CZ302706B6 - Lidská monoklonální protilátka, farmaceutická kompozice tuto protilátku obsahující, bunecná linie produkující tuto protilátku, izolovaná molekula kódující težký nebo lehký retezec uvedené protilátky, hostitelská bunka obsahující tuto izolovanou molek - Google Patents
Lidská monoklonální protilátka, farmaceutická kompozice tuto protilátku obsahující, bunecná linie produkující tuto protilátku, izolovaná molekula kódující težký nebo lehký retezec uvedené protilátky, hostitelská bunka obsahující tuto izolovanou molek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302706B6 CZ302706B6 CZ20012349A CZ20012349A CZ302706B6 CZ 302706 B6 CZ302706 B6 CZ 302706B6 CZ 20012349 A CZ20012349 A CZ 20012349A CZ 20012349 A CZ20012349 A CZ 20012349A CZ 302706 B6 CZ302706 B6 CZ 302706B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antibody
- ctla
- antibodies
- amino acid
- binding
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Rešení se týká lidské monoklonální protilátky, která se váže na antigen 4 cytotoxických T lymfocytu, farmaceutické kompozice, která tuto protilátku obsahuje, bunecné linie produkující tuto protilátku, izolované molekuly, která kóduje težký nebo lehký retezec uvedené protilátky, hostitelské bunky obsahující uvedenou izolovanou molekulu a použití uvedené protilátky pro výrobu léciva pro zvýšení tvorby cytokinu v T bunkách.
Description
Lidská monoklonální protilátka, farmaceutická kompozice tuto protilátku obsahující, buněčná linie produkující tuto protilátku, izolovaná molekula kódující těžký nebo lehký řetězec uvedené protilátky, hostitelská buňka obsahující tuto izolovanou molekulu a použití uvedené protilátky
Oblast techniky
Vynález se týká lidské monoklonální protilátky, která se váže na antigen 4 cytotoxických T lymfocytů, farmaceutické kompozice, která tuto protilátku obsahuje, buněčné linie produkující tuto protilátku, izolované molekuly, která kóduje těžký nebo lehký řetězec uvedené protilátky, hostitelské buňky obsahující uvedenou izolovanou molekulu a použití uvedené protilátky pro výrobu léčiva pro zvýšení tvorby cytokinů v T buňkách.
Dosavadní stav techniky
Regulace imunitní reakce pacientů by poskytla žádoucí léčbu mnoha lidských nemocí, která by mohla vést ke specifickému účinku, jehož lze zřídka dosáhnout použitím běžných léků. Bylo by možné dosáhnout aktivace i utlumení reakcí imunitního systému. Úlohy T a B lymfocytů byly obsáhle studovány a charakterizovány ve spojitosti s regulací imunitní reakce. Z těchto studií vyplývá, že úloha T lymfocytů je v mnoha případech obzvláště důležitá při prevenci nemocí a léčbě.
T lymfocyty mají velmi složitý systém kontroly svých interakcí. Pro interakce mezi T lymfocyty jsou používány početné receptory a rozpustné faktory. Tudíž účinek každého konkrétního signálu na imunitní reakci se většinou mění a závisí na konkrétních faktorech, receptorech a protireceptorech, které jsou zapojeny do metabolické dráhy. Metabolické dráhy pro utlumení reakcí jsou stejně důležité jako drahý vyžadované pro aktivaci. Jeden mechanismus prevence imunitní reakce na konkrétní antigen je vyzrávání v thymu vedoucí k toleranci T lymfocytů. Jsou také známy další mechanismy, jako je například sekrece supresivních cytokinů.
Aktivace T lymfocytů nevyžaduje pouze stimulaci prostřednictvím antigenového receptorů (T buněčný receptor (TCR)), ale další signály prostřednictvím kostimulačních (společně stimulujících) povrchových molekul, jako je například CD28. Ligandy pro CD28 jsou proteiny B71 (CD80) a B7-2 (CD86), které jsou exprimovány na buňkách prezentujících antigen jako jsou například dendritické buňky, aktivované B lymfocyty nebo monocyty, které interagují s CD28 nebo CTLA—4 T lymfocytů pro zajištění kostimulačního signálu. Úloha kostimulačních signálů byla studována u experimentální alergické encefalomyelitidy (EAE) autory Perrinem et al. (Immunol. Res., 14, 189-99, 1995). EAE je autoimunitní porucha indukovaná buňkami Thl namířenými proti myelinovým antigenům, která poskytuje in vivo model pro studium úlohy B7 zprostředkované kostimulace v indukci patologické imunitní reakce. Použitím rozpustného ťuzního proteinového ligandů pro receptory B7, jakož i monoklonálních protilátek specifických buď pro CD80 nebo CD86, Perrin et al. prokázali, že B7 kostimulace má významnou úlohu pro určení klinického výsledku nemoci u EAE.
Interakce mezi B7 a CD28 je jedna z několika kostimulačních signálních drah, která se jeví postačující pro spuštění maturace a proliferace antigen-specifických T lymfocytů. Nedostatečná kostimulace a doprovodná nedostatečnost produkce IL-2 zabraňují následné proliferaci T lymfocytů a indukují stav nereaktivity nazývaný „anergie“. Aktivaci a proliferaci T lymfocytů může blokovat celá řada virů a nádorů, což vede k nepostačující aktivitě nebo nereaktivitě hostitelského imunitního systému k infikovaným nebo transformovaným buňkám. Z celé řady možných poruch T lymfocytů může být anergie alespoň částečně zodpovědná za selhání hostitele zbavit se patogenů nebo nádorových buněk.
- 1 CZ 302706 Β6
Použití proteinu B7 ke zprostředkování protinádorové imunity bylo popsáno v práci Chen et al. (Cell, 71, 1093-1102, 1992) a Townsend a Allison (Science, 259, 368, 1993). Schwartz (Cell, 71, 1065, 1992) podává přehled úlohy CD28, CTLA—4, a B7 v produkci IL—2 a imunoterapíí. Harding et al. (Nátuře, 356, 607-609, 1994) dokazuje, že signály zprostředkované CD28 kostimulují myší T lymfocyty a zabraňují indukci anergie u klonů T lymfocytů. (viz také patenty Spojených Států 5 434 131, 5 770 197, a 5 773 253, a mezinárodní patentové přihlášky WO 93/00431. WO 95/01994, WO 95/03408, WO 95/24217, a WO 95/33770).
Z výše uvedeného je jasné, že T lymfocyty vyžadují dva typy signálů od buněk prezentujících antigen (APC) pro aktivaci a následnou diferenciaci efektorové funkce. Zaprvé je zde antigenspecifický signál vznikající pro interakcích mezi TCR naT lymfocytech a molekulách MHC prezentujících peptidy na APC. Za druhé zde je signál na antigenů nezávislý, který je zprostředkován interakcí CD28 se členy rodiny B7 (B7-I (CD80) nebo B7-2 (CDB6)). Zpočátku bylo nejasné, kam přesně do prostředí imunitní reaktivity CTLA-4 patří. Myší CTLA—4 byl poprvé identifikován a klonován autory Brunet et al. (Nátuře, 328, 267-270, 1987) jako součást hledání molekul, které jsou přednostně exprimovány na cytotoxických T lymfocytech. Lidský CTLA—4 byl identifikován a klonován krátce nato autory Dariavach et al. (Eur. J. Immunol., 18, 19011905, 1988). Molekuly Č I LA—4 myšího a lidského původu mají přibližně celkem ze 76 % homologní sekvence a blíží se k úplné identitě sekvencí svých cytoplazmatickýeh domén (Dariavach et al., Eur. J. Immunol., 18, 1901-1905, 1988). CTLA—4 je člen imunoglobulinové (Ig) velké rodiny („su perlám i ly“) proteinů. Rodina Ig je skupina proteinů, které sdílejí klíčové strukturní charakteristické vlastnosti buď variabilních (V) nebo konstantních (C) domén Ig molekul. Členové Ig rodiny, bez omezení, zahrnují samotné imunoglobuliny, molekuly hlavního histokompatibilního komplexu (MHC) (tj. MHC třídy I a II) a molekuly TCR.
V roce 1991, Einsley et al. (J. Exp. Med., 174, 561-569, 1991) navrhovali, že CTLA—4 je druhý receptor pro B7. Podobně Harperet al. (J. Immunol., 147, 1037 44. 1991) prokázali, že molekuly CTLA 4 a CD28 jsou blíže příbuzné u myši a člověka, co se týče sekvence, exprese RNA, genové struktury a lokalizace chromozomů. (Viz také Balzano et al., Int. J. Cancer Suppl., 7, 28-32, 1992). Další důkaz pro tuto úlohu byl získán funkčními studiemi. Například Lanschow et al. (Science, 257, 789-792, 1992) prokázal, že CTLA—44g indukoval dlouhodobé přežívání štěpů pankreatických ostrůvků. Freeman et al. (Science, 262, 907-909, 1993) zkoumal úlohu CTLA-4 u myší s deficitem B7. Zkoumání ligandů pro CTLA-4 je popsáno v práci Lenschow et al. (P.N.A.S., 90, 11054-11058, 1993) Linsley et al. (Science, 257, 792-795, 1992) popisuje imunosupresi in vivo prostřednictvím rozpustné formy CTLA—4. Linsley et al. (J. Exp, Med. 176, 1595604, 1992) připravili protilátky, které váží Č I LA—4 a které nereagují zkříženě s CD28 a uzavřeli, že ČI LA 4 je exprimován společně (koexprimován) sCD28 na aktivovaných T lymfocytech a kooperativně reguluje adhezi T lymfocytů a aktivaci prostřednictvím B7. Kuchroo et al. (Cell, 80, 707-18, 1995) prokázali, že kostimulační molekuly B7-I a B7-2 odlišně aktivovaly vývojové metabolické dráhy Thl/Th2. Yiqun et al. (Int. Immunol. 8, 37-44, 1996) prokázali, že existují odlišné požadavky na kostimulační signály od Členů rodiny B7 pomocí klidových versus nově aktivovaných paměťových T lymfocytů vůči rozpustným upomínacím antigenům. (Viz také de Boer et al., Eur. J. Immunol., 23, 3120-5, 1993).
Několik skupin vědců navrhovalo alternativní nebo rozdílné interakce receptor/ligand pro CTLA-4 ve srovnání sCD28 a dokonce přemýšleli o třetím B-7 komplexu, který byl rozpoznáván prostřednictvím protilátky BB1. (Viz například Hathcock et al., Science, 262, 905-7, 1993, Freeman et al., Science, 262, 907-9, 1993, Freeman et al., J. Exp. Med., 178, 2185-92, 1993, Lenschow et al., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 90, 11054-8, 1993, Razi-Wolf et al,, Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 90, 11182-6, 1993 a Boussiotís et al„ Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 90, 1 1059-63, 1993). Ale Freeman et al. (J. Immunol., 161, 2708-15, 1998) diskutovali zjištění, že protilátka BB1 váže molekulu, která je totožná s buněčnou povrchovou formou CD74, a tudíž BB1 mAB váže protein odlišný než je B7-I, a tento epitop se také vyskytuje na proteinu B7-1. Toto zjištění tedy vyžadovalo prostor pro opětné uvážení studií s použitím BB1 mAB v analýze exprese a funkce CD80.
-2CZ 302706 Bó
Počínaje rokem 1993 s kulminací v roce 1995 začali vědci dále zpřesňovat úlohu CTLA-4 ve stimulaci T lymfocytů. Nejdříve s použitím monoklonálních protilátek proti CTLA-4 Walunas et al. (lmmunity, 1, 405-13, 1994) poskytli důkaz, že CTLA-4 může působit jako negativní regulátor aktivace T lymfocytů. Potom Waterhouse et al. (Science, 270, 985-988, 1995) prokázali, že myši s deficitem CTLAM akumulovaly T lymfoblasty s aktivovanými aktivačními markéry ve svých lymfatických uzlinách a slezině. Blasty tak infiltrovaly játra, srdce, plíce a pankreatickou tkáň, a množství sérových imunoglobulinů bylo zvýšeno a T lymfocyty proliferovaly silně a spontánně, když byly stimulovány prostřednictvím T buněčného receptoru, ale byly senzitivní k buněčné smrti indukované obsazením (zesítěním „cross-linking”) receptorů Fas a zářením gama. Waterhouse et al. uzavřeli, že CTLA-4 působí jako negativní regulátor aktivace T lymfocytů aje životně důležitý pro kontrolu homeostázy lymfocytů. V komentáři ve stejném vydání Allison a Krummel Science, 270, 932-933, 1995) diskutovali práci Waterhouse et al. jako průkaznou, že CTLA -4 působí tak, že tlumí reaktivitu T lymfocytů nebo má inhibiční signální úlohu v aktivaci a vývoji T lymfocytů. Tivol et al. (lmmunity, 3, 541-7, 1995) také vytvořili myši s deficitem CTL A—4 a prokázali, že se u těchto myší rychle vyvíjejí lymfoprol iterativní choroby s mu 1tiorgánovou lymfocytámí infiltrací a tkáňovou destrukcí, s obzvláště závažnou myokarditídou a pankreatitidou. Uzavřeli, že CTLA-4 má klíčovou úlohu v tlumení aktivace T lymfocytů a udržování imunologické homeostázy. Krummel a Allison (J. Exp. Med., 182, 45965, 1995) dále objasnili, že CD28 a CTLA-4 mají opačné účinky na reakci T lymfocytů na stimulaci. Vytvořili protilátku proti CTL A—4 a zkoumali účinky její vazby na CTLA-4 v systému používajícímu vysoce purifikované T lymfocyty. Ve svém článku ukázali, že přítomnost nízkých hladin B7-2 na čerstvě explantované T lymfocyty může částečně inhibovat proliferaci T lymfocytů a tato inhibice byla zprostředkována interakcemi s CTLA-4. Zkřížená vazba CTLA—4 spolu s TCR a CD28 silně inhibuje proliferaci a sekreci IL—2 T lymfocyty. Konečně výsledky ukázaly, že CD28 a CTLA—4 předávají opačné signály, které se zdají být sjednoceny T lymfocyty při určování reakce na antigen. Autoři tudíž uzavřeli, že výsledek stimulace receptoru T lymfocytů antigenem je regulován CD28 kostimulačními signály, jakož i inhibičními signály pocházejícími od CTLA—4. (Viz také Krummel et ak, Int. Immunol., 8, 519-23, 1996, a patent Spojených Států 5 811 097 a mezinárodní patentová přihláška WO 97/20574).
Byla prováděna celá řada dalších pokusů pro další objasnění výše uvedené funkce CTI.A—4. Například Walunas et ak (J. Exp. Med., 183, 2541-50, 1996) prostřednictvím použití protilátek anti-CTLA-4 navrhovali, že signální dráha CTLA-4 nereguluje přežívání buněk nebo reaktivitu na IL-2, ale inhibuje produkci IL—2 závislou na CD28. Také Perrin et ak (J. Immunol., 157, 1333-6, 1996) prokázali, že protilátky anti-CTLA-4 použité u experimentální alergické encefalomyelitidy (EAE) exacerbovaly nemoc a zvýšily úmrtnost. Exacerbace nemoci byla spojena se zvýšenou produkcí encefalitogenních cytokinů TNF-alfa, IFN-gama a IL-2. Tito autoři tedy uzavřeli, že CTLA^4 reguluje intenzitu auto imunitní reakce u EAE, oslabuje produkci zánětlivých cytokinů a klinickou manifestaci nemoci. (Viz také Hurwitz et ak, J. Neuroimmunok, 73, 57-62, 1997 a Cepero et ak, J. Exp. Med., 188, 199-204, 1998) (anti-CTLA-4 „vlásenkový” ribozym, který specificky ruší expresi Č I LA—4 po přenosu genu do myšího modelu T lymfocytů).
Kromě toho Blair et ak (J. Immunol., 160, 12-5, 1998) vyhodnotili působení panelu CTLA-4 monoklonálních protilátek (mAb) na klidové lidské CD4+ T lymfocyty. Jejich výsledky prokázaly, že některé CTLA-4 mAb inhibovaly proliferaci klidových buněk CD4+ a přechodné stádium buněčného cyklu od G0 do Gl. Inhibiční vliv CTLA-4 byl zjevný během 4 hodin, v době, kdy exprese buněčného povrchového CTLA-4 nebyla detekovatelná. Ale další CTLA-4 mAb neměly zjistitelný inhibiční účinek, což indikovalo, že vazba mAb na samotný CTLA—4 nebyla postačující pro zprostředkování útlumu reakcí T lymfocytů. Je zajímavé, že zatímco produkce IL-2 byla zastavena, inhibiční anti-CTLA—4 mAb umožnily indukci a expresi genu přežívání buněk bcl-X(L). Ve shodě s tímto pozorováním zůstávaly buňky životaschopné a po ligaci CTLA-4 nebyla zjišťována apoptóza.
Ve spojitosti sanergií Perez et al. (lmmunity, 6, 411-7, 1997) prokázali, že indukci anergie T lymfocytů bylo zabráněno blokádou CTLA-4 a uzavřeli, že výsledek rozpoznávání antigenu T lymfocyty je určován interakcí CD28 nebo CTLA—4 na T lymfocytech s molekulami B7. Také Van Parijs et al. (J. Exp. Med., 186, 1119-28, 1997) zkoumali úlohu interleukinu 12 a kostímulátorů u anergie T lymfocytů in vivo a nalezli, že prostřednictvím inhibice zapojení C I LA^l v průběhu indukce anergie byla blokována proliferace T lymfocytů a nebyla podněcována plná diferenciace Thl, Ale T lymfocyty vystavené antigenu vyvolávajícímu toleranci v přítomnosti jak IL—12, tak protilátky anti-CTLA-4 nebyly anergizovány a chovaly se identicky jako T lymfocyty, které potkaly imunogenní antigen. Tyto výsledky svědčí pro to, že k indukci anergie in vivo přispívají dva procesy; zapojení CTLA-4, které vede k blokádě schopnosti T lymfocytů proliferovat, a absence prototypového zánětlivého cytokinů, 1L-12. který zabraňuje diferenciaci T lymfocytů na Thl efektorové buňky. Kombinace IL-12 a anti-CTLA-4 protilátky byla postačující ke konverzi normálně tolerovaného stimulu na imunogenní podnět.
Ve spojitosti s infekcemi prokázali McCoy et al. (J. Exp. Med., 186, 183-7, 1997), že antiCTLA-4 protilátky značně zesílily a urychlily imunitní reakci T lymfocytů na Nippostrongylus brasiliensis, což mělo za následek vydatnou redukci počtu dospělých červů a časné ukončení produkce vajíček parazitem. (Viz také Murphy et al., J. Immunol., 161,4153-4160, 1998) (Leishmania donovani).
Ve spojitosti s rakovinou zavedli Kwon et al. (PNAS USA, 94, 8099-103, 1997) syngenní myší model karcinomu prostaty a zkoumali dvě odlišné manipulace, o kterých se předpokládalo, že vyvolají reakci proti karcinomu prostaty prostřednictvím zvýšené kostimulace T lymfocytů: i) zabezpečení přímé kostimulace prostatickými rakovinnými buňkami transdukovanými tak, že exprimovaly ligand B7-1 a ii) in vivo blokáda CTI. A ^4 T lymfocytů zprostředkovaná protilátkou, což zabraňovalo útlumu T lymfocytů. Bylo prokázáno, že in vivo blokáda CTLA—4 zprostředkovaná protilátkou zvýšila imunitní reakci proti karcinomu prostaty. Také Yang et al. (Cancer Res., 57, 4036-41, 1997) studovali, zda blokáda funkce CTLA—4 vede k zesílení protinádorové odpovědi T lymfocytů v různých stádiích nádorového růstu. Na základě in vitro a in vivo výsledků zjistili, že blokáda CTLA-4 u jedinců s nádorem zvýšila kapacitu vytvářet protinádorovou odpověď T lymfocytů, ale exprese tohoto zesilujícího účinku v jejich modelu byla omezena na časná stádia růstu nádoru. Dáie Hurwitz et al. (Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 95, 10067-71, 1998) zjistili, že vyvolání protinádorové reakce zprostředkované T lymfocyty závisí na zapojení receptoru T lymfocytů hlavním histokompatibilním komplexem/antigenem, jakož i ligace CD28 prostřednictvím B7. Určité nádory, jako například karcinom prsu SMI, byly refrakterní na imunoterapii anti -CTLA^4. A tak díky použití kombinace blokády CTLA-4 a vakcíny obsahující faktor stimulující granulocytové a makrofágové kolonie exprimovaný buňkami SMI byla pozorována regrese parenterálních SMI nádorů, navzdory neúčinnosti každé jednotlivé léčby použité samotné. Tato kombinační léčba měla za následek dlouhotrvající imunitu na SMI a závisela jak na CD4(+), tak na CD8(+) T lymfocytech. Zjištění svědčí pro to, že blokáda CTLA^4 působí na úrovni buňky prezentující antigen pocházející z hostitele.
Ve spojitosti s diabetem Luhder et al. (J. Exp. Med., 187, 427-32. 1998) injikovali anti-CTLA 4 mAb do TCR transgenního myšího modelu diabetů v různých stádiích nemoci. Nalezli, že zapojení CTLA-4 v době, kdy jsou poprvé aktivovány potenciálně diabetogenní T lymfocyty, je klíčový jev, je-li zapojení tolerováno, nastává invaze ostrůvků, ale zůstává po celé měsíce zcela neškodná. Jestliže zapojení tolerováno není, inzulttida je mnohem agresivnější a rychle vzniká diabetes.
Ve spojitosti s imunizací prostřednictvím vakcíny zjistili Horspool et al. (J. Immunol., 160, 2706-14, 1998), že intaktní anti-CTLA-4 mAb, ale ne fragmenty Fab, tlumili primární humorální odpověd1 na pClA/beta gal bez ovlivněni upomínací reakce, což naznačuje, že aktivace CTLA4 inhibovala produkci Ab, ale ne instruování („priming) T lymfocytů. Blokáda ligandů pro CD28 a CTLA-4, CD80 (B7-I) a CD86 (B7-2), odhalila rozdílnou a nepřekrývající se funkci. Blokáda CD80 při iniciální imunizací kompletně zrušila primární a sekundární Ab reakci, zatím-4 CZ 302706 B6 co blokáda CD86 tlumila odpověď primární, ale ne sekundární. Současná blokáda CD80 + CD86 byla méně účinná v tlumení Ab reakcí, než blokáda každého z nich samotného. Zesílení kosti mu láce prostřednictvím společné injekce plazmidu exprimujících B7 zvýšilo CTL reakce, ale ne Ab odpovědi, a bez průkazu asymetrie Thl kTh2. Tato zjištění svědčí pro složité a rozdílné úlohy CD28, CTLA-4, CD80 a CD86 při kostimulaci T lymfocytů po vakcinaci nukleovou kyselinou.
Ve spojitosti s rejekci štěpu zjistili Markees et al. (J. Clin. Invest., 101, 2446-55, 1998) v myším modelu rejekce kožního aloštěpu, že přijetí zpočátku záviselo na přítomnosti IFN-gamma, CTLA-4, a CD4(+) T lymfocytů. Přidání anti-CTLA-4 neb anti-ÍFN-gama mAb do laboratorního protokolu bylo spojeno s okamžitou rejekci štěpu, zatímco anti-IL-4 mAb neměla žádný účinek.
Ve spojitostí s úlohou CTL A—4 ve vztahu kCD28, Fallarino et al. (J. Exp. Med., 188, 205-10, 1998) vytvořili transgenní myši TCR/s deficitem genu 2 aktivujícího rekombinázu/ s CD28 divokým typem nebo s deficitem CD28, které byly imunizovány nádorem exprimujícím antigen. Instruované T lymfocyty od obou typů myší produkovaly cytokiny a proliferovaly při reakci na stimulující buňky bez exprese B7. Avšak zatímco odpověď CD28+/+ T lymfocytů zesílena kostimulací s B7-1, odpověď CD28-/- T lymfocytů byla silně inhibována. Tato inhibice byla zrušena monoklonální protilátkou proti B7-1 nebo CTL A—4. Tedy CTLA-4 mohou účinně inhibovat aktivaci T lymfocytů v nepřítomnosti CD28, což indikuje, že antagonismus signálu zprostředkovaného TCR je postačující pro vysvětlení inhibičního účinku CTLA^L Také Lin et al. (J. Exp. Med., 188, 199-204, 1998) studovali rejekci srdečních aloštěpů u myší s deficitem CD28. H-2(q) srdce byla transplantována do myší s alogenním divokým typem nebo s deficitem CD28 (H-2(b). Rejekce štěpu byla oddálena u myší s deficitem CD28 ve srovnání s myšmi s divokým typem. Ošetření příjemců s divokým typem s CTLA-4 imunoglobulinem (Ig) nebo santi-B7-l plus anti-B7-2 mAb významně prodloužilo přežívání aloštěpu. Na rozdíl od toho, ošetření myší s deficitem CD28 s CTLA-4-Ig, anti-B7-l plus anti-B7-2 mAb, nebo blokující anti-CTLA-4 mAb indukovalo akceleraci rejekce aloštěpu. Tato zvýšená rychlost rejekce štěpu byla spojena se závažnější infiltrací mononukleámími buňkami a zvýšenými hladinami transkriptů IFN-gama a IL-6 v dárcovských srdcích neošetřeného divokého typu a myší s deficitem CD28 ošetřených CTLA—4--Ig- nebo anti-CTLA-4 mAb. Tudíž negativní regulační úloha CTLA- 4 se šíří za jeho potenciální schopnost zabránit aktivaci CD28 prostřednictvím kompetice o ligand. Dokonce i v nepřítomnosti CD28 má CTLA^4 inhibiční účinek v regulaci rejekce aloštěpu.
Byla také studována další charakterizace exprese CTLA-4. Například Alegre et al. (J. Immunol., 157, 4762-70, 1996) navrhli, že povrchový CTLA-4 je rychle intemalizován, což může vysvětlit nízké hladiny exprese obecně zjišťované na povrchu buněk. Uzavřeli, že jak CD28 tak IL-2 mají důležité úlohy v aktivaci exprese CTLA-4. Kromě toho se zdá, že akumulace CTLA-4 na buněčném povrchu je primárně regulována jeho rychlou endocytózou. Také Castan et al. (Immunology, 90, 265-71, 1997) na základě in šitu imunohistologických analýz exprese ČI LA—4 naznačili, že germinální centra T lymfocytů, která byla CTLA-4 pozitivní, mohou být důležitá pro imunitní regulaci.
Podle toho ve světle široké a ústřední úlohy, kterou jak se ukazuje, CTLA-4 má v imunní reaktivitě, by bylo žádoucí vytvořit protilátky k CTLA-4, které mohou být účinně používány v imunoterapii. Navíc by bylo žádoucí vytvořit protilátky proti CTLA-4, které mohou být používány u chronických nemocí, u kterých je vyžadováno opakované podávání protilátek.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je lidská monoklonální protilátka, která se váže na antigen 4 cytotoxických T lymfocytů (CTLA-4) nebo její antigen-vázající fragment, kde uvedená protilátka obsahuje aminokyselinové sekvence CDR1, CDR2 a CDR3 uvedené v SEKVENCI ID. Č. 70 a aminokyselinové sekvence CDRI, CDR2 a CDR3 uvedené v SEKVENCI ID. Č. 71.
- 5 CZ 302706 B6
Výhodně se jedná o výše definovanou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, kde lehký řetězec uvedené protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 71.
Výhodně se jedná o výše definovanou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, kde těžký řetězec uvedené protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 70.
Výhodně se jedná o výše definovanou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, kde uvedená protilátka obsahuje aminokyselinovou sekvenci variabilního úseku těžkého řetězce v SEKio VENCI ID. Č. 70 a aminokyselinovou sekvenci variabilního úseku lehkého řetězce v SEKVENCI ID.Č. 71.
Výhodně se jedná o výše definovanou protilátku, která obsahuje aminokyselinovou sekvenci těžkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 70 a aminokyselinovou sekvenci lehkého řetězce SEKVEN15 CE ID.Č. 71.
Výhodně se jedná o výše definovanou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, kde uvedená protilátka nebo její antigen-vázající fragment má jednu nebo více vlastností zvolených ze skupiny sestávající z následujících vlastností:
a) kompetitivně inhibuje vazbu C1LA-4 s uvedenou protilátkou;
b) váže se na stejný epitop jako uvedená protilátka; a
e) váže se na CTLA4 se stejnou specifičností jako uvedená protilátka.
Výhodně se jedná o výše uvedenou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, přičemž uvedená protilátka nebo její antigen-vázající fragment kompetitivně inhibuje vazbu CTLA-4 s protilátkou obsahující aminokyselinovou sekvenci těžkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 70 a aminokyselinovou sekvenci lehkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 71.
Výhodně se jedná o výše uvedenou monoklonální protilátku, která se váže na Č I LA—1. nebo její antigen-vázající fragment, přičemž uvedená protilátka obsahuje:
a) těžký řetězec obsahující aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 9 nebo aminokyselinovou sekvenci s ní alespoň z 90 % identickou; a
b) lehký řetězec obsahující aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 22 nebo aminokyselinovou sekvenci s ní alespoň z 90 % identickou.
přičemž uvedená protilátka nebo její antigen-vázající fragment má vazebnou afinitu pro CTLA-4 40 199 M nebo vyšší, inhibuje vazbu mezi CTLA-4 a B7-I s IC50 100 nM nebo nižší a inhibuje vazbu mezi CTLA^l a B7-2 s IC5tí 100 nM nebo nižší.
Výhodně se jedná o výše uvedenou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, kde uvedená protilátka nebo fragment inhibuje vazbu lidského CTLA-4 na B7-1 s IC50 ΙΟΟηΜ nebo nižší a inhibuje vazbu lidského Č I LA 4 na B7-2 s IC50 100 nM nebo nižší, přičemž uvedená protilátka má alespoň jednou vlastnost zvolenou ze skupiny sestávající z následujících vlastností:
a) váže se na CTLA-4 s vazebnou afinitou ΙΟ9 M nebo vyšší;
b) zvyšuje produkci cytokinů v testu lidských T lymfocytů o 500 pg/ml nebo více;
5o c) zvyšuje produkci IL-2 v testu lidských T lymfocytů o 500 pg/ml nebo více,
d) zvyšuje produkci interferonu-γ v testu lidských T lymfocytů o 500 pg/ml nebo více,
e) naváže se na CTLA-4 myši, potkana nebo králíka a
-6 CZ 302706 Bó
f) váže se na CTLA-4 cynomologního makaka (Macaca fascicularis) a rhesus makaka (Macaca mullata).
Výhodně se jedná o výše uvedenou protilátku nebo její antigen-vázající fragment, kde uvedená protilátka ínhibuje vazbu lidského CTLA-4 na B7- 1 s IC5O 0,50 nM nebo nižší a ínhibuje vazbu lidského CTLA-4 na B7-2 s IC50 0,38 nM nebo nižší.
Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutická kompozice pro léčení rakoviny a zánčtlivých nebo autoimunitních onemocnění, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje výše uvedenou protilátku nebo fragment a farmaceuticky přijatelný nosič.
Předmětem vynálezu je rovněž buněčná linie produkující výše uvedenou protilátku nebo fragment.
Předmětem vynálezu je rovněž izolovaná molekula nukleové kyseliny, která kóduje těžký řetězec nebo jeho antigen-vázající fragment nebo lehký řetězec nebo jeho antigen-vázající fragment výše uvedené protilátky.
Výhodně se jedná o izolovaná molekulu nukleové kyseliny, kteráje operativně spojená s kontrolní expresní sekvencí.
Předmětem vynálezu je rovněž hostitelská buňka obsahující uvedenou izolovanou molekulu nukleové kyseliny.
Předmětem vynálezu je rovněž použití výše uvedené protilátky nebo jejího fragmentu nebo výše uvedené farmaceutické kompozice pro výrobu léčiva pro zvýšení tvorby cytokinů v T buňkách nebo pro zesílení odezvy cytotoxických T buněk.
Výhodně se jedná o uvedené použití, kdy se protilátka nebo její fragment nepodílejí na cytotoxicitě závislé na komplementu.
Předmětem vynálezu je rovněž kombinace obsahující výše uvedenou protilátku nebo její fragment nebo výše uvedené farmaceutické kompozice a buněk exprimujících faktor stimulující kolonie granulocytů-makrofágů pro výrobu léčiva pro léčení nádoru u subjektu trpícího tímto nádorem.
Popis obrázků
Obrázek 1 popisuje řadu nukleotidových a aminokyselinových sekvencí těžkého řetězce a lehkého řetězce kapa (κ) imunoglobulinových molekul podle vynálezu: 4.14 (obrázek IA), 4,8.1 (obrázek 1B), 4.14.3 (obrázek IC), 6.1.1 (obrázek ID), 3.1.1 (obrázek 1E), 4.10.2 (obrázek 1F), 2.1.3 (obrázek IG), 4.13.1 (obrázek IH), 11.24 (obrázek 11), 11.6.1 (obrázek IJ), 11.74 (obrázek 1K), 12.344 (obrázek IL) a 12.944 (obrázek 1M).
Obrázek 2 poskytuje srovnání sekvencí mezi před i kovaný mi aminokyselinovými sekvencemi těžkého řetězce zklonů 444, 4.84, 444.3, 644, 344, 440.2, 4434, 11.24, 11.64, 11.74, 12.34 4, a 12.94 4 a aminokyselinová sekvence zárodečné linie DP-50 (3-33). Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zárodečné linie DP-50 a sekvencí v klonu jsou znázorněny tučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí CDR1. CDR2 a CDR3, které jsou vystínovány.
Obrázek 3 ukazuje přiřazení sekvencí predí kované aminokyselinové sekvence těžkého řetězce klonu 24.3 a zárodečné linie DP-65 (4-31). Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zárodečné linie DP-65 a sekvencí v klonu jsou znázorněny tučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí CDR1, CDR2 a CDR3, které jsou podtrženy.
-7 CZ 302706 B6
Obrázek 4 ukazuje přiřazení predikované aminokyselinové sekvence lehkého řetězce kapa klonil
4.1.1, 4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 4.10.2 a 4.13.1 a zárodečné linie Λ27 aminokyselinové sekvence. Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zárodečné linie Λ27 a sekvencí v klonu jsou znázorněny lučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí CDRt, CDR2 a CDR3 protilátky, které jsou podtrženy. Zjevné delece v úseku CDR1 klonů 4.8.1,4.14.3 a 6.1.1 jsou označeny symboly ,-Ο'“.
Obrázek 5 ukazuje přiřazení predikované aminokyselinové sekvence lehkého řetězce kapa klonů
3.1.1, 12.2.1, 1 1.6.1, a 1 1.7.1 a zárodečné linie 012. Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zároKi dečné linie 012 a sekvencí v klonu jsou znázorněny tučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí
ODŘI, CDR2 a CDR3 protilátky, které jsou podtrženy.
Obrázek 6 ukazuje přiřazení predikované aminokyselinové sekvence lehkého řetězce kapa klonu 2.1.3 a sekvencí zárodečné linie A10/A26. Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zárodečné linie
A1O/A26 a sekvencí klonu jsou znázorněny tučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí CDRI,
CDR2 a CDR3 protilátky, které jsou podtrženy.
Obrázek 7 ukazuje přiřazení predikované aminokyselinové sekvence lehkého řetězce kapa klonu
12.3.1 a sekvencí zárodečné linie A17. Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zárodečné linie AI7 20 a sekvencí klonu jsou znázorněny tučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátky, které jsou podtrženy.
Obrázek 8 ukazuje přiřazení predikované aminokyselinové sekvence lehkého řetězce kapa klonu
12.9.1 a sekvencí zárodečné linie A3/AI9. Rozdíly v aminokyselinové sekvenci zárodečné linie
Λ3/Α19 a sekvencí klonu jsou znázorněny tučně. Obrázek také ukazuje pozici sekvencí CDRI,
CDR2 a CDR3 protilátky, které jsou podtrženy.
Obrázek 9 ukazuje souhrn N-koncové aminokyselinové sekvence získaný přímým proteinovým sekvencováním těžkého a lehkého řetězce protilátek,
Obrázek 10 uvádí některé další charakteristiky některých protilátek podle vynálezu. Na obr. 10A jsou shrnuta data týkající se klonů 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.14.3 a 6.1.1 Data týkající se koncentrace, isoelektrického ťokusingu (IEF), SDS-PAGE, vylučovací chromatografie, kapalinové chromatografie/hmotové spektroskopie (LCMS), hmotové spektroskopie (MALDI), N-koneové sekvence lehkého řetězce jsou uvedena. Další detailní údaje týkající se IEF jsou na obr. 10B, data týkající se SDS-PAGE na obr. i 0C a SEC protilátky klonu 4.1.1. na obr. 10D.
Obrázek I 1 ukazuje expresi B7-1 a B7-2 na buňkách Ráji užitím monoklonálních protilátek (mAb) anti-CD8O-PE a antiCD86-PH.
H)
Obrázek 12 ukazuje na koncentraci závislé zvýšení produkce IL-2 v testu T lymfoblastů/Raji indukované blokujícími protilátkami anti-GTLA-4 (BNI3, 4.1.1,4.8.1 a 6.1.1).
Obrázek 13 ukazuje na koncentraci závislé zvýšení produkce IFN-γ v testu ΐ lymfoblastů/Raji 45 indukované blokujícími protilátkami anti CTLA—1 (BNI3, 4.1.1., 4.8.1 a 6.1.1) (shodné donorové T-buňky).
Obrázek 14 ukazuje průměrné zvýšení produkce IL-2 T-buňkami ze 6 donorů indukovaných blokujícími monoklonálními protilátkami anti-CTLA-4 testu T-buňky blast/Raji.
Obr. 15 ukazuje průměrné zvýšení produkce IFN-γ T-buňkami ze 6 donorů indukovaných blokujícími monoklonálními protilátkami anti-CTLA-4 testu Ί-buňky blast/Raji.
-8CZ 302706 Β6
Obr. 16 ukazuje průměrné zvýšení produkce 1L 2 v hPBMC z 5 donorů indukovaných blokujícími monoklonálntmi protilátkami anti-CTLA-4 testu T-buňky blast/Raji, měřeno 72 hodin po stimulaci SEA.
Obr. 17 ukazuje průměrné zvýšení produkce IL-2 v celé krvi ze 3 donorů indukovaných blokujícími monoklonální mi protilátkami anti-CTLA—4 testu T-buňky blast/Raji, měřeno 72 a 96 hodin po stimulaci SEA.
Obrázek 18 ukazuje zvýšení produkce IL-2 indukované protilátkami anti-CTLA-4 (4,1.1 a 11.2.1) podle vynálezu v testu T blast/Raji a Superantigen po 72 hodinách (mononukleámí buňky z celé krve a periferní krve ze 6 dárců).
Obrázek 20 ukazuje na dávce závislé zvýšení produkce IL-2 indukované protilátkami antiCTLA-4 (4. L1 a 11.2.1) podle vynálezu v testu T blast/Raji a Superantigen po 72 hodinách.
Obrázek 21 ukazuje na dávce závislé zvýšení produkce IL-2 indukované protilátkami antiCTLA-4 (4.1.1 a 11.2.1) podle vynálezu v testu a Superantigenu po 72 hodinách, kde celá krev byla stimulovaná 100 ng/ml superantigenu.
Obr. 22 ukazuje sérii dalších nukleotidových a aminokyselinových sekvencí následujících řetězců protilátek anti-CTLA-4: těžký řetězec 4.1.1 plné délky (cDNA 22(a), genomická sekvence 22(b), a aminokyselinová sekvence 22(c)), aglykosylovaný těžký řetězec plné 4.1.1 (cDNA 22(d) a aminokyselinová sekvence 22(e)), lehký řetězec 4.1.1 (cDNA 22(f) a aminokyselinová sekvence 22(g)), těžký řetězec 4.8.1 plné délky (cDNA 22(h) a aminokyselinová sekvence 22(i)), lehký řetězec 4.8.1 (cDNA 22(j) a aminokyselinová sekvence 22(k)), těžký řetězec 6.1.1 plné délky (cDNA 22(1) a aminokyselinová sekvence 22(m)), lehký řetězec 6.L1 (cDNA 22(n) a aminokyselinová sekvence 22(o)), těžký řetězec 11.2.1 plné délky (cDNA 22(p) a aminokyselinová sekvence 22(q)), a lehký řetězec 11.2.1 (cDNA 22 (r) a aminokyselinová sekvence 22(s)). Podrobný popis vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje plně lidskou monoklonální protilátku proti lidskému CTLA-4. Vynález zejména poskytuje také nukleotidová sekvence kódující aminokyselinové sekvence obsahující těžký a lehký řetězec imunoglobulinových molekul, zejména sekvence odpovídající souvislým sekvencím těžkého a lehkého řetězce zFRl a CDR1 a CDR3 a FR4. Dále vynález poskytuje protilátky mající podobné vazebné vlastnosti jako protilátky a protilátky (nebo jiné antagonisty) mající podobné funkce jako protilátky popsané ve vynálezu. Také poskytuje hybridomy exprimující tyto imunoglobulinové molekuly a také monoklonální protilátky.
Definice
Pokud není definováno jinak, vědecké a technické termíny jsou v předkládané přihlášce užívány v tom smyslu, jak jsou odborníkovi obecně srozumitelné. Pokud ze souvislosti nevyplývá opak, termíny použité v jednotném čísle zahrnují i množné číslo a termíny použité v množném čísle zahrnují i jednotné číslo. Obecně jsou názvosloví a metody použité v této přihlášce v souvislosti s buněčnými a tkáňovými kulturami, molekulární biologií, biochemií proteinů, oligonukleotidů a polynukleotidů a hybridizačním technikami obecně známé a odborníkovi srozumitelné. Pro rekombinantní DNA, syntézu oligonukleotidů, tkáňové kultury a transformace byly užity standardní postupy odborníkovi známé (jako je např. elektroforéza, lipofekce atd.). Enzymatické reakce a purifíkační metody se prováděly podle návodů výrobce, nebo obecně známými postupy a nebo jak je popsáno zde. Všechny zmíněné metody se prováděly odborníkovi známým způsobem, jak byly popsány v obecných příručkách, jako je např. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1989, nebo ve specifických publikacích, kteréjsou dále v textu citovány, a tyto citace jsou formou odkazu do přihlášky zahrnuty. Názvosloví použité v přihlášce v souvislosti s laboratorními postupy z oboru
- 9 CZ 302706 B6 analytické chemie, organické sy ntetické chemie a lékařské a farmaceutické chemie jsou obecně užívané a odborníkovi známé. Pro chemické syntézy, chemické analýzy, přípravu a formulaci farmaceutických přípravků a podávání přípravků pacientům a léčení byly užity standardní postupy odborníkům známé.
Následující termíny užívané v přihlášce mají, pokud není specificky uvedeno jinak, následující význam:
Termín „izolovaný polynukleotid“ znamená podle vynálezu polynukleotid genomové DNA, cDNA nebo syntetického původu nebo jakoukoliv jejich kombinaci, který je „izolovaný“ tím, že l) není spojen ani s celým ani s části polynukleotidu, ve kterém se „izolovaný polynukleotid“ nalézá v přírodě, 2) je operativně spojený s polynukleotidem, se kterým není v přírodě spojen, nebo 3) v přírodě se nevyskytuje jako součást delší sekvence.
Termín „izolovaný protein“ znamená podle vynálezu protein vzniklý na základě cDNA, rekombinantní RNA nebo syntetickým způsobem nebo jakoukoliv jejich kombinací, který je „izolovaný“ vzhledem k původu nebo vzniku tím, že 1) není spojen s proteiny tak, jak se nachází v přírodě, 2) neobsahuje další proteiny ze stejného zdroje, např. neobsahuje žádné další proteiny z myši, a 3) je exprimován buňkami jiného biologického druhu, nebo 4) nevyskytuje se v přírodě.
Termín „polypeptid“ se užívá v popisu vynálezu jako generický termín a označuje nativní protein, fragmenty nebo analogy polypeptidové sekvence. Tudíž nativní protein, fragmenty nebo analogy jsou „druhy“ polypepťidového „rodu“. Výhodné polypeptidy podle předkládaného vynálezu jsou např. molekuly těžkého řetězce lidského imunoglobulinu a molekuly lehkého řetězce kapa lidského imunoglobulinu uvedené na obr. I, a také molekuly protilátek vytvořené jejich kombinací, obsahující molekuly těžkého řetězce s molekulami lehkého řetězce, např. lehkého řetězce kapa lidského imunoglobulinu, a také naopak, a také jejich fragmenty a analogy.
Termín „přirozeně se vyskytující“ nebo „vyskytující se v přírodě“ se v popisu vynálezu týká skutečnosti, že příslušný předmět lze nalézt v přírodě. Tak např. polypeptid nebo polynukleotidová sekvence, které jsou přítomny v organismu (včetně virů) a které z takové přírodního zdroje mohou být izolovány a nebyly přitom záměrně člověkem modifikovány, ať už v laboratoři nebo jinak, jsou „přirozeně se vyskytující.
Termín „operativně spojený“ v popisu vynálezu označuje to, že složky jsou v takové pozici, která jim umožňuje zamýšlenou funkci. Kontrolní sekvence operativně spojená škodující sekvencí je ligována s kódující sekvencí takovým způsobem, aby bylo dosaženo exprese kódující sekvence za podmínek vhodných pro funkci kontrolní sekvence.
Termín „kontrolní sekvence“ označuje v popisu vynález polynukleotidovou sekvenci, která je nutná k expresi a obecně k činnosti kódující sekvence, ke kteréje ligována (připojena). Kontrolní sekvence jsou různé povahy v závislosti na hostitelském organismu: u prokaryotických organismů obsahuje kontrolní sekvence obecně promotor, ribozomální vazebné místo a term i nač ní sekvenci transkripce, u eukaryotických organismů obsahuje kontrolní sekvence obecně promotor a terminační sekvenci transkripce. Termín „kontrolní sekvence“ zahrnuje jakožto minimum všechny složky, jejichž přítomnost je nezbytná pro expresi a „zpracování“ DNA, přitom může obsahovat ještě další složky, jejichž přítomnost je výhodná, např. vedoucí sekvenci („leader“) nebo partnerskou fúzní sekvenci.
Termín „polynukleotid“ podle předkládaného vynálezu znamená polymemí formu nukleotidů délky nejméně 10 baží, a to buďto ribonukleotidů nebo deoxyribonukleotidů nebo modifikované formy obou těchto typů nukleotidů. Termín přitom zahrnuje jak jednořetězcové tak dvouřetězcové formy DNA.
- 10CZ 302706 B6
Termín „oligonukleotid“ podle vynálezu označuje přirozeně se vyskytující i modifikované nukleotidy navázané oligonukleotidovými vazbami přirozeně se vyskytujícími nebo jinými než přirozeně se vyskytujícími. Oligonukleotidy jsou obecně podmnožinou polynukleotidu a obsahují přibližně 200 bází nebo méné. Výhodné oligonukleotidy obsahují 10 až 60 bází a nejvýhodněji 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 nebo 20 až 40 bází. Oligonukleotidy jsou obvykle jednořetězcové, např. oligonukleotidové sondy, ačkoliv mohou být i dvouřetězcové, např. pro konstrukci mutovaných genů. Oligonukleotidy podle vynálezu jsou buďto „sense“ nebo „antisense“ oligonukleotidy. Termín „přirozeně se vyskytující oligonukleotidy“ označuje jak ribonukleotidy tak i deoxyribonukleotidy. Termín „modifikované oligonukleotidy“ označuje v popisu vynálezu nukleotidy s modifikovanými nebo substituovanými cukernými skupinami a podobně. Termín „oligonukleotidové vazby“ označuje oligonukleotidové vazby jako je vazba fosforothioátová, fosforodithioátová, fosforoselenoátová, fosfordiselenoátová, fosfbroanilothoátová, fosforoaniladátová, fosforoamidátová a další. Viz např. publikace LaPlanche et al. Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec etal. J. Am. Chem. Soc. 106:6077(1984); Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988); Zon et al. Anti-Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practival Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. U.S. Patent 5,151,510; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990), které jsou zahrnuty formou odkazu. Všechny oligonukleotidy mohou být pro detekci označeny, pokud je to třeba.
Termín „selektivně hybridizovat“ znamená v popisu vynálezu detekovatelné a specificky se vázat. Póly nukleotidy, oligonukleotidy ajejich fragmenty podle vynálezu selektivně hybridizují s řetězci nukleových kyselin za podmínek hybridizace a promývání, kdy je minimalizováno množství detekovatelné vazby nespecifických nukleových kyselin. Podmínky s vysokou stringencí se užívají k dosažení selektivní hybridizace, což je odborníkům známo a bude zde ještě diskutováno. Obecně homologie sekvencí nukleových kyselin mezi polynukleotidy, oligonukleotidy a fragmenty sekvencí nukleových kyselin podle vynálezu a požadovanými nukleovými kyselinami je nejméně 80 % a více, výhodně s rostoucí homologii alespoň 85%, 90%, 95%, 99% a 100%. Dvě aminokyselinové sekvence jsou homologní, pokud je zde Částečná nebo úplná identita mezi jejich sekvencemi. Tak např. 85% homologie znamená, že 85 % aminokyselin je identických, když jsou dvě sekvence přiřazeny („alignment“) s dosažením maximální shody („matching“). Mezery (vjedné ze dvou přirazených sekvencí) jsou povoleny, aby bylo dosaženo maximální shody, výhodné jsou mezeiy velikosti 5 nebo kratší, nejvýhodnější jsou mezery velikosti dvě nebo kratší. Alternativně a výhodně, dvě proteinové sekvence (nebo dvě polypeptidové sekvence z nich odvozené dlouhé alespoň 30 aminokyselin) jsou homologní, ve smyslu zde užívaného termínu, pokud mají skóre shody přiřazení vyšší než 5 (v jednotkách standardní odchylky) při užití programu AL1GN s mutační datovou maticí a sankcí za mezeru 6 nebo více. Viz Dayhoff, M. O„ in Atlas of Protein: Sequence and Structure, str. 101-110 (Volume 5, National Biomedical Research Foundation (1972)), a Supplement 2 k tomuto dílu, str. 1-10. Dvě sekvence nebo jejich části jsou výhodně homologní, když jejich aminokyseliny jsou z 50% a více identické při dosažení optimální shody přiřazení v programu AL1GN. Termín „odpovídá“ se v popisu vynálezu užívá ve významu, že polynukleotidová sekvence je homologní (tj. identická, nikoliv evolučně příbuzná) s celou nebo částí referenční póly nukleotidové sekvence, nebo že polypeptidová sekvence je identická s referenční polypeptidovou sekvencí. Naproti tomu termín „komplementární“ znamená, že komplementární sekvence je homologní k části nebo celé polynukleotidové sekvence, ke které se srovnává. Tak pro ilustraci nukleotidová sekvence „TATAC“ odpovídá referenční sekvenci „TATAC“ a je komplementární k referenční sekvenci „GTATA“.
Následující termíny se užívají k popisu vztahů mezi dvěma nebo více polynukleotidovými nebo aminokyselinovými sekvencemi: „referenční sekvence“, „srovnávací okno“, „sekvenční identita“, „procento sekvenční identity“ a „podstatná identita“. „Referenční sekvence“ je definována jako sekvence použitá jako základ pro srovnávání sekvencí, referenční sekvence může být podmnožina vetší sekvence, např. segment cDNA plné délky nebo genové sekvence uvedené v seznamu sekvencí, nebo může obsahovat celou cDNA nebo genovou sekvenci. Obecně je referenční sekvence dlouhá alespoň 18 nukleotidů nebo 6 aminokyselin, často 24 nukleotidů nebo 8 amino- 11 C Z 302706 B6 kyselin, a častěji alespoň 48 nukleotidů nebo 16 aminokyselin. Jelikož v případě dvou polynukleolitlů nebo aminokyselinových sekvencí každý/á z nich I) může obsahovat sekvenci (tj. část úplné polynukleotidové nebo aminokyselinové sekvence), která je pro obč molekuly podobná a 2) dále může obsahoval sekvenci, která je pro obě molekuly odlišná, srovnávání dvou nebo více sekvencí se provádí obvykle pomocí tzv. „srovnávacího okna“ pro identifikaci a srovnání lokálních úseku sekvenční identity/podobnosti. Termín „srovnávací okno“ označuje myšlený segment alespoň 18 souvisle po sobě následujících nukleotidových pozic nebo 6 aminokyselin, kde polynukleotidová sekvence nebo aminokyselinová sekvence může být srovnána s referenční sekvencí alespoň 18 souvisle po sobě jdoucích nukleotidů nebo sekvencí 6 aminokyselin, přičemž úsek polynukleotidové sekvence ve srovnávacím okně může obsahovat adice, delece, substituce apod. (tj. mezery) z 20 % nebo méně ve srovnání s referenční sekvencí (která neobsahuje adice nebo delece) pro dosažení optimální shody přiřazení dvou sekvencí. Optimální přiřazení sekvencí při porovnávání srovnávacích oken může být prováděno algoritmem lokální homologie podle Smith a Waterman Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), algoritmem homologního přiřazení podle Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970), metodou vyhledávání podobnosti podle Perason and Lipman Proč. Natí Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988), počítačovou implementací těchto algoritmů (GAP, BESTFIT, FASTA, a TFASTA v programovém balíku Wísconsin Genetics Software Package Release 7.0 od Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.), nebo v programovém balíku Geneworsk nebo MacVector), nebo prohlížením, a nejlepší přiřazení (které vede k nej vyššímu procentu homologie ve srovnávacím okně) získané různými metodami se vybere.
