NO341893B1 - Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning. - Google Patents

Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning. Download PDF

Info

Publication number
NO341893B1
NO341893B1 NO20062289A NO20062289A NO341893B1 NO 341893 B1 NO341893 B1 NO 341893B1 NO 20062289 A NO20062289 A NO 20062289A NO 20062289 A NO20062289 A NO 20062289A NO 341893 B1 NO341893 B1 NO 341893B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
cells
sequence
human
region
Prior art date
Application number
NO20062289A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
NO20062289L (no
Inventor
Peter Brünker
Claudia Ferrara
Tobias Suter
Pablo Umaña
Ursula Püntener
Ekkehard Mössner
Original Assignee
Roche Glycart Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34572912&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO341893(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Roche Glycart Ag filed Critical Roche Glycart Ag
Publication of NO20062289L publication Critical patent/NO20062289L/no
Publication of NO341893B1 publication Critical patent/NO341893B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01144—Beta-1,4-mannosyl-glycoprotein 4-beta-N-acetylglucosaminyltransferase (2.4.1.144)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology

Abstract

Foreliggende oppfinnelse angår antigenbindende molekyler (ABM). Ved spesielle utførelsesformer angår foreliggende oppfinnelse rekombinante monoklonale antistoffer, innbefattende kimæriske, primatiserte eller humaniserte antistoffer som er spesifikke for humant CD20. Dessuten angår foreliggende oppfinnelse nukleinsyremolekyler som koder for slike ABM, og vektorer og vertsceller omfattende slike nukleinsyremolekyler. Oppfinnelsen angår videre fremgangsmåter for frembringelse av ABM ifølge oppfinnelsen, samt fremgangsmåter for anvendelse av disse ABM ved behandling av sykdom. Dessuten angår foreliggende oppfinnelse ABM med modifisert glykosylering med forbedrede terapeutiske egenskaper, innbefattende antistoffer med øket Fc-reseptorbinding og øket effektorfunksjon.

