EA015009B1 - АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ - Google Patents

АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ Download PDF

Info

Publication number
EA015009B1
EA015009B1 EA200600905A EA200600905A EA015009B1 EA 015009 B1 EA015009 B1 EA 015009B1 EA 200600905 A EA200600905 A EA 200600905A EA 200600905 A EA200600905 A EA 200600905A EA 015009 B1 EA015009 B1 EA 015009B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
δεο
antibody
sequence
cells
polypeptide
Prior art date
Application number
EA200600905A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200600905A1 (ru
Inventor
Пабло Умана
Петер Брюнкер
Клаудиа Феррара
Тобиас Зутер
Урсула Пюнтенер
Эккехард Мёсснер
Original Assignee
Гликарт Биотехнологи Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34572912&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA015009(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Гликарт Биотехнологи Аг filed Critical Гликарт Биотехнологи Аг
Publication of EA200600905A1 publication Critical patent/EA200600905A1/ru
Publication of EA015009B1 publication Critical patent/EA015009B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01144—Beta-1,4-mannosyl-glycoprotein 4-beta-N-acetylglucosaminyltransferase (2.4.1.144)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology

Abstract

В изобретении описаны антигенсвязывающие молекулы (АСМ). В частности, в изобретении описаны рекомбинантные моноклональные антитела, включая химерные, приматизированные или гуманизированные антитела, специфические в отношении человеческого CD20. Кроме того, описаны молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие АСМ, и векторы и клетки-хозяева, содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот. Описаны также способы получения АСМ, предлагаемых в изобретении, и способы применения таких АСМ для лечения заболевания. Кроме того, описаны АСМ с модифицированным гликозилированием, обладающие улучшенными терапевтическими свойствами, включая антитела с повышенной способностью к связыванию с Fc-рецептором и повышенной эффекторной функцией.