Termín „sekvenční identita znamená identitu dvou polynukleotidových nebo aminokyselinových sekvencí (tj. jsou identické na bázi nukleotid za nukleotidem nebo zbytek za zbytkem) ve srovnávacím okně. Termín „procento sekvenční identity“ označuje hodnotu, která se vypočte porovnáním dvou optimálně přiřazených sekvencí ve srovnávacím okně a určením počtu pozic, kde jsou identické báze (např. A, T, C, G, U nebo I) nebo aminokyselinové zbytky v obou sekvencích, čímž se získá počet shodných pozic, a tento počet shodných pozic se dělí celkovým počtem pozic ve srovnávacím okně (tj. velikostí okna) a výsledek se vynásobí 100, čímž se dostane hodnota procenta sekvenční identity. Termín „podstatná identita“ v přihlášce označuje vlastnosti polynukleotidové nebo aminokyselinové sekvence, kdy polynukleotidová nebo aminokyselinová sekvence obsahuje sekvenci, která má alespoň 85% sekvenční identitu, výhodně alespoň 90 až 95% sekvenční identitu, a nejvýhodněji a nejobvykleji alespoň 99% sekvenční identitu při srovnání s referenční sekvencí ve srovnávacím okně velikosti alespoň 18 nukleotidů (6 aminokyselin), často velikosti alespoň 24 až 48 nukleotidů (8 až 16 aminokyselin), kdy procento sekvenční identity se vypočítává ze srovnání referenční sekvence se sekvencí, která může obsahovat delece nebo adice představující nejvýše 20 % celkové referenční sekvence ve srovnávacím okně.
V popisu vynálezu se pro označení 20 esenciálních aminokyselin užívají konvenční zkratky, viz publikace hntnunology - A Synthesis (2,ui Edition, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. 20 (1991)), která je vložena formou odkazu. Stereoisomery dvaceti konvenčních aminokyselin (např. D-aminokyseliny), přírodně se nevyskytující aminokyseliny, jako např. ct-, ad i substituované aminokyseliny, N-alkylaminokyseliny, kyselina mléčná a další neobvyklé aminokyseliny mohou být také vhodné složky polypeptidu podle předkládaného vynálezu. K příkladům neobvyklých aminokyselin patří: 4-hydroxyprolin, γ-karboxyglutamát ε-Ν,Ν,Ν-trimethyllysin, ε -N-acetyllysině, O-fosfoserin, N-aeetylserin, N-formylmethionin, 3-methylhistidin, 5-hydroxylysín, σ-N-methylargÍnin, a další podobné aminokyseliny (např. 4-hydroxyprolin). Při označování polypeptidu v popisu vynálezu je vlevo amino-koncová část a vpravo karboxy-koncová část polypeptidu v souladu s konvencí odborníkovi známou.
Obdobně, pokud není specifikováno jinak, levý konec jednořetězcové polynukleotidové sekvence je 5’ -konec a tudíž směr vlevo u dvouřetězcové polynukleotidové sekvence je označován jako
5'-směr. Směr od 5'-konce do 3' konce. kterým vzniká RNA transkript je označován jako směr transkripce, úseky DNA řetězce mající stejnou sekvenci jako RNA, ležící 5-směrem od 5'konce RNA transkriptu jsou označovány jako „upstream“ (tj, proti směru transkripce) sekvence.
- 12 CZ 302706 B6 úseky DNA řetězce mající stejnou sekvenci jako RNA, ležící 3'-směrem od 3'-konce RNA transkriptu jsou označovány jako „downstream“ (tj. po směru transkripce) sekvence.
Při aplikaci na póly peptidy termín „podstatná identita“ znamená, že dvě peptidové sekvence, s pokud jsou optimálně přiřazeny, jako např. v programu GAP nebo BESTFIt při použití předem nastavených hodnot váhy mezery, sdílejí alespoň 80% sekvenční identitu, výhodně alespoň 90% sekvenční identitu, výhodněji 95% sekvenční identitu a nejvýhodněji alespoň 99% sekvenční identitu. Výhodně aminokyselinové zbytky v pozicích, které nejsou identické, se liší konzervativní substitucí aminokyseliny. Konzervativní aminokyselinové substituce jsou vzájemně záměny io takových aminokyselin, které mají podobné postranní řetězce, tak např. skupiny aminokyselin s alifatickým postranním řetězcem obsahuje glycin, alanin, valin, leucin a isoleucin, skupina aminokyselin majících alifatický-hydroxylový postranní řetězec obsahuje serin athreonin, skupina aminokyselin s postranním řetězcem obsahujícím amidovou skupinu obsahuje asparagin a glutamin, skupina aminokyselin majících aromatické postranní řetězce obsahuje fenylalanin, is ty ros i n a tryptofan, skupina aminokyselin majících bazický postranní řetězec obsahuje lysin, arginin a histidin, a skupina aminokyselin majících postranní řetězec obsahující síru obsahuje cystein a methionin. Výhodné skupiny aminokyselin pro konzervativní substituce jsou: valin-leucinísoleucin, fenylalanín-tyrosin, lysin-arginin, alanin-valin, glutamát-aspartát a asparaginglutamin,
Jak již bylo diskutováno, menší variace v aminokyselinové sekvenci protilátek nebo imunoglobulinových molekul jsou zahrnuty v předkládaném vynálezu, za předpokladu, že variace udržují alespoň 75%, výhodněji alespoň 80%, 90% nebo 95% a nej výhodněji 99% sekvenční identitu. Zejména sem patří konzervativní substituce aminokyselin. Konzervativní substituce jsou takové substituce, které se odehrávají v rámci rodiny aminokyselin, kteréjsou příbuzné svými postranními skupinami. Geneticky kódované aminokyseliny se obecně dělí do rodin: (1) kyselé = aspartát, glutamát, (2) bazické = lysin, arginin, histidin, (3) nepolární = alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, methionin, tryptofan, a (4) nenabité polární = glycin, asparagin, glutamin, cystein, serin, threonin, tyrosin. Výhodnější rodiny jsou: serin a threonin tvoří rodinu alifatickou3» hydroxylovou, asparagin a glutamin tvoří rodinu obsahující amidovou skupinu, alanin, valin, leucin a isoleucin tvoří alifatickou rodinu, a fenylalanin, tryptofan a tyrosin tvoří aromatickou rodinu. Tak např. je rozumné očekávat, že izolované nahrazení leucinu ísoleucinem nebo val i nem, aspartátu glutamátem, threoninu serinem nebo podobné náhrady aminokyselin strukturně příbuznými aminokyselinami, nebudou mít závažný vliv na vazebné nebo jiné vlastnosti výsledné molekuly, zejména pokud se náhrady nebudou týkat oblasti kostry. Zda záměna aminokyseliny vedla k funkčnímu peptidu lze okamžitě ověřit testováním specifické aktivity polypeptidového derivátu. Příslušné testy jsou v této přihlášce podrobně popsány. Fragmenty nebo analogy protilátek nebo imunoglobulinových molekul mohou být odborníkem snadno připraveny. Výhodné amino-konce nebo karboxy-konce fragmentů nebo analogů se vyskytují v blízkosti hranic
4o funkčních domén. Strukturní a funkční domény mohou být identifikovány srovnáním nukleotidové a/nebo aminokyselinové sekvence s daty ve veřejných nebo soukromých databázích sekvencí. Výhodně se užívají počítačové metody k identifikaci sekvenčních motivů nebo predikci proteinových konformačních domén, které se vyskytují u jiných proteinů, jejichž struktura a/nebo funkce je známá. Metody k identifikaci proteinových sekvencí, které se skládají do známých trojrozměr45 ných struktur, jsou odborníkům známy (viz např. Bowie et al. Science 253:164 (1991)). Čili předcházející příklady ukazují, že odborník je schopen rozeznat motivy a strukturní konformace, které lze užít pro definování strukturních a funkčních domén podle předkládaného vynálezu.
Výhodné aminokyselinové substituce jsou takové, které: (1) redukují citlivost k proteolýze, (2) redukují citlivost k oxidaci, (3) mění vazebnou afinitu pro vytvářející se proteinové komplexy, (4) mění vazebné afinity a (5) poskytují nebo modifikují jiné fyzikálně—chemické nebo funkční vlastnosti takových analogů. Analogy mohou obsahovat různé muteiny sekvence odlišné od přirozeně se vyskytující peptidové sekvence. Tak např. jednoduchá nebo vícenásobná aminokyselinová substituce (výhodně konzervativní substituce aminokyselin) se může provést v přirozené se vyskytující sekvenci (výhodně v části polypeptidu mimo doménu/domény tvořící intermolekulár- 13 CZ 302706 Β6 ni spojení). Konzervativní aminokyselinové substituce by neměla podstatně změnit strukturní charakteristiky původní (parenterální) sekvence (např. náhrada aminokyseliny by neměla narušit šroubovieovou strukturu parenterální molekuly nebo narušit jiné typy sekundárních struktur charakteristických pro parenterální sekvenci). Příklady v oboru známých sekundárních a terciárních struktur polypeptidu byly popsány např. v publikacích Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Fd.. W. H. Freeman and Company, New York (1984)), Introduction to Protein Structure (C. Brandeu and J. Tooze, eds„ Garland Publishing, New York, N. Y. (1991)), a l hornton et al.. Nátuře 354:105 (1991), které jsou vloženy formou odkazu.
Termín „polypeptidový fragment označuje v předkládané přihlášce polypeptid s delecí aminokonce a/nebo karboxykonee, přičemž zbývající aminokyselinová sekvence je identická s odpovídajícími pozicemi přirozeně se vyskytující sekvence, dedukované např. na základě cDNA plné délky. Fragmenty jsou typicky dlouhé alespoň 6, 8 nebo 10 aminokyselin, výhodně alespoň 14 aminokyselin a nejvýhodněji alespoň 20 aminokyselin, obvykle však alespoň 50 aminokyselin a ještě výhodněji alespoň 70 aminokyselin.
Termín „analog v popisu vynálezu znamená polypeptid, který obsahuje segment alespoň 25 aminokyselin, který má podstatnou identitu s úsekem dedukované aminokyselinové sekvence a která má alespoň jednu z následujících vlastností: (1) specificky se váže kČILA—1 za vhodných vazebných podmínek, (2) má schopnost blokovat vazbu CTLA-4 s jeho receptorem, nebo (3) má schopnost inhibovat růst buněk exprimujících CTLA-4 in vitro nebo in vivo. Typicky póly peptidové analogy obsahují konzervativní aminokyselinové substituce (nebo adice nebo dcíece) vzhledem k přirozeně se vyskytující sekvenci. Analogy jsou typicky dlouhé alespoň 20 aminokyselin, výhodně alespoň 50 aminokyselin nebo delší, a často jsou dlouhé stejně jako přirozeně se vyskytující polypeptid plné délky.
Peptidové analogy jsou obecně ve farmaceutickém průmyslu užívány jako nepeptidové léčiva s vlastnostmi analogickými s původním (templátovým) peptidem. Tyto typy nepeptidových sloučenin se nazývají „peptidová mímetíka nebo také „peptidomimetika (viz Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber and Freidinger TINS p.392 (1985); and Evans et al., J. Med. Chem. 30:1229 (1987)). Takové sloučeniny jsou obvykle vyvíjeny pomocí počítačového modelování molekul. Peptidomimetika strukturně podobná terapeuticky užitečným peptidům se mohou užít pro dosažení ekvivalentního terapeutického nebo profylaktického účinku. Obecně jsou peptidomimetika strukturně podobná „paradigmatíckému“ peptidů (tj. polypeptidu, který má požadované biochemické vlastnosti nebo farmakologickou aktivitu), jako jsou např. protilátky, ale má jednu nebo více peptidových vazeb nahrazených vazbou vybranou ze skupiny obsahující: -CH2NH- -CFFS-, -C1L-CH2- -CH=CH- (cis a trans), -COCH2- -CH(OH)CH2a -CFFSO-, a sice metodami, kteréjsou odborníkům známy. Systematická substituce jedné nebo více aminokyselin kanonickou sekvencí D-aminokyselin stejného typu (tj. např. D-lysín místo l-lysinu) se může využít k přípravě stabilnějších peptidů. Kromě toho „nepřirozené“ peptidy obsahující kanonickou sekvenci nebo v podstatě identickou variaci mohou být připraveny metodami, které jsou odborníkům známy (viz např. Rizo a Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)), např. přidáním vnitřních cysteinových zbytků schopných tvořit intramolekulární dtsulfídické můstky, které cyklizují peptid.
Termín ..protilátka“ nebo „protilátkový peptid“ se týkají intaktní protilátky nebo jejího vazebného fragmentu, který kompetuje s intaktní protilátkou o specifickou vazbu. Vazebné fragmenty se připravují technikami rekombinantní DNA nebo enzymatickým nebo chemickým štěpením intaktních protilátek. K vazebným fragmentům patří fragmenty Fab, Fab', F(ab')2, Év ajednořetězcové protilátky. Protilátky jiné než „bispecifické“ nebo „bifunkční“ jsou takové, které mají všechna svá vazebná místa identická. Protilátka podstatně inhibuje adhezi receptoru na „protireceptor“, když přístup protilátky snižuje množství receptoru vázaného na „protireceptor“ alespoň o 20 %, 40 %, 60 % nebo 80 %, obvykle alespoň o více než 85 % (měřeno kompetitivním vazebným testem in vitro).
- 14CZ 302706 B6
Termín „epitop“ označuje jakoukoliv proteinovou determinantu schopnou specificky se vázat na imunoglobulin nebo receptor T-buňky. Epitopové determinanty jsou obvykle tvořeny chemicky aktivním povrchovým seskupením molekul jako jsou aminokyseliny nebo cukerné postranní řetězce a obvykle mají specifické trojrozměrné strukturní vlastnosti a také specifické vlastnosti pokud jde o náboj. Protilátka se specificky váže na antigen, když disociační konstanta je menší nebo rovna 1 μΜ, výhodně menší nebo rovna lOOnM a nejvýhodněji je menší nebo rovna 10 nM.
Termín „činidlo“ nebo „agens“ označuje v přihlášce chemickou sloučeninu, směs chemických sloučenin, biologickou makromolekulu nebo extrakt připravený z biologických materiálů.
Termín „značka“ a/nebo „značený“ v popisu vynálezu znamená inkorporaci detekovatelného markéru, tj. např. vložením radioaktivně značené aminokyseliny nebo navázání biotinylováných skupin k polypeptidu, které pak mohou být detekovány značeným avidinem (tj. streptavidin obsahující fluorescenční markér nebo enzymatickou aktivitu, které mohou být detekovány optickými nebo kolorimetrickými metodami. Mohou být použity různé metody značení polypeptidů a glykoproteinů, které jsou odborníkům známé. K příkladům značek pro polypeptidy patří, aniž by výčet byl omezující, následující: radioisotopy nebo radionuklidy (např. 3H, !4C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111 In, '251, 1311), fluorescenční značky (např. FITC, rhodamin, lanthanidfosfory), enzymatické značky (např. křenová peroxidáza, β-galaktosidáza, luciferáza, alkalická fosfatáza), chemiluminiscenční značky, biotinylové skupiny, predeterminované polypeptidové epitopy rozpoznávané sekundární reportérovou molekulou (např. párové sekvence leucinového zipu, vazebná místa pro sekundární protilátku, domény vázající kov, epitopové značky). V některých provedeních vynálezu jsou značky navázány prostřednictvím oddělovacího ramínka (spaceru) různé délky, aby se redukovaly potenciální ster ické zábrany.
Termíny „farmaceutické činidlo“ nebo „farmaceutický přípravek“ nebo „léčivo“ se v popisu vynálezu užívají k označení chemických sloučenin, které jsou schopné vyvolat požadovaný terapeutický účinek, pokud jsou správně podávány pacientovi. Další chemické termíny jsou v předkládané přihlášce užívány ve smyslu, kterýje obvyklý a odborníkům známý, např. jak je uvedeno ve slovníku The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S„ Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985)).
Termín „antineoplázické činidlo“ označuje činidlo, které má takové funkční vlastnosti, že inhibuje vývoj nebo progresi neoplázií u člověka, zejména maligních (rakovinných) lézí, jako je např. karcinom, sarkom, lymfom nebo leukémie. Častou vlastností antineoplázického činidla je inhibice metastáz.
„V podstatě čistý“ v předkládané přihlášce znamená, že předmětný druh je převládající přítomný druh (tj. na molární úrovni je hojnější než jakýkoliv jiný druh přítomný ve sloučenině), výhodně „v podstatě čistá“ frakce je přípravek, kde předmětný druh je zastoupen alespoň z 50 % (na molámím základě) mezi všemi přítomnými makromolekulami. Obecně v podstatě čistý přípravek obsahuje více než 80 % všech druhů makromolekul přítomných v přípravku, výhodněji více než 85 %, 90 %, 95 % a 99 %. Mej výhodněji je předmětný druh purifikován do nezbytné homogenity (konvenčními metodami nelze detekovat kontaminující druhy molekul), přičemž přípravek je v podstatě tvořen jediným druhem makromolekuly.
Struktura protilátky
Základní strukturní jednotka protilátky je, jak je známo, tvořena tetramerem. Každý tetramer je složen ze dvou identických dvojic póly peptid ických řetězců, přičemž každý pár obsahuje jeden „lehký“ (přibližně 25 kDa) a jeden „těžký“ (přibližně 50 až 70 kDa) řetězec. Amino-koncová část každého řetězce obsahuje variabilní úsek složený přibližně ze 100 až 110 nebo i více aminokyselin, primárně zodpovědný za rozpoznání antigenu. Karboxy-koncová část každého řetězce definuje konstantní úsek primárně zodpovědný za efektorové funkce. Lidské lehké řetězce jsou
- 15 CZ 302706 B6 klasifikovány jako kapa a lambda lehké řetězce. Lidské těžké řetězce jsou klasifikovány jako mí (μ), delta, gama, alfa a epsilon a definují isotyp protilátky označovaný jako IgM, IgD, IgG, IgA, a Igb, v uvedeném pořadí. Uvnitř těžkého a lehkého řetězce jsou variabilní a konstantní úsek spojeny úsekem „J“ velikosti 12 nebo více aminokyselin, přičemž těžký řetězec obsahuje navíc s úsek „D“ velikosti 10 a více aminokyselin (pro obecný přehled viz publikace Fundamentu! lmmunology Ch. 7 (Paul, W.. ed., 2d ed. Raen Press, N.Y. (1989)), která je celá zahrnuta formou odkazu. Variabilní úseky každé dvojice těžký/lehký řetězec vytvářejí vazebné místo protilátky.
Takže intaktní IgG má dvě vazebná místa. Až na b i funkční nebo b i specifické protilátky, tato io vazebná místa jsou shodná.
Všechny řetězce mají stejnou obecnou strukturu relativně konzervativního úseku kostry (PR) spojeného třemi hypervariabilními úseky, které se nazývají úseky determinující komplementaritu, zkráceně CDR. Úseky CDR ze dvou řetězců z každého páru jsou spojeny úsekem kostry, což is umožňuje vazbu na specifický epitop. Ve směru od N-konce k C-konci, těžký a lehký řetězec obsahují domény PRU CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 a FR4. Přiřazení aminokyselin ke každé doméně je v souladu s definicí podle Kabata: Sequences of Proteins of hnmunological Interest (National Institutes of I lealth, Bethesda, Md. (1987 a 1991)), nebo publikacemi Chothia & Lesk 7. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et a!. Nature 342:878-883 (1989).
B i specifická nebo b i funkční protilátka je umělá hybridní protilátka obsahující dva různé páry těžký/lehký řetězec a dvě odlišná vazebná místa. Bispeeifieké protilátky mohou být připraveny řadou metod, např. fúzí hybridomu nebo spojením fragmentů Fb' (viz Songsivilai & Lachmann Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321 (1990), Kostelny et al. 7. Immunol. 148:1547 1553 (1992)).
Kromě toho bispeeifieké protilátky mohou být tvořeny jako tzv. „diabodies“ (Hollíger et al. ..'Diabodies': smáli bivalení and bispecific antibody fragments“ PNAS USA 90:6444-6448 (1993)) nebo „Janusiny“ (Traunecker et al., „Bispecific single chain molecules (Janusins) target cytotoxic lymphocytes on HIV infected cells“ EMBO 7 10:3655-3659 (1991), Traunecker et al. .Janusin: new molecular design for bispecific reagents“ Int J. Cancer Suppl 7:51-52 (1992)). ío Produkce bispecifiekých protilátek je proces relativně náročný na práci ve srovnání s produkcí konvenčních protilátek a výtěžky i stupeň čistoty, kterých se dosahuje, jsou obvykle nižší pro bispecifické protilátky. Bispeeifieké protilátky neexistují ve formě fragmentů majících jedno vazebné místo (jako jsou např. fragmenty Fab, Fab' a Fv).
Lidské protilátky a humanizace protilátek
Při použití lidských protilátek nedochází k některým problémům, které jsou spojeny s protilátkami, které obsahují variabilní a/nebo konstantní úseky z protilátek myší nebo potkana. Přítomnost proteinů pocházejících z myši nebo potkana vede k tomu, že se zvyšuje clearance a protilátka může vyvolat imunitní reakci u pacienta. Aby se zabránilo užívání protilátek pocházejících z myši nebo potkana, bylo navrženo vyvinout humanizované protilátky nebo připravit plně lidské protilátky tím, že se vnesou funkce lidských protilátek do hlodavce, který pak bude produkovat protilátky mající plně lidské sekvence.
Lidské protilátky
Schopnost klonování a rekonstrukce lidských lokusu velikosti megabází v YAC (umělých kvasinkových chromozómech a jejich vnesení do myších zárodečných buněk poskytují velmi účinné metody ke zjištění funkčních komponent velmi velkých nebo jen hrubě zmapovaných fokusů a k vytvoření užitečných modelů lidských nemocí. Kromě toho užití takové technologie k nahrazení myších lokusu jejich lidskými ekvivalenty poskytuje jedinečné informace o expresi a regulaci produktů lidských genů v průběhu vývoje, jejich komunikaci sjinými systémy ajejich účast v indukci a rozvoj nemoci.
- 16CZ 302706 B6
Důležitou praktickou aplikací takové strategie je „humanizace“ myšího humorálního imunitního systému. Vnesení lidských imunoglobulinových (Ig) lokusů do myši, jejíž endogenní Ig geny byly inaktivovány, nabízí možnost zkoumat mechanismus programované exprese a sestavování protilátek a také jejich roli ve vývoji B lymfocytů. Kromě toho tato strategie poskytuje ideální zdroj pro produkci monoklonálních plně lidských protilátek jakožto významný milník na cestě ke splnění příslibu proti látkových terapií lidských nemocí. Očekává se, že plně lidské protilátky minimalizují imunitní a alergické reakce, které jsou vlastní myším protilátkám nebo protilátkám žních derivatizovaných, a tudíž zvýší bezpečnost a účinnost podávání protilátek. Podávání plně lidských protilátek bude zásadně výhodné pro léčení chronických a rekurentních nemocí, jako jsou zánětlivá a autoimunitní onemocnění a rakovina, kdy je třeba opakované podávání protilátek.
Jeden z přístupů k dosažení tohoto cíle je metodami genového inženýrství upravit myší kmeny deficientní v tvorbě protilátek pomocí velkých fragmentů lidských Ig lokusů s očekáváním, že takto modifikované myši budou tvořit velký repertoár lidských protilátek aniž by tvořily myší protilátky. Velké fragmenty lidské Ig zachovají velkou genovou diverzítu a také správnou regulaci tvorby a exprese protilátek. Vzhledem k využití mechanismů myšího organismu pro diverzifikaci a selekci protilátek a nepřítomnosti imunologické tolerance k lidským proteinům, reprodukovaný repertoár lidských protilátek v těchto myších kmenech by mělo vest k vysokoafinitním protilátkám proti jakémukoliv požadovanému antigenů, včetně lidských antigenů. Užitím technologie hybridomu mohou být snadno připravovány a selektovány antígenně specifické monoklonální protilátky.
Tato obecná strategie byla poprvé demonstrována ve spojení s vytvořením prvních kmenů myší XenoMouse™, jak bylo publikováno v r. 1994 (viz Green et al. Nátuře Genetics 7:13-21 (1994)). Kmeny XenoMouse™ byly geneticky manipulovány pomocí umělých kvasinkových chromozómů (YAC) obsahujících fragmenty velikosti 245 a 190 kb se zárodečnou konfigurací lokusů pro lidský těžký řetězec a lidský lehký řetězec kapa, obsahující jádro sekvencí konstantního a variabilního úseku. YAC obsahující lidské Ig se ukázaly jako kompatibilní s myším systémem jak pro nové uspořádání tak expresi protilátek a byly vhodné pro substituci inaktivovaných myších Ig genů. To bylo prokázáno jejich schopností indukovat vývoj B-lymfocytů, vytvářet dospělý repertoár plně lidských protilátek a vytvářet dospělý repertoár plně lidských protilátek a vytvářet dospělý repertoár plně lidských protilátek a vytvářet antigenně specifické lidské monoklonální protilátky. Tyto výsledky také vedly k předpokladu, že vnesení velkých částí lidských Ig lokusů obsahujících velký počet V genů, další regulační elementy a lidské konstantní úseky, by mohlo v podstatě opakovat plný repertoár, kterýje charakteristický pro lidskou imunitní humorální reakci na infekci a imunizaci. Práce Greena et al. byla nedávno rozšířena o vnesení více než 80 % repertoáru lidských protilátek prostřednictvím fragmentů YAC velikosti megabází obsahujících zárodečnou konfiguraci lokusů pro lidský těžký řetězec a lidský lehký řetězec kapa do myší XenoMouse™ (viz např. Mendez et al. Nátuře Genetics 15:146—156 (1997), Green a Jakobovits J. Exp. Med. 188:483—495 (1998), patentová přihláška U.S. Seriál No. 08/759,620, podaná 3. 12. 1996, vložená formou odkazu).
Tento experimentální přístup byl dále diskutován a popsán v patentové přihlášce U.S. 07/466,008, podané 12.1. 1990, 07/610,515, podané 8.11. 1990, 07/919,297, podané
24.7. 1992, 07/922,649, podané 30. 7. 1992, 08/031,801, podané 15.3.1993,08/112,848, podané 27.8.1993, 08/234,145, podané 28. 4.1995, 08/376,279, podané 20.1.1995, 08/430,938, podané 27. 4. 1995, 081464,584, podané 5. 6. 1995, 08/464,582, podané 5. 6. 1995, 08/463,191, podané 5.6. 1995, 08/462,837, podané 5.6. 1995, 08/486.853, podané 5.6. 1995, 08/486,857, podané 5. 6. 1995, 08/486,859, podané 5. 6. 1996, 08/462,513, podané 5. 6.1995, 08/1724,752, podané 2. 10. 1996, a 08/759,620, podané 3. 12. 1996. Viz také publikace Mendez et al. Nátuře Genetics 15:146-156 (1997) a Green a Jakobovits J. Exp. Med. 188:483—495 (1998). Viz dále také Evropský patent EP 0 463 151 B 1, udělení zveřejněno 12. 6. 1996, mezinárodní patentová přihláška W094/02602, publikovaná 3. 2. 1994, mezinárodní patentová přihláška WO 96/34096, publikovaná 31. 10.1996, a mezinárodní patentová přihláška WO 98/24893, publikovaná
- 17CS. 302706 B6
11.6. 1998. Vynálezy popsané ve výše citovaných patentech, přihláškách a publikacích jsou v úplnosti formou odkazu zahrnuty v předkládané přihlášce.
Alternativní přístup použitý dalšími, např. firmou Gen Pharm International, lne., využil tzv.
„minilokusů“. Při této metodě je exogenní lg lokus napodoben vložením kousků (jednotlivých genů) z lg lokusů. Takže se vytvoří konstrukt, obsahující jeden nebo více VN genů, jeden nebo více Dfj genů, jeden nebo více Ju genů, konstantní úsek μ a druhý konstantní úsek (výhodně konstantní úsek gama), vhodný pro inzerci do zvířete. lakové metody byly popsány v patentu U. S. 5,545,807, Surani et al., a U.S. 5,545,806, 5,625,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016, ío 5,770,429, 5,789,650, a 5,814,318, všechny Lonberg a Kay, a U.S. 5,591,669, Krimpenfort a Berns, U.S. 5,612,205. 5,721.367 a 5,789,215, Kerns et al., a U.S. ,643,763 Choi a Duím, a U.S. patentové přihlášky Gen Pharm International 07/574,748, podaná 29,8. 1990, 07/575,962, podaná
31.8. 1990, 07/810,279, podaná 17.12. 1991, 07/853,408, 18.3.1992, 07/904,068, podaná
23.6. 1992,07/990,860, podaná 16. 12. 1992. 08/053,13 1, podaná 26. 4. 1993,08/096,762, poda15 ná 22. 6. 1993, 08/155,301, podaná 18. ll. 1993, 08/161,739, podaná 3. 12. 1992, 08/165,699, podaná 10. 12. 1993, 08/209,741, podaná 9. 3. 1994, jejichž úplné popisy jsou zahrnuty formou odkazu. Viz také Evropský patent 0 546 073 Bl, mezinárodní patentové přihlášky WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227. WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852, a WO 98/24884, jejichž úplné popisy jsou také zahrnu20 ty formou odkazu. Viz také publikace Taylor et al., 1992, Chen et al., 1993, Tuaillon et al., 1993. Choi et al.. 1993, Lonberg et al., (1994), Taylor et al., (1994), and Tuaillon et al., (1995) a EishwhiId et al., (1996), kteréjsou také plně zahrnuty formou odkazu.
Původci Surani et al., ve výše citovaném vynálezu přihlašovatele Med i ca I Research Counsel („MRC“), připravily transgenní myši mající lg lokus metodou minilokusů. Původci vynálezů firmy Gen Pharm International Lonberg a Kay navrhli inaktivaci endogenního myšího lg lokusu spojenou s podstatnou duplikací práce Surani et al.
Výhodou metody minilokusů je především rychlost, sjakou mohou být konstrukty obsahující
5o úseky lg lokusů vytvářeny a vkládány do zvířat. Avšak současně nevýhodou metody minilokusů je to, že vnesením malého počtu V, D, a J genů se vnese nedostatečná diverzita. A skutečně publikované práce potvrzují tyto obavy. Vývoj B-lymfocytů a tvorba protilátek u zvířat připravených metodou minilokusů jsou nedostatečné. Tudíž výzkum, který byl základem pro předkládaný vynález, byl zaměřen na vnesení velkých úseků lg lokusů, aby bylo dosaženo velké diverzity a aby byl rekonstituován celý imunitní repertoár.
Lidská anti-myší proti látková reakce (HAMA) vedla průmysl k přípravě chimérických nebo jiným způsobem humanizovaných protilátek. Jelikož chimérické protilátky mají lidský konstantní úsek a myší variabilní úsek, očekává se, že bude pozorována určitá lidská antichimérická protilát4o ková reakce (HACA), zejména při chronickém nebo mnohodávkovém použití protilátky.
Je tudíž potřebné poskytnout plně lidské protilátky proti CTLA -L aby bylo možné odstranit obavy a také ovlivnit HAMA nebo HACA reakce.
Humanizace protilátek a metody displeje
Jak bylo již diskutováno výše ve spojitosti s tvorbou lidských protilátek, je výhodné připravovat protilátky se sníženou imunogenicitou. Toho lze do jisté míry dosáhnout metodami humanizace a displeje užitím vhodných knihoven. Je známo, že myší protilátky nebo protilátky z jiných druhů so mohou být humanizovány nebo pri mat izovány metodami, kteréjsou v oboru dobře známy, viz např. Winter a Harris Immunol Today 14:43-46 (1993) a Wright et al. Crit. Reviews in Immunol.
12125-168 (1992). Požadované protilátky lze připravit metodami rekombinantní DNA substitucí domén CHl, CH2, CH3, kloubové domény a/nebo domény kostry odpovídajícími lidskými doménami (viz WO 92/02190 a IJ.S. patenty 5,530,101, 5,585,089, 5,693,761, 5,693,792,
5.714.350, a 5,777,085). Také použití lg cDNA pro konstrukci chimérických lg genů je odborní- 18CZ 302706 B6 kům známo (viz např. Liu et al. P.N.A.S. 84:3439 (1987) a J. Immunol. 139:3521 (1987)). mRNA se izoluje z hybridomů nebo jiných buněk produkujících protilátku a užije se pro přípravu cDNA. Požadovaná cDNA se pak ampliflkuje např. polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) užitím specifických primerů (viz U.S. patenty 4,683,195 a 4,683,202). Alternativně se připraví knihovna a provede se její sereening, čímž se izoluje požadovaná sekvence. DNA sekvence kódující variabilní úsek protilátky se pak fúzuje se sekvencí lidskou konstantní sekvencí. Sekvence lidských konstantních úseků lze najít v publikaci Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, N. 1. H. publication no. 91-3242. Lidské geny C úseků jsou okamžitě k dispozici ze známých klonů. Výběr isotypů se řídí požadovanými efektorovými funkcemi, jako je např. fixace komplementu, nebo aktivita v buněčné cytotoxic i tě závislé na protilátkách. Výhodné isotypy jsou IgGl, lgG2, IgG3 a ígG4. Zvláště výhodné isotypy protilátek podle předkládaného vynálezu jsou IgG2 a IgG4. Mohou být užity oba typy konstantních úseků lidského lehkého řetězce kapa i lambda. Chimérické humanizované protilátky se pak exprimují obvyklým způsobem.
Protilátkové fragmenty jako např. Fv, F(ab')2 a Fab se připraví štěpením intaktních proteinů, např. proteázami nebo chemicky. Alternativně se připraví zkrácené geny. Tak např. chimérický gen kódující část fragmentu F(ab')2 by zahrnoval sekvence DNA kódující doménu CHI a kloubový úsek H řetězce, pak by následoval translační stop-kodon, aby vznikla zkrácená molekula.
V jedné metodě se užijí kanonické sekvence kódující J úseky těžkého a lehkého řetězce pro návrh sekvencí oligonukleotidových primerů, které se užijí pro vnesení vhodných restrikčních míst do J úseků pro následné spojení segmentů V úseku se segmenty lidského C úseku. cDNA C úseku může být modifikována místně cílenou mutagenezí, aby se umístila restrikční místa do analogických pozic v lidské sekvenci.
K expresním vektorům patří plazmidy. retrovirv. kosmidv, YAC. episomv odvozené z EBV, atd. Vhodným vektorem je takový, který kóduje funkčně kompletní CH nebo CL sekvenci lidského imunoglobulinu, s vhodně vloženými restrikčními místy, takže jakákoliv sekvence VH nebo VL může být snadno vložena a exprimována. V takových vektorech dochází k sestřihu zpravidla mezi donorovým sestříhovým místem ve vloženém J úseku a akceptorovým sestřihovým místem, které předchází lidský C úsek, a také v se stři ho vých úsecích, které se vyskytují v lidských CH exonech. Polyadenylace a terminace transkripce se uskutečňuje v přirozených chromozómových místech směrem „downstream“ od kódujícího úseku. Výsledná chimérická protilátka se může spojit s jakýmkoliv silným promotorem, včetně promotorů jako je retrovirový LTR, např. časný promotor SV—40 (Okayama et al. Mol. Cell. Bio. 3:280 (1983)), LTR viru Rousova sarkomu (Gorman et al. P.N.A.S. 79:6777 (1982)), a LTR Moloneyho myšího leukemického viru (Grosschedl et al. Cell 41:885 (1985)), nativní promotory Ig apod.
Kromě toho lidské protilátky nebo protilátky zjiných biologických druhů mohou být připraveny metodami typu displeje, např. displeje na fágu, retroviru, ribozomu apod., což jsou metody odborníkovi známé, a výsledné molekuly se podrobí dodatečné maturaci (zrání), jako je např. afinitní maturace, které jsou v oboru známy (viz např. Wright a Harris, viz výše, Hanes a Plucthau PNAS USA 94:4937—4942 (1997) (ribosomální display), Parmley a Smith Gene 73:305-318 (1988) (fágový displej), Scott TIBS 17:241-245 (1992), Cwirla et al. PNAS USA 87:6387-6382 (1990), Russel et al. Nucl. Acids Research 21:1081-1085 (1993), Hoganboom et al. Immunol. Reviews 130:43-68 (1992), Chiswell a McCafferty TIBTECH 10:80-84 (1992), a U.S. Patent 5,733,743.
Pokud se uvedené metody displeje užijí k produkci protilátek, které nejsou lidské, takové protilátky se pak mohou humanizovat, jak bylo již výše popsáno.
Užitím těchto postupů lze připravit protilátky k buňkám produkujícím CTL A—4, samotnému
CTLA^L formám CTLA-4 epitopů nebo peptidů a jejich expresním knihovnám (viz např.
U.S. Patent 5,703,057), které se pak mohou podrobit sereeningu na aktivity výše popsané.
- 19 C7 302706 B6
Další kritéria pro protilátková léčiva
Obecně řečeno není žádoucí usmrtit buňky exprimující CTLA 4. Spíše je potřebné jednoduše inhibovat vazbu CTLA-4 s ligandy, aby se zmírnila inaktivace T-lymfocytů. Jeden z hlavních mechanismů, kterým protilátky usmrcují buňky, je fixace komplementu a účast na CDC. Konstantní úsek protilátky hraje důležitou roli ve schopnosti protilátky fixovat komplement a podílet se na CDC. Takže obecně se vybere isotyp protilátky, který budJo umožňuje fixaci komplementu nebo ne. V předkládaném vynálezu není výhodné, jak již bylo zmíněno výše, užít takové protilátky, které vedou k usmrcení buněk. Existují četné isotypy protilátek, které jsou schopné fixovat komplement a CDC, patří k nim např. následující protilátky: myší IgM, myší Ig(i2a, myší lgG2b, myší IgG3, lidská IgM, lidská IgGl a lidská IgG3. nepatří sem však např. isotypy lidské lgG2 a lgG4.
Protilátky, které se připraví, nemusejí mít na počátku zvláštní požadovaný isotyp, ale mohou to být protilátky v podstatě jakéhokoliv isotypu a pak je isotyp ..přepnut užitím metod, které jsou odborníkovi známy. K takovým metodám patří např. metody přímé rekombinace (viz např. U.S. Patent 4,816,397), metody buněčné fůze (viz např. IJ.S. patentová přihláška 08/730,639, podání 11. 10. 1996).
Při metodě buněčných fúzí se připraví myelomová buněčná linie nebo jiná linie, která obsahuje těžký řetězec požadovaného isotypu a další myelomová buněčná linie nebo jiná linie, která obsahuje lehký řetězec. Tyto buňky jsou pak fúzovány a výsledná buněčná linie exprimující intaktní protilátku je izolována.
Jako příklad uvádíme, že většina CTLA-4 protilátek diskutovaných v předložené přihlášce jsou lidské anti-CTLA-4 lgG2 protilátky. Jelikož tyto protilátky mají požadovanou vazbu k molekule CTLA-4, kterákoliv z nich může být snadno isotypově „přepnuta“ a vytvořit např. lidský isotyp lgG4, přičemž si uchová stejný variabilní úsek (který definuje proti látkovou specificitu a také z části afinitu).
Tudíž se připraví kandidátní protilátky, které splňují „strukturní“ požadavky jak byly diskutovány výše, a které jsou vybaveny alespoň některými dalšími „funkčními“ vlastnostmi nutnými pro přepnutí isotypu.
Návrhy a tvorba dalších léčiv
Na základě aktivity protilátek k (711.A—4 popsaných a charakterizovaných zde lze v souladu s vynálezem snadno navrhovat další léčiva, včetně dalších protilátek, antagonistů nebo chemických sloučenin jiných než jsou protilátky. K takovým formám léčiv patří např. protilátky mající podobnou vazebnou aktivitu nebo funkcí, pokročilá protilátková léčiva, jako jsou např. bispecifické protilátky, imunotoxiny a radioaktivně značená léčiva, tvorba peptidových léčiv, genové terapie, „intrabodies“, antisense léčiva a malé molekuly. Kromě toho, jak již bylo diskutováno výše, efektorové funkce protilátek podle vynálezu mohou být změněny „přepnutím“ isotypu na IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgD, IgA, IgA nebo IgM pro různá terapeutická využití.
Ve spojení s přípravou pokročilých proti látkových léčiv, kde je požadovanou vlastností fixace komplementu, je možné závislost usmrcení buněk na komplementu obejít, tím že se užijí bispecifické protilátky, imunotoxiny nebo radioaktivní značky.
Mohou být připraveny takové bispeciflcké protilátky, které obsahují (I) dvě protilátky, kdy jedna má specificitu k CTLA-4 a druhá protilátka má specificitu k druhé molekule, které jsou společně konjugovány, (II) jednu protilátku, která má jeden řetězec specifický pro CTLA-4 a druhý řetězec specifický pro druhou molekulu, nebo (III) jednořetězcovou protilátku, která má specificitu k CTLA-4 a k druhé molekule. Takové bispeciflcké protilátky mohou být připraveny metodami, které jsou odborníkům známy, pro (I) a (II) viz např. Fanger et al. immunol Methods 4:72-81
-20CZ 302706 B6 (1994) a Wright a Harris. cit. výše, pro (III) viz např. Traunecker et al. Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52(1992).
Kromě toho mohou být připraveny i tzv. „kappabodies“ (111 et al. „Design arid construction of a hybrid immunoglobulin domain with properties of both heavy and light chain variable regions Protein Eng 10:949-57 (1997)), „minibodies“ (Martin et al. „The affinity-selection of a minobody polypeptide inhibitor of human interleukin-6“ EMBO J 13:5303-9 (1994)), „diabodies“ (Holliger et al. „'Diabodies': smáli bivalent and bispecific antibody fragments“ PNAS USA 90:6444-6448 (1993)), nebo „Janusiny“ (Traunecker et al. „Bispecific single chain molecules (Janusins) target cytotoxic lymphocytes on HIV infected cells“ EMBO J 10:3655-3659 (1991) a Traunecker et al. „Janusin: new molecular design tor bispecific reagents“ Int J. Cancer Suppl 7:51-52 (1992)).
Pokud jde o imunotoxiny, protilátky mohou být modifikovány tak, aby působily jako imunotoxiny, a sice metodami, které jsou odborníkům známy. Viz např. Vitetta Immunol Today 14:252 (1993) a také U.S. Patent 5,194,594.
Pokud jde o přípravu radioaktivně značených protilátek, takto modifikované protilátky lze snadno připravit metodami, které jsou odborníkům známy. Viz např. Junghaus et al., Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686 (2d edition, Chafner and Longo, eds., Lippincot Raven (1996)), U.S. Patenty 4,681,581, 4,735,210, 5,101,827, 5,102,990 (RE 35,500), 5,648,471 a 5,697,902. Každý z imunotoxinů nebo radioaktivně značených molekul pravděpodobně povede k usmrcení buněk exprimujících CTLA-4, zejména těch buněk, kde protilátky podle vynálezu jsou účinné.
Pokud jde o přípravu peptidových léčiv, užitím strukturních informací týkajících se CTLA—4 a protilátek k CTLA-4, např. protilátek podle vynálezu (jak bude ještě popsáno dále ve spojení s malými molekulami), nebo screeningem peptidových knihoven, je možné připravit terapeutické peptidy namířené proti CTLA-4. Návrh a screening peptidových léčiv byly např. popsány v publikacích Houghten et al. Biotechniques 13:412—421 (1992), Houghten PNAS USA 82:51315135 (1985), Pinalla et al. Biotechniques 13:901-905 (1992), Blake a Litzi-Davis BioConjugate Chem. 3:510-513 (1992). Imunotoxiny a radioaktivně značené protilátky mohou být připraveny podobným způsobem, jako peptidové části, jak bylo diskutováno výše pro protilátky.
Důležité informace týkající se vazby protilátky a antigenů mohou být získány experimenty s fágovou expozicí (fágový displej). Takové experimenty se obecně provádějí „rýžováním“ fágové knihovny exprimující náhodné peptidy na vazbu s protilátkou podle vynálezu, a pak určením, zda peptid, který se váže, může být izolován. Pokud je pokus úspěšný, z peptidu, který se váže, je možné získat určité informace o epitopů.
Obecně fágové knihovny exprimující náhodné peptidy mohou být koupeny od firmy New England Biolabs (knihovny 7-merů a 12-merů, souprava Ph.D-7 Peptide 7-mer Library Kit a Ph.D.-12 Peptid představují valnou většinu, pokud ne všechny, z 2O7 = 1,28 x 109 sekvencí 7merů. Knihovna 12-merů představuje diverzitu přibližně 1,9 x 109 nezávislých klonů, které představují jen velmi malou část možných 2012 = 4.1 x 1015 sekvencí 12-merů. Každá z knihoven 7-merů a 12-merů byla „rýžována“ nebo „screenována“ podle návodu výrobce, kde destičky byly potaženy protilátkou k zachycení vhodné protilátky (např. kozí anti-1 idský IgG Fc pro IgG protilátku) a pak opláchnuty. Navázaný fág byl eluován 0,2 M glycin-HCl, pH 2,2. Po třech opakováních cyklů selekce/amplifikace při konstantní stringenci (0,5% Tween) bylo možné pomocí sekvencování DNA charakterizovat klony z knihovny, které reagovaly s jednou nebo více protilátkami. Reaktivita peptidů se může určit pomocí ELISA. Pro další diskusi o epitopové analýze peptidů viz. např. také Scott, J. K. a Smith, G. P. Science 249:386-390 (1990); Cwirla et al. PNAS USA 87:63786382 (1990); Felici et al. J. Mol. Biol. 222:301-310 (1991), and Kuwabara et al. Nátuře Bioteehnology 15:74-78 (1997).
-21 CZ 302706 B6
Návrh a příprava genových léčiv a antisense léčiv konvenčními metodami jsou také usnadněny prostřednictvím předkládaného vynálezu. Tyto formy léčiv se mohou užít pro modulaci funkce CTLA-4. V této souvislosti protilátky podle vynálezu usnadňují návrh a použití funkčních testů. Návrh a příprava antisense léčiv byly podrobně diskutovány např. v mezinárodní patentové při5 hlášce WO 94/29444. Návrhy a strategie pro genovou terapii jsou odborníkům známy. Avšak ve specifickém případě použití metod užívajících Jntrabodies může být zvláště výhodné. Viz např. Chen et al. Human Gene Therapy 5:595-601 (1994) a Marasco Gene Therapy 4:11-15 (1997). Obecné návrhy a úvahy týkající se léčiv vhodných pro genové terapie lze najít např. také v mezinárodní patentové přihlášce WO 97/38137. Genetické materiály kódující protilátky podle vynáleni zu (jako např. 4.1.1,4.8.1 nebo 6.1.1, a další) se vloží do vhodného expresního systému (ve formě viru, atenuovaného viru, nevirové formě, „nahé formě nebo jiné) a podají sc příjemci, a pak se protilátky tvoří in vivo v příjemci/hostiteli.
Léčiva zvaná malé molekuly lze také připravovat užitím předkládaného vynálezu. Lze navrhnout i? taková léčiva, která budou modulovat aktivitu CTLA-4. Znalosti získané ze struktury CTLA—4 a interakce s jinými molekulami podle vynálezu, např. CD28, B7, B7-I, B7-2, a dalšími, se mohou využít k racionálnímu návrhu dalších forem léčiv. V tomto ohledu mohou být využity metody racionálních návrhů léčiv jako je rentgenová krystalografie, počítačové molekulové modelování (CAMM), kvantitativní nebo kvalitativní analýza vztahu struktura-aktivita (QSAR)
2o a podobné metody, k dalšímu upřesnění cílů při objevování nových léčiv. Metody racionálního navrhování dovolují před i kovat proteinové nebo syntetické struktury, které reagují s molekulou nebo její specifickou formou, a které mohou být užity k modifikaci nebo modulaci aktivity Č I LA 4. Takové struktury se mohou syntetizovat chemicky nebo exprimovat v biologických systémech. Tyto metody byly v přehledu uvedeny např. v Capsey et al. Genetically Engineered
2? Human Therapeutic Drugs (Stockton Press, NY (1988)). A skutečně racionální návrh molekul (peptidů. peptidomimetic, malých molekul apod.) založený na známém, nebo alespoň nastíněném. vztahu mezi strukturou a aktivitou s jinými molekulami (jako jsou např. protilátky podle vynálezu), se nyní obecně stává rutinním postupem. Viz např. Fry et al. „Specific, irreversible inactivation oťthe epidermal growth factor receptor and erbB2, by a new class of tyrosine kinase io inhibitor“ Proč Nati Acad Sci USA 95:12022-7 (1998); Hoffman et al. „A model of Cdc25 phosphatase catalytic domain and Cdk-internet i on surface based on the presence of a rhodanese homology domain“ J Mol Biol 282:195-208 (1998); Ginalski et al. „Modeiling of active forms of protein kinases: p38-a čase study“ Acta Biochim Pol 44:557-64 (1997); Jouko et al. „Identification of esk tyrosine phosphorylation sites and a tyrosine residue important for kinase domain structure“ Biochem J 322:927-35 (1997); Singh et al. „Structure-based design of a potent, selective, and irreversible inhibitor of the catalytic domain of the erbB receptor subfamily of protein tyrosine kinases“ J Med Chem 40:1130-5 (1997); Mandel et al. „ABGEN: a knowledgebased automated approach for antibody structure modeling“ Nat Bioteehnol 14:328-8 (1996); Monfardini et al. „Rational desig analysis, and potential utility of GM-CSF antagonists“ Proč
Assoc Am Physicians 108:420-31 (1996); Furet et al. „Modeiling study of protein kinase inhibitors: binding mode of staurosporine and origin of the selectivity of CGP 52411“ J Comput Aided Mol Des 9:465-72 (1995).
Jako další možnost se mohou připravit a syntetizovat kombinační knihovny a použít ve sereenin45 gových programech, jakojsou např. vysokovýkonné sereeningové programy.
Formulace léčiv ajejich podávání
Léčiva obsahující sloučeniny podle vynálezu se podávají formulována s vhodnými nosiči, exci50 pienty a dalšími činidly, která jsou součástí farmaceutického přípravku, aby se zlepšil přenos, příjem, tolerance apod. Existují mnohé vhodné lékové formy, jak je známo odborníkům v oboru farmaceutické chemie, a jak bylo popsáno např. v publikaci Remingtonů Pharmaceutical Sciences (I5lh ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), zejména kapitola 87: Blaug a Seymour. Takové přípravky obsahují např. prášky, pasty, masti, želé, vosky, oleje, tuky, vesi55 kuly (kationtové nebo aniontové) obsahující tuky (jako je např. Lipofectin ), DNA konjugáty,
-22 CZ 302706 B6 bezvodé absorpční pasty, emulze typu olej ve vodě nebo typu vody v oleji, emulzní karbovosky (polyethylenglykoly různých molekulových hmotností), polotuhé gely a polotuhé směsi obsahující karbovosky. Kterákoliv výše uvedená směs může být vhodná pro použití vynálezu za předpokladu, že účinná složka přípravku není i n aktivován a těmito pomocnými látkami pro formulaci přípravku a že přípravek je fyziologicky kompatibilní a tolerovatelný pri daném způsobu podávání. Pro další informace týkající se excipientů a nosičů, které jsou odborníkům ve farmaceutické chemii známy, viz také Powell et al. „Compendium of excipients for parenteral formulations“ PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998).
Příprava protilátek
Protilátky podle předkládaného vynálezu se výhodně připravují prostřednictvím transgenních myší, které obsahují vloženou podstatnou část lidského genomu produkujícího protilátky a naopak jsou deficientní v produkci endogenních myších protilátek. Takové myši jsou pak schopné produkovat molekuly lidského imunoglobulinu a protilátek ajsou deficientní v produkci myších imunoglobulinových molekul a protilátek. Postupy vhodné k dosažení tohoto cíle byly popsány v patentech, patentových přihláškách a dalších publikacích, které jsou uvedeny ve stavu techniky. Výhodné provedení transgenních myší a produkce protilátek je popsáno v U.S. patentové přihlášce 08/759,620, podané 3. 12. 1996, a dále také viz Mendez et al. Nátuře Genetics 15:146-156 (1997), což je plně zahrnuto formou odkazu.
Použitím těchto metod byly připraveny plně lidské monoklonální protilátky kcelé řadě různých antigenů. Podstata postupu spočívala v tom, že myši linií Xe no Mou se™ byly imunizovány požadovaným antigenem, z myši, která exprimovala požadované protilátky byly odebrány lymfatické buňky (jako např. B-lymfocyty), fúzovány s buňkami myeloidní linie, čímž se získaly imortalizované hybridomové linie a tyto hybridomové linie se pak podrobily screeningu a selekci, kdy byly identifikovány hybridomové buněčné linie produkující protilátku specifickou k požadovanému antigenu. V předkládaném vynálezu byly tyto metody použity pro přípravu protilátek specifických k CTLA^f. Popisuje se zde proto příprava mnoha hybridomových linií, které produkují protilátky specifické proti CTLA-M. Dále vynález poskytuje charakteristiky těchto protilátek, včetně analýz nukleotidových a aminokyselinových sekvencí těžkého a lehkého řetězce těchto protilátek.
Protilátky pocházející zvýše uvedených hybridomových linií byly označeny 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6,1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1. Každá z těchto protilátek představuje plně lidský buďto lgG2 nebo IgG4 řetězec s lidským lehkým řetězcem kapa. Obecně řečeno protilátky podle vynálezu mají velmi vysokou afinitu, typicky mají hodnoty Kd od 10“9 do 10_llM, když jsou měřeny v pevné nebo kapalné fázi.
Protilátky podle vynálezu mohou být exprimovány i v jiných buňkách či buněčných liniích než jen hybridomových.