Description

[0001] Foreliggende oppfinnelse angår humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning.
Immunsystemet og anti-CD20-antistoffer
[0002] Immunsystemet hos virveldyr, innbefattende mennesker, består av en rekke organer og celletyper, som er blitt utviklet til nøyaktig og spesifikt å gjenkjenne, binde og ødelegge inntrengende fremmende mikroorganismer ("antigener"). Lymfocytter er avgjørende for fyllestgjørende funksjon av immunsystemet. Disse celler dannes i thymus, milt og benmarg (voksne) og representerer ca.30% av den totale mengde hvite blodlegemer som finnes i sirkulasjonssystemet hos voksne mennesker. Det er to hoved-subpopulasjoner av lymfocytter: T-celler og B-celler. T-celler er ansvarlige for cellemediert immunitet, mens B-celler er ansvarlige for antistoffdannelse (humoral immunitet). I en typisk immunrespons funksjonerer imidlertid T-celler og B-celler i gjensidig avhengighet av hverandre: T-celler aktiveres når T-cellereseptoren bindes til fragmenter av et antigen som er bundet til vevstypekompleks-("MHC")-glykoproteiner på overflaten av en antigen-presenterende celle; slik aktivering gir frigjøring av biologiske mediatorer ("interleukiner"), som stimulerer B-celler til å differensiere og danne antistoffer ("immunglobuliner") overfor antigenet.
[0003] Hver B-celle i verten uttrykker et antistoff av én spesiell type og spesifisitet, og forskjellige B-celler uttrykker antistoffer som er spesifikke for forskjellige antigener. B-celleproliferasjon og antistoffdannelse skyter fart som reaksjon på et fremmed antigen, og begge opphører typisk (eller opphører i det vesentlige) straks det fremmede antigen er blitt nøytralisert. Leilighetsvis vil imidlertid proliferasjon av en spesiell B-celler fortsette med uforminsket styrke; slik proliferasjon kan resultere i en krefttype som omtales som "B-cellelymfom".
[0004] Både T-celler og B-celler omfatter celleoverflateproteiner som kan anvendes som "markører" for differensiering og identifisering. Én slik human B-cellemarkør er det humane B-lymfocytt-begrensede differensieringsantigen Bp35, omtalt som "CD20". CD20 uttrykkes under tidlig pre-B-celleutvikling og vedvarer inntil plasmacelledifferensiering. Spesifikt kan CD20-molekylet regulere et trinn i aktiveringsprosessen som er nødvendig for cellesyklusinitiering og -differensiering, og uttrykkes vanligvis i meget høye nivåer på neoplastiske ("tumor"-) B-celler. På grunn av at CD20 er til stede i høye nivåer på "maligne" B-celler, dvs. B-celler hvis uforminskede proliferasjon kan føre til B-celle-lymfom, har CD20-overflateantigenet potensial til å tjene som en kandidat for "målsøking" av B-cellelymfomer.
[0005] Slik målsøking kan hovedsakelig generaliseres som følger: antistoffer som er spesifikke for CD20-overflateantigenet på B-celler, innføres i en pasient, for eksempel ved injeksjon. Disse anti-CD20-antistoffer bindes spesifikt til CD20-celleoverflateantigenet på (øyensynlig) både normale og maligne B-celler; anti-CD20-antistoffet som er bundet til CD20-overflateantigenet, kan føre til ødeleggelse og uttømming av neoplastiske B-celler. Dessuten kan kjemiske midler eller radioaktive merkesubstanser med potensial til å ødelegge tumoren konjugeres til anti-CD20-antistoffet slik at midlet spesifikt "avgis" til f.eks. de neoplastiske B-celler. Uansett fremgangsmåte er det et primært mål å ødelegge tumoren: den spesifikke fremgangsmåte kan bestemmes ved det spesielle anti-CD20-antistoff som anvendes, og således kan de tilgjengelige fremgangsmåter for målsøking av CD20-antigenet variere i betydelig grad.
[0006] Ukonjugerte monoklonale antistoffer (mAb) kan være anvendelige medisiner for behandling av kreft, som vist ved U.S. Food and Drug Administrations godkjennelse av Rituximab (Rituxan<TM>; IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA, og Genetech Inc., San Francisco, CA), for behandling av CD20-positiv B-celle, lavgradig eller follikulær ikke-Hodgkins lymfom, Trastuzumab (Herceptin<TM>; Genentech Inc.) for behandling av fremskreden brystkreft (Grillo-Lopez, A.-J., et al., Semin. Oncol. 26:66-73 (1999); Goldenberg, M. M., Clin. Ther.
21:309-18 (1999)), Gemtuzumab (Mylotarg<TM>, Celltech/Wyeth-Ayerst) for behandling av tilbakefall av myeloid leukemi, samt Alemtuzumab (CAMPATH<TM>, Millenium Pharmaceuticals/Schering AG) for behandling av kronisk B-cellelymfocyttleukemi. Suksessen med disse produkter er ikke bare basert på deres effektivitet, men også på deres utmerkede sikkerhetsprofiler (Grillo-Lopez, A.-J., et al., Semin. Oncol.26:66-73 (1999); Goldenberg, M. M., Clin. Ther.21:309-18 (1999)). Til tross for oppnåelse av disse medikamenter, er det for tiden stor interesse for oppnåelse av høyere spesifikk antistoffaktivitet enn det som typisk fås ved ukonjugert mAb-terapi. Det monoklonale museantistoff, B-Ly1, er et annet antistoff som er kjent for å være spesifikt for humant CD20. (Poppema, S. og Visser, L., Biotest Bulletin 3: 131-139 (1987)).
[0007] Resultatene av en rekke undersøkelser tyder på at Fc-reseptoravhengige mekanismer i vesentlig grad bidrar til virkningen av cytotoksiske antistoffer overfor tumorer, og tyder på at et optimalt antistoff mot tumorer vil bindes preferensielt til aktiverings-Fc-reseptorer og minimalt til den inhiberende partner Fc γRIIB. (Clynes, R. A., et al., Nature Medicine 6(4):443-446 (2000);
Kalergis, A.M. og Ravetch, J. V., J Exp. Med.195(12):1653-1659 (juni 2002). Resultatene av minst én undersøkelse tyder for eksempel på at Fc γRIIIareseptoren spesielt er sterkt forbundet med effektiviteten av antistoffterapi.
(Cartron, G., et al., Blood 99(3):754-757 (februar 2002)). Denne undersøkelse viste at pasienter som er homozygote for Fc γRIIIa, har bedre respons overfor Rituxirnab enn heterozygote pasienter. Forfatterne konkluderte med at den overlegne respons skyldtes bedre in vivo-binding av antistoffet til Fc γRIIIa, noe som resulterte i bedre ADCC-aktivitet overfor lymfomceller. (Cartron, G., et al., Blood 99(3):754-757 (februar 2002)).
WO 03/011878 beskriver glukosyleringsvarianter av Rituxan anti-CD20 antistoff.
Polyak, M. et al., Blood 99:3256-3262 (2002) beskriver anvendelse av et heltmurint B-Ly1 anti-CD20 antistoff (Rituxan), bland andre anti-CD20 antistoffer, for å teste reaktivitet, homotypisk aggregasjon og translokasjon av CD20 i cellemembranen.
Cragg, M. et al., Blood 101:1045-1052 (2003) korrelerer komplement-mediert lyse til forskjellige anti-CD20 antistoffer, inkludert Rituxan anti-CD20 antistoff, med segragasjon av CD20 til lipidrafter.
Davies, J. et al., Biotech. Bioeng.74:288-294 (2001) beskriver co-ekspresjon av en glykosyleringsenzym med Rituxan anti-CD20 antistoff.
US 2003/003097 beskriver co-ekspresjon av et glykosyleringsenzym med Rituxan anti-CD20 antistoff.
WO 00/067796 beskriver metode for behandling av autoimmune sykdommer med antagonister som bindes til B celle overflatemarkører (f.eks. anti-CD20 antistoffer).
Eksemplene er rettet på Rituxan anti-CD20 antistoff.
[0008] Forskjellige forsøk på å målsøke CD20-overflateantigenet er rapportert. Monoklonalt museantistoff 1F5 (et anti-CD20-antistoff) ble ifølge rapport administrert ved kontinuerlig intravenøs infusjon til pasienter med B-cellelymfom. Meget høye nivåer (>2 gram) 1F5 var ifølge rapport nødvendig for å uttømme sirkulerende tumorceller, og resultatene ble beskrevet som "forbigående". Press et al., "Monoclonal Antibody 1F5 (Anti-CD20) Serotherapy of Human B-Cell Lymphomas." Blood 69/2:584-591 (1987). Et potensielt problem med denne fremgangsmåte er at ikke-humane monoklonale antistoffer (f.eks. monoklonale museantistoffer) typisk mangler human effektorfunksjonalitet, dvs. at de ikke er i stand til blant annet å formidle komplementavhengig lyse, eller til å lysere humane målceller via antistoffavhengig cellulær toksisitet eller Fc-reseptormediert fagocytose. Videre kan ikke-humane monoklonale antistoffer gjenkjennes av menneskeverten som et fremmed protein; gjentatte injeksjoner av slike fremmede antistoffer kan derfor føre til induksjon av immunresponser som fører til skadelige hypersensitivitetsreaksjoner. Når det gjelder musebaserte monoklonale antistoffer, omtales dette ofte som human anti-mus-antistoffrespons, eller "HAMA"-respons. Disse "fremmede" antistoffer kan dessuten angripes av vertens immunsystem slik at de egentlig nøytraliseres før de når sitt målsted.
[0009] En annen rapportert fremgangsmåte til forbedring av evnen hos monoklonale museantistoffer til å være effektive ved behandling av B-celleforstyrrelser har vært å konjugere en radioaktiv merkesubstans eller toksin til antistoffet slik at merkesubstansen eller toksinet lokaliseres på tumorstedet. For eksempel er det ovenfor angitte 1F5-antistoff blitt "merket" med jod-131 ("<131>I") og er ifølge rapport evaluert for biofordeling i to pasienter. Se Eary, J. F. et al., "Imaging and Treatment of B-Cell Lymphoma" J. Nuc. Med.31/8:1257-1268 (1990); se også Press, O. W. et al., "Treatment of Refractory Non-Hodgkin's Lymphoma with Radiolabeled MB-1 (Anti-CD37) Antibody" J. Clin. Onc.7/8:1027-1038 (1989) (indikasjon om at én pasient behandlet med<131>I-merket IF-5 oppnådde en "delvis respons"); Goldenberg, D. M. et al., "Targeting, Dosimetry and Radioimmunotherapy of B-Cell Lymphomas with Iodine-131-Labeled LL2 Monoclonal Antibody" J. Clin. Onc.9/4:548-564 (1991) (tre av åtte pasienter som fikk multiple injeksjoner, rapporterte å ha utviklet en HAMA-respons); Appelbaum, F. R. "Radiolabeled Monoclonal Antibodies in the Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma" Hem./Onc. Clinics of N. A.5/5:1013-1025 (1991) (oversiktsartikkel); Press, O. W. et al "Radiolabeled-Antibody Therapy of B-Cell Lymphoma with Autologous Bone Marrow Support." New England J. Med.329/17: 1219-1223 (1993) (iodine-131 labeled anti-CD20 antibody IFS and B1); og Kaminski, M. G. et al "Radioimmunotherapy of B-Cell Lymphoma with<131>I Anti-B1 (Anti-CD20) Antibody". New England J. Med.329/7(1993) (jod-131-merket anti-CD20-antistoff B1; i det følgende "Kaminski"). Toksiner (dvs. kjemoterapeutiske midler så som doksorubicin eller mitomycin C) er også blitt konjugert til antistoffer. Se for eksempel publisert PCT-patentsøknad WO 92/07466 (publisert 14. mai 1992).
[0010] Kimæriske antistoffer omfattende deler av antistoffer fra to eller flere forskjellige arter (f.eks. mus og menneske) er blitt utviklet som alternativ til "konjugerte" antistoffer. For eksempel beskriver Liu, A. Y. et al i "Production of a Mouse-Human Chimeric Monoclonal Antibody to CD20 with Potent Fc-Dependent Biologic Activity" J. Immun.139/10:3521-3526 (1987) et kimærisk muse/humantantistoff rettet mot CD20-antigenet. Se også PCT-publikasjon nr. WO 88/04936. For eksempel er rituximab (RITUXAN ®), et kimærisk anti-CD20, blitt godkjent for behandling av ikke-Hodgkins lymfom.
[0011] På bakgrunn av ekspresjonen av CD20 ved B-cellelymfomer kan dette antigen tjene som kandidat for "målsøking" av slike lymfomer. Slik målsøking kan hovedsakelig generaliseres som følger: antistoffer som er spesifikke for CD20-overflateantigen på B-celler, administreres til en pasient. Disse anti-CD20-antistoffer bindes spesifikt til CD20-antigenet på (tilsynelatende) både normale og maligne B-celler, og antistoffet bundet til CD20 på celleoverflaten resulterer i ødeleggelse og uttømming av tumorigene B-celler. Dessuten kan kjemiske midler, cytotoksiner eller radioaktive midler festes direkte eller indirekte til anti-CD20-antistoffet slik at midlet selektivt "avgis" til de CD20-antigen-uttrykkende B-celler. Med begge disse fremgangsmåter er det primære mål å ødelegge tumoren. Den spesifikke fremgangsmåte vil avhenge av det spesielle anti-CD20-antistoff som anvendes. Det fremgår således at de forskjellige fremgangsmåter for målsøking av CD20-antigenet kan variere betraktelig.
[0012] Rituximab- (RITUXAN®) antistoffet er et genteknologisk konstruert kimærisk humant konstant gamma 1-musedoméne inneholdende monoklonalt antistoff rettet mot det humane CD20-antigen. Dette kimæriske antistoff inneholder humane konstante gamma 1-doméner og identifiseres ved navnet "C2B8" i US-patent nr.5 736 137 utstedt 17. april 1998, overdradd til IDEC Pharmaceuticals Corporation. RITUXAN® er godkjent for behandling av pasienter med tilbakevendt eller refraktært ("refracting") lavgradig eller follikulært, CD20-positivt ikke-Hodgkins B-cellelymfom. In vitro-virkningsmekanisme-undersøkelser har vist at RITUXAN® viser human komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) (Reff et. al, Blood 83(2): 435-445 (1994)). Det viser dessuten betydelig aktivitet i analyser som måler antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC). RITUXAN® er blitt vist å ha antiproliferativ aktivitet i thymidin-inkorporeringsanalyser og en begrenset evne til å indusere apoptose direkte, mens CD20-antistoffer ikke har dette (Maloney et. al, Blood 88 (10): 637a (1996)).
Antistoffglykosylering
[0013] Oligosakkaridkomponenten kan i betydelig grad påvirke egenskaper som angår effektiviteten av et terapeutisk glykoprotein, innbefattende fysisk stabilitet, motstandsdyktighet overfor proteaseangrep, interaksjoner med immunsystemet, farmakokinetikk og spesifikk biologisk aktivitet. Slike egenskaper kan avhenge ikke bare av tilstedeværelse eller fravær, men også av de spesifikke strukturer, av oligosakkarider. Det kan gjøres noen generaliseringer mellom oligosakkaridstruktur og glykoproteinfunksjon. For eksempel medierer visse oligosakkaridstrukturer hurtig fjerning av glykoproteinet fra blodstrømmen via interaksjoner med spesifikke karbohydratbindende proteiner, mens andre kan bindes av antistoffer og trigge uønskede immunreaksjoner (Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)).
[0014] Pattedyrceller er de foretrukne verter for dannelse av terapeutiske glykoproteiner på grunn av sin evne til å glykosylere proteiner i den mest kompatible form for human anvendelse (Cumming et al., Glycobiology 1:115-30 (1991); Jenkins et al., Nature Biotechnol.14:975-81 (1996)). Bakterier glykosylerer proteiner meget sjelden, og gir, i likhet med andre typer vanlige verter, så som gjærsopp, filamentøse sopp, insekt- og planteceller, glykosyleringsmønstre forbundet med hurtig fjerning fra blodstrømmen, uønskede immun-interaksjoner, og i noen spesifikke tilfeller redusert biologisk aktivitet. Blant pattedyrceller har kinesisk hamster-ovarie- (CHO)-celler vært mest alminnelig anvendt i de siste to tiår. I tillegg til at disse celler gir egnede glykosyleringsmønstre, muliggjør de konstant generering av genetisk stabile, meget produktive klonale cellelinjer. De kan dyrkes til høye tettheter i enkle bioreaktorer ved anvendelse av serumfrie medier, og muliggjøre utvikling av sikre og reproduserbare bioprosesser. Andre vanlig anvendte dyreceller innbefatter babyhamsternyre (BHK)-celler, NS0- og Sp2/0-musemyelomceller. I den senere tid er dannelse ut fra transgene dyr også blitt testet. (Jenkins et al., Nature Biotechnol.
14:975-81 (1996)).
[0015] Alle antistoffer inneholder karbohydratstrukturer i konserverte stillinger i de konstante tungkjederegioner, og hver isotype har en særlig rekke N-bundne karbohydratstrukturer, som variabelt påvirker proteinsammensetning, -utskillelse og funksjonell aktivitet. (Wright, A., og Morrison, S. L., Trends Biotech.
15:26-32 (1997)). Strukturen av det tilknyttede N-bundne karbohydrat varierer i betydelig grad, avhengig av graden av prosessering, og kan innbefatte komplekse oligosakkarider med høyt innhold av mannose, med multiple grener og med to antenner ("biantennary"). (Wright, A., og Morrison, S. L., Trends Biotech.15:26-32 (1997)). Det er typisk en heterogen prosessering av kjerne-oligosakkaridstrukturene tilknyttet på et spesielt glykosyleringssted, slik at til og med monoklonale antistoffer finnes som multiple glykoformer. Det er likeledes vist at hovedforskjeller i antistoff-glykosyleringen finnes mellom cellelinjer, og enda mindre forskjeller sees for en gitt cellelinje dyrket under forskjellige dyrkningsbetingelser. (Lifely, M. R. et al., Glycobiology 5(8):813-22 (1995)).
[0016] Én måte til å oppnå store økninger i potens, mens det opprettholdes en enkel produksjonsprosess og potensielt unngås betydelige, uønskede bivirkninger, er å forsterke de naturlige, cellemedierte effektorfunksjoner hos monoklonale antistoffer ved omarbeiding av deres oligosakkaridkomponent som beskrevet i Umaña, P. et al., Nature Biotechnol.17:176-180 (1999) og US-patent nr. 6 602 684. Antistoffer av IgG1-typen, de mest alminnelig anvendte antistoffer ved kreft-immunterapi, er glykoproteiner som har et konservert N-bundet glykosyleringssete ved Asn297 i hvert CH2-doméne. De to komplekse toantenneoligosakkarider knyttet til Asn297 er begravet mellom CH2-doménene og danner utstrakte kontakter med polypeptidskjelettet, og deres tilstedeværelse er essensiell for at antistoffet skal mediere effektorfunksjoner så som antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) (Lifely, M. R., et al., Glycobiology 5:813-822 (1995); Jefferis, R., et al., Immunol Rev.163:59-76 (1998); Wright, A. og Morrison, S. L., Trends Biotechnol. 15:26-32 (1997)).
[0017] De nærværende oppfinnere har tidligere vist at overekspresjon i kinesisk hamster-ovarie- (CHO)-celler av β(1,4)-N-acetylglukosaminyltransferase III ("GnTIII"), en glykosyltransferase som katalyserer dannelsen av todelte ("oligosakkarider, i betydelig grad øker ADCC-aktiviteten in vitro av et kimærisk monoklonalt anti-neuroblastom-antistoff (chCE7) dannet av de omarbeidede CHO-celler (se Umaña, P. et al., Nature Biotechnol.17:176-180 (1999); og internasjonal publikasjon nr. WO 99/54342. Antistoffet chCE7 hører til en stor klasse ukonjugerte mAb som har høy tumoraffinitet og -spesifisitet, men har for liten potens til å være klinisk anvendelige ved fremstilling i industrielle standardcellelinjer som mangler GnTIII-enzymet (Umaña, P., et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)). Denne undersøkelse var den første som viste at store økninger i ADCC-aktivitet kan oppnås ved at de antistoffproduserende celler omarbeides til å uttrykke GnTIII, noe som også førte til en økning i andelen av todelte ("bisected") oligosakkarider som er knyttet til den konstante region (Fc), innbefattende todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider, over nivåene som finnes i naturlig forekommende antistoffer.
[0018] Det er et stadig behov for forbedrede terapeutiske fremgangsmåter rettet mot CD20-antigenet for behandling av B-celle-lymfomer i primater, innbefattende, men ikke begrenset til, mennesker.
[0019] Idet man er klar over det voldsomme terapeutiske potensial hos antigenbindende molekyler (ABM) som har bindingsspesifisitet som hos muse-B-Ly1-antistoffet, og som er blitt glyko-omarbeidet til å forsterke Fc-reseptorbindende affinitet og -effektorfunksjon, har de nærværende oppfinnere utviklet en fremgangsmåte for fremstilling av slike ABM. Denne fremgangsmåte innbefatter blant annet frembringelse av rekombinante, kimæriske antistoffer eller kimæriske fragmenter derav. Effektiviteten av disse ABM blir ytterligere forsterket ved omarbeiding av glykosyleringsprofilen for antistoff-Fc-regionen.
[0020] Ved ett aspekt er oppfinnelsen følgelig rettet mot humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff med øket ADCC som et resultat av nevnte glykoomkonstruering og som har forøket evne til å indusere apoptose av målceller etter nevnte humanisering, idet nevnte antistoff omfatter en tungkjede variabel region omfattende komplementaritetsbestemmende regioner (CDRs) av murint B-Ly1 antistoff, hvor:
a. tungkjede CDR1 er SEKV ID NR:16;
b. tungkjede CDR2 er SEKV ID NR:26; og
c. tungkjede CDR3 er SEKV ID NR:28;
idet tungkjede variabel region rammeverk regionene (FRs) FR1, FR2 og FR3 til nevnte antistoff er humane FR sekvenser som blir kodet for av VH1_10 human kim-linjesekvens og tungkjede variabel region FR4 til nevnte antistoff er en human FR sekvens kodet av JH4 human kimlinjesekvens, og idet nevnte antistoff videre omfatter en lettkjede variabel region omfattende CDRs av murint B-Ly1 antistoff, hvor:
d. lettkjede CDR1 er SEKV ID NR:18;
e. lettkjede CDR2 er SEKV ID NR:19; og
f. lettkjede CDR3 er SEKV ID NR:20,
hvor lettkjede variable regioner FRs FR1, FR2 og FR3 til nevnte antistoff er humane FR sekvenser kodet av VK_2_40 human kim-linje sekvens og lettkjede variabel region FR4 til nevnte antistoff er en human FR sekvens kodet av JK4 human kim-linje sekvensen, og idet nevnte antistoff enten omfatter human tungkjede variabel rammeverkregion eller en variant derav med en eller flere aminosyresubstitusjoner i tungkjedevariable rammeverk region.
Ved ett aspekt er oppfinnelsen følgelig rettet mot antistoff ifølge krav 1, idet nevnte antistoff omfatter et isolert polypeptid omfattende en tungkjede variabel regionsekvens ifølge SEKV ID NR:32 eller SEKV ID NR:40.
Ved ett aspekt er oppfinnelsen følgelig rettet mot antistoff ifølge krav 1 eller krav 2, idet nevnte antistoff omfatter et isolert polypeptid omfattende en tungkjede variabel regionsekvens ifølge SEKV ID NR:40.
Ved ett aspekt er oppfinnelsen følgelig rettet mot antistoff ifølge et hvilket som helst ifølge kravene 1-3, idet nevnte antistoff omfatter et isolert polypeptid omfattende en lettkjede variabel regionsekvens ifølge SEKV ID NR:76.
[0021] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot Vertscelle som uttrykker minst en nukleinsyre kodende for et polypeptid som har β(1,4)-N acetylglukosaminyltransferase III aktivitet i en mengde som er tilstrekkelig for å glykoomkonstruere Fc-regionen til et polypeptid produsert av nevnte vertscelle, idet nevnte polypeptid er antistoffet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-11.
Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot vertscelle ifølge krav 12, idet nevnte antistoff produsert av nevnte vertscelle utviser forøket Fc reseptor bindingsaffinitet som et resultat av nevnte glykoomkonstruering.
Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot vertscelle ifølge krav 13, idet nevnte Fc reseptor er FcγRIIIA reseptor.
[0022] Oppfinnelsen er videre rettet mot farmasøytisk sammensetning som omfatter antistoffet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-11 og en farmasøytisk akseptabel bærer.
Oppfinnelsen er videre rettet mot antistoff ifølge et hvilket som helst av kravene 1-11 for anvendelse som et medikament for å behandle B celle lymfom.
Oppfinnelsen er videre rettet motaAnvendelse av antistoffet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-11 for fremstilling av et medikament for å behandle B celle lymfom.
[0033] Det er beskrevet et ABM, hvilket ABM har modifiserte oligosakkarider. Ved én utførelsesform har de modifiserte oligosakkarider redusert fukosylering sammenliknet med ikkemodifiserte oligosakkarider. Ved andre utførelsesformer er de modifiserte oligosakkarider hybride eller komplekse. Ved en ytterligere utførelsesform har ABM en øket andel av ikke-fukosylerte oligosakkarider eller todelte ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fcregionen av molekylet. Ved én utførelsesform er de todelte, ikkefukosylerte oligosakkarider hybride. Ved en ytterligere utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider komplekse. Ved én utførelsesform er minst 20% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet ikke-fukosylerte eller todelte, ikke-fukosylerte. Ved mer foretrukne utførelsesformer er minst 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% eller 75% eller mer av oligosakkaridene ikkefukosylerte eller todelte, ikke-fukosylerte.
[0035] Det er videre mulig å fremstille et ABM som er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet om binding til CD20, og hvor nevnte ABM er kimærisk; hvilken fremgangsmåte omfatter: (a) dyrking av en vertscelle omfattende et polynukleotid som koder for et ABM i et medium under betingelser som muliggjør ekspresjon av polynukleotidet som koder for dette ABM; og (b) gjenvinning av dette ABM fra den resulterende kultur.
[0036] Ved et annet aspekt angår oppfinnelsen følgelig et farmasøytisk preparat som angitt ovenfor. Det er påtenkt at det farmasøytiske preparat videre kan omfatte en farmasøytisk akseptabel bærer, en adjuvans eller en kombinasjon derav.
[0037] Det er mulig å behandle en sykdom som kan behandles med B-celle-uttømming. Fremgangsmåten omfatter administrering av en terapeutisk effektiv mengde av ABM til et menneske som trenger det. Ved en foretrukket utførelsesform behandles sykdommen ved administrering av et ABM som er et kimærisk antistoff, eller et kimærisk fragment av et antistoff.
[0038] Det er videre beskrevet en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet i en mengde tilstrekkelig til å modifisere oligosakkaridene i Fc-regionen dannet av vertscellen, hvor ABM er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og hvor ABM er kimærisk. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid. Ved en annen utførelsesform er ABM dannet av vertscellen et antistoff eller et antistoff-fragment. Ved en ytterligere utførelsesform omfatter ABM en region ekvivalent med Fcregionen av et humant IgG.
[0039] Det er videre beskrevet et isolert polynukleotid omfattende minst én komplementaritetesbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Slike isolerte polynukleotider koder fortrinnsvis for et fusjonspolypeptid som er et antigenbindende molekyl. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitets-bestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved en annen utførelsesform koder polynukleotidet for hele den variable region av den lette eller tunge kjede av et kimærisk (f.eks. humanisert) antistoff.
[0040] Det er videre beskrevet et antigenkombinerende molekyl omfattende minst én komplementaritets-bestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant- eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, og omfattende en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved et annet aspekt omfatter det antigenbindende molekyl den variable region av en lett eller tung antistoffkjede. Ved én spesielt anvendelig utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk, f.eks. humanisert, antistoff.
[0041] Det er det første kjente tilfellet hvor et type II-anti-CD20-antistoff er blitt omarbeidet til å ha økte effektorfunksjoner så som ADCC, mens det fremdeles bibeholder potent apoptoseevne. Det er videre beskrevet et omarbeidet anti-CD20-antistoff type II med øket ADCC som resultat av denne omarbeidelse og uten tap av vesentlig evne til å indusere apoptose. Ved én utførelsesform er anti-CD20-antistoffene type II blitt omarbeidet til å ha forandret glykosyleringsmønster i Fc-regionen. Ved en spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et øket nivå av todelte komplekse rester i Fc-regionen. Ved en annen spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et redusert nivå av fukoserester i Fc-regionen. Ved en annen utførelsesform har anti-CD20-antistoffene type II gjennomgått polypeptidomarbeiding.
[0042] Vertscellen kan velges fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, en CHO-celle, en BHK-celle, en NSO-celle, en SP2/0-celle, en YO-myelomcelle, en P3X63-musemyelomcelle, en PER-celle, en PER.C6-celle eller en hybridomcelle. Ved én utførelsesform omfatter vertscellen videre et transfektert polynukleotid omfattende et polynukleotid som koder for VL-regionen av muse-B-Ly1-antistoffet eller varianter derav og en sekvens som koder for en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant immunglobulin. Ved en annen utførelsesform omfatter vertscellen videre et transfektert polynukleotid omfattende et polynukleotid som koder for VH-regionen av muse-B-Ly1-antistoffet eller varianter derav, og en sekvens som koder for en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant immunglobulin.
[0043] Det er videre beskrevet en vertscelle som danner et ABM som oppviser øket Fc-reseptorbindingsaffinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider. Ved én utførelsesform er den økte bindingsaffinitet til en Fc-reseptor, spesielt Fc γRIIIA-reseptoren.
Effektorfunksjonen som er påtenkt i det foreliggende, kan velges fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet; øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til polymorfonukleære celler; øket binding til monocytter; øket direkte signalisering som induserer apoptose; øket dendrittcelleutvikling; og øket T-celle-priming.
[0044] Ved en ytterligere utførelsesform omfatter vertscellen minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, som er operabelt knyttet til et konstitutivt promoterelement.
[0045] Det er videre beskrevet en metode for frembringelse av et ABM i en vertscelle, omfattende: (a) dyrking av en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst ett polynukleotid som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet, under betingelser som muliggjør frembringelse av nevnte ABM, og som muliggjør modifisering av oligosakkaridene som finnes på Fc-regionen av dette ABM; og (b) isolering av nevnte ABM; hvor nevnte ABM er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og hvor nevnte ABM er kimærisk. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid, fortrinnsvis omfattende det katalytiske doméne av GnTIII og Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt Golgi-residerende polypeptid valgt fra gruppen bestående av lokalisasjons-doménet av mannosidase II, lokalisasjonsdoménet av β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase I ("GnTI"), lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase II ("GnTII") og lokalisasjonsdoménet av α1-6-kjerne-fukosyltransferase. Golgi-lokalisasjons-doménet er fortrinnsvis fra mannosidase II eller GnTI.
[0046] Det er videre beskrevet en fremgangsmåte for modifisering av glykosyleringsprofilen for et anti-CD20-ABM frembrakt av en vertscelle, omfattende innføring i vertscellen av minst én nukleinsyre eller ekspresjonsvektor ifølge oppfinnelsen. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff eller et fragment derav; fortrinnsvis omfattende Fc-regionen av et IgG. Alternativt er polypeptidet et fusjonsprotein som innbefatter en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant IgG.
[0047] Det er videre beskrevet et rekombinant, kimærisk antistoff, eller et fragment derav, som kan konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og med redusert fukosylering.
[0048] Det er videre beskrevet en fremgangsmåte for modifisering av glykosyleringen av det rekombinante antistoff eller et fragment derav ifølge oppfinnelsen ved anvendelse av et fusjons-polypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt Golgi-residerende polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter fusjonspolypeptidene ifølge oppfinnelsen det katalytiske doméne av GnTIII. Ved en annen utførelsesform er Golgi-lokalisasjonsdoménet valgt fra gruppen bestående av: lokalisasjonsdoménet av mannosidase II, lokalisasjonsdoménet av GnTI, lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av GnTII og lokalisasjonsdoménet av α1-6-kjerne-fukosyltransferase. Fortrinnsvis er Golgilokalisasjonsdoménet fra mannosidase II eller GnTI.
[0049] Ved én utførelsesform er fremgangsmåten rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav, med modifiserte oligosakkarider hvor de modifiserte oligosakkarider har redusert fukosylering sammenliknet med ikke-modifiserte oligosakkarider. Disse modifiserte oligosakkarider kan være hybride eller komplekse. Ved en annen utførelsesform er fremgangsmåten rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav med øket andel av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen av polypeptidet. Ved én utførelsesform er de todelte, ikkefukosylerte oligosakkarider hybride. Ved en annen utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider komplekse. Ved en ytterligere utførelsesform er fremgangsmåten rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav hvor minst 20% av oligosakkaridene i Fc-regionen av nevnte polypeptid er todelte, ikke-fukosylerte. Ved en foretrukket utførelsesform er minst 30% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet todelte, ikkefukosylerte. Ved en annen foretrukket utførelsesform er minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet todelte, ikke-fukosylerte.
[0050] Det er videre beskrevet et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav, som oppviser øket Fc-reseptor-bindingsaffinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider. Ved én utførelsesform er den økte bindingsaffinitet til en Fc-aktiverende reseptor. Ved en ytterligere utførelsesform er Fc-reseptoren Fc γ-aktiverende reseptor, spesielt Fc γRIIIa-reseptoren. Effektorfunksjonen som er påtenkt i det foreliggende, kan være valgt fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, øket Fcmediert cellulær cytotoksisitet; øket binding til NK-celler; øket binding til makrofager; øket binding til polymorfonukleære celler; øket binding til monocytter; øket direkte signalisering som induserer apoptose; øket dendrittcelleutvikling; og øket T-celle-priming.
[0051] Det er videre beskrevet et rekombinant, kimærisk antistoff-fragment, med bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet og inneholdende Fcregionen, som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene heri.
[0052] Det er videre beskrevet et fusjonsprotein som innbefatter et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:1 og en region ekvivalent med Fcregionen av et immunglobulin, og som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene heri.
[0053] Det er videre beskrevet et fusjonsprotein som innbefatter et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2 og en region ekvivalent med Fcregionen av et immunglobulin og omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene heri.
[0054] Det er videre beskrevet et farmasøytisk preparat som angitt ovenfor.
[0055] Det er videre beskrevet en fremgangsmåte for behandling av en sykdom som kan behandles ved B-celle-uttømming, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av det rekombinante, kimæriske antistoff eller fragmentet derav, frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene heri, til et menneske som trenger det.
Det vises nå til tegningene.
[0056] Fig 1. Nukleotid- (SEKV ID NR:3) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:1) for VH-regionen av muse-B-Ly1.
[0057] Fig 2. Nukleotid- (SEKV ID NR:4) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:2) for VL-regionen av muse-B-Ly1.
[0058] Fig 3. Binding av Rituximab® (O) og ch-B-Ly1 (∆) til CD20 på Raji B-lymfomceller.
[0059] Fig 4. B-celle-uttømming ved Rituximab® (O) og ch-B-Ly1 (∆) i fullblod fra de tre forskjellige klasser av Fc γRIIIa-158V/F-genotype: (A) fullblod fra en F/F-donor, homozygot med hensyn til lavereaffinitets-reseptoren; (B) fullblod fra en F/V-donor, heterozygot med hensyn til affinitetsreseptoren; og (C) fullblod fra en V/V-donor, homozygot med hensyn til høyereaffinitetsreseptoren.
[0060] Fig 5. Nukleotid- (SEKV ID NR:11) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:13) for den tunge kjede av et kimærisk, anti-CD20-antistoff.
[0061] Fig 6. Nukleotid- (SEKV ID NR:12) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:13) for den lette kjede av et kimærisk, anti-CD20-antistoff.
[0062] Fig 7. Nukleotid- og aminosyresekvenser for muse- B-Ly1-antistoff-CDR: (A) Forutsette CDR for VH-regionen. (B) Forutsette CDR for VLregionen.
[0063] Fig 8. MALDI-TOF-profil for et glyko-omarbeidet, kimærisk B-Ly1-antistoff. (A) Tabell som detaljert viser prosentandelene av spesifikke topper; (B) Spektrum for glyko-omarbeidet kimærisk B-Ly1; (C) Spektrum for glykoomarbeidet kimærisk B-Ly1 behandlet med Endo-H.
[0064] Fig 9. Binding av forskjellige humaniserte anti-CD20-antistoffer til Raji B-celler. Forskjellene mellom B-HH2-konstruksjonen og B-HL8- og B-HL11-konstruksjonene befinner seg i rammeverk 1- og 2-regionene idet alle de tre CDR er identiske. FR1- og FR2-sekvensene i B-HL8 og B-HL11 stammer fra den humane VH3-klasse, mens det fullstendige B-HH2-rammeverk er humant VH1-avledet. B-HL11 er et derivat av B-HL8 med enkeltmutasjonen Glu1Gln, hvor Gln er aminosyreresten i B-HH2-konstruksjonen. Dette betyr at Glu1Gln-utskiftingen ikke forandringer bindingsaffiniteten eller -intensiteten. De andre forskjeller mellom B-HH2 og B-HL8 er 14 FR-rester, hvorav hvilke én eller flere vil innvirke på dette antistoffs antigenbindende oppførsel.
[0065] Fig. 10. Binding av det humaniserte anti-CD20-antistoff BHL4-KV1 på Raji-målceller. B-HL4-konstruksjonen fås fra B-HH2-antistoffet ved erstatting av FR1 i B-HH2 med FR1 fra den humane kimlinjesekvens VH1_45. Denne konstruksjon viser sterkt redusert antigenbindende evne, til tross for at den har forskjellige aminosyrer ved bare tre stillinger i FR1. Disse rester befinner seg i stillingene 2, 14 og 30 ifølge Kabat-nummerering. Blant disse ser det ut til at stilling 30 er den mest innflytelsesrike stilling, siden den er en del av Chothiadefinisjonen av CDR1.
[0066] Fig. 11. Sammenlikning av bindingsoppførselen hos B-HH1, B-HH2, B-HH3 og parentalantistoffet B-ly1. Dataene viser at alle Ab viser en liknende ED50-verdi, men B-HH1-konstruksjonen bindes med lavere intensitet/støkiometri enn variantene B-HH2 og B-HH3. B-HH1 kan skjelnes fra B-HH2 og B-HH3 ved sine delvis humane CDR1- og CDR2-regioner (Kabat-definisjon), samt Ala/Thrpolymorfismen i stilling 28 (Kabat-nummerering). Dette tyder på at enten stilling 28, den fullstendige CDR1 og/eller den fullstendige CDR2 er viktig for antistoff/antigen-interaksjon.
[0067] Fig. 12. Sammenlikning av B-HL1, B-HH1 og B-ly1-parentalantistoffet. Dataene viste fravær av en hver bindingsaktivitet i B-HL1-konstruksjonen, og omtrent halvdelen av bindingsintensiteten/støkiometrien for BHH1 sammenliknet med B-ly1. Både B-HL1 og B-HH1 er utformet basert på akseptor-rammeverk som stammer fra den humane VH1-klasse. Blant andre forskjeller er stilling 71 (Kabat-nummerering) i B-HL1-konstruksjonen en slående forskjell, noe som tyder på dens putative betydning for antigenbinding.
[0068] Fig. 13. Fluorcytometrisk analyse av kapasiteten hos anti-CD20-antistoffet overfor sitt antigen. Dataene viste at B-HL2- og B-HL3-konstruksjonene ikke viser CD20-bindingsaktivitet.
[0069] Fig. 14. Apoptose av anti-CD20-antistoffer på Z-138 MCL-celler.
[0070] Fig. 15. Apoptose ved anti-CD20-antistoffer. Analysedetaljer: 5 x 10<5>celler pr. brønn ble utsådd i 24-brønnsplater (5 x 10<5>celler pr. ml) i dyrkningsmedium. 10 mg av de respektive Ab, PBS for den negative kontroll eller 5 mM kamptotecin (CPT)-positive kontroll ble tilsatt i brønnene. Prøvene ble inkubert natten over (16 timer), merket med AnnV-FITC og analysert ved hjelp av FACS. Analyser ble utført in triplo (*): Signal for PBS alene subtrahert (PBS alene ga 8% og 2% AnnV+ for henholdsvis PR-1- og Z-138-celler). Anvendte antistoffer var: C2B8 (kimæriske, ikke glyko-omarbeidede); BHH2-KV1 (humaniserte, ikke glyko-omarbeidede). Bemerk: denne analyse innbefatter ikke noen ytterligere effektorceller, bare målceller pluss antistoff eller kontroller.
[0071] Fig. 16. Målcelledreping ved anti-CD20-antistoffer med immuneffektorceller. Analysedetaljer: B-celle-uttømming i normalt fullblod inkubering natten over og analyse med henblikk på CD19+/CD3+ ved FACS. ADOC ved anvendelse av PBMC som effektorer, 4 timers inkubering, 25:1 effektor:mål-forhold, måldreping målt ved Calcein-retensjon i forhold til detergentlyse (100%) og lyse uten Ab (0%). Anvendte antistoffer: C2B8 (kimærisk, ikke glyko-omarbeidet form); BHH2-KV1-wt (humanisert, ikke glyko-omarbeidet form av BHH2-KV1); BHH2:KV1-GE (humanisert, glyko-omarbeidet form av BHH2-KV1).
[0072] Fig. 17. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av ikke-modifisert, ikke glyko-omarbeidet BHH2-KV1 humanisert IgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff.
[0073] Fig. 18. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av glyko-omarbeidet BHH2-KV1g1 humanisert IgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff. Glyko-omarbeiding utført ved koekspresjon i vertsceller av antistoffgener og gen som koder for enzym med β-1,4-Nacetylglukosaminyltransferase III (GnT-III)-katalytisk aktivitet.
[0074] Fig. 19. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av glyko-omarbeidet BHH2-KV1g2 humanisert IgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff. Glyko-omarbeiding utført ved koekspresjon i vertsceller av antistoffgener og gen som koder for enzym med β-1,4-N-acetylglukosaminyltransferase III (GnT-III)-katalytisk aktivitet og koder for enzym med Golgi α-mannosidase II-katalytisk aktivitet.
[0075] Fig. 20. Binding av ikke glyko-omarbeidede og glyko-omarbeidede antistoffer til human FcgammaRIIIa-reseptor som viser seg på overflaten av rekombinante CHO-CD16-celler.
[0076] Fig. 21. Apoptose av ikke-Fc-omarbeidede og Fc-omarbeidede anti-CD20-antistoffer på Z-138 MCL-celler. Analysedetaljer: 5 x 10<5>celler pr. brønn ble utsådd i 24 brønns plater (5 x 10<5>celler pr. ml) i dyrkningsmedium.10 mg av det respektive Ab, PBS for den negative kontroll ble tilsatt i brønnene. Prøvene ble inkubert natten over (16 timer), merket med AnnV-FITC og analysert ved hjelp av FACS. Analyse ble utført in triplo. Ab anvendt: C2B8 = rituximab (kimærisk, ikke glyko-omarbeidet form, samme som kommersiell form); BHH2-KV1 (humanisert, ikke glyko-omarbeidet - se fig.6 for glykosyleringsprofil); BHH2-KV1g1 (humanisert, glyko-omarbeidet - se fig.7 for glykosyleringsprofil; BHH2-KV1g2 (humanisert, glyko-omarbeidet - se fig.8 med hensyn til glykosyleringsprofil). Bemerk: denne analyse innbefatter ikke noen ytterligere effektorceller, kun målceller pluss antistoff eller kontroller. (*): Signal for PBS alene subtrahert.
[0077] Betegnelser er anvendt her i dokumentet slik de vanligvis anvendes på området, dersom ikke annet er definert, som følger.
[0078] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen antistoff ment å innbefatte hele antistoffmolekyler, innbefattende monoklonale, polyklonale og multispesifikke (f.eks. bispesifikke) antistoffer, samt antistoff-fragmenter med Fc-regionen og som bibeholder bindingsspesifisitet, og fusjonsproteiner som innbefatter en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin og som bibeholder bindingsspesifisitet. Humaniserte, primatiserte og kimæriske antistoffer er også innbefattet.
[0079] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen Fc-region ment å angi en C-terminal region av en IgG-tungkjede. Skjønt grensene for Fc-regionen av en IgG-tungkjede kan variere litt, er den humane IgG-tungkjede-Fc-region vanligvis definert som å strekke seg fra aminosyreresten i stilling Cys226 til den karboksylterminale ende.
[0080] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen region ekvivalent med Fcregionen av et immunglobulin ment å innbefatte naturlig forekommende allele varianter av Fc-regionen av et immunglobulin samt varianter med forandringer som frembringer substitusjoner, addisjoner eller delesjoner, men som ikke i noen vesentlig grad reduserer immunglobulinets evne til å mediere effektorfunksjoner (så som antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet). For eksempel kan én eller flere aminosyrer utelukkes fra den N-terminale eller C-terminale ende av Fc-regionen av et immunglobulin uten vesentlig tap av biologisk funksjon. Slike varianter kan velges i henhold til generelle regler kjent på området, for å ha minimal effekt på aktiviteten. (Se f.eks. Bowie, J.U. et al., Science 247:1306-10 (1990).
[0081] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen antigenbindende molekyl i sin videste betydning et molekyl som spesifikt binder en antigen determinant. Mer spesifikt er et antigenbindende molekyl som binder CD20, et molekyl som spesifikt bindes til et ikke-glykosylert celleoverflate-fosfoprotein på 35 000 dalton, typisk betegnet som det humane B-lymfocytt-begrensede differensieringsantigen Bp35, vanligvis omtalt som CD20. Med "spesifikt binder" menes at bindingen er selektiv for antigenet og kan skjelnes fra uønskede eller ikke-spesifikke interaksjoner.
[0082] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsene fusjon og kimærisk, anvendt med henvisning til polypeptider så som ABM, polypeptider omfattende aminosyresekvenser som stammer fra to eller flere heterologe polypeptider, så som deler av antistoffer fra forskjellige arter. Når det for eksempel gjelder kimæriske ABM, kan de ikke-antigenbindende komponenter stamme fra mange forskjellige arter, innbefattende primater så som sjimpanser og mennesker. Den konstante region av det kimæriske ABM er mest foretrukket hovedsakelig identisk med den konstante region av et naturlig humant antistoff; den variable region av det kimæriske antistoff er mest foretrukket hovedsakelig identisk med den variable region av et rekombinant anti-CD20-antistoff med aminosyresekvens som hos den variable muse-B-Ly1-region. Humaniserte antistoffer er en spesielt foretrukket form av fusjons- eller kimærisk antistoff.
[0083] Anvendt her i dokumentet angir et polypeptid med "GnTIII-aktivitet" polypeptider som kan katalysere addisjonen av en N-acetylglykosamin- (GlcNAc-) rest i β-1-4-binding til det β-bundne mannosid i trimannosylkjernen av N-bundne oligosakkarider. Dette innbefatter fusjonspolypeptider som oppviser enzymatisk aktivitet i likhet med, men ikke nødvendigvis identisk med, aktiviteten av β(1,4)-N-acetylglukosaminyltransferase III, også kjent som β-1,4-mannosylglykoprotein 4-beta-N-acdetylglukosaminyl-transferase (EC 2.4.1.144), i henhold til Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB) målt i en spesiell biologisk analyse, med eller uten doseavhengighet. I det tilfelle hvor doseavhengighet finnes, behøver det ikke være identisk med doseavhengigheten hos GnTIII, men heller hovedsakelig lik doseavhengigheten i en gitt aktivitet sammenliknet med GnTIII (dvs. at kandidatpolypeptidet vil oppvise større aktivitet eller ikke mer enn ca.25 ganger mindre, og fortrinnsvis ikke mer enn ca. ti ganger mindre aktivitet, og mest foretrukket ikke mer enn ca. tre ganger mindre aktivitet i forhold til GnTIII).
[0084] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen variant (eller analog) et polypeptid som er forskjellig fra et spesifikt angitt polypeptid ved aminosyreinnsettinger, -delesjoner og -substitusjoner, frembrakt ved anvendelse av f.eks. rekombinante DNA-teknikker. Varianter av ABM innbefatter kimæriske, primatiserte eller humaniserte antigenbindende molekyler hvor én eller flere av aminosyrerestene er modifisert ved substitusjon, addisjon og/eller delesjon på en slik måte at det ikke i noen vesentlig grad påvirker antigen- (f.eks. CD20-) bindende affinitet. Rettledning med hensyn til bestemmelse av hvilken aminosyrerest som kan erstattes, adderes eller utelukkes uten at aktuelle aktiviteter oppheves, kan finnes ved sammenlikning av sekvensen for det spesielle polypeptid med sekvensen for homologe peptider, og minimalisering av antallet aminosyresekvensforandringer utført i regioner med høy homologi (konserverte regioner), eller ved erstatting av aminosyrer med konsensussekvens.
[0085] Alternativt kan rekombinante varianter som koder for disse samme eller liknende polypeptider, syntetiseres eller utvelges ved at det gjøres bruk av "overflødigheten" i den genetiske kode. Forskjellige kodonsubstitusjoner, så som de stumme forandringer som frembringer forskjellige restriksjonsseter, kan innføres for optimalisering av kloning i et plasmid eller en virusvektor, eller ekspresjon i et spesielt prokaryot eller eukaryot system. Mutasjoner i polynukleotidsekvensen kan gjenspeiles i polypeptidet eller doménene av andre peptider som er tilføyd til polypeptidet, for modifisering av egenskapene hos hvilken som helst del av polypeptidet, under forandring av karakteregenskaper så som ligandbindende affiniteter, interkjedeaffiniteter eller nedbrytnings/turnoverhastighet.
[0086] Aminosyre-"substitusjoner" er fortrinnsvis et resultat av erstatting av én aminosyre med en annen aminosyre med liknende strukturelle og/eller kjemiske egenskaper, dvs. konserverende aminosyre-erstatninger.
"Konserverende" aminosyresubstitusjoner kan gjøres på basis av likhet med hensyn til polaritet, ladning, løselighet, hydrofobitet, hydrofilitet og/eller den amfipatiske beskaffenhet av de rester som inngår. For eksempel innbefatter ikkepolare (hydrofobe) aminosyrer alanin, leucin, isoleucin, valin, prolin, fenylalanin, tryptofan og metionin; polare nøytrale aminosyrer innbefatter glycin, serin, treonin, cystein, tyrosin, asparagin og glutamin; positivt ladde (basiske) aminosyrer innbefatter arginin, lysin og histidin; og negativt ladde (sure) aminosyrer innbefatter asparaginsyre og glutaminsyre. "Innsettinger" eller "utelukkelser" er fortrinnsvis i området ca.1-20 aminosyrer, mer foretrukket 1-10 aminosyrer. Den tillatte variasjon kan bestemmes eksperimentelt ved at det systematisk foretas innsettinger, utelukkelser eller substitusjoner av aminosyrer i et polypeptidmolekyl ved anvendelse av rekombinante DNA-teknikker og analysering av de resulterende rekombinante varianter med henblikk på aktivitet.
[0087] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen humanisert anvendt for henvisning til et antigenbindende molekyl som stammer fra et ikke-humant antigenbindende molekyl, for eksempel et museantistoff, som bibeholder eller i det vesentlige bibeholder de antigenbindende egenskaper hos opphavsmolekylet, men som er mindre immunogent i mennesker. Dette kan oppnås ved forskjellige metoder innbefattende (a) poding av hele de ikke-humane variable doméner på humane konstante regioner under frembringelse av kimæriske antistoffer, (b) poding av bare de ikke-humane CDR på humane rammeverk- og konstante regioner med eller uten tilbakeholdelse av kritiske rammeverkrester (f.eks. slike som er viktige for bibeholdelse av gode antigenbindende affinitets- eller antistoff-funksjoner), eller (c) transplantering av hele de ikke-humane variable doméner, men "tilsløring" av dem med en humanliknende del ved erstatting av overflaterester. Slike metoder er beskrevet i Jones et al., Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 81:6851-6855 (1984);
Morrison og Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994. Det er generelt 3 komplementaritetsbestemmende regioner, eller CDR, (CDR1, CDR2 og CDR3) i hver av de variable tung- og lettkjededoméner av et antistoff, som er flankert av fire rammeverk-subregioner (dvs. FR1, FR2, FR3 og FR4) i hver av de variable tung- og lettkjededoméner av et antistoff: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. En omtale av humaniserte antistoffer kan blant annet finnes i US-patent nr.
6 632 927, og i publisert US-patentsøknad nr.2003/0175269.
[0088] Anvendt her i dokumentet er likeledes betegnelsen primatisert anvendt for henvisning til et antigenbindende molekyl som stammer fra et antigenbindende ikke-primat-molekyl, for eksempel et museantistoff, som bibeholder eller i det vesentlige bibeholder de antigenbindende egenskaper hos opphavsmolekylet, men som er mindre immunogent i primater.
[0089] I det tilfelle hvor det er to eller flere definisjoner av en betegnelse som anvendes og/eller er akseptert på området, er definisjonen av betegnelsen anvendt her i dokumentet ment å innbefatte alle slike betydninger dersom ikke det motsatte er uttrykkelig angitt. Et spesifikt eksempel er bruken av betegnelsen "komplementaritetsbestemmende region" ("CDR") til beskrivelse av de ikke på hverandre følgende antigenkombinerende seter som finnes i den variable region av både tung- og lettkjede-polypeptider. Denne spesielle region er beskrevet av Kabat et al., U.S. Dept. of Health og Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) og av Chothia et al., J. Mol. Biol.196:901-917 (1987), hvor definisjonene innbefatter overlappende eller subsett av aminosyrerester sammenliknet med hverandre. Ikke desto mindre er anvendelse av én av definisjonene til å omtale en CDR av et antistoff eller varianter derav ment å være innenfor rammen for betegnelsen som definert og anvendt her i dokumentet. De passende aminosyrerester som omfatter CDR som definert ved hver av de ovenfor angitte referanser, er angitt nedenfor i tabell I som sammenlikning. De nøyaktige restnumre som omfatter en bestemt CDR, vil variere avhengig av sekvensen og størrelsen av CDR. Fagfolk på området kan rutinemessig bestemme hvilke rester som omfatter en bestemt CDR på bakgrunn av aminosyresekvensen for den variable region av antistoffet.
TABELL 1. CDR-definisjoner<1>
<1>Nummerering av alle CDR-definisjoner i tabell 1 i henhold til nummereringskonvensjonene angitt av Kabat et al. (se nedenfor).
[0090] Kabat et al. definerte også et nummereringssystem for sekvenser av variable doméner, som er anvendelig for hvilket som helst antistoff. En vanlig fagperson på området kan utvetydig tilordne dette system med "Kabatnummerering" til hvilken som helst sekvens for variabelt doméne, uten å basere seg på noen forsøksdata ut over selve sekvensen. Avnendt her i dokumentet angir "Kabat-nummerering" nummereringssystemet angitt av Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983). Dersom ikke annet er spesifisert, er henvisninger til nummereringen av spesifikke aminosyrereststillinger i et ABM i henhold til Kabatnummereringssystemet. Sekvensene i sekvenslisten (dvs. SEKV ID NR: 1 til SEKV ID NR: 78) er ikke nummerert i henhold til Kabat-nummereringssystemet.
[0091] Med en nukleinsyre eller et polynukleotid med en nukleotidsekvens som er for eksempel minst 95% "identisk" med en referanse-nukleotidsekvens ifølge foreliggende oppfinnelse menes at nukleotidsekvensen i polynukleotidet er identisk med referansesekvensen, bortsett fra at polynukleotidsekvensen kan innbefatte opp til fem punktmutasjoner pr.100 nukleotider i referansenukleotidsekvensen. Med andre ord kan opp til 5% av nukleotidene i referansesekvensen utelukkes eller substitueres med et annet nukleotid for oppnåelse av et polynukleotid med en nukleotidsekvens som er minst 95% identisk med en referanse-nukleotidsekvens, eller et antall nukleotider på opp til 5% av den totale mengde nukleotider i referansesekvensen kan innføres i referansesekvensen. Søkesekvensen kan være hele sekvensen vist enten på fig.
24 eller fig.25.
[0092] I praksis kan det bestemmes om hvorvidt hvilket som helst spesielt nukleinsyremolekyl eller polypeptid er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en nukleotidsekvens eller polypeptid-sekvens ifølge foreliggende oppfinnelse, på konvensjonell måte ved anvendelse av kjente datamaskinprogrammer. En foretrukket metode for bestemmelse av den beste totale samstemmighet mellom en søkesekvens (en sekvens beskrevet heri) og en aktuell sekvens, også omtalt som en global sekvensinnretting, kan bestemmes ved anvendelse av FASTDB-datamaskin-programmet basert på algoritmen ifølge Brutlag et al., Comp. App. Biosci.6:237-245 (1990). I en sekvensoppstilling er både søkesekvensen og de aktuelle sekvenser DNA-sekvenser. En RNA-sekvens kan sammenliknes ved omdannelse av U til T. Resultatet av den globale sekvensoppstilling er prosent identitet. Foretrukne parametere anvendt i en FASTDB-oppstilling av DNA-sekvenser for beregning av prosent identitet er: Matriks=Enhetlig, k-tuppel=4, Mismatch-fradrag (-"penalty")=1, Kombinasjons-("joining")-fradrag=30, Randomiserings-gruppelengde=0, Forkortnings-("cut off")-poeng=1, Mellomromsfradrag=5, Mellomromsstørrelse-fradrag 0,05, Vindusstørrelse=500 eller lengden av den aktuelle nukleotidsekvens, avhengig av hvilken som er den korteste.
[0093] Hvis den aktuelle sekvens er kortere enn søkesekvensen på grunn av 5'- eller 3'-delesjoner, ikke på grunn av indre delesjoner, må det utføres en manuell korrigering av resultatene. Dette er på grunn av at FASTDB-programmet ikke svarer for 5'- og 3'-avkortninger av den aktuelle sekvens ved beregning av prosent identitet. Når det gjelder aktuelle sekvenser som er avkortet i 5'- eller 3'-endene, i forhold til søkesekvensen, korrigeres prosent identitet ved beregning av antallet baser i søkesekvensen som er 5' og 3' i forhold til den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet på linje, som prosent av de totale baser i søkesekvensen. Om et nukleotid er samsvarig/innrettet bestemmes ved resultatene av FASTDB-sekvensinnrettingen. Denne prosentandel blir så trukket fra prosent identitet, beregnet ved ovennevnte FASTDB-program ved anvendelse av de spesifiserte parametere, under opppnåelse av et endelig prosent identitetspoengtall. Dette korrigerte poengtall er det som anvendes for foreliggende oppfinnelses formål. Bare baser utenfor 5'- og 3'-basene i den aktuelle sekvens, vist ved FASTDB-innrettingen, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, beregnes for det formål å justere prosent identitetspoeng manuelt.
[0094] For eksempel blir en aktuell sekvens på 90 baser innrettet med en 100 basers søkesekvens for bestemmelse av prosent identitet. Delesjonene finnes i 5'-enden av den aktuelle sekvens, og derfor viser ikke FASTDB-innrettingen samsvar/innretting av de første 10 baser i 5'-enden. De 10 uparede baser representerer 10% av sekvensen (antall baser i 5'- og 3'-endene som ikke samsvarer/totalt antall baser i søkesekvensen) slik at 10% trekkes fra prosent identitet-poengtallet beregnet ved FASTDB-programmet. Hvis de gjenværende 90 baser var fullkomment tilpasset, ville den endelige prosent identitet være 90%. I et annet eksempel sammenliknes en 90 basers aktuell sekvens med en 100 basers søkesekvens. Denne gang er delesjonene indre delesjoner slik at det ikke er noen baser på 5' eller 3' av den aktuelle sekvens som ikke er tilpasset/innrettet med søkesekvensen. I dette tilfelle blir ikke prosent identitet beregnet ved FASTDB manuelt korrigert. Enda en gang blir bare baser 5' og 3' i den aktuelle sekvens som ikke er tilpasset/innrettet med søkesekvensen, korrigert manuelt. Ingen andre manuelle korrigeringer gjøres for foreliggende oppfinnelses formål.
[0095] Med et polypeptid med en aminosyresekvens som for eksempel er minst 95% "identisk" med en søke-aminosyresekvens, er det ment at aminosyresekvensen i det aktuelle polypeptid er identisk med søkesekvensen, bortsett fra at den aktuelle polypeptidsekvens kan innbefatte opp til fem aminosyreforandringer pr.100 aminosyrer i søke-aminosyresekvensen. For oppnåelse av et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 95% identisk med en søke-aminosyresekvens kan, med andre ord, opp til 5% av aminosyrerestene i den aktuelle sekvens innsettes, utelukkes eller erstattes med en annen aminosyre. Disse forandringer av referansesekvensen kan skje i de amino- eller karboksyterminale stillinger av referanse-aminosyre- sekvensen eller hvor som helst mellom disse terminale stillinger, spredt enten individuelt blant rester i referansesekvensen, eller i én eller flere på hverandre følgende grupper i referansesekvensen.
[0096] I praksis kan det bestemmes om hvorvidt hvilket som helst bestemt polypeptid er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med et referanse-polypeptid, konvensjonelt ved anvendelse av kjente datamaskin-programmer. En foretrukket metode for bestemmelse av det beste totale samsvar mellom en søkesekvens (en sekvens heri) og en aktuell sekvens, også omtalt som en global sekvensinnretting, kan bestemmes ved anvendelse av FASTDB-datamaskinprogrammet basert på algoritmen ifølge Brutlag et al., Comp. App. Biosci.6:237-245 (1990). Ved en sekvensinnretting er både søkesekvensen og den aktuelle sekvens enten nukleotidsekvenser eller aminosyresekvenser. Resultatet av den globale sekvensinnretting er prosent identitet. Foretrukne parametere anvendt i en FASTDB-aminosyreinnretting er:
Matriks=PAM 0, k-tuppel=2, Umake-fradrag = 1, Kombinasjonsfradrag=20, Randomiserings-gruppelengde=0, Forkortningspoeng=1, Vindusstørrelse= sekvenslengde, Mellomromsfradrag=5, Mellomromsstørrelse-fradrag 0,05, Vindusstørrelse=500 eller lengden av den aktuelle aminosyre, avhengig av hvilken som er den korteste.
[0097] Hvis den aktuelle sekvens er kortere enn søkesekvensen på grunn av N- eller C-terminale delesjoner, ikke på grunn av indre delesjoner, må det foretas en manuell korrigering av resultatene. Dette er på grunn av av FASTDB-programmet ikke gjør rede for N- og C-terminale avkortninger av den aktuelle sekvens ved beregning av global prosent identitet. Når det gjelder aktuelle sekvenser som er avkortet ved den N- og C-terminale ende, i forhold til søkesekvensen, blir prosent identitet korrigert ved beregning av antallet rester i søkesekvensen som er N- og C-terminale i forhold til den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet med en tilsvarende aktuell rest, som prosent av de totale baser i søkesekvensen. Om en rest er samsvarig/innrettet bestemmes ved resultatene av FASTDB-sekvensinnrettingen. Denne prosentandel blir så trukket fra prosent identitet, beregnet ved ovennevnte FASTDB-program under anvendelse av de spesifiserte parametere, under oppnåelse av en endelig prosent identitetspoengverdi. Denne endelige prosent identitetspoengverdi er det som anvendes for foreliggende oppfinnelses formål. Bare rester til de N- og C-terminale ender av den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, tas i betraktning for manuell justering av prosent identitetspoengverdi. Det vil si bare søke-reststillingen utenfor de fjerneste N- og C-terminale rester i den aktuelle sekvens.
[0098] For eksempel blir en 90 aminosyreresters aktuell sekvens innrettet på linje med en 100 resters søkesekvens for bestemmelse av prosent identitet. Delesjonen finner sted i den N-terminale ende av den aktuelle sekvens, og derfor viser ikke FASTDB-innrettningen et samsvar/innretting av de første 10 rester i den N-terminale ende. De 10 uparede rester representerer 10% av sekvensen (antall rester i den N- og C-terminale ende som ikke er samsvarige/totalt antall rester i søkesekvensen) slik at 10% trekkes fra prosent identitet-poengverdien beregnet ved FASTDB-programmet. Hvis de gjenværende 90 rester var fullkomment samstemmige, ville den endelige prosent identitet være 90%. Ved et annet eksempel sammenliknes en 90 resters aktuell sekvens med en 100 resters søkesekvens. Denne gang er delesjonene indre delesjoner slik at det ikke er noen rester i den N- eller C-terminale ende av den aktuelle sekvens som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen. I dette tilfelle blir prosent identitet beregnet ved FASTDB ikke manuelt korrigert. Enda en gang blir bare reststillinger utenfor de N- og C-terminale ender av den aktuelle sekvens, vist i FASTDB-innrettingen, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, manuelt korrigert for. Ingen andre manuelle korrigeringer skal gjøres for foreliggende oppfinnelses formål.
[0099] Anvendt her i dokumentet angir en nukleinsyre som "hybridiserer under stringente betingelser" til en nukleinsyresekvens ifølge oppfinnelsen, et polynukleotid som hybridiserer i en inkubering natten over ved 42 ºC i en løsning omfattende 50% formamid, 5 x SSC (750 mM NaCl, 75 mM natriumcitrat), 50 mM natriumfosfat (pH 7,6), 5x Denhardts løsning, 10% dekstransulfat og 20 μg/ml denaturert, kuttet ("sheared") laksespermie-DNA, fulgt av vasking av filtrene i 0,1x SSC ved ca.65 ºC.
[0100] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen Golgi-lokalisasjonsdoméne aminosyresekvensen i et Golgi-residerende polypeptid som er ansvarlig for forankring av polypeptidet på lokasjonen i Golgi-komplekset. Lokalisasjonsdoméner omfatter generelt aminoterminale "haler" av et enzym.
[0101] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen effektorfunksjon de biologiske aktiviteter som kan tilskrives Fc-regionen (en nativ sekvens-Fc-region eller aminosyresekvens-variant-Fc-region) av et antistoff. Eksempler på antistoffeffektorfunksjoner innbefatter, men er ikke begrenset til, Fc-reseptorbindingsaffinitet, antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), cytokinutskillelse, immun-kompleksmediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, nedregulering av celleoverflatereseptorer, osv.
[0102] Anvendt her i dokumentet betraktes betegnelsene omarbeide, omarbeidet, omarbeiding og glykosyleringsomarbeiding som å innbefatte en hver manipulering av glykosyleringsmønsteret for et naturlig forekommende eller rekombinant polypeptid eller fragment derav. Glykosyleringsomarbeiding innbefatter metabolsk omarbeiding av en celles glykosyleringsmaskineri, innbefattende genetiske manipuleringer av oligosakkarid-synteseveiene under oppnåelse av forandret glykosylering av glykoproteiner som uttrykkes i celler. Videre innbefatter glykosyleringsomarbeiding virkningene av mutasjoner og cellemiljøet på glykosyleringen.
[0103] Anvendt her i dokumentet dekker betegnelsen vertscelle hver cellesystemtype som kan omarbeides til å frembringe polypeptidene og de antigenbindende molekyler heri. Ved én utførelsesform blir vertscellen omarbeidet til å muliggjøre dannelse av et antigenbindende molekyl med modifiserte glykoformer. Ved en foretrukket utførelsesform er det antigenbindende molekyl et antistoff, antistoff-fragment eller fusjonsprotein. Ved visse utførelsesformer er vertscellene blitt ytterligere manipulert til å uttrykke økte nivåer av ett eller flere polypeptider med GnTIII-aktivitet. Vertsceller innbefatter dyrkede celler, f.eks. dyrkede pattedyrceller, så som CHO-celler, BHK-celler, NS0-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, gjærceller, insektceller og planteceller, for bare å nevne noen få, men også celler som finnes i et transgent dyr, en transgen plante eller et dyrket plante- eller dyrevev.
[0104] Anvendt her i dokumentet innbefatter betegnelsen Fc-mediert cellulær cytotoksisitet antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet og cellulær cytotoksisitet mediert ved et løselig Fc-fusjonsprotein inneholdende en human Fcregion. Det er en immunmekanisme som fører til lyse av "antistoff-målsøkte celler" ved "humane immuneffektorceller", hvor:
[0105] De humane immuneffektorceller er en populasjon av leukocytter som viser Fc-reseptorer på sin overflate gjennom hvilke de bindes til Fc-regionen av antistoffer eller av Fc-fusjonsproteiner, og utfører effektorfunksjoner. En slik populasjon kan innbefatte, men er ikke begrenset til, mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) og/eller naturlige dreper-(NK-) celler.
[0106] De antistoff-målsøkte celler er celler som er bundet av antistoffene eller Fc-fusjonsproteinene. Antistoffene eller Fc-fusjonsproteinene bindes til målceller via proteindelen som er N-terminal i forhold til Fc-regionen.
[0107] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet definert som enten en økning i antallet "antistoff-målsøkte celler" som lyseres innen en gitt tid, ved en gitt konsentrasjon av antistoff eller av Fcprotein, i mediet som omgir målcellene, ved mekanismen for Fc-mediert cellulær cytotoksisitet definert ovenfor, og/eller en reduksjon i konsentrasjonen av antistoff, eller av Fc-fusjonsprotein, i mediet som omgir målcellene, som trenges for oppnåelse av lyse av et gitt antall "antistoff-målsøkte celler" i et gitt tidsrom, ved mekanismene for Fc-mediert cellulær cytotoksisitet. Økningen i Fc-mediert cellulær cytotoksisitet er i forhold til den cellulære cytotoksisitet som medieres ved det samme antistoff eller Fc-fusjonsprotein, frembrakt ved den samme type vertsceller, under anvendelse av de samme standardfrembringelses-, -rense-, -formulerings- og -lagringsmetoder, som er kjent for fagfolk på området, men som ikke er blitt frembrakt av vertsceller som er omarbeidet til å uttrykke glykosyltransferasen GnTIII ved metodene beskrevet her i dokumentet.
[0108] Med antistoff med øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) menes et antistoff, slik denne betegnelse er definert her i dokumentet, med øket ADCC ifølge bestemmelse ved hvilken som helst egnet metode kjent for vanlige fagfolk på området. Én akseptert in vitro-ADCC-analyse er som følger:
1) analysen anvender målceller som er kjent for å uttrykke målantigenet som gjenkjennes av den antigenbindende region av antistoffet;
2) analysen anvender humane mononukleære celler fra perifert blod (PBMC), isolert fra blod fra vilkårlig valgt frisk donor, som effektorceller;
3) analysen utføres i henhold til følgende protokoll:
i) PBMC isoleres under anvendelse av standard-densitetssentrifugeringsmetoder og oppslemmes med 5 x 10<6>celler pr. ml i RPMI-celledyrkningsmedium;
ii) målcellene dyrkes ved standard-vevsdyrkningsmetoder, høstes fra den eksponensielle vekstfase med en levedyktighet høyere enn 90%, vaskes i RPMI-celledyrkningsmedium, merkes med 100 μCi<51>Cr, vaskes to ganger med celledyrkningsmedium og gjenoppslemmes i celledyrkningsmedium med en tetthet på 10<5>celler pr. ml;
iii) 100 mikroliter av den endelige målcellesuspensjon ovenfor overføres til hver brønn i en 96 brønns mikrotiterplate;
iv) antistoffet seriefortynnes fra 4000 ng/ml til 0,04 ng/ml i celledyrkningsmedium, og 50 mikroliter av de resulterende antistoffløsninger tilsettes til målcellene i 96 brønns mikrotiterplaten, under in triplo-testing av forskjellige antistoffkonsentrasjsoner som dekker hele konsentrasjonsområdet ovenfor;
v) for maksimal frigjørings-(MR)-kontrollene får 3 ytterligere brønner i platen som inneholder de merkede målceller, 50 mikroliter av en 2% (på volumbasis) vandig løsning av ikke-ionisk detergent (Nonidet, Sigma, St. Louis), i stedet for antistoffløsningen (punkt iv ovenfor).
vi) for spontan frigjørings-(SR)-kontrollene får 3 ytterligere brønner i platen inneholdende de merkede målceller 50 mikroliter RPMI-celledyrkningsmedium i stedet for antistoffløsningen (punkt iv ovenfor);
vii) 96 brønns mikrotiterplaten blir så sentrifugert ved 50 x g i 1 minutt og inkuberes i 1 time ved 4 ºC;
viii) 50 mikroliter av PBMC-suspensjonen (punkt i ovenfor) tilsettes i hver brønn under frembringelse av et effektor:målcelle-forhold på 25:1, og platene anbringes i en inkubator under 5% CO2-atmosfære ved 37 ºC i 4 timer;
ix) den cellefrie supernatant fra hver brønn høstes, og den eksperimentelt frigjorte radioaktivitet (ER) kvantifiseres under anvendelse av en gammateller;
x) prosentandelen av spesifikk lyse beregnes for hver antistoffkonsentrasjon i henhold til formelen (ER-MR)/(MR-SR) x 100, hvor ER er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for denne antistoffkonsentrasjon, MR er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for MR-kontrollene (se punkt v ovenfor), og SR er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for SR-kontrollene (se punkt vi ovenfor);
4) "øket ADCC" er definert som enten en økning i den maksimale prosentandel av spesifikk lyse observert i antistoffkonsentrasjonsområdet testet ovenfor, og/eller en reduksjon i konsentrasjonen av antistoff som trenges for oppnåelse av halvdelen av den maksimale prosentandel av spesifikk lyse observert i antistoffkonsentrasjonsområdet testet ovenfor. Økningen i ADCC er i forhold til ADCC, målt med ovennevnte analyse, som medieres ved det samme antistoff, frembrakt ved den samme type vertsceller, under anvendelse av de samme standardfrembringelses-, -rense-, -formulerings- og -lagringsmetoder, som er kjent for fagfolk på området, men som ikke er blitt frembrakt av vertsceller som er omarbeidet til å overuttrykke GnTIII.
[0109] Det er videre beskrevet antigenbindende molekyler med bindingsspesifisitet som hos muse-B-Ly1-antistoffet, og oppdagelsen av at deres effektorfunksjoner kan forbedres ved forandret glykosylering. Ved én utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk antistoff. Ved en foretrukket utførelsesform er den rettet mot et kimærisk antistoff, eller et fragment derav, omfattende CDR vist på fig.7. Spesifikt er det beskrevet et isolert polynukleotid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av:
SEKV ID NR:5, SEKV ID NR: 6 og SEKV ID NR: 7. (CDR VH-1); og (b) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:21, SEKV ID NR: 22 og SEKV ID NR: 23. (CDR VH-2; og SEKV ID NR: 24. Det er videre beskrevet et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR: 8, SEKV ID NR: 9 og SEKV ID NR: 10. (CDR VL). Ved én utførelsesform koder hvert av disse polynukleotidene for et fusjonspolypeptid.
[0110] Ved en annen utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl VH-doménet av muse-B-Ly1-antistoffet vist på fig.1, eller en variant derav; og et ikke-muse-polypeptid. Ved en annen foretrukket utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et antigenbindende molekyl omfattende VL-doménet av muse-B-Ly1-antistoffet vist på fig.2, eller en variant derav; og et ikke-muse-polypeptid.
[0111] Det er videre beskrevet antigenbindende molekyler omfattende én eller flere avkortede CDR av B-Ly1. Slike avkortede CDR vil mimimalt inneholde de spesifisitetsbestemmende aminosyrerester for den gitte CDR. Med "spesifisitetsbestemmende rest" menes de rester som er direkte involvert i interaksjonen med antigenet. Vanligvis deltar bare ca. én femtedel til én tredjedel av restene i en gitt CDR i binding til antigen. De spesifisitets-bestemmende rester i en spesiell CDR kan identifiseres for eksempel ved beregning av interatomiske kontakter ut fra tredimensjonal modellering og bestemmelse av sekvensvariabiliteten ved en gitt reststilling i henhold til metodene beskrevet i Padlan et al., FASEB J.9(1):133-139 (1995).
[0112] Det er videre beskrevet et isolert polynukleotid omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant- eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, hvor det isolert polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Slike isolerte polynukleotider koder fortrinnsvis for et fusjonspolypeptid som er et antigenbindende molekyl. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved en annen utførelsesform koder polynukleotidet for hele den variable region av den lette eller tunge kjede av et kimærisk (f.eks. humanisert) antistoff. Det er videre beskrevet polypeptidene som kodes for av slike polynukleotider.
[0113] Det er videre beskrevet et antigen-kombinerende molekyl omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant eller avkortet form derav inneholdende i det minste de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, og omfattende en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved et annet aspekt omfatter det antigenbindende molekyl den variable region av en lett eller tung antistoffkjede. Ved én spesielt anvendelig utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk, f.eks. humanisert, antistoff. Det er videre beskrevet fremgangsmåter for frembringelse av slike antigenbindende molekyler, og anvendelse av disse ved behandling av sykdom, innbefattende B-cellelymfomer.
[0114] Det er kjent at flere mekanismer inngår ved den terapeutiske effektivitet av anti-CD20-antistoffer, innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) og induksjon av vekststansing eller apoptose. For eksempel tyder hovedandelen av eksperimentelle beviser på at rituximab opererer via konvensjonelle effektormekanismer målt ved CDC- og ADCC-analyser. Likeledes er det vist at bestandigheten hos forskjellige lymfomceller overfor rituximab in vivo er en funksjon av deres følsomhet overfor CDC in vitro. I motsetning til dette fordrer virkningsmåten in vivo for et annet antistoff som er blitt godkjent for terapeutisk bruk, B1, verken komplement eller naturlig dreper (NK)-celle-aktivitet.
Effektiviteten av B1 in vivo skyldes snarere dets evne til å indusere potent apoptose.
[0115] Monoklonale anti-CD20-antistoffer kan generelt inndeles i to atskilte kategorier basert på sin virkningsmekanisme med hensyn til å utrydde lymfomceller. Anti-CD20-antistoffer type I anvender hovedsakelig komplement til å drepe målceller, mens antistoffer type II opererer ved andre mekanismer, hovedsakelig apoptose. Rituximab og 1F5 er eksempler på anti-CD20-antistoffer type I, mens B1 er et eksempel på et antistoff type II. Se f.eks. Cragg, M.S, og Glennie, M.J., Blood 103(7):2738-2743 (april 2004); Teeling, J.L. et al., Blood 104(6):1793-1800 (september 2004).
[0116] Det er det første kjente tilfellet heri hvor et anti-CD20-antistoff type II er blitt omarbeidet til å ha økte effektorfunksjoner så som ADCC, mens det fremdeles bibeholder potent apoptoseevne. Det er videre beskrevet et omarbeidet anti-CD20-antistoff type II med øket ADCC som resultat av denne omarbeiding, og uten tap av vesentlig evne til å indusere apoptose. Ved én utførelsesform er anti-CD20-antistoffene type II blitt omarbeidet til å ha et forandret mønster for glykosylering i Fc-regionen. Ved en spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et øket nivå av todelte kompleksrester i Fc-regionen. Ved en annen spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et redusert nivå av fukoserester i Fc-regionen. Se publisert US-patentsøknad nr. 2004/0093621. Ved en annen utførelsesform har anti-CD20-antistoffene type II gjennomgått polypeptidomarbeiding som angitt i US-patent nr.6 737 056 eller publisert US-patentsøknad nr.2004/0185045 eller publisert US-patentsøknad nr.
2004/0132101. Det er videre beskrevet fremgangsmåter for frembringelse av slike omarbeidede antistoffer type II samt fremgangsmåter for anvendelse av slike antistoffer ved behandling av forskjellige B-celle-forstyrrelser, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0117] Kimæriske muse-/humane antistoffer er beskrevet. Se for eksempel Morrison, S. L. et al., PNAS I1 :6851-6854 (november 1984); europeisk patentpublikasjon nr.173494; Boulianna, G. L, et al., Nature 312:642 (desember 1984); Neubeiger, M. S. et al., Nature 314:268 (mars 1985); europeisk patentpublikasjon nr.125023; Tan et al., J. Immunol.135:8564 (november 1985); Sun, L. K et al., Hybridoma 5(1):517 (1986); Sahagan et al., J. Immunol.
137:1066-1074 (1986). Se generelt Muron, Nature 312:597 (desember 1984); Dickson, Genetic Engineering News 5(3) (mars 1985); Marx, Science 229:455 (august 1985); og Morrison, Science 229:1202-1207 (september 1985). PCT-publikasjon nr. WO/88104936 beskriver et kimærisk antistoff med konstant human region og variabel museregion, med spesifisitet overfor en epitop på CD20; musedelen av det kimæriske antistoff i Robinson-referansen stammer fra det monoklonale museantistoff 2H7 (gamma 2b, kappa). Skjønt referansen bemerker at det beskrevne kimæriske antistoff er en "hovedkandidat" for behandling av B-celleforstyrrelser, kan dette utsagn anses som ikke mer enn et forslag overfor fagfolk på området for å bestemme om hvorvidt dette forslag er nøyaktig for dette spesielle antistoff eller ikke, spesielt på grunn av at referansen mangler data som underbygger påstanden om terapeutisk effektivitet, og i det vesentlige data som anvender høyereordens-pattedyr så som primater eller mennesker.
[0118] Metodikker for frembringelse av kimæriske antistoffer er tilgjengelige for fagfolk på området. For eksempel kan de lette og tunge kjeder uttrykkes separat, for eksempel under anvendelse av immunglobulin-lettkjeder og immunglobulin-tungkjeder i separate plasmider, eller på en enkelt (f.eks. polycistronisk) vektor. Disse kan så renses og settes sammen in vitro til fullstendige antistoffer; metodikker for utførelse av slik sammensetting er beskrevet. Se for eksempel Scharff M., Harvey Lectures 69:125 (1974). In vitroreaksjonsparametere for dannelse av IgG-antistoffer fra reduserte isolerte lette og tunge kjeder er også beskrevet. Se for eksempel Sears et al., Biochem.
16(9):2016-25 (1977).
[0119] Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er det kimæriske ABM et humanisert antistoff. Metoder for humanisering av ikke-humane antistoffer er kjent på området. For eksempel kan humaniserte ABM frembringes i henhold til metodene ifølge US-patent nr.5 225539, US-patent nr.6180 370 eller US-patent nr. 6 632 927. Et humanisert antistoff har fortrinnsvis innført én eller flere aminosyrerester fra en kilde som er ikke-human. Disse ikke-humane aminosyrerester omtales ofte som "import"-rester, som typisk er tatt fra et variabelt "import"-doméne. Humanisering kan i det vesentlige utføres i henhold til metoden ifølge Winter og medarbeidere (Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986);
Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)) ved innsetting av hypervariable regionsekvenser i stedet for de tilsvarende sekvenser av et humant antistoff. Slike "humaniserte" antistoffer er følgelig kimæriske antistoffer (US-patent nr.4 816 567) hvor hovedsakelig mindre enn et intakt humant variabelt doméne er blitt erstattet med den tilsvarende sekvens fra en ikke-human art. I praksis er humaniserte antistoffer typisk humane antistoffer hvor en del hypervariabel region-rester og eventuelt en del FR-rester er erstattet med rester fra analoge steder i gnager-antistoffer. De aktuelle humaniserte anti-CD20-antistoffer vil omfatte konstante regioner av humant immunglobulin.
[0120] Valget av humane variable doméner, både lette og tunge, for anvendelse ved frembringelse av de humaniserte antistoffer er meget viktig for redusering av antigenisitet. I henhold til den såkalte "beste tilpasnings"-metode blir sekvensen i det variable doméne av et gnager-antistoff screenet mot hele biblioteket av kjente humane variabelt doméne-sekvenser. Den humane sekvens som er nærmest gnagersekvensen, blir så akseptert som den humane rammeverkregion (FR) for det humaniserte antistoff (Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Clothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). En annen metode for utvelging av den humane rammeverksekvens er å sammenlikne sekvensen for hver individuell subregion av hele gnager-rammeverket (dvs. FR1, FR2, FR3 og FR4) eller en kombinasjon av de individuelle subregioner (f.eks. FR1 og FR2) med et bibliotek av kjente humane variabel region-sekvenser som svarer til denne rammeverk-subregion (f.eks. bestemt ved Kabat-nummerering) og velge den humane sekvens for hver subregion eller kombinasjon som er nærmest gnagersekvensen (publisert US-patentsøknad nr.2003/0040606A1, publisert 27. feb. 2003). En annen metode anvender en bestemt rammeverkregion som stammer fra konsensussekvensen hos alle humane antistoffer i en spesiell subgruppe av lette eller tunge kjeder. Det samme rammeverk kan anvendes for flere forskjellige humaniserte antistoffer (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)).
[0121] Det er videre viktig at antistoffer humaniseres med retensjon av høy affinitet for antigenet og andre gunstige biologiske egenskaper. For å oppnå dette mål blir humaniserte antistoffer i henhold til en foretrukket metode frembrakt ved hjelp av en prosess for analyse av parentalsekvensene og forskjellige begrepsmessige humaniserte produkter under anvendelse av tredimensjonale modeller av parentalsekvensene og de humaniserte sekvenser. Tredimensjonale immunglobulinmodeller er alminnelig tilgjengelige og er kjent for fagfolk på området. Det er tilgjengelig datamaskinprogrammer som illustrerer og viser sannsynlige tredimensjonale konformasjonelle strukturer av utvalgte kandidatimmunglobulinsekvenser. Inspeksjon av disse fremvisninger muliggjør analyse av den sannsynlige rolle for restene ved funksjonering av kandidat-immunglobulinsekvensen, dvs. analyse av rester som innvirker på evnen hos kandidatimmunglobulinet til å binde sitt antigen. På denne måte kan FR-rester utvelges og kombineres fra mottaker- og importsekvensene slik at de ønskede antistoffkarakteregenskaper, så som øket affinitet for målantigenet (-antigenene) oppnås. Vanligvis er restene i den hypervariable region direkte og i det alt vesentlige involvert i innvirkning på antigenbinding.
[0122] Ved en annen utførelsesform blir de antigenbindende molekyler omarbeidet til å ha forøket bindingsaffinitet, for eksempel i henhold til metodene beskrevet i publisert US-patentsøknad nr.2004/0132066.
[0123] Det er videre beskrevet at det antigenbindende molekyl ifølge foreliggende oppfinnelse blir konjugert til en ytterligere del, så som en radiomerkesubstans eller et toksin. Slike konjugerte ABM kan frembringes ved hjelp av tallrike metoder som er velkjente på området.
[0124] En rekke radionuklider er anvendelige heri, og fagfolk på området tillegges evnen til lett å bestemme hvilken radionuklide som er mest hensiktsmessig under en rekke omstendigheter. For eksempel er<131>jod en velkjent radionuklide som anvendes for målsøkt immunterapi. Den kliniske anvendelighet av<131>jod kan imidlertid være begrenset av flere faktorer innbefattende: åtte dagers fysisk halveringstid; dehalogenering av jodert antistoff både i blodet og på tumorsteder; og emisjonsegenskaper (f.eks. stor gammakomponent) som kan være suboptimal for lokalisert doseavsetning i tumor. Med tilkomst av bedre chelateringsmidler har muligheten til å knytte metallchelaterende grupper til proteiner øket mulighetene til å anvende andre radionuklider så som<111>indium og<90>yttrium.<90>Yttrium gir flere fordeler for anvendelse ved radioimmunterapeutiske anvendelser: 64 timers halveringstiden for<90>yttrium er lang nok til å muliggjøre antistoffopphopning ved tumor, og i motsetning til f.eks.<131>jod, er<90>yttrium en ren betaemitter med høy energi uten noen ledsagende gammastråling ved nedbrytningen av det, med en rekkevidde i vev på 100 til 1000 cellediametre. Videre muliggjør den minimale mengde av gjennomtrengende stråling poliklinisk administrering av<90>yttrium-merkede antistoffer. Dessuten er internalisering av merket antistoff ikke nødvendig for celledreping, og den lokale emisjon av ioniserende stråling skulle være letal for nabo-tumorceller som mangler mål-antigenet.
[0125] Effektive enkeltbehandlingsdoseringer (dvs. terapeutisk effektive mengder) av<90>yttrium-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca.5 og ca.75 mCi, mer foretrukket mellom ca.10 og ca.40 mCi. Effektive ablative enkeltbehandlings-benmargdoser av<131>jod-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca.5 og ca.70 mCi, mer foretrukket mellom ca.5 og ca.40 mCi. Effektive ablative enkeltbehandlingsdoser (dvs. kan kreve autolog benmargtransplantasjon) av<131>jod-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca.30 og ca.600 mCi, mer foretrukket mellom ca.50 og mindre enn ca.
500 mCi. I forbindelse med et kimærisk anti-CD20-antistoff er en effektiv ablativ enkeltbehandlings-benmargdose av<131>jod-merkede kimæriske anti-CD20-antistoffer i området mellom ca.5 og ca.40 mCi, mer foretrukket mindre enn ca.
30 mCi, på grunn av den lengre sirkulerings-halveringstid i forhold til museantistoffer. Avbildingskriterier for f.eks.<111>indium-merkesubstansen er typisk mindre enn ca.5 mCi.
[0126] Med hensyn til radiomerkede anti-CD20-antistoffer kan terapi med disse også finne sted ved anvendelse av en enkeltterapibehandling eller ved anvendelse av multiple behandlinger. På grunn av radionuklidekomponenten er det foretrukket at perifere stamceller ("PSC") eller benmarg ("BM") "høstes" for behandling av pasienter som har fått potensielt fatal benmargtoksisitet som resultat av bestråling. BM og/eller PSC høstes under anvendelse av standardteknikker, og blir så utskylt og frosset for eventuell reinfusjon. Det er dessuten meget foretrukket at det før behandling utføres en diagnostisk dosimetriundersøkelse med anvendelse av et diagnostisk merket antistoff (f.eks. under anvendelse av<111>indium) på pasienten; et formål med dette er å sikre at det terapeutisk merkede antistoff (f.eks. med anvendelse av<90>yttrium) ikke vil bli unødvendig "konsentrert" i noe normalt organ eller vev.
[0127] Det er videre beskrevet et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som vist i tabell 3 nedenfor. Det er videre beskrevet en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en nukleotidsekvens vist i tabell 2 nedenfor. Det er videre beskrevet en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en aminosyresekvens i tabell 3. Det er videre beskrevet en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvens som hos hvilken som helst av konstruksjonene i tabell 3 med konserverende aminosyresubstitusjoner.
TABELL 2
�
�
[0128] Det er videre beskrevet et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvensen vist på fig.1 eller fig. 2. Det er videre beskrevet en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med nukleotidsekvensen vist på fig.5 eller fig.6. Det er videre beskrevet en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med aminosyresekvensen vist på fig.5 eller fig.6. Oppfinnelsen omfatter også en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvensen ifølge hvilken som helst av fig.1. fig.2, fig.5 eller fig.6 med konserverende aminosyresubstitusjoner.
[0129] Det er videre beskrevet en ekspresjonsvektor og/eller en vertscelle som omfatter ett eller flere isolerte polynukleotider.
[0130] Generelt kan hvilken som helst type dyrket cellelinje anvendes til å uttrykke ABM. Ved en foretrukket utførelsesform anvendes CHO-celler, BHK-celler, NS0-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som bakgrunnscellelinje til frembringelse av de omarbeidede vertsceller.
[0131] Den terapeutiske effektivitet av ABM kan forsterkes ved at de frembringes i en vertscelle som videre uttrykker et polynukleotid som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et polypeptid som finnes i Golgi-apparatet. Ved en annen foretrukket utførelsesform resulterer ekspresjonen av ABM i en vertscelle som uttrykker et polynukleotid som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, i ABM med øket Fcreseptor-bindingsaffinitet og øket effektorfunksjon. Det er videre beskrevet en vertscelle omfattende (a) en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet; og (b) et isolert polynukleotid som koder for et ABM, så som et kimærisk, primatisert eller humanisert antistoff som binder humant CD20. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet som har GnTIII-aktivitet, et fusjonspolypeptid omfattende det katalytiske doméne av GnTIII, og Golgi-lokalisdasjonsdoménet er lokalisasjonsdoménet for mannosidase II.
Metoder for frembringelse av slike fusjonspolypeptider og anvendelse av dem til fremstilling av antistoffer med økte effektorfunksjoner er beskrevet i midlertidig US-patentsøknad nr. 60/495 142. Ved en annen foretrukket utførelsesform er det kimæriske ABM et kimærisk antistoff eller et fragment derav, som har bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter det kimæriske antistoff et humant Fc. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet primatisert eller humanisert.
[0132] Ved én utførelsesform kan ett eller flere polynukleotider som koder for et ABM, uttrykkes under regulering av en konstitutiv promoter, eller alternativt et regulert ekspresjonssystem. Egnede regulerte ekspresjonssystemer innbefatter, men er ikke begrenset til, et tetracyklinregulert ekspresjonssystem, et ecdyson-induserbart ekspresjons-system, et lac-omskiftings-ekspresjonssystem, et glukokortikoid-induserbart ekspresjonssystem, et temperatur-induserbart promotersystem og et metalltionein-metall-induserbart ekspresjonssystem. Hvis flere forskjellige nukleinsyrer som koder for et ABM finnes i vertscellesystemet, kan noen av dem uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, mens andre uttrykkes under kontroll av en regulert promoter. Det maksimale ekspresjonsnivå anses for å være det høyest mulige nivå av stabil polypeptidekspresjon som ikke har en betydelig uheldig virkning på celleveksthastigheten, og vil bli bestemt under anvendelse av rutine-eksperimentering. Ekspresjonsnivåene bestemmes ved metoder som er generelt kjent på området, innbefattende Western blotanalyse med anvendelse av et antistoff som er spesifikt for ABM, eller et antistoff som er spesifikt for et peptid-merkemateriale koplet til ABM; og Northern blotanalyse. Ved et ytterligere alternativ kan polynukleotidet være operativt knyttet til et reportergen; ekspresjonsnivåene for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet bestemmes ved måling av et signal som er korrelert med ekspresjonsnivået for reportergenet.
Reportergenet kan transkriberes sammen med nukleinsyren(e) som koder for nevnte polypeptid som et enkelt mRNA-molekyl; deres respektive kodingssekvenser kan sammenknyttes enten ved et indre ribosominngangssete (IRES) eller ved en deksel ("cap")-uavhengig translasjonsforsterker (CITE).
Reportergenet kan translateres sammen med minst én nukleinsyre som koder for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet slik at det dannes en enkelt polypeptidkjede. Nukleinsyrene som koder for AMB ifølge foreliggende oppfinnelse, kan være operativt knyttet til reportergenet under kontroll av en enkelt promoter, slik at nukleinsyren som koder for fusjons-polypeptidet og reportergenet, transkriberes til et RNA-molekyl som alternativt spleises til to atskilte budbringer-RNA (mRNA)-molekyler; ett av de resulterende mRNA translateres til reporterproteinet, og det andre translateres til fusjons-proteinet.
[0133] Metoder som er velkjente for fagfolk på området, kan anvendes til konstruering av ekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for et ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet sammen med passende transkripsjons/translasjons-kontrollsignaler. Disse metoder innbefatter rekombinante in vitro-DNA-teknikker, synteseteknikker og in vivo-rekombinasjon/genetisk rekombinasjon. Se for eksempel teknikkene beskrevet i Maniatis et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989) og Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1989).
[0134] Det kan anvendes forskjellige verts-ekspresjonsvektorsystemer til å uttrykke kodingssekvensen for ABM. Det anvendes fortrinnsvis pattedyrceller som vertssystemer transfektert med rekombinant plasmid-DNA- eller kosmid-DNA-ekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for det aktuelle protein, og kodingssekvensen for fusjonspolypeptidet. Mest foretrukket anvendes CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som vertscellesystem. Noen eksempler på ekspresjonssystemer og seleksjonsmetoder er beskrevet i følgende referanser, og referanser i disse: Borth et al., Biotechnol. Bioen.
71(4):266-73 (2000-2001), i Werner et al., Arzneimittelforschung/Drug Res.
48(8):870-80 (1998), i Andersen og Krummen, Curr. Op. Biotechnol.13:117-123 (2002), i Chadd og Chamow, Curr. Op. Biotechnol. 12:188-194 (2001), og i Giddings, Curr. Op. Biotechnol.12: 450-454 (2001). Ved alternative utførelsesformer kan andre eukaryote vertscellesystemer overveies, innbefattende gjærceller transformert med rekombinante gjærekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for et ABM; insektscellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. baculovirus) inneholdende kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet; plantecellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. blomkålmosaikkvirus, CaMV; tobakkmosaikkvirus, TMV) eller transformert med rekombinante plasmid-ekspresjonsvektorer (f.eks. Ti-plasmid) inneholdende kodingssekvensen for ABM; eller dyrecellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. adenovirus, vacciniavirus) innbefattende cellelinjer omarbeidet til å inneholde multiple kopier av DNA som koder for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, enten stabilt amplifisert (CHO/dhfr) eller ustabilt amplifisert i dobbelt-småkromosomer (f.eks. musecellelinjer). Ved én utførelsesform er vektoren omfattende polynukleotidet (polynukleotidene) som koder for ABM, polycistronisk. Ved én utførelsesform er ABM omtalt ovenfor dessuten et antistoff eller et fragment derav. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff.
[0135] Når det gjelder fremgangsmåtene ifølge denne oppfinnelse, er stabil ekspresjon vanligvis foretrukket fremfor forbigående ekspresjon på grunn av at den typisk oppnår mer reproduserbare resultater og dessuten er mer tilpassbar til storskalaproduksjon. Heller enn å anvende ekspresjonsvektorer som inneholder virus-replikasjonsorigo, kan vertsceller transformeres med de respektive kodingsnukleinsyrer kontrollert ved passende ekspresjonskontrollelementer (f.eks. promoter, forsterker, sekvenser, transkripsjonsterminatorer, polyadenyleringsseter osv.) og en selekterbar markør. Etter innføring av fremmed DNA, kan omarbeidede celler få vokse i 1-2 dager i et anriket medium, som deretter blir skiftet til et selektivt medium. Den selekterbare markør i det rekombinante plasmid gir resistens til seleksjonen og muliggjør seleksjon av celler som har stabilt integrert plasmidet i sine kromosomer og vokser under dannelse av foci som i sin tur kan klones og ekspanderes i cellelinjer.
[0136] En rekke seleksjonssystemer kan anvendes, innbefattende, men ikke begrenset til, herpes simplex-virus-thymidinkinase- (Wigler et at, Cell 11:223 (1977)), hypoxantin-guanin fosforibosyltransferase- (Szybalska & Szybalski, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 48:2026 (1962)), og adeninfosforibosyltransferase- (Lowy et at, Cell 22:817 (1980)) gener, som kan anvendes i henholdsvis tk-- hgprt-- eller aprt--celle. Dessuten kan antimetabolittresistens anvendes som basis for seleksjon med henblikk på dhfr, som gir resistens overfor metotreksat (Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA 77:3567 (1989); O'Hare et at , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527 (1981)); gpt, som gir resistens overfor mykofenolsyre (Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981)); neo, som gir resistens overfor aminoglykosid G-418- (Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol. 150:1 (1981)); og hygro, som gir resistens overfor hygromycin- (Santerre et at , Gene 30:147 (1984) gener. Det er nylig beskrevet ytterligere selekterbare gener, nemlig trpB, som gir mulighet for celler å anvende indol i stedet for tryptofan; hisD, som gir mulighet for celler å anvende histinol i stedet for histidin (Hartman & Mulligan, Proc. Natl. Acad. Set USA 85:8047 (1988)); glutaminsyntasesystemet; og ODC (ornitindekarboksylase) som gir resistens overfor ornitindekarboksylase-inhibitoren, 2-(difluormeyl-DL-ornitin, DFMO (McConlogue, i: Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory red. (1987)).
[0137] Det er videre beskrevet en metode for modifisering av glykosyleringsprofilen for ABM som dannes av en vertscelle, omfattende ekspresjon i vertscellen av en nukleinsyre som koder for et ABM, og en nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, eller en vektor omfattende slike nukleinsyrer. Det modifiserte polypeptid er fortrinnsvis IgG eller et fragment derav omfattende Fc-regionen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav.
[0138] De modifiserte ABM dannet av vertscellene heri oppviser øket Fcreseptor-bindende affinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav inneholdende Fc-regionen. Den økte Fc-reseptorbindende affinitet er fortrinnsvis øket binding til en Fc γ-aktiverende reseptor, så som Fc γRIIIa-reseptoren. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis en økning i én eller flere av følgende: øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet, øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket Fcmediert cellulær cytotoksisitet, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til polymorfonukleære celler (PMN), øket binding til monocytter, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket dendrittcelleutvikling og øket T-celle-priming.
[0139] Det er videre beskrevet en fremgangsmåte for frembringelse av et ABM, med modifiserte oligosakkarider i en vertscelle, omfattende (a) dyrking av en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet under betingelser som muliggjør dannelse av et ABM, hvor polypeptidet med GnTIII-aktivitet uttrykkes i en mengde som er tilstrekkelig til å modifisere oligosakkaridene i Fc-regionen av nevnte ABM dannet av vertscellen; og (b) isolering av dette ABM. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende det katalytiske doméne av GnTIII. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter fusjonspolypeptidet videre Golgi-lokalisasjonsdoménet av et polypeptid i Golgiapparatet.
[0140] Golgi-lokalisasjonsdoménet er fortrinnsvis lokalisasjonsdoménet av mannosidase II eller GnTI. Alternativt er Golgi-lokalisasjonsdoménet valgt fra gruppen bestående av: lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av GnTII og lokalisasjonsdoménet av α1-6-kjerne-fukosyltransferase. ABM fremstilt ved hjelp av fremgangsmåtene heri har øket Fc-reseptor-bindende affinitet og/eller øket effektorfunksjon. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis én eller flere av følgende: øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet (innbefattende øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet), øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til monocytter, øket binding til polymorfonukleære celler, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket dendrittcelleutvikling eller øket T-cellepriming. Den økte Fc-reseptor-bindende affinitet er fortrinnsvis øket binding til Fcaktiverende reseptorer så som Fc γRIIIa. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav.
[0141] Det er videre beskrevet et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet frembrakt ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge oppfinnelse som har en øket andel av todelte oligosakkarider i Fc-regionen av nevnte polypeptid. Man tenker seg at et slikt ABM omfatter antistoffer og fragmenter derav omfattende Fc-regionen. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff. Ved én utførelsesform er prosentandelen av todelte oligosakkarider i Fc-regionen av ABM minst 50%, mer fortrukket minst 60%, minst 70%, minst 80%, minst 90% og mest foretrukket minst 90-95% av den totale mengde oligosakkarider. Ved enda en annen utførelsesform har ABM fremstilt ved fremgangsmåtene heri en øket andel av ikkefukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider ved hjelp av fremgangsmåtene heri. Ved én utførelsesform er prosentandelen av ikke-fukosylerte oligosakkarider minst 50%, fortrinnsvis minst 60 til 70%, mest foretrukket minst 75%. De ikke-fukosylerte oligosakkarider kan være av hybrid- eller komplekstypen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform har ABM dannet av vertscellene og ved fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen en øket andel av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen. De todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider kan være enten hybride eller komplekse.
Fremgangsmåtene heri kan spesifikt anvendes til frembringelse av ABM hvor minst 15%, mer foretrukket minst 20%, mer foretrukket minst 25%, mer foretrukket minst 30%, mer foretrukket minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av ABM er todelte, ikke-fukosylerte. Fremgangsmåtene heri kan også anvendes til fremstilling av polypeptider hvor minst 15%, mer foretrukket minst 20%, mer foretrukket minst 25%, mer foretrukket minst 30%, mer foretrukket minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet er todelte hybride, ikke-fukosylerte.
[0142] Det er videre beskrevet et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon og/eller øket Fc-reseptor-bindende affinitet, fremstilt ved fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis én eller flere av følgende: øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet (innbefattende øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet), øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til monocytter, øket binding til polymorfonukleære celler, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket dendrittcelleutvikling eller øket T-cellepriming. Ved en foretrukket utførelsesform er den økte Fc-reseptor-bindende affinitet øket binding til en Fc-aktiverende reseptor, mest foretrukket Fc γRIIIa. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff, et antistoff-fragment inneholdende Fcregionen eller et fusjonsprotein som innbefatter en region som er ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff.
[0143] Det er videre beskrevet farmasøytiske preparater omfattende ABM og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0144] Det er videre beskrevet anvendelse av slike farmasøytiske preparater ved metoden for behandling av kreft. Spesifikt er det beskrevet en fremgangsmåte for behandling av kreft, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av det farmasøytiske preparat ifølge oppfinnelsen.
[0145] Det er videre beskrevet fremgangsmåter for frembringelse og anvendelse av vertscellesystemer for fremstilling av glykoformer av ABM, med øket Fc-reseptor-bindende affinitet, fortrinnsvis øket binding til Fc-aktiverende reseptorer, og/eller med økte effektorfunksjoner, innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet. Glyko-omarbeidingsmetodikken som kan anvendes med ABM, er beskrevet mer detaljert i US-patent nr.6 602 684 og midlertidig US-patentsøknad nr.60/441 307 og WO 2004/065540. ABM kan alternativt glykoomarbeides til å ha reduserte fukoserester i Fc-regionen i henhold til teknikkene beskrevet i EP 1176 195 A1.
Frembringelse av cellelinjer for fremstilling av proteiner med forandret glykosyleringsmønster
[0146] Det er videre beskrevet vertscelle-ekspresjons-systemer for frembringelse av ABM med modifiserte glykosyleringsmønstre. Det er videre beskrevet vertscellesystemer for frembringelse av glykoformer av ABM med forbedret terapeutisk verdi. Det er videre beskrevet vertscelleekspresjonssystemer valgt eller omarbeidet til å uttrykke et polypeptid med GnTIII-aktivitet. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid i Golgi-apparatet. Slike vertscelle-ekspresjons-systemer kan spesifikt omarbeides til å omfatte et rekombinant nukleinsyremolekyl som koder for et polypeptid med GnTIII, operabelt knyttet til et konstitutivt eller regulert promotersystem.
[0147] Det er videre beskrevet en vertscelle som er blitt omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet. Ved ett aspekt er vertscellen omarbeidet med et nukleinsyremolekyl omfattende minst ett gen som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet.
[0148] Generelt kan hvilken som helst type dyrket cellelinje, innbefattende cellelinjene omtalt ovenfor, anvendes som bakgrunn for omarbeiding av vertscellelinjene ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved en foretrukket utførelsesform anvendes CHO-celler, BHK-celler, NS0-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som bakgrunns-cellelinje for frembringelse av de omarbeidede vertscellene heri.
[0149] Det er videre beskrevet hvilke som helst omarbeidede vertsceller som uttrykker et polypeptid med GnTIII-aktivitet, innbefattende et fusjonspolypeptid som omfatter Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet, som definert her i dokumentet.
[0150] Én eller flere nukleinsyrer som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, kan uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, eller alternativt et regulert ekspresjonssystem. Slike systemer er velkjente på området og innbefatter systemene omtalt ovenfor. Hvis flere forskjellige nukleinsyrer som koder for fusjonspolypeptider med GnTIII-aktivitet, og som omfatter Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet, omfattes i vertscellesystemet, kan noen av dem uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, mens andre uttrykkes under kontroll av en regulert promoter.
Ekspresjonsnivåer av fusjonspolypeptidene med GnTIII-aktivitet bestemmes ved metodene som er generelt kjent på området, innbefattende Western blot-analyse, Northern blot-analyse, reportergen-ekspresjonsanalyse eller måling av GnTIII-aktivitet. Alternativt kan det anvendes et lektin som bindes til biosyntetiske produkter av GnTIII, for eksempel E4-PHA-lektin. Alternativt kan det anvendes en funksjonsanalyse som måler den økte Fc-reseptor-binding eller øket effektorfunksjon formidlet av antistoffer dannet av cellene som er omarbeidet med nukleinsyren som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet.
Identifikasjon av transfektanter eller transformanter som uttrykker proteinet med et modifisert glykosyleringsmønster
[0151] Vertscellene som inneholder kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, og som uttrykker de biologisk aktive genprodukter, kan identifiseres ved minst fire generelle fremgangsmåter: (a) DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridisering; (b) tilstedeværelse eller fravær av "markør"-genfunksjoner; (c) fastsettelse av nivået av transkripsjon målt ved ekspresjon av de respektive mRNA-transkripter i vertscellen; og (d) påvisning av genproduktet målt ved immunanalyse eller ved dets biologiske aktivitet.
[0152] Ved den første fremgangsmåte kan tilstedeværelsen av kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet påvises ved DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridisering under anvendelse av prober omfattende nukleotidsekvenser som er homologe med henholdsvis de respektive kodingssekvenser eller deler eller derivater derav.
[0153] Ved den andre fremgangsmåte kan det rekombinante ekspresjonsvektor/verts-system identifiseres og selekteres basert på tilstedeværelse eller fravær av visse "markør"-genfunksjoner (f.eks. thymidinkinaseaktivitet, resistens overfor antibiotika, resistens overfor metotreksat, transformasjons-fenotype, okklusjons-legemedannelse i baculovirus, osv.). Hvis for eksempel kodingssekvensen for ABM, eller et fragment derav, og kodingsssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet innføres i en markørgensekvens av vektoren, kan rekombinanter inneholdende de respektive kodingssekvenser identifiseres ved fraværet av markørgenfunksjonen. Alternativt kan et markørgen anbringes i tandem med kodingssekvensene under kontroll av den samme eller annen promoter anvendt til regulering av ekspresjonen av kodingssekvensene.
Ekspresjon av markøren som svar på induksjon eller seleksjon angir ekspresjon av kodingssekvensen for ABM og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet.
[0154] Ved den tredje fremgangsmåte kan transkripsjonsaktivitet for kodingsregionen for ABM, eller et fragment derav, og kodings-sekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet, fastsettes ved hybridiserings-forsøk. For eksempel kan RNA isoleres og analyseres ved hjelp av Northern blot under anvendelse av en probe som er homolog til kodingssekvensene for ABM, eller et fragment derav, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet eller spesielle deler derav. Alternativt kan total mengde nukleinsyrer i vertscellen ekstraheres og analyseres med henblikk på hybridisering til slike prober.
[0155] Ved den fjerde fremgangsmåte kan ekspresjonen av proteinproduktene fastsettes immunologisk, for eksempel ved Western blot, immunanalyser så som radioimmunpresipitasjon, enzymbundne immunanalyser og liknende. Den endelige test angående vellykkethet av ekspresjonssystemet innbefatter imidlertid påvisning av de biologisk aktive genprodukter.
Frembringelse og anvendelse av ABM med øket effektorfunksjon innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet
[0156] Det er videre beskrevet glykoformer av kimæriske ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet og med øket effektorfunksjon innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet. Glykosyleringsomarbeiding av antistoffer er beskrevet tidligere. Se f.eks. US-patent nr.6 602 684.
[0157] Kliniske forsøk angående ukonjugerte monoklonale antistoffer (mAb) for behandling av noen typer kreft har nylig gitt oppmuntrende resultater. Dillman, Cancer Biother. Radiopharm. 12:223-25 (1997); Deo et at, Immunology Today 18:127 (1997). Et kimærisk, ukonjugert IgG1 er godkjent for lavgradig eller follikulært ikke-Hodgkins B-celle-lymfom. Dillman, Cancer Biother. & Radiopharm. 12:223-25 (1997), mens et annet ukonjugert mAb, et humanisert IgG1 som søker mot faste brysttumorer, også har vist lovende resultater i kliniske forsøk fase III. Deo et al., Immunology Today 18:127 (1997). Antigenene for disse to mAb uttrykkes sterkt i sine respektive tumorceller, og antistoffene formidler potent tumorødeleggelse ved effektorceller in vitro og in vivo. I motsetning til dette kan mange andre ukonjugerte mAb med fine tumorspesifisiteter ikke trigge effektorfunksjoner med tilstrekkelig potens til at det er klinisk anvendelig. Frost et al., Cancer 80:317-33 (1997); Surfus et al., J. Immunother.19:184-91 (1996). Når det gjelder noen av disse svakere mAb, blir hjerper-cytokinterapi testet for tiden.
Tilsetting av cytokiner kan stimulere antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) ved øking av aktiviteten og antallet av sirkulerende lymfocytter. Frost et al., Cancer 80:317-33 (1997); Surfus et at, J. Immunother.19:184-91 (1996). ADCC, et lytisk angrep på antistoff-målsøkte celler, trigges ved binding av leukocyttreseptorer til den konstante region (Fc) av antistoffer. Deo et al., Immunology Today 18:127 (1997).
[0158] En annen, men komplementerende, fremgangsmåte for øking av ADCC-aktiviteten av ukonjugerte IgG1 er å omarbeide Fc-regionen av antistoffet. Proteinomarbeidingsundersøkelser har vist at Fc γR interagerer med den lavere hengselregion av IgG CH2-doménet. Lund et al., J. Immunol.
157:4963-69 (1996). Fc γR-binding fordrer imidlertid også tilstedeværelse av oligosakkarider som er kovalent knyttet til det konserverte Asn 297 i CH2-regionen. Lund et al., J. Immunol.157:4963-69 (1996); Wright og Morrison, Trends Biotech.15:26-31 (1997), noe som tyder på at både oligosakkarid og polypeptid bidrar direkte til interaksjonssetet, eller at oligosakkaridet trenges for opprettholdelse av en aktiv CH2-polypeptidkonformasjon. Modifikasjon av oligosakkaridstrukturen kan derfor utforskes som middel for å øke affiniteten ved interaksjonen.
[0159] Et IgG-molekyl bærer to N-bundne oligosakkarider i Fcregionen, ett på hver tung kjede. Som hvilket som helst glykoprotein, frembringes et antistoff som en populasjon av glykoformer som har samme polypeptidskjelett, men som har forskjellige oligosakkarider knyttet til glykosyleringssetene. Oligosakkaridene som normalt finnes i Fc-regionen av serum-IgG, er av kompleks toantennetype (Wormald et al., Biochemistry 36:130-38 (1997), med et lavt nivå av terminal sialinsyre og todelende N-acetylglukosamin (GlnNAc), og en variabel grad av terminal galaktosylering og kjerne-fukosylering. Noen undersøkelser tyder på at den minimale karbohydratstruktur som trenges for Fc γR-binding, ligger innenfor oligosakkaridkjernen. Lund et al., J. Immunol.157:4963-69 (1996).
[0160] De muse- eller hamsteravledede cellelinjer som anvendes i industrien og akademien for dannelse av ukonjugerte terapeutiske mAb, knytter normalt de fordrede oligosakkarid-determinanter til Fc-seter. IgG som uttrykkes i disse cellelinjer, mangler imidlertid det todelende GlcNAc som finnes i små mengder i serum-IgG. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). I motsetning til dette er det nylig observert at et rottemyelomfrembrakt, humanisert IgG1 (CAMPATH-1H) bar et todelende GlcNAc i noen av sine glykoformer. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). Det rottecelleavledede antistoff nådde en liknende maksimal in vitro-ADCC-aktivitet som CAMPATH-1H-antistoffer dannet i standardcellelinjer, men i betydelig lavere antistoffkonsentrasjoner.
[0161] CAMPATH-antigenet er normalt til stede i høye nivåer på lymfomceller, og dette kimæriske mAb har høy ADCC-aktivitet i fravær av et todelende GlcNAc. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). I den N-bundne glykosyleringsvei tilføyes et todelende GlcNAc ved GnTIII.
Schachter, Biochem. Cell Biol. 64:163-81 (1986).
[0162] Tidligere undersøkelser anvendte en enkelt antistoffproduserende CHO-cellelinje som på forhånd var blitt omarbeidet til på en eksternt regulert måte å uttrykke forskjellige nivåer av et klonet GnTIII-genenzym (Umana, P., et al., Nature Biotechnol.17:176-180 (1999)). Denne fremgangsmåte påviste for første gang en meget nøyaktig korrelasjon mellom ekspresjon av GnTIII og ADCC-aktiviteten av det modifiserte antistoff. Oppfinnelsen forutsetter således også et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav med bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, med forandret glykosylering som resultat av øket GnTIII-aktivitet. Den økte GnTIII-aktivitet resulterer i en økning i prosentandelen av todelte oligosakkarider, samt en reduksjon i prosentandelen av fukoserester, i Fc-regionen av ABM. Dette antistoff, eller fragmentet derav, har øket Fcreseptor-bindende affinitet og øket effektorfunksjon. Det er videre beskrevet et antistoff-fragment og fusjonsproteiner omfattende en region som er ekvivalent med Fc-regionen av immunglobuliner.
Terapeutiske anvendelser av ABM fremstilt i henhold til fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen.
[0163] ABM kan anvendes alene til å målsøke og drepe tumorceller in vivo. ABM kan også anvendes i forbindelse med et passende terapeutisk middel til behandling av humant karsinom. For eksempel kan ABM anvendes i kombinasjon med standard- eller vanlige behandlingsmetoder så som kjemoterapi eller bestrålings-terapi, eller de kan konjugeres eller knyttes til et terapeutisk medikament eller toksin, samt til et lymfokin eller en tumorinhiberende vekstfaktor, for avgivelse av det terapeutiske middel til stedet for karsinomet. Konjugatene av ABM som er av største betydning, er (1) immuntoksiner (konjugater av ABM og en cytotoksisk del) og (2) merkede (f.eks. radiomerkede, enzym-merkede eller fluorkrom-merkede) ABM hvor merkesubstansen tilveiebringer et middel for identifisering av immunkomplekser som innbefatter det merkede ABM. ABM kan også anvendes til indusering av lyse gjennom den naturlige komplementprosess, og til å interagere med antistoffavhengige cytotoksiske celler som normalt er til stede.
[0164] Den cytotoksiske del av immuntoksinet kan være et cytotoksisk medikament eller et enzymatisk aktivt toksin av bakterie- eller planteopprinnelse, eller et enzymatisk aktivt fragment ("A-kjede") av et slikt toksin. Enzymatisk aktive toksiner og fragmenter derav som anvendes, er difteri A-kjede, ikke-bindende aktive fragmenter av difteritoksin, eksotoksin A-kjede (fra Pseudomonas aeruginosa), ricin A-kjede, abrin A-kjede, modeccin A-kjede, alfa-sarcin, Aleurites fordii-proteiner, diantinproteiner, Phytolacca americana-proteiner (PAPI, PAPII og PAP-S), momordica charantia-inhibitor, curcin, crotin, sapaonaria officinalis-inhibitor, gelonin, mitogellin, restrictocin, fenomycin og enomycin. Ved en annen utførelsesform blir ABM konjugert til småmolekylære antikreftmedikamenter. Konjugater av ABM og slike cytotoksiske deler lages under anvendelse av forskjellige bifunksjonelle proteinkoplingsmidler. Eksempler på slike reagenser er SPDP, IT, bifunksjonelle derivater av imidoestere så som dimetyladipimidat-HCl, aktive estere så som disuksinimidylsuberat, aldehyder så som glutaraldehyd, bisazidoforbindelser så som bis(p-azidobenzoyl)heksandiamin, bisdiazoniumderivater så som bis(p-diazoniumbenzoyl)-etylendiamin, diisocyanater så som tolylen-2,6-diisocyanat, og bis-aktive fluorforfindelser så som 1,5-difluor-2,4-dinitrobenzen. Den lyserende del av et toksin kan knyttes til Fab-fragmentet av ABM. Ytterligere passende toksiner er kjent på området, som vist i f.eks. publisert US-patentsøknad nr.2002/0128448.
[0165] Ved én utførelsesform blir et kimærisk, glyko-omarbeidet ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, konjugert til ricin A-kjede. Mest fordelaktig blir ricin A-kjeden deglykosylert og frembrakt ved rekombinante metoder. En fordelaktig metode for fremstilling av ricin-immuntoksinet er beskrevet i Vitetta et al., Science 238, 1098 (1987).
[0166] Anvendt til å drepe humane kreftceller in vitro for diagnostiske formål vil konjugatene typisk bli tilsatt til celledyrkningsmediet i en konsentrasjon på minst ca.10 nM. Formuleringen og administreringsmåten for in vitro-anvendelse er ikke avgjørende. Vandige formuleringer som er kompatible med dyrknings- eller perfusjonsmediet, vil normalt bli anvendt. Cytotoksisitet kan avleses ved konvensjonelle teknikker for bestemmelse av tilstedeværelse eller graden av kreft.
[0167] Som omtalt ovenfor, kan det lages et cytotoksisk radiofarmasøytisk middel for behandling av kreft ved konjugering av en radioaktiv isotop (f.eks. I, Y, Pr) til et kimærisk, glyko-omarbeidet ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet. Betegnelsen "cytotoksisk del" anvendt her i dokumentet er ment å innbefatte slike isotoper.
[0168] Ved en annen utførelsesform fylles liposomer med et cytotoksisk medikament, og liposomene belegges med ABM. På grunn av at det er mange CD20-molekyler på overflaten av den maligne B-celle, muliggjør denne metode avgivelse av store mengder medikament til den riktige celletype.
[0169] Teknikker for konjugering av slike terapeutiske midler til antistoffer er velkjente (se f.eks. Arnon et al., "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy", i Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Reisfeld et al. (red.), s.243-56 (Alan R. Liss, Inc.1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", i Controlled Drug Delivery (2. utg.), Robinson et al. (red.), s.623-53 (Marcel Dekker, Inc.1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", i Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (red.), s.475-506 (1985); og Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62:119-58 (1982)).
[0170] Enda andre terapeutiske anvendelser for ABM innbefatter konjugering eller binding, f.eks. ved rekombinante DNA-teknikker, til et
enzym som er i stand til å omdanne en prodroge til et cytotoksisk
medikament, og anvendelse av dette antistoff-enzym-konjugat i kombinasjon med prodrogen til omdannelse av prodrogen til et cytotoksisk middel på tumorstedet (se f.eks. Senter et al., "Anti-Tumor Effects of Antibody-alkaline Phosphatase", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4842-46 (1988); "Enhancement of the in vitro and in vivo Antitumor Activities of Phosphorylated Mitocycin C and Etoposide Derivatives by Monoclonal Antibody-Alkaline Phosphatase Conjugates", Cancer Research 49:5789-5792 (1989); og Senter, "Activation of Prodrugs by Antibody-Enzyme Conjugates: A New Approach to Cancer Therapy," FASEB J.4:188-193 (1990)).
[0171] Enda en annen terapeutisk anvendelse for ABM innbefatter anvendelse, enten ukonjugert, i nærvær av komplement, eller som en del av et antistoff-medikament- eller antistoff-toksin-konjugat, til fjerning av tumorceller fra benmargen hos kreftpasienter. I henhold til denne fremgangsmåte kan autolog benmarg utspyles ex vivo ved behandling med antistoffet, og margen infunderes tilbake i pasienten [se f.eks. Ramsay et al., "Bone Marrow Purging Using Monoclonal Antibodies", J Clin. Immunol., 8(2):81-88 (1988)].
[0172] Det er videre beskrevet et enkeltkjedet immuntoksin omfattende antigenbindende doméner som muliggjør hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet (f.eks. polypeptider
omfattende CDR av muse-B-Ly1-antistoffet) og videre omfatter et toksinpolypeptid. Enkeltkjede-immuntoksinene kan anvendes til behandling av humant karsinom in vivo.
[0173] Likeledes kan det anvendes et fusjonsprotein omfattende minst den antigenbindende region av et ABM knyttet til minst en funksjonelt aktiv del av et andre protein med antitumoraktivitet, f.eks. et lymfokin eller onkostatin, til behandling av humant karsinom in vivo.
[0174] Det er videre beskrevet en fremgangsmåte for selektiv dreping av tumorceller som uttrykker CD20. Denne metode omfatter omsetting av immunkonjugatet (f.eks. immuntoksinet) med tumorcellene. Disse tumorceller kan være fra et humant karsinom.
[0175] Det er videre beskrevet en metode for behandling av
karsinomer (for eksempel humane karsinomer) in vivo. Denne metode omfatter administrering til et individ av en farmasøytisk effektiv mengde av et preparat inneholdende minst ett av immunkonjugatene (f.eks. immuntoksinet).
[0176] Det er videre beskrevet en forbedret metode for behandling av B-celle-proliferative forstyrrelser innbefattende B-celle-lymfom, samt en autoimmun sykdom frembrakt helt eller delvis av patogene autoantistoffer, basert på B-celle-uttømming, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av et ABM til et menneske som trenger det. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et glyko-omdannet anti-CD20-antistoff med en bindingsspesifisitet som er hovedsakelig den samme som for muse-B-Ly1-antistoffet. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet humanisert. Eksempler på autoimmune sykdommer eller forstyrrelser innbefatter, men er ikke begrenset til, immunmedierte trombocytopenier, så som akutt idiopatisk trombocytopenisk purpura og kronisk idiopatisk trombocytopenisk purpura, dermatomyositt, Sydenhams chorea, lupusnefritt, reumatisk feber, polyglandulære syndromer, Henoch-Schonlein purpura, post-streptokokk-nefritt, erythema nodosum, Takayasus arteritt, Addisons sykdom, erythema multiforme, polyarteritis nodosa, ankyloserende spondylitt, Goodpastures syndrom, tromboangitis ubiterans, primær biliær cirrhose, Hashimotos tyreoiditt, tyreotoksikose, kronisk aktiv hepatitt, polymyositt/dermatomyositt, polykondritt, pamphigus vulgaris, Wegeners granulomatose, membranøs nefropati, amyotrofisk lateral sklerose, tabes dorsalis, polymyaglia, perniciøs anemi, "rapidly progressive" glomerulonefritt og fibroserende alveolitt, inflammatoriske responser så som inflammatoriske hudsykdommer innbefattende psoriasis og dermatitt (f.eks. atopisk dermatitt); systemisk skleroderma og sklerose; responser forbundet med inflammatorisk tarmsykdom (så som Crohns sykdom og ulcerøs kolitt); åndenødssyndrom (inbefattende akutt åndenødssyndrom; ARDS); dermatitt; meningitt; encefalitt; uveitt; kolitt; glomerulonefritt; allergiske tilstander så som eksem og astma, og andre tilstander som innbefatter infiltrasjon av T-celler og kroniske inflammatoriske responser; aterosklerose; leukocyttadhesjonsdefekt; reumatoid artritt; systemisk lupus erythematosus (SLE); diabetes mellitus (f.eks. diabetes mellitus type 1, eller insulinavhengig diabetes mellitus); multippel sklerose; Reynauds syndrom; autoimmun tyreoiditt; allergisk encefalomyelitt; Sjögrens syndrom; juvenil diabetes; og immunresponser forbundet med akutt og forsinket hypersensitivitet mediert ved cytokiner og T-lymfocytter som typisk finnes ved tuberkulose, sarkoidose, polymyositt, granulomatose og vaskulitt; perniciøs anemi (Addisons sykdom); sykdommer som innbefatter leukocytt-diapedese; inflammatorisk forstyrrelse i sentralnervesystemet (CNS); multippelt organskadesyndrom; hemolytisk anemi (innbefattende, men ikke begrenset til, kryoglobulinemi eller Coombs positive anemi); myasthenia gravis; antigenantistoff-kompleks-medierte sykdommer; anti-glomerulær basalmembransykdom; antifosfolipidsyndrom; allergisk neuritt; Graves' sykdom; myastenisk Eaton-Lamberts syndrom; bulløst pemfigoid; pemfigus; autoimmune polyendokrinopatier; Reiters sykdom; "stiff man"-syndrom; Behcets sykdom; kjempecellearteritt; immunkompleks-nefritt; IgA-nefropati; IgM-polyneuropatier; idiopatisk trombocytopenisk purpura (ITP) eller autoimmun trombocytopeni osv. Ved dette aspekt ved oppfinnelsen anvendes ABM til tømming av blodet for normale B-celler i et langvarig tridsrom.
[0177] I henhold til praksisen ifølge denne oppfinnelsen kan individet være et menneske-, heste-, grise-, bovint, muse-, hunde-, katte- og fugleindivid. Andre varmblodige dyr inngår også i denne oppfinnelse.
[0178] Det er videre beskrevet metoder for hemming av veksten av humane tumorceller, behandling av en tumor i et individ og behandling av en proliferativ sykdomstype hos et individ. Disse metoder omfatter administrering til individet av en effektiv mengde av preparatet ifølge oppfinnelsen.
[0179] Det er derfor klart at foreliggende oppfinnelse omfatter farmasøytiske preparater. For eksempel innbefatter oppfinnelsen farmasøytiske preparater for anvendelse ved behandling av humane karsinomer, omfattende en farmasøytisk effektiv mengde av et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0180] ABM-preparatene kan administreres under anvendelse av konvensjonelle administreringsmåter innbefattende, men ikke begrenset til, intravenøs, intraperitoneal, oral, intralymfatisk eller administrering direkte i tumoren. Intravenøs administrering er foretrukket.
[0181] Det er videre beskrevet tilberedelse av terapeutiske utformninger inneholdende ABM for lagring ved blanding av et antistoff med den ønskede grad av renhet med eventuelle farmasøytisk akseptable bærere, tilsetningsmidler eller stabilisatorer (Remington's Pharmaceutical Sciences 16. utgave, Osol, A. red. (1980)), i form av lyofiliserte formuleringer eller vandige løsninger. Akseptable bærere, tilsetningsmidler eller stabilisatorer er ikke-toksiske for mottakere i de anvendte doser og konsentrasjoner, og innbefatter buffere så som fosfat, citrat og andre organiske syrer; antioksidanter innbefattende askorbinsyre og metionin; konserveringsmidler (så som oktadekyldimetylbenzyl-ammonium-klorid; heksametoniumklorid; benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid; fenol, butyleller benzylalkohol; alkylparabener så som metyl- eller propylparaben; katekol; resorcinol; cykloheksanol; 3-pentanol; og m-kresol); lavmolekylære (mindre enn ca.10 rester) polypeptider; proteiner, så som serumalbumin, gelatin eller immunglobuliner; hydrofile polymerer så som polyvinylpyrrolidon; aminosyrer så som glycin, glutamin, asparagin, histidin, arginin eller lysin; monosakkarider, disakkarider og andre karbohydrater innbefattende glukose, mannose eller dekstriner; chelateringsmidler så som EDTA; sukkerarter så som sakkarose, mannitol, trehalose og sorbitol; saltdannende mot-ioner så som natrium; metallkomplekser (f.eks. Zn-protein-komplekser); og/eller ikkeioniske overflateaktive midler så som TWEEN ™, PLURONICS ™ eller polyetylenglykol (PEG).
[0182] Eksempler på anti-CD20-ABM-formuleringer er beskrevet i WO98/56418, uttrykkelig medtatt her i dokumentet som referanse. Denne publikasjon beskriver en flytende flerdoseformulering omfattende 40 mg/ml rituximab, 25 mM acetat, 150 mM trehalose, 0,9% benzylalkohol, 0,02% polysorbat 20 ved pH 5,0 som har en minimal holdbarhet på to års lagring ved 2-8 ºC. En annen aktuell anti-CD20-formulering omfatter 10 mg/ml rituximab i 9,0 mg/ml natriumklorid, 7,35 mg/ml natriumcitrat-dihydrat, 0,7 mg/ml polysorbat 80 og sterilt vann for injeksjon, pH 6,5. Ved foreliggende oppfinnelse vil RITUXAN ® bli erstattet med et ABM.
[0183] Lyofiliserte formuleringer tilpasset for subkutan administrering er beskrevet i WO97/04801. Slike lyofiliserte formuleringer kan rekondisjoneres med et egnet fortynningsmiddel til høy proteinkonsentrasjon, og den rekondisjonerte formulering kan administreres subkutant til pattedyret som skal behandles i det foreliggende.
[0184] Formuleringen i det foreliggende kan også inneholde mer enn én aktiv forbindelse etter som det er nødvendig for den spesielle indikasjon som behandles, fortrinnsvis slike med komplementære aktiviteter som ikke på uheldig måte påvirker hverandre. Det kan for eksempel være ønskelig videre å tilveiebringe et cytotoksisk middel, et kjemoterapeutisk middel, et cytokin eller et immunundertrykkende middel (f.eks. et middel som virker på T-celler, så som cyklosporin eller et antistoff som binder T-celler, f.eks. ett som binder LFA-1). Den effektive mengde av slike andre midler avhenger av mengden av antagonist som finnes i formuleringen, typen sykdom eller forstyrrelse eller behandling, samt andre faktorer omtalt ovenfor. Disse anvendes vanligvis i samme doseringer og med administreringsmåter som anvendt i det foregående, eller omtrent fra 1 til 99% av de hittil anvendte doser.
[0185] De aktive bestanddeler kan også innfanges i mikrokapsler som for eksempel er fremstilt ved koacervasjonsteknikker eller ved grenseflatepolymerisering, for eksempel hydroksymetylcellulose, eller henholdsvis gelatin-mikrokapsler og poly(metylmetakrylat)-mikrokapsler, i kolloidale medikamentavgivelsessystemer (for eksempel liposomer, albuminmikrokuler, mikroemulsjoner, nanopartikler og nanokapsler) eller i makroemulsjoner. Slike teknikker er beskrevet i Remington's Pharmaceutical Sciences 16. utgave, Osol, A. red. (1980).
[0186] Det kan fremstilles preparater med langvarig frigjøring. Egnede eksempler på preparater med langvarig frigjøring innbefatter semipermeable matrikser av faste hydrofobe polymerer inneholdende antagonisten, hvilke matrikser er i form av formede artikler, f.eks. filmer, eller mikrokapsler.
Eksempler på matrikser for langvarig frigjøring innbefatter polyestere, hydrogeler (for eksempel poly(2-hydroksyetylmetakrylat), eller poly(vinylalkohol)), polylaktider (US-patent nr.3 773 919), kopolymerer av L-glutaminsyre og γetyl-L-glutamat, ikke-nedbrybart etylen-vinylacetat, nedbrytbare melkesyre-glykolsyre-kopolymerer så som LUPRON DEPOT ™ (injiserbare mikrokuler bestående av melkesyre-glykolsyre-kopolymer og leuprolidacetat), og poly-D-(-)-3-hydroksysmørsyre.
[0187] Formuleringene for anvendelse for in vivo-administrering må være sterile. Dette oppnås lett ved filtrering gjennom sterilfiltreringsmembraner.
[0188] Preparatene ifølge oppfinnelsen kan være i mange forskjellige doseringsformer som innbefatter, men er ikke begrenset til, flytende løsninger eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, stikkpiller, polymere mikrokapsler eller mikrovesikler, liposomer og injiserbare eller infunderbare løsninger. Den foretrukne form avhenger av administreringsmåten og den terapeutiske anvendelse.
[0189] Preparatene ifølge oppfinnelsen innbefatter også fortrinnsvis konvensjonelle farmasøytisk akseptable bærere og adjuvanser kjent på området, så som humant serumalbumin, ionebyttere, aluminiumoksid, lecitin, buffersubstanser så som fosfater, glycin, sorbinsyre, kaliumsorbat, og salter eller elektrolytter så som protaminsulfat.
[0190] Den mest effektive administreringsmåte og doseringsregime for de farmasøytiske preparater ifølge denne oppfinnelse avhenger av graden og forløpet av sykdommen, pasientens helse og respons overfor behandling og den behandlende leges bedømmelse. Dosene av preparatene bør følgelig titreres til den individuelle pasient. Ikke desto mindre vil en effektiv dose av preparatene ifølge denne oppfinnelse vanligvis være i området fra ca.0,01 til ca. 2000 mg/kg.
[0191] Molekylene beskrevet her i dokumentet kan være i mange forskjellige doseringsformer som innbefatter, men er ikke begrenset til, flytende løsninger eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, stikkpiller, polymere mikrokapsler eller mikrovesikler, liposomer, og injiserbare eller infunderbare løsninger. Den foretrukne form avhenger av administreringsmåten og den terapeutiske anvendelse.
[0192] Preparatet omfattende et ABM vil bli formulert, dosert og administrert på en måte i overensstemmelse med god medisinsk praksis. Faktorer for overveielse i denne forbindelse innbefatter den spesielle sykdom eller forstyrrelse som behandles, det spesielle pattedyr som behandles, den kliniske tilstand for den individuelle pasient, forløpet av sykdommen eller forstyrrelsen, stedet for avgivelse av midlet, administreringsmetoden, timeplanen for administrering og andre faktorer kjent for praktiserende leger.
Den terapeutisk effektive mengde av antagonisten som skal administreres, vil bli styrt av slike hensyn.
[0193] Som et generelt forslag vil den terapeutisk effektive mengde av antistoffet administrert parenteralt pr. dose være i området ca.0,1 til 20 mg/kg pasient-kroppsvekt pr. dag, hvor det typiske innledende område for anvendt antagonist er i området ca.2-10 mg/kg.
[0194] Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et antistoff, fortrinnsvis et humanisert antistoff. Egnede doser for et slikt ukonjugert antistoff er for eksempel i området fra ca.20 mg/m<2>til ca.1000 mg/m<2>. Ved én utførelsesform er doseringen av antistoffet forskjellig fra det som for tiden anbefales for RITUXAN ®. Man kan for eksempel administrere til pasienten én eller flere doser med hovedsakelig mindre enn 375 mg/m<2>av antistoffet, f.eks. hvor dosen er i området fra ca.20 mg/m<2>til ca.250 mg/m<2>, for eksempel fra ca.50 mg/m<2>til ca.200 mg/m<2>.
[0195] Man kan videre administrere én eller flere innledende doser av antistoffet, fulgt av én eller flere påfølgende doser, hvor mg/m<2>dose for antistoffet i påfølgende dose(r) overstiger mg/m<2>dose av antistoffet i den
(de) innledende dose(r). Den innledende dose kan for eksempel være i området fra ca.20 mg/m<2>til ca.250 mg/m<2>(f.eks. fra ca.50 mg/m<2>til ca.200 mg/m<2>), og den påfølgende dose kan være i området fra ca.250 mg/m<2>til ca. 1000 mg/m<2>.
[0196] Som angitt ovenfor, er imidlertid disse foreslåtte mengder av ABM gjenstand for en stor del terapeutisk skjønn. Nøkkelfaktoren ved utvelging av en passende dose og program er det oppnådde resultat, som angitt ovenfor. Det kan for eksempel trenges relativt høyere doser innledningsvis for behandling av pågående og akutte sykdommer. For oppnåelse av de mest effektive resultater, avhengig av sykdommen eller forstyrrelsen, blir antagonisten administrert så nær det første tegn på, diagnostisering av, tilsynekomst eller fremkomst av sykdommen eller forstyrrelsen som mulig eller under remisjon av sykdommen eller forstyrrelsen.
[0197] ABM som beskrevet kan administreres på hvilken som helst egnet måte, innbefattende parenteralt, subkutant, intraperitonealt, intrapulmonalt og intranasalt, og, hvis ønskelig for lokal immunsuppressiv behandling, intralesjonal administrering. Parenterale infusjoner innbefatter intramuskulær, intravenøs, intraarteriell, intraperitoneal eller subkutan administrering. Dessuten kan antagonist passende administreres ved pulsinfusjon, f.eks. med avtakende doser av antagonisten. Doseringen gis fortrinnsvis ved injeksjoner, mest foretrukket intravenøs eller subkutan injeksjon, avhengig delvis av om hvorvidet administreringen er kort eller kronisk.
[0198] Man kan administrere andre forbindelser, så som cytotoksiske midler, kjemoterapeutiske midler, immunsuppressive midler og/eller cytokiner med antagonistene i det foreliggende. Den kombinerte administrering innbefatter koadministrering under anvendelse av separate formuleringer eller en enkelt farmasøytisk formulering, og på hverandre følgende administrering i hvilken som helst rekkefølge, hvor det fortrinnsvis er et tidsrom hvor begge (eller alle) aktive midler samtidig utøver sine biologiske aktiviteter.
[0199] Det vil være klart at dosen av preparatet ifølge oppfinnelsen som trenges for oppnåelse av helbredelse, kan reduseres ytterligere med tidsplanoptimalisering.
[0200] I henhold til praksisen ifølge oppfinnelsen kan den farmasøytiske bærer være en lipidbærer. Lipidbæreren kan være et fosfolipid. Videre kan lipidbæreren være en fettsyre. Lipidbæreren kan også være en detergent. Anvendt her i dokumentet er en detergent hvilken som helst substans som forandrer en væskes overflatespenning, generelt reduserer den.
[0201] Ved ett eksempel ifølge oppfinnelsen kan detergenten være en ikkeionisk detergent. Eksempler på ikke-ioniske detergenter innbefatter, men er ikke begrenset til, polysorbat 80 (også kjent som Tween 80 eller (polyoksyetylensorbitan-monooleat), Brij og Triton (for eksempel Triton WR-1339 og Triton A-20).
[0202] Detergenten kan alternativt være en ionisk detergent. Et eksempel på en ionisk detergent innbefatter, men er ikke begrenset til, alkyltrimetylammoniumbromid.
[0203] Lipidbæreren kan dessuten være et liposom. Anvendt i denne patentsøknad er et "liposom" hvilken som helst membranbundet vesikkel som inneholder hvilke som helst molekyler heri eller kombinasjoner derav.
EKSEMPLER
[BEMERK: Dersom ikke annet er spesifisert, er henvisninger til nummereringen av spesifikke aminosyrerest-stillinger i følgende eksempler i henhold til Kabatnummereringssystemet].
EKSEMPEL 1
Materialer og metoder
Kloning og ekspresjon av rekombinant antistoff B-Ly1
[0205] B-Ly1-uttrykkende hybridomceller ble dyrket i RPMI inneholdende 10% FBS og 4 mM L-glutamin.6 x 10<6>celler med levedyktighet > 90% ble høstet, og total-RNA ble isolert under anvendelse av et Qiagen RNAeasy midi-sett. cDNA som kodet for de variable lette og tunge kjeder av B-Ly1, ble amplifisert ved RT-PCR. RT-PCR-reaksjonen ble utført under anvendelse av følgende betingelser: 30 min 50°C for førstestreng-cDNA syntese; 15 min 95°C begynnelsesdenaturering; 30 sykluser på 1 min 94°C, 1 min 45°C, 1,5 min 72°C; og et endelig forlengelsestrinn i 10 min ved 72°C. Den forventede størrelse av PCR-produktene ble bekreftet ved gel-elektroforese. PCR-produktene ble klonet i passende E. coli-vektorer, og DNA-sekvensering bekreftet at de variable lett- og tungkjede-kodende gener var isolert.
[0206] For konstruksjon av kimæriske B-Ly1-ekspresjonsvektorer ble syntesesignalsekvenser og passende restriksjonsseter koplet til de variable kjeder ved ytterligere PCR-reaksjoner. Etter en endelig bekreftelse av den riktige DNA-sekvens for de variable kjeder, ble de kombinert med de tilsvarende humane konstante IgG1-regioner. Etter at genene var konstruert, ble de klonet under kontroll av av MPSV-promoteren og oppstrøms for et syntetisk polyA-sete, under anvendelse av to separate vektorer, én for hver kjede, som resulterte i plasmidene pETR1808 (tungkjede-ekspresjonsvektor) og pETR1813 (lettkjedeekspresjonsvektor). Hver vektor bar en EBV OriP-sekvens.
[0207] Kimærisk B-Ly1 ble frembrakt ved ko-transfektering av HEK293-EBNA-celler med vektorer pETR1808 og pETR1813 under anvendelse av en kalsumfosfat-transfekteringsmetode. Eksponensielt voksende HEK293-EBNA-celler ble transfektert ved kalsiumfosfatmetoden. Cellene ble dyrket som tilheftende monolag-kulturer i T-kolber under anvendelse av DMEM-dyrkningsmedium supplert med 10% FCS, og ble transfektert når de var mellom 50 og 80% konfluente. For transfektering av en T75-kolbe ble 8 millioner celler utsådd 24 timer før transfektering i 14 ml DMEM-dyrkningsmedium supplert med FCS (i en endelig konsentrasjon på 10 volum%), 250 µg/ml neomycin, og cellene ble anbrakt ved 37°C i en inkubator med 5% CO2-atmosfære natten over. For hver T75-kolbe som skulle transfekteres ble det tilberedt en løsning av DNA, CaCl2 og vann ved blanding av 47 μg total plasmidvektor-DNA delt likt mellom lett- og tungkjede-ekspresjonsvektorene, 235 μl av en 1M CaCl2-løsning og tilsetting av vann til et sluttvolum på 469 μl. Til denne løsning ble det tilsatt 469 μl av en løsning av 50 mM HEPES og 280 mM NaCl, 1,5 mM Na2HPO4-løsning ved pH 7,05 ble tilsatt, og det ble umiddelbart blandet i 10 sek. og fikk stå ved romtemperatur i 20 sek. Suspensjonen ble fortynnet med 12 ml DMEM supplert med 2% FCS, og tilsatt til T75 i stedet for det eksisterende medium. Cellene ble inkubert ved 37°C og 5% CO2 i ca.17-20 timer, og medium ble deretter erstattet med 12 ml DMEM, 10% FCS. For frembringelse av umodifisert antistoff "chB-Ly1" ble cellene transfektert med bare antistoff-ekspresjonsvektorer pETR1808 og pETR1813 i et forhold på 1:1. For fremstilling av det glyko-omarbeidede antistoff "chB-Ly1-ge" ble cellene ko-transfektert med fire plasmider, to for antistoffekspresjon (pETR1808 og pETR1813), ett for en fusjons-GnTIII-polypeptidekspresjon (pETR1519) og én for mannosidase II-ekspresjon (pCLF9) i et forhold på henholdsvis 4:4:1:1. På dag 5 etter transfektering ble supernatanten høstet og sentrifugert i 5 min ved 1200 omdr. pr. min., fulgt av en andre sentrifugering i 10 min ved 4000 omdr. pr. min., og holdt ved 4°C.
[0208] chB-Ly1 og chB-Ly1-ge ble renset fra dyrkningssupernatant under anvendelse av tre sekvensielle kromatografiske trinn, protein A-kromatografi, kationebytterkromatografi og et størrelsesutelukkelseskromatografitrinn på en Superdex 200-kolonne (Amersham Pharmacia) idet bufferen ble skiftet til fosfatbufret saltløsning, og toppen for monomert antistoff fra dette siste trinn ble oppsamlet. Antistoffkonsentrasjonen ble anslått under anvendelse av et spektrofotometer, ut fra absorbansen ved 280 nm.
Oligosakkaridanalyse
[0209] Oligosakkarider ble frigjort enzymatisk fra antistoffene ved PNGaseF-digerering, hvor antistoffene enten var immobilisert på en PVDF-membran eller i løsning.
[0210] Den resulterende digereringsløsning inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble enten tilberedt direkte for MALDI/TOF-MS-analyse eller ytterligere nedbrutt med EndoH-glykosidase før prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS-analyse.
Oligosakkaridfrigjøringsmetode for PVDF-membran-immobiliserte antistoffer [0211] Brønnene i en 96-brønnsplate laget av en PVDF- (Immobilon P, Millipore, Bedford, Massachusetts) membran ble fuktet med 100 μl metanol, og væsken ble trukket gjennom PVDF-membranen under anvendelse av vakuum påført på Multiscreen vakuum-manifolden (Millipore, Bedford, Massachusetts). PVDF-membranene ble vasket tre ganger med 300 μl vann. Brønnene ble deretter vasket med 50 μl RCM-buffer (8M urea, 360 mM Tris, 3,2 mM EDTA, pH 8,6). Mellom 30 og 40 μg antistoff ble tilsatt i en brønn inneholdende 10 μl RCM-buffer. Væsken i brønnen ble trukket gjennom membranen ved påføring av vakuum, og membranen ble deretter vasket to ganger med 50 μl RCM-buffer. Reduksjon av disulfidbroer ble utført ved tilsetting av 50 μl 0,1M ditiotreitol i RCM og inkubering ved 37°C i 1 time.
[0212] Etter reduksjon ble det påført vakuum for fjerning av ditiotreitolløsningen fra brønnen. Brønnene ble vasket tre ganger med 300 μl vann før utførelse av karboksymetyleringen av cysteinrestene ved tilsetting av 50 μl 0,1M jodeddiksyre i RCM-buffer og inkubering ved romtemperatur i mørke i 30 min.
[0213] Etter karboksymetylering ble brønnene påført vakuum og deretter vasket tre ganger med 300 μl vann. PVDF-membranen ble deretter blokkert for forhindring av adsorpsjon av endoglykosidasen, ved inkubering av 100 μl av en 1% vandig løsning av polyvinylpyrrolidon 360 ved romtemperatur i 1 time. Blokkeringsreagenset ble deretter fjernet ved svakt vakuum fulgt av tre vaskinger med 300 μl vann.
[0214] N-bundne oligosakkarider ble frigjort ved tilsetting av 2,5 mE peptid-N-glykosydase F (rekombinant N-Glycanase, GLYKO, Novato, CA) og 0,1 mE Sialidase (GLYKO, Novato, CA), for fjerning av potensielle ladde monosakkaridrester, i et sluttvolum på 25 μl i 20 mM NaHCO3, pH 7,0). Digerering ble utført i 3 timer ved 37°C.
Oligosakkaridfrigjøringsmetode for antistoffer i løsning
[0215] Mellom 40 og 50 μg antistoff ble blandet med 2,5 mE PNGaseF (Glyko, U.S.A.) i 2 mM Tris, pH 7,0 i et sluttvolum på 25 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C.
Anvendelse av endoglykosidase H-digerering av PNGaseF-frigjorte oligosakkarider for tilordning av hybride todelte oligosakkaridstrukturer til nøytrale MALDI/TOF-MS-oligosakkaridtopper
[0216] De PNGaseF-frigjorte oligosakkarider ble deretter digerert med Endoglykosidase H (EC 3.2.1.96). For EndoH-digerering ble 15 mE EndoH (Roche, Sveits) tilsatt til PNGaseF-digereringsproduktet (antistoff i løsning-metode ovenfor) under oppnåelse av et sluttvolum på 30 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C. EndoH spalter mellom N-acetylglukosaminrestene i chitobiosekjernen i N-bundne oligosakkarider. Enzymet kan bare digerere oligomannose og de fleste glykaner av hybridtypen, mens komplekse oligosakkaridtyper ikke hydrolyseres.
Prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS
[0217] De enzymatiske nedbrytningsprodukter inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble inkubert i ytterligere 3 timer ved romtemperatur etter tilsetting av eddiksyre til en sluttkonsentrasjon på 150 mM, og ble deretter ledet gjennom 0,6 ml kationebytterharpiks (AG50W-X8-hrpiks, hydrogenform, 150-75 μm (100-200 mesh), BioRad, Sveits) pakket i en mikro-bio-spinn-kromatografikolonne (BioRad, Sveits) for fjerning av kationer og proteiner. Én mikroliter av den resulterende prøve ble påført på en målplate av rustfritt stål og blandet på platen med 1 μl sDHB-matriks. sDHB-matriks ble tilberedt ved oppløsing av 2 mg 2,5-dihydroksybenzosyre pluss 0,1 mg 5-metoksysalicylsyre i 1 ml etanol/10 mM vandig natriumklorid 1:1 (på volumbasis). Prøvene ble lufttørket, 0,2 μl etanol ble påført, og prøvene fikk til slutt omkrystalliseres under luft.
MALDI/TOF-MS
[0218] MALDI-TOF-massespektrometret anvendt til å oppnå massespektraene var en Voyager Elite (Perspective Biosystems). Instrumentet ble operert i lineær konfigurasjon, med en akselerering på 20kV og 80 ns forsinkelse.
Ekstern kalibrering under anvendelse av oligosakkaridstandarder ble anvendt for masse-tilordning av ionene. Spektraene fra 200 laserskudd ble oppsummert for oppnåelse av sluttspektret.
Uttømming av fullblod-B-celler
[0219] 495 μl heparinisert blod fra en frisk donor ble porsjonert i 5 ml polystyrenrør, 5 μl 100 ganger konsentrerte antistoffprøver (sluttkonsentrasjon 1-1000 ng/ml) eller bare PBS ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 37°. Etter 24 timer ble 50 μl blod overført til et nytt rør og merket med anti-CD3-FITC, anti-CD19-PE og anti-CD45-CyChrome (Becton-Dickinson) i 15 min ved romtemperatur i mørke. Før analyse ble det tilsatt 500 μl FACS-buffer (PBS inneholdende 2% FCS og 5mM EDTA) til rørene. CD3-FITC- og CD19-PE-fluorescens av blodprøvene ble væskestrømcytometrisk analysert ved innstilling av en terskel på CD45-CyChrome. B celle-uttømming ble bestemt ved avsetting av forholdet mellom CD19<+>B-celler og CD3<+>T-celler.
Binding av anti-CD20-antistoffer til Raji-celler
[0220] 500 000 i 180 μl FACS-buffer (PBS inneholdende 2% FCS og 5mM EDTA) ble overført til 5 ml polystyrenrør, og 20 μl 10 ganger konsentrert anti-CD20-antistoffprøver (1-5000 ng/mI sluttkonsentrasjon) eller bare PBS ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 4°C i 30 min. Prøvene ble deretter vasket to ganger med FACS-buffer og pelletert ved 300 x g i 3 min. Supernatant ble avsugd, og cellene ble tatt opp i 100 μl FACS-buffer, 1 μl anti-Fc-spesifikke F(ab')2-FITC-fragmenter (Jackson Immuno Research Laboratories, USA) ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 4°C i 30 min. Prøvene ble vasket to ganger med FACS-buffer og tatt opp i 500 μl FACS-buffer inneholdende 0,5 µg/ml PI for analyse ved væskestrømcytometri. Binding ble bestemt ved avsetting av den geometriske middelfluorescens mot antistoffkonsentrasjonene.
EKSEMPEL 2
Høyhomologiakseptor-fremgangsmåte
[0221] Høyhomologi-antistoffakseptor-rammeverksøkingen ble utført ved innretting av muse-B-Ly1-proteinsekvensen mot en samling av humane kimlinjesekvensr og plukking av den humane sekvens som viste den høyeste sekvensidentitet. Her ble sekvensen VH1_10 fra VBase-databasen valgt som tungkjederammverk-akseptorsekvens, og VK_2_40-sekvensen ble valgt til være rammeverkakseptoren for den lette kjede. På disse to akseptor-rammeverk ble de tre komplementaritetsbestemmende regioner (CDR) av de tunge og lette variable musedoméner podet. Siden rammeverk 4-regionen ikke er en del av den variable region av kimlinje-V-genet, ble innrettingen for denne stilling utført individuelt. JH4-regionen ble valgt for den tunge kjede, og JK4-regionen ble valgt for den lette kjede. Molekylmodellering av det skisserte immunglobulindoméne viste ett sted som potensielt fordret muse-aminosyrerestene i stedet for de humane utenfor CDR. Gjeninnføring av muse-aminosyrerester i det humane rammeverk ville frembringe de såkalte tilbakemutasjoner. For eksempel ble den humane akseptoraminosyrerest i Kabat-stilling 27 tilbakemutert til en tyrosinrest. Det ble utformet humaniserte antistoffvarianter som enten innbefattet eller utelukket tilbakemutasjonene. Den lette humaniserte antistoffkjede fordret ikke noen tilbakemutasjoner. Etter skissering av proteinsekvensene, ble DNA-sekvenser som kodet for disse proteiner, syntetisert som angitt detaljert nedenfor.
Blandet rammeverk-fremgangsmåte
[0222] For å unngå innføring av tilbakemutasjoner i kritiske aminosyrereststillinger (kritiske for bibeholdelse av god antigenbindende affinitet eller antistofffunksjoner) i det humane akseptor-rammeverk ble det undersøkt om hvorvidt enten hele rammeverkregion 1 (FR1) eller rammeverkregionene 1 (FR1) og 2 (FR2) sammen kunne erstattes av humane antistoffsekvenser som allerede hadde donor-rester, eller funksjonelt ekvivalente, i disse viktige stillinger i den naturlige humane kimlinjesekvens. For dette formål ble VH-rammeverkene 1 og 2 av muse-Bly-1-sekvensen innrettet individuelt i forhold til humane kimlinjesekvenser. Her var det ikke viktig med høyeste sekvensidentitet, og dette ble ikke anvendt, for velging av akseptor-rammeverk, men i stedet ble matching av flere kritiske rester antatt å være viktigere. Disse kritiske rester omfatter restene 24, 71 og 94 (Kabatnummerering) og dessuten restene i stilling 27, 28 og 30 (Kabat-nummerering), som ligger utenfor CDR1-definisjonen ifølge Kabat, men ofte inngår ved antigenbinding. IMGT-sekvensen VH_3_15 ble valgt som en egnet sekvens.
Etter skissering av proteinsekvensene, ble DNA-sekvensene som kodet for disse proteiner, syntetisert som angitt detaljert nedenfor. Ved anvendelse av denne fremgangsmåte trengtes det ingen tilbakemutasjoner verken for den lette eller tunge kjede, for bibeholdelse av gode nivåer av antigenbinding.
Syntese av antistoffgenene
[0223] Etter å ha utpekt aminosyresekvensen for den humaniserte antistoff V-region, måtte DNA-sekvensen frembringes. DNA-sekvensdataene for de individuelle rammeverkregioner ble funnet i databasene for humane kimlinjesekvenser. DNA-sekvensen for CDR-regionene ble tatt fra de tilsvarende muse-cDNA-data. Med disse sekvenser ble hele DNA-sekvensen i realiteten satt sammen. Med disse DNA-sekvensdata ble det innført diagnostiske restriksjonsseter i den virkelige sekvens, ved innføring av stumme mutasjoner, noe som frembrakte gjenkjennelsesseter for restriksjonsendonukleaser. For oppnåelse av den fysiske DNA-kjede ble det utført gensyntese (f.eks. Wheeler et al., 1995). Ved denne metode utformes oligonukleotider fra de aktuelle gener, slik at én serie oligonukleotider fås fra kodingsstrengen, og en annen serie fra den ikke-kodende streng.3'- og 5'-endene av hvert oligonukleotid (bortsett fra den aller første og siste i rekken) viser alltid komplementære sekvenser med to primere som stammer fra den motsatte streng. Når disse oligonukleotider innlemmes i en reaksjonsbuffer egnet for hvilken som helst varmestabil polymerase, og det tilsettes Mg<2+>, dNTP og en DNA-polymerase, strekker hvert oligonukleotid seg fra sin 3'-ende. Den nydannede 3'-ende av én primer koples så til den neste primer på den motsatte streng og utvider sin sekvens videre under betingelser som er egnet for templatavhengig DNA-kjede-forlengelse. Det endelige produkt ble klonet i en konvensjonell vektor for formering i E. coli.
Antistoffproduksjon
[0224] Humane tung- og lettkjede-ledersekvenser (for sekresjon) ble tilføyd oppstrøms for de ovennevnte variabel region-sekvenser, og disse ble deretter sammenføyd oppstrøms for henholdsvis humane konstante tunge og lette IgG1-kappa-sekvenser under anvendelse av standard-molekylærbiologiteknikker. De resulterende fullstendige tung- og lettkjede-DNA-antistoffsekvenser ble subklonet i pattedyr-ekspresjonsvektorer (én for den lette kjede og én for den tunge kjede) under kontroll av MPSV-promoteren og oppstrøms for et syntetisk polyA-sete, idet hver vektor bar en EBV OriP-sekvens, som beskrevet i eksempel 1 ovenfor.
Antistoffer ble frembrakt som beskrevet i eksempel 1 ovenfor, nemlig ved kotransfektering av HEK293-EBNA med pattedyr-antistoff-tung- og lettkjedeekspresjonsvektorer, høsting av det kondisjonerte dyrkningsmedium 5 til 7 dager etter transfeksjon og rensing av de utskilte antistoffer ved protein A-affinitetskromatografi, fulgt av kationebytterkromatografi og et endelig størrelseseksklusjonskromatografitrinn for isolering av rene monomere IgG1-antistoffer. Antistoffene ble formulert i en løsning av 25 mM kaliumfosfat, 125 mM natriumklorid, 100 mM glycin, med pH 6,7. Glyko-omarbeidede varianter av de humaniserte antistoffvarianter ble frembrakt ved kotransfeksjon av antistoffekspresjonsvektorene sammen med en GnT-III-glykosyltransferaseekspresjonsvektor, eller sammen med en GnT-III-ekspresjonsvektor pluss en Golgi-mannosidase II-ekspresjonsvektor, som beskrevet for det kimæriske antistoff i eksempel 1 ovenfor. Glyko-omarbeide antistoffer ble renset og formulert som beskrevet ovenfor for de ikke-glyko-omarbeidede antistoffer.
Oligosakkaridene knyttet til Fc-regionen av antistoffene ble analysert ved MALDI/TOF-MS som beskrevet nedenfor.
Oligosakkaridanalyse
[0225] Oligosakkaridfrigjøringsmetode for antistoffer i løsning
Mellom 40 og 50 μg antistoff ble blandet med 2,5 mE PNGaseF (Glyko, USA) i 2 mM Tris, pH 7,0, i et sluttvolum på 25 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37 ºC.
Prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS
[0226] De enzymatiske nedbrytningsprodukter inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble inkubert i ytterligere 3 timer ved romtemperatur etter tilsetting av eddiksyre til en sluttkonsentrasjon på 150 mM, og ble deretter ledet gjennom 0,6 ml kationebytterharpiks (AG50W-X8-harpiks, hydrogenform, 150-75 μm, BioRad, Sveits) pakket i en mikro-bio-spin-kromatografikolonne (BioRad, Sveits) under fjerning av kationer og proteiner. Én mikroliter av den resulterende prøve ble påført på en målplate av rustfritt stål og blandet på platen med 1 μl sDHB-matriks.
sDHB-matriks ble tilberedt ved oppløsing av 2 mg 2,5-dihydroksybenzosyre pluss 0,1 mg 5-metoksysalicylsyre i 1 ml etanol/10 mM vandig natriumklorid 1:1 (på volumbasis). Prøvene ble lufttørket, 0,2 μl etanol ble påført, og prøvene fikk til slutt omkrystalliseres under luft.
MALDI/TOF-MS
[0227] MALDI-TOF-massespektrometeret anvendt til opptak av massespektraene var et Voyager Elite (Perspective Biosystems). Instrumentet ble operert i lineær konfigurasjon, med en akselerering på 20kV og 80 ns forsinkelse. Ekstern kalibrering med anvendelse av oligosakkaridstandarder ble anvendt for massetilordning av ionene. Spektraene fra 200 laserskudd ble summert under oppnåelse av det endelige spektrum.
Antigenbindingsanalyse
[0228] De rensede, monomere humaniserte antistoffvarianter ble testet med hensyn til binding til humant CD20 på Raji B-cellelymfom-målceller under anvendelse av væskestrømcytometribasert analyse, som beskrevet for det kimæriske B-ly1-antistoff i Eksempel 1 ovenfor.
Binding av monomere IgG1-glykovarianter til NK-celler og Fc γRIIIA-uttrykkende CHO-cellelinje
[0229] Humane NK-celler ble isolert fra nyisolerte mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) med anvendelse av negativ seleksjonsanriking med hensyn til CD16- og CD56-positive celler (MACS-system, Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach/Tyskland). Renheten bestemt ved CD56-ekspresjon var mellom 88 og 95%. Nyisolerte NK-celler ble inkubert i PBS uten kalsium- og magnesium-ioner (3 x 10<5>celler/ml) i 20 minutter ved 37°C under fjerning av NK-celle-assosiert IgG. Cellene ble inkubert med 10<6>celler/ml med forskjellige konsentrasjoner av anti-CD20-antistoff (0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 μg/ml) i PBS, 0,1% BSA. Etter flere vaskinger ble antistoffbinding påvist ved inkubering med 1:200 FITC-konjugert F(ab')2 geiteantihumant, F(ab')2-spesifikt IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA/USA) og anti-humant CD56-PE (BD Biosciences, Allschwil/Sveits). Anti-FcgammaRIIIA 3G8 F(ab')2-fragmenter (Ancell, Bayport, MN/USA) ble tilsatt i en konsentrasjon på 10 µg/ml for konkurrering av binding av antistoff-glykovarianter (3 μg/ml). Fluorescensintensiteten som kan tilskrives de bundne antistoffvarianter, ble bestemt for CD56-positive celler på en FACSCalibur (BD Biosciences, Allschwil/Sveits). CHO-celler ble transfektert ved elektroporasjon (280 V, 950 μF, 0,4 cm) med en ekspresjonsvektor som kodet for FcgammaRIIIA-Val158 α-kjeden og γ-kjeden. Transfektanter ble selektert ved tilsetting av 6 μg/ml puromycin, og stabile kloner ble analysert ved FACS under anvendelse av 10 μl monoklonalt FITC-konjugert anti-FcgammaRIII 3G8-antistoff (BD Biosciences, Allschwil/Sveits) for 10<6>celler. Binding av IgG1 til FcgammaRIIIA-Val158-uttrykkende CHO-celler ble utført analogt med NK-cellebindingen beskrevet ovenfor.
ADCC-analyse
[0230] Humane mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) ble anvendt som effektorceller og ble preparert under anvendelse av Histopaque-1077 (Sigma Diagnostics Inc., St. Louis, M063178 USA) og idet man hovedsakelig fulgte fabrikantens instruksjoner. Kort angitt ble veneblod tatt med hepariniserte sprøyter fra frivillige personer. Blodet ble fortynnet 1:0,75-1,3 med PBS (ikke inneholdende Ca<++>eller Mg<++>) og lagt på Histopaque-1077. Gradienten ble sentrifugert ved 400 x g i 30 min ved romtemperatur (RT) uten bremser. Interfasen inneholdende PBMC ble oppsamlet og vasket med PBS (50 ml pr. celler fra to gradienter) og harvested ved sentrifugering ved 300 x g i 10 minutter ved RT. Etter gjenoppslemming av pelleten med PBS, ble PBMC tellet og vasket en andre gang ved sentrifugering ved 200 x g i 10 minutter ved RT. Cellene ble deretter gjenoppslemmet i passende medium for de påfølgende prosesser.
[0231] Forholdet mellom effektor og mål anvendt for ADCC-analysene var 25:1 og 10:1 for henholdsvis PBMC og NK-celler. Effektorcellene ble preparert i AIM-V-medium i passende konsentrasjon for tilsetting av 50 μl pr. brønn i rundbunnede 96 brønnsplater. Målcellene var humane B-lymfomceller (f.eks. Rajiceller) dyrket i DMEM inneholdende 10% FCS. Målcellene ble vasket i PBS, tellet og gjenoppslemmet i AIM-V med 0,3 millioner pr. ml for tilsetting av 30000 celler i 100 μl pr. mikrobrønn. Antistoffene ble fortynnet i AIM-V, tilsatt i 50 μl til de forutplatede målcellene og fikk bindes til målcellene i 10 minutter ved RT. Deretter ble effektorcellene tilsatt, og platen ble inkubert i 4 timer ved 37°C i fuktig atmosfære inneholdende 5% CO2. Dreping av målcellene ble fastslått ved måling av laktatdehydrogenase (LDH)-frigjøring fra ødelagte celler under anvendelse av Cytotoksisitetspåvisningssettet (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Sveits). Etter inkuberingen på 4 timer ble platene sentrifugert ved 800 x g.100 μl supernatant fra hver brønn ble overført til en ny transparent flatbunnet 96 brønns plate. 100 μl fargesubstratbuffer fra utstyrssettet ble tilsatt pr. brønn. Vmaks-verdiene for fargereaksjonen ble fastsatt i en ELISA-avlesningsinnretning ved 490 nm i minst 10 min under anvendelse av SOFTmax PRO-programvare (Molecular Devices, Sunnyvale, CA94089, USA). Spontan LDH-frigjøring ble målt fra brønner inneholdende bare mål- og effektorceller, men ingen antistoffer. Maksimal frigjøring ble bestemt fra brønner inneholdende bare målceller og 1% Triton X-100. Prosentandel av spesifikk antistoffmediert dreping ble beregnet som følger: ((x — SR)/(MR — SR)*100, hvor x er middelverdien for Vmaks ved en spesifikk antistoffkonsentrasjon, SR er middelverdien for Vmaks for den spontane frigjøring, og MR er middelverdien for Vmaks for den maksimale frigjøring.
Komplementavhengig cytotoksisitetsanalyse
[0232] Målcellene ble tellet, vasket med PBS, gjenoppslemmet i AIM-V (Invitrogen) med 1 millioner celler pr. ml.50 μl celler ble utplatet pr. brønn i en flatbunnet 96 brønns plate. Antistoff-fortynninger ble tilberedt i AIM-V og tilsatt i 50 μl til cellene. Antistoffene fikk bindes til cellene i 10 minutter ved romtemperatur. Humant serumkomplement (Quidel) ble nytint, fortynnet 3 ganger med AIM-V og tilsatt i 50 μl i brønnene. Kaninkomplement (Cedarlane Laboratories) ble tilberedt som beskrevet av fabrikanten, fortynnet 3 ganger med AIM-V og tilsatt i 50 μl i brønnene. Som kontroll ble komplementkilder oppvarmet i 30 min ved 56°C før tilsetting til analysen. Analyseplatene ble inkubert i 2 timer ved 37°C. Dreping av cellene ble bestemt ved måling av LDH-frigjøring. Kort angitt ble platene sentrifugert ved 300 x g i 3 min.50 μl supernatant pr. brønn ble overført til en ny 96 brønns plate, og 50 μl av analysereagenset fra Cytotoksisitets-settet (Roche) ble tilsatt. En kinetisk måling med ELISA-avlesningsinnretningen bestemte Vmaks som samsvarte med LDH-konsentrasjonen i supernatanten. Maksimal frigjøring ble bestemt ved inkubering av cellene i nærvær av 1% Trition X-100.
Uttømmingsanalyse for B-celler i fullblod
[0233] Normal B-celle-uttømming i fullblod ved anti-CD20-antistoffene ble utført som beskrevet i Eksempel 1 ovenfor.
Apoptoseanalyse
[0234] Den apoptotiske potens for antistoffene ble analysert ved inkubering av antistoffet med 10 μg/ml (metningsbetingelser med hensyn til antigenbinding) med målcellene (med en målcellekonsentrasjon på 5 x 10<5>celler/ml) natten over (16-24 t). Prøvene ble merket med AnnV-FITC og analysert ved FACS. Analyse ble utført in triplo.
[0235] Påvisning utføres ved væskestrømcytometri ved at man fulgte tilsynekomsten av apoptotiske markører så som annexin V og fosfatidylserin.
Negativ kontroll (ingen apoptose indusert) inneholder intet antistoff, men bare fosfatbufret saltløsning. Positiv kontroll (maksimal apoptose) inneholder 5 mikromolar av det sterke apoptoseinduserende middel camptothecin (CPT).
Resultater og diskusjon
[0236] Sammenlikning av bindingen til humant CD20-antigen av antistoffvariantene B-HH1, B-HH2, B-HH3, enten kompleksbundet med den kimæriske B-ly1-lettkjede (mVL, som beskrevet i eksempel 1 ovenfor) eller med den humaniserte B-ly1-lettkjede (KV1), og det parentale, kimæriske antistoff chB-ly1 (beskrevet i eksempel 1 ovenfor) viser at alle antistoffer har liknende EC50-verdi, men B-HH1-konstruksjonen bindes med lavere intensitet/støkiometri enn variantene B-HH2 og B-HH3 (fig.11). B-HH1 kan skjelnes fra B-HH2 og B-HH3 ved sine delvis humane CDR1- og CDR2-regioner (Kabat-definisjon), samt Ala/Thr-polymorfismen i stilling 28 (Kabat-nummerering). Dette tyder på at enten 28, det fullstendige CDR1 og/eller det fullstendige CDR2 er viktige for antistoff/antigen-interaksjon.
[0237] Sammenlikningen av B-HL1, B-HH1 og det kimæriske parentale chB-ly1-antistoff viste fravær av en hver bindingsaktivitet i B-HL1-konstruksjonen, og omtrent halvdelen av bindingsintensiteten/støkiometrien for B-HH1 sammenliknet med B-ly1 (fig.12). Både B-HL1 og B-HH1 utformes basert på akseptorrammeverk som stammer fra den humane VH1-klasse. Blant andre forskjeller er stilling 71 (Kabat-nummerering; Kabat-stilling 71 svarer til stilling 72 i SEKV ID NR: 48) av B-HL1-konstruksjonen et slående avvik, noe som viser dens antatte betydning for antigenbinding.
[0238] Ved sammenlikning av antigenbindingsdataene ifølge fig.9-13 viser BHH2-KV1-, BHL8-KV1- og BHL11-KV1-variantene den beste bindingsaffinitet, blant de forskjellige testede humaniserte antistoffvarianter, til humant CD20 på overflaten av humane celler. Forskjellene mellom B-HH2 på den ene side og B-HL8 og B-HL11 på den annen side befinner seg kun i FR1- og FR2-regionene, idet alle de tre CDR er identiske (sammenlikne f.eks. SEKV ID NR: 32, 56 og 60, som ikke er nummerert ifølge Kabat, men hvis Kabat-nummerering lett kan bestemmes av en vanlig fagperson). B-HL8 og B-HL11 har sine FR1- og FR2-sekvenser fra den humane VH3-klasse, mens det fullstendige B-HH2-rammeverk er humant VH1-avledet. B-HL11 er et derivat av B-HL8 med enkeltmutasjonen Glu1Gln (stilling 1 er den samme både ved Kabat-nummerering og det konvensjonelle nummereringssystem anvendt i sekvenslisten), hvor Gln er aminosyreresten i B-HH2-konstruksjonen. Dette betyr at Glu1Gln-utskifting ikke forandrer bindingsaffinitet eller intensitet. De andre forskjeller mellom B-HH2 og B-HL8 er 14 rammeverkrester, hvorav én eller flere vil innvirke på den antigenbindende oppførsel hos dette antistoff.
[0239] B-HL4-konstruksjonen fås fra B-HH2-antistoffet ved erstatting av FR1 i B-HH2 med FR1 i den humane kimlinjesekvens VH1_45. Denne konstruksjon viser sterkt redusert antigenbindende evne, til tross for at den har forskjellige aminosyrer bare i tre stillinger i FR1. Disse rester befinner seg i stillingene 2, 14 og 30 (Kabat-nummerering). Blant disse kan stilling 30 være en stilling av betydning, siden det er en del av Chothia-definisjonen av CDR1. Total analyse av alle bindingskurvene fra fig.9 til 13 viser at følgende humaniserte B-ly1-tungkjederester (Kabat-nummerering) er viktige for binding til CD20: N35 (enden av Kabat CDR1), fullstendig Kabat CDR1, fullstendig Kabat CDR2 og fullstendig Kabat CDR3, restene A71 og R94 (i dette tilfelle kan R94 ikke erstattes av et treonin) og Y27. A28 og S30 bidrar også i mindre utstrekning. Dessuten er Kabat CDR3 og alle kanoniske rester viktige for antigenbinding. Ingen tilbakemutasjoner ble innført i den humaniserte lette kjede, som hadde de fullstendige Kabat CDR1, CDR2 og CDR3 innpodet. Ved induksjon av apoptose (fig. 14, 15 og 21) var den mest potente variant humanisert B-ly1-variant BHH2-KV1 (enda mer potent enn den opprinnelige chB-ly1, og meget mer potent enn et antistoff med en sekvens identisk med rituximab, C2B8). Andre humaniserte varianter (derivater av BHL8) som kan gjenvinne den økte apoptose, er: B-HL12 til B-HL17 (se tabell) og BHH8 (blandede rammeverk) og BHH9 ("blandede rammeverk" med én tilbakemutasjon, S30T). Stillingene 9 og 48 (Kabatnummerering) kan kontakte antigenet. Variantene BHH4 til BHH7 er andre humaniserte B-ly1-varianter som ikke innfører ytterligere ikke-humane sekvenser.
[0240] Viktige egenskaper hos det humaniserte B-ly1-antistoff er at det er et anti-CD20-antistoff type II som definert i Cragg, M.S. og Glennie, M.J., Blood 103(7):2738-2743 (april 2004). Ved binding til CD20 induserte det derfor ikke noen betydelig resistens overfor ekstraksjon av CD20 med ikke-ionisk detergent fra overflaten av humane CD20+-celler, ved anvendelse av analysen beskrevet for dette formål i Polyak, M.J. og Deans, J.P., Blood 99(9):3256-3262 (2002). Det induserte unektelig betydelig mindre resistens overfor ekstraksjon av CD20 med ikke-ionisk detergent enn C2B8-antistoffet gjør (et annet anti-CD20-antistoff med identisk sekvens som rituximab (se US-patentpublikasjon nr.2003/0003097). Som ventet for et anti-CD20-antistoff type II, hadde det humaniserte B-ly1 ikke noen signifikant komplementmediert lyseaktivitet og unektelig en mengde mer komplementmediert lyseaktivitet enn anti-CD20-antistoffet C2B8 (kimærisk IgG1 med identisk sekvens som rituximab). En annen viktig egenskap hos det humaniserte B-ly1-antistoff var at det var meget potent i den homotypiske aggregeringsanalyse. I denne analyse ble CD20-positive humane celler, Daudiceller, inkubert i celledyrkningsanalysemedium i opp til 24 timer ved 37 ºC i 5% CO2-atmosfære i en pattedyrcelleinkubator som beskrevet detaljert i (Deans referanse) med antistoffet i en konsentrasjon på 1 mikrogram pr. ml og parallelt i en konsentrasjon på 5 mikrogram pr. ml. Til sammenlikning ble kontroll, parallell inkubering av cellene utført under identiske betingelser, men med anvendelse av anti-CD20-antistoffet C2B8. På forskjellige tidspunkter, innbefattende 8 timers og 24 timers inkubering, ble cellene inspisert visuelt ved anvendelse av mikroskop. Det ble funnet at det humaniserte B-ly1-antistoff førte til sterk homotypisk aggregering, idet aggregatene var betydelig større enn aggregatene innført ved tilsetting av C2B8-kontrollantistoffet. Dessuten, og i overensstemmelse med at antistoffet var anti-CD20 type II, induserte det høyere nivåer av apoptose når CD20-positive humane celler ble inkubert med det humaniserte B-ly1-antistoff, i forhold til en kontroll under identiske betingelser under anvendelse av det C2B8kimæriske IgG1-antistoff med identisk sekvens som rituximab.
[0241] Glyko-omarbeidede varianter av de humaniserte antistoffer ble frembrakt ved ko-ekspresjon av GnTIII-glykosyltransferase, sammen med antistoffgenene, i pattedyrceller. Dette førte til en økning i fraksjonen av ikkefukosylerte oligosakkarider knyttet til Fc-regionen av antistoffene, innbefattende todelte ikke-fukosylerte oligosakkarider, som beskrevet i WO 2004/065540 (fig.17-19). De glyko-omarbeidede antistoffer hadde betydelig høyere nivåer av binding til humane FcgammaRIII-reseptorer (fig.20) samt ADCC-aktivitet (fig.16), i forhold til det ikke-glyko-omarbeidede antistoff og i forhold til C2B8-antistoffet. Det humaniserte B-ly1-antistoff var også mer potent ved innføring av human B-celleuttømming i en fullblodanalyse (fig.16), enn kontroll-C2B8-antistoffet. Dette var tilfellet både for det ikke-glyko-omarbeidede B-ly1-antistoff og for den glykoomarbeidede versjon av det. Det glyko-omarbeidede antistoff var omtrent 1000 ganger mer potent enn C2B8-kontroll-anti-CD20-antistoffet med hensyn til uttømming av B-celler i fullblodanalysen. Denne sammenlikning er viktig både for de ikke-glyko-omarbeidede og for de glyko-omarbeidede humaniserte former av B-ly1-antistoff, på grunn av at den viste at i analyser som kombinerte Fc-reseptoravhengige aktiviteter, så som ADCC, pluss komplementmediert lyse, pluss induksjon av apoptose, var begge former av B-ly1 betydelig mer potente enn C2B8, skjønt begge former av B-ly1 har dramatisk lavere komplementmediert lyseaktivitet. De Fc-reseptor-avhengige ADCC-dreperaktiviteter og apoptoseinduksjon var til stede i denne overlegne aktivitet av de humaniserte B-ly1-antistoffvarianter. Ved apoptoseanalysen var videre både de glyko-omarbeidede og ikke-glyko-omarbeidede former av dette type II-anti-CD20-antistoff potente, og de Fc-omarbeidede varianter med øket bindingsaffinitet til Fcgamma-reseptorer var enda mer potente ved apoptoseinduksjon enn den ikke-Fc-omarbeidede variant, og alle varianter var betydelig mer potente enn kontrollantistoffet C2B8. Den nøyaktige mekanisme for forøket homotypisk aggregering og induksjon av apoptose mediert ved type II-anti-CD20-antistoffer er ikke kjent, og samtidig binding til andre molekyler på overflaten av CD20-positive celler, så som Fcgamma-reseptorer, kan innvirke på denne viktige egenskap. Det var derfor viktig å vise at anti-CD20-antistoffer av type II som er blitt omarbeidet i sin Fc-region for øket bindingsaffinitet til Fc-gamma-reseptorer, innbefattende FcgammaRIII og med en tilknyttet økning i ADCC-aktivitet, fremdeles var i stand til å indusere sterk apoptose, enda høyere enn den ikke-Fc-omarbeidede og homotypiske aggregering. Apoptoseinduksjon er viktig in vivo, siden det er steder i kroppen hvor de CD20-positive målceller kan finnes, men hvor adgang til FcgammaRIII-positive celler er mer vanskelig enn i blod; slike steder er for eksempel lymfeknuter. På disse steder kan induksjonen av apoptose ved selve anti-CD20-antistoffet være avgjørende for god effektivitet av anti-CD20-antistoff-terapien hos mennesker, både for behandling av hematologiske maligniteter så som ikke-Hodgkins lymfomer og kronisk B-celle-lymfocyttleukemi, og for behandling av autoimmune sykdommer så som reumatoid artritt og lupus via en B-celleuttømmings-fremgangsmåte. Den økte bindingsaffinitet til FcgammaRIII og høyere ADCC hos det humaniserte, Fc-omarbeidede anti-CD20-antistoff type II kan også være en meget viktig egenskap for slike terapier. Endelig kan den reduserte eller ubetydelige komplementmedierte lyseaktivitet hos disse anti-CD20-antistoffer type II, innbefattende humaniserte og Fc-omarbeidede varianter, også være viktig høyere komplementaktivering ved anti-CD20-antistoffer er blitt korrelert med økte, uønskede bivirkninger.
NO20062289A 2003-11-05 2006-05-19 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning. NO341893B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51709603P 2003-11-05 2003-11-05
PCT/IB2004/003896 WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2004-11-05 Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20062289L NO20062289L (no) 2006-08-03
NO341893B1 true NO341893B1 (no) 2018-02-12

Family

ID=34572912

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20210499A NO346533B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
NO20220263A NO347530B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Et humanisert type II anti-CD20 antistoff og vertscelle som produserer et humanisert type II anti-CD20 antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling og en farmasøytisk sammensetning.
NO20062289A NO341893B1 (no) 2003-11-05 2006-05-19 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning.
NO20171989A NO346167B1 (no) 2003-11-05 2017-12-13 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning
NO20220904A NO347800B1 (no) 2003-11-05 2022-08-24 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20210499A NO346533B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
NO20220263A NO347530B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Et humanisert type II anti-CD20 antistoff og vertscelle som produserer et humanisert type II anti-CD20 antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling og en farmasøytisk sammensetning.

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20171989A NO346167B1 (no) 2003-11-05 2017-12-13 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning
NO20220904A NO347800B1 (no) 2003-11-05 2022-08-24 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning

Country Status (40)

Country Link
US (7) US9296820B2 (no)
EP (5) EP1692182B1 (no)
JP (5) JP4653109B2 (no)
KR (3) KR101220691B1 (no)
CN (4) CN102373214B (no)
AT (1) ATE463513T1 (no)
AU (1) AU2004287643C1 (no)
BE (1) BE2016C008I2 (no)
BR (2) BR122020013239B1 (no)
CA (1) CA2544865C (no)
CR (1) CR11848A (no)
CY (6) CY1110301T1 (no)
DE (1) DE602004026470D1 (no)
DK (5) DK1692182T3 (no)
EA (4) EA015009B1 (no)
EC (2) ECSP066603A (no)
ES (5) ES2672640T3 (no)
FR (1) FR15C0076I2 (no)
HK (4) HK1100005A1 (no)
HR (5) HRP20100303T1 (no)
HU (5) HUE026669T2 (no)
IL (4) IL175367A (no)
LT (4) LT2348051T (no)
LU (2) LU92632I2 (no)
MA (1) MA31040B1 (no)
ME (3) ME01775B (no)
MX (2) MXPA06004836A (no)
NL (1) NL300801I2 (no)
NO (5) NO346533B1 (no)
NZ (2) NZ588860A (no)
PL (5) PL1692182T3 (no)
PT (5) PT1692182E (no)
RS (5) RS54450B1 (no)
SG (3) SG10202008722QA (no)
SI (5) SI2077282T1 (no)
TN (1) TNSN06126A1 (no)
TR (2) TR201809892T4 (no)
UA (1) UA91823C2 (no)
WO (1) WO2005044859A2 (no)
ZA (1) ZA200604547B (no)

Families Citing this family (764)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1071700T3 (da) * 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
AU2004252067B2 (en) 2003-05-09 2012-04-12 Duke University CD20-specific antibodies and methods of employing same
WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2006012508A2 (en) * 2004-07-22 2006-02-02 Genentech, Inc. Method of treating sjögren's syndrome
DK1776384T3 (da) 2004-08-04 2013-09-02 Mentrik Biotech Llc VARIANT-Fc-REGIONER
SG165344A1 (en) * 2004-10-05 2010-10-28 Genentech Inc Method for treating vasculitis
EP2404937A1 (en) 2005-02-07 2012-01-11 GlycArt Biotechnology AG Antigen binding molecules that bind EGFR, vectors encoding same, and uses thereof
RU2007145509A (ru) * 2005-05-09 2009-06-20 Гликарт Биотехнологи Аг (Ch) Антигенсвязывающие молекулы, имеющие модифицированные fc-участки и измененное связывание с fc-рецепторами
AU2006251647A1 (en) * 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
US20090208500A1 (en) * 2005-06-03 2009-08-20 Genentech, Inc. Method of producing antibodies with improved function
CA2615846A1 (en) 2005-07-21 2007-01-25 Genmab A/S Potency assays for antibody drug substance binding to an fc receptor
SG192479A1 (en) * 2005-08-26 2013-08-30 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
AU2012216702B2 (en) * 2005-08-26 2014-12-04 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
CA2627981A1 (en) * 2005-11-07 2007-05-18 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
US8470318B2 (en) * 2005-11-07 2013-06-25 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
US20080206246A1 (en) * 2006-04-05 2008-08-28 Ravetch Jeffrey V Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
ES2547689T3 (es) 2005-12-02 2015-10-08 Genentech, Inc. Composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con la señalización de citocinas que implican anticuerpos que se unen a IL-22 y a IL-22R
EP1973950B1 (en) 2006-01-05 2014-09-17 Genentech, Inc. Anti-ephb4 antibodies and methods using the same
US8716033B2 (en) * 2006-02-10 2014-05-06 Life Technologies Corporation Oligosaccharide modification and labeling of proteins
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
MX2008012843A (es) * 2006-04-05 2009-01-19 Univ Rockefeller Polipeptidos con propiedades antiinflamatorias aumentadas y citotoxicas reducidas y metodos relacionados.
CA2652945C (en) 2006-05-30 2015-06-02 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
KR20090016762A (ko) * 2006-06-06 2009-02-17 제넨테크, 인크. 혈관 발달을 조정하기 위한 조성물 및 방법
AR062223A1 (es) * 2006-08-09 2008-10-22 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas
WO2008063776A2 (en) * 2006-10-12 2008-05-29 Genentech, Inc. Antibodies to lymphotoxin-alpha
PT2502938E (pt) 2006-10-27 2015-06-05 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados e suas utilizações
AU2013202392B2 (en) * 2006-12-20 2016-02-25 Mmrglobal, Inc. Antibodies and methods for making and using them
CN103709249B (zh) 2006-12-20 2016-02-24 Mmr全球公司 抗体及其制备和使用方法
AU2008209404B2 (en) 2007-01-22 2012-08-16 Genentech, Inc. Polyelectrolyte precipitation and purification of antibodies
JP2010517944A (ja) * 2007-01-26 2010-05-27 バイオインヴェント インターナショナル アーベー Ｄｌｌ４シグナリング阻害薬およびその使用
CA2676766A1 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Genentech, Inc. Anti-robo4 antibodies and uses therefor
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
FR2915398B1 (fr) * 2007-04-25 2012-12-28 Lab Francais Du Fractionnement "ensemble de moyens pour le traitement d'une pathologie maligne, d'une maladie auto-immune ou d'une maladie infectieuse"
ES2558689T3 (es) 2007-05-14 2016-02-08 Medimmune, Llc Métodos para reducir los niveles de eosinófilos
SI2158315T1 (sl) 2007-06-25 2016-05-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Postopki za spreminjanje protiteles in spremenjena protitelesa z izboljšanimi funkcionalnimi lastnostmi
CN101802013B (zh) 2007-07-16 2014-07-02 健泰科生物技术公司 人源化抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法
NZ583367A (en) 2007-07-16 2012-10-26 Genentech Inc Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
KR101234436B1 (ko) 2007-09-05 2013-02-18 로슈 글리카트 아게 유형 ⅰ 및 유형 ⅱ 항-ｃｄ２０ 항체를 사용하는 병용 치료요법
EP3789400A1 (en) 2007-09-26 2021-03-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US20090098118A1 (en) * 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) * 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
LT2514436T (lt) 2007-11-07 2018-04-10 Genentech, Inc. Il-22 panaudojimas mikrobinių sutrikimų gydymui
TWI580694B (zh) 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
ES2511844T3 (es) * 2007-12-21 2014-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Formulación de anticuerpo
EP2231183A2 (en) * 2007-12-21 2010-09-29 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
MX2010008437A (es) 2008-01-31 2010-11-25 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados y metodos de uso.
US20090246197A1 (en) * 2008-03-25 2009-10-01 Charles Dumontet Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with increased antibody dependent cellular cytotoxicity (adcc)
KR102070761B1 (ko) * 2008-03-31 2020-01-29 제넨테크, 인크. 천식을 치료 및 진단하기 위한 조성물 및 방법
AU2009240637A1 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 The Rockefeller University Methods of identifying anti-inflammatory compounds
WO2009134738A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
KR101054362B1 (ko) * 2008-07-03 2011-08-05 재단법인 목암생명공학연구소 재조합 단백질의 푸코스 함량을 감소시키는 방법
US8680020B2 (en) 2008-07-15 2014-03-25 Academia Sinica Glycan arrays on PTFE-like aluminum coated glass slides and related methods
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 Genentech Inc 治療進展型多發性硬化症之方法
KR102100066B1 (ko) 2008-10-14 2020-04-10 제넨테크, 인크. 이뮤노글로불린 변이체 및 그의 용도
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
BRPI0918204A2 (pt) 2008-12-23 2015-12-08 Genentech Inc igv variante composição farmaceutica e kit
TW201544123A (zh) 2009-03-20 2015-12-01 Genentech Inc 抗-ｈｅｒ抗體
EP2679600A1 (en) * 2009-03-25 2014-01-01 Genentech, Inc. Anti-FGFR3 antibodies and methods using same
UA108199C2 (uk) 2009-03-25 2015-04-10 АНТИТІЛО ПРОТИ α5β1 І ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
AR075982A1 (es) * 2009-03-31 2011-05-11 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo afucosilado y una o mas de las citoquinas seleccionadas de gm- csf humano, m -csf humano y/o il-3 humano y composicion
RU2598248C2 (ru) 2009-04-02 2016-09-20 Роше Гликарт Аг Полиспецифичные антитела, включающие антитела полной длины и одноцепочечные фрагменты fab
CN102378768A (zh) 2009-04-07 2012-03-14 罗氏格黎卡特股份公司 双特异性抗-ErbB-3/抗-c-Met抗体
KR20110124368A (ko) 2009-04-07 2011-11-16 로슈 글리카트 아게 이중특이적 항―ｅｒｂｂ―２／항―ｃ―ｍｅｔ 항체
AU2010234031B2 (en) 2009-04-07 2015-10-01 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
WO2010146059A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
KR20120031083A (ko) 2009-07-24 2012-03-29 에프. 호프만-라 로슈 아게 교반기 시스템
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
WO2011014750A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Genentech, Inc. Inhibition of tumor metastasis using bv8- or g-csf-antagonists
EP2464380A1 (en) 2009-08-14 2012-06-20 Roche Glycart AG Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with fludarabine and/or mitoxantrone
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
GB0914691D0 (en) 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
TW201113037A (en) 2009-08-28 2011-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against CDCP1 for the treatment of cancer
TWI412375B (zh) 2009-08-28 2013-10-21 Roche Glycart Ag 人類化抗ｃｄｃｐ１抗體
ES2599076T3 (es) 2009-09-02 2017-01-31 Genentech, Inc. Smoothened mutante y métodos de utilización del mismo
AR078161A1 (es) * 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
SG179196A1 (en) 2009-09-16 2012-04-27 Genentech Inc Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
US9096877B2 (en) 2009-10-07 2015-08-04 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
US8435511B2 (en) 2009-10-22 2013-05-07 Genentech, Inc. Anti-hepsin antibodies and methods using same
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
CA2780221A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
KR101968766B1 (ko) 2009-11-05 2019-04-12 제넨테크, 인크. 이종 폴리펩티드의 분비를 위한 방법 및 조성물
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
EP2509626B1 (en) 2009-12-11 2016-02-10 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-vegf-c antibodies and methods using same
HUE029026T2 (en) 2009-12-22 2017-01-30 Roche Glycart Ag Anti-HER3 antibodies and their applications
CA2784385A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Genentech, Inc. Anti-bv8 antibodies and uses thereof
RU2573994C2 (ru) * 2010-02-10 2016-01-27 Иммьюноджен, Инк Антитела против cd20 и их применение
RU2577702C2 (ru) 2010-02-11 2016-03-20 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг 3d-facs-анализ-adcc nk-клеток
US9556249B2 (en) 2010-02-18 2017-01-31 Genentech, Inc. Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
KR101899835B1 (ko) 2010-03-24 2018-09-19 제넨테크, 인크. 항-ｌｒｐ６ 항체
AR080793A1 (es) 2010-03-26 2012-05-09 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos
WO2011124635A1 (en) 2010-04-07 2011-10-13 Humalys Binding molecules against chikungunya virus and uses thereof
EP2374816B1 (en) 2010-04-07 2016-09-28 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
CA2795544A1 (en) 2010-04-27 2011-11-03 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a mtor inhibitor
CN103068378B (zh) 2010-05-10 2016-07-06 中央研究院 具有抗流感活性的扎那米韦膦酸酯同类物及其制备方法
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
RU2613886C2 (ru) 2010-06-03 2017-03-21 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты, визуализируемые при помощи иммуно-позитрон-эмиссионной томографии, и способы их применения
EP2582729A4 (en) 2010-06-18 2014-05-28 Hoffmann La Roche ANTI-AXL ANTIBODIES AND METHOD FOR THEIR USE
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
EP2591004A1 (en) 2010-07-09 2013-05-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-neuropilin antibodies and methods of use
NZ605400A (en) 2010-07-09 2015-05-29 Biogen Idec Hemophilia Inc Chimeric clotting factors
EP2409712A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC and CDC functions and improved glycosylation profile
EP2409993A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC function with improved glycosylation profile
EP2409989A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Method to improve glycosylation profile for antibody
FR2962908A1 (fr) 2010-07-20 2012-01-27 Lfb Biotechnologies Formulation d'anticorps anti-cd20
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
RU2013106216A (ru) 2010-08-03 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биомаркеры хронической лимфоцитарной лейкемии
KR20130049196A (ko) 2010-08-05 2013-05-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-mhc 항체 항-바이러스성 사이토카인 융합 단백질
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012020038A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-tenascin-c a2 antibodies and methods of use
CR20180142A (es) 2010-08-13 2018-04-05 Roche Glycart Ag ANTICUERPOS ANTI-FAP Y MÉTODOS DE USO(Divisional Exp: 2013-0038)
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
NZ604510A (en) 2010-08-17 2013-10-25 Csl Ltd Dilutable biocidal compositions and methods of use
AR082693A1 (es) * 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
WO2012025530A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment
CN103080132B (zh) 2010-08-25 2016-06-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗il-18r1的抗体及其用途
DK2612151T3 (en) 2010-08-31 2017-10-02 Genentech Inc BIOMARKETS AND METHODS OF TREATMENT
ES2862955T3 (es) 2010-10-01 2021-10-08 Modernatx Inc Acidos nucleicos manipulados y métodos de uso de los mismos
DK2625197T3 (en) 2010-10-05 2016-10-03 Genentech Inc Smoothened MUTANT AND METHODS OF USING THE SAME
KR20190120439A (ko) 2010-11-08 2019-10-23 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
EP2638070B1 (en) 2010-11-10 2016-10-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for neural disease immunotherapy
CN103443125B (zh) 2010-11-30 2019-05-03 霍夫曼-拉罗奇有限公司 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
AR084342A1 (es) 2010-12-16 2013-05-08 Genentech Inc Diagnostico y tratamientos relacionados con la inhibicion de th2
CN103261229A (zh) 2010-12-16 2013-08-21 罗切格利卡特公司 无岩藻糖基化cd20抗体与mdm2抑制剂的联合疗法
JP6253987B2 (ja) 2010-12-20 2017-12-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗メソテリン抗体及びイムノコンジュゲート
US20120195910A1 (en) 2010-12-22 2012-08-02 Genentech, Inc. Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
JP5766296B2 (ja) 2010-12-23 2015-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用
WO2012107416A2 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Roche Glycart Ag Improved immunotherapy
BR112013019975A2 (pt) 2011-02-28 2017-08-01 Hoffmann La Roche proteínas de ligação de antígeno, composição farmacêutica, uso de uma proteína de ligação de antígeno, método para o tratamento de um paciente e método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira"
EP2681240B1 (en) 2011-02-28 2017-08-16 F. Hoffmann-La Roche AG Monovalent antigen binding proteins
WO2012130831A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
US8710200B2 (en) 2011-03-31 2014-04-29 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression
MX342240B (es) 2011-04-07 2016-09-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr4 y metodos de uso.
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
JP5987053B2 (ja) 2011-05-12 2016-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド フレームワークシグネチャーペプチドを用いて動物サンプルにおける治療抗体を検出するための多重反応モニタリングｌｃ−ｍｓ／ｍｓ法
MX370233B (es) 2011-05-16 2019-12-06 Genentech Inc Antagonistas de fgfr1 y sus metodos de uso.
BR112013032235A2 (pt) 2011-06-15 2016-11-22 Hoffmann La Roche anticorpos do receptor de epo anti-humano e métodos de uso
FR2976811A1 (fr) 2011-06-22 2012-12-28 Lfb Biotechnologies Utilisation d'un anticorps anti-cd20 a haute adcc pour le traitement de la maladie de waldenstrom
BR112013029746B1 (pt) 2011-06-22 2021-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag método para a produção recombinante de um complexo, complexo, formulação farmacêutica e uso do complexo
KR20140045440A (ko) 2011-06-30 2014-04-16 제넨테크, 인크. 항-c-met 항체 제제
CN103890007A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 神经调节蛋白抗体及其用途
KR20140068877A (ko) 2011-08-17 2014-06-09 제넨테크, 인크. 불응성 종양에서의 혈관신생의 억제
RU2014109038A (ru) 2011-08-23 2015-09-27 Рош Гликарт Аг Антитела к хондроитинсульфат протеогликану меланомы
BR112014004168A2 (pt) 2011-08-23 2017-12-12 Roche Glycart Ag anticorpo biespecífico, composição farmacêutica, uso do anticorpo biespecífico, célula hospedeira procariótica ou eucariótica, método de produção de anticorpo e invenção
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
MX2014003094A (es) 2011-09-15 2014-04-25 Genentech Inc Metodos para promover diferenciacion.
BR112014006419A2 (pt) 2011-09-19 2018-08-07 Genentech Inc métodos para tratar um paciente com câncer, kit e artigo
EP2758435A1 (en) 2011-09-23 2014-07-30 Roche Glycart AG Bispecific anti-egfr/anti igf-1r antibodies
CN107287660A (zh) * 2011-09-30 2017-10-24 中外制药株式会社 离子浓度依赖性结合分子文库
EA035018B1 (ru) 2011-09-30 2020-04-17 Тева Фармасьютикал Австралия Пти Лтд. АНТИТЕЛА К TL1a И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
WO2013052523A1 (en) 2011-10-03 2013-04-11 modeRNA Therapeutics Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
AU2012319150B2 (en) 2011-10-05 2017-08-17 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using Notch2 antagonists
PT2766393T (pt) 2011-10-14 2018-10-15 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-htra1 e métodos de utilização
RU2014119426A (ru) 2011-10-15 2015-11-20 Дженентек, Инк. Способы применения антагонистов scd1
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
CA2852709A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Patrys Limited Pat-lm1 epitopes and methods for using same
AR088509A1 (es) 2011-10-28 2014-06-11 Genentech Inc Combinaciones terapeuticas y metodos para tratar el melanoma
CN103906533A (zh) 2011-11-07 2014-07-02 米迪缪尼有限公司 多特异性和多价结合蛋白及其用途
MX2014005885A (es) 2011-11-21 2014-09-04 Genentech Inc Purificacion de anticuerpos anti-c-met.
US20130302274A1 (en) * 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
US20140335084A1 (en) 2011-12-06 2014-11-13 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody formulation
CN104114572A (zh) 2011-12-16 2014-10-22 现代治疗公司 经修饰的核苷、核苷酸和核酸组合物
RS60499B1 (sr) 2011-12-20 2020-08-31 Medimmune Llc Modifikovani polipeptidi za bispecifične skelete antitela
SG11201403223PA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Hoffmann La Roche Expression vector organization, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides
SG10201700169PA (en) 2011-12-22 2017-02-27 Hoffmann La Roche Expression vector element combinations, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides
WO2013092720A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Full length antibody display system for eukaryotic cells and its use
AR089434A1 (es) 2011-12-23 2014-08-20 Genentech Inc Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas
CN104066449B (zh) 2012-01-18 2018-04-27 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗lrp5抗体及使用方法
CA2862424A1 (en) 2012-01-18 2013-07-25 Genentech, Inc. Methods of using fgf19 modulators
KR20140127854A (ko) 2012-02-10 2014-11-04 제넨테크, 인크. 단일-쇄 항체 및 다른 이종다량체
RU2014133069A (ru) 2012-02-11 2016-04-10 Дженентек, Инк. Транслокации r-спондина и способы с их использованием
JP6152120B2 (ja) 2012-02-15 2017-06-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｆｃ受容体に基づくアフィニティークロマトグラフィー
RU2014136886A (ru) 2012-03-27 2016-05-20 Дженентек, Инк. Диагностика и виды лечения, связанные с ингибиторами her3
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP2833920A2 (en) 2012-04-02 2015-02-11 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of biologics and proteins associated with human disease
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
BR112014027166A2 (pt) 2012-05-01 2017-06-27 Genentech Inc anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratamento, método de inibir proliferação e métodos de detecção.
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
EP2849723B1 (en) 2012-05-18 2018-05-02 Genentech, Inc. High-concentration monoclonal antibody formulations
EP2852618A2 (en) 2012-05-21 2015-04-01 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for improving safety of blood-brain barrier transport
RU2625771C2 (ru) 2012-05-23 2017-07-18 Дженентек, Инк. Способ отбора терапевтических средств
MX2014014830A (es) 2012-06-15 2015-05-11 Genentech Inc Anticuerpos anti-pcsk9, formulaciones, dosificacion y metodos de uso.
RU2015101699A (ru) 2012-06-21 2016-08-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Слитые полипептиды и конъюгаты полипептида лиганда рецептора инкретина и fc-области с измененной fc-эффекторной функцией
BR112014028368A2 (pt) 2012-06-27 2017-11-14 Hoffmann La Roche método de produção de conjugado de região fc de anticorpo, conjugado de região fc de anticorpo e formulação farmacêutica
CA2871880A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for selection and production of tailor-made highly selective and multi-specific targeting entities containing at least two different binding entities and uses thereof
WO2014004549A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
CA2872192A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-biotin antibodies and methods of use
CN107973856B (zh) 2012-07-04 2021-11-23 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 共价连接的抗原-抗体缀合物
BR112014030843A2 (pt) 2012-07-04 2019-10-15 Hoffmann La Roche anticorpo anti-teofilina, formulação farmacêutica e uso do anticorpo
CN110042114A (zh) 2012-07-05 2019-07-23 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达和分泌系统
BR112015000441A2 (pt) 2012-07-09 2017-12-19 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica e método de tratamento e método para inbir a proliferação de uma célula positiva para cd22
IN2014DN10652A (no) 2012-07-09 2015-09-11 Genentech Inc
EA201590173A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела к cd22
CN104411337A (zh) 2012-07-09 2015-03-11 基因泰克公司 包含抗cd79b抗体的免疫偶联物
MA37794B1 (fr) 2012-07-13 2017-07-31 Roche Glycart Ag Anticorps bispécifiques anti-vegf/anti-ang-2 et leur utilisation dans le cadre du traitement de pathologies vasculaires oculaires
TR201816437T4 (tr) 2012-08-07 2018-11-21 Roche Glycart Ag Azalmış ve artmış efektör fonksiyonuna sahip olacak şekilde tasarlanmış iki antikor içeren bileşim.
CA2880701A1 (en) 2012-08-18 2014-02-27 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
WO2014031762A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
EP3315514A1 (en) 2012-08-29 2018-05-02 F. Hoffmann-La Roche AG Blood brain barrier shuttle
KR102158467B1 (ko) * 2012-09-07 2020-09-25 제넨테크, 인크. Ｉｉ형 항-ｃｄ20 항체와 선택적 ｂｃｌ-2 억제제와의 병용 치료요법
ES2773107T3 (es) 2012-10-05 2020-07-09 Kyowa Kirin Co Ltd Composición de proteína heterodimérica
WO2014056783A1 (en) 2012-10-08 2014-04-17 Roche Glycart Ag Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use
EP2727941A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
US20150259430A1 (en) 2012-11-05 2015-09-17 Mab Discovery Gmbh Method for the production of multispecific antibodies
EP2727943A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Trispecific antibodies against human EGFR, HER2 and HER3
CA2890207A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
EP2727942A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Bispecific antibodies against human EGFR, HER2, and HER3
US9725512B2 (en) 2012-11-08 2017-08-08 Hoffmann-La Roche Inc. HER3 antibodies binding to the beta-hairpin of HER3
MA38176A1 (fr) 2012-11-13 2017-06-30 Genentech Inc Nouvel anticorps anti-hemagglutinine, utile pour le traitement, l'inhibition ou la prévention de l’infection virale a grippe a
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
EP3514175A1 (fr) 2012-12-17 2019-07-24 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Utilisation d'anticorps monoclonaux pour le traitement de l'inflammation et d'infections bacteriennes
AU2013360775B2 (en) 2012-12-21 2018-04-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Disulfide-linked multivalent MHC class I comprising multi-function proteins
US20140194368A1 (en) * 2013-01-04 2014-07-10 Beech Tree Labs, Inc. Method of Treating Cancer by Administration of Low Levels of Heat Shock Protein 70 (HSP70)
AR094403A1 (es) 2013-01-11 2015-07-29 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos anti-her3
RU2519546C1 (ru) 2013-01-16 2014-06-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Биоинтегратор" (Ооо "Биоинтегратор") КОНЪЮГАТЫ И МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С РЕЦЕПТОРОМ CD16а
US10980804B2 (en) 2013-01-18 2021-04-20 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
MX2015010023A (es) 2013-02-01 2017-11-17 Transbio Ltd Anticuerpos anti-cd83 y su uso.
US9340618B2 (en) 2013-02-07 2016-05-17 Csl Limited IL-11R binding proteins
ES2755181T3 (es) 2013-02-13 2020-04-21 Lab Francais Du Fractionnement Anticuerpos anti-TNF-alfa altamente galactosilados y usos de los mismos
CN104994879A (zh) 2013-02-22 2015-10-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 治疗癌症和预防药物抗性的方法
RU2015140921A (ru) 2013-02-26 2017-04-03 Роше Гликарт Аг Антитела к mcsp
KR20150122761A (ko) 2013-02-26 2015-11-02 로슈 글리카트 아게 Ｔ 세포 활성화 항원 결합 분자
SG11201504497TA (en) 2013-02-26 2015-09-29 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
JP2016510751A (ja) 2013-03-06 2016-04-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗がん剤耐性を治療及び予防する方法
US10251906B2 (en) * 2013-03-12 2019-04-09 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods for inducing apoptosis
EP3744345B1 (en) 2013-03-13 2022-02-09 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody formulations
CA2903480A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
BR112015022604A2 (pt) 2013-03-14 2017-10-24 Genentech Inc usos de um modulador de modificador de cromatina e um antagonista de egfr
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
MX2015010777A (es) 2013-03-14 2016-04-25 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-b7-h4.
US9587235B2 (en) 2013-03-15 2017-03-07 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-tRNA synthetase-Fc conjugates
SG11201507427QA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Genentech Inc Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers
BR112015023262B8 (pt) 2013-03-15 2024-02-06 Ac Immune Sa Anticorpo isolado, imunoconjugado, formulação farmacêutica e usos do anticorpo
UA118843C2 (uk) 2013-03-15 2019-03-25 Дженентек, Інк. ХИМЕРНИЙ БІЛОК IL-22 Fc ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
CN105143265A (zh) 2013-03-15 2015-12-09 豪夫迈·罗氏有限公司 抗CRTh2抗体及其用途
EP2968537A1 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
KR102158924B1 (ko) 2013-03-15 2020-09-22 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
KR102282134B1 (ko) 2013-04-29 2021-07-27 에프. 호프만-라 로슈 아게 인간 fcrn-결합 변형된 항체 및 사용 방법
WO2014177459A2 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
SG10201810481UA (en) 2013-04-29 2018-12-28 Hoffmann La Roche Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
CA2904040A1 (en) * 2013-05-02 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a cd22 antibody-drug conjugate
WO2014177615A2 (en) * 2013-05-02 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN AFUCOSYLATED CD20 ANTIBODY WITH A CD79b ANTIBODY-DRUG CONJUGATE
EP2999716A2 (en) 2013-05-20 2016-03-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
WO2014210397A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
US9981030B2 (en) 2013-06-27 2018-05-29 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
ME03476B (me) 2013-08-01 2020-01-20 Five Prime Therapeutics Inc Nefukozilisana anti-fgfr2iiib antitijela
AU2014312190A1 (en) 2013-08-28 2016-02-18 Bioasis Technologies Inc. CNS-targeted conjugates of antibodies
CA2923579C (en) 2013-09-06 2023-09-05 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
CN105518027A (zh) 2013-09-17 2016-04-20 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗lgr5抗体的方法
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
CN113667012A (zh) 2013-10-02 2021-11-19 免疫医疗有限责任公司 中和抗甲型流感抗体及其用途
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015054670A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Genentech, Inc. Nsp4 inhibitors and methods of use
WO2015052230A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
JP6502931B2 (ja) 2013-10-11 2019-04-17 アメリカ合衆国 Ｔｅｍ８抗体およびその使用
KR20160070136A (ko) 2013-10-18 2016-06-17 제넨테크, 인크. 항-rspo2 및/또는 항-rspo3 항체 및 그의 용도
RU2016119425A (ru) 2013-10-23 2017-11-28 Дженентек, Инк. Способы диагностики и лечения эозинофильных заболеваний
EP3071597B1 (en) 2013-11-21 2020-07-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
WO2015082446A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of cancer using an anti-cdcp1 antibody and a taxane
LT3079719T (lt) 2013-12-09 2019-12-10 Allakos Inc Antikūnai prieš siglec-8 ir jų panaudojimo būdai
WO2015089344A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Genentech, Inc. Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
MX2016007958A (es) 2013-12-17 2016-08-03 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd3 y metodos de uso.
NZ720515A (en) 2013-12-17 2022-12-23 Genentech Inc Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
CN105899535A (zh) 2013-12-17 2016-08-24 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂和抗cd20抗体治疗癌症的方法
CA2934028A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
TWI670283B (zh) 2013-12-23 2019-09-01 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CN105873616B (zh) 2014-01-03 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 共价连接的多肽毒素-抗体缀合物
CN105873615B (zh) 2014-01-03 2020-12-25 豪夫迈·罗氏有限公司 共价连接的helicar-抗helicar抗体缀合物及其用途
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2015101586A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
PL3092251T3 (pl) 2014-01-06 2021-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Jednowartościowe moduły transportera wahadłowego przez barierę krew-mózg
CA2931986A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
TW201620939A (zh) 2014-01-16 2016-06-16 中央研究院 治療及檢測癌症之組合物及方法
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
BR112016015693A2 (pt) 2014-01-24 2017-10-24 Genentech Inc método para tratar um câncer de próstata e anticorpo
DK3102197T3 (en) 2014-02-04 2018-11-19 Genentech Inc Smoothened mutant and methods for its use
PL3102230T3 (pl) 2014-02-08 2021-11-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Sposoby leczenia choroby Alzheimera
AU2015214058B2 (en) 2014-02-08 2020-07-09 Genentech, Inc. Methods of treating Alzheimer's Disease
AR099465A1 (es) 2014-02-12 2016-07-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-jagged1 y métodos de uso
MX2016010729A (es) 2014-02-21 2016-10-26 Genentech Inc Anticuerpos biespecificos anti-il-13 / il-17 y sus usos.
EP4014995A1 (en) 2014-02-28 2022-06-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating siglec-8 associated diseases
PL3116999T3 (pl) 2014-03-14 2021-12-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Sposoby i kompozycje do wydzielania polipeptydów heterologicznych
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
MA39776A (fr) 2014-03-24 2017-02-01 Hoffmann La Roche Traitement du cancer avec des antagonistes de c-met et corrélation de ces derniers avec l'expression de hgf
JP6562942B2 (ja) 2014-03-27 2019-08-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 反応性標識化合物およびその使用
RU2016142476A (ru) 2014-03-31 2018-05-07 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия, включающая антиангиогенезные агенты и агонисты, связывающие ох40
MA51552A (fr) 2014-03-31 2021-03-24 Hoffmann La Roche Anticorps anti-ox40 et procédés d'utilisation
US10160812B2 (en) 2014-04-11 2018-12-25 Medimmune, Llc Bispecific HER2 antibodies
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
RU2016150370A (ru) 2014-05-22 2018-06-26 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты против GPC3
KR20170005016A (ko) 2014-05-23 2017-01-11 제넨테크, 인크. MiT 바이오마커 및 그의 사용 방법
AU2015267045B2 (en) 2014-05-27 2021-02-25 Academia Sinica Anti-HER2 glycoantibodies and uses thereof
JP2017518989A (ja) 2014-05-27 2017-07-13 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 抗ｃｄ２０糖操作抗体群およびその使用
WO2015184008A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Academia Sinica Fucosidase from bacteroides and methods using the same
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
TWI732738B (zh) 2014-05-28 2021-07-11 中央研究院 抗TNF-α醣抗體及其用途
CN106714830B (zh) 2014-05-30 2020-08-25 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗表皮生长因子受体(egfr)抗体
CA2949982A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Genentech, Inc. Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
EP3154589A1 (en) 2014-06-13 2017-04-19 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
CA2947504A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-brdu antibodies and methods of use
JP7032929B2 (ja) 2014-07-11 2022-03-09 ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． 抗ｐｄ－ｌ１抗体及びその診断上の使用
CN106488775A (zh) 2014-07-11 2017-03-08 基因泰克公司 Notch途径抑制
PE20170263A1 (es) * 2014-08-04 2017-03-30 Hoffmann La Roche Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
JP7286267B2 (ja) 2014-08-28 2023-06-05 バイオアトラ インコーポレイテッド 修飾ｔ細胞に対する条件的活性型キメラ抗原受容体
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
CA2960712A1 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids
EP3567056A1 (en) * 2014-09-10 2019-11-13 F. Hoffmann-La Roche AG Galactoengineered immunoglobulin 1 antibodies
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
JP7085837B2 (ja) 2014-09-12 2022-06-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体及び免疫複合体
PE20170670A1 (es) 2014-09-12 2017-06-06 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados
CA2959545A1 (en) 2014-09-15 2016-03-24 Genentech, Inc. Antibody formulations
KR20170055521A (ko) 2014-09-17 2017-05-19 제넨테크, 인크. 항-her2 항체를 포함하는 면역콘주게이트
LT3262071T (lt) 2014-09-23 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd79b imunokonjugatų naudojimo būdai
US9732148B2 (en) 2014-10-16 2017-08-15 Genentech, Inc. Anti-α-synuclein antibodies and methods of use
US10870704B2 (en) 2014-10-23 2020-12-22 Kira Biotech Pty Limited CD83 binding proteins and uses thereof
US10626176B2 (en) 2014-10-31 2020-04-21 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind B7-H4
CN107109484B (zh) 2014-11-03 2021-12-14 豪夫迈·罗氏有限公司 用于ox40激动剂治疗的功效预测和评估的方法和生物标志物
CN106796235B (zh) 2014-11-03 2021-01-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于检测t细胞免疫子集的测定法及其使用方法
RU2017119185A (ru) 2014-11-05 2018-12-05 Дженентек, Инк. Антитела против fgfr2/3 и способы их применения
JP6576456B2 (ja) 2014-11-06 2019-09-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 修飾されたＦｃＲｎ結合特性およびプロテインＡ結合特性を有するＦｃ領域変種
WO2016071376A2 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn-binding and methods of use
CN107073126A (zh) 2014-11-06 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和tigit抑制剂的组合疗法
EP3552488A1 (en) 2014-11-10 2019-10-16 F. Hoffmann-La Roche AG Animal model for nephropathy and agents for treating the same
EP3218403B1 (en) 2014-11-10 2020-05-13 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
HUE049982T2 (hu) 2014-11-14 2020-11-30 Hoffmann La Roche TNF-családba tartozó ligandum-trimert tartalmazó antigénkötõ molekulák
EP3218397B8 (en) 2014-11-14 2021-04-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
BR112017010198A2 (pt) 2014-11-17 2017-12-26 Genentech Inc terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação a ox40 e antagonistas de ligação ao eixo de pd-1
CN107108745B (zh) 2014-11-19 2021-01-12 基因泰克公司 抗bace1的抗体和其用于神经疾病免疫疗法的用途
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
US11008403B2 (en) 2014-11-19 2021-05-18 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-BACE1 multispecific antibodies and methods of use
SG11201704056XA (en) 2014-11-20 2017-06-29 Hoffmann La Roche Combination therapy of t cell activating bispecific antigen binding molecules cd3 abd folate receptor 1 (folr1) and pd-1 axis binding antagonists
PL3227332T3 (pl) 2014-12-03 2020-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Wielospecyficzne przeciwciała
US9975949B2 (en) 2014-12-05 2018-05-22 Genentech, Inc. Anti-CD79b antibodies and methods of use
WO2016094566A2 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Genentech, Inc. Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
PT3233921T (pt) 2014-12-19 2021-12-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpos anti-c5 e processos para a sua utilização
WO2016111947A2 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
CN107428833B (zh) 2015-01-16 2021-11-02 朱诺治疗学股份有限公司 Ror1特异性抗体和嵌合抗原受体
CN113956354A (zh) 2015-01-22 2022-01-21 中外制药株式会社 两种以上抗-c5抗体的组合与使用方法
JP6779887B2 (ja) 2015-01-24 2020-11-04 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 新規なグリカンコンジュゲートおよびその使用方法
JP2018512597A (ja) 2015-02-04 2018-05-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 突然変異体スムースンド及びその使用方法
US9969800B2 (en) 2015-02-05 2018-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha IL-8 antibodies
WO2016138160A1 (en) 2015-02-24 2016-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
CN107430117A (zh) 2015-03-16 2017-12-01 豪夫迈·罗氏有限公司 检测和定量IL‑13的方法和在诊断和治疗Th2相关疾病中的用途
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
WO2016154003A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
RU2742241C2 (ru) 2015-03-23 2021-02-04 Джоунс Терапьютикс, Инк. Антитела к icos
CN107743495B (zh) 2015-03-23 2021-05-14 拜耳制药股份公司 抗ceacam6抗体及其用途
EP3277314A4 (en) 2015-04-03 2018-08-29 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
SI3286315T1 (sl) 2015-04-24 2021-09-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek identifikacije bakterij, ki obsegajo vezavne polipeptide
CN107708986B (zh) * 2015-04-30 2019-12-13 富士胶片株式会社 装饰片
WO2016179003A1 (en) 2015-05-01 2016-11-10 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
JP6963508B2 (ja) 2015-05-11 2021-11-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎を治療する組成物及び方法
JP7048319B2 (ja) 2015-05-12 2022-04-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌のための治療方法及び診断方法
JP7144935B2 (ja) 2015-05-29 2022-09-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌のための治療方法及び診断方法
CN107771182A (zh) 2015-05-29 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化抗埃博拉病毒糖蛋白抗体和使用方法
CN107810012A (zh) 2015-06-02 2018-03-16 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗il‑34抗体治疗神经疾病的组合物和方法
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
BR112017025995A2 (pt) 2015-06-04 2018-08-14 Ospedale San Raffaele S.R.L. inibidor de igfbp3, composição farmacêutica para uso no tratamento e/ou prevenção de um distúrbio intestinal, método para o diagnóstico de um distúrbio intestinal em um indivíduo e kit para o diagnóstico de um distúrbio intestinal
MX367312B (es) 2015-06-04 2019-08-14 Ospedale San Raffaele Srl Inhibidor del eje igrbp3/tmem219 y diabetes.
US10112990B2 (en) 2015-06-05 2018-10-30 Genentech, Inc. Anti-Tau antibodies and methods of use
MX2017014740A (es) 2015-06-08 2018-08-15 Genentech Inc Métodos de tratamiento del cáncer con anticuerpos anti-ox40.
MX2017015937A (es) 2015-06-08 2018-12-11 Genentech Inc Métodos de tratamiento del cáncer con anticuerpos anti-ox40 y antagonistas de unión al eje de pd-1.
EP3307780A1 (en) 2015-06-15 2018-04-18 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates
JP6996983B2 (ja) 2015-06-16 2022-02-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｌｌ－１抗体及び使用方法
JP2018526972A (ja) 2015-06-16 2018-09-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３抗体及び使用方法
CR20180031A (es) 2015-06-16 2018-05-07 Genentech Inc Anticuerpos madurados por afinidad y humanizados para fcrh5 y métodos para su uso
WO2016205531A2 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and methods of use
CA2987797A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Christopher Robert Bebbington Methods and compositions for treating fibrotic diseases
EP3310815A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
LT3313879T (lt) 2015-06-24 2022-03-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš transferino receptorių su pritaikytu giminingumu
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
JP6811733B2 (ja) * 2015-06-24 2021-01-13 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト リンパ腫又は白血病におけるリンパ球増加症を誘導することにおける使用のためのヒトｃｓｆ−１ｒに対する抗体
WO2016207304A2 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Mab Discovery Gmbh Monoclonal anti-il-1racp antibodies
WO2017001350A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
CA2989936A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
EP3932953A1 (en) 2015-08-28 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hypusine antibodies and uses thereof
JP6904947B2 (ja) 2015-09-22 2021-07-21 スプリング バイオサイエンス コーポレーション 抗ｏｘ４０抗体及びその診断用途
CN116987187A (zh) 2015-09-23 2023-11-03 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-vegf抗体的优化的变体
BR112018005931A2 (pt) 2015-09-24 2018-10-09 Abvitro Llc composições de anticorpo para hiv e métodos de uso
JP2018535655A (ja) 2015-09-29 2018-12-06 アムジエン・インコーポレーテツド Ａｓｇｒ阻害剤
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
PE20240096A1 (es) 2015-10-02 2024-01-18 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos especificos para un receptor de tnf coestimulador
CN107849137B (zh) 2015-10-02 2021-11-26 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗ceaxcd3 t细胞活化性抗原结合分子
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
NZ741067A (en) 2015-10-02 2023-07-28 Hoffmann La Roche Bispecific anti-human cd20/human transferrin receptor antibodies and methods of use
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
MY192202A (en) 2015-10-02 2022-08-06 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
JP7074665B2 (ja) 2015-10-07 2022-05-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 共刺激ｔｎｆ受容体に対する四価の二重特異性抗体発明の分野
CA2997809A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
CA2998208A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
WO2017072210A1 (en) 2015-10-29 2017-05-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-variant fc-region antibodies and methods of use
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
MX2018004509A (es) 2015-10-30 2018-08-01 Genentech Inc Anticuerpos anti-htra1 y metodos de uso de los mismos.
WO2017075173A2 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Genentech, Inc. Anti-factor d antibodies and conjugates
WO2017079479A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use
WO2017079768A1 (en) 2015-11-08 2017-05-11 Genentech, Inc. Methods of screening for multispecific antibodies
WO2017091580A1 (en) 2015-11-23 2017-06-01 Five Prime Therapeutics, Inc. Predicting response to cancer treatment with fgfr2 inhibitors
WO2017097723A2 (en) * 2015-12-09 2017-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment method
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
CA3005592C (en) 2015-12-18 2024-01-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c5 antibodies and methods of use
ES2837428T3 (es) 2016-01-08 2021-06-30 Hoffmann La Roche Procedimientos de tratamiento de cánceres positivos para CEA usando antagonistas de unión al eje PD-1 y anticuerpos biespecíficos anti-CEA/anti-CD3
CN114113625A (zh) 2016-01-20 2022-03-01 基因泰克公司 用于阿尔茨海默氏病的高剂量治疗
JP2019509721A (ja) 2016-02-04 2019-04-11 キュリス，インコーポレイテッド 突然変異体スムースンド及びその使用方法
JP6821693B2 (ja) 2016-02-29 2021-01-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんのための治療方法及び診断方法
CN108699155B (zh) * 2016-03-01 2023-03-21 豪夫迈·罗氏有限公司 具有改变的细胞死亡诱导的奥滨尤妥珠单抗变体
CN109195996A (zh) 2016-03-08 2019-01-11 中央研究院 N-聚醣及其阵列的模组化合成方法
ES2904286T3 (es) 2016-03-15 2022-04-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Métodos de tratamiento de cánceres que emplean antagonistas que se unen al eje PD-1 y anticuerpos anti-GPC3
ES2947230T3 (es) 2016-03-22 2023-08-03 Hoffmann La Roche Moléculas biespecíficas para linfocitos T activadas por proteasa
CN108700598A (zh) 2016-03-25 2018-10-23 豪夫迈·罗氏有限公司 多路总抗体和抗体缀合的药物量化测定法
KR102370762B1 (ko) 2016-03-31 2022-03-04 엔지엠 바이오파마슈티컬스, 아이엔씨. 결합 단백질 및 이의 사용 방법
US20170319688A1 (en) 2016-04-14 2017-11-09 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
SG11201808994YA (en) 2016-04-15 2018-11-29 Bioatla Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
WO2017181079A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
KR20190003958A (ko) 2016-04-15 2019-01-10 제넨테크, 인크. 암의 치료 및 모니터링 방법
PE20181890A1 (es) 2016-05-02 2018-12-11 Hoffmann La Roche Contorsbody - un ligante de diana monocatenario
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
EP3241845A1 (en) 2016-05-06 2017-11-08 MAB Discovery GmbH Humanized anti-il-1r3 antibodies
CN109071640B (zh) 2016-05-11 2022-10-18 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰抗生腱蛋白抗体及使用方法
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
CN109071652B (zh) 2016-05-11 2022-09-23 豪夫迈·罗氏有限公司 包含tnf家族配体三聚体和生腱蛋白结合模块的抗原结合分子
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
ES2930255T3 (es) 2016-05-13 2022-12-09 Bioatla Inc Anticuerpos anti-Ror2, fragmentos de anticuerpos, sus inmunoconjugados y usos de los mismos
JP2019522633A (ja) 2016-05-20 2019-08-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｒｏｔａｃ抗体コンジュゲート及び使用方法
WO2017205741A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Genentech, Inc. Bioanalytical method for the characterization of site-specific antibody-drug conjugates
CA3059010A1 (en) 2016-06-02 2018-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3257866A1 (en) 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
JP7133477B2 (ja) 2016-06-24 2022-09-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ポリユビキチン多重特異性抗体
KR20190025855A (ko) * 2016-06-30 2019-03-12 에프. 호프만-라 로슈 아게 개선된 입양 t-세포 요법
JP6983824B2 (ja) 2016-07-04 2021-12-17 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 新規抗体フォーマット
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US20240018268A1 (en) 2016-07-29 2024-01-18 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies against anti-cd19 antibodies
MX2018015721A (es) 2016-07-29 2019-05-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos biespecificos que exhiben actividad de funcion de cofactor fviii alternativa mejorada.
SG11201801024XA (en) 2016-08-05 2018-05-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Therapeutic or preventive compositions for il-8-related diseases
CN109476748B (zh) 2016-08-08 2023-05-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的治疗和诊断方法
CA3034057A1 (en) 2016-08-22 2018-03-01 CHO Pharma Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
US10870694B2 (en) 2016-09-02 2020-12-22 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018049083A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3515932B1 (en) 2016-09-19 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Complement factor based affinity chromatography
EP4268845A3 (en) 2016-09-23 2024-02-28 F. Hoffmann-La Roche AG Uses of il-13 antagonists for treating atopic dermatitis
CN109843926B (zh) 2016-09-30 2023-01-20 豪夫迈·罗氏有限公司 针对cd3的双特异性抗体
US11072660B2 (en) 2016-10-03 2021-07-27 Juno Therapeutics, Inc. HPV-specific binding molecules
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
EP3523451A1 (en) 2016-10-06 2019-08-14 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
JP2019535250A (ja) 2016-10-29 2019-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｍｉｃ抗体及び使用方法
HUE057559T2 (hu) 2016-11-02 2022-06-28 Jounce Therapeutics Inc PD-1 elleni antitestek és alkalmazásaik
EP3541843A1 (en) 2016-11-15 2019-09-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
CN110023334B (zh) 2016-11-21 2023-11-14 科雅博有限责任公司 抗gp73抗体和免疫偶联物
KR20230146126A (ko) 2016-12-07 2023-10-18 제넨테크, 인크. 항-타우 항체 및 이의 이용 방법
CN117820467A (zh) 2016-12-07 2024-04-05 基因泰克公司 抗tau抗体和使用方法
AU2017375946A1 (en) 2016-12-12 2019-06-20 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-PD-l1 antibodies and antiandrogens
TWI829628B (zh) 2016-12-19 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與靶向4-1bb (cd137)促效劑併用之組合療法
WO2018114748A1 (en) 2016-12-20 2018-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and 4-1bb (cd137) agonists
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
TW201829469A (zh) 2017-01-03 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 包含抗4-1bb純系20h4.9之雙特異性抗原結合分子
WO2018129029A1 (en) 2017-01-04 2018-07-12 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US11274157B2 (en) 2017-01-12 2022-03-15 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting histone H3 peptide/MHC complexes and uses thereof
MY197534A (en) 2017-02-10 2023-06-21 Genentech Inc Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof
EP3580235A1 (en) 2017-02-10 2019-12-18 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
MX2019010295A (es) 2017-03-01 2019-11-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
EP3600442A1 (en) 2017-03-22 2020-02-05 Genentech, Inc. Optimized antibody compositions for treatment of ocular disorders
SG10201911225WA (en) 2017-03-28 2020-01-30 Genentech Inc Methods of treating neurodegenerative diseases
EP3601345A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JP7205995B2 (ja) 2017-03-29 2023-01-17 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 共刺激性ｔｎｆ受容体に対する二重特異性抗原結合分子
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
RU2766234C2 (ru) 2017-04-04 2022-02-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Новые биспецифические антигенсвязывающие молекулы, обладающие способностью специфически связываться с cd40 и fap
CN116375876A (zh) 2017-04-05 2023-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 特异性结合pd1和lag3的双特异性抗体
CN110770255A (zh) 2017-04-11 2020-02-07 印希彼有限公司 具有受限cd3结合的多特异性多肽构建体及其使用方法
CN110621787A (zh) 2017-04-14 2019-12-27 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的诊断和治疗方法
EP3612215A4 (en) 2017-04-20 2021-05-26 aTyr Pharma, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF Pneumonia
SG11201909048TA (en) 2017-04-21 2019-11-28 Genentech Inc Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
KR20200012860A (ko) 2017-04-26 2020-02-05 유레카 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 글리피칸 3을 특이적으로 인식하는 구축물 및 그의 용도
CN110799541A (zh) 2017-04-27 2020-02-14 特沙诺有限公司 针对淋巴细胞活化基因-3(lag-3)的抗体药剂及其用途
CN110831628A (zh) 2017-05-05 2020-02-21 爱乐科斯公司 用于治疗过敏性眼病的方法和组合物
EP3401332A1 (en) 2017-05-08 2018-11-14 MAB Discovery GmbH Anti-il-1r3 antibodies for use in inflammatory conditions
CN110621336A (zh) 2017-05-16 2019-12-27 戊瑞治疗有限公司 癌症治疗中抗fgfr2抗体与化学治疗剂的组合
WO2019011918A1 (en) 2017-07-10 2019-01-17 International - Drug - Development - Biotech TREATMENT OF LYMPHOCYTE B MALIGNANCIES USING AFUCOSYLATED PRO-APOPTOTIC ANTI-CD19 ANTIBODIES IN COMBINATION WITH ANTI-CD20 ANTIBODIES OR CHEMOTHERAPEUTIC AGENTS
AU2018304458B2 (en) 2017-07-21 2021-12-09 Foundation Medicine, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
ES2963157T3 (es) 2017-07-26 2024-03-25 Forty Seven Inc Anticuerpos anti-SIRP-alfa y métodos relacionados
JP2020528061A (ja) 2017-07-26 2020-09-17 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を用いた併用療法
KR20200035441A (ko) 2017-08-08 2020-04-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 Dlbcl 환자 하위그룹의 오비누투주맙 치료
CN107881160A (zh) 2017-08-11 2018-04-06 百奥泰生物科技(广州)有限公司 一种由基因组被编辑的cho宿主细胞产生的具有独特糖谱的重组抗体及其制备方法
CN111511762A (zh) 2017-08-21 2020-08-07 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
EP3456738A1 (en) * 2017-09-19 2019-03-20 Tillotts Pharma Ag Antibody variants
JP7382922B2 (ja) 2017-09-20 2023-11-17 中外製薬株式会社 Ｐｄ－１系結合アンタゴニストおよびｇｐｃ３標的化剤を使用する併用療法のための投与レジメン
EP3692063A1 (en) 2017-10-03 2020-08-12 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
CA3078974A1 (en) 2017-10-12 2019-04-18 Immunowake Inc. Vegfr-antibody light chain fusion protein
AU2018303836A1 (en) 2017-10-19 2020-05-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of CD20-positive B-cell lymphoma with obituzumab
CN111246884A (zh) 2017-11-01 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的含有tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
CA3079036A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with targeted ox40 agonists
EP3703821A2 (en) 2017-11-01 2020-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific 2+1 contorsbodies
JP7256197B2 (ja) 2017-11-01 2023-04-11 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｂ細胞成熟抗原に特異的な抗体およびキメラ抗原受容体
MX2020004567A (es) 2017-11-06 2020-08-13 Genentech Inc Metodos diagnosticos y terapeuticos para el cancer.
BR112020010753A2 (pt) 2017-12-01 2020-11-24 The Regents Of The University Of California anticorpos anti-cxcr5 e composições e usos dos mesmos
JP2021506817A (ja) 2017-12-14 2021-02-22 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療するための投与計画におけるｃｅａ ｃｄ３二重特異性抗体及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストの使用
US20210070845A1 (en) 2017-12-15 2021-03-11 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
AU2018389111A1 (en) 2017-12-22 2020-06-18 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to LILRB2
TW201929907A (zh) 2017-12-22 2019-08-01 美商建南德克公司 Pilra結合劑用於治療疾病之用途
KR20200104886A (ko) 2017-12-28 2020-09-04 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-l1에 대한 항체 및 변이체
EP3732202A4 (en) 2017-12-28 2022-06-15 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. SINGLE DOMAIN ANTIBODIES AND VARIANTS THEREOF AGAINST TIGIT
US20210079067A1 (en) 2018-01-02 2021-03-18 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
AU2019205090A1 (en) 2018-01-05 2020-08-06 Ac Immune Sa Misfolded TDP-43 binding molecules
EP3508499A1 (en) 2018-01-08 2019-07-10 iOmx Therapeutics AG Antibodies targeting, and other modulators of, an immunoglobulin gene associated with resistance against anti-tumour immune responses, and uses thereof
WO2019137541A1 (en) 2018-01-15 2019-07-18 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against pd-1
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
KR20200115546A (ko) 2018-01-26 2020-10-07 제넨테크, 인크. IL-22 Fc 융합 단백질 및 사용 방법
BR112020015016A2 (pt) 2018-01-26 2020-12-29 Genentech, Inc. Composições farmacêuticas, métodos de tratamento da doença inflamatória intestinal, de inibição da infecção microbiana no intestino e de aceleração ou melhora da cicatrização de feridas
CA3081125A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Fully humanized anti-b cell maturation antigen (bcma) single-chain antibody and use thereof
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
PE20211116A1 (es) 2018-02-08 2021-06-23 Genentech Inc Moleculas biespecificas de union al antigeno y metodos de uso
CA3226165A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
EP3752530A1 (en) 2018-02-14 2020-12-23 ABBA Therapeutics AG Anti-human pd-l2 antibodies
AU2019226085A1 (en) 2018-02-21 2020-09-17 Genentech, Inc. Dosing for treatment with IL-22 Fc fusion proteins
RU2020130795A (ru) 2018-02-21 2022-03-21 Дзе Юнайтед Стэйтс Оф Америка, Эс Репрезентед Бай Дзе Секретэри, Департмент Оф Хелт Энд Хьюман Сервисиз Нейтрализующие антитела к env вич-1 и их применение
US20200399376A1 (en) 2018-02-26 2020-12-24 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
TW202003561A (zh) 2018-03-13 2020-01-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
AU2019236372A1 (en) 2018-03-13 2020-07-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 BB agonists with anti-CD20 antibodies
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
US11485782B2 (en) 2018-03-14 2022-11-01 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibodies
CN116327926A (zh) 2018-03-15 2023-06-27 中外制药株式会社 对寨卡病毒具有交叉反应性的抗登革热病毒抗体及使用方法
CA3092589A1 (en) 2018-03-21 2019-09-26 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
CN111886254B (zh) 2018-03-30 2023-12-08 南京传奇生物科技有限公司 针对lag-3的单结构域抗体及其用途
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
SG11202009284TA (en) 2018-04-05 2020-10-29 Juno Therapeutics Inc T cell receptors and engineered cells expressing same
AU2019251488A1 (en) 2018-04-11 2020-10-22 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained CD3 binding and related methods and uses
WO2019197600A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Her2-targeting antigen binding molecules comprising 4-1bbl
EP3560945A1 (en) 2018-04-27 2019-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for purification of polypeptides using polysorbates
EP3805400A4 (en) 2018-06-04 2022-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
JP2021528439A (ja) 2018-06-22 2021-10-21 ゲンマブ ホールディング ビー．ブイ． 抗ｃｄ３７抗体および抗ｃｄ２０抗体、組成物、ならびにそれらの使用方法
BR112020026384A2 (pt) 2018-06-23 2021-03-30 Genentech, Inc. Métodos para tratar um indivíduo com câncer de pulmão e para tratar um indivíduo com câncer de pulmão de pequenas células, kits, anticorpo anti-pd-l1 e composição
TW202035447A (zh) 2018-07-04 2020-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎雙特異性促效性4-1bb抗原結合分子
JP7411627B2 (ja) 2018-07-09 2024-01-11 ファイヴ プライム セラピューティクス インク Ｉｌｔ４と結合する抗体
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
MX2021000213A (es) 2018-07-11 2021-03-25 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos de union al supresor de activacion de linfocitos t que contiene inmunoglobulina con dominio v (vista) a ph acidico.
CA3104147A1 (en) 2018-07-18 2020-01-23 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
BR112021000727A2 (pt) 2018-07-20 2021-04-13 Surface Oncology, Inc. Composições anti-cd112r e métodos
JP2021531785A (ja) 2018-07-24 2021-11-25 インヒブルクス インコーポレイテッド 制約されたｃｄ３結合ドメインおよび受容体結合領域を含有する多重特異性ポリペプチド構築物ならびにそれを使用する方法
JPWO2020027330A1 (ja) 2018-08-03 2021-08-19 中外製薬株式会社 互いに連結された２つの抗原結合ドメインを含む抗原結合分子
EP3608674A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor
SG10202106830VA (en) 2018-08-10 2021-08-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-cd137 antigen-binding molecule and utilization thereof
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020061060A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
EP4249917A3 (en) 2018-09-21 2023-11-08 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
AU2019347751A1 (en) 2018-09-27 2021-04-29 Xilio Development, Inc. Masked cytokine polypeptides
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
MX2021003548A (es) 2018-10-01 2021-05-27 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno biespecificas que comprenden el clon 212 anti-fap.
EP3632929A1 (en) 2018-10-02 2020-04-08 Ospedale San Raffaele S.r.l. Antibodies and uses thereof
KR20210074286A (ko) 2018-10-05 2021-06-21 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 항-fgfr2 항체 제형
AU2019356573A1 (en) 2018-10-11 2021-05-27 Inhibrx, Inc. PD-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
EP3867646A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
WO2020089380A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Bayer Aktiengesellschaft REVERSAL AGENTS FOR NEUTRALIZING THE THERAPEUTIC ACTIVITY OF ANTI-FXIa ANTIBODIES
EP3880714A4 (en) 2018-11-16 2022-07-20 Memorial Sloan Kettering Cancer Center ANTIBODIES TO MUCIN-16 AND METHODS OF USE THEREOF
JP2022511502A (ja) 2018-12-05 2022-01-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの免疫療法のための診断方法及び診断用組成物
WO2020117257A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Genentech, Inc. Combination therapy of diffuse large b-cell lymphoma comprising an anti-cd79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-cd20 antibody
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
AR117453A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Genentech Inc Fc de anticuerpos modificados y métodos para utilizarlas
EP3883609A2 (en) 2018-12-20 2021-09-29 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
JP2022513495A (ja) 2018-12-21 2022-02-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 腫瘍標的化スーパーアゴニストｃｄ２８抗原結合分子
CN113286821A (zh) 2018-12-21 2021-08-20 豪夫迈·罗氏有限公司 靶向肿瘤的激动性cd28抗原结合分子
MX2021007768A (es) 2018-12-26 2021-08-24 Xilio Dev Inc Anticuerpos anti-ctla4 y metodos de uso de los mismos.
WO2020141145A1 (en) 2018-12-30 2020-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-rabbit cd19 antibodies and methods of use
TW202043272A (zh) 2019-01-14 2020-12-01 美商建南德克公司 使用pd-1軸結合拮抗劑及rna疫苗治療癌症之方法
US20220128561A1 (en) 2019-01-17 2022-04-28 Bayer Aktiengesellschaft Methods to determine whether a subject is suitable of being treated with an agonist of soluble gyanylyl cyclase (sgc)
CN113329770A (zh) 2019-01-24 2021-08-31 中外制药株式会社 新型癌抗原及所述抗原的抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
MA54863A (fr) 2019-01-29 2021-12-08 Juno Therapeutics Inc Anticorps et récepteurs antigéniques chimériques spécifiques du récepteur orphelin-1 de type récepteur à tyrosine kinase (ror1)
JP2022521773A (ja) 2019-02-27 2022-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体と抗ｃｄ２０抗体又は抗ｃｄ３８抗体とによる処置のための投薬
KR20210138588A (ko) 2019-03-08 2021-11-19 제넨테크, 인크. 세포외 소포 상에서 막 관련 단백질을 검출하고 정량하기 위한 방법
TW202100556A (zh) 2019-03-14 2021-01-01 美商建南德克公司 使用her2 t細胞依賴性雙特異性抗體之治療
CN113677403A (zh) 2019-04-12 2021-11-19 豪夫迈·罗氏有限公司 包含脂质运载蛋白突变蛋白的双特异性抗原结合分子
WO2020214995A1 (en) 2019-04-19 2020-10-22 Genentech, Inc. Anti-mertk antibodies and their methods of use
US20220143094A1 (en) 2019-04-19 2022-05-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chimeric receptor that recognizes engineered site in antibody
EP3962947A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
WO2020227228A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
AU2020275415A1 (en) 2019-05-14 2021-11-25 Genentech, Inc. Methods of using anti-CD79B immunoconjugates to treat follicular lymphoma
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
MX2021014274A (es) 2019-05-23 2022-01-06 Ac Immune Sa Moleculas de union anti-tdp-43 y usos de las mismas.
BR112021023735A2 (pt) * 2019-06-05 2022-01-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula de ligação de sítio de clivagem de anti-corpo
AU2020304813A1 (en) 2019-06-26 2022-01-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fusion of an antibody binding CEA and 4-1BBL
EP3990492A1 (en) 2019-06-27 2022-05-04 F. Hoffmann-La Roche AG Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
AU2020299382A1 (en) 2019-07-02 2022-01-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind EGFRvIII and their use
CA3146023A1 (en) 2019-07-05 2021-01-14 Iomx Therapeutics Ag Antibodies binding igc2 of igsf11 (vsig3) and uses thereof
JPWO2021010326A1 (no) 2019-07-12 2021-01-21
CN114641490B (zh) 2019-08-06 2023-06-06 新旭生技股份有限公司 结合至病理性tau种类的抗体及其用途
TW202118512A (zh) 2019-09-12 2021-05-16 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎之組成物及方法
JP2022548292A (ja) 2019-09-19 2022-11-17 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体
US20220348687A1 (en) 2019-09-20 2022-11-03 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
JP2022548978A (ja) 2019-09-27 2022-11-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 薬抗ｔｉｇｉｔ及び抗ｐｄ－ｌ１アンタゴニスト抗体を用いた処置のための投薬
TW202122114A (zh) 2019-10-18 2021-06-16 美商建南德克公司 使用抗CD79b 免疫偶聯物治療彌漫性大B 細胞淋巴瘤的方法
MX2022005400A (es) 2019-11-06 2022-05-24 Genentech Inc Metodos de diagnostico y terapeuticos para el tratamiento de canceres hematologicos.
CN116478292A (zh) 2019-11-15 2023-07-25 恩瑟拉有限责任公司 Tmem219抗体及其治疗性用途
EP3822288A1 (en) 2019-11-18 2021-05-19 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts Antibodies targeting, and other modulators of, the cd276 antigen, and uses thereof
US20230039165A1 (en) 2019-11-21 2023-02-09 Enthera S.R.L. Igfbp3 antibodies and therapeutic uses thereof
JP2023504736A (ja) 2019-12-06 2023-02-06 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｇｐｒｃ５ｄ標的結合ドメインに対する抗イディオタイプ抗体ならびに関連する組成物および方法
US20230028050A1 (en) 2019-12-06 2023-01-26 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
AU2020403145A1 (en) 2019-12-13 2022-07-07 Genentech, Inc. Anti-Ly6G6D antibodies and methods of use
CR20220357A (es) 2019-12-27 2022-08-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti antígeno-4 asociado al linfocito t citotóxico (ctla-4) y uso del mismo
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
IL292780A (en) 2020-01-09 2022-07-01 Hoffmann La Roche A new 4-1bbl trimer containing antigen-binding molecules
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
BR112022014667A2 (pt) 2020-01-29 2022-09-20 Inhibrx Inc Anticorpos de domínio único de cd28 e construtos multivalentes e multiespecíficos dos mesmos
CN115768800A (zh) 2020-01-31 2023-03-07 克利夫兰诊所基金会 抗苗勒管激素受体2抗体和使用方法
CN116650628A (zh) 2020-01-31 2023-08-29 基因泰克公司 用pd-1轴结合拮抗剂和rna疫苗诱导新表位特异性t细胞的方法
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
IL295023A (en) 2020-02-14 2022-09-01 Jounce Therapeutics Inc Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and their uses
WO2021168292A1 (en) 2020-02-20 2021-08-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
EP3868396A1 (en) 2020-02-20 2021-08-25 Enthera S.R.L. Inhibitors and uses thereof
JP2023516945A (ja) 2020-02-28 2023-04-21 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト及びその使用
CA3169910A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
CR20220461A (es) 2020-03-13 2022-10-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y usos de estos
KR20220156575A (ko) 2020-03-19 2022-11-25 제넨테크, 인크. 동종형 선택적 항-tgf-베타 항체 및 이용 방법
EP4107184A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Method for treating pneumonia, including covid-19 pneumonia, with an il6 antagonist
CN115867577A (zh) 2020-03-23 2023-03-28 基因泰克公司 用于预测covid-19肺炎中对il-6拮抗剂反应的生物标志物
WO2021194860A1 (en) 2020-03-23 2021-09-30 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
CA3169967A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Tie2-binding agents and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
CN115698717A (zh) 2020-04-03 2023-02-03 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
WO2021217051A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
JP2023523145A (ja) 2020-04-27 2023-06-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア リポ蛋白（ａ）に対するイソ型非依存性抗体
WO2021222167A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
EP4146283A1 (en) 2020-05-03 2023-03-15 Levena (Suzhou) Biopharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates (adcs) comprising an anti-trop-2 antibody, compositions comprising such adcs, as well as methods of making and using the same
EP4157881A1 (en) 2020-05-27 2023-04-05 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
TW202210515A (zh) 2020-06-02 2022-03-16 美商當康生物科技有限公司 抗ｃｄ３９之構築體及其用途
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
CN115698719A (zh) 2020-06-12 2023-02-03 基因泰克公司 用于癌症免疫疗法的方法和组合物
KR20230025691A (ko) 2020-06-16 2023-02-22 제넨테크, 인크. 삼중 음성 유방암을 치료하기 위한 방법과 조성물
WO2021257124A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
TWI811703B (zh) 2020-06-19 2023-08-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與ｃｄ３及ｃｄ１９結合之抗體
MX2022015795A (es) 2020-06-23 2023-01-24 Hoffmann La Roche Moleculas agonistas de union al antigeno cd28 que se dirigen a her2.
WO2021260064A1 (en) 2020-06-25 2021-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3/anti-cd28 bispecific antigen binding molecules
WO2022008027A1 (en) 2020-07-06 2022-01-13 Iomx Therapeutics Ag Antibodies binding igv of igsf11 (vsig3) and uses thereof
JP2023532764A (ja) 2020-07-07 2023-07-31 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 治療用タンパク質製剤の安定剤としての代替界面活性剤
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
CN116783215A (zh) 2020-07-29 2023-09-19 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
JP2023536602A (ja) 2020-08-03 2023-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
US20230324408A1 (en) 2020-08-05 2023-10-12 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
EP4192854A1 (en) 2020-08-07 2023-06-14 Genentech, Inc. Flt3 ligand fusion proteins and methods of use
TW202221026A (zh) 2020-08-14 2022-06-01 瑞士商Ａｃ 免疫有限公司 人源化抗ｔｄｐ－４３結合分子及其用途
EP4204448A2 (en) 2020-08-27 2023-07-05 cureab GmbH Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
CN116249719A (zh) 2020-09-15 2023-06-09 拜耳公司 新的抗a2ap抗体及其用途
EP4213877A1 (en) 2020-09-17 2023-07-26 Genentech, Inc. Results of empacta: a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter study to evaluate the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with covid-19 pneumonia
CA3193952A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Bernard Martin Fine Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
JP2023545566A (ja) 2020-10-20 2023-10-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ－１軸結合アンタゴニストとｌｒｒｋ２阻害剤との併用療法
EP4232475A1 (en) 2020-10-20 2023-08-30 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
AU2021374803A1 (en) 2020-11-03 2023-06-22 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Target-cell restricted, costimulatory, bispecific and bivalent anti-cd28 antibodies
WO2022098628A2 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2022098638A2 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
IL302217A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies and anti-CD79B drug antibody conjugates
EP4244254A1 (en) 2020-11-16 2023-09-20 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy with fap-targeted cd40 agonists
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
JP2024503826A (ja) 2021-01-06 2024-01-29 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ１－ｌａｇ３二重特異性抗体及びｃｄ２０ ｔ細胞二重特異性抗体を用いる併用療法
WO2022162587A1 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
AU2022212599A1 (en) 2021-01-28 2023-08-17 Universität Ulm Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CA3210753A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
KR20230142790A (ko) 2021-02-09 2023-10-11 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 코로나바이러스 스파이크 단백질(spike protein)을 타겟팅하는 항체
TW202302626A (zh) 2021-02-15 2023-01-16 日商武田藥品工業股份有限公司 用於調節ｔｇｆ－ｂ信息傳導之細胞療法組成物及方法
PE20231503A1 (es) 2021-02-26 2023-09-26 Bayer Ag INHIBIDORES DE IL-11 O IL-11Ra PARA USO EN EL TRATAMIENTO DE SANGRADO UTERINO ANORMAL
US20220306743A1 (en) 2021-03-01 2022-09-29 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
JP2024508488A (ja) 2021-03-01 2024-02-27 エクシリオ デベロップメント， インコーポレイテッド がんを治療するためのマスクされたｃｔｌａ４及びｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の組み合わせ
JP2024509169A (ja) 2021-03-03 2024-02-29 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ抗体を含む抗体－薬物コンジュゲート
EP4301472A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-vista constructs and uses thereof
WO2022198192A1 (en) 2021-03-15 2022-09-22 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
EP4314049A1 (en) 2021-03-25 2024-02-07 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
BR112023018061A2 (pt) 2021-03-30 2023-10-03 Bayer Ag Anticorpos anti-sema3a e usos dos mesmos
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
IL307821A (en) 2021-04-30 2023-12-01 Hoffmann La Roche Dosage for treatment with BISPIFIC ANTI-CD20/ANTI-CD3 antibody
CN117321078A (zh) 2021-04-30 2023-12-29 豪夫迈·罗氏有限公司 针对用抗cd20/抗cd3双特异性抗体和抗cd79b抗体药物缀合物进行组合治疗的给药
WO2022241446A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
AU2022273303A1 (en) 2021-05-14 2023-11-02 Genentech, Inc. Agonists of trem2
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
AR126009A1 (es) 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
WO2022255440A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
KR20240019109A (ko) 2021-06-09 2024-02-14 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료에 이용하기 위한 특정 braf 억제제(패러독스 브레이크) 및 pd-1 축 결합 길항제의 조합물
CA3221924A1 (en) 2021-06-11 2022-12-15 Genentech, Inc. Method for treating chronic obstructive pulmonary disease with an st2 antagonist
WO2022266660A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
WO2022263638A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
CA3220353A1 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Use of anti-ctla-4 antibody
CN117616123A (zh) 2021-06-25 2024-02-27 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体
WO2023283611A1 (en) 2021-07-08 2023-01-12 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing tnfr2 and uses thereof
CN115812082A (zh) 2021-07-14 2023-03-17 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别cd40的抗体及其应用
WO2023004386A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
WO2023019092A1 (en) 2021-08-07 2023-02-16 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
WO2023021055A1 (en) 2021-08-19 2023-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
AU2022332303A1 (en) 2021-08-27 2024-02-01 Genentech, Inc. Methods of treating tau pathologies
WO2023034750A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
AU2022345251A1 (en) 2021-09-17 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023081818A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 American Diagnostics & Therapy, Llc (Adxrx) Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
WO2023091887A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab
TW202334202A (zh) 2021-11-16 2023-09-01 瑞士商Ａｃ免疫有限公司 用於治療和診斷的新分子
TW202340248A (zh) 2021-12-20 2023-10-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 促效性ｌｔｂｒ抗體及包含其之雙特異性抗體
WO2023131901A1 (en) 2022-01-07 2023-07-13 Johnson & Johnson Enterprise Innovation Inc. Materials and methods of il-1beta binding proteins
WO2023154824A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
TW202342519A (zh) 2022-02-16 2023-11-01 瑞士商Ａｃ 免疫有限公司 人源化抗ｔｄｐ－４３結合分子及其用途
TW202342520A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 美商樂天醫藥生技股份有限公司 抗計畫性死亡配體１（ｐｄ—ｌ１）抗體分子、編碼多核苷酸及使用方法
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US20230414750A1 (en) 2022-03-23 2023-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023192827A1 (en) 2022-03-26 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023192881A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023194565A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2023201299A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023198727A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
WO2023203177A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
WO2023215737A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11807689B1 (en) * 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020407A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
WO2024020564A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
WO2024020579A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to human pad4 and uses thereof
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024028732A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
WO2024028731A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2024068996A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000067796A1 (en) * 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US20030003097A1 (en) * 2001-04-02 2003-01-02 Idec Pharmaceutical Corporation Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Family Cites Families (171)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7097A (en) 1850-02-19 Elevating- and lowering carriage-tops
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
ATE117434T1 (de) 1988-03-30 1995-02-15 Toray Industries Gefriergetrocknete zusammensetzung, die ein mit meerrettichperoxydase markiertes fab'-fragment eines gegen menschliches beta-interferon gerichteten antikörpers und trehalose enthält; eia kit, der diese zusammensetzung enthält.
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
EP0556285A4 (en) 1990-11-05 1993-10-27 Bristol-Myers Squibb Company Synergistic therapy with combinations of anti-tumor antibodies and biologically active agents
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
ES2091684T3 (es) 1992-11-13 1996-11-01 Idec Pharma Corp Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b.
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US20030180290A1 (en) 1995-06-07 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-CD80 antibody having ADCC activity for ADCC mediated killing of B cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
AU716785B2 (en) 1995-07-27 2000-03-09 Genentech Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
US6001358A (en) 1995-11-07 1999-12-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof
EP0938334A4 (en) 1996-07-26 2004-12-15 Smithkline Beecham Corp IMPROVED METHOD FOR TREATING IMMUNE-MEDIATED SYSTEMIC DISEASES
UA76934C2 (en) 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
SI1897890T1 (sl) 1996-11-27 2010-03-31 Genentech Inc Afinitetno čiščenje polipeptida na proteinskemA matriksu
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
AU740284B2 (en) 1997-06-13 2001-11-01 Genentech Inc. Stabilized antibody formulation
US6991790B1 (en) 1997-06-13 2006-01-31 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20040191256A1 (en) 1997-06-24 2004-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
EP0994903B1 (en) 1997-06-24 2005-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
CA2325346A1 (en) 1998-04-03 1999-10-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Humanized antibody against human tissue factor (tf) and process for constructing humanized antibody
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
PT1308456E (pt) 1998-05-06 2007-12-03 Genentech Inc Purificação de anticorpos por cromatografia de permuta iónica
EA004107B1 (ru) 1998-08-11 2003-12-25 Айдек Фармацевтикалс Корпорэйшн Комбинированная терапия в-клеточных лимфом, предусматривающая введение антитела против cd20
WO2000010007A2 (en) 1998-08-17 2000-02-24 California Institute Of Technology Devices and methods for analysis of non-ionic solutes
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
DK1616572T3 (da) 1998-11-09 2010-12-06 Biogen Idec Inc Kimært anti-CD20-antistof, rituxan, til anvendelse i behandling af kronisk lymfatisk leukæmi
MY155913A (en) 1998-11-09 2015-12-15 Biogen Inc Chimeric anti-cd20 antibody treatment of patients receiving bmt or pbsc transpants
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2364997A3 (en) 1999-01-15 2012-07-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2420835T3 (es) 1999-04-09 2013-08-27 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Procedimiento para controlar la actividad de las moléculas inmunofuncionales
DE60042785D1 (de) 1999-06-09 2009-10-01 Immunomedics Inc Immuntherapie von autoimmunerkrankungen durch die verwendung von b-zell spezifischen antikörpern
MXPA02000419A (es) 1999-07-12 2004-09-10 Genentech Inc Bloqueo de la respuesta inmune a un antigeno extrano utilizando un antagonista que se enlaza a cd20.
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
WO2001010462A1 (en) 1999-08-11 2001-02-15 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of patients having non-hodgkins lymphoma with bone marrow involvement with anti-cd20 antibodies
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
CN1169952C (zh) 1999-10-10 2004-10-06 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院 抗cd20单克隆抗体的重链和轻链可变区基因及其应用
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
RU2305561C2 (ru) 1999-11-08 2007-09-10 Байоджен Айдек Инк. Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием антител против cd40l в комбинации с антителами против cd20 и/или химиотерапией и лучевой терапией
US20020028178A1 (en) 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
PL358215A1 (en) 2000-03-24 2004-08-09 Micromet Ag Multifunctional polypeptides comprising a binding site to an epitope of the nkg2d receptor complex
JP2004500412A (ja) 2000-03-31 2004-01-08 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞リンパ腫の治療のための抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストおよび抗ｃｄ２０の併用
AU2001259142C1 (en) 2000-04-25 2006-11-23 Biogen Idec Inc. Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
EP1299128A2 (en) 2000-06-20 2003-04-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
MXPA03000306A (es) 2000-07-12 2004-04-05 Idec Pharma Corp Tratamiento de malignidades de celulas b que usan una combinacion de anticuerpos supresores de celulas b y aplicaciones relacionadas con anticuerpos moduladores inmunes.
AU8822601A (en) 2000-07-31 2002-02-13 Biolex Inc Expression of biologically active polypeptides in duckweed
DE10043452A1 (de) 2000-09-04 2002-03-14 Basf Ag Formkörper mit einer tonmineralischen Beschichtung
KR20040023565A (ko) 2000-09-18 2004-03-18 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 고갈/면역조절 항체 조합을 이용한 자가면역질환의 치료를 위한 조합 요법
WO2002034790A1 (en) 2000-10-20 2002-05-02 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030211107A1 (en) 2002-01-31 2003-11-13 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
AU2002243718B2 (en) 2001-01-31 2007-12-06 Biogen Idec Inc. Use of immunoregulatory antibodies in the treatment of neoplastic disorders
US20020159996A1 (en) 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030077826A1 (en) 2001-02-02 2003-04-24 Lena Edelman Chimeric molecules containing a module able to target specific cells and a module regulating the apoptogenic function of the permeability transition pore complex (PTPC)
WO2002062850A2 (en) 2001-02-02 2002-08-15 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Hybrid antibodies and uses thereof
WO2002078766A2 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Genentech, Inc. Combination therapy
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
IL166244A0 (en) 2001-07-12 2006-01-15 Jefferson Foote Super humanized antibodies
US7192586B2 (en) 2001-09-20 2007-03-20 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compositions for treating or preventing skin disorders using binding agents specific for prostate specific membrane antigen
JP2005532253A (ja) 2001-10-25 2005-10-27 ジェネンテック・インコーポレーテッド 糖タンパク質組成物
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
ES2402527T3 (es) 2001-12-27 2013-05-06 Glycofi, Inc. Procedimientos para obtener estructuras de carbohidrato de tipo mamífero mediante ingeniería genética
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
CN101914158A (zh) 2002-02-14 2010-12-15 免疫医疗公司 抗cd 20抗体及其融合蛋白和使用方法
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US7897842B2 (en) 2002-03-19 2011-03-01 Plant Research International B.V. GnTIII expression in plants
PT1490405E (pt) 2002-03-21 2007-11-07 Lilly Co Eli Anticorpos humanos anti-ligando de hfas antagonistas e fragmentos dos mesmos
KR100708398B1 (ko) 2002-03-22 2007-04-18 (주) 에이프로젠 인간화 항체 및 이의 제조방법
US20030190689A1 (en) 2002-04-05 2003-10-09 Cell Signaling Technology,Inc. Molecular profiling of disease and therapeutic response using phospho-specific antibodies
JPWO2003084569A1 (ja) * 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物含有医薬
AU2003236019A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
WO2004000102A2 (en) 2002-06-19 2003-12-31 Abgenix, Inc. Method for predicting response to epidermal growth factor receptor-directed therapy
US7425620B2 (en) 2002-08-14 2008-09-16 Scott Koenig FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
DK1539966T3 (da) 2002-09-12 2010-10-04 Greenovation Biotech Gmbh Fremgangsmåde til fremstilling af proteiner
KR20100050587A (ko) 2002-10-17 2010-05-13 젠맵 에이/에스 Ｃｄ20에 대한 인간 모노클로날 항체
AU2003298799A1 (en) 2002-12-02 2004-06-23 Abgenix, Inc. Antibodies directed to phospholipase a2 and uses thereof
JP2006513725A (ja) 2002-12-16 2006-04-27 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヒトｃｄ２０及び／又はｃｄ１６を発現するトランスジェニックマウス
JP4351674B2 (ja) 2002-12-16 2009-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体とその使用法およびその使用
JP4559358B2 (ja) 2002-12-20 2010-10-06 グリーンオベーション バイオテク ゲーエムベーハー コケ細胞における異種グリコシル化タンパク質の産生
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
PL222222B1 (pl) 2003-01-22 2016-07-29 Glycart Biotechnology Ag Sposób wytwarzania polipeptydu
WO2004065417A2 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
EP1603948A1 (en) 2003-03-14 2005-12-14 Pharmacia Corporation Antibodies to igf-i receptor for the treatment of cancers
RS51686B (sr) 2003-04-09 2011-10-31 Genentech Inc. Lečenje autoimune bolesti kod pacijenata sa neadekvatnim odgovorom na tnf-alfa inhibitor
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
US20050163775A1 (en) 2003-06-05 2005-07-28 Genentech, Inc. Combination therapy for B cell disorders
PT1631313E (pt) 2003-06-05 2015-07-02 Genentech Inc Terapêutica de combinação para distúrbios de células b
WO2005017529A1 (en) 2003-07-29 2005-02-24 Genentech, Inc. Assay for human anti cd20 antibodies and uses therefor
US20050042664A1 (en) 2003-08-22 2005-02-24 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
ZA200601218B (en) 2003-08-29 2007-05-30 Genentech Inc Anti-CD20 therapy of ocular disorders
WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
AU2004303848A1 (en) 2003-12-19 2005-07-07 Genentech, Inc. Detection of CD20 in transplant rejection
AU2004305560A1 (en) 2003-12-19 2005-07-07 Genentech, Inc. Detection of CD20 in therapy of autoimmune diseases
CA2551097A1 (en) 2003-12-23 2005-07-14 Rinat Neuroscience Corp. Agonist anti-trkc antibodies and methods using same
EP1720908A2 (en) 2004-02-17 2006-11-15 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
US20060002930A1 (en) 2004-04-16 2006-01-05 Genentech, Inc. Treatment of disorders
WO2005108989A2 (en) 2004-04-16 2005-11-17 Genentech, Inc. Assay for antibodies
JP2007532681A (ja) 2004-04-16 2007-11-15 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｂ細胞の枯渇を増大させる方法
MXPA06012674A (es) 2004-05-05 2007-03-26 Genentech Inc Prevencion de enfermedades autoinmunes.
EP1769243A2 (en) 2004-05-15 2007-04-04 Genentech, Inc. Cross-screening system and methods for detecting a molecule having binding affinity for a target molecule
BRPI0510885A (pt) 2004-06-04 2007-12-26 Genentech Inc método de tratamento de lúpus e artigo industrializado
TW201422238A (zh) 2004-06-04 2014-06-16 Genentech Inc Ｃｄ２０抗體於治療多發性硬化症之用途及用於該用途之物品
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
WO2006012508A2 (en) 2004-07-22 2006-02-02 Genentech, Inc. Method of treating sjögren's syndrome
EP1778728A2 (en) 2004-08-19 2007-05-02 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MX2007002855A (es) 2004-09-08 2007-04-27 Genentech Inc Metodos para usar ligandos de receptor de muerte y anticuerpos cd20.
KR20070050951A (ko) 2004-09-08 2007-05-16 제넨테크, 인크. 사멸 수용체 리간드 및 ｃｄ20 항체의 사용 방법
US7572456B2 (en) 2004-09-13 2009-08-11 Macrogenics, Inc. Humanized antibodies against West Nile Virus and therapeutic and prophylactic uses thereof
SG165344A1 (en) 2004-10-05 2010-10-28 Genentech Inc Method for treating vasculitis
WO2006066089A1 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition
US20060134111A1 (en) 2004-12-17 2006-06-22 Genentech, Inc. Antiangiogenesis therapy of autoimmune disease in patients who have failed prior therapy
AU2005318999B2 (en) 2004-12-22 2012-07-19 Genentech, Inc. Methods for producing soluble multi-membrane-spanning proteins
ZA200705459B (en) 2005-01-13 2008-09-25 Genentech Inc Treatment method
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
MX2007012989A (es) 2005-04-22 2008-01-11 Genentech Inc Metodo para tratar la demencia o la enfermedad de alheimer.
WO2006125140A2 (en) 2005-05-18 2006-11-23 Biogen Idec Inc. Methods for treating fibrotic conditions
AU2006251647A1 (en) 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
US20090208500A1 (en) 2005-06-03 2009-08-20 Genentech, Inc. Method of producing antibodies with improved function
SG192479A1 (en) 2005-08-26 2013-08-30 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
AU2006318539B2 (en) 2005-11-23 2012-09-13 Genentech, Inc. Methods and compositions related to B cell assays
US20070136826A1 (en) 2005-12-02 2007-06-14 Biogen Idec Inc. Anti-mouse CD20 antibodies and uses thereof
US7708944B1 (en) 2006-06-13 2010-05-04 Research Foundation Of State University Of New York Ultra-sensitive, portable capillary sensor
EP2137325A1 (en) 2007-04-02 2009-12-30 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
WO2008157282A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
AU2008275229B2 (en) 2007-07-09 2014-11-06 Genentech, Inc. Prevention of disulfide bond reduction during recombinant production of polypeptides
KR100898362B1 (ko) 2007-07-10 2009-05-18 주식회사 그리폰 다목적 신발
KR101234436B1 (ko) 2007-09-05 2013-02-18 로슈 글리카트 아게 유형 ⅰ 및 유형 ⅱ 항-ｃｄ２０ 항체를 사용하는 병용 치료요법
US20090214561A1 (en) 2007-09-24 2009-08-27 David Robert Close Treatment method
GB0718684D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
CA2703279C (en) 2007-10-30 2014-04-22 Genentech, Inc. Antibody purification by cation exchange chromatography
EP2231183A2 (en) 2007-12-21 2010-09-29 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients
ES2511844T3 (es) 2007-12-21 2014-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Formulación de anticuerpo
JP2011507870A (ja) 2007-12-21 2011-03-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０抗体の結晶化
US20090162351A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase
US20090246197A1 (en) 2008-03-25 2009-10-01 Charles Dumontet Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with increased antibody dependent cellular cytotoxicity (adcc)
WO2009134738A1 (en) 2008-04-29 2009-11-05 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
US8021850B2 (en) 2008-07-14 2011-09-20 Ribo Guo Universal tandem solid-phases based immunoassay
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 Genentech Inc 治療進展型多發性硬化症之方法
MX2011005051A (es) 2008-11-17 2011-06-01 Genentech Inc Metodo y formulacion para reducir la agregacion de una macromolecula bajo condiciones fisiologicas.
WO2010057109A1 (en) 2008-11-17 2010-05-20 Genentech, Inc. Method and formulation for reducing aggregation of a macromolecule under physiological conditions
AR075982A1 (es) 2009-03-31 2011-05-11 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo afucosilado y una o mas de las citoquinas seleccionadas de gm- csf humano, m -csf humano y/o il-3 humano y composicion
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
EP2464380A1 (en) 2009-08-14 2012-06-20 Roche Glycart AG Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with fludarabine and/or mitoxantrone
CN107385034B (zh) 2009-09-03 2021-08-17 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于治疗、诊断和监控类风湿性关节炎的方法
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
WO2011131749A1 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Glaxo Group Limited New 14 and 15 membered macrolides for the treatment of neutrophil dominated inflammatory diseases
RU2013106216A (ru) 2010-08-03 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биомаркеры хронической лимфоцитарной лейкемии
AR082693A1 (es) 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
KR20140022815A (ko) 2011-02-28 2014-02-25 제넨테크, 인크. B-세포 길항제에 대한 반응을 예측하기 위한 생물학적 마커 및 방법
US8592156B2 (en) 2011-08-08 2013-11-26 Roche Molecular Systems, Inc. Predicting response to anti-CD20 therapy in DLBCL patients
EP2892470A4 (en) 2012-09-06 2016-07-06 Freedom Innovations Llc METHOD AND SYSTEM FOR A PROSTHESIS DEVICE WITH SEVERAL FUNCTION LEVELS ACTIVATED THROUGH SEVERAL CONTROL SYSTEMS
KR102158467B1 (ko) 2012-09-07 2020-09-25 제넨테크, 인크. Ｉｉ형 항-ｃｄ20 항체와 선택적 ｂｃｌ-2 억제제와의 병용 치료요법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000067796A1 (en) * 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US20030003097A1 (en) * 2001-04-02 2003-01-02 Idec Pharmaceutical Corporation Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cragg MS. et al. Complement-mediated lysis by anti-CD20 mAb correlates with segregation into lipid rafts. Blood. 2003, vol. 101, no. 3, side 1045-1052. , Dated: 01.01.0001 *
Davies J. et al. Expression of GnTIII in a recombinant anti-CD20 CHO production cell line: Expression of antibodies with altered glycoforms leads to an increase in ADCC through higher affinity for FC gamma RIII. Biotechnol Bioeng. 2001, vol. 74, no. 4, side 288-294., Dated: 01.01.0001 *
Polyak MJ. and Deans JP. Alanine-170 and proline-172 are critical determinants for extracellular CD20 epitopes; heterogeneity in the fine specificity of CD20 monoclonal antibodies is defined by additional requirements imposed by both amino acid sequence and quaternary structure. Blood. 2002, vol. 99, no. 9, side 3256-32562. , Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0416262A (pt) 2007-01-09
EP2380911B1 (en) 2018-05-09
CN102373215B (zh) 2014-07-30
EP2348051B1 (en) 2018-12-19
IL207347A (en) 2015-08-31
TR201903329T4 (tr) 2019-04-22
WO2005044859A3 (en) 2005-08-04
EP2077282A2 (en) 2009-07-08
EP2348051A2 (en) 2011-07-27
US20230212303A1 (en) 2023-07-06
JP2012254083A (ja) 2012-12-27
EP2077282A3 (en) 2009-08-05
ES2550311T3 (es) 2015-11-06
JP2018027088A (ja) 2018-02-22
CY2016004I1 (el) 2016-08-31
CY1110301T1 (el) 2015-01-14
PL1692182T3 (pl) 2010-09-30
NO20220263A1 (no) 2006-08-03
HK1213574A1 (zh) 2016-07-08
NO347530B1 (no) 2023-12-11
HK1167681A1 (en) 2012-12-07
BR122020013239B1 (pt) 2022-05-10
SG10202008722QA (en) 2020-10-29
EA202091901A1 (ru) 2020-11-24
HUE042914T2 (hu) 2019-07-29
JP6235521B2 (ja) 2017-11-22
CN1902231A (zh) 2007-01-24
AU2004287643A1 (en) 2005-05-19
BRPI0416262B1 (pt) 2022-04-12
NO346533B1 (no) 2022-09-26
PL2380911T3 (pl) 2018-10-31
CN102373214B (zh) 2014-07-09
CN104829719A (zh) 2015-08-12
LT2380911T (lt) 2018-07-10
US20090010921A1 (en) 2009-01-08
HRP20181204T1 (hr) 2018-09-21
ES2615507T3 (es) 2017-06-07
EA025962B1 (ru) 2017-02-28
IL235172A0 (en) 2014-11-30
DK2380911T3 (en) 2018-08-06
SI2077282T1 (sl) 2017-03-31
NO20171989A1 (no) 2006-08-03
HK1167682A1 (en) 2012-12-07
US20050123546A1 (en) 2005-06-09
CY1120252T1 (el) 2019-07-10
EP1692182A2 (en) 2006-08-23
DK1692182T3 (da) 2010-05-31
CY1121206T1 (el) 2020-05-29
HUE026669T2 (en) 2016-06-28
NO347800B1 (no) 2024-03-25
RS51334B (en) 2011-02-28
DK2077282T3 (en) 2017-01-30
BE2016C008I2 (no) 2021-08-16
ECSP066603A (es) 2006-10-17
CY1118719T1 (el) 2017-07-12
ECSP21023271A (es) 2021-05-31
SI2380910T1 (sl) 2015-11-30
KR101364902B1 (ko) 2014-02-21
LT2348051T (lt) 2019-02-25
KR20120104419A (ko) 2012-09-20
CY2016004I2 (el) 2016-08-31
DK2348051T3 (en) 2019-03-18
ES2672640T3 (es) 2018-06-15
RS55723B1 (sr) 2017-07-31
RS54450B1 (en) 2016-06-30
KR20110129990A (ko) 2011-12-02
ME01775B (me) 2011-02-28
CN102373214A (zh) 2012-03-14
MX337587B (es) 2016-03-11
RS58420B1 (sr) 2019-04-30
SI2380911T1 (en) 2018-07-31
LT2077282T (lt) 2017-03-10
AU2004287643C1 (en) 2012-05-31
WO2005044859A2 (en) 2005-05-19
EA036531B1 (ru) 2020-11-19
EA201100128A1 (ru) 2011-06-30
EP2380910B1 (en) 2015-09-30
FR15C0076I2 (fr) 2016-03-11
LU93001I2 (fr) 2016-05-17
JP2015134814A (ja) 2015-07-27
AU2004287643B2 (en) 2011-11-17
MXPA06004836A (es) 2006-07-06
HRP20170398T2 (hr) 2019-06-28
JP2010081940A (ja) 2010-04-15
JP2008500017A (ja) 2008-01-10
US20160076009A1 (en) 2016-03-17
US20210002382A1 (en) 2021-01-07
HK1100005A1 (en) 2007-08-31
US20160075794A1 (en) 2016-03-17
HRP20100303T1 (hr) 2010-07-31
EP1692182B1 (en) 2010-04-07
NO20220904A1 (no) 2006-08-03
PL2380910T3 (pl) 2015-12-31
EA200600905A1 (ru) 2006-12-29
ES2341009T3 (es) 2010-06-14
RS57466B1 (sr) 2018-09-28
TNSN06126A1 (en) 2007-11-15
PL2077282T3 (pl) 2017-08-31
IL232954A0 (en) 2014-07-31
LU92632I2 (fr) 2015-11-02
CN1902231B (zh) 2015-05-20
JP4653109B2 (ja) 2011-03-16
NZ588860A (en) 2012-03-30
HRP20151418T1 (hr) 2016-01-29
UA91823C2 (ru) 2010-09-10
SG160348A1 (en) 2010-04-29
EP2380911A1 (en) 2011-10-26
DK2380910T3 (en) 2015-10-19
EP2348051A3 (en) 2012-12-19
US8883980B2 (en) 2014-11-11
EA015009B1 (ru) 2011-04-29
CY2015001I1 (el) 2016-06-22
CA2544865C (en) 2019-07-09
CR11848A (es) 2011-04-04
LTC2380910I2 (lt) 2018-01-25
JP6125770B2 (ja) 2017-05-10
ME03330B (me) 2019-10-20
PT1692182E (pt) 2010-05-13
SI2348051T1 (sl) 2019-03-29
NO20210499A1 (no) 2006-08-03
SG10201504094SA (en) 2015-06-29
HUS1600013I1 (hu) 2016-04-28
US9296820B2 (en) 2016-03-29
PL2348051T3 (pl) 2019-05-31
ME02332B (me) 2016-06-30
KR101220691B1 (ko) 2013-01-14
ES2708095T3 (es) 2019-04-08
TR201809892T4 (tr) 2018-07-23
IL207347A0 (en) 2010-12-30
IL232954A (en) 2015-09-24
DE602004026470D1 (de) 2010-05-20
CY2015001I2 (el) 2016-06-22
PT2380910E (pt) 2015-11-26
HUE038955T2 (hu) 2018-12-28
IL175367A0 (en) 2006-09-05
ZA200604547B (en) 2007-07-25
HRP20190333T1 (hr) 2019-05-03
SI1692182T1 (sl) 2010-06-30
NO346167B1 (no) 2022-04-04
NL300801I2 (nl) 2017-09-19
EP2380910A1 (en) 2011-10-26
KR101364858B1 (ko) 2014-02-19
CA2544865A1 (en) 2005-05-19
EP2077282B1 (en) 2016-12-28
MA31040B1 (fr) 2010-01-04
PT2348051T (pt) 2019-02-04
CN102373215A (zh) 2012-03-14
ATE463513T1 (de) 2010-04-15
IL175367A (en) 2014-11-30
PT2380911T (pt) 2018-07-04
NZ547589A (en) 2009-05-31
EA201300481A1 (ru) 2014-01-30
PT2077282T (pt) 2017-02-14
KR20060130579A (ko) 2006-12-19
FR15C0076I1 (no) 2016-01-01
NO20062289L (no) 2006-08-03
US20160075793A1 (en) 2016-03-17
HUE031632T2 (en) 2017-07-28
HRP20170398T1 (hr) 2017-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230212303A1 (en) Antigen binding molecules with increased fc receptor binding affinity and effector function
EP2395024B1 (en) Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity

Legal Events

Date Code Title Description
CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: ROCHE GLYCART AG, CH

SPCF Filing of supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: OBINUTUZUMAB; REG. NO/DATE: EU/1/14/937 20140813

Spc suppl protection certif: 2018020

Filing date: 20180627

SPCG Granted supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: OBINUTUZUMAB; REG. NO/DATE: EU/1/14/937 20140813

Spc suppl protection certif: 2018020

Filing date: 20180627

Extension date: 20290724