Description

Настоящее изобретение относится к антигенсвязывающим молекулам (АСМ). Конкретные варианты осуществления настоящего изобретения относятся к рекомбинантным моноклональным антителам, включая химерные, приматизированные или гуманизированные антитела, обладающие специфичностью в отношении человеческого СЭ20. Кроме того, настоящее изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот, которые кодируют такие АСМ, и векторам и клеткам-хозяевам, содержащим такие молекулы нуклеиновых кислот. Изобретение относится также к способам получения АСМ, предлагаемых в изобретении, и к способам применения таких АСМ для лечения заболевания. Кроме того, настоящее изобретение относится к АСМ с модифицированным гликозилированием, которые обладают улучшенными терапевтическими свойствами, включая антитела с повышенной способностью к связыванию с Рсрецептором и повышенной эффекторной функцией.
Известный уровень техники
Иммунная система и антитела к СИ20
Иммунная система позвоночных, включая человека, состоит из многих органов и типов клеток, которые участвуют в точном и специфическом распознавании, связывании и разрушении проникших чужеродных микроорганизмов (антигенов). Решающее значение для правильного функционирования иммунной системы играют лимфоциты. Эти клетки продуцируются в тимусе, селезенке и костном мозге (взрослых особей) и составляют примерно 30% от общего количества лейкоцитов, присутствующих в кровеносной системе взрослого человека. Существует две основные субпопуляции лимфоцитов: Тклетки и В-клетки. Т-клетки ответственны за опосредуемый клетками иммунитет, в то время как Вклетки ответственны за производство антител (гуморальный иммунитет). Однако при создании типичного иммунного ответа Т-клетки и В-клетки функционируют независимо: Т-клетки активируются, когда Тклеточный рецептор связывается с фрагментами антигена, которые связаны с гликопротеинами главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) на поверхности антигенпрезентирующей клетки; такая активация приводит к высвобождению биологических медиаторов (интерлейкинов), которые стимулируют Вклетки к дифференцировке и продуцированию антител (иммуноглобулинов) к антигену.
Каждая В-клетка в организме-хозяине экспрессирует антитело одного конкретного типа и специфичности, а различные В-клетки экспрессируют антитела, специфические в отношении различных антигенов. В-клеточная пролиферация и продуцирование антител выступают в качестве реакции на чужеродный антиген, и то и другое, как правило, прекращается (или существенно уменьшается), после того как чужеродный антиген нейтрализован. Однако иногда пролиферация конкретной В-клетки может продолжаться без ограничения; такая пролиферация может приводить к раку, который называют В-клеточной лимфомой.
Как Т-клетки, так и В-клетки содержат белки клеточной поверхности, которые можно использовать в качестве маркеров для дифференцировки и идентификации. Одним из таких маркеров человеческих В-клеток является связанный только с человеческими В-лимфоцитами дифференцировочный антиген Вр35, который называют СЭ20. СЭ20 экспрессируется на ранней стадии развития пре-В-клеток и сохраняется до дифференцировки плазматических клеток. В частности, молекула СЭ20 необходима для регулирования стадии процесса активации, которая требуется для инициации клеточного цикла и дифференцировки, и, как правило, на неопластических (опухолевых) В-клетках имеет место высокий уровень ее экспрессии. Поскольку высокие уровни СЭ20 присутствуют на злокачественных В-клетках, т.е. на тех В-клетках, неограниченная пролиферация которых может приводить к В-клеточной лимфоме, то поверхностный антиген СЭ20 может являться кандидатом в качестве мишени для распознавания Вклеточных лимфом.
По существу, процесс распознавания мишени можно обобщить следующим образом: антитела, специфические в отношении поверхностного антигена СЭ20 на В-клетках, вводят пациенту, например, путем инъекции. Эти антитела к СЭ20 специфически связываются с клеточным поверхностным антигеном СЭ20 (очевидно) как на здоровых, так и на злокачественных В-клетках; антитело к СЭ20. связанное с поверхностным антигеном СЭ20, может приводить к разрушению и истощению неопластических Вклеток. Кроме того, с антителом к СЭ20 можно конъюгировать химические агенты или радиоактивные метки, обладающие способностью разрушать опухоль, так чтобы осуществлять специфический перенос агента, например, к неопластическим В-клеткам. Независимо от подхода основной целью является разрушение опухоли: конкретный подход может определяться выбором конкретного применяемого антитела к СЭ20 и, таким образом, пригодные подходы для распознавания в качестве мишени антигена СЭ20 могут широко варьироваться.
Неконъюгированные моноклональные антитела (МАт) можно применять в качестве лекарственных средств для лечения рака, о чем свидетельствует разрешение Департамента по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств США (И8 Рооб апб Эгид ΛώηίπίδΙηΙίοη) применения ритуксимаба (КДихап™; фирма 1ЭЕС РйаттассийсаИ, Сан-Диего, шт. Калифорния и фирма Сспс1сс11 1пс., Сан-Франциско, шт. Калифорния) для лечения СЭ20-позитивной В-клеточной, низкозло
- 1 015009 качественной или фолликулярной неходжкинской лимфомы, трастузумаба (НегрсерБп™, фирма Сспс1ссй 1пс.) для лечения развитого рака молочной железы (СгШо-Борех Л.-1 и др., 8ет1п. Опсо1., 26, 1999, сс. 6673; Со1БепЬегд М.М., СБп. Тйег., 21, 1999, сс. 309-318), гемтузумаба (Му1о1агд™, фирма Сеп1ес11/\Ууе111Ауегк!) для лечения рецидива острого миелоидного лейкоза и алемтузумаба (САМРАТН™, фирма М111еп1ит РйагтасеиБса1к/8сйеппд АС) для лечения В-клеточного хронического лимфолейкоза. Успешное применение этих продуктов обусловлено не только их эффективностью, но и их очень хорошими профилями безопасности (ОпПо-Борех А.-1 и др., 8етт. Опсо1., 26, 1999, сс. 66-73; Со1БепЬегд М.М., С1т. Тйег., 21, 1999, сс. 309-318). В свете успехов, связанных с этими лекарственными средствами, в настоящее время существует большая потребность в достижении более высокой специфической активности антител по сравнению с той, которая, как правило, обеспечивается при лечении с использованием неконъюгированного МАт. Другим антителом, обладающим специфичностью в отношении человеческого ί.Ό20. является мышиное моноклональное антитело В-Ьу1 (Роррета 8. и У1ккег Б., Вю1ек1 Ви11еБп, 3, 1987, сс. 131-139).
Результаты многочисленных исследований позволяют предположить, что зависящие от Рсрецептора механизмы оказывают существенное влияние на действие цитотоксичных антител на опухоли и указывают на то, что оптимальное антитело, действующее на опухоли, должно связываться предпочтительно с Рс-рецепторами-активаторами и в минимальной степени с партнером-ингибитором РсуКНВ (С1упек К.А. и др., ИаШге МеБюте, 6(4), 2000, сс. 443-446; Ка1егд1к А.М. и Кауе1сй 1.У., 1. Ехр. МеБ., 195(12), июнь 2002, сс. 1653-1659. Например, результаты по меньшей мере одного исследования позволяют, в частности, предположить, что РсуКШа-рецептор имеет большое значение для эффективности терапии с использованием антител (СаБгоп С. и др., В1ооБ, 99(3), февраль 202, сс. 754-757). В этом исследовании установлено, что пациенты, гомозиготные по РсуКШа, дают лучшую реакцию на ритуксимаб, чем гетерозиготные пациенты. Авторы сделали вывод о том, что более высокая реакция обусловлена лучшим связыванием антитела с РсуКШа ίπ у|уо, что приводит к более высокой антителообусловленной клеточнозависимой цитотоксичности (АЭСС-активности) в отношении клеток лимфомы (СаБгоп С. и др., В1ооБ, 99(3), февраль 202, сс. 754-757).
Известны многочисленные попытки использовать в качестве мишени поверхностный антиген СИ20. Опубликованы данные о том, что мышиное (мышь) моноклональное антитело 1Р5 (антитело к СБ20) вводили путем внутривенной непрерывной инфузии пациентам с В-клеточной лимфомой. Было указано, что для истощения опухолевых клеток, присутствующих в кровотоке, необходимы очень высокие уровни (> 2 г) 1Р5 и отмечено, что результаты оказывались кратковременными (Ргекк и др., Мопос1опа1 АпБЬоБу 1Р5 (АпБ-СИ20) 8его1Бегару о! Нитап В-Се11 Бутрйотак, В1ооБ, 69/2, 1987, сс. 584-591). Потенциальной проблемой, связанной с этим подходом, является то, что у моноклональных антител из организма кроме человека (например у мышиных моноклональных антител), как правило, отсутствует человеческая эффекторная функция, т. е. они неспособны среди прочего опосредовать комплементзависимый лизис или лизировать человеческие клетки-мишени с помощью антителообусловленной клеточнозависимой токсичности или путем опосредованного Рс-рецептором фагоцитоза. Кроме того, моноклональные антитела из организма кроме человека могут распознаваться человеческим организмомхозяином как чужеродный белок; поэтому повторные инъекции таких чужеродных антител могут индуцировать иммунные ответы, приводящие к вредным реакциям гиперчувствительности. Для моноклональных антител, выведенных из организма мыши, это явление часто называют человеческим антимышиным гуморальным иммунным ответом или НАМА-ответом. Кроме того, эти чужеродные антитела могут быть атакованы иммунной системой хозяина, в результате чего они фактически оказываются нейтрализованными до того, как достигнут своей области-мишени.
Другой известный из литературы подход к усилению способности мышиных моноклональных антител оказывать действие при лечении связанных с В-клетками заболеваний заключался в осуществлении конъюгации радиоактивной метки или токсина с антителом так, чтобы метка или токсин оказались локализованными в области опухоли. Например, опубликованы данные о том, что указанное выше антитело 1Р5 метили с помощью йода-131 (1311) и оценивали его биораспределение в организме двух пациентов (см. Еагу ЕР. и др., 1тадтд апБ Тгеа1теп1 о! В-Се11 Бутрйота, 1. Иис. МеБ. 31/8, 1990, сс. 12571268; см. также Ргекк ОЛУ. и др., Тгеа1теп1 о! КеГгасЮгу Ыоп-НоБдкш'к Бутрйота \νί(1ι КаБю1аЬе1еБ МВ-1 (АпБ-СИ37) АпБЬоБу, 1. СИп. Опс., 7/8, 1980, сс. 1027-1038 (указано, что у одного подвергавшегося лечению меченым с помощью 13111Р-5 пациента был достигнут частичный ответ); Со1БепЬегд И.М. и др., ТагдеБпд, ОоытеБу апБ К.аБю1ттипо1Бегару о! В-Се11 Бутрйотак \νί(1ι 1оБте-131-БаЬе11еБ ЕЬ2 Мопос1опа1 АпБЬоБу, 1. С1ш. Опе, 9/4, 1991< 548-564 (указано, что у трех из восьми пациентов, которым делали несколько инъекций, развился НАМА-ответ); Арре1Ьаит Р.К., КаБю1аЬе1еБ Мопос1опа1 АпБЬоБ1ек ш 111е 1геа1теп1 о! Ыоп-НоБдкт'к Бутрйота, Нет./Опс. СНшск о! И.А., 5/5, 1991, сс. 1013-1025 (обзорная статья); Ргекк ОЛУ. и др., К.аБю1аЬе11еБ-АпБЬоБу Тйегару о! В-Се11 Бутрйота \νί(1ι Аи1о1одоик Вопе Магго\у 8ирроБ, Ие\у Епд1апБ 1. МеБ., 329/17, 1993, сс. 1219-12223 (меченные с помощью йода-131 антитела 1Р5 и В1 к СИ20); Каттккт М.С. и др., КаБю1ттипо1йегару о! В-Се11 Бутрйота \νί(1ι I АпБ-В1 (АпБСС20) АпБЬоБу, №\ν Епд1апБ 1. МеБ., 329/7, 1993 (меченное с помощью йода-131 антитело В1 к СБ20;
- 2 015009 ниже цитируется как Катш8к1). Имеются данные о том, что осуществляли также конъюгацию токсинов (т.е. химиотерапевтических агентов, таких как доксорубицин или митомицин С) с антителами (см., например опубликованную заявку РСТ \УО 92/07466 (опубликованную 14 мая 1992)).
В качестве альтернативы конъюгированным антителам были разработаны химерные антитела, содержащие фрагменты антител из двух или большего количества различных видов (например, из организма мыши и человека). Например, у Ые Α.Υ. и др., Ртобисйоп οί а Моике-Нишап СЫшепс Мопос1опа1 АиОЬобу Ю СЭ20 \νί11ι Ро1еп1 Гс-Оерепбеп! Вю1одк Асбуйу, 1. 1шшипо1., 139/10, 1987, сс. 3521-3526, описано химерное мышиное/человеческое антитело к антигену СИ20 (см. также публикацию РСТ XVО 88/04936). Для лечения неходжкинской лимфомы был разрешен, например ритуксимаб (ΚΙΤυΧΑΝ®), представляющий собой химерное антитело к СЭ20.
Поскольку при В-клеточных лимфомах происходит экспрессия СИ20, то этот антиген может служить в качестве мишени для распознавания таких лимфом. По существу, процесс распознавания мишени можно обобщить следующим образом: антитела, специфические в отношении поверхностного антигена СЭ20 на В-клетках, вводят пациенту. Эти антитела к СИ20 специфически связываются с антигеном СЭ20 (очевидно) как на здоровых, так и на злокачественных В-клетках, и антитело к СЭ20, связанное с поверхностным антигеном СЭ20. может приводить к разрушению и истощению онкогенных Вклеток. Кроме того, с антителом к СЭ20 можно непосредственно или косвенным образом связывать химические агенты, цитотоксины или радиоактивные агенты, так что осуществляется избирательный «перенос» агента к В-клеткам, экспрессирующим антиген СЭ20. В обоих указанных подходах основной целью является разрушение опухоли. Конкретный подход может определяться выбором конкретного применяемого антитела к СЭ20. Таким образом, очевидно, что пригодные подходы для распознавания в качестве мишени антигена СЭ20 могут широко варьироваться.
Антитело ритуксимаб (ΚΙΤϋΧΑΝ®) представляет собой созданное с помощью генной инженерии химерное моноклональное антитело к человеческому антигену СЭ20, содержащее человеческую гамма 1-типа и мышиную константную область. Это химерное антитело содержит человеческие константные области гамма 1-типа и в патенте И8 5736137 (на имя Апбеткеп и др.), выданном 17 апреля 1998 г., переуступленном ГОЕС РйагшасеибсаГ Сотротайоп, обозначено как С2В8. ΚΙΤυΧΑΝ® разрешен для применения при лечении пациентов с СЭ20-позитивной В-клеточной рецидивной или рефрактерной низкозлокачественной или фолликулярной неходжкинской лимфомой. Исследования механизма действия ш νίΙΐΌ позволили установить, что ΚΙΤυΧΑΝ® обладает человеческой комплементзависимой цитотоксичностью (СЭС) (Рей и др., В1ооб, 83(2), 1994, сс. 435-445). Кроме того, было установлено, что он обладает выраженной активностью в анализах по оценке антитело-обусловленной клеточнозависимой цитотоксичностью (ЛЭСС). Было установлено, что ΚΙΤυΧΑΝ® обладает антипролиферативной активностью в анализах с использованием включения тимидина и ограниченной способностью непосредственно индуцировать апоптоз, в то время как антитела к СЭ20 не обладают такими свойствами (Ма1опеу и др., В1ооб, 88(10), 1996, 637а).
Гликозилирование антител
Компонент, представляющий собой олигосахарид, может оказывать существенное влияние на свойства, касающиеся эффективности гликопротеина, включая физическую стабильность, устойчивость к воздействию протеаз, взаимодействия с иммунной системой, фармакокинетические характеристики и специфическую биологическую активность. Такие свойства могут зависеть не только от присутствия или отсутствия олигосахаридов, но также и от их конкретных структур. Можно сделать некоторые общие выводы о связи структуры олигосахаридов и функцией гликопротеина. Например, некоторые олигосахаридные структуры опосредуют быстрый клиренс гликопротеина из кровотока в результате взаимодействий со специфическими связывающими углеводы белками, в то время как другие могут быть связаны с антителами и стимулировать нежелательные иммунные ответы Депкпъ и др., №1Шге Вю1ес1то1., 14, 1996, сс. 975-981).
Клетки млекопитающих являются предпочтительными хозяевами для производства имеющих терапевтическое значение гликопротеинов благодаря их способности гликозилировать белки с получением формы, наиболее совместимой с организмом человека (Ситшшд и др., 61усоЬю1о§у, 1,1991, сс. 115-130; 1епкш5 и др., №1Шге Вю1ес11поГ 14, 1996, сс. 975-981). Бактерии очень редко гликозилируют белки и подобно другим типам обычно применяемых хозяев, таких как дрожжи, гифомицеты, клетки насекомых и растений, создают схемы гликозилирования, приводящие к быстрому клиренсу из кровотока, нежелательным иммунным взаимодействиям и в некоторых конкретных случаях к пониженной биологической активности. Среди клеток млекопитающих в последние двадцать лет наиболее часто используют клетки яичника китайского хомячка (СНО). Помимо пригодной схемы гликозилирования эти клетки позволяют постоянно получать генетически стабильные высокопродуктивные клоны клеточных линий. Их можно культивировать до достижения высоких плотностей в простых биореакторах с использованием бессывороточных сред и их использование позволяет разрабатывать безопасные и воспроизводимые биологические процессы. К другим обычно применяемым клеткам животных относятся клетки почки детеныша хомячка (ВНК), клетки мышиной миеломы линий Ν80 и 8Р2/0. В последние годы изучали методы произ
- 3 015009 водства с использованием трансгенных животных (1еикшк и др., Ыа1иге Вю1есйио1., 14, 1996, сс. 975-981).
Все антитела содержат углеводные структуры в консервативных положениях в константных областях тяжелых цепей, причем каждый изотип несет различный набор ^связанных углеводных структур, которые различным образом влияют на сборку белка, его секрецию или функциональную активность (\Угщ111 А. и Моткоп 8.Ь., Ттепйк Вю1ес11п.. 15, 1997, сс. 26-32). Структура присоединенных Ν-связанных углеводов в значительной степени варьируется в зависимости от уровня процессинга и может включать имеющие высокое содержание маннозы, многократно разветвленные, а также биантенные комплексные олигосахариды (\Угщ111 А. и Моткоп 8.Ь., Ттепйк Вю1есйи., 15, 1997, сс. 26-32). Как правило, имеет место гетерогенный процессинг коровых олигосахаридных структур, присоединенных в конкретном сайте гликозилирования, в результате чего даже моноклональные антитела обладают множеством гликоформ. Аналогично этому было установлено, что основные различия в гликозилировании антител имеют место между клеточными линиями и даже для данной клеточной линии, выращенной в различных условиях культивирования, можно обнаружить небольшие различия (ЬДЫу М.В. и др., С1усоЫо1оду, 5(8), 1995, сс. 813-822).
Одним из путей достижения значительного повышения эффективности при сохранении простого процесса производства и возможности избежать значительных нежелательных побочных действий является усиление природных опосредуемых клеткой эффекторных функций моноклональных антител путем конструирования олигосахаридного компонента согласно методу, описанному у Ишапа Р. и др., Ыа1ите Вю1есЬпо1., 17, 1999, сс. 176-180 и в патенте И8 6602684, полное содержание которых включены в настоящее описание в качестве ссылки. Антитела 1дО1-типа, представляющие собой антитела, наиболее часто используемые в иммунотерапии рака, являются гликопротеинами, которые имеют консервативный Ν-связанный сайт гликозилирования в положении Акп297 в каждом СН2-домене. Два комплексных биантенных олигосахарида, которые присоединены к Акп297, размещаются между СН2-доменами, образуя обширные контакты с каркасом полипептида и их наличие является существенным для способности антитела опосредовать эффекторные функции, такие как антителозависимая клеточно-обусловленная цитотоксичность (АЭСС) (ЫГе1у М.В. и др., О1усоЬю1оду, 5, 1995, сс. 813-822; 1ейепк В. и др., 1ттипо1. Неу., 163, 1998, сс. 59-76; \Угщ111 А. и Моткоп 8.Ь., Тгепйк Вю1есЬпо1., 15, 1997, сс. 26-32).
Ранее авторы настоящего изобретения установили, что сверхэкспрессия в клетках яичника китайского хомячка (СНО) в(1,4)-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (ОпТШ), гликозилтрансферазы, катализирующей образование бисекционных олигосахаридов, существенно повышает АЭСС-активность щ νίΙΐΌ антинейробластомного химерного моноклонального антитела (сйСЕ7), продуцируемого сконструированными клетками СНО Штаба Р. и др., Ыа!ите Вю1есйио1., 17, 1999, сс. 176-180; и публикацию международной заявки на патент \У0 99/54342, полные содержания которых включены в настоящее описание в качестве ссылки). Антитело сйСЕ7 относится к большому классу неконъюгированных МАт, которые обладают высокой аффинностью и специфичностью в отношении опухоли, но имеют слишком малую эффективность для клинического применения при их продуцировании в стандартных клеточных линиях, в которых отсутствует фермент ОпТШ (Лтапа Р. и др., №1иге Вю1есЬпо1., 17, 1999, сс. 176-180). Это исследование было первым, в котором установлено, что существенные повышения АЭССактивности могут быть достигнуты путем конструирования продуцирующих антитело клеток, экспрессирующих ОпТШ, что приводит также к увеличению содержания связанных с константной областью (Ес) бисекционных олигосахаридов, включая бисекционные нефукозилированные олигосахариды, превышающему уровни, присутствующие во встречающихся в естественных условиях антителах.
Таким образом, сохраняется необходимость разработки улучшенных терапевтических подходов к использованию в качестве мишени для распознавания антигена СЭ20 для лечения В-клеточных лимфом у приматов, включая человека (но не ограничиваясь им).
Краткое изложение сущности изобретения
Принимая во внимание чрезвычайно большой терапевтический потенциал антигенсвязывающих молекул (АСМ), которые обладают специфичностью связывания, присущей мышиному антителу В-Ьу1, и у которых с помощью генной инженерии сконструирована схема гликозилирования с целью повышения аффинности к связыванию с Ес-рецептором и повышения эффекторной функции, при создании настоящего изобретения был разработан способ получения таких АСМ. Этот способ среди прочего позволяет получать рекомбинантные химерные антитела или их химерные фрагменты. Эффективность этих АСМ дополнительно повышают путем конструирования профиля гликозилирования Ес-области антитела.
Таким образом, одним из объектов изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий: (а) последовательность, выбранную из ряда, включающего: 8ЕО ГО ΝΟ: 5, 8ЕО ГО ΝΟ: 6 и 8Е0 ГО N0: 7, (СОВ Ун-ί); (б) последовательность, выбранную из ряда, включающего: 8Е0 ГО N0: 21, 8Е0 ГО N0: 22 и 8Е0 ГО N0: 23, (СЭВ Ун-2); и 8Е0 ГО N0: 24. Другим объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий 8Е0 ГО N0: 8, 8Е0 ГО N0: 9 и 8Е0 ГО N0: 10, (СОВ Уь-1). В одном из вариантов осуществления изобретения любой из этих полинуклеотидов кодирует слитый полипептид.
Следующим объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий 8Е0 ГО N0: 3. Еще одним объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий 8Е0 ГО N0: 4. Сле
- 4 015009 дующим объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, выбранную из ряда, включающего: 8ЕО ΙΌ N0: 29; 8Е0 ГО N0: 31; 8Е0 ГО N0: 33; 8Е0 ГО N0: 35; 8Е0 ГО N0: 37; 8ЕО ГО N0: 39; 8ЕО ГО N0: 41; 8ЕО ГО N0: 43; 8ЕО ГО N0: 45; 8ЕО ГО N0: 47; 8ЕО ГО N0: 49; 8ЕО ГО N0: 51; 8ЕО ГО N0: 53; 8ЕО ГО N0: 55; 8ЕО ГО N0: 57; 8ЕО ГО N0: 59; 8ЕО ГО N0: 61; 8ЕО ГО N0: 63; 8ЕО ГО N0: 65; 8ЕО ГО N0: 67; 8ЕО ГО N0: 69 и 8ЕО ГО N0: 71. Еще одним объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий 8Е0 ГО N0: 75. В одном из вариантов осуществления изобретения такие полинуклеотиды кодируют слитые полипептиды.
Кроме того, изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, содержащему последовательность, которая идентична по меньшей мере на 80% 8Е0 ГО N0: 3, где выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид. Другим объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая идентична по меньшей мере на 80% 8Е0 ГО N0: 4, где выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид.
Кроме того, изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, содержащему последовательность, которая идентична по меньшей мере на 80% последовательности, выбранной из ряда, включающего: 8ЕО ГО N0: 29; 8ЕО ГО N0: 31; 8ЕО ГО N0: 33; 8ЕО ГО N0: 35; 8ЕО ГО N0: 37; 8ЕО ГО N0: 39; 8ЕО ГО N0: 41; 8ЕО ГО N0: 43; 8ЕО ГО N0: 45; 8ЕО ГО N0: 47; 8ЕО ГО N0: 49; 8ЕО ГО N0: 51; 8ЕО ГО N0: 53; 8ЕО ГО N0: 55; 8ЕО ГО N0: 57; 8ЕО ГО N0: 59; 8ЕО ГО N0: 61; 8ЕО ГО N0: 63; 8ЕО ГО N0: 65; 8ЕО ГО N0: 67; 8Е0 ГО N0: 69 и 8Е0 ГО N0: 71, где выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид. Еще одним объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая идентична по меньшей мере на 80% 8Е0 ГО N0: 75, где выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид.
Кроме того, изобретение относится к полинуклеотиду, содержащему 8Е0 ГО N0: 11 (полная тяжелая цепь), или к полинуклеотидам, идентичным на 80, 85, 90, 95 или 99% 8Е0 ГО N0: 11. Изобретение относится также к полинуклеотиду, содержащему 8Е0 ГО N0: 12 (полная легкая цепь) или к полинуклеотидам, идентичным на 80, 85, 90, 95 или 99% 8Е0 ГО N0: 12.
Изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, кодирующему химерный полипептид, который имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 1. В одном из вариантов осуществления изобретения полинуклеотид содержит последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 1; и последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность Ес-области антитела из видов животных кроме мыши или ее фрагмент. Изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, кодирующему химерный полипептид, который имеет последовательность, выбранную из ряда, включающего: 8Е0 ГО N0: 30; 8Е0 ГО N0: 32; 8Е0 ГО N0: 34; 8Е0 ГО N0: 36; 8ЕО ГО N0: 38; 8ЕО ГО N0: 40; 8ЕО ГО N0: 42; 8ЕО ГО N0: 44; 8ЕО ГО N0: 46; 8ЕО ГО N0: 48; 8ЕО ГО N0: 50; 8ЕО ГО N0: 52; 8ЕО ГО N0: 54; 8ЕО ГО N0: 56; 8ЕО ГО N0: 58; 8ЕО ГО N0: 60; 8ЕО ГО N0: 62; 8ЕО ГО N0: 64; 8ЕО ГО N0: 66; 8ЕО ГО N0: 68; 8ЕО ГО N0: 70 и 8ЕО ГО N0: 72. В одном из вариантов осуществления изобретения полинуклеотид содержит последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность выбранную из ряда, включающего: 8Е0 ГО N0: 30; 8Е0 ГО N0: 32; 8ЕО ГО N0: 34; 8ЕО ГО N0: 36; 8ЕО ГО N0: 38; 8ЕО ГО N0: 40; 8ЕО ГО N0: 42; 8ЕО ГО N0: 44; 8ЕО ГО N0: 46; 8ЕО ГО N0: 48; 8ЕО ГО N0: 50; 8ЕО ГО N0: 52; 8ЕО ГО N0: 54; 8ЕО ГО N0: 56; 8ЕО ГО N0: 58; 8ЕО ГО N0: 60; 8ЕО ГО N0: 62; 8ЕО ГО N0: 64; 8ЕО ГО N0: 66; 8ЕО ГО N0: 68; 8ЕО ГО N0: 70; и 8Е0 ГО N0: 72; и последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность Ес-области антитела из видов животных кроме мыши или ее фрагмент.
Еще одним объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий химерный полипептид, который имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 2. В одном из вариантов осуществления изобретения полинуклеотид содержит последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 2; и последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность Ес-области антитела из видов животных кроме мыши или ее фрагмент. Еще одним объектом изобретения является выделенный полинуклеотид, кодирующий химерный полипептид, который имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 76. В одном из вариантов осуществления изобретения полинуклеотид содержит последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность 8Е0 ГО N0: 76; и последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность Есобласти антитела из видов животных кроме мыши или ее фрагмент.
Изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, содержащему последовательность, кодирующую полипептид, который содержит Ун-область мышиного антитела В-Ьу1, или ее функциональные варианты, и последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность Ес-области антитела из видов животных кроме мыши или ее фрагмент. Изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, содержащему последовательность, кодирующую полипептид, который содержит Уь-область мышиного антитела В-Ьу1, или ее функциональные варианты, и последовательность, кодирующую полипептид, который имеет последовательность Ес-области антитела из видов животных кроме мыши или ее фрагмент.
Изобретение относится также к экспрессионному вектору, содержащему любой из описанных выше выделенных полинуклеотидов, и клетке-хозяину, содержащей такой экспрессионный вектор. Другим
- 5 015009 объектом изобретения является клетка-хозяин, содержащая любой из описанных выше выделенных полинуклеотидов.
Одним из объектов изобретения является выделенный полипептид, содержащий: (а) последовательность, выбранную из ряда, включающего: 8ЕС ГО N0: 15, 8ЕС ГО N0: 16 и 8ЕС ГО N0: 17, (СЭВ Ун-1); (б) последовательность, выбранную из ряда, включающего: 8ЕС ГО N0: 25, 8ЕС ГО N0: 26 и 8ЕС ГО N0: 27, (СОВ Ун-2); И 8ЕС ГО N0: 28, где полипептид представляет собой слитый полипептид. Другим объектом изобретения является выделенный полипептид, содержащий 8ЕС ГО N0: 18, 8ЕС ГО N0: 19 и 8ЕС 10 N0: 20, (СОВ Уь), где полипептид представляет собой слитый полипептид.
Изобретение относится также к химерному полипептиду, содержащему последовательность 8ЕС ГО N0: 1 или ее вариант. Кроме того, изобретение относится к химерному полипептиду, содержащему последовательность 8Е0 ГО N0: 2 или ее вариант. В одном из вариантов осуществления изобретения любой из указанных полипептидов содержит, кроме того, человеческую Ее-область. Изобретение относится также к химерному полипептиду, который содержит последовательность, выбранную из ряда, включающего: 5ЕС ГО N0: 30; 5ЕС ГО N0: 32; 5ЕС ГО N0: 34; 5ЕС ГО N0: 36; 5ЕС ГО N0: 38; 5ЕС ГО N0: 40; 5ЕС ГО N0: 42; 5ЕС ГО N0: 44; 5ЕС ГО N0: 46; 5ЕС ГО N0: 48; 5ЕС ГО N0: 50; 5ЕС ГО N0: 52; 5ЕС ГО N0: 54; 5ЕС ГО N0: 56; 5ЕС ГО N0: 58; 5ЕС ГО N0: 60; 5ЕС ГО N0: 62; 5ЕС ГО N0: 64; 5ЕС ГО N0: 66; 8Е0 ГО N0: 68; 8ЕС ГО N0: 70; и 8ЕС ГО N0: 72, или ее вариант. Изобретение относится также к химерному полипептиду, содержащему последовательность 8ЕС ГО N0: 76 или ее вариант. В одном из вариантов осуществления изобретения любой из указанных полипептидов содержит, кроме того, человеческую Ес-область.
Другим объектом изобретения является полипептид, который содержит последовательность, выведенную из мышиного антитела В-Ьу1, и последовательность, выведенную из гетерологичного полипептида, и антигенсвязывающая молекула, содержащая такой полипептид. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело. В предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело является химерным. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело представляет собой гуманизированное или приматизированное антитело.
Еще одним объектом изобретения является выделенный полипептид, содержащий 8ЕС ГО N0: 13 или ее вариант. Другим объектом изобретения является выделенный полипептид, содержащий 8ЕС ГО N0: 14.
Следующим объектом изобретения является АСМ, способная конкурировать с мышиным антителом В-Ьу1 за связывание с СЭ20, и которая является химерной. В одном из вариантов осуществления изобретения АСМ представляет собой антитело или его фрагмент. Еще в одном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой рекомбинантное антитело, содержащее Ун-область, которая имеет аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего 8ЕС ГО N0: 1; 8ЕС ГО N0: 30; 5ЕС ГО N0: 32; 5ЕС ГО N0: 34; 5ЕС ГО N0: 36; 5ЕС ГО N0: 38; 5ЕС ГО N0: 40; 5ЕС ГО N0: 42; 5ЕС ГО
N0: 44; 5ЕС ГО N0: 46; 5ЕС ГО N0: 48; 5ЕС ГО N0: 50; 5ЕС ГО N0: 52; 5ЕС ГО N0: 54; 5ЕС ГО N0: 56;
5ЕС ГО N0: 58; 5ЕС ГО N0: 60; 5ЕС ГО N0: 62; 5ЕС ГО N0: 64; 5ЕС ГО N0: 66; 5ЕС ГО N0: 68; 5ЕС ГО
N0: 70 и 8ЕС ГО N0: 72. В другом варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой рекомбинантное антитело, содержащее У|-область, которая имеет аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего 8ЕС ГО N0: 2 и 8ЕС ГО N0: 76. В следующем варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой рекомбинантное антитело, которое является приматизированным. Еще в одном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой рекомбинантное антитело, которое является гуманизированным. В другом варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой рекомбинантное антитело, которое содержит человеческую Ес-область. Еще в одном варианте осуществления изобретения любая из указанных выше АСМ может быть конъюгирована с таким фрагментом, как токсин или радиоактивная метка.
Кроме того, изобретение относится к АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении, где АСМ несет модифицированные олигосахариды. В одном из вариантов осуществления изобретения модифицированные олигосахариды имеют пониженный уровень фукозилирования по сравнению с немодифицированными олигосахаридами. В других вариантах осуществления изобретения модифицированные олигосахариды являются гибридными или комплексными. Еще одном варианте осуществления изобретения АСМ имеет повышенное содержание нефукозилированных олигосахаридов или бисекционных нефукозилированных олигосахаридов в Ес-области указанной молекулы. В одном из вариантов осуществления изобретения бисекционные нефукозилированные олигосахариды являются гибридными. В другом варианте осуществления изобретения бисекционные нефукозилированные олигосахариды являются комплексными. В одном из вариантов осуществления изобретения по меньшей мере 20% олигосахаридов в Есобласти указанного полипептида являются нефукозилированными или бисекционными нефукозилированными. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 или 75% или более олигосахаридов в Ес-области указанного полипептида являются нефукозилированными или бисекционными нефукозилированными.
Кроме того, изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему любую из указанных выше
- 6 015009
АСМ, и экспрессионным векторам и клеткам, содержащим такой полинуклеотид.
Кроме того, изобретение относится к способу получения АСМ, способной конкурировать с мышиным антителом В-Ьу1 за связывание с СЭ20, и где АСМ является химерной; который заключается в том, что: (а) культивируют клетку-хозяина, содержащую полинуклеотид, который кодирует АСМ, предлагаемую в настоящем изобретении, в среде в условиях, позволяющих осуществлять экспрессию полинуклеотида, кодирующего АСМ; и (б) выделяют АСМ из полученной культуры.
Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая АСМ, предлагаемую в изобретении. Подразумевается, что фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или их комбинацию.
Следующим объектом изобретения является способ лечения заболевания, которое поддается лечению с помощью В-клеточного истощения. Способ заключается в том, что человеку, нуждающемуся в этом, вводят терапевтически эффективное количество АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении. В предпочтительном варианте осуществления изобретения заболевание лечат путем введения АСМ, представляющей собой химерное антитело или химерный фрагмент антитела.
Еще одним объектом изобретения является клетка-хозяин, сконструированная таким образом, чтобы экспрессировать по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, которая кодирует полипептид, обладающий СиТШ-активностью, в количестве, достаточном для модификации олигосахаридов в Ес-области АСМ, продуцируемой клеткой-хозяином, где АСМ способна конкурировать с мышиным антителом ВЬу1 за связывание с СЭ20 и где АСМ является химерной. В одном из вариантов осуществления изобретения полипептид, обладающий СиТШ-активностью, представляет собой слитый полипептид. В другом варианте осуществления изобретения АСМ, продуцируемая клеткой-хозяином, представляет собой антитело или фрагмент антитела. Еще в одном варианте осуществления изобретения АСМ содержит область, эквивалентную Ес-области человеческого 1дС.
Изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, содержащему по меньшей мере один гипервариабельный участок мышиного антитела В-Ьу1 или его вариант или укороченную форму, которая содержит по меньшей мере определяющие специфичность остатки указанного гипервариабельного участка, где выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид. Предпочтительно такой выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид, представляющий собой антигенсвязывающую молекулу. В одном из вариантов осуществления изобретения полинуклеотид содержит три гипервариабельных участка мышиного антитела В-Ьу1 или их варианты или укороченные формы, которые содержат, по меньшей мере, определяющие специфичность остатки каждого из трех указанных гипервариабельных участков. В другом варианте осуществления изобретения полинуклеотид кодирует всю вариабельную область легкой или тяжелой цепи химерного (например гуманизированного) антитела. Кроме того, изобретение относится к полипептидам, кодируемым такими полинуклеотидами.
Другой вариант осуществления изобретения относится к антигенсвязывающей молекуле, содержащей по меньшей мере один гипервариабельный участок мышиного антитела В-Ьу1 или его вариант или укороченную форму, которые содержат, по меньшей мере, определяющие специфичность остатки указанного гипервариабельного участка, и содержат последовательность, выведенную из гетерологичного полипептида. В одном из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула содержит три гипервариабельных участка мышиного антитела В-Ьу1 или их варианты или укороченные формы, которые содержат, по меньшей мере, определяющие специфичность остатки каждого из трех указанных гипервариабельных участков. В другом варианте осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула содержит вариабельную область легкой или тяжелой цепи антитела. В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула представляет собой химерное, например гуманизированное, антитело. Изобретение относится также к способам получения таких антигенсвязывающих молекул и к их применению для лечения заболеваний, включая В-клеточные лимфомы.
Настоящее изобретение является первым известным случаем, когда антитело типа II к СЭ20 было сконструировано с целью усиления эффекторных функций, таких как АЭСС. при сохранении выраженной способности индуцировать апоптоз. Таким образом, настоящее изобретение относится к сконструированному антителу типа II к СЭ20, которое в результате этого конструирования приобрело повышенную АЭСС и при этом не утратило выраженной способности индуцировать апоптоз. В одном из вариантов осуществления изобретения антитела типа II к СЭ20 конструировали с целью изменения схемы гликозилирования в Ес-области. В конкретном варианте осуществления изобретения измененное гликозилирование представляет собой повышенное содержание бисекционных комплексных остатков в Есобласти. В другом конкретном варианте осуществления изобретения измененное гликозилирование представляет собой пониженное содержание остатков фукозы в Ес-области. В другом варианте осуществления изобретения антитела типа II к СИ20 конструируют с помощью полипептидов. Кроме того, изобретение относится к способам получения таких сконструированных антител типа II и способам применения таких антител для лечения различных связанных с В-клетками нарушений, включая В-клеточные лимфомы.
Клетки-хозяева, предлагаемые в настоящем изобретении, можно выбирать из ряда, включающего (но не ограничиваясь ими) СНО-клетку, ВНК-клетку, ΝδΘ-клетку, 8Р2/0-клетку, клетку миеломы линии
- 7 015009
ΥΟ, клетку мышиной миеломы линии РЗХ63, РЕК-клетку, РЕК.Сб-клетку или клетку гибридомы. В одном из вариантов осуществления изобретения клетка-хозяин, предлагаемая в изобретении, включает, кроме того, трансфектированный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид, кодирующий Уъ-область мышиного антитела О-Ьу1 или ее варианты, и последовательность, кодирующую область, эквивалентную Ее-области человеческого иммуноглобулина. В другом варианте осуществления изобретения клеткахозяин, предлагаемая в изобретении, включает, кроме того, трансфектированный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид, кодирующий Ун-область мышиного антитела О-Ьу1 или ее варианты, и последовательность, кодирующую область, эквивалентную Ес-области человеческого иммуноглобулина.
Другим объектом изобретения является клетка-хозяин, продуцирующая АСМ, которая в результате модификации содержащихся в ней олигосахаридов обладает повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором и/или повышенной эффекторной функцией. В одном из вариантов осуществления изобретения повышенная аффинность к связыванию представляет собой афинность к связыванию с Есрецептором, прежде всего с ЕсуКША-рецептором. В контексте настоящего описания подразумевается, что эффекторную функцию можно выбирать из ряда, включающего (но не ограничиваясь ими) повышенную Ес-опосредованную клеточнозависимую цитотоксичность; повышенную способность к связыванию с ΝΚ-клетками; повышенную способность к связыванию с макрофагами, повышенную способность к связыванию с полиморфноядерными клетками; повышенную способность к связыванию с моноцитами; повышенную способность к прямой передаче сигналов, индуцирующих апоптоз; повышенное созревание дендритных клеток и повышенное Т-клеточное примирование.
В другом варианте осуществления изобретения клетка-хозяин, предлагаемая в настоящем изобретении, содержит по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, которая кодирует полипептид, обладающий ΟΝΤΙΙΙ-активностью, и которая функционально связана с конститутивным промоторным элементом.
Следующим объектом изобретения является способ получения АСМ в клетке-хозяине, заключающийся в том, что: (а) культивируют клетку-хозяина, сконструированную таким образом, чтобы она экспрессировала по меньшей мере один полинуклеотид, который кодирует слитый полипептид, обладающий ΟΝΤΙΙΙ-активностью, в условиях, которые позволяют осуществлять производство указанной АСМ и которые позволяют осуществлять модификацию олигосахаридов, присутствующих в Ес-области АСМ; и (б) выделяют указанную АСМ, где АСМ способна конкурировать с мышиным антителом В-Ьу1 за связывание с ΟΌ20 и где АСМ является химерной. В одном из вариантов осуществления изобретения полипептид, обладающий ΟΝΤΙΙΙ-активностью, представляет собой слитый полипептид, который предпочтительно содержит каталитический домен ΟΝΤΙΙΙ и домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного полипептида, присущего комплексу Гольджи, выбранный из ряда, включающего домен локализации маннозидазы ΙΙ, домен локализации в(1,2)-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазы Ι (ΟηΤΙ), домен локализации маннозидазы Ι, домен локализации в(1,2)-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазы ΙΙ (ΟηΤΙΙ) и домен локализации α1-6 коровой фукозилтрансферазы. Предпочтительно домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации маннозидазы ΙΙ или ΟηΤΙ.
Другим объектом изобретения является способ модификации профиля гликозилирования АСМ, связывающейся с ΟΌ20, которая продуцируется клеткой-хозяином, заключающийся в том, что в клеткухозяина интродуцируют по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту или экспрессионный вектор, предлагаемые в изобретении. В одном из вариантов осуществления изобретения АСМ представляет собой антитело или его фрагмент; предпочтительно содержащие Ес-область Ι§Ο. В альтернативном варианте полипептид представляет собой слитый белок, который содержит область, эквивалентную Ес-области человеческого ΙβΟ.
Одним из объектов изобретения является рекомбинантное химерное антитело или его фрагмент, способные конкурировать с мышиным антителом В-Ьу1 за связывание с ΟΌ20 и имеющие пониженный уровень фукозилирования.
Другим объектом настоящего изобретения является способ модификации гликозилирования рекомбинантного антитела или его фрагмента, предлагаемых в изобретении, путем использования слитого полипептида, обладающего ΟηΤΙΙ-активностью и содержащего домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного присущего комплексу Гольджи полипептида. В одном из вариантов осуществления изобретения слитые полипептиды, предлагаемые в изобретении, содержат каталитический домен ΟηΤΙΙΙ. В другом варианте осуществления изобретения домен локализации в комплексе Гольджи выбран из ряда, включающего домен локализации маннозидазы ΙΙ, домен локализации ΟηΤΙ, домен локализации маннозидазы Ι, домен локализации ΟηΤΙΙ и домен локализации α1-6 коровой фукозилтрансферазы. Предпочтительно домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации маннозидазы ΙΙ или ΟηΤΙ.
В одном из вариантов осуществления изобретения способ, предлагаемый в изобретении, заключается в том, что получают рекомбинантное химерное антитело или его фрагмент, содержащие модифицированные олигосахариды, где модифицированные олигосахариды имеют пониженный уровень гликозилирования по сравнению с немодифицированными олигосахаридами. Согласно настоящему изобретению эти модифицированные олигосахариды могут быть гибридными или комплексными. Согласно другому
- 8 015009 варианту осуществления изобретения способ, предлагаемый в изобретении, заключается в том, что получают рекомбинантное химерное антитело или его фрагмент, имеющие повышенное содержание бисекционных нефукозилированных олигосахаридов в Ес-области указанного полипептида. В одном из вариантов осуществления изобретения бисекционные нефукозилированные олигосахариды являются гибридными. В другом варианте осуществления изобретения бисекционные нефукозилированные олигосахариды являются комплексными. Еще в одном варианте осуществления изобретения способ, предлагаемый в изобретении, заключается в том, что получают рекомбинантное химерное антитело или его фрагмент, в котором по меньшей мере 20% олигосахаридов в Ес-области указанного полипептида являются бисекционными нефукозилированными. В предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере 30% олигосахаридов в Ес-области указанного полипептида являются бисекционными нефукозилированными. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере 35% олигосахаридов в Ес-области указанного полипептида являются бисекционными нефукозилированными.
Следующим объектом изобретения является рекомбинантное химерное антитело или его фрагмент, которые в результате модификации содержащихся в них олигосахаридов обладают повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором и/или повышенной эффекторной функцией. В одном из вариантов осуществления изобретения повышенная аффинность к связыванию представляет собой аффинность к связыванию с активирующим Ес-рецептором. В другом варианте осуществления изобретения Есрецептор представляет собой активирующий Есу-рецептор, в частности, ЕсуКНА-рецептор. В контексте настоящего описания подразумевается, что эффекторную функцию можно выбирать из ряда, включающего (но не ограничиваясь ими) повышенную Ес-опосредованную клеточнозависимую цитотоксичность; повышенную способность к связыванию с ΝΚ-клетками; повышенную способность к связыванию с макрофагами, повышенную способность к связыванию с полиморфноядерными клетками; повышенную способность к связыванию с моноцитами; повышенную способность к непосредственной передаче сигналов, индуцирующих апоптоз; повышенное созревание дендритных клеток и повышенное Т-клеточное примирование.
Другим объектом настоящего изобретения является фрагмент рекомбинантного химерного антитела, обладающий специфичностью к связыванию, свойственной мышиному антителу В-Ьу1, и содержащий Ес-область, которая сконструирована с целью повышения эффекторной функции с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении.
Следующим объектом настоящего изобретения является слитый белок, который содержит полипептид, имеющий последовательность 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 1 и область, эквивалентную Ес-области иммуноглобулина, и который сконструирован с целью повышения эффекторной функции с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении.
Еще одним объектом настоящего изобретения является слитый белок, который содержит полипептид, имеющий последовательность 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 2 и область, эквивалентную Ес-области иммуноглобулина, и который сконструирован с целью повышения эффекторной функции с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении.
Следующим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантное химерное антитело, полученное с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель. Еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фрагмент рекомбинантного химерного антитела, полученный с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель. Еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая слитый белок, полученный с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель.
Кроме того, изобретение относится к способу лечения заболевания, которое можно лечить с помощью В-клеточного истощения, заключающемуся в том, что человеку, нуждающемуся в этом, вводят терапевтически эффективное количество рекомбинантного химерного антитела или его фрагмента, полученного с помощью любого из способов, предлагаемых в настоящем изобретении.
Краткое описание чертежей
На чертежах показано:
на фиг. 1 - нуклеотидная (8Е0 ΙΌ ΝΟ: 3) и аминокислотная (8Е0 ΙΌ ΝΟ: 1) последовательности Унобласти мышиного В-Ьу1;
на фиг. 2 - нуклеотидная (8Е0 ΙΌ ΝΟ: 4) и аминокислотная (8Е0 ΙΌ ΝΟ: 2) последовательности Унобласти мышиного В-Ьу1;
на фиг. 3 - связывание Вйих1шаЬ® (О) и сй-В_Еу1 (А) с СЭ20 на клетках В-лимфомы линии Кар;
на фиг. 4 - В-клеточное истощение, вызываемое КйихипаЬ® (О) и сй-В_Еу1 (А) в цельной крови трех различных классов генотипа ЕсуК1Па-158У/Е: (А) цельная кровь, полученная от Е/Е-донора, гомозиготная по рецептору с низкой аффинностью; (Б) цельная кровь, полученная от Е/У-донора, гетерозиготная по обладающему аффинностью рецептору; (В) цельная кровь, полученная от У/У-донора, гомозиготная по рецептору с высокой аффинностью;
- 9 015009 на фиг. 5 - нуклеотидная (8ЕО ГО N0: 11) и аминокислотная (8ЕО ГО N0: 13) последовательности тяжелой цепи химерного антитела к СГО20;
на фиг. 6 - нуклеотидная (8Е0 ГО N0: 12) и аминокислотная (8Е0 ГО N0: 14) последовательности легкой цепи химерного антитела к СГО20;
на фиг. 7 - нуклеотидная и аминокислотная последовательности СЭВ мышиного антитела В-Ьу1; (А) - предсказанные СОЕ У| (-области. (Б) - предсказанные СОЕ Уъ-области;
на фиг. 8 - МАЬП1-Т0Е-профиль химерного антитела В-Ьу1. имеющего сконструированную схему гликозилирования; (А) - таблица. в которой представлены процентные содержания специфических пиков; (Б) - спектр химерного В-Ьу1. имеющего сконструированную схему гликозилирования; (В) -спектр химерного В-Ьу1. имеющего сконструированную схему гликозилирования. после обработки Епбо-Н;
на фиг. 9 - данные о связывании различных гуманизированных антител к СГО20 с В-клетками линии Над. Различия между конструкцией В-НН2 и конструкциями В-НБ8 и В-НБ11 сосредоточены в каркасных участках 1 и 2. причем все три СОВ являются идентичными. В-НБ8 и В-НБ11 имеют последовательности ЕВ1 и ЕВ2. выведенные из человеческой вариабельной области тяжелой цепи УН3. в то время как полный каркасный участок В-НН2 выведен из человеческой УН1. В-НБ11 представляет собой производное В-НБ8. имеющее одну мутацию С1и1С1п. где С1п представляет собой аминокислотный остаток в конструкции В-НН2. Это означает. что замена С1и1С1п не изменяет аффинность или интенсивность к связыванию. В-НН2 и В-НБ8 различаются также 14 остатками ЕВ. из которых один или несколько могут оказывать влияние на антигенсвязывающую способность рассматриваемого антитела;
на фиг. 10 - данные о связывании гуманизированного антитела к СГО20 ВНБ4-КУ1 с клеткамимишенями линии Ва_ц. Конструкция ВНЬ4 получена из антитела В-НН2 путем замены ЕВ1 В-НН2 соответствующим участком последовательности УН1_45 человеческой зародышевой линии. Эта конструкция характеризуется существенно более низкой антигенсвязывающей способностью несмотря на то. что она имеет отличные от исходной последовательности аминокислоты только в трех положениях в ЕВ1. Эти остатки находятся в положениях 2. 14 и 30 (согласно нумерации Кэбота). Среди них наиболее сильное влияние. по-видимому. оказывает положение 30. поскольку оно является частью СЭВ1 согласно определению Хотиа (Сйойа);
на фиг. 11 - сравнительные данные о связывающей способности В-НН1. В-НН2. В-НН3 и родительского антитела В-Ьу1. Из представленных данных видно. что все Ат характеризуются близкими значениями ЕС50. но конструкция В-НН1 связывается с более низкой интенсивностью/стехиометрией. чем варианты В-НН2 и В-НН3. В-НН1 отличается от В-НН2 и В-НН3 своими частично человеческими участками СЭВ1 и СЭВ2 (согласно определению Кэбота). а также полиморфизмом А1а/Т11г в положении 28 (согласно нумерации Кэбота). Это указывает на то. что положение 28. полный СЭВ1 и/или полный СЭВ2 важны для взаимодействия антитело/антиген;
на фиг. 12 - сравнительные данные для В-НЬ1. В-НН1 и родительского антитела В-Ьу1. Данные свидетельствуют о том. что конструкция В-НБ1 совсем не обладает связывающей активностью. а связывающая интенсивность/стехиометрия В-НН1 примерно в два раза меньше. чем В-Ьу1. Как В-НЬ1. так и В-НН1 сконструированы на основе акцепторных каркасов. выведенных из вариабельных областей человеческой тяжелой цепи УН1-класса. Среди других различий наиболее значительным является различие в положении 71 (согласно нумерации Кэбота) конструкции В-НЬ1. что свидетельствует о его возможном важном значении для связывания с антигеном;
на фиг. 13 - флуороцитометрический анализ антигенсвязывающей способности антитела к СГО20. Данные свидетельствуют о том. что конструкции В-НБ2 и В-НБ3 не обладают СЭ-20-связывающей активностью;
на фиг. 14 - данные об апоптозе моноклональных клеток (МСЬ) линии Ζ-138. индуцируемом антителом к СГО20;
на фиг. 15 - данные об апоптозе. индуцируемом антителом к СГО20. Детали анализа: высевали 5χ105 клеток/лунку в 24-луночные планшеты (5 χ 105 клеток/мл) в культуральную среду. В лунки добавляли 10 мг соответствующего Ат. ЗФР в качестве негативного контроля или 5мМ камптотецин (СРТ) в качестве позитивного контроля. Образцы инкубировали в течение ночи (16 ч). окрашивали с помощью АппУФИТЦ и анализировали с помощью ЕАС8. Анализ осуществляли в 3-х повторностях. (*): вычитали сигнал. соответствующий только ЗФР (применение только ЗФР приводило к появлению 8 и 2% АппУ+ для РВ-1- и Ζ-138-клеток соответственно). Использовали следующие антитела: С2В8 (химерное. не имеющее сконструированную схему гликозилирования; ВНН2-КУ1 (гуманизированное. не имеющее сконструированную схему гликозилирования). Примечание: в этом анализе не применяли какие-либо дополнительные эффекторные клетки. а только клетки-мишени плюс антитело или контроли;
на фиг. 16 - данные об уничтожении клетки-мишени антителами к СГО20 с помощью иммунокомпетентных эффекторных клеток. Детали анализа: В-клеточное истощение в цельной крови здоровых доноров осуществляли путем инкубации в течение ночи и анализировали в отношении СЭ19+/СЭ3+ с помощью ЕАС8. АЭСС оценивали с использованием РВМС в качестве эффекторов. инкубация в течение 4 ч. соотношение эффектора:мишени 25:1. уничтожение клеток-мишеней оценивали по удерживанию
- 10 015009 кальцеина по сравнению с лизисом с помощью детергента (100%) и с лизисом без Ат (0%). Применяемые антитела: С2В8 (химерная, не имеющая сконструированную схему гликозилирования форма); ВНН21<ν1-\\1 (гуманизированная, не имеющая сконструированную схему гликозилирования форма ВНН2КУ1); ВНН2-КХ1-СЕ (гуманизированная, имеющая сконструированную схему гликозилирования форма антитела ВНН2-ΚV1);
на фиг. 17 - ΜΑΕΌΙ/ТОР-МС-профиль выделившихся после обработки РЫСазойР Рсолигосахаридов (олигосахаридов из Рс-области) немодифицированного, не имеющего сконструированную схему гликозилирования гуманизированного 1дС1 В-1у1 антитела к человеческому СЭ20. ВНН2Κν1;
на фиг. 18 - ΜΑΕΌΙ/ΤΟΡ-МС-профиль выделившихся после обработки РЫСазойР Рсолигосахаридов имеющего сконструированную схему гликозилирования гуманизированного 1дС1 В-1у1 антитела к человеческому СЭ20, ВНН2-ΚV1д1. Конструирование схемы гликозилирования осуществляли путем совместной экспрессии в клетках-хозяевах генов антител и гена, кодирующего фермент с каталитической активностью в-1,4-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (СпТ-ΙΙΙ);
на фиг. 19 - ΜΑΕΌΙ/ТОР-МС-профиль выделившихся после обработки РЫСазойР Рсолигосахаридов имеющего сконструированную схему гликозилирования гуманизированного 1дС1 В-1у1 антитела к человеческому СЭ20, ВНН2-ΚV1д2. Конструирование схемы гликозилирования осуществляли путем совместной экспрессии в клетках-хозяевах генов антител и генов, кодирующих фермент с каталитической активностью в-1,4-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (СпТ-ΙΙΙ) и кодирующих фермент с каталитической активностью α-маннозидазы II комплекса Гольджи;
на фиг. 20 - данные о связывании не имеющих сконструированную схему гликозилирования и имеющих сконструированную схему гликозилирования антител к человеческому РсуШа-рецептору, находящемуся на поверхности рекомбинантных СНО-СЭ1б-клеток;
на фиг. 21 - данные об апоптозе не имеющих сконструированную Рс-область и имеющих сконструированную Рс-область антител к ί.'Ό20 на моноклональных клетках линии Ζ-138. Детали анализа: высевали 5 х 105 клеток/лунку в 24-луночные планшеты (5х105 клеток/мл) в культуральной среде. В лунки добавляли 10 мг соответствующего Ат, ЗФР в качестве негативного контроля. Образцы инкубировали в течение ночи (1б ч), окрашивали с помощью Αηην-ФИТЦ и анализировали с помощью РАС8. Анализ осуществляли в 3 повторностях. Применяемые Ат: С2В8 = ритуксимаб (химерная не имеющая сконструированную схему гликозилирования форма, аналогичная поступающей в продажу форме; ВНН2-ΚV1 (гуманизированное не имеющее сконструированную схему гликозилирования (см. на фиг. б профиль гликозилирования); ВНН2-КХ1Д (гуманизированное имеющее сконструированную схему гликозилирования (см. на фиг. 7 профиль гликозилирования); ВНН2-КХ1§2 (гуманизированное не имеющее сконструированную схему гликозилирования (см. на фиг. 8 профиль гликозилирования). Примечание: в этом анализе не применяли какие-либо дополнительные эффекторные клетки, а только клетки-мишени плюс антитело или контроли. (*): Вычитали сигнал, соответствующий только ЗФР.
Подробное описание изобретения
Понятия, применяемые в контексте настоящего описания, соответствуют общепринятым в данной области, если не указано иное.
В контексте настоящего описания понятие антитело относится к полным молекулам антител, включая моноклональные, поликлональные и мультиспецифические (например биспецифические) антитела, а также фрагменты антител, которые имеют Рс-область и сохраняют специфичность связывания, и к слитым белкам, которые включают область, эквивалентную Рс-области иммуноглобулина и которые сохраняют специфичность связывания. Под понятие подпадают гуманизированные, приматизированные и химерные антитела.
В контексте настоящего описания понятие Рс-область относится к С-концевой области тяжелой цепи Ι§Ο. Хотя примыкающие к Рс-области участки тяжелой цепи Ι§Ο могут слегка различаться, Рсобласть тяжелой цепи человеческого ΙβΟ, как правило, представляет собой участок цепи от аминокислоты Сук22б до карбоксильного конца.
В контексте настоящего описания понятие область, эквивалентная Рс-области иммуноглобулина относится к встречающимся в естественных условиях аллельным вариантам Рс-области иммуноглобулина, а также вариантам, имеющим изменения, которые получают в результате замен, добавлений или делеций, но которые не снижают в значительной степени способность иммуноглобулина опосредовать эффекторные функции (такие как антителозависимая клеточно-обусловленная цитотоксичность). Например, одну или несколько аминокислот можно изымать путем делеций из Ν-конца или С-конца Рс-области иммуноглобулина без существенного снижения биологической функции. Такие варианты можно отбирать согласно общим правилам, которые известны в данной области, так, чтобы оказывать минимальное воздействие на активность (см., например, Во\\зе 1. и. и др., 8с1епсе 247, 1990, сс. 1306-1310).
В контексте настоящего описания понятие антигенсвязывающая молекула в наиболее широком смысле относится к молекуле, которая специфически связывает антигенную детерминанту. Более конкретно понятие антигенсвязывающая молекула, которая связывает ί.'Ό20 обозначает молекулу, которая
- 11 015009 специфически связывается с находящимся на клеточной поверхности негликозилированным фосфопротеином с молекулярной массой 35000 Да, который обычно называют консервативным дифференцировочным антигеном человеческих В-лимфоцитов Вр35, который, как правило, называют СЭ20. Понятие специфически связывается означает, что связывание является избирательным в отношении антигена и его можно отличать от нежелательных или неспецифических взаимодействий.
В контексте настоящего описания понятия слитый и химерный касательно полипептидов, таких как АСМ относится к полипептидам, которые содержат аминокислотные последовательности, выведенные из двух или большего количества гетерологичных полипептидов, таких как фрагменты антител из различных видов. Для химерных АСМ, например, несвязывающие антиген компоненты можно получать из широкого разнообразия видов, включая приматов, таких как шимпанзе и люди. Константная область химерной АСМ наиболее предпочтительно является практически идентичной константной области встречающегося в естественных условиях человеческого антитела; вариабельная область химерного антитела наиболее предпочтительно практически идентична вариабельной области рекомбинантного антитела к СЭ20, которое имеет аминокислотную последовательность вариабельной области мышиного антитела В-Ьу1. Гуманизированные антитела являются наиболее предпочтительной формой слитого или химерного антитела.
В контексте настоящего описания понятие полипептид, обладающий СиТШ-активностью относится к полипептидам, которые обладают способностью катализировать добавление остатка Νацетилглюкозамина (ΟΙοΝΛο) в β-Ι-4-связи к β-связанному маннозиду триманнозильного ядра Νсвязанных олигосахаридов. Понятие относится к слитым полипептидам, которые обладают ферментативной активностью подобной, но не обязательно идентичной, активности β(1,4)-Νацетилглюкозаминилтрансферазы III, также известной под названием в-1,4-маннозил-гликопротеин-4бета-№ацетилглюкозаминилтрансфераза (КФ 2.4.1.144) согласно номенклатуре Комитета Международного союза по биохимии и молекулярной биологии (СоттШее о£ 111е 1п1егпайопа1 Ишоп о£ ВюсйстМгу апб Мо1еси1аг Вю1оду (Νί’-ΐυΒΜΒ)). при оценке с помощью конкретного биологического анализа как в случае зависимости от дозы, так и без зависимости от дозы. В случае, когда существует зависимость от дозы, фермент не обязательно должен быть идентичен СпТ111, а скорее должен быть практически подобен в отношении зависимости данной активности от дозы по сравнению с СпТ111 (т.е. полипептидкандидат должен обладать более высокой активностью или не более чем при мерно в 25 раз пониженной активностью, предпочтительно не более чем примерно в 10 раз пониженной активностью, и еще более предпочтительно не более чем примерно в 3 раза пониженной активностью по сравнению с СпТШ)
В контексте настоящего описания понятие вариант (или аналог) относится к полипептиду, который отличается от конкретного указанного полипептида, предлагаемого в изобретении, наличием аминокислотных инсерций, делеций и замен, созданных например, с помощью метода рекомбинантной ДНК. Варианты АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, включают химерные, приматизированные или гуманизированные антигенсвязывающие молекулы, в которых один или несколько аминокислотных остатков модифицированы путем замены, добавления и/или делеций таким образом, что это не оказывает существенного воздействия на аффинность связывания с антигеном (например СИ20). Для решения вопроса о том, какие аминокислотные остатки можно заменять, добавлять или удалять без снижения представляющих интерес видов активности, можно осуществлять сравнение последовательности конкретного полипептида с последовательностью гомологичных пептидов, и минимизируя количество замен в аминокислотной последовательности в областях высокой гомологии (консервативные области), или путем замены аминокислот консенсусной последовательностью.
В другом случае рекомбинантные варианты, кодирующие эти же или подобные полипептиды, можно синтезировать или отбирать на основе избыточности генетического кода. Различные замены кодонов, такие как молчащие замены, которые приводят к получению различных сайтов рестрикции, можно интродуцировать с целью оптимизации клонирования в плазмидном или вирусном векторе или экспрессии в конкретной прокариотической или эукариотической системе. Мутации в полинуклеотидной последовательности могут проявляться в полипептиде или доменах других пептидов, добавленных к полипептиду для модификации свойств любого фрагмента полипептида с целью изменения характеристик, таких как аффинность к связыванию лиганда, внутрицепочечная аффинность или скорость расщепления/обновления.
Предпочтительно аминокислотные замены являются результатом замены одной аминокислоты другой аминокислотой, которая имеет сходные структурные и/или химические свойства, т. е. консервативные аминокислотные замены. Консервативные аминокислотные замены можно создавать на основе сходства в полярности, заряде, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или амфипатической природы участвующих в этом остатков. Например, к неполярным (гидрофобным) аминокислотам относятся аланин, лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан и метионин; к полярным нейтральным аминокислотам относятся глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин и глутамин; к положительно заряженным (основным) аминокислотам относятся аргинин, лизин и гистидин; и к отрицательно заряженным (кислотным) аминокислотам относятся аспарагинованя кислота и глутаминовая
- 12 015009 кислота. Инсерции или делеции предпочтительно затрагивают примерно 1-20 аминокислот, более предпочтительно 1-10 аминокислот. Приемлемую вариацию можно определять экспериментально, создавая систематически инсерции, делеции или замены аминокислот в полипептидной молекуле с помощью методов рекомбинантной ДНК и анализируя активность полученных рекомбинантных вариантов.
В контексте настоящего описания понятие гуманизированный относится к антигенсвязывающей молекуле, полученной из антигенсвязывающей молекулы из организма кроме человека, например к мышиному антителу, которая сохраняет или практически сохраняет антигенсвязывающие свойства родительской молекулы, но которая является менее иммуногенной для людей. Это можно достигать с различных методов, которые включают (а) трансплантацию полных нечеловеческих вариабельных областей в человеческие константные области с получением химерных антител, (б) трансплантацию нечеловеческих СЭК в человеческие каркасные и константные области с сохранением имеющих решающее значение остатков каркасного участка (например остатков, важных для сохранения хорошей аффинности к связыванию антигена или функций антитела) или без их сохранения, или (в) трансплантацию полных нечеловеческих вариабельных областей, но с их маскировкой участком, напоминающим человеческий, путем замены находящихся на поверхности остатков. Такие методы описаны у 1опез и др., Мотзоп и др., Ргос. Ναίΐ. Асаб. 8с1., 81, 1984, сс. 6851-6855; Мотзоп и Οι, Λάν. 1ттипо1., 44, 1988, сс. 65-92; Уегйоеуеп и др., 8с1еисе, 239, 1988, сс. 1534-1536; Раб1ап, Мо1ес. 1ттип., 28, 1991, сс. 489-498; Раб1ап, Мо1ес. 1ттип., 31(3), 1994, сс. 169-217, все указанные публикации полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. В каждой из вариабельных областей тяжелой и легкой цепи антитела присутствует 3 гипервариабельных участка или СОК (С1Ж1, С1Ж2 и С1Ж3), которые фланкированы четырьмя каркасными подобластями (участками) (т.е. РК1, РК2, РК3 и РК4) в каждой из вариабельных областей тяжелой и легкой цепи антитела: 1'К 1-С1Ж 1-1;К2-С[)1К2-1;К3-С[)1К3-1;К4. Обсуждение гуманизированных антител представлено среди прочего в ϋ8 6632927 и в опубликованной заявке на патент США № 2003/0175269, оба документа полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки.
Аналогично этому, в контексте настоящего описания понятие приматизированный относится к антигенсвязывающей молекуле, полученной из антигенсвязывающей молекулы организма кроме примата, например, к мышиному антителу, которая сохраняет или практически сохраняет антигенсвязывающие свойства родительской молекулы, но которая является менее иммуногенной для приматов.
