CN111479613A - 施用嵌合抗原受体免疫疗法的方法 - Google Patents

Abstract

本公开提供了包含CD19导向的嵌合抗原受体(CAR)遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的细胞，用于治疗例如在两线或更多线的系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL。本公开的一些方面涉及治疗以及在本文提供的T细胞疗法的输注之后监测的方法。

Description

施用嵌合抗原受体免疫疗法的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年10月18日提交的美国临时申请号62/574,159的优先权，其通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本公开总体上涉及T细胞疗法，更具体地涉及包含嵌合抗原受体(CAR)的CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法。

背景

人类癌症就其本质而言包含已经经历了遗传或表观遗传转化而变成异常癌细胞的正常细胞。此时，癌细胞开始表达与正常细胞表达的蛋白质和其他抗原不同的蛋白质和其他抗原。这些异常的肿瘤抗原可以被身体的先天免疫系统用于特异性靶向和杀伤癌细胞。然而，癌细胞采用各种机制来防止免疫细胞如T和B淋巴细胞成功靶向癌细胞。

嵌合抗原受体(CAR)，其包含能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域，允许T细胞靶向并杀伤表达特定肿瘤抗原的癌细胞。

发明概述

如以下详细描述的，本公开部分地基于令人惊讶的发现，即本文公开的施用方法识别并管理CAR T细胞免疫疗法的不良副作用。

本文所述的任何方面或实施方案可以与如本文公开的任何其他方面或实施方案组合。尽管本发明已联合其详细描述进行描述，但前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改在所附权利要求的范围内。

在一方面，本发明提供了治疗患者中在两线或更多线的系统疗法后复发或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL的方法，其包括：以每kg体重约1×10⁶个和约2×10⁶个之间的CAR阳性活T细胞的剂量直至约1×10⁸个CAR阳性活T细胞的最大剂量通过静脉内输注向有此需要的患者施用axicabtagene ciloleucel悬浮液，其中axicabtagene ciloleucel是CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包含经收获并通过逆转录病毒转导进行离体遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)的患者自身的T细胞，所述CAR包含与CD28和CD3-zeta共刺激结构域连接的抗CD19单链可变片段(scFv)。

在另一方面，本发明提供了治疗患者中在两线或更多线的系统疗法后复发或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)的方法，其包括：以约0.4×10⁸个和约2×10⁸个之间的CAR阳性活T细胞的剂量通过静脉内输注向有此需要的患者施用axicabtagene ciloleucel悬浮液，其中axicabtagene ciloleucel是CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包含经收获并通过逆转录病毒转导进行离体遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)的患者自身的T细胞，所述CAR包含与CD28和CD3-zeta共刺激结构域连接的抗CD19单链可变片段(scFv)。

在一些实施方案中，静脉内输注时间为15和120分钟之间。在一些实施方案中，静脉内输注时间长达30分钟。

在一些实施方案中，输注体积为50和100mL之间。在一些实施方案中，输注体积为约68mL。

在一些实施方案中，免疫疗法是从输液袋输注的。在一些实施方案中，在输注期间搅动输液袋。

在一些实施方案中，免疫疗法在解冻后3小时内施用。

在一些实施方案中，悬浮液进一步包含白蛋白。在一些实施方案中，白蛋白以约2-3％(v/v)的量存在。在一些实施方案中，白蛋白以约2.5％(v/v)的量存在。在一些实施方案中，白蛋白是人白蛋白。

在一些实施方案中，悬浮液进一步包含DMSO。在一些实施方案中，DMSO以约4-6％(v/v)的量存在。在一些实施方案中，DMSO以约5％(v/v)的量存在。

在一方面，本发明提供了治疗患者中在两线或更多线系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括：(a)向有此需要的患者施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法；和(b)输注后监测患者的不良反应的体征和症状。

在一些实施方案中，复发或难治性大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL。

在一些实施方案中，不良反应选自下组：细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性、超敏反应、严重感染、血细胞减少和低丙种球蛋白血症。

在一些实施方案中，不良反应的体征和症状选自下组：发烧、低血压、心动过速、低氧和发冷，包括心律失常(包括心房颤动和室性心动过速)、心脏骤停、心力衰竭、肾功能不全、毛细血管渗漏综合征、低血压、低氧、器官毒性、噬血细胞性淋巴组织细胞增生/巨噬细胞活化综合征(HLH/MAS)、癫痫发作、脑病、头痛、震颤、头晕、失语症、谵妄、失眠焦虑、过敏反应、发热性中性粒细胞减少、血小板减少、中性粒细胞减少和贫血。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用IL-6受体抑制剂。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用有效量的托西利珠单抗(tocilizumab)以治疗不良反应的症状。

在一些实施方案中，以约8mg/kg的剂量静脉施用托西利珠单抗。在一些实施方案中，在约1小时内静脉施用托西利珠单抗。在一些实施方案中，约每8小时施用一次托西利珠单抗。在一些实施方案中，施用托西利珠单抗不超过约24小时。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用皮质类固醇以治疗不良反应的症状。

在一些实施方案中，皮质类固醇是甲泼尼松(methylprednisone)或地塞米松的至少一种。

在一些实施方案中，以约1mg/kg的剂量静脉施用甲泼尼松。在一些实施方案中，每天两次施用甲泼尼松。在一些实施方案中，以每天约1,000mg的剂量静脉施用甲泼尼松。在一些实施方案中，静脉施用甲泼尼松持续约3天。

在一些实施方案中，以约10mg的剂量施用地塞米松。在一些实施方案中，约每6小时静脉施用地塞米松。

在一些实施方案中，不良反应是细胞因子释放综合征(CRS)。在一些实施方案中，在输注后至少每天监测细胞因子释放综合征(CRS)的体征和症状持续约7天。在一些实施方案中，在输注后至少每天监测细胞因子释放综合征(CRS)的体征和症状持续约8天、约9天或约10天。在一些实施方案中，在输注后至少每天监测细胞因子释放综合征(CRS)的体征和症状持续约10天。在一些实施方案中，在输注后监测细胞因子释放综合征(CRS)的体征和症状持续约4周。

在一些实施方案中，不良反应是神经毒性。

在一些实施方案中，在输注后监测神经毒性的体征和症状长达8周。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用非镇静抗癫痫药用于癫痫发作预防。

在一些实施方案中，非镇静抗癫痫药是左乙拉西坦(levetiracetam)。

在一些实施方案中，不良反应是血细胞减少。在一些实施方案中，血细胞减少是血小板减少、中性粒细胞减少和/或贫血。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用红细胞生成素、达贝泊汀α、血小板输血、集落刺激因子(CSF)、粒细胞集落刺激因子、非格司亭(filgrastim)、聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的至少一种。

在一些实施方案中，方法进一步包括测量细胞因子和趋化因子水平。在一些实施方案中，测量IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、TNF-α、IFN-γ和sIL2Rα的至少一种的水平。

在一方面，本发明提供了容器，其包含CD19导向的遗传修饰的自体T细胞、约5％二甲基亚砜(DMSO)和约2.5％人白蛋白(v/v)的悬浮液。在另一方面，容器包含约0.4x10⁸-2x10⁸个之间的CD19导向的遗传修饰的自体T细胞(CAR阳性活T细胞)的悬浮液。

在一些实施方案中，容器是无菌输液袋。在一些实施方案中，输液袋体积为约100mL、250mL、500mL、750mL、1000mL、1500mL、2000mL或3000mL。

在一方面，本发明提供了治疗人中在两线或更多线系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括向有此需要的人施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包括：(a)向患者施用包含CD19导向的嵌合抗原受体(CAR)阳性活T细胞的组合物；(b)施用后监测患者的不良反应的体征和症状；和(c)如果在(b)中观察到细胞因子释放综合征(CRS)大于2级，则在1小时内以约8mg/kg的剂量静脉施用托西利珠单抗，如果对静脉液体或增加补充氧气不响应，则根据需要每8小时重复一次托西利珠单抗；(d)如果在(c)的24小时后(b)中观察到的CRS症状未改善，则每天两次静脉施用约1mg/kg甲泼尼龙或施用等效地塞米松剂量并继续皮质类固醇使用直至事件为1级或以下，然后在3天内逐渐减少；(e)如果在(b)中观察到CRS 3级，则在1小时内以8mg/kg的剂量静脉施用托西利珠单抗，如果对静脉液体或增加补充氧气不响应，则根据需要每8小时重复一次托西利珠单抗，并每天两次静脉施用约1mg/kg甲泼尼龙或施用等效地塞米松剂量并继续皮质类固醇使用直至事件为1级或以下，然后在3天内逐渐减少；和(f)如果在(b)中观察到CRS 4级，则在1小时内以约8mg/kg的剂量静脉施用托西利珠单抗，如果对静脉液体或增加补充氧气不响应，则根据需要每8小时重复一次托西利珠单抗，并每天静脉施用约1,000mg甲泼尼龙持续3天。

在一方面，本发明提供了治疗患者中在两线或更多线系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括向有此需要的患者施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包括：(a)向患者施用包含CD19导向的嵌合抗原受体(CAR)阳性活T细胞的组合物；(b)施用后监测患者不良反应的体征和症状；和(c)如果观察到细胞因子释放综合征(CRS)和/或神经毒性，则根据表1和/或表2管理细胞因子释放综合征(CRS)和/或神经毒性。

通过以下包括实施例的发明详述和权利要求，本公开的其他特征和优点将显而易见。

发明详述

本公开涉及包含CD19 CAR遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的工程化细胞(例如T细胞)，其被指定用于治疗在两线或更多线系统疗法后患有复发或难治性大B细胞淋巴瘤的成年患者，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL。在一些实施方案中，本公开提供了使用工程化T细胞治疗患有癌症的患者的治疗方法。

为了制备CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，可以收获患者自身的T细胞，并通过逆转录病毒转导进行离体遗传修饰，以表达包含与CD28和CD3-zeta共刺激结构域连接的鼠抗CD19单链可变片段(scFv)的嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，CAR包含与4-1BB和CD3-zeta共刺激结构域连接的鼠抗CD19单链可变片段(scFv)。可以将抗CD19CAR T细胞扩增并输注回患者中，其中它们可以识别并消除表达CD19的靶细胞。

(Axi-cel^TM；axicabtagene ciloleucel)是此类CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的实例。参见Kochenderfer,et al.,(J Immunother 2009；32:689 702)。另外的CD19导向的CAR疗法包括JCAR017、JCAR015、JCAR014、Kymriah(tisagenlecleucel)。参见Sadelain et al.Nature Rev.Cancer Vol.3(2003)，Ruella et al.,Curr HematolMalig Rep.,Springer,NY(2016)和Sadelain et al.Cancer Discovery(Apr 2013)。

可以从患者的外周血单核细胞制备CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，所述外周血单核细胞通常是经由标准白细胞单采术(leukapheresis)规程获得的。可以使单核细胞富集T细胞，并在存在IL-2的情况下用抗CD3抗体活化，然后用含有抗CD19 CAR转基因的无复制能力的逆转录病毒载体转导。经转导的T细胞可以在细胞培养物中扩增、洗涤、配制成悬浮液和/或冷冻保存。通常，包含遗传修饰的自体T细胞的产品在释放以在患者专用输注容器(如输液袋)中作为冷冻悬浮液运输之前必须通过无菌测试。通常，产品在输注之前解冻。

除T细胞外，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法可以含有NK和NK-T细胞。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法配制剂含有约5％二甲基亚砜(DMSO)和约2.5％白蛋白(人)(v/v)。

CD19导向的遗传修饰的自体T细胞与表达CD19的癌细胞和正常B细胞结合。研究已经表明，在抗CD19 CAR T细胞与表达CD19的靶细胞衔接后，CD28和CD3-zeta共刺激结构域激活下游信号传导级联，其导致T细胞活化、增殖、效应功能的获得以及炎性细胞因子和趋化因子的分泌。这一系列事件导致杀伤表达CD19的细胞。

在一方面，本发明提供了治疗患者中在两线或更多线的系统疗法后复发或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL的方法，其包括：以每kg体重约1×10⁶个和约2×10⁶个之间的CAR阳性活T细胞的剂量直至约1×10⁸个CAR阳性活T细胞的最大剂量通过静脉内输注向有此需要的患者施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞悬浮液。

定义

为了使本发明更容易理解，下面首先定义某些术语。对于以下术语和其他术语的附加定义在整个说明书中得以阐述。

如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。

除非在上下文中明确说明或显而易见，否则如本文所用，术语“或”应当理解为包含性的并且涵盖“或”和“和”两者。

本文使用的术语“和/或”视为具有或不具有另一个的两个指定特征或组件中的每一个的具体公开。因此，如在本文中的短语例如“A和/或B”中所使用的术语“和/或”旨在包括A和B；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样地，如在短语例如“A、B和/或C”中所使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

如本文所用，术语“例如”和“即”仅作为实例使用，而无意于限制，并且不应当诠释为仅涉及在说明书中明确列举的那些项目。

术语“或更多”、“至少”、“超过”等，例如“至少一种”应当理解为包括但不限于至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或超过所述值。还包括其间任何更大的数字或分数。

相反地，术语“不超过”包括小于所述值的每个值。例如，“不超过100个核苷酸”包括100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1和0个核苷酸。还包括其间任何更小的数字或分数。

术语“多个”、“至少两个”、“两个或更多个”、“至少第二个”等应当理解为包括但不限于至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或更多。还包括其间任何更大的数字或分数。

在整个说明书中，词语“包含”或变形如“包括”将理解为暗指包括所述要素、整数或步骤，或要素、整数或步骤的组，但不排除任何其他要素、整数或步骤，或要素、整数或步骤的组。应当理解的是，在本文中无论何处用语言“包含”描述方面，还提供了以“由......组成”和/或“基本上由......组成”描述的其他类似方面。

除非明确说明或从上下文中显而易见，如本文所用，术语“约”是指如本领域普通技术人员测定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其将部分取决于如何测量或测定值或组成，即测量系统的局限性。例如，“约”或“大约”可以意指按本领域实践的1个内或超过1个标准偏差。“约”或“大约”可以意指高达10％的范围(即±10％)。因此，“约”可以理解为在10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或0.001％内大于或小于所述值。例如，约5mg可以包括4.5mg和5.5mg之间的任何量。此外，特别是关于生物系统或过程，该术语可以意指高达一个数量级或高达5倍的值。当在本公开中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应当假定“约”或“大约”的含义在该特定值或组成的可接受的误差范围内。

如文本所述，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应当理解为包括所叙述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(例如整数的十分之一和百分之一)。

使用其国际单位制(SI)接受的形式提供本文所使用的单位、前缀和符号。数字范围包括定义范围的数字。

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本公开所涉及领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。例如，Juo,“The Concise Dictionary ofBiomedicine and Molecular Biology”,2nd ed.,(2001),CRC Press；“The Dictionaryof Cell&Molecular Biology”,5th ed.,(2013),Academic Press；和“The OxfordDictionary Of Biochemistry And Molecular Biology”,Cammack et al.eds.,2nd ed,(2006),Oxford University Press为本领域技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。

“施用”是指使用本领域技术人员已知的任何各种方法和递送系统将药剂物理导入受试者。本文公开的制剂的示例性施用途径包括静脉、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外施用”意指除肠内和局部施用外的施用方式，通常通过注射以及包括但不限于静脉、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。在一些实施方案中，经由非肠胃外途径例如口服施用制剂。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、阴道、直肠、舌下或局部。也可以进行施用，例如，一次，多次，和/或在一个或多个延长时期。

术语“抗体”(Ab)包括但不限于，特异性结合抗原的糖蛋白免疫球蛋白。通常，抗体可以包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链，或其抗原结合分子。每条H链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域，CL。VH和VL区域可以进一步细分为高变的区域，称为互补决定区(CDR)，散布着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，以下列顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。Ab的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。

抗体可以包括例如，单克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、工程化抗体、人源化抗体、嵌合抗体、免疫球蛋白、合成抗体、包含两个重链和两个轻链分子的四聚体抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-抗体重链对、胞内抗体、抗体融合物(本文有时称为“抗体缀合物”)、异缀合抗体、单结构域抗体、单价抗体、单链抗体或单链Fv(scFv)、骆驼源化抗体、亲和体、Fab片段、F(ab’)2片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如，抗-抗Id抗体)、微抗体、结构域抗体、合成抗体(本文有时称为“抗体模拟物”)和以上任何的抗原结合片段。在一些实施方案中，本文所述的抗体是指多克隆抗体群。

“抗原结合分子”、“抗原结合部分”或“抗体片段”是指包含从该分子所源于的抗体的抗原结合部分(例如，CDR)的任何分子。抗原结合分子可以包括抗原互补决定区(CDR)。抗体片段的实例包括但不限于，从抗原结合分子形成的Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、dAb、线性抗体、scFv抗体和多特异性抗体。肽体(即，包含肽结合结构域的Fc融合分子)是合适的抗原结合分子的另一个实例。在一些实施方案中，抗原结合分子结合肿瘤细胞上的抗原。在一些实施方案中，抗原结合分子结合参与过度增殖性疾病的细胞上的抗原或结合病毒或细菌抗原。在一些实施方案中，抗原结合分子结合CD19。在进一步的实施方案中，抗原结合分子是特异性结合抗原的抗体片段，包括其一个或多个的互补决定区(CDR)。在进一步的实施方案中，抗原结合分子是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，抗原结合分子包含高亲和性多聚体(avimer)或由高亲和性多聚体组成。

“抗原”是指引发免疫应答或能够被抗体或抗原结合分子结合的任何分子。免疫应答可以牵涉抗体产生或特异性免疫活性细胞的活化或这两者。本领域技术人员将容易理解任何大分子(包括几乎所有蛋白质或肽)均可以充当抗原。抗原可以内源性表达，即由基因组DNA表达或可以重组表达。抗原可以对某些组织，例如癌细胞具有特异性或者其可以广泛地表达。此外，较大分子的片段可以起抗原作用。在一些实施方案中，抗原为肿瘤抗原。

“CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法”是指嵌合抗原受体(CAR)阳性T细胞的悬浮液。此类免疫疗法的一个实例是axicabtagene ciloleucel(也称为Axi-cel^TM，

)，由Kite Pharmaceuticals,Inc.开发。

术语“中和”是指结合配体并防止或降低该配体的生物效应的抗原结合分子、scFv、抗体或其片段。在一些实施方案中，抗原结合分子、scFv、抗体或其片段直接阻断配体上的结合位点或者通过间接方式(如配体的结构或能量改变)改变配体的结合能力。在一些实施方案中，抗原结合分子、scFv、抗体或其片段防止与其结合的蛋白质行使生物学功能。

术语“自体”是指源自其稍后重新导入到其中的同一个体的任何物质。例如，本文所述的工程化自体细胞疗法(eACT^TM)的方法牵涉从患者收集淋巴细胞，然后将其工程化改造以表达例如CAR构建体，然后再施用回同一患者。

术语“同种异体”是指源自一个个体然后被导入相同物种的另一个个体的任何物质，例如同种异体T细胞移植。

术语“转导”和“经转导的”是指一种过程，通过该过程将外源DNA经由病毒载体导入到细胞中(参见Jones et al.,“Genetics:principles and analysis,”Boston:Jones&Bartlett Publ.(1998))。在一些实施方案中，载体为逆转录病毒载体、DNA载体、RNA载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、EB病毒载体、乳多空病毒载体、牛痘病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。

“癌症”是指一大组各种疾病，其特征为体内异常细胞不受控制的生长。不受调节的细胞分裂和生长导致形成入侵相邻组织且也可以通过淋巴系统或血流转移到身体远程部分的恶性肿瘤。“癌症”或“癌症组织”可以包括肿瘤。可以通过本文公开的方法治疗的癌症的实例包括但不限于免疫系统的癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤及其他白细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法可以用于缩小源自例如下组的肿瘤的肿瘤尺寸：骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、多发性骨髓瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、转化滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、由环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的那些)、其他B细胞恶性肿瘤以及所述癌症的组合。在一些实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。特定癌症可以对化学疗法或放射疗法有响应或者癌症可以是难治性的。难治性癌症是指不易于通过外科手术干预的癌症，并且癌症或是最初对化学疗法或放射疗法无响应，或是癌症随时间变成无响应。

如本文所用，“抗肿瘤效应”是指可以呈现为肿瘤体积缩小、肿瘤细胞的数目减少、肿瘤细胞增殖减少、转移的数目减少、总体或无进展生存期增加、期望寿命增加或各种与肿瘤相关的生理症状改善的生物效应。抗肿瘤效应也可以指肿瘤发生的预防，例如疫苗。

如本文所用，“细胞因子”是指响应与特定抗原的接触由一个细胞释放的非抗体蛋白质，其中细胞因子与第二个细胞相互作用以介导在第二个细胞中的应答。如本文所用，“细胞因子”意指由一个细胞群释放的蛋白质，其作为细胞间介体作用于另一细胞。细胞因子可以由细胞内源性表达或施用于受试者。细胞因子可以由免疫细胞(包括巨噬细胞、B细胞、T细胞和肥大细胞)释放以传播免疫应答。细胞因子可以诱导受体细胞中的各种应答。细胞因子可以包括稳态细胞因子、趋化因子、促炎细胞因子、效应物和急性期蛋白质。例如，稳态细胞因子(包括白细胞介素(IL)7和IL-15)促进免疫细胞存活和增殖，而促炎细胞因子可以促进炎症应答。稳态细胞因子的实例包括但不限于IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15及干扰素(IFN)gamma。促炎细胞因子的实例包括但不限于IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、肿瘤坏死因子(TNF)-alpha、TNF-beta、成纤维细胞生长因子(FGF)2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏附分子1(sVCAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D以及胎盘生长因子(PLGF)。效应物的实例包括但不限于颗粒酶A、颗粒酶B、可溶性Fas配体(sFasL)以及穿孔蛋白。急性期蛋白质的实例包括但不限于C反应蛋白(CRP)及血清淀粉样蛋白A(SAA)。

“趋化因子”是介导细胞趋化性或定向运动的一类细胞因子。趋化因子的实例包括但不限于IL-8、IL-16、嗜酸性粒细胞趋化因子、嗜酸性粒细胞趋化因子-3、巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC或CCL22)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1或CCL2)、MCP-4、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α、MIP-1a)、MIP-1β(MIP-1b)、gamma-诱导蛋白10(IP-10)以及胸腺和活化调节的趋化因子(TARC或CCL17)。

治疗剂(例如经工程化的CAR T细胞)的“治疗有效量”、“有效剂量”、“有效量”或“治疗有效剂量”是当单独使用或与另一治疗剂组合使用时保护受试者免于疾病发作或者促进疾病消退的任何量，所述疾病消退的证据为疾病症状的严重性降低、疾病无症状期的频率和持续期间增加或防止由于疾病折磨导致的损伤或残疾。可以使用熟练从业人员已知的各种方法评估治疗剂促进疾病消退的能力，例如在临床试验期间在人受试者中评估、在用于预测在人体中的效力的动物模型系统中评估或通过在体外测定法中测定试剂的活性评估。

如本文所用，术语“淋巴细胞”包括自然杀伤(NK)细胞、T细胞或B细胞。NK细胞是代表固有免疫系统的主要组分的一类细胞毒性(cytotoxic)(细胞毒性(cell toxic))淋巴细胞。NK细胞排斥肿瘤以及病毒感染的细胞。其通过凋亡或程序性细胞死亡的过程发挥作用。由于其不需要活化来杀伤细胞，因而称为“自然杀伤”。T细胞在细胞介导的免疫(无抗体参与)中发挥主要作用。它的T细胞受体(TCR)将自身与其他淋巴细胞类型区分开来。胸腺(免疫系统的专门器官)主要负责T细胞的成熟。有六种类型的T细胞，即：辅助性T细胞(例如CD4+细胞)、细胞毒性T细胞(也称为TC、细胞毒性T淋巴细胞、CTL、T杀伤细胞、溶细胞性T细胞、CD8+T细胞或杀伤T细胞)、记忆T细胞((i)干细胞样记忆TSCM细胞(如初始细胞)为CD45RO-、CCR7+、CD45RA+、CD62L+(L选择素)、CD27+、CD28+以及IL-7Rα+，但它们也表达大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3以及LFA-1，并且显示许多记忆细胞独特的功能属性；(ii)中央记忆TCM细胞表达L-选择素和CCR7，它们分泌IL-2，但不分泌IFNγ或IL-4，以及(iii)效应记忆TEM细胞，然而，不表达L-选择素或CCR7，但产生效应细胞因子，如IFNγ和IL-4)、调节性T细胞(Treg、抑制性T细胞或CD4+CD25+调节性T细胞)、自然杀伤T细胞(NKT)以及Gamma Delta T细胞。另一方面，B细胞在体液免疫(有抗体参与)中发挥主要作用。其生成抗体和抗原并执行抗原呈递细胞(APC)的作用，并且在通过抗原相互作用的活化后转变成记忆B细胞。在哺乳动物中，未成熟的B细胞在骨髓中形成，该处为B细胞名字的来源。

术语“经基因工程化改造的”或“经工程化改造的”是指修饰细胞的基因组的方法，包括但不限于删除编码或非编码区或其部分，或插入编码区或其部分。在一些实施方案中，经修饰的细胞为淋巴细胞(例如T细胞)，其可以从患者或供体获得。细胞可以经修饰以表达外源构建体，例如整合到细胞的基因组中的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。

“免疫应答”是指免疫系统的细胞(例如T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突状细胞以及中性粒细胞)和由这些细胞的任一种或肝脏产生的可溶性大分子(包括Ab、细胞因子和补体)的作用，该作用导致选择性靶向、结合、损害、破坏和/或排除脊椎动物体内的入侵病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞或其他异常细胞，或者在自身免疫或病理性炎症的情况下，正常的人细胞或组织。

术语“免疫疗法”是指患有疾病或处于感染疾病或疾病复发的风险的受试者的治疗，该治疗通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫应答的方法进行。免疫疗法的实例包括但不限于T细胞疗法。T细胞疗法可以包括过继性T细胞疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法、自体细胞疗法、工程化自体细胞疗法(eACT^TM)以及同种异体T细胞移植。然而，本领域技术人员将认为本文公开的调理方法将增强任何移植的T细胞疗法的有效性。T细胞疗法的实例描述于美国专利公开号2014/0154228和2002/0006409、美国专利号7,741,465、美国专利号6,319,494、美国专利号5,728,388以及国际公开号WO 2008/081035中。

免疫疗法的T细胞可以来自本领域已知的任何来源。例如，T细胞可以在体外从造血干细胞群分化，或者T细胞可以从受试者获得。T细胞可以从例如外周血单核细胞(PBMC)、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织以及肿瘤获得。此外，T细胞可以源自本领域中可获得的一个或多个T细胞系。T细胞也可以使用本领域技术人员已知的任何数目的技术(如FICOLL^TM分离和/或单采术(apheresis))从受试者收集的单位血液获得。分离用于T细胞疗法的T细胞的另外的方法公开于美国专利公开号2013/0287748，其通过引用整体并入本文。

术语“工程化自体细胞疗法”(其可以缩写为“eACT^TM”，也称为过继细胞转移)是收集患者自身的T细胞，随后将其经遗传改变以识别并靶向一种或多种在一种或多种特定的肿瘤细胞或恶性肿瘤的细胞表面上表达的抗原的过程。T细胞可以经工程化改造以表达例如嵌合抗原受体(CAR)。CAR阳性(+)T细胞经工程化改造以表达对特定肿瘤抗原具有特异性的细胞外单链可变片段(scFv)，其连接到包含至少一个共刺激结构域和至少一个活化结构域的细胞内信号传导部分。CAR scFv可以设计成靶向例如CD19，CD19是由B细胞谱系(包括所有正常B细胞和B细胞恶性肿瘤，包括但不限于弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤，和滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL、NHL、CLL以及非T细胞ALL)的细胞表达的跨膜蛋白。实例CAR T细胞疗法和构建体描述于美国专利公开号2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309以及2014/0050708中，并且这些参考文献通过引用整体并入。

如本文所用，“患者”包括任何患有癌症(例如淋巴瘤或白血病)的人。本文中，术语“受试者”和“患者”可互换使用。

如本文所用，术语“体外细胞”是指离体培养的任何细胞。特别地，体外细胞可以包括T细胞。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用并且是指包含通过肽键共价连接的氨基酸残基的化合物。蛋白质或肽含有至少两个氨基酸并且可以包含蛋白质或肽的序列的氨基酸的最大数量没有限制。多肽包括任何包含两个或更多个通过肽键彼此连接的氨基酸的肽或蛋白质。如本文所用，该术语是指短链(其在本领域中也通常称为例如肽、寡肽和寡聚体)和较长的链(其在本领域中通常称为蛋白质，其具有许多类型)两者。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚体、异源二聚体、多肽的变体、经修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然的肽、重组的肽、合成的肽或其组合。

如本文所用，“刺激”是指由刺激分子与其同源配体的结合所诱导的初级应答，其中结合介导信号转导事件。“刺激分子”是T细胞上的分子，例如与存在于抗原呈递细胞上的同源刺激配体特异性结合的T细胞受体(TCR)/CD3复合物。“刺激配体”是当存在于抗原呈递细胞(例如APC、树突状细胞、B细胞等)上时可以与T细胞上的刺激分子特异性结合，从而介导T细胞的初级应答(包括但不限于活化、启动免疫应答、增殖等)的配体。刺激配体包括但不限于抗CD3抗体、装载有肽的MHCI类分子、超激动性抗CD2抗体以及超激动性抗CD28抗体。

如本文所用，“共刺激信号”是指与初级信号(例如TCR/CD3连接)组合时导致T细胞应答(例如但不限于增殖和/或关键分子的上调或下调)的信号。

如本文所用，“共刺激配体”包括与T细胞上的同源共刺激分子特异性结合的抗原呈递细胞上的分子。共刺激配体的结合提供介导T细胞应答(包括但不限于增殖、活化、分化等)的信号。共刺激配体诱导除了由刺激分子提供的初级信号(例如由T细胞受体(TCR)/CD3复合物与装载有肽的主要组织相容性复合物(MHC)分子的结合提供)外的信号。共刺激配体可以包括但不限于，3/TR6、4-1BB配体、结合Toll配体受体的激动剂或抗体、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD30配体、CD40、CD7、CD70、CD83、疱疹病毒侵入介体(HVEM),人白细胞抗原G(HLA-G)、ILT4、免疫球蛋白样转录物(ILT)3、诱导性共刺激配体(ICOS-L)、细胞内黏附分子(ICAM)、特异性结合B7-H3的配体、淋巴毒素beta受体、MHC I类链相关蛋白A(MICA)、MHC I类链相关蛋白B(MICB)、OX40配体、PD-L2或程序性死亡(PD)L1。共刺激配体包括但不限于，与存在于T细胞上的共刺激分子特异性结合的抗体，该存在于T细胞上的共刺激分子例如但不限于4-1BB、B7-H3、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD7、ICOS、与CD83特异性结合的配体、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、自然杀伤细胞受体C(NKG2C)、OX40、PD-1或肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14或LIGHT)。

“共刺激分子”是在T细胞上特异性结合共刺激配体，从而介导T细胞的共刺激反应(例如但不限于增殖)的同源结合配偶体。共刺激分子包括但不限于4-1BB/CD137、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD 33、CD 45、CD100(SEMA4D)、CD103、CD134、CD137、CD154、CD16、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD22、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD28、CD29、CD3(alpha；beta；delta；epsilon；gamma；zeta)、CD30、CD37、CD4、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD5、CD64、CD69、CD7、CD80、CD83配体、CD84、CD86、CD8alpha、CD8beta、CD9、CD96(Tactile)、CDl-la、CDl-lb、CDl-lc、CDl-ld、CDS、CEACAM1、CRT AM、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fc gamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、ICOS、Ig alpha(CD79a)、IL2R beta、IL2R gamma、IL7R alpha、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、LIGHT、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDl la/CD18)、MHC I类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX40、PAG/Cbp、PD-1、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子,SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF、TNFr、TNFR2、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或其片段、截短或组合。

本文中，术语“减少”和“降低”可互换使用并且表示小于原来的任何变化。“减少”和“降低”是相对的术语，需要在测量前和测量后间进行比较。“减少”和“降低”包括完全消耗。

受试者的“治疗”或“处理”是指在受试者上进行任何类型的干预或过程，或对该受试者施用活性剂，以达到逆转、减轻、改善、抑制、减缓或预防症状、并发症或状况或与疾病相关的生化指标的发作、进展、发展、严重或复发的目的。在一些实施方案中，“治疗”或“处理”包括部分缓解。在另一个实施方案中，“治疗”或“处理”包括完全缓解。

本公开的各种方面进一步详细描述于下列小节中。

嵌合抗原受体

嵌合抗原受体(CAR或CAR-T)是经基因工程化改造的受体。这些工程化受体可以根据本领域已知的技术容易地插入到免疫细胞(包括T细胞)中并且被其表达。使用CAR，可以对单一受体进行编程以识别特定抗原，并且当与该抗原结合时，活化免疫细胞以攻击并破坏携带该抗原的细胞。当这些抗原存在于肿瘤细胞上，表达CAR的免疫细胞可以靶向并杀伤肿瘤细胞。

工程化T细胞及用途

CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法指示用于治疗在两线或更多线系统疗法后患有复发或难治性大B细胞淋巴瘤的患者，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法是axicabtagene ciloleucel(Axi-cel^TM，

)。

本公开的细胞可以通过从受试者获得的T细胞获得。T细胞可以从例如外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织以及肿瘤获得。此外，T细胞可以源自本领域中可获得的一个或多个T细胞系。T细胞也可以使用本领域技术人员已知的任何数目的技术(例如FICOLL^TM分离和/或单采术)从受试者收集的单位血液获得。在一些实施方案中，通过单采术收集的细胞经洗涤以去除血浆级分，并且放置于适当的缓冲液或介质中用于后续处理。在一些实施方案中，细胞用PBS洗涤。如应当领会的，可以例如通过使用半自动无逆流离心机(例如CobeTM 2991细胞处理器，BaxterCytoMateTM等)来使用洗涤步骤。在一些实施方案中，将经洗涤的细胞重悬于一种或多种生物相容性缓冲液，或具有或不具有缓冲液的其他盐溶液中。在一些实施方案中，单采样品中不期望的组分得以除去。分离用于T细胞疗法的T细胞的另外的方法公开于美国专利公开号2013/0287748，其通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，T细胞通过溶解红细胞和消耗单核细胞(例如通过使用经由PERCOLLTM梯度的离心)从PBMC分离。在一些实施方案中，T细胞的特定亚群，例如CD4+、CD8+、CD28+、CD45RA+和CD45RO+T细胞可以通过本领域中已知的正或负选择技术进一步分离。例如，通过负选择进行的T细胞群的富集可以用针对经负选择的细胞所特有的表面标志物的抗体组合来完成。在一些实施方案中，可以使用细胞分选和/或经由负磁性免疫黏附或流式细胞术(其使用针对存在于经负选择的细胞上的细胞表面标志物的单克隆抗体混合物)进行选择。例如，为了通过负选择来富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对CD8、CD11b、CD14、CD16、CD20和HLA-DR的抗体。在一些实施方案中，使用流式细胞术和细胞分选来分离用于本公开中的感兴趣的细胞群。

在一些实施方案中，PBMC直接用于使用如本文所述的方法的免疫细胞的遗传修饰(例如CAR)。在一些实施方案中，分离PBMC后，可以进一步分离出T淋巴细胞，并在遗传修饰和/或扩增前或后将细胞毒性和辅助性T淋巴细胞两者分选成初始T细胞、记忆T细胞和效应T细胞亚群。

在一些实施方案中，通过鉴别与CD8+细胞的初始细胞、中央记忆细胞和效应细胞类型中每种相关联的细胞表面抗原来将CD8+细胞进一步分选成初始细胞、中央记忆细胞及效应细胞。在一些实施方案中，中央记忆T细胞的表型标志物的表达包括CCR7、CD3、CD28、CD45RO、CD62L和CD127并且为颗粒酶B阴性。在一些实施方案中，中央记忆T细胞为CD8+、CD45RO+和CD62L+T细胞。在一些实施方案中，效应T细胞为CCR7、CD28、CD62L和CD127阴性并且为颗粒酶B和穿孔蛋白阳性。在一些实施方案中，将CD4+T细胞进一步分选成亚群。例如，可以通过鉴别具有细胞表面抗原的细胞群将CD4+T辅助性细胞分选为初始细胞、中央记忆细胞和效应细胞。

在一些实施方案中，免疫细胞例如T细胞在分离后使用已知的方法进行遗传修饰，或者免疫细胞在经遗传修饰前在体外活化和扩增(或者，在祖细胞的情况下分化)。在另一个实施方案中，免疫细胞例如T细胞以本文所述的嵌合抗原受体进行遗传修饰(例如用包含一个或多个编码CAR的核苷酸序列的病毒载体转导)，并然后在体外活化和/或扩增。用于活化和扩增T细胞的方法为本领域所已知并描述于例如美国专利号6,905,874；6,867,041；和6,797,514；以及PCT公开号WO 2012/079000，其内容在此通过引用整体并入。一般而言，此类方法包括将PBMC或分离的T细胞在具有适当的细胞因子(例如IL-2)的培养基中与刺激剂和共刺激剂(例如抗CD3和抗CD28抗体，通常黏附在珠或其他表面)接触。黏附在相同珠上的抗CD3和抗CD28抗体充当“替代”抗原呈递细胞(APC)。一个实例为

系统，用于生理活化人T细胞的CD3/CD28活化剂/刺激剂系统。在其他实施方案中，使用例如美国专利号6,040,177和5,827,642以及PCT公开号WO 2012/129514(其内容在此通过引用整体并入)中描述的方法，以饲养细胞以及适当的抗体和细胞因子活化并刺激T细胞以进行增殖。

在一些实施方案中，从供体受试者获得T细胞。在一些实施方案中，供体受试者为患有癌症或肿瘤的人类患者。在一些实施方案中，供体受试者为未患有癌症或肿瘤的人类患者。

在一些实施方案中，组合物包含药学上可接受的载体、稀释剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。在一些实施方案中，组合物包含赋形剂。

在一些实施方案中，组合物经选择以用于肠胃外递送、用于吸入或用于通过消化道递送，例如口服。制备此类药学上可接受的组合物在本领域技术人员的能力内。在一些实施方案中，缓冲液用于将该组合物维持在生理pH或稍低的pH，通常在约5至约8的pH范围内。在一些实施方案中，当考虑肠胃外施用时，组合物为无热原、肠胃外可接受的水溶液形式，其包含在药学上可接受的媒介物中的具有或不具有另外的治疗剂的本文所述的组合物。在一些实施方案中，用于肠胃外注射的媒介物为无菌蒸馏水，其中将本文所述的组合物(具有或不具有至少一种另外的治疗剂)配制成经适宜保存的无菌的等张溶液。在一些实施方案中，制备牵涉具有提供产品受控或持续释放的聚合化合物(例如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠或脂质体的所期望的分子的制剂，然后该制剂经由贮存注射(depot injection)来递送。在一些实施方案中，使用可植入的药物递送装置来导入所期望的分子。

在一些实施方案中，治疗有此需要的受试者中癌症的方法包括T细胞疗法。在一些实施方案中，本文公开的T细胞疗法为工程化自体细胞疗法(eACT^TM)。根据该实施方案，方法可以包括从患者收集血细胞。然后，分离的血细胞(例如T细胞)可以经工程化改造以表达本文公开的CAR或TCR。在具体的实施方案中，将CAR T细胞或TCR T细胞施用于患者。在一些实施方案中，CART细胞或TCR T细胞治疗患者中的肿瘤或癌症。在一些实施方案中，CAR T细胞或TCR T细胞缩小肿瘤或癌症的尺寸。

在一些实施方案中，从患者获得用于T细胞疗法中的供体T细胞(例如用于自体T细胞疗法)。在其他实施方案中，从非患者的受试者获得用于T细胞疗法中的供体T细胞。T细胞可以以治疗有效量施用。例如，T细胞的治疗有效量可以为至少约10⁴个细胞、至少约10⁵个细胞、至少约10⁶个细胞、至少约10⁷个细胞、至少约10⁸个细胞、至少约10⁹个或至少约10¹⁰个。在另一个实施方案中，T细胞的治疗有效量为约10⁴个细胞、约10⁵个细胞、约10⁶个细胞、约10⁷个细胞或约10⁸个细胞。在一些实施方案中，CAR T细胞的治疗有效量为约2×10⁶个细胞/kg、约3×10⁶个细胞/kg、约4×10⁶个细胞/kg、约5×10⁶个细胞/kg、约6×10⁶个细胞/kg、约7×10⁶个细胞/kg、约8×10⁶个细胞/kg、约9×10⁶个细胞/kg、约1×10⁷个细胞/kg、约2×10⁷个细胞/kg、约3×10⁷个细胞/kg、约4×10⁷个细胞/kg、约5×10⁷个细胞/kg、约6×10⁷个细胞/kg、约7×10⁷个细胞/kg、约8×10⁷个细胞/kg、或约9×10⁷个细胞/kg。在一些实施方案中，CAR阳性活T细胞的治疗有效量为每kg体重约1×10⁶和约2×10⁶个之间的CAR阳性活T细胞，直至约1×10⁸个CAR阳性活T细胞的最大剂量。

在一些实施方案中，CAR阳性活T细胞的治疗有效量为约0.4×10⁸和约2×10⁸个之间的CAR阳性活T细胞。在一些实施方案中，CAR阳性活T细胞的治疗有效量为约0.4x10⁸个、约0.5x10⁸个、约0.6x10⁸个、约0.7x10⁸个、约0.8x10⁸个、约0.9x10⁸个、约1.0x10⁸个、约1.1x10⁸个、约1.2x10⁸个、约1.3x10⁸个、约1.4x10⁸个、约1.5x10⁸个、约1.6x10⁸个、约1.7x10⁸个、约1.8x10⁸个、约1.9x10⁸或约2.0x10⁸个CAR阳性活T细胞。

治疗方法

本文公开的方法可以用于治疗受试者中的癌症、缩小肿瘤尺寸、杀伤肿瘤细胞、防止肿瘤细胞增殖、防止肿瘤生长、从患者消除肿瘤、防止肿瘤复发、防止肿瘤转移、诱导患者中的缓解或其任何组合。在一些实施方案中，方法诱导完全反应。在其他实施方案中，方法诱导部分反应。

可以治疗的癌症包括未血管化、基本上尚未血管化或血管化的肿瘤。癌症也可以包括实体瘤或非实体瘤。在一些实施方案中，癌症为血液学癌症。在一些实施方案中，癌症为白细胞的癌症。在其他实施方案中，癌症为浆细胞的癌症。在一些实施方案中，癌症为白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症为急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、急性淋巴样白血病(ALL)和噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)、B细胞幼淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴样白血病(“BALL”)、母细胞性浆细胞样树突状细胞赘生物、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性髓样白血病(CML)、慢性或急性肉芽肿病、慢性或急性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、毛细胞白血病、噬血细胞综合征(巨噬细胞活化综合征(MAS)、霍奇金病、大细胞肉芽肿、白细胞黏附缺陷、恶性淋巴增生性状况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征(MDS)、髓样疾病包括但不限于急性髓样白血病(AML)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、浆细胞增生性病症(例如无症状性骨髓瘤(郁积型多发性骨髓瘤或惰性骨髓瘤)、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞赘生物、浆细胞瘤(例如浆细胞恶液质；单发性骨髓瘤；单发性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤；和多发性浆细胞瘤)、POEMS综合征(Crow-Fukase综合征；Takatsuki病；PEP综合征)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、系统性淀粉样蛋白轻链淀粉样变、T细胞急性淋巴样白血病(“TALL”)、T细胞淋巴瘤、转化滤泡性淋巴瘤或瓦氏巨球蛋白血症，或其组合。

在一些实施方案中，癌症为骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症为白血病。在一些实施方案中，癌症为急性髓样白血病。

在一些实施方案中，方法进一步包括施用化疗剂。在一些实施方案中，选择的化疗剂是淋巴消减(预调理)化疗剂。有益的预调理治疗方案以及相关的有益生物标志物描述于美国临时专利申请62/262,143和62/167,750，其在此通过引用整体并入本文。这些描述了例如调理需要T细胞疗法的患者的方法，包括对患者施用指定的有益剂量的环磷酰胺(200mg/m²/天-2000mg/m²/天)和指定剂量的氟达拉滨(20mg/m²/天-900mg/m²/天)。一个此类剂量方案牵涉治疗患者，包括每天向患者施用约500mg/m²/天的环磷酰胺和约60mg/m²/天的氟达拉滨，持续3天，然后向患者施用治疗有效量的工程化T细胞。

在一些实施方案中，抗原结合分子，转导的(或以其他方式工程化的)细胞(例如CAR)和化疗剂各自以有效治疗受试者中疾病或状况的量施用。

在一些实施方案中，包含本文公开的表达CAR的免疫效应细胞的组合物可以与任何数目的化疗剂联合施用。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylating agents)，如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)(CYTOXANTM)；磺酸烷基酯类(alkylsulfonates)，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphaoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine resume)；氮芥类(nitrogen mustards)，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素类，如阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、加利车霉素(calicheamicin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄激素类，如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；曲布赛(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptiniumacetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；

雷佐生(razoxane)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托辛(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)(TAXOLTM,Bristol-Myers Squibb)和多西他塞(doxetaxel)(

Rhone-Poulenc Rorer)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；丝裂霉素C；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱；长春瑞滨；诺维本(navelbine)；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；xeloda；伊本膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维A酸(retinoic acid)衍生物，如TargretinTM(贝沙罗汀(bexarotene))、PanretinTM、(阿利维A酸(alitretinoin))；ONTAKTM地尼白介素(denileukindiftitox)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；卡培他滨(capecitabine)；和上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，包含本文公开的表达CAR和/或TCR的免疫效应细胞的组合物可以与抗激素剂联合施用，所述抗激素剂作用为调节或抑制激素对肿瘤的作用，如抗雌激素，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、奇沃昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(Fareston)；和抗雄激素如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；和上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在适当的情况下也施用化疗剂的组合，包括但不限于CHOP，即环磷酰胺

多柔比星(羟基多柔比星)、长春新碱

和泼尼松。

在一些实施方案中，在施用工程化细胞或核酸同时或之后一周内施用化疗剂。在其他实施方案中，在施用工程化细胞或核酸后1至4周或1周至1个月，1周至2个月，1周至3个月，1周至6个月，1周至9个月或1周至12个月施用化疗剂。在一些实施方案中，在施用细胞或核酸之前至少1个月施用化疗剂。在一些实施方案中，该方法还包括施用两种或更多种化疗剂。

多种另外的治疗剂可以与本文所述的组合物联合使用。例如，潜在有用的另外的治疗剂包括PD-1抑制剂，例如纳武单抗(nivolumab)

派姆单抗(pembrolizumab)

派姆单抗、阿巴伏单抗(pidilizumab)(CureTech)和阿特珠单抗(Atezolizumab)(Roche)。

适合于与本文公开的组合物和方法组合使用的另外的治疗剂包括但不限于伊布替尼(ibrutinib)

奥法木单抗(ofatumumab)

利妥昔单抗(rituximab)

贝伐单抗(bevacizumab)

曲妥珠单抗(trastuzumab)

trastuzumabemtansine

伊马替尼(imatinib)

西妥昔单抗(cetuximab)

帕尼单抗(panitumumab)

卡妥索单抗(Catumaxomab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、奥法木单抗、托西莫单抗(tositumomab)、本妥昔单抗(brentuximab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、阿法替尼afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、阿昔替尼(axitinib)、马赛替尼(masitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、toceranib、来他替尼(lestaurtinib)、阿昔替尼(axitinib)、西地尼布(cediranib)、乐伐替尼(lenvatinib)、尼达尼布(nintedanib)、帕唑帕尼(pazopanib)、瑞格非尼(regorafenib)、司马沙尼(semaxanib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、替瓦沙尼(tivozanib)、托西雷尼(toceranib)、凡德他尼、恩曲替尼(entrectinib)、卡博替尼(cabozantinib)、伊马替尼(imatinib)、达沙替尼(dasatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕纳替尼(ponatinib)、雷多替尼(radotinib)、博舒替尼(bosutinib)、来他替尼(lestaurtinib)、鲁索替尼(ruxolitinib)、帕利替尼(pacritinib)、考比替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、必尼美替尼(binimetinib)、阿雷替尼(alectinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克唑替尼(crizotinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿迪波太(adipotide)、地尼白介素、mTOR抑制剂如依维莫司(Everolimus)和西罗莫司(Temsirolimus)、hedgehog抑制剂如索尼得吉(sonidegib)和维莫得告(vismodegib)、CDK抑制剂如CDK抑制剂(帕博西尼(palbociclib))。

在一些实施方案中，包含CAR免疫细胞的组合物与抗炎剂一起施用。抗炎剂或药物可以包括但不限于类固醇和糖皮质激素(包括倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松(dexamethasone)、乙酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松、甲泼尼龙(methylprednisolone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、曲安西龙(triamcinolone))、非类固醇类消炎药(NSAIDS)，包括阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、来氟米特(leflunomide)、抗TNF药物、环磷酰胺和麦考酚酯(mycophenolate)。示例性的NSAID包括布洛芬、萘普生、萘普生钠、Cox-2抑制剂和唾液酸化物(sialylate)。示例性镇痛剂包括对乙酰氨基酚(acetaminophen)、羟考酮(oxycodone)、曲马多或盐酸丙氧芬(tramadol ofproporxyphene hydrochloride)。示例性糖皮质激素包括可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙或泼尼松。示例性生物反应调节剂包括针对细胞表面标志物(例如CD4、CD5等)的分子、细胞因子抑制剂如TNF拮抗剂，(例如依那西普(etanercept)

阿达木单抗(adalimumab)

和英夫利昔单抗(infliximab)

趋化因子抑制剂和黏附分子抑制剂。生物反应调节剂包括单克隆抗体以及重组形式的分子。示例性的DMARD包括硫唑嘌呤(azathioprine)、环磷酰胺、环孢菌素、甲氨蝶呤、青霉胺、来氟米特、柳氮磺胺吡啶、羟氯喹、Gold(口服(金诺芬(auranofin))和肌内)和米诺环素(minocycline)。

在一些实施方案中，本文所述的组合物与细胞因子联合施用。细胞因子的实例是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子中包括生长激素，如人生长激素，N-甲硫氨酰人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和黄体生成素(LH)；肝生长因子(HGF)；成纤维细胞生长因子(FGF)；催乳素；胎盘催乳激素；缪勒管抑制物质(mullerian-inhibiting substance)；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子(NGF)如NGF-beta；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)如TGF-alpha和TGF-beta；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO，

)；骨诱导因子；干扰素如干扰素-α、β和-γ；集落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)，如IL-1、IL-1alpha、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；IL-15，肿瘤坏死因子如TNF-alpha或TNF-beta；和其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等效物。

CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的施用

适应症和用法

在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法指示用于治疗在两线或更多线系统疗法后患有复发或难治性大B细胞淋巴瘤的成年患者，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法未指示用于治疗患有原发性中枢神经系统淋巴瘤的患者。

剂量和施用

在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的输液袋包含约68mL中的嵌合抗原受体(CAR)阳性T细胞的悬浮液。目标剂量可以在每kg体重约1×10⁶个和约2×10⁶个CAR阳性活T细胞之间，其中最大为2×10⁸个CAR阳性活T细胞。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法是Axi-cel^TM(

axicabtagene ciloleucel)。

CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法是自体使用的。患者的身份必须与CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法盒和输液袋上的患者标识符匹配。如果患者特异性标签上的信息与预期患者不匹配，则不能施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法。

在一些实施方案中，必须在开始淋巴细胞清除(lymphodepleting)方案之前确认CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的可用性。

在一些实施方案中，在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注之前，施用淋巴细胞清除化疗对患者进行预治疗。在一些实施方案中，在输注CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法之前的第五、第四和第三天，静脉施用环磷酰胺500mg/m²和静脉施用氟达拉滨30mg/m²的淋巴细胞清除化疗方案。

在一些实施方案中，在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注之前，通过以约500-1000mg、约600-1000mg、约700-1000mg、约800-1000mg、约900-1000mg、约500-900mg、约500-800mg、约500-700mg、约500-600mg、约600-900mg、约600-800mg、约600-700mg、约700-900mg、约700-800mg或约800-900mg之间的剂量口服施用对乙酰氨基酚对患者进行预药物治疗。在一些实施方案中，在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注之前，通过以约500mg、约525mg、约550mg、约575mg、约600mg、约625mg、约650mg、约675mg、约700mg、约725mg、约750mg、约775mg、约800mg、约825mg、约850mg、约875mg、约900mg、约925mg、约950mg、约975mg或约1000mg的剂量口服施用对乙酰氨基酚对患者进行预药物治疗。

在一些实施方式中，在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注之前，通过口服施用对乙酰氨基酚650mg和静脉施用苯海拉明12.5mg或在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法前约1小时通过口服来对患者进行预药物治疗。

在一些实施方案中，避免系统性类固醇的预防性使用，因为它可能干扰CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的活性。

用于输注的CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的制备

CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法解冻和输注的时机经协调。在一些实施方案中，预先确定输注时间，并且调整CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法解冻的开始时间，使得当患者准备好时其可用于输注。

在一些实施方案中，在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法解冻之前确认患者身份。在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法制备之前，将患者的身份与CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法盒上的患者标识符匹配。在一些实施方案中，如果患者特异性标签上的信息与预期患者不匹配，则不从盒中取出CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法产品袋。

在一些实施方案中，一旦确认患者身份，就从盒中取出CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法产品袋，并确认盒标签上的患者信息与袋标签匹配。

在一些实施方案中，方法包括在解冻之前检查产品袋容器完整性的任何缺口，例如破裂或裂缝。在一些实施方案中，根据当地指南，将输液袋放置在第二个无菌袋中。

在一些实施方案中，方法包括使用水浴或干融法在约37℃下解冻CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，直到输液袋中没有可见的冰。在一些实施方案中，方法包括混合或搅动袋的内容物以分散成块的细胞材料。在一些实施方案中，将袋的内容物轻轻地混合或搅动。在一些实施方案中，方法包括检查袋中是否存在可见的剩余的细胞团块，并继续混合或搅拌。小块的细胞物质应该用轻轻的手动混合分散。在一些实施方案中，方法不包括在输注前在新培养基中洗涤、快速离心和/或重新悬浮出CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法。

在一些实施方案中，一旦解冻，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法可以在室温(20℃至25℃)下保存长达3小时。

施用

在一些实施方案中，目前公开的施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的方法包括以下的一个或多个作为步骤或考虑因素：

·在输注之前和恢复期期间确保托西利珠单抗和急救设备可用。

·请勿使用白细胞清除过滤器。

·推荐中央静脉通路用于输注CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法。

·确认患者的身份与CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法产品袋上的患者标识符匹配。

·输注前用生理盐水灌注管道。

·通过重力或蠕动泵，在30分钟内输注CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法袋的全部内容物。解冻后，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法在室温下稳定长达3小时。

·在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注期间，轻轻搅动产品袋以防止细胞结块。

·输注产品袋的全部内容物后，以相同的输注速度用生理盐水冲洗管道以确保递送所有产品。

·CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法含有用无复制能力的逆转录病毒载体进行遗传修饰的人血细胞。遵循通用预防措施和当地生物安全指南进行处理和处置以避免潜在的传染病传播。

监测

在一些实施方案中，在经认证的医疗机构进行CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的施用。

在一些实施方案中，本文公开的方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS和神经毒性的体征和症状持续7天。在一些实施方案中，本文公开的方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS和神经毒性的体征和症状持续10天。

在一些实施方案中，嘱咐患者在输注后保持在经认证的医疗机构的附近持续至少4周。

严重不良反应的管理

在一些实施方案中，方法包括不良反应的管理。在一些实施方案中，不良反应选自下组：细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性、超敏反应、严重感染、血细胞减少和低丙种球蛋白血症。

在一些实施方案中，不良反应的体征和症状选自下组：发烧、低血压、心动过速、低氧和发冷，包括心律失常(包括心房颤动和室性心动过速)、心脏骤停、心力衰竭、肾功能不全、毛细血管渗漏综合征、低血压、低氧、器官毒性、噬血细胞性淋巴组织细胞增生/巨噬细胞活化综合征(HLH/MAS)、癫痫发作、脑病、头痛、震颤、头晕、失语症、谵妄、失眠焦虑、过敏反应、发热性中性粒细胞减少、血小板减少、中性粒细胞减少和贫血。

细胞因子释放综合征

在一些实施方案中，方法包括基于临床表现来鉴定CRS。在一些实施方案中，方法包括评估和治疗发烧、低氧和低血压的其他原因。如果观察到或怀疑CRS，根据表1中的建议进行管理。经历≥2级CRS的患者(例如低血压、对液体不响应或需要补充氧合的低氧)应该用连续心脏遥测和脉搏血氧定量法来监测。在一些实施方案中，对于经历严重CRS的患者，考虑进行超声心动图以评价心脏功能。对于严重或危及生命的CRS，可以考虑采用重症监护支持疗法。在一些实施方案中，在本文公开的方法中，可以使用托西利珠单抗的生物类似物或等效物代替托西利珠单抗。

表1.CRS分级和管理指南

(a)Lee DW et al.,(2014).Current concepts in the diagnosis andmanagement of cytokine release syndrome.Blood.2014 Jul 10；124(2):188–195。

(b)关于神经毒性的管理，参见表2。

(c)关于详细信息，参见

(托西利珠单抗)处方信息，https://www.gene.com/download/pdf/actemra_prescribing.pdf(上次访问2017年10月18日)。美国的首次批准时间显示为2010年。

神经毒性

在一些实施方案中，方法包括监测患者神经毒性的体征和症状(表2)。在一些实施方案中，方法包括排除神经系统症状的其他原因。经历≥2级神经毒性的患者应该用连续心脏遥测和脉搏血氧定量法来监测。为严重或危及生命的神经毒性提供重症监护支持疗法。对于任何≥2级神经毒性，考虑非镇静抗癫痫药(例如左乙拉西坦)用于预防癫痫发作。

表2.神经毒性分级和管理指南

剂型和优势

在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法可作为用于输注的细胞悬浮液获得。

在一些实施方案中，单剂量的CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法包含输液袋中约68mL悬浮液中每kg的体重约1×10⁶个和约2×10⁶个之间的CAR阳性活T细胞的目标剂量(或者对于100kg及以上的患者，最大为2×10⁸个CAR阳性活T细胞)。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法是axicabtagene ciloleucel

在一些实施方案中，单剂量的CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法存在于容器中。此类容器可以是无菌的。在一些实施方案中，容器是输液袋。在一些实施方案中，输液袋体积为约100mL、150mL、200mL、250mL、300mL、500mL、750mL、1,000mL、1,500mL、2,000mL或3,000mL。

风险评估和缓解策略(REMS)

由于CRS和神经毒性的风险，在一些实施方案中，在风险评估和缓解策略(REMS)下可通过受限程序获得CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法。REMS的典型组成部分是：

·分配和施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的医疗机构必须注册，并符合REMS要求。

·经认证的医疗机构必须可现场立即使用托西利珠单抗，并且如果需要CRS的治疗，确保在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注后2小时内，每位患者最少两剂的托西利珠单抗可用于输注。

·经认证的医疗机构必须确保开处方、分配或施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的医疗提供者接受有关CRS和神经毒性管理的培训。

细胞因子释放综合征(CRS)

在一些实施方案中，医疗机构确保在输注CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法之前可获得两剂的托西利珠单抗。在一些实施方案中，医疗机构确保在输注CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法之前可获得四剂的托西利珠单抗。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续7天。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续7-10天。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续8天。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续9天。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续10天。在一些实施方案中，方法包括在输注后监测患者CRS的体征或症状持续4周。在一些实施方案中，方法包括在任何时间如果发生CRS的体征或症状，则指导患者立即就医。在一些实施方案中，方法包括如CRS的第一体征所指示的，用支持性护理、托西利珠单抗或托西利珠单抗和皮质类固醇开始治疗。

神经毒性

在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者神经毒性的体征和症状持续7天。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续7-10天。在一些实施方案中，方法包括在输注后，至少每天在经认证的医疗机构监测患者CRS的体征和症状持续10天。在一些实施方案中，方法包括在输注后监测患者神经毒性的体征或症状4周并及时治疗。

超敏反应

伴随输注CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法可能发生过敏性反应。在一些实施方案中，包括过敏反应的严重的超敏反应可能是由于在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法中的二甲基亚砜(DMSO)或残留的庆大霉素。

病毒再激活

在一些实施方案中，乙肝病毒(HBV)再激活(在一些情况下导致暴发性肝炎、肝衰竭和死亡)可能发生在用针对B细胞的药物治疗的患者中。在一些实施方案中，方法包括在收集用于制造的细胞之前，根据临床指南对HBV、HCV和HIV进行筛选。

长时间的血细胞减少

在一些实施方案中，患者可能在淋巴细胞清除化疗和CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注后表现出血细胞减少数周。在一些实施方案中，方法包括在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注后监测血细胞计数。

低丙种球蛋白血症

在一些实施方式中，B细胞发育不全和低丙种球蛋白血症可能发生在接受用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法治疗的患者中。在一些实施方案中，方法包括在用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法治疗后监测免疫球蛋白水平，并使用感染预防措施、抗生素预防和免疫球蛋白替换进行管理。

在一些实施方案中，在开始淋巴细胞清除化疗之前至少6周，在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法治疗期间，以及直到在用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法治疗后免疫恢复，不建议用活病毒疫苗接种。

继发性恶性肿瘤

在一些实施方案中，用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法治疗的患者可能发展继发性恶性肿瘤。在一些实施方案中，方法包括终生监测继发性恶性肿瘤。

肿瘤溶解综合征(TLS)

用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法治疗的患者可能发展TLS，其可能是严重的。为了使TLS的风险最小化，在一些实施方案中，方法包括评估患者尿酸升高或肿瘤负荷高，并在axicabtagene ciloleucel输注前施用别嘌呤醇或替代性预防。应根据标准指南监测TLS的体征和症状并管理事件。对驾驶和使用机器的能力的影响

由于对于神经系统事件，包括精神状态改变或癫痫发作的可能性，接受CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法的患者在CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输注后的8周内有意识或协调性改变或降低的风险。在一些实施方案中，方法包括建议患者在此初期期间避免驾驶和从事危险的职业或活动，例如操作重型或潜在危险的机械。

储存和处理

在一些实施方案中，在输液袋中供应CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，其含有在5％DMSO和2.5％白蛋白(人)中的约68mL的遗传修饰的自体T细胞的冷冻悬浮液。在一些实施方案中，在输液袋中供应CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，其含有在5％DMSO和2.5％白蛋白(人)中的约68mL的遗传修饰的自体T细胞的冷冻悬浮液(NDC71287-119-01)。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法包含Cryostor CS10。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法包含每输注300mg钠。在一些实施方案中，在输液袋中供应CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，其含有在5％DMSO和2.5％白蛋白(人)中的约50-100mL、50-90mL、50-80mL、50-70mL、60-70mL、60-75mL或65-75mL的遗传修饰的自体T细胞的悬浮液。在一些实施方案中，在输液袋中供应CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，其含有在5％DMSO和2.5％白蛋白(人)中的小于100mL、小于90mL、小于80mL、小于70mL、小于70mL、小于72mL或小于75mL的遗传修饰的自体T细胞的悬浮液。在一些实施方案中，在输液袋中供应CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，其含有在5％DMSO和2.5％白蛋白(人)中的大于50mL、大于60mL、大于65mL、大于66mL、大于67mL或大于68mL的遗传修饰的自体T细胞的悬浮液。在一些实施方案中，悬浮液是冷冻的。

在一些实施方案中，在具有密封的添加管和两个可用的刺针端口的乙烯-乙酸乙烯酯低温贮藏袋中供应CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输液袋，其含有约68mL的细胞分散液。

在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输液袋单独包装在金属盒中。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输液袋单独包装在金属盒(NDC 71287-119-02)中。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输液袋存储在液氮的蒸汽相中。在一些实施方案中，CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法输液袋在液氮干托运器中供应。

在一些实施方案中，方法包括在接收时将患者的身份与盒和输液袋上的患者标识符匹配。在一些实施方案中，将CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法冷冻保存在液氮的蒸汽相中(小于或等于负150℃)。在一些实施方案中，在使用前将CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法解冻。

实施例

实施例1：复发或难治性大B细胞淋巴瘤的临床研究

一项单臂、开放标签、多中心试验评估了Axi-cel^TM

的单次输注对患有复发或难治性侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤的成年患者的功效。符合条件的患者具有对最近的疗法难治的疾病或在自体造血干细胞移植(HSCT)后1年内复发。研究排除了具有先前的同种异体HSCT、任何中枢神经系统淋巴瘤病史、ECOG活动状态为2或更高、绝对淋巴细胞计数低于100/μL、肌酐清除低于60mL/min、肝转氨酶超过正常上限的2.5倍、心脏射血分数低于50％或活动性严重感染的患者。

淋巴细胞清除化疗后，以2×10⁶个CAR阳性活T细胞/kg的目标剂量(最大允许剂量：2×10⁸个细胞)的单次静脉内输注施用Axi-cel^TM。淋巴细胞清除方案由环磷酰胺500mg/m²静脉和氟达拉滨30mg/m²静脉组成，两者均在Axi-cel^TM之前第五、第四和第三天给予。不允许在白细胞单采术和淋巴细胞清除化疗之间进行桥接化疗。所有患者均住院接受Axi-cel^TM输注，并在之后住院最少7天。

在111名经历白细胞单采术的患者中，101名接受了Axi-cel^TM。在经治疗的患者中，中位年龄为58岁(范围：23至76岁)，67％为男性，且89％为白人。大多数(76％)患有DLBCL，16％患有转化性滤泡性淋巴瘤，而8％患有原发性纵隔大B细胞淋巴瘤。先前疗法的中位数为3(范围：1至10)，77％的患者具有对第二线或更多线的疗法难治的疾病，而21％在自体HSCT的1年内复发。

111名患者中有1名由于制造失败而未接受产品。其他九名患者未经治疗，主要是由于白细胞单采术后的进行性疾病或严重不良反应。从白细胞单采术到产品递送的中位时间为17天(范围：14至51天)，且从白细胞单采术到输注的中位时间为24天(范围：16至73天)。中位剂量为2.0×10⁶个CAR阳性活T细胞/kg(范围：1.1至2.2×10⁶个细胞/kg)。

功效是由独立审查委员会确定，基于完全缓解(CR)率和反应持续时间(DOR)建立的(表3和表4)。中位反应时间为0.9个月(范围：0.8至6.2个月)。与具有部分缓解(PR)最佳反应的患者相比，实现CR的患者的反应持续时间更长(表4)。在52名达到CR的患者中，有14名最初具有稳定的疾病(7名患者)或PR(7名患者)，其中改善中位时间为2.1个月(范围：1.6至5.3个月)。

表3.反应率

CI，置信区间。

^a根据2007年修订的国际工作组标准，由独立审查委员会评价。

表4.反应持续时间

CR，完全缓解；DOR，反应持续时间；NE，不可估；PR，部分缓解。

^a在所有反应者中。DOR是从首次客观反应的日期至因复发或毒性而进展或死亡的日期进行测量的。

^bKaplan-Meier估计。

^cA+符号表示截尾值。

实施例2：Axi-cel^TM输注后的药效学和药代动力学

在Axi-cel^TM输注之后，通过测量血液中细胞因子、趋化因子和其他分子的瞬时升高，在4周的间隔内评估药效学反应。对细胞因子和趋化因子如IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、TNF-α、IFN-γ和sIL2Rα的水平进行了分析。在输注后的前14天内观察到峰值升高，并且通常在28天内恢复到基线。由于Axi-cel^TM的在靶效应，预计出现B细胞发育不全的时段。

输注Axi-cel^TM后，抗CD19 CAR T细胞表现出最初的快速扩增，随后3个月下降至接近基线水平。抗CD19 CAR T细胞的峰值水平发生在Axi-cel^TM输注后的前7-14天内。年龄(23-76岁)和性别对Axi-cel^TM的AUC_(0-28d)和Cmax不具有明显影响。

血液中抗CD19 CAR T细胞的数量与客观反应(完全缓解(CR)或部分缓解(PR))正相关。与无反应者(n＝23)的相应水平相比，反应者(n＝73)中的中位抗CD19 CAR T细胞Cmax水平为205％更高(43.6个细胞/μL对21.2个细胞/μL)。有反应的患者(n＝73)的中位AUC第0-28天是无反应者(n＝23)相应水平的251％(557.1天*细胞/μL对222.0天*细胞/μL)。

一些患者需要托西利珠单抗和皮质类固醇用于管理CRS和神经毒性。如分别通过AUC_(0-28d)和Cmax所测量的，与未接受托西利珠单抗的患者(n＝57)相比，用托西利珠单抗治疗的患者(n＝44)具有262％和232％更高的抗CD19 CAR T细胞。类似地，与未接受皮质类固醇的患者(n＝75)相比，接受皮质类固醇的患者(n＝26)具有217％和155％更高的AUC_(0-28d)和Cmax。

实施例3：CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法后的不良反应的管理

因为临床试验是在各种各样的条件下进行的，所以不能将在一种药物的临床试验中观察到的不良反应率直接与另一种药物的临床试验中观察到的不良反应率进行比较，并且可能无法反映出在实践中观察到的不良反应率。

本小节中描述的安全性数据反映了临床试验(研究1)中对Axi-cel^TM的暴露，其中108名患有复发/难治性B细胞NHL患者接受了基于推荐剂量(基于体重)的CAR阳性T细胞。患有CNS病症(如癫痫发作或脑血管缺血)或需要系统性免疫抑制的自身免疫性疾病病史的患者是不符合条件的。中位随访持续时间为8.7个月。研究人群的中位年龄为58岁(范围：23至76岁)；68％是男性。基线ECOG活动状态为43％具有ECOG 0，而57％具有ECOG 1。

最常见的不良反应(发生率≥20％)包括CRS、发烧、低血压、脑病、心动过速、疲劳、头痛、食欲下降、发冷、腹泻、发热性中性粒细胞减少、感染-未指明的病原体、恶心、低氧、震颤、咳嗽、呕吐、头晕、便秘和心律失常。52％的患者发生了严重的不良反应。最常见的严重不良反应(>2％)包括脑病、发烧、肺部感染、发热性中性粒细胞减少、心律失常、心力衰竭、尿路感染、肾功能不全、失语症、心脏骤停、艰难梭菌感染、谵妄、低血压和低氧。

最常见的(≥10％)3级或更高的反应包括发热性中性粒细胞减少、发烧、CRS、脑病、感染-未指明的病原体、低血压、低氧和肺部感染。

百分之四十五(49/108)的患者在Axi-cel^TM输注后接受了托西利珠单抗。

表5总结了在至少10％的用Axi-cel^TM治疗的患者中发生的不良反应，并且表6描述了在至少10％的患者中发生的3级或4级实验室异常。

表5.研究1中在至少10％的用Axi-cel^TM治疗的患者中观察到不良反应的概述

在少于10％的用Axi-cel^TM治疗的患者中发生的其他临床上重要的不良反应包括以下：

·血液和淋巴系统病症：凝血病(2％)

·心脏病症：心力衰竭(6％)和心脏骤停(4％)

·免疫系统病症：噬血细胞性淋巴组织细胞增生/巨噬细胞活化综合征(HLH/MAS)(1％)、超敏反应(1％)

·感染和侵染病症：真菌感染(5％)

·神经系统病症：共济失调(6％)、癫痫发作(4％)、计算困难(2％)和肌阵挛(2％)

·呼吸、胸和纵隔病症：肺水肿(9％)

·皮肤和皮下组织病症：皮疹(9％)

·血管病症：毛细血管渗漏综合征(3％)

实验室异常：

表6.研究1中在使用基于CTCAE的Axi-cel治疗后，≥10％的患者中发生的3级或4级实验室异常(N＝108)

细胞因子释放综合征

在用Axi-cel^TM治疗后发生了CRS，包括致命或危及生命的反应。在研究1中，94％(101/108)的接受Axi-cel^TM的患者中发生了CRS，包括13％(14/108)的患者中发生了≥3级(Lee分级系统¹)CRS。在接受Axi-cel^TM后死亡的患者中，4名在死亡时具有进行中的CRS事件。中位发作时间为2天(范围：1至12天)，且中位CRS持续时间为7天(范围：2至58天)。CRS的主要表现包括发烧(78％)、低血压(41％)、心动过速(28％)、低氧(22％)和发冷(20％)。可能与CRS相关的严重事件包括心律失常(包括心房颤动和室性心动过速)、心脏骤停、心力衰竭、肾功能不全、毛细血管渗漏综合征、低血压、低氧和噬血细胞性淋巴组织细胞增生/巨噬细胞活化综合征(HLH/MAS)。

神经毒性

在用Axi-cel^TM治疗后发生了致命或危及生命的神经毒性。87％的患者中发生了神经毒性。所有神经毒性的百分之九十八发生在Axi-cel^TM输注的前8周内，其中中位发作时间为4天(范围：1至43天)。中位神经毒性持续时间为17天。31％的患者中发生3级或更高的神经毒性。

最常见的神经系统毒性包括脑病(57％)、头痛(44％)、震颤(31％)、头晕(21％)、失语症(18％)、谵妄(17％)、失眠(9％)和焦虑(9％)。注意到持续长达173天的长时间脑病。伴随Axi-cel^TM发生了包括白质脑病和癫痫发作的严重事件。用Axi-cel^TM治疗的患者中发生了致命和严重的脑水肿病例。

严重感染

在Axi-cel^TM输注后的患者中发生了严重或危及生命的感染。在研究1中，38％的患者中发生了感染(所有级别)。23％的患者中发生了3级或更高的感染。16％的患者中发生了3级或更高的未指明病原体的感染，9％中为细菌感染而4％中为病毒感染。不应将Axi-cel^TM施用于有临床意义的活动性全身感染的患者。在Axi-cel^TM输注前后监测患者的感染的体征和症状，并进行适当治疗。根据当地指南施用预防性抗微生物药物。

在Axi-cel^TM输注后，36％的患者中观察到发热性中性粒细胞减少，并且可能与CRS同时发生。在发热性中性粒细胞减少的情况下，评估感染并按照医学指示使用广谱抗生素、液体和其他支持性护理进行管理。

免疫原性

Axi-cel^TM具有诱导抗产物抗体的潜力。已使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)评估了Axi-cel^TM的免疫原性，以检测针对FMC63的结合抗体，FMC63是抗CD19 CAR的起源抗体。在研究1中的基线和第1、3或6个月，三名患者给药前抗FMC63抗体测试呈阳性。没有证据表明Axi-cel^TM的初始扩增和持久性的动力学，或Axi-cel^TM的安全性或有效性在这些患者中发生了改变。

在研究1中，(28％)患者中发生了Axi-cel^TM输注后第30天仍未解决的3级或更高的血细胞减少，包括血小板减少(18％)、中性粒细胞减少(15％)和贫血(3％)。输注Axi-cel^TM后监测血液计数。

在研究1中，15％的患者中发生了低丙种球蛋白血症。

本说明书中提到的所有出版物、专利、专利申请和参考文献，包括处方信息，均通过引用并入本文，如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指示为通过引用并入。然而，本文引用的参考文献不应被理解为承认此类参考文献是本发明的现有技术。在通过引用并入的参考文献中提供的任何定义或术语与本文提供的术语和讨论不同的程度上，以本术语和定义为准。

Claims (30)

1.治疗患者中在两线或更多线的系统疗法后复发或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL的方法，其包括：

以每kg体重约1×10⁶个和约2×10⁶个之间的CAR阳性活T细胞的剂量直至约1×10⁸个CAR阳性活T细胞的最大剂量通过静脉内输注向有此需要的所述患者施用axicabtageneciloleucel悬浮液，

其中axicabtagene ciloleucel是CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包含经收获并通过逆转录病毒转导进行离体遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)的所述患者自身的T细胞，所述CAR包含与CD28和CD3-zeta共刺激结构域连接的抗CD19单链可变片段(scFv)。

2.权利要求1的方法，其中所述静脉内输注时间为15和120分钟之间。

3.权利要求1的方法，其中所述静脉内输注时间长达30分钟。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述输注体积为50和100mL之间。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述输注体积为约68mL。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述免疫疗法是从输液袋输注的。

7.权利要求6的方法，其中在所述输注期间搅动所述输液袋。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述免疫疗法在解冻后3小时内施用。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述悬浮液进一步包含白蛋白。

10.权利要求9的方法，其中白蛋白以约2-3％(v/v)的量存在。

11.权利要求10的方法，其中白蛋白以约2.5％(v/v)的量存在。

12.权利要求9-11中任一项的方法，其中白蛋白是人白蛋白。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述悬浮液进一步包含DMSO。

14.治疗患者中在两线或更多线系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括：

(a)向有此需要的所述患者施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法；和

(b)输注后监测所述患者的不良反应的体征和症状。

15.权利要求14的方法，其中所述复发或难治性大B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)非特指型、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、高级B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤引起的DLBCL。

16.权利要求14的方法，其中所述不良反应选自下组：细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性、超敏反应、严重感染、血细胞减少和低丙种球蛋白血症。

17.权利要求14的方法，其中所述不良反应的体征和症状选自下组：发烧、低血压、心动过速、低氧和发冷，包括心律失常(包括心房颤动和室性心动过速)、心脏骤停、心力衰竭、肾功能不全、毛细血管渗漏综合征、低血压、低氧、器官毒性、噬血细胞性淋巴组织细胞增生/巨噬细胞活化综合征(HLH/MAS)、癫痫发作、脑病、头痛、震颤、头晕、失语症、谵妄、失眠焦虑、过敏反应、发热性中性粒细胞减少、血小板减少、中性粒细胞减少和贫血。

18.权利要求14的方法，其中所述方法进一步包括施用有效量的托西利珠单抗(tocilizumab)以治疗不良反应的症状。

19.权利要求18的方法，其进一步包括施用皮质类固醇以治疗不良反应的症状。

20.权利要求14的方法，其中所述不良反应是细胞因子释放综合征(CRS)。

21.权利要求20的方法，其中所述方法包括在输注后至少每天监测细胞因子释放综合征(CRS)的体征和症状持续约7天。

22.权利要求14的方法，其中所述不良反应是神经毒性。

23.权利要求22的方法，其中所述方法进一步包括施用非镇静抗癫痫药用于癫痫发作预防。

24.权利要求14的方法，其中所述不良反应是血细胞减少。

25.权利要求24的方法，其中所述方法进一步包括施用红细胞生成素、达贝泊汀α、血小板输血、集落刺激因子(CSF)、粒细胞集落刺激因子、非格司亭(filgrastim)、聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的至少一种。

26.权利要求14的方法，其进一步包括测量细胞因子和趋化因子水平。

27.权利要求26的方法，其中测量IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、TNF-α、IFN-γ和sIL2Rα的至少一种的水平。

28.容器，其包含CD19导向的遗传修饰的自体T细胞、约5％二甲基亚砜(DMSO)和约2.5％人白蛋白(v/v)的悬浮液。

29.治疗人中在两线或更多线系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括向有此需要的所述人施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包括：

(a)向所述患者施用包含CD19导向的嵌合抗原受体(CAR)阳性活T细胞的组合物；

(b)施用后监测所述患者的不良反应的体征和症状；和

(c)如果在(b)中观察到细胞因子释放综合征(CRS)大于2级，则在1小时内以约8mg/kg的剂量IV施用托西利珠单抗，如果对IV液体或增加补充氧气不响应，则根据需要每8小时重复一次托西利珠单抗；

(d)如果在(c)的24小时后(b)中观察到的CRS症状未改善，则每天两次IV施用约1mg/kg甲泼尼龙或施用等效地塞米松剂量并继续皮质类固醇使用直至事件为1级或以下，然后在3天内逐渐减少；

(e)如果在(b)中观察到CRS 3级，则在1小时内以8mg/kg的剂量IV施用托西利珠单抗，如果对IV液体或增加补充氧气不响应，则根据需要每8小时重复一次托西利珠单抗，并每天两次IV施用约1mg/kg甲泼尼龙或施用等效地塞米松剂量并继续皮质类固醇使用直至事件为1级或以下，然后在3天内逐渐减少；和

(f)如果在(b)中观察到CRS 4级，则在1小时内以约8mg/kg的剂量IV施用托西利珠单抗，如果对IV液体或增加补充氧气不响应，则根据需要每8小时重复一次托西利珠单抗，并每天IV施用约1,000mg甲泼尼龙持续3天。

30.治疗患者中在两线或更多线系统疗法后复发或难治性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括向有此需要的所述患者施用CD19导向的遗传修饰的自体T细胞免疫疗法，包括：

(a)向所述患者施用包含CD19导向的嵌合抗原受体(CAR)阳性活T细胞的组合物；

(b)施用后监测所述患者不良反应的体征和症状；和

(c)如果观察到细胞因子释放综合征(CRS)和/或神经毒性，则根据表1和/或表2管理细胞因子释放综合征(CRS)和/或神经毒性。