NO20220904A1 - Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning - Google Patents

Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning Download PDF

Info

Publication number
NO20220904A1
NO20220904A1 NO20220904A NO20220904A NO20220904A1 NO 20220904 A1 NO20220904 A1 NO 20220904A1 NO 20220904 A NO20220904 A NO 20220904A NO 20220904 A NO20220904 A NO 20220904A NO 20220904 A1 NO20220904 A1 NO 20220904A1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
seq
cells
sequence
cell
Prior art date
Application number
NO20220904A
Other languages
English (en)
Other versions
NO347800B1 (no
Inventor
Peter Brünker
Claudia Ferrara
Tobias Suter
Ursula Püntener
Ekkehard Mössner
Pablo Umana
Original Assignee
Roche Glycart Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34572912&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20220904(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20220904A1 publication Critical patent/NO20220904A1/no
Application filed by Roche Glycart Ag filed Critical Roche Glycart Ag
Publication of NO347800B1 publication Critical patent/NO347800B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01144—Beta-1,4-mannosyl-glycoprotein 4-beta-N-acetylglucosaminyltransferase (2.4.1.144)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Description

[0001] Foreliggende oppfinnelse angår antigenbindende molekyler (ABM). Ved spesielle utførelsesformer angår foreliggende oppfinnelse rekombinante monoklonale antistoffer, innbefattende kimæriske, primatiserte eller humaniserte antistoffer som er spesifikke for humant CD20. Foreliggende oppfinnelse angår dessuten nukleinsyremolekyler som koder for slike ABM, samt vektorer og vertsceller omfattende slike nukleinsyremolekyler. Oppfinnelsen angår videre fremgangsmåter for fremstilling av ABM ifølge oppfinnelsen, samt fremgangsmåter for anvendelse av disse ABM ved behandling av sykdom. Dessuten angår foreliggende oppfinnelse ABM med modifisert glykosylering med forbedrede terapeutiske egenskaper, innbefattende antistoffer med øket Fc-reseptorbinding og øket effektorfunksjon.
Immunsystemet og anti-CD20-antistoffer
[0002] Immunsystemet hos virveldyr, innbefattende mennesker, består av en rekke organer og celletyper, som er blitt utviklet til nøyaktig og spesifikt å gjenkjenne, binde og ødelegge inntrengende fremmende mikroorganismer ("antigener"). Lymfocytter er avgjørende for fyllestgjørende funksjon av immunsystemet. Disse celler dannes i thymus, milt og benmarg (voksne) og representerer ca. 30% av den totale mengde hvite blodlegemer som finnes i sirkulasjonssystemet hos voksne mennesker. Det er to hoved-subpopulasjoner av lymfocytter: T-celler og B-celler. T-celler er ansvarlige for cellemediert immunitet, mens B-celler er ansvarlige for antistoffdannelse (humoral immunitet). I en typisk immunrespons funksjonerer imidlertid T-celler og B-celler i gjensidig avhengighet av hverandre: T-celler aktiveres når T-cellereseptoren bindes til fragmenter av et antigen som er bundet til vevstypekompleks-("MHC")-glykoproteiner på overflaten av en antigen-presenterende celle; slik aktivering gir frigjøring av biologiske mediatorer ("interleukiner"), som stimulerer B-celler til å differensiere og danne antistoffer ("immunglobuliner") overfor antigenet.
[0003] Hver B-celle i verten uttrykker et antistoff av én spesiell type og spesifisitet, og forskjellige B-celler uttrykker antistoffer som er spesifikke for forskjellige antigener. B-celleproliferasjon og antistoffdannelse skyter fart som reaksjon på et fremmed antigen, og begge opphører typisk (eller opphører i det vesentlige) straks det fremmede antigen er blitt nøytralisert. Leilighetsvis vil imidlertid proliferasjon av en spesiell B-celler fortsette med uforminsket styrke; slik proliferasjon kan resultere i en krefttype som omtales som "B-cellelymfom".
[0004] Både T-celler og B-celler omfatter celleoverflateproteiner som kan anvendes som "markører" for differensiering og identifisering. Én slik human B-cellemarkør er det humane B-lymfocytt-begrensede differensieringsantigen Bp35, omtalt som "CD20". CD20 uttrykkes under tidlig pre-B-celleutvikling og vedvarer inntil plasmacelledifferensiering. Spesifikt kan CD20-molekylet regulere et trinn i aktiveringsprosessen som er nødvendig for cellesyklusinitiering og -differensiering, og uttrykkes vanligvis i meget høye nivåer på neoplastiske ("tumor"-) B-celler. På grunn av at CD20 er til stede i høye nivåer på "maligne" B-celler, dvs. B-celler hvis uforminskede proliferasjon kan føre til B-celle-lymfom, har CD20-overflateantigenet potensial til å tjene som en kandidat for "målsøking" av B-cellelymfomer.
[0005] Slik målsøking kan hovedsakelig generaliseres som følger: antistoffer som er spesifikke for CD20-overflateantigenet på B-celler, innføres i en pasient, for eksempel ved injeksjon. Disse anti-CD20-antistoffer bindes spesifikt til CD20-celleoverflateantigenet på (øyensynlig) både normale og maligne B-celler; anti-CD20-antistoffet som er bundet til CD20-overflateantigenet, kan føre til ødeleggelse og uttømming av neoplastiske B-celler. Dessuten kan kjemiske midler eller radioaktive merkesubstanser med potensial til å ødelegge tumoren konjugeres til anti-CD20-antistoffet slik at midlet spesifikt "avgis" til f.eks. de neoplastiske B-celler. Uansett fremgangsmåte er det et primært mål å ødelegge tumoren: den spesifikke fremgangsmåte kan bestemmes ved det spesielle anti-CD20-antistoff som anvendes, og således kan de tilgjengelige fremgangsmåter for målsøking av CD20-antigenet variere i betydelig grad.
[0006] Ukonjugerte monoklonale antistoffer (mAb) kan være anvendelige medisiner for behandling av kreft, som vist ved U.S. Food and Drug Administrations godkjennelse av Rituximab (Rituxan™; IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA, og Genetech Inc., San Francisco, CA), for behandling av CD20-positiv B-celle, lavgradig eller follikulær ikke-Hodgkins lymfom, T rastuzumab (Herceptin™; Genentech Inc.) for behandling av fremskreden brystkreft (Grillo-Lopez, A.-J., et al., Semin. Oncol. 26:66-73 (1999); Goldenberg, M. M., Clin. Ther.
21 :309-18 (1999)), Gemtuzumab (Mylotarg™, Celltech/Wyeth-Ayerst) for behandling av tilbakefall av myeloid leukemi, samt Alemtuzumab (CAMPATH™, Millenium Pharmaceuticals/Schering AG) for behandling av kronisk B-cellelymfocyttleukemi. Suksessen med disse produkter er ikke bare basert på deres effektivitet, men også på deres utmerkede sikkerhetsprofiler (Grillo-Lopez, A.-J., et al., Semin. Oncol. 26:66-73 (1999); Goldenberg, M. M., Clin. Ther. 21 :309-18 (1999)). Til tross for oppnåelse av disse medikamenter, er det for tiden stor interesse for oppnåelse av høyere spesifikk antistoffaktivitet enn det som typisk fås ved ukonjugert mAb-terapi. Det monoklonale museantistoff , B-Ly1 , er et annet antistoff som er kjent for å være spesifikt for humant CD20. (Poppema, S. og Visser, L, Biotest Bulletin 3: 131 -139 (1987)).
[0007] Resultatene av en rekke undersøkelser tyder på at Fc-reseptoravhengige mekanismer i vesentlig grad bidrar til virkningen av cytotoksiske antistoffer overfor tumorer, og tyder på at et optimalt antistoff mot tumorer vil bindes preferensielt til aktiverings-Fc-reseptorer og minimalt til den inhiberende partner FcyRIIB. (Clynes, R. A., et al., Nature Medicine 6(4):443-446 (2000);
Kalergis, A.M. og Ravetch, J. V., J Exp. Med. 195(12):1653-1 659 (juni 2002). Resultatene av minst én undersøkelse tyder for eksempel på at FcyRlllareseptoren spesielt er sterkt forbundet med effektiviteten av antistoffterapi.
(Cartron, G., et al., Blood 99(3) :754-757 (februar 2002)). Denne undersøkelse viste at pasienter som er homozygote for FcyRIIIa, har bedre respons overfor Rituxirnab enn heterozygote pasienter. Forfatterne konkluderte med at den overlegne respons skyldtes bedre in vivo-binding av antistoffet til FcyRIIIa, noe som resulterte i bedre ADCC-aktivitet overfor lymfomceller. (Cartron, G., et al., Blood 99(3):754-757 (februar 2002)).
[0008] Forskjellige forsøk på å målsøke CD20-overflateantigenet er rapportert. Monoklonalt museantistoff 1 F5 (et anti-CD20-antistoff) ble ifølge rapport administrert ved kontinuerlig intravenøs infusjon til pasienter med B-cellelymfom. Meget høye nivåer (>2 gram) 1 F5 var ifølge rapport nødvendig for å uttømme sirkulerende tumorceller, og resultatene ble beskrevet som "forbigående". Press et al., "Monoclonal Antibody 1 F5 (Anti-CD20) Serotherapy of Human B-Cell Lymphomas." Blood 69/2:584-591 (1987). Et potensielt problem med denne fremgangsmåte er at ikke-humane monoklonale antistoffer (f.eks. monoklonale museantistoffer) typisk mangler human effektorfunksjonalitet, dvs. at de ikke er i stand til blant annet å formidle komplementavhengig lyse, eller til å lysere humane målceller via antistoffavhengig cellulær toksisitet eller Fc-reseptormediert fagocytose. Videre kan ikke-humane monoklonale antistoffer gjenkjennes av menneskeverten som et fremmed protein; gjentatte injeksjoner av slike fremmede antistoffer kan derfor føre til induksjon av immunresponser som fører til skadelige hypersensitivitetsreaksjoner. Når det gjelder musebaserte monoklonale antistoffer, omtales dette ofte som human anti-mus-antistoffrespons, eller "HAMA"-respons. Disse "fremmede" antistoffer kan dessuten angripes av vertens immunsystem slik at de egentlig nøytraliseres før de når sitt målsted.
[0009] En annen rapportert fremgangsmåte til forbedring av evnen hos monoklonale museantistoffer til å være effektive ved behandling av B-celleforstyrrelser har vært å konjugere en radioaktiv merkesubstans eller toksin til antistoffet slik at merkesubstansen eller toksinet lokaliseres på tumorstedet. For eksempel er det ovenfor angitte 1 F5-antistoff blitt "merket" med jod-131 (<,,131>|") og er ifølge rapport evaluert for biofordeling i to pasienter. Se Eary, J. F. et al., "Imaging and Treatment of B-Cell Lymphoma" J. Nuc. Med. 31/8:1257-1268 (1990); se også Press, O. W. et al., "Treatment of Refractory Non-Hodgkin's Lymphoma with Radiolabeled MB-1 (Anti-CD37) Antibody" J. Clin. One. 7/8:1027-1038 (1989) (indikasjon om at én pasient behandlet med <131>l-merket IF-5 oppnådde en "delvis respons"); Goldenberg, D. M. et al., "Targeting, Dosimetry and Radioimmunotherapy of B-Cell Lymphomas with Iodine-1 31 -Labeled LL2 Monoclonal Antibody" J. Clin. One. 9/4:548-564 (1991 ) (tre a v åtte pasienter som fikk multiple injeksjoner, rapporterte å ha utviklet en HAMA-respons); Appelbaum, F. R. "Radiolabeled Monoclonal Antibodies in the Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma" HemJOnc. Clinics of N. A. 5/5:1013-1025 (1991) (oversiktsartikkel); Press, O. W. et al "Radiolabeled-Antibody Therapy of B-Cell Lymphoma with Autologous Bone Marrow Support." New England J. Med. 329/17: 1219-1223 (1993) (iodine-131 labeled anti-CD20 antibody IFS and B1); og Kaminski, M. G. et al "Radioimmunotherapy of B-Cell Lymphoma with <131>1 Anti-B1 (Anti-CD20) Antibody". New England J. Med. 329/7(1993) (jod-131 -merket anti-CD20-antistoff B1 ; i det følgende "Kaminski"). Toksiner (dvs. kjemoterapeutiske midler så som doksorubicin eller mitomycin C) er også blitt konjugert til antistoffer. Se for eksempel publisert PCT-patentsøknad WO 92/07466 (publisert 14. mai 1992).
[0010] Kimæriske antistoffer omfattende deler av antistoffer fra to eller flere forskjellige arter (f.eks. mus og menneske) er blitt utviklet som alternativ til "konjugerte" antistoffer. For eksempel beskriver Liu, A. Y. et al i "Production of a Mouse-Human Chimeric Monoclonal Antibody to CD20 with Potent Fc-Dependent Biologic Activity" J. Immun. 139/10:3521-3526 (1987) et kimaerisk muse/humantantistoff rettet mot CD20-antigenet. Se også PCT-publikasjon nr. WO 88/04936. For eksempel er rituximab (RITUXAN®), et kimærisk anti-CD20, blitt godkjent for behandling av ikke-Hodgkins lymfom.
[0011] På bakgrunn av ekspresjonen av CD20 ved B-cellelymfomer kan dette antigen tjene som kandidat for "målsøking" av slike lymfomer. Slik målsøking kan hovedsakelig generaliseres som følger; antistoffer som er spesifikke for CD20-overflateantigen på B-celler, administreres til en pasient. Disse anti-CD20-antistoffer bindes spesifikt til CD20-antigenet på (tilsynelatende) både normale og maligne B-celler, og antistoffet bundet til CD20 på celleoverflaten resulterer i ødeleggelse og uttømming av tumorigene B-celler. Dessuten kan kjemiske midler, cytotoksiner eller radioaktive midler festes direkte eller indirekte til anti-CD20-antistoffet slik at midlet selektivt "avgis" til de CD20-antigen-uttrykkende B-celler. Med begge disse fremgangsmåter er det primære mål å ødelegge tumoren. Den spesifikke fremgangsmåte vil avhenge av det spesielle anti-CD20-antistoff som anvendes. Det fremgår således at de forskjellige fremgangsmåter for målsøking av CD20-antigenet kan variere betraktelig.
[0012] Rituximab- (RITUXAN®) antistoffet er et genteknologisk konstruert kimærisk humant konstant gamma 1 -musedoméne inneholdende monoklonalt antistoff rettet mot det humane CD20-antigen. Dette kimæriske antistoff inneholder humane konstante gamma 1 -doméner og identifiseres ved navnet "C2B8" i US-patent nr. 5 736 137 utstedt 17. april 1998, overdradd til IDEC Pharmaceuticals Corporation. RITUXAN® er godkjent for behandling av pasienter med tilbakevendt eller refraktært ("refracting") lavgradig eller follikulært, CD20-positivt ikke-Hodgkins B-cellelymfom. In vitro-virkningsmekanisme-undersøkelser har vist at RITUXAN® viser human komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) (Reff et. al, Blood 83(2): 435-445 (1994)). Det viser dessuten betydelig aktivitet i analyser som måler antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC). RITUXAN® er blitt vist å ha antiproliferativ aktivitet i thymidin-inkorporeringsanalyser og en begrenset evne til å indusere apoptose direkte, mens CD20-antistoffer ikke har dette (Maloney et. al, Blood 88 (10): 637a (1996)).
Antistoffglykosylering
[0013] Oligosakkaridkomponenten kan i betydelig grad påvirke egenskaper som angår effektiviteten av et terapeutisk glykoprotein, innbefattende fysisk stabilitet, motstandsdyktighet overfor proteaseangrep, interaksjoner med immunsystemet, farmakokinetikk og spesifikk biologisk aktivitet. Slike egenskaper kan avhenge ikke bare av tilstedeværelse eller fravær, men også av de spesifikke strukturer, av oligosakkarider. Det kan gjøres noen generaliseringer mellom oligosakkaridstruktur og glykoproteinfunksjon. For eksempel medierer visse oligosakkaridstrukturer hurtig fjerning av glykoproteinet fra blodstrømmen via interaksjoner med spesifikke karbohydratbindende proteiner, mens andre kan bindes av antistoffer og trigge uønskede immunreaksjoner (Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)).
[0014] Pattedyrceller er de foretrukne verter for dannelse av terapeutiske glykoproteiner på grunn av sin evne til å glykosylere proteiner i den mest kompatible form for human anvendelse (Cumming et al., Glycobiology 1:115-30 (1991 ); Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)). Bakterier glykosylerer proteiner meget sjelden, og gir, i likhet med andre typer vanlige verter, så som gjærsopp, filamentøse sopp, insekt- og planteceller, glykosyleringsmønstre forbundet med hurtig fjerning fra blodstrømmen, uønskede immun-interaksjoner, og i noen spesifikke tilfeller redusert biologisk aktivitet. Blant pattedyrceller har kinesisk hamster-ovarie- (CHO)-celler vært mest alminnelig anvendt i de siste to tiår. I tillegg til at disse celler gir egnede glykosylerings-mønstre, muliggjør de konstant generering av genetisk stabile, meget produktive klonale cellelinjer. De kan dyrkes til høye tettheter i enkle bioreaktorer ved anvendelse av serumfrie medier, og muliggjøre utvikling av sikre og reproduserbare bioprosesser. Andre vanlig anvendte dyreceller innbefatter baby-hamsternyre (BHK)-celler, NS0- og Sp2/0-musemyelomceller. I den senere tid er dannelse ut fra transgene dyr også blitt testet. (Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)).
[0015] Alle antistoffer inneholder karbohydratstrukturer i konserverte stillinger i de konstante tungkjederegioner, og hver isotype har en særlig rekke N-bundne karbohydratstrukturer, som variabelt påvirker proteinsammensetning, -utskillelse og funksjonell aktivitet. (Wright, A., og Morrison, S. L, Trends Biotech.
15:26-32 (1997)). Strukturen av det tilknyttede N-bundne karbohydrat varierer i betydelig grad, avhengig av graden av prosessering, og kan innbefatte komplekse oligosakkarider med høyt innhold av mannose, med multiple grener og med to antenner ("biantennary"). (Wright, A., og Morrison, S. L, Trends Biotech. 15:26-32 (1997)). Det er typisk en heterogen prosessering av kjerne-oligosakkaridstrukturene tilknyttet på et spesielt glykosyleringssted, slik at til og med monoklonale antistoffer finnes som multiple glykoformer. Det er likeledes vist at hovedforskjeller i antistoff-glykosyleringen finnes mellom cellelinjer, og enda mindre forskjeller sees for en gitt cellelinje dyrket under forskjellige dyrkningsbetingelser. (Lifely, M. R. et al., Glycobiology 5(8):813-22 (1995)).
[0016] Én måte til å oppnå store økninger i potens, mens det opprettholdes en enkel produksjonsprosess og potensielt unngås betydelige, uønskede bivirkninger, er å forsterke de naturlige, cellemedierte effektorfunksjoner hos monoklonale antistoffer ved omarbeiding av deres oligosakkaridkomponent som beskrevet i Umaha, P. et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999) og US-patent nr. 6 602 684, og hele innholdet i disse er hen/ed i sin helhet medtatt her i dokumentet som referanse. Antistoffer av lgG1 -typen, de mest alminnelig anvendte antistoffer ved kreft-immunterapi, er glykoproteiner som har et konservert N-bundet glykosyleringssete ved Asn297 i hvert CH2-doméne. De to komplekse toantenne-oligosakkarider knyttet til Asn297 er begravet mellom CH2-doménene og danner utstrakte kontakter med polypeptidskjelettet, og deres tilstedeværelse er essensiell for at antistoffet skal mediere effektorfunksjoner så som antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) (Lifely, M. R., et al., Glycobiology 5:813-822 (1995); Jefferis, R., et al., Immunol Rev. 163:59-76 (1998); Wright, A. og Morrison, S. L., Trends Biotechnol. 15:26-32 (1997)).
[0017] De nærværende oppfinnere har tidligere vist at overekspresjon i kinesisk hamster-ovarie- (CHO)-celler av β(1 ,4)-N-acetylglukosaminyltransferase III ("GnTIII"), en glykosyltransferase som katalyserer dannelsen av todelte ("oligosakkarider, i betydelig grad øker ADCC-aktiviteten in vitro av et kimærisk monoklonalt anti-neuroblastom-antistoff (chCE7) dannet av de omarbeidede CHO-celler (se Umaha, P. et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999); og internasjonal publikasjon nr. WO 99/54342, idet hele innholdet i disse er medtatt her i dokumentet som referanse). Antistoffet chCE7 hører til en stor klasse ukonjugerte mAb som har høy tumoraffinitet og -spesifisitet, men har for liten potens til å være klinisk anvendelige ved fremstilling i industrielle standardcellelinjer som mangler GnTIM-enzymet (Umaha, P., et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)). Denne undersøkelse var den første som viste at store økninger i ADCC-aktivitet kan oppnås ved at de antistoffproduserende celler omarbeides til å uttrykke GnTIII, noe som også førte til en økning i andelen av todelte (“bisected") oligosakkarider som er knyttet til den konstante region (Fc), innbefattende todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider, over nivåene som finnes i naturlig forekommende antistoffer.
[001 8] Det er et stadig behov for forbedrede terapeutiske fremgangsmåter rettet mot CD20-antigenet for behandling av B-celle-lymfomer i primater, innbefattende, men ikke begrenset til, mennesker.
[0019] Idet man er klar over det voldsomme terapeutiske potensial hos antigenbindende molekyler (ABM) som har bindingsspesifisitet som hos muse-B-Ly1 -antistoffet, og som er blitt glyko-omarbeidet til å forsterke Fc-reseptorbindende affinitet og -effektorfunksjon, har de nærværende oppfinnere utviklet en fremgangsmåte for fremstilling av slike ABM. Denne fremgangsmåte innbefatter blant annet frembringelse av rekombinante, kimæriske antistoffer eller kimæriske fragmenter derav. Effektiviteten av disse ABM blir ytterligere forsterket ved omarbeiding av glykosyleringsprofilen for antistoff-Fc-regionen.
[0020] Ved ett aspekt er oppfinnelsen følgelig rettet mot et isolert polynukleotid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av:
SEKV ID NR:5, SEKV ID NR: 6 og SEKV ID NR:7. (CDR VH-i); (b) en
sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:21 , SEKV ID NR:22 og SEKV ID NR:23. (CDR VH.2); og SEKV ID NR:24. Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:8, SEKV ID NR:9 og SEKV ID NR:10. (CDR V|_). Ved én utførelsesform koder hvilke som helst av disse polynukleotider for et fusjonspolypeptid.
[0021] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:3. Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:4. Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:29; SEKV ID NR:31 ; SEKV ID NR:33; SEKV ID NR:35; SEKV ID NR:37; SEKV ID NR:39; SEKV ID NR:41 ; SEKV ID NR:43; SEKV ID NR:45; SEKV ID NR:47; SEKV ID NR:49; SEKV ID NR:51 ; SEKV ID NR:53; SEKV ID NR:55; SEKV ID NR:57; SEKV ID NR:59; SEKV ID NR:61 ; SEKV ID NR:63; SEKV ID NR:65; SEKV ID NR:67; SEKV ID NR:69; og SEKV ID NR:71 . Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:75. Ved én utførelsesform koder slike polynukleotider for fusjonspolypeptider.
[0022] Oppfinnelsen er videre rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med SEKV ID NR:3, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med SEKV ID NR: 4, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Oppfinnelsen er videre rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:29; SEKV ID NR:31 ; SEKV ID NR:33; SEKV ID NR:35; SEKV ID NR:37; SEKV ID NR:39; SEKV ID NR:41 ; SEKV ID NR:43; SEKV ID NR:45; SEKV ID NR:47; SEKV ID NR:49; SEKV ID NR:51 ; SEKV ID NR:53; SEKV ID NR:55; SEKV ID NR:57; SEKV ID NR:59; SEKV ID NR:61 ; SEKV ID NR:63; SEKV ID NR:65; SEKV ID NR:67; SEKV ID NR:69; og SEKV ID NR:71 , hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med SEKV ID NR:75, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid.
[0023] Oppfinnelsen er videre rettet mot et polynukleotid omfattende SEKV ID NR:1 1 (hel tung kjede), eller polynukleotider med 80%, 85%, 90%, 95% eller 99% identitet med SEKV ID NR:11 . Oppfinnelsen er også rettet mot et polynukleotid omfattende SEKV ID NR: 12 (hel lett kjede), eller to polynukleotider med 80%, 85%, 90%, 95% or 99% identitet med SEKV ID NR:12.
[0024] Oppfinnelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:1 . Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 1 , og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen for en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
Oppfinnelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:30;
SEKV ID NR:32; SEKV ID NR:34; SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40; SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48;
SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52; SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58; SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:30; SEKV ID NR:32; SEKV ID NR: 34, SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40; SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48; SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52;
SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58; SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72; og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen som hos en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
[0025] Ved enda et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen som hos en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus. Ved enda et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:76. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:76; og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvens som for en antistoff-Fcregion, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
[0026] Oppfinnelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med VH-regionen som hos muse-B-Ly1 -antistoffet, eller funksjonelle varianter derav, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvens som for en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus. Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med VL-regionen av muse- B-Ly1 -antistoffet, eller funksjonelle varianter derav, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvens som for en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
[0027] Oppfinnelsen er videre rettet mot en ekspresjonsvektor omfattende hvilke som helst av de isolerte polynukleotider beskrevet ovenfor, og en vertscelle som omfatter en slik ekspresjonsvektor. Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot en vertscelle omfattende hvilke som helst av de isolerte polynukleotider beskrevet ovenfor.
[0028] Ved ett aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR: 15, SEKV ID NR: 16 og SEKV ID NR:17. (CDR VH-i); (b) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:25, SEKV ID NR:26 og SEKV ID NR:27 (CDR VH.2); og SEKV ID NR:28, hvor polypeptidet er et fusjonspolypeptid. Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende SEKV ID NR:18, SEKV ID NR: 19 og SEKV ID NR:20. (CDR VL), hvor polypeptidet er et fusjonspolypeptid.
[0029] Oppfinnelsen er også rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende sekvensen SEKV ID NR:1 eller en variant derav. Oppfinnelsen er videre rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende sekvensen SEKV ID NR:2 eller en variant derav. Ved én utførelsesform omfatter hvert av disse polypeptider videre en human Fc-region. Oppfinnelsen er også rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:30; SEKV ID NR:32; SEKV ID NR:34; SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40;
SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48; SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52; SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58;
SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72, eller en variant derav. Oppfinnelsen er videre rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende sekvensen SEKV ID NR:76 eller en variant derav. Ved én utførelsesform omfatter hvert av disse polypeptider videre en human Fc-region.
[0030] Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et polypeptid omfattende en sekvens som stammer fra muse-B-Ly1 -antistoffet, og en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid, samt et antigenbindende molekyl omfattende et slikt polypeptid. Ved én utførelsesform er det antigenbindende molekyl et antistoff. Ved en foretrukket utførelsesform er antistoffet kimærisk. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet humanisert eller primatisert.
[0031] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende SEKV ID NR: 13 eller en variant derav. Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende SEKV ID NR: 14.
[0032] Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et ABM som er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1 -antistoffet med hensyn til binding til CD20, og som er kimærisk. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff eller et fragment derav. Ved en ytterligere utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff omfattende en VH-region med en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:1 ; SEKV ID NR:30; SEKV ID NR:32; SEKV ID NR:34; SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40; SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48; SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52; SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58; SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72. Ved en annen utførelsesform er ABM is et rekombinant antistoff omfattende en VL-region med en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR: 2 og SEKV ID NR:76. Ved en ytterligere utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff som er primatisert. Ved enda en ytterligere utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff som er humanisert. Ved en annen utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff omfattende en human Fc-region. Ved en ytterligere utførelsesform kan hvilke som helst av ABM omtalt ovenfor være konjugert til en del så som et toksin eller en radiomerkesubstans.
[0033] Oppfinnelsen angår videre et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, hvilket ABM har modifiserte oligosakkarider. Ved én utførelsesform har de modifiserte oligosakkarider redusert fukosylering sammenliknet med ikkemodifiserte oligosakkarider. Ved andre utførelsesformer er de modifiserte oligosakkarider hybride eller komplekse. Ved en ytterligere utførelsesform har ABM en øket andel av ikke-fukosylerte oligosakkarider eller todelte ikkefukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen av molekylet. Ved én utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider hybride. Ved en ytterligere utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider komplekse. Ved én utførelsesform er minst 20% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet ikke-fukosylerte eller todelte, ikke-fukosylerte. Ved mer foretrukne utførelsesformer er minst 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% eller 75% eller mer av oligosakkaridene ikke-fukosylerte eller todelte, ikke-fukosylerte.
[0034] Oppfinnelsen angår videre et polynukleotid som koder for hvilke som helst av ABM omtalt ovenfor, samt ekspresjonsvektorer og celler omfattende et slikt polynukleotid.
[0035] Oppfinnelsen angår videre en fremgangsmåte for fremstilling av et ABM som er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1 -antistoffet om binding til CD20, og hvor nevnte ABM er kimærisk; hvilken fremgangsmåte omfatter: (a) dyrking av en vertscelle omfattende et polynukleotid som koder for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse i et medium under betingelser som muliggjør ekspresjon av polynukleotidet som koder for dette ABM; og (b) gjenvinning av dette ABM fra den resulterende kultur.
[0036] Ved et annet aspekt angår oppfinnelsen et farmasøytisk preparat omfattende ABM ifølge oppfinnelsen. Det er påtenkt at det farmasøytiske preparat videre kan omfatte en farmasøytisk akseptabel bærer, en adjuvans eller en kombinasjon derav.
[0037] Ved et ytterligere aspekt angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for behandling av en sykdom som kan behandles med B-celle-uttømming.
Fremgangsmåten omfatter administrering av en terapeutisk effektiv mengde av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse til et menneske som trenger det. Ved en foretrukket utførelsesform behandles sykdommen ved administrering av et ABM som er et kimærisk antistoff, eller et kimærisk fragment av et antistoff.
[0038] Ved enda et annet aspekt angår oppfinnelsen en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTI II -aktivitet i en mengde tilstrekkelig til å modifisere oligosakkaridene i Fcregionen dannet av vertscellen, hvor ABM er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1 -antistoffet med hensyn til binding til CD20, og hvor ABM er kimærisk. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTI II -aktivitet et fusjonspolypeptid. Ved en annen utførelsesform er ABM dannet av vertscellen et antistoff eller et antistoff -fragment. Ved en ytterligere utførelsesform omfatter ABM en region ekvivalent med Fc-regionen av et humant IgG.
[0039] Oppfinnelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid omfattende minst én komplementaritetesbestemmende region av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller en variant eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Slike isolerte polynukleotider koder fortrinnsvis for et fusjonspolypeptid som er et antigenbindende molekyl. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitets-bestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved en annen utførelsesform koder polynukleotidet for hele den variable region av den lette eller tunge kjede av et kimærisk (f.eks. humanisert) antistoff. Oppfinnelsen er videre rettet mot polypeptidene som kodes for av slike polynukleotider.
[0040] Ved en annen utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et antigenkombinerende molekyl omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller en variant- eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, og omfattende en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved et annet aspekt omfatter det antigenbindende molekyl den variable region av en lett eller tung antistoff kjede. Ved én spesielt anvendelig utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk, f.eks. humanisert, antistoff. Oppfinnelsen er også rettet mot fremgangsmåter for frembringelse av slike antigenbindende molekyler, og anvendelse av disse ved behandling av sykdom, innbefattende B-celle-lymfomef.
[0041] Foreliggende oppfinnelse er det første kjente tilfelle hvor et type II-anti-CD20-antistoff er blitt omarbeidet til å ha økte effektorfunksjoner så som ADCC, mens det fremdeles bibeholder potent apoptoseevne. Foreliggende oppfinnelse er følgelig rettet mot et omarbeidet anti-CD20-antistoff type II med øket ADCC som resultat av denne omarbeidelse og uten tap av vesentlig evne til å indusere apoptose. Ved én utførelsesform er anti-CD20-antistoffene type II blitt omarbeidet til å ha forandret glykosyleringsmønster i Fc-regionen. Ved en spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et øket nivå av todelte komplekse rester i Fc-regionen. Ved en annen spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et redusert nivå av fukoserester i Fc-regionen. Ved en annen utførelsesform har anti-CD20-antistoffene type II gjennomgått polypeptidomarbeiding. Oppfinnelsen er videre rettet mot fremgangsmåter for fremstilling av slike omarbeidede type II -antistoffer, og fremgangsmåter for anvendelse av slike antistoffer ved behandling av forskjellige B-celle-forstyrrelser, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0042] Vertscellen ifølge foreliggende oppfinnelse kan velges fra gruppen som innbefater, men som ikke er begrenset til, en CHO-celle, en BHK-celle, en NSO-celle, en SP2/0-celle, en YO-myelomcelle, en P3X63-musemyelomcelle, en PER-celle, en PER.C6-celle eller en hybridomcelle. Ved én utførelsesform omfatter vertscellen ifølge oppfinnelsen videre et transfektert polynukleotid omfatende et polynukleotid som koder for VL-regionen av muse-B-Ly1 -antistoffet eller varianter derav og en sekvens som koder for en region ekvivalent til Fcregionen av et humant immunglobulin. Ved en annen utførelsesform omfatter vertscellen ifølge oppfinnelsen videre et transfektert polynukleotid omfattende et polynukleotid som koder for Vn-regionen av muse-B-Ly1 -antistoffet eller varianter derav, og en sekvens som koder for en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant immunglobulin.
[0043] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot en vertscelle som danner et ABM som oppviser øket Fc-reseptorbindingsaffinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider. Ved én utførelsesform er den økte bindingsaffinitet til en Fc-reseptor, spesielt FcyRIIIA-reseptoren. Effektorfunksjonen som er påtenkt i det foreliggende, kan velges fra gruppen som innbefater, men som ikke er begrenset til, øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet; øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til polymorfonukleære celler; øket binding til monocyter; øket direkte signalisering som induserer apoptose; øket dendritcelleutvikling; og øket T-celle-priming.
[0044] Ved en yterligere utførelsesform omfater vertscellen ifølge foreliggende oppfinnelse minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, som er operabelt knytet til et konstitutivt promoterelement.
[0045] Ved et annet aspekt er oppfinnelsen retet mot en metode for frembringelse av et ABM i en vertscelle, omfatende: (a) dyrking av en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst et polynukleotid som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIIl-aktivitet, under betingelser som muliggjør frembringelse av nevnte ABM, og som muliggjør modifisering av oligosakkaridene som finnes på Fc-regionen av dette ABM; og (b) isolering av nevnte ABM; hvor nevnte ABM er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1 -antistoffet med hensyn til binding til CD20, og hvor nevnte ABM er kimærisk. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTII l-aktivitet et fusjonspolypeptid, fortrinnsvis omfattende det katalytiske doméne av GnTI II og Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt Golgi-residerende polypeptid valgt fra gruppen bestående av lokalisasjonsdoménet av mannosidase II, lokalisasjonsdoménet av β(1 ,2)-N-acetylglukosaminyltransferase I (''GnTI'<1>), lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av β(1 ,2)-N-acetylglukosaminyltransferase II ("GnTII") og lokalisasjonsdoménet av α1 -6-kjeme-fukosyltransferase. Golgi-lokalisasjonsdoménet er fortrinnsvis fra mannosidase II eller GnTI.
[0046] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot en fremgangsmåte for modifisering av glykosyleringsprofilen for et anti-CD20-ABM frembrakt av en vertscelle, omfattende innføring i vertscellen av minst én nukleinsyre eller ekspresjonsvektor ifølge oppfinnelsen. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff eller et fragment derav; fortrinnsvis omfattende Fc-regionen av et IgG. Alternativt er polypeptidet et fusjonsprotein som innbefatter en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant IgG.
[0047] Ved ett aspekt angår oppfinnelsen et rekombinant, kimærisk antistoff, eller et fragment derav, som kan konkurrere med muse-B-Ly1 -antistoffet med hensyn til binding til CD20, og med redusert fukosylering.
[0048] Ved et annet aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot en fremgangsmåte for modifisering av glykosyleringen av det rekombinante antistoff eller et fragment derav ifølge oppfinnelsen ved anvendelse av et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt Golgi-residerende polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter fusjonspolypeptidene ifølge oppfinnelsen det katalytiske doméne av GnTIII. Ved en annen utførelsesform er Golgi-lokalisasjonsdoménet valgt fra gruppen bestående av: lokalisasjonsdoménet av mannosidase II, lokalisasjonsdoménet av GnTI, lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av GnTII og lokalisasjonsdoménet av α1-6-kjeme-fukosyltransferase. Fortrinnsvis er Golgilokalisasjonsdoménet fra mannosidase II eller GnTI.
[0049] Ved én utførelsesform er fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav, med modifiserte oligosakkarider hvor de modifiserte oligosakkarider har redusert fukosylering sammenliknet med ikke-modifiserte oligosakkarider. I henhold til foreliggende oppfinnelse kan disse modifiserte oligosakkarider være hybride eller komplekse. Ved en annen utførelsesform er fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav med øket andel av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen av polypeptidet. Ved én utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider hybride. Ved en annen utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider komplekse. Ved en ytterligere utførelsesform er fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav hvor minst 20% av oligosakkaridene i Fc-regionen av nevnte polypeptid er todelte, ikke-fukosylerte. Ved en foretrukket utførelsesform er minst 30% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet todelte, ikkefukosylerte. Ved en annen foretrukket utførelsesform er minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet todelte, ikke-fukosylerte.
[0050] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav, som oppviser øket Fc-reseptorbindingsaffinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider. Ved én utførelsesform er den økte bindingsaffinitet til en Fcaktiverende reseptor. Ved en ytterligere utførelsesform er Fc-reseptoren Fcyaktiverende reseptor, spesielt FcyRllla-reseptoren. Effektorfunksjonen som er påtenkt i det foreliggende, kan være valgt fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet; øket binding til NK-celler; øket binding til makrofager; øket binding til polymorfonukleære celler; øket binding til monocytter; øket direkte signalisering som induserer apoptose; øket dendrittcelleutvikling; og øket T-celle-priming.
[0051] Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et rekombinant, kimærisk antistoff-fragment, med bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet og inneholdende Fc-regionen, som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse.
[0052] Ved et annet aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot et fusjonsprotein som innbefatter et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:1 og en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin, og som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse.
[0053] Ved et annet aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot et fusjonsprotein som innbefatter et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2 og en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin og omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse.
[0054] Ved ett aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et rekombinant, kimærisk antistoff, frembrakt ved hjelp av hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer. Ved et annet aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et rekombinant, kimærisk antistofffragment frembrakt ved hjelp av hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer. Ved et annet aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et fusjonsprotein frembrakt ved hjelp av hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0055] Oppfinnelsen er videre rettet mot en fremgangsmåte for behandling av en sykdom som kan behandles ved B-celle-uttømming, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av det rekombinante, kimæriske antistoff eller fragmentet derav, frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse, til et menneske som trenger det.
Det vises nå til tegningene.
[0056] Fig 1. Nukleotid- (SEKV ID NR:3) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:1) for VH-regionen av muse-B-Ly1.
[0057] Fig 2. Nukleotid- (SEKV ID NR:4) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:2) for VL-regionen av muse-B-Ly1 .
[0058] Fig 3. Binding av Rituximab® (O) og ch-B-Ly1 (Δ) til CD20 på Raji B-lymfomceller.
[0059] Fig 4. B-celle-uttømming ved Rituximab® (O) og ch-B-Ly1 (Δ) i fullblod fra de tre forskjellige klasser av FcyRllla-158V/F-genotype: (A) fullblod fra en F/F-donor, homozygot med hensyn til lavereaffinitets-reseptoren; (B) fullblod fra en F/V-donor, heterozygot med hensyn til affinitetsreseptoren; og (C) fullblod fra en V/V-donor, homozygot med hensyn til høyereaffinitetsreseptoren.
[0060] Fig 5. Nukleotid- (SEKV ID NR:1 1) og aminosyresekvens (SEKV ID NR: 13) for den tunge kjede av et kimærisk, anti-CD20-antistoff.
[0061] Fig 6. Nukleotid- (SEKV ID NR:12) og aminosyresekvens (SEKV ID NR: 13) for den lette kjede av et kimærisk, anti-CD20-antistoff.
[0062] Fig 7. Nukleotid- og aminosyresekvenser for muse- B-Ly1 -antistoff-CDR: (A) Forutsette CDR for VH-regionen. (B) Forutsette CDR for VL-regionen.
[0063] Fig 8. MALDI-TOF-profil for et glyko-omarbeidet, kimaerisk B-Ly1-antistoff. (A) Tabell som detaljert viser prosentandelene av spesifikke topper; (B) Spektrum for glyko-omarbeidet kimaerisk B-Ly1 ; (C) Spektrum for glykoomarbeidet kimærisk B-Ly1 behandlet med Endo-H.
[0064] Fig 9. Binding av forskjellige humaniserte anti-CD20-antistoffer til Raji B-celler. Forskjellene mellom B-HH2-konstruksjonen og B-HL8- og B-HL1 1 -konstruksjonene befinner seg i rammeverk 1- og 2-regionene idet alle de tre CDR er identiske. FR1- og FR2-sekvensene i B-HL8 og B-HL11 stammer fra den humane VH3-klasse, mens det fullstendige B-HH2-rammeverk er humant VH1-avledet. B-HL1 1 er et derivat av B-HL8 med enkeltmutasjonen GlulGIn, hvor Gin er aminosyreresten i B-HH2-konstruksjonen. Dette betyr at Glul Gln-utskiftingen ikke forandringer bindingsaffiniteten eller -intensiteten. De andre forskjeller mellom B-HH2 og B-HL8 er 14 FR-rester, hvorav hvilke en eller flere vil innvirke på dette antistoffs antigenbindende oppførsel.
[0065] Fig. 10. Binding av det humaniserte anti-CD20-antistoff BHL4-KV1 på Raji-målceller. B-HL4-konstruksjonen fås fra B-HH2-antistoffet ved erstatting av FR1 i B-HH2 med FR1 fra den humane kimlinjesekvens VH1_45. Denne konstruksjon viser sterkt redusert antigenbindende evne, til tross for at den har forskjellige aminosyrer ved bare tre stillinger i FR1 . Disse rester befinner seg i stillingene 2, 14 og 30 ifølge Kabat-nummerering. Blant disse ser det ut til at stilling 30 er den mest innflytelsesrike stilling, siden den er en del av Chothiadefinisjonen av CDR1 .
[0066] Fig. 11 . Sammenlikning av bindingsoppførselen hos B-HH1 , B-HH2, B-HH3 og parentalantistoffet B-ly1 . Dataene viser at alle Ab viser en liknende ED50-verdi, men B-HH1 -konstruksjonen bindes med lavere intensitet/støkiometri enn variantene B-HH2 og B-HH3. B-HH1 kan skjelnes fra B-HH2 og B-HH3 ved sine delvis humane CDR1- og CDR2-regioner (Kabat-definisjon), samt Ala/Thrpolymorfismen i stilling 28 (Kabat-nummerering). Dette tyder på at enten stilling 28, den fullstendige CDR1 og/eller den fullstendige CDR2 er viktig for antistoff/antigen-interaksjon.
[0067] Fig. 12. Sammenlikning av B-HL1 , B-HH1 og B-ly1 -parentalantistoffet. Dataene viste fravær av en hver bindingsaktivitet i B-HL1-konstruksjonen, og omtrent halvdelen av bindingsintensiteten/støkiometrien for B-HH1 sammenliknet med B-ly1 . Både B-HL1 og B-HH1 er utformet basert på akseptor-rammeverk som stammer fra den humane VH1 -klasse. Blant andre forskjeller er stilling 71 (Kabat-nummerering) i B-HL1 -konstruksjonen en slående forskjell, noe som tyder på dens putative betydning for antigenbinding.
[0068] Fig. 13. Fluorcytometrisk analyse av kapasiteten hos anti-CD20-antistoffet overfor sitt antigen. Dataene viste at B-HL2- og B-HL3-konstruksjonene ikke viser CD20-bindingsaktivitet.
[0069] Fig. 14. Apoptose av anti-CD20-antistoffer på Z-138 MCL-celler.
[0070] Fig. 15. Apoptose ved anti-CD20-antistoffer. Analysedetaljer: 5 x 10<5 >celler pr. brønn ble utsådd i 24-brønnsplater (5 x 10<5 >celler pr. ml) i dyrkningsmedium. 10 mg av de respektive Ab, PBS for den negative kontroll eller 5 mM kamptotecin (CPT)-positive kontroll ble tilsatt i brønnene. Prøvene ble inkubert natten over (16 timer), merket med AnnV-FITC og analysert ved hjelp av FACS. Analyser ble utført in triplo (<*>): Signal for PBS alene subtrahert (PBS alene ga 8% og 2% AnnV+ for henholdsvis PR-1 - og Z-138-celler). Anvendte antistoffer var: C2B8 (kimæriske, ikke glyko-omarbeidede); BHH2-KV1 (humaniserte, ikke glyko-omarbeidede). Bemerk: denne analyse innbefatter ikke noen ytterligere effektorceller, bare målceller pluss antistoff eller kontroller.
[0071] Fig. 16. Målcelledreping ved anti-CD20-antistoffer med immuneffektorceller. Analysedetaljer: B-celle-uttømming i normalt fullblod inkubering natten over og analyse med henblikk på CD19+/CD3+ ved FACS. ADOC ved anvendelse av PBMC som effektorer, 4 timers inkubering, 25:1 effektor.mål-forhold, måldreping målt ved Calcein-retensjon i forhold til detergentlyse (100%) og lyse uten Ab (0%). Anvendte antistoffer: C2B8 (kimærisk, ikke glyko-omarbeidet form); BHH2-KV1 -wt (humanisert, ikke glyko-omarbeidet form av BHH2-KV1); BHH2:KV1-GE (humanisert, glyko-omarbeidet form av BHH2-KV1).
[0072] Fig. 17. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av ikke-modifisert, ikke glyko-omarbeidet BHH2-KV1 humanisert lgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff.
[0073] Fig. 18. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av glyko-omarbeidet BHH2-KV1 g1 humanisert lgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff. Glyko-omarbeiding utført ved koekspresjon i vertsceller av antistoffgener og gen som koder for enzym med β-1 ,4-N-acetylglukosaminyltransferase III (GnT-lll)-katalytisk aktivitet.
[0074] Fig. 19. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av glyko-omarbeidet BHH2-KV1g2 humanisert lgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff. Glyko-omarbeiding utført ved koekspresjon i vertsceller av antistoffgener og gen som koder for enzym med β-1 ,4-N-acetylglukosaminyltransferase III (GnT-lll)-katalytisk aktivitet og koder for enzym med Golgi α-mannosidase ll-katalytisk aktivitet.
[0075] Fig. 20. Binding av ikke glyko-omarbeidede og glyko-omarbeidede antistoffer til human FcgammaRllla-reseptor som viser seg på overflaten av rekombinante CHO-CD16-celler.
[0076] Fig. 21 . Apoptose av ikke-Fc-omarbeidede og Fc-omarbeidede anti-CD20-antistoffer på Z-138 MCL-celler. Analysedetaljer: 5 x 10<5 >celler pr. brønn ble utsådd i 24 brønns plater (5 x 10<5 >celler pr. ml) i dyrkningsmedium. 10 mg av det respektive Ab, PBS for den negative kontroll ble tilsatt i brønnene. Prøvene ble inkubert natten over (16 timer), merket med AnnV-FITC og analysert ved hjelp av FACS. Analyse ble utført in triplo. Ab anvendt: C2B8 = rituximab (kimærisk, ikke glyko-omarbeidet form, samme som kommersiell form); BHH2-KV1 (humanisert, ikke glyko-omarbeidet - se fig. 6 for glykosyleringsprofil); BHH2-KV1g1 (humanisert, glyko-omarbeidet - se fig. 7 for glykosyleringsprofil; BHH2-KV1g2 (humanisert, glyko-omarbeidet - se fig. 8 med hensyn til glykosyleringsprofil). Bemerk: denne analyse innbefatter ikke noen ytterligere effektorceller, kun målceller pluss antistoff eller kontroller. (<*>): Signal for PBS alene subtrahert.
[0077] Betegnelser er anvendt her i dokumentet slik de vanligvis anvendes på området, dersom ikke annet er definert, som følger.
[0078] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen antistoff ment å innbefatte hele antistoffmolekyler, innbefattende monoklonale, polyklonale og multispesifikke (f.eks. bispesifikke) antistoffer, samt antistoff-fragmenter med Fc-regionen og som bibeholder bindingsspesifisitet, og fusjonsproteiner som innbefatter en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin og som bibeholder bindingsspesifisitet. Humaniserte, primatiserte og kimæriske antistoffer er også innbefattet.
[0079] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen Fc-region ment å angi en C-terminal region av en IgG-tungkjede. Skjønt grensene for Fc-regionen av en IgG-tungkjede kan variere litt, er den humane IgG-tungkjede-Fc-region vanligvis definert som å strekke seg fra aminosyreresten i stilling Cys226 til den karboksylterminale ende.
[0080] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen region ekvivalent med Fcregionen av et immunglobulin ment å innbefatte naturlig forekommende allele varianter av Fc-regionen av et immunglobulin samt varianter med forandringer som frembringer substitusjoner, addisjoner eller delesjoner, men som ikke i noen vesentlig grad reduserer immunglobulinets evne til å mediere effektorfunksjoner (så som antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet). For eksempel kan én eller flere aminosyrer utelukkes fra den N-terminale eller C-terminale ende av Fc-regionen av et immunglobulin uten vesentlig tap av biologisk funksjon. Slike varianter kan velges i henhold til generelle regler kjent på området, for å ha minimal effekt på aktiviteten. (Se f.eks. Bowie, J.U. et al., Science 247:1306-10 (1990).
[0081] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen antigenbindende molekyl i sin videste betydning et molekyl som spesifikt binder en antigen determinant. Mer spesifikt er et antigenbindende molekyl som binder CD20, et molekyl som spesifikt bindes til et ikke-glykosylert celleoverflate-fosfoprotein på 35 000 dalton, typisk betegnet som det humane B-lymfocytt-begrensede differensieringsantigen Bp35, vanligvis omtalt som CD20. Med "spesifikt binder" menes at bindingen er selektiv for antigenet og kan skjelnes fra uønskede eller ikke-spesifikke interaksjoner.
[0082] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsene fusjon og kimærisk, anvendt med henvisning til polypeptider så som ABM, polypeptider omfattende aminosyresekvenser som stammer fra to eller flere heterologe polypeptider, så som deler av antistoffer fra forskjellige arter. Når det for eksempel gjelder kimæriske ABM, kan de ikke-antigenbindende komponenter stamme fra mange forskjellige arter, innbefattende primater så som sjimpanser og mennesker. Den konstante region av det kimæriske ABM er mest foretrukket hovedsakelig identisk med den konstante region av et naturlig humant antistoff; den variable region av det kimæriske antistoff er mest foretrukket hovedsakelig identisk med den variable region av et rekombinant anti-CD20-antistoff med aminosyresekvens som hos den variable muse-B-Ly1 -region. Humaniserte antistoffer er en spesielt foretrukket form av fusjons- eller kimærisk antistoff.
[0083] Anvendt her i dokumentet angir et polypeptid med "GnTIII-aktivitet" polypeptider som kan katalysere addisjonen av en N-acetylglykosamin- (GlcNAc-) rest i β-1 -4-binding til det β-bundne mannosid i trimannosylkjernen av N-bundne oligosakkarider. Dette innbefatter fusjonspolypeptider som oppviser enzymatisk aktivitet i likhet med, men ikke nødvendigvis identisk med, aktiviteten av β(1 ,4)-N-acetylglukosaminyltransferase III, også kjent som β-1 ,4-mannosylglykoprotein 4-beta-N-acdetylglukosaminyl-transferase (EC 2.4.1 .144), i henhold til Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB) målt i en spesiell biologisk analyse, med eller uten doseavhengighet. I det tilfelle hvor doseavhengighet finnes, behøver det ikke være identisk med doseavhengigheten hos GnTIII, men heller hovedsakelig lik doseavhengigheten i en gitt aktivitet sammenliknet med GnTIII (dvs. at kandidatpolypeptidet vil oppvise større aktivitet eller ikke mer enn ca. 25 ganger mindre, og fortrinnsvis ikke mer enn ca. ti ganger mindre aktivitet, og mest foretrukket ikke mer enn ca. tre ganger mindre aktivitet i forhold til GnTIII).
[0084] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen variant (eller analog ) et polypeptid som er forskjellig fra et spesifikt angitt polypeptid ifølge oppfinnelsen ved aminosyreinnsettinger, -delesjoner og -substitusjoner, frembrakt ved anvendelse av f.eks. rekombinante DNA-teknikker. Varianter av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter kimæriske, primatiserte eller humaniserte antigenbindende molekyler hvor én eller flere av aminosyrerestene er modifisert ved substitusjon, addisjon og/eller delesjon på en slik måte at det ikke i noen vesentlig grad påvirker antigen- (f.eks. CD20-) bindende affinitet. Rettledning med hensyn til bestemmelse av hvilken aminosyrerest som kan erstattes, adderes eller utelukkes uten at aktuelle aktiviteter oppheves, kan finnes ved sammenlikning av sekvensen for det spesielle polypeptid med sekvensen for homologe peptider, og minimalisering av antallet aminosyresekvensforandringer utført i regioner med høy homologi (konserverte regioner), eller ved erstatting av aminosyrer med konsensussekvens.
[0085] Alternativt kan rekombinante varianter som koder for disse samme eller liknende polypeptider, syntetiseres eller utvelges ved at det gjøres bruk av "overflødigheten" i den genetiske kode. Forskjellige kodonsubstitusjoner, så som de stumme forandringer som frembringer forskjellige restriksjonsseter, kan innføres for optimalisering av kloning i et plasmid eller en virusvektor, eller ekspresjon i et spesielt prokaryot eller eukaryot system. Mutasjoner i polynukleotidsekvensen kan gjenspeiles i polypeptidet eller doménene av andre peptider som er tilføyd til polypeptidet, for modifisering av egenskapene hos hvilken som helst del av polypeptidet, under forandring av karakteregenskaper så som ligandbindende affiniteter, interkjedeaffiniteter eller nedbrytnings/turnoverhastighet.
[0086] Aminosyre-"substitusjoner" er fortrinnsvis et resultat av erstatting av én aminosyre med en annen aminosyre med liknende strukturelle og/eller kjemiske egenskaper, dvs. konserverende aminosyre-erstatninger.
"Konserverende" aminosyresubstitusjoner kan gjøres på basis av likhet med hensyn til polaritet, ladning, løselighet, hydrofobitet, hydrofilitet og/eller den amfipatiske beskaffenhet av de rester som inngår. For eksempel innbefatter ikkepolare (hydrofobe) aminosyrer alanin, leucin, isoleucin, valin, prolin, fenylalanin, tryptofan og metionin; polare nøytrale aminosyrer innbefatter glycin, serin, treonin, cystein, tyrosin, asparagin og glutamin; positivt ladde (basiske) aminosyrer innbefatter arginin, lysin og histidin; og negativt ladde (sure) aminosyrer innbefatter asparaginsyre og glutaminsyre. "Innsettinger" eller "utelukkelser" er fortrinnsvis i området ca. 1 -20 aminosyrer, mer foretrukket 1-10 aminosyrer. Den tillatte variasjon kan bestemmes eksperimentelt ved at det systematisk foretas innsettinger, utelukkelser eller substitusjoner av aminosyrer i et polypeptidmolekyl ved anvendelse av rekombinante DNA-teknikker og analysering av de resulterende rekombinante varianter med henblikk på aktivitet.
[0087] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen humanisert anvendt for henvisning til et antigenbindende molekyl som stammer fra et ikke-humant antigenbindende molekyl, for eksempel et museantistoff, som bibeholder eller i det vesentlige bibeholder de antigenbindende egenskaper hos opphavsmolekylet, men som er mindre immunogent i mennesker. Dette kan oppnås ved forskjellige metoder innbefattende (a) poding av hele de ikke-humane variable doméner på humane konstante regioner under frembringelse av kimæriske antistoffer, (b) poding av bare de ikke-humane CDR på humane rammeverk- og konstante regioner med eller uten tilbakeholdelse av kritiske rammeverkrester (f.eks. slike som er viktige for bibeholdelse av gode antigenbindende affinitets- eller antistoff-funksjoner), eller (c) transplantering av hele de ikke-humane variable doméner, men "tilsløring" av dem med en humanliknende del ved erstatting av overflaterester. Slike metoder er beskrevet i Jones et al., Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 81 :6851-6855 (1984); Morrison og Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31 (3):169-217 (1994), som alle i sin helhet er medtatt her i dokumentet som referanse. Det er generelt 3 komplementaritetsbestemmende regioner, eller CDR, (CDR1 , CDR2 og CDR3) i hver av de variable tung- og lettkjededoméner av et antistoff, som er flankert av fire rammeverk-subregioner (dvs. FR1 , FR2, FR3 og FR4) i hver av de variable tung- og lettkjededoméner av et antistoff: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. En omtale av humaniserte antistoffer kan blant annet finnes i US-patent nr. 6 632 927, og i publisert US-patentsøknad nr.
2003/0175269, som begge i sin helhet er medtatt her i dokumentet som referanse.
[0088] Anvendt her i dokumentet er likeledes betegnelsen primatisert anvendt for henvisning til et antigenbindende molekyl som stammer fra et antigenbindende ikke-primat-molekyl, for eksempel et museantistoff, som bibeholder eller i det vesentlige bibeholder de antigenbindende egenskaper hos opphavsmolekylet, men som er mindre immunogent i primater.
[0089] I det tilfelle hvor det er to eller flere definisjoner av en betegnelse som anvendes og/eller er akseptert på området, er definisjonen av betegnelsen anvendt her i dokumentet ment å innbefatte alle slike betydninger dersom ikke det motsatte er uttrykkelig angitt. Et spesifikt eksempel er bruken av betegnelsen "komplementaritetsbestemmende region" ("CDR") til beskrivelse av de ikke på hverandre følgende antigenkombinerende seter som finnes i den variable region av både tung- og lettkjede-polypeptider. Denne spesielle region er beskrevet av Kabat et al., U.S. Dept. of Health og Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) og av Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), som er medtatt her i dokumentet som referanse, hvor definisjonene innbefatter overlappende eller subsett av aminosyrerester sammenliknet med hverandre. Ikke desto mindre er anvendelse av én av definisjonene til å omtale en CDR av et antistoff eller varianter derav ment å være innenfor rammen for betegnelsen som definert og anvendt her i dokumentet. De passende aminosyrerester som omfatter CDR som definert ved hver av de ovenfor angitte referanser, er angitt nedenfor i tabell I som sammenlikning. De nøyaktige restnumre som omfatter en bestemt CDR, vil variere avhengig av sekvensen og størrelsen av CDR. Fagfolk på området kan rutinemessig bestemme hvilke rester som omfatter en bestemt CDR på bakgrunn av aminosyresekvensen for den variable region av antistoffet.
TABELL 1. CDR-definisjoner<1>
1Nummerering av alle CDR-definisjoner i tabell 1 i henhold til nummereringskonvensjonene angitt av Kabat et al. (se nedenfor).
[0090] Kabat et al. definerte også et nummereringssystem for sekvenser av variable doméner, som er anvendelig for hvilket som helst antistoff. En vanlig fagperson på området kan utvetydig tilordne dette system med "Kabatnummerering<11 >til hvilken som helst sekvens for variabelt doméne, uten å basere seg på noen forsøksdata ut over selve sekvensen. Avnendt her i dokumentet angir "Kabat-nummerering" nummereringssystemet angitt av Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983). Dersom ikke annet er spesifisert, er henvisninger til nummereringen av spesifikke aminosyrereststillinger i et ABM i henhold til Kabatnummereringssystemet. Sekvensene i sekvenslisten (dvs. SEKV ID NR: 1 til SEKV ID NR: 78) er ikke nummerert i henhold til Kabat-nummereringssystemet.
[0091] Med en nukleinsyre eller et polynukleotid med en nukleotidsekvens som er for eksempel minst 95% "identisk" med en referanse-nukleotidsekvens ifølge foreliggende oppfinnelse menes at nukleotidsekvensen i polynukleotidet er identisk med referansesekvensen, bortsett fra at polynukleotidsekvensen kan innbefatte opp til fem punktmutasjoner pr. 100 nukleotider i referansenukleotidsekvensen. Med andre ord kan opp til 5% av nukleotidene i referansesekvensen utelukkes eller substitueres med et annet nukleotid for oppnåelse av et polynukleotid med en nukleotidsekvens som er minst 95% identisk med en referanse-nukleotidsekvens, eller et antall nukleotider på opp til 5% av den totale mengde nukleotider i referansesekvensen kan innføres i referansesekvensen. Søkesekvensen kan være hele sekvensen vist enten på fig.
24 eller fig. 25.
[0092] I praksis kan det bestemmes om hvorvidt hvilket som helst spesielt nukleinsyremolekyl eller polypeptid er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en nukleotidsekvens eller polypeptid-sekvens ifølge foreliggende oppfinnelse, på konvensjonell måte ved anvendelse av kjente datamaskinprogrammer. En foretrukket metode for bestemmelse av den beste totale samstemmighet mellom en søkesekvens (en sekvens ifølge foreliggende oppfinnelse) og en aktuell sekvens, også omtalt som en global sekvensinnretting, kan bestemmes ved anvendelse av FASTDB-datamaskin-programmet basert på algoritmen ifølge Brutlag et al., Comp. App. Biosci. 6:237-245 (1990). I en sekvensoppstilling er både søkesekvensen og de aktuelle sekvenser DNA-sekvenser. En RNA-sekvens kan sammenliknes ved omdannelse av U til T.
Resultatet av den globale sekvensoppstilling er prosent identitet. Foretrukne parametere anvendt i en FASTDB-oppstilling av DNA-sekvenser for beregning av prosent identitet er: Matriks=Enhetlig, k-tuppel=4, Mismatch-fradrag (-"penalty")=1 , Kombinasjons-("joining")-fradrag=30, Randomiseringsgruppelengde=0, Forkortnings-("cut off")-poeng=1 , Mellomromsfradrag=5, Mellomromsstørrelse-fradrag 0,05, Vindusstørrelse=500 eller lengden av den aktuelle nukleotidsekvens, avhengig av hvilken som er den korteste.
[0093] Hvis den aktuelle sekvens er kortere enn søkesekvensen på grunn av 5<1>- eller 3'-delesjoner, ikke på grunn av indre delesjoner, må det utføres en manuell korrigering av resultatene. Dette er på grunn av at FASTDB-programmet ikke svarer for 5'- og 3'-avkortninger av den aktuelle sekvens ved beregning av prosent identitet. Når det gjelder aktuelle sekvenser som er avkortet i 5'- eller 3'-endene, i forhold til søkesekvensen, korrigeres prosent identitet ved beregning av antallet baser i søkesekvensen som er 5' og 3' i forhold til den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet på linje, som prosent av de totale baser i søkesekvensen. Om et nukleotid er samsvarig/innrettet bestemmes ved resultatene av FASTDB-sekvensinnrettingen. Denne prosentandel blir så trukket fra prosent identitet, beregnet ved ovennevnte FASTDB-program ved anvendelse av de spesifiserte parametere, under opppnåelse av et endelig prosent identitetspoengtall. Dette korrigerte poengtall er det som anvendes for foreliggende oppfinnelses formål. Bare baser utenfor 5'- og 3'-basene i den aktuelle sekvens, vist ved FASTDB-innrettingen, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, beregnes for det formål å justere prosent identitetspoeng manuelt.
[0094] For eksempel blir en aktuell sekvens på 90 baser innrettet med en 100 basers søkesekvens for bestemmelse av prosent identitet. Delesjonene finnes i 5'-enden av den aktuelle sekvens, og derfor viser ikke FASTDB-innrettingen samsvar/innretting av de første 10 baser i 5'-enden. De 10 uparede baser representerer 10% av sekvensen (antall baser i 5'- og 3'-endene som ikke samsvarer/totalt antall baser i søkesekvensen) slik at 10% trekkes fra prosent identitet-poengtallet beregnet ved FASTDB-programmet. Hvis de gjenværende 90 baser var fullkomment tilpasset, ville den endelige prosent identitet være 90%. I et annet eksempel sammenliknes en 90 basers aktuell sekvens med en 100 basers søkesekvens. Denne gang er delesjonene indre delesjoner slik at det ikke er noen baser på 5' eller 3' av den aktuelle sekvens som ikke er tilpasset/innrettet med søkesekvensen. I dette tilfelle blir ikke prosent identitet beregnet ved FASTDB manuelt korrigert. Enda en gang blir bare baser 5‘ og 3' i den aktuelle sekvens som ikke er tilpasset/innrettet med søkesekvensen, korrigert manuelt. Ingen andre manuelle korrigeringer gjøres for foreliggende oppfinnelses formål.
[0095] Med et polypeptid med en aminosyresekvens som for eksempel er minst 95% "identisk" med en søke-aminosyresekvens ifølge foreliggende oppfinnelse, er det ment at aminosyresekvensen i det aktuelle polypeptid er identisk med søkesekvensen, bortsett fra at den aktuelle polypeptidsekvens kan innbefatte opp til fem aminosyreforandringer pr. 100 aminosyrer i søkeaminosyresekvensen. For oppnåelse av et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 95% identisk med en søke-aminosyresekvens kan, med andre ord, opp til 5% av aminosyrerestene i den aktuelle sekvens innsettes, utelukkes eller erstattes med en annen aminosyre. Disse forandringer av referansesekvensen kan skje i de amino- eller karboksyterminale stillinger av referanse-aminosyresekvensen eller hvor som helst mellom disse terminale stillinger, spredt enten individuelt blant rester i referansesekvensen, eller i én eller flere på hverandre følgende grupper i referansesekvensen.
[0096] I praksis kan det bestemmes om hvorvidt hvilket som helst bestemt polypeptid er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med et referanse-polypeptid, konvensjonelt ved anvendelse av kjente datamaskinprogrammer. En foretrukket metode for bestemmelse av det beste totale samsvar mellom en søkesekvens (en sekvens ifølge foreliggende oppfinnelse) og en aktuell sekvens, også omtalt som en global sekvensinnretting, kan bestemmes ved anvendelse av FASTDB-datamaskinprogrammet basert på algoritmen ifølge Brutlag et al., Comp. App. Biosci. 6:237-245 (1990). Ved en sekvensinnretting er både søkesekvensen og den aktuelle sekvens enten nukleotidsekvenser eller aminosyresekvenser. Resultatet av den globale sekvensinnretting er prosent identitet. Foretrukne parametere anvendt i en FASTDB-aminosyreinnretting er: Matriks=PAM 0, k-tuppel=2, Umake-fradrag = 1 , Kombinasjonsfradrag=20, Randomiserings-gruppelengde=0, Forkortningspoeng=1 , Vindusstørrelse= sekvenslengde, Mellomromsfradrag=5, Mellomromsstørrelse-fradrag 0,05, Vindusstørrelse=500 eller lengden av den aktuelle aminosyre, avhengig av hvilken som er den korteste.
[0097] Hvis den aktuelle sekvens er kortere enn søkesekvensen på grunn av N- eller C-terminale delesjoner, ikke på grunn av indre delesjoner, må det foretas en manuell korrigering av resultatene. Dette er på grunn av av FASTDB-programmet ikke gjør rede for N- og C-terminale avkortninger av den aktuelle sekvens ved beregning av global prosent identitet. Når det gjelder aktuelle sekvenser som er avkortet ved den N- og C-terminale ende, i forhold til søkesekvensen, blir prosent identitet korrigert ved beregning av antallet rester i søkesekvensen som er N- og C-terminale i forhold til den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/inn rettet med en tilsvarende aktuell rest, som prosent av de totale baser i søkesekvensen. Om en rest er samsvarig/innrettet bestemmes ved resultatene av FASTDB-sekvensinnrettingen. Denne prosentandel blir så trukket fra prosent identitet, beregnet ved ovennevnte FASTDB-program under anvendelse av de spesifiserte parametere, under oppnåelse av en endelig prosent identitetspoengverdi. Denne endelige prosent identitetspoengverdi er det som anvendes for foreliggende oppfinnelses formål. Bare rester til de N- og C-temninale ender av den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, tas i betraktning for manuell justering av prosent identitetspoengverdi. Det vil si bare søke-reststillingen utenfor de fjerneste N- og C-terminale rester i den aktuelle sekvens.
[0098] For eksempel blir en 90 aminosyreresters aktuell sekvens innrettet på linje med en 100 resters søkesekvens for bestemmelse av prosent identitet.
Delesjonen finner sted i den N-terminale ende av den aktuelle sekvens, og derfor viser ikke FASTDB-innrettningen et samsvar/innretting av de første 10 rester i den N-terminale ende. De 10 uparede rester representerer 10% av sekvensen (antall rester i den N- og C-terminale ende som ikke er samsvarige/totalt antall rester i søkesekvensen) slik at 10% trekkes fra prosent identitet-poengverdien beregnet ved FASTDB-programmet. Hvis de gjenværende 90 rester var fullkomment samstemmige, ville den endelige prosent identitet være 90%. Ved et annet eksempel sammenliknes en 90 resters aktuell sekvens med en 100 resters søkesekvens. Denne gang er delesjonene indre delesjoner slik at det ikke er noen rester i den N- eller C-terminale ende av den aktuelle sekvens som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen. I dette tilfelle blir prosent identitet beregnet ved FASTDB ikke manuelt korrigert. Enda en gang blir bare reststillinger utenfor de N- og C-terminale ender av den aktuelle sekvens, vist i FASTDB-innrettingen, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, manuelt korrigert for. Ingen andre manuelle korrigeringer skal gjøres for foreliggende oppfinnelses formål.
[0099] Anvendt her i dokumentet angir en nukleinsyre som " hybridiserer under stringente betingelset' til en nukleinsyresekvens ifølge oppfinnelsen, et polynukleotid som hybridiserer i en inkubering natten over ved 42°C i en løsning omfattende 50% formamid, 5 x SSC (750 mM NaCI, 75 mM natriumcitrat), 50 mM natriumfosfat (pH 7,6), 5x Denhardts løsning, 10% dekstransulfat og 20 μg/ml denaturert, kuttet ("sheared") laksespermie-DNA, fulgt av vasking av filtrene i 0,1 x SSC ved ca. 65°C.
[0100] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen Golgi-lokalisasjonsdomene aminosyresekvensen i et Golgi-residerende polypeptid som er ansvarlig for forankring av polypeptidet på lokasjonen i Golgi-komplekset. Lokalisasjonsdoméner omfatter generelt aminoterminale "haler" av et enzym.
[0101] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen effektorfunksjon de biologiske aktiviteter som kan tilskrives Fc-regionen (en nativ sekvens-Fc-region eller aminosyresekvens-variant-Fc-region) av et antistoff. Eksempler på antistoffeffektorfunksjoner innbefatter, men er ikke begrenset til, Fc-reseptorbindingsaffinitet, antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), cytokinutskillelse, immun-kompleksmediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, nedregulering av celleoverflatereseptorer, osv.
[0102] Anvendt her i dokumentet betraktes betegnelsene omarbeide, omarbeidet, omarbeiding og glykosyleringsomarbeiding som å innbefatte en hver manipulering av glykosyleringsmønsteret for et naturlig forekommende eller rekombinant polypeptid eller fragment derav. Glykosyleringsomarbeiding innbefatter metabolsk omarbeiding av en celles glykosyleringsmaskineri, innbefattende genetiske manipuleringer av oligosakkarid-synteseveiene under oppnåelse av forandret glykosylering av glykoproteiner som uttrykkes i celler. Videre innbefatter glykosyleringsomarbeiding virkningene av mutasjoner og cellemiljøet på glykosyleringen.
[0103] Anvendt her i dokumentet dekker betegnelsen vertscelle hver cellesystemtype som kan omarbeides til å frembringe polypeptidene og de antigenbindende molekyler ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved én utførelsesform blir vertscellen omarbeidet til å muliggjøre dannelse av et antigenbindende molekyl med modifiserte glykoformer. Ved en foretrukket utførelsesform er det antigenbindende molekyl et antistoff, antistoff-fragment eller fusjonsprotein. Ved visse utførelsesformer er vertscellene blitt ytterligere manipulert til å uttrykke økte nivåer av ett eller flere polypeptider med GnTIII-aktivitet. Vertsceller innbefatter dyrkede celler, f.eks. dyrkede pattedyrceller, så som CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, gjærceller, insektceller og planteceller, for bare å nevne noen få, men også celler som finnes i et transgent dyr, en transgen plante eller et dyrket plante- eller dyrevev.
[0104] Anvendt her i dokumentet innbefatter betegnelsen Fc-mediert cellulær cytotoksisitet antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet og cellulær cytotoksisitet mediert ved et løselig Fc-fusjonsprotein inneholdende en human Fcregion. Det er en immunmekanisme som fører til lyse av "antistoff-målsøkte celler" ved "humane immuneffektorceller", hvor:
[0105] De humane immuneffektorceller er en populasjon av leukocytter som viser Fc-reseptorer på sin overflate gjennom hvilke de bindes til Fc-regionen av antistoffer eller av Fc-fusjonsproteiner, og utfører effektorfunksjoner. En slik populasjon kan innbefatte, men er ikke begrenset til, mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) og/eller naturlige dreper-(NK-) celler.
[01 06] De antistoff-målsøkte celler er celler som er bundet av antistoffene eller Fc-fusjonsproteinene. Antistoffene eller Fc-fusjonsproteinene bindes til målceller via proteindelen som er N-terminal i forhold til Fc-regionen.
[0107] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet definert som enten en økning i antallet "antistoff-målsøkte celler" som lyseres innen en gitt tid, ved en gitt konsentrasjon av antistoff eller av Fcprotein, i mediet som omgir målcellene, ved mekanismen for Fc-mediert cellulær cytotoksisitet definert ovenfor, og/eller en reduksjon i konsentrasjonen av antistoff, eller av Fc-fusjonsprotein, i mediet som omgir målcellene, som trenges for oppnåelse av lyse av et gitt antall "antistoff-målsøkte celler" i et gitt tidsrom, ved mekanismene for Fc-mediert cellulær cytotoksisitet. Økningen i Fc-mediert cellulær cytotoksisitet er i forhold til den cellulære cytotoksisitet som medieres ved det samme antistoff eller Fc-fusjonsprotein, frembrakt ved den samme type vertsceller, under anvendelse av de samme standardfrembringelses-, -rense-, -formulerings- og -lagringsmetoder, som er kjent for fagfolk på området, men som ikke er blitt frembrakt av vertsceller som er omarbeidet til å uttrykke glykosyltransferasen GnTIII ved metodene beskrevet her i dokumentet.
[01 08] Med antistoff med øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) menes et antistoff, slik denne betegnelse er definert her i dokumentet, med øket ADCC ifølge bestemmelse ved hvilken som helst egnet metode kjent for vanlige fagfolk på området. Én akseptert in vitro-ADCC-analyse er som følger:
1 ) analysen anvender målceller som er kjent for å uttrykke målantigenet som gjenkjennes av den antigenbindende region av antistoffet;
2) analysen anvender humane mononukleære celler fra perifert blod (PBMC), isolert fra blod fra vilkårlig valgt frisk donor, som effektorceller;
3) analysen utføres i henhold til følgende protokoll:
i) PBMC isoleres under anvendelse av standard-densitetssentrifugeringsmetoder og oppslemmes med 5 x 10<6 >celler pr. ml i RPMI-celledyrkningsmedium;
ii) målcellene dyrkes ved standard-vevsdyrkningsmetoder, høstes fra den eksponensielle vekstfase med en levedyktighet høyere enn 90%, vaskes i RPMI-celledyrkningsmedium, merkes med 100 μCi <51>Cr, vaskes to ganger med celledyrkningsmedium og gjenoppslemmes i celledyrkningsmedium med en tetthet på 10<5 >celler pr. ml;
iii) 100 mikroliter av den endelige målcellesuspensjon ovenfor overføres til hver brønn i en 96 brønns mikrotiterplate;
iv) antistoffet seriefortynnes fra 4000 ng/ml til 0,04 ng/ml i celledyrkningsmedium, og 50 mikroliter av de resulterende antistoffløsninger tilsettes til målcellene i 96 brønns mikrotiterplaten, under in triplo-testing av forskjellige antistoffkonsentrasjsoner som dekker hele konsentrasjonsområdet ovenfor;
v) for maksimal frigjørings-(MR)-kontrollene får 3 ytterligere brønner i platen som inneholder de merkede målceller, 50 mikroliter av en 2% (på volumbasis) vandig løsning av ikke-ionisk detergent (Nonidet, Sigma, St. Louis), i stedet for antistoffløsningen (punkt iv ovenfor).
vi) for spontan frigjørings-(SR)-kontrollene får 3 ytterligere brønner i platen inneholdende de merkede målceller 50 mikroliter RPMI-celledyrkningsmedium i stedet for antistoffløsningen (punkt iv ovenfor);
vii) 96 brønns mikrotiterplaten blir så sentrifugert ved 50 x g i 1 minutt og inkuberes i 1 time ved 4°C;
viii) 50 mikroliter av PBMC-suspensjonen (punkt i ovenfor) tilsettes i hver brønn under frembringelse av et effektormålcelle-forhold på 25:1 , og platene anbringes i en inkubator under 5% CO2-atmosfære ved 37°C i 4 timer;
ix) den cellefrie supernatant fra hver brønn høstes, og den eksperimentelt frigjorte radioaktivitet (ER) kvantifiseres under anvendelse av en gammateller;
x) prosentandelen av spesifikk lyse beregnes for hver antistoffkonsentrasjon i henhold til formelen (ER-MR)/(MR-SR) x 100, hvor ER er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for denne antistoffkonsentrasjon, MR er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for MR-kontrollene (se punkt v ovenfor), og SR er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for SR-kontrollene (se punkt vi ovenfor);
4) "øket ADCC" er definert som enten en økning i den maksimale prosentandel av spesifikk lyse observert i antistoffkonsentrasjonsområdet testet ovenfor, og/eller en reduksjon i konsentrasjonen av antistoff som trenges for oppnåelse av halvdelen av den maksimale prosentandel av spesifikk lyse observert i antistoffkonsentrasjonsområdet testet ovenfor. Økningen i ADCC er i forhold til ADCC, målt med ovennevnte analyse, som medieres ved det samme antistoff, frembrakt ved den samme type vertsceller, under anvendelse av de samme standardfrembringelses-, -rense-, -formulerings- og -lagringsmetoder, som er kjent for fagfolk på området, men som ikke er blitt frembrakt av vertsceller som er omarbeidet til å overuttrykke GnTIII.
[0109] Ved ett aspekt angår foreliggende oppfinnelse antigenbindende molekyler med bindingsspesifisitet som hos muse-B-Ly1 -antistoffet, og oppdagelsen av at deres effektorfunksjoner kan forbedres ved forandret glykosylering. Ved én utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk antistoff. Ved en foretrukket utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et kimærisk antistoff, eller et fragment derav, omfattende CDR vist på fig. 7. Spesifikt er oppfinnelsen ved en foretrukket utførelsesform rettet mot et isolert polynukleotid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:5, SEKV ID NR: 6 og SEKV ID NR: 7. (CDR VH-i); og (b) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:21 , SEKV ID NR: 22 og SEKV ID NR: 23. (CDR VH-2; og SEKV ID NR: 24. Ved en annen foretrukket utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR: 8, SEKV ID NR: 9 og SEKV ID NR: 10. (CDR VL). Ved én utførelsesform koder hvert av disse polynukleotidene for et fusjonspolypeptid.
[0110] Ved en annen utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl VH-doménet av muse-B-Ly1 -antistoffet vist på fig. 1 , eller en variant derav; og et ikke-muse-polypeptid. Ved en annen foretrukket utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et antigenbindende molekyl omfattende VL-doménet av muse-B-Ly1-antistoffet vist på fig. 2, eller en variant derav; og et ikke-muse-polypeptid.
[0111] Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot antigenbindende molekyler omfattende én eller flere avkortede CDR av B-Ly1 . Slike avkortede CDR vil mimimalt inneholde de spesifisitetsbestemmende aminosyrerester for den gitte CDR. Med "spesifisitetsbestemmende rest" menes de rester som er direkte involvert i interaksjonen med antigenet. Vanligvis deltar bare ca. én femtedel til én tredjedel av restene i en gitt CDR i binding til antigen. De spesifisitetsbestemmende rester i en spesiell CDR kan identifiseres for eksempel ved beregning av interatomiske kontakter ut fra tredimensjonal modellering og bestemmelse av sekvensvariabiliteten ved en gitt reststilling i henhold til metodene beskrevet i Padlan et al., FASEB J. 9(1): 133-139 (1995), hvis innhold i sin helhet er medtatt her i dokumentet som referanse.
[0112] Oppfinnelsen er følgelig også rettet mot et isolert polynukleotid omfattende minst en komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant- eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, hvor det isolert polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Slike isolerte polynukleotider koder fortrinnsvis for et fusjonspolypeptid som er et antigenbindende molekyl. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved en annen utførelsesform koder polynukleotidet for hele den variable region av den lette eller tunge kjede av et kimærisk (f. eks. humanisert) antistoff.
Oppfinnelsen er videre rettet mot polypeptidene som kodes for av slike polynukleotider.
[0113] Ved en annen utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et antigenkombinerende molekyl omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller en variant eller avkortet form derav inneholdende i det minste de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, og omfattende en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1 -antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved et annet aspekt omfatter det antigenbindende molekyl den variable region av en lett eller tung antistoffkjede. Ved én spesielt anvendelig utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk, f.eks. humanisert, antistoff. Oppfinnelsen er også rettet mot fremgangsmåter for frembringelse av slike antigenbindende molekyler, og anvendelse av disse ved behandling av sykdom, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0114] Det er kjent at flere mekanismer inngår ved den terapeutiske effektivitet av anti-CD20-antistoffer, innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) og induksjon av vekststansing eller apoptose. For eksempel tyder hovedandelen av eksperimentelle beviser på at rituximab opererer via konvensjonelle effektormekanismer målt ved CDC- og ADCC-analyser. Likeledes er det vist at bestandigheten hos forskjellige lymfomceller overfor rituximab in vivo er en funksjon av deres følsomhet overfor CDC in vitro. I motsetning til dette fordrer virkningsmåten in vivo for et annet antistoff som er blitt godkjent for terapeutisk bruk, B1 , verken komplement eller naturlig dreper (NK)-celle-aktivitet.
Effektiviteten av B1 in vivo skyldes snarere dets evne til å indusere potent apoptose.
[0115] Monoklonale anti-CD20-antistoffer kan generelt inndeles i to atskilte kategorier basert på sin virkningsmekanisme med hensyn til å utrydde lymfomceller. Anti-CD20-antistoffer type I anvender hovedsakelig komplement til å drepe målceller, mens antistoffer type II opererer ved andre mekanismer, hovedsakelig apoptose. Rituximab og 1 F5 er eksempler på anti-CD20-antistoffer type I, mens B1 er et eksempel på et antistoff type II. Se f.eks. Cragg, M.S, og Glennie, M.J., Blood 103(7):2738-2743 (april 2004); Teeling, J.L. et al., Blood 104(6): 1793- 1800 (september 2004); hele innholdet i hver av disse er medtatt her i dokumentet som referanse.
[0116] Foreliggende oppfinnelse er det første kjente tilfelle hvor et anti-CD20-antistoff type II er blitt omarbeidet til å ha økte effektorfunksjoner så som ADCC, mens det fremdeles bibeholder potent apoptoseevne. Foreliggende oppfinnelse er følgelig rettet mot et omarbeidet anti-CD20-antistoff type II med øket ADCC som resultat av denne omarbeiding, og uten tap av vesentlig evne til å indusere apoptose. Ved én utførelsesform er anti-CD20-antistoffene type II blitt omarbeidet til å ha et forandret mønster for glykosylering i Fc-regionen. Ved en spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et øket nivå av todelte kompleksrester i Fc-regionen. Ved en annen spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et redusert nivå av fukoserester i Fcregionen. Se publisert US-patentsøknad nr. 2004/0093621 , hvis hele innhold er medtatt her i dokumentet som referanse. Ved en annen utførelsesform har anti-CD20-antistoffene type II gjennomgått polypeptidomarbeiding som angitt i US-patent nr. 6 737 056 eller publisert US-patentsøknad nr. 2004/0185045 eller publisert US-patentsøknad nr. 2004/0132101 ; hele inneholdet i hver av disse er medtatt som referanse. Oppfinnelsen er videre rettet mot fremgangsmåter for frembringelse av slike omarbeidede antistoffer type II samt fremgangsmåter for anvendelse av slike antistoffer ved behandling av forskjellige B-celle-forstyrrelser, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0117] Kimæriske muse-/humane antistoffer er beskrevet. Se for eksempel Morrison, S. L. et al., PNAS 11 :6851-6854 (november 1984); europeisk patentpublikasjon nr. 173494; Boulianna, G. L, et al., Nature 312:642 (desember 1984); Neubeiger, M. S. et al., Nature 314:268 (mars 1985); europeisk patentpublikasjon nr. 125023; Tan et al., J. Immunol. 135:8564 (november 1985); Sun, L. K et al., Hybridoma 5(1):517 (1986); Sahagan et al., J. Immunol.
137:1066-1074 (1986). Se generelt Muron, Nature 312:597 (desember 1984); Dickson, Genetic Engineering News 5(3) (mars 1985); Marx, Science 229:455 (august 1985); og Morrison, Science 229: 1202-1207 (september 1985). PCT-publikasjon nr. WO/881 04936 beskriver et kimærisk antistoff med konstant human region og variabel museregion, med spesifisitet overfor en epitop på CD20; musedelen av det kimæriske antistoff i Robinson-referansen stammer fra det monoklonale museantistoff 2H7 (gamma 2b, kappa). Skjønt referansen bemerker at det beskrevne kimæriske antistoff er en "hovedkandidat" for behandling av B-celleforstyrrelser, kan dette utsagn anses som ikke mer enn et forslag overfor fagfolk på området for å bestemme om hvorvidt dette forslag er nøyaktig for dette spesielle antistoff eller ikke, spesielt på grunn av at referansen mangler data som underbygger påstanden om terapeutisk effektivitet, og i det vesentlige data som anvender høyereordens-pattedyr så som primater eller mennesker.
[01 18] Metodikker for frembringelse av kimæriske antistoffer er tilgjengelige for fagfolk på området. For eksempel kan de lette og tunge kjeder uttrykkes separat, for eksempel under anvendelse av immunglobulin-lettkjeder og immunglobulin-tungkjeder i separate plasmider, eller på en enkelt (f.eks. polycistronisk) vektor. Disse kan så renses og settes sammen in vitro til fullstendige antistoffer; metodikker for utførelse av slik sammensetting er beskrevet. Se for eksempel Scharff M., Harvey Lectures 69:125 (1974). In vitroreaksjonsparametere for dannelse av IgG-antistoffer fra reduserte isolerte lette og tunge kjeder er også beskrevet. Se for eksempel Sears et al., Biochem.
16(9):201 6-25 (1977).
[0119] Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er det kimæriske ABM ifølge foreliggende oppfinnelse et humanisert antistoff. Metoder for humanisering av ikke-humane antistoffer er kjent på området. For eksempel kan humaniserte ABM ifølge foreliggende oppfinnelse frembringes i henhold til metodene ifølge USpatent nr. 5 225 539, US-patent nr. 6 180 370 eller US-patent nr. 6 632 927; hele innholdet i hvert av disse er herved medtatt som referanse. Et humanisert antistoff har fortrinnsvis innført én eller flere aminosyrerester fra en kilde som er ikkehuman. Disse ikke-humane aminosyrerester omtales ofte som "impott"-rester, som typisk er tatt fra et variabelt "import"-doméne. Humanisering kan i det vesentlige utføres i henhold til metoden ifølge Winter og medarbeidere (Jones et al., Nature, 321 :522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)) ved innsetting av hypervariable regionsekvenser i stedet for de tilsvarende sekvenser av et humant antistoff. Slike "humaniserte" antistoffer er følgelig kimæriske antistoffer (US-patent nr.
4 816 567) hvor hovedsakelig mindre enn et intakt humant variabelt doméne er blitt erstattet med den tilsvarende sekvens fra en ikke-human art. I praksis er humaniserte antistoffer typisk humane antistoffer hvor en del hypervariabel regionrester og eventuelt en del FR-rester er erstattet med rester fra analoge steder i gnager-antistoffer. De aktuelle humaniserte anti-CD20-antistoffer vil omfatte konstante regioner av humant immunglobulin.
[0120] Valget av humane variable doméner, både lette og tunge, for anvendelse ved frembringelse av de humaniserte antistoffer er meget viktig for redusering av antigenisitet. I henhold til den såkalte "beste tilpasnings"-metode blir sekvensen i det variable doméne av et gnager-antistoff screenet mot hele biblioteket av kjente humane variabelt doméne-sekvenser. Den humane sekvens som er nærmest gnagersekvensen, blir så akseptert som den humane rammeverkregion (FR) for det humaniserte antistoff (Sims et al., J. Immunol., 151 :2296 (1993); Clothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). En annen metode for utvelging av den humane rammeverksekvens er å sammenlikne sekvensen for hver individuell subregion av hele gnager-rammeverket (dvs. FR1 , FR2, FR3 og FR4) eller en kombinasjon av de individuelle subregioner (f .eks. FR1 og FR2) med et bibliotek av kjente humane variabel region-sekvenser som svarer til denne rammeverk-subregion (f. eks. bestemt ved Kabat-nummerering) og velge den humane sekvens for hver subregion eller kombinasjon som er nærmest gnagersekvensen (publisert US-patentsøknad nr. 2003/0040606A1 , publisert 27. feb. 2003). En annen metode anvender en bestemt rammeverkregion som stammer fra konsensussekvensen hos alle humane antistoffer i en spesiell subgruppe av lette eller tunge kjeder. Det samme rammeverk kan anvendes for flere forskjellige humaniserte antistoffer (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151 :2623 (1993)).
[0121] Det er videre viktig at antistoffer humaniseres med retensjon av høy affinitet for antigenet og andre gunstige biologiske egenskaper. For å oppnå dette mål blir humaniserte antistoffer i henhold til en foretrukket metode frembrakt ved hjelp av en prosess for analyse av parentalsekvensene og forskjellige begrepsmessige humaniserte produkter under anvendelse av tredimensjonale modeller av parentalsekvensene og de humaniserte sekvenser. Tredimensjonale immunglobulinmodeller er alminnelig tilgjengelige og er kjent for fagfolk på området. Det er tilgjengelig datamaskinprogrammer som illustrerer og viser sannsynlige tredimensjonale konformasjonelle strukturer av utvalgte kandidatimmunglobulinsekvenser. Inspeksjon av disse fremvisninger muliggjør analyse av den sannsynlige rolle for restene ved funksjonering av kandidat-immunglobulinsekvensen, dvs. analyse av rester som innvirker på evnen hos kandidatimmunglobulinet til å binde sitt antigen. På denne måte kan FR-rester utvelges og kombineres fra mottaker- og importsekvensene slik at de ønskede antistoffkarakteregenskaper, så som øket affinitet for målantigenet (-antigenene) oppnås. Vanligvis er restene i den hypervariable region direkte og i det alt vesentlige involvert i innvirkning på antigenbinding.
[0122] Ved en annen utførelsesform blir de antigenbindende molekyler ifølge foreliggende oppfinnelse omarbeidet til å ha forøket bindingsaffinitet, for eksempel i henhold til metodene beskrevet i publisert US-patentsøknad nr.
2004/0132066, og hele innholdet i dette er medtatt her i dokumentet som referanse.
[0123] Ved én utførelsesform blir det antigenbindende molekyl ifølge foreliggende oppfinnelse konjugert til en ytterligere del, så som en radiomerkesubstans eller et toksin. Slike konjugerte ABM kan frembringes ved hjelp av tallrike metoder som er velkjente på området.
[0124] En rekke radionuklider er anvendelige ved foreliggende oppfinnelse, og fagfolk på området tillegges evnen til lett å bestemme hvilken radionuklide som er mest hensiktsmessig under en rekke omstendigheter. For eksempel er <131>jod en velkjent radionuklide som anvendes for målsøkt immunterapi. Den kliniske anvendelighet av <131>jod kan imidlertid være begrenset av flere faktorer innbefattende: åtte dagers fysisk halveringstid; dehalogenering av jodert antistoff både i blodet og på tumorsteder; og emisjonsegenskaper (f. eks. stor gammakomponent) som kan være suboptimal for lokalisert doseavsetning i tumor. Med tilkomst av bedre chelateringsmidler har muligheten til å knytte metallchelaterende grupper til proteiner øket mulighetene til å anvende andre radionuklider så som <111>indium og "yttrium. <90>Yttrium gir flere fordeler for anvendelse ved radioimmunterapeutiske anvendelser: 64 timers halveringstiden for "yttrium er lang nok til å muliggjøre antistoffopphopning ved tumor, og i motsetning til f.eks. <131>jod, er "yttrium en ren betaemitter med høy energi uten noen ledsagende gammastråling ved nedbrytningen av det, med en rekkevidde i vev på 100 til 1000 cellediametre. Videre muliggjør den minimale mengde av gjennomtrengende stråling poliklinisk administrering av "yttrium-merkede antistoffer. Dessuten er internalisering av merket antistoff ikke nødvendig for celledreping, og den lokale emisjon av ioniserende stråling skulle være letal for nabo-tumorceller som mangler mål-antigenet.
[0125] Effektive enkeltbehandlingsdoseringer (dvs. terapeutisk effektive mengder) av "yttrium-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca. 5 og ca. 75 mCi, mer foretrukket mellom ca. 10 og ca. 40 mCi. Effektive ablative enkeltbehandlings-benmargdoser av <131>jod-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca. 5 og ca. 70 mCi, mer foretrukket mellom ca. 5 og ca. 40 mCi. Effektive ablative enkeltbehandlingsdoser (dvs. kan kreve autolog benmargtransplantasjon) av <131>jod-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca. 30 og ca. 600 mCi, mer foretrukket mellom ca. 50 og mindre enn ca.
500 mCi. I forbindelse med et kimærisk anti-CD20-antistoff er en effektiv ablativ enkeltbehandlings-benmargdose av <131>jod-merkede kimæriske anti-CD20-antistoffer i området mellom ca. 5 og ca. 40 mCi, mer foretrukket mindre enn ca.
30 mCi, på grunn av den lengre sirkulerings-halveringstid i forhold til museantistoffer. Avbildingskriterier for f.eks. <111>indium-merkesubstansen er typisk mindre enn ca. 5 mCi.
[0126] Med hensyn til radiomerkede anti-CD20-antistoffer kan terapi med disse også finne sted ved anvendelse av en enkeltterapibehandling eller ved anvendelse av multiple behandlinger. På grunn av radionuklidekomponenten er det foretrukket at perifere stamceller ("PSC") eller benmarg ("BM") "høstes" for behandling av pasienter som har fått potensielt fatal benmargtoksisitet som resultat av bestråling. BM og/eller PSC høstes under anvendelse av standardteknikker, og blir så utskylt og frosset for eventuell reinfusjon. Det er dessuten meget foretrukket at det før behandling utføres en diagnostisk dosimetriundersøkelse med anvendelse av et diagnostisk merket antistoff (f .eks. under anvendelse av <111 >indium) på pasienten; et formål med dette er å sikre at det terapeutisk merkede antistoff (f.eks. med anvendelse av <90>yttrium) ikke vil bli unødvendig "konsentrert" i noe normalt organ eller vev.
[0127] Ved en foretrukket utførelsesform er foreliggende oppfinnelse rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som vist i tabell 3 nedenfor. Oppfinnelsen er videre rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en nukleotidsekvens vist i tabell 2 nedenfor. Ved en annen utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en aminosyresekvens i tabell 3. Oppfinnelsen omfatter også en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvens som hos hvilken som helst av konstruksjonene i tabell 3 med konserverende aminosyresubstitusjoner.
TABELL 2
TABELL 3
[0128] Ved en annen foretrukket utførelsesform er foreliggende oppfinnelse rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvensen vist på fig. 1 eller fig. 2. Oppfinnelsen er videre rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med nukleotidsekvensen vist på fig. 5 eller fig. 6. Ved en annen utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med aminosyresekvensen vist på fig. 5 eller fig. 6. Oppfinnelsen omfatter også en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvensen ifølge hvilken som helst av fig. 1. fig. 2, fig. 5 eller fig. 6 med konserverende aminosyresubstitusjoner.
[0129] Ved en annen utførelsesform er foreliggende oppfinnelse rettet mot en ekspresjonsvektor og/eller en vertscelle som omfatter ett eller flere isolerte polynukleotider ifølge foreliggende oppfinnelse.
[0130] Generelt kan hvilken som helst type dyrket cellelinje anvendes til å uttrykke ABM ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved en foretrukket utførelsesform anvendes CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som bakgrunnscelielinje til frembringelse av de omarbeidede vertsceller ifølge oppfinnelsen.
[0131] Den terapeutiske effektivitet av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse kan forsterkes ved at de frembringes i en vertscelle som videre uttrykker et polynukleotid som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et polypeptid som finnes i Golgiapparatet. Ved en annen foretrukket utførelsesform resulterer ekspresjonen av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse i en vertscelle som uttrykker et polynukleotid som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, i ABM med øketFc-reseptorbindingsaffinitet og øket effektorfunksjon. Ved én utførelsesform er foreliggende oppfinnelse følgelig rettet mot en vertscelle omfattende (a) en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet; og (b) et isolert polynukleotid som koder for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, så som et kimærisk, primatisert eller humanisert antistoff som binder humant CD20. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet som har GnTIII-aktivitet, et fusjonspolypeptid omfattende det katalytiske doméne av GnTIII, og Golgilokalisdasjonsdoménet er lokalisasjonsdoménet for mannosidase II. Metoder for frembringelse av slike fusjonspolypeptider og anvendelse av dem til fremstilling av antistoffer med økte effektorfunksjoner er beskrevet i midlertidig US-patentsøknad nr. 60/495 142; hele innholdet i denne er uttrykkelig medtatt her i dokumentet som referanse. Ved en annen foretrukket utførelsesform er det kimæriske ABM et kimærisk antistoff eller et fragment derav, som har bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter det kimæriske antistoff et humant Fc. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet primatisert eller humanisert.
[0132] Ved én utførelsesform kan ett eller flere polynukleotider som koder for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, uttrykkes under regulering av en konstitutiv promoter, eller alternativt et regulert ekspresjonssystem. Egnede regulerte ekspresjonssystemer innbefatter, men er ikke begrenset til, et tetracyklinregulert ekspresjonssystem, et ecdyson-induserbart ekspresjonssystem, et lac-omskiftings-ekspresjonssystem, et glukokortikoid-induserbart ekspresjonssystem, et temperatur-induserbart promotersystem og et metalltionein-metall-induserbart ekspresjonssystem. Hvis flere forskjellige nukleinsyrer som koder for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse finnes i vertscellesystemet, kan noen av dem uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, mens andre uttrykkes under kontroll av en regulert promoter. Det maksimale ekspresjonsnivå anses for å være det høyest mulige nivå av stabil polypeptidekspresjon som ikke har en betydelig uheldig virkning på celleveksthastigheten, og vil bli bestemt under anvendelse av rutineeksperimentering. Ekspresjonsnivåene bestemmes ved metoder som er generelt kjent på området, innbefattende Western blot-analyse med anvendelse av et antistoff som er spesifikt for ABM, eller et antistoff som er spesifikt for et peptidmerkemateriale koplet til ABM; og Northern blot-analyse. Ved et ytterligere alternativ kan polynukleotidet være operativt knyttet til et reportergen; ekspresjonsnivåene for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1 -antistoffet bestemmes ved måling av et signal som er korrelert med ekspresjonsnivået for reportergenet. Reportergenet kan transkriberes sammen med nukleinsyren(e) som koder for nevnte polypeptid som et enkelt mRNA-molekyl; deres respektive kodingssekvenser kan sammenknyttes enten ved et indre ribosominngangssete (IRES) eller ved en deksel ("cap")-uavhengig translasjonsforsterker (CITE). Reportergenet kan translateres sammen med minst én nukleinsyre som koder for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1 -antistoffet slik at det dannes en enkelt polypeptidkjede. Nukleinsyrene som koder for AMB ifølge foreliggende oppfinnelse, kan være operativt knyttet til reportergenet under kontroll av en enkelt promoter, slik at nukleinsyren som koder for fusjonspolypeptidet og reportergenet, transkriberes til et RNA-molekyl som alternativt spleises til to atskilte budbringer-RNA (mRNA)-molekyler; ett av de resulterende mRNA translateres til reporterproteinet, og det andre translateres til fusjonsproteinet.
[0133] Metoder som er velkjente for fagfolk på området, kan anvendes til konstruering av ekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for et ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1 -antistoffet sammen med passende transkripsjons/translasjons-kontrollsignaler. Disse metoder innbefatter rekombinante in vitro-DNA-teknikker, synteseteknikker og in vivo-rekombinasjon/genetisk rekombinasjon. Se for eksempel teknikkene beskrevet i Maniatis et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989) og Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1989).
[0134] Det kan anvendes forskjellige verts-ekspresjonsvektorsystemer til å uttrykke kodingssekvensen for ABM ifølge foreliggende oppfinnelse. Det anvendes fortrinnsvis pattedyrceller som vertssystemer transfektert med rekombinant plasmid-DNA- eller kosmid-DNA-ekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for det aktuelle protein, og kodingssekvensen for fusjonspolypeptidet. Mest foretrukket anvendes CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som vertscellesystem. Noen eksempler på ekspresjonssystemer og seleksjonsmetoder er beskrevet i følgende referanser, og referanser i disse: Borth et al., Biotechnol. Bioen. 71 (4):266-73 (2000-2001), i Werner et al., Arzneimittelforschung/Drug Res. 48(8):870-80 (1998), i Andersen og Krummen, Curr. Op. Biotechnol. 13:117-123 (2002), i Chadd og Chamow, Curr. Op.
Biotechnol. 12:188-194 (2001), og i Giddings, Curr. Op. Biotechnol. 12: 450-454 (2001). Ved alternative utførelsesformer kan andre eukaryote vertscellesystemer overveies, innbefattende gjærceller transformert med rekombinante gjærekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse; insektscellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. baculovirus) inneholdende kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet; plantecellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. blomkålmosaikkvirus, CaMV; tobakkmosaikkvirus, TMV) eller transformert med rekombinante plasmid-ekspresjonsvektorer (f.eks. Ti-plasmid) inneholdende kodingssekvensen for ABM ifølge oppfinnelsen; eller dyrecellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. adenovirus, vacciniavirus) innbefattende cellelinjer omarbeidet til å inneholde multiple kopier av DNA som koder for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet, enten stabilt amplifisert (CHO/dhfr) eller ustabilt amplifisert i dobbelt-småkromosomer (f.eks. musecellelinjer). Ved én utførelsesfomn er vektoren omfattende polynukleotidet (polynukleotidene) som koder for ABM ifølge oppfinnelsen, polycistronisk. Ved én utførelsesform er ABM omtalt ovenfor dessuten et antistoff eller et fragment derav. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff.
[0135] Når det gjelder fremgangsmåtene ifølge denne oppfinnelse, er stabil ekspresjon vanligvis foretrukket fremfor forbigående ekspresjon på grunn av at den typisk oppnår mer reproduserbare resultater og dessuten er mer tilpassbar til storskalaproduksjon. Heller enn å anvende ekspresjonsvektorer som inneholder virus-replikasjonsorigo, kan vertsceller transformeres med de respektive kodingsnukleinsyrer kontrollert ved passende ekspresjonskontrollelementer (f.eks. promoter, forsterker, sekvenser, transkripsjonsterminatorer, polyadenyleringsseter osv.) og en selekterbar markør. Etter innføring av fremmed DNA, kan omarbeidede celler få vokse i 1 -2 dager i et anriket medium, som deretter blir skiftet til et selektivt medium. Den selekterbare markør i det rekombinante plasmid gir resistens til seleksjonen og muliggjør seleksjon av celler som har stabilt integrert plasmidet i sine kromosomer og vokser under dannelse av foci som i sin tur kan klones og ekspanderes i cellelinjer.
[0136] En rekke seleksjonssystemer kan anvendes, innbefattende, men ikke begrenset til, herpes simplex-virus-thymidinkinase- (Wigler et at, Cell 11 :223 (1977)), hypoxantin-guanin fosforibosyltransferase- (Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:2026 (1962)), og adeninfosforibosyltransferase- (Lowy et at, Cell 22:817 (1980)) gener, som kan anvendes i henholdsvis tk - hgprt - eller aprf -celle. Dessuten kan antimetabolittresistens anvendes som basis for seleksjon med henblikk på dhfr, som gir resistens overfor metotreksat (Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA 77:3567 (1989); O'Hare etat , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527 (1981)); gpt, som gir resistens overfor mykofenolsyre (Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981 )); neo, som gir resistens overfor aminoglykosid G-418- (Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol. 150:1 (1981)); og hygro, som gir resistens overfor hygromycin- (Santerre etat , Gene 30:147 (1984) gener. Det er nylig beskrevet ytterligere selekterbare gener, nemlig trpB, som gir mulighet for celler å anvende indol i stedet for tryptofan; hisD, som gir mulighet for celler å anvende histinol i stedet for histidin (Hartman & Mulligan, Proc. Natl. Acad. Set USA 85:8047 (1988)); glutaminsyntasesystemet; og ODC (omitindekarboksylase) som gir resistens overfor ornitindekarboksylase-inhibitoren, 2-(difluormeyl-DL-omitin, DFMO (McConlogue, i: Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory red. (1987)).
[0137] Foreliggende oppfinnelse er videre rettet mot en metode for modifisering av glykosyleringsprofilen for ABM ifølge foreliggende oppfinnelse som dannes av en vertscelle, omfattende ekspresjon i vertscellen av en nukleinsyre som koder for et ABM ifølge oppfinnelsen, og en nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, eller en vektor omfattende slike nukleinsyrer. Det modifiserte polypeptid er fortrinnsvis IgG eller et fragment derav omfattende Fcregionen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav.
[0138] De modifiserte ABM dannet av vertscellene ifølge oppfinnelsen oppviser øket Fc-reseptor-bindende affinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav inneholdende Fc-regionen. Den økte Fc-reseptor-bindende affinitet er fortrinnsvis øket binding til en Fcy-aktiverende reseptor, så som FcyRIIIa-reseptoren. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis en økning i én eller flere av følgende: øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet, øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket Fcmediert cellulær cytotoksisitet, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til polymorfonukleære celler (PMN), øket binding til monocytter, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket dendrittcelleutvikling og øket T-celle-priming.
[0139] Foreliggende oppfinnelse er også rettet mot en fremgangsmåte for frembringelse av et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, med modifiserte oligosakkarider i en vertscelle, omfattende (a) dyrking av en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet under betingelser som muliggjør dannelse av et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, hvor polypeptidet med GnTIII-aktivitet uttrykkes i en mengde som er tilstrekkelig til å modifisere oligosakkaridene i Fc-regionen av nevnte ABM dannet av vertscellen; og (b) isolering av dette ABM. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende det katalytiske doméne av GnTIII. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter fusjonspolypeptidet videre Golgi-lokalisasjonsdoménet av et polypeptid i Golgi-apparatet.
[0140] Golgi-lokalisasjonsdoménet er fortrinnsvis lokalisasjonsdoménet av mannosidase II eller GnTI. Alternativt er Golgi-lokalisasjonsdoménet valgt fra gruppen bestående av: lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av GnTII og lokalisasjonsdoménet av α1 -6-kjerne-fukosyltransferase. ABM fremstilt ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse har øket Fc-reseptor-bindende affinitet og/eller øket effektorfunksjon. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis én eller flere av følgende: øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet (innbefattende øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet), øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til monocytter, øket binding til polymorfonukleære celler, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket dendrittcelleutvikling eller øket T-celle-priming. Den økte Fc-reseptor-bindende affinitet er fortrinnsvis øket binding til Fc-aktiverende reseptorer så som FcyRllla. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav.
[0141] Ved en annen utførelsesform er foreliggende oppfinnelse rettet mot et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet frembrakt ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge oppfinnelse som har en øket andel av todelte oligosakkarider i Fc-regionen av nevnte polypeptid. Man tenker seg at et slikt ABM omfatter antistoffer og fragmenter derav omfattende Fc-regionen. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff. Ved én utførelsesform er prosentandelen av todelte oligosakkarider i Fcregionen av ABM minst 50%, mer fortrukket minst 60%, minst 70%, minst 80%, minst 90% og mest foretrukket minst 90-95% av den totale mengde oligosakkarider. Ved enda en annen utførelsesform har ABM fremstilt ved fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen en øket andel av ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved én utførelsesform er prosentandelen av ikke-fukosylerte oligosakkarider minst 50%, fortrinnsvis minst 60 til 70%, mest foretrukket minst 75%. De ikke-fukosylerte oligosakkarider kan være av hybrid- eller komplekstypen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform har ABM dannet av vertscellene og ved fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen en øket andel av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen. De todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider kan være enten hybride eller komplekse. Fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse kan spesifikt anvendes til frembringelse av ABM hvor minst 15%, mer foretrukket minst 20%, mer foretrukket minst 25%, mer foretrukket minst 30%, mer foretrukket minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av ABM er todelte, ikkefukosylerte. Fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også anvendes til fremstilling av polypeptider hvor minst 15%, mer foretrukket minst 20%, mer foretrukket minst 25%, mer foretrukket minst 30%, mer foretrukket minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet er todelte hybride, ikke-fukosylerte.
[0142] Ved en annen utførelsesform er foreliggende oppfinnelse rettet mot et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon og/eller øket Fcreseptor-bindende affinitet, fremstilt ved fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis én eller flere av følgende: øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet (innbefattende øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet), øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til monocytter, øket binding til polymorfonukleære celler, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket dendrittcelleutvikling eller øket T-celle-priming. Ved en foretrukket utførelsesform er den økte Fcreseptor-bindende affinitet øket binding til en Fc-aktiverende reseptor, mest foretrukket FcyRIIIa. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff, et antistoff -fragment inneholdende Fc-regionen eller et fusjonsprotein som innbefatter en region som er ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff.
[0143] Foreliggende oppfinnelse er videre rettet mot farmasøytiske preparater omfattende ABM ifølge foreliggende oppfinnelse og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0144] Foreliggende oppfinnelse er videre rettet mot anvendelse av slike farmasøytiske preparater ved metoden for behandling av kreft. Spesifikt er foreliggende oppfinnelse rettet mot en fremgangsmåte for behandling av kreft, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av det farmasøytiske preparat ifølge oppfinnelsen.
[01 45] Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre fremgangsmåter for frembringelse og anvendelse av vertscellesystemer for fremstilling av glykoformer av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, med øket Fc-reseptor-bindende affinitet, fortrinnsvis øket binding til Fc-aktiverende reseptorer, og/eller med økte effektorfunksjoner, innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet. Glykoomarbeidingsmetodikken som kan anvendes med ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, er beskrevet mer detaljert i US-patent nr. 6 602 684 og midlertidig US-patentsøknad nr. 60/441 307 og WO 2004/065540; innholdet i hver av disse er i sin helhet medtatt her i dokumentet som referanse. ABM ifølge foreliggende oppfinnelse kan alternativt glyko-omarbeides til å ha reduserte fukoserester i Fcregionen i henhold til teknikkene beskrevet i EP 1 176 195 A1 , hvis hele innhold er medtatt her i dokumentet som referanse.
Frembringelse av cellelinjer for fremstilling av proteiner med forandret glykosyleringsmønster
[0146] Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer vertscelle-ekspresjonssystemer for frembringelse av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse med modifiserte glykosyleringsmønstre. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer spesielt vertscellesystemer for frembringelse av glykoformer av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse med forbedret terapeutisk verdi. Oppfinnelsen tilveiebringer derfor vertscelle-ekspresjonssystemer valgt eller omarbeidet til å uttrykke et polypeptid med GnTIII-aktivitet. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid i Golgi-apparatet. Slike vertscelle-ekspresjons-systemer kan spesifikt omarbeides til å omfatte et rekombinant nukleinsyremolekyl som koder for et polypeptid med GnTIII, operabelt knyttet til et konstitutivt eller regulert promotersystem.
[0147] Ved én spesifikk utførelsesform tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en vertscelle som er blitt omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgilokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgiapparatet. Ved ett aspekt er vertscellen omarbeidet med et nukleinsyremolekyl omfattende minst ett gen som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet.
[0148] Generelt kan hvilken som helst type dyrket cellelinje, innbefattende cellelinjene omtalt ovenfor, anvendes som bakgrunn for omarbeiding av vertscellelinjene ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved en foretrukket utførelsesform anvendes CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som bakgrunns-cellelinje for frembringelse av de omarbeidede vertsceller ifølge oppfinnelsen.
[01 49] Oppfinnelsen er forutsett å omfatte hvilke som helst omarbeidede vertsceller som uttrykker et polypeptid med GnTIII-aktivitet, innbefattende et fusjonspolypeptid som omfatter Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet, som definert her i dokumentet.
[0150] Én elier flere nukleinsyrer som koder for et polypeptid med GnTI II-aktivitet, kan uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, eller alternativt et regulert ekspresjonssystem. Slike systemer er velkjente på området og innbefatter systemene omtalt ovenfor. Hvis flere forskjellige nukleinsyrer som koder for fusjonspolypeptider med GnTI I l-aktivitet, og som omfatter Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet, omfattes i vertscellesystemet, kan noen av dem uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, mens andre uttrykkes under kontroll av en regulert promoter.
Ekspresjonsnivåer av fusjonspolypeptidene med GnTI I l-aktivitet bestemmes ved metodene som er generelt kjent på området, innbefattende Western blot-analyse, Northern blot-analyse, reportergen-ekspresjonsanalyse eller måling av GnTIII-aktivitet. Alternativt kan det anvendes et lektin som bindes til biosyntetiske produkter av GnTIII, for eksempel E4-PHA-lektin. Alternativt kan det anvendes en funksjonsanalyse som måler den økte Fc-reseptor-binding eller øket effektorfunksjon formidlet av antistoffer dannet av cellene som er omarbeidet med nukleinsyren som koder for et polypeptid med GnTI I l-aktivitet.
Identifikasjon av transfektanter eller transformanter som uttrykker proteinet med et modifisert glykosyleringsmønster
[01 51 ] Vertscellene som inneholder kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet, og som uttrykker de biologisk aktive genprodukter, kan identifiseres ved minst fire generelle fremgangsmåter: (a) DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridisering; (b) tilstedeværelse eller fravær av "markør"-genfunksjoner; (c) fastsettelse av nivået av transkripsjon målt ved ekspresjon av de respektive mRNA-transkripter i vertscellen; og (d) påvisning av genproduktet målt ved immunanalyse eller ved dets biologiske aktivitet.
[0152] Ved den første fremgangsmåte kan tilstedeværelsen av kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1 -antistoffet, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet påvises ved DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridisering under anvendelse av prober omfattende nukleotidsekvenser som er homologe med henholdsvis de respektive kodingssekvenser eller deler eller derivater derav.
[0153] Ved den andre fremgangsmåte kan det rekombinante ekspresjonsvektor/verts-system identifiseres og selekteres basert på tilstedeværelse eller fravær av visse "markør"-genfunksjoner (f.eks. thymidinkinaseaktivitet, resistens overfor antibiotika, resistens overfor metotreksat, transformasjons-fenotype, okklusjons-legemedannelse i baculovirus, osv.). Hvis for eksempel kodingssekvensen for ABM ifølge oppfinnelsen, eller et fragment derav, og kodingsssekvensen for polypeptidet med GnTI II -aktivitet innføres i en markørgensekvens av vektoren, kan rekombinanter inneholdende de respektive kodingssekvenser identifiseres ved fraværet av markørgenfunksjonen. Alternativt kan et markørgen anbringes i tandem med kodingssekvensene under kontroll av den samme eller annen promoter anvendt til regulering av ekspresjonen av kodingssekvensene. Ekspresjon av markøren som svar på induksjon eller seleksjon angir ekspresjon av kodingssekvensen for ABM ifølge oppfinnelsen og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet.
[0154] Ved den tredje fremgangsmåte kan transkripsjonsaktivitet for kodingsregionen for ABM ifølge oppfinnelsen, eller et fragment derav, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet, fastsettes ved hybridiseringsforsøk. For eksempel kan RNA isoleres og analyseres ved hjelp av Northern blot under anvendelse av en probe som er homolog til kodingssekvensene for ABM ifølge oppfinnelsen, eller et fragment derav, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet eller spesielle deler derav. Alternativt kan total mengde nukleinsyrer i vertscellen ekstraheres og analyseres med henblikk på hybridisering til slike prober.
[01 55] Ved den fjerde fremgangsmåte kan ekspresjonen av proteinproduktene fastsettes immunologisk, for eksempel ved Western blot, immunanalyser så som radioimmunpresipitasjon, enzymbundne immunanalyser og liknende. Den endelige test angående vellykkethet av ekspresjonssystemet innbefatter imidlertid påvisning av de biologisk aktive genprodukter.
Frembringelse og anvendelse av ABM med øket effektorfunksjon innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet
[0156] Ved foretrukne utførelsesformer tilveiebringer foreliggende oppfinnelse glykoformer av kimæriske ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet og med øket effektorfunksjon innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet. Glykosyleringsomarbeiding av antistoffer er beskrevet tidligere. Se f.eks. US-patent nr. 6 602 684, i sin helhet medtatt her i dokumentet som referanse.
[0157] Kliniske forsøk angående ukonjugerte monoklonale antistoffer (mAb) for behandling av noen typer kreft har nylig gitt oppmuntrende resultater. Dillman, Cancer Biother. Radiopharm. 12:223-25 (1997); Deo et at, Immunology Today 18:127 (1997). Et kimærisk, ukonjugert lgG1 er godkjent for lavgradig eller follikulært ikke-Hodgkins B-celle-lymfom. Dillman, Cancer Biother. & Radiopharm. 12:223-25 (1997), mens et annet ukonjugert mAb, et humanisert lgG1 som søker mot faste brysttumorer, også har vist lovende resultater i kliniske forsøk fase III. Deo et al., Immunology Today 18:127 (1997). Antigenene for disse to mAb uttrykkes sterkt i sine respektive tumorceller, og antistoffene formidler potent tumorødeleggelse ved effektorceller in vitro og in vivo. I motsetning til dette kan mange andre ukonjugerte mAb med fine tumorspesifisiteter ikke trigge effektorfunksjoner med tilstrekkelig potens til at det er klinisk anvendelig. Frost et al., Cancer 80:317-33 (1997); Surfus et al., J. Immunother. 19:184-91 (1996). Når det gjelder noen av disse svakere mAb, blir hjerper-cytokinterapi testet for tiden. Tilsetting av cytokiner kan stimulere antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) ved øking av aktiviteten og antallet av sirkulerende lymfocytter. Frost et al., Cancer 80:317-33 (1997); Surfus etat, J. Immunother. 19:184-91 (1996). ADCC, et lytisk angrep på antistoff-målsøkte celler, trigges ved binding av leukocyttreseptorer til den konstante region (Fc) av antistoffer.
Deo et al., Immunology Today 18:127 (1997).
[0158] En annen, men komplementerende, fremgangsmåte for øking av ADCC-aktiviteten av ukonjugerte lgG1 er å omarbeide Fc-regionen av antistoffet. Proteinomarbeidingsundersøkelser har vist at FcyR interagerer med den lavere hengselregion av IgG CH2-doménet. Lund et al., J. Immunol. 157:4963-69 (1996). FcyR-binding fordrer imidlertid også tilstedeværelse av oligosakkarider som er kovalent knyttet til det konserverte Asn 297 i CH2-regionen. Lund et al., J. Immunol. 157:4963-69 (1996); Wright og Morrison, Trends Biotech. 15:26-31 (1997), noe som tyder på at både oligosakkarid og polypeptid bidrar direkte til interaksjonssetet, eller at oligosakkaridet trenges for opprettholdelse av en aktiv CH2-polypeptidkonformasjon. Modifikasjon av oligosakkaridstrukturen kan derfor utforskes som middel for å øke affiniteten ved interaksjonen.
[0159] Et IgG-molekyl bærer to N-bundne oligosakkarider i Fcregionen, ett på hver tung kjede. Som hvilket som helst glykoprotein, frembringes et antistoff som en populasjon av glykoformer som har samme polypeptidskjelett, men som har forskjellige oligosakkarider knyttet til glykosyleringssetene. Oligosakkaridene som normalt finnes i Fc-regionen av serum-IgG, er av kompleks toantennetype (Wormald et al., Biochemistry 36:130-38 (1997), med et lavt nivå av terminal sialinsyre og todelende N-acetylglukosamin (GlnNAc), og en variabel grad av terminal galaktosylering og kjerne-fukosylering. Noen undersøkelser tyder på at den minimale karbohydratstruktur som trenges for FcyR-binding, ligger innenfor oligosakkaridkjernen. Lund et al., J. Immunol. 157:4963-69 (1996).
[0160] De muse- eller hamsteravledede cellelinjer som anvendes i industrien og akademien for dannelse av ukonjugerte terapeutiske mAb, knytter normalt de fordrede oligosakkarid-determinanter til Fc-seter. IgG som uttrykkes i disse cellelinjer, mangler imidlertid det todelende GlcNAc som finnes i små mengder i serum-IgG. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). I motsetning til dette er det nylig observert at et rottemyelomfrembrakt, humanisert lgG1 (CAMPATH-1 H) bar et todelende GlcNAc i noen av sine glykoformer. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). Det rottecelleavledede antistoff nådde en liknende maksimal in vitro-ADCC-aktivitet som CAMPATH-1 H-antistoffer dannet i standardcellelinjer, men i betydelig lavere antistoffkonsentrasjoner.
[0161] CAMPATH-antigenet er normalt til stede i høye nivåer på lymfomceller, og dette kimæriske mAb har høy ADCC-aktivitet i fravær av et todelende GlcNAc. Lifely et al., Glycobiology 318:81 3-22 (1995). I den N-bundne glykosyleringsvei tilføyes et todelende GlcNAc ved GnTIII.
Schachter, Biochem. Cell Biol. 64:163-81 (1986).
[0162] Tidligere undersøkelser anvendte en enkelt antistoffproduserende CHO-cellelinje som på forhånd var blitt omarbeidet til på en eksternt regulert måte å uttrykke forskjellige nivåer av et klonet GnTIII-genenzym (Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)). Denne fremgangsmåte påviste for første gang en meget nøyaktig korrelasjon mellom ekspresjon av GnTIII og ADCC-aktiviteten av det modifiserte antistoff. Oppfinnelsen forutsetter således også et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav med bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet, med forandret glykosylering som resultat av øket GnTIII-aktivitet. Den økte GnTIII-aktivitet resulterer i en økning i prosentandelen av todelte oligosakkarider, samt en reduksjon i prosentandelen av fukoserester, i Fc-regionen av ABM. Dette antistoff, eller fragmentet derav, har øket Fcreseptor-bindende affinitet og øket effektorfunksjon. Oppfinnelsen er dessuten rettet mot et antistoff-fragment og fusjonsproteiner omfattende en region som er ekvivalent med Fc-regionen av immunglobuliner.
Terapeutiske anvendelser av ABM fremstilt i henhold til fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen.
[0163] ABM ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes alene til å målsøke og drepe tumorceller in vivo. ABM kan også anvendes i forbindelse med et passende terapeutisk middel til behandling av humant karsinom. For eksempel kan ABM anvendes i kombinasjon med standard- eller vanlige behandlingsmetoder så som kjemoterapi eller bestrålings-terapi, eller de kan konjugeres eller knyttes til et terapeutisk medikament eller toksin, samt til et lymfokin eller en tumorinhiberende vekstfaktor, for avgivelse av det terapeutiske middel til stedet for karsinomet. Konjugatene av ABM ifølge denne oppfinnelse som er av største betydning, er (1) immuntoksiner (konjugater av ABM og en cytotoksisk del) og (2) merkede (f. eks. radiomerkede, enzym-merkede eller fluorkrom-merkede) ABM hvor merkesubstansen tilveiebringer et middel for identifisering av immunkomplekser som innbefatter det merkede ABM. ABM kan også anvendes til indusering av lyse gjennom den naturlige komplementprosess, og til å interagere med antistoffavhengige cytotoksiske celler som normalt er til stede.
[0164] Den cytotoksiske del av immuntoksinet kan være et cytotoksisk medikament eller et enzymatisk aktivt toksin av bakterie- eller planteopprinnelse, eller et enzymatisk aktivt fragment ("A-kjede") av et slikt toksin. Enzymatisk aktive toksiner og fragmenter derav som anvendes, er difteri A-kjede, ikke-bindende aktive fragmenter av difteritoksin, eksotoksin A-kjede (fra Pseudomonas aeruginosa), ricin A-kjede, abrin A-kjede, modeccin A-kjede, alfa-sarcip, Aleurites fordii-proteiner, diantinproteiner, Phytolacca americana-proteiner (PAPI, PAPII og PAP-S), momordica charantia-inhibitor, curcin, crotin, sapaonaria officinalis-inhibitor, gelonin, mitogellin, restrictocin, fenomycin og enomycin. Ved en annen utførelsesform blir ABM konjugert til småmolekylære antikreftmedikamenter. Konjugater av ABM og slike cytotoksiske deler lages under anvendelse av forskjellige bifunksjonelle proteinkoplingsmidler. Eksempler på slike reagenser er SPDP, IT, bifunksjonelle derivater av imidoestere så som dimetyladipimidat-HCI, aktive estere så som disuksinimidylsuberat, aldehyder så som glutaraldehyd, bisazidoforbindelser så som bis(p-azidobenzoyl)heksandiamin, bisdiazoniumderivater så som bis(p-diazoniumbenzoyl)-etylendiamin, diisocyanater så som tolylen-2,6-diisocyanat, og bis-aktive fluorforfindelser så som 1 ,5-difluor-2,4-dinitrobenzen. Den lyserende del av et toksin kan knyttes til Fab-fragmentet av ABM. Ytterligere passende toksiner er kjent på området, som vist i f. eks. publisert US-patentsøknad nr. 2002/0128448, i sin helhet medtatt her i dokumentet som referanse.
[0165] Ved én utførelsesform blir et kimærisk, glyko-omarbeidet ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, konjugert til ricin A-kjede. Mest fordelaktig blir ricin A-kjeden deglykosylert og frembrakt ved rekombinante metoder. En fordelaktig metode for fremstilling av ricin-immuntoksinet er beskrevet i Vitetta et al., Science 238, 1098 (1987), medtatt her i dokumentet som referanse.
[0166] Anvendt til å drepe humane kreftceller in vitro for diagnostiske formål vil konjugatene typisk bli tilsatt til celledyrkningsmediet i en konsentrasjon på minst ca. 10 nM. Formuleringen og administreringsmåten for in vitro-anvendelse er ikke avgjørende. Vandige formuleringer som er kompatible med dyrknings- eller perfusjonsmediet, vil normalt bli anvendt. Cytotoksisitet kan avleses ved konvensjonelle teknikker for bestemmelse av tilstedeværelse eller graden av kreft.
[0167] Som omtalt ovenfor, kan det lages at cytotoksisk radiofarmasøytisk middel for behandling av kreft ved konjugering av en radioaktiv isotop (f.eks. I, Y, Pr) til et kimærisk, glyko-omarbeidet ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1 -antistoffet. Betegnelsen "cytotoksisk del" anvendt her i dokumentet er ment å innbefatte slike isotoper.
[0168] Ved en annen utførelsesform fylles liposomer med et cytotoksisk medikament, og liposomene belegges med ABM ifølge foreliggende oppfinnelse. På grunn av at det er mange CD20-molekyler på overflaten av den maligne B-celle, muliggjør denne metode avgivelse av store mengder medikament til den riktige celletype.
[0169] Teknikker for konjugering av slike terapeutiske midler til antistoffer er velkjente (se f.eks. Amon et al., "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy", i Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Reisfeld et al. (red.), s. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", i Controlled Drug Delivery (2. utg.), Robinson et al. (red.), s. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", i Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (red.), s. 475-506 (1985); og Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62:1 19-58 (1982)).
[01 70] Enda andre terapeutiske anvendelser for ABM ifølge oppfinnelsen innbefatter konjugering eller binding, f.eks. ved rekombinante DNA-teknikker, til et enzym som er i stand til å omdanne en prodroge til et cytotoksisk medikament, og anvendelse av dette antistoff-enzym-konjugat i kombinasjon med prodrogen til omdannelse av prodrogen til et cytotoksisk middel på tumorstedet (se f.eks. Senter et al., "Anti-Tumor Effects of Antibody-alkaline Phosphatase", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4842-46 (1988); "Enhancement of the in vitro and in vivo Antitumor Activities of Phosphorylated Mitocycin C and Etoposide Derivatives by Monoclonal Antibody-Alkaline Phosphatase Conjugates", Cancer Research 49:5789-5792 (1989); og Senter, "Activation of Prodrugs by Antibody-Enzyme Conjugates: A New Approach to Cancer Therapy," FASEB J. 4:188-193 (1990)).
[0171] Enda en annen terapeutisk anvendelse for ABM ifølge oppfinnelsen innbefatter anvendelse, enten ukonjugert, i nærvær av komplement, eller som en del av et antistoff-medikament- eller antistoff-toksin-konjugat, til fjerning av tumorceller fra benmargen hos kreftpasienter. I henhold til denne fremgangsmåte kan autolog benmarg utspyles ex vivo ved behandling med antistoffet, og margen infunderes tilbake i pasienten [se f.eks. Ramsay et al., "Bone Marrow Purging Using Monoclonal Antibodies", J Clin. Immunol., 8(2):81-88 (1988)].
[0172] Det er videre forutsett at oppfinnelsen omfatter et enkeltkjedet immuntoksin omfattende antigenbindende doméner som muliggjør
hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1 -antistoffet (f.eks. polypeptider omfattende CDR av muse-B-Ly1 -antistoffet) og videre omfatter et toksin-polypeptid. Enkeltkjede-immuntoksinene ifølge oppfinnelsen kan anvendes til behandling av humant karsinom in vivo.
[0173] Likeledes kan det anvendes et fusjonsprotein omfattende minst den antigenbindende region av et ABM ifølge oppfinnelsen knyttet til minst en funksjonelt aktiv del av et andre protein med antitumoraktivitet, f.eks. et lymfokin eller onkostatin, til behandling av humant karsinom in vivo.
[0174] Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for selektiv dreping av tumorceller som uttrykker CD20. Denne metode omfatter omsetting av immunkonjugatet (f.eks. immuntoksinet) ifølge oppfinnelsen
med tumorcellene. Disse tumorceller kan være fra et humant karsinom.
[0175] Denne oppfinnelse tilveiebringer dessuten en metode for behandling av karsinomer (for eksempel humane karsinomer) in vivo. Denne metode omfatter administrering til et individ av en farmasøytisk effektiv
mengde av et preparat inneholdende minst ett av immunkonjugatene (f.eks. immuntoksinet) ifølge oppfinnelsen.
[0176] Ved et ytterligere aspekt er oppfinnelsen rettet mot en forbedret metode for behandling av B-celle-proliferative forstyrrelser innbefattende B-celle-lymfom, samt en autoimmun sykdom frembrakt helt eller delvis av -patogene autoantistoffer, basert på B-celle-uttømming, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av et ABM ifølge
foreliggende oppfinnelse til et menneske som trenger det. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et glyko-omdannet anti-CD20-antistoff med en bindingsspesifisitet som er hovedsakelig den samme som for muse-B-Ly1 antistoffet. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet humanisert. Eksempler på autoimmune sykdommer eller forstyrrelser innbefatter, men er ikke begrenset til, immunmedierte trombocytopenier, så som akutt idiopatisk trombocytopenisk purpura og kronisk idiopatisk trombocytopenisk purpura, dermatomyositt, Sydenhams chorea, lupusnefritt, reumatisk feber, polyglandulære syndromer, Henoch-Schonlein purpura, post-streptokokknefritt, erythema nodosum, Takayasus arteritt, Addisons sykdom, erythema multiforme, polyarteritis nodosa, ankyloserende spondylitt, Goodpastures syndrom, tromboangitis ubiterans, primær biliser cirrhose, Hashimotos tyreoiditt, tyreotoksikose, kronisk aktiv hepatitt, polymyositt/dermatomyositt, polykondritt, pamphigus vulgaris, Wegeners granulomatose, membranes nefropati, amyotrofisk lateral sklerose, tabes dorsalis, polymyaglia, perniciøs anemi, "rapidly progressive" glomerulonefritt og fibroserende alveolitt, inflammatoriske responser så som inflammatoriske hudsykdommer innbefattende psoriasis og dermatitt (f.eks. atopisk dermatitt); systemisk skleroderma og sklerose; responser forbundet med inflammatorisk tarmsykdom (så som Crohns sykdom og ulcerøs kolitt); åndenødssyndrom (inbefattende akutt åndenødssyndrom; ARDS); dermatitt; meningitt; encefalitt; uveitt; kolitt; glomerulonefritt; allergiske tilstander så som eksem og astma, og andre tilstander som innbefatter infiltrasjon av T-celler og kroniske inflammatoriske responser; aterosklerose; leukocytt-adhesjonsdefekt; reumatoid artritt; systemisk lupus erythematosus (SLE); diabetes mellitus (f.eks. diabetes mellitus type 1 , eller insulinavhengig diabetes mellitus); multippel sklerose; Reynauds syndrom; autoimmun tyreoiditt; allergisk encefalomyelitt; Sjogrens syndrom; juvenil diabetes; og immunresponser forbundet med akutt og forsinket hypersensitivitet mediert ved cytokiner og T-lymfocytter som typisk finnes ved tuberkulose, sarkoidose, polymyositt, granulomatose og vaskulitt; perniciøs anemi (Addisons sykdom); sykdommer som innbefatter leukocytt-diapedese; inflammatorisk forstyrrelse i sentralnervesystemet (CNS); multippelt organskadesyndrom; hemolytisk anemi (innbefattende, men ikke begrenset til, kryoglobulinemi eller Coombs positive anemi); myasthenia gravis; antigen-antistoff-kompleks-medierte sykdommer; anti-glomerulær basalmembran-sykdom; antifosfolipidsyndrom; allergisk neuritt; Graves' sykdom; myastenisk Eaton-Lamberts syndrom; bulløst pemfigoid; pemfigus; autoimmune polyendokrinopatier; Reiters sykdom; "stiff man"-syndrom; Behcets sykdom; kjempecellearteritt; immunkompleks-nefritt; IgA-nefropati; IgM-polyneuropatier; idiopatisk trombocytopenisk purpura (ITP) eller autoimmun trombocytopeni osv. Ved dette aspekt ved oppfinnelsen anvendes ABM ifølge oppfinnelsen til tømming av blodet for normale B-celler i et langvarig tridsrom.
[0177] I henhold til praksisen ifølge denne oppfinnelsen kan individet være et menneske-, heste-, grise-, bovint, muse-, hunde-, katte- og fugleindivid. Andre varmblodige dyr inngår også i denne oppfinnelse.
[0178] Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre metoder for hemming av veksten av humane tumorceller, behandling av en tumor i et individ og behandling av en proliferativ sykdomstype hos et individ. Disse metoder omfatter administrering til individet av en effektiv mengde av preparatet ifølge oppfinnelsen.
[0179] Det er derfor klart at foreliggende oppfinnelse omfatter farmasøytiske preparater, kombinasjoner og metoder for behandling av humane karsinomer, så som et B-celle-lymfom. For eksempel innbefatter oppfinnelsen farmasøytiske preparater for anvendelse ved behandling av humane karsinomer, omfattende en farmasøytisk effektiv mengde av et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0180] ABM-preparatene ifølge oppfinnelsen kan administreres under anvendelse av konvensjonelle administreringsmåter innbef attende, men ikke begrenset til, intravenøs, intraperitoneal, oral, intralymfatisk eller administrering direkte i tumoren. Intravenøs administrering er foretrukket.
[0181] Ved ett aspekt ved oppfinnelsen tilberedes terapeutiske utformninger inneholdende ABM ifølge oppfinnelsen for lagring ved blanding av et antistoff med den ønskede grad av renhet med eventuelle farmasøytisk akseptable bærere, tilsetningsmidler eller stabilisatorer (Remington's Pharmaceutical Sciences 16. utgave, Osol, A. red. (1980)), i form av lyofiliserte formuleringer eller vandige løsninger. Akseptable bærere, tilsetningsmidler eller stabilisatorer er ikke-toksiske for mottakere i de anvendte doser og konsentrasjoner, og innbefatter buffere så som fosfat, citrat og andre organiske syrer; antioksidanter innbefattende askorbinsyre og metionin; konserveringsmidler (så som oktadekyldimetylbenzyl-ammoniumklorid; heksametoniumklorid; benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid; fenol, butyl- eller benzylalkohol; alkylparabener så som metyl- eller propylparaben; katekol; resorcinol; cykloheksanol; 3-pentanol; og m-kresol); lavmolekylære (mindre enn ca. 10 rester) polypeptider; proteiner, så som serumalbumin, gelatin eller immunglobuliner; hydrofile polymerer så som polyvinylpyrrolidon; aminosyrer så som glycin, glutamin, asparagin, histidin, arginin eller lysin; monosakkarider, disakkarider og andre karbohydrater innbefattende glukose, mannose eller dekstriner; chelateringsmidler så som EDTA; sukkerarter så som sakkarose, mannitol, trehalose og sorbitol; saltdannende mot-ioner så som natrium; metallkomplekser (f.eks. Zn-protein-komplekser); og/eller ikkeioniske overflateaktive midler så som TWEEN™, PLURONICS™ eller polyetylenglykol (PEG).
[01 82] Eksempler på anti-CD20-ABM-formuleringer er beskrevet i W098/56418, uttrykkelig medtatt her i dokumentet som referanse. Denne publikasjon beskriver en flytende flerdoseformulering omfattende 40 mg/ml rituximab, 25 mM acetat, 150 mM trehalose, 0,9% benzylalkohol, 0,02% polysorbat 20 ved pH 5,0 som har en minimal holdbarhet på to års lagring ved 2-8°C. En annen aktuell anti-CD20-formulering omfatter 10 mg/ml rituximab i 9,0 mg/ml natriumklorid, 7,35 mg/ml natriumcitrat-dihydrat, 0,7 mg/ml polysorbat 80 og sterilt vann for injeksjon, pH 6,5. Ved foreliggende oppfinnelse vil RITUXAN® bli erstattet med et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse.
[01 83] Lyofiliserte formuleringer tilpasset for subkutan administrering er beskrevet i W097/04801 . Slike lyofiliserte formuleringer kan rekondisjoneres med et egnet fortynningsmiddel til høy proteinkonsentrasjon, og den rekondisjonerte formulering kan administreres subkutant til pattedyret som skal behandles i det foreliggende.
[0184] Formuleringen i det foreliggende kan også inneholde mer enn én aktiv forbindelse etter som det er nødvendig for den spesielle indikasjon som behandles, fortrinnsvis slike med komplementære aktiviteter som ikke på uheldig måte påvirker hverandre. Det kan for eksempel være ønskelig videre å tilveiebringe et cytotoksisk middel, et kjemoterapeutisk middel, et cytokin eller et immunundertrykkende middel (f.eks. et middel som virker på T-celler, så som cyklosporin eller et antistoff som binder T-celler, f. eks. ett som binder LFA-1). Den effektive mengde av slike andre midler avhenger av mengden av antagonist som finnes i formuleringen, typen sykdom eller forstyrrelse eller behandling, samt andre faktorer omtalt ovenfor. Disse anvendes vanligvis i samme doseringer og med administreringsmåter som anvendt i det foregående, eller omtrent fra 1 til 99% av de hittil anvendte doser.
[0185] De aktive bestanddeler kan også innfanges i mikrokapsler som for eksempel er fremstilt ved koacervasjonsteknikker eller ved grenseflatepolymerisering, for eksempel hydroksymetylcellulose, eller henholdsvis gelatin-mikrokapsler og poly(metylmetakrylat)-mikrokapsler, i kolloidale medikamentavgivelsessystemer (for eksempel liposomer, albuminmikrokuler, mikroemulsjoner, nanopartikler og nanokapsler) eller i makroemulsjoner. Slike teknikker er beskrevet i Remington's Pharmaceutical Sciences 16. utgave, Osol, A. red. (1980).
[0186] Det kan fremstilles preparater med langvarig frigjøring. Egnede eksempler på preparater med langvarig frigjøring innbefatter semipermeable matrikser av faste hydrofobe polymerer inneholdende antagonisten, hvilke matrikser er i form av formede artikler, f. eks. filmer, eller mikrokapsler.
Eksempler på matrikser for langvarig frigjøring innbefatter polyestere, hydrogeler (for eksempel poly(2-hydroksyetylmetakrylat), eller poly(vinylalkohol)), polylaktider (US-patent nr. 3773 919), kopolymerer av L-glutaminsyre og yetyl-L-glutamat, ikke-nedbrybart etylen-vinylacetat, nedbrytbare melkesyre-glykolsyre-kopolymerer så som LUPRON DEPOT™ (injiserbare mikrokuler bestående av melkesyre-glykolsyre-kopolymer og leuprolidacetat), og poly-D-(-)-3-hydroksysmørsyre.
[0187] Formuleringene for anvendelse for in vivo-administrering må være sterile. Dette oppnås lett ved filtrering gjennom sterilfiltreringsmembraner.
[0188] Preparatene ifølge oppfinnelsen kan være i mange forskjellige doseringsformer som innbefatter, men er ikke begrenset til, flytende løsninger eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, stikkpiller, polymere mikrokapsler eller mikrovesikler, liposomer og injiserbare eller infunderbare løsninger. Den foretrukne form avhenger av administreringsmåten og den terapeutiske anvendelse.
[0189] Preparatene ifølge oppfinnelsen innbefatter også fortrinnsvis konvensjonelle farmasøytisk akseptable bærere og adjuvanser kjent på området, så som humant serumalbumin, ionebyttere, aluminiumoksid, lecitin, buffersubstanser så som fosfater, glycin, sorbinsyre, kaliumsorbat, og salter eller elektrolytter så som protaminsulfat.
[0190] Den mest effektive administreringsmåte og doseringsregime for de farmasøytiske preparater ifølge denne oppfinnelse avhenger av graden og forløpet av sykdommen, pasientens helse og respons overfor behandling og den behandlende leges bedømmelse. Dosene av preparatene bør følgelig titreres til den individuelle pasient. Ikke desto mindre vil en effektiv dose av preparatene ifølge denne oppfinnelse vanligvis være i området fra ca. 0,01 til ca. 2000 mg/kg.
[0191] Molekylene beskrevet her i dokumentet kan være i mange forskjellige doseringsformer som innbefatter, men er ikke begrenset til, flytende løsninger eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, stikkpiller, polymere mikrokapsler eller mikrovesikler, liposomer, og injiserbare eller infunderbare løsninger. Den foretrukne form avhenger av administreringsmåten og den terapeutiske anvendelse.
[0192] Preparatet omfattende et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse vil bli formulert, dosert og administrert på en måte i overensstemmelse med god medisinsk praksis. Faktorer for overveielse i denne forbindelse innbefatter den spesielle sykdom eller forstyrrelse som behandles, det spesielle pattedyr som behandles, den kliniske tilstand for den individuelle pasient, forløpet av sykdommen eller forstyrrelsen, stedet for avgivelse av midlet, administreringsmetoden, timeplanen for administrering og andre faktorer kjent for praktiserende leger. Den terapeutisk effektive mengde av antagonisten som skal administreres, vil bli styrt av slike hensyn.
[0193] Som et generelt forslag vil den terapeutisk effektive mengde av antistoffet administrert parenteralt pr. dose være i området ca. 0,1 til 20 mg/kg pasient-kroppsvekt pr. dag, hvor det typiske innledende område for anvendt antagonist er i området ca. 2-10 mg/kg.
[01 94] Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et antistoff, fortrinnsvis et humanisert antistoff. Egnede doser for et slikt ukonjugert antistoff er for eksempel i området fra ca. 20 mg/m<2 >til ca. 1000 mg/m<2>. Ved én utførelsesform.er doseringen av antistoffet forskjellig fra det som for tiden anbefales for RITUXAN®. Man kan for eksempel administrere til pasienten én eller flere doser med hovedsakelig mindre enn 375 mg/m<2 >av antistoffet, f. eks. hvor dosen er i området fra ca. 20 mg/m<2 >til ca. 250 mg/m<2>, for eksempel fra ca. 50 mg/m<2 >til ca. 200 mg/m<2>.
[0195] Man kan videre administrere én eller flere innledende doser av antistoffet, fulgt av én eller flere påfølgende doser, hvor mg/m<2 >dose for antistoffet i påfølgende dose(r) overstiger mg/m<2 >dose av antistoffet i den
(de) innledende dose(r). Den innledende dose kan for eksempel være i området fra ca. 20 mg/m<2 >til ca. 250 mg/m<2 >(f.eks. fra ca. 50 mg/m<2 >til ca. 200 mg/m<2>), og den påfølgende dose kan være i området fra ca. 250 mg/m<2 >til ca.
1000 mg/m<2>.
[0196] Som angitt ovenfor, er imidlertid disse foreslåtte mengder av ABM gjenstand for en stor del terapeutisk skjønn. Nøkkelfaktoren ved utvelging av en passende dose og program er det oppnådde resultat, som angitt ovenfor. Det kan for eksempel trenges relativt høyere doser innledningsvis for behandling av pågående og akutte sykdommer. For oppnåelse av de mest effektive resultater, avhengig av sykdommen eller forstyrrelsen, blir antagonisten administrert så nær det første tegn på, diagnostisering av, tilsynekomst eller fremkomst av sykdommen eller forstyrrelsen som mulig eller under remisjon av sykdommen eller forstyrrelsen.
[0197] ABM ifølge foreliggende oppfinnelse administreres på hvilken som helst egnet måte, innbefattende parenteralt, subkutant, intraperitonealt, intrapulmonalt og intranasalt, og, hvis ønskelig for lokal immunsuppressiv behandling, intralesjonal administrering. Parenterale infusjoner innbefatter intramuskulær, intravenøs, intraarteriell, intraperitoneal eller subkutan administrering. Dessuten kan antagonist passende administreres ved pulsinfusjon, f.eks. med avtakende doser av antagonisten. Doseringen gis fortrinnsvis ved injeksjoner, mest foretrukket intravenøs eller subkutan injeksjon, avhengig delvis av om hvorvidet administreringen er kort eller kronisk.
[0198] Man kan administrere andre forbindelser, så som cytotoksiske midler, kjemoterapeutiske midler, immunsuppressive midler og/eller cytokiner med antagonistene i det foreliggende. Den kombinerte administrering innbefatter koadministrering under anvendelse av separate formuleringer eller en enkelt farmasøytisk formulering, og på hverandre følgende administrering i hvilken som helst rekkefølge, hvor det fortrinnsvis er et tidsrom hvor begge (eller alle) aktive midler samtidig utøver sine biologiske aktiviteter.
[0199] Det vil være klart at dosen av preparatet ifølge oppfinnelsen som trenges for oppnåelse av helbredelse, kan reduseres ytterligere med tidsplanoptimalisering.
[0200] I henhold til praksisen ifølge oppfinnelsen kan den farmasøytiske bærer være en lipidbærer. Lipidbæreren kan være et fosfolipid. Videre kan lipidbæreren være en fettsyre. Lipidbæreren kan også være en detergent. Anvendt her i dokumentet er en detergent hvilken som helst substans som forandrer en væskes overflatespenning, generelt reduserer den.
[0201] Ved ett eksempel ifølge oppfinnelsen kan detergenten være en ikkeionisk detergent. Eksempler på ikke-ioniske detergenter innbefatter, men er ikke begrenset til, polysorbat 80 (også kjent som Tween 80 eller (polyoksyetylensorbitan-monooleat), Brij og Triton (for eksempel Triton WR-1339 og Triton A-20).
[0202] Detergenten kan alternativt være en ionisk detergent. Et eksempel på en ionisk detergent innbefatter, men er ikke begrenset til, alkyltrimetylammoniumbromid.
[0203] I henhold til oppfinnelsen kan lipidbæreren dessuten være et liposom. Anvendt i denne patentsøknad er et "liposom" hvilken som helst membranbundet vesikkel som inneholder hvilke som helst molekyler ifølge oppfinnelsen eller kombinasjoner derav.
[0204] Eksemplene nedenfor forklarer oppfinnelsen mer detaljert. Følgende preparater og eksempler er gitt for at fagfolk på området klarere skal kunne forstå og utøve foreliggende oppfinnelse. Foreliggende oppfinnelse er imidlertid ikke begrenset med hensyn til ramme ved de eksemplifiserte utførelsesformer, som kun er påtenkt som illustrasjoner av enkeltaspekter ved oppfinnelsen, og metoder som er funksjonelt ekvivalente, er innenfor oppfinnelsens ramme. Faktisk vil forskjellige modifikasjoner av oppfinnelsen, i tillegg til dem som er beskrevet her i dokumentet, bli åpenbare for fagfolk på området ut fra foranstående beskrivelse og de medfølgende tegninger. Slike modifikasjoner er påtenkt å ligge innenfor rammen for de tilknyttede krav.
EKSEMPLER
[BEMERK: Dersom ikke annet er spesifisert, er henvisninger til nummereringen av spesifikke aminosyrerest-stiilinger i følgende eksempler i henhold til Kabatnummereringssystemet].
EKSEMPEL 1
Materialer og metoder
Kloning og ekspresjon av rekombinant antistoff B-Ly1
[0205] B-Ly1 -uttrykkende hybridomceller ble dyrket i RPMI inneholdende 10% FBS og 4 mM L-glutamin. 6 x 10<6 >celler med levedyktighet > 90% ble høstet, og total-RNA ble isolert under anvendelse av et Qiagen RNAeasy midi-sett. cDNA som kodet for de variable lette og tunge kjeder av B-Ly1 , ble amplifisert ved RT-PCR. RT-PCR-reaksjonen ble utført under anvendelse av følgende betingelser: 30 min 50°C for førstestreng-cDNA syntese; 15 min 95°C begynnelsesdenaturering; 30 sykluser på 1 min 94°C, 1 min 45°C, 1 ,5 min 72°C; og et endelig forlengelsestrinn i 10 min ved 72°C. Den forventede størrelse av PCR-produktene ble bekreftet ved gel-elektroforese. PCR-produktene ble klonet i passende E. coli-vektorer, og DNA-sekvensering bekreftet at de variable lett- og tungkjede-kodende gener var isolert.
[0206] For konstruksjon av kimæriske B-Ly1-ekspresjonsvektorer ble syntesesignalsekvenser og passende restriksjonsseter koplet til de variable kjeder ved ytterligere PCR-reaksjoner. Etter en endelig bekreftelse av den riktige DNA-sekvens for de variable kjeder, ble de kombinert med de tilsvarende humane konstante lgG1 -regioner. Etter at genene var konstruert, ble de klonet under kontroll av av MPSV-promoteren og oppstrøms for et syntetisk polyA-sete, under anvendelse av to separate vektorer, én for hver kjede, som resulterte i plasmidene pETR1808 (tungkjede-ekspresjonsvektor) og pETR1813 (lettkjedeekspresjonsvektor). Hver vektor bar en EBV OriP-sekvens.
[0207] Kimærisk B-Ly1 ble frembrakt ved ko-transfektering av HEK293-EBNA-celler med vektorer pETR1 808 og pETR1813 under anvendelse av en kalsumfosfat-transfekteringsmetode. Eksponensielt voksende HEK293-EBNA-celler ble transfektert ved kalsiumfosfatmetoden. Cellene ble dyrket som tilheftende monolag-kulturer i T-kolber under anvendelse av DMEM-dyrkningsmedium supplert med 10% FCS, og ble transfektert når de var mellom 50 og 80% konfluente. For transfektering av en T75-kolbe ble 8 millioner celler utsådd 24 timer før transfektering i 14 ml DMEM-dyrkningsmedium supplert med FCS (i en endelig konsentrasjon på 10 volum%), 250 μg/ml neomycin, og cellene ble anbrakt ved 37°C i en inkubator med 5% CO2-atmosfære natten over. For hver T75-kolbe som skulle transfekteres ble det tilberedt en løsning av DNA, CaCI2 og vann ved blanding av 47 μg total plasmidvektor-DNA delt likt mellom lett- og tungkjede-ekspresjonsvektorene, 235 μl av en 1 M CaCI2-løsning og tilsetting av vann til et sluttvolum på 469 pl. Til denne løsning ble det tilsatt 469 μΙ av en løsning av 50 mM HEPES og 280 mM NaCI, 1 ,5 mM Na2HP04-løsning ved pH 7,05 ble tilsatt, og det ble umiddelbart blandet i 10 sek. og fikk stå ved romtemperatur i 20 sek. Suspensjonen ble fortynnet med 12 ml DMEM supplert med 2% FCS, og tilsatt til T75 i stedet for det eksisterende medium. Cellene ble inkubert ved 37°C og 5% C02 i ca. 17-20 timer, og medium ble deretter erstattet med 12 ml DMEM, 10% FCS. For frembringelse av umodifisert antistoff "chB-LyT<1 >ble cellene transfektert med bare antistoff-ekspresjonsvektorer pETR1808 og pETR1813 i et forhold på 1 :1. For fremstilling av det glyko-omarbeidede antistoff "chB-Ly1-ge" ble cellene ko-transfektert med fire plasmider, to for antistoffekspresjon (pETR1808 og pETR1813), ett for en fusjons-GnTIII-polypeptidekspresjon (pETR1519) og én for mannosidase ll-ekspresjon (pCLF9) i et forhold på henholdsvis 4:4:1 :1 . På dag 5 etter transfektering ble supematanten høstet og sentrifugert i 5 min ved 1200 omdr. pr. min., fulgt av en andre sentrifugering i 10 min ved 4000 omdr. pr. min., og holdt ved 4°C.
[0208] chB-Ly1 og chB-Ly1 -ge ble renset fra dyrkningssupematant under anvendelse av tre sekvensielle kromatografiske trinn, protein A-kromatografi, kationebytterkromatografi og et størrelsesutelukkelseskromatografitrinn på en Superdex 200-kolonne (Amersham Pharmacia) idet bufferen ble skiftet til fosfatbufret saltløsning, og toppen for monomert antistoff fra dette siste trinn ble oppsamlet. Antistoffkonsentrasjonen ble anslått under anvendelse av et spektrofotometer, ut fra absorbansen ved 280 nm.
Oligosakkaridanalyse
[0209] Oligosakkarider ble frigjort enzymatisk fra antistoffene ved PNGaseF-digerering, hvor antistoffene enten var immobilisert på en PVDF-membran eller i løsning.
[0210] Den resulterende digereringsløsning inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble enten tilberedt direkte for MALDI/TOF-MS-analyse eller ytterligere nedbrutt med EndoH-glykosidase før prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS-analyse.
Oligosakkaridfrigjøringsmetode for PVDF-membran-immobiliserte antistoffer [0211] Brønnene i en 96-brønnsplate laget av en PVDF- (Immobilon P, Millipore, Bedford, Massachusetts) membran ble fuktet med 100 μΙ metanol, og væsken ble trukket gjennom PVDF-membranen under anvendelse av vakuum påført på Multiscreen vakuum-manifolden (Millipore, Bedford, Massachusetts). PVDF-membranene ble vasket tre ganger med 300 μΙ vann. Brønnene ble deretter vasket med 50 μl RCM-buffer (8M urea, 360 mM Tris, 3,2 mM EDTA, pH 8,6). Mellom 30 og 40 μg antistoff ble tilsatt i en brønn inneholdende 10 μΙ RCM-buffer. Væsken i brønnen ble trukket gjennom membranen ved påføring av vakuum, og membranen ble deretter vasket to ganger med 50 μΙ RCM-buffer. Reduksjon av disulfidbroer ble utført ved tilsetting av 50 μΙ 0,1 M ditiotreitol i RCM og inkubering ved 37°C i 1 time.
[0212] Etter reduksjon ble det påført vakuum for fjerning av ditiotreitolløsningen fra brønnen. Brønnene ble vasket tre ganger med 300 μΙ vann før utførelse av karboksymetyleringen av cysteinrestene ved tilsetting av 50 μΙ 0,1 M jodeddiksyre i RCM-buffer og inkubering ved romtemperatur i mørke i 30 min.
[0213] Etter karboksymetylering ble brønnene påført vakuum og deretter vasket tre ganger med 300 μΙ vann. PVDF-membranen ble deretter blokkert for forhindring av adsorpsjon av endoglykosidasen, ved inkubering av 100 μΙ av en 1% vandig løsning av polyvinylpyrrolidon 360 ved romtemperatur i 1 time. Blokkeringsreagenset ble deretter fjernet ved svakt vakuum fulgt av tre vaskinger med 300 μΙ vann.
[0214] N-bundne oligosakkarider ble frigjort ved tilsetting av 2,5 mE peptid-N-glykosydase F (rekombinant N-Glycanase, GLYKO, Novato, CA) og 0,1 mE Sialidase (GLYKO, Novato, CA), for fjerning av potensielle ladde monosakkaridrester, i et sluttvolum på 25 μΙ i 20 mM NaHC03, pH 7,0). Digerering ble utført i 3 timer ved 37°C.
Oligosakkaridfrigjøringsmetode for antistoffer i løsning
[0215] Mellom 40 og 50 μg antistoff ble blandet med 2,5 mE PNGaseF (Glyko, U.S.A.) i 2 mM Tris, pH 7,0 i et sluttvolum på 25 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C.
Anvendelse av endoglykosidase H-digerering av PNGaseF-frigjorte oligosakkarider for tilordning av hybride todelte oligosakkaridstrukturer til nøytrale MALDI/TOF-MS-oligosakkaridtopper
[0216] De PNGaseF-frigjorte oligosakkarider ble deretter digerert med Endoglykosidase H (EC 3.2.1.96). For EndoH-digerering ble 15 mE EndoH (Roche, Sveits) tilsatt til PNGaseF-digereringsproduktet (antistoff i løsning-metode ovenfor) under oppnåelse av et sluttvolum på 30 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C. EndoH spalter mellom N-acetylglukosaminrestene i chitobiosekjernen i N-bundne oligosakkarider. Enzymet kan bare digerere oligomannose og de fleste glykaner av hybridtypen, mens komplekse oligosakkaridtyper ikke hydrolyseres.
Prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS
[0217] De enzymatiske nedbrytningsprodukter inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble inkubert i ytterligere 3 timer ved romtemperatur etter tilsetting av eddiksyre til en sluttkonsentrasjon på 150 mM, og ble deretter ledet gjennom 0,6 ml kationebytterharpiks (AG50W-X8-hrpiks, hydrogenform, 150-75 pm (100-200 mesh), BioRad, Sveits) pakket i en mikro-bio-spinn-kromatografikolonne (BioRad, Sveits) for fjerning av kationer og proteiner. Én mikroliter av den resulterende prøve ble påført på en målplate av rustfritt stål og blandet på platen med 1 μl sDHB-matriks. sDHB-matriks ble tilberedt ved oppløsing av 2 mg 2,5-dihydroksybenzosyre pluss 0,1 mg 5-metoksysalicylsyre i 1 ml etanol/10 mM vandig natriumklorid 1 :1 (på volumbasis). Prøvene ble lufttørket, 0,2 pl etanol ble påført, og prøvene fikk til slutt omkrystalliseres under luft.
MALDI/TOF-MS
[0218] MALDI-TOF-massespektrometret anvendt til å oppnå massespektraene var en Voyager Elite (Perspective Biosystems). Instrumentet ble operert i lineær konfigurasjon, med en akselerering på 20kV og 80 ns forsinkelse. Ekstern kalibrering under anvendelse av oligosakkaridstandarder ble anvendt for masse-tilordning av ionene. Spektraene fra 200 laserskudd ble oppsummert for oppnåelse av sluttspektret.
Uttømming av fullblod-B-celler
[0219] 495 μl heparinisert blod fra en frisk donor ble porsjonert i 5 ml polystyrenrør, 5 μl 100 ganger konsentrerte antistoffprøver (sluttkonsentrasjon 1-1000 ng/ml) eller bare PBS ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 37°. Etter 24 timer ble 50 μΙ blod overført til et nytt rør og merket med anti-CD3-FITC, anti-CD19-PE og anti-CD45-CyChrome (Becton-Dickinson) i 15 min ved romtemperatur i mørke. Før analyse ble det tilsatt 500 μΙ FACS-buffer (PBS inneholdende 2% FCS og 5mM EDTA) til rørene. CD3-FITC- og CD19-PE-fluorescens av blodprøvene ble væskestrømcytometrisk analysert ved innstilling av en terskel på CD45-CyChrome. B celle-uttømming ble bestemt ved avsetting av forholdet mellom CD19<+ >B-celler og CD3<+ >T-celler.
Binding av anti-CD20-antistoffer til Raji-celler
[0220] 500 000 i 180 μΙ FACS-buffer (PBS inneholdende 2% FCS og 5mM EDTA) ble overført til 5 ml polystyrenrør, og 20 μΙ 10 ganger konsentrert anti-CD20-antistoffprøver (1-5000 ng/ml sluttkonsentrasjon) eller bare PBS ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 4°C i 30 min. Prøvene ble deretter vasket to ganger med FACS-buffer og pelletert ved 300 x g i 3 min. Supernatant ble avsugd, og cellene ble tatt opp i 100 μΙ FACS-buffer, 1 μΙ anti-Fc-spesifikke F(ab')2-FITC-fragmenter (Jackson Immuno Research Laboratories, USA) ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 4°C i 30 min. Prøvene ble vasket to ganger med FACS-buffer og tatt opp i 500 μΙ FACS-buffer inneholdende 0,5 μg/ml Pl for analyse ved væskestrømcytometri. Binding ble bestemt ved avsetting av den geometriske middelfluorescens mot antistoffkonsentrasjonene.
EKSEMPEL 2
Høyhomologiakseptor-fr-emgangsmåte
[0221] Høyhomologi-antistoffakseptor-rammeverksøkingen ble utført ved innretting av muse-B-Ly1 -proteinsekvensen mot en samling av humane kimlinjesekvensr og plukking av den humane sekvens som viste den høyeste sekvensidentitet. Her ble sekvensen VH1_10 fra VBase-databasen valgt som tungkjederammverk-akseptorsekvens, og VK_2_40-sekvensen ble valgt til være rammeverkakseptoren for den lette kjede. På disse to akseptor-rammeverk ble de tre komplementaritetsbestemmende regioner (CDR) av de tunge og lette variable musedoméner podet. Siden rammeverk 4-regionen ikke er en del av den variable region av kimlinje-V-genet, ble innrettingen for denne stilling utført individuelt. JH4-regionen ble valgt for den tunge kjede, og JK4-regionen ble valgt for den lette kjede. Molekylmodellering av det skisserte immunglobulindoméne viste ett sted som potensielt fordret muse-aminosyrerestene i stedet for de humane utenfor CDR. Gjeninnføring av muse-aminosyrerester i det humane rammeverk ville frembringe de såkalte tilbakemutasjoner. For eksempel ble den humane akseptoraminosyrerest i Kabat-stilling 27 tilbakemutert til en tyrosinrest. Det ble utformet humaniserte antistoffvarianter som enten innbefattet eller utelukket tilbakemutasjonene. Den lette humaniserte antistoffkjede fordret ikke noen tilbakemutasjoner. Etter skissering av proteinsekvensene, ble DNA-sekvenser som kodet for disse proteiner, syntetisert som angitt detaljert nedenfor.
Blandet rammeverk-fremgangsmåte
[0222] For å unngå innføring av tilbakemutasjoner i kritiske aminosyrereststillinger (kritiske for bibeholdelse av god antigenbindende affinitet eller antistofffunksjoner) i det humane akseptor-rammeverk ble det undersøkt om hvorvidt enten hele rammeverkregion 1 (FR1) eller rammeverkregionene 1 (FR1) og 2 (FR2) sammen kunne erstattes av humane antistoffsekvenser som allerede hadde donor-rester, eller funksjonelt ekvivalente, i disse viktige stillinger i den naturlige humane kimlinjesekvens. For dette formål ble VH-rammeverkene 1 og 2 av muse-Bly-1 -sekvensen innrettet individuelt i forhold til humane kimlinjesekvenser. Her var det ikke viktig med høyeste sekvensidentitet, og dette ble ikke anvendt, for velging av akseptor-rammeverk, men i stedet ble matching av flere kritiske rester antatt å være viktigere. Disse kritiske rester omfatter restene 24, 71 og 94 (Kabatnummerering) og dessuten restene i stilling 27, 28 og 30 (Kabat-nummerering), som ligger utenfor CDR1 -definisjonen ifølge Kabat, men ofte inngår ved antigenbinding. IMGT-sekvensen VH_3_15 ble valgt som en egnet sekvens. Etter skissering av proteinsekvensene, ble DNA-sekvensene som kodet for disse proteiner, syntetisert som angitt detaljert nedenfor. Ved anvendelse av denne fremgangsmåte trengtes det ingen tilbakemutasjoner verken for den lette eller tunge kjede, for bibeholdelse av gode nivåer av antigenbinding.
Syntese av antistoffgenene
[0223] Etter å ha utpekt aminosyresekvensen for den humaniserte antistoff V-region, måtte DNA-sekvensen frembringes. DNA-sekvensdataene for de individuelle rammeverkregioner ble funnet i databasene for humane kimlinjesekvenser. DNA-sekvensen for CDR-regionene ble tatt fra de tilsvarende muse-cDNA-data. Med disse sekvenser ble hele DNA-sekvensen i realiteten satt sammen. Med disse DNA-sekvensdata ble det innført diagnostiske restriksjonsseter i den virkelige sekvens, ved innføring av stumme mutasjoner, noe som frembrakte gjenkjennelsesseter for restriksjonsendonukleaser. For oppnåelse av den fysiske DNA-kjede ble det utført gensyntese (f. eks. Wheeler et al., 1995). Ved denne metode utformes oligonukleotider fra de aktuelle gener, slik at én serie oligonukleotider fås fra kodingsstrengen, og en annen serie fra den ikke-kodende streng. 3'- og 5'-endene av hvert oligonukleotid (bortsett fra den aller første og siste i rekken) viser alltid komplementære sekvenser med to primere som stammer fra den motsatte streng. Når disse oligonukleotider innlemmes i en reaksjonsbuffer egnet for hvilken som helst varmestabil polymerase, og det tilsettes Mg<2+>, dNTP og en DNA-polymerase, strekker hvert oligonukleotid seg fra sin 3'-ende. Den nydannede 3'-ende av én primer koples så til den neste primer på den motsatte streng og utvider sin sekvens videre under betingelser som er egnet for templatavhengig DNA-kjede-forlengelse. Det endelige produkt ble klonet i en konvensjonell vektor for formering i E. coli.
Antistoffproduksjon
[0224] Humane tung- og lettkjede-ledersekvenser (for sekresjon) ble tilføyd oppstrøms for de ovennevnte variabel region-sekvenser, og disse ble deretter sammenføyd oppstrøms for henholdsvis humane konstante tunge og lette lgG1-kappa-sekvenser under anvendelse av standard-molekylærbiologiteknikker. De resulterende fullstendige tung- og lettkjede-DNA-antistoffsekvenser ble subklonet i pattedyr-ekspresjonsvektorer (én for den lette kjede og én for den tunge kjede) under kontroll av MPSV-promoteren og oppstrøms for et syntetisk polyA-sete, idet hver vektor bar en EBV OriP-sekvens, som beskrevet i eksempel 1 ovenfor.
Antistoffer ble frembrakt som beskrevet i eksempel 1 ovenfor, nemlig ved kotransfektering av HEK293-EBNA med pattedyr-antistoff-tung- og lettkjedeekspresjonsvektorer, høsting av det kondisjonerte dyrkningsmedium 5 til 7 dager etter transfeksjon og rensing av de utskilte antistoffer ved protein A-aff initetskromatografi, fulgt av kationebytterkromatografi og et endelig størrelseseksklusjonskromatografitrinn for isolering av rene monomere lgG1 -antistoffer. Antistoffene ble formulert i en løsning av 25 mM kaliumfosfat, 125 mM natriumklorid, 100 mM glycin, med pH 6,7. Glyko-omarbeidede varianter av de humaniserte antistoffvarianter ble frembrakt ved kotransfeksjon av antistoffekspresjonsvektorene sammen med en GnT-lll-glykosyltransferaseekspresjonsvektor, eller sammen med en GnT-lll-ekspresjonsvektor pluss en Golgi-mannosidase ll-ekspresjonsvektor, som beskrevet for det kimæriske antistoff i eksempel 1 ovenfor. Glyko-omarbeide antistoffer ble renset og formulert som beskrevet ovenfor for de ikke-glyko-omarbeidede antistoffer. Oligosakkaridene knyttet til Fc-regionen av antistoffene ble analysert ved MALDI/TOF-MS som beskrevet nedenfor.
Oligosakkaridanalyse
[0225] Oligosakkaridfrigjøringsmetode for antistoffer i løsning
Mellom 40 og 50 pg antistoff ble blandet med 2,5 mE PNGaseF (Glyko, USA) i 2 mM Tris, pH 7,0, i et sluttvolum på 25 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C.
Prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS
[0226] De enzymatiske nedbrytningsprodukter inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble inkubert i ytterligere 3 timer ved romtemperatur etter tilsetting av eddiksyre til en sluttkonsentrasjon på 150 mM, og ble deretter ledet gjennom 0,6 ml kationebytterharpiks (AG50W-X8-harpiks, hydrogenform, 150-75 pm, BioRad, Sveits) pakket i en mikro-bio-spin-kromatografikolonne (BioRad, Sveits) under fjerning av kationer og proteiner. Én mikroliter av den resulterende prøve ble påført på en målplate av rustfritt stål og blandet på platen med 1 μΙ sDHB-matriks. sDHB-matriks ble tilberedt ved oppløsing av 2 mg 2,5-dihydroksybenzosyre pluss 0,1 mg 5-metoksysalicylsyre i 1 ml etanol/10 mM vandig natriumklorid 1 :1 (på volumbasis). Prøvene ble lufttørket, 0,2 μΙ etanol ble påført, og prøvene fikk til slutt omkrystalliseres under luft.
MALDI/TOF-MS
[0227] MALDI-TOF-massespektrometeret anvendt til opptak av massespektraene var et Voyager Elite (Perspective Biosystems). Instrumentet ble operert i lineær konfigurasjon, med en akselerering på 20kV og 80 ns forsinkelse. Ekstern kalibrering med anvendelse av oligosakkaridstandarder ble anvendt for massetilordning av ionene. Spektraene fra 200 laserskudd ble summert under oppnåelse av det endelige spektrum.
Antigenbindingsanalyse
[0228] De rensede, monomere humaniserte antistoffvarianter ble testet med hensyn til binding til humant CD20 på Raji B-cellelymfom-målceller under anvendelse av væskestrømcytometribasert analyse, som beskrevet for det kimæriske B-ly1 -antistoff i Eksempel 1 ovenfor.
Binding av monomere lgG1 -glykovarianter til NK-celler og FcyRIIIA-uttrykkende CHO-cellelinje
[0229] Humane NK-celler ble isolert fra nyisolerte mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) med anvendelse av negativ seleksjonsanriking med hensyn til CD16- og CD56-positive celler (MACS-system, Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach/Tyskland). Renheten bestemt ved CD56-ekspresjon var mellom 88 og 95%. Nyisolerte NK-celler ble inkubert i PBS uten kalsium- og magnesium-ioner (3 x 10<5 >celler/ml) i 20 minutter ved 37°C under fjerning av NK-celle-assosiert IgG. Cellene ble inkubert med 10<6 >celler/ml med forskjellige konsentrasjoner av anti-CD20-antistoff (0, 0,1 , 0,3, 1 , 3, 10 μg/ml) i PBS, 0,1% BSA. Etter flere vaskinger ble antistoffbinding påvist ved inkubering med 1 :200 FlTC-konjugert F(ab')2 geiteantihumant, f (ab')2-spesifikt IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA/USA) og anti-humant CD56-PE (BD Biosciences, Al Ischwi I/Sveits). AntiFcgammaRIIIA 3G8 F(ab‘)2-fragmenter (Ancell, Bayport, MN/USA) ble tilsatt i en konsentrasjon på 10 μg/ml for konkurrering av binding av antistoff-glykovarianter (3 μg/ml). Fluorescensintensiteten som kan tilskrives de bundne antistoffvarianter, ble bestemt for CD56-positive celler på en FACSCalibur (BD Biosciences, Allschwil/Sveits). CHO-celler ble transfektert ved elektroporasjon (280 V, 950 μF, 0,4 cm) med en ekspresjonsvektor som kodet for FcgammaRIIIA-Val158 α-kjeden og γ-kjeden. Transfektanter ble selektert ved tilsetting av 6 μg/ml puromycin, og stabile kloner ble analysert ved FACS under anvendelse av 10 pl monoklonalt FlTC-konjugert anti-FcgammaRIII 3G8-antistoff (BD Biosciences, Allschwil/Sveits) for 10<6 >celler. Binding av lgG1 til FcgammaRIIIA-Val158-uttrykkende CHO-celler ble utført analogt med NK-cellebindingen beskrevet ovenfor.
ADCC-analyse
[0230] Humane mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) ble anvendt som effektorceller og ble preparert under anvendelse av Histopaque-1077 (Sigma Diagnostics Inc., St. Louis, M063178 USA) og idet man hovedsakelig fulgte fabrikantens instruksjoner. Kort angitt ble veneblod tatt med hepariniserte sprøyter fra frivillige personer. Blodet ble fortynnet 1 :0,75-1 ,3 med PBS (ikke inneholdende Ca<++ >eller Mg<++>) og lagt på Histopaque-1077. Gradienten ble sentrifugert ved 400 x g i 30 min ved romtemperatur (RT) uten bremser. Interfasen inneholdende PBMC ble oppsamlet og vasket med PBS (50 ml pr. celler fra to gradienter) og harvested ved sentrifugering ved 300 x g i 10 minutter ved RT. Etter gjenoppslemming av pelleten med PBS, ble PBMC tellet og vasket en andre gang ved sentrifugering ved 200 x g i 10 minutter ved RT. Cellene ble deretter gjenoppslemmet i passende medium for de påfølgende prosesser.
[0231] Forholdet mellom effektor og mål anvendt for ADCC-analysene var 25:1 og 10:1 for henholdsvis PBMC og NK-celler. Effektorcellene ble preparert i AIM-V-medium i passende konsentrasjon for tilsetting av 50 pl pr. brønn i rundbunnede 96 brønnsplater. Målcellene var humane B-lymfomceller (f.eks. Rajiceller) dyrket i DMEM inneholdende 10% FCS. Målcellene ble vasket i PBS, tellet og gjenoppslemmet i AIM-V med 0,3 millioner pr. ml for tilsetting av 30 000 celler i 100 μΙ pr. mikrobrønn. Antistoffene ble fortynnet i AIM-V, tilsatt i 50 μΙ til de forutplatede målcellene og fikk bindes til målcellene i 10 minutter ved RT. Deretter ble effektorcellene tilsatt, og platen ble inkubert i 4 timer ved 37°C i fuktig atmosfære inneholdende 5% CO2. Dreping av målcellene ble fastslått ved måling av laktatdehydrogenase (LDH)-frigjøring fra ødelagte celler under anvendelse av Cytotoksisitetspåvisningssettet (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Sveits). Etter inkuberingen på 4 timer ble platene sentrifugert ved 800 x g. 100 μΙ supernatant fra hver brønn ble overført til en ny transparent flatbunnet 96 brønns plate. 100 μΙ fargesubstratbuffer fra utstyrssettet ble tilsatt pr. brønn. Vmaks-verdiene for fargereaksjonen ble fastsatt i en ELISA-avlesningsinnretning ved 490 nm i minst 10 min under anvendelse av SOFTmax PRO-p rog ram vare (Molecular Devices, Sunnyvale, CA94089, USA). Spontan LDH-frigjøring ble målt fra brønner inneholdende bare mål- og effektorceller, men ingen antistoffer. Maksimal frigjøring ble bestemt fra brønner inneholdende bare målceller og 1% Triton X-100. Prosentandel av spesifikk antistoffmediert dreping ble beregnet som følger: ((x — SR)/(MR — SR)<*>100, hvor x er middelverdien for Vmaks ved en spesifikk antistoffkonsentrasjon, SR er middelverdien for Vmaks for den spontane frigjøring, og MR er middelverdien for Vmaks for den maksimale frigjøring.
Komplementavhengig cytotoksisitetsanalyse
[0232] Målcellene ble tellet, vasket med PBS, gjenoppslemmet i AIM-V (Invitrogen) med 1 millioner celler pr. ml. 50 μΙ celler ble utplatet pr. brønn i en flatbunnet 96 brønns plate. Antistoff -fortynninger ble tilberedt i AIM-V og tilsatt i 50 μΙ til cellene. Antistoffene fikk bindes til cellene i 10 minutter ved romtemperatur. Humant serumkomplement (Quidel) ble nytint, fortynnet 3 ganger med AIM-V og tilsatt i 50 μΙ i brønnene. Kaninkomplement (Cedarlane Laboratories) ble tilberedt som beskrevet av fabrikanten, fortynnet 3 ganger med AIM-V og tilsatt i 50 μΙ i brønnene. Som kontroll ble komplementkilder oppvarmet i 30 min ved 56°C før tilsetting til analysen. Analyseplatene ble inkubert i 2 timer ved 37°C. Dreping av cellene ble bestemt ved måling av LDH-frigjøring. Kort angitt ble platene sentrifugert ved 300 x g i 3 min. 50 μΙ supernatant pr. brønn ble overført til en ny 96 brønns plate, og 50 μΙ av analysereagenset fra Cytotoksisitets-settet (Roche) ble tilsatt. En kinetisk måling med ELISA-avlesningsinnretningen bestemte Vmaks som samsvarte med LDH-konsentrasjonen i supernatanten. Maksimal frigjøring ble bestemt ved inkubering av cellene i nærvær av 1 % T rition X-100.
Uttømmingsanalyse for B-celler i fullblod
[0233] Normal B-celle-uttømming i fullblod ved anti-CD20-antistoffene ble utført som beskrevet i Eksempel 1 ovenfor.
Apoptoseanalyse
[0234] Den apoptotiske potens for antistoffene ble analysert ved inkubering av antistoffet med 10 μg/ml (metningsbetingelser med hensyn til antigenbinding) med målcellene (med en målcellekonsentrasjon på 5 x 10<5 >celler/ml) natten over (16-24 1). Prøvene ble merket med AnnV-FITC og analysert ved FACS. Analyse ble utført in triplo.
[0235] Påvisning utføres ved væskestrømcytometri ved at man fulgte tilsynekomsten av apoptotiske markører så som annexin V og fosfatidylserin.
Negativ kontroll (ingen apoptose indusert) inneholder intet antistoff, men bare fosfatbufret saltløsning. Positiv kontroll (maksimal apoptose) inneholder 5 mikromolar av det sterke apoptoseinduserende middel camptothecin (CPT).
Resultater og diskusjon
[0236] Sammenlikning av bindingen til humant CD20-antigen av antistoffvariantene B-HH1 , B-HH2, B-HH3, enten kompleksbundet med den kimæriske B-ly 1 -lettkjede (mVL, som beskrevet i eksempel 1 ovenfor) eller med den humaniserte B-ly1 -lettkjede (KV1), og det parentale, kimæriske antistoff chB-Iy1 (beskrevet i eksempel 1 ovenfor) viser at alle antistoffer har liknende EC50-verdi, men B-HH1 -konstruksjonen bindes med lavere intensitet/støkiometri enn variantene B-HH2 og B-HH3 (fig. 11). B-HH1 kan skjelnes fra B-HH2 og B-HH3 ved sine delvis humane CDR1- og CDR2-regioner (Kabat-definisjon), samt Ala/Thr-polymorfismen i stilling 28 (Kabat-nummerering). Dette tyder på at enten 28, det fullstendige CDR1 og/eller det fullstendige CDR2 er viktige for antistoff/antigen-interaksjon.
[0237] Sammenlikningen av B-HL1 , B-HH1 og det kimæriske parentale chB-Iy1 -antistoff viste fravær av en hver bindingsaktivitet i B-HL1 -konstruksjonen, og omtrent halvdelen av bindingsintensiteten/støkiometrien for B-HH1 sammenliknet med B-ly1 (fig. 12). Både B-HL1 og B-HH1 utformes basert på akseptorrammeverk som stammer fra den humane VH1 -klasse. Blant andre forskjeller er stilling 71 (Kabat-nummerering; Kabat-stilling 71 svarer til stilling 72 i SEKV ID NR: 48) av B-HL1 -konstruksjonen et slående avvik, noe som viser dens antatte betydning for antigenbinding.
[0238] Ved sammenlikning av antigenbindingsdataene ifølge fig. 9-13 viser BHH2-KV1 BHL8-KV1 - og BHL11 -KV1 -variantene den beste bindingsaff initet, blant de forskjellige testede humaniserte antistoffvarianter, til humant CD20 på overflaten av humane celler. Forskjellene mellom B-HH2 på den ene side og B-HL8 og B-HL11 på den annen side befinner seg kun i FR1- og FR2-regionene, idet alle de tre CDR er identiske (sammenlikne f.eks. SEKV ID NR: 32, 56 og 60, som ikke er nummerert ifølge Kabat, men hvis Kabat-nummerering lett kan bestemmes av en vanlig fagperson). B-HL8 og B-HL1 1 har sine FR1 - og FR2-sekvenser fra den humane VH3-klasse, mens det fullstendige B-HH2-rammeverk er humant VH1 -avledet. B-HL1 1 er et derivat av B-HL8 med enkeltmutasjonen GlulGIn (stilling 1 er den samme både ved Kabat-nummerering og det konvensjonelle nummereringssystem anvendt i sekvenslisten), hvor Gin er aminosyreresten i B-HH2-konstruksjonen. Dette betyr at GlulGln-utskifting ikke forandrer bindingsaffinitet eller intensitet. De andre forskjeller mellom B-HH2 og B-HL8 er 14 rammeverkrester, hvorav én eller flere vil innvirke på den antigenbindende oppførsel hos dette antistoff.
[0239] B-HL4-konstruksjonen fås fra B-HH2-antistoffet ved erstatting av FR1 i B-HH2 med FR1 i den humane kimlinjesekvens VH1_45. Denne konstruksjon viser sterkt redusert antigenbindende evne, til tross for at den har forskjellige aminosyrer bare i tre stillinger i FR1 . Disse rester befinner seg i stillingene 2, 14 og 30 (Kabat-nummerering). Blant disse kan stilling 30 være en stilling av betydning, siden det er en del av Chothia-definisjonen av CDR1 . Total analyse av alle bindingskurvene fra fig. 9 til 13 viser at følgende humaniserte B-Iy1-tungkjederester (Kabat-nummerering) er viktige for binding til CD20: N35 (enden av Kabat CDR1), fullstendig Kabat CDR1 , fullstendig Kabat CDR2 og fullstendig Kabat CDR3, restene A71 og R94 (i dette tilfelle kan R94 ikke erstattes av et treonin) og Y27. A28 og S30 bidrar også i mindre utstrekning. Dessuten er Kabat CDR3 og alle kanoniske rester viktige for antigenbinding. Ingen tilbakemutasjoner ble innført i den humaniserte lette kjede, som hadde de fullstendige Kabat CDR1 , CDR2 og CDR3 innpodet. Ved induksjon av apoptose (fig. 14, 15 og 21) var den mest potente variant humanisert B-ly1 -variant BHH2KV1 (enda mer potent enn den opprinnelige chB-ly1 , og meget mer potent enn et antistoff med en sekvens identisk med rituximab, C2B8). Andre humaniserte varianter (derivater av BHL8) som kan gjenvinne den økte apoptose, er: B-HL12 til B-HL17 (se tabell) og BHH8 (blandede rammeverk) og BHH9 ("blandede rammeverk" med én tilbakemutasjon, S30T). Stillingene 9 og 48 (Kabatnummerering) kan kontakte antigenet. Variantene BHH4 til BHH7 er andre humaniserte B-ly1 -varianter som ikke innfører ytterligere ikke-humane sekvenser.
[0240] Viktige egenskaper hos det humaniserte B-ly1 -antistoff er at det er et anti-CD20-antistoff type II som definert i Cragg, M.S. og Glennie, M.J., Blood 103(7):2738-2743 (april 2004). Ved binding til CD20 induserte det derfor ikke noen betydelig resistens overfor ekstraksjon av CD20 med ikke-ionisk detergent fra overflaten av humane CD20+-celler, ved anvendelse av analysen beskrevet for dette formål i Polyak, M.J. og Deans, J.P., Blood 99(9):3256-3262 (2002). Det induserte unektelig betydelig mindre resistens overfor ekstraksjon av CD20 med ikke-ionisk detergent enn C2B8-antistoffet gjør (et annet anti-CD20-antistoff med identisk sekvens som rituximab (se US-patentpublikasjon nr. 2003/0003097). Som ventet for et anti-CD20-antistoff type II, hadde det humaniserte B-ly1 ikke noen signifikant komplementmediert lyseaktivitet og unektelig en mengde mer komplementmediert lyseaktivitet enn anti-CD20-antistoffet C2B8 (kimærisk lgG1 med identisk sekvens som rituximab). En annen viktig egenskap hos det humaniserte B-ly1 -antistoff var at det var meget potent i den homotypiske aggregeringsanalyse. I denne analyse ble CD20-positive humane celler, Daudiceller, inkubert i celledyrkningsanalysemedium i opp til 24 timer ved 37°C i 5% CO2-atmosfære i en pattedyrcelleinkubator som beskrevet detaljert i (Deans referanse) med antistoffet i en konsentrasjon på 1 mikrogram pr. ml og parallelt i en konsentrasjon på 5 mikrogram pr. ml. Til sammenlikning ble kontroll, parallell inkubering av cellene utført under identiske betingelser, men med anvendelse av anti-CD20-antistoffet C2B8. På forskjellige tidspunkter, innbefattende 8 timers og 24 timers inkubering, ble cellene inspisert visuelt ved anvendelse av mikroskop. Det ble funnet at det humaniserte B-ly1 -antistoff førte til sterk homotypisk aggregering, idet aggregatene var betydelig større enn aggregatene innført ved tilsetting av C2B8-kontrollantistoffet. Dessuten, og i overensstemmelse med at antistoffet var anti-CD20 type II, induserte det høyere nivåer av apoptose når CD20-positive humane celler ble inkubert med det humaniserte B-ly1 -antistoff, i forhold til en kontroll under identiske betingelser under anvendelse av det C2B8-kimæriske lgG1 -antistoff med identisk sekvens som rituximab.
[0241] Glyko-omarbeidede varianter av de humaniserte antistoffer ble frembrakt ved ko-ekspresjon av GnTIII-glykosyltransferase, sammen med antistoff genene, i pattedyrceller. Dette førte til en økning i fraksjonen av ikkefukosylerte oligosakkarider knyttet til Fc-regionen av antistoffene, innbefattende todelte ikke-fukosylerte oligosakkarider, som beskrevet i WO 2004/065540 (fig. 17-19). De glyko-omarbeidede antistoffer hadde betydelig høyere nivåer av binding til humane FcgammaRIII-reseptorer (fig. 20) samt ADCC-aktivitet (fig. 16), i forhold til det ikke-glyko-omarbeidede antistoff og i forhold til C2B8-antistoffet. Det humaniserte B-ly1 -antistoff var også mer potent ved innføring av human B-celleuttømming i en fullblodanalyse (fig. 16), enn kontroll-C2B8-antistoffet. Dette var tilfellet både for det ikke-glyko-omarbeidede B-ly1 -antistoff og for den glykoomarbeidede versjon av det. Det glyko-omarbeidede antistoff var omtrent 1000 ganger mer potent enn C2B8-kontroll-anti-CD20-antistoffet med hensyn til uttømming av B-celler i fullblodanalysen. Denne sammenlikning er viktig både for de ikke-glyko-omarbeidede og for de glyko-omarbeidede humaniserte former av B-Iy1 -antistoff, på grunn av at den viste at i analyser som kombinerte Fc-reseptoravhengige aktiviteter, så som ADCC, pluss komplementmediert lyse, pluss induksjon av apoptose, var begge former av B-ly1 betydelig mer potente enn C2B8, skjønt begge former av B-ly1 har dramatisk lavere komplementmediert lyseaktivitet. De Fc-reseptor-avhengige ADCC-dreperaktiviteter og apoptoseinduksjon var til stede i denne overlegne aktivitet av de humaniserte B-ly1-antistoffvarianter. Ved apoptoseanalysen var videre både de glyko-omarbeidede og ikke-glyko-omarbeidede former av dette type ll-anti-CD20-antistoff potente, og de Fc-omarbeidede varianter med øket bindingsaffinitet til Fcgamma-reseptorer var enda mer potente ved apoptoseinduksjon enn den ikke-Fc-omarbeidede variant, og alle varianter var betydelig mer potente enn kontrollantistoffet C2B8. Den nøyaktige mekanisme for forøket homotypisk aggregering og induksjon av apoptose mediert ved type ll-anti-CD20-antistoffer er ikke kjent, og samtidig binding til andre molekyler på overflaten av CD20-positive celler, så som Fcgamma-reseptorer, kan innvirke på denne viktige egenskap. Det var derfor viktig å vise at anti-CD20-antistoffer av type II som er blitt omarbeidet i sin Fc-region for øket bindingsaffinitet til Fc-gamma-reseptorer, innbefattende FcgammaRIII og med en tilknyttet økning i ADCC-aktivitet, fremdeles var i stand til å indusere sterk apoptose, enda høyere enn den ikke-Fc-omarbeidede og homotypiske aggregering. Apoptoseinduksjon er viktig in vivo, siden det er steder i kroppen hvor de CD20-positive målceller kan finnes, men hvor adgang til FcgammaRIII-positive celler er mer vanskelig enn i blod; slike steder er for eksempel lymfeknuter. På disse steder kan induksjonen av apoptose ved selve anti-CD20-antistoffet være avgjørende for god effektivitet av anti-CD20-antistoff -terapien hos mennesker, både for behandling av hematologiske maligniteter så som ikke-Hodgkins lymfomer og kronisk B-celle-lymfocyttleukemi, og for behandling av autoimmune sykdommer så som reumatoid artritt og lupus via en B-celle-uttømmingsfremgangsmåte. Den økte bindingsaffinitet til FcgammaRIII og høyere ADCC hos det humaniserte, Fc-omarbeidede anti-CD20-antistoff type II kan også være en meget viktig egenskap for slike terapier. Endelig kan den reduserte eller ubetydelige komplementmedierte lyseaktivitet hos disse anti-CD20-antistoffer type II, innbefattende humaniserte og Fc-omarbeidede varianter, også være viktig høyere komplementaktivering ved anti-CD20-antistoffer er blitt korrelert med økte, uønskede bivirkningen

Claims (22)

Patentkrav
1. Humanisert type II anti-CD20 antistoff omfattende
(a) en tungkjede variabel region valgt fra SEKV ID NR:62, SEKV ID NR:64, SEKV ID NR:66, SEKV ID NR:68, SEKV ID NR:70 og SEKV ID NR 72, og (b) KV1 lett kjede variabel region av SEKV ID NR:76.
2. Humanisert type II anti-CD20 antistoff som omfatter en tungkjede variabel region som er kodet av en nukleinsyresekvens som er 80 % identisk med SEKV ID NR: 61, 63, 65, 67, 69 eller 71 og en lett kjede variabel region som er kodet av en nukleinsyresekvens som er minst 80 % identisk med SEKV ID NR: 75, hvori antistoffet induserer høyere nivåer av apoptose når det inkuberes med CD20-positive humane celler i forhold til en kontroll under identiske forhold ved bruk av det kimære C2B8 IgG1-antistoffet med en sekvens identisk med rituximab.
3. Ekspresjonsvektor omfattende et polynukleotid som koder for en tungkjede variabel region ifølge krav 1 eller krav 2 og et polynukleotid som koder for en lett kjede variabel region ifølge krav 1 eller krav 2.
4. Vektor ifølge krav 3, som er polycistronisk.
5. Isolert vertscelle omfattende ekspresjonsvektoren ifølge krav 3 eller krav 4 eller et polynukleotid som koder for en tungkjede variabel region ifølge krav 1 eller krav 2 og et polynukleotid som koder for en lett kjede variabel region ifølge krav 1 eller krav 2.
6. Vertscelle ifølge krav 5, hvori vertscellen er konstruert til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid som har β(1,4)-N-acetylglukosylaminyltransferase III-aktivitet.
7. Vertscelle ifølge krav 6, hvori polypeptidet som har β(1,4)-N-acetylglukosylaminyltransferase III-aktivitet er et fusjonspolypeptid som videre omfatter Golgi-lokaliseringsdomenet til et heterologt Golgi-resident polypeptid.
8. Vertscelle ifølge krav 7, hvori nevnte Golgi-lokaliseringsdomene er valgt fra lokaliseringsdomenet til mannosidase II, lokaliseringsdomenet til β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase I, β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase II, mannosidase I eller α1-6 kjernefucosyltransferase.
9. Fremgangsmåte for fremstilling av et humanisert Type-II anti-CD20 antistoff ifølge krav 1 eller krav 2, omfattende dyrking av vertscellen ifølge hvilket som helst av kravene 5 til 8 under betingelser som tillater produksjon av antistoffet og utvinning av antistoffet fra nevnte antistoffkultur.
10. Humanisert type II anti-CD20-antistoff, hvori antistoffet er oppnåelig av vertscellen ifølge hvilket som helst av kravene 5 til 8.
11. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, hvori antistoffet omfatter en glykokonstruert Fc-region.
12. Antistoff ifølge krav 11, hvori antistoffet har en økning i fraksjonen av ikkefukosylerte oligosakkarider festet til den glykokonstruerte Fc-regionen.
13. Antistoff ifølge krav 11, hvori nevnte antistoff har en økning i fraksjonen av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider festet til nevnte glykokonstruerte Fc-region.
14. Antistoff ifølge krav 11, hvori nevnte antistoff har signifikant høyere nivåer av binding til humane FcgammaRIII-reseptorer i forhold til det ikke-glykokonstruerte antistoffet.
15. Antistoff ifølge krav 11, hvori nevnte antistoff har signifikant høyere nivåer av ADCC-aktivitet i forhold til det ikke-glykokonstruerte antistoffet.
16. Farmasøytisk sammensetning omfattende antistoffet ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
17. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for bruk som et medikament for å behandle en B-cellelidelse.
18. Antistoff ifølge krav 17, hvori nevnte B-cellelidelse er et B-celle lymfom.
19. Anvendelse av antistoffet ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for fremstilling av et medikament for å behandle en lidelse som kan behandles ved B-celleutarming.
20. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for bruk som et medikament for å behandle en lidelse som kan behandles ved B-celleutarming.
21. Anvendelse ifølge krav 19 eller antistoffet ifølge krav 20, hvori nevnte lidelse er en hematologisk malignitet eller en autoimmun sykdom.
22. Antistoff eller anvendelse ifølge krav 21, hvori den hematologiske maligniteten er B-celle lymfom, non-Hodgkins lymfom eller B-celle kronisk lymfatisk leukemi.
NO20220904A 2003-11-05 2022-08-24 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning NO347800B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51709603P 2003-11-05 2003-11-05
PCT/IB2004/003896 WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2004-11-05 Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20220904A1 true NO20220904A1 (no) 2006-08-03
NO347800B1 NO347800B1 (no) 2024-03-25

Family

ID=34572912

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20220263A NO347530B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Et humanisert type II anti-CD20 antistoff og vertscelle som produserer et humanisert type II anti-CD20 antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling og en farmasøytisk sammensetning.
NO20210499A NO346533B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
NO20062289A NO341893B1 (no) 2003-11-05 2006-05-19 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning.
NO20171989A NO346167B1 (no) 2003-11-05 2017-12-13 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning
NO20220904A NO347800B1 (no) 2003-11-05 2022-08-24 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning

Family Applications Before (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20220263A NO347530B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Et humanisert type II anti-CD20 antistoff og vertscelle som produserer et humanisert type II anti-CD20 antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling og en farmasøytisk sammensetning.
NO20210499A NO346533B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
NO20062289A NO341893B1 (no) 2003-11-05 2006-05-19 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning.
NO20171989A NO346167B1 (no) 2003-11-05 2017-12-13 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning

Country Status (40)

Country Link
US (7) US9296820B2 (no)
EP (5) EP1692182B1 (no)
JP (5) JP4653109B2 (no)
KR (3) KR101220691B1 (no)
CN (4) CN102373215B (no)
AT (1) ATE463513T1 (no)
AU (1) AU2004287643C1 (no)
BE (1) BE2016C008I2 (no)
BR (2) BRPI0416262B1 (no)
CA (1) CA2544865C (no)
CR (1) CR11848A (no)
CY (6) CY1110301T1 (no)
DE (1) DE602004026470D1 (no)
DK (5) DK2077282T3 (no)
EA (4) EA015009B1 (no)
EC (2) ECSP066603A (no)
ES (5) ES2615507T3 (no)
FR (1) FR15C0076I2 (no)
HK (4) HK1167681A1 (no)
HR (5) HRP20100303T1 (no)
HU (5) HUE031632T2 (no)
IL (4) IL175367A (no)
LT (4) LT2077282T (no)
LU (2) LU92632I2 (no)
MA (1) MA31040B1 (no)
ME (3) ME02332B (no)
MX (2) MXPA06004836A (no)
NL (1) NL300801I2 (no)
NO (5) NO347530B1 (no)
NZ (2) NZ588860A (no)
PL (5) PL2077282T3 (no)
PT (5) PT2380910E (no)
RS (5) RS54450B1 (no)
SG (3) SG10201504094SA (no)
SI (5) SI2380911T1 (no)
TN (1) TNSN06126A1 (no)
TR (2) TR201903329T4 (no)
UA (1) UA91823C2 (no)
WO (1) WO2005044859A2 (no)
ZA (1) ZA200604547B (no)

Families Citing this family (786)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4334141B2 (ja) * 1998-04-20 2009-09-30 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 抗体依存性細胞傷害性を改善するための抗体のグリコシル化操作
HUP0700103A3 (en) 2001-08-03 2012-09-28 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
KR101412271B1 (ko) 2003-05-09 2014-06-25 듀크 유니버시티 Ｃｄ２０-특이적 항체 및 이를 이용한 방법
MXPA06004836A (es) 2003-11-05 2006-07-06 Glycart Biotechnology Ag Anticuerpos cd20 con funcion del efector y afinidad de enlace al receptor fc mejoradas.
NZ552433A (en) * 2004-07-22 2009-10-30 Genentech Inc Method of treating sjogrenÆs syndrome
PL2213683T3 (pl) 2004-08-04 2013-10-31 Mentrik Biotech Llc WARIANTY REGIONÓW Fc
RU2411956C2 (ru) 2004-10-05 2011-02-20 Дженентек, Инк. Способ лечения васкулита
LT1871805T (lt) * 2005-02-07 2019-12-10 Roche Glycart Ag Antigeną surišančios molekulės, kurios suriša egfr, jas koduojantys vektoriai ir jų panaudojimas
RU2007145509A (ru) * 2005-05-09 2009-06-20 Гликарт Биотехнологи Аг (Ch) Антигенсвязывающие молекулы, имеющие модифицированные fc-участки и измененное связывание с fc-рецепторами
BRPI0613259A2 (pt) * 2005-05-20 2010-12-28 Genentech Inc método de tratamento de amostra biológica e kit de diagnóstico
MX2007015107A (es) * 2005-06-03 2008-02-15 Genentech Inc Metodo para producir anticuerpos con funcion mejorada.
CA2615846A1 (en) 2005-07-21 2007-01-25 Genmab A/S Potency assays for antibody drug substance binding to an fc receptor
AU2012216702B2 (en) * 2005-08-26 2014-12-04 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
TWI615407B (zh) * 2005-08-26 2018-02-21 羅齊克雷雅公司 具有經改變細胞傳訊活性之改質抗原結合分子
US8470318B2 (en) * 2005-11-07 2013-06-25 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
WO2007055916A2 (en) * 2005-11-07 2007-05-18 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
US20080206246A1 (en) * 2006-04-05 2008-08-28 Ravetch Jeffrey V Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
EP1954719A2 (en) 2005-12-02 2008-08-13 Genentech Inc. Compositions and methods for the treatment of diseases and disorders associated with cytokine signaling involving antibodies that bind to il-22 and il-22r
RU2450020C2 (ru) 2006-01-05 2012-05-10 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ EphB4 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
EP2623986B1 (en) 2006-02-10 2017-06-14 Life Technologies Corporation Labeling and detection of post translationally modified proteins
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
EP3456351A1 (en) * 2006-04-05 2019-03-20 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
PL2032606T3 (pl) 2006-05-30 2014-04-30 Genentech Inc Przeciwciała i immunokoniugaty oraz ich zastosowania
AU2007256617A1 (en) * 2006-06-06 2007-12-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for modulating vascular development
AR062223A1 (es) 2006-08-09 2008-10-22 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas
BRPI0715580A2 (pt) * 2006-10-12 2014-06-10 Genentech Inc ''ANTICORPO ANTI-LINFOTOXINA-a (LTa) ISOLADO, ANTICORPO HUMANIZADO, ANTICORPOS ANTI-LINFOTOXINA-a,COMPOSIÇÃO DE ANTICORPO,ANTICORPO ANTI-IDIOTIPO,HIBRIDOMA,ANTICORPO,ÁCIDO NUCLÉICO ISOLADO, VETOR DE EXPRESSÃO,CÉLULA HOSPEDEIRA,MÉTODO DE PRODUÇÃO DE UM ANTICORPO,MÉTODO PARA INIBIR A PROLIFERAÇÃO CELULAR ATIVADA POR LTa, MÉTODO PARA TRATAR UM DISTURBIO AUTO-IMUNE, ARTIGOS MANUFATURADOS, MÉTODO PARA DIVULGAR UM ANTICORPO E MÉTODO PARA EMBALAR O ANTICORPO''
EP2061814B1 (en) 2006-10-27 2012-06-06 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
CN103709249B (zh) 2006-12-20 2016-02-24 Mmr全球公司 抗体及其制备和使用方法
AU2013202392B2 (en) * 2006-12-20 2016-02-25 Mmrglobal, Inc. Antibodies and methods for making and using them
BRPI0806367A2 (pt) 2007-01-22 2011-09-06 Genentech Inc métodos de purificação de anticorpos
EP2125013A4 (en) * 2007-01-26 2010-04-07 Bioinvent Int Ab DLL4 SIGNALING INHIBITOR AND ITS USES
NZ578701A (en) 2007-02-09 2012-02-24 Genentech Inc Anti-robo4 antibodies and uses therefor
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
FR2915398B1 (fr) * 2007-04-25 2012-12-28 Lab Francais Du Fractionnement "ensemble de moyens pour le traitement d'une pathologie maligne, d'une maladie auto-immune ou d'une maladie infectieuse"
CN103223167B (zh) 2007-05-14 2015-06-17 米迪缪尼有限公司 降低嗜酸性粒细胞水平的方法
PL2158315T3 (pl) 2007-06-25 2016-10-31 Sposoby modyfikowania przeciwciał i zmodyfikowane przeciwciała o ulepszonych właściwościach funkcjonalnych
CL2008002083A1 (es) 2007-07-16 2008-11-21 Genentech Inc Anticuerpo humanizado anti-cd79b/igbeta/b29; inmunoconjugado; metodo in vitro para determinar presencia de cd79b, inhibir crecimiento de celula con cd79b, o para detectara celula b; metodo para elaborar dicho anticyerpo humanizado; acido nucleico; celula huesped; composicion; metodo de elaboracion de inmunoconjugado; uso medico
TWI439286B (zh) 2007-07-16 2014-06-01 Genentech Inc 抗－ｃｄ７９ｂ抗體及免疫共軛物及使用方法
AU2008295140A1 (en) * 2007-09-05 2009-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type I and type II anti-CD20 antibodies
KR102339457B1 (ko) 2007-09-26 2021-12-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) * 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
HUE038588T2 (hu) 2007-11-07 2018-10-29 Genentech Inc IL-22 mikrobiális rendellenességek kezelésében történõ alkalmazásra
AR069501A1 (es) 2007-11-30 2010-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti- vegf (factor de crecimiento endotelial vascular)
KR20100102172A (ko) * 2007-12-21 2010-09-20 제넨테크, 인크. 리툭시마브-난치성 류마티스성 관절염 환자의 요법
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
WO2009080541A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
CA2713504A1 (en) 2008-01-31 2009-08-13 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
RS55258B1 (sr) * 2008-03-25 2017-02-28 Roche Glycart Ag Korišćenje anti-cd20 antitela tipa ii sa povećanom ćelijskom citotoksičnošću zavisnom od antitela (adcc) u kombinaciji sa ciklofosfamidom, vinkristinom i doksorubicinom za lečenje non-hodgkinovih limfoma
CN102232113A (zh) * 2008-03-31 2011-11-02 健泰科生物技术公司 用于治疗和诊断哮喘的组合物和方法
WO2009132130A2 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 The Rockefeller University Methods of identifying anti-inflammatory compounds
US20090269339A1 (en) * 2008-04-29 2009-10-29 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
KR101054362B1 (ko) * 2008-07-03 2011-08-05 재단법인 목암생명공학연구소 재조합 단백질의 푸코스 함량을 감소시키는 방법
DK2318832T3 (da) 2008-07-15 2014-01-20 Academia Sinica Glycan-arrays på PTFE-lignende aluminiumcoatede objektglas og relaterede fremgangsmåder
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
CN110317272A (zh) 2008-10-14 2019-10-11 霍夫曼-拉罗奇有限公司 免疫球蛋白变体及其用途
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
MX2011006870A (es) 2008-12-23 2011-07-19 Genentech Inc Variantes de inmunoglobulina con union alterada a proteina a.
PE20120539A1 (es) 2009-03-20 2012-05-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-her biespecifico
AU2010229479B2 (en) 2009-03-25 2013-03-28 Genentech, Inc. Novel anti-alpha5beta1 antibodies and uses thereof
NZ594339A (en) 2009-03-25 2013-06-28 Genentech Inc Anti-fgfr3 antibodies and methods using same
US20100247484A1 (en) * 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
JP5501439B2 (ja) 2009-04-02 2014-05-21 ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト 完全長抗体と単鎖Ｆａｂフラグメントとを含む多重特異的抗体
AU2010233993A1 (en) 2009-04-07 2011-09-08 Roche Glycart Ag Bispecific anti-ErbB-1/anti-c-Met antibodies
SG175077A1 (en) 2009-04-07 2011-11-28 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
KR20110124369A (ko) 2009-04-07 2011-11-16 로슈 글리카트 아게 이중특이적 항­ｅｒｂｂ­3／항­ｃ­ｍｅｔ 항체
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
WO2010146059A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
WO2011009625A1 (en) 2009-07-24 2011-01-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Stirrer system
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
CA2769308A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Genentech, Inc. Inhibition of tumor metastasis using bv8- or g-csf-antagonists
BR112012003066A2 (pt) 2009-08-14 2016-11-16 Roche Glycart Ag uso de um anticorpo anti-cd20 defucosilado e composição compreendendo um anticorpo anti-cd20 defucosilado
TWI409079B (zh) * 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
GB0914691D0 (en) 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
TWI412375B (zh) 2009-08-28 2013-10-21 Roche Glycart Ag 人類化抗ｃｄｃｐ１抗體
TW201113037A (en) 2009-08-28 2011-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against CDCP1 for the treatment of cancer
CA2772715C (en) 2009-09-02 2019-03-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
AR078161A1 (es) * 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
MX2012003396A (es) 2009-09-16 2012-04-10 Genentech Inc Complejos de proteina conteniendo helice super-enrollada y/o enlazador tether y usos de los mismos.
CA2776385C (en) * 2009-10-07 2019-04-09 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
JP5814925B2 (ja) 2009-10-22 2015-11-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ヘプシン抗体及びその使用方法
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
AU2010315101B2 (en) 2009-11-04 2016-01-28 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
CN102933600B (zh) 2009-11-05 2015-11-25 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 分泌异源多肽的方法和组合物
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
TWI505836B (zh) 2009-12-11 2015-11-01 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ－ｃ抗體及其使用方法
HUE029026T2 (en) 2009-12-22 2017-01-30 Roche Glycart Ag Anti-HER3 antibodies and their applications
CA2784385A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Genentech, Inc. Anti-bv8 antibodies and uses thereof
CN105001334A (zh) 2010-02-10 2015-10-28 伊缪诺金公司 Cd20抗体及其用途
US20120309016A1 (en) 2010-02-11 2012-12-06 Hoffmann-La Roche Inc. 3d adcc nk facs assay
ES2519348T3 (es) 2010-02-18 2014-11-06 Genentech, Inc. Antagonistas de neurregulina y uso de los mismos en el tratamiento del cáncer
KR101899835B1 (ko) 2010-03-24 2018-09-19 제넨테크, 인크. 항-ｌｒｐ６ 항체
AR080793A1 (es) 2010-03-26 2012-05-09 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos
EP2374816B1 (en) 2010-04-07 2016-09-28 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
US9441032B2 (en) 2010-04-07 2016-09-13 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
KR101620661B1 (ko) * 2010-04-27 2016-05-12 로슈 글리카트 아게 어푸코실화된 ＣＤ20 항체와 mTOR 억제제의 복합 요법
KR101915647B1 (ko) 2010-05-10 2018-11-06 아카데미아 시니카 항-인플루엔자 활성을 가진 자나미비르 포스포네이트 동족체 및 인플루엔자 바이러스의 오셀타미비르 감수성을 확인하는 방법
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
CA2795972A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Genentech, Inc. Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
EP2582729A4 (en) 2010-06-18 2014-05-28 Hoffmann La Roche ANTI-AXL ANTIBODIES AND METHOD FOR THEIR USE
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
AU2011274528B2 (en) 2010-07-09 2015-04-23 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AU2011274423B2 (en) 2010-07-09 2016-02-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeric clotting factors
EP2409712A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC and CDC functions and improved glycosylation profile
EP2409989A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Method to improve glycosylation profile for antibody
EP2409993A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC function with improved glycosylation profile
FR2962908A1 (fr) 2010-07-20 2012-01-27 Lfb Biotechnologies Formulation d'anticorps anti-cd20
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
WO2012018771A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Genentech, Inc. Chronic lymphocytic leukemia (cll) biomarkers
EP2600898A1 (en) 2010-08-05 2013-06-12 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
RU2584597C2 (ru) 2010-08-13 2016-05-20 Рош Гликарт Аг Антитела против а2 тенасцина с и способы их применения
NZ605980A (en) 2010-08-13 2015-01-30 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
NZ604510A (en) 2010-08-17 2013-10-25 Csl Ltd Dilutable biocidal compositions and methods of use
AR082693A1 (es) * 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
JP5758004B2 (ja) 2010-08-24 2015-08-05 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ジスルフィドによって安定化されたＦｖ断片を含む二重特異性抗体
TW201215405A (en) 2010-08-25 2012-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against IL-18R1 and uses thereof
AU2011295919A1 (en) 2010-08-31 2013-03-07 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treatment
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2625197B1 (en) 2010-10-05 2016-06-29 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
RU2013126477A (ru) 2010-11-08 2014-12-20 Дженентек, Инк. Вводимые подкожно антитела против рецептора il-6
EP2638070B1 (en) 2010-11-10 2016-10-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for neural disease immunotherapy
CA2818173C (en) 2010-11-30 2022-05-03 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
TWI708944B (zh) 2010-12-16 2020-11-01 美商建南德克公司 關於th2抑制作用之診斷及治療
RU2013131444A (ru) 2010-12-16 2015-01-27 Рош Гликарт Аг Сочетанная терапия афукозилированным антителом к cd20 и ингибитором mdm2
NZ610976A (en) 2010-12-20 2015-07-31 Genentech Inc Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
BR112013015687A2 (pt) 2010-12-22 2016-10-11 Genentech Inc anticorpo anti-pcsk9 ou um fragmento de anticorpo que se liga a pcsk9, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, método para fabricar um anticorpo anti-pcsk9, composição farmacêutica, método de redução do nível de colesterol ldl em um sujeito e método de tratamento de hipercolesterolemia em um sujeito
WO2012085111A1 (en) 2010-12-23 2012-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
EP2672999A2 (en) 2011-02-10 2013-12-18 Roche Glycart AG Improved immunotherapy
WO2012116927A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent antigen binding proteins
ES2549638T3 (es) 2011-02-28 2015-10-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Proteínas de unión a antígeno
AU2012234335B2 (en) 2011-03-29 2016-09-01 Roche Glycart Ag Antibody Fc variants
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
MX342240B (es) 2011-04-07 2016-09-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr4 y metodos de uso.
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
JP5987053B2 (ja) 2011-05-12 2016-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド フレームワークシグネチャーペプチドを用いて動物サンプルにおける治療抗体を検出するための多重反応モニタリングｌｃ−ｍｓ／ｍｓ法
RS56090B1 (sr) 2011-05-16 2017-10-31 Hoffmann La Roche Fgfr1 agonisti i načini primene
KR101629073B1 (ko) 2011-06-15 2016-06-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-인간 에리스로포이에틴 수용체 항체 및 이의 사용 방법
FR2976811A1 (fr) 2011-06-22 2012-12-28 Lfb Biotechnologies Utilisation d'un anticorps anti-cd20 a haute adcc pour le traitement de la maladie de waldenstrom
SG195077A1 (en) 2011-06-22 2013-12-30 Hoffmann La Roche Removal of target cells by circulating virus-specific cytotoxic t-cells using mhc class i comprising complexes
EP2726098A1 (en) 2011-06-30 2014-05-07 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-c-met antibody formulations
KR20140057326A (ko) 2011-08-17 2014-05-12 제넨테크, 인크. 뉴레귤린 항체 및 그의 용도
CN103890008A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 在顽固性肿瘤中抑制血管发生
KR20140048292A (ko) 2011-08-23 2014-04-23 로슈 글리카트 아게 항-mcsp 항체
EP2747781B1 (en) 2011-08-23 2017-11-15 Roche Glycart AG Bispecific antibodies specific for t-cell activating antigens and a tumor antigen and methods of use
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CN103930781A (zh) 2011-09-15 2014-07-16 霍夫曼-拉罗奇有限公司 促进分化的方法
RU2014114617A (ru) 2011-09-19 2015-10-27 Дженентек, Инк. Комбинированные виды лечения, содержащие антагонисты с-мет и антагонисты b-raf
CN104302668A (zh) 2011-09-23 2015-01-21 罗氏格黎卡特股份公司 双特异性的抗-egfr/抗igf-1r抗体
US10024867B2 (en) * 2011-09-30 2018-07-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Ion concentration-dependent binding molecule library
CN104114577A (zh) 2011-09-30 2014-10-22 特瓦制药澳大利亚私人有限公司 针对TL1a的抗体及其用途
US9428535B2 (en) 2011-10-03 2016-08-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
AU2012319150B2 (en) 2011-10-05 2017-08-17 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using Notch2 antagonists
KR20140082796A (ko) 2011-10-14 2014-07-02 제넨테크, 인크. 항-HtrA1 항체 및 사용 방법
JP6254087B2 (ja) 2011-10-15 2017-12-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌を治療するためのｓｃｄ１アンタゴニスト
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
MX2014004991A (es) 2011-10-28 2014-05-22 Genentech Inc Combinaciones terapeuticas y metodos para tratar el melanoma.
JP2015504413A (ja) 2011-10-28 2015-02-12 パトリス リミテッド Ｐａｔ−ｌｍ１エピトープおよびそれを使用するための方法
AU2012336069A1 (en) 2011-11-07 2014-05-22 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
CN104066748A (zh) 2011-11-21 2014-09-24 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗c-met抗体的纯化
US20130302274A1 (en) * 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
US20140335084A1 (en) 2011-12-06 2014-11-13 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody formulation
HRP20220717T1 (hr) 2011-12-16 2022-07-22 Modernatx, Inc. Modificirani pripravci mrna
LT2794905T (lt) 2011-12-20 2020-07-10 Medimmune, Llc Modifikuoti polipeptidai, skirti bispecifinių antikūnų karkasams
RU2639519C2 (ru) 2011-12-22 2017-12-21 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Комбинации элементов экспрессионного вектора, новые способы получения клеток-продуцентов и их применение для рекомбинантного получения полипептидов
RU2625033C2 (ru) 2011-12-22 2017-07-11 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Система индикации на основе полноразмерного антитела для эукариотических клеток и ее применение
MX355625B (es) 2011-12-22 2018-04-25 Hoffmann La Roche Organizacion de vector de expresion, metodos novedosos de generacion de celulas de produccion y su uso para la produccion recombinante de polipeptidos.
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
US20130183294A1 (en) 2012-01-18 2013-07-18 Genentech, Inc. Methods of using fgf19 modulators
MX2014008157A (es) 2012-01-18 2014-10-06 Genentech Inc Anticuerpos anti-lrp5 y metodos de uso.
WO2013119966A2 (en) 2012-02-10 2013-08-15 Genentech, Inc. Single-chain antibodies and other heteromultimers
KR102148303B1 (ko) 2012-02-11 2020-08-26 제넨테크, 인크. R-스폰딘 전위 및 그의 사용 방법
BR112014018005B1 (pt) 2012-02-15 2021-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de um complexo não covalente imobilizado
US20130259867A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
JP2015513912A (ja) 2012-04-02 2015-05-18 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
BR112014027166A2 (pt) 2012-05-01 2017-06-27 Genentech Inc anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratamento, método de inibir proliferação e métodos de detecção.
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
BR112014028600B1 (pt) 2012-05-18 2022-11-22 Genentech, Inc Formulações de suspensão compreendendo anticorpo monoclonal de alta concentração, seu método de preparação, seu uso e dispositivo para sua administração subcutânea, e método para produção de um artigo de fabricação
KR102293061B1 (ko) 2012-05-21 2021-08-23 제넨테크, 인크. 혈액-뇌 장벽 수송의 안전성을 개선하는 방법
MX2014014086A (es) 2012-05-23 2015-01-26 Genentech Inc Metodo de seleccion para agentes terapeuticos.
MX2014014830A (es) 2012-06-15 2015-05-11 Genentech Inc Anticuerpos anti-pcsk9, formulaciones, dosificacion y metodos de uso.
RU2015101699A (ru) 2012-06-21 2016-08-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Слитые полипептиды и конъюгаты полипептида лиганда рецептора инкретина и fc-области с измененной fc-эффекторной функцией
EP2867253B1 (en) 2012-06-27 2016-09-14 F. Hoffmann-La Roche AG Method for selection and production of tailor-made highly selective and multi-specific targeting entities containing at least two different binding entities and uses thereof
JP6309002B2 (ja) 2012-06-27 2018-04-11 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 標的に特異的に結合する少なくとも１つの結合実体を含む抗体Ｆｃ領域結合体を作製するための方法およびその使用
US20140004121A1 (en) 2012-06-27 2014-01-02 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
DK2869837T3 (en) 2012-07-04 2016-09-26 Hoffmann La Roche Anti-theophylline antibodies and methods of use
EP2870180A1 (en) 2012-07-04 2015-05-13 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-biotin antibodies and methods of use
JP6148729B2 (ja) 2012-07-04 2017-06-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 共有結合している抗原−抗体結合体
CN104428416B (zh) 2012-07-05 2019-01-29 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达和分泌系统
EP2869847B1 (en) 2012-07-09 2017-12-06 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
BR112015000437A2 (pt) 2012-07-09 2017-06-27 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica, métodos de tratamento e de inbir a proliferação de uma célula
BR112015000441A2 (pt) 2012-07-09 2017-12-19 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica e método de tratamento e método para inbir a proliferação de uma célula positiva para cd22
BR112015000439A2 (pt) 2012-07-09 2017-12-19 Genentech Inc imunoconjugado , formulação farmacêutica e métodos de tratamento de um indivíduo e de inibição da proliferação
ES2690312T3 (es) 2012-07-13 2018-11-20 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecíficos anti-VEGF/anti-ANG-2 y su uso en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares
MX365382B (es) 2012-08-07 2019-05-31 Roche Glycart Ag Una combinación de inmunoconjugado y anticuerpo para usarse en el tratamiento de cáncer.
AU2013306098A1 (en) 2012-08-18 2015-02-12 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
US9547009B2 (en) 2012-08-21 2017-01-17 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
RU2663120C2 (ru) 2012-08-29 2018-08-01 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Шаттл для гематоэнцефалического барьера
RU2648476C2 (ru) 2012-09-07 2018-03-26 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия с использованием антитела против cd20 типа ii и селективного ингибитора bcl-2
EP2905290B1 (en) 2012-10-05 2019-12-04 Kyowa Kirin Co., Ltd. Heterodimeric protein composition
WO2014056783A1 (en) 2012-10-08 2014-04-17 Roche Glycart Ag Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use
EP2914621B1 (en) 2012-11-05 2023-06-07 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
EP2727941A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
EP2727943A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Trispecific antibodies against human EGFR, HER2 and HER3
EP2727942A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Bispecific antibodies against human EGFR, HER2, and HER3
EP2914629A1 (en) 2012-11-05 2015-09-09 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
JP6302476B2 (ja) 2012-11-08 2018-03-28 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｅｒ３のベータヘアピンに結合するｈｅｒ３抗原結合タンパク質
CA2890669A1 (en) 2012-11-13 2014-05-22 Genetech, Inc. Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use
EP2922554B1 (en) 2012-11-26 2022-02-23 ModernaTX, Inc. Terminally modified rna
EP3514175A1 (fr) 2012-12-17 2019-07-24 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Utilisation d'anticorps monoclonaux pour le traitement de l'inflammation et d'infections bacteriennes
RU2015129640A (ru) 2012-12-21 2017-01-26 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Связанные дисульфидом мультивалентные многофункциональные белки, содержащие молекулы гкгс класса 1
US20140194368A1 (en) * 2013-01-04 2014-07-10 Beech Tree Labs, Inc. Method of Treating Cancer by Administration of Low Levels of Heat Shock Protein 70 (HSP70)
AR094403A1 (es) 2013-01-11 2015-07-29 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos anti-her3
RU2519546C1 (ru) * 2013-01-16 2014-06-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Биоинтегратор" (Ооо "Биоинтегратор") КОНЪЮГАТЫ И МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С РЕЦЕПТОРОМ CD16а
CA3150658A1 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
US9840559B2 (en) 2013-02-01 2017-12-12 The Regents Of The University Of California Anti-CD83 antibodies and use thereof
FI2953971T3 (fi) 2013-02-07 2023-04-27 Csl Ltd Il-11r-sitojaproteiineja ja niiden käyttöjä
EP3594231A1 (en) 2013-02-13 2020-01-15 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof
EP2958592A1 (en) 2013-02-22 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancer and preventing drug resistance
CN104936986B (zh) 2013-02-26 2019-08-09 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化性抗原结合分子
WO2014131715A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
WO2014131694A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
EP2964260A2 (en) 2013-03-06 2016-01-13 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating and preventing cancer drug resistance
CN105163755A (zh) 2013-03-12 2015-12-16 犹他大学研究基金会 用于诱导细胞凋亡的组合物和方法
NZ751452A (en) 2013-03-13 2020-04-24 Genentech Inc Antibody formulations
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
CA2903480A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
EP2970474B1 (en) 2013-03-14 2017-12-20 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
EP2968537A1 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
DK2970921T3 (en) 2013-03-15 2019-01-14 Atyr Pharma Inc Histidyl-tRNA synthetase-Fc conjugates
NZ751260A (en) 2013-03-15 2021-07-30 Genentech Inc Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
EP2970471A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-crth2 antibodies and their use
BR112015020290A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Genentech Inc métodos para tratar um câncer, para prevenir câncer, para inibir proliferação, para tratar terapeuticamente um mamífero, para tratar uma disfunção, para reduzir níveis de proteína spp1, para tratar terapeuticamente um câncer, para tratar um indivíduo e para inibir proliferação celular, artigo, anticorpos e usos
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
LT2970422T (lt) 2013-03-15 2018-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Il-22 polipeptidai ir il-22 su fc sulieti baltymai bei panaudojimo būdai
BR112015023262B8 (pt) 2013-03-15 2024-02-06 Ac Immune Sa Anticorpo isolado, imunoconjugado, formulação farmacêutica e usos do anticorpo
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
EP2992011B1 (en) 2013-04-29 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
WO2014177459A2 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
AU2014261630B2 (en) 2013-04-29 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Human FcRn-binding modified antibodies and methods of use
SG11201509026VA (en) * 2013-05-02 2015-12-30 Hoffmann La Roche Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a cd22 antibody-drug conjugate
WO2014177615A2 (en) 2013-05-02 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN AFUCOSYLATED CD20 ANTIBODY WITH A CD79b ANTIBODY-DRUG CONJUGATE
UA119235C2 (uk) 2013-05-20 2019-05-27 Дженентек, Інк. Антитіло анти-рецептор трансферину і способи його застосування
WO2014210397A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
US9981030B2 (en) 2013-06-27 2018-05-29 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
LT3708583T (lt) 2013-08-01 2022-04-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Afukozilinti anti-fgfr2iiib antikūnai
AU2014312190A1 (en) 2013-08-28 2016-02-18 Bioasis Technologies Inc. CNS-targeted conjugates of antibodies
CA2923579C (en) 2013-09-06 2023-09-05 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
AR097685A1 (es) 2013-09-17 2016-04-06 Genentech Inc Métodos de uso de anticuerpos anti-lgr5
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
SI3052192T1 (sl) 2013-10-02 2020-11-30 Medimmune, Llc Nevtralizarijoča protitelesa proti-influenci A in njihove uporabe
AU2014329452B2 (en) 2013-10-03 2019-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
JP2016537965A (ja) 2013-10-11 2016-12-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｓｐ４阻害剤及び使用方法
MX2016003593A (es) 2013-10-11 2016-06-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos de cadena ligera variable comun intercambiada de dominio multiespecifico.
EP3054987B1 (en) 2013-10-11 2019-10-09 The United States of America, represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Tem8 antibodies and their use
TWI658052B (zh) 2013-10-18 2019-05-01 美商建南德克公司 抗－ｒｓｐｏ抗體及使用方法
MX2016005159A (es) 2013-10-23 2016-07-05 Genentech Inc Metodos de diagnostico y tratamiento de trastornos eosinofilicos.
ES2821904T3 (es) 2013-11-21 2021-04-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-alfa-sinucleína y procedimientos de uso
WO2015082446A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of cancer using an anti-cdcp1 antibody and a taxane
KR20230107382A (ko) 2013-12-09 2023-07-14 알라코스 인크. 항-Siglec-8 항체 및 그의 사용 방법
CA2931340A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Genentech, Inc. Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
KR102357961B1 (ko) 2013-12-17 2022-02-08 제넨테크, 인크. 항-cd3 항체 및 이의 사용 방법
EP3527587A1 (en) 2013-12-17 2019-08-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-l1 binding antagonists
US20150210772A1 (en) 2013-12-17 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
EP3647324A1 (en) 2013-12-17 2020-05-06 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
KR102278979B1 (ko) 2014-01-03 2021-07-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 공유적으로 연결된 헬리카-항-헬리카 항체 접합체 및 그의 용도
ES2895752T3 (es) 2014-01-03 2022-02-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos anti-hapteno/anti-receptor de la barrera hematoencefálica, complejos de los mismos y su uso como lanzaderas a través de la barrera hematoencefálica
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
JP6521464B2 (ja) 2014-01-03 2019-05-29 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート
CA2932547C (en) 2014-01-06 2023-05-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
BR112016016416A2 (pt) 2014-01-15 2017-10-03 Hoffmann La Roche VARIANTES DE REGIÕES-"Fc" COM 'FcRn' MODIFICADAS E PROPRIEDADES DE LIGAÇÃO DE PROTEÍNA "A" MANTIDAS
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
KR20160104727A (ko) 2014-01-16 2016-09-05 아카데미아 시니카 암의 치료 및 검출을 위한 조성물 및 방법
WO2015112909A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
EP3102197B1 (en) 2014-02-04 2018-08-29 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
US20150246963A1 (en) 2014-02-08 2015-09-03 Genentech, Inc. Methods of treating alzheimer's disease
AU2015213741B2 (en) 2014-02-08 2020-10-08 Genentech, Inc. Methods of treating Alzheimer's Disease
RS57608B1 (sr) 2014-02-12 2018-11-30 Hoffmann La Roche Anti-jagged1 antitela i načini primene
AU2015218631A1 (en) 2014-02-21 2016-08-11 Genentech, Inc. Anti-IL-13/IL-17 bispecific antibodies and uses thereof
EP3110446B1 (en) 2014-02-28 2021-12-01 Allakos Inc. Methods and compositions for treating siglec-8 associated diseases
CN106103730B (zh) 2014-03-14 2021-06-08 豪夫迈·罗氏有限公司 用于分泌异源多肽的方法和组合物
WO2015140591A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
EP3122900A1 (en) 2014-03-24 2017-02-01 F. Hoffmann-La Roche AG Cancer treatment with c-met antagonists and correlation of the latter with hgf expression
JP6562942B2 (ja) 2014-03-27 2019-08-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 反応性標識化合物およびその使用
JP6637439B2 (ja) 2014-03-31 2020-01-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｏｘ４０抗体及び使用方法
WO2015153514A1 (en) 2014-03-31 2015-10-08 Genentech, Inc. Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
US10160812B2 (en) 2014-04-11 2018-12-25 Medimmune, Llc Bispecific HER2 antibodies
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
JP2017522861A (ja) 2014-05-22 2017-08-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｇｐｃ３抗体及びイムノコンジュゲート
RU2016144405A (ru) 2014-05-23 2018-06-26 Дженентек, Инк. MiT БИОМАРКЕРЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
FI3149045T3 (fi) 2014-05-27 2023-03-20 Academia Sinica Koostumuksia ja menetelmiä, jotka liittyvät yleisglykoformeihin vasta-aineiden parannettua tehokkuutta varten
TWI679020B (zh) 2014-05-27 2019-12-11 中央研究院 抗ｈｅｒ２醣抗體及其用途
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
JP2017518989A (ja) 2014-05-27 2017-07-13 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 抗ｃｄ２０糖操作抗体群およびその使用
CA2950433A1 (en) 2014-05-28 2015-12-03 Academia Sinica Anti-tnf-alpha glycoantibodies and uses thereof
HUE047113T2 (hu) 2014-05-30 2020-04-28 Henlix Biotech Co Ltd Epidermális növekedési faktor receptora (EGFR) elleni antitestek
MX2016016233A (es) 2014-06-11 2017-03-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 y sus usos.
US20230190750A1 (en) 2014-06-13 2023-06-22 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
RU2705299C2 (ru) 2014-06-26 2019-11-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела против 5-бром-2'-дезоксиуридина и способы применения
RU2017103289A (ru) 2014-07-11 2018-08-14 Дженентек, Инк. Ингибирование пути notch
BR112017000497B1 (pt) 2014-07-11 2023-12-26 Ventana Medical Systems, Inc Anticorpo isolado, célula hospedeira procariótica, imunoconjugado e método de detecção da presença ou do nível de expressão de pd-l1
RS65573B1 (sr) * 2014-08-04 2024-06-28 Hoffmann La Roche Bispecifični antigen vezujući molekuli koji aktiviraju t ćelije
MX2017002605A (es) 2014-08-28 2017-05-19 Bioatla Llc Receptores de antigeno quimerico condicionalmente activos para celulas t modificadas.
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
US9879042B2 (en) 2014-09-08 2018-01-30 Academia Sinica Human iNKT cell activation using glycolipids
EP3191527B1 (en) * 2014-09-10 2020-01-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Galactoengineered immunoglobulin 1 antibodies
KR102508173B1 (ko) 2014-09-12 2023-03-10 제넨테크, 인크. 항-her2 항체 및 면역콘주게이트
CN113698485A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
PE20170670A1 (es) 2014-09-12 2017-06-06 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados
CA2959545A1 (en) 2014-09-15 2016-03-24 Genentech, Inc. Antibody formulations
CA2957148A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
US20160082120A1 (en) 2014-09-23 2016-03-24 Genentech, Inc. METHODS OF USING ANTI-CD79b IMMUNOCONJUGATES
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
US10870704B2 (en) 2014-10-23 2020-12-22 Kira Biotech Pty Limited CD83 binding proteins and uses thereof
WO2016070001A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
CN107109484B (zh) 2014-11-03 2021-12-14 豪夫迈·罗氏有限公司 用于ox40激动剂治疗的功效预测和评估的方法和生物标志物
BR112017009151A2 (pt) 2014-11-03 2018-03-06 Genentech, Inc. ensaios para detectar subgrupos imunológicos de célula t e métodos de uso dos mesmos
WO2016073789A2 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-fgfr2/3 antibodies and methods using same
KR20170076697A (ko) 2014-11-06 2017-07-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 개질된 FCRN-결합 특성 및 단백질 A-결합 특성을 가진 Fc-영역 변이체
CN107073126A (zh) 2014-11-06 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和tigit抑制剂的组合疗法
PL3215528T3 (pl) 2014-11-06 2020-01-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Warianty regionu Fc ze zmodyfikowanym wiązaniem FcRn i sposoby stosowania
JP6929771B2 (ja) 2014-11-10 2021-09-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン−３３抗体及びその使用
EP3217787B1 (en) 2014-11-10 2019-04-17 F.Hoffmann-La Roche Ag Animal model for nephropathy and agents for treating the same
US10160795B2 (en) 2014-11-14 2018-12-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to Ebola virus glycoprotein and their use
LT3224275T (lt) 2014-11-14 2020-05-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigeną surišančios molekulės, apimančios tnf šeimos ligando trimerą
RU2017121096A (ru) 2014-11-17 2018-12-19 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия, включающая применение ох40-связывающих агонистов и антагонистов связывания оси pd-1
WO2016081640A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
CN107001473B (zh) 2014-11-19 2021-07-09 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-运铁蛋白受体抗体及使用方法
US10882920B2 (en) 2014-11-19 2021-01-05 Genentech, Inc. Antibodies against BACE1 and use thereof for neural disease immunotherapy
HUE059632T2 (hu) 2014-11-20 2022-12-28 Hoffmann La Roche T-sejteket aktiváló bispecifikus antigénkötõ molekulák és PD-1 tengelyt célzó antagonisták kombinációs terápiája
PL3227332T3 (pl) 2014-12-03 2020-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Wielospecyficzne przeciwciała
ES2744540T3 (es) 2014-12-05 2020-02-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-CD79b y procedimientos de uso
KR20170085595A (ko) 2014-12-10 2017-07-24 제넨테크, 인크. 혈뇌 장벽 수용체 항체 및 사용 방법
KR20180054923A (ko) 2014-12-19 2018-05-24 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-마이오스타틴 항체, 변이체 Fc 영역을 함유하는 폴리펩타이드, 및 사용 방법
EP3981794A1 (en) 2014-12-19 2022-04-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c5 antibodies and methods of use
WO2016111947A2 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
TW202126682A (zh) 2015-01-16 2021-07-16 美商奇諾治療有限公司 針對ror1之特異性抗體及嵌合抗原受體
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
EP3247723A1 (en) 2015-01-22 2017-11-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
TWI736523B (zh) 2015-01-24 2021-08-21 中央研究院 新穎聚醣結合物及其使用方法
AU2016215227A1 (en) 2015-02-04 2017-09-21 Assistance Publique-Hopitaux De Paris Mutant smoothened and methods of using the same
US9969800B2 (en) 2015-02-05 2018-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha IL-8 antibodies
EP3261665A1 (en) 2015-02-24 2018-01-03 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
KR20170127011A (ko) 2015-03-16 2017-11-20 제넨테크, 인크. Il-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 th2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
ES2789348T3 (es) 2015-03-20 2020-10-26 Us Health Anticuerpos neutralizantes para GP120 y sus usos
JP6944924B2 (ja) 2015-03-23 2021-10-06 ジョンス セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｉｃｏｓに対する抗体
PE20171790A1 (es) 2015-03-23 2017-12-28 Bayer Pharma AG Anticuerpos anti-ceacam6 y sus usos
CN114456272A (zh) 2015-04-03 2022-05-10 优瑞科生物技术公司 靶向afp肽/mhc复合体的构建体及其用途
ES2881694T3 (es) 2015-04-24 2021-11-30 Hoffmann La Roche Procedimientos de identificación de bacterias que comprenden polipéptidos de unión
JP6434135B2 (ja) * 2015-04-30 2018-12-05 富士フイルム株式会社 装飾シート
CN107709363A (zh) 2015-05-01 2018-02-16 基因泰克公司 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
EP3294771A1 (en) * 2015-05-11 2018-03-21 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compositions and methods of treating lupus nephritis
MX2017014381A (es) 2015-05-12 2018-03-02 Genentech Inc Metodos terapeuticos y diagnosticos para cancer.
WO2016196298A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnolstic methods for cancer
WO2016196343A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Genentech, Inc. Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
EP3302552A1 (en) 2015-06-02 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compositions and methods for using anti-il-34 antibodies to treat neurological diseases
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
PL3302520T3 (pl) 2015-06-04 2021-03-22 Ospedale San Raffaele S.R.L. IGFBP3 i jego zastosowania
BR112017025998A2 (pt) 2015-06-04 2018-08-14 Ospedale San Raffaele Srl inibidor de eixo igfbp3/tmem219, composição farmacêutica para uso no tratamento e/ou prevenção de diabetes, método para identificar um indivíduo em risco de desenvolver diabetes tipo 1 e/ou tipo 2 ou para monitorar a resposta a um tratamento terapêutico em um indivíduo e kit
CA2986942A1 (en) 2015-06-05 2016-12-08 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
EP3303399A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
EP3303397A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
JP2018524295A (ja) 2015-06-15 2018-08-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及び免疫複合体
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
CN107847568B (zh) 2015-06-16 2022-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cll-1抗体和使用方法
PL3310814T3 (pl) 2015-06-16 2023-12-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Humanizowane i wykazujące dojrzałe powinowactwo przeciwciała przeciwko FcRH5 i sposoby stosowania
CN107787331B (zh) 2015-06-17 2022-01-11 豪夫迈·罗氏有限公司 抗her2抗体和使用方法
CN107771076A (zh) 2015-06-17 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 使用pd‑1轴结合拮抗剂和紫杉烷治疗局部晚期或转移性乳腺癌的方法
EP3310385A4 (en) 2015-06-17 2018-12-19 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
US20180222985A1 (en) * 2015-06-24 2018-08-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
DK3313879T3 (da) 2015-06-24 2022-03-14 Hoffmann La Roche Anti-transferrinreceptor-antistoffer med tilpasset affinitet
US10906971B2 (en) 2015-06-26 2021-02-02 Sanofi Biotechnology SAS Monoclonal anti-IL-1RAcP antibodies
US20170029520A1 (en) 2015-06-29 2017-02-02 Genentech, Inc. Compositions and methods for use in organ transplantation
CA3162586A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
WO2017040342A1 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Genentech, Inc. Anti-hypusine antibodies and uses thereof
EP3353206A1 (en) 2015-09-22 2018-08-01 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
MY191756A (en) 2015-09-23 2022-07-14 Genentech Inc Optimized variants of anti-vegf antibodies
CN108289954B (zh) 2015-09-24 2022-05-31 阿布维特罗有限责任公司 Hiv抗体组合物和使用方法
CN108290946B (zh) 2015-09-25 2021-09-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗tigit抗体和使用方法
US10358497B2 (en) 2015-09-29 2019-07-23 Amgen Inc. Methods of treating cardiovascular disease with an ASGR inhibitor
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
BR112018002570A2 (pt) 2015-10-02 2018-10-16 Hoffmann La Roche molécula de ligação ao antígeno biespecífica, anticorpo biespecífico, polinucleotídeos, anticorpo que se liga especificamente ao ox40, composição farmacêutica e método para inibir o crescimento de células tumorais em um indivíduo
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MX2018003822A (es) 2015-10-02 2018-06-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso.
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
CR20180161A (es) 2015-10-02 2018-05-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos para pd1 y tim3
KR20180073561A (ko) 2015-10-02 2018-07-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 이중특이적 항-ceaxcd3 t 세포 활성화 항원 결합 분자
EP3359568B1 (en) 2015-10-07 2022-03-09 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory tnf receptor
WO2017062748A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
CA2998208A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
BR112018006562A2 (pt) 2015-10-29 2018-12-11 Hoffmann La Roche anticorpos, ácido nucleico, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, conjugado e uso de um anticorpo
WO2017075212A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Genentech, Inc. Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof
WO2017075173A2 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Genentech, Inc. Anti-factor d antibodies and conjugates
WO2017079479A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use
EP3371217A1 (en) 2015-11-08 2018-09-12 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of screening for multispecific antibodies
TWI791422B (zh) 2015-11-23 2023-02-11 美商戊瑞治療有限公司 用於癌症治療之單獨fgfr2抑制劑或與免疫刺激劑組合
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
BR112018003984A2 (pt) * 2015-12-09 2018-09-25 Hoffmann La Roche anticorpos
KR101789973B1 (ko) 2015-12-18 2017-10-26 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-c5 항체 및 사용 방법
BR112018011029A2 (pt) 2016-01-08 2018-11-21 Hoffmann La Roche métodos para tratar ou atrasar a progressão do câncer e para melhorar a função imune em um indivíduo com câncer, usos de um antagonista de ligação e de um anticorpo biespecífico, composições e kits
CN108602883A (zh) 2016-01-20 2018-09-28 基因泰克公司 用于阿尔茨海默氏病的高剂量治疗
CA3019952A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
MX2018010361A (es) 2016-02-29 2019-07-08 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
WO2017148879A1 (en) * 2016-03-01 2017-09-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Obinutuzumab and rituximab variants having reduced adcp
US10336784B2 (en) 2016-03-08 2019-07-02 Academia Sinica Methods for modular synthesis of N-glycans and arrays thereof
TWI759287B (zh) 2016-03-15 2022-04-01 日商中外製藥股份有限公司 使用ｐｄ－１軸結合拮抗劑和抗ｇｐｃ３抗體治療癌症的方法
PE20231511A1 (es) 2016-03-22 2023-09-26 Hoffmann La Roche Moleculas biespecificas de celulas t activadas por proteasas que se unen especificamente al receptor 1 de folato (folr1) y cd3
US20170315132A1 (en) 2016-03-25 2017-11-02 Genentech, Inc. Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
PE20190126A1 (es) 2016-03-31 2019-01-17 Ngm Biopharmaceuticals Inc Proteinas de union y metodos de uso de las mismas
EP3443004A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-rspo3 antibodies and methods of use
EP3443350B1 (en) 2016-04-15 2020-12-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
KR102606938B1 (ko) 2016-04-15 2023-11-29 바이오아트라, 인코퍼레이티드 항 Axl항체 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
CA3020718A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
EP3889175A1 (en) 2016-05-02 2021-10-06 F. Hoffmann-La Roche AG The contorsbody - a single chain target binder
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
EP3241845A1 (en) 2016-05-06 2017-11-08 MAB Discovery GmbH Humanized anti-il-1r3 antibodies
CN109071640B (zh) 2016-05-11 2022-10-18 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰抗生腱蛋白抗体及使用方法
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
CN109071652B (zh) 2016-05-11 2022-09-23 豪夫迈·罗氏有限公司 包含tnf家族配体三聚体和生腱蛋白结合模块的抗原结合分子
AU2017263568B2 (en) 2016-05-13 2024-01-18 Bioatla, Llc Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
WO2017201449A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Genentech, Inc. Protac antibody conjugates and methods of use
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
BR112019022558A2 (pt) 2016-06-02 2020-05-19 Hoffmann La Roche anticorpos, métodos para tratar ou retardar a progressão de uma doença proliferativa e para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, composições farmacêuticas, kit, usos de uma combinação de um anticorpo anti-cd20 e de um anticorpo e invenção
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3257866A1 (en) 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
CN109563160B (zh) 2016-06-24 2023-02-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗聚泛素多特异性抗体
MX2018015414A (es) * 2016-06-30 2019-08-01 Hoffmann La Roche Terapia de célula t adoptiva mejorada.
EP3478717B1 (en) 2016-07-04 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody format
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
EP3491024A2 (en) 2016-07-29 2019-06-05 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies against anti-cd19 antibodies
CA3027018A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Bispecific antibody exhibiting increased alternative fviii-cofactor-function activity
TWI693940B (zh) 2016-08-05 2020-05-21 日商中外製藥股份有限公司 Ｉｌ-８相關疾病之治療用或預防用組成物
CN109476748B (zh) 2016-08-08 2023-05-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的治疗和诊断方法
KR102588027B1 (ko) 2016-08-22 2023-10-12 초 파마 인크. 항체, 결합 단편 및 사용 방법
US10870694B2 (en) 2016-09-02 2020-12-22 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018049083A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
WO2018050878A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Complement factor based affinity chromatography
RS64550B1 (sr) 2016-09-23 2023-09-29 Hoffmann La Roche Upotreba il-13 antagonista za lečenje atopičnog dermatitisa
ES2897217T3 (es) 2016-09-30 2022-02-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos frente a p95HER2
KR20190062505A (ko) 2016-10-03 2019-06-05 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Hpv-특이적 결합 분자
CN110139674B (zh) 2016-10-05 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 制备抗体药物缀合物的方法
CN110418851A (zh) 2016-10-06 2019-11-05 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
EP3532091A2 (en) 2016-10-29 2019-09-04 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-mic antibidies and methods of use
DK3535298T3 (da) 2016-11-02 2021-11-15 Jounce Therapeutics Inc Antistoffer til pd-1 og brug deraf
US11466094B2 (en) 2016-11-15 2022-10-11 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
AU2017361887B2 (en) 2016-11-21 2019-08-15 Cureab Gmbh Anti-GP73 antibodies and immunoconjugates
CA3044679A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
KR102645073B1 (ko) 2016-12-07 2024-03-11 제넨테크, 인크. 항-타우 항체 및 이의 이용 방법
KR20190095921A (ko) 2016-12-12 2019-08-16 제넨테크, 인크. 항-pd-l1 항체 및 안티안드로겐을 사용하여 암을 치료하는 방법
TWI829628B (zh) 2016-12-19 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與靶向4-1bb (cd137)促效劑併用之組合療法
PL3559034T3 (pl) 2016-12-20 2021-04-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapia skojarzona dwuswoistymi przeciwciałami anty-CD20/anty-CD3 i agonistami 4-1BB (CD137)
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
WO2018127473A1 (en) 2017-01-03 2018-07-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
TW201825515A (zh) 2017-01-04 2018-07-16 美商伊繆諾金公司 Ｍｅｔ抗體以及其免疫結合物及用途
TW201831517A (zh) 2017-01-12 2018-09-01 美商優瑞科生物技術公司 靶向組織蛋白h3肽/mhc複合體之構築體及其用途
WO2018148660A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
KR102362006B1 (ko) 2017-02-10 2022-02-14 제넨테크, 인크. 항-트립타제 항체, 이의 조성물, 및 그의 용도
EP3589754B1 (en) 2017-03-01 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
SG11201908650PA (en) 2017-03-22 2019-10-30 Genentech Inc Optimized antibody compositions for treatment of ocular disorders
SG11201908326YA (en) 2017-03-28 2019-10-30 Genentech Inc Methods of treating neurodegenerative diseases
WO2018178076A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
MA49039A (fr) 2017-04-04 2020-02-12 Hoffmann La Roche Nouvelles molécules bispécifiques de liaison à l'antigène capables de se lier spécifiquement à cd40 et à fap
CN110506059B (zh) 2017-04-05 2023-01-17 豪夫迈·罗氏有限公司 特异性结合pd1和lag3的双特异性抗体
EP3619235A1 (en) 2017-04-11 2020-03-11 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and methods of using the same
WO2018191660A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
WO2018195338A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
CN110536691A (zh) 2017-04-21 2019-12-03 豪夫迈·罗氏有限公司 Klk5拮抗剂治疗疾病的用途
EP3615574A4 (en) 2017-04-26 2021-02-24 Eureka Therapeutics, Inc. CONSTRUCTIONS SPECIFICALLY RECOGNIZING GLYPICANE 3 AND USES OF SUCH LATEST
KR20200003843A (ko) 2017-04-27 2020-01-10 테사로, 인코포레이티드 림프구 활성화 유전자-3 (lag-3)에 대한 항체 작용제 및 그의 용도
BR112019022912A2 (pt) 2017-05-05 2020-05-26 Allakos Inc. Métodos e composições para tratar doenças oculares alérgicas
EP3401332A1 (en) 2017-05-08 2018-11-14 MAB Discovery GmbH Anti-il-1r3 antibodies for use in inflammatory conditions
SG10202112636SA (en) 2017-05-16 2021-12-30 Five Prime Therapeutics Inc Anti-fgfr2 antibodies in combination with chemotherapy agents in cancer treatment
EP3652206A1 (en) 2017-07-10 2020-05-20 International-Drug-Development-Biotech Treatment of b cell malignancies using afucosylated pro-apoptotic anti-cd19 antibodies in combination with anti cd20 antibodies or chemotherapeutics
CA3069469A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
EP3658589B1 (en) 2017-07-26 2023-09-27 Forty Seven, Inc. Anti-sirp-alpha antibodies and related methods
WO2019020606A1 (en) 2017-07-26 2019-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag POLYTHERAPY WITH BET INHIBITOR, BCL-2 INHIBITOR AND ANTI-CD20 ANTIBODY
AU2018314765A1 (en) 2017-08-08 2020-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Obinutuzumab treatment of a DLBCL patient subgroup
CN107881160A (zh) 2017-08-11 2018-04-06 百奥泰生物科技(广州)有限公司 一种由基因组被编辑的cho宿主细胞产生的具有独特糖谱的重组抗体及其制备方法
WO2019036855A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Adagene Inc. ANTI-CD137 MOLECULES AND THEIR USE
EP3456738B1 (en) * 2017-09-19 2024-07-17 Tillotts Pharma Ag Antibody variants
EP3684413A1 (en) 2017-09-20 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
MA50613A (fr) 2017-10-03 2020-08-12 Editas Medicine Inc Molécules de liaison spécifique à l'hpv
EP3694890A4 (en) 2017-10-12 2021-11-03 Immunowake Inc. LIGHT CHAIN ANTIBODY FUSION PROTEIN WITH VEGFR
AU2018303836A1 (en) 2017-10-19 2020-05-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of CD20-positive B-cell lymphoma with obituzumab
MA50505A (fr) 2017-11-01 2020-09-09 Hoffmann La Roche Anticorps 2 + 1 bispécifiques (contorsbodies)
JP2021500902A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規ｔｎｆファミリーリガンド三量体含有抗原結合分子
BR112020008323A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-03 Juno Therapeutics Inc anticorpos e receptores de antígenos quiméricos específicos para antígeno de maturação de células b
MX2020004573A (es) 2017-11-01 2020-09-25 Hoffmann La Roche Terapia de combinacion con agonistas de ox40 dirigidos.
EP3707510B1 (en) 2017-11-06 2024-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
SG11202003930YA (en) 2017-12-01 2020-05-28 Pfizer Anti-cxcr5 antibodies and compositions and uses thereof
JP2021506817A (ja) 2017-12-14 2021-02-22 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療するための投与計画におけるｃｅａ ｃｄ３二重特異性抗体及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストの使用
MA51184A (fr) 2017-12-15 2020-10-21 Juno Therapeutics Inc Molécules de liaison à l'anti-cct5 et procédés d'utilisation associés
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
TW201929907A (zh) 2017-12-22 2019-08-01 美商建南德克公司 Pilra結合劑用於治療疾病之用途
EA202091540A1 (ru) 2017-12-22 2021-03-22 Джаунс Терапьютикс, Инк. Антитела к lilrb2
WO2019129221A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against tigit
JP7383617B2 (ja) 2017-12-28 2023-11-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－ｌ１に対する抗体及びそのバリアント
EP3724223A1 (en) 2018-01-02 2020-10-21 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
WO2019134981A1 (en) 2018-01-05 2019-07-11 Ac Immune Sa Misfolded tdp-43 binding molecules
EP3508499A1 (en) 2018-01-08 2019-07-10 iOmx Therapeutics AG Antibodies targeting, and other modulators of, an immunoglobulin gene associated with resistance against anti-tumour immune responses, and uses thereof
JP7366908B2 (ja) 2018-01-15 2023-10-23 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－１に対する単一ドメイン抗体及びその変異体
CA3088649A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
PE20212075A1 (es) 2018-01-26 2021-10-26 Genentech Inc PROTEINAS DE FUSION Fc IL-22 Y METODOS DE USO
PL3743088T3 (pl) 2018-01-26 2023-03-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Kompozycje i sposoby stosowania il-22 fc
CN116041516A (zh) 2018-02-01 2023-05-02 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗b细胞成熟抗原(bcma)单链抗体及其应用
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
CN111712261B (zh) 2018-02-08 2024-08-09 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
CA3226165A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
EP3752530A1 (en) 2018-02-14 2020-12-23 ABBA Therapeutics AG Anti-human pd-l2 antibodies
RU2020130795A (ru) 2018-02-21 2022-03-21 Дзе Юнайтед Стэйтс Оф Америка, Эс Репрезентед Бай Дзе Секретэри, Департмент Оф Хелт Энд Хьюман Сервисиз Нейтрализующие антитела к env вич-1 и их применение
MA51907A (fr) 2018-02-21 2021-05-26 Hoffmann La Roche Posologie pour un traitement avec des protéines de fusion il-22 fc
KR20200135313A (ko) 2018-02-26 2020-12-02 제넨테크, 인크. 항-tigit 및 항-pd-l1 길항제 항체에 의한 치료를 위한 투약
AU2019236372B2 (en) 2018-03-13 2024-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 BB agonists with anti-CD20 antibodies
TWI841551B (zh) 2018-03-13 2024-05-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
TW202003562A (zh) 2018-03-14 2020-01-16 中國大陸商北京軒義醫藥科技有限公司 抗密連蛋白18.2(cldn18.2)抗體
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
US11891432B2 (en) 2018-03-15 2024-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to Zika virus and methods of use
KR20200135421A (ko) 2018-03-21 2020-12-02 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 산성 pH에서 VISTA에 결합하는 항체
EP3774917A4 (en) 2018-03-30 2022-01-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. SINGLE DOMAIN ANTIBODIES AGAINST LAG-3 AND USES THEREOF
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
EP3773908A1 (en) 2018-04-05 2021-02-17 Juno Therapeutics, Inc. T cell receptors and engineered cells expressing same
TW202010757A (zh) 2018-04-11 2020-03-16 美商英伊布里克斯公司 具有經受限cd3結合的多重特異性多肽構築體以及相關方法及用途
MA52182A (fr) 2018-04-13 2021-02-17 Hoffmann La Roche Molécules de liaison à l'antigène ciblant her2 comprenant 4-1bbl
EP3560945A1 (en) 2018-04-27 2019-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for purification of polypeptides using polysorbates
US11987629B2 (en) 2018-06-01 2024-05-21 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
EP3805400A4 (en) 2018-06-04 2022-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
CN112469440A (zh) 2018-06-18 2021-03-09 优瑞科生物技术公司 靶向前列腺特异性膜抗原(psma)的构建体和其用途
EP3810194A1 (en) 2018-06-22 2021-04-28 Genmab Holding B.V. Anti-cd37 antibodies and anti-cd20 antibodies, compositions and methods of use thereof
MX2020014091A (es) 2018-06-23 2021-05-27 Genentech Inc Metodos para tratar el cancer de pulmon con un antagonista de fijacion al eje pd-1, un agente de platino y un inhibidor de la topoisomerasa ii.
CN112424228B (zh) 2018-07-04 2024-08-09 豪夫迈·罗氏有限公司 新型双特异性激动性4-1bb抗原结合分子
BR112020027095A2 (pt) 2018-07-09 2021-03-30 Five Prime Therapeutics, Inc. Anticorpos de ligação a ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CN112638948A (zh) 2018-07-11 2021-04-09 戊瑞治疗有限公司 在酸性pH下结合至VISTA的抗体
MX2021000558A (es) 2018-07-18 2021-04-13 Genentech Inc Metodos para tratar el cancer de pulmon con un antagonista de fijacion al eje pd-1, un antimetabolito y un agente de platino.
KR20210032488A (ko) 2018-07-20 2021-03-24 서피스 온콜로지, 인크. 항-cd112r 조성물 및 방법
WO2020023553A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs containing a constrained cd3 binding domain and a receptor binding region and methods of using the same
AU2019315226A1 (en) 2018-08-03 2021-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
EP3608674A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor
MX2021001431A (es) 2018-08-10 2021-05-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union al antigeno anti grupo de diferenciacion 137 (cd137) y su uso.
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
KR20210063330A (ko) 2018-09-19 2021-06-01 제넨테크, 인크. 방광암에 대한 치료 및 진단 방법
AU2019342133A1 (en) 2018-09-21 2021-04-22 Genentech, Inc. Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
WO2020069398A1 (en) 2018-09-27 2020-04-02 Akrevia Therapeutics Inc. Masked cytokine polypeptides
BR112021005822A2 (pt) 2018-10-01 2021-07-27 F. Hoffmann-La Roche Ag molécula de ligação ao antígeno biespecífica, anticorpo, célula hospedeira, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, métodos para produzir uma molécula de ligação ao antígeno biespecífico e para tratar um indivíduo com câncer, composição farmacêutica e uso da molécula de ligação
WO2020070035A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules with trivalent binding to cd40
EP3632929A1 (en) 2018-10-02 2020-04-08 Ospedale San Raffaele S.r.l. Antibodies and uses thereof
AU2019355995A1 (en) 2018-10-05 2021-04-08 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-FGFR2 antibody formulations
CA3115285A1 (en) 2018-10-11 2020-04-16 Inhibrx, Inc. Pd-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
JP2022512744A (ja) 2018-10-18 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド 肉腫様腎臓がんのための診断および治療方法
CA3118312A1 (en) * 2018-10-29 2020-05-07 Tigatx, Inc. Compositions and methods comprising iga antibody constructs
US20210395390A1 (en) 2018-10-31 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Reversal agents for neutralizing the therapeutic activity of anti-fxia antibodies
JP2022513050A (ja) 2018-11-16 2022-02-07 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター ムチン－１６に対する抗体およびそれを使用する方法
JP2022511502A (ja) 2018-12-05 2022-01-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの免疫療法のための診断方法及び診断用組成物
MX2021006573A (es) 2018-12-06 2021-07-15 Genentech Inc Tratamiento conjunto de linfoma difuso de linfocitos b grandes que comprende un inmunoconjugado anti-cd79b, un agente alquilante y un anticuerpo anti-cd20.
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
WO2020132230A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Genentech, Inc. Modified antibody fcs and methods of use
EP3883609A2 (en) 2018-12-20 2021-09-29 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
EP3898682A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Tumor-targeted agonistic cd28 antigen binding molecules
EP3898683A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Tumor-targeted superagonistic cd28 antigen binding molecules
AU2019416216A1 (en) 2018-12-26 2021-07-08 City Of Hope Activatable masked anti-CTLA4 binding proteins
JP2022515543A (ja) 2018-12-30 2022-02-18 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 抗ウサギｃｄ１９抗体および使用方法
AU2020208193A1 (en) 2019-01-14 2021-07-29 BioNTech SE Methods of treating cancer with a PD-1 axis binding antagonist and an RNA vaccine
US20220128561A1 (en) 2019-01-17 2022-04-28 Bayer Aktiengesellschaft Methods to determine whether a subject is suitable of being treated with an agonist of soluble gyanylyl cyclase (sgc)
WO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2020-07-30 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
CA3123303A1 (en) 2019-01-29 2020-08-06 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
EP3931220A1 (en) 2019-02-27 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies
JP7402247B2 (ja) 2019-03-08 2023-12-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 細胞外小胞の膜結合タンパク質を検出及び定量化するための方法
MX2021010996A (es) 2019-03-14 2021-11-04 Genentech Inc Tratamiento de cancer con anticuerpos biespecificos contra her2xcd3 en combinacion con mab anti-her2.
WO2020208049A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising lipocalin muteins
TW202043291A (zh) 2019-04-19 2020-12-01 美商建南德克公司 抗mertk抗體及使用方法
AU2020257748A1 (en) 2019-04-19 2021-11-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chimeric receptor recognizing modification site of antibody
WO2020227228A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2020226986A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
TW202108178A (zh) 2019-05-14 2021-03-01 美商建南德克公司 使用抗CD79b免疫結合物治療濾泡性淋巴瘤之方法
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
CA3137882A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Tamara SEREDENINA Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
MX2021014433A (es) * 2019-06-05 2022-03-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a sitio de escision de anticuerpo.
WO2020260329A1 (en) 2019-06-26 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Fusion of an antibody binding cea and 4-1bbl
WO2020260326A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
CA3142833A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use
AU2020311579A1 (en) 2019-07-05 2022-02-03 Iomx Therapeutics Ag Antibodies binding IgC2 of IGSF11 (VSIG3) and uses thereof
US20220267452A1 (en) 2019-07-12 2022-08-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-mutation type fgfr3 antibody and use therefor
TWI832183B (zh) 2019-08-06 2024-02-11 香港商新旭生技股份有限公司 結合至病理性tau種類之抗體及其用途
TW202118512A (zh) 2019-09-12 2021-05-16 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎之組成物及方法
US20230192860A1 (en) 2019-09-19 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies Binding to Vista at Acidic pH
CN114423454A (zh) 2019-09-20 2022-04-29 豪夫迈·罗氏有限公司 抗类胰蛋白酶抗体的给药
TW202126690A (zh) 2019-09-27 2021-07-16 美商建南德克公司 用抗ｔｉｇｉｔ和抗ｐｄ－ｌ１拮抗劑抗體給藥治療
BR112022007216A2 (pt) 2019-10-18 2022-08-23 Genentech Inc Métodos para tratamento de linfoma difuso, kit e imunoconjugado
IL292458A (en) 2019-11-06 2022-06-01 Genentech Inc Diagnostic and treatment methods for the treatment of hematological cancer
CA3154526A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 Enthera S.R.L. Tmem219 antibodies and therapeutic uses thereof
EP3822288A1 (en) 2019-11-18 2021-05-19 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts Antibodies targeting, and other modulators of, the cd276 antigen, and uses thereof
WO2021099574A1 (en) 2019-11-21 2021-05-27 Enthera S.R.L. Igfbp3 antibodies and therapeutic uses thereof
IL293430A (en) 2019-12-06 2022-07-01 Juno Therapeutics Inc Anti-idiotic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
US20230192869A1 (en) 2019-12-06 2023-06-22 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to gprc5d-targeted binding domains and related compositions and methods
IL293423A (en) 2019-12-13 2022-07-01 Genentech Inc Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
CR20220357A (es) 2019-12-27 2022-08-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti antígeno-4 asociado al linfocito t citotóxico (ctla-4) y uso del mismo
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
IL292780A (en) 2020-01-09 2022-07-01 Hoffmann La Roche A new 4-1bbl trimer containing antigen-binding molecules
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
AU2021213177A1 (en) 2020-01-29 2022-08-18 Inhibrx Biosciences, Inc. CD28 single domain antibodies and multivalent and multispecific constructs thereof
AU2021214795A1 (en) 2020-01-31 2022-08-18 The Cleveland Clinic Foundation Anti-Müllerian Hormone Receptor 2 antibodies and methods of use
WO2021155149A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Genentech, Inc. Methods of inducing neoepitope-specific t cells with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
CA3169451A1 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
EP4093762A1 (en) 2020-02-20 2022-11-30 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
EP3868396A1 (en) 2020-02-20 2021-08-25 Enthera S.R.L. Inhibitors and uses thereof
KR20220148209A (ko) 2020-02-28 2022-11-04 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항cd137 작제물 및 그 용도
CA3169910A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
WO2021183849A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
CA3169626A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Genentech, Inc. Isoform-selective anti-tgf-beta antibodies and methods of use
JP2023518815A (ja) 2020-03-23 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｉｌ６アンタゴニストによるｃｏｖｉｄ－１９肺炎を含む肺炎の治療方法
CN115867577A (zh) 2020-03-23 2023-03-28 基因泰克公司 用于预测covid-19肺炎中对il-6拮抗剂反应的生物标志物
US20230174656A1 (en) 2020-03-23 2023-06-08 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
EP4126949A1 (en) 2020-03-24 2023-02-08 Genentech, Inc. Tie2-binding agents and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
EP4127724A1 (en) 2020-04-03 2023-02-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
MX2022013198A (es) 2020-04-24 2022-11-14 Genentech Inc Metodos de uso de inmunoconjugados anti-cd79b.
KR20230004520A (ko) 2020-04-27 2023-01-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 지단백(ａ)에 대한 이소형-비의존성 항체
WO2021222167A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
AU2021267995A1 (en) 2020-05-03 2022-12-08 Levena (Suzhou) Biopharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates (ADCs) comprising an anti-Trop-2 antibody, compositions comprising such ADCs, as well as methods of making and using the same
CN113993900B (zh) 2020-05-27 2023-08-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别神经生长因子的抗体及其用途
WO2021247769A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
JP2023529206A (ja) 2020-06-12 2023-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がん免疫療法のための方法及び組成物
MX2022015877A (es) 2020-06-16 2023-01-24 Genentech Inc Metodos y composiciones para tratar cancer de mama triple negativo.
BR112022025801A2 (pt) 2020-06-18 2023-10-03 Hoffmann La Roche Métodos para tratar um paciente e para tratar um paciente com escc avançado, kit, anticorpo, uso de um anticorpo e uso de um antagonista de ligação
EP4168447A1 (en) 2020-06-19 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to cd3 and cd19
US12049515B2 (en) 2020-06-23 2024-07-30 Hoffmann-La Roche Inc. Agonistic CD28 antigen binding molecules targeting Her2
CN115916830A (zh) 2020-06-25 2023-04-04 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cd3/抗cd28双特异性抗原结合分子
WO2022008027A1 (en) 2020-07-06 2022-01-13 Iomx Therapeutics Ag Antibodies binding igv of igsf11 (vsig3) and uses thereof
JP2023532764A (ja) 2020-07-07 2023-07-31 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 治療用タンパク質製剤の安定剤としての代替界面活性剤
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
US20230322935A1 (en) 2020-07-29 2023-10-12 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
JP2023536602A (ja) 2020-08-03 2023-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
WO2022029660A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
PE20230983A1 (es) 2020-08-07 2023-06-21 Genentech Inc Proteinas de fusion del ligando para flt3 y metodos de uso
WO2022034228A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 Ac Immune Sa Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
PE20240214A1 (es) 2020-09-15 2024-02-16 Bayer Ag Nuevos anticuerpos anti-a2ap y usos de los mismos
CN116685351A (zh) 2020-09-17 2023-09-01 基因泰克公司 Empacta的结果：一项用于评估托珠单抗在患有covid-19肺炎的住院患者中的功效和安全性的随机、双盲、安慰剂对照、多中心研究
MX2023003756A (es) 2020-10-05 2023-04-24 Genentech Inc Dosis para el tratamiento con anticuerpos biespecificos anti-fcrh5/anti-cd3.
CA3192306A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Burkhard Ludewig Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
EP4232040A1 (en) 2020-10-20 2023-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhitibors
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
KR20230098317A (ko) 2020-11-03 2023-07-03 도이체스크레브스포르슝스젠트룸스티프퉁데스외펜트리헨레크츠 표적 세포가 제한되는, 공동자극, 이중특이적 및 2가 항-cd28 항체
IL302396A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies
EP4240493A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
US20220153858A1 (en) 2020-11-04 2022-05-19 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
JP2023549316A (ja) 2020-11-16 2023-11-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｆａｐを標的としたｃｄ４０アゴニストとの併用療法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
KR20230117406A (ko) 2021-01-06 2023-08-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1-lag3 이중특이성 항체와 cd20 t 세포 이중특이성항체를 이용한 조합 요법
WO2022162587A1 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
EP4284422A1 (en) 2021-01-28 2023-12-06 Vaccinvent GmbH Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
EP4291226A1 (en) 2021-02-09 2023-12-20 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Antibodies targeting the spike protein of coronaviruses
WO2022173689A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
WO2022172085A2 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
WO2022180172A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Bayer Aktiengesellschaft Inhibitors of il-11 or il-11ra for use in the treatment of abnormal uterine bleeding
US20220340662A1 (en) 2021-03-01 2022-10-27 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
US20220306743A1 (en) 2021-03-01 2022-09-29 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
CA3210069A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Tong Zhu Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
EP4301472A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-vista constructs and uses thereof
KR20230156373A (ko) 2021-03-15 2023-11-14 제넨테크, 인크. 루푸스 신염의 치료 조성물 및 치료 방법
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
US20240150466A1 (en) 2021-03-25 2024-05-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
KR20230162800A (ko) 2021-03-30 2023-11-28 바이엘 악티엔게젤샤프트 항-sema3a 항체 및 그의 용도
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
WO2022228706A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
WO2022228705A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
MX2023013264A (es) 2021-05-12 2023-11-30 Genentech Inc Metodos para usar inmunoconjugados anti-cd79b para tratar linfoma difuso de linfocitos b grandes.
CN117396510A (zh) 2021-05-14 2024-01-12 基因泰克公司 Trem2的激动剂
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
AR126009A1 (es) 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
EP4155321A1 (en) 2021-06-04 2023-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
TW202313045A (zh) 2021-06-09 2023-04-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於癌症治療之組合療法
WO2022261417A1 (en) 2021-06-11 2022-12-15 Genentech, Inc. Method for treating chronic obstructive pulmonary disease with an st2 antagonist
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
WO2022263638A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
AR126236A1 (es) 2021-06-25 2023-10-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Uso del anticuerpo anti-ctla-4
BR112023022992A2 (pt) 2021-06-25 2024-01-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-ctla-4
TW202317633A (zh) 2021-07-08 2023-05-01 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司 特異性識別ｔｎｆｒ２的抗體及其用途
WO2023284714A1 (zh) 2021-07-14 2023-01-19 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别cd40的抗体及其应用
EP4373576A1 (en) 2021-07-22 2024-05-29 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
EP4380978A1 (en) 2021-08-07 2024-06-12 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
EP4388014A1 (en) 2021-08-19 2024-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
WO2023028591A1 (en) 2021-08-27 2023-03-02 Genentech, Inc. Methods of treating tau pathologies
WO2023034750A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
AU2022345251A1 (en) 2021-09-17 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
AR127269A1 (es) 2021-10-08 2024-01-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulación de anticuerpo anti-hla-dq2.5
AU2022379952A1 (en) 2021-11-05 2024-05-16 American Diagnostics & Therapy, Llc (Adxrx) Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
KR20240102971A (ko) 2021-11-16 2024-07-03 제넨테크, 인크. 모수네투주맙을 이용하여 전신 홍반성 루푸스(sle)를 치료하기 위한 방법과 조성물
CA3235206A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Davide BASCO Novel molecules for therapy and diagnosis
WO2023103788A1 (zh) 2021-12-06 2023-06-15 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合肺炎克雷伯菌o2抗原和o1抗原的双特异性抗体以及组合物
AU2022411573A1 (en) 2021-12-17 2024-06-27 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-ox40 antibodies and methods of use
AU2022408865A1 (en) 2021-12-17 2024-07-04 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
AR128031A1 (es) 2021-12-20 2024-03-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecíficos que los comprenden
US20230227545A1 (en) 2022-01-07 2023-07-20 Johnson & Johnson Enterprise Innovation Inc. Materials and methods of il-1beta binding proteins
WO2023154824A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
AR128540A1 (es) 2022-02-16 2024-05-22 Ac Immune Sa Moléculas de unión anti-tdp-43 humanizadas y usos de las mismas
WO2023159182A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
AU2023238766A1 (en) 2022-03-23 2024-07-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023192827A1 (en) 2022-03-26 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
WO2023192881A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023194565A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2023201299A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
JP2024517042A (ja) 2022-04-13 2024-04-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の薬学的組成物及び使用方法
WO2023203177A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11807689B1 (en) * 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11965032B1 (en) 2022-06-01 2024-04-23 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020407A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
TW202413433A (zh) 2022-07-19 2024-04-01 美商建南德克公司 用抗ｆｃｒｈ５／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
TW202417504A (zh) 2022-07-22 2024-05-01 美商建南德克公司 抗ｓｔｅａｐ１抗原結合分子及其用途
WO2024020579A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to human pad4 and uses thereof
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024028732A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
WO2024028731A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024062074A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Sanofi Biotechnology Humanized anti-il-1r3 antibody and methods of use
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2024068996A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
WO2024097741A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Gilead Sciences, Inc. Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations
WO2024102734A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100200A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Cis Pharma Ag Anti-l1-cam antibodies and their uses for diagnostic and therapeutic applications
US20240226313A1 (en) 2022-11-17 2024-07-11 Sanofi Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2024137381A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection
WO2024133940A2 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Iomx Therapeutics Ag Cross-specific antigen binding proteins (abp) targeting leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily b1 (lilrb1) and lilrb2, combinations and uses thereof
WO2024148243A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024148241A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024148240A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. ANTI-IL-11Rα ANTIBODIES FOR TREATING THYROID EYE DISEASE

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Family Cites Families (173)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7097A (en) 1850-02-19 Elevating- and lowering carriage-tops
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
ATE117434T1 (de) 1988-03-30 1995-02-15 Toray Industries Gefriergetrocknete zusammensetzung, die ein mit meerrettichperoxydase markiertes fab'-fragment eines gegen menschliches beta-interferon gerichteten antikörpers und trehalose enthält; eia kit, der diese zusammensetzung enthält.
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
CA2095141A1 (en) 1990-11-05 1992-05-06 Ingegerd Hellstrom Synergistic therapy with combinations of anti-tumor antibodies and biologically active agents
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
RO118524B1 (ro) 1992-11-13 2003-06-30 Idec Pharmaceuticals Corp San Metoda pentru tratarea unei tulburari legata de celulele b
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US20030180290A1 (en) 1995-06-07 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-CD80 antibody having ADCC activity for ADCC mediated killing of B cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
EP2275119B1 (en) 1995-07-27 2013-09-25 Genentech, Inc. Stable isotonic lyophilized protein formulation
US6001358A (en) 1995-11-07 1999-12-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof
WO1998004281A1 (en) 1996-07-26 1998-02-05 Smithkline Beecham Corpration Improved method of treating immune cell mediated systemic diseases
UA76934C2 (en) 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
SI1864999T1 (sl) 1996-11-27 2009-08-31 Genentech Inc Afinitetno čiščenje polipeptida na proteinskem A matriksu
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
AU740284B2 (en) 1997-06-13 2001-11-01 Genentech Inc. Stabilized antibody formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6991790B1 (en) 1997-06-13 2006-01-31 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20040191256A1 (en) 1997-06-24 2004-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
PT994903E (pt) 1997-06-24 2005-10-31 Genentech Inc Metodos e composicoes para glicoproteinas galactosiladas
CA2307166A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
HUP0101160A2 (hu) 1998-04-03 2001-08-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Humán szöveti faktor (TF) elleni humanizált antitest és eljárás előállítására
JP4334141B2 (ja) 1998-04-20 2009-09-30 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 抗体依存性細胞傷害性を改善するための抗体のグリコシル化操作
DK1075488T4 (da) 1998-05-06 2013-10-21 Genentech Inc Proteinoprensning ved ionbytningskromatografi
CN100409898C (zh) 1998-08-11 2008-08-13 拜奥根Idec公司 包括施用抗-cd20抗体的b-细胞淋巴瘤联合疗法
AU5565299A (en) 1998-08-17 2000-03-06 California Institute Of Technology Devices and methods for analysis of non-ionic solutes
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
JP2002529429A (ja) 1998-11-09 2002-09-10 アイデック・ファーマシューティカルズ・コーポレイション Ｂｍｔまたはｐｂｓｃ移植を受ける患者のキメラ化抗ｃｄ２０抗体による治療。
PT2055313E (pt) 1998-11-09 2015-08-25 Biogen Idec Inc Tratamento de malignidades hematológicas associadas a células tumorais em circulação utilizando anticorpo quimérico anti-cd20
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
BR0008758A (pt) * 1999-01-15 2001-12-04 Genentech Inc Variantes de polipeptìdeos parentais com funçãoefetora alterada, polipeptìdeos, composição ácidonucleico isolado, vetor, célula hospedeira,método para produzir uma variante depolipeptìdeo, método para o tratamento de umadesordem em mamìferos e método para produziruma região fc variante
EP2275541B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
EP1642596A3 (en) 1999-05-07 2006-04-12 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to B cell surface markers
EP1194167B1 (en) 1999-06-09 2009-08-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells
HUP0202238A3 (en) 1999-07-12 2004-05-28 Idec Pharmaceuticals Inc San D Blocking immune response to a foreign antigen using an antagonist which binds to cd20
WO2001010462A1 (en) 1999-08-11 2001-02-15 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of patients having non-hodgkins lymphoma with bone marrow involvement with anti-cd20 antibodies
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
CN1169952C (zh) 1999-10-10 2004-10-06 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院 抗cd20单克隆抗体的重链和轻链可变区基因及其应用
US20020028178A1 (en) 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
CN1407901A (zh) 1999-11-08 2003-04-02 Idec药物公司 使用抗cd40l抗体并联合抗cd20抗体和/或化疗剂和放疗治疗b细胞恶性瘤
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
WO2002004021A1 (en) 2000-07-12 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of b cell malignancies using combination of b cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
HUP0300919A2 (hu) 2000-03-24 2003-07-28 Micromet Ag Többfunkciós polipeptidek NKG2D receptor komplex epitóp kötőhellyel
EP1283722A1 (en) 2000-03-31 2003-02-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Combined use of anti-cytokine antibodies or antagonists and anti-cd20 for the treatment of b cell lymphoma
US20020009444A1 (en) 2000-04-25 2002-01-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
JP2004512262A (ja) 2000-06-20 2004-04-22 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション 非放射性抗ｃｄ２０抗体／放射標識抗ｃｄ２２抗体の組合せ
AU8822601A (en) 2000-07-31 2002-02-13 Biolex Inc Expression of biologically active polypeptides in duckweed
DE10043452A1 (de) 2000-09-04 2002-03-14 Basf Ag Formkörper mit einer tonmineralischen Beschichtung
CN1592645A (zh) 2000-09-18 2005-03-09 拜奥根Idec公司 使用b细胞耗尽/免疫调节抗体组合治疗自身免疫病的联合疗法
WO2002034790A1 (en) 2000-10-20 2002-05-02 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20020159996A1 (en) 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030211107A1 (en) 2002-01-31 2003-11-13 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
WO2002060485A2 (en) 2001-01-31 2002-08-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Use of immunoregulatory antibodies in the treatment of neoplastic disorders
US20030077826A1 (en) 2001-02-02 2003-04-24 Lena Edelman Chimeric molecules containing a module able to target specific cells and a module regulating the apoptogenic function of the permeability transition pore complex (PTPC)
AU2002251913A1 (en) 2001-02-02 2002-08-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Hybrid antibodies and uses thereof
CA2442801A1 (en) * 2001-04-02 2002-10-10 Idec Pharmaceutical Corporation Recombinant antibodies coexpressed with gntiii
JP4679035B2 (ja) 2001-04-02 2011-04-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 併用療法
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
MXPA05000511A (es) 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
US7192586B2 (en) 2001-09-20 2007-03-20 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compositions for treating or preventing skin disorders using binding agents specific for prostate specific membrane antigen
US20030157108A1 (en) 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
CA2471551C (en) 2001-12-27 2014-09-30 Glycofi, Inc. Methods to engineer mammalian-type carbohydrate structures
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
EP2295468B1 (en) 2002-02-14 2015-07-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US7897842B2 (en) 2002-03-19 2011-03-01 Plant Research International B.V. GnTIII expression in plants
PT1490405E (pt) 2002-03-21 2007-11-07 Lilly Co Eli Anticorpos humanos anti-ligando de hfas antagonistas e fragmentos dos mesmos
KR100708398B1 (ko) 2002-03-22 2007-04-18 (주) 에이프로젠 인간화 항체 및 이의 제조방법
US20030190689A1 (en) 2002-04-05 2003-10-09 Cell Signaling Technology,Inc. Molecular profiling of disease and therapeutic response using phospho-specific antibodies
CA2481925A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
EP1500400A4 (en) * 2002-04-09 2006-10-11 Kyowa Hakko Kogyo Kk MEDICAMENT WITH ANTIBODY COMPOSITION
WO2004000102A2 (en) 2002-06-19 2003-12-31 Abgenix, Inc. Method for predicting response to epidermal growth factor receptor-directed therapy
EP1534335B9 (en) 2002-08-14 2016-01-13 Macrogenics, Inc. Fcgammariib-specific antibodies and methods of use thereof
AU2003270152A1 (en) 2002-09-12 2004-04-30 Greenovation Biotech Gmbh Protein production method
KR101348472B1 (ko) 2002-10-17 2014-01-07 젠맵 에이/에스 Ｃｄ20에 대한 인간 모노클로날 항체
JP2006517188A (ja) 2002-12-02 2006-07-20 アブジェニックス・インコーポレーテッド ホスホリパーゼａ２に対する抗体及びその使用
HU227217B1 (en) 2002-12-16 2010-11-29 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
EP1573314B1 (en) 2002-12-16 2008-07-23 Genentech, Inc. Transgenic mice expressing human cd20
CA2549932C (en) 2002-12-20 2013-08-20 Greenovation Biotech Gmbh Production of heterologous glycosylated proteins in bryophyte cells
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
CA2512729C (en) 2003-01-09 2014-09-16 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same
ES2574993T3 (es) 2003-01-22 2016-06-23 Roche Glycart Ag Construcciones de fusión y uso de las mismas para producir anticuerpos con mayor afinidad de unión al receptor de Fc y función efectora
WO2004065417A2 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
MXPA05009837A (es) 2003-03-14 2005-12-05 Pharmacia Corp Anticuerpos para el receptor del factor de crecimiento tipo insulina-i, para el tratamiento de canceres.
ES2322267T3 (es) 2003-04-09 2009-06-18 Genentech, Inc. Terapia de una enfermedad autoinmunologica en un paciente que presenta una respuesta inadecuada a un inhibidor de tnf-alfa.
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
KR20060027801A (ko) 2003-06-05 2006-03-28 제넨테크, 인크. Ｂ 세포 장애에 대한 조합 요법
US20050163775A1 (en) 2003-06-05 2005-07-28 Genentech, Inc. Combination therapy for B cell disorders
MXPA06001065A (es) 2003-07-29 2006-04-11 Genentech Inc Ensayo de anticuerpo neutralizante y sus usos.
AU2004280333A1 (en) 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Llc Humanization of antibodies
AU2004270165A1 (en) 2003-08-29 2005-03-17 Genentech, Inc. Anti-CD20 therapy of ocular disorders
MXPA06004836A (es) 2003-11-05 2006-07-06 Glycart Biotechnology Ag Anticuerpos cd20 con funcion del efector y afinidad de enlace al receptor fc mejoradas.
WO2005060999A2 (en) 2003-12-19 2005-07-07 Genentech, Inc. Detection of cd20 in therapy of autoimmune diseases
KR20060107555A (ko) 2003-12-19 2006-10-13 제넨테크, 인크. 이식 거부에서 ｃｄ20의 검출
EP1700121A4 (en) 2003-12-23 2008-09-03 Rinat Neuroscience Corp AGONIST ANTI-TRKC ANTIBODIES AND METHODS OF USE
AU2005214988A1 (en) 2004-02-17 2005-09-01 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
RU2006140374A (ru) 2004-04-16 2008-05-27 Дженентек, Инк. (Us) Лечение нарушений
US20060099662A1 (en) 2004-04-16 2006-05-11 Genentech, Inc. Assay for antibodies
WO2005113003A2 (en) 2004-04-16 2005-12-01 Genentech, Inc. Method for augmenting b cell depletion
ZA200608982B (en) 2004-05-05 2008-06-25 Genentech Inc Preventing autoimmune disease by using an anti-CD20 antibody
CA2562800A1 (en) 2004-05-15 2005-12-01 Genentech, Inc. Cross-screening system and methods for detecting a molecule having binding affinity for a target molecule
BRPI0510885A (pt) 2004-06-04 2007-12-26 Genentech Inc método de tratamento de lúpus e artigo industrializado
KR20150092374A (ko) 2004-06-04 2015-08-12 제넨테크, 인크. 다발성 경화증의 치료 방법
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
NZ552433A (en) 2004-07-22 2009-10-30 Genentech Inc Method of treating sjogrenÆs syndrome
US20060067930A1 (en) 2004-08-19 2006-03-30 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
JP2008512479A (ja) 2004-09-08 2008-04-24 ジェネンテック・インコーポレーテッド デスレセプターリガンド及びｃｄ２０抗体の使用方法
MX2007002855A (es) 2004-09-08 2007-04-27 Genentech Inc Metodos para usar ligandos de receptor de muerte y anticuerpos cd20.
US7572456B2 (en) 2004-09-13 2009-08-11 Macrogenics, Inc. Humanized antibodies against West Nile Virus and therapeutic and prophylactic uses thereof
RU2411956C2 (ru) 2004-10-05 2011-02-20 Дженентек, Инк. Способ лечения васкулита
AR052051A1 (es) 2004-12-15 2007-02-28 Neuralab Ltd Anticuerpos ab humanizados usados en mejorar la cognicion
MX2007007165A (es) 2004-12-17 2007-08-14 Genentech Inc Terapia de antiangiogenesis de enfermedad autoinmune en pacientes en quienes ha fallado la terapia anterior.
CA2592390A1 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Genentech, Inc. Methods for producing soluble multi-membrane-spanning proteins
GT200600020A (es) 2005-01-13 2006-11-08 Procedimiento de tratamiento
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
BRPI0612972A2 (pt) 2005-04-22 2010-12-14 Genentech Inc mÉtodo para tratar doenÇa de alzheimer, mÉtodo para tratar demÊncia, artigo de fabricaÇço e usos de um anticorpo cd20
CA2609190A1 (en) 2005-05-18 2006-11-23 Biogen Idec Inc. Methods for treating fibrotic conditions
BRPI0613259A2 (pt) 2005-05-20 2010-12-28 Genentech Inc método de tratamento de amostra biológica e kit de diagnóstico
MX2007015107A (es) 2005-06-03 2008-02-15 Genentech Inc Metodo para producir anticuerpos con funcion mejorada.
TWI615407B (zh) 2005-08-26 2018-02-21 羅齊克雷雅公司 具有經改變細胞傳訊活性之改質抗原結合分子
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
JP6088723B2 (ja) 2005-11-23 2017-03-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｂ細胞アッセイに関する組成物及び方法。
US20070136826A1 (en) 2005-12-02 2007-06-14 Biogen Idec Inc. Anti-mouse CD20 antibodies and uses thereof
US7708944B1 (en) 2006-06-13 2010-05-04 Research Foundation Of State University Of New York Ultra-sensitive, portable capillary sensor
CA2682406A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
US20090004189A1 (en) 2007-06-18 2009-01-01 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
WO2009009523A2 (en) 2007-07-09 2009-01-15 Genentech, Inc. Prevention of disulfide bond reduction during recombinant production of polypeptides
KR100898362B1 (ko) 2007-07-10 2009-05-18 주식회사 그리폰 다목적 신발
AU2008295140A1 (en) 2007-09-05 2009-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type I and type II anti-CD20 antibodies
US20090214561A1 (en) 2007-09-24 2009-08-27 David Robert Close Treatment method
GB0718684D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
AU2008318865B2 (en) 2007-10-30 2012-06-28 Genentech, Inc. Antibody purification by cation exchange chromatography
KR20100102172A (ko) 2007-12-21 2010-09-20 제넨테크, 인크. 리툭시마브-난치성 류마티스성 관절염 환자의 요법
US20090162351A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase
AU2008343347A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Crystallization of anti-CD20 antibodies
WO2009080541A1 (en) 2007-12-21 2009-07-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
RS55258B1 (sr) 2008-03-25 2017-02-28 Roche Glycart Ag Korišćenje anti-cd20 antitela tipa ii sa povećanom ćelijskom citotoksičnošću zavisnom od antitela (adcc) u kombinaciji sa ciklofosfamidom, vinkristinom i doksorubicinom za lečenje non-hodgkinovih limfoma
US20090269339A1 (en) 2008-04-29 2009-10-29 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
US8021850B2 (en) 2008-07-14 2011-09-20 Ribo Guo Universal tandem solid-phases based immunoassay
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
CN102281903B (zh) 2008-11-17 2013-11-13 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 降低大分子在生理条件下聚集的方法和配方
WO2010057109A1 (en) 2008-11-17 2010-05-20 Genentech, Inc. Method and formulation for reducing aggregation of a macromolecule under physiological conditions
US20100247484A1 (en) 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
BR112012003066A2 (pt) 2009-08-14 2016-11-16 Roche Glycart Ag uso de um anticorpo anti-cd20 defucosilado e composição compreendendo um anticorpo anti-cd20 defucosilado
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
KR20120104517A (ko) 2009-09-03 2012-09-21 제넨테크, 인크. 류마티스 관절염의 치료, 진단 및 모니터링 방법
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
WO2011131749A1 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Glaxo Group Limited New 14 and 15 membered macrolides for the treatment of neutrophil dominated inflammatory diseases
WO2012018771A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Genentech, Inc. Chronic lymphocytic leukemia (cll) biomarkers
AR082693A1 (es) 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
BR112013021725A2 (pt) 2011-02-28 2016-11-01 Genentech Inc marcadores biológicos e métodos para prever resposta aos antagonistas de células b
US8592156B2 (en) 2011-08-08 2013-11-26 Roche Molecular Systems, Inc. Predicting response to anti-CD20 therapy in DLBCL patients
EP2892470A4 (en) 2012-09-06 2016-07-06 Freedom Innovations Llc METHOD AND SYSTEM FOR A PROSTHESIS DEVICE WITH SEVERAL FUNCTION LEVELS ACTIVATED THROUGH SEVERAL CONTROL SYSTEMS
RU2648476C2 (ru) 2012-09-07 2018-03-26 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия с использованием антитела против cd20 типа ii и селективного ингибитора bcl-2

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
POLYAK MARIA J. & DEANS JULIE P., "Alanine-170 and proline-172 are critical determinants for extracellular CD20 epitopes; heterogeneity in the fine specificity of CD20 monoclonal antibodies is defined by additional requirements imposed by both amino acid sequence and quaternary structure". Blood, 2002, vol. 99, no. 9, side 3256-3262. , Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2004287643B2 (en) 2011-11-17
CN102373215A (zh) 2012-03-14
HK1100005A1 (en) 2007-08-31
EP2077282A2 (en) 2009-07-08
US20210002382A1 (en) 2021-01-07
HUE038955T2 (hu) 2018-12-28
ES2341009T3 (es) 2010-06-14
BRPI0416262B1 (pt) 2022-04-12
PL2348051T3 (pl) 2019-05-31
JP2018027088A (ja) 2018-02-22
JP6235521B2 (ja) 2017-11-22
IL235172A0 (en) 2014-11-30
HRP20170398T1 (hr) 2017-05-19
CA2544865C (en) 2019-07-09
EA201100128A1 (ru) 2011-06-30
PT2348051T (pt) 2019-02-04
EP2348051A2 (en) 2011-07-27
CR11848A (es) 2011-04-04
BR122020013239B1 (pt) 2022-05-10
HRP20151418T1 (hr) 2016-01-29
CY1121206T1 (el) 2020-05-29
EP1692182B1 (en) 2010-04-07
CY2015001I2 (el) 2016-06-22
DK2077282T3 (en) 2017-01-30
AU2004287643C1 (en) 2012-05-31
JP4653109B2 (ja) 2011-03-16
NZ588860A (en) 2012-03-30
PL1692182T3 (pl) 2010-09-30
CN102373215B (zh) 2014-07-30
NO347800B1 (no) 2024-03-25
EP2077282A3 (en) 2009-08-05
ES2550311T3 (es) 2015-11-06
NO346533B1 (no) 2022-09-26
HUS1600013I1 (hu) 2016-04-28
CY1120252T1 (el) 2019-07-10
KR101220691B1 (ko) 2013-01-14
DK2348051T3 (en) 2019-03-18
PT2380910E (pt) 2015-11-26
EA201300481A1 (ru) 2014-01-30
US8883980B2 (en) 2014-11-11
EA036531B1 (ru) 2020-11-19
FR15C0076I1 (no) 2016-01-01
NZ547589A (en) 2009-05-31
PT2077282T (pt) 2017-02-14
LU93001I2 (fr) 2016-05-17
PL2380911T3 (pl) 2018-10-31
IL175367A0 (en) 2006-09-05
MA31040B1 (fr) 2010-01-04
CY2016004I1 (el) 2016-08-31
LTC2380910I2 (lt) 2018-01-25
LT2380911T (lt) 2018-07-10
FR15C0076I2 (fr) 2016-03-11
KR20110129990A (ko) 2011-12-02
ME01775B (me) 2011-02-28
JP2008500017A (ja) 2008-01-10
HK1167681A1 (en) 2012-12-07
SG160348A1 (en) 2010-04-29
US20160075794A1 (en) 2016-03-17
CN102373214A (zh) 2012-03-14
SG10201504094SA (en) 2015-06-29
RS55723B1 (sr) 2017-07-31
CA2544865A1 (en) 2005-05-19
HUE042914T2 (hu) 2019-07-29
KR20060130579A (ko) 2006-12-19
ZA200604547B (en) 2007-07-25
SI2077282T1 (sl) 2017-03-31
PL2077282T3 (pl) 2017-08-31
LT2077282T (lt) 2017-03-10
EP2380911A1 (en) 2011-10-26
EP2348051A3 (en) 2012-12-19
RS51334B (en) 2011-02-28
DK1692182T3 (da) 2010-05-31
EP2348051B1 (en) 2018-12-19
NO341893B1 (no) 2018-02-12
US20160076009A1 (en) 2016-03-17
US20160075793A1 (en) 2016-03-17
EA200600905A1 (ru) 2006-12-29
AU2004287643A1 (en) 2005-05-19
PL2380910T3 (pl) 2015-12-31
NO346167B1 (no) 2022-04-04
US20090010921A1 (en) 2009-01-08
IL175367A (en) 2014-11-30
ME03330B (me) 2019-10-20
PT1692182E (pt) 2010-05-13
MXPA06004836A (es) 2006-07-06
NL300801I2 (nl) 2017-09-19
SG10202008722QA (en) 2020-10-29
IL232954A (en) 2015-09-24
EA202091901A1 (ru) 2020-11-24
SI2380910T1 (sl) 2015-11-30
EA015009B1 (ru) 2011-04-29
NO347530B1 (no) 2023-12-11
IL232954A0 (en) 2014-07-31
US20050123546A1 (en) 2005-06-09
ES2672640T3 (es) 2018-06-15
EP2380911B1 (en) 2018-05-09
CN102373214B (zh) 2014-07-09
EP2077282B1 (en) 2016-12-28
TR201903329T4 (tr) 2019-04-22
KR20120104419A (ko) 2012-09-20
BRPI0416262A (pt) 2007-01-09
IL207347A0 (en) 2010-12-30
CY1118719T1 (el) 2017-07-12
HRP20190333T1 (hr) 2019-05-03
SI2380911T1 (en) 2018-07-31
RS58420B1 (sr) 2019-04-30
EP2380910A1 (en) 2011-10-26
HRP20170398T2 (hr) 2019-06-28
JP2010081940A (ja) 2010-04-15
ES2615507T3 (es) 2017-06-07
IL207347A (en) 2015-08-31
HK1167682A1 (en) 2012-12-07
EP2380910B1 (en) 2015-09-30
JP2012254083A (ja) 2012-12-27
LU92632I2 (fr) 2015-11-02
WO2005044859A3 (en) 2005-08-04
ES2708095T3 (es) 2019-04-08
ATE463513T1 (de) 2010-04-15
RS57466B1 (sr) 2018-09-28
TNSN06126A1 (en) 2007-11-15
CY2015001I1 (el) 2016-06-22
KR101364902B1 (ko) 2014-02-21
LT2348051T (lt) 2019-02-25
HK1213574A1 (zh) 2016-07-08
CN104829719A (zh) 2015-08-12
ECSP21023271A (es) 2021-05-31
PT2380911T (pt) 2018-07-04
CY1110301T1 (el) 2015-01-14
SI1692182T1 (sl) 2010-06-30
JP6125770B2 (ja) 2017-05-10
NO20062289L (no) 2006-08-03
CY2016004I2 (el) 2016-08-31
HUE026669T2 (en) 2016-06-28
DE602004026470D1 (de) 2010-05-20
EP1692182A2 (en) 2006-08-23
DK2380910T3 (en) 2015-10-19
US20230212303A1 (en) 2023-07-06
HUE031632T2 (en) 2017-07-28
NO20171989A1 (no) 2006-08-03
JP2015134814A (ja) 2015-07-27
BE2016C008I2 (no) 2021-08-16
KR101364858B1 (ko) 2014-02-19
NO20210499A1 (no) 2006-08-03
ME02332B (me) 2016-06-30
RS54450B1 (en) 2016-06-30
SI2348051T1 (sl) 2019-03-29
US9296820B2 (en) 2016-03-29
HRP20181204T1 (hr) 2018-09-21
TR201809892T4 (tr) 2018-07-23
UA91823C2 (ru) 2010-09-10
DK2380911T3 (en) 2018-08-06
MX337587B (es) 2016-03-11
CN1902231B (zh) 2015-05-20
CN1902231A (zh) 2007-01-24
HRP20100303T1 (hr) 2010-07-31
NO20220263A1 (no) 2006-08-03
WO2005044859A2 (en) 2005-05-19
EA025962B1 (ru) 2017-02-28
ECSP066603A (es) 2006-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230212303A1 (en) Antigen binding molecules with increased fc receptor binding affinity and effector function
EP2395024B1 (en) Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
EA047444B1 (ru) АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