Sekvence kódující cDNA nebo genomické klony určitých protilátek mohou být užity pro transformaci buněk vhodného hostitele, kterým je savec nebo organismus jiný než savec. K. transformaci lze užít jakoukoliv známou metodu pro vnesení polynukleotidu do hostitelské buňky, včetně metod jako je např. sbalení („pakážování“) polynukleotidu do viru (nebo do virového vektoru a transdukce hostitelské buňky virem (vektorem), nebo transfekcí, jak byly např. popsány v U.S. Patentech 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461 a 4,959,455 (které jsou zahrnuty formou odkazu). Použitá metoda transformace závisí na hostiteli, který má být transformován. Metody pro vnášení heterologních polynukleotidů do savčích buněk jsou odborníkům známy a patří k nim, aniž by však tento výčet byl vyčerpávající, dextranem zprostředkovaná transfekce, precipitace s kalciumfosfátem, transfekce zprostředkovaná polybrenem, fúze protoplastů, eiektroporace, bombardování mikročásticemi, enkapsulace polynukleotidu do fiposomů, peptidové konjugáty, dendrimery a přímé mi kro injekce DNA do jádra.
-23 CZ 302706 B6
Linie savčích buněk vhodných jako hostitelské buňky pro expresi jsou odborníkům dobře známy a patří k nim mnoho imortilizovaných buněčných linií dostupných v Americké sbírce kultur a mikroorganismů (ATCC), jako jsou např. buňky vajecníků čínského křečka (CHO), buňky NSO(), buňky HeLa, buňky BHK (křeččí fetální ledviny), COS buňky (opičích ledvin), buňky lidského bepatocelulárního karcinomu (např. Hep G2) a celá řada dalších buněčných linií. K vhodným buňkám, které nejsou ze savců, a které mohou být užity pro expresi rekombinantních protilátek patří, avšak výčet tím není omezen, např. bakteriální buňky, kvasinky, houby, hmyz a rostliny. Místně cílená mutageneze proti látkové domény CH2, která eliminuje glykosylaci, je výhodná ktomu, aby se zabránilo změnám v imunogenicitě, farmakokinetice a/nebo efektorových funkcích, které jsou výsledek glykosylace lišící se od lidského glykosylačního profilu. Metody exprese se vybírají na základě toho, že se stanoví, který systém produkuje nejvyšší expresní hladiny a tvoří protilátky s konstitutivními vazebnými vlastnostmi pro CTI.A 4.
Dále exprese protilátek podle vynálezu (nebo jiných sloučenin) v produkčních liniích může být zesílena řadou známých metod. Tak např. expresní systém glutaminsyntetázy a DHFR jsou známé systémy pro zvýšení exprese za jistých podmínek. Buněčné klony s vysokou expresí mohou být identifikovány konvenčními metodami, jako je např. klonování limitního ředění a nebo technika mikrokapky. Systém GS byl podrobně popsán a diskutován ve spojení s Evropskými patenty 0 216 846, 0 256 055 a 0 323 997 a evropskou patentovou přihláškou 5 89303964.4.
Protilátky podle vynálezu mohou být připraveny také transgenním způsobem, a sice vytvořením transgenniho zvířete nebo transgenní rostliny, které je transgenní na požadované sekvence těžkého a lehkého řetězce imunoglobulinu, a produkcí protilátek v izolovatelné formě. Pokud jde o transgenní savce, protilátky mohou být produkovány do mléka, ze kterého jsou pak izolovány, a sice u kozy, krávy a jiných savců (viz patenty U.S. 5,827,690, 5,756,687, 5,750,172, a 5,741,957.
Protilátky podle předkládaného vynálezu byly analyzovány strukturně i funkčně. Ve spojení se strukturami protilátek byly aminokyselinové sekvence těžkého a kapa lehkého řetězce predikovány na základě cDNA sekvencí získaných pomocí RT-PCR hybridomů. Viz příklady 3 a 4 a obrázky 1 až 8. Sekvencování A-konců protilátek bylo také provedeno pro potvrzení výsledků diskutovaných v příkladech 3 a 4. Viz také příklad 5 a obr. 9. Kinetické analýzy protilátek byly provedeny ke stanovení jejich afinit, viz příklad 2. Protilátky podle vynálezu (zejména 4.1.1, 4.8.1 a 6.1.1) mají vysoké afinity (4.1.1: 1,63 χ I010 1/M, 4.8.1: 3,54 χ IO10 1/M; a 6.1.1: 7,2 x ΙΟ9 1/M). Dále byly protilátky analyzovány izoelektrickým zaostřováním (IEF), redukující gelovou elektroforézou (SDS-PAGE), velikostní vylučovací chromatografií, kapalinovou chromatografií a hmotovou spektroskopií a vyhodnocením tvorby protilátek hybridomy. Viz příklad 6 a obr. 10.
Pokud jde o funkční analýzu protilátek podle vynálezu, tyto protilátky se ukázaly být silnými inhibitory Č I LA—4 a jeho vazby na ligandy z rodiny molekul B7. Tak např. bylo ukázáno, že protilátky podle vynálezu blokovaly vazbu CTLA-4 jak na B7-1 tak i B7-2. Viz příklad 7. Skutečně, mnoho protilátek podle vynálezu má hodnotu IC5fl pro inhibicí vazby CTLA-4 na B71 nebo B7-2 řádu nanomolů a nižší. Kromě toho protilátky podle vynálezu mají vynikající selektivitu pro CTLA—4 ve srovnání např. s CD28, CD44, B7-2 nebo hlgGl. Viz příklad 8. Selektivita je poměr, který odráží stupeň preference vazby molekuly s prvním činidlem ve srovnání s druhým. a případně dalším, činidlem. V předkládaném popisu se termín selektivita týká stupně preference vazby protilátky podle vynálezu k CTLA—4 ve srovnání s vazbou protilátky sjinými molekulami, jako např. CD28, CD44, B7-2 nebo hlgGl. Hodnoty selektivity protilátek podle vynálezu vyšší než 500:1 jsou běžné. Bylo také ukázáno, že protilátky podle vynálezu indukují nebo zvyšují expresi některých cytokinů (jako např. IL-2 a IFN-γ) v kultuře T lymfocytů a v modelu T lymfoblastů. Viz příklady 9 a 10 a také obrázky 12 až 17. Lze také očekávat, že protilátky podle vynálezu budou inhibovat růst nádorů ve vhodných in vivo modelech nádorů. Návrh takových modelů je popsán a diskutován v příkladech 11 a 12.
-24 CZ 302706 B6
Výsledky popsané v předkládané přihlášce ukázaly, že protilátky podle vynálezu mají určité výhodné vlastnosti, pro které jsou vhodnější a účinnější než v současnosti užívané protilátky proti CTLA—4.
Zejména protilátky 4.1.1, 4.8.1 a 6.1.1 podle vynálezu mají výhodné vlastnosti. Jejich strukturní charakteristiky, funkce nebo aktivity poskytují měřítka, která usnadňují návrh a selekci dalších protilátek nebo jiných typů molekul, jak již bylo diskutováno výše. K těmto kritériím path jedno nebo více z následujících:
i o - schopnost kompetovat o vazbu k CTLA-4 s jednou nebo více protilátkami podle vynálezu, podobná vazebná specificita k CTLA—4 jako má jedna nebo více protilátek podle vynálezu,
- vazebná afinita k CTLA^l 10“9 nebo vyšší, výhodně 10~ιθ nebo vyšší,
- nereaguje křížově s CTI.A—4 nižších savců, jako je např. myš, potkan, králík, výhodně nereaguje s CTLA—4 myši a potkana, is - reaguje křížově s CTLA—4 primátů, výhodně „cynomolgního“ makaka (Macaca fascicuiaris) a makaka „rhesus (Macaca mullata), selektivita pro CTLA^4 proti CD2B, B7-2, CD44 nebo hlgGl je alespoň 100:1 nebo vyšší, výhodně 300, 400 nebo 500:1 nebo vyšší,
1C5O blokování CTLA^l· vazby na B7-2 je 100 nM nebo nižší, výhodně 5. 4, 3, 2, 1, 0,5
2o nebo 0,38 nM nebo nižší,
IC50 blokování CTLA-4 vazby na B7-1 je 100 nm nebo nižší, výhodně 5, 4, 3, 2, 1, 0,5 nebo 0,50 nM nebo nižší,
- zvyšuje produkci cytokinů v jednom nebo více in vitro testech, např.
zvyšuje produkci IL-2 v testu T lymfoblasty/Raji buňky o 500 pg/ml nebo více, výhodně
750, 1000, 1500, 2000, 3000 nebo 3846 pg/ml, zvyšuje produkci IFN-γ v testu T lymfoblasty/Raji buňky o 500 pg/ml nebo více, výhodně 750, 1000 nebo 1233 pg/ml nebo více,
- zvyšuje produkci ÍL-2 v testu hPBMC nebo testu superantigenu celé krve o 500 pg/ml nebo více a výhodně 750, 1000, 1200 nebo 1511 pg/ml nebo více, vyjádřeno jinak produkce IL-2 je zvýšena o 30, 35, 40, 45, 50 procent a více při srovnání s kontrolním testem.
Očekává se, že protilátky podle vynálezu (nebo molekuly na jejich základě navržené nebo syntetizované), mající jednu nebo více z uvedených vlastností, budou mít také podobnou účinnost jako protilátky podle předkládaného vynálezu.
Požadované funkční vlastnosti popsané výše vedou k vazbě na CTLA-4 a inhibicí vazby CTLA4 molekulou (např. protilátkou, protilátkovým fragmentem, peptidem, malou molekulou) podobným způsobem jako se chová protilátka podle vynálezu (tj, vazbou na stejný nebo podobný epitop molekuly CTLA-4).
Molekula podle vynálezu se podává buďto přímo (tj. přímé podávání molekul pacientovi) nebo se může „podávat“ nepřímo (tj. např. podáváním peptidu nebo podobné molekuly, která vyvolá imunitní reakci u pacienta, podobně jako vakcína, a tato reakce zahrnuje tvorbu protilátek, které se váží na stejný nebo podobný epitop nebo protilátku nebo její fragment, které jsou produkovány po podání genetického materiálu, který kóduje takové protilátky nebo jejich fragmenty vázající se stejný nebo podobný epitop). Takže je jasné, že epitop na CTLA—4, ke kterému se váží protilátky podle vynálezu, je užitečný ve spojení s přípravou léčiv podle vynálezu. Při návrhu léčiv bývá stejně tak důležitá i negativní informace (tj. skutečnost, že protilátka, která se váže na CTLA-4, se neváže na epitop, který působí jako inhibitor CTLA-4, je užitečná). Takže epitop, na který se váží protilátky podle vynálezu, které nevedou k požadovaným funkcím, může být také velmi
CZ 302706 Ró důležitý. Tudíž do rozsahu předkládaného vynálezu spadají také molekuly (a zejména protilátky), které se váži na stejný nebo podobný epitop jako protilátky podle předkládaného vynálezu.
Kromě toho, že předmětem předkládaného vynálezu jsou protilátky a lze tudíž uvažovat i epito5 py, na které se váží, byly provedeny i předběžné studie mapování epitopů pro určité protilátky podle vynálezu, zejména protilátky 4.1.1 a 11.2.1
Jako první krok byly provedeny kompetiční studie BIAcore pro vytvoření hrubé mapy vazeb mezi protilátkami podle vynálezu také ve spojení sjejich schopností kompotovat o vazbu ío s CTLA-4. Pro tento účel byl CTLA-4 navázán na čip BIAcore a první protilátka, za saturujících podmínek, byla navázána na čip a pak byla měřena kompetiční vazba následné sekundární protilátky na CTLA-4. Tato metoda umožňuje vytvořené hrubé mapy, podle které lze klasifikovat rodiny protilátek.
Tímto způsobem bylo stanoveno, že protilátky podle vynálezu lze rozdělit do následujících epitopových kategorií.
Kategorie | Protilátka | Kompetice o vazbu CTLA-4 |
A | BO1M* | Plně křížově kompetují navzájem, křížově kompetují s kategorií B, do jisté míry kompetují s kategorií D |
B02M* | ||
B | 4.1.1 | Plně křížově kompetuj í navzájem, křížově kompetují s kategorií A, C a D |
4.13.1 | ||
C | 6.1.1 | Plně kří žově kompetuj í navzáj em, kří žove kompetují s kategorií B a D |
3.1.1 | ||
4.8.1 | ||
11.2.1 | ||
11.6.1 | ||
11.7.1 | ||
D | 4.14.1 | křížově kompetují s kategorií C a B, do jisté míry s kategorií A |
E | 4.9.1 | BNI3 blokuje vazbu 4.9.1 na CTLA-4, ale ne naopak |
BNI3*** |
(*) a (**)jsou dostupné od Biostride (***) jsou dostupné od Pharmingen
V dalším kroku se původci pokusili stanovit, zda protilátky podle vynálezu rozpoznávají lineární epitop na CTLA-4 za redukujících a neredukujících podmínek metodou westernového přenosu (western blot). Bylo pozorováno, že žádná z protilátek 4.1.1, 3.1.1, I1.7.L 1 L6.1 nebo 11.2.1 nerozpoznávala redukovanou formu CTLA-4 na westernovém přenosu. Tudíž se zdá, že všechny epitopy rozpoznávané příslušnými protilátkami nejsou lineární epitopy, ale spíše konformační epitop, jehož struktura je zrušena v redukujících podmínkách.
Tudíž bylo dále zkoumáno, zdaje možné něco zjistit o aminokyselinových zbytcích, které jsou důležité pro vazbu protilátek podle vynálezu. Jednou metodou bylo užití kinetické metody stanovení rychlostních konstant pro lidský CTLA- 4 a dva vysoce konzervativní CTLA-4 primátů
-26CZ 302706 B6 (makak, Macaca fascicularis a marmoset. Callithrix jacchuss). Studie pomocí techniky BIAcore ukázaly, že protilátka podle vynálezu 4.1.1 se váže na CTLA—4 člověka i obou primátů stejnou rychlostí. Avšak vzhledem ke kinetice se ukázalo, že protilátka 4.1.1 má nejvyšší afinitu (nejmenší rychlost rozpadu) pro lidský CTLA-4, rychlejší rozpad pro CTLA—4 makaka a ještě mnohem rychlejší pro marmoseta. Naproti tomu protilátka 11.2.1 se váže na CTLA-4 člověka i obou primátů se stejnou rychlostí, přitom má i stejné afinity (rychlosti rozpadu) pro všechny tri CTLA—4. Tato informace dále ukazuje, že protilátky 4.1.1 a 11.2.1 se váží na různé epitopy CTLA-4.
Pro další zkoumání epitopů, na které se váží protilátky kategorie B a C podle vynálezu byly provedeny studie s místně cílenou mutagenezí. CTLA-4 marmoseta má proti lidskému dva významné rozdíly, a sice ve zbytcích 105 a 106. Tyto rozdíly jsou změna leucinu na methioninu v pozici 105 a glycinu na serin v pozici 106. Tudíž byla mutována cDNA kódující lidský CTLA-4 tak, aby kódovala mutovaný CTLA—4 mající změny L105M a G106S. Homologní náhrada mutovaného CTLA-4 neovlivnila vazbu B7.2-IgGI fúzního proteinu. Avšak tato molekula byla významně inhibována ve schopnosti vázat se na protilátku 4.1.1 podle vynálezu (podobně marmoset). Dále byla mutována cDNA marmoseta kódující CTLA-4, čímž byla vytvořena mutanta CTLA—4 marmoseta obsahující záměnu S106G. Tato záměna vedla k obnovení původní stabilní vazby. Kromě toho byla připravena mutanta CTLA—4 marmoseta mající záměnu M105L. Tato záměna částečně obnovila vazbu mezi protilátkou 4.1.1 a mutovaným CTLA—4.
Každá z kategorií protilátek A až D podle vynálezu se zdá mít podobné funkční vlastnosti a má zřejmě potenciál působit jako silné terapeutické činidlo anti-CTLA—4. Dále každá z molekul vykazuje jistou křížovou kompetici ve vazbě k CTLA—4. Avšak jak již bylo výše diskutováno, každá z molekul různých kategorií se zjevně váže na samostatný konformační epitop CTLA-4.
Z předchozích údajů a diskusí vyplývá, že informace o epitopech diskutované výše ukazují, že protilátky (nebo jiné molekuly) podle vynálezu, které křížově kompetují s protilátkami, budou mít zřejmě značný terapeutický potenciál. Dále lze čekat, že protilátky (nebo jiné molekuly) podle vynálezu, které křížově kompetují s protilátkami podle vynálezu (tj. křížově kompetují s protilátkami skupin B, C a/nebo D, budou mít podle předkládaného vynálezu další terapeutický potenciál. A dále lze čekat, že protilátky (nebo jiné molekuly) podle vynálezu, které krizově kompetují s protilátkami podle vynálezu (tj. krizově kompetují s protilátkami skupin B, C a/nebo D) a I) nemají sníženou vazbu s CTLA-4 marmoseta (podobné protilátce 111.2.1) nebo II) mají sníženou vazbu s CTLA—4 marmoseta, budou mít podle předkládaného vynálezu další terapeutický potenciál. Také protilátky (nebo jiné molekuly) podle vynálezu, které křížově kompetují s protilátkami skupin A a E podle vynálezu mají určitý terapeutický potenciál.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady včetně provedených pokusů a dosažených výsledků jsou uvedeny pouze pro ilustrativní účely a předkládaný vynález nijak neomezují.
Příklad 1
Příprava hybridomů produkujících protilátku anti-CTLA—4
Protilátky podle vynálezu byly připraveny, selektovány a testovány podle popsaného příkladu.
-27CZ 302706 B6
Příprava antigenu:
Pro imunizaci myší XenoMouse''1 byly připraveny tři rozdílné imunogeny: i) luzní protein > CTLA-4-|gG, ii) peptid CTLA-4 a iii) buňky myšího lymfomu 300,19 transfekované mutantou CTLA-4 (Y20I V), která je konstitutivně exprimována na buněčném povrchu, i) fúzní protein CTLA 4-1 gG io Konstrukce expresního vektoru:
cDNA kódující zralou extracelulámí doménu CTLA-4 byla ampliíikována pomocí PCR z cDNA knihovny lidského thymu (Clontech) s použitím primerú navržených podle publikované sekvence (Eur. J. Immunol·. 18, 1901-1905, 1988). Fragment byl směrově subklonován do pSR5, expres15 ního plazmidu viru Sindbis (InVitrogen), mezi domény CH1/CH2/CH3 signálního peptidů lidského onkostatinu M a lidského IgG gama 1 (IgG 1). Fúzní protein neobsahuje kloubovou doménu, ale obsahuje cystein 120 v extracelulámí doméně CTLA-4 za vzniku kovalentního dimeru. Výsledný vektor byl nazván CTLA-4-lgG/pSR5. Sekvence kompletní cDNA CTLA-4-lgGl ve vektoru byla potvrzena v obou vláknech. Aminokyselinová sekvence proteinu CTLA—4-lg je
2o ukázána níže. Zralá extracelulámí doména pro CD44 byla amplifikovana pomocí PCR z lidské lymfocytové knihovny (Clontech) a subklonována do pSínRepS za vzniku kontrolního proteinu s identickým koncem IgGl,
Fúzní protein OM-CTLA4-IgG I:
MGVLLT0RTLLSLVLALLFPSMASMAMHVAQPAWLA3SRGIASFVC
EYASPGKATEVRVTVLRQADSQVTEVCAATYMMGNELTFLDDSICT
GTSSGNQVNLTIQGLRAMDTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIY
VIDPEPCPDSDLEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE
YKCKVSNKALPTPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR
WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Podtrženo: signální peptid
Tučně: extracelulámí doména CTLA-4 cDNA pro zralou extracelulámí doménu CD28 byly amplífíkovány pomocí PCR z lidské lymfocytové knihovny (Clontech), a pak subklonovány do pCDM8 (J. Immunol., 151, 5261-71, 1993) za vzniku fúzního proteinu lidského IgGl obsahujícího oblast štěpení trombinem a kloubovou oblast. CTL A—4 z op i c Callithrix jacchuss, Macaca fascicularis a Macaca mullata byl klonován z mRNA izolované z PBMC stimulovaných PHA s použitím standardních technik degenerované PCR. Sekvencování prokázalo, že aminokyselinové sekvence opis rhesus a cynomologous byly totožné, se třemi odlišnostmi oproti zralé lidské extracelulámí doméně CTI.A—4 (S13N, I17T a L105M). U opic C. jacchuss bylo prokázáno deset aminokyselinových odchylek od zralé lidské extracelulámí domény CTLA-4 (V21A. V33I, A41T, A51G, 541, S71F, Q75K, T88M, L105M aG106S). Místně cílená mutageneze byla použita pro vytváření jednobodových mutací všech aminokyselin odlišných v marmoset CTLA-4 pro mapování aminokyselin důležitých pro interakci protilátek s lidským CTLA-4--IgG. Mutace lidského a marmoset CTLA-4- IgG pro epitopové mapování byly vytvářeny pomocí značkovací soupravy pro místně cílené mutageneze (Prome-28 CZ 302706 B6 ga). Fúzní proteiny IgG byly produkovány pomocí přechodné transfekce buněk Cos7 a purifikovány s použitím standardních technik Protein A. U mutovaných proteinů CTLA-4-IgG byla hodnocena vazba k protilátkám prostřednictvím imunopřenosu („imunoblotting“) a s použitím analýz BlAcore.
Exprese/purifikace rekombinantního proteinu
Rekombinantní virus Sindbis vznikal elektroporaci (Gibco) buněk z embryonálních ledvin křečka s SP6 in vitro transkribovanou mRNA CTLA—4—IgG/pSR5 a pomocnou mRNA DH-26S, jak popsáno firmou InVitrogen. Rekombinantní virus byl sklízen čtyřicet osm hodin později a titrován na optimální expresi proteinu v buňkách ovarií čínského křečka (CHO-Kl). Buňky CHO-Kl byly pěstovány v suspenzi DMEM/F12 (Gibco) obsahující 10% teplem inaktivované fetáiní bovinní sérum (Gibco), neesenciální aminokyseliny (Gibco), 4mM glutamin (Gibco), pěnici lin/streptomycin (Gibco), lOmM Hepes pH 7.5 (Gibco). Aby produkovaly CTLA-4-IgG, byly buňky CHO-Kl resuspendovány v množství lxlO7 buněk/ml vDMEM/F12 a inkubovány s virem Sindbis jednu hodinu při teplotě místnosti. Pak byly buňky naředěny na lxl0ó/mI v DMEM/F12 obsahujícím 1% fetáiní bovinní sérum zbavené bovinního IgG s použitím Protein A Sepharose (Pharmacia), neesenciální aminokyseliny, 4mM glutamin, 12,5mM Hepes pH 7,5, a penicilin/streptomyein. Čtyřicet osm hodin po infekci byly buňky peletovány a kondicionovaná média byla sklizena a doplněna tabletami úplného inhibitoru proteáz (Boehringer Mannheim), pH bylo upraveno na 7,5, a média byla filtrována přes 0,2 filtr (Nalgene). FPLC (Pharmacia) byla použita pro afinitní purifikací fúzního proteinu s použitím 5ml kolony A HiTrap (Pharmacia) při rychlosti průtoku 10 ml/minutu. Kolona byla promyta PBS 30 objemy kolony a eluována 0,lM glycinem/HCI, pH 2,8, rychlostí 1 ml/minutu. Frakce (1 ml) byly okamžitě neutralizovány na pH 7,5 pomocí Tris pH 9. Frakce obsahující CTLA—4-lgGl byly identifikovány prostřednictvím SDSPAGE, a pak koncentrovány s použitím Centriplus 50 (Amicon) před aplikací na kolonu Sepharose 200 (Pharmacia) rychlostí 1 ml/minutu s použitím PBS jako rozpouštědla. Frakce obsahující CTLA—4-lgGl byly sloučeny, sterilizovány filtrací 0,2 (Millipore), rozděleny na poměrné části a zmraženy v -80 °C. CD44-IgGl byl exprimován a purifikován s použitím stejných metod, CD28-IgG byl purifikován z kondicionovaných médií od přechodně transfekovaných buněk Cos7.
Charakterizace CTLA-4-IgGl
Purifíkovaný CTLA-4-IgGl migroval jako jeden pás na SDS-PAGE při použití barvení koloidní modří Coomassie (Novex). Za neredukujících podmínek byl Č I LA—4-1 gGl dimer (lOOkD), který se redukoval na monomer o velikosti 50 kD, když byl ošetřen 50mM DTT. Sekvencování aminokyselin purifikovaného CTLA-4-IgGl v roztoku potvrdilo N-koncovou část CTLA 4 (MHVAQPAVVLAS) a to, že signální peptid onkostatinu M byl odštěpen ze zralého fúzního proteinu.
CTLA^4-IgGl se vázal na imobilizovaný B7.1-ígG způsobem závislým na koncentraci a vazba byla blokována křečci profilidskou anti-CTLAM protilátkou (BNI3, PharMingen). Sterilní CTLA^4-IgG byl bez endotoxinu a byl kvantifikován při OD280 s použitím 1,4 jako extinčního koeficientu. Výtěžek purifikovaného CTLA^4-IgG se pohyboval v rozmezí 0,5 až 3 mg/ml buněk CHO-KL (ii) CTLA 4 peptid
Následující peptid Č I LA-4 byl připraven tak, jak je popsáno dále:
NH3: MHVAQPAVVLAS SRGI AS FVCEYASPGKATEVRVTVLRQADSQVT
EVCAATYMMGNELTFLDDSICTGTSSGNQVNLTIQGLRAMDTGLYICK
VELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPC-CONH2
- 29 CZ 302706 Β6
Zkratky/materiál:
NMP. N-melhylpyrrolidiiion; Tí E, 2,2,2-triťluoroethanol; DCM. dichlormethan; FMOC, fluorenylmethoxykarbonyl. Všechny reagencie byly dodávaný firmou Perkin Elmer s následujícími výjimkami: THE od firmy Aldrieh Chemical, FMOC-PAL-PEG pryskyřice od firmy Perseptive Biosystems. Pro ty aminokyseliny, které vyžadují ochranné skupiny postranních řetězců, byly použity: Emoc-Arg(PMC)-Ol 1, FMOC-Asn(Trt)-OH, FMOC-Asp(tBu)-()l 1, FMOC-Cys(Trt)OH, ' FMOC-Ghi(tBu)-OH, FMOC-Gln(Trt)-OI I, FMOC-His(Boc)-OH, I-MOCEys(B()C)OH, FM()C-Ser(tBu)-OH, FMOC-Thr(tBu)-OH a FMOC -Tyr(tBu)-OH.
Syntéza peptidů
Syntéza peptidů byla prováděna na přístroji Perkin—Elmer 431A dodatečně vybaveném monitorováním vazby prostřednictvím UV absorbance v 301 nm (Perkin-Elmer Model 759A detector). Sekvence peptidů byla syntetizována na pryskyřici FMOC-ΡΑΙ -PEG s použitím kondicionovanýeh dvojitých kondenzačních cyklů. Zesílené dvojité kondenzační reakce byly prováděny v cyklech 10, 11, 18, 19, 20 a 28 až 33. Pryskyřice byla promyta 50% směsí DCM a ΤΓΈ pri ukončení každého acy lačního cyklu, a potom následovalo „zakrytí“ nezreagovaných aminoskupin aeetanhydrídem v NMP. Pryskyřice byla odstraněna z reaktoru po ukončení cyklu 49 a zbytek pokračoval až do ukončení. Odštěpení peptidů z pryskyřice bylo prováděno s použitím Reagent K (King et al„ International Journal of Protein and Peptide Research, 36. 255-266, 1990) po dobu 6 hodin na 415 mg pryskyřice, která poskytla 186 mg hrubého peptidů CTLA-4.
Charakterizace peptidů
25mg alikvoty hrubého peptidů C'TLA-4 byly rozpuštěny v 5 ml 6M guanidin HCI/lOOmM K2PO3 při pH 6,4 a eluovány přes kolonu Pharmacia hi Load Superdex 75 16/60 (16 mm x 600 mm, 120 ml objem kolony) s 2M guanidin HCI/lOOmM K2PO3 při pH 6,4 rychlostí 2 ml/min po dobu 180 minut a při sběru 5ml frakcí. Frakce byly analyzovány nanesením 1,7 μΙ frakce na gel NuPAGE Laemeli s MES pufrem a vizualizaci prostřednictvím Daichiiova protokolu barvení stříbrem. Frakce mající molekulovou hmotnost 12 kD, jak usuzováno ze srovnání se standardy molekulové hmotnosti, byly sloučeny a uloženy ve 4 °C. Spojené frakce byly analyzovány pomoct UV a elektroforézy v gelu. Sek věncování aminokyselin bylo prováděno absorpcí vzorku o objemu 100 μΐ na zásobník ProSorb (absorpce na membránu PVDF) a promytím pro odstranění solí pufru. Sekvencování bylo prováděno na přístroji Applied Biosystems 420. Byla pozorována očekávaná N-koncová sekvence (Μ Η V A Q Ρ A V V L A). Imunopřenos prokázal, že peptid byl rozpoznáván CTLA-4 proti-lidskému BN13 (PharMingen). Pro odsolení byl alikvot obsahující 648 pg materiálu přenesen do dialyzačních trubiček 3500 D MWCO a byl dialyzován proti 0,1% TFA/H2O ve 4 °C po dobu 9 dnů s mícháním. Veškerý obsah dialyzačntho váčku byl lyofilizován na prášek.
(iii) Buňky 300.19 transfekované CTLA-4 (Y201V)
Kompletní cDNA Č I LA 4 byla amplifikována pomocí PCR z cDNA knihovny lidského thymu (Stratagene) a subklonována do pIRESneo (Clontech). Byla zavedena mutace CTLA-4, která má za následek konstitutivní expresi na buněčném povrchu s použitím systému MatchMaker Mutagenesis (Promega). Mutace tyrosinu Y201 na valin inhibuje vazbu proteinu adaptinu AP50, který je zodpovědný za rychlou internalizaci CTLA-4 (Chuang et al., J. Immunol., 159. 144-151, 1997). Buňky 300.19 myšího lymfomu bez mykoplazmat byly pěstovány v RPM1-1640 obsahujícím 10% fetální telecí sérum, neesenciální aminokyseliny, penicilin/streptomycin, 2mM glutamin, I2,5mM Hepes pH 7,5, a 25 M beta-merkaptoethanol. Buňky byly transfekovány elektroporací (3xl0b/0,4 ml RPMI bez séra) v Iml komůrce s 20 g CTLA—L Y201 V/pIRESneo s použitím 200V/1180uF (Gibco CellPorator). Buňky byly ponechány v klidu 10 minut, a pak bvlo přidáno 8 ml předem ohřátého kompletního média RPMI. Za 48 hodin byly buňky naředěny
- 30 CZ 302706 B6 na 0,5x10ó/ml kompletním médiem RPMI obsahujícím 1 mg/ml G418 (Gibco). Rezistentní buňky se rozšířily a vykazovaly expresi CTLA—4 na buněčném povrchu pří použití protilátky BNI3 konjugované s iykoerythrinem (PharMingen). Buňky s vysokou hladinou exprese byly izolovány sterilním tříděním.
Imunizace a příprava hybridomu
Myši XenoMouse (staré 8 až 10 týdnů) byly imunizovány i) subkutánně do kořene ocasu s 1x107 buněk 300.19, které byly transfekovány tak, aby exprimovaly CTLA-4. jak popsáno výše, a resuspendovány ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfáty (PBS) s kompletním Freundovým adjuvans, nebo ii) subkutánně do kořene ocasu s a) 10 g Č I LA—4 fúzního proteinu nebo b) 10 g peptidů CTLA-4 emulgovaného v kompletním Freundově adjuvans. V každém případě byla dávka opakována třikrát nebo čtyřikrát v nekompletním Freundově adjuvans. Čtyři dny před fúzí dostaly myši poslední injekci imunogenu nebo buněk v PBS. Lymfocyty ze sleziny a/nebo lymfatických uzlin z imunizovaných myší byly fúzovány s buněčnou linií myšího nesekrečního myelomu P3 a byly podrobeny selekci HAT tak, jak bylo popsáno dříve (Galfre, G. a Milstein, C., „Preparation of monoclonal antibodies, strategies and procedures.“, Methods Enzymol., 73, 3-46, 1981). Byl získán velký panel hybridomů, které všechny sekretovaly CTLA-4 specifické lidské IgG2K nebo lgG4K protilátky (jak odhaleno níže).
Test ELISA
ELISA pro zjišťování antigen-specifických protilátek v myším séru a v supematantech hybridomů byla prováděna tak, jak bylo popsáno (Coligan et al., oddíl 2.1, „Enzyme-linked immunosorbent assays,“, Current protocols in immunology, 1994) s použitím CTLA-4-Ig fúzního proteinu k záchytu protilátek. Zvířata, která byla imunizována fúzním proteinem CTLA—4-1 gG, původci navíc testovali na nespecifickou reaktivitu proti lidské Ig části fúzního proteinu. To bylo prováděno s použitím ELISA destiček potažených lidským Ig jako negativní kontrolou specifity.
Ve výhodném testu ELISA byly použity následující techniky:
ELISA destičky byly potahovány 100 μΙ/jamku potahovacím pufrem pro destičky s anti genem (0,lM uhličitanový pufr, pH 9,6 a NaHCO3 (MW 84) 8,4 g/l). Potom byly destičky inkubovány přes noc ve 4 °C. Po inkubaci byl potahovací pufr odstraněn a destička byla blokována 200 pg/jamku blokovacího pufru (0,5% BSA, 0,1% Tween 20, 0,01% Thimerosal v 1 x PBS) a inkubována při teplotě místnosti 1 hodinu. Nebo byly destičky s blokovacím pufrem uloženy v lednici a utěsněny. Blokovací pufr byl odstraněn a bylo přidáno 50 μΙ/jamku supernatantu z hybridomu, séra nebo supernatantu z jiného hybridomu (pozitivní kontrola) a média HAT nebo blokovacího pufru (negativní kontrola). Destičky byly inkubovány 2 hodiny pri teplotě místnosti. Po inkubaci byly destičky promyty promývacím pufrem (lx PBS). Detekující protilátka (tj. myší proti-lidská IgG2-HRP (SB, #9070-05) pro protilátky IgG2 nebo myší proti-lidská IgG4-HRP (SB #9200-05) pro protilátky IgG4) byla přidána v množství 100 μΙ/jamku (myší proti—liská lgG2-HRP v ředění 1:2000 nebo myší proti-lidská IgG4-HRP v ředění 1:1000 (každá naředěna blokujícím pufrem). Destičky byly inkubovány při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny, a pak promyty promývacím pufrem. Potom bylo do jamek přidáno 100 μΙ/jamku čerstvě připraveného vyvíjecího roztoku (10 ml substrátového pufru, 5 mg OPD (o-fenylendiamin, Sigma kat. č. P7288) a 10 μΐ 30% H3O2 (Sigma). Destičky se ponechaly vyvíjet 10 až 20 minut, dokud se neobjevilo slabé zabarvení v jamkách s negativními kontrolami. Potom bylo přidáno 100 μΙ/jamku stopovacího roztoku (2M H2SO4) a destičky byly odečítány na odečítacím zařízení pro destičky ELISA pri vlnové délce 490 nm.
-31 CZ 302706 B6
Zjišťování afinitních konstant plně lidských Mab pomocí zařízení BlAcore
Měření afinity puntíkovaných lidských monoklonálních protilátek, Fab fragmentů nebo supernatantů z hybrido mu prostřednictvím plazmonové rezonance bylo prováděno s použitím přístroje
BlAcore 2000, s použitím obecných postupu uvedených výrobcem.
Kinetická analýza protilátek byla prováděna s použitím antigenů i mobilizovaných s nízkou denzitou na povrchu senzoru. Na třech površích senzorického Čipu BlAcore byl imobilizován fúzní protein CTLA—4-lg v hustotě pohybující se od přibližně 390 až 900 při použití fúzního proteinu io CTLA-4-Ig v koncentraci 20 nebo 50 g/ml v lOmM acetátu sodném, pH 5,0, s použitím soupravy pro kondenzaci aminu dodávané výrobcem (BlAcore, lne.). Na čtvrtém povrchu senzorického čipu BlAcore byl imobilizován IgG 1 (900 RU) a byl použítjako negativní kontrolní povrch pro nespecifickou vazbu. Kinetická analýza byla prováděna při rychlosti průtoku 25 nebo 50 μΙ/minutu a byly určovány disociaění (kd nebo k<wt) a asociační (ka nebo k„„) rychlosti s použitím i? software poskytnutého výrobcem (BIA evaluation 3.0), který umožnil celkové výpočty.
Příklad 2
Měření afinity anti-CTLA-4 protilátek
V následující tabulce jsou poskytnuty výsledky měření afinity některých z protilátek takto vybraných.
Tabulka I
Pevná fáze i | pomocí BlAcore) | ||||
Hybridom | Rychlost asociace Ka (MXS'1 xlO6) | Rychlost disociace Kd (S_1 XlO’4) | Asociační konstanta KA (l/M)=ka/kd xlO10 | Disociační konstanta KD (M) =kd/kaxlO*10 | Povrchová denzita [RU] |
MoabOl | 0,68 | 1,01 | 0,67 | 1,48 | 878,7 |
0,70 | 4,66 | 0,15 | 6,68 | 504,5 | |
0,77 | 6,49 | 0,19 | 8,41 | 457,2 | |
0,60 | 3,08 | 0,20 | 5,11 | 397, 8 | |
4.1.1 | 1,85 | 0,72 | 2,58 | 0,39 | 878,7 |
1,88 | 1,21 | 1,55 | 0,64 | 504,5 | |
1,73 | 1,54 | 1,13 | 0,88 | 457,2 | |
1,86 | 1,47 | 1,26 | 0,79 | 397,8 | |
4.8.1 | 0,32 | 0,07 | 4,46 | 0,22 | 878,7 |
0,31 | 0,23 | 1,33 | 0,75 | 504,5 | |
0,28 | 0,06 | 4,82 | 0,21 | 397,8 | |
4.14.3 | 2,81 | 3,04 | 0,92 | 1,08 | 878,7 |
2,88 | 3,97 | 0,73 | 1,38 | 504,5 | |
2,84 | 6,66 | 0,43 | 2,35 | 457,2 | |
3,17 | 5,03 | 0,63 | 1,58 | 397,8 |
- 32 CZ 302706 B6
6.1.1 | 0z43 | 0,35 | 1,21 | 0,83 | 878,7 |
0,46 | 0,90 | 0,51 | 1,98 | 504,5 | |
0,31 | 0,51 | 0,61 | 1,63 | 457,2 | |
0,45 | 0,79 | 0,57 | 1,76 | 397,8 | |
3.1.1 | 1,04 | 0,96 | 1,07 | 0,93 | 878,7 |
0,95 | 1,72 | 0,55 | 1,82 | 504,5 | |
0,73 | 1,65 | 0,44 | 2,27 | 457,2 | |
0,91 | 2,07 | 0,44 | 2,28 | 397,8 | |
4.9.1 | 1,55 | 13,80 | 0,11 | 8,94 | 878,7 |
1/43 | 19,00 | 0,08 | 13,20 | 504,5 | |
1,35 | 20,50 | 0,07 | 15,20 | 397,8 | |
4.10.2 | 1,00 | 2,53 | 0,39 | 2,54 | 878,7 |
0,94 | 4,30 | 0,22 | 4,55 | 504,5 | |
0,70 | 5,05 | 0,14 | 7,21 | 457,2 | |
1,00 | 5,24 | 0,19 | 5,25 | 397,8 | |
2.1.3 | 1,24 | 9,59 | 0,13 | 7,72 | 878,7 |
1,17 | 13,10 | 0,09 | 11,20 | 504,5 | |
1,11 | 13,00 | 0,09 | 11,70 | 397,8 | |
4.13.1 | 1,22 | 5,83 | 0,21 | 4,78 | 878,7 |
1,29 | 6,65 | 0, 19 | 5,17 | 504,5 | |
1,23 | 7,25 | 0,17 | 5,88 | 397,8 |
Jak je z údajů vidět, protilátky připravené podle vynálezu mají vysoké afinity a vazebné konstantyPříklad 3
Struktury anti-CTLA-4 protilátek připravených podle vynálezu
V následující diskusi jsou poskytnuty strukturální informace týkající se protilátek připravených podle vynálezu.
Aby se analyzovaly struktury protilátek vytvořených podle vynálezu, vyklonovali původci geny kódující fragmenty těžkého a lehkého řetězce z konkrétního hybridomu. Klonování genů a sekvencování bylo prováděno následovně:
Poly(A)' mRNA byla izolována z přibližně 2x1 Cf hybridomových buněk pocházejících z imunizovaných myší XenoMouse s použitím soupravy Fast-Track (Invitrogen). Po vytvoření cDNA s náhodnými primery následovala PCR. Byly použity primery specifické pro variabilní oblasti rodin lidských VH nebo lidských VK (Marks et al., „Olígonucleotide primers for polymerase chain reaction amplification of human immunoglobulin variable genes and design of family-specific olígonucleotide probes.“, Eur. J. Immunol., 21, 985-991, 1991) ve spojení s primery specifickými pro konstantní oblast lidského C 2 (MG-40d, 5-GCTGAGGGAGTAGAGTCCTGAGGA-3) nebo konstantní oblast Ck (1ikP2, jak popsáno dříve v Green et al., 1994). Sekvence transkriptů lidských mAb pocházejících z těžkého řetězce a řetězce kappa z hybridomů byly získány přímým
-33 CZ 302706 B6 sekvencováním produktů PCR vzniklých z poly(A)1 RNA s použitím primerú popsaných výše. Produkty PCR byly také klonovány do pCRII s použitím TA klonovacího kilu (Invitrogen) a obě vlákna byla sekvencována s použitím souprav pro sekvencování s terminační barevnou značkou Prism a přístrojem pro sekvencování ABI 377. Všechny sekvence byly analyzovány pomoci srovnání s „V BASE sequence directory“ (Tomlinson et al., MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK) s použitím programového software MacVector a Geneworks.
Dále byla každá z protilátek 4.1.1,4.8.1, 11.2.1 a 6.1.1 podrobena sekvencování kompletní DNA. Pro toto sekvencování byla izolována poly(A)' mRNA z přibližně 4xl0(> hybridomových buněk s použitím soupravy mRNA Direct kit (Dynal). mRNA byla reverzně přepsána s použitím oligodT(18) a soupravy Advantage RT/PCR kit (Clonetech). Byla použita databáze variabilních oblastí (V Base) pro navržení amplifikačních primerů začínajících v počátečním místě ATG těžkého řetězce genu DP50:
5-TATCTAAGCTTCTAGACTCGACCGCCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTG-3 a ke stop kodonu konstantní oblasti IgG2:
5-TTCTCTGATCAGAATTCCTATCATTTACCCGGAGACAGGGAGAGCT-3.
K počátečnímu místu ATG byla přidána 5 optimální Kozáková sekvence (ACCGCCACC). Stejná metoda byla použita pro návrh primeru k počátečnímu místu ATG řetězce kappa genu A27:
5-TCTTCAAGCTTGCCCGGGCCCGCCACCATGGAAACCCCAGCGCAG-3 a ke stop kodonu kappa konstantní oblasti:
5-TTCTTTGATCAGAATTCTCACTAACACTCTCCCCTGTTGAAGC-3. 0,12 cDNA byla klonována s použitím primeru k počátečnímu místu ATG:
5-TCTTCAAGCTTGCCCGGGCCCGCCACCATGGCATGAGGGTCCCCGCT-3 a primeru pro stop kodon kappa konstantní oblasti uvedeného výše. cDNA těžkého řetězce byly také klonovány jako genomové konstrukty místně cílenou mutagenezí přidáním místa Nhel na konec variabilní J domény a subklonováním fragmentu Nhel obsahujícím genomové oblasti lgG2 CHl/kloubová oblast/CH2/CH3. Bodová mutace pro vznik místa Nhel nemění aminokyselinovou sekvenci proti sekvenci zárodečné linie. Páry primerů byly použity pro amplifikací cDNA s použitím soupravy Advantage High Fidelity PCR Kit (Clonetech). Sekvence z PCR byla získána přímým sekvencováním s použitím sekvenačních souprav s terminační barevnou značkou a přístrojem pro sekvencování ABL Produkt PCR byl klonován do savčích expresních vektorů pEE-glutaminsyntetáza (Lonza) a tři klony byly sekvencovány pro potvrzení somatických mutací. U každého klonu byla sekvence verifikována na obou vláknech v přinejmenším třech reakcích. Neglykosylovaná protilátka 4.1.1 byla vytvořena místně cílenou mutagenezí N294Q v doméně CH2. Rekombinantní protilátky byly produkovány přechodnou transfekci buněk Cos7 v FCS bez IgG a purifikovány s použitím standardních technik Protein A Sepharose. Stabilní transfektanty byly vytvářeny elektroporací myších buněk NSO a selekcí v médiu bez glutaminu. Rekombinantní 4.1.1 s gly kosy lácí nebo bez ní projevovaly identickou spec i fí tu a afinitu pro CTLA—4 v in vitro testech ELISA a BIAcore.
Analýza utilizace genu
Následující tabulka uvádí utilizací genu prokázanou vybranými hybridomovými klony protilátek podle vynálezu:
-34CZ 302706 B6
Tabulka II
Utilizace genů těžkého a lehkého řetězce
Klon | Těžký řetězec | Lehký řetězec kapa | ||||
VH | D | JH | VK | JK | ||
4.1.1 | DP-50 | DIR4 nebo DIR3 | JH4 | A27 | JK1 | |
4.8.1 | DP-50 | 7-27 | JH4 | A27 | JK4 | |
4.14.3 | DP-50 | 7-27 | JH4 | A27 | JK3 | |
6.1.1 | DP-50 | DIR5 nebo DXRSrc | JH4 | A27 | JK3 | |
3.1.1 | DP-50 | 3-3 | JH6 | 012 | JK3 | |
4.10.2 | DP-50 | 7-27 | JH4 | A27 | JK3 | |
2.1.3 | DP-65 | 1-26 | JH6 | A10/A26 | JK4 | |
4.13.1 | DP-50 | 7-27 | JH4 | A27 | JK3 | |
11.2.1 | DP-50 | Dl-26 | JH6 | 012 | JK3 | |
11.6.1 | DP-50 | D2-2 nebo D4 | JH6 | 012 | JK3 | |
11.7.1 | DP-50 | D3-22 nebo D21-9 | JH4 | 012 | JK3 | |
12.3.1.1 | DP-50 | D3-3 nebo DXP4 | JH6 | A17 | JK1 | |
12.9.1.1 | DP-50 | D6-19 | JH4 | A3/A19 | JK4 | |
,4.9.1 | DP-47 | 5-24 a/nebo 6-19 | JH4 | L5 | JK1 |
Jak bylo pozorováno, protilátky podle předkládaného vynálezu byly vytvářeny se silnou tendencí k utilizaci variabilní oblasti těžkého řetězce DP^IO. Gen DP-50 je také odkazován do rodiny genu VH 3-33. Pouze jedna protilátka, která byla selektována na základě vazby CTLA-4 a předběžných in vitro funkčních testů vykázala utilizaci genu těžkého řetězce jiného než je DP50. Tento klon, 2.1.3., používal variabilní oblast těžkého řetězce DP-65 aje izotypu IgG4. Gen DP-65 je také odkazován do rodiny genu VH 4-31. Na druhé straně klon 4.9.1, který má variabilní oblast těžkého řetězce DP-47, váže CTLA—4, ale ne inhibuje vazbu k B7-1 nebo B7-2. U myší XenoMouse je více než 30 odlišných funkčních variabilních genů těžkého řetězce, ke kterým se tvoří protilátky. Tato tendence je tudíž ukazatel preferovaného vazebného motivu v interakci protilátka-antigen s ohledem na kombinované vlastnosti vazby k antigenu a funkční aktivitu.
Mutační analýza
Jak bylo vyhodnoceno, analýza utilizace genů poskytuje pouze omezený přehled proti látkové struktury. Protože B lymfocyty myší XenoMouse náhodně vytvářejí transkripty V-D-J- těžkého řetězce nebo V-J kappa lehkého řetězce, je zde celá řada sekundárních procesů, které se objevují, včetně, ale bez omezení, somatické hypermutace, n-adicí a CDR3 extenzí. (Viz například Mendez et al., Nátuře Genetics, 15, 146-156, 1997, patentová přihláška Spojených Států 08/759 620, podaná 3. prosince, 1996. V souladu s tím byly pro další zkoumání protilátkové struktury vytvářeny z cDNA získané z klonů predikované aminokyselinové sekvence protilátek. Navíc byly získány prostřednictvím sekvencování proteinů N—koncové aminokyselinové sekvence.
Obrázek 1 poskytuje nukleotidové a predikované aminokyselinové sekvence těžkých a kappa lehkých řetězců z klonů 4.1.1 (obrázek IA), 4.8.1 (obrázek 1B), 4.14.3 (obrázek IC), 6.1.1 (obrázek ID), 3.1.1 (obrázek 1E), 4.10.2 (obrázek 1F), 2.1.3 (obrázek ÍG), 4.13.1 (obrázek IH), 11.2.1 (obrázek II), 11.6.1 (obrázek IJ), 11.7.1 (obrázek 1K), 12.3.1.1 (obrázek 1L) a 12.9.1.1 (obrázek
-35 CZ 302706 B6
1M). Na obrázcích 1 A, 1B a ID jsou uvedené rozšířené sekvence protilátek 4.1.1, 4.8.1 a 6,1.1 získané klonováním kompletních cDNA, jak popsáno výše. Na těchto obrázcích jsou sekvence signálního peptidu (nebo báze kódující totéž) označeny tučně a sekvence používané pro 5 PCR reakce jsou podtrženy.
s
Obrázek 2 poskytuje srovnání sekvencí mezí před i kovaný mí aminokyselinovými sekvencemi těžkého řetězce z klonů 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 3.1.1, 4.10.2. 4.13.1, 1 1.2.1, 11.6.1. 11.7.1,
12.3.1.1 a 12.9.1.1 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie DP-50 (3-33). Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie DP-50 (3-33). Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie DP-50 a sekvenio cemi z klonů jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátek jako stínované.
Obrázek 3 poskytuje srovnání sekvencí mezi předikovanou aminokyselinovou sekvencí těžkého řetězce klonu 2.1.3 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie DP-65 (4 -31). Rozdíly mezi i? sekvencí zárodečné linie DP-65 a sekvencí z klonu jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátky jako podtržené.
Obrázek 4 poskytuje srovnání sekvencí mezi předikovanou aminokyselinovou sekvencí kappa lehkého řetězce z klonů 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 4.10.2 a 4.13.1 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie A27. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie A27 a sekvencemi z klonů jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátek jako podtržené. Zřejmé delece v CDR klonů 4.8.1,4.14.3 a 6.1.1 jsou označeny „0“.
Obrázek 5 poskytuje srovnání sekvencí mezi předikovanou aminokyselinovou sekvencí kappa lehkého řetězce z klonů 3.1.1, 11.2.1, 11.6.1 a 11.7.1 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie 012. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie 012 a sekvencí z klonů jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátek jako podtržené.
Obrázek 6 poskytuje srovnání sekvencí mezi předikovanou aminokyselinovou sekvencí kappa κι lehkého řetězce z klonů 2.1.3 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie A10/A26. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie A10/A26 a sekvencí z klonu jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátek jako podtržené.
Obrázek 7 poskytuje srovnání sekvencí mezi předikovanou aminokyselinovou sekvencí kappa lehkého řetězce klonu 12.3.1 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie A17. Rozdíly mezi sekvencí zárodečné linie AI7 a sekvencí z klonu jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátek jako podtržené.
Obrázek 8 poskytuje srovnání sekvencí mezi předikovanou aminokyselinovou sekvencí kappa lehkého řetězce klonu 12.9.1 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie A3/A19. Rozdíly mezí sekvencí zárodečné linie A3/A19 a sekvencí z klonu jsou označeny tučným písmem. Obrázek také ukazuje pozice sekvencí CDRI, CDR2 a CDR3 protilátek jako podtržené.
Obrázek 22 poskytuje série dalších nukleotidových a aminokyselinových sekvencí následujících anti-CTLA-4 proti látkových řetězců:
4.1.1:
kompletní 4.1.1 těžký řetězec (cDNA 22(a), genomová 22(b) a aminokyselinová 22(c)) kompletní neglykosylovaný 4.1,1 těžký řetězec (cDNA 22(d) a aminokyselinová 22(e))
4.1.1 lehký řetězec (cDNA 22(f) a aminokyselinová 22(g)).
- 36 CZ 302706 B6
4.8.1:
kompletní 4.8.1 těžký řetězec (cDNA 22(h) a aminokyselinová 22(i))
4.8.1 lehký řetězec (cDNA 22(j) a aminokyselinová 22(k))
6.1.1:
kompletní 6.1.1 těžký řetězec (cDNA 22(1) a aminokyselinová 22(m))
6.1.1 lehký řetězec (cDNA 22(n) a aminokyselinová 22(o))
11.2.1:
kompletní 11.2.1 těžký řetězec (cDNA 22(p) a aminokyselinová 22(q))
11.2.1 lehký řetězec (cDNA 22(r) a aminokyselinová 22(s))
Sekvence signálního peptidu jsou označeny tučným písmem a velkým textem. Otevřené čtecí rámce kompletní sekvence 4.1.1 genomové DNA (obr. 22(b)) jsou podtržené. A mutace zavedené pro vytvoření neglykosylovaného 4.1.1 těžkého řetězce a výsledná změna (N294Q) jsou označeny podtržením a tučným textem (sekvence cDNA (obr. 22(b)) a aminokyselinová sekvence (obr. 22(c)).
Příklad 4
Analýza aminokyselinových substitucí těžkého a lehkého řetězce
Na obrázku 2, který poskytuje srovnání sekvencí mezi před i kovaný mi aminokyselinovými sekvencemi těžkého řetězce z klonů 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3, 6.1.1, 3.1.1, 4.10.2, 4.13.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1 a 12.9.1.1 a aminokyselinovou sekvencí zárodečné linie DP-50 (3-33), vyšel najevo zajímavý vzor. Navíc k faktu dispozice pro těžký řetězec DP-50 ve většině klonů, existuje relativně omezená hypermutace v protilátkách příbuzných s genem zárodečné linie DP50. Například klony 3.1.1 a 11.2.1 neměly žádné mutace. Navíc mutace v dalších klonech jsou všeobecně konzervativní změny týkající se substitucí aminokyselin s podobnými vlastnostmi s aminokyselinami v zárodečné linii. Mutace v mnoha sekvencích CDR.1 a CDR2 jsou obzvláště konzervativní povahy. Tři těžké řetězce zobrazené na obrázku 2, 4.10.2, 4.13.1 a 4.14.3, jasně pocházejí od jednoho rekombinantního jevu (tj. pocházejí z totožného germinálního centra) a mají téměř totožnou sekvenci. Jestliže jsou tyto tři považovány za jednu sekvenci, pak z 10 rozdílných protilátek obsahujících DP50 těžký řetězec, jsou v CDR1 a CDR2 3 pozice, ve kterých je nepolární zbytek nahrazen jiným nepolárním zbytkem, 12, kdy je polární nenabitý zbytek nahrazen jiným polárním nenabitým zbytkem a 1, ve které je polární nabitý zbytek nahrazen jiným polárním nabitým zbytkem. Navíc jsou dvě pozice, ve kterých jsou dva zbytky, které jsou velice podobné strukturálně, glycin a alanin, substituovány navzájem. Jediné mutace, které nejsou striktně konzervativní, se týkají 3 substitucí polárního nabitého zbytku polárním nenabitým zbytkem a jedné substituce nepolárního zbytku polárním zbytkem.
Lehké řetězce těchto protilátek pocházejí z 5 rozdílných genů Vk. Gen A27 je zastoupen nejvíce aje zdrojem 6 odlišných lehkých řetězců. Srovnání těchto 6 sekvencí odhalilo dvě pozoruhodné charakteristické stránky. Zaprvé tři z nich, 4.8.1, 4.14.3 a 6.1.1, obsahují delece jednoho nebo dvou zbytků v CDR1, což je vzácný jev. Za druhé, existuje silný důvod proti šeřinu v pozici šest v CDR3 zárodečné linie, a serin je v každé sekvenci nahrazen. To svědčí pro to, že šeřin v této pozici je nekompatibilní s vazbou CTLA-4.
- 37 CZ 302706 B6
Uznává se, že mnoho z výše identifikovaných aminokyselinových substitucí existuje v těsné blízkosti s CDR nebo v CDR. Zdá se, že tylo substituce mají určitý vliv na vazbu protilátky k molekule CTLA-4. Dále tyto substituce by mohyl mít významný účinek na afinitu protilátek.
Příklad 5
Analýza N-koncové aminokyselinové sekvence protilátek podle vynálezu
Aby se dále verifikovalo složení a struktura protilátek podle vynálezu identifikovaných výše, sekvencovali původci několik těchto protilátek s použitím sekvenačního přístroje Perkin-Elmer. Byly izolovány oba, těžký a kappa lehký řetězec protilátek, a purifikovány prostřednictvím preparativní gelové elektroforézy a elektropřenosu, a pak přímo sekvencovány, jak je popsáno v příkladu 6. Většina sekvencí těžkého řetězce byla blokována na svém amino-konci. Tyto protilátky byly tedy nejdříve ošetřeny pyroglutamátaminopeptidázou, a pak sekvencovány.
Výsledky tohoto pokusu jsou ukázány na obrázku 9. Obrázek 9 také poskytuje molekulovou hmotnost těžkého a lehkého řetězce, jak byly určeny hmotnostní spektroskopií (MALDI).
Příklad 6
Další charakterizace protilátek podle vynálezu
Obrázek 10 poskytuje některé další charakteristické informace o určitých protilátkách podle vynálezu. Na obrázku jsou sumarizována data týkající se klonů 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.14.3 a 6.1.1. Jsou poskytnuta následující data: koncentrace, izoelektrické „zaostřování“ („focusin“) (IEF), SDS-PAGE, vylučování chromatografie, FACS, hmotnostní spektroskopie (MALDI) a Nkoncové sekvence lehkého řetězce.
Data všeobecně byla získávána následovně:
Materiál a metody:
Proteinová koncentrace byla zjišťována při 280 nm z UV skenu (200 až 350 nm), kdy 1,58 jednotky absorbance při 280 nm odpovídalo 1 mg/ml.
SDS-PAGE byla prováděna s použitím elektroforetického systému s 10% gelem NuPAGE a pracovním pufrem MES. Vzorky byly připraveny ředěním 3:1 s 4x pufrem NuPAGE pro vzorky (+/-), beta-merkaptoethanolem, zahřátím a na gel bylo naneseno -5 g proteinu. Gel byl pak obarven barvicím roztokem Brilliant Blue R (Sigma kat. č. B-6529) a molekulové hmotnosti byly vyhodnoceny srovnáním obarvených pásů se standardy „Perfect Protein Markers“ (Novagen kat. č. 69149-3).
Pro N-koncové sekvencování byly vzorky děleny tak, jak je uvedeno výše, na gelech NuPAGE, přeneseny na jmobilizační membránu Pro Blot (Applied Biosystems), a pak obarveny modří Coomassie Blue R-250. Obarvené proteinové pásy byly vyříznuty a podrobeny sekvenační analýze pomocí automatizované Ed man o vy degradace na sekvenačním přístroji Applied Biosystems 494 Procise HT Sequencer.
Izoelektrické zaostřování (IEF) bylo prováděno s použitím gelů Pharmacia IEF 3-9 pHast (kat. č. 17-0543-01). Vzorky byly naředěny 10% glycerolem na koncentraci -0,8 mg/ml a 1 μΙ byl nanesen na gel, a poté obarven. Hodnoty pl pak byly vyhodnoceny srovnáním obarvených pásů se standardy IEF pro široké rozmezí (pH 3 až 10) (Pharmacia, kat. č. 17-0471-01).
- 38CZ 302706 Β6
Vylučovací chromatografie (SEC) byla prováděna ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfáty (PBS) na systému SMART Pharmacia s použitím kolony Superdex 75 PC 3,2/30. Molekulové hmotnosti byly vyhodnoceny srovnáním retenčního času vrcholu s retenčním časem gelu.
Pro studie FACS byly připraveny lidské periferní T lymfocyty a 48 hodin stimulovány. T lymfocyty byly jednou promyty, resuspendovány ve FACS pufru v množství 1x106 buněk/100 μΐ a barveny na povrchovou expresi CD3 s 10 μΐ anti-CD3-FITC (Immunotech, Marseille, Francie) po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Buňky byly promyty dvakrát, pak fixovány, permeabilizovány (Fix and Perm, Caltag) a obarveny na intracelulámí expresi CTLA-4 s 10 μΐ anti-CD152-PE (Pharmingen). Průtoková cytometrie byla prováděna s použitím přístroje FACsort Becton Dickinson. Kvadranty byly ustanoveny analýzou relevantních izotypových kontrolních protilátek (Caltag).
Jak bylo diskutováno výše, bylo prokázáno, že anti-CTLA—4 protilátky mají spolehlivou silnou imunomodulační aktivitu. Následující pokusy byly prováděny proto, aby se určilo, jestli protilátky podle předkládaného vynálezu mají tuto aktivitu. Pokusy byly obecně navrženy pro stanovení schopnosti protilátek inhibovat interakci mezi molekulami CTLA-4 a B7, být selektivní pro molekuly CTLA-4, B7 a CD28 a podporovat produkci cytokinů T lymfocyty, včetně, ale bez omezení, exprese IL-2 a/nebo IFN-. Dále se vyšetřovala zkřížená reaktivita protilátek podle vynálezu s některými lidskými tkáněmi a molekulami CTLA—4 jiných živočišných druhů (např. myší a primátů).
Příklad 7
Kompetitivní ELISA: inhibice interakce CTLA—4/B7-1 nebo B7-2 protilátkami podle vynálezu
Byl prováděn in vitro test, aby se určilo, jestli byly protilátky podle předkládaného vynálezu schopné inhibice vazby CTLA-4 s B7-1 nebo B7-2. Jak bylo uznáno, očekává se, že protilátky podle vynálezu, které jsou schopné inhibovat vazbu CTLA-4 s molekulami B7, jsou kandidáty pro regulaci imunity prostřednictvím metabolické dráhy CTLA—4. V testu byly použity následující materiály a metody:
Materiály a metody
96-jamkové destičky MaxiSop byly potaženy 3 nM B7.1-Ig(Gl) nebo B7.2-Ig(Gl) (Repligen, lne. Needham, MA) v Dulbeccově PBS a inkubovány ve 4 °C přes noc. Druhý den byl B7-Ig odstraněn a destičky byly blokovány 1% BSA s 0,05% Tween-20 v D-PBS po dobu dvou hodin. Destičky byly promyty 3x promývacím pufrem (0,05% Tween-20 v D-PBS). Protilátky v příslušných testovaných koncentracích a CTLA—4-1 g(G4) (0,3 nM konečná koncentrace) (Repligen, lne. Needham, MA) byly předem míchány po dobu 15 minut a pak přidány na destičku potaženou B7-Ig (60 μΐ celkový objem) a inkubovány při teplotě místnosti 1,5 hodiny. Destičky byly promyty 3x a bylo přidáno 50 μΐ ředění 1 až 1000 myší protilidské protilátky IgG4 konjugované s HRP (Zymed, San Francisco, CA, ě. 05-3820) a destičky byly inkubovány 20 minut při teplotě místnosti, a pak bylo na destičku přidáno 50 μΐ IN FLSO4. Destičky byly odečítány ve 450 nm s použitím odečítacího zařízení pro destičky od Molecular Devices (Sunnyvale, CA). Všechny vzorky byly testovány v duplikátech. Maximální signál byl definován jako vazba CTLA—4 v nepřítomnosti testované protilátky. Nespecifická vazba byla definována jako absorbance v nepřítomnosti CTLA—4-1 g a testované protilátky.
Výsledky testu jsou uvedeny v tabulkách IIIA a ΙΠΒ. V tabulce ΠΙΑ jsou výsledky uvedeny pro celou řadu protilátek podle vynálezu. V tabulce IIIB jsou uvedeny výsledky srovnávající protilátku 4.1.1 podle vynálezu s protilátkou 11.2.1 podle vynálezu ze samostatného pokusu.
-39 C7. 302706 B6
Tabulka IIIA
Klon CTLA-4-Ig | Izotyp | CTLA-4/B7.2 komp. ELISA IC50 (nM) | CTLA-4/B7.1 komp. ELISA IC50 (nM) |
CT3.1.1 | IgG2 | 0,45±0,07 (n=3) | 0,63±0,10 (n=2) |
CT4.1.1 | IgG2 | 0,38+0,06 (n=5) | 0,50±0,05 (n=2) |
CT4.8.1 | IgG2 | 0,57+0,03 (n=3) | 0,17±0,28 (n = 2) |
CT4.9.1 | IgG2 | Nekompetitivní (n=3) | Nekompet i t i vní (n=2) |
CT4.10.2 | IgG2 | 1,5010,37 (n=3) | 3,39+0,31 (n=2) |
CT4.13.1 | IgG2 | 0,49±0,05 (n=3) | 0,98±0,ll (n=2) |
CT4.14.3 | IgG2 | 0,69±0,11 (n=3) | l,04±0,15 (n=2) |
CTG.1.1 | IgG2 | 0,39±0,06 (n=3) | 0,67+0,07 (n=2) |
Tabulka IIIB
Klon CTLA-4-Ig | Izotyp | CTLA-4/B7.2 komp, ELISA IC50 (nM) | CTLA-4/B7.1 komp. ELISA IC50 (nM) |
CT4.1.1 | IgG2 | 0,55+0,08 (n=4) | 0,87+0,14 (n=2) |
CT11.2.1 | IgG2 | 0,56±0,05 (n=4) | 0,81±0,24 (n=2) |
Příklad 8
Poměr selektivity protilátek podle vynálezu k CTLA—4 ve srovnání s CD28 nebo B7-2
Byl prováděn další in vitro test, aby se určila selektivita protilátek podle vynálezu vzhledem k CTLA-4 buď proti CD28 nebo B7-2. V pokusech byly použity následující materiály a metody. ELISA na selektivitu CTLA-4: Materiály a metody
96—jamková destička FluroNUNC (Nunc kat. č. 475515) byla potažena čtyřmi antigeny: CTLA— 4/lg. CD44/Ig, CD28/Ig a B7.2/Ig (antigeny vytvořené ve vlastní laboratoři). Destička byla potahována přes noc ve 4 °C antigeny v koncentraci 1 g/ml v množství 100 μΙ/jamku v 0,lM pufru hydrogenuhličitanu sodném, pH 96. Destička pak byla promyta s PBST (PBS+0,1%
Tween-20) třikrát s použitím myčky destiček NUNC. Destička byla blokována s PPBST +0,5% BSA v množství 150 μΙ/jamku. Destička byla inkubována při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny, a pak promyta třikrát s PBST. Pak byly naředěny anti-CTI.A4 protilátky podle vynálezu en bloc v 1 g/ml a byly přidány na destičku. Destička byla inkubována při teplotě místnosti po dobu i hodiny, a pak promyta třikrát s PBST. Jamky, které obsahovaly protilátky podle vynálezu, pak byly ošetřeny 100 μΙ/jamku proti-lidským IgG2-HRP (Souther Biotech kat. č. 9070-05) v ředění
1:4000 en bloc. Jedna řada byla také ošetřena proti-lidským IgG (Jackson kat. č. 209-035-088)
-40CZ 302706 B6 pro normalizaci potažení destiček, Tato protilátka byla nareděna 1:5000 en bloc a přidána v množství 100 μΙ/jamku. Jedna řada byla také ošetřena proti-lidským CTLA-4-HRP (Pharmingen, kat. ě. 345815/konjugováno s HRP na přání zákazníka) jako pozitivní kontrola. Tato protilátka byla použita v množství 0,05g/ml ředěná en bloc. Destička byla inkubována při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny, a pak promyta třikrát s PBST. LBA chem i luminiscenční substrát (Pierce) byl přidán v množství 100 μΙ/jamku a destička byla inkubována na třepačce destiček 5 minut. Destička pak byla odečtena s použitím zobrazovacího zařízení luminiscence po 2 minutové expozici.
io Test selektivity vazby IGEN pro CTLA-4: materiály a metody
Perličky M^45O Dynabeads (Dynal A.S., Oslo, Norsko, č. 140.02) byly promyty 3x pufrem fosfátem sodným, pH 7,4, a resuspendovány v pufru fosfátu sodném. Ke 100μΙ perliček byl přidán 1,0 g CTLA-A-Ig(Gl), 1,0 g CD2 8-1 g(Gl) nebo 1,0 až 3,0 g B7.2-Ig(Gl) (Repligen, lne.
Needham, MA) a byly inkubovány přes noc na rotátoru ve 4 °C. Druhý den byly perličky promyty 3x v 1% BSA plus 0,05% Tween-20 v Dulbeccově PBS a blokovány 30 minut. Perličky byly naředěny 1 až 10 blokujícím pufrem a 25 μΐ potažených perliček bylo dáno do polypropylenových zkumavek 12x75 mm. Všechny vzorky byly testovány v duplikátu. Do zkumavek bylo přidáno 50 μΐ testované protilátky (konečná koncentrace 1 g/ml) nebo blokujícího pufru a inku20 bováno 30 minut na karuselovém pásu analyzátoru Origen 1,5 (IGEN International, Inc., Gaithersburg, MD) při teplotě místnosti, vortexováno 100 rpm. Do zkumavek bylo přidáno 25 μ) myší proti-lidské IgGl, IgG2 nebo IgG4 s rutheniem (Zymed, Inc., San Francisco, CA, č. 05-3300, 05-3500 a 05-3800) (konečná koncentrace 3 g/ml ve 100 μΐ celkového objemu). Zkumavky byly inkubovány 30 minut při teplotě místnosti na karuselovém pásu, vertexováno 100 rpm. Bylo přidáno 200 μΐ pufru testu Origen (IGEN International, Inc., Gaithersburg, MD, č. 402-050—03) do každé zkumavky, krátce vortexováno, a pak byly zkumavky odečítány na analyzátoru Origen a pro každou zkumavku byly určeny jednotky ECL (elektrochemiluminiscence). Byly zjištěny normalizační faktory pro opravu odchylek vazby fúzních proteinů na perličky Dynabeads a jednotky ECL byly korigovány na nespecifickou vazbu před výpočtem stupně selektivity.
Výsledky testů jsou uvedeny v tabulkách IVA a IVB.
-41 CZ 302706 B6
Tabulka IVA
Klon | Izotyp | CTLA4/CD28 ELISA | CTLA4/B7.2 ELISA | CTLA4/CD44 ELISA | CTLA4/CD28 IGEN | CTLA4/B7.2 IGEN |
3.1.1 | IgG2 | >500:1 (n-3) | >500:1 (n-3) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n-2) | >500:1 (n=l) 195:1 (n-1) |
4.1.1 | IgG2 | >500:1 (n-3) | >500:1 (n=2) 485:1 (n=l) | >500:1 (n-3) | >500:1 (n-1) 261:1 (n-1) | >500:1 (n-1) 107:1 (n-1) |
4.8.1 | IgG2 | >500:1 (n=3) | >500:1 (n-2) 190:1 (n-1) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n=2) | >500:1 (n-2) |
4.9.1 | IgG2 | >500:1 (n=2) 244:1 (n-1) | >500:1 (n=2) 33:1 (n-i) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n-1) | >500:1 (n=l) |
4.10.2 | IgG2 | >500:1 (n-3) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n=l) | >500:1 (n=l) |
4.13,1 | IgG2 | >500:1 (n=2) 46:1 (n-1) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n-3) | >500:1 (n=D 329:1 (n=l) | >500:1 (n-2) |
4.14.3 | IgG2 | >500:1 (n=2) 80:1 (n=l) | >500:1 (n=2) 10:1 (n-1) | >500:1 (n-2) 126:1 (n-1) | >413:1 (n-1) | >234:1 (n-1) |
6.1.1 | IgG2 | >500:1 (n=2) 52:1 (n=l> | >500:1 (n=3) | >500:1 (n=3) | >500:1 (n=2) | >500:1 (n-2) |
Tabulka IVB
Klon | Izotyp | CTLA4/CD28 ELISA | CTLA4/B7.2 ELISA | CTLA4/hIgG ELISA |
4.1.1 | IgG2 | >500:1 (n-3) | >500:1 (n=2) | >500:1 (n-3) |
11.2.1 | IgG2 | >500:1 (n=3) | >500:1 (n-3) | >500:1 (n=3) |
Příklad 9
Model buněčného signálu lidských T lymfocytů
Pro další vymezení aktivity protilátek podle vynálezu při působení jako regulátorů imunity, vyvinuli původci některé testy T lymfocytů, aby se kvantifikovalo zvýšení produkce IL-2 T lymfocyty při blokádě CTLA-4 signálu protilátkami. Při těchto pokusech byly použity následující materiály a metody:
Materiály a metody
Čerstvě izolované lidské T lymfocyty byly připraveny a použitím Histopaque (Sigma, St. Louis,
MO, č. A-70543) a T-kwik (Lympho-Kwik, One Lambda, Canoga Park, CA, č. LK-50-T)
-42 CZ 302706 B6 a stimulovány s PHA (1 g/ml) (puntíkovaný fytohemaglutinin, Murex Diagnostics Ltd., Dartford, England, č. HA 16) v médiu (RPMI 1640 obsahující L-glutamin, MEM neesenciální aminokyseliny, penicilín, streptomycin, 25 mM Hepes a 10% FBS) v koncentraci lxlO6 buněk/ml a inkubovány ve 37 °C po 2 dny. Buňky byly promyty a naředěny médiem na 2x106 buněk/ml. Buňky Ráji (Burkittův lymfom, lidský, ATCC č.: CCL 86 Class II American Type Culture Collection, Rockville, MD) byly ošetřeny mitomycinem C (Sigma, St. Louis, MO, č, M-4287) (25 g/ml) jednu hodinu ve 37 °C. Buňky Ráji byly promyty 4x v PBS a resuspendovány v množství 2x10Ď buněk/ml. Lidské T lymfoblasty (5xl05/ml), buňky Ráji (5xl05/ml) a anti-CTLA-4 protilátky nebo kontrolní protilátka souhlasného izotypu v různých koncentracích byly přidány na 96jamkové mikrotitrační destičky a destičky byly inkubovány ve 37 °C po 72 hodin. Celkový objem jamky byl 200 μΙ. 72 hodin po stimulaci byly destičky stočeny a supematant byl odstraněn a zamražen pro pozdější zjišťování IL-2 (Quantikine IL-2 ELISA kit, R&D Systems, MN, č. D 2050) a IFN(Quantikine IL-2 ELISA kit, R&D Systems). Zvýšení cytokinů bylo definováno jako rozdíl mezi hladinami cytokinů v tkáňových kulturách obsahujících anti-CTLA-4 blokující mAb proti kontrolní protilátce souhlasného izotypu. Pro experimenty s průtokovou cytometrií byly buňky Ráji promyty lx pufrem FACS (PBS obsahující 2% teplem inaktivované FCS, 0,025% azid sodný). Buněčné pelety byly resuspendovány v pufru FACS v množství lxlO6 buněk/100 μΐ a inkubovány s 10 μΐ anti-CD80-PE (Becton Dickinson, San Josse, CA) nebo anti-CD86-PE (Pharmingen, San Díego) po dobu 30 minut pri teplotě místnosti. Buňky byly promyty dvakrát a resuspendovány v 1 mí pufru FACS. Průtoková cytometrie byla prováděna s použitím přístroje Becton Dickinson FACSort. Histogramové markéry byly nastavené analýzou relevantních izotypových kontrolních protilátek (Caltag, Burlingame, CA).
Původci obecně vyvinuly test, který může být použit pro rychlé určení aktivace IL-2 T lymfocyty. Jak bylo uznáno, stimulace T lymfocytů je závislá na B7 a CD28. Navíc promyté T blasty netvořily zjistitelný IL-2 a buňky Ráji netvořily zjistitelný IL-2, dokonce ani když byly stimulovány LPS neb PWM. Ale, v kombinaci, T blasty společně pěstované s buňkami Ráji mohou modelovat signální jevy B7, CTLA-4 a CD28 a může na nich tedy být hodnocen účinek protilátek.
Obrázek 11 ukazuje expresi B7-1 a B7-2 na buňkách Ráji při použití anti-CD80-PE a antiCD86-Pe mAb a s použitím průtokové cytometrie (FACS), jak je popsáno v příkladu 6.
Obrázek 12 ukazuje na koncentraci závislé zvýšení produkce IL-2 v testu sT lymfoblasty/Raji indukované protilátkami blokujícími CTLA—4 (BNI3 (Pharmingen) a 4.1.1,4.8.6 a 6.1.1 protilátkami podle vynálezu).
Obrázek 13 ukazuje na koncentraci závislé zvýšení produkce IFN- v testu sT lymfoblasty/Raji indukované protilátkami blokujícími CTLA—4 (BNI3 (Pharmingen)a4.l.l,4.8.6a6.I.l protilátkami podle vynálezu) (stejné dárcovské T lymfocyty).
Obrázek 14 ukazuje průměrné zvýšení produkce IL-2 vT lymfocytech od 6 dárců indukované protilátkami blokujícími CTLA—4 v testu sT lymfoblasty/Raji. Je zajímavé zvážit, že mAb CT4.9.1 se váže na CTLA—4, ale neblokuje vazbu B7. Tedy pouhá vazba na CTLA-4 nepostačuje sama zajistit funkční protilátku podle vynálezu.
Obrázek 15 ukazuje průměrné zvýšení produkce IFN- vT lymfocytech od 6 dárců indukované protilátkami blokujícími CTLA-4 v testu s T lymfoblasty/Raji.
Obrázek 19 ukazuje srovnání mezi 4.1.1 a 11.2.1 protilátkami podle vynálezu v koncentraci 30 g/ml v 72 hodinovém testu s T lymfoblasty/Raji, jak bylo popsáno v tomto příkladu 9 a v testu se superantigenem popsaném v příkladu 10.
Obrázek 20 ukazuje na koncentraci závislé zvýšení produkce IL-2 v testu sT lymfoblasty/Raji indukované 4.1,1 a 11.2.1 CTLA-4 protilátkami podle vynálezu.
-43 CZ 302706 Β6
Následující tabulka 1VC poskytuje informaci týkající se průměrného zvýšení a rozsahu zvýšení cytokinové odpovědi v testech Kaji a SEA podle vynálezu. Každý z pokusů zahrnutých ve výsledcích je založen na protilátce v dávce 30 g/ml a měřen v 72 hodinách. Jsou uvedeny počty dárců zúčastněných v pokusech, jakož i odpovědi.
Tabulka IVC
Test | mAb | Cytokin | Průměrné zvýšení pg/ml | SEM | Rozsah zvýšení pg/ml | n | Reakce dárců |
T lymfoblasty/ Ráji | 4.1.1 | IL-2 | 3329 | 408 | 0 až 8861 | 42 | 19 z 21 |
T lymfoblasty/ Ráji | 4.1.1 | IFří- | 3630 | 980 | 600 až 13939 | 17 | 13 ze 13 |
T lymfoblasty/ Ráji | 11.2.1 | IL-2 | 3509 | 488 | 369 až 6424 | 18 | 14 ze 14 |
SEA (PBMC) | 4.1.1 | IL-2 | 2800 | 312 | 330 až 6699 | 42 | 17 ze 17 |
SEA (PBMC) | 11.2.1 | IL-2 | 2438 | 366 | 147 až 8360 | 25 | 15 z 15 |
SEA (plná krev) | 4.1.1 | IL-2 | 6089 | 665 | -168 až 18417 | 46 | 15 ze 17 |
SEA (plná krev) | 11.2.1 | IL-2 | 6935 | 700 | -111 až 11803 | 25 | 12 z 14 |
Příklad 10
Model signálu T lymfocytů u člověka
Původci vyvinuli druhý buněčný test, aby se kvantifikovalo zvýšení aktivace IL-2 T lymfocyty při blokádě signálu CTLA-4 protilátkami. Při těchto pokusech byly použity následující materiály a metody:
Materiály a metody
Lidské PBMC byly připraveny s použitím Accuspin. Mikrotitrační destičky byly předem potaženy santi-CD3 protilátkou (leu4, Becton Dickinson) (60 ng/ml) a inkubovány 2 hodiny ve 37 °C. Do jamek byly přidány hPBMC v množství 200 000 buněk na jamku. Do jamek byl přidán stafylokokový enterotoxin A (SEA) (Sigma) v koncentraci 100 ng/ml. Do jamek byly přidány protilátky, obvykle v koncentraci 30 g/ml. Pak byly buňky stimulovány 48, 72 nebo 96 hodin. Destičky byly stočeny v žádoucím časovém bodu a zjamek byl odstraněn supernatant. Potom byla v supematantu vyšetřována produkce IL-2 s použitím ELISA (R&D Systems).
Výsledky z těchto pokusů jsou ukázány na obrázcích 16, 17 a 21. Na obrázku 16 byla měřena indukce produkce IL-2 v hPBMC od 5 dárců 72 hodin po stimulaci. Na obrázku 17 jsou ukázány výsledky z měření plné krve rozebírající rozdíl v indukcí produkce IL-2 v krvi 3 dárců, jak byla měřena 72 a 96 hodin po stimulaci.
Na obrázku 21 je zvýšení produkce IL-2 v plné krvi 2 dárců, jak měřeno 72 hodin po stimulaci.
-44 CZ 302706 B6
Příklad 11
Model nádoru u zvířat
Původci nastolili podle nádoru u zvířat pro in vivo analýzu proti-myších CTLA-4 protilátek při inhibici nádorového růstu. V tomto modelu nádoru je pěstován myší fibosarkom a zvířata jsou ošetřována proti-myšími CTLA-4 protilátkami. Materiály a metody pro zavedení modelu jsou poskytnuty níže:
Materiály a metody
Samicím myší A/J (ve věku 6 až 8 týdnů) byly podány subkutánní injekce do dorzální strany krku s 0,2 ml nádorových buněk SalN (IxlO6) (Baskar 1995). Intraperitoneální injekcí byla podána proti--myší CTLA-4 nebo kontrolní protilátka souhlasného izotypu (Phramingen, San Diego, CA, 200 g/zvíre) ve dnech 0, 4, 7 a 14 po injekci nádorových buněk. Nádor byl měřen v průběhu 3 až 4 týdnů pokusů s použitím elektronického kaliperu Starret SPC Plus Athol, MA) a velikost nádoru byla vyjádřena jako povrchová oblast postižená růstem nádoru (mm2).
Obrázek 18 ukazuje inhibici nádorového růstu při proti-myší CTLA-4 protilátce v modelu nádoru myšího fibrosarkomu. Jak je ukázáno na obrázku 18, u zvířat ošetřených s anti-CTLA-4 nastala redukce nádorového růstu ve srovnání se zvířaty ošetřenými izotypovou kontrolní protilátkou. Podle toho jsou proti-myší CTLA-4 mAb schopné inhibovat růst fibrosarkomu v modelu myšího nádoru.
Lze očekávat, že protilátky, které reagují zkříženě s myším CTLA-4. se budou v tomto modelu chovat podobně. Ale žádná z protilátek podle vynálezu, u kterých byla zkoumána zkřížená reaktivita, nereaguje zkříženě s myším CTLA-4.
Příklad 12
Model nádoru u zvířat
Aby se dále zkoumala aktivita protilátek podle vynálezu, byl navržen model xenoimplantátu myší SC1D pro testování eradikace zjištěných nádorů ajejich metastáz. V tomto modelu jsou myším SCID podány jako štěp lidské T lymfocyty a myším jsou implantovány buňky pocházející z velkobuněčného plicního karcinomu (NSCL) nebo kolorektálního (CC) karcinomu pacientů. Implantace se provádí do tukových polštářků v gonádách myší SCID. Tumory se ponechají narůst, a pak se odstraní. U myší se rozvinuly nádorové metastázy jater podobné lidskému nádoru. Tento model je popsán v práci Bumpers et al., J. Surgical Res., 61, 282-288, 1996).
Očekává se, že protilátky podle vynálezu budou inhibovat růst nádorů tvořených u těchto myší.
SEZNAM SEKVENCÍ
Nukleotidové a aminokyselinové sekvence jsou uvedeny ve formě seznamu podle WIPO standardu 25.
Všechny uvedené sekvence jsou lidského původu, v popisném poli <213> angl. termín „human“ označuje zdroj sekvence Homo sapiens.
-45 CZ 302706 Ró <2I0> 1 <21 1> 463 <212> PRT <213> Human
Met | <4O0> Glu Phe | 1 Gly | Leu | Ser | Trp | val | Phe | Leu | Val | Ala | Leu | Leu | Arg | Gly | |
1 Val | Gin | Cys | Gin | 5 Val | Gin | Leu | Val | Glu | 10 Ser | Gly | Gly | Gly | Val | 15 Val | Gin |
Pro | Gly | Arg | 20 Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | 25 Cys | Val | Ala | Ser | Gly | 30 Phe | Thr | Phe |
Ser | Ser | 35 His | Gly | Met | Hle | Trp | 40 Val | Arg | Gin | Ala | Pro | 45 Gly | Lys | Gly | Leu |
Glu | 50 Trp | val | Ala | Val | Ile | 55 Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | 60 Asn | Lys | Tyr | Tyr | Ala |
65 Asp | Ser | Val | Lys | Gly | 70 Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | 75 Arg | Asp | Asn | Ser | Lys | 80 Asn |
Thr | Leu | Phe | Leu | 85 Gin | Met | Asn | Ser | Leu | 90 Arg | Ala | Glu | Asp | Thr | 95 Ala | Val |
Tyr | Tyr | Cys | 100 Ala | Arg | Gly Gly | His | 105 Phe | Gly | Pro | Phe | Asp | 110 Tyr | Trp | Gly | |
Gin | Gly | 115 Thr | Leu | Val | Thr | Val | 120 Ser | Ser | Ala | Ser | Thr | 125 Lys | Gly | Pro | Ser |
130 135 140
Val 145 | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro 150 | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr 155 | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala 160 |
Ala | Leu | Gly | Cys | Leu 165 | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe 170 | Pro | Glu | Pro | Val | Thr 175 | Val |
Ser | Trp | Asn | Ser 180 | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser 185 | Gly | Val | His | Thr | Phe 190 | Pro | Ala |
Val | Leu | Gin 195 | Ser | Ser | Gly | Leu | Tyr 200 | Ser | Leu | Ser | Ser | Val 205 | Val | Thr | Val |
Pro | Ser 210 | Ser | Asn | Phe | Gly | Thr 215 | Gin | Thr | Tyr | Thr | Cys 220 | Asn | Val | Asp | His |
Lys 225 | Pro | Ser | Asn | Thr | Lys 230 | Val | Asp | Lys | Thr | Val 235 | Olu | Arg | Lys | Cys | cys 240 |
Val | Glu | Cys | Pro | Pro 245 | Cys | Pro | Ala | Pro | Pro 250 | Val | Ala | Gly | Pro | Ser 255 | Val |
Phe | Leu | Phe | Pro 260 | Pro | Lys | Pro | Lys | Asp 265 | Thr | Leu | Met | Ile | Ser 270 | Arg | Thr |
Pro | Glu | Val 275 | Thr | Cys | Val | Val | val 280 | Asp | Val | Ser | His | Glu 285 | Asp | Pro | Glu |
Val | Gin 290 | Phe | Asn | Trp | Tyr | Val 295 | Asp | Gly | Val | Glu | Val 300 | His | Asn | Ala | Lys |
Thr 305 | Lys | Pro | Arg | Glu | Glu 310 | Gin | Phe | Asn | Ser | Thr 315 | Phe | Arg | Val | Val | Ser 320 |
Val | Leu | Thr | Val | Val 325 | His | Gin | Asp | Trp | Leu 330 | Asn. | Gly | Lys | Glu | Tyr 335 | Lys |
Cys | Lys | Val | Ser 340 | Asn | Lys | Gly | Leu | Pro 345 | Ala | Pro | Ile | Glu | Lys 350 | Thr | Ile |
Ser | Lys | Thr 355 | Lys | Gly | Gin | Pro | Arg 360 | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr 365 | Thr | Leu | Pro |
Pro | Ser 370 | Arg | Glu | Glu | Met | Thr 375 | Lys | Asn | Gin | Val | Ser 380 | Leu | Thr | Cys | Leu |
Val 385 | Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro 390 | Ser | Asp | Ile | Ala | Val 395 | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn 400 |
Gly | Gin | Pro | Glu | Asn 405 | Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr 410 | Pro | Pro | Met | Leu | Asp 415 | Ser |
Asp | Gly | Ser | Phe 420 | Phe | Leu | Tyr | Ser | Lys 425 | Leu | Thr | Val | Asp | Lys 430 | Ser | Arg |
Trp | Gin | Gin 435 | Gly | Asn | Val | Phe | Ser 440 | Cys | Ser | Val | Met | His 445 | Glu | Ala | Leu |
His | Asn 450 | His | Tyr | Thr | Gin | Lys 455 | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser 460 | Pro | Gly | Lys |
-46CZ 302706 B6 <210>2 <211> 464 <212> PRT <213> Human <40O> 2
Met 1 | Glu | Phe | Gly | Leu 5 | Ser | Trp | Val | Phe | Leu 10 | Val | Ala | Leu | Leu | Arg 15 | Oly |
Val | Gin | Cys | Gin 20 | Val | Gin | Leu | Val | Glu 25 | Ser | Gly Gly | Gly | Val 30 | Val | Gin | |
Pro | Gly | Arg 35 | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser 40 | Cys | Thr | Ala | Ser | Gly 45 | Phe | Thr | Phe |
Ser | Asn 50 | Tyr | Gly | Met | His | Trp 55 | Val | Arg | Gin | Ala | Pro 60 | Gly | Lys | Gly | Leu |
Glu 65 | Trp | Val | Ala | Val | Ile 70 | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser 75 | Asn | Lys | His | Tyr | Gly 80 |
Asp | Ser | Val | Lys | Gly 85 | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser 90 | Ser | Asp | Asn | Ser | Lys 95 | Asn |
Thr | Leu | Tyr | Leu 100 | Gin | Met | Asn | Ser | Leu 105 | Arg | Ala | Glu | Asp | Thr 110 | Ala | Val |
Tyr | Tyr | Cys 115 | Ala | Arg | Gly | Glu | Arg 120 | Leu | Gly | Ser | Tyr | Phe 125 | Asp | Tyr | Trp |
Gly | Gin 130 | Gly | Thr | Leu | Val | Thr 135 | Val | Ser | Ser | Ala | Ser 140 | Thr | Lys | Gly | Pro |
Ser 145 | Val | Phe | Pro | Leu | Ala 150 | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser 155 | Thr | Ser- | Glu | Ser | Thr 160 |
Ala | Ala | Leu | Gly | Cys 165 | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr 170 | Phe | Pro | Glu | Pro | Val 175 | Thr |
Val | Ser | Trp | Asn 180 | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr 185 | Ser | Gly | Val | His | Thr 190 | Phe | Pro |
Ala | Val | Leu | Gin | Ser | Ser | Gly | Leu | Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser | val | Val | Thr |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Val | Pro 210 | Ser | Ser | Asn | Phe | Gly 215 | Thr | Gin | Thr | Tyr | Thr 220 | Cys | Asn | Val | Asp |
His 225 | Lys | Pro | Ser | Asn | Thr 230 | Lys | Val | Asp | Lys | Thr 235 | Val | Glu | Arg | Lys | Cys 240 |
Cys | Val | Glu | Cys | Pro 245 | Pro | Cys | Pro | Ala | Pro 250 | Pro | Val | Ala | Gly | Pro 255 | Ser |
Val | Phe | Leu | Phe 260 | Pro | Pro | Lys | Pro | Lys 265 | Asp | Thr | Leu | Met | Ile 270 | Ser | Arg |
Thr | Pro | Glu 275 | Val | Thr | Cys | Val | Val 280 | Val | Asp | Val | Ser | His 285 | Glu | Asp | Pro |
Glu | Val 290 | Gin | Phe | Asn | Trp | Tyr 295 | Val | Asp | Gly | Val | Glu 300 | Val | His | Asn | Ala |
Lys 305 | Thr | Lys | Pro | Arg | Glu 310 | Glu | Gin | Phe | Asn | Ser 315 | Thr | Phe | Arg | Val | Val 320 |
Ser | Val | Leu | Thr | Val 325 | Val | His | Gin | Asp | Trp 330 | Leu | Asn | Gly Lys | Glu 335 | Tyr | |
Lys | Cys | Lys | Val 340 | Ser | Asn | Lys | Gly | Leu 345 | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu 350 | Lys | Thr |
Ile | Ser | Lys 355 | Thr | Lys | Gly | Gin | Pro 360 | Arg | Glu | Pro | Gin | Val 365 | Tyr | Thr | Leu |
Pro | Pro 370 | Ser | Arg | Glu | Glu | Met 375 | Thr | Lys | Asn | Gin | Val 380 | Ser | Leu | Thr | Cys |
Leu 385 | Val | Lys | Gly | Phe | Tyr 390 | Pro | Ser | Asp | Ile | Ala 395 | Val | Glu | Trp | Glu | Ser 400 |
Asn | Gly | Gin | Pro | Glu 405 | Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr 410 | Thr | Pro | Pro | Met | Leu 415 | Asp |
Ser | Asp | Gly | Ser 420 | Phe | Phe | Leu | Tyr | Ser 425 | Lys | Leu | Thr | Val | Asp 430 | Lys | Ser |
Arg | Trp | Gin 435 | Gin | Gly | Asn | Val | Phe 440 | Ser | Cys | Ser | Val | Met 445 | His | Glu | Ala |
Leu | His 450 | Asn | His | Tyr | Thr | Gin 455 | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu 460 | Ser | Pro | Gly | Lys |
-47 CZ 302706 Βή <2 1 ()> 3 <21 1> 163 <12> PRT <213> Human <40Q> 3
Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | Gly | Phe | Thr | Phe |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | Ser | His | Gly | lle | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Glu | Trp | Val | Ala | Val | lle | Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | Asn | Lys | Asp | Tyr | Ala |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | lle | Ser | Arg | Asp | Asn | Ser | Lys | Lys |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu | Asp | Thr | Ala | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Val | Ala | Pro | Leu | Gly | Pro | Leu | Asp | Tyr | Trp | Gly |
35 | 90 | 95 | |||||||||||||
Gin | Gly | Thr | Leu | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu | Pro | Val | Thr | Val |
130 | 135 | 14 0 | |||||||||||||
Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His | Thr | Phe | Pro | Ala |
14 5 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Val | Leu | Gin |
<21O> 4 io <21 1 > 463 <212> PRT <213> Human <400> 4
Met 1 | Glu | Phe | Gly | Leu 5 | Ser | Trp | Val | Phe | Leu 10 | Val | Ala | Leu | Leu | Arg 15 | Gly |
Val | Gin | Cys | Gin 20 | Val | Gin | Leu | Val | Glu 25 | Ser | Gly Gly | Gly | Val 30 | Val | Glu | |
Pro | Gly | Arg 35 | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser 40 | Cys | Thr | Ala | Ser | Gly 45 | Phe | Thr | Phe |
Ser | Ser 50 | Tyr | Gly | Met | His | Trp 55 | Val | Arg | Gin | Ala | Pro 60 | Gly | Lys | Gly | Leu |
Glu 65 | Trp | Val | Ala | Val | lle 70 | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser 75 | Asn | Lys | His | Tyr | Ala 80 |
Asp | Ser | Ala | Lys | Gly 85 | Arg | Phe | Thr | lle | Ser 90 | Arg | Asp | Asn | Ser | Lys 95 | Asn |
Thr | Leu | Tyr | Leu 100 | Gin | Met | Asn | Ser | Leu 105 | Arg | Ala | Glu | Asp | Thr 110 | Ala | val |
Tyr | Tyr | Cys 115 | Ala | Arg | Ala | Gly | Leu 120 | Leu | Gly | Tyr | Phe | Asp 125 | Tyr | Trp | Gly |
Gin | Gly 130 | Thr | Leu | Val | Thr | Val 135 | Ser | Ser | Ala | Ser | Thr 140 | Lys | Gly | Pro | Ser |
Val 145 | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro 150 | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr 155 | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala 160 |
Ala | Leu | Gly | Cys | Leu 165 | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe 170 | Pro | Glu | Pro | Val | Thr 17S | Val |
Ser | Trp | Asn | Ser 180 | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser 185 | Gly | Val | His | Thr | Phe 190 | Pro | Ala |
Val | Leu | Gin 195 | Ser | Ser | Gly | Leu | Tyr 200 | Ser | Leu | Ser | Ser | Val 205 | Val | Thr | Val |
Pro | Ser | Ser | Asn | Phe | Gly | Thr | Gin | Thr | Tyr | Thr | Cys | Asn | Val | Asp | His |
210 215 220
Lys | Pro | Ser | Asn | Thr | Lys | Val | Asp | Lys | Thr | Val | Glu | Arg | Lys | Cys | Cys |
225 Val | Glu | Cys | Pro | Pro | 230 Cys | Pro | Ala | Pro | Pro | 235 Val | Ala | Gly | Pro | Ser | 240 Val |
Phe | Leu | Phe | Pro | 245 Pro | Lys | Pro | Lys | Asp | 250 Thr | Leu | Met | Ile | Ser | 255 Arg | Thr |
Pro | Glu | Val | 260 Thr | Cys | Val | Val | Val | 265 Asp | Val | Ser | His | Glu | 270 Asp | Pro | Glu |
val | Gin | 275 Phe | Asn | Trp | Tyr | Val | 280 Asp | Gly | Val | Glu | Val | 285 His | Asn | Ala | Lys |
Thr | 290 Lys | Pro | Arg | Glu | Glu | 2 95 Gin | Phe | Asn | Ser | Thr | 3 00 Phe | Arg | Val | Val | Ser |
305 Val | Leu | Thr | Val | Val | 310 His | Gin | Asp | Trp | Leu | 315 Asn | Gly | Lys | Glu | Tyr | 320 Lys |
Cys | Lys | Val | Ser | 325 Asn | Lys | Gly | Leu | Pro | 330 Ala | Pro | Ile | Glu | Lys | 335 Thr | Ile |
Ser | Lys | Thr | 340 Lys | Gly | Gin | Pro | Arg | 345 Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | 350 Thr | Leu | Pro |
Pro | ser | 35S Arg | Glu | Glu | Met | Thr | 360 Lys | Asn | Gin | Val | Ser | 365 Leu | Thr | Cys | Leu |
Val | 370 Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro | 375 Ser | Asp | Ile | Ala | Val | 380 Glu | Trp | Glu | Ser | Asn |
385 Gly | Gin | Pro | Glu | Asn | 390 Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr | 395 Pro | Pro | Met | Leu | Asp | 400 Ser |
Asp | Gly | Ser | Phe | 405 Phe | Leu | Tyr | Ser | Lys | 410 Leu | Thr | val | Asp | Lys | 415 Ser | Arg |
Trp | Gin | Gin | 420 Gly | Asn | Val | Phe | Ser | 425 Cys | Ser | Val | Met | His | 430 Glu | Ala | Leu |
His | Asn | 435 His | Tyr | Thr | Gin | Lys | 440 Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | 445 Pro | Gly | Lys |
450 455 460 <210>5 S <2ll>169 <212> PRT <213> Human
<400> | 5 | ||||||||||||||
Gly | Val | Val | Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | cys | Ala | Ala | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Gly | Phe | Thr | phe | Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | His | Trp | val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Tyr | Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ser | Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Gly | Ala | Arg | Ile | Ile | Thr | Pro |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Cys | Met | Asp | Val | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Thr | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Ser | Olu | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Pro | Glu | Pro | Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Val | His | Thr | Phe | Pro | Ala | Val | Leu | Gin | |||||||
165 |
<210> 6 <211> 167 <212> PRT
CZ 302706 R6 <213> Human <400> 6
Gly | Val | Val | Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Val | Ala | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Gly | Phe | Ile | Phe | Ser | Ser | His | Gly | Ile | His | Trp | val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Asp | Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ser | Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | eo | ||||||||||||
Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Val | Ala | Pro | Leu | Gly | Pro | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Asp | Tyr | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala | Ser | Thr |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Lys | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr | Ser |
115 | 120 | 12S | |||||||||||||
Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Pro | Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Thr | Phe | Pro | Ala | Val | Leu | Gin |
165 <21 ()> 7 <211> 172 <212> PRT <213> Human <400> 7
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin Ile Leu Ser Leu Thr Cys 15 10 15
Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly His Tyr Trp Ser Trp 20 25 30
Ile Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr 35 40 45
Tyr Ile Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr
55 60
Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser
70 75 80
Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Gly
90 95
Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin
165 170 <210> 8 <211> 153 <212>PRT <213> Human
-50CZ 302706 B6 <400> 8
Pro Gly | Arg Ser Leu Arg Leu | Ser | Cys Ala Ala Ser | Gly Phe Thr | Phe | ||||||||||
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | Ser | His | Gly | Ile | Hle | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | Asn | Lys | Asp | Tyr | Ala |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp | Asn | Ser | Lys | Asn |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu | Asp | Thr | Ala | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | val | Ala | Pro | Leu | Gly | Pro | Leu | Asp | Tyr | Trp | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Gin | Gly | Thr | Leu | val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu | Pro | Val | Thr | Val |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser |
145 150 <210>9 <211> 167 s <212>PRT <213> Human <220>
Gly | <400> Val Val | 9 Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | |
1 Gly | Phe | Thr | Phe | 5 Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | 10 His | Trp | Val | Arg | Gin | 15 Ala | Pro |
Gly | Lys | Gly | 20 Leu | Glu | Trp | Val | Ala | 25 Val | Ile | Trp | Tyr Asp | 30 Gly | Ser | Asn | |
Lys | Tyr | 35 Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | 40 Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | 45 Ile | Ser | Arg | Asp |
Asn | 50 Ser | Lys | Asn | Thr | Leu | 55 Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | 60 Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 Asp | Thr | Ala | val | Tyr | 70 Tyr | Cys | Ala | Arg | Asp | 75 Pro | Arg | Gly | Ala | Thr | 80 Leu |
Tyr | Tyr | Tyr | Tyr | 85 Tyr | Arg | Xaa | Asp | Val | 90 Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | 95 Thr | Val |
Thr | Val | Ser | 100 Ser | Ala | Ser | Thr | Lys | 105 Gly | Pro | Ser | Val | Phe | 110 Pro | Leu | Ala |
Pro | Cys | 115 Ser | Arg | Ser | Thr | Ser | 120 Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | 125 Leu | Gly | Cys | Leu |
Val | 130 Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | 135 GlU | Pro | Val | Thr | Val | 140 Ser | Trp | Asn | Ser | Gly |
145 Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | 150 Val | His | 155 | 160 |
io <210> 10 <211> 151 <212> PRT <213>Human
Gly | <400> Val Val | 10 Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | |
1 Gly | Phe | Thr | Phe | 5 Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | 10 His | Trp | Val | Arg | Gin | 15 Ala | Pro |
Gly | Lys | Gly | 20 Leu | Glu | Trp | Val | Ala | 25 val | Ile | Trp | Tyr | Asp | 30 Gly | Ser | His |
Lys | Tyr | 35 Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | 40 Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | 45 Ile | Ser | Arg | Asp |
Asn | 50 Ser | Lys | Asn | Thr | Leu | 55 Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | 60 Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 Asp | Thr | Ala | val | Tyr | 70 Tyr | Cys | Ala | Arg | Gly | 75 Ala | Val | Val | Val | Pro | 80 Ala |
Ala | Met | Asp | Val | 85 Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | 90 Thr | Val | Thr | Val | Ser | 95 Ser | Ala |
Ser | Thr | Lys | 100 Gly | Pro | Ser | Val | Phe | 105 Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | 110 Ser | Arg | Ser |
Thr | Ser | 115 Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | 120 Leu | Gly | Cys | Leu | Val | 125 Lys | Asp | Tyr | Phe |
Pro | 130 Glu | Pro | Val | Thr | Val | 135 Ser | 140 |
145 150 <210> 11
<211> 146 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||||
<220> <400> Val Val Gin | 11 Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | Gly | ||
1 Phe | Thr | Phe | Ser | S Ser | Xaa | Gly | Met | His | 10 Trp | Val | Arg | Gin | Ala | 15 Pro | Gly |
Lys | Gly | Leu | 20 Glu | Trp | val | Ala | Val | 25 Ile | Trp | Ser | Asp | Gly | 30 Ser | His | Lys |
Tyr | Tyr | 35 Ala | Asp | Ser | Val | Lys | 40 Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | 45 Ser | Arg | Asp | Asn |
Ser | 50 Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | 55 Leu | Gin | Met | Asn | Ser | 60 Leu | Arg | Ala | Glu | Asp |
65 Thr | Ala | Val | Tyr | 70 Tyr Cys | Ala | Arg | Gly | Thr | 75 Met | Ile | Val | Val | Gly | 80 Thr | |
Leu | Asp | Tyr | Trp | 85 Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | 90 Val | Thr | Val | Ser | Ser | 95 Ala | Ser |
Thr | Lys | Gly | 100 Pro | Ser | Val | Phe | Pro | 105 Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | 110 Arg | Ser | Thr |
Ser | Glu | 115 Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | 120 Gly | Cys | Leu | Val | Lys | 125 Asp | Tyr | Phe | Pro |
130 135 140
Glu Pro 10 145 <210> 12 <211> 174 <212> PRT
J5 <213> Human <400> 12
Ser Gly Gly Gly Val | val | Gin Pro Gly Arg Ser | Leu | Arg Leu | Ser Cys |
1 5 | 10 | 15 | |||
Ala Ala Ser Gly Phe | Thr | Phe Ser Ser Tyr Gly | Val | His Trp | Val Arg |
20 | 25 | 30 | |||
Gin Ala Pro Gly Lys | Gly | Leu Glu Trp Val Ala | Val | Ile Trp | Tyr Asp |
35 | 40 | 45 | |||
Gly Ser Asn Lys Tyr | Tyr | Ala Asp Ser Val Lys | Gly | Arg Phe | Thr Ile |
50 | 55 | 60 | |||
Ser Arg Aep Asn Ser | Lys | Ser Thr Leu Tyr Leu | Gin | Met Asn | Ser Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||
Arg Ala Glu Asp Thr | Ala | Val Tyr Tyr Cys Ala | Arg Aep Ser | Tyr Tyr | |
85 | 90 | 95 | |||
Asp Phe Trp Ser Gly Arg | Gly Gly Met Asp Val | Trp | Gly Gin | Gly Thr | |
100 | 105 | 110 | |||
Thr Val Thr Val Ser | Ser | Ala Ser Thr Lys Gly | Pro | Ser Val | Phe Pro |
115 | 120 | 125 | |||
Leu Ala Pro Cys Ser | Arg | Ser Thr Ser Glu Ser | Thr | Ala Ala | Leu Gly |
130 | 135 | 140 | |||
Cys Leu Val Lys Asp | Tyr | Phe Pro Glu Pro Val | Thr | Val Ser | Trp Asn |
145 | 150 | 155 | 160 | ||
Ser Gly Ala Leu Thr | Ser | Gly Val His Thr Phe | Pro | Ala Val |
165 170 <210> 13 <211> 163 <212> PRT <213> Human
Val | <400> Gin Pro | 13 Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | Gly | Phe | |
1 Thr | Phe | Ser | Asn | 5 Tyr | Ala | Met | His | Trp | 10 Val | Arg | Gin | Ala | Pro | 15 Gly | Lys |
Gly | Leu | Glu | 20 Trp | Val | Val | Val | Ile | 25 Trp | His | Asp | Gly | Asn | 30 Asn | Lys | Tyr |
Tyr | Ala | 35 Glu | Ser | Val | Lys | Gly | 40 Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | 45 Arg | Asp | Asn | Ser |
Lys | 50 Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | 55 Gin | Met | Asn | Ser | Leu | 60 Arg | Ala | Glu | Asp | Thr |
65 Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | 70 Ala | Arg | Asp | Gin | Gly | 75 Thr | Gly | Trp | Tyr | Gly | 80 Gly |
Phe | Asp | Phe | Trp | 85 Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | 90 Val | Thr | Val | Ser | Ser | 95 Ala | Ser |
Thr | Lys | Gly | 100 Pro | Ser | Val | Phe | Pro | 105 Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | 110 Arg | Ser | Thr |
Ser | Glu | 115 Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | 12 0 Gly | Cys | Leu | val | Lys | 125 Asp | Tyr | Phe | Pro |
Glu | 130 Pro | Val | Thr | val | Ser | 135 Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | 14 0 Leu | Thr | Ser | Gly | Val |
145 | 150 | 155 | 160 |
His Thr Phe <210> 14 <211> 235 <212> PRT <213> Human
CZ, 302706 B6
Met | <400> Glu Thr | 14 Pro | Ala | □ln | Leu | Leu | Phe | Leu | Leu | Leu | Leu | Trp | Leu | Pro | |
1 ASp | Thr | Thr | Gly | 5 Glu | Ile | Val | Leu | Thr | 10 Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | 15 Leu | Ser |
Leu | Ser | Pro | 20 Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | 25 Leu | Ser | Cys | Arg | Ala | 30 Ser | Gin | Ser |
Ile | Ser | 35 Ser | Ser | Phe | Leu | Ala | 40 Trp | Tyr | Gin | Gin | Arg | 45 Pro | Gly | Gin | Ala |
pro | 50 Arg | Leu | Leu | Ile | Tyr | 55 Gly | Ala | Ser | Ser | Arg | 60 Ala | Thr | Gly | Ile | Pro |
65 Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | 70 Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | 75 Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | 80 Ile |
Ser | Arg | Leu | Glu | 05 Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | 90 Val | Tyr | Tyr | Cys | Gin | 95 Gin | Tyr |
Gly | Thr | Ser | 100 Pro | Trp | Thr | Phe | Gly | 105 Gin | Gly | Thr | Lys | Val | 110 Glu | Ile | Lys |
Arg | Thr | 115 Val | Ala | Ala | Pro | Ser | 120 Val | Phe | Ile | Phe | Pro | 125 Pro | Ser | Asp | Glu |
Gin | 130 Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | 135 Ala | Ser | val | Val | Cys | 140 Leu | Leu | Asn | Asn | Phe |
145 Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | ISO Lys | Val | Gin | Trp | Lys | 155 Val | Asp | Asn | Ala | Leu | 160 Gin |
Ser | Gly | Asn | ser | 165 Gin | Glu | Ser | Val | Thr | 170 Glu | Gin | Asp | Ser | Lya | 175 Asp | Ser |
Thr | Tyr | Ser | íao Leu | Ser | Ser | Thr | Leu | 185 Thr | Leu | Ser | Lys | Ala | 190 Asp | Tyr | Glu |
Lys | His | 195 Lys | Val | Tyr | Ala | Cys | 200 Glu | Val | Thr | His | Gin | 205 Gly | Leu | Ser | Ser |
Pro 225 | 210 Val | Thr | Lys | Ser | Phe 230 | 215 Asn | Arg | Gly | Glu | Cys 235 | 220 |
<-2 ΙΟ 15 <21í> 233 <212> PRT <213> Human
<400> | 15 | ||||||
Met 1 | Glu | Thr | Pro | Ala 5 | Gin | Leu | Leu |
Asp | Thr | Thr | Gly 20 | Glu | Ile | Val | Leu |
Leu | Ser | Pro 35 | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr 40 |
Ser | Ser 50 | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr 55 | Gin |
Leu 65 | Leu | Ile | Tyr | Gly | Ala 70 | Ser | ser |
Phe | Ser | Gly | Ser | Gly 85 | Ser | Gly | Thr |
Leu | Glu | Pro | Glu 100 | Asp | Phe | Ala | Val |
Ser | Pro | Phe 115 | Thr | Phe | Gly | Gly Gly 120 | |
Val | Ala 130 | Ala | Pro | Ser | Val | Phe 135 | Ile |
Lys 145 | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser 150 | Val | Val |
Arg | Glu | Ala | Lys | Val 165 | Gin | Trp | Lys |
Asn | Ser | Gin | Glu 180 | Ser | Val | Thr | Glu |
Ser | Leu | Ser 195 | Ser | Thr | Leu | Thr | Leu 200 |
Lys | Val 210 | Tyr | Ala | Cys | Glu | Val 215 | Thr |
Thr 225 | Lys | Ser | Phe | Asn | Arg 230 | Gly | Glu |
Phe | Leu 10 | Leu | Leu | Leu | Trp | Leu 15 | Pro |
Thr 25 | Gin | Ser | Pro | Gly | Thr 30 | Leu | Ser |
Leu | Ser | Cys | Arg | Thr 45 | Ser | Val | Ser |
Gin | Lys | Pro | Gly Gin 60 | Ala | Pro | Arg | |
Arg | Ala | Thr 75 | Gly | Ile | Pro | Asp | Arg 80 |
Asp | Phe 90 | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser 95 | Arg |
Tyr 105 | Tyr | Cys | □ln | Gin | Tyr 110 | Gly | ile |
Thr | Lys | Val | Glu | Ile 125 | Lys | Arg | Thr |
Phe | Pro | Pro | Ser 140 | Asp | Glu | Gin | Leu |
Cys | Leu | Leu 155 | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro 160 |
Val | Asp 170 | Asn | Ala | Leu | Gin | Ser 175 | Gly |
Gin 185 | Asp | Ser | Lys | Asp | Ser 190 | Thr | Tyr |
Ser | Lys | Ala | Asp | Tyr 205 | Glu | Lys | His |
His Cys | Gin | Gly | Leu 220 | Ser | Ser | Pro | Val |
-54CZ 302706 Bó <210 16 <211> 139 <212> PRT <213> Human <4Q0> 16
Gly Thr Leu Ser 1 | Leu 5 | Ser Pro Gly | Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg | ||||||||||||
10 | 15 | ||||||||||||||
Ala | Ser | Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gly | Gin | Ala | Pro | Arg | Leu | Leu | Ile | Tyr | Gly | Ala | ser | Ser | Arg | Ala | Thr |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Gly | Tle | Pro | Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Leu | Thr | Ile | Ser | Arg | Leu | Glu | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Val | Tyr | Tyr Cys | |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Gin | Tyr | Gly Arg | Ser | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly | Thr | Lys | Val | |
05 | 90 | 95 | |||||||||||||
Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Xle | Phe | Pro | Pro |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | val | Gin | |||||
130 | 135 |
<210> 17 io <211> 234 <212> PRT <213> Human
<400> | 17 | ||||||||||||||
Met | Glu | Thr | Pro | Ala | Gin | Leu | Leu | Phe | Leu | Leu | Leu | Leu | Trp | Leu | Pro |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
ASp | Thr | Thr | Gly | Glu | Ile | Val | Leu | Thr | Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | Leu | Ser | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
val | Ser | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Arg | Pro | Leu | Ile | Tyr | Gly | Val | Ser | Ser | Arg | Ala | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp |
65 | 70 | 75 | 00 |
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 05 90 95
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly 100 105 110
Ile Ser Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg 11S 120 125
Thr | Val 13 0 | Ala | Ala Pro Ser | Val Phe 135 | Ile Phe Pro Pro 140 | Ser Asp | Glu Gin | ||||||||
Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | Trp | Lys | Val | Asp | Asn | Ala | Leu | Gin | Ser |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gly | Asn | Ser | Gin | Glu | Ser | Val | Thr | Glu | Gin | Asp | Ser | Lys | Asp | Ser | Thr |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser | Thr | Leu | Thr | Leu | Ser | Lys | Ala | Asp | Tyr | Glu | Lys |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
His | Lys | Val | Tyr | Ala | Cys | Glu | Val | Thr | His | Gin | Gly | Leu | Ser | Ser | Pro |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Val | Thr | Lys | Ser | Phe | Asn | Arg | Gly | Glu | Cys | ||||||
225 | 230 |
- 55 CZ 302706 B6 <210> 18 <21l> 152 <212>PRT <213> Human <400> 18
Gin | Ser | Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr | Ile |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Thr | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Ile | Asn | Thr | Tyr | Leu | Ile | Trp | Tyr | Gin |
20 | 2S | 30 | |||||||||||||
Gin | Lys | Pro | Gly | Lya | Ala | Pro | Asn | Phe | Leu | Ile | Ser | Ala | Thr | Ser | Ile |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Leu | Gin | Ser | Gly | Val | Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Asn | Ser | Leu | His | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Thr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Ser | Tyr | Ser | Thr | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Thr | Lys | Val | Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Phe | Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | Trp | Lys |
130 | 135 | 14 0 | |||||||||||||
Val | Asp | Asn | Ala | Leu | Gin | Ser | Gly |
145 ISO <210> 19 <211> 142 to <-212>HRT <213> Human
<400> | 19 | |||||||||||||
Ser Pro | Gly | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | Leu | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Cys Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Ile | Ser | Ser | Asn | Phe | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||
Gin Lys | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg | Leu | Leu | Ile | Tyr | Arg | Pro | Ser | Ser |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||
Arg Ala | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp | Ser | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||
Asp Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Arg | Leu | Glu | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
Tyr Tyr | Cys | Gin | Gin | Tyr | Gly | Thr | Ser | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||
Thr Lys | Val | Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||
Phe Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | val |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||
Cys Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | ||
130 | 135 | 140 | ||||||||||||
<210> 20 | ||||||||||||||
<211> 155 | ||||||||||||||
<212> PRT | ||||||||||||||
<213> Human |
-56CZ 302706 B6
Ser | <400> Pro Asp | 20 Phe | Gin | Ser | Val | Thr | Pro | Lys | Glu | Lys | Val | Thr | Ile | Thr | |
1 Cys | Arg | Ala | Ser | 5 Gin | Ser | Ile | Gly | ser | 10 Ser | Leu | His | Trp | Tyr | 15 Gin | Gin |
Lys | Pro | Asp | 20 Gin | Ser | Pro | Lys | Leu | 25 Leu | Ile | Lys | Tyr | Ala | 30 Ser | Gin | Ser |
Phe | Ser | 35 Gly | Val | Pro | Ser | Arg | 40 Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | 45 Ser | Gly | Thr | Asp |
Phe | 50 Thr | Leu | Thr | Ile | Asn | 55 Ser | Leu | Glu | Ala | Glu | 60 Asp | Ala | Ala | Thr | Tyr |
65 Tyr | Cys | His | Gin | Ser | 70 Ser | Ser | Leu | Pro | Leu | 75 Thr | Phe | Gly Gly Gly | 80 Thr | ||
Lys | val | Glu | Xie | 85 Lys | Arg | Thr | Val | Ala | 90 Ala | Pro | Ser | Val | Phe | 95 Ile | Phe |
Pro | Pro | Ser | 100 Aep | Glu | Gin | Leu | Lye | 105 Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | 110 Val | val | Cys |
Leu | Leu | 115 Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | 120 Arg | Glu | Ala | Lys | Val | 125 Gin | Trp | Lys | Val |
Asp 145 | 130 Asn | Ala | Leu | Gin | Ser 150 | 135 Gly | Asn | Ser | Gin | Glu 155 | 140 |
<210> 21 <211> 146 <212> PRT <213> Human <400> 21
Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | cys | Arg | Ala 20 | Ser | Gin | Ser | Val | Ser 25 | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp 30 | Tyr | Gin |
Gin | Lys | Pro 35 | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg 40 | Leu | Leu | Ile | Tyr | Gly 45 | Ala | Ser | Ser |
Arg | Ala 50 | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp 55 | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser 60 | Gly | Ser | Gly | Thr |
Asp 65 | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile 70 | Ser | Arg | Leu | Glu | Pro 75 | Glu | Asp | Phe | Ala | Val 80 |
Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin 85 | Tyr | Gly | Arg | Ser | Pro 90 | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro 95 | Gly |
Thr | Lys | Val | Asp 100 | Ile | Lys | Arg | Thr | val 105 | Ala | Ala | Pro | Ser | Val 110 | Phe | Ile |
Phe | Pro | Pro 115 | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu 120 | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala 125 | Ser | Val | Val |
Cys | Leu 130 | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr 135 | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys 14 0 | Val | Gin | Trp | Lys |
Gly Gly 145 <210> 22 <211> 139 <212> PRT <213> Human
- 57CZ 302706 B6
<400> | 22 | ||||||||||||
Pro Ser Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr | Ile | Thr | Cys |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Arg Ala Ser | Gin | Ser | Ile | Asn | Ser | Tyr | Leu | Asp | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Pro Gly Lys | Ala | Pro | Lys | Leu | Leu | Ile | Tyr | Ala | Ala | Ser | Ser | Leu | Gin |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Ser Gly Val | Pro | Ser | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Thr Leu Thr | Ile | Ser | Ser | Leu | Gin | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Thr | Tyr | Tyr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Cys Gin Gin | Tyr | Tyr | Ser | Thr | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly | Thr | Lys |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Val Glu Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe | Pro |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Pro Ser Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Leu Asn Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | |||||
130 | 135 | ||||||||||||
<210> 23 | |||||||||||||
<21 1> 134 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 23 | ||||||||||||
Thr Gin Ser | Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Ile Thr Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Asn | Ile | Ser | Arg | Tyr | Leu | Asn | Trp | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Gin Gin Lys | Pro | Gly | Lys | Ala | Pro | Lys | Phe | Leu | Ile | Tyr | Val | Ala | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Ile Leu Gin | Ser | Gly | Val | Pro | Ser | Gly | Phe | Ser | Ala | Ser | Gly | Ser | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Pro Asp Phe | Thr | Leu | Thr | ile | Ser | Ser | Leu | Gin | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Thr Tyr Tyr | Cys | Gin | Gin | Ser | Tyr | Ser | Thr | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Gly Thr Lys | Val | Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Ile Phe Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Val Cys Leu | Leu | Asn | Asn | ||||||||||
130 | |||||||||||||
<210> 24 | |||||||||||||
<211> 150 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human |
-58CZ 302706 B6
Thr | <400> Gin Ser | 24 Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | |
1 lle | Thr | Cys | Arg | 5 Ala | Ser | Gin | Ser |
Gin | Gin | Lys | 20 Pro | Gly | Lys | Ala | Pro |
Ser | Leu | 35 Gin | Gly Gly | Val | Pro | 40 Ser | |
lle | 50 Asp | Cys | Thr | Leu | Thr | 55 lle | Ser |
65 Thr | Tyr | Tyr | Cys | Gin | 70 Gin | Ser | Tyr |
Gly | Thr | Arg | Val | 85 Asp | lle | Glu | Arg |
lle | Phe | Pro | 100 Pro | Ser | Asp | Glu | Gin |
Val | cys | 115 Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | 120 Tyr |
Lys 145 | 130 Val | Asp | Asn | Ala | Tyr ISO | 135 |
Ala | Ser 10 | Val | Gly | Asp | Arg | Val 15 | Thr |
lle 25 | Cys | Asn | Tyr | Leu | Asn 30 | Trp | Tyr |
Arg | Val | Leu | lle | Tyr 45 | Ala | Ala | Ser |
Arg | Phe | Ser | Gly 60 | Ser | Gly | Ser | Gly |
Ser | Leu | Gin 75 | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala 80 |
lle | Thr 90 | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly 95 | Pro |
Thr 105 | val | Ala | Ala | Pro | Ser 110 | Val | Phe |
Leu | Lys | Ser | Gly | Thr 125 | Ala | Ser | Val |
Pro | Arg | Glu | Ala 140 | Lys | Val | Gin | Trp |
<210> 25 <211> 139 <212> PRT <213> Human
<400> | 2S | ||||||
Pro 1 | Leu | Ser | Leu | Pro 5 | Val | Thr | Leu |
Arg | Ser | Ser | Gin 20 | Ser | Leu | val | Tyr |
Trp | Phe | Gin 35 | Gin | Arg | Pro | Gly | Gin 40 |
Val | Ser 50 | Asn | Trp | Asp | Ser | Gly 55 | Val |
Ser 6S | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr 70 | Leu | Lys |
Val | Gly | Val | Tyr | Tyr 85 | Cys | Met | Gin |
Gly | Gin | Gly | Thr 100 | Lys | Val | Glu | lle |
Val | Phe | lle 115 | Phe | Pro | Pro | Ser | Asp 120 |
Ser | Val 130 | Val | Cys | Leu | Leu | Asn 135 | Asn |
Gly | Gin 10 | Pro | Ala | Ser | lle | Ser 15 | Cys |
Ser 25 | Asp | Gly | Asn | Thr | Tyr 30 | Leu | Asn |
Ser | Pro | Arg | Arg | Leu 45 | lle | Tyr | Lys |
Pro | Asp | Arg | Phe 60 | Ser | Gly | Ser | Gly |
lle | Ser | Arg 75 | Val | Glu | Ala | Glu | Asp 80 |
Gly | Ser 90 | His | Trp | Pro | Pro | Thr 95 | Phe |
Lys 105 | Arg | Thr | Val | Ala | Ala 110 | Pro | Ser |
Glu Phe | Gin Tyr | Leu Pro | Lys | Ser 125 | Gly | Thr | Ala |
io <210>26 <211> 133 <212> PRT <213> Human
- 59 CZ 302706 B6
Pro | <40Q> Gly Glu | 26 Pro | Ala | Ser | Ile | Ser | Cys | Arg | Ser | Ser | Gin | Ser | Leu | Leu | |
1 His | Ser | Asn | Gly | 5 Tyr | Asn | Tyr | Leu | Asp | 10 Trp | Tyr | Leu | Gin | Lys | 15 Pro | Gly |
Gin | Ser | Pro | 20 Gin | Leu | Leu | Ile | Tyr | 25 Leu | Gly | Ser | Asn | Arg | 30 Ala | Ser | Gly |
Val | Pro | 35 Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | 40 Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | 45 Asp | Phe | Thr | Leu |
Lys | 50 Leu | Ser | Arg | Val | Glu | 55 Ala | Glu | Asp | Val | Gly | 60 Val | Tyr | Tyr | Cys | Met |
65 | 70 | 75 | 80 |
Gin Ala Leu Gin Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
90 95
Ile | Lys | Arg Thr 100 | Val | Ala | Ala Pro Ser 105 | Val | Phe | Ile | Phe | Pro Pro Ser 110 | |||||
Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu | Leu | Asn |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | |||||||||||
130 |
<2IO> 27 <211> 364 <212> PRT <213> Human
Met | <400> Gly Val | 27 Leu | Leu | Thr | Gin | Arg | Thr | Leu | Leu | Ser | Leu | Val | Leu | Ala | |
1 Leu | Leu | Phe | Pro | 5 Ser | Met | Ala | Ser | Met | 10 Ala | Met | His | Val | Ala | 15 Gin | Pro |
Ala | Val | Val | 20 Leu | Ala | Ser | Ser | Arg | 25 Gly | Ile | Ala | Ser | Phe | 30 Val | Cys | Glu |
Tyr | Ala | 35 Ser | Pro | Gly | Lys | Ala | 40 Thr | Glu | Val | Arg | Val | 4S Thr | Val | Leu | Arg |
Gin | 50 Ala | Asp | Ser | Gin | Val | 55 Thr | Glu | Val | Cys | Ala | 60 Ala | Thr | Tyr | Met: | Met |
65 Gly | Asn | Glu | Leu | Thr | 70 Phe | Leu | Asp | Asp | Ser | 75 Ile | Cys | Thr | Gly | Thr | 80 Ser |
Ser | Gly | Asn | Gin | 85 Val | Asn | Leu | Thr | Ile | 90 Gin | Gly | Leu | Arg | Ala. | 95 Met | Asp |
Thr | Gly | Leu | 100 Tyr | Ile | Cys | Lys | Val | 105 Glu | Leu | Met | Tyr | Pro | 110 Pro | Pro | Tyr |
Tyr | Leu | 115 Gly | Ile | Gly | Asn | Gly | 120 Thr | Gin | Ile | Tyr | Val | 125 Ile | ASp | Pro | Glu |
Pro | 130 Cys | Pro | Asp | Ser | Asp | 135 Leu | Glu | Gly | Ala | Pro | 140 Ser | Val | Phe | Leu | Phe |
145 Pro | Pro | Lys | Pro | Lys | 150 Asp | Thr | Leu | Met | Ile | 155 Ser | Arg | Thr | Pro | Glu | 160 Val |
Thr | Cys | Val | Val | 165 Val | Asp | Val | Ser | His | 170 Glu | Asp | Pro | Glu | Val | 175 Lys | Phe |
Asn | Trp | Tyr | 160 Val | Asp Gly | Val | Glu | 185 Val | His | Asn | Ala | Lys | 190 Thr | Lys | Pro | |
Arg | Glu | 195 Glu | Gin | Tyr | Asn | Ser | 200 Thr | Tyr | Arg | Val | Val | 205 Ser | Val | Leu | Thr |
Val | 210 Leu | His | Gin | Asp | Trp | 215 Leu | Asn | Gly | Lys | Glu | 220 Tyr | Lys | Cys | Lys | Val |
225 Ser | Asn | Lys | Ala | Leu | 230 Pro | Thr | Pro | Ile | Glu | 235 Lys | Thr | Ile | Ser | Lys | 240 Ala |
- 60 CZ 302706 B6
245 | 250 | 255 | |||||||||||
Lys Gly Gin | Pro | Arg | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | Thr | Leu | Pro | Pro | Ser | Arg |
260 | 265 | 270 | |||||||||||
Asp Glu Leu | Thr | Lys | Asn | Gin | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu | Val | Lys | Gly |
275 | 280 | 285 | |||||||||||
Phe Tyr Pro | Ser | Asp | lle | Ala | Val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn | Gly | Gin | Pro |
290 | 295 | 300 | |||||||||||
Glu Asn Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Val | Leu | Asp | Ser | Aep | Gly | Ser |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||
Phe Phe Leu | Tyr | Ser | Lys | Leu | Thr | Val | Asp | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin | Gin |
325 | 330 | 335 | |||||||||||
Gly Asn Val | Phe | Ser | Cys | Ser | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His |
340 | 345 | 350 | |||||||||||
Tyr Thr Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | ||||
355 | 360 | ||||||||||||
<210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 28 | ||||||||||||
Met His Val | Ala | Gin | Pro | Ala | Val | Val | Leu | Ala | Ser | ||||
1 | s | 10 | |||||||||||
<210> 29 <211> 120 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 29 | ||||||||||||
Met His Val | Ala | Gin | Pro | Ala | Val | Val | Leu | Ala | Ser | Ser | Arg | Gly | lle |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Ala Ser Phe | Val | Cys | Glu | Tyr | Ala | Ser | Pro | Gly | Lys | Ala | Thr | Glu | Val |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Arg Val Thr | Val | Leu | Arg | Gin | Ala | Asp | Ser | Gin | Val | Thr | Glu | Val | Cys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Ala Ala Thr | Tyr | Met | Met | Gly | Asn | Glu | Leu | Thr | Phe | Leu | Asp | Asp | Ser |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
lle Cys Thr | Gly | Thr | Ser | Ser | Gly | Ásn | Gin | Val | Asn | Leu | Thr | lle | Gin |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Gly Leu Arg | Ala | Met | ASp | Thr | Gly | Leu | Tyr | lle | Cys | Lys | Val | Glu | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Met Tyr Pro | Pro | Pro | Tyr | Tyr | Leu | Gly | lle | Gly | Asn | Gly | Thr | Gin | lle |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Tyr Val lle | ASp | Pro | Glu | Pro | Cys | ||||||||
115 | 120 | ||||||||||||
<210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 30 | ||||||||||||
Met His val | Ala | Gin | Pro | Ala | Val | Val | Leu | Ala |
10 <210>31 <211> 89 <212> PRT
- 61 CZ 302706 B6
- 213> [ luman <400> 31
Gly | Val | Val | Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Gly | Phe | Thr | Phe | Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Tyr | Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | ser | Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg |
S <2IO>32
<21l> 169 <212> PRT <213> Human | ||||||||||||||
<400> | 32 | |||||||||||||
Gly | Val Val | Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Gly | Phe Thr | Phe | Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||
Gly | Lys Gly | Leu | Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser | Asn |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||
Lys | Tyr Tyr | Ala | Asp | ser | val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||
Asn | Ser Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
Asp | Thr Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Gly | Ala | Arg | Ile | Ile | Thr | Pro |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||
Cys | Met Asp | Val | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Thr | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||
Ser | Thr Lys | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||
Thr | Ser Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||
Pro | Glu Pro | Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
Val | His Thr | Phe | Pro | Ala | Val | Leu | Gin | |||||||
165 | ||||||||||||||
<210> 33 | ||||||||||||||
<211 | > 167 | |||||||||||||
<212> PRT <213> Human | ||||||||||||||
<400> | 33 | |||||||||||||
Gly | Val Val | Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Val | Ala | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Gly | Phe Thr | Phe | Ser | Ser | His | Gly | Met | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||
Gly | Lys Gly | Leu | Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | Asn |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||
Lys | Tyr Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||
Asn | Ser Lys | Asn | Thr | Leu | Phe | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
Asp | Thr Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Gly | Gly | His | Phe | Gly | Pro | Phe |
-62 CZ 302706 B6 ίο
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Asp Tyr Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | Val | Thr | Val | ser | Ser | Ala | Ser | Thr |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Lys Gly Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr | Ser |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Glu Ser Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Pro Val Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
Thr Phe Pro | Ala | Val | Leu | Gin | |||||||||
165 | |||||||||||||
<210> 34 | |||||||||||||
<211> 166 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 34 | ||||||||||||
Gly Val Val | Gin | Pro | Gly Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Thr | Ala | Ser | |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Gly Phe Thr | Phe | Ser | Asn | Tyr | Oly | Met | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Gly Lys Gly | Leu | Glu | Trp | val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Lys His Tyr | Gly | Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | ser | Ser | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Asn Ser Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
es | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Asp Thr Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Gly | Glu | Arg | Leu | Gly | Ser | Tyr |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Phe Asp Tyr | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala | Ser |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Thr Lys Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Ser Glu Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Glu Pro Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
His Thr Phe | Pro | Ala | Val | ||||||||||
165 | |||||||||||||
<210> 35 | |||||||||||||
<211> 167 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 35 | ||||||||||||
Gly Val Val | Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Val | Ala | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Gly Phe Ile | Phe | Ser | Ser | His | Gly | Ile | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Gly Lys Gly | Leu | Olu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Lys Asp Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Asn Ser Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Asp Thr Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Val | Ala | Pro | Leu | Gly | Pro | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Asp Tyr Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | Val | Thr | Val | Ser | Ser | Ala | Ser | Thr |
100 105 110
CZ, 302706 B6
Lys Gly Pro | Ser Val | Phe | Pro | Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser | |||||||||||
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Pro | Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Thr | Phe | Pro | Ala | Val | Leu | Gin |
165 <210> 36
<21l> 153 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||||
Pro | <400> Gly Arg | 36 Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | Gly | Phe | Thr | Phe | |
1 Ser | Ser | His | Gly | 5 Ile | His | Trp | Val | Arg | 10 Gin | Ala | Pro | Gly | Lys | 15 Gly | Leu |
Glu | Trp | Val | 20 Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | 25 Asp | Gly | Arg | Asn | Lys | 30 Asp | Tyr | Ala |
Asp | Ser | 35 Val | Lys | Gly | Arg | Phe | 40 Thr | Ile | Ser | Arg | Asp | 45 Asn | Ser | Lys | Asn |
Thr | 50 Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | 55 Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | 60 Glu | Asp | Thr | Ala | Val |
65 Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | 70 Val | Ala | Pro | Leu | Gly | 75 Pro | Leu | Asp | Tyr | Trp | 80 Gly |
Gin | Gly | Thr | Leu | 05 Val | Thr | Val | Ser | Ser | 90 Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | 95 Pro | Ser |
Val | Phe | Pro | 100 Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | 105 Arg | Ser | Thr | Ser | Glu | 110 Ser | Thr | Ala |
Al a | Leu | 115 Gly | Cys | Leu | Val | Lys | 120 Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu | 125 Pro | Val | Thr | Val |
130 135 140
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 145 150 io <21O>37 <211> 163 <212> PRT <213> Human
Pro | <400> Gly Arg | 37 Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | ser | Gly | Phe | Thr | Phe | |
1 Ser | Ser | His | Gly | 5 Ile | His | Trp | Val | Arg | 10 Gin | Ala | Pro | Gly | Lys | 15 Gly | Leu |
Glu | Trp | Val | 20 Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | 25 Asp | Gly | Arg | Asn | Lys | 30 Asp | Tyr | Ala |
Asp | Ser | 35 Val | Lys | Gly Arg | Phe | 40 Thr | Ile | Ser | Arg | Asp | 45 Αβπ | Ser | Lys | Lys | |
Thr | 50 Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | 55 Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | 60 Glu | Asp | Thr | Ala | Val |
65 Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | 70 Val | Ala | Pro | Leu | Gly | 75 Pro | Leu | Asp | Tyr | Trp | 80 Gly |
Gin | Gly | Thr | Leu | 85 Val | Thr | Val | Ser | Ser | 90 Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | 95 Pro | Ser |
Val | Phe | Pro | 100 Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | 105 Arg | Ser | Thr | Ser | Glu | 110 Ser | Thr | Ala |
Ala | Leu | 115 Gly | Cys | Leu | Val | Lys | 120 Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu | 125 Pro | Val | Thr | Val |
Ser | 130 Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | 135 Leu | Thr | Ser | Gly | Val | 140 His | Thr | Phe | Pro | Ala |
145 150 155 160
Val Leu Gin
-64CZ 302706 B6 <210> 38 <211> 138 <212>PRT <213>Human
Gly | <400> Gly Val | 38 Val | Olu | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Thr | Ala | |
1 Ser | Gly | Phe | Thr | 5 Phe | Ser | Ser | Tyr | Gly | 10 Met | His | Trp | Val | Arg | 15 Gin | Ala |
Pro | Gly | Lys | 20 Gly | Leu | Glu | Trp | Val | 25 Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | 30 Asp | Gly | Ser |
Asn | Lys | 35 His | Tyr | Ala | Asp | Ser | 40 Ala | Lys | Gly | Arg | Phe | 45 Thr | Ile | Ser | Arg |
Asp | 50 Asn | Ser | Lys | Asn | Thr | 55 Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | 60 Asn | Ser | Leu | Arg | Ala |
65 Glu | Asp | Thr | Ala | Val | 70 Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | 75 Ala | Gly | Leu | Leu | Gly | 80 Tyr |
Phe | Asp | Tyr | Trp | 85 Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | 90 Val | Thr | Val | Ser | Ser | 95 Ala | Ser |
Thr | Lys | Gly | 100 Pro | Ser | Val | Phe | Pro | 105 Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | 110 Arg | Ser | Thr |
Ser | Glu | 115 Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | 120 Gly | Cys | Leu | 125 |
130 135 <210> 39 io <211> 167 <212> PRT <213> Human <220>
Gly | <400> Val Val | 39 Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | |
1 Gly | Phe | Thr | Phe | 5 Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | 10 His | Trp | Val | Arg | Gin | 15 Ala | Pro |
Gly | Lys | Gly | 20 Leu | Glu | Trp | val | Ala | 25 Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | 30 Gly | Ser | Asn |
Lys | Tyr | 35 Tyr | Ala | Asp | Ser | val | 40 Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | 45 Ile | Ser | Arg | Asp |
Asn | 50 Ser | Lys | Asn | Thr | Leu | 55 Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | 60 Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | 70 Tyr | Cys | Ala | Arg | Asp | 75 Pro | Arg | Gly | Ala | Thr | 80 Leu |
Tyr | Tyr | Tyr | Tyr | 85 Tyr | Arg | Xaa | Asp | Val | 90 Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | 95 Thr | Val |
Thr | Val | Ser | 100 Ser | Ala | Ser | Thr | Lys | 105 Gly | Pro | Ser | Val | Phe | 110 Pro | Leu | Ala |
Pro | Cys | 115 Ser | Arg | Ser | Thr | Ser | 120 Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | 125 Leu | Gly | Cys | Leu |
val | 130 Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | 13 5 Glu | Pro | Val | Thr | Val | 140 Ser | Trp | Asn | Ser | Gly |
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 <210> 40 <211> 150 <212>PRT <213> Human
Gly | <400> Val val | 40 Gin | Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser | |
1 Gly | Phe | Thr | Phe | 5 Ser | Ser | Tyr | Gly | Met | 10 His | Trp | Val | Arg | Gin | 15 Ala | Pro |
Gly | Lys | Gly | 20 Leu | Glu | Trp | Val | Ala | 25 Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | 30 Gly | Ser | His |
Lys | Tyr | 35 Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | 40 Lys | Gly | Arg | Phe | Thr | 45 Ile | Ser | Arg | Asp |
Asn | 50 Ser | Lys | Asn | Thr | Leu | 55 Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | 60 Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | 70 Tyr | Cys | Ala | Arg | Gly | 75 Ala | Val | Val | Val | Pro | 80 Ala |
Ala | Met | Asp | Val | 85 Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | 90 Thr | Val | Thr | Val | Ser | 95 Ser | Ala |
Ser | Thr | Lys | 100 Gly | Pro | Ser | Val | Phe | 105 Pro | Leu | Ala | Pro | Cys | 110 Ser | Arg | Ser |
Thr | Ser | 115 Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | 120 Leu | Gly | Cys | Leu | Val | 125 Lys | Asp | Tyr | Phfe |
Pro 145 | 130 Glu | Pro | Val | Thr | Val 150 | 135 | 14 0 |
<2Ι0>41 <211> 146 <212>PRT <213> Human <400> 41
Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 15 10 15
Phe Thr Phe Ser Ser Cys Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 20 25 30
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser His Lys 35 40 45
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 50 55 60
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
70 75 80
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Thr Met Ile Val Val Gly Thr
90 95
Leu Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
100 105 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
115 120 125
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
130 135 140
Glu Pro 14S io <210> 42 <211> 171 <212> PRT <213> Human <400> 42
Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 1 s 10 15
-66 CZ 302706 B6
Gly | Phe Thr | Phe Ser 20 | Ser Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gin Ala Pro | ||||||||||||
25 | 30 | ||||||||||||||
Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Val | Ala | Val | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Tyr | Tyr | Ala | Asp | Ser | Val | Lys | Gly Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | Arg | Asp | |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ser | Lys | Ser | Thr | Leu | Tyr | Leu | Gin | Met | Asn | Ser | Leu | Arg | Ala | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Asp | Ser | Tyr | Tyr | Asp | Phe | Trp |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Ser | Gly | Arg | Gly | Gly | Met | Asp | Val | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Thr | Val | Thr |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | Ser | Ser | Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro |
115 | 120 | 12S | |||||||||||||
Cys | Ser | Arg | Ser | Thr | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu | Pro | Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His | Thr | Phe | Pro | Ala | Val |
165 170 <210> 43 <211> 163 <212> PRT <213> Human
Val | <400> Gin Pro | 43 Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | ser | Cys | Ala | Ala | Ser | Gly | Phe | |
1 Thr | Phe | Ser | Asn | 5 Tyr | Ala | Met | His | Trp | 10 Val | Arg | Gin | Ala | Pro | 15 Gly | Lys |
Gly | Leu | Glu | 20 Trp | Val | Val | Val | Ile | 25 Trp | His | Asp | Gly | Asn | 30 Asn | Lys | Tyr |
Tyr | Ala | 35 Glu | Ser | Val | Lys | Gly | 40 Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | 45 Arg | Asp | Asn | Ser |
Lys | 50 Asn | Thr | Leu | Tyr | Leu | 55 Gin | Met | Asn | Ser | Leu | 60 Arg | Ala | Glu | Asp | Thr |
65 Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | 70 Ala | Arg | Asp | Gin | Gly | 75 Thr | Gly | Trp | Tyr | Gly | 80 Gly |
Phe | Asp | Phe | Trp | 85 Gly | Gin | Gly | Thr | Leu | 90 Val | Thr | Val | Ser | Ser | 95 Ala | Ser |
Thr | Lys | Gly | 100 Pro | Ser | Val | Phe | Pro | 105 Leu | Ala | Pro | Cys | Ser | 110 Arg | Ser | Thr |
Ser | Glu | 115 ser | Thr | Ala | Ala | Leu | 120 Gly | Cys | Leu | Val | Lys | 125 Asp | Tyr | Phe | Pro |
Glu | 13 0 Pro | val | Thr | Val | Ser | 135 Trp | Asn | ser | Gly | Ala | 140 Leu | Thr | Ser | Gly | Val |
145 | 150 | 155 | 160 |
His Thr Phe
1tí <210> 44 <211> 76 <212> PRT <213> Human
<400> | 44 | ||||||||||||
Val | Ser | Gly | Gly | Ser | lle | Ser | Ser | Gly Gly | Tyr | Tyr Trp | Ser | Trp | Ile |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Arg | Gin | His | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu | Glu Trp | Ile | Gly Tyr | Ile | Tyr | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Ser | Gly | Ser | Thr | Tyr | Tyr | Asn | Pro | Ser Leu | Lys | Ser Arg | Val | Thr | Ile |
-67 15
40 45
Ser Val Asp | Thr | Ser | Lys | Asn | Gin | Phe | Ser | Leu | Lys | Leu | Ser | Ser | Val |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Thr Ala Ala | Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | ||||
65 | 70 | 75 | |||||||||||
<210> 45 | |||||||||||||
<211> 172 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 45 | ||||||||||||
Ser Gly Pro | Gly | Leu | Val | Lys | Pro | Ser | Gin | Ile | Leu | Ser | Leu | Thr | Cys |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Thr Val Ser | Gly | Gly | Ser | Ile | Ser | Ser | Gly | Gly | His | Tyr | Trp | Ser | Trp |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Ile Arg Gin | His | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Ile | Gly | Tyr | Ile | Tyr |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Tyr Ile Gly | Asn | Thr | Tyr | Tyr | Asn | Pro | Ser | Leu | Lys | Ser | Arg | Val | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Ile Ser Val | Asp | Thr | Ser | Lys | Asn | Gin | Phe | Ser | Leu | Lys | Leu | Ser | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Val Thr Ala | Ala | Asp | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Asp | Ser | Gly |
85 | 90 | 9S | |||||||||||
Asp Tyr Tyr | Gly | Ile | Asp | Val | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Thr | Val | Thr | Val |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Ser Ser Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | Cys |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Ser Arg Ser | Thr | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | Val | Lys |
130 | 135 | 14 0 | |||||||||||
Asp Tyr Phe | Pro | Glu | Pro | Val | Thr | val | Ser | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala | Leu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
Thr Ser Gly | Val | His | Thr | Phe | Pro | Ala | Val | Leu | Gin | ||||
165 | 170 | ||||||||||||
<210> 46 | |||||||||||||
<211> 96 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 46 | ||||||||||||
Glu Ile Val | Leu | Thr | Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Glu Arg Ala | Thr | Leu | Ser | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Tyr Leu Ala | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lya | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg | Leu | Leu |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Ile Tyr Gly | Ala | Ser | Ser | Arg | Ala | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp | Arg | Phe | Ser |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Gly Ser Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Arg | Leu | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Pro Glu Asp | Phe | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Tyr | Gly | Ser | Ser | Pro |
90 95 <210> 47 <211> 141 <212> PRT <213>Human <4O0> 47
Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu
- 68CZ 302706 86
1 | 5 | 10 | 15 |
Ser Cys | Arg Ala Ser Gin | Ser Ile Ser Ser Ser | Phe Leu Ala Trp Tyr |
20 | 25 | 30 | |
Gin Gin | Arg Pro Gly Gin | Ala Pro Arg Leu Leu | Ile Tyr Gly Ala Ser |
35 | 40 | 45 | |
Ser Arg | Ala Thr Gly Ile | Pro Asp Arg Phe Ser | Gly Ser Gly Ser Gly |
50 | 55 | 60 | |
Thr Asp | Phe Thr Leu Thr | Ile Ser Arg Leu Glu | Pro Glu Asp Phe Ala |
65 | 70 | 75 | 80 |
Val Tyr | Tyr Cys Gin Gin | Tyr Gly Thr Ser Pro | Trp Thr Phe Gly Gin |
85 | 90 | 95 | |
Gly Thr | Lys Val Glu Ile | Lys Arg Thr Val Ala | Ala Pro Ser Val Phe |
100 | 105 | 110 | |
Ile Phe | Pro Pro Ser Asp | Glu Gin Leu Lys Ser | Gly Thr Ala Ser Val |
115 | 120 | 125 | |
Val Cys | Leu Leu Asn Asn | Phe Tyr Pro Arg Glu | Ala Lys |
130 | 135 | 140 | |
<210 48 | |||
<211> 141 | |||
<212> PRT | |||
<213> Human | |||
<400> 48 | |||
Gin Ser | Pro Gly Thr Leu | Ser Leu Ser Pro Gly | Glu Arg Ala Thr Leu |
1 | 5 | 10 | 15 |
Ser Cys | Arg Thr Ser Val | Ser Ser Ser Tyr Leu | Ala Trp Tyr Gin Gin |
20 | 25 | 30 | |
Lys Pro | Gly Gin Ala Pro | Arg Leu Leu Ile Tyr | Gly Ala Ser Ser Arg |
35 | 40 | 45 | |
Ala Thr | Gly Ile Pro Asp | Arg Phe Ser Gly Ser | Gly Ser Gly Thr Asp |
50 | 55 | 60 | |
Phe Thr | Leu Thr Ile Ser | Arg Leu Glu Pro Glu | Asp Phe Ala Val Tyr |
65 | 70 | 75 | 80 |
Tyr Cys | Gin Gin Tyr Gly | Ile Ser Pro Phe Thr | Phe Gly Gly Gly Thr |
85 | 90 | 95 | |
Lys Val | Glu Ile Lys Arg | Thr Val Ala Ala Pro | Ser Val Phe Ile Phe |
100 | 105 | 110 | |
Pro Pro | Ser Asp Glu Gin | Leu Lys Ser Gly Thr | Ala Ser val Val Cys |
115 | 120 | 125 | |
Leu Leu | Asn Asn Phe Tyr | Pro Arg Glu Ala Lys | Val Gin |
130 | 135 | 140 | |
<210 49 | |||
<211> 139 | |||
<212> PRT | |||
<213> Human | |||
<400> 49 | |||
Gly Thr | Leu Ser Leu Ser | Pro Gly Glu Arg Ala | Thr Leu Ser Cys Arg |
1 | 5 | 10 | 15 |
Ala Ser | Gin Ser Val ser | Ser Tyr Leu Ala Trp | Tyr Gin Gin Lys Pro |
20 | 25 | 30 | |
Gly Gin | Ala Pro Arg Leu | Leu Ile Tyr Gly Ala | Ser Ser Arg Ala Thr |
35 | 40 | 45 | |
Gly Ile | Pro Asp Arg Phe | Ser Gly Ser Gly Ser | Gly Thr Asp Phe Thr |
50 | 55 | 60 | |
Leu Thr | Ile Ser Arg Leu | Glu Pro Glu Asp Phe | Ala Val Tyr Tyr Cys |
65 | 70 | 75 | 80 |
Gin Gin | Tyr Gly Arg Ser | Pro Phe Thr Phe Gly | Pro Gly Thr Lys Val |
90 95
-69 CZ 302706 B6
Asp | Xle | Lys | Arg 100 | Thr Val | Ala | Ala Pro 105 | Ser Val | Phe | Ile Phe Pro 110 | Pro | |||||
Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin |
130 135 <2I0> 50 <21l> 142 <212> PR I' <213> Human
<400> | 50 | ||||||||||||||
Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | Leu |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Lys | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg | Pro | Leu | Ile | Tyr | Gly | Val | Ser | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Arg | Ala | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Arg | Leu | Glu | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Tyr | Gly | Ile | Ser | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Thr | Lys | val | Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Phe | Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | ||
130 | 135 | 140 |
io <210> 51 <211> 142 <212> PRT <213> Human
<400> 51 | |||||||||||||||
Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | Leu | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Ile | Ser | Ser | Asn | Phe | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Lys | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg | Leu | Leu | Ile | Tyr | Arg | Pro | Ser | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Arg | Ala | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp | Ser | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Arg | Leu | Glu | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Tyr | Gly | Thr | Ser | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Thr | Lys | Val | Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Phe | Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | ||
130 | 135 | 140 |
<210> 52 <211> 146 <212> PRT <213> Human
-70CZ 302706 B6
<400> | 52 | ||||||||||||||
Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | Leu |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Lys | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg | Leu | Leu | lle | Tyr | Gly | Ala | Ser | ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Arg | Ala | Thr | Gly | lle | Pro | Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | lle | Ser | Arg | Leu | Glu | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Tyr | Gly | Arg | Ser | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Thr | Lys | Val | Asp | lle | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | lle |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Phe | Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | Trp | Lys |
130 | 135 | 14 0 | |||||||||||||
Gly | Gly | ||||||||||||||
145 |
<210> 53 <211> 95 s <212>PRT <2 í 3> Human <400> 53
Asp 1 | lle Gin | Met Thr Gin 5 | Ser Pro | Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly | |||||||||||
10 | 15 | ||||||||||||||
ASp | Arg | Val | Thr | xle | Thr | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | lle | Ser | Ser | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Leu | Asn | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro | Gly | Lys | Ala | Pro | Lys | Leu | Leu | lle |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Tyr | Ala | Ala | Ser | Ser | Leu | Gin | Ser | Gly | Val | Pro | Ser | Arg | Phe | Ser | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | lle | ser | Ser | Leu | Gin | Pro |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Glu | Asp | Phe | Ala | Thr | Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Ser | Tyr | Ser | Thr | Pro | |
85 | 90 | 95 |
io <210>54 <211> 152 <212> PRT <213> Human
<400> | 54 | ||||||||||||||
Gin | Ser | Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr | lle |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Thr | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | lle | Asn | Thr | Tyr | Leu | lle | Trp | Tyr | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Lys | Pro | Gly | Lys | Ala | Pro | Asn | Phe | Leu | lle | Ser | Ala | Thr | Ser | lle |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Leu | Gin | Ser | Gly | Val | Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Phe | Thr | Leu | Thr | lle | Asn | Ser | Leu | His | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Thr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Ser | Tyr | Ser | Thr | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Thr | Lys | val | Asp | lle | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | val | Phe | lle |
-71 CZ 302706 B6
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Phe Pro Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Cys Leu Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg Glu | Ala | Lys | Val | Gin | Trp | Lys | |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Val Asp Asn | Ala | Leu | Gin | Ser | Gly | ||||||||
145 | 150 | ||||||||||||
<210> 55 | |||||||||||||
<211> 139 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Ihiman | |||||||||||||
<400> | 55 | ||||||||||||
Pro Ser Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr | Ile | Thr | Cys |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Arg Ala Ser | Gin | Ser | ile | Asn | Ser | Tyr | Leu | Asp | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Pro Gly Lys | Ala | Pro | Lys | Leu | Leu | Ile | Tyr | Ala | Ala | Ser | Ser | Leu | Gin |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Ser Gly Val | Pro | Ser | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Thr Leu Thr | Ile | Ser | Ser | Leu | Gin | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | Thr | Tyr | Tyr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Cys Gin Gin | Tyr | Tyr | Ser | Thr | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro | Gly | Thr | Lys |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Val Glu Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe | Pro |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Pro Ser Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Leu Asn Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | |||||
130 | 135 | ||||||||||||
<210> 56 | |||||||||||||
<211> 134 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 56 | ||||||||||||
Thr Gin Ser | Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Ile Thr Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Asn | Ile | Ser | Arg | Tyr | Leu | Asn | Trp | Tyr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Gin Gin Lys | Pro | Gly | Lys | Ala | Pro | Lys | Phe | Leu | Ile | Tyr | Val | Ala | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Ile Leu Gin | Ser | Gly | Val | Pro | Ser | Gly | Phe | ser | Ala | Ser | Gly | Ser | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Pro Asp Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Ser | Leu | Gin | Pro | Glu | Asp | Phe | Ala |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Thr Tyr Tyr | Cys | Gin | Gin | Ser | Tyr | Ser | Thr | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Gly Thr Lys | Val | Asp | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Ile Phe Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | val |
115 | 120 | 125 |
Val Cys Leu Leu Asn Asn 15 130 <2IO> 57 <211> 150 <212> PRT <2l3>Human
- 72 CZ 302706 B6
Thr | <400> Gin Ser | 57 Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | Asp | Arg | Val | Thr | |
1 Ile | Thr | Cys | Arg | 5 Ala | ser | Gin | Ser | Ile | 10 Cys | Asn | Tyr | Leu | Asn | 15 Trp | Tyr |
Gin | Gin | Lys | 20 Pro | Gly | Lys | Ala | Pro | 25 Arg | Val | Leu | Ile | Tyr | 30 Ala | Ala | Ser |
Ser | Leu | 35 Gin | Gly | Gly | Val | Pro | 40 Ser | Arg | Phe | Ser | Gly | 45 Ser | Gly | Ser | Gly |
Ile | 50 Asp | Cys | Thr | Leu | Thr | 55 Ile | Ser | Ser | Leu | Gin | 60 Pro | Glu | Asp | Phe | Ala |
85 Thr | Tyr | Tyr | Cys | Gin | 70 Gin | Ser | Tyr | Ile | Thr | 75 Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | 80 Pro |
Gly | Thr | Arg | Val | 85 Asp | Ile | Glu | Arg | Thr | 90 Val | Ala | Ala | Pro | Ser | 95 Val | Phe |
Ile | Phe | Pro | 100 Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | 105 Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | 110 Ala | Ser | Val |
Val. | Cys | 115 Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | 120 Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | 125 Lys | Val | Gin | Trp |
Lys | 130 Val | Asp | Asn | Ala | Tyr | 135 | 140 |
145 150 <210> 58
<211> 96 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||||
Glu | <400> Ile Val | 58 Leu | Thr | Gin | Ser | Pro | Asp | Phe | Gin | Ser | Val | Thr | Pro | Lys | |
1 Glu | Lys | Val | Thr | 5 Ile | Thr | Cys | Arg | Ala | 10 Ser | Gin | Ser | Ile | Gly | 15 ser | Ser |
Leu | His | Trp | 20 Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro | 25 ASp | Gin | Ser | Pro | Lys | 30 Leu | Leu | ile |
Lys | Tyr | 35 Ala | Ser | Gin | Ser | Phe | 40 Ser | Gly | Val | Pro | Ser | 45 Arg | Phe | Ser | Gly |
Ser | 50 Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | 55 Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | 60 Asn | Ser | Leu | Glu | Ala |
65 Glu | Asp | Ala | Ala | Thr | 70 Tyr | Tyr | Cys | His | Gin | 75 Ser | Ser | Ser | Leu | Pro | 80 Gin |
85 | 90 | 95 |
<210> 59 <211> 155 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 59 | ||||||||||||
Ser Pro Asp | Phe | Gin | Ser | Val | Thr | Pro | Lys | Glu | Lys | Val | Thr | Ile | Thr |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Cys Arg Ala | Ser | Gin | Ser | Ile | Gly | Ser | Ser | Leu | His | Trp | Tyr | Gin | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Lys Pro Asp | Gin | Ser | Pro | Lys | Leu | Leu | Ile | Lys | Tyr | Ala | Ser | Gin | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Phe Ser Gly | Val | Pro | Ser | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Phe Thr Leu | Thr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Ala | Glu | Asp | Ala | Ala | Thr | Tyr |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Tyr Cys His | Gin | Ser | Ser | Ser | Leu | Pro | Leu | Thr | Phe | Gly | Gly | Gly | Thr |
90 95
- 73 CZ 302706 B6
Lys Val Glu | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Pro Pro Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Leu Leu Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro | Arg | Glu | Ala | Lys | Val | Gin | Trp | Lys | Val |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Asp Asn Ala | Leu | Gin | Ser | Gly | Asn | Ser | Gin | Glu | |||||
145 | 150 | 155 | |||||||||||
<210> 60 | |||||||||||||
<211> 100 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 60 | ||||||||||||
Asp Val Val | Met | Thr | Gin | Ser | Pro | Leu | Ser | Leu | Pro | Val | Thr | Leu | Gly |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Gin Pro Ala | Ser | Ile | Ser | Cys | Arg | Ser | Ser | Gin | Ser | Leu | Val | Tyr | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Asp Gly Asn | Thr | Tyr | Leu | Asn | Trp | Phe | Gin | Gin | Arg | Pro | Gly | Gin | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Pro Arg Arg | Leu | Ile | Tyr | Lys | Val | Ser | Asn | Arg | Asp | Ser | Gly | Val | Pro |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Asp Arg Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Lys | Ile |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Ser Arg Val | Glu | Ala | Glu | Asp | Val | Gly | Val | Tyr | Tyr | Cys | Met | Gin | Gly |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Thr Hia Trp | Pro | ||||||||||||
100 | |||||||||||||
<210> 61 | |||||||||||||
<211> 139 | |||||||||||||
<212> PRT | |||||||||||||
<213> Human | |||||||||||||
<400> | 61 | ||||||||||||
Pro Leu Ser | Leu | Pro | Val | Thr | Leu | Gly | Gin | Pro | Ala | Ser | Ile | Ser | Cys |
1 | S | 10 | 15 | ||||||||||
Arg Ser Ser | Gin | Ser | Leu | Val | Tyr | Ser | Asp | Gly | Asn | Thr | Tyr | Leu | Asn |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Trp Phe Gin | Gin | Arg | Pro | Gly | Gin | Ser | Pro | Arg | Arg | Leu | Ile | Tyr | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Val Ser Asn | Trp | Asp | Ser | Gly | Val | Pro | Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Ser Gly Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Lys | Ile | Ser | Arg | Val | Glu | Ala | Glu | Asp |
65 | 70 | 75 | 60 | ||||||||||
Val Gly Val | Tyr | Tyr | Cys | Met | Gin | Gly | Ser | His | Trp | Pro | Pro | Thr | Phe |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Gly Gin Gly | Thr | Lys | Val | Glu | Ile | Lys | Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
val Phe Ile | Phe | Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Ser Val Val | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro |
130 135 <2 10> 62 <21 l> 100 <212> PRT io <213> Human
- 74CZ 302706 B6 <400? 62
Asp lle Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser | Leu Pro Val Thr | Pro 15 | Gly | ||||||||||
1 | 5 | 10 | |||||||||||
Glu Pro Ala | Ser | lle | Ser | Cys | Arg | Ser | Ser | Gin | Ser | Leu | Leu | His | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Asn Gly Tyr | Asn | Tyr | Leu | Asp | Trp | Tyr | Leu | Gin | Lys | Pro | Gly | Gin | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Pro Gin Leu | Leu | lle | Tyr | Leu | Gly | Ser | Asn | Arg | Ala | Ser | Gly | Val | Pro |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Asp Arg Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Lys | lle |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Ser Arg Val | Glu | Ala | Glu | Asp | Val | Gly | Val | Tyr | Tyr | Cys | Met | Gin | Ala |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Leu Gin Thr | Pro | ||||||||||||
100 | |||||||||||||
<210> 63 <211> 133 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 63 | ||||||||||||
Pro Gly Glu | Pro | Ala | Ser | lle | Ser | Cys | Arg | Ser | Ser | Gin | Ser | Leu | Leu |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
His Ser Asn | Gly | Tyr | Asn | Tyr | Leu | Asp | Trp | Tyr | Leu | Gin | Lys | Pro | Gly |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Gin Ser Pro | Gin | Leu | Leu | lle | Tyr | Leu | Gly | Ser | Asn | Arg | Ala | Ser | Gly |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Val Pro Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | ASp | Phe | Thr | Leu |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Lys Leu Ser | Arg | Val | Glu | Ala | Glu | Asp | Val | Gly | Val | Tyr | Tyr | Cys | Met |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Gin Ala Leu | Gin | Thr | Pro | Leu | Thr | Phe | Gly | Gly | Gly | Thr | Lys | Val | Glu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
lle Lys Arg | Thr | Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | lle | Phe | Pro | Pro | Ser |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Asp Glu Gin | Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu | Leu | Asn |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Asn Phe Tyr | Pro | Arg | |||||||||||
130 | |||||||||||||
<210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 64 | ||||||||||||
Asp lle Gin | Met | Thr | Gin | Ser | Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly |
1 Asp Arg Val | Thr | 5 | 10 | 15 | |||||||||
20 | |||||||||||||
<210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||
<400> | 65 | ||||||||||||
Glu lle Val | Leu | Thr | Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly |
S 10 15
Glu Arg Ala Thr
- 75 CZ 302706 B6 <2 1 ()> 66 <2 1 I > 20 <2 12> PRT <213> Human
<400> | 66 | |||||
Glu | Ile | Val | Leu | Thr | Gin Ser Pro Gly Thr | Leu Ser Leu Ser Pro Gly |
1 | 5 | 10 | 15 | |||
Glu | Arg | Ala | Thr | |||
20 |
<210> 67 io <2Il>20 <212> PRT <213> Human
<400> | 67 | |||||
Asp | Ile | Gin | Met | Thr Gin Ser | Pro Ser Ser Val | Ser Ala Ser Val |
1 | 5 | 10 | 15 | |||
Asp | Arg | Val | Thr | |||
20 |
<210> 68 <21l>20 <2 12> PRT <2 13> Human <400> 68
Thr Gly Glu Phe Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser 15 10 15
Pro Gly Glu Arg 20 <210> 69 <2 I i> 20 <212>PRT <213> Human <400> 69
Glu Phe Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr 20 <210> 70 <21 l>20 <212> PRT <213> Human <400> 70
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 is
Glu Arg Ala Thr
20 <210> 71 <211> 20 <212> PRT
- 76 CZ 302706 B6 <213> Human <400> 71
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr 20 <210> 72 <211> 20 <212> PRT <213> Human
<400> | 72 | ||||
Glu | Ile Val | Leu | Thr | Gin Ser Pro Oly Thr | Leu Ser Leu Ser Pro Gly |
1 | 5 | 10 | 15 | ||
Glu | Arg Ala | Thr | |||
20 |
<210> 73 <211> 20 <212> PRT <213> Human <40O> 73
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 15 10 15
Leu Arg Leu Ser 20 <21O> 74 20 <211>5 <212> PRT <213> Human <400> 74
Pro Glu Val Gin Phe 1 5 <210> 75 <211> 20 <212> PRT <213> Human <400> 75 val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 15 10 15
Leu Arg Leu Ser 20 <210> 76 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 76
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 15 10
- 77 CZ 302706 B6 <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Human <400> 77
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 15 10 15
Leu <210> 78 K) <211>8 <212> PRT <213> Human <400> 78
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr 1 5 <210> 79 <211> 20 <212> PRT <213> Human <400> 79
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu 20 <210> 80 <21I> 20 <212>PRT <213> Human <400> 80
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 15 10 15
Leu Arg Leu Ser 20 <210> 81 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 81
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp i 5 10 <210> 82 <211> 20 <212>PRT <213>Human
-78CZ 302706 Bó <400> 82
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 15 10 15
Leu Arg Leu Ser <210> 83 <211>9 <212> PRT <213> Human <400> 83
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val 1 5 io <210>84 <211> 20 <212> PRT <213> Human <400> 84
Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg Ser 15 10 15
Leu Arg Leu Ser <210> 85
2117-6 <212> PRT <213> Human <400> as
Pro Glu Val Gin Phe Asn 1 5 <210> 86 25 <211>20 <212> PRT <213> Human
<400> | 86 | ||||
Val | Gin Leu | Val | Glu | Ser Gly Gly Gly Val | Val Glu Pro Gly Arg |
1 | 5 | 10 | 15 | ||
Leu | Arg Leu | Ser | |||
20 |
<210> 87 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 87
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 15 10 <210> 88 <211>8
- 79 CZ 302706 B6 <212> PRT <213> Human <400> 88
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5 <210> 89 <211>8 <212> PRT <213> Human <40O> 89
Glu Ile Val Leu Thr Gin. Ser Pro 1 5 <210> 90 <211> 8 <212> PRT <213> Human <400> 90
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro l 5 <210>91 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 91
Thr Gly Glu Phe val Leu Thr Gin Ser Pro 15 10 <210 92 <211>8 <212> PRT <213> Human <400> 92
Glu Phe Val Leu Thr Gin Ser Pro 1 s <210 93 <211> 8 <212> PRT <213> Human <400> 93
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro <210 94 <211>8 <212> PRT
4> <213> Human
-80CZ 302706 B6 <400> 94
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro 1 5 <210> 95 <211> 463 <212> PRT <213> Human
<400> | 95 | ||||||||||||||
Met | Glu | Phe | Gly | Leu | Ser | Trp | Val | Phe | Leu | Val | Ala | Leu | Leu | Arg | Gly |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Val | Gin | Cys | Gin | Val | Gin | Leu | Val | Glu | Ser | Gly | Gly | Gly | Val | Val | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Pro | Gly | Arg | Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | Cys | Val | Ala | Ser | Gly | Phe | Thr | Phe |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Ser | Ser | His | Gly | Met | His | Trp | Val | Arg | Gin | Ala | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu |
Glu | 50 Trp | Val | Ala | Val | Ile | 55 Trp | Tyr | Asp | Gly | Arg | 60 Asn | Lys | Tyr | Tyr | Ala |
65 Asp | Ser | Val | Lys | Gly | 70 Arg | Phe | Thr | Ile | Ser | 75 Arg | Asp | Asn | Ser | Lys | 80 Asn |
Thr | Leu | Phe | Leu | 85 Gin | Met | Asn | Ser | Leu | 90 Arg | Ala | Glu | Asp | Thr | 95 Ala | Val |
Tyr | Tyr | Cys | 100 Ala | Arg | Gly | Gly | His | 105 Phe | Gly | Pro | Phe | Asp | 110 Tyr | Trp | Gly |
Gin | Gly | 115 Thr | Leu | Val | Thr | Val | 120 Ser | Ser | Ala | Ser | Thr | 125 Lys | Gly | Pro | Ser |
val | 130 Phe | Pro | Leu | Ala | Pro | 135 cys | Ser | Arg | Ser | Thr | 140 Ser | Glu | Ser | Thr | Ala |
145 Ala | Leu | Gly | Cys | Leu | 150 Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | 155 Pro | Glu | Pro | Val | Thr | 160 Val |
Ser | Trp | Asn | Ser | 165 Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | 170 Gly | Val | His | Thr | Phe | 175 Pro | Ala |
Val | Leu | Gin | 180 Ser | Ser | Gly | Leu | Tyr | 185 Ser | Leu | Ser | Ser | val | 190 val | Thr | Val |
Pro | Ser | 195 Ser | Asn | Phe | Gly | Thr | 200 Gin | Thr | Tyr | Thr | Cys | 205 Asn | Val | Asp | His |
Lys | 210 Pro | Ser | Asn | Thr | Lys | 215 Val | Asp | Lys | Thr | val | 220 Glu | Arg | Lys | Cys | Cys |
225 Val | Glu | Cys | Pro | Pro | 230 Cys | Pro | Ala | Pro | Pro | 235 Val | Ala | Gly | Pro | Ser | 240 Val |
Phe | Leu | Phe | Pro | 245 Pro | Lys | Pro | Lys | Asp | 250 Thr | Leu | Met | Ile | Ser | 255 Arg | Thr |
Pro | Glu | Val | 260 Thr | Cys | Val | Val | Val | 265 Asp | Val | Ser | His | Glu | 270 Asp | Pro | Glu |
Val | Gin | 275 Phe | Asn | Trp | Tyr | Val | 280 Asp | Gly | Val | Glu | Val | 285 His | Asn | Ala | Lys |
Thr | 290 Lys | Pro | Arg | Olu | Glu | 295 Gin | Phe | Asn | Ser | Thr | 300 Phe | Arg | Val | Val | Ser |
305 val | Leu | Thr | Val | Val | 310 His | Gin | Asp | Trp | Leu | 315 Asn | Gly | Lys | Glu | Tyr | 320 Lys |
Cys | Lys | Val | Ser | 325 Asn | Lys | Gly | Leu | Pro | 330 Ala | Pro | Ile | Glu | Lys | 335 Thr | Ile |
Ser | Lys | Thr | 340 Lys | Gly | Gin | Pro | Arg | 345 Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | 350 Thr | Leu | Pro |
Pro | Ser | 355 Arg | Glu | Glu | Met | Thr | 360 Lys | Asn | Gin | Val | Ser | 365 Leu | Thr | Cys | Leu |
Val | 370 Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro | 375 Ser | Asp | Ile | Ala | Val | 380 Glu | Trp | Glu | Ser | Asn |
385 | 390 | 395 | 400 |
-8! CZ 302706 B6
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460
10> 96 1 1> 463 12> PRT <213> Human <400> 96
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin
Pro | Gly | Arg | 20 Ser |
Ser | Ser | 35 His | Gly |
Glu | 50 Trp | Val | Ala |
65 Asp | Ser | Val | Lys |
Thr | Leu | Phe | Leu |
Tyr | Tyr | Cys | 100 Ala |
Gin | Gly | 115 Thr | Leu |
Val | 130 Phe | Pro | Leu |
145 Ala | Leu | Gly | Cys |
Ser | Trp | Asn | Ser |
Val | Leu | Gin | 180 Ser |
Pro | Ser | 195 Ser | Asn |
Lys | 210 Pro | Ser | Asn |
225 Val | Glu | Cys | Pro |
Phe | Leu | Phe | Pro |
Pro | Glu | Val | 260 Thr |
Val | Gin | 2*75 Phe | Asn |
Thr | 290 Lys | Pro | Arg |
305 Val | Leu | Thr | val |
Cys | Lys | val | Ser |
Ser | Lys | Thr | 340 Lys |
Pro | Ser | 355 Arg | Glu |
370 |
Leu | Arg | Leu | Ser 40 |
Met | His | Trp 55 | Val |
Val | Ile 70 | Trp | Tyr |
Gly Arg 85 | Phe | Thr | |
Gin | Met | Asn | Ser |
Arg | Gly | Gly | His 120 |
Val | Thr | Val 135 | Ser |
Ala | Pro 150 | Cys | Ser |
Leu 165 | Val | Lys | Asp |
Gly | Ala | Leu | Thr |
Ser | Gly | Leu | Tyr 200 |
Phe | Gly | Thr 215 | Gin |
Thr | Lys 230 | Val | Asp |
Pro 245 | Cys | Pro | Ala |
Pro | Lys | Pro | Lys |
Cys | Val | Val | Val 280 |
Trp | Tyr | Val 295 | Asp |
Glu | Glu 310 | Gin | Phe |
Val 325 | His | Gin | Asp |
Asn | Lys | Gly | Leu |
Gly | Gin | Pro | Arg 360 |
Glu | Met | Thr 375 | Lys |
25 Cys | Val | Ala | Ser |
Arg | Gin | Ala | Pro 60 |
Asp | Gly | Arg 75 | Asn |
Ile | Ser 90 | Arg | Asp |
Leu | Arg | Ala | Glu |
105 | |||
Phe | Gly | Pro | Phe |
Ser | Ala | Ser | Thr 140 |
Arg | Ser | Thr 155 | Ser |
Tyr | Phe 170 | Pro | Glu |
Ser | Gly | val | His |
185 | |||
Ser | Leu | Ser | Ser |
Thr | Tyr | Thr | Cys 220 |
Lys | Thr | Val 235 | Glu |
Pro | Pro 250 | Val | Ala |
Asp | Thr | Leu | Met |
265 | |||
Asp | Val | Ser | HiS |
Gly | Val | Glu | Val 300 |
Gin | Ser | Thr 315 | Phe |
Trp | Leu 330 | Asn | Gly |
Pro | Ala | Pro | Ile |
345 | |||
Glu | Pro | Gin | Val |
Asn | Gin | Val | Ser 380 |
Gly | 30 Phe | Thr | Phe |
45 Gly | Lys | Gly | Leu |
Lys | Tyr | Tyr | Ala |
Asn | Ser | Lys | 80 Asn |
Asp | Thr | 95 Ala | Val |
Asp | 110 Tyr | Trp | Gly |
125 Lys | Gly | Pro | Ser |
Glu | Ser | Thr | Ala |
Pro | Val | Thr | 160 Val |
Thr | Phe | 175 Pro | Ala |
Val | 190 Val | Thr | Val |
205 Asn | Val | Asp | His |
Arg | Lys | Cys | Cys |
Gly | Pro | Ser | 240 Val |
Ile | Ser | 255 Arg | Thr |
Glu | 270 Asp | Pro | Glu |
285 His | Asn | Ala | Lys |
Arg | Val | Val | Ser |
Lys | Glu | Tyr | 320 Lys |
Glu | Lys | 335 Thr | Ile |
Tyr | 350 Thr | Leu | Pro |
365 Leu | Thr | Cys | Leu |
82CZ 302706 B6
Val | Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro | ser | Asp | Ile | Ala | Val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Gly | Gin. | Pro | Glu | Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Met | Leu | Asp | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Asp | Gly | Ser | Phe | Phe | Len | Tyr | Ser | Lys | Leu | Thr | Val | Asp | Lys | Ser | Arg |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Trp | Gin | Gin | Gly | Asn | Val | Phe | Ser | Cys | Ser | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
His | Asn | His | Tyr | Thr | Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | |
450 | 455 | 460 |
<210> 97 <211> 235 <212> PRT <213> Human
Met | <400> Glu Thr | 97 Pro | Ala | Gin | Leu | Leu | Phe | Leu | Leu | Leu | Leu | Trp | Leu | Pro | |
1 Asp | Thr | Thr | Gly | 5 Glu | Ile | Val | Leu | Thr | 10 Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | 15 Leu | Ser |
Leu | Ser | Pro | 20 Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | 25 Leu | Ser | Cys | Arg | Ala | 30 Ser | Gin | Ser |
Ile | Ser | 35 Ser | Ser | Phe | Leu | Ala | 40 Trp | Tyr | Gin | Gin | Arg | 45 Pro | Gly | Gin | Ala |
Pro | 50 Arg | Leu | Leu | Ile | Tyr | 55 Gly | Ala | Ser | Ser | Arg | 60 Ala | Thr | Gly | Ile | Pro |
65 Asp | Arg | Phe | Ser | Gly | 70 ser | Gly | Ser | Gly | Thr | 75 Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | 80 Ile |
Ser | Arg | Leu | Glu | 85 Pro | Glu | Asp | Phe | Ala | 90 Val | Tyr | Tyr | Cys | Gin | 95 Gin | Tyr |
Gly | Thr | Ser | 100 Pro | Trp | Thr | Phe | Gly | 105 Gin | Gly | Thr | Lys | Val | 110 Glu | Ile | Lys |
Arg | Thr | 115 Val | Ala | Ala | Pro | Ser | 120 Val | Phe | Ile | Phe | Pro | 125 Pro | Ser | Asp | Glu |
Gin | 130 Leu | Lys | Ser | Gly | Thr | 135 Ala | Ser | Val | Val | Cys | 140 Leu | Leu | Asn | Asn | Phe |
145 Tyr | Pro | Arg | GlU | Ala | ISO Lys | Val | Gin | Trp | Lys | 155 Val | Asp | Asn | Ala | Leu | 160 Gin |
Ser | Gly | Asn | Ser | 165 Gin | Glu | Ser | Val | Thr | 170 Glu | Gin | Asp | Ser | Lys | 175 Asp | Ser |
Thr | Tyr | Ser | 180 Leu | Ser | Ser | Thr | Leu | 185 Thr | Leu | Ser | Lys | Ala | 190 Asp | Tyr | Glu |
Lys | His | 195 Lys | Val | Tyr | Ala | Cys | 200 Glu | Val | Thr | His | Gin | 205 Gly | Leu | Ser | Ser |
Pro 225 | 210 Val | Thr | Lys | Ser | Phe 230 | 215 Asn | Arg | Gly | Glu | Cys 235 | 220 |
io <210>98 <211> 464 <212> PRT <213> Human
Met | <400> Glu Phe | 98 Gly | Leu | Ser | Trp | Val | Phe | Leu | Val | Ala | Leu | Leu | Arg | Gly | |
1 Val | Gin | Cys | Gin | 5 Val | Gin | Leu | Val | Glu | 10 Ser | Gly | Gly | Gly | Val | 15 Val | Gin |
Pro | Gly | Arg | 20 Ser | Leu | Arg | Leu | Ser | 25 Cys | Thr | Ala | Ser | Gly | 30 Phe | Thr | Phe |
Ser | Asn | 35 Tyr | Gly | Met | His | Trp | 40 Val | Arg | Gin | Ala | Pro | 45 Gly | Lys | Gly | Leu |
Glu | SO Trp | Val | Ala | Val | Ile | 55 Trp | Tyr | Asp | Gly | Ser | 60 Asn | Lys | His | Tyr | Gly |
65 | 70 | 75 | 80 |
- 83 15
Asp | Ser | Val | Lys | Gly 85 | Arg | Phe | Thr | Ile | Ser 90 | Ser | Aďp | Asn | Ser | Lys 95 | Asn |
Thr | Leu | Tyr | Leu 100 | Gin | Met | Asn | Ser | Leu 105 | Arg | Ala | Glu | Asp | Thr 110 | Ala | Val |
Tyr | Tyr | Cys 115 | Ala | Arg | Gly | Glu | Arg 120 | Leu | Gly | Ser | Tyr | Phe 125 | Asp | Tyr | Trp |
Gly | Gin 130 | Gly | Thr | Leu | Val | Thr 135 | Val | Ser | Ser | Ala | Ser 140 | Thr | Lys | Gly | Pro |
Ser 145 | val | Phe | Pro | Leu | Ala 150 | Pro | Cys | Ser | Arg | Ser 155 | Thr | Ser | Glu | Ser | Thr 160 |
Ala | Ala | Leu | Gly | Cys 165 | Leu | Val | Lys | Asp | Tyr 170 | Phe | Pro | Glu | Pro | Val 175 | Thr |
Val | Ser | Trp | Asn 180 | Ser | Gly | Ala | Leu | Thr 185 | Ser | Gly | Val | His | Thr 190 | Phe | Pro |
Ala | Val | Leu 195 | Gin | Ser | Ser | Gly | Leu 200 | Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser 205 | Val | Val | Thr |
Val | Pro 210 | Ser | Ser | Asn | Phe | Gly 215 | Thr | Gin | Thr | Tyr | Thr 220 | Cys | Asn | Val | Asp |
His 225 | Lys | Pro | Ser | Asn | Thr 230 | Lys | Val | Asp | Lys | Thr 235 | Val | Glu | Arg | Lys | Cys 240 |
Cys | Val | Glu | Cys | Pro 245 | Pro | Cys | Pro | Ala | Pro 250 | Pro | Val | Ala | Gly | Pro 255 | Ser |
Val | Phe | Leu | Phe 260 | Pro | Pro | Lys | Pro | Lys 265 | Asp | Thr | Leu | Met | Ile 270 | Ser | Arg |
Thr | Pro | Glu 27 5 | Val | Thr | Cys | Val | Val 280 | Val | Asp | Val | Ser | His 285 | Glu | Asp | Pro |
Glu | Val 290 | Gin | Phe | Asn | Trp | Tyr 2 95 | Val | Asp | Gly | Val | Glu 300 | Val | His | Asn | Ala |
Lys 305 | Thr | Lys | Pro | Arg | Glu 310 | Glu | Gin | Phe | Asn | Ser 315 | Thr | Phe | Arg | Val | Val 320 |
Ser | Val | Leu | Thr | Val 325 | Val | His | Gin | Asp | Trp 330 | Leu | Asn | Gly | Lys | Glu 335 | Tyr |
Lys | Cys | Lys | Val 340 | Ser | Asn | Lys | Gly | Leu 345 | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu 350 | Lys | Thr |
Ile | Ser | Lys 355 | Thr | Lys | Gly | Gin | Pro 360 | Arg | Glu | Pro | Gin | Val 365 | Tyr | Thr | Leu |
Pro | Pro 370 | Ser | Arg | Glu | Glu | Met 375 | Thr | Lys | Asn | Gin | val 380 | Ser | Leu | Thr | Cys |
Leu 385 | val | Lys | Gly | Phe | Tyr 390 | Pro | Ser | Asp | Ile | Ala 395 | Val | Glu | Trp | Glu | Ser 400 |
Asn | Gly | Gin | Pro | Glu 405 | Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr 410 | Thr | Pro | Pro | Met | Leu 415 | Asp |
Ser | Asp | Gly | Ser 420 | Phe | Phe | Leu | Tyr | Ser 425 | Lys | Leu | Thr | Val | Asp 430 | Lys | Ser |
Arg | Trp | Gin 435 | Gin | Gly | Asn | Val | Phe 440 | Ser | Cys | Ser | Val | Met 445 | His | Glu | Ala |
Leu | His 450 | Asn | His | Tyr | Thr | Gin 455 | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu 460 | Ser | Pro | Gly | Lys |
<210> 99 5 <211>233 <212> PRT <213> Human
- 84 CZ 302706 B6 <400> 99
Met | GlU | Thr | Pro | Ala | Gin | Leu | Leu | Phe | Leu | Leu | Leu | Leu | Trp | Leu | Pro |
1 | 5 | 10 | IS | ||||||||||||
Asp | Thr | Thr | Gly | Glu | Ile | val | Leu | Thr | Gin | Ser | Pro | Gly | Thr | Leu | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr | Leu | Ser | cys | Arg | Thr | Ser | Val | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Ser | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro | Gly | Gin | Ala | Pro | Arg |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Leu | Leu | Ile | Tyr | Gly | Ala | Ser | Ser | Arg | Ala | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp | Arg |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Arg |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Pro | Glu | ASp | Phe | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Tyr Gly | Ile | |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ser | Pro | Phe | Thr | Phe | Gly | Gly | Gly | Thr | Lys | Val | Glu | Ile | Lys | Arg | Thr |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Val | Ala | Ala | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe | Pro | Pro | Ser | Asp | Glu | Gin | Leu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Lys | Ser | Gly | Thr | Ala | Ser | Val | Val | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | Pro |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Arg | Glu | Ala | Lye | Val | Gin | Trp | Lys | val | Asp | Asn | Ala | Leu | Gin | Ser | Gly |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Asn | Ser | Gin | Glu | Ser | Val | Thr | Glu | Gin | Asp | Ser | Lys | Asp | Ser | Thr | Tyr |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Ser | Leu | Ser | Ser | Thr | Leu | Thr | Leu | Ser | Lys | Ala | Asp | Tyr | Glu | Lys | His |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Lys | Val | Tyr | Ala | Cys | Glu | Val | Thr | His | Gin | Gly | Leu | Ser | Ser | Pro | Val |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Thr | Lys | Ser | Phe | Asn | Arg | Gly | Glu | Cys | |||||||
225 | 230 |
<210> 100 5 <211>463 <212> PRT <213> Human <400> 100
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly i s 10 15
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Glu 20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu
55 60
Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala
70 75 80
Asp Ser Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Gly Leu Leu Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
115 120 125
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
-85CZ 302706 B6
Val Leu Gin Ser | Ser | Gly | Leu | Tyr Ser Leu Ser Ser Val | Val | Thr | Val | ||||||||
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Pro | Ser | Ser | Asn | Phe | Gly | Thr | Gin | Thr | Tyr | Thr | Cys | Asn | Val | Asp | His |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Lys | Pro | Ser | Asn | Thr | Lys | Val | Asp | Lys | Thr | Val | Glu | Arg | Lys | Cys | Cys |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Val | Glu | Cys | Pro | Pro | Cys | Pro | Ala | Pro | Pro | Val | Ala | Gly | Pro | Ser | Val |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Phe | Leu | Phe | Pro | Pro | Lys | Pro | Lys | Asp | Thr | Leu | Met | Ile | Ser | Arg | Thr |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Pro | Glu | Val | Thr | Cys | Val | Val | Val | Asp | Val | Ser | His | Glu | ASp | Pro | Glu |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
val | Gin | Phe | Asn | Trp | Tyr | Val | Asp | Gly | val | Glu | Val | His | Asn | Ala | Lys |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Thr | Lys | Pro | Arg | Glu | Glu | Gin | Phe | Asn | Ser | Thr | Phe | Arg | Val | Val | Ser |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Val | Leu | Thr | val | Val | His | Gin | Asp | Trp | Leu | Asn | Gly | Lys | Glu | Tyr | Lys |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Cys | Lys | Val | Ser | Asn | Lys | Gly | Leu | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu | Lys | Thr | Ile |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
ser | Lys | Thr | Lys | Gly | Gin | Pro | Arg | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | Thr | Leu | Pro |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Pro | Ser | Arg | Glu | Glu | Met | Thr | Lys | Asn | Gin | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Val | Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro | Ser | Asp | Ile | Ala | Val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Gly | Gin | Pro | Glu | Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Met | Leu | Asp | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Asp | Gly | Ser | Phe | Phe | Leu | Tyr | Ser | Lys | Leu | Thr | Val | Asp | Lys | Ser | Arg |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Trp | Gin | Gin | Gly | Asn | Val | Phe | Ser | Cys | Ser | val | Met | His | Glu | Ala | Leu |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
His | Asn | His | Tyr | Thr | Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | |
450 | 455 | 460 |
<210> 101 <211> 234 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||||
<400> | 101 | ||||||||||||||
Met 1 | Glu | Thr | Pro | Ala 5 | Gin | Leu | Leu | Phe | Leu 10 | Leu | Leu | Leu | Trp | Leu 15 | Pro |
Asp | Thr | Thr | Gly 20 | Glu | Ile | val | Leu | Thr 25 | Gin | Ser | Pro | Gly | Thr 30 | Leu | Ser |
Leu | Ser | Pro 35 | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr 40 | Leu | Ser | Cys | Arg | Ala 45 | Ser | Gin | Ser |
Val | Ser 50 | ser | Tyr | Leu | Ala | Trp 55 | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro 60 | Gly | Gin | Ala | Pro |
Arg 65 | Pro | Leu | Ile | Tyr | Gly 70 | Val | Ser | Ser | Arg | Ala 75 | Thr | Gly | Ile | Pro | Asp 80 |
Arg | Phe | Ser | Gly | Ser 85 | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp 90 | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile 95 | Ser |
Arg | Leu | Glu | Pro 100 | Glu | Asp | Phe | Ala | Val 105 | Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin 110 | Tyr | Gly |
Ile | Ser | Pro 115 | Phe | Thr | Phe | Gly | Pro 120 | Gly | Thr | Lys | val | Asp 125 | Ile | Lys | Arg |
Thr | Val 130 | Ala | Ala | Pro | Ser | Val 135 | Phe | Ile | Phe | Pro | Pro 140 | Ser | Asp | Glu | Gin |
Leu 145 | Lys | Ser | Gly | Thr | Ala 150 | Ser | Val | Val | Cys | Leu 155 | Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr 160 |
Pro | Arg | Glu | Ala | Lys 165 | Val | Gin | Trp | Lys | Val 170 | Asp | Asn | Ala | Leu | Gin 175 | Ser |
-86CZ 302706 B6
Gly Asn Ser Gin | Glu Ser Val Thr | Glu Gin Asp Ser Lys Asp | Ser Thr | ||||||||||||
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser | Thr | Leu | Thr | Leu | Ser | Lys | Ala | Asp | Tyr | Glu | Lys |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
His | Lya | Val | Tyr | Ala | Cys | Glu | Val | Thr | His | Gin | Gly | Leu | Ser | Ser | Pro |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Val | Thr | Lys | Ser | Phe | Asn | Arg Gly | Glu | Cys | |||||||
225 | 230 |
<210> 102 <211> 451 <2I2>PRT <213> Human <400> 102
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg
1 | 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Ser | Leu | Arg | Leu 20 | Ser | Cys | Ala | Ala | Ser 25 | Gly | Phe | Thr | Phe | Ser 30 | Ser | Tyr |
Gly | Met | His 35 | Trp | Val | Arg | Gin | Ala 40 | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu 45 | Glu | Trp | Val |
Ala | Val 50 | Ile | Trp | Tyr | Asp | Gly 55 | Ser | Asn | Lys | Tyr | Tyr 60 | Ala | Asp | Ser | Val |
Lys 65 | Gly | Arg | Phe | Thr | Ile 70 | Ser | Arg | Asp | Asn | Ser 75 | Lys | Asn | Thr | Leu | Tyr 80 |
Leu | Gin | Met | Asn | Ser 85 | Leu | Arg | Ala | Glu | Asp 90 | Thr | Ala | Val | Tyr | Tyr 95 | Cys |
Ala | Arg | Asp | Pro 100 | Arg | Gly | Ala | Thr | Leu 105 | Tyr | Tyr | Tyr | Tyr | Tyr Gly 110 | Met | |
Asp | Val | Trp 115 | Gly | Gin | Gly | Thr | Thr 120 | Val | Thr | Val | Ser | Ser 125 | Ala | Ser | Thr |
Lys | Gly 130 | Pro | Ser | Val | Phe | Pro 135 | Leu | Ala | Pro | cys | Ser 140 | Arg | Ser | Thr | Ser |
Glu 145 | Ser | Thr | Ala | Ala | Leu 150 | Gly | Cys | Leu | Val | Lys 155 | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu 160 |
Pro | Val | Thr | Val | Ser 165 | Trp | Asn | Ser | Gly | Ala 170 | Leu | Thr | ser | Gly | Val 175 | HÍS |
Thr | Phe | Pro | Ala 180 | val | Leu | Gin | Ser | Ser 185 | Gly | Leu | Tyr | Ser | Leu 190 | Ser | Ser |
Val | Val | Thr 195 | Val | Pro | Ser | Ser | Asn 200 | Phe | Gly | Thr | Gin | Thr 205 | Tyr | Thr | Cys |
Asn | Val 210 | Asp | His | Lys | Pro | Ser 215 | Asn | Thr | Lys | Val | Asp 220 | Lys | Thr | Val | Glu |
Arg 225 | Lys | Cys | Cys | Val | Glu 230 | Cys | Pro | Pro | Cys | Pro 235 | Ala | Pro | Pro | Val | Ala 240 |
Gly | Pro | Ser | Val | Phe 245 | Leu | Phe | Pro | Pro | Lys 250 | Pro | Lys | Asp | Thr | Leu 255 | Met |
Ile | Ser | Arg | Thr 260 | Pro | Glu | Val | Thr | Cys 265 | Val | Val | Val | Asp | Val 270 | Ser | His |
Glu | Asp | Pro 275 | Glu | Val | Gin | Phe | Asn 280 | Trp | Tyr | Val | ASp | Gly 285 | Val | Glu | Val |
His | Asn 290 | Ala | Lys | Thr | Lys | Pro 295 | Arg | Glu | Glu | Gin | Phe 300 | Asn | Ser | Thr | Phe |
Arg 305 | Val | Val | Ser | Val | Leu 310 | Thr | Val | Val | His | Gin 315 | Asp | Trp | Leu | Asn | Gly 320 |
Lys | Glu | Tyr | Lys | Cys 325 | Lys | Val | Ser | Asn | Lys 330 | Gly | Leu | Pro | Ala | Pro 335 | Ile |
Glu | Lys | Thr | Ile 340 | Ser | Lys | Thr | Lys | Gly 345 | Gin | Pro | Arg | Glu | Pro 350 | Gin | Val |
Tyr | Thr | Leu 355 | Pro | Pro | Ser | Arg | Glu 360 | Glu | Met | Thr | Lys | Asn 365 | Gin | Val | Ser |
87CZ 302706 B6
Leu | Thr | Cys | Leu | Val | Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro | Ser | Asp | lle | Ala | Val | Glu |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Trp | Glu | Ser | Asn | Gly | Gin | Pro | Glu | Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr | Pro | Pro |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Met | Leu | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser | Phe | Phe | Leu | Tyr | Ser | Lys | Leu | Thr | Val |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Asp | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin | Gin | Gly | Asn | Val | Phe | Ser | Cys | Ser | val | Met |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His | Tyr | Thr | Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Pro | Gly | Lya |
450 <210> 103
<211>214 <212> PRT <213> Human | |||||||||||||||
Asp | <400> lle Gin | 103 Met | Thr | Gin | Ser | Pro | Ser | Ser | Leu | Ser | Ala | Ser | Val | Gly | |
1 Asp | Arg | Val | Thr | 5 lle | Thr | Cys | Arg | Ala | 10 Ser | Gin | Ser | lle | Asn | 15 Ser | Tyr |
Leu | Asp | Trp | 20 Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro | 25 Gly | Lys | Ala | Pro | Lys | 30 Leu | Leu | lle |
Tyr | Ala | 35 Ala | Ser | Ser | Leu | Gin | 40 Ser | Gly | Val | Pro | Ser | 45 Arg | Phe | Ser | Gly |
Ser | 50 Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | 55 Phe | Thr | Leu | Thr | lle | 60 Ser | Ser | Leu | Gin | Pro |
65 Glu | Asp | Phe | Ala | Thr | 70 Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | 75 Tyr | Tyr | Ser | Thr | Pro | 80 Phe |
Thr | Phe | Gly | Pro | 85 Gly | Thr | Lys | Val | Glu | 90 lle | Lys | Arg | Thr | Val | 95 Ala | Ala |
Pro | Ser | Val | 100 Phe | lle | Phe | Pro | Pro | 105 Ser | Asp | Glu | Gin | Leu | 110 Lys | Ser | Gly |
Thr | Ala | 115 Ser | Val | Val | Cys | Leu | 120 Leu | Asn | Asn | Phe | Tyr | 125 Pro | Arg | Glu | Ala |
Lys | 130 Val | Gin | Trp | Lys | Val | 135 Asp | Asn | Ala | Leu | Gin | 140 Ser | Gly | Asn | Ser | Gin |
145 Glu | Ser | Val | Thr | Glu | 150 Gin | Asp | Ser | Lys | Asp | 155 Ser | Thr | Tyr | Ser | Leu | 160 Ser |
Ser | Thr | Leu | Thr | 165 Leu | Ser | Lys | Ala | Asp | 170 Tyr | Glu | Lys | His | Lys | 175 Val | Tyr |
Ala | Cys | Glu | 180 Val | Thr | His | Gin | Gly | 185 Leu | Ser | Ser | Pro | Val | 190 Thr | Lys | Ser |
Phe | Asn | 195 Arg | Gly | Glu | Cys | 200 | 205 |
210 io <210> 104 <211> 22 <212> DNA <213> Human <400> 104 caggtgcagc tggagcagtc gg <210> 105 <211> 24 <212> DNA zn <213> Human
- 88 22 <400> 105 gctgagggag tagagtcctg agga 24 <210> 106 <211> 49 <212>DNA <213> Human <400> 106 tatctaagct tctagactcg accgccacca tggagtttgg gctgagctg 49 ío <210> 107 <211> 46 <212> DNA <213> Human <400> 107 ttctctgatc agaattccta tcatttaccc ggagacaggg agagct 46 <210> 108 <211> 9 <212>DNA <213> Human <400> 108 accgccacc 9 <210> 109 <211>45 <212» DNA <213> Human <400> 109 30 tcttcaagct tgcccgggcc cgccaccatg gaaaccccag cgcag 45 <210> 110 <211> 43 <212> DNA <213>Human <400> 110 ttctttgatc agaattctca ctaacactct cccctgttga agc 43 <210> 111 <211>48 <212>DNA <213> Human <400> 111 tcttcaagct tgcccgggcc cgccaccatg gacatgaggg tccccgct 48 <210> 112 <211> 1392 <212>DNA <213> Human
-SOCZ 302706 B6 <400> 112 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgtagcgt ctggattcac cttcagtagc catggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagaaataa atactatgca 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtttctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggaggtcac 360 ttcggtcctt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 720 gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392 <210> 113 <21 1> 708 <212> DNA <213> Human <400> 113 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca gggccagtca gagtattagc agcagcttct tagcctggta ccagcagaga 180 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 240 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta cctcaccctg gacgttcggc 360 caagggacca aggtggaaat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 420 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 480 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 540 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 600 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 660 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgttag 708 <210> 114 <211> 1395 <212> DNA <213>Human <400> 114 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtacagcgt ctggattcac cttcagtaac tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagtaataa acactatgga 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agtgacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggagagaga 360 ctggggtcct actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 420 accaagggcc catcggtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 480 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
- 90CZ 302706 B6 tcaggcgctc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccagctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcaact tcggcaccca gacctacacc 660 tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agacagttga gcgcaaatgt 720 tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tctccgggta aatga 1395 <210> 115 <211> 702 <212>DNA <213> Human <400> 115 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca ggaccagtgt tagcagcagt tacttagcct ggtaccagca gaaacctggc 180 caggctccca ggctcctcat ctatggtgca tccagcaggg ccactggcat cccagacagg 240 ttcagtggca gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcagcagact ggagcctgaa 300 gattttgcag tctattactg tcagcagtat ggcatctcac ccttcacttt cggcggaggg 360 accaaggtgg agatcaagcg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 agtgtcacag ageaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702 <210> 116 <211> 489 <212> DNA <213> Human <400> 116 cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca gcgtctggat tcaccttcag tagtcatggc 60 atccactggg tccgccaggc tccaggcaag gggctggagt gggtggcagt tatatggtat 120 gatggaagaa ataaagacta tgcagactcc gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac 180 aattccaaga agacgctgta tttgcaaatg aacagcctga gagccgagga cacggctgtg 240 tattactgtg cgagagtggc cccactgggg ccacttgact actggggcca gggaaccctg 300 gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 360 aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 420 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct 480 gtcctacag 489 <210> 117 <211> 417 <212>DNA <213> Human
- oj CZ 302706 B6 <400> 117 ggcaccctgt ctttgtctcc aggggaaaga gccaccctct cctgcagggc cagtcagagt 60 gtcagcagct acttagcctg gtaccagcag aaacctggcc aggctcccag actcctcatc 120 tatggtgcat ccagcagggc cactggcatc ccagacaggt tcagtggcag tgggtctggg 180 acagacttca ctctcaccat cagcagactg gagcctgagg attttgcagt gtattactgt 240 cagcagtatg gtaggtcacc attcactttc ggccctggga ccaaagtgga tatcaagcga 300 actgtggctg caccatctgt cttcatcttc ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga 360 actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac ttctatccca gagaggccaa agtacag 417 <210> 1 18 <21 1> 1392 <212> DNA <213> Human <400> 118 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtcgagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtacagcgt ctggattcac čttcagtagt tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagcaataa acactatgca 240 gactccgcga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agccggactg 360 ctgggttact ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420 aa999cccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 720 gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg ttgtgcaeca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392 <210> 119 <211> 705 <212> DNA <213> Human <400> 119 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgcfcactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgta gggccagtca aagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 180 ggccaggctc ccaggcccct catctatggt gtatccagca gggccactgg catcccagac 240 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 300 gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtatct caccattcac tttcggccct 360 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 705 <210> 120 <21 1 > 507 <212> DNA
- 92 CZ 302706 B6 <213> Human <400> 120 ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc 60 agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag gctccaggca aggggctgga gtgggtggča 120 gttatatggt atgatggaag taataaatac tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc ISO atctccagag acaattccaa gaacacgctg tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag 240 gacacggctg tgtattactg tgcgagaggg gcccgtataa taaccccttg tatggacgtc 300 tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc 480 gtgeacacct tcccagctgt cctacag 507 <210 121 <211> 458 <212>DNA <213> Human <400? 121 cagtctccat cctccctgtc tgcatctgta ggagacagag tcaccatcac ttgccgggca 60 agtcagagca ttaacaccta tttaatttgg tatcagcaga aaccagggaa agcccctaac 120 ttcctgatct ctgctacatc cattttgcaa agtggggtcc catcaaggtt ccgtggcagt 180 ggctctggga caaatttcac tctcaccatc aacagtcttc atcctgaaga ttttgcaact 240 tactactgtc aacagagtta cagtacccca ttcactttcg gccctgggac caaagtggat 300 atcaaacgaa ctgtggctgc accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg 360 aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg ctgaataact tctatcccag agaggccaaa 420 gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa tcgggtaa 458 <210122 <211> 501 <212>DNA <213>Human <400> 122 ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga ctctcctgtg tagcgtctgg attcatcttc 60 agtagtcatg gcatccactg ggtccgccag gctccaggca aggggctgga gtgggtggča 120 gttatatggt atgatggaag aaataaagac tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc 180 atctccagag acaattccaa gaacacgctg tatttgcaaa tgaacagcct gagagccgag 240 gacacggctg tgtattactg tgcgagagtg gccccactgg ggccacttga ctactggggc 300 cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360 gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420 tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac 480 accttcccag ctgtcctaca g 501 <210> 123 20 <211> 426 <212> DNA <213> Human <400> 123 tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg gaaagagcca ccctctcctg cagggccagt 60 cagagtatta gcagcaattt cttagcctgg taccagcaga aacctggcca ggcteccagg 120 ctcctcatct atcgtccatc cagcagggcc actggcatcc cagacagttt cagtggcagt 180 gggtctggga cagacttcac tctcaccatc agcagactgg agcctgagga ttttgcatta 240 tattactgtc agcagtatgg tacgtcacca ttcactttcg gccctgggac caaagtggat 300 atcaagcgaa ctgtggctgc accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg 360 aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg ctgaataact tctatcccag agaggccaaa 420 gtacag 426 <210 124 <211> 516
- 93 CZ 302706 B6 <212> DNA <213> Human <400> 124 tCGGGCccag gactggtgaa gccttcacag atcctgtccc tcacctgcac tgtctctggt 60 ggctccatca gcagtggtgg tcactactgg agctggatcc gccagcaccc agggaagggc 120 ctggagtgga ttgggtacat ctattacatt gggaacacct actacaaccc gtccctCaag 190 agtcgagtta ccatatcagt agacacgtct aagaaccagt tctccctgaa gctgagctct 240 gtgactgccg cggacacggc cgtgtattat tgtgcgagag atagtgggga ctactacggt 300 atagacgtct ggggccaagg gaccacggtc accgtctcct cagcttccac caagggccca 360 tccgtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc cgccctgggc 420 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 480 accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacaa 516 <210> 125 <21 1> 465 <212> DNA <213> Human <400> 125 tctccagact ttcagtctgt gactccaaag gagaaagtca ccatcacctg ccgggccagt 60 cagagcattg gtagtagctt acattggtat cagcagaaac cagatcagtc tccaaagctc 120 ctcatcaagt atgcttccca gtccttctct ggggtcccct cgaggttcag tggcagtgga 180 tctgggacag atttcaccct caccatcaat agcctggaag ctgaagatgc tgcaacgtat 240 tactgtcatc agagtagtag tttaccgctc actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc 300 aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa 360 tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta 420 cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg ggtaactccc aggag 465 <210> 126 <21 l> 459 <212> DNA <213> Human <400> 126 cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca gcgtctggat tcaccttcag tagtcatggc 60 atccactggg tccgccaggc tccaggcaag gggctggagt gggtggcagt tatatggtat 120 gatggaagaa ataaagacta tgcagactcc gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac 180 aattccaaga acacgctgta tttgcaaatg aacagcctga gagccgagga cacggctgtg 240 tattactgtg cgagagtggc cccactgggg ccacttgact actggggcca gggaaccctg 300 gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 360 aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 420 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagc 459 <210> 127 <21 l> 440 <212> DNA <213> Human <400> 127 cagtctccag gcaccctgtc tttgtctcca ggggaaagag ccaccctctc ctgcagggcc 60 agtcagagtg tcagcagcta cttagcctgg taccagcaga aacctggcca ggctcccagg 120 ctcctcatct atggtgcatc cagcagggcc actggcatcc eagacaggtt cagtggcagt 180 gggtctggga cagacttcac tctcaccatc agcagactgg agcctgagga ttttgcagtg 240 tattactgtc aacagtatgg taggtcacca ttcactttcg gccctgggac caaagtagat 300 atcaagcgaa ctgtggctgc accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg 360 aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg ctgaataact tctatcccag agaggccaaa 420 gtacagtgga aaggtggata 440
-94CZ 302706 B6 <210> 128 <211> 503 <212> DNA <213> Human <400> 128 ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc 60 agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag gctccaggca aggggctgga gtgggtggca 120 gttatatggt atgatggaag taataaatac tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc 180 atctccagag acaattccaa gaacacgctg tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag 240 gacacggctg tgtattactg tgcgagagat ccgaggggag ctacccttta ctactactac 300 taccggtkgg acgtctgggg ccaagggacc acggtcaccg tctcctcagc ctccaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttccce gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gctctgacca gcggcgtgca cac 503 <21O> 129 <211> 417 io <212> DNA <213> Human <400> 129 ccatcctccc tgtctgcatc tgtaggagac agagtcacca tcacttgccg ggcaagtcag 60 agcattaaca gctatttaga ttggtatcag cagaaaccag ggaaagcccc taaactcctg 120 atctatgctg catccagttt gcaaagtggg gtcccatcaa ggttcagtgg cagtggatct 180 gggacagatt tcactctcac catcagcagt ctgcaacctg aagattttgc aacttactac 240 tgtcaacagt attacagtac tccattcact ttcggccctg ggaccaaagt ggaaatcaaa 300 cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 360 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagta 417 is <210 130 <211> 451 <212>DNA <213> Human <400> 130 ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc 60 agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag gctccaggca aggggctgga gtgggtggca 120 gttatatggt atgatggaag tcataaátac tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc 180 atctccagag acaattccaa gaacacgctg tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag 240 gacacggctg tgtattactg tgcgagaggc gctgtagtag taccagctgc tatggacgtc 300 tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360 cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc 420 aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg t 451 <210 131 <211> 402 <212>DNA <213> Human <220 <400> 131 acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 60 gcaagtcaga acattagcag gtatttaaat tggtatcaac agaaaccagg gaaagcccct 120 aagttcctga tctatgttgc atctattttg caaagtgggg tcccatcagg gttcagtgcc 180 agtggatctg ggccagattt cactctnacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgca 240 acttactact gtcaacagag ttacagtacc ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg 300 gatatcaaac gaactgtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag 360 ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata ac 402 i
- 95 i <210> 132 <21 l> 438 <2I2> DNA <213> Human <22()>
<400> 132 gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt 60 agcngtggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt 120 atatggtctg atggaagtca taaatactat gcagactccg tgaagggccg attcaccatc 180 tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac 240 acggctgtgt attactgtgc gagaggaact atgatagtag tgggtaccct tgactactgg 300 ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca gcctccacca agggcceatc ggtcttcccc 360 ctggcgccct gctccaggag cacctccgag agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag 420 gactacttcc ccgaaccg 438 o <21O> 133 <21 1> 451 <212> DNA <213> Human <400> 133 acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 60 gcaagtcaga gcatttgcaa ctatttaaat tggtatcagc agaaaccagg aaaagcccct 120 agggtcctga tctatgctgc atccagtttg caaggtgggg tcccgtcaag gttcagtggc 180 agtggatctg ggacagattg cactctcacc atcagcagtc tgcaacctga agattttgca 240 acttactact gtcaacagag ttaeactacc ccattcactt tcggccctgg gaccagagtg 300 gatatcgaac gaactgtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag 360 ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc 420 aaagtacagt ggaaggtgga taacgcctat t 451 <210> 134 <211> 562 o <212>DNA <213> Human <400> 134 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt tactatggcg tctgggggag gcgtggtcca 60 gcctgggagg tccctgagac tctcctgtgc agcgtctgga ttcaccttca gtagctatgg 120 cgtgcactgg gtccgccagg ctccaggcaa ggggctggag tgggtggcag ttatatggta 180 tgatggaagt aataaatact atgcagactc cgtgaagggc cgattcacca tctccagaga 240 caattccaag agcacgctgt atctgcaaat gaacagcctg agagccgagg acacggctgt 300 gtattattgt gcgagagact cgtattacga tttttggagt ggtcggggcg gtatggacgt 360 ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt 420 ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca gcggccctgg gctgcctggt 480 caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgctc tgaccagcgg 540 cgtgcacacc ttcccagctg tc 562 <210> 135 <211> 419 <212> DNA <213> Human
- 96CZ 302706 B6 <400> 135 ccactctccc tgcccgtcac ccttggacag ccggcctcca tctcctgcag gtctagtcaa agcctcgtat acagtgatgg aaacacctac ttgaattggt ttcagcagag gccaggccaa tctccaaggc gcctaattta taaggtttct aactgggact ctggggtccc agacagattc agcggcagtg ggtcaggcac tgatttcaca ctgaaaatca gcagggtgga ggctgaggat gttggggttt attactgcat gcaaggttca cactggcctc cgacgttcgg ccaagggacc aaggtggaaa tcaaacgaac tgtggctgca ccatctgtct tcatcttccc gccatctgat gagcagttga aatctggaac tgcctctgtt gtgtgcctgc tgaataactt ctatcccac <210> 136 <211> 490 <212>DNA <213> Human <40Ú> 136 gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc tgtgcagcgt ctggattcac cttcagtaac tatgccatgc actgggtccg ccaggctcca ggcaaggggc tggagtgggt ggtagttatt tggcatgatg gaaataataa atactatgca gagtccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtatatt actgtgcgag agatcagggc actggctggt acggaggctt tgacttctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc ιο <2I0> 137 <211> 419 <212> DNA <213> Human <400> 137 cctggagagc cggcttccat ctcttgcagg tctagtcaga gcctcctgca tagtaatgga tacaactatt tggattggta cctgcagaag ccaggacagt ctccacagct cctgatctat ttgggttcta atcgggcctc cggggtccct gacaggttca gtggcagtgg atcaggcaca gattttacac tgaaactcag cagagtggag gctgaggatg ttggggttta ttactgcatg caagctctac aaactcctct cactttcggc ggagggacca aggtggagat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagar aggccaaagt acattccat <210> 138 <211> 1392 ío <212>DNA <213> Human <400> 138 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc tgtgtagcgt ctggattcac cttcagtagc catggcatgc actgggtccg ccaggctcca ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagaaataa atactatgca gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtttctg caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggaggtcac ttcggtcctt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc
120
180
240
300
360
419
120
180
240
300
360
42Q
480
490
120
180
240
300
360
419
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392 <210> 139 <21 1> 1999 <212>DNA <213> Human <400> 139 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgtagcgt ctggattcac cttcagtagc catggcatgc actgggtccg ecaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagaaataa atactatgca 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtttctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggaggtcac 360 ttcggtcctt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agctagcacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttggtga gaggccagct 720 cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagccct cctgcctgga cgcaccccgg 780 ctgtgcagcc ccagcccagg gcagcaaggc aggccccatc tgtctcctca cccggaggcc 640 tctgcccgcc ccactcatgc tcagggagag ggtcttctgg ctttttccac caggctccag 900 gcaggcacag gctgggtgcc cctaccccag gcccttcaca cacaggggca ggtgcttggc 960 tcagacctgc caaaagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc cgaccccaaa 1020 ggccaaactg tccactccct cagctcggac accttctctc ctcccagatc cgagtaactc 1080 ccaatcttct ctctgcagag cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccaggtaagc 1140 cagcccaggc ctcgccctcc agctcaaggc gggacaggtg ccctagagta gcctgcatcc 1200 agggacaggc cccagctggg tgctgacacg tccacctcca tctcttcctc agcaccacct 1260 gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 1320 cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag 1380 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag 1440 cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg 1500 aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa 1560 accatctcca aaaccaaagg tgggacccgc ggggtatgag ggccacatgg acagaggccg 1620 gctcggccca ccctctgccc tgggagtgac cgctgtgcca acctctgtcc ctacagggca 1680 gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca 1740 ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga 1800 gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg actccgacgg 1860 ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt 1920 cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc 1980 cctgtctccg ggtaaatga 1999 <2 10> 140 <21 1> 1392 <212> DNA <213> Human
-98CZ 302706 B6 <400> 140 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc tgtgtagcgt ctggattcac cttcagtagc catggcatgc actgggtccg ccaggctcca ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagaaataa atactatgca gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtttctg caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggaggtcac ttcggtcctt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttccaaa gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tccéagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga <210> 141 <21l>708 <212> DNA <213> Human <400> 141 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtattagc agcagcttct tagcctggta ccagcagaga cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta cctcaccctg gacgttcggc caagggacca aggtggaaat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataácg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgttag <210> 142 <211> 1395 <212> DNA <213> Human <400> 142 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc tgtacagcgt ctggattcac cttcagtaac tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagtaataa acactatgga gactccgtga agggccgatt caccatctcc agtgacaatt ccaagaacac gctgtatctg caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggagagaga ctggggtcct actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgctc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccagctg tcctacagtc ctcaggactc
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1392
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
708
120
180
240
300
360
420
480
540
600
-99 CZ 302706 B6 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcaact tcggcaccca gacctacacc 660 tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agacagttga gcgcaaatgt 720 tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tctccgggta aatga 1395 <210> 143 <211> 702 <212> DNA <213> Human <400> 143 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca ggaccagtgt tagcagcagt tacttagcct ggtaccagca gaaacctggc 180 caggctccca ggctcctcat ctatggtgca tccagcaggg ccactggcat cccagacagg 240 ttcagtggca gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcagcagact ggagcctgaa 300 gattttgcag tctattactg tcagcagtat ggcatctcac ccttcacttt cggcggaggg 360 accaaggtgg agatcaagcg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702 !() <210> 144 <211> 1392 <212> DNA <213> Human <400> 144 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtcgagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtacagcgt ctggattcac cttcagtagt tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagcaataa acactatgca 240 gactccgcga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agccggactg 360 ctgggttact ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 720 gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200
- 100 CZ 302706 B6 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392 <210> 145 <211> 705 <212>DNA <213> Human <400> 145 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgta gggccagtca aagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 1B0 ggccaggctc ccaggcccct catctatggt gtatccagca gggccactgg catcccagac 240 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 300 gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtatct caccattcac tttcggccct 360 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 705 io <210> 146 <211> 1413 <212> DNA <213> Human <400> 146 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcgt ctggattcac cttcagtagc tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180 ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagtaataa atactatgca 240 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatccgagg 360 ggagctaccc tttactacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 420 accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 480 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 660 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 960 agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1260 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 1413 <210> 147 <211> 714 <212>DNA <213> Human
- 101 CZ 302706 B6 <400 atggacatga agatgtgaca gtcaccatca aaaccaggga ccatcaaggt caacctgaag ggccctggga ccgccatctg ttctatccca tcccaggaga ctgacgctga cagggcctga ► 147 gggtccccgc tccagatgac cttgccgggc aagcccctaa tcagtggcag attttgcaac ccaaagtgga atgagcagtt gagaggccaa gtgtcacaga gcaaagcaga gctcgcccgt tcagctcctg ccagtctcca aagtcagagc actcctgatc tggatctggg ttactactgt aatcaaacga gaaatctgga agtacagtgg gcaggacagc ctacgagaaa cacaaagagc gggctcctgc tcctccctgt attaacagct tatgctgcat acagatttca caacagtatt actgtggctg actgcctctg aaggtggata aaggacagca cacaaagtct ttcaacaggg tactctggct ctgcatctgt atttagattg ccagtttgca ctctcaccat acagtactcc caccatctgt ttgtgtgcct acgccctcca cctacagcct acgcctgcga gagagtgtta ccgaggtgcc aggagacaga gtatcagcag aagtggggtc cagcagtctg attcactttc cttcatcttc gctgaataac atcgggtaac cagcagcacc agtcacccat gtga
120
1Θ0
240
300
360
420
480
540
600
660
714
Seznam citované literatury s Všechny publikace citované v přihlášce včetně patentů, patentových přihlášek, vědeckých článků, příruček apod., a také publikace v nich citované, jsou zahrnuty v plném rozsahu formou odkazu. Kromě toho jsou plně zahrnuty i následující publikace, včetně publikací v nich citovaných.
Alegre etal. J. Immunol 157: 4762-70(1996) io Allison and Krummel Science 270:932-933 (1995)
Balzano et al. lni J Cancer Suppl. 7:28-32 (1992)
Blaír et al.Immunol 160; 12-5 (1998)
Blake and Lítzí-Davis BioConjugate Chem. 3:510-5 13 (1992)
Boussiotís et al. Proč. Nati. Acad Sci USA 90:11059-63 (1993) is Bowie etal. Science 253:164 (1991)
Bruggeman et al. PNSA USA 86:6709-6713 (1989)
Bruggeman, M. and Neuberger, M. S. in Methods: A companion to Methods in Enzymology 2:159-165 (Lerner et al. eds. Academie Press (1991))
Bruggemann et al., „Human antibody production in trasgenie mice: expression from 100 kb of the human IgH locus.“ Eur. J. Immunol. 21:1323-1326(1991)
Bruggemann, M. and Neuberger, M. S. „Strategies for expressing human antibody repertoires in transgenic mice.“ Immunology Today 17:391-397 (1996)
Brunet et al. Nátuře 328:267-270 (1987)
Bumpers et al J. Surgical Res. 61:282-288 (1996)
Capsey et al. Genetically EngineeredHuman Therapeutic Drugs (Stockton Press, NY (1988)) Castan et al. Immunology 90:265-71 (1997)
Cepero et al. JExp. Med 188:199-204 (1998)
Chen et al. „Immunoglobulin gene rearrangement tn B-cell deficient mice generated by targeted deletion of the Jh locus“ International Immunology 5:647-656 (1993) .to Chen et al. Cell 71:1093-1102 (1992)
Chen et al. Human Gene Therapy 5:595-601 (1994)
Chiswell and McCafferty T1BTECH 10:80-84 (1992)
Choi et al. „Transgenic mice eontaining a human heavy chain immunoglobulin gene fragment cloned in a yeast artifical chromosome“ Nátuře Genetics 4:117-123 (1993
Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)
- 102 CZ 302706 Β6
Chothiaet al. Nátuře 342:878-883 (1989)
Chuang et al. J. Immunol. 159:144-151 (1997)
Coligan et al., Unit 2.1, „Enzyme-linked immunosorbent assays,“ in Current protocols in immunology (1994)
Cwirla et al. PNAS USA 87:6378-6382 (1990)
Dariavach et al. Eur. J. Immunol. 18:1901-1905 (1988)
Dayhoff, M. O., in Atlas of Protein Sequence and Structure, pp. 101-110 (Volume 5, National Biomedical Research Foundation (1972)) and Supplement 2 to this volume, pp. 1-10 de Boer et al. Eur. J, Immunol 23:3120-5 (1993)
Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991))
Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987)
Fallarino et al., J. Exp Med 188:205-10 (1998)
Fanger et al. Immunol Methods 4:72-81 (1994)
Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986)
Fishwild et al., „High-avidity human IgGy monoclonal antibodies from a novel strain of minilocus transgenic rnice. Nátuře Biotech. 14:845—851 (1996).
Freeman et al. J. Exp Med 178:2185-92 (1993)
Freeman etal. J. Immunol 161:2708-15 (1998)
Freeman et al. Science 262:907-9 (1993)
Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul. W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989))
Galfre, G. and Milstein, C., „Preparation of monoclonal antibodies: strategies and procedures.“ Methods Enzymol. 73:3—46 (1981)
Gorman et al. P.N.A.S. 79-.6771 (1982)
Green and Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-^195 (1998)
Green et al. Nátuře Genetics 7:13-21 (1994)
Grosschedl et al. Cell 41:885 (1985)
Hanes and Plucthau PNAS USA 94:4937-4942 (1997)
Harding et al. Nátuře 356:607-609 (1994)
Harper et al. J Immunol 147:103 7- 44 (1991)
Hathcock et al. Science 262:905-7 (1993)
Hoganboom et al. J Immunol. Reviews 130:43-68 (1992)
Horspool et al. J. Immunol. 160:2706—14 (1998)
Houghten et al. Biotechniques 13:412—421 (1992)
Houghten PNAS USA 82:5131-5135 (1985)
Hurwitz et al. J. Neuroimmunol 73:57-62 (1997)
Hurwitz et al. Proč. Nati Acad Sci US Λ 95:10067-71 (1998)
Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates,
Sunderland, Mass. (1991))
- 103CZ 302706 B6
Inlroduclion to Protein Structure (C. Branděn and J. fooze, eds., Garland Hublishing, New York, N.Y.(199I))
Jakobovits et al., „Germ-line transmission and expression of a human-derived yeast artificial— chromosome.“ Nátuře 362:255-258 (1993) > Jakobovits, A ct al., „Analysis of homozygous mutant chimeric mice: Deletion of the immunoglobnlin heavy-chain joining region bloeks B-eell development and antibody production.“ Proč. Nati. Acad. Sci. USA 90:2551-2555 (1993)
Jakobovits, A„ „Human izing the mouše genome.“ Current Biology 4:761-763 (1994)
Jakobovits, A„ „Production of fully human antibodies by transgenic mice.“ Current Opinion in io Biotechnology 6:561-566 (1995)
Junghans et al. in Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686 (2d edition, Chafner and Longo, eds., Lippincott Raven (1996))
Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of ImmunologicaI lnterest, N.I.H. publication no. 913242
Kabat Sequences of Proteins of Immunol ogical Interes (National Institutes of Health, Bethesda, Md.( 1987 and 1991))
Kostelny et al. J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)
Krummel and Allison J Exp. Med 182:459-65 (1995)
Krummel et al. Int. Immunol 8:519-23 (1996) zo Kuchroo et al. Cell 80:707-18 (1995)
Kwon et al. PNAS USA 94:8099-103 (1997)
LaPlanche et al. Nud. Acids Res, 14:9081 (1986)
Lenschow et al. Proč. Nati. Acad Sci. USA 90:11054-8 (1993)
Lenschow et al. Science 257:789-792 (1992)
Lin et al., 7. Exp. Med. 188:199-204 (1998)
Linsley et al. 7. Exp. Med. 176:1595-604 (1992)
Linsley et al. J. Exp. Med. 174:561-569 (1991)
Linsley et al. Science 257:792-795 (1992)
L\u et a\. J. Immunol 139:3521 (1987)
Liu et al. P.N.A.S. 84:3439 (1987)
Lonberg et al., „Antigen-speciflc human antibodies from mice comprísing four distinct genetic modifications.“ Nátuře 368:856-859 (1994).
Luhder et al. J. Exp Med. 187:427-32(1998)
Marasco Gene Therapy 4\\ 1-15 (1997)
Markees et al. J. Clin Invest 101:2446-55 (1998)
Marks et al.. „Olígonucleotide primers for polymerase chain reaction amplification of human immunoglobulin variable genes and design of family-specific oligonukleotide probes.“ Eur. J. Immunol 21:985-991 (1991)
McCoy et al. 7 Exp Med 186:183-7 (1997)
Mendez et at. Nátuře Genetics 15:146-156(1997)
Needleman and Wunsch.7. Mol. Biol. 48:443 (1970)
- 104 CZ 302706 Β6
Okayama et al. Mol. Cell. Bio. 3:280 (1983)
Parmley and Smith Gene 73:305-318 (1988)
Pearson and Lipman Proč. Nati. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)
Perez et al. Immunity 6:411-7 (1997)
Perrin et al. Immunol Res 14:189-99 (1995)
Perrin et al. J. Immunol 157:1333-6 (1996)
PinallaetaL Biotechniques 13:901-905 (1992)
Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Com pany, New York (1984))
Razi-Wolf et al. Proč. Nati Acad Sci U S A 90:11182-6 (1993)
Remingtonů Pharmaceutical Sciences (15,h ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), particularly Chapter 87 by Blaug, Seymour
Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)
Russel et al. Nucl. Acids Research 21:1081-1085 (1993)
Schwart Cell 71:1065 (1992)
Scott TIBS 17:241-245 (1992)
Smith and Waterman Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)
Songsivilai & Lachmann Clin. Exp. Immunol 79:315-321 (1990)
Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:3209 (1988)
Taylor et al„ ,.A transgenic mouše that express a diversity of human sequence heavy and light chain immunoglobulins.“ Nucleic Acids Research 20:6287-6295 (1992)
Taylor et al., „Human immunoglobulin transgenes undergo rearrangement, somatic mutation and class switching in mice that lack endogenous IgM.“ International Immunology 6:579-591 (1994)
The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985))
Thomton et al. Nátuře 354:105 (1991)
Tivol et al. Immunity 3:541-7 (1995)
Townsend and Allison Science 259:368 (1993)
Traunecker et al. Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992)
Tuaillon et al. „Analysis of direct and inverted DJH rearrangements in a human lg heavy chain transgenic minilocus J. Immunol. 154:6453-6465 (1995)
Tuaillon et al., „Human immunoglobulin heavy-chain minilocus recombination in transgenic mice: gene-segment use in μ and γ transcripts.“ Proč. Nati. Acad. Sci. USA 90:3720-3724 (1993) (Jhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)
Van Parijs et al. J. Exp. Med 186:1119-28 (1997)
Veber and Freidinger TINS p.392 (1985)
Vitetta Immunol Today 14:252 (1993)
Walunaset al. Immunity 1:405-13 (1994)
Walunas et al../. Exp. Med 183:2541-50 (1996)
Waterhouse et al. Science 270-985-988 (1995)
- 105 C7. 302706 B6
Winter and Harris Immunol Today 14:43- 46 (1993)
Wright et al· Crit Reviews in Immunol. 12:125-168 (1992)
Yang et al. Cancer Res 57:4036-41 (1997)
Υί-qun et al. Int. immunol. 8:37—44 {1996) ? Zon et al. Anti-Cancer Drug Design 6:539 (1991)
Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Pracíical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)
Fry et ai. „Specific, irreversible inactivation of the epidermal growth factor receptor and erbB2, by a new class of tyrosine kinase inhibitor“ Proč Nati Acad Sci U SA 95:12022-7 (1998) ío Hoffman et al. „A model of Cdc25 phosphatase catalytic domain and Cdk-interaction surface based on the presence of a rhodanese homology domain“ J Mol Biol 282-195-208 (1998)
Ginalski et al. „Modelling of active forms of protein kinases: p38-a čase study“ Acta Biochem Pol 44:557-64(1997)
Jouko et al. „Identification of csk tyrosine phosphorylation sites and a tyrosine residue important i? for kinase domain structure“ Biochem J322:927-35 (1997)
Singh et al. „Structure-based design of a potent, selective, and irreversible inhibitor of the catalytic domain of the erbB receptor subťamily of protein tyrosine kinases“ J. Med Chem 40:1130-5 (1997)
Mandel et al. „ABGEN: a knowledge-based automatcd approach for antibody structure model ing“ Nat Biotechnol 14:323-8 (1996)
Monfardini et al. „Rational design, analysis, and potential utility of GM-CSF antagonists“ Proč. Assoc Am Physicžans 108:420-31 (1996)
Furet et al. „Modeling study of protein kinase inhibitors: binding mode of staurosporine and origin ofthe selectivity of CGP 52411“ JCompui AidedMol Des 9:465-72 (1995)
III et al. „Design and construction of a hybrid immunoglobulin domain with properties of both heavy and light chain variable regíons“ Protein Eng 10:949—57 (1997)
Martin et al. „The affinity-selection of a minobody polypeptide inhibitor of human interleukin6“ EMBO J 13:5303-9 (1994) so Přihlášky vynálezu USA:
U.S. Patent Application Seriál No U.S. Patent Application Seriál No, U.S. Patent Application Seriál No,
U.S. Patent Application Seriál No, U.S. Patent Application Seriál No. U.S. Patent Application Seriál No. U.S. Patent Application Seriál No, U.S. Patent Application Seriál No.
U.S. Patent Application Seriál No, U.S. Patent Application Seriál No. U.S. Patent Application Seriál No. U.S. Patent Application Seriál No. U.S. Patent Application Seriál No.
07/466,008, fi led January 12, 1990 07/574.748, filed August 29, 1900 07/575,962, filed August 31, 1990 07/610,515, filed November 8, 1990 07/810,279, filed December 17, 1991 07/853,408, filed March 18, 1992 07/904,068, filed June 23, 1992 07/919,297, filed July 24, 1992 07/922,649, filed July 30, 1992 07/990,860, filed December 16, 1992 08/031,801, filed March 15, 1993 08/053,131, filed Apríl 26, 1993 08/096.762, filed July 22, 1993
- 106 CZ 302706 B6
U.S. Patent Application Seriál No. 08/112,848, filed August 27, 1993 U.S. Patent Application Seriál No. 08/155,301, filed November 18, 1993 U.S. Patent Application Seriál No. 08/161,739, filed December 3, 1993 U.S. Patent Application Seriál No. 08/165,699, filed December 10, 1993 s U.S. Patent Application Seriál No. 08/209,741, filed March 9, 1994 U.S. Patent Application Seriál No. 08/234,145, filed Apríl 28, 1994 U.S. Patent Application Seriál No. 08/724,752, filed October 2, 1996 U.S. Patent Application Seriál No. 08/730,639, filed October 11, 1996 U.S. Patent Application Seriál No. 08/759,620, filed December 3, 1996 io U.S. Patent Application Seriál No. 08/759,672, filed December 3, 1996
Patenty USA:
U.S,
U.S,
U.S
U.S.
U.S.
U.S,
U.S.
U.S,
U.S
U.S,
IJ.S
U.S
U.S,
U.S,
U.S
U.S,
U.S,
U.S
U.S.
U.S.
U.S.
U.S.
U.S.
U.S.
U.S,
U.S.
U.S.
U.S
U.S
U.S.
Patent No: Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No Patent No
4,399,216
4,681,581
4,683,195
4,683,202
4,735,210
4,740,461
4,816,397
4,912,040
4,959,455
5,101,827
5,102,990
5,151,510
5,194,594
5,434,131
5,530,101
5.545.806
5.545.807 5,585,089 5,591,669 5,612,205 5,625,126 5,625,825 5,633,425 5,643,763 5,648,471 5,661,016 5,693,761 5,693,792 5,697,902 5,703,057
107CZ 302706 B6
U.S
U.S
U.S
U.S
U.S U.S U.S U.S U.S o U.S
Patent No: Patent No: Patent No: Patent No Patent No: Patent No: Patent No: Patent No Patent No Patent No
5,714.350
5,721,367 5,733,743 5,770,197 5,770,429 5,773,253 5,777,085 5,789,215 5,789,650 5,81 1,097
Evropské patenty:
European Patent No. EP 0 546 073 Bl
European Patent No. EP0463 151, Bl, grant published June 12, 1996 Mezinárodní přihlášky PCT:
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Patent Application No. WO 92/02190 Patent Application No. WO 92/0391 8 Patent Application No. WO 92/22645 Patent Application No. WO 92/22647 Patent Application No. WO 92/22670 Patent Application No. WO 93/0043 1 Patent Application No. WO 93/12227 Patent Application No. WO 94/00569
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Patent Application No. WO 94/02602, published February 3, 1994
Patent Application No. WO 94/25585
Patent Application No. WO 94/29444
Patent Application No. WO 95/01994
Patent Application No. WO 95/03408
Patent Application No. WO 95/24217
Patent Application No. WO 95/33770
Patent Application No. WO 96/14436
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Internationa
Patent Application No. WO 96/34096, published October 31,1996
Patent Application No. WO 97/13852
Patent Application No. WO 97/20574
Patent Application No. WO 97/38137
Patent Application No. WO 98/24884
Patent Application No. WO 98/24893, published June 1 1, 1998
Ekvivalenty
- 108CZ 302706 B6
Popis vynálezu a příklady výhodných provedení uvádějí dle původců nej výhodnější provedení vynálezu. Je však zřejmé, že vynález lze realizovat různými ekvivalentními způsoby. Předmět vynálezu je definován následujícími patentovými nároky ajejich ekvivalenty.
Claims (19)
- PATENTOVÉ NÁROKY io1. Lidská monoklonální protilátka, která se váže na antigen 4 cytotoxických T lymfocytů (CTLA—4) nebo její antigen-vázající fragment, kde uvedená protilátka obsahuje aminokyselinové sekvence CDRI, CDR2 a CDR3 uvedené v SEKVENCI ID. Č. 70 a aminokyselinové sekvence CDRI, CDR2 a CDR3 uvedené v SEKVENCI ID. Č. 71.
- 2. Protilátka nebo její antigen-vázající fragment podle nároku 1, kde lehký řetězec uvedené protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 71.
- 3. Protilátka nebo její antigen-vázající fragment podle nároku I, kde těžký řetězec uvedené 20 protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 70.
- 4. Protilátka nebo její antigen-vázající fragment podle nároku 1, kde uvedená protilátka obsahuje aminokyselinovou sekvenci variabilního úseku těžkého řetězce v SEKVENCE ID. Č. 70 a aminokyselinovou sekvenci variabilního úseku lehkého řetězce v SEKVENCI ID. Č. 71.
- 5. Protilátka podle nároku 1, kde protilátka obsahuje aminokyselinovou sekvenci těžkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 70 a aminokyselinovou sekvenci lehkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 71.
- 6. Protilátka nebo její antigen-vázající fragment podle nároku 1, kde uvedená protilátka nebo io její antigen-vázající fragment má jednu nebo více vlastností zvolených ze skupiny sestávající z následujících vlastností:a) kompetitivně inhibuje vazbu CTLA-4 s protilátkou podle některého z nároků 4 nebo 5;b) váže se na stejný epitop jako uvedená protilátka podle některého z nároků 4 nebo 5; a35 c) váže se na CTLA-4 se stejnou specifičností jako protilátka podle některého z nároků 4 nebo 5.
- 7. Protilátka nebo její antigen-vázající fragment podle nároku 1, přičemž uvedená protilátka nebo její antigen-vázající fragment kompetitivně inhibuje vazbu CTLA-4 s protilátkou obsahují40 cí aminokyselinovou sekvenci těžkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 70 a aminokyselinovou sekvenci lehkého řetězce SEKVENCE ID. Č. 71.
- 8. Monoklonální protilátka, která se váže na CTLA-4, nebo její antigen-vázající fragment, přičemž uvedená protilátka obsahuje:a) těžký řetězec obsahující aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 9 nebo aminokyselinovou sekvenci s ní alespoň z 90 % identickou; ab) lehký řetězec obsahující aminokyselinovou sekvenci SEKVENCE ID. Č. 22 nebo aminoky50 setinovou sekvenci s ní alespoň z 90 % identickou, přičemž uvedená protilátka nebo její antigen-vázající fragment má vazebnou afinitu pro CTLA 419“9 M nebo vyšší, inhibuje vazbu mezi CTLA-4 a B7-1 s ICso 100 nM nebo nižší a inhibuje vazbu mezi CTLA-4 a B7-2 s IC50 100 nM nebo nižší.-109CZ 302706 B6
- 9. Proti látka nebo její antigen-vázající fragment podle některého z nároku 1 až 8, kde uvedená protilátka nebo fragment inhibuje vazbu lidského C I LA 4 na B7-1 s IC™ 100 nM nebo nižší a inhibuje vazbu lidského CTLA-4 na B7-2 s ÍC™ lOOnM nebo nižší, přičemž uvedená5 protilátka má alespoň jednu vlastnost zvolenou ze skupiny sestávající z následujících vlastností:a) váže se na CTLA-4 s vazebnou afinitou
- 10 9 M nebo vyšší;b) zvyšuje produkci cytokinu v testu lidských T lymfocytů o 500 pg/ml nebo více; e) zvyšuje produkci IL—2 v testu lidských T lymfocytů o 500 pg/ml nebo více;io d) zvyšuje produkci interferonu-γ v testu lidských T lymfocytů o 500 pg/ml nebo více;e) naváže se na CTLA-4 myši, potkana nebo králíka af) váže se na CTLA—4 cynomologního makaka (Meicaca jáscicularis) a rhesus makaka (Macaca muUata).15 10. Protilátka nebo její antigen-vázající fragment podle nároku 9, kde uvedená protilátka inhibuje vazbu lidského CTLA-4 na B7-1 s IC™ 0,50 nM nebo nižší a inhibuje vazbu lidského CTLA-4 na B7-2 s IC™ 0,38 nM nebo nižší.
- 11. Farmaceutická kompozice pro léčení rakoviny a zánětlivých nebo autoimunitních onemoc30 nění, vyznačená tím, že obsahuje protilátku nebo fragment podle některého z nároků 1 až 10 a farmaceuticky přijatelný nosič.
- 12. Buněčná linie produkující protilátku nebo fragment podle některého z nároků 1 až 10.25
- 13. Izolovaná molekula nukleové kyseliny, která kóduje těžký řetězec nebo jeho antigen-vázající fragment nebo lehký řetězec nebo jeho antigen-vázající fragment protilátky podle některého z nároků 1 až 10.
- 14. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 13 operativně spojená s kontrolní30 expresní sekvencí.
- 15. Hostitelská buňka obsahující izolovanou molekulu nukleové kyseliny podle nároku 13 nebo 14.35
- 16. Použití protilátky nebo jejího fragmentu podle některého z nároků 1 až 10 nebo farmaceutické kompozice podle nároku 11 pro výrobu léčiva pro zvýšení tvorby cytokinu v T buňkách.
- 17. Použití protilátky nebo jejího fragmentu podle některého z nároků 1 až 10 nebo farmaceutické kompozice podle nároku 11 pro výrobu léčiva pro zesílení odezvy cytotoxických T buněk.
- 18. Použití podle nároku 17, kdy se protilátka nebo její fragment nepodílejí na cytotoxicitě závislé na komplementu.
- 19. Použití kombinace obsahující protilátku nebo jejího fragmentu podle některého z nároků 145 až. 10 nebo farmaceutické kompozice podle nároku 11 a buněk exprimujících faktor stimulující kolonie granulocytů-makrofágu pro výrobu léčiva pro léčení nádoru u subjektu trpícího tímto nádorem.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US11364798P | 1998-12-23 | 1998-12-23 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ20012349A3 CZ20012349A3 (cs) | 2001-10-17 |
CZ302706B6 true CZ302706B6 (cs) | 2011-09-14 |
Family
ID=22350712
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20110342A CZ303703B6 (cs) | 1998-12-23 | 1999-12-23 | Monoklonální protilátka nebo její antigen-vázající fragment, farmaceutická kompozice obsahující tuto protilátku nebo fragment, bunecná linie produkující tuto protilátku nebo fragment, zpusob prípravy této protilátky, izolovaná nukleová kyselina kóduj |
CZ20012349A CZ302706B6 (cs) | 1998-12-23 | 1999-12-23 | Lidská monoklonální protilátka, farmaceutická kompozice tuto protilátku obsahující, bunecná linie produkující tuto protilátku, izolovaná molekula kódující težký nebo lehký retezec uvedené protilátky, hostitelská bunka obsahující tuto izolovanou molek |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20110342A CZ303703B6 (cs) | 1998-12-23 | 1999-12-23 | Monoklonální protilátka nebo její antigen-vázající fragment, farmaceutická kompozice obsahující tuto protilátku nebo fragment, bunecná linie produkující tuto protilátku nebo fragment, zpusob prípravy této protilátky, izolovaná nukleová kyselina kóduj |
Country Status (41)
Country | Link |
---|---|
EP (3) | EP3553085A1 (cs) |
JP (2) | JP3793693B2 (cs) |
KR (3) | KR100849443B1 (cs) |
CN (1) | CN1328571B (cs) |
AP (1) | AP1590A (cs) |
AT (1) | ATE458008T1 (cs) |
AU (1) | AU772676B2 (cs) |
BG (1) | BG65899B1 (cs) |
BR (2) | BRPI9916853B8 (cs) |
CA (1) | CA2356215C (cs) |
CR (2) | CR6425A (cs) |
CU (1) | CU23292B7 (cs) |
CY (1) | CY1121451T1 (cs) |
CZ (2) | CZ303703B6 (cs) |
DE (1) | DE69942037D1 (cs) |
DK (2) | DK2112166T3 (cs) |
EA (1) | EA006972B1 (cs) |
EE (1) | EE05483B1 (cs) |
ES (2) | ES2706547T3 (cs) |
GE (1) | GEP20053594B (cs) |
HK (1) | HK1041274B (cs) |
HR (2) | HRP20010551B1 (cs) |
HU (2) | HU1300750D0 (cs) |
ID (1) | ID29991A (cs) |
IL (2) | IL143797A0 (cs) |
IS (2) | IS2798B (cs) |
LT (1) | LT2112166T (cs) |
MX (1) | MXPA01006422A (cs) |
NO (2) | NO332618B1 (cs) |
NZ (1) | NZ512553A (cs) |
OA (1) | OA11917A (cs) |
PL (2) | PL210435B1 (cs) |
PT (2) | PT2112166T (cs) |
RS (1) | RS51309B (cs) |
SG (2) | SG143018A1 (cs) |
SI (2) | SI2112166T1 (cs) |
SK (2) | SK288057B6 (cs) |
TR (2) | TR200200735T2 (cs) |
UA (1) | UA76936C2 (cs) |
WO (1) | WO2000037504A2 (cs) |
ZA (1) | ZA200105742B (cs) |
Families Citing this family (455)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7605238B2 (en) * | 1999-08-24 | 2009-10-20 | Medarex, Inc. | Human CTLA-4 antibodies and their uses |
MXPA02001911A (es) * | 1999-08-24 | 2003-07-21 | Medarex Inc | Anticuerpos ctla-4 humanos y sus usos. |
EP2338515A3 (en) | 2000-02-10 | 2011-11-16 | Abbott Laboratories | Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using |
US7981420B2 (en) | 2000-12-22 | 2011-07-19 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Foederung Der Wissenschaften E.V. | Therapeutic use of antibodies directed against repulsive guidance molecule (RGM) |
MX349009B (es) | 2001-01-05 | 2017-07-06 | Pfizer | Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento similar a insulina. |
CN100352501C (zh) | 2001-04-26 | 2007-12-05 | 比奥根艾迪克Ma公司 | Cripto阻断抗体及其用途 |
WO2002092017A2 (en) | 2001-05-16 | 2002-11-21 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Human antipneumococcal antibodies from non-human animals |
IL149701A0 (en) * | 2001-05-23 | 2002-11-10 | Pfizer Prod Inc | Use of anti-ctla-4 antibodies |
SG10201603108QA (en) * | 2001-06-26 | 2016-05-30 | Amgen Inc | Antibodies To OPGL |
AU2006228095B2 (en) * | 2001-10-11 | 2010-11-04 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
US7521053B2 (en) * | 2001-10-11 | 2009-04-21 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
AR039067A1 (es) | 2001-11-09 | 2005-02-09 | Pfizer Prod Inc | Anticuerpos para cd40 |
ES2327830T3 (es) | 2002-03-29 | 2009-11-04 | Schering Corporation | Anticuerpos monoclonales humanos anti-interleuquina-5 y metodos y composiciones que los contienen. |
US7452535B2 (en) * | 2002-04-12 | 2008-11-18 | Medarex, Inc. | Methods of treatment using CTLA-4 antibodies |
WO2004029069A2 (en) * | 2002-09-30 | 2004-04-08 | Pfizer Products Inc. | Hybridomas producing high levels of human sequence antibody |
DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
US7465446B2 (en) | 2003-05-30 | 2008-12-16 | Medarex, Inc. | Surrogate therapeutic endpoint for anti-CTLA4-based immunotherapy of disease |
EP1660537A2 (en) * | 2003-08-14 | 2006-05-31 | Dyax Corp. | Endotheliase-2 ligands |
AR045563A1 (es) * | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Warner Lambert Co | Anticuerpos dirigidos a m-csf |
US20050100965A1 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-12 | Tariq Ghayur | IL-18 binding proteins |
CN1956738B (zh) | 2004-01-09 | 2013-05-29 | 辉瑞大药厂 | MAdCAM抗体 |
KR100845354B1 (ko) * | 2004-03-26 | 2008-07-09 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 항-ctla-4 항체의 용도 |
US7494779B2 (en) | 2004-06-14 | 2009-02-24 | Li-Te Chin | Method for producing human antibodies to human CD152 with properties of agonist, antagonist, or inverse agonist |
EP1791868B1 (en) | 2004-07-01 | 2011-02-23 | Novo Nordisk A/S | Antibodies binding to receptors kir2dl1, -2, 3 but not kir2ds4 and their therapeutic use |
EP1802341A1 (en) | 2004-07-16 | 2007-07-04 | Pfizer Products Inc. | Combination treatment for non-hematologic malignancies using an anti-igf-1r antibody |
US7892827B2 (en) | 2004-11-26 | 2011-02-22 | Pieris Ag | Compound with affinity for the cytotoxic T lymphocyte-associated antigen (CTLA-4) |
BRPI0608815B1 (pt) * | 2005-03-08 | 2021-10-13 | Pfizer Products Inc | Composições de anticorpo anti-ctla-4 |
AU2014240252B2 (en) * | 2005-03-08 | 2016-10-06 | Pfizer Products Inc | Anti-CTLA-4 Antibody Compositions |
AU2012200203B2 (en) * | 2005-03-08 | 2014-07-03 | Pfizer Products Inc. | Anti-CTLA-4 Antibody Compositions |
AU2006227879A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Pfizer Products Inc. | Therapy of prostate cancer with CTLA4 antibodies and hormonal therapy |
JP2006265155A (ja) * | 2005-03-23 | 2006-10-05 | Link Genomics Kk | 癌の免疫療法 |
PT2343320T (pt) | 2005-03-25 | 2018-01-23 | Gitr Inc | Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações |
AU2006239860B2 (en) | 2005-04-25 | 2012-01-19 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies to myostatin |
JP4253037B2 (ja) | 2005-04-26 | 2009-04-08 | ファイザー・インク | P−カドヘリン抗体 |
WO2006117910A1 (ja) | 2005-04-28 | 2006-11-09 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | 抗血小板膜糖蛋白質ⅵモノクローナル抗体 |
JP5224707B2 (ja) * | 2005-04-28 | 2013-07-03 | 持田製薬株式会社 | 抗血小板膜糖蛋白質viモノクローナル抗体 |
CA2607147C (en) | 2005-05-09 | 2018-07-17 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
CN103830725A (zh) | 2005-06-08 | 2014-06-04 | 达纳-法伯癌症研究院 | 通过抑制程序性细胞死亡1(pd-1)途经治疗持续性感染和癌症的方法及组合物 |
JP2009500412A (ja) * | 2005-07-07 | 2009-01-08 | コーリー ファーマシューティカル グループ,インコーポレイテッド | 癌の処置のための、抗ctla−4抗体とcpgモチーフ含有合成オリゴデオキシヌクレオチドとの組み合わせ治療 |
CN100443503C (zh) * | 2005-07-18 | 2008-12-17 | 四川大学华西医院 | 人源化ctla-4单链抗体与人穿孔素通道形成肽p34的重组免疫毒素 |
EP2500356A3 (en) | 2005-08-19 | 2012-10-24 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
EP2520588A1 (en) | 2005-08-19 | 2012-11-07 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
DOP2006000195A (es) | 2005-09-07 | 2017-08-15 | Amgen Fremont Inc | Anticuerpos monoclonales humanos para la quinasa-1 tipo receptor de activina |
US7700567B2 (en) | 2005-09-29 | 2010-04-20 | Supergen, Inc. | Oligonucleotide analogues incorporating 5-aza-cytosine therein |
WO2007039256A2 (de) | 2005-09-30 | 2007-04-12 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Bindungsdomänen von proteinen der repulsive guidance molecule (rgm) proteinfamilie und funktionale fragmente davon sowie deren verwendung |
CN101300024A (zh) | 2005-11-08 | 2008-11-05 | 米德列斯公司 | 对于与免疫刺激性治疗抗体治疗有关的小肠结肠炎的TNF-α阻断剂治疗 |
RU2432362C2 (ru) | 2005-11-30 | 2011-10-27 | Эбботт Лэборетриз | Моноклональные антитела и их применения |
PT2289909E (pt) | 2005-11-30 | 2015-02-10 | Abbvie Inc | Método de rastreio, processo de purificação de globulómeros a-beta não difundíveis, anticorpos selectivos contra os referidos globulómeros a-beta não difundíveis e processo para o fabrico dos referidos anticorpos |
EP1954311A4 (en) | 2005-12-07 | 2009-12-23 | Medarex Inc | CTLA-4 ANTIBODY DOSAGE ESCALATION THERAPY |
EP2468765B1 (en) | 2006-03-03 | 2015-04-22 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | Tetramer of extracellular domain of PD-L1 |
AU2007241023B2 (en) | 2006-03-30 | 2013-11-28 | University Of California | Methods and compositions for localized secretion of anti-CTLA-4 antibodies |
US7919079B2 (en) * | 2006-03-31 | 2011-04-05 | Biosante Pharmaceuticals, Inc. | Cancer immunotherapy compositions and methods of use |
BRPI0709481A2 (pt) | 2006-04-07 | 2011-07-19 | Government Of The Us Secretary Dept Of Health And Human Services | anticorpo monoclonal isolado, anticorpo monoclonal humano isolado, composição farmacêutica, anticorpo anti-igf-i e anti-igf-ii recombinante isolado ou fragmento de ligação ao antìgeno do mesmo, método para detectar o fator i e o fator ii de crescimento insulina humana em uma amostra, método para dectetar o fator i de crescimento insulina humana em uma amostra, ácido nucléico isolado, célula recombinante , célula hospedeira ,método para preparar um anticorpo, método para preparar um anticorpo, método para tratar uma doença neoplásica em um indivìduo mamìfero, método para diagnosticar doença neoplásica em um indivìduo mamìfero e método para classificar um composto candidato a fármaco |
SI2511301T1 (en) | 2006-08-04 | 2018-05-31 | MedImmune Limited, | Human antibodies to ERBB 2 |
UA115964C2 (uk) | 2006-09-08 | 2018-01-25 | Еббві Айрленд Анлімітед Компані | Інтерлейкін-13-зв'язувальний білок |
US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
WO2008104386A2 (en) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Method for the treatment of amyloidoses |
EP2134855A4 (en) | 2007-03-12 | 2011-01-05 | Dana Farber Cancer Inst Inc | PROGNOSIS, DIAGNOSIS AND USES IN THE TREATMENT OF FANCI CANCER AND FANCI MODULATION AGENTS |
EP2142214A4 (en) | 2007-04-02 | 2012-03-21 | Amgen Fremont Inc | ANTI-IGE ANTIBODIES |
DK2175884T3 (en) | 2007-07-12 | 2016-09-26 | Gitr Inc | Combination USING GITR BINDING MOLECULES |
KR101666228B1 (ko) | 2007-09-28 | 2016-10-13 | 인트렉손 코포레이션 | 생물치료학적 분자를 발현시키기 위한 치료학적 유전자-스위치 작제물 및 생물반응기, 및 이의 용도 |
AU2008319053B2 (en) | 2007-11-01 | 2012-04-26 | Astellas Pharma Inc. | Immunosuppressive polypeptides and nucleic acids |
ES2628093T3 (es) | 2007-12-14 | 2017-08-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Moléculas de unión al receptor OX40 humano |
EP2962731A1 (en) | 2008-01-08 | 2016-01-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of ipilimumab and paclitaxel for the treatment of cancer |
US8263073B2 (en) | 2008-02-04 | 2012-09-11 | Medarex, Inc. | Anti-CTLA-4 antibodies with reduced blocking of binding of CTLA-4 to B7 and uses thereof |
JO2913B1 (en) | 2008-02-20 | 2015-09-15 | امجين إنك, | Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses |
US8962803B2 (en) | 2008-02-29 | 2015-02-24 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Antibodies against the RGM A protein and uses thereof |
WO2009134776A2 (en) | 2008-04-29 | 2009-11-05 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
JP5890174B2 (ja) | 2008-05-09 | 2016-03-22 | アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー | 終末糖化産物受容体(rage)に対する抗体及びその使用 |
AU2009256250B2 (en) | 2008-06-03 | 2013-05-30 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
CA2725666A1 (en) | 2008-06-03 | 2009-12-10 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
KR20110040886A (ko) | 2008-07-08 | 2011-04-20 | 아보트 러보러터리즈 | 프로스타글란딘 e2 결합 단백질 및 이의 용도 |
KR20110031369A (ko) | 2008-07-08 | 2011-03-25 | 아보트 러보러터리즈 | 프로스타글란딘 e2 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
US8119129B2 (en) | 2008-08-01 | 2012-02-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of anti-CTLA4 antibody with dasatinib for the treatment of proliferative diseases |
AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
JP5685535B2 (ja) | 2008-08-18 | 2015-03-18 | ファイザー インコーポレイティッド | Ccr2に対する抗体 |
KR101012267B1 (ko) * | 2008-08-29 | 2011-02-08 | 주식회사 세이프로드 | 파손이 방지되는 차선규제봉 및 차선규제봉 시공방법 |
WO2010042433A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of cd137 antibody and ctla-4 antibody for the treatment of proliferative diseases |
DK2387627T3 (en) | 2009-01-15 | 2016-07-04 | Adaptive Biotechnologies Corp | Adaptive immunity profiling and methods for producing monoclonal antibodies |
BRPI1013688A8 (pt) | 2009-03-05 | 2017-02-14 | Abbott Lab | Proteínas de ligação de il-17. |
US8283162B2 (en) | 2009-03-10 | 2012-10-09 | Abbott Laboratories | Antibodies relating to PIVKAII and uses thereof |
MX2012000851A (es) | 2009-07-20 | 2012-06-08 | Squibb Bristol Myers Co | Combinacion de anticuerpo de anti-antigeno 4 asociado al linfocito t citotoxico con diversos regimenes terapeuticos para tratamiento sinergistico de enfermedades proliferativas. |
MX336152B (es) | 2009-08-29 | 2016-01-08 | Abbvie Inc | Proteinas terapeutico de union a dll4. |
PE20121530A1 (es) | 2009-09-01 | 2012-12-22 | Abbvie Inc | Inmunoglobulinas con dominio variable dual |
EP2949671A1 (en) | 2009-10-12 | 2015-12-02 | Pfizer Inc | Cancer treatment |
RU2012119756A (ru) | 2009-10-15 | 2013-11-20 | Эбботт Лэборетриз | Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение |
UY32979A (es) | 2009-10-28 | 2011-02-28 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
US8420083B2 (en) | 2009-10-31 | 2013-04-16 | Abbvie Inc. | Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof |
EP2510001B1 (en) | 2009-12-08 | 2015-12-02 | AbbVie Deutschland GmbH & Co KG | Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration |
RU2605928C2 (ru) | 2010-03-02 | 2016-12-27 | Эббви Инк. | Терапевтические dll4-связывающие белки |
ES2684475T3 (es) | 2010-04-15 | 2018-10-03 | Abbvie Inc. | Proteínas que se unen a beta amiloide |
MX350723B (es) | 2010-05-14 | 2017-09-14 | Abbvie Inc | Proteínas de unión a il-1. |
US20130064831A1 (en) | 2010-05-17 | 2013-03-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof |
US20120009196A1 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
US9120862B2 (en) | 2010-07-26 | 2015-09-01 | Abbott Laboratories | Antibodies relating to PIVKA-II and uses thereof |
SG188190A1 (en) | 2010-08-03 | 2013-04-30 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
CA2808187A1 (en) | 2010-08-14 | 2012-02-23 | Abbvie Inc. | Amyloid-beta binding proteins |
DK3333188T3 (da) | 2010-08-19 | 2022-03-07 | Zoetis Belgium S A | Anti-NGF-antistoffer og deres anvendelse |
WO2012027570A2 (en) | 2010-08-26 | 2012-03-01 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
EP2646552B1 (en) * | 2010-12-02 | 2017-07-05 | Pieris Pharmaceuticals GmbH | Muteins of human lipocalin 2 with affinity for ctla-4 |
ES2644236T3 (es) | 2010-12-14 | 2017-11-28 | National University Of Singapore | Anticuerpo humano monoclonal con especificidad para el virus Dengue serotipo 1 E proteína y usos de la misma |
RU2627171C2 (ru) | 2010-12-21 | 2017-08-03 | Эббви Инк. | Il-1 альфа и бета биспецифические иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение |
WO2012088094A2 (en) | 2010-12-21 | 2012-06-28 | Abbott Laboratories | Il-1 binding proteins |
GB201103955D0 (en) | 2011-03-09 | 2011-04-20 | Antitope Ltd | Antibodies |
US9150644B2 (en) | 2011-04-12 | 2015-10-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies that bind insulin-like growth factor (IGF) I and II |
US20140341913A1 (en) | 2011-07-13 | 2014-11-20 | Abbvie Inc. | Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies |
WO2013013029A1 (en) | 2011-07-19 | 2013-01-24 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Anti-clta4, anti-glut2 protein for the treatment of type 1 diabetes |
EP2750768B1 (en) | 2011-08-30 | 2018-10-03 | Astex Pharmaceuticals, Inc. | Decitabine derivative formulations |
TW201326207A (zh) | 2011-10-24 | 2013-07-01 | Abbvie Inc | 抗tnf免疫結合物 |
MX2014004977A (es) | 2011-10-24 | 2014-09-11 | Abbvie Inc | Inmunoaglutinantes dirigidos contra esclerostina. |
MX2014005570A (es) | 2011-11-08 | 2014-05-30 | Pfizer | El uso de anticuerpos anti factor estimulante de la colonia de macrofagos para tratar trastornos inflamatorios. |
CA3204283A1 (en) | 2011-12-14 | 2013-06-20 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders |
CA2855570A1 (en) | 2011-12-14 | 2013-06-20 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders |
EP2797955A2 (en) | 2011-12-30 | 2014-11-05 | AbbVie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins against il-13 and/or il-17 |
LT2807192T (lt) | 2012-01-27 | 2018-07-25 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Kompozicijos ir būdai, skirti ligų, susijusių su neuritų degeneracija, diagnostikai ir gydymui |
US20150110779A1 (en) | 2012-03-15 | 2015-04-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for predicting gastrointestinal immune-related adverse events (gi-irae) in patients treated with modulation of the co-stimulatory pathway |
US20150079100A1 (en) | 2012-03-23 | 2015-03-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treatments using ctla-4 antibodies |
EP2836514A4 (en) | 2012-04-13 | 2015-12-30 | Childrens Medical Center | TIKI INHIBITORS |
HUE044612T2 (hu) | 2012-05-04 | 2019-11-28 | Pfizer | Prosztata-asszociált antigének és vakcina-alapú immunterápiás rendek |
WO2013169971A1 (en) | 2012-05-10 | 2013-11-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Anti-tumor antibodies as predictive or prognostic biomarkers of efficacy and survival in ipilimumab-treated patients |
EP2850102A1 (en) | 2012-05-15 | 2015-03-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling |
ES2894852T3 (es) | 2012-06-06 | 2022-02-16 | Zoetis Services Llc | Anticuerpos anti-NGF caninizados y métodos de los mismos |
UY34887A (es) | 2012-07-02 | 2013-12-31 | Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware | Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos |
TW201402608A (zh) | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Abbvie Inc | Il-1結合蛋白質 |
PT2887959T (pt) * | 2012-08-23 | 2019-02-01 | Seattle Genetics Inc | Conjugados anticorpo-fármaco (adc) que se ligam a proteínas 158p1d7 |
MY171664A (en) | 2012-11-01 | 2019-10-22 | Abbvie Inc | Anti-dll4/vegf dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US9550986B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-01-24 | Abbvie Inc. | High-throughput antibody humanization |
CN110448566A (zh) | 2013-03-01 | 2019-11-15 | 阿斯泰克斯制药公司 | 药物组合 |
CN105452292A (zh) | 2013-03-14 | 2016-03-30 | 帕卡什·吉尔 | 使用结合细胞表面grp78的抗体进行癌症治疗 |
MX2015012824A (es) | 2013-03-14 | 2016-06-24 | Abbott Lab | Antigenos recombinantes ns3 del vhc y mutantes de los mismos para la deteccion mejorada de anticuerpos. |
EP3916103A1 (en) | 2013-03-14 | 2021-12-01 | Abbott Laboratories | Hcv core lipid binding domain monoclonal antibodies |
JP6505076B2 (ja) | 2013-03-14 | 2019-04-24 | アボット・ラボラトリーズAbbott Laboratories | Hcv抗原−抗体組み合わせアッセイおよびこれに使用するための方法および組成物 |
US9469686B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-10-18 | Abbott Laboratories | Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same |
BR112015023797A2 (pt) | 2013-03-15 | 2017-10-24 | Abbvie Inc | proteínas de ligação de especificidade dupla dirigidas contra il-1b e/ou il-17 |
ES2753419T3 (es) | 2013-06-07 | 2020-04-08 | Univ Duke | Inhibidores del factor H del complemento |
CA2919725C (en) | 2013-08-08 | 2023-04-18 | Cytune Pharma | An il-15 and il-15r.aplha. sushi domain based modulokines |
DK3030262T3 (da) | 2013-08-08 | 2019-12-02 | Cytune Pharma | Kombineret farmaceutisk sammensætning |
HRP20230603T1 (hr) | 2013-09-20 | 2023-09-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Kombinacija anti-lag-3 antitijela i anti-pd-1 antitijela za liječenje tumora |
KR102006527B1 (ko) | 2013-11-01 | 2019-08-02 | 화이자 인코포레이티드 | 전립선-연관 항원의 발현을 위한 벡터 |
JP2016540042A (ja) | 2013-11-05 | 2016-12-22 | コグネート バイオサービシズ, インコーポレイテッド | がんを処置するためのチェックポイント阻害剤および治療薬の組合せ |
US20160264670A1 (en) | 2013-11-06 | 2016-09-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof |
WO2015104406A2 (en) | 2014-01-13 | 2015-07-16 | Pieris Ag | Multi-specific polypeptide useful for localized tumor immunomodulation |
CA2949998A1 (en) | 2014-05-28 | 2015-12-03 | Agenus Inc. | Anti-gitr antibodies and methods of use thereof |
WO2015187835A2 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof |
CN105296433B (zh) | 2014-08-01 | 2018-02-09 | 中山康方生物医药有限公司 | 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途 |
PT3186281T (pt) | 2014-08-28 | 2019-07-10 | Halozyme Inc | Terapia de combinação com uma enzima de degradação de hialuronano e um inibidor de pontos de verificação imunológica |
CA2944085C (en) | 2014-09-16 | 2018-04-10 | Ease Charm Limited | Anti-egfr antibody and uses of same |
CN106999574B (zh) | 2014-10-10 | 2022-05-24 | 伊黛拉制药有限公司 | 使用tlr9激动剂与检查点抑制剂对癌症的治疗 |
CA3126536C (en) | 2014-10-14 | 2023-07-25 | Halozyme, Inc. | Compositions of adenosine deaminase-2 (ada2), variants thereof and methods of using same |
WO2016070769A1 (zh) * | 2014-11-04 | 2016-05-12 | 北京韩美药品有限公司 | 同时阻断b7/cd28和il6/il6r/gp130信号通路的重组融合蛋白 |
WO2016074580A1 (zh) * | 2014-11-14 | 2016-05-19 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种提高cd4阳性t淋巴细胞存活率和活性的试剂及其应用 |
PE20170782A1 (es) | 2014-11-21 | 2017-07-04 | Bristol Myers Squibb Co | Anticuerpos frente a cd73 y usos de los mismos |
RS60998B1 (sr) | 2014-11-21 | 2020-11-30 | Bristol Myers Squibb Co | Antitela koja sadrže modifikovane regione teškog lanca |
US20170355768A1 (en) | 2014-12-04 | 2017-12-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of anti-cs1 and anti-pd1 antibodies to treat cancer (myeloma) |
CN104387453A (zh) * | 2014-12-08 | 2015-03-04 | 深圳市同康生物医药有限公司 | 树突状细胞靶向肽及编码基因及应用 |
US10093733B2 (en) | 2014-12-11 | 2018-10-09 | Abbvie Inc. | LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins |
KR102644115B1 (ko) | 2014-12-23 | 2024-03-05 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | Tigit에 대한 항체 |
LT3240801T (lt) | 2014-12-31 | 2021-02-25 | Checkmate Pharmaceuticals, Inc. | Kombinuota navikų imunoterapija |
WO2016127052A1 (en) | 2015-02-05 | 2016-08-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Cxcl11 and smica as predictive biomarkers for efficacy of anti-ctla4 immunotherapy |
KR20180006367A (ko) * | 2015-02-13 | 2018-01-17 | 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | Ctla4에 결합하는 항체 치료제 |
WO2016146143A1 (en) | 2015-03-16 | 2016-09-22 | Amal Therapeutics Sa | Cell penetrating peptides and complexes comprising the same |
US10376535B2 (en) | 2015-03-26 | 2019-08-13 | University Of Rochester | Therapy for malignant disease |
CN107530432B (zh) | 2015-04-07 | 2021-04-27 | Cytlimic公司 | 药物 |
EP3729967A1 (en) | 2015-05-06 | 2020-10-28 | Snipr Technologies Limited | Altering microbial populations & modifying microbiota |
EP3718569B1 (en) | 2015-05-22 | 2023-05-03 | Translational Drug Development, LLC | Benzamide and active compound compositions and methods of use |
EP3303395B1 (en) | 2015-05-29 | 2019-12-11 | AbbVie Inc. | Anti-cd40 antibodies and uses thereof |
UY36687A (es) | 2015-05-29 | 2016-11-30 | Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware | Anticuerpos contra ox40 y sus usos |
TW201710286A (zh) | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗vegf、pdgf及/或其受體之結合蛋白 |
HUE056491T2 (hu) | 2015-06-29 | 2022-02-28 | Bristol Myers Squibb Co | Immunterápiás adagolási rendszerek, amelyek tartalmaznak pomalidomid-et és anti-CS1-antitestet rák kezelésére |
JP2018526977A (ja) | 2015-06-29 | 2018-09-20 | ザ ロックフェラー ユニヴァーシティ | アゴニスト活性が増強されたcd40に対する抗体 |
AU2016287585B2 (en) | 2015-07-02 | 2020-12-17 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Lyophilized pharmaceutical compositions |
CA2991628C (en) | 2015-07-16 | 2020-04-07 | Bioxcel Therapeutics, Inc. | A novel approach for treatment of cancer using immunomodulation |
EP3744340A3 (en) | 2015-07-16 | 2021-03-03 | Biokine Therapeutics Ltd. | Compositions and methods for treating cancer |
EP3331917A1 (en) | 2015-08-04 | 2018-06-13 | GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited | Combination treatments and uses and methods thereof |
US20180230431A1 (en) | 2015-08-07 | 2018-08-16 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combination Therapy |
EP3370733B1 (en) | 2015-11-02 | 2021-07-14 | Board of Regents, The University of Texas System | Methods of cd40 activation and immune checkpoint blockade |
US20180320136A1 (en) | 2015-11-03 | 2018-11-08 | GlycoMimitics, Inc. | Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies, hematopoietic stem cells, and methods of using the same |
AU2016349632A1 (en) | 2015-11-07 | 2018-05-24 | Multivir Inc. | Compositions comprising tumor suppressor gene therapy and immune checkpoint blockade for the treatment of cancer |
MX2018006072A (es) | 2015-11-19 | 2018-08-01 | Squibb Bristol Myers Co | Anticuerpos contra receptor de factor de necrosis de tumor inducido por glucocorticoides (gitr) y usos de los mismos. |
KR20180083944A (ko) | 2015-12-02 | 2018-07-23 | 아게누스 인코포레이티드 | 항체 및 이의 사용 방법 |
JP6955507B2 (ja) | 2015-12-14 | 2021-10-27 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | Pd‐1及びctla‐4との免疫応答性を有する二重特異性並びにその使用方法 |
US20190241658A1 (en) | 2016-01-10 | 2019-08-08 | Modernatx, Inc. | Therapeutic mRNAs encoding anti CTLA-4 antibodies |
IL295230A (en) | 2016-03-04 | 2022-10-01 | Bristol Myers Squibb Co | Combination therapy with anti-cd73 antibodies |
WO2017160599A1 (en) | 2016-03-14 | 2017-09-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Use of cd300b antagonists to treat sepsis and septic shock |
KR102413037B1 (ko) | 2016-03-15 | 2022-06-23 | 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | Napi2b 표적화된 항체-약물 접합체 및 이의 사용 방법 |
LT3429618T (lt) | 2016-03-16 | 2024-05-10 | Amal Therapeutics Sa | Imuninės sistemos patikros taško moduliatoriaus ir komplekso, apimančio į ląsteles prasiskverbiantį peptidą, krovinį ir tlr peptido agonistą, derinys, skirtas naudoti medicinoje |
WO2017173091A1 (en) | 2016-03-30 | 2017-10-05 | Musc Foundation For Research Development | Methods for treatment and diagnosis of cancer by targeting glycoprotein a repetitions predominant (garp) and for providing effective immunotherapy alone or in combination |
EP3436066A1 (en) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Checkmate Pharmaceuticals, Inc. | Fc receptor-mediated drug delivery |
JP7038064B2 (ja) | 2016-04-18 | 2022-03-17 | セルデックス セラピューティクス インコーポレイテッド | ヒトcd40に結合するアゴニスト抗体およびその使用 |
PL3449017T3 (pl) | 2016-04-29 | 2022-06-27 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Ukierunkowane pomiary aktywności transkrypcyjnej związanej z receptorami hormonów |
US20190298824A1 (en) | 2016-05-04 | 2019-10-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Serv | Albumin-binding immunomodulatory compositions and methods of use thereof |
WO2017201352A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Mrna combination therapy for the treatment of cancer |
CN109641044A (zh) | 2016-05-30 | 2019-04-16 | 吉奥瓦科斯公司 | 用于产生对乙型肝炎病毒的免疫应答的组合物和方法 |
US10994033B2 (en) | 2016-06-01 | 2021-05-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Imaging methods using 18F-radiolabeled biologics |
GB201609811D0 (en) | 2016-06-05 | 2016-07-20 | Snipr Technologies Ltd | Methods, cells, systems, arrays, RNA and kits |
TWI793162B (zh) | 2016-06-20 | 2023-02-21 | 英商克馬伯有限公司 | 抗體 |
KR20190035714A (ko) | 2016-06-30 | 2019-04-03 | 온코루스, 인크. | 치료 폴리펩티드의 위형된 종양용해성 바이러스 전달 |
AU2017297506A1 (en) | 2016-07-14 | 2019-02-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against TIM3 and uses thereof |
NL2017270B1 (en) * | 2016-08-02 | 2018-02-09 | Aduro Biotech Holdings Europe B V | New anti-hCTLA-4 antibodies |
US11649289B2 (en) | 2016-08-04 | 2023-05-16 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Anti-ICOS and anti-PD-1 antibody combination therapy |
WO2018035710A1 (en) | 2016-08-23 | 2018-03-01 | Akeso Biopharma, Inc. | Anti-ctla4 antibodies |
KR20190057345A (ko) | 2016-09-21 | 2019-05-28 | 아말 테라퓨틱스 에스에이 | 암 치료를 위한, 세포 투과 펩타이드, 멀티 에피토프 및 tlr 펩타이드 작용제를 포함하는 융합체 |
CN116196425A (zh) | 2016-09-27 | 2023-06-02 | 得克萨斯系统大学评议会 | 通过调节微生物组来增强免疫检查点阻断疗法的方法 |
CN110249226B (zh) | 2016-10-03 | 2023-08-25 | 雅培实验室 | 评估患者样品中gfap状态的改进方法 |
JP6976322B2 (ja) * | 2016-10-10 | 2021-12-08 | クラウン バイオサイエンス,インコーポレイテッド(タイツァン) | 新規抗ctla4抗体 |
WO2018070069A1 (ja) | 2016-10-11 | 2018-04-19 | サイトリミック株式会社 | 医薬 |
CA3040458A1 (en) | 2016-10-12 | 2018-04-19 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for tusc2 immunotherapy |
KR102634093B1 (ko) | 2016-10-28 | 2024-02-07 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-pd-1 항체를 사용하여 요로상피 암종을 치료하는 방법 |
US11124570B2 (en) | 2016-11-08 | 2021-09-21 | Qilu Puget Sound Biotherapeutics Corporation | Anti-PD1 and anti-CTLA4 antibodies |
CA3043356A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-17 | Musc Foundation For Research Development | Cd38-nad+ regulated metabolic axis in anti-tumor immunotherapy |
WO2018089628A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-17 | Agenus Inc. | Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof |
US11135307B2 (en) | 2016-11-23 | 2021-10-05 | Mersana Therapeutics, Inc. | Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates |
IL300095A (en) | 2016-11-23 | 2023-03-01 | Translational Drug Dev Llc | Compositions of benzamide and an agonist for the cancer necrosis factor receptor superfamily and uses thereof |
WO2018099539A1 (en) | 2016-11-29 | 2018-06-07 | Horst Lindhofer | Combination of t-cell redirecting multifunctional antibodies with immune checkpoint modulators and uses thereof |
CN110248676A (zh) | 2016-12-01 | 2019-09-17 | 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司 | 组合疗法 |
KR20190090823A (ko) | 2016-12-01 | 2019-08-02 | 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 | 조합 요법 |
KR20190112263A (ko) | 2016-12-12 | 2019-10-04 | 멀티비르 인코포레이티드 | 암 및 감염성 질환의 치료 및 예방을 위한 바이러스 유전자 치료요법 및 면역 체크포인트 억제제를 포함하는 방법 및 조성물 |
US11273155B2 (en) | 2016-12-12 | 2022-03-15 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Combination of antibody-drug conjugate and immune checkpoint inhibitor |
TWI674261B (zh) | 2017-02-17 | 2019-10-11 | 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 | Nlrp3 調節劑 |
WO2018156250A1 (en) * | 2017-02-21 | 2018-08-30 | Remd Biotherapeutics, Inc. | Cancer treatment using antibodies that bind cytotoxic t-lymphocyte antigen-4 (ctla-4) |
CN110612447B (zh) | 2017-02-24 | 2024-02-06 | 德克萨斯州立大学董事会 | 用于检测早期胰腺癌的测定 |
EP3366703B1 (en) | 2017-02-28 | 2019-04-03 | Ralf Kleef | Immune checkpoint therapy with hyperthermia |
TW201834697A (zh) | 2017-02-28 | 2018-10-01 | 美商梅爾莎納醫療公司 | Her2標靶抗體-藥物結合物之組合療法 |
WO2018167780A1 (en) | 2017-03-12 | 2018-09-20 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of prognosing and treating cancer |
EP3596469A1 (en) | 2017-03-12 | 2020-01-22 | Yeda Research and Development Co., Ltd. | Methods of diagnosing and prognosing cancer |
US11016092B2 (en) | 2017-03-23 | 2021-05-25 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1 |
SG10202110594UA (en) | 2017-03-31 | 2021-11-29 | Bristol Myers Squibb Co | Methods of treating tumor |
TWI788340B (zh) | 2017-04-07 | 2023-01-01 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 抗icos促效劑抗體及其用途 |
JP7344797B2 (ja) | 2017-04-15 | 2023-09-14 | アボット・ラボラトリーズ | 早期バイオマーカーを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の、超急性の診断及び決定の一助となるための方法 |
KR20190141223A (ko) | 2017-04-26 | 2019-12-23 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 디술피드 결합 환원을 최소화하는 항체 생산 방법 |
CA3053410A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury using early biomarkers on at least two samples from the same human subject |
US10865238B1 (en) | 2017-05-05 | 2020-12-15 | Duke University | Complement factor H antibodies |
CN108948194B (zh) * | 2017-05-19 | 2023-02-17 | 上海药明生物技术有限公司 | 一种新的ctla-4单克隆抗体 |
US11643463B2 (en) * | 2017-05-19 | 2023-05-09 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Monoclonal antibodies to cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4) |
KR20220167342A (ko) | 2017-05-25 | 2022-12-20 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체 |
WO2018218169A1 (en) | 2017-05-25 | 2018-11-29 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers |
SI3631454T1 (sl) | 2017-05-30 | 2023-12-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Zdravljenje lag-3 pozitivnih tumorjev |
BR112019025313A2 (pt) | 2017-05-30 | 2020-06-23 | Abbott Laboratories | Métodos para auxílio no diagnóstico e avaliação de uma lesão cerebral traumática leve em um indivíduo humano usando troponina cardíaca i |
KR20200011447A (ko) | 2017-05-30 | 2020-02-03 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-lag-3 항체 또는 항-lag-3 항체 및 항-pd-1 또는 항-pd-l1 항체를 포함하는 조성물 |
EP4245375A3 (en) | 2017-05-30 | 2023-12-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent |
EP3634584A4 (en) | 2017-06-09 | 2021-04-07 | Providence Health & Services - Oregon | USE OF CD39 AND CD103 FOR THE IDENTIFICATION OF REACTIVE HUMAN TUMOR CELLS FOR THE TREATMENT OF CANCER |
JP7454945B2 (ja) | 2017-07-03 | 2024-03-25 | アボット・ラボラトリーズ | 血液中のユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼl1レベルを測定するための、改善された方法 |
WO2019014402A1 (en) | 2017-07-14 | 2019-01-17 | Innate Tumor Immunity, Inc. | MODULATORS OF NLRP3 |
WO2019014572A1 (en) | 2017-07-14 | 2019-01-17 | Pfizer, Inc. | ANTIBODIES DIRECTED AGAINST MADCAM |
TWI799432B (zh) * | 2017-07-27 | 2023-04-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗ctla-4抗體及其用途 |
KR20200035438A (ko) | 2017-08-03 | 2020-04-03 | 오쓰까 세이야꾸 가부시키가이샤 | 약물 화합물 및 이의 정제 방법 |
WO2019036855A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Adagene Inc. | ANTI-CD137 MOLECULES AND THEIR USE |
WO2019075090A1 (en) | 2017-10-10 | 2019-04-18 | Tilos Therapeutics, Inc. | ANTI-LAP ANTIBODIES AND USES THEREOF |
US20200239577A1 (en) | 2017-10-15 | 2020-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
JP2021501801A (ja) | 2017-11-01 | 2021-01-21 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーBristol−Myers Squibb Company | 癌の処置に用いるための免疫刺激アゴニスト抗体 |
US11638760B2 (en) | 2017-11-27 | 2023-05-02 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates |
CN108003238B (zh) * | 2017-11-30 | 2021-02-02 | 常州费洛斯药业科技有限公司 | 一种能特异识别ctla-4的全人源单克隆抗体或抗体片段及其方法和用途 |
AU2018378971A1 (en) | 2017-12-09 | 2020-01-02 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (TBI), using glial fibrillary acidic protein (GFAP) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (UCH-L1) |
EP3721234A1 (en) | 2017-12-09 | 2020-10-14 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in diagnosing and evaluating a traumatic brain injury in a human subject using a combination of gfap and uch-l1 |
DK3710484T3 (da) * | 2017-12-20 | 2023-11-27 | Harbour Biomed Shanghai Co Ltd | Ctla-4-bindende antistoffer og anvendelser deraf |
CN111757757A (zh) | 2017-12-21 | 2020-10-09 | 梅尔莎纳医疗公司 | 吡咯并苯并二氮呯抗体共轭物 |
JP7284759B2 (ja) | 2017-12-27 | 2023-05-31 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | 抗cd40抗体およびその使用 |
JP2021508477A (ja) | 2017-12-29 | 2021-03-11 | オンコラス, インコーポレイテッド | 治療用ポリペプチドの腫瘍溶解性ウイルス送達 |
EP3737700A1 (en) | 2018-01-12 | 2020-11-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against tim3 and uses thereof |
CN111629731A (zh) | 2018-01-22 | 2020-09-04 | 百时美施贵宝公司 | 治疗癌症的组合物和方法 |
WO2019148445A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Adagene Inc. | Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same |
CA3093742A1 (en) | 2018-03-12 | 2019-09-19 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Use of caloric restriction mimetics for potentiating chemo-immunotherapy for the treatment of cancers |
EP3765499A1 (en) | 2018-03-12 | 2021-01-20 | Zoetis Services LLC | Anti-ngf antibodies and methods thereof |
CA3094329A1 (en) | 2018-03-19 | 2020-02-20 | Multivir Inc. | Methods and compositions comprising tumor suppressor gene therapy and cd122/cd132 agonists for the treatment of cancer |
CN112218892B (zh) * | 2018-03-19 | 2023-04-25 | 上海药明生物技术有限公司 | 新型抗ctla-4抗体多肽 |
KR20200135421A (ko) | 2018-03-21 | 2020-12-02 | 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. | 산성 pH에서 VISTA에 결합하는 항체 |
US11242393B2 (en) | 2018-03-23 | 2022-02-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against MICA and/or MICB and uses thereof |
GB2609346B (en) | 2018-03-25 | 2023-06-21 | Snipr Biome Aps | Treating & preventing microbial infections |
US10760075B2 (en) | 2018-04-30 | 2020-09-01 | Snipr Biome Aps | Treating and preventing microbial infections |
CA3094108A1 (en) | 2018-03-27 | 2019-10-03 | Board Of Regents, The University Of Texas Systems | Compounds with anti-tumor activity against cancer cells bearing her2 exon 19 mutations |
WO2019191676A1 (en) | 2018-03-30 | 2019-10-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
US20190365861A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-12-05 | Xencor, Inc. | Il-15/il-15ra heterodimeric fc fusion proteins and uses thereof |
KR20210010862A (ko) | 2018-04-18 | 2021-01-28 | 젠코어 인코포레이티드 | IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 PD-1 항원 결합 도메인을 함유하는 PD-1 표적화 이종이량체 융합 단백질 및 이의 용도 |
US12037344B2 (en) | 2018-04-25 | 2024-07-16 | Innate Tumor Immunity, Inc | NLRP3 modulators |
US20210253614A1 (en) | 2018-05-31 | 2021-08-19 | Peloton Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for inhibiting cd73 |
BR112020027095A2 (pt) | 2018-07-09 | 2021-03-30 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Anticorpos de ligação a ilt4 |
SG11202100023XA (en) | 2018-07-11 | 2021-01-28 | Actym Therapeutics Inc | Engineered immunostimulatory bacterial strains and uses thereof |
CN112638948A (zh) | 2018-07-11 | 2021-04-09 | 戊瑞治疗有限公司 | 在酸性pH下结合至VISTA的抗体 |
KR20210032488A (ko) | 2018-07-20 | 2021-03-24 | 서피스 온콜로지, 인크. | 항-cd112r 조성물 및 방법 |
WO2020037091A1 (en) | 2018-08-16 | 2020-02-20 | Innate Tumor Immunity, Inc. | Imidazo[4,5-c]quinoline derived nlrp3-modulators |
CN112888677A (zh) | 2018-08-16 | 2021-06-01 | 先天肿瘤免疫公司 | 被取代的4-氨基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉化合物及其改进的制备方法 |
KR20210045430A (ko) | 2018-08-16 | 2021-04-26 | 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 | 이미다조[4,5-c]퀴놀린 유래 NLRP3-조정제 |
EP3617230A1 (en) | 2018-09-03 | 2020-03-04 | BioInvent International AB | Novel antibodies and nucleotide sequences, and uses thereof |
WO2020048942A1 (en) | 2018-09-04 | 2020-03-12 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for enhancing cytotoxic t lymphocyte-dependent immune responses |
US20220073638A1 (en) | 2018-09-19 | 2022-03-10 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy |
US20210213102A1 (en) | 2018-09-21 | 2021-07-15 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Novel interleukin-2 and use thereof |
WO2020057646A1 (zh) | 2018-09-21 | 2020-03-26 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 新型白介素2及其用途 |
WO2020070053A1 (en) | 2018-10-01 | 2020-04-09 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Use of inhibitors of stress granule formation for targeting the regulation of immune responses |
US11358999B2 (en) | 2018-10-03 | 2022-06-14 | Xencor, Inc. | IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins |
WO2020076969A2 (en) | 2018-10-10 | 2020-04-16 | Tilos Therapeutics, Inc. | Anti-lap antibody variants and uses thereof |
BR112021006783A2 (pt) | 2018-10-12 | 2021-07-13 | Xencor, Inc. | proteína de fusão fc heterodimérica de il-15/r¿ direcionada, composição de ácido nucleico, composição de vetor de expressão, célula hospedeira, e, métodos de produção da proteína de fusão fc heterodimérica de il-15/r¿ direcionada e de tratamento de um câncer. |
WO2020086724A1 (en) | 2018-10-23 | 2020-04-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
CA3117050A1 (en) | 2018-10-29 | 2020-05-07 | Mersana Therapeutics, Inc. | Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers |
KR20210092769A (ko) | 2018-11-16 | 2021-07-26 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-nkg2a 항체 및 그의 용도 |
WO2020106621A1 (en) | 2018-11-19 | 2020-05-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | A modular, polycistronic vector for car and tcr transduction |
CN113272427A (zh) | 2018-11-28 | 2021-08-17 | 得克萨斯大学体系董事会 | 免疫细胞的多重基因组编辑以增强功能性和对抑制环境的抵抗力 |
ES2971964T3 (es) | 2018-11-28 | 2024-06-10 | Inst Nat Sante Rech Med | Métodos y kit para someter a ensayo el potencial lítico de células efectoras inmunitarias |
EP3887397A1 (en) | 2018-11-28 | 2021-10-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies comprising modified heavy constant regions |
WO2020112493A1 (en) | 2018-11-29 | 2020-06-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for ex vivo expansion of natural killer cells and use thereof |
WO2020115262A1 (en) | 2018-12-07 | 2020-06-11 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Use of cd26 and cd39 as new phenotypic markers for assessing maturation of foxp3+ t cells and uses thereof for diagnostic purposes |
WO2020123453A2 (en) | 2018-12-11 | 2020-06-18 | Theravance Biopharma R&D Ip, Llc | Alk5 inhibitors |
EP3897624A1 (en) | 2018-12-17 | 2021-10-27 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) | Use of sulconazole as a furin inhibitor |
EP3902562A1 (en) | 2018-12-28 | 2021-11-03 | Transgene SA | M2-defective poxvirus |
EP3911417B1 (en) | 2019-01-14 | 2022-10-26 | Innate Tumor Immunity, Inc. | Heterocyclic nlrp3 modulators , for use in the treatment of cancer |
CN113286787A (zh) | 2019-01-14 | 2021-08-20 | 先天肿瘤免疫公司 | Nlrp3调节剂 |
CN113286786A (zh) | 2019-01-14 | 2021-08-20 | 先天肿瘤免疫公司 | Nlrp3调节剂 |
JP7373571B2 (ja) | 2019-01-14 | 2023-11-02 | イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド | がん治療に用いるためのnlrp3モジュレーターとしての置換キナゾリン |
JP2022517029A (ja) | 2019-01-15 | 2022-03-03 | アンセルム(アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル) | 変異したインターロイキン-34(il-34)ポリペプチドおよび治療におけるその使用 |
WO2020169472A2 (en) | 2019-02-18 | 2020-08-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods of inducing phenotypic changes in macrophages |
US20220143161A1 (en) | 2019-03-13 | 2022-05-12 | Etherna Immunotherapies Nv | Mrna vaccine |
EP3946628A1 (en) | 2019-03-28 | 2022-02-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
US20220041733A1 (en) | 2019-03-28 | 2022-02-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
JP2022527972A (ja) | 2019-04-02 | 2022-06-07 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 前悪性病変を有する患者において癌を予測及び予防する方法 |
US20220160692A1 (en) | 2019-04-09 | 2022-05-26 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Use of sk2 inhibitors in combination with immune checkpoint blockade therapy for the treatment of cancer |
WO2020212484A1 (en) | 2019-04-17 | 2020-10-22 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and compositions for treatment of nlrp3 inflammasome mediated il-1beta dependent disorders |
AU2020268199A1 (en) | 2019-05-09 | 2021-11-18 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Methods for the production of hepatocytes |
EP3968971A1 (en) | 2019-05-17 | 2022-03-23 | Cancer Prevention Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating familial adenomatous polyposis |
EP3977132A1 (en) | 2019-05-30 | 2022-04-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and combination therapy |
WO2020243568A1 (en) | 2019-05-30 | 2020-12-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy |
WO2020243563A1 (en) | 2019-05-30 | 2020-12-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy |
WO2020247974A1 (en) | 2019-06-03 | 2020-12-10 | The University Of Chicago | Methods and compositions for treating cancer with collagen binding drug carriers |
BR112021024402A2 (pt) | 2019-06-03 | 2022-02-15 | Univ Chicago | Métodos e composições para tratamento de câncer com adjuvantes direcionados ao câncer |
US20210038684A1 (en) | 2019-06-11 | 2021-02-11 | Alkermes Pharma Ireland Limited | Compositions and Methods for Cancer Immunotherapy |
JP2022540759A (ja) | 2019-06-27 | 2022-09-20 | イーザアールエヌーエー イムノセラピーズ エンヴェー | 併用療法 |
BR112021026832A2 (pt) | 2019-07-02 | 2022-05-10 | Hutchinson Fred Cancer Res | Vetores ad35 recombinantes e aprimoramentos da terapia gênica relacionada |
EP3999539A1 (en) | 2019-07-15 | 2022-05-25 | Intervet International B.V. | Caninized antibodies to human and canine ctla-4 |
CN114174337A (zh) | 2019-07-15 | 2022-03-11 | 英特维特国际股份有限公司 | 针对犬ctla-4的犬源化抗体 |
WO2021024742A1 (ja) * | 2019-08-06 | 2021-02-11 | 国立大学法人筑波大学 | 細胞傷害アッセイ方法 |
WO2021024020A1 (en) | 2019-08-06 | 2021-02-11 | Astellas Pharma Inc. | Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer |
EP4031531A1 (en) | 2019-09-17 | 2022-07-27 | Bial-R&D Investments, S.A. | Substituted imidazole carboxamides and their use in the treatment of medical disorders |
WO2021055627A1 (en) | 2019-09-17 | 2021-03-25 | Bial- Biotech Investments, Inc. | Substituted n-heterocyclic carboxamides as acid ceramidase inhibitors and their use as medicaments |
KR20220100860A (ko) | 2019-09-17 | 2022-07-18 | 비알 - 알&디 인베스트먼츠, 에스.에이. | 질병의 치료에 사용하기 위한 치환된, 포화 및 불포화 n-헤테로시클릭 카르복사미드 및 관련 화합물 |
US20230192860A1 (en) | 2019-09-19 | 2023-06-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies Binding to Vista at Acidic pH |
AU2020350795A1 (en) | 2019-09-22 | 2022-03-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Quantitative spatial profiling for LAG-3 antagonist therapy |
KR20220066346A (ko) | 2019-09-25 | 2022-05-24 | 서피스 온콜로지, 인크. | 항-il-27 항체 및 이의 용도 |
EP3800201A1 (en) | 2019-10-01 | 2021-04-07 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Cd28h stimulation enhances nk cell killing activities |
AU2020358979A1 (en) | 2019-10-03 | 2022-04-21 | Xencor, Inc. | Targeted IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins |
EP4037710A1 (en) | 2019-10-04 | 2022-08-10 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) | Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer |
TW202128757A (zh) | 2019-10-11 | 2021-08-01 | 美商建南德克公司 | 具有改善之特性的 PD-1 標靶 IL-15/IL-15Rα FC 融合蛋白 |
EP4049675A4 (en) | 2019-10-25 | 2023-11-22 | Daiichi Sankyo Company, Limited | COMBINATION OF ANTI-GARP ANTIBODY AND IMMUNOREGULATOR |
WO2021087458A2 (en) | 2019-11-02 | 2021-05-06 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Targeting nonsense-mediated decay to activate p53 pathway for the treatment of cancer |
WO2021092220A1 (en) | 2019-11-06 | 2021-05-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy |
WO2021092221A1 (en) | 2019-11-06 | 2021-05-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy |
KR20220093349A (ko) | 2019-11-08 | 2022-07-05 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 흑색종에 대한 lag-3 길항제 요법 |
KR20220104208A (ko) | 2019-11-22 | 2022-07-26 | 세라밴스 바이오파마 알앤디 아이피, 엘엘씨 | Alk5 억제제로서 치환된 1,5-나프티리딘 또는 퀴놀린 |
EP4066852A4 (en) | 2019-11-27 | 2024-05-22 | NEC Corporation | PHARMACEUTICAL COMPOSITION |
WO2021113644A1 (en) | 2019-12-05 | 2021-06-10 | Multivir Inc. | Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer |
JP2023510108A (ja) | 2019-12-19 | 2023-03-13 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | Dgk阻害剤およびチェックポイントアンタゴニストの組み合わせ |
CR20220357A (es) | 2019-12-27 | 2022-08-24 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo anti antígeno-4 asociado al linfocito t citotóxico (ctla-4) y uso del mismo |
BR112022012918A2 (pt) | 2020-01-07 | 2022-09-06 | Univ Texas | Variantes de enzima de exaustão de metiltioadenosina/adenosina humana melhorada para terapia do câncer |
EP4087842A1 (en) | 2020-01-10 | 2022-11-16 | Innate Tumor Immunity, Inc. | Nlrp3 modulators |
AU2021215936A1 (en) | 2020-02-05 | 2022-08-25 | Larimar Therapeutics, Inc. | TAT peptide binding proteins and uses thereof |
EP4100426A1 (en) | 2020-02-06 | 2022-12-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Il-10 and uses thereof |
CA3168337A1 (en) | 2020-02-17 | 2021-08-26 | Marie-Andree Forget | Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof |
WO2021170750A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | Orega Biotech | Combination therapies based on ctla4 and il-17b inhibitors |
WO2022074464A2 (en) | 2020-03-05 | 2022-04-14 | Neotx Therapeutics Ltd. | Methods and compositions for treating cancer with immune cells |
KR20220151189A (ko) | 2020-03-09 | 2022-11-14 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 증진된 효능제 활성을 갖는 cd40에 대한 항체 |
JP2023519673A (ja) | 2020-03-31 | 2023-05-12 | セラヴァンス バイオファーマ アール&ディー アイピー, エルエルシー | 置換ピリミジンおよび使用方法 |
WO2021207449A1 (en) | 2020-04-09 | 2021-10-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof |
CA3175523A1 (en) | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Antti Virtanen | Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample |
CA3175499A1 (en) | 2020-04-21 | 2021-10-28 | University Of Rochester | Inhibitors of human epididymus protein 4 |
CA3176356A1 (en) | 2020-04-22 | 2021-10-28 | Anne BROOKS | Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy |
WO2021231732A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies to garp |
AU2021275239A1 (en) | 2020-05-21 | 2022-12-15 | Board Of Regents, The University Of Texas System | T cell receptors with VGLL1 specificity and uses thereof |
US20230235080A1 (en) | 2020-06-03 | 2023-07-27 | Bionecure Therapeutics, Inc. | Trophoblast cell-surface antigen-2 (trop-2) antibodies |
WO2021247836A1 (en) | 2020-06-03 | 2021-12-09 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for targeting shp-2 to overcome resistance |
CA3169518A1 (en) | 2020-06-03 | 2021-12-09 | Mv Biotherapeutics Sa | Combination of an atp-hydrolyzing enzyme and an immune checkpoint modulator and uses thereof |
CN116323607A (zh) | 2020-06-10 | 2023-06-23 | 施万生物制药研发Ip有限责任公司 | 用作alk5抑制剂的萘啶衍生物 |
WO2021260675A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Agents for sensitizing solid tumors to treatment |
CN116133679A (zh) | 2020-06-30 | 2023-05-16 | 门德斯有限公司 | 白血病衍生细胞在卵巢癌疫苗中的用途 |
WO2022003156A1 (en) | 2020-07-02 | 2022-01-06 | Oncurious Nv | Ccr8 non-blocking binders |
CN116234568A (zh) | 2020-07-07 | 2023-06-06 | 生物技术公司 | 用于hpv阳性癌症的治疗性rna |
KR20230152783A (ko) | 2020-07-07 | 2023-11-03 | 칸큐어 엘엘씨 | Mic 항체 및 결합제 및 이의 사용 방법 |
US20230295146A1 (en) | 2020-07-24 | 2023-09-21 | The University Of Rochester | Inhibitors of interleukin-1 receptor-associated kinases 1 and 4 |
AU2021311743A1 (en) | 2020-07-24 | 2023-02-16 | Amgen Inc. | Immunogens derived from SARS-CoV-2 spike protein |
KR20230042301A (ko) | 2020-08-04 | 2023-03-28 | 애벗트 라보라토리이즈 | 샘플에서 sars-cov-2 단백질을 검출하기 위한 개선된 방법 및 키트 |
CN112359052B (zh) * | 2020-08-20 | 2023-01-03 | 山东兴瑞生物科技有限公司 | 抗EpCAM嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用 |
WO2022047189A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma |
WO2022047412A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and immunotherapy |
KR20230093282A (ko) | 2020-10-23 | 2023-06-27 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 폐암에 대한 lag-3 길항제 요법 |
EP4243839A1 (en) | 2020-11-13 | 2023-09-20 | Catamaran Bio, Inc. | Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof |
AU2021388155A1 (en) | 2020-11-25 | 2023-06-15 | Catamaran Bio, Inc. | Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof |
WO2023102384A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Abbott Laboratories | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
CA3198161A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Beth MCQUISTON | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
WO2022120179A1 (en) | 2020-12-03 | 2022-06-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Multi-tumor gene signatures and uses thereof |
WO2022120388A2 (en) | 2020-12-04 | 2022-06-09 | Tidal Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof |
WO2022121966A1 (en) * | 2020-12-10 | 2022-06-16 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | An antibody against p-cadherin and uses thereof |
WO2022130206A1 (en) | 2020-12-16 | 2022-06-23 | Pfizer Inc. | TGFβr1 INHIBITOR COMBINATION THERAPIES |
WO2022135666A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | BioNTech SE | Treatment schedule for cytokine proteins |
TW202245808A (zh) | 2020-12-21 | 2022-12-01 | 德商拜恩迪克公司 | 用於治療癌症之治療性rna |
WO2022135667A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | BioNTech SE | Therapeutic rna for treating cancer |
EP4267618A1 (en) | 2020-12-24 | 2023-11-01 | Vib Vzw | Non-blocking human ccr8 binders |
US20240076391A1 (en) | 2020-12-24 | 2024-03-07 | Oncurious Nv | Human ccr8 binders |
CA3206125A1 (en) | 2020-12-24 | 2022-06-30 | Vib Vzw | Murine cross-reactive human ccr8 binders |
CA3196999A1 (en) | 2020-12-28 | 2022-07-07 | Masano HUANG | Methods of treating tumors |
MX2023007734A (es) | 2020-12-28 | 2023-08-21 | Bristol Myers Squibb Co | Composiciones de anticuerpos y metodos de uso de las mismas. |
EP4271998A1 (en) | 2020-12-30 | 2023-11-08 | Abbott Laboratories | Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample |
CN117529338A (zh) | 2021-01-19 | 2024-02-06 | 威廉马歇莱思大学 | 多肽的骨特异性递送 |
US20220249639A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-08-11 | Dcprime B.V. | Methods of tumor vaccination |
AU2022235341A1 (en) | 2021-03-12 | 2023-09-21 | Mendus B.V. | Methods of vaccination and use of cd47 blockade |
JP2024514530A (ja) | 2021-04-02 | 2024-04-02 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 切断型cdcp1に対する抗体およびその使用 |
EP4070799A1 (en) | 2021-04-08 | 2022-10-12 | Nuvamid SA | Compositions for the improvement of sport performance |
CN117279664A (zh) | 2021-04-10 | 2023-12-22 | 普方生物制药美国公司 | Folr1结合剂、其偶联物及其使用方法 |
EP4326321A1 (en) | 2021-04-20 | 2024-02-28 | Institut Curie | Compositions and methods for use in immunotherapy |
EP4079310A1 (en) | 2021-04-20 | 2022-10-26 | Nuvamid SA | Nmn and derivatives for its use in the treatment of alpha-synucleinopathies |
EP4079311A1 (en) | 2021-04-20 | 2022-10-26 | Nuvamid SA | Nmn and derivatives for its use in the treatment of depression and/or anxiety in patients having a form of parkinsonism |
CN117203238A (zh) | 2021-04-23 | 2023-12-08 | 普方生物制药美国公司 | Cd70结合剂、其偶联物及其使用方法 |
CA3216320A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Abbott Laboratories | Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject |
WO2022251359A1 (en) | 2021-05-26 | 2022-12-01 | Theravance Biopharma R&D Ip, Llc | Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use |
BR112023022097A2 (pt) | 2021-06-07 | 2023-12-19 | Agonox Inc | Cxcr5, pd-1 e icos expressando células t cd4 reativas de tumor e seu uso |
CA3222291A1 (en) | 2021-06-14 | 2022-12-22 | Jaime MARINO | Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind |
BR112023022992A2 (pt) | 2021-06-25 | 2024-01-23 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticorpo anti-ctla-4 |
AR126236A1 (es) | 2021-06-25 | 2023-10-04 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Uso del anticuerpo anti-ctla-4 |
EP4367269A1 (en) | 2021-07-05 | 2024-05-15 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Gene signatures for predicting survival time in patients suffering from renal cell carcinoma |
WO2023285552A1 (en) | 2021-07-13 | 2023-01-19 | BioNTech SE | Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer |
EP4380967A1 (en) | 2021-08-04 | 2024-06-12 | The Regents of the University of Colorado, a body corporate | Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof |
CN118284623A (zh) | 2021-08-23 | 2024-07-02 | 伊莫尼塔斯治疗公司 | 抗cd161抗体及其用途 |
AU2022339759A1 (en) | 2021-08-31 | 2024-03-07 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
EP4409294A1 (en) | 2021-09-30 | 2024-08-07 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
WO2023060136A1 (en) | 2021-10-05 | 2023-04-13 | Cytovia Therapeutics, Llc | Natural killer cells and methods of use thereof |
TW202333802A (zh) | 2021-10-11 | 2023-09-01 | 德商拜恩迪克公司 | 用於肺癌之治療性rna(二) |
WO2023068382A2 (en) | 2021-10-20 | 2023-04-27 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Compositions targeting bcma and methods of use thereof |
WO2023076880A1 (en) | 2021-10-25 | 2023-05-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Foxo1-targeted therapy for the treatment of cancer |
KR20240099362A (ko) | 2021-10-29 | 2024-06-28 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 혈액암에 대한 lag-3 길항제 요법 |
WO2023092099A1 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-25 | Ardeagen Corporation | Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same |
AU2022396272A1 (en) * | 2021-11-24 | 2024-06-06 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against ctla-4 and methods of use thereof |
WO2023114978A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Abbott Laboratories | Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples |
TW202332687A (zh) | 2021-12-23 | 2023-08-16 | 比利時商eTheRNA免疫治療公司 | 免疫刺激性mrna組成物及其用途 |
WO2023129942A1 (en) | 2021-12-28 | 2023-07-06 | Abbott Laboratories | Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan |
WO2023147371A1 (en) | 2022-01-26 | 2023-08-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination therapy for hepatocellular carcinoma |
WO2023150652A1 (en) | 2022-02-04 | 2023-08-10 | Abbott Laboratories | Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample |
WO2023164638A1 (en) | 2022-02-25 | 2023-08-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination therapy for colorectal carcinoma |
WO2023168404A1 (en) | 2022-03-04 | 2023-09-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating a tumor |
WO2023170606A1 (en) | 2022-03-08 | 2023-09-14 | Alentis Therapeutics Ag | Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability |
WO2023178192A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Compugen Ltd. | Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer |
WO2023178329A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of isolating polypeptides |
WO2023196987A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating tumor |
WO2023201369A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment |
WO2023211972A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Medical University Of South Carolina | Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer |
WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
WO2023213763A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab |
WO2023228095A1 (en) | 2022-05-24 | 2023-11-30 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate |
WO2023235847A1 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibody compositions and methods of use thereof |
WO2023240156A1 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Tidal Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof |
WO2024006876A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Abbott Laboratories | Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples |
WO2024003353A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Transgene | Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf |
WO2024023750A1 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Astrazeneca Uk Limited | Combination of antibody-drug conjugate and bispecific checkpoint inhibitor |
WO2024028794A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Temple Therapeutics BV | Methods for treating endometrial and ovarian hyperproliferative disorders |
WO2024052356A1 (en) | 2022-09-06 | 2024-03-14 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Inhibitors of the ceramide metabolic pathway for overcoming immunotherapy resistance in cancer |
WO2024059708A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Abbott Laboratories | Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury |
WO2024086827A2 (en) | 2022-10-20 | 2024-04-25 | Repertoire Immune Medicines, Inc. | Cd8 t cell targeted il2 |
WO2024112571A2 (en) | 2022-11-21 | 2024-05-30 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom |
WO2024126457A1 (en) | 2022-12-14 | 2024-06-20 | Astellas Pharma Europe Bv | Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors |
WO2024137776A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination therapy for lung cancer |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995033770A1 (en) * | 1994-06-03 | 1995-12-14 | Repligen Corporation | Ligands for induction of antigen specific apoptosis in t cells |
WO1996033735A1 (en) * | 1995-04-27 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
WO1998042752A1 (en) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Brigham And Women's Hospital Inc. | Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides |
Family Cites Families (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3180193A (en) | 1963-02-25 | 1965-04-27 | Benedict David | Machines for cutting lengths of strip material |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4681581A (en) | 1983-12-05 | 1987-07-21 | Coates Fredrica V | Adjustable size diaper and folding method therefor |
US4740461A (en) | 1983-12-27 | 1988-04-26 | Genetics Institute, Inc. | Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
AU584417B2 (en) | 1985-04-01 | 1989-05-25 | Lonza Group Ag | Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same |
US5776093A (en) | 1985-07-05 | 1998-07-07 | Immunomedics, Inc. | Method for imaging and treating organs and tissues |
US5101827A (en) | 1985-07-05 | 1992-04-07 | Immunomedics, Inc. | Lymphographic and organ imaging method and kit |
US4735210A (en) | 1985-07-05 | 1988-04-05 | Immunomedics, Inc. | Lymphographic and organ imaging method and kit |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US4959455A (en) | 1986-07-14 | 1990-09-25 | Genetics Institute, Inc. | Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions |
US4912040A (en) | 1986-11-14 | 1990-03-27 | Genetics Institute, Inc. | Eucaryotic expression system |
US5750172A (en) | 1987-06-23 | 1998-05-12 | Pharming B.V. | Transgenic non human mammal milk |
GB8717430D0 (en) | 1987-07-23 | 1987-08-26 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
US5648471A (en) | 1987-12-03 | 1997-07-15 | Centocor, Inc. | One vial method for labeling antibodies with Technetium-99m |
GB8809129D0 (en) | 1988-04-18 | 1988-05-18 | Celltech Ltd | Recombinant dna methods vectors and host cells |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5175384A (en) | 1988-12-05 | 1992-12-29 | Genpharm International | Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
DE69032742T2 (de) | 1989-08-09 | 1999-06-17 | Rhomed, Inc., Albuquerque, N.Mex. | Direkte radioetikettierung von antikörpern und sonstigen proteinen mittels technetium oder rhenium |
US5633076A (en) | 1989-12-01 | 1997-05-27 | Pharming Bv | Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo |
WO1991010741A1 (en) | 1990-01-12 | 1991-07-25 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
US5151510A (en) | 1990-04-20 | 1992-09-29 | Applied Biosystems, Inc. | Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs |
FR2664073A1 (fr) | 1990-06-29 | 1992-01-03 | Thomson Csf | Moyens de marquage d'objets, procede de realisation et dispositif de lecture. |
US5165424A (en) | 1990-08-09 | 1992-11-24 | Silverman Harvey N | Method and system for whitening teeth |
US5789650A (en) | 1990-08-29 | 1998-08-04 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
EP0546073B1 (en) | 1990-08-29 | 1997-09-10 | GenPharm International, Inc. | production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5814318A (en) | 1990-08-29 | 1998-09-29 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US6300129B1 (en) | 1990-08-29 | 2001-10-09 | Genpharm International | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
WO1992003917A1 (en) | 1990-08-29 | 1992-03-19 | Genpharm International | Homologous recombination in mammalian cells |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
WO1993012227A1 (en) | 1991-12-17 | 1993-06-24 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5194594A (en) | 1990-09-07 | 1993-03-16 | Techniclone, Inc. | Modified antibodies |
WO1992022670A1 (en) | 1991-06-12 | 1992-12-23 | Genpharm International, Inc. | Early detection of transgenic embryos |
AU2235992A (en) | 1991-06-14 | 1993-01-12 | Genpharm International, Inc. | Transgenic immunodeficient non-human animals |
ATE170562T1 (de) | 1991-06-27 | 1998-09-15 | Bristol Myers Squibb Co | Ctl4a rezeptor, ihn enthaltenden fusionsproteine und deren verwendungen |
US5770197A (en) | 1991-06-27 | 1998-06-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for regulating the immune response using B7 binding molecules and IL4-binding molecules |
AU2515992A (en) | 1991-08-20 | 1993-03-16 | Genpharm International, Inc. | Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs |
US5777085A (en) | 1991-12-20 | 1998-07-07 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized antibodies reactive with GPIIB/IIIA |
WO1993016043A1 (en) | 1992-02-18 | 1993-08-19 | Otsuka Kagaku Kabushiki Kaisha | β-LACTAM COMPOUND AND CEPHEM COMPOUND, AND PRODUCTION THEREOF |
US5714350A (en) | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
CA2135313A1 (en) | 1992-06-18 | 1994-01-06 | Theodore Choi | Methods for producing transgenic non-human animals harboring a yeast artificial chromosome |
ATE381614T1 (de) | 1992-07-24 | 2008-01-15 | Amgen Fremont Inc | Bildung von xenogenen antikörpern |
US5773253A (en) | 1993-01-22 | 1998-06-30 | Bristol-Myers Squibb Company | MYPPPY variants of CTL A4 and uses thereof |
WO1994019935A1 (en) | 1993-03-09 | 1994-09-15 | Genzyme Corporation | Isolation of components of interest from milk |
EP0754225A4 (en) | 1993-04-26 | 2001-01-31 | Genpharm Int | HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS |
ATE196313T1 (de) | 1993-06-04 | 2000-09-15 | Us Health | Verfahren zur behandlung von kaposi-sarcoma mit antisense-oligonukleotide |
CA2144319A1 (en) | 1993-07-09 | 1995-01-19 | George N. Cox | Recombinant ctla4 polypeptides and methods for making the same |
EP0711345A1 (en) | 1993-07-26 | 1996-05-15 | Dana Farber Cancer Institute | B7-2: ctl a4/cd 28 counter receptor |
US5625825A (en) | 1993-10-21 | 1997-04-29 | Lsi Logic Corporation | Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network |
US5827690A (en) | 1993-12-20 | 1998-10-27 | Genzyme Transgenics Corporatiion | Transgenic production of antibodies in milk |
EP0749323B1 (en) | 1994-03-08 | 2000-11-29 | Dana-Farber Cancer Institute | Methods for modulating t cell anergy |
US5643763A (en) | 1994-11-04 | 1997-07-01 | Genpharm International, Inc. | Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating |
US5703057A (en) | 1995-04-07 | 1997-12-30 | Board Of Regents The University Of Texas System | Expression library immunization |
CA2219486A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5811097A (en) | 1995-07-25 | 1998-09-22 | The Regents Of The University Of California | Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling |
US6025130A (en) | 1996-04-04 | 2000-02-15 | Mercator Genetics, Inc. | Hereditary hemochromatosis gene |
WO1998004281A1 (en) * | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Smithkline Beecham Corpration | Improved method of treating immune cell mediated systemic diseases |
KR20080059467A (ko) | 1996-12-03 | 2008-06-27 | 아브게닉스, 인크. | 복수의 vh 및 vk 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체 |
US6235883B1 (en) * | 1997-05-05 | 2001-05-22 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
MXPA02001911A (es) * | 1999-08-24 | 2003-07-21 | Medarex Inc | Anticuerpos ctla-4 humanos y sus usos. |
US7945340B2 (en) | 2005-03-14 | 2011-05-17 | Omron Corporation | Programmable controller system |
US8209741B2 (en) | 2007-09-17 | 2012-06-26 | Microsoft Corporation | Human performance in human interactive proofs using partial credit |
JP6071725B2 (ja) | 2013-04-23 | 2017-02-01 | カルソニックカンセイ株式会社 | 電気自動車の駆動力制御装置 |
JP6943759B2 (ja) | 2017-12-28 | 2021-10-06 | 株式会社東海理化電機製作所 | シフト装置 |
US11284893B2 (en) | 2019-04-02 | 2022-03-29 | Covidien Lp | Stapling device with articulating tool assembly |
-
1999
- 1999-12-23 KR KR1020077015213A patent/KR100849443B1/ko active IP Right Grant
- 1999-12-23 ES ES09007161T patent/ES2706547T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 SG SG200305551-4A patent/SG143018A1/en unknown
- 1999-12-23 OA OA00100166A patent/OA11917A/en unknown
- 1999-12-23 SI SI9931084T patent/SI2112166T1/sl unknown
- 1999-12-23 WO PCT/US1999/030895 patent/WO2000037504A2/en active Application Filing
- 1999-12-23 CN CN99813642.5A patent/CN1328571B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 EP EP18200101.6A patent/EP3553085A1/en not_active Withdrawn
- 1999-12-23 HU HUP1300750 patent/HU1300750D0/hu not_active Application Discontinuation
- 1999-12-23 PT PT90071614T patent/PT2112166T/pt unknown
- 1999-12-23 PL PL349266A patent/PL210435B1/pl unknown
- 1999-12-23 BR BRPI9916853A patent/BRPI9916853B8/pt unknown
- 1999-12-23 ES ES99966644T patent/ES2340745T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 KR KR1020057012533A patent/KR100856446B1/ko active IP Right Grant
- 1999-12-23 CZ CZ20110342A patent/CZ303703B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 TR TR2002/00735T patent/TR200200735T2/xx unknown
- 1999-12-23 EP EP09007161.4A patent/EP2112166B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 UA UA2001075213A patent/UA76936C2/uk unknown
- 1999-12-23 CZ CZ20012349A patent/CZ302706B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 EA EA200100698A patent/EA006972B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 PL PL384501A patent/PL214003B1/pl unknown
- 1999-12-23 BR BR9916853-7A patent/BR9916853A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 NZ NZ512553A patent/NZ512553A/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 ID IDW00200101614A patent/ID29991A/id unknown
- 1999-12-23 MX MXPA01006422A patent/MXPA01006422A/es active IP Right Grant
- 1999-12-23 GE GE4453A patent/GEP20053594B/en unknown
- 1999-12-23 HU HU0104604A patent/HU229566B1/hu unknown
- 1999-12-23 DK DK09007161.4T patent/DK2112166T3/en active
- 1999-12-23 TR TR2001/01831T patent/TR200101831T2/xx unknown
- 1999-12-23 DK DK99966644.9T patent/DK1141028T3/da active
- 1999-12-23 AU AU22149/00A patent/AU772676B2/en not_active Expired
- 1999-12-23 PT PT99966644T patent/PT1141028E/pt unknown
- 1999-12-23 EP EP99966644A patent/EP1141028B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 SK SK914-2001A patent/SK288057B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 CA CA2356215A patent/CA2356215C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 SK SK5035-2011A patent/SK288274B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-12-23 LT LTEP09007161.4T patent/LT2112166T/lt unknown
- 1999-12-23 RS YUP-455/01A patent/RS51309B/sr unknown
- 1999-12-23 AP APAP/P/2001/002213A patent/AP1590A/en active
- 1999-12-23 JP JP2000589573A patent/JP3793693B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 EE EEP200100336A patent/EE05483B1/xx unknown
- 1999-12-23 IL IL14379799A patent/IL143797A0/xx active IP Right Grant
- 1999-12-23 SI SI9931041T patent/SI1141028T1/sl unknown
- 1999-12-23 AT AT99966644T patent/ATE458008T1/de active
- 1999-12-23 KR KR1020017007965A patent/KR100617337B1/ko active IP Right Grant
- 1999-12-23 DE DE69942037T patent/DE69942037D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-23 SG SG200803369-8A patent/SG156547A1/en unknown
-
2001
- 2001-06-17 IL IL143797A patent/IL143797A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-06-22 IS IS5974A patent/IS2798B/is unknown
- 2001-06-22 NO NO20013147A patent/NO332618B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-06-25 CU CU20010147A patent/CU23292B7/es not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 ZA ZA200105742A patent/ZA200105742B/en unknown
- 2001-07-18 CR CR6425A patent/CR6425A/es unknown
- 2001-07-20 BG BG105722A patent/BG65899B1/bg unknown
- 2001-07-20 HR HRP20010551AA patent/HRP20010551B1/hr not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-04-15 HK HK02102809.5A patent/HK1041274B/zh not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-09-28 JP JP2004281376A patent/JP2005087215A/ja active Pending
-
2008
- 2008-05-13 CR CR9972A patent/CR9972A/xx unknown
-
2011
- 2011-03-03 IS IS8950A patent/IS8950A/is unknown
-
2012
- 2012-03-30 NO NO20120398A patent/NO337037B1/no not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-01-29 HR HRP20130077AA patent/HRP20130077A2/hr not_active Application Discontinuation
-
2018
- 2018-12-19 CY CY20181101358T patent/CY1121451T1/el unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995033770A1 (en) * | 1994-06-03 | 1995-12-14 | Repligen Corporation | Ligands for induction of antigen specific apoptosis in t cells |
WO1996033735A1 (en) * | 1995-04-27 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
WO1998042752A1 (en) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Brigham And Women's Hospital Inc. | Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Jakobovits A.: "The long-awaited magic bullets: therapeutic human monoclonal antibodies from transgenic mice", Expert Opinion on Investigational Drugs, Vol. 7 (4), 607-614, 1998, abstrakt * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6682736B1 (en) | Human monoclonal antibodies to CTLA-4 | |
DK2112166T3 (en) | Human monoclonal antibodies to CTLA-4 | |
US20040228858A1 (en) | Human monoclonal antibodies to CTLA-4 | |
KR100531707B1 (ko) | 항-ctla-4 항체의 용도 | |
KR20070007114A (ko) | 항-ctla-4 항체의 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK4A | Patent expired |
Effective date: 20191223 |