В случае, когда в данной области применяют и/или являются приемлемыми два или более определений понятия, то в контексте настоящего описания подразумевается, что применяемое определение включает все такие значения, если специально не указано иное. Конкретным примером является применение понятия гипервариабельный участок (СОК) для описания не соприкасающихся антигенсвязывающих центров, присутствующих в полипептидах вариабельной области как тяжелой, так и легкой цепи. Этот конкретный участок описан у КаЪа! и др., 8ециепсез Рго1етз о£ 1ттипо1ощса1 1и1егез1, изд-во ϋ.8. Оер1. о£ Неа11й апб Нитап 8ег\асез, (1983) и СЪоОна и др., Т Мо1. Вю1. 196, 1987, сс. 901-917, публикации включены в настоящее описание в качестве ссылки, причем эти определения относятся к перекрывающимся аминокислотным остаткам или поднаборам аминокислотных остатков, при их сравнении друг с другом. Однако в контексте настоящего описания подразумевается возможность применения любого определения к СОК антитела или его вариантов. Соответствующие аминокислотные остатки, из которых состоят СОК, как они определены в каждой из процитированных выше ссылок, представлены в сравнении ниже в табл. I. Точные номера остатков, которые образуют конкретный СОК, должны варьироваться в зависимости от последовательности и размера СОК. Специалисты в данной области легко могут определить, какие остатки входят в конкретный СОК, на основе данных о аминокислотной последовательности вариабельной области антитела.
Таблица 1. Определения СОК
Кэбот Хотиа АСМ
νΗ ΟϋΚΙ 31-35 26-32 26-35
νΗ СШ<2 50-65 52-58 50-58
νΗ СОКЗ 95-102 95-102 95-102
Уь ΟϋΚΙ 24-34 26-32
Уь СОК2 50-56 50-52
Уь ΟϋΚ3 89-97 91-96
Нумерация всех входящих в СОК остатков в табл. 1 дана в соответствии с нумерацией, предложенной Кэботом и др. (см. ниже).
Кэбот и др. предложили также систему нумерации последовательностей вариабельных областей, которую можно применять для любого антитела. Обычный специалист в данной области может однозначно применять эту систему нумерации по Кэботу для последовательности любой вариабельной области, не имея никаких экспериментальных данных, кроме сведений о самой последовательности. В контексте настоящего описания понятие нумерация по Кэботу относится к системе нумерации, описанной у КаЪа! и др., 8едиепсе о£ Рго1етз о£ 1ттипо1ощса1 1п1егез1, изд-во ϋ8 Оер1. о£ Неа11й апб Нитап 8ег
- 13 015009
У1се5, 1983. Если не указано иное, то ссылки на нумерацию положений конкретных аминокислотных остатков в АСМ даны в соответствии с системой нумерации по Кэботу. Нумерация в последовательностях, представленных в перечне последовательностей (т.е. 8ЕС Ш N0: 1-8ЕС Ш N0: 78) не соответствует системе нумерации по Кэботу.
В контексте настоящего описания понятие нуклеиновая кислота или полинуклеотид, имеющие нуклеотидную последовательность по меньшей мере например, на 95% идентичную нуклеотидной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении, с которой проводят сравнение (референспоследовательность) означает, что нуклеотидная последовательность полинуклеотида идентична референс-последовательности за исключением того, что полинуклеотидная последовательность может включать до пяти точковых мутаций на каждые 100 нуклеотидов нуклеотидной референс-последовательности. Другими словами, для получения полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% нуклеотидной референс-последовательности, можно изымать путем делеции или заменять другими нуклеотидами вплоть до 5% нуклеотидов референс-последовательности или вплоть до 5% от общего количества нуклеотидов в референс-последовательности можно встраивать в референс-последовательность. Эталонная последовательность может представлять собой полную последовательность, представленную на фиг. 24 или 25.
С практической точки зрения определять, являются ли любая конкретная молекула нуклеиновой кислоты или полипептид по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичными нуклеотидной последовательности или полипептидной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении, можно с помощью известных широко используемых компьютерных программ. В качестве предпочтительного метода для определения наилучшего общего совпадения эталонной последовательности (последовательность, предлагаемая в настоящем изобретении) и анализируемой последовательности, который также обозначают как метод глобального сравнительного анализа последовательности, можно использовать компьютерную программу ΕΑ8ΤΏΒ, основанную на алгоритме ВтиЙад и др., Сотр. Арр. Βίο8С1. 6, 1990, сс. 237-245. При сравнительном анализе последовательностей как эталонная, так и анализируемая последовательности, обе представляют собой последовательности ДНК. Последовательности РНК можно сравнивать путем замены остатков и на Т. Результатом указанного глобального сравнительного анализа последовательностей является процент идентичности. Предпочтительными параметрами для расчета процента идентичности, используемыми в программе ΕΑ8ΤΌΒ сравнительного анализа последовательностей ДНК являются: матрица = унитарная, к-запись в базе данных = 4, штраф за несовпадение = 1, штраф за присоединение = 30, длина рандомизированной группы = 0, балл за срезание = 1, штраф за брешь = 5, штраф за размер бреши 0,05, размер окна = 500 или длина анализируемой нуклеотидной последовательности, если она короче.
Если анализируемая последовательность короче эталонной последовательности вследствие наличия делеций на 5'- или З'-конце, но не вследствие внутренних делеций, то результаты можно скорректировать вручную. Это обусловлено тем, что программа ΕΑ8ΤΏΒ не учитывает укорочения на 5'- и З'-конце анализируемой последовательности при расчете процента идентичности. Для анализируемых последовательностей, укороченных на 5'- или З'-концах по отношению к эталонной последовательности, процент идентичности корректируют путем вычисления количества оснований эталонной последовательности, расположенных за 5'- и З'-концами анализируемой последовательности, которые не совпали/не проанализированы, в виде процента от общего количества оснований эталонной последовательности. Совпадают ли/проанализированы ли нуклеотиды, определяется результатами сравнительного анализа последовательностей с помощью программы ΕΑ8ΤΏΒ. Затем этот процент вычитают из процента идентичности, рассчитанного с помощью указанной выше программы ΕΑ8ΤΏΒ с использованием указанных заданных параметров, в результате чего получают окончательную оценку процента идентичности. Эту скорректированную оценку используют для целей настоящего изобретения. Для целей ручной коррекции оценки процента идентичности рассчитывают только основания, расположенные за 5'- и З'-концами анализируемой последовательности, выявленные с помощью сравнительного анализа с использованием программы ΕΑ8ΤΏΒ, которые не совпадали/не проанализированы с эталонной последовательностью.
Например, для определения процента идентичности анализируемую последовательность длиной 90 оснований сравнивают с эталонной последовательностью длиной 100 оснований. На 5'-конце анализируемой последовательности имеются делеции и поэтому сравнительный анализ с помощью ΕΑ8ΤΏΒ не позволяет устанавливать совпадения/анализировать 10 первых оснований на 5'-конце. 10 неспаренных оснований представляют собой 10% последовательности (количество несовпавших оснований на 5'- и З'концах/общее количество оснований в эталонной последовательности), таким образом, 10% вычитают из оценки процента идентичности, рассчитанного с помощью программы ΕΑ8ΤΌΒ. Если остальные 90 оснований идеально совпадают, то окончательный процент идентичности составляет 90%. В другом примере анализируемую последовательность длиной 90 оснований сравнивают с эталонной последовательностью длиной 100 оснований. В данном случае делеции представляют собой внутренние делеции, так что на 5'- или З'-конце анализируемой последовательности не имеется оснований, которые не совпадали/не проанализированы с эталоном. В этом случае процент идентичности, рассчитанный с помощью
- 14 015009 программы ЕА§ТЭВ, не корректируют вручную. Еще раз следует подчеркнуть, что вручную осуществляют коррекцию только для оснований, которые не совпали/не проанализированы на 5'- и З'-концах анализируемой последовательности. Для целей настоящего изобретения не проводят никаких других коррекций.
Подразумевается, что у полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, по меньшей мере, например, на 95% идентичную эталонной аминокислотной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении, аминокислотная последовательность идентична эталонной последовательности за исключением того, что анализируемая последовательность полипептида может иметь вплоть до пяти аминокислотных изменений на каждые 100 аминокислот эталонной последовательности. Другими словами для того, чтобы получить полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 95% идентична эталонной аминокислотной последовательности, можно встраивать, изымать путем делеции или заменять другой аминокислотой вплоть до 5% аминокислотных остатков анализируемой последовательности. Эти изменения по сравнению с референс-последовательностью могут иметь место в Ν- или С-концевых положениях эталонной аминокислотной последовательности или в любом положении между этими концами, в виде изменений, либо распределенных индивидуально между остатками референс-последовательности, либо в виде одной или нескольких непрерывных групп в референспоследовательности.
С практической точки зрения определять, является ли любой конкретный полипептид по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичным референс-полипептиду, можно с помощью известных широко используемых компьютерных программ. В качестве предпочтительного метода для определения наилучшего общего совпадения эталонной последовательности (последовательность, предлагаемая в настоящем изобретении) и анализируемой последовательности, который также обозначают как метод глобального сравнительного анализа последовательности, можно использовать компьютерную программу ЕА§ТЭВ, основанную на алгоритме ВгиНад и др., Сотр. Арр. Вю8С1. 6, 1990, сс. 237-245. При сравнительном анализе последовательностей как эталонная, так и анализируемая последовательности либо обе представляют собой нуклеотидные последовательности, либо обе представляют собой аминокислотные последовательности. Результатом указанного глобального сравнительного анализа последовательностей является процент идентичности. Предпочтительными параметрами, используемыми в программе ЕА8ТЭВ сравнительного анализа аминокислотных последовательностей для расчета процента идентичности являются: матрица=РАМ 0, к-запись в базе данных=2, штраф за несовпадением, штраф за присоединение =20, длина рандомизированной группы=0, балл за срезание=1, размер окна=длина последовательности, штраф за брешь=5, штраф за размер бреши 0,05, размер окна=500 или длина анализируемой аминокислотной последовательности, если она короче.
Если анализируемая последовательность короче эталонной последовательности вследствие наличия делеций на Ν'- или С'-конце, но не вследствие внутренних делеций, то результаты можно скорректировать вручную. Это обусловлено тем, что программа ЕА8ТЭВ не учитывает укорочения на Ν'- и С'-конце при расчете процента идентичности. Для анализируемых последовательностей, укороченных на Ν'- или С'-концах по отношению к эталонной последовательности, процент идентичности корректируют путем вычисления количества остатков эталонной последовательности, выступающих за Ν'- и С'-концы анализируемой последовательности, которые не совпали/не проанализированы, в виде процента от общего количества оснований эталонной последовательности. Совпадают ли остатки при сравнительном анализе, определяется результатами сравнительного анализа последовательностей с помощью программы ЕА8ТЭВ. Затем этот процент вычитают из процента идентичности, рассчитанного с помощью указанной выше программы ЕА8ТЭВ с использованием указанных параметров, в результате чего получают окончательную оценку процента идентичности. Эту скорректированную оценку используют для целей настоящего изобретения. Для целей ручной коррекции оценки процента идентичности рассчитывают только остатки, расположенные за Ν'- и С'-концами анализируемой последовательности, выявленные с помощью сравнительного анализа с использованием программы ЕА§ТЭВ, которые не совпадают при сравнительном анализе с эталонной последовательностью. Т.е. учитывают только положения эталонных остатков вне наиболее удаленных Ν- и С-концевых остатков анализируемой последовательности.
Например, для определения процента идентичности анализируемую аминокислотную последовательность, содержащую 90 остатков, сравнивают с эталонной последовательностью, содержащей 100 остатков. На Ν'-конце анализируемой последовательности имеются делеции и поэтому сравнительный анализ с помощью ЕА8ТЭВ не позволяет устанавливать совпадения при сравнительном анализе для 10 первых остатков на Ν'-конце. 10 несовпавших остатков представляют собой 10% последовательности (количество несовпавших остатков на Ν'- и С'-концах/общее количество остатков в эталонной последовательности), таким образом, 10% вычитают из оценки процента идентичности, рассчитанного с помощью программы ЕА8ТЭВ. Если остальные 90 остатков идеально совпадают, то окончательный процент идентичности составляет 90%. В другом примере анализируемую последовательность, содержащую 90 остатков, сравнивают с эталонной последовательностью, содержащей 100 остатков. В данном случае делеции представляют собой внутренние делеции, так что на Ν'- или С'-конце анализируемой последовательности не имеется остатков, которые не совпадают при сравнительной анализе с эталоном. В этом
- 15 015009 случае процент идентичности, рассчитанный с помощью программы ΡΆ8ΤΏΒ, не корректируют вручную. Еще раз следует подчеркнуть, что вручную осуществляют коррекцию только для несовпавших/не проанализированных остатков на Ν'- и С'-концах анализируемой последовательности. Для целей настоящего изобретения не проводят никаких других коррекций.
В контексте настоящего описания понятие нуклеиновая кислота, которая гибридизуется в строгих условиях с нуклеотидной последовательностью, предлагаемой в изобретении, относится к полинуклеотиду, который гибридизуется при инкубации в течение ночи при 42°С в растворе, содержащем 50% формамида, 5х88С (750мМ №С1, 75мМ цитрат натрия), 50мМ фосфат натрия (рН 7,6), 5х раствор Денхардта, 10% сульфата декстрана и 20 мкг/мл недатурированной, гидродинамически фрагментированной ДНК из спермы лосося, с последующей отмывкой фильтров в 0,1х88С примерно при 65°С.
В контексте настоящего описания понятие домен локализации в комплексе Гольджи относится к аминокислотной последовательности расположенного в комплексе Гольджи полипептида, который ответствен за заякоривание полипептида в области внутри комплекса Гольджи. Как правило, домены локализации содержат аминоконцевые хвосты фермента.
В контексте настоящего описания понятие эффекторная функция относится к видам биологической активности, присущим Рс-области (нативная последовательность Рс-области или аминокислотная последовательность варианта Рс-области) антитела. Примерами эффекторных функций антитела являются (но не ограничиваясь ими) аффинность к связыванию с Рс-рецептором, антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность (ЛОСС), антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ЛОСР), секреция цитокинов, опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, понижающая регуляция рецепторов клеточной поверхности и т.д.
В контексте настоящего описания понятие конструкция, сконструированный (созданный), конструирование (создание) и сконструированная схема гликозилирования относятся к любой манипуляции, которой подвергают схему гликозилирования встречающегося в естественных условиях или рекомбинантного полипептида или его фрагмента. Конструирование схемы гликозилирования включает метаболическое конструирование механизма гликозилирования клетки, в том числе генетические манипуляции, касающиеся путей олигосахаридного синтеза, с целью получения измененного гликозилирования гликопротеинов, экспрессируемых в клетках. Кроме того, конструирование схемы гликозилирования включает воздействия мутаций и клеточного окружения на гликозилирование.
В контексте настоящего описания понятие клетка-хозяин относится к любой клеточной системе, которую можно сконструировать для производства полипептидов и антигенсвязывающих молекул, предлагаемых в настоящем изобретении. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения клеткухозяина конструируют так, чтобы с ее помощью получать антигенсвязывающую молекулу с модифицированными гликоформами. В предпочтительном варианте осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело, фрагмент антитела или слитый белок. В конкретных вариантах осуществления изобретения клетки-хозяева подвергали дополнительным манипуляциям для экспрессии повышенных уровней одного или нескольких полипептидов, обладающих СпТШактивностью. Клетки-хозяева представляют собой культивируемые клетки, например культивируемые клетки млекопитающих, такие как СНО-клетки, ВНК-клетки, ΝδΟ-клетки, 8Р2/0-клетки, клетки миеломы линии ΥΟ, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, РЕВ-клетки, РЕВ.Сб-клетки или клетки гибридомы, клетки дрожжей, клетки насекомых и растительные клетки, а также клетки, находящиеся в организме трансгенного животного, трансгенного растения или культивируемой растительной или животной ткани.
В контексте настоящего описания понятие Рс-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность относится к антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности и клеточнозависимой, опосредованной растворимым слитым с Рс белком, который содержит человеческую Рс-область. Это представляет собой механизм иммунитета, приводящий к лизису меченных антителом клеток человеческими иммунокомпетентными эффекторными клетками, где:
Понятие человеческие иммунокомпетентные эффекторные клетки означает популяцию лейкоцитов, несущих на поверхности Рс-рецепторы, с помощью которых они связываются с Рс-областью антител или слитыми с Рс белками и осуществляют эффекторные функции. Такая популяция может включать (но не ограничиваясь ими) периферические мононуклеарные клетки (РВМС) и/или естественные клеткикиллеры (ΝΚ).
Понятие меченные антителом клетки относится к клеткам, которые связаны с антителами или слитыми с Рс белками. Антитела или слитые с Рс белки связываются с клетками-мишенями посредством Ν-концевого по отношению к Рс-области фрагмента белка.
В контексте настоящего описания понятие повышенная Рс-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность относится к любому увеличению количества меченных антителом клеток, подвергнутых лизису в данный момент времени при данной концентрации антитела или слитого с Рс белка, в среде, окружающей клетки-мишени, с помощью указанного выше механизма Рс-опосредованной клеточ
- 16 015009 нозависимой цитотоксичности и/или снижению концентрации антитела или слитого с Ес белка в среде, окружающей клетки-мишени, необходимой для лизиса данного количества меченных антителом клеток в данный момент времени с помощью механизма Ес-опосредованной клеточнозависимой цитотоксичности. Понятие повышение уровня Ес-опосредованной клеточнозависимой цитотоксичности оценивают относительно клеточнозависимой цитотоксичности, опосредованной одним и тем же антителом или слитым с Ес белком, продуцированным в одном и том же типе клеток-хозяев, с использованием одних и тех же стандартных методов получения, очистки, приготовления композиций и хранения, которые хорошо известны специалистам в данной области, но которое не продуцировалось клеткой-хозяином, сконструированной для экспрессии гликозилтрансферазы ΟηΤΙΙΙ с помощью способов, представленных в настоящем описании.
Понятие антитело, обладающее повышенной антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичностью (АЭСС) означает антитело, как оно определено выше, которое обладает повышенной АЭСС при определении с помощью любого приемлемого метода, известного обычным специалистам в данной области. Один из приемлемых методов анализа ίη νίίτο АЭСС заключается в том, что:
1) для анализа применяют клетки-мишени, для которых известно, что они экспрессируют антигенмишень, распознаваемый антигенсвязывающим центром антитела;
2) для анализа в качестве эффекторных клеток используют человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС), выделенные из крови произвольно выбранных здоровых доноров;
3) анализ осуществляют с помощью следующего протокола:
Ι) РВМС выделяют с помощью стандартных методов центрифугирования в градиенте плотности и суспендируют 5χ 106 клеток/мл в ΚΡΜΙ-среде для культуры клеток;
ΙΙ) выращивают клетки-мишени с помощью стандартных методов культуры тканей, собирают на экспоненциальной фазе роста, когда жизнеспособность составляет более 90%, промывают в ΚΡΜΙ-среде для культуры клеток, меченной 100 мкКи 51Сг, дважды промывают с помощью среды для культуры клеток и ресуспендируют в среде для культуры клеток с плотностью 105 клеток/мл;
ΙΙΙ) переносят по 100 мкл указанной выше конечной суспензии клеток-мишеней в каждую лунку 96луночного титрационного микропланшета;
Ιν) готовят серийные разведения с концентрацией антител от 4000 до 0,04 нг/мл в среде для культуры клеток и добавляют 50 мкл образовавшихся растворов антител к клеткам-мишеням в 96-луночном титрационном микропланшете, оценивая в трех повторностях различные концентрации антител во всем указанном выше диапазоне концентраций;
У) для создания контролей с максимальным высвобождением (ΜΚ) используют 3 дополнительные лунки в планшете, которые содержат меченые клетки-мишени, с добавлением 50 мкл 2 об.% водного раствора неионогенного детергента (Νοηίάβΐ, фирма 81дта, Сент-Луис), вместо раствора антитела (указанного в пТУ, выше);
У!) для создания контролей со спонтанным высвобождением (8К) используют 3 дополнительные лунки в планшете, которые содержат меченые клетки-мишени, с добавлением 50 мкл ΚΡΜΙ-среды для культуры клеток вместо раствора антитела (указанного в п.ГУ, выше);
УН) затем 96-луночный титрационный микропланшет центрифугируют при 50хд в течение 1 мин и инкубируют в течение 1 ч при 4°С;
УШ) добавляют в каждую лунку по 50 мкл суспензии РВМС (указанной в пТ, выше), получая соотношение эффекторная клетка:клетка-мишень 25:1, и планшеты помещают в инкубатор в атмосферу 5% СО2 и выдерживают при 37°С в течение 4 ч;
ΙΧ) собирают бесклеточный супернатант из каждой лунки и количественно оценивают выделенную в процессе эксперимента радиоактивность (ЕК) с помощью счетчика гамма-лучей;
Χ) рассчитывают процент специфического лизиса для каждой концентрации антитела согласно формуле (ΕΚ-ΜΚ)/(ΜΚ-8Κ)χ100, где ЕК обозначает среднюю радиоактивность, рассчитанную (см. п.ЕХ, выше) для указанной концентрации антитела, ΜΚ означает среднюю радиоактивность, рассчитанную (см. пТХ, выше) для ΜΚ-контролей (см. п.У, выше), а 8К означает среднюю радиоактивность, рассчитанную (см. пТХ, выше) для 8К-контролей (см. п.У!, выше);
4) повышенную АЭСС определяют либо как увеличение максимального процента специфического лизиса, обнаруженного для указанного выше диапазона концентраций антитела, и/или как снижение концентрации антитела, необходимой для достижения 1/2 максимального процента специфического лизиса, обнаруженного для указанного выше диапазона концентраций антитела. Повышение АЭСС оценивают относительно АЭСС. опосредованной одним и тем же антителом, продуцированным в одном и том же типе клеток-хозяев, с использованием одних и тех же стандартных методов получения, очистки, приготовления композиций и хранения, которые хорошо известны специалистам в данной области, но которое не продуцировалось клеткой-хозяином, сконструированной для сверхэкспрессии ΟηΤΙΙΙ.
Один из объектов настоящего изобретения относится к антигенсвязывающим молекулам, обладающим специфичностью связывания, соответствующей специфичности мышиного антитела В-Ьу1, и он основан на установленном при создании изобретения факте, что их эффекторные функции можно усили
- 17 015009 вать путем изменения гликозилирования. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула представляет собой химерное антитело. Предпочтительным вариантом осуществления изобретения является химерное антитело или его фрагмент, которые содержат СОВ, представленные на фиг. 7. В частности, предпочтительным вариантом осуществления изобретения является выделенный полинуклеотид, который содержит: (а) последовательность, выбранную из ряда, включающего 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 5, 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 6 и 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 7 (СИВ Ун-1); и (б) последовательность, выбранную из группы, включающей: 8Ер ΙΌ ΝΟ: 21, 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 22 и 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 23 (СОВ Ун-2); и 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 24. Другим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является выделенный полинуклеотид, который содержит 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 8, 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 9 и 8Е0 ΙΌ ΝΟ: 10 (СЭВ Уъ). Согласно одному из вариантов осуществления изобретения все эти полинуклеотиды кодируют слитый полипептид.
Согласно другому варианту осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула содержит Ун-область мышиного антитела В-Ьу1, представленную на фиг. 1, или ее вариант; и немышиный полипептид. Следующим предпочтительным вариантом осуществления изобретения является антигенсвязывающая молекула, которая содержит Уъ-область мышиного антитела В-Ьу1, представленную на фиг. 2, или ее вариант; и немышиный полипептид.
Еще одним объектом изобретения являются антигенсвязывающие молекулы, которые содержат один или несколько укороченных СЭВ антитела ВЬу-1. Такие укороченные СЭВ должны содержать, как минимум, определяющие специфичность аминокислотные остатки данного СОВ. Под определяющим специфичность остатком понимают остатки, которые непосредственно участвуют во взаимодействии с антигеном. В целом, только от 1/5 до 1/3 остатков в данном СОВ принимает участие в связывании с антигеном. Определяющие специфичность остатки в каждом конкретном СОВ можно идентифицировать, например, путем вычисления внутриатомных контактов на трехмерной модели структуры и определения вариабельности последовательности в данном положении остатков согласно методу, описанному у Раб1ап и др., ЕА8ЕВ 1. 9(1), 1995, сс. 133-139, содержание публикации полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Таким образом, изобретение относится также к выделенному полинуклеотиду, который содержит по меньшей мере один гипервариабельный участок мышиного антитела В-Ьу1 или его вариант или укороченную форму, которые содержат, по меньшей мере, определяющие специфичность остатки указанного гипервариабельного участка, где выделенный полинуклеотид кодирует слитый полипептид. Предпочтительно указанные выделенные полинуклеотиды кодируют слитый полипептид, который представляет собой антигенсвязывающую молекулу. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения полинуклеотид несет три гипервариабельных участка мышиного антитела В-Ьу1 или их варианты или укороченные формы, содержащие, по меньшей мере, определяющие специфичность остатки каждого из трех гипервариабельных участков. Согласно другому варианту осуществления изобретения полинуклеотид кодирует полную вариабельную область легкой или тяжелой цепи химерного (например, гуманизированного) антитела. Изобретение относится также к полипептидам, кодируемым указанными полинуклеотидами.
Следующим вариантом осуществления изобретения является антигенсвязывающая молекула, которая несет по меньшей мере один гипервариабельный участок мышиного антитела В-Ьу1 или его вариант или укороченную форму, которые содержат по меньшей мере определяющие специфичность остатки указанного гипервариабельного участка и которые содержат последовательность, выведенную из гетерологичного полипептида. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула несет три гипервариабельных участка мышиного антитела В-Ьу1 или их варианты или укороченные формы, содержащие, по меньшей мере, определяющие специфичность остатки каждого из трех указанных гипервариабельных участков. Согласно другому варианту осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула содержит вариабельную область легкой или тяжелой цепи антитела. Согласно одному из предпочтительных вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающая молекула представляет собой химерное (например гуманизированное) антитело. Изобретение относится также к способам получения таких антигенсвязывающих молекул и к их применению для лечения заболевания, включая В-клеточные лимфомы.
Известно несколько механизмов, которые обусловливают терапевтическую эффективность антител к СЭ20. включая антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (АЭСС), комплементзависимую цитотоксичность (СЭС) и индукцию замедления роста или апоптоза. Например, большинство экспериментальных данных свидетельствует о том, что действие ритуксимаба обусловлено обычными эффекторными механизмами, которые оценивают путем анализов СЭС и АЭСС. Аналогично этому было установлено, что устойчивость различных клеток лимфомы к ритуксимабу ίη νίνο является функцией их чувствительности к СЭС ίη νίίτο. В противоположность этому для механизма действия ίη νίνο другого антитела, рекомендованного для применения в терапии, такого как В1, не требуется ни комплементзависимой, ни связанной с естественными клетками-киллерами (ΝΚ) активности. В большей степени эффективность В1 ίη νίνο является результатом его способности индуцировать выраженный апоптоз.
В целом, моноклональные антитела к СЭ20 подразделяются на две различные категории на основе
- 18 015009 их механизма действия, обеспечивающего уничтожения клеток лимфомы. Антитела типа I к СЭ20 прежде всего используют комплемент для уничтожения клеток-мишеней, в то время как антитела типа II проявляют действие посредством других механизмов, прежде всего апоптоза. Ритуксимаб и 1Р5 являются примерами антител типа I к СЭ20, а В1 является примером антитела типа II (см., например, Сгадд М.8. и С1епте Μ.Ι., В1оой 103(7), апрель 2004, сс. 2738-2743; Тее1тд ЕЬ. и др., В1оой 104(6), сентябрь 2004, сс. 1793-1800), содержание публикаций полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Настоящее изобретение является первым известным примером создания антитела типа II к СЭ20, которое обладает повышенными эффекторными функциями, такими как АЭСС, сохраняя при этом способность индуцировать эффективный апоптоз. Таким образом, настоящее изобретение относится к сконструированному антителу типа II к СЭ20, которое обладает повышенной АЭСС, что является результатом указанного конструирования, и не утрачивает выраженную способность индуцировать апоптоз. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения конструировали антитела типа II к СЭ20, которые имели измененную схему гликозилирования в Рс-области. Согласно конкретному варианту осуществления изобретения измененное гликозилирование предусматривает повышенный уровень бисекционных комплексных остатков в Рс-области. Согласно другому конкретному варианту осуществления изобретения измененное гликозилирование предусматривает также и понижение уровня остатков фукозы в Рс-области (см. опубликованную заявку на патент США № 20040093621 на имя фирмы 81и1ага и др., содержание которой полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. В другом варианте осуществления изобретения антитела типа II к СЭ20 создают с помощью метода конструирования полипептидов, который изложен в И8 6737056 на имя Ргейа или в опубликованной заявке на патент США № 20040185045 (на имя Μас^одешсκ) или в опубликованной заявке на патент США № 20040132101 (на имя Хепсог), содержание каждой из которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Изобретение относится также к способам получения таких сконструированных антител типа II и к способам применения таких антител для лечения различных В-клеточных нарушений, включая В-клеточные лимфомы.
Химерные мышиные /человеческие антитела являются известными (см., например, Μо^^^κоη 8. Ь. и др., ΡΝΑ8 II, ноябрь 1984 г., сс. 6851-6854; опубликованный европейский патент № 173494; ВоиНаппа С. Ь и др., Ыа!иге 312, декабрь 1984 г., с. 642; ЫенЬещег Μ. 8. и др., Ыа!иге 314, март 1985 г., с. 268; опубликованный европейский патент № 125023; Тап и др., I. Фтипок 135, ноябрь 1985 г., с. 8564; 8ип Ь. К и др., НуЬпйота 5(1), 1986, с. 517; 8а1адап и др., I. Iттиηо1. 137, 1986, сс. 1066-1074). Общие сведения приведены у Уиган, Ыа!иге 312, декабрь 1984 г., с. 597; □юккою СепеДс Епдтееппд Ые\\ъ 5(3), март 1985 г.; Μπγχ, 8с1епсе 229, август 1985 г., с. 455; и Μо^^^κоη, 8с1епсе 229, сентябрь 1985 г., сс. 1202-1207. РоЬткоп с соавторами в опубликованной заявке РСТ \УО/88104936 описали химерное антитело, которое несет человеческую константную область и мышиную вариабельную область, обладающее специфичностью в отношении эпитопа СЭ20; мышиный фрагмент химерного антитела по данным РоЫпкоп выведен из мышиного моноклонального антитела 2Н7 (гамма 2Ь, каппа). Несмотря на то, что в указанной ссылке это химерное антитело рассматривается в качестве основного кандидата для лечения В-клеточных нарушений, специалисты в данной области могут рассматривать его только как гипотетичное при определении того, справедливо ли оно для конкретного антитела, прежде всего из-за того, что в ссылке отсутствуют какие-либо данные, подтверждающие утверждение о наличии терапевтической эффективности, и, что является важным, результаты, полученные с использованием высших млекопитающих, таких как приматы или люди.
Методологии получения химерных антител известны в данной области. Например, легкую и тяжелую цепи можно экспрессировать по отдельности, используя, например легкую цепь иммуноглобулина и тяжелую цепь иммуноглобулина в различных плазмидных векторах или в одном (например, полицистронном) векторе. Затем их можно очищать и собирать ш νίΙΐΌ с получением полных антител; методы осуществления такой сборки известны (см., например, 8с11агГГ Μ., Нагуеу ЬесШгек 69, 1974, с. 125). Параметры реакций ш νίΙΐΌ для получения антител в виде ΙβΟ из восстановленных выделенных легких и тяжелых цепей также описаны в литературе (см., например, 8еагк и др., Вюскет. 16(9), 1977, сс. 20162025).
Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления изобретения химерная АСМ, предлагаемая в настоящем изобретении, представляет собой гуманизированное антитело. Методы гуманизации антител, полученных из организма кроме человека, известны в данной области. Например, гуманизированные АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получать с помощью методов, описанных в И8 5225539 на имя ХУтЮг И8 6180370 на имя Циееп и др. или И8 6632927 на имя Айап и др., полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительно гуманизированное антитело несет один или несколько интродуцированных аминокислотных остатков из источника кроме человека. Эти аминокислотные остатки из источника кроме человека часто называют импортными остатками, которые, как правило, получают из импортной вариабельной области. Гуманизацию, как правило, осуществляют с помощью метода, описанного у ^М1п1ег с сотрудниками (Йопек и др., Ыа!иге, 321, 1986, сс. 522-525; КгесЬтапп и др., Ыа!иге, 332, 1988, сс. 323-327; Vе^1юеуеη и др.,
- 19 015009
8с1епсе, 239, 1988, сс. 1534-1536), путем замены последовательностей гипервариабельных участков на соответствующие последовательности человеческого антитела. Таким образом, такие гуманизированные антитела являются химерными антителами (υδ 4816567), в которых область, существенно меньшая по сравнению с интактной человеческой вариабельной областью, заменена на соответствующую последовательность из видов кроме человека. На практике гуманизированные антитела представляют собой типичные человеческие антитела, в которых некоторые остатки гипервариабельного участка и, вероятно, некоторые остатки ΕΚ-участка заменены остатками из аналогичных сайтов антител грызунов. Предлагаемые в изобретении гуманизированные антитела к СЭ20 должны содержать константные области человеческого иммуноглобулина.
Выбор человеческих вариабельных областей как легкой, так и тяжелой цепи, применяемых для создания гуманизированных антител, очень важен для снижения антигенности. Согласно так называемому методу наилучшего подбора последовательность вариабельной области антитела грызунов подвергают скринингу с использованием полной библиотеки известных последовательностей человеческих вариабельных областей. Затем человеческую последовательность, наиболее сходную с последовательностью грызунов, отбирают в качестве человеческого каркасного участка (ΕΚ) для создания гуманизированного антитела (81Ш5 и др., I. 1шшипо1., 151, 1993, с. 2296; С1ю11иа и др., I. Мо1. Вю1., 196, 1987, с. 901). Другой метод выбора последовательности человеческого каркасного участка заключается в сравнении последовательности каждой индивидуальной подобласти полного каркасного участка грызунов (т.е. ΕΚ1, ΕΚ2, ΕΚ3 и ΕΚ4) или определенной комбинации индивидуальных подобластей (например, ΕΚ1 и ΕΚ2) и библиотеки известных последовательностей человеческих вариабельных областей, которые соответствуют указанной каркасной подобласти (например, с использованием нумерации по Кэботу), и выборе человеческой последовательности для каждой подобласти или комбинации, которая является наиболее сходной с последовательностью грызунов (Ъеипд, заявка на патент США № 2003/0040606А1, опубликованная 27 февраля 2003 г.). Еще один метод основан на применении конкретного каркасного участка, выведенного из консенсусной последовательности всех человеческих антител конкретной подгруппы легких и тяжелых цепей. Один и тот же каркасный участок можно применять для нескольких различных гуманизированных антител (Сайег и др., Ргос. №111. Αсаά. δα. υδΑ, 89, 1992, с. 4285; Ргейа и др., I. 1шшипо1., 151, 1993, с. 2623).
Также важно, чтобы антитела, будучи гуманизированными, сохраняли их высокую аффинность к антигену и другие ценные биологические свойства. Для решения этой задачи согласно предпочтительному способу гуманизированные антитела получают с помощью процесса анализа родительских последовательностей и различных концептуальных (схематических) гуманизированных продуктов с использованием трехмерных моделей родительских и гуманизированных последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулинов доступны и хорошо известны специалистам в данной области. Доступны компьютерные программы, которые иллюстрируют и отображают вероятные трехмерные конформационные структуры выбранных в качестве перспективных (кандидатов) последовательностей иммуноглобулинов. Оценка этих изображений позволяет проанализировать вероятную роль остатков в проявлении функции последовательности иммуноглобулина-кандидата, т.е. анализ остатков, которые влияют на способность иммуноглобулина-кандидата связываться с антигеном. Таким методом можно отбирать остатки ΕΚ-участка и объединять остатки, полученные из реципиента, и импортные последовательности так, чтобы получать требуемые характеристики антитела, такие как повышенная аффинность к антигену(ам)-мишени(ям). В целом, остатки гиперварибельных участков непосредственно и в наибольшей степени оказывают воздействие на связывание антигена.
Согласно другому варианту осуществления изобретения антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в настоящем изобретении, конструируют так, чтобы они обладали повышенной аффинностью к связыванию, например, с использованием методов, описанных в опубликованной заявке на патент США № 2004/0132066 на имя Ва1т1 и др., полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения антигенсвязывающие молекулы, предлагаемые в настоящем изобретении, конъюгируют с дополнительным фрагментом, таким как радиоактивная метка или токсин. Такие конъюгированные АСМ можно получать многочисленными методами, хорошо известными в данной области.
Различные радионуклиды можно применять согласно настоящему изобретению, и специалисты в данной области могут легко определить, какой радионуклид является наиболее пригодным в различных ситуациях. Например, 131йод представляет собой хорошо известный радионуклид, применяемый для целенаправленной иммунотерапии. Однако клиническая применимость 131йода может быть ограничена несколькими факторами, которые включают восьмидневный физический период полураспада; дегалогенизация йодированного антитела как в крови, так и в областях опухоли; и характеристики испускания (например, высокий уровень гамма-компонента), что может оказаться не оптимальным для локализованного отложения дозы в опухоли. С появлением более эффективных хелатирующих агентов возможность присоединения к белкам хелатирующих групп металлов повысила возможность использования других ра
- 20 015009 дионуклидов, таких как 111 индий и 90иттрий. 90Иттрий обладает рядом преимуществ при радиоиммунотерапевтическом применении: 64-ч период полураспада 90иттрия является достаточным для накопления антитела опухолью и, например, в отличие от 131иода, 90иттрий испускает только бета-лучи высокой энергии без накопления гамма-излучения при его распаде на участке ткани, диаметром 100-1000 клеток. Кроме того, минимальное количество проникающей радиации позволяет вводить антитела, меченные иттрием, амбулаторным больным. Кроме того, для уничтожения клетки не требуется интернализация меченого антитела, и местное испускание ионизирующего излучения должно быть летальным для примыкающих опухолевых клеток, лишенных антигена-мишени.
Эффективные однократные дозы (т.е. терапевтически эффективные количества) меченных с помощью 90иттрия антител к СЭ20 составляют от примерно 5 и до примерно 75 мКи, более предпочтительно от примерно 10 до примерно 40 мКи. Эффективные однократные неаблятивные дозы (при использовании которых не требуется трансплантация костного мозга) меченных с помощью 131йода антител к СЭ20 составляют от примерно 5 и до примерно 70 мКи, более предпочтительно от примерно 5 и до примерно 40 мКи. Эффективные однократные аблятивные дозы (т.е. при применении которых может потребоваться аутологичная трансплантация костного мозга) меченых с помощью 131 йода антител к СЭ20 составляют от примерно 30 и до примерно 600 мКи, более предпочтительно от примерно 50 и менее чем примерно 500 мКи. С учетом того, что химерное антитело к СЭ20 обладает более продолжительным периодом полужизни в кровотоке по сравнению с мышиными антителами, эффективные однократные неаблятивные дозы (при использовании которых не требуется трансплантация костного мозга) меченных с помощью йода химерных антител к СЭ20 составляют от примерно 5 и до примерно 40 мКи, более предпочтительно менее чем примерно 30 мКи. Критерии визуализации, например, в случае использования в качестве метки 111 индия, как правило, составляют менее примерно 5 мКи.
При лечении с использованием радиоактивно меченных антител к СЭ20 можно использовать как однократную терапевтическую обработку, так и несколько обработок. Из-за присутствия радионуклидного компонента предпочтительно, чтобы перед лечением периферические стволовые клетки (Р8С) или клетки костного мозга (ВМ) были собраны с целью оценки их способности к выживанию в присутствии потенциально смертельной для костного мозга токсичности радиации. ВМ и/или Р8С выделяют стандартными методами и затем очищают и замораживают для возможной реинфузии. Кроме того, наиболее предпочтительно перед лечением проводить диагностическое дозиметрическое исследование пациента с помощью диагностического меченого антитела (например, с помощью индия), целью которого является гарантия того, что терапевтическое меченое антитело (например, с помощью иттрия) не концентрируется в излишнем количестве в любом здоровом органе или ткани.
Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая представлена ниже в табл. 3. Изобретение относится также к выделенной нуклеиновой кислоте, содержащей последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности, которая представлена ниже в табл. 2. Следующим вариантом осуществления изобретения является выделенная нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, которая кодирует полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, представленной в табл. 3. Под объем изобретения подпадает также выделенная нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, которая кодирует полипептид, имеющий аминокислотную последовательность любой из представленной в табл. 3 конструкции с консервативными аминокислотными заменами.
- 21 015009
Таблица 2
Конструкция Нуклеотидная последовательность 8Εζ) ГО N0
В-НН1 САООТОСААТТООТОСАСТСТООСОСТОААОТТ 29
ААОААОССТССгОАОТТСАОТСгААОСгТСТССТСгС
ААООСТТССООАТАСАССТТСАОСТАТТСТТОО
АТОАОСТОООТССООСАООССССТООАСААОО
ОСТСОАОТООАТОООАСООАТСТТТСССООСОА
ТОО6ОАТАСТОАСТАСОСАСАОАААТТССААОО
ААОАОТСАСААТТАССОСССАСАААТССАСТАО
САСАСССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТОАООАСАСОСССОТОТАТТАСТОТОСААОААА
ТОТСТТТОАТООТТАСТ6ОСТТОТТТАСТООООС
СА6ООААСССТООТСАССОТСТССТСА
В-НН2 САООТОСААТТООТССАОТСТОССОСТОААСТТ 31
ААОААОССТОООАОТТСАОТОААООТСТССТОС
ААОССТТСС6ОАТАССССТТСАОСТАТТСТТОО
АТбААСТСООТОСООСАбОССССТСОАСААОО
ОСТСОАОТООАТОООАСООАТСТТТСССООСОА
ТООООАТАСТОАСТАСААТОООАААТТСААООО
САОАОТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАО
САСАОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТОАСОАСАССбССОТОТАТТАСТОТОСААОААА
ТОТСТТТОАТССТТАСТООСТТОТТТАСТООООС
САОООААСССТООТСАССОТСТССТСА
В-ННЗ САОбТССААТТООТССАСТСТООСССТбААОТТ 33
ААОААСССТОО6АСТТСАОТОААООТСТССТОС
АА6ОСТТССООАТАСОССТТСАОСТАТТСТТОО
АТОААСТООСТОСООСАСОССССТбСАСААбО
ОСТСОАОТООАТСООАСООАТСТТТСССОССОА
ТО6ООАТАСТОАСТАСААТСООАААТТСААООО
САОАОТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАО
САСАбССТАТАТООАССТОАСгСАОССТСАСгАТС
ТОАСОАСАСООССОТСТАТСТОТОТОСААОААА
ТОТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТООООС
САОООААСССТООТСАССОТСТССТСАОСТАОС
АСС
В-НН4 САОСТОСААТТСОТОСАОТСТООСОСТОААОТТ 35
ААОАА6ССТООАОСТТСАОТОААООТСТССТОС
АА00ТСТСС00АТАС0С0ТТСА0СТАТТСТТ60
АТОААСТОООТССООСАООССССТООАСААОО
ОСТСОАОТООАТОООАСООАТСТТТСССООСОА
ТООООАТАСТОАСТАСААТОООАААТТСААООО
САОАОТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАО
САСАОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТбАСОАСАСООССОТОТАТТАСТОТССААОААА
ТОТСТТТСАТООТТАСТОССТТОТТТАСТООСОС
САО6ОААСССТОСТСАССОТСТССТСА
- 22 015009
Конструкция Нуклеотидная последовательность 8Е0 ГО N0
В-НН5 САООТОСААТТООТССАОТСТООСССТОААСТТ 37
ААОААОССТОООАОТТСАОТОААООТСТССТОС
ААСОСТТСССОАТАССССгТТСАОСТАТТСТТСО
АТСА0СТС06Т0С06СА60С6ССТ66АСАА00
ОСТСОАОТООАТООСАССОАТСТТТССС66СОА
Т6ОО6АТАСТОАСТАСААТОООАААТТСААООО
САОАОТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАО
САСАОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
Т6АООАСАСООСССТОТАТТАСТОТССААОААА
ТОТСТТТОАТООТТАСТОССТТОТТТАСТООООС
САОО6ААСССТООТСАССОТСТССТСА
В-НН6 САООТбСААТТСОТОСАОТСТООСОСТОААСТТ 39
ААОААОССТСО6АОТТСАОТОААСОТСТССТОС
ААСОСТТСССОАТАСОССТТСАОСТАТТСТТОО
АТСААТТОбОТОСООСАООССССТОСАСААОбб
СТС0А0Т00АТ060АС00АТСТТТССС00С0АТ
ООСОАТАСТОАСТАСААТОООАААТТСААО6СС
АОАОТСАСААТТАСС6ССОАСАААТССАСТАОС
АСАОССТАТАТОСАОСТОАОСАОССТОАОАТСТ
ОАСОАСАСООССОТОТАТТАСТОТОСААОАААТ
ОТСТТТОАТС6ТТАСТООСТТ6ТТТАСТ6ОС6СС
АОООААСССТ6ОТСАССОТСТССТСА
В-НН7 СА6ОТОСААТТООТОСАОТСТ6ОСОСТОААОТТ 41
АА6АА6ССТОООАСТТСАОТОААООТСТССТ6С
ААСОСТТССООАТАССССТТСАОСТАТТСТТбО
АТСТСОТОООТОСОССАСОСОССТбОАСААбОС
СТСОАОТООАТОООАСООАТСТТТСССООСОАТ
ООООАТАСТОАСТАСААТОООАААТТСААОООС
АСАСгТСАСААТТАСССгСССАСАААТССАСТАСгС
АСАОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТСТ
ОАООАСАСООССОТОТАТТАСТОТОСААОАААТ
ОТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТООООСС
АОООААСССТОСгТСАСССгТСТССТСА
В-НН8 САООТ6СААТТООТОСА6ТСТООС6СТ6ААОТТ 43
ААОААОССТООСОССТСА6ТОААООТСТССТОС
ААООСТТССО6АТАСАССТТСАСАТАСАОСТОО
АТ0ААСТ000Т0С00СА00ССССТ66АСАА00
ССТСОАОТбОАТООбАСООАТСТТТСССООСОА
ТООО6АТАСТОАСТАСААТО6ОАААТТСАА6ОС
САОА6ТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАС
САСАОССТАТАТС6АОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТОА66АСАС6ОССОТОТАТТАСТОТОСАА6ААА
Т6ТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТ66ООС
СА666ААСССТООТСАССОТСТССТСА
- 2З 015009
Конструкция Нуклеотидная последовательность 8Е() ГО ΝΟ
В-НН9 САОСгТОСААТТСгОТОСАОТСТСгСгСбСТСгААОТТ 45
ААСААСССТСОССССТСАОТСААООТСТССТОС
ААООСТТССООАТАСАССТТСАОСТАТТСТТОО
АТОААСТО6ОТСС66СА6ОССССТ66АСААО6
ОСТСОАОТО6АТ6ООАС6ОАТСТТТСССС6С6А
ТОС6ОАТАСТСАСТАСААТОООАААТТСААООО
САОАОТСАСААТТАССОСССАСАААТССАСТАО
САСАОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТОА6ОАСАСООССОТ6ТАТТАСТОТОСААОААА
ТОТСТТТОАТООТТАСТО6СТТСТТТАСТООООС
СА6ООААСССТСЮТСАССОТСТССТСА
В-НЫ САСгСгТССААТТСгОТОСАОТСТОСгСОСТСААОТТ 47
АА6ААОССТСОООССТСАОТОААООТСТССТОС
ААООСТТССООАТАСАССТТСАССТАТТСТТ6О
АТОСАСТОО6ТОС6ОСАООССССТ6ОАСААО6О
СТСОАОТССАТбОбАСОСАТСТТТСССООСОАТ
ООООАТАСТОАСТАСОСАСАОАААТТССААООА
АОАОТСАСААТСАСАСОСОАСАСОТССАСТТСС
АССОТСТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТСТ
ОАООАСАСООССбТСТАТТАСТСТОСААбАААТ
ОТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТОО6ОСС
АСаОААСССТССТСАСССТСТССТСА
В-НЬ2 ОАОСТОСААТТООТОСАбТСТСОСОСТбААСТТ 49
ААОААОССТООООССАССОТОААОАТСТССТОС
АА6ОТОТССОСАТАСАССТТСАССТАТТСТТОО
АТОСАСТСООТОСАОСАОбССССТООАААСОС
ОСТСОАОТСОАТОООАСООАТСТТТСССббСОА
ТООООАТАСТОАСТАСОСАОАОАААТТССААОО
АА6АОТСАСААТСАСАСССОАСАСОТССАСТ6А
САССОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТСгАСгОАСАСООССОТСгТАТТАСТСТССААССАА
ТОТСТТТСАТООТТАСТООСТТСТТТАСТОСбОС
СА6ООААСССТООТСАССОТСТССТСА
В-НЬЗ ОАС6ТОСААТТО6ТССАСТСТ66СОСТСАА6ТТ 51
ААОААОССТООООССАССОТОААОАТСТССТОС
АА6ОТОТССО6АТАСАССТТСАССТАТТСТТ66
АТОААСТ666ТОСАОСАООССССТООАААСОО
0СТС0А0ТС0АТ060АС00АТСТТТССС00С0А
Т6ООСАТАСТОАСТАСААТОО6АААТТСАА6ОО
АА6АОТСАСААТСАСАОССОАСАСОТССАСТОА
САССОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТОАООАСАССОССОТ6ТАТТАСТСТ6СААССАА
ТбТСТТТОАТССТТАСТОбСТТОТТТАСТООООС
САООСААСССТООТСАССОТСТССТСА
- 24 015009
Конструкция Нуклеотидная последовательность 8Е<3 Ю N0
В-НЬ4 САОАТОСААТТООТОСАОТСТООСОСТОААОТТ 53
ААОААОАССОООАОТТСАОТОААООТСТССТОС
ААООСТТССООАТАСАССТТСАССТАТТСТТОО
АТОАОСТОООТОСОССАООССССТООАСААОО
ОСТСОАОТООАТОООАСООАТСТТТСССООСОА
ТООООАТАСТОАСТАСОСАСАОАААТТССААОО
ААОАОТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАО
САСАОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТС
ТОАООАСАСООССОТОТАТТАСТОТОСААОААА
ТОТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТООООС
САОООААСССТООТСАССОТСТССТСАОСТАОС
АСС
В-НЬ8 ОААОТОСАОСТООТООАОТСТООАООАООСТТО 55
ОТСААОССТООСОООТСССТОСООСТСТССТОТ
ОСАОССТСТООАТТСАСАТТТАОСТАТТСТТООА
ТОААСТОООТОСООСАООСТССТООАААОООСС
ТСОАОТОООТОООАСООАТСТТТСССООСОАТО
ОООАТАСТОАСТАСААТОООАААТТСААОООСА
/П А П'Т’Г^ А ГА А ПГТ1 А Г'Г'ПГ'Г'ГУ А Г> А А А ТГГ А Г^'Т’ А ΓΣΓ* А νιζ-кчл х х х х ι ζιυοη.
САОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТСТО
АООАСАСООССОТОТАТТАСТОТОСААОАААТО
ТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТООООССА
ОООААСССТООТСАССОТСТССТСА
В-НЫО СООААТТСООСССАССООТООССАССАТООАСТ 57
ООАССТООАООАТССТСТТСТТООТООСАОСАО
ССАСАООАОСССАСТССОААОТОСАОСТООТОО
АОТСТООАООАООСТТООТСААОССТООСОООТ
СССТОСООСТСТССТОТОСАОССТСТООАТТСОС
А Α Ζ'-ί'!-’ А Α «Τ’ Ζ~1 А Α /'Ι'Τ'Ζ—’ /ПГГЛ1 /~Ч А Άΐ ιοαοοιλι юз шолшалсклллоылгсл
ООСТССТООАААОООССТСОАОТОООТОООАСО
ОАТСТТТСССООСОАТООООАТАСТОАСТАСАА
ТОООАААТТСААОООСАОАОТСАСААТТАССОС
СОАСАААТССАСТАОСАСАОССТАТАТООАОСТ
САОСАОССТОАОАТСТОАООАСАСООССОТОТА
ТТАСТОТОСААОАААТОТСТТТОАТООТТАСТОО
СТТОТТТАСТООООССАОООААСССТООТСАСС
ОТСТССТСАОСТАОСОААТТСТСОА
В-НЫ1 САООТОСАССТООТООАОТСТООАООАООСТТО 59
ОТСААОССТООСОООТСССТОСООСТСТССТОТ
ОСАСССТСТОСАТТСАСАТТТАОСТАТТСТТСОА
ТОААСТОООТОСОССАООСТССТООАААОООСС
ТСОАОТОООТОООАСООАТСТТТСССООСОАТО
ОООАТАСТОАСТАСААТОСОАААТТСААОООСА
ОАОТСАСААТТАССОССОАСАААТССАСТАОСА
САОССТАТАТООАОСТОАОСАОССТОАОАТСТО
АООАСАСООССОТОТАТТАСТОТОСААОАААТО
ТСТТТОАТООТТАСТООСТТОТТТАСТООССССА
ОООААСССТООТСАССОТСТССТСА
- 25 015009
Конструкция
В-НЫ2
В-НЫЗ
В-НЫ4
Нуклеотидная последовательность
8Ε(3 ΙΡ ΝΟ
СОСААТТСООСССАССООТООССАССАТООАСТ ООАССТОСАбОАТССТСТТСТТООТООСЛОСАО ССАСАООАССТСАСТССОААОТОСАОСТСОТОО АОТСТОСАОСАООСТТСОТСААОССТО6СОСОТ СССТОСОССТСТССТОСбСАОССТСТООАТТСАС АТТТАОСТАТТСТТООАТОААСТОСОТОССОСА ОбСТССТООАААООСССТСОАОТОООТОООАСО ОАТСТТТСССООСОАТОСООАТАСТОАСТАСАА ТОООАААТТСААООбСАОАОТСАСААТТАССОС СОАСАААТССАСТАОСАСАОССТАТАТООАОСТ ОАОСАОССТОАСАТСТСАООАСАССОСССТОТА ТТАСТОТОСААОАААТОТСТТТОАТООТТАСТО6 СТТбТТТАСТООСОССАОООААСССТООТСАСС ОТСТССТСАССТА6СОААТТСТСОА_________
СбОААТТСОбСССАССООТООССАССАТбОАСТ аОАССТООАбОАТССТСТТСТТООТОССАОСАС ССАСАООАССТСАСТСССААСТССАОСТССТСО АСТСТООАООАСОСОТООТСААОССТОССббОТ СССТОСООСТСТССТОСОСАОССТСТОСАТТСАС АТТТАОСТАТТСТТбОАТОААСТОООТОСООСА ООСТССТООАААОООССТСОАСТОООТОООАСО ОАТСТТТСССООСОАТСОООАТАСТОАСТАСАА ТООСтАААТТСААСООСАОАОТСАСААТТАССбС СОАСАААТССАСТАОСАСАОССТАТАТСОАОСТ ОАОСАОССТОАОАТСТОАООАСАСООССОТОТА ТТАСТОТОСААОАААТОТСТТТОАТООТТАСТОб СТТОТТТАСТООООССАОООААСССТООТСАСС ОТСТССТСАОСТАОСОААТТСТСОА_________
СООААТТСООСССАССОСТООССАССАТООАСТ ООАССТООАООАТССТСТТСТТООТООСАОСАО ССАСАОСАОСТСАСТССОААСТОСАОСТбОТСО АОТССССАОаАОбСТТОААОААбССТООСОСО ТСССТОС66СТСТССТОСОСА6ССТСТ6ОАТТСА САТТТАОСТАТТСТТООАТОААСТОССТОСОСС АОССТССТООАААбОбССТСОАОТОООТОООАС аОАТСТТТСССбОСОАТОСОСАТАСТОАСТАСА АТОООАААТТСААОООСАСАОТСАСААТТАССС СССАСАААТССАСТАССАСАОССТАТАТООАСС ТОАССАСССТОАОАТСТСАООАСАСОСССОТОТ АТТАСТОТОСААСАААТОТСТТТОАТООТТАСТО ОСТТОТТТАСТООбОССАОООААСССТООТСАС СОТСТССТСАССТАССОААТТСТСОА
- 26 015009
Конструкция
В-НЫ5
В-НЫ6
В-НЫ7
Сигнальная последовательность УН ______Нуклеотидная последовательность______ СООААТТСООСССАССООТООССАССАТООАСТ ООАССТООАСОАТССТСТТСТТООТООСАОСАО ССАСАООАОСССАСТССОААОТОСАОСТООТОО АОТСТООАООАООСТТООТСААОССТООСТСТТ СССТОССОСТСТССТОСОСАОССТСТООАТТСАС АТТТАОСТАТТСТТООАТОААСТОООТОСООСА 00СТССТ06ААА060ССТС0АСТ000Т000АС0 САТСТТТСССООС6АТ6ОООАТАСТОАСТАСАА ТОООАААТТСААОООСАОАОТСАСААТТАССОС ССАСАААТССАСТАОСАСАОССТАТАТООАОСТ ОАОСАОССТОАОАТСТОАООАСАСООССОТОТА ТТАСТОТОСААОАААТОТСТТТОАТООТТАСТОО СТТОТТТАСТООООССАОООААСССТООТСАСС СТСТССТСАОСТАОСОААТТСТСОА_________
СООААТТСОССССАССООТООССАССАТООАСТ СОАССТОСАОСАТССТСТТСТТООТООСАОСАО ССАСАООАОСССАСТССОААОТОСАОСТООТСО А0ТСТ00А00А00СТТ00ТСАА0ССТ00С060Т СССТОСОООТСАОСТОСОСАСССТСТООАТТСА САТТТАОСТАТТСТТООАТОААСТОООТОСООС АОССТССТООАААОООССТССАОТСООТСООАС СОАТСТТТСССООСОАТООСОАТАСТОАСТАСА АТОООАААТТСААОООСАОАОТСАСААТТАССС ССОАСАААТССАСТАОСАСАОССТАТАТООАОС ТОАССАОССТОАОАТСТОАСОАСАССОССОТОТ АТТ АСТОТОС А АО АААТОТСТТТО АТООТТ АСТР ОСТТОТТТАСТОО66ССА6ООААСССТООТСАС СОТСТССТСАОСТАОСОААТТСТСОА________
СООААТТСООСССАССООТООССАССАТООАСТ ООАССТООАООАТССТСТТСТТООТООСАОСАО ССАСАСОАОСССАСТССОААОТОСАОСТООТОО А0ТСТ60А00А00СТТ00ТСАА0ССТ60С000Т СССТОСООСТСТССТОСОСАОССТСТСОАТТСАС АТТТАОСТАТТСТТООАТОААСТОСОТОСООСА 00СТССТ00ААА006ССТС0А0Т000Т000АСС ОАТСТТТСССООСОАТООООАТАСТОАСТАСАА ТОООАААТТСААОООСАОАОТСАСААТТАССОС СОАСАААТССАСТАОСАСАОССТАТАТООАОСТ ОАОСАОССТОАОАТСТСАСОАСАСООССОТОТА ТТАСТОТССААОАААТОТСТТТОАТООТТАСТОО СТТОТТТАСТООООССАОССААСССТООТСАСС ОТСТССТСАОСТАОСОААТТСТСОА_________
АТООАСТООАССТООАООАТССТСТТСТТООТО ОСАОСАОССАСАООАОСССАСТСС
8Еф ГО N0
Конструкция
Нуклеотидная последовательность
8Еф ГО N0
В-КУ1
Сигнальная последовательность УЬ
ОАТАТСОТОАТОАСССАОАСТССАСТСТСССТО СССОТСАССССТООАСАОСССОССАОСАТТАОС ТОСАООТСТАОСААОАОССТСТТОСАСАОСААТ ООСАТСАСТТАТТТОТАТТООТАССТОСААААО ССАОООСАОТСТССАСАОСТССТОАТТТАТСАА АТОТССААССТТОТСТСТСОСОТСССТОАССООТ ТСТССООАТССОООТСАО6САСТОАТТТСАСАС ТОААААТСАССАООСТООАООСТОАООАТОТТО ОАОТТТАТТАСТОСОСТСАОААТСТАОААСТТС СТТАСАССТТС00С00А600АССАА00Т00А0А ТСАААСОТАССОТО___________________
АТООАСАТОАОООТССССОСТСАОСТССТОООС СТССТОСТОСТСТООТТСССАООТОССАООТОТ
- 27 015009
Таблица 3
Конструкция Аминокислотная последовательность 8Е(} ГО N0
В-НН1 ОУОЬУО8ОАЕУККРО88УКУ8СКА8ОУТГ8У8ХУМ8 30
ХУУКОАРООСЬЕУ7МСК.1ГРООСОТОУАОКРОСКУТ1Т
АОК8Т8ТАУМЕЕ88ЬК8ЕОТАУУУСА1ШУЕООУХУЕУ
УА¥ОООТЬУТУ88
В-НН2 0У0ЬУ08ОАЕУККР088УКУ8СКА8ОУАГ8У8ХУММ 32
ΧννΚΟΑΡΟΟΟΕΕΧνΜΟΚ,ΙΕΡΟΟΟΟΤΟΥΝΟΚΓΚΟΚνΤΙΤ
АБК8Т8ТАУМЕЕ88ЕК8ЕОТАУУУСАВКУГООУХ¥ЕУ
УШЗООТЬУТУ88
В-ННЗ ОУОЬУО8СгАЕУККРО88УКУ8СКА8СУАЕ8У8ХУМЫ 34
ХУУК0АР006ЕЕАУМ(ЗК.1ГРОО6ВТОУМ0КГК6К.УТ1Т
ΑϋΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ.8ΕΟΤΑνΥΕΟΑΚΝνΕϋΟΥΧνΕν
УАУОООТЬУТУ88
В-НН4 ОУОЬУ08СгАЕУККРОА8УКУ8СКУ8СУАЕ8У8ХУМЫ 36
ХУУК.ОАРОООЕЕХ¥М6К1РРСОООТОУКОКЕКОК.УТ1
ΤΑϋΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ.8ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΝνΓΟΟΥΧν
ЬУУХУОООТЬУТУ88
В-НН5 0У0ЬУ08САЕУККРО88УКУ8СКА8аУАЕ8У8ХУМ8 38
ΧννΚ.0ΑΡ606ΕΕΧνΜ6ΚΙΓΡ<3ΟΟΟΤΟΥΝΟΚΡΚΟΚνΤΙ
ТАВК8Т8ТАУМЕЬ88ЬК.8ЕОТАУУУСА1ШУЕВОУХУ
ЬУУХУОООТЬУТУ88
В-НН6 0ν0Εν08ΟΑΕνΚΚΡΟ88νκν80ΚΑ8ΟΥΑΓ8Υ8\νΐΝΧν 40
νΚΟΑΡΟΟΟΕΕΧνΜΟΚΙΕΡΟΟΟΟΤΟΥΝαΚΓΚΟΚνΤΙΤΑ
ΟΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕϋΤΑνΥΥΟΑΚΝνΕΟΟΥΧνΕνΥ
ХУОО<лТЬУТУ88
В-НН7 0У0ЬУ08ОАЕУККРО88УКУ8СКА8ОУАЕ8У8ХУ18ХУ 42
νΚ.0ΑΡΟ0ΟΕΕΧνΜ6Κ.ΙΓΡΟΟ6ΟΤΟΥΝ6ΚΓΚΟΒ.νΤΙΤΑ
ΟΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕϋΤΑνΥΥεΑΚΝνΕϋΟΥΧνΕνΥ
ХУОООТЬУТУ88
В-НН8 0У0ЕУ08ОАЕУККР6А8УКУ8СКА8ОУТЕТУ8ХУМЫ 44
ΧννΚ.ΟΑΡ600ΕΕΧνΜ6ΚΙΕΡΟΟΟΟΤΟΥΝΘΚΕΚ6ΚνΤΙ
ΤΑϋΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕΒΤΑνΥΥΟΑΚΝνΓϋΟΥΧν
Ь V УХУОООТЬ УТУ8 8
- 28 015009
Конструкция Аминокислотная последовательность 8ЕЦ Ιϋ ΝΟ
В-НН9 0У0ЬУ086АЕУККРОА8УКУ8СКА80УТГ8У8\УКт 46
ν/νΚΟΑΡσθθΕΕν/ΜΟΚΙΕΡαθΟΟΤΟΥΝ6ΚΡΚ(3ΚνΊΊ
ΤΑΟΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ.8ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΝνΓϋΟΥ\ν
ί V ΥΥ/ΟΟΟΤΕ УТ У8 8
В-НЫ 0У0ЕУ08ОАЕУККРОА8УКУ8СКА8<ЗУТЕТУ8У/МН 48
λννΚΟΑΡΟΟΟΕΕλνΜΟΚ.ΙΕΡΟϋΟϋΤΟΥΑΟΚΕΟΟΒ.νΤ
ΜΤΚϋΤ8Τ8ΤνΥΜΕΕ88ΕΚ.8ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚ.ΝνΕϋ6Υ
λνΕνγλναοοτΕντνδδ
В-НБ2 ЕУОЕУО8ОАЕУККРОАТУК18СКУ8ОУТГТУ8\УМН 50
λνν00ΑΡσΚΟΕΕλνΜΘΒ.ΙΕΡ6ΟΟϋΤΟΥΑΕΚΓ0ΟΚ.νΤΙ
ΤΑϋΤδΤϋΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥΥΟΑΤΝνΡϋΟΥλν
ί V ΥννΟΟΟΤΕντνδ 8
В-НЬЗ ЕУОЕУО8САЕУККРОАТУК18СКУ8СУ1ТТУ8\УММ 52
λννθΟΑΡΟΚΟΕΕλνΜΟΚ.ΙΡΡΟϋΟϋΤϋΥΝΟΚΡΚΟΚνΤΙ
ΤΑΟΤ8ΤϋΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ.8ΕϋΤΑνΥΥΟΑΤΝνΓϋΟΥλν
ΕνΥλΥΟΟΟΤΕντνδδ
В-НЕ4 0М0ЕУ08САЕУККТО88УКУ8СКА8СУТРТУ8У/М8 54
ΑννΚ.ΟΑΡΟΟΟΕΕν7Μ6ΚΙΕΡΟϋ60ΤΟΥΑΟΚΓΟΟΚνΤΙΤ
ΑΟΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ.8ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚ.ΝνΓϋ6Υ\νΕν
ΥλΥΟΟΟΤΕντνδδ
В-НЬ8 ЕУ0ЕУЕ8ОО6ЕУКР0О8ЕКЕ8САА8ОЕТГ8У8\¥КШ 56
λννΚ.ΟΑΡ6ΚΟΕΕ\ννσΚ.ΙΓΡΟϋΟΟΤΟΥΝσΚΓΚ6ΚνΤΙ
ΤΑϋΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΝνΓϋΟΥ^
ЕУУ\У6ООТЕУТУ88
В-НЫ0 ЕУОЕУЕ8ООСЕУКР6О8ЕКЕ8САА8ОЕАР8У8\УМЪПУ 58
νΚ.ΟΑΡΟΚΟΕΕλννθΚΙΡΡΘθσθΤΟΥΝΘΚΓΚακνΤΙΤΑ
ΟΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕδ8ΕΚ.8ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΝνΓϋ6Υ1\νΕνΥ
ЖЗООТЕУТУ88
В-НЫ1 0ν0ΕνΕ8ΘΟΟΕνΚΡΟΟ8ΕΚ.Ε80ΑΑ8ΟΕΤΡ8Υ8λνΜΝ 60
АУУК.ОАРСКОЕЕУ¥У6К1РРСОСОТОУК6КЕКСК.УТ1
ΤΑϋΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΝνΕΟΟΥ\ν
ίν Υν/СОСТЕ УТУ8 8
В-НЫ 2 ΕνΟΕνΕδΟΑΟΕνΚΡΟΟδΕΚ.ΕδΟΑΑδΟΡΤΡδΥδ’ΎΜΝ 62
λννΒ.ΟΑΡΟΚΟΕΕλνΜΟΚ.ΙΡΡΟϋΟΟΤΟΥΝΟΚΡΚΟΚ.νΤΙ
ΤΑϋΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΝνΡϋαΥλν
ЕУ γ\νσοστΕντ У8 8
В-НЫЗ ЕУОЕУЕ8ООСУУКРСО8ЕКЕ8САА8ОГТГ8У8А¥МЬГ№ 64
νΚΟΑΡΟΚΟΕΕλνΜΟΚΙΓΡΟΒΟϋΤϋΥΝΟΚΡΚΟΚνΤΙΤΑ
ΒΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΒ.8ΕΒΤΑνΥΥΟΑΚΝνΓΒΟΥλνΕνΥ
λνοοστΕντνδδ
В-НЫ4 ЕУ0ЕУЕ8С6ОЕККРСС8ЕК.Е8САА8ОРТР8У8АУМЫ^ 66
νΚΟΑΡΟΚΟΕΕλνΜΟΚΙΡΡΟΒΟΒΤΒΥΝΟΚΓΚΟΚνΤΙΤΑ
ΒΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕΒΤΑνΥΥΟΑΚΝνΡΒΟΥλ¥ΕνΥ
\УООСгТЕУТУ88
В-НЫ5 Εν0ΕνΕ86ΟΟΕνΚΡΟ88ΕΚΕ80ΑΑ8ΟΕΤΓ8Υ8ΑνΜΝΨ 68
νΚ.ΟΑΡΟΚΟΕΕλνΜΟΚ.ΙΡΡΟΒΟΒΤΒΥΝΟΚΡΚΟΚ.νΤΙΤ
АВК8Т8ТАУМЕЕ88ЕК8ЕВТАУУУСАКЦУГВСУУЩ
νγλνοοστΕντνδδ
В-НЫ 6 ЕУ0ЕУЕ86О6ЕУКР6С8ЕКУ8САА8ОГТГ8У8\¥ММУ 70
νκ0ΑΡ0Κ0ΕΕ\νΜ0κΐΡΡ0Β0ΒΤΒΥΝ0ΚΡΚ0κ.ντιΤΑ
ΒΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕΒΤΑνΥΥΟΑΚ.ΝνΕΒΟΥλνΕνΥ
λνσοατΕντνδδ
Конструкция В-НЫ 7 Сигнальная последовательность УН Аминокислотная последовательность Εν0ΕνΕ8σσσΕνΚΡΟΟ8ΕΚ.Ε80ΑΑ8σΡΤΡ8Υ8\νΜΝ \ννΚ.ΟΑΡΟΚΟΕΕΧνΜΟΚ.ΙΡΡ<3ΒΟΒΤΒΥΝΟΚΡΚΟΚ.νΤΙ ΤΑΒΚ8Τ8ΤΑΥΜΕΕ88ΕΚ8ΕΒΤΑνΥΥΟΑΚΝνΡΒΟΥλν ΕνΥλ¥ΟΟ6ΤΕντν88 МВУ7ТУ7ШЕРЕУАААТОАН8 8ЕЦ ΙΒ ΝΟ 72 74
В-КУ1 ΒΐνΜΤΟΤΡΕ8ΕΡνΤΡΟΕΡΑ8ΙδΟΚ.88Κ8ΕΕΗ8ΝΟΙΤΥΕΥ 76
λνΥΕ0ΚΡΟ08Ρ0ΕΕΙΥ0Μ8ΝΕν8θνΡΒΚ.Ρ8Ο8Ο8σΤΒΡ
ТЕК18К.УЕАЕОУСУУУСАОМЕЕЕРУТРСОСТКУЕ1КК.
τν
Сигнальная последовательность УЬ ΜΒΜΚ.νΡΑΟΕΕΟΕΕΕΕλνΡΡΟΑΚ.Ο 78
Другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является выделенный полинуклеотид, который содержит последовательность, кодирующую полипептид, который имеет аминокислотную последовательность, представленную на фиг. 1 или 2. Изобретение относится также к выделенной нуклеиновой кислоте, содержащей последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной на фиг. 5 или фиг. 6. Следующим вариантом осуществления изобретения является выделенная нуклеиновая кислота, которая содержит последовательность, кодирующую полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, представленной на фиг. 5 или 6. Под объем изобретения подпадает также выделенная нуклеиновая кислота, которая содержит последовательность, кодирующую полипептид, аминокислотная после
- 29 015009 довательность которого представлена на одной из фиг. 1, 2, 5 или 6 с консервативными аминокислотными заменами.
Следующим вариантом осуществления настоящего изобретения является экспрессионный вектор и/или клетка-хозяин, которые содержат один или несколько выделенных полинуклеотидов, предлагаемых в настоящем изобретении.
Как правило, любую культивируемую клеточную линию можно применять для экспрессии АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении. В предпочтительном варианте осуществления изобретения СНО-клетки, ВНК-клетки, №0-клетки, 8Р2/0-клетки, клетки миеломы линии Υ0, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, РЕВ-клетки, РЕВ.С6-клетки или клетки гибридомы, другие клетки млекопитающих, клетки дрожжей, клетки насекомых или растительные клетки используют в качестве основной клеточной линии для создания клеток-хозяев, предлагаемых в изобретении.
Терапевтическую эффективность АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, можно усиливать, получая их в клетке-хозяине, которая дополнительно экспрессирует полинуклеотид, кодирующий полипептид, который обладает СиТШ-активностью. В предпочтительном варианте осуществления изобретения полипептид, обладающий СпТ111-активностью, представляет собой слитый полипептид, который содержит домен локализации в комплексе Гольджи присущего комплексу Гольджи полипептида. Согласно другому предпочтительному варианту осуществления изобретения экспрессия АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, в клетке-хозяине, которая экспрессирует полинуклеотид, кодирующий полипептид, который обладает СпТ111-активностью, приводит к получению АСМ, которые обладают повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором и повышенной эффекторной функцией. Таким образом, одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является клетка-хозяин, содержащая (а) выделенную нуклеиновую кислоту, которая содержит последовательность, кодирующую полипептид, который обладает СпТШ-активностью; и (б) выделенный полинуклеотид, который кодирует АСМ, предлагаемую в настоящем изобретении, такую как химерное, приматизированное или гуманизированное антитело, которое связывается с человеческим СЭ20. В предпочтительном варианте осуществления изобретения полипептид, обладающий СпТШ-активностью, представляет собой слитый полипептид, который содержит каталитический домен СпТШ, а домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации маннозидазы II. Методы получения таких слитых полипептидов и их применение для получения антител с повышенными эффекторными функциями описаны в предварительной заявке на патент США № 60/495142, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки. Согласно другому предпочтительному варианту осуществления изобретения химерная АСМ представляет собой химерное антитело или его фрагмент, которые обладают способностью к специфическому связыванию, свойственную мышиному антителу В-Ьу1. Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления изобретения химерное антитело содержит человеческую Есобласть. Согласно другому предпочтительному варианту осуществления антитело является приматизированным или гуманизированным.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения один или несколько полинуклеотидов, кодирующих АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, можно экспрессировать под контролем конститутивного промотора или в другом варианте регулируемой экспрессионной системы. Приемлемые регулируемые экспрессионные системы включают (но не ограничиваясь ими) регулируемую тетрациклином экспрессионную систему, индуцируемую экдизоном экспрессионную систему, переключаемую с помощью 1ас экспрессионную систему, индуцируемую глюкокортикоидом экспрессионную систему, систему с использованием индуцируемого температурой промотора и индуцируемую металлом металлотионеина экспрессионную систему. Если в систему клетки-хозяина входят несколько различных нуклеиновых кислот, кодирующих АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, то некоторые из них можно экспрессировать под контролем конститутивного промотора, а другие экспрессировать под контролем регулируемого промотора. За максимальный уровень экспрессии принимают наиболее высокий возможный уровень стабильной экспрессии полипептида, который не оказывает значительного вредного воздействия на скорость клеточного роста, и его можно определять с помощью обычного эксперимента. Уровни экспрессии определяют методами, хорошо известными в данной области, в том числе с помощью Вестерн-блоттинга с использованием антитела, специфического в отношении АСМ, или антитела, специфического к пептидной метке, слитой с АСМ; и методом Нозерн-блоттинга. В другом варианте полинуклеотид может быть функционально связан с репортерным геном; уровни экспрессии химерной АСМ, которая имеет аффинность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, определяют, оценивая сигнал, который коррелирует с уровнем экспрессии репортерного гена. Репортерный ген можно транскрибировать вместе с нуклеиновой(ами) кислотой(ами), которая(ые) кодирует(ют) слитый полипептид, в виде одной молекулы мРНК; соответствующие им кодирующие последовательности могут быть слиты либо с помощью внутреннего сайта входа в рибосому (1ВЕ8) или с помощью независящего от кэпа энхансера трансляции (С1ТЕ). Репортерный ген можно транслировать в сочетании с по меньшей мере одной нуклеиновой кислотой, кодирующей химерную АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, с образованием одной полипептидной цепи. Нуклеиновые кислоты, которые кодируют АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, можно
- 30 015009 функционально связывать с репортерным геном под контролем одного промотора, так, чтобы нуклеиновая кислота, кодирующая слитый полипептид и репортерный ген, транскрибировалась с молекулы РНК, из которой в результате альтернативного сплайсинга образовывались две различные молекулы матричной РНК (мРНК); после трансляции одной из образовавшихся мРНК получают репортерный белок, а после трансляции второй получают указанный слитый полипептид.
Для конструирования экспрессионных векторов, содержащих кодирующую последовательность АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, наряду с соответствующими транскрипционными/трансляционными контролирующими сигналами, применяют методы, хорошо известные специалистам в данной области. Эти методы представляют собой методики ίη νίίτο рекомбинантной ДНК, методы синтеза и методы рекомбинации/генетической рекомбинации ίη νίνο (см, например, методы, описанные у Машабк и др., Μο1еси1а^ Οοηίηβ А ^аЬο^аΐο^у Мата!, изд-во Со1б 8ρπη§ на^т Ьа^гаШту, Ν.Υ. (1989) и АикиЬе1 и др., СштеШ Ρτοΐο^1κ ίη ΜοΒαιΕπ ВюШду, изд-во Стене РиЫЫшщ Аккοс^аΐек амб ТС11еу Щеткае^е, Ν.Υ (1989).
