TW202124448A - 於酸性pH結合VISTA之抗體 - Google Patents

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Abstract

本申請案係關於於酸性pH特異性結合至含有V-結構域免疫球蛋白之T細胞活化抑制因子(VISTA)之抗體，及其在癌症治療中之用途。在一些實施例中，該等抗體於酸性pH特異性結合人類VISTA，但於中性或生理pH並不顯著結合人類VISTA。

Description

於酸性pH結合VISTA之抗體
本申請案係關於於酸性pH特異性結合含有V-結構域免疫球蛋白之T細胞活化抑制因子(VISTA)之抗體及其在癌症治療中之用途。
含有V-結構域Ig之T細胞活化抑制因子或VISTA係由骨髓單核球性細胞及其他白血球表現之免疫受體之B7家族的共抑制成員。然而，對VISTA抑制免疫反應之機制知之甚少。
發明人已發現，不同於其他已知免疫受體，VISTA與其反受體接合且於酸性pH選擇性發揮作用，且於生理pH (例如7.3 - 7.4)具有較小活性。VISTA可由此於酸性微環境(例如腫瘤床或發炎部位)中抑制免疫反應，且並不擾亂血液中之細胞循環或駐留於非發炎、非酸性組織中。另外，發明人已發現，抗VISTA抗體可經改造以於酸性pH選擇性結合VISTA，且於生理pH具有較小結合或並無結合，從而反映了VISTA之自有酸性pH選擇性。相對於於生理pH結合VISTA之抗體，該等酸性pH選擇性抗體可提供治療疾病(例如癌症)之期望性質。
本發明係關於於酸性pH (例如於酸性條件中)特異性結合VISTA (例如人類VISTA (「hVISTA」或「huVISTA」))之細胞外結構域(ECD)之抗體。本發明亦係關於於酸性pH特異性結合VISTA (例如hVISTA)之細胞外結構域(ECD)且於中性或生理pH具有較小結合或並無結合之抗體。發明人在本文中指出，hVISTA-ECD胺基酸序列包含諸多保守以及非保守組胺酸殘基，且組胺酸殘基在VISTA ECD中之頻率遠高於其他B7家族成員及其他免疫球蛋白超家族成員。(參見圖1A及1B。)在溶液中，胺基酸組胺酸具有約6.5之pKa ，此意味著在pH為或低於6.5時蛋白質內之組胺酸殘基通常發生質子化且由此帶正電，而在pH高於pH 6.5時其愈加未質子化且具有中性電荷。腫瘤微環境及發炎組織通常係酸性，且由此發現於該等微環境中之VISTA蛋白可至少部分地在其組胺酸殘基處發生質子化。如本文所論述，發明人已假設，組胺酸質子化可影響VISTA之構形、表面結構及/或電荷密度，此繼而可產生用於受體-配體相互作用及抗體結合之pH特異性或pH選擇性表位。使用於酸性pH結合但於中性或生理pH不結合之抗體靶向VISTA可防止經由循環及淋巴樣器官駐留性骨髓單核球性細胞進行之靶介導之藥物體內動向，從而改良抗體PK、受體佔據及腫瘤微環境中之活性。在諸如抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)及酬載(抗體-藥物偶聯物)遞送等治療方式之情形下，酸性pH選擇性抗體亦可改良VISTA抗體對腫瘤內(而非循環)靶細胞之特異性。
本發明闡述包含下列各項之抗hVISTA Ab：  P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S及P1-068748_D57K_D100S。該等抗體可含有經修飾以使至少一個H、D或E殘基回復至發現於P1-061015親代抗體中之相同位置處之殘基之P1-068744或P1-068748 Ab的重鏈CDR。
更通常地，本發明包含含有如下重鏈可變區(VH)之抗hVISTA Ab：其包括含有GFTFSX1 YAMH之VH CDR1，其中X1 係E或S (SEQ ID NO: 690)；含有X2 IWYDGSNKYX3 ADSVKG之VH CDR2，其中X2 係H或I，且X3 係E或Y (SEQ ID NO: 691)；及/或含有DSGFYX4 SYYFDX5 之VH CDR3，其中X4 係E或S且X5 係E或Y (SEQ ID NO: 692)。(亦參見圖29C。)  在Ab P1-061015中，該等位置分別係S、I、Y、S及Y，而在P1-068744中，該等位置分別係E、H、E、E及E。在該等情形下，抗體可包括P1-068744之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，但在下列指定位置回復至P1-61015之情形(參見表11及27)：P1-068744_E31S (亦即，包括P1-068744之CDR，只是X1 係S)、P1-68744_H50I (亦即，X2 係I)、P1-68744_E59Y (亦即，X3 係Y)、P1-068744_E100S (亦即，X4 係S)、P1-068744_E102Y (亦即，X5 係Y)、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y或P1-068744_E59Y_E102Y。應注意，上文所使用該等抗體之命名係基於Kabat編號方案，該方案部分地根據殘基之結構位置而非根據其序列位置來進行編號。因抗體可具有不同長度之CDR，故該編號方案可能未必對應於抗體序列之殘基位置編號。X1 、X2 、X3 、X4 及X5 處之上述取代在本文中位於SEQ ID No: 95及103之重鏈序列之位置31、50、60、104及110處，如亦可易於藉由查看表11及27所見。關於抗體殘基編號方式之其他資訊可參見(例如) M. Dondelinger等人，Front. Immunol. 9: 2278 (2018)。
另外，本發明包含含有如下重鏈可變區(VH)之抗hVISTA Ab：其包括含有GFTFSX1 X2 AMH之VH CDR1，其中X1 係H或S，且X2 係H或Y (SEQ ID NO: 693)；含有IIWYDGSNX3 X4 YADSVKG之VH CDR2，其中X3 係D或K，且X4 係D或Y (SEQ ID NO: 694)；及/或含有DSGFYX5 SYYFDY之VH CDR3，其中X5 係D或S (SEQ ID NO: 695)。(亦參見圖29C。)  在Ab P1-061015中，該等位置分別係S、Y、K、Y及S，而在P1-068748中，該等位置係H、H、D、D及D。在該等情形下，抗體可包括P1-068748之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，但在下列指定位置回復至P1-61015之情形(參見表12及28)：P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及/或CDR3。應注意，本文之命名係基於Kabat編號。X1 、X2 、X3 、X4 、及X5 處之上述取代位於SEQ ID No: 95及99之重鏈序列之位置31、32、58、59及104處，如(例如)亦可藉由查看表12及28及SEQ ID No: 95及99所見。
定義 在本申請案中，除非另外陳述，否則使用「或」意指「及/或」。在多重附屬請求項之背景中，所用之「或」僅以替代形式重新提及一個以上前述獨立或附屬請求項。術語「包括」、「包含」及「具有」可在本文中互換使用。根據本發明，「經分離」分子係已自其天然環境取出之分子。因此，術語「經分離」未必反映分子之純化程度。
術語「多肽」係指胺基酸殘基之聚合物，且並不限於最小長度。「蛋白質」可包括一或多個多肽。該等胺基酸殘基聚合物可含有天然或非天然胺基酸殘基，且包含(但不限於)肽、寡肽、胺基酸殘基之二聚體、三聚體及多聚體。全長蛋白質及其片段皆由該定義所涵蓋。該等術語亦包含多肽之表現後修飾，例如醣基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化及諸如此類。另外，出於本發明目的，「多肽」或「蛋白質」分別係指包含關於天然序列之修飾(例如缺失、添加及取代(通常係保守性質))之多肽或蛋白質，只要該蛋白質維持期望活性即可。該等修飾可為特意的(如經由定點誘變)，或可為偶然的(例如經由產生蛋白質之宿主突變或由PCR擴增所致之誤差)。「蛋白質」可包括兩個或更多個多肽。
「VISTA」係含有V-結構域免疫球蛋白之T細胞活化抑制蛋白之縮寫，其係免疫檢查點調控劑之B7家族之成員。VISTA亦稱為PD-1同系物(PD1H)、B7-H5、C10orf54、ESC-1分化物(Dies-1)、血小板受體Gi24前體及死亡結構域1α (DD1α)。術語「hVISTA」或「huVISTA」在本文中係指人類VISTA蛋白。hVISTA (包含其信號肽)之胺基酸序列提供於SEQ ID NO:1中，而不含信號肽之序列提供於SEQ ID NO:2中。(參見下文之序列表。)VISTA之細胞外結構域或「ECD」或「VISTA-ECD」係指VISTA蛋白中位於細胞外空間中之部分，其在hVISTA之情形下包括SEQ ID NO:2之胺基酸1-162。(亦參見圖1B。)hVISTA之「IgV結構域」部分包括SEQ ID NO:2之殘基5-135。
術語「前導肽」或「前導序列」係指位於多肽N末端之促進多肽自哺乳動物細胞分泌之胺基酸殘基序列。前導序列可在將多肽自哺乳動物細胞輸出後裂解，從而形成成熟蛋白質。前導序列可為天然或合成序列，且其可與其所附接之蛋白質異源或同源。
術語「抗體」或「Ab」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包含(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現期望之抗原結合活性。如本文中所使用，該術語係指包括至少重鏈之互補決定區(CDR) 1、CDR2及CDR3及至少輕鏈之CDR1、CDR2及CDR3之分子，其中該分子能夠結合抗原。術語抗體包含(但不限於)能夠結合抗原之片段(例如Fv、單鏈Fv (scFv)、Fab、Fab’及(Fab’)2 )。術語抗體亦包含(但不限於)嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體及各種物種(例如小鼠、食蟹獼猴等)之抗體。
術語「重鏈」或「HC」係指至少包括重鏈可變區且含有或不含前導序列之多肽。在一些實施例中，重鏈包括重鏈恆定區之至少一部分。術語「全長重鏈」係指包括重鏈可變區及重鏈恆定區之多肽，其含有或不含前導序列且含有或不含C-末端離胺酸(K)。
術語「重鏈可變區」或「VH」係指包括重鏈之重鏈互補決定區(CDR) 1、框架區(FR) 2、CDR2、FR3及CDR3之區域。在一些實施例中，重鏈可變區亦包括FR1之至少一部分及/或FR4之至少一部分。如下文所指定，在一些實施例中，重鏈CDR1包括本文之VH SEQ ID NO之殘基26-35；重鏈CDR2包括本文之VH SEQ ID NO之殘基50-66，且重鏈CDR3包括本文之VH SEQ ID NO之殘基99-110。在其他實施例中，若指定，則重鏈CDR1對應於Kabat殘基31至35；重鏈CDR2對應於Kabat殘基50至65；且重鏈CDR3對應於Kabat殘基95至102。例如參見Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987及1991, NIH, Bethesda, Md.)。在一些實施例中，重鏈CDR係如本文在(例如)下文序列表或表2中所指定。
術語「輕鏈」或「LC」係指至少包括輕鏈可變區且含有或不含前導序列之多肽。在一些實施例中，輕鏈包括輕鏈恆定區之至少一部分。術語「全長輕鏈」係指包括輕鏈可變區及輕鏈恆定區且含有或不含前導序列之多肽。
術語「輕鏈可變區」或「VL」係指包括輕鏈CDR1、FR2、HVR2、FR3及HVR3之區域。在一些實施例中，輕鏈可變區亦包括FR1及/或FR4。如下文所指定，在一些實施例中，輕鏈CDR1包括本文之VL SEQ ID NO之殘基24-35；輕鏈CDR2包括本文之VL SEQ ID NO之殘基51-57，且輕鏈CDR3包括本文之VL SEQ ID NO之殘基90-98。在其他實施例中，若指定，則輕鏈CDR1對應於Kabat殘基24至34；輕鏈CDR2對應於Kabat殘基50至56；且輕鏈CDR3對應於Kabat殘基89至97。例如參見Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987及1991, NIH, Bethesda, Md.)。在一些實施例中，輕鏈CDR係如本文在(例如)序列表中所指定。
「嵌合抗體」係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定來源或物種、而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同來源或物種之抗體。在一些實施例中，嵌合抗體係指包括至少一個來自第一物種(例如小鼠、大鼠、食蟹獼猴等)之可變區及至少一個來自第二物種(例如人類、食蟹獼猴等)之恆定區之抗體。在一些實施例中，嵌合抗體包括至少一個小鼠可變區及至少一個人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體包括至少一個食蟹獼猴可變區及至少一個人類恆定區。在一些實施例中，嵌合抗體之所有可變區皆係來自第一物種且嵌合抗體之所有恆定區皆係來自第二物種。
「人類化抗體」係指非人類可變區之框架區中之至少一個胺基酸經來自人類可變區之相應胺基酸代替的抗體。在一些實施例中，人類化抗體包括至少一個人類恆定區或其片段。在一些實施例中，人類化抗體係Fab、scFv、(Fab')2 等。
本文所用之「人類抗體」係指在人類中產生之抗體、在非人類動物中產生之包括人類免疫球蛋白基因之抗體(例如XenoMouse®)及使用活體外方法(例如噬菌體顯示)選擇之抗體，其中抗體譜係基於人類免疫球蛋白序列。
本文所用之「VISTA抗體」或「抗VISTA抗體」係指在至少一些條件(例如酸性pH)下特異性結合VISTA之抗體。在一些實施例中，抗體可為「huVISTA抗體」或「抗huVISTA抗體」，此指示其在至少一些條件下(例如於酸性pH)特異性結合人類VISTA蛋白。舉例而言，特異性結合VISTA之細胞外結構域(ECD)之VISTA抗體可稱為「VISTA-ECD抗體。」
在一些實施例中，本文之抗體與特定、指定序列相比可含有一或多個「保守取代」。本文之「保守胺基酸取代」係指胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基取代。具有相似側鏈之胺基酸殘基之家族包含具有鹼性側鏈之胺基酸(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈之胺基酸(例如，天門冬胺酸、麩胺酸)、具有不帶電極性側鏈之胺基酸(例如，甘胺酸、天門冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、具有非極性側鏈之胺基酸(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、具有β分枝側鏈之胺基酸(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及具有芳香族側鏈之胺基酸(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。在某些實施例中，本文抗體中之預測非必需胺基酸殘基經來自相同側鏈家族(例如鹼性、酸性、β分枝、芳香族、不帶電極性)之另一胺基酸殘基代替。鑑別不消除抗原結合之核苷酸及胺基酸保守取代之方法已闡述於(例如) Brummell等人，Biochem . 32: 1180-1187 (1993)；Kobayashi等人，Protein Eng . 12(10):879-884 (1999)；及Burks等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997))中。
在一些實施例中，抗體可於酸性pH而非中性及/或生理pH以較高親和力結合VISTA。在一些實施例中，抗體可於酸性pH以較高親和力結合VISTA且可於中性及/或生理pH僅可忽略地或非特異性地結合。
抗體結合蛋白質(例如VISTA-ECD蛋白)之「KD 」或「解離常數」係抗體與蛋白質(例如VISTA-ECD蛋白)之親和力或特異性結合之量度。較低KD 指示相對於較高KD 具有改良之結合或親和力。KD 係指抗體及多肽之「解離速率」或k解離 或kd 與「締合速率」或k締合 或ka 之間之比率。解離速率及締合速率係兩個結合配偶體在系統中締合及解離之速率。因此，較緩慢解離速率(其中締合速率保持大致恆定)產生較高整體親和力且由此產生較低KD 。如本文中所使用，特定值「或更小」之k解離 指示，k解離 或「解離速率」係如所指定或慢於指定速率。
術語「特異性結合(specific binding或specifically binds)」或類似術語表示，兩種多肽(例如抗體及其多肽靶)之結合之KD 小於存在於相同條件下之兩種隨機多肽之間的情形。換言之，KD 小於由多肽在系統中之非特異性聚集所致者。
在一些實施例中，抗體在特定pH或pH範圍特異性結合VISTA-ECD蛋白。本文之「酸性」 pH通常係指小於7.0之pH，「鹼性」 pH通常係指高於7.0之pH且「中性」 pH通常係指約7.0之pH。本文之「生理pH」係指正常(亦即非癌性)生理條件中之pH，例如7.35至7.45或7.3至7.4，例如約7.4。本文中之諸如「於酸性條件中結合」或「於生理條件中結合」及諸如此類等片語(用於諸如VISTA及VISTA結合配偶體或VISTA及T細胞等兩種分子之結合之背景中)係指分別於酸性pH中結合及於生理pH中結合。
在提及「阻斷配體(或受體)或競爭抗體與受體(或配體)單獨或在細胞上之結合」或「抑制該結合」之抗體時，若與對照相比存在統計學顯著之整體降低(例如50%或更大之整體降低，例如75%、80%、85%、90%、95%或更大之整體降低)，則結合被阻斷。舉例而言，「抗VISTA阻斷性抗體」係可在至少一些條件下(例如於酸性pH)阻斷VISTA結合PSGL-1或另一VISTA配體或受體或硫酸乙醯肝素蛋白多醣者。
在提及相對於投與抗體之患者之器官或組織(例如血液)抗體累積於患者之腫瘤中時，「較佳累積(preferally accumulates或preferably accumulates)」係指腫瘤中之累積大於器官或組織至少50%、75%、100% (亦即2倍)、5倍或更高。舉例而言，酸性pH選擇性結合抗體累積至在受試者之腫瘤中之含量係其血液中累積之至少兩倍。
本文所用之「腫瘤模型」係指活體內臨床前分析，其可用於研究VISTA-ECD抗體之生物活性，且包含異種移植物或天然小鼠腫瘤分析系統。在一些情形下，腫瘤模型可容許在使用抗體治療時追蹤腫瘤大小或生長及/或追蹤腫瘤中之免疫細胞(例如特定類型之T細胞或NK細胞)之存在以測定抗體是否已觸發或增強免疫反應。
本文所用之術語「免疫刺激劑」係指藉由用作免疫刺激分子(包含共刺激分子)之激動劑或用作免疫抑制分子(包含共抑制分子)之拮抗劑來刺激免疫系統的分子。免疫刺激分子或免疫抑制分子可為免疫檢查點調控劑，例如VISTA或另一B7家族成員或如下文另外闡述之另一分子。免疫刺激劑可為生物劑(例如抗體或抗體片段、其他蛋白質或疫苗)，或可為小分子藥物。「免疫刺激分子」包含用於增強、刺激、誘導或另外「開啟」免疫反應之受體或配體。如本文所定義之免疫刺激分子包含共刺激分子。「免疫抑制分子」包含用於減小、抑制、抑制或另外「關斷」免疫反應之受體或配體。如本文所定義之免疫抑制分子包含共抑制分子。該等免疫刺激分子及免疫抑制分子可為(例如)發現於免疫細胞(例如T細胞)上或發現於涉及先天性免疫性之細胞(例如NK細胞)上之受體或配體。
關於肽、多肽或抗體序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」及「同源性」定義為在比對序列並引入空位(若需要)以達成最大序列一致性百分比後，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分之情況下，候選序列中與特定肽或多肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的，比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可測定用於量測比對之適當參數，包含在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需之任何演算法。
術語「觸發」或「增強」係指引發或增加任一事件(例如蛋白質配體結合)或引發或增加任一生物活性(例如免疫反應)或表型特性或引發或增加活性或特性之發生、程度或可能性。「觸發」或「增強」係與參考相比開始或增加活性、功能及/或量。觸發或增強未必係完全的。舉例而言，在某些實施例中，「增強」意指能夠引起20%或更大之整體增加。在另一實施例中，「增強」意指能夠引起50%或更大之整體增加。在又一實施例中，「增強」意指能夠引起75%、85%、90%、95%或更大之整體增加。
術語「抑制(inhibition或inhibit)」更通常係指降低或中止任一事件(例如蛋白質配體結合)或降低或中止任一表型特性或降低或中止特性之發生、程度或可能性。「減小」或「抑制」係與參考相比降低、減小或阻止活性、功能及/或量。抑制或減小未必係完全的。舉例而言，在某些實施例中，「減小」或「抑制」意指能夠引起20%或更大之整體降低。在另一實施例中，「減小」或「抑制」意指能夠引起50%或更大之整體降低。在又一實施例中，「減小」或「抑制」意指能夠引起75%、85%、90%、95%或更大之整體降低。
本文所用之「治療」涵蓋用於人類疾病之任一治療劑投與或施加，且包含抑制疾病或疾病或一或多種疾病症狀之進展，抑制或減緩疾病或其進展或一或多種其症狀，阻止其發展，部分地或完全減輕疾病或一或多種其症狀，或預防一或多種疾病症狀之復發。
術語「受試者」及「患者」可在本文中互換使用且係指人類。
術語「有效量」或「治療有效量」係指有效治療受試者之疾病或病症(例如直至部分地或完全減輕一或多種症狀)之藥物量。在一些實施例中，「有效量」係指在所需劑量及時間段內有效達成期望治療或預防結果之量。
術語「癌症」在本文中用於係指展現異常高程度之增殖及生長之細胞群。癌症可為良性(亦稱為良性腫瘤)、惡化前或惡性。癌細胞可為實體癌細胞或白血病癌細胞。術語「腫瘤生長」在本文中用於係指包括癌症之一或多個細胞之增殖或生長，該增殖或生長導致癌症之大小或程度發生相應增加。
適用於本文治療方法之癌症之實例包含(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病。該等癌症之較特定非限制性實例包含鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、垂體癌、食管癌、星形細胞瘤、軟組織肉瘤、非小細胞肺癌(包含鱗狀細胞非小細胞肺癌)、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸道癌、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細胞癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、腦癌、子宮內膜癌、睪丸癌、膽管癌、膽囊癌、胃癌、黑色素瘤及各種類型之頭頸癌(包含頭頸鱗狀細胞癌)。
與一或多種其他治療劑「組合」投與包含以任一順序同時(並行)及連續(依序)投與。
「醫藥上可接受之載劑」係指業內常與治療劑一起使用且一起構成用於投與受試者之醫藥組合物之無毒固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、囊封材料、調配物助劑或載劑。醫藥上可接受之載劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒且與調配物之其他成分相容。醫藥上可接受之載劑適用於所採用調配物。舉例而言，若治療劑擬經口投與，則載劑可為凝膠膠囊。若治療劑擬經皮下投與，則載劑理想地對皮膚並無刺激性且並不引起注射位點反應。
「化學治療劑」係可用於治療癌症之化學化合物。可在本文方法中投與之化學治療劑之實例包含(但不限於)烷基化劑，例如噻替派(thiotepa)及Cytoxan® 環磷醯胺(cyclosphosphamide)；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，例如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)及尿多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基蜜胺，包含六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；番荔枝內酯(acetogenin) (尤其布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin) (包含合成類似物托泊替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；卡利抑制素(callystatin)；CC-1065 (包含其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡澤來新(carzelesin)及比澤來新(bizelesin))；念珠藻素(cryptophycin) (尤其念珠藻素1及念珠藻素8)；尾海兔素(dolastatin)；多卡黴素(duocarmycin) (包含合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)；曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)，尤其卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ωI1 (例如參見Agnew,Chem Intl. Ed. Engl. , 33:183-186(1994))；達內黴素(dynemicin)，包含達內黴素A；雙膦酸鹽，例如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新製癌菌素髮色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(anthramycin)、偶氮絲胺酸、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉黴素(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D (dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、Adriamycin®多柔比星(doxorubicin) (包含嗎啉基-多柔比星、氰基嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin) (例如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，例如胺甲蝶呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)；葉酸類似物，例如二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，例如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone Propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺素，例如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，例如亞葉酸；乙醯葡醛酸內酯(aceglatone)；醛磷醯胺醣苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；百垂布昔(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatrexate)；地磷醯胺(defosfamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(eflornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美坦辛(maytansinoid)，例如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, OR)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(尤其T-2毒素、黏液黴素A (verrucarin A)、漆斑菌素(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；噶薩托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside) (「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉烷(taxoid)，例如Taxol® 太平洋紫杉醇(paclitaxel) (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、Abraxane® 太平洋紫杉醇之無克列莫佛(Cremophor)、白蛋白工程化奈米顆粒調配物(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)及Taxotere® 多西他賽(docetaxel) (Rhône-Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥；Gemzar® 吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲蝶呤；鉑類似物，例如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide) (VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；Navelbine® 長春瑞濱(vinorelbine)；能滅瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；希羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；伊立替康(irinotecan) (Camptosar, CPT-11) (包含伊立替康與5-FU及甲醯四氫葉酸(leucovorin)之治療方案)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，例如視黃酸；卡培他濱(capecitabine)；康布瑞塔卡汀(combretastatin)；甲醯四氫葉酸(LV)；奧沙利鉑，包含奧沙利鉑治療方案(FOLFOX)；PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR之抑制劑(例如埃羅替尼(erlotinib) (Tarceva® ))及減小細胞增殖之VEGF-A；及上述物質中之任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。
可在本文方法中投與之其他非限制性實例性化學治療劑包含用於調控或抑制對癌症之激素作用的抗激素藥劑，例如抗雌激素製劑及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包含(例如)他莫昔芬(tamoxifen) (包含Nolvadex® 他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(tiroxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及Fareston® 托瑞米芬(toremifene)；抑制酶芳香酶之芳香酶抑制劑，其調控腎上腺中雌激素產生，例如4(5)-咪唑、胺魯米特、Megase® 乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、Aromasin® 依西美坦(exemestane)、福美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、Rivisor® 伏羅唑(vorozole)、Femara® 來曲唑(letrozole)及Arimidex® 阿那曲唑(anastrozole)；及抗雄激素製劑(例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine) (1,3-二噁烷核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其抑制黏附細胞增殖中涉及之信號傳導途徑中之基因表現者，例如PKC-α、Ralf及H-Ras；核糖酶，例如VEGF表現抑制劑(例如，Angiozyme® 核糖酶)及HER2表現抑制劑；疫苗，例如基因療法疫苗，例如Allovectin® 疫苗、Leuvectin® 疫苗及Vaxid® 疫苗；Proleukin® rIL-2；Lurtotecan® 拓撲異構酶1抑制劑；Abarelix® rmRH；及上述物質中之任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。
「抗血管生成劑」或「血管生成抑制劑」係指直接或間接抑制血管生成、血管發生或不期望血管滲透性之小分子量物質、多核苷酸(例如包含抑制性RNA (RNAi或siRNA))、多肽、分離蛋白、重組蛋白、抗體或其偶聯物或融合蛋白。應理解，抗血管生成劑包含彼等結合血管生成因子或其受體且阻斷其血管生成活性之藥劑。舉例而言，可在本文方法中投與之抗血管生成劑可包含血管生成劑之抗體或其他拮抗劑，例如VEGF-A 抗體(例如貝伐珠單抗(bevacizumab) (Avastin® ))或VEGF-A受體(例如KDR受體或Flt-1受體)之抗體、抗PDGFR抑制劑(例如Gleevec® (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate)))、阻斷VEGF受體信號傳導之小分子(例如PTK787/ZK2284、SU6668、Sutent® /SU11248 (蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate))、AMG706或闡述於(例如)國際專利申請案WO 2004/113304中者)。抗血管生成劑亦包含天然血管生成抑制劑，例如血管抑素(angiostatin)、內皮抑素等。例如參見Klagsbrun及D’Amore (1991)Annu. Rev. Physiol. 53:217-39；Streit及Detmar (2003)Oncogene 22:3172-3179 (例如列示惡性黑色素瘤中之抗血管生成療法之表3)；Ferrara & Alitalo (1999)Nature Medicine 5(12):1359-1364；Tonini等人(2003)Oncogene 22:6549-6556 (例如列示已知抗血管生成因子之表2)；及Sato (2003)Int. J. Clin. Oncol . 8:200-206 (例如列示用於臨床試驗中之抗血管生成劑之表1)。
本文所用之「生長抑制劑」係指在活體外或在活體內抑制細胞(例如表現VEGF之細胞)之生長之化合物或組合物。因此，可在本文方法中投與之生長抑制劑可為顯著減小S期之細胞(例如表現VEGF之細胞)之百分比者。生長抑制劑之實例包含(但不限於)阻斷細胞週期進展(在除S期外之處)之藥劑，例如誘導G1阻滯及M期阻滯之藥劑。經典M期阻斷劑包含長春花提取物(vinca) (長春新鹼及長春鹼)、紫杉烷(taxane)及拓撲異構酶II抑制劑(例如多柔比星、表柔比星、柔紅黴素、依託泊苷及博來黴素)。彼等阻滯G1之藥劑亦進一步阻滯S期，例如DNA烷基化劑，例如他莫昔芬、普賴松(prednisone)、達卡巴嗪、雙氯乙基甲胺、順鉑、胺甲喋呤5-氟尿嘧啶及ara-C。其他資訊可參見Mendelsohn及Israel編輯，The Molecular Basis of Cancer ，第1章，標題為「Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs」，Murakami等人(W.B.Saunders, Philadelphia, 1995)，例如p. 13。紫杉烷(太平洋紫杉醇及多西他賽)係皆衍生自紫杉樹之抗癌藥。衍生自歐洲紫杉之多西他賽(Taxotere® , Rhone-Poulenc Rorer)係太平洋紫杉醇(Taxol® , Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。太平洋紫杉醇及多西他賽促進微管自微管蛋白二聚體之組裝並藉由防止解聚而使微管穩定，此可抑制細胞有絲分裂。
術語「抗腫瘤組合物」係指可用於治療癌症之包括至少一種活性治療劑之組合物。舉例而言，治療劑之實例包含(但不限於)化學治療劑、生長抑制劑、細胞毒性劑、用於輻射療法中之藥劑、抗血管生成劑、癌症免疫治療劑、細胞凋亡劑、抗微管蛋白劑及用以治療癌症之其他藥劑(例如抗HER-2抗體、抗CD20抗體、表皮生長因子受體(EGFR)拮抗劑(例如酪胺酸激酶抑制劑)、HER1/EGFR抑制劑(例如埃羅替尼(Tarceva® )、血小板衍生之生長因子抑制劑(例如Gleevec® (甲磺酸伊馬替尼))、COX-2抑制劑(例如塞來昔布(celecoxib))、干擾素、CTLA4抑制劑(例如抗CTLA抗體伊匹單抗(ipilimumab) (YERVOY®))、PD-1或PD-L1抑制劑(例如OPDIVO®、KEYTRUDA®、TECENTRIQ®、BAVENCIO®、IMFINZI®)、TIM3抑制劑(例如抗TIM3抗體)、細胞介素、結合下列靶ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA、CTLA4、TIM3或VEGF受體中之一或多者之拮抗劑(例如中和抗體)、TRAIL/Apo2及其他生物活性及有機化學藥劑等)。其組合亦包含於本發明中。
於酸性 pH 特異性結合 VISTA-ECD 之抗體 因VISTA在其細胞外結構域(ECD)中具有大量組胺酸殘基，故其摺疊及整體結構以及可用於結合配體(例如抗體)之表面可於酸性pH與中性pH、尤其近pH 6.5 (其係組胺酸之pKa )有所不同。因腫瘤微環境通常係酸性，故為結合彼等微環境中之VISTA，抗體可能需要於酸性pH特異性結合VISTA，其中至少一些表面組胺酸殘基更可能發生質子化。
下文之序列表提供分別含有或不含信號肽之人類VISTA (hVISTA) (SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2 (成熟hVISTA))之胺基酸序列。信號肽包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基1-32。細胞外結構域(ECD)由SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基1-162組成)。IgV結構域包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基37-167及SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基5- 135。頸部區域位於SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基172-194及SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基136-162處；跨膜結構域位於SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基195-216及SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基163-184處。SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基187及SEQ ID NO: 2之155 (粗體且加下劃線)可為D或E，其代表hVISTA中之多型性。該殘基係以粗體展示且加下劃線。因此，SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2涵蓋該殘基處之兩種人類多型性。VISTA之ECD中之組胺酸殘基係灰色陰影。
抗VISTA抗體(Ab)可於酸性pH特異性結合VISTA-ECD或其片段(例如包括VISTA之IgV結構域或hVISTA中包括(例如) SEQ ID NO: 2之胺基酸20-95、20-70、35-70、35-95、35-127或37-125之區域)。在某些實施例中，Ab在小於pH 7.0之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.8之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.5之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.3之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.0之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.8之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.5之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.3之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.0之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。
某些Ab在pH 5.0-pH 7.0範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。某些Ab在pH 5.0-pH 6.5範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。某些Ab在pH 5.0-pH 6.0範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。某些Ab在pH 5.5-pH 7.0範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。某些Ab在pH 5.5-pH 6.5範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。某些Ab在pH 6.0-6.5範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。
本文亦提供在6.5或更小之pH下以10-6 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白(例如hVISTA-ECD或包括VISTA之IgV結構域或hVISTA中包括(例如) SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70、35-70、35-95、35-127或37-125之區域之其片段)之Ab。在一些實施例中，Ab以10-7 M或更小之KD 進行結合。在一些實施例中，Ab以10-8 M或更小之KD 進行結合。在一些實施例中，Ab以10-9 M之KD 進行結合。在一些實施例中，Ab以10-10 M或更小之KD 進行結合。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白。
本文亦提供在pH 6.0-6.5範圍內以10-6 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在一些實施例中，Ab以10-7 M或更小之KD 進行結合。在一些實施例中，Ab以10-8 M或更小之KD 進行結合。在一些實施例中，Ab以10-9 M之KD 進行結合。在一些實施例中，Ab以10-10 M或更小之KD 進行結合。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下(例如在pH 6.0-6.5範圍內)以10-7 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白。另外，Ab可在6.5或更小之pH下(例如在pH 6.0-6.5範圍內)以10-8 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白。Ab可在6.5或更小之pH下(例如在pH 6.0-6.5範圍內)以10-9 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD。
本文亦提供(例如)在6.5或更小之pH下以10-5 s-1 或更小之k解離 在25℃下或在37℃特異性結合VISTA-ECD蛋白(例如hVISTA-ECD或包括VISTA之IgV結構域或hVISTA中包括(例如) SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70、35-70、35-95、35-127或37-125之區域之其片段)之Ab。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有10-4 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有2 10-4 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有5 10-4 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有7 10-4 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有10-3 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有2 10-3 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有5 10-3 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有7 10-3 s-1 或更小之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有10-2 s-1 之k解離 。在一些實施例中，Ab在25℃下或在37℃具有10-1 s-1 或更小之k解離 。舉例而言，Ab可在25℃下或在37℃以10-3 s-1 或更小之k解離 在6.5或更小之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。Ab可在25℃下或在37℃以10-3 s-1 或更小之k解離 在6.5或更小之pH下特異性結合hVISTA-ECD。另外，Ab可在25℃下或在37℃以10-2 s-1 或更小之k解離 在6.5或更小之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白。
