)을 받은 환자.
CNS 침범 및 특정 이상이 있는 환자는 배제되었다. 중추신경계-1 질환(뇌척수액에서 검출 가능한 림프모세포가 없음) 환자와, 림프모세포가 존재하고 신경학적 증상이 있고 임상적으로 명백한 신경학적 변화가 없으며 이전에 블리나투모맙 치료를 받았던 중추신경계-2 질환(검출 가능한 질환, 하지만 뇌척수액 내 백혈구 수 < 5/μL) 환자는, ALL 및 NHL 코호트에 포함되었을 수 있다. 림프모세포가 존재하고 신경학적 증상이 있는 환자, 림프모세포가 존재하고 신경학적 증상이 있거나 없는 중추신경계-3 질환(CSF 내 WBC ≥ 5/μL) 환자, 영상화 분석 시 임의의 CNS 종양 덩어리 및/또는 뇌수막 종괴가 있는 환자, 뇌혈관 허혈/출혈, 치매, 소뇌질환 또는 임의의 CNS 관련 자가면역 질환, 후두부 가역적 뇌병증 증후군, 또는 구조적 결함이 있는 뇌부종과 같은 임의의 CNS 장애의 병력 또는 존재, 지난 12개월 이내 뇌졸중 또는 일시적 허혈성 발작의 병력, 및 활성 항경련 약물이 필요한 발작 장애가 있는 환자는 배제되었다. 블리나투모맙을 제외하고, 이전에 CD19 지향 요법을 받은 환자는 배제되었다.
환자는 -4일차, -3일차 및 -2일차에 플루다라빈 25 mg/m2 및 -2일차에 시클로포스파미드 900 mg/m2을 이용한 조건화 화학요법을 받은 후, 0일차에 1 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏의 목표 용량으로 항-CD19 CAR T세포의 단일 주입을 받았다. ALL의 경우, 1차 2상 목표는 전체 CR 비율(CR 및 불완전한 혈액학적 회복을 나타내는 CR)을 평가하여 항-CD19 CAR T세포 효능을 평가하는 것이었다. NHL의 경우, 1차 2상 목표는 객관적 반응률(CR + 부분 반응)로 항-CD19 CAR T세포 요법 효능을 평가하는 것이었다. ALL 및 NHL 코호트에 대한 2차 2상 목표에는, 안전성 및 내약성, 추가 효능 평가변수 및 환자자기평가결과 점수의 변화가 포함되었다.
본 연구에 사용된 CAR T세포 치료는, R/R 외투세포림프종 및 다른 R/R 혈액학적 악성종양의 치료를 위한 자가유래 항-CD19 CAR T세포 요법인, 실시예 5(KTE-X19로도 알려져 있음)와 같은 이전 실시예에 기재되어 있다. 성분채집술 생성물로부터의 PBMC에는 악성 세포를 제거하는 CD4+/CD8+ 양성 선택을 통해 T세포가 농축되어 있다. 생성된 T세포를 IL-2의 존재 하에서 항-CD3/항-CD28 항체로 활성화시키고, 레트로바이러스로 형질도입하여 항-CAR 유전자 구조체(FMC63-28Z CAR)를 도입하고, 목적하는 용량까지 증식시켰다. 증식된 T세포를 수송을 위해 동결시키고, 주입을 위해 환자에게 다시 배송할 수 있다. 악시캅타진 실로류셀은, 예를 들어 문헌[Park J.H. et al. N Engl J Med. 2018;378(5):449-459]; 및 문헌[Lee D.W. et al. Lancet. 2015;385(9967):517-528]에 기재된 바와 같이 상이한 방법으로 제조되었다. 성인 R/R B-ALL 환자에서, KTE-X19 치료는 1상에서 CR 비율, CRi 비율 또는 안전성 프로파일을 개선시켰다. 문헌[Shah BD, et al. J Clin Oncol. 2019;37(suppl, abstr):7006].
1상에서 DLT 평가 동안, 시작 용량은 2 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏였다. DLT는 7일 넘게 지속되는 3등급의 비혈액학적 AE, 및 프로토콜 지정 예외를 포함하여 지속기간에 관계없이 4등급의 비혈액학적 AE, 또는 30일 넘게 지속되는 4등급의 혈액학적 AE로 정의되었다. 68 mL 부피 또는 40 mL 부피로의 1 × 106개의 CAR-T세포의 용량을 또한 시험하였다. 40 mL의 1 × 106 코호트를 투여받은 환자는 수정된 AE 관리를 받았다. 이용 가능한 데이터에 기반하여, 40 mL의 1 × 106개의 세포를 2상에 사용하였다. 1상 연구 결과는, 소아 및 청소년 R/R B-ALL 환자에서 94%의 MRD 음성 및 73%의 CR + Cri이 관찰되었음 보여주었다. 결과는 또한, 알려진 독성과 일치하는 관리 가능한 AE 프로파일, 및 최적화된 용량 제형과 개정된 안전성 관리를 통한 NE의 낮은 발생률 및 중증도를 나타냈다. 문헌[Wayne AS, et al. Pediatr Blood Cancer. 2019;66(suppl):S24].
2상에서, 환자를 스크리닝하고, 백혈구성분채집술에 이어, -4일차에 시작하는 조건화 화학요법에 적용하였다. 가교요법은 시험자의 재량으로 백혈구성분채집술 후에 투여될 수 있었으며, 조건화 화학요법의 적용 7일 이상 또는 5회 반감기 전에 완료해야 했다. KTE-X19는 0일차에 주입하였다. 첫 번째 질환 평가는 28일차에 이루어졌다. 치료 후 안전성 및 효능 평가는 2주차, 4주차, 2개월차 및 3개월차에 이루어졌다. 환자는 18개월까지는 3개월마다, 24개월에서 60개월 사이에는 6개월마다 추적조사를 받았다. 6년차부터, 환자는 최대 15년 동안 연 1회 내원하였다. 총 50명의 R/R ALL 환자와 16명의 R/R NHL 환자를 1 × 106개의 KTE-X19 세포/㎏로의 40 mL 제형에 대한 연구에 등록시켰다. 현재 연구의 2상 환자에는 또한 NHL 코호트가 포함되었으며, R/R B-ALL에 대한 등록 기준을 확장시켜 불량한 결과와 관련이 있는 조기에 첫 번째 재발한 환자와 MRD 양성 질환 환자를 포함시켰다. 1차 목표는, ALL의 경우 전체 CR 비율(CR 및 Cri)로, NHL의 경우 ORR(CR + PR)로 평가된 효능이었다. 2차 목표에는, 안전성, 내약성, DOR, OS, 무재발 생존기간(RFS)/무진행 생존기간(PFS) 및 환자자기평가결과(PRO)의 평가가 포함되었다. ALL의 경우, 추가의 2차 목표에는, MRD 음성 비율과 allo-SCT 비율의 평가가 포함되었다. 전체 CR 비율(ALL 코호트만)의 경우, 발생률과 정확한 양측 95% CI를 결정한다. 이를 정확한 이항 검정을 사용하여 단측 α-수준 0.025에서 35%의 반응률과 비교한다. MRD 음성 비율(ALL 코호트만)의 경우, 발생률과 정확한 양측 95% CI를 결정한다. 전체 CR 비율의 통계적 검정이 유의한 경우, MRD 음성 비율을 정확한 이항 검정을 사용하여 단측 α-수준 0.025에서 30%의 비율과 비교한다. DOR 및 OS의 경우, 카플란-마이어 추정치 및 양측 95% CI를 결정한다. AlloSCT 비율(ALL 코호트만)의 경우, mITT 설정에서의 발생률과 정확한 양측 95% CI를 결정한다. 안전성의 측면에서, 모든, 중증의, 치명적인, CTCAE 버전 4.03 3등급 이상을 포함하는 AE, 및 주입일 또는 그 이후에 발생한 치료 관련 AE를 포함하는 AE의 발생률을 결정한다. NHL 코호트에 대해서는 특정 가설을 시험하지 않는다. 이러한 코호트에서 계획된 샘플 크기로, 관찰된 ORR을 63%(16명의 환자 중 10명), 69%(16명의 환자 중 11명), 75%(16명의 환자 중 12명) 및 81%(16명의 환자 중 13명)로 추정하였으며, 추정된 ORR에 대한 95% 정확한 CI의 하한은, 각각, 35%, 41%, 48% 및 54%였다.
실시예 9
본 실시예는, 성인 재발된/불응성(R/R) B세포 ALL 환자에서, CD3ζ 및 CD28 공동자극 도메인을 포함하고, 이전 실시예에 기재된 바와 같이 제조된(CD4+/CD8+ 농축/악성 세포의 제거) 자가유래 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 요법을 평가하는 1/2상 연구인 ZUMA-3(ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02614066)에 대한 1상 결과를 보고한다. 암세포가 제거된 항-CD19 CAR T세포의 제조를 위한 이러한 프로토콜은 생체외 제조 동안 항-CD19 CAR T세포의 활성화 및 고갈 가능성을 감소시킨다. 말초 혈액 중 백혈병 모세포의 존재는 CAR T세포 생성물의 제조에 이용 가능한 T세포의 수를 제한할 수 있으며, 이는 잠재적으로 제조 실패로 이어질 수 있다. 문헌[Sabatino M. et al. Blood. 2016;128(22):1227]. 본 연구에 사용된 MCL에 사용하기 위한 항-CD19 CAR T세포 생성물은, 문헌[Wang M. et al. N Engl J Med. 2020;382(14):1331-1342]에 기재되어 있다. 이는 문헌[Sabatino M. et al. Blood. 2016;128(22):1227], 문헌[Park J.H. et al. N Engl J Med. 2018;378(5):449-459]; 및 문헌[Lee D.W. et al. Lancet. 2015;385(9967):517-528]에 사용된 바와 상이하다. 이러한 항-CD19 CAR T세포 생성물은 T세포 표현형의 측면에서 상기 기재된 방법에 따라 제조된 바와 상이한 생성물 특징을 갖는다. 이러한 항-CD19 CAR은 본 실시예 및 본 출원의 다른 곳에서 KTE-X19로도 지칭되었다.
플루다라빈/시클로포스파미드 림프구제거 후, 환자는 2 × 106개, 1 × 106개 또는 0.5 × 106개의 세포/㎏로 항-CD19 CAR T세포를 투여받았다. CAR T세포 주입 후 28일 이내 용량 제한 독성(DLT) 비율이 1차 평가변수였다. 54명의 등록 환자에 대해 항-CD19 CAR T세포를 제조하고, 45명(중앙값 연령 46세[범위, 18세 내지 77세])에게 투여하였다. DLT 평가 가능한 코호트에서 DLT는 발생하지 않았다. 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사례(NE)는, 각각, 환자의 31% 및 38%에서 발생하였다. 유익-위험 비를 최적화하기 위해, CRS 및 NE에 대한 개정된 이상사례(AE) 관리(NE의 경우 조기 스테로이드 사용 및 CRS의 경우에만 토실리주맙 사용)를 1 × 106개 세포/㎏의 항-CD19 CAR T세포로 평가하였다. 개정된 AE 관리로 치료받은 9명의 환자에서, 33%는 3등급 CRS였고, 11%는 3등급 NE였고, 4/5등급 NE는 없었다. 전체 완전 관해율은 CAR T세포 증식과 상관관계가 있었으며, 이는 1 × 106개의 세포/㎏로 치료받은 환자에서 83%였고, 모든 환자에서 69%였다. 최소 잔류 질환은 모든 반응한 환자에서 검출 가능하지 않았다. 중앙값 22.1개월(범위, 7.1개월 내지 36.1개월)의 추적조사에서, DOR 중앙값은 1 × 106개의 세포/㎏로 치료받은 환자에서 17.6개월(범위, 5.8개월 내지 17.6개월)이었고, 모든 환자에서 14.5개월(범위, 5.8개월 내지 18.1개월)이었다. 항-CD19 CAR T세포 치료는 성인 R/R B-ALL 환자에서 높은 반응률과 견딜 수 있는 안전성을 제공하였다. 2상은 개정된 AE 관리를 이용하여 1 × 106개의 세포/㎏로 진행하였다.
환자
적격한 환자는 1차 치료에 대해 불응성(즉, 원발성 불응성)이거나, 첫 번째 관해 후 12개월 이내에 재발된 것이거나, 2회 이상의 선행 전신 요법 후 재발된 것 또는 불응성이거나, 또는 동종이계 줄기세포 이식(SCT) 후 재발된 것으로 정의된 R/R B세포 ALL을 앓고 있는 18세 이상의 환자였다. 환자는 골수 모세포 ≥5%, ECOG 전신활동도 0 또는 1, 및 적절한 신장, 간 및 심장 기능을 갖도록 요구되었다. 등록된 처음 6명의 환자는 골수에 모세포가 25% 이상 있어야 했다. 이전에 블리나투모맙을 투여받았던 환자의 경우, CD19 발현이 90% 이상인 백혈병 모세포가 요구되었다. 필라델피아 염색체 양성(Ph+) 질환, 수반되는 골수외 질환, 신경학적 변화가 없는 중추신경계(CNS)-2 질환(1 ㎣ 당 5개 미만의 백혈구 세포를 갖는 뇌척수액[CSF] 모세포)을 앓고 있는 환자와, 다운증후군 환자는 적격하였다. 신경학적 변화와 무관한 CNS-3 질환(1 ㎣ 당 5개 이상의 백혈구 세포를 갖는CSF 모세포)과 CNS 장애의 병력은 배제되었다.
추가 적격 기준에는 하기가 포함되었다: 필라델피아 염색체(Ph)+ 질환 환자는, 티로신 키나아제 저해제(TKI) 요법에 대해 불내성인 질환이 있거나, 2가지 이상의 상이한 TKI를 이용한 치료에도 불구하고 재발된/불응성 질환이 있었던 경우 적격하였음; 시험자의 의견에 따라 혈구감소증이 기저 백혈병으로 인한 것이고, 백혈병 요법을 이용하여 잠재적으로 가역적일 수 있는 경우를 제외하고, 절대 호중구 수 ≥500/μL; 시험자의 의견에 따라 혈구감소증이 기저 백혈병으로 인한 것이고, 백혈병 요법을 이용하여 잠재적으로 가역적일 수 있는 경우를 제외하고, 혈소판 수 ≥50,000/μL; 절대 림프구 수 ≥100/μL; 크레아티닌 청소율(Cockcroft Gault 방정식에 따라 추정됨)이 ≥ 60 cc/분으로 정의된 적절한 신장, 간, 폐 및 심장 기능; 혈청 알라닌 아미노트랜스퍼라아제/아스파르테이트 아미노트랜스퍼라아제가 정상 상한(ULN)의 2.5배 이하임; 길버트증후군 환자를 제외하고, 총 빌리루빈 ≤ 1.5 mg/dl; 좌심실 박출률 ≥50%, 심장초음파도, 뉴욕심장학회(New York Heart Association) 클래스 III 또는 클래스 IV 기능 분류에 따라 결정 시 심낭삼출의 증거가 없고, 임상적으로 유의한 부정맥이 없음; 임상적으로 유의한 흉막삼출이 없음; 실내 공기에서의 기준선 산소 포화도 > 92%; 가임 여성은 혈청 또는 소변 임신 검사에서 음성이어야 했음; 가임 여성은 혈청 또는 소변 임신 검사에서 음성이어야 했음.
추가 배제 기준에는 하기가 포함되었다: 세계보건기구(World Health Organization) 분류에 따른 버킷 백혈병/림프종, 또는 만성 골수성 백혈병 림프 모세포 위기로의 진단; 3년 이상 동안 질환이 없는 경우를 제외하고 비흑색종성 피부암 또는 상피내암종(예를 들어, 자궁경부, 방광, 유방) 이외의 악성종양의 병력; 아미노글리코시드 또는 본 연구에 사용된 임의의 작용제에 대한 중증 과민반응의 병력; 중추신경계(CNS) 이상[신경학적 변화의 존재 유무 하에 1 ㎣ 당 백혈구 세포(WBC)가 5개 이상인 뇌척수액(CSF) 샘플에서 검출 가능한 뇌척수 모세포로 정의되는 CNS-3 질환의 존재; 및 신경학적 변화와 함께 1 ㎣ 당 WBC가 5개 미만인 CSF 샘플에서 검출 가능한 뇌척수 모세포로 정의되는 CNS-2 질환의 존재. 참고: CNS-1(CSF에서 검출 가능한 백혈병이 없음)을 앓고 있는 대상과 임상적으로 명백한 신경학적 변화가 없는 CNS-2를 앓고 있는 대상은 본 연구에 참여하는 데 적격함; 발작 장애, 뇌혈관 허혈/출혈, 치매, 소뇌질환, 임의의 CNS 관련 자가면역 질환, 후두부 가역적 뇌병증 증후군, 또는 뇌부종과 같은 임의의 CNS 장애의 병력 또는 존재]; 아미노글리코시드 또는 본 연구에 사용된 임의의 작용제에 대한 중증 과민반응의 병력; 골수 부전과 관련된 수반되는 유전 증후군의 병력; 등록 12개월 이내의 다른 임상적으로 유의한 심장 질환의 병력; 등록 6개월 이내 증상이 있는 심부 정맥 혈전증 또는 폐색전증의 병력; 원발성 면역결핍; HIV, B형 간염 또는 C형 바이러스 간염을 포함하는 알려진 감염. B형 간염 또는 C형 간염의 병력은 바이러스 부하가 정량적 중합효소 연쇄반응 및/또는 핵산 검정에 따라 검출 가능하지 않은 경우에 허용됨; 단순 요로 감염 및 합병증을 수반하지 않는 세균성 인두염은, 활성 치료에 반응하고, Kite Medical Monitor와의 상담 후 허용됨; Glucksberg 기준에 따른 급성 이식편대숙주병(GVHD) II 내지 IV 등급 또는 국제 골수 이식 등록 지수(International Bone Marrow Transplant Registry index)에 따른 B 내지 D의 중증도; 등록 전 4주 이내 전신 치료를 필요로 하는 급성 또는 만성 GVHD; 선행 약물치료[1회 이하의 블리나투모맙으로의 전신 구제요법(화학요법, Ph+ 질환을 위한 TKI 및 블리나투모맙 포함); 선행 CD19 지향 요법을 받은 경우 이상사례에 대한 공통 용어 기준으로 4등급 신경학적 사례 또는 4등급 사이토카인 방출 증후군의 병력; 등록 전 6개월 이내 알렘투주맙, 등록 전 3개월 이내 클로파라빈 또는 클라드리빈, 또는 등록 전 3개월 내 PEG-아스파라기나아제로의 치료; 등록 전 4주 이내 공여자 림프구 주입; 등록 4주 전 GVHD를 위한 임의의 약물 및 임의의 면역억제 항체로의 치료; 등록 전 임의의 선행 전신 저해/자극 면역 체크포인트 분자 요법으로부터 적어도 3회의 반감기가 경과해야 함; 약리학적 용량(1일 >5 mg의 프레드니손 또는 등가의 용량의 기타 코르티코스테로이드)의 코르티코스테로이드 요법 및 다른 면역억제 약물은 등록 1주 전에 회피되어야 함]; 임의의 유치관 또는 배출관의 존재. 오마야 저장소 및 전용 중심 정맥 접근 카테터는 허용됨; 등록 전 4주 이내 생백신; 태아 또는 유아에 대한 예비 화학요법의 잠재적으로 위험한 영향으로 인해 임신 중이거나 모유 수유 중인 가임기 여성; 동의 시점부터 CD19 CAR-T세포 요법 완료 후 6개월까지 피임할 의사가 없는 가임기의 남성 및 여성 대상; 시험자의 판단에 따라, 모든 프로토콜에 필요한 연구 방문 또는 절차를 완료하거나, 연구 참여 요건을 준수할 가능성이 낮은 대상[지난 2년 이내 말단 기관 손상을 초래하거나, 전신 면역억제 또는 전신 질환 변형제를 필요로 하는 자가면역질환의 병력].
연구 설계 및 치료
1상 목표는, 항-CD19 CAR T세포 치료의 안전성을 평가하고, 용량 제한 독성(DLT) 발생률과 전반적인 안전성 프로파일에 기반하여 최적의 2상 용량을 결정하는 것이었다. DLT는, 항-CD19 CAR T세포 주입 후 처음 28일 이내에 발생하는 항-CD19 CAR T세포 관련 이상사례(AE)로, 7일 넘게 지속되는 3등급의 비혈액학적 AE, 사전 명시된 예상 사례(예를 들어, 종양 용해 증후군)를 제외하고 지속기간에 관계없이 4등급의 비혈액학적 AE, 및 림프구감소증을 제외하고 30일 넘게 지속되는 4등급의 혈액학적 AE를 포함하는 것으로 정의되었다(표 15).
[표 15]
Figure pct00034
초기 환자를 2 × 106개의 CAR T세포/㎏의 시작 용량으로 등록시켰다(도 3). 전반적인 안전성 프로파일에 기반하여, 후속 환자들은 2 × 106개, 1 × 106개 또는 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏를 투여받았다. 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏로. 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏로의 저용량을 투여받은 환자에 대해 2가지 제형을 탐구하였는데, 하나는 총 부피 40 mL였고, 다른 하나는 부피가 68 mL였다. 40 mL 제형은 동결/해동 공정 동안 세포 밀도와 세포 생존능을 유지하도록 의도되었다.
사이토카인 방출 증후군(CRS)과 신경학적 사례(NE)의 위험을 완화시키기 위해, 토실리주맙을 CRS(및 분리되지 않은 신경독성) 치료로 제한하고, 3등급이 아닌 2등급 NE의 발병 시 코르티코스테로이드 치료를 개시하는 것으로 AE 관리 지침을 개정하였다(표 16).
[표 16]
Figure pct00035
Figure pct00036
개정된 AE 관리 지침은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 환자의 추가 코호트에서 시행하였다. 안전성 검토 팀(SRT: safety review team)은 지속적으로 안전성 및 효능 데이터를 검토하고, 프로토콜 및 SRT 헌장에 정의된 이정표에서 추가 1상 등록 및 2상 권장용량(RP2D)에 대한 권고를 제시하였다.
환자는 항-CD19 CAR T세포 제조를 위한 목표인 5 × 109개 내지 10 × 109개의 단핵세포를 얻기 위해 등록 시 백혈구성분채집술을 받았다. 사전 정의된 가교 화학요법(표 17)은 백혈구성분채집술 후 특히 기준선에서 질환 부담이 높은(국소 검토에 따라 골수에서 25% 초과의 백혈병 모세포 또는 말초 순환에서 1 ㎣ 당 1,000개 이상의 모세포) 환자에 대해 권장되었다.
[표 17]
Figure pct00037
가교 화학요법으로부터 7일 이상 또는 5회 반감기(더 짧은 경우) 동안의 휴약 후, 환자는 -4일차, -3일차 및 -2일차에 플루다라빈 정맥내(IV) 1일 25 mg/m2 및 -2일차에 시클로포스파미드 IV 1일 900 mg/m2의 림프구제거 요법을 투여받았다. 0일차에, 항-CD19 CAR T세포의 단일 주입을 투여받았다.
결과 및 평가
1차 1상 평가변수는 DLT 평가 가능한 환자에서 DLT의 발생률이었다. 2차 평가변수에는, 안전성, 시험자 평가 전체 관해율(CR + 불완전한 혈액학적 회복을 나타내는 CR[CRi] 포함), 관해 지속기간(DOR), 무재발 생존기간, OS 및 골수 내 검출 가능하지 않은 최소 잔류 질환(MRD)의 비율이 포함되었다. 혈중 CAR T세포 및 사이토카인 수준은 탐색적 평가변수였다. CRS 및 NE의 증상을 포함하는 AE는 AE 버전 4.03에 대한 공통 용어 기준(Common Terminology Criteria)에 따라 등급화하였다. CRS는 문헌[Lee, et al. Blood. 2014;124(2):188-195]의 기준에 따라 등급화하였다. 골수외 질환이 있는 환자의 경우, 반응은 악성림프종에 대한 개정된 국제 연구 위원회 기준(revised International Working Group Criteria for malignant lymphoma)으로 골수외 및 CNS 질환에 대한 반응 기준에 따라 평가하였다. 문헌[Cheson BD et al. J Clin Oncol. 2007;25(5):579-586]. 10,000개의 생존 세포 당 1개 미만의 백혈병 세포로 정의되는 검출 가능하지 않은 MRD는, 유세포분석(NeoGenomics, Fort Myers, FL)을 사용하여 중앙에서 평가하였다. 문헌[Borowitz MJ et al Blood. 2015;126(8):964-971]; 문헌[Bruggemann M. et al. Blood Adv. 2017;1(25):2456-2466]; 및 문헌[Gupta S. et al. Leukemia. 2018;32(6):1370-1379].
주입 후 7일 이상 동안의 입원이 필요하였다. 환자를 14일차 및 28일차, 및 2개월차 및 3개월차에 신체 검사, 활력 징후 평가, 신경학적 및 실험실 평가를 통해 평가하였다. 골수 평가와 반응 평가는 7일차 내지 14일차(선택적) 및 28일차, 및 2개월차 및 3개월차에 수행하였다. 항-CD19 CAR T세포 주입 후 SCT를 받은 환자의 경우, 골수 평가는 SCT 후 처음 100일 동안 필요하지 않았다. 기준선에서 CNS-2 질환을 앓고 있는 환자의 CR을 확인하기 위해 CSF의 채취 및 분석이 필요하였다. 치료 후 3개월차 평가를 완료한 환자는 18개월까지는 3개월마다, 24개월 내지 60개월 동안에는 6개월마다, 이후 최대 15년 동안 연 1회 생존 및 질환 상태에 대해 추적조사를 받았다. CR을 달성한 환자는 3개월 초과의 관해 후에 진행되는 경우, 단, CD19 발현이 유지되고, CAR에 대한 중화 항체가 의심되지 않는다면, 항-CD19 CAR T세포의 두 번째 주입을 받을 수 있었다.
항-CD19 CAR T세포에 대한 예측적 약동학적 및 약력학적 마커를 평가하기 위해 혈액 및 혈청 샘플에서 바이오마커 분석을 수행하였다. 상기 기재된 바와 같이, 액적 디지털 중합효소 연쇄반응을 사용하여 혈액 내 형질도입된 CD19 CAR+ T세포의 존재, 증식 및 존속을 측정하였다. 문헌[Locke FL et al. Mol Ther. 2017;25(1):285-295]. 이전에 보고된 방법을 사용하여 사이토카인, 케모카인, 면역 이펙터 분자 및 대식세포 활성화 증후군의 마커에 대해 혈청을 평가하였다. 문헌[Locke FL et al. Mol Ther. 2017;25(1):285-295].
통계 분석
DLT 평가 가능한 코호트에는, 2 × 106 용량 수준으로 치료받은 처음 3명의 환자가 포함되었다. 안전성 및 효능 분석에는, 임의의 용량의 항-CD19 CAR T세포로 치료받은 모든 환자가 포함되었다. 사례까지의 시간 평가변수를 위해 카플란-마이어 추정치 및 양측 95% 신뢰 구간을 생성하였다. DOR은 문서화된 재발 없이 CR에서 재발 또는 사망까지의 시간으로 정의되었다. 관해 동안 동종이계 SCT을 받은 환자에 대한 DOR은 이식일에 중도 중단되었다. OS는 항-CD19 CAR T세포 주입에서부터 임의의 원인으로 인한 사망일까지의 시간으로 정의되었다. 일자는 2019년 4월 1일자를 기준으로 제시되어 있다. 모든 통계 분석은 SAS(version 9.4)로 수행하였다.
결과
환자
2016년 3월 9일과 2018년 7월 12일 사이에, 54명의 환자가 등록하여, 1상에서 백혈구성분채집술을 받았다(도 4). 모든 54명의 환자에 대해 항-CD19 CAR T세포 생성물을 성공적으로 제조하였으며; 생성물 제조를 위해 1명의 환자는 2회의 백혈구성분채집술 절차가 필요하였고, 1명의 환자는 3회의 절차가 필요하였다. 백혈구성분채집술로부터 연구 부위로의 항-CD19 CAR T세포의 전달까지의 시간 중앙값은 15일이었다. 5명의 환자는 AE(n = 3; 도 4), 동의 철회(n = 1) 또는 백혈구성분채집술 후 부적격(n = 1)으로 인해 림프구제거 전 중단하였다. 4명의 추가 환자가 림프구제거 후 중단하였다. 3명은 4등급 패혈증(n = 1), 새로운 요법의 개시(n = 1) 및 5등급 패혈증으로 인한 사망(n = 1)으로 인해 항-CD19 CAR T세포를 투여받지 않았다. 1명의 환자는 심부 정맥 혈전증(배제 기준)으로 인해 주입 전 중단하였지만, 동정적 사용으로 항-CD19 CAR T세포를 투여받았다. 54명의 환자 중 45명(83%)은 다음과 같은 용량 수준으로 항-CD19 CAR T세포를 투여받았다: 2 × 106개의 CAR T세포/㎏(n = 6), 1 × 106개의 CAR T세포/㎏(n = 23) 또는 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏(n = 16). 1 × 106개의 CAR T세포/㎏ 코호트에서 23명의 환자 중 9명은, NE의 경우 스테로이드를 조기에 사용해야 하고, CRS의 치료를 위해서만 토실리주맙을 보유해야 하는 개정된 AE 관리 지침에 따라 치료를 받았다. 44명의 환자는 목표 용량의 항-CD19 CAR T세포를 투여받았고; 1명의 환자는 1 × 106개의 항-CD19 CAR T세포/㎏을 투여받도록 등록되었으며, 개정된 AE 관리는 0.5 × 106개의 세포/㎏으로 치료하는 것이었지만, 이는 1 × 106 용량 수준에서의 분석에 포함되었다.
모든 치료받은 환자의 중앙값 연령은 46세(범위, 18세 내지 77세)였고, 67%는 3회 이상의 선행 요법을 받았다(표 18). 등록 전, 16명의 환자(40%)는 원발성 불응성이었고, 13명(29%)은 SCT 후 재발되었고, 21명(47%)은 이전에 블리나투모맙을 투여받았다. 블리나투모맙은 8명 환자(18%)에서 연구 시작 전 사용된 마지막 요법이었으며, 이 중 1명만 블리나투모맙에 대해 반응(CR)을 달성했었다.
[표 18]
Figure pct00038
안전성
DLT 평가 가능한 세트(n = 3)에서 DLT는 관찰되지 않았다. 환자의 98%는 3등급 이상의 AE를 경험하였다(표 19). 가장 흔한 임의의 등급의 AE는 발열(89%), 저혈압(69%), 설사(42%) 및 오한(42%)이었다. 흔한 3등급 이상의 AE(환자의 20% 이상)는 발열(42%), 저혈압(40%), 혈소판 수 감소(33%), 빈혈(31%), 저인산혈증(31%), 저산소증(24%), 뇌병증(22%), 발열성 호중구감소증(22%) 및 호중구 수 감소(22%)였다. 환자의 84%에서 임의의 등급의 중증 AE가 발생하였다.
[표 19]
Figure pct00039
42명 환자(93%)에서 CRS가 보고되었으며; 14명의 환자(31%)는 3등급 이상의 CRS를 경험하였다(표 19). 흔한 3등급 이상의 CRS 증상은 발열(45%), 저혈압(36%) 및 저산소증(17%)이었다. 혈압상승제를 12명의 환자(27%)에서 CRS 치료에 사용하였다. 주입 후 CRS 발병까지의 시간 중앙값은 2일(범위, 1일 내지 12일)이었고; 임의의 등급의 CRS 지속기간 및 3등급 이상의 CRS 지속기간 중앙값은, 각각, 9일 및 4.5일이었다. CRS 관련 사례는 5등급 항-CD19 CAR T세포 관련 AE을 경험했던 2명의 환자를 제외하고 모두 해소되었다. 2 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 1명의 환자는 CRS에 대한 이차발병으로 다기관 부전을 나타냈다(6일차). 0.5 × 106개의 세포/㎏로 치료받은 1명의 환자에서는 CRS 및 NE의 맥락에서 뇌혈관 사고(뇌졸중)가 발생하였다(7일차). 기타 항-CD19 CAR T세포 관련 5등급 AE는 보고되지 않았다.
35명의 환자(78%)에서 NE가 보고되었으며; 17명의 환자(38%)에서 3등급 이상의 사례가 발생하였다(표 19). 환자의 5% 이상에서 발생한 3등급 이상의 NE는 뇌병증(22%), 언어상실증(16%) 및 착란 상태(9%)였다. 뇌부종 사례와 5등급 NE는 없었다. NE 발병까지의 시간 중앙값은 주입 후 6일(범위, 1일 내지 31일)이었으며; 임의의 등급의 NE 지속기간 및 3등급 이상의 NE 지속기간 중앙값은, 각각, 12일 및 9일이었다. 35명의 환자 중 31명(89%)에서 NE가 해소되었으며; 1명의 환자는 진행성 질환으로 사망하였고, 3명의 환자는 신경학적 사례 해소 전 항-CD19 CAR T세포와 관련이 없는 AE(패혈증[n = 1], 뇌혈관 사고[n = 1], 단순헤르페스 바이러스혈증[n = 1])로 인해 사망하였다.
모든 환자의 53%는 토실리주맙을 투여받았고, 36%는 또한 CRS 관리를 위해 스테로이드를 투여받았고; 31% 및 44%는, 각각, NE를 위해 토실리주맙 및 스테로이드를 투여받았다. 기존 지침에 따라 동일한 용량으로 치료받은 14명의 환자와 비교하여, 개정된 AE 관리 지침에 따라 치료받은 9명의 환자에서 전반적인 안전성의 개선이 관찰되었다(표 20). 기존 지침에 따라 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 14명의 환자 중 4명은 3등급 또는 4등급 CRS를 나타냈다. 개정된 AE 관리를 이용한 경우, 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 9명의 환자 중 3명은 3등급 CRS를 나타냈고, 4등급 CRS는 보고되지 않았다. 이러한 환자는 또한 기존 AE 지침에 따라 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 환자보다 3등급 이상의 CRS 지속기간 중앙값이 더 짧았으며(4일 대 7일), 3등급 이상의 증상 발생까지의 시간이 더 길었다(각각, 6일 대 4.5일). 특히, 기존 지침으로 관리된 1 × 106개의 CAR T세포/㎏ 용량 코호트에서 14명의 환자 중 9명은 3/4등급 NE를 경험한 반면, 개정된 관리 지침에 따라 동일한 용량을 받은 환자에서는 1건의 3등급 사례가 있었고 4등급 사례는 없었다(표 20). 모든 이용 가능한 안전성 및 효능 데이터의 검토를 기반으로, 유익/위험 비는 1 × 106개의 CAR T세포/㎏ 용량에서 가장 유리한 것으로 간주되었으며, 이에 따라 이러한 용량이 RP2D가 되었다. 모든 2상 환자는 개정된 AE 관리 지침에 따라 치료를 받았다.
[표 20]
Figure pct00040
Figure pct00041
2명의 상기 언급된 치료 관련 사망을 포함하여 26명의 치료받은 환자(58%)가 사망하였으며, 이 중 19명의 환자(42%)는 질환 진행으로 인해, 7명 환자(16%)는 AE로 인해 사망하였다. 나머지 5건의 AE 관련 사망은 항-CD19 CAR T세포를 주입하고 중앙값 63일(범위, 48일 내지 579일) 후에 발생하였으며, 이는 항-CD19 CAR T세포와 관련이 없는 것으로 간주되었다. 이에는, 패혈증(n = 2), 뇌혈관 사고(n = 1), 단순헤르페스 바이러스혈증(n = 1) 및 세균혈증(n = 1)이 포함되었다.
효능
모든 45명의 치료받은 환자는 효능 분석에 적격하였다. 중앙값 22.1개월(범위, 7.1개월 내지 36.1개월)의 추적조사에서, 전체 관해율(ORR)은 69%였으며, 이 중 51%는 CR을 달성한 환자였고, 18%는 CRi를 달성하였다(표 21). 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 23명의 환자 중에서, ORR은 83%였으며, 이 중14명(61%)은 CR을 달성하였고, 5명(22%)은 CRi를 달성하였다. 개정된 AE 관리를 받은 9명의 환자 중 6명은 CR/CRi(4명 CR, 2명 CRi)를 달성하였다. 용량 수준에 걸친 CR/CRi까지의 시간 중앙값은 30일(범위, 26일 내지 192일)이었으며, 이에는 28일차에 모세포가 없는 저형성/무형성 골수(BFBM)를 가진 것으로 확인되어 6개월까지 CR 기준을 충족하지 못한 1명의 환자가 포함되었다. ORR은 일반적으로 불응성 환자(56%), 선행 이식(77%), 선행 블리나투모맙(57%) 또는 이노투주맙 오조가마이신(50%), 및 Ph+ 질환 환자(100%)를 포함하는 주요 공변량에 걸쳐 일관성이 있었다(도 5). 검출 가능하지 않은 골수 MRD는 28일차에 반응자의 100%에서 달성되었으며, 이 중 31명의 환자는 CR/CRi를 나타냈고, 1명의 환자는 부분 반응을 나타냈고, 1명의 환자는 BFBM이 있었다. BFBM이 있는 1명의 환자에서는 잔류 질환 평가가 불가능하였다. 7일차 내지 14일차에 선택적 골수 평가를 받은 6명의 환자 중 2명은 검출 가능하지 않은 MRD가 있었고; 30일차에 이용 가능한 데이터가 있는 5명의 환자는 검출 가능하지 않은 MRD가 있었다.
[표 21]
Figure pct00042
CR/CRi를 달성한 31명의 환자에 대한 DOR 중앙값은 14.5개월(95% CI, 5.8개월 내지 18.1개월; 도 6a)이었고, 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 환자에서는 17.6개월(95% CI, 5.8개월 내지 17.6개월)이었다. DOR 중앙값은 항-CD19 CAR T세포 후 SCT에 대해 중도 중단된 것과 관계없이 유사하였다(도 6b). 데이터 컷오프 시점에서, 8명의 환자(26%)가 진행중인 CR을 나타냈으며, 이 중 2명은 0.5 × 106개의 CAR T세포/㎏을 투여받았고, 6명은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏을 투여받았으며, 이때 추적조사 기간 중앙값은 6.3개월(범위, 5.9개월 내지 18.2개월)이었다. 6명의 환자(2명의 CR과 1명의 부분 반응은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏으로 치료받았고; 3명의 CR은 0.5 × 106개의 세포/㎏으로 치료받았음)는 주입 후 중앙값 2.7개월(범위, 1.7개월 내지 4.3개월) 차에 SCT를 받았다. 이러한 분석 시, 이들 중 3명은 CR(2명은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏으로 치료받았고, 1명은 0.5 × 106개의 세포/㎏으로 치료받았음)을 유지하였다. 모든 용량 수준에 걸친 무재발 생존기간의 중앙값은 7.3개월(95% CI, 2.7개월 내지 18.7개월)이었고, 1 × 106개의 CAR T세포/㎏을 투여받은 환자에서는 7.7개월(95% CI, 3.2개월 내지 18.7개월)이었다(도 6c). OS 중앙값은 모든 용량 수준에 걸쳐 12.1개월(95% CI, 6.1개월 내지 19.1개월)이었고, 1 × 106개의 CAR T세포/㎏을 이용한 경우에는 16.1개월(95% CI, 10.2개월 내지 추정 불가)이었다(도 6d).
데이터 컷오프 시점에서, 1명의 환자(2%)는 동의 철회하였고, 1명(2%)은 추적조사에 실패하였고, 17명(38%)(1 × 106개의 세포/㎏으로 치료받은 23명의 환자 중 11명(50%) 포함)은 생존해 있었다. 4명의 환자가 항-CD19 CAR T세포의 2차 주입을 받았으며; 1명은 재투여 후 15개월차에 CR을 나타냈고, 2명은 3개월차 평가 시 재발하였으며, 1명은 첫 번째 반응 평가 전에 동의를 철회하였다.
임상 약리학
혈중 DNA 1 ㎍ 당 CAR 유전자 카피 수로 측정되는 CAR T세포 수준은 대부분의 환자에서 항-CD19 CAR T세포를 주입하고 7일 내지 14일 후에 피크에 도달했으며, 12명의 평가 가능한 환자 중 2명은 12개월차에 검출 가능하게 유지되었으며, 2명의 환자 모두 CR이었다(도 7a; 표 22).
[표 22]
Figure pct00043
CAR T세포는 재발 시 이용 가능한 데이터가 있었던 5명의 환자에서 검출 가능하지 않았다. 피크 CAR T세포 수준 중앙값은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏을 이용한 경우 가장 높았고, 기존 AE 관리를 받은 환자와 개정된 AE 관리를 받은 환자 간에 유사하였다(도 7b; 도 8). CR/CRi를 달성한 환자는 비반응자보다 피크 증식 중앙값이 컸으며, 이는 MRD가 검출 가능하지 않은 환자와 검출 가능한 환자에서도 마찬가지였다(도 7c 및 도 7d; 도 84b 및 도 84c). 또한, 2 등급 이하의 NE를 나타내는 환자보다 3 등급 이상의 NE를 나타내는 환자에서 더 높은 피크 증식 중앙값이 관찰되었다(도 7e 및 도 7f; 도 8d 및 도 8e). 재발한 13명의 환자 중에서, 7명은 재발 시 검출 가능한 CD19 양성 세포가 있었고, 3명은 검출 가능한 CD19 양성 세포가 없었고, 3명은 이용 가능한 데이터가 없었다.
주요 사이토카인, 케모카인 및 전염증 마커의 피크 수준은 7일차에 발생하였으며, 일부는 1 × 106개의 CAR T세포/㎏와 비교하여 2 × 106개의 CAR T세포/㎏로 투여받은 환자에서 더 높은 경향(IL-15, CRP, SAA, CXCL10, IFNγ), 또는 기존 AE 관리를 받은 경우에 비해 개정된 AE 관리를 받은 경우에 더 낮은 경향(IL-6, 페리틴, IL-1RA, IFNγ, IL-8, CXCL10, MCP-1)을 나타냈다(도 9; 도 10). 피크 IL-15 혈청 수준은 놀랍게도 3등급 이상의 CRS 환자에서 더 낮았지만, 몇몇 전염증 마커의 피크 수준 중앙값은 3등급 이상의 CRS 환자와 3등급 이상의 NE 환자에서 더 높은 경향을 보였다(IFNγ, IL-8, GM-CSF, IL-1RA, CXCL10, MCP-1, 그랜자임 B; 도 11).
4명의 환자는 항-CAR 항체에 대한 스크리닝 검정 동안 양성으로 확인되었지만, 모두 백혈구성분채집술 시 확인 검정에서 음성이었다. 제조된 CAR T세포 생성물의 특징은 예상한 바 및 이전에 보고된 바와 같았다(표 23).
[표 23]
Figure pct00044
ZUMA-3은 성인 R/R B-ALL에서 CAR T세포 요법을 평가하여 1상을 완료하는 최초의 다기관 연구이다. 1상 부분에서, 항-CD19 CAR T세포를 이용한 경우 프로토콜 정의된 DLT는 관찰되지 않았으며, 보고된 AE는 항-CD19 CAR T세포 요법의 선행 연구와 일치하였다. 문헌[Neelapu SS. et al. N Engl J Med. 2017;377(26):2531-2544]; 문헌[Maude SL et al. N Engl J Med. 2018;378(5):439-448]. 개정된 AE 관리 지침과 조합된 1 × 106 CAR T세포/㎏ 용량은 활성을 손상시키지 않으면서 가장 유리한 위험/유익 비를 나타냈다. 환자는 질환 부담이 컸고 무리한 사전 치료를 받았지만, 특히 1 × 106 용량 수준으로 치료받은 환자에서 높은 관해율과 검출 가능하지 않은 골수 MRD가 달성되었고, ORR은 61% CR 및 22% CRi를 포함하여 83%였고, 이들 모두 검출 가능하지 않은 MRD가 있었다. 항-CD19 CAR T세포가 안전하고 유망한 효능이 있음을 보여주는 이러한 결과에 기반하여, ZUMA-3의 2상에서 추가 평가를 위해 1 × 106개의 CAR T세포/㎏ 용량을 선택하였다.
성인 R/R B-ALL을 치료하기 위한 항-CD19 CAR T세포의 사용은 이러한 질환의 고도로 증식성인 특징 및 치료 관련 AE에 대한 불내성으로 인해 어려운 것으로 입증되었다. 이러한 집단에서 이전 CAR T세포 시험은 5건의 뇌부종 사례를 포함하는 치명적인 NE로 인해 조기에 종결되었다. 문헌[DeAngelo DJ, Ghobadi A, Park JH, et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 2017;5(Suppl 2):P217]. ZUMA-3에서 기존 AE 관리 지침에 따른 경우, 2명의 환자가 CRS에 대한 이차발병으로 또는 DLT 평가 기간을 벗어난 CRS 및 NE의 맥락에서 항-CD19 CAR T세포와 관련이 있는 것으로 간주되는 5등급 AE로 인해 사망하였다. 가장 다루기 쉬운 독성을 갖는 용량을 확인하기 위해 다중 용량을 평가하는 것에 더하여, 신경독성에 대한 조기 스테로이드 개입 및 CRS의 경우에만 토실리주맙의 사용을 필요로 하는 개정된 AE 관리 지침을 1 × 106개의 CAR T세포/㎏ 용량 수준으로 등록된 9명의 환자에 대해 시행하였다. 이는, 기존 지침에 따라 동일한 용량으로 치료받은 14명의 환자와 비교하여, 더 짧은 CRS 사례 지속기간, 및 더 낮은 NE 발생률, 중증도 및 지속기간을 나타냈다.
중앙값 22.1개월의 추적조사 시, 반응은 환자의 26%에서 진행중이었고, 이들 대부분은 1 × 106개의 CAR T세포/㎏로 치료받은 환자였다(32% 진행중인 CR/CRi). 반응은 치료 후 조기에 발생하는 경향이 있었다. 대부분은 1개월 이내에 발생하였지만, 1명의 골수외 질환 환자는 6개월차에 CR을 달성하였다. 모든 사전 지정된 하위군에 걸쳐 높은 반응률이 관찰되었으며, 여기서 Ph+ 질환 환자에서는 100% CR 비율이 관찰되었다. 반응(CR/CRi)은 치료 후 2주 이내에 측정된 CAR T세포 증식이 더 높은 것과 관련이 있었다. 유사하게, CD3ζ 및 CD28 공동자극 도메인을 또한 포함하는 항-CD19 CAR T세포 요법을 사용한 단일 중심 1상 연구에서(문헌[Park JH et a. N Engl J Med. 2018;378(5):449-459]), 전체 CR 비율은 83%였지만, 가교요법 후 환자의 절반만 골수에 5% 이상의 모세포가 있었고, 28%는 MRD가 있었고, 11%는 검출 가능하지 않은 MRD가 있었다. 그럼에도 불구하고, 이러한 시험 결과는 본 발명의 연구의 결과와 대체로 상응하여, 성인 R/R B-ALL에서 CD3ζ 및 CD28 공동자극 도메인을 사용하는 항-CD19 CAR T세포 요법의 잠재적인 유용성을 추가로 뒷받침한다.
CD3ζ T세포 활성화 도메인 및 4-1BB 공동자극 도메인을 포함하는 항-CD19 CAR T세포 요법인 티사젠렉류셀은, 어린이 및 젊은 성인(25세 이하)에서 R/R B-ALL의 치료를 위해 승인되었다. 문헌[Maude SL et al. N Engl J Med. 2018;378(5):439-448]; 문헌[KYMRIAH (tisagenlecleucel) [package insert]. Novartis. East Hanover, NJ; 2018]. 하지만, 젊은 환자에서 티사젠렉류셀에 대한 투약 요법은, R/R B-ALL을 앓고 있는 성인에서 상당한 독성 및 CRS 관련 사망을 초래하였다. 문헌[Frey NV. et al. J Clin Oncol. 2020;38(5):415-422]. 2가지 임상 시험에 걸친 성인 R/R B-ALL 환자의 단일 중심 연구에서, 용량을 분획으로 투여하는 경우 관리 가능한 CRS 및 90% CR 비율을 나타냈다. 문헌[Frey NV. et al. J Clin Oncol. 2020;38(5):415-422]. ZUMA-3 관찰과 유사하게, 최적화된 투약 및 독성 관리 전략은 생명을 위협하는 치료 관련 독성에 취약한 환자가 CAR T세포 요법으로 이점을 얻을 수 있게 할 수 있다.
시험 설계, 환자 집단 및 OS 방법의 차이에도 불구하고, 본 연구에서 1 × 106개의 CAR T세포/㎏를 이용한 경우 OS 중앙값은 16.1개월이었지만, 마찬가지로 CD19를 표적으로 하는 블리나투모맙으로 이전에 보고되었던 OS 중앙값은 성인 R/R B-ALL에서 6.1개월 내지 7.7개월이었다. 문헌[Topp MS et al. Lancet Oncol. 2015;16(1):57-66]; 문헌[Kantarjian H. et al. N Engl J Med. 2017;376(9):836-847]. CD19 모세포 발현에 대해 재발 시 평가 가능한 10명의 환자 중에서, 3명은 CD19 발현의 결여를 나타냈으며, 이는 엑손 스플라이스 변이체 및 돌연변이의 선택으로 인한 표적 상실로 여겨지는 다른 보고서를 연상시켰다. 문헌[Sotillo E et al. Cancer Discov. 2015;5(12):1282-1295]. 본 연구에서, 마지막 선행 요법으로 블리나투모맙을 투여받은 8명의 환자 중 1명(13%)만 블리나투모맙에 대해 반응하였다. 이는, 일부 R/R ALL 환자에서 조작되지 않은 T세포의 면역학적 무능성을 시사하여, 이중특이적 T세포 결합 요법의 유용성을 제한할 수 있다. 임의의 횟수로 이전에 블리나투모맙을 투여받은 21명의 환자 중에서, 12명(57%)은 항-CD19 CAR T세포 요법 후 CR/CRi를 달성하였다. 이전에 보고된 바와 같이(문헌[Shah BD. et al. J Clin Oncol. 2018;36(suppl):abstr 7006]), 항-CD19 CAR T세포에 대한 반응은 CD19 양성이 지속되는 환자에서 선행 블리나투모맙 노출에 관계없이 유사하였다. 또한, CR을 달성한 6명의 환자는 SCT를 받았고, SCT 시 중도 중단되었으며; 3명은 관해를 유지하였다.
R/R B-ALL을 앓고 있는 성인은 항-CD19 CAR T세포를 이용한 치료 후 허용 가능한 안전성 프로파일과 함께, 높은 CR 비율 및 검출 가능하지 않은 골수 MRD를 달성하였다. 모든 등록 환자에 대한 성공적인 제조와 비교적 신속한 총 처리시간은, 신속한 치료가 필요한 빠르게 진행되는 질환을 앓고 있는 환자에게 이러한 세포 요법 치료를 제공할 수 있는 가능성을 지지하였다. AE를 관리하기 위해 투여되어야 하는 토실리주맙 또는 스테로이드의 사용, 및 조건들을 포함하여, 다양한 용량을 신중하게 평가하고 안전성 전략을 채택하는 방식으로, 연구를 1상에서 국제 2상 연구로 전환할 수 있었다. 1상에서는 이러한 집단에서의 선행 연구의 한계였던 치명적인 뇌부종 사례가 없었다. ZUMA-3의 2상은 개정된 AE 관리 지침에 따라 1 × 106개의 CAR T세포/㎏ 용량으로 진행하였다.
실시예 10
본 실시예는 CAR T세포 요법 치료에 대한 내성과 관련된 B-ALL 환자의 CD19에서 CD19ΔTyr260의 결과를 설명한다. KTE-X19 이전 블리나투모맙을 포함하는 몇몇 요법의 실패 후, B-ALL 환자는 1 × 106개의 CAR T세포/㎏의 목표 용량을 투여받았다. 환자는 임상적으로 반응하지 않았으며; 28일차에 CAR T 및 CD19 발현 림프구는 검출되지 않았다. KTE-X19 주입 전후 다양한 시점에서 B-ALL 환자로부터 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 채취하였다. 다색 유세포분석을 사용하여, CD19 야생형(WT)이 되거나 CD19ΔTyr260을 발현하도록 조작된 환자의 PBMC 및 Jurkat 세포주에서 CD19(클론 FMC63, HIB19, SJ25C1) 표면 발현을 조사하였다. 유전자 변이체의 존재는 강화된 전체 게놈 및 RNA 시퀀싱(TruSeq Stranded Total RNA)을 사용하여 평가하였다. 세포 단백질 발현 위치는 탈글리코실화 효소의 존재 유무 하에 웨스턴 블롯을 사용하여 평가하였다.
국소 병리학은 선주입 B 림프모세포가 균일하게 CD19dim라고 결론지었지만, FMC63(KTE-X19의 단일 사슬 가변 단편)을 이용한 동일한 샘플의 추가 분석으로 CD19가 선주입 B 림프모세포에서 검출되지 않았음을 밝혔다. RNA 시퀀싱 결과는, 순환 백혈병 모세포 내 Tyr260(CD19ΔTyr260)에서 CD19의 세포내 도메인 내 인프레임 결실을 보여주었다. 유세포분석을 사용한 추가 분석은, CD19 발현이 Jurkat CD19ΔTyr260 세포에서 검출되지 않았지만, Jurkat CD19-WT 세포에는 존재함을 보여주었고, 이는 이러한 점 돌연변이를 운반하는 세포의 가시화 결여 및 CAR T세포 요법에 대한 내성을 시사하였다. 종방향 RNA 및 DNA 시퀀싱 분석은, 돌연변이가 CAR-T 요법의 주입 이전에 발생하였음을 보여주었다. 분획화된 세포 용해물은, 고분자량 및 저분자량 밴드를 갖는 세포막 내 WT CD19뿐 아니라, 단일 저분자량 밴드를 갖는 표면에서 발현된 CD19ΔTyr260을 나타내었다. 탈글리코실화 조건 하에서, WT CD19 및 CD19ΔTyr260 세포 분획 둘 모두에 단 1개의 밴드만 존재하였다. 임의의 과학적 이론 또는 가설에 구애됨 없이, CD19ΔTyr260 돌연변이는 적합하거나 기능적인 CD19 글리코실화의 결여 및/또는 검출 제한을 초래할 가능성이 있다. B-ALL 악성 세포의 돌연변이는 다른 항-CD19 CAR 또는 비CD19 CAR 세포 요법에 대해 잠재적인 영향을 나타낼 수 있다.
실시예 11
BTKi 요법 후 진행한 MCL 환자는, 구제요법을 이용한 경우 전체 생존기간이 단지 5.8개월로 전형적으로 예후가 불량하였다. 문헌[Martin P, et al. Blood. 2016;127:1559-1563]. 2상 ZUMA-2 연구에서는, BTKi를 포함하여 1회 내지 5회의 선행 요법에 대해 R/R이었던 MCL 환자에서 KTE-X19를 평가하였다. 문헌[Wang M, et al. N Engl J Med. 2020;382:1331-1342]. 중앙값 12.3개월의 추적조사 시, ZUMA-2(N = 60)의 1차 효능 분석에서 ORR은 93%(67% 완전 반응)였다. 모세포형 또는 다형성 MCL을 포함하는 공격성 질환 변형은, 일반적으로 불량한 임상 결과와 관련이 있지만, ORR은 ZUMA-2에서 다양한 조직학을 가진 환자에 걸쳐 유사하였다. 문헌[Wang M, et al. N Engl J Med. 2020;382:1331-1342]; 문헌[Jain P and Wang M. Am J Hematol. 2019;94:710-725]. 본 연구에서는, ZUMA-2에서 MCL 형태 및 선행 BTKi 노출로 정의되는 환자 하위군에서의 약리학적 프로파일과 임상 결과를, 생성물 속성 및 기타 전처리 인자의 특징분석과 함께 비교하였다. 환자는 백혈구성분채집술과 조건화 화학요법을 받은 후, 0일차에 단일 IV 주입을 통해 2 × 106개의 CAR T세포/㎏의 목표 용량으로 CD19 CAR-T세포의 단일 주입을 받았다. 일부 환자는 덱사메타손(1일 내지 4일 동안 매일 20 mg 내지 40 mg, 또는 등가량, PO 또는 IV), 이브루티닙(매일 560 mg PO) 또는 아칼라브루티닙(1일 2회 100 mg PO)을 이용한 가교요법을 받았으며, 이는 백혈구성분채집술 후 투여되어 조건화 화학요법의 개시 전 5일 이내에 완료되었고; 가교요법 후 PET-CT가 필요하였다. 1차 평가변수는 객관적 반응률(ORR[완전 반응(CR) + 부분 반응])이었다. 2차 평가변수는 반응 지속기간(DOR), 무진행 생존기간(PFS), OS, 이상사례(AE) 빈도, 혈중 CAR T세포 수준 및 혈청 내 사이토카인 수준이었다. 효능 및 안전성 분석에는 CD19 CAR-T세포 요법을 받은 모든 환자가 포함되었다. 첫 번째 종양 평가는 28일차에 이루어졌다. 골수 생검은 스크리닝 시 이루어졌으며, 양성인 경우에는 수행되지 않았거나, 뚜렷하지 않은 경우에는 CR을 확인하기 위해 생검이 필요하였다.
ZUMA-2에서 중앙값 12.3개월의 추적조사로 관찰된 KTE-X19로 치료받은 60명의 MCL 환자 중에서, 93%는 ORR이었고, 67%는 CR 비율이었으며, 모든 환자의 57%와 CR 환자의 78%는 반응이 진행중이었다. CRS 및 신경학적 사례는 대부분 가역적이었다(N = 68명의 치료받은 환자). 약 15%는 3등급 이상의 CRS였고, 31%는 3등급 이상의 신경학적 사례였고, 2건은 5등급 AE(1건은 KTE-X19 관련)였다. 환자 하위군은 형태학적 특징(전형적, 모세포형, 또는 다형성 MCL), 및 이브루티닙 단독, 아칼라브루티닙 단독, 또는 이브루티닙과 아칼라브루티닙 둘 모두에 대한 선행 노출에 따라 정의되었다. 표 24. 기준선 특징은 일반적으로 이러한 군에 걸쳐 유사하였다. 이전에 이브루티닙으로 치료받은 환자에서 더 높은 치료 전 종양 부담을 나타내는 경향이 있었다. 생성물 속성, 혈중 CAR T세포 수준 및 혈청 내 사이토카인 수준은 이전에 기재된 방법을 사용하여 분석하였다. 문헌[Locke FL, et al. Mol Ther. 2017;25:285-295]. 생성물 T세포 속성은 일반적으로 MCL 형태 하위군에 걸쳐 유사하였다. 다형성 형태를 갖는 환자로부터의 생성물에서 생성물 공동배양 IFN-γ 및 CCR7+ 세포의 백분율이 증가하는 경향이 있었다. 표 25. 생성물 T세포 속성은 또한 일반적으로 선행 BTKi 하위군에 걸쳐 유사하였다. 이전에 이브루티닙으로 치료받은 환자에서 생성물 공동배양 IFN-γ가 증가하는 경향이 있었다. 표 26.
[표 24]
Figure pct00045
[표 25]
Figure pct00046
[표 26]
Figure pct00047
MCL 형태 및 선행 BTKi 하위군에 걸쳐 높은 반응률이 달성되었다. 표 27. KTE-X19 치료로 인한 임상 유익이 MCL 형태 또는 선행 BTKi에 따라 정의된 모든 하위군에서 관찰되었다. 이전에 이브루티닙으로 치료받은 환자에서 6개월차에 지속 반응률이 더 높은 경향이 있었다. 표 27. CRS 및 신경학적 사례는 일반적으로 MCL 형태 및 선행 BTKi 하위군에 걸쳐 유사하였다. 표 28. 비모세포형 형태이거나 이전에 이브루티닙으로 치료받은 환자에서 3등급 이상의 신경학적 사례의 비율이 증가하는 경향이 관찰되었다. 표 28.
[표 27]
Figure pct00048
[표 28]
Figure pct00049
하위군에 걸친 비교는 Kruskal-Wallis 검정을 사용하여 수행하였으며; Dunn의 사후 검정을 사용하여 군 사이를 비교하였다. 약리학적 프로파일, 생성물 속성 및 안전성 데이터는 KTE-X19(2 × 106개의 세포/㎏)로 치료받은 모든 68명의 환자에 대해 보고되었다. MCL 형태 하위군에 걸친 KTE-X19의 약리학적 및 약력학적 프로파일은, 모세포형 형태를 가진 환자와 비교하여 전형적 형태를 가진 환자에서(도 12 및 도 13) 또는 이전에 아칼라브루티닙 단독으로 치료받은 환자와 비교하여 이브루티닙으로 치료받은 환자에서(도 14 및 도 15) CAR T세포 증식 및 선택적 전염증성 사이토카인이 증가했음을 시사하였다. 치료 전 환자 및 생성물 특징은 일반적으로 MCL 형태 및 상이한 선행 요법을 이용한 서브세트에 걸쳐 유사하였다. 모세포형 형태를 갖는 환자는, CAR T세포 증식, 순환하는 골수 관련 사이토카인 및 케모카인, 및 3등급 이상의 CRS 및 신경학적 사례 비율의 감소를 나타냈지만, 임상 효능은 전형적 형태를 가진 환자와 유사하였다. 모세포형 형태를 갖는 환자에서의 개선된 안전성 프로파일에 대한 경향은, 더 낮은 피크 CAR T세포 증식 및 골수 관련 염증과 관련된 사이토카인의 감소된 피크 수준에 상응하였다. 이전에 이브루티닙으로 치료받은 환자는, CAR T세포 증식, 순환하는 염증성 사이토카인 및 케모카인, 및 3등급 이상의 CRS 및 신경학적 사례 비율의 증가뿐 아니라; 6개월차 지속 반응률의 증가 및 이전에 아칼라브루티닙 단독으로 치료받은 환자와 유사한 ORR을 나타냈다. 이전에 아칼라브루티닙으로 치료받은 환자는, CAR T세포 증식, 및 순환하는 T1 관련 사이토카인 및 케모카인의 감소를 나타냈으며, 이는 개선된 안전성 프로파일과 일치하였다.
실시예 12
본 실시예는 실시예 5에 따라 제조된 KTE-X19와 악시캅타진 실로류셀의 2가지 항-CD19 CAR T 요법을 특징분석했다. 세포를 CD3(범용 T세포 마커), CD14, CD19(B세포 마커), CD45(범용 백혈구 마커) 및 CD56(활성화 및 NK 마커)에 대한 형광 접합 항체로 표지하고, 유세포분석으로 평가하였다. 세포 생존능은 생존능 염료(SYTOX 근적외선)의 음성 염색을 사용하여 평가하였다. 검정의 정량화 하한(LLOQ)은 0.2%였고, NK 세포 및 단핵구의 경우에는 5%였다. NK 세포의 백분율을 결정하였다(NK 세포는 CD45+, CD14-, CD3- 및 CD56+였고; T세포는 CD45+, CD14- 및 CD3-였음). 23개의 악시캅타진 실로류셀 로트(lot)와 97개의 KTE-X19 로트로부터의 NK 세포의 백분율 중앙값은, 각각, 1.9%(범위 0.8% 내지 3.2%) 및 0.1%(범위 0.0% 내지 2.8%)였다. 동일한 악시캅타진 실로류셀 및 KTE-X19 로트에서 CD3- 세포 불순물의 백분율 중앙값은, 각각, 2.4%(범위 0.9% 내지 4.6%) 및 0.5%(범위 0.3% 내지 3.9%)였다. KTE-X19 및 악시캅타진 실로류셀의 결과는, 세포 생존능에 대해서는, 각각, ≥ 72% 및 ≥ 80%였고; 항-CD19 CAR 발현에 대해서는, 각각, ≥ 24% 및 ≥ 15%였고; IFN-± 생산에 대해서는, 각각, ≥ 190 pg/mL 및 ≥ 520 pg/mL였고, CD3+개의 세포의 백분율에 대해서는, 각각, ≥ 90% 및 ≥ 85%였다.
실시예 13
실시예 2 및 실시예 7을 포함하는 이전 실시예에서 단일 주입으로 2 × 106개의 KTE-X19 세포/㎏를 투여받은 환자의 추가 결과가 제공되어 있다. IRRC 평가에 의한 ORR은 92%(95% CI, 82% 내지 97%)였고, CR 비율은 67%(95% CI, 53% 내지 78%)였다. 중앙값 17.5개월(범위, 12.3개월 내지 37.6개월)의 추적조사 시, 29명의 환자는 반응이 지속적인 채로 남아있었다. 지속 반응률은 고위험 질환 특징이 있는 환자 사이에서 대체로 일치하였다. 치료받은 처음 28명의 환자는 중앙값 32.3개월(범위, 30.6개월 내지 37.6개월)의 추적조사를 받았다. 환자의 39%는 추가 요법 없이 지속적인 관해를 유지하였다. 모든 등록 환자(N = 74) 중에서, ORR은 84%(59% CR 비율)였다. 중앙값 17.5개월의 추적조사 후 DOR, PFS 및 OS에 대한 중앙값에 도달하지 못했다. 표 29. 지속 반응률은 불리한 예후군에 걸쳐 일치하였다. 도 16. 중앙값 17.5개월의 추적조사 시, ZUMA-2 연구는 R/R MCL 환자에서 KTE-X19 요법의 실질적이고 지속적인 임상 유익을 지속적으로 보여주었다. 추가 추적조사에서 새로운 안전성 신호는 관찰되지 않았다. 이전 보고서 이후 새로운 CRS 또는 새로운 5등급 사례는 발생하지 않았다. 표 30. AE 비율은 시간 경과에 따라 감소하였다. KTE-X19 요법은 연장된 추적조사에서 관리 가능한 안전성 프로파일을 나타냈다.
[표 29]
Figure pct00050
[표 30]
Figure pct00051
이용 가능한 데이터가 있는 57명의 효능 평가 가능한 환자 중에서, 48명(84%)은 기준선에서 검출 가능한 B세포를 가지고 있었다. 12개월차에 반응이 지속적인 환자 중에서, 평가 가능한 환자의 50% 초과는 6개월차, 12개월차, 15개월차 및 24개월차에 검출 가능한 B세포 및 유전자 마킹된 CAR T세포를 가지고 있었다. 12개월차에 반응이 지속적인 환자 중에서, 유전자 마킹된 CAR T세포를 가진 환자의 백분율은 일반적으로 시간 경과에 따라, 3개월차, 6개월차, 12개월차, 15개월차, 18개월차 및 24개월차에, 각각, 100%, 93%, 82%, 89%, 80% 및 56%로 감소하였다. KTE-X19에 반응하지 못한 환자에서 CAR T세포 피크 증식이 감소하였다. 비반응성 환자와 비교하여, 12개월차에 반응이 지속적인 환자 또는 12개월차에 재발한 환자에서 피크 CAR T세포 증식이 증가하였다. 상승된 CAR T세포 수준은 이후 재발한 환자에서 초기에 관찰되었으며, 이는 아마도 2차 치료의 실패에 대한 대안적인 메커니즘을 가리킬 수 있다. 기준선 종양 부담과 12개월차 데이터 컷에서 지속적인 반응으로 정규화된 CAR T세포 피크 수준은, 도 17a(INV) 및 도 17b(CEN)에 제시되어 있다.
본 출원에 인용된 모든 간행물, 특허, 특허출원 및 기타 문헌은, 이들 각각의 간행물, 특허, 특허출원 또는 기타 문헌이 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로서 인용되는 바와 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
다양한 특정 구현예가 예시되고 기재되었지만, 본 개시내용의 사상 및 범주를 벗어나지 않는 한 다양한 변경이 이루어질 수 있다는 것을 이해할 것이다.

Claims (36)

  1. 외투세포림프종(MCL: mantle cell lymphoma) 또는 B세포 ALL의 치료를 필요로 하는 대상에서 외투세포림프종 또는 B세포 ALL을 치료하는 방법으로서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR: chimeric antigen receptor)를 발현하는 자가유래 T세포를 포함하는 T세포 생성물의 치료적 유효량을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 MCL 및 B세포 ALL이 재발된 또는 불응성 MCL 및 B세포 ALL이며, 선택적으로 상기 MCL이 전형적(classical), 모세포형(blastoid), 및 다형성(pleomorphic) MCL인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 MCL 및 B세포 ALL이 화학요법, 방사선요법, 면역요법(T세포 요법, 및/또는 항체 또는 항체-약물 접합체를 이용한 치료 포함), 자가유래 줄기세포 이식, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상 이후에 재발된 것이거나, 이에 대해 불응성인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 1회 내지 5회의 선행 치료를 받았고, 선택적으로 상기 선행 치료 중 적어도 하나가 자가유래 SCT, 항-CD20 항체, 안트라시클린(anthracycline) 또는 벤다무스틴(bendamustine) 함유 화학요법, 및/또는 브루톤 티로신 키나아제 저해제(BTKi: Bruton Tyrosine Kinase inhibitor)에서 선택되는, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 BTKi가 이브루티닙(ibrutinib) 또는 아칼라브루티닙(acalabrutinib)인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재발된/불응성(R/R) B세포 ALL이 1차 치료에 대해 불응성(즉, 원발성 불응성)이거나, 첫 번째 관해 후 12개월 이내 재발된 것이거나, 2회 이상의 선행 전신 요법 후 재발된 것 또는 불응성이거나, 또는 동종이계 줄기세포 이식(SCT: allogeneic stem cell transplant) 후 재발된 것으로 정의되며, 선택적으로 상기 대상이 골수 모세포 ≥5%, ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group, 미동부 종양학 협력 그룹) 전신활동도 0 또는 1, 및/또는 적절한 신장, 간 및 심장 기능을 가지고 있어야 하는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 이전에 블리나투모맙(blinatumomab)을 투여받은 경우, 상기 대상이 CD19 발현이 90% 이상인 백혈병 모세포를 가지고 있어야 하는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 백혈구성분채집술(leukapheresis) 후 그리고 조건화/림프구제거(lymphodepleting) 화학요법 전에 가교요법(bridging therapy)을 받는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCL 대상이 시클로포스파미드(cyclophosphamide) 정맥내 500 mg/m2 및 플루다라빈(fludarabine) 정맥내 30 mg/m2의 림프구제거 화학요법을 받고, 두 가지 모두 T세포 주입 전 5일차, 4일차 및 3일차에 각각 제공되는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 T세포 주입 전 4일차, 3일차, 2일차에 각각 플루다라빈 정맥내(IV) 1일 25 mg/m2, 및 주입 전 2일차에 시클로포스파미드 IV 1일 900 mg/m2의 림프구제거 요법을 받는, 방법.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCL 가교요법이 덱사메타손(dexamethasone)(예를 들어, 1일 내지 4일 동안 매일 20 mg 내지 40 mg, 또는 등가량, PO 또는 IV); 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 이브루티닙(예를 들어, 매일 560 mg PO), 및/또는 아칼라브루티닙(예를 들어, 1일 2회 100 mg PO); 면역조절제; R-CHOP, 벤다무스틴; 알킬화제; 및/또는 백금계 작용제(platinum-based agent)에서 선택되며, 상기 가교요법이 백혈구성분채집술 후 투여되고, 예를 들어 조건화 화학요법 전 5일 이내에 완료되는, 방법.
  12. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 하기 가교 화학요법 중 임의의 하나 이상을 받을 수 있는, 방법:
    Figure pct00052
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T세포 생성물이 순환 암세포의 양성 농축, 및 결과적인 부분 또는 완전 고갈을 통해 말초혈액 단핵세포(PBMC)에서 제조되는 CD4+ CAR T세포와 CD8+ CAR T세포를 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 PBMC가 CD4+ 세포와 CD8+ 세포에 대한 양성 선택에 의해 T세포에 대해 농축되고, IL-2 존재 하에서 항-CD3 항체와 항-CD28 항체로 활성화된 후, 항-CD19 단일 사슬 가변 단편(scFv), CD28 및 CD3-제타 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)인 FMC63-28Z CAR을 함유하는 복제 불능 바이러스 벡터로 형질도입되는, 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 T세포 생성물이 CD4+ T세포와 CD8+ T세포에 대해 양성으로 선택되지 않은 백혈구성분채집술 생성물로부터의 T세포를 포함하는 T세포 생성물보다 더 적은 암세포를 포함하는, 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T세포 생성물이 CD4+ T세포와 CD8+ T세포에 대해 양성으로 선택/농축되지 않은 백혈구성분채집술 생성물로부터의 T세포를 포함하는 T세포 생성물에 비해 다른 우수한 생성물 속성을 갖는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 우수한 생성물 속성이 CDRA45+CCR7+(나이브(
    Figure pct00053
    ) 유사) T세포의 증가된 백분율, 분화된 T세포의 감소된 백분율, CD3+ 세포의 증가된 백분율, 감소된 IFN-감마 생산 및 CD3- 세포의 감소된 백분율에서 선택되는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCL 대상이 체중 1 ㎏ 당 1.8×106개, 1.9×106개 또는 2×106개의 CAR 양성 생존 T세포, 최대 2×108개의 CAR 양성 생존 T세포(100 ㎏ 이상 환자의 경우)의 1회 이상의 용량으로 투여받고, 상기 B세포 ALL 대상이 체중 1 ㎏ 당 0.5×106개, 1×106개 또는 2×106개의 CAR 양성 생존 T세포, 최대 2×108개의 CAR 양성 생존 T세포(100 ㎏ 이상 환자의 경우)로 투여받는, 방법.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 첫 번째 주입에 대해 완전 반응을 달성한 경우, 3개월 초과의 관해 후에 진행되는 경우에는, 단, CD19 발현이 유지되고, 상기 CAR에 대한 중화 항체가 의심되지 않는다면, 상기 대상이 항-CD19 CAR T세포의 두 번째 주입을 받을 수 있으며, 여기서 반응은 루가노 분류(Lugano classification)를 사용하여 평가되는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 T세포 투여 후 사이토카인 방출 증후군(CRS: cytokine release syndrome) 및 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 모니터링되는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 대상이 CRS 및 신경학적 독성의 징후 및 증상에 대해 주입 후 적어도 7일 동안, 바람직하게는 4주 동안 매일 모니터링되는, 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 CRS와 관련된 징후 또는 증상이 발열, 오한, 피로, 빈맥, 구역, 저산소증 및 저혈압을 포함하고, 신경학적 사례와 관련된 징후 또는 증상이 뇌병증, 발작, 의식 수준의 변화, 언어장애, 떨림 및 착란을 포함하는, 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCL 대상에서의 사이토카인 방출 증후군이 하기 프로토콜에 따라 관리되는, 방법:
    Figure pct00054
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCL 대상에서의 신경학적 독성이 하기 프로토콜에 따라 관리되는, 방법:
    Figure pct00055
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCL 대상이 Ki-67 종양 증식 지수 ≥50% 및/또는 TP53 돌연변이의 존재에 따라 결정된 고위험 환자인, 방법.
  26. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상에서의 CRS가 하기 프로토콜에 따라 관리되는, 방법:
    Figure pct00056
  27. 제20항 내지 제22항 및 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상에서의 신경학적 독성이 하기 2개의 프로토콜 중 하나에 따라 관리되는, 방법:
    Figure pct00057

    Figure pct00058
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B세포 ALL 대상이 하기 가교 화학요법 중 임의의 하나 이상을 받을 수 있는, 방법:
    Figure pct00059
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 외투세포림프종(MCL) 또는 B세포 ALL을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-CD19 CAR을 발현하는 자가유래 T세포.
  30. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 외투세포림프종(MCL) 또는 B세포 ALL을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 항-CD19 CAR을 발현하는 자가유래 T세포의 용도.
  31. 하기와 같은 예측 방법:
    (i) 피크 CAR T세포 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료에 대한 대상의 객관적 반응을 예측하는 방법으로서, 여기서 객관적 반응은 피크 CAR T세포 수준과 양의 상관관계가 있고, 완전 반응과 부분 반응을 모두 포함하며, 모든 반응은 루가노 분류를 사용하여 평가되는 예측 방법.
    (xii) 피크 CAR T세포 수준을 측정하고 이를 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료에 대한 반응으로 (예를 들어, 4주차에서의) 최소 잔류 질환을 예측하는 방법으로서, 여기서 음성 최소 잔류 질환은 더 높은 피크 CAR T세포 수준과 관련이 있는 예측 방법.
    (xiii) 치료 후 피크 CAR T세포 증식을 측정하고 이의 수준을 참조 값과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료를 받는 대상에서 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 신경학적 사례(NE)를 예측하는 방법으로서, 여기서 CAR T세포 증식이 높을수록, 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE 사례에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
    (xiv) (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료 후 GM-CSF 및 IL-6의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 예측하는 방법으로서, 여기서 이러한 사이토카인의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
    (xv) CAR T세포 치료 후 혈청 페리틴의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료를 받는 대상에서 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 페리틴의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 CRS에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
    (xvi) (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의) CAR T세포 치료 후 혈청 IL-2 및 IFN-감마의 피크 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-2 및 IFN-감마의 피크 수준이 높을수록, 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
    (xvii) (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의) CAR T세포 치료 후 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및/또는 혈관 세포 부착 분자(VCAM: vascular cell adhesion molecule)의 뇌척수액 수준을 측정하고 이를 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 C-반응성 단백질, 페리틴, IL-6, IL-8 및/또는 혈관 세포 부착 분자(VCAM)의 뇌척수액 수준이 높을수록, 3등급 이상의 NE에 대한 가능성이 더 높은 예측 방법.
    (xviii) 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및/또는 퍼포린의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료 후 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-15, IL-2 Rα, IL-6, TNFα, GM-CSF, 페리틴, IL-10, IL-8, MIP-1a, MIP-1b, 그랜자임 A, 그랜자임 B 및/또는 퍼포린의 피크 혈청 수준은 3등급 이상의 CRS와 양의 상관관계가 있는 예측 방법.
    (xix) 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-15의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) B세포 ALL의 CAR T세포 치료 후 3등급 이상의 CRS를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-15의 피크 혈청 수준은 3등급 이상의 CRS와 음의 상관관계가 있는 예측 방법.
    (xx) 항-CD19 CAR T 치료 후 IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 수준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법에 따른) CAR T세포 치료 후 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 예측하는 방법으로서, 여기서 IL-6, TNFα, GM-CSF, IL-10, MIP-1b 및 그랜자임 B의 피크 혈청 수준은 3등급 이상의 CRS 및 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있는 예측 방법.
    (xxi) 치료 후 IFN-γ, IL-6 및/또는 IL-2의 피크 혈청 수준을 측정하고 이의 수준을 참조 표준과 비교하는 것을 포함하는 (선택적으로, 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의) CAR T세포 치료 후, 환자가 4주/1개월차에 MRD(10-5 민감도) 음성이 될 것인지 여부를 예측하는 방법으로서, 여기서 IFN-γ, IL-6 및/또는 IL-2의 피크 혈청 수준은 1개월차에 MRD 음성인 것과 양의 상관관계가 있는 예측 방법.
  32. 제20항 내지 제24항, 제26항, 제27항, 제30항 및 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CRS 및 NE가 문헌[Lee et al., Blood 2014; 124: 188-195]에 기재된 방법에 따라 등급화되는, 방법.
  33. 제31항에 있어서, 상기 참조 표준이 알려진 반응, 독성 등급 및 MRD 수준에 따른 환자 집단의 사분위 분석과 같은 바이오마커 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 방법에 의해 확립되는, 방법.
  34. 제31항에 있어서, 상기 CAR T세포 수준이 혈중 DNA 1 마이크로그램 당 CAR 유전자 카피 수로 측정되는, 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE를 감소시키기 위해, CAR T세포 주입 후 3등급 이상의 CRS 및/또는 3등급 이상의 NE와 양의 상관관계가 있는 사이토카인의 수준/활성을 감소시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  36. CAR T세포 치료를 필요로 하는 대상에서 상기 대상에게 투여된 T세포 생성물의 T세포 표현형을 조작하는 것을 포함하는, (예를 들어, 전형적, 모세포형, 및 다형성 MCL, 및 B세포 ALL에 대한) CAR T세포 치료의 효과를 개선시키는 방법으로서, 선택적으로 상기 조작은 CD3+ T세포의 수를 증가시키는 것, CD3- 세포의 수를 감소시키는 것, CDRA45+CCR7+(나이브 유사) T세포의 수/백분율을 증가시키는 것 및/또는 생산 동안 T세포 생성물에서 분화된 세포의 수/백분율을 감소시키는 것, T세포에 의한 IFN-감마 생산 수준을 감소시키는 것을 포함하며, 여기서 개선은 CDRA45+CCR7+(나이브 유사) T세포의 수/백분율 및/또는 T세포 생성물 중 분화된 세포의 수/백분율의 임의의 의도적인 조작 없이 제조된 T세포 생성물의 효과와 비교하여 관찰되는 것인, CAR T세포 치료의 효과를 개선시키는 방법.
KR1020227018999A 2019-11-06 2020-11-06 키메라 항원 수용체 t세포 요법 KR20220098184A (ko)

Applications Claiming Priority (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962931636P 2019-11-06 2019-11-06
US62/931,636 2019-11-06
US201962944937P 2019-12-06 2019-12-06
US62/944,937 2019-12-06
US202063031217P 2020-05-28 2020-05-28
US63/031,217 2020-05-28
US202063056369P 2020-07-24 2020-07-24
US63/056,369 2020-07-24
US202063063692P 2020-08-10 2020-08-10
US63/063,692 2020-08-10
US202063089930P 2020-10-09 2020-10-09
US63/089,930 2020-10-09
PCT/US2020/059285 WO2021092290A1 (en) 2019-11-06 2020-11-06 Chimeric antigen receptor t cell therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220098184A true KR20220098184A (ko) 2022-07-11

Family

ID=75849106

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227018999A KR20220098184A (ko) 2019-11-06 2020-11-06 키메라 항원 수용체 t세포 요법

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20210161959A1 (ko)
EP (1) EP4054603A1 (ko)
JP (1) JP2023500321A (ko)
KR (1) KR20220098184A (ko)
CN (1) CN114901295A (ko)
AU (1) AU2020380366A1 (ko)
BR (1) BR112022008514A2 (ko)
CA (1) CA3159938A1 (ko)
CO (1) CO2022007238A2 (ko)
IL (1) IL292665A (ko)
MX (1) MX2022005389A (ko)
WO (1) WO2021092290A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020511462A (ja) 2016-12-03 2020-04-16 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド キナーゼ阻害剤との組み合わせで治療用ｔ細胞を使用するための方法および組成物
MX2019014268A (es) 2017-06-02 2020-08-03 Juno Therapeutics Inc Artículos de manufactura y métodos para tratamiento usando terapia celular adoptiva.
WO2024092227A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Kite Pharma, Inc. Factors for optimizing immunotherapy
WO2024092152A1 (en) * 2022-10-28 2024-05-02 Kite Pharma, Inc. Improving efficacy and durable response of immunotherapy

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002077029A2 (en) * 2000-11-07 2002-10-03 City Of Hope Cd19-specific redirected immune cells
MY191608A (en) * 2014-04-07 2022-07-01 Novartis Ag Treatment of cancer using anti-cd19 chimeric antigen receptor
IL269209B2 (en) * 2017-04-01 2023-11-01 Avm Biotechnology Llc Substitution of cytotoxic preconditioning before cellular immunotherapy
AU2018335617B2 (en) * 2017-09-25 2021-12-09 Astrazeneca Ab Combination of a BTK inhibitor and an inhibitor of CDK9 to treat cancer

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020380366A1 (en) 2022-05-26
EP4054603A1 (en) 2022-09-14
CO2022007238A2 (es) 2022-06-10
US20220387492A1 (en) 2022-12-08
MX2022005389A (es) 2022-07-27
JP2023500321A (ja) 2023-01-05
BR112022008514A2 (pt) 2022-07-26
CN114901295A (zh) 2022-08-12
CA3159938A1 (en) 2021-05-14
US20210161959A1 (en) 2021-06-03
WO2021092290A1 (en) 2021-05-14
IL292665A (en) 2022-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220387492A1 (en) Chimeric antigen receptor t cell therapy
JP2021521137A (ja) 腫瘍微小環境の特性を使用するキメラ受容体ｔ細胞治療
JP2023154073A (ja) キメラ抗原受容体免疫療法薬を投与する方法
US20230270785A1 (en) Methods of administering chimeric antigen receptor immunotherapy
CA3107938C (en) Chimeric antigen receptor therapy t cell expansion kinetics and uses thereof
KR20230129485A (ko) T 세포 요법
TWI837437B (zh) 嵌合抗原受體t細胞療法
TW202128741A (zh) 嵌合抗原受體t細胞療法
US20220265719A1 (en) Immunotherapies
WO2024092152A1 (en) Improving efficacy and durable response of immunotherapy
US20220378830A1 (en) Chimeric antigen receptor t cell therapy
WO2024092227A1 (en) Factors for optimizing immunotherapy
CN117295507A (zh) 嵌合抗原受体t细胞疗法
CN116964225A (zh) 用于选择免疫疗法的基因标志物

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination