TW202417643A - 用於將免疫療法最佳化之因素 - Google Patents

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Abstract

本揭露係關於用於用細胞療法治療對象之惡性疾病的方法、預測該對象中對細胞療法產品之反應之可能性的方法、及預測該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性的方法。

Description

用於將免疫療法最佳化之因素
本揭露係關於用於用細胞療法治療對象之惡性疾病的方法、預測該對象中對細胞療法產品之反應之可能性的方法、及預測該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性的方法。
人類癌症就其本質而言包含了已發生基因或表觀遺傳轉化而變成異常癌細胞之正常細胞。在此過程中，癌細胞開始表現與正常細胞所表現者不同之蛋白質（包括但不限於抗原）。身體之先天免疫系統可使用這些失常腫瘤抗原來特異性靶向及殺滅癌細胞。然而，癌細胞會採用各種機制來防止免疫細胞（諸如T及B淋巴球）成功靶向癌細胞。
人類T細胞療法仰賴經富集或經修飾人類T細胞以靶向及殺滅患者中之癌細胞。為了增加T細胞靶向及殺滅特定癌細胞之能力，已開發出方法來工程改造T細胞以表現將T細胞對準特定目標癌細胞之構築體。例如，包含能夠與特定腫瘤抗原交互作用之結合域的嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)及T細胞受體(T cell receptor, TCR)使T細胞能夠靶向並殺滅表現該特定腫瘤抗原之癌細胞。需要理解人類T細胞療法之治療前屬性（例如，某些基因之表現水平）如何影響治療結果，包括免疫療法之安全性結果。
應理解的是，本揭露在其應用方面不限於在以下實施例、申請專利範圍、實施方式、及圖式中闡述之細節。本揭露能夠具有其他實施例且能夠以許多其他方式實行或進行。
本文提供之方法涉及評估特定參數，例如特定生物標記或分析物之表現，其可與結果（諸如治療結果）相關，包括反應，諸如完全反應(CR)或部分反應(PR)；或安全性結果（例如，不良事件），諸如在投予免疫療法（例如，細胞療法）後出現毒性，例如神經毒性或CRS。亦提供基於參數（諸如患者體內生物標記或分析物之表現）之評估來評估反應之可能性及/或毒性風險之可能性的方法。本文亦提供免疫療法（例如T細胞、非T細胞、基於TCR之療法、基於CAR之療法、雙特異性T細胞銜接器(BiTE)、及/或免疫檢查點阻斷），其包括細胞（例如經工程改造T細胞）及/或其組成物之方法及用途，其用於治療患有疾病或病況之對象，該疾病或病況通常係或包括癌症或腫瘤，諸如白血病或淋巴瘤。在一些態樣中，在用一些方法治療之對象中，該等方法及用途相較於某些替代方法提供或達成改善之反應及/或更持久之反應或功效且/或降低毒性或其他副作用之風險。在一些實施例中，該等方法包含投予指定數目或相對數目的經工程改造細胞、投予所定義比率的特定細胞類型、治療特定患者群體（諸如具有特定風險概況、分期、及/或既往治療史者）、投予額外治療劑、及/或其組合。
本揭露之一實施例係關於一種預測有需要之患者中對細胞療法產品之反應之可能性的方法，該方法包括：測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及至少部分地自該細胞療法產品中之該基因表現水平判定該患者中對該細胞療法產品之該反應之該可能性，其中相較於對照值，該至少一個基因之該基因表現水平之增加指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
本揭露之一實施例係關於一種預測細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性的方法，該方法包括：測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及至少部分地自該細胞療法產品中之該基因表現水平判定該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之該可能性，其中相較於對照值，該至少一個基因之該基因表現水平之增加指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
本揭露之一實施例係關於一種用於治療患者之惡性疾病的方法，該方法包括：測量細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；至少部分地自該測量至少一個基因之該基因表現水平來判定是否應向該患者投予有效劑量的該細胞療法產品、或有效劑量的該細胞療法產品及組合療法；及基於該判定步驟投予該有效劑量的該細胞療法產品、或該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法，其中若該至少一個基因之該基因表現水平處於或低於該至少一個基因之對照值，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品，且其中若該至少一個基因之該基因表現水平高於該至少一個基因之該對照值，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
本揭露之一實施例係關於一種用於選擇用於向有需要之患者投予之免疫療法CAR-T細胞產品之方法，該方法包括：測量該免疫療法CAR-T細胞產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；以及至少部分地自該測量至少一個基因之該基因表現水平，選擇用於向該患者投予之該免疫療法CAR-T細胞產品，或選擇用於向該患者投予之該免疫療法CAR-T細胞產品及組合療法，其中若該至少一個基因之該基因表現水平處於或低於該至少一個基因之對照值，則選擇該免疫療法CAR-T細胞產品用於向該患者投予，或者其中若該至少一個基因之該基因表現水平高於該至少一個基因之該對照值，則選擇該免疫療法CAR-T細胞產品及該組合療法用於向該患者投予。
在一個實施例中，免疫療法係T細胞療法。在一些實施例中，T細胞療法包含過繼細胞療法。在某些實施例中，過繼細胞療法係選自腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、經工程改造自體細胞療法(eACT)、及同種異體T細胞移植。在一個特定實施例中，eACT包含投予經工程改造之抗原特異性嵌合抗原受體(CAR)陽性(+) T細胞。在另一實施例中，eACT包含投予經工程改造之抗原特異性T細胞受體(TCR)陽性(+) T細胞。在一個實施例中，免疫療法係CAR T細胞或TCR T細胞療法。在一個實施例中，免疫療法係抗CD19 CAR T細胞療法。
以下係本揭露之非限制性實施例。
本揭露之一實施例係關於一種預測有需要之患者中對細胞療法產品之反應之可能性的方法，該方法包括：測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及至少部分地自該細胞療法產品中之該基因表現水平判定該患者中對該細胞療法產品之該反應之該可能性，其中相較於對照值，該至少一個基因之該基因表現水平之增加指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中在向該患者投予該細胞療法產品之前，測量該細胞療法產品中該至少一個基因之該基因表現水平。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中相較於IL-4之對照值，IL-4之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中相較於HLA-DQB1之對照值，HLA-DQB1之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中反應被定義為完全反應、部分反應、或正在進行之反應中之一或多者。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係識別目標抗原之CAR T或TCR T細胞療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係自體或同種異體的。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該目標抗原係腫瘤抗原，較佳地係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD79a、CD79b、CD123、FLT3、BCMA、SLAMF7、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白(endoglin)、蝶素(ephrin) B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、賴薩(Lassa)病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素(mesothelin)、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶(prostase)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(survivin)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C (tenascin-C)之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、GPC3（磷脂醯肌醇蛋白聚醣3）、以及此等抗原之任何衍生物或變體。此外，一些實施例包括可靶向上述抗原中之至少2者之CAR T細胞。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品表現包含CD28共刺激域之嵌合抗原受體。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該患者已被診斷患有選自由以下所組成之群組的癌症/腫瘤：實體腫瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)（非特指型）、濾泡淋巴瘤(FL)、由FL引起之DLBCL、變化型濾泡淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、慢性或急性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞淋巴瘤、一或多種B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、急性淋巴樣白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、B細胞前淋巴球白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、及多發性漿細胞瘤）、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、POEMS症候群（亦稱為Crow-Fukase氏症候群、Takatsuki氏症、及PEP症候群）、頭頸癌、子宮頸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、前列腺癌、乳癌、或其組合。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該癌症係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL、或被套細胞淋巴瘤。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係選自西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)、利基邁崙賽(lisocabtagene maraleucel)、及bb2121。
本揭露之一實施例係關於一種預測細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性的方法，該方法包括：測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及至少部分地自該細胞療法產品中之該基因表現水平判定該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之該可能性，其中相較於對照值，該至少一個基因之該基因表現水平之增加指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中在向該患者投予該細胞療法產品之前，測量該細胞療法產品中該至少一個基因之該基因表現水平。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中相較於IL-4之對照值，IL-4之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中相較於HLA-DQB1之對照值，HLA-DQB1之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係自體或同種異體的。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品識別目標抗原。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該目標抗原係腫瘤抗原，較佳地係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD79a、CD79b、CD123、FLT3、BCMA、SLAMF7、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白(endoglin)、蝶素(ephrin) B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、賴薩(Lassa)病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素(mesothelin)、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶(prostase)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(survivin)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C (tenascin-C)之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、GPC3（磷脂醯肌醇蛋白聚醣3）、以及此等抗原之任何衍生物或變體。一些實施例包括可靶向上述抗原中之至少2者之CAR T細胞。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品表現包含CD28共刺激域之嵌合抗原受體。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係用於向患者投予，該患者已被診斷患有選自由以下所組成之群組的癌症/腫瘤：實體腫瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)（非特指型）、濾泡淋巴瘤(FL)、由FL引起之DLBCL、變化型濾泡淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、慢性或急性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞淋巴瘤、一或多種B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、急性淋巴樣白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、B細胞前淋巴球白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、及多發性漿細胞瘤）、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、POEMS症候群（亦稱為Crow-Fukase氏症候群、Takatsuki氏症、及PEP症候群）、頭頸癌、子宮頸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、前列腺癌、乳癌、或其組合。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該癌症係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL、或被套細胞淋巴瘤。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係選自西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)、利基邁崙賽(lisocabtagene maraleucel)、及bb2121。
本揭露之一實施例係關於一種用於治療患者之惡性疾病的方法，該方法包括：測量細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；至少部分地自該測量至少一個基因之該基因表現水平來判定是否應向該患者投予有效劑量的該細胞療法產品、或有效劑量的該細胞療法產品及組合療法；及基於該判定步驟投予該有效劑量的該細胞療法產品、或該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法，其中若該至少一個基因之該基因表現水平處於或低於該至少一個基因之對照值，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品，且其中若該至少一個基因之該基因表現水平高於該至少一個基因之該對照值，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中在向該患者投予該細胞療法產品之前，測量該細胞療法產品中該至少一個基因之該基因表現水平。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中若IL-4之該基因表現水平較IL-4之對照值大至少約2倍，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中若HLA-DQB1之該基因表現水平較HLA-DQB1之對照值大至少約2倍，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該組合療法係IL-4拮抗劑、或IL-4受體拮抗劑、或其組合。在一些此類實施例中，組合療法係結合至IL-4之抗體或其片段。在一些此類實施例中，組合療法係結合至IL-4受體之抗體或其片段。在其他實施例中，細胞療法產品包括已經工程改造以具有降低或缺失之IL-4之表現的CAR T細胞。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中若IL-4之該基因表現水平並未較IL-4之對照值大至少約2倍，則不投予該組合療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中若HLA-DQB1之該基因表現水平並未較HLA-DQB1之對照值大至少約2倍，則不投予該組合療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係識別目標抗原之CAR T或TCR T細胞療法。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係自體或同種異體的。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該目標抗原係腫瘤抗原，較佳地係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD79a、CD79b、CD123、FLT3、BCMA、SLAMF7、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白(endoglin)、蝶素(ephrin) B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、賴薩(Lassa)病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素(mesothelin)、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶(prostase)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(survivin)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C (tenascin-C)之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、GPC3（磷脂醯肌醇蛋白聚醣3）、以及此等抗原之任何衍生物或變體。一些實施例包括靶向上述抗原中之至少2者之CAR T細胞。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品表現包含CD28共刺激域之嵌合抗原受體。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該患者已被診斷患有選自由以下所組成之群組的癌症/腫瘤：實體腫瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)（非特指型）、濾泡淋巴瘤(FL)、由FL引起之DLBCL、變化型濾泡淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、慢性或急性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞淋巴瘤、一或多種B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、急性淋巴樣白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、B細胞前淋巴球白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、及多發性漿細胞瘤）、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、POEMS症候群（亦稱為Crow-Fukase氏症候群、Takatsuki氏症、及PEP症候群）、頭頸癌、子宮頸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、前列腺癌、乳癌、或其組合。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該惡性疾病係（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL、或被套細胞淋巴瘤。
本揭露之一實施例係關於上述方法，其中該細胞療法產品係選自西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)、利基邁崙賽(lisocabtagene maraleucel)、及bb2121。
本揭露之一實施例係關於一種用於選擇用於向有需要之患者投予之免疫療法CAR-T細胞產品之方法，該方法包括：測量該免疫療法CAR-T細胞產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；以及至少部分地自該測量至少一個基因之該基因表現水平，選擇用於向該患者投予之該免疫療法CAR-T細胞產品，或選擇用於向該患者投予之該免疫療法CAR-T細胞產品及組合療法，其中若該至少一個基因之該基因表現水平處於或低於該至少一個基因之對照值，則選擇該免疫療法CAR-T細胞產品用於向該患者投予，並且其中若該至少一個基因之該基因表現水平高於該至少一個基因之該對照值，則選擇該免疫療法CAR-T細胞產品及該組合療法用於向該患者投予。
相關申請案之交互參照
本申請案主張2022年10月28日申請之美國臨時專利申請案第63/381,435號及2022年12月7日申請之美國臨時專利申請案第63/386,411號之優先權，其等之各者之全文特此以引用方式併入。
本揭露係部分地基於以下發現，即細胞療法產品中IL-4及/或HLA DQB1表現水平之增加與對象中CAR T細胞衰竭及對細胞療法產品反應之可能性降低相關。 定義
為了能更輕易理解本揭露，以下先定義某些用語。下列用語及其他用語之額外定義係在本說明書中各處闡述。
如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a)」、「一(an)」、及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。
除非有具體陳述或自上下文中明顯可知，如本文中所使用，用語「或(or)」係理解為涵括性的且同時涵蓋「或(or)」與「及(and)」。
在本文中，將使用用語「及/或(and/or)」之處認為是具體揭露兩個指定特徵或組分之各者（包含或不包含另一者）。因此，如用於諸如「A及/或B」之詞組中的用語「及/或」在本文中係意欲包括A及B；A或B；A（單獨）；及B（單獨）。同樣地，如用於諸如「A、B、及/或C (A, B, and/or C)」之詞組中的用語「及/或(and/or)」係意欲涵蓋下列態樣之各者：A、B、及C；A、B、或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A（單獨）；B（單獨）；及C（單獨）。
如本文中所使用，用語「例如(e.g.,)」與「亦即(i.e.)」僅意欲以作為範例而不造成限制之方式來使用，並且不應解讀為僅指本說明書中所明示列出的那些項目。
用語「或更多(or more)」、「至少(at least)」、「多於(more than)」、及類似者（例如，「至少一(at least one)」）係理解為包括但不限於至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或多於所述值。亦包括的是任何更大之數目或其間之分數。
相反地，用語「不多於(no more than)」包括少於所述值之各值。例如，「不多於100個核苷酸」包括100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、及0個核苷酸。亦包括的是任何更小之數目或其間之分數。
用語「複數(plurality)」、「至少二(at least two)」、「二或更多(two or more)」、「至少第二(at least second)」、及類似者係理解為包括但不限於至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或更多。亦包括的是任何更大之數目或其間之分數。
在本說明書各處，詞語「包含(comprising)」或諸如「comprises」或「comprising」之變型將理解為有意涵括所述元素、整數、或步驟、或元素組、整數組、或步驟組，但不排除任何其他元素、整數、或步驟、或元素組、整數組、或步驟組。應理解的是，在本文中以用語「包含」描述的態樣之處，亦另提供以用語「由……所組成(consisting of)」及/或「基本上由……所組成(consisting essentially of)」所描述之類似態樣。用語「由……所組成」排除申請專利範圍中未指定之任何元件、步驟、或成分。 In re Gray, 53 F.2d 520, 11 USPQ 255 (CCPA 1931); Ex parte Davis, 80 USPQ 448, 450 (Bd.App. 1948)（「由……所組成」定義為「除了通常與之相關之雜質以外，封閉申請專利範圍包括除所列者之外的材料」）。用語「基本上由……所組成」將申請專利範圍之範疇限制為指定材料或步驟「及不實質上影響所請揭露之（多個）基本及新穎特徵者」。
除非具體陳述或自上下文明顯可知，如本文中所使用，用語「約(about)」係指值或組成，其係在針對該特定值或組成物之可接受誤差範圍內，如由所屬技術領域中具有通常知識者所判定，其將部分取決於該值或組成如何測量或判定，亦即測量系統之限制。例如，「約」或「大約(approximately)」可意指依據所屬技術領域中之實務在一或多於一個標準偏差內。「約」或「大約」可意指至多10%之範圍（亦即，±10%）。因此，「約」可理解為在大於或小於所述值10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%、或0.001%內。例如，約5 mg可包括在4.5 mg與5.5 mg之間之任何量。此外，特別在關於生物系統或程序時，該等用語可意指值的至多一個數量級或至多5倍。當本揭露中提供特定的值或組成時，除非另有陳述，「約」或「大約」之意義應假設為在針對特定值或組成之可接受誤差範圍內。
如本文中所述，任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍、或整數範圍係理解為涵括所述範圍內之任何整數值，並且在適當時亦涵括其分數（諸如整數之十分之一及百分之一），除非另有指示。
本文中所使用之單位、前綴、及符號係使用其國際單位制(SI)公認形式來提供。數字範圍涵括定義該範圍之數字。
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語具有與本揭露所相關之技術領域中具有通常知識者一般理解者相同的意義。例如，Juo, 「The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology」, 2nd ed., (2001), CRC Press；「The Dictionary of Cell & Molecular Biology」, 5th ed., (2013), Academic Press；及「The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology」, Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press為所屬技術領域中具有通常知識者提供本揭露中所使用之許多用語的通用詞典。
「投予(administering)」係指使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何各種方法及遞送系統，將劑實際引入至對象。用於本文所揭示之配方的例示性投予途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊椎、或其他腸胃外投予途徑，例如藉由注射或輸注。用於本文所揭示之組成物的例示性投予途徑包括靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、脊椎、或其他腸胃外投予途徑，例如藉由注射或輸注。如本文中所使用，詞組「腸胃外投予(parenteral administration)」意指腸內及局部投予以外之投予模式（通常藉由注射），且包括但不限於靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、淋巴內(intralymphatic)、病灶內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管(transtracheal)、皮下、表皮下(subcuticular)、關節內、囊下、蜘蛛膜下、脊椎內、硬膜外、及胸骨內注射及輸注、以及體內電穿孔。在一些實施例中，配方係經由非腸胃外途徑（例如，口服）來投予。其他非腸胃外途徑包括局部、上皮或黏膜投予途徑，例如，鼻內、陰道內、直腸、舌下、或局部。投予亦可執行例如一次、複數次、及/或在一或多個延長期間內。在一個實施例中，CAR T細胞治療係經由包含CAR T細胞之「輸注產品(infusion product)」投予。
用語「抗體(antibody)」(Ab)包括但不限於特異性結合至抗原之醣蛋白免疫球蛋白。大致上，抗體可包含由雙硫鍵所互連之至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈、或其抗原結合分子。各H鏈包含重鏈可變區（在本文中縮寫為VH）及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個恆定域，CH1、CH2、及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區（在本文中縮寫為VL）及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個恆定域，CL。VH及VL區可進一步細分成稱為互補決定區(CDR)之高度可變區域，其間有稱為架構區(FR)之更具保留性區域。各VH及VL包含三個CDR及四個FR，以下列順序從胺基端排列到羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原交互作用之結合域。Ab之恆定區可介導免疫球蛋白對宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞（例如，效應細胞）及典型補體系統之第一組分(C1q)。
抗體可包括例如單株抗體、重組生產之抗體、單特異性抗體、多特異性抗體（包括雙特異性抗體）、人類抗體、經工程改造抗體、人源化抗體、嵌合抗體、免疫球蛋白、合成抗體、包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚體抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-抗體重鏈對、內抗體(intrabody)、抗體融合（在本文中有時稱為「抗體接合物(antibody conjugate)」)、異源接合物抗體、單域抗體、單價抗體、單鏈抗體或單鏈Fv (scFv)、駱駝化(camelized)抗體、親和抗體(affybody)、Fab片段、F(ab')2片段、雙硫鍵連接之Fv (sdFv)、抗獨特型(anti-idiotypic)（抗Id）抗體（包括例如抗-抗Id抗體）、微抗體(minibody)、域抗體、合成抗體（在本文中有時稱為「抗體擬似物(antibody mimetic)」)、及任何上述者之抗原結合片段。在一些實施例中，本文所述之抗體係指多株抗體群。
「抗原結合分子(antigen binding molecule)」、「抗原結合部分(antigen binding portion)」、或「抗體片段(antibody fragment)」係指包含抗體之抗原結合部分（例如，CDR）的任何分子，該分子係衍生自該抗體。抗原結合分子可包括抗原互補決定區(CDR)。抗體片段之實例包括但不限於形成自抗原結合分子之Fab、Fab'、F(ab')2、及Fv片段、dAb、線性抗體、scFv抗體、及多特異性抗體。肽體(peptibody)（亦即，包含肽結合域之Fc融合分子）係合適抗原結合分子之另一個實例。在一些實施例中，抗原結合分子結合至腫瘤細胞上之抗原。在一些實施例中，抗原結合分子結合至涉及過度增生性疾病之細胞上的抗原或結合至病毒或細菌抗原。在一些實施例中，抗原結合分子結合至CD19。在進一步實施例中，抗原結合分子係特異性結合至抗原之抗體片段，包括一或多個其互補決定區(CDR)。在進一步實施例中，抗原結合分子係單鏈可變片段(scFv)。在一些實施例中，抗原結合分子包含親合性多聚體(avimer)或由其所組成。
「抗原」係指任何引起免疫反應或能夠由抗體或抗原結合分子所結合之分子。免疫反應可涉及抗體生產、或特定免疫機能健全細胞之活化、或兩者。所屬技術領域中具有通常知識者會輕易理解到，任何巨分子（包括實際上所有蛋白質或肽）皆可作為抗原。抗原可係內源表現的，亦即由基因體DNA所表現，或可係重組表現的。抗原可對於某些組織（諸如癌細胞）具有特異性，或其可係廣泛表現的。此外，較大分子之片段可作為抗原。在一些實施例中，抗原係腫瘤抗原。
用語「中和(neutralizing)」係指結合至配體且防止或降低該配體之生物效應的抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段。在一些實施例中，抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段直接阻斷配體上之結合位點或另行透過間接方式改變配體結合之能力（諸如配體中之結構性或能量性改變）。在一些實施例中，抗原結合分子、scFv、抗體、或其片段防止其所結合之蛋白質執行生物功能。
用語「自體(autologous)」係指任何衍生自相同個體之材料，該材料之後會再重新引入至該個體。例如，本文所述之經工程改造自體細胞療法(eACT ™)方法涉及自患者收集淋巴球，接著將其工程改造以表現例如CAR構築體，接著再投予至相同患者。
用語「同種異體(allogeneic)」係指衍生自一個個體之任何材料，接著將其引入相同物種之另一個體，例如同種異體T細胞移植。
在一個實施例中，CAR T細胞治療包括「西卡思羅治療」。「西卡思羅治療」係由以下所組成：單次輸注抗CD19 CAR轉導之自體T細胞，其係以2 × 106個抗CD19 CAR T細胞/kg之目標劑量靜脈投予。針對體重大於100 kg之對象，可投予2 × 108個抗CD19 CAR T細胞之最大固定(flat)劑量。抗CD19 CAR T細胞係自體人類T細胞，其經工程改造以表現對CD19具有特異性之胞外單鏈可變片段(scFv)，該片段連接至胞內信號傳導部分，該胞內信號傳導部分包含來自串聯排列之CD28及CD3ζ (CD3-zeta)分子之信號傳導域，抗CD19 CAR載體建構體已在美國國家癌症研究所外科分部(NCI, IND 13871)設計、最佳化、及初步測試（Kochenderfer et al, J Immunother. 2009; 32(7):689-702; Kochenderfer et al, Blood.2010; 116(19):3875-86）。scFv係衍生自抗CD19單株抗體FMC63之可變區(Nicholson et al, Molecular Immunology.1997; 34(16-17):1157-65)。添加CD28共刺激分子之一部分，因為鼠類模型表明，此對於抗腫瘤效應及抗CD19 CAR T細胞之持續性係重要的(Kowolik et al, Cancer Res. 2006; 66(22):10995-1004)。CD3ζ鏈之信號傳導域係用於T細胞活化。將此等片段選殖至基於鼠幹細胞病毒(MSGV1)之載體中，用以基因工程改造自體T細胞。CAR建構體係藉由反轉錄病毒載體轉導插入T細胞基因體中。簡言之，周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)係藉由白血球分離術及Ficoll分離獲得。藉由在重組介白素2 (IL-2)存在下與抗CD3抗體培養來活化周邊血液單核細胞。將經刺激細胞用含有抗CD19 CAR基因之反轉錄病毒載體轉導，並在培養中增殖，以產生足夠的經工程改造T細胞用於投予。在一些實施例中，CAR T細胞療法係Yescarta ®（西卡思羅）。在一些實施例中，CAR T細胞療法係Tecartus ®（布萊奧妥）。
用語「轉導(transduction)」及「轉導(transduced)」係指藉由病毒載體將外來DNA引入細胞中之程序（參見Jones et al., 「Genetics: principles and analysis,」 Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998))。在一些實施例中，載體係反轉錄病毒載體、DNA載體、RNA載體、腺病毒載體、桿狀病毒載體、艾司坦-巴爾(Epstein Barr)病毒載體、乳多泡病毒載體、牛痘病毒載體、單純疱疹病毒載體、腺病毒相關載體、慢病毒載體、或其任何組合。
「癌症(cancer)」係指一組廣泛的各種疾病，其特徵在於體內異常細胞不受控制的生長。不受調控的細胞分裂及生長會導致惡性腫瘤形成，惡性腫瘤會侵犯鄰近組織，且亦可能透過淋巴系統或血液流轉移至身體遠處部位。「癌症」或「癌症組織」可包括腫瘤。在本申請案中，用語癌症係與惡性疾病(malignancy)同義。可藉由本文所揭示之方法治療的癌症之實例包括但不限於免疫系統之癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、及其他白血球惡性疾病。在一些實施例中，本文所揭示之方法可用於縮小衍生自例如下列之腫瘤的腫瘤大小：骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部位癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡淋巴瘤(FL)、變化型濾泡淋巴瘤、脾邊緣區型淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、兒童實體腫瘤、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導之癌症（包括由石棉誘導者）、其他B細胞惡性疾病、及該等癌症之組合。在一些實施例中，癌症係多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係NHL。特定癌症可能對化學或放射療法有反應或該癌症可能係難治性的。難治性癌症係指無法藉由外科介入來處理之癌症，並且該癌症一開始對化學或放射療法沒有反應或該癌症隨時間過去變得沒有反應。
如本文中所使用，「抗腫瘤效應(anti-tumor effect)」係指可呈現為腫瘤體積縮小、腫瘤細胞數目減少、腫瘤細胞增殖減少、轉移數目減少、整體或無進展存活期增加、預期壽命增加、或與腫瘤相關之各種生理症狀改善的生物效應。抗腫瘤效應亦可指預防腫瘤發生，例如疫苗。
如本文中所使用，「細胞介素(cytokine)」係指一個細胞回應於與特異性抗原之接觸而釋出的非抗體蛋白質，其中該細胞介素與第二個細胞交互作用而介導該第二個細胞中之反應。如本文中所使用，「細胞介素」意欲指由一個細胞群釋放且作為細胞間介導物作用於另一細胞之蛋白質。細胞介素可由細胞所內源表現或投予至對象。細胞介素可由免疫細胞（包括巨噬細胞、B細胞、T細胞、及肥大細胞）釋放而傳播免疫反應。細胞介素可在受體細胞中誘導各種反應。細胞介素可包括體內恆定細胞介素、趨化因子、促發炎細胞介素、效應物、及急性期蛋白。例如，體內恆定細胞介素（包括介白素(IL) 7及IL-15）會促進免疫細胞存活及增殖，而促發炎細胞介素可促進發炎反應。體內恆定細胞介素之實例包括但不限於IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15、及干擾素(IFN) γ。促發炎細胞介素之實例包括但不限於IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、腫瘤壞死因子(TNF)-α、TNF-β、纖維母細胞生長因子(FGF) 2、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、可溶細胞間黏附分子1 (sICAM-1)、可溶血管黏附分子1 (sVCAM-1)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、及胎盤生長因子(PLGF)。效應物之實例包括但不限於顆粒酶A、顆粒酶B、可溶性Fas配體(sFasL)、及穿孔素。急性期蛋白之實例包括但不限於C反應蛋白(CRP)及血清類澱粉蛋白A (SAA)。
「趨化因子(chemokine)」係一種細胞介素類型，其介導細胞趨化性或方向性移動。趨化因子之實例包括但不限於IL-8、IL-16、伊紅趨素、伊紅趨素-3、巨噬細胞衍生之趨化因子（MDC或CCL22）、單核球趨化蛋白1（MCP-1或CCL2）、MCP-4、巨噬細胞炎性蛋白1α (MIP-1α, MIP-1a)、MIP-1β (MIP-1b)、γ誘導蛋白10 (IP-10)、及胸腺及活化調控趨化因子（TARC或CCL17）。
如本文中所使用，「嵌合受體(chimeric receptor)」係指經工程改造表面表現之分子，其能夠辨識特定分子。包含能夠與特定腫瘤抗原交互作用之結合域的嵌合抗原受體(CAR)及經工程改造T細胞受體(TCR)讓T細胞能夠靶向及殺滅表現該特定腫瘤抗原之癌細胞。在一個實施例中，T細胞治療係基於經工程改造以表現嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)之T細胞，其包含(i)抗原結合分子、(ii)共刺激域、及(iii)活化域。共刺激域可包含胞外域、跨膜域、及胞內域，其中胞外域包含可經截短之鉸鏈域。
治療劑（例如經工程改造CAR T細胞、小分子、說明書中所述之「藥劑」）之「治療有效量(therapeutically effective amount)」、「有效劑量(effective dose)」、「有效量(effective amount)」、或「治療有效劑量(therapeutically effective dosage)」係當單獨使用或與其他治療劑組合使用時保護對象免於疾病發作或促進疾病消退之任何量，其係藉由疾病症狀嚴重性降低、無疾病症狀期間之頻率及持續時間增加、或預防因罹患疾病之損傷或失能而獲得證明。此類用語可互換使用。治療劑促進疾病消退之能力可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之各種方法評估（諸如在臨床試驗期間之人類對象中、在預測於人類中功效之動物模型系統中），或藉由檢定藥劑在體外檢定中之活性評估。可藉由在已知的體外或體內（例如動物模型）系統中測試來憑經驗判定治療有效量及劑量方案。
用語「組合」係指呈一個劑量單位形式之固定組合或組合投予，其中本揭露之化合物及組合夥伴（例如以下所解釋之另一種藥物，亦稱為「治療劑」或「藥劑」）可同時獨立投予或在時間間隔內單獨投予，尤其在此等時間間隔使組合夥伴顯示協作（例如協同）效應之情況下。單一組分可包裝於套組中或單獨包裝。組分（例如粉末或液體）中之一或兩者可在投予之前回溶或稀釋至所欲劑量。如本文中所使用，用語「共投予(co-administration)」或「組合投予(combined administration)」或類似者意指涵蓋向有需要之單一對象（例如患者）投予所選組合夥伴，且意欲包括其中藥劑不一定藉由相同投予途徑或同時投予的治療方案。
用語「醫藥上可接受(pharmaceutically acceptable)」係指分子或組成物當向接受者投予時，對其接受者無害，或對其接受者的益處超過任何有害效應。關於用於調配如本文所揭示之組成物的載劑、稀釋劑、或賦形劑，醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、或賦形劑必須與組成物之其他成分相容且對其接受者無害，或對接受者的益處必須超過任何有害效應。用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」意指醫藥上可接受之材料、組成物、或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、或溶劑包封材料，其涉及將藥劑自身體之一個部分攜帶或運輸至另一部分（例如自一個器官至另一個）。在醫藥組成物中存在之各載體在與配方之其他成分相容之情況下必須係「可接受(acceptable)」，且對患者無害，或必須對接受者的益處超過任何有害效應。可用作醫藥上可接受之載劑之材料的一些實例包含：糖，諸如乳糖、葡萄糖、及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花子油、芝麻油、橄欖油、玉米油、及黃豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨醇、甘露醇、及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；洋菜；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；藻酸；無致熱原的水；等張鹽水；林格氏液；乙醇；pH緩衝溶液；聚酯、聚碳酸酯及/或聚酐；及醫藥配方中採用的其他非毒性相容物質。
用語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」係指其中活性劑與一或多種醫藥上可接受之載劑調配在一起之組成物。在一些實施例中，活性劑以適於治療方案中投予之單位劑量存在，該治療方案展示當向相關對象或群體投予時達成預定治療效果之統計顯著機率。在一些實施例中，醫藥組成物可經調配以固體或液體形式投予，包含但不限於適用於以下形式：口服投予，例如灌劑（水性或非水性溶液或懸浮液）、錠劑，例如用於經頰、舌下、及全身性吸收者、丸劑、散劑、顆粒劑、施用於舌頭之糊劑；腸胃外投予，例如藉由皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜外注射作為例如無菌溶液或懸浮液或持續釋放配方；局部施用，例如作為乳膏、軟膏或控制釋放貼片、或施用至皮膚、肺或口腔之噴霧；陰道內或直腸內，例如作為栓劑、乳膏或泡沫；舌下；眼；經皮膚；或經鼻、肺及其他黏膜表面。
用語「降低(reducing)」及「減少(decreasing)」在本文中可互換使用，並且指示任何小於原始者之改變。「降低」及「減少」係相對用語，需要測量前後之間的比較。「降低」及「減少」包括完全耗盡。
用語「參考(reference)」描述與其進行比較之標準或控制。舉例而言，在一些實施例中，將所關注之藥劑、動物、個體、群體、樣本、序列、或值與作為藥劑、動物、個體、群體、樣本、序列、或值之參考或對照相比較。在一些實施例中，將所關注之測試、測量或判定與參考或對照實質上同時測試、測量及/或判定。在一些實施例中，參考或對照係歷史參考或對照，該歷史參考或對照可選地實施在有形介質中。通常，參考或對照係在與評估對象相當的條件或情況下判定或表徵的。當存在足夠的相似性以證明對所選擇之參考或對照的依賴及/或比較是合理的。
如通篇所用，「對照值」係指在投予細胞療法產品之前，在可比細胞療法產品中觀察到之特定分析物之基線量度。在某些態樣中，基線量度係基於特定批次之可比細胞療法產品中之特定分析物之測量而指定之值。在某些態樣中，基線量度係基於多批可比細胞療法產品中之特定分析物之測量而指定之值。在一些實施例中，與基線量度之偏差與向有需要之患者投予後細胞療法產品中CAR -T細胞衰竭之速率增加及/或用細胞療法產品治療之患者之反應率降低相關。更特定而言，在一些實施例中，相對於對應分析物之對照表現水平，來自細胞療法產品之測試樣本中分析物表現之增加與細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之速率相對於CAR T細胞衰竭之預期或歷史平均速率之增加相關聯，並且/或者相對於對應分析物之對照表現水平，來自細胞療法產品之測試樣本中分析物之表現增加與用細胞療法產品治療之患者中之反應可能性相對於群體中對細胞療法產品之反應之預期或歷史平均可能性降低相關聯。
用語「產品(product)」或「輸注產品(infusion product)」在本文中可互換使用，且係指向有需要之對象投予的T細胞組成物。一般而言，在CAR T細胞療法中，T細胞組成物係作為輸注產品投予。
如本文中所使用，用語「淋巴球(lymphocyte)」包括自然殺手(NK)細胞、T細胞、或B細胞。NK細胞係一種細胞毒性(cytotoxic)淋巴球類型，其代表先天免疫系統之主要組分。NK細胞會除去腫瘤及受病毒感染之細胞。其透過細胞凋亡或程式性細胞死亡之程序發揮作用。其等之所以稱為「自然殺手」是因為不需要活化即可殺滅細胞。T細胞在細胞介導之免疫性（無抗體涉及）中扮演主要角色。其T細胞受體(TCR)是自其他淋巴球類型使自身分化出來。胸腺（免疫系統之特化器官）主要負責T細胞之成熟。T細胞有六種類型，即：輔助T細胞（例如CD4+細胞）、細胞毒性T細胞（亦稱為TC、細胞毒性T淋巴球、CTL、T殺手細胞、細胞溶解T細胞、CD8+ T細胞、或殺手T細胞）、記憶T細胞（(i)幹記憶TSCM細胞（如初始細胞）係CD45RO−、CCR7+、CD45RA+、CD62L+（L-選擇素）、CD27+、CD28+、及IL-7Rα+，但其亦表現大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3、及LFA-1，且顯示許多記憶細胞特有之功能屬性）；(ii)中央記憶TCM細胞表現L-選擇素及CCR7，其等分泌IL-2但不分泌IFNγ或IL-4；及(iii)效應記憶TEM細胞，然而其不表現L-選擇素或CCR7，但生產效應細胞介素（如IFNγ及IL-4））、調節T細胞（Treg、抑制性T細胞、或CD4+CD25+調節T細胞）、自然殺手T細胞(NKT)、及γδ T細胞。在另一方面，B細胞在體液免疫性（有抗體涉及）中扮演主要角色。
此外，各類型之T細胞均可用如所屬技術領域中熟知的細胞表面標記表徵。例如，初始T細胞可表徵為CCR7+、CD45RO-、及CD95-。初始T細胞之額外標記包括CD45RA+、CD62L+、CD27+、CD28+、CD127+、CD132+、CD25-、CD44-、及HLA-DR-。記憶T幹細胞(Tscm)之表面標記包括但不限於CD45RO-、CCR7+、CD45RA+、CD62L+（L-選擇素）、CD27+、CD28+、IL-7Ra+、CD95+、IL-2RP+、CXCR3+、及LFA-。效應記憶T細胞(Tem)之表面標記包括但不限於CCR7-、CD45RO+、及CD95+。效應記憶T細胞之額外標記係IL-2Rβ+。對於中央記憶T細胞(Tcm)，合適的標記包括CD45RO+、CD95+、IL-2Rβ+、CCR7+、及CD62L+。對於效應T細胞(Teff)，合適的標記包括但不限於CD45RA+、CD95+、IL-2Rβ+、CCR7-、及CD62L-。
用語「經基因工程改造(genetically engineered)」或「經工程改造(engineered)」係指修飾細胞基因體之方法，其包括但不限於缺失編碼或非編碼區或其部分、或插入編碼區或其部分。在一些實施例中，經修飾之細胞係淋巴球（例如T細胞），其可獲自患者或捐贈者。細胞可經修飾以表現外源性構築體，諸如例如嵌合抗原受體(CAR)或T細胞受體(TCR)，其等係併入細胞基因體中。
「免疫反應(immune response)」係指免疫系統細胞（例如，T淋巴球、B淋巴球、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥大細胞、樹突細胞、及嗜中性球）及由任何這些細胞或肝臟所生產之可溶巨分子（包括Ab、細胞介素、及補體）的作用，其會導致對脊椎動物體內之侵犯病原體、受病原體所感染之細胞或組織、癌性或其他異常細胞、或（在自體性或病理性發炎之情況下）正常人類細胞或組織的選擇性靶向、結合、損傷、破壞、及/或消除。
用語「免疫療法(immunotherapy)」係指罹患疾病、或有感染疾病或遭受疾病再發之風險的對象藉由包含誘導、增強、抑制、或以其他方式修改免疫反應之方法的治療。免疫療法之實例包括但不限於T細胞療法。T細胞療法可包括過繼性T細胞療法、腫瘤浸潤淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、經工程改造自體細胞療法(eACT ™)、及同種異體T細胞移植。然而，所屬技術領域中具有通常知識者會認知到，本文中所揭示之調理方法會增強任何移植T細胞療法之有效性。T細胞療法之實例描述於美國專利公開案第2014/0154228號及第2002/0006409號、美國專利第7,741,465號、美國專利第6,319,494號、美國專利第5,728,388號、國際公開案第WO 2008/081035號、國際公開案第WO 2015/20096號、國際公開案第WO 2016/191756號、國際公開案第WO 2016/191755號、國際公開案第WO 2019/079564號、及國際公開案第WO 2021/092290號，其各自以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，免疫療法包含CAR T細胞治療。在一些實施例中，CAR T細胞治療產品係經由輸注投予。
免疫療法之T細胞可來自所屬技術領域中已知之任何來源。例如，T細胞可體外分化自造血幹細胞群，或T細胞可獲自對象。T細胞可得自例如周邊血液單核細胞(PBMC)、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸膜積水、脾臟組織、及腫瘤。此外，T細胞可衍生自所屬技術領域中可得之一或多種T細胞系。T細胞亦可得自使用熟習技藝人士已知之多種技術（諸如FICOLL ™分離及/或血球分離術）收集自對象的血液單元。單離用於T細胞療法之T細胞的額外方法以及用於製造用於細胞療法之CAR T細胞的方法揭示於美國專利公開案第2013/0287748號、國際公開案第WO 2015/20096號、國際公開案第WO 2016/191756號、國際公開案第WO 2016/191755號、國際公開案第WO 2019/079564號、及國際公開案第WO 2021/092290號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。
用語「經工程改造自體細胞療法(engineered Autologous Cell Therapy)」或「eACT ™」（亦稱為過繼性細胞轉移）係一種程序，藉此收集患者自身T細胞隨後對其進行基因改造以辨識並靶向在一或多種特定腫瘤細胞或惡性疾病之細胞表面上表現的一或多種抗原。T細胞可經工程改造以表現例如嵌合抗原受體(CAR)。CAR陽性(+) T細胞經工程改造以表現對連接至胞內信號傳導部分（包含至少一個共刺激域及至少一個活化域）之特定腫瘤抗原具有特異性的胞外單鏈可變片段(scFv)。CAR scFv可經設計以靶向例如CD19，其係由B細胞譜系中之細胞（包括所有正常B細胞及B細胞惡性疾病）表現的跨膜蛋白，包括但不限於非特指型之瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、及由濾泡淋巴瘤、NHL、CLL、及非T細胞ALL引起之DLBCL。實例CAR T細胞療法及構築體係描述於美國專利公開案第2013/0287748號、第2014/0227237號、第2014/0099309號、及第2014/0050708號中，且此等參考文獻之全文係以引用方式併入本文中。
如本文中所使用，「患者(patient)」或「對象(subject)」包括任何罹患癌症（例如淋巴瘤或白血病）之人類。用語「對象(subject)」及「患者」在本文中可互換使用。
如本文中所使用，用語「體外細胞(in vitro cell)」係指任何離體培養之細胞。特定而言，體外細胞可包括T細胞。用語「體內(in vivo)」意指在患者內。
用語「肽(peptide)」、「多肽(polypeptide)」、及「蛋白質(protein)」可互換使用，且係指包含由肽鍵共價連接之胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽含有至少兩個胺基酸，並且對於可包含蛋白質序列或肽序列之胺基酸數目上限沒有限制。多肽包括包含彼此由肽鍵所接合之二或更多個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文中所使用，該用語係同時指短鏈（在所屬技術領域中亦經常稱為例如肽、寡肽、及寡聚物）及長鏈（在所屬技術領域中通常稱為蛋白質，而蛋白質有許多類型）。「多肽」包括例如生物活性片段、實質上同源之多肽、寡肽、同二聚體、異二聚體、多肽之變體、經修飾多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括自然肽、重組肽、合成肽、或其組合。
如本文中所使用，「刺激(stimulation)」係指由刺激分子與其同族配體之結合所誘導的初級反應，其中該結合介導信號轉導事件。「刺激分子(stimulatory molecule)」係T細胞上之分子（例如T細胞受體(TCR)/CD3複合物），其與抗原呈現T細胞上存在之同族刺激配體特異性結合。「刺激配體(stimulatory ligand)」係當存在於抗原呈現細胞（例如，APC、樹突細胞、B細胞、及類似者）上時可與T細胞上之刺激分子特異性結合的配體，藉以介導由該T細胞所致之初級反應，包括但不限於活化、起始免疫反應、增殖、及類似者。刺激配體包括但不限於抗CD3抗體、裝載有肽之MHC第I型分子、超級促效劑抗CD2抗體、及超級促效劑抗CD28抗體。
如本文中所使用，「共刺激信號(costimulatory signal)」係指與初級信號（諸如TCR/CD3連接）組合時會導致T細胞反應之信號，諸如但不限於關鍵分子之增殖及/或上調或下調。
如本文中所使用，「共刺激配體(costimulatory ligand)」包括抗原呈現細胞上特異性結合T細胞上之同族共刺激分子的分子。共刺激配體之結合提供介導T細胞反應之信號，包括但不限於增殖、活化、分化、及類似者。除了刺激分子所提供之初級信號外，共刺激配體亦藉由T細胞受體(TCR)/CD3複合物與裝載肽之主要組織相容性複合體(MHC)分子的結合誘導信號。共刺激配體可包括但不限於3/TR6、4-1BB配體、結合鐸(Toll)配體受體之促效劑或抗體、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、CD30配體、CD40、CD7、CD70、CD83、疱疹病毒進入介導劑(HVEM)、人類白血球抗原G (HLA-G)、ILT4、免疫球蛋白樣轉錄本(ILT) 3、可誘導共刺激配體(ICOS-L)、細胞間黏附分子(ICAM)、與B7-H3特異性結合之配體、淋巴毒素β受體、MHC第I型鏈相關蛋白A (MICA)、MHC第I型鏈相關蛋白B (MICB)、OX40配體、PD-L2、或程式性死亡(PD) L1。在某些實施例中，共刺激配體包括但不限於與T細胞上存在之共刺激分子特異性結合的抗體，諸如但不限於4-1BB、B7-H3、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD7、ICOS、與CD83特異性結合之配體、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1)、自然殺手細胞受體C (NKG2C)、OX40、PD-1、或腫瘤壞死因子超家族成員14（TNFSF14或LIGHT）。
「共刺激分子(costimulatory molecule)」係與共刺激配體特異性結合之T細胞上之同源結合夥伴(partner)，從而介導T細胞之共刺激反應，諸如但不限於增殖。共刺激分子包括但不限於4-1BB/CD137、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD33、CD45、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD134、CD137、CD154、CD16、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD22、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3 (α; β; δ; ε; γ; ζ)、CD30、CD37、CD4、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD5、CD64、CD69、CD7、CD80、CD83配體、CD84、CD86、CD8α、CD8β、CD9、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICOS、Ig α (CD79a)、IL2R β、IL2R γ、IL7R α、整合素、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LIGHT（腫瘤壞死因子超家族成員14；TNFSF14）、LTBR、Ly9 (CD229)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1 (CD11a/CD18)、MHC第I型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX40、PAG/Cbp、PD-1、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6 (NTB-A; Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF、TNFr、TNFR2、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。
用語「降低(reducing)」及「減少(decreasing)」在本文中可互換使用，並且指示任何小於原始者之改變。「降低」及「減少」係相對用語，需要測量前後之間的比較。「降低」及「減少」包括完全耗盡。同樣地，用語「增加(increasing)」指示高於原始值之任何改變。「增加」、「較高(higher)」、及「較低(lower)」係相對用語，需要測量前後之間及/或參考標準之間的比較。在一些實施例中，參考值係得自一般群體者，其可係一般患者群體。在一些實施例中，參考值來自一般患者群體之四分位數分析(quartile analysis)。
對象之「治療(treatment/treating)」係指對該對象執行之任何類型的介入或程序或向該對象投予活性劑，其中目標為逆轉、減輕、改善、抑制、減緩、或預防與疾病相關之症狀、併發症或病況、或生物化學指標的發作、進展、發展、嚴重性、或再發。在一些實施例中，「治療」包括部分緩解。在另一實施例中，「治療」包括完全緩解。在一些實施例中，治療可係疾病預防性的，在此情況下，治療係在觀察到病況之任何症狀之前投予。如本文所使用，用語「疾病預防(prophylaxis)」意指對疾病或疾病狀態之預防或保護性治療。預防症狀、疾病、或疾病狀態可包括降低（例如減輕）疾病或疾病狀態之一或多種症狀，其係例如相對於參考水平（例如不投予治療之類似對象中之（多種）症狀）。預防亦可包括延緩疾病或疾病狀態之一或多種症狀之發作，其係例如相對於參考水平（例如在不投予治療之類似對象中（多種）症狀之發作）。在實施例中，疾病係本文所述之疾病。在一些實施例中，疾病係癌症。在一些實施例中，疾病狀態係CRS或神經毒性。在一些實施例中，改善或成功治療之指標包括判定未能在毒性分級量表（例如CRS或神經毒性分級量表）上表現出相關得分，諸如小於3之得分；或如本文所論述之分級量表上的分級或嚴重性之變化，諸如自4分變化至3分、或自4分變化至2、1、或0分。
如本文所使用，「骨髓細胞(myeloid cell)」係白血球之子群，其包括顆粒球、單核球、巨噬細胞、及樹突細胞。
在一個實施例中，用語「高」及「低」意指「高於」及「低於」代表性對象群之中位數值。在一個實施例中，此等用語分別意指上四分位數或下四分位數。平均值及四分位數分布二者皆可由所屬技術領域中具有通常知識者藉由常規方法來判定。
如本文中所使用，用語「四分位數(quartile)」係統計用語，其描述基於數據值及其等與整組觀察結果之比較來將觀察結果區分為四個定義之區段。
如本文中所使用，用語「研究第0天(Study day 0)」係定義為對象接受第一次CAR T細胞輸注當天。研究第0天前一天將是研究第-1天。招募後及研究第-1天前之任何天將依序給予負整數值。
如本文中所使用，用語「持久反應(durable response)」係指在CAR T細胞輸注後在至少一年追蹤時仍有持續反應之對象。在一個實施例中，「反應持續時間(duration of response)」係定義為自第一次客觀反應至疾病進展或因疾病復發而死亡的時間。
如本文中所使用，用語「復發(relapse)」係指達到完全反應(CR)或部分反應(PR)且隨後經歷疾病進展之對象。
如本文中所使用，用語「無反應(non-response)」係指在CAR T細胞輸注後從未經歷CR或PR之對象，包括具有疾病穩定(SD)及疾病進展(PD)之對象。
如本文中所使用，用語「客觀反應(objective response)」係指完全反應(CR)、部分反應(PR)、或無反應。其可依據修改之IWG惡性淋巴瘤反應標準評估(Cheson et al., J Clin Oncol. 2007;25(5):579-86)。
如本文中所使用，用語「完全反應(complete response)」係指疾病完全解除，其變為無法藉由放射造影及臨床實驗室評估來偵測到。在給定時間無癌症證據。
如本文中所使用，用語「部分反應(partial response)」係指腫瘤有大於30%之縮小但未完全解除。
如本文中所使用，「客觀反應率」(objective response rate, ORR)係依據國際工作小組(International Working Group, IWG) 2007標準判定(Cheson et al. J Clin Oncol. 2007; 25(5):579-86)。
如本文中所使用，「無進展存活期(progression-free survival, PFS)」可定義為自T細胞輸注日期至疾病進展或因任何原因死亡之日期的時間。進展係依據由IWG標準定義之試驗主持人對反應之評估來定義(Cheson et al., J Clin Oncol. 2007; 25(5):579-86)。
用語「整體存活期(overall survival, OS)」可定義為自T細胞輸注日期至因任何原因死亡之日期的時間。
如本文中所使用，CAR T細胞在末梢血液中之擴增及持續性可藉由qPCR分析來監測，例如使用針對CAR之scFv部分（例如，CD19結合域之重鏈）及其鉸鏈/CD28跨膜域的CAR特異性引子。替代地，其可藉由計數CAR細胞/血液體積單位來測量。
如本文中所使用，針對CAR T細胞之排定抽血可在CAR T細胞輸注前、第7天、第2週（第14天）、第4週（第28天）、第3個月（第90天）、第6個月（第180天）、第12個月（第360天）、及第24個月（第720天）。
如本文中所使用，「CAR T細胞峰值(peak of CAR T cell)」係定義為第0天後所達到的血清中CAR+ PBMC/µL之最大絕對數目。
如本文中所使用，「到達CAR T細胞峰值之時間」係定義為第0天至達到CAR T細胞峰值當天的天數。
如本文中所使用，「第0天至第28天CAR T細胞水平之曲線下面積(AUC)」係定義為CAR T細胞水平對第0天至第28天之排定訪視作圖中的曲線下面積。此AUC測量CAR T細胞隨時間之總水平。
如本文中所使用，針對細胞介素之排定抽血係在調理化學療法前或當天（第-5天）、第0天、第1天、第3天、第5天、第7天、每隔一天（如果有的話透過住院）、第2週（第14天）、及第4週（第28天）。
如本文中所使用，細胞介素之「基線(baseline)」係定義為調理化學療法前測量的最後一次值。
如本文中所使用，在第X天相對於基線之倍數變化係定義為
如本文中所使用，「基線後細胞介素峰值(peak of cytokine post baseline)」係定義為在基線（第-5天）後至至多第28天所達到之血清中最高細胞介素水平。
如本文中所使用，CAR T細胞輸注後的「到達細胞介素峰值之時間(time to peak of cytokine)」係定義為第0天至達到細胞介素之峰值當天的天數。
如本文中所使用，第-5天至第28天「細胞介素水平之曲線下面積(AUC)」係定義為細胞介素水平對第-5天至第28天之排定訪視作圖中的曲線下面積。此AUC測量細胞介素隨時間之總水平。假使細胞介素及CAR+ T細胞係在某些離散時間點測量，則可使用梯形法則估計AUC。
如本文中所使用，治療後出現之不良事件(treatment-emergent adverse event, TEAE)係定義為在第一劑量之調理化學療法時或之後發生的不良事件(adverse event, AE)。不良事件可用藥事管理的醫學詞典(Medical Dictionary for Regulatory Activities, MedDRA)第22.0版編碼，並使用美國國家癌症研究所(National Cancer Institute, NCI)不良事件通用術語標準(Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE)第4.03版分級。細胞介素釋放症候群(Cytokine Release Syndrome, CRS)事件可依照Lee及其同事在症候群水平上進行分級(Lee et al, 2014 Blood.2014; 124(2):188-95。個別CRS症狀可依據CTCAE 4.03分級。神經性事件可用基於與CAR T免疫療法相關之已知神經毒性的搜尋策略來識別，如描述於例如Topp, MS et al. Lancet Oncology.2015; 16(1):57-66。
本揭露之各種態樣係進一步詳細描述於以下小節。 免疫療法癌症患者之血清蛋白譜之表徵
在一些實施例中，本揭露提供在用免疫療法及/或預調理進行治療之前表徵癌症患者之血清蛋白質譜之方法。在一個實施例中，免疫療法係選自使用嵌合受體療法（例如YESCARTA ™西卡思羅(axi-cel)、TECARTUS ™-布萊奧妥/KTE-X19、KYMRIAH ™（替薩真來魯塞）等）、TCR、TIL、免疫檢查點抑制劑等之治療。在一個實施例中，免疫療法產品包含自體或同種異體CAR T細胞。在一個實施例中，該免疫療法包含T細胞受體經修飾T細胞。在一個實施例中，該免疫療法包含腫瘤浸潤淋巴球(tumor infiltrating lymphocyte, TIL)。在一個實施例中，免疫療法產品包含誘導性多能幹細胞(iPSC)。如本文所述，在一些實施例中，藉由預先指定之蛋白組獲得血清蛋白特徵，並且藉由OPI及機器學習模型進行分析。在一些實施例中，可藉由ELISA來測量血清水平。在一些實施例中，血清蛋白譜與嵌合受體療法（例如，西卡思羅(axi-cel)）之不良事件相關聯，並且可用於回應於所有免疫療法（例如，T細胞、非T細胞、基於TCR之療法、基於CAR之療法、雙特異性T細胞銜接器(BiTE)及/或免疫檢查點阻斷）而預測不良事件。
在一個實施例中，本揭露提供與代謝程序及白血球活化相關聯之某些蛋白質之基線（預調理）血清水平與免疫療法之不良預後因素正相關，並且可為其生物標記，該等不良預後因素包括國際預後指數及基線腫瘤負荷量。在一個實施例中，免疫療法係T細胞療法。在一些實施例中，T細胞療法包含過繼細胞療法。在某些實施例中，過繼細胞療法係選自腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、經工程改造自體細胞療法(eACT)、及同種異體T細胞移植。在一個特定實施例中，eACT包含投予經工程改造之抗原特異性嵌合抗原受體(CAR)陽性(+) T細胞。在另一實施例中，eACT包含投予經工程改造之抗原特異性T細胞受體(TCR)陽性(+) T細胞。在一個實施例中，免疫療法係CAR T細胞或TCR T細胞療法。在一個實施例中，免疫療法係抗CD19 CAR T細胞療法。
因此，在一個實施例中，本發明提供一種基於癌症患者中之代謝程序標記及/或白血球活化標記之基線（預調理）血清水平來預測該患者中之國際預後指數及基線腫瘤負荷量參數之方法。
在一個實施例中，本揭露提供在投予細胞療法產品之前，該細胞療法產品中IL-4及/或HLA-DQB1表現水平之增加與CAR T細胞衰竭速率之增加及/或對該細胞療法產品之反應可能性之降低相關聯。在某些態樣中，在投予細胞療法產品（其中CAR包含CD28共刺激域）之前，該細胞療法產品中IL-4及/或HLA-DQB1表現水平之增加與CAR T細胞衰竭速率之增加及/或對該細胞療法產品之反應可能性之降低相關聯。在一個實施例中，此資訊用於作出與免疫療法相關聯之決定，包括是否投予免疫療法、投予何種劑量之免疫療法、遵循何種劑量方案、及/或在投予免疫療法之前、之後及/或期間應向患者投予何種藥劑，以改善管理及/或降低患者中之3+級CRS。
在一個實施例中，高生物標記水平係中位數或歷史值之至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、或至少100倍之水平。在一個實施例中，當（多個）蛋白質生物標記之表現水平下降0至0.1%、0.1%至0.5%、0.5%至1.0%、1至5%、5至10%、10至15%、15至20%、20至25%、25至30%、30至35%、35至40%、40至45%、45至50%、50至55%、55至60%、60至65%、65至70%等95%至100%）至分別高於或低於以上指定之中位數或值時，該等表現水平分別為高或低。所有列出之值皆可藉由用語「高於(above)」來修飾。
在一個實施例中，本揭露提供用免疫療法治療具有高腫瘤負荷量之對象之方法，其中藉由投予導致發炎減少（例如，血液中細胞介素誘導減少）之一或多種藥劑或治療及/或藉由使用替代淋巴球除盡方案來減少對象中之免疫活化介導之應激，該替代淋巴球除盡方案不包含在免疫療法之前投予500至600 mg/m 2/天之環磷醯胺及30 mg/m 2/天之氟達拉濱持續3天。在一個實施例中，當基線腫瘤負荷量(SPD)大於2500 mm 2、3000 mm 2、3500 mm 2、或4000 mm 2、較佳地大於3000 mm 2且/或腫瘤代謝體積高於代表性腫瘤群之中位數（例如高於100 ml或高於150 ml）時，該對象具有高腫瘤負荷量（如藉由SPD及/或腫瘤代謝體積所評估）。
在一個實施例中，本揭露提供治療具有高國際預後指數之對象之方法，其中藉由投予導致發炎減少（例如，血液中細胞介素誘導減少）之一或多種藥劑或治療及/或藉由使用替代淋巴球除盡方案來減少對象中之免疫活化介導之應激，該替代淋巴球除盡方案不包含在免疫療法之前投予500至600 mg/m 2/天之環磷醯胺及30 mg/m 2/天之氟達拉濱持續3天。在一個實施例中，當國際預後指數(IPI)大於1、2、或3時，對象具有高IPI。
在一個實施例中，免疫療法係T細胞療法。在一個實施例中，T細胞療法係自體的。在一個實施例中，T細胞療法係同種異體的。在一些實施例中，T細胞療法包含過繼細胞療法。在某些實施例中，過繼細胞療法係選自腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)免疫療法、自體細胞療法、經工程改造自體細胞療法(eACT)、iPSC、檢查點抑制劑、及同種異體T細胞移植。在一個特定實施例中，eACT包含投予經工程改造之抗原特異性嵌合抗原受體(CAR)陽性(+) T細胞。在另一實施例中，eACT包含投予經工程改造之抗原特異性T細胞受體(TCR)陽性(+) T細胞。在一個實施例中，免疫療法係CAR T細胞或TCR T細胞療法。在一個實施例中，免疫療法係抗CD19 CAR T細胞療法。目標腫瘤抗原之實例係列於說明書中其他地方。可藉由本揭露之方法治療的癌症之實例亦提供於說明書中之其他地方。
在一個實施例中，與免疫療法組合投予並減少免疫活化及/或內皮細胞破壞之（多種）藥劑（其中該組合療法減少細胞介素誘導，並且/或者其中該組合療法減少內皮細胞破壞）係選自抗IL-1（例如，阿那白滯素）、T細胞活化抑制劑（例如，達沙替尼）、JAK抑制劑（例如，菲格替尼）、抗GM-CSF（例如，倫齊魯單抗）、抗TNF（例如，英利昔單抗）、Ang2抑制劑（例如，阿齊沙坦）、抗血管生成療法（例如，貝伐單抗）、抗IFNg（例如，依帕伐單抗）等。在一個實施例中，免疫療法以增強T細胞增殖之組合療法投予。在一個實施例中，該組合療法包含使用派姆單抗、來那度胺、艾可瑞妥單抗、及烏托魯單抗之治療。在一個實施例中，該療法包含馬格羅單抗（抗CD47拮抗劑）、GSK3745417（STING促效劑）、INCB001158（ARG1/2抑制劑）、GS-1423 (CD73xTGFβ mAb)、塞魯單抗（CD40促效劑）、GS3583（FLT3促效劑）、培西達替尼（CSF1R抑制劑）、艾卡哚司他（IDO1抑制劑）、GS9620（TLR促效劑）。在一個實施例中，藥劑係選自：(i) GM-CSF抑制劑，其係選自朗齊魯單抗(lenzilumab)；奈米路單抗(namilumab) (AMG203)；GSK3196165/MOR103/奧替利單抗(otilimab) (GSK/MorphoSys)；KB002及KB003 (KaloBios)；MT203（Micromet及Nycomed）；MORAb-022/吉斯魯單抗(gimsilumab) (Morphotek)；或其任一者之生物相似藥(biosimilar)；E21R；及小分子；(ii) CSF1抑制劑，其係選自RG7155、PD-0360324、MCS110/拉妥珠單抗(lacnotuzumab)、或其任一者之生物相似藥版本；及小分子；及/或(iii) GM-CSFR抑制劑及CSF1R抑制劑，其係選自嗎里木單抗(mavrilimumab)（原CAM-3001；MedImmune, Inc.）；卡比拉單抗(cabiralizumab) (Five Prime Therapeutics)；LY3022855 (IMC-CS4)(Eli Lilly)，艾瑪圖單抗(emactuzumab)，亦稱為RG7155或RO5509554；FPA008 (Five Prime/BMS)；AMG820 (Amgen)；ARRY-382 (Array Biopharma)；MCS110 (Novartis)；PLX3397 (Plexxikon)；ELB041/AFS98/TG3003 (ElsaLys Bio, Transgene)、SNDX-6352 (Syndax)；其任一者之生物相似藥版本；及小分子。在一些實施例中，額外治療可係細胞介素（例如IL-2、IL-15）、刺激抗體（例如抗41BB、OX-40）、檢查點阻斷（例如CTLA4、PD-1）、或先天性免疫刺激劑（例如TLR、STING促效劑）。在一些實施例中，額外治療可係T細胞招募趨化因子（例如CCL2、CCL1、CCL22、CCL17、及其組合）。在一些實施例中，額外的一或多種療法係全身性或腫瘤內投予。在一些實施例中，組合使用之額外療法與調理及/或免疫療法一起投予。在一些實施例中，組合使用之額外療法與調理及/或免疫療法依序投予。
在一個實施例中，可以/應該在免疫療法投予之前、之後及/或期間向患者投予藥劑，以降低對象中之3+級CRS。在一個實施例中，在CAR-T輸注之前，在CAR-T擴增峰之前（例如輸注後第0天至第6天）及/或在峰值CAR-T擴增時（例如第7天至第14天）向該患者投予（多種）藥劑。在一個實施例中，CAR-T擴增峰係輸注後第7至14天。在一個實施例中，CAR-T擴增峰係輸注後第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、或第20天。在一個實施例中，峰值CAR-T擴增之後的期間係輸注後第14至28天之間的期間。在一個實施例中，峰值CAR-T擴增之後的期間係第1天至第5天、第5天至第10天、第10天至第15天、第15天至第20天、第20天至第25天；在第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、第20天、第25天、第30天、第35天、第40天、第45天、第50天後、峰值擴增之後的任一天。
在一個實施例中，免疫療法係與低劑量輻射、透過免疫檢查點阻斷促進T細胞活性、及/或T細胞促效劑組合。在一個實施例中，T細胞促效劑係選自派姆單抗、來那度胺、艾可瑞妥單抗、及烏托魯單抗。在一個實施例中，組合藥劑係選自檢查點抑制劑（例如抗PD1抗體，派姆單抗(Keytruda)、西米普利單抗(cemiplimab) (Libtayo)、納武單抗(nivolumab) (Opdivo)；抗PD-L1抗體，阿特珠單抗(Tecentriq)、阿維魯單抗(Bavencio)、德瓦魯單抗(Imfinzi)；及/或抗CTLA-4抗體，伊匹單抗(Yervoy)）。
在一個實施例中，預調理方案為淋巴球除盡方案。在一個實施例中，（多個）淋巴球除盡治療方案係選自環磷醯胺/氟達拉濱、苯達莫司汀、全身輻照、抗CD45（艾妥單抗）及其他化學治療劑（例如，AVM0703、白消安、噻替派/依託泊苷、噴司他丁）之若干種可能方案中之一者。額外調理方法及方案可在說明書中別處找到。
在一個實施例中，本揭露提供一種改善免疫療法（例如CAR T細胞治療）之方法，其係藉由將橋接療法(bridging therapy)最佳化，以將腫瘤微環境調節成更有利的免疫許可狀態(immune permissive state)。在一個實施例中，最佳化包含投予使用免疫調節醯亞胺藥物(IMID)/塞勒布隆(cereblon)調節劑（例如來那度胺、泊馬度胺(pomalidomide)、伊柏米特(iberdomide)、及阿普斯特(apremilast)）之橋接療法。在一個實施例中，最佳化包含投予使用局部輻射之橋接療法。
在一個實施例中，本揭露提供一種改善免疫療法（例如CAR T細胞治療）之方法，其係藉由將橋接療法最佳化，以在投予免疫療法（例如CAR T細胞治療）之前減少腫瘤負荷量。在一個實施例中，最佳化包含投予使用R-CHOP、苯達莫司汀(bendamustine)、烷化劑、及/或基於鉑之藥劑之橋接療法。其他例示性橋接療法係描述於本申請案中之其他地方。
在一個實施例中，本揭露提供一種改善免疫療法（例如CAR T細胞治療）之方法，其係藉由將調理治療最佳化，以將腫瘤微環境調理成更有利的免疫許可狀態（例如TME中的骨髓發炎較少）。在一個實施例中，最佳化包含添加局部輻照至環磷醯胺/氟達拉濱(fludarabine)調理。在一個實施例中，最佳化包含投予基於鉑之藥劑作為調理劑。
在一個實施例中，本揭露提供一種改善免疫療法（例如CAR T細胞治療）之方法，其係藉由一起共投予生物反應調節劑或免疫療法（例如CAR T細胞治療）後投予，以實現CAR T細胞活性。在一個實施例中，該方法包含投予γ鏈細胞介素（例如IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、及IL-21）。在一個實施例中，該方法包含投予檢查點阻斷劑（例如抗CTLA-4）。
在一個實施例中，本揭露提供一種改善免疫療法（例如CAR T細胞治療）之方法，其係藉由將T細胞重編程，以克服有害的腫瘤微環境，包括低T/M比率、高腫瘤負荷量、高TME骨髓細胞密度、及/或高TME骨髓發炎水平。在一個實施例中，T細胞經工程改造以表現γ鏈受體細胞介素。在一個實施例中，γ鏈受體細胞介素在持續性(constitutive)或誘導性啟動子下表現。
在一個實施例中，本揭露提供一種改善CAR T細胞治療之方法，其係藉由將T細胞製造最佳化，以幫助CAR T細胞克服有害的腫瘤微環境，其中可能有害的腫瘤微環境之特徵包含低T/M比率、高腫瘤負荷量、高TME骨髓細胞密度、及/或高TME骨髓發炎水平。在一個實施例中，可能有害的TME之特徵包含低T/M比率（在-0.5至4內）、高腫瘤負荷量（在3000至40000 mm 2）、高骨髓細胞密度（在1000至4000個細胞/mm 2內）、及/或高TME骨髓發炎水平（在27至2000內）。在一個實施例中，該方法包含工程改造CAR T細胞以表現γ鏈受體細胞介素。在一個實施例中，γ鏈受體細胞介素在持續性(constitutive)或誘導性啟動子下表現。在一個實施例中，該方法包含在γ鏈細胞介素（諸如IL-15）存在下使T細胞生長。 臨床結果
在一些實施例中，臨床結果係完全反應。在一些實施例中，臨床結果係持久反應。在一些實施例中，臨床結果係完全反應。在一些實施例中，臨床結果係無反應。在一些實施例中，臨床結果係部分反應。在一些實施例中，臨床結果係客觀反應。在一些實施例中，臨床結果係存活。在一些實施例中，臨床結果係復發。
在一些實施例中，客觀反應(OR)係依據修改之IWG惡性淋巴瘤反應標準(Cheson, 2007)判定且藉由IWG惡性淋巴瘤反應標準(Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27 (September 2014) 3059-3067)判定。評估反應之持續期間。評估依據Lugano反應分類標準(Lugano Response Classification Criteria)由試驗主持人評估的無進展存活期(PFS)。
在一些實施例中，臨床結果之部分係評估不良事件。就此而言，CRS分級係根據Lee DW et al., (2014). Current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome. Blood.2014 Jul 10; 124(2): 188–195來進行。藉由監測患者神經毒性之體徵及症狀，排除神經症狀之其他原因，從而評估神經毒性。經歷≥ 2級神經毒性之患者應使用連續心臟遙測及脈搏血氧測定來進行監測。針對嚴重或威脅生命之神經毒性提供加護支持性療法。在一些實施例中，神經毒性之症狀係選自腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、及焦慮。
在一些實施例中，方法包含在輸注後在認證照護機構針對神經毒性之徵象及症狀至少每天監測患者持續7天。在一些實施例中，方法包含在輸注後針對神經毒性之徵象及症狀監測患者持續4週。
在一些實施例中，神經毒性之症狀係選自腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、及焦慮。在一些實施例中，不良反應之症狀係選自由下列所組成之群組：發燒、低血壓、心搏過速、缺氧、及發冷，包括心律不整（包括心房顫動及心室性心搏過速）、心跳停止、心臟衰竭、腎功能衰竭、微血管滲漏症候群、低血壓、缺氧、器官毒性、噬血球性淋巴組織球增生症/巨噬細胞活化症候群(HLH/MAS)、癲癎、腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、焦慮、急性過敏、嗜中性球低下合併發燒、血小板減少症、嗜中性球減少症、及貧血。在一些實施例中，指示患者在輸注後留在認證健康照護設施附近至少4週。
CAR T細胞治療之臨床結果係取決於血液中CAR T細胞之水平。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天時的追蹤判定。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1週、約2週、約3週、或約4週時的追蹤判定。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、及/或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約13個月、約14個月、約15個月、約16個月、約17個月、約18個月、約19個月、約20個月、約21個月、約22個月、約23個月、或約24個月時的追蹤判定。在一些實施例中，反應、血液中之CAR T細胞水平、及/或免疫相關因子係藉由在投予經工程改造CAR T細胞後約1年、約1.5年、約2年、約2.5年、約3年、約4年、或約5年時的追蹤判定。
在一些實施例中，本文中所述之方法可向對象提供臨床效益。在一些實施例中，至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%的患者達到臨床效益。在一些實施例中，大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、0%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%及其間之任何未列舉%的患者達到臨床效益。在一些實施例中，反應率係1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、9.5%、10.5%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、25 55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100%、或1%與100%之間的一些其他未列舉百分比及範圍。在一些實施例中，反應率係介於0%至10%、10%至20%、20%至30%、30%至40%、40%至50%、50%至60%、60%至70%、70%至80%、80%至90%、或90%至100%之間。在一些實施例中，反應率係介於0%至1.%、1%至1.5%、1.5%至2%、2%至3%、3%至4%、4%至5%、5%至6%、6%至7%、7%至8%、8%至9%、9%至10%、10%至15%、15%至20%、20至25%、25%至30%、35至40%、依此類推直到95%至100%之間。 嵌合抗原受體
在一個實施例中，免疫療法係CAR T細胞免疫療法。嵌合抗原受體(CAR)係經基因工程改造之受體。這些經工程改造受體可根據所屬技術領域中已知之技術插入免疫細胞中及由免疫細胞所表現，包括T細胞及其他淋巴球。使用CAR，可將單一受體程式化以辨識特異性抗原，且當結合至該抗原時活化免疫細胞以攻擊並破壞帶有該抗原之細胞。當這些抗原存在於腫瘤細胞上時，表現該CAR之免疫細胞即可靶向及殺滅該腫瘤細胞。嵌合抗原受體中可併入共刺激（信號傳導）域以增加其效力。參見美國專利第7,741,465、及6,319,494號、以及Krause et al.and Finney et al.（上述）、Song et al., Blood 119:696-706 (2012)；Kalos et al., Sci. Transl. Med. 3:95 (2011)；Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)、及Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59–83 (2016)。
在一些實施例中，包括截短鉸鏈域(truncated hinge domain, “THD”)之共刺激域進一步包含免疫球蛋白家族之一些或全部成員，諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM、或其片段。
在一些實施例中，THD係衍生自人類完整鉸鏈域（「CHD (complete hinge domain)」）。在其他實施例中，THD係衍生自共刺激蛋白之囓齒動物、小鼠、或靈長動物（例如，非人類靈長動物）CHD。在一些實施例中，THD係衍生自共刺激蛋白之嵌合CHD。
本揭露之CAR之共刺激域可進一步包含跨膜域及/或胞內信號傳導域。跨膜域可融合至CAR之胞外域。共刺激域同樣地可融合至CAR之胞內域。在一些實施例中，使用自然與CAR中之一個域相關的跨膜域。在一些情況下，跨膜域經選擇或修飾（藉由胺基酸取代）以避免此類域與相同或不同表面膜蛋白之跨膜域結合，以最小化與受體複合物之其他成員的交互作用。跨膜域可衍生自自然或合成來源。若來源係自然的，則該域可衍生自任何膜結合或跨膜蛋白。特別用於本揭露之跨膜區可衍生自（亦即，包含）4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8、CD8α、CD8β、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、Ig α (CD79a)、IL-2R β、IL-2R γ、IL-7R α、可誘導T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、與CD83特異性結合之配體、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1; CD11a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡-1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6 (NTB-A; Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。
可選地，短連接子可在CAR之任何或一些胞外、跨膜、及胞內域之間形成連接。本文所述之連接子亦可用作肽標籤。連接子肽序列可具有任何適當長度以連接一或多種所關注蛋白質，且較佳地經設計以足夠可撓，從而允許適當摺疊及/或其所連接之肽中之一或兩者的功能及/或活性。因此，連接子肽可具有不多於10、不多於11、不多於12、不多於13、不多於14、不多於15、不多於16、不多於17、不多於18、不多於19、或不多於20個胺基酸之長度。在一些實施例中，連接子肽包含至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、或至少20個胺基酸之長度。在一些實施例中，連接子包含至少7個且不多於20個胺基酸、至少7個且不多於19個胺基酸、至少7個且不多於18個胺基酸、至少7個且不多於17個胺基酸、至少7個且不多於16個胺基酸、至少7個且不多於15個胺基酸、至少7個且不多於14個胺基酸、至少7個且不多於13個胺基酸、至少7個且不多於12個胺基酸、或至少7個且不多於11個胺基酸。在某些實施例中，連接子包含15至17個胺基酸，且在特定實施例中，包含16個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含10至20個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含14至19個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含15至17個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含15至16個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含16個胺基酸。在一些實施例中，連接子包含3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個胺基酸。
在一些實施例中，使用間隔域。在一些實施例中，間隔域係衍生自CD4、CD8a、CD8b、CD28、CD28T、4-1BB、或本文中所述之其他分子。在一些實施例中，間隔域可包括化學誘導二聚化因子(dimerizer)以在添加小分子時控制表現。在一些實施例中，不使用間隔物。
本揭露之經工程改造T細胞之胞內（信號傳導）域可提供向活化域之信號傳導，其接著活化免疫細胞之至少一種正常效應功能。T細胞之效應功能例如可係細胞溶解活性或輔助活性，包括細胞介素之分泌。
在某些實施例中，合適的胞內信號傳導域包括（亦即，包含）但不限於4-1BB/CD137、活化NK細胞受體、免疫球蛋白蛋白質、B7-H3、BAFFR、BLAME (SLAMF8)、BTLA、CD100 (SEMA4D)、CD103、CD160 (BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276 (B7-H3)、CD28、CD29、CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8、CD8α、CD8β、CD96 (Tactile)、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CDS、CEACAM1、CRT AM、細胞介素受體、DAP-10、DNAM1 (CD226)、Fcγ受體、GADS、GITR、HVEM (LIGHTR)、IA4、ICAM-1、Ig α (CD79a)、IL-2R β、IL-2R γ、IL-7R α、可誘導T細胞共刺激劑(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、與CD83特異性結合之配體、LIGHT、LTBR、Ly9 (CD229)、Lyl08)、淋巴球功能相關抗原-1 (LFA-1; CD11a/CD18)、MHC第1型分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80 (KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程式性死亡-1 (PD-1)、PSGL1、SELPLG (CD162)、信號傳導淋巴球性活化分子（SLAM蛋白）、SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3)、SLAMF4 (CD244; 2B4)、SLAMF6 (NTB-A)、SLAMF7、SLP-76、TNF受體蛋白、TNFR2、TNFSF14、鐸配體受體、TRANCE/RANKL、VLA1、或VLA-6、或其片段、截短、或組合。 抗原結合分子
合適的CAR及TCR可結合至抗原（諸如細胞表面抗原），其係藉由併入與該靶向抗原交互作用之抗原結合分子。在一些實施例中，抗原結合分子係其抗體片段，例如一或多個單鏈抗體片段（「scFv」）。scFv係具有抗體重鏈及輕鏈之連結在一起之可變區的單鏈抗體片段。參見美國專利第7,741,465號及第6,319,494號、以及Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136。scFv保有親系抗體與目標抗原特異性交互作用之能力。scFv可用於嵌合抗原受體中，因為其等可經工程改造而表現為單鏈之一部分連同其他CAR組分。 Id.亦參見Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619–626)；Finney et al., Journal of Immunology,1998, 161: 2791–2797。將理解的是，抗原結合分子一般係包含在CAR或TCR之胞外部分內，使得其能夠識別並結合至所關注之抗原。雙特異性及多特異性CAR及TCR被設想在本揭露之範疇內，其等對多於一個所關注目標具有特異性。
在一些實施例中，多核苷酸編碼包含（截短）鉸鏈域及特異性結合至目標抗原之抗原結合分子的CAR或TCR。在一些實施例中，目標抗原係腫瘤抗原。在一些實施例中，抗原係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白、蝶素B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、拉薩病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(surviving)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、以及此等表面抗原之任何衍生物或變體。 經工程改造 T細胞及產品
在一個實施例中，免疫療法係T細胞療法。在一些實施例中，用於T細胞療法之捐贈者T細胞係獲自患者（例如用於自體T細胞療法）。在其他實施例中，用於T細胞療法之捐贈者T細胞係獲自不是該患者之對象。在某些實施例中，T細胞係腫瘤浸潤淋巴球(TIL)、經工程改造自體T細胞(eACT ™)、同種異體T細胞、異源T細胞、或其任何組合。在一些實施例中，T細胞係得自捐贈人對象。在一些實施例中，捐贈者對象係罹患癌症或腫瘤之人類患者。在一些實施例中，捐贈者對象係未罹患癌症或腫瘤之人類患者。
在一個實施例中，細胞係得自對象。在一個實施例中，細胞係誘導性多能幹細胞(iPSC)。T細胞可得自例如周邊血液單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸膜積水、脾臟組織、腫瘤、或體外分化。此外，T細胞可衍生自所屬技術領域中可得之一或多種T細胞系。T細胞亦可得自使用熟習技藝人士已知之多種技術（諸如FICOLL ™分離及/或血球分離術）收集自對象的血液單元。在一些實施例中，將藉由血球分離術收集之細胞洗滌以移除血漿部分，並置於適當緩衝劑或培養基中以用於後續處理。在一些實施例中，細胞係用PBS洗滌。如將理解的是，可使用洗滌步驟，諸如藉由使用半自動順流(flow through)離心機，例如CobeTM 2991細胞處理機、Baxter CytoMate ™、或類似者。在一些實施例中，經洗滌細胞係再懸浮於一或多種生物相容緩衝劑、或其他有或無緩衝劑之鹽水溶液中。在一些實施例中，血球分離術樣本之非所欲組分係經移除。用於T細胞療法之額外單離T細胞方法係揭示於美國專利公開案第2013/0287748號，其全文係以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，T細胞係單離自PBMC，方式為溶解紅血球及去除單核球，例如藉由使用透過PERCOLL ™梯度之離心。在一些實施例中，特定T細胞亞群（諸如CD4+、CD8+、CD28+、CD45RA+、及CD45RO+ T細胞）係藉由所屬技術領域中已知之正向或負向選擇技術進一步單離。例如，藉由負向選擇之T細胞群富集可用針對負向選擇細胞特有之表面標記的抗體之組合達成。在一些實施例中，可使用經由負向磁性免疫黏附或流動式細胞測量術之細胞分選及/或選擇，其使用針對存在於負向選擇細胞上之細胞表面標記的單株抗體混合物。例如，為了藉由負向選擇來富集CD4+細胞，單株抗體混合物一般包括針對CD8、CD11b、CD14、CD16、CD20、及HLA-DR之抗體。在一些實施例中，使用流動式細胞測量術及細胞分選來單離用於本揭露之所關注細胞群。
在一些實施例中，PBMC係使用本文中所述之方法直接用於對免疫細胞（諸如CAR）進行基因修飾。在一些實施例中，在單離PBMC後，將T淋巴球進一步單離，並且在基因修飾及/或擴增前或後將細胞毒性及輔助T淋巴球分選為初始、記憶、及效應T細胞亞群。
在一些實施例中，CD8+細胞係進一步分選為初始、中央記憶、及效應細胞，其係藉由識別與此等類型的CD8+細胞中之各者相關之細胞表面抗原。在一些實施例中，中央記憶T細胞之表型標記之表現包括CCR7、CD3、CD28、CD45RO、CD62L、及CD127之表現，且對顆粒酶B呈陰性。在一些實施例中，中央記憶T細胞係CD8+、CD45RO+、及CD62L+ T細胞。在一些實施例中，效應T細胞對CCR7、CD28、CD62L、及CD127呈陰性且對顆粒酶B及穿孔素呈陽性。在一些實施例中，CD4+ T細胞係進一步分選為亞群。例如，CD4+輔助T細胞可分選為初始、中央記憶、及效應細胞，其係藉由識別具有細胞表面抗原之細胞群。
在一些實施例中，使用已知方法單離後將免疫細胞（例如T細胞）基因修飾（經工程改造），或者在將免疫細胞基因修飾前先將其體外活化及擴增（或在先驅細胞之情況下將其分化）。在另一個實施例中，將免疫細胞（例如T細胞）用本文中所述之嵌合抗原受體（例如，用包含一或多個編碼CAR之核苷酸序列的病毒載體轉導）基因修飾然後將其體外活化及/或擴增。用於活化及擴增T細胞之方法為本領域中已知的並且作為非限制性實例描述於美國專利第6905874號、第6867041號及第6797514號以及國際公開案第WO 2015/20096號、第WO 2016/191756號、第WO 2016/191755號、第WO 2019/079564號及WO 2021/092290號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。其內容據此以全文引用之方式併入本文中。大致上，此類方法包括使PBMC或經單離T細胞在具有適當細胞介素（諸如IL-2）之培養基中與刺激劑及共刺激劑（諸如抗CD3及抗CD28抗體，通常附接至珠或其他表面）接觸。附接至相同珠之抗CD3及抗CD28抗體作為「代理(surrogate)」抗原呈現細胞(APC)。一個實例係Dynabeads ®系統，用於生理活化人類T細胞之CD3/CD28活化劑/刺激劑系統。在其他實施例中，將T細胞用餵養細胞及適當抗體與細胞介素來活化及刺激以增殖，並且使用諸如描述於美國專利第6,040,177及5,827,642號及PCT專利公開案第WO 2012/129514號之方法，其等之內容全文特此以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，包含經工程改造T細胞之組成物包含醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、溶解劑、乳化劑、保存劑、及/或佐劑。在一些實施例中，組成物包含賦形劑。
在一些實施例中，組成物係經選擇以用於腸胃外遞送、用於吸入、或用於透過消化道遞送（諸如口服）。此等醫藥上可接受組成物之製備係在所屬技術領域中具有通常知識者之能力內。在一些實施例中，緩衝劑係用以將組成物維持在生理pH或在稍低pH，一般在約5至約8之pH範圍內。在一些實施例中，當設想腸胃外投予時，組成物係呈包含本文中所述組成物（有或無額外治療劑）的無熱原、腸胃外可接受水溶液之形式，其在醫藥上可接受之媒劑中。在一些實施例中，用於腸胃外注射之媒劑係無菌蒸餾水，將本文所述之組成物（具有或不具有至少一種額外治療劑）於其中調配為無菌等張溶液並妥善保存。在一些實施例中，製備涉及所欲分子與聚合化合物（諸如聚乳酸或聚乙醇酸）、珠、或微脂體（其提供產品之控制或持續釋放）之配方，其接著經由長效儲存式注射(depot injection)遞送。在一些實施例中，使用可植入藥物遞送裝置來引入所欲分子。
在一些實施例中，經工程改造T細胞係以治療有效量來投予。例如，經工程改造T細胞之治療有效量可係至少約10 4個細胞、至少約10 5個細胞、至少約10 6個細胞、至少約10 7個細胞、至少約10 8個細胞、至少約10 9個、或至少約10 10個。在另一個實施例中，T細胞之治療有效量係約10 4個細胞、約10 5個細胞、約10 6個細胞、約10 7個細胞、或約10 8個細胞。在一些實施例中，T細胞之治療有效量係約2 × 10 6個細胞/kg、約3 × 10 6個細胞/kg、約4 × 10 6個細胞/kg、約5 × 10 6個細胞/kg、約6 × 10 6個細胞/kg、約7 × 10 6個細胞/kg、約8 × 10 6個細胞/kg、約9 × 10 6個細胞/kg、約1 × 10 7個細胞/kg、約2 × 10 7個細胞/kg、約3 × 10 7個細胞/kg、約4 × 10 7個細胞/kg、約5 × 10 7個細胞/kg、約6 × 10 7個細胞/kg、約7 × 10 7個細胞/kg、約8 × 10 7個細胞/kg、或約9 × 10 7個細胞/kg。
在一些實施例中，經工程改造活T細胞之治療有效量係在每kg體重約1 × 10 6與約2 × 10 6個經工程改造活T細胞之間至至多約1 × 10 8個經工程改造活T細胞之最高劑量。
在一些實施例中，經工程改造T細胞係抗CD19 CART T細胞。在一些實施例中，抗CD19 CAR T細胞為西卡思羅產品，YESCARTA ™西卡思羅(axi-cel)、TECARTUS ™-布萊奧妥/KTE-X19、KYMRIAH ™（替薩真來魯塞）、利基邁侖賽，在一些實施例中，經工程改造T細胞為抗BCMA CAR T細胞，諸如艾基維侖賽/bb2121等，在一些實施例中，產品符合商業規格。在一些實施例中，產品不符合商業規格（偏離規格(out-of-specification)產品，OOS）。在一些實施例中，相較於符合商業規格之西卡思羅產品，OOS產品包含較少的較低分化CCR7+ T N及T CM及更大比例的較高分化CCR7− T EM+ T EFF細胞。在一些實施例中，OOS產品導致投予之後中位數峰值CAR T細胞水平低於商業產品之水平。在一些實施例中，OOS產品仍顯示出可管理的安全性概況及有意義的臨床效益。
本申請案亦提供藉由本申請案之方法製備之細胞之劑量及投予（例如，CD19導向之基因修飾之自體T細胞免疫療法之輸注袋），其包含用於輸注之約68 mL嵌合抗原受體(CAR)陽性T細胞之懸浮液。在一些實施例中，CAR T細胞係以約40 mL調配用於輸注，在一些實施例中，CAR T細胞產品係以35 mL、40 mL、45 mL、50 mL、55 mL、60 mL、65 mL、70 mL、75 mL、80 mL、85 mL、90 mL、95 mL、100 mL、200 mL、300 mL、400 mL、500 mL、500 mL、700 mL、800 mL、900 mL、1000 mL之總體積調配。在一個態樣中，藉由本申請案之方法製備之細胞之劑量及投予（例如，CD19導向之基因修飾之自體T細胞免疫療法之輸注袋），其包含約40 mL之1×10 6CAR-T陽性細胞之懸浮液。目標劑量可為每kg體重約1 × 10 6至約2 × 10 6個CAR陽性活T細胞，其中最大值為2 × 10 8個CAR陽性活T細胞。
在一些實施例中，劑型包含用於在一次性使用患者特異性輸注袋中輸注之細胞懸浮液；投予途徑係靜脈內；藉由重力或蠕動泵歷經30分鐘輸注各一次性使用患者特異性袋之全部內容物。在一個實施例中，給藥方案為單次輸注，其由2.0 × 10 6個抗CD19 CAR T細胞/kg體重(± 20%)組成，其最大劑量為2 × 10 8個抗CD19 CAR T細胞（在對象≥100 kg情況下）。在一些實施例中，構成劑量之T細胞為CD19 CAR-T細胞。 調理劑
在一些實施例中，在免疫療法之前向對象投予調理劑。在一些實施例中，調理係用輻射治療來進行。在一些實施例中，調理療法為淋巴球除盡化學療法。
在一個實施例中，調理療法包含烷化劑，其選自由下列所組成之群組：美法侖、氯芥苯丁酸、環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、氮芥(HN2)、烏拉莫司汀、尿嘧啶氮芥、美法侖、氯芥苯丁酸、異環磷醯胺、苯達莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈脲黴素、烷基磺酸酯、白消安、噻替哌或其類似物、及其任何組合；嘌呤類似物，其選自由下列所組成之群組：硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、巰基嘌呤、硫嘌呤、硫鳥嘌呤、氟達拉濱、噴司他丁、克拉屈濱、及其任何組合；及/或基於鉑之預調理劑，其選自由下列所組成之群組：鉑、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、沙鉑(satraplatin)、四硝酸三鉑(triplatin tetranitrate)、丙卡巴肼(procarbazine)、六甲蜜胺(altretamine)、三氮烯(triazene)、達卡巴仁(dacarbazine)、米托唑胺(mitozolomide)、替莫唑胺(temozolomide)、達卡巴仁、替莫唑胺、及其任何組合。
在另一實施例中，該一或多種預調理劑可包括基於鉑之化學治療劑。在某些實施例中，基於鉑之化學治療劑係選自由下列所組成之群組：鉑、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、沙鉑(satraplatin)、四硝酸三鉑(triplatin tetranitrate)、丙卡巴肼(procarbazine)、六甲蜜胺(altretamine)、三氮烯(triazene)、達卡巴仁(dacarbazine)、米托唑胺(mitozolomide)、替莫唑胺(temozolomide)、達卡巴仁、替莫唑胺、其任何類似物或官能衍生物、及其任何組合。
在另一實施例中，該一或多種預調理劑可包括嘌呤類似物。在某些實施例中，嘌呤類似物係選自由下列所組成之群組：硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、巰基嘌呤、硫嘌呤、硫鳥嘌呤、氟達拉濱、噴司他丁、克拉屈濱、其任何類似物或官能衍生物、及其任何組合。在一個實施例中，該一或多種預調理劑包括氟達拉濱。
在一些實施例中，該一或多種預調理劑可包括環磷醯胺及嘌呤類似物。嘌呤類似物可選自由下列所組成之群組：硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、巰基嘌呤、硫嘌呤、硫鳥嘌呤、氟達拉濱、噴司他丁、克拉屈濱、其任何類似物或官能衍生物、及其任何組合。在一個特定實施例中，該一或多種預調理劑包括環磷醯胺及噴司他丁。在一個特定實施例中，該一或多種預調理劑包括環磷醯胺及氟達拉濱。作為非限制性實例，環磷醯胺及氟達拉濱之給藥量及方案描述於至少國際公開案第WO 2019/079564號、國際公開案第WO 2021/092290號、國際公開案第WO 2015/20096號、及國際公開案第WO 2016/191755號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，向患者投予第一劑量（亦適用於重複劑量）之該一或多種預調理劑。舉例而言，在一些實施例中，環磷醯胺之第一劑量為約300 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天。在另一實施例中，環磷醯胺之第一劑量高於300 mg/m 2/天且低於2000 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為約350 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天、至少約400 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天、約450 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天、約500 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天、約550 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天、或約600 mg/m 2/天至約2000 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為約350 mg/m 2/天至約1500 mg/m 2/天、約350 mg/m 2/天至約1000 mg/m 2/天、約400 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、約450 mg/m 2/天至約800 mg/m 2/天、約450 mg/m 2/天至約700 mg/m 2/天、約500 mg/m 2/天至約600 mg/m 2/天、或約300 mg/m 2/天至約500 mg/m 2/天。在另一實施例中，環磷醯胺之劑量為約350 mg/m 2/天、約400 mg/m 2/天、約450 mg/m 2/天、約500 mg/m 2/天、約550 mg/m 2/天、約600 mg/m 2/天、約650 mg/m 2/天、約700 mg/m 2/天、約800 mg/m 2/天、約900 mg/m 2/天、或約1000 mg/m 2/天。
在其他實施例中，環磷醯胺之第一劑量（亦適用於重複劑量）為約200 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天。在另一實施例中，環磷醯胺之第一劑量高於200 mg/m 2/天且低於3000 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為約200 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約300 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約400 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約500 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約600 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約700 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約800 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約900 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1000 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1100 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1200 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1300 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1400 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1500 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1600 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1700 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1800 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約1900 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約2000 mg/m 2/天至約3000 mg/m 2/天、約200 mg/m 2/天至約2900 mg/m 2/天、約400 mg/m 2/天至約2800 mg/m 2/天、約500 mg/m 2/天至約2700 mg/m 2/天、約600 mg/m 2/天至約2600 mg/m 2/天、約700 mg/m 2/天至約2500 mg/m 2/天、約800 mg/m 2/天至約2400 mg/m 2/天、約900 mg/m 2/天至約2350 mg/m 2/天、約1000 mg/m 2/天至約2300 mg/m 2/天、約1100 mg/m 2/天至約2250 mg/m 2/天、或約1110 mg/m 2/天至約2220 mg/m 2/天。在一個實施例中，環磷醯胺之第一劑量為200 mg/m 2/天。在另一實施例中，環磷醯胺之第一劑量為300 mg/m 2/天。在另一實施例中，環磷醯胺之第一劑量為500 mg/m 2/天。
在一些實施例中，氟達拉濱之第一劑量（亦適用於重複劑量）為約20 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天。在一些實施例中，氟達拉濱之劑量高於30 mg/m 2/天且低於900 mg/m 2/天。在一些實施例中，氟達拉濱之劑量為約35 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、約40 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、約45 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、約50 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、約55 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、或約60 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天。在一些實施例中，氟達拉濱之劑量為約35 mg/m 2/天至約900 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約800 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約700 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約600 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約500 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約400 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約300 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約200 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天至約100 mg/m 2/天、約40 mg/m 2/天至約90 mg/m 2/天、約45 mg/m 2/天至約80 mg/m 2/天、約45 mg/m 2/天至約70 mg/m 2/天、或約50 mg/m 2/天至約60 mg/m 2/天。在一些實施例中，氟達拉濱之劑量為約20 mg/m 2/天、約25 mg/m 2/天、約30 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天、約40 mg/m 2/天、約45 mg/m 2/天、約50 mg/m 2/天、約55 mg/m 2/天、約60 mg/m 2/天、約65 mg/m 2/天、約70 mg/m 2/天、約75 mg/m 2/天、約80 mg/m 2/天、約85 mg/m 2/天、約90 mg/m 2/天、約95 mg/m 2/天、約100 mg/m 2/天、約200 mg/m 2/天、或約300 mg/m 2/天。在一些實施例中，氟達拉濱之劑量為約20 mg/m 2/天、約25 mg/m 2/天、約30 mg/m 2/天、約35 mg/m 2/天、約40 mg/m 2/天、約45 mg/m 2/天、約50 mg/m 2/天、約55 mg/m 2/天、約60 mg/m 2/天、約65 mg/m 2/天、約70 mg/m 2/天、約75 mg/m 2/天、約80 mg/m 2/天、約85 mg/m 2/天、約90 mg/m 2/天、約95 mg/m 2/天、或約100 mg/m 2/天。在其他實施例中，氟達拉濱之劑量為約110 mg/m 2/天、120 mg/m 2/天、130 mg/m 2/天、140 mg/m 2/天、150 mg/m 2/天、160 mg/m 2/天、170 mg/m 2/天、180 mg/m 2/天、或190 mg/m 2/天。在一些實施例中，氟達拉濱之劑量為約210 mg/m 2/天、220 mg/m 2/天、230 mg/m 2/天、240 mg/m 2/天、250 mg/m 2/天、260 mg/m 2/天、270 mg/m 2/天、280 mg/m 2/天、或290 mg/m 2/天。在一個特定實施例中，氟達拉濱之劑量為約20 mg/m 2/天。在一個特定實施例中，氟達拉濱之劑量為約25 mg/m 2/天。在另一實施例中，氟達拉濱之劑量為約30 mg/m 2/天。在另一實施例中，氟達拉濱之劑量為約60 mg/m 2/天。
可調整該一或多種預調理劑之投予時序以最大化效果。在某些實施例中，該一或多種預調理劑包含二或更多種預調理劑。該二或更多種預調理劑可同時或依序投予。在一個特定實施例中，第一預調理劑（例如，環磷醯胺）在第二預調理劑（例如，氟達拉濱）之前或之後向患者投予。
環磷醯胺及氟達拉濱之劑量可一起或獨立地升高或降低。舉例而言，可在減少氟達拉濱之劑量之同時增加環磷醯胺之劑量，並且可在增加氟達拉濱之劑量之同時減少環磷醯胺之劑量。替代地，環磷醯胺及氟達拉濱二者之劑量可一起增加或減少。在一些實施例中，環磷醯胺之劑量為300 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為20 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為300 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為30 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為300 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為60 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為500 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為20 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為500 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為30 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為500 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為60 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為200 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為20 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為200 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為30 mg/m 2/天。在其他實施例中，環磷醯胺之劑量為200 mg/m 2/天，且氟達拉濱之劑量為60 mg/m 2/天。
如本文所述，投予T細胞療法之天係指定為第0天。該一或多種預調理劑可在投予T細胞療法之前的任何時間投予。在一些實施例中，該一或多種預調理劑之投予係在T細胞療法之投予前至少七天、至少六天、至少五天、至少四天、至少三天、至少兩天、或至少一天開始。在其他實施例中，該一或多種預調理劑之投予係在T細胞療法之投予前至少八天、至少九天、至少十天、至少十一天、至少十二天、至少十三天、或至少十四天開始。在一個實施例中，該一或多種預調理劑之投予係在T細胞療法投予前約七天開始。在另一實施例中，該一或多種預調理劑之投予係在T細胞療法投予前約五天開始。
在一個實施例中，第一預調理劑之投予係在T細胞療法投予前約七天開始，並且第二預調理劑之投予係在T細胞療法之投予前約五天開始。在一個特定實施例中，第一預調理劑係在T細胞療法投予前約七天及約六天向患者投予兩天。在另一實施例中，第二預調理劑係在T細胞療法投予前約五、四、三、二、及一天向患者投予五天。在另一實施例中，第一預調理劑係在T細胞療法投予前約五、四、及三天向患者投予三天。
在一個特定實施例中，環磷醯胺之投予係在T細胞療法投予前約七天開始，並且嘌呤類似物（例如，氟達拉濱或噴司他丁）之投予係在T細胞療法投予前約五天開始。在另一實施例中，環磷醯胺之投予係在T細胞療法投予前約五天開始，並且嘌呤類似物（例如，氟達拉濱或噴司他丁）之投予係在T細胞療法投予前約五天開始。
可調整各組分之投予時序以最大化效果。通常，該一或多種預調理劑可每天投予。在一些實施例中，該一或多種預調理劑係每天投予，持續約兩天、約三天、約四天、約五天、約六天、或約七天。在一些實施例中，該一或多種預調理劑可每天投予，持續至少一天、至少兩天、至少三天、至少四天、至少五天、至少六天、或至少七天。在一個特定實施例中，該一或多種預調理劑係每天投予，持續約三天。
如本文所述，向患者投予T細胞療法之天係指定為第0天。在一些實施例中，該一或多種預調理劑（例如，環磷醯胺）在第0天之前的第7天及第6天（即，第-7天及第-6天）向患者投予。在其他實施例中，該一或多種預調理劑（例如，環磷醯胺）在第-5天、第-4天、及第-3天向患者投予。在一些實施例中，該一或多種預調理劑（例如，氟達拉濱）在第-5天、第-4天、第-3天、第-2天、及第-1天向患者投予。在其他實施例中，該一或多種預調理劑（例如，氟達拉濱）在第-5天、第-4天、及第-3天向患者投予。
該一或多種預調理劑（例如，環磷醯胺及氟達拉濱）可在相同或不同天投予。若環磷醯胺及氟達拉濱在同一天投予，則環磷醯胺劑量可在氟達拉濱劑量之前或之後投予。在一個實施例中，環磷醯胺劑量在第-7天及第-6天向患者投予，並且氟達拉濱劑量在第-5天、第-4天、第-3天、第-2天、及第-1天向患者投予。在另一實施例中，環磷醯胺劑量在第-5天、第-4天、及第-3天向患者投予，並且氟達拉濱劑量在第-5天、第-4天、及第-3天向患者投予。
在某些實施例中，該一或多種預調理劑（例如，環磷醯胺及氟達拉濱）可同時或依序投予。在一個實施例中，環磷醯胺係在氟達拉濱之前向患者投予。在另一實施例中，環磷醯胺係在氟達拉濱之後向患者投予。
投予該一或多種預調理劑之途徑及方案為所屬技術領域中已知的，並且至少描述於例如國際公開案第WO 2019/079564號、國際公開案第WO 2021/092290號、國際公開案第WO 2015/20096號、及國際公開案第WO 2016/191755號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。 癌症
本文中所揭示之方法可用以治療對象中之癌症、縮小腫瘤大小、殺滅腫瘤細胞、預防腫瘤細胞增殖、預防腫瘤生長、自患者中消除腫瘤、預防腫瘤復發、預防腫瘤轉移、在患者中誘導緩解、或其任何組合。在一些實施例中，方法誘導完全反應。在其他實施例中，方法誘導部分反應。
可治療之癌症包括未形成血管、尚未實質上形成血管、或已形成血管之腫瘤。癌症亦可包括實體或非實體腫瘤。在一些實施例中，癌症係血液癌症。在一些實施例中，癌症係白血球細胞者。在其他實施例中，癌症係漿細胞者。在一些實施例中，癌症係白血病、淋巴瘤、或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、急性淋巴樣白血病(ALL)、及噬血球性淋巴組織細胞增生症(HLH)、B細胞前淋巴球白血病、B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓白血病(CML)、慢性或急性肉芽腫病、慢性或急性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡淋巴瘤、濾泡淋巴瘤(FL)、毛細胞白血病、噬血球性症候群（巨噬細胞活化症候群(MAS)、霍奇金氏病、大細胞肉芽腫、白血球黏附缺乏症、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、多發性骨髓瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群(MDS)、骨髓疾病（包括但不限於急性骨髓白血病(AML)）、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質；孤立性骨髓瘤；孤立性漿細胞瘤；髓外漿細胞瘤；及多發性漿細胞瘤）、POEMS症候群（Crow-Fukase氏症候群；Takatsuki氏症；PEP症候群）、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBC)、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、T細胞淋巴瘤、變化型濾泡淋巴瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、由FL引起之DLBCL、高級別B細胞淋巴瘤、或其組合。
在一些實施例中，癌症係骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症係白血病。在一些實施例中，癌症係急性骨髓白血病。在一些實施例中，癌症係復發性或難治性大B細胞淋巴瘤（可能在二或更多個全身性療法線之後），包括非特指型之彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、及由濾泡性淋巴瘤、或復發性或難治性濾泡性淋巴瘤(FL)（可能在二或更多個全身性療法線之後）、或復發性或難治性被套細胞淋巴瘤(MCL)引起之DLBCL。
在一些實施例中，癌症係非霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施例中，癌症係復發性/難治性NHL。在一些實施例中，癌症係被套細胞淋巴瘤。
在一些實施例中，癌症係晚期低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤(indolent non-Hodgkin lymphoma, iNHL)，包括濾泡淋巴瘤(FL)及邊緣區淋巴瘤(MZL)。在一些實施例中，患者在≥2種前線療法（包括具有烷化劑之抗CD20單株抗體）之後患有復發性/難治性疾病。在一些實施例中，患者可已接受PI3K抑制劑。在一些實施例中，患者（亦）可已接受自體幹細胞移植。在一些實施例中，患者經歷白血球分離術以獲得T細胞以用於CAR T細胞製造，接著在第-5天、第-4天、及第-3天投予使用500 mg/m 2/天環磷醯胺及30 mg/m 2/天氟達拉濱之調理化學療法；在第0天，患者可以2×10 6個CAR T細胞/kg之目標劑量接受單次靜脈內輸注CAR T細胞療法（例如西卡思羅、布萊奧妥）。在一些實施例中，可在稍後期間給予額外輸注。在一些實施例中，若患者在初始投予之後第3個月評估時有反應後出現進展，則患者可接受使用CAR T細胞治療（例如西卡思羅、布萊奧妥）之再治療。在一些實施例中，患者可接受橋接療法。橋接療法之實例係提供於說明書中之其他地方（包括實例）。在一些實施例中，患者經歷CRS。在一些實施例中，CRS係使用本申請案（包括實例）中所述之任一規程管理。在一些實施例中，CRS係用托珠單抗、皮質類固醇、及/或升壓劑管理。
在一些實施例中，癌症係復發性/難治性低惡性度非霍奇金氏淋巴瘤，且治療有需要之對象之方法包含向對象投予治療有效量的CAR T細胞作為再治療，其中該對象先前已接受使用CAR T細胞之第一次治療。在一些實施例中，使用CAR T細胞之第一次治療可已作為第一線療法或第二線療法投予，可選地其中淋巴瘤係R/R濾泡淋巴瘤(FL)或邊緣區淋巴瘤(MZL)，且可選地其中先前的前線療法包括與烷化劑組合之抗CD20單株抗體。在一些實施例中，調理療法包含在第-5天、第-4天、及第-3天之氟達拉濱30 mg/m 2IV及環磷醯胺500 mg/m 2IV。在一些實施例中，CAR T細胞治療包含在第0天之單次IV輸注2 × 10 6個CAR T細胞/kg。在一些實施例中，投予至少約10 4個細胞、至少約10 5個細胞、至少約10 6個細胞、至少約10 7個細胞、至少約10 8個細胞、至少約10 9個、或至少約10 10個CAR T細胞。在另一個實施例中，T細胞之治療有效量係約10 4個細胞、約10 5個細胞、約10 6個細胞、約10 7個細胞、或約10 8個細胞。在一些實施例中，T細胞之治療有效量係約2 × 10 6個細胞/kg、約3 × 10 6個細胞/kg、約4 × 10 6個細胞/kg、約5 × 10 6個細胞/kg、約6 × 10 6個細胞/kg、約7 × 10 6個細胞/kg、約8 × 10 6個細胞/kg、約9 × 10 6個細胞/kg、約1 × 10 7個細胞/kg、約2 × 10 7個細胞/kg、約3 × 10 7個細胞/kg、約4 × 10 7個細胞/kg、約5 × 10 7個細胞/kg、約6 × 10 7個細胞/kg、約7 × 10 7個細胞/kg、約8 × 10 7個細胞/kg、或約9 × 10 7個細胞/kg。在一些實施例中，CAR T細胞係抗CD19 CAR T細胞。在一些實施例中，CAR T細胞係西卡思羅CAR T細胞。在一些實施例中，再治療資格標準包括在第3個月疾病評估時具有後續進展之CR或PR之反應；藉由局部審查，進展活體組織切片中無CD19喪失之證據；及/或在使用CAR T細胞之第一次治療下，無4級CRS或神經性事件或危及生命之毒性。在一些實施例中，治療方法係臨床試驗(NCT03105336)之前的方法。
在一些實施例中，癌症係NHL，且免疫療法（例如CAR T或TCR T細胞治療）係作為第一線療法投予。在一些實施例中，癌症係LBCL。在一些實施例中，LBCL係具有 MYC及 BCL2及/或 BCL6易位之高風險/高級別LBCL或在招募前之任何時間IPI評分≥ 3之DLBCL。在一些實施例中，第一線療法包含與抗CD20單株抗體及含蒽環類藥物(anthracycline)之方案組合的CAR T細胞治療。在一些實施例中，先投予CAR T細胞治療。在一些實施例中，先投予抗CD20單株抗體/含蒽環類藥物之方案。在一些實施例中，治療係相隔至少2週、至少4週、至少6週、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、少於一年等投予。在一些實施例中，該方法進一步包含在白血球分離術之後投予且在起始調理化學療法之前完成的橋接療法。在一些實施例中，額外納入標準包括年齡≥18歲及ECOG PS 0至1。在一些實施例中，調理療法包含在第-5天、第-4天、及第-3天之氟達拉濱30 mg/m 2IV及環磷醯胺500 mg/m 2IV。其他例示性有益預調理治療方案係描述於美國臨時專利申請案62/262,143及62/167,750及美國專利第9,855,298號及第10,322,146號中，其等之全文特此以引用方式併入本文中。此等描述例如調理需要T細胞療法之患者的方法，其包含向患者投予指定有益劑量的環磷醯胺（在200 mg/m 2/天與2000 mg/m 2/之間）及指定劑量的氟達拉濱（在20 mg/m 2/天與900 mg/m 2/天之間）。一種此類劑量方案涉及治療患者，其包含在向患者投予治療有效量的經工程改造T之細胞前先向患者每天投予約500 mg/m 2/天的環磷醯胺及約60 mg/m 2/天的氟達拉濱達三天。另一實施例包含在T細胞投予前第-4天、第-3天、及第-2天的血清環磷醯胺及氟達拉濱，在該段時間的劑量係每天500 mg/m 2體表面積的環磷醯胺及每天30 mg/m 2體表面積的氟達拉濱。另一實施例包含在T細胞投予前第-2天的環磷醯胺及第-4、-3、及-2天的氟達拉濱，在該段時間期間劑量係900 mg/m 2體表面積的環磷醯胺及每天25 mg/m 2體表面積的氟達拉濱。在另一實施例中，調理包含在T細胞投予前第-5、-4、及-3天的環磷醯胺及氟達拉濱，在該段時間期間劑量係每天500 mg/m 2體表面積的環磷醯胺及每天30 mg/m 2體表面積的氟達拉濱。其他預調理實施例包含每天200-300 mg/m 2體表面積的環磷醯胺及每天20-50 mg/m 2體表面積的氟達拉濱之劑量，持續三天。在一些實施例中，CAR T細胞治療包含在第0天之單次IV輸注2 × 10 6個CAR T細胞/kg。在一些實施例中，投予至少約10 4個細胞、至少約10 5個細胞、至少約10 6個細胞、至少約10 7個細胞、至少約10 8個細胞、至少約10 9個、或至少約10 10個CAR T細胞。在另一個實施例中，T細胞之治療有效量係約10 4個細胞、約10 5個細胞、約10 6個細胞、約10 7個細胞、或約10 8個細胞。在一些實施例中，T細胞之治療有效量係約2 × 10 6個細胞/kg、約3 × 10 6個細胞/kg、約4 × 10 6個細胞/kg、約5 × 10 6個細胞/kg、約6 × 10 6個細胞/kg、約7 × 10 6個細胞/kg、約8 × 10 6個細胞/kg、約9 × 10 6個細胞/kg、約1 × 10 7個細胞/kg、約2 × 10 7個細胞/kg、約3 × 10 7個細胞/kg、約4 × 10 7個細胞/kg、約5 × 10 7個細胞/kg、約6 × 10 7個細胞/kg、約7 × 10 7個細胞/kg、約8 × 10 7個細胞/kg、或約9 × 10 7個細胞/kg。在一些實施例中，CAR T細胞係抗CD19 CAR T細胞。在一些實施例中，CAR T細胞治療包含抗CD19 CAR T細胞。在一些實施例中，CAR T細胞治療包含西卡思羅或YESCARTA ™。在一些實施例中，CAR T細胞治療包含TECARTUS ™-布萊奧妥或KYMRIAH ™（替薩真來魯塞）等）、艾基維侖賽/bb2121。
在另一實施例中，本揭露提供一種治療有需要之對象之癌症的方法，其包含向對象投予治療有效量的CD19 CAR-T治療，其中前線療法之數目係1至2；3；4；或≥ 5。在一個實施例中，本揭露提供一種治療有需要之對象之癌症的方法，其包含向對象投予治療有效量的CD19 CAR-T治療，其中前線療法之數目係1至2。癌症可係以上所列癌症中之任一者。CD19 CAR-T治療可係以上所列CD19 CAR-T治療中之任一者。在一些實施例中，CD19 CAR-T治療係用作第一線治療。在一些實施例中，CD19 CAR-T治療係用作第二線治療。
在一個實施例中，CD19 CAR-T治療係以上所述之CD19 CAR-T治療中之任一者。在一個實施例中，CD19 CAR-T治療包含西卡思羅治療。在實施例中，癌症係非特指型之難治性DLBCL (ABC/GCB)、具有或不具有MYC及BCL2及/或BCL6重排之HGBL、由FL引起之DLBCL、T細胞/組織細胞豐富型大B細胞淋巴瘤、與慢性發炎相關之DLBCL、原發性皮膚DLBCL腿型、及/或艾司坦-巴爾病毒(EBV) + DLBCL。在一個實施例中，選為進行西卡思羅治療之對象患有非特指型之難治性DLBCL (ABC/GCB)、具有或不具有MYC及BCL2及/或BCL6重排之HGBL、由FL引起之DLBCL、T細胞/組織細胞豐富型大B細胞淋巴瘤、與慢性發炎相關之DLBCL、原發性皮膚DLBCL腿型、及/或艾司坦-巴爾病毒(EBV) + DLBCL。在一些實施例中，西卡思羅治療係用作第二線治療，其中第一線療法係CHOP，亦即環磷醯胺(Cytoxan ®)、阿黴素(doxorubicin)（羥基阿黴素）、長春新鹼(vincristine) (Oncovin ®)、及潑尼松(prednisone)。在一些實施例中，西卡思羅治療係用作第二線治療，其中第一線療法係R-CHOP（CHOP加利妥昔單抗(rituximab)）。
在實施例中，選擇在第一線化學免疫療法之後患有復發性或難治性疾病之患者進行第二線西卡思羅治療，難治性疾病被定義為對第一線療法沒有完全緩解；排除不耐受第一線療法之個體。疾病進展(PD)作為對第一線療法之最佳反應，疾病穩定(SD)作為在至少4個循環的第一線療法（例如4個循環的R-CHOP）後之最佳反應，部分反應(PR)作為至少6個循環且活體組織切片證實之殘餘疾病或疾病進展≤ 12個月的療法後之最佳反應，且/或復發性疾病定義為對第一線療法完全緩解，接著在第一線療法之≤ 12個月活體組織切片證實之復發。在一些實施例中，對選為進行第二線西卡思羅治療之患者提供調理療法，該調理療法包含在第-5天、第-4天、及第-3天之氟達拉濱30 mg/m 2IV及環磷醯胺500 mg/m 2IV。在一些實施例中，西卡思羅治療係用作第二線治療。 組合治療
本文所揭示之包含表現CAR之免疫效應細胞之組成物可與任何數目之化學治療劑組合投予（在T細胞投予之前、之後及/或同時投予）。在一些實施例中，抗原結合分子、經轉導（或以其他方式經工程改造）細胞（諸如CAR）、及化學治療劑係以有效治療對象中之疾病或病況之量來投予。化學治療劑之實例包括烷化劑，諸如噻替哌(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN ™)；烷基磺酸酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)、及優瑞多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphaoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylol melamine)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如氯芥苯丁酸、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C (cactinomycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D (dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿黴素(doxorubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎拉黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、胺甲喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-硫唑脲嘧啶、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄性激素，諸如卡魯睪酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺麩精(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；埃夫咪辛(elformithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；凡那明(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多醣K (PSK)；雷佐生(razoxane)；西索菲蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴仁；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；伽托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷（「Ara-C」）；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL ™, Bristol-Myers Squibb)及多西他賽(doxetaxel) (TAXOTERE ®, Rhone-Poulenc Rorer)；氯芥苯丁酸；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰嘌呤；胺甲喋呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C (mitomycin C)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；溫諾平(navelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷；道諾黴素(daunomycin)；胺喋呤；截瘤達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸衍生物，諸如Targretin ™（貝沙羅汀(bexarotene)）、Panretin ™（阿利維A酸(alitretinoin)）；ONTAK ™（地尼介白素(denileukin diftitox)）；埃斯培拉黴素(esperamicin)；卡培他濱；及以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，包含本文中所揭示之CAR表現免疫效應細胞的組成物可與抗荷爾蒙劑結合投予，抗荷爾蒙劑作用為調控或抑制對腫瘤之荷爾蒙作用，諸如抗雌激素，包括例如泰莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制4(5)-咪唑、4-羥基泰莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、克沃昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene) (Fareston)；及抗雄性激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、柳菩林(leuprolide)、及戈舍瑞林(goserelin)；及以上任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。若適當，亦投予化學治療劑之組合，包括但不限於CHOP（亦即環磷醯胺(Cytoxan ®)、阿黴素（羥基阿黴素）、長春新鹼(Oncovin ®)、及潑尼松）、R-CHOP（CHOP加利妥昔單抗）、及G-CHOP（CHOP加阿托珠單抗(obinutuzumab)）。
在一些實施例中，化學治療劑係與經工程改造細胞之投予同時投予或在經工程改造細胞之投予後一週內投予。在其他實施例中，化學治療劑係在經工程改造細胞或核酸之投予後1至4週、或1週至1個月、1週至2個月、1週至3個月、1週至6個月、1週至9個月、或1週至12個月投予。在一些實施例中，化學治療劑係在投予細胞或核酸前至少1個月投予。在一些實施例中，方法進一步包含投予二或更多種化學治療劑。
各種額外治療劑可與本文所述之組成物結合使用（在T細胞投予之前、之後、及/或與其並行）。例如，可能有用的額外治療劑包括PD-1抑制劑，諸如納武單抗(OPDIVO ®)、派姆單抗(KEYTRUDA ®)、西米普利單抗(Libtayo)、皮地利珠單抗(pidilizumab) (CureTech)、及阿特珠單抗(Roche)；及PD-L1抑制劑，諸如阿特珠單抗、德瓦魯單抗、及阿維魯單抗。在一些實施例中，組合使用之（多種）治療劑為抗IL-1（例如，阿那白滯素）、T細胞活化抑制劑（例如，達沙替尼）、JAK抑制劑（例如，菲格替尼）、抗GM-CSF（例如，朗齊魯單抗）、抗TNF（例如，英利昔單抗）、Ang2抑制劑（例如，阿齊沙坦）、抗血管生成療法（例如，貝伐單抗）、及/或抗IFNg（例如，依帕伐單抗）。
適用於與本文所揭示之組成物及方法組合（在T細胞投予之前、之後、及/或與其並行）之額外治療劑包括但不限於依魯替尼(ibrutinib) (IMBRUVICA ®)、奧法木單抗(ofatumumab) (ARZERRA ®)、利妥昔單抗(RITUXAN ®)、貝伐珠單抗(bevacizumab) (AVASTIN ®)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (HERCEPTIN ®)、曲妥珠單抗恩他新(trastuzumab emtansine) (KADCYLA ®)、伊馬替尼(imatinib) (GLEEVEC ®)、西妥昔單抗(cetuximab) (ERBITUX ®)、帕尼單抗(panitumumab) (VECTIBIX ®)、卡妥索單抗(catumaxomab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、奧法木單抗、托西莫單抗(tositumomab)、本妥昔單抗(brentuximab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、來那替尼(neratinib)、阿西替尼(axitinib)、馬賽替尼(masitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、托西尼布(toceranib)、來他替尼(lestaurtinib)、阿西替尼、西地尼布(cediranib)、樂伐替尼(lenvatinib)、尼達尼布(nintedanib)、帕唑帕尼、瑞戈非尼(regorafenib)、司馬沙尼(semaxanib)、索拉非尼、舒尼替尼、替沃紮尼(tivozanib)、托西尼布、凡德他尼(vandetanib)、恩曲替尼(entrectinib)、卡博替尼(cabozantinib)、伊馬替尼、達沙替尼(dasatinib)、尼羅替尼(nilotinib)、普納替尼(ponatinib)、拉多替尼(radotinib)、博舒替尼(bosutinib)、來他替尼、魯索替尼(ruxolitinib)、帕瑞替尼(pacritinib)、考比替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、比美替尼(binimetinib)、艾樂替尼(alectinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克唑替尼(crizotinib)、阿柏西普(aflibercept)、脂肪肽(adipotide)、地尼白介素(denileukin diftitox)、mTOR抑制劑（諸如依維莫司(everolimus)及替西羅莫司(temsirolimus)）、刺蝟蛋白抑制劑（諸如索尼德吉(sonidegib)及維莫德吉(vismodegib)）、CDK抑制劑（諸如CDK抑制劑（帕博西尼(palbociclib)））、GM-CSF、CSF1、GM-CSFR、或CSF1R之抑制劑、加上抗胸腺細胞球蛋白、朗齊魯單抗、及嗎里木單抗。
在一個實施例中，GM-CSF抑制劑係選自朗齊魯單抗；奈米路單抗(namilumab) (AMG203)；GSK3196165/MOR103/奧替利單抗(otilimab) (GSK/MorphoSys)；KB002及KB003 (KaloBios)；MT203（Micromet及Nycomed）；MORAb-022/吉斯魯單抗(gimsilumab) (Morphotek)；或其任一者之生物相似藥(biosimilar)；E21R；及小分子。在一個實施例中，CSF1抑制劑係選自RG7155、PD-0360324、MCS110/拉妥珠單抗、或其任一者之生物相似藥版本；及小分子。在一個實施例中，GM-CSFR抑制劑及CSF1R抑制劑係選自嗎里木單抗（原CAM-3001；MedImmune, Inc.）；卡比拉單抗(cabiralizumab) (Five Prime Therapeutics)；LY3022855 (IMC-CS4)(Eli Lilly)，艾瑪圖單抗(emactuzumab)，亦稱為RG7155或RO5509554；FPA008 (Five Prime/BMS)；AMG820 (Amgen)；ARRY-382 (Array Biopharma)；MCS110 (Novartis)；PLX3397 (Plexxikon)；ELB041/AFS98/TG3003 (ElsaLys Bio, Transgene)、SNDX-6352 (Syndax)；其任一者之生物相似藥版本；及小分子。
在一些實施例中，包含免疫療法（例如經工程改造CAR T細胞）之組成物係與消炎劑（在T細胞投予之前、之後、及/或與其並行）一起投予。消炎劑或藥物包括但不限於類固醇及糖皮質素（包括倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松、乙酸氫化可體松、氫化可體松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、潑尼松、曲安西龍(triamcinolone)）、非類固醇消炎藥(NSAIDS)，包括阿司匹靈、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、胺甲喋呤(methotrexate)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、來氟米特(leflunomide)、抗TNF藥品、環磷醯胺、及黴酚酸酯(mycophenolate)。例示性NSAID包括布洛芬、萘普生、萘普生鈉、Cox-2抑制劑、及唾液酸化物(sialylate)。例示性止痛劑包括乙醯胺酚、羥考酮(oxycodone)、鹽酸普帕西芬之曲馬多(tramadol)。例示性糖皮質素包括可體松、地塞米松、氫化可體松、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、或潑尼松。例示性生物反應調節劑包括針對細胞表面標記（例如CD4、CD5等）之分子、細胞介素抑制劑（諸如TNF拮抗劑（例如依那西普(etanercept) (ENBREL ®)、阿達木單抗(adalimumab) (HUMIRA ®)、及英夫利昔單抗(infliximab) (REMICADE ®)））、趨化因子抑制劑、及黏附分子抑制劑。生物反應調節劑包括單株抗體以及分子之重組形式。例示性DMARD包括硫唑嘌呤、環磷醯胺、環孢素、胺甲喋呤、青黴胺、來氟米特、柳氮磺吡啶、羥氯奎寧、Gold（口服（金諾芬(auranofin)）及肌內）、及米諾環素(minocycline)。
在一些實施例中，本文所述之組成物係與細胞介素（在T細胞投予之前、之後、或與其並行）結合投予。細胞介素之實例係淋巴激素、單核因子(monokines)、及傳統多肽荷爾蒙。細胞介素中包括係生長荷爾蒙，諸如人類生長荷爾蒙、N-甲硫胺醯基人類生長荷爾蒙、及牛生長荷爾蒙；副甲狀腺荷爾蒙；甲狀腺素；胰島素；前胰島素；鬆弛素；前鬆弛素(prorelaxin)；醣蛋白荷爾蒙，諸如濾泡刺激素(FSH)、甲狀腺刺激素(TSH)、及黃體激素(LH)；肝生長因子(HGF)；纖維母細胞生長因子(FGF)；泌乳素；胎盤泌乳原；密拉氏管抑制物質；小鼠促性腺素相關肽；抑制素；活化素；血管內皮生長因子；整合素；促血小板生成素(thrombopoietin) (TPO)；神經生長因子(NGF)，諸如NGF-β；血小板生長因子；轉化生長因子(TGF)，諸如TGF-α及TGF-β；似胰島素生長因子-I及-II；紅血球生成素(EPO, Epogen ®, Procrit ®)；骨誘導因子；干擾素，諸如干擾素α、β、及γ；群落刺激因子(CSF)，諸如巨噬細胞-CSF (M-CSF)；顆粒球-巨噬細胞-CSF (GM-CSF)；及顆粒球-CSF (G-CSF)；介白素(IL)，諸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；IL-15，腫瘤壞死因子，諸如TNF-α或TNF-β；及其他多肽因子，包括LIF及kit配體(KL)。如本文中所使用，用語細胞介素包括來自自然來源或重組T細胞培養物之蛋白質、及初始序列細胞介素之生物活性等效物。
在一些實施例中，細胞之投予及額外治療劑之投予係在同一天進行，間隔不超過36小時、間隔不超過24小時、間隔不超過12小時、間隔不超過6小時、間隔不超過4小時、間隔不超過2小時、或間隔不超過1小時、或間隔不超過30分鐘進行。在一些實施例中，細胞之投予及額外治療劑之投予係在剛好或約0與剛好或約48小時之間、在剛好或約0與剛好或約36小時之間、在剛好或約0與剛好或約24小時之間、在剛好或約0與剛好或約12小時之間、在剛好或約0與剛好或約6小時之間、在剛好或約0與剛好或約2小時之間、在剛好或約0與剛好或約1小時之間、在剛好或約0與剛好或約30分鐘之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約48小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約36小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約24小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約12小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約6小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約4小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約2小時之間、在剛好或約30分鐘與剛好或約1小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約6小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約4小時之間、在剛好或約1小時與剛好或約2小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約6小時之間、在剛好或約2小時與剛好或約4小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約4小時與剛好或約6小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約6小時與剛好或約12小時之間、在剛好或約12小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約12小時與剛好或約36小時之間、在剛好或約12小時與剛好或約24小時之間、在剛好或約24小時與剛好或約48小時之間、在剛好或約24小時與剛好或約36小時之間、或在剛好或約36小時與剛好或約48小時之間進行。在一些實施例中，細胞及額外治療劑係同時投予。
在一些實施例中，藥劑係以剛好或約30 mg至5000 mg之劑量投予，諸如50 mg至1000 mg、50 mg至500 mg、50 mg至200 mg、50 mg至100 mg、100 mg至1000 mg、100 mg至500 mg、100 mg至200 mg、200 mg至1000 mg、200 mg至500 mg、或500 mg至1000 mg。
在一些實施例中，藥劑係以0.5 mg/kg至100 mg/kg、1 mg/kg至50 mg/kg、1 mg kg至25 mg/kg、1 mg/kg至10 mg/kg、1 mg/kg至5 mg/kg、5 mg/kg至100 mg/kg、5 mg/kg至50 mg/kg、5 mg/kg至25 mg/kg、5 mg/kg至10 mg/kg、10 mg/kg至100 mg/kg、10 mg/kg至50 mg/kg、10 mg/kg至25 mg/kg、25 mg/kg至100 mg/kg、25 mg/kg至50 mg/kg至50 mg/kg至100 mg/kg之劑量投予。在一些實施例中，藥劑各以1 mg/kg至10 mg/kg、2 mg kg/至8 mg/kg、2 mg/kg至6 mg/kg、2 mg/kg至4 mg/kg、或6 mg/kg至8 mg/kg之劑量投予。在一些態樣中，藥劑係以至少1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg、8 mg/kg、10 mg/kg、或更高之劑量投予。
在一些實施例中，（多種）藥劑藉由注射投予，例如靜脈內或皮下注射、眼內注射、眼周(periocular)注射、視網膜下注射、玻璃體內注射、經中隔(trans-septal)注射、鞏膜下注射、脈絡膜內注射、前房內(intracameral)注射、結膜下(subconjectval)注射、結膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜下(sub-Tenon's)注射、眼球後注射、眼球周注射、或後鞏膜旁(posterior juxtascleral)遞送。在一些實施例中，其係藉由腸胃外、肺內、及鼻內投予，且若需要局部治療，則係藉由病灶內投予。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內、或皮下投予
在一些實施例中，治療進一步包含橋接療法，該橋接療法係在調理與本文所揭示之組成物之間的療法、或在白血球分離術之後投予且在起始調理化學療法之前完成的療法。在一些實施例中，橋接療法包含CHOP、G-CHOP、R-CHOP（利妥昔單抗、環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼、及潑尼松龍(prednisolone)）、皮質類固醇、苯達莫司汀、鉑化合物、蒽環類藥物、及/或磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑。在一些實施例中，PI3K抑制劑係選自杜維昔布(duvelisib)、艾德昔布(idelalisib)、維奈托克(venetoclax)、皮克昔布(pictilisib) (GDC‐0941)、考班昔布(copanlisib)、PX‐866、布帕昔布(buparlisib) (BKM120)、皮拉昔布(pilaralisib) (XL‐147)、GNE‐317、艾培昔布(alpelisib) (BYL719)、INK1117、GSK2636771、AZD8186、SAR260301、及泰斯昔布(taselisib) (GDC‐0032)。在一些實施例中，AKT抑制劑係哌立福新(perifosine)、MK‐2206。在一個實施例中，mTOR抑制劑係選自依維莫司、西羅莫司(sirolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)、利達福莫司(ridaforolimus)。在一些實施例中，雙重PI3K/mTOR抑制劑係選自BEZ235、XL765、及GDC‐0980。在一些實施例中，PI3K抑制劑係選自杜維昔布(duvelisib)、艾德昔布(idelalisib)、維奈托克(venetoclax)、皮克昔布(pictilisib) (GDC‐0941)、考班昔布(copanlisib)、PX‐866、布帕昔布(buparlisib) (BKM120)、皮拉昔布(pilaralisib) (XL‐147)、GNE‐317、艾培昔布(alpelisib) (BYL719)、INK1117、GSK2636771、AZD8186、SAR260301、及泰斯昔布(taselisib) (GDC‐0032)。
在一些實施例中，橋接療法包含阿卡替尼、布倫圖昔單抗貝多汀、庫潘尼西鹽酸、奈拉濱、貝利司他、鹽酸苯達莫司汀、卡莫司汀、硫酸博來黴素、硼替佐米、澤布替尼、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、庫潘尼西鹽酸、地尼白介素、地塞米松、鹽酸阿黴素、度維利塞、普拉曲沙、奧濱尤妥珠單抗、替伊莫單抗、依魯替尼、艾代拉裡斯、重組幹擾素α-2b、羅米地普、來那度胺、鹽酸氮芥、胺甲蝶呤、莫格利珠單抗-kpc、prerixafor、尼拉拉濱、奧濱尤妥珠、地尼白介素、派姆單抗、普樂沙福、維泊妥珠單抗-piiq、莫格利珠單抗-kpc、潑尼松、利妥昔單抗、玻尿酸酶、羅米地普、硼替佐米、維奈托克、硫酸長春鹼、伏立諾他、澤布替尼、CHOP、COPP、CVP、EPOCH、R-EPOCH、HYPER-CVAD、ICE、R-ICE、R-CHOP、R-CVP、及其組合。
在一些實施例中，細胞免疫療法係與以降低腫瘤負荷量為目的使用之減積(debulking)療法結合投予。在一個實施例中，減積療法將在白血球分離術之後且在投予調理化學療法或細胞輸注之前投予。減積療法之實例包括下列（表1） 表1：例示性減積橋接療法
類型 建議方案 a 時機/洗除(washout)
R-CHOP 第1天利妥昔單抗375 mg/ m 2、第1天阿黴素50 mg/ m 2、第1天至第5天潑尼松100 mg、第1天環磷醯胺750 mg/ m 2、第1天長春新鹼1.4 mg/ m 2 在白血球分離術/招募之後投予，並且應在調理化學療法開始之前至少14天完成
R-ICE 第1天利妥昔單抗375 mg/ m 2、第2天異環磷醯胺5 g/ m 224h-CI、第2天卡鉑AUC5、第1天至第3天最大劑量800 mg依託泊苷100 mg/ m 2/d
R-GEMOX 第1天利妥昔單抗375 mg/ m 2、第2天吉西他濱1000 mg/ m 2、第2天奧沙利鉑(oxaliplatin) 100 mg/ m 2
R-GDP 第1天（或第8天）利妥昔單抗375 mg/ m 2、第1天及第8天吉西他濱1 g/ m 2、第1天至第4天地塞米松40 mg、第1天順鉑75 mg/ m 2（或第1天卡鉑AUC5）
放射療法 b 依據當地標準，至多20至30 Gy 在白血球分離術/招募之後投予，並且應在調理化學療法開始之前至少5天完成
縮寫：AUC，曲線下面積 a可使用其他減積治療選項，與醫療監測員討論。根據當地標準，可使用用水合、止吐、美司鈉、生長因子支持、及腫瘤溶解疾病預防之支持性照護。允許多於1個循環。 b至少1個目標病灶應保持在輻射場外，以允許腫瘤測量 監測
在一些實施例中，免疫療法（例如，嵌合受體T細胞免疫療法）之投予在認證健康健康照護設施發生。
在一些實施例中，本文所揭示之方法包含在輸注後在認證健康照護設施針對CRS及神經毒性之徵象及症狀及對CAR T細胞治療之其他不良反應至少每天監測患者持續7天。在一些實施例中，神經毒性之症狀係選自腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、及焦慮。在一些實施例中，不良反應之症狀係選自由下列所組成之群組：發燒、低血壓、心搏過速、缺氧、及發冷，包括心律不整（包括心房顫動及心室性心搏過速）、心跳停止、心臟衰竭、腎功能衰竭、微血管滲漏症候群、低血壓、缺氧、器官毒性、噬血球性淋巴組織球增生症/巨噬細胞活化症候群(HLH/MAS)、癲癎、腦病變、頭痛、震顫、暈眩、失語、譫妄、失眠、焦慮、急性過敏、嗜中性球低下合併發燒、血小板減少症、嗜中性球減少症、及貧血。在一些實施例中，指示患者在輸注後留在認證健康照護設施附近至少4週。 不良事件之預防或管理
在一些實施例中，該方法包含在任何對象中管理不良事件。用語「不良事件」、「不良反應」、及「不良效應」在本文中可互換使用。在一些實施例中，不良事件係選自由下列所組成之群組：細胞介素釋放症候群(CRS)、神經毒性、高敏感性反應、嚴重感染、血球減少、及低伽瑪球蛋白血症(hypogammaglobulinemia)。用於預測、偵測及/或管理與細胞療法治療相關聯之不良事件的方法為本領域中已知的並且作為非限制性實例描述於美國專利第6905874號、第6867041號及第6797514號以及國際公開案第WO 2015/20096號、第WO 2016/191756號、第WO 2016/191755號、第WO 2019/079564號及第WO 2021/092290號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。 繼發性惡性疾病
在一些實施例中，用CAR T細胞（例如CD19導向）或其他經基因修飾之自體T細胞免疫療法治療之患者可能發展繼發性惡性疾病。在某些實施例中，用CAR T細胞（例如CD19導向）或其他經基因修飾之同種異體T細胞免疫療法治療之患者可能發展繼發性惡性疾病。在一些實施例中，該方法包含針對繼發性惡性疾病進行終生監測。 用以產生用於增加臨床功效及/或減少毒性之產品的方法及組成物
在一個實施例中，本揭露提供一種製造具有改善臨床功效及/或降低毒性之免疫療法產品以根據預測之毒性級別(CRS/NE)在患者中使用之方法。
作為非限制性實例，用於單離免疫細胞及由經單離免疫細胞製造用於治療性產品之CAR T細胞的方法揭示於美國專利公開案第2013/0287748號、國際公開案第WO 2015/20096號、國際公開案第WO 2016/191756號、國際公開案第WO 2016/191755號、國際公開案第WO 2019/079564號、及國際公開案第WO 2021/092290號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，免疫療法產品包含血液細胞。在一些實施例中，將自對象或患者收集之血液細胞洗滌，以例如移除血漿部分，並將細胞置於適當緩衝劑或培養基中以用於後續處理步驟。在一些實施例中，將細胞用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌。在一些實施例中，洗滌溶液缺乏鈣、及/或鎂、及/或許多或所有二價陽離子。在一些實施例中，根據製造商的說明，在半自動「順流」離心機（例如Cobe 2991細胞處理機、Baxter）中完成洗滌步驟。在一些實施例中，根據製造商的說明，藉由切向流過濾(tangential flow filtration, TFF)完成洗滌步驟。在一些實施例中，在洗滌之後將細胞再懸浮於各種生物相容緩衝劑（諸如例如無Ca++Mg++之PBS）中。在某些實施例中，移除血液細胞樣本之組分，且將細胞直接再懸浮於培養基中。
在一些實施例中，該等方法包括基於密度之細胞分離方法，諸如藉由將紅血球裂解且透過Percoll或Ficoll梯度離心，自周邊血液製備白血球。在一些實施例中，該等方法包括白血球分離術。
可選地，在一些實施例中，本文所述之方法進一步包括在轉導步驟之前富集自供體對象獲得之淋巴球群的步驟。富集淋巴球可藉由任何合適的製備方法，包括但不限於使用分離培養基（例如，Ficoll-Paque ™、RosetteSep ™HLA總淋巴球富集混合液、淋巴球分離培養基(LSA)（MP Biomedical目錄號0850494X）、基於非離子型碘克沙醇之培養基，諸如OptiPrep ™、或其類似者）、藉由過濾或淘析之細胞大小、形狀或密度分離、免疫磁性分離（例如，磁活化細胞分選系統，MACS）、螢光分離（例如，螢光活化細胞分選系統，FACS）、或基於珠粒之管柱分離來完成。
可選地，在一些實施例中，經由使用選擇試劑通過CD4 +/CD8 +細胞之正向富集自樣本移除循環淋巴瘤細胞。在一些此類實施例中，在與選擇試劑一起培養之後，將經培養之細胞，包括其中結合有選擇試劑之細胞，轉移至用於基於免疫親和力之細胞分離系統中。在一些實施例中，用於基於免疫親和力之分離系統係或含有磁性分離柱。
在一些此類實施例中，單離方法包括基於一或多種特定分子（諸如表面標記，例如表面蛋白、胞內標記、或核酸）在細胞中之表現或存在來分離不同的細胞類型。在一些實施例中，可使用任何已知的基於此類標記之分離方法。在一些實施例中，分離係基於親和力或免疫親和力之分離。例如，在一些實施例中，單離包括基於細胞之表現、或一或多種標記（一般係細胞表面標記）之表現水平將細胞及細胞群分離，例如藉由與特異性結合至此類標記之抗體或結合夥伴培養，接著通常進行洗滌步驟及將已結合抗體或結合夥伴之細胞與未與抗體或結合夥伴結合之細胞分離。此類分離步驟可基於正向選擇，其中保留已結合試劑之細胞以供進一步使用；及/或負向選擇，其中保留未與抗體或結合夥伴結合之細胞。此類分離步驟可基於正向選擇，其中保留已結合試劑之細胞以供進一步使用；及/或負向選擇，其中保留未與抗體或結合夥伴結合之細胞。在一些實例中，保留兩個部分以供進一步使用。
在一些此類實施例中，在沒有特異性識別異質群中之細胞類型的抗體可用之情況下，負向選擇可係特別有用的，使得最好基於由除所欲群以外之細胞表現的標記進行分離。
分離不需要產生100%富集或移除表現特定標記之特定細胞群體或細胞。舉例而言，對於特定類型之細胞（諸如表現標記之彼等細胞）的正向選擇或富集係指增加此類細胞之數目或百分比，但不需要導致完全不存在不表現標記之細胞。同樣地，特定類型之細胞（諸如表現標記之彼等細胞）的負向選擇、移除或耗乏係指減少此類細胞之數目或百分比，但不需要導致完全移除所有此類細胞。
在一些實例中，進行多輪分離步驟，其中來自一個步驟之正向或負向選擇之部分經受另一分離步驟，諸如後續正向選擇或負向選擇。在一些實例中，單一分離步驟可諸如藉由將細胞與複數個抗體或結合夥伴（各自特異性針對靶向負向選擇之標記）一起培養來同時耗乏表現多個標記之細胞。同樣地，多種細胞類型可藉由將細胞與在各種細胞類型上表現之複數個抗體或結合夥伴一起培養來同時正向選擇。
舉例而言，在一些實施例中，藉由正向選擇或負向選擇技術單離T細胞之特定亞群，諸如陽性或表現一或多個表面標記，例如CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+、及/或CD45RO+T細胞之細胞。舉例而言，CD3+、CD28+T細胞可使用抗CD3/抗CD28接合磁珠（例如DYNABEADS ®M-450 CD3/CD28 T Cell Expander）來正向選擇。在一些實施例中，針對具有初始表型之T細胞(CD45RA+ CCR7+)富集細胞群。
在一些實施例中，單離係藉由正選擇富集特定細胞群體，或藉由負向選擇耗乏特定細胞群體來進行。在一些實施例中，正向選擇或負向選擇係藉由將細胞與特異性結合至分別在正向選擇細胞或負向選擇細胞上表現或以相對更高水平（標記高）表現（標記+）之一或多個表面標記的一或多種抗體或其他結合劑一起培養來達成。
在特定實施例中，對生物樣本，例如PBMC或其他白血球樣本進行CD4+ T細胞選擇，其中保留負向選擇及正向選擇部分兩者。在某些實施例中，CD8+ T細胞係選自負向選擇部分。在一些實施例中，對生物樣本進行CD8+ T細胞選擇，其中保留負向選擇及正向選擇部分兩者。在某些實施例中，CD4+ T細胞係選自負向選擇部分。
在一些實施例中，藉由在非T細胞，諸如諸如B細胞、單核球、或其他白血球，諸如CD14上表現之標記的負向選擇自PBMC樣本分離T細胞。在一些實施例中，CD4+或CD8+選擇步驟用於分離CD4+輔助及CD8+細胞毒性T細胞。此類CD4+及CD8+群可藉由正向選擇或負向選擇進一步分類為用於在一或多個初始、記憶、及/或效應T細胞亞群上表現或表現至相對較高程度之標記的亞群。
在一個實例中，為了藉由負向選擇來富集CD4+細胞，單株抗體混合物一般包括針對CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR、及CD8之抗體。在一些實施例中，抗體或結合夥伴結合至固體支撐物或基質，諸如磁珠或順磁珠，以允許分離用於正向選擇及/或負向選擇之細胞。例如，在一些實施例中，使用免疫磁性（或親和力磁性）分離技術將細胞及細胞群分離或單離。在一些實施例中，將待分離之細胞之樣本或組成物與小型、可磁化、或磁性反應材料，諸如磁性反應粒子或微粒子，諸如順磁珠（例如，諸如Dynabeads ™或MACS珠粒）一起培養。磁性反應材料，例如粒子通常直接或間接附接至結合夥伴，例如抗體，該結合夥伴特異性結合至分子，例如，存在於細胞、多個細胞、或細胞群體上之表面標記，例如意欲分離，例如意欲進行負向選擇或正向選擇。
在一些實施例中，磁性粒子或珠粒包含結合至特定結合部件，諸如抗體或其他結合夥伴之磁性反應材料。在磁性分離方法中使用了許多眾所周知的磁性反應材料。培養通常係在其中抗體或結合夥伴，或分子（諸如二級抗體或其他試劑）之條件下進行，該等分子特異性結合至與磁性粒子或珠粒附接之此類抗體或結合夥伴，特異性結合至細胞表面分子（若存在於樣本內的細胞上）。在一些實施例中，將樣本置於磁場中，且具有與其附接的磁性反應或可磁化粒子之彼等細胞將吸引至磁體且與未經標記之細胞分離。對於正向選擇，保留吸引至磁體之細胞；對於負向選擇，保留未吸引之細胞（未經標記之細胞）。在一些實施例中，正向選擇及負向選擇之組合係在相同選擇步驟期間執行，其中保留正向選擇及負向選擇部分且進一步處理或經受進一步分離步驟。在一些實施例中，磁性反應粒子被一級抗體或其他結合夥伴、二級抗體、凝集素、酶、或鏈親和素塗覆。在某些實施例中，磁性粒子經由特異性針對一或多個標記之一級抗體的塗覆來附接至細胞。在某些實施例中，添加細胞而非用一級抗體或結合夥伴標記之珠粒，且接著添加經細胞類型特異性二級抗體或其他結合夥伴（例如鏈親和素）塗覆之磁性粒子。在某些實施例中，將經鏈親和素塗覆之磁性粒子與生物素化一級或二級抗體結合使用。在一些實施例中，使磁性反應粒子附接至隨後培養(incubated)、培養(cultured)、及/或工程改造之細胞；在一些實施例中，使該等粒子附接至用於向患者投予之細胞。在一些實施例中，可磁化或磁性反應粒子自細胞移除。用於自細胞移除磁化顆粒之方法為已知的且包括例如使用競爭非標記抗體及接合至可裂解連接子之可磁化粒子或抗體。在一些實施例中，可磁化粒子係可生物降解的。
在一些實施例中，基於親和力選擇係經由磁性活化細胞分選(MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA)。磁性活化細胞分選(MACS)系統能夠具有附接至其之磁化粒子之細胞的高純度選擇。在某些實施例中，MACS以其中在施用外部磁場之後依序洗提非靶標及靶標物種之模式操作。亦即，附接至磁化粒子之細胞在不附接物種經洗提時保持原位。接著，在完成此第一洗提步驟之後，以某種方式釋放在磁場中捕獲且被阻止洗提之物種，使得該等物種可被洗提且回收。在某些實施例中，非靶細胞係經標記且自非均質細胞群體耗乏。
在一些實施例中，使用進行方法之單離、細胞製備、分離、處理、培養(incubation)、培養(culture)、及/或調配步驟中之一或多者之系統、裝置、或設備來進行分離或單離。在一些實施例中，系統用於在封閉或無菌環境中進行此等步驟中之每一者，例如以最大限度地減少誤差、用戶處理、及/或污染。在一個實例中，系統係如國際專利申請公開案第W02009/072003號或第US 20110003380 Al號中所描述之系統，該等國際專利申請公開案各自以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，系統或設備以整合或自含式系統及/或以自動化或可程式化方式進行例如單離、處理、工程改造、及調配步驟中之一或多者。在一些實施例中，系統或設備包括與該系統或設備通訊之電腦及/或電腦程式，該電腦及/或電腦程式允許使用者程式化、控制、評定處理、單離、工程改造及調配步驟之結果、及/或調整處理、單離、工程改造及調配步驟之各種實施例。在一些實施例中，使用CliniMACS系統(Miltenyi Biotec)進行分離及/或其他步驟，例如用於在封閉及無菌系統中以臨床規模等級自動分離細胞。組分可包括整合微電腦、磁性分離單元、蠕動泵及各種夾緊閥。在一些實施例中，整合電腦控制儀器之組件，且將系統引導在標準化序列中執行重複程序。在一些實施例中，磁性分離單元包括可移動永久磁鐵及用於選擇管柱之固持器。該蠕動泵控制整個管道組中之流動速率且與該等夾緊閥一起，確保緩衝液受控流動通過系統及細胞之持續懸浮液。
在一些實施例中，CliniMACS系統使用在無菌、非致熱溶液中供應之抗體-偶聯可磁化粒子。在一些實施例中，在具有磁性粒子之細胞標記之後，將細胞洗滌以移除過量粒子。接著將細胞製備袋連接至管道組，繼而連接至含有緩衝液之袋子及細胞收集袋。管道組由預組裝無菌管道，包括前置管柱及分離管柱組成，且僅用於單次使用。在分離程式起始後，系統自動將細胞樣本施加至分離管柱上。將經標記之細胞保留在管柱內，而未經標記之細胞藉由一系列洗滌步驟移除。在一些實施例中，用於與本文所述之方法使用之細胞群體未經標記且未保留在管柱中。在一些實施例中，用於與本文所述之方法使用之細胞群體經標記且保留在管柱中。在一些實施例中，用於與本文所述之方法使用之細胞群體在移除磁場後自管柱洗提，且在細胞收集袋內收集。
在某些實施例中，使用CliniMACS Prodisy系統(Miltenyi Biotec)進行分離及/或其他步驟。在一些實施例中，CliniMACS Prodigy系統配備有細胞處理單元，其允許藉由離心對細胞進行自動化洗滌及分離(fractionation)。CliniMACS Prodisy系統亦可包括機載攝影機及影像識別軟體，其藉由辨別源細胞產品之肉眼可見層來判定最佳細胞分離終點。例如，周邊血液自動分離成紅血球、白血球細胞、及血漿層。CliniMACS Prodisy系統亦可包括整合細胞培養室，其實現細胞培養方案，諸如細胞分化及擴增、抗原裝載、及長期細胞培養。輸入埠可允許無菌移除以及補充培養基，且可使用整合顯微鏡監測細胞。
在一些實施例中，本文所述之細胞群體經由流式細胞術收集且富集（或耗乏），其中針對多種細胞表面標記染色之細胞在流體流中攜帶。在一些實施例中，本文所述之細胞群體經由製備型規模(FACS)-分選收集且富集（或耗乏）。在某些實施例中，本文所述之細胞群體藉由使用微電機系統(MEMS)晶片與基於FACS之偵測系統之組合來收集且富集（或耗乏）（參見例如WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573；及Godin et al. (2008) J Biophoton. l(5):355-376）。在兩種情況下，細胞可用多種標記來標記，允許以高純度單離良好界定之T細胞子集。
在一些實施例中，抗體或結合夥伴經一或多個可偵測標記來標記，以促進正向選擇及/或負向選擇之分離。舉例而言，分離可基於與螢光標記之抗體之結合。在一些實例中，基於針對一或多種細胞表面標記具有特異性之抗體或其他結合夥伴之結合的細胞分離在流體流中進行，諸如藉由螢光活化細胞分選(FACS)，包括製備型規模(FACS)及/或微電機系統(MEMS)晶片，例如與流式細胞術偵測系統組合。此類方法允許同時基於多種標記進行正向選擇及負向選擇。
在一些實施例中，至少0.5 × 10 9個淋巴球係自供體取得，且可選地富集及/或經受刺激。在一些實施例中，至少0.6 × 10 9、0.7 × 10 9、0.8 × 10 9、0.9 × 10 9、1 × 10 9、1.1 × 10 9、1.2 × 10 9、1.3 × 10 9、1.4 × 10 9、1.5 × 10 9、1.6 × 10 9、1.7 × 10 9、1.8 × 10 9、1.9 × 10 9、2 × 10 9、2.5 × 10 9、或3 × 10 9個淋巴球係自供體取得，且可選地富集及/或經受刺激。在一些實施例中，不大於1 × 10 9、1.1 × 10 9、1.2 × 10 9、1.3 × 10 9、1.4 × 10 9、1.5 × 10 9、1.6 × 10 9、1.7 × 10 9、1.8 × 10 9、1.9 × 10 9、2 × 10 9、2.5 × 10 9、或3 × 10 9個淋巴球係自供體取得，且可選地富集及/或經受刺激。
在一些實施例中，細胞與用於分離或單離選擇細胞之任何試劑一起培養通常在混合條件下進行，諸如在旋轉存在之情況下，通常在相對低之力或速度（諸如低於用於沉澱細胞之速度）下進行，諸如為或為約600 rpm至1700 rpm（例如為或為約或至少600 rpm、1000 rpm、或1500 rpm、或1700 rpm），諸如在樣本處或腔室或其他容器之壁處之RCF為或為約80g至l00g（例如為或為約或至少80 g、85 g、90 g、95 g、或100 g）。在一些實施例中，使用在此種低速度下旋轉之重複間隔來進行旋轉，隨後係休息時段，諸如旋轉及/或休息1秒、2秒、3秒、4秒、5秒、6秒、7秒、8秒、9秒、或10秒，諸如旋轉約1秒或2秒，然後休息約5秒、6秒、7秒、或8秒。
在一些實施例中，此種程序及後續步驟在完全封閉之系統內進行。在一些此類實施例中，腔室與封閉系統係成一體。在一些實施例中，此程序（以及在一些實施例中還有一或多個額外步驟，諸如洗滌含有細胞之樣本（諸如血球分離樣品）之先前洗滌步驟）以自動方式進行，使得細胞、試劑及其他組分在適當時間被吸入及推出腔室，並且進行離心，從而使用自動程式在單一封閉系統中完成洗滌及結合步驟。
在一些實施例中，在細胞及一或多種選擇試劑之培養及/或混合之後，對經培養之細胞進行分離，以基於一或多種特定試劑之存在或不存在來選擇細胞。在一些實施例中，分離係在相同封閉系統中執行，其中執行細胞與選擇試劑之培養。在一些實施例中，在與選擇試劑一起培養之後，將經培養之細胞，包括其中結合有選擇試劑之細胞，轉移至用於基於免疫親和力之細胞分離系統中。在一些實施例中，用於基於免疫親和力之分離系統係或含有磁性分離柱。
在一些實施例中，在基因工程改造之前或結合基因工程改造，對細胞進行培養(incubated)及/或培養(cultured)。培養(incubation)步驟可包括培養(culture)、培育(cultivation)、刺激、活化、及/或繁殖。培養及/或工程改造可在培養容器中進行，諸如用於培養或培育細胞之單元、腔室、孔、柱、管、管道組、真空管、小瓶、培養皿、袋、或其他容器。在一些實施例中，在刺激條件或刺激劑存在情況下培養組成物或細胞。此類條件包括經設計用以誘導群體中細胞之增殖、擴增、活化及/或存活，以模擬抗原暴露，及/或針對基因工程改造，諸如針對重組抗原受體之引入而使細胞準備好之彼等條件。該等條件可包括一或多種特定培養基、溫度、氧含量、二氧化碳含量、時間、藥劑（例如，營養物、胺基酸、抗生素、離子）及/或刺激因子（諸如細胞介素、趨化因子、抗原、結合夥伴、融合蛋白、重組可溶性受體）以及經設計用於活化細胞之任何其他藥劑。
在一些實施例中，在轉導步驟之前或與之同時刺激細胞。在此類實施例中，一或多種合適淋巴球刺激劑之任何組合可用於刺激（活化）淋巴球。非限制性實例包括抗體或其功能片段，其靶向T細胞刺激或共刺激分子（例如，抗CD2抗體、抗CD3抗體、抗CD28抗體、或其功能片段）、T細胞細胞介素（例如，任何單離、野生型或重組細胞介素，諸如：介白素1(IL-1)、介白素2(IL-2)、介白素4(IL-4)、介白素5(IL-5)、介白素7(IL-7)、介白素15(IL-15)、腫瘤壞死因子α(TNFα)），或任何其他合適的有絲分裂原（例如十四烷醯佛波醋酸酯(tetradecanoyl phorbol acetate, TPA)、植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA)、刀豆球蛋白A(concanavalin A, conA)、脂多醣(lipopolysaccharide, LPS)、美洲商陸有絲分裂原(pokeweed mitogen, PWM)）或T細胞刺激或共刺激分子之天然配體。在一些實施例中，刺激劑係抗CD3抗體及/或抗CD28抗體。
在一些實施例中，如本文所述之刺激淋巴球之步驟可能需要在預定溫度下用一或多種刺激劑刺激淋巴球預定時間量，及/或在預定水平之CO 2存在下刺激。在某些實施例中，用於刺激之預定溫度可係約34℃、約35℃、約36℃、約37℃、約38℃、或約39℃。在某些實施例中，用於刺激之預定溫度可係約34℃至39℃。在某些實施例中，刺激淋巴球之步驟包含用一或多種刺激劑刺激淋巴球達預定時間。在某些實施例中，用於刺激之預定時間可係約24小時至72小時。在某些實施例中，用於刺激之預定時間可係約24小時至36小時。在某些實施例中，刺激淋巴球之步驟可包含在預定水平之CO 2存在下用一或多種刺激劑刺激淋巴球。在某些實施例中，用於刺激之預定水平之CO 2可係約1.0至10% CO 2。在某些實施例中，用於刺激之預定水平之CO 2可係約1.0%、約2.0%、約3.0%、約4.0%、約5.0%、約6.0%、約7.0%、約8.0%、約9.0%、或約10.0% CO 2。
在一些實施例中，可根據刺激淋巴球群之步驟使用抗CD3抗體（或其功能片段）、抗CD28抗體（或其功能片段）、或抗CD3及抗CD28抗體之組合。可使用任何可溶性或經固定之抗CD3及/或抗CD28抗體或其功能片段（例如殖株OKT3（抗CD3）、殖株145-2C11（抗CD3）、殖株UCHT1（抗CD3）、殖株L293（抗CD28）、殖株15E8（抗CD28））。在一些態樣中，抗體可商購自所屬技術領域中已知的供應商，包括但不限於Miltenyi Biotec、BD Biosciences（例如MACS GMP CD3純1 mg/mL，件號170-076-116）、及eBioscience, Inc。此外，所屬技術領域中具有通常知識者將理解如何藉由標準方法產生抗CD3及/或抗CD28抗體。本文所述之方法中所使用之任何抗體應在良好作業規範(GMP)下產生，以符合生物產品之相關機構指南。
在某些實施例中，T細胞刺激劑可包括濃度為約20 ng/mL至100 ng/mL的抗CD3或抗CD28抗體。在某些實施例中，抗CD3或抗CD28抗體之濃度可係約20 ng/mL、約30 ng/mL、約40 ng/mL、約50 ng/mL、約60 ng/mL、約70 ng/mL、約80 ng/mL、約90 ng/mL、或約100 ng/mL。
在一些實施例中，例如用刺激劑培養之總持續時間在或在約1小時與96小時之間、1小時與72小時之間、1小時與48小時之間、4小時與36小時之間、8小時與30小時之間、或12小時與24小時之間，諸如至少或約至少6小時、12小時、18小時、24小時、36小時、或72小時。在一些實施例中，進一步培養之時間為在或在約1小時與48小時、4小時與36小時、8小時與30小時、或12小時與24小時之間，包括端點。
在一些實施例中，刺激條件包括與一或多種細胞介素一起及/或在一或多種細胞介素存在情況下培養、培養、及/或培育經富集T細胞之組成物。在特定實施例中，該一或多種細胞介素為重組細胞介素。在一些實施例中，該一或多種細胞介素為人類重組細胞介素。在某些實施例中，該一或多種細胞介素結合至及/或能夠結合至由T細胞表現之及/或T細胞內源性之受體。在特定實施例中，該一或多種細胞介素為或包括細胞介素之4-α-螺旋束家族之成員。在一些實施例中，細胞介素之4-α-螺旋束家族之成員包括但不限於介白素-2 (IL-2)、介白素-4 (IL-4)、介白素-7 (IL-7)、介白素-9 (IL-9)、介白素12 (IL-12)、介白素15 (IL-15)、顆粒球集落刺激因子(G-CSF)、及顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)。在一些實施例中，刺激引起細胞之活化及/或增殖，例如在轉導之前。
在一些實施例中，與所提供之方法、用途、製造製品或組成物結合使用之經工程改造細胞（諸如T細胞）係已經基因工程改造以表現重組受體（例如，本文所述之CAR或TCR）之細胞。在一些實施例中，藉由引入、遞送或轉移編碼重組受體及/或其他分子之核酸序列來工程改造細胞。
在一些實施例中，用於產生經工程改造細胞之方法包括將編碼重組受體（例如，抗CD19 CAR）之多核苷酸引入細胞（例如，諸如經刺激或經活化細胞）中。在特定實施例中，重組蛋白為重組受體，諸如所述任一者。編碼重組蛋白（諸如重組受體）之核酸分子在細胞中之引入可以使用許多已知載體中之任一者來進行。此類載體包括病毒及非病毒系統，包括慢病毒及γ反轉錄病毒系統，以及基於轉位子之系統，諸如PiggyBac或基於睡美人之基因轉移系統。
在一些實施例中，載體可係病毒載體，諸如慢病毒載體以及反轉錄病毒載體。數種重組病毒已被用作病毒載體以將基因材料遞送至細胞。可根據轉導步驟使用之病毒載體可係任何親嗜性(ecotropic)或雙嗜性病毒載體，包括但不限於重組反轉錄病毒載體、重組慢病毒載體、重組腺病毒載體、及重組腺相關病毒(AAV)載體。在一個實施例中，病毒載體係MSGV1γ反轉錄病毒載體。在一些實施例中，載體係非病毒載體。
在一些實施例中，使用含有載體之至少100 mL總體積之溶液。在一些實施例中，使用含有載體之至少110 mL、120 mL、130 mL、140 mL、150 mL、160 mL、170 mL、180 mL、190 mL、200 mL、210 mL、220 mL、230 mL、240 mL、250 mL、260 mL、270 mL、280 mL、290 mL、300 mL、350 mL、或400 mL總體積之溶液。在一些實施例中，使用含有載體之不大於150 mL、160 mL、170 mL、180 mL、190 mL、200 mL、210 mL、220 mL、230 mL、240 mL、250 mL、260 mL、270 mL、280 mL、290 mL、300 mL、350 mL、400 mL、或500 mL總體積之溶液。
在一些實施例中，載體溶液包括每毫升1×10 3至1×10 12個轉導單位(TU/ml)之病毒載體。
在一些實施例中，淋巴球轉導可在具有固定載體之經塗覆的封閉系統中進行。在一些實施例中，用含有淋巴球之樣本進行轉導。在一些實施例中，樣本包括至少2.5 × 10 7個淋巴球（例如，T細胞）。在一些實施例中，樣本包括至少3 × 10 7、4 × 10 7、5 × 10 7、6 × 10 7、7 × 10 7、8 × 10 7、9 × 10 7、1 × 10 8、1.2 × 10 8、1.5 × 10 8、1.8 × 10 8、2 × 10 8、2.2 × 10 8、2.5 × 10 8、2.6 × 10 8、2.7 × 10 8、2.8 × 10 8、2.9 × 10 8、3 × 10 8、3.1 × 10 8、3.2 × 10 8、3.3 × 10 8、3.4 × 10 8、3.5 × 10 8、3.6 × 10 8、3.7 × 10 8、3.8 × 10 8、3.9 × 10 8、4 × 10 8、4.1 × 10 8、4.2 × 10 8、4.3 × 10 8、4.4 × 10 8、4.5 × 10 8、4.6 × 10 8、4.7 × 10 8、4.8 × 10 8、4.9 × 10 8、5 × 10 8、5.1 × 10 8、5.2 × 10 8、5.3 × 10 8、5.4 × 10 8、5.5 × 10 8、5.6 × 10 8、5.7 × 10 8、5.8 × 10 8、5.9 × 10 8、6 × 10 8、6.1 × 10 8、6.2 × 10 8、6.3 × 10 8、6.4 × 10 8、6.5 × 10 8、6.6 × 10 8、6.7 × 10 8、6.8 × 10 8、6.9 × 10 8、7 × 10 8、7.5 × 10 8、8 × 10 8、9 × 10 8、或10 × 10 8個淋巴球（例如，T細胞）。在一些實施例中，樣本包括不大於3 × 10 8、3.1 × 10 8、3.2 × 10 8、3.3 × 10 8、3.4 × 10 8、3.5 × 10 8、3.6 × 10 8、3.7 × 10 8、3.8 × 10 8、3.9 × 10 8、4 × 10 8、4.1 × 10 8、4.2 × 10 8、4.3 × 10 8、4.4 × 10 8、4.5 × 10 8、4.6 × 10 8、4.7 × 10 8、4.8 × 10 8、4.9 × 10 8、5 × 10 8、5.1 × 10 8、5.2 × 10 8、5.3 × 10 8、5.4 × 10 8、5.5 × 10 8、5.6 × 10 8、5.7 × 10 8、5.8 × 10 8、5.9 × 10 8、6 × 10 8、6.1 × 10 8、6.2 × 10 8、6.3 × 10 8、6.4 × 10 8、6.5 × 10 8、6.6 × 10 8、6.7 × 10 8、6.8 × 10 8、6.9 × 10 8、7 × 10 8、7.5 × 10 8、8 × 10 8、9 × 10 8、或10 × 10 8個淋巴球（例如，T細胞）。
在某些實施例中，經刺激之T細胞之一或多種組成物係或包括經富集T細胞之兩種單獨的經刺激組成物。在一些實施例中，分別工程改造兩種單獨的經富集T細胞之組成物，例如自相同生物樣本中選擇、分離及/或富集之經富集T細胞之兩種單獨的組成物。在某些實施例中，兩種單獨的組成物包括經富集CD4+ T細胞之組成物。在一些實施例中，兩種單獨的組成物包括經富集CD8+ T細胞之組成物。在一些實施例中，經富集CD4+ T細胞及經富集CD8+ T細胞之兩種單獨的組成物被分別進行基因工程改造。在一些實施例中，同一種組成物富含CD4+ T細胞及CD8+ T細胞，並且此等細胞一起經基因工程改造。
在一個實施例中，T淋巴球樣本係藉由對來自對象之PBMC進行白血球分離術來製備。在一個實施例中，藉由對CD4+及/或CD8+細胞之陽性選擇，進一步對白血球分離術樣本進行T淋巴球富集。在一個實施例中，淋巴球經進一步工程改造以包含CAR或外源性TCR。CAR及TCR之實例以及工程改造淋巴球之方法在本揭露之其他地方有所描述。在一個實施例中，該方法包含在IL-2存在情況下擴增經工程改造淋巴球以產生T細胞輸注產品。在一個實施例中，經工程改造淋巴球係擴增約1至7天。在一些實施例中，擴增步驟包括IL-2。
經轉導淋巴球之培養可在所屬技術領域中已知之培養基及條件中進行。在一些實施例中，經轉導淋巴球之培養可在一定溫度下及/或在CO 2存在下進行。在某些實施例中，溫度可係約34℃、約35℃、約36℃、約37℃、約38℃、或約39℃。在某些實施例中，溫度可係約34至39℃。在某些實施例中，預定溫度可係約35至37℃。在某些實施例中，較佳預定溫度可係約36至38℃。在某些實施例中，預定溫度可係約36至37℃，或者更佳的是約37℃。
在一些實施例中，經轉導淋巴球之培養可在預定水平之CO 2下進行 。在某些實施例中，預定水平之CO 2可係1.0至10% CO 2。在某些實施例中，預定水平之CO 2可係約1.0%、約2.0%、約3.0%、約4.0%、約5.0%、約6.0%、約7.0%、約8.0%、約9.0%、或約10.0% CO 2。在某些實施例中，預定水平之CO 2可係約4.5至5.5% CO 2。在某些實施例中，預定水平之CO 2可係約5% CO 2。在某些實施例中，預定水平之CO 2可係約3.5%、約4.0%、約4.5%、約5.0%、約5.5%、或約6.5% CO 2。在一些實施例中，擴增經轉導之T細胞群體之步驟可在預定溫度下及/或在預定水平之CO 2存在下以任何組合進行。例如，在一個實施例中，擴增經轉導之T細胞群體之步驟可包含約36℃至38℃之預定溫度及在約4.5%至5.5% CO 2之預定水平之CO 2存在下。
在一些實施例中，擴增經轉導T細胞群體之步驟可在至少一天、或至少2天、或至少3天、或至少4天、或至少5天、或至少6天、或至少7天之範圍內。在一些實施例中，擴增經轉導T細胞群體之步驟可少於1天，或少於2天，或少於3天。在一些實施例中，擴增經轉導T細胞群體之步驟進行直至經轉導細胞群體達到活細胞之預定數目，其中該預定數目由療法所需之細胞之預定治療濃度或量來決定。
任何合適的培養基T細胞生長培養基可用於培養於懸浮液中之細胞。例如，T細胞生長培養基可包括但不限於無菌低葡萄糖溶液，該溶液包括合適量之緩衝劑、丙酮酸鎂、丙酮酸鈣、丙酮酸鈉、及碳酸氫鈉。在一個實施例中，培養基係OpTmizer ™(Life Technologies)，但所屬技術領域中具有通常知識者將理解如何產生類似培養基。
在一些實施例中，刺激係在轉導步驟之前進行。在一些實施例中，刺激係在轉導步驟之後進行。
在一些實施例中，分離、培養及/或轉導步驟可在但不限於封閉系統中進行。在某些實施例中，封閉系統係使用任何合適的細胞培養袋（例如Mitenyi Biotec MACS ®GMP細胞分化袋、Origen Biomedical PermaLife ™細胞培養袋）之封閉袋培養系統。
在一些實施例中，製備方法包括在單離、培養及/或工程改造之前或之後冷凍（例如，冷凍保存）細胞之步驟。在一些實施例中，冷凍及隨後之解凍步驟去除了細胞群體中之顆粒球，並在一定程度上去除了單核球。在一些實施例中，將細胞懸浮於冷凍溶液中，例如在洗滌步驟以移除血漿及血小板後。在一些實施例中，可使用各種已知冷凍溶液及參數中之任一者。一個實例涉及使用含有20% DMSO及8%人血清白蛋白(HSA)之PBS，或其他合適之細胞冷凍培養基。然後用培養基進行1:1稀釋，使DMSO及HSA之最終濃度分別為10%及4%。然後通常以每分鐘1°之速率將細胞冷凍至-80℃，並儲存於液氮儲罐之氣相中。
本文提及之專利及科學文獻建立了所屬技術領域中具有通常知識者可獲得之知識。本文引用之所有美國專利及公開或未公開之美國專利申請案皆以引用方式併入本文中。本文引用之所有公開之外國專利及專利申請案皆據此以引用方式併入本文中。本文引用之所有其他公開之參考文獻、詞典、文獻、手稿、基因體資料庫序列及科學文獻皆據此以引用方式併入本文中。本說明書中所提及之所有出版物、專利、及專利申請案係以引用方式併入本文中，有如特定及個別指示以引用方式併入各個別出版物、專利、及專利申請案。然而，在本文中引用參考文獻不應解讀為承認此類參考文獻對本揭露而言係先前技術。在以引用方式併入之參考文獻中所提供之任何定義及用語不同於本文中所提供之用語及論述之情況下，則以本文之用語及定義為準。
以下實例旨在說明本申請案之各種態樣。因此，所論述之具體態樣並不解釋為限制本申請案之範圍。舉例而言，儘管以下實例係關於經抗CD19嵌合抗原受體(CAR)轉導之T細胞，所屬技術領域中具有通常知識者將理解，本文所述之方法可適用於經任何CAR轉導之免疫細胞。該等方法亦適用於其他免疫療法。所屬技術領域中具有通常知識者將顯而易見，可在不脫離本申請案之範圍之情況下進行各種等效、改變、及修改，且應理解此等等效態樣包括於本文中。
除了上述方法外，本申請案所提供之揭露可用於各種方法及上述方法中或與上述方法組合使用。下列係可衍生自本申請案中所提供之揭露的例示性方法之彙編。 實例實例 1
靶向CD19 (CART19)之嵌合抗原受體(CAR) T細胞療法在血液惡性疾病之治療中顯示出顯著之總體反應率。然而，持久反應率保持在約40%。CART細胞之體內功能取決於輸注後它們相關聯之細胞命運。T細胞衰竭係一種獲得性及表觀遺傳調控之功能異常狀態，其與增殖及功效降低相關聯。雖然此種現象被廣泛視為CART細胞療法之主要限制，但CART細胞衰竭之機制仍知之甚少，並且因構建設計及疾病背景而異。相較於具有4-1BB共刺激域之CART19細胞，具有CD28共刺激域(CART19-28ζ)之第二代CART19細胞表現出降低之持久性。在此項研究中，我們旨在探究CART19-28ζ細胞衰竭之表觀基因景觀。為了確保嚴謹性，我們採用了以下三個獨立之策略：1)藉由利用體外衰竭模型，對未受刺激及衰竭之健康供體CART19-28ζ細胞進行RNA及ATAC定序，2)對B細胞淋巴瘤患者輸注前之axi-cel細胞產品進行RNA及ATAC定序，該B細胞淋巴瘤患者在導致FDA批准axi-cel之關鍵Zuma-1臨床試驗中接受治療，將有反應者與無反應者進行比較，3)對健康供體CART19-28ζ細胞進行全基因體CRISPR敲除篩選。
為開始我們的研究，我們用健康供體CART19-28ζ細胞開發了14天的體外重複刺激檢定來對抗原驅動之衰竭進行建模。在藉由具有CD19 +腫瘤細胞系JeKo-1之CAR重複刺激7天后，相較於基線CART19-28ζ細胞，CART19-28ζ細胞表現出衰竭之表型及功能特徵，其特徵在於：1)上調之抑制性受體（PD-1： p＜0.0001，TIM-3： p＜0.0001，及LAG-3： p= 0.02），2)減少增殖( p＜0.0001)，3) CD4損失( p＜ 0.0001)，及4)用於刺激及效應細胞介素之具有陽性細胞內染色之細胞百分比降低（IL-2： p＜0.0001，及TNF-α： p＜0.0001）。RNA定序在經衰竭之CART19-28ζ細胞中鑑定出449個顯著上調之基因及320個顯著下調之基因。ATAC定序鑑定出411個可及性增加之基因區及445個可及性降低之基因區。
RNA及ATAC結果之重疊顯示出105個差異表現且差異可及之基因。對此等基因之獨創性途徑分析顯示出T細胞衰竭途徑之活化( p= 4.23E-03, Z= 1.0)，Th1及Th2活化途徑之潛在作用( p= 4.43E-05)，並鑑定了IL-4為重要的上游調控因子( p= 5.05E-06)。接下來，我們研究了基線axi-cel產品之轉錄及表觀基因學特徵，比較了有反應者（最佳反應為完全緩解之患者）及無反應者（最佳反應為疾病穩定或進展之患者）。RNA定序顯示出54個差異表現之基因，並且ATAC定序顯示出24個差異可及之基因區。基於RNA及ATAC定序數據，在無反應者中僅兩個基因IL-4及HLA-DQB1上調。然後，藉由使用我們的體外衰竭模型在來自健康供體之CART19-28ζ細胞中進行全基因體CRISPR敲除篩選，我們看到了由基因本體富集分析鑒定之參與IL-4介導之信號傳導的負調控之基因之正向選擇（ p= 1.08E-04）。最後，為驗證IL-4對CART細胞之功能影響，我們評估了用人類重組IL-4治療後健康供體CART19-28ζ細胞之效應子功能。相較於媒劑治療之細胞，在人類重組IL-4存在情況下與JeKo-1共培養之CART19-28ζ細胞表現出抗原特異性增殖減少( p= 0.027)，抑制性受體表現增加（TIM-3： p= 0.002，及LAG-3： p= 0.007），並且細胞毒性減少（圖1）。更具體而言，圖1係示出根據本揭露之實施例，用20 ng/mL人類重組IL-4或對照媒劑治療之CAR T細胞之48小時細胞毒性結果之圖表。將CAR T細胞與表現螢光素酶之Jeko-1細胞共培養。向共培養物中加入螢光素後，藉由發光測量細胞毒性。在圖1中，x軸描繪效應細胞(CAR T)與目標（腫瘤）細胞之間之比率。例如，2.5:1意味著對於每個腫瘤細胞(1)，在共培養殺滅檢定中有2.5個效應細胞。在圖1中，IL-4之存在使得CAR T細胞殺滅腫瘤細胞之效率較低（即，對於所測試之CAR-T:腫瘤細胞比率（在共培養中）中之任一者，在IL-4存在情況下，腫瘤殺滅較少）。
IL-4誘導之CART19-28ζ細胞調節並不歸因於對腫瘤細胞之直接影響，此藉由當JeKo-1細胞單獨用人類重組IL-4治療時，腫瘤細胞毒性或增殖沒有變化來鑑定。總之，此等數據表明，IL-4軸可為與CART細胞衰竭相關聯之CART19療法失敗之關鍵調控因子。 實例 2
此係實例1之延續。
使用四種獨立的方法來研究CAR T細胞療法衰竭之表觀遺傳調控：(1)對基線及衰竭之健康供體CART19-28ζ細胞進行RNA及ATAC定序，(2)對來自Zuma-1臨床試驗中有反應者及無反應者之預輸注患者來源之CART19細胞進行RNA及ATAC定序，(3)對藉由檢定已經歷體外衰竭之健康供體CART19-28ζ細胞進行全基因體CRISPR敲除篩選，以及(4)對鉛衰竭驅動基因進行功能驗證研究。 體外衰竭模型之驗證
當用於治療移植了CD19+腫瘤細胞系JeKo-1（未圖示）之NSG小鼠時，第15天及第22天之CART19-28ζ細胞表現出抗原特異性增殖之降低（見下表2），CD4+與CD8+ T細胞之比率降低（見下表3），以及其體內抗腫瘤活性降低。 表2：絕對CD3+細胞計數檢定（來自三個生物重複體之數據，使用普通單因子ANOVA使用GraphPad Prism進行分析）
第8天 251501.8 195592.2 222479.2
第15天 132764.9 89706.8 117538.3
第22天 4221.465 602.855 22934.26
表3：CD4:CD8比率（來自三個生物重複體之數據，使用普通單因子ANOVA使用GraphPad Prism進行分析）
第8天 1.0 0.87 1.63
第15天 0.22 0.13 0.12
第22天 0.08 0.12 0.05
第15天及第22天之CART19-28ζ細胞亦顯示出衰竭之跡象，諸如抑制性受體（PD-1、TIM-3、CTLA-4及LAG-3；未圖示）之表現增加，以及在用JeKo-1細胞以1:5之比例刺激它們四小時後，IL-2（見下表4）及TNF-α（見下表5）之產生減少。 表4：產生IL-2之CD3細胞%（來自三個生物重複體之數據，使用普通單因子ANOVA使用GraphPad Prism進行分析）
第8天 29.665 27.345 26.935
第15天 7.82 15.22 8.895
第22天 5.595 9.77 3.57
表5：產生TNF-a之CD3細胞%（來自三個生物重複體之數據，使用普通單因子ANOVA使用GraphPad Prism進行分析）
第8天 24.42 19.995 16.475
第15天 7.305 7.195 4.905
第22天 2.615 4.99 1.645
衰竭之表觀遺傳及轉錄景觀
比較第8天至第15天樣本之RNA定序，觀察到明顯的轉錄譜之發展，其特徵在於已知衰竭相關基因諸如EOMES及IL10RA之上調（未圖示）。
當將第8天與第15天之細胞進行比較時，對差異表現及可及之基因之獨創性途徑分析顯示出T細胞衰竭途徑中之富集，並鑑定出IL-2、Tcf-7及IL-4為潛在上游調控劑（未圖示）。 臨床試驗與 CAR T細胞功能異常相關
在Zuma-1臨床試驗中對來自3個有反應者及3個無反應者之基線Axi-cel產品進行RNA及ATAC定序後，僅以下兩個基因在基線無反應者產品中上調且更可及：IL-4及HLA-DQB1（參見下表6及表7） 表6：基線IL-4轉錄（以繪製之每百萬個讀數之計數(CPM)來測量）
無反應者 325.6014 353.521 228.8773
有反應者 61.64034562 41.22627722 104.5709
表7：基線IL-4染色質可及性
無反應者 187.3679206 130.840964 164.646561
有反應者 62.16032 60.78051 75.14106
為了判定轉錄因子在有反應者及無反應者之基線Axi-cel產品中之不同作用，使用先前建立之多組學數據分析框架來揭示無反應患者中GATA3及EOMES之富集（未圖示）。 用全基因體 CRIPR篩選來判定衰竭發展中之關鍵基因
使用體外衰竭模型，用三個健康供體T細胞完成了全基因體CRISPR篩選。各樣本之吉尼(gini)指數顯示到第22天出現了gRNA之陽性選擇（未圖示）。此外，PCA分析顯示出基於樣本時間點之簇集，與生物重複體相反（未圖示）。
為了調查藉由正向選擇富集之途徑，進行了基因本體富集分析。此揭示了參與IL-2及IL-4途徑之基因之富集。特別地，相較於第8天樣本，觀察到第22天樣本中2/3靶向IL-4之gRNA之富集（見下表8）。 表8：IL-4 gRNA之平均倍數變化（來自三個生物重複體之數據）
第8天 第22天
IL-4 gRNA 1 0 0 0 0.873292 0.850809 -0.05902
IL-4 gRNA 2 0 0 0 5.492769 0.239805 -0.31375
IL-4 gRNA 3 0 0 0 0.191098 -0.37718 -0.26877
IL-4作為 CAR T細胞功能異常調控劑之驗證
為了在體外驗證IL-4誘導之CAR T細胞功能異常，用稀釋劑或20 ng/mL人類重組IL-4 (hrIL-4)來處理CART19-28ζ細胞。到第15天，用hrIL-4處理降低了增殖能力（見下表9）及細胞毒性（見下表10），增加了抑制性受體TIM-3之表現（見下表11），並且增加了已知衰竭相關轉錄因子EOMES之轉錄（見下表12）。 表9：絕對CD3+細胞計數測試（來自三個生物重複體之數據，並在GraphPad Prism上使用T檢定進行分析）
CART 19-CD28 75871.69 68133.805 73265.695
CART 19-CD28 + 20 ng/mL hrIL-4 60934.83 66841.835 51372.67
表10：殺滅%（來自三個生物重複體之數據，並在GraphPad Prism上使用二因子ANOVA分析進行分析）
CART 19-CD28 CART 19-CD28 + 20 ng/mL hrIL-4
1.25:1 69.42 67.33
80.77 75.77
78.63 68.98
0.625:1 49.35 43.03
69.87 53.24
58.81 44.67
0.312:1 35.42 15.01
52.05 26.23
39.65 16.13
0.156:1 16.06 0
30.51 1.7
25.11 3.72
表11：CD3+細胞上TIM-3%（來自三個生物重複體之數據，並在GraphPad Prism上使用T檢定進行分析）
CART 19-CD28 47.515 42.135 43.31
CART 19-CD28 + 20 ng/mL hrIL-4 70.24 84.595 71.875
表12：EOMES倍數變化（來自三個生物重複體之數據，並在GraphPad Prism上使用T檢定進行分析）
CART 19-CD28 1.24 0.71 1.14
CART 19-CD28 + 20 ng/mL hrIL-4 3.34 2.18 3.29
為評估IL-4抑制與CART19-28ζ細胞療法組合是否可防止衰竭之發展並且因此改善總體功效，用第8天CART19-28ζ細胞+ 10 mg/kg IL-4單株抗體(mAb)或用第8天CART19-28ζ細胞+ 10 mg/kg IgG對照來治療螢光素酶+ JeKo-1異種移植NSG小鼠。用mAb治療之IL-4抑制導致體內CAR T細胞增殖增加（見下表13）、腫瘤通量降低（見下表14）及總存活率增加（見下表15）。 表13：第15天周邊血液中之人類T細胞（n=5隻小鼠，在GraphPad Prism上使用T檢定進行分析，測量為每微升血液中之絕對CD3+細胞計數）
CART 19-CD28 + IL-14 mAb 55.76 32.01 20.76 22.96 26.09
CART 19-CD28 + IgG對照 10.42 13.47 11.89 17.17 2.51
表14：腫瘤通量（n=5隻小鼠，在GraphPad Prism上使用二因子ANOVA進行分析）
天數 C385 K122 D8 + IL-4 mAb C385 K122 D8 + IgG對照
0 3.66e+007 1.15e+008 7.53e+007 1.32e+008 1.51e+008 3.92e+007 1.52e+008 6.94e+007 1.31e+008 1.17e+008
7 8.63e+008 7.6e+008 7.25e+008 9.97e+008 1e+009 5.98e+008 1.22e+009 6.3e+008 8.7e+008 1.23e+009
14 5.64e+008 8.68e+007 9.72e+007 1.28e+008 3.87e+007 1.59e+008 1.5e+009 7.85e+007 2.08e+009 1.99e+009
21 3860000 1560000 2630000 1620000 1630000 1300000 1.92e+009 3380000 6.23e+009 1.2e+010
28 1184000 1310000 1486000 1261000 1108000 1280000 6.01e+008 1407000 1.11e+010 7.68e+009
表15：存活概率（n=5隻小鼠，在GraphPad Prism上用對數秩(Mantel-Cox)檢定進行分析-＞ 0=存活，且1 =死亡）
天數 第8天CART19-28z + IL-4 mAb 第8天CART19-28z + IgG對照
46 0
46 0
46 0
46 0
46 0
46 0
46 1
74 0
36 1
38 1
結論
上述結果表明：(1)衰竭之體外模型，(2) IL-4係CAR T-細胞功能異常中之關鍵調控基因，(3)當用hrIL-4處理CAR T-細胞時，在體外誘導CAR T-細胞功能異常，及(4)藉由與IL-4 mAb之組合治療，改善CART19-28ζ細胞之體內抗腫瘤活性。
此等發現不僅表明IL-4在CAR T細胞功能異常中之新作用，而且提供了一種可轉化方法來改善對CART19細胞療法之持久反應。
本申請案中所引用之所有出版物、專利、專利申請案、及其他文件全文出於所有目的以引用方式併入本文中，如同各個別出版物、專利、專利申請案、或其他文件出於所有目的經個別指示以引用方式併入。
雖然已說明及描述各種具體實施例/態樣，但應理解的是，可在不脫離本揭露之精神及範疇的情況下進行各種改變。
無
［ 圖 1］係顯示根據本揭露之實施例，用20 ng/mL人類重組IL-4或對照媒劑治療之CAR T細胞之48小時細胞毒性結果之圖表。

Claims (39)

  1. 一種預測有需要之患者中對細胞療法產品之反應之可能性的方法，其包含： 測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及 至少部分地自該細胞療法產品中之該基因表現水平判定該患者中對該細胞療法產品之該反應之該可能性， 其中相較於對照值，該至少一個基因之該基因表現水平之增加指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
  2. 如請求項1之方法，其中在向該患者投予該細胞療法產品之前，測量該細胞療法產品中該至少一個基因之該基因表現水平。
  3. 如請求項1及2中任一項之方法，其中相較於IL-4之對照值，IL-4之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
  4. 如請求項1及2中任一項之方法，其中相較於HLA-DQB1之對照值，HLA-DQB1之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於反應率之對照可能性，反應之可能性降低。
  5. 如請求項1及2中任一項之方法，其中反應被定義為完全反應、部分反應、或正在進行之反應中之一或多者。
  6. 如請求項1及2中任一項之方法，其中該細胞療法產品係識別目標抗原之CAR T或TCR T細胞療法。
  7. 如請求項6之方法，其中該細胞療法產品係自體或同種異體的。
  8. 如請求項6之方法，其中該目標抗原係腫瘤抗原，較佳地係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD79a、CD79b、CD123、FLT3、BCMA、SLAMF7、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白(endoglin)、蝶素(ephrin) B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、賴薩(Lassa)病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素(mesothelin)、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶(prostase)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(survivin)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C (tenascin-C)之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、GPC3（磷脂醯肌醇蛋白聚醣3）、以及此等抗原之任何衍生物或變體。
  9. 如請求項6之方法，其中該細胞療法產品表現包含CD28共刺激域之嵌合抗原受體。
  10. 如請求項1及2中任一項之方法，其中該患者已被診斷患有選自由以下所組成之群組的癌症/腫瘤：實體腫瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)（非特指型）、濾泡淋巴瘤(FL)、由FL引起之DLBCL、變化型濾泡淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、慢性或急性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞淋巴瘤、一或多種B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、急性淋巴樣白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、B細胞前淋巴球白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、及多發性漿細胞瘤）、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、POEMS症候群（亦稱為Crow-Fukase氏症候群、Takatsuki氏症、及PEP症候群）、頭頸癌、子宮頸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、前列腺癌、乳癌、或其組合。
  11. 如請求項10之方法，其中該癌症係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL、或被套細胞淋巴瘤。
  12. 如請求項1及2中任一項之方法，其中該細胞療法產品係選自西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)、利基邁崙賽(lisocabtagene maraleucel)、及bb2121。
  13. 一種預測細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性的方法，其包含： 測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及 至少部分地自該細胞療法產品中之該基因表現水平判定該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之該可能性， 其中相較於對照值，該至少一個基因之該基因表現水平之增加指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
  14. 如請求項13之方法，其中在向該患者投予該細胞療法產品之前，測量該細胞療法產品中該至少一個基因之該基因表現水平。
  15. 如請求項13之方法，其中相較於IL-4之對照值，IL-4之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
  16. 如請求項13之方法，其中相較於HLA-DQB1之對照值，HLA-DQB1之該基因表現水平增加至少約2倍指示相較於細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之對照可能性，該細胞療法產品中CAR T細胞衰竭之可能性增加。
  17. 如請求項13至16中任一項之方法，其中該細胞療法產品係自體或同種異體的。
  18. 如請求項13至16中任一項之方法，其中該細胞療法產品識別目標抗原。
  19. 如請求項18之方法，其中該目標抗原係腫瘤抗原，較佳地係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD79a、CD79b、CD123、FLT3、BCMA、SLAMF7、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白(endoglin)、蝶素(ephrin) B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、賴薩(Lassa)病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素(mesothelin)、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶(prostase)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(survivin)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C (tenascin-C)之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、GPC3（磷脂醯肌醇蛋白聚醣3）、以及此等抗原之任何衍生物或變體。
  20. 如請求項18之方法，其中該細胞療法產品表現包含CD28共刺激域之嵌合抗原受體。
  21. 如請求項13至16中任一項之方法，其中該細胞療法產品係用於向患者投予，該患者已被診斷患有選自由以下所組成之群組的癌症/腫瘤：實體腫瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)（非特指型）、濾泡淋巴瘤(FL)、由FL引起之DLBCL、變化型濾泡淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、慢性或急性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞淋巴瘤、一或多種B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、急性淋巴樣白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、B細胞前淋巴球白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、及多發性漿細胞瘤）、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、POEMS症候群（亦稱為Crow-Fukase氏症候群、Takatsuki氏症、及PEP症候群）、頭頸癌、子宮頸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、前列腺癌、乳癌、或其組合。
  22. 如請求項21之方法，其中該癌症係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL、或被套細胞淋巴瘤。
  23. 如請求項13至16中任一項之方法，其中該細胞療法產品係選自西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)、利基邁崙賽(lisocabtagene maraleucel)、及bb2121。
  24. 一種細胞療法產品之用途，其係用於製備治療患者之惡性疾病之藥物，其中該治療包含： 測量該細胞療法產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平； 至少部分地自該測量至少一個基因之基因表現水平來判定是否應向該患者投予有效劑量的該細胞療法產品、或有效劑量的該細胞療法產品及組合療法；及 基於該判定步驟投予該有效劑量的該細胞療法產品、或該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法， 其中若該至少一個基因之基因表現水平處於或低於該至少一個基因之對照值，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品，且其中若該至少一個基因之基因表現水平高於該至少一個基因之該對照值，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
  25. 如請求項24之用途，其中在向該患者投予該細胞療法產品之前，測量該細胞療法產品中該至少一個基因之基因表現水平。
  26. 如請求項24及25中任一項之用途，其中若該IL-4之基因表現水平較IL-4之對照值大至少約2倍，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
  27. 如請求項24及25中任一項之用途，其中若該HLA-DQB1之基因表現水平較HLA-DQB1之對照值大至少約2倍，則向該患者投予該有效劑量的該細胞療法產品及該組合療法。
  28. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該組合療法係IL-4拮抗劑、或IL-4受體拮抗劑、或其組合。
  29. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該組合療法係抗IL-4抗體。
  30. 如請求項24及25中任一項之用途，其中若該IL-4之基因表現水平並未較IL-4之對照值大至少約2倍，則不投予該組合療法。
  31. 如請求項24及25中任一項之用途，其中若該HLA-DQB1之基因表現水平並未較HLA-DQB1之對照值大至少約2倍，則不投予該組合療法。
  32. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該細胞療法產品係識別目標抗原之CAR T或TCR T細胞療法。
  33. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該細胞療法產品係自體或同種異體的。
  34. 如請求項32之用途，其中該目標抗原係腫瘤抗原，較佳地係選自腫瘤相關表面抗原，諸如5T4、α胎兒蛋白(AFP)、B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、BCMA、B-人類絨毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD79a、CD79b、CD123、FLT3、BCMA、SLAMF7、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特異性抗原、CS-1、CSPG4、CTLA-4、DLL3、雙唾液酸神經節苷脂GD2、管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特異性抗原、EGFR變體III (EGFRvIII)、ELF2M、內皮糖蛋白(endoglin)、蝶素(ephrin) B2、表皮生長因子受體(EGFR)、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、上皮腫瘤抗原、ErbB2 (HER2/neu)、纖維母細胞相關蛋白(fap)、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、神經膠質瘤相關抗原、醣神經鞘脂質、gp36、HBV特異性抗原、HCV特異性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3組合、HERV-K、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV-1套膜醣蛋白gp41、HPV特異性抗原、人類端粒酶反轉錄酶、IGFI受體、IGF-II、IL-11Rα、IL-13R-a2、流感病毒特異性抗原；CD38、胰島素生長因子(IGFl)-l、腸羧基酯酶、κ鏈、LAGA-la、λ鏈、賴薩(Lassa)病毒特異性抗原、凝集素反應性AFP、譜系特異性或組織特異性抗原（諸如CD3、MAGE、MAGE-A1）、主要組織相容性複合體(MHC)分子、呈現腫瘤特異性肽表位之主要組織相容性複合體(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相關抗原、間皮素(mesothelin)、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、經突變p53、經突變ras、嗜中性球彈性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、前列腺酶(prostase)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺癌腫瘤抗原-1 (PCTA-1)、前列腺特異性抗原蛋白、STEAP1、STEAP2、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2 (AS)、表面黏附分子、生存素(survivin)及端粒酶、TAG-72、纖連蛋白之額外域A (EDA)及額外域B (EDB)及肌腱蛋白C (tenascin-C)之Al域(TnC Al)、甲狀腺球蛋白、腫瘤基質抗原、血管內皮生長因子受體-2 (VEGFR2)、病毒特異性表面抗原（諸如HIV特異性抗原（諸如HIV gpl20））、GPC3（磷脂醯肌醇蛋白聚醣3）、以及此等抗原之任何衍生物或變體。
  35. 如請求項32之用途，其中該細胞療法產品表現包含CD28共刺激域之嵌合抗原受體。
  36. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該患者已被診斷患有選自由以下所組成之群組的癌症/腫瘤：實體腫瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)（非特指型）、濾泡淋巴瘤(FL)、由FL引起之DLBCL、變化型濾泡淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)、慢性或急性白血病、急性骨髓白血病、慢性骨髓白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)（包括非T細胞ALL）、慢性淋巴球性白血病(CLL)、T細胞淋巴瘤、一或多種B細胞急性淋巴樣白血病（「BALL」）、T細胞急性淋巴樣白血病（「TALL」）、急性淋巴樣白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、B細胞前淋巴球白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Burkitt氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡淋巴瘤、惡性淋巴增生性病況、MALT淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、骨髓化生不良及骨髓化生不良症候群、漿母細胞淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞贅瘤、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、漿細胞增生性病症（例如無症狀骨髓瘤（燜燃型多發性骨髓瘤或無痛骨髓瘤））、意義不明單株免疫球蛋白增高症(MGUS)、漿細胞瘤（例如漿細胞惡液質、孤立性骨髓瘤、孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、及多發性漿細胞瘤）、全身性類澱粉蛋白輕鏈類澱粉變性症、POEMS症候群（亦稱為Crow-Fukase氏症候群、Takatsuki氏症、及PEP症候群）、頭頸癌、子宮頸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝細胞癌、前列腺癌、乳癌、或其組合。
  37. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該惡性疾病係非特指型之（復發性或難治性）瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤、高級別B細胞淋巴瘤、由濾泡淋巴瘤引起之DLBCL、或被套細胞淋巴瘤。
  38. 如請求項24及25中任一項之用途，其中該細胞療法產品係選自西卡思羅(axicabtagene ciloleucel)、布萊奧妥(brexucabtagene autoleucel)、替薩真來魯塞(tisagenlecleucel)、利基邁崙賽(lisocabtagene maraleucel)、及bb2121。
  39. 一種用於選擇用於向有需要之患者投予之免疫療法CAR-T細胞產品之方法，其包含： 測量該免疫療法CAR-T細胞產品中選自由介白素-4 (IL-4)及HLA-DQB1所組成之群組之至少一個基因之基因表現水平；及 至少部分地自該測量至少一個基因之基因表現水平，選擇用於向該患者投予之該免疫療法CAR-T細胞產品，或選擇用於向該患者投予之該免疫療法CAR-T細胞產品及組合療法， 其中若該至少一個基因之基因表現水平處於或低於該至少一個基因之對照值，則選擇該免疫療法CAR-T細胞產品用於向該患者投予，或者其中若該至少一個基因之基因表現水平高於該至少一個基因之該對照值，則選擇該免疫療法CAR-T細胞產品及該組合療法用於向該患者投予。
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