本文提供(例如)在6.5或更小之pH下以(i) 10-6 M或更小、10-7 M或更小、10-8 M或更小、10-9 M或更小或10-10 M或更小之KD 及(ii) 10-5 s-1 或更小、10-4 (或2、5或7 10-4 ) s-1 或更小、10-3 (或2、5或7 10-4 ) s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白(例如hVISTA-ECD或包括VISTA之IgV結構域或hVISTA中包括(例如) SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70、35-70或35-95、35-95、35-127或37-125之區域之其片段)之Ab。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 及10-3 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 及10-3 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 及10-2 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 及10-3 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 及10-3 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 及10-2 s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 及10-4 (或2、5或7 10-4 ) s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 及10-5 (或2、5或7 10-5 ) s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 及10-4 (或2、5或7 10-4 ) s-1 之k解離 速率或更小(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 及10-5 (或2、5或7 10-5 ) s-1 或更小之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。
本文提供(例如)在25℃下或在37℃以104 M-1 s-1 或更高之k締合 在6.5或更小之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在一些該等實施例中，Ab可以105 M-1 s-1 或更高之k締合 進行結合。在一些該等實施例中，Ab可以106 M-1 s-1 或更高之k締合 進行結合。在一些該等實施例中，Ab可以107 M-1 s-1 或更高之k締合 進行結合。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以106 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以106 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA之ECD。
本文提供(例如)在6.5或更小之pH下以(i) 10-6 M或更小、10-7 M或更小、10-8 M或更小、10-9 M或更小或10-10 M或更小之KD 及(ii) 104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 及106 M-1 s-1 或更高之k締合 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 及106 M-1 s-1 或更高之k締合 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 及106 M-1 s-1 之k締合 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。舉例而言，Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 及106 M-1 s-1 或更高之k締合 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)結合hVISTA-ECD。
在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、2 10-5 s-1 或更小、5 10-5 s-1 或更小、7 10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、2 10-4 s-1 或更小、5 10-4 s-1 或更小、7 10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、2 10-3 s-1 或更小、5 10-3 s-1 或更小、7 10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些該等實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-10 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。
在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 以及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 以及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 以及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些該等實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-10 M或更小之KD 以及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。
在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-7 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-8 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-9 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。在一些該等實施例中，Ab可在6.5或更小之pH下以10-10 M或更小之KD 以及10-5 s-1 或更小、10-4 s-1 或更小、10-3 s-1 或更小、10-2 s-1 或更小或10-1 s-1 或更小之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)及104 M-1 s-1 或更高、105 M-1 s-1 或更高、106 M-1 s-1 或更高、107 M-1 s-1 或更高之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白。
如亦在上文所述，在一些上述實施例中，VISTA-ECD蛋白係hVISTA-ECD或係hVISTA-ECD之一部分(例如IgV結構域)。在一些上述實施例中，Ab可特異性結合包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95之表位。在一些上述實施例中，Ab可特異性結合包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-70之表位。在一些上述實施例中，Ab可特異性結合包括SEQ ID NO:2之胺基酸35-95之表位。在一些上述實施例中，Ab可特異性結合包括SEQ ID NO:2之胺基酸35-70之表位。在一些上述實施例中，表位係三維表位，其不僅包括SEQ ID NO:2中殘基20-95、20-70、35-95或35-70之上述部分中之一者，且亦包括SEQ ID NO:2之另一部分(例如SEQ ID NO:2之殘基95-105)。在某些實施例中，Ab結合WO2015/097536中闡述之Ab所結合之hVISTA表位。舉例而言，Ab可與WO2015/097536中所揭示之Ab競爭或交叉競爭結合hVISTA。在某些實施例中，Ab結合人類VISTA之構形表位。在某些實施例中，Ab結合包括人類VISTA中SEQ ID NO: 2之殘基103-111及SEQ ID NO:2之136-146或存在於該等殘基內之構形表位。在某些實施例中，Ab結合包括人類VISTA之SEQ ID NO:2之殘基24-36、54-65及100-102或存在於該等殘基內之構形表位。在某些實施例中，Ab結合包括人類VISTA之FG環中之胺基酸殘基之構形表位。在一些實施例中，Ab結合包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35至127及/或37-125之多肽。在一些實施例中，Ab結合VISTA ECD多肽或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基350-127之其部分，但抗體並不結合或以減小之親和力結合包括胺基酸取代之VISTA ECD多肽或其部分，其中取代(1)係取代下列胺基酸殘基中之一者：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127及SEQ ID NO: 2或(2)取代下列胺基酸殘基中之一者Y37、T39、R54、F62、Q63、H66、L115、V117、I119、S124或E125。在一些實施例中，抗VISTA抗體與本文所闡述之抗體(例如如在實例及/或申請專利範圍中所陳述)具有相同結合特性(或顯著相同之結合特性)。
一些上述抗體可端視pH對VISTA-ECD蛋白展示差異性結合親和力。某些Ab於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)特異性結合VISTA-ECD蛋白，亦於中性及/或鹼性pH以類似親和力特異性結合VISTA-ECD蛋白(亦即其係「泛結合劑(pan binder)」)。舉例而言，一些該等Ab可以10-7 M或更小之KD 在pH 6.5及pH 7.0下(在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合VISTA-ECD蛋白，從而pH 6.5下之KD 在pH 7.0下之KD 之1.5倍內。一些該等Ab可以10-8 M或更小之KD 在pH 6.5及pH 7.0下(在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合VISTA-ECD蛋白，從而pH 6.5下之KD 在pH 7.0下之KD 之1.5倍內。一些該等Ab可以10-8 M或更小之KD 在pH 6.5及pH 7.0下(在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合hVISTA-ECD，從而pH 6.5下之KD 在pH 7.0下之KD 之1.5倍內。
某些Ab於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)特異性結合VISTA-ECD蛋白，可於中性、生理及/或鹼性條件下以較低親和力結合VISTA-ECD蛋白(「pH敏感性結合劑」或「pH敏感性Ab」)。某些Ab於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)特異性結合VISTA-ECD蛋白，可於中性、生理及/或鹼性條件中對VISTA-ECD蛋白具有非顯著(例如幾乎不可檢測)結合。舉例而言，在一些實施例中，Ab可在pH 6.5下以10-8 M或更小之KD 及在pH 7.0及/或pH 7.4下以大於10-8 M之KD 結合VISTA-ECD蛋白。在一些該等實施例中，Ab可在pH 6.5下以10-8 M或更小之KD 及在pH 7.0及/或pH 7.4下以高於pH 6.5下1.5倍以上之KD 結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，提供pH敏感性Ab，其在pH 6.5下以低於pH 7.0下至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍或5000倍之KD (在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)特異性結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，在一些情形下，Ab在pH 6.0下以小於pH 7.0及/或pH 7.4或更高pH至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍或5000倍之KD (在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合VISTA-ECD蛋白。
在某些實施例中，Ab於酸性條件中以低於中性、生理或鹼性條件之k解離 特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，提供於酸性條件中於pH 6.5下以低於pH 7.0及/或pH 7.4下之k解離 至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。換言之，酸性pH下之解離速率慢於中性pH。舉例而言，在一些實施例中，Ab在pH 6.0下以低於pH 7.0及/或pH 7.4至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，提供在pH 6.5下以低於pH 7.4下之k解離 至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在一些實施例中，Ab在pH 6.0下以低於pH 7.4至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k解離 速率(如例如在25℃下或在37℃所量測)特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，提供在pH 6.0-6.5下以低於pH 7.0-7.4下之k解離 至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
在某些實施例中，Ab於酸性條件中以高於中性、生理或鹼性條件之k締合 特異性結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，提供於酸性條件中於pH 6.5下以高於pH 7.0及/或pH 7.4下之k締合 至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。舉例而言，在一些實施例中，Ab在pH 6.0下以高於pH 7.0及/或pH 7.4至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或1000倍之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)特異性結合VISTA-ECD蛋白。
在某些實施例中，Ab特異性在至少一個組胺酸殘基(例如SEQ ID NO: 1中之His 98)發生質子化之pH下結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，Ab在ECD中之大部分組胺酸殘基發生質子化之pH下(其預計為pH 6.5或更小pH，例如介於pH 6.0與pH 6.5之間)特異性結合VISTA-ECD蛋白。
本文亦涵蓋於中性、生理或鹼性pH下以高於酸性pH之親和力特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab，條件係酸性pH下之結合親和力保持較高。舉例而言，Ab可在pH 6.5及pH 7.0下以10-8 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白，但Ab在pH 7.0下以低於pH 6.5至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍之KD 進行結合。
本文亦涵蓋共有此部分之上述性質中之一或多者之Ab。上述性質(例如特定KD 、k解離 、k締合 、特定表位)並不孤立處理。因此，Ab可結合包括SEQ ID NO:2之一個上述區域之表位，且亦可具有如上文所闡述之泛結合或pH敏感性或pH選擇性結合性質，如藉由其KD 、k解離 或k締合 在不同pH下之一或多種行為所展示。
在上述實施例中之任一者中，Ab可為(例如)全長抗體(亦即包括全長重鏈(含有或不含C-末端離胺酸)及全長輕鏈)或抗原結合片段(例如Fab片段、Fab’片段、(Fab’)2 片段、scFv片段、Fv片段)，或Ab可為嵌合、人類化或人類抗體，或Ab可為雙特異性或多特異性抗體。
可使用若干不同方法來測定Ab如何在既定pH下充分結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，藉由表面電漿共振(SPR)，例如藉由BIACORE®分析。實例性SPR分析包括使用固定捕獲試劑(例如使用Biacore®抗人類Fc捕獲套組，GE Healthcare，目錄號BR-1008-39；或Biacore®抗小鼠捕獲套組，GE Healthcare，目錄號BR-1008-39)將一種或若干抗體捕獲於CM4感測器晶片上，且使VISTA抗原(呈一定濃度系列之分析物)流動以測定在期望pH下於電泳緩衝液中之結合動力學及親和力。在一實施例中，以0.1 nM至500 nM範圍內之二至五個濃度(例如0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、500 nM)使用30 uL/min之流速注射VISTA，最多4分鐘締合時間且最多10分鐘解離時間。在結合循環之間，遵循各別捕獲套組之製造商說明書來再生捕獲表面。使用參考流動槽及空白注射雙重參考所有數據。使用Biacore® T200評估軟體將具有簡單1:1動力學之數據擬合成具有質量轉移之蘭格繆爾(Langmuir)結合模型。亦可使用實例中所闡述之SPR方法。
可使用在表面上表現VISTA ECD多肽、PSGL-1或硫酸乙醯肝素之細胞來測定Ab對VISTA ECD多肽之親和力，該方法包括流式細胞術，且其中在既定pH下(例如pH 6.5或更小pH)測定Ab與結合細胞之VISTA-ECD之結合。實例性流式細胞術分析包括下列步驟：將異位表現hVISTA ECD之293T細胞或其他細胞再懸浮於由HBSS + 1% BSA組成且調節至期望pH (例如使用MES達成pH 6.0或使用HEPES達成pH 7.4)之緩衝液中。將針對hVISTA之Ab (例如人類IgG)自大約20 μg/mL連續稀釋並與再懸浮細胞一起在4℃下培育30分鐘。然後使用相同緩衝液將細胞洗滌兩次，且維持期望pH (例如pH 6.0或7.4)，並與識別一級抗體(例如人類IgG)之螢光團偶聯之二級抗體一起培育且在減小之pH下較為穩定。然後如之前所述洗滌細胞並立即獲取於BD Fortessa或其他流式細胞儀上且並不固定。可如實例中所闡述來測定Ab對VISTA ECD多肽之親和力。
在某些實施例中，結合hVISTA ECD之Ab會阻斷hVISTA與其結合配偶體(例如VISTA受體)在(例如)細胞上之結合。抑制或阻斷可為100%或至少99%、95%、90%、85%、80%、75%或50%。在某些實施例中，Ab於酸性pH (例如pH 6.5或更小pH)結合VISTA-ECD蛋白，且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50% (例如至少75%、80%、85%、90%、95%或100%)。在某些實施例中，Ab在小於pH 7.0之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.8之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.5之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.3之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 6.0之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.8之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.5之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.3之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。在某些實施例中，Ab在小於pH 5.0之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。
某些Ab在pH 5.0-pH 7.0範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。某些Ab在pH 5.0-pH 6.5範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。某些Ab在pH 5.0-pH 6.0範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。某些Ab在pH 5.5-pH 7.0範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。某些Ab在pH 5.5-pH 6.5範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。某些Ab在pH 6.0-6.5範圍內之pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白且將VISTA與其結合配偶體之結合抑制至少50%。可如實例中所闡述來測定結合抑制。
VISTA結合配偶體可為PSGL-1 (例如人類PSGL-1)。人類PSGL-1同種型之序列提供為本文之SEQ ID NO: 3-10。VISTA結合含有或不含唾液醯基路易斯X之PSGL-1。結合配偶體亦可為(例如)存在於某些細胞上之硫酸乙醯肝素蛋白多醣。
可在存在及不存在抗體下藉由量測VISTA (或VISTA ECD或VISTA IgV結構域或VISTA陽性細胞)與VISTA結合細胞(例如T細胞(例如CD4+T細胞、CD8+ T細胞，活化或未活化)、NK細胞或其他VISTA結合細胞)之結合之抑制來測定與VISTA結合配偶體之結合的抑制。可用以測定抗體是否抑制VISTA與其結合配偶體或表現結合配偶體之T細胞之結合之實例性實驗係流式細胞術分析，例如包括下列步驟之分析：將來自供體血液、血沉棕黃層或單采濃縮白血球(leukopak)之人類周邊血單核細胞再懸浮於由HBSS + 1% BSA組成且調節至期望pH (例如使用MES達成pH 6.0或使用HEPES達成pH 7.4)之緩衝液中。然後將細胞在4℃下與20 μg/mL由融合至人類IgG1 Fc之hVISTA ECD (VISTA-Fc)組成之重組嵌合蛋白以及不同濃度之候選VISTA阻斷性抗體或對照抗體一起培育30分鐘。然後將細胞在相同緩衝液中洗滌兩次，維持期望pH (例如pH 6.0或7.4)，並在4℃下與識別VISTA-Fc之螢光團偶聯之二級抗體(但無候選阻斷性抗體或對照抗體)一起再培育30分鐘，且在減小之pH下較為穩定。然後如之前所述洗滌細胞，並立即獲取於BD Fortessa或其他流式細胞儀上且並不固定。可(例如)如實例中所闡述來測定結合抑制。
在具體實施例中，本文所闡述之Ab可觸發或增強免疫反應(例如抗原特異性免疫反應)。在某些實施例中，Ab尤其於酸性pH (例如發現於腫瘤微環境中)刺激T細胞活性。可(例如)在混合淋巴球反應(MLR)中或在活體外分析中使用抗原呈遞細胞(天然或人工)及T細胞來量測T細胞活性刺激。亦可使用(例如)實例中所闡述之Jurkat分析來量測T細胞活性刺激。亦可藉由測定來自T細胞之IFN-γ分泌來量測T細胞活性刺激，其中增強之IFN-γ分泌指示T細胞刺激。亦可量測其他細胞介素自活化T細胞之分泌。在某些實施例中，量測活化T細胞之信號轉導(例如NF-kB含量)。在具體實施例中，本文所闡述之Ab抑制細胞黏附，此可如實例中所闡述來量測。
亦可在單核球分析、ADCC分析及ADCP分析中尤其於酸性pH (例如發現於腫瘤微環境中)展示抗VISTA Ab之活性。
在某些實施例中，抗VISTA Ab抑制腫瘤模型(例如人類VISTA基因嵌入腫瘤模型)中之腫瘤生長。
如本文實例中所展示，抗VISTA Ab在胞內體中再循環以(例如)增強抗體之藥物動力學(PK)性質(亦即半衰期)，此需要抗VISTA抗體於酸性條件中結合VISTA。因此，如本文進一步所闡述，在低pH下(例如pH 6.5或更低pH)結合VISTA之抗VISTA Ab亦預計相對於於酸性pH不結合VISTA之VISTA抗體具有較長可接受半衰期。
在一些實施例中，VISTA抗體在活體內較骨髓樣細胞較佳地結合腫瘤。已展示，本文之特定抗VISTA Ab在VISTA基因嵌入小鼠中較血液優先局部化至腫瘤中。舉例而言，在一些實施例中，在將Ab投與受試者之後24至51小時，本文之抗體以至少兩倍於血液之含量累積於腫瘤中。在一些實施例中，相對於受試者之血液，抗VISTA Ab不顯著累積於肝或肺中。在一些實施例中，腫瘤中之抗VISTA Ab可在向受試者投與VISTA Ab後持續(例如)長達至少51小時之時間。在一些實施例中，藉由向受試者投與經PET示蹤劑標記之Ab來測定受試者中之抗VISTA Ab局部化。
實例性 hVISTA-ECD 結合 Ab 本文提供相對於生理pH或中性pH於酸性pH (例如於酸性條件中)優先結合VISTA (ECD)之Ab。
本發明闡述包含下列各項之抗hVISTA Ab：P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S及P1-068748_D57K_D100S。該等抗體可含有經修飾以使至少一個H、D或E殘基回復至發現於P1-061015親代抗體中之相同位置處之殘基之P1-068744或P1-068748 Ab的重鏈CDR。在一些實施例中，該等抗體可包括抗體P1-061015之輕鏈CDR。
更通常地，本發明包含含有如下重鏈可變區(VH)之抗hVISTA Ab：其包括含有GFTFSX1 YAMH之VH CDR1，其中X1 係E或S (SEQ ID NO: 690)；含有X2 IWYDGSNKYX3 ADSVKG之VH CDR2，其中X2 係H或I，且X3 係E或Y (SEQ ID NO: 691)；及/或含有DSGFYX4 SYYFDX5 之VH CDR3，其中X4 係E或S且X5 係E或Y (SEQ ID NO: 692)。在Ab P1-061015中，該等位置分別係S、I、Y、S及Y，而在P1-068744中，該等位置分別係E、H、E、E及E。(例如參見圖29C。)  在該等情形下，抗體可包括P1-068744之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，但在下列指定位置回復至P1-61015之情形(參見表11及27)：P1-068744_E31S (亦即，包括P1-068744之CDR，只是X1 係S)、P1-68744_H50I (亦即，X2 係I)、P1-68744_E59Y (亦即，X3 係Y)、P1-068744_E100S (亦即，X4 係S)、P1-068744_E102Y (亦即，X5 係Y)、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y或P1-068744_E59Y_E102Y。應注意，上文所使用該等抗體之命名係基於Kabat編號方案，該方案部分地根據殘基之結構位置而非根據其序列位置來進行編號。因抗體可具有不同長度之CDR，故該編號方案可能未必對應於抗體序列之殘基位置編號。X1 、X2 、X3 、X4 及X5 處之上述取代在本文中位於SEQ ID No: 95及103之重鏈序列之位置31、50、60、104及110處，如亦可易於藉由查看表11及27所見。關於抗體殘基編號方式之其他資訊可參見(例如) M. Dondelinger等人，Front. Immunol. 9: 2278 (2018)。
在一些實施例中，抗體可包括P1-068744或X2 係H之上述突變體中之一者之重鏈CDR。在一些實施例中，抗體可包括P1-068744或X2 係H且X4 係E (亦即不包括H50I或E100S突變)之上述突變體中之一者之重鏈CDR。實例包含含有P1-068744、P1-068744_E31S、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_ E59Y及P1-068744_E59Y_E102Y之重鏈CDR之抗體。在一些實施例中，該等抗體另外具有(a) ＜ 5 × 10-8 M、＜ 1 × 10-8 M、＜ 5 × 10-9 M或＜ 3 × 10-9 M之hVISTA親和力(例如藉由表面電漿共振(SPR)測得且由Kd表示)；(b)在pH 7.4下1 × 10-8 及1 × 10-6 之Kd (例如藉由SPR量測)；及/或(c)抗體另外在pH 6.0下具有＜ 5 × 10-3 (1/s)、＜ 4 × 10-3 (1/s)或＜ 3 × 10-3 (1/s)之k解離 (例如如藉由SPR所量測)。在其他實施例中，抗體保留位置X2 處之H及位置X3 處之E。在一些實施例中，抗體保留位置X3 及X4 二者處之E。另外，在一些實施例中，與P1-068744相比，抗體保留X2 處之H、X3 處之E及X4 處之E。實例包含含有P1-068744、P1-068744_E31S、P1-068744_E31S_E102Y及P1-068744_E102Y之重鏈CDR之抗體。在上述實施例中，抗體可包括彼等抗體中之一者之重鏈CDR及P061015抗體之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗hVISTA抗體係本文(例如上文)所闡述在CDR或可變區中並無其他胺基酸取代者。
另外，本發明包含含有如下重鏈可變區(VH)之抗hVISTA Ab：其包括含有GFTFSX1 X2 AMHH之CDR1，其中X1 係H或S，且X2 係H或Y (SEQ ID NO: 693)；含有IIWYDGSNX3 X4 YADSVKG之VH CDR2，其中X3 係D或K，且X4 係D或Y (SEQ ID NO: 694)；及/或含有DSGFYX5 SYYFDY之VH CDR3，其中X5 係D或S (SEQ ID NO: 695)。在Ab P1-061015中，該等位置分別係S、Y、K、Y及S及，而在P1-068748中，該等位置係H、H、D、D及D。(參見圖29C。)  在該等情形下，抗體可包括P1-068748之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，但在下列指定位置回復至P1-61015之情形(參見表12及28)：P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及/或CDR3。應注意，本文之命名係基於Kabat編號。X1 、X2 、X3 、X4 及X5 處之上述取代位於SEQ ID No: 95及99之重鏈序列之位置31、32、58、59及104處，如(例如)亦可藉由查看表12及28及SEQ ID No: 95及99所見。
在一些該等實施例中，重鏈CDR可在位置X5 處保留D (亦即在胺基酸序列位置104處；亦即其不含如上述命名中所闡述之D100S取代)。在一些情形下，抗體在序列位置X5 處保留D且亦對hVISTA顯示pH選擇性結合。在一些情形下，抗體在位置X4 處保留D。在一些情形下，抗體在位置X4 及X5 二者處保留D (亦即，其相對於P1-068744不包含D58Y或D100S取代)。在一些情形下，抗體包括P1-068748、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K或P1-068748_H31S_D57K之重鏈CDR。在一些該等情形下，抗體可包括彼等抗體中之一者之重鏈CDR及P061015抗體之輕鏈CDR。在一些實施例中，抗體另外具有(a) ＜ 1 × 10-8 M、＜ 7 × 10-9 M或＜ 5 × 10-9 M之hVISTA親和力(例如藉由表面電漿共振(SPR)測得且由Kd表示)；(b)在pH 7.4下5 × 10-8 及1 × 10-6 之Kd (例如藉由SPR量測)；及/或(c)抗體另外在pH 6.0下具有＜ 5 × 10-3 (1/s)、＜ 4 × 10-3 (1/s)或＜ 3 × 10-3 (1/s)之k解離 (例如如藉由SPR所量測)。在一些實施例中，抗hVISTA抗體係本文(例如上文)所闡述在CDR或可變區中並無其他胺基酸取代者。
在某些實施例中，抗hVISTA抗體包括P1-068744或P1-068748之VH及VL CDR或包括含有至P1-061015胺基酸之胺基酸回復之P1-068744或P1-068748之VH及VL，其中該等胺基酸回復不影響抗體之期望特性。舉例而言，抗hVISTA抗體可包括P1-068744或P1-068748之VH及VL或VH及VL CDR，且具有不影響pH選擇性及/或結合動力學之回復突變，如本文進一步所闡述。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH CDR1、CDR2及/或CDR3之重鏈可變區(「VH」)。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH CDR1、CDR2及CDR3之VH。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VH CDR1、CDR2及/或CDR3之VH。該等物質中之每一者之VH CDR1、CDR2及CDR3包括下文序列表中所提供上述抗體物質中之每一者之VH序列的胺基酸位置26-35 (VH CDR1)、50-66 (VH CDR2)及99-110 (VH CDR3)。下文序列表中所提供上述抗體物質之每一VH序列之CDR亦加下劃線且呈粗體。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL CDR1、CDR2及CDR3之VL。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有以下中之一者之VL CDR1、CDR2及CDR3之VL：P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S。該等物質中之每一者之VL CDR1、CDR2及CDR3包括下文序列表中所提供上述抗體物質中之每一者之VL序列的胺基酸位置24-35 (VL CDR1)、51-57 (VL CDR2)及90-98 (VL CDR3)。彼等序列中之每一者上之CDR亦加下劃線且呈粗體。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括VH (包括本文所提供之任一抗hVISTA Ab之VH CDR1、CDR2及/或CDR3)及VL (包括本文所提供之任一抗hVISTA Ab之CDR1、CDR2及/或CDR3)。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括VH (包括本文所提供之任一抗hVISTA Ab之VH CDR1、CDR2及CDR3)及VL (包括本文所提供之任一抗hVISTA Ab之CDR1、CDR2及CDR3)。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括：VH，其包括P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E或P1-061029_Y32E_F100fE)之VH CDR1、CDR2及/或CDR3；及VL，其包括P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S。
在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括： (a)    包括P1-061029之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061029之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (b)    包括P1-061015之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061015之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (c)    包括P1-068757之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068757之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (d)    包括P1-068759之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068759之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (e)    包括P1-068761之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (f)    包括P1-068763之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068763之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (g)    包括P1-068765之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068765之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (h)    包括P1-068767之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (i)    包括P1-068769之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068769之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (j)    包括P1-068771之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068771之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (k)    包括P1-068773之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068773之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (l)    包括P1-068775之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068775之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (m)   包括P1-069059之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069059之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (n)    包括P1-069061之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069061之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (o)    包括P1-069063之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069063之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (p)    包括P1-069065之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069065之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (q)    包括P1-069067之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069067之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (r)    包括P1-069069之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069069之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (s)    包括P1-069071之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069071之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (t)    包括P1-069073之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069073之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (u)    包括P1-069075之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069075之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (v)    包括P1-069077之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-069077之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (w)   包括P1-068736之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068736之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (x)    包括P1-068738之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068738之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (y)    包括P1-068740之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068740之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (z)    包括P1-068742之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068742之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (aa)  包括P1-068744之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (bb)  包括P1-068746之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068746之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (cc)  包括P1-068748之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (dd)  包括P1-068750之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068750之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ee)  包括P1-068752之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068752之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ff)   包括P1-068754之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068754之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (gg)  包括P1-068761_E55A之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E55A之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (hh)  包括P1-068761_H100G之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_H100G之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ii)   包括P1-068761_E56N之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E56N之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (jj)   包括P1-068761_E55A_E56N之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E55A_E56N之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (kk)  包括P1-068761_E30D之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ll)   包括P1-068761_E30D_E55A之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_E55A之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (mm) 包括P1-068761_E56N_H100G之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E56N_H100G之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (nn)  包括P1-068761_E30D_H100G之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_H100G之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (oo)  包括P1-068761_E30D_E56N之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_E56N之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (pp)  包括P1-068761_E100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (qq)  包括P1-068761_E55A_E100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E55A_E100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (rr)   包括P1-068761_H100G_E100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_H100G_E100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ss)   包括P1-068761_E30D_H100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_H100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (tt)   包括P1-068761_E56N_H100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E56N_H100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (uu)  包括P1-068761_E32Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (vv)  包括P1-068761_E32Y_E55A之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_E55A之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ww) 包括P1-068761_E32Y_E56N之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_E56N之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (xx)  包括P1-068761_E30D_E32Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_E32Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (yy)  包括P1-068761_E32Y_H100G之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_H100G之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (zz)  包括P1-068761_E32Y_H100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_H100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (aaa) 包括P1-068767_D52N_D102V之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N_D102V之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (bbb) 包括P1-068767_D52N之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ccc) 包括P1-068767_D52N_E55A之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N_E55A之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ddd) 包括P1-068767_E55A_D102V之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E55A_D102V之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (eee) 包括P1-068767_D102V之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D102V之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (fff)  包括P1-068767_E55A之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E55A之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ggg) 包括P1-068767_E30D_D52N之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_D52N之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (hhh) 包括P1-068767_E30D_D102V之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_D102V之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (iii)  包括P1-068767_E30D之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (jjj)  包括P1-068767_E30D_E55A之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_E55A之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (kkk) 包括P1-068767_E100fF_D102V之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E100fF_D102V之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (lll)  包括P1-068767_E55A_E100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E55A_E100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (mmm)   包括P1-068767_D52N_E100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N_E100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (nnn) 包括P1-068767_E100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ooo) 包括P1-068767_E30D_H100fF之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_H100fF之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ppp) 包括P1-061029_F100fE_V102D之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_F100fE_V102D之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (qqq) 包括P1-061029_F100fE之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_F100fE之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (rrr)  包括P1-061029_V102D之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_V102D之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (sss) 包括P1-061029_Y32E之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_Y32E之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ttt)  包括P1-061029_Y32E_F100fE之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_Y32E_F100fE之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (uuu) 包括P1-068744_E31S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (vvv) 包括P1-068744_H50I之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (www)   包括P1-068744_E59Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E59Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (xxx) 包括P1-068744_E100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (yyy) 包括P1-068744_E102Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E102Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (zzz) 包括P1-068744_E31S_H50I之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_H50I之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (aaaa)    包括P1-068744_H50I_E59Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I_E59Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (bbbb)    包括P1-068744_E59Y_E100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E59Y_E100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (cccc)    包括P1-068744_E100S_E102Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E100S_E102Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (dddd)    包括P1-068744_E31S_E102Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_E102Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (eeee)    包括P1-068744_E31S_E59Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_E59Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ffff) 包括P1-068744_E31S_E100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_E100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (gggg)    包括P1-068744_H50I_E100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I_E100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (hhhh)    包括P1-068744_H50I_E102Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I_E102Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (iiii) 包括P1-068744_E59Y_E102Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E59Y_E102Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (jjjj) 包括P1-068748_H31S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (kkkk)    包括P1-068748_H32Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (llll) 包括P1-068748_D57K之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D57K之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (mmmm) 包括P1-068748_D58Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D58Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (nnnn)    包括P1-068748_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (oooo)    包括P1-068748_H31S_H32Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_H32Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (pppp)    包括P1-068748_H32Y_D57K之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y_D57K之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (qqqq)    包括P1-068748_D57K_D58Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D57K_D58Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (rrrr) 包括P1-068748_D58Y_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D58Y_D100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (ssss) 包括P1-068748_H31S_D57K之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_D57K之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (tttt) 包括P1-068748_H31S_D58Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_D58Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (uuuu)    包括P1-068748_H31S_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_D100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (vvvv)    包括P1-068748_H32Y_D58Y之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y_D58Y之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL； (wwww) 包括P1-068748_H32Y_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y_D100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL；或 (xxxx)    包括P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D57K_D100S之VL CDR1、CDR2及CDR3的VL。
同樣，下文之序列表提供具有IgG1.3重鏈恆定區(除非在表中指出不同HC恆定區)之上文所列示抗體之重鏈及輕鏈可變區序列及全長重鏈及輕鏈序列且指出其VH CDR1、CDR2及CDR3以及VL CDR1、CDR2及CDR3之位置(根據胺基酸殘基)，且每一VH及VL序列中之CDR加粗體且加下劃線。因此，舉例而言，P1-061029之VH CDR1包括SEQ ID NO: 67之胺基酸26-35，而VH CDR2包括SEQ ID NO: 67之胺基酸50-66，且VH CDR3包括SEQ ID NO: 67之胺基酸99-110，等等，如藉由序列表中所展示SEQ ID NO: 67之粗體及加下劃線胺基酸所指出。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH之胺基酸序列之VH。本文所提供特定抗體物質之個別VH序列列示於序列表中。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VH之胺基酸序列之VH。
在一些實施例中，抗hVISTA Ab包括以下抗體中之任一者之VH：P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S，但在VH序列之框架區中具有1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)。視情況，P1-061029或其子代可在VH框架區中含有取代K16R及/或T84A (P1-061015已在該等位置處具有R及A)。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH CDR之胺基酸序列之VH CDR1、CDR2及CDR3，且包括與本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有與以下物質之VH之胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的VH：P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S。在某些實施例中，抗體之VH與序列表中所展示VH序列因VH序列框架區中之1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)或(例如) P1-061029或其子代中之K16R及/或T84A取代中之一或兩者而有所不同。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括由本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH之胺基酸序列組成之VH。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括由P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VH之胺基酸序列組成之VH，其中在P1-061029或其子代之情形下視情況具有K16R及/或T84A取代中之一或兩者。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL之胺基酸序列之VL。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VL之胺基酸序列之VL。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL CDR之胺基酸序列之VL CDR1、CDR2及CDR3，且包括與本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VL。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有與以下物質之VL之胺基酸序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的VL：P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S。在某些實施例中，抗體之VL與序列表中所展示之VL序列因VL序列之框架區中之1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)而有所不同。舉例而言，P1-061015或其子代可視情況在VL框架區中具有T85V取代。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括由本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL之胺基酸序列組成之VL。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括由P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VL之胺基酸序列組成之VL。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH之胺基酸序列之VH，且包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL之胺基酸序列之VL。在某些該等實施例中，抗hVISTA Ab包括含有P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029 (SEQ ID NO: 68)或P1-061015 (SEQ ID NO: 96)或包括T85V取代之P1-061015 (參見SEQ ID NO: 569；P1-061016 T85V)之VL之胺基酸序列的VL。
然而，在某些實施例中，抗體之VH係P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH，但在VH序列之框架區中具有1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)；且VL係P1-061029或P1-061015或P1-061015 T85V之VL。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之VH及VL之胺基酸序列之VH及VL，視情況，其中P1-061029或其子代之VH包括K16R及/或T84A取代中之一或兩者，且另外視情況其中P1-061015或其子代之VL包括T85V取代。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括VH CDR1、CDR2及CDR3 (包括本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH CDR之胺基酸序列)以及VL CDR1、CDR2及CDR3 (包括本文所提供任一抗hVISTA Ab之VL CDR之胺基酸序列)，且亦包括各自與本文所提供任一抗hVISTA Ab之相應VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL。在某些實施例中，抗體之VH及VL與序列表中所展示之VH及VL序列因序列框架區中之1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)或(例如)在P1-061029或其子代之情形下VH序列中之K16R及/或T84A取代中之一或兩者或(例如)在P1-061015或其子代之情形下的T85V取代而有所不同。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括由本文所提供任一抗hVISTA Ab之VH及VL之胺基酸序列組成之VH及VL。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括各自由P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)組成之VH及VL之胺基酸序列之VH及VL，視情況，其中藉由具有K16R及/或T84A取代中之一或兩者來修飾P1-061029或其子代之VH，且藉由具有T85V取代來修飾P1-061015或其子代之VL。
抗hVISTA Ab可包括： (a)    包括P1-061029中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061029中VL之胺基酸序列之VL； (b)    包括P1-061015中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061015中VL之胺基酸序列之VL； (c)    包括P1-068757中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068757中VL之胺基酸序列之VL； (d)    包括P1-068759中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068759中VL之胺基酸序列之VL； (e)    包括P1-068761中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761中VL之胺基酸序列之VL； (f)    包括P1-068763中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068763中VL之胺基酸序列之VL； (g)    包括P1-068765中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068765中VL之胺基酸序列之VL； (h)    包括P1-068767中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767中VL之胺基酸序列之VL； (i)    包括P1-068769中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068769中VL之胺基酸序列之VL； (j)    包括P1-068771中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068771中VL之胺基酸序列之VL； (k)    包括P1-068773中VH之胺基酸序列之VH及包括-068773中VL之胺基酸序列之VL； (l)    包括P1-068775中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068775中VL之胺基酸序列之VL； (m)   包括P1-069059中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069059中VL之胺基酸序列之VL； (n)    包括P1-069061中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069061中VL之胺基酸序列之VL； (o)    包括P1-069063中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069063中VL之胺基酸序列之VL； (p)    包括P1-069065中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069065中VL之胺基酸序列之VL； (q)    包括P1-069067中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069067中VL之胺基酸序列之VL； (r)    包括P1-069069中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069069中VL之胺基酸序列之VL； (s)    包括P1-069071中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069071中VL之胺基酸序列之VL； (t)    包括P1-069073中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069073中VL之胺基酸序列之VL； (u)    包括P1-069075中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069075中VL之胺基酸序列之VL； (v)    包括P1-069077中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-069077中VL之胺基酸序列之VL； (w)   包括P1-068736中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068736中VL之胺基酸序列之VL； (x)    包括P1-068738中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068738中VL之胺基酸序列之VL； (y)    包括P1-068740中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068740中VL之胺基酸序列之VL； (z)    包括P1-068742中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068742中VL之胺基酸序列之VL； (aa)  包括P1-068744中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744中VL之胺基酸序列之VL； (bb)  包括P1-068746中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068746中VL之胺基酸序列之VL； (cc)  包括P1-068748中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748中VL之胺基酸序列之VL； (dd)  包括P1-068750中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068750中VL之胺基酸序列之VL； (ee)  包括P1-068752中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068752中VL之胺基酸序列之VL； (ff)   包括P1-068754中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068754中VL之胺基酸序列之VL； (gg)  包括P1-068761_E55A中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E55A中VL之胺基酸序列之VL； (hh)  包括P1-068761_H100G中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_H100G中VL之胺基酸序列之VL； (ii)   包括P1-068761_E56N中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E56N中VL之胺基酸序列之VL； (jj)   包括P1-068761_E55A_E56N中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E55A_E56N中VL之胺基酸序列之VL； (kk)  包括P1-068761_E30D中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D中VL之胺基酸序列之VL； (ll)   包括P1-068761_E30D_E55A中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_E55A中VL之胺基酸序列之VL； (mm) 包括P1-068761_E56N_H100G中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E56N_H100G中VL之胺基酸序列之VL； (nn)  包括P1-068761_E30D_H100G中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_H100G中VL之胺基酸序列之VL； (oo)  包括P1-068761_E30D_E56N中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_E56N中VL之胺基酸序列之VL； (pp)  包括P1-068761_E100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E100fF中VL之胺基酸序列之VL； (qq)  包括P1-068761_E55A_E100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E55A_E100fF中VL之胺基酸序列之VL； (rr)   包括P1-068761_H100G_E100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_H100G_E100fF中VL之胺基酸序列之VL； (ss)   包括P1-068761_E30D_H100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_H100fF中VL之胺基酸序列之VL； (tt)   包括P1-068761_E56N_H100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E56N_H100fF中VL之胺基酸序列之VL； (uu)  包括P1-068761_E32Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y中VL之胺基酸序列之VL； (vv)  包括P1-068761_E32Y_E55A中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_E55A中VL之胺基酸序列之VL； (ww) 包括P1-068761_E32Y_E56N中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_E56N中VL之胺基酸序列之VL； (xx)  包括P1-068761_E30D_E32Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E30D_E32Y中VL之胺基酸序列之VL； (yy)  包括P1-068761_E32Y_H100G中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_H100G中VL之胺基酸序列之VL； (zz)  包括P1-068761_E32Y_H100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068761_E32Y_H100fF中VL之胺基酸序列之VL； (aaa) 包括P1-068767_D52N_D102V中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N_D102V中VL之胺基酸序列之VL； (bbb) 包括P1-068767_D52N中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N中VL之胺基酸序列之VL； (ccc) 包括P1-068767_D52N_E55A中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N_E55A中VL之胺基酸序列之VL； (ddd) 包括P1-068767_E55A_D102V中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E55A_D102V中VL之胺基酸序列之VL； (eee) 包括P1-068767_D102V中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D102V中VL之胺基酸序列之VL； (fff)  包括P1-068767_E55A中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E55A中VL之胺基酸序列之VL； (ggg) 包括P1-068767_E30D_D52N中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_D52N中VL之胺基酸序列之VL； (hhh) 包括P1-068767_E30D_D102V中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_D102V中VL之胺基酸序列之VL； (iii)  包括P1-068767_E30D中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D中VL之胺基酸序列之VL； (jjj)  包括P1-068767_E30D_E55A中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_E55A中VL之胺基酸序列之VL； (kkk) 包括P1-068767_E100fF_D102V中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E100fF_D102V中VL之胺基酸序列之VL； (lll)  包括P1-068767_E55A_E100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E55A_E100fF中VL之胺基酸序列之VL； (mmm)   包括P1-068767_D52N_D100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_D52N_D100fF中VL之胺基酸序列之VL； (nnn) 包括P1-068767_E100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E100fF中VL之胺基酸序列之VL； (ooo) 包括P1-068767_E30D_H100fF中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068767_E30D_H100fF中VL之胺基酸序列之VL； (ppp) 包括P1-061029_F100fE_V102D中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_F100fE_V102D中VL之胺基酸序列之VL； (qqq) 包括P1-061029_F100fE中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_F100fE中VL之胺基酸序列之VL； (rrr)  包括P1-061029_V102D中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_V102D中VL之胺基酸序列之VL； (sss) 包括P1-061029_Y32E中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_Y32E中VL之胺基酸序列之VL； (ttt)  包括P1-061029_Y32E_F100fE中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-061029_Y32E_F100fE中VL之胺基酸序列之VL； (uuu) 包括P1-068744_E31S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S之VL之VL； (vvv) 包括P1-068744_H50I中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I之VL之VL； (www)   包括P1-068744_E59Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E59Y之VL之VL； (xxx) 包括P1-068744_E100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E100S之VL之VL； (yyy) 包括P1-068744_E102Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E102Y之VL之VL； (zzz) 包括P1-068744_E31S_H50I中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_H50I之VL之VL； (aaaa)    包括P1-068744_H50I_E59Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I_E59Y之VL之VL； (bbbb)    包括P1-068744_E59Y_E100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E59;Y_E100S之VL之VL； (cccc)    包括P1-068744_E100S_E102Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E100S_E102Y之VL之VL； (dddd)    包括P1-068744_E31S_E102Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_E102Y之VL之VL； (eeee)    包括P1-068744_E31S_E59Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_E59Y之VL之VL； (ffff) 包括P1-068744_E31S_E100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E31S_E100S之VL之VL； (gggg)    包括P1-068744_H50I_E100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I_E100S之VL之VL； (hhhh)    包括P1-068744_H50I_E102Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_H50I_E102Y之VL之VL； (iiii) 包括P1-068744_E59Y_E102Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068744_E59;Y_E102Y之VL之VL； (jjjj) 包括P1-068748_H31S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S之VL之VL； (kkkk)    包括P1-068748_H32Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y之VL之VL； (llll) 包括P1-068748_D57K中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D57K之VL之VL； (mmmm) 包括P1-068748_D58Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D58Y之VL之VL； (nnnn)    包括P1-068748_D100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D100S之VL之VL； (oooo)    包括P1-068748_H31S_H32Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_H32Y之VL之VL； (pppp)    包括P1-068748_H32Y_D57K中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y_D57K之VL之VL； (qqqq)    包括P1-068748_D57K_D58Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D57K_D58Y之VL之VL； (rrrr) 包括P1-068748_D58Y_D100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D58Y_D100S之VL之VL； (ssss) 包括P1-068748_H31S_D57K中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_D57K之VL之VL； (tttt) 包括P1-068748_H31S_D58Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_D58Y之VL之VL； (uuuu)    包括P1-068748_H31S_D100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H31S_D100S之VL之VL； (vvvv)    包括P1-068748_H32Y_D58Y中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y_D58Y之VL之VL； (wwww) 包括P1-068748_H32Y_D100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_H32Y_D100S之VL之VL； (xxxx)    包括P1-068748_D57K_D100S中VH之胺基酸序列之VH及包括P1-068748_D57K_D100S之VL之VL，視情況其中(a)或(c)-(ttt)之VH包括 K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)-(xxxx)之VL包括T85V取代。
抗hVISTA Ab可包括： (a)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-061029之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029之VL之胺基酸序列之VL； (b)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068757之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068757之VL之胺基酸序列之VL； (c)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068759之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068759之VL之胺基酸序列之VL； (d)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761之VL之胺基酸序列之VL； (e)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068763之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068763之VL之胺基酸序列之VL； (f)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068765之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068765之VL之胺基酸序列之VL； (g)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767之VL之胺基酸序列之VL； (h)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068769之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068769之VL之胺基酸序列之VL； (i)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068771之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068771之VL之胺基酸序列之VL； (j)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068773之VH之胺基酸序列之VH；及包括-068773之VL之胺基酸序列之VL； (k)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068775之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068775之VL之胺基酸序列之VL； (l)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069059之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069059之VL之胺基酸序列之VL； (m)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069061之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069061之VL之胺基酸序列之VL； (n)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069063之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069063之VL之胺基酸序列之VL； (o)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069065之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069065之VL之胺基酸序列之VL； (p)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069067之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069067之VL之胺基酸序列之VL； (q)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069069之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069069之VL之胺基酸序列之VL； (r)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069071之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069071之VL之胺基酸序列之VL； (s)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069073之VH之胺基酸序列之VH；包括P1-069073之VL之胺基酸序列之VL； (t)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069075之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069075之VL之胺基酸序列之VL； (u)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-069077之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-069077之VL之胺基酸序列之VL； (v)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E55A之VL之胺基酸序列之VL； (w)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_H100G之VL之胺基酸序列之VL； (x)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E56N之VL之胺基酸序列之VL； (y)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E55A_E56N之VL之胺基酸序列之VL； (z)    包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E30D之VL之胺基酸序列之VL； (aa)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E30D_E55A之VL之胺基酸序列之VL； (bb)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E56N_H100G之VL之胺基酸序列之VL； (cc)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E30D_H100G之VL之胺基酸序列之VL； (dd)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E30D_E56N之VL之胺基酸序列之VL； (ee)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (ff)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E55A_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (gg)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_H100G_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (hh)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E30D_H100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E30D_H100fF之VL之胺基酸序列之VL； (ii)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E56N_H100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E56N_H100fF之VL之胺基酸序列之VL； (jj)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E32Y之VL之胺基酸序列之VL； (kk)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E32Y_E55A之VL之胺基酸序列之VL； (ll)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E32Y_E56N之VL之胺基酸序列之VL； (mm) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E30D_E32Y之VL之胺基酸序列之VL； (nn)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E32Y_H100G之VL之胺基酸序列之VL； (oo)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068761_E32Y_H100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068761_E32Y_H100fF之VL之胺基酸序列之VL； (pp)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_D52N_D102V之VL之胺基酸序列之VL； (qq)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_D52N之VL之胺基酸序列之VL； (rr)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_D52N_E55A之VL之胺基酸序列之VL； (ss)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E55A_D102V之VL之胺基酸序列之VL； (tt)   包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列之VH；包括P1-068767_D102V之VL之胺基酸序列之VL； (uu)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E55A之VL之胺基酸序列之VL； (vv)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E30D_D52N之VL之胺基酸序列之VL； (ww) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E30D_D102V之VL之胺基酸序列之VL； (xx)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E30D之VL之胺基酸序列之VL； (yy)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E30D_E55A之VL之胺基酸序列之VL； (zz)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E100fF_D102V之VL之胺基酸序列之VL； (aaa) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E55A_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (bbb) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_D52N_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (ccc) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (ddd) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-068767_E30D_E100fF之VL之胺基酸序列之VL； (eee) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029_F100fE_V102D之VL之胺基酸序列之VL； (fff)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029_F100fE之VL之胺基酸序列之VL； (ggg) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029_V102D之VL之胺基酸序列之VL； (hhh) 包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029_Y32E之VL之胺基酸序列之VL；或 (iii)  包括藉由K16R及/或T84A取代修飾之P1-061029_Y32E_F100fE之VH之胺基酸序列之VH；及包括P1-061029_Y32E_F100fE之VL之胺基酸序列之VL。
抗hVISTA Ab可包括： (a)    包括P1-061029中VH之VH CDR之VH及包括P1-061029之VL CDR之VL；及與P1-061029之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (b)    包括P1-061015中VH之VH CDR之VH及包括P1-061015之VL CDR之VL；及與P1-061015之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (c)    包括P1-068757中VH之VH CDR之VH及包括P1-068757之VL CDR之VL；及與P1-068757之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (d)    包括P1-068759中VH之VH CDR之VH及包括P1-068759之VL CDR之VL；及與P1-068759之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (e)    包括P1-068761中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761之VL CDR之VL；及與P1-068761之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (f)    包括P1-068763中VH之VH CDR之VH及包括P1-068763之VL CDR之VL；及與P1-068763之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (g)    包括P1-068765中VH之VH CDR之VH及包括P1-068765之VL CDR之VL；及與P1-068765之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (h)    包括P1-068767中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767之VL CDR之VL；及與P1-068767之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (i)    包括P1-068769中VH之VH CDR之VH及包括P1-068769之VL CDR之VL；及與P1-068769之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (j)    包括P1-068771中VH之VH CDR之VH及包括P1-068771之VL CDR之VL；及與P1-068771之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (k)    包括P1-068773中VH之VH CDR之VH及包括P1-068773之VL CDR之VL；及與P1-068773之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (l)    包括P1-068775中VH之VH CDR之VH及包括P1-068775之VL CDR之VL；及與P1-068775之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (m)   包括P1-069059中VH之VH CDR之VH及包括P1-069059之VL CDR之VL；及與P1-069059之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (n)    包括P1-069061中VH之VH CDR之VH及包括P1-069061之VL CDR之VL；及與P1-069061之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (o)    包括P1-069063中VH之VH CDR之VH及包括P1-069063之VL CDR之VL；及與P1-069063之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (p)    包括P1-069065中VH之VH CDR之VH及包括P1-069065之VL CDR之VL；及與P1-069065之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (q)    包括P1-069067中VH之VH CDR之VH及包括P1-069067之VL CDR之VL；及與P1-069067之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (r)    包括P1-069069中VH之VH CDR之VH及包括P1-069069之VL CDR之VL；及與P1-069069之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (s)    包括P1-069071中VH之VH CDR之VH及包括P1-069071之VL CDR之VL；及與P1-069071之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (t)    包括P1-069073中VH之VH CDR之VH及包括P1-069073之VL CDR之VL；及與P1-069073之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (u)    包括P1-069075中VH之VH CDR之VH及包括P1-069075之VL CDR之VL；及與P1-069075之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (v)    包括P1-069077中VH之VH CDR之VH及包括P1-069077之VL CDR之VL；及與P1-069077之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (w)   包括P1-068736中VH之VH CDR之VH及包括P1-068736之VL CDR之VL；及與P1-068736之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (x)    包括P1-068738中VH之VH CDR之VH及包括P1-068738之VL CDR之VL；及與P1-068738之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (y)    包括P1-068740中VH之VH CDR之VH及包括P1-068740之VL CDR之VL；及與P1-068740之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (z)    包括P1-068742中VH之VH CDR之VH及包括P1-068742之VL CDR之VL；及與P1-068742之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (aa)  包括P1-068744中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744之VL CDR之VL；及與P1-068744之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (bb)  包括P1-068746中VH之VH CDR之VH及包括P1-068746之VL CDR之VL；及與P1-068746之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (cc)  包括P1-068748中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748之VL CDR之VL；及與P1-068748之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (dd)  包括P1-068750中VH之VH CDR之VH及包括P1-068750之VL CDR之VL；及與P1-068750之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ee)  包括P1-068752中VH之VH CDR之VH及包括P1-068752之VL CDR之VL；及與P1-068752之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ff)   包括P1-068754中VH之VH CDR之VH及包括P1-068754之VL CDR之VL；及與P1-068754之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (gg)  包括P1-068761_E55A中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E55A之VL CDR之VL；及與P1-068761_E55A之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (hh)  包括P1-068761_H100G中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_H100G之VL CDR之VL；及與P1-068761_H100G之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ii)   包括P1-068761_E56N中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E56N之VL CDR之VL；及與P1-068761_E56N之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (jj)   包括P1-068761_E55A_E56N中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E55A_E56N之VL CDR之VL；及與P1-068761_E55A_E56N之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (kk)  包括P1-068761_E30D中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E30D之VL CDR之VL；及與P1-068761_E30D之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ll)   包括P1-068761_E30D_E55A中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E30D_E55A之VL CDR之VL；及與P1-068761_E30D_E55A之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (mm) 包括P1-068761_E56N_H100G中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E56N_H100G之VL CDR之VL；及與P1-068761_E56N_H100G之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (nn)  包括P1-068761_E30D_H100G中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E30D_H100G之VL CDR之VL；及與P1-068761_E30D_H100G之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (oo)  包括P1-068761_E30D_E56N中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E30D_E56N之VL CDR之VL；及與P1-068761_E30D_E56N之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (pp)  包括P1-068761_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068761_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (qq)  包括P1-068761_E55A_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E55A_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068761_E55A_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (rr)   包括P1-068761_H100G_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_H100G_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068761_H100G_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ss)   包括P1-068761_E30D_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E30D_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068761_E30D_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (tt)   包括P1-068761_E56N_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E56N_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068761_E56N_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (uu)  包括P1-068761_E32Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E32Y之VL CDR之VL；及與P1-068761_E32Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (vv)  包括P1-068761_E32Y_E55A中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E32Y_E55A之VL CDR之VL；及與P1-068761_E32Y_E55A之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ww) 包括P1-068761_E32Y_E56N中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E32Y_E56N之VL CDR之VL；及與P1-068761_E32Y_E56N之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (xx)  包括P1-068761_E30D_E32Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E30D_E32Y之VL CDR之VL；及與P1-068761_E30D_E32Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (yy)  包括P1-068761_E32Y_H100G中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E32Y_H100G之VL CDR之VL；及與P1-068761_E32Y_H100G之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (zz)  包括P1-068761_E32Y_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068761_E32Y_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068761_E32Y_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (aaa) 包括P1-068767_D52N_D102V中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_D52N_D102V之VL CDR之VL；及與P1-068767_D52N_D102V之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (bbb) 包括P1-068767_D52N中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767之VL CDR_D52N之VL；及與P1-068767_D52N之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ccc) 包括P1-068767_D52N_E55A中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_D52N_E55A之VL CDR之VL；及與P1-068767_D52N_E55A之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ddd) 包括P1-068767_E55A_D102V中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E55A_D102V之VL CDR之VL；及與P1-068767_E55A_D102V之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (eee) 包括P1-068767_D102V中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_D102V之VL CDR之VL；及與P1-068767_D102V之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (fff)  包括P1-068767_E55A中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E55A之VL CDR之VL；及與P1-068767_E55A之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ggg) 包括P1-068767_E30D_D52N中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E30D_D52N之VL CDR之VL；及與P1-068767_E30D_D52N之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (hhh) 包括P1-068767_E30D_D102V中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E30D_D102V之VL CDR之VL；及與P1-068767_E30D_D102V之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (iii)  包括P1-068767_E30D中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E30D之VL CDR之VL；及與P1-068767_E30D之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (jjj)  包括P1-068767_E30D_E55A中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E30D_E55A之VL CDR之VL；及與P1-068767_E30D_E55A之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (kkk) 包括P1-068767_E100fF_D102V中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E100fF_D102V之VL CDR之VL；及與P1-068767_E100fF_D102V之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (lll)  包括P1-068767_E55A_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E55A_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068767_E55A_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (mmm)   包括P1-068767_D52N_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_D52N_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068767_D52N_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (nnn) 包括P1-068767_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068767_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ooo) 包括P1-068767_E30D_E100fF中VH之VH CDR之VH及包括P1-068767_E30D_E100fF之VL CDR之VL；及與P1-068767_E30D_E100fF之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ppp) 包括P1-061029_F100fE_V102D中VH之VH CDR之VH及包括P1-061029_F100fE_V102D之VL CDR之VL；及與P1-061029_F100fE_V102D之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (qqq) 包括P1-061029_F100fE中VH之VH CDR之VH及包括P1-061029_F100fE之VL CDR之VL；及與P1-061029_F100fE之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (rrr)  包括P1-061029_V102D中VH之VH CDR之VH及包括P1-061029_V102D之VL CDR之VL；及與P1-061029_V102D之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (sss) 包括P1-061029_Y32E中VH之VH CDR之VH及包括P1-061029_Y32E之VL CDR之VL；及與P1-061029_Y32E之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ttt)  包括P1-061029_Y32E_F100fE中VH之VH CDR之VH及包括P1-061029_Y32E_F100fE之VL CDR之VL；及與P1-061029_Y32E_F100fE之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (uuu) 包括P1-068744_E31S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E31S之VL CDR之VL；及與P1-068744_E31S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (vvv) 包括P1-068744_H50I中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_H50I之VL CDR之VL；及與P1-068744_H50I之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (www)   包括P1-068744_E59Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E59Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_E59Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (xxx) 包括P1-068744_E100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E100S之VL CDR之VL；及與P1-068744_E100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (yyy) 包括P1-068744_E102Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E102Y之VL CDR之VL；及與VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (zzz) 包括P1-068744_E31S_H50I中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E31S_H50I之VL CDR之VL；及與P1-068744_E102Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (aaaa)    包括P1-068744_H50I_E59Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_H50I_E59Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_H50I_E59Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (bbbb)    包括P1-068744_E59Y_E100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E59Y_E100S之VL CDR之VL；及與P1-068744_E59Y_E100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (cccc)    包括P1-068744_E100S_E102Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E100S_E102Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_E100S_E102Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (dddd)    包括P1-068744_E31S_E102Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E31S_E102Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_E31S_E102Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (eeee)    包括P1-068744_E31S_E59Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E31S_E59Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_E31S_E59Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ffff) 包括P1-068744_E31S_E100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E31S_E100S之VL CDR之VL；及與P1-068744_E31S_E100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (gggg)    包括P1-068744_H50I_E100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_H50I_E100S之VL CDR之VL；及與P1-068744_H50I_E100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (hhhh)    包括P1-068744_H50I_E102Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_H50I_E102Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_H50I_E102Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (iiii) 包括P1-068744_E59Y_E102Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068744_E59Y_E102Y之VL CDR之VL；及與P1-068744_E59Y_E102Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (jjjj) 包括P1-068748_H31S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H31S之VL CDR之VL；及與P1-068748_H31S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (kkkk)    包括P1-068748_H32Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H32Y之VL CDR之VL；及與P1-068748_H32Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (llll) 包括P1-068748_D57K中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_D57K之VL CDR之VL；及與P1-068748_D57K之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (mmmm) 包括P1-068748_D58Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_D58Y之VL CDR1、CDR2及CDR3之VL；及與P1-068748_D58Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (nnnn)    包括P1-068748_D100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_D100S之VL CDR之VL；及與P1-068748_D100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (oooo)    包括P1-068748_H31S_H32Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H31S_H32Y之VL CDR之VL；及與P1-068748_H31S_H32Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (pppp)    包括P1-068748_H32Y_D57K中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H32Y_D57K之VL CDR之VL；及與P1-068748_H32Y_D57K之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (qqqq)    包括P1-068748_D57K_D58Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_D57K_D58Y之VL CDR之VL；及與P1-068748_D57K_D58Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (rrrr) 包括P1-068748_D58Y_D100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_D58Y_D100S之VL CDR之VL；及與P1-068748_D58Y_D100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ssss) 包括P1-068748_H31S_D57K中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H31S_D57K之VL CDR之VL；及與P1-068748_H31S_D57K之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (tttt) 包括P1-068748_H31S_D58Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H31S_D58Y之VL CDR之VL；及與P1-068748_H31S_D58Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (uuuu)    包括P1-068748_H31S_D100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H31S_D100S之VL CDR之VL；及與P1-068748_H31S_D100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (vvvv)    包括P1-068748_H32Y_D58Y中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H32Y_D58Y之VL CDR之VL；及與P1-068748_H32Y_D58Y之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (wwww) 包括P1-068748_H32Y_D100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_H32Y_D100S之VL CDR之VL；及與P1-068748_H32Y_D100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列；或 (xxxx)    包括P1-068748_D57K_D100S中VH之VH CDR之VH及包括P1-068748_D57K_D100S之VL CDR之VL；及與P1-068748_D57K_D100S之VH及VL至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列， 視情況其中(a)或(c)-(ttt)中之任一者之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，或其中(b)或(uuu)-(xxxx)中之任一者中之VL含有T85V取代。 在一些上述實施例中，VH及/或VL與物質(a)至(ttt)中之每一者之序列之區別可在於存在1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)。在一些實施例中，P1-061029或一種其子代抗體之VH可包括K16R及T84A取代中之一或兩者。在一些實施例中，P1-061015或一種其子代抗體之VL可包括T85V取代。
抗hVISTA Ab可包括： (a)    由P1-061029中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061029之VL組成之VL； (b)    由P1-061015中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061015之VL組成之VL； (c)    由P1-068757中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068757之VL組成之VL； (d)    由P1-068759中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068759之VL組成之VL； (e)    由P1-068761中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761之VL組成之VL； (f)    由P1-068763中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068763之VL組成之VL； (g)    由P1-068765中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068765之VL組成之VL； (h)    由P1-068767中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767之VL組成之VL； (i)    由P1-068769中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068769之VL組成之VL； (j)    由P1-068771中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068771之VL組成之VL； (k)    由P1-068773中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068773之VL組成之VL； (l)    由P1-068775中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068775之VL組成之VL； (m)   由P1-069059中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069059之VL組成之VL； (n)    由P1-069061中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069061之VL組成之VL； (o)    由P1-069063中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069063之VL組成之VL； (p)    由P1-069065中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069065之VL組成之VL； (q)    由P1-069067中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069067之VL組成之VL； (r)    由P1-069069中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069069之VL組成之VL； (s)    由P1-069071中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069071之VL組成之VL； (t)    由P1-069073中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069073之VL組成之VL； (u)    由P1-069075中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069075之VL組成之VL； (v)    由P1-069077中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-069077之VL組成之VL； (w)   由P1-068736中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068736之VL組成之VL； (x)    由P1-068738中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068738之VL組成之VL； (y)    由P1-068740中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068740之VL組成之VL； (z)    由P1-068742中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068742之VL組成之VL； (aa)  由P1-068744中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744之VL組成之VL； (bb)  由P1-068746中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068746之VL組成之VL； (cc)  由P1-068748中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748之VL組成之VL； (dd)  由P1-068750中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068750之VL組成之VL； (ee)  由P1-068752中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068752之VL組成之VL； (ff)   由P1-068754中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068754之VL組成之VL； (gg)  由P1-068761_E55A中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E55A中VL之胺基酸序列組成之VL； (hh)  由P1-068761_H100G中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_H100G中VL之胺基酸序列組成之VL； (ii)   由P1-068761_E56N中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E56N中VL之胺基酸序列組成之VL； (jj)   由P1-068761_E55A_E56N中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E55A_E56N中VL之胺基酸序列組成之VL； (kk)  由P1-068761_E30D中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E30D中VL之胺基酸序列組成之VL； (ll)   由P1-068761_E30D_E55A中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E30D_E55A中VL之胺基酸序列組成之VL； (mm) 由P1-068761_E56N_H100G中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E56N_H100G中VL之胺基酸序列組成之VL； (nn)  由P1-068761_E30D_H100G中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E30D_H100G中VL之胺基酸序列組成之VL； (oo)  由P1-068761_E30D_E56N中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E30D_E56N中VL之胺基酸序列組成之VL； (pp)  由P1-068761_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (qq)  由P1-068761_E55A_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E55A_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (rr)   由P1-068761_H100G_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_H100G_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (ss)   由P1-068761_E30D_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E30D_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (tt)   由P1-068761_E56N_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E56N_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (uu)  由P1-068761_E32Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E32Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (vv)  由P1-068761_E32Y_E55A中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E32Y_E55A中VL之胺基酸序列組成之VL； (ww) 由P1-068761_E32Y_E56N中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E32Y_E56N中VL之胺基酸序列組成之VL； (xx)  由P1-068761_E30D_E32Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E30D_E32Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (yy)  由P1-068761_E32Y_H100G中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E32Y_H100G中VL之胺基酸序列組成之VL； (zz)  由P1-068761_E32Y_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068761_E32Y_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (aaa) 由P1-068767_D52N_D102V中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_D52N_D102V中VL之胺基酸序列組成之VL； (bbb) 由P1-068767_D52N中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_D52N中VL之胺基酸序列組成之VL； (ccc) 由P1-068767_D52N_E55A中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_D52N_E55A中VL之胺基酸序列組成之VL； (ddd) 由P1-068767_E55A_D102V中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E55A_D102V中VL之胺基酸序列組成之VL； (eee) 由P1-068767_D102V中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_D102V中VL之胺基酸序列組成之VL； (fff)  由P1-068767_E55A中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E55A中VL之胺基酸序列組成之VL； (ggg) 由P1-068767_E30D_D52N中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E30D_D52N中VL之胺基酸序列組成之VL； (hhh) 由P1-068767_E30D_D102V中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E30D_D102V中VL之胺基酸序列組成之VL； (iii)  由P1-068767_E30D中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E30D中VL之胺基酸序列組成之VL； (jjj)  由P1-068767_E30D_E55A中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E30D_E55A中VL之胺基酸序列組成之VL； (kkk) 由P1-068767_E100fF_D102V中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E100fF_D102V中VL之胺基酸序列組成之VL； (lll)  由P1-068767_E55A_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E55A_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (mmm)   由P1-068767_D52N_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_D52N_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (nnn) 由P1-068767_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (ooo) 由P1-068767_E30D_E100fF中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068767_E30D_E100fF中VL之胺基酸序列組成之VL； (ppp) 由P1-061029_F100fE_V102D中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061029_F100fE_V102D中VL之胺基酸序列組成之VL； (qqq) 由P1-061029_F100fE中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061029_F100fE中VL之胺基酸序列組成之VL； (rrr)  由P1-061029_V102D中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061029_V102D中VL之胺基酸序列組成之VL； (sss) 由P1-061029_Y32E中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061029_Y32E中VL之胺基酸序列組成之VL； (ttt)  由P1-061029_Y32E_F100fE中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-061029_Y32E_F100fE中VL之胺基酸序列組成之VL； (uuu) 由P1-068744_E31S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E31S中VL之胺基酸序列組成之VL； (vvv) 由P1-068744_H50I中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_H50I中VL之胺基酸序列組成之VL； (www)   由P1-068744_E59Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E59Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (xxx) 由P1-068744_E100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (yyy) 由P1-068744_E102Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E102Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (zzz) 由P1-068744_E31S_H50I中VH之胺基酸序列組成之VH及包括P1-068744_E31S_H50I之VL之VL； (aaaa)    包括P1-068744_H50I_E59Y中VH之胺基酸序列之VH及由P1-068744_H50I_E59Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (bbbb)    由P1-068744_E59Y_E100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E59Y_E100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (cccc)    由P1-068744_E100S_E102Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E100S_E102Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (dddd)    由P1-068744_E31S_E102Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E31S_E102Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (eeee)    由P1-068744_E31S_E59Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E31S_E59Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (ffff) 由P1-068744_E31S_E100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E31S_E100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (gggg)    由P1-068744_H50I_E100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_H50I_E100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (hhhh)    由P1-068744_H50I_E102Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_H50I_E102Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (iiii) 由P1-068744_E59Y_E102Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068744_E59Y_E102Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (jjjj) 由P1-068748_H31S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H31S中VL之胺基酸序列組成之VL； (kkkk)    由P1-068748_H32Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H32Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (llll) 由P1-068748_D57K中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_D57K中VL之胺基酸序列組成之VL； (mmmm) 由P1-068748_D58Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_D58Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (nnnn)    由P1-068748_D100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_D100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (oooo)    由P1-068748_H31S_H32Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H31S_H32Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (pppp)    由P1-068748_H32Y_D57K中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H32Y_D57K中VL之胺基酸序列組成之VL； (qqqq)    由P1-068748_D57K_D58Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_D57K_D58Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (rrrr) 由P1-068748_D58Y_D100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_D58Y_D100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (ssss) 由P1-068748_H31S_D57K中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H31S_D57K中VL之胺基酸序列組成之VL； (tttt) 由P1-068748_H31S_D58Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H31S_D58Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (uuuu)    由P1-068748_H31S_D100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H31S_D100S中VL之胺基酸序列組成之VL； (vvvv)    由P1-068748_H32Y_D58Y中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H32Y_D58Y中VL之胺基酸序列組成之VL； (wwww) 由P1-068748_H32Y_D100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_H32Y_D100S中VL之胺基酸序列組成之VL；或 (xxxx)    由P1-068748_D57K_D100S中VH之胺基酸序列組成之VH及由P1-068748_D57K_D100S中VL之胺基酸序列組成之VL， 視情況其中(a)或(c)-(ttt)中之任一者中之VH包括重鏈K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)-(xxxx)中之任一者中之VL包括T85V取代。
在某些實施例中，抗VISTA Ab包括上文及本文其他處所闡述抗體之可變區及/或可變區CDR 1-3中之任一者，例如： (1) VH CDR1、CDR2及CDR3中之一或多者： (2) VH CDR1、CDR2及CDR3： (3) VH： (4) VH CDR1、CDR2及CDR3中之一或多者及VL CDR1、CDR2及CDR3中之一或多者： (5) VH CDR1、CDR2及CDR3及VL CDR1、CDR2及CDR3： (6) VH及VL： 或 (7) VL (視情況，P1-061015或其子代之VL中之T85V取代除外)及VH (視情況，P1-061029或其子代情形下之VH中之K16R及T84A取代中之一或兩者除外)，該等區域係來自以下物質： P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S；且抗VISTA Ab亦係IgG抗體(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體)或如下文部分中所闡述之其經修飾形式。在一些實施例中，恆定區具有效應功能，且在一些實施例中，恆定區係無效應的。在某些實施例中，恆定區係IgG1.3之恆定區。
在某些實施例中，抗VISTA Ab包括上文及本文其他處所闡述抗體之可變區及/或可變區CDR 1-3中之任一者，例如： (1) VH CDR1、CDR2及CDR3中之一或多者： (2) VH CDR1、CDR2及CDR3： (3) VH： (4) VH CDR1、CDR2及CDR3中之一或多者及VL CDR1、CDR2及CDR3中之一或多者： (5) VH CDR1、CDR2及CDR3及VL CDR1、CDR2及CDR3： (6) VH及VL： 或 (7) VL及VH，VH中之K16R取代及T84A取代中之一或兩者除外(在P1-061029及其子代之情形下)，該等區域係來自以下物質： P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S， 且進一步包括下列特性中之一或多者： -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)特異性結合hVISTA (例如ECD之富組胺酸區域或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35-127之多肽)； -  於生理pH或中性pH (例如pH 7.4或pH 7.0)並不顯著結合hVISTA (例如ECD之富組胺酸區域或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35-127之多肽)； -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)特異性結合食蟹獼猴VISTA (例如ECD之富組胺酸區域)； -  於生理pH或中性pH (例如pH 7.4或pH 7.0)並不顯著結合食蟹獼猴VISTA (例如ECD之富組胺酸區域)； -  相對於具有SEQ ID NO: 2之hVISTA ECD，較小程度地結合在下列胺基酸中之一或多者處具有取代之hVISTA-ECD：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127； -  與P1-061029、P1-068761、P1-068767、P1-061015、P1-068744及/或P1-068748交叉競爭結合hVISTA； -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)抑制hVISTA與表現VISTA之人類T細胞(例如初始或活化T細胞)之結合； -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)抑制hVISTA與PSGL-1之結合(例如抑制具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之H153及H154與PSGL-1酪胺酸Y46及Y48之間之相互作用)，其中PSGL-1含有或不含唾液醯基路易斯X，且其中酪胺酸較佳係磺基酪胺酸； -  抑制hVISTA與VSIG-3之結合； -  食蟹獼猴中之平均滯留時間(MRT)為至少100、200、300、350、400、450、500、600或700小時(例如至少350小時)，如實例中所闡述來量測； -  藉由(例如)增強T細胞增殖、增強IFN-γ自T細胞之產生及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導來刺激T細胞活化； -  抑制VISTA調介之細胞:細胞黏附； -  特異性結合表現VISTA之人類腫瘤細胞試樣或發炎人類組織試樣中之hVISTA； -  經由一或多個(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124(參見表21)接觸hVISTA，如(例如)使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定；且其中編號係成熟hVISTA (參見SEQ ID NO: 2)之編號； -  結合具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之區域1：57 LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566)；區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567)；及區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568)，且視情況其中與區域2之結合最強，如藉由如實例中所闡述之MS-HDX所測定； -  結合hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，如(例如)藉由例如在實例中所闡述之結晶學所測定； -  經由(例如)氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及/或H123 (4.0埃(Å)或更小之距離)，如(例如)藉由結晶學所測定且如(例如)實例中所闡述； -  經由位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之至少一個或多個麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA； -  與具有MC38腫瘤之人類VISTA基因嵌入小鼠中之骨髓樣細胞相比、與其血液相比及/或與其肝、肺及脾細胞相比，較佳累積於腫瘤組織中，如實例中所闡述； -  與患者之骨髓樣細胞相比、與其血液相比及/或與其肝、肺及脾細胞相比，較佳累積於腫瘤中(如例如藉由投與經PET示蹤劑標記之Ab所檢測)； -  在酸性條件下(例如在pH 6.5下)以至少低於hVISTA於中性或生理pH之結合KD 或k解離 10倍、100倍或1000倍之KD (及/或k解離 )特異性結合hVISTA，如藉由如本文實例30中所闡述之表面電漿共振(SPR)所測定； -  抑制hVISTA與hVISTA所結合細胞(例如表現PSGL-1之細胞)之結合，其中根據本文實例31中所闡述之方案來測定結合(視情況其中細胞係人類白血球、PBMC或T細胞)； -  阻斷或交叉阻斷本文所闡述之任一抗體之結合，如使用如本文實例32中所闡述之競爭性SPR表位分類所測定；及 -  申請專利範圍及/或實例中所陳述之任一其他特性。
在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab之重鏈之胺基酸序列之重鏈(HC)。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有如下文在序列表中所展示包括IgG1.3重鏈恆定區之P1-061029或P1-061015或其子代(P1-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 69)、P1-068757.IgG1.3、P1-068759.IgG1.3、P1-068761.IgG1.3、P1-068763.IgG1.3、P1-068765.IgG1.3、P1-068767.IgG1.3、P1-068769.IgG1.3、P1-068771.IgG1.3、P1-068773.IgG1.3、P1-068775.IgG1.3、P1-069059.IgG1.3、P1-069061.IgG1.3、P1-069063.IgG1.3、P1-069065.IgG1.3、P1-069067.IgG1.3、P1-069069.IgG1.3、P1-069071.IgG1.3、P1-069073.IgG1.3、P1-069075.IgG1.3、P1-069077.IgG1.3、P1-061015.IgG1.3、P1-068736.IgG1.3、P1-068738.IgG1.3、P1-068740.IgG1.3、P1-068742.IgG1.3、P1-068744.IgG1.3、P1-068766.IgG1.3、P1-068748.IgG1.3、P1-068750.IgG1.3、P1-068752.IgG1.3、P1-068754.IgG1.3、P1-068761_E55A.IgG1.3、P1-068761_H100G.IgG1.3、P1-068761_E56N.IgG1.3、P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3、P1-068761_E30D.IgG1.3、P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3、P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3、P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3、P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3、P1-068761_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3、P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E32Y.IgG1.3、P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3、P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3、P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3、P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3、P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3、P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3、P1-068767_D52N.IgG1.3、P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3、P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3、P1-068767_D102V.IgG1.3、P1-068767_E55A.IgG1.3、P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3、P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3、P1-068767_E30D.IgG1.3、P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3、P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3、P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3、P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3、P1-068767_E100fF.IgG1.3、P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3、P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3、P1-061029_F100fE.IgG1.3、P1-061029_V102D.IgG1.3、P1-061029_Y32E.IgG1.3、P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之重鏈之胺基酸序列的重鏈，且視情況對於P1-061029子代而言其中VH包括K16R取代及T84A取代中之一或兩者，且對於P1-061015子代而言其中VL序列包括T85V取代。 在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有本文所提供任一抗hVISTA Ab (其包括IgG1.3重鏈恆定區)之重鏈之胺基酸序列之重鏈及本文所提供任抗hVISTA Ab之輕鏈的胺基酸序列。在某些實施例中，抗hVISTA Ab包括含有包括IgG1.3 HC恆定區之P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 69)、P1-068757.IgG1.3、P1-068759.IgG1.3、P1-068761.IgG1.3、P1-068763.IgG1.3、P1-068765.IgG1.3、P1-068767.IgG1.3、P1-068769.IgG1.3、P1-068771.IgG1.3、P1-068773.IgG1.3、P1-068775.IgG1.3、P1-069059.IgG1.3、P1-069061.IgG1.3、P1-069063.IgG1.3、P1-069065.IgG1.3、P1-069067.IgG1.3、P1-069069.IgG1.3、P1-069071.IgG1.3、P1-069073.IgG1.3、P1-069075.IgG1.3、P1-069077.IgG1.3、P1-061015.IgG1.3、P1-068736.IgG1.3、P1-068738.IgG1.3、P1-068740.IgG1.3、P1-068742.IgG1.3、P1-068744.IgG1.3、P1-068766.IgG1.3、P1-068748.IgG1.3、P1-068750.IgG1.3、P1-068752.IgG1.3、P1-068754.IgG1.3、P1-068761_E55A.IgG1.3、P1-068761_H100G.IgG1.3、P1-068761_E56N.IgG1.3、P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3、P1-068761_E30D.IgG1.3、P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3、P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3、P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3、P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3、P1-068761_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3、P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3、P1-068761_E32Y.IgG1.3、P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3、P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3、P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3、P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3、P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3、P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3、P1-068767_D52N.IgG1.3、P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3、P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3、P1-068767_D102V.IgG1.3、P1-068767_E55A.IgG1.3、P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3、P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3、P1-068767_E30D.IgG1.3、P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3、P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3、P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3、P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3、P1-068767_E100fF.IgG1.3、P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3、P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3、P1-061029_F100fE.IgG1.3、P1-061029_V102D.IgG1.3、P1-061029_Y32E.IgG1.3、P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3、P1-068744_E31S.IgG1.3、P1-68744_H50I.IgG1.3、P1-68744_E59Y.IgG1.3、P1-068744_E100S.IgG1.3、P1-068744_E102Y.IgG1.3、P1-068744_E31S_H50I.IgG1.3、P1-068744_H50I_E59Y.IgG1.3、P1-068744_E59Y_E100S.IgG1.3、P1-068744_E100S_E102Y.IgG1.3、P1-068744_E31S_E102Y.IgG1.3、P1-068744_E31S_E59Y.IgG1.3、P1-068744_E31S_E100S.IgG1.3、P1-068744_H50I_E100S.IgG1.3、P1-068744_H50I_E102Y.IgG1.3、P1-068744_E59Y_E102Y.IgG1.3、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y.IgG1.3、P1-068748_D57K.IgG1.3、P1-068748_D58Y.IgG1.3、P1-068748_D100S.IgG1.3、P1-068748_H31S_H32Y.IgG1.3、P1-068748_H32Y_D57K.IgG1.3、P1-068748_D57K_D58Y.IgG1.3、P1-068748_D58Y_D100S.IgG1.3、P1-068748_H31S_D57K.IgG1.3、P1-068748_H31S_D58Y.IgG1.3、P1-068748_H31S_D100S.IgG1.3、P1-068748_H32Y_D58Y.IgG1.3、P1-068748_H32Y_D100S.IgG1.3或P1-068748_D57K_D100S.IgG1.3)之VH之胺基酸序列的重鏈，且視情況對於P1-061029子代而言其中VH包括K16R取代及T84A取代中之一或兩者；及包括P1-061029或P1-061015之輕鏈之胺基酸序列之輕鏈，且視情況對於P1-061015子代而言其中VL序列包括T85V取代。
抗hVISTA Ab可包括： (a)    包括P1-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 69)之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061029 (SEQ ID NO: 70)之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (b)    包括P1-061015.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061015之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (c)    包括P1-068757.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068757之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (d)    包括P1-068759.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068759之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (e)    包括P1-068761.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (f)    包括P1-068763.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068763之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (g)    包括P1-068765.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068765之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (h)    包括P1-068767.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (i)    包括P1-068769.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068769之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (j)    包括P1-068771.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068771之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (k)    包括P1-068773.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068773之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (l)    包括P1-068775.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068775之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (m)   包括P1-069059.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069059之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (n)    包括P1-069061.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069061之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (o)    包括P1-069063.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069063之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (p)    包括P1-069065.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069065之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (q)    包括P1-069067.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069067之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (r)    包括P1-069069.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069069之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (s)    包括P1-069071.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069071之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (t)    包括P1-069073.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069073之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (u)    包括P1-069075.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069075之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (v)    包括P1-069077.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-069077之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (w)   包括P1-068736.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068736之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (x)    包括P1-068738.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068738之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (y)    包括P1-068740.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068740之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (z)    包括P1-068742.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068742之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aa)  包括P1-068744.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bb)  包括P1-068746.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068746之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cc)  包括P1-068748.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dd)  包括P1-068750.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068750之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ee)  包括P1-068752.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068752之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ff)   包括P1-068754.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068754之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gg)  包括P1-068761_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hh)  包括P1-068761_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ii)   包括P1-068761_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jj)   包括P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kk)  包括P1-068761_E30D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ll)   包括P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mm) 包括P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nn)  包括P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oo)  包括P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pp)  包括P1-068761_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qq)  包括P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rr)   包括P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ss)   包括P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tt)   包括P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uu)  包括P1-068761_E32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vv)  包括P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ww) 包括P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xx)  包括P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yy)  包括P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zz)  包括P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaa) 包括P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbb) 包括P1-068767_D52N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ccc) 包括P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ddd) 包括P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eee) 包括P1-068767_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (fff)  包括P1-068767_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ggg) 包括P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhh) 包括P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iii)  包括P1-068767_E30D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjj)  包括P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkk) 包括P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (lll)  包括P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmm)   包括P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnn) 包括P1-068767_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ooo) 包括P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈。 (ppp) 包括P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqq) 包括P1-061029_F100fE.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrr)  包括P1-061029_V102D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (sss) 包括P1-061029_Y32E.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ttt)  包括P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-061029_Y32E_F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuu) 包括P1-068744_E31S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvv) 包括P1-068744_H50I.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (www)   包括P1-068744_E59Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xxx) 包括P1-068744_E100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yyy) 包括P1-068744_E102Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zzz) 包括P1-068744_E31S_H50I.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaaa)    包括P1-068744_H50I_E59Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbbb)    包括P1-068744_E59Y_E100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E59Y_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cccc)    包括P1-068744_E100S_E102Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dddd)    包括P1-068744_E31S_E102Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eeee)    包括P1-068744_E31S_H59Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E31S_H59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ffff) 包括P1-068744_E31S_E100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gggg)    包括P1-068744_H50I_E100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhhh)    包括P1-068744_H50I_E102Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iiii) 包括P1-068744_E59Y_E102Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及VL及包括P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjjj) 包括P1-068748_E31S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_E31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkkk)    包括P1-068748_E32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (llll) 包括P1-068748_D57K.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmmm) 包括P1-068748_D58Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnnn)    包括P1-068748_D100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oooo)    包括P1-068748_H31S_H32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pppp)    包括P1-068748_H32Y_D57K.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqqq)    包括P1-068748_D57K_D58Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrrr) 包括P1-068748_D58Y_D100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ssss) 包括P1-068748_H31S_D57K.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tttt) 包括P1-068748_H31S_D58Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuuu)    包括P1-068748_H31S_D100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvvv)    包括P1-068748_H32Y_D58Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (wwww) 包括P1-068748_H32Y_D100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈；或 (xxxx)    包括P1-068748_D57K_D100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈， 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)中之任一者之VL包括T85V取代。
抗hVISTA Ab可包括： (a)    包括P1-061029中HC之HC CDR之重鏈(HC)及包括P1-061029之LC CDR之輕鏈(LC)；及與P1-061029.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (b)    包括P1-061015中HC之HC CDR之HC及包括P1-061015之LC CDR之LC；及與P1-061015.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (c)    包括P1-068757中HC之HC CDR之HC及包括P1-068757之LC CDR之LC；及與P1-068757.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (d)    包括P1-068759中HC之HC CDR之HC及包括P1-068759之LC CDR之LC；及與P1-068759.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (e)    包括P1-068761中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761之LC CDR之LC；及與P1-068761.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (f)    包括P1-068763中HC之HC CDR之HC及包括P1-068763之LC CDR之LC；及與P1-068763.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (g)    包括P1-068765中HC之HC CDR之HC及包括P1-068765之LC CDR之LC；及與P1-068765.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (h)    包括P1-068767中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767之LC CDR之LC；及與P1-068767.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (i)    包括P1-068769中HC之HC CDR之HC及包括P1-068769之LC CDR之LC；及與P1-068769.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (j)    包括P1-068771中HC之HC CDR之HC及包括P1-068771之LC CDR之LC；及與P1-068771.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (k)    包括P1-068773中HC之HC CDR之HC及包括P1-068773之LC CDR之LC；及與P1-068773.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (l)    包括P1-068775中HC之HC CDR之HC及包括P1-068775之LC CDR之LC；及與P1-068775.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (m)   包括P1-069059中HC之HC CDR之HC及包括P1-069059之LC CDR之LC；及與P1-069059.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (n)    包括P1-069061中HC之HC CDR之HC及包括P1-069061之LC CDR之LC；及與P1-069061.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (o)    包括P1-069063中HC之HC CDR之HC及包括P1-069063之LC CDR之LC；及與P1-069063.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (p)    包括P1-069065中HC之HC CDR之HC及包括P1-069065之LC CDR之LC；及與P1-069065.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (q)    包括P1-069067中HC之HC CDR之HC及包括P1-069067之LC CDR之LC；及與P1-068767.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (r)    包括P1-069069中HC之HC CDR之HC及包括P1-069069之LC CDR之LC；及與P1-069069.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (s)    包括P1-069071中HC之HC CDR之HC及包括P1-069071之LC CDR之LC；及與P1-069071.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (t)    包括P1-069073中HC之HC CDR之HC及包括P1-069073之LC CDR之LC；及與P1-069073.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (u)    包括P1-069075中HC之HC CDR之HC及包括P1-069075之LC CDR之LC；及與P1-069075.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (v)    包括P1-069077中HC之HC CDR之HC及包括P1-069077之LC CDR之LC；及與P1-069077.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (w)   包括P1-068736中HC之HC CDR之HC及包括P1-068736之LC CDR之LC；及與P1-068736.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (x)    包括P1-068738中HC之HC CDR之HC及包括P1-068738之LC CDR之LC；及與P1-068738.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (y)    包括P1-068740中HC之HC CDR之HC及包括P1-068740之LC CDR之LC；及與P1-068740.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (z)    包括P1-068742中HC之HC CDR之HC及包括P1-068742之LC CDR之LC；及與P1-068742.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (aa)  包括P1-068744中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744之LC CDR之LC；及與P1-068744.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (bb)  包括P1-068746中HC之HC CDR之HC及包括P1-068746之LC CDR之LC；及與P1-068746.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (cc)  包括P1-068748中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748之LC CDR之LC；及與P1-068748.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (dd)  包括P1-068750中HC之HC CDR之HC及包括P1-068750之LC CDR之LC；及與P1-068750.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ee)  包括P1-068752中HC之HC CDR之HC及包括P1-068752之LC CDR之LC；及與P1-068752.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ff)   包括P1-068754中HC之HC CDR之HC及包括P1-068754之LC CDR之LC；及與P1-068754.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (gg)  包括P1-068761_E55A.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E55A之LC CDR之LC；及與P1-068761_E55A.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (hh)  包括P1-068761_H100G.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_H100G之LC CDR之LC；及與P1-068761_H100G.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ii)   包括P1-068761_E56N.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E56N之LC CDR之LC；及與P1-068761_E56N.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (jj)   包括P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E55A_E56N之LC CDR之LC；及與P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (kk)  包括P1-068761_E30D.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E30D之LC CDR之LC；及與P1-068761_E30D.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ll)   包括P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E30D_E55A之LC CDR之LC；及與P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (mm) 包括P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E56N_H100G之LC CDR之LC；及與P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (nn)  包括P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E30D_H100G之LC CDR之LC；及與P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (oo)  包括P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E30D_E56N之LC CDR之LC；及與P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (pp)  包括P1-068761_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068761_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (qq)  包括P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E55A_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (rr)   包括P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_H100G_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ss)   包括P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E30D_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (tt)   包括P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E56N_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (uu)  包括P1-068761_E32Y.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E32Y之LC CDR之LC；及與P1-068761_E32Y.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (vv)  包括P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E32Y_E55A之LC CDR之LC；及與P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ww) 包括P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E32Y_E56N之LC CDR之LC；及與P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (xx)  包括P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E30D_E32Y之LC CDR之LC；及與P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (yy)  包括P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E32Y_H100G之LC CDR之LC；及與P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (zz)  包括P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068761_E32Y_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (aaa) 包括P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_D52N_D102V之LC CDR之LC；及與P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (bbb) 包括P1-068767_D52N.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_D52N之LC CDR之LC；及與P1-068767_D52N.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ccc) 包括P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_D52N_E55A之LC CDR之LC；及與P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ddd) 包括P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E55A_D102V之LC CDR之LC；及與P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (eee) 包括P1-068767_D102V.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_D102V之LC CDR之LC；及與P1-068767_D102V.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (fff)  包括P1-068767_E55A.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E55A之LC CDR之LC；及與P1-068767_E55A.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ggg) 包括P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E30D_D52N之LC CDR之LC；及與P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (hhh) 包括P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E30D_D102V之LC CDR之LC；及與P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (iii)  包括P1-068767_E30D.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E30D之LC CDR之LC；及與P1-068767_E30D.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (jjj)  包括P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E30D_E55A之LC CDR之LC；及與P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (kkk) 包括P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E100fF_D102V之LC CDR之LC；及與P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (lll)  包括P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E55A_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (mmm)   包括P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_D52N_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (nnn) 包括P1-068767_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068767_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ooo) 包括P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-068767_E30D_E100fF之LC CDR之LC；及與P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ppp) 包括P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-061029_F100fE_V102D之LC CDR之LC；及與P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (qqq) 包括P1-061029_F100fE.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-061029_F100fE之LC CDR之LC；及與P1-061029_F100fE.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (rrr)  包括P1-061029_V102D.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-061029_V102D之LC CDR之LC；及與P1-061029_V102D.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (sss) 包括P1-061029_Y32E.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-061029_Y32E之LC CDR之LC；及與P1-061029_Y32E.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ttt)  包括P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3中HC之HC CDR之HC及包括P1-061029_Y32E_F100fE之LC CDR之LC；及與P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3之HC及LC分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (uuu) 包括P1-068744_E31S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E31S之LC CDR之LC；及與P1-068744_E31S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (vvv) 包括P1-068744_H50I中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_H50I之LC CDR之LC；及與P1-068744_H50I.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (www)   包括P1-068744_E59Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E59Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_E59Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (xxx) 包括P1-068744_E100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E100S之LC CDR之LC；及與P1-068744_E100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (yyy) 包括P1-068744_E102Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E102Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_E102Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (zzz) 包括P1-068744_E31S_H50I中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E31S_H50I之LC CDR之LC；及與P1-068744_E31S_H50I.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (aaaa)    包括P1-068744_H50I_E59Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_H50I_E59Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_H50I_E59Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (bbbb)    包括P1-068744_E59Y_E100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E5;9Y_E100S之LC CDR之LC；及與P1-068744_E59Y_E100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (cccc)    包括P1-068744_E100S_E102Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E100S_E102Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_E100S_E102Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (dddd)    包括P1-068744_E31S_E102Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E31S_E102Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_E31S_E102Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (eeee)    包括P1-068744_E31S_E59Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E31S_E59Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_E31S_E59Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (ffff) 包括P1-068744_E31S_E100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E31S_E100S之LC CDR之LC；及與P1-068744_E31S_E100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (gggg)    包括P1-068744_H50I_E100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_H50I_E100S之LC CDR之LC；及與P1-068744_H50I_E100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (hhhh)    包括P1-068744_H50I_E102Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_H50I_E102Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_H50I_E102Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (iiii) 包括P1-068744_E59Y_E102Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068744_E59Y_E102Y之LC CDR之LC；及與P1-068744_E59Y_E102Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (jjjj) 包括P1-068748_H31S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H31S之LC CDR之LC；及與P1-068748_H31S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (kkkk)    包括P1-068748_H32Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H32Y之LC CDR之LC；及與P1-068748_H32Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之VH及VL胺基酸序列； (llll) 包括P1-068748_D57K中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_D57K之LC CDR之LC；及與P1-068748_D57K.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (mmmm) 包括P1-068748_D58Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_D58Y之LC CDR之LC；及與P1-068748_D58Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (nnnn)    包括P1-068748_D100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_D100S之LC CDR之LC；及與P1-068748_D100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (oooo)    包括P1-068748_H31S_H32Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H31S_H32Y之LC CDR之LC；及與P1-068748_H31S_H32Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (pppp)    包括P1-068748_H32Y_D57K中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H32Y_D57K之LC CDR之LC；及與P1-068748_H32Y_D57K.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (qqqq)    包括P1-068748_D57K_D58Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_D57K_D58Y之LC CDR之LC；及與P1-068748_D57K_D58Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (rrrr) 包括P1-068748_D58Y_D100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_D58Y_D100S之LC CDR之LC；及與P1-068748_D58Y_D100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (ssss) 包括P1-068748_H31S_D57K中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H31S_D57K之LC CDR之LC；及與P1-068748_H31S_D57K.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (tttt) 包括P1-068748_H31S_D58Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H31S_D58Y之LC CDR之LC；及與P1-068748_H31S_D58Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (uuuu)    包括P1-068748_H31S_D100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H31S_D100S之LC CDR之LC；及與P1-068748_H31S_D100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (vvvv)    包括P1-068748_H32Y_D58Y中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H32Y_D58Y之LC CDR之LC；及與P1-068748_H32Y_D58Y.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列； (wwww) 包括P1-068748_H32Y_D100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_H32Y_D100S之LC CDR之LC；及與P1-068748_H32Y_D100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列；或 (xxxx)    包括P1-068748_D57K_D100S中HC之HC CDR之HC及包括P1-068748_D57K_D100S之LC CDR之LC；及與P1-068748_D57K_D100S.IgG1.3之VH及VL分別至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之HC及LC胺基酸序列。
在一些上述實施例中，HC及/或LC與物質(a)至(ttt)中之每一者之序列之區別可在於存在1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)。在一些實施例中，舉例而言，P1-061029或一種其子代之HC可在HC之VH區域中包括K16R取代及T84A取代中之一或兩者(P1-061015及其子代已分別在彼等位置具有R及A)。在一些實施例中，P1-061015或其子代之LC可包括T85V取代。
在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括： (a)    由P1-061029.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061029之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (b)    由P1-061015.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061015之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (c)    由P1-068757.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068757之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (d)    由P1-068759.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068759之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (e)    由P1-068761.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (f)    由P1-068763.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068763之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (g)    由P1-068765.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068765之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (h)    由P1-068767.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (i)    由P1-068769.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068769之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (j)    由P1-068771.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068771之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (k)    由P1-068773.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068773之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (l)    由P1-068775.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068775之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (m)   由P1-069059.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069059之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (n)    由P1-069061.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069061之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (o)    由P1-069063.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069063之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (p)    由P1-069065.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069065之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (q)    由P1-069067.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069067之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (r)    由P1-069069.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069069之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (s)    由P1-069071.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069071之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (t)    由P1-069073.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069073之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (u)    由P1-069075.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069075之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (v)    由P1-069077.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-069077之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (w)   由P1-068736.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068736之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (x)    由P1-068738.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068738之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (y)    由P1-068740.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068740之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (z)    由P1-068742.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068742之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aa)  由P1-068744.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bb)  由P1-068746.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068746之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cc)  由P1-068748.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dd)  由P1-068750.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068750之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ee)  由P1-068752.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068752之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ff)   由P1-068754.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068754之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gg)  由P1-068761_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hh)  由P1-068761_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ii)   由P1-068761_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jj)   由P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kk)  由P1-068761_E30D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ll)   由P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mm) 由P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nn)  由P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oo)  由P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pp)  由P1-068761_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qq)  由P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rr)   由P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ss)   由P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tt)   由P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uu)  由P1-068761_E32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vv)  由P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ww) 由P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xx)  由P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yy)  由P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zz)  由P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaa) 由P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbb) 由P1-068767_D52N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ccc) 由P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ddd) 由P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eee) 由P1-068767_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (fff)  由P1-068767_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ggg) 由P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhh) 由P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iii)  由P1-068767_E30D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjj)  由P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkk) 由P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (lll)  由P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmm)   由P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnn) 由P1-068767_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ooo) 由P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ppp) 由P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqq) 由P1-061029_F100fE.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrr)  由P1-061029_V102D.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (sss) 由P1-061029_Y32E.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ttt)  由P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-061029_Y32E_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈 (uuu) 由P1-068744_E31S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvv) 由P1-068744_H50I.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (www)   由P1-068744_E59Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xxx) 由P1-068744_E100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yyy) 由P1-068744_E102Y.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zzz) 由P1-068744_E31S_H50I.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaaa)    由P1-068744_H50I_E59Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbbb)    由P1-068744_E59Y_E100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068744_E5;9Y_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cccc)    由P1-068744_E100S_E102Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dddd)    由P1-068744_E31S_E102Y.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eeee)    由P1-068744_E31S_E59Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ffff) 包括P1-068744_E31S_E100S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列之重鏈及包括P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gggg)    由P1-068744_H50I_E100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhhh)    由P1-068744_H50I_E102Y.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iiii) 由P1-068744_E59Y_E102Y.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及VL及由P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjjj) 由P1-068748_H31S.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkkk)    由P1-068748_H32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (llll) 由P1-068748_D57K.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmmm) 由P1-068748_D58Y.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnnn)    由P1-068748_D100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oooo)    由P1-068748_H31S_H32Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pppp)    由P1-068748_H32Y_D57K.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqqq)    由P1-068748_D57K_D58Y.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrrr) 由P1-068748_D58Y_D100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ssss) 由P1-068748_H31S_D57K.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tttt) 由P1-068748_H31S_D58Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuuu)    由P1-068748_H31S_D100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvvv)    由P1-068748_H32Y_D58Y.IgG1.3之重鏈胺基酸序列組成之重鏈及由P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (wwww) 由P1-068748_H32Y_D100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈；或 (xxxx)    由P1-068748_D57K_D100S.IgG1.3組成之重鏈胺基酸序列之重鏈及由P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈， 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)-(xxxx)中之VL包括T85V取代。
在一些實施例中，本發明涵蓋包括以下各項之抗VISTA mAb： 由上文所列示(a)至(ttt)之重鏈胺基酸序列組成且後接有Lys殘基之重鏈；及 輕鏈，其由上文所列示(a)至(ttt)之輕鏈胺基酸序列組成； 其中重鏈及輕鏈胺基酸序列係選自來自上文所列示(a)至(ttt)之相同抗體物質。
在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括含有本文抗體物質之VH胺基酸序列之重鏈胺基酸序列，但不包括IgG1.3重鏈恆定區(如本文序列表之HC序列中所提供，且參見SEQ ID NO: 163)，該抗體可包括不同重鏈恆定區序列，例如人類野生型IgG1恆定區(例如人類IgG1異型f (IgG1f) (SEQ ID NO: 182))或經修飾人類IgG1恆定區(例如IgG1.1f (SEQ ID NO: 183))或經修飾人類IgG1恆定區(例如IgG1.P238K (SEQ ID NO: 184))。因此，本發明實施例包含含有以下各項之抗VISTA Ab： (a)    包括(i) P1-061029之VH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 67)及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO: 70)之輕鏈； (b)    包括(i) P1-061015之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061015之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (c)    包括(i) P1-068757之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068757之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (d)    包括(i) P1-068759之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068759之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (e)    包括(i) P1-068761之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (f)    包括(i) P1-068763之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068763之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (g)    包括(i) P1-068765之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068765之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (h)    包括(i) P1-068767之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (i)    包括(i) P1-068769之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068769之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (j)    包括(i) P1-068771之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068771之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (k)    包括(i) P1-068773之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068773之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (l)    包括(i) P1-068775之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068775之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (m)   包括(i) P1-069059之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069059之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (n)    包括(i) P1-069061之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069061之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (o)    包括(i) P1-069063之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069063之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (p)    包括(i) P1-069065之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069065之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (q)    包括(i) P1-069067之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069067之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (r)    包括(i) P1-069069之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069069之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (s)    包括(i) P1-069071之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069071之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (t)    包括(i) P1-069073之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069073之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (u)    包括(i) P1-069075之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069075之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (v)    包括(i) P1-069077之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069077之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (w)   包括(i) P1-068736之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068736之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (x)    包括(i) P1-068738之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068738之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (y)    包括(i) P1-068740之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068740之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (z)    包括(i) P1-068742之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068742之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aa)  包括(i) P1-068744之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bb)  包括P1-068746之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068746之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cc)  包括(i) P1-068748之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dd)  包括(i) P1-068750之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068750之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ee)  包括(i) P1-068752之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068752之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ff)   包括(i) P1-068754之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068754之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gg)  包括(i) P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hh)  包括(i) P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ii)   包括(i) P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jj)   包括(i) P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kk)  包括(i) P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ll)   包括(i) P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mm) 包括(i) P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nn)  包括(i) P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO:182之 胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oo)  包括(i) P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pp)  包括(i) P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qq)  包括(i) P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rr)   包括(i) P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ss)   包括(i) P1-068761_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tt)   包括(i) P1-068761_E56N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uu)  包括(i) P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vv)  包括(i) P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ww) 包括(i) P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xx)  包括(i) P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yy)  包括(i) P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zz)  包括(i) P1-068761_E32Y_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaa) 包括(i) P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbb) 包括(i) P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ccc) 包括(i) P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ddd) 包括(i) P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eee) 包括(i) P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (fff)  包括(i) P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ggg) 包括(i) P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhh) 包括(i) P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iii)  包括(i) P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjj)  包括(i) P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkk) 包括(i) P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (lll)  包括(i) P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmm)   包括(i) P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnn) 包括(i) P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ooo) 包括(i) P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ppp) 包括(i) P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqq) 包括(i) P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrr)  包括(i) P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (sss) 包括(i) P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ttt)  包括(i) P1-061029_Y32E _F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_Y32E _F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuu) 包括(i) P1-068744_E31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvv) 包括(i) P1-068744_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (www)   包括(i) P1-068744_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xxx) 包括(i) P1-068744_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yyy) 包括(i) P1-068744_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zzz) 包括(i) P1-068744_E31S_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaaa)    包括(i) P1-068744_H50I_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbbb)    包括(i) P1-068744_E59Y_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E59Y_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cccc)    包括(i) P1-068744_E100S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dddd)    包括(i) P1-068744_E31S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eeee)    包括(i) P1-068744_E31S_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ffff) 包括(i) P1-068744_E31S_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gggg)    包括(i) P1-068744_H50I_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhhh)    包括(i) P1-068744_H50I_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iiii) 包括(i) P1-068744_E59Y_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及VL及包括P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjjj) 包括(i) P1-068748_H31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkkk)    包括(i) P1-068748_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (llll) 包括(i) P1-068748_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmmm) 包括(i) P1-068748_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnnn)    包括(i) P1-068748_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oooo)    包括(i) P1-068748_H31S_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pppp)    包括(i) P1-068748_H32Y_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqqq)    包括(i) P1-068748_D57K_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrrr) 包括(i) P1-068748_D58Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ssss) 包括(i) P1-068748_H31S_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tttt) 包括(i) P1-068748_H31S_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuuu)    包括(i) P1-068748_H31S_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvvv)    包括(i) P1-068748_H32Y_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (wwww) 包括(i) P1-068748_H32Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈；或 (xxxx)    包括(i) P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈， 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)之VL包括T85V取代。
在一些實施例中，LC可如上述(a)至(ttt)中所指定，但HC可與物質(a)至ttt)中之每一者之序列因存在1、2、3、4或5個胺基酸取代(例如1、2、3、4或5個保守取代)而有所不同。在一些實施例中，舉例而言，P1-061029或一種其子代之HC可在HC之VH區域中包括K16R取代及T84A取代中之一或兩者(P1-061015及其子代已具有VH位置16之R及VH位置84之A)。在一些實施例中，P1-061015或其子代之VL可具有T85V取代。
本發明之某些實施例包含含有以下各項之抗VISTA Ab： (a)    由(i) P1-061029之VH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 67)及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO: 70)組成之輕鏈； (b)    由(i) P1-061015之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061015之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (c)    由(i) P1-068757之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068757之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (d)    由(i) P1-068759之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068759之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (e)    由(i) P1-068761之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (f)    由(i) P1-068763之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068763之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (g)    由(i) P1-068765之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068765之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (h)    由(i) P1-068767之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (i)    由(i) P1-068769之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068769之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (j)    由(i) P1-068771之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068771之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (k)    由(i) P1-068773之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068773之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (l)    由(i) P1-068775之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068775之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (m)   由(i) P1-069059之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069059之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (n)    由(i) P1-069061之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069061之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (o)    由(i) P1-069063之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069063之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (p)    由(i) P1-069065之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069065之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (q)    由(i) P1-069067之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069067之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (r)    由(i) P1-069069之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069069之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (s)    由(i) P1-069071之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069071之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (t)    由(i) P1-069073之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069073之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (u)    由(i) P1-069075之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069075之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (v)    由(i) P1-069077之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069077之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (w)   由(i) P1-068736之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068736之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (x)    由(i) P1-068738之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068738之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (y)    由(i) P1-068740之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068740之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (z)    由(i) P1-068742之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068742之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aa)  由(i) P1-068744之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bb)  由P1-068746之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068746之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cc)  由(i) P1-068748之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dd)  由(i) P1-068750之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068750之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ee)  由(i) P1-068752之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068752之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ff)   由(i) P1-068754之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068754之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gg)  由(i) P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hh)  由(i) P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ii)   由(i) P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jj)   由(i) P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kk)  由(i) P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ll)   由(i) P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mm) 由(i) P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nn)  由(i) P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oo)  由(i) P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pp)  由(i) P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qq)  由(i) P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rr)   由(i) P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ss)   由(i) P1-068761_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tt)   由(i) P1-068761_E56N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uu)  由(i) P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vv)  由(i) P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ww) 由(i) P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xx)  由(i) P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yy)  由(i) P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zz)  由(i) P1-068761_E32Y_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaa) 由(i) P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbb) 由(i) P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ccc) 由(i) P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ddd) 由(i) P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eee) 由(i) P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (fff)  由(i) P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ggg) 由(i) P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhh) 由(i) P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iii)  由(i) P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjj)  由(i) P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkk) 由(i) P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (lll)  由(i) P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmm)   由(i) P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnn) 由(i) P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ooo) 由(i) P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ppp) 由(i) P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqq) 由(i) P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrr)  由(i) P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (sss) 由(i) P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ttt)  由(i) P1-061029_Y32E_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_Y32E_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuu) 由(i) P1-068744_E31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvv) 由(i) P1-068744_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (www)   由(i) P1-068744_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xxx) 由(i) P1-068744_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yyy) 由(i) P1-068744_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zzz) 由(i) P1-068744_E31S_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaaa)    由(i) P1-068744_H50I_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbbb)    由(i) P1-068744_E59Y_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E59Y_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cccc)    由(i) P1-068744_E100S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dddd)    由(i) P1-068744_E31S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eeee)    由(i) P1-068744_E31S_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ffff) 由(i) P1-068744_E31S_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gggg)    由(i) P1-068744_H50I_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhhh)    由(i) P1-068744_H50I_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iiii) 由(i) P1-068744_E59Y_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及VL及由P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjjj) 由(i) P1-068748_H31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkkk)    由(i) P1-068748_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (llll) 由(i) P1-068748_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmmm) 由(i) P1-068748_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnnn)    由(i) P1-068748_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oooo)    由(i) P1-068748_H31S_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pppp)    由(i) P1-068748_H32Y_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqqq)    由(i) P1-068748_D57K_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrrr) 由(i) P1-068748_D58Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ssss) 由(i) P1-068748_H31S_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tttt) 由(i) P1-068748_H31S_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuuu)    由(i) P1-068748_H31S_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvvv)    由(i) P1-068748_H32Y_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (wwww) 由(i) P1-068748_H32Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈；或 (xxxx)    由(i) P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈， 其中VH之C-末端胺基酸及SEQ ID NO: 182之N-末端胺基酸形成肽鍵；且 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)中之任一者之VL包括T85V取代。
在一些實施例中，本發明涵蓋包括以下各項之抗VISTA mAb： 重鏈，其由(i)上文所列示(a)至(ttt)之VH之胺基酸序列、(ii) SEQ ID NO: 182之胺基酸序列及(iii) Lys殘基組成，其中VH之C-末端胺基酸及SEQ ID NO: 182之N-末端胺基酸形成肽鍵且其中SEQ ID NO: 182之C-末端胺基酸接合至Lys之N-末端；及 輕鏈，其由上文所列示(a)至(xxxx)之輕鏈胺基酸序列組成； 其中VH及輕鏈胺基酸序列係選自來自上文所列示(a)至(xxxx)之相同抗體物質。
本發明之某些實施例包含含有以下各項之抗VISTA Ab： (a)    包括(i) P1-061029之VH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 67)及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO: 70)之輕鏈； (b)    包括(i) P1-061015之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061015之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (c)    包括(i) P1-068757之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068757之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (d)    包括(i) P1-068759之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068759之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (e)    包括(i) P1-068761之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (f)    包括(i) P1-068763之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068763之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (g)    包括(i) P1-068765之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068765之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (h)    包括(i) P1-068767之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (i)    包括(i) P1-068769之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068769之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (j)    包括(i) P1-068771之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068771之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (k)    包括(i) P1-068773之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068773之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (l)    包括(i) P1-068775之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068775之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (m)   包括(i) P1-069059之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069059之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (n)    包括(i) P1-069061之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069061之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (o)    包括(i) P1-069063之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069063之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (p)    包括(i) P1-069065之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069065之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (q)    包括(i) P1-069067之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069067之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (r)    包括(i) P1-069069之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069069之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (s)    包括(i) P1-069071之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069071之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (t)    包括(i) P1-069073之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069073之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (u)    包括(i) P1-069075之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069075之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (v)    包括(i) P1-069077之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069077之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (w)   包括(i) P1-068736之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068736之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (x)    包括(i) P1-068738之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068738之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (y)    包括(i) P1-068740之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068740之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (z)    包括(i) P1-068742之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068742之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aa)  包括(i) P1-068744之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bb)  包括P1-068746之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068746之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cc)  包括(i) P1-068748之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dd)  包括(i) P1-068750之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068750之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ee)  包括(i) P1-068752之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068752之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ff)   包括(i) P1-068754之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068754之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gg)  包括(i) P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hh)  包括(i) P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ii)   包括(i) P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jj)   包括(i) P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kk)  包括(i) P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ll)   包括(i) P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mm) 包括(i) P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nn)  包括(i) P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oo)  包括(i) P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pp)  包括(i) P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qq)  包括(i) P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rr)   包括(i) P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ss)   包括(i) P1-068761_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tt)   包括(i) P1-068761_E56N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uu)  包括(i) P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vv)  包括(i) P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ww) 包括(i) P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xx)  包括(i) P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yy)  包括(i) P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zz)  包括(i) P1-068761_E32Y_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaa) 包括(i) P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbb) 包括(i) P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ccc) 包括(i) P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ddd) 包括(i) P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eee) 包括(i) P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (fff)  包括(i) P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ggg) 包括(i) P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhh) 包括(i) P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iii)  包括(i) P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjj)  包括(i) P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkk) 包括(i) P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (lll)  包括(i) P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmm)   包括(i) P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnn) 包括(i) P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ooo) 包括(i) P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ppp) 包括(i) P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqq) 包括(i) P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrr)  包括(i) P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (sss) 包括(i) P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ttt)  包括(i) P1-061029_Y32E _F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_Y32E _F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈 (uuu) 包括(i) P1-068744_E31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvv) 包括(i) P1-068744_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (www)   包括(i) P1-068744_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xxx) 包括(i) P1-068744_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yyy) 包括(i) P1-068744_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zzz) 包括(i) P1-068744_E31S_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaaa)    包括(i) P1-068744_H50I_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbbb)    包括(i) P1-068744_E59Y_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E5;9Y_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cccc)    包括(i) P1-068744_E100S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dddd)    包括(i) P1-068744_E31S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eeee)    包括(i) P1-068744_E31S_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ffff) 包括(i) P1-068744_E31S_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gggg)    包括(i) P1-068744_H50I_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhhh)    包括(i) P1-068744_H50I_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iiii) 包括(i) P1-068744_E59Y_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及VL及包括P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjjj) 包括(i) P1-068748_H31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkkk)    包括(i) P1-068748_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (llll) 包括(i) P1-068748_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmmm) 包括(i) P1-068748_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnnn)    包括(i) P1-068748_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oooo)    包括(i) P1-068748_H31S_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pppp)    包括(i) P1-068748_H32Y_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqqq)    包括(i) P1-068748_D57K_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrrr) 包括(i) P1-068748_D58Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ssss) 包括(i) P1-068748_H31S_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tttt) 包括(i) P1-068748_H31S_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuuu)    包括(i) P1-068748_H31S_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvvv)    包括(i) P1-068748_H32Y_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (wwww) 包括(i) P1-068748_H32Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈；或 (xxxx)    包括(i) P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈， 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)中之任一者之VL包括T85V取代。
本發明之某些實施例包含含有以下各項之抗VISTA Ab： (a)    由(i) P1-061029之VH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 67)及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO: 70)組成之輕鏈； (b)    由(i) P1-061015之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061015之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (c)    由(i) P1-068757之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068757之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (d)    由(i) P1-068759之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068759之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (e)    由(i) P1-068761之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (f)    由(i) P1-068763之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068763之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (g)    由(i) P1-068765之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068765之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (h)    由(i) P1-068767之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (i)    由(i) P1-068769之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068769之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (j)    由(i) P1-068771之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068771之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (k)    由(i) P1-068773之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068773之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (l)    由(i) P1