Для экспрессии кодирующей последовательности АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении, можно использовать различные системы экспрессионных векторов-хозяев. Предпочтительно клетки млекопитающих применяют в качестве систем клеток-хозяев, трансфектированных экспрессионными векторами в виде рекомбинантной плазмидной ДНК или рекомбинантной космидной ДНК, которые содержат кодирующую последовательность представляющего интерес белка и кодирующую последовательность слитого полипептида. Наиболее предпочтительно в качестве системы клетки-хозяина применяют СНОклетки, ВНК-клетки, ΝδΟ-клетки, 8Р2/0-клетки, клетки миеломы линии ΥΟ, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, РЕВ-клетки, РЕВ.Сб-клетки или клетки гибридомы, другие клетки млекопитающих, клетки дрожжей, клетки насекомых и растительные клетки. Некоторые примеры экспрессионных систем и методов отбора даны в следующих публикациях и приведенных в них ссылках: ΕοΡΗ и др., Вю1ес11гю1. Вюеш 71(4), 2000-2001, сс. 266-273, ХУегпег и др., Аг/петиЦеКогксНшщ/Огид Век. 48(8), 1998, сс. 870-880, Апбегкег! и Κ^иттеη, Сшт. Ορ. Вю1ес1ню1. 13, 2002, сс. 117-123, СНабб и Οιηιηο\ν. Сигг. Ορ. Вю1ес1ню1. 12, 2001, сс. 188-194 и 61ббтдк, Сигг. Ορ. Вю1ес1ню1. 12, 2001, сс. 450-454. В альтернативных вариантах осуществления изобретения можно применять другие системы на основе эукариотических клеток-хозяев, такие как клетки дрожжей, трансформированные рекомбинантными дрожжевыми экспрессионными векторами, которые содержат последовательность, кодирующую АСМ, предлагаемую в настоящем изобретении; системы клеток насекомых, зараженных рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, бакуловирусными), содержащими кодирующую последовательность химерной АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1; системы растительных клеток, зараженные рекомбинантными вирусными экспрессионными векторам (например вирусом мозаики цветной капусты, СаМУ; вирусом мозаики табака, ТМУ), или трансформированные рекомбинантными плазмидными экспрессионными векторами (например, Τί-плазмидными), которые содержат кодирующую последовательность АСМ, предлагаемой в изобретении; или системы на основе клеток животных, зараженных рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, аденовирусными, на основе вируса оспы), включая клеточные линии, сконструированные так, что они содержат множество копий ДНК, кодирующей химерную АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, где копии либо стабильно амплифицируются (ΟΠΟΜΜτ), либо нестабильно амплифицируются в двойных микрохромосомах (например мышиные клеточные линии). Согласно одному из вариантов осуществления изобретения вектор, содержащий полинуклеотид(ы), который(ые) кодирует(ют) АСМ, предлагаемую в изобретении, является полицистронным. Кроме того, согласно одному из вариантов осуществления изобретения указанная выше АСМ представляет собой антитело или его фрагмент. В предпочтительном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой гуманизированное антитело.
В способах, предлагаемых к настоящем изобретении, понятие стабильная экспрессия, как правило, предпочтительно относится к кратковременной экспрессии, поскольку при этом обычно получают более воспроизводимые результаты, а также это больше соответствует крупномасштабному производству. Помимо применения экспрессионных векторов, которые содержат вирусные сайты инициации репликации, клетки-хозяева можно трансформировать соответствующими кодирующими нуклеиновыми кислотами, которые находятся под контролем соответствующих контролирующих экспрессию элементов (например, промоторные, энхансерные последовательности, терминаторы транскрипции, сайты полиаденилирования и т.д.) и селектируемым маркером. После интродукции чужеродной ДНК созданным клеткам можно давать расти в течение 1-2 дней в обогащенных средах, а затем переносить на селективные среды. Селектируемый маркер в рекомбинантных плазмидах придает устойчивость к селектирующему агенту и позволяет отбирать клетки, в хромосомах которых присутствует стабильно интегрированная плазмида, и выращивать до образования очагов, которые в свою очередь можно клонировать и размножать с получением клеточных линий.
Можно применять многочисленные системы селекции, включая (но не ограничиваясь ими) гены тимидинкиназы герпеса простого (^М1ц1ег и др., Се11 11, 1977, с. 223), гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы (8хуЬа1кка и 8хуЬа1ккк Ргас. №111. Асаб. 8ск И8А 48, 1962, с 2026), и аденин
- 31 015009 фосфорибозилтрансферазы (Ьо^у и др., Се11 22 1980, с. 817), которые можно применять в ΐ--, йдрй-- или аргТ-клетках соответственно. Кроме того, можно использовать устойчивость к антиметаболитам в качестве основы для отбора гена бйй, который придает устойчивость к метотрексату (^1д1ет и др., №аЙ. Лсаб. 8с1. И8Л 77, 1989, с. 3567; О'Наге и др., Ргос. №аЙ. Лсаб. 8с1. И8Л 78, 1981, с 1527); гена др1 который придает устойчивость к микофенольной кислоте (МиШдап и Вегд, Ргос. №111. Лсаб. 8ск И8Л 78. 1981, с 2072); гена пео, который придает устойчивость к аминогликозиду С-418 (Со1Ьетге-Сагарт и др., I. Мо1. В1о1. 150, 1981, с. 1; и гена Будто, который придает устойчивость к гигромицину (8ап1етге и др., Сепе 30, 1984, с. 147). В настоящее время описаны дополнительные селектируемые гены, такие как 1трВ, который обусловливает возможность клеток утилизировать индол вместо триптофана; ЫбИ, который обусловливает возможность клеток утилизировать гистинол вместо гистидина (Найтап и МиШдап, Ргос. №111. Лсаб. 8ст И8Л 85, 1988, с 8047); система глутаминсинтазы; и ОЭС (орнитиндекарбоксилаза), который придает устойчивость к ингибитору орнитиндекарбоксилазы, 2-(дифторметил)-ЭЬ-орнитину, ИЕМО (МсСоп1одие, в: Сиггеп! СоттишсайопБ т Мо1еси1аг Вю1оду, изд-во Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬогаЮгу (1987)).
В настоящем изобретении описан также способ модификации профиля гликозилирования АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, которые продуцируются клеткой-хозяином, заключающийся в том, что экспрессируют в клетке-хозяине нуклеиновую кислоту, кодирующую АСМ , предлагаемую в изобретении, и нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, который обладает СпТШ-активностью, или вектор, содержащий указанные бисй нуклеиновые кислоты. Предпочтительно модифицированный полипептид представляет собой 1дС или его фрагмент, содержащий Ес-область. В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой гуманизированное антитело или его фрагмент.
Модифицированные АСМ, продуцируемые клетками-хозяевами, предлагаемыми в изобретении, в результате модификации обладают повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором и/или повышенной эффекторной функцией. В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой гуманизированное антитело или его фрагмент, содержащий Ес-область. Предпочтительно повышенная аффинность к связыванию с Ес-рецептором представляет собой повышенное связывание с активирующим Есу-рецептором, таким как ЕсуйШа-рецептор. Повышенная эффекторная функция предпочтительно представляет собой повышение одной или нескольких следующих функций: повышенная антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность, повышенный антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ЛИСР), повышенная секреция цитокинов, повышенное опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, повышенная Ес-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность, повышенное связывание с ΝΚклетками, повышенное связывание с макрофагами, повышенное связывание с полиморфноядерными клетками (РМ№), повышенное связывание с моноцитами, повышенное перекрестное связывание связанных с мишенью антител, повышенная непосредственная передача сигнала, индуцирующего апоптоз, повышенное созревание дендритных клеток и повышенное Т-клеточное примирование.
В настоящем изобретении предложен также способ получения АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении, которая имеет модифицированные олигосахариды в клетке-хозяине, заключающийся в том, что (а) культивируют клетку-хозяина, сконструированную для экспрессии по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, который обладает СпТ111-активностью, в условиях, которые позволяют осуществлять производство АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении, где полипептид, обладающий СпТ111-активностью, экспрессируют в количестве, достаточном для модификации олигосахаридов в Ес-области АСМ, продуцируемой клеткой-хозяином; и (б) выделяют указанную АСМ. В предпочтительном варианте осуществления изобретения полипептид, обладающий СпТШ-активностью, представляет собой слитый полипептид, который несет каталитический домен СпТШ. В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения слитый полипептид содержит дополнительно домен локализации в комплексе Гольджи присущего комплексу Гольджи полипептида.
Предпочтительно домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации маннозидазы II или СпТ1. В альтернативном варианте домен локализации в комплексе Гольджи выбирают из группы, включающей: домен локализации маннозидазы I, домен локализации СпТП и домен локализации α-1-6 коровой фукозилтрансферазы. АСМ, полученные с помощью способов, предлагаемых в настоящем изобретении, обладают повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором и/или повышенной эффекторной функцией. Предпочтительно повышенная эффекторная функция представляет собой одну или несколько следующих функций: повышенная Ес-зависимая клеточно-опосредованную цитотоксичность (включая повышенную антителозависимую клеточно-опосредованная цитотоксичность), повышенный антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ЛИСР), повышенная секреция цитокинов, повышенное опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, повышенное связывание с ΝΚ-клетками, повышенное связывание с макрофагами, повышенное связывание с моноцитами, повышенное связывание с полиморфноядерными клетками, повышенная непосредственная передача сигнала, индуцирующего апоптоз, повышенное пере
- 32 015009 крестное связывание связывающихся с мишенью антител, повышенное созревание дендритных клеток или повышенное Т-клеточное примирование. Повышенная аффинность к связыванию с Рс-рецептором предпочтительно представляет собой повышенное связывание с активирующими Рсу-рецепторами, таким как РсуКШа-рецептор. В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой гуманизированное антитело или его фрагмент.
Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения является химерная АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, полученная способами, предлагаемыми в изобретении, с повышенным содержанием бисекционных олигосахаридов в Рс-области указанного полипептида. Подразумевается, что к таким АСМ относятся антитела и их фрагменты, содержащие Рс-область. В предпочтительном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой гуманизированное антитело. В одном из вариантов осуществления изобретения процент бисекционных олигосахаридов в Рс-области АСМ составляет по меньшей мере 50%, более предпочтительно по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 90-95% от общего содержания олигосахаридов. Согласно следующему варианту осуществления изобретения АСМ, полученная способами, предлагаемыми в изобретении, имеет повышенное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Рс-области в результате модификации олигосахаридов с помощью способов, предлагаемых в настоящем изобретении. В одном из вариантов осуществления изобретения процент нефукозилированных олигосахаридов составляет по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60-70%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 75%. Нефукозилированные олигосахариды могут быть гибридного или комплексного типа. Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления изобретения АСМ, полученная в клеткаххозяевах и с помощью способов, предлагаемых в изобретении, обладает повышенным содержанием бисекционных нефукозилированных олигосахаридов в Рс-области. Бисекционные нефукозилированные олигосахариды могут быть гибридными или комплексными. В частности, способы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для получения АСМ, в которых по меньшей мере 15%, более предпочтительно по меньшей мере 20%, еще более предпочтительно по меньшей мере 25%, еще более предпочтительно по меньшей мере 30%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 35% олигосахаридов Рс-области АСМ являются бисекционными нефукозилированными. Способы, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять также для получения полипептидов, в которых по меньшей мере 15%, предпочтительно по меньшей мере 20%, более предпочтительно по меньшей мере 25%, еще более предпочтительно по меньшей мере 30%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 35% олигосахаридов в Рс-области полипептида являются бисекционными гибридными нефукозилированными.
Следующим вариантом осуществления настоящего изобретения является химерная АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, сконструированная таким образом, что она обладает повышенной эффекторной функцией и/или повышенной аффинностью к связыванию с Рс-рецептором, которую получают способами, предлагаемыми в изобретении. Предпочтительно повышенная эффекторная функция представляет собой одну или несколько следующих функций: повышенная Рс-зависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (включая повышенную антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность), повышенный антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (АОСР), повышенная секреция цитокинов, повышенное опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, повышенное связывание с ΝΚ-клетками, повышенное связывание с макрофагами, повышенное связывание с моноцитами, повышенное связывание с полиморфноядерными клетками, повышенная непосредственная передача сигнала, индуцирующего апоптоз, повышенное перекрестное связывание связывающихся с мишенью антител, повышенное созревание дендритных клеток или повышенное Т-клеточное примирование. В предпочтительном варианте осуществления изобретения повышенная аффинность к связыванию с Рс-рецептором означает повышенное связывание с активирующим Рс-рецептором, наиболее предпочтительно РсуКШа. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения АСМ представляет собой антитело, фрагмент антитела, содержащий Рс-область, или слитый белок, который включает область, эквивалентную Рс-области иммуноглобулина. Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления изобретения АСМ представляет собой гуманизированное антитело.
Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель.
Настоящее изобретение относится также к применению таких фармацевтических композиций в способе лечения рака. В частности, в настоящем изобретении предложен способ лечения рака, заключающийся в том, что вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, предлагаемой в изобретении.
Настоящее изобретение относится также к получению и применению систем клеток-хозяев для получения гликоформ АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, которые обладают повышенной аффинностью к связыванию с Рс-рецептором, предпочтительно повышенной аффинностью к связыванию с активирующими Рс-рецепторами, и/или повышенными эффекторными функциями, включая антителоза
- 33 015009 висимую клеточно-опосредованную цитотоксичность. Методы конструирования схем гликозилирования, которые можно использовать для АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, более подробно описаны в υδ 6602684 и предварительной заявке на патент США 60/441307 и в νΟ 2004/065540, полное содержание каждого из этих документов включено в настоящее описание в качестве ссылки. В другом варианте в АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, можно конструировать схемы гликозилирования, отличающиеся пониженным содержанием фукозных остатков в Ес-области, с помощью методов, описанных в ЕР 1176195А1, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Получение клеточных линий для производства белков с измененной схемой гликозилирования
В настоящем изобретении предложены системы экспрессии клеток-хозяев для получения АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, которые имеют модифицированные схемы гликозилирования. В частности, в настоящем изобретении предложены системы клеток-хозяев для получения гликоформ АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, которые имеют повышенную терапевтическую ценность. Таким образом, в изобретении предложены системы экспрессии клеток-хозяев, выбранных или сконструированных для экспрессии полипептида, который обладает СнПП-активностью. В одном из вариантов осуществления изобретения полипептид, обладающий СнПП-активностью, представляет собой слитый полипептид, который содержит домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного присущего комплексу Гольджи полипептида. В частности, системы экспрессии клеток-хозяев можно создавать так, чтобы они содержали рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, обладающий ^ηΤШ-активностью, функционально связанную с конститутивной или регулируемой промоторной системой.
Одним из конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения является клетка-хозяин, которую сконструировали для экспрессии по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый полипептид, который обладает СнПИ-активностью, и который содержит домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного присущего комплексу Гольджи полипептида. Следующим объектом изобретения является созданная клетка-хозяин, которая несет молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую по меньшей мере один ген, который кодирует слитый полипептид, обладающий СйППактивностью, и содержащую домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного присущего комплексу Гольджи полипептида.
Как правило, любой тип культивируемой клеточной линии, включая перечисленные выше клеточные линии, можно применять в качестве основы для создания линий клеток-хозяев, предлагаемых в настоящем изобретении. В предпочтительном варианте осуществления изобретения СНО-клетки, ВНКклетки, ΝδΟ-клетки, δР2/0-клетки, клетки миеломы линии ΥΟ, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, РЕК-клетки, РЕК.С6-клетки или клетки гибридомы, другие клетки млекопитающих, клетки дрожжей, клетки насекомых или растительные клетки используют в качестве основной клеточной линии для создания клеток-хозяев, предлагаемых в изобретении.
Изобретение относится к любым созданным клеткам-хозяевам, экспрессирующим полипептид, который обладает ΟιιΤΙΙΙ-активностью, включая слитый полипептид, который несет домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного присущего комплексу Гольджи полипептида, как он определен выше.
Одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, который обладает ΟιιΤΙΙΙактивностью, можно экспрессировать под контролем конститутивного промотора или в другом варианте регулируемой экспрессионной системы. Такие системы хорошо известны в данной области, и они включают описанные выше системы. Если несколько различных нуклеиновых кислот, кодирующих слитые полипептиды, которые обладают СнПИ-активностью и содержат домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного присущего комплексу Гольджи полипептида, входят в систему клетки-хозяина, то некоторые из них можно экспрессировать под контролем конститутивного промотора, а другие экспрессировать под контролем регулируемого промотора. Уровни экспрессии слитых полипептидов, которые обладают СнПИ-активностью, определяют методами, хорошо известными в данной области, включая анализ методом Вестерн-блотинга, методом Нозерн-блоттинга, анализ экспрессии репортерного гена или определение СнПИ-активности. В альтернативном варианте можно применять лектин, который связывается с продуктами биосинтеза Οΐ'ΐΤΙΙ Ι, например Е4-РНА-лектин. В альтернативном варианте можно использовать функциональный анализ, который позволяет оценивать повышенную способность связываться с Ес-рецептором или повышенную эффекторную функцию, опосредуемую антителами, которые получают путем создания клеток, несущих нуклеиновую кислоту, которая кодирует полипептид, обладающий СйГШ-активностью.
Идентификация трансфектантов или трансформантов, которые экспрессируют белок, имеющий модифицированную схему гликозилирования
Клетки-хозяева, которые содержат кодирующую последовательность химерной АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, и экспрессирует биологически активные генные продукты, можно модифицировать с помощью по меньшей мере четырех общих подходов, таких как: (а) гибридизация ДНК-ДНК или ДНК-РНК; (б) наличие или отсутствие
- 34 015009 функций маркерных генов; (в) оценка уровня транскрипции в качестве меры экспрессии соответствующих транскриптов мРНК в клетке-хозяине; и (г) обнаружение генных продуктов с помощью иммунного анализа или по их биологической активности.
При использовании первого подхода присутствие кодирующей последовательности химерной АСМ, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, и кодирующей последовательности полипептида, который обладает СпТШ-активностью, можно определять с помощью гибридизации ДНК-ДНК или ДНК-РНК с использованием зондов, содержащих нуклеотидные последовательности, гомологичные соответствующим кодирующим последовательностям соответственно, или их фрагментам или производным.
При использовании второго подхода рекомбинантный экспрессионный вектор/систему хозяина можно идентифицировать и отбирать по присутствию или отсутствию функций определенных маркерных генов (например, тимидинкиназная активность, устойчивость к антибиотикам, устойчивость к метотрексату, трансформация фенотипа, образование включенных телец в бакуловирусах и т. д.). Например, если кодирующая последовательность АСМ, предлагаемой в изобретении, или ее фрагмент и кодирующую последовательность полипептида, который обладает СпТШ-активностью, встраивают в последовательность маркерного гена вектора, то рекомбинантные содержащие соответствующие кодирующие последовательности можно идентифицировать по отсутствию функции маркерного гена. В альтернативном варианте маркерный ген можно помещать в тандеме с кодирующими последовательностями под контроль одинаковых или различных промоторов, применяемых для контроля экспрессии кодирующих последовательностей.
Экспрессия маркера в ответ на индукцию или селекцию свидетельствует об экспрессии кодирующей последовательности АСМ, предлагаемой в изобретении, и кодирующей последовательности полипептида, который обладает СпТШ-активностью.
При использовании третьего подхода транскрипционную активность кодирующей области АСМ, предлагаемой в изобретении, или ее фрагмента и кодирующей последовательности полипептида, который обладает СпТШ-активностью, можно оценивать с помощью гибридизации. Например, РНК можно выделять и анализировать с помощью Нозерн-блоттинга с использованием зонда, гомологичного кодирующим последовательностям АСМ, предлагаемым в изобретении, или их фрагментам, и кодирующей последовательности полипептида, обладающего СпТШ-активностью, или ее определенного фрагмента. В альтернативном варианте общие нуклеиновые кислоты клетки хозяина можно экстрагировать и оценивать гибридизацию с указанными зондами.
При использовании четвертого подхода экспрессию белковых продуктов можно оценивать иммунологически, например с помощью Вестерн-блоттина, таких иммунологических анализов, как радиоиммунопреципитация, ферментные иммуноанализы и т.п. Однако конечный тест, позволяющий оценить эффективность системы экспрессии, включает определение биологически активных генных продуктов.
Получение и применение АСМ, которые обладают повышенной эффекторной функцией, такой как антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения являются гликоформы химерных АСМ, которые имеют специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, и обладают повышенной эффекторной функцией, включая антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность. Ранее описано создание определенной схемы гликозилирования антител (см., например, И8 6602684, содержание которого полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки).
Клинические опыты с использованием неконъюгированных моноклональных антител (МАт) для лечения некоторых типов рака в настоящее время дали обнадеживающие результаты (ЭШтап, Сапсег ВюШет. & Кабюрйатт. 12, 1997, сс. 223-225; Эео и др., 1ттипо1оду Тобау 18, 1997, с. 127). Химерный неконъюгированный 1дС1 одобрен для применения при слабо дифференцированной или фолликулярной В-клеточной неходжкинской лимфоме (ЭШтап, Сапсег ВюШег. & Кабюрйатт. 12, 1997, сс. 223-225), а при использовании другого неконъюгированного МАт, такого как гуманизированный 1дС1, мишенью которого являются плотные опухоли, также получены многообещающие результаты на фазе III клинических опытов (Эео и др., [ттипо1оду Тобау 18, 1997, с. 127). Антигены двух указанных МАт характеризуются высоким уровнем экспрессии на соответствующих опухолевых клетках, и антитела опосредуют эффективное разрушение опухоли с помощью эффекторных клеток ш \'йго и ш νί\Ό. В противоположность этому многие другие неконъюгированные МАт, обладающие высокой специфичностью в отношении опухолей, не обладают способностью запускать эффекторные функции такого уровня, чтобы их можно было с успехом применять в клинических целях (Егоз! и др., Сапсег 80, 1997, сс. 317-333; 8иг£из и др., 1. Iттипоΐйе^. 19, 1996, сс. 184-191). В сочетании с такими менее эффективными МАт в настоящее время оценивали дополнительную терапию с использованием цитокинов. Добавление цитокинов может стимулировать антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (АЭСС) путем повышения активности и количества присутствующих в кровотоке лимфоцитов (Егоз! и др., Сапсег 80, 1997, сс. 317-333); 8иг£из и др., 1. Iттипоΐйе^. 19, 1996, сс. 184-191). АЭСС, представляющую собой литическое
- 35 015009 воздействие на меченные антителом клетки, запускают связыванием рецепторов лейкоцитов с константной областью (Рс) антител (Эео и др., Iттиηо1оду Тойау 18, 1997, с. 127).
Другой дополняющий подход к повышению АЭСС-активности неконъюгированных Ι§01 состоит в конструировании Рс-области антитела. Опыты по конструированию белков позволили установить, что РсуК взаимодействуют с меньшей шарнирной областью СН2-домена ΙβΟ (Ьипй и др., I. ФтипоР 157, 1996, сс. 4963-4969). Однако для связывания РсуК. также требуется присутствие олигосахаридов, ковалентно связанных с консервативным Акп 297 в СН2-области (Ьипй и др., I. Iттиηо1. 157. 1996, сс. 49634969; \Угщ1и и Μо^^^коη, Тгепйк Вю1ес11. 15, 1997, сс. 26-31), это позволяет предположить либо что олигосахарид и полипептид оба непосредственно принимают участие в сайте связывания, либо что для поддержания активной конформации СН2-полипептида требуется олигосахарид. Таким образом, модификацию структуры олигосахарида можно применять в качестве средства повышения аффинности взаимодействия.
Молекула ΙβΟ несет два Ν-связанных олигосахарида в Рс-области, по одному на каждой тяжелой цепи. Как любой гликопротеин антитело получают в виде популяция гликоформ, которые имеют одинаковый полипептидный каркас, но несут различные присоединенные к сайтам гликозилирования олигосахариды. Олигосахариды, которые, как правило, присутствуют в Рс-области сывороточного ΙβΟ, представляют собой комплекс олигосахаридов биантенного типа (\Уогта1й и др., ВюсРеткйу 36, 1997, сс. 130-138) с низким уровнем концевой сиаловой кислоты и бисекционного Ν-ацетилглюкозамина (С1сЫАс), с различными уровнями концевого галоктозилирования и корового фукозилирования. В некоторых исследования высказано предположение, что для РсуК-связывания внутри олигосахаридного ядра требуется минимальная углеводная структура (Ьипй и др., I. ФтипоР 157, 1996, сс.4963-4969).
В мышиных или хомячковых клеточных линиях, которые применяют в промышленности и научных исследованиях для получения неконъюгированных терапевтических МАт, как правило, присоединяют требуемые олигосахаридные детерминанты к Рс-сайтам. Ι§0, экспрессируемые этими клеточными линиями, не содержат бисекционные С1сЫАс, обнаруженные в небольших количествах в сывороточных ΙβΟ (Ь1Ре1у и др., С1усоЬ1о1оду 318, 1995, сс. 813-822 ). В противоположность этому в настоящее время установлено, что некоторые из гликоформ крысиного продуцируемого миеломой гуманизированного ^С1 (САМРАТН-1Н) несут бисекционный С1сЫАс (Ь1Ре1у и др., С1усоЬю1оду 318, 1995, сс. 813-822). Полученное из крысиных клеток антитело достигает аналогичной максимальной АЭСС-активности ш νίϋΌ, что и антитела САМРАТН-1Н, полученные в стандартных клеточных линиях, но при использовании существенно более низких концентраций антитела.
Антиген САМРАТН обычно присутствует в невысоких концентрациях на клетках лимфомы, а соответствующее химерное МАт обладает высокой АЭСС-активностью в отсутствии бисекционного С1сЫАс (Ь1Ре1у и др., С1усоЬ1о1оду 318, 1995. сс. 813-822). В Ν-связанном пути гликозилирования бисекционный С1сЫАс добавляют с помощью СпТШ (8сРасЫег, ВюсЬет. Се11 Вю1. 64, 1986, сс. 163-181).
В проведенных ранее экспериментах использовали одну антителопродуцирующую линию СНОклеток, которая ранее была создана для экспрессии под воздействием внешней регуляции различных уровней клонированного гена фермента СпТШ (Итапа Р. и др., №11иге Вю1ес1то1. 17, 1999, сс. 176-180). Этот подход прежде всего использовали для доказательства строгой корреляции между экспрессией СпТШ и АЭСС-активностью модифицированного антитела. Таким образом, изобретение относится к рекомбинантному химерному антителу или его фрагменту, обладающему специфичностью связывания, практически соответствующей мышиному антителу В-Ьу1, которое имеет измененную схему гликозилирования в результате повышенной СпТШ-активности. Повышенная СпТШ-активность приводит к повышению процентного содержания бисекционных олигосахаридов, а также к снижению процентного содержания фукозных остатков в Рс-области АСМ. Это антитело или его фрагмент обладают повышенной аффинностью к связыванию с Рс-рецептором и повышенной эффекторной функцией. Кроме того, изобретение относится к фрагменту антитела и слитым белкам, которые содержат область, эквивалентную Рс-области иммуноглобулина.
Терапевтическое применение АСМ, полученных с помощью способов, предлагаемых в изобретении
АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять индивидуально для мечения и уничтожения опухолевых клеток ш νί\Ό. ΑСΜ можно использовать также в сочетании с соответствующим терапевтическим агентом для лечения карциномы человека. Например, АСМ можно применять в сочетании со стандартными или общепринятыми методами лечения, такими как химиотерапия, лучевая терапия, или их можно конъюгировать или связывать с терапевтическим лекарственным средством или токсином, а также с лимфокином или ингибирующим рост опухоли фактором для введения терапевтического агента в область карциномы. Наиболее важными конъюгатами АСМ, предлагаемых в настоящем изобретении, являются (1) иммунотоксины (конъюгаты АСМ и цитотоксического фрагмента) и (2) меченые (например меченные с помощью радиоактивного изотопа, меченные с помощью фермента или меченные с помощью флуорохрома) АСМ, в которых метка является средством идентификации иммунных комплексов, включающих меченую АСМ. АСМ можно применять также для индукции лизиса посредст
- 36 015009 вом встречающегося в естественных условиях связанного с комплементом процесса и для взаимодействия с существующей в норме антителозависимой клеточно-опосредуемой цитотоксичностью.
Цитотоксический фрагмент иммунотоксина может представлять собой цитотоксическое лекарственное средство или ферментативно активный токсин бактериального или растительного происхождения, или ферментативно активный фрагмент (А-цепь) такого токсина. Применяемые ферментативно активные токсины и их фрагменты представляют собой А-цепь дифтерийного токсина, несвязывающиеся активные фрагменты дифтерийного токсина, А-цепь экзотоксина (из РкеиБотопак аегидтока), А-цепь рицина, А-цепь абрина, А-цепь модесцина, альфа-сарцин, белки А1ешйек !огББ, белки диантина, белки Рку1о1асса атепсапа (РАР1, РАР11 и РАР-8), ингибитор из МотогБюа скагапйа, курцин, кротин, ингибитор 8араопапа о!йста11к, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин и эномицин. В другом варианте осуществления изобретения АСМ конъюгируют с небольшой молекулой противоракового лекарственного средства. Конъюгаты АСМ и таких цитотоксических фрагментов получают с помощью разнообразных бифункциональных белковых связывающих агентов. Примерами таких реагентов являются 8РЭР, 1Т, бифункциональные производные сложных имидоэфиров, таких как диметиладипимидатхНС1, активные сложные эфиры, такие как дисукцинимидилсуберат, альдегиды, такие как глутаровый альдегид, бисазидосоединения, такие как бис(пара-азидобензоил)гександиамин, производные бисдиазония, такие как бис(пара-диазонийбензоил)этилендиамин, диизоцианаты, такие как толилен-2,6-диизоцианат, и биоактивные соединения фтора, такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол. Лизирующий фрагмент токсина можно соединять с РаЬ-фрагментом АСМ. Дополнительные приемлемые токсины известны в данной области, например, описаны в опубликованной заявке на патент США № 2002/0128448, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
В одном из вариантов осуществления изобретения химерную АСМ с сконструированной схемой гликозилирования, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1, конъюгируют с А-цепью рицина. В наиболее предпочтительном варианте А-цепь рицина дегликозилируют и получают с помощью рекомбинции. Предпочтительный метод получения иммунооксина рицина описан у УЙеБа и др., 8с1епсе 238, 1987, с. 1098), публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки.
При применении для уничтожения опухолевых клеток у человека 1п \йго для диагностических целей конъюгаты, как правило, добавляют в среду для культивирования клеток в концентрации по меньшей мере примерно 10 нМ. Препаративная форма и путь введения 1п уйго не имеют решающего значения. Как правило, можно использовать водные композиции, которые совместимы со средой для культивирования или перфузии. Цитотоксичность можно оценивать с помощью общепринятых методов, предназначенных для определения наличия или степени развития рака.
Как указано выше, цитотоксический радиофармацевтический агент, предназначенный для лечения рака, можно приготавливать путем конъюгации радиоактивного изотопа (например, I, Υ, Рг) с химерной АСМ со сконструированной схемой гликозилирования, которая имеет специфичность связывания, практически такую же, как у мышиного антитела В-Ьу1. Подразумевается, что понятие «цитотоксический фрагмент» в контексте настоящего описания относится также к таким изотопам.
В другом варианте осуществления изобретения в липосомы вносят цитотоксическое лекарственное средство и на липосомы наносят АСМ, предлагаемые в настоящем изобретении. Поскольку на поверхности злокачественных В-клеток присутствует множество молекул СЭ20, этот метод позволяет осуществлять введение больших количеств лекарственного средства к клеткам требуемого (правильного) типа.
Методы получения конъюгатов таких указанных терапевтических агентов и антител хорошо известны (см., например, Атоп и др., Мопос1опа1 АпйЬоБ1ек !ог 1ттипо1агдеБпд о! Эгидк ш Сапсег Ткегару в Мопос1опа1 АпйЬоБ1ек апБ Сапсег Ткегару, под ред. Ке1к!е1Б и др., изд-во А1ап К. Ыкк, 1пс., 1985, сс. 243-256); Не11кйот и др., АпйЬоБ1ек Рог Эгид ПеБуегу, в Соп1го11еБ Эгид Оекуегу (2-ое изд.), под ред. КоЬткоп и др., изд-во Магсе1 Эеккег, 1пс., 1987 сс. 623-653; Ткогре, АпБЬоБу Сатегк О! СуЮЮхю АдегИк 1п Сапсег Ткегару: А Кеу1ете, в: Мопос1опа1 АпБЬоБ1ек '84: Вю1одюа1 АпБ С1шюа1 АррБсаБопк, под ред. Ртскега и др., 1985, сс. 475-506; и Ткогре и др., Тке РгерагаБоп АпБ СуЮЮхю РгорегБек О! АпБЬоБу-Тохт Соп)ида1ек, 1ттипо1. Кеу., 62, 1982, сс.119-158).
Другими терапевтическими применениями АСМ, предлагаемых в изобретении, являются конъюгация или связывание, например с помощью рекомбинантной ДНК, с ферментом, который обладает способностью превращать пролекарство в цитотоксическое лекарственное средство, и применение конъюгата антитело-фермент в сочетании с пролекарством для превращения пролекарства в цитотоксический агент в области опухоли (см., например, 8еп1ег и др., АпБ-Титог ЕГГес1к о! АпБЬоБу-а1какпе Ркокрка!аке, Ргос. Νη11. АсаБ. 8ск И8А 85, 1988, сс. 4842-4846; Епкапсетеп! о! 1ке ш уйго апБ т у1уо АпЫитог Асйуйек о! Ркокркогу1а1еБ Мйосуст С апБ ЕюройБе Оепуакуек Ьу Мопос1опа1 АпБЬоБуА1кайпе Ркокрка1аке Соп)ида1ек, Сапсег Кекеагск 49, 1989, сс. 5789-5792; и 8еп1ег, Асйуайоп о! РгоБгидк Ьу АпиЬоБу-Епхуте Соп)ида1ек: А Ν™ Арргоаск 1о Сапсег Ткегару, РА8ЕВ 1. 4, 1990, сс. 188-193).
Следующим терапевтическим применением АСМ, предлагаемых в изобретении, является применение либо в неконъюгированной форме в присутствии комплемента, либо в виде фрагмента конъюгата
- 37 015009 антитело-лекарственное средство или антитело-токсин, для удаления опухолевых клеток из костного мозга страдающих раком пациентов. При таком подходе аутологичный костный мозг можно очищать ех νίνο обработкой антителом и возвращать мозг путем инфузии в организм пациента [см., например, Ваткау и др., Вопе Магготе Ритдшд Ищпд Мопос1опа1 АпБЬоФек, ί. С1т. 1ттипо1., 8(2), 1988, сс. 81-88].
Изобретение относится также к одноцепочечному иммунотоксину, содержащему антигенсвязывающие центры, которые обладают практически такой же специфичностью связывания, что и мышиное антитело В-Ьу1 (например, полипептиды, которые содержат СОВ мышиного антитела В-Ьу1), и содержащему также токсичный полипептид.
Одноцепочечные иммунотоксины, предлагаемые в изобретении, можно применять для лечения человеческой саркомы ш νί\Ό.
Аналогично этому для лечения человеческой саркомы ш νί\Ό можно применять слитый белок, содержащий по меньшей мере одну антигенсвязывающую область АСМ, предлагаемой в изобретении, сцепленную по меньшей мере с одной функционально активной областью второго белка, обладающего противоопухолевой активностью, например лимфокином или онкостатином.
В настоящем изобретении предложен способ избирательного уничтожения опухолевых клеток, экспрессирующих СЭ20. Этот способ предусматривает взаимодействие иммуноконъюгата (например иммунотоксина), предлагаемого в изобретении, с указанными опухолевыми клетками. Эти опухолевые клетки могут представлять собой клетки человеческой карциномы.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ лечения карцином (например, человеческих карцином) ш νί\Ό. Этот способ заключается в том, что пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции, содержащей по меньшей мере один иммуноконъюгат (например, иммунтоксин), предлагаемый в изобретении.
Следующим объектом изобретения является улучшенный способ лечения В-клеточных пролиферативных нарушений, включая В-клеточную лимфому, а также аутоиммунного заболевания, частично или полностью вызванного патогенными аутоантителами, основой которого является В-клеточное истощение, заключающийся в том, что человеку, который нуждается в этом, вводят терапевтически эффективное количество АСМ, предлагаемой в настоящем изобретении. В предпочтительном варианте осуществления изобретенияе АСМ представляет собой антитело к СЭ20 со сконструированной схемой гликозилирования, которое обладает практически такой же специфичностью связывания, что и мышиное антитело В-Ьу1. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело является гуманизированным. Примеры аутоиммунных заболеваний или нарушений включают (но не ограничиваясь ими) иммунные тромбоцитопении, такие как острая идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура и хроническая идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, дерматомиозит, хорею Сиденгама, волчанковый нефрит, ревматическую атаку, плюригландулярные синдромы, геморрагический васкулит (болезнь Шенлейна-Геноха), нефрит после стрептококковой инфекции, нодозную эритему, артериит Такаясу, болезнь Аддисона, многоформную эритему, нодозный полиартерит, анкилозирующий спонделит, синдром Гудпасчера, тромбангиит облитерирующий, первичный билиарный цирроз, тироидит Хашимото, тиротоксикоз, хронический активный гепатит, полимиозит/дерматомиозит, полихондрит, памфигит обыкновенный (ратрЫдщ уи^ал!® гранулемотоз Вегенера, мембранную нефропатию, боковой амиотрофический склероз, сухотку спинного мозга, полимиалгии, пернициозную анемию, быстро прогрессирующий гломерулонефрит и фиброзный альвеолит, воспалительные реакции, такие как воспалительные кожные заболевания, включая псориаз и дерматит (например, атопический дерматит); системную склеродермию и склероз; реакции, связанные с воспалительным заболеванием кишечника (такие как болезнь Крона и неспецифический язвенный колит); респираторный дистресс-синдром (включая респираторный дистресс-синдром взрослых; РДСВ); дерматит; менингит; энцефалит; увеит; колит; гломерулонефрит; аллергические состояния, такие как экзема и астма, и другие состояния, связанные с Т-клеточной инфильтрацией и хроническими воспалительными реакциями; атеросклероз; недостаточность адгезии лейкоцитов; ревматоидный артрит; системную красную волчанку (СКВ); сахарный диабет (например, сахарный диабет типа 1 или инсулинзависимый сахарный диабет); рассеянный склероз; синдром Рейно; аутоиммунный тиреоидит; аллергический энцефаломиелит; синдром Шегрена; юношеский диабет; и иммунные реакции, связанные с острой и замедленной гиперчувствительностью, опосредуемой цитокинами и Т-лимфоцитами, что обычно наблюдается при туберкулезе, саркоидозе, полимиозите, гранулематозе и васкулите; пернициозную анемию (болезнь Аддисона); болезни, включающие диапедез лимфоцитов; воспалительное заболевание центральной нервной системы (ЦНС); синдром поражения множества органов; гемолитическую анемию (включая (но не ограничиваясь ими) криоглобинемию или анемию Куумба (СоотЬк роЩще апет1а); тяжелую псевдопаралитическую хромоту; заболевания, опосредованные комплексом антиген-антитело; заболевание, повреждающее клубочковую базальную мембрану; антифосфолипидный синдром; аллергический неврит; болезнь Грейвса; миастенический синдром Лэмберта-Итона; буллезный пемфигоид; пузырчатку; аутоиммунные полиэндокринопатии; болезнь Рейтера; синдром негнущегося человека; болезнь Бехчета; гигантоклеточный артериит; иммунный комплексный нефрит; 1дА-нефропатию; 1дМ-полинейропатии; иммунную тромбоцитопеническую пурпуру (1ТР) или аутоим
- 38 015009 мунную тромбоцитопению и т. д. Согласно одному из объектов изобретения АСМ, предлагаемые в изобретении, применяют для истощения находящихся в кровотоке здоровых В-клеток в течение пролонгированного периода времени.
Настоящее изобретение можно применять для лечения пациентов, которые могут представлять собой человека, лошадь, свинью, быка, мышь, собаку, кошку и птиц. Другие теплокровные животные также подпадают под объем настоящего изобретения.
Объектом изобретения являются также способы ингибирования роста человеческих опухолевых клеток, лечения опухоли у пациента и лечение заболевания пролиферативного типа у пациента. Эти способы заключаются в том, что пациенту вводят эффективное количество композиции, предлагаемой в изобретении.
Таким образом, очевидно, что настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, комбинациям и способам лечения человеческих карцином, таких как В-клеточная лимфома. Например, изобретение относится к фармацевтическим композициям, предназначенным для применения при лечении человеческих карцином, которые содержат фармацевтически эффективное количество антитела, предлагаемого в настоящем изобретении, и фармацевтически приемлемый носитель.
Содержащие АСМ композиции, предлагаемые в изобретении, можно вводить общепринятыми путями, включая (но не ограничиваясь ими) внутривенное, внутрибрюшинное, оральное, внутрилимфатическое введение или введение непосредственно в опухоль. Предпочтительным является внутривенное введение.
Согласно одному из объектов изобретения терапевтические композиции, которые содержат АСМ, предлагаемые в изобретении, готовят в предназначенной для хранения форме путем смешения антитела, имеющего требуемую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами (Кештдоп'к Рйагшасеийса1 δ^ι^δ, 16-ое изд., под ред. Око1 Α., 1980), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях и представляют собой буферы, такие как фосфатный, цитратный буферы и буферы на основе других органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид, бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и мета-крезол); низкомолекулярные (состоящие менее чем примерно из 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины, гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТК; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы с металлами (например, комплексы 2п-белок); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как ΤνΕΕΝ™, ΚΕυΚΟΝΙΟδ™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Примеры композиций АСМ в виде антител к ί.Ό20 описаны в νΟ 98/56418, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки. В этой публикации описана жидкая композиция, включающая несколько доз, которая содержит 40 мг/мл ритуксимаба, 25 мМ ацетат, 150 мМ трегалозу, 0,9% бензилового спирта, 0,02% полисорбата 20, рН 5,0, минимальный срок годности которой составляет 2 года при хранении при 2-8°С. Другая содержащая антитело к СЭ20 представляющая интерес композиция содержит 10 мг/мл ритуксимаба в смеси, включающей 9,0 мг/мл хлорида натрия, 7,35 мг/мл дигидрата цитрата натрия, 0,7 мг/мл полисорбата 80 и стерильную воду для инъекций, рН 6,5. В настоящем изобретении и вместо ΚΙΤϋΧΑΝ® применяли АСМ, предлагаемую в настоящем изобретении.
Лиофилизированные композиции, адаптированные для подкожного введения, описаны в νΟ 97/04801. Такие лиофилизированные композиции можно восстанавливать с помощью пригодного разбавителя с получением высокой концентрации белка и восстановленную композицию можно вводить подкожно подлежащему лечению млекопитающему.
Композиции, предлагаемые в изобретении, могут содержать также более одного действующего вещества, необходимого для лечения конкретного показания, которое предпочтительно обладает дополнительными видами активности, и они не оказывают отрицательного воздействия друг на друга. Например, может требоваться введение дополнительного цитотоксического агента, химиотерапевтического агента, цитокина или иммуносупрессорного агента (например, оказывающего действие на Т-клетки, такого как циклоспорин или антитело, связывающееся в Т-клетками, например, связывающееся с ΕΕΑ-1). Эффективное количество указанных дополнительных агентов зависит от количества антагониста, присутствующего в композиции, типа заболевания или нарушения или лечения и других указанных выше факторов. Их, как правило, применяют в таких же дозах и с использованием тех же путей введения, которые указаны выше, или в дозе, составляющей примерно 1-99% от применяемых доз.
Действующие вещества могут быть также заключены в микрокапсулы, полученные, например, методами коацервации или с помощью межфазной полимеризации, например, в микрокапсулы из гидро
- 39 015009 ксиметилцеллюлозы или желатина и поли(метилметацилатные) микрокапсулы соответственно, в коллоидных системах для введения лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы), или в макроэмульсии. Такие методы описаны в Кетшд1оп'з Рйагтасеийса1 8с1епсез, 16-ое изд., под ред. Озо1 А., 1980.
Можно приготавливать препараты с замедленным высвобождением. Соответствующими примерами препаратов с замедленным высвобождением являются полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащих антагонист, эти матрицы могут представлять собой изделия, имеющие определенную форму, например, пленок или микрокапсул. Примерами матриц в препаратах с пролонгированным высвобождением являются сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли(2гидроксиэтилметакрилат) или поли(виниловый спирт), полилактиды (И8 3773919), сополимеры Ьглутаминовой кислоты и γ-этил-Ь-глутамата, неразложимые сополимеры этилена и винилацетата, разложимые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как ΕυΓΕΟΝ ЭЕРОТ™ (инъецируемые микрокапсулы, состоящие из сополимера молочной кислоты-гликолевой кислоты и леупролидацетата) и поли-Э-(-)-3-гидроксимасляная кислота.
Составы, предназначенные для применения ш νί\Ό. должны быть стерильными. Для этой цели принято использовать фильтрацию через стерильные фильтрационные мембраны.
Композиции, предлагаемые в изобретении, могут представлять собой различные формы лекарственных средств, включая (но не ограничиваясь ими) жидкие растворы или суспензии, таблетки, пилюли, порошки, суппозитории, полимерные микрокапсулы или микропузырьки, липосомы и вводимые путем инъекции или инфузии растворы. Предпочтительная форма зависит от пути введения и терапевтического применения.
Композиции, предлагаемые в изобретении, предпочтительно включают также общепринятые фармацевтически приемлемые носители и адъюванты, известные в данной области, такие как человеческий сывороточный альбумин, ионообменники, квасцы, лецитин, буферы, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия и соли или электролиты, такие как сульфат протамина.
Наиболее эффективный путь введения и схема приема лекарственного средства для фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, зависит от серьезности и течения заболевания, состояния здоровья пациента и его реакции на лечение, и их определяет лечащий врач. Такие дозы композиций должны быть подобраны для каждого пациента. Однако эффективная доза композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, как правило, составляет от примерно 0,01 до примерно 2000 мг/кг.
Представленные в настоящем описании молекулы могут входить в состав различных форм лекарственных средств, включая (но не ограничиваясь ими) жидкие растворы или суспензии, таблетки, пилюли, порошки, суппозитории, полимерные микрокапсулы или микропузырьки, липосомы и вводимые путем инъекции или инфузии растворы. Предпочтительная форма зависит от пути введения и терапевтического применения.
Композиции, содержащие АСМ, предлагаемую в настоящем изобретении, можно приготавливать, дозировать и вводить путями, соответствующими высокоэффективной медицинской практике. Рассматриваемые в этом контексте факторы включают конкретное заболевание или нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, течение болезни или нарушения, область введения агента, метод введения, схема применения и другие факторы, известные практикующим специалистам-медикам. Терапевтически эффективное количество антагониста, подлежащее введению, должно определяться этими факторами.
В соответствии с общепринятыми положениями терапевтически эффективное количество антитела на дозу при парентеральном введении должно составлять примерно 0,1-20 мг/кг веса тела пациента в день, при этом обычные начальные дозы применяемого антагониста составляют примерно 2-10 мг/кг.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения АСМ представляет собой антитело, предпочтительно гуманизированное антитело. Приемлемые дозы такого неконъюгированного антитела составляют, например от примерно 20 до примерно 1000 мг/м2. В одном из вариантов осуществления изобретения доза антитела отличается от дозы, рекомендованной в настоящее время для КIТυXАN®. Например, пациенту можно вводить одну или несколько доз антитела, которые существенного ниже 375 мг/м2, например, доза может составлять от примерно 20 до примерно 250 мг/м2, например от примерно 50 до примерно 200 мг/м2 .
Кроме того, антитело можно вводить в виде одной или нескольких начальных доз с последующим введением еще одной или нескольких доз антитела, при этом дозы антитела (в мг/м2) в последующих дозах превышают начальную(ые) дозу(ы) антитела (в мг/м2). Например, начальная доза может составлять от примерно 20 до примерно 250 мг/м2 (например от примерно 50 до примерно 200 мг/м2), а последующие дозы могут составлять от примерно 250 до примерно 1000 мг/м2.
Однако, как отмечалось выше, эти предполагаемые количества АСМ могут в значительной степени подвергаться терапевтической корректировке. Фактор, имеющий решающее значение для выбора соответствующей дозы и схемы применения лекарственного средства, является результатом, полученным с
- 40 015009 помощью описанных выше параметров. Например, относительно более высокие дозы могут требоваться, прежде всего, для лечения заболеваний на начальной стадии и острых заболеваний. Для получения наиболее эффективных результатов, в зависимости от заболевания или нарушения, антагонист вводят максимально быстро к моменту появления первого симптома, диагноза, проявления или возникновения заболевания или нарушения или во время ремиссии заболевания или нарушения.
АСМ, предлагаемую в настоящем изобретении, вводят с помощью приемлемых путей, включая парентеральное, подкожное, внутрибрюшинное, внутрилегочное и интраназальное введение, и, если это требуется для местного иммуносупрессорного лечения, вводят в область повреждения. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Кроме того, антагонист можно вводить с помощью импульсной инфузии, например, используя понижающиеся дозы антагониста. Предпочтительно введение дозы осуществляют путем инъекций, наиболее предпочтительно внутривенных или подкожных инъекций, в частности, в зависимости от того, является ли введение кратковременным или продолжительным.
Согласно изобретению в сочетании с указанными антагонистами можно вводить другие соединения, такие как цитотоксические агенты, химиотерапевтические агенты, иммуносупрессоры и/или цитокины. Комбинированное введение предусматривает совместное введение с использованием различных композиций или с использованием одной фармацевтической композиции или последовательное введение в любом порядке, при этом предпочтительно в течение периода времени, когда оба (или все) действующих вещества одновременно проявляют их биологическую активность.
Должно быть очевидно, что дозу композиции, предлагаемой в изобретении, которая необходима для достижения лечебного действия, можно дополнительно снижать путем оптимизации схемы приема лекарственного средства.
При практическом воплощении изобретения фармацевтический носитель может представлять собой липидный носитель. Липидный носитель может представлять собой фосфолипид. Кроме того, липидный носитель может представлять собой жирную кислоту. Липидный носитель может представлять собой также детергент. В контексте настоящего описания детергент представляет собой любое вещество, которое изменяет поверхностное натяжение жидкости, как правило, снижая его.
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения детергент, может представлять собой неионный детергент. Примеры неионных детергентов включают (но не ограничиваясь ими) полисорбат 80 (известный также под названием Твин 80 или полиоксиэтиленсорбитанмонОолеат), Вгу и Тритон (например Тритон ^К-1339 и Тритон А-20).
В другом варианте детергент может представлять собой ионный детергент. Примеры ионных детергентов включают (но не ограничиваясь им) алкилтриметиламмонийбромид.
Кроме того, согласно изобретению липидный носитель может представлять собой липосому. В контексте настоящего описания понятие липосома обозначает любой связанный с мембраной пузырек, который содержит любые молекулы, предлагаемые в изобретении, или их комбинации.
Ниже изобретение проиллюстрировано более подробно с помощью примеров. Приведенные ниже препараты и примеры даны для того, чтобы настоящее изобретение стало более понятным специалистам в данной области и они могли осуществить его практическое воплощение. Однако приведенные в качестве примеров варианты осуществления изобретения не ограничивают его объем, они приведены только с целью иллюстрации некоторых объектов настоящего изобретения и функционально эквивалентных способов, заявляемых в изобретении. Различные модификации изобретения, помимо приведенных в настоящем описании, должны стать очевидными специалистам в данной области после ознакомления с приведенным выше описанием и прилагаемыми к нему чертежами. Такие модификации подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.
Примеры
Примечание: Если не указано иное, то в приведенных ниже примерах нумерация положений конкретных аминокислотных остатков дана согласно системе нумерации Кэбота.
Пример 1.
Материалы и методы
Клонирование и экспрессия рекомбинантного антитела В-Ьу1
Клетки гибридомы, экспрессирующие В-Ьу1, выращивали в среде КРМГ содержащей 10% ЕВ8 и 4мМ Ь-глутамин. Собирали 6х106 клеток с жизнеспособностью > 90% и выделяли общую РНК с использованием набора типа 01адеп К№Аеа5у т1б1. кДНК, кодирующие вариабельные области легкой и тяжелой цепей В-Ьу1 амплифицировали с помощью ОТ-ПЦР. ОТ-ПЦР осуществляли с использованием следующих условий: 30 мин при 50°С для синтеза первой цепи кДНК; начальная денатурация в течение 15 мин при 95°С; 30 циклов по 1 мин при 94°С, 1 мин при 45°С, 1,5 мин при 72°С; и конечная стадия удлинения в течение 10 мин при 72°С. Ожидаемый размер ПЦР-продуктов подтверждали с помощью гельэлектрофореза. ПЦР-продукты клонировали в пригодных для Е.соБ векторах и путем секвенирования ДНК подтверждали, что были выделены гены, кодирующие вариабельную область легкой и тяжелой цепи.
- 41 015009
Для конструирования экспрессионных векторов для химерного В-Ьу1 синтетические сигнальные последовательности и соответствующие сайты рестрикции сливали с вариабельными областями цепей с помощью дополнительных ПЦР. После окончательного подтверждения правильности последовательности ДНК вариабельных областей цепей их объединяли с соответствующими константными областями человеческого Ιβ61. После создания генов их клонировали под контролем промотора МР8У и против хода транскрипции относительно синтетического сайта полиаденилирования (ρο1νΛ) с использованием двух отдельных векторов, по одному для каждой цепи, в результате чего получали плазмиду цЕТВ1808 (экспрессионный вектор для тяжелой цепи) и цЕТВ1813 (экспрессионный вектор для легкой цепи). Каждый вектор нес последовательность Οι^ ЕВУ.
Химерное В-Ьу1 конструировали путем котрансфекции клеток линии ΗЕΚ293-ЕВNА векторами цЕТВ1808 и ρЕΤВ 1813 с помощью метода трансфекции, основанного на использовании фосфата кальция. Клетки линии ΗЕΚ293-ЕВNА на экспоненциальной фазе роста трансфектировали с помощью метода трансфекции, основанного на использовании фосфата кальция. Клетки выращивали в виде адгезионных монослойных культур в Т-колбах с использованием среды для культивирования ЦМЕМ, дополненной 10% ЕС8, и осуществляли трансфекцию, когда они достигали 50-80%-ной конфлюэнтности. Для трансфекции Т75-колбы 8 млн клеток высевали за 24 ч до трансфекции в 14 мл среды для культивирования ЦМЕМ, дополненной ЕС8 (в конечной концентрации 10 об.%), 250 мкг/мл неомицина, и клетки инкубировали в течение ночи при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2. Для каждой используемой для трансфекции Т75-колбы приготавливали раствор, содержащий ДНК, СаС12 и воду, путем смешения 47 мкг общей плазмидной векторной ДНК, взятой в виде равных долей экспрессионных векторов для легкой и тяжелой цепей, 235 мкг 1М раствора СаС12 и добавления воды до конечного объема 469 мкл. К этому раствору добавляли 469 мкл 50 мМ нЕРЕ8, 280 мМ №С1, 1,5 мМ раствор Nа2ΗΡΟ4, ρΗ 7,05, сразу перемешивали в течение 10 с и давали выстояться при комнатной температуре в течение 20 с. Суспензию разбавляли 12 мл ЦМЕМ, дополненной 2% ЕС8, и вносили в колбу Т75 вместо существующей среды. Клетки инкубировали при 37°С, 5% ТС2 в течение примерно 17-20 ч, затем среду заменяли 12 мл ЦМЕМ, 10% ЕС8. Для продуцирования немодифицированного антитела сйВ-Ьу1 клетки трансфектировали только экспрессионными векторами для антитела ЦЕТВ1808 и ρЕΤВ 1813, взятыми в соотношении 1:1. Для продуцирования антитела сйВ-ЬуГде, имеющего сконструированную схему гликозилирования, клетки котрансфектировали четырьмя плазмидами, двумя для экспрессии антитела (цЕТВ1808 и ρЕΤВ1813). одной для экспрессии слитого полипептида ΟηΤΙΙΙ (цЕТВ1519) и одной для экспрессии маннозидазы ΙΙ (рСЬЕ9), взятыми в соотношении 4:4:1:1, соответственно. В день 5 после трансфекции супернатант собирали, центрифугировали в течение 5 мин при 1200 об./мин, а затем второй раз центрифугировали в течение 10 мин при 4000 об./мин и выдерживали при 4°С.
Антитела сйВ-Ьу1 и сйВ-Ьу1-де очищали из супернатанта культуры с помощью трех последовательных стадий хроматографии, а именно хроматографии на протеине А, катионообменной хроматографии и гельфильтрации на 8ицегбех 200-колонке (фирма АтегкНат РНагтааа), заменяя буфер на солевой фосфатный буфер и собирая полученный на этой последней стадии пик мономерного антитела. Концентрацию антитела определяли с помощью спектрофотометра, измеряя абсорбцию при длине волны 280 нм.
Анализ олигосахаридов
Олигосахариды высвобождали ферментативным путем из антитела путем расщепления РНС-войЕ, причем антитела либо были иммобилизованы на ПВДФ (поливинилидендифторид)мембране, либо находились в растворе.
Полученный после расщепления раствор, содержащий высвобожденные олигосахариды, либо использовали непосредственно для ΜА^^I/ΤΟЕ-ΜС-анализа, либо осуществляли дополнительное расщепление с помощью глюкозидазы ЕηбοΗ перед приготовлением образца для МАЕПЕТОЕ-МС-анализа.
Метод высвобождения олигосахаридов для антител, иммобилизованных на ПВДФ-мембране
Лунки 96-луночного планшета из ПВДФ-мембраны (типа ΙιηιηοΝ1οη Р, фирма Μ^11^ρο^е, Бэдфорд, шт. Массачусетс) смачивали 100 мкл метанола и жидкость отсасывали через ПВДФ-мембрану с помощью вакуума, создаваемого в вакуумном многомембранном коллекторе (типа Μ^11^ρο^е, Бэдфорд, шт. Массачусетс). ПВДФ-мембраны трижды промывали 300 мкл воды. Затем лунки промывали 50 мкл ВСМбуфера (8М мочевина, 360 мМ Трис, 3,2 мМ ЭДТК, рН 8,6). 30-40 мкг антитела вносили в лунку, содержащую 10 мкл ВСМ-буфера. Жидкость в лунке отсасывали через мембрану путем создания вакуума и мембрану последовательно дважды промывали 50 мкл ВСМ-буфера. Восстановление дисульфидных мостиков осуществляли путем добавления 50 мкл 0,1М дитиотреитола в ВСМ и инкубации при 37°С в течение 1 ч.
После восстановления создавали вакуум для удаления раствора дитиотреитола из лунки. Лунки трижды промывали 300 мкл воды, после чего осуществляли карбоксиметилирование цистеиновых остатков путем добавления 50 мкл 0,1М йодуксусной кислоты в ВСМ-буфере и инкубации при комнатной температуре в темноте в течение 30 мин.
После карбоксиметилирования жидкость из лунок отсасывали с помощью вакуума и последовательно трижды промывали 300 мкл воды. Затем ПВДФ-мембрану блокировали для предупреждения адсорбции эндоглюкозидазы путем инкубирования 100 мкл 1%-ного водного раствора поливинилпирроли
- 42 015009 дона 360 при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого блокирующий реагент удаляли с помощью слабого вакуума и последующей трехкратной промывки 300 мкл воды.
^связанные олигосахариды высвобождали путем добавления 2,5 мед пептид-Ы-гликозидазы Е (рекомбинантная №гликаназа, фирма ΟΒΥΚ0, Новато, шт. Калифорния) и 0,1 мед сиалидазы (фирма ΟΒΥΚ0, Новато, шт. Калифорния) для удаления любых возможных заряженных остатков моносахаридов в конечном объеме 25 мкл в 20мМ NаΗС0з, рН 7,0). Расщепление осуществляли в течение 3 ч при 37°С.
Метод высвобождения олигосахаридов для антител, находящихся в растворе
40-50 мкг антитела смешивали с 2,5 мед РNСазыЕ (фирма С1уко, США) в 2 мМ Трис, рН 7,0 в конечном объеме 25 мкл и смесь инкубировали в течение 3 ч при 37°С.
Использование расщепления с помощью эндоглюкозидазы Н высвобожденных с помощью ΡΝΟ,ιιι.ιΓ олигосахаридов для определения соответствия структур гибридных бисекционных олигосахаридов пикам нейтральных олигосахаридов, полученных методом МАЬВ1/ТОР-МС Высвобожденные с помощью РNСазыЕ олигосахариды затем расщепляли с помощью эндогликозидазы Н (КФ 3.2.1.96). Для осуществления расщепления с помощью ЕпбоН добавляли 15 мед ЕпбоН (фирма Воске, Швейцария) к продукту расщепления РNСазыЕ (описанный выше метод для антитела, находящегося в растворе), получая конечный объем 30 мкл, и смесь инкубировали в течение 3 ч при 37°С. ЕпбоН осуществляет расщепление между N-ацетилглюкозаминовыми остатками хитобиозного ядра ^связанных олигосахаридов. Фермент может расщеплять только олигоманнозу и большинство гибридных типов гликанов, в то время как олигосахариды комплексного типа не гидролизуются.
Приготовление образца для МАЬП1/ТОР-МС
Продукты ферментативного расщепления, содержащие высвобожденные олигосахариды, после добавления уксусной кислоты до конечной концентрации 150 мМ инкубировали еще в течение 3 ч при комнатной температуре и затем пропускали через 0,6 мл катионообменной смолы (смола АС50^-Х8, гидрированная форма, 100-200 меш, фирма ВюВаб, Швейцария) упакованной в микробиоспиновую хроматографическую колонку (фирма ВюВаб, Швейцария), для удаления катионов и белков. Один микролитр полученного образца наносили на пластину-мишень из нержавеющей стали и смешивали на пластине с 1 мкл &ЭНВ-матрицы. ЖНВ-матрицу получали путем растворения 2 мг 2,5дигидроксибензойной кислоты и 0,1 мг 5-метоксисалициловой кислоты в 1 мл смеси этанол/10 мМ водный раствор хлорида натрия 1:1 (об./об.). Образцы сушили на воздухе, наносили 0,2 мкл этанола и образцам давали окончательно перекристаллизоваться на воздухе.
МАЬЫ/ТОР-МС
Для получения масс-спектров применяли МАЬП1-Т0Е-масс-спектрометр типа Уоуадег Е1йе (фирма РегкресРуе ВюкуЧепъ). Прибор работал в линейной конфигурации при ускоряющем напряжении 20 кВ и с временем задержки 80 нс. Для определения массы ионов применяли внешнюю калибровку с использованием олигосахаридных стандартов. Для получения окончательного спектра суммировали спектры, полученные при 200 лазерных импульсах.
В-клеточное истощение цельной крови
Аликвоты по 495 мкл гепаринизированной крови от здорового донора в 5 мл полистироловые пробирки, добавляли по 5 мкл 100-кратно концентрированных образцов антитела (конечная концентрация 11000 нг/мл) или только ЗФР и пробирки инкубировали при 37°. Через 24 ч 50 мкл крови переносили в свежие пробирку и окрашивали конъюгированным с флюоресцеин-изотиоцианатом (Е1ТС) антителом к СЭ3, конъюгированным с РЕ (фосфатидилэтаноламин) антителом к СЭ19 и конъюгированным с СуСкготе (ВесФп-Эккшкоп) антителом к СЭ45 в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте. Перед анализом в пробирки добавляли по 500 мкл ЕАС8-буфера (ЗФР, содержащий 2% ЕС8 и 5 мМ ЭДТК). Флуоресценцию СО3-Е1ТС и СЭ 19-РЕ в образцах крови анализировали с помощью проточной цитометрии, принимая за пороговое значение флуоресценцию СО45-СуС11готе. В-клеточное истощение определяли на основе графика соотношения количества СО 19+ В-клеток и количества СЭ3' Т-клеток.
Связывание антител к СБ20 с клетками линии Кар
500000 клеток в 180 мкл ЕАС8-буфера (ЗФР, содержащий 2% ЕС8 и 5мМ ЭДТК) переносили в 5 мл полистироловые пробирки, добавляли по 20 мкл 10-кратно концентрированных образцов антитела к СЭ20 (конечная концентрация 1-5000 нг/мл) или только ЗФР и пробирки инкубировали при 4°С в течение 30 мин. Затем образцы промывали дважды ЕАС8-буфером и пеллетировали при 300 х д в течение 3 мин. Супернатант удаляли путем аспирации и клетки растворяли в 100 мкл ЕАС8-буфера, добавляли 1 мкл Е(аЬ')2-Е1ТС-фрагментов, специфических в отношении Ес (фирма 1асккоп 1ттипо Векеагск ЬаЬотаФпек, США) и пробирки инкубировали при 4°С в течение 30 мин. Образцы промывали дважды ЕАС8буфером и растворяли в 500 мкл ЕАС8-буфера, содержащего 0,5 мкл/мл ингибитора протеаз (Р1), для анализа с помощью проточной цитометрии. Связывание оценивали путем построения графика зависимости средней геометрической величины флуоресценции от концентраций антитела.
Пример 2. Подход с использованием акцептора с высокой степенью гомологии
Поиск каркасного участка антитела-акцептора с высокой степенью гомологии проводили на основе сравнительного анализа белковой последовательности мышиного В-1у1 и коллекцией последовательностей человеческой зародышевой линии и отбора той человеческой последовательности, которая обладала
- 43 015009 наибольшей степенью идентичности последовательности. В результате этого последовательность УН1_10 из базы данных УВаке была выбрана в качестве акцепторной каркасной последовательности тяжелой цепи, а последовательность УК_2_40 была выбрана в качестве акцепторной каркасной последовательности легкой цепи. В эти два акцепторных каркаса трансплантировали (встраивали) три гипервариабельных участка (СОК) вариабельных областей мышиной тяжелой и легкой цепи. Поскольку каркасный участок 4 не являлся частью гена вариабельной области У зародышевой линии, сравнительный анализ для этого положения проводили индивидуально. Для тяжелой цепи выбирали участок Ш4, а для легкой цепи выбирали участок ДК4. Молекулярное моделирование сконструированного домена иммуноглобулина позволило выявить одно положение за пределами СОК, в котором потенциально возможно заменять человеческие аминокислотные остатки на мышиные. Повторная интродукция мышиных аминокислотных остатков в человеческий каркасный участок должна вызывать так называемые обратные мутации. Например, человеческий акцепторный аминокислотный остаток в положении 27 (по Кэботу) подвергали обратной мутации с заменой на остаток тирозина. Конструировали варианты гуманизированного антитела, которые либо включали, либо не включали обратные мутации. Легкая цепь гуманизированного антитела не требовала наличия никаких обратных мутаций. После создания белковых последовательностей синтезировали последовательности ДНК, кодирующие эти белки, согласно описанному ниже методу.
Подход, основанный на использовании смешанного каркасного участка
Для того чтобы избежать интродукции обратных мутаций в имеющие решающее значение положения аминокислотных остатков (имеющих решающее значение для сохранения высокой аффинности в отношении связывания с антигеном или функций антитела) в человеческом акцепторном каркасном участке, проводили исследование того, можно ли весь каркасный участок 1 (ЕК1) или каркасные участки 1 (ЕК1) и 2 (ЕК2) вместе заменять последовательностями человеческого антитела, уже несущими донорные остатки, или их функциональными вариантами, в этих важных положениях встречающейся в естественных условиях человеческой последовательности зародышевой линии. Для этой цели проводили индивидуальный сравнительный анализ каркасных участков 1 и 2 последовательности УН мышиного В1у1 и человеческих последовательностей зародышевой линии. В данном случае максимально высокая степень идентичности последовательностей была не важна и ее не использовали при выборе акцепторных каркасных участков, предполагалось, что вместо этого более важным являлось совпадение нескольких остатков, имеющих решающее значение. К таким имеющим решающее значение остаткам относятся остатки 24, 71 и 94 (нумерация согласно Кэботу), а также остатки в положениях 27, 28 и 30 (нумерация согласно Кэботу), которые расположены вне СЭК1 согласно Кэботу, но которые часто принимают участие в связывании с антигеном. В качестве пригодной IМСΤ-последовательности была выбрана УН_3_15. После создания белковых последовательностей синтезировали последовательности ДНК, кодирующие эти белки, согласно описанному ниже методу. При использовании указанного подхода для сохранения высоких уровней связывания с антигеном не требовались обратные мутации ни для легкой, ни для тяжелой цепи.
Синтез генов антитела
После создания аминокислотной последовательности У-области гуманизированного антитела конструировали последовательность ДНК. Данные для последовательностей ДНК индивидуальных каркасных участков получали из баз данных последовательностей человеческой зародышевой линии. Последовательности ДНК СЭК-участков получали из соответствующих данных мышиных кДНК. С использованием этих последовательностей создавали полную виртуальную последовательность ДНК. С учетом данных о этой последовательности ДНК в виртуальную последовательность интродуцировали диагностические сайты рестрикции, создавая путем интродукции «молчащих» мутаций сайты, распознаваемые рестриктазами. Для получения физической цепи ДНК осуществляли синтез гена (например, согласно методу, описанному νΐ^^Γ и др. 1995). С помощью этого метода на основе представляющих интерес генов создавали олигонуклеотиды таким образом, что одну серию олигонуклеотидов получали из кодирующей цепи, другую серию - из некодирующей цепи. 3'- и 5'-концы каждого олигонуклеотида (за исключением самого первого и самого последнего в ряду) всегда имели комплементарные последовательности для двух праймеров, полученных из другой цепи. Когда эти олигонуклеотиды помещали в реакционный буфер, пригодный для любой термостойкой полимеразы, и добавляли Мд2+, дНТФ и ДНКполимеразу, то происходило удлинение каждого олигонуклеотида на его 3'-конце. Затем новый образовавшийся 3'-конец одного праймера отжигали со следующим праймером другой цепи и проводили дальнейшее удлинение его последовательности в условиях, пригодных для зависящего от матрицы удлинения цепи ДНК. Конечный продукт клонировали в пригодном векторе для размножения в Е. сой.
Производство антител
С использованием стандартных методов молекулярной биологии лидерные последовательности человеческой тяжелой и легкой цепи (для секреции) добавляли против хода транскрипции относительно указанных выше последовательностей вариабельных областей и затем их присоединяли против хода транскрипции к константной области тяжелой и легкой каппа-цепи человеческого Ι§Ο1, соответственно. Полученные полные последовательности ДНК тяжелой и легкой цепи антитела субклонировали в экс
- 44 015009 прессионных векторах млекопитающих (один для легкой цепи и один для тяжелой цепи) под контролем МР8У-промотора и против хода транскрипции относительно синтетического ро1уА-сайта, при этом каждый вектор нес последовательность ОпР ЕВУ, как описано выше в примере 1. Антитела получали согласно методу, описанному выше в примере 1, а именно, осуществляли котрансфекцию клеток НЕК293ЕВNΛ с использованием экпрессионных векторов для тяжелой и легкой цепи антитела млекопитающего, собирали кондиционированную среду для культивирования через 5-7 дней после трансфекции и очищали секретированные антитела с помощью аффинной хроматографии на протеине А, катионообменной хроматографии и гель-фильтрации на конечной стадии с выделением чистого мономерного антитела в виде фСк Антитела помещали в среду, содержащую 25 мМ фосфат калия, 125 мМ хлорид натрия, 100 мМ раствор глицина, рН 6,7. Варианты гуманизированных антител со сконструированной схемой глигозилирования получали путем котрансфекции с использованием экспрессионных векторов для антител в сочетании с экспрессионными векторами для гликозилтрансферазы СпТ-Ш или с СпТ-Ш-экспрессионным вектором и экспрессионным вектором для маннозидазы II комплекса Гольджи, как это описано выше в примере 1 для химерного антитела. Антитела со сконструированной схемой гликозилирования очищали и приготавливали для дальнейшего анализа согласно описанному выше методу создания антител, не имеющих сконструированную схему гликозилирования. Олигосахариды, присоединенные к Ес-области антитела, анализировали с помощью МАБО^ОЕ-МС согласно описанному ниже методу.
Анализ олигосахаридов
Метод высвобождения олигосахаридов для антител, находящихся в растворе
40-50 мкг антитела смешивали с 2,5 мед РNСазыЕ (фирма С1уко, США) в 2 мМ Трис, рН 7,0 в конечном объеме 25 мкл и смесь инкубировали в течение 3 ч при 37°С.
Приготовление образцов для МАБ01/ТОР-МС
Продукты, полученные в результате ферментативного расщепления, которые содержали высвобожденные олигосахариды, инкубировали еще в течение 3 ч при комнатной температуре после добавления уксусной кислоты до конечной концентрации 150 мМ и затем пропускали через 0,6 мл катионообменной смолы (смола АС50^-Х8, гидрированная форма, 100-200 меш, фирма ВюКаб, Швейцария), которой заполняли микробиоспиновую хроматографическую колонку (фирма ВюКаб, Швейцария), для удаления катионов и белков. Один микролитр полученного образца наносили на пластину-мишень из нержавеющей стали и смешивали на пластине с 1 мкл зОНВ-матрицы. зОНВ-матрицу получали путем растворения 2 мг 2,5-дигидроксибензойной кислоты и 0,1 мг 5-метоксисалициловой кислоты в 1 мл смеси этанол/10 мМ водный раствор хлорида натрия 1:1 (об./об.). Образцы сушили на воздухе, наносили 0,2 мкл этанола и образцам давали окончательно перекристаллизоваться на воздухе.
МАЬШ/ТОЕ-МС
Для получения масс-спектров применяли МАЕПЕТОЕ-масс-спектрометр типа Уоуадег Е1йе (фирма РегзресЕуе Вюзуз(етз). Прибор работал в линейной конфигурации при ускоряющем напряжении 20 кВ и с временем задержки 80 нс. Для определения массы ионов применяли внешнюю калибровку с использованием олигосахаридных стандартов. Для получения окончательного спектра суммировали спектры, полученные при 200 лазерных импульсах.
Анализ связывания с антигеном
Варианты очищенного мономерного гуманизированного антитела тестировали в отношении связывания с человеческим СЭ20 на клетках-мишенях В-клеточной лимфомы линии Каф с помощью метода анализа, основанного на использовании проточной цитометрии, согласно процедуре, описанной выше в примере 1 для химерного антитела В-1у1.
Связывание вариантов мономерного 1цС1 со сконструированной схемой гликозилирования с ΝΚклетками и линией клеток СНО, экспрессирующих ЕеуКША
Человеческие ΝΚ-клетки выделяли из свежевыделенных мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС), используя для обогащения отрицательную селекцию СО 16- и СО56-позитивны.х клеток (система МАС8, фирма М111епу1 Вю1ес СтЬН, Бергиш Гладбах, Германия). Чистота, которую оценивали по экспрессии СЭ56. составляла 88-95%. Свежевыделенные ΝΚ-клетки инкубировали в ЗФР без ионов кальция и магния (3х105 клеток/мл) в течение 20 мин при 37°С для удаления связанного с ΝΚ-клетками фС. Клетки инкубировали до концентрации 106 клеток/мл в присутствии различных концентраций антитела к ί.Ό20 (0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 мкг/мл) в ЗФР, 0,1% БСА. После нескольких отмывок связывание антитела оценивали путем инкубации с конъюгированным (1: 200) с ЕПС Е(аЬ')2-фрагментом козьи антитела, специфическим в отношении Е(аЬ')2 человеческого фС (фирма 1аскзоп IттипоКеазеа^сй, Вест Гроу, шт. Пенсильвания, США) и античеловеческим СЭ56-РЕ (фирма ВО Вюзаепсез, Алшвил, Швейцария). Добавляли Е(аЬ')2-фрагменты антитела к ЕсγКIIIΛ 3С8 (фирма Апсе11, Байпорт, шт. Миннесота, США) в концентрации 10 мкг/мл для конкурентного связывания гликозилированных вариантов антитела (3 мкг/мл). Интенсивность флуоресценции, характеризующую варианты связанного антитела, определяли для СО56-позитивны.х клеток с помощью устройства ЕАС8Са11Ьиг (фирма ВО Вюзаепсез, Алшвил, Швейцария). СНО-клетки трансфектировали путем электропорации (280 В, 950 мкФ, 0,4 см) экспрессионным вектором, кодирующим α-цепь и γ-цепь ЕсγКIIIΛ-Уа1158. Отбор трансфектантов проводили путем
- 45 015009 добавления 6 мкг/мл пуромицина на 106 клеток и стабильные клоны анализировали с помощью ЕАС8 с использованием 10 мкл конъюгированного с НТС моноклонального антитела к ЕсдаттаКШ 3С8 (фирма ВИ ВюБаепсеБ, Алшвил, Швейцария). Связывание ^С1 с экспрессирующими ЕсдаттаКША-Уа1158 СНО-клетками осуществляли аналогично описанному выше связыванию с ΝΚ-клетками.
Анализ АБСС
В качестве эффекторных клеток использовали человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС), которые получали с помощью НкЮрасще-ИШ (фирма 81дта П1адпо5Йс5 Шс., СентЛуис, шт. Миссури, 63178, США) в основном согласно инструкциям производителя. В целом метод состоял в следующем. У добровольцев брали с помощью гепаринизированных шприцев образцы венозной крови. Кровь разбавляли в соотношении 1: 0,75-1,3 ЗФР (не содержащим Са++ или Мд++) и наслаивали на Н|51орас.|ие-1077. Осуществляли центрифугирование в градиенте плотности при 400 х д в течение 30 мин при комнатной температуре (КТ) без перерывов. Промежуточную фазу, содержащую РВМС, объединяли и промывали ЗФР (50 мл на клетки, полученные после двух стадий центрифугирования в градиенте плотности) и собирали центрифугированием при 300 х д в течение 10 мин при КТ. После ресуспендирования дебриса с помощью ЗФР подсчитывали количество РВМС и промывали второй раз путем центрифугирования при 200 х д в течение 10 мин при КТ. Затем клетки ресуспендировали в соответствующей среде для проведения дальнейших процедур.
Соотношение эффекторных клеток и клеток-мишеней, которое использовали для АЭСС-анализов, составляло 25:1 и 10:1 для РВМС и ΝΚ-клеток соответственно. Эффекторные клетки приготавливали в среде АГМ-У в соответствующей концентрации и вносили по 50 мкл на лунку в круглодонные 96луночные планшеты. Клетки-мишени, представляли собой клетки человеческой В-лимфомы (например, клетки линии Кар), выращенные в среде ИМЕМ, содержащей 10% ФТС. Клетки-мишени промывали ЗФР, подсчитывали и ресуспендировали в среде АЕМ-У до концентрации 0,3 млн/мл из расчета 30000 клеток на 100 мкл. Антитела разбавляли А^-У, добавляли 50 мкл к предварительно высеянным клеткам-мишеням и давали связываться с мишенями в течение 10 мин при КТ. Затем добавляли эффекторные клетки и планшет инкубировали в течение 4 ч при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2. Гибель клеток-мишеней оценивали путем измерения высвобождения лактатгидрогеназы (ЛДГ) из поврежденных клеток с использованием набора для определения цитотоксичности (фирма КосНе П1адпо5йск, Роткрейц, Швейцария). После инкубации в течение 4 ч планшеты центрифугировали при 800хд. 100 мкл супернатанта из каждой лунки переносили в новый прозрачный плоскодонный 96-луночный планшет. В каждую лунку добавляли по 100 мкл цветного субстратного буфера из набора. Величины Утах цветной реакции определяли с помощью ридера для ЕШ8А при длине волны 490 нм в течение по меньшей мере 10 мин с использованием пакета программ 8ОЕТтах РКО (фирма Мо1еси1аг Пеу1се5, Саннивале, шт. Калифорния, 94089, США). Спонтанное высвобождение ЛДГ оценивали в лунках, содержащих только клетки-мишени и эффекторные клетки, но не содержащих антитела. Максимальное высвобождение определяли в лунках, содержащих только клетки-мишени и 1% Тгйоп Х-100. Процент специфической опосредуемой антителом гибели рассчитывали по следующей формуле: ((х - 8К)/(МК - 8К) -100, где х обозначает среднее значение Утах при конкретной концентрации антитела, 8К обозначает среднее значение Утах при спонтанном высвобождении и МК обозначает среднее значение Утах при максимальном высвобождении.
Анализ комплементзависимой цитотоксичности
Клетки-мишени подсчитывали, промывали ЗФР, ресуспендировали в среде АЕМ-У (фирма ИщЦгодеп) до концентрации 1 млн клеток/мл. Высевали по 50 мкл клеток на лунку в плоскодонный 96луночный планшет. Приготавливали разведения антитела в А^-У и по 50 мкл добавляли к клеткам. Антителам давали связываться с клетками в течение 10 мин при комнатной температуре. Свежеоттаянный комплемент человеческой сыворотки (фирма Ошбе1) разбавляли тремя объемами А^-У и вносили по 50 мкл в лунки. Кроличий комплемент (фирма Себаг1апе ЬаЬогаЮпеБ) приготавливали согласно инструкциям производителя, разбавляли тремя объемами А^-У и вносили по 50 мкл в лунки. Для контроля перед внесением в среду для анализа источники комплемента выдерживали в течение 30 мин при 56°С.
Планшеты для анализа инкубировали в течение 2 ч при 37°С. Уничтожение клеток оценивали путем измерения высвобождения ЛДГ. В целом метод заключался в следующем. Планшеты центрифугировали при 300 х д в течение 3 мин. Переносили по 50 мкл супернатанта на лунку в новый 96-луночный планшет и добавляли по 50 мкл реагента для анализа из набора для определения цитотоксичности (фирма КосНе). Путем измерения кинетических характеристик с помощью ридера для ЕШ8А определяли величину Утах для соответствующей концентрации ЛДГ в супернатанте. Максимальное высвобождение определяли путем инкубирования клеток в присутствии 1% Тпйоп Х-100.
Анализ В-клеточного истощения цельной крови
Стандартное В-клеточное истощение цельной крови, вызванное антителами к СИ20, осуществляли согласно методу, описанному выше в примере 1.
Анализ апоптоза
Способность антител вызывать апоптоз анализировали путем инкубации в течение ночи (16-24 ч)
- 46 015009 антитела в концентрации 10 мкг/мл (насыщающие условия для связывания с антигеном) с клеткамимишенями (при концентрации клеток-мишеней 5 х 105 клеток/мл). Образцы окрашивали ΑηηV-ΡIΤС и анализировали с помощью РАС8. Анализ проводили в трех повторностях.
Обнаружение проводили с помощью проточной цитометрии путем выявления апоптозных маркеров, таких как аннексин V и фосфатидилсерин. Образцы для отрицательного контроля (без индукции апоптоза) не содержали никаких антител, а содержали только забуференный фосфатом физиологический раствор. Образцы для положительного контроля (максимальный апоптоз) содержали 5 мкМ сильного индуктора апоптоза камфотецина (СРТ).
Результаты и обсуждение
Сравнение связывания с человеческим антигеном ί.Ό20 вариантов антитела В-НН1, В-НН2, В-ННЗ либо в комплексе с легкой цепью химерного антитела В-1у1 (т'УЕ, полученного согласно методу, описанному в примере 1), либо с легкой цепью гуманизированного В-1у1 (Κν1), и родительского химерного антитела с1 В-1у1 (описанного выше в примере) позволило установить, что все антитела имели близкие значения ЕС50, но конструкция В-НН1 связывалась с меньшей интенсивностью/стехиометрией, чем варианты В-НН2 и В-НН3 (фиг. 11). В-НН1 отличался от В-НН2 и В-НН3 своими частично гуманизированными участками СЭК1 и СЭК2 (определение Кэбота), а также наличием полиморфизма А1а/ТЬг в положении 28 (нумерация согласно Кэботу). Это свидетельствует о том, что как положение 28, так полный ί.ΌΡ1 и/или полный СЭК2 являются важными для взаимодействия антитело/антиген.
Сравнение В-НЬ1, В-НН1 и химерного родительского антитела с1В-1у1 позволило установить, что у конструкции В-НЬ1 отсутствовала какая-либо связывающая активность, а интенсивность связывания/стехиометрия В-НН1 была примерно в два раза меньше, чем у В-1у1 (фиг. 12). Как В-НЬ1, так и ВНН1 были сконструированы на основе акцепторных каркасных участков, выведенных из человеческих вариабельных областей νΉ1 -класса. Среди других различий наиболее важным является различие в положении 71 (нумерация согласно Кэботу; положение 71 по Кэботу соответствует положению 72 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 48) конструкции В-НЬ1, что указывает на его возможную важную роль в связывании с антигеном.
Из сравнения представленных на фиг. 9-13 данных о связывании с антигеном видно, что варианты ВНН2-ΚV1, ВН^8-ΚV1 и ВН^11-ΚV1 обладали наиболее высокой аффинностью к связыванию с человеческим ί.Ό20 на поверхности человеческих клеток среди различных тестированных вариантов гуманизированного антитела. Различия между В-НН2, с одной стороны, и В-НЬ8 и В-НЬ11, с другой стороны, присутствуют только в РК1- и РК2-участках, причем все три СОК являются идентичными (что видно, например, из сравнения 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 32, 56 и 60, которые не пронумерованы согласно Кэботу, но для которых обычный специалист в данной области легко может установить нумерацию согласно Кэботу). Для В-НЬ8 и В-НБ11 последовательности РК1 и РК2 выводили из последовательностей человеческой вариабельной области УН3-класса, в то время как полный каркасный участок В-НН2 выводили из человеческой УН1. В-НБ11 представляет собой производное В-НЬ8, несущее одиночную мутацию С1и1С1п (положение 1 является одинаковым как в нумерации согласно Кэботу, так и в стандартной системе нумерации, использованной в перечне последовательностей), при этом в конструкции В-НН2 аминокислотный остаток представляет собой С1п. Это означает, что замена С1и1С1п не изменяет ни аффинность, ни интенсивность связывания. Другие различия между В-НН2 и В-НЬ8 касаются 14 остатков каркасного участка, из которых один или несколько могут оказывать влияние на способность этого антитела связываться с антигеном.
Конструкцию В-НЬ4 получали из антитела В-НН2 путем замены РК1 В-НН2 участком последовательности УН1_45 человеческой зародышевой линии. Эта конструкция обладает существенно более низкой способностью к связыванию с антигеном несмотря на то, что аминокислотные различия присутствуют только в трех положениях в РК1. Эти остатки находятся в положениях 2, 14 и 30 (нумерация согласно Кэботу). Среди них положение 30 может являться положением, оказывающим влияние, поскольку оно является частью СОРТ согласно определению Хотиа. Общий анализ всех представленных на фиг. 9-13 кривых, характеризующих связывание, показывает, что для связывания с ί.Ό20 важны следующие остатки тяжелой цепи гуманизированного В-1у1 (нумерация согласно Кэботу): Ν35 (конец СЭК1 согласно Кэботу), полный ί.ΌΡ1 согласно Кэботу, полный СЭК2 согласно Кэботу и полный СЭК3 согласно Кэботу, остатки А71 и К94 (в этом случае остаток К94 не может быть заменен на треонин) и Υ27. А28 и 830 также могут оказывать влияние, но в меньшей степени. Кроме того, для связывания с антигеном важны ί.ΌΡ3 согласно Кэботу и все канонические остатки. В гуманизированную легкую цепь, в которую трансплантировали полные СОК1-, СЭК2- и СЭК3-участки (согласно Кэботу), не интродуцировали никаких обратных мутаций. В отношении индукции апоптоза (фиг. 14, 15 и 21) наиболее эффективным вариантом оказался гуманизированный вариант В-1у1 ВНН2-ΚV1 (даже более эффективным, чем исходное с1В-1у1 и намного более эффективным, чем антитело, имеющее последовательность, идентичную последовательности ритуксимаба, С2В8). Другими гуманизированными вариантами (производными ВНЬ8), которые могли вызывать усиленный апоптоз, оказались: В-НБ12 - В-НБ17 (см. таблицу) и ВНН8 (смешанные каркасные участки) и ВНН9 (смешанные каркасные участки с одной обратной мутацией, 830Т). Положения 9 и 48 (нумерация согласно Кэботу) могут контактировать с антигеном. Варианты ВНН4 - ВНН7 представляют собой другие гуманизированные варианты В-1у1, которые не несут дополнительных отлич
- 47 015009 ных от человеческих последовательностей.
Важные свойства гуманизированного антитела В-1у1 обусловлены тем, что оно представляет собой антитело типа II к СЭ20 согласно определению, которое дано у Сгадд М.8. и О1епше Μ.Ι., В1ооб 103(7), апрель 2004 г., сс. 2738-2743. Вследствие этого при связывании с СЭ20 оно не индуцирует какой-либо устойчивости к экстракции неионными детергентами СЭ20 с поверхности человеческих СЭ20+-клеток при анализе с использованием предназначенного для этой цели метода, который описан у Ро1уак МЛ. и Эеапз 1.Р., В1ооб 99(9), 2002, сс. 3256-3262. Оно действительно индуцирует существенно меньшую устойчивость к экстракции неионными детергентами ί.Ό20. чем антитело С2В8 (другое антитело к СЭ20. имеющее последовательность, идентичную с последовательностью ритуксимаба (см. публикацию патента США № 20030003097 на имя Вей). Как следует ожидать для антитела типа II к СЭ20, гуманизированное В-1у1 не обладает какой-либо значительной опосредуемой комплементом литической активностью и, конечно, меньшей опосредуемой комплементом литической активностью, чем антитело кСЭ20 С2В8 (химерный ^01, имеющий последовательность, идентичную последовательности ритуксимаба). Другой важной особенностью гуманизированного антитела В-1у1 является то, что оно обладает очень большой активностью в анализе гомотипической агрегации. В этом анализе СЭ20-позитивные человеческие клетки, клетки Дауди, инкубировали в среде для культуры клеток в течение периода времени вплоть до 24 ч при 37 С в атмосфере, содержащей 5% СО2, в инкубаторе для клеток млекопитающих согласно подробно описанному методу (см. Эеапз) с антителом в концентрации 1 мкг/мл и параллельно в концентрации 5 мкг/мл. Для сравнения параллельно проводили контрольную инкубацию клеток в идентичных условиях, но с использованием антитела к СЭ20 С2В8. В различные моменты времени, в том числе после инкубации в течение 8 и 24 ч клетки визуально обследовали с помощью микроскопа. Было установлено, что гуманизированное антитело В-1у1 приводит к сильной гомотипической агрегации, причем агрегаты были существенно крупнее, чем те, которые индуцировались при добавлении контрольного антитела С2В8. Кроме того, в соответствии с тем, что антитело является антителом типа II к СЭ20, оно индуцировало более высокие уровни апоптоза, когда СЭ20-позитивные человеческие клетки инкубировали с гуманизированным антителом В-1у1, по сравнению с контрольным опытом, проводимым в идентичных условиях с использованием химерного антитела в виде ^01, С2В8, имеющего последовательность, идентичную последовательности ритуксимаба.
Варианты гуманизированного антитела со сконструированной схемой гликозилирования получали в клетках млекопитающих путем коэкспрессии гликозилтрансферазы ОпТШ совместно с генами антител. Это приводило к увеличению фракции нефукозилированных олигосахаридов, присоединенных к Рсобласти антител, включая бисекционные нефукозилированные олигосахариды, как это описано в \УО 2004/065540 (фиг. 17-19). Антитела со сконструированной схемой гликозилирования обладают существенно большими уровнями связывания с человеческими РсуВШ-рецепторами (фиг. 20), а также большей АЭСС-активностью (фиг. 16) по сравнению с антителом с несконструированной схемой гликозилирования и по сравнению с антителом С2В8. Гуманизированное антитело В-1у1 оказалось также более эффективным в отношении индукции истощения человеческих В-клеток при анализе цельной крови (фиг. 16), чем контрольное антитело С2В8. Это имело место как для антитела В-1у1 с несконструированной схемой гликозилирования, так и для его версии со сконструированной схемой гликозилирования. Антитело со сконструированной схемой гликозилирования оказалось примерно в 1000 раз более эффективным в отношении В-клеточного истощения при анализе цельной крови, чем контрольное антитело к СЭ20 С2В8. Это сравнение имеет большое значение для гуманизированных форм антитела В-1у1, как с несконструированной схемой гликозилирования, так и со сконструированной схемой гликозилирования, поскольку в анализах, объединяющих оценку зависящих от Рс-рецептора видов активности, таких как АЭСС, опосредуемого комплементом лизиса и индукции апоптоза установлено, что обе формы В-1у1 существенно более эффективны, чем С2В8, хотя обе формы В-1у1 обладают существенно более низкой опосредуемой комплементом литической активностью. Такая более высокая активность гуманизированных вариантов антитела В-1у1 включает АЭСС, Рс-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность и индукцию апоптоза. Кроме того, в анализе апоптоза формы этого антитела типа II к СЭ20 как со сконструированной схемой гликозилирования, так и с несконструированной схемой гликозилирования, оказались более эффективными, причем варианты со сконструированной Рс-областью, обладающие повышенной аффинностью к связыванию с Рсу-рецепторами, оказались даже более эффективными в отношении индукции апоптоза, чем вариант с несконструированной Рс-областью, и все варианты имели более высокую эффективность, чем контрольное антитело С2В8. Точный механизм повышенной гомотипической агрегации и индукции апоптоза, опосредуемый антителом типа II к СЭ20, не изучен и на это важное свойство может оказывать влияние сопутствующее связывание с другими молекулами на поверхности СЭ20-позитивных клеток, таких как Рсу-рецепторы. Поэтому важно продемонстрировать, что антитела типа II к СЭ20, у которых сконструирована их Рс-область для повышения аффинности к связыванию с Рсу-рецепторами, включая РсуВШ, и для связанного с этим повышения АЭСС-активности, все еще обладают выраженной способностью индуцировать апоптоз, даже превышающей способность антител с несконструированной Рс-областью, и индуцируют гомотипическую агрегацию. Индукция апоптоза важна ίη угуо, поскольку в
- 48 015009 организме имеются области, в которых могут находиться СО20-позитивные клетки-мишени, но где доступ к ЕсдаштаКШ-позитивным клеткам более затруднен, чем в крови, такими областями являются, например, лимфатические узлы. В таких местах индукция апоптоза антителом к ί'.Ό20 сама по себе может иметь решающее значение для хорошей эффективности терапии человека с использованием антител к ί'.Ό20. как при лечении злокачественных гематологических заболеваний, таких как неходжкинские лимфомы и хронический В-клеточный лимфолейкоз, так и для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и волчанка, посредством В-клеточного истощения. Повышенная аффинность к связыванию с ЕсуКШ и более высокая ЛЭСС гуманизированного антитела типа II к СЭ20 со сконструированной Ес-областью может иметь очень большое значение для таких методов лечения. Наконец, пониженная или незначительная опосредуемая комплементом литическая активность этого антитела типа II к СЭ20, включая гуманизированные варианты и варианты со сконструированной Ес-областью, может быть важной, поскольку более высокая активация комплемента антителом к СЭ20 коррелирует с более сильными нежелательными побочными действиями.
- 49 015009
Перечень последовательностей <110> СХусАгб В1обесЬпо1оду АО итапа, РаЫо Вгиепкег, РеЬег
ЗиЬег, ТоЫаз
Риепбепег, игзи1а Моеззпег, ЕккеЬагд Ееггага, СХаисИа <Х20> Антигенсвязывающие молекулы, обладающие повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором и эффекторной функцией <130> 1975.029РС01 <160> 78 <170> РаЬепЬХп версия 3.3 <210> 1 <211> 112 <212> РКТ <213> Миз зр.
<400>1
СХу 1 Рго СХи Ьеи УаХ 5 Ьуз Рго СХу А1а Зег 10 УаХ Ьуз 11е Зег Суз 15 Ьуз
А1а Зег СХу Туг АХа РЬе Зег Туг Зег Тгр МеЬ Азп Тгр УаХ Ьуз Ьеи
20 25 30
Агд Рго СХу О1п СХу Ьеи СХи Тгр Не СХу Агд 11е РЬе Рго СХу Азр
35 40 45
О1у Азр ТЬг Азр Туг Азп СХу Ьуз РЬе Ьуз СХу Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг
50 55 60
А1а Азр Ьуз Зег Зег Азп ТЬг А1а Туг Меб СХп Ьеи ТЬг Зег Ьеи ТЬг
65 70 75 80
Зег УаХ Азр Зег АХа УаХ Туг Ьеи Суз А1а Агд Азп УаХ РЬе Азр СХу
85 90 95
Туг Тгр Ьеи УаХ Туг Тгр СХу СХп СХу ТЬг Ьеи УаХ ТЬг УаХ Зег А1а
100 105 110
<210> 2 <211>336 <212> ДНК <213> Миз зр.
<400> 2
ддассЪдаас ЬддЬдаадсс Ьддддссбса дЬдаадаЬЫ: ссЬдсааадс ЬЪсбддсЬас 60
дсаЬбсадЬЬ асЬсЫзддаб даасСдддЬд ааасЬдаддс сЬддасаддд ЬсЬЬдадбдд 120
аЬЬддасдда ЬЬЬЬЬссЬдд адабддддаС асЬдасЬаса абдддаааьь саадддсаад 180
дссасасбда сбдсЬдасаа аЬссбссаас асадссЬаса Ьдсаасбсас садссбдасс 240
ЬсЬдбддасЬ сбдсддЬсЬа ЬЫзаЬдЬдса адаааЪдЬсб ЬЬдабддЬЬа сЬддЬЬадЬЬ 300
Ьасбддддсс аадддасбсб ддбсасбдбс ЪсЬдса 336
<210>3 <211>103 <212> РКТ <213> Миз зр.
- 50 015009 <400> 3
Азп 1 Рго Уа1 ТЬг Ьеи 5 С1у ТЬг Зег А1а Зег 10 11е Зег Суз Агд Зег 15 Зег
Ьуз Зег Ьеи Ьеи Н13 Зег Азп <31у 11е ТЬг Туг Ьеи Туг Тгр Туг Ьеи
20 25 30
С1п Ьуз Рго С1у С1п Зег Рго С1п Ьеи Ьеи 11е Туг С1п МеЬ Зег Азп
35 40 45
Ьеи Уа1 Зег С1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег Зег Зег С1у Зег б1у ТЬг
50 55 60
Азр РЬе ТЬг Ьеи Агд 11е Зег Агд Уа1 С1и А1а С1и Азр Уа1 С1у Уа1
65 70 75 80
Туг Туг Суз А1а С1п Азп Ьеи С1и Ьеи Рго Туг ТЬг РЬе С1у С1у С1у
85 90 95
ТЬг Ьуз Ьеи С1и Не Ьуз Агд
100 <210> 4 <211> 309 <212> ДНК <213> Миз зр <400> 4
ааЬссадкса сЬсЬЬддаас аЬсадсЬЬсс аксЪссЬдса ддЬсЬадЬаа дадксЬссЬа 60
саЬадЬааЬд дсаЬсасЬЬа ЪЬЬдЬаЬЬдд СаЬсЬдсада адссаддсса дЪсЬссЬсад 120
сЬссЬдаЬЬЬ аксадаЬдЬс саассЬЬдЬс ЬсаддадЬсс садасаддЬЬ садЪадсадк 180
дддЬсаддаа сЬдаЬЬЬсас асЪдадааЬс адсададЬдд аддсЬдадда ЬдЬдддЬдЬЬ 240
ЬаЬЬасЬдЬд сЬсааааЬсб адаасЬЬссд ЬасасдЬЬсд даддддддас саадсЬддаа 300
аЬаааасдд 309
<210> 5 <211> 15 <212> ДНК <213> Миз зр.
<400> 5 ЬасбсЬЪдда Ьдаас 15
<210> 6 <211> 18 <212> ДНК <213> Миз зр.
<400> 6 ддскасдсаЪ ЬсадЬЬас 18
<210> 7 <211> 30 <212> ДНК <213> Миз зр.
<400> 7 ддсЬасдсаЪ ЬсадЬЬасЬс ЬЬддаЬдаас 30
- 51 015009 <210> 8 <211>48 <212> ДНК <213> Миз зр .
<400>8 аддРсРадРа ададРсРссР асарадраар ддсаРсасРР аРРРдРар <210>9 <211> 21 <212> ДНК <213> Миз зр.
<400>9 садаРдРсса ассРРдРсРс а
<210> 10
<211> 27
<212> ДНК
<213> Миз зр.
<400> 10
дсрсаааарс РадаасРРсс дРасасд 27
<210> 11 <211>1407 <212> ДНК <213> искусственная последовательность <220>
<223> химерная мышиная-человеческая кДНК <400> 11
аРдддРРдда дссРсаРсРР дсРсРРссРР дРсдсРдРРд сРасдсдРдР ссрдРссдад 60
ггЬ г* а ггг< ЯГГГ>Я/Т<-/-1^-4ТГГ ώγτΈγτώ □/’Егг <т+- гг а ώγύγιγΈγγ птгггг’η Е/-ι з/тЕ ггзппзББЕпг’ 12 0
V. 22 чи. «. ν_ _23 Э 1-22 333^ 4ν«3 к-
рдсааадсРР сРддсРасдс аРРсадРРас РсРРддаРда асрдддрдаа асРдаддссР 180
ддасадддрс РРдадРддаР РддасддаРР РРРссРддад аРддддаРас рдасРасааР 240
дддаааРРса адддсааддс сасасРдаср дсРдасаааР ссрссаасас адссРасаРд 300
саасРсасса дссрдассРс РдРддасРсР дсддРсРаРР РаРдРдсаад аааРдРсРРР 360
даРддРРасР ддРРадРРРа сРддддссаа дддасРсРдд РсасРдРсРс РдсадсРадс 420
ассаадддсс саРсддРсРР сссссРддса сссРссРсса ададсассРс ьдддддсаса 480
дсддсссРдд дсРдссРддР сааддасРас РРссссдаас сддРдасддР дрсдрддаас 540
Рсаддсдссс Рдассадсдд сдРдсасасс РРсссддсРд РссРасадрс сРсаддасРс 600
РасРсссРса дсадсдрддр дассдРдссс РссадсадсР Рдддсассса дассРасаРс 660
рдсаасдрда арсасаадсс садсаасасс ааддрддаса адааадсада дсссаааРсР 720
рдрдасаааа сРсасасаРд сссассдрдс ссадсассРд аасРссРддд дддассдРса 780
дРсРРссРсР Рссссссааа асссааддас асссрсарда РсРсссддас сссрдаддрс 840
ЙГ’ЯЛ-СГГ’СТЪСГСГ к д д Г д д я г. а Г дадссасдаа ггапсгЧ- гтя гтгг £саад££саа г· 1 гт гт к· я г’гт!- гг 9 00
“--- _1 — --ϋ ~ 3 Ζ> ''-зз-’ — ’-з-з
дасддсдрдд аддрдсараа Рдссаадаса аадссдсддд аддадсадра саасадсасд 960
РассдРдРдд РсадсдРссР сассдРссРд сассаддасР ддсРдааРдд сааддадРас 1020
аадрдсаадд РсРссаасаа адсссРссса дсссссаРсд адаааассаР сРссааадсс 1080
ааадддсадс сссдадаасс асаддрдрас асссрдсссс саРсссддда рдадсРдасс 1140
аадаассадд РсадссРдас сРдссРддРс аааддсРРсР аРсссадсда сарсдссдрд 1200
дадрдддада дсааРдддса дссддадаас аасРасаада ссасдссРсс сдрдсрддас 1260
- 52 015009
РссдасддсР ссррсеессе сЬасадсаад сРсассдРдд асаададсад дрддсадсад 1320
дддаасдРсР РсРсаРдсРс сдРдаРдсаР даддсРсРдс асаассасРа сасдсадаад 1380
адссСсРссс РдРсРссддд РаааРда 1407
<210> 12 <211> 720 <212> ДНК <213> искусственная последовательность
<220> <223> химерная мышиная-человеческая кДНК
<400> 12 аРддаеРРЬс аддРдсадаР РаРсадсРРс сРдсРааРса дЬдсРРсаде сараардрсс 60
ададдадаса ЬЬдРдсРсас ссааасРаса ааРссадРса сСсРЬддаас аРсадсРРсс 120
аРсРссРдса ддбсРадеаа дадбсрссеа саРадРааРд дсаРсасСРа ССРдРаРедд 180
РаРсРдсада адссаддсса дРсРссРсад сСссРдаРРе аСсадаРдРс саассррдес 240
РсаддадРсс садасаддрр садРадсадЬ дддрсаддаа срдареесас асРдадааРс 300
адсададрдд аддсРдадда рдедддрдее РаРРасРдед сРсааааРсе адаасррссд 360
РасасдРЬсд даддддддас саадсРддаа аРаааасдЬа сддРддсРдс ассаЬсРдРс 420
еесаРсРРсс сдссаРсрда РдадсадРЬд аааРсРддаа сРдссРсРдР РдедСдссРд 480
сЬдааРаасР РсРаРсссад ададдссааа драсадрдда аддРддаРаа сдсссрссаа 540
РсдддРаасР сссаддадад РдРсасадад саддасадса аддасадсас сРасадссРс 600
адсадсассс РдасдсРдад сааадсадас Расдадааас асааадРсЬа сдссРдсдаа 660
дрсасссарс адддссРдад сРсдсссдРс асааададср Рсаасадддд ададрдерад 720
<210> 13 <211> 468 <212> ΡΚΤ <213> искусственная последовательность <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 13
Мер 1 ©1у Тгр Зег Ьеи 5 11е Ьеи Ьеи РЬе Ьеи 10 Уа1 А1а Уа1 А1а ТЬг 15 Агд
Уа1 Ьеи 5ег С1и Уа1 Ьуз Ьеи <31п С1п Зег С1у Рго С1и Ьеи Уа1 Ьуз
20 25 30
Рго ©1у А1а Зег Уа1 Ьуз Не Зег Суз Ьуз А1а Зег ©1у Туг А1а РЬе
35 40 45
Зег Туг Зег Тгр Мер Азп Тгр Уа1 Ьуз Ьеи Агд Рго С1у <31п <31у Ьеи
50 55 60
О1и Тгр Не С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр <31у Азр ТЬг Азр Туг Азп
65 70 75 80
С1у Ьуз РЬе Ьуз О1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Азп
85 90 95
ТЬг А1а Туг Мее С1п Ьеи ТЬг Зег Ьеи ТЬг Зег Уа1 Азр Зег А1а Уа1
- 5З 015009
100 105 110
Туг Ьеи Суз А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр <31у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр
115 120 125
С1у С1п б1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег А1а А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго
130 135 140
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг
145 150 155 160
А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг
165 170 175
Уа1 Зег Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н18 ТЬг РЬе Рго
180 185 190
А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 01у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг
195 200 205
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп
210 215 220
Ηίε ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз А1а С1и Рго Ьуз Зег
225 230 235 240
Суз Азр Ьуз ТЬг Н1з ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С31и Ьеи Ьеи
245 250 255
С1у С1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи
260 265 270
МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго (31и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег
275 280 285
ΗΪ3 <31и Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 <31и
290 295 300
Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и <31п Туг Азп Зег ТЬг
305 310 315 320
Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Н18 О1п Азр Тгр Ьеи Азп
325 330 335
С1у Ьуз С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго
340 345 350
Не С1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п
355 360 365
Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз АЗП С1п Уа1
370 375 380
Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1
385 390 395 400
<31и Тгр О1и Зег Азп С1у <31п Рго 61и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго
405 410 415
- 54 015009
Рго Уа1 Ьеи Азр 420 Зег Азр Б1у Зег
Уа1 Азр Ьуз 435 Зег Агд Тгр С1п С1п 440
Мер Н13 450 С1и А1а Ьеи ΗΪ3 Азп 455 Шз
5ег 465 Рго С1у Ьуз
РЬе 425 РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз 430 Ьеи ТЬг
С1у Азп Уа1 РЬе Зег 445 Суз Зег Уа1
Туг ТЬг С1п Ьуз 460 Зег Ьеи Зег Ьеи
<210> 14 <211> 239 <212> ΡΚΤ <213> искусственная последовательность <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 14
Мер 1 Азр РЬе С1п Уа1 5 С1п Не Не Зег РЬе 10 Ьеи Ьеи Не Зег А1а 15 Зег
у = 1 Не * с Λ т ΠΊ -,г Λ Не у=1 Ьеи ТЬг С1п ТЬг ТЬг Λ ην. Рго
'-‘‘-Л
20 25 30
Уа1 ТЬг Ьеи Б1у ТЬг Зег А1а Зег Не Зег Суз Агд Зег Зег Ьуз Зег
35 40 45
Ьеи Ьеи Нтз Зег Азп С1у Не ТЬг Туг Ьеи Туг Тгр Туг Ьеи <31п Ьуз
50 55 60
Рго С1у С1п Зег Рго О1п Ьеи Ьеи Не Туг С1п Мер Зег Азп Ьеи Уа1
65 70 75 80
Зег С1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег Зег Зег С1у Зег <31у ТЬг Азр РЬе
85 90 95
ТЬг Ьеи Агд Не Зег Агд Уа1 С1и А1а О1и Азр Уа1 С1у Уа1 Туг Туг
100 105 110
Суз А1а С1п Азп Ьеи С1и Ьеи Рго Туг ТЬг РЬе (31у С1у С1у ТЬг Ьуз
115 120 125
Ьеи С1и Не Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Зег Уа1 РЬе Не РЬе Рго
130 135 140
Рго Зег Азр С1и О1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи
145 150 155 160
Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд О1и А1а Ьуз Уа1 <31п Тгр Ьуз Уа1 Азр
165 170 175
Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр
180 185 190
Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз
195 200 205
- 55 015009
А1а Азр 210 Туг <31и Ьуз Н13 Ьуз 215 Уа1 Туг А1а Суз С1и 220 Уа1 ТЬг ΗΪ8 61п
С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд С1у С1и Суз
- 56 015009
<211> <212> <213> <400> сддаЬЫ 51 ДНК Ми 8 21 зр. ааСЬсааддд с 51
сСддадаЬдд ддабасЬдас ЬасааЬддда
<210> 22
<211> 24
<212> ДНК
<213> Ми 8 зр.
<400> 22
СЬЬссЬддад абддддаЬас Ьдас 24
<210> 23
<211> 30
<212> ДНК
<213> Ми 8 зр.
<400> 23
сддаЬЪЬЬ!с сЬддадаЬдд ддаСасЬдас 30
<210> 24
<211> 30
<212> ДНК
<213> Миз зр.
<400> 24
ааЬдЬсЬЬЬд аЪддЬСасЬд дЬЬадЬРЬас 30
<210> 25
<211> 17
<212> РКТ
<213> Миз зр.
<400> 25
Агд Не РЬе ; Рго С1у Азр <31у Азр ТЬг Азр Туг Азп <31у Ъуз РЬе Ъуз
<210> 28
<211> 10
<212> РКТ
<213> Миз
- 57 015009 <400>28
Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг
510 <210>29 <211>357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223 > химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 29
саддЬдсааЬ ЬддЬдсадЬс СддсдсЬдаа дЪЪаадаадс сЬдддадЬЬс адрдааддрс 60
ЬссРдсаадд сЪРссддаЬа сассЪЬсадс РаРЬсЬЬдда СдадсЬдддС дсддсаддсс 120
ссЬддасаад ддсЬсдадЪд даЬдддасдд аЬсЬЬЪсссд дсдаРдддда ЬасЬдасЬас 180
дсасадаааЪ Ьссааддаад адЬсасааЬЬ ассдссдаса ааЬссасЬад сасадссЪаС 240
арддадсРда дсадссСдад аЬсРдаддас асддссдрдр аРЪасРдЪдс аадаааЬдЪс 300
рррдарддрр асЬддсЬЬдЬ ЬЬасЬддддс садддаассс ЪддЬсассдЬ сЪссЬса 357
<210> 30
<211> 119
<212> РКТ
<213> искусственная
<220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид
<400> 30
С1П 1 Уа1 Θ1Π Ьеи Уа1 5 О1п Зег С1у А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 Зег
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр Мер Зег Тгр Уа1 Агд Θΐη А1а Рго О1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр Мер
35 40 45
С1у Агд Не РНе Рго СПу Азр СПу Азр ТЬг Азр Туг А1а С1п Ьуз РЬе
50 55 60
- 58 015009
С1п 65 О1у Агд Уа1 Ткг 11е 70 ТНг А1а Азр Ьуз Зег 75 Ткг Зег Ткг А1а Туг 80
Мер О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр Ткг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 Рке Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр О1у С1п С1у
т л л ТЛЕ ТТЛ
Ткг Ьеи Уа1 Ткг Уа1 Зег Зег
115 <210> 31 <211> 357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 31
саддкдсаар РддСдсадРс РддсдсРдаа дЬРаадаадс сРдддадЪРс адСдааддЬс 60
РссРдсаадд сЪЬссддаСа сдссССсадс РаРСсЬСдда РдаасЬдддС дсддсаддсс 120
ссРддасаад ддсЬсдадЪд дасдддасдд аРсРССсссд дсдаРдддда ЬасРдаскас 180
ааЪдддааак ксаадддсад адрсасаакк ассдссдаса аакссасЪад сасадсскак 240
аЪддадсЬда дсадссЬдад аСсЪдаддас асддссдРдЬ аЬРасЬдРдс аадаааРдРс 300
ЪЪРдаЬддСЬ асСддсЪРдР РЬасРддддс садддаассс РддЬсассдЬ сЬссЬса 357
<210> 32
<211> 119
<212> РКТ
<213> искусственная
<220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид
<400> 32
<31п Уа1 <31п Ьеи Уа1 <31п Зег С1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго (31у Зег
10 15
- 59 015009
Зег Уа1 Ьуз Уа1 20 Зег Суз Ьуз А1а
Тгр МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а
35 40
<31у Агд Не РЬе Рго <31у Азр С1у
50 55
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а
65 70
Мер О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег
85
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр <31у Туг
100
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
Зег С1у 25 Туг А1а РЬе Зег Туг 30 Зег
Рго С1у С1п <31у Ьеи <31и Тгр Мер
45
Азр ТЬг Азр Туг Азп 61у Ьуз РЬе
6 0
Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
75 80
С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
90 95
Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр О1у <31п О1у
105 110
<210> 33 <211> 366 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 33
саддрдсаар РддРдсадРс РддсдсРдаа дрраадаадс сРдддадРРс адРдааддРс 60
РссРдсаадд сРРссддаРа сдссРРсадс РаРРсРРдда рдаасрдддр дсддсаддсс 120
ссРддасаад ддсрсдадрд дардддасдд аРсРРРсссд дсдардддда РасРдасРас 180
ааРдддаааР Рсаадддсад адРсасааРР ассдссдаса ааРссасРад сасадссРаР 240
арддадсрда дсадссРдад аРсРдаддас асддссдрдр арсрдрдрдс аадаааРдРс 300
РРРдаРддРР асРддсРРдР РРасРддддс садддаассс РддРсассдР сРссРсадсР 360
адсасс 366
- 60 015009 <210> 34 <211> 119 <212> ΡΚΤ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400>34
<31п Уа1 1 <31п Ьеи Уа1 5 С1п Зег <31у А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 Зег
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег б1у Туг А1а РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеЪ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго (Пу (31п <31у Ьеи <31и Тгр мер
35 40 45
СПу Агд Не РЬе Рго СПу Азр С1у Азр ТЬг Азр Туг Азп С1у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Ьеи Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр СЯу С1п СЯу
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210>35 <211>357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 35
- 61 015009
саддДдсааД ДддДдсадДс ДддсдсДдаа дДДаадаадс сДддадсДДс адДдааддДс 60
ДссДдсаадд ДсДссддаДа сдсдДДсадс ДаДДсдДдда ДдаасДдддД дсддсаддсс 120
ссДддасаад ддсДсдадДд даДдддасдд аДсДДДсссд дсдаДдддда ДасДдасДас 180
ааДдддаааД Дсаадддсад адДсасааДД ассдссдаса ааДссасДад сасадссДаД 240
аДддадсДда дсадссДдад аДсДдаддас асддссдДдД адДасДдДдс аадаааДдДс 300
ДДДдаДддДД асДддсДДдД ДДасДддддс садддаассс ДддДсассдД сДссДса 357
<210> 36 <211> 119 <212> ΡΗΤ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 36
Сбп 1 Уаб Сбп Ьеи Уаб 5 Сбп Зег Сбу Аба Сби 10 Уаб Ьуз Ьуз Рго Сбу 15 Аба
Зег Уаб Ьуз Уаб Зег Суз Ьуз Уаб Зег Сбу Туг Аба РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеД Азп Тгр Уа1 Агд Сбп Аба Рго Сбу Сбп Сбу Ьеи Сби Тгр МеД
35 40 45
Сбу Агд Не РЬе Рго Сбу Азр Сбу Азр ТЬг Азр Туг Азп Сбу Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз 61у Агд Уаб ТЬг 11е ТЬг Аба Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг Аба Туг
65 70 75 80
МеД Сби Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Сби Азр ТЬг Аба Уаб Туг Туг Суз
85 90 95
Аба Агд Азп Уа1 РЬе Азр Сбу Туг Тгр Ьеи Уаб Туг Тгр Сбу Сбп Сбу
100 105 110
ТЬг Ьеи Уаб ТЬг Уа1 Зег Зег
- 62 015009
115 <210> 37 <211> 357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400>37
саддЬдсаа! ЬддрдсадЬс ЬддсдсЬдаа дЬЬаадаадс срдддадЕЕс адрдааддЬс 60
ЬссРдсаадд сЬЬссддаРа сдсдЬЬсадс ЬаЬЬсСЬдда ЬдадсЬдддЬ дсддсаддсд 120
ссЬддасаад ддсрсдадрд дардддасдд аЕсЬЕЕсссд дсдаЬдддда ЬасЬдасЬас 180
ааЬдддаааЪ Ьсаадддсад адЬсасааЬР ассдссдаса ааЬссасЬад сасадссЬа! 240
аЬддадсЬда дсадссЬдад аЬсЬдаддас асддссдрд! аРЬасЬдЬдс аадаааРдЬс 300
РЬЬдаЬддСЬ асЬддсСЬдС ЬРасЬддддс садддаассс ЬддЬсассдЬ сЬссЬса 357
<210>38 <211>119 <212> РЕТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 38
σΐη 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег С1у А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 Зег
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр Мер Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго <31у С1п <31у Ьеи <31и Тгр Ме!
35 40 45
<31у Агд Не РЬе Рго С1у Азр (31у Азр ТЬг Азр Туг Азп С1у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд 7а1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
- 63 015009
70 7580
МеЬ <31и Ьеи Зег. Зег 85 Ьеи Агд Зег <31и Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг туг 95 Суз
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у С1п С1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210>39 <211>357 <212> ДНК <213> Искусственная <220>
<223> Химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 39
саддрдсаар ьддкдсадьс ЬддсдсЬдаа дЬЬаадаадс сЪдддадЬЬс адЬдааддЪс 60
ЬссЬдсаадд сЬЬссддаЬа сдссЕЬсадс ЕаЕЪсЬЬдда ЬсааЬЕдддЬ дсддсаддсд 120
ссбддасаад ддсЬсдадЬд даЬдддасдд аЬсЬЬЬсссд дсдаЬдддда СасЬдасЬас 180
ааЪдддаааЬ Ьсаадддсад адЬсасааЫ: ассдссдаса ааЬссасЪад сасадссЬаЬ 240
абддадсЬда дсадссбдад аЬсЬдаддас асддссдЬде аЬЪасбдЬдс аадааабдЬс 300
ЫзЬдаЬддЪР асЬддсЬЬдЬ ЬЬасЬддддс садддаассс СддЬсассдЬ сЬссЬса 357
<210> 40
<211> 119
<212> РКТ
<213> искусственная
<220>
<223> химерный МЫШИНЫЙ- -человеческий полипептид
<400> 40
<31п Уа1 <31п Ьеи Уа1 С1п Зег <31у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго <31у Зег
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе Зег Туг Зег
- 64 015009
20 25 30
Тгр 11е Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго <31у <31п С1у Ьей С1и Тгр Ме!
35 40 45
<31у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр <31у Азр ТЬг Азр Туг Азп С1у Ьуз РЬе
С Λ д д 6 0
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ме! С1и Ьей Зег Зег Ьей Агд Зег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр О1у Туг Тгр Ьей Уа1 Туг Тгр <31у Θΐη С1у
100 105 110
ТЬг Ьей Уа! ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 41 <211> 357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 41
садд!дсаа! ЬддрдсадЬс ЬддсдсЬдаа дПаадаадс сЬдддадРЬс ад!даадд!с 60
!сс!дсаадд с!!ссддаЬа сдссЬЬсадс !а!!с!!дда РсЬсдЬддд! дсддсаддсд 120
ссЬддасаад ддс!сдад!д да!дддасдд а!с!ЬЬсссд дсда!дддда ЪасЬдасЬас 180
аа!дддаааЬ Ьсаадддсад ад!сасааЬ! ассдссдаса аа!ссас!ад сасадсс!а! 240
а!ддадс!да дсадссЬдад аЬсрдаддас асддссдЬд! а!!ас!д!дс аадаааЬдЬс 300
!!!да!дд!Ь ас!ддс!!д! НасЬддддс садддаассс ЬддЬсассд! сЬссЬса 357
<210> 42
<211> 119
<212> РРТ
- 65 015009 <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400>42
С1п 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег <31у А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго (31у 15 Зег
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг А1а РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр 11е Зег Тгр Уа1 Агд Θΐη А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр С1у Азр ТЬг Азр Туг Азп О1у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у Θΐη СЯу
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210>43 <211>357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 43
саддбдсааь ЬддЬдсадЬс ЬддсдсЬдаа дЫаадаадс сЬддсдссЬс адЪдааддЪс 60
ЬссЬдсаадд сЬЬссддаЬа сассЬЬсаса ЬасадсЬдда ЬдаасЬдддЪ дсддсаддсс 120
- 66 015009
ссСддасаад ддсСсдадСд даСдддасдд аЕсЪЕЕсссд дсдаСдддда СасСдасСас 180
ааСдддаааС Ссаадддсад адСсасааСС ассдссдаса ааСссасСад сасадссСаС 240
аСддадсСда дсадссСдад аСсСдаддас асддссдЕдЕ аССасСдСдс аадаааСдСс 300
СССдаСддСС асСддсССдС ССасСддддс садддаассс СддСсассдС сСссСса 357
<210> 44 <211> 119 <212> ΡΚΤ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 44
(31п 1 Уа1 С1П Ьеи Уа1 5 О1п Зег С1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Туг Зег
20 25 30
Тгр Мес Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи О1и Тгр МеС
35 40 45
<31у Агд Не РЬе Рго <31у Азр С1у Азр ТЬг Азр Туг Азп <31у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мес С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег <31и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр <31у <31п <31у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 45 <211> 357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 45
саддРдсааР РддрдсадЬс РддсдсРдаа дСРаадаадс сРддсдссРс адРдааддРс 60
ЬссРдсаадд сРЬссддаРа сассРРсадс ЬаРРсЬРдда РдаасРдддР дсддсаддсс 120
ссРддасаад ддсрсдадрд даРдддасдд аРсеььсссд дсдаЬдддда РасРдасРас 180
аардддааар Рсаадддсад адРсасааРР ассдссдаса ааРссасРад сасадссеар 240
аРддадсРда дсадссРдад аРсРдаддас асддссдрдр аРРасРдСдс аадаааРдРс 300
ЬРедаРддРС асЬддсРРдЬ ЬРасРддддс садддаассс РддРсассдР сРссЬса 357
<210> 46 <211> 119 <212> ΡΕΤ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 46
©1п 1 Уа1 <31п Ьеи Уа1 5 Θΐη Зег С1у
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а
20
Тгр Мер Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а
35 40
С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр С1у
50 55
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а
65 70
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег
А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 А1а
Зег 25 С1у Туг ТЬг РЬе Зег 30 Туг Зег
Рго <31у С1п <31у Ьеи 45 С1и Тгр Мер
Азр ТЬг Азр Туг 60 Азп (31у Ьуз РЬе
Азр Ьуз Зег 75 ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 80
<31и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
- 68 015009
А1а Агд Азп Уа1 Рке Азр <31у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у <31п С1у
100 105110
Ткг Ьеи Уа1 Ткг Уа1 Зег Зег
115 <210>47 <211>357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400>47
саддРдсааР РддРдсадРс РддсдсРдаа дРРаадаадс сРддддссРс адРдааддРс 60
РссРдсаадд сРРссддаРа сассРРсасс РаРРсРРдда РдсасРдддР дсддсаддсс 120
ссрддасаад ддсРсдадрд дардддасдд аРсРРРсссд дсдаРдддда РасрдасРас 180
дсасадаааР Рссааддаад адрсасаард асасдддаса сдРссасРРс сассдРсРаР 240
аРддадсРда дсадссРдад аРсРдаддас асддссдрдр аРРасРдРдс аадааардрс 300
рррдарддрр асрддсррдр РРасРддддс садддаассс РддРсассдР сРссРса 357
<210>48 <211>119 <212> РЕТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400? 48
С1п Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег О1у А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго <31у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг Ткг Рке Ткг Туг Зег
20 25 30
Тгр Мер Н13 Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у О1п С1у Ьеи С1и Тгр Мер
- 69 015009
35 40 45
С1у Агд 11е РЬе Рго О1у Азр С1у Азр ТЬ-г Азр Туг А1а С1п Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЯу Агд Уа1 ТЬг Мер ТЬг Агд Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у С1п С1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 49 <211> 357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 49
даддРдсааР рддрдсадрс РддсдсРдаа дРРаадаадс сРддддссас сдРдаадаРс 60
РссРдсаадд РдРссддаРа сассРРсасс РаРРсРРдда рдсасрдддр дсадсаддсс 120
ссрддааадд ддсРсдадРд даРдддасдд аРсРРРсссд дсдаРдддда РасРдасРас 180
дсададааар Рссааддаад адРсасааРс асадссдаса сдРссасРда сассдссРаР 240
аРддадсРда дсадссрдад аРсРдаддас асддссдрдр аРРасРдРдс аассаардрс 300
РРРдаРддРР асРддсРРдР РРасРддддс садддаассс рддрсассдр сРссРса 357
<210> 50
<211> 119
<212> РКТ
<213> искусственная
<220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид
- 70 015009 <400> 50
<31и Уа1 1 е1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег С1у А1а <31и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 А1а
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз Уа1 Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Туг Зег
20 25 30
Тгр Мер Н1з Тгр Уа1 С1п С1п А1а Рго <31у Ьуз <31у Ьеи <31и Тгр Мер
35 40 45
С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр С1у Азр ТЬг Азр Туг А1а О1и Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег <31и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а ТЬг Азп Уа1 РЬе Азр О1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у (31п С1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 51 <211> 357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 51
даддрдсаар рддрдсадрс РддсдсРдаа дРРаадаадс сРддддссас сдРдаадаРс 60
РссРдсаадд РдРссддаРа сассррсасс РаРРсРРдда РдаасРдддР дсадсаддсс 120
ссРддааадд ддсРсдадРд даРдддасдд аРсРРРсссд дсдаРдддда РасРдасРас 180
аардддааар Рсаадддаад адРсасааРс асадссдаса сдРссасРда сассдссРаР 240
- 71 015009 абддадсбда дсадссбдад абсбдаддас асддссдбдб аббасбдбдс аассаабдбс 300 бббдабддбб асбддсббдб ббасбддддс садддаассс бддбсассдб сбссбса357 <210>52 <211>119 <212> РЕТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 52
С1и 1 Уа1 СЯп Ьеи Уа1 5 С1п Зег С1у А1а С1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЯу 15 А1а
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз Уа1 Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Туг Зег
20 25 30
Тгр Меб Азп Тгр Уа1 СЯп СЯп А1а Рго СЯу Ьуз О1у Ьеи 61и Тгр Меб
35 40 45
СЯу Агд Не РЬе Рго СЯу Азр <31у Азр ТЬг Азр Туг Азп СЯу Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз О1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб СЯи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЯи Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а ТЬг Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр СЯу О1п СЯу
100 105 но
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 53
<211> 366
<212> днк
<213> икусственная
- 72 015009 <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 53
садаЕдсааЕ ЕддЕдсадЕс ЕддсдсЕдаа дЕЕаадаада ссдддадЕЕс адЕдааддЕс 60
СссЕдсаадд сЕЕссддаЕа сассЕЕсасс ЕаЕЕсЕЕдда ЕдадсЕдддЕ дсддсаддсс 120
ссЕддасаад ддсЕсдадЕд даЕдддасдд аЕсЕЕЕсссд дсдаЕдддда ЕасЕдасЕас 180
дсасадаааЕ Ьссааддаад адЕсасааЕЕ ассдссдаса ааЕссасЕад сасадссЕаЕ 240
аЕддадсЕда дсадссрдад аЕсЕдаддас асддссдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс аадаааЕдЕс 300
ЕЕЕдаЕддЕЕ асЕддсЕЕдЕ ЕЕасЕддддс садддаассс ЕддЕсассдЕ сЕссЕсадсЕ 360
адсасс 366
<210> 54
<211> 119
<212> РКТ
<213> искусственная
<400>
О1п 1 МеЕ С1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег С1у А1а О1и Уа1 10 Ьуз Ьуз ТЬг О1у 15 Зег
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Туг Зег
20 25 30
Тгр МеЕ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЕ
35 40 45
С1у Агд 11е РЬе Рго <31у Азр О1у Азр ТЬг Азр Туг А1а С1п Ьуз РЬе
50 55 60
С1п 61у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Аба Агд Азп Уаб РЬе Азр Сбу Туг Тгр Ьеи Уаб Туг Тгр Сбу Сбп Сбу
100 105110
ТЬг Ьеи Уаб ТЬг Уаб Зег Зег
115 <210>55 <211>357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 55
даадддсадс ДддДддадДс дддаддаддс ДДддДсаадс сДддсдддДс ссДдсддсДс 60
ДссДдДдсад ссДсДддаДД сасаДДДадс ДаДДсДДдда ДдаасДдддД дсддсаддсД 120
ссДддааадд дссДсдадДд ддДдддасдд аДсДДДсссд дсдаДдддда ДасДдасДас 180
ааДдддаааД Дсаадддсад адДсасааДД ассдссдаса ааДссасДад сасадссДаД 240
аДддадсДда дсадссДдад аДсДдаддас асддссдДдД аДДасДдДдс аадаааДдДс 300
ДДДдаДддДД асДддсДДдД ДДасДддддс садддаассс ДддДсассдД сДссДса 357
<210> 56 <211> 119 <212> РКТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 56
Сби 1 Уаб Сбп Ьеи Уаб 5 Сби Зег Сбу Сбу Сбу Ьеи 10 Уаб Ьуз Рго Сбу 15 Сбу
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз Аба Аба Зег Сбу РЬе ТЬг РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеД Азп Тгр Уаб Агд Сбп Аба Рго Сбу Ьуз Сбу Ьеи Сби Тгр Уаб
35 40 45
- 74 015009
С1у Агд 50 Не РЬе Рго Б1у Азр 55 О1у Азр ТЬг Азр Туг 60 Азп С1у Ьуз РЬе
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у С1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 57 <211> 456 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 57
сддааРРсдд сссассддрд дссассаРдд асрддассрд даддарссрс ррсррддрдд 60
садсадссас аддадсссас РссдаадРдс адсрддрдда дрсрддадда ддсррддрса 120
адссРддсдд дРсссРдсдд сРсРссРдрд садссРсРдд аРРсдсаРРс адсРаРРсРР 180
ддаРдаасРд ддрдсддсад дсрссрддаа адддссРсда дрдддрддда сддаРсРРРс 240
ссддсдардд ддаРасРдас РасааРддда ааРРсааддд сададрсаса аРРассдссд 300
асаааРссас Радсасадсс РаРаРддадс РдадсадссР дадаРсРдад дасасддссд 360
РдРаРРасРд РдсаадаааР дРсРРРдаРд дррасрддср РдРРРасРдд ддссадддаа 420
сссРддРсас сдРсРссРса дсРадсдааР РсРсда 456
<210> 58
<211> 119
<212> РКТ
<213> искусственная
- 75 015009 <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400>58
<31и 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 б1и Зег (31у С1у С1у 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго С1у 15 <31у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе А1а РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр С1у Азр ТЬг Азр Туг Азп С1у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз <31у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр (31у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у 61п С1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210>59 <211>357 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 59
саддЬдсадс ьддьддадьс Ьддаддаддс ЬЬддЬсаадс сЬддсдддЬс ссЪдсддсЬс 60
ЬссЬдЬдсад ссЬсЬддаЬЬ сасаЬЫзадс ЬаЫзсЬСдда ЬдаасЬдддЬ дсддсаддсЬ 120
ссЬддааадд дссЬсдадЬд ддьдддасдд аЬсЬЬЬсссд дсдаЬдддда ЬасЬдасЬас 180
- 76 015009
аабдддаааЬ Ьсаадддсад адЬсасааЬЬ ассдссдаса ааЬссасЬад сасадссбаЬ 240
аЬддадсЬда дсадссбдад аЬсЬдаддас асддссдСдЬ аЬЬасбдЬдс аадаааЬдЬс 300
СЬЬдаЬддес асЬддсЫдЬ ееасьддддс садддаассс ХддСсассдС сСссЬса 357
<210> 60 <211> 119 <212> ΡΚΤ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 60
С1п 1 УаХ СХп Ьеи УаХ 5 СХи Зег СХу СХу СХу 10 Ьеи УаХ Ьуз Рго СХу 15 СХу
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АХа АХа Зег СХу РЬе ТЬг РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеЬ Азп Тгр УаХ Агд СХп АХа Рго СХу Ьуз СХу Ьеи СХи Тгр УаХ
35 40 45
С1у Агд 1Хе РЬе Рго СХу Азр СХу Азр ТЬг Азр Туг Азп СХу Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз СХу Агд УаХ ТЬг 1Хе ТЬг АХа Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг АХа Туг
65 70 75 80
МеС. СХи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СХи Азр ТЬг АХа УаХ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп УаХ РЬе Азр СХу Туг Тгр Ьеи УаХ Туг Тгр СХу СХп СХу
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 61 <211> 456 <212> ДНК
- 77 015009 <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 61
сддааеесдд сссассддед дссассаедд аседдассед даддаессес еесееддедд 60
садсадссас аддадсесас ессдаадедс адсесдедда деседдадса ддсееддеса 120
адссЬддсдд дессседсдд сесесседсд садссСседд аеесасаеее адсеаеесее 180
ддаедаасед ддЬдсддсад дсесседдаа адддссесда дедддеддда сддаесееес 240
ссддсдаедд ддаеаседас еасааеддда ааеесааддд сададесаса аееассдссд 300
асаааессас еадсасадсс еаеаеддадс едадсадссе дадаЬседад дасасддссд 360
едеаееасед едсаадааае десееедаед дееаседдсе едеееаседд ддссадддаа 420
ссседдесас сдесессеса дсеадсдаае есесда 456
<210> 62 <211> 119 <212> РКТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 62
<31и 1 Уа1 σΐη Ьеи Уа1 5 С1и Зег С1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а
20
Тгр МеЬ Азп Тгр Уа1 Агд С1п А1а
35 40
С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр О1у
50 55
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а
65 70
А1а СЯу 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго О1у 15 СЯу
Зег 25 С1у РЬе ТЬг РЬе Зег 30 Туг Зег
Рго С1у Ьуз О1у Ьеи 45 <31и Тгр МеЬ
Азр ТЬг Азр Туг 60 Азп С1у Ьуз РЬе
Азр Ьуз Зег 75 ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 80
- 78 015009
Ме! С1и Ьей Зег Зег 85 Ъеи Агд Зег С1и Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг Туг 95 Суз
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьей Уа1 Туг Тгр С1у С1п С1у
100 105 но
ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 63 <211> 456 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 63
сддааЬЬсдд сссассддЬд дссассаЪдд асЬддассСд даддаЬссЬс ГЬсЪЪддЬдд 60
садсадссас аддадсЪсас ЬссдаадЬдс адсЬсдЪсда дЬсЬддадда ддсдЬддеса 120
адссЬддсдд дЪсссЪдсдд сЬсЬссЬдсд садссЪсЬдд аЬСсаса!!! адсЪаПсЬЬ 180
ддаЬдаасРд ддрдсддсад дсЬссрддаа адддссЬсда дЬдддЬддда сддаЬсЬЬЬс 240
ссддсдаЬдд ддаЪасЬдас ЬасааЬддда ааЬЬсааддд сададЬсаса аЬЬассдссд 300
асаааЬссас Ьадсасадсс РаЬаЬддадс Ъдадсадсс! дадаЬсЬдад дасасддссд 360
ЬдЬаЪЬасЪд Ьдсаадааа! дЬсЬЬЬдаЪд дЪЬасЬддс! ЬдЬЬЬасЬдд ддссадддаа 420
сссЬддЬсас сдЬсЪссЬса дсЬадсдаа! ЬсЬсда 456
<210> 64
<211> 119
<212> РЕТ
<213> искусственная
<220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид
<400> 64
С1и Уа1 С1п Ьей Уа1 С1и Зег <31у С1у <31у Уа1 Уа1 Ьуз Рго <31у С1у
10 15
- 79 015009
Зег Ьеи Агд Ьеи 20 Зег Суз Аба Аба Зег 25 Сбу РЬе ТЬг РЬе Зег 30 Туг Зег
Тгр МеД Азп Тгр Уаб Агд Сбп Аба Рго Сбу Ьуз Сбу Ьеи Сби Тгр МеД
35 40 45
Сбу Агд 1бе РЬе Рго Сбу Азр Сбу Азр ТЬг Азр Туг Азп Сбу Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз Сбу Агд Уаб ТЬг 1бе ТЬг Аба Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг Аба Туг
65 70 75 80
МеД Сби Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Сби Азр ТЬг Аба Уаб Туг Туг Суз
85 90 95
Аба Агд Азп Уаб РЬе Азр Сбу Туг Тгр Ьеи Уаб Туг Тгр Сбу Сбп Сбу
100 105 110
ТЬг Ьеи Уаб ТЬг Уаб Зег Зег
115 <210> 65 <211> 456 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 65
сддааДДсдд сссассддДд дссассаДдд асДддассДд даддаДссДс ДДсДДддДдд 60
садсадссас аддадсДсас ДссдаадДдс адсДддДсда дДссддадда ддсДДдаада 120
адссДддсдд дДсссДдсдд сДсДссДдсд садссДсДдд аДДсасаДДД адсДаДДсДД 180
ддаДдаасДд ддДдсддсад дсДссДддаа адддссДсда дДдддДддда сддадсдддс 240
ссддсдаДдд ддаДасДдас ДасааДддда ааДДсааддд сададДсаса аДДассдссд 300
асаааДссас Дадсасадсс ДаДаДддадс ДдадсадссД дадаДсДдад дасасддссд 360
ДдДаДДасДд ДдсаадаааД дДсДДДдаДд дДДасДддсД ДдДДДасДдд ддссадддаа 420
- 80 015009 сссРддРсас сдРсРссРса дсРадсдаар РсРсда
456 <210> 66 <211> 119 <212> РКТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400>66
О1и Уа1 1 С1п Ьеи Уа1 5 С1и Зег 61у С1у <31у 10 Ьеи Ьуз Ьуз Рго С1у 15 <31у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеР Азп Тгр Уа1 Агд <31п А1а Рго С1у Ьуз <31у Ьеи С1и Тгр Мер
35 40 45
<31у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр <31у Азр ТЬг Азр Туг Азп С1у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег (31и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр О1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у С1п С1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210>67 <211>456 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК
- 81 015009 <400> 67
сддааРРсдд сссассддРд дссассардд асРддассРд даддаРссРс РРсРРддРдд 60
садсадссас аддадсссас РссдаадРдс адсРддРдда дРсРддадда ддсРРддРса 120
адссрддсрс РРсссРдсдд сРсРссРдсд садссРсРдд аРРсасаРРР адсРаРРсРР 180
ддаРдаасРд ддрдсддсад дсРссРддаа адддссРсда дрдддрддда сддаРсРРРс 240
ссддсдаРдд ддаРасРдас РасааРддда ааРРсааддд сададРсаса аРРассдссд 300
асаааРссас Радсасадсс РаРаРддадс РдадсадссР дадарсрдад дасасддссд 360
РдРарРасРд РдсаадаааР дРсРРРдаРд дРРасРддсР рдрррасрдд ддссадддаа 420
сссРддРсас сдрсрссрса дсРадсдааР РсРсда 456 <210> 68 <211> 119 <212> РКТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 68
С1и 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 <31и Зег С1у С1у <31у 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго С1у 15 Зег
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Рке Ткг Рке Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр Мер Азп Тгр Уа1 Агд Θΐη А1а Рго С1у Ьуз О1у Ьеи С1и Тгр Мер
35 40 45
С1у Агд Не Рке Рго О1у Азр О1у Азр Ткг Азр Туг Азп С1у Ьуз Рке
50 55 60
Ьуз <31у Агд Уа1 Ткг 11е Ткг А1а Азр Ьуз Зег Ткг Зег Ткг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр Ткг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
- 82 015009
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр С1у С1п (31у
100 105110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 5ег Зег
115 <210>69 <211>456 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 69
сддааРРсдд сссассддрд дссассардд асРддассРд даддарссрс РРсРРддРдд 60
садсадссас аддадсссас РссдаадРдс адсрддрдда дрсрддадда ддсРРддРса 120
адссРддсдд дРсссРдсдд дрсадсрдсд садссРсРдд аРРсасаРРР адсРаРРсРР 180
ддаРдаасРд ддрдсддсад дсРссРддаа адддссрсда дрдддрддда сддаРсРРРс 240
ссддсдаРдд ддаРасРдас РасааРддда ааРРсааддд сададРсаса аРРассдссд 300
асаааРссас Радсасадсс РаРаРддадс рдадсадсср дадаРсРдад дасасддссд 360
рдРаРРасРд РдсаадаааР дРсРРРдаРд дРРасРддсР РдРРРасРдд ддссадддаа 420
сссРддРсас сдРсРссРса дсРадсдаар РсРсда 456
<210> 70 <211> 119 <212> РКТ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400> 70
<31и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у <31у 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго <31у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Уа1 Зег Суз А1а А1а Зег <31у РЬе ТЬг РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
- 83 015009
Тгр Мер Азп 35 Тгр Уа1 Агд С1п А1а 40 Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и 45 Тгр Мер
С1у Агд 11е РЬе Рго С1у Азр С1у Азр ТЬг Азр Туг Азп С1у Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мер С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп Уа1 РЬе Азр С1у Туг Тгр Ьеи Уа1 Туг Тгр <31у О1п О1у
100 105 110
ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 71 <211> 456 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400> 71
сддааРРсдд сссассддрд дссассардд асрддассрд даддаРссРс РРсРРддРдд 60
садсадссас аддадсссас РссдаадРдс адсРддРдда дРсРддадда ддсРРддРса 120
адссрддсдд дРсссРдсдд сРсРссРдсд садссрсрдд аРРсасаРРР адсРаРРсРР 180
ддаРдаасРд ддрдсддсад дсРссРддаа адддссРсда дрдддрддда сддаРсРРРс 240
ссддсдаРдд ддаРасРдас РасааРддда ааРРсааддд сададРсаса аРРассдссд 300
асааарссас Радсасадсс РаРаРддадс РдадсадссР дадаРсРдад дасасддссд 360
РдРаРРасРд РдсаадаааР дРсРРРдаРд дРРасРддсР РдРРРасРдд ддссадддаа 420
сссРддРсас сдРсРссРса дсРадсдааР РсРсда 456
<210> 72
- 84 015009 <211> 119 <212> ΡΚΤ <213> искусственная <220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400>72
СЬи УаЬ 1 СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 10 Ьеи УаЬ Ьуз Рго СЬу 15 СЬу
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Туг Зег
20 25 30
Тгр МеЬ Азп Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мер
35 40 45
СЬу Агд 1Ье РЬе Рго СЬу Азр СЬу Азр ТЬг Азр Туг Азп СЬу Ьуз РЬе
50 55 60
Ьуз СЬу Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр Ьуз Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеС СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азп УаЬ РЬе Азр СЬу Туг Тгр Ьеи УаЬ Туг Тгр СЬу СЬп СЬу
10 0 1 ЛС Ч Ч А
ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210>73 <211>57 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз <400>73 аЬддасСдда ссСддаддаС ссСсЬСсСЬд дрддсадсад ссасаддадс ссасСсс <210>74 <211>19
- 85 015009
<212> РКТ
<213> Ното зарЬепз
<400> 74
Меб Азр Тгр ТЬг Тгр Агд 11е Ьеи РЬе Ьеи Уа1 А1а А1а А1а ТЬг С1у
1 5 10 15
А1а Н1з Зег <210> 75 <211> 345 <212> ДНК <213> искусственная <220>
<223> химерная мышиная-человеческая ДНК <400>75
дабабсдбда бдасссадас бссасбсбсс сбдсссдбса ссссбддада дсссдссадс 60
аббадсбдса ддбсбадсаа дадссбсббд сасадсаабд дсабсасбба бббдбаббдд 120
бассбдсааа адссадддса дбсбссасад сбссбдаббб абсааабдбс саассббдбс 180
бсбддсдбсс сбдассддбб сбссддабсс дддбсаддса сбдабббсас асбдаааабс 240
адсадддбдд аддсбдадда бдббддадбб баббасбдсд сбсадаабсб адаасббссб 300
басассббсд дсддадддас сааддбддад абсааасдба сддбд 345
<210> 76
<211> 115
<212> РКТ
<213> искусственная
<220>
<223> химерный мышиный-человеческий полипептид <400>76
Азр 11е Уа1 Меб ТЬг <31п ТЬг Рго Ьеи Зег Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго <31у
1015
- 86 015009
Азп С1у Не 35 ТЬг Туг Ьеи Туг Тгр 40 Туг Ьеи С1п Ьуз Рго 45 С1у С1п Зег
Рго С1п Ьеи Ьеи 11е Туг <31п МеЪ Зег Азп Ьеи Уа1 Зег С1у Уа1 Рго
50 55 60
Азр Агд РЬе Зег С1у Зег 61у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е
65 70 75 80
Зег Агд Уа1 С1и А1а <31и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз А1а С1п Азп
85 90 95
Ьеи Й1и Ьеи Рго Туг ТЬг РЬе 61у С1у <31у ТЬг Ьуз Уа1 01и 11е Ьуз
100 105 110
Агд ТЬг Уа1
115 <210>77 <211> 66 <212> ДНК <213 > Ното зархепз <400>77 аЪддасаЬда дддСссссдс ЬсадсСссРд ддссРссЬдс ЬдсЬсЬддЬР сссаддрдсс60 аддЬдЬ
<210> 78
<211> 22
<212> РЕТ
<213> Ното заргепз
<400> 78
МеЬ Азр МеР Агд Уа1 Рго А1а С1п Ьеи Ьеи С1у Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Тгр
1015
РЬе Рго <31у А1а Агд Суз

Claims (55)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Сконструированное антитело типа II к СИ20, обладающее повышенной ДОСС без существенной потери способности индуцировать апоптоз клеток-мишеней, экспрессирующих СИ20, содержащее гипервариабельный участок (СЭК) Β-Ру! антитела мыши, который выбран из группы, включающей СЭК1 81 У) ГО N0: 15, 81 У) ГО N0: 16 или 81 У) ГО N0: 17 тяжелой цепи; СИК2 81 У) ГО N0: 25, 81 У) ГО N0: 26 или 8Е0 ГО N0: 27 тяжелой цепи; СИКЗ 8Е0 ГО N0: 28 тяжелой цепи; СИК1 8Е0 ГО N0: 18 легкой цепи; СО1\2 8Е0 ГО N0: 19 легкой цепи и СИКЗ 8Е0 ГО N0: 20 легкой цепи, причем антитело имеет Рсобласть или область, эквивалентную Рс-области иммуноглобулина, с модифицированными олигосахаридами.
  2. 2. Антитело по п.1, где антитело включает СЭК1 8Е0 ГО N0: 15, 8Е0 ГО N0: 16 или 8Е0 ГО N0: 17 тяжелой цепи; С01\2 8Е0 ГО N0: 25, 8Е0 ГО N0: 26 или 8Е0 ГО N0: 27 тяжелой цепи; С01\З 8Е0 ГО N0: 28 тяжелой цепи.
  3. 3. Антитело по п.2, дополнительно включающее СЭК1, СЭК2 и СЭКЗ легкой цепи, имеющие 8Е0
    - 87 015009
    ΙΌ ΝΟ: 18, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 19 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 20 соответственно.
  4. 4. Антитело по п.1, где указанное антитело было сконструировано так, что имеет повышенное содержание бисекционных (разветвленных) комплексных олигосахаридов.
  5. 5. Антитело по п.1, где указанное антитело было сконструировано так, что имеет уменьшенное содержание остатков фукозы.
  6. 6. Антитело по п.1, включающее полипептид, который содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из последовательностей, включающих δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 30; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 32; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 34; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 36; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 38; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 40; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 42; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 44; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 46; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 48; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 50; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 52; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 54; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 56; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 58; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 60; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 62; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 64; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 66; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 68; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 70 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 72.
  7. 7. Антитело по п.3, где указанное антитело включает полипептид, который содержит последовательность вариабельной области легкой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 76.
  8. 8. Антитело по п.1, где указанное антитело является гуманизированным антителом, включающим:
    а) последовательность, содержащую СОК1 тяжелой цепи, который выбран из группы, включающей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 15, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 16 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 17; и
    б) последовательность, содержащую СОК2 тяжелой цепи, который выбран из группы, включающей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 25, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 26 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 27; и
    в) СОК3 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 28 тяжелой цепи.
  9. 9. Антитело по п.1, где указанное антитело является гуманизированным антителом, включающим последовательность, содержащую СОК1 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 18 легкой цепи; СОК2 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 19 легкой цепи и СОК3 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 20 легкой цепи.
  10. 10. Антитело по п.1, где указанное антитело включает первый выделенный полипептид, включающий последовательность гипервариабельного участка вариабельной области тяжелой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 40 и второй выделенный полипептид, который включает последовательность гипервариабельного участка вариабельной области легкой цепи δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 76.
  11. 11. Антитело по п.1, в котором по меньшей мере 20% олигосахаридов в Ес-области являются бисекционными (разветвленными) нефукозилированными.
  12. 12. Антитело по п.1, в котором по меньшей мере 50% олигосахаридов в Ес-области являются бисекционными (разветвленными) нефукозилированными.
  13. 13. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, которая кодирует гипервариабельный участок вариабельной области тяжелой цепи по п.6, включающий последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности, которая выбрана из группы, включающей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 29; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 31; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 33; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 35; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 37; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 39; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 41; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 43; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 45; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 47; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 49; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 51; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 53; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 55; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 57; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 59; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 61; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 63; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 65; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 67; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 69 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 71.
  14. 14. Выделенный полинуклеотид по п.13, включающий последовательность, которая выбрана из группы, включающей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 29; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 31; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 33; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 35; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 37; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 39; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 41; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 43; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 45; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 47; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 49; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 51; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 53; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 55; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 57; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 59; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 61; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 63; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 65; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 67; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 69 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 71.
  15. 15. Выделенный полинуклеотид по п.13, включающий последовательность, которая кодирует полипептид, имеющий последовательность, которая выбрана из группы, включающей δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 30; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 32; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 34; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 36; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 38; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 40; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 42; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 44; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 46; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 48; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 50; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 52; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 54; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 56; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 58; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 60; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 62; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 64; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 66; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 68; δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 70 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 72, где указанный полипептид имеет консервативные замены аминокислот.
  16. 16. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, кодирующую гипервариабельный участок вариабельной области легкой цепи по п.7, включающий последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 75.
  17. 17. Полинуклеотид по п.16, включающий δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 75.
  18. 18. Полинуклеотид по п.16, включающий последовательность, которая кодирует полипептид, имеющий последовательность δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 76, где указанный полипептид имеет консервативные аминокислотные замены.
  19. 19. Гуманизированное антитело типа ΙΙ к СО20, включающее вариабельную область В-Ьу1 антитела мыши, которая содержит СОК1 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 15, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 16 и δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 17 тяжелой цепи, СОК2 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 25, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 26 или δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 27 тяжелой цепи и СОК3 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 28 тяжелой цепи, где указанное антитело способно индуцировать апоптоз при инкубировании с СО20-позитивными человеческими клетками по отношении к контролю при идентичных условиях с использованием химерного ΙβΟ1 антитела С2В2, последовательность которого идентична последовательности ритуксимаба.
  20. 20. Антитело по п.19, содержащее СОК1, СОК2 и СОК3 тяжелой цепи, которые имеют последова
    - 88 015009 тельности 8ЕО ГО N0: 16, 8ЕЦ ГО N0: 26 и 8ЕЦ ГО N0: 28 соответственно.
  21. 21. Антитело по п.19 или 20, дополнительное содержащее вариабельную область В-Ьу1 антитела мыши, содержащую СЭК1, СЭЕ2 и СЭЕ3 легкой цепи, которые имеют последовательности 8ЕЦ ГО N0: 18, 8ЕЦ ГО N0: 19 и 8ЕЦ ГО N0: 20 соответственно.
  22. 22. Антитело по п.19, включающее вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, которая включает 8ЕО ГО N0: 30, 8Ер ГО N0: 32, 8Ер ГО N0: 34, 8Ер ГО N0: 36, 8Ер ГО N0: 38, 8ЕО ГО
    N0: 40, 8ЕО ГО N0: 42, 8ЕО ГО N0: 44, 8ЕО ГО N0: 46, 8ЕО ГО N0: 48, 8ЕО ГО N0: 50, 8ЕО ГО N0: 52,
    8ЕО ГО N0: 54, 8ЕО ГО N0: 56, 8ЕО ГО N0: 58, 8ЕО ГО N0: 60, 8ЕО ГО N0: 62, 8ЕО ГО N0: 64, 8ЕО ГО
    N0: 66, 8ЕО ГО N0: 68, 8ЕО ГО N0: 70 и 8ЕО ГО N0: 72.
  23. 23. Антитело по п.19, где указанное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 40.
  24. 24. Антитело по п.21, где указанное антитело включает вариабельную область легкой цепи 8Е0 ГО N0: 76.
  25. 25. Антитело по п.19, включающее полипептид, который содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи 8Е0 ГО N0: 40, и полипептид, который содержит последовательность вариабельной области легкой цепи 8Е0 ГО N0: 76.
  26. 26. Антитело по любому из пп.19-25, содержащее подвергнутую гликоинжинирингу Ес-область.
  27. 27. Антитело по п.26, которое имеет повышенное количество бисекционных (разветвленных) нефукозилированных олигосахаридов.
  28. 28. Антитело по п.26, которое имеет пониженное количество бисекционных (разветвленных) нефукозилированных олигосахаридов.
  29. 29. Антитело по п.26, которое обладает значительно более высокой степенью связывания с рецепторами ЕсуКШ по отношению к антителу, которое не повергалось гликоинжинирингу.
  30. 30. Антитело по п.26, указанное антитело обладает значительно более высокой степенью АЭСС активности по отношению к антителу, которое не повергалось гликоинжинирингу.
  31. 31. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи по п.22, где указанный полинуклеотид включает последовательность, имеющую по меньшей мере 80%-ную идентичность с последовательностями, выбранными из группы, включающей 8ЕО ГО N0: 29, 8ЕО ГО N0: 31, 8ЕО ГО N0: 33, 8ЕО ГО N0: 35, 8ЕО ГО N0: 37, 8ЕО ГО N0: 39, 8ЕО ГО N0: 41, 8ЕО ГО N0: 43, 8ЕО ГО N0: 45, 8ЕО ГО N0: 47, 8ЕО ГО N0: 49, 8ЕО ГО N0: 51, 8ЕО ГО N0: 53, 8ЕО ГО N0: 55, 8ЕО ГО N0: 57, 8ЕО ГО N0: 59, 8ЕО ГО N0: 61, 8ЕО ГО N0: 63, 8ЕО ГО N0: 65, 8ЕО ГО N0: 67, 8ЕО ГО N0: 69 и 8ЕО ГО N0: 71.
  32. 32. Выделенный полинуклеотид по п.31, включающий последовательность, выбранную из группы, включающей 8ЕО ГО N0: 29, 8ЕО ГО N0: 31, 8ЕО ГО N0: 33, 8ЕО ГО N0: 35, 8ЕО ГО N0: 37, 8ЕО ГО N0: 39, 8ЕО ГО N0: 41, 8ЕО ГО N0: 43, 8ЕО ГО N0: 45, 8ЕО ГО N0: 47, 8ЕО ГО N0: 49, 8ЕО ГО N0: 51, 8ЕО ГО N0: 53, 8ЕО ГО N0: 55, 8ЕО ГО N0: 57, 8ЕО ГО N0: 59, 8ЕО ГО N0: 61, 8ЕО ГО N0: 63, 8ЕО ГО N0: 65, 8ЕО ГО N0: 67, 8ЕО ГО N0: 69 и 8ЕО ГО N0: 71.
  33. 33. Выделенный полинуклеотид по п.31, где указанный полинуклеотид включает последовательность, кодирующую полипептид, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей 8ЕО ГО N0: 30, 8ЕО ГО N0: 32, 8ЕО ГО N0: 34, 8ЕО ГО N0: 36, 8ЕО ГО N0: 38, 8ЕО ГО N0: 40, 8ЕО ГО N0: 42, 8ЕО ГО N0: 44, 8ЕО ГО N0: 46, 8ЕО ГО N0: 48, 8ЕО ГО N0: 50, 8ЕО ГО N0: 52, 8ЕО ГО N0: 54, 8ЕО ГО N0: 56, 8ЕО ГО N0: 58, 8ЕО ГО N0: 60, 8ЕО ГО N0: 62, 8ЕО ГО N0: 64, 8Е0 ГО N0: 66, 8ЕЦ ГО N0: 68, 8ЕЦ ГО N0: 70 и 8ЕЦ ГО N0: 72, где указанный полипептид имеет консервативные аминокислотные замены.
  34. 34. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи по п.24, где указанный полинуклеотид включает последовательность, имеющую по меньшей 80%-ную идентичность с 8ЕЦ ГО N0: 75.
  35. 35. Полинуклеотид по п.34, включающий 8ЕЦ ГО N0: 75.
  36. 36. Полинуклеотид по п.34, включающий последовательность, которая кодирует полипептид, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 76, где указанный полипептид имеет консервативные аминокислотные замены.
  37. 37. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.13-18 или 31-36.
  38. 38. Клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор по п.37.
  39. 39. Клетка-хозяин, обеспечивающая экспрессию по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью в(1,4)-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазы III, в количестве, которое является достаточным для модификации олигосахаридов в Ес-области полипептида, продуцируемого клеткойхозяином, где полипептид представляет собой антитело по любому из пп.6-10 или 26-30.
  40. 40. Клетка-хозяин по п.39, где указанное продуцируемое клеткой-хозяином антитело обладает в результате модификации повышенной аффинностью к связыванию с Ес-рецептором.
  41. 41. Клетка-хозяин по п.40, где указанный Ес-рецептор является ЕсуКША рецептором.
  42. 42. Клетка-хозяин по п.39, где указанное продуцируемое клеткой-хозяином антитело проявляет в
    - 89 015009 результате модификации повышенную эффекторную функцию.
  43. 43. Клетка-хозяин по п.42, где повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную способность к непосредственной передаче сигнала, индуцирующего апоптоз.
  44. 44. Клетка-хозяин по п.39, содержащая по меньшей мере один встроенный путем трансфекции полинуклеотид, который кодирует полипептид по одному из пп.6-10 или 26-30, причем этот полинуклеотид содержит последовательность, кодирующую область, эквивалентную Рс-области человеческого иммуноглобулина.
  45. 45. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-12 или 19-30 и фармацевтически приемлемый носитель.
  46. 46. Способ лечения нарушения, которое можно лечить путем В-клеточного истощения, предусматривающий введение терапевтически эффективного количества антитела по одному из пп.1-12 или 19-30.
  47. 47. Способ по п.46, где указанное нарушение является злокачественным гематологическим или аутоиммунным заболеванием.
  48. 48. Способ по п.47, где указанным злокачественным гематологическим заболеванием является Вклеточный лимфолейкоз; неходжкинская лимфома или хронический В-клеточный лимфолейкоз.
  49. 49. Способ по п.46, где аутоиммунным заболеванием является ревматоидный артрит или волчанка.
  50. 50. Способ получения в клетке-хозяине антитела к СЭ20, которое имеет Рс-область с модифицированными олигосахаридами и модифицированной повышенной эффекторной функцией, заключающийся в том, что:
    а) культивируют клетку-хозяин, сконструированную для обеспечения экспрессии, по меньшей мере, нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, обладающий активностью β(1,4)-Νацетилглюкозаминилтрансферазы III в условиях, позволяющих получить антитело и осуществить модификацию олигосахаридов, присутствующих в Рс-области антитела; и
    б) выделяют антитело, где указанное антитело является слитым белком, включающим полипептид, имеющий последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранной из группы, включающей 8ЕР ГО ΝΟ: 30, 8ЕР ГО ΝΟ: 32, 8Ер ГО ΝΟ: 34, 8Ер ГО ΝΟ: 36, 8Ер ГО ΝΟ: 38, 8Ер ГО ΝΟ: 40, 8Ер ГО ΝΟ: 42, 8Ер ГО ΝΟ: 44, 8Ер ГО ΝΟ: 46, 8Ер ГО ΝΟ: 48, 8Ер ГО ΝΟ: 50, 8Ер ГО ΝΟ: 52, 8Ер ГО ΝΟ: 54, 8Ер ГО ΝΟ: 56, 8Ер ГО ΝΟ: 58, 8Ер ГО ΝΟ: 60, 8Ер ГО ΝΟ: 62, 8Ер ГО ΝΟ: 64, 8Ер ГО ΝΟ: 66, 8Ер ГО ΝΟ: 68, 8Ер ГО ΝΟ: 70 и 8ЕР ГО ΝΟ: 72, где Рс-область эквивалента Рс-области иммуноглобулина.
  51. 51. Способ по п.50, где указанные модифицированные олигосахариды имеют пониженное количество остатков фукозы по сравнению с немодифицированными олигосахаридами.
  52. 52. Способ по п.50, где антитело, продуцируемое клеткой-хозяином, имеет пониженное количество бисекционных (разветвленных) олигосахаридов в Рс-области.
  53. 53. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, которая кодирует гипервариабельный участок вариабельной области тяжелой цепи 8ЕР ГО ΝΟ: 39, и последовательность, которая кодирует гипервариабельный участок вариабельной области легкой цепи 8ЕР ГО ΝΟ: 75.
  54. 54. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательности, которые кодируют гипервариабельные участки вариабельной области тяжелой цепи 8Ер ГО ΝΟ: 6, 8Ер ГО ΝΟ: 22 и 8Ер ГО ΝΟ: 24.
  55. 55. Выделенный полинуклеотид по п.54, дополнительно включающий последовательности, которые кодируют гипервариабельные участки вариабельной области легкой цепи 8Ер ГО ΝΟ: 8, 8Ер ГО ΝΟ: 9 и 8Ер ГО ΝΟ: 10.
    Линкер (ЗАССТСААСС ТССАСЗСАСТС Т СТССАСЗТТСС АССТССТСАЗ А
    Ε V К Б 0 <2 3
    Начало 8Е0 ГО N0:1 (аминокислотная последовательность) и 8Е<2 ГО N0:2 (нуклеотидная последовательность) (ЗСАССТСАА СТССТСААСС СТСССЗССТС АСТСААСАТТ ТССТСЗСЙААС СТТСТЗЗСТА СССАТТСАОТ ТАСТСТТССА ССТЗЗАСТТ (ЗАССАСТТСЗ САССССССАС ТСАСТТСТАА АЗЗАСОТТТС (ЗААСАСССАТ (ЗССТААОТСА АТЗАЗААССТ (ЭРЕ БУК Р О А 5 V К I 5 С К АЗС Υ А Е 3 Υ 5 И . ............ В-Еу1 уЬ. >
    101 ТСААСТСССТ САААСТСАСС ССТСЗОАСАСС (ЗТСТТСАСТО (ЗАТТССЗАССО АТТТТТССТС САСАТССОСА ТАСТСАСТАС ААТСССАААТ ТСААССССАА
    АСТТСЗАСССА СТТТСЭАСТСС СОАССТСТСС САСААСТСАС СТААССТССС ТАААААСКЗАС СТСТАССССТ АТОАСТСЗАТСЗ ТТАСССТТТА АСТТСССОТТ МНИ V К Ь В РСО Θ Ь Е . И I СЗ Р. I Р Р (3 Б (3 Б Т Б Υ N С К Е К 6 >....................................... .........В-Ьу1 νΕ>
    201 (ЗСССАСАСТО АСТССТСАСА ААТССТССАА САСАСССТАС АТССААСТСА ССАЗССТСАС СТСТСТССАС ТСТОСССТСТ АТТТАТОТСС ААСАААТСТС
    СССетСТСАС ТСАСОАСТет ТТАССАСОТТ ОТбТСССАТС ТАССТТСАСТ (ЗСТСССАСТб ОАСАСАССТС АСАССССАСА ТАААТАСАСС ТТСТТТАСАС
    КАТЕ Т А Б КЗЗ ΝΤΑΥ МОБ Т 3 Е Т 3 V Б 3 А V Υ Ь САРРГУ >.................................................В -Бу1 уЬ.>
    3 01 ТТТСАТООТТ АСТССТТАСТ ТТАСТСОСОС СААСССАСТС ТССТСАСТСТ СТСТССА
    АААСТАССАА ТСАССААТСА ААТСАССССС СТТСССТСАС АССАОТСАСА (ЗАСЗАССТ Р В (3 Υ И Б V Υ И (3 ОСТ БУТ УЗА >..........................В-Еу1 νΐι»
    Фиг. 1
    - 90 015009
    Линкер
    НрЫ . .
    Начало 8Е(} ГО N0:1 (аминокислотная последовательность) и 8Е<3 ГО N0:2 (нуклеотидная последовательность) Мя11
    РАСАТТОТЗС СТЗТААСАСО ϋ I V
    ТСАСССАААС άρτρορτττρ ь т о
    ТАСА атрт т т >>
    ААТССА ЗТСАСТСТТР СААСАТСАСС ТТССАТСТСС ТРСАРСТСТА РТААРАРТСТ ССТАСАТАРТ ААТРРСАТСА ТТАРСТ САРТРАСААС СТТЗТАСТСЗ ΑΆΟΡΤΑΟΑΘΟ АСРТССАСАТ САТТСТСАЗА РРАТОТАТСА ТТАССРТАРТ А 3 I 5 СВЗ 3 К 5 ЬЬНЗ 16 1
    ν.1............................................... .>
    N Р УТЬ 3 Т 3
    .....................В-Ьу1
    ВэеВ!
    Мгле!
    101
    СТТАТТТРТА ТТРСТАТСТР САРААРССАО РССАРТСТСС ТСАРСТССТР
    РААТАААСАТ ААССАТАРАС ОТСТТСЗЗТС СРЗТСАОАСР аЬтСЗАРОАС
    Т Υ Ь Υ Ν Υ Ь 0КР РОЗ Ρ Ω Ь Ь >................................................В-Ьу1
    АТТТАТСАОА ТАААТАРТСТ
    I Υ Ω
    ν.1
    ТОТССААССТ АСАРРТТРРА
    М 3 N
    ТОТСТСАРЗА ОТСССАРАСА РРТТСАРТАО АСАРАРТССТ САРЗСТСТЗТ ССААРТСАТС ь у з о νρϋ вез
    ВЪз!
    ΑίΙΙΙΙ
    201
    АРЗАТОТРСС ТРТТТАТТАС ТОТРСТСААА АТСТАРААСТ ТССРТАСАСР ТССТАСАССС АСАААТААТР АСАСРАРТТТ ТАРАТСТТРА АРРСАТСТРС ЕВУ Р У Υ Υ САО N В Е ЬРУТ ν.1..................................................>
    301
    ТТСРРАССРС РРАССААРСТ ΡΡΑΑΑΤΆΆΆΑ СОР ААРССТСССС ССТРРТТСРА ССТТТАТТТТ ОСС ВЗО О Т К Ь Е I К В >............В-Ьу1 ν.1............>>
    Фиг. 2
    Фиг. 3
    Б
    О 1 ю 100 1000 в 1 10 100 НИЮ концентрация Ат (мкг/мл)
    Зар!
    Μ111Ι концентрация Ат (мкг/мл)
    Фиг. 4
    Р8ГГ
    АТСЗСТТ&ЗА СССТСАТСТТ ССТСТТССТТ СТСЗСТ6ТТО ТАСССААССТ ССОАСТАСАА ССАОААВбАА САВСВАСААС Μ О N 3 Ь I ЪЬРЪ V А V
    ΗίηάΙΙΙ
    8Ш1
    8Е0 ПЭ N0:11 (нуклеотидная последовательность) и 8Еф ГО N0:13 (аминокислотная последовательность)
    101
    201
    301
    СААСТСАССА ВССТОАССТС ТСТЭВАСТСТ ВСВВТСТАГТ ТАТВТЗСААВ АААГСТСТТТ ВАТЗВТТАСТ ВВТГАВТТТА СТ0ОВВССАА Ж6АСТСГЯЗ СТТВАСТССТ СССАСТебАЭ АСАССТВАЗА СВССАВАТАА АТАСАСВТТС ТТТАСАВААА СТАССААТВА ССААТСАААТ САССССООТТ СССТВАВАСС о ь Т 3 Ь Т 3 V Р 5 А V У Ь С А И N V Г РВУ И Ь V У И В 0 В Т Ь >...................... В-Ьу1 Ь.с..................................................>
    нЬе1
    РзЫ
    401 тсастзтстс тесАсстлес АССААоеасс сатсввтстт ссссстаасА ссстсстсса ледесАсстс твввзвсаса асеессстад встасстввт
    АВТВАСАВАВ АСВТСВАТСС ТВВТТСССВВ 6ТАВССАВАА 6ВВВ6АССВТ ВВВАЗВАВВТ ТСТСВТОВАО АСССССВГВТ ССССВВВАСС СВАСВВАССА
    V Т V 3 А А 3 Т К 3 Р 5 V РРЬА Р 3 3 К 3 Т 3 В В Т А А Ь ОСЬ >................................................В-Ьу1 Ь.С................................................. .>
    Фиг. 5А
    501
    СААССАСТАС ТТССССбААС ССбТбАСббТ 6ТССТС6ААС ТСАббСбССС ТбАССАОСбб СбТОСАСАСС ТТСССббСТб ТССТАСАбТС СТСАСбАСТС 6ТТССТ5АТ6 ААСбббСТТб ОССАСТбССА СА6САССТТ6 АбТССбСббб АСТ66ТС6СС ССАСбТОТОб ААбббССОАС АСбАТСТСАО 0А6ТССТ6А6 V К О Υ ГРЕ РУТ УЗИН 3 С А ьтз оунт рра'уьо 3 3 <3 ь .................................................В-Ьу1 Ь.С
    601
    ТАСТСССТСА ССАОСбТбСТ ОАССбТбССС ТССАбСАбСТ ТбббСАСССА САССТАСАТС ТССААССТбА АТСАСААбСС СА6СААСАСС ААббТббАСА АТбАбббАбТ СбТСбСАССА СТСбСАСССС АССТСбТССА АСССбТбббТ СТббАТСТАб АССТТбСАСГ ТАСТбТТССб СТССТТбТСС ТТССАССТбТ УЗЬ 8 3 V V Т V Р 3 3 3 Ь О Т >................................................В-Ьу1
    8Ε<2 ГО N0:11 (нуклеотидная последовательность) и 8Е0 ГО N0:13 (аминокислотная последовательность)
    701
    801 о Т У I Ь.с...·....
    Ν V N И К Р 3 Ν Т КУО
    ΑΗάΙ
    ССАбСАССТб ААСТССТббб бббАССбТСА СТСТТССТСТ ТССССССААА ОбТСбТббАС ТТбАббАССС СССТббСАбТ САбААбСАбА АОбббббТТТ
    РАР Е Ь Ь О С Р 3 V Г Ь Р Р Р
    Ь.с...................... >
    901
    ОАССССбТСС АбСТбСАТАА ТСССААОАСА ААбССОСббб АббАбСАбТА СААСАбСАСО ТАССбТбТбб ТСАОСбТССТ САССбТССТО САССАССАСТ СТбССбСАСС ТССАССТАТТ АСббТТСТбТ ТГСббСбССС ТССТСбТСАТ ϋ б V Ε V Η N А К Т КРР. Ε Ε ζ) >............. ........... ........................В-Ьу1 бТТбТСбТбС АТббСАСАСС АбТСбСАббА бТббСАббАС 6Т66ТССТ6А УЫЗТ У К V УЗУ Ь Т V Ь Η Ω О Ь.с..................................................>
    1001
    Фиг. 5Б
    1101
    АСАббТСТАС АСССТОСССС татссАСАте тсболсоесе Р о V У Т Ь Р
    1201
    1301
    1401
    ΤΑΑΑΤΏΑ АТТТАСТ б К ..>> В-Ъу1 Ь.с
    Зтпа!
    ТСА6ССТ6АС СТбССТСбТС АААСбСТТСТ АТСССАССбА САТССССбТб ДбТСССАСТб бАСССАССАб ТТТССбААСА ТАСббТСбСТ ©ТАбСбССАС
    УЗЬ Т С Ь V К б Ε ΎΡ3 Г I А V Ь.с...........................................
    8Εζ) ГО N0:11 (нуклеотидная последовательность) и 8Е<2 ГО N0:13 (аминокислотная последовательность)
    Зар!
    Фиг. 5В
    101
    АТббАТТТТС АббТССАСАТ ТАТСАбСТТС СТбСТААГСА бТбСТТСАбТ ТАССТААААб ТССАСбТСТА АТАбТСбААб бАССАТТАбТ САССААбТСА
    МОЕ <2 V <2 I I 3 Р Ь Ь I ЗАЗ
    »........... в-ьу1
    РзЫ +САТААТбТСС АбАббАбАСА ТТОТССТСАС ССАААСТАСА ААТССАбТСА СТАТТАСАбб ТСТССТСТбТ ААСАСбАОТб СбТТТСАТСТ ТТАббТСАбТ V I М 3 К С- О I V Ь Т (2 Т Т Ν Р V 1,с................ >
    РзШ
    ЗЕО ГО N0:12 (нуклеотидная последовательность) и 8Εζ) ГО N0:14 (аминокислотная последовательность)
    СТСТТбОААС АТСАбСТТСС АТСТССТССА ббТСТАОТАА 6А6ТСТССТА СА6ААССТТ6 ТАбТСбААбб ТАбАббАСбТ ССАбАТСАТТ СТСАСАбСАТ
    Т Ь С Т 3 А 8 I 3 С К 5 5 К 8 Ь Ь >................................................В-Ьу1
    САТАбТААТб 6САТСАСТТА ТТТСТАТТСб ТАТСТбСАбА АбССАСОССА СТАТСАТТАС СбТАОТСААТ АААСАТААСС АТАбАСбТСТ ТСббТССббТ
    ИЗЫ б I Т У Ь У N У Ь ζ) К Р С
    1.с................................................. ·>
    201 СТСТССГСАб СТССТСАТТТ АТСАбАТбТС СААССТТбТС ТСАбСАСТСС САбАСОАОТС 6АС6АСТААА ТАбТСТАСАб СТТббААСАб АбТССТСАбб
    О 8 Р <2 Ь Ь I УбМ 3 N Ь V ЗбУ >................................................В-Ьу1
    САбАСАСбТТ САбТАбСАОТ бОЗТСАббАА СТОАТТТСАС АСТбАбААТС 6ТСТ6ТССАА 0ТСАТС6ТСА СССАбТССТТ 6АСТАААСТ6 ТбАСТСТТАб
    Р □ Η Е 3 3 5 636 ТОГ ТЬКГ
    1.с..................................................>
    ХЬа! ВзтИ!
    301 АОСАбАСТЭЗ АСССТбАббА ТбТСббТОТТ ТАТТАСТОТб СТСААААТСТ А6ААСТТСС6 ТАСАСбТТСб ОАССбСббАС СААССТбСАА АТААААСбТА ТСОТСТСАСС ТССОАСТССТ АСАСССАСАА АТААТбАСАС ΘΑ6ΤΤΤΤΑ6Α ТСТТ6ААССС АТОТбСААбС СТССССССТб 6ГТС6АССТТ ТАТТТТбСАТ
    3 Η V В А Е Ώ V б V У У С А О N ЬЕЬР УТЕ б б б ТКЬЕ I К К >. . . .............................................В-Ьу1 1-е................ >
    ХгппХ
    -----+----401 СбОТббСТбС АССАТСТСТС ТТСАТСТТСС ССССАТСТСА ТСАССАСТТб АААТСТббАА СТбССТСТСТ ТОТОТОССТб СТбААТААСТ ТСТАТСССАб 6ССАСС6АС6 ТббТАОАСАб ААбТАбААСб 6СО6ТА6АСТ АСТСбТСААС ТТТАОАССТТ 6АС6СА6АСА АСАСАСбСАС 6АСТТАТТСА АОАТАббОТС ТУА А ₽ 8 V Р I Ε РРЗ ϋ Е <2 Ь К 3 О ТАЗ V V С Ь Ь N N ГУР >................................................В-Ьу1 1.С............... ...>
    501 А6АС6ССААА ОТАСАОТббА АббТОбАТАА СбСССТССАА ТСбббТААСТ СССАббАбАб ТбТСАСАбАО САС-САСАОСА АббАСАбСАС СТАСАбССТС ТСТССС6ТТТ САТбТСАССТ ТССАССТАТТ бСбббАббТТ АОСССАТТбА бббТССТСТС АСАбТбТСТС СТССТбТССТ ТССТСТСЗТС ОАТОТСббАб
    К Е А К V б Н КУО ИЛЬО 3ΘΝ ЗбЕ ЗУТЕ 608 К ϋ 8 ТУ5Ь >. . ..............................................В-Ьу1 1,с. . . ..................................... >
    Фиг. 6А
    Вас!
    601
    701
    АбСАбСАССС ТбАСССТбАб САААбСАбАС ТАСОАбАААС АСАААбТСТА СбССТбССАА СТСАСССАТС АбббССТбАб СТСбСССбТС АСАААбАбСТ ТССТССТбОС АСТССОАСТС бТТТСбТСТб АТбСТСТТТС ТбТТТСАбАТ бСббАСбСТТ САСТСббТАб ТСССОбАСТС 6А6СС66СА6 ТбТТТСТСбА ЗЗТ ЬТЬ ЗКАО УЕК НКУ У А С Е УТН ОСЬ ЭЗРУ Т К 5 >....... В-Ьу1 1.С............ ....>
    ТСААСАбббб АбАбТбТТАС
    8Е0 ГО N0:12 (нуклеотидная последовательность) и 8Е0 ГО N0:14 (аминокислотная последовательность)
    АбТТбТСССС ТСТСАСААТС
    Е N В. б Е С >..._В-Ьу1 1.с.....»
    Фиг. 6Б
    срк1 (Кэбот): ТАСТСТТСЮАТОААС Туг8етТгрМе1Азп 8Εζ)1Ι)ΝΟ:5 8Ες ГО ΝΟ: 15
    СЦК1 (Хотия):
    СаСТАСОСАТТСАбТТАС О1уТугА1аР1те8егТуг 8Ες>ΙΟΝΌ:6 8Εζ)Π)ΝΟ: 16
    СШ<1 (МАТ):
    СОСТАСССАТТСАОТТАСТСТТООАТОААС О1уТугА1аРЬе5егТуг8егТгрМе1А8п 8Ε(}ΙΟΝΟ:7 8Ε()ΙΟΝΟ: 17
    СШ<2 (Кэбот):
    СООАТГПТССТООАОАТООООАТАСТОАСТАСААТСООАААТТСААОбОС АгеПеРЬеРгоСЕуАзрСИуАзрТЬгАзрТугАзпО^ЬувРкеЬузСЛу δΕρίΟΝΟ: 21 8Ер ГО ΝΟ: 25 СПК2 (Хотия): ТГГССТССгАОАТОСООАТАСТСАС РЪеРгоСДуАзрСйуАзрТЬгАзр 8Е<2 ГО ΝΟ: 22 ЗЕрГОИО: 26
    СОК2 (МАТ):
    СОСАТТТТТССТСОАбАТабООАТАСТОАС Агф11еР11еРгоС1уА8р<31уА8рТ11гАзр ЗЕрГОИО: 23 8Е0 ГО ΝΟ: 27
    СОК2 (Кэбот, Хотиа, АСМ):
    ААТОТСТТТОАТООТТАСТООТТАаТТТАС АзпУаГРИеАзрСНуТугТ грЬеиУ аГГуг ЗЕр ГО ΝΟ: 24 8Εζ)ΙΟΝΟ:28
    СЦК1 (Кэбот): АООТСТАОТААОАОТСТССТАСАТАОТААТООСАТСАСТТАТТГОТАТ АгвЗегЗегЬузЗегЕеиЕеиШзЗегАбпСйуПеТЬгТугЕеиТуг 8ΕςΐΟΝΟ:8 βΕςίΟΝΟ: 18 СОК2 (Кэбот): САОАТОТССААССТТОТСТСА 8ΕρΐΟΝΟ:9 О1пМе(8егА8пЬеиУа13ег δΕρίΟΝΟ: 19 СОКЗ (Кэбот): ОСТСААААТСТАОААСТТССОТАСЛСО 8ΕρΐϋΝΟ: 10 А1а01пА8пЬеи61иЬеиРгоТу1Т1п· 8Εζ)ΙΟΝΟ: 20
    Фиг. 7 относительные величины в процентах + ЕпбоН
    В1у-1 т! ВВу-1 т1
    03*1024 031024
    016 017
    1053 1256 1282 1298 3.70% 1339 18.60% 17.90% 1460 4.30% 1486 5.90% 5.50% 1502 5.10% 3.70% 1543 35.00% 39.20% 1622 1647 4.60% 3.00% 1664 7% 1680 1688 11.00% 10.30% 1705 7.20% 7.30% 1810 1826 1850 5,90% 5.20% 1972 2012 100% 100%
    Фиг. 8А
    - 93 015009
    Связывание различных гуманизированных антител к СИ20 с В-клетками линии Кар концентрация Ат (мкг/мл)
    Фиг. 9
    - 94 015009
    Фиг. 11
    Фиг. 12
    - 95 015009
    Гуманизация В-Ьу1
    0.01 0.1 1 10 концентрация Ат (мкг/мл)
    Фиг. 13
    Апоптоз мононуклеарных клеток Ζ-138, вызываемый антителами к СО20
    Фиг. 14
    РК.-1 (линия клеток ОЬВСЬ)
    Ζ-138 (мононуклеарная линия клеток)
    Фиг. 15
    - 96 015009
    В-клеточное истощение цельной крови здоровых доноров
    АОСС при использовании в качестве клеток-мишеней клеток линии Кар
    -151-------------------------------------—-------0.01 0.1 1 10 100 1000 10000 концентрация Ат (нг/мл)
    Фиг. 16
    Фиг. 17 т/ζ 1257,631 1298.633 1442.684
    1460.695 1485.716 1501,689 1524,699 1647.725 1663,734
    1679.695 1638.775 1697,752 1738.663 1799.732
    1805.785
    1825.786 1841.784 1850.815 1971.847 1987.327 2001.644 относительная интенсивность
    100
    1.0
    О . 6 о
    О.5 со αί
    00 1200 1400 1600 1800 2000 , т/ζ
    Фиг. 18
    - 97 015009
    Фиг. 20
    Апоптоз, вызываемый антителами к СЭ20 линия клеток лимфомы клеток мантии Ζ-138
EA200600905A 2003-11-05 2004-11-05 АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ EA015009B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51709603P 2003-11-05 2003-11-05
PCT/IB2004/003896 WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2004-11-05 Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200600905A1 EA200600905A1 (ru) 2006-12-29
EA015009B1 true EA015009B1 (ru) 2011-04-29

Family

ID=34572912

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202091901A EA202091901A1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ
EA201100128A EA025962B1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ
EA201300481A EA036531B1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение
EA200600905A EA015009B1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202091901A EA202091901A1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ
EA201100128A EA025962B1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ
EA201300481A EA036531B1 (ru) 2003-11-05 2004-11-05 Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение

Country Status (40)

Country Link
US (7) US9296820B2 (ru)
EP (5) EP1692182B1 (ru)
JP (5) JP4653109B2 (ru)
KR (3) KR101364902B1 (ru)
CN (4) CN104829719A (ru)
AT (1) ATE463513T1 (ru)
AU (1) AU2004287643C1 (ru)
BE (1) BE2016C008I2 (ru)
BR (2) BR122020013239B1 (ru)
CA (1) CA2544865C (ru)
CR (1) CR11848A (ru)
CY (6) CY1110301T1 (ru)
DE (1) DE602004026470D1 (ru)
DK (5) DK2380910T3 (ru)
EA (4) EA202091901A1 (ru)
EC (2) ECSP066603A (ru)
ES (5) ES2708095T3 (ru)
FR (1) FR15C0076I2 (ru)
HK (4) HK1100005A1 (ru)
HR (5) HRP20100303T1 (ru)
HU (5) HUE026669T2 (ru)
IL (4) IL175367A (ru)
LT (4) LT2077282T (ru)
LU (2) LU92632I2 (ru)
MA (1) MA31040B1 (ru)
ME (3) ME01775B (ru)
MX (2) MX337587B (ru)
NL (1) NL300801I2 (ru)
NO (5) NO20220904A1 (ru)
NZ (2) NZ547589A (ru)
PL (5) PL2380911T3 (ru)
PT (5) PT2077282T (ru)
RS (5) RS57466B1 (ru)
SG (3) SG10201504094SA (ru)
SI (5) SI1692182T1 (ru)
TN (1) TNSN06126A1 (ru)
TR (2) TR201809892T4 (ru)
UA (1) UA91823C2 (ru)
WO (1) WO2005044859A2 (ru)
ZA (1) ZA200604547B (ru)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2519546C1 (ru) * 2013-01-16 2014-06-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Биоинтегратор" (Ооо "Биоинтегратор") КОНЪЮГАТЫ И МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С РЕЦЕПТОРОМ CD16а
RU2650788C2 (ru) * 2012-08-07 2018-04-17 Роше Гликарт Аг Композиция, содержащая два антитела, сконструированных так, чтобы они обладали пониженной и повышенной эффекторной функцией
US10766967B2 (en) 2015-10-02 2020-09-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific T cell activating antigen binding molecules
RU2732151C2 (ru) * 2011-09-30 2020-09-11 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Библиотека зависимых от концентрации ионов связывающих молекул
US11013801B2 (en) 2015-12-09 2021-05-25 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment method

Families Citing this family (758)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2434961T5 (es) 1998-04-20 2018-01-18 Roche Glycart Ag Ingeniería de glicosilación de anticuerpos para mejorar la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo
KR20100018071A (ko) 2001-08-03 2010-02-16 글리카트 바이오테크놀로지 아게 항체 의존적 세포 독성이 증가된 항체 글리코실화 변이체
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
JP5416338B2 (ja) 2003-05-09 2014-02-12 デューク ユニバーシティ Ｃｄ２０特異的抗体およびその使用方法
ME01775B (me) 2003-11-05 2011-02-28 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom
RU2007106722A (ru) * 2004-07-22 2008-08-27 Дженентек, Инк. (Us) Способ лечения синдрома шегрена
JP5055603B2 (ja) 2004-08-04 2012-10-24 メントリック・バイオテック・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 変異Ｆｃ領域
CN101087807A (zh) * 2004-10-05 2007-12-12 健泰科生物技术公司 治疗血管炎的方法
PL1871805T3 (pl) 2005-02-07 2020-03-31 Roche Glycart Ag Cząsteczki wiążące antygen, które wiążą egfr, wektory kodujące te cząsteczki oraz ich zastosowania
CA2605781A1 (en) * 2005-05-09 2007-04-12 Glycart Biotechnology Ag Antigen binding molecules having modified fc regions and altered binding to fc receptors
EP1902320B1 (en) * 2005-05-20 2010-03-10 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
WO2006133148A2 (en) * 2005-06-03 2006-12-14 Genentech, Inc. Method of producing antibodies with modified fucosylation level
US9580506B2 (en) 2005-07-21 2017-02-28 Genmab A/S Potency assays for antibody drug substance binding to an Fc receptor
AU2012216702B2 (en) * 2005-08-26 2014-12-04 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
NO345919B1 (no) * 2005-08-26 2021-10-18 Roche Glycart Ag Modifiserte antigen-bindende molekyler med endret celle-signaliseringsaktivitet
US8470318B2 (en) * 2005-11-07 2013-06-25 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
US20080206246A1 (en) * 2006-04-05 2008-08-28 Ravetch Jeffrey V Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
EP1957099B1 (en) * 2005-11-07 2015-03-25 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
JP2009518314A (ja) 2005-12-02 2009-05-07 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｉｌ−２２に結合する抗体およびｉｌ−２２ｒに結合する抗体を含む、サイトカインシグナリングに関連する疾患および障害の処置のための組成物および方法
AU2007248444B2 (en) 2006-01-05 2012-10-25 Genentech, Inc. Anti-EphB4 antibodies and methods using same
DK1991273T4 (da) * 2006-02-10 2022-02-07 Life Technologies Corp Mærkning og påvisning af post-translationelt modificerede proteiner
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
AU2007235413B2 (en) * 2006-04-05 2012-08-02 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
RU2436796C9 (ru) 2006-05-30 2013-12-27 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты и их применения
WO2007143689A2 (en) * 2006-06-06 2007-12-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for modulating vascular development
AR062223A1 (es) * 2006-08-09 2008-10-22 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas
JP5298021B2 (ja) 2006-10-12 2013-09-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンホトキシン−αに対する抗体
KR101541550B1 (ko) 2006-10-27 2015-08-04 제넨테크, 인크. 항체 및 면역접합체 및 이들의 용도
AU2013202392B2 (en) * 2006-12-20 2016-02-25 Mmrglobal, Inc. Antibodies and methods for making and using them
EP2716658A3 (en) 2006-12-20 2014-10-08 Mmrglobal, Inc. Antibodies and methods for making and using them
WO2008091740A2 (en) 2007-01-22 2008-07-31 Genentech, Inc. Polyelectrolyte precipitation and purification of antibodies
EP2125013A4 (en) * 2007-01-26 2010-04-07 Bioinvent Int Ab DLL4 SIGNALING INHIBITOR AND ITS USES
RU2009133784A (ru) 2007-02-09 2011-03-20 Дженентек, Инк. (Us) АНТИ-Robo4-АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
FR2915398B1 (fr) * 2007-04-25 2012-12-28 Lab Francais Du Fractionnement "ensemble de moyens pour le traitement d'une pathologie maligne, d'une maladie auto-immune ou d'une maladie infectieuse"
PL2068927T3 (pl) 2007-05-14 2016-06-30 Medimmune Llc Sposoby redukcji poziomów eozynofilii
JP5611820B2 (ja) 2007-06-25 2014-10-22 エスバテック − ア ノバルティスカンパニー エルエルシー 抗体の修飾方法並びに改善された機能特性を有する修飾された抗体
ES2381788T3 (es) 2007-07-16 2012-05-31 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-CD79b e inmunoconjugados y métodos de uso
SG183044A1 (en) 2007-07-16 2012-08-30 Genentech Inc Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugatesand methods of use
US20110243931A1 (en) * 2007-09-02 2011-10-06 Thomas Friess Combination therapy with type i and type ii anti-cd20 antibodies
EP3415529B1 (en) 2007-09-26 2020-11-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US20090098118A1 (en) * 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) * 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
AU2008323770B2 (en) 2007-11-07 2014-08-07 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
TWI580694B (zh) 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
CA2708869C (en) * 2007-12-21 2016-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
WO2009086072A2 (en) * 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
UA106586C2 (ru) 2008-01-31 2014-09-25 Дженентек, Інк. Анти-cd79b антитела и имуноконьюгаты и способы их применение
KR101280716B1 (ko) * 2008-03-25 2013-07-01 로슈 글리카트 아게 비-호지킨 림프종의 치료를 위한, 시클로포스파미드, 빈크리스틴 및 독소루비신과 조합으로의 증가된 항체 의존성 세포 세포독성 (ａｄｃｃ) 을 갖는 유형 ⅱ 항-ｃｄ20 항체의 용도
EP2271770B1 (en) * 2008-03-31 2018-08-22 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
US7846744B2 (en) * 2008-04-22 2010-12-07 Ravetch Jeffrey V Methods of identifying anti-inflammatory compounds
WO2009134738A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
KR101054362B1 (ko) * 2008-07-03 2011-08-05 재단법인 목암생명공학연구소 재조합 단백질의 푸코스 함량을 감소시키는 방법
US8680020B2 (en) 2008-07-15 2014-03-25 Academia Sinica Glycan arrays on PTFE-like aluminum coated glass slides and related methods
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
CN102245208B (zh) 2008-10-14 2016-03-16 霍夫曼-拉罗奇有限公司 免疫球蛋白变体及其用途
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
JP6039183B2 (ja) 2008-12-23 2016-12-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド プロテインａに対する結合が変化した免疫グロブリン変異体
MX2011009729A (es) 2009-03-20 2011-10-14 Genentech Inc Anticuerpos anti-her.
TWI504409B (zh) 2009-03-25 2015-10-21 Genentech Inc 新穎抗－α５β１抗體及其用途
EP2679600A1 (en) 2009-03-25 2014-01-01 Genentech, Inc. Anti-FGFR3 antibodies and methods using same
AR075982A1 (es) * 2009-03-31 2011-05-11 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo afucosilado y una o mas de las citoquinas seleccionadas de gm- csf humano, m -csf humano y/o il-3 humano y composicion
WO2010112193A1 (en) 2009-04-02 2010-10-07 Roche Glycart Ag Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments
PL2417156T3 (pl) 2009-04-07 2015-07-31 Roche Glycart Ag Trójwartościowe, bispecyficzne przeciwciała
WO2010115551A1 (en) 2009-04-07 2010-10-14 Roche Glycart Ag Bispecific anti-erbb-1/anti-c-met antibodies
BRPI1012589A2 (pt) 2009-04-07 2016-03-22 Roche Glycart Ag anticorpos bi-específicos anti-erbb-3/anti-c-met
US20100316639A1 (en) 2009-06-16 2010-12-16 Genentech, Inc. Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
SG177727A1 (en) 2009-07-24 2012-02-28 Hoffmann La Roche Stirrer system
WO2011014457A1 (en) 2009-07-27 2011-02-03 Genentech, Inc. Combination treatments
EP2459591B1 (en) 2009-07-31 2014-08-20 Genentech, Inc. Inhibition of tumor metastasis using anti-g-csf-antibodies
TWI409079B (zh) * 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
JP2013501741A (ja) 2009-08-14 2013-01-17 ロシュ グリクアート アーゲー アフコシル化ｃｄ２０抗体とフルダラビン及び／又はミトキサントロンの併用療法
GB0914691D0 (en) 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
TWI412375B (zh) 2009-08-28 2013-10-21 Roche Glycart Ag 人類化抗ｃｄｃｐ１抗體
TW201113037A (en) 2009-08-28 2011-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against CDCP1 for the treatment of cancer
AU2010289400B2 (en) 2009-09-02 2014-10-23 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
AR078161A1 (es) * 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
CN102712696A (zh) 2009-09-16 2012-10-03 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 包含卷曲螺旋和/或系链的蛋白质复合体及其用途
LT2486141T (lt) 2009-10-07 2018-05-25 Macrogenics, Inc. Fc regioną turintys polipeptidai, pasižymintys pagerinta efektorine funkcija dėl fukozilinimo laipsnio pasikeitimų, ir jų naudojimo būdai
CA2778481A1 (en) 2009-10-22 2011-04-28 Genentech, Inc. Anti-hepsin antibodies and methods using same
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
EP2496600A1 (en) 2009-11-04 2012-09-12 Fabrus LLC Methods for affinity maturation-based antibody optimization
EP2496601B1 (en) 2009-11-05 2017-06-07 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
TWI505836B (zh) 2009-12-11 2015-11-01 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ－ｃ抗體及其使用方法
US8859737B2 (en) 2009-12-22 2014-10-14 Roche Glycart Ag Anti-HER3 antibodies and uses thereof
MX2012007379A (es) 2009-12-23 2012-08-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-bv8 y usos de los mismos.
CA2789629A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
CN102741695B (zh) 2010-02-11 2015-08-26 霍夫曼-拉罗奇有限公司 3d adcc nk facs测定法
JP5981853B2 (ja) 2010-02-18 2016-08-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド ニューレグリンアンタゴニスト及び癌の治療におけるそれらの使用
KR101899835B1 (ko) 2010-03-24 2018-09-19 제넨테크, 인크. 항-ｌｒｐ６ 항체
AR080793A1 (es) 2010-03-26 2012-05-09 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos
EP2374816B1 (en) 2010-04-07 2016-09-28 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
US9441032B2 (en) 2010-04-07 2016-09-13 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
MX342590B (es) 2010-04-27 2016-10-05 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo cd20 afucosilado con un inhibidor mtor.
JP5947289B2 (ja) 2010-05-10 2016-07-06 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 抗インフルエンザ活性を有するザナミビルホスホネート同族体およびインフルエンザウイルスのオセルタミビルに対する感受性の決定
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
KR20130098165A (ko) 2010-06-03 2013-09-04 제넨테크, 인크. 항체 및 면역접합체의 이뮤노-ｐｅｔ 영상화 및 그의 용도
CA2794731C (en) 2010-06-18 2019-03-19 Genentech, Inc. Anti-axl antibodies and methods of use
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
EP3560962A1 (en) 2010-07-09 2019-10-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Processable single chain molecules and polypeptides made using same
SG186983A1 (en) 2010-07-09 2013-02-28 Genentech Inc Anti-neuropilin antibodies and methods of use
EP2409712A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC and CDC functions and improved glycosylation profile
EP2409993A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC function with improved glycosylation profile
EP2409989A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Method to improve glycosylation profile for antibody
FR2962908A1 (fr) 2010-07-20 2012-01-27 Lfb Biotechnologies Formulation d'anticorps anti-cd20
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
KR20130045914A (ko) 2010-08-03 2013-05-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 만성 림프구성 백혈병(cll) 생체지표
RU2013106217A (ru) 2010-08-05 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Гибридный белок из антитела против мнс и противовирусного цитокина
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
SI2603530T1 (en) 2010-08-13 2018-02-28 Roche Glycart Ag Anti-FAP antibodies and methods of use
RU2584597C2 (ru) 2010-08-13 2016-05-20 Рош Гликарт Аг Антитела против а2 тенасцина с и способы их применения
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
TW201208703A (en) 2010-08-17 2012-03-01 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with an anti-VEGF antibody
NZ604510A (en) 2010-08-17 2013-10-25 Csl Ltd Dilutable biocidal compositions and methods of use
RU2013110875A (ru) 2010-08-24 2014-09-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ СТАБИЛИЗИРОВАННЫЙ ДИСУЛЬФИДОМ ФРАГМЕНТ Fv
KR101603001B1 (ko) 2010-08-25 2016-03-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 Il-18r1에 대한 항체 및 그의 용도
BR112013004673A8 (pt) 2010-08-31 2018-01-02 Genentech Inc biomarcadores e métodos de tratamento.
EP4108671A1 (en) 2010-10-01 2022-12-28 ModernaTX, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
WO2012047968A2 (en) 2010-10-05 2012-04-12 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR20200059320A (ko) 2010-11-08 2020-05-28 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
EP2638070B1 (en) 2010-11-10 2016-10-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for neural disease immunotherapy
NZ706751A (en) 2010-11-30 2016-10-28 Genentech Inc Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
AU2011343570B2 (en) 2010-12-16 2016-11-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to TH2 inhibition
RU2013131444A (ru) 2010-12-16 2015-01-27 Рош Гликарт Аг Сочетанная терапия афукозилированным антителом к cd20 и ингибитором mdm2
NZ610976A (en) 2010-12-20 2015-07-31 Genentech Inc Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
JP2014511106A (ja) 2010-12-22 2014-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｐｃｓｋ９抗体及び使用方法
JP5766296B2 (ja) 2010-12-23 2015-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用
BR112013019083A2 (pt) * 2011-02-10 2017-04-04 Roche Glycart Ag combinação de (a) um imunoconjugado, composição farmacêutica, uso de (a) um imunoconjugado, método de tratamento de uma doença em um individuo, método de estímulo de função celular efetora em um indivíduo e kit destinado ao tratamento de uma doença.
EP2681239B8 (en) 2011-02-28 2015-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding proteins
BR112013020338A2 (pt) 2011-02-28 2016-10-18 Hoffmann La Roche proteína de ligação de antígeno monovalente, composição farmacêutica, uso da proteína de ligação de antígeno monovalente, método para o tratamento de um paciente com necessidade de terapia, método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno monovalente, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira
HUE041335T2 (hu) 2011-03-29 2019-05-28 Roche Glycart Ag Antitest FC-variánsok
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
EP2694551A1 (en) 2011-04-07 2014-02-12 Genentech, Inc. Anti-fgfr4 antibodies and methods of use
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
EP2707723B1 (en) 2011-05-12 2016-02-10 Genentech, Inc. Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature pepides
AU2012255881C1 (en) 2011-05-16 2015-11-26 Genentech, Inc. FGFR1 agonists and methods of use
EP2721067B1 (en) 2011-06-15 2019-07-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-human epo receptor antibodies and methods of use
FR2976811A1 (fr) 2011-06-22 2012-12-28 Lfb Biotechnologies Utilisation d'un anticorps anti-cd20 a haute adcc pour le traitement de la maladie de waldenstrom
AR086982A1 (es) 2011-06-22 2014-02-05 Hoffmann La Roche Eliminacion de celulas diana por parte de celulas t citotoxicas especificas de virus utilizando complejos que comprenden mhc de clase i
AR086823A1 (es) 2011-06-30 2014-01-22 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-c-met, metodos
CA2842375A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Erica Jackson Neuregulin antibodies and uses thereof
EP2744825A1 (en) 2011-08-17 2014-06-25 F.Hoffmann-La Roche Ag Inhibition of angiogenesis in refractory tumors
CN103889452B (zh) 2011-08-23 2017-11-03 罗切格利卡特公司 对t细胞活化性抗原和肿瘤抗原特异性的双特异性抗体及使用方法
KR20140048292A (ko) 2011-08-23 2014-04-23 로슈 글리카트 아게 항-mcsp 항체
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
BR112014005720A2 (pt) 2011-09-15 2017-12-12 Genentech Inc método de seleção e/ou identificação de um antagonista de usp1, antagonista de uaf1 e/ou um antagonista de id que promove uma alteração no destino celular do dito método
RU2014114617A (ru) 2011-09-19 2015-10-27 Дженентек, Инк. Комбинированные виды лечения, содержащие антагонисты с-мет и антагонисты b-raf
BR112014006537A2 (pt) 2011-09-23 2017-11-28 Roche Glycart Ag anticorpos biespecíficos, formulação farmacêutica, usos de um anticorpo biespecífico, método de tratamento, ácido nucleico, vetores de expressão, célula hospedeira e método para a produção de um anticorpo biespecífico
KR101982899B1 (ko) 2011-09-30 2019-05-27 테바 파마슈티컬즈 오스트레일리아 피티와이 엘티디 ＴＬ1ａ에 대한 항체 및 그의 용도
CN103974724B (zh) 2011-10-03 2019-08-30 现代泰克斯公司 修饰的核苷、核苷酸和核酸及其用途
AU2012319150B2 (en) 2011-10-05 2017-08-17 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using Notch2 antagonists
RS57645B1 (sr) 2011-10-14 2018-11-30 Hoffmann La Roche Anti-htra1 antitela i načini primene
RU2014119426A (ru) 2011-10-15 2015-11-20 Дженентек, Инк. Способы применения антагонистов scd1
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
SG11201401815XA (en) 2011-10-28 2014-05-29 Genentech Inc Therapeutic combinations and methods of treating melanoma
WO2013059886A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Patrys Limited Pat-lm1 epitopes and methods for using same
CA2854806A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
TW201326193A (zh) 2011-11-21 2013-07-01 Genentech Inc 抗－ｃ－ｍｅｔ抗體之純化
US20130302274A1 (en) * 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
CA2859387A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
RS60499B1 (sr) 2011-12-20 2020-08-31 Medimmune Llc Modifikovani polipeptidi za bispecifične skelete antitela
SG11201403223PA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Hoffmann La Roche Expression vector organization, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides
KR102229491B1 (ko) 2011-12-22 2021-03-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 발현 벡터 구성원 조합, 신규한 제조 세포 생성 방법 및 폴리펩티드의 재조합적 제조를 위한 그의 용도
SG11201403445YA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Hoffmann La Roche Full length antibody display system for eukaryotic cells and its use
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
WO2013109856A2 (en) 2012-01-18 2013-07-25 Genentech, Inc. Methods of using fgf19 modulators
PE20141561A1 (es) 2012-01-18 2014-11-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-lrp5 y metodos de uso
BR112014019579A2 (pt) 2012-02-10 2019-10-15 Genentech, Inc Anticorpo de cadeia única, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo de cadeia única, heteromultímero e método de produção do heteromultímero
EP2812350B1 (en) 2012-02-11 2019-04-03 F.Hoffmann-La Roche Ag R-spondin translocations and methods using the same
BR112014018005B1 (pt) 2012-02-15 2021-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de um complexo não covalente imobilizado
US20130259867A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
AU2013243951A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of secreted proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
TW201402609A (zh) 2012-05-01 2014-01-16 Genentech Inc 抗ｐｍｅｌ１７抗體及免疫結合物
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
RU2711089C2 (ru) 2012-05-18 2020-01-15 Дженентек, Инк. Высококонцентрированные составы моноклональных антител
BR112014028838A2 (pt) 2012-05-21 2020-05-12 Genentech Inc Usos de um anticorpo, método para fazer um anticorpo e anticorpos
JP6294311B2 (ja) 2012-05-23 2018-03-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド 治療薬の選択方法
BR112014031310A2 (pt) 2012-06-15 2017-07-25 Genentech Inc anticorpos anti-pcsk9, formulações, dosagem e métodos de uso
CN104582736A (zh) 2012-06-21 2015-04-29 印第安纳大学研究及科技有限公司 Fc效应子功能改变的肠降血糖素受体配体多肽Fc区融合多肽和缀合物
WO2014001325A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof
US20140004121A1 (en) 2012-06-27 2014-01-02 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
BR112014032193A2 (pt) 2012-06-27 2017-06-27 Hoffmann La Roche métodos de produção de anticorpos biespecíficos e de determinação de combinação, anticorpo biespecífico, formulação e uso de anticorpo biespecífico
CN107082810B (zh) 2012-07-04 2020-12-25 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗茶碱抗体及使用方法
WO2014006123A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-biotin antibodies and methods of use
EP2869848B1 (en) 2012-07-04 2016-09-21 F. Hoffmann-La Roche AG Covalently linked antigen-antibody conjugates
SI2870247T1 (sl) 2012-07-05 2019-10-30 Hoffmann La Roche Ekspresijski in sekrecijski sistem
AU2013288929A1 (en) 2012-07-09 2014-12-04 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-CD22 antibodies
EA201590171A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. ИММУНОКОНЪЮГАТЫ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К CD79b
WO2014011520A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
SG11201500096YA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti - cd79b antibodies
LT2872534T (lt) 2012-07-13 2018-10-25 Roche Glycart Ag Dvigubai specifiniai anti-vegf/anti-ang-2 antikūnai ir jų panaudojimas akių kraujagyslių ligoms gydyti
JP6302909B2 (ja) 2012-08-18 2018-03-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ シアリダーゼの同定および画像化のための細胞透過性プローブ
AU2013305827A1 (en) 2012-08-21 2015-03-05 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
SG11201500583PA (en) 2012-08-29 2015-04-29 Hoffmann La Roche Blood brain barrier shuttle
CN111481552A (zh) 2012-09-07 2020-08-04 吉宁特有限公司 II型抗CD20抗体与选择性Bcl-2抑制剂的组合治疗
US9714291B2 (en) 2012-10-05 2017-07-25 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Heterodimer protein composition
WO2014056783A1 (en) 2012-10-08 2014-04-17 Roche Glycart Ag Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use
EP2914629A1 (en) 2012-11-05 2015-09-09 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
EP2727941A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
EP2727943A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Trispecific antibodies against human EGFR, HER2 and HER3
EP2727942A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Bispecific antibodies against human EGFR, HER2, and HER3
AU2013337277B2 (en) 2012-11-05 2018-03-08 Foundation Medicine, Inc. Novel NTRK1 fusion molecules and uses thereof
WO2014072306A1 (en) 2012-11-08 2014-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Her3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of her3
TWI657095B (zh) 2012-11-13 2019-04-21 美商建南德克公司 抗血球凝集素抗體及使用方法
JP6144355B2 (ja) 2012-11-26 2017-06-07 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 化学修飾ｍＲＮＡ
JP6461808B2 (ja) 2012-12-17 2019-01-30 ラボラトワール フランセ ドゥ フラクションマン エ デ バイオテクノロジーズＬａｂｏｒａｔｏｉｒｅ Ｆｒａｎｃａｉｓ Ｄｕ Ｆｒａｃｔｉｏｎｎｅｍｅｎｔ Ｅｔ Ｄｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ 炎症および細菌感染症処置におけるモノクローナル抗体の使用
WO2014096015A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Disulfide-linked multivalent mhc class i comprising multi-function proteins
US20140194368A1 (en) * 2013-01-04 2014-07-10 Beech Tree Labs, Inc. Method of Treating Cancer by Administration of Low Levels of Heat Shock Protein 70 (HSP70)
US9180185B2 (en) 2013-01-11 2015-11-10 Hoffman-La Roche Inc. Combination therapy of anti-HER3 antibodies
EP3939614A1 (en) 2013-01-18 2022-01-19 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
KR102449868B1 (ko) 2013-02-01 2022-10-04 키라 바이오테크 피티와이 리미티드 항-cd83 항체 및 이의 용도
ES2942636T3 (es) 2013-02-07 2023-06-05 Csl Ltd Proteínas de unión a IL-11R y usos de las mismas
TW201506041A (zh) 2013-02-13 2015-02-16 Lab Francais Du Fractionnement 高度半乳糖基化的抗腫瘤壞死因子阿爾法抗體及其用途
KR20150118159A (ko) 2013-02-22 2015-10-21 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료 방법 및 약물 내성의 예방 방법
JP6133444B2 (ja) 2013-02-26 2017-05-24 ロシュ グリクアート アーゲー 二重特異性ｔ細胞活性化抗原結合分子
CN104936987A (zh) 2013-02-26 2015-09-23 罗切格利卡特公司 抗mcsp抗体
EP2961773B1 (en) 2013-02-26 2019-03-20 Roche Glycart AG Bispecific t cell activating antigen binding molecules
US9925240B2 (en) 2013-03-06 2018-03-27 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
WO2014164913A1 (en) * 2013-03-12 2014-10-09 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods for inducing apoptosis
MY189047A (en) 2013-03-13 2022-01-21 Genentech Inc Antibody formulations
MX2015011606A (es) 2013-03-14 2016-05-17 Genentech Inc Metodo para tratar cancer y prevenir resistencia a farmacos contra cancer.
EP3299391B1 (en) 2013-03-14 2019-12-04 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
JP2016515132A (ja) 2013-03-14 2016-05-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｍｅｋ阻害剤化合物のｈｅｒ３／ｅｇｆｒ阻害剤化合物との組み合わせ及び使用方法
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
JP6527132B2 (ja) 2013-03-15 2019-06-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 肝臓がんの診断及び治療のための組成物及び方法
JP6397479B2 (ja) 2013-03-15 2018-09-26 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼＦｃコンジュゲート
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
AU2014235453A1 (en) 2013-03-15 2015-10-08 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treating PD-1 and PD-L1 related conditions
WO2014150877A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Ac Immune S.A. Anti-tau antibodies and methods of use
MX368005B (es) 2013-03-15 2019-09-13 Genentech Inc Polipéptidos de il-22 y proteínas de fusion de il-22 fc y métodos de uso.
JP2016517441A (ja) 2013-03-15 2016-06-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＣＲＴｈ２抗体及び使用方法
MX2015011899A (es) 2013-03-15 2016-05-05 Genentech Inc Metodos para el tratamiento de cáncer y prevención de resistencia a los fármacos para el cáncer.
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
AU2014261631B2 (en) 2013-04-29 2019-02-14 F. Hoffmann-La Roche Ag FcRn-binding abolished anti-IGF-1R antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
EP2992010B1 (en) 2013-04-29 2021-03-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
AU2014261630B2 (en) 2013-04-29 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Human FcRn-binding modified antibodies and methods of use
CN105143268A (zh) * 2013-05-02 2015-12-09 豪夫迈·罗氏有限公司 无岩藻糖基化cd20抗体与cd22抗体-药物缀合物的组合疗法
BR112015027309A2 (pt) * 2013-05-02 2017-09-26 Hoffmann La Roche anticorpo, composição, método de tratamento e uso de um anticorpo
KR102293064B1 (ko) 2013-05-20 2021-08-23 제넨테크, 인크. 항-트랜스페린 수용체 항체 및 사용 방법
WO2014210397A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
US9981030B2 (en) 2013-06-27 2018-05-29 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
PT3708583T (pt) 2013-08-01 2022-05-13 Five Prime Therapeutics Inc Anticorpos anti-fgfr2iiib afucosilados
AU2014312190A1 (en) 2013-08-28 2016-02-18 Bioasis Technologies Inc. CNS-targeted conjugates of antibodies
CN105682666B (zh) 2013-09-06 2021-06-01 中央研究院 使用醣脂激活人类iNKT细胞
CN105518027A (zh) 2013-09-17 2016-04-20 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗lgr5抗体的方法
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
LT3052192T (lt) 2013-10-02 2020-12-10 Medimmune, Llc Neutralizuojantys antikūnai prieš gripą a ir jų naudojimas
EA201690675A1 (ru) 2013-10-03 2016-08-31 Модерна Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности
JP6502931B2 (ja) 2013-10-11 2019-04-17 アメリカ合衆国 Ｔｅｍ８抗体およびその使用
CA2922912A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
EP3055328A1 (en) 2013-10-11 2016-08-17 F. Hoffmann-La Roche AG Nsp4 inhibitors and methods of use
CA2925598A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Genentech, Inc. Anti-rspo antibodies and methods of use
SG11201603127WA (en) 2013-10-23 2016-05-30 Genentech Inc Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders
MX2016005631A (es) 2013-11-21 2016-07-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-alfa-sinucleina y metodos de uso.
WO2015082446A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of cancer using an anti-cdcp1 antibody and a taxane
AU2014363944B2 (en) 2013-12-09 2020-03-26 Allakos Inc. Anti-Siglec-8 antibodies and methods of use thereof
EP3080164B1 (en) 2013-12-13 2019-01-16 Genentech, Inc. Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
MX2016007972A (es) 2013-12-17 2016-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar canceres con antagonistas de union al eje pd-1 y taxanos.
US20150190506A1 (en) 2013-12-17 2015-07-09 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
RU2016128726A (ru) 2013-12-17 2018-01-23 Дженентек, Инк. Способы лечения злокачественных опухолей с использованием антагонистов связывания по оси pd-1 и антитела против cd20
HUE050156T2 (hu) 2013-12-17 2020-11-30 Genentech Inc Anti-CD3 antitestek és alkalmazási eljárások
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
JP6476194B2 (ja) 2014-01-03 2019-02-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 二重特異性抗ハプテン／抗血液脳関門受容体抗体、それらの複合体、及び血液脳関門シャトルとしてのそれらの使用
CN105873616B (zh) 2014-01-03 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 共价连接的多肽毒素-抗体缀合物
RU2694981C2 (ru) 2014-01-03 2019-07-18 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Ковалентно связанные конъюгаты хеликар-антитело против хеликара и их применения
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
RU2694659C2 (ru) 2014-01-06 2019-07-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Одновалентные модули-переносчики через гематоэнцефалический барьер
RU2727639C2 (ru) 2014-01-15 2020-07-22 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Варианты fc-области с модифицированной способностью связываться с fcrn и с сохраненной способностью связываться с белком а
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
EP3094352B1 (en) 2014-01-16 2020-09-23 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
EP3096797A1 (en) 2014-01-24 2016-11-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
JP6736467B2 (ja) 2014-02-04 2020-08-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 平滑化変異体及びその使用方法
WO2015120280A1 (en) 2014-02-08 2015-08-13 Genentech, Inc. Methods of treating alzheimer's disease
SG11201606316XA (en) 2014-02-08 2016-08-30 Genentech Inc Methods of treating alzheimer's disease
TW201902515A (zh) 2014-02-12 2019-01-16 美商建南德克公司 抗jagged1抗體及使用方法
EP3107574A2 (en) 2014-02-21 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-il-13/il-17 bispecific antibodies and uses thereof
US10183996B2 (en) 2014-02-28 2019-01-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating Siglec-8 associated diseases
WO2015139046A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Genentech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
MA39776A (fr) 2014-03-24 2017-02-01 Hoffmann La Roche Traitement du cancer avec des antagonistes de c-met et corrélation de ces derniers avec l'expression de hgf
EP3129767B1 (en) 2014-03-27 2021-09-01 Academia Sinica Reactive labelling compounds and uses thereof
MA39817A (fr) 2014-03-31 2017-02-08 Hoffmann La Roche Thérapie combinatoires comprenant des agents anti-angiogenèse et des agonistes se liant à ox40
EP3632934A1 (en) 2014-03-31 2020-04-08 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-ox40 antibodies and methods of use
BR112016022910A2 (pt) 2014-04-11 2017-10-17 Medimmune Llc anticorpos contra her2 biespecíficos
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
CN106414499A (zh) 2014-05-22 2017-02-15 基因泰克公司 抗gpc3抗体和免疫偶联物
RU2016144405A (ru) 2014-05-23 2018-06-26 Дженентек, Инк. MiT БИОМАРКЕРЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
TWI679020B (zh) 2014-05-27 2019-12-11 中央研究院 抗ｈｅｒ２醣抗體及其用途
KR20170003720A (ko) 2014-05-27 2017-01-09 아카데미아 시니카 항-ｃｄ20 글리코항체 및 이의 용도
TWI717319B (zh) 2014-05-27 2021-02-01 中央研究院 得自類桿菌屬之岩藻糖苷酶及其用途
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
KR102494193B1 (ko) 2014-05-28 2023-01-31 아카데미아 시니카 항-ｔｎｆ-알파 글리코항체 및 이의 용도
CN106714830B (zh) 2014-05-30 2020-08-25 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗表皮生长因子受体(egfr)抗体
EP3155015A1 (en) 2014-06-11 2017-04-19 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
CN107073121A (zh) 2014-06-13 2017-08-18 基因泰克公司 治疗及预防癌症药物抗性的方法
WO2015197736A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-brdu antibodies and methods of use
BR112017000130A2 (pt) 2014-07-11 2018-01-09 Genentech Inc método para atenuar a toxicidade associada à inibição da via de notch e método de tratamento do câncer
EP3309174B1 (en) 2014-07-11 2022-05-11 Ventana Medical Systems, Inc. Anti-pd-l1 antibodies and diagnostic uses thereof
EP3177643B1 (en) 2014-08-04 2019-05-08 F.Hoffmann-La Roche Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
AU2015308818B2 (en) 2014-08-28 2021-02-25 Bioatla Llc Conditionally active chimeric antigen receptors for modified T-cells
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
CN107001404B (zh) 2014-09-08 2021-06-29 中央研究院 使用醣脂激活人类iNKT细胞
EP3567056A1 (en) * 2014-09-10 2019-11-13 F. Hoffmann-La Roche AG Galactoengineered immunoglobulin 1 antibodies
JP6886398B2 (ja) 2014-09-12 2021-06-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ａｎｔｉ−ｃｌｌ−１抗体及び免疫複合体
SG11201701623UA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
CN113698485A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
EP3193932B1 (en) 2014-09-15 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody formulations
RU2727663C2 (ru) 2014-09-17 2020-07-22 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела против her2 и пирролбензодиазепины
EP3689910A3 (en) 2014-09-23 2020-12-02 F. Hoffmann-La Roche AG Method of using anti-cd79b immunoconjugates
EP3207057A2 (en) 2014-10-16 2017-08-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
EP3209695A4 (en) 2014-10-23 2018-05-30 DendroCyte BioTech Pty Ltd Cd83 binding proteins and uses thereof
EP3223865A4 (en) 2014-10-31 2018-10-03 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
AU2015343337A1 (en) 2014-11-03 2017-06-15 Genentech, Inc. Assays for detecting T cell immune subsets and methods of use thereof
EP3215637B1 (en) 2014-11-03 2019-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and biomarkers for predicting efficacy and valuation of an ox40 agonist treatment
US10208120B2 (en) 2014-11-05 2019-02-19 Genentech, Inc. Anti-FGFR2/3 antibodies and methods using same
JP6576456B2 (ja) 2014-11-06 2019-09-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 修飾されたＦｃＲｎ結合特性およびプロテインＡ結合特性を有するＦｃ領域変種
RU2714116C2 (ru) 2014-11-06 2020-02-11 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ FcRn И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
EP3215536A1 (en) 2014-11-06 2017-09-13 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
JP6929771B2 (ja) 2014-11-10 2021-09-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン−３３抗体及びその使用
CN107105632A (zh) 2014-11-10 2017-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 肾病动物模型及其治疗剂
BR112017009006A2 (pt) 2014-11-14 2018-04-10 F. Hoffmann-La Roche Ag molécula de ligação, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, método de produção da molécula de ligação, composição farmacêutica, uso da molécula de ligação e método de tratamento de uma doença em um indivíduo
US10160795B2 (en) 2014-11-14 2018-12-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to Ebola virus glycoprotein and their use
SG10201807625PA (en) 2014-11-17 2018-10-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
US10882920B2 (en) 2014-11-19 2021-01-05 Genentech, Inc. Antibodies against BACE1 and use thereof for neural disease immunotherapy
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
MY192999A (en) 2014-11-20 2022-09-20 Hoffmann La Roche Combination therapy of t cell activating bispecific antigen binding molecules and pd-1 axis binding antagonists
WO2016087416A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
DK3227336T3 (da) 2014-12-05 2019-09-16 Hoffmann La Roche Anti-CD79b-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
EP3230317A2 (en) 2014-12-10 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
EP3233921B1 (en) 2014-12-19 2021-09-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c5 antibodies and methods of use
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
CA2973964A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1
EP3247723A1 (en) 2015-01-22 2017-11-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
JP6779887B2 (ja) 2015-01-24 2020-11-04 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 新規なグリカンコンジュゲートおよびその使用方法
CA2975875A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
SG10201907215QA (en) 2015-02-05 2019-09-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibodies Comprising An Ion Concentration Dependent Antigen-Binding Domain, Fc Region Variants, Il-8-Binding Antibodies, And Uses Therof
KR20170140180A (ko) 2015-02-24 2017-12-20 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 중동 호흡기 증후군 코로나 바이러스 면역원, 항체 및 그 용도
CA2977285A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
AU2016235541B2 (en) 2015-03-20 2021-04-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
WO2016154177A2 (en) 2015-03-23 2016-09-29 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to icos
CN107743495B (zh) 2015-03-23 2021-05-14 拜耳制药股份公司 抗ceacam6抗体及其用途
SG11201707490SA (en) 2015-04-03 2017-10-30 Eureka Therapeutics Inc Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
ES2881694T3 (es) 2015-04-24 2021-11-30 Hoffmann La Roche Procedimientos de identificación de bacterias que comprenden polipéptidos de unión
CN107708986B (zh) * 2015-04-30 2019-12-13 富士胶片株式会社 装饰片
JP2018520642A (ja) 2015-05-01 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド マスク抗ｃｄ３抗体及びその使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
JP6963508B2 (ja) * 2015-05-11 2021-11-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎を治療する組成物及び方法
CA2983282A1 (en) 2015-05-12 2016-11-17 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
CA2984003A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
JP2018520658A (ja) 2015-05-29 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体及びその使用
JP2018516933A (ja) 2015-06-02 2018-06-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−３４抗体を使用して神経学的疾患を治療するための組成物及び方法
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
US10682391B2 (en) 2015-06-04 2020-06-16 Ospedale San Raffaele Srl Inhibitors of IGFBP3 binding to TMEM219 for treatment of intestinal diseases
JP6360265B2 (ja) 2015-06-04 2018-07-18 オスペダーレ・サン・ラッファエーレ・エッセエッレエッレ Ｉｇｆｂｐ３／ｔｍｅｍ２１９軸及び糖尿病のインヒビター
CA2986942A1 (en) 2015-06-05 2016-12-08 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
KR20180011839A (ko) 2015-06-08 2018-02-02 제넨테크, 인크. 항-ox40 항체를 이용한 암의 치료 방법
US20170000885A1 (en) 2015-06-08 2017-01-05 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
CN108064246A (zh) 2015-06-15 2018-05-22 基因泰克公司 抗体和免疫结合物
CN107847568B (zh) 2015-06-16 2022-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cll-1抗体和使用方法
HRP20231134T1 (hr) 2015-06-16 2024-01-05 F. Hoffmann - La Roche Ag Humanizirana i afinitetno zrela protutijela na fcrh5 i postupci za uporabu
JP2018526972A (ja) 2015-06-16 2018-09-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３抗体及び使用方法
AU2016280159A1 (en) 2015-06-17 2017-12-07 Genentech, Inc. Anti-HER2 antibodies and methods of use
AU2016280070B2 (en) 2015-06-17 2022-09-15 Genentech, Inc. Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using PD-1 axis binding antagonists and taxanes
AU2016278239B9 (en) 2015-06-17 2022-08-11 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
HRP20220304T1 (hr) 2015-06-24 2022-05-13 F. Hoffmann - La Roche Ag Anti-transferinska receptorska protutijela s prilagođenim afinitetom
CR20170537A (es) * 2015-06-24 2018-02-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos contra csf-1r humano para uso en la inducción de linfocitosis en linfomas o leucemias.
CN108026172B (zh) 2015-06-26 2022-04-29 赛诺菲生物技术公司 单克隆抗il-1racp抗体
BR112017027736A2 (pt) 2015-06-29 2018-10-09 Genentech Inc anticorpo anti-cd20 tipo ii para uso no transplante de órgãos
WO2017001350A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
EP3341415B1 (en) 2015-08-28 2021-03-24 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-hypusine antibodies and uses thereof
CA2999369C (en) 2015-09-22 2023-11-07 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
PE20181363A1 (es) 2015-09-23 2018-08-27 Genentech Inc Variantes optimizadas de anticuerpos anti-vegf
US11142565B2 (en) 2015-09-24 2021-10-12 Abvitro Llc Broadly neutralizing anti-HIV-1 antibodies that bind to an N-glycan epitope on the envelope
EP3356415A1 (en) 2015-09-29 2018-08-08 Amgen Inc. Asgr inhibitors
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
EP3356406A1 (en) 2015-10-02 2018-08-08 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific anti-human cd20/human transferrin receptor antibodies and methods of use
RU2761115C1 (ru) 2015-10-02 2021-12-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела, специфические в отношении костимуляторного tnf-рецептора
LT3356411T (lt) 2015-10-02 2021-09-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecifiniai antikūnai, specifiniai pd1 ir tim3
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MY193013A (en) 2015-10-07 2022-09-22 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory tnf receptor
US10392441B2 (en) 2015-10-07 2019-08-27 United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
KR20180066236A (ko) 2015-10-22 2018-06-18 조운스 테라퓨틱스, 인크. Icos 발현을 계측하기 위한 유전자 특질
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
IL295756A (en) 2015-10-29 2022-10-01 Hoffmann La Roche Antibodies against fc-variable region and methods of use
TW201730211A (zh) 2015-10-30 2017-09-01 建南德克公司 抗因子d抗體及結合物
PE20181009A1 (es) 2015-10-30 2018-06-26 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-HtrA1 Y METODOS DE USO DE LOS MISMOS
EP4011911A1 (en) 2015-11-03 2022-06-15 The United States of America as represented by The Secretary Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use
CN108602884A (zh) 2015-11-08 2018-09-28 豪夫迈·罗氏有限公司 筛选多特异性抗体的方法
TWI791422B (zh) 2015-11-23 2023-02-11 美商戊瑞治療有限公司 用於癌症治療之單獨fgfr2抑制劑或與免疫刺激劑組合
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
TWI597292B (zh) 2015-12-18 2017-09-01 中外製藥股份有限公司 抗ｃ５抗體及使用方法
PL3400246T3 (pl) 2016-01-08 2021-03-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby leczenia nowotworów z dodatnim markerem cea z wykorzystaniem antagonistów wiążących oś pd-1 oraz przeciwciał dwuswoistych anty-cea/anty-cd3
CA3011739A1 (en) 2016-01-20 2017-07-27 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
WO2017136558A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
CN114395624A (zh) 2016-02-29 2022-04-26 基因泰克公司 用于癌症的治疗和诊断方法
CN108699155B (zh) * 2016-03-01 2023-03-21 豪夫迈·罗氏有限公司 具有改变的细胞死亡诱导的奥滨尤妥珠单抗变体
CA3016170A1 (en) 2016-03-08 2017-09-14 Academia Sinica Methods for modular synthesis of n-glycans and arrays thereof
MX2018010546A (es) 2016-03-15 2019-02-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodos de tratamiento de cancer que usan antagonistas de union al eje de muerte programada 1 (pd-1) y anticuerpos anti glipicano 3 (gpc3).
RU2018136567A (ru) 2016-03-22 2020-04-22 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Активируемые протеазой связывающие т-клетки биспецифические молекулы
JP6943872B2 (ja) 2016-03-25 2021-10-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重全抗体及び抗体複合体化薬物定量化アッセイ
MY194669A (en) 2016-03-31 2022-12-12 Ngm Biopharmaceuticals Inc Binding Proteins and Methods of use Thereof
EP3443004A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-rspo3 antibodies and methods of use
SG11201808994YA (en) 2016-04-15 2018-11-29 Bioatla Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
EP3443120A2 (en) 2016-04-15 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
CN109154613A (zh) 2016-04-15 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于监测和治疗癌症的方法
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
UA123323C2 (uk) 2016-05-02 2021-03-17 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Димерний злитий поліпептид
EP3241845A1 (en) 2016-05-06 2017-11-08 MAB Discovery GmbH Humanized anti-il-1r3 antibodies
JP7285076B2 (ja) 2016-05-11 2023-06-01 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｔｎｆファミリーリガンドトリマーとテネイシン結合部分とを含む抗原結合分子
EP3455252B1 (en) 2016-05-11 2022-02-23 F. Hoffmann-La Roche AG Modified anti-tenascin antibodies and methods of use
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
IL308504A (en) 2016-05-13 2024-01-01 Bioatla Llc Antibodies, Antibody Fragments and Their Immunomodules Against ROR2 and Their Uses
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
PL3458101T3 (pl) 2016-05-20 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania
US20170370906A1 (en) 2016-05-27 2017-12-28 Genentech, Inc. Bioanalytical analysis of site-specific antibody drug conjugates
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3257866A1 (en) 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
CN109563160B (zh) 2016-06-24 2023-02-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗聚泛素多特异性抗体
CA3026858A1 (en) * 2016-06-30 2018-01-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Improved adoptive t-cell therapy
WO2018007314A1 (en) 2016-07-04 2018-01-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel antibody format
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
MX2019001184A (es) 2016-07-29 2019-09-26 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos anti-idiotípicos y métodos relacionados.
AU2017303205A1 (en) 2016-07-29 2019-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Bispecific antibody exhibiting increased alternative FVIII-cofactor-function activity
CN116271014A (zh) 2016-08-05 2023-06-23 中外制药株式会社 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物
WO2018029124A1 (en) 2016-08-08 2018-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic and diagnostic methods for cancer
JP7213549B2 (ja) 2016-08-22 2023-01-27 シーエイチオー ファーマ インコーポレイテッド 抗体、結合性断片、および使用の方法
WO2018045379A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
EP3510046A4 (en) 2016-09-07 2020-05-06 The Regents of the University of California ANTIBODIES AGAINST OXIDATION-SPECIFIC EPITOPES
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
CN109689682B (zh) 2016-09-19 2022-11-29 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
LT3528838T (lt) 2016-09-23 2023-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Il-13 antagonistų panaudojimas gydant atopinį dermatitą
ES2897217T3 (es) 2016-09-30 2022-02-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos frente a p95HER2
MX2019003768A (es) 2016-10-03 2019-06-24 Juno Therapeutics Inc Moleculas de enlace especificas de hpv.
WO2018065501A1 (en) 2016-10-05 2018-04-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for preparing antibody drug conjugates
MX2019003934A (es) 2016-10-06 2019-07-10 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
EP3532091A2 (en) 2016-10-29 2019-09-04 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-mic antibidies and methods of use
PL3535298T3 (pl) 2016-11-02 2021-12-27 Jounce Therapeutics, Inc. Przeciwciała wobec pd-1 i ich zastosowanie
MX2019005438A (es) 2016-11-15 2019-08-16 Genentech Inc Dosificacion para tratamiento con anticuerpos bispecificos anti-cd20 / anti-cd3.
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
NZ750948A (en) 2016-11-21 2020-06-26 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
AU2017373889A1 (en) 2016-12-07 2019-06-06 Ac Immune Sa Anti-Tau antibodies and methods of use
CN110248959B (zh) 2016-12-07 2023-06-30 基因泰克公司 抗tau抗体和使用方法
CN110366562A (zh) 2016-12-12 2019-10-22 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗pd-l1抗体和抗雄激素治疗癌症的方法
TWI829628B (zh) 2016-12-19 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與靶向4-1bb (cd137)促效劑併用之組合療法
JP7247091B2 (ja) 2016-12-20 2023-03-28 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体と４－１ｂｂ（ｃｄ１３７）アゴニストの併用療法
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
TW201829469A (zh) 2017-01-03 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 包含抗4-1bb純系20h4.9之雙特異性抗原結合分子
WO2018129029A1 (en) 2017-01-04 2018-07-12 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
TW201831517A (zh) 2017-01-12 2018-09-01 美商優瑞科生物技術公司 靶向組織蛋白h3肽/mhc複合體之構築體及其用途
UA126574C2 (uk) 2017-02-10 2022-11-02 Дженентек, Інк. Антитіло проти триптази, його композиція та застосування
US11021535B2 (en) 2017-02-10 2021-06-01 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
EP3589754B1 (en) 2017-03-01 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
JP7227151B2 (ja) 2017-03-22 2023-02-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 眼障害の治療のために最適化された抗体組成物
SG10201911225WA (en) 2017-03-28 2020-01-30 Genentech Inc Methods of treating neurodegenerative diseases
WO2018178076A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
BR112019017753A2 (pt) 2017-04-04 2020-04-07 Hoffmann La Roche molécula biespecífica, polinucleotídeo, vetor, célula, métodos para a produção de uma molécula e para o tratamento de um indivíduo, composição e uso da molécula biespecífica
KR102408873B1 (ko) 2017-04-05 2022-06-15 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 lag3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체
WO2018191438A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and methods of using the same
MX2019012192A (es) 2017-04-14 2020-01-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
US11767520B2 (en) 2017-04-20 2023-09-26 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
EP3624820A1 (en) 2017-04-21 2020-03-25 H. Hoffnabb-La Roche Ag Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
AU2018258049A1 (en) 2017-04-26 2019-12-12 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
US20220135670A1 (en) 2017-04-27 2022-05-05 Tesaro, Inc. Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
US11203638B2 (en) 2017-05-05 2021-12-21 Allakos Inc. Methods and compositions for treating perennial allergic conjunctivitis and keratoconjunctivitis
EP3401332A1 (en) 2017-05-08 2018-11-14 MAB Discovery GmbH Anti-il-1r3 antibodies for use in inflammatory conditions
JP7299842B2 (ja) 2017-05-16 2023-06-28 ファイヴ プライム セラピューティクス インク がん治療における化学療法剤と組み合わせた抗ｆｇｆｒ２抗体
EP3630829A1 (en) 2017-06-02 2020-04-08 H. Hoffnabb-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
US11634488B2 (en) 2017-07-10 2023-04-25 International—Drug—Development—Biotech Treatment of B cell malignancies using afucosylated pro-apoptotic anti-CD19 antibodies in combination with anti CD20 antibodies or chemotherapeutics
KR20200093518A (ko) 2017-07-21 2020-08-05 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
US10961318B2 (en) 2017-07-26 2021-03-30 Forty Seven, Inc. Anti-SIRP-α antibodies and related methods
JP2020528061A (ja) 2017-07-26 2020-09-17 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を用いた併用療法
UA126204C2 (uk) 2017-08-08 2022-08-31 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Лікування нової підгрупи пацієнтів із dlbcl за допомогою обінутузумабу
CN107881160A (zh) 2017-08-11 2018-04-06 百奥泰生物科技(广州)有限公司 一种由基因组被编辑的cho宿主细胞产生的具有独特糖谱的重组抗体及其制备方法
WO2019036855A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Adagene Inc. ANTI-CD137 MOLECULES AND THEIR USE
EP3456738A1 (en) * 2017-09-19 2019-03-20 Tillotts Pharma Ag Antibody variants
EP3684413A1 (en) 2017-09-20 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
CA3080546A1 (en) 2017-10-03 2019-04-11 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
CA3078974A1 (en) 2017-10-12 2019-04-18 Immunowake Inc. Vegfr-antibody light chain fusion protein
EP3697818A2 (en) 2017-10-19 2020-08-26 H. Hoffnabb-La Roche Ag A pharmaceutical composition
JP2021501162A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 標的ｏｘ４０アゴニストとの併用療法
EP3703746A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Novel tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
SG11202003501XA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
WO2019086500A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific 2+1 contorsbodies
MX2020004567A (es) 2017-11-06 2020-08-13 Genentech Inc Metodos diagnosticos y terapeuticos para el cancer.
MX2020005662A (es) 2017-12-01 2020-08-20 Pfizer Anticuerpos anti-cxcr5 y composiciones y usos de los mismos.
JP2021506817A (ja) 2017-12-14 2021-02-22 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療するための投与計画におけるｃｅａ ｃｄ３二重特異性抗体及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストの使用
KR20200110745A (ko) 2017-12-15 2020-09-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 항 - ｃｃｔ5 결합 분자 및 이의 사용 방법
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
WO2019126514A2 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies for lilrb2
US20190211098A1 (en) 2017-12-22 2019-07-11 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
WO2019129221A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against tigit
KR20200104886A (ko) 2017-12-28 2020-09-04 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-l1에 대한 항체 및 변이체
WO2019136029A1 (en) 2018-01-02 2019-07-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
CN111886247A (zh) 2018-01-05 2020-11-03 Ac免疫有限公司 错折叠tdp-43结合分子
EP3508499A1 (en) 2018-01-08 2019-07-10 iOmx Therapeutics AG Antibodies targeting, and other modulators of, an immunoglobulin gene associated with resistance against anti-tumour immune responses, and uses thereof
SG11202004233UA (en) 2018-01-15 2020-06-29 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Single-domain antibodies and variants thereof against pd-1
US20200339686A1 (en) 2018-01-16 2020-10-29 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
JP7345479B2 (ja) 2018-01-26 2023-09-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド 組成物及び使用方法
JP7349995B2 (ja) 2018-01-26 2023-09-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び使用方法
CN116041516A (zh) 2018-02-01 2023-05-02 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗b细胞成熟抗原(bcma)单链抗体及其应用
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
AR115360A1 (es) 2018-02-08 2021-01-13 Genentech Inc Moléculas de unión al antígeno y métodos de uso
MA51741A (fr) 2018-02-09 2021-05-19 Hoffmann La Roche Procédés thérapeutiques et de diagnostic pour des maladies inflammatoires médiées par des mastocytes
JP7350756B2 (ja) 2018-02-14 2023-09-26 アバ セラピューティクス アーゲー 抗ヒトｐｄ－ｌ２抗体
WO2019165122A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
EP3755364A1 (en) 2018-02-21 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with il-22 fc fusion proteins
CA3092108A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
TW202003561A (zh) 2018-03-13 2020-01-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
AU2019236372A1 (en) 2018-03-13 2020-07-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 BB agonists with anti-CD20 antibodies
CN112166123B (zh) 2018-03-14 2022-09-30 北京轩义医药科技有限公司 抗紧密连接蛋白18.2抗体
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
CN112119090B (zh) 2018-03-15 2023-01-13 中外制药株式会社 对寨卡病毒具有交叉反应性的抗登革热病毒抗体及使用方法
TW201945393A (zh) 2018-03-21 2019-12-01 美商戊瑞治療有限公司 在酸性pH結合至VISTA之抗體
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
CA3095027A1 (en) 2018-04-05 2019-10-10 Juno Therapeutics, Inc. T cell receptors and engineered cells expressing same
CN112218686A (zh) 2018-04-11 2021-01-12 印希比股份有限公司 具有受限cd3结合的多特异性多肽构建体以及相关方法和用途
EP3774900A1 (en) 2018-04-13 2021-02-17 F. Hoffmann-La Roche AG Her2-targeting antigen binding molecules comprising 4-1bbl
EP3560945A1 (en) 2018-04-27 2019-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for purification of polypeptides using polysorbates
JP7372237B2 (ja) 2018-06-04 2023-10-31 中外製薬株式会社 細胞質内での半減期が変化した抗原結合分子
US20210371539A1 (en) 2018-06-22 2021-12-02 Genmab Holding B.V. Anti-cd37 antibodies and anti-cd20 antibodies, compositions and methods of use thereof
BR112020026384A2 (pt) 2018-06-23 2021-03-30 Genentech, Inc. Métodos para tratar um indivíduo com câncer de pulmão e para tratar um indivíduo com câncer de pulmão de pequenas células, kits, anticorpo anti-pd-l1 e composição
CN112424228A (zh) 2018-07-04 2021-02-26 豪夫迈·罗氏有限公司 新型双特异性激动性4-1bb抗原结合分子
SG11202100096XA (en) 2018-07-09 2021-02-25 Five Prime Therapeutics Inc Antibodies binding to ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CA3104536A1 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to vista at acidic ph
US20200171146A1 (en) 2018-07-18 2020-06-04 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
EP3823673A4 (en) 2018-07-20 2022-05-11 Surface Oncology, Inc. ANTI-CD112R COMPOSITIONS AND METHODS
JP2021531785A (ja) 2018-07-24 2021-11-25 インヒブルクス インコーポレイテッド 制約されたｃｄ３結合ドメインおよび受容体結合領域を含有する多重特異性ポリペプチド構築物ならびにそれを使用する方法
US20220195045A1 (en) 2018-08-03 2022-06-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
MA50586A (fr) 2018-08-09 2020-09-16 Regeneron Pharma Procédés d'évaluation de l'affinité de liaison d'une variante d'anticorps au récepteur fc néonatal
BR112021002037A2 (pt) 2018-08-10 2021-05-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha molécula de ligação de antígeno anti-cd137 e uso da mesma
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
EP3853611A1 (en) 2018-09-19 2021-07-28 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
EP3857230B1 (en) 2018-09-21 2023-06-07 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
JP2022502088A (ja) 2018-09-27 2022-01-11 エクシリオ デベロップメント， インコーポレイテッド マスクされたサイトカインポリペプチド
US11242396B2 (en) 2018-10-01 2022-02-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antigen binding molecules comprising anti-FAP clone 212
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
EP3632929A1 (en) 2018-10-02 2020-04-08 Ospedale San Raffaele S.r.l. Antibodies and uses thereof
KR20210074286A (ko) 2018-10-05 2021-06-21 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 항-fgfr2 항체 제형
CA3115285A1 (en) 2018-10-11 2020-04-16 Inhibrx, Inc. Pd-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
KR20210079311A (ko) 2018-10-18 2021-06-29 제넨테크, 인크. 육종성 신장암에 대한 진단과 치료 방법
US20210395390A1 (en) 2018-10-31 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Reversal agents for neutralizing the therapeutic activity of anti-fxia antibodies
US20210403597A1 (en) 2018-11-16 2021-12-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies to mucin-16 and methods of use thereof
JP2022511502A (ja) 2018-12-05 2022-01-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの免疫療法のための診断方法及び診断用組成物
KR20210100668A (ko) 2018-12-06 2021-08-17 제넨테크, 인크. 항-CD79b 면역접합체, 알킬화제 및 항-CD20 항체를 포함하는 미만성 큰 B-세포 림프종의 조합 요법
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
US20220089694A1 (en) 2018-12-20 2022-03-24 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
AR117453A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Genentech Inc Fc de anticuerpos modificados y métodos para utilizarlas
JP2022513495A (ja) 2018-12-21 2022-02-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 腫瘍標的化スーパーアゴニストｃｄ２８抗原結合分子
EP3898682A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Tumor-targeted agonistic cd28 antigen binding molecules
EP3902832A2 (en) 2018-12-26 2021-11-03 Xilio Development, Inc. Anti-ctla4 antibodies and methods of use thereof
CN113272327A (zh) 2018-12-30 2021-08-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗兔cd19抗体及其使用方法
TW202043272A (zh) 2019-01-14 2020-12-01 美商建南德克公司 使用pd-1軸結合拮抗劑及rna疫苗治療癌症之方法
EP3911675A1 (en) 2019-01-17 2021-11-24 Bayer Aktiengesellschaft Methods to determine whether a subject is suitable of being treated with an agonist of soluble guanylyl cyclase (sgc)
CN113329770A (zh) 2019-01-24 2021-08-31 中外制药株式会社 新型癌抗原及所述抗原的抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
KR20210122272A (ko) 2019-01-29 2021-10-08 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ror1)에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체
CA3130695A1 (en) 2019-02-27 2020-09-03 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies
WO2020185535A1 (en) 2019-03-08 2020-09-17 Genentech, Inc. Methods for detecting and quantifying membrane-associated proteins on extracellular vesicles
JP2022524074A (ja) 2019-03-14 2022-04-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＨＥＲ２ ＭＡＢと組み合わせたＨＥＲ２ｘＣＤ３二重特異性抗体によるがんの処置
JP7301155B2 (ja) 2019-04-12 2023-06-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト リポカリンムテインを含む二重特異性抗原結合分子
SG11202111345PA (en) 2019-04-19 2021-11-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Chimeric receptor that recognizes engineered site in antibody
MX2021012692A (es) 2019-04-19 2021-11-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk y sus metodos de uso.
US20220227853A1 (en) 2019-05-03 2022-07-21 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
CN114269376A (zh) 2019-05-03 2022-04-01 豪夫迈·罗氏有限公司 用抗pd-l1抗体治疗癌症的方法
CA3138045C (en) 2019-05-14 2024-02-20 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat follicular lymphoma
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
AU2020278907A1 (en) 2019-05-23 2022-01-20 Ac Immune Sa Anti-TDP-43 binding molecules and uses thereof
CN113905757A (zh) * 2019-06-05 2022-01-07 中外制药株式会社 抗体切割位点结合分子
AU2020304813A1 (en) 2019-06-26 2022-01-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fusion of an antibody binding CEA and 4-1BBL
JP7354306B2 (ja) 2019-06-27 2023-10-02 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規ｉｃｏｓ抗体及びそれらを含む腫瘍標的化抗原結合分子
EA202290208A1 (ru) 2019-07-02 2022-03-25 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Эмерика, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретэри, Дипартмент Оф Хелт Энд Хьюман Сервисиз МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТ EGFRvIII, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CA3146023A1 (en) 2019-07-05 2021-01-14 Iomx Therapeutics Ag Antibodies binding igc2 of igsf11 (vsig3) and uses thereof
JPWO2021010326A1 (ru) 2019-07-12 2021-01-21
WO2021024209A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Aprinoia Therapeutics Inc. Antibodies that bind to pathological tau species and uses thereof
TW202118512A (zh) 2019-09-12 2021-05-16 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎之組成物及方法
EP4031575A1 (en) 2019-09-19 2022-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to vista at acidic ph
EP4031580A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for anti-tryptase antibodies
KR20220070237A (ko) 2019-09-27 2022-05-30 제넨테크, 인크. 항-tigit 및 항-pd-l1 길항제 항체를 이용한 치료를 위한 투약
AU2020365836A1 (en) 2019-10-18 2022-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of using anti-CD79b immunoconjugates to treat diffuse large B-cell lymphoma
EP4055388A1 (en) 2019-11-06 2022-09-14 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
BR112022008629A2 (pt) 2019-11-15 2022-07-19 Enthera S R L Anticorpo isolado ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, polinucleotídeo isolado, vetor, célula isolada, composição farmacêutica, uso dos mesmos e método para inibir a ligação de igfbp3 ao receptor tmem219
EP3822288A1 (en) 2019-11-18 2021-05-19 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts Antibodies targeting, and other modulators of, the cd276 antigen, and uses thereof
US20230039165A1 (en) 2019-11-21 2023-02-09 Enthera S.R.L. Igfbp3 antibodies and therapeutic uses thereof
CN115335399A (zh) 2019-12-06 2022-11-11 朱诺治疗学股份有限公司 针对gprc5d靶结合结构域的抗独特型抗体以及相关组合物和方法
BR112022010627A2 (pt) 2019-12-06 2022-08-16 Juno Therapeutics Inc Anticorpos anti-idiotípicos para domínios de ligação alvejados por bcma e composições e métodos relacionados
WO2021119505A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Genentech, Inc. Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
US20230058982A1 (en) 2019-12-27 2023-02-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ctla-4 antibody and use thereof
MX2022008214A (es) 2020-01-09 2022-08-08 Hoffmann La Roche Nuevas moleculas de union al antigeno que contienen el trimero de 4-1bbl.
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
EP4097129A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 Inhibrx, Inc. Cd28 single domain antibodies and multivalent and multispecific constructs thereof
WO2021155295A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 The Cleveland Clinic Foundation Anti-müllerian hormone receptor 2 antibodies and methods of use
CA3164559A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Lars Mueller Methods of inducing neoepitope-specific t cells with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
CA3169451A1 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
WO2021168292A1 (en) 2020-02-20 2021-08-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
EP3868396A1 (en) 2020-02-20 2021-08-25 Enthera S.R.L. Inhibitors and uses thereof
JP2023516945A (ja) 2020-02-28 2023-04-21 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト及びその使用
JP2023516941A (ja) 2020-02-28 2023-04-21 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト、多重特異性抗体及びその使用
CR20220461A (es) 2020-03-13 2022-10-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y usos de estos
CN117510630A (zh) 2020-03-19 2024-02-06 基因泰克公司 同种型选择性抗TGF-β抗体及使用方法
EP4107184A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Method for treating pneumonia, including covid-19 pneumonia, with an il6 antagonist
CN115867577A (zh) 2020-03-23 2023-03-28 基因泰克公司 用于预测covid-19肺炎中对il-6拮抗剂反应的生物标志物
US20230174656A1 (en) 2020-03-23 2023-06-08 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
PE20230414A1 (es) 2020-03-24 2023-03-07 Genentech Inc Agentes de fijacion a tie2 y metodos de uso
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
WO2021202959A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
MX2022013198A (es) 2020-04-24 2022-11-14 Genentech Inc Metodos de uso de inmunoconjugados anti-cd79b.
KR20230004520A (ko) 2020-04-27 2023-01-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 지단백(ａ)에 대한 이소형-비의존성 항체
JP2023523450A (ja) 2020-04-28 2023-06-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 非小細胞肺がん免疫療法のための方法及び組成物
CN116963782A (zh) 2020-05-03 2023-10-27 联宁（苏州）生物制药有限公司 包含抗trop-2抗体的抗体药物偶联物
US20230220057A1 (en) 2020-05-27 2023-07-13 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
MX2022015376A (es) 2020-06-02 2023-04-14 Dynamicure Biotechnology Llc Construcciones anti grupo de diferenciacion 93 (cd93) y usos de las mismas.
WO2021252977A1 (en) 2020-06-12 2021-12-16 Genentech, Inc. Methods and compositions for cancer immunotherapy
CA3181820A1 (en) 2020-06-16 2021-12-23 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer
US20210395366A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
BR112022025856A2 (pt) 2020-06-19 2023-01-10 Hoffmann La Roche Anticorpo que se liga a cd3 e cd19, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo que se liga a cd3 e cd19, composição farmacêutica, uso do anticorpo, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção
EP4168448A1 (en) 2020-06-23 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Agonistic cd28 antigen binding molecules targeting her2
JP2023531067A (ja) 2020-06-25 2023-07-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ３／抗ｃｄ２８二重特異性抗原結合分子
WO2022008027A1 (en) 2020-07-06 2022-01-13 Iomx Therapeutics Ag Antibodies binding igv of igsf11 (vsig3) and uses thereof
JP2023532764A (ja) 2020-07-07 2023-07-31 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 治療用タンパク質製剤の安定剤としての代替界面活性剤
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
MX2023001083A (es) 2020-07-29 2023-04-10 Dynamicure Biotechnology Llc Construcciones anti grupo de diferenciacion 93 (cd93) y usos de las mismas.
JP2023536602A (ja) 2020-08-03 2023-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
KR20230095918A (ko) 2020-08-05 2023-06-29 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ror1-표적 결합 도메인에 대한 항이디오타입 항체 및 관련 조성물 및 방법
BR112023002123A2 (pt) 2020-08-07 2023-03-07 Genentech Inc Proteína de fusão fc, ácidos nucleicos isolados, método de produção da proteína de fusão fc, formulação farmacêutica, métodos para expandir o número de células dendríticas (dcs) em um indivíduo e para tratar um câncer, proteína fc sem efetora e anticorpo
JP2023537761A (ja) 2020-08-14 2023-09-05 エイシー イミューン ソシエテ アノニム ヒト化抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
US20240010750A1 (en) 2020-09-15 2024-01-11 Bayer Aktiengesellschaft Novel anti-a2ap antibodies and uses thereof
US20230357418A1 (en) 2020-09-17 2023-11-09 Genentech, Inc. Results of empacta: a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter study to evaluate the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with covid-19 pneumonia
EP4225443A1 (en) 2020-10-05 2023-08-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4232475A1 (en) 2020-10-20 2023-08-30 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
WO2022084210A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhitibors
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
EP4240762A1 (en) 2020-11-03 2023-09-13 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Target-cell restricted, costimulatory, bispecific and bivalent anti-cd28 antibodies
TW202225191A (zh) 2020-11-04 2022-07-01 美商建南德克公司 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體之皮下給藥
JP7402381B2 (ja) 2020-11-04 2023-12-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体による処置のための投与
MX2023005131A (es) 2020-11-04 2023-05-25 Genentech Inc Dosis para el tratamiento con anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3 y conjugados anticuerpo farmaco anti-cd79b.
JP2023549316A (ja) 2020-11-16 2023-11-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｆａｐを標的としたｃｄ４０アゴニストとの併用療法
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
WO2022148732A1 (en) 2021-01-06 2022-07-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and a cd20 t cell bispecific antibody
WO2022162587A1 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
KR20230147099A (ko) 2021-01-28 2023-10-20 백신벤트 게엠베하 B 세포 매개 면역 반응을 조절하기 위한 방법 및 수단(method and means for modulating b-cell mediated immune responses)
EP4291306A1 (en) 2021-02-09 2023-12-20 University of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
CA3209136A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibodies targeting the spike protein of coronaviruses
WO2022172085A2 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
WO2022180145A2 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Bayer Aktiengesellschaft Inhibitors of il-11 or il-11ra for use in the treatment of abnormal uterine bleeding
EP4301467A1 (en) 2021-03-01 2024-01-10 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
EP4301781A1 (en) 2021-03-01 2024-01-10 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
JP2024509169A (ja) 2021-03-03 2024-02-29 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ抗体を含む抗体－薬物コンジュゲート
TW202302646A (zh) 2021-03-05 2023-01-16 美商當康生物科技有限公司 抗vista構築體及其用途
JP2024511970A (ja) 2021-03-15 2024-03-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎の治療の組成物及び方法
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
WO2022204724A1 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
JP2024512633A (ja) 2021-03-30 2024-03-19 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 抗ｓｅｍａ３ａ抗体およびその用途
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
WO2022228706A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
TW202243689A (zh) 2021-04-30 2022-11-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體及抗ｃｄ７８ｂ抗體藥物結合物的組合治療之給藥
TW202310876A (zh) 2021-05-12 2023-03-16 美商建南德克公司 使用抗ｃｄ７９ｂ免疫結合物治療瀰漫性大ｂ細胞淋巴瘤之方法
TW202306993A (zh) 2021-05-14 2023-02-16 美商建南德克公司 Ｔｒｅｍ２之促效劑
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
AR126009A1 (es) 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
EP4155321A1 (en) 2021-06-04 2023-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
KR20240019109A (ko) 2021-06-09 2024-02-14 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료에 이용하기 위한 특정 braf 억제제(패러독스 브레이크) 및 pd-1 축 결합 길항제의 조합물
IL308597A (en) 2021-06-11 2024-01-01 Genentech Inc A method for treating chronic obstructive pulmonary disease with an ST2 antagonist
WO2022263638A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
WO2022266660A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
CN117616123A (zh) 2021-06-25 2024-02-27 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体
IL308633A (en) 2021-06-25 2024-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Use of anti-CTLA-4 antibodies
TW202317633A (zh) 2021-07-08 2023-05-01 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司 特異性識別ｔｎｆｒ２的抗體及其用途
CN115812082A (zh) 2021-07-14 2023-03-17 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别cd40的抗体及其应用
WO2023004386A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
US20230099756A1 (en) 2021-08-07 2023-03-30 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
WO2023021055A1 (en) 2021-08-19 2023-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
TW202328177A (zh) 2021-08-27 2023-07-16 美商建南德克公司 治療ｔａｕ病理學之方法
TW202325727A (zh) 2021-08-30 2023-07-01 美商建南德克公司 抗聚泛素多特異性抗體
AU2022345251A1 (en) 2021-09-17 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023081818A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 American Diagnostics & Therapy, Llc (Adxrx) Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
WO2023088959A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Ac Immune Sa Novel molecules for therapy and diagnosis
TW202337494A (zh) 2021-11-16 2023-10-01 美商建南德克公司 用莫蘇妥珠單抗治療全身性紅斑狼瘡（ｓｌｅ）之方法及組成物
AR128031A1 (es) 2021-12-20 2024-03-20 F Hoffmann La Roche Ag Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecíficos que los comprenden
WO2023131901A1 (en) 2022-01-07 2023-07-13 Johnson & Johnson Enterprise Innovation Inc. Materials and methods of il-1beta binding proteins
WO2023154824A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
TW202342519A (zh) 2022-02-16 2023-11-01 瑞士商Ａｃ 免疫有限公司 人源化抗ｔｄｐ－４３結合分子及其用途
TW202342520A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 美商樂天醫藥生技股份有限公司 抗計畫性死亡配體１（ｐｄ—ｌ１）抗體分子、編碼多核苷酸及使用方法
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US20230414750A1 (en) 2022-03-23 2023-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023192827A1 (en) 2022-03-26 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023192881A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023194565A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2023201299A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023198727A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
WO2023203177A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
WO2023215737A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11807689B1 (en) * 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020407A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020579A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to human pad4 and uses thereof
WO2024020564A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024028731A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
WO2024028732A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2024068996A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000067796A1 (en) * 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US20030003097A1 (en) * 2001-04-02 2003-01-02 Idec Pharmaceutical Corporation Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Family Cites Families (171)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7097A (en) 1850-02-19 Elevating- and lowering carriage-tops
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6893625B1 (en) * 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE68920693T2 (de) 1988-03-30 1995-05-24 Toray Industries Gefriergetrocknete Zusammensetzung, die ein mit Meerrettichperoxydase markiertes Fab'-Fragment eines gegen menschliches Beta-Interferon gerichteten Antikörpers und Trehalose enthält; EIA Kit, der diese Zusammensetzung enthält.
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1992007466A1 (en) 1990-11-05 1992-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Synergistic therapy with combinations of anti-tumor antibodies and biologically active agents
US7744877B2 (en) * 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
DE122004000036I1 (de) 1992-11-13 2005-07-07 Biogen Idec Inc Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antik¦rper gegen menschlichen B Lymphozyt beschr{nkter Differenzierung antigen f}r die Behandlung von B-Zell-Lymphoma.
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US20030180290A1 (en) * 1995-06-07 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-CD80 antibody having ADCC activity for ADCC mediated killing of B cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
ES2434840T3 (es) 1995-07-27 2013-12-17 Genentech, Inc. Formulación de proteína liofilizada isotónica estable
US6001358A (en) 1995-11-07 1999-12-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof
JP2000516594A (ja) 1996-07-26 2000-12-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 免疫細胞介在全身性疾患の改良された治療法
UA76934C2 (en) * 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
PT1864999E (pt) 1996-11-27 2009-06-25 Genentech Inc Purificação por afinidade de um polipéptido numa matriz de proteína a
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6991790B1 (en) 1997-06-13 2006-01-31 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2190087T3 (es) 1997-06-13 2003-07-16 Genentech Inc Formulacion estabilizada de un anticuerpo.
US20040191256A1 (en) * 1997-06-24 2004-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
WO1998058964A1 (en) 1997-06-24 1998-12-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK1069185T3 (da) * 1998-04-03 2011-06-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humaniseret antistof mod human vævsfaktor (TF) og fremgangsmåde til at konstruere humaniseret antistof
ES2434961T5 (es) 1998-04-20 2018-01-18 Roche Glycart Ag Ingeniería de glicosilación de anticuerpos para mejorar la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo
AU760048B2 (en) 1998-05-06 2003-05-08 Genentech Inc. Protein purification by ion exchange chromatography
NZ528199A (en) 1998-08-11 2005-06-24 Idec Pharma Corp Combination therapies for B-cell lyphomas comprising administration of anti-CD20 antibody
AU5565299A (en) 1998-08-17 2000-03-06 California Institute Of Technology Devices and methods for analysis of non-ionic solutes
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
AU761844C (en) * 1998-11-09 2004-09-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of hematologic malignancies associated with circulating tumor cells using chimeric anti-CD20 antibody
ES2338287T3 (es) 1998-11-09 2010-05-05 Biogen Idec Inc. Tratamiento de anticuerpos anti-cd20 de pacientes que reciben trasplantes de injertos de medula osea o celulas madre de sangre periferica.
CN1763097B (zh) * 1999-01-15 2011-04-13 杰南技术公司 具有改变的效应功能的多肽变体
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2420835T3 (es) 1999-04-09 2013-08-27 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Procedimiento para controlar la actividad de las moléculas inmunofuncionales
AU782160B2 (en) 1999-06-09 2005-07-07 Immunomedics Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target B-cells
BR0013201A (pt) 1999-07-12 2002-04-30 Genentech Inc Método de bloqueio de uma resposta imunológica a um antigeno externo em mamìferos através da utilização de um antagonista que se liga ao cd20, método de tratamento de mamìferos, método de tratamento de uma doença de enxerto contra hospedeiro ou hospedeiro contra enxerto em mamìferos, método de insensibilização de mamìferos que aguardam transplante e artigo industrializado
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
CN100389825C (zh) 1999-08-11 2008-05-28 拜奥根Idec公司 用抗cd20抗体治疗累及骨髓的非霍奇金淋巴瘤患者
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
CN1169952C (zh) 1999-10-10 2004-10-06 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院 抗cd20单克隆抗体的重链和轻链可变区基因及其应用
EP1229935A1 (en) * 1999-11-08 2002-08-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of b cell malignancies using anti-cd40l antibodies in combination with anti-cd20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20020028178A1 (en) * 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
US20020006404A1 (en) * 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
AU2001260153B2 (en) 2000-03-24 2006-08-17 Micromet Ag Multifunctional polypeptides comprising a binding site to an epitope of the NKG2D receptor complex
MXPA02009626A (es) * 2000-03-31 2003-05-14 Idec Pharma Corp Uso combinado de anticuerpos anti-citocina o antagonistas y anti-cd20 para el tratamiento de linfoma de celulas b.
US20020009444A1 (en) 2000-04-25 2002-01-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
AU2001268363B2 (en) * 2000-06-20 2006-08-17 Biogen Idec Inc. Treatment of B cell associated diseases
WO2003056914A1 (en) 2001-12-27 2003-07-17 Glycofi, Inc. Methods to engineer mammalian-type carbohydrate structures
AU6461201A (en) 2000-07-12 2002-01-21 Idec Pharma Corp Treatment of b cell malignancies using combination of b cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
ATE479761T1 (de) * 2000-07-31 2010-09-15 Biolex Therapeutics Inc Expression biologisch aktiver polypeptide in wasserlinse
DE10043452A1 (de) 2000-09-04 2002-03-14 Basf Ag Formkörper mit einer tonmineralischen Beschichtung
MXPA03002262A (es) * 2000-09-18 2003-10-15 Idec Pharma Corp Terapia de combinacion para tratamiento de enfermedades autoinmunes usando una combinacion de anticuerpos inmunorreguladores/supresores de celulas b.
WO2002034790A1 (en) 2000-10-20 2002-05-02 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US7754208B2 (en) * 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20020159996A1 (en) * 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030211107A1 (en) * 2002-01-31 2003-11-13 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030103971A1 (en) * 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
EP1372724A2 (en) * 2001-01-31 2004-01-02 Idec Pharmaceuticals Corporation Use of immunoregulatory antibodies in the treatment of neoplastic disorders
US20030077826A1 (en) 2001-02-02 2003-04-24 Lena Edelman Chimeric molecules containing a module able to target specific cells and a module regulating the apoptogenic function of the permeability transition pore complex (PTPC)
AU2002251913A1 (en) 2001-02-02 2002-08-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Hybrid antibodies and uses thereof
AU2002250352C1 (en) 2001-04-02 2009-04-30 Genentech, Inc. Combination therapy
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US6881557B2 (en) * 2001-07-12 2005-04-19 Arrowsmith Technologies Llp Super humanized antibodies
US7192586B2 (en) * 2001-09-20 2007-03-20 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compositions for treating or preventing skin disorders using binding agents specific for prostate specific membrane antigen
US20030157108A1 (en) * 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
CN100522999C (zh) 2002-02-14 2009-08-05 免疫医疗公司 抗cd20抗体及其融合蛋白和使用方法
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
AU2003219402B2 (en) 2002-03-19 2008-05-08 Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek GnTIII (UDP-n-acethylglucosamine:beta-D mannoside beta (1,4)-N-acethylglucosaminy ltransferase III) expression in plants
DK1490405T3 (da) * 2002-03-21 2007-12-27 Lilly Co Eli Antagonistiske humane anti-hFas-igand-antistoffer og fragmenter deraf
CN1305905C (zh) 2002-03-22 2007-03-21 Aprogen株式会社 人源化抗体及其制备方法
US20030190689A1 (en) * 2002-04-05 2003-10-09 Cell Signaling Technology,Inc. Molecular profiling of disease and therapeutic response using phospho-specific antibodies
EP1502603A4 (en) * 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk AN ANTIBODY COMPOSITION CONTAINING MEDICAMENT FOR PATIENTS WITH Fc gamma RIIIa POLYMORPHISM
JPWO2003084569A1 (ja) * 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物含有医薬
AU2003251597A1 (en) * 2002-06-19 2004-01-06 Abgenix, Inc. Method for predicting response to epidermal growth factor receptor-directed therapy
WO2004016750A2 (en) * 2002-08-14 2004-02-26 Macrogenics, Inc. FcϜRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
SI1539966T1 (sl) 2002-09-12 2010-10-29 Greenovation Biotech Gmbh Postopek za produkcijo proteinov
CA3029035C (en) 2002-10-17 2023-03-07 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
CN1878795A (zh) * 2002-12-02 2006-12-13 阿布格尼克斯公司 针对磷脂酶a2的抗体及其应用
JP2006513725A (ja) 2002-12-16 2006-04-27 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヒトｃｄ２０及び／又はｃｄ１６を発現するトランスジェニックマウス
BRPI0316779B8 (pt) * 2002-12-16 2023-02-28 Genentech Inc Anticorpo anti-cd20 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seus usos, composição, artigo manufaturado e formulação líquida
US7781197B2 (en) 2002-12-20 2010-08-24 Greenovation Biotech Gmbh Transformed bryophyte cell having disrupted endogenous alpha 1,3-fucosyl and beta 1,2-xylosyl transferase encoding nucleotide sequences for the production of heterologous glycosylated proteins
US7960512B2 (en) * 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7355008B2 (en) * 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
PL224786B1 (pl) 2003-01-22 2017-01-31 Glycart Biotechnology Ag Wyizolowany kwas nukleinowy, ssaczy wektor ekspresyjny, komórki gospodarza, fuzja polipeptydowa i sposób jej wytwarzania, sposoby in vitro i ex vivo modyfikowania profilu glikozylacji polipeptydu wytwarzanego przez komórki gospodarza
AU2004205684A1 (en) * 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
CA2518980A1 (en) * 2003-03-14 2004-09-30 Pharmacia Corporation Antibodies to igf-i receptor for the treatment of cancers
ZA200507805B (en) * 2003-04-09 2006-12-27 Genentech Inc Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a TNF-alpha inhibitor
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
US20050163775A1 (en) 2003-06-05 2005-07-28 Genentech, Inc. Combination therapy for B cell disorders
WO2005005462A2 (en) * 2003-06-05 2005-01-20 Genentech, Inc. Blys antagonists and uses thereof
AU2004264601A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-24 Genentech, Inc. Assay for human anti CD20 antibodies and uses therefor
CA2537055A1 (en) * 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
CN1845755A (zh) 2003-08-29 2006-10-11 健泰科生物技术公司 眼部疾病的抗cd－20治疗
ME01775B (me) 2003-11-05 2011-02-28 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom
MXPA06006865A (es) * 2003-12-19 2006-08-23 Genentech Inc Deteccion de cd20 en rechazo de transplante.
CN1917901A (zh) * 2003-12-19 2007-02-21 健泰科生物技术公司 自身免疫病疗法中cd20的检测
KR20070001932A (ko) 2003-12-23 2007-01-04 리나트 뉴로사이언스 코퍼레이션 작용물질 항 티알케이씨 항체 및 그의 사용 방법
EP1720908A2 (en) 2004-02-17 2006-11-15 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
BRPI0509419A (pt) * 2004-04-16 2007-09-04 Genentech Inc método de ensaio imunossorvente ligado por enzimas, anticorpos, hibridoma e kit de imunoensaio
EP1735000A2 (en) * 2004-04-16 2006-12-27 Genentech, Inc. Method for augmenting b cell depletion
AU2005247303A1 (en) * 2004-04-16 2005-12-08 Genentech, Inc. Treatment of polychondritis and mononeuritis multiplex with anti-CD20 antibodies
BRPI0510224A (pt) 2004-05-05 2007-10-23 Genentech Inc métodos de prevenção de doença autoimunológica e artigo industrializado
CA2562800A1 (en) * 2004-05-15 2005-12-01 Genentech, Inc. Cross-screening system and methods for detecting a molecule having binding affinity for a target molecule
RU2384345C2 (ru) 2004-06-04 2010-03-20 Дженентек, Инк. Способ лечения рассеянного склероза
DOP2005000108A (es) * 2004-06-04 2007-06-15 Genentech Inc Method for treating lupus
US7501121B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
RU2007106722A (ru) * 2004-07-22 2008-08-27 Дженентек, Инк. (Us) Способ лечения синдрома шегрена
US20060067930A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-30 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MX2007002855A (es) 2004-09-08 2007-04-27 Genentech Inc Metodos para usar ligandos de receptor de muerte y anticuerpos cd20.
RU2007112952A (ru) * 2004-09-08 2008-10-20 Дженентек, Инк. (Us) Способы применения лигандов рецепторов смерти и cd20-антител
MX2007002883A (es) * 2004-09-13 2007-06-15 Macrogenics Inc Anticuerpos humanizados contra el virus de nilo occidental y usos terapeuticos y profilacticos del mismo.
CN101087807A (zh) * 2004-10-05 2007-12-12 健泰科生物技术公司 治疗血管炎的方法
PE20061329A1 (es) 2004-12-15 2006-12-08 Neuralab Ltd Anticuerpos ab humanizados para mejorar la cognicion
SG158089A1 (en) 2004-12-17 2010-01-29 Genentech Inc Antiangiogenesis therapy of autoimmune disease in patients who have failed prior therapy
CA2592390A1 (en) * 2004-12-22 2006-06-29 Genentech, Inc. Methods for producing soluble multi-membrane-spanning proteins
ZA200705459B (en) 2005-01-13 2008-09-25 Genentech Inc Treatment method
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
CA2607475A1 (en) 2005-04-22 2006-11-02 Genentech, Inc. Method for treating dementia or alzheimer's disease with a cd20 antibody
US20070009518A1 (en) 2005-05-18 2007-01-11 Biogen Idec Inc. Methods for treating fibrotic conditions
EP1902320B1 (en) 2005-05-20 2010-03-10 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
WO2006133148A2 (en) 2005-06-03 2006-12-14 Genentech, Inc. Method of producing antibodies with modified fucosylation level
NO345919B1 (no) * 2005-08-26 2021-10-18 Roche Glycart Ag Modifiserte antigen-bindende molekyler med endret celle-signaliseringsaktivitet
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
ES2618543T3 (es) 2005-11-23 2017-06-21 Genentech, Inc. Métodos y composiciones relacionados con ensayos de linfocitos B
WO2007064911A1 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Biogen Idec Inc. Anti-mouse cd20 antibodies and uses thereof
US7708944B1 (en) 2006-06-13 2010-05-04 Research Foundation Of State University Of New York Ultra-sensitive, portable capillary sensor
CA2682406A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
WO2008157282A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
EP2188302B1 (en) 2007-07-09 2017-11-01 Genentech, Inc. Prevention of disulfide bond reduction during recombinant production of polypeptides
KR100898362B1 (ko) 2007-07-10 2009-05-18 주식회사 그리폰 다목적 신발
US20110243931A1 (en) 2007-09-02 2011-10-06 Thomas Friess Combination therapy with type i and type ii anti-cd20 antibodies
US20090214561A1 (en) 2007-09-24 2009-08-27 David Robert Close Treatment method
GB0718684D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
EP2840090B1 (en) 2007-10-30 2018-02-21 Genentech, Inc. Antibody purification by cation exchange chromatography
CN101945890A (zh) 2007-12-21 2011-01-12 健泰科生物技术公司 抗cd20抗体的结晶
US20090162351A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase
CA2708869C (en) 2007-12-21 2016-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
WO2009086072A2 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
KR101280716B1 (ko) 2008-03-25 2013-07-01 로슈 글리카트 아게 비-호지킨 림프종의 치료를 위한, 시클로포스파미드, 빈크리스틴 및 독소루비신과 조합으로의 증가된 항체 의존성 세포 세포독성 (ａｄｃｃ) 을 갖는 유형 ⅱ 항-ｃｄ20 항체의 용도
WO2009134738A1 (en) 2008-04-29 2009-11-05 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
US8021850B2 (en) 2008-07-14 2011-09-20 Ribo Guo Universal tandem solid-phases based immunoassay
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
KR20110097772A (ko) 2008-11-17 2011-08-31 제넨테크, 인크. 생리적 조건하에 거대분자의 응집을 감소시키는 방법 및 제제
MX2011005051A (es) 2008-11-17 2011-06-01 Genentech Inc Metodo y formulacion para reducir la agregacion de una macromolecula bajo condiciones fisiologicas.
AR075982A1 (es) 2009-03-31 2011-05-11 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo afucosilado y una o mas de las citoquinas seleccionadas de gm- csf humano, m -csf humano y/o il-3 humano y composicion
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
JP2013501741A (ja) 2009-08-14 2013-01-17 ロシュ グリクアート アーゲー アフコシル化ｃｄ２０抗体とフルダラビン及び／又はミトキサントロンの併用療法
KR20120104517A (ko) 2009-09-03 2012-09-21 제넨테크, 인크. 류마티스 관절염의 치료, 진단 및 모니터링 방법
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
WO2011131749A1 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Glaxo Group Limited New 14 and 15 membered macrolides for the treatment of neutrophil dominated inflammatory diseases
KR20130045914A (ko) 2010-08-03 2013-05-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 만성 림프구성 백혈병(cll) 생체지표
TW201208703A (en) 2010-08-17 2012-03-01 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with an anti-VEGF antibody
RU2013140975A (ru) 2011-02-28 2015-04-10 Дженентек, Инк. Биологические маркеры и способы прогнозирования восприимчивости к антагонистам в-клеток
US8592156B2 (en) 2011-08-08 2013-11-26 Roche Molecular Systems, Inc. Predicting response to anti-CD20 therapy in DLBCL patients
WO2014039885A1 (en) 2012-09-06 2014-03-13 Freedom Innovations, Llc Method and system for a prosthetic device with multiple levels of functionality enabled through multiple control systems
CN111481552A (zh) 2012-09-07 2020-08-04 吉宁特有限公司 II型抗CD20抗体与选择性Bcl-2抑制剂的组合治疗

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000067796A1 (en) * 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US20030003097A1 (en) * 2001-04-02 2003-01-02 Idec Pharmaceutical Corporation Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CRAGG MARK S. ET AL.: "Complement-mediated lysis by anti-CD20 mAb correlates with segregation into lipid rafts", BLOOD. 1 FEB. 2003, vol. 101, no. 3, 1 February 2003 (2003-02-01), pages 1045-1052, XP002329935, ISSN: 0006-4971, page 1051, left-hand column - right-hand column *
DAVIES J. ET AL.: "Expression of GnTIII in a recombinant anti-CD20 CHO production cell line: Expression of antibodies with altered glycoforms leads to an increase in ADCC through higher affinity for FC gamma RIII", BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING-COMBINATORIAL CHEMISTRY, WILEY, NEW YORK, NY, US, vol. 74, no. 4, 20 August 2001 (2001-08-20), pages 288-294, XP002285964, ISSN: 0006-3592, the whole document *
POLYAK MARIA J. ET AL.: "Alanine-170 and proline-172 are critical determinants for extracellular CD20 epitopes; heterogeneity in the fine specificity of CD20 monoclonal antibodies is defined by additional requirements imposed by both amino acid sequence and quaternary structure", BLOOD, W.B.SAUNDERS COMPANY, ORLANDO, FL, US, vol. 99, no. 9, 1 May 2002 (2002-05-01), pages 3256-3262, XP002308044, ISSN: 0006-4971, page 3259; table 2 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2732151C2 (ru) * 2011-09-30 2020-09-11 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Библиотека зависимых от концентрации ионов связывающих молекул
US11243210B2 (en) 2011-09-30 2022-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Ion concentration-dependent binding molecule library
RU2650788C2 (ru) * 2012-08-07 2018-04-17 Роше Гликарт Аг Композиция, содержащая два антитела, сконструированных так, чтобы они обладали пониженной и повышенной эффекторной функцией
RU2519546C1 (ru) * 2013-01-16 2014-06-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Биоинтегратор" (Ооо "Биоинтегратор") КОНЪЮГАТЫ И МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С РЕЦЕПТОРОМ CD16а
WO2014112898A1 (ru) 2013-01-16 2014-07-24 Общество С Ограниченной Ответственностью "Биоинтегратор" (Ооо "Биоинтегратор") КОНЪЮГАТЫ И МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С РЕЦЕПТОРОМ CD16a
US10766967B2 (en) 2015-10-02 2020-09-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific T cell activating antigen binding molecules
US11013801B2 (en) 2015-12-09 2021-05-25 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment method

Also Published As

Publication number Publication date
JP2012254083A (ja) 2012-12-27
AU2004287643B2 (en) 2011-11-17
DK2380910T3 (en) 2015-10-19
EP2380910A1 (en) 2011-10-26
IL232954A (en) 2015-09-24
TR201903329T4 (tr) 2019-04-22
US9296820B2 (en) 2016-03-29
BRPI0416262A (pt) 2007-01-09
HUE031632T2 (en) 2017-07-28
SG10201504094SA (en) 2015-06-29
CN102373215A (zh) 2012-03-14
SG10202008722QA (en) 2020-10-29
KR101364902B1 (ko) 2014-02-21
LT2348051T (lt) 2019-02-25
HRP20181204T1 (hr) 2018-09-21
MXPA06004836A (es) 2006-07-06
HK1213574A1 (zh) 2016-07-08
US20160075794A1 (en) 2016-03-17
HUE042914T2 (hu) 2019-07-29
JP2015134814A (ja) 2015-07-27
US20050123546A1 (en) 2005-06-09
EA201100128A1 (ru) 2011-06-30
DK2380911T3 (en) 2018-08-06
JP6235521B2 (ja) 2017-11-22
RS58420B1 (sr) 2019-04-30
IL207347A0 (en) 2010-12-30
NO20210499A1 (no) 2006-08-03
NO20220263A1 (no) 2006-08-03
SI2077282T1 (sl) 2017-03-31
NO346533B1 (no) 2022-09-26
IL175367A0 (en) 2006-09-05
EA025962B1 (ru) 2017-02-28
CY2016004I1 (el) 2016-08-31
HK1167681A1 (en) 2012-12-07
PL2348051T3 (pl) 2019-05-31
ES2708095T3 (es) 2019-04-08
EP2380911A1 (en) 2011-10-26
HUE038955T2 (hu) 2018-12-28
ECSP21023271A (es) 2021-05-31
MA31040B1 (fr) 2010-01-04
ES2615507T3 (es) 2017-06-07
IL232954A0 (en) 2014-07-31
US20160076009A1 (en) 2016-03-17
ATE463513T1 (de) 2010-04-15
ME03330B (me) 2019-10-20
PT1692182E (pt) 2010-05-13
MX337587B (es) 2016-03-11
RS57466B1 (sr) 2018-09-28
TNSN06126A1 (en) 2007-11-15
RS54450B1 (en) 2016-06-30
RS51334B (en) 2011-02-28
HK1100005A1 (en) 2007-08-31
CN1902231A (zh) 2007-01-24
FR15C0076I1 (ru) 2016-01-01
HRP20170398T1 (hr) 2017-05-19
CY1121206T1 (el) 2020-05-29
PT2380911T (pt) 2018-07-04
HUS1600013I1 (hu) 2016-04-28
NO20062289L (no) 2006-08-03
JP4653109B2 (ja) 2011-03-16
NZ588860A (en) 2012-03-30
ES2341009T3 (es) 2010-06-14
KR20110129990A (ko) 2011-12-02
ME01775B (me) 2011-02-28
BRPI0416262B1 (pt) 2022-04-12
US8883980B2 (en) 2014-11-11
CY2016004I2 (el) 2016-08-31
HRP20151418T1 (hr) 2016-01-29
PL1692182T3 (pl) 2010-09-30
BE2016C008I2 (ru) 2021-08-16
NO341893B1 (no) 2018-02-12
DK2077282T3 (en) 2017-01-30
PT2380910E (pt) 2015-11-26
KR101364858B1 (ko) 2014-02-19
EA200600905A1 (ru) 2006-12-29
BR122020013239B1 (pt) 2022-05-10
EP2077282A3 (en) 2009-08-05
ES2550311T3 (es) 2015-11-06
PL2380911T3 (pl) 2018-10-31
NO20220904A1 (no) 2006-08-03
SI2380910T1 (sl) 2015-11-30
ES2672640T3 (es) 2018-06-15
EP2348051A3 (en) 2012-12-19
US20230212303A1 (en) 2023-07-06
PL2380910T3 (pl) 2015-12-31
HRP20170398T2 (hr) 2019-06-28
JP2010081940A (ja) 2010-04-15
SI1692182T1 (sl) 2010-06-30
CN102373214B (zh) 2014-07-09
SI2348051T1 (sl) 2019-03-29
EA201300481A1 (ru) 2014-01-30
PL2077282T3 (pl) 2017-08-31
EP2380911B1 (en) 2018-05-09
AU2004287643A1 (en) 2005-05-19
LU92632I2 (fr) 2015-11-02
WO2005044859A3 (en) 2005-08-04
US20090010921A1 (en) 2009-01-08
IL175367A (en) 2014-11-30
NL300801I2 (nl) 2017-09-19
CY1120252T1 (el) 2019-07-10
CY2015001I1 (el) 2016-06-22
KR20120104419A (ko) 2012-09-20
US20160075793A1 (en) 2016-03-17
FR15C0076I2 (fr) 2016-03-11
DK1692182T3 (da) 2010-05-31
CA2544865A1 (en) 2005-05-19
CN102373214A (zh) 2012-03-14
EP1692182B1 (en) 2010-04-07
AU2004287643C1 (en) 2012-05-31
EA202091901A1 (ru) 2020-11-24
CN104829719A (zh) 2015-08-12
LU93001I2 (fr) 2016-05-17
EA036531B1 (ru) 2020-11-19
US20210002382A1 (en) 2021-01-07
PT2077282T (pt) 2017-02-14
LT2380911T (lt) 2018-07-10
LT2077282T (lt) 2017-03-10
JP2018027088A (ja) 2018-02-22
NO346167B1 (no) 2022-04-04
IL235172A0 (en) 2014-11-30
CY1118719T1 (el) 2017-07-12
UA91823C2 (ru) 2010-09-10
HUE026669T2 (en) 2016-06-28
CA2544865C (en) 2019-07-09
TR201809892T4 (tr) 2018-07-23
RS55723B1 (sr) 2017-07-31
DK2348051T3 (en) 2019-03-18
EP2077282A2 (en) 2009-07-08
HK1167682A1 (en) 2012-12-07
ZA200604547B (en) 2007-07-25
CY1110301T1 (el) 2015-01-14
HRP20100303T1 (hr) 2010-07-31
CN1902231B (zh) 2015-05-20
DE602004026470D1 (de) 2010-05-20
KR101220691B1 (ko) 2013-01-14
NZ547589A (en) 2009-05-31
SI2380911T1 (en) 2018-07-31
CY2015001I2 (el) 2016-06-22
WO2005044859A2 (en) 2005-05-19
EP2348051A2 (en) 2011-07-27
EP2380910B1 (en) 2015-09-30
JP6125770B2 (ja) 2017-05-10
EP2077282B1 (en) 2016-12-28
EP2348051B1 (en) 2018-12-19
HRP20190333T1 (hr) 2019-05-03
CN102373215B (zh) 2014-07-30
NO347530B1 (no) 2023-12-11
SG160348A1 (en) 2010-04-29
CR11848A (es) 2011-04-04
NO20171989A1 (no) 2006-08-03
PT2348051T (pt) 2019-02-04
ECSP066603A (es) 2006-10-17
ME02332B (me) 2016-06-30
EP1692182A2 (en) 2006-08-23
IL207347A (en) 2015-08-31
KR20060130579A (ko) 2006-12-19
LTC2380910I2 (lt) 2018-01-25
JP2008500017A (ja) 2008-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA015009B1 (ru) АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ
US20200270361A1 (en) Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
RU2603743C2 (ru) Иммуноглобулины k cd52 человека
JP6425644B2 (ja) 結合抗ｃｄ３８抗体
FI103131B (fi) Menetelmä CD25 sitovan molekyylin valmistamiseksi
KR20120100914A (ko) 에프라투주맙을 이용한 자가면역 및 염증 질환의 치료
JPH11228600A (ja) 抗体におけるまたは抗体に関する改良
CN101484470A (zh) 具有增强的抗体依赖性细胞毒性活性的抗体及其生产方法和用途
JPH09512705A (ja) Ｅ−セレクチンに対する抗体
KR102296416B1 (ko) 항-세라마이드 항체
CN104394880B (zh) 用于调节toso活性的方法和组合物
JPH09506507A (ja) Ｃａ５５．１抗原指向性結合構造
TW200918555A (en) Kit of parts for the treatment of cancer or infectious diseases
CN112566937A (zh) 对cd3特异性的抗体及其用途
TW201522373A (zh) 抗ｃｄ５２之抗體
TW201942135A (zh) 抗cd27 抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
EP4209512A1 (en) Development of drug therapeutic agent containing adaptor and use thereof
TW202210518A (zh) 結合人cd38的抗體、其製備方法和用途
JP4808841B2 (ja) Ｔ細胞活性化および増殖を阻害するＬＯ−ＣＤ２ａ抗体およびその使用法
Rashid Production and comparison of anti-CD4 chimeric antibodies for the induction of tolerance to skin allografts in mice
NZ710201B2 (en) Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent