BR112020027095A2

BR112020027095A2 - Anticorpos de ligação a ilt4

Info

Publication number: BR112020027095A2
Application number: BR112020027095-4A
Authority: BR
Inventors: Xiao Min Schebye; Mark J. Selby; Alan J. Korman; Nils Lonberg; Guodong Chen; Richard Y. HUANG; Ekaterina G. Deyanova; Diana Yuhui Chen; Andrew Rankin; Xiaodi Deng; Joseph Toth; Linda Liang; Michelle Minhua HAN; Christine BEE; Hong-An TRUONG
Original assignee: Five Prime Therapeutics, Inc.; Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 2018-07-09
Filing date: 2019-07-08
Publication date: 2021-03-30
Also published as: JP2024045119A; US11401328B2; CN113056483A; TWI819024B; WO2020014132A3; TW202012438A; CO2021000044A2; CL2021000011A1; US20200079848A1; KR20210030405A; JP2022513420A; SG11202100096XA; AU2019302454A1; IL279894A; PE20211604A1; EP3820904A2; US20230174647A1; CA3104530A1; JP7411627B2; WO2020014132A2

Abstract

anticorpos de ligação a ilt4. a presente invenção refere-se a anticorpos que se ligam especificamente a transcrito do tipo imunoglobulina 4 (ilt4), que é também conhecido como lilrb2, lir2, mir10 e cd85d, e ácidos nucleicos, células hospedeiras, composições e usos correspondentes. em algumas modalidades, os anticorpos se ligam especificamente a itl4 humano, mas não se ligam significantemente a ilt2, ilt3 ou ilt5 ou a outros membros das famílias lilra ou lilrb.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “ANTICORPOS DE LIGAÇÃO A ILT4”.

CAMPO

[001] A presente invenção refere-se a anticorpos que se ligam especificamente a e inibem ILT4 e ao seu uso em tratamento de câncer.

ANTECEDENTES

[002] ILT4 (transcrito do tipo imunoglobulina 4; também conhecido como LILRB2, LIR2, MIR10 e CD85d) é expresso em células mieloides, tais como monócitos, macrófagos e células dendríticas. ILT4 é parte de uma família de receptores estruturalmente relacionados que também inclui as proteínas LILRA1, LILRA2, LILRA3, LILRA4, LILRA5, LILRA6, ILT2, ILT3, ILT5 e LIR8.

[003] Os domínios extracelulares de proteínas nesta família contêm várias repetições do tipo imunoglobulina, enquanto suas caudas citoplásmicas contêm vários motivos inibidores à base de tirosina (ITIMs), que recrutam tirosina fosfatases.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[004] O presente pedido reivindica prioridade para os pedidos de patente provisórios US que contêm pelo menos um desenho da lista abaixo colorido. Uma vez o presente pedido de patente publicado e seus pedidos de prioridade provisórios sendo disponibilizados ao público, é suposto que os desenhos coloridos serão fornecidos pelo US Patent and Trademark Office quando da solicitação e pagamento da taxa necessária.

[005] A Figura 1 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da região variável de cadeia pesada (“VH”) de anticorpo anti-hILT4 9G4, indicando a localização das Cmdrs de VH.

[006] A Figura 2 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da região variável de cadeia leve (“VL”) de anticorpo anti- hILT4 9G4, indicando a localização das CDRs de VL.

[007] A Figura 3 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VH de anticorpo anti-hILT4 9C8, indicando a localização das CDRs de VH.

[008] A Figura 4 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VL de anticorpo anti-hILT4 9C8, indicando a localização das CDRs de VL.

[009] A Figura 5 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VH de anticorpo anti-hILT4 2H2, indicando a localização das CDRs de VH.

[010] A Figura 6 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VL de anticorpo anti-hILT4 2H2, indicando a localização das CDRs de VL.

[011] A Figura 7 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VH de anticorpo anti-hILT4 2E5, indicando a localização das CDRs de VH.

[012] A Figura 8 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VL de anticorpo anti-hILT4 2E5, indicando a localização das CDRs de VL.

[013] A Figura 9 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VH de anticorpo anti-hILT4 24E5, indicando a localização das CDRs de VH.

[014] A Figura 10 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VL de anticorpo anti-hILT4 24E5, indicando a localização das CDRs de VL.

[015] A Figura 11 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VH de anticorpo anti-hILT4 21D9, indicando a localização das CDRs de VH.

[016] A Figura 12 mostra as sequências de nucleotídeo e aminoácido da VL de anticorpo anti-hILT4 21D9, indicando a localização das CDRs de VL.

[017] As Figuras 13A e 13C mostram alinhamentos das sequências de aminoácido dos domínios variáveis das cadeias peada (VH) (Figura 13A) e leve (VH) (Figura 13C) de anticorpo para ILT4 21D9 com sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa hIGHV3- 23*01 e hIGKV3-20*01, respectivamente. As setas apontam para mutações na linhagem germinativa. Sequências de CDR1 VH de AbM e CDR2 VH, CDR3 VH e CDR1-3 VL de Kabat são mostradas em texto claro. A Figura 13B mostra as sequências de aminoácido de VH dos quatro mutantes de reversão de linhagem germinativa 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d e 21D9.e, com uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3 (isto é, 21D9.b-.e hIgG1.3). Resíduos de aminoácido representados em caso superior na Figura 13B são substituições de reversão de linhagem germinativa.

[018] As Figuras 14A e 14B mostram alinhamentos das sequências de aminoácido dos domínios variáveis das cadeias pesada e leve de anticorpo para ILT4 21A5 com sequências de imunoglobulina de linhagem germinativa hIGHV1-46*01 (Figura 14A) e hIGKV3-20*01 (Figura 14B), respectivamente. As sequências de CDR1 VH AbM e CDR2VH, CDR3VH e CDR1-3VL Kabat são mostradas em texto claro. As setas apontam para mutações de reversão de linhagem germinativa.

[019] A Figura 15 mostra alinhamentos das sequências de aminoácido de domínios variáveis de cadeias pesada e leve de anticorpo para ILT4 10F10 com sequências de imunoglobulina de linhagem germinativa hIGHV3-30*01 (3 linhas superiores) e hIGKV1- 13*02 (3 linhas inferiores), respectivamente. As sequências de CDR1 VH AbM e CDR2 VH, CDR3VH e CDR1-3VL Kabat são mostradas em texto claro. As setas apontam para mutações de reversão de linhagem germinativa.

[020] A Figura 16 mostra sensorgramas de ligação dos anticorpos anti-hIL4 indicados a hILT4. Um esquema do método usado é mostrado acima dos painéis de sensorgramas.

[021] A Figura 17 mostra ligação de anticorpos anti-hILT4 2H2, do tipo selvagem 10F10 (WT, isto é, anticorpo parental), 21A5.a, 21A5 WT, 21D9 WT, 21D9e e controle de isotipo hIgG1.3 a células CHO transfectadas com hILT4, como uma função de concentração de anticorpo, e conforme determinado através de citometria de fluxo. Valores de EC50 são fornecidos abaixo em um gráfico dos dados de ligação.

[022] A Figura 18A mostra ligação dos anticorpos anti-hILT4 especificados e controles de isotipo a células CHO transfectadas com hILT4, como uma função de concentração de anticorpo, e conforme determinado através de citometria de fluxo. Valores de EC50 são providos à direita no gráfico de dados de ligação. A Figura 18B mostra ligação de anticorpos anti-hILT4 a monócitos humanos isolados do sangue periférico de um doador saudável normal. As espécies de anticorpo são listadas próximo do gráfico e os valores de EC50 são fornecidos nas tabelas logo abaixo do gráfico.

[023] A Figura 19A mostra diagramas de citometria de fluxo de ligação de anticorpos anti-hILT4 21D9, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10 e 2H2 (da esquerda para a direita) a LILRA1 humana, LILRA2 humana, LILRA3 humana, LILRA4 humana, LILRA5 humana, LILRA6 humana, ILT2humana, ILT3humana, ILT4humana, ILT5 humana e LIR8 humana (de cima para baixo). A Figura 19B mostra diagramas de citometria de fluxo de ligação de anticorpos anti-hILT4 21A5 e mutante de reversão de linhagem germinativa 21A5 a LIRA1, LIRA3 e ILT4 humanos.

[024] As Figuras 20A e B mostram a porcentagem de ligação máxima dos anticorpos especificados 21D9 (“21D9 IgG1.1”) e 21D9.e (Figura 20A) e 21A5 (“21A5WT”) e 21A5.a (Figura 20B) aos membros da família LILRA/LILRB humanas especificadas, LILRA5, ILT4 na Figura 20A e LILRA1, LILRA3 e ILT4 na Figura 20B, como uma função de concentração de anticorpo, indicando que os anticorpos anti-ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5 e 21A5.a mostram reatividade cruzada fraca com outros membros da família LILRA.

[025] As Figuras 21A-D mostram atividade de célula T de anticorpos anti-hILT4. A Figura 21A é um histograma de incorporação de 3H timidina de células T coculturadas com células CHO transfectadas com hILT4 e OKT3 incubada com (da esquerda para a direita no eixo x) sem anticorpo, anticorpo hIgG1.3 controle de isotipo e anticorpos 21D9 (“21D9 WT”), 21D9.e, 21A5 (“21A5 WT”), 21A5.a e 10F10 (“10F10 WT”) como uma função de concentração de anticorpo (20, 4, 0,8, 0,16, 0,032 e 0,0064 μg/ml). A Figura 21B provê os valores de EC50 associados. A Figura 21C mostra atividade de célula T de anticorpos anti-hILT4. A Figura 21C é um histograma de produção de IFNγ de células T coculturadas com células CHO transfectadas com hILT4 e OKT3 incubadas (da esquerda para a direita no eixo x) sem nenhum anticorpo, anticorpo hIgG1.3 controle de isotipo e anticorpos 21D9 (“21D9 WT”), 21D9.e, 21A5 (“21A5 WT”), 21A5.a e 10F10 (“10F10 WT”) como uma função de concentração de anticorpo (20, 4, 0,8, 0,16, 0,032 e 0,0064 μg/ml). A Figura 21D provê os valores de EC50 associados.

[026] As Figuras 22A-D mostram proliferação (Figs. 22A e 22C) e produção de IFNγ (Figs. 22B e 22D) de células T em uma alo-MLR (reação de linfócito mista) de células dendríticas derivadas de monócito (MoDC) coculturadas com células T. Anticorpo anti-hILT4 21A5.a ou 21D9.e (Figs. 22A e 22B) ou 2H2 ou 21D9 (Figs. 22C e 22D) ou controle de isotipo ou nenhum anticorpo (“não tratado”) foram adicionados durante diferenciação de monócito para MoDC e cada anticorpo não foi adicionado durante o ensaio de alo-MLR.

[027] As Figuras 23A-D mostram níveis de expressão de CD83 e CD86 em células dendríticas derivadas de monócito (MoDC). Anticorpos anti-hILT4 21D9.e, 21A5.a (Figura 23A), 21A5, 10F10, 21D9

(Figura 23B) ou 2H2 (Figs. 23C e 23D) ou controle de isotipo foram incubados durante a diferenciação de monócito para MoDC ou deixados sem tratamento (sem anticorpo).

[028] As Figuras 24A e B mostram o nível de TNF-alfa secretado a partir de macrófagos diferenciados in vitro ativados por lipopolissacarídeo (LPS) (FIGURA 24A) ou agonista STING 2’3’-cGAMP (FIGURA 24B). Anticorpos anti-ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 2H2 e 10F10 ou controle de isotipo foram incluídos durante ativação.

[029] As Figuras 25A e B mostram a porcentagem de proliferação de célula T CD4 (FIGURA 25A) e quantidade de IFN-gama (FIGURA 25B) produzido a partir da alo-MLR de células T CD4 coculturadas com macrófagos diferenciados in vitro na presença de anticorpos anti-hILT4 21D9, 21D9.e, 21A5 ou 21A5.a ou anticorpo anti-PD-L1 ou anticorpo controle de isotipo. A Figura 25A mostra a porcentagem de proliferação de célula T CD4 através de análise FACS com base em diluição de CFSE e a Figura 25B mostra a produção de IFNγ medida através de Alphalisa, ambos como uma função dos anticorpos para ILT4 ou controles.

[030] As Figuras 26A e B mostram que a combinação de anticorpo anti-ILT4 21D9 com o clone de anticorpo anti-PD-L1 29E.2A3 aumenta a produção de IFNγ para um nível maior do que em relação a cada anticorpo sozinho em um macrófago: alo-MLR de célula T CD4. A Figura 26A mostra um experimento de um macrófago: par alogênico de T CD4. A Figura 26B mostra respostas de pares alogeneicos múltiplos, em que cada linha denota um experimento de um par alogeneico. Análises estatísticas foram realizadas usando a comparação múltipla Anova de uma via paramétrica (teste Friedman). *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001.

[031] A Figuras 27A, B e C mostram mapeamento de epítopo de HDX de Abs 21D9 e Fabs 2H2 anti-hILT4. A Figura 27A mostra a cobertura da sequência de hILT4 por Pepsina. A Figura 27B mostra HDX diferencial dos Fabs 21D9 e 2H2. Das porções de sequência delineadas na figura, aquelas que são sublinhadas têm menos proteção de HDX do que aquelas que não estão sublinhadas, como também notado abaixo do desenho da figura. A Figura 27C mostra os epítopos de HDX dos dois Fabs mapeados para a sequência linear de hILT4. O epítopo de anticorpo 21D9 é mostrado por um sublinhado simples. O epítopo de anticorpo 2H2 é mostrado no sublinhado duplo e porções sublinhadas sombreadas/hachurada da sequência.

[032] As Figuras 28A, B, C e D mostram inibição de ligação de hILT4 a HLA-A e HLA-B por anticorpos 21D9 (Figura 28A), 2H2 (Figura 28B), 10F10 (Figura 28C) e 21A5 (Figura 28D).

[033] As Figuras 29A-D mostram que 21D9e.IgG1.3 aumenta a secreção de ambos IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+, conforme determinado por tingimento de IFN-γ e TNF-α intracelular. A Figura 29A mostra secreção de IFN-γ em células T CD4+; A Figura 29B mostra secreção de TNF-α em células T CD4+; a Figura 29C mostra secreção de IFN-γ em células T CD8+ T; e a Figura 29D mostra secreção de TNF-α em células T CD8+.

[034] A Figura 30 mostra que anticorpos anti-ILT4 21D9, 21A5, 21D9 Fab aumentam a secreção de IFN-g quando da estimulação por antígeno em um Ensaio de Lisato de CMV. Nivolumabe foi usado como um controle positivo e a ausência de anticorpo (“sem Ab”) e controle de isotipo foram usados como controles negativos. As concentrações de anticorpos anti-ILT4 são, da esquerda para a direita: 0,00128; 0,0064; 0,032; 0,16; 0,8; 4; e 20 µg/ml (uma barra para cada concentração é mostrada no histograma). Os anticorpos e controles são mostrados da esquerda para a direita na mesma ordem conforme mostrado à direita do histograma (por exemplo, “Sem Ab” corresponde à barra à esquerda e “Nivo” corresponde à barra à direita).

[035] A Figura 31 mostra que anticorpos anti-ILT4 2H2 e 21D9, ou como IgG1.1f ou como Fab, aumentam a proliferação de célula T (medido através da incorporação de 3H) em um monócito : T alo-MLR.

[036] As Figuras 32A-C mostram que anticorpos anti-ILT4 21D9e.IgG1.3 (“ILT4.8” na figura) e 9G4.IgG1.3 (“ILT4.1”) (vide Tabela 1 para nomenclatura de anticorpos) promovem expressão das moléculas coestimuladoras CD86 (Figura 32A) e CD80 (Figura 32B) e do marcador de ativação de célula dendrítica CD83 (Figura 32C) em células dendríticas derivadas de monócito de cynomolgus in vitro. Cada anticorpo foi adicionado durante diferenciação de monócito de cynomolgus em células dendríticas derivadas de monócito (DC).

[037] As Figuras 33A e B mostram o nível de TFN-alfa secretado a partir de macrófagos diferenciados in vitro ativados por lipopolissacarídeo (LPS) (FIGURA 33A) ou agonista STING 2’3’ cGAMP (FIGURA 33B). Anticorpos anti-ILT4 21D9.e e 10F10.4 ou controle de isotipo foram incluídos durante ativação.

[038] A Figura 34 mostra que o nível de TNF-alfa secretado por macrófagos diferenciados in vitro incubados com 21D9.e no contexto de IgG1, IgG4 ou IgG1.3 é similar.

[039] A Figura 35 mostra a porcentagem de monômero, espécies de peso molecular alto (HMW) e espécies de peso molecular baixo (LMW) de 21D9.e.IgG1.3 após 0, 1, 2 e 3 meses a 25º C ou 40º C. O monômero, espécies HMW e LMW correspondem às porções inferior, média e superior de cada uma das barras, respectivamente, no histograma.

[040] A Figura 36 mostra a porcentagem de basófilos ativados de um total de 8 doadores após incubação com 21D9e.IgG1.3 (“ILT4.8” na figura) , 21A5.a.IgG1.3 (“ILT4.9”), um anticorpo controle de isotipo “anti- DT”, anti-FcƐRI ou N-formilmetionina-leucil-fenilalanina (fMLP), mostrando uma falta de ativação de basófilo por 21D9e.IgG1.3 (ILT4.8)

e 21A5.a.IgG1.3 (“ILT4.9”).

[041] As Figuras 37A-D mostram resultados de experimentos para determinar os epítopos de certos anticorpos. As Figuras 37A e 37B mostram resultados de ensaio de competição (ou bloqueio cruzado) de 2H2 (Figura 37A) e 21D9 (Figura 37B) por anticorpos 10F10 e 21A5 de hILT4 expresso na superfície de células CHO. A Figura 37C é um diagrama mostrando uma representação tridimensional de hILT4 com a localização dos domínios do tipo Ig 1 e 2, e indicando as áreas de hILT4 às quais os anticorpos 21D9, 29A5, 2H2 e 10F10 se ligam. A Figura 37D mostra uma representação tridimensional adicional de hILT4 com a localização de domínio do tipo Ig 1 e 2, e indicando as áreas de hILT4 às quais anticorpos 21D9, 21A5 e 10F10 se ligam.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[042] Certas modalidades da presente invenção são sumarizadas nas reivindicações que estão no final do relatório descritivo. Por exemplo, a presente invenção inclui as modalidades que seguem, bem como outras modalidades descritas, em seções adicionais do texto e nas figuras e sequências aqui.

[043] Modalidade 1: um anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano (hILT4 ou ILT4), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e compreendendo ainda uma ou mais das características que seguem:

[044] ligação específica a hILT4 (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 108, 109, 111, 112 ou 119), por exemplo, com uma KD de 10-8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos;

[045] falta de ligação específica a hILT2, hILT3 e/ou hILT5;

[046] falta de ligação específica a um ou mais membros das famílias LILRA e/ou LILRB;

[047] estimula ativação de célula T, por exemplo, em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme medido através de proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama aumentada, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[048] estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[049] promove expressão de CD83 e CD86 em células dendríticas imaturas derivadas de monócito humanas (Mo-iDC), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[050] aumenta a secreção de IFN-γ quando da estimulação por antígeno em um ensaio de lisato de citomegalovírus (CMV), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[051] aumenta a secreção de IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+ em um ensaio de alo-reação de linfócito mista (MLR) quando da estimulação com CD3, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[052] inibe ligação de HLA-A e/ou HLA-B a ILT4;

[053] se liga a 70ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122) conforme determinado através de troca de hidrogênio deutério (HDX), por exemplo, como mostrado em um ensaio de HDX descrito nos Exemplos;

[054] compete por ligação a hILT4 com um anticorpo descrito aqui;

[055] se liga especificamente a um ILT4 de cyno compreendendo SEQ ID NO: 118, por exemplo, como mostrado em um ensaio de ligação descrito nos Exemplos;

[056] inibe ligação de ILT4 humano (hILT4) a uma contraparte de ligação a ILT4, tal como uma molécula classe I do MHC, tais como HLA- A e HLA-B (por exemplo, inibe ligação de hILT4 a ambas HLA-A e HLA- B);

[057] tem um perfil de ligação a HLA-A e HLA-B mostrado na

Figura 28;

[058] promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos M1;

[059] tem um perfil de ligação como mostrado na Fig 27;

[060] não induz (ou dispara) ativação de basófilo;

[061] se liga às regiões de hILT4 que seguem: (i) 70ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou (iii) 154ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) e/ou 425SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), e, se ligando a (i) ou (ii), então opcionalmente, não se ligando significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos localizados N-terminal para o aminoácido I70, em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 compreendendo sua sequência de sinal nativa); e

[062] interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Lys43, Ile49, Thr50 e Arg51 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Gly117, Val119, Try120, Leu134, Lys136, Gln149, Pro150, Ile159, Ser161, Val162 ,Gly163, Pro164, Pro167, His173, Try178, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Glu42, Lys43, Gly76, Cys77, Leu88, Pro91, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro, conforme determinado por pegada de carbono, por exemplo, como descrito nos Exemplos.

[063] Modalidade 2: o anticorpo isolado da modalidade 1, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende VH CDR1, CDR2 e CDR3 de anticorpo anti- ILT4 9G4 (SEQ ID Nos: 125-127), 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133), 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139), 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145), 24E5 (SEQ ID

Nos: 149-151), 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157), 21A5 (SEQ ID Nos: 161- 163) ou 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169).

[064] Modalidade 3: o anticorpo isolado da modalidade 1 ou 2, compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de anticorpo anti- ILT4 9G4 (SEQ ID Nos: 128-130), 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136), 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142), 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148), 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154), 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160), 21A5 (SEQ ID Nos: 164- 166) ou 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172).

[065] Modalidade 4: o anticorpo isolado da modalidade 2, em que a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID Nos: 143- 148), 24E5 (SEQ ID Nos: 149-154), 21D9 (SEQ ID Nos: 155-160), 21A5 (SEQ ID Nos: 161-166) ou 10F10 (SEQ ID Nos: 167-172).

[066] Modalidade 5: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-4, o qual compreende

[067] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 9G4 (SEQ ID Nos: 125-127) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 9G4 (SEQ ID Nos: 128-130);

[068] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136);

[069] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139) e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142);

[070] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148);

[071] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 24E5 (SEQ ID Nos: 149-151) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154);

[072] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160);

[073] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.b (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.b (SEQ ID Nos: 158-160);

[074] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.c (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.c (SEQ ID Nos: 158-160);

[075] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.d (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.d (SEQ ID Nos: 158-160);

[076] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.e (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.e (SEQ ID Nos: 158-160);

[077] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21A5 (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21A5 (SEQ ID Nos: 164-166);

[078] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21A5.a (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21A5.a (SEQ ID Nos: 164-166);

[079] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172);

[080] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido de VL CDR1, CDR2 e CDR3 de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 170-172);

[081] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 170-172); ou

[082] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 170-172).

[083] Modalidade 6: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-5, em que a cadeia pesada de anticorpo compreende uma VH com uma sequência de aminoácido pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido da VH de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3

(SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91).

[084] Modalidade 7: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-6, em que a cadeia leve do anticorpo compreende uma VL com uma sequência de aminoácido pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido da VL de 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-25), 9C8 (SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114).

[085] Modalidade 8: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-7, em que a cadeia pesada de anticorpo compreende uma VH com uma sequência de aminoácido compreendendo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, substituições conservativas ou reversão de substituições, comparado com a sequência de aminoácido da VH de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91).

[086] Modalidade 9: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-8, em que a cadeia leve de anticorpo compreende uma VL com uma sequência de aminoácido compreendendo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, substituições conservativas ou substituições de reversão, comparado com a sequência de aminoácido da VL de 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-25), 9C8 (SEQ ID NO:

54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114).

[087] Modalidade 10: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-9, em que a cadeia pesada compreende a VH de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91).

[088] Modalidade 11: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-10, em que a cadeia leve compreende a VL de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-25), 9C8 (SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114).

[089] Modalidade 12: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-11, que compreende VH e VL de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-25), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 70),

21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 114).

[090] Modalidade 13: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-11, o qual compreende

[091] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 9G4 (SEQ ID Nos: 125-127) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 9G4 (SEQ ID Nos: 128-130) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-125);

[092] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 54);

[093] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59);

[094] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 62);

[095] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 24E5 (SEQ ID Nos: 149-151) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 66);

[096] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 70);

[097] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.b (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.b (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 70);

[098] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.c

(SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.c (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 70);

[099] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.d (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.d (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 70);

[100] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.e (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.e (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 70);

[101] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21A5 (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21A5 (SEQ ID Nos: 164-166) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 82);

[102] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21A5.a (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21A5.a (SEQ ID Nos: 164-166) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH e à VL de 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 86);

[103] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 90);

[104] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 94);

[105] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 96); ou

[106] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 114).

[107] Modalidade 14: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-13, o qual compreende

[108] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 9G4 (SEQ ID NO: 51 resíduos 20-135) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 9G4 (SEQ ID NO: 50 resíduos 19- 125);

[109] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 9C8 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 54);

[110] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 2H2 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59);

[111] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 2E5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 62);

[112] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 24E5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 66);

[113] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 70);

[114] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.b e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 70);

[115] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.c e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 70);

[116] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.d e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 70);

[117] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.e e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 70);

[118] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21A5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 82);

[119] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21A5.a e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 86);

[120] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 90);

[121] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.1 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 94);

[122] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.3 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 96); ou

[123] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.4 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 114).

[124] Modalidade 15: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-14, o qual é um anticorpo IgG.

[125] Modalidade 16: o anticorpo isolado da modalidade 15, o qual é um anticorpo IgG1, IgG2 ou IgG4, em que o IgG4 compreende opcionalmente uma substituição S228P (Numeração EU).

[126] Modalidade 17: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-16, em que o anticorpo é um anticorpo ineficaz.

[127] Modalidade 18: o anticorpo isolado da modalidade 17, em que a região constante de cadeia pesada compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 mutações em uma região constante de cadeia pesada humana contrário do tipo selvagem que reduzem a função efetora do anticorpo comparado com um anticorpo sem as mutações 1, 2, 3, 4 ou 5, mas de outro modo com a mesma sequência de aminoácido.

[128] Modalidade 19: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-18, em que a região constante de cadeia pesada do anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, uma região constante de cadeia pesada de IgG1.1 ou uma região constante de cadeia pesada de IgG1 com uma substituição P238K (Numeração EU) ou uma região constante de cadeia pesada de IgG1 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma das SEQ ID Nos: 98, 100, 102, 103 ou 104.

[129] Modalidade 20: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-16 ou 19, em que o anticorpo tem função efetora.

[130] Modalidade 21: o anticorpo isolado da modalidade 20, em que o anticorpo é afucosilado (por exemplo, um anticorpo IgG1 afucosilado).

[131] Modalidade 22: o anticorpo isolado da modalidade 20 ou 21, em que a região constante de cadeia pesada compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 mutações em uma região constante de cadeia pesada humana contrário do tipo selvagem que aumenta a função efetora do anticorpo comparado com um anticorpo sem as mutações 1, 2, 3, 4 ou 5, mas de outro modo com a mesma sequência de aminoácido.

[132] Modalidade 23: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-22, o qual compreende a HC de anticorpo anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1 ou 10F10.3, em que a região constante da HC é IgG1 (por exemplo, 9G4.IgG1, etc.), IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3,

etc.), IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc.), IgG4 (por exemplo, 9G4.IgG4, etc.) ou IgG4 S228P (Numeração EU) (por exemplo, 9G4.IgG4_S228P).

[133] Modalidade 24: o anticorpo isolado da modalidade 23, em que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de HC como segue:

[134] IgG1, por exemplo, 9G4.IgG1, 9G4 (SEQ ID NO: 2), 9C8 (SEQ ID NO: 4), 2H2 (SEQ ID NO: 6), 2E5 (SEQ ID NO: 8), 24E5 (SEQ ID NO: 10), 21D9 (SEQ ID NO: 12), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 98), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 98), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 98), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 98), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 98), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 98), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98),

[135] IgG1, por exemplo, 9G4.IgG1, 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 102), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 102), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 102), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 102), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 102), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 102), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 102), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 102), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 102), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 102), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 102), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 102), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102),

[136] IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 100), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 100), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 100), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 100), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO:

100), 21D9 ((i) SEQ ID NO: 113, ou (ii) SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 100), 21D9.b (SEQ ID NO: 36), 21D9.c (SEQ ID NO: 38), 21D9.d (SEQ ID NO: 40), 21D9.e (SEQ ID NO: 13), 21A5 (SEQ ID NO: 15), 21A5.a (SEQ ID NO: 17), 10F10 (SEQ ID NO: 19), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100);

[137] IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 103), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 103), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 103), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 103), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 103), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 103), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 103), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 103), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 103), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 103), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 103), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 103), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103),

[138] IgG1fa.P238K (por exemplo, 9G4.IgG1fa.P238K, etc.) 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 104), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 104), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 104), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 104), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 104), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 104), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 104), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 104), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 104), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 104), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 104), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 104), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), ou

[139] IgG4 S228P (por exemplo, 9G4.IgG4 S228P, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 179), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 179), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 179), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 179), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 179), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 179), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 179), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 179), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 179), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 179), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 179), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 179), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179).

[140] Modalidade 25: o anticorpo isolado da modalidade 23, em que a HC do anticorpo não tem um resíduo lisina C-terminal.

[141] Modalidade 26: o anticorpo isolado da modalidade 23, em que a HC do anticorpo compreende a sequência de aminoácido de região constante de cadeia pesada de qualquer uma da SEQ ID No: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179.

[142] Modalidade 27: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-26, o qual compreende a LC de anticorpo anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[143] Modalidade 28: o anticorpo isolado da modalidade 27, em que a região constante de cadeia leve é uma região constante de cadeia leve Kappa humana.

[144] Modalidade 29: o anticorpo isolado da modalidade 27, em que a LC compreende a sequência de: 9G4 (SEQ ID NO: 1), 9C8 (SEQ ID NO: 3), 2H2 (SEQ ID NO: 5), 2E5 (SEQ ID NO: 7), 24E5 (SEQ ID NO: 9), 21D9 (SEQ ID NO: 11), 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5 (SEQ ID NO: 14), 21A5.a (SEQ ID NO: 16), 10F10 (SEQ ID NO: 18),

10F10.1 (SEQ ID NO: 20), 10F10.3 (SEQ ID NO: 21) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 116).

[145] Modalidade 30: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-29, o qual compreende HC e LD de anticorpo anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, em que a região constante da HC é IgG1 (por exemplo, 9G4.IgG1, etc.), IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3, etc.), IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc.), IgG4 (por exemplo, 9G4.IgG4, etc.) ou IgG4 S228P (Numeração EU) (por exemplo, 9G4.IgG4_S228P).

[146] Modalidade 31: o anticorpo isolado da modalidade 30, o qual compreende

[147] uma cadeia pesada (HC) compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 9G4 ((i) SEQ ID NO: 2, ou (ii) SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve (LC) compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 9G4 (SEQ ID NO: 1);

[148] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 9C8 ((i) SEQ ID NO: 4 ou (ii) SEQ ID NOs: 55 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 9C8 (SEQ ID NO: 3);

[149] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 2H2 ((i) SEQ ID NO: 6 ou (ii) SEQ ID NOs: 58 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 2H2 (SEQ ID NO: 5);

[150] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 2E5 ((i) SEQ ID NO: 8 ou (ii) SEQ ID NOs: 63 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 2E5 (SEQ ID NO: 7);

[151] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 24E5 ((i) SEQ ID NO: 10 ou (ii) SEQ ID NOs: 67 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 24E5 (SEQ ID NO: 9);

[152] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9 ((i) SEQ ID NO: 12 ou 113 ou (ii) SEQ ID NOs: 71 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9 (SEQ ID NO: 11);

[153] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.b (SEQ ID NOs: 74 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.b (SEQ ID NO: 11);

[154] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.c (SEQ ID NOs: 75 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.c (SEQ ID NO: 11);

[155] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.d (SEQ ID NOs: 78 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.d (SEQ ID NO: 11);

[156] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.e ((i) SEQ ID NO: 13, 176, 177 ou 178; ou (ii) SEQ ID NOs: 80 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103,

104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.e (SEQ ID NO: 11);

[157] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21A5 ((i) SEQ ID NO: 15 ou (ii) SEQ ID NOs: 83 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21A5 (SEQ ID NO: 14);

[158] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21A5.a (i) SEQ ID NO: 17 ou (ii) SEQ ID NOs: 87 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21A5.a (SEQ ID NO: 16);

[159] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10 ((i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10 (SEQ ID NO: 18);

[160] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.1 (i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.1 (SEQ ID NO: 20);

[161] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.3 ((i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.3 (SEQ ID NO: 21); ou

[162] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.4 ((i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.4 (SEQ ID NO: 116).

[163] Modalidade 32: um anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, o qual compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 13 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

[164] Modalidade 33: um anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, o qual compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 176 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

[165] Modalidade 34: um anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, o qual compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 177 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

[166] Modalidade 35: um anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, o qual compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 178 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

[167] Modalidade 36: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 32-35, em que o anticorpo tem uma ou mais das propriedades dos anticorpos da modalidade 1.

[168] Modalidade 37: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-36, o qual é um anticorpo de comprimento integral.

[169] Modalidade 38: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-14, o qual é um fragmento de anticorpo.

[170] Modalidade 39: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-38, o qual é um anticorpo multimérico (por exemplo, dimérico ou trimérico).

[171] Modalidade 40: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-39, o qual é ligado (por exemplo, covalentemente) a uma outra molécula.

[172] Modalidade 41: o anticorpo isolado da modalidade 40, em que a outra molécula é um marcador.

[173] Modalidade 42: o anticorpo isolado da modalidade 40, em que a outra molécula é um peptídeo.

[174] Modalidade 43: o anticorpo isolado da modalidade 40, o qual é um conjugado de anticorpo-fármaco (ADC).

[175] Modalidade 44: um ácido nucleico isolado codificando um anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-43.

[176] Modalidade 45: um ácido nucleico isolado codificando a cadeia pesada e/ou a cadeia leve de um anticorpo de qualquer uma das modalidades1-43.

[177] Modalidade 46: Um conjunto de pelo menos dois ácidos nucleicos isolados codificando a cadeia pesada e a cadeia leve de um anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-43.

[178] Modalidade 47: Uma composição compreendendo um ácido nucleico codificando a cadeia pesada de um anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-43 e um ácido nucleico codificando a cadeia leve do anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-43.

[179] Modalidade 48: uma célula compreendendo o ácido nucleico isolado de qualquer uma das modalidades 44-46 ou da composição da modalidade 47.

[180] Modalidade 49: um método de preparação de um anticorpo, o qual compreende cultura da célula da modalidade 48 em condições sob as quais o anticorpo é expresso.

[181] Modalidade 50: uma composição compreendendo um anticorpo isolado, ácido nucleico, composição ou célula de qualquer uma das modalidades 1-49 e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[182] Modalidade 51: a composição da modalidade 50, a qual compreende um segundo agente terapêutico.

[183] Modalidade 52: a composição da modalidade 51, em que o segundo agente terapêutico é um agente imunoestimulador.

[184] Modalidade 53: a composição da modalidade 52, em que o agente imunoestimulador é um antagonista de uma molécula imunossupressora, por exemplo, o PD-1/PD-L1, um CTLA-4 e LAG-3, ou um agonista de uma molécula imunoestimuladora, por exemplo, GITR e OX40.

[185] Modalidade 54: um método de tratamento de um indivíduo tendo câncer, o qual compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição de qualquer uma das modalidades 50-53 ou anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-43 que estimula uma resposta imune e/ou é um antagonista de ILT-4.

[186] Modalidade 55: o método da modalidade 54, em que o método compreende ainda administrar uma segunda terapia.

[187] Modalidade 56: o método da modalidade 55, em que a segunda terapia é radioterapia, cirurgia ou administração de um segundo agente.

[188] Modalidade 57: o método da modalidade 55, em que a terapia secundária é um segundo agente e o segundo agente é um agente imunoestimulador.

[189] Modalidade 58: o método da modalidade 57, em que o agente imunoestimulador é um antagonista de uma molécula imunossupressora, por exemplo, o PD-1/PD-L1, um CTLA-4 e LAG-3, ou um agonista de uma molécula imunoestimuladora, por exemplo,

GITR e OX40.

[190] Modalidade 60: um método de tratamento de doença infecciosa (por exemplo, doença viral) em um indivíduo, o qual compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição de qualquer uma das modalidades 50-53 ou anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-43 que estimula uma resposta imune e/ou é um antagonista de ILT4.

[191] Modalidade 61: um método de detecção de ILT4 em uma amostra, o qual compreende contato da amostra com um anticorpo para ILT4 de qualquer uma das modalidades 1-43.

[192] Modalidade 62: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-43, tendo as características que seguem:

[193] ligação específica a hILT4 (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 108, 109, 111, 112 ou 119), por exemplo, com uma KD de 10-8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos;

[194] estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[195] tem um perfil de ligação como mostrado na Fig 27; e

[196] se liga aos domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, tal como compreendendo as regiões de hILT4 que seguem: (i) 70 ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou 154 (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) 425 e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), e não se liga significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos que estão localizados N-terminal para o aminoácido I70, em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 compreendendo sua sequência de sinal nativa).

[197] Modalidade 63: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-43, tendo as características que seguem:

[198] ligação específica a hILT4 (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 108, 109, 111, 112 ou 119), por exemplo, com uma KD de 10-8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos;

[199] falta de ligação específica a hILT2, hILT3 e/ou hILT5;

[200] falta de ligação específica a um ou mais membros das famílias LILRA e/ou LILRB;

[201] estimula ativação de célula T, por exemplo, em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme medido através de proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama aumentada, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[202] estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[203] inibe ligação de hILT4 a HLA-A e HLA-B;

[204] tem um perfil de ligação como mostrado na Fig 27;

[205] se liga aos domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, tal como compreendendo as regiões de hILT4 que seguem: (i) 70 ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122), e não se liga significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos que estão localizados N-terminal para o aminoácido I70; em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 com sua sequência de sinal).

[206] promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos M1;

[207] não induz (ou dispara) ativação de basófilo; e

[208] compreende menos de 5% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação a 25°C e/ou menos de 10% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação em 40°C.

[209] Modalidade 64: o anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 1-43, tendo as características que seguem:

[210] promove expressão de CD83 e CD86 em células dendríticas imaturas derivadas de monócito humanas (Mo-iDC), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[211] aumenta a secreção de IFN-γ quando da estimulação por antígeno em um ensaio de lisato de citomegalovírus (CMV), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[212] aumenta a secreção de IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+ em um ensaio de alo-reação de linfócito mista (MLR) quando da estimulação com CD3, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[213] inibe ligação de HLA-A e/ou HLA-B a ILT4;

[214] se liga a domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, tal como 70 a uma região compreendendo (i) ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou 154 (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) 425 e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), conforme determinado através de troca de hidrogênio deutério (HDX), por exemplo, como mostrado em um ensaio de HDX descrito nos Exemplos;

[215] interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Lys43, Ile49, Thr50 e Arg51 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Gly117, Val119,

Try120, Leu134, Lys136, Gln149, Pro150, Ile159, Ser161, Val162 ,Gly163, Pro164, Pro167, His173, Try178, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Glu42, Lys43, Gly76, Cys77, Leu88, Pro91, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro, conforme determinado por pegada de carbono, por exemplo, como descrito nos Exemplos;

[216] compete por ligação a hILT4 com um anticorpo descrito aqui; e

[217] se liga especificamente a um ILT4 de cyno compreendendo SEQ ID NO: 118, por exemplo, como mostrado em um ensaio de ligação descrito nos Exemplos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE CERTAS MODALIDADES Definições

[218] A menos que de outro modo definido, termos técnicos e científicos usados em conexão com a presente invenção devem ter os significados que são comumente compreendidos por aqueles de habilidade comum na técnica. Ainda, a menos que de outro modo requerido pelo contexto, termos singulares devem incluir pluralidades e termos no plural devem incluir o singular.

[219] No presente pedido, o uso de “ou” significa “e/ou” a menos que de outro modo declarado. No contexto de uma reivindicação dependente múltipla, o uso de “ou” se refere a mais de uma reivindicação independente ou dependente precedente na alternativa apenas. Os termos “compreendendo”, “incluindo” e “tendo” podem ser usados intercomutavelmente aqui. De acordo com a presente invenção, uma molécula “isolada” é uma molécula que foi removida de seu ambiente natural. Desta maneira, o termo “isolado” não reflete necessariamente o grau ao qual a molécula foi purificada.

[220] O termo “polipeptídeo” se refere a um polímero de resíduos de aminoácido, e não é limitado a um comprimento mínimo. Uma

“proteína” pode compreender um ou mais polipeptídeos. Tais polímeros de resíduos de aminoácido podem conter resíduos de aminoácido naturais ou não naturais e incluem, mas não estão limitados a, peptídeos, oligopeptídeos, dímeros, trímeros e multímeros de resíduos de aminoácido. Ambas as proteínas de comprimento integral e seus fragmentos são compreendidos pela definição. Os termos incluem também modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e similar. Ainda, para propósitos da presente invenção, um “polipeptídeo” ou “proteína” se refere a um polipeptídeo ou proteína, respectivamente, que inclui modificações, tais como deleções, adições e substituições (geralmente de natureza conservativa), na sequência nativa, contanto que a proteína mantenha a atividade desejada. Essas modificações podem ser deliberadas, como através de mutagênese direcionada a sítio, ou podem ser acidentais, tal como através de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros devido à amplificação por PCR. Uma proteína pode compreender dois ou mais polipeptídeos. A letra “h” na frente do nome de uma proteína denota aqui uma proteína humana, nativa, por exemplo, “hILT4”.

[221] Os termos “ILT4”, “ILT4 humano”, “hILT4”, “transcrito do tipo imunoglobulina 4”, “transcrito do tipo Ig 4”, receptor do tipo imunoglobulina leucocitário B2”, “LIR2”, “LILRB2”, “MIR10” e “CD85d” são todos usados intercomutavelmente e se referem a um ILT4 humano, nativo, a menos que de outro modo especificamente indicado (por exemplo, ILT4 de camundongo, ILT4 de cynomolgus, etc.). O termo inclui ILT4 não processado, de comprimento integral, bem como qualquer forma de ILT4 que resulte de processamento na célula. O termo compreende variantes de ocorrência natural de ILT4 humano, por exemplo, variantes de união ou variantes alélicas. Em algumas modalidades, ILT4 compreende ou consiste em uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 107 (precursora, com peptídeo de sinal) ou SEQ ID NO: 108 (madura, sem peptídeo de sinal). Em algumas modalidades, ILT4 compreende uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 110 (precursora, com peptídeo de sinal) ou SEQ ID NO: 111 (madura, sem peptídeo de sinal).

[222] Como aqui usado, o termo “fragmento de ILT4” se refere a ILT4 tendo um ou mais resíduos deletados do terminal N- e/ou C- do ILT4 de comprimento integral. O fragmento de ILT4 pode ou não incluir um peptídeo de sinal N-terminal, mas retém a habilidade de se ligar a células T. Como aqui usado, o termo “variante de ILT4” se refere a ILT4 que contém adições, deleções e substituições de aminoácido de ocorrência natura, mas que retêm a habilidade de se ligar a células T.

[223] O termo “antagonista” é usado no sentido mais amplo e inclui qualquer molécula que iniba ou neutralize parcialmente ou totalmente uma atividade biológica de um polipeptídeo, tal como ILT4. Moléculas antagonistas exemplares incluem anticorpos antagonistas. O termo “antagonista de ILT4” se refere a uma molécula que inibe ou bloqueia a atividade biológica de ILT-4 ao, por exemplo, bloquear ou inibir a interação entre ILT4 e uma célula-alvo, por exemplo, uma célula T e/ou uma molécula-alvo. Antagonistas de ILT4 exemplares incluem anticorpos que bloqueiam a ligação de ILT4 a uma célula-alvo, por exemplo, uma célula T e/ou uma molécula-alvo. Um antagonista de ILT4 é considerado “bloquear ligação de ILT4 a células-alvo ou moléculas-alvo” quando ele reduz a quantidade de ligação detectável para pelo menos um de ILT4 para uma célula-alvo, por exemplo, uma célula T, e/ou uma molécula-alvo, em pelo menos 50% em um ensaio de ligação celular. Em algumas modalidades, um antagonista para ILT4 reduz a quantidade de ligação detectável em pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90%. Em algumas modalidades do tipo, o antagonista é dito bloquear ligação de ligante em pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, etc. Bloqueio de ligação de ILT4 a células-alvo, por exemplo, células T, pode ser demonstrado, por exemplo, através da ligação de células transfectadas com ILT4, por exemplo, ECD de ILT4 e domínio de transmembrana, ou proteína de fusão de Fc de ILT4 recombinante, por exemplo, proteínas de fusão de Fc de ECD de ILT4 recombinante em células, tais como células T, na presença ou ausência do antagonista.

[224] Os termos “inibição” e “inibir” se referem a uma diminuição, redução ou cessação de qualquer característica fenotípica ou à diminuição, redução ou cessação na incidência, grau ou probabilidade dessa característica. Em algumas modalidades, por “reduzir” ou “inibir” quer dizer a habilidade em causar uma diminuição de 20% ou mais. Em uma outra modalidade, por “reduzir” ou “inibir” quer dizer a habilidade em causar uma diminuição de 50% ou mais. Em ainda uma outra modalidade, por “reduzir” ou “inibir” quer dizer a habilidade em causar uma diminuição geral de 75%, 85%, 90%, 95% ou mais.

[225] Os termos “intensificando atividade de célula T” ou “intensificação de atividade de célula T” se refere a uma intensificação ou aumento de pelo menos uma de ativação de célula T, secreção de citocina, tal como secreção de interferon-gama (IFN-γ) ou proliferação de célula T em um indivíduo. “Intensificação de atividade de célula T” pode ser usando um agente que é um agonista de atividade de célula T, e/ou um agente que é um antagonista de (isto é, inibe ou bloqueia) um mecanismo que inibe atividade de célula T. Mudanças em atividade de célula T podem ser medidas através de, por exemplo, ensaio de proliferação de célula T ou um ELISA de IFN-γ, por exemplo, como descrito nos Exemplos.

[226] O termo “anticorpo para ILT4” ou “anticorpo para hILT4” ou “anticorpo anti-ILT4” ou “anticorpo anti-hILT4” ou “anticorpo que se liga a ILT4”, como aqui usado, se referem a um anticorpo que se liga a ILT4 e que opcionalmente inibe a atividade biológica de ILT4, tal como através de bloqueio ou inibição da ligação de ILT4 a células- alvo, tais como células T, ou molécula-alvo. Em algumas modalidades, a extensão de ligação de um anticorpo para ILT4 a uma proteína não- ILT4, não relacionada, é menos do que 10% da ligação do anticorpo a ILT4 conforme medido, por exemplo, através de SPR (Biacore®) ou em um radioimunoensaio (RIA). Em algumas modalidades, a extensão de ligação de um anticorpo para ILT4 a outras proteínas da família ILT, tal como LILRA, é menos do que 20%, menos do que 10%, menos do que 5% da ligação do anticorpo a ILT4 conforme medido, por exemplo, através de SPR ou em um radioimunoensaio (RIA). Em algumas modalidades, um anticorpo para ILT4 se liga a ILT4, mas não se liga a pelo menos uma proteína selecionada de ILT2, ILT3 e ILT5.

[227] O termo “peptídeo líder” ou “sequência líder” ou “peptídeo de sinal” ou “sequência de sinal” se refere a um peptídeo ou sequência de resíduos de aminoácido localizado no terminal N de um polipeptídeo que facilita secreção de um polipeptídeo a partir de uma célula de mamífero. Uma sequência líder pode ser clivada quando da exportação do polipeptídeo a partir da célula de mamífero, formando uma proteína madura. Sequências líderes podem ser naturais ou sintéticas, e elas podem ser heterólogas ou homogêneas para a proteína à qual elas estão ligadas.

[228] O termo “anticorpo” ou “Ab” aqui é usado no sentido mais amplo e compreende várias estruturas de anticorpo incluindo, mas não limitado a, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) e fragmentos de anticorpo contanto que eles exibam a atividade de ligação a antígeno desejada. Como aqui usado, o termo se refere a uma molécula compreendendo pelo menos região de determinação de complementaridade (CDR) 1, CDR2 e CDR3 de uma cadeia pesada e pelo menos CDR1, CDR2 e CDR3 de uma cadeia leve, em que a molécula é capaz de se ligar a antígeno. O termo anticorpo também inclui, mas não está limitado a, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos e anticorpos de várias espécies tais como camundongo, macaco cynomolgus, etc. O termo “fragmento de anticorpo” inclui, mas não está limitado a, fragmentos que são capazes de se ligar a antígeno, tal como Fv, Fc de cadeia simples (scFv), Fab, Fab’ e (Fab’)2.

[229] O termo “cadeia pesada” ou “HC” se refere a um polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia pesada, com ou sem uma sequência líder. Em algumas modalidades, uma cadeia pesada compreende pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia pesada. O termo “cadeia pesada de comprimento integral” se refere a um polipeptídeo compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região constante de cadeia pesada, com ou sem uma sequência líder, e com ou sem uma lisina C-terminal (K). O termo “cadeia pesada de comprimento integral madura” se refere a um polipeptídeo compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região constante de cadeia pesada, sem uma sequência líder e com ou sem uma lisina C-terminal (K).

[230] O termo “região variável de cadeia pesada” ou “VH” se refere a uma região compreendendo uma região de determinação de complementaridade de cadeia pesada (CDR) 1, região de estrutura principal (FR) 2, CDR2, FR3 e CDR3 da cadeia pesada. Em algumas modalidades, uma região ariavel de cadeia pesada também compreende pelo menos uma porção de uma FR1 e/ou pelo menos uma porção de uma FR4. Em algumas modalidades, as CDRs de cadeia pesada são como aqui especificado, tal como na tabela de sequências abaixo ou nas Figuras 1-12. Como aqui usado, a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH são CDRs Kabat providas nas Figuras 1-12, por exemplo.

[231] O termo “cadeia leve” ou “LC” se refere a um polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia leve, com ou sem uma sequência líder. Em algumas modalidades, uma cadeia leve compreende pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia leve. O termo “cadeia leve de comprimento integral” se refere a um polipeptídeo compreendendo uma região variável de cadeia leve e uma região constante de cadeia leve, com ou sem uma sequência líder. O termo “cadeia leve de comprimento integral madura” se refere a um polipeptídeo compreendendo uma região variável de cadeia leve e uma região constante de cadeia leve, sem uma sequência líder.

[232] O termo “região variável de cadeia leve” ou “VL” se refere a uma região compreendendo uma CDR1, FR2, HVR2, FR3 e HVR3 de cadeia leve. Em algumas modalidades, uma região variável de cadeia leve também compreende uma FR1 e/ou uma FR4. Em algumas modalidades, as CDRs de cadeia leve são como aqui especificado tal como na tabela de sequências ou nas Figuras 1-12. Como aqui usado, as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL são CDRs de Kabat conforme provido nas Figuras 1-12, por exemplo.

[233] Um “anticorpo quimérico” se refere a um anticorpo em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie particular, enquanto o restante da cadeia pesada e/ou leve é derivado de uma fonte ou espécie diferente. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico se refere a um anticorpo compreendendo pelo menos uma região variável de uma primeira espécie (tais como camundongo, rato, macaco cynomolgus, etc.) e pelo menos uma região constante de uma segunda espécie (tais como humano, macaco cynomolgus, etc.). Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de camundongo e pelo menos uma região constante humana. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de cynomolgus e pelo menos uma região constante humana. Em algumas modalidades, todas das regiões variáveis de um anticorpo quimérico são de uma primeira espécie e todas das regiões constantes do anticorpo quimérico são de uma segunda espécie.

[234] Um “anticorpo humanizado” se refere a um anticorpo em que pelo menos um aminoácido em uma região de estrutura principal de uma região variável não humana foi substituído com o aminoácido correspondente de uma região variável humana. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado compreende pelo menos uma região constante humana ou fragmento da mesma. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado é um Fab, um scFv, um (Fab’)2, etc.

[235] Um “anticorpo humano” como aqui usado se refere a anticorpos produzidos em humanos, anticorpos produzidos em animais não humanos que compreendem genes da imunoglobulina humana, tal como XenoMouse®, e anticorpos selecionados usando métodos in vitro, tal como exibição de fago, em que o repertório de anticorpo é baseado em uma sequência de imunoglobulina humana.

[236] Em algumas modalidades, um presente anticorpo pode conter uma ou mais “substituições conservativas” comparado com uma sequência especificada, particular. “Substituições de aminoácido conservativas” aqui se referem a substituições de um resíduo de aminoácido com um resíduo de aminoácido tendo uma cadeia lateral similar. Famílias de resíduos de aminoácido tendo cadeias laterais similares incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina,

metionina), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Em certas modalidades, um resíduo de aminoácido não essencial previsto em um presente anticorpo é substituído com um outro resíduo de aminoácido da mesma família de cadeia lateral (por exemplo, básica, ácida, beta-ramificada, aromática, polar não carregada). Métodos de identificação de substituições conservativas de nucleotídeo e aminoácido que não eliminam ligação a antígeno foram descritos, por exemplo, em Brummell e outros., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi e outros. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); e Burks e outros. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)).

[237] Em algumas modalidades, um presente anticorpo pode conter uma ou mais “substituições de reversão”. São mostrados exemplos nas Figs. 13-15 aqui. Substituições de reversão são mutações de volta para uma sequência de aminoácido de linhagem germinativa a partir da qual uma cadeia pesada ou cadeia leve de anticorpo foi derivada.

[238] Uma “KD” ou “constante de dissociação” para ligação de um anticorpo a uma proteína, por exemplo, ILT4, é uma medida da afinidade ou ligação específica do anticorpo à proteína, por exemplo, ILT4. Uma KD menor indica ligação ou afinidade melhorada com relação a KD maior. Uma KD é composta de uma razão entre uma “off-rate” ou koff ou kd e uma “on-rate” ou kon ou ka para o anticorpo e polipeptídeo.

[239] Os termos “ligação específica” e “se liga especificamente” ou termos similares significam que a KD para a ligação de dois polipeptídeos, tal como um anticorpo e seu polipeptídeo- alvo, é menos do que seria o caso entre dois polipeptídeos aleatórios existindo sob as mesmas condições. Em outras palavras, a KD é menos do que aquela devido à agregação não específica de polipeptídeos no sistema.

[240] Um “modelo de tumor”, como aqui usado, se refere a um ensaio pré-clínico in vivo, que pode ser usado para estudo da atividade biológica de um anticorpo para ILT4, e inclui sistemas de ensaio de tumor de camundongo de xenoenxerto e nativo. Em alguns casos, um modelo de tumor pode permitir rastreamento de tamanho ou crescimento de tumor quando do tratamento com o anticorpo e/ou rastreamento da presença de células imunes no tumor, tais como tipos específicos de células T ou células NK, a fim de determinar se um anticorpo disparou ou intensificou uma resposta imune.

[241] O termo “agente imunoestimulador” como aqui usado se refere a uma molécula que estimula o sistema imune ou agindo como um agonista de uma molecula imunoestimuladora, incluindo molecula coestimuladora, ou agindo como um antagonista de uma molécula imunoinibidora, incluindo uma molécula coinibidor. A molécula imunoestimuladora ou molecula imunoinibidora pode ser um regulador de ponto de checagem imune, tal como um inibidor de ponto de checagem imune ou estimulador de ponto de checagem imune. Um agente imunoestimuladora pode ser um biológico, tal como um anticorpo ou fragmento de anticorpo, outra proteína ou vacina ou pode ser um fármaco de molécula pequena. Uma “molécula imunoestimuladora” inclui um receptor ou ligante que age como intensificar, estimular, induzir ou de outra maneira “ligar” uma resposta imune. Moléculas imunoestimuladoras como aqui definido incluem moléculas coestimuladoras. Uma molécula imunoinibidora” inclui um receptor ou ligante que age para reduzir, inibir, suprimir ou de outro modo “desligar” uma resposta imune. Moléculas imunoinibidoras como aqui definido incluem moléculas coinibidoras. Tais moléculas imunoestimuladoras e imunoinibidoras podem ser, por exemplo, receptores ou ligantes encontrados em células imunes tais como células T ou encontrados em células envolvidas em imunidade inata tais como células NK.

[242] “Identidade de sequência de aminoácido percentual (%)”, “identidade %”, homologia de sequência de aminoácido percentual” e “homologia %” com relação a uma sequência de peptídeo, polipeptídeo ou anticorpo significa a porcentagem de resíduos de aminoácido em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácido na sequência de peptídeo ou polipeptídeo específica, após alinhamento das sequências e introdução de lacunas, se necessário, para obter a identidade de sequência percentual máxima, e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. Alinhamento para propósitos de determinação de identidade de sequência de aminoácido percentual pode ser obtido de várias maneiras que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, usando software de computador publicamente disponível tal como software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou MEGALIGNTM (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar parâmetros apropriados para medição de alinhamento, incluindo quaisquer algoritmos necessários para obter alinhamento máximo em todo o comprimento das sequências sendo comparadas.

[243] “Tratamento” como aqui usado compreende qualquer administração ou aplicação de um agente terapêutico para doença em um humano, e inclui inibição de progressão de doença da doença ou um ou mais sintomas da doença, deixando mais lenta a doença ou sua progressão ou um ou mais de seus sintomas, parando se desenvolvimento, aliviando parcialmente ou totalmente a doença ou um ou mais de seus sintomas, ou prevenindo uma recorrência de um ou mais sintomas da doença.

[244] Os termos “indivíduo” e “paciente” são aqui usados intercomutavelmente para se referir a um humano, a menos que especificamente de outro modo declarado.

[245] O termo “quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade de um fármaco eficaz para tratamento de uma doença ou distúrbio em um indivíduo, de modo a parcialmente ou totalmente aliviar um ou mais sintomas. Em algumas modalidaides, uma quantidade eficaz se refere a uma quantidade eficaz, nas dosagens e por períodos de tempo necessários, para obter o resultado terapêutico ou profilático desejado.

[246] O termo “câncer” é usado aqui para se referir a um grupo de células que exibe níveis anormalmente altos de proliferação e crescimento. Um câncer pode ser benigno (também referido como tumor benigno), pré-maligno ou maligno. Células de câncer podem ser células de câncer sólidas ou células de câncer leucêmicas. O termo “crescimento de tumor” é usado aqui para se referir à proliferação ou crescimento por uma célula ou células que compreendem um câncer que leva a um aumento correspondendo no tamanho ou grau do câncer.

[247] Exemplos de cânceres aplicáveis a métodos de tratamento aqui incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Exemplos não limitantes mais particulares de tais cânceres incluem câncer de célula escamosa, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pituitária, câncer esofageal, astrocitoma, sarcoma de tecido mole, câncer de pulmão de não pequenas células (incluindo câncer de pulmão de célula escamosa não pequenas células), adenocarcinoma do pulmão, carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritônio, câncer hepatocelular, câncer gastrintestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer colorretal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma da glândula salivar, câncer de rim, carcinoma de célula renal, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer de vulva, câncer da tireoide, carcinoma hepático, câncer de cérebro, câncer endometrial, câncer de testículo, colangiocarcinoma, carcinoma da vesícula biliar, câncer gástrico, melanoma e vários tipos de câncer de cabeça e pescoço (incluindo carcinoma de célula escamosa da cabeça e pescoço).

[248] Administração “em combinação com” um ou mais agentes terapêuticos adicionais inclui administração simultânea (concomitante) e consecutiva (sequencial) em qualquer ordem.

[249] Um “carreador farmaceuticamente aceitável” se refere a uma carga sólida, semissólida ou líquida não tóxica, diluente, material de encapsulação, auxiliar de formulação ou carreador convencional na técnica para uso com um agente terapêutico que juntos compreendem uma “composição farmacêutica” para administração a um indivíduo. Um carreador farmaceuticamente aceitável é não tóxico para recipientes nas dosagens e concentrações empregadas e é compatível com outros ingredientes da formulação. O carreador farmaceuticamente aceitável é apropriado para a formulação empregada. Por exemplo, se o agente terapêutico tiver que ser administrado oralmente, o carreador pode ser uma cápsula de gel. Se o agente terapêutico tiver que ser administrado subcutaneamente, o carreador idealmente não é irritável para a pele e não causa reação no local de injeção.

[250] Um “agente quimioterapêutico” é um composto químico útil no tratamento de câncer. Exemplos de agentes quimioterapêuticos que podem ser administrados em métodos aqui incluem, mas não estão limitados a, agentes de alquilação tais como tiotepa e Cytoxan® ciclofosfamida; sulfonatos de alquila tais como bussulfano, improssulfano e pipossulfano; aziridinas tais como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etilenoimina e metilamelaminas incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenefosforamida, trietilenetiofosforamida e trimetilolmelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacinona); uma camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano); briostatina; calistatina; CC-1065

(incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); criptoficinas (particularmentecriptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; uma sarcodictina; espongistatina; nitrogênio mostardas tais como clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, uracil mostarda; nitrosoureias tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina e ranimnustina; antibióticos tais como os antibióticos enodiina (por exemplo, calicheamicina, especialmente calicheamicina gama1I e calicheamicina ômegaI1 (vide, por exemplo, Agnew, Chem Intl.

Ed.

Engl., 33: 183-186 (1994)); dinemicina, incluindo dinemicina A; bis- fosfonatos, tal como clodronato; uma esperamicina; bem como cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos antibióticos enodiina cromoproteína relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, Adriamycin® doxorrubicina (incluindo morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino- doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina e desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina tais como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos tais como metotrexato e 5-fluorouracila (5- FU); análogos de ácido fólico tais como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tais como fludarabina, 6- mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina,

didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; erogenos tal como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-adrenais tais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; repositor de ácido fólico tal como ácido frolínico; aceglatona; glicosídeo de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracil; amsacrina; bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptínio; uma epotilona; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinano; lonidainina; maitansinoides tais como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamete; pirarrubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilidrazida; procarbazina; complexo de polissacarídeo PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxana; rizoxina; sizofirano; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretaana; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosídeo (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, Taxol® paclitaxel (Bristol- Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), formulação de nanopartícula engenheirada com albumina de paclitaxel, livre de Cremophor Abraxane® (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) e doxetaxel Taxotere® (Rhône- Poulenc Rorer, Antony, França); cloranbucil; gemcitabina Gemzar®; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina tais como cisplatina, oxaliplatina e carboplatina; vinblastina; platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorrelbina Navelbine®; novantrona; teniposídeo; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; irinotecano (Camptosar, CPT-11) (incluindo o regime de tratamento de irinotecano com 5-FU e leucovorina); inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluormetililornitina (DMFO); retinoides tal como ácido retinoico; capecitabina; combretastatina; leucovorina (LV); oxaliplatina, incluindo o regime de tratamento com oxaliplatina (FOLFOX); inibidores de PKC-alfa, Raf, H-Ras, EGFR (por exemplo, erlotinibe (Tarceva®)) e VEGF-A que reduzem proliferação celular e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima.

[251] Agentes quimioterapêuticos exemplares não limitantes adicionais que podem ser administrados em métodos aqui incluem agentes anti-hormonais que agem para regular ou inibir ação de hormônio sobre cânceres tais como antiestrogênios e moduladores de receptor de estrogênio seletivos (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo tamoxifeno Nolvadex®), raloxifeno, droloxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queoxifeno, LY117018, onapristona e toremifeno Fareston®; inibidores de aromatase que inibem a enzima aromatase, que regula produção de estrogênio nas glândulas adrenais, tais como, por exemplo, 4(5)-imidazois, aminoglutetimida, acetato de megestrol Megase®, exemestano Aromasin®, formestania, fadrozol, vorozol Rivisor®, letrozol Femara® e anastrozol Arimidex®; e antiandrogênios tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida e goserelina; bem como troxacitabina (um análogo de 1,3- dioxolano nucleosídeo citosina); oligonucleotídeos de antissentido, particularmente aqueles que inibem expressão de genes em vias de sinalização implicadas em proliferação de célula aberrante, tais como, por exemplo, PKC-alfa, Ralf e H-Ras; ribozima tal como um inibidor de expressão de VEGF (por exemplo, ribozima Angiozyme®) e um inibidor de expressão de HER2; vacinas tais como vacinas para terapia genética, por exemplo, vacina Allovectin®, vacina Leuvectin® e vacina Vaxid®; Proleukin® rIL-2; inibidor de topoisomerase 1 Lurtotecan®; Abarelix® rmRH; e sais farmaceuticamente aceitável, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima.

[252] Um “agente antiangiogênese” ou “inibidor de angiogênese” se refere a uma substância de peso molecular pequeno, um polinucleotídeo (incluindo, por exemplo, um RNA inibidor (RNAi ou siRNA)), um polipeptídeo, uma proteína isolada, uma proteína recombinante, um anticorpo ou conjugados ou suas proteínas de fusão, que inibem angiogênese, vasculogênese ou permeabilidade vascular indesejável, ou diretamente ou indiretamente. Deve ser compreendido que o agente antiangiogênese inclui aqueles agentes que se ligam a e bloqueiam a atividade angiogênica do fator angiogênico ou seu receptor. Por exemplo, um agente antiangiogênese que pode ser administrado no presente método pode incluir um anticorpo ou outro antagonista para o agente angiogênico, por exemplo, anticorpos para VEGF-A (por exemplo, (por exemplo, bevacizumabe (Avastin®)) ou para o receptor de VEGF-A (por exemplo, receptor KDR ou receptor Flt-1), inibidores anti-PDGFR tal como Gleevec® (Mesilato de Imatinibe), moléculas pequenas que bloqueiam sinalização de receptor de VEGF (por exemplo, PTK787/ZK2284, SU6668, Sutent®/SU11248 (malato de sunitinibe), AMG706, ou aquelas descritas no, por exemplo, pedido de patente internacional WO 2004/113304). Agentes antiangiogênese também incluem inibidores de angiogênese nativos, por exemplo, angiostatina, endostatina, etc. Vide, por exemplo, Klagsbrun e D’Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit e Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179 (por exemplo, Tabela 3 listando terapia antiangiogênica em melanoma maligno); Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini e outros (2003) Oncogene 22:6549-6556 (por exemplo, Tabela 2 listando fatores antiangiogênicos conhecidos); e Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206 (por exemplo, Tabela 1 listando agentes antiangiogênicos usados em testes clínicos).

[253] Um “agente inibidor de crescimento” como aqui usado se refere a um composto ou composição que inibe crescimento de uma célula (tal como uma célula expressando VEGF) ou in vitro ou in vivo. Portanto, o agente inibidor de crescimento que pode ser administrado nos presentes métodos pode ser um que reduz significantemente a porcentagem de células (tal como uma célula expressando VEGF) na fase S. Exemplos de agentes inibidores de crescimento incluem, mas não estão limitados a, agentes que bloqueiam a progressão do ciclo celular (em um lugar diferente da fase S), tais como agentes que induzem parada de G1 e parada da fase M. Bloqueadores da fase M clássicos incluem os vincas (vincristina e vimblastina), taxanos e inibidores de topoisomerase II tais como doxorrubicina, epirrubicina, daunorrubicina, etoposídeo e bleomicina. Esses agentes que param G1 também se estendem para parada da fase S, por exemplo, agentes de alquilação de DNA tais como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatina, metotrexato, 5-fluoruracila e ara-C. Informação adicional pode ser encontrada em Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Capítulo 1, intitulado "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" de Murakami e outros (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), por exemplo, p. 13. Os taxanos (paclitaxel e docetaxel) são fármacos anticancer ambos derivados da árvore do teixo. Docetaxel (Taxotere®, Rhone-Poulenc Rorer), derivado do teixo Europeu, é um análogo semissintético de paclitaxel (Taxol®, Bristol-Myers Squibb). Paclitaxel e docetaxel promovem a montagem de microtúbulos a partir de dímeros de tubulina e estabilizam microtúbulos através da prevenção de despolimerização, o que resulta na inibição de mitose em células.

[254] O termo “composição antineoplástica” se refere a uma composição útil no tratamento de câncer compreendendo pelo menos um agente terapêutico ativo. Exemplos de agentes terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, por exemplo, agentes quimioterapêuticos, agentes inibidores de crescimento, agentes citotóxicos, agentes usados em terapia de radiação, agentes antiangiogênese, agentes imunoterapêuticos para câncer, agentes apoptóticos, agentes antitubulina e outros agentes para tratar câncer, tais como anticorpos anti-HER2, anticorpos anti-CD20, um antagonista de receptor de fator de crescimento epidermal (EGFR) (por exemplo, um inibidor de tirosina cinase), inibidor de HER1/EGFR (por exemplo, erlotinibe (Tarceva®), inibidores de fator de crescimento derivado de plaqueta (por exemplo, Gleevec® (Mesilato de Imatinibe)), um inibidor de COX-2 (por exemplo, celecoxibe), interferons, inibidores de CTLA4 (por exemplo, anticorpo anti-CTLA ipilimumabe (YERVOY®)), inibiores de PD-1 ou PD-L1 (por exemplo, OPDIVO®, KEYTRUDA®, TECENTRIQ®, BAVENCIO®, IMFINZI®), inibidores de TIM3 (por exemplo, anticorpos anti-TIM3), inibidores de LAG-3, citocinas, antagonistas (por exemplo, anticorpos de neutralização) que se ligam a um ou mais dos alvos abaixo: receptor(es) ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-beta, BlyS, APRIL, BCMA, CTLA4, TIM3 ou VEGF, TRAIL/Apo2, e outros agentes químicos bioativos e orgânicos, etc. Combinações dos mesmos também estão incluídas na presente invenção. Anticorpos que se Ligam Especificamente a ILT4

[255] A Tabela de Sequências abaixo provê a sequência de aminoácido de ILT4 humano com ou sem peptídeo de sinal, respectivamente (vide SEQ ID NOs: 107-108 e 110-111). O domínio extracelular compreende (ECD) compreende os resíduos de aminoácido mostrado nas SEQ ID NOs: 109 e 112. Um ECD exemplar acoplado a esse marcador His-Avi compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 119.

[256] Anticorpos anti-ITL4 (Abs) podem se ligar especificamente ao ILT4-ECD ou fragmentos do mesmo (vide SEQ ID NOs: 109 e 112, bem como 119).

[257] São providos aqui Abs que se ligam a ILT4 com uma KD de 10-6 M ou menos, 10-7 M ou menos, 10-8 ou menos, 10-9 ou menos ou 10-10 ou menos, conforme medido, por exemplo, a 25º C ou a 37º C.

[258] Determinação de quão bem um Ab se liga a uma proteína ILT4 pode ser conduzida usando vários métodos diferentes. Por exemplo, através de ressonância de plasmon de superfície (SPR), tal como através de ensaios BIACORE®. Um ensaio SPR exemplar compreende captura de um ou vários anticorpos em um sensor chip CM4 com reagente de captura imobilizado (por exemplo, usando Biacore® anti-human Fc capture kit, No. catálogo GE Healthcare BR- 1008-39 ou Biacore® anti-mouse capture kit, No. catálogo GE Healthcare BR-1008-39), e antígeno de ILT4 fluindo (por exemplo, ECD de ILT4) como analito em uma série de concentração para determinar cinética e afinidades de ligação em um tampão contínuo. Em uma modalidade, ILT4 é injetado em duas a cinco concentrações na faixa de 0,1 nM a 500 nM (por exemplo, 0,1 nM, 1 nM, 10 nM, 100 nM, 500 nM) com uma taxa de fluxo de 30 uL/min, tempo de associação de até quatro minutos e tempo de dissociação de até dez minutos. Entre os ciclos de ligação, a superfície de captura é regenerada seguindo as instruções do fabricante para o respectivo estojo de captura. Todos os dados são referidos duplamente usando uma célula de fluxo de referência e uma injeção blank. Dados com cinética 1:1 simples são ajustados a um modelo de ligação Langmuir com transferência de massa usando o software de avaliação Biacore® T200. Os métodos de SPR descritos nos Exemplos também podem ser usados.

[259] A afinidade de um Ab com um polipeptídeo de ECD de ILT4 pode ser determinada usando células expressando um polipeptídeo de ILT4 em sua superfície, método que compreende citometria de fluxo. um ensaio de citometria de fluxo exemplar compreende o que segue: células T ou outras células expressando ectopicamente ILT4 são ressuspensas em um tampão em que o Ab foi serialmente diluído de aproximadamente 20 μg/mL e incubado com as células ressuspensas por 30 minutos a 4º C. As células são então lavadas duas vezes com os mesmos tampões, mantendo as condições de tampão desejadas, e incubadas com um anticorpo secundário conjugado a fluoróforo que reconhece o anticorpo primário (por exemplo, IgG humano). As células são então lavadas como antes e levadas imediatamente, sem fixação, em um BD Fortessa® ou outro citômetro de fluxo. A afinidade de um Ab com um polipeptídeo de ILT4 pode ser determinada como descrito nos Exemplos.

[260] Em certas modalidades, Abs que se liga a ILT4 bloqueia ligação de ILT4 a células-alvo, tais como células T. Inibição ou bloqueio pode ser 100% ou pelo menos 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% ou 50%.

[261] Inibição de ligação entre ILT4 e células de ligação a ILT4 tais como células T pode ser determinada medindo a inibição de ligação de células às quais ILT4 se liga na presença ou ausência do anticorpo. Um experimento exemplar que pode ser usado para determinar se um anticorpo inibe a ligação de ILT4 a células de ligação a ILT4 é um ensaio de citometria de fluxo, por exemplo, um ensaio que compreende o que segue: células mononucleares de sangue periférico humanas de sangue de doador, camada leucocitária ou Leukopak são ressuspensas em um tampão consistindo em HBSS + BSA 1%. As células são então incubadas por 30 minutos a 4º C com 20 μg/mL de, por exemplo, ECD de ILT4 ou uma proteína de fusão de ECD de ILT4 fundidos a Fc de IgG1 humana e com concentrações variáveis de anticorpos de bloqueio de ILT4 candidatos ou anticorpos de controle. As células são então lavadas duas vezes nos mesmos tampões e incubadas por mais 30 minutos a 4º C com um anticorpo secundário conjugado a fluoróforo que reconhece ILT4, mas não os anticorpos de bloqueio candidatos ou anticorpos de controle. As células são então lavadas como antes e imediatamente levadas, sem fixação, para um BD Fortessa® ou outro citômetro de fluxo. Inibição de ligação também pode ser determinada, por exemplo, como descrito nos Exemplos. Abs de Ligação a ILT4 Exemplar

[262] São providos aqui Abs que se ligam especificamente a ILT4, por exemplo, a ECD de ILT4.

[263] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma região variável de cadeia pesada (“VH”) compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de qualquer um dos Abs para ILT4 providos aqui. CDRs de VH aqui são CDRs Kabat como mostrado nas Figuras 1, 3, 5, 7, 9 e 11 aqui, a menos que de outro modo especificado (por exemplo, uma CDR1 de AbM, etc.). Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, (isto é, qualquer um de 9G4 (SEQ ID Nos: 125- 127), 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133), 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139), 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145), 24E5 (SEQ ID Nos: 149-151), 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157), 21D9.b (SEQ ID Nos: 155-157), 21D9.c (SEQ ID Nos: 155-157), 21D9.d (SEQ ID Nos: 155-157), 21D9.e (SEQ ID Nos: 155- 157), 21A5 (SEQ ID Nos: 161-163), 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169), 10F10.1 (SEQ ID Nos: 167-169), 10F10.3 (SEQ ID Nos: 167-169) ou 10F10.4 (SEQ ID Nos: 167-169)).

[264] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[265] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui e uma VL compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. CDRs de VL são CDRs Kabat como mostrado nas Figuras 2, 4, 6, 8, 10 e 12 aqui, a menos que de outro modo especificado (por exemplo, uma CDR1 de AbM, etc.). Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui e uma VL compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4 e uma VL compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4 (isto é, qualquer um de 9G4 (SEQ ID Nos: 128- 130), 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136), 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142), 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148), 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154), 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160), 21D9.b (SEQ ID Nos: 158-160), 21D9.c (SEQ ID Nos: 158-160), 21D9.d (SEQ ID Nos: 158-160), 21D9.e (SEQ ID Nos: 158- 160), 21A5 (SEQ ID Nos: 164-166), 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172), 10F10.1 (SEQ ID Nos: 170-172), 10F10.3 (SEQ ID Nos: 170-172) ou 10F10.4 (SEQ ID Nos: 170-172)).

[266] Em algumas modalidades, um Ab para ILT4 pode compreender:

[267] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 9G4 e uma VL compreendendo a

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 9G4;

[268] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 9C8 e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 9C8;

[269] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 2H2 e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 2H2;

[270] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 25E5 e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 25E5;

[271] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 24E5 e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 24E5;

[272] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9 e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9;

[273] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.b e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.b;

[274] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.c e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.c;

[275] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.d e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.d;

[276] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.e e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.e;

[277] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21A5 e uma VL compreendendo a

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21A5;

[278] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21A5.a e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21A5.a;

[279] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10 e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10;

[280] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.1 e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10.1;

[281] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.3 e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10.3; ou

[282] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.4 e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10.4.

[283] Novamente, a Tabela de Sequências abaixo provê as sequências de região variável de cadeias pesada e leve e sequências de cadeias pesada e leve de comprimento integral listados acima.

[284] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. As sequências de VH individuais para espécies de anticorpo particulares providas aqui são listadas na Tabela de Sequências. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, (isto é, qualquer um de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ

ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91)).

[285] Em algumas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, mas com 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido nas regiões de estrutura principal da sequência de VH, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas. Em algumas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, mas com 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão nas regiões de estrutura principal da sequência de VH.

[286] Em algumas modalidades, um Ab de ILT4 compreende as CDRs de VH e VK de qualquer um dos Abs de ILT4 descritos aqui em que as CDRs compreendem 1, 2 ou 3 adições, substituições (por exemplo, substituições conservativas) ou deleção de 1, 2 ou 3 aminoácidos dentre todas as CDRs.

[287] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo as sequências de aminoácido das CDRs de VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui e compreende uma VH que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VH compreendendo uma sequência de aminoácido que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos

99% idêntica à sequência de aminoácido da VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4. Em certas modalidades, a VH do anticorpo difere daquela das sequências de VH mostradas na Tabela de Sequência devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido nas regiões de estrutura principal da sequência de VH, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas. Em certas modalidades, a VH do anticorpo difere daquela das sequências de VH mostradas na Tabela de Sequência devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão nas regiões de estrutura principal da sequência de VH.

[288] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH que consiste na sequência de aminoácido da VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[289] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, (isto é, 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-25), 9C8 (SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114)). Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo as sequências de aminoácido das CDRs de VL de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui e compreende uma VL que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à VL de qualquer um dos Abs para ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácido que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido da VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4. Em certas modalidades, a VL do anticorpo difere daquela das sequências de VL mostradas na Tabela de Sequência devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido nas regiões de estrutura principal da sequência de VL, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas. Em certas modalidades, a VL do anticorpo difere daquela das sequências de VL mostradas na Tabela de Sequências devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão.

[290] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VL consistindo na sequência de aminoácido da VL de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VL que consiste na sequência de aminoácido da VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[291] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui e compreende uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas dessas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[292] Em certas modalidades, no entanto, a VH do anticorpo é aquela de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, mas com 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido nas regiões de estrutura principal da sequência de VH, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas, e a VL é aquela de qualquer uma das mesmas espécies da lista acima. Em certas modalidades, no entanto, a VH do anticorpo é aquela de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, mas com 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão nas regiões de estrutura principal da sequência de VH.

[293] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VH e uma VL compreendendo as sequências de aminoácido da VH e da VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[294] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo as sequências de aminoácido das CDRs de VH de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui bem como uma CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo as sequências de aminoácido das CDRs de VL de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui, e também compreende uma VH e uma VL que são, cada uma, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas às VH e VL correspondentes de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, a VH e a VL do anticorpo diferem das sequências de VH e VL mostradas na Tabela de Sequências devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido nas regiões de estrutura principal das sequências, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas ou tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão.

[295] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VH e uma VL consistindo na sequência de aminoácido da VH e da VL de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende a VH e uma VL que consistem, cada uma, nas sequências de aminoácido da VH e da VL de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

[296] Um Ab de ILT4 Ab pode compreender:

[297] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 9G4 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 9G4;

[298] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 9C8 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 9C8;

[299] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 2H2 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 2H2;

[300] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 25E5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 25E5;

[301] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 24E5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 24E5;

[302] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9;

[303] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.b e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.b;

[304] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.c e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.c;

[305] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.d e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.d;

[306] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.e e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.e;

[307] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21A5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21A5;

[308] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21A5.a e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21A5.a;

[309] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10;

[310] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.1 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.1;

[311] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.3 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.3; ou

[312] uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.4 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.4.

[313] Um Ab de ILT4 pode compreender:

[314] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 9G4 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 9G4, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 9G4;

[315] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 9C8 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 9C8, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 9C8;

[316] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 2H2 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 2H2, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 2H2;

[317] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 25E5 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 25E5, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 25E5;

[318] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 24E5 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 24E5, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%,

pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 24E5;

[319] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9;

[320] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.b e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.b, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.b;

[321] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.c e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.c, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.c;

[322] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.d e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.d, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.d;

[323] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.e e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.e, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%,

pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.e;

[324] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21A5 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21A5, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21A5;

[325] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21A5.a e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21A5.a, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21A5.a;

[326] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10;

[327] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.1 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.1, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.1;

[328] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.3 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.3, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%,

pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.3; ou

[329] uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.3 e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.4, e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.4.

[330] Em algumas das modalidades acima, a VH e/ou VL pode diferir da sequência de cada uma das espécies (a) a (p) pela presença de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas. Em algumas modalidades, a VH pode compreender 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão.

[331] Um Ab de ILT4 pode compreender:

[332] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 9G4 e uma VL consistindo na VL de 9G4;

[333] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 9C8 e uma VL consistindo na VL de 9C8;

[334] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 2H2 e uma VL consistindo na VL de 2H2;

[335] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 25E5 e uma VL consistindo na VL de 25E5;

[336] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 24E5 e uma VL consistindo na VL de 24E5;

[337] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 21D9 e uma VL consistindo na VL de 21D9;

[338] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 21D9.b e uma VL consistindo na VL de 21D9.b;

[339] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de

21D9.c e uma VL consistindo na VL de 21D9.c;

[340] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 21D9.d e uma VL consistindo na VL de 21D9.d;

[341] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 21D9.e e uma VL consistindo na VL de 21D9.e;

[342] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 21A5 e uma VL consistindo na VL de 21A5;

[343] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 21A5.a e uma VL consistindo na VL de 21A5.a;

[344] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 10F10 e uma VL consistindo na VL de 10F10;

[345] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 10F10.1 e uma VL consistindo na VL de 10F10.1;

[346] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 10F10.3 e uma VL consistindo na VL de 10F10.3; ou

[347] uma VH consistindo na sequência de aminoácido da VH de 10F10.4 e uma VL consistindo na VL de 10F10.4.

[348] Em certas modalidades, um Ab para ILT4 compreende qualquer uma das regiões variáveis e/ou CDRs 1-3 de região variável dos anticorpos descritos acima e em outro local aqui, tais como

[349] uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[350] as CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[351] a VH de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[352] uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9,

21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[353] a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[354] a VH e as VLs de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[355] ou

[356] (7) a VL e a VH, com a exceção de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão ou conservativas na VH e/ou VL de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4; e o Ab de ILT4 é também um anticorpo IgG, tal como anticorpo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 ou uma forma modificada do mesmo como descrito na seção abaixo. Em algumas modalidades, a região constante tem função efetora, e em algumas modalidades, a região constante é sem efeito. Em certas modalidades, a região constante é aquela de IgG1.3 ou IgG1.1f ou outra região constante descrita aqui, por exemplo, IgG1 e IgG1.238K.

[357] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende qualquer uma das regiões variáveis e/ou CDRs 1-3 de região variável dos anticorpos descritos acima e em outro local aqui, tais como

[358] uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de:9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[359] as CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[360] a VH de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[361] uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[362] as CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[363] a VH e as VLs de: 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4;

[364] ou

[365] (7) a VL e a VH de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, com a exceção de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão ou conservativas na VH e/ou VL;

[366] e

[367] o anticorpo compreende ainda uma ou mais das características que seguem:

[368] ligação específica a hILT4, por exemplo, com uma KD de 10- 8 M, 10-9 M ou menos;

[369] falta de ligação específica a hILT2, hILT3, hILT5;

[370] falta de ligação específica a um ou mais membros das famílias LILRA e/ou LILRB;

[371] estimula ativação de célula T, por exemplo, em uma MLR, conforme medido através de proliferação de célula T ou secreção de IFN-g aumentada, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[372] estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[373] promove expressão de CD83 e CD86 em células dendríticas imaturas derivadas de monócito humanas (Mo-iDC), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[374] intensifica a secreção de IFN-γ quando da estimulação por antígeno em um ensaio de lisato de CMV, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[375] intensifica secreção de IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+ em um ensaio de alo-reação de linfócito mista (MLR) quando da estimulação de CD3, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

[376] não induz (ou dispara) ativação de basófilo;

[377] inibe ligação de HLA-A e/ou HLA-B a ILT4;

[378] tem um perfil de ligação a hILT4 como mostrado na Figura 27 ou Figura 37C;

[379] se liga a domínio do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4 (que corresponde aos aminoácidos 27-110 e 111-229 de SEQ ID NO: 107, respectivamente), tal como a uma região compreendendo (i) 70 ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou 154 (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) 425 e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), conforme determinado através de troca de hidrogênio deutério (HDX), por exemplo, como mostrado em um ensaio de HDX descrito nos Exemplos;

[380] não se liga significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos que estão localizados N-terminal para o aminoácido I70; em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 com sua sequência de sinal);

[381] compete por ligação a hILT4 com um anticorpo descrito aqui;

[382] se liga especificamente a ILT4 de cyno compreendendo SEQ ID NO: 118, por exemplo, como mostrado em um ensaio de ligação descrito nos Exemplos;

[383] promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos M1s;

[384] não induz (ou dispara) ativação de basófilo; e

[385] compreende menos de 5% de espécies de pesos moleculares alto e baixo após 3 meses de incubação a 25°C e/ou menos de 10% de espécies de pesos molecular e salto e baixo após 3 meses de incubação em 40°C.

[386] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma cadeia pesada (HC) compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, como mostrado abaixo na Tabela de Sequências (isto é, uma sequência de HC completa como provido na Tabela ou um compósito de uma sequência de VH para o anticorpo com uma sequência de região constante de HC tais como SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179, como provido na Tabela).

[387] Portanto, por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo pode compreender uma sequência de aminoácido de HC de um dos tipos abaixo, compreendendo uma sequência de aminoácido como segue:

[388] IgG1, por exemplo, 9G4.IgG1, 9G4 (SEQ ID NO: 2), 9C8 (SEQ ID NO: 4), 2H2 (SEQ ID NO: 6), 2E5 (SEQ ID NO: 8), 24E5 (SEQ ID NO: 10), 21D9 (SEQ ID NO: 12), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID

NO: 98), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 98), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 98), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 98), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 98), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 98), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98),

[389] IgG1, por exemplo, 9G4.IgG1, 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 102), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 102), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 102), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 102), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 102), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 102), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 102), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 102), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 102), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 102), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 102), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 102), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102),

[390] IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 100), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 100), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 100), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 100), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 100), 21D9 ((i) SEQ ID NO: 113, ou (ii) SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 100), 21D9.b (SEQ ID NO: 36), 21D9.c (SEQ ID NO: 38), 21D9.d (SEQ ID NO: 40), 21D9.e (SEQ ID NO: 13), 21A5 (SEQ ID NO: 15), 21A5.a (SEQ ID NO: 17), 10F10 (SEQ ID NO: 19), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100);

[391] IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 103), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 103), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 103), 2E5 (SEQ

ID NO: 63 e SEQ ID NO: 103), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 103), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 103), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 103), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 103), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 103), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 103), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 103), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 103), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103),

[392] IgG1fa.P238K (por exemplo, 9G4.IgG1fa.P238K, etc.) 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 104), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 104), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 104), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 104), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 104), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 104), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 104), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 104), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 104), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 104), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 104), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 104), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), ou

[393] IgG4 S228P (por exemplo, 9G4.IgG4 S228P, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 179), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 179), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 179), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 179), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 179), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 179), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 179), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 179), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 179), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 179), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 179), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 179), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e

SEQ ID NO: 179), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 179).

[394] Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui, a qual compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, e a sequência de aminoácido da cadeia levede qualquer um dos Abs de ILT4 providos aqui. Em certas modalidades, um Ab de ILT4 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da VH qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, que compreende uma região constante de HC de IgG1.3 (que é denotada pela nomenclatura 9G4.IgG1.3, etc.); e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia leve de qualquer um de 9G4, 9C8, 2H2, 25E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4. Em algumas modalidades, a cadeia leve é uma cadeia leve Kappa compreendendo uma sequência de aminoácido como segue: 9G4 (SEQ ID NO: 1), 9C8 (SEQ ID NO: 3), 2H2 (SEQ ID NO: 5), 2E5 (SEQ ID NO: 7), 24E5 (SEQ ID NO: 9), 21D9 (SEQ ID NO: 11), 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5 (SEQ ID NO: 14), 21A5.a (SEQ ID NO: 16), 10F10 (SEQ ID NO: 18), 10F10.1 (SEQ ID NO: 20), 10F10.3 (SEQ ID NO: 21) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 116).

[395] Um Ab de ILT4 pode compreender:

[396] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 9G4 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 9G4;

[397] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 9C8 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 9C8;

[398] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 2H2 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 2H2;

[399] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 25E5 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 25E5;

[400] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 24E5 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 24E5;

[401] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 9G4 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9;

[402] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.b e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.b;

[403] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.c e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.c;

[404] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.d e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.d;

[405] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.e e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.e;

[406] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21A5 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21A5;

[407] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21A5.a e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21A5.a;

[408] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10;

[409] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.1 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.1;

[410] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.3; ou

[411] uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.4 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.4.

[412] Um Ab de ILT4 pode compreender:

[413] uma cadeia pesada (HC) compreendendo as CDRs de HC da HC de 9G4 e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 9G4 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 9G4, respectivamente;

[414] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 9C8, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 9C8 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 9C8, respectivamente;

[415] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 2H2, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 2H2 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 2H2, respectivamente;

[416] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 25E5, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 25E5 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 25E5, respectivamente;

[417] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 24E5, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 24E5 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 24E5, respectivamente;

[418] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21D9, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21D9 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21D9, respectivamente;

[419] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21D9.b, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21D9.b e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21D9.b, respectivamente;

[420] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21D9.c, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21D9.c e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21D9.c, respectivamente;

[421] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21D9.d, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21D9.d e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21D9.d, respectivamente;

[422] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21D9.e, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21D9.e e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21D9.e, respectivamente;

[423] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21A5, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21A5 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21A5, respectivamente;

[424] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 21A5.a, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 21A5.a e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 21A5.a, respectivamente;

[425] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 10F10, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 10F10 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 10F10, respectivamente;

[426] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 10F10.1, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 10F10.1 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 10F10.1, respectivamente;

[427] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 10F10.3, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 10F10.3 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 10F10.3, respectivamente; ou

[428] uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de 10F10.3, e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs de LC de 10F10.4 e sequências de aminoácido de HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à HC e à LC de 10F10.4, respectivamente.

[429] Em algumas das modalidades acima, a HC e/ou LC pode diferir da sequência de cada uma das espécies (a) a (p) pela presença de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservativas. Em algumas das modalidades acima, a HC e/ou LC pode diferir da sequência de cada uma das espécies (a) a (p) pela presença de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de reversão.

[430] Em algumas modalidades, um Ab para ILT4 pode compreender:

[431] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 9G4 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 9G4;

[432] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 9C8 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 9C8;

[433] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 2H2 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 2H2;

[434] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 25E5 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 25E5;

[435] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 24E5 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 24E5;

[436] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21D9;

[437] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.b e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21D9.b;

[438] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.c e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21D9.c;

[439] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.d e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21D9.d;

[440] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21D9.e e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21D9.e;

[441] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21A5 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21A5;

[442] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 21A5.a e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 21A5.a;

[443] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 10F10;

[444] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.1 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 10F10.1;

[445] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.3 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 10F10.3; ou

[446] uma cadeia pesada consistindo na sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.4 e uma cadeia leve consistindo na sequência de aminoácido da cadeia leve de 10F10.4.

[447] Em algumas modalidades, um Ab de ILT4 pode compreender uma sequência de aminoácido de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de VH da presente espécie de anticorpo, mas ao invés de uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, conforme provido nas sequências de HC na presente Tabela de Sequência (e vide SEQ ID NO: 100), o anticorpo pode compreender uma sequência de região constante de cadeia pesada diferente, tal como uma região constante de IgG1 do tipo selvagem tais como aquelas providas nas SEQ ID NOs: 98 e 102-104 ou uma região constante de cadeia pesada de IgG4 ou uma região constante de IgG4 com uma substituição de S228P (numeração EU) ou qualquer uma das regiões constantes de cadeia pesada descritas na seção sobre regiões constantes que segue abaixo.

[448] Em algumas modalidades, tal Abs de ILT4 modificado possui uma ou mais das características que seguem:

[449] ligação específica a hILT4, por exemplo, com uma KD de 10- 8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos;

[450] falta de ligação específica a um, dois ou todos os três de hILT2, hILT3, hILT5;

[451] falta de ligação específica a um ou mais membros das famílias LILRA e/ou LILRB;

[452] estimula ativação de célula T, por exemplo, em um ensaio de MLR, conforme medido através de proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama aumentada; e

[453] estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos.

[454] Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, que corresponde aos aminoácidos 27-110 na sequência de SEQ ID NO: 107 (domínio 1) e 111-229 nessa 70 sequência (domínio 2), nos locais compreendendo ITRIRPEL77 (SEQ 78 ID NO: 120) e/ou VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 154 122); ou (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID 425 NO: 123) e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), conforme determinado através de troca de hidrogênio deutério (HDX), por exemplo, como mostrado em um ensaio de HDX descrito nos Exemplos. (vide Figura 27.) Regiões Constantes de Anticorpo Exemplares

[455] Em algumas modalidades, o anticorpo descrito aqui compreende uma ou mais regiões constantes humanas. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia pesada humana é de um isotipo selecionado de IgA, IgG e IgD. Em algumas modalidades, a região constante de cadeia leve humana é de um isotipo selecionado de κ e λ. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito aqui compreende uma região constante de IgG humana, tal como uma IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito aqui compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. Em algumas modalidades do tipo, um anticorpo descrito aqui compreende uma mutação S241P na região constante de IgG4 humana. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito aqui compreende uma região constante de IgG4 humana e uma cadeia leve κ humana.

[456] A escolha de região constante de cadeia pesada pode determinar se ou não um anticorpo terá função efetora in vivo. Tal função efetora, em algumas modalidades, inclui citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC), e pode resultar em morte da célula à qual o anticorpo está ligado. Em alguns métodos de tratamento, incluindo métodos de tratamento de alguns cânceres, morte de célula pode ser desejável, por exemplo, quando o anticorpo se liga a uma célula que dá suporte à manutenção ou crescimento do tumor. Células exemplares que podem dar suporte à manutenção ou crescimento de um tumor incluem, mas não estão limitadas a, as próprias células de tumor células que auxiliam no recrutamento de vasculatura para o tumor, e células que proveem ligantes, fatores de crescimento ou contrarreceptores que dão suporte ou promove crescimento de tumor ou sobrevivência de tumor. Em algumas modalidades, quando a função efetora é desejável, um anticorpo compreendendo uma cadeia pesada de IgG1 humana ou uma cadeia pesada de IgG3 humana é selecionado.

[457] Em certas modalidades, o anticorpo provido aqui é alterado para aumentar ou diminuir o grau ao qual o anticorpo é glicosilado.

Adição ou deleção de sítios de glicosilação para um anticorpo pode ser convenientemente obtida alterando a sequência de aminoácido de modo que um ou mais sítios de glicosilação são criados ou removidos.

[458] Onde o anticorpo compreende uma região Fc, o carboidrato ligado a ela pode ser alterado. Anticorpos nativos produzidos por células de mamífero compreendem tipicamente um oligossacarídeo biantenário, ramificado, que é geralmente ligado por uma ligação N a Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Vide, por exemplo, Wright e outros. TIBTECH 15:26-32 (1997). O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos, por exemplo, manose, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada a um GlcNAc no “tronco” da estrutura de oligossacarídeo biantenária. Em algumas modalidades, modificações do oligossacarídeo no anticorpo da invenção podem ser feitas a fim de criar anticorpos com certas propriedades aperfeiçoadas. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo pode ser afucosilado, por exemplo, por resíduos mutantes tal como Asn297 que são normalmente glicosilados com glicosilações contendo fucose ou através de outro meio. Em algumas modalidades, os presentes anticorpos podem compreender uma região constante de IgG1 humana afucosilada.

[459] Os anticorpos são ainda providos com oligossacarídeos bissectados, por exemplo, em que um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc do anticorpo é bisseccionado por GlcNAc. Tais anticorpos podem ter fucosilação reduzida e/ou função de ADCC aperfeiçoada. Exemplos de tais anticorpos são descritos, por exemplo, WO 2003/011878 (Jean-Mairet e outros.); Patente US No. 6.602.684 (Umana e outros); e US 2005/0123546 (Umana e outros). Anticorpos com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc são também providos. Tais anticorpos podem ter função de CDC aperfeiçoada. Tais anticorpos são descritos, por exemplo, WO

1997/30087 (Patel e outros); WO 1998/58964 (Raju, S.); e WO 1999/22764 (Raju, S.).

[460] Os anticorpos são também providos com extensões líderes amino-terminais. Por exemplo, um ou mais resíduos de aminoácido da sequência líder amino-terminal estão presentes no terminal amino de qualquer uma ou mais cadeias pesadas ou leves de um anticorpo. Uma extensao líder amino-terminal exemplar compreende ou consiste em três resíduos de aminoácido, VHS, presentes em uma ou ambas as cadeias leves de um anticorpo.

[461] A meia-vida in vivo ou no soro de polipeptídeos de ligação com alta afinidade FcRn humanos pode ser ensaiada, por exemplo, em camundongos transgênicos, em humanos ou em primatas não humanos aos quais os polipeptídeos com uma região Fc variante são administrados. Vide também, por exemplo, Petkova e outros. International Immunology 18(12):1759-1769 (2006).

[462] Em algumas modalidades da invenção, um anticorpo afucosilado faz a mediação de ADCC na presença de células efetoras humanas mais eficazmente do que um anticorpo parental que compreende fucose. Em geral, atividade de ADCC pode ser determinada usando o ensaio de ADCC in vitro como aqui revelado, mas outros ensaios e métodos para determinação de atividade de ADCC, por exemplo, em um modelo animal, etc., são compreendidos.

[463] Em certas modalidades, a região Fc é alterada substituindo pelo menos um resíduo de aminoácido com um resíduo de aminoácido diferente para alterar a(s) função(ões) efetora(s) do anticorpo. Por exemplo, um ou mais aminoácidos selecionados de resíduos de aminoácido 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320, 322, 330 e/ou 331 podem ser substituídos com um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tem uma afinidade alterada com um ligante efetor, mas retém a habilidade de ligação a antígeno do anticorpo parental. O ligante efetor para o qual afinidade é alterada pode ser, por exemplo, um receptor Fc ou o componente C1 de complemento. Essa abordagem é descrita em mais detalhes das Patentes U.S. Nos. 5.624.821 e

5.648.260, ambas de Winter e outros.

[464] Em alguns exemplos, um ou mais aminoácidos selecionados de resíduos de aminoácido 329, 331 e 322 podem ser substituídos com um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tenha ligação a C1q alterada e/ou citotoxicidade dependente do complemento (CDC) reduzida ou abolida. Essa abordagem é descrita em mais detalhes nas Patentes U.S. Nos. 6.194.551 de Idusogie e outros.

[465] Em alguns exemplos, um ou mais resíduos de aminoácido dentro das posições de aminoácido 231 e 239 são alterados para então alterar a habilidade do anticorpo em fixar complemento. Essa abordagem é descrita mais na Publicação PCT WO 94/29351 de Bodmer e outros. Em alguns exemplos, a região Fc pode ser modificada para diminuir a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou diminuir a afinidade com um receptor Fcγ através da modificação de um ou mais aminoácidos nas posições que seguem: 234, 235, 236, 238, 239, 240, 241 , 243, 244, 245, 247, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 313, 315, 320, 322, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 433, 434, 435, 436, 437, 438 ou 439. Substituições exemplares incluem 236A, 239D, 239E, 268D, 267E, 268E, 268F, 324T, 332D e 332E. Variantes exemplares incluem 239D/332E, 236A/332E, 236A/239D/332E, 268F/324T, 267E/268F, 267E/324T e 267E/268F/324T. Outras modificações de Fc que podem ser feitas em Fcs são aquelas para redução ou ablação de ligação a FcγR e/ou proteínas do complemento, dessa maneira reduzindo ou realizando ablação de funções efetoras mediadas por Fc tais como ADCC, ADCP e CDC. Modificações exemplares incluem, mas não estão limitadas a, substituições, inserções e deleções nas posições 234, 235, 236, 237, 267, 269, 325, 328, 330 e/ou 331 (por exemplo, 330 e 331), em que numeração é de acordo com o índice EU. Substituições exemplares incluem, mas não estão limitadas a, 234A, 235E, 236R, 237A, 267R, 269R, 325L, 328R, 330S e 331S (por exemplo, 330S e 331S), em que numeração é de acordo com o índice EU. Uma variante de Fc pode compreender 236R/328R. Outras modificações para redução de FcγR e interações do complemento incluem substituições 297A, 234A, 235A, 237A, 318A, 228P, 236E, 268Q, 309L, 330S, 331 S, 220S, 226S, 229S, 238S, 233P e 234V, bem como remoção da glicosilação na posição 297 por meios mutacionais ou enzimáticos ou pela produção em organismos tais como bactérias que não glicosilam proteínas. Essas e outras modificações são revistas em Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691. Por exemplo, a região constante de Fc de IgG1.3 humana contém substituições L234A, L235E e G237A. A IgG1fa.P238K (ou IgG1.P238K) contém uma substituição P238K. A IgG1.1f compreende substituições L234A, L235E, G237A, A330S e P331S.

[466] Variantes de Fc que intensificam a afinidade com um receptor inibidor FcγRIIb podem também ser usadas. Tais variantes podem prover uma proteína de fusão de Fc com atividades imunomoduladoras relacionadas a células de FcγRIIb, incluindo, por exemplo, células B e monócitos. Em uma modalidade, a variante de Fc provê afinidade seletivamente intensificada com FcγRIIb em relação a um ou mais receptores de ativação. Modificações para alterar ligação a FcγRIIb incluem uma ou mais modificações em uma posição selecionada do grupo consistindo em 234, 235, 236, 237, 239, 266, 267, 268, 325, 326, 327, 328, 330, 331 e 332, de acordo com o índice EU.

Substituições exemplares para intensificar afinidade com FcγRIIb incluem, mas não estão limitadas a, 234A, 234D, 234E, 234F, 234W, 235D, 235E, 235F, 235R, 235Y, 236D, 236N, 237A, 237D, 237N, 239D, 239E, 266M, 267D, 267E, 268D, 268E, 327D, 327E, 328F, 328W, 328Y, 330S, 331S e 332E. Substituições exemplares incluem 235Y, 236D, 239D, 266M, 267E, 268D, 268E, 328F, 328W e 328Y. Outras variantes de Fc para intensificação de ligação a FcγRIIb incluem 235Y/267E, 236D/267E, 239D/268D, 239D/267E, 267E/268D, 267E/268E, e 267E/328F.

[467] Outras modificações para intensificação de interações de FcγRIIb e complemento incluem, mas não estão limitadas a, substituições 298 A, 333A, 334A, 326A, 2471, 339D, 339Q, 280H, 290S, 298D, 298V, 243L, 292P, 300L, 396L, 3051 e 396L. Essas e outras modificações são revistas em Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691. Modificações de Fc que aumentam ligação a um receptor de Fcγ incluem modificações de aminoácido em qualquer uma ou mais de posições de aminoácido 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 279, 280, 283, 285, 298, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 312, 315, 324, 327, 329, 330, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 379, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ou 439 da região Fc, em que a numeração dos resíduos na região Fc é aquela do índice EU como na Publicação de Patente No. WO 00/42072.

[468] Opcionamlente, a região Fc pode compreender um resíduo de aminoácido de ocorrência não natural em posições adicionais e/ou alternativas conhecidas do versado na técnica (vide, por exemplo, Pat. U.S. Nos. 5.624.821; 6.277.375; 6.737.056; 6.194.551; 7.317.091;

8.101.720; Publicações de Patente PCX WO 00/42072; WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO

05/040217, WO 05/092925 e WO 06/020114).

[469] As afinidades e propriedades de ligação de uma região Fc com seu ligante podem ser determinadas através de uma variedade de métodos de ensaio in vitro (ensaios com base bioquímica ou imunológica) conhecidos na técnica incluindo, mas não limitado a, métodos de equilíbrio (por exemplo, ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA) ou radioimunoensaio (RIA)) ou cinética (por exemplo, análise BIACORE) e outros métodos tais como ensaios de ligação indireta, ensaios de inibição competitiva, transferência de energia por ressonância de fluorescência (FRET), eletroforese em gel e cromatografia (por exemplo, filtragem em gel). Esses e outros métodos podem utilizar um marcador em um ou mais dos componentes sendo examinados e/ou empregar uma variedade de métodos de detecção incluindo, mas não limitado a, marcadores cromogênios, fluorescentes, luminescentes ou isotópicos. Uma descrição detalhada de afinidades e cinética de ligação pode ser encontrada em Paul, W. E., ed., Fundamental immunology, 4ª Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999), que foca em interações anticorpo-imunógeno.

[470] Em certas modalidades, o anticorpo é modificado para aumentar sua meia-vida biológica. Várias abordagens são possíveis. Por exemplo, isso pode ser feito aumentando a afinidade de ligação da região Fc com FcRn, por exemplo, um ou mais de mais dos resíduos que seguem podem ser mutados: 252, 254, 256, 433, 435, 436, como descrito na Pat. U.S. No. 6,277,375. Substituições exemplares específicas incluem uma ou mais do que segue: T252L, T254S e/ou T256F. Alternativamente, para aumentar a meia-vida biológica, o anticorpo pode ser alterado dentro da região CH1 ou CL para conter um epítopo de ligação a receptor de salvamento obtido de duas alças de um domínio CH2 de uma região Fc de uma IgG, como descrito nas Patentes U.S. Nos. 5.869.046 e 6.121.022 de Presta e outros. Outras variantes exemplares que aumentam ligação a FcRn e/ou melhoram as propriedades farmacocinéticas incluem substituições nas posições 259, 308, 428 e 434, incluindo, por exemplo, 2591, 308F, 428L, 428M, 434S, 4341 1. 434F, 434Y e 434X1. Outras variantes que aumentam ligação de Fc a FcRn incluem: 250E, 250Q, 428 L, 428F, 250Q/428L (Hinton e outros, 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216, Hinton e outros, 2006 Journal of Immunology 176:346-356), 256A, 272A, 286A, 305A, 307A, 307Q, 31 1A, 312A, 376A, 378Q, 380A, 382A, 434A (Shields e outros, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604), 252F, 252T, 252Y, 252W, 254T, 256S, 256R, 256Q, 256E, 256D, 256T, 309P, 31 1 S, 433R, 433S, 4331, 433P, 433Q, 434H, 434F, 434Y, 252Y/254T/256E, 433K/434F/436H, 308T/309P/311S (Dall Acqua e outros, Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall'Acqua e outros, 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524). Outras modificações para modulação de ligação a FcRn são descritas em Yeung e outros, 2010, J. Immunol., 182:7663-7671.

[471] Em certas modalidades, isotipos de IgG híbrida com características biológicas particulares podem ser usados. Por exemplo, uma variante híbrida de IgG1/IgG3 pode ser construída substituindo as posições de IgG1 na região CH2 e/ou CH3 com os aminoácidos de IgG3 nas posições onde dois isotipos diferem. Portanto, um anticorpo IgG variante híbrido pode ser construído, o qual compreende uma ou mais substituições, por exemplo, 274Q, 276K, 300F, 339T, 356E, 358M, 384S, 392N, 397M, 4221, 435R e 436F. Em algumas modalidades descritas aqui, uma variante híbrida de IgG1/IgG2 pode ser construída substituindo as posições IgG2 na região CH2 e/ou CH3 com aminoácidos de IgG1 nas posições onde dois isotipos diferem. Desta maneira um anticorpo IgG variante híbrido pode ser construído, o qual compreende uma ou mais substituições, por exemplo, uma ou mais das substituições de aminoácido que seguem: 233E, 234L, 235L, -236G (se referindo a uma inserção de uma glicina na posição 236) e 327A.

[472] Além disso, os sítios de ligação em IgG1 humana para FcγRI, FcγRII, FcγRIII e FcRn foram mapeados e variantes com ligação aperfeiçoada foram descritas (vide Shields, R.L. e outros. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604). Mutações específicas nas posições 256, 290, 298, 333, 334 e 339 foram mostradas melhorar a ligação a FcγRIII. Ainda, os mutantes de combinação que seguem foram mostrados melhorar ligação a FcγRIII: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A e 298A/E333A/K334A, o que foi mostrado exibir ligação a FcγRIIIa e atividade de ADCC intensificadas (Shields e outros, 2001). Outras variantes de IgG1 com ligação fortemente intensificada com FcγRIIIa foram identificadas, incluindo variantes com mutações S239D/I332E e S239D/I332E/A330L que mostraram o maior aumento em afinidade com FcγRIIIa, uma diminuição em ligação a FcγRIIIb e atividade citotóxica forte em macacos cynomolgus (Lazer e outros, 2006). Introdução de mutações triplas em anticorpos tais como alemtuzumabe (específico para CD52), trastuzumabe (específico para HER2/neu), rituximabe (específico para CD20) e cetuximabe (específico para EGFR) se traduziu em atividade de ADCC bastante intensificada in vitro, e a variante S239D/I332E mostrou uma capacidade aumentada em depletar células B em macacos (Lazar e outros, 2006). Ainda, mutantes de IgG1 contendo mutações L235V, F243L, R292P, Y300L e P396L que exibiram ligação intensificada com FcγRIIIa e concomitantemente intensificaram atividade de ADCC em camundongos transgênicos expressando FcγRIIIa humano em modelos de malignidades de célula B e câncer de mama foram identificados (Stavenhagen e outros, 2007; Nordstrom e outros, 2011). Outros Fc mutantes que podem ser usados incluem: S298A/E333A/L334A, S239D/I332E, S239D/I332E/A330L, L235V/F243L/R292P/Y300L/ P396L e M428L/N434S.

[473] Em certas modalidades, é escolhido um Fc que tem ligação reduzida a FcγRs. Um Fc exemplar, por exemplo, Fc de IgG1, com ligação a FcγR reduzida compreende as três substituições de aminoácido que seguem: L234A, L235E e G237A.

[474] Em certas modalidades, é escolhido um Fc que tem fixação de complemento reduzida. Um Fc exemplar, por exemplo, Fc de IgG1, com fixação de complemento reduzida tem as duas substituições de aminoácido que seguem: A330S e P331S.

[475] Em certas modalidades, é escolhido um Fc que não tem essencialmente nenhuma função efetora, isto é, ele tem ligação reduzida com FcγRs e fixação de complemento reduzida. Um Fc exemplar, por exemplo, Fc de IgG1, que é sem efetor compreende as cinco mutações que seguem: L234A, L235E, G237A, A330S e P331S.

[476] Quando usando um domínio constante de IgG4, ele pode incluir a substituição S228P, que imita a sequência de dobra em IgG1 e desta maneira estabiliza moléculas de IgG4.

[477] Modificações de Fc descritas no WO 2017/087678 ou WO2016081746 podem também ser usadas.

[478] Em certas modalidades, a glicosilação de um anticorpo é modificada. Por exemplo, um anticorpo aglicosilado pode ser feito (isto é, o anticorpo não tem glicosilação). Glicosilação pode ser alterada para, por exemplo, aumentar a afinidade do anticorpo com antígeno. Tais modificações de carboidrato podem ser realizadas através de, por exemplo, alteração de um ou mais sítios de glicosilação dentro da sequência de anticorpo. Por exemplo, uma ou mais substituições de aminoácido podem ser feitas, as quais resultam em eliminação de um ou mais sítios de glicosilação de estrutura principal da região variável para dessa maneira eliminar glicosilação nesse sítio. Tal aglicosilação pode aumentar a afinidade do anticorpo com antígeno. Tal abordagem é descrita em mais detalhes nas Patentes U.S. Nos. 5.714.350 e

6.350.861 de Co e outros.

[479] Glicosilação da região constante em N297 pode ser evitada mutando o resíduo N297 para um outro resíduo, por exemplo, N297A, e/ou mutante um aminoácido adjacente, por exemplo, 298, para dessa maneira reduzir glicosilação em N297.

[480] Adicionalmente ou alternativamente, pode ser feito um anticorpo que tem um tipo de glicosilação alterado, tal como um anticorpo hipofucosilado tendo quantidades reduzidas de resíduos fucosila ou um anticorpo tendo estruturas de GlcNac em bissetriz aumentadas. Tais padrões de glicosilação alterados foram demonstrados aumentar a habilidade de ADCC de anticorpos. Tais modificações de carboidrato podem ser realizadas através de, por exemplo, expressão do anticorpo em uma célula hospedeira com maquinário de glicosilação alterado. Células com maquinário de glicosilação alterado foram descritas na técnica e podem ser usadas como células hospedeiras nas quais expressar anticorpos recombinantes descritos aqui para dessa maneira produzir um anticorpo com glicosilação alterada. Por exemplo, a EP 1.176.195 de Hanai e outros descreve uma linhagem celular com um gene FUT8 funcionalmente rompido, que codifica uma fucosil transferase, de modo que anticorpos expressos em tal linhagem celular exibem hipofucosilação. A Publicação PCT WO 03/035835 de Presta descreve uma linhagem de célula CHO variante, células Led 3, com habilidade reduzida em ligar fucose a carboidratos ligados a Asn(297), também resultando em hipofucosilação de anticorpos expressos nessa célula hospedeira (vide também Shields, R.L. e outros, (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740). A Publicação PCT WO 99/54342 de Umana e outros descreve linhagens celulares engenheiradas para expressar glicosil transferases de modificação de glicoproteína {por exemplo, beta(l,4)-N- acetilglucosaminiltransferase III (GnTIII)) de modo que anticorpos expressos em linhagens de célula engenheiradas exibem estruturas de GlcNac bissetrizes aumentadas que resulta em atividade de ADCC aumentada dos anticorpos (vide também Umana e outros (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180).

[481] Uma outra modificação dos anticorpos descritos aqui é peguilação. Um anticorpo pode ser peguilado para, por exemplo, aumentar a meia-vida biológica (por exemplo, soro) do anticorpo. Para peguilar um anticorpo, o anticorpo, ou fragmento do mesmo, é tipicamente reagido com polietileno glicol (PEG), tal como um derivado éster ou aldeído reativo de PEG, sob condições em que um ou mais grupos de PEG passam a ficar ligados ao anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em algumas modalidaides, a peguilação é realizada por meio de uma reação de acilação ou uma reação de alquilação com uma molécula de PEG reativa (ou um polímero solúvel em água reativo análogo). Como aqui usado, o termo “polietileno glicol” pretende compreender qualquer uma das formas de PEG que foram usadas para derivatizar outras proteínas, tal como mono (CI-CIO) alcoxi- ou ariloxi- polietileno glicol ou polietileno glicol-maleimida. Em certas modalidades, o anticorpo a ser peguilado é um anticorpo aglicosilado. Métodos para peguilação de proteínas são conhecidos na técnica e podem ser aplicados aos anticorpos descritos aqui. Vide, por exemplo, EP 0 154 316 de Nishimura e outros e EP 0 401 384 de Ishikawa e outros.

[482] Modalidades de anticorpo exemplares específicas aqui são listadas mais nas seções que seguem. Modalidades se relacionando ao anticorpo 21D9.e:

[483] Modalidade 1: um anticorpo isolado (“Ab”) que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de

VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70.

[484] Modalidade 2: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano, em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o anticorpo estimula ativação de célula T (ou potencializa uma resposta de célula T), por exemplo, (i) em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme evidenciado, por exemplo, por proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama ou produção de TNF-alfa aumentada, ou (ii) em uma célula T: Ensaio de CHO-OKT3-ILT4 (por exemplo, como descrito no Exemplo 5).

[485] Modalidade 3: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab aumenta ativação de célula T em uma alo-MLR de monócito:célula T.

[486] Modalidade 4: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157,

respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab aumenta a secreção de IFN-gama a partir de PBMCs quando da estimulação por antígeno em um ensaio de lisato de citomegalovírus (CMV).

[487] Modalidade 5: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano, em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o anticorpo potencializa secreção de TNF-alfa a partir de macrófagos, por exemplo, macrófagos diferenciados.

[488] Modalidade 6: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o anticorpo aumenta a expressão de CD83 e/ou CD86 em células dendríticas derivadas de monócito(MoDCs).

[489] Modalidade 7: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano, em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de

VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o anticorpo inibe ligação de hILT4 a uma célula T e/ou uma contraparte de ligação, por exemplo, HLA-A e/ou HLA-B.

[490] Modalidade 8: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab (a) se liga ao domínio do tipo Ig 1 de hILT4 e/ou à região do hILT4 70 compreendendo ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121) e/ou 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122), conforme determinado através de HDX; e/ou (b) interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Lys43, Ile49, Thr50 e Arg51 de hILT4 maduro, conforme determinado através de pegada de carbono.

[491] Modalidade 9: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab inibe ligação de (ou compete com) um anticorpo compreendendo uma HC compreendendo SEQ ID NO: 12 ou 13 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11 e/ou inibe ligação de um anticorpo compreendendo VH e VL de 21D9.IgG1.1f e/ou 21D9.e.IgG1.3, a hILT4.

[492] Modalidade 10: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab se liga a hILT4 com uma KD de 10-8 M ou 10-9 M ou menos.

[493] Modalidade 11: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab se liga a ILT4 de cyno com uma KD de 10-7 M ou 10-8 M ou menos e/ou promove expressão de CD80, CD83 e/ou CD86 em células dendríticas derivadas de monócito de cyno.

[494] Modalidade 12: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de

VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab não se liga significantemente às proteínas humanas LILRA1, LILRA2, LILRA3, LILRA4, LILRA6, ILT2, ILT3, ILT5 ou LIR8.

[495] Modalidade 13: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos de M1.

[496] Modalidade 14: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab não induz (ou dispara) ativação de basófilo.

[497] Modalidade 15: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou

(ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que uma composição compreendendo o Ab compreende menos de 5% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação a 25°C e/ou menos de 10% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação em 40°C.

[498] Modalidade 16: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70, em que o Ab compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG, por exemplo, uma IgG1 (por exemplo, SEQ ID NO: 98 ou 102), IgG1.1f (SEQ ID NO: 103), IgG1.3 (SEQ ID NO: 100), IgGP238K (SEQ ID NO: 104), IgG4 ou IgG4.S228P (SEQ ID NO: 179).

[499] Modalidade 17: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 13 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[500] Modalidade 18: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende duas cadeias pesadas, cada cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 13, e duas cadeias leves, cada cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11, em que, opcionalmente, uma ou ambas das cadeias pesadas compreendem uma lisina C-terminal.

[501] Modalidade 19: anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 13 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11, em que,

opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal, e em que o Ab compreende pelo menos uma ligação dissulfeto ligando as cadeias pesadas.

[502] Modalidade 20: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 176 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[503] Modalidade 21: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 177 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[504] Modalidade 22: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 178 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 11, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[505] Modalidade 23: um ácido nucleico isolado ou conjunto de ácidos nucleicos codificando o anticorpo de qualquer uma das Modalidades 1-22.

[506] Modalidade 24: uma célula hospedeira para produção de qualquer um dos anticorpos das Modalidades 1-22, por exemplo, compreendendo o ácido nucleico isolado ou conjunto de ácidos nucleicos da Modalidade 23.

[507] Modalidade 25: um método de tratamento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz do anticorpo de qualquer uma das Modalidades 1-22, ou de um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo

SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente; (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 13 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 11.

[508] Modalidade 26: um método de tratamento de câncer em um indivíduo, o qual compreende administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de:

[509] (1) o anticorpo de qualquer uma das Modalidades 1-19, ou (2) um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente; (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 13 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 11, e (B) um antagonista de PD-1 ou PD-L1, tal como um anticorpo antagonista se ligando a PD-1 humano ou PD-L1 humano, por exemplo, nivolumabe, pembrolizumabe, cemiplimabe, toripalimabe, sintilimabe, atezolizumabe, durvalumabe ou avelumab.

[510] Modalidade 27: uma composição compreendendo:

[511] (1) o anticorpo de qualquer uma das Modalidades 1-19 ou (2) um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 155, 156 e 157, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 158, 159 e 160, respectivamente; (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 80 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 70 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 13 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 11 e

[512] um antagonista de PD-1 ou PD-L1, tal como um anticorpo antagonista se ligando a PD-1 humano ou PD-L1 humano, por exemplo, nivolumabe, pembrolizumabe, cemiplimabe, toripalimabe, sintilimabe, atezolizumabe, durvalumabe ou avelumab. Modalidades se relacionando ao anticorpo 21D5.a:

[513] Modalidade 1: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86.

[514] Modalidade 2: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o anticorpo estimula ativação de célula T (ou potencializa uma resposta de célula T), por exemplo, (i) em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme evidenciado, por exemplo, por proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama ou produção de TNF-alfa aumentada, ou (ii) em uma célula T: Ensaio de CHO-OKT3-ILT4 (por exemplo, como descrito no Exemplo 5).

[515] Modalidade 3: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab aumenta ativação de célula T em uma alo-MLR de monócito:célula T.

[516] Modalidade 4: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab intensifica secreção de IFN-gama a partir de PBMCs quando da estimulação de antígeno em um ensaio de lisato de CMV.

[517] Modalidade 5: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o anticorpo potencializa secreção de TNF-alfa a partir de macrófagos, por exemplo, macrófagos diferenciados.

[518] Modalidade 6: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o anticorpo aumenta a expressão de CD83 e/ou CD86 em células dendríticas derivadas de monócito(Mo-DCs).

[519] Modalidade 7: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o anticorpo inibe ligação de hILT4 a uma célula T e/ou uma contraparte de ligação, por exemplo, HLA-A e/ou HLA-B.

[520] Modalidade 8: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab(a) se liga ao domínio do tipo Ig de hILT4 e/ou à região de hILT4 154 compreendendo : ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ 425 ID NO: 123) e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124) , conforme determinado através de HDX; e/ou (b) interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Gly117, Val119, Try120, Leu134, Lys136, Gln149, Pro150, Ile159, Ser161, Val162 ,Gly163, Pro164, Pro167, His173, Try178, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro, determinado pela pegada de carbono.

[521] Modalidade 9: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab inibe ligação de (ou compete com) um anticorpo compreendendo uma HC compreendendo SEQ ID NO: 15 ou 17 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 14 ou 16, respectivamente, e/ou inibe ligação de um anticorpo compreendendo VH e VL de 21D5 ou 21D5.a a hILT4.

[522] Modalidade 10: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab se liga a hILT4 com uma KD de 10-8 M ou 10-9 M ou menos.

[523] Modalidade 11: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e

CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab se liga a ILT4 de cyno com uma KD de 10-7 M ou 10-8 M ou menos e/ou promove expressão de CD80, CD83 e/ou CD86 em células dendríticas derivadas de monócito de cyno.

[524] Modalidade 12: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab não se liga significantemente às proteínas humanas LILRA1, LILRA2, LILRA4, LILRA5, LILRA6, ILT2, ILT3, ILT5 ou LIR8.

[525] Modalidade 13: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos de M1.

[526] Modalidade 14: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab não induz (ou dispara) ativação de basófilo.

[527] Modalidade 15: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que uma composição compreendendo o Ab compreende menos de 5% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação a 25°C e/ou menos de 10% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação em 40°C.

[528] Modalidade 16: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86, em que o Ab compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG, por exemplo, uma IgG1 (por exemplo, SEQ ID NO: 98 ou 102), IgG1.1f (SEQ ID NO: 103), IgG1.3 (SEQ ID NO: 100), IgGP238K (SEQ ID NO:

104), IgG4 ou IgG4.S228P (SEQ ID NO: 179).

[529] Modalidade 17: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 17 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 16, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[530] Modalidade 18: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende duas cadeias pesadas, cada cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 17, e duas cadeias leves, cada cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 16, em que, opcionalmente, uma ou ambas das cadeias pesadas compreendem uma lisina C-terminal.

[531] Modalidade 19: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 17 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 16, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal, e em que o Ab compreende pelo menos uma ligação dissulfeto ligando as cadeias pesadas.

[532] Modalidade 20: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 15 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 14, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[533] Modalidade 21: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 17 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 16, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[534] Modalidade 22: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 15 ou 17 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 14 ou 16, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C- terminal.

[535] Modalidade 23: um ácido nucleico isolado ou conjunto de ácidos nucleicos codificando o anticorpo de qualquer uma das Modalidades 1-22.

[536] Modalidade 24: uma célula hospedeira para produção de qualquer um dos anticorpos das Modalidades 1-22, por exemplo, compreendendo o ácido nucleico isolado ou conjunto de ácidos nucleicos da Modalidade 23.

[537] Modalidade 25: um método de tratamento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 17 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 16.

[538] Modalidade 26: um método de tratamento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de (A) um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 17 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 16 e (B) um antagonista de PD-1 ou PD-L1, tal como um anticorpo antagonista se ligando a PD-1 humano ou PD-L1 humano, por exemplo, nivolumabe, pembrolizumabe, cemiplimabe, toripalimabe, sintilimabe, atezolizumabe, durvalumabe ou avelumab.

[539] Modalidade 27: uma composição compreendendo (A) um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 161, 162 e 163, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 164, 165 e 166, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 87 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 86 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 17 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 16 e (B) um antagonista de PD-1 ou PD-L1, tal como um anticorpo antagonista se ligando a PD-1 humano ou PD-L1 humano, por exemplo, nivolumabe, pembrolizumabe, cemiplimabe, toripalimabe, sintilimabe, atezolizumabe, durvalumabe ou avelumab. Modalidades relacionadas a anticorpos 10F10, 10F10.1, 10F10.3 e 10F10.4:

[540] Modalidade 1: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114.

[541] Modalidade 2: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o anticorpo estimula ativação de célula T (ou potencializa uma resposta de célula T), por exemplo, (i) em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme evidenciado, por exemplo, por proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama ou produção de TNF-alfa aumentada, ou (ii) em uma célula T: Ensaio de CHO-OKT3- ILT4 (por exemplo, como descrito no Exemplo 5).

[542] Modalidade 3: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab aumenta ativação de célula T em uma alo-MLR de monócito:célula T.

[543] Modalidade 4: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab intensifica secreção de IFN-gama a partir de PBMCs quando da estimulação de antígeno em um ensaio de lisato de CMV.

[544] Modalidade 5: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab inibe ligação de hILT4 a uma célula T e/ou uma contraparte de ligação, por exemplo, HLA-A e/ou HLA-B.

[545] Modalidade 6: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o anticorpo potencializa secreção de TNF-alfa a partir de macrófagos, por exemplo, macrófagos diferenciados.

[546] Modalidade 7: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o anticorpo aumenta a expressão de CD83 e/ou CD86 em células dendríticas derivadas de monócito (MoDCs).

[547] Modalidade 8: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab (i) se liga ao domínio 2 do tipo Ig de hILT4, próximo do domínio 1 do tipo Ig e/ou (ii) interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Glu42, Lys43, Gly76, Cys77, Leu88, Pro91, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro, conforme determinado através de pegada de carbono.

[548] Modalidade 9: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab inibe ligação de (ou compete com) um anticorpo compreendendo uma HC compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 18, 20, 21 ou 116, respectivamente e/ou inibe ligação de um anticorpo compreendendo VH e VL de 10F10, 10F10.1, 10F10.3 e/ou 10F10.4, a hILT4.

[549] Modalidade 10: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab se liga a hILT4 com uma KD de 10-8 M ou 10-9 M ou menos.

[550] Modalidade 11: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab se liga a ILT4 de cyno com uma KD de 10-7 M ou 10-8 M ou menos e/ou promove expressão de CD80, CD83 e/ou CD86 em células dendríticas derivadas de monócito de cyno.

[551] Modalidade 12: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos de M1.

[552] Modalidade 13: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab não induz (ou dispara) ativação de basófilo.

[553] Modalidade 14: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que uma composição compreendendo o Ab compreende menos de 5% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação a 25°C e/ou menos de 10% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação em 40°C.

[554] Modalidade 15: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab não se liga significantemente às proteínas humanas LILRA1, LILRA2, LILRA3, LILRA4, LILRA5, LILRA6, ILT2, ILT3, ILT5 ou LIR8.

[555] Modalidade 16: um anticorpo isolado que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114, em que o Ab compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG, por exemplo, uma IgG1 (por exemplo, SEQ ID NO: 98 ou 102), IgG1.1f (SEQ ID NO: 103), IgG1.3 (SEQ ID NO: 100), IgGP238K (SEQ ID NO: 104), IgG4 ou IgG4.S228P (SEQ ID NO: 179).

[556] Modalidade 17: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 18, 20, 21 ou 116, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C- terminal.

[557] Modalidade 18: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 18, 20, 21 ou 116, em que, opcionalmente, uma ou ambas das cadeias pesadas compreendem uma lisina C-terminal.

[558] Modalidade 19: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 18, 20, 21 ou 116, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C- terminal, e em que o Ab compreende pelo menos uma ligação dissulfeto ligando as cadeias pesadas.

[559] Modalidade 20: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 18, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[560] Modalidade 21: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 20, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[561] Modalidade 22: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 21, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[562] Modalidade 23: um anticorpo isolado que se liga a hILT4, em que o Ab compreende uma cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 19 e uma cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 116, em que, opcionalmente, a cadeia pesada compreende uma lisina C-terminal.

[563] Modalidade 24: Um ácido nucleico isolado ou conjunto de ácidos nucleicos codificando o anticorpo de qualquer uma das Modalidades 1-23.

[564] Modalidade 25: Uma célula hospedeira para produção de qualquer um dos anticorpos das Modalidades 1-23, por exemplo, compreendendo o ácido nucleico isolado ou conjunto de ácidos nucleicos da Modalidade 24.

[565] Modalidade 26: Um método de tratamento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo

SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 19 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 18, 20, 21 ou 116.

[566] Modalidade 27: Um método de tratamento de câncer em um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 19 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 18, 20, 21 ou 116 e (B) um antagonista de PD-1 ou PD-L1, tal como um anticorpo antagonista se ligando a PD-1 humano ou PD-L1 humano, por exemplo, nivolumabe, pembrolizumabe, cemiplimabe, toripalimabe, sintilimabe, atezolizumabe, durvalumabe ou avelumab.

[567] Modalidade 28: uma composição compreendendo (A) um anticorpo que se liga a ILT4 humano (hILT4), em que o Ab compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que (i) a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo SEQ ID Nos: 167, 168 e 169, respectivamente, e a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo SEQ ID Nos: 170, 171 e 172, respectivamente e/ou (ii) a cadeia pesada compreende VH compreendendo SEQ ID NO: 91 e a cadeia leve compreende VL compreendendo SEQ ID NO: 90, 94, 96 ou 114 e/ou (iii) a cadeia pesada compreende SEQ ID NO: 19 a cadeia leve compreende SEQ ID NO: 18,

20, 21 ou 116 e (B) um antagonista de PD-1 ou PD-L1, tal como um anticorpo antagonista se ligando a PD-1 humano ou PD-L1 humano, por exemplo, nivolumabe, pembrolizumabe, cemiplimabe, toripalimabe, sintilimabe, atezolizumabe, durvalumabe ou avelumab. Ácidos Nucleicos e Células Hospedeiras

[568] São também providos ácidos nucleicos codificando um anticorpo ou uma cadeia pesada ou leve do mesmo ou uma porção do mesmo. Ácidos nucleicos exemplares são providos na Tabela de Sequências. Qualquer ácido nucleico que seja pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% _ a um ácido nucleico na Tabela de Sequências é compreendido aqui. Composições compreendendo ácidos nucleicos codificando um anticorpo provido aqui são também compreendidas, bem como células compreendendo esses e métodos para preparação de anticorpos, compreendendo cultura de uma célula transformada com um ácido nucleico codificando um anticorpo para ILT4, e isolamento do anticorpo a partir do meio ou da célula. Métodos de Tratamento usando Abs de Ligação a ILT4 e Composições Farmacêuticas Relacionadas

[569] Os anticorpos descritos aqui podem ser usados, por exemplo, para tratamento de câncer. Em algumas modalidades, métodos para tratamento de câncer são providos, os quais compreendem administrar uma quantidade eficaz de um anticorpo descrito aqui a um paciente. Em algumas modalidades, o Abs pode disparar ou intensificar uma resposta imune no paciente, tal como uma resposta imune específica de antígeno. Em algumas modalidades, o Abs pode estimular atividade de célula T. Em algumas modalidades, o Abs pode inibir o crescimento de pelo menos um tumor no paciente.

[570] São providos aqui métodos para tratamento de um indivíduo tendo câncer, os quais compreendem administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo para ILT4 descrito aqui, de modo que o indivíduo é tratado. Um anticorpo para ILT4 pode ser usado sozinho. Alternativamente, um anticorpo para ILT4 pode ser usado em conjunto com um outro agente, como descrito mais abaixo.

[571] Cânceres podem ser cânceres com tumores sólidos ou malignidades do sangue (tumores líquidos).

[572] Exemplos não limitantes de cânceres para tratamento incluem carcinoma de célula escamosa, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de não pequenas células, câncer de pulmão de não pequenas células escamoso (NSCLC), NSCLC não escamoso, glioma, câncer gastrintestinal, câncer renal (por exemplo, carcinoma de células claras), câncer ovariano, câncer de fígado, câncer colorretal, câncer endometrial, câncer de rim (por exemplo, carcinoma de célula renal (RCC)), câncer de próstata (por exemplo, adenocarcinoma de próstata refratário a hormônio), câncer de tireoide, neuroblastoma, câncer pancreático, glioblastoma (glioblastoma multiforme), câncer cervical, câncer de estômago, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, carcinoma de cólon e câncer de cabeça e pescoço (ou carcinoma), câncer gástrico, tumor de célula germinativa, sarcoma pediátrico, assassino natural sinonasal, melanoma (por exemplo, melanoma maligno metastático, tal como melanoma maligno cutâneo ou intraocular), câncer de osso, câncer de pele, câncer uterino, câncer da região anal, câncer de testículo, carcinoma dos tubos falopianos, carcinoma do endométrio, carcinoma do colo do útero, carcinoma da vagina, carcinoma da vulva, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sistema endócrino, câncer da glândula paratireoide, câncer da glândula adrenal, sarcoma de tecido mole, câncer da uretra, câncer do pênis, tumores sólidos da infância, câncer do ureter, carcinoma da pélvis renal, neoplasma do sistema nervoso central (SNC), linfoma do SNC primário, angiogênese de tumor, tumor do eixo espinhal, câncer de cérebro, glioma do tronco cerebral, adenoma da pituitária, sarcoma de Kaposi, câncer epidermoide, câncer de célula escamosa, linfoma de célula T, cânceres ambientalmente induzidos incluindo aqueles induzidos por asbestos, cânceres relacionados a vírus ou cânceres de origem viral (por exemplo, papiloma vírus humano (tumores relacionados a ou tendo origem em HPV)) e males hematológicos derivados ou das duas principais linhagens de célula sanguínea, isto é, a linhagem de célula mieloide (que produz granulócitos, eritrócitos, trombócitos, macrófagos e mastócitos) ou linhagem de célula linfoide (que produz células B, T, NK e do plasma), tais como todos os tipos de leucemias, linfomas e mielomas, por exemplo, leucemias aguda, crônica, linfocítica e/ou mielógena, tais como leucemia aguda (ALL), leucemia mielógena aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL) e leucemia mielógena crônica (CML), AML não diferenciada (MO), leucemia mieloblástica (MI), leucemia mieloblástica (M2; com maturação celular), leucemia promielocítica (M3 ou variante de M3 [M3V], leucemia mielomonocítica (M4 ou variante de M4 com eosinofilia [M4E], leucemia monocítica (M5), eritroleucemia (M6), leucemia megacarioblástica (M7), sarcoma granulocítico isolado e cloroma; linfomas, tais como linfoma de Hodgkin (HL), linfoma não Hodgkin (NHL), malignidade hematológica de célula B, por exemplo, linfomas de célula B, linfomas de célula T, linfoma linfoplasmacitoide, linfoma de célula B monocitoide, linfoma de tecido linfoide associado à mucosa (MALT), linfoma anaplástico de grandes células (por exemplo, Ki 1+), linfoma/leucemia de célula T adulto, linfoma de célula do manto, linfoma de célula T angio imunoblástico, linfoma angiocêntrico, linfoma de célula T intestinal, linfoma de célula B mediastinal primário, linfoma linfoblástico T precursor, T-linfoblástico; e linfoma/leucemia (TLbly/T- ALL), linfoma de célula T periférico, linfoma linfoblástico, distúrbio linfoproliferativo pós-transplante, linfoma histiocítico verdadeiro, linfoma do sistema nervoso central primário, linfoma de efusão primário, linfoma de célula B, linfoma linfoblástico (LBL), tumores hematopoiéticos de linhagem linfoide, leucemia linfoblástica aguda, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, linfoma histiocítico difuso (DHL), linfoma imunoblástico de grandes células, linfoma linfoblástico B precursor, linfoma cutâneo de célula T (CTLC) (também conhecido como micose fungoide ou síndrome de Sezary) e linfoma linfoplasmacitoide (LPL) com macroglobulinemia de Waldenstrom; mielomas, tal como mieloma de IgG, mieloma de cadeia leve, mieloma não secretor, mieloma latente (também chamado mieloma indolente), plasmocitoma solitário e mielomas múltiplos, leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma de célula pilosa; tumores hematopoiéticos de linhagem mieloide, tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma e rabdomiossarcoma; seminoma, teratocarcinoma, tumores do sistema nervoso central e do periférico, incluindo astrocitoma, schwannomas; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, rabdomiossarcoma e osteossarcoma; e outros tumores, incluindo melanoma, xeroderma pigmentoso, queratoacantoma, seminoma, câncer folicular da tireoide e teratocarcinoma, tumores hematopoiéticos de linhagem linfoide, por exemplo, tumores de célula T e célula B, incluindo, mas não limitado a, distúrbios de célula T tal como leucemia T-prolinfocítica (T-PLL), incluindo do tipo de célula pequena e célula cerebriforme; leucemia linfocítica granular grande (LGL) do tipo de célula T; linfoma hepatosplênico T-NHL a/d; linfoma de célula T periférico/pós-tímico (subtipos pleomórfico e imunoblástico); linfoma de célula T angiocêntrico (nasal); câncer da cabeça ou pescoço, câncer renal, câncer retal, câncer da glândula da tireoide; linfoma mieloide agudo, bem como quaisquer combinações dos ditos cânceres.

Os métodos descritos aqui podem ser também usados para tratamento de cânceres metastáticos, cânceres refratários, não ressecáveis (por exemplo,

cânceres refratários à imunoterapia anterior, por exemplo, com um anticorpo para CTLA-4 ou PD-1 de bloqueio) e/ou cânceres recorrentes.

[573] Em certas modalidades, um anticorpo descrito aqui é administrado a pacientes tendo um câncer que exibiu uma resposta inadequada a, ou progrediu sob, um tratamento anterior, por exemplo, um tratamento anterior com um fármaco de imuno-oncologia ou imunoterapia. Em algumas modalidades, o câncer é refratário ou resistente a um tratamento anterior, ou intrinsicamente refratário ou resistente (por exemplo, refratário a um antagonista da via de PD-1) ou estado de resistência ou refratário é adquirido. Por exemplo, um anticorpo descrito aqui pode ser administrado a indivíduos que não são responsivos ou não suficientemente responsivos a uma primeira terapia ou que têm progressão de doença seguindo tratamento, por exemplo, tratamento com antagonista da via anti-PD-1, ou sozinha ou em combinação com uma outra terapia (por exemplo, com uma terapia antagonista da vida anti-PD-1). Em outras modalidades, um anticorpo descrito aqui é administrado a pacientes que não receberam anteriormente (isto é, foram tratados com) um agente de imuno- oncologia, por exemplo, um antagonista da via de PD-1. Combinações com Agentes Imunoestimulantes

[574] Em algumas modalidades, um anticorpo como descrito aqui, por exemplo, um anticorpo para ILT4 descrito aqui, é administrado em combinação com e pelo menos um agente imunoestimulante. Por exemplo, os agentes terapêuticos podem ser infundidos juntos ou injetados mais ou menos ao mesmo tempo. Em algumas modalidades, o anticorpo e o pelo menos um agente imunoestimulante são administrados sequencialmente. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo é administrado sequencialmente antes ou após pelo menos um agente imunoestimulante de modo que os dois agentes terapêuticos são administrados 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias ou duas semanas de intervalo.

[575] Em algumas modalidades, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três doses, pelo menos cinco doses ou pelo menos dez doses do anticorpo são administradas antes da administração de pelo menos um agente imunoestimulante. Em algumas modalidades, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três doses, pelo menos cinco doses ou pelo menos dez doses de pelo menos um agente imunoestimulante são administradas antes da administração do anticorpo. Em algumas modalidades, a última dose de agente imunoestimulante é administrada pelo menos um, dois, três, cinco dias ou mais ou dez ou uma, duas, três, cinco, doze ou vinte e quatro semanas antes da primeira dose do anticorpo. Em algumas modalidades, a última dose do anticorpo é administrada pelo menos um, dois, três, cinco dias ou dez ou uma, duas, três, cinco, doze ou vinte e quatro semanas antes da primeira dose do pelo menos um agente imunoestimulante. Em algumas modalidades, um indivíduo recebeu, ou está recebendo, terapia com pelo menos um agente imunoestimulante, e um anticorpo para ILT4 é adicionado ao regime terapêutico.

[576] Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um antagonista de um inibidor da ativação de células imunes, tais como células T, enquanto em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agonista de um estimulador da ativação de uma célula imune, tal como uma célula T. Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um antagonista de CTLA4, LAG-3, PD- 1, PD-L1, Galectina 1, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD25, CD69, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, B7-H3, B7-H4, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM1, TIM3, TIM4, IL-6, IL-10, TGFβ, VEGF, KIR, receptor de adenosina A2A, PI3Kdelta ou IDO. Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agonista de B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD27, CD40, CD40L, DR3, CD28H, IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, IFNα, STING ou um agonista de receptor do tipo Toll tal como um agonista de TLR2/4. Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agente que se liga a um outro membro da família B7 de proteínas ligadas à membrana tais como B7-1, B7-2, B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7- H4 e B7-H6. Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agente que se liga a um membro da família de receptor TNF ou uma molécula coestimuladora ou coinibidora se ligando a um membro da família de receptor TNF tais como CD40, CD40L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4- 1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, EDA1, EDA2, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DeR3, HVEM, VEGL/TL1A, TRAMP/DR3, TNFR1, TNFβ, TNFR2, TNFα, 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY ou NGFβ.

Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulador compreende um agente que antagoniza ou inibe uma citocina que inibe ativação de célula T tais como IL-6, IL-10, TGFβ, VEGF.

Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agonista de uma citocina que estimula ativação de célula T tais como IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 e IFNα.

Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um antagonista de uma quimiocina, tal como CXCR2, CXCR4, CCR2 ou CCR4. Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um anticorpo.

Em algumas modalidades, o pelo menos um agente imunoestimulante pode compreender uma vacina, tal como uma vacina se direcionando à mesotelina ou vacina atenuada para câncer de listeria tal como CRS-207.

[577] Por exemplo, um anticorpo para ILT4 descrito aqui poderia ser administrado com um ou mais dos agentes que seguem:

[578] Um antagonista (agente inibidor ou de bloqueio) de uma proteína que inibe ativação de célula T (por exemplo, inibidores de ponto de checagem imune) tais como CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2 e LAG-3, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectina-1, TIGIT, CD113, GPR56, B7-H3, B7-H4, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1,TIM-3 e TIM-4; e/ou (2) um agonista de uma proteína que estimula ativação de célula T, tais como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, GITR, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, DR3 e CD28H.

[579] Agentes exemplares que podem ser combinados com anticorpos para ILT4 descritos aqui para tratamento de câncer incluem: YERVOY® (ipilimumabe) ou Tremelimumabe (para CTLA-4), galiximabe (para B7.1), BMS-936558 (para PD-1), MK-3475 (para PD-1), atezolizumabe (TECENTRIQ®), Avelumabe, Durvalumabe, AMP224 (para B7DC), BMS-936559 (para B7-H1), MPDL3280A (para B7-H1), MEDI-570 (para ICOS), AMG557 (para B7H2), MGA271 (para B7H3), IMP321 (para LAG-3), BMS-663513 (para CD137), PF-05082566 (para CD137), CDX-1127 (para CD27), anti-OX40 (Providence Health Services), huMAbOX40L (para OX40L), Atacicepte (para TACI), CP- 870893 (para CD40), Lucatumumabe (para CD40), Dacetuzumabe (para CD40), Muromonabe-CD3 (para CD3); anticorpos anti-GITR MK4166, TRX518, Medi1873, INBRX-110, LK2-145, GWN-323, GITRL- Fc ou qualquer combinação dos mesmos.

[580] Outras moléculas que podem ser combinadas com anticorpos para ILT4 para o tratamento de câncer incluem antagonistas de receptores inibidores em células NK ou agonistas de receptores de ativação em células NK, por exemplo, antagonistas de KIR (por exemplo, lirilumabe).

[581] Ativação de célula T também pode ser regulada por citocinas solúveis. Em algumas modalidades, anticorpos para ILT4 podem ser administrados em combinação com antagonistas de citocinas que pretendem inibir ativação de célula T ou agonistas de citocinas que estimulam ativação de célula T. Por exemplo, anticorpos para ILT4 podem ser usados em combinação com (i) antagonistas (ou agentes inibidores ou de bloqueio) de proteínas da família IgSF ou família B7 ou da família TNF que inibem ativação de célula T ou antagonistas de citocina que inibem ativação de célula T (por exemplo, IL-6, IL-10, TGF- β, VEGF; “imunossupressores e citocinas”) e/ou (ii) agonistas de receptores estimuladores para a família IgSF, família B7 ou a família TNF ou de citocinas que estimulam ativação de célula T.

[582] Ainda outros agentes para terapias de combinação incluem agentes que inibem ou depletam macrófagos ou monócitos, incluindo, mas não limitado a, antagonistas de CSF-1R tais como anticorpos antagonistas de CSF-1R incluindo RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, W013/87699, W013/119716, WO13/132044) ou FPA-008 (WO11/140249; W013169264; WO14/036357).

[583] Anticorpos para ILT4 podem ser também administrados com agentes que inibem sinalização de TGF-β.

[584] Agentes adicionais que podem ser combinados com um anticorpo para ILT4 incluem agentes que intensificam a apresentação de antígeno de tumor, por exemplo, vacinas de célula dendrítica, vacinas celulares de secreção de GM-CSF, oligonucleotídeos CpG e imiquimode ou terapias que intensificam a imunogenicidade de células de tumor (por exemplo, antraciclinas).

[585] Ainda outras terapias que podem ser combinadas com um anticorpo para ILT4 incluem terapias que depletam ou bloqueiam célula Treg, por exemplo, um agente que se liga especificamente a CD25.

[586] Uma outra terapia que pode ser combinada com um anticorpo para ILT4 é uma terapia que inibe uma enzima metabólica tal como indolamina dioxigenase (IDO), dioxigenase, arginase e óxido nítrico sintetase.

[587] Uma outra classe de agentes que pode ser usada com um anticorpo para ILT4 inclui agentes que inibem a formação de adenosina, por exemplo, inibidores de CD73, ou inibem o receptor de adenosina A2A.

[588] Outras terapias que podem ser combinadas com um anticorpo para ILT4 para tratamento de câncer incluem terapias que revertem/previnem anergia ou exaustão de célula T e terapias que disparam uma imunoativação inata e/ou inflamação em um sítio de tumor.

[589] Outras terapias que podem ser combinadas com um anticorpo para ILT4 para tratamento de câncer incluem terapias que bloqueiam IL-8, por exemplo, com HuMax®-IL8.

[590] Um anticorpo para ILT4 podem ser combinado com mais de um agente de imuno-oncologia, e pode ser, por exemplo, combinado com uma abordagem combinatorial que é pretendida se direcionar a elementos múltiplos da via imune, tais como uma ou mais das que seguem: uma terapia que intensifica apresentação de antígeno de tumor (por exemplo, vacina de célula dendrítica, vacinas celulares de secreção de GM-CSF, oligonucleotídeos CpG, imiquimode); uma terapia que inibe regulagem imune negativa, por exemplo, através de inibição de CTLA-4 e/ou via PD1/PD-L1/PD-L2 e/ou depleção ou bloqueio de Tregs ou outras células imunossupressoras; uma terapia que estimula regulagem imune positiva, por exemplo, com agonistas que estimulam a CD-137, OX-40 e/ou CD40 ou via GITR e/ou estimulam função efetora de célula T; uma terapia que aumenta sistemicamente a frequência de células T antitumor; uma terapia que depleta ou inibe Tregs, tais como

Tregs no tumor, por exemplo, usando um antagonista de CD25 (por exemplo, daclizumabe) ou através de depleção de esfera anti-CD25 ex vivo; uma terapia que impacta a função de células supressoras mieloides no tumor, uma terapia que intensifica imunogenicidade de células de tumor (por exemplo, antraciclinas); transferência de célula T ou célula NK adotiva incluindo células geneticamente modificadas, por exemplo, células modificadas por receptores de antígeno quiméricos (terapia CAR-T); uma terapia que inibe uma enzima metabólica tal como indolamina dioxigenase (IDO), dioxigenase, arginase ou óxido nítrico sintetase; uma terapia que reverte/previne anergia ou exaustão de célula T; uma terapia que dispara uma imunoativação inata e/ou inflamação em um sítio de tumor; administração de citocinas imunoestimuladoras; ou bloqueio de citocinas imunossupressoras.

[591] Anticorpos para ILT4 descritos aqui podem ser usados junto com um ou mais de agentes agonísticos que ligam receptores coestimuladores positivos, agentes de bloqueio que atenuam sinalização através de receptores inibidores, antagonistas e um ou mais agentes que aumentam sistemicamente a frequência de células T antitumor, agentes que superam vias imunossupressoras distintas dentro do microambiente de tumor (por exemplo, bloqueiam envolvimento de receptor inibidor (por exemplo, interações PD-L1/PD- 1), depletam ou inibem Tregs (por exemplo, usando um anticorpo monoclonal anti-CD25 (por exemplo, daclizumabe) ou através de depleção de esfera anti-CD25 ex vivo), inibem enzimas metabólicas tal como IDO ou revertem/previnem anergia ou exaustão de célula T) e agentes que disparam imunoativação inata e/ou inflamação em sítios de tumor.

[592] Em certas modalidades, um anticorpo para ILT4 é administrado a um indivíduo junto com um inibidor de BRAF se o indivíduo for positivo para mutação BRAF V600.

[593] Antagonistas de PD-1 adequados para uso na terapia de combinação descrita aqui incluem, sem limitação, ligantes, anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais e anticorpos biespecíficos) e agentes multivalentes. Em uma modalidade, o antagonista de PD-1 é uma proteína de fusão, por exemplo, uma proteína de fusão Fc, tal como AMP-244. Em uma modalidade, o antagonista de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 ou anti-PD-L1.

[594] Um anticorpo anti-PD-1 exemplar é nivolumabe (BMS- 936558) ou um anticorpo que compreende as CDRs ou regiões variáveis de um de anticorpos 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 7D3, 5F4 e 4A11 descritos no WO 2006/121168. Em certas modalidades, um anticorpo anti-PD-l é MK-3475 (Lambrolizumabe) descrito no WO2012/145493; AMP-514 descrito no WO 2012/145493; ou PDR001. Anticorpos para PD-1 conhecidos adicionais e outros inibidores de PD-1 incluem aqueles descritos nos WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, Patentes U.S. Nos.

7.635.757 e 8.217.149, e Publicação de Patente U.S. No. 2009/0317368. Qualquer um dos anticorpos anti-PD-1 revelados no WO2013/173223 pode ser também usado. Um anticorpo anti-PD-1 que compete por ligação com, e/ou se liga ao mesmo epítopo em PD-1 que, um desses anticorpos pode ser também usado em tratamentos de combinação.

[595] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 útil para a terapia de combinação é BMS-936559 (referido como 12A4 no WO 2007/005874 e Patente U.S. No. 7,943,743) ou um anticorpo que compreende as CDRs ou regiões variáveis de 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7 e 13G4, que são descritas na Publicação PCT WO 07/005874 e Patente U.S. No. 7.943.743. Em certas modalidades, um anticorpo anti-PD-L1 é MEDI4736 (também conhecido como durvalumabe e Anti-B7-H1), MPDL3280A (também conhecido como atezolizumabe e RG7446), MSB0010718C (também conhecido como avelumabe; WO2013/79174), ou rHigM12B7. Qualquer um dos anticorpos anti-PD-L1 revelados nos WO2013/173223, WO2011/066389, WO2012/145493, Patentes U.S. Nos. 7.635.757 e

8.217.149 e Publicação U.S. No. 2009/145493 pode ser também usado. Anticorpos anti-PD-L1 que competem com e/ou se ligam ao mesmo epítopo que aquele de qualquer uma dessas modalidades podem ser também usados em tratamentos de combinação.

[596] Em certas modalidades, o anticorpo para ILT4 da invenção pode ser usado com um antagonista de CTLA-4, por exemplo, um anticorpo anti-CTLA-4. Em uma modalidade, um anticorpo anti-CTLA-4 é um anticorpo selecionado do grupo de: YERVOY® (ipilimumabe ou anticorpo 10D1, descrito na Publicação PCT WO 01/14424), tremelimumabe (antes ticilimumabe, CP-675,206), anticorpo monoclonal ou um anti-CTLA-4 descrito em qualquer uma das publicações que seguem: WO 98/42752; WO 00/37504; U.S. Pat. No. 6,207,156; Hurwitz e outros (1998) Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071; Camacho e outros (2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract No. 2505 (anticorpo CP-675206); e Mokyr e outros (1998) Cancer Res. 58:5301-5304. Qualquer um dos anticorpos anti-CTLA-4 revelados no WO2013/173223 pode ser também usado.

[597] Em algumas modalidades, um anticorpo para ILT4 da invenção é usado em combinação com um antagonista de LAG3. Exemplos de anticorpos anti-LAG3 incluem anticorpos compreendendo as CDRs ou regiões variáveis de anticorpos 25F7, 26H10, 25E3, 8B7, 11F2 ou 17E5, que são descritos na Publicação de Patente U.S. No. US2011/0150892, WO10/19570 e WO2014/008218. Em uma modalidade, um anticorpo anti-LAG-3 é BMS-986016. Outros anticorpos anti-LAG-3 reconhecidos na técnica que podem ser usados incluem IMP731 e IMP-321, descritos na US 2011/007023, WO08/132601 e

WO09/44273. Anticorpos anti-LAG-3 que compete com e/ou se ligam ao mesmo epítopo que aquele de qualquer uma dessas modalidades podem ser também usados em tratamentos de combinação.

[598] Em algumas modalidades, um anticorpo para ILT4 da invenção pode ser administrado em combinação com um agonista de CD137 (4-1BBB), tal como um anticorpo para CD137 agonístico. Anticorpos para CD137 adequados incluem, por exemplo, urelumabe ou PF-05082566 (W012/32433).

[599] Em algumas modalidades, um anticorpo para ILT4 pode ser administrado em combinação com um agonista de OX40, tal como um anticorpo para OX40 agonístico. Anticorpos para OX40 adequados incluem, por exemplo, MEDI-6383, MEDI-6469 ou MOXR0916 (RG7888; WO06/029879).

[600] Em uma modalidade, um anticorpo para ILT4 é administrado em combinação com um agonista de CD40, tal como um anticorpo para CD40 agonístico. Em certas modalidades, o agente de imuno-oncologia é um antagonista de CD40, tal como um anticorpo para CD40 antagonístico. Anticorpos para CD40 adequados incluem, por exemplo, lucatumumabe (HCD122), dacetuzumabe (SGN-40), CP-870,893 ou Chi Lob 7/4.

[601] Em uma modalidade, um anticorpo para ILT4 é administrado em combinação com um agonista de CD27, tal como um anticorpo para CD27 agonístico. Anticorpos para CD27 adequados incluem, por exemplo, varlilumabe (CDX-1127).

[602] Em certas modalidades, o anticorpo para ILT4 é administrado junto com um anticorpo anti-GITR, por exemplo, um anticorpo tendo as sequências de CDR de 6C8, por exemplo, um anticorpo humanizado tendo as CDRs de 6C8, como descrito, por exemplo, no WO2006/105021; um anticorpo compreendendo as CDRs de um anticorpo anti-GITR descrito noWO2011/028683; um anticorpo compreendendo as CDRs de um anticorpo anti-GITR descrito na JP2008278814, um anticorpo compreendendo as CDRs de um anticorpo anti-GITR descrito no WO2015/031667, WO2015/187835, WO2015/184099, WO2016/054638, WO2016/057841 ou WO2016/057846 ou outro anticorpo anti-GITR descrito ou referido aqui.

[603] Em algumas modalidades, um anticorpo para ILT4 é administrado em combinação com MGA271 (para B7H3) (WO11/109400).

[604] Em algumas modalidades, um anticorpo para ILT4 é administrado em combinação com um antagonista de KIR, tal como lirilumabe.

[605] Em algumas modalidaides, um anticorpo para ILT4 é administrado em combinação com um antagonista de IDO. Antagonistas de IDO adequados incluem, por exemplo, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), indoximode, NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237) ou F001287.

[606] Em algumas modalidaides, um anticorpo para ILT4 é administrado em combinação com um agonista de receptor do tipo Toll, por exemplo, um agonista de TLR2/4 (por exemplo, Bacillus Calmette- Guerin); um agonista de TLR7 (por exemplo, Hiltonol ou Imiquimode); um agonista de TLR7/8 (por exemplo, Resiquimode); ou um agonista de TLR9 (por exemplo, CpG7909).

[607] Em uma modalidade, um ILT4 é administrado em combinação com um inibidor de TGF-β, por exemplo, GC1008, LY2157299, TEW7197 ou IMC-TR1. Terapia de Combinação Adicional

[608] O presente Abs pode ser também provido antes, substancialmente contemporâneo com ou após outros modos de tratamento, por exemplo, cirurgia, quimioterapia, terapia de radiação ou administração de um agente biológico, tal como um outro anticorpo terapêutico. Em algumas modalidades, o câncer recorreu ou progrediu seguindo uma terapia selecionada de cirurgia, quimioterapia e terapia de radiação ou uma combinação dos mesmos. Por exemplo, um anticorpo para ILT4 como aqui descrito poderia ser administrado como terapia adjunta quando há um risco que micrometástases possam estar presentes e/ou a fim de reduzir o risco de um relapso.

[609] Para tratamento de câncer, as combinações podem ser administradas em conjunto com um ou mais agentes anticâncer adicionais, tal como um agente quimioterapêutico, um agente inibidor de crescimento, vacina anticâncer tal como uma varina para terapia genética, agentes antiangiogênese e/ou composição antineoplástica. Exemplos não limitantes de agente quimioterapêutico, agente inibidor de crescimento, vacina anticâncer, agente antiangiogênese e composição antineoplástica que podem ser usados em combinação com os anticorpos da presente invenção são providos abaixo sob “Definições”.

[610] Em algumas modalidades, um fármaco anti-inflamatório pode ser administrado com a combinação, tal como um fármaco anti- inflamatório esteroidal ou um não esteroidal (NSAID). Em casos onde é desejável tornar células aberrantemente proliferativas quiescentes em conjunto com ou antes do tratamento com anticorpos para ILT4 descritos aqui, hormônios e esteroides (incluindo análogos sintéticos), tais como 17a-Etinilestradiol, Dietilstilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Propionato de dromostanolona, Testolactona, Megestrolacetato, Metilprednisolona, Metil-testosterona, Prednisolona, Triamcinolona, Clorotrianiseno, Hidroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramustina, Medroxiprogesteronaacetato, Leuprolida, Flutamida, Toremifeno, ZOLADEX®, podem ser também administrados ao paciente. Quando empregando os métodos ou composições descritos aqui, outros agentes usados na modulação de crescimento ou metástase de tumor em um cenário clínico, tais como antimiméticos, podem também ser administrados conforme desejado.

[611] Os anticorpos descritos aqui podem ser também combinados com um agente imunogênico, tais como células cancerosas, antígenos de tumor purificados (incluindo proteínas recombinantes, peptídeos e moléculas de carboidrato), células e células transfectadas com genes codificando citocinas imunoestimuladoras (He e outros (2004) J. Immunol. 173:4919-28). Exemplos não limitantes de vacinas para tumor que podem ser usadas incluem peptídeos de antígenos de melanoma, tais como peptídeos de gp100, antígenos MAGE, Trp-2, MART1 e/ou tirosinase ou células de tumor transfectadas para expressar a citocina GM-CSF (discutida mais abaixo).

[612] Um anticorpo para ILT4 descrito aqui pode ser também combinado com um protocolo de vacinação. Muitas estratégias experimentais para vacinação contra tumores foram criadas (vide Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; vide também Restifo, N. e Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Quinta Edição). Em uma dessas estratégias, uma vacina é preparada usando células de tumor autólogas ou alogeneicas. Essas vacinas celulares foram mostradas ser mais eficazes quando as células de tumor são transduzidas para expressar GM-CSF. GM-CSF foi mostrado ser um ativador potente de apresentação de antígeno para vacinação de tumor (Dranoff e outros (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43).

[613] O estudo de expressão de gene e padrões de expressão de gene em larga escala em vários tumores levou à definição dos chamados antígenos específicos de tumor (Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7). Em muitos casos, esses antígenos específicos de tumor são antígenos de diferenciação expressos nos tumores e na célula a partir da qual o tumor se originou, por exemplo, antígenos de melanócitos gp100, antígenos MAGE e Trp-2. Mais importante, muitos desses antígenos podem ser mostrados ser os alvos de células T específicas de tumor encontradas no hospedeiro. Inibição de ILT4 pode ser usada em conjunto com uma coleção de proteínas e/ou peptídeos recombinantes expressos em um tumor a fim de gerar uma resposta imune para essas proteínas. Essas proteínas são normalmente vistas pelo sistema imune como autoantígenos e é, portanto, tolerante a elas. O antígeno de tumor pode incluir a proteína telomerase, que é requerida para a síntese de telômeros de cromossomos e que é expressa em mais de 85% de cânceres humanos e em apenas um número limitado de tecidos somáticos (Kim e outros, (1994) Science 266: 2011-2013). Antígenos de tumor podem ser também “neoantígenos” expressos em células de câncer devido a mutações somáticas que alteram a sequência de proteína ou criam proteínas de fusão entre duas sequências não relacionadas (isto é, bcr-abl no cromossomo Philadelphia) ou idiotipo de tumores de célula B.

[614] Outras vacinas para tumor podem incluir as proteínas de vírus implicadas em cânceres humanos tais como Papiloma Vírus Humano (HPV), Vírus da Hepatite (HBV e HCV) e Herpes Vírus Sarcoma de Kaposi (KHSV). Uma outra forma de antígeno específico de tumor que pode ser usada em conjunto com Abs para ILT4 são proteínas de choque térmico purificadas (HSP) isoladas do próprio tecido de tumor. Essas proteínas de choque térmico contêm fragmentos de proteínas das células de tumor e essas HSPs são altamente eficientes na administração a células apresentando antígeno para elicitação de imunidade tumoral (Suot & Srivastava (1995) Science 269: 1585-1588; Tamura e outros (1997) Science 278: 117-120).

[615] Células dendríticas (DC) são células apresentando antígeno potentes que podem ser usadas para iniciar respostas específicas de antígeno. DCs podem ser produzidas ex vivo e carregadas com vários antígenos de proteína e peptídeo bem como extratos de célula de tumor (Nestle e outros (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DCs podem ser também transduzidas através de meios genéticos para expressar esses antígenos de tumor também. DCs foram também fundidas diretamente a células de tumor para os propósitos de imunização (Kugler e outros (2000) Nature Medicine 6:332-336). Como um método de vacinação, imunização com DC pode ser combinada com inibição de ILT4 para ativar respostas antitumor mais potentes. Tratamentos de Doença Infecciosa

[616] Métodos descritos aqui também podem ser usados para tratar pacientes que foram expostos a toxinas ou patógenos particulares. Portanto, a presente invenção compreende métodos de tratamento de uma doença infecciosa em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo um anticorpo como aqui descrito, por exemplo, um anticorpo para ILT4, de modo que o indivíduo é tratado para a doença infecciosa. Similar à sua aplicação a tumores como acima discutido, inibição de ILT4 mediada por anticorpo pode ser usada sozinha, ou como um adjuvante, em combinação com vacinas, para estimular a resposta imune a patógenos, toxinas e autoantígenos. Exemplos de patógenos para os quais essa abordagem terapêutica seria particularmente útil incluem patógenos para os quais atualmente não existe nenhuma vacina eficaz ou patógenos para os quais vacinas convencionais são menos do que completamente eficazes. Esses incluem, mas não estão limitados a, HIV, Hepatite (A, B & C), Gripe, Herpes, Giardia, Malária, Leishmania, Staphylococcus aureus,

Pseudomonas aeruginosa. Inibição de ILT4 pode ser útil contra infecções estabelecidas por agentes tal como HIV que apresentam antígenos alterados durante o curso das infecções.

[617] Alguns exemplos de vírus patogênicos que causam infecções que podem ser tratáveis através dos métodos descritos aqui incluem HIV, hepatite (A, B ou C), herpes vírus (por exemplo, VZV, HSV- 1, HAV-6, HSV-II e CMV, vírus Epstein Barr), adenovírus, vírus da gripe, flavivírus, ecovírus, rinovírus, vírus coxsackie, coronavírus, vírus sincicial respiratório, vírus da caxumba, rotavírus, vírus do sarampo, vírus da rubéola, parvovírus, vírus vaccínia, vírus HTLV, vírus da dengue, papilomavírus, vírus molluscum, poliovírus, vírus da raiva, vírus JC e vírus da encefalite arboviral.

[618] Alguns exemplos de bactérias patogênicas que causam infecções que podem ser tratáveis através dos métodos descritos aqui incluem clamídia, bactérias rickettsiais, micobactérias, staphylococci, streptococci, pneumonococci, meningococci e gonococci, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, legionella, diphtheria, salmonella, bacilos, cólera, tétano, botulismo, anthrax, peste, leptospirose e bactérias da doença de Lyme.

[619] Alguns exemplos de fungos patogênicos que causam infecções que podem ser tratáveis através dos métodos descritos aqui incluem Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Gênero Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum.

[620] Alguns exemplos de parasitas patogênicos que causam infecções que podem ser tratáveis através dos métodos descritos aqui incluem Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii, e Nippostrongylus brasiliensis.

[621] Em todos os métodos acima, inibição de ILT4 pode ser combinada com outras formas de imunoterapia, por exemplo, aquelas descritas aqui, tal como tratamento com citocina (por exemplo, interferon, GM-CSF, G-CSF, IL-2) ou terapia com anticorpo biespecífica, que pode prover apresentação de antígenos de tumor intensificada (vide, por exemplo, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444- 6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123). Vias de Administração e Carreadores

[622] Em várias modalidades, os anticorpos podem ser administrados in vivo através de várias vias, incluindo, mas não limitado a, intravenosa (i.v.), oral, intra-arterial, parenteral, intranasal, intramuscular, intracardíaca, intraventricular, intratraqueal, bucal, retal, intraperitoneal, intradermal, tópica, transdermal e intratecal ou então através de implantação ou inalação. As composições-objeto podem ser formuladas em preparações em formas sólida, semissólida, líquida ou gasosa, incluindo, mas não limitado a, comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, unguentos, soluções, supositórios, enemas, injeções, inalantes e aerossóis. Uma molécula de ácido nucleico codificando um anticorpo pode ser revestida em micropartículas de ouro e administrada intradermalmente através de um dispositivo de bombardeamento de partícula, ou “pistola de gene”, como descrito na literatura (vide, por exemplo, Tang e outros, Nature 356:152-154 (1992)). A formulação e a via de administração apropriadas podem ser selecionadas de acordo com a aplicação pretendida.

[623] Em várias modalidades, composições compreendendo anticorpos são providas em formulações com uma ampla variedade de carreadores farmaceuticamente aceitáveis (vide, por exemplo,

Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel e outros, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe e outros, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)). Vários carreadores farmaceuticamente aceitáveis, que incluem veículos, adjuvantes e diluentes, estão disponíveis. Além disso, várias substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de ajuste do pH e tamponamento, agentes de ajuste da tonicidade, estabilizadores, agentes umectantes e similar, estão também disponíveis. Carreadores exemplares não limitantes incluem solução salina, solução salina tamponada, dextrose, água, glicerol, etanol e combinações dos mesmos.

[624] Em várias modalidades, composições compreendendo anticorpos podem ser formuladas para injeção, incluindo administração subcutânea, dissolvendo, suspendendo ou emulsificando-as em um solvente aquoso ou não aquoso, tais como óleos vegetais ou outros, glicerídeos de ácido alifático sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores ou propileno glicol; e, se desejado, com aditivos convencionais tais como solubilizadores, agentes isotônicos, agentes de suspensão, agentes emulsificantes, estabilizadores e conservantes. Em várias modalidades, as composições podem ser formuladas para inalação, por exemplo, usando propelentes aceitáveis pressurizados tais como diclorodifluormetano, propano, nitrogênio e similar. As composições podem ser formuladas, em várias modalidades, em microcápsulas de liberação sustentada, tais como com polímeros biodegradáveis ou não biodegradáveis. Uma formulação biodegradável exemplar não limitante inclui polímero de ácido poli láctico-ácido glicólico. Uma formulação não biodegradável exemplar não limitante inclui um éster de ácido graxo de poliglicerina. Certos métodos de fabricação de tais formulações são descritos, por exemplo, na EP 1 125 584 A1.

[625] Pacotes e estojos farmacêuticos compreendendo um ou mais recipientes, cada um contendo uma ou mais doses de um anticorpo ou combinação de anticorpos, são também providos. Em algumas modalidaides, uma dosagem unitária é provida, em que a dosagem unitária contém uma quantidade predeterminada de uma composição compreendendo um anticorpo ou combinação de anticorpos, com ou sem um ou mais agentes adicionais. Em algumas modalidades, tal dosagem unitária é fornecida em seringa pré-cheia de uso único para injeção. Em várias modalidades, a composição contida na dosagem unitária pode compreender solução salina, sacarose ou similar; um tampão, tal como fosfato, ou similar; e/ou formulado dentro de uma faixa de pH estável e eficaz. Alternativamente, em algumas modalidades, a composição pode ser provida como um pó liofilizado que pode ser reconstituído quando da adição de um líquido apropriado, por exemplo, água estéril. Em algumas modalidades, a composição compreende uma ou mais substâncias que inibem agregação de proteína, incluindo, mas não limitado a, sacarose e arginina. Em algumas modalidades, uma composição da invenção compreende heparina e/ou um proteoglicano.

[626] As composições farmacêuticas são administradas em uma quantidade eficaz para tratamento ou profilaxia da indicação específica. A quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente dependente do peso do indivíduo sendo tratado, sua condição física ou de saúde, a extensao da condição a ser tratada ou a idade do indivíduo sendo tratado. Em geral, anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 10 μg/kg de peso corporal a cerca de 100 μg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 50 μg/kg de peso corporal a cerca de 5 μg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 10 μg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 20 μg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 0,5 μg/kg de peso corporal a cerca de 20 μg/kg de peso corporal por dose.

[627] As composições de anticorpo podem ser administradas conforme necessário a indivíduos. Determinação da frequência de administração pode ser feita por versados na técnica, tal como um médico acompanhante com base em considerações da condição sendo tratada, idade do indivíduo sendo tratado, severidade da condição sendo tratada, estado geral de saúde do indivíduo sendo tratado e similar. Em algumas modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada a um indivíduo uma ou mais vezes. Em várias modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada ao indivíduo uma vez por mês, menos de uma vez por mês, tal como, por exemplo, a cada dois meses ou a cada três meses. Em outras modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada mais de uma vez por mês, tal como, por exemplo, a cada três semanas, a cada duas semanas ou toda semana. Em algumas modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada uma vez por 1, 2, 3, 4 ou 5 semanas. Em algumas modalidades, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada duas vezes ou três vezes por semana. Uma dose eficaz de um anticorpo é administrada ao indivíduo pelo menos uma vez. Em algumas modalidaides, a dose eficaz de um anticorpo pode ser administrada múltiplas vezes, incluindo por períodos de pelo menos um mês, pelo menos seis meses ou pelo menos um ano.

[628] Em certas modalidades, a combinação do anticorpo para ILT4 e um segundo agente discutida aqui pode ser administrada concomitantemente como uma composição única em um carreador farmaceuticamente aceitável ou concomitantemente como composições separadas com o anticorpo para ILT4 e o segundo agente em um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a combinação do anticorpo para ILT-4 e o segundo agente pode ser administrada sequencialmente. A administração dos dois agentes pode começar em momentos que são, por exemplo, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias ou uma ou mais semanas de intervalo ou administração do segundo agente pode iniciar, por exemplo, 30 minutos, 60 minutos, 09 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias ou uma ou mais semanas após o primeiro agente ter sido administrado.

EXEMPLOS

[629] Os exemplos discutidos abaixo pretendem ser puramente exemplares da invenção e não devem ser considerados limitar a invenção de modo algum. Os exemplos não pretendem representar que os experimentos abaixo são todos ou os únicos experimentos realizados. Foram feitos esforços para assegurar a precisão com relação a números usados (por exemplo, quantidades, temperatura, etc.), mas alguns erros experimentais e desvios devem ser considerados. A menos que de outro modo indicado, partes são partes em peso, peso molecular é peso molecular médio, temperatura está em graus Centígrados e pressão está na ou próximo da atmosférica. EXEMPLO 1: geração de anticorpos que se ligam a ILT4 humano

[630] Anticorpos monoclonais para ILT4 anti-humanos (anticorpos para ILT4 ou anticorpos para hILT4) foram gerados usando camundongos transgênicos que expressam genes de anticorpo humano. Anticorpos monoclonais integralmente humanos para ILT4 humano foram gerados imunizando 2 tipos de animais transgênicos de imunoglobulina humana. Camundongos KM [M/K] foram imunizados com proteína recombinante hILT4-mFc, que era composta da porção extracelular de hILT4 com um marcador de Fc de camundongo C- terminal. O antígeno foi misturado 1:1 com adjuvante Ribi e os camundongos foram imunizados em intervalos semanais intraperitonealmente e subcutaneamente. A cepa HCo42:01 [J/K] foi imunizada com proteína recombinante marcada com hILT4-his, que era composta da porção extracelular de hILT4 com um marcador his no terminal C. O antígeno foi misturado 1:1 com adjuvante Ribi e os camundongos foram imunizados em intervalos semanais na almofada da pata. Os títulos de soro em ambos os tipos de camundongos foram monitorados seguindo quatro e seis injeções. Os camundongos receberam reforços finais antes da coleta final. Dependendo da via de imunização, drenagens de nós linfáticos e baço foram coletadas para fusões subsequentes.

[631] Linfócitos de camundongo foram isolados de camundongos imunizados. Hibridomas foram gerados através de fusões com uma contraparte de fusão de mieloma de camundongo através de eletrofusão baseada em campo elétrico usando um eletroporador de fusão de célula de câmara grande Cyto Pulse Hybrimmune (BTX/Harvard Apparatus). Suspensões de célula única de linfócitos de camundongos imunizados foram fundidas a um número igual de células de mieloma de camundongo não secretoras P3X63 Ag8.6.53 (ATCC) (números de fusão 4865 e 6951). As células resultantes foram plaqueadas em placas de microtitulação de fundo plano em meio E (StemCell Technologies) suplementado com aminopterina para seleção de hibridomas (Sigma).

[632] Poços individuais foram avaliados quando à presença de anticorpos de cadeia leve de IgG humana/kappa humana (hIgG/hK) usando um ensaio de HTFR humano após 10-12 dias de cultura. Sobrenadantes de hibridoma de poços positivos para hIgG/hK foram testados através de FACS ou através de FMAT para ligação a células transfectadas com hILT4 ou células CHO controle. Os anticorpos que seguem que interagiram especificamente com hILT4 foram caracterizados mais: 9C8.A6, 24E5.A7, 2H2.H3, 21D9.H11, 2E5.A11 e 9G4. Os anticorpos 21A5 e 10F10 foram isolados de uma imunização anterior.

[633] Anticorpos dos hibridomas foram sequenciados usando um método de sequenciamento de alto rendimento NGS. Em suma, para cada clone de hibridoma em um poço de uma placa de 96 poços, amplificação por PCR das regiões VH e VL foi feita usando códigos de barra de DNA únicos para identificar cada poço. O primer de PCR 5’ hibridiza para a região líder de modo que a sequência de região variável inteira é obtida. Uma sequência de anticorpo de hibridoma particular é identificada correspondendo o código de barras e a localização do clone na placa.

[634] Anticorpos anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21A5 e 10F10 foram recombinantemente expressos no contexto de uma região constante de cadeia pesada de IgG1, IgG1.1 ou IgG1.3, e são também referidos como providos na Tabela 1. A sequência de aminoácido de, e sequências de nucleotídeo codificando as, HCs, LCs, VHs e VLs são providas nas Figs. 1-12 e na Tabela de Sequências abaixo. A localização de cada uma das CDRs é fornecida nas Figuras bem como indicada por sublinhado nas sequências de região variável da Tabela de Sequência e as CDRs estão incluídas também como SEQ ID Nos separadas em direção ao final da Tabela de Sequências.

[635] Uma análise das sequências de aminoácido dos domínios variáveis de anticorpos 21D9, 21A5, 2H2 e 10F10 indicou que certos resíduos de aminoácido de estrutura principal não estavam presentes em nenhuma linhagem germinativa humana. Para reduzir questões de imunogenicidade potenciais quando esses anticorpos são administrados a humanos, mutantes de reversão de linhagem germinativa desses anticorpos para ILT4 foram gerados.

[636] Para o anticorpo 21D9, quatro mutações de estrutura principal na região variável de cadeia pesada em relação a sequências de linhagem germinativa foram identificadas (V2G, G10D, A24T e V48I), e são mostradas na Figura 13. Dentre as várias combinações dessas 4 mutações reversas, quatro mutantes de reversão (21D9.b, 21D9.c, 21D9.d e 21D9.e) foram gerados (vide Figura 13) e testados quanto à ligação a hILT4. Todos os 4 mutantes de reversão compreendem a mutação EQG para EVQ (ou G2V) N-terminal, que é improvável afetar ligação a ILT4. Em adição a essa substituição, os mutantes 21D9.b, 21D9.c e 21D9.d compreendem, cada um, uma das substituições adicionais mostradas na Figura 13 (D10G; I24A; e/ou I48V) e 21D9.e compreende substituições de todos os três (vide Figura 13). Os quatro mutantes foram gerados no contexto de uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, que é uma região constante de IgG1 compreendendo substituições de aminoácido L234A, L235E e G237A para reduzir função efetora. os mutantes são referidos como 21D9.b.hIgG1.3 (“21D9.VH-G2V/D10G8V.IgG1.3”), 21D9.c.hIgG1.3 (“21D9.VH-G2V/ T24A.IgG1.3”), 21D9.d.hIgG1.3 (“21D9.VH-G2V/I48V”) e 21D9.e.hIgG1.3 (“21D9.VH-G2V/D10G/T24A/I48V.IgG1.3”) e compreendem a cadeia leve de 21D9. Quaisquer reversões de linhagem germinativa foram feitas na cadeia leve.

[637] Para o anticorpo 21A5, uma mutação de estrutura principal foi identificada em cada uma das regiões variáveis de cadeia pesada (T70I) e cadeia leve (V3A), como mostrado na Figura 14. Como a reversão N-terminal na cadeia leve kappa, mostrada em A3V, é improvável afetar ligação, um mutante compreendendo ambas as mutações de reversão de cadeia pesada (I70T) e leve (A3V) (21A5.a com uma cadeia leve 21A5.1) foi gerada e testada no contexto de IgG1.3 (21A5.a.IgG1.3, também referido como “21A5.VH-I70T.VK- A3V.IgG1.3”).

[638] Para o anticorpo 10F10, duas mutações de estrutura principal foram identificadas na região variável de cadeia leve (Y36F e S63T), e são mostradas na Figura 15. Nenhuma mutação de estrutura principal foi verificada na região variável de cadeia pesada. Como a reversão F para Y na posição 36 é uma diferença pequena, um mutante duplo (10F10.3) compreendendo ambas mutações de reversão de cadeia leve F36Y e T63S foi gerado e testado no contexto de IgG1.3 (10F10.3.IgG1.3, também referido como “10F10.VK- F36Y/T63S.IgG1.3”). Um mutante tendo apenas a mutação de reversão F36Y foi também gerado e testado no contexto de IgG1.3 (10F10.1.IgG1.3, também referido como “10F10.VK-F36Y.IgG1.3”). ambos Abs mutantes de reversão compreendem a cadeia pesada de 10F10. A Tabela 1 mostra os nomes alternativos de anticorpos recombinantes descritos aqui. Tabela 1. Nomes alternativos de anticorpos anti-hILT4 recombinantes 9G4.IgG1.1 ILT4.1.IgG1.1 9C8.IgG1.1 ILT4.2.IgG1.1 2H2.IgG1.1 ILT4.3.IgG1.1 2E5.IgG1.1 ILT4.4.IgG1.1 24E5.IgG1.1 ILT4.5.IgG1.1 21D9.IgG1.1 ILT4.6.IgG1.1 21D9.IgG1.3 ILT4.6.IgG1.3 21D9.e.IgG1.3 ILT4.8.IgG1.3 21A5.a.IgG1.3 ILT4.9.IgG1.3 10F10.IgG1.3 ILT4.10.IgG1.3 10F10.3.IgG1.3 ILT4.11.IgG1.3 EXEMPLO 2: ligação de anticorpos anti-hILT4 a hILT4 solúvel

[639] As cinéticas de ligação dos anticorpos anti-hILT4 mutantes de reversão parentais e linhagem germinativa (no contexto de IgG1.3)

foram medidas através de Ressonância de Plasmon de Superfície (SPR) usando um instrumento Biacore® T200. A temperatura do ensaio foi 37º C e o tampão contínuo era PBS pH 7,4 suplementado com Tween-20 0,05%. Todos os anticorpos anti-hILT4 foram capturados em um chip CM4 com proteína A/G pré-imobilizada (Número de catálogo Pierce Thermo Scientific 21186). Três lotes diferentes de 21D9 foram usados como controles. ILT4 humano monomérico foi injetado como analito. Concentrações apropriadas foram usadas para análise: para 10F10.1 e 10F10.3 a, uma série de diluição de 3 vezes com uma concentração superior de hILT4 de 1,4 μM foi analisada. Para 10F10, duas séries de diluição de hILT4 independentes foram analisadas: concentração superior 1,4 μM, diluições de 5 vezes e 470 nM, diluições de 3 vezes. Para todos os outros anticorpos, uma concentração superior de hILT4 de 94 nM e uma série de diluição de 5 vezes foram usadas. O hILT4 usado nesse experimento, compreendendo a região extracelular de hILT4 ligada a um marcador His-Avi, consiste na sequência de aminoácido que segue:

[640] QTGTIPKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLY

REKKSASWITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWSE LSDPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTLQCESQVAFGGFIL CKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYD LNSPYVWSSPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGESLTLQCVS DVGYDRFVLYKEGERDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGG QYRCYGAHNLSSESSAPSDPLDILITGQIRGTPFISVQPGPTVASGEN VTLLCQSWRQFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMSPVT SAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSGPSMGSSPPPTGPIS

TPAGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGSPGGGSGGGSEQKLISEEDL GHHHHHHGLNDIFEAQKIEWHE (hILT4-marcador His-Avi; SEQ ID NO: 119).

[641] Os resultados são mostrados na Tabela 2 e na Figura 16.

Tabela 2. Cinéticas de ligação de anticorpos anti-hILT4 para hILT4 Nível de Rmax Ligante Ligante Amostra ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) (RU) (RU) Ativ. Aprox. 10F10 hILT4 estado uniforme 1,8E-08 31,2 39,4 114% 10F10 hILT4 1,6E+06 2,3E-02 1,4E-08 22,3 24,7 130% 10F10 hILT4 estado uniforme 1,9E-08 20,5 24,7 120% 10F10 hILT4 1,3E+06 2,0E-02 1,5E-08 30,7 39,4 112% 10F10,1 hILT4 1,5E+06 ~7E-02 4,6E-08 21,3 32,8 94% 10F10,1 hILT4 estado uniforme 5,6E-08 20 32,8 88% 10F10,3 hILT4 estado uniforme 5,2E-08 18,8 23,5 115% 10F10,3 hILT4 1,7E+06 ~8E-02 4,7E-08 20,1 23,5 123% 21A5 hILT4 1,2E+06 1,7E-04 1,4E-10 27,1 31 126% 21A5,a hILT4 1,1E+06 1,9E-04 1,7E-10 27,9 41 98% 21D9,b hILT4 3,1E+06 1,1E-03 3,4E-10 24,9 39,8 90% 21D9,c hILT4 3,0E+06 1,2E-03 4,2E-10 27,4 40,7 97% 21D9,d hILT4 3,1E+06 1,1E-03 3,5E-10 26,3 45,3 84% 21D9,e hILT4 3,1E+06 1,2E-03 3,9E-10 25,4 39,3 93% 21D9_3610 hILT4 3,3E+06 1,0E-03 3,1E-10 14,3 27,5 75% 21D9_3848 hILT4 3,2E+06 1,0E-03 3,2E-10 15,8 44,1 52% 21D9_LC2_4313 hILT4 3,0E+06 1,1E-03 3,7E-10 27,8 40,8 98%

[642] Os resultados mostram que os 4 mutantes de reversão de 21D9 têm cinéticas e afinidades similares. 21A5 e seu mutante de reversão 21a5.a também têm cinéticas e afinidades similares. No entanto, os dois mutantes de reversão 10F10, 10F10.1 e 10F10.3, têm taxas de dissociação ligeiramente mais rápidas do que seu 10F10 parental, levando a uma perda de cerca de 3 vezes em afinidade total. Taxas de dissociação de 10F10.1 e 10F10.3 são muito rápidas para serem determinadas com alta confiança. EXEMPLO 3: ligação de anticorpos anti-hILT4 a células expressando hILT4

[643] Esse Exemplo descreve as características de ligação de anticorpos anti-hILT4 a células CHO transfectadas com hILT4 e a monócitos humanos expressando hILT4.

[644] Células CHO foram transfectadas com hILT4 e foram tingidas com anticorpos anti-hILT4 individuais 2H2, 10F10 (“10F10 WT”), 21A5 (“21A5 WT”), 21A5.a, 21D9 (“21D9 WT”) e 21D9e (todos no contexto de IgG1.3) que foram titulados a partir de 20 μg/ml através de diluição serial de 3 vezes e então submetidos a um IgG anti-humano secundário conjugado a PE. Análise FACS para intensidade de florescência média geométrica (GMFI) foi usada para determinar a EC50.

[645] As curvas de ligação e valores de EC são mostrados nas Figs. 17 e 18A.

[646] Na Figura 18B, monócitos selecionados de sangue periférico de doador saudável normal foram tingidos com anticorpos anti-ILT4 individuais conjugados a Alexa67. Os anticorpos foram titulados a partir de 20 ug/mL através de diluição serial de 3 vezes, e GMFI foi determinado através de análise FACS para cálculo de EC50 (mostrado na tabela abaixo do gráfico). EXEMPLO 4: seletividade de anticorpos anti-ILT4 contra membros da família LILRA/B

[647] ILT4 é um membro de uma família de receptores relacionados, também referida como famílias LILRA e LILRB. Nesse Exemplo, a ligação de anticorpos para hILT4 a vários membros da família LILRA/LILRB foi medida.

[648] Membros da família ILT individuais foram superexpressos em células 293T. Cada transfectante foi tingido com 20 μg/ml de anticorpos anti-ILT4 seguido por 1 μg/ml de mAb secundário IgG anti- humano. Ligação dos anticorpos a cada transfectantes foi medida através de citometria de fluxo. Em um segundo experimento, transfectantes de LILRA1, LILRA3 e ILT4 foram incubados com várias concentrações de 21A5 e 21A5.a.

[649] Os resultados, que são mostrados nas Figs. 19A e B e na Tabela 3, indicam que anticorpos anti-hILT4 se ligam principalmente seletivamente a hILT4, em relação a outros membros das famílias LILRA e LILRB. LILRA3 é a única proteína secretada na família LILRA/B. Mais especificamente, 21D9 e 21D9.e não se ligam significantemente a LILRA1, LILRA2, LILRA3, LILRA4, LILRA6, ILT2, ILT3, ILT5 e LIR8, e apenas ligação fraca a LILRA5. Tabela 3. Perfil de seletividade de anticorpos anti-ILT4 a 20 μg/ml

[650] “Parenteral” na Tabela 3 se refere à linhagem de célula de origem em que as moléculas de LILRA ou LILRB foram expressas.

[651] Reatividade cruzada em relação a outros membros da família de LILRA foi testada mais como segue. Um ensaio de ligação de citometria de fluxo de titulação de anticorpo foi realizado para determinar a potência de ligação de 21D9, 21D9.e, 21A5 e 21A5.a a hILT4 e suas respectivas moléculas de ILT de reação cruzada. EC50 foi determinada usando a fórmula de regressão não linear do software GraphPad Prism®.

[652] Os resultados, que são mostrados na Tabela 4 e na Figura 20, mostram que anticorpos anti-ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5 e 21A5.a mostram reatividade cruzada fraca com outros membros da família de LILRA: 21D9 e 21D9.e para LILRA5 e 21A5 e 21A5.a para LILRA1 e LILRA3. Tabela 4. Sumário de potência de ligação EC50 de anticorpos anti-ILT4 a ILTs de reação cruzada (μg/ml)

21D9 21D9.e 21A5 21A5.a ILT4 0,0460 0,039 0,091 0,085 LILRA5 ~29964 ~312,6 Nenhuma Nenhuma ligação ligação LILRA1 Nenhuma Nenhuma 12,53 49,82 ligação ligação LILRA3 Nenhuma Nenhuma 9,18 52,94 ligação ligação

[653] 21D9 e 21D9.e se ligam a hILT4 com afinidade alta, mas não se ligam significantemente a hLILRA1, hLILRA2, hLILRA3, hLILRA4, hLILRA6, hILT2, hILT3, hILT5 e hLIR8, e apenas fracamente e hLILRA5. Então, 21D9 e 21D9.e são muito mais específicos em ligação a hILT4 em relação a outros membros das famílias hLILRA e hLIRB do que outros anticorpos anti-ILT4, tal como clone 287219 da R&D Systems, que é reativo cruzado com ILT5 (LILRB3) e LILRA6. EXEMPLO 5: anticorpos anti-hILT4 potencializam respostas de célula T

[654] O efeito dos anticorpos anti-hILT4 sobre respostas de célula T, particularmente proliferação de célula T e secreção de célula T interferon-gama (IFNγ), foi determinado como segue. O hILT4 citoplásmico truncado foi transfectado em células CHO expressando um nível baixo de fragmento variável de cadeia simples de anticorpo anti- CD3 (células CHO-OKT3). As linhagens de célula transfectadas foram chamadas CHO-OKT3-ILT4. Células T totais isoladas de PBMCs humanas foram coculturadas com células CHO-OKT3-ILT4 irradiadas (crescimento parado) em uma razão 4:1. Anticorpos anti-ILT421D9 (“21D9 WT”), 21D9.e, 21A5 (“21A5 WT), 21A5.a e 10F10 (“10F10 WT”) foram titulados a partir de 20 μg/mL através de diluição serial 5 vezes e incubados por 3 dias a 37º C. Sobrenadante foi coletado para avaliar os níveis de IFNγ através de ELISA, e as placas foram pulsadas de um dia para o outro com 3H timidina para avaliar proliferação através de incorporação de timidina.

[655] Os resultados, que são mostrados nas Figs. 21A-D, indicam que anticorpos anti-ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5, 21A5.a e 10F10 estimulam proliferação de célula T e secreção de IFNγ de uma maneira dependente da dose. Quaisquer diferenças significantes em atividade foram encontradas entre esses anticorpos nesse ensaio. EXEMPLO 6: pré-tratamento de monócitos com anticorpos anti- ILT4 durante diferenciação resulta em células dendríticas derivadas de monócito (MoDC) que são mais estimuladoras para células T alogeneicas

[656] Monócitos CD14+ foram isolados de PBMC humana usando StemCell EasySep® Human Monocyte Isolation Kit, plaqueados em 1 milhão de células por mL e diferenciados em DC imatura derivada de monócito (Mo-iDC) em meio de cultura RPMI suplementado com 50 ng/mL de GM-CSF e 100 ng/mL de IL-4 por seis ou sete dias. Durante a diferenciação, as células foram incubadas com anticorpo anti-ILT4 ou de isotipo ou deixadas sem tratamento. Depois das células terem sido diferenciadas em Mo-iDC, elas foram lavadas como remover anticorpos anti-ILT4, GM-CSF e IL-4, e foram ativadas mais para células dendríticas amadurecidas (DC (Mo-mDC) na presença de 50 ng/mL de anticorpos agonístico para CD40. As DCs maduras (Mo-mDC) foram configuradas para um ensaio de reação leucocitária mista alogeneica (alo-MLR) através de cocultura delas com células T em uma razão 1:10 (Mo-mDC : T) por 5 dias. O sobrenadante celular foi coletado no final da alo-MLR para medição de IFNγ através de ELISA, e a proliferação de célula T foi avaliada através da incorporação de 3H-timidina das 16 horas finais.

[657] Os resultados de ensaios separados, que são mostrados na Figura 22, indicam que proliferação de célula T CD4+ (Figs. 22A e C) e secreção de IFNγ (Figs. 22B e D) em uma alo-MLR com ensaio de MoDC são intensificadas quando as MoDC são diferenciadas a partir de monócitos na presença de anticorpos anti-ILT4 21a5.a ou 21D9.e.

Monócitos de dois doadores diferentes foram usados nos ensaios separados. EXEMPLO 7: células dendríticas derivadas de monócito (MoDC) diferenciadas a partir de monócitos inicializados com anticorpo anti-ILT4 têm expressão aumentada de moléculas coestimuladoras ou de maturação

[658] Monócitos CD14+ foram isolados de PBMC humana usando StemCell EasySep® Human Monocyte Isolation Kit, plaqueados em 1 milhão de células por mL e diferenciados em células dendríticas imaturas derivadas de monócito (Mo-iDC) em meio de cultura de RPMI suplementado com 50 ng/mL de GM-CSF e 100 ng/mL de IL-4 por seis ou sete dias na presença de anticorpos anti-ILT4 21D9.e, 21A5.a, 21A5, 10F10, 21D9, 2H2 ou anticorpo de isotipo ou deixados sem tratamento. As Mo-iDC foram então coletadas para tingimento de marcadores de superfície celular CD86 e CD83.

[659] Os resultados, que são mostrados na Figura 23, indicam expressão aumentada de CD86 e CD83, uma molécula coestimuladora e uma de maturação, respectivamente, em Mo-iDc quando anticorpos anti-ILT4 estavam presentes durante diferenciação de monócito em Mo- iDC. Reunidos com os resultados do Exemplo 6, esses resultados mostram que tratamento de monócitos com anticorpo anti-hILT4 durante diferenciação de monócito em MoDC promove proinflamação de MoDC como mostrado pela suprarregulagem de CD83 e CD86 (Figuras 23A- D), que consequentemente dispara proliferação de célula T e produção de IFNγ intensificadas a partir de células T alogeneicas no ensaio alo- MLR (Figura 22). Ao intensificar as funções de célula T, tratamento com anticorpos anti-hILT4 pode prover uma resposta imune anticâncer intensificada. EXEMPLO 8: anticorpos anti-ILT4 potencializam secreção de TNFα a partir de macrófagos diferenciados in vitro

[660] Monócitos isolatos de PBMC humana foram diferenciados em macrófagos na presença de M-CSF por 5 dias. Os macrófagos foram tratados com as concentrações indicadas (próximo do seu nome e como ng/ml) de anticorpos anti-ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 2H2 e 10F10 ou controle de isotipo na presença de 10 ng/ml de LPS (Figura 24A) ou 5 µg/ml de agonista 2’ 3’-cGAMP STING (Figura 24B). Produção de TNFα foi medida através de ELISA 24 horas após tratamento e os valores de EC50 na presença de cada anticorpo são anotados próximo das curvas.

[661] Os resultados, que são mostrados na Figura 24, indicam que a presença de anticorpos para ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 2H2 e 10F10 potencializaram secreção de TNFα dos macrófagos diferenciados in vitro ou por LPS ou um agonista STING. Portanto, macrófagos imunossupressores mostram uma mudança para um fenótipo mais proinflamatório quando ILT4 é bloqueado, o que pode potencialmente prover uma resposta imunes anticâncer aumentada. Esses resultados sugerem que anticorpos anti-ILT4 promovem polarização proinflamatórias em relação a macrófagos M1. Exemplo 9: anticorpos anti-ILT4 promovem respostas de célula T CD4 em alo-MLR de macrófago : célula T CD4+

[662] Monócitos isolatos de PBMC periférica foram tratados com M-CSF por 5 dias para diferenciar em macrófagos. Os macrófagos foram então culturados com células T CD4+ alogeneicas que foram isoladas de uma PBMC de doador diferente, e marcados com corante CFSE. Os anticorpos indicados em 1 μg/ml (controle de isotipo, anti- ILT3 ou anti-PDL1) foram incluídos na cocultura de alo-MLR. No dia 6, o sobrenadante foi coletado para análise de IFNγ e proliferação de célula T CD4+ e foi avaliado através de FACS com base em diluição de CFSE.

[663] Os resultados, que são mostrados nas Figs. 25A-B, indicam que a presença dos anticorpos anti-ILT4 21D9, 21D9.e, 21A5 ou 21A5.a em alo-MLR de macrófagos diferenciados in vitro e células T CD4+ promove proliferação de célula T CD4+ (Figura 25A) e produção de IFNγ (Figura 25B). Esses resultados sugerem que os anticorpos anti-ILT4 promovem ativação de célula T ou através da modulação de sinalização de ILT4 supressiva em macrófagos ou bloqueio de sua atividade supressiva direta em células T. EXEMPLO 10: efeito combinado de anti-ILT4 e anti-PD-L1 em alo- MLR de macrófagos : célula T CD4

[664] Monócitos isolados de PBMC periférica foram tratados com M-CSF por 5 dias para diferenciar em macrófagos, que foram então coculturados com células T CD4+ alogeneicas que foram isoladas de uma PBMC de doador alogeneica. Anticorpo anti-ILT4 21D9 e anticorpo anti-PD-L1 adicionados sozinhos ou juntos a 10 μg/ml (controle de isotipo, anti-ILT4, anti-PD-L1 ou anti-ILT4 e anti-PD-L1 combinados) foram incluídos na cocultura de alo-MLR. No dia 6, o sobrenadante foi coletado para análise de IFNγ.

[665] Os resultados, que são mostrados na Figura 26, indicam que a combinação do anticorpo anti-ILT4 21D9 com o anticorpo anti-PD-L1 estimulou uma produção aumentada de IFNγ a partir da alo-MLR de macrófago : célula T CD4+ em relação a cada anticorpo sozinho. EXEMPLO 11: mapeamento de epítopo HDX de Abs anti-hILT4 21D9 e Fabs 2H2

[666] HDX-MS foi usado para identificar as áreas de hILT4 às quais anticorpos anti-hILT4 21D9 e 2H2 se ligam.

[667] HDX-MS sonda conformação de proteína e dinâmica conformacional em solução através do monitoramento da taxa e grau de troca de deutério de átomos de hidrogênio de amida da estrutura principal (Huang e Chen (2014) Analytical and Bioanalytical Chem. 406:6541 e Wei e outros (2014) Drug Discovery Today 19:95). O nível de HDX depende da acessibilidade ao solvente de átomos de hidrogênio de amida da estrutura principal e das ligações de hidrogênio da proteína.

[668] O aumento de massa da proteína quando do HDX pode ser precisamente medido através de EM. Quando essa técnica é emparelhada com digestão enzimática, características estruturais no nível de peptídeo podem ser determinadas, permitindo diferenciação de peptídeos expostos à superfície a partir daqueles dobrados no interior, ou daqueles sequestrados na interface de um complexo proteína- proteína. Tipicamente, a marcação com deutério e experimentos de extinção subsequentes são realizados, seguido por digestão enzimática, separação de peptídeo e análise de EM.

[669] Antes dos experimentos de mapeamento de epítopo, experimentos não deuterados foram realizados para gerar uma lista de peptídeos comuns para ILT4 humano recombinante (15 μM) e complexos de proteína e ILT4 com Fabs 21D9 e 2H2 (razão molar 1:1). No experimento de HDX-MS, 5 μL de cada amostra (ILT4 ou ILT4 com Fabs) foram diluídos em 55 μL de tampão de D2O (tampão de fosfato 10 mM, D2O, pH 7,0) para iniciar as reações de marcação. As reações foram realizadas para períodos de tempo diferentes: 1 min, 10 min e 240 min. No final de cada período de reação de marcação, a reação foi arrefecida pela adição de tampão de arrefecimento (Ureia 6M, TCEP 1M, pH 2,5, 1:1, v/v) e 50 μL de amostra arrefecida foram injetados no sistema Waters HDX-MS para análise. Os níveis de absorção de deutério de peptídeos pépticos comuns foram monitorados na ausência/presença de Fabs 21D9 e 2H2.

[670] ILT4 humano (hILT4) foi marcado com histidina e misturado com Fabs 21D9 ou 2H2 em uma razão 1:1 e submetido a HDX por 1 minuto, 10 minutos ou 4 horas. A cobertura de sequência de hILT4 por pepsina é mostrada na Figura 27A. As áreas de hILT4 (ou peptídeos de hILT4) ligadas por cada um dos Fabs são mostradas nas Figs. 27B e C.

Especificamente, experimentos de HDX-MS proveram 85% de cobertura de sequência para ILT4 humano.

[671] Análise de dados de HDX-MS em 21D9 e 2H2 em ILT4 humano indica epítopo de 21D9 é compreendido de uma região de ILT4 humano (números de resíduo corresponde à sequência de ILT4 humano nativo): Região: 70ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122) em domínio 2 de Ig. (Vide Figura 27B, painel superior)

[672] A análise de dados de HDX-MS indicou que o epítopo de 2H2 é compreendido de cinco regiões de ILT4 humano com regiões 2 e 5 sendo o epítopo primário:

[673] Região 1: 127SAQPSPVVTSGGRVTL142 (SEQ ID NO: 175) 154

[674] Região 2: ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123)

[675] Região 3: 182 SVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSPSDL213 (SEQ ID NO: 176)

[676] Região 4: 378QAEFPMSPVTSAHAG392 (SEQ ID NO: 177)

[677] Região 5: 425SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124)

[678] (Vide Figura 27B, painel inferior) EXEMPLO 12: anticorpos anti-ILT4 bloqueiam ligação de ILT4 a moléculas classe I do MHC

[679] Um ensaio de bloqueio de anticorpo baseado em citometria de fluxo foi realizado para determinar a habilidade de anticorpos anti- ILT4 em bloquear hILT4-Fc se ligando a células CHO superexpressando HLA-A ou HLA-B. Proteína de fusão rhILT4-Fc foi produzida, a qual continha uma cauda de Fc de murino. Anticorpos anti-hILT4 21D9, 2H2, 10F10 e 21A5 foram titulados na presença de uma concentração de 30 μg/ml fixa de rhILT4-Fc. A mistura de anticorpo e rhILT4-Fc foi incubada em gelo por 30 minutos e então adicionada a células CHO engenheiradas para superexpressar HLA-A ou HLA-B. As células CHO foram tingidas por 30 minutos em gelo, lavadas e então tingidas com anticorpo secundário Ig anticamundongo para detectar rhILT4-Fc ligado.

[680] Os resultados, que são mostrados nas Figs. 28A-D, indicam que os anticorpos21D9, 2H2, 10F10 e 21A5, respectivamente, inibem ligação de hILT4 a HLA-A e HLA-B. EXEMPLO 13: 21D9e.IgG1.3 aumenta secreção de ambos IFN-γ e TNF-α por células T

[681] Esse Exemplo mostra que 21D9e.IgG1.3 aumenta secreção de IFN-gama e TNF-alfa de células T em uma reação linfocítica mista (MLR) autóloga de monócitos e células T.

[682] Células T e monócitos foram isolados de células mononucleares de sague periférico (PBMCs) e coculturadas em uma razão 1:1 na presença de 20 ng/mL de anticorpo anti-CD3 (Clone: OKT3, BioLegend). 21D9e.IgG1.3 e controle de isotipo (DT-1D12-g1.3f) foram adicionados a 10 ug/mL. Tingimento intracelular foi realizado para determinar as frequências de células T expressando IFN-γ e TNF-α em cada amostra após um período de incubação de 88 horas usando anticorpo para IFN-γ conjugado a fluorcromo (Clone No. B27, BioLegend) e anticorpo TNF-α (Clone No. MAb11, BioLengend). As amostras foram adquiridas em um citômetro Cytoflex® (Beckmen Coulter) e analisadas com software FlowJo™ (Tree Star, Inc, Ashland, OR).

[683] Os resultados, que são mostrados nas Figs. 29A-D, indicam que 21D9e.IgG1.3 aumenta secreção de ambos IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+ na alo-MLR autóloga quando da estimulação com anti-CD3. EXEMPLO 14: anticorpos anti-ILT4 aumentam a secreção de IFN-γ quando da estimulação com antígeno em um Ensaio de Lisato de

CMV

[684] Células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de um doador reativo a citomegalovírus (CMV) foram plaqueadas a 200.000 células por poço na presença de 0,3 μg/mL de Lisato de CMV (Antígeno 2 de CMV, Microbix No. Cat. EL-02-01-001). As células foram tratadas com titulação de 5 vezes, de 8 pontos, de anticorpos anti-ILT4 21D9.IgG1.3 e 21A5.IgG1.3 começando em 20 µg/mL. Nivolumabe foi adicionado a 1 µg/mL como um controle positivo. 21D9-Fab e DT-1D12- g1.3 foram adicionados a 20 µg/mL. Sobrenadante de cada amostra foi coletado e medido quanto ao nível de IFN-γ através de ELISA (Human IFN-γ ELISA Kit, BD OptEIA Cat. 555142) após uma incubação de 6 dias.

[685] Os resultados, que são mostrados na Figura 30, indicam que os anticorpos anti-ILT4 21D9.IgG1.3, 21D9-Fab e 21A5.IgG1.3 aumentam a secreção de IFN-γ quando da estimulação no ensaio de lisato de CMV. EXEMPLO 15: antagonismo de ILT4 aumenta a ativação de célula T em alo-MLR monócitos : T

[686] Células T (100.000) de um doador e monócitos alogeneicos foram coculturados em uma razão 2:1 por poço em uma placa de fundo em U de 96 poços. Anticorpos anti-ILT4 2H2.IgG1.1f, 2H2 Fab, 21D9.IgG1.1f e 21D9 Fab foram adicionados em uma titulação de 7 pontos, 4 vezes, começando em uma concentração de 30 μg/mL para anticorpo de comprimento integral ou 80 μg/mL para anticorpo Fab. Anti- KLH-g1.1f (anticorpo anti-hemocianina) foi adicionado a 30 μg/mL como um controle de isotipo. A cultura celular foi incubada por 6 dias. Proliferação celular foi avaliada através de incorporação de 3H-timidina durante as 16 horas finais de cultura.

[687] Os resultados, que são mostrados na Figura 31, indicam que ambos anticorpos anti-ILT4 de comprimento integral 21D9.IgG1.1f e 2H2.IgG1.1f, e seus respectivos fragmentos Fab, induzem proliferação de célula T. EXEMPLO 16: ligação de anticorpos anti-hILT4 a ILT4 de cyno

[688] Vário s membros da família de ILT foram obtidos através de PCR a partir de macacos cynomolgus. Uma vez que análise de sequência dessas proteínas não indicou claramente qual era a correspondência mais próxima de hILT4, tração de perfil de expressão e ensaios funcionais foram conduzidos. Esses ensaios identificaram um clone chamado “9152” como a melhor correspondência com hILT4 com relação ao traçado de perfil de expressão e características funcionais. A sequência de aminoácido da região extracelular de 9152, incluindo um Marcador His-Avi, é a que segue:

[689] QAGILPKPMLWAEPDRVITQGSPVTLRCQGNLEARGYHL

YRERKSASWITLIRPELVKKGQFPIPSITWEDAGRYRCQYYSHSWWS EHSDPLELVVTGAYRKPTLSALPSPVVASGGNVTLQCDSRVALDGFI LCKEGEDEHSQRLNSQPRTRGSSRAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGY ELHSRYVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAGGDKLTLQC GSDAGYDRFALYKEGERDFLQRPGQQLQAGLAQANFTLDPVRGSH GGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILISAGPHSGLRRECDPAVSVT

GMDGHFLSDQGGSSSPGGGSGGGSEQKLISEEDLGHHHHHHGLND IFEAQKIEWHE (SEQ ID NO: 118). Para ligação a hILT4, a região extracelular (ECD) de marcador hILT4-His-Avi; SEQ ID NO: 119, descrita no Exemplo 2, foi usada.

[690] A cinética de anticorpo 21D9.e se ligando a ILT4 de cyno e humano, usando os construtos de ILT4 acima, foi analisada em um ensaio de SPR comparativo. O anticorpo foi acoplado à amina para um sensor chip GLC em um instrumento Proteon XPR36 (BioRad). ILT4 humano e ILT4 de cyno 9152 foram injetados como analitos em uma série de diluição de 5 vezes, 5 membros, com concentração máxima de 1 μM (concentração mínima de 1,6 nM). Todos os dados foram referidos duplamente, exportados e analisados com BIAevaluation Software 4.1.1 usando o modelo de titulação cinética descrito por Karlsson e outros (Karlsson e outros (2005) Analytical Biochem. 349:136). O tampão contínuo consistia em HEPES 10mM pH 7,4, NaCl 150 mM e Tween-20 0,05%. A temperatura do ensaio era 37°C.

[691] Os resultados, que são mostrados na Tabela 5, mostram que 21D9.e ligado a ILT4 de cyno 9152 com afinidade aproximadamente 11 vezes mais fraca do que ILT4 humano (valores de KD de 3,5 nM para cyno e 0,33 nM para ILT4 humano). Similarmente, o anticorpo parental, 21D9, ligou a cyno com afinidade de aproximadamente 12 vezes mais fraca do que ILT4 humano. A diferença foi impulsionada por uma constante de taxa de dissociação mais rápida para ILT4 de cyno (valores de KD de 4,0 nM para ILT4 de cyno e 0,32 nM para de humano). Tabela 5 Ligante Analito Ka (M-1 s-1) Kd (s-1) KD (M) 21D9 cyLILR 9152 8,8E+05 3,5E-03 4,0E-09 21D9 hILT4 8,2E+0,5 2,6E-04 3,2E-10 21D9e cyLILR 9152 7,3E+05 2,6E-03 3,5E09 21D9e hILT4 9,9E+05 3,3E-04 3,3E-10 EXEMPLO 17: anticorpos para ILT4 promovem expressão de moléculas coestimuladoras e marcadores de ativação em células dendríticas derivadas de monócito de cynomolgus in vitro

[692] Esse Exemplo mostra que anticorpos para ILT4 21D9.e.IgG1.3 (ILT4.8 na Figura 32; vide Tabela 1) e 9G4. hIgG1.3 (ILT4.1 na Figura 32; vide Tabela 1) estimularam a expressão de CD80, CD83 e CD86 em células dendríticas derivadas de monócito.

[693] Monócitos isolados de PBMC de macaco cynomolgus (Microesferas CD14 de Primata Não humano, Miltenyi) foram culturados na presença de 62,5 U/mL de GM-CSF humano recombinante (Peprotech) e 125 U/mL de IL-4 humano recombinante (Peprotech) por 5 dias. Anticorpos anti-ILT4 foram adicionados à cultura @ 10 ug/mL no momento que a cultura foi configurada. As células foram tingidas por seu nível de expressão de superfície de CD86, CD80 e CD83 usando anti-CD86 (clone# IT2.2, BioLegend), anti-CD80 (clone# L307) e anti-

CD83 (clone# HIB15e). As amostras foram adquiridas em um citômetro Cytoflex® (Beckmen Coulter) e analisadas com software FlowJo™ (Tree Star, Inc, Ashland, OR).

[694] Os resultados, que são mostrados nas Figs. 32A-C, indicam que anticorpos para ILT4 21D9.e.IgG1.3 (também conhecido como ILT4.8.IgG1.3; “ILT4.8” na figura) e 9G4.IgG1.3 (também conhecido como ILT4.1.IgG1.3; “ILT4.1” na figura) promove expressão de moléculas coestimuladoras CD80 e CD86 bem como marcador de maturação de célula dendrítica CD83 em DC derivada de monócito, como evidenciado pela suprarregulagem de CD80, CD83 e CD86 nas células dendríticas. EXEMPLO 18: anticorpo anti-ILT4 modificado 10F10.4

[695] A tirosina em F36Y na cadeia leve de 10F10.1 e 10F10.3 (vide Exemplo 2) está localizada na CDR3 de cadeia pesada em modelagem de anticorpos hILT4 e 10F10. Portanto, substituição de F36 com Y poderia causar um choque com uma isoleucina em CDR3 de cadeia pesada, como evidenciado por uma taxa de dissociação mais rápida de 10F10.1 e 10F10.3 em relação a 10F10 (vide Exemplo 2). Um mutante adicional foi criado, no qual F36 na cadeia leve não foi mutada e a única mutação de região de estrutura principal de cadeia leve feita em 10F10 foi T63S. A cadeia pesada não foi mutada, bem como aquela de 10F10. Esse anticorpo modificado é chamado 10F10.4, e a sequência de aminoácido de sua cadeia leve é mostrada na Tabela de Sequências como SEQ ID NO: 116.

[696] As cinéticas de ligação de 10F10.4 foram determinadas a 37º C usando um instrumento Biacore® T200. O tampão contínuo era HEPES 10 mM pH 7,4 suplementado com Tween-20 0,05% e 1 g/L de BSA. Todos os anticorpos anti-ILT4 foram capturados em um chip CM4 com anticorpo de captura Fc anti-humano pré-imobilizado da Southern Biotech (número de catálogo 2081-01). ILT4 humano (marcador hILT4-

His-Avi descrito no Exemplo 2) foi injetado a 1,2 uM (apenas em 10F10, 10F10.4 e uma réplica de 1E5 ILT4.15), 405 nM, 81 nM (em duplicata), 16n M, 3 nM e 0,6 nM. Todos os dados foram referidos duplamente e ajustados a um modelo Langmuir 1:1 com transporte de massa usando Biacore T200 Evaluation Software versão 3.1.

[697] Os resultados, que são mostrados na Tabela 6, indicam que cinéticas de ligação de 10F10.4 são muito similares àquelas de 10F10. 21A5, 21A5a, 21D9 e 21D9.e foram incluídos como controles. Os valores absolutos diferem ligeiramente dos valores mostrados na Tabela 2, o que é devido ao reagente de captura diferente utilizado nesse ensaio. Tabela 6 Nível de Rmax Ligante Ativ. Ligante Amostra ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) (RU) (RU) Aprox. 10F10 hILT4 1,2E+06 2,6E-02 2,2E-08 35 50 100% 10F10,4 hILT4 1,2E+06 2,7E-02 2,2E-08 33 41 117% 21A5 hILT4 5,2E+05 1,2E-05 2,3E-11 81 119 98% 21A5,a hILT4 4,9E+05 1,7E-05 3,6E-11 76 109 100% 21D9 hILT4 1,1E+06 5,4E-04 5,0E-10 31 65 70% 21D9,e hILT4 1,0E+06 5,8E-04 5,8E-10 101 154 94%

[698] 10F10.4 foi mostrado ser funcionalmente ativo através de potencialização de secreção de TNFα a partir de macrófagos diferenciados in vitro. Isso foi demonstrado através da incubação de 10F10.4 com macrófagos diferenciados a partir de monócitos de PBMC como descrito no Exemplo 8. 21D9.e foi também incluído, bem como um controle de isotipo. Os resultados, que são mostrados nas Figuras 33A e B, indicam que a presença de anticorpo para ILT4 10F10.4 potencializou secreção de TNFα durante a diferenciação in vitro de monócitos em macrófagos ou através de LPS ou um agonista STING. EXEMPLO 19: 21D9.e tem potência similar no contexto de IgG1, IgG4 e IgG1.3

[699] Esse Exemplo mostra que a potência de 21D9.e é similar no contexto de uma cadeia pesada de IgG1, IgG4 (S228P) e IgG1.3.

[700] Anticorpos 21D9.e foram clonados no contexto de um IgG1, IgG4 (com S228P) ou IgG1.3 (SEQ ID Nos: 176, 178 e 13, respectivamente) e usados em um ensaio medindo secreção de TNFα, conduzido como segue.

[701] Os resultados, que são mostrados na Figura 34, indicam que uma quantidade similar de TNFα é secretada para 21D9.e.IgG1, 21D9.e.IgG4.S228P e 21D9.e.IgG1.3. Portanto, regiões variáveis de 21D9.e têm potência funcional similar no contexto dessas regiões de Fc diferentes. DT-1D12 é um controle de isotipo. EXEMPLO 20: 21D9e se liga a alelos de hILT4

[702] Esse Exemplo descreve ensaios para determinar se 21D9.e se liga a alelos alternativos de hILT4.

[703] Apenas aqueles alelos tendo uma frequência de mais de 1% foram considerados. Dois alelos tendo mudanças de aminoácido nas regiões D1 e D2 foram considerados mais: E161D e R103H (numeração de acordo com SEQ ID NO: 107, isto é, ILT4 com sequência de sinal). Como modelagem 3-dimensional mostrou que ambos os resíduos de aminoácido não estão próximos da interface de ligação com classe I do MHC, mudanças de aminoácido nesses resíduos não eram esperadas afetar ligação de anticorpo a hILT4. Para confirmar isso, uma proteína hILT4 com as substituições E161D e R103H (hILT4 E161D/R103H) foi feita e testada quanto à ligação a 21D9.e.IgG1.3 e 21A5.a.IgG1.3 (ILT4.9.IgG1.3; vide Tabela 1) por meio de Octet BLI. Ambas as proteínas foram verificadas se ligar similarmente a hILT4 E161D/R103H e a hILT4 E161/R103. EXEMPLO 21: 21D9e.IgG1.3 não dispara significantemente ativação de basófilo

[704] O ensaio usado para detecção de ativação de basófilo por anticorpos anti-ILT4 envolveu as etapas que seguem. O ensaio foi conduzido usando a metodologia do Buhlmann Laboratories AG usada em Flow CAST© Basophil Activation Test, de um modo geral como segue. Basófilos humanos, derivados de sangue de doador, foram detectados usando anti-Ccr3. CD63 foi usado como indicador de ativação de basófilo. Tampão de estimulação e os anticorpos foram adicionados a sangue integral. Seguindo incubação, reagentes de tingimento foram adicionados ao sangue; e seguindo incubação de anticorpo, eritrócitos foram lisados e as amostras foram centrifugadas, lavadas e analisadas em um BD FACS Canto II.

[705] Com base nesse ensaio, basófilos ativados Ccr3+CD63+ de 8 doadores foram medidos através de FACS seguindo incubação ou com 21D9.e.IgG1.3 (ILT4.8.IgG1.3; vide Tabela 1) 21.5Aa.IgG1.3, (ILT4.9.IgG1.3) ou anti-DT a 4,5, 45,45 ou 454,55 µg/mL por 180 minutos. Controles positivos incluíam anti-FcƐRI e fMLP (N- formilmetionina-leucil-fenilalanina). Controle negativo era DT1DT12- IgG1.3, que se direciona a um antígeno irrelevante, toxina da difteria.

[706] Os resultados, que são mostrados na Figura 36, indicam que 21D9.e.IgG1.3 (ILT4.8.IgG1.3) e 21.5Aa.IgG1.3 (ILT4.9.IgG1.3) não induzem ativação de basófilos nas condições testadas. A falta de ativação de basófilos representa uma característica de segurança importante. EXEMPLO 22: anticorpo anti-ILT4 21D9.e.IgG1.3 é estável

[707] Esse Exemplo descreve estudos de estabilidade de 3 meses realizados com anticorpo anti-ILT4 21D9.e.IgG1.3 (também conhecido como ILT4.8.IgG1.3), dados que mostram que o anticorpo é estável pelo menos durante 3 meses.

[708] Amostras de 21D9.e.IgG1.3 foram incubadas a 25 ou 40°C em uma concentração de 150mg/mL. As amostras foram diluídas com fase móvel (NaH2PO4 40 mM, Na2HPO4 60 mM, Na2SO4 0,1 M, pH 6.8) para 1mg/mL e quarenta microlitros foram analisados usando um Agilent

1200 Series HPLC System (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) usando uma coluna TSKgel Super3000SW (4,6mm ID x 30cm, 4µm, Tosoh Bioscience, King of Prussia, PA) com um gradiente isocrático (Fosfato de Sódio 0,1 M, Sulfato de Sódio 0,1M, pH 6,8 a 0,2 mL/min). Detecção de UV foi ajustada a 280 nM.

[709] Os resultados, que são mostrados na Figura 35, indicam que a composição de anticorpo 21D9.e.IgG1.3 (ILT4.8) compreende menos de 5% de espécies de peso molecular alto e baixo após incubação por 3 meses a 25º C e menos do que 10% de espécies de peso molecular alto e baixo após incubação por 3 meses a 40º C. EXEMPLO 23: bloqueio cruzado de 2H2 e 21D9 por anticorpos monoclonais anti-ILT4

[710] Células CHO superexpressando ILT4 foram primeiro pré- incubadas com diluições seriais de anticorpos anti-ILT4 não conjugados 10F10.IgG1.3 e 21A5.IgG1.3 (3 vezes, 12 pontos, partindo de 40 µg/mL). Anti-KLH-g1.1f (anticorpo Anti-Hemocianina) foi adicionado como um controle de isotipo enquanto 2H2.IgG1.1f ou 21D9.IgG1.1f não conjugado foi adicionado a 40 μg/mL como um controle positivo para demonstrar atividade de bloqueio. Seguindo um período de incubação de 30 minutos, 2H2.IgG1.1f ou 21D9.IgG1.1f conjugado a PE foi salpicado a 1,5 μg/mL e incubado com células por mais 30 minutos. Após lavagem, as amostras foram postas em um citômetro FACSCanto™ (BD Bioscience, San Jose) e analisadas com software Flowjo™ (Tree Star, Inc, Ashland, OR).

[711] Os resultados são mostrados na Figura 37A (bloqueio cruzado de 2H2) e na Figura 37B (bloqueio cruzado de 21D9). Os resultados indicam que 10F10 e 21A5 bloqueiam cruzado (ou competem com) 2H1 por ligação a hILT4 (Figura 37A) e que 10F10, mas não 21A5, bloqueia cruzado (ou complete com) 21D9 por ligação a hILT4 (Figura 37B). Então, (i) 21A5 e 2H2 estão no mesmo grupo de ligação (isto é,

eles competem um com o outro para ligação a hILT4); (ii) 21D9 está em um grupo de ligação separado daquele de 21A5/2H2; e (iii) 10F10 compete com ambos 21D9 e 2H2/21A5 por ligação a hILT4.

[712] Um diagrama mostrando as regiões de ligação de hILT4 dos anticorpos na estrutura de cristal de hILT4 é mostrado na Figura 37C. O domínio 1 tipo Ig corresponde aos resíduos de aminoácido 27-100 de SEQ ID NO: 107, enquanto domínio 2 tipo Ig corresponde aos resíduos de aminoácido 111-229 de SEQ ID NO: 107. Esses dois domínios são mostrados em forma de fita na Figura 37C. Os resultados desses experimentos indicam que o anticorpo 21D9 se liga a domínio 1 tipo Ig, anticorpos 2H2 e 21A5 se ligam a domínio tipo Ig e anticorpo 10F10 se liga a uma região que está localizada no domínio 2 tipo Ig, próximo ao domínio 1 tipo Ig e podem competir distante por anticorpo que se ligam a domínio 1 tipo Ig ou domínio 2 tipo Ig. Anticorpos diferindo dos anticorpos usados nesses experimentos apenas por mutações de linhagem germinativa (por exemplo, 21D9.e, 29A5.a e 10F10.3 e 10F10.4) são esperados se ligar à mesma região que seus anticorpos parentais (21D9, 29A5 e 10F10, respectivamente). Exemplo 24: mapeamento de epítopo usando pegada química de carbono

[713] Os reagentes para ILT4 humano e clones Fab de anticorpo para ILT4 anti-humano 10F10, 21D9 e 21A5 tiveram tampão trocado em Tris-HCl 100 mM e NaCl 50 mM em pH 7,5 a 1 mg/mL. Complexos individuais de ILT4 humano e cada anticorpo Fab para ILT4 anti-humano foram feitos misturando em uma razão 1:1. Experimentos em triplicata de 5 ug de ILT4 e 10 ug dos complexos foram misturados 1:1 com ácido 4-[3-(Trifluormetil)-3H-diazirin-3-il]benzoico 20 mM em Tris-HCl 100 mM e NaCl 50 mM em pH 7,5. As misturas resultantes foram rapidamente congeladas em nitrogênio líquido. Todas as amostras foram postas em gelo seco e irradiadas com luz (300-800 nm) de uma caixa de luz Atlas

Suntest® CPS+ por 20 minutos para permitir modificação covalente da proteína pelo reagente diazirina. As amostras irradiadas foram reduzidas, alquiladas e digeridas com quimiotripsina. Análise LC- MS/MS foi realizada em um espectrômetro de massa Orbitrap Fusion Lumos® usando uma coluna Waters BEH C18. Um gradiente linear de 60 minutos a 10 μL/min de tampão B 0-35% (A: água com ácido fórmico 0,1%; B: acetonitrila com ácido fórmico 0,1%) foi usado para separar os peptídeos. O eluente resultante foi misturado com 2 μL/min de acetonitrila misturada com álcool 3-nitrobenzílico 0,6%. Os peptídeos modificados foram identificados e quantificados usando Byonic® e Byologic® da Protein Metrics. Separação cromatográfica e identificações MS/MS foram usadas para localizar e confirmar os aminoácidos modificados.

[714] Diazirinas são compostos fotoativos que podem reagir com qualquer ligação C-H em todos os 20 aminoácidos. A modificação covalente resultante pode ser separada cromatograficamente de outros sítios de aminoácido no mesmo peptídeo. Comparações das áreas de pico em triplicata para os peptídeos não modificados e peptídeos modificados uma única vez foram usadas para determinar diferenças em marcação de diazirina para os clones de anticorpo 10F10, 21A5 e 21A9 para identificar o epítopo de anticorpo. Peptídeos com >50% de diminuições em marcação em um ou mais complexos foram considerados significantes e usados para localizar os epítopos de anticorpo. Peptídeos significantes, ou em casos onde a comparação com o peptídeo não modificado não poderia ser feita devido a um sítio de clivagem de enzima ausente, os cromatogramas de peptídeo modificado para todas as amostras foram comparados uns com os outros com diminuições de >50% de cromatogramas de eluição de pico de peptídeo individuais sendo usadas para determinar aminoácidos diferencialmente modificados que são protegidos pelo epítopo de anticorpo. Os espectros de MS/MS dos aminoácidos diferencialmente modificados foram confirmados manualmente através de MS/MS e marcados na estrutura de cristalografia de raios X de ILT4 humano (PDB: 2DYP) (Figura 37D). O epítopo de anticorpo para clone 21D9 foi verificado ter marcação diferencial em dois sítios individuais de 1 e 3 aminoácidos no domínio 1 de ILT4 humano e é marcado em vermelho e púrpura (devido a um sítio de sobreposição com 10F10). O epítopo de anticorpo para clone 10F10 foi verificado ter marcação diferencial em seis sítios individuais de 1-2 aminoácidos no domínio 1 e domínio 2 de ILT4 humano e como marcado na Figura 37D (devido a sítios de sobreposição com ambos 21A5 e 21D9). O epítopo de anticorpo para clone 21A5 foi verificado ter marcação individual em 11 sítios individuais de 1-4 aminoácidos em domínio 2 de ILT4 humano, como também marcado na Figura 37D (devido a um sítio de sobreposição com ambos 10F10).

[715] Os resíduos de aminoácido de hILT4 Gly117, Val119, Try120, Leu134, Lys136, Gln149, Pro150, Ile159, Ser161, Val162, Gly163, Pro164, Pro167, His173, Try178, Pro183 e Tyr184 são mostrados como bolas na Figura 37D com relação ao anticorpo 21A5. Os resíduos Glu42, Lys43, Gly76, Cys77, Leu88, Pro91, Pro183 e Tyr184 são mostrados na Figura 37D com relação ao anticorpo 10F10. Os resíduos Lys43, Ile49, Thr50 e são mostrados com relação ao anticorpo 21A9. Tabela de Sequências

[716] O que segue é uma tabela de certas sequências referidas no presente pedido. Várias das sequências abaixo também são providas nas Figs. 1-15 e as CDRs de VH e VL para os anticorpos são denotadas nas Figs. 1-15. Dentro das sequências de LC e HC providas abaixo, as sequências de VL e VH componentes estão sublinhadas e em negrito. Dentro das sequências de VL e VH abaixo, as CDRs estão sublinhadas e em negrito, como mostrado também nas Figs. 1-12 e dentro de certas sequências de VH e VL, mutações de reversão são mostradas. (Vide também Figs. 13-15 para mostra de mutações de reversão). Em alguns casos, mutações de reversão estão sombreadas ou estão em negrito e sublinhadas e sombreadas de cinza. SEQ ID Nome Sequência

NO

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLI 9G4 kappa LC YDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAGYYCQQRSYWP 1 (aka. ILT4.1-kappa) WTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE

AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWNWIRQPPGKGLE WLGYIYYSGSTKYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYY CASSGWYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL

GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPS 9G4-IgG1.1f HC

SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAP 2 (aka. ILT4.1-IgG1.1f)

SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK

AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLI 9C8 kappa LC YDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPF 3 ILT4.2-kappa TFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK

VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSSDINWVRQATGQGLE WMGWMNPNSGHTGYAQKFQDRVTLTRDTSISTAYMELSSLRSEDSA

VYYCARGGNSIDWGFSYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPS 9C8-IgG1.1f HC SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG ILT4.2-IgG1.1f LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTC 4

PPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR

WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 5 2H2 kappa LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRL

SEQ ID Nome Sequência

NO ILT4.3-kappa LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSS

YTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC QVQLVQSGAEVKKPGSSVEVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLE WMGGIIPILATANYAPKFQGRVTITADEFTSSAYMELSSLRSEDTAVYY CAKSSITMIRGAYLYYYDGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPS

SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG 2H2-IgG1.1fHC

LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTC 6 ILT4.3-IgG1.1f

PPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLI 2E5 kappa LC YDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWP 7 ILT4.4-kappa PWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR

EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKH KVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGL EWVAVIWYDGSNEYYAESVKGRLTISRDNSKNTLYLQVNSLRAEDTA VYYCARDPFYGSGNYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST

SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS 2E5-IgG1.1f HC SVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPA 8 ILT4.4-IgG1.1f PEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV

DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLI 24E5 kappa LC YAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYP 9 ILT4.5-kappa LTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREA

KVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKV

YACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 24E5-IgG1.1 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYVMSWVRQAPGKGLE 10 ILT4.5-IgG1.1f WVSGISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV

YYCAKDQDIIAAYYFVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG

SEQ ID Nome Sequência

NO GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRL 21D9 kappa LC LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSS 11 ILT4.6-kappa PLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE

AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHK VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC EGQLLESGGDLVQPGGSLRLSCATSGFTFSNYAMNWVRQAPGKGL EWISVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS

KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL 21D9-IgG1.1f HC

YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP 12 ILT4.6-IgG1.1f

PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW

QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 21D9.e.IgG1.3 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGL ILT4.8.IgG1.3 EWVSVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA

VYYCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG

LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTC 13 PPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK

FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPG

EIALTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRL 21A5 kappa LC LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSTF 14

GGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA

SEQ ID Nome Sequência

NO CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYLHWVRQAPGQGL EWMGIFHPSGDITSSAQNFQGRVTMIRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAV YYCARGGVLRYLDWSHAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK

STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY 21A5.IgG1.3 HC SLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPP 15

CPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRL

LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSTF 21A5.1 kappa LC 16 GGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV (ILT4.9.1K)

QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYLHWVRQAPGQGL EWMGIFHPSGDITSSAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTA VYYCARGGVLRYLDWSHAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSS

KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL 21A5.a.IgG1.3 HC YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP 17 (ILT4.9.IgG1.3) PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF

NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW

QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 10F10 kappa LC AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWFQQKPGKAPKLLI

YDASSLESGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPI 18 TFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK

VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY

ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 10F10.IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGL ILT4.10.IgG1.3 EWVAIISYDEYNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV

YYCAREWVGIRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA 19

LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGA PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH

SEQ ID Nome Sequência

NO NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPG AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLI

YDASSLESGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPI 10F10.1 kappa LC 20 TFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK

VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLI

YDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPI 21 10F10.3 kappa LC TFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK

VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA GCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGC TCCTCATCTATGATGCGTCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAG GTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGC AGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGGTTATTACTGTCAGCAGCGTA

GCTACTGGCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCA 9G4 LC DNA 22 AACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGA ILT4.1-kappa DNA

TGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAAT AACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACA GCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCA TCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA GTGTTAG CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCG GAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTA

GTTACTACTGGAACTGGATTCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGG 9G4 IgG1.1f HC DNA AGTGGCTTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGTACCAAGTACAACCC 23 ILT4.1-IgG1.1f DNA CTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC

CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCC GTGTATTATTGTGCCAGCAGTGGCTGGTACTACTTTGACTATTGGG GCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCC

SEQ ID Nome Sequência

NO CATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGG GCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAAC CGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTG CACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCA GCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCT ACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAA GAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCG TGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTC CCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAG GTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTC AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTC AGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAG TACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAAGCAGCATCGAGA AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGT ACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCA GCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGT GGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCAC GCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAG CTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCA TGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAATGA GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCA GTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCT CCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGG TTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCA GCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAAT

AGTTACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAC 9C8 kappa LC DNA 24 GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGA ILT4.2-kappa DNA

GCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAAC TTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCA GGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTG TTAG

SEQ ID Nome Sequência

NO CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTAAAGAAGCCTGGG GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA GCTCTGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTG AGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTCACACAGGCTATG CACAGAAGTTCCAGGACAGAGTCACCTTGACCCGGGACACCTCCAT AAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACTC GGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTGGGAATAGCATTGACTGGGG GTTCTCCTACTACGGTCTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGT CACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCT GGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGG GCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTG TCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGT GCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAAT

CACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAA 9C8 IgG1.1f DNA 25 TCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAG ILT4.2-IgG1.1f DNA

CCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGG ACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGG TGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACG TGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTC CTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTC TCCAACAAAGCCCTCCCAAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAAG CCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGG TCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCA ATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGG ACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAA GAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCC CCGGGTAAATGA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAG

GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA 2H2 kappa LC DNA GCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCA 26 ILT4.3-kappa DNA GGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAG

ACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCAT CAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG

SEQ ID Nome Sequência

NO TATGGTAGCTCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCA AACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGA TGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAAT AACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACA GCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCA TCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGA GTGTTAG CAGGTCCAGTTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG TCCTCGGTGGAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGGGGCACCTTCAGC AACTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTT GAGTGGATGGGAGGGATCATCCCCATCTTGGCTACAGCAAACTAC GCACCGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATTC ACGAGCTCAGCTTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGAC ACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAGTCTAGTATTACTATGATTCGGG GAGCCTATCTTTACTACTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGG GACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGT CTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGC GGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGAC GGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTT

CCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTG 2H2 IgG1.1f HC DNA GTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGC 27 ILT4.3-IgG1.1f DNA AACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTT

GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAG CACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAA AACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG CGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAA CTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCC GCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTG CAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAAGCAGCATCGAGAAAACCATC TCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTG CCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACC TGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGG GAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCC GTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCG

SEQ ID Nome Sequência

NO TGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCG TGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTC CCTGTCCCCGGGTAAATGA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA GCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGC TCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAG GTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGC AGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTA

GCAACTGGCCTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAA 2E5 kappa LC DNA 28 TCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATC ILT4.4-kappa DNA

TGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTG AATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATA ACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGG ACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGA GCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCAC CCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGG AGAGTGTTAG CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGG GAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCGTCTGGATTCACCTTCAGT AACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTG GAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATGAATACTATG CAGAATCCGTGAAGGGCCGACTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GAACACGCTGTATCTGCAAGTGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACAC GGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGATCCTTTCTATGGTTCGGGGAAT TACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG

CTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCA 2E5 IgG1.1f HC DNA 29 AGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAG ILT4.4-IgG1.1f DNA

GACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCC CTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCA GGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGC TTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAAC TCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCC GTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATC TCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC GAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAG

SEQ ID Nome Sequência

NO GTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGC ACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGG CTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCC CAAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCC GAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGA CCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTT CTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCA GGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAAC CACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAATGA GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTAG GAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCA GCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAGTC CCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGG TTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCA GCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAAT

AGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAC 24E5 kappa LC DNA 30 GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGA ILT4.5-kappa DNA

GCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAAC TTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCA AGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCA GGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTG TTAG GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGG GGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCA GCTATGTCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGG AGTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGC

AGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG 24E5 IgG1.1f HC DNA 31 AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACG ILT4.5-IgG1.1f DNA

GCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCAGGATATTATAGCAGCATACTA CTTTGTCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCT AGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAG AGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGA CTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCT

SEQ ID Nome Sequência

NO GACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGG ACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTT GGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAA CACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCG TCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCT CCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGG TGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCA CGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGC TGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCC AAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCG AGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGAC CAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCC AGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAA CAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTT CTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCA GGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAAC CACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAATGA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA GCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCA GGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAG ACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCAT CAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG

TATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAG 21D9 kappa LC DNA 32 ATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT ILT4.6-kappa DNA

CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCT GAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGAT AACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAG GACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTG AGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGG GAGAGTGTTAG

GAGGGACAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACAGCCTGGG 21D9 IgG1.1f HC DNA 33 GGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAACCTCTGGATTCACCTTTAGCA ILT4.6-IgG1.1f DNA

ACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGG

SEQ ID Nome Sequência

NO AGTGGATCTCAGTTATTAGTGTTAGTGGTGGTAGCACATACTACGC AGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACG GCCGTATATTACTGTGCGAAAGATTATTACTATGATTCGGGGAGTTA TTATGACTCTTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACC GTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGC CTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAAC TCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACA AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTT GTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCG AAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACAC CCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGA CGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGA CGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGC AGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAA CAAAGCCCTCCCAAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAA GGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGG GAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGG CAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC GACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCA GGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGG CTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGG GTAAATGA GAGGGACAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACAGCCTGG

GGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAACCTCTGGATTCACCTTTAG 21D9.IgG1.3 HC DNA CAACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGC ILT4.6-IgG1.3 HC DNA TGGAGTGGATCTCAGTTATTAGTGTTAGTGGTGGTAGCACATACTA 34 (a região variável está CGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTC sublinhada e em CAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGG negrito) ACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATTATTACTATGATTCGGG

GAGTTATTATGACTCTTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTG GTCACCGTCTCCTCA

SEQ ID Nome Sequência

NO GCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCC AAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC AGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAG CTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGC AACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAA CTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCC CGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGAT CTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA CGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAG CACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTC CCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATG ACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATC CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAG AACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCC TTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAA

CCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 21D9.b.IgG1.3 HC GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGG

DNA AGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCACCTCTGGCTTCACATTTTCC AACTATGCCATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCTGGCAAGGGACTG GAGTGGATCTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA AGAATACACTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA

CAGCCGTGTACTATTGTGCCAAGGACTACTATTACGATTCCGGCTC 35 TTATTACGACTCCTTCTTTGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG

ACAGTGAGCTCCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGG CTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTG GAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTG CCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATC ACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAAT

SEQ ID Nome Sequência

NO CTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGA CACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGT GGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGT GGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG AGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCT GCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC CAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC AAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCC CGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCC

GGGTTGA 21D9.b.IgG1.3 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE

WISVISVSGGSTYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDYYYDSGSYY DSFFDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS

GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN 36

TKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS

LSPG 21D9.c.IgG1.3 HC GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGACCTGGTGCAGCCAGG

DNA AGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCGCCTCTGGCTTCACATTTTCC AACTATGCCATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCTGGCAAGGGACTG

GAGTGGATCTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG 37 CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA

AGAATACACTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CAGCCGTGTACTATTGTGCCAAGGACTACTATTACGATTCCGGCTC TTATTACGACTCCTTCTTTGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG ACAGTGAGCTCCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG

SEQ ID Nome Sequência

NO GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGG CTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTG GAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTG CCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATC ACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAAT CTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGA CACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGT GGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGT GGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG AGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCT GCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC CAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC AAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCC CGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCC

GGGTTGA 21D9.c.IgG1.3 HC EVQLLESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE

GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN 38

LSPG 21D9.d.IgG1.3 HC GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGACCTGGTGCAGCCAGG 39 DNA AGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCACCTCTGGCTTCACATTTTCC

AACTATGCCATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCTGGCAAGGGACTG

SEQ ID Nome Sequência

NO GAGTGGGTGTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA AGAATACACTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CAGCCGTGTACTATTGTGCCAAGGACTACTATTACGATTCCGGCTC TTATTACGACTCCTTCTTTGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG ACAGTGAGCTCCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGG CTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTG GAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTG CCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATC ACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAAT CTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGA CACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGT GGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGT GGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG AGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCT GCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC CAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC AAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCC CGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATG AGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCC

GGGTTGA 21D9.d.IgG1.3 HC EVQLLESGGDLVQPGGSLRLSCATSGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE

WVSVISVSGGSTYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDYYYDSGSYY

DSFFDYWGQGTL 40 VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS

GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL

SEQ ID Nome Sequência

NO PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS

LSPG 21D9.e.IgG1.3 HC ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGAGAGCG

DNA CTCGCAGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAG ILT4.8.IgG1.3 HC DNA CCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACC Com peptídeo de sinal TTTAGCAACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG (o peptídeo de sinal GGGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTAGTGTTAGTGGTGGTAGCACAT codificando sequência ACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACA está sublinhado) ATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGA

GGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATTATTACTATGATTCG GGGAGTTATTATGACTCTTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCC TGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCC CCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCT GGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGC TGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTG

AATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCC 41

AAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAA GGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGT GGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTA CGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGA GGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGT CCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGT CTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCA TCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTG GTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGC AATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTG GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACA AGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGC ATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTC

CCCGGGT 21A5 LC GAGATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGGCACACTGTCTCTGAGCCC 42

DNA AGGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGAGCCTCCCAGTCTGTGA

SEQ ID Nome Sequência

NO (sequência de GCTCCTCTTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCAC codificação de região CTAGGCTGCTGATCTACGGAGCCAGCTCCAGGGCAACCGGCATC variável sublinhada e CCTGACCGCTTCAGCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTCACCCTG em negrito) ACAATCTCTAGGCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTATTGT

CAGCAGTATGGCTCCACCTTTGGCGGCGGCACAAAGGTGGAGAT CAAG GAATTCGCCACCATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGG CCGGGCGCGCCCTCGCAGAGATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGGC ACACTGTCTCTGAGCCCAGGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGA GCCTCCCAGTCTGTGAGCTCCTCTTACCTGGCCTGGTATCAGCAGA AGCCAGGACAGGCACCTAGGCTGCTGATCTACGGAGCCAGCTCCA GGGCAACCGGCATCCCTGACCGCTTCAGCGGCTCCGGCTCTGGCA CAGACTTCACCCTGACAATCTCTAGGCTGGAGCCCGAGGACTTCGC CGTGTACTATTGTCAGCAGTATGGCTCCACCTTTGGCGGCGGCACA AAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCGTCCGTGTTTATC TTCCCTCCATCGGACGAGCAGCTCAAGTCCGGTACCGCGAGCGTG GTCTGCCTGCTGAACAATTTCTACCCGCGCGAAGCTAAAGTGCAAT GGAAGGTCGATAACGCACTTCAGTCCGGGAACAGCCAGGAATCTG TGACCGAGCAGGACTCCAAGGATTCGACCTATTCCCTGTCCTCGAC TCTCACCCTGTCAAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTCTACGCC TGCGAAGTGACCCATCAGGGCTTGTCCTCACCCGTGACTAAGAGCT TCAACCGGGGAGAGTGTTAGTGA CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCAGAGGTGAAGAAGCCAGG AGCCTCTGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCAC AGATTACTATCTGCACTGGGTGCGGCAGGCACCAGGACAGGGAC TGGAGTGGATGGGCATCTTCCACCCTTCTGGCGACATCACAAGCT CCGCCCAGAACTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACAAGAGATACC

AGCACATCCACCGTGTACATGGAGCTGTCTAGCCTGAGGTCTGAG 21A5.IgG1.3 HC

GACACCGCCGTGTACTATTGTGCAAGGGGAGGCGTGCTGAGGTA

DNA 43 TCTGGACTGGAGCCACGCCTTTGATATCTGGGGCCAGGGCACAAT (região variável em

GGTGACCGTGTCCTCT negrito e sublinhada)

GCTAGCACCAAAGGACCTTCAGTGTTCCCGCTCGCGCCGTCATCCA AGTCCACCTCCGGCGGAACCGCTGCCCTGGGATGCCTTGTGAAGG ACTACTTCCCTGAGCCTGTGACTGTGTCCTGGAACTCCGGAGCCCT GACCTCCGGCGTGCATACCTTCCCTGCTGTGCTGCAATCAAGCGG CCTCTACTCATTGAGCTCCGTCGTGACCGTGCCGAGCTCCAGCCTC GGTACTCAAACCTACATCTGCAATGTCAACCACAAGCCCAGCAACA

SEQ ID Nome Sequência

NO CCAAGGTCGATAAGAGAGTGGAGCCCAAGTCGTGCGACAAGACTC ACACTTGTCCCCCATGCCCGGCCCCCGAGGCCGAGGGGGCCCCG AGCGTCTTTCTGTTCCCGCCTAAGCCCAAGGATACCCTGATGATTT CGCGGACTCCCGAAGTGACCTGTGTCGTGGTGGACGTGTCCCACG AAGATCCCGAAGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGAGTCGAGG TGCACAACGCAAAGACCAAGCCTCGCGAGGAACAGTACAACTCGA CCTATCGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCATCAGGACTGGC TCAACGGAAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCCCTGC CAGCGCCCATTGAAAAGACTATCAGCAAGGCCAAGGGGCAGCCAA GGGAACCCCAAGTGTACACCCTGCCTCCGTCCCGCGAAGAAATGA CCAAGAACCAGGTGTCCCTGACGTGCTTGGTCAAGGGCTTTTACCC TTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCGAACGGGCAGCCGGAAAA CAACTACAAGACCACTCCACCGGTGCTCGACTCGGATGGCTCGTTC TTCCTGTATTCGAAGCTGACTGTCGACAAAAGCCGGTGGCAGCAGG GCAATGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCCCTCCACAACCA CTACACCCAGAAGTCTCTGAGCCTTTCCCCGGGATGA ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGCGCGCC TTGGCCGAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGT CTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTG TTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCAT

CCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCT 21A5.1 kappa LC DNA

CACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGT (ILT4.9.1K)

CAGCAGTATGGTAGCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATC 44 DNA

AAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTG

ATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAA Com peptídeo de sinal

TAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAAC GCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGAC AGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGC AAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCC ATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG

AGTGT 21A5.a.IgG1.3 HC ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGAGAGCG

DNA CTCGCACAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAG 45 (ILT4.9.IgG1.3) CCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCT

DNA TCACCGACTACTATTTGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAG GGCTTGAGTGGATGGGAATATTCCACCCTAGTGGTGATATCACAAG

SEQ ID Nome Sequência

NO Com peptídeo de sinal CTCCGCACAGAACTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACAC

GTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGA GGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGAGGCGTGCTGAGGTA TCTGGACTGGAGCCATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATG GTCACCGTCTCTTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCC TGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGG GCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTG TCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGT GCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAAT CACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAA TCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAG CCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGG ACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGG TGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACG TGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTC CTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTC TCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAG CCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGG TCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCA ATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGG ACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAA GAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCC

CCGGGT 10F10 kappa LC DNA ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGCGCGCC ILT4.10K CTCGCAGCCATCCAGCTGACCCAGTCTCCTAGCTCCCTGTCTGCCA

DNA GCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAA

TCTCTAGCGCCCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCC Com peptídeo de sinal CTAAGCTGCTGATCTACGATGCCTCCTCTCTGGAGAGCGGAGTGCC 46

ATCCAGGTTCACCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACA ATCAGCTCCCTGCAGCCAGAGGATTTTGCCACATACTATTGTCAGC AGTTCAACAGCTATCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGGA GATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCGTCCGTGTTTATCTTCCCTCCA TCGGACGAGCAGCTCAAGTCCGGTACCGCGAGCGTGGTCTGCCTG

SEQ ID Nome Sequência

NO CTGAACAATTTCTACCCGCGCGAAGCTAAAGTGCAATGGAAGGTCG ATAACGCACTTCAGTCCGGGAACAGCCAGGAATCTGTGACCGAGC AGGACTCCAAGGATTCGACCTATTCCCTGTCCTCGACTCTCACCCT GTCAAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTCTACGCCTGCGAAGT GACCCATCAGGGCTTGTCCTCACCCGTGACTAAGAGCTTCAACCGG

GGAGAGTGT 10F10.IgG1.3 HC DNA ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGCGCGCC ILT4.10.IgG1.3 CTCGCACAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGAGTGGTGCA

DNA GCCAGGCCGGTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCAGCGGCTTCAC

CTTTAGCTCCTACGCAATGCACTGGGTGAGGCAGGCACCTGGCAA Com peptídeo de sinal GGGACTGGAGTGGGTGGCCATCATCAGCTACGACGAGTATAACAA

GTACTATGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCTCCCGCGAC AACTCTAAGAATACACTGTACCTGCAGATGAATAGCCTGAGAGCCG AGGATACAGCCGTGTACTATTGTGCCCGGGAGTGGGTGGGCATCA GATATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCTAGCGCTAGCA CCAAAGGACCTTCAGTGTTCCCGCTCGCGCCGTCATCCAAGTCCAC CTCCGGCGGAACCGCTGCCCTGGGATGCCTTGTGAAGGACTACTT CCCTGAGCCTGTGACTGTGTCCTGGAACTCCGGAGCCCTGACCTC CGGCGTGCATACCTTCCCTGCTGTGCTGCAATCAAGCGGCCTCTAC TCATTGAGCTCCGTCGTGACCGTGCCGAGCTCCAGCCTCGGTACT

CAAACCTACATCTGCAATGTCAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGG 47 TCGATAAGAGAGTGGAGCCCAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTG

TCCCCCATGCCCGGCCCCCGAGGCCGAGGGGGCCCCGAGCGTCT TTCTGTTCCCGCCTAAGCCCAAGGATACCCTGATGATTTCGCGGAC TCCCGAAGTGACCTGTGTCGTGGTGGACGTGTCCCACGAAGATCC CGAAGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAA CGCAAAGACCAAGCCTCGCGAGGAACAGTACAACTCGACCTATCG GGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCATCAGGACTGGCTCAACGG AAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCCCTGCCAGCGCC CATTGAAAAGACTATCAGCAAGGCCAAGGGGCAGCCAAGGGAACC CCAAGTGTACACCCTGCCTCCGTCCCGCGAAGAAATGACCAAGAAC CAGGTGTCCCTGACGTGCTTGGTCAAGGGCTTTTACCCTTCCGACA TCGCCGTGGAGTGGGAGTCGAACGGGCAGCCGGAAAACAACTACA AGACCACTCCACCGGTGCTCGACTCGGATGGCTCGTTCTTCCTGTA TTCGAAGCTGACTGTCGACAAAAGCCGGTGGCAGCAGGGCAATGT GTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCCCTCCACAACCACTACACC CAGAAGTCTCTGAGCCTTTCCCCGGGA

SEQ ID Nome Sequência

NO GCCATCCAGCTGACCCAGTCTCCTAGCTCCCTGTCTGCCAGCGTG GGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAATCTCT AGCGCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAG CTGCTGATCTATGATGCCTCCTCTCTGGAGAGCGGAGTGCCATCCA GGTTCACCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACAATCAG CTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATACTATTGTCAGCAGTTC

AACAGCTACCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGGAGATC 10F10.1 kappa LC 48 AAGCGTACGGTGGCCGCCCCGTCCGTGTTTATCTTCCCTCCATCGG

DNA ACGAGCAGCTCAAGTCCGGTACCGCGAGCGTGGTCTGCCTGCTGA ACAATTTCTACCCGCGCGAAGCTAAAGTGCAATGGAAGGTCGATAA CGCACTTCAGTCCGGGAACAGCCAGGAATCTGTGACCGAGCAGGA CTCCAAGGATTCGACCTATTCCCTGTCCTCGACTCTCACCCTGTCA AAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTCTACGCCTGCGAAGTGACC CATCAGGGCTTGTCCTCACCCGTGACTAAGAGCTTCAACCGGGGA GAGTGT ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGCGCGCC CTCGCAGCCATCCAGCTGACCCAGTCTCCTAGCTCCCTGTCTGCCA GCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAA TCTCTAGCGCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCC CTAAGCTGCTGATCTATGATGCCTCCTCTCTGGAGAGCGGAGTGCC

ATCCAGGTTCAGCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACA 10F10.3 kappa LC

ATCAGCTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATACTATTGTCAGC DNA

AGTTCAACAGCTACCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGG 49 ILT4.11K

AGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCGTCCGTGTTTATCTTCCCTCC DNA

ATCGGACGAGCAGCTCAAGTCCGGTACCGCGAGCGTGGTCTGCCT Com peptídeo de sinal

GCTGAACAATTTCTACCCGCGCGAAGCTAAAGTGCAATGGAAGGTC GATAACGCACTTCAGTCCGGGAACAGCCAGGAATCTGTGACCGAG CAGGACTCCAAGGATTCGACCTATTCCCTGTCCTCGACTCTCACCC TGTCAAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTCTACGCCTGCGAAG TGACCCATCAGGGCTTGTCCTCACCCGTGACTAAGAGCTTCAACCG

GGGAGAGTGT 9G4 VL APAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSS ILT4.1K YLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLE 50 VL (incluindo PEDFAGYYCQQRSYWPWTFGQGTKVEIK sequência de sinal, resíduos 1-18) 51 9G4.IgG1.1 VH MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSI

SEQ ID Nome Sequência

NO ILT4.1.IgG1.1 SSYYWNWIRQPPGKGLEWLGYIYYSGSTKYNPSLKSRVTISVDTSKN VH (incluindo QFSLKLSSVTAADTAVYYCASSGWYYFDYWGQGTLVTVSS sequência de sinal, resíduos 1-19)

GCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTACTCTGGCTCCCAGATA CCACCGGAGAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTT

GTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAG 9G4 VL DNA TGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCT 52 ILT4.1K CCCAGGCTCCTCATCTATGATGCGTCCAACAGGGCCACTGGCATCC

VL DNA CAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGGTTATTACTGTCA GCAGCGTAGCTACTGGCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGT GGAAATCAAA ATGAAACATCTGTGGTTCTTCCTTCTCCTGGTGGCAGCTCCCAGAT GGGTCCTGTCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTG

GTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTG 9G4.IgG1.1 VH DNA GCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAACTGGATCCGGCAGCCCCCAG 53 ILT4.1.IgG1.1 GGAAGGGACTGGAGTGGCTTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGTA

VH DNA CCAAGTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGA CACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCT GCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCCAGCAGTGGCTGGTACTACT TTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA

AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIY 9C8 kappa VL

DASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPFT 54 ILT4.2K

FGPGTKVDIK VL

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSSDINWVRQATGQGLE 9C8.IgG1.1 VH

WMGWMNPNSGHTGYAQKFQDRVTLTRDTSISTAYMELSSLRSEDSA 55 ILT4.2.IgG1.1

VYYCARGGNSIDWGFSYYGLDVWGQGTTVTVSS VH GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCA 9C8 kappa VL DNA GTGCTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCT 56 ILT4.2K CCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGG

VL DNA TTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCA GCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAAT AGTTACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA

SEQ ID Nome Sequência

NO CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTAAAGAAGCCTGGG GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA

GCTCTGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTG 9C8.IgG1.1 VH DNA AGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTCACACAGGCTATG 57 ILT4.2.IgG1.1 CACAGAAGTTCCAGGACAGAGTCACCTTGACCCGGGACACCTCCAT

VH DNA AAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACTC GGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTGGGAATAGCATTGACTGGGG GTTCTCCTACTACGGTCTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGT CACCGTCTCCTCA

QVQLVQSGAEVKKPGSSVEVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLE 2H2.IgG1.1 VH

WMGGIIPILATANYAPKFQGRVTITADEFTSSAYMELSSLRSEDTAVYY 58 ILT4.3.IgG1.1

CAKSSITMIRGAYLYYYDGMDVWGQGTTVTVSS

VH 2H2 kappa VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL ILT4.3K IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSYT 59

VL FGQGTKLEIK CAGGTCCAGTTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG TCCTCGGTGGAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGGGGCACCTTCAGC

AACTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTT 2H2.IgG1.1 VH DNA

GAGTGGATGGGAGGGATCATCCCCATCTTGGCTACAGCAAACTAC ILT4.3.IgG1.1 60 GCACCGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATTC

VH DNA ACGAGCTCAGCTTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGAC ACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAGTCTAGTATTACTATGATTCGGG GAGCCTATCTTTACTACTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGG GACCACGGTCACCGTCTCCTCA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA

GCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCA 2H2 kappa VL DNA

GGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAG 61 ILT4.3K

ACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCAT VL DNA CAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG TATGGTAGCTCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCA

AA 2E5 kappa VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLI 62 ILT4.4K YDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPP

VL WTFGQGTKVEIK

SEQ ID Nome Sequência

NO

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLE 2E5.IgG1.1 VH

WVAVIWYDGSNEYYAESVKGRLTISRDNSKNTLYLQVNSLRAEDTAVY 63 ILT4.4.IgG1.1

YCARDPFYGSGNYFDYWGQGTLVTVSS VH GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA

GCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGC 2E5 kappa VL DNA

TCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAG 64 ILT4.4K

GTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGC VL AGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTA GCAACTGGCCTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAA TCAAA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGG GAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCGTCTGGATTCACCTTCAGT

AACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTG 2E5.IgG1.1 VH DNA

GAGTGGGTGGCAGTTATCTGGTATGATGGAAGTAATGAATACTATG 65 ILT4.4.IgG1.1

CAGAATCCGTGAAGGGCCGACTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA VH GAACACGCTGTATCTGCAAGTGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACAC GGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGATCCTTTCTATGGTTCGGGGAAT TACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLI 24E5 kappa VL

YAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPL 66 ILT4.5K

TFGGGTKVEIK VL

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYVMSWVRQAPGKGLE 24E5.IgG1.1 VH

WVSGISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV 67 ILT4.5.IgG1.1

YYCAKDQDIIAAYYFVYWGQGTLVTVSS VH GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCA 24E5 kappa VL DNA GCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAGTC 68 ILT4.5K CCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGG

VL TTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCA GCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAAT

AGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA 24E5.IgG1.1 VH DNA GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGG 69 ILT4.5.IgG1.1 GGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCA

SEQ ID Nome Sequência

NO VH GCTATGTCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGG AGTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGC AGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACG GCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCAGGATATTATAGCAGCATACTA CTTTGTCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL 21D9K kappa VL

IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPL 70 ILT4.6K

TFGGGTKVEIK VL

EGQLLESGGDLVQPGGSLRLSCATSGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE 21D9.IgG1.1 VH

WISVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY 71 ILT4.6.IgG1.1

YCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSS VH GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA

GCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCA 21D9K kappa VL DNA

GGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAG 72 ILT4.6K

ACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCAT VL DNA CAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG TATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAG ATCAAA GAGGGACAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACAGCCTGGG GGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAACCTCTGGATTCACCTTTAGCA

ACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGG 21D9.IgG1.1 VH DNA AGTGGATCTCAGTTATTAGTGTTAGTGGTGGTAGCACATACTACGC 73 ILT4.6.IgG1.1 AGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG

VH DNA AACACGCTGTATCTGCAAATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACG GCCGTATATTACTGTGCGAAAGATTATTACTATGATTCGGGGAGTTA TTATGACTCTTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACC

GTCTCCTCA 21D9.b.IgG1.3 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE 74 VH WISVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYY

CAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSS 21D9.c.IgG1.3 EVQLLESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE 75 VH WISVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYY

CAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID Nome Sequência

NO 21D9.b.IgG1.3 GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGG

VH DNA AGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCACCTCTGGCTTCACATTTTCC AACTATGCCATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCTGGCAAGGGACTG

GAGTGGATCTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG 76 CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA

AGAATACACTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CAGCCGTGTACTATTGTGCCAAGGACTACTATTACGATTCCGGCTC TTATTACGACTCCTTCTTTGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG

ACAGTGAGCTCC 21D9.c.IgG1.3 GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGACCTGGTGCAGCCAGG

VH DNA AGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCGCCTCTGGCTTCACATTTTCC AACTATGCCATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCTGGCAAGGGACTG

GAGTGGATCTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG 77 CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA

ACAGTGAGCTCC 21D9.d.IgG1.3 EVQLLESGGDLVQPGGSLRLSCATSGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE

VH WVSVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY 78

YCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSS 21D9.d.IgG1.3 GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGACCTGGTGCAGCCAGG

GAGTGGGTGTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG 79 CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA

ACAGTGAGCTCC 21D9.e.IgG1.3 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLE ILT4.8.IgG1.3 WVSVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY 80

VH YCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSS 21D9.e.IgG1.3 VH GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGAGGACTGGTGCAGCCAGG 81

DNA AGGCAGCCTGAGGCTGTCCTGCGCCGCCTCTGGCTTCACATTTTCC

SEQ ID Nome Sequência

NO ILT4.8.IgG1.3 AACTATGCCATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCTGGCAAGGGACTG

VH DNA GAGTGGGTGTCTGTGATCTCTGTGAGCGGCGGCTCTACCTACTATG CCGACAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCAGAGATAACTCCA AGAATACACTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGGGCCGAGGACA CAGCCGTGTACTATTGTGCCAAGGACTACTATTACGATTCCGGCTC TTATTACGACTCCTTCTTTGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG ACAGTGAGCTCC EIALTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL

IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSTFG 82 21A5 kappa VL

GGTKVEIK

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYLHWVRQAPGQGLE 21A5.IgG1.3 WMGIFHPSGDITSSAQNFQGRVTMIRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVY 83

VH YCARGGVLRYLDWSHAFDIWGQGTMVTVSS GAAATTGCGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAG GGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCA

GCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCA 84 21A5 kappa VL DNA GGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAG

ACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCAT CAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAG TATGGTAGCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG GGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACC GACTACTATTTACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTT

GAGTGGATGGGAATATTCCACCCTAGTGGTGATATCACAAGCAGCG 21A5.IgG1.3 85 CACAGAACTTCCAGGGCAGAGTCACCATGATCAGGGACACGTCCA

VH DNA CGAGCACCGTCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATCTGAAGACA CGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGTGTATTACGATATCTTGA CTGGTCCCATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 21A5.a kappa VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL 21A5.1K IYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSTFG 86 ILT4.9K GGTKVEIK

VL 87 21A5.a.IgG1.3 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYLHWVRQAPGQGLE

SEQ ID Nome Sequência

NO ILT4.9.IgG1.3 WMGIFHPSGDITSSAQNFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAV

VH YYCARGGVLRYLDWSHAFDIWGQGTMVTVSS

GAGATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGGCACACTGTCTCTGAGCCCA 21A5.a kappa VL DNA GGAGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGAGCCTCCCAGTCTGTGAGC 21A5.1K TCCTCTTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCACCTA 88 ILT4.9K GGCTGCTGATCTACGGAGCCAGCTCCAGGGCAACCGGCATCCCTG

VL ACCGCTTCAGCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTCACCCTGACAAT CTCTAGGCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTATTGTCAGCA GTATGGCTCCACCTTTGGCGGCGGCACAAAGGTGGAGATCAAG CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCAGAGGTGAAGAAGCCAGG

AGCCTCTGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCAC 21A5.a.IgG1.3 VH AGATTACTATCTGCACTGGGTGCGGCAGGCACCAGGACAGGGACT

DNA GGAGTGGATGGGCATCTTCCACCCTTCTGGCGACATCACAAGCTCC 89 ILT4.9.IgG1.3 GCCCAGAACTTTCAGGGCCGGGTGACCATGACAAGAGATACCAGC

VH ACATCCACCGTGTACATGGAGCTGTCTAGCCTGAGGTCTGAGGACA CCGCCGTGTACTATTGTGCAAGGGGAGGCGTGCTGAGGTATCTGG ACTGGAGCCACGCCTTTGATATCTGGGGCCAGGGCACAATGGTGA CCGTGTCCTCT

AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWFQQKPGKAPKLLIY 10F10 kappa VL

DASSLESGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITF 90 ILT4.10K

GQGTRLEIK VL

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLE 10F10.IgG1.3 VH

WVAIISYDEYNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY 91 ILT4.10.IgG1.3

YCAREWVGIRYWGQGTLVTVSS VH GCCATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG

GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGCA 10F10 kappa VL DNA GTGCTTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCT 92 ILT4.10K CCTGATCTATGATGCCTCCAGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGG

VL TTCACCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCA GCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGTTTAAT

AGTTACCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA 10F10.IgG1.3 VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGG 93 ILT4.10.IgG1.3 GAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGT

VH AGCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTG

SEQ ID Nome Sequência

NO GAGTGGGTGGCAATTATATCATATGATGAATACAATAAATACTACGC AGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACG GCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTGGGTGGGGATACGTTACTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA

AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIY 10F10.1 kappa DASSLESGVPSRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITF 94

VL GQGTRLEIK GCCATCCAGCTGACCCAGTCTCCTAGCTCCCTGTCTGCCAGCGTG GGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAATCTCT

AGCGCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAG 10F10.1 kappa CTGCTGATCTATGATGCCTCCTCTCTGGAGAGCGGAGTGCCATCCA 95

VL DNA GGTTCACCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACAATCAG CTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATACTATTGTCAGCAGTTC AACAGCTACCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGGAGATC AAG

AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIY 10F10.3 kappa VL

DASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITF 96 ILT4.11K

GQGTRLEIK VL GCCATCCAGCTGACCCAGTCTCCTAGCTCCCTGTCTGCCAGCGTG

GGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAATCTCT 10F10.3 kappa VL AGCGCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAG

DNA CTGCTGATCTATGATGCCTCCTCTCTGGAGAGCGGAGTGCCATCCA 97 ILT4.11K GGTTCAGCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACAATCAG

VL DNA CTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATACTATTGTCAGCAGTTC AACAGCTACCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGGAGATC AAG ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK

RVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC Região Constante 98 VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV IgG1f Humana

LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 99 IgG1f DNA de Região GCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCC

SEQ ID Nome Sequência

NO Constante AAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA

GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC AGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAG CTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGC AACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAA CTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGAC CGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGAT CTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA CGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAG CACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTC CCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATG ACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATC CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAG AACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCC TTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAA

CCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAATGA 100 IgG1.3 (ou IgG1.3f) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS região constante de GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK cadeia pesada RVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC (L234A, L235E, VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV G237A) LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE

EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 101 Região constante de RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQ cadeia leve exemplar SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS

PVTKSFNRGEC 102 IgG1f (halotipo f do tipo ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS selvagem humano GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK ) região constante de RVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC cadeia pesada VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV

SEQ ID Nome Sequência

NO

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 103 IgG1.1f ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS Região constante de GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK cadeia pesada (L234A, RVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC L235E, G237A, A330S, VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV P331S) LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE

EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 104 IgG1fa.P238K (ou ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS IgG1.P238K) região GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK constante de cadeia RVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGKSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC pesada VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTV

LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRD ELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 105 IgG1.3 DNA de GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCC região constante de AAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA cadeia pesada GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGC

CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTC AGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAG CTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGC AACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAA CTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCC CGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGAT CTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCA CGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAG CACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTC CCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATG ACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATC CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAG AACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCC TTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAA CCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA

SEQ ID Nome Sequência

NO 106 DNA de CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATG região constante de AGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAA cadeia leve exemplar CTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCC

CTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGC AAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAA GCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATC AGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGT GTTAG MTPIVTVLIC LGLSLGPRTH VQTGTIPKPT LWAEPDSVIT QGSPVTLSCQ GSLEAQEYRL YREKKSASWI TRIRPELVKN GQFHIPSITW EHTGRYGCQY YSRARWSELS DPLVLVMTGA YPKPTLSAQP SPVVTSGGRV TLQCESQVAF GGFILCKEGE

EEHPQCLNSQ PHARGSSRAI FSVGPVSPNR RWSHRCYGYD Precursor de ILT4 LNSPYVWSSP SDLLELLVPG VSKKPSLSVQ PGPVVAPGES humano, com peptídeo LTLQCVSDVG YDRFVLYKEG ERDLRQLPGR QPQAGLSQAN 107 de sinal FTLGPVSRSY GGQYRCYGAH NLSSECSAPS DPLDILITGQ (UniProtKB Ref. IRGTPFISVQ PGPTVASGEN VTLLCQSWRQ FHTFLLTKAG Q8N423.4, 24-JUL- AADAPLRLRS IHEYPKYQAE FPMSPVTSAH AGTYRCYGSL 2013) NSDPYLLSHP SEPLELVVSG PSMGSSPPPT GPISTPAGPE

DQPLTPTGSD PQSGLGRHLG VVIGILVAVV LLLLLLLLLF LILRHRRQGK HWTSTQRKAD FQHPAGAVGP EPTDRGLQWR SSPAADAQEE NLYAAVKDTQ PEDGVEMDTR AAASEAPQDV TYAQLHSLTL RRKATEPPPS QEREPPAEPS IYATLAIH QTGTIPKPTL WAEPDSVITQ GSPVTLSCQG SLEAQEYRLY REKKSASWIT RIRPELVKNG QFHIPSITWE HTGRYGCQYY SRARWSELSD PLVLVMTGAY PKPTLSAQPS PVVTSGGRVT LQCESQVAFG GFILCKEGEE EHPQCLNSQP HARGSSRAIF SVGPVSPNRR WSHRCYGYDL NSPYVWSSPS DLLELLVPGV

SKKPSLSVQP GPVVAPGESL TLQCVSDVGY DRFVLYKEGE ILT4 humano maduro, RDLRQLPGRQ PQAGLSQANF TLGPVSRSYG GQYRCYGAHN 108 sem peptídeo de sinal LSSECSAPSD PLDILITGQI RGTPFISVQP GPTVASGENV

TLLCQSWRQF HTFLLTKAGA ADAPLRLRSI HEYPKYQAEF PMSPVTSAHA GTYRCYGSLN SDPYLLSHPS EPLELVVSGP SMGSSPPPTG PISTPAGPED QPLTPTGSDP QSGLGRHLGV VIGILVAVVL LLLLLLLLFL ILRHRRQGKH WTSTQRKADF QHPAGAVGPE PTDRGLQWRS SPAADAQEEN LYAAVKDTQP EDGVEMDTRA AASEAPQDVT YAQLHSLTLR RKATEPPPSQ

SEQ ID Nome Sequência

NO EREPPAEPSI YATLAIH GTIPKPTL WAEPDSVITQ GSPVTLSCQG SLEAQEYRLY REKKSASWIT RIRPELVKNG QFHIPSITWE HTGRYGCQYY SRARWSELSD PLVLVMTGAY PKPTLSAQPS PVVTSGGRVT

LQCESQVAFG GFILCKEGEE EHPQCLNSQP HARGSSRAIF Região de ECD de SVGPVSPNRR WSHRCYGYDL NSPYVWSSPS DLLELLVPGV 109 ILT4 humano SKKPSLSVQP GPVVAPGESL TLQCVSDVGY DRFVLYKEGE

RDLRQLPGRQ PQAGLSQANF TLGPVSRSYG GQYRCYGAHN LSSECSAPSD PLDILITGQI RGTPFISVQP GPTVASGENV TLLCQSWRQF HTFLLTKAGA ADAPLRLRSI HEYPKYQAEF PMSPVTSAHA GTYRCYGSLN SDPYLLSHPS EPLELVVSGP SMGSSPPPTG PISTPAGPED QPLTPTGSDP QSGLGRHLGV MTPIVTVLIC LGLSLGPRTH VQTGTIPKPT LWAEPDSVIT QGSPVTLSCQ GSLEAQEYRL YREKKSASWI TRIRPELVKN GQFHIPSITW EHTGRYGCQY YSRARWSELS DPLVLVMTGA YPKPTLSAQP SPVVTSGGRV TLQCESQVAF GGFILCKEGE

EEHPQCLNSQ PHARGSSRAI FSVGPVSPNR RWSHRCYGYD Precursor de ILT4

LNSPYVWSSP SDLLELLVPG VSKKPSLSVQ PGPVVAPGES humano, com peptídeo

LTLQCVSDVG YDRFVLYKEG ERDLRQLPGR QPQAGLSQAN de sinal, isoforma 2 110 FTLGPVSRSY GGQYRCYGAH NLSSECSAPS DPLDILITGQ (NCBI Ref.

IRGTPFISVQ PGPTVASGEN VTLLCQSWRQ FHTFLLTKAG NP_001074447.1, 12-

AADAPLRLRS IHEYPKYQAE FPMSPVTSAH AGTYRCYGSL SEP-2013)

NSDPYLLSHP SEPLELVVSG PSMGSSPPPT GPISTPGPED QPLTPTGSDP QSGLGRHLGV VIGILVAVVL LLLLLLLLFL ILRHRRQGKH WTSTQRKADF QHPAGAVGPE PTDRGLQWRS SPAADAQEEN LYAAVKDTQP EDGVEMDTRA AASEAPQDVT YAQLHSLTLR RKATEPPPSQ EREPPAEPSI YATLAIH QTGTIPKPTL WAEPDSVITQ GSPVTLSCQG SLEAQEYRLY REKKSASWIT RIRPELVKNG QFHIPSITWE HTGRYGCQYY

SRARWSELSD PLVLVMTGAY PKPTLSAQPS PVVTSGGRVT ILT4 maduro humano, LQCESQVAFG GFILCKEGEE EHPQCLNSQP HARGSSRAIF isoforma 2, sem SVGPVSPNRR WSHRCYGYDL NSPYVWSSPS DLLELLVPGV 111 peptídeo de sinal SKKPSLSVQP GPVVAPGESL TLQCVSDVGY DRFVLYKEGE

RDLRQLPGRQ PQAGLSQANF TLGPVSRSYG GQYRCYGAHN LSSECSAPSD PLDILITGQI RGTPFISVQP GPTVASGENV TLLCQSWRQF HTFLLTKAGA ADAPLRLRSI HEYPKYQAEF PMSPVTSAHA GTYRCYGSLN SDPYLLSHPS EPLELVVSGP

SEQ ID Nome Sequência

NO SMGSSPPPTG PISTPGPEDQ PLTPTGSDPQ SGLGRHLGVV IGILVAVVLL LLLLLLLFLI LRHRRQGKHW TSTQRKADFQ HPAGAVGPEP TDRGLQWRSS PAADAQEENL YAAVKDTQPE DGVEMDTRAA ASEAPQDVTY AQLHSLTLRR KATEPPPSQE REPPAEPSIY ATLAIH GTIPKPTL WAEPDSVITQ GSPVTLSCQG SLEAQEYRLY REKKSASWIT RIRPELVKNG QFHIPSITWE HTGRYGCQYY SRARWSELSD PLVLVMTGAY PKPTLSAQPS PVVTSGGRVT LQCESQVAFG GFILCKEGEE EHPQCLNSQP HARGSSRAIF

SVGPVSPNRR WSHRCYGYDL NSPYVWSSPS DLLELLVPGV ILT4 humano isoforma 112 SKKPSLSVQP GPVVAPGESL TLQCVSDVGY DRFVLYKEGE 2, ECD

RDLRQLPGRQ PQAGLSQANF TLGPVSRSYG GQYRCYGAHN LSSECSAPSD PLDILITGQI RGTPFISVQP GPTVASGENV TLLCQSWRQF HTFLLTKAGA ADAPLRLRSI HEYPKYQAEF PMSPVTSAHA GTYRCYGSLN SDPYLLSHPS EPLELVVSGP SMGSSPPPTG PISTPGPEDQ PLTPTGSDPQ SGLGRHLGV EGQLLESGGD LVQPGGSLRL SCATSGFTFS NYAMNWVRQA PGKGLEWISV ISVSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKDY YYDSGSYYDS FFDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE

PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA 21D9.IgG1.3 HC VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD 113

KRVEPKSCDK THTCPPCPAPEAEGAPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPG

AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWFQQKPGKAPKLLIY 114 10F10.4 VL DASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITF

GQGTRLEIK GCCATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGTCTGCCAGCGTG GGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAATCTCT

AGCGCCCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAG 115 10F10.4 VL DNA

CTGCTGATCTACGATGCCTCCTCTCTGGAGTCCGGCGTGCCCTCTA GGTTCTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACAATCA GCTCCCTGCAGCCAGAGGATTTTGCCACATACTATTGTCAGCAGTT

SEQ ID Nome Sequência

NO CAACTCTTATCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGGAGATC AAG AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWFQQKPGKAPKLLI

YDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPI 116 10F10.4 LC TFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK

VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GCCATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGTCTGCCAGCGTG GGCGACAGGGTGACCATCACATGCAGAGCCTCCCAGGGAATCTCT AGCGCCCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAG CTGCTGATCTACGATGCCTCCTCTCTGGAGTCCGGCGTGCCCTCTA GGTTCTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACAATCA GCTCCCTGCAGCCAGAGGATTTTGCCACATACTATTGTCAGCAGTT

CAACTCTTATCCCATCACCTTTGGCCAGGGCACACGGCTGGAGATC 117 10F10.4 LC DNA AAGCGTACGGTGGCCGCCCCGTCCGTGTTTATCTTCCCTCCATCGG

ACGAGCAGCTCAAGTCCGGTACCGCGAGCGTGGTCTGCCTGCTGA ACAATTTCTACCCGCGCGAAGCTAAAGTGCAATGGAAGGTCGATAA CGCACTTCAGTCCGGGAACAGCCAGGAATCTGTGACCGAGCAGGA CTCCAAGGATTCGACCTATTCCCTGTCCTCGACTCTCACCCTGTCA AAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTCTACGCCTGCGAAGTGACC CATCAGGGCTTGTCCTCACCCGTGACTAAGAGCTTCAACCGGGGA GAGTGT

QAGILPKPMLWAEPDRVITQGSPVTLRCQGNLEARGYHLYRERKSAS Domínio extracelular WITLIRPELVKKGQFPIPSITWEDAGRYRCQYYSHSWWSEHSDPLELV 9152 de ILT4 de Cyno, VTGAYRKPTLSALPSPVVASGGNVTLQCDSRVALDGFILCKEGEDEHS incluindo marcador QRLNSQPRTRGSSRAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYELHSRYVWSLP 118 His-Avi SDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAGGDKLTLQCGSDAGYDRFALYK

EGERDFLQRPGQQLQAGLAQANFTLDPVRGSHGGQYRCYGAHNLSS EWSAPSDPLDILISAGPHSGLRRECDPAVSVTGMDGHFLSDQGGSSS PGGGSGGGSEQKLISEEDLGHHHHHHGLNDIFEAQKIEWHE

QTGTIPKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASW Domínio extracelular

ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWSELSDPLVLVMT de hILT4H mais

GAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTLQCESQVAFGGFILCKEGEEEHPQ marcador HIS-Avi 119 CLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSPS (usado no Exemplo 2)

DLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGESLTLQCVSDVGYDRFVLYKE GERDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSE SSAPSDPLDILITGQIRGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWRQFHTF

SEQ ID Nome Sequência

NO LLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSLNS DPYLLSHPSEPLELVVSGPSMGSSPPPTGPISTPAGPEDQPLTPTGSD PQSGLGRHLGSPGGGSGGGSEQKLISEEDLGHHHHHHGLNDIFEAQK

IEWHE Resíduos 70-77 de ITRIRPEL 120 hILT4 Resíduos 78-100 de VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY 121 hILT4 Resíduos 70-100 de ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY 122 hILT4 Resíduos 154 a 181 de ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF 123 hILT4 Resíduos 425 a 434 de SSPPPTGPIS 124 hILT4 125 9G4 (ILT4.1) VH CDR1 SYYWN 126 9G4 VH CDR2 YIYYSGSTKYNPSLKS 127 9G4 VH CDR3 SGWYYFDY 128 9G4 VL CDR1 RASQSVSSYLA 129 9G4 VL CDR2 DASNRAT 130 9G4 VL CDR3 QQRSYWPWT 131 9C8 VH CDR1 SSDIN 132 9C8 VH CDR2 WMNPNSGHTGYAQKFQD 133 9C8 VH CDR3 GGNSIDWGFSYYGLDV 134 9C8 VL CDR1 RASQGISSALA 135 9C8 VL CDR2 DASSLES 136 9C8 VL CDR3 QQFNSYPFT 137 2H2 VH CDR1 NYAIS 138 2H2 VH CDR2 GIIPILATANYAPKFQG 139 2H2 VH CDR3 SSITMIRGAYLYYYDGMDV 140 2H2 VL CDR1 RASQSVSSSYLA 141 2H2 VL CDR2 GASSRAT 142 2H2 VL CDR3 QQYGSSYT 143 2E5 VH CDR1 NYGMH 144 2E5 VH CDR2 VIWYDGSNEYYAESVKG 145 2E5 VH CDR3 DPFYGSGNYFDY 146 2E5 VL CDR1 RASQSVSSYLA

SEQ ID Nome Sequência

NO 147 2E5 VL CDR2 DASNRAT 148 2E5 VL CDR3 QQRSNWPPWT 149 24E5 VH CDR1 SYVMS 150 24E5 VH CDR2 GISGSGGSTYYADSVKG 151 24E5 VH CDR3 DQDIIAAYYFVY 152 24E5 VL CDR1 RASQGISSWLA 153 24E5 VL CDR2 AASSLQS 154 24E5 VL CDR3 QQYNSYPLT 155 21D9 VH CDR1 NYAMN 156 21D9 VH CDR2 VISVSGGSTYYADSVKG 157 21D9 VH CDR3 DYYYDSGSYYDSFFDY 158 21D9 VL CDR1 RASQSVSSSYLA 159 21D9 VL CDR2 GASSRAT 160 21D9 VL CDR3 QQYGSSPLT 161 21A5 VH CDR1 DYYLH 162 21A5 VH CDR2 IFHPSGDITSSAQNFQG 163 21A5 VH CDR3 GGVLRYLDWSHAFDI 164 21A5 VL CDR1 RASQSVSSSYLA 165 21A5 VL CDR2 GASSRAT 166 21A5 VL CDR3 QQYGST 167 10F10 VH CDR1 SYAMH 168 10F10 VH CDR2 IISYDEYNKYYADSVKG 169 10F10 VH CDR3 EWVGIRY 170 10F10 VL CDR1 RASQGISSALA 171 10F10 VL CDR2 DASSLES 172 10F10 VL CDR3 QQFNSYPIT Resíduos 127-142 de SAQPSPVVTSGGRVTL 173 hILT4 Resíduos 182-213 de SVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSPSDL 174 hILT4 Resíduos 378-392 de QAEFPMSPVTSAHAG 175 hILT4 21D9.e,IgG1f EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGL (Mesmo Fc que SEQ EWVSVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA 176 ID NO: 98 sem term-C. VYYCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS K) SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG

SEQ ID Nome Sequência

NO LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTC PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW

QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 21D9.e.IgG1.1f EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGL (Fc é o mesmo que EWVSVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA SEQ ID NO: 103) VYYCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG

LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTC 177

WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 21D9.e.IgG4_S228P EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGL

EWVSVISVSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA VYYCAKDYYYDSGSYYDSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPC SRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL

YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCP 178

APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGN

VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS hIgG4 S228P ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS (Fc de SEQ ID NO: GVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK 178) RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV 179 DVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQ

DWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano (hILT4 ou ILT4), caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, e compreendendo ainda uma ou mais das características que seguem: - ligação específica a hILT4 (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 108, 109, 111, 112 ou 119), por exemplo, com uma KD de 10-8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos; - falta de ligação específica a hILT2, hILT3 e/ou hILT5; - falta de ligação específica a um ou mais membros das famílias LILRA e/ou LILRB; - estimula ativação de célula T, por exemplo, em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme medido através de proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama aumentada, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; - estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; - promove expressão de CD83 e CD86 em células dendríticas imaturas derivadas de monócito humanas (Mo-iDC), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; - aumenta secreção de IFN-γ quando da estimulação por antígeno em um ensaio de lisato de citomegalovírus (CMV), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; - aumenta secreção de IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+ em um ensaio de alo-reação de linfócito mista (MLR) quando da estimulação com CD3, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

- inibe ligação de HLA-A e/ou HLA-B a ILT4; - se liga a 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122) conforme determinado através de troca de hidrogênio deutério (HDX), por exemplo, como mostrado em um ensaio de HDX descrito nos Exemplos; - compete por ligação a hILT4 com um anticorpo descrito aqui; - se liga especificamente a um ILT4 de cyno compreendendo SEQ ID NO: 118, por exemplo, como mostrado em um ensaio de ligação descrito nos Exemplos; - inibe ligação de ILT4 humano (hILT4) a uma contraparte de ligação a ILT4, tal como uma molécula classe I do MHC, tais como HLA-A e HLA-B (por exemplo, inibe ligação de hILT4 a ambas HLA-A e HLA-B); - tem um perfil de ligação a HLA-A e HLA-B mostrado na Figura 28; - tem um perfil de ligação como mostrado na Fig 27; - se liga às regiões de hILT4 que seguem: (i) 70 ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou 154 (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) 425 e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), e, se ligando a (i) ou (ii), então opcionalmente, não se ligando significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos localizados N-terminal para o aminoácido I70, em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 compreendendo sua sequência de sinal nativa); e - interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Lys43, Ile49, Thr50 e Arg51 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Gly117, Val119, Try120, Leu134, Lys136, Gln149, Pro150, Ile159, Ser161, Val162 , Gly163, Pro164, Pro167, His173, Try178, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Glu42, Lys43, Gly76, Cys77, Leu88, Pro91, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro, conforme determinado por pegada de carbono, por exemplo, como descrito nos Exemplos.

2. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID Nos: 125-127), 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133), 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139), 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145), 24E5 (SEQ ID Nos: 149-151), 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157), 21A5 (SEQ ID Nos: 161-163) ou 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169).

3. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, em que a cadeia leve compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID Nos: 128-130), 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136), 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142), 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148), 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154), 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160), 21A5 (SEQ ID Nos: 164-166) ou 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172).

4. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada compreende CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de anticorpo anti- ILT4 9G4 (SEQ ID Nos: 125-130), 9C8 (SEQ ID Nos: 131-136), 2H2 (SEQ ID Nos: 137-142), 2E5 (SEQ ID Nos: 143-148), 24E5 (SEQ ID Nos: 149-154), 21D9 (SEQ ID Nos: 155-160), 21A5 (SEQ ID Nos: 161- 166) ou 10F10 (SEQ ID Nos: 167-172).

5. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que compreende (a) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 9G4 (SEQ ID Nos: 125-127) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 9G4 (SEQ ID Nos: 128-130); (b) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136); (c) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139) e uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142); (d) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148); (e) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 24E5 (SEQ ID Nos: 149-151) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154); (f) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160); (g) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.b (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.b (SEQ ID Nos: 158-160); (h) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.c (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.c (SEQ ID Nos: 158-160); (i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.d (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.d (SEQ ID Nos: 158-160); (j) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21D9.e (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21D9.e (SEQ ID Nos: 158-160); (k) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21A5 (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21A5 (SEQ ID Nos: 164-166); (l) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 21A5.a (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 21A5.a (SEQ ID Nos: 164-166); (m) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172); (n) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido de VL CDR1, CDR2 e CDR3 de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 170-172); (o) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e

CDR3 de VL de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 170-172); ou (p) uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 170-172).

6. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada do anticorpo compreende uma VH com uma sequência de aminoácido pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido da VH de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91).

7. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve do anticorpo compreende uma VL com uma sequência de aminoácido pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido da VL de 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-125), 9C8 (SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114).

8. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada de anticorpo compreende uma VH com uma sequência de aminoácido compreendendo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, substituições conservativas ou reversão de substituições, comparado com a sequência de aminoácido da VH de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91).

9. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve do anticorpo compreende uma VL com uma sequência de aminoácido compreendendo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácido, substituições conservativas ou substituições de reversão, comparado com a sequência de aminoácido da VL de 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-125), 9C8 (SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114).

10. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada compreende a VH de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135), 9C8 (SEQ ID NO: 55), 2H2 (SEQ ID NO: 58), 2E5 (SEQ ID NO: 63), 24E5 (SEQ ID NO: 67), 21D9 (SEQ ID NO: 71), 21D9.b (SEQ ID NO: 74), 21D9.c (SEQ ID NO: 75), 21D9.d (SEQ ID NO: 78), 21D9.e (SEQ ID NO: 80), 21A5 (SEQ ID NO: 83), 21A5.a (SEQ ID NO: 87), 10F10 (SEQ ID NO: 91), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91).

11. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende a VL de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-125), 9C8 (SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 114).

12. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende VH e VL de anticorpo anti-ILT4 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-125), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 54), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 62), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 66), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 70), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 70), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 70), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 70), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 70), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 82), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 86), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 90), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 94), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 96) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 114).

13. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende a. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 9G4 (SEQ ID Nos: 125-127) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 9G4 (SEQ ID Nos: 128-130) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à

VL de 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e SEQ ID NO: 50, aminoácidos 19-125); b. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 9C8 (SEQ ID Nos: 131-133) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 9C8 (SEQ ID Nos: 134-136) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 54); c. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 2H2 (SEQ ID Nos: 137-139) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 2H2 (SEQ ID Nos: 140-142) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59); d. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 2E5 (SEQ ID Nos: 143-145) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 2E5 (SEQ ID Nos: 146-148) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 62); e. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 24E5 (SEQ ID Nos: 149-151) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 24E5 (SEQ ID Nos: 152-154) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 66);

f. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9 (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9 (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 70); g. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.b (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.b (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 70); h. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.c (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.c (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 70); i. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.d (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21D9.d (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 70); j. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21D9.e (SEQ ID Nos: 155-157) e uma VL compreendendo as CDRs de

VL de 21D9.e (SEQ ID Nos: 158-160) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 70); k. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21A5 (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21A5 (SEQ ID Nos: 164-166) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 82); l. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 21A5.a (SEQ ID Nos: 161-163) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 21A5.a (SEQ ID Nos: 164-166) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 86); m. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 90); n. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.1 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%,

pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 94); o. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.3 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 96); ou p. uma VH compreendendo as CDRs de VH da VH de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 167-169) e uma VL compreendendo as CDRs de VL de 10F10.4 (SEQ ID Nos: 170-172) e sequências de aminoácido de VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e à VL de 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 114).

14. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que compreende a. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 9G4 (SEQ ID NO: 51 resíduos 20-135) e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 9G4 (SEQ ID NO: 50 resíduos 19-125); b. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 9C8 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 54); c. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 2H2 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 59); d. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 2E5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 62); e. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 24E5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 66); f. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 70); g. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.b e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 70); h. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.c e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 70); i. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.d e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 70); j. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21D9.e e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 70); k. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21A5 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 82); l. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 21A5.a e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 86); m. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 90); n. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.1 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 94); o. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.3 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 96); ou p. uma VH compreendendo a sequência de aminoácido da VH de 10F10.4 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácido da VL de 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 114).

15. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo IgG.

16. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo IgG1, IgG2 ou IgG4, em que o IgG4 compreende opcionalmente uma substituição S228P (Numeração EU).

17. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo ineficaz.

18. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia pesada compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 mutações em uma região constante de cadeia pesada humana contrário do tipo selvagem que reduzem a função efetora do anticorpo comparado com um anticorpo sem as mutações 1, 2, 3, 4 ou 5, mas de outro modo com a mesma sequência de aminoácido.

19. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia pesada do anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, uma região constante de cadeia pesada de IgG1.1 ou uma região constante de cadeia pesada de IgG1 com uma substituição P238K (Numeração EU) ou uma região constante de cadeia pesada de IgG1 compreendendo a sequência de aminoácido de qualquer uma da SEQ ID No: 98, 100, 102, 103 ou 104.

20. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o anticorpo tem função efetora.

21. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é afucosilado (por exemplo, um anticorpo IgG1 afucosilado).

22. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia pesada compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 mutações em uma região constante de cadeia pesada humana contrário ao tipo selvagem que aumenta a função efetora do anticorpo comparado com um anticorpo sem as mutações 1, 2, 3, 4 ou 5, mas de outro modo com a mesma sequência de aminoácido.

23. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que compreende a HC de anticorpo anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1 ou 10F10.3, em que a região constante da HC é IgG1 (por exemplo, 9G4.IgG1, etc), IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3, etc), IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc), IgG4 (por exemplo, 9G4.IgG4, etc) ou IgG4 S228P (Numeração EU) (por exemplo, 9G4.IgG4_S228P).

24. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma sequência de aminoácido de HC como segue: a. IgG1, por exemplo, 9G4.IgG1, 9G4 (SEQ ID NO: 2), 9C8 (SEQ ID NO: 4), 2H2 (SEQ ID NO: 6), 2E5 (SEQ ID NO: 8), 24E5 (SEQ ID NO: 10), 21D9 (SEQ ID NO: 12), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e

SEQ ID NO: 98), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 98), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 98), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 98), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 98), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 98), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 98), b.

IgG1, por exemplo, 9G4.IgG1, 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e SEQ ID NO: 102), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 102), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 102), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 102), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 102), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 102), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 102), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 102), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 102), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 102), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 102), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 102), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 102), c.

IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3, etc), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 100), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 100), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 100), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 100), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 100), 21D9 ((i) SEQ ID NO: 113, ou (ii) SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 100), 21D9.b (SEQ ID NO: 36), 21D9.c (SEQ ID NO: 38), 21D9.d (SEQ ID NO: 40), 21D9.e (SEQ ID NO: 13), 21A5 (SEQ ID NO: 15), 21A5.a (SEQ ID NO: 17), 10F10 (SEQ ID NO: 19), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 100); d.

IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 103), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 103), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 103), 2E5 (SEQ

ID NO: 63 e SEQ ID NO: 103), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 103), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 103), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 103), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 103), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 103), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 103), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 103), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 103), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 103), e.

IgG1fa.P238K (por exemplo, 9G4.IgG1fa.P238K, etc.) 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 104), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 104), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 104), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 104), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 104), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 104), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 104), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 104), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 104), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 104), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 104), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 104), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), 10F10.1 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), 10F10.3 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 91 e SEQ ID NO: 104), ou f.

IgG4 S228P (por exemplo, 9G4.IgG4 S228P, etc.), 9G4 (SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135, e SEQ ID NO: 179), 9C8 (SEQ ID NO: 55 e SEQ ID NO: 179), 2H2 (SEQ ID NO: 58 e SEQ ID NO: 179), 2E5 (SEQ ID NO: 63 e SEQ ID NO: 179), 24E5 (SEQ ID NO: 67 e SEQ ID NO: 179), 21D9 (SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 179), 21D9.b (SEQ ID NO: 74 e SEQ ID NO: 179), 21D9.c (SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 179), 21D9.d (SEQ ID NO: 78 e SEQ ID NO: 179), 21D9.e (SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 179), 21A5 (SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 179), 21A5.a (SEQ ID NO: 87 e SEQ ID NO: 179), 10F10 (SEQ ID NO: 91 e

25. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que a HC do anticorpo não tem um resíduo lisina C-terminal.

26. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que a HC do anticorpo compreende a sequência de aminoácido de região constante de cadeia pesada de qualquer uma da SEQ ID No: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179.

27. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que compreende a LC de anticorpo anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4.

28. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve é uma região constante Kappa humana.

29. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a LC compreende a sequência de: 9G4 (SEQ ID NO: 1), 9C8 (SEQ ID NO: 3), 2H2 (SEQ ID NO: 5), 2E5 (SEQ ID NO: 7), 24E5 (SEQ ID NO: 9), 21D9 (SEQ ID NO: 11), 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5 (SEQ ID NO: 14), 21A5.a (SEQ ID NO: 16), 10F10 (SEQ ID NO: 18), 10F10.1 (SEQ ID NO: 20), 10F10.3 (SEQ ID NO: 21) ou 10F10.4 (SEQ ID NO: 116).

30. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que compreende HC e LD de anticorpo anti-ILT4 9G4, 9C8, 2H2, 2E5, 24E5, 21D9, 21D9.b, 21D9.c, 21D9.d, 21D9.e, 21A5, 21A5.a, 10F10, 10F10.1, 10F10.3 ou 10F10.4, em que a região constante da HC é IgG1 (por exemplo,

9G4.IgG1, etc.), IgG1.3 (por exemplo, 9G4.IgG1.3, etc.), IgG1.1f (por exemplo, 9G4.IgG1.1f, etc.), IgG4 (por exemplo, 9G4.IgG4, etc.) ou IgG4 S228P (Numeração EU) (por exemplo, 9G4.IgG4_S228P).

31. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que compreende a. uma cadeia pesada (HC) compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 9G4 ((i) SEQ ID NO: 2 ou (ii) SEQ ID NO: 51, aminoácidos 20-135 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve (LC) compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 9G4 (SEQ ID NO: 1); b. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 9C8 ((i) SEQ ID NO: 4 ou (ii) SEQ ID NOs: 55 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 9C8 (SEQ ID NO: 3); c. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 2H2 ((i) SEQ ID NO: 6 ou (ii) SEQ ID NOs: 58 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 2H2 (SEQ ID NO: 5); d. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 2E5 ((i) SEQ ID NO: 8 ou (ii) SEQ ID NOs: 63 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 2E5 (SEQ ID NO: 7); e. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 24E5 ((i) SEQ ID NO: 10 ou (ii) SEQ ID NOs: 67 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 24E5 (SEQ ID NO: 9);

f. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9 ((i) SEQ ID NO: 12 ou 113 ou (ii) SEQ ID NOs: 71 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9 (SEQ ID NO: 11); g. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.b (SEQ ID NOs: 74 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.b (SEQ ID NO: 11); h. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.c (SEQ ID NOs: 75 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.c (SEQ ID NO: 11); i. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.d (SEQ ID NOs: 78 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.d (SEQ ID NO: 11); j. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21D9.e ((i) SEQ ID NO: 13, 176, 177 ou 178; ou (ii) SEQ ID NOs: 80 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21D9.e (SEQ ID NO: 11); k. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21A5 ((i) SEQ ID NO: 15 ou (ii) SEQ ID NOs: 83 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21A5 (SEQ ID NO: 14);

l. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia pesada de 21A5.a (i) SEQ ID NO: 17 ou (ii) SEQ ID NOs: 87 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 21A5.a (SEQ ID NO: 16); m. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10 ((i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10 (SEQ ID NO: 18); n. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.1 (i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.1 (SEQ ID NO: 20); o. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.3 ((i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.3 (SEQ ID NO: 21); ou p. uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido da cadeia pesada de 10F10.4 ((i) SEQ ID NO: 19 ou (ii) SEQ ID NOs: 91 e uma de SEQ ID NO: 98, 100, 102, 103, 104 ou 179) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de 10F10.4 (SEQ ID NO: 116).

32. Anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 13 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

33. Anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 176 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

34. Anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 177 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

35. Anticorpo isolado que se liga especificamente a ILT4 humano, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 178 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 11.

36. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 35, caracterizado pelo fato de que o anticorpo tem uma ou mais das propriedades dos anticorpos como definidos na reivindicação 1.

37. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo de comprimento integral e a cadeia pesada do anticorpo compreende ou não compreende um resíduo lisina C-terminal.

38. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que é um fragmento de anticorpo.

39. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizado pelo fato de que é um anticorpo multimérico (por exemplo, dimérico ou trimérico).

40. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato de que é ligado (por exemplo, covalentemente) a uma outra molécula.

41. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a outra molécula é um marcador.

42. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a outra molécula é um peptídeo.

43. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que é um conjugado de anticorpo-fármaco (ADC).

44. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43.

45. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica a cadeia pesada e/ou a cadeia leve de um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43.

46. Conjunto de pelo menos dois ácidos nucleicos isolados, caracterizado pelo fato de que codifica a cadeia pesada e a cadeia leve de um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a

43.

47. Composição, caracterizada pelo fato de que compreendo um ácido nucleico que codifica a cadeia pesada de um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43 e um ácido nucleico codificando a cadeia leve do anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43.

48. Célula compreendendo o ácido nucleico isolado como definido em qualquer uma das reivindicações 44 a 46 ou a composição como definida na reivindicação 47, caracterizada pelo fato de que, por exemplo, o ácido nucleico compreende um ácido nucleico mostrado na Tabela de Sequências.

49. Método de preparação de um anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende cultura da célula como definida na reivindicação 48 em condições sob as quais o anticorpo é expresso.

50. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo isolado, ácido nucleico, composição ou célula como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 49 e um carreador farmaceuticamente aceitável.

51. Composição de acordo com a reivindicação 50, caracterizada pelo fato de que compreende um segundo agente terapêutico.

52. Composição de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que o segundo agente terapêutico é um agente imunoestimulador.

53. Composição de acordo com a reivindicação 52, caracterizada pelo fato de que o agente imunoestimulador é um antagonista de uma molécula imunossupressora, por exemplo, um PD- 1/PD-L1, um CTLA-4 um LAG-3, ou um agonista de uma molécula imunoestimuladora, por exemplo, GITR e OX40.

54. Método de tratamento de um indivíduo tendo câncer, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 53 ou anticorpo isolado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43 que estimula uma resposta imune e/ou é um antagonista de ILT-4.

55. Método de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ainda uma segunda terapia.

56. Método de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a segunda terapia é radioterapia, cirurgia ou administração de um segundo agente.

57. Método de acordo com a reivindicação 55,

caracterizado pelo fato de que a terapia secundária é um segundo agente e o segundo agente é um agente imunoestimulador.

58. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o agente imunoestimulador é um antagonista de uma molécula imunossupressora, por exemplo, o PD- 1/PD-L1, um CTLA-4 e LAG-3, ou um agonista de uma molécula imunoestimuladora, por exemplo, GITR e OX40.

59. Método de tratamento de doença infecciosa (por exemplo, doença viral) em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 53 ou anticorpo isolado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43 que estimula uma resposta imune e/ou é um antagonista de ILT4.

60. Método de detecção de ILT4 em uma amostra, caracterizado pelo fato de que compreende contato da amostra com um anticorpo para ILT4 como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43.

61. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que tem as características que seguem: a. ligação específica a hILT4 (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 108, 109, 111, 112 ou 119), por exemplo, com uma KD de 10-8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos; b. estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; c. tem um perfil de ligação como mostrado na Fig 27; e d. se liga aos domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, tal como compreendendo as regiões de hILT4 que seguem: (i) 70 ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou 154 (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) 425 e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), e não se liga significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos que estão localizados N-terminal para o aminoácido I70, em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 compreendendo sua sequência de sinal nativa).

62. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que tem as características que seguem: a. ligação específica a hILT4 (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 108, 109, 111, 112 ou 119), por exemplo, com uma KD de 10-8 M ou menos ou de 10-9 M ou menos; b. falta de ligação específica a hILT2, hILT3 e/ou hILT5; c. falta de ligação específica a um ou mais membros das famílias LILRA e/ou LILRB; d. estimula ativação de célula T, por exemplo, em um ensaio de reação de linfócito mista (MLR), conforme medido através de proliferação de célula T ou secreção de IFN-gama aumentada, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; e. estimula diferenciação ou ativação de monócitos em macrófagos, por exemplo, estimula diferenciação de monócitos em macrófagos pró-inflamatórios, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos;

f. inibe ligação de hILT4 a HLA-A e HLA-B; g. tem um perfil de ligação como mostrado na Fig 27; h. se liga aos domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, tal como compreendendo as regiões de hILT4 que seguem: (i) 70 ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) e/ou 78 VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122), e não se liga significantemente a outras regiões do domínio extracelular de ILT4, tais como regiões ou resíduos que estão localizados N-terminal para o aminoácido I70; em que a numeração de aminoácido de hILT4 é aquela de hILT4 imaturo (isto é, ILT4 com sua sequência de sinal). i. promove polarização pró-inflamatória de macrófagos em relação a macrófagos M1; j. não induz (ou dispara) ativação de basófilo; e k. compreende menos de 5% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação a 25°C e/ou menos de 10% de espécies de peso molecular alto e baixo após 3 meses de incubação em 40°C.

63. Anticorpo isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que tem as características que seguem: a. promove expressão de CD83 e CD86 em células dendríticas imaturas derivadas de monócito humanas (Mo-iDC), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; b. aumenta a secreção de IFN-γ quando da estimulação por antígeno em um ensaio de lisato de citomegalovírus (CMV), por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; c. aumenta a secreção de IFN-γ e TNF-α por células T CD4+ e CD8+ em um ensaio de alo-reação de linfócito mista (MLR) quando da estimulação com CD3, por exemplo, como mostrado em um ensaio descrito nos Exemplos; d. inibe ligação de HLA-A e/ou HLA-B a ILT4; e. se liga a domínios do tipo Ig 1, 2 ou 1 e 2 de hILT4, tal 70 como uma região compreendendo (i) ITRIRPEL77 (SEQ ID NO: 120) 78 e/ou VKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 121); (ii) 70 ITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQY100 (SEQ ID NO: 122); ou 154 (iii) ILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIF181 (SEQ ID NO: 123) 425 e/ou SSPPPTGPIS434 (SEQ ID NO: 124), conforme determinado através de troca de hidrogênio deutério (HDX), por exemplo, como mostrado em um ensaio de HDX descrito nos Exemplos; f. interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Lys43, Ile49, Thr50 e Arg51 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Gly117, Val119, Try120, Leu134, Lys136, Gln149, Pro150, Ile159, Ser161, Val162, Gly163, Pro164, Pro167, His173, Try178, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro ou interage com um ou mais (ou todos dos) resíduos de aminoácido Glu42, Lys43, Gly76, Cys77, Leu88, Pro91, Pro183 e Tyr184 de hILT4 maduro, conforme determinado por pegada de carbono, por exemplo, como descrito nos Exemplos; g. compete por ligação a hILT4 com um anticorpo descrito aqui; e h. se liga especificamente a um ILT4 de cyno compreendendo SEQ ID NO: 118, por exemplo, como mostrado em um ensaio de ligação descrito nos Exemplos.