CN106414726A - 抗nme抗体 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了抗NME抗体及其治疗或预防疾病的用途。本申请涉及治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向受试者给予针对所述NME家族的成员制备的抗体。NME家族可以是NME7家族。抗体可以结合至NME7或抗体可以结合至NME7‑AB或NME‑AB样蛋白或抗体可以结合至NME7‑XI。抗体可以抑制NME7和其同源结合伴侣之间的结合。同源结合伴侣可以是MUC1。

Description

抗NME抗体
技术领域
本申请涉及NME蛋白、衍生自NME蛋白的肽和由其肽产生的抗体或凭借其与所述肽结合的能力而选择的抗体或抗体片段。本申请还涉及在患者中治疗或预防与NME的表达相关的疾病。
背景技术
NDPK(核苷二磷酸蛋白激酶)蛋白是集合在一起的蛋白家族，因为它们都包含NDPK结构域。发现的第一个NME蛋白，以前称为NM23蛋白，是NM23-H1和NM23-H2。几十年来，并不清楚它们是否诱导分化或阻止造血细胞的分化。本发明人先前发现，当NM23-H1是结合至MUC1*生长因子受体的二聚体时阻止分化，但在较高浓度下NM23-H1变成六聚体，其不结合至MUC1*，并且其诱导分化。当发现NM23在一些极具侵略性的癌症中是低表达之前，NM23曾被称为转移抑制子。本发明人先前公开了NM23-H1二聚体结合至在绝大多数癌症上过表达的MUC1*生长因子受体的胞外结构域并使之二聚，并且这种结合促进癌症细胞的生长。相反，在较高浓度下，NM23形成不会结合至MUC1*并且不会促进肿瘤产生的四聚体和六聚体。最近已经发现更多的NME家族蛋白(NME 1-10)，但是到现在为止，它们的功能还没有被阐明。NME7是新发现的NME家族蛋白，但不像其他NME家族成员，其NDPK结构域没有酶活性。NME7在成体组织中完全不表达或以极低水平表达。
发明内容
本申请涉及治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向受试者给予针对NME家族的成员制备的抗体。NME家族可以是NME7家族。抗体可以结合至NME7。抗体可以结合至NME7-AB或NME-AB样蛋白。抗体可以结合至NME7-XI。抗体可以抑制NME7和其同源结合伴侣之间的结合。同源结合伴侣可以是MUC1*。同源结合伴侣可以是MUC1*胞外结构域的PSMGFR部分。在一个方面中，可以针对其结合至选自图16–图19中列出的那些(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的肽的能力而产生或选择抗体。优选地，肽可以选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。
肽可以高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)，或在其N端或C端向其加上或减去最高达7、最高达6、最高达5、最高达4、最高达3、最高达2或最高达1个氨基酸残基。在一个方面中，可以针对其结合至NME7-AB或NME7-X1而不结合NME1的能力而选择抗体。抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、二价抗体、单价抗体、双特异性抗体、含可变区的抗体片段或抗体模拟物。抗体可以是人的或人源化的。抗体可以是单链scFv。
在另一方面中，本发明涉及治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向受试者给予高度同源或同一于NME7-AB的区域的肽。肽可以至少80％同源于图16中所列的肽中的一个或多个。肽可以至少80％同源于图17中所列的肽中的一个或多个。肽可以至少80％同源于图18中所列的肽中的一个或多个。肽可以至少80％同源于图19中所列的肽中的一个或多个。肽可以选自图16-图19中所列的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)。肽可以选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。或者，肽可以高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)，或在其N端或C端向其加上或减去最高达7、最高达6、最高达5、最高达4、最高达3、最高达2或最高达1个氨基酸残基。肽可以经由间隔子或连接子(接头，linker)连接至另一肽。
在另一方面中，本发明涉及用于治疗或预防癌症的嵌合抗原受体(CAR)，其中CAR的靶向胞外部分包括至少NME家族的成员的肽片段。NME家族可以是NME7家族。NME7家族的成员可以是NME7。或者，NME7家族的成员可以是NME7-AB或NME-AB样蛋白。NME7家族的成员也可以是NME7-X1。CAR的靶向胞外部分可以包括图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的肽。肽可以选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。肽可以包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)，或在其N端或C端向其加上或减去最高达7、最高达6、最高达5、最高达4、最高达3、最高达2或最高达1个氨基酸残基的肽。肽可以经由间隔子或连接子连接至另一肽。
在还有的另一方面中，本发明涉及治疗或预防癌症或癌转移的方法，包括将根据权利要求3所述的嵌合抗原受体工程改造至免疫系统细胞中并将细胞给予至对其需要的受试者。
在另一方面中，本发明涉及用于治疗或预防癌症的嵌合抗原受体(CAR)，其中嵌合抗原受体的靶向胞外部分包括结合至NME7-AB、NME-AB样蛋白或NME7-X1的抗体的一部分。抗体的部分可以是单链scFv或可以是人的或人源化的。
在还有的另一方面中，本发明涉及接种人来抵抗癌症或转移性癌症的方法，包括采用NME家族的成员的肽片段对人进行免疫。NME家族可以是NME7家族。NME7家族的成员可以是NME7或NME7b。NME7家族的成员可以是NME7-AB或NME7-AB样蛋白。NME7家族可以是NME7-X1。免疫化肽可以是来自图16-图19中所列的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的肽。优选地，肽可以选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。免疫化肽(immunizing peptide)可以包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQID NO:145)，或在其N端或C端向其加上或减去最高达7、最高达6、最高达5、最高达4、最高达3、最高达2或最高达1个氨基酸残基的肽。免疫化肽可以经由间隔子或连接子连接至另一肽。
在还有的另一方面中，本发明涉及治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向受试者给予抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的核酸。核酸可以是抑制NME7、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的反义核酸。核酸可以是抑制NME7、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的抑制性RNA、siRNA、RNAi或shRNA。
在另一方面中，本发明涉及治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向受试者给予抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的经遗传编辑的核酸。抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的经遗传编辑的核酸可以插入到随后可以给予至患者的细胞中。抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的经遗传编辑的核酸可以使用病毒载体插入到细胞。病毒载体可以是慢病毒系统。
在另一方面中，本发明涉及使癌细胞生长的方法，包括将细胞与NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-XI，2i或5i接触。方法可以包括培养细胞在含有NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1、2i或5i的培养基中，或在表达人NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1，或向其给予NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的动物中生长细胞。癌细胞可以是乳癌(乳腺癌，breast cancer)、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌、黑素瘤或脑癌细胞。可以在细胞上测试候选药物。可以通过将癌症生长与无药物对照比较或者将转移标志物或干细胞标志物的表达水平与无药物对照比较或者将所获得的细胞在来自低细胞拷贝数的动物中形成肿瘤的能力与无药物对照比较并且确定候选药物用于治疗癌症或癌症转移的效力来评价药物的效力。细胞可以获自正在对于癌症治疗和基于使用以上的方法的结果选出的患者将会有效的药物进行评价的患者。细胞可以不获自对于癌症治疗进行评价的患者但是获自对于基于使用上述方法的结果选出的患者有效的药物进行评价的患者。
在另一方面中，本发明涉及由肽或肽模拟物产生抗体或抗体样分子的方法，该肽或肽模拟物具有源自NME的序列的序列。NME可以是NME7。肽可以用作产生抗体或抗体样分子的免疫原。肽可以给予至动物以产生抗NME7抗体。肽可以给予至人以产生抗NME7抗体。肽可以具有图16-图19中所列的序列(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)。优选地，肽可以选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至145)。肽可以包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)，或在其N端或C端向其加上或减去最高达7、最高达6、最高达5、最高达4、最高达3、最高达2或最高达1个氨基酸残基的肽。
在另一方面中，本发明涉及检测癌症的存在或癌症的进展的方法，包括以下步骤：
1)从患有癌症或处于发展癌症的风险的患者获取样品；
2)使样品经受能够检测或测定NME7家族的成员水平或编码NME7家族的成员的核酸的水平的分析测试；
3)将测试样品中的测定的NME7家族的成员的水平或编码NME7家族的成员的核酸的水平与对照患者或对照细胞中的水平相比较；
4)确定NME7家族的成员或编码NME7家族的成员的核酸的水平相对于对照是升高的；和
5)推论出测试样品的供体患有癌症或如果测试进行对比的对照来自先前诊断患有癌症的供体则推论出测试样品的供体已经具有癌症的进展。在这种方法中，在循环中或在组织中检测出NME7家族的成员可以是患者中癌症的指标。NME7家族的成员可以是NME7、NME7b、NME7-X1或NME7-AB样蛋白。
在还有的另一方面中，本发明涉及一种方法，包括：
在患者中检测NME7家族的成员或MUC1*的存在；和
向表现出NME7家族的成员或MUC1*表达的患者给予抗NME7或抗MUCl*抗体或其多种抗体。NME7家族的成员可以是NME7、NME7b、NME7-X1或NME7-AB样蛋白。
在还有的另一方面中，本发明涉及一种用于治疗或预防癌症的方法，包括：
1)从疑似患有癌症或处于发展癌症的风险或处于发展转移性癌症的风险的患者获取样品；
2)测定NME7家族的成员或编码NME7家族的成员的核酸的含量，其中所测定的水平显著超过在对照样品中测定的那些；
3)确定患者患有癌症或已经发展更具侵略性的或转移性的癌症；
4)向患者给予有效量的抑制NME7家族的成员的表达、抑制NME7的裂解或抑制NME7结合至其靶标的治疗剂。NME7家族的成员的靶标可以是MUC1*。NME7家族的成员的靶标可以是MUC1*胞外结构域的PSMGFR部分。NME7家族的成员可以是NME7、NME7b、NME7-X1或NME7-AB样蛋白。
在以上涉及癌症的任何方法中，癌症可以包括乳癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌、黑素瘤或脑癌。
附图说明
由下面给出的详细描述和仅以图示说明给出的附图将会更加充分地理解本发明，并且因此并非对本发明是限制性的，并且其中：
图1A-图1D示出NME1或NME7在以下细胞裂解物中的表达的蛋白质免疫印迹(Western印迹)凝胶照片：1)在涂覆有MUC1*抗体表面(MN-C3mab)的表面上在NM23-H1二聚体中培养的BGOIV人胚胎干细胞；2)在小鼠饲养细胞(MEF)层上的bFGF中根据标准方案培养的BGOIV人胚胎干细胞；3)在RPMI培养基中通过标准方法培养的T47D乳癌细胞；和4)重组人NM23-H1野生型，“wt”(A，B)。底部行(C，D)显示了“拉下”或免疫沉淀分析测定的结果，其中分别用加入了MUC1细胞质尾的抗体“Ab-5”的珠子孵育细胞裂解物。通过SDS-PAGE分离通过结合至MUC1*肽捕获的物质，并用针对每个各自的NM23蛋白的抗体进行免疫印迹。用NME6进行相同的实验，但没有显示数据。
图2A-图2E示出蛋白质免疫印迹的照片，其中对于NME1、NME6或NME7的存在探测来自T47D乳癌细胞、BGOIV和HES-3人ES细胞和人SC101-A1iPS细胞的细胞裂解物。在所有细胞系中的NME1具有～17kDa的表观分子量(A)。在所有细胞系中，除了HES-3细胞系(在FGF中培养)外，在所有细胞系中都可以检测到NME7的～33kDa物质和42kDa物质(C，E)。当使用SuperSignal增强可视化时，在除了HES-3细胞系之外的所有细胞系中都检测到与NME6特异性抗体反应的物质。
图3A-图3C示出对于NME7的存在探测的人胚胎干(ES)细胞(A)和诱导的多能干(iPS)细胞(B，C)的蛋白质印迹的照片组。蛋白质免疫印迹表明细胞裂解物中存在三种形式的NME7。一种具有～42kDa(全长)的表观分子量，一种具有～33kDa(缺乏N末端DH结构域的NME7-AB结构域)的表观分子量和一种小的～25kDa的物质。然而，仅仅低分子量的物质在条件培养基(B)中。
图4A-图4C.(A)是NME7-AB的尺寸排阻色谱纯化的洗脱曲线；(B)是来自NME7-AB峰级分的非还原SDS-PAGE凝胶；(C)是纯化的NME7-AB的尺寸排阻色谱的洗脱曲线。
图5示出来自显示NME7-AB二聚化MUC1*细胞外结构域肽的ELISA夹心分析测试的HRP信号的曲线图。
图6A-图6G示出未处理(行A)、用紫杉醇(Taxol)(行B)或抗NME7抗体(行C-行E)处理的MUC1*阳性癌细胞的照片；示出响应于48小时处理的细胞计数(F)的曲线图，和用于估计癌细胞抑制实验(G)中使用的抗体浓度的斑点印迹。
图7A-图7K示出使用抗NME7抗体抑制癌症细胞生长的实验的48小时结果。在单独培养基(A)、紫杉醇(B)或在所示浓度(C-J)下的抗NME7中培养的细胞的照片；示出使用钙黄绿素AM分析测定法获得的细胞数的曲线图(K)。
图8A-图8K示出使用抗NME7抗体抑制癌细胞生长的实验的96小时结果。在单独培养基(A)、紫杉醇(B)或在所示浓度(C-J)下的抗NME7中培养的细胞的照片；示出使用钙黄绿素AM分析测定法获得的细胞数目的曲线图。曲线图和照片表明抗NME7抗体在低至纳摩尔范围的浓度下都抑制癌细胞生长。
图9是蛋白质免疫印迹的照片，其中对于NME7的存在探测了干细胞裂解物(奇数泳道)或细胞条件培养基(偶数泳道)。在MEF的FGF(泳道1，2)、抗MUC1*抗体(C3)表面上的NM23-H1二聚体(泳道3，4)或抗MUC1*抗体(C3)表面上的NME7(泳道5-8)中培养iPS(诱导的多能干)细胞。HES-3(人胚胎干)细胞培养于MEF上的FGF(泳道9，10)、抗MUC1*抗体(C3)表面上的NM23-H1二聚体(泳道11，12)或抗MUC1*抗体(C3)表面上的NME7(泳道13，14)中。还探测了小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)细胞(泳道15，16)。蛋白质免疫印迹表明细胞裂解物含有分子量～42kDa的NME7物质，其对应于全长蛋白。然而，分泌的物质具有～33kDa的表观MW，其对应于没有N端前导序列的NME7物质。
图10A-图10B示出使用小鼠单克隆抗体(A)或仅识别N端DM10序列(B)的另一单克隆抗体对于NME7的存在探测的各种细胞裂解物和相应条件培养基的蛋白质免疫印迹的照片。DM10特异性抗体与来自细胞条件培养基的样品中的～33kDa NME7物质的结合的缺乏表明NME7的分泌形式缺乏大部分(如果不是全部)的N端DM10前导序列。
图11是在传统培养基或含有NME7的培养基中培养后T47D癌细胞的干细胞标志物和癌症干细胞标志物的基因表达的RT-PCR测量的图表，其中变成不贴壁的(漂浮物)的细胞与仍然贴壁的那些分离而进行分析。
图12是T47D癌细胞的干细胞标志物SOX2和癌症干细胞标志物CXCR4的基因表达的RT-PCR测量的图表。细胞培养于传统培养基或含有NME1二聚体或NME7(NME7-AB)的培养基中。独立分析的细胞类型是漂浮细胞，细胞+Rho激酶抑制剂(+Ri)，其使得所有细胞贴壁，或在除去漂浮物之后保持贴壁的细胞，其没有rho激酶抑制剂(-Ri)。
图13是对于DU145前列腺癌细胞的多种干细胞和推定的癌症干细胞标志物的基因表达的RT-PCR测量的图表。细胞培养于在常规培养基或含有NME1二聚体(“NM23”)或NME7(NME7-AB)的培养基中。不使用Rho激酶抑制剂，是因为在第2代之前(by passage 2)，细胞保持贴壁。
图14A-图14B是转移标志物和多能干细胞标志物的RT-PCR测量的图，表明先前已经证明将干细胞回复到更初始(naive)状态的2i抑制剂(GSK3-β和MEK抑制剂)(A)或与人NME1或人NME7具有高度序列同源性的细菌NME(B)也将癌细胞转化为更具转移性的状态。
图15是人NME1和人NME7-A或-B结构域之间的序列比对(对齐，alignment)。
图16列出了来自人NME7的与NME1具有低序列同一性并因为其产生治疗或预防癌症的治疗性抗NME7抗体的能力而选择的免疫原性肽。
图17列出了来自人NME7的可能对结构完整性或对MUC1*的结合是很重要的并且因为其产生用于治疗或预防癌症的治疗性抗NME7抗体的能力而选择的免疫原性肽。
图18列出了来自人NME1的可能对结构完整性或对MUC1*的结合是很重要的并且因为其产生用于治疗或预防癌症的治疗性抗NME7抗体的能力而选择的免疫原性肽。
图19列出了来自人NME7的因为其与NME1的低序列同一性和其与癌症中涉及的细菌性NME1蛋白的同源性而选择的免疫原性肽。这些肽因为其产生用于治疗或预防癌症的治疗性抗NME7抗体的能力而是优选的。该图中所示的肽包括并添加了在C端共价结合的半胱氨酸。
图20示出24只中的两只雌性无胸腺nu/nu小鼠的照片，其用仅仅50个首先在NME7-AB中生长7天并证明CXCR4、CHD1和干细胞标志物表达极大增加的人乳癌细胞异种移植。此外，每天还向一半小鼠注射人重组NME7-AB。同样每天注射NME7-AB的小鼠中的82％都发展出远距离转移以及在注射部位的肿瘤。
图21示出实验结果的表格，其中小鼠用通过在含有人NME7-AB的培养基中预培养而转化至更具转移性的状态的癌细胞进行异种移植。
图22A示出在侧腹(in the flank)皮下植入50、100、1,000或10,000个细胞的四(4)组免疫受损nu/nu雌性小鼠的肿瘤体积测量的图表，其中所植入的细胞是在重组人NME7-AB中培养七(7)天的人MUC1阳性乳癌细胞，其中收集了“漂浮物”，并证实过表达转移受体CXCR4超过100倍。每组中的一半小鼠每天注射人重组NME7-AB。图中的数字是指小鼠跟踪数。'M'表示具有多个肿瘤的小鼠。
图22B示出在侧腹皮下植入50、100、1,000或10,000个细胞的四(4)组免疫受损nu/nu雌性小鼠的肿瘤体积测量的图表，其中所植入的细胞是在重组人NME7-AB中培养七(7)天的人MUC1阳性乳癌细胞，其中收集了“漂浮物”，并证实过表达转移受体CXCR4超过100倍。每组中的一半小鼠每天注射人重组NME7-AB。在每天接受NME7-AB注射的小鼠中，80％发展了多个肿瘤。该图表示出同一小鼠中多种肿瘤的组合体积。图中的数字是指小鼠跟踪数。'M'表示具有多个肿瘤的小鼠。
图23示出采用通过在含有人NME7-AB的培养基中预培养而转化到更具转移性的状态的人乳癌细胞进行异种移植的小鼠上的原生肿瘤以及远距离肿块的蛋白质免疫印迹。免疫印迹表明远距离肿块是人乳腺肿瘤，因为VU4H5抗体只染色人MUC1，而不会染色鼠的。
图24示出采用通过在含有人NME7-AB的培养基中预培养而转化到更具转移性的状态的人乳癌细胞进行异种移植的小鼠上的原生肿瘤的蛋白质免疫印迹。免疫印迹表明，可见的肿块是人乳腺肿瘤，因为VU4H5抗体只染色人MUC1，而不会染色鼠的。
图25示出由采用通过在含有人NME7-AB的培养基中预培养而转化到更具转移性的状态的人乳癌细胞进行异种移植的小鼠收获的器官的蛋白质免疫印迹。免疫印迹表明，一些似乎没有远距离肿瘤的小鼠在其一些器官中具有人MUC1阳性癌症。
图26A-图26B示出ELISA分析测试的图表，其中NME7-AB(A)或NME1(B)中的任一种吸附于孔板上，并对其结合至NME7而不结合NME1的能力测试由NME7肽A1、A2、B1、B2和B3产生的抗NME7抗体。C20是抗NMEl抗体。
图27示出ELISA分析测试的图表，其中对所产生的抗NME7抗体抑制NME7-AB与表面固定的MUC1*肽的结合而不抑制NME1的结合的能力进行了测试。
图28示出癌细胞生长实验的图表，其中乳癌细胞在存在或不存在NME7抗体或衍生自NME7的短肽的情况下生长，这用于产生或选择抗体。此外，已经证明通过用几乎整个NME7-AB肽(氨基酸100-376)免疫而产生的抗体抑制癌细胞生长。
图29示出癌细胞生长实验的图表，其中乳癌细胞在存在或不存在NME7抗体的组合或衍生自NME7的短肽的组合的情况下生长，这用于产生或选择抗体。两种抗体及其免疫化NME7-AB肽都抑制癌细胞的生长。
图30示出当癌细胞生长于NME7-AB或2i抑制剂任一种中时的科学家观察结果的表格，NME7-AB和2i抑制剂都能够将癌细胞转化为更具转移性的状态，并且在存在或不存在NME7衍生肽A1、A2、B1、B2和B3之下都是如此。NME7-AB肽抑制贴壁癌细胞向漂浮物细胞的转变，其RT-PCR测量结果表明转移标志物，特别是CXCR4的表达已经增加。
图31A-图31C示出在NME7-AB或2i抑制剂任一种中生长的T47D乳癌细胞中的CXCR4表达的RT-PCR测量结果，其每种都将癌细胞转变为更具转移性的状态，和抗NME7抗体对转移性转化的抑制性效应(A)的图表。在2i抑制剂中生长72小时或144小时的T47D乳癌细胞中的CXCR4、CHD1和SOX2表达的RT-PCR测量结果的图表表明，NME7-AB免疫化肽本身对转移性转化是抑制性的。在部分(A)中的抑制性Combo2和3中使用的肽A1、A2和B1作为肽也是抑制性的。肽B3是最抑制性的，并是部分(A)中测试的最抑制性抗体的抗体61的免疫化肽。在部分(C)中，部分(B)的图表的Y-轴的标度减小。
图32示出用于图31中CXCR4的RT-PCR测量的样品中所记录的RNA水平以及CXCR4表达和对照看家基因的阈值循环数的表格。
图33示出在一组人干细胞和癌细胞中的NME7-XI的表达的RT-PCR测量结果的图表。
图34示出在一组人干细胞和癌细胞中的NME7、NME7a、NME7b和NME7-X1的表达的RT-PCR测量结果的图表。NME7a是全长NME7，NME7b缺少了DM10结构域的小部分，NME7-X1缺少了所有DM10结构域和第一NDPK A结构域的N端的小部分。条状标记的NME7是指用于检测NME7a和NME7b的引物。
图35A-图35C示出蛋白质免疫印迹的照片，其中各种癌细胞系都使用通过用NME7衍生的短肽免疫产生的抗体对NME7物质的表达进行了探测。
图36A-图36B示出蛋白质免疫印迹的照片，其中各种癌细胞系都使用了商业上可获得的抗体对NME7物质的表达进行了探测。
图37A-图37C示出与标准培养基相比，在含有NME7-AB的无血清培养基中培养后，癌细胞中转移标志物的RT-PCR测量结果的图表。A)SK-OV3，其是MUC1阳性卵巢癌细胞系，提高了转移标志物CXCR4、CDH1(也称为E-钙粘蛋白)、SOX2和NME7-X1的表达；B)OV-90a，其是MUC1阴性卵巢癌细胞系，提高了转移标志物CXCR4和NME7-X1的表达；C)MDA-MB a乳癌细胞系，其表达最小水平的MUC1，增加了转移标志物CDH1(也称为E-钙粘蛋白)和SOX2的表达。
图38A-图38F示出蛋白质免疫印迹的照片和癌症生长曲线图。A)各种癌细胞系都使用抗串联式重复抗体VU4H5对全长MUC1的表达进行探测。B)各种癌细胞系使用抗PSMGFR抗体对切割形式MUC1*的表达进行探测。C)各种癌细胞系使用市售的抗NME7抗体B9对NME7物质的表达进行探测，表明全长NME7以及33kDa和30kDa物质与天然NME7-AB样物质以及NME7-X1是一致的。D)HER2阳性BT-474乳癌细胞很少至不表达于MUC1或MUC1*，直到它们获得对化疗药物的抗性和发生转移。通过在亚致死水平的药物中培养细胞而使亲代细胞对赫赛汀(Herceptin)、紫杉醇、多柔比星(Doxorubicin)和环磷酰胺具有抗性。部分(D)表明HER2的表达水平没有改变，但MUC1*的表达显著增加。E)示出在存在或不存在抗MUC1*Fab的情况下，响应于用赫赛汀的处理，亲代BT-474细胞与药物抗性转移性细胞相比的生长的图表。F)示出在存在或不存在抗MUC1*Fab的情况下，响应于用紫杉醇的处理，亲代BT-474细胞与药物抗性转移性细胞相比的生长的图表。
图39A-图39E示出免疫共沉淀实验的蛋白质免疫印迹的照片。将T47D乳癌细胞提取物用针对MUC1胞质尾区的抗体，Ab-5或对照抗体，IgG进行培养，并进行免疫共沉淀。凝胶用两种不同的市售抗NME7抗体B9(A)和CF7(B)实施印迹法。两种凝胶在～33kDa和～30kDa处都显示出独特的NME7带。凝胶剥离并用针对MUC1*的胞外结构域的抗体——抗PSMGFR(C)和(D)进行重新探测，这表明NME7物质和MUC1*相互作用。将重组NME7-AB和重组NME7-X1混合在一起并在凝胶上跑过，然后用抗NME7抗体探测，表明天然存在于乳癌细胞中并与MUC1*相互作用的两种独特NME7物质是NME7-AB样物质和NME7-X1(E)。
图40A-图40C示出免疫共沉淀实验的蛋白质免疫印迹的照片。将人诱导多能干细胞iPS7或胚胎干细胞HES3细胞提取物与针对MUC1细胞质尾区的抗体Ab-5或对照抗体IgG一起培养，并进行免疫共沉淀。凝胶用市售抗NME7抗体B9(A)实施印迹法。两种细胞类型在～33kDa和～30kDa处都显示出独特NME7带。凝胶剥离并用针对MUC1*的胞外结构域的抗体——抗PSMGFR(B)进行重新探测，这表明NME7物质和MUC1*相互作用。将重组NME7-AB和重组NME7-X1混合在一起并在凝胶上跑过，然后用抗NME7抗体探测，表明天然存在于乳癌细胞中并与MUC1*相互作用的两种独特NME7物质是NME7-AB样物质和NME7-X1(C)。
具体实施方式
优选实施方式的详细描述
定义
在本申请中，“一个(a)”和“一种(an)”用于指单个和多个对象。
正如本文所使用的，“约”或“基本上”通常提供限于精确数量的余量。例如，正如在多肽序列的长度的上下文中使用的，“约”或“基本上”表示多肽不限于引述数量的氨基酸。可以包括从N端或C端添加或减去的几个氨基酸，只要存在功能活性如其结合活性即可。
正如本文所用，“与一种或多种其他治疗药物组合”给予包括同时(并行)和以任何顺序连续给予。
正如本文中所用，“氨基酸”和“多种氨基酸”是指所有天然存在的L-ot-氨基酸。该定义意在包括正亮氨酸、鸟氨酸和高半胱氨酸。
正如本文中所用，一般而言，术语“氨基酸序列变体”是指与参考(例如，天然序列)多肽相比，其氨基酸序列中具有一些差异的分子。氨基酸改变可以是天然氨基酸序列中的取代、插入、缺失或这些改变的任何所需的组合。
取代变体是在天然序列中除去至少一个氨基酸残基并在相同位置插入不同氨基酸的那些变体。取代可以是单一的，其中分子中只有一个氨基酸被取代，或它们可以是多重的，其中两个或更多个氨基酸已经在同一分子中被取代。
序列中氨基酸的替代物可以选自氨基酸所属类别的其他成员。例如，非极性(疏水)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷的(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。带负电荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。本发明范围内还包括表现出相同或相似生物活性的蛋白或其片段或衍生物，以及在翻译之时或之后差异修饰，例如，通过糖基化、蛋白水解切割、与抗体分子或其他细胞配体的连接等的衍生物。
插入变体是具有一个或多个紧邻天然氨基酸序列中的特定位置处的氨基酸插入的氨基酸的那些。紧邻氨基酸意指连接到氨基酸的α-羧基或α-氨基官能团。
缺失变体是在天然氨基酸序列中除去一个或多个氨基酸的变体。通常，缺失变体会在分子的特定区域缺失一个或两个氨基酸。
正如本文中所用，“片段”或“功能性衍生物”是指本发明多肽的生物活性氨基酸序列变体和片段，以及共价修饰，包括通过与有机衍生剂反应获得的衍生物，翻译后修饰，具有非蛋白性聚合物的衍生物和免疫粘附素。
正如本文中所用，“载体”包括对以所采用的剂量和浓度暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的药用载体、赋形剂或稳定剂。通常而言，药用载体是水性pH缓冲溶液。药用载体的实例包括但不限于缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白，如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨醇；成盐反离子如钠；和/或非离子表面活性剂如聚乙二醇(PEG)和
正如本文中所用，“药用载体和/或稀释剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、涂层抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这种介质和试剂用于药物活性物质在本领域中是众所周知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则应该考虑其在治疗组合物中的使用。补充活性成分也可以掺入组合物中。
特别有利的是以便于给予和剂量的均匀性的剂量单位形式配制肠胃外组合物。正如本文中所用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的物理上不连续的单位；每个单位包含经计算产生所需的治疗效果与所需的药物载体结合的预定量的活性物质。本发明的剂量单位形式的规格由以下因素决定并直接取决于以下因素：(a)活性物质的独特特性和要实现的特定治疗效果，和(b)复合用于治疗具有其中身体健康受损的疾病状态的活体受试者的疾病的这种活性物质的技术领域内的固有限制。
主要的活性成分是以有效量以剂量单位形式为了方便有效地给予而与合适的药用载体进行复合。单位剂型可以例如含有范围为0.5μg至约2000mg量的主要活性化合物。按比例表示，活性化合物通常以约0.5μg/mL载体存在。在含有补充活性成分的组合物的情况下，通过参考通常的剂量和成分的给予方式确定剂量。
正如本文中所用，“载体”，“多核苷酸载体”，“构建体”和“多核苷酸构建体”在本文中可互换使用。本发明的多核苷酸载体可以是几种形式中的任何一种，包括但不限于RNA、DNA、封装在逆转录病毒外壳中的RNA、包封在腺病毒外壳中的DNA、以另一种病毒或病毒样形式包装的DNA(例如单纯疱疹和腺瘤结构，例如聚酰胺)。
正如本文中所用“宿主细胞”包括能够是或已经是本发明载体的受体的各个细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于天然、偶然或故意突变和/或改变，后代可能不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态学或在总DNA互补中)。
正如本文中所用，“受试者”是脊椎动物，优选哺乳动物，更优选人。
正如本文中所用，用于治疗目的“哺乳动物”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，例如狗、猫、牛、马、绵羊、猪等。优选地，哺乳动物是人类。
正如本文中所用，“治疗”是用于获得有益或所需的临床结果的方法。为了本发明的目的，有益的或所需的临床结果包括，但不限于，症状缓解，疾病程度降低，疾病状态稳定(即，不恶化)，疾病进展的延迟或减缓，疾病状态改善或减轻，以及缓解(无论部分或全部)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还能够是指与不接受治疗的预期存活相比延长存活。“治疗”是指治疗性治疗和预防性措施。需要治疗的那些包括已经患有该病症的那些以及其中要预防该病症的那些。“缓解”疾病是指与没有治疗的情况相比，疾病状态的程度和/或不良临床表现减轻和/或进展的时间进程减慢或延长。
正如本文中所用，“A1”肽，“A2”肽，“B1”肽，“B2”肽和“B3”肽是指结合至人NME7-AB，但不(或显著较低)结合至人NME1的肽。对于NME7-AB和NME7-X1二者，用于产生这些抗体的肽是共同的，并且如下所列。
Al是NME7A肽1(A结构域)：MLSRKEALDFHVDHQS(SEQ ID NO:141)
A2是NME7A肽2(A结构域)：SGVARTDASES(SEQ ID NO:142)
Bl是NME7B肽1(B结构域)：DAGFEISAMQMFNMDRVNVE(SEQ ID NO:143)
B2是NME7B肽2(B结构域)：EVYKGVVTEYHDMVTE(SEQ ID NO:144)
B3是NME7B肽3(B结构域)：AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:145)
此外，为了清楚起见，NME7A(具有大写字母“A”)是指NME7的亚单位A部分。NME7a(具有小写字母“a”)是指在本申请其他地方描述的全长NME7。而且，NME7B(具有大写字母“B”)指NME7的亚基B部分。NME7b(具有小字母“b”)是指部分缺失DM10区的NME7物质，其在本申请的其他地方描述。
正如本文中所用，术语“抗体样”是指可以被经过工程改造而使其包含抗体的部分而非天然存在的抗体的分子。实例包括但不限于CAR(嵌合抗原受体)T细胞技术和技术。CAR技术使用与T-细胞的部分融合的抗体表位，而使身体的免疫系统被导向攻击特异性靶蛋白或细胞。技术由“抗体样”基因库组成，“抗体样”基因库是合成人类fab的集合，其随后对其与来自靶蛋白的肽表位结合进行筛选。然后所选择的Fab区能够进行工程改造至支架或框架中而使它们类似于抗体。
正如本文中所用，“有效量的抑制NME家族成员蛋白的药剂”是指阻碍NME家族成员蛋白与其同源受体之间的激活相互作用的有效量的药剂，同源受体如。
正如本文中所用，“NME衍生的片段”是指作为NME的片段的或高度同源于作为NME的片段的肽序列的肽序列。
正如本文中所用，“MUC1*”胞外结构域主要由PSMGFR序列(GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:6))定义。因为MUC1切割的精确位点取决于剪切它的酶，并且切割酶取决于细胞类型、组织类型或细胞进化中的时间而变化，所以MUC1*胞结构域的精确序列可以在N端进行变化。
正如本文中所用，术语“PSMGFR”是如GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:6)所示的MUC1生长因子受体的一级序列的缩写。关于这方面，正如在“N-10PSMGFR”、“N-15PSMGFR”或“N-20PSMGFR”中的“N-数”是指在PSMGFR的N端缺失的氨基酸残基的数目。同样，正如在“C-10PSMGFR”、“C-15PSMGFR”或“C-20PSMGFR”中的“C-数”是指在PSMGFR的C端缺失的氨基酸残基的数目。
正如本文中所用，“MUC1*的胞外结构域”是指没有串联重复结构域的MUC1蛋白的胞外部分。在大多数情况下，MUC1*是切割产物，其中MUC1*部分由缺少串联重复体的短胞外结构域、跨膜结构域和细胞质尾部组成。MUC1的切割精确位置是未知的，或许因为它似乎能够被多于一种酶切割。MUC1*的胞外结构域会包括PSMGFR序列的大部分，但可以具有另外的10～20个N端氨基酸。
正如本文中所用，“高度同源性”被认为是任何两个多肽之间的所指定重叠区域内至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％的同一性。
正如本文中所用，“NME家族蛋白”或“多个NME家族成员蛋白”，编号为1～10，是被分组在一起的蛋白，因为它们都具有至少一个NDPK(核苷酸二磷酸激酶)结构域。在一些情况下，NDPK结构域在能够催化ATP向ADP的转化方面是没有功能的。NME蛋白以前称为NM23蛋白，编号为H1和H2。最近，已经确定了多达十(10)个NME家族成员。本文中，术语NM23和NME是可互换的。本文中，术语NME1、NME2、NME5、NME6、NME7、NME8和NME9用于指示天然蛋白以及NME变体。在一些情况下，这些变体是更易溶的，在大肠杆菌中表达更好或比天然序列蛋白是更易溶的。例如，本说明书中使用的NME7能够是指天然蛋白或变体，例如NME7-AB，其因为变化允许在大肠杆菌中高产量表达可溶的适当折叠的蛋白而具有优异的商业应用性。NME7-AB主要由NME7A和B结构域组成，但缺少DM10结构域(SEQ ID NO:39)的大部分，其位于天然蛋白的N端。本文提及的“NME1”可与“NM23-H1”互换。也预想本发明并不限于NME蛋白的精确序列。突变NME1-S120G，也称为NM23-S120G，在整个本申请中可互换使用。S120G突变体和P96S突变体因为其对于二聚体形成的偏好性是优选的，但在本文中可以称为NM23二聚体，NME1二聚体或二聚的NME1或二聚的NM23。
本文所指的NME7意指具有约42kDa分子量的天然NME7。
“NME7家族”是指全长NME7以及具有约30kDa，33kDa分子量的天然或人工产生的切割形式，或具有约25kDa的分子量的切割形式，缺少或部分缺失DM10前导序列(SEQ ID NO:162)的变体，其是由SEQ ID NO:82或147表示的NME7的NME7氨基酸1-91，例如NME7b、NME7-X1、NME7-AB或重组NME7蛋白，或其序列可以经过改变而容许有效表达或提高产量、溶解性或其他特性(使NME7更有效或商业上更可变)的变体。“NME7的家族”还可以包括“NME7-AB样”蛋白，其是在癌细胞中表达的范围30至33kDa内的蛋白。
正如本文中所用，“维持干细胞于原始态或将始发态干细胞回复至原始态的药剂”是指单独或组合维持干细胞于原始态(类似于胚胎的内细胞团的细胞)的蛋白、小分子或核酸。实例包括但不限于人NME1二聚体，细菌、真菌、酵母、病毒或寄生的NME蛋白，其与人NME蛋白，特别是NME1、NME7、NME7-X1、NME7-AB、NME6、2i(Silva J et al,2008；Hanna et al,2010)、5i(Theunissen TW et al,2014)、核酸如抑制MBD3表达的siRNA、CHD4(Rais Yl etal,2013)、BRD4或JMJD6(Liu W et al 2013)具有高序列同一性。
正如本文中所用，“促进多能性的药剂”或“将体细胞恢复为干细胞样或癌样状态”是指单独或组合诱导表达某些基因的表达或抑制其表达而使遗传标签转移到更接近干细胞或癌细胞的基因的蛋白，小分子或核酸。实例包括但不限于NME1二聚体，NME7，NME7-X1，NME7-AB，2i，5i，核酸如抑制MBD3，CHD4，BRD4或JMJD6的表达的siRNA，与人NME1，NME2，NME5，NME6，NME7，NME8或NME9具有高序列同源性的微生物NME蛋白，优选具有容纳NDPK结构域的区域。
正如本文中所用，关于被称为“小分子”的药剂，其可以是具有50～2000Da，更优选150～1000Da，仍更优选200～750Da分子量的合成化学或化学基的分子。
正如本文中所用，关于被称为“天然产物”的药剂，只要该分子存在于自然界中，其可以是化学分子或生物分子。
正如本文中所用，FGF、FGF-2或bFGF是指成纤维细胞生长因子(Xu RH et al,2005；Xu C et al,2005)。
正如本文中所用，“Rho相关的激酶抑制剂”可以是小分子、肽或蛋白(Rath N，etal,2012)。Rho激酶抑制剂在本文和其他地方缩写为ROCi或ROCKi或Ri。特异性rho激酶抑制剂的使用意在是示例性的，并能够替代成任何其他rho激酶抑制剂。
正如本文中所用，术语“癌症干细胞”或“肿瘤引发性细胞”是指表达已与更具转移性的状态或更具侵袭性的癌症相关的基因水平的癌细胞。术语“癌症干细胞”或“肿瘤引发性细胞”也能够是指当植入到动物体内时需要少得多的细胞来产生肿瘤的癌细胞。癌症干细胞和肿瘤引发性细胞通常对化疗药物具有抗药性。
正如本文中所用，术语“干细胞/癌”，“癌样”，“干细胞样”是指这样的状态，其中细胞获得干细胞或癌细胞的特征，共享干细胞、癌细胞或癌症干细胞的基因表达谱的重要要素。干细胞样细胞可以是经受诱导成较不成熟状态，例如增加多能性基因的表达的体细胞。干细胞样细胞也是指已经经历一些去分化或处于亚稳态的细胞，由此它们能够改变其终末分化。癌细胞样细胞可以是尚未被完全表征但显示癌细胞形态和特性，例如能够独立地生长锚定或能够在动物中产生肿瘤的癌细胞。
正如本文中所用，不同长度的“间隔子”或“连接子”能够引入到肽中的任何位置。间隔子连接通常是通过酰胺键完成的，但其他官能团也是可能的。
NME，NME7和NME7的蛋白家族
本发明人发现，NME7高度表达于早期人类干细胞并也表达于大多数癌细胞中(图1、2、3、35、36、38、39和40以及实施例2、3和4)。此外，我们证实，像NM23-H1一样，NME7结合至MUC1*生长因子受体并将其二聚于干细胞和癌细胞二者之上。图15示出NME1和NME7A和B结构域的序列比对。
本发明人最近发现，NME7是在非常早期的胚胎干细胞中表达的NME1(NM23-H1)的原始形式(primitive form)。NME7在成年组织中完全不表达，或以极低水平表达。然而，本发明人发现，NME7在癌变细胞和组织中高水平表达，并在转移性癌细胞和组织中以更加高的水平表达。NME7的切割形式可以是允许其结合和激活胞外受体的分泌形式。我们检测了全长NME7，MW 42kDa，以及约33kDa和30kDa的NME7物质。33kDa和30kDa物质从癌细胞中分泌。蛋白质免疫印迹法检测了细胞裂解物中的全长NME7，但在其条件培养基中检测较小的30至33kDa NME7物质(图9和10)。用识别NME7的抗体或仅识别DM10结构域的抗体探测的蛋白质免疫印迹法表明，分泌到条件培养基中的较低分子量NME7物质没有DM10结构域(图10)。这些数据符合天然NME7物质与我们产生的重组NME7-AB相当的想法，因为它们具有几乎相同的分子量，两者都是分泌的，并且都没有可以保持蛋白保留于细胞内的DM10结构域的91个氨基酸。
我们发现了一种新的NME7同种型，NME7-X1，并还发现它过表达于癌中，并尤其会过表达于前列腺癌中(图33，34)。NME7-X1，分子量～30kDa，包含NME7氨基酸125-376，而我们产生的重组NME7-AB，分子量～33kDa，跨越氨基酸92-376，因此多包括33个N端的氨基酸。NME7b跨越氨基酸37-376并且无DM10结构域的仅37个氨基酸，也过表达于前列腺癌中(图34)。我们产生了人重组NME7-X1，并证明它是癌细胞中的分泌30kDa NME7物质，其跑过仅仅低于天然～33kDa NME7物质，似乎是属于切割产物或可变同种型的天然“NME7-AB样”蛋白。
我们测试了一组癌细胞系，并发现它们表达高水平的NME7和较低分子量物质，该低分子量物质可以是类似于NME7-AB的截短物，如NME7-AB样蛋白或可变同种型，如NME7-X1。
与NM23-H1(也称为NME1)必须是二聚体相反，NME7是具有用于MUC1*胞外结构域的两个结合位点的单体。我们产生了无DM10结构域的重组人NME7，我们称之为NME7-AB。图4A-图4C示出NME7-AB的尺寸排阻色谱纯化的洗脱曲线，来自NME7-AB峰级分的非还原性SDS-PAGE凝胶和纯化的NME7-AB的尺寸排阻色谱的洗脱曲线。夹心ELISA结合分析测试表明重组NME7、NME7-AB同时结合至两个PSMGFR肽，其中MUC1*的胞外结构域由大多数或全部PSMGFR序列组成(图5，实施例6)。在纳米颗粒结合分析测试中，还证实NME7能够结合至MUC1*胞外结构域的PSMGFR部分并使之二聚。
使NME7失能、阻断其与其结合伴侣的相互作用或抑制其表达的药剂是强效抗癌治疗剂。这种试剂可以是抗体、小分子或核酸。它们可以直接作用于NME7、作用于调节NME7表达的分子或作用于将NME7切割为癌促形式的酶。
我们发现，像NM23-H1二聚体一样，重组NME7-AB单体在无任何其他生长因子、细胞因子或血清存在之下完全能够支持多能干细胞生长。竞争性抑制NME7和主要是由PSMGFR序列构成的MUC1*胞外结构域之间的相互作用，干细胞的诱导分化，表明它是促进干细胞生长和抑制分化的NME7和MUC1*的相互作用。
接着，我们证明了NME7-AB单独也能够完全支持人癌细胞生长。当添加到常规癌细胞生长培养基中时，NME7-AB刺激癌细胞生长，并且特别是MUC1阳性和MUC1*阳性癌细胞的生长。抑制NME7与MUC1*的相互作用抑制癌细胞生长。用抗MUC1*Fab阻断MUC1*生长因子受体有效抑制癌细胞生长。类似地，结合至NME7的抗体抑制癌细胞生长。通过抗NME7抗体抑制癌生长的一个实例如图6～图8和实施例10中所示。在这种情况下，由采用跨越氨基酸100-376的部分NME7免疫动物而产生多克隆抗体。然而，我们发现，采用来自NME7-AB或NME7-X1的较短肽免疫而产生的抗体也会抑制癌症生长。具体而言，它们会抑制MUC1和MUC1*阳性癌的生长。
NME7导致癌转移
本发明人还发现，在含有NME7-AB的基本培养基中培养癌细胞诱导各种各样的癌细胞转化为更具转移性的状态。这种诱导的转移性状态的证据包括从贴壁细胞生长到非贴壁细胞(也称为“漂浮物”细胞)生长的变化，和伴随的特异性转移标志物的上调，这些标志物在漂浮细胞中尤其上调。在NME7-AB中培养后上调的这些转移标志物包括，但不限于，CXCR4，CHD1(也称为E-钙粘蛋白)，CD44和多能干细胞标志物如OCT4、SOX2、NANOG和KLF2/4。在NME7-AB中培养的癌细胞，当异种移植到测试动物中时，具有显著更高的移植速率，其超过了90％。此外，非常低数量的植入癌细胞会在测试动物中形成肿瘤，这就是NME7-AB已经将其转化为癌症干细胞，也称为转移性癌细胞的证据。因为癌细胞制成了NME7切割产物或基本上等同于NME7-AB的可变同种型，本文描述的方法不限于使用NME7-AB；其他NME7物质也可以起作用。例如，我们发现，另一种NME7同种型，NME7-X1，被癌细胞表达。它与我们的重组NME7-AB相同，但是XI同种型从N端缺失了33个氨基酸。NME7-X1预期具有NME7-AB的功能。“NME7-AB样”蛋白在癌细胞中也被检出是约33Da物质。
我们注意到，本发明人先前的工作表明单独NME7-AB就能够将人干细胞回复到更早的原始状态。我们发现，在其他使干细胞回复到更原始状态的试剂存在下培养癌细胞，会使癌细胞转变为更具转移性的状态。我们证明了与人NME1或人NME7(图14B)具有高序列同源性的NME7-AB(图11和图12)、“2i”抑制剂(图14A)、人NME1二聚体或细菌NME1二聚体各自都能够将常规癌细胞转化成转移性癌细胞，这也称为癌症干细胞“CSC”或肿瘤引发性细胞“TIC”(图11-图14)。
2i是给予两种生物化学抑制剂的名称，研究人员发现它们使人干细胞回复到更原始状态。2i是MEK和GSK3-β抑制剂PD0325901和CHIR99021，它们被分别加入到培养基中至终浓度约1mM和3mM。当将NME7-AB和NME7-X1加入到独立批次的基本培养基中而使癌细胞转化为转移性细胞时，其终浓度为约4nM，但是更低和更高的浓度在约1nM至16nM的范围内也起良好作用。人或细菌NME1二聚体以4nM至32nM的终浓度使用，而在这些实验中通常使用16nM，其中人NME具有S120G突变。如果使用野生型，则可能需要较低的浓度。这些精确浓度并不意味着是重要的。重要的是NME1蛋白是二聚体，并且这所发生的浓度范围处于低纳摩尔范围内，尽管某些突变允许更高浓度使之保持为二聚体。类似地，NME7蛋白的浓度能够进行变化。NME7-AB和NME7-X1是单体并且用于将癌细胞转化为转移性细胞的浓度应该允许蛋白保持为单体。
除了NME7、NME7-AB、NME7-X1以及2i抑制剂MEKi和GSK3i以外，其他试剂和抑制剂已被其他人证明能够引起干细胞回复至更原始状态，这些抑制剂，“i′s”，包括JNKi、p38i、PKCi、ROCKi、BMPi、BRAFi、SRCi以及生长因子激活和LIF(Gafni et al 2013，Chan et al2013，Valamehr et al 2014，Ware et al 2014，Theunissen et al 2014)。这些试剂也能够用于使癌细胞进展到更具转移性的状态。使用任何单因素或抑制剂或生长因子的组合已经诱导转化到更具转移性的状态的细胞，会使得干细胞回复到更原始的状态，则能够用作识别或测试治疗或预防癌症转移的药物的发现工具。
作为转移性癌细胞的指标，已经提出了各种分子标记。不同的癌类型可以具有上调的不同分子。例如，受体CXCR4在转移乳癌中上调，而E-钙粘蛋白，也称为CHD1，在转移性前列腺癌中上调更多。除了这些特异性转移标志物外，多能性的典型标志物如OCT4、SOX2、NANOG和KLF4随着癌变为转移性而上调。通过PCR分析测定起始癌细胞和较晚转移性癌细胞而测定这些基因的表达水平。我们证实，培养于引起癌细胞转变到更具转移性的状态的试剂如NME7-AB中的这些癌细胞，如通过提高转移标志物和多能干细胞标志物的表达证明的，像转移性癌细胞一样发挥功能。
癌细胞群体是否转移的功能测试是将非常低数目例如200个的细胞植入免疫受损小鼠中，并观察它们是否发展成肿瘤。通常需要5-6百万个癌细胞才能在免疫受损的小鼠中形成肿瘤。我们证明了少至50个NME诱导的转移性癌细胞就能在小鼠中形成肿瘤。此外，在整个测试期间用人NME7-AB、NME1或NME7-X1注射的小鼠发展出远距离转移。
在一个具体的实验中，将T47D人乳癌细胞培养于标准RPMI培养基中14天，其中每48小时更换培养基，并且当大约75％汇合时通过(pass by)胰蛋白酶进行消化。然后将细胞接种于6-井孔板中，并培养于补充有4nM NME7-AB的干细胞培养基中(参见实施例1)。每48小时更换培养基。到约第4天，一些细胞从表面脱离并漂浮。小心改变培养基而保留“漂浮物”，因为这些都是具有最高转移潜力的细胞，这通过转移标志物的RT-PCR测定证明。在第7天或第8天，收获漂浮物并计数。保留样品用于RT-PCR测定。所测定的关键标志物是CXCR4，其在NME7-AB中短暂培养后就上调了40-200倍。
将新鲜收集的漂浮物转移性细胞异种移植到已经植入90-天缓释雌激素小丸的雌性nu/nu无胸腺小鼠的侧腹中。漂浮物细胞每次异种移植10,000、1,000、100或50个细胞。每组6只小鼠的一半也在最初的植入部位附近每天注射32nM NME7-AB。在不含NME7-AB的RPMI培养基中培养的亲本T47D细胞也以600万、10,000或100个植入作为对照。植入NME7诱导的漂浮细胞的小鼠，即使植入少至50个细胞时，也发展出肿瘤。植入漂浮物细胞并且每天接收注射NME7-AB的小鼠也在多种器官中发展出远距离肿瘤或远距离转移(图20-图25)。在植入NME7-AB培养的癌细胞后在注射部位注射人NME7-AB的12只小鼠中有11只，或92％，发展出肿瘤。在植入后未注射人NME7-AB的12只小鼠中只有7只，或58％，发展出肿瘤。表现出肿瘤并注射人NME7-AB的11只小鼠中有9只，或82％，发展出远离注射部位的多个肿瘤。没有注射NME7-AB的小鼠无任何一个发展出多个可见的肿瘤。
处死后，RT-PCR和蛋白质免疫印迹法表明，注射NME7-AB的小鼠上的远距离肿块确实是人乳腺肿瘤。它们器官的类似分析表明，除了远距离肿块外，小鼠肝和肺随机转移了植入的人乳癌细胞的人乳癌特性。如所预期，只有植入600万个细胞的小鼠生长肿瘤。
我们已经证明，人重组NME7-AB在尺寸和序列上与NME7-X1和30至33kDa的NME7切割产物相当。我们已经证明，NME7-AB促进癌变生长并引起癌细胞加速到高转移性癌症干细胞(CSC)状态，也称为肿瘤引发性细胞(TIC)。因此，我们推论，NME7-X1和去除DM10结构域的NME7切割产物也促进癌变生长并引起癌细胞加速到高转移性癌症干细胞(CSC)状态，也称为肿瘤引发性细胞(TIC)。在一个实施例中，在无血清培养基中且在不存在任何其他生长因子或细胞因子的情况下将NME7-AB加入到癌细胞中。在7-10天内，癌细胞已经回复到高度转移性CSC/TIC，这通过分子标志物如CXCR4(它们是转移性癌细胞的指标)的表达增加超过100倍而证明。在一个实例中，将T47D乳癌细胞培养于标准RPMI培养基或基本干细胞培养基(实施例1)中，向其中加入了重组NME7-AB至终浓度为16nM。10天后收集细胞并通过RT-PCR分析升高10-200倍的CSC分子标志物的表达(图11，图12)。这是我们如何将一种癌细胞类型转化为更具转移性的状态的具体而详细的实例。不希望本发明受这些细节的限制，因为存在以这种方式转化的一系列癌细胞，将干细胞回复到更原始状态并也推进癌细胞至更具转移性的状态和所加试剂转移癌细胞的浓度范围的一系列试剂。其他类型的癌细胞在NME7-AB中需要更长时间的培养才能用于转移标志物的显著上调和具有从极少量植入的癌细胞形成肿瘤的能力。例如，在NME7-AB、2i、人NME1或与人NME1或人NME7具有高同源性的细菌NME1中培养的前列腺癌细胞在2～3代传代后表现出转移标志物显著增加。
转移标志物CXCR4在转移乳癌细胞中尤其升高，而CHD1在转移性前列腺癌中尤其升高。在本文中我们证明了多能干细胞标志物如OCT4、SOX2、NANOG、KLF2/4和TBX3在癌细胞转化为更转移性细胞时也上调。
类似地培养DU145前列腺癌细胞，并在NME7-AB中培养的那些细胞也显示出CSC标志物的表达的显著增加(图13)。在前列腺癌细胞中，与不在NME7-AB中生长的对照癌细胞相比，CHD1(也称为E-钙粘蛋白)和CXCR4都上调，连同其他多能干细胞标志物。卵巢癌细胞、胰腺癌细胞和黑素瘤细胞也培养于NME7-AB中，并且在少至培养3天后转化为更具转移性的状态。图37A-图37C示出在用NME7-AB培养72或144小时后，卵巢癌细胞系SK-OV3、OV-90和乳癌细胞系MDA-MB全都从贴壁转变至非贴壁的漂浮细胞并增加了转移标志物的表达。
本文中我们已经证明，NME7-AB将各种癌细胞转化为更具转移性的状态。我们还证明，癌细胞表达与重组NME7-AB 33kDa具有大约相同的分子量的天然物质(图33-图36和图38)，并也无DM10结构域(图10)，如NME7-AB，并且还表达除了从N端缺失33个氨基酸之外而与NME7-AB具有相同序列的可变同种型NME7-X1 30kDa。在T47D乳癌细胞上进行免疫共沉淀实验，其中细胞提取物用针对MUC1胞质尾区的抗体Ab-5或对照抗体IgG培养，并进行免疫共沉淀。免疫沉淀物质通过凝胶电泳分离。凝胶用两种不同的市售抗NME7抗体进行免疫印迹。两种凝胶在～33kDa和～30kDa处显示出独特的NME7带(图39A，图39B)。凝胶经过剥离，并用针对MUC1*的胞外结构域的抗体，抗PSMGFR进行重新探测(图39C，图39D)，其证明NME7物质和MUC1*相互作用。将我们制备的重组NME7-AB和重组NME7-XI混合在一起并在凝胶上跑过，然后用抗NME7抗体探测，表明在乳癌细胞中天然存在并与MUC1*相互作用的两种独特的NME7物质是NME7-AB样物质和NME7-X1(图39E)。在人类干细胞中进行类似的实验。图40A-图40C示出免疫共沉淀实验的蛋白质免疫印迹的照片。将人诱导多能干细胞，iPS7，或胚胎干细胞，HES3，细胞提取物与针对MUC1细胞质尾的抗体Ab-5或对照抗体IgG一起培养，并进行免疫共沉淀。凝胶用市售的抗NME7抗体B9(A)进行免疫印迹。两种细胞类型在约33kDa和约30kDa处都显示独特的NME7带。凝胶经过剥离并用针对MUC1*的胞外结构域的抗体，抗PSMGFR(B)进行重新探测，其证明NME7物质和MUC1*相互作用。将我们制备的重组NME7-AB和重组NME7-X1混合在一起并在凝胶上跑过，然后用抗NME7抗体探测，表明天然存在于乳癌细胞中并且类与MUC1*相互作用的两种独特的NME7物质是NME7-AB样物质和NME7-X1(C)。由于NME7-AB是重组蛋白，我们不知道天然存在的物质是否可以比重组NME7-AB含有另外的1-15个其他氨基酸或缺少1-15个其他氨基酸，然而在跑胶时具有相同的表观分子量。对于“NME7-AB样”，我们是指能够以重组NME7-AB的方式发挥功能的、以表观分子量约33kDa跑过的NME7物质，因为其能够刺激癌细胞生长、诱导癌细胞向更具转移性的状态转变，并能够完全支持人干细胞的多能生长。
我们推论，表达NME7和较低分子量的NME7物质的癌细胞系和癌细胞群体包含一些是CSC或转移性癌细胞的癌细胞。这些癌能够通过将细胞培养于NME7-AB、NME7-X1或低分子量NME7物质中而使之更具转移性或增加转移性细胞群。图35示出全部表达NME7以及较低分子量物质33kDa的NME7-AB样品和30kDa的NME7-X1的一组癌细胞的蛋白质免疫印迹。图38表明，癌细胞系T47D乳癌症，PC3和DU145前列腺癌症，BT-474乳癌症，CHL-1和A2058两种黑素瘤细胞系以及CAPAN-2和PANC-1两种胰腺细胞系都表达MUC1、MUC1*和NME7-AB样物质和NME7-X1。在图38A中，BT0474细胞似乎并不表达MUC1或MUC1*，然而，我们先前已经证明(Fessler et al 2009)，当这些HER2阳性乳癌细胞变得对化疗药物有抗性，即，转移时，它们就通过增加MUC1*的表达而如此完成(图38D)。用抗MUC1*Fab阻断MUC1*受体会逆转其对赫赛汀(图38E)、紫杉醇(图38F)以及其他化疗药物的抗药性。表达NME7和较低分子量NME7物质例如33kDa，30kDa的这些癌症类型和其他癌症类型，能够通过在NME7-AB、NME7-X1或更低分子量的NME7物质中培养细胞而使之更具转移性或增加转移性细胞群体。
相反，通过用抗NME7抗体处理细胞，能够逆转表达NME7和较低分子量NME7物质如33kDa或30kDa的这些和其他癌症类型的转移潜势。抗NME7抗体或结合至NME7-AB或NME7-X1的抗体给予至患者以治疗或预防包括乳癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌和肝癌在内的癌症。因为我们已经证明NME7-AB通过结合并激活MUC1*生长因子受体而发挥其致瘤作用，抗NME7抗体将会有效对抗任何MUC1*阳性癌，这包括但不限于乳癌、肺癌、肝癌、胰腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、脑癌、黑素瘤、肾癌等。抗NME7、抗NME7-AB或抗NME7-Xl抗体给予至患者用于治疗或预防属于NME7-AB、NME7-AB样或NME7-X1阳性或MUC1*阳性的癌症。
有效疗法的患者癌细胞测试
NME7-AB、NME7-X1以及2i和其他使干细胞回复更原始状态的试剂也诱导癌细胞转化为更具转移性的状态。在使用这些试剂中的任一种或组合治疗后，癌细胞具有更高的异种移植速率并需要高达100,000倍之少的细胞就能在测试动物中引起肿瘤形成。因此，本公开中描述的方法能够用于使患者的原发性肿瘤细胞能够异种移植到测试动物中。
然后就可以在接受动物上测试候选治疗药物。以这种方式识别的有效治疗剂能够用于治疗具有类似癌症的供体患者或其他患者。在一个实施方式中，识别针对具体患者或具体癌症类型的有效治疗药物的方法包括以下步骤：1)会给予获自细胞系、患者或要测试治疗药物的患者的癌细胞；2)将癌细胞培养于NME7-AB、NME7-X1、人NME1、与人NME1或NME7具有高同源性的细菌NME1、2i或其他试剂中而使干细胞回复到更原始的状态；3)将所得到的癌细胞植入到也可以给予证明能够使干细胞回复更原始状态的人NME7-AB、NME7-X、人NME1、与人NME1或NME7具有高同源性的细菌NME1、2i或其他试剂的测试动物或对于人NME7-AB或NME7-X1是转基因的动物；4)向动物给予候选抗癌治疗药物；5)评价治疗药物的效力；和6)将有效治疗药物给予至供体患者或另一个患有类似癌症的患者。
抗NME7抗体
抗NME7抗体是强效抗癌药。NME7是促进癌细胞生长的生长因子，并也促进它们进展到更具转移性的状态或更具侵袭性的状态。NME7和约33kDa或30kDa的NME7截短形式已证明甚至在没有任何其他生长因子或细胞因子的无血清培养基中都完全支持癌症生长。在拉下分析测试(pull-down assays)，即ELISA和纳米颗粒结合实验中，我们已经证明生长因子受体MUC1*是NME7和NME7-AB的结合伴侣。通过消除所有其他生长因子或细胞因子促进这种相互作用增加了癌症干细胞标志物的表达。阻断这种相互作用，甚至在血清存在下，使用特异性结合至NME7的多克隆抗体会活性杀死癌细胞。因此，抗NME7或抗NME7-AB抗体是能够给予至患者用于治疗或预防癌症的强效抗癌药。所有癌症超过75％的都是MUC1*阳性。MUC1*是MUC1的跨膜切割产物，其中胞外结构域的大部分已经脱落，留下胞外结构域包含大部分PSMGFR序列的部分，并可以包含9～20个PSMGFR序列的N端边界的其他氨基酸。
本发明的一个方面是治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向受试者给予有效量的抗NME7抗体。在一个实例中，抗NME7抗体能够结合至NME7-AB。在另一个实例中，抗NME7抗体能够结合至NME7-X1。在还有的另一个实例中，给予至患者的抗NME7抗体在促进癌症中抑制或阻止其与其靶标的结合。在一种情况下，靶标是切割的MUC1的胞外结构域。更具体而言，促进癌症的NME7靶标是MUC1*胞外结构域的PSMGFR区。在一个方面中，有效治疗药剂是破坏或阻止NME7物质和主要由MUC1*的PSMGFR部分或PSMGFR肽构成的MUC1*胞外结构域之间的相互作用的治疗药物。用于治疗或预防癌症的药物是直接或间接抑制NME7、NME7-AB样切割产物或可变同种型(包括NME7-X1)的表达或功能的那些药剂。在一种情况下，有效抗癌治疗药物是结合至NME7物质或使其致瘤活性失能的治疗药物。用于治疗或预防癌症的有效治疗剂是结合至NME7、NME7-AB样裂解产物或可变同种型或NME7-X1或使之失能的药物。在一个方面中，结合至NME7物质的治疗药物是抗体。抗体可以是多克隆的，单克隆的，双特异性的，二价的，单价的，单链的，scFv，或可以是动物来源、人-动物嵌合体、人源化的或人的抗体模拟物。抗体能够通过用NME7物质或其片段接种或免疫产生，或因为其结合至NME7物质，包括NME7、NME7-AB样切割产物或可变同种型(包括NME7-X1)的能力而选自例如抗体库或抗体池。
抗NME7抗体的产生
抗NME7抗体能够在患者之外，例如在宿主动物中或在患者中产生。抗体能够通过NME7或NME7片段的免疫作用产生，或基于其结合至所需NME7物质如NME7-AB或NME7-X1的能力而选自抗体库或抗体池，其可以是天然的、合成的、完整的或抗体片段。在一个方面中，抗体由用选自图16-图19中列出的那些的肽免疫产生，或因为其与图16-图19中列出的那些的肽结合的能力而进行选择。在另一方面中，抗体由其序列与人NME1的序列不相同的肽产生，或抗体对其结合至NME7物质的能力和其没有结合至人NME1的能力而进行选择。
一种用于识别产生抑制癌症生长和抑制向转移转变的抗体的NME7或NME7-X1衍生的肽或其本身就是抑制性的肽的方法如下：1)比对人NME1、人NME7、人NME7-X1和与人NME1或人NME7具有高序列同源性的几种细菌或真菌NME蛋白的蛋白序列；2)识别出所有NME中高序列同源性的区域；3)识别出对于NME7或NME7-X1是独特的而侧接于高序列同源性区域的肽序列。然后合成肽并用于人或宿主动物中产生抗体。测试所获得的抗体抑制癌症生长的能力或抑制向转移性癌细胞转变的能力。
抗NME7抗体治疗癌症的用途
选择那些抑制癌症生长或向更具转移性的状态转变的抗体用作抗癌治疗剂并可以给予至患者用于治疗或预防癌症。所选择的抗体可以，例如通过遗传工程改造或制成人嵌合抗体或全人抗体而进一步优化。为了证明这种方法的效力，我们从NME7怀疑对其癌症功能是至关重要的区域中选择出NME7肽。然后我们使用这些肽产生抗体，并随后测试所得的抗体以及免疫化肽的以下能力：a)抑制癌变生长；和b)抑制从癌细胞到转移性癌细胞的诱导转变。NME7肽选出作为抗体生产的免疫试剂和本身作为抑制试剂(图19和实施例11)。肽A1(SEQ ID NO:141)，A2(SEQ ID NO:142)，B1(SEQ ID NO:143)，B2(SEQ ID NO:144)和B3(SEQ ID NO:145)，其中A是指肽所源自的结构域，即NDPK A结构域而B表示肽源自NDPK B结构域(图15)。每个肽用作免疫原并注射到每只用于生产多克隆抗体的2只兔子中。从免疫的兔血液中收获的抗体在用免疫化肽衍生的柱上纯化。纯化的抗体然后测试其结合至人NME7的能力。如所期望的，所有得到的抗体结合人NME7而不结合人NME1(图26A-B，实施例12)。这些结果表明，通过选择在NME7中发现其序列而在NME1中不完全相同的肽，产生特异性结合至NME7而不结合NME1的抗体。因为NME1具有健康功能，在大多数情况下产生不干扰NME1的抗体是合乎需要的。也测试了抗体抑制NME7与MUC1*胞外结构域肽的结合的能力。图27中所示的ELISA实验表明抗体抑制NME7-AB与MUC1*胞外结构域肽的结合远远超过其抑制NME1的结合。
这只是选择产生抑制NME7和NME7物质癌症功能的抗体的肽的一个实例。在人NME1、人NME7、人NME7-X1和与人NME1或NME7具有高序列同源性的细菌NME蛋白之间的序列比对识别出了5个同源区域。肽A1、A2、B1、B2和B3全部产生抑制癌症生长或其向转移性状态的转变的抗体的事实意味着从其衍生这些肽的五个区域是对于其在癌症促进方面的功能是很重要的NME7的区域。来自这些区域的其他肽也将产生会抑制癌症生长和转移并因此是有效的抗癌治疗剂的抗NME7抗体。由肽A1、A2、B1、B2和B3产生的抗体表现出抑制癌生长并抑制向更具转移性的状态的转变。通过用相同或相似的肽免疫产生的单克隆抗体和随后的单克隆抗体测试将会识别出在人源化或本领域技术人员已知的其他工程工程改造之后将给予患者而治疗或预防癌症的抗体。
在具体的实验中，通过用肽A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的抗体以及这些免疫化肽本身，被加入到培养物中的癌细胞中以观察添加抗体或免疫化肽是否会抑制癌细胞生长。在低浓度和单独添加时，抗体以及免疫化肽抑制癌细胞生长(对于一个实例，参见图28)。然而，当以较高浓度或组合添加时，抗体以及免疫化肽强烈效抑制癌细胞生长(图29)。免疫化肽A1、A2、B1、B2和B3的相应的人NME7氨基酸数目分别是来自具有SEQ ID NO:82或147的人全长NME7的127-142、181-191、263-282、287-301、343-371。
为了阐明清楚，当讨论NME7的残基编号时，它们是指如SEQ ID NO:82或147所示的NME7的残基编号。
用于图6-图8中所示的癌症生长抑制实验中的抗体和图28所示的抗体之一都是通过用对应于NME7(SEQ ID NO:82或147)的氨基酸100-376的NME7肽免疫产生。为了产生较高亲和力和特异性抗NME7抗体，按照以下步骤实施：用含有人NME7氨基酸100-376的肽免疫动物，然后：1)淘汰结合至人NME1的那些抗体；2)选择出那些抑制NME7-AB，2i或其他诱导癌细胞向更具转移性的状态转变的NME的抗体；3)选择出那些抑制癌细胞生长的抗体；4)选择出那些抑制MUC1*阳性癌细胞生长的抗体；5)选择出那些抑制NME7-AB或NME7-X1与MUC1*胞外结构域的结合、基本上抑制与PSMGFR肽结合的抗体；和/或6)选择出那些结合至图19中所列的肽——A1、A2、B1、B2或B3肽中的一个或多个的抗体。
由较长肽产生的更高亲和力的单克隆抗体或多种单克隆抗体可以是更有效的抗体治疗剂。可替代地，将抗NME7、抗NME7-AB或抗NME7-X1抗体的组合给予至患者以增加效力。
抗NME7抗体抑制癌细胞向转移性癌细胞的转变。
抗NME7抗体抑制癌细胞向转移性癌细胞也称为癌症干细胞(CSC)或肿瘤引发性细胞(TIC)的转变。回顾一下，我们已经证明，在NME7-AB存在下培养各种癌细胞导致其从常规癌细胞转化成转移性CSC或TIC。因此，结合至NME7、NME7-AB或NME7-X1的抗体将会抑制癌细胞向更具转移性的状态的进展。
当在将干细胞回复到更原始状态的药剂存在下培养时，癌细胞会转变至更具转移性的状态。我们已经证明，在NME7-AB、人NME1二聚体、细菌NME1二聚体或MEK和GSK3-β抑制剂(称为“2i”)中培养癌细胞会导致细胞变得更具转移性。随着细胞转变至更具转移性的状态，它们变得非贴壁的或不太贴壁的并漂离培养板。这些漂浮的细胞，“漂浮物”与那些贴壁的细胞分开收集并显示出：a)表达更加高水平的转移性基因；和b)当以非常低的拷贝数异种移植到小鼠中时产生肿瘤。特异性转移标志物如用于乳癌的CXCR4、用于前列腺癌的CHD1和其他多能干细胞标志物如OCT4、SOX2、NANOG、KLF4等的RT-PCR测量在培养于NME7-AB中的癌细胞中显著过表达而在变得不贴壁，本文中和附图中称为“漂浮物”的细胞中最高地过表达。
在一个实例中，通过用NME7衍生的肽A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的NME7-AB特异性抗体以及免疫化肽本身，与NME7-AB或2i中的任一种一起加入到培养基中以确定它们是否抑制常规癌细胞向转移癌症干细胞的转变。抗体和肽与引起转移性转化的试剂，在这种情况下，是NME7-AB或2i抑制剂PD0325901和CHIR99021一起分开加入。NME7-AB和2i独立用于诱导癌细胞转化为更具侵袭性的转移性状态。使用2i使之不能认为添加到培养基中的抗体简单地吸收了(sopped up)所有的NME7-AB而使致病剂没有有效地存在(实施例14)。
两个科学家随着实验的进展独立记录了视觉观察(图30)。最惊人的观察结果是抗体和肽显著减少漂浮细胞数，这是抗体和肽抑制向转移性癌细胞的转化的第一个指示。具体而言，向其添加通过用B3肽免疫产生的抗体的细胞几乎不产生任何漂浮细胞。从漂浮细胞、贴壁细胞和对照癌细胞中提取mRNA。对指示细胞活力和生长的所有mRNA量进行测定。用抗体处理的细胞具有少得多的mRNA，这指示分裂细胞不太活力(图32)，这证实抗NME7-AB抗体抑制癌细胞生长及其向更具转移性的状态的转变。RT-PCR用于测量包括CXCR4在内的转移标志物的表达水平。用抗NME7抗体的治疗极大降低了转移标志物如CXCR4的量，表明抗NME7抗体或肽抑制向转移性癌症的转变(图31A-图31C)。这些结果表明，结合至NME7-AB的抗体能够给予至患者用于治疗或预防转移性癌症。
衍生自NME7-AB或NME7-X1的肽竞争性抑制完整NME7-AB和NME7-X1的结合，并且是抗癌剂。
在本发明的另一方面中，用于治疗或预防癌症的治疗剂是衍生自NME7序列的肽，其给予至患者用于治疗或预防癌症。在一个方面中，将NME7衍生肽给予至患者而使应该短于整个NME7并且不能赋予NME7的致癌活性的肽结合至NME7的靶标并竞争性地抑制完整NME7与其靶标的相互作用，其中这种相互作用促进癌症。由于NME7-AB完全能够赋予致癌活性，因此优选NME7-AB的序列作为较短肽的来源，其中必须确证的是肽本身不能促进癌变生长或具有其他致瘤或致癌活性。在优选的实施方式中，向患者给予一个或多个具有一部分NME7-AB的序列并且长度优选约12-56个氨基酸的肽。为了增加半衰期，肽可以是肽模拟物，如具有非天然主链的肽或对于L的D-型氨基酸的肽。在还有的另一种情况下，抗癌治疗剂是肽或肽模拟物，其中肽具有与至少一部分NME7、NME7-AB或NME7-X1或其靶标MUC1*胞外结构域(包括PSMGFR肽，在本文的一些情况下也称为“FLR”)高度同源的序列。
图16-图19提供了预测抑制NME7与其同源靶标结合的优选氨基酸序列的列表。在一个更加优选的实施方式中，选择出为给予至患有癌症或处于发展癌症风险的患者所选择的肽，因为它们结合至NME7结合伴侣并且它们本身不具有致肿瘤活性。在一个更加优选的实施方式中，NME7结合伴侣是MUC1*的胞外结构域。在一个更加优选的实施方式中，NME7结合伴侣是PSMGFR肽。
对于术语“赋予致瘤活性或致癌活性”，是指肽本身不能支持或促进癌的生长。测试肽或衍生自NME7的肽是否能够促进肿瘤生成的另一种方法是测试肽是否能够支持人干细胞的多能生长。支持多能人干细胞生长的NME蛋白和肽也支持癌症生长。在还有的另一个方法中，如果肽能够导致体细胞回复至较不成熟的状态，则就淘汰它们。
NME7-AB的片段抑制癌细胞生长和癌细胞向更具转移性的状态的转变。作为示范，分开(图28)或组合(图29)添加的NME7肽A1、A2、B1、B2和B3抑制癌细胞的生长。此外，NME7肽A1、A2、B1、B2和B3抑制癌细胞向更具转移性的状态的转变(图31B-图31C)。
因此，通过用NME7特异性的肽以及NME7-AB或NME7-X1特异性的肽免疫而产生的抗体会阻断NME7物质的癌作用并将是强效的抗癌剂。类似地，这些结果表明NME7特异性的肽和NME7-AB或NME7-X1特异性的肽将会阻断NME7物质的癌作用。在本发明的一个方面中，肽选自图16中所示的列表。在本发明的一个方面中，肽选自图17中所示的列表。在本发明的一个方面中，肽选自图18中所示的列表。在本发明的还有的另一方面中，肽选自图19中所示的列表。
用于治疗或预防癌症的抗NME7抗体能够通过本领域那些技术人员已知的标准方法产生，其中那些方法用于产生抗体或识别NME7、NME7-AB或构成N端的其他10～25个氨基酸不存在的NME7-AB较短形式的抗体样分子。
在本发明的另一方面中，小分子是因为其抑制NME7、NME7-AB或NME7-XI的致瘤作用的能力而选择的抗癌剂。例如，高通量筛选识别出将会治疗癌症的小分子。在多孔孔板中，将小分子分开加入到在含有NME7-AB的培养基中培养癌细胞的井孔中。如果小分子降低成为漂浮细胞的细胞数量和/或降低转移标志物如CXCR4、CHD1或多能干细胞标志物的表达，则小分子就是候选抗癌药物。识别属于抗癌剂的小分子的另一种方法是选择那些结合至NME7、NME7-AB或NME7-X1或抑制NME7物质的表达的小分子。另一个高通量筛选法是选择抑制NME7-AB与MUC1*胞外结构域的PSMGFR肽结合的小分子，而那些小分子都将是抗癌剂。
NME7-AB和NME7-X1的序列不同之处仅在于NME7-X1缺失了NME7-AB具有的一些N端序列。实验表明，存在与NME7-AB几乎相同的天然NME7物质，我们称其为NME-AB样物质。结合至NME7-X1的抗体也可以结合至模拟NME7-AB的天然物质，除非存在抗体可以区分的构象差异。因此，如果期望抑制NME7-X1而不是NME7-AB样物质，或反之亦然，可以使用siRNA、反义核酸或遗传编辑技术抑制一个而非另一个的表达。
在一种情况下，抗癌治疗剂是直接或间接抑制NME7、NME7-X1或NME7-AB样物质的特异性表达的核酸。这样的核酸可以是直接抑制NME7物质的siRNA、RNAi、反义核酸等。在本发明的另一方面中，核酸可以，例如，通过改变其调节的分子的表达间接抑制NME7物质。例如，超级增强子BRD4抑制NME7的表达。因此，用于治疗或预防癌症的有效治疗剂是增加BRD4表达的药物。有效治疗剂可以是增加BRD4的辅因子JMJD6的表达的药物。
在动物中使用衍生自NME7-AB或NME7-X1的肽或整个蛋白来产生抗NME7或抗NME7-Xl抗体，我们已经证明其抑制癌症生长并抑制癌细胞向转移性癌细胞转变。类似地，NME7衍生肽可以给予至人而使其产生治疗或预防癌症或抑制癌细胞向转移性癌细胞转变的抗体。NME7肽或蛋白给予至人而作为一种类型的疫苗来刺激接受者中抗NME7、抗NME7-AB或抗NME7-X1抗体产生。图28和图29中所示的结果表明，用源自NME7，特别是NME7-X1或NME7-AB序列的肽的集合使人免疫，可以是用单个肽的免疫更有效的疫苗。所述肽或蛋白可以进一步与本领域技术人员已知的载体蛋白或其他佐剂缀合以辅助刺激免疫应答。
优选位于DM10结构域之外的NME7肽来产生用于治疗或预防癌症的抗体。可以给予至患者用于预防癌症或转移的肽含有图16-图19中列出的肽的序列。A1、A2、B1、B2和B3是产生结合至NME7-AB和NME7-X1的抗体并给予至患者用于治疗或预防癌症的肽的实例。本发明不限于天然存在于NME7或NME7-X1中的精确序列的肽。正如本领域技术人员所知，肽序列的几个氨基酸的取代仍然可以产生特异性识别天然蛋白序列的抗体。本发明并不旨在限于本文所证明的抑制癌症生长或抑制常规癌细胞向转移性癌细胞转变的肽。本文用于识别肽A1、A2、B1、B2和B3的方法也可以用于识别可以与本文所示的肽同等或更有效的其他肽序列。
包含人NME7-AB或NME7-X1的部分或包含结合至NME7-AB或NME7-X1的抗体片段的嵌合抗原受体分子是抗癌治疗剂，并且给予至患者用于治疗或预防癌症。
在一种情况下，使用称为CAR(嵌合抗原受体)技术或CAR T技术的技术将抗NME7抗体的识别单元或可变区融合至T细胞的分子。可以用于治疗性地治疗或预防癌症的抗体或其片段的显著特征是确定识别NME7并防止其与促进癌症的靶标相互作用的抗体样可变区。在一种情况下，靶标是MUC1*的PSMGFR区。
抗体、抗体片段或单链抗体可以工程改造成嵌合分子，包括嵌合抗原受体(也称为CAR)，分子随后转染或转导到免疫系统细胞如T-细胞中，并给予至患者。人源化抗体或抗体片段，通常是scFv，包括CAR的胞外结构域的大部分。抗体片段生物化学地融合于免疫系统信号分子如CD8作为跨膜结构域和胞质信号基序如也称为激活结构域的T细胞受体信号分子，或包括但不限于CD3-ζ，CD28，41bb，OX40的共刺激结构域。CAR可以转染到T细胞或其他细胞，优选免疫系统细胞中并给予至患者。在本文中我们描述了胞外部分包含抗NME7、抗NME7-AB或抗NME7-Xl抗体、抗体片段或单链，scFv抗体片段的CAR。在优选的实施方式中，抗体或抗体片段是人的或人源化的。
有效的抗NME7或抗NME7-Xl抗体或片段会具有结合至天然NME7、NME7-AB或NME7-X1的能力。在实践中，通过用NME7、NME7-AB或NME7-X1衍生肽对动物免疫产生亲本抗体，由其遗传工程改造CAR的胞外结构域。在本发明的一个方面中，免疫化肽由NME7氨基酸1-376构成。在本发明的一个方面中，免疫化肽由NME7氨基酸92-376构成。在本发明的另一方面中，免疫化肽由NME7氨基酸125-376构成。在本发明的还有的另一方面中，免疫化肽由图16-18中列出的序列构成。在本发明的另一方面中，免疫化肽由图19中列出的序列构成。可替代地，亲本抗体或抗体片段选自抗体库或抗体池，其可以是天然的、合成的或其任一的片段，其中它们因为其结合至NME7、NME7-AB或NME7-X1、图16-18中列出的肽或图19中列出的肽的能力而选择。
CAR的靶向部分不需要是抗体或抗体片段。本文中我们描述了其中胞外结构域包含NME7片段的CAR。NME7衍生肽被工程改造成不同种类的CAR，其中胞外结构域的靶向部分是蛋白片段或肽而不是抗体或抗体片段。肽CAR被转染或转导入免疫系统细胞，典型地是T细胞中。NME7片段或NME7衍生肽因为结合至其同源结合伴侣，但不应该能够如同完整NME7、NME7-AB或NME7-X1一样发挥功能并赋予致瘤活性的能力而被选择。NME7片段或NME7衍生肽生物化学地融合至免疫系统信号分子如作为跨膜结构域的CD8和细胞质信号基序如T细胞受体信号分子，也称为激活结构域，或包括但不限于CD3-ζ、CD28、41bb、OX40的共刺激结构域中。
在本发明的一个方面中，NME7片段是大多数或所有NME7NDPK B结构域。在本发明的另一方面中，NME7片段是包含图16-19中列出的肽序列中的一个或多个的NME7肽。实验表明，对于使用NME7或NME7的片段、NME7-AB或NME7-X1作为嵌合抗原受体(CAR)的靶向部分用于工程改造免疫细胞治疗剂的策略，NME7-AB或NME7-X1相当大的片段比较短的肽，例如，长度小于15个氨基酸的肽更有效。可替代地，每个具有不同NME7-AB衍生肽的CAR集可以共同转染或转导至免疫系统细胞中并给予至患者用于治疗或预防癌症。图28和图29中所示的实验支持这种方法的有效性。
在其胞外结构域中包含NME7片段的CAR转染或转导入免疫系统细胞，通常是T细胞中，并给予至患者用于治疗或预防癌症。在一个方面中，癌症是MUC1*阳性癌症。在另一方面中，癌症是转移性癌症。
抑制切割NME7的酶的药剂可以用于治疗或预防癌症。一些形式的NME7螯合于(sequestered)细胞内并且因此不会从细胞中分泌，因此它们可以充当生长因子而促进癌症。全长NME7为42kDa。然而，我们发现，没有DM10结构域并且看起来与我们产生的重组NME7-AB基本相同的～33kDa NME7物质是从癌细胞和干细胞中分泌的。这种～33kDa NME7物质和另一～25kDa NME7物质可以是将会由抑制NME7的裂解的试剂消除的裂解产物。
在患者样品中检测升高水平的NME7或～33kDa NME7物质(我们称其为NME7-AB样物质)或NME7-X1是癌症存在或其进展为更具侵略性或转移性状态的诊断。本发明人已经发现，原始干细胞和癌细胞(特别是MUC1*阳性癌细胞)二者早期阶段，都表达高水平的无DM10结构域的～33kDa NME7和NME7-X1。
NME7-X1最近在蛋白数据库中列出而成为NME7的理论可变同种型，然而，它在组织或细胞中从未检测到。我们设计了通过PCR区分NME7-X1和NME7的引物。通过PCR在包括成纤维细胞、人胚胎干细胞、人iPS细胞、T47D人乳癌细胞、DU145人前列腺癌细胞、PC3人前列腺癌细胞、HEK295人胎儿肝细胞和其他人干细胞系的细胞组中测量了人NME7、NME7a、NME7b和NME7-X1的表达水平。NME7在癌细胞中比在干细胞中表达水平更高。具体而言，与在成纤维细胞或干细胞中相比，NME7-X1在前列腺癌细胞中表达高10倍，在乳癌细胞中高3倍。NME7-X1在HEK293胎儿肝细胞中比在成纤维细胞或干细胞中表达高～5倍，而因此预测NME7-X1在肝癌中会升高。NME7b在前列腺癌细胞中比在干细胞中表达高17～25倍。
在患者样品中检测水平升高的NME7物质将是患者患有癌症或处于发展癌症的癌风险的指标。可以通过PCR、杂交方案、循环探针技术、FISH、免疫细胞化学、IHC、蛋白质免疫印迹、免疫沉淀、夹心分析测试、ELISA分析测试等测量或评价NME7物质水平的水平。患者样品可以是流体样品、血液样品、乳汁、尿液、细胞、液体活检、活组织检查等。在诊断患有癌症的患者中，升高水平的NME7物质是转移潜力增加的指标。升高水平的NME7-X1是前列腺癌症的指标。本发明的抗体用于检测和区分NME7物质并用作诊断工具。
因为成熟细胞和组织不表达显著水平的NME7或分泌NME7，诊断癌症或诊断更具侵略性或转移形式、或向更具侵略性形式的转变的有效方式是测定来自患者、来自细胞或组织的集合或所培养的细胞的样品中NME7与健康样品中的NME7水平或与已知存在于健康成年细胞或组织中的NME7水平相比的水平。NME7水平增加表明癌症的存在、转移性癌症的存在或转移的发生。NME7水平增加也是MUC1*阳性癌的指示。对NME7存在进行分析测定的样品可以是培养细胞系或来自患者、体液、血液样品、组织标本或活检标本的细胞的细胞集合。因此，会检测癌症或癌症的进展的诊断分析测试，包括以下步骤：1)由患有癌症或处于发展癌症的风险的患者获取样品；2)使样品经受可以检测或测定NME7的水平或编码NME7的核酸的水平的分析测试；3)将测试样品中的测定的NME7蛋白或编码NME7的核酸的水平与对照患者或对照细胞中的水平进行比较；4)确定NME7的水平或编码NME7的核酸的水平相对于对照是升高的；和5)推论出测试样品的供体患有癌症或如果测试进行对比的对照来自先前患有癌症的供体则推论出其已经具有癌症进展。
在这种分析测试中，与测试样品进行比较的对照样品可以是非癌性细胞、培养细胞、来自健康供体的样品、来自供体的非癌性样品、或来自在这种情况下对照样品在此时之前的时间点采集自供体的测试样品供体的样品。这些样品的来源可以是采集自要对癌症存在或进展进行测试的患者的任何样本，包括体液、脑脊液、骨髓样品、血液、组织、细胞、活检组织或细胞、源自患者细胞的培养细胞等。与测试样品比较的样品的来源可以是体液、脑脊液、骨髓样品、血液、组织、细胞、活检组织或细胞、或可以源于健康供体或样品在此时之前的时间点采集的测试患者的培养细胞。测试样品所对比的所测定的水平可以是来自先前记录的数据并编撰到用于测试样品对比的列表中。
治疗诊断学
然后用抑制NME7的表达、抑制NME7断裂或抑制NME7结合至其靶标的治疗剂治疗诊断出NME7蛋白或编码NME7的核酸的水平升高的患者，其中这种相互作用促进癌症。NME7或NME7切割产物的重要靶标是MUC1*。NME7结合至MUC1*的胞外结构域并使之二聚。因此，诊断出NME7水平升高的患者将受益于采用抑制NME7的治疗剂和/或抑制MUC1切割形式的二聚化的治疗剂的治疗，MUC1切割形式的胞外结构域由一些或所有PSMGFR序列构成。因此，评价癌症治疗的合适性和给予有效量的治疗或预防癌症的治疗剂将包括以下步骤：1)由疑似患有癌症或处于发展癌症的风险或处于发展转移性癌症的风险的患者获取样品；2)测定NME7或其切割产物或编码NME7的核酸的含量，其中测定的水平显著超过对照样品中测定的那些；3)确定患者患有癌症或已经发展更具侵略性的或转移性的癌症；4)向患者给予有效量的抑制NME7的表达、抑制NME7的断裂或抑制NME7结合至其靶标的治疗药物和/或向患者给予有效量的抑制MUC1的表达、抑制MUC1断裂成MUC1*或抑制MUC1*结合至其靶标的治疗药物。在优选的实施方式中，治疗剂抑制NME7结合至其靶标，抑制其与MUC1*的相互作用。在更优选的实施方式中，它抑制其与基本上由PSMGFR序列构成的MUC1*的胞外结构域的相互作用。在优选的实施方式中，治疗剂抑制MUC1*结合至其靶标，抑制MUC1*和NME7之间的相互作用。在更优选的实施方式中，治疗剂抑制MUC1*和NME7之间的相互作用，抑制MUC1*与NME7基本上由NME7-AB序列构成的部分的结合。
化学修饰的肽
多肽或抗体治疗剂可能会遭致短循环半衰期和蛋白水解降解以及低溶解度。为了改善创造性生物药物的药代动力学和药效动力学性质，可以进行诸如操作氨基酸序列的方法降低或增加免疫原性并降低蛋白水解切割；也可以进行肽与免疫球蛋白和血清蛋白如白蛋白的融合或缀合；也可以进行向生物药物如本发明的肽和抗体的药物递送媒介物(vehicle)中引入而实现保护和缓释；和还考虑与天然或合成聚合物的缀合。具体而言，对于合成聚合物缀合，也考虑聚乙二醇化或酰化，例如N-酰化，S-酰化等。
核酸构建体
本发明还提供了包含本文中的本发明核酸分子的表达载体，其中核酸分子可操作地连接至表达控制序列。本发明还提供了用于生产多肽的宿主-载体系统，多肽包括已经引入到适用于表达多肽的宿主细胞中的本发明的表达载体。合适的宿主细胞可以是细菌细胞如大肠杆菌(E.coli)，酵母细胞例如巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，昆虫细胞如草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)，或哺乳动物细胞如COS、HEK或CHO细胞。
本发明还提供了在允许产生多肽和回收如此产生的多肽的条件下，通过生长本文所描述的宿主-载体系统的细胞生产本发明的多肽的方法。适用于实施本发明的多肽可以通过在原核或真核表达系统中表达而制备。
可以使用任何方法表达重组基因并纯化多肽。基因可以亚克隆到细菌表达载体中，如但不限于，pZErO。
多肽可以通过允许随后形成稳定的生物活性蛋白的任何技术进行纯化。例如，但不限于，因子可以由作为可溶性蛋白或作为从中可以通过8M盐酸胍和透析定量地提取这些因子的包涵体的细胞中回收。为了进一步纯化因子，可以使用任何数目的纯化方法，包括但不限于，常规离子交换层析法、亲合层析法、不同糖层析法、疏水相互作用层析法、反相层析法或凝胶过滤法。
当在本文中使用时，多肽包括功能等同的分子，其中氨基酸残基取代成序列内导致沉默或保守变化的残基。例如，序列内的一个或多个氨基酸残基可以被相似极性的另一个氨基酸取代，其充当功能等同物，导致沉默或保守改变。序列中的氨基酸的替代物可以选自氨基酸所属的类别的其他成员。例如，非极性(疏水)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷的(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。带负电荷(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。潜在的糖基化氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸和天冬酰胺。本发明的范围内还包括表现出相同或相似生物活性的蛋白或其片段或衍生物，以及在翻译期间或翻译后，例如，通过糖基化、蛋白水解切割、与抗体分子或其他细胞配体等连接而差异修饰的衍生物。
本领域技术人员已知的用于将DNA片段插入载体中的任何方法都可以用于使用合适的转录/翻译控制信号和蛋白编码序列构建编码本发明的多肽的表达载体。这些方法可以包括体外重组DNA和合成技术以及体内重组(遗传重组)。可以通过第二核酸序列调节编码本发明的多肽的核酸序列的表达，而使多肽表达于用重组DNA分子转化的宿主中。例如，可以通过本领域已知的任何启动子/增强子要素控制本文所描述的多肽的表达。可用于控制多肽的表达的启动子包括，但不限于，如Squinto等(1991，Cell 65：1-20)中所描述的长末端重复；SV40早期启动子区(Bernoist and Chambon，1981，Nature 290:304-310)，CMV启动子，M-MuLV 5'-端重复，包含于Rous肉瘤病毒的3'长端重复序列中的启动子(Yamamoto，et al.，1980，Cell 22:787-797)，疱疹胸苷激酶启动子(Wagner et al.，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.78:144-1445)，金属硫蛋白基因的调节序列(Brinster etal.，1982，Nature 296:39-42)；原核表达载体如β-内酰胺酶启动子(Villa-Kamaroff，etal.，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.75:3727-3731)或tac启动子(DeBoer，et al.，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:21-25)，还参见Scientific American，1980,242：74-94中的“Useful proteins from recombinant bacteria”；来自酵母或其他真菌的启动子元件如Gal 4启动子，ADH(醇脱氢酶)启动子，PGK(磷酸甘油激酶)启动子，碱性磷酸酶启动子和以下动物转录控制区，其表现出组织特异性并已用于转基因动物：在胰腺腺泡细胞中有活性的弹性蛋白酶I基因控制区(Swift et al.，1984，Cell 38:639-646；Ornitz etal.，1986，Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.50:399-409；MacDonald，1987，Hepatology 7:425-515)；在胰腺β细胞中有活性的胰岛素基因控制区(Hanahan，1985，Nature 315：115-122)，淋巴样细胞中具有活性的免疫球蛋白基因控制区(Grosschedl etal.，1984，Cell 38:647-658；Adames et al.，1985，Nature 318:533-538；Alexander etal.，1987，Mol.Cell.Biol.7:1436-1444)，睾丸、乳腺、淋巴和肥大细胞中有活性的小鼠乳腺肿瘤病毒控制区(Leder et al.，1986，Cell 45:485-495)，肝中有活性的仙台病毒、慢病毒、白蛋白基因控制区(Pinkert et al.，1987，Genes and Devel.1:268-276)，肝中有活性的α-甲胎蛋白基因控制区(Krumlauf et al.，1985，Mol.Cell.Biol.5:1639-1648；Hammeret al.，1987，Science 235:53-58)；肝中有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制区(Kelsey etal.，1987，Genes and Devel.1:161-171)，骨髓细胞中有活性的β-球蛋白基因控制区(Mogram et al.，1985，Nature 315:338-340；Kollias et al.，1986，Cell 46:89-94)；脑中少突胶质细胞中有活性的髓鞘碱性蛋白基因控制区(Readhead et al.，1987，Cell 48:703-712)；骨骼肌中有活性的肌球蛋白轻链-2基因控制区(Shani，1985，Nature 314:283-286)和下丘脑中有活性的促性腺激素释放激素基因控制区(Mason et al.，1986，Science234:1372-1378)。
因此，根据本发明，在包括编码本文所描述多肽的核酸的细菌或真核宿主中可以复制的表达载体，用于转染宿主，并由此指导这种核酸的表达而产生可以随后以生物活性形式回收的多肽。正如本文中所用，生物活性形式包括可以结合相关受体并引起分化功能和/或影响表达受体的细胞的表型的形式。
包含实施核酸插入物的表达载体可以通过但不限于至少三种通用方法确定：(a)DNA-DNA杂交，(b)存在或不存在“标志物”基因功能，和(c)插入序列的表达。在第一种方法中，可以通过使用包含同源于所插入的核酸序列的序列的探针通过DNA-DNA杂交而检测插入于表达载体中的外源核酸的存在。在第二种方法中，基于由载体中外源核酸序列的插入引起的某些“标志物”基因功能的存在或缺失(例如，胸苷激酶活性、对抗生素的抗性、转化表型、杆状病毒中的闭塞体形成等)可以识别和选择重组载体/宿主系统。例如，如果将efl核酸序列插入载体的标记基因序列内，则通过不存在标记基因功能可以识别含有插入物的重组体。在第三种方法中，通过分析测试由重组构建体表达的外源核酸产物可以识别重组表达载体。这样的分析测试可以，例如，通过将配体结合至可以用例如可检测的抗体标记的受体或其部分或结合针对所关注的蛋白而产生的抗体或其部分而基于，例如，所关注的核酸产物的物理或功能性质。
多肽，特别是本发明修饰的多肽，可以是瞬时地、组成性地或永久表达于宿主细胞中。
使用本领域技术人员已知的方法可以确定适用于治疗本申请中指出的疾病或病症的有效剂量(参见，例如，Fingl，et al.，The Pharmacological Basis ofTherapeutics，Goodman and Oilman，eds.Macmillan Publishing Co，New York，pp.1-46(1975))。根据本发明使用的药物组合物包括连接到载体或靶向分子(例如，抗体，激素，生长因子等)和/或在体内给予之前掺入脂质体，微胶囊和控释制剂中的药理学上可接受的液体、固体或半固体载体中的上述多肽。例如，药物组合物可以包含在水溶液，例如无菌水，盐水，磷酸盐缓冲液或葡萄糖溶液中的多肽。可替代地，活性剂可以包含于可以植入需要这种治疗的患者中的固体(例如，蜡)或半固体(例如，凝胶)制剂中。给予途径可以是本领域已知的任何给予方式，包括但不限于，静脉内、鞘内、皮下、子宫内、通过注射到所涉及的组织中、动脉内、鼻内、口服或经由植入器件。
给予可以导致本发明的活性剂分布于整个身体或局部区域中。例如，在涉及神经系统的远距离区域的一些情况下，静脉内或鞘内给予药剂可能是合乎需要的。在一些情况下，含活性剂的植入物可以放置于损伤区域之中或附近。合适的植入物包括但不限于基于明胶海绵、蜡、喷雾或微粒基的植入物。
本发明还提供了在药理学上可接受的载体中包含的本文所描述的多肽的药物组合物。组合物可以全身或局部给予。可以使用本领域已知的任何合适的给予方式，包括但不限于、静脉内、鞘内、动脉内、鼻内、口服、皮下、腹膜内，或通过局部注射或外科植入。本发明还提供了缓释制剂。
基因疗法
基因疗法是指通过向受试者给予表达的或可表达的核酸而实施的治疗法。在本发明的这个实施方式中，核酸产生其介导治疗效果的编码蛋白。
根据本发明可以使用本领域可用的任何基因治疗方法。示例性方法如下描述。
对于基因治疗的方法的一般综述，参见Goldspiel et al.，Clinical Pharmacy12:488-505(1993)；Wu and Wu，Biotherapy 3:87-95(1991)；Tolstoshev，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596(1993)；Mulligan，Science 260:926-932(1993)；和Morgan and Anderson，Ann.Rev.Biochem.62：191-217(1993)；May，TIBTECH 11(5)：155-215(1993)。在可以使用的重组DNA技术的领域内众所周知的方法描述于Ausubelet al.(eds.)，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，NY(1993)；和Kriegler，Gene Transfer and Expression，A Laboratory Manual，Stockton Press，NY(1990)中。
将核酸递送到患者中可以是直接的，在这种情况下，患者直接暴露于核酸或载核酸的载体，或是间接的，在这种情况下，首先在体外用核酸转化细胞，然后将细胞移植到患者中。这些两种方法作为体内或离体基因疗法分别是已知的。
在具体的实施方式中，核酸序列直接体内给予，其中它经过表达而产生编码产物。这可以通过本领域已知多种方法中的任一种方法，例如，通过将其构建为合适的核酸表达载体的部分并将其给予而使其变成细胞内的，例如，通过使用缺陷型或减毒的逆转录病毒或其他病毒载体的感染，或通过直接注射裸DNA，或用脂质或细胞表面受体或转染试剂涂层，包封于脂质体、微粒或微胶囊中，或通过给予它们于与已知进入核子内的肽的连接，通过将其给予至与经受受体介导的胞吞作用的配体的连接(参见，例如，Wu and Wu，J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))(其可以用于靶向特异性表达受体的细胞类型)等完成。在另一个实施方式中，可以形成核酸-配体复合物，其中配体包括融合生成的病毒肽而破坏内体，允许核酸避免溶酶体降解。在另一个实施方式中，核酸可以通过靶向特异性受体而在体内为了细胞特异性摄取和表达而被靶向。可替代地，核酸可以通过同源重组而胞内引入和掺入宿主细胞DNA中而进行表达(Koller and Smithies，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:8932-8935(1989)；Zijlstra et al.，Nature 342:435-438(1989))。
在具体的实施方式中，使用含有编码多肽的核酸序列的病毒载体。编码用于基因疗法的多肽的核酸序列被克隆于一个或多个载体中，这有助于将基因递送至患者中。慢病毒载体，如逆转录病毒载体，和其他载体，如腺病毒载体和腺相关病毒，是可以使用的病毒载体的实例。逆转录病毒载体包含正确包装病毒基因组和整合到宿主细胞DNA中所必需的组件。
腺病毒是将基因递送到呼吸上皮而特别有吸引力的载体，因为它们天然感染呼吸道上皮，其中它们会引起轻度疾病。腺病毒基的递送系统的其他靶标是肝，中枢神经系统，内皮细胞和肌肉。腺病毒具有可以感染非分裂细胞的优点。此外，腺病毒相关的病毒(AAV)也已经提出用于基因疗法。
基因疗法的另一种方法涉及通过诸如电穿孔，脂转染，磷酸钙介导的转染，或病毒感染的方法将基因转移至组织培养基的细胞中。通常而言，转移的方法包括：可选择的标记向细胞中的转移。然后细胞置于选择下而分离那些已经吸收并表达转基因的细胞。然后将那些细胞递送到患者中。
在这个实施方式中，核酸在体内给予所得的重组细胞之前引入到细胞中。这种引入可以通过本领域已知的任何方法，包括但不限于转染、电穿孔、显微注射、用含有核酸序列的病毒或噬菌体载体感染、细胞融合、染色体介导的基因转移、微细胞介导的基因转移、原生质球融合等进行实施。许多技术在本领域内用于将外源基因引入至细胞中是已知的并可以根据本发明使用，条件是接受细胞所必需的发育和生理功能不会破坏。技术应该提供核酸向细胞内的稳定转移，而使核酸通过细胞可以表达和优选可遗传的，以及通过其细胞后代可以表达。
为了基因疗法的目的，核酸可以引入的细胞包括任何所需的可用细胞类型，并且包括但不限于：上皮细胞、内皮细胞、角质形成细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、肝细胞；血细胞如T-淋巴细胞、B-淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、粒细胞；各种干细胞或祖细胞、特别是造血祖干细胞或祖细胞，例如，从骨髓、脐带血、外周血、胎儿肝脏获得的那些，等。
在优选的实施方式中，基因疗法的细胞是患者的自体细胞。
在重组细胞用于基因疗法的实施方式中，将编码多肽的核酸序列引入细胞中而使它们可以被细胞或其后代表达，并随后体内给予重组细胞而实现治疗效果。在具体的实施方式中，使用了干细胞或祖细胞。根据本发明的这个实施方式可以潜在地使用可以体外分离和维持的任何干细胞和/或祖细胞。
在具体实施方式中，为了基因疗法目的而引入的核酸包括可操作地连接到编码区的可诱导型启动子，而使核酸的表达可以通过控制合适的转录诱导子的存在或缺乏进行控制。
治疗组合物
治疗化合物的制剂通常在本领域内是已知的，并可以方便地参考《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第17版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，USA。例如，可以给予约0.05ng～约20mg/千克体重/天。剂量方案可以经过调整而提供最佳治疗响应。例如，可以每天给予几个分开的剂量，或可以按照治疗情况的紧急程度按比例降低剂量。活性化合物可以以方便的方式，例如，通过口服、静脉内(在这种情况下是水溶性的)、肌内、皮下、鼻内、眼内、皮内或栓剂途径或植入(例如，使用缓释分子通过腹膜内途径或通过使用细胞，例如，单核细胞或树突细胞在体外致敏并过继性转移至受体)给予。取决于给予途径，可能需要将肽包覆于材料中而保护其免受酶、酸和可使成分失活的其他天然条件的作用。
例如，肽的低亲脂性将允许其在胃肠道中通过可以切割肽键的酶和在胃中通过酸水解而破坏。为了通过除了非胃肠外给予之外给予所肽，它们将被包覆于材料中或与材料一起给予而防止其失活。例如，肽可以在佐剂中给予、酶抑制剂共给予或在脂质体中给予。本文考虑的佐剂包括间苯二酚、非离子表面活性剂如聚氧乙烯油基醚和正十六烷基聚乙烯醚。酶抑制剂包括胰腺胰蛋白酶抑制剂、二异丙基氟磷酸(DEP)和抑酞酶(trasylol)。脂质体包括水包油包水CGF乳剂以及常规脂质体。
活性化合物还可以胃肠外或腹膜内给予。分散体也可以在甘油液体聚乙二醇及其混合物和油中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂才能防止微生物生长。
适于可注射使用的药物形式包括无菌水性溶液(在这种情况下是水溶性的)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，形式必须是无菌的，并且必须流化至存在方便可注射性的程度。它在制作和储存条件下必须是稳定的，并且必须防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是包含，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)溶剂或分散介质，其合适的混合物和植物油。例如，在分散体的情况下通过使用包衣如卵磷脂，通过维持所需的粒径和通过使用表面活性剂可以维持合适的流动性。防止微生物的作用可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如，氯丁醇、苯酚、山梨酸、石克柳汞(theomersal)等而实现。在许多情况下，优选的是包括等渗剂，例如，糖或氯化钠。可以通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝和明胶实现可注射组合物的延时吸收。
通过将所需用量的活性化合物，根据需要与上面列举的各种其他成分一起引入合适的溶剂中，然后过滤灭菌制备无菌可注射溶液。通常而言，通过将各种无菌活性成分引入含有基础分散介质和来自上面列举的那些所需的其他成分的无菌媒介物中而制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分+来自其之前无菌过滤的溶液的任何其他所需成分的粉末。
当肽如上被适当地保护时，活性化合物可以口服给予，例如，与惰性稀释剂或与可同化的可食用载体一起口服，或其可以包封于硬或软壳明胶胶囊中，或其可以压缩成片剂，或它可以直接与饮食的食物结合。对于口服治疗给予，活性化合物可以与赋形剂混合并以可消化片剂、颊含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂等的形式使用。这样的组合物和制剂应该包含按重量计至少1％的活性化合物。组合物和制剂的百分比当然是可以变化的，并且可以方便地处于单位重量的约5％至约80％之间。在这种治疗有用的组合物中的活性化合物的用量在此范围内而使之获得合适的剂量。制备根据本发明的优选组合物或制剂，而使口服剂量单位形式含有约0.1μg～2000mg的活性化合物。
片剂、丸剂、胶囊等还可以包含以下物质：粘合剂如黄蓍胶，阿拉伯胶，玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂如硬脂酸镁；以及甜味剂如蔗糖、乳糖或糖精可以添加或调味剂如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的材料之外，它可以包含液体载体。各种其他材料可以作为包衣存在或以其他方式改变剂量单位的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊可以用虫胶、糖或两者进行包衣。糖浆或酏剂可以包含活性化合物，作为甜味剂的蔗糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯，染料和调味剂如樱桃或橙味剂。当然，用于制备任何剂量单位形式的任何材料应该是药学纯的并且在所使用的用量下基本上是无毒的。此外，活性化合物可以引入缓释制剂和制剂中。
递送系统
各种递送系统是已知的并且可以用于给予本发明的化合物，例如，包封于脂质体、微粒、微胶囊、可以表达化合物的重组细胞中，受体介导的内吞作用，作为逆转录病毒的一部分的核酸的构建或其他载体等。引入的方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、眼内、硬膜外和口服途径。化合物或组合物可以通过任何方便的途径，例如通过输注或推注(bolus injection)、通过上皮或粘膜皮层(例如，口腔粘膜，直肠和肠粘膜等)吸收进行给予并可以与其他生物活性剂一起给予。给予可以是全身性的或局部的。此外，合乎需要的是通过任何合适的途径，包括心室内和鞘内注射，将本发明的药物化合物或组合物引入中枢神经系统中；通过心室内导管，例如，连接至储池，如Ommaya池而促进心室内注射。例如，通过使用吸入器或雾化器，以及具有雾化剂的制剂，而使用肺部给予。
在具体的实施方式中，合乎需要的是，将本发明的药物化合物或组合物局部给予至需要治疗的区域；这可以通过，例如，但不限于，手术期间的局部输注，局部施用，例如，与手术后的伤口敷料结合、通过注射、通过导管、通过栓剂或通过植入物，植入物是多孔的、无孔的或凝胶状材料，包括膜如硅橡胶膜，或纤维而实现。优选当给予蛋白，包括本发明的抗体或肽时，必须小心使用蛋白不吸收的材料。在另一个实施方式中，化合物或组合物可以在囊泡，特别是脂质体中递送。在另一个实施方式中，化合物或组合物可以在控释系统中递送。在一个实施方式中，可以使用泵。在另一个实施方式中，可以使用聚合材料。在另一个实施方式中，控释系统可以放置于治疗靶标附近，由此仅需要全身剂量的一部分。
序列表自由文本
关于除a、g、c、t以外的核苷酸符号的使用，它们遵循WIPO标准ST.25，附录2，表1中的约定，其中k表示t或g；n表示a、c、t或g；m表示a或c；r表示a或g；s表示c或g；w表示a或t而y表示c或t。
MUCl受体(黏蛋白1前体，Genbank登录号：P15941)。
MTPGTQSPFFLLLLLTVLT(SEQ ID NO:2)
MTPGTQSPFFLLLLLTVLT VVTA(SEQ ID NO:3)
MTPGTQSPFFLLLLLTVLT VVTG(SEQ ID NO:4)
SEQ ID NO:2、3和4描述了将MUCl受体和短截同种型引导至细胞膜表面的N端MUC-1信号序列。可以在C端缺失最高达3个氨基酸残基，这通过SEQ ID NO:2，3和4中的变体指示。
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAAASANL(SEQ ID NO:5)描述了在其N端具有nat-PSMGFR并包括全长MUC1受体的跨膜和胞质序列的截短MUC1受体同种型。
GTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:6)描述了MUCl生长因子受体的天然一级序列(Native Primary Sequence)的胞外结构域(nat-PSMGFR–“PSMGFR”的一个实例)：
TINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:7)描述了MUCl生长因子受体的天然一级序列的胞外结构域(nat-PSMGFR–“PSMGFR”的一个实例)，在SEQ IDNO:6的N端具有单个氨基酸缺失)。
GTINVHDVETQFNQYKTEAASPYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:8)描述了具有增强稳定性的MUCl生长因子受体的天然一级序列的“SPY”功能性变体的胞外结构域(var-PSMGFR–“PSMGFR”的一个实例)。
TINVHDVETQFNQYKTEAASPYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:9)描述了具有增强稳定性的MUCl生长因子受体的天然一级序列的“SPY”功能性变体的胞外结构域(var-PSMGFR-“PSMGFR”的一个实例)，在SEQ ID NO:8的C端具有单个氨基酸缺失。
tgtcagtgccgccgaaagaactacgggcagctggacatctttccagcccgggatacctaccatcctatgagcgagtaccccacctaccacacccatgggcgctatgtgccccctagcagtaccgatcgtagcccctatgagaaggtttctgcaggtaacggtggc agcagcctctcttacacaaacccagcagtggcagccgcttctgccaacttg(SEQID NO:10)描述了MUCl细胞质结构域核苷酸序列。
CQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAAASANL(SEQ ID NO:ll)描述了MUCl细胞质结构域氨基酸序列。
gagatcctgagacaatgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagcttttattttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgataacctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttttctcgacaactggtattaattgactatggggatcaatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggtatgttgaatacactatattcagtacattttgttaataggagagcaatgtttattttcttgatgtactttatgtatagaaaataa(SEQ ID NO:12)描述了NME7核苷酸序列(NME7：Genbank登录号AB209049)。
DPETMNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGMLNTLYSVHFVNRRAMFIFLMYFMYRK(SEQ ID NO:13)描述了NME7氨基酸序列(NME7：Genbank登录号AB209049)。
atggtgctactgtctactttagggatcgtctttcaaggcgaggggcctcctatctcaagctgtgatacaggaaccatggccaactgtgagcgtaccttcattgcgatcaaaccagatggggtccagcggggtcttgtgggagagattatcaagcgttttgagcagaaaggattccgccttgttggtctgaaattcatgcaagcttccgaagatcttctcaaggaacactacgttgacctgaaggaccgtccattctttgccggcctggtgaaatacatgcactcagggccggtagttgccatggtctgggaggggctgaatgtggtgaagacgggccgagtcatgctcggggagaccaaccctgcagactccaagcctgggaccatccgtggagacttctgcatacaagttggcaggaacattatacatggcagtgattctgtggagagtgcagagaaggagatcggcttgtggtttcaccctgaggaactggtagattacacgagctgtgctcagaactggatctatgaatga(SEQ ID NO:14)描述了NM23-H1核苷酸序列(NM23-H1：Genbank登录号AF487339)。
MVLLSTLGIVFQGEGPPISSCDTGTMANCERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFEQKGFRLVGLKFMQASEDLLKEHYVDLKDRPFFAGLVKYMHSGPVVAMVWEGLNVVKTGRVMLGETNPADSKPGTIRGDFCIQVGRNIIHGSDSVESAEKEIGLWFHPEEL VDYTSCAQNWIYE(SEQ ID NO:15)NM23-H1描述了氨基酸序列(NM23-Hl：Genbank登录号AF487339)。
atggtgctactgtctactttagggatcgtctttcaaggcgaggggcctcctatctcaagctgtgatacaggaaccatggccaactgtgagcgtaccttcattgcgatcaaaccagatggggtccagcggggtcttgtgggagagattatcaagcgttttgagcagaaaggattccgccttgttggtctgaaattcatgcaagcttccgaagatcttctcaaggaacactacgttgacctgaaggaccgtccattctttgccggcctggtgaaatacatgcactcagggccggtagttgccatggtctgggaggggctgaatgtggtgaagacgggccgagtcatgctcggggagaccaaccctgcagactccaagcctgggaccatccgtggagacttctgcatacaagttggcaggaacattatacatggcggtgattctgtggagagtgcagagaaggagatcggcttgtggtttcaccctgaggaactggtagattacacgagctgtgctcagaactggatctatgaatga(SEQ ID NO:16)描述了NM23-H1S120G突变核苷酸序列(NM23-Hl：Genbank登录号AF487339)。
MVLLSTLGIVFQGEGPPISSCDTGTMANCERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFEQKGFRLVGLKFMQASEDLLKEHYVDLKDRPFFAGLVKYMHSGPVVAMVWEGLNVVKTGRVMLGETNPADSKPGTIRGDFCIQVGRNIIHGGDSVESAEKEIGLWFHPEEL VDYTSCAQNWIYE(SEQ ID NO:17)描述了NM23-H1S120G突变氨基酸序列(NM23-H1：Genbank登录号AF487339)。
atggccaacctggagcgcaccttcatcgccatcaagccggacggcgtgcagcgcggcctggtgggcgagatcatcaagcgcttcgagcagaagggattccgcctcgtggccatgaagttcctccgggcctctgaagaacacctgaagcagcactacattgacctgaaagaccgaccattcttccctgggctggtgaagtacatgaactcagggccggttgtggccatggtctgggaggggctgaacgtggtgaagacaggccgagtgatgcttggggagaccaatccagcagattcaaagccaggcaccattcgtggggacttctgcattcaggttggcaggaacatcattcatggcagtgattcagtaaaaagtgctgaaaaagaaatcagcctatggtttaagcctgaagaactggttgactacaagtcttgtgctcatgactgggtctatgaataa(SEQ ID NO:18)描述了NM23-H2核苷酸序列(NM23-H2：Genbank登录号AK313448)。
MANLERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFEQKGFRLVAMKFLRASEEHLKQHYIDLKDRPFFPGLVKYMNSGPVVAMVWEGLNVVKTGRVMLGETNPADSKPGTIRGDFCIQVGRNIIHGSDSVKSAEKEISLWFKPEELVDYKSCAHDWVYE(SEQ ID NO:19)描述了NM23-H2氨基酸序列(NM23-H2：Genbank登录号AK313448)。
对于大肠杆菌表达优化的人NM23-H7-2序列：
(DNA)
atgcatgacgttaaaaatcaccgtacctttctgaaacgcacgaaatatgataatctgcatctggaagacctgtttattggcaacaaagtcaatgtgttctctcgtcagctggtgctgatcgattatggcgaccagtacaccgcgcgtcaactgggtagtcgcaaagaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatggtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttcccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaatttaccaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttcaaaattctggataattga(SEQ ID NO:20)
(氨基酸)
MHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN-(SEQ ID NO:21)
人NME7-A：
(DNA)
atggaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgtttttttga(SEQ ID NO:22)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIR NAAHGPDSFASAAREMELFF-(SEQ ID NO:23)
人NME7-A1：
(DNA)
atggaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttacttga(SEQ IDNO:24)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFT-(SEQ ID NO:25)
人NME7-A2：
(DNA)
atgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagcttttattttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgataacctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttttctcgacaactggtattaattgactatggggatcaatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattct tttgcttctgcggccagagaaatggagttgtttttttga(SEQ ID NO:26)
(氨基酸)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFF-(SEQ ID NO:27)
人NME7-A3：
(DNA)
atgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagcttttattttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgataacctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttttctcgacaactggtattaattgactatggggatcaatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttacttga(SEQ ID NO:28)
(氨基酸)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFT-(SEQ ID NO:29)
人NME7-B：
(DNA)
atgaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttctga(SEQ ID NO:30)
(氨基酸)
MNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTL RAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF-(SEQ IDNO:31)
人NME7-B 1：
(DNA)
atgaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttcaagatcttggataattagtga(SEQ ID NO:32)
(氨基酸)
MNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN—(SEQID NO:33)
人NME7-B2：
(DNA)
atgccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttctga(SEQ ID NO:34)
(氨基酸)
MPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF-(SEQ ID NO:35)
人NME7-B3：
(DNA)
atgccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttcaagatcttggataattagtga(SEQ ID NO:36)
(氨基酸)
MPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN-(SEQ ID NO:37)
人NME7-AB：
(DNA)
atggaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttcaagatcttggataattagtga(SEQ ID NO:38)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN--(SEQ ID NO:39)
人NME7-AB 1：
(DNA)
atggaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttctga(SEQ ID NO:40)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF-(SEQ ID NO:41)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A序列：
(DNA)
atggaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatggtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttctga(SEQ ID NO:42)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFF-(SEQ ID NO:43)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A1序列：
(DNA)
atggaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatggtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttcccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaatttacctga(SEQ IDNO:44)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFT-(SEQ ID NO:45)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A2序列：
(DNA)
atgaatcactccgaacgctttgtttttatcgccgaatggtatgacccgaatgcttccctgctgcgccgctacgaactgctgttttatccgggcgatggtagcgtggaaatgcatgacgttaaaaatcaccgtacctttctgaaacgcacgaaatatgataatctgcatctggaagacctgtttattggcaacaaagtcaatgtgttctctcgtcagctggtgctgatcgattatggcgaccagtacaccgcgcgtcaactgggtagtcgcaaagaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatg gtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttctga(SEQ ID NO:46)
(氨基酸)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFF-(SEQ ID NO:47)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A3序列：
(DNA)
atgaatcactccgaacgctttgtttttatcgccgaatggtatgacccgaatgcttccctgctgcgccgctacgaactgctgttttatccgggcgatggtagcgtggaaatgcatgacgttaaaaatcaccgtacctttctgaaacgcacgaaatatgataatctgcatctggaagacctgtttattggcaacaaagtcaatgtgttctctcgtcagctggtgctgatcgattatggcgaccagtacaccgcgcgtcaactgggtagtcgcaaagaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatggtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttcccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaattt acctga(SEQ ID NO:48)
(氨基酸)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSS GGCGPANTAKFT-(SEQ ID NO:49)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B序列：
(DNA)
atgaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttctga(SEQ ID NO:50)
(氨基酸)
MNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTL RAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF-(SEQ IDNO:51)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B 1序列：
(DNA)
atgaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttcaaaattctggataattga(SEQ ID NO:52)
(氨基酸)
MNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN-(SEQID NO:53)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B2序列：
(DNA)
atgccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaatttaccaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttctga(SEQ ID NO:54)
(氨基酸)
MPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF-(SEQ ID NO:55)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B3序列：
(DNA)
atgccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaatttaccaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttcaaaattctggataattga(SEQ ID NO:56)
(氨基酸)
MPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN-(SEQ ID NO:57)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-AB序列：
(DNA)
atggaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatggtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttcccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaatttaccaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttcaaaattctggataattga(SEQ ID NO:58)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN-(SEQ ID NO:59)
对于大肠杆菌表达优化的人NME7-AB1序列：
(DNA)
Atggaaaaaacgctggccctgattaaaccggatgcaatctccaaagctggcgaaattatcgaaattatcaacaaagcgggtttcaccatcacgaaactgaaaatgatgatgctgagccgtaaagaagccctggattttcatgtcgaccaccagtctcgcccgtttttcaatgaactgattcaattcatcaccacgggtccgattatcgcaatggaaattctgcgtgatgacgctatctgcgaatggaaacgcctgctgggcccggcaaactcaggtgttgcgcgtaccgatgccagtgaatccattcgcgctctgtttggcaccgatggtatccgtaatgcagcacatggtccggactcattcgcatcggcagctcgtgaaatggaactgtttttcccgagctctggcggttgcggtccggcaaacaccgccaaatttaccaattgtacgtgctgtattgtcaaaccgcacgcagtgtcagaaggcctgctgggtaaaattctgatggcaatccgtgatgctggctttgaaatctcggccatgcagatgttcaacatggaccgcgttaacgtcgaagaattctacgaagtttacaaaggcgtggttaccgaatatcacgatatggttacggaaatgtactccggtccgtgcgtcgcgatggaaattcagcaaaacaatgccaccaaaacgtttcgtgaattctgtggtccggcagatccggaaatcgcacgtcatctgcgtccgggtaccctgcgcgcaatttttggtaaaacgaaaatccagaacgctgtgcactgtaccgatctgccggaagacggtctgctggaagttcaatactttttctga(SEQ ID NO:60)
(氨基酸)
MEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF-(SEQ ID NO:61)
小鼠NME6
(DNA)
Atgacctccatcttgcgaagtccccaagctcttcagctcacactagccctgatcaagcctgatgcagttgcccacccactgatcctggaggctgttcatcagcagattctgagcaacaagttcctcattgtacgaacgagggaactgcagtggaagctggaggactgccggaggttttaccgagagcatgaagggcgttttttctatcagcggctggtggagttcatgacaagtgggccaatccgagcctatatccttgcccacaaagatgccatccaactttggaggacactgatgggacccaccagagtatttcgagcacgctatatagccccagattcaattcgtggaagtttgggcctcactgacacccgaaatactacccatggctcagactccgtggtttccgccagcagagagattgcagccttcttccctgacttcagtgaacagcgctggtatgaggaggaggaaccccagctgcggtgtggtcctgtgcactacagtccagaggaaggtatccactgtgcagctgaaacaggaggccacaaacaacctaacaaaacctag(SEQ ID NO:62)
(氨基酸)
MTSILRSPQALQLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRTRELQWKLEDCRRFYREHEGRFFYQRLVEFMTSGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARYIAPDSIRGSLGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPVHYSPEEGIHCAAETGGHKQPNKT-(SEQ ID NO:63)
人NME6：
(DNA)
Atgacccagaatctggggagtgagatggcctcaatcttgcgaagccctcaggctctccagctcactctagccctgatcaagcctgacgcagtcgcccatccactgattctggaggctgttcatcagcagattctaagcaacaagttcctgattgtacgaatgagagaactactgtggagaaaggaagattgccagaggttttaccgagagcatgaagggcgttttttctatcagaggctggtggagttcatggccagcgggccaatccgagcctacatccttgcccacaaggatgccatccagctctggaggacgctcatgggacccaccagagtgttccgagcacgccatgtggccccagattctatccgtgggagtttcggcctcactgacacccgcaacaccacccatggttcggactctgtggtttcagccagcagagagattgcagccttcttccctgacttcagtgaacagcgctggtatgaggaggaagagccccagttgcgctgtggccctgtgtgctatagcccagagggaggtgtccactatgtagctggaacaggaggcctaggaccagcctga(SEQ ID NO:64)
(氨基酸)
MTQNLGSEMASILRSPQALQLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPVCYSPEGGVHYVAGTGGLGPA-(SEQ ID NO:65)
人NME6 1：
(DNA)
Atgacccagaatctggggagtgagatggcctcaatcttgcgaagccctcaggctctccagctcactctagccctgatcaagcctgacgcagtcgcccatccactgattctggaggctgttcatcagcagattctaagcaacaagttcctgattgtacgaatgagagaactactgtggagaaaggaagattgccagaggttttaccgagagcatgaagggcgttttttctatcagaggctggtggagttcatggccagcgggccaatccgagcctacatccttgcccacaaggatgccatccagctctggaggacgctcatgggacccaccagagtgttccgagcacgccatgtggccccagattctatccgtgggagtttcggcctcactgacacccgcaacaccacccatggttcggactctgtggtttcagccagcagagagattgcagccttcttccctgacttcagtgaacagcgctggtatgaggaggaagagccccagttgcgctgtggccctgtgtga(SEQID NO:66)
(氨基酸)
MTQNLGSEMASILRSPQALQLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPV-(SEQ ID NO:67)
人NME6 2：
(DNA)
Atgctcactctagccctgatcaagcctgacgcagtcgcccatccactgattctggaggctgttcatcagcagattctaagcaacaagttcctgattgtacgaatgagagaactactgtggagaaaggaagattgccagaggttttaccgagagcatgaagggcgttttttctatcagaggctggtggagttcatggccagcgggccaatccgagcctacatccttgcccacaaggatgccatccagctctggaggacgctcatgggacccaccagagtgttccgagcacgccatgtggccccagattctatccgtgggagtttcggcctcactgacacccgcaacaccacccatggttcggactctgtggtttcagccagcagagagattgcagccttcttccctgacttcagtgaacagcgctggtatgaggaggaagagccccagttgcgctgtggccctgtgtga(SEQ ID NO:68)
(氨基酸)
MLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPV-(SEQ ID NO:69)
人NME6 3：
(DNA)
Atgctcactctagccctgatcaagcctgacgcagtcgcccatccactgattctggaggctgttcatcagcagattctaagcaacaagttcctgattgtacgaatgagagaactactgtggagaaaggaagattgccagaggttttaccgagagcatgaagggcgttttttctatcagaggctggtggagttcatggccagcgggccaatccgagcctacatccttgcccacaaggatgccatccagctctggaggacgctcatgggacccaccagagtgttccgagcacgccatgtggccccagattctatccgtgggagtttcggcctcactgacacccgcaacaccacccatggttcggactctgtggtttcagccagcagagagattgcagccttcttccctgacttcagtgaacagcgctggtatgaggaggaagagccccagttgcgctgtggccctgtgtgctatagcccagagggaggtgtccactatgtagctggaacaggaggcctagga ccagcctga(SEQ ID NO:70)
(氨基酸)
MLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPVCYSPEGGVHY VAGTGGLGPA-(SEQ ID NO:71)
对于大肠杆菌表达优化的人NME6序列：
(DNA)
Atgacgcaaaatctgggctcggaaatggcaagtatcctgcgctccccgcaagcactgcaactgaccctggctctgatcaaaccggacgctgttgctcatccgctgattctggaagcggtccaccagcaaattctgagcaacaaatttctgatcgtgcgtatgcgcgaactgctgtggcgtaaagaagattgccagcgtttttatcgcgaacatgaaggccgtttcttttatcaacgcctggttgaattcatggcctctggtccgattcgcgcatatatcctggctcacaaagatgcgattcagctgtggcgtaccctgatgggtccgacgcgcgtctttcgtgcacgtcatgtggcaccggactcaatccgtggctcgttcggtctgaccgatacgcgcaataccacgcacggtagcgactctgttgttagtgcgtcccgtgaaatcgcggcctttttcccggacttctccgaacagcgttggtacgaagaagaagaaccgcaactgcgctgtggcccggtctgttattctccggaaggtggtgtccattatgtggcgggcacgggtggtctgggtccggcatga(SEQ ID NO:72)
(氨基酸)
MTQNLGSEMASILRSPQALQLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPVCYSPEGGVHYVAGTGGLGPA-(SEQ ID NO:73)
对于大肠杆菌表达优化的人NME6 1序列：
(DNA)
Atgacgcaaaatctgggctcggaaatggcaagtatcctgcgctccccgcaagcactgcaactgaccctggctctgatcaaaccggacgctgttgctcatccgctgattctggaagcggtccaccagcaaattctgagcaacaaatttctgatcgtgcgtatgcgcgaactgctgtggcgtaaagaagattgccagcgtttttatcgcgaacatgaaggccgtttcttttatcaacgcctggttgaattcatggcctctggtccgattcgcgcatatatcctggctcacaaagatgcgattcagctgtggcgtaccctgatgggtccgacgcgcgtctttcgtgcacgtcatgtggcaccggactcaatccgtggctcgttcggtctgaccgatacgcgcaataccacgcacggtagcgactctgttgttagtgcgtcccgtgaaatcgcggcctttttcccggacttctccgaacagcgttggtacgaagaagaagaaccgcaactgcgctgtggcccggtctga(SEQID NO:74)
(氨基酸)
MTQNLGSEMASILRSPQALQLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEE PQLRCGPV-(SEQ ID NO:75)
对于大肠杆菌表达优化的人NME6 2序列：
(DNA)
Atgctgaccctggctctgatcaaaccggacgctgttgctcatccgctgattctggaagcggtccaccagcaaattctgagcaacaaatttctgatcgtgcgtatgcgcgaactgctgtggcgtaaagaagattgccagcgtttttatcgcgaacatgaaggccgtttcttttatcaacgcctggttgaattcatggcctctggtccgattcgcgcatatatcctggctcacaaagatgcgattcagctgtggcgtaccctgatgggtccgacgcgcgtctttcgtgcacgtcatgtggcaccggactcaatccgtggctcgttcggtctgaccgatacgcgcaataccacgcacggtagcgactctgttgttagtgcgtcccgtgaaatcgcggcctttttcccggacttctccgaacagcgttggtacgaagaagaagaaccgcaactgcgctgtggcccggtctga(SEQ ID NO:76)
(氨基酸)
MLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPV-(SEQ ID NO:77)
对于大肠杆菌表达优化的人NME6 3序列：
(DNA)
Atgctgaccctggctctgatcaaaccggacgctgttgctcatccgctgattctggaagcggtccaccagcaaattctgagcaacaaatttctgatcgtgcgtatgcgcgaactgctgtggcgtaaagaagattgccagcgtttttatcgcgaacatgaaggccgtttcttttatcaacgcctggttgaattcatggcctctggtccgattcgcgcatatatcctggctcacaaagatgcgattcagctgtggcgtaccctgatgggtccgacgcgcgtctttcgtgcacgtcatgtggcaccggactcaatccgtggctcgttcggtctgaccgatacgcgcaataccacgcacggtagcgactctgttgttagtgcgtcccgtgaaatcgcggcctttttcccggacttctccgaacagcgttggtacgaagaagaagaaccgcaactgcgctgtggcccggtctgttattctccggaaggtggtgtccattatgtggcgggcacgggtggtctgggtccggcatga(SEQ ID NO:78)
(氨基酸)
MLTLALIKPDAVAHPLILEAVHQQILSNKFLIVRMRELLWRKEDCQRFYREHEGRFFYQRLVEFMASGPIRAYILAHKDAIQLWRTLMGPTRVFRARHVAPDSIRGSFGLTDTRNTTHGSDSVVSASREIAAFFPDFSEQRWYEEEEPQLRCGPVCYSPEGGVHYVAGTGGLGPA-(SEQ ID NO:79)
OriGene-NME7-l全长
(DNA)
gacgttgtatacgactcctatagggcggccgggaattcgtcgactggatccggtaccgaggagatctgccgccgcgatcgccatgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagcttttattttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgataacctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttctctcgacaactggtattaattgactatggggatcaatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggcctattagaggttcaatacttcttcaagatcttggataatacgcgtacgcggccgctcgagcagaaactcatctcagaagaggatctggcagcaaatgatatcctggattacaaggatgacgacgataaggtttaa(SEQ ID NO:80)
(氨基酸)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDNTRTRRLEQKLISEEDLAANDILDYKDDDDKV(SEQ ID NO:81)
Abnova NME7-1全长
(氨基酸)
MNHSERFVFIAEWYDPNASLLRRYELLFYPGDGSVEMHDVKNHRTFLKRTKYDNLHLEDLFIGNKVNVFSRQLVLIDYGDQYTARQLGSRKEKTLALIKPDAISKAGEIIEIINKAGFTITKLKMMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN(SEQ ID NO:82)
Abnova部分NME7-B
(氨基酸)
DRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKIL(SEQ ID NO:83)
组氨酸标签
(ctcgag)caccaccaccaccaccactga(SEQ ID NO:84)
Strept II标签
(accggt)tggagccatcctcagttcgaaaagtaatga(SEQ ID NO:85)
N-10肽：
QFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGA(SEQ ID NO:86)
C-10肽
GTINVHD VETQFNQYKTE AASRYNLTISD VS VSD V(SEQ ID NO：87)
LALIKPDA(SEQ ID NO:88)
MMMLSRKEALDFHVDHQS(SEQ ID NO:89)
ALDFHVDHQS(SEQ ID NO:90)
EILRDD AICEWKRL(SEQ ID NO:91)
FNELIQFITTGP(SEQ ID NO:92)
RDDAICEW(SEQ ID NO:93)
SGVARTDASESIRALFGTDGIRNAA(SEQ ID NO:94)
ELFFPSSGG(SEQ ID NO:95)
KFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMA(SEQ ID NO:96)
LMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVT(SEQ ID NO:97)
EFYEVYKGVVTEYHD(SEQ ID NO:98)
EIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNA(SEQ ID NO:99)
YSGPCVAM(SEQ ID NO:100)
FREFCGP(SEQ ID NO:101)
VHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDN(SEQ ID NO:102)
IQNAVHCTD(SEQ ID NO:103)
TDLPEDGLLEVQYFFKILDN(SEQ ID NO:104)
PEDGLLEVQYFFK(SEQ ID NO:105)
EIINKAGFTITK(SEQ ID NO:106)
MLSRKEALDFHVDHQS(SEQ ID NO:107)
NELIQFITT(SEQ ID NO:108)
EILRDD AICEWKRL(SEQ ID NO:109)
SGVARTDASESIRALFGTDGI(SEQ ID NO:110)
SGVARTDASES(SEQ ID NO:111)
ALFGTDGI(SEQ ID NO:112)
NCTCCIVKPHAVSE(SEQ ID NO:113)
LGKILMAIRDA(SEQ ID NO:114)
EISAMQMFNMDRVNVE(SEQ ID NO:115)
EVYKGVVT(SEQ ID NO:116)
EYHDMVTE(SEQ ID NO:117)
EFCGPADPEIARHLR(SEQ ID NO:118)
AIFGKTKIQNAV(SEQ ID NO:119)
LPEDGLLEVQYFFKILDN(SEQ ID NO:120)
GPDSFAS AAREMELFFP(SEQ ID NO:121)
衍生自人NME7的免疫化肽
ICEWKRL(SEQ ID NO:122)
LGKILMAIRDA(SEQ ID NO:123)
HA VSEGLLGK(SEQ ID NO:124)
VTEMYSGP(SEQ ID NO:125)
NATKTFREF(SEQ ID NO:126)
AIRDAGFEI(SEQ ID NO:127)
AICEWKRLLGPAN(SEQ ID NO:128)
DHQSRPFF(SEQ ID NO:129)
AICEWKRLLGPAN(SEQ ID NO:130)
VDHQSRPF(SEQ ID NO:131)
PDSFAS(SEQ ID NO:132)
KAGEIIEIINKAGFTITK(SEQ ID NO:133)
衍生自人NMEl的免疫化肽
MANCERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFE(SEQ ID NO:134)
VDLKDRPF(SEQ ID NO:135)
HGSDSVESAEKEIGLWF(SEQ ID NO:136)
ERTFIAIKPDGVQRGLVGEIIKRFE(SEQ ID NO:137)
VDLKDRPFFAGLVKYMHSGPVVAMVWEGLN(SEQ ID NO:138)
NIIHGSDSVESAEKEIGLWFHPEELV(SEQ ID NO:139)
KPDGVQRGLVGEII(SEQ ID NO:140)
衍生自人NME7的免疫化肽，但其并不结合NMEl
MLSRKEALDFHVDHQS(SEQ ID NO:141)肽Al
SGVARTDASES(SEQ ID NO:142)肽A2
DAGFEISAMQMFNMDRVNVE(SEQ ID NO:143)肽B 1
EVYKGVVTEYHDMVTE(SEQ ID NO:144)肽B2
AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:145)肽B3
人NME7a
(DNA)
atgaatcatagtgaaagattcgttttcattgcagagtggtatgatccaaatgcttcacttcttcgacgttatgagcttttattttacccaggggatggatctgttgaaatgcatgatgtaaagaatcatcgcacctttttaaagcggaccaaatatgataacctgcacttggaagatttatttataggcaacaaagtgaatgtcttttctcgacaactggtattaattgactatggggatcaatatacagctcgccagctgggcagtaggaaagaaaaaacgctagccctaattaaaccagatgcaatatcaaaggctggagaaataattgaaataataaacaaagctggatttactataaccaaactcaaaatgatgatgctttcaaggaaagaagcattggattttcatgtagatcaccagtcaagaccctttttcaatgagctgatccagtttattacaactggtcctattattgccatggagattttaagagatgatgctatatgtgaatggaaaagactgctgggacctgcaaactctggagtggcacgcacagatgcttctgaaagcattagagccctctttggaacagatggcataagaaatgcagcgcatggccctgattcttttgcttctgcggccagagaaatggagttgttttttccttcaagtggaggttgtgggccggcaaacactgctaaatttactaattgtacctgttgcattgttaaaccccatgctgtcagtgaaggactgttgggaaagatcctgatggctatccgagatgcaggttttgaaatctcagctatgcagatgttcaatatggatcgggttaatgttgaggaattctatgaagtttataaaggagtagtgaccgaatatcatgacatggtgacagaaatgtattctggcccttgtgtagcaatggagattcaacagaataatgctacaaagacatttcgagaattttgtggacctgctgatcctgaaattgcccggcatttacgccctggaactctcagagcaatctttggtaaaactaagatccagaatgctgttcactgtactgatctgccagaggatggc ctattagaggttcaatacttcttcaagatcttggataattag(SEQ ID NO:146)
(氨基酸)
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人NME7b
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人NME7-AB
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人NME7-X1
(DNA)
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人NME7a(对于大肠杆菌表达优化的)
(DNA)
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人NME7b(对于大肠杆菌表达优化的)
(DNA)
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人NME7-AB(对于大肠杆菌表达优化的)
(DNA)
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(氨基酸)
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人NME7-X1(对于大肠杆菌表达优化的)
(DNA)
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(氨基酸)
MMMLSRKEALDFHVDHQSRPFFNELIQFITTGPIIAMEILRDDAICEWKRLLGPANSGVARTDASESIRALFGTDGIRNAAHGPDSFASAAREMELFFPSSGGCGPANTAKFTNCTCCIVKPHAVSEGLLGKILMAIRDAGFEISAMQMFNMDRVNVEEFYEVYKGVVTEYHDMVTEMYSGPCVAMEIQQNNATKTFREFCGPADPEIARHLRPGTLRAIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFFKILDNTG(SEQ ID NO:161)
NME7的DM10结构域
(氨基酸)
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实施例
实施例1–基础无血清培养基(“MM”)的组分(500mL)
400mL DME/F 12/GlutaM AX I(Invitrogen#10565-018)
100mL Knockout血清替代物(KO-SR，Invitrogen#10828-028)
5mL 100×MEM非必需氨基酸溶液(Invitrogen#11140-050)
0.9mL(0.1mM)β-巯基乙醇(55mM原液，Invitrogen#21985-023)
实施例2-对于NMEl、NME6和NME7的存在探测癌细胞和干细胞
在这一系列的实验中，我们探测了NME6和NME7在干细胞和癌细胞中的表达。此外，我们确定了MUC1*作为NME7的靶标。我们首先在细胞裂解物上进行蛋白质免疫印迹分析测试以确定NME1、NME6和NME7的存在或不存在。在图1A中，通过SDS-PAGE分离来自以下各项的裂解物：BGO1v人胚胎干细胞，其在用抗MUC1*抗体涂覆的表面上培养于NME1二聚体中(泳道1)或在MEF上培养于bFGF中(泳道2)，或T47D人乳癌细胞裂解物(泳道3)或作为阳性对照的NME1-wt，然后用抗NME1特异性抗体进行探测。结果表明NME1在人ES细胞中强烈表达，无论其是否培养于NME1二聚体或bFGF中，并且强烈表达于T47D癌细胞中。通过SDS-PAGE分离出相同的细胞裂解物，并随后用抗NME6特异性抗体(Abnova的抗NME6)探测。未检测出NME6(数据未显示)，然而，其后来在更浓的样品中检测出(参见图2)。
在图1B中，通过SDS-PAGE分离出相同的细胞裂解物，并随后用抗NME7特异性抗体(Santa Cruz Biotechnology,Inc的nm23-H7B9)探测。结果表明NME7强烈表达于在抗MUC1*抗体表面上培养于NME1二聚体中的人ES细胞中(泳道1)，弱表达于在MEF上培养于bFGF中的相同的ES细胞中(泳道2)，并强烈表达于乳癌细胞中(泳道3)。加入了NME1的泳道4是空白，表明NME7抗体不与NME1交叉反应。NME7以较大程度表达于在NME1二聚体中培养的干细胞中的事实(这是我们已经证明其表达标志物表明它们相比于在bFGF中培养的细胞是处于更原始的状态)意味着与其在始发态细胞中的表达相比，NME7在原始态细胞中会更高的水平表达。
为了确定NME7是否也起到具有MUC1*作为其靶受体的生长因子的作用，我们进行拉下(pull-down)分析测试。在这些实验中，将合成的MUC1*胞外结构域肽(带His标签的PSMGFR序列)固定于NTA-Ni磁珠上。用在涂覆有抗MUC1*抗体的表面上培养于NME1二聚体中(泳道1)或在MEF上培养于bFGF中(泳道2)的BGOlv人胚胎干细胞的细胞裂解物或T47D人乳癌细胞(泳道3)的裂解物孵育这些珠子。珠子经过洗涤并通过加入咪唑释放所捕获的蛋白。通过SDS-PAGE分离出蛋白，并随后用抗NMEl抗体(图1C)或NME7抗体(图1D)进行探测。结果表明NME7结合至MUC1*胞外结构域肽。这意味着在干细胞和癌细胞中，NME7经由其两个NDPK结构域的部分，通过使MUC1*胞外结构域二聚而激活多能途径。
实施例3-MUC1拉下分析测试证明NME1、NME6和NME7都结合MUC1物质蛋白。
在一组细胞上实施使用针对MUC1*细胞质尾的抗体(Ab-5)的拉下测定。结果如图2A-图2F中所示。通过SDS-PAGE分离出由MUC1抗体拉下的蛋白，然后使用蛋白质免疫印迹技术，用NME1、NME6和NME7的特异性抗体进行探测。MUC1*阳性乳癌细胞系T47D细胞(ATCC)、人胚胎干细胞系BGOlv(LifeTechnologies)、人ES细胞(HES-3，BioTime Inc.)、人iPS细胞(SCIOIA-I，System Biosciences Inc.)和T47D癌细胞根据ATCC方案生长于RPMI-1640(ATCC)+10％FBS(VWR)中。所有干细胞都培养于含有8nM NM23-RS(重组NME1S120G二聚体)的基础干细胞培养基“MM”中。将干细胞生长于用12.5μg/mL抗MUCl*C3mab涂覆的塑料制品上。在冰上用200μL RIPA缓冲液裂解细胞10min。通过离心除去细胞碎片后，将上清液用于免疫共沉淀分析测试中。使用与Dynabeads蛋白G(Life Technologies)偶联的、识别MUC1细胞质尾的Ab-5抗体(抗MUC-1Ab-5，Thermo Scientific)拉下MUC1*。珠子用RIPA缓冲液清洗两次并重新悬浮于还原缓冲液中。将上清液的样品经受还原性SDS-PAGE，接着将蛋白转移至PVDF膜。在图2中，随后用以下物质探测膜：A)抗NM23-H1(NME1)抗体(C-20，Santa CruzBiotechnology)；B)抗NME6(Abnova)；或C)抗NM23-H7抗体(B-9，Santa CruzBiotechnology)；D)使用超级信号(Supersignal)(Pierce)增强NME6的染色；和E)使用超级信号(Supersignal)增强NME7的染色。
在用其各自偶联于HRP的二级抗体孵育之后，蛋白通过化学发光法进行检测。照片表明天然NME1、NME6和NME7存在于MUC1*阳性乳癌细胞、人ES细胞和人iPS细胞中，并且它们结合MUC1*。注意，HES-3沉淀中存在的细胞数量小于其他样品中存在的细胞数量。
实施例4-在胚胎干细胞和iPS细胞中检测NME7
结果如图3中所示。人ES细胞(BGO1v和HES-3)培养于基于NME的培养基中，其中细胞接种于抗MUC1*抗体层上。为了识别NME7物质，将细胞收获并用补充有蛋白酶抑制剂(Pierce)的RIPA缓冲液(Pierce)裂解。通过在12％SDS-PAGE还原性凝胶上电泳而分离细胞裂解物(20uL)并转移至PVDF膜(GE Healthcare)。印迹用含有3％牛奶的PBS-T封闭，并随后用一级抗体(抗NM23-H7克隆B-9，Santa Cruz Biotechnology)在4℃下孵育过夜。用PBS-T洗涤后，将膜与辣根过氧化物酶(HRP)缀合的二级抗体(山羊抗小鼠，Pierce)在室温下培养1h。用Immun-Star化学发光(Immun-Star Chemiluminescence)试剂盒(Bio-Rad)检测信号。图3A示出来自人干细胞的裂解物含有三种NME7物质：42kDa的全长和～33kDa和～30kDa的两种较低分子量NME7物质。图3B和图3C示出分泌的NME7物质(B)和保留于细胞中的那些物质(C)之间的差异。图3B示出仅仅30至33kDa NME7物质从细胞中分泌。图3C示出那些相同细胞的裂解物同时具有全长形式和可以是裂解产物或两者的可变同种型的较低分子量物质。对于部分(B)，通过在12％SDS-PAGE还原性凝胶上电泳而分离iPS条件培养基(20uL)，并转移至PVDF膜(GE Healthcare)。印迹用含有3％的牛奶的PBS-T封闭并随后用一级抗体(抗NM23-H7克隆B-9，Santa Cruz Biotechnology)在4℃孵育过夜。在用PBS-T洗涤后，将膜用辣根过氧化物酶(HRP)缀合的二级抗体(山羊抗小鼠，Pierce)在室温下孵育1h。用Immun-Star化学发光(Immun-Star Chemiluminescence)试剂盒(Bio-Rad)检测信号。对于部分(C)，类似地进行实验，但使用细胞裂解物代替条件培养基。
实施例5-产生蛋白构建体
为了产生重组NME7，首先，制备构建体以制备能够有效和以可溶形式表达的重组NME7。第一种方法是制备会编码天然NME7(a)或具有N端缺失的可变剪接变体NME7(b)的构建体。在一些情况下，构建体携带组氨酸标签或strep标签以辅助纯化。NME7-a，在大肠杆菌中表达较差的全长NME7，和NME7-b在大肠杆菌中完全不表达。然而，制备的新构建体中缺失DM10序列，并且NME7基本上包含具有33kDa的计算分子量的NDPK A和B结构域。
这种新的NME7-AB在大肠杆菌中表达非常充分，并作为可溶性蛋白存在。首先在NTA-Ni柱上纯化NME7-AB，并随后在Sephadex 200柱上通过尺寸排阻色谱法(FPLC)进一步纯化(图4A)。收集各级分并通过SDS-PAGE测试以确定具有NME7-AB的最高和最纯表达的级分(图4B)。图4C示出最纯的合并级分的FPLC图谱。然后测试纯化的NME7-AB蛋白，并表明其完全支持人干细胞的生长，并进一步将其回复至最原始的前X失活(pre-X-inactivation)状态。纯化的NME7-AB也表现出加速癌细胞的生长。
实施例6-证明NME7-AB同时结合两个MUC1*胞外结构域肽的ELISA分析测试
结果如图5中所示。使用Imject Maleimide活化的BSA试剂盒(Thermo Fisher)将携带C端半胱氨酸的PSMGFR肽(PSMGFR-Cys)共价偶联至BSA。将PSMGFR-Cys偶联的BSA在0.1M碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液pH 9.6中稀释至10μg/mL并取50μL加入96-井孔板的每个孔井中。在4℃下孵育过夜后，将孔板用PBS-T洗涤两次并加入3％BSA溶液以封闭孔井上的剩余结合位点。在室温下1h后，孔板用PBS-T洗涤两次，并以不同浓度加入稀释在PBS-T+1％BSA中的NME7。在室温下1h后，将孔板用PBS-T洗涤3次，并按照1/500的稀释度加入稀释于PBS-T+1％BSA中的抗NM23-H7(B-9，Santa Cruz Biotechnology)。在室温下1h后，孔板用PBS-T洗涤3次，并以1/3333的稀释度加入稀释于PBS-T+1％BSA中的山羊抗小鼠-HRP。在室温下1h后，用PBS-T洗涤孔板3次，并使用ABTS溶液(Pierce)在415nm下测定NME7的结合。
ELISA MUC1*二聚化：使用了NME7结合的方案，并使用了11.6μg/mL的NME7。
在室温下1h后，孔板用PBS-T洗涤3次，并以不同浓度加入在PBS-T+1％BSA中稀释的带His标签的PSMGFR肽(PSMGFR-His)或生物素化的PSMGFR肽(PSMGFR-生物素)。在室温下1h后，孔板用PBS-T洗涤3次，并以1/5000的浓度加入在PBS-T+1％BSA中稀释的抗Histag-HRP(Abcam)或链霉亲和素-HRP(Pierce)。在室温下1h后，孔板用PBS-T洗涤3次，并使用ABTS溶液(Pierce)在415nm处测定PSMGFR肽与已经结合另一偶联BSA的PSMGFR肽(其通过抗His抗体或通过链霉亲和素不发信号)的NME7的结合。
实施例7-人重组NME7-AB的功能测试
为了测试重组NME7-AB保持多能性和抑制分化的能力，产生并纯化了NME7的可溶性变体NME7-AB。人干细胞(iPS cat#SClOla-1，System Biosciences)按照厂商的说明在小鼠成纤维细胞饲养细胞层上生长于4ng/mL bFGF中长达四代。然后将这些源干细胞接种于已经涂覆有12.5μg/井孔的单克隆抗MUC1*抗体MN-C3的6-井孔细胞培养板(VitaTM，ThermoFisher)上。细胞以300,000细胞/孔的密度接种。基础培养基是基础干细胞培养基，由以下物质组成：400mL DME/F12/GlutaM AX I(Invitrogen#10565-018)，100mL Knockout血清替代物(KO-SR，Invitrogen#10828-028)，5mL 100×MEM非必需氨基酸溶液(Invitrogen#11140-050)和0.9mL(0.1mM)β-巯基乙醇(55mM原液，Invitrogen#21985-023)。基础培养基可以是任何培养基。在优选的实施方式中，基础培养基不含其他生长因子和细胞因子。向基础培养基中加入8nM的NME7-AB或8nM的NM23-H1，重折叠并纯化为稳定的二聚体。每48小时更换培养基，并由于加速的生长，必须在接种后第3天收获并传代。当干细胞在NM23-H1二聚体或NME7单体中生长时，获得了相当的(可比的，comparable)多能干细胞生长。
NME7和NM23-H1(NME1)二聚体都多能地生长并且甚至在100％汇合时也没有分化。正如照片中可以看出，NME7细胞生长快于NM23-H1二聚体中生长的细胞。第一次收获的细胞计数证实NME7中的培养物产生了比NM23-H1二聚体中的培养物多1.4倍的细胞。典型的多能标志物的ICC染色证实了NME7-AB完全支持人干细胞生长，多能性和抵抗的分化。
～30-33kDa的NME7物质可以是可变剪接同种型或翻译后修饰例如酶切，其可以使之能够从细胞中分泌。
实施例8-通过在将干细胞回复到更原始状态的条件下培养细胞而诱导癌细胞向转移性癌细胞的转变
癌细胞通常培养于含血清的培养基如RPMI中。我们发现，在使干细胞回复到更原始状态的试剂存在下培养癌细胞使癌细胞转变为更具转移性的状态。
我们证明了NME7-AB、人NME1二聚体、细菌NME1二聚体、NME7-X1和“2i”抑制剂每种能够将常规癌细胞转化为转移性癌细胞，其也称为癌症干细胞“CSC”或肿瘤引发性细胞“TIC”。2i是给予两种生化抑制剂的名称，研究人员发现它们使人干细胞回复到更原始状态的。2i是MEK和GSK3-β抑制剂PD0325901和CHIR99021，它们被分别加入培养基中至约1mM和3mM的终浓度。
当将NME7-AB和NME7-X1加入到独立批次的基本培养基中而使癌细胞转化为转移性细胞时，其终浓度为约4nM，但在约1nM-16nM的范围内更低和更高的浓度也工作良好。人或细菌NME1二聚体以4nM～32nM的终浓度使用，在这些实验中通常使用16nM，其中人NME具有S120G突变。如果使用野生型，可能需要较低的浓度。并不意在这些精确浓度是重要的。重要的是但NME1蛋白是二聚体并且尽管某些突变允许更高浓度才能保持为二聚体，但发生这种情况的浓度范围都处于低纳摩尔范围内。
类似地，NME7蛋白的浓度可以变化。NME7-AB和NME7-XI是单体而用于将癌细胞转变为转移性细胞的浓度应该允许蛋白保持为单体。已经提出了各种分子标志物作为转移性癌细胞的指示剂。不同的癌症类型可以具有被上调的不同分子。例如，受体CXCR4在转移性乳癌中上调，而E-钙粘蛋白，也称为CHD1，在转移性前列腺癌中上调更多。
除了这些特异性转移标志物外，典型的多能性标志物如OCT4、SOX2、NANOG和KLF4都随着癌症变为转移而上调。起始癌细胞和后来的转移性癌细胞可以通过PCR进行分析测试而测定这些基因的表达水平。
图11示出在含有NME7-AB的培养基中培养的T47D乳癌细胞的RT-PCR测量的图表。加入rho I激酶抑制剂ROCi、ROCKi或Ri而防止转化的细胞从孔板上漂离。对于亲本细胞和对于NME7-AB培养的细胞测定各种转移标志物以及多能干细胞标志物的表达水平。结果表明，与接受ROCi的细胞相比，漂浮细胞表达更高量的转移和多能性标志物。我们推断，这是因为这些测量结果是未转化的细胞的平均值，而ROCi转化的那些使其保持贴壁。这可以清楚地在图12中看出，其中“-Ri”表示未接受ROCi的贴壁细胞并因此不与漂浮的高转移性细胞混合。
当在含有NM23，也称为NMEl，或NME7-AB的培养基中培养时，前列腺癌细胞也转变为更具转移性的状态。在本文中我们证明了对于迄今为止测试的每个细胞系，在NME7-AB、人NME1二聚体或与人具有高序列同源性的细菌NME中的培养物诱导了向更具转移性的状态的转变。
图14A显示在含有2i抑制剂，NME7-AB或两者的培养基中培养的乳癌细胞的转移性和多能性标志物的表达水平的RT-PCR测量的图表。正如可以看出，2i抑制剂也能够诱导癌细胞向更具转移性的状态的转变。图14B示出在含有来自序列高度同源于人NME1和NME7-AB的细菌HSP593的NME1的培养基中培养的乳癌细胞的转移性和多能性标志物的表达水平的RT-PCR测量的图表，表明具有高序列同源性的细菌NME可以模拟人NME1和NME7-AB的作用，因为它们诱导向更具转移性状态的转变。当在NME7-AB和/或2i抑制剂中培养时，卵巢癌细胞系SK-OV3、OV-90，胰腺癌细胞系CAPAN-2和PANC-1，乳癌细胞系MDA-MB都表现出从贴壁到非贴壁的形态转变。
图37示出在NME7-AB中培养72或144h的各种癌细胞系的转移性或多能性标志物的RT-PCR测量的图表。图37A示出当在NME7-AB中培养时，SK-OV3细胞提高了转移标志物CHD1、SOX2和NME7-X1的表达。图37B示出在NME7-AB中培养后OV-90细胞提高了转移标志物CXCR4和NME7-X1的表达。
实施例9-证明在NME7中培养的癌细胞变成转移性的癌细胞
癌细胞群体是否是转移性的功能测试是将非常低数目，例如，200个细胞植入免疫受损小鼠中，观察它们是否发展成肿瘤。通常需要5～6百万个癌细胞在免疫受损的小鼠中形成肿瘤。我们证明了少至50个NME诱导的转移性癌细胞就能在小鼠中形成肿瘤。此外，在整个测试期间用人NME7-AB、NME1或NME7-X1注射的小鼠都发展了远距离转移。
将T47D人乳癌细胞在标准RPMI培养基中培养14天，其中每48小时更换培养基，并当约75％汇合时通过胰蛋白酶消化。然后将细胞接种到6-孔井孔板中并在补充有4nMNME7-AB的基本干细胞培养基中培养(参见实施例1)。每48小时更换培养基。到第4天，一些细胞从表面脱离并漂浮。小心改变培养基而保留“漂浮物”，因为这些是具有最高转移潜力的细胞，这通过转移标志物的RT-PCR测量而证明。在第7天或第8天，收获并计数漂浮物。样品保留用于RT-PCR测量。所测量的关键标志物是CXCR4，其在NME7-AB中简单培养后上调40～200倍。
将新鲜收获的漂浮转移性细胞异种移植到已经植入90天缓慢释放雌激素小丸的雌性nu/nu无胸腺小鼠的侧腹中。漂浮细胞按照每10,000、1,000、100或50个细胞进行异种移植。每组6只小鼠中的一半小鼠也在最初植入位点附近每天注射32nM NME7-AB。在不含NME7-AB的RPMI培养基中培养的所有亲本T47D细胞也分别按照600万，10,000或100的量植入作为对照。植入NME7诱导的漂浮细胞的小鼠，即使植入少至50个细胞都发展了肿瘤。植入漂浮细胞并每天接受NME7-AB注射的小鼠也在各种器官中发展了远距离肿瘤或远距离转移(图20-图25)。注射人NME7-AB的12只小鼠中的11只或92％，在植入NME7-AB培养的癌细胞后，在注射部位形成了肿瘤。未注射人NME7-AB的12只小鼠中的仅仅7只或58％，在植入后发展成肿瘤。获得肿瘤并注射人NME7-AB的11只小鼠中9只或82％，远离注射部位发展出多个肿瘤。未注射NME7-AB的小鼠都没有发展出多个可见肿瘤。
在处死后，RT-PCR和蛋白质免疫印迹表明，注射NME7-AB的小鼠上的远距离肿瘤确实是人乳腺肿瘤。对其器官的类似分析表明，除了远距离肿块之外，小鼠具有随机被转移到具有植入的人乳癌细胞的人乳癌特性的肝和肺。正如所预期的那样，仅仅植入600万个细胞的小鼠生长肿瘤。
用基本上相同的结果进行如上的几个实验。在每个实验中，有24只或52只小鼠，包括所有合适的对照。
实施例10-抗NME7抗体抑制癌细胞生长。
根据ATCC的推荐方案培养T47D乳癌细胞和DU145前列腺癌细胞。细胞生长至～30％汇合。针对几近包含整个蛋白：氨基酸100-376的NME7片段产生抗NME7多克隆兔抗体。这种多克隆抗体以2.7～375ng/mL的浓度添加至癌细胞中。紫杉醇用作阳性对照。在48小时(图6和图7)和96小时(图8)后对细胞进行照相和计数。照片和细胞计数表明抗体有效地抑制乳腺和前列腺癌细胞的生长。然而，因为没有尝试选择对于NME7独有的免疫化肽，则这种抗体可能通过结合并抑制NME7-AB样物质和NME1而产生细胞毒性效应。
实施例11-由于其序列对于NME7、A1、A2、B1、B2和B3是独有的而选择的肽，抑制NME7物质与MUC1*胞外结构域肽的结合。
NME7肽被选为抗体生产的免疫试剂。使用人NME1、人NME7和同源于人NME1或人NME7的几种细菌NME中的序列比对方法选择NME7肽A1、A2、B1、B2和B3(图19)。在所有中识别具有高序列同源性的5个区域。然而，为了防止选择将产生抑制人NME1以及人NME7的抗体的肽，我们选择了与同源区相邻的NME7序列，其中那些肽具有不同于人NME1的序列。我们进行了ELISA分析测试观察肽本身是否可以结合至表面上的合成MUC1*肽并抑制人NME7或人NME1与固定的肽的结合(图27)。图27示出肽抑制NME7和NME1与固定的肽的结合。这表明，肽衍生的区域是与MUC1*相互作用的区域，并将产生会结合NME7的那些区域的抗体并抑制其与MUC1*受体的结合。
在另一个实验中，游离肽A1、A2、B1、B2和B3加入到培养基中的癌细胞中，这些癌细胞通过在NME7-AB或2i中培养而转变至更具转移性的状态。图30示出当癌细胞在NME7-AB或2i抑制剂中生长时科学家的观察结果的表格，并表明游离肽抑制从贴壁细胞至漂浮细胞的形态变化，其对于乳癌细胞直接与转移标志物、特别是CXCR4的表达增加相关。RT-PCR测量结果证实NME7-AB肽抑制转移性标志物CXCR4表达的增加。
图31示出在NME7-AB或2i抑制剂中生长的T47D乳癌细胞中的CXCR4表达的RT-PCR测量的图表，其每种都将癌细胞转变至更具转移性的状态，和NME7-衍生肽，A1，A2，B1，B2和B3对转移转变的抑制性效应。图32示出用于图31中CXCR4的RT-PCR测量的样品中所记录的RNA水平以及CXCR4表达以及对照看家基因的阈值循环数的表格。
实施例12-抗NME7抗体特异性结合人NME7而不结合人NME1
进行标准ELISA分析测试以确定我们通过用NME7-AB肽A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的NME7抗体是否会特异性结合NME7-AB而不结合人NME1，因为其具有健康功能并且其可能对人有害而将其与抗体阻断。图26的ELISA表明，我们由肽A1、A2、B1、B2和B3产生的所有NME7抗体都结合人NME7-AB(A)而不结合人NME1(B)。用于产生这些抗体的肽是NME7-AB和NME7-X1都共有的。这种分析测试表明，由肽A1、A2、B1、B2和B3产生的抗体特异性地结合NME7-AB，并通过延伸而将结合NME7-X1。
NME7肽1(A结构域)：MLSRKEALDFHVDHQS(SEQ ID NO:141)
NME7肽2(A结构域)：SGVARTDASES(SEQ ID NO:142)
NME7B肽1(B结构域)：DAGFEISAMQMFNMDRVNVE(SEQ ID NO:143)
NME7B肽2(B结构域)：EVYKGVVTEYHDMVTE(SEQ ID NO:144)
NME7B肽3(B结构域)：AIFGKTKIQNAVHCTDLPEDGLLEVQYFF(SEQ ID NO:145)
实施例13-抗NME7特异性抗体和产生它们的肽抑制癌细胞生长
用NME7肽A1、A2、B1、B2和B3免疫兔并产生抗体，收集并在与免疫化肽缀合的柱上纯化。T47D乳癌细胞进行接种并根据ATCC方案培养于补充有血清的RPMI培养基中。以图28中所示的浓度加入用肽A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的抗体。免疫化肽A1、A2、B1、B2和B3，以及本文中称为“FLR”的MUC1*的PSMGFR胞外结构域肽也单独地加入至正在生长的T47D乳癌细胞。添加紫杉醇和E6抗MUC1*Fab作为对照。图28的曲线图表明所产生的抗体，以及游离肽，有效地抑制癌细胞的生长。请注意与使用紫杉醇的抑制作用的对比，紫杉醇属于化疗药物，其以同样的方式杀死健康细胞和癌细胞。此外，为了进行对比，示出使用来自氨基酸100-376的大段NME7产生的多克隆抗体。虽然这种抗体是癌症生长的有效抑制剂，但它可以具有非特异性效应，因为它可以结合NME1以及NME7。
在类似的实验中，按照指定的浓度将由用肽A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的抗体以及肽本身的组合加入至正生长的癌细胞中，图29中所示的细胞生长的曲线图表明抗体和肽的组合有效抑制癌细胞的生长。在这两个实验中，细胞是MUC1*阳性乳癌细胞。
实施例14-抗NME7抗体抑制癌细胞向转移性癌细胞的转变
当在将干细胞回复到更原始状态的试剂存在下培养时，癌细胞转变为更具转移性的状态。我们已经证明，在NME7-AB、人NME1二聚体、细菌NME1二聚体或MEK和GSK3-β抑制剂(称为“2i”)中培养癌细胞导致细胞变得更具转移性。随着细胞转变至更具转移性的状态，它们变成非贴壁的并漂离培养孔板。这些漂浮细胞，“漂浮物”与那些贴壁的细胞分开收集，并表现出：a)表达高得多的水平的转移基因；和b)当异种移植到小鼠中时，当以非常低的数目植入时，漂浮细胞也能够产生肿瘤。特异性转移标志物如乳癌中的CXCR4，前列腺癌症中的CHD1和其他多能干细胞标志物如OCT4、SOX2、NANOG、KLF4、c-Myc等的RT-PCR测量结果显著过表达于在NME7-AB中培养的癌细胞中并最高过表达于变得贴壁的，本文中和图中称为“漂浮物”的细胞中。
在本文中我们证明了由用NME7衍生的肽A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的NME7特异性抗体，以及这些肽本身，可以抑制从癌细胞到转移性癌细胞的转变。在这些实验的第一个实验中，对通过用A1、A2、B1、B2和B3免疫产生的抗体测试了其抑制由NME7-AB或2i抑制剂中对T47D乳癌细胞的培养诱导的转移转变的能力。最引人注目的观察结果是抗体和肽显著降低了漂浮细胞的数量，这是抗体和肽抑制向转移性癌细胞转变的第一个指标。具体而言，添加由用B3肽免疫产生的抗体的细胞几乎不产生任何漂浮细胞。
图30示出相对于未接受任何抗体治疗的对照孔井，对于每种抗体可见的漂浮细胞百分比的所记录的观察结果。从漂浮细胞和贴壁细胞提取mRNA。RT-PCR用于测定包括CXCR4在内的转移标志物的表达水平。采用抗NME7抗体的治疗极大降低了转移标志物如CXCR4的量，表明抗体抑制向转移癌的转变(参见图31)。值得注意的是，通过用抗B3抗体免疫产生的抗体，称为抗体#61，基本上完全抑制向更具转移性的状态的转变。图31B表明，单独用NME7-AB肽A1、A2、B1、B2和B3处理的乳癌细胞能够有效抑制通过在含有2i抑制剂的培养基中培养细胞而诱导的更具转移性的状态的转变。肽B3因为其产生抗体#61而是特别有效的。图31C示出相同的图，但扩展Y轴以示出转移标志物的肽抑制。测量了指示细胞活力和生长的mRNA含量。用抗体处理的细胞具有少得多的mRNA，表明除了抑制向更具转移性的状态的转变之外，抗NME7-AB抗体抑制癌细胞的生长。图32示出对于图31A中所示的抑制实验回收的RNA含量的表格。
实施例15-用NME7衍生肽A1、A2、B1、B2和B3产生的抗NME7抗体识别出使用任何市售抗体不能检测的新的NME7物质。
正如本领域技术人员已知的，一些抗体识别靶蛋白的线性部分并可以用于蛋白质免疫印迹分析测试中，而同时其他抗体识别非线性构象基序并可以用于拉下或免疫沉淀分析测试中。在本申请之前，并不知道存在切割的NME7或同种型NME7-X1。使用在申请提交时市售的抗体表明现有抗体不能特异性地检测这些重要的NME7物质。B9(Santa CruzBiotechnology)是针对NME7氨基酸100-376产生的单克隆抗体。图36A表明其仅检测全长42kDa NME7。另一种市售抗体H278是针对NME7氨基酸100-376产生的兔多克隆抗体，其包括NME7非唯一的氨基酸序列。图36B表明，这种抗体也染色NME1(其为17kDa)以及全长NME7和其他看似对于NME7-AB并不特异的谱带。
通过用NME7-AB肽A1、A2、B1、B2或B3免疫产生的NME7抗体识别出新的NME7物质，包括全长42kDa蛋白、可以是切割产物或可变同种型的～33kDa NME7物质、可以是切割产物或可变同种型的～30kDaNME7物质，其中～30kDa物质看起来是NME7-X1。图35A-图35C示出由肽A1、B1和B3产生的抗体在宽范围的癌细胞系(包括T47D乳癌细胞，PC3和DU145前列腺癌，HEK293胎儿肝细胞，以及白血病细胞IM-9、K562和MV411)中识别出NME7、NME7-AB和NME7-X1的分泌形式。
本文引用的所有参考文献以其全部内容结合于本文中作为参考。
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<400> 1
Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr
1 5 10 15
Val Leu Thr Val Val Thr Gly Ser Gly His Ala Ser Ser Thr Pro Gly
20 25 30
Gly Glu Lys Glu Thr Ser Ala Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Ser Ser
35 40 45
Thr Glu Lys Asn Ala Val Ser Met Thr Ser Ser Val Leu Ser Ser His
50 55 60
Ser Pro Gly Ser Gly Ser Ser Thr Thr Gln Gly Gln Asp Val Thr Leu
65 70 75 80
Ala Pro Ala Thr Glu Pro Ala Ser Gly Ser Ala Ala Thr Trp Gly Gln
85 90 95
Asp Val Thr Ser Val Pro Val Thr Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Thr
100 105 110
Pro Pro Ala His Asp Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn Lys Pro Ala Pro
115 120 125
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
130 135 140
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
145 150 155 160
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
165 170 175
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
180 185 190
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
195 200 205
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
210 215 220
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
225 230 235 240
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
245 250 255
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
260 265 270
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
275 280 285
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
290 295 300
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
305 310 315 320
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
325 330 335
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
340 345 350
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
355 360 365
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
370 375 380
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
385 390 395 400
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
405 410 415
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
420 425 430
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
435 440 445
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
450 455 460
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
465 470 475 480
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
485 490 495
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
500 505 510
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
515 520 525
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
530 535 540
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
545 550 555 560
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
565 570 575
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
580 585 590
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
595 600 605
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
610 615 620
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
625 630 635 640
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
645 650 655
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
660 665 670
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
675 680 685
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
690 695 700
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
705 710 715 720
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
725 730 735
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
740 745 750
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
755 760 765
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
770 775 780
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
785 790 795 800
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
805 810 815
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
820 825 830
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
835 840 845
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr
850 855 860
Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser
865 870 875 880
Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His
885 890 895
Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala
900 905 910
Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro
915 920 925
Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn
930 935 940
Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val Thr Ser
945 950 955 960
Ala Ser Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Thr Leu Val His Asn Gly
965 970 975
Thr Ser Ala Arg Ala Thr Thr Thr Pro Ala Ser Lys Ser Thr Pro Phe
980 985 990
Ser Ile Pro Ser His His Ser Asp Thr Pro Thr Thr Leu Ala Ser His
995 1000 1005
Ser Thr Lys Thr Asp Ala Ser Ser Thr His His Ser Ser Val Pro
1010 1015 1020
Pro Leu Thr Ser Ser Asn His Ser Thr Ser Pro Gln Leu Ser Thr
1025 1030 1035
Gly Val Ser Phe Phe Phe Leu Ser Phe His Ile Ser Asn Leu Gln
1040 1045 1050
Phe Asn Ser Ser Leu Glu Asp Pro Ser Thr Asp Tyr Tyr Gln Glu
1055 1060 1065
Leu Gln Arg Asp Ile Ser Glu Met Phe Leu Gln Ile Tyr Lys Gln
1070 1075 1080
Gly Gly Phe Leu Gly Leu Ser Asn Ile Lys Phe Arg Pro Gly Ser
1085 1090 1095
Val Val Val Gln Leu Thr Leu Ala Phe Arg Glu Gly Thr Ile Asn
1100 1105 1110
Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr Glu Ala
1115 1120 1125
Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val Ser Asp
1130 1135 1140
Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala Gly Val Pro Gly
1145 1150 1155
Trp Gly Ile Ala Leu Leu Val Leu Val Cys Val Leu Val Ala Leu
1160 1165 1170
Ala Ile Val Tyr Leu Ile Ala Leu Ala Val Cys Gln Cys Arg Arg
1175 1180 1185
Lys Asn Tyr Gly Gln Leu Asp Ile Phe Pro Ala Arg Asp Thr Tyr
1190 1195 1200
His Pro Met Ser Glu Tyr Pro Thr Tyr His Thr His Gly Arg Tyr
1205 1210 1215
Val Pro Pro Ser Ser Thr Asp Arg Ser Pro Tyr Glu Lys Val Ser
1220 1225 1230
Ala Gly Asn Gly Gly Ser Ser Leu Ser Tyr Thr Asn Pro Ala Val
1235 1240 1245
Ala Ala Ala Ser Ala Asn Leu
1250 1255
<210> 2
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N端MUC-1信号序列
<400> 2
Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr
1 5 10 15
Val Leu Thr
<210> 3
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N端MUC-1信号序列
<400> 3
Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr
1 5 10 15
Val Leu Thr Val Val Thr Ala
20
<210> 4
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N端MUC-1信号序列
<400> 4
Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr
1 5 10 15
Val Leu Thr Val Val Thr Gly
20
<210> 5
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的MUC1受体同种型，在其N端具有nat-PSMGFR
<400> 5
Gly Thr Ile Asn Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys
1 5 10 15
Thr Glu Ala Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val
20 25 30
Ser Asp Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala Gly Val Pro
35 40 45
Gly Trp Gly Ile Ala Leu Leu Val Leu Val Cys Val Leu Val Ala Leu
50 55 60
Ala Ile Val Tyr Leu Ile Ala Leu Ala Val Cys Gln Cys Arg Arg Lys
65 70 75 80
Asn Tyr Gly Gln Leu Asp Ile Phe Pro Ala Arg Asp Thr Tyr His Pro
85 90 95
Met Ser Glu Tyr Pro Thr Tyr His Thr His Gly Arg Tyr Val Pro Pro
100 105 110
Ser Ser Thr Asp Arg Ser Pro Tyr Glu Lys Val Ser Ala Gly Asn Gly
115 120 125
Gly Ser Ser Leu Ser Tyr Thr Asn Pro Ala Val Ala Ala Ala Ser Ala
130 135 140
Asn Leu
145
<210> 6
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC1生长因子受体的天然一级序列
<400> 6
Gly Thr Ile Asn Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys
1 5 10 15
Thr Glu Ala Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val
20 25 30
Ser Asp Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala
35 40 45
<210> 7
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC1生长因子受体的天然一级序列
<400> 7
Thr Ile Asn Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val Ser
20 25 30
Asp Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala
35 40
<210> 8
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC1生长因子受体的天然一级序列的"SPY"功能性变体
<400> 8
Gly Thr Ile Asn Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys
1 5 10 15
Thr Glu Ala Ala Ser Pro Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val
20 25 30
Ser Asp Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala
35 40 45
<210> 9
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC1生长因子受体的天然一级序列的"SPY"功能性变体
<400> 9
Thr Ile Asn Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ser Pro Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val Ser
20 25 30
Asp Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala
35 40
<210> 10
<211> 216
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC1细胞质结构域核苷酸序列
<400> 10
tgtcagtgcc gccgaaagaa ctacgggcag ctggacatct ttccagcccg ggatacctac 60
catcctatga gcgagtaccc cacctaccac acccatgggc gctatgtgcc ccctagcagt 120
accgatcgta gcccctatga gaaggtttct gcaggtaacg gtggcagcag cctctcttac 180
acaaacccag cagtggcagc cgcttctgcc aacttg 216
<210> 11
<211> 72
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC1细胞质结构域氨基酸序列
<400> 11
Cys Gln Cys Arg Arg Lys Asn Tyr Gly Gln Leu Asp Ile Phe Pro Ala
1 5 10 15
Arg Asp Thr Tyr His Pro Met Ser Glu Tyr Pro Thr Tyr His Thr His
20 25 30
Gly Arg Tyr Val Pro Pro Ser Ser Thr Asp Arg Ser Pro Tyr Glu Lys
35 40 45
Val Ser Ala Gly Asn Gly Gly Ser Ser Leu Ser Tyr Thr Asn Pro Ala
50 55 60
Val Ala Ala Ala Ser Ala Asn Leu
65 70
<210> 12
<211> 854
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NME7核苷酸序列
<400> 12
gagatcctga gacaatgaat catagtgaaa gattcgtttt cattgcagag tggtatgatc 60
caaatgcttc acttcttcga cgttatgagc ttttatttta cccaggggat ggatctgttg 120
aaatgcatga tgtaaagaat catcgcacct ttttaaagcg gaccaaatat gataacctgc 180
acttggaaga tttatttata ggcaacaaag tgaatgtctt ttctcgacaa ctggtattaa 240
ttgactatgg ggatcaatat acagctcgcc agctgggcag taggaaagaa aaaacgctag 300
ccctaattaa accagatgca atatcaaagg ctggagaaat aattgaaata ataaacaaag 360
ctggatttac tataaccaaa ctcaaaatga tgatgctttc aaggaaagaa gcattggatt 420
ttcatgtaga tcaccagtca agaccctttt tcaatgagct gatccagttt attacaactg 480
gtcctattat tgccatggag attttaagag atgatgctat atgtgaatgg aaaagactgc 540
tgggacctgc aaactctgga gtggcacgca cagatgcttc tgaaagcatt agagccctct 600
ttggaacaga tggcataaga aatgcagcgc atggccctga ttcttttgct tctgcggcca 660
gagaaatgga gttgtttttt ccttcaagtg gaggttgtgg gccggcaaac actgctaaat 720
ttactaattg tacctgttgc attgttaaac cccatgctgt cagtgaaggt atgttgaata 780
cactatattc agtacatttt gttaatagga gagcaatgtt tattttcttg atgtacttta 840
tgtatagaaa ataa 854
<210> 13
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NME7氨基酸序列
<400> 13
Asp Pro Glu Thr Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu
1 5 10 15
Trp Tyr Asp Pro Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe
20 25 30
Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg
35 40 45
Thr Phe Leu Lys Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu
50 55 60
Phe Ile Gly Asn Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile
65 70 75 80
Asp Tyr Gly Asp Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu
85 90 95
Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu
100 105 110
Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys
115 120 125
Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His
130 135 140
Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly
145 150 155 160
Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp
165 170 175
Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala
180 185 190
Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala
195 200 205
Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu
210 215 220
Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe
225 230 235 240
Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
245 250 255
Met Leu Asn Thr Leu Tyr Ser Val His Phe Val Asn Arg Arg Ala Met
260 265 270
Phe Ile Phe Leu Met Tyr Phe Met Tyr Arg Lys
275 280
<210> 14
<211> 534
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NM23-H1核苷酸序列
<400> 14
atggtgctac tgtctacttt agggatcgtc tttcaaggcg aggggcctcc tatctcaagc 60
tgtgatacag gaaccatggc caactgtgag cgtaccttca ttgcgatcaa accagatggg 120
gtccagcggg gtcttgtggg agagattatc aagcgttttg agcagaaagg attccgcctt 180
gttggtctga aattcatgca agcttccgaa gatcttctca aggaacacta cgttgacctg 240
aaggaccgtc cattctttgc cggcctggtg aaatacatgc actcagggcc ggtagttgcc 300
atggtctggg aggggctgaa tgtggtgaag acgggccgag tcatgctcgg ggagaccaac 360
cctgcagact ccaagcctgg gaccatccgt ggagacttct gcatacaagt tggcaggaac 420
attatacatg gcagtgattc tgtggagagt gcagagaagg agatcggctt gtggtttcac 480
cctgaggaac tggtagatta cacgagctgt gctcagaact ggatctatga atga 534
<210> 15
<211> 177
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NM23-H1描述了氨基酸序列
<400> 15
Met Val Leu Leu Ser Thr Leu Gly Ile Val Phe Gln Gly Glu Gly Pro
1 5 10 15
Pro Ile Ser Ser Cys Asp Thr Gly Thr Met Ala Asn Cys Glu Arg Thr
20 25 30
Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Val Gly Glu
35 40 45
Ile Ile Lys Arg Phe Glu Gln Lys Gly Phe Arg Leu Val Gly Leu Lys
50 55 60
Phe Met Gln Ala Ser Glu Asp Leu Leu Lys Glu His Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Lys Asp Arg Pro Phe Phe Ala Gly Leu Val Lys Tyr Met His Ser Gly
85 90 95
Pro Val Val Ala Met Val Trp Glu Gly Leu Asn Val Val Lys Thr Gly
100 105 110
Arg Val Met Leu Gly Glu Thr Asn Pro Ala Asp Ser Lys Pro Gly Thr
115 120 125
Ile Arg Gly Asp Phe Cys Ile Gln Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly
130 135 140
Ser Asp Ser Val Glu Ser Ala Glu Lys Glu Ile Gly Leu Trp Phe His
145 150 155 160
Pro Glu Glu Leu Val Asp Tyr Thr Ser Cys Ala Gln Asn Trp Ile Tyr
165 170 175
Glu
<210> 16
<211> 534
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NM23-H1 S120G 突变核苷酸序列
<400> 16
atggtgctac tgtctacttt agggatcgtc tttcaaggcg aggggcctcc tatctcaagc 60
tgtgatacag gaaccatggc caactgtgag cgtaccttca ttgcgatcaa accagatggg 120
gtccagcggg gtcttgtggg agagattatc aagcgttttg agcagaaagg attccgcctt 180
gttggtctga aattcatgca agcttccgaa gatcttctca aggaacacta cgttgacctg 240
aaggaccgtc cattctttgc cggcctggtg aaatacatgc actcagggcc ggtagttgcc 300
atggtctggg aggggctgaa tgtggtgaag acgggccgag tcatgctcgg ggagaccaac 360
cctgcagact ccaagcctgg gaccatccgt ggagacttct gcatacaagt tggcaggaac 420
attatacatg gcggtgattc tgtggagagt gcagagaagg agatcggctt gtggtttcac 480
cctgaggaac tggtagatta cacgagctgt gctcagaact ggatctatga atga 534
<210> 17
<211> 177
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NM23-H1 S120G 突变氨基酸序列
<400> 17
Met Val Leu Leu Ser Thr Leu Gly Ile Val Phe Gln Gly Glu Gly Pro
1 5 10 15
Pro Ile Ser Ser Cys Asp Thr Gly Thr Met Ala Asn Cys Glu Arg Thr
20 25 30
Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Val Gly Glu
35 40 45
Ile Ile Lys Arg Phe Glu Gln Lys Gly Phe Arg Leu Val Gly Leu Lys
50 55 60
Phe Met Gln Ala Ser Glu Asp Leu Leu Lys Glu His Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Lys Asp Arg Pro Phe Phe Ala Gly Leu Val Lys Tyr Met His Ser Gly
85 90 95
Pro Val Val Ala Met Val Trp Glu Gly Leu Asn Val Val Lys Thr Gly
100 105 110
Arg Val Met Leu Gly Glu Thr Asn Pro Ala Asp Ser Lys Pro Gly Thr
115 120 125
Ile Arg Gly Asp Phe Cys Ile Gln Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly
130 135 140
Gly Asp Ser Val Glu Ser Ala Glu Lys Glu Ile Gly Leu Trp Phe His
145 150 155 160
Pro Glu Glu Leu Val Asp Tyr Thr Ser Cys Ala Gln Asn Trp Ile Tyr
165 170 175
Glu
<210> 18
<211> 459
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NM23-H2核苷酸序列
<400> 18
atggccaacc tggagcgcac cttcatcgcc atcaagccgg acggcgtgca gcgcggcctg 60
gtgggcgaga tcatcaagcg cttcgagcag aagggattcc gcctcgtggc catgaagttc 120
ctccgggcct ctgaagaaca cctgaagcag cactacattg acctgaaaga ccgaccattc 180
ttccctgggc tggtgaagta catgaactca gggccggttg tggccatggt ctgggagggg 240
ctgaacgtgg tgaagacagg ccgagtgatg cttggggaga ccaatccagc agattcaaag 300
ccaggcacca ttcgtgggga cttctgcatt caggttggca ggaacatcat tcatggcagt 360
gattcagtaa aaagtgctga aaaagaaatc agcctatggt ttaagcctga agaactggtt 420
gactacaagt cttgtgctca tgactgggtc tatgaataa 459
<210> 19
<211> 152
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NM23-H2氨基酸序列
<400> 19
Met Ala Asn Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val
1 5 10 15
Gln Arg Gly Leu Val Gly Glu Ile Ile Lys Arg Phe Glu Gln Lys Gly
20 25 30
Phe Arg Leu Val Ala Met Lys Phe Leu Arg Ala Ser Glu Glu His Leu
35 40 45
Lys Gln His Tyr Ile Asp Leu Lys Asp Arg Pro Phe Phe Pro Gly Leu
50 55 60
Val Lys Tyr Met Asn Ser Gly Pro Val Val Ala Met Val Trp Glu Gly
65 70 75 80
Leu Asn Val Val Lys Thr Gly Arg Val Met Leu Gly Glu Thr Asn Pro
85 90 95
Ala Asp Ser Lys Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Phe Cys Ile Gln Val
100 105 110
Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Ser Val Lys Ser Ala Glu Lys
115 120 125
Glu Ile Ser Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Asp Tyr Lys Ser
130 135 140
Cys Ala His Asp Trp Val Tyr Glu
145 150
<210> 20
<211> 1023
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NM23-H7-2序列
<400> 20
atgcatgacg ttaaaaatca ccgtaccttt ctgaaacgca cgaaatatga taatctgcat 60
ctggaagacc tgtttattgg caacaaagtc aatgtgttct ctcgtcagct ggtgctgatc 120
gattatggcg accagtacac cgcgcgtcaa ctgggtagtc gcaaagaaaa aacgctggcc 180
ctgattaaac cggatgcaat ctccaaagct ggcgaaatta tcgaaattat caacaaagcg 240
ggtttcacca tcacgaaact gaaaatgatg atgctgagcc gtaaagaagc cctggatttt 300
catgtcgacc accagtctcg cccgtttttc aatgaactga ttcaattcat caccacgggt 360
ccgattatcg caatggaaat tctgcgtgat gacgctatct gcgaatggaa acgcctgctg 420
ggcccggcaa actcaggtgt tgcgcgtacc gatgccagtg aatccattcg cgctctgttt 480
ggcaccgatg gtatccgtaa tgcagcacat ggtccggact cattcgcatc ggcagctcgt 540
gaaatggaac tgtttttccc gagctctggc ggttgcggtc cggcaaacac cgccaaattt 600
accaattgta cgtgctgtat tgtcaaaccg cacgcagtgt cagaaggcct gctgggtaaa 660
attctgatgg caatccgtga tgctggcttt gaaatctcgg ccatgcagat gttcaacatg 720
gaccgcgtta acgtcgaaga attctacgaa gtttacaaag gcgtggttac cgaatatcac 780
gatatggtta cggaaatgta ctccggtccg tgcgtcgcga tggaaattca gcaaaacaat 840
gccaccaaaa cgtttcgtga attctgtggt ccggcagatc cggaaatcgc acgtcatctg 900
cgtccgggta ccctgcgcgc aatttttggt aaaacgaaaa tccagaacgc tgtgcactgt 960
accgatctgc cggaagacgg tctgctggaa gttcaatact ttttcaaaat tctggataat 1020
tga 1023
<210> 21
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NM23-H7-2序列
<400> 21
Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys Arg Thr Lys Tyr
1 5 10 15
Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn Lys Val Asn Val
20 25 30
Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp Gln Tyr Thr Ala
35 40 45
Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro
50 55 60
Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala
65 70 75 80
Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu
85 90 95
Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu
100 105 110
Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu
115 120 125
Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn
130 135 140
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe
145 150 155 160
Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala
165 170 175
Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys
180 185 190
Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val
195 200 205
Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala
210 215 220
Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met
225 230 235 240
Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val
245 250 255
Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val
260 265 270
Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe
275 280 285
Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr
290 295 300
Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys
305 310 315 320
Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys
325 330 335
Ile Leu Asp Asn
340
<210> 22
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A
<400> 22
atggaaaaaa cgctagccct aattaaacca gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt 60
gaaataataa acaaagctgg atttactata accaaactca aaatgatgat gctttcaagg 120
aaagaagcat tggattttca tgtagatcac cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc 180
cagtttatta caactggtcc tattattgcc atggagattt taagagatga tgctatatgt 240
gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa 300
agcattagag ccctctttgg aacagatggc ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct 360
tttgcttctg cggccagaga aatggagttg tttttttga 399
<210> 23
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A
<400> 23
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe
130
<210> 24
<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A1
<400> 24
atggaaaaaa cgctagccct aattaaacca gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt 60
gaaataataa acaaagctgg atttactata accaaactca aaatgatgat gctttcaagg 120
aaagaagcat tggattttca tgtagatcac cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc 180
cagtttatta caactggtcc tattattgcc atggagattt taagagatga tgctatatgt 240
gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa 300
agcattagag ccctctttgg aacagatggc ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct 360
tttgcttctg cggccagaga aatggagttg ttttttcctt caagtggagg ttgtgggccg 420
gcaaacactg ctaaatttac ttga 444
<210> 25
<211> 147
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A1
<400> 25
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr
145
<210> 26
<211> 669
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A2
<400> 26
atgaatcata gtgaaagatt cgttttcatt gcagagtggt atgatccaaa tgcttcactt 60
cttcgacgtt atgagctttt attttaccca ggggatggat ctgttgaaat gcatgatgta 120
aagaatcatc gcaccttttt aaagcggacc aaatatgata acctgcactt ggaagattta 180
tttataggca acaaagtgaa tgtcttttct cgacaactgg tattaattga ctatggggat 240
caatatacag ctcgccagct gggcagtagg aaagaaaaaa cgctagccct aattaaacca 300
gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt gaaataataa acaaagctgg atttactata 360
accaaactca aaatgatgat gctttcaagg aaagaagcat tggattttca tgtagatcac 420
cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc cagtttatta caactggtcc tattattgcc 480
atggagattt taagagatga tgctatatgt gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac 540
tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa agcattagag ccctctttgg aacagatggc 600
ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct tttgcttctg cggccagaga aatggagttg 660
tttttttga 669
<210> 27
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A2
<400> 27
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe
210 215 220
<210> 28
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A3
<400> 28
atgaatcata gtgaaagatt cgttttcatt gcagagtggt atgatccaaa tgcttcactt 60
cttcgacgtt atgagctttt attttaccca ggggatggat ctgttgaaat gcatgatgta 120
aagaatcatc gcaccttttt aaagcggacc aaatatgata acctgcactt ggaagattta 180
tttataggca acaaagtgaa tgtcttttct cgacaactgg tattaattga ctatggggat 240
caatatacag ctcgccagct gggcagtagg aaagaaaaaa cgctagccct aattaaacca 300
gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt gaaataataa acaaagctgg atttactata 360
accaaactca aaatgatgat gctttcaagg aaagaagcat tggattttca tgtagatcac 420
cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc cagtttatta caactggtcc tattattgcc 480
atggagattt taagagatga tgctatatgt gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac 540
tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa agcattagag ccctctttgg aacagatggc 600
ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct tttgcttctg cggccagaga aatggagttg 660
ttttttcctt caagtggagg ttgtgggccg gcaaacactg ctaaatttac ttga 714
<210> 29
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-A3
<400> 29
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser
210 215 220
Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr
225 230 235
<210> 30
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B
<400> 30
atgaattgta cctgttgcat tgttaaaccc catgctgtca gtgaaggact gttgggaaag 60
atcctgatgg ctatccgaga tgcaggtttt gaaatctcag ctatgcagat gttcaatatg 120
gatcgggtta atgttgagga attctatgaa gtttataaag gagtagtgac cgaatatcat 180
gacatggtga cagaaatgta ttctggccct tgtgtagcaa tggagattca acagaataat 240
gctacaaaga catttcgaga attttgtgga cctgctgatc ctgaaattgc ccggcattta 300
cgccctggaa ctctcagagc aatctttggt aaaactaaga tccagaatgc tgttcactgt 360
actgatctgc cagaggatgg cctattagag gttcaatact tcttctga 408
<210> 31
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B
<400> 31
Met Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
1 5 10 15
Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
20 25 30
Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe
35 40 45
Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr
50 55 60
Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn
65 70 75 80
Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile
85 90 95
Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr
100 105 110
Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu
115 120 125
Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe
130 135
<210> 32
<211> 426
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B1
<400> 32
atgaattgta cctgttgcat tgttaaaccc catgctgtca gtgaaggact gttgggaaag 60
atcctgatgg ctatccgaga tgcaggtttt gaaatctcag ctatgcagat gttcaatatg 120
gatcgggtta atgttgagga attctatgaa gtttataaag gagtagtgac cgaatatcat 180
gacatggtga cagaaatgta ttctggccct tgtgtagcaa tggagattca acagaataat 240
gctacaaaga catttcgaga attttgtgga cctgctgatc ctgaaattgc ccggcattta 300
cgccctggaa ctctcagagc aatctttggt aaaactaaga tccagaatgc tgttcactgt 360
actgatctgc cagaggatgg cctattagag gttcaatact tcttcaagat cttggataat 420
tagtga 426
<210> 33
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B1
<400> 33
Met Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
1 5 10 15
Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
20 25 30
Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe
35 40 45
Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr
50 55 60
Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn
65 70 75 80
Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile
85 90 95
Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr
100 105 110
Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu
115 120 125
Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
130 135 140
<210> 34
<211> 453
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B2
<400> 34
atgccttcaa gtggaggttg tgggccggca aacactgcta aatttactaa ttgtacctgt 60
tgcattgtta aaccccatgc tgtcagtgaa ggactgttgg gaaagatcct gatggctatc 120
cgagatgcag gttttgaaat ctcagctatg cagatgttca atatggatcg ggttaatgtt 180
gaggaattct atgaagttta taaaggagta gtgaccgaat atcatgacat ggtgacagaa 240
atgtattctg gcccttgtgt agcaatggag attcaacaga ataatgctac aaagacattt 300
cgagaatttt gtggacctgc tgatcctgaa attgcccggc atttacgccc tggaactctc 360
agagcaatct ttggtaaaac taagatccag aatgctgttc actgtactga tctgccagag 420
gatggcctat tagaggttca atacttcttc tga 453
<210> 35
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B2
<400> 35
Met Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr
1 5 10 15
Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu
20 25 30
Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser
35 40 45
Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr
50 55 60
Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu
65 70 75 80
Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala
85 90 95
Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala
100 105 110
Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys
115 120 125
Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu
130 135 140
Glu Val Gln Tyr Phe Phe
145 150
<210> 36
<211> 471
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B3
<400> 36
atgccttcaa gtggaggttg tgggccggca aacactgcta aatttactaa ttgtacctgt 60
tgcattgtta aaccccatgc tgtcagtgaa ggactgttgg gaaagatcct gatggctatc 120
cgagatgcag gttttgaaat ctcagctatg cagatgttca atatggatcg ggttaatgtt 180
gaggaattct atgaagttta taaaggagta gtgaccgaat atcatgacat ggtgacagaa 240
atgtattctg gcccttgtgt agcaatggag attcaacaga ataatgctac aaagacattt 300
cgagaatttt gtggacctgc tgatcctgaa attgcccggc atttacgccc tggaactctc 360
agagcaatct ttggtaaaac taagatccag aatgctgttc actgtactga tctgccagag 420
gatggcctat tagaggttca atacttcttc aagatcttgg ataattagtg a 471
<210> 37
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-B3
<400> 37
Met Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr
1 5 10 15
Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu
20 25 30
Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser
35 40 45
Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr
50 55 60
Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu
65 70 75 80
Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala
85 90 95
Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala
100 105 110
Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys
115 120 125
Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu
130 135 140
Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
145 150 155
<210> 38
<211> 864
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB
<400> 38
atggaaaaaa cgctagccct aattaaacca gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt 60
gaaataataa acaaagctgg atttactata accaaactca aaatgatgat gctttcaagg 120
aaagaagcat tggattttca tgtagatcac cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc 180
cagtttatta caactggtcc tattattgcc atggagattt taagagatga tgctatatgt 240
gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa 300
agcattagag ccctctttgg aacagatggc ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct 360
tttgcttctg cggccagaga aatggagttg ttttttcctt caagtggagg ttgtgggccg 420
gcaaacactg ctaaatttac taattgtacc tgttgcattg ttaaacccca tgctgtcagt 480
gaaggactgt tgggaaagat cctgatggct atccgagatg caggttttga aatctcagct 540
atgcagatgt tcaatatgga tcgggttaat gttgaggaat tctatgaagt ttataaagga 600
gtagtgaccg aatatcatga catggtgaca gaaatgtatt ctggcccttg tgtagcaatg 660
gagattcaac agaataatgc tacaaagaca tttcgagaat tttgtggacc tgctgatcct 720
gaaattgccc ggcatttacg ccctggaact ctcagagcaa tctttggtaa aactaagatc 780
cagaatgctg ttcactgtac tgatctgcca gaggatggcc tattagaggt tcaatacttc 840
ttcaagatct tggataatta gtga 864
<210> 39
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB
<400> 39
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
145 150 155 160
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe
165 170 175
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
180 185 190
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met
195 200 205
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln
210 215 220
Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro
225 230 235 240
Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly
245 250 255
Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp
260 265 270
Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
275 280 285
<210> 40
<211> 846
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB1
<400> 40
atggaaaaaa cgctagccct aattaaacca gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt 60
gaaataataa acaaagctgg atttactata accaaactca aaatgatgat gctttcaagg 120
aaagaagcat tggattttca tgtagatcac cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc 180
cagtttatta caactggtcc tattattgcc atggagattt taagagatga tgctatatgt 240
gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa 300
agcattagag ccctctttgg aacagatggc ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct 360
tttgcttctg cggccagaga aatggagttg ttttttcctt caagtggagg ttgtgggccg 420
gcaaacactg ctaaatttac taattgtacc tgttgcattg ttaaacccca tgctgtcagt 480
gaaggactgt tgggaaagat cctgatggct atccgagatg caggttttga aatctcagct 540
atgcagatgt tcaatatgga tcgggttaat gttgaggaat tctatgaagt ttataaagga 600
gtagtgaccg aatatcatga catggtgaca gaaatgtatt ctggcccttg tgtagcaatg 660
gagattcaac agaataatgc tacaaagaca tttcgagaat tttgtggacc tgctgatcct 720
gaaattgccc ggcatttacg ccctggaact ctcagagcaa tctttggtaa aactaagatc 780
cagaatgctg ttcactgtac tgatctgcca gaggatggcc tattagaggt tcaatacttc 840
ttctga 846
<210> 41
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB1
<400> 41
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
145 150 155 160
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe
165 170 175
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
180 185 190
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met
195 200 205
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln
210 215 220
Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro
225 230 235 240
Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly
245 250 255
Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp
260 265 270
Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe
275 280
<210> 42
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A序列
<400> 42
atggaaaaaa cgctggccct gattaaaccg gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc 60
gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt 120
aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt 180
caattcatca ccacgggtcc gattatcgca atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc 240
gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa 300
tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt atccgtaatg cagcacatgg tccggactca 360
ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg tttttctga 399
<210> 43
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A序列
<400> 43
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe
130
<210> 44
<211> 444
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A1序列
<400> 44
atggaaaaaa cgctggccct gattaaaccg gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc 60
gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt 120
aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt 180
caattcatca ccacgggtcc gattatcgca atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc 240
gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa 300
tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt atccgtaatg cagcacatgg tccggactca 360
ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg tttttcccga gctctggcgg ttgcggtccg 420
gcaaacaccg ccaaatttac ctga 444
<210> 45
<211> 147
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A1序列
<400> 45
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr
145
<210> 46
<211> 669
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A2序列
<400> 46
atgaatcact ccgaacgctt tgtttttatc gccgaatggt atgacccgaa tgcttccctg 60
ctgcgccgct acgaactgct gttttatccg ggcgatggta gcgtggaaat gcatgacgtt 120
aaaaatcacc gtacctttct gaaacgcacg aaatatgata atctgcatct ggaagacctg 180
tttattggca acaaagtcaa tgtgttctct cgtcagctgg tgctgatcga ttatggcgac 240
cagtacaccg cgcgtcaact gggtagtcgc aaagaaaaaa cgctggccct gattaaaccg 300
gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc 360
acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac 420
cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt caattcatca ccacgggtcc gattatcgca 480
atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac 540
tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt 600
atccgtaatg cagcacatgg tccggactca ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg 660
tttttctga 669
<210> 47
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A2序列
<400> 47
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe
210 215 220
<210> 48
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A3序列
<400> 48
atgaatcact ccgaacgctt tgtttttatc gccgaatggt atgacccgaa tgcttccctg 60
ctgcgccgct acgaactgct gttttatccg ggcgatggta gcgtggaaat gcatgacgtt 120
aaaaatcacc gtacctttct gaaacgcacg aaatatgata atctgcatct ggaagacctg 180
tttattggca acaaagtcaa tgtgttctct cgtcagctgg tgctgatcga ttatggcgac 240
cagtacaccg cgcgtcaact gggtagtcgc aaagaaaaaa cgctggccct gattaaaccg 300
gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc 360
acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac 420
cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt caattcatca ccacgggtcc gattatcgca 480
atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac 540
tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt 600
atccgtaatg cagcacatgg tccggactca ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg 660
tttttcccga gctctggcgg ttgcggtccg gcaaacaccg ccaaatttac ctga 714
<210> 49
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-A3序列
<400> 49
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser
210 215 220
Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr
225 230 235
<210> 50
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B序列
<400> 50
atgaattgta cgtgctgtat tgtcaaaccg cacgcagtgt cagaaggcct gctgggtaaa 60
attctgatgg caatccgtga tgctggcttt gaaatctcgg ccatgcagat gttcaacatg 120
gaccgcgtta acgtcgaaga attctacgaa gtttacaaag gcgtggttac cgaatatcac 180
gatatggtta cggaaatgta ctccggtccg tgcgtcgcga tggaaattca gcaaaacaat 240
gccaccaaaa cgtttcgtga attctgtggt ccggcagatc cggaaatcgc acgtcatctg 300
cgtccgggta ccctgcgcgc aatttttggt aaaacgaaaa tccagaacgc tgtgcactgt 360
accgatctgc cggaagacgg tctgctggaa gttcaatact ttttctga 408
<210> 51
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B序列
<400> 51
Met Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
1 5 10 15
Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
20 25 30
Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe
35 40 45
Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr
50 55 60
Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn
65 70 75 80
Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile
85 90 95
Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr
100 105 110
Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu
115 120 125
Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe
130 135
<210> 52
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B1序列
<400> 52
atgaattgta cgtgctgtat tgtcaaaccg cacgcagtgt cagaaggcct gctgggtaaa 60
attctgatgg caatccgtga tgctggcttt gaaatctcgg ccatgcagat gttcaacatg 120
gaccgcgtta acgtcgaaga attctacgaa gtttacaaag gcgtggttac cgaatatcac 180
gatatggtta cggaaatgta ctccggtccg tgcgtcgcga tggaaattca gcaaaacaat 240
gccaccaaaa cgtttcgtga attctgtggt ccggcagatc cggaaatcgc acgtcatctg 300
cgtccgggta ccctgcgcgc aatttttggt aaaacgaaaa tccagaacgc tgtgcactgt 360
accgatctgc cggaagacgg tctgctggaa gttcaatact ttttcaaaat tctggataat 420
tga 423
<210> 53
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B1序列
<400> 53
Met Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
1 5 10 15
Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
20 25 30
Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe
35 40 45
Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr
50 55 60
Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn
65 70 75 80
Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile
85 90 95
Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr
100 105 110
Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu
115 120 125
Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
130 135 140
<210> 54
<211> 453
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B2序列
<400> 54
atgccgagct ctggcggttg cggtccggca aacaccgcca aatttaccaa ttgtacgtgc 60
tgtattgtca aaccgcacgc agtgtcagaa ggcctgctgg gtaaaattct gatggcaatc 120
cgtgatgctg gctttgaaat ctcggccatg cagatgttca acatggaccg cgttaacgtc 180
gaagaattct acgaagttta caaaggcgtg gttaccgaat atcacgatat ggttacggaa 240
atgtactccg gtccgtgcgt cgcgatggaa attcagcaaa acaatgccac caaaacgttt 300
cgtgaattct gtggtccggc agatccggaa atcgcacgtc atctgcgtcc gggtaccctg 360
cgcgcaattt ttggtaaaac gaaaatccag aacgctgtgc actgtaccga tctgccggaa 420
gacggtctgc tggaagttca atactttttc tga 453
<210> 55
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B2序列
<400> 55
Met Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr
1 5 10 15
Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu
20 25 30
Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser
35 40 45
Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr
50 55 60
Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu
65 70 75 80
Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala
85 90 95
Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala
100 105 110
Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys
115 120 125
Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu
130 135 140
Glu Val Gln Tyr Phe Phe
145 150
<210> 56
<211> 468
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B3序列
<400> 56
atgccgagct ctggcggttg cggtccggca aacaccgcca aatttaccaa ttgtacgtgc 60
tgtattgtca aaccgcacgc agtgtcagaa ggcctgctgg gtaaaattct gatggcaatc 120
cgtgatgctg gctttgaaat ctcggccatg cagatgttca acatggaccg cgttaacgtc 180
gaagaattct acgaagttta caaaggcgtg gttaccgaat atcacgatat ggttacggaa 240
atgtactccg gtccgtgcgt cgcgatggaa attcagcaaa acaatgccac caaaacgttt 300
cgtgaattct gtggtccggc agatccggaa atcgcacgtc atctgcgtcc gggtaccctg 360
cgcgcaattt ttggtaaaac gaaaatccag aacgctgtgc actgtaccga tctgccggaa 420
gacggtctgc tggaagttca atactttttc aaaattctgg ataattga 468
<210> 57
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-B3序列
<400> 57
Met Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr
1 5 10 15
Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu
20 25 30
Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser
35 40 45
Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr
50 55 60
Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu
65 70 75 80
Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala
85 90 95
Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala
100 105 110
Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys
115 120 125
Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu
130 135 140
Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
145 150 155
<210> 58
<211> 861
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-AB序列
<400> 58
atggaaaaaa cgctggccct gattaaaccg gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc 60
gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt 120
aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt 180
caattcatca ccacgggtcc gattatcgca atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc 240
gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa 300
tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt atccgtaatg cagcacatgg tccggactca 360
ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg tttttcccga gctctggcgg ttgcggtccg 420
gcaaacaccg ccaaatttac caattgtacg tgctgtattg tcaaaccgca cgcagtgtca 480
gaaggcctgc tgggtaaaat tctgatggca atccgtgatg ctggctttga aatctcggcc 540
atgcagatgt tcaacatgga ccgcgttaac gtcgaagaat tctacgaagt ttacaaaggc 600
gtggttaccg aatatcacga tatggttacg gaaatgtact ccggtccgtg cgtcgcgatg 660
gaaattcagc aaaacaatgc caccaaaacg tttcgtgaat tctgtggtcc ggcagatccg 720
gaaatcgcac gtcatctgcg tccgggtacc ctgcgcgcaa tttttggtaa aacgaaaatc 780
cagaacgctg tgcactgtac cgatctgccg gaagacggtc tgctggaagt tcaatacttt 840
ttcaaaattc tggataattg a 861
<210> 59
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-AB序列
<400> 59
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
145 150 155 160
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe
165 170 175
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
180 185 190
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met
195 200 205
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln
210 215 220
Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro
225 230 235 240
Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly
245 250 255
Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp
260 265 270
Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
275 280 285
<210> 60
<211> 846
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-AB1序列
<400> 60
atggaaaaaa cgctggccct gattaaaccg gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc 60
gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt 120
aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt 180
caattcatca ccacgggtcc gattatcgca atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc 240
gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa 300
tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt atccgtaatg cagcacatgg tccggactca 360
ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg tttttcccga gctctggcgg ttgcggtccg 420
gcaaacaccg ccaaatttac caattgtacg tgctgtattg tcaaaccgca cgcagtgtca 480
gaaggcctgc tgggtaaaat tctgatggca atccgtgatg ctggctttga aatctcggcc 540
atgcagatgt tcaacatgga ccgcgttaac gtcgaagaat tctacgaagt ttacaaaggc 600
gtggttaccg aatatcacga tatggttacg gaaatgtact ccggtccgtg cgtcgcgatg 660
gaaattcagc aaaacaatgc caccaaaacg tttcgtgaat tctgtggtcc ggcagatccg 720
gaaatcgcac gtcatctgcg tccgggtacc ctgcgcgcaa tttttggtaa aacgaaaatc 780
cagaacgctg tgcactgtac cgatctgccg gaagacggtc tgctggaagt tcaatacttt 840
ttctga 846
<210> 61
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME7-AB1序列
<400> 61
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
145 150 155 160
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe
165 170 175
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
180 185 190
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met
195 200 205
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln
210 215 220
Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro
225 230 235 240
Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly
245 250 255
Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp
260 265 270
Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe
275 280
<210> 62
<211> 570
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的小鼠NME6
<400> 62
atgacctcca tcttgcgaag tccccaagct cttcagctca cactagccct gatcaagcct 60
gatgcagttg cccacccact gatcctggag gctgttcatc agcagattct gagcaacaag 120
ttcctcattg tacgaacgag ggaactgcag tggaagctgg aggactgccg gaggttttac 180
cgagagcatg aagggcgttt tttctatcag cggctggtgg agttcatgac aagtgggcca 240
atccgagcct atatccttgc ccacaaagat gccatccaac tttggaggac actgatggga 300
cccaccagag tatttcgagc acgctatata gccccagatt caattcgtgg aagtttgggc 360
ctcactgaca cccgaaatac tacccatggc tcagactccg tggtttccgc cagcagagag 420
attgcagcct tcttccctga cttcagtgaa cagcgctggt atgaggagga ggaaccccag 480
ctgcggtgtg gtcctgtgca ctacagtcca gaggaaggta tccactgtgc agctgaaaca 540
ggaggccaca aacaacctaa caaaacctag 570
<210> 63
<211> 189
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠NME6
<400> 63
Met Thr Ser Ile Leu Arg Ser Pro Gln Ala Leu Gln Leu Thr Leu Ala
1 5 10 15
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala His Pro Leu Ile Leu Glu Ala Val
20 25 30
His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys Phe Leu Ile Val Arg Thr Arg Glu
35 40 45
Leu Gln Trp Lys Leu Glu Asp Cys Arg Arg Phe Tyr Arg Glu His Glu
50 55 60
Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu Val Glu Phe Met Thr Ser Gly Pro
65 70 75 80
Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His Lys Asp Ala Ile Gln Leu Trp Arg
85 90 95
Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val Phe Arg Ala Arg Tyr Ile Ala Pro
100 105 110
Asp Ser Ile Arg Gly Ser Leu Gly Leu Thr Asp Thr Arg Asn Thr Thr
115 120 125
His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser Ala Ser Arg Glu Ile Ala Ala Phe
130 135 140
Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg Trp Tyr Glu Glu Glu Glu Pro Gln
145 150 155 160
Leu Arg Cys Gly Pro Val His Tyr Ser Pro Glu Glu Gly Ile His Cys
165 170 175
Ala Ala Glu Thr Gly Gly His Lys Gln Pro Asn Lys Thr
180 185
<210> 64
<211> 585
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的人NME6
<400> 64
atgacccaga atctggggag tgagatggcc tcaatcttgc gaagccctca ggctctccag 60
ctcactctag ccctgatcaa gcctgacgca gtcgcccatc cactgattct ggaggctgtt 120
catcagcaga ttctaagcaa caagttcctg attgtacgaa tgagagaact actgtggaga 180
aaggaagatt gccagaggtt ttaccgagag catgaagggc gttttttcta tcagaggctg 240
gtggagttca tggccagcgg gccaatccga gcctacatcc ttgcccacaa ggatgccatc 300
cagctctgga ggacgctcat gggacccacc agagtgttcc gagcacgcca tgtggcccca 360
gattctatcc gtgggagttt cggcctcact gacacccgca acaccaccca tggttcggac 420
tctgtggttt cagccagcag agagattgca gccttcttcc ctgacttcag tgaacagcgc 480
tggtatgagg aggaagagcc ccagttgcgc tgtggccctg tgtgctatag cccagaggga 540
ggtgtccact atgtagctgg aacaggaggc ctaggaccag cctga 585
<210> 65
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME6
<400> 65
Met Thr Gln Asn Leu Gly Ser Glu Met Ala Ser Ile Leu Arg Ser Pro
1 5 10 15
Gln Ala Leu Gln Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala
20 25 30
His Pro Leu Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys
35 40 45
Phe Leu Ile Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys
50 55 60
Gln Arg Phe Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu
65 70 75 80
Val Glu Phe Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His
85 90 95
Lys Asp Ala Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val
100 105 110
Phe Arg Ala Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly
115 120 125
Leu Thr Asp Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser
130 135 140
Ala Ser Arg Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg
145 150 155 160
Trp Tyr Glu Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val Cys Tyr
165 170 175
Ser Pro Glu Gly Gly Val His Tyr Val Ala Gly Thr Gly Gly Leu Gly
180 185 190
Pro Ala
<210> 66
<211> 525
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的人NME6 1
<400> 66
atgacccaga atctggggag tgagatggcc tcaatcttgc gaagccctca ggctctccag 60
ctcactctag ccctgatcaa gcctgacgca gtcgcccatc cactgattct ggaggctgtt 120
catcagcaga ttctaagcaa caagttcctg attgtacgaa tgagagaact actgtggaga 180
aaggaagatt gccagaggtt ttaccgagag catgaagggc gttttttcta tcagaggctg 240
gtggagttca tggccagcgg gccaatccga gcctacatcc ttgcccacaa ggatgccatc 300
cagctctgga ggacgctcat gggacccacc agagtgttcc gagcacgcca tgtggcccca 360
gattctatcc gtgggagttt cggcctcact gacacccgca acaccaccca tggttcggac 420
tctgtggttt cagccagcag agagattgca gccttcttcc ctgacttcag tgaacagcgc 480
tggtatgagg aggaagagcc ccagttgcgc tgtggccctg tgtga 525
<210> 67
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME6 1
<400> 67
Met Thr Gln Asn Leu Gly Ser Glu Met Ala Ser Ile Leu Arg Ser Pro
1 5 10 15
Gln Ala Leu Gln Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala
20 25 30
His Pro Leu Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys
35 40 45
Phe Leu Ile Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys
50 55 60
Gln Arg Phe Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu
65 70 75 80
Val Glu Phe Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His
85 90 95
Lys Asp Ala Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val
100 105 110
Phe Arg Ala Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly
115 120 125
Leu Thr Asp Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser
130 135 140
Ala Ser Arg Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg
145 150 155 160
Trp Tyr Glu Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val
165 170
<210> 68
<211> 468
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的人NME6 2
<400> 68
atgctcactc tagccctgat caagcctgac gcagtcgccc atccactgat tctggaggct 60
gttcatcagc agattctaag caacaagttc ctgattgtac gaatgagaga actactgtgg 120
agaaaggaag attgccagag gttttaccga gagcatgaag ggcgtttttt ctatcagagg 180
ctggtggagt tcatggccag cgggccaatc cgagcctaca tccttgccca caaggatgcc 240
atccagctct ggaggacgct catgggaccc accagagtgt tccgagcacg ccatgtggcc 300
ccagattcta tccgtgggag tttcggcctc actgacaccc gcaacaccac ccatggttcg 360
gactctgtgg tttcagccag cagagagatt gcagccttct tccctgactt cagtgaacag 420
cgctggtatg aggaggaaga gccccagttg cgctgtggcc ctgtgtga 468
<210> 69
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME6 2
<400> 69
Met Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala His Pro Leu
1 5 10 15
Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys Phe Leu Ile
20 25 30
Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys Gln Arg Phe
35 40 45
Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu Val Glu Phe
50 55 60
Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His Lys Asp Ala
65 70 75 80
Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val Phe Arg Ala
85 90 95
Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly Leu Thr Asp
100 105 110
Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser Ala Ser Arg
115 120 125
Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg Trp Tyr Glu
130 135 140
Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val
145 150 155
<210> 70
<211> 528
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的人NME6 3
<400> 70
atgctcactc tagccctgat caagcctgac gcagtcgccc atccactgat tctggaggct 60
gttcatcagc agattctaag caacaagttc ctgattgtac gaatgagaga actactgtgg 120
agaaaggaag attgccagag gttttaccga gagcatgaag ggcgtttttt ctatcagagg 180
ctggtggagt tcatggccag cgggccaatc cgagcctaca tccttgccca caaggatgcc 240
atccagctct ggaggacgct catgggaccc accagagtgt tccgagcacg ccatgtggcc 300
ccagattcta tccgtgggag tttcggcctc actgacaccc gcaacaccac ccatggttcg 360
gactctgtgg tttcagccag cagagagatt gcagccttct tccctgactt cagtgaacag 420
cgctggtatg aggaggaaga gccccagttg cgctgtggcc ctgtgtgcta tagcccagag 480
ggaggtgtcc actatgtagc tggaacagga ggcctaggac cagcctga 528
<210> 71
<211> 175
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME6 3
<400> 71
Met Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala His Pro Leu
1 5 10 15
Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys Phe Leu Ile
20 25 30
Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys Gln Arg Phe
35 40 45
Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu Val Glu Phe
50 55 60
Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His Lys Asp Ala
65 70 75 80
Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val Phe Arg Ala
85 90 95
Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly Leu Thr Asp
100 105 110
Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser Ala Ser Arg
115 120 125
Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg Trp Tyr Glu
130 135 140
Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val Cys Tyr Ser Pro Glu
145 150 155 160
Gly Gly Val His Tyr Val Ala Gly Thr Gly Gly Leu Gly Pro Ala
165 170 175
<210> 72
<211> 585
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6序列
<400> 72
atgacgcaaa atctgggctc ggaaatggca agtatcctgc gctccccgca agcactgcaa 60
ctgaccctgg ctctgatcaa accggacgct gttgctcatc cgctgattct ggaagcggtc 120
caccagcaaa ttctgagcaa caaatttctg atcgtgcgta tgcgcgaact gctgtggcgt 180
aaagaagatt gccagcgttt ttatcgcgaa catgaaggcc gtttctttta tcaacgcctg 240
gttgaattca tggcctctgg tccgattcgc gcatatatcc tggctcacaa agatgcgatt 300
cagctgtggc gtaccctgat gggtccgacg cgcgtctttc gtgcacgtca tgtggcaccg 360
gactcaatcc gtggctcgtt cggtctgacc gatacgcgca ataccacgca cggtagcgac 420
tctgttgtta gtgcgtcccg tgaaatcgcg gcctttttcc cggacttctc cgaacagcgt 480
tggtacgaag aagaagaacc gcaactgcgc tgtggcccgg tctgttattc tccggaaggt 540
ggtgtccatt atgtggcggg cacgggtggt ctgggtccgg catga 585
<210> 73
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6序列
<400> 73
Met Thr Gln Asn Leu Gly Ser Glu Met Ala Ser Ile Leu Arg Ser Pro
1 5 10 15
Gln Ala Leu Gln Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala
20 25 30
His Pro Leu Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys
35 40 45
Phe Leu Ile Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys
50 55 60
Gln Arg Phe Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu
65 70 75 80
Val Glu Phe Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His
85 90 95
Lys Asp Ala Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val
100 105 110
Phe Arg Ala Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly
115 120 125
Leu Thr Asp Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser
130 135 140
Ala Ser Arg Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg
145 150 155 160
Trp Tyr Glu Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val Cys Tyr
165 170 175
Ser Pro Glu Gly Gly Val His Tyr Val Ala Gly Thr Gly Gly Leu Gly
180 185 190
Pro Ala
<210> 74
<211> 525
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6 1序列
<400> 74
atgacgcaaa atctgggctc ggaaatggca agtatcctgc gctccccgca agcactgcaa 60
ctgaccctgg ctctgatcaa accggacgct gttgctcatc cgctgattct ggaagcggtc 120
caccagcaaa ttctgagcaa caaatttctg atcgtgcgta tgcgcgaact gctgtggcgt 180
aaagaagatt gccagcgttt ttatcgcgaa catgaaggcc gtttctttta tcaacgcctg 240
gttgaattca tggcctctgg tccgattcgc gcatatatcc tggctcacaa agatgcgatt 300
cagctgtggc gtaccctgat gggtccgacg cgcgtctttc gtgcacgtca tgtggcaccg 360
gactcaatcc gtggctcgtt cggtctgacc gatacgcgca ataccacgca cggtagcgac 420
tctgttgtta gtgcgtcccg tgaaatcgcg gcctttttcc cggacttctc cgaacagcgt 480
tggtacgaag aagaagaacc gcaactgcgc tgtggcccgg tctga 525
<210> 75
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6 1序列
<400> 75
Met Thr Gln Asn Leu Gly Ser Glu Met Ala Ser Ile Leu Arg Ser Pro
1 5 10 15
Gln Ala Leu Gln Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala
20 25 30
His Pro Leu Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys
35 40 45
Phe Leu Ile Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys
50 55 60
Gln Arg Phe Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu
65 70 75 80
Val Glu Phe Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His
85 90 95
Lys Asp Ala Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val
100 105 110
Phe Arg Ala Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly
115 120 125
Leu Thr Asp Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser
130 135 140
Ala Ser Arg Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg
145 150 155 160
Trp Tyr Glu Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val
165 170
<210> 76
<211> 468
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6 2序列
<400> 76
atgctgaccc tggctctgat caaaccggac gctgttgctc atccgctgat tctggaagcg 60
gtccaccagc aaattctgag caacaaattt ctgatcgtgc gtatgcgcga actgctgtgg 120
cgtaaagaag attgccagcg tttttatcgc gaacatgaag gccgtttctt ttatcaacgc 180
ctggttgaat tcatggcctc tggtccgatt cgcgcatata tcctggctca caaagatgcg 240
attcagctgt ggcgtaccct gatgggtccg acgcgcgtct ttcgtgcacg tcatgtggca 300
ccggactcaa tccgtggctc gttcggtctg accgatacgc gcaataccac gcacggtagc 360
gactctgttg ttagtgcgtc ccgtgaaatc gcggcctttt tcccggactt ctccgaacag 420
cgttggtacg aagaagaaga accgcaactg cgctgtggcc cggtctga 468
<210> 77
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6 2序列
<400> 77
Met Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala His Pro Leu
1 5 10 15
Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys Phe Leu Ile
20 25 30
Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys Gln Arg Phe
35 40 45
Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu Val Glu Phe
50 55 60
Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His Lys Asp Ala
65 70 75 80
Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val Phe Arg Ala
85 90 95
Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly Leu Thr Asp
100 105 110
Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser Ala Ser Arg
115 120 125
Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg Trp Tyr Glu
130 135 140
Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val Met Leu Thr Leu Ala
145 150 155 1 5
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala His Pro Leu Ile Leu Glu Ala Val
10 15 20
His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys Phe Leu Ile Val Arg Met Arg Glu
25 30 35
Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys Gln Arg Phe Tyr Arg Glu His Glu
40 45 50
Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu Val Glu Phe Met Ala Ser Gly Pro
55 60 65
Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His Lys Asp Ala Ile Gln Leu Trp Arg
70 75 80 85
Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val Phe Arg Ala Arg His Val Ala Pro
90 95 100
Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly Leu Thr Asp Thr Arg Asn Thr Thr
105 110 115
His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser Ala Ser Arg Glu Ile Ala Ala Phe
120 125 130
Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg Trp Tyr Glu Glu Glu Glu Pro Gln
135 140 145
Leu Arg Cys Gly Pro Val
150 155
<210> 78
<211> 528
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6 3序列
<400> 78
atgctgaccc tggctctgat caaaccggac gctgttgctc atccgctgat tctggaagcg 60
gtccaccagc aaattctgag caacaaattt ctgatcgtgc gtatgcgcga actgctgtgg 120
cgtaaagaag attgccagcg tttttatcgc gaacatgaag gccgtttctt ttatcaacgc 180
ctggttgaat tcatggcctc tggtccgatt cgcgcatata tcctggctca caaagatgcg 240
attcagctgt ggcgtaccct gatgggtccg acgcgcgtct ttcgtgcacg tcatgtggca 300
ccggactcaa tccgtggctc gttcggtctg accgatacgc gcaataccac gcacggtagc 360
gactctgttg ttagtgcgtc ccgtgaaatc gcggcctttt tcccggactt ctccgaacag 420
cgttggtacg aagaagaaga accgcaactg cgctgtggcc cggtctgtta ttctccggaa 480
ggtggtgtcc attatgtggc gggcacgggt ggtctgggtc cggcatga 528
<210> 79
<211> 175
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 对于大肠杆菌表达优化的人NME6 3序列
<400> 79
Met Leu Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Val Ala His Pro Leu
1 5 10 15
Ile Leu Glu Ala Val His Gln Gln Ile Leu Ser Asn Lys Phe Leu Ile
20 25 30
Val Arg Met Arg Glu Leu Leu Trp Arg Lys Glu Asp Cys Gln Arg Phe
35 40 45
Tyr Arg Glu His Glu Gly Arg Phe Phe Tyr Gln Arg Leu Val Glu Phe
50 55 60
Met Ala Ser Gly Pro Ile Arg Ala Tyr Ile Leu Ala His Lys Asp Ala
65 70 75 80
Ile Gln Leu Trp Arg Thr Leu Met Gly Pro Thr Arg Val Phe Arg Ala
85 90 95
Arg His Val Ala Pro Asp Ser Ile Arg Gly Ser Phe Gly Leu Thr Asp
100 105 110
Thr Arg Asn Thr Thr His Gly Ser Asp Ser Val Val Ser Ala Ser Arg
115 120 125
Glu Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asp Phe Ser Glu Gln Arg Trp Tyr Glu
130 135 140
Glu Glu Glu Pro Gln Leu Arg Cys Gly Pro Val Cys Tyr Ser Pro Glu
145 150 155 160
Gly Gly Val His Tyr Val Ala Gly Thr Gly Gly Leu Gly Pro Ala
165 170 175
<210> 80
<211> 1306
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> OriGene-NME7-1全长
<400> 80
gacgttgtat acgactccta tagggcggcc gggaattcgt cgactggatc cggtaccgag 60
gagatctgcc gccgcgatcg ccatgaatca tagtgaaaga ttcgttttca ttgcagagtg 120
gtatgatcca aatgcttcac ttcttcgacg ttatgagctt ttattttacc caggggatgg 180
atctgttgaa atgcatgatg taaagaatca tcgcaccttt ttaaagcgga ccaaatatga 240
taacctgcac ttggaagatt tatttatagg caacaaagtg aatgtcttct ctcgacaact 300
ggtattaatt gactatgggg atcaatatac agctcgccag ctgggcagta ggaaagaaaa 360
aacgctagcc ctaattaaac cagatgcaat atcaaaggct ggagaaataa ttgaaataat 420
aaacaaagct ggatttacta taaccaaact caaaatgatg atgctttcaa ggaaagaagc 480
attggatttt catgtagatc accagtcaag accctttttc aatgagctga tccagtttat 540
tacaactggt cctattattg ccatggagat tttaagagat gatgctatat gtgaatggaa 600
aagactgctg ggacctgcaa actctggagt ggcacgcaca gatgcttctg aaagcattag 660
agccctcttt ggaacagatg gcataagaaa tgcagcgcat ggccctgatt cttttgcttc 720
tgcggccaga gaaatggagt tgttttttcc ttcaagtgga ggttgtgggc cggcaaacac 780
tgctaaattt actaattgta cctgttgcat tgttaaaccc catgctgtca gtgaaggact 840
gttgggaaag atcctgatgg ctatccgaga tgcaggtttt gaaatctcag ctatgcagat 900
gttcaatatg gatcgggtta atgttgagga attctatgaa gtttataaag gagtagtgac 960
cgaatatcat gacatggtga cagaaatgta ttctggccct tgtgtagcaa tggagattca 1020
acagaataat gctacaaaga catttcgaga attttgtgga cctgctgatc ctgaaattgc 1080
ccggcattta cgccctggaa ctctcagagc aatctttggt aaaactaaga tccagaatgc 1140
tgttcactgt actgatctgc cagaggatgg cctattagag gttcaatact tcttcaagat 1200
cttggataat acgcgtacgc ggccgctcga gcagaaactc atctcagaag aggatctggc 1260
agcaaatgat atcctggatt acaaggatga cgacgataag gtttaa 1306
<210> 81
<211> 407
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OriGene-NME7-1全长
<400> 81
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser
210 215 220
Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr
225 230 235 240
Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys
245 250 255
Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln
260 265 270
Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr
275 280 285
Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser
290 295 300
Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr
305 310 315 320
Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu
325 330 335
Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn
340 345 350
Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln
355 360 365
Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn Thr Arg Thr Arg Arg Leu Glu Gln
370 375 380
Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Ala Ala Asn Asp Ile Leu Asp Tyr
385 390 395 400
Lys Asp Asp Asp Asp Lys Val
405
<210> 82
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Abnova NME7-1全长
<400> 82
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser
210 215 220
Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr
225 230 235 240
Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys
245 250 255
Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln
260 265 270
Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr
275 280 285
Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser
290 295 300
Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr
305 310 315 320
Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu
325 330 335
Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn
340 345 350
Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln
355 360 365
Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
370 375
<210> 83
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Abnova部分NME7-B
<400> 83
Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val
1 5 10 15
Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val
20 25 30
Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe
35 40 45
Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr
50 55 60
Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys
65 70 75 80
Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys
85 90 95
Ile Leu
<210> 84
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的组氨酸标签
<400> 84
ctcgagcacc accaccacca ccactga 27
<210> 85
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA编码的Strept II标签
<400> 85
accggttgga gccatcctca gttcgaaaag taatga 36
<210> 86
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> N-10肽
<400> 86
Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr Glu Ala Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ile Ser Asp Val Ser Val Ser Asp Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln
20 25 30
Ser Gly Ala
35
<210> 87
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C-10肽
<400> 87
Gly Thr Ile Asn Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys
1 5 10 15
Thr Glu Ala Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val
20 25 30
Ser Asp Val
35
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 88
Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala
1 5
<210> 89
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 89
Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His
1 5 10 15
Gln Ser
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 90
Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser
1 5 10
<210> 91
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 91
Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu
1 5 10
<210> 92
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 92
Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro
1 5 10
<210> 93
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 93
Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp
1 5
<210> 94
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 94
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe
1 5 10 15
Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala
20 25
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 95
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly
1 5
<210> 96
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 96
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
1 5 10 15
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala
20 25
<210> 97
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 97
Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln Met
1 5 10 15
Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys
20 25 30
Gly Val Val Thr
35
<210> 98
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 98
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp
1 5 10 15
<210> 99
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 99
Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly
1 5 10 15
Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg
20 25 30
Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala
35 40
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 100
Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met
1 5
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 101
Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro
1 5
<210> 102
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 102
Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr
1 5 10 15
Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
20
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 103
Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp
1 5
<210> 104
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 104
Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys
1 5 10 15
Ile Leu Asp Asn
20
<210> 105
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 105
Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys
1 5 10
<210> 106
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 106
Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
1 5 10
<210> 107
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 107
Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser
1 5 10 15
<210> 108
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 108
Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr
1 5
<210> 109
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 109
Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu
1 5 10
<210> 110
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 110
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe
1 5 10 15
Gly Thr Asp Gly Ile
20
<210> 111
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 111
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser
1 5 10
<210> 112
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 112
Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile
1 5
<210> 113
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 113
Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu
1 5 10
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 114
Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala
1 5 10
<210> 115
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 115
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
1 5 10 15
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 116
Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr
1 5
<210> 117
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 117
Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu
1 5
<210> 118
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 118
Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu Arg
1 5 10 15
<210> 119
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 119
Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val
1 5 10
<210> 120
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 120
Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu
1 5 10 15
Asp Asn
<210> 121
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 121
Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe
1 5 10 15
Pro
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 122
Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu
1 5
<210> 123
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 123
Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala
1 5 10
<210> 124
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 124
His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys
1 5 10
<210> 125
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 125
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro
1 5
<210> 126
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 126
Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe
1 5
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 127
Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
1 5
<210> 128
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 128
Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn
1 5 10
<210> 129
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 129
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe
1 5
<210> 130
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 130
Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn
1 5 10
<210> 131
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 131
Val Asp His Gln Ser Arg Pro Phe
1 5
<210> 132
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 132
Pro Asp Ser Phe Ala Ser
1 5
<210> 133
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME7的免疫化肽
<400> 133
Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile
1 5 10 15
Thr Lys
<210> 134
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 134
Met Ala Asn Cys Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val
1 5 10 15
Gln Arg Gly Leu Val Gly Glu Ile Ile Lys Arg Phe Glu
20 25
<210> 135
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 135
Val Asp Leu Lys Asp Arg Pro Phe
1 5
<210> 136
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 136
His Gly Ser Asp Ser Val Glu Ser Ala Glu Lys Glu Ile Gly Leu Trp
1 5 10 15
Phe
<210> 137
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 137
Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu
1 5 10 15
Val Gly Glu Ile Ile Lys Arg Phe Glu
20 25
<210> 138
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 138
Val Asp Leu Lys Asp Arg Pro Phe Phe Ala Gly Leu Val Lys Tyr Met
1 5 10 15
His Ser Gly Pro Val Val Ala Met Val Trp Glu Gly Leu Asn
20 25 30
<210> 139
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 139
Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Ser Val Glu Ser Ala Glu Lys Glu Ile
1 5 10 15
Gly Leu Trp Phe His Pro Glu Glu Leu Val
20 25
<210> 140
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自人NME1的免疫化肽
<400> 140
Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Val Gly Glu Ile Ile
1 5 10
<210> 141
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽 A1
<400> 141
Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser
1 5 10 15
<210> 142
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽 A2
<400> 142
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser
1 5 10
<210> 143
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽 B1
<400> 143
Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg
1 5 10 15
Val Asn Val Glu
20
<210> 144
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽 B2
<400> 144
Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu
1 5 10 15
<210> 145
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽 B3
<400> 145
Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp
1 5 10 15
Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe
20 25
<210> 146
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 a
<400> 146
atgaatcata gtgaaagatt cgttttcatt gcagagtggt atgatccaaa tgcttcactt 60
cttcgacgtt atgagctttt attttaccca ggggatggat ctgttgaaat gcatgatgta 120
aagaatcatc gcaccttttt aaagcggacc aaatatgata acctgcactt ggaagattta 180
tttataggca acaaagtgaa tgtcttttct cgacaactgg tattaattga ctatggggat 240
caatatacag ctcgccagct gggcagtagg aaagaaaaaa cgctagccct aattaaacca 300
gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt gaaataataa acaaagctgg atttactata 360
accaaactca aaatgatgat gctttcaagg aaagaagcat tggattttca tgtagatcac 420
cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc cagtttatta caactggtcc tattattgcc 480
atggagattt taagagatga tgctatatgt gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac 540
tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa agcattagag ccctctttgg aacagatggc 600
ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct tttgcttctg cggccagaga aatggagttg 660
ttttttcctt caagtggagg ttgtgggccg gcaaacactg ctaaatttac taattgtacc 720
tgttgcattg ttaaacccca tgctgtcagt gaaggactgt tgggaaagat cctgatggct 780
atccgagatg caggttttga aatctcagct atgcagatgt tcaatatgga tcgggttaat 840
gttgaggaat tctatgaagt ttataaagga gtagtgaccg aatatcatga catggtgaca 900
gaaatgtatt ctggcccttg tgtagcaatg gagattcaac agaataatgc tacaaagaca 960
tttcgagaat tttgtggacc tgctgatcct gaaattgccc ggcatttacg ccctggaact 1020
ctcagagcaa tctttggtaa aactaagatc cagaatgctg ttcactgtac tgatctgcca 1080
gaggatggcc tattagaggt tcaatacttc ttcaagatct tggataatta g 1131
<210> 147
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 a
<400> 147
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser
210 215 220
Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr
225 230 235 240
Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys
245 250 255
Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln
260 265 270
Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr
275 280 285
Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser
290 295 300
Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr
305 310 315 320
Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu
325 330 335
Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn
340 345 350
Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln
355 360 365
Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
370 375
<210> 148
<211> 1023
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 b
<400> 148
atgcatgatg taaagaatca tcgcaccttt ttaaagcgga ccaaatatga taacctgcac 60
ttggaagatt tatttatagg caacaaagtg aatgtctttt ctcgacaact ggtattaatt 120
gactatgggg atcaatatac agctcgccag ctgggcagta ggaaagaaaa aacgctagcc 180
ctaattaaac cagatgcaat atcaaaggct ggagaaataa ttgaaataat aaacaaagct 240
ggatttacta taaccaaact caaaatgatg atgctttcaa ggaaagaagc attggatttt 300
catgtagatc accagtcaag accctttttc aatgagctga tccagtttat tacaactggt 360
cctattattg ccatggagat tttaagagat gatgctatat gtgaatggaa aagactgctg 420
ggacctgcaa actctggagt ggcacgcaca gatgcttctg aaagcattag agccctcttt 480
ggaacagatg gcataagaaa tgcagcgcat ggccctgatt cttttgcttc tgcggccaga 540
gaaatggagt tgttttttcc ttcaagtgga ggttgtgggc cggcaaacac tgctaaattt 600
actaattgta cctgttgcat tgttaaaccc catgctgtca gtgaaggact gttgggaaag 660
atcctgatgg ctatccgaga tgcaggtttt gaaatctcag ctatgcagat gttcaatatg 720
gatcgggtta atgttgagga attctatgaa gtttataaag gagtagtgac cgaatatcat 780
gacatggtga cagaaatgta ttctggccct tgtgtagcaa tggagattca acagaataat 840
gctacaaaga catttcgaga attttgtgga cctgctgatc ctgaaattgc ccggcattta 900
cgccctggaa ctctcagagc aatctttggt aaaactaaga tccagaatgc tgttcactgt 960
actgatctgc cagaggatgg cctattagag gttcaatact tcttcaagat cttggataat 1020
tag 1023
<210> 149
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 b
<400> 149
Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys Arg Thr Lys Tyr
1 5 10 15
Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn Lys Val Asn Val
20 25 30
Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp Gln Tyr Thr Ala
35 40 45
Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro
50 55 60
Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala
65 70 75 80
Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu
85 90 95
Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu
100 105 110
Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu
115 120 125
Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn
130 135 140
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe
145 150 155 160
Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala
165 170 175
Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys
180 185 190
Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val
195 200 205
Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala
210 215 220
Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met
225 230 235 240
Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val
245 250 255
Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val
260 265 270
Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe
275 280 285
Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr
290 295 300
Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys
305 310 315 320
Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys
325 330 335
Ile Leu Asp Asn
340
<210> 150
<211> 861
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB
<400> 150
atggaaaaaa cgctagccct aattaaacca gatgcaatat caaaggctgg agaaataatt 60
gaaataataa acaaagctgg atttactata accaaactca aaatgatgat gctttcaagg 120
aaagaagcat tggattttca tgtagatcac cagtcaagac cctttttcaa tgagctgatc 180
cagtttatta caactggtcc tattattgcc atggagattt taagagatga tgctatatgt 240
gaatggaaaa gactgctggg acctgcaaac tctggagtgg cacgcacaga tgcttctgaa 300
agcattagag ccctctttgg aacagatggc ataagaaatg cagcgcatgg ccctgattct 360
tttgcttctg cggccagaga aatggagttg ttttttcctt caagtggagg ttgtgggccg 420
gcaaacactg ctaaatttac taattgtacc tgttgcattg ttaaacccca tgctgtcagt 480
gaaggactgt tgggaaagat cctgatggct atccgagatg caggttttga aatctcagct 540
atgcagatgt tcaatatgga tcgggttaat gttgaggaat tctatgaagt ttataaagga 600
gtagtgaccg aatatcatga catggtgaca gaaatgtatt ctggcccttg tgtagcaatg 660
gagattcaac agaataatgc tacaaagaca tttcgagaat tttgtggacc tgctgatcct 720
gaaattgccc ggcatttacg ccctggaact ctcagagcaa tctttggtaa aactaagatc 780
cagaatgctg ttcactgtac tgatctgcca gaggatggcc tattagaggt tcaatacttc 840
ttcaagatct tggataatta g 861
<210> 151
<211> 286
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB
<400> 151
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
145 150 155 160
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe
165 170 175
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
180 185 190
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met
195 200 205
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln
210 215 220
Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro
225 230 235 240
Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly
245 250 255
Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp
260 265 270
Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
275 280 285
<210> 152
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 x1
<400> 152
atgatgatgc tttcaaggaa agaagcattg gattttcatg tagatcacca gtcaagaccc 60
tttttcaatg agctgatcca gtttattaca actggtccta ttattgccat ggagatttta 120
agagatgatg ctatatgtga atggaaaaga ctgctgggac ctgcaaactc tggagtggca 180
cgcacagatg cttctgaaag cattagagcc ctctttggaa cagatggcat aagaaatgca 240
gcgcatggcc ctgattcttt tgcttctgcg gccagagaaa tggagttgtt ttttccttca 300
agtggaggtt gtgggccggc aaacactgct aaatttacta attgtacctg ttgcattgtt 360
aaaccccatg ctgtcagtga aggactgttg ggaaagatcc tgatggctat ccgagatgca 420
ggttttgaaa tctcagctat gcagatgttc aatatggatc gggttaatgt tgaggaattc 480
tatgaagttt ataaaggagt agtgaccgaa tatcatgaca tggtgacaga aatgtattct 540
ggcccttgtg tagcaatgga gattcaacag aataatgcta caaagacatt tcgagaattt 600
tgtggacctg ctgatcctga aattgcccgg catttacgcc ctggaactct cagagcaatc 660
tttggtaaaa ctaagatcca gaatgctgtt cactgtactg atctgccaga ggatggccta 720
ttagaggttc aatacttctt caagatcttg gataattag 759
<210> 153
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 x1
<400> 153
Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His
1 5 10 15
Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly
20 25 30
Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp
35 40 45
Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala
50 55 60
Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala
65 70 75 80
Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu
85 90 95
Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe
100 105 110
Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
115 120 125
Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe
145 150 155 160
Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr
165 170 175
Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn
180 185 190
Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile
195 200 205
Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr
210 215 220
Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu
225 230 235 240
Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn
245 250
<210> 154
<211> 1128
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 a (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 154
atgaatcact ccgaacgctt tgtttttatc gccgaatggt atgacccgaa tgcttccctg 60
ctgcgccgct acgaactgct gttttatccg ggcgatggta gcgtggaaat gcatgacgtt 120
aaaaatcacc gtacctttct gaaacgcacg aaatatgata atctgcatct ggaagacctg 180
tttattggca acaaagtcaa tgtgttctct cgtcagctgg tgctgatcga ttatggcgac 240
cagtacaccg cgcgtcaact gggtagtcgc aaagaaaaaa cgctggccct gattaaaccg 300
gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc 360
acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac 420
cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt caattcatca ccacgggtcc gattatcgca 480
atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac 540
tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt 600
atccgtaatg cagcacatgg tccggactca ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg 660
tttttcccga gctctggcgg ttgcggtccg gcaaacaccg ccaaatttac caattgtacg 720
tgctgtattg tcaaaccgca cgcagtgtca gaaggcctgc tgggtaaaat tctgatggca 780
atccgtgatg ctggctttga aatctcggcc atgcagatgt tcaacatgga ccgcgttaac 840
gtcgaagaat tctacgaagt ttacaaaggc gtggttaccg aatatcacga tatggttacg 900
gaaatgtact ccggtccgtg cgtcgcgatg gaaattcagc aaaacaatgc caccaaaacg 960
tttcgtgaat tctgtggtcc ggcagatccg gaaatcgcac gtcatctgcg tccgggtacc 1020
ctgcgcgcaa tttttggtaa aacgaaaatc cagaacgctg tgcactgtac cgatctgccg 1080
gaagacggtc tgctggaagt tcaatacttt ttcaaaattc tggataat 1128
<210> 155
<211> 378
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 a (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 155
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala
85 90 95
Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile
100 105 110
Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu
115 120 125
Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro
130 135 140
Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala
145 150 155 160
Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu
165 170 175
Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile
180 185 190
Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro
195 200 205
Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser
210 215 220
Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr
225 230 235 240
Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys
245 250 255
Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln
260 265 270
Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr
275 280 285
Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser
290 295 300
Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr
305 310 315 320
Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu
325 330 335
Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn
340 345 350
Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln
355 360 365
Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn Thr Gly
370 375
<210> 156
<211> 1020
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 b (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 156
atgcatgacg ttaaaaatca ccgtaccttt ctgaaacgca cgaaatatga taatctgcat 60
ctggaagacc tgtttattgg caacaaagtc aatgtgttct ctcgtcagct ggtgctgatc 120
gattatggcg accagtacac cgcgcgtcaa ctgggtagtc gcaaagaaaa aacgctggcc 180
ctgattaaac cggatgcaat ctccaaagct ggcgaaatta tcgaaattat caacaaagcg 240
ggtttcacca tcacgaaact gaaaatgatg atgctgagcc gtaaagaagc cctggatttt 300
catgtcgacc accagtctcg cccgtttttc aatgaactga ttcaattcat caccacgggt 360
ccgattatcg caatggaaat tctgcgtgat gacgctatct gcgaatggaa acgcctgctg 420
ggcccggcaa actcaggtgt tgcgcgtacc gatgccagtg aatccattcg cgctctgttt 480
ggcaccgatg gtatccgtaa tgcagcacat ggtccggact cattcgcatc ggcagctcgt 540
gaaatggaac tgtttttccc gagctctggc ggttgcggtc cggcaaacac cgccaaattt 600
accaattgta cgtgctgtat tgtcaaaccg cacgcagtgt cagaaggcct gctgggtaaa 660
attctgatgg caatccgtga tgctggcttt gaaatctcgg ccatgcagat gttcaacatg 720
gaccgcgtta acgtcgaaga attctacgaa gtttacaaag gcgtggttac cgaatatcac 780
gatatggtta cggaaatgta ctccggtccg tgcgtcgcga tggaaattca gcaaaacaat 840
gccaccaaaa cgtttcgtga attctgtggt ccggcagatc cggaaatcgc acgtcatctg 900
cgtccgggta ccctgcgcgc aatttttggt aaaacgaaaa tccagaacgc tgtgcactgt 960
accgatctgc cggaagacgg tctgctggaa gttcaatact ttttcaaaat tctggataat 1020
<210> 157
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 b (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 157
Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys Arg Thr Lys Tyr
1 5 10 15
Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn Lys Val Asn Val
20 25 30
Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp Gln Tyr Thr Ala
35 40 45
Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro
50 55 60
Asp Ala Ile Ser Lys Ala Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala
65 70 75 80
Gly Phe Thr Ile Thr Lys Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu
85 90 95
Ala Leu Asp Phe His Val Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu
100 105 110
Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu
115 120 125
Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn
130 135 140
Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe
145 150 155 160
Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala
165 170 175
Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys
180 185 190
Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val
195 200 205
Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala
210 215 220
Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met
225 230 235 240
Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val
245 250 255
Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val
260 265 270
Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe
275 280 285
Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr
290 295 300
Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys
305 310 315 320
Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys
325 330 335
Ile Leu Asp Asn Thr Gly
340
<210> 158
<211> 858
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 158
atggaaaaaa cgctggccct gattaaaccg gatgcaatct ccaaagctgg cgaaattatc 60
gaaattatca acaaagcggg tttcaccatc acgaaactga aaatgatgat gctgagccgt 120
aaagaagccc tggattttca tgtcgaccac cagtctcgcc cgtttttcaa tgaactgatt 180
caattcatca ccacgggtcc gattatcgca atggaaattc tgcgtgatga cgctatctgc 240
gaatggaaac gcctgctggg cccggcaaac tcaggtgttg cgcgtaccga tgccagtgaa 300
tccattcgcg ctctgtttgg caccgatggt atccgtaatg cagcacatgg tccggactca 360
ttcgcatcgg cagctcgtga aatggaactg tttttcccga gctctggcgg ttgcggtccg 420
gcaaacaccg ccaaatttac caattgtacg tgctgtattg tcaaaccgca cgcagtgtca 480
gaaggcctgc tgggtaaaat tctgatggca atccgtgatg ctggctttga aatctcggcc 540
atgcagatgt tcaacatgga ccgcgttaac gtcgaagaat tctacgaagt ttacaaaggc 600
gtggttaccg aatatcacga tatggttacg gaaatgtact ccggtccgtg cgtcgcgatg 660
gaaattcagc aaaacaatgc caccaaaacg tttcgtgaat tctgtggtcc ggcagatccg 720
gaaatcgcac gtcatctgcg tccgggtacc ctgcgcgcaa tttttggtaa aacgaaaatc 780
cagaacgctg tgcactgtac cgatctgccg gaagacggtc tgctggaagt tcaatacttt 840
ttcaaaattc tggataat 858
<210> 159
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7-AB (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 159
Met Glu Lys Thr Leu Ala Leu Ile Lys Pro Asp Ala Ile Ser Lys Ala
1 5 10 15
Gly Glu Ile Ile Glu Ile Ile Asn Lys Ala Gly Phe Thr Ile Thr Lys
20 25 30
Leu Lys Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val
35 40 45
Asp His Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr
50 55 60
Thr Gly Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys
65 70 75 80
Glu Trp Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr
85 90 95
Asp Ala Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg
100 105 110
Asn Ala Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met
115 120 125
Glu Leu Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala
130 135 140
Lys Phe Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser
145 150 155 160
Glu Gly Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe
165 170 175
Glu Ile Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu
180 185 190
Glu Phe Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met
195 200 205
Val Thr Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln
210 215 220
Asn Asn Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro
225 230 235 240
Glu Ile Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly
245 250 255
Lys Thr Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp
260 265 270
Gly Leu Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn Thr Gly
275 280 285
<210> 160
<211> 756
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 X1 (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 160
atgatgatgc tgagccgtaa agaagccctg gattttcatg tcgaccacca gtctcgcccg 60
tttttcaatg aactgattca attcatcacc acgggtccga ttatcgcaat ggaaattctg 120
cgtgatgacg ctatctgcga atggaaacgc ctgctgggcc cggcaaactc aggtgttgcg 180
cgtaccgatg ccagtgaatc cattcgcgct ctgtttggca ccgatggtat ccgtaatgca 240
gcacatggtc cggactcatt cgcatcggca gctcgtgaaa tggaactgtt tttcccgagc 300
tctggcggtt gcggtccggc aaacaccgcc aaatttacca attgtacgtg ctgtattgtc 360
aaaccgcacg cagtgtcaga aggcctgctg ggtaaaattc tgatggcaat ccgtgatgct 420
ggctttgaaa tctcggccat gcagatgttc aacatggacc gcgttaacgt cgaagaattc 480
tacgaagttt acaaaggcgt ggttaccgaa tatcacgata tggttacgga aatgtactcc 540
ggtccgtgcg tcgcgatgga aattcagcaa aacaatgcca ccaaaacgtt tcgtgaattc 600
tgtggtccgg cagatccgga aatcgcacgt catctgcgtc cgggtaccct gcgcgcaatt 660
tttggtaaaa cgaaaatcca gaacgctgtg cactgtaccg atctgccgga agacggtctg 720
ctggaagttc aatacttttt caaaattctg gataat 756
<210> 161
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人NME7 X1 (对于大肠杆菌表达优化的)
<400> 161
Met Met Met Leu Ser Arg Lys Glu Ala Leu Asp Phe His Val Asp His
1 5 10 15
Gln Ser Arg Pro Phe Phe Asn Glu Leu Ile Gln Phe Ile Thr Thr Gly
20 25 30
Pro Ile Ile Ala Met Glu Ile Leu Arg Asp Asp Ala Ile Cys Glu Trp
35 40 45
Lys Arg Leu Leu Gly Pro Ala Asn Ser Gly Val Ala Arg Thr Asp Ala
50 55 60
Ser Glu Ser Ile Arg Ala Leu Phe Gly Thr Asp Gly Ile Arg Asn Ala
65 70 75 80
Ala His Gly Pro Asp Ser Phe Ala Ser Ala Ala Arg Glu Met Glu Leu
85 90 95
Phe Phe Pro Ser Ser Gly Gly Cys Gly Pro Ala Asn Thr Ala Lys Phe
100 105 110
Thr Asn Cys Thr Cys Cys Ile Val Lys Pro His Ala Val Ser Glu Gly
115 120 125
Leu Leu Gly Lys Ile Leu Met Ala Ile Arg Asp Ala Gly Phe Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Met Gln Met Phe Asn Met Asp Arg Val Asn Val Glu Glu Phe
145 150 155 160
Tyr Glu Val Tyr Lys Gly Val Val Thr Glu Tyr His Asp Met Val Thr
165 170 175
Glu Met Tyr Ser Gly Pro Cys Val Ala Met Glu Ile Gln Gln Asn Asn
180 185 190
Ala Thr Lys Thr Phe Arg Glu Phe Cys Gly Pro Ala Asp Pro Glu Ile
195 200 205
Ala Arg His Leu Arg Pro Gly Thr Leu Arg Ala Ile Phe Gly Lys Thr
210 215 220
Lys Ile Gln Asn Ala Val His Cys Thr Asp Leu Pro Glu Asp Gly Leu
225 230 235 240
Leu Glu Val Gln Tyr Phe Phe Lys Ile Leu Asp Asn Thr Gly
245 250
<210> 162
<211> 91
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NME7的DM10结构域
<400> 162
Met Asn His Ser Glu Arg Phe Val Phe Ile Ala Glu Trp Tyr Asp Pro
1 5 10 15
Asn Ala Ser Leu Leu Arg Arg Tyr Glu Leu Leu Phe Tyr Pro Gly Asp
20 25 30
Gly Ser Val Glu Met His Asp Val Lys Asn His Arg Thr Phe Leu Lys
35 40 45
Arg Thr Lys Tyr Asp Asn Leu His Leu Glu Asp Leu Phe Ile Gly Asn
50 55 60
Lys Val Asn Val Phe Ser Arg Gln Leu Val Leu Ile Asp Tyr Gly Asp
65 70 75 80
Gln Tyr Thr Ala Arg Gln Leu Gly Ser Arg Lys
85 90

Claims (78)

1.一种治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向所述受试者给予针对NME家族的成员制备的抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述NME家族是NME7家族。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体结合至NME7。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体结合至NME7-AB或NME-AB样蛋白。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体结合至NME7-X1。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体抑制NME7和其同源结合伴侣之间的结合。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述同源结合伴侣是MUC1*。
8.根据权利要求6所述的方法，其中所述同源结合伴侣是MUC1*胞外结构域的PSMGFR部分。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体是因为其结合至选自图16-图19中列出的那些(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的肽的能力而产生或选出的。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述肽选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述肽包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)或在图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的N端或C端加上或减去最高达7个氨基酸残基的肽。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体因为其结合至NME7-AB或NME7-X1而不结合NME1的能力而选择。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、二价抗体、单价抗体、双特异性抗体、含可变区的抗体片段或抗体模拟物。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体是人抗体或人源化抗体。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体是单链scFv。
16.一种治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向所述受试者给予高度同源或同一于NME7-AB的区域的肽。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述肽至少80％同源于图16中所列的肽中的一个或多个。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述肽至少80％同源于图17中所列的肽中的一个或多个。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述肽至少80％同源于图18中所列的肽中的一个或多个。
20.根据权利要求所述的方法16，其中所述肽至少80％同源于图19中所列的肽中的一个或多个。
21.根据权利要求16所述的方法，其中所述肽选自图16-图19中所列的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述肽选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。
23.根据权利要求16所述的方法，其中所述肽包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)或在图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的N端或C端加上或减去最高达7个氨基酸残基的肽。
24.根据权利要求16所述的方法，其中所述肽经由间隔子或连接子连接至另一肽。
25.一种嵌合抗原受体(CAR)，用于治疗或预防癌症，其中所述CAR的靶向胞外部分至少包括NME家族的成员的肽片段。
26.根据权利要求25所述的嵌合抗原受体，其中所述NME家族是NME7家族。
27.根据权利要求26所述的嵌合抗原受体，其中所述NME7家族的成员是NME7。
28.根据权利要求26所述的嵌合抗原受体，其中所述NME7家族的成员是NME7-AB或NME-AB样蛋白。
29.根据权利要求26所述的嵌合抗原受体，其中所述NME7家族的成员是NME7-X1。
30.根据权利要求25所述的嵌合抗原受体，其中所述CAR的所述靶向胞外部分包括图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ IDNO:145)的肽。
31.根据权利要求30所述的嵌合抗原受体，其中所述肽选自图19中列出的那些(SEQ IDNO:141至SEQ ID NO:145)。
32.根据权利要求25所述的嵌合抗原受体，其中所述肽包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)或在图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQID NO:145)的N端或C端加上或减去最高达7个氨基酸残基的肽。
33.根据权利要求25所述的嵌合抗原受体，其中所述肽经由间隔子或连接子连接至另一肽。
34.一种治疗或预防癌症或癌转移的方法，包括将根据权利要求25所述的嵌合抗原受体工程改造至免疫系统细胞中并将所述细胞给予至对其需要的受试者。
35.一种嵌合抗原受体(CAR)，用于治疗或预防癌症，其中所述嵌合抗原受体的靶向胞外部分包括结合至NME7-AB、NME-AB样蛋白或NME7-X1的抗体的一部分。
36.根据权利要求35所述的嵌合抗原受体，其中所述抗体的一部分是单链scFv。
37.根据权利要求35所述的嵌合抗原受体，其中所述抗体是人抗体或人源化抗体。
38.一种接种人来抵抗癌症或转移性癌症的方法，包括用NME家族的成员的肽片段对所述人进行免疫。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述NME家族是NME7家族。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述NME7家族的成员是NME7或NME7b。
41.根据权利要求39所述的方法，其中所述NME7家族的成员是NME7-AB或NME7-AB样蛋白。
42.根据权利要求39所述的方法，其中所述NME7家族的成员是NME7-X1。
43.根据权利要求38所述的方法，其中所述免疫化肽是来自图16-图19中所列的肽(SEQID NO:88至SEQ ID NO:145)的肽。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述肽选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。
45.根据权利要求38所述的方法，其中所述免疫化肽包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)或在图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ IDNO:145)的N端或C端加上或减去最高达7个氨基酸残基的肽。
46.根据权利要求38所述的方法，其中所述免疫化肽经由间隔子或连接子连接至另一肽。
47.一种治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向所述受试者给予抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的核酸。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述核酸是抑制NME7、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的反义核酸。
49.根据权利要求47所述的方法，其中所述核酸是抑制NME7、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的抑制性RNA、siRNA、RNAi或shRNA。
50.一种治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向所述受试者给予抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的经遗传编辑的核酸。
51.根据权利要求50所述的方法，其中抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的所述经遗传编辑的核酸插入到随后给予至患者的细胞中。
52.根据权利要求50所述的方法，其中使用病毒载体将抑制NME7、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的表达的所述经遗传编辑的核酸插入到细胞中。
53.根据权利要求50所述的方法，其中所述病毒载体是慢病毒系统。
54.一种使癌细胞生长的方法，包括将所述细胞与NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1、2i或5i接触。
55.根据权利要求54所述的方法，包括在含有NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1、2i或5i的培养基中培养所述细胞。
56.根据权利要求54所述的方法，包括使细胞在表达人NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1或者向其给予了NME7-AB、NME7b、NME7-AB样蛋白或NME7-X1的动物中生长。
57.根据权利要求54所述的方法，其中所述癌细胞是乳癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肝癌、黑素瘤或脑癌细胞。
58.根据权利要求54所述的方法，其中在所述细胞上测试候选药物。
59.根据权利要求58所述的方法，其中通过将癌症生长与无药物对照比较或者将转移标志物或干细胞标志物的表达水平与无药物对照比较或者将所获得的细胞在来自低细胞拷贝数的动物中形成肿瘤的能力与药物对照比较并且确定候选药物用于治疗癌症或癌症转移的效力来评价所述药物的效力。
60.根据权利要求54所述的方法，其中所述细胞获自正在对于癌症治疗和基于上述权利要求的结果选出的患者将会有效的药物进行评价的患者。
61.根据权利要求54所述的方法，其中所述细胞不获自对于癌症治疗进行评价的患者但是获自对于基于上述权利要求的结果选出的患者将会有效的药物进行评价的患者。
62.一种由具有源自NME的序列的肽或肽模拟物产生抗体或抗体样分子的方法。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述NME是NME7。
64.根据权利要求62所述的方法，其中所述肽用作产生抗体或抗体样分子的免疫原。
65.根据权利要求63所述的方法，其中所述肽给予至动物以产生抗NME7抗体。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述肽给予至人以产生抗NME7抗体。
67.根据权利要求62所述的方法，其中所述肽具有图16-图19中所列的序列(SEQ IDNO:88至SEQ ID NO:145)。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述肽选自图19中列出的那些(SEQ ID NO:141至SEQ ID NO:145)。
69.根据权利要求67所述的方法，其中所述肽包括高度同源于图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)或在图16-图19中列出的肽(SEQ ID NO:88至SEQ ID NO:145)的N端或C端加上或减去最高达7个氨基酸残基的肽。
70.一种检测癌症的存在或癌症的进展的方法，包括以下步骤：
1)从患有癌症或处于发展癌症的风险的患者获取样品；
2)使所述样品经受能够检测或测定NME7家族的成员的水平或编码所述NME7家族的成员的核酸的水平的分析测试；
3)将测试样品中测定的所述NME7家族的成员或编码所述NME7家族的成员的核酸的水平与对照患者或对照细胞中的水平相比较；
4)确定所述NME7家族的成员或编码所述NME7家族的成员的核酸的水平相对于所述对照是升高的；和
5)推论出所述测试样品的供体患有癌症或如果所述测试进行对比的所述对照来自先前诊断患有癌症的供体则推论出所述测试样品的供体已经具有癌症的进展。
71.根据权利要求70所述的方法，其中在循环中或在组织中检测出所述NME7家族的成员是患者中癌症的指标。
72.根据权利要求70所述的方法，其中所述NME7家族的成员是NME7、NME7b、NME7-X1或NME7-AB样蛋白。
73.一种方法，包括：
在患者中检测NME7家族的成员或MUC1*的存在；和
向表现出所述NME7家族的成员或MUC1*表达的患者给予抗NME7或抗MUCl*抗体或其多种抗体。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述NME7家族的成员是NME7、NME7b、NME7-X1或NME7-AB样蛋白。
75.一种用于治疗或预防癌症的方法，包括：
1)从疑似患有癌症或处于发展癌症的风险或处于发展转移性癌症的风险的患者获取样品；
2)测定NME7家族的成员或编码所述NME7家族的成员的核酸的含量，其中所测定的水平显著超过在对照样品中测定的那些；
3)确定所述患者患有癌症或已经发展更具侵略性的或转移性的癌症；
4)向所述患者给予有效量的抑制所述NME7家族的成员的表达、抑制NME7的裂解或抑制NME7结合至其靶标的治疗剂。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述NME7家族的成员的靶标是MUC1*。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述NME7家族的成员的靶标是MUC1*胞外结构域的PSMGFR部分。
78.根据权利要求75所述的方法，其中所述NME7家族的成员是NME7、NME7b、NME7-X1或NME7-AB样蛋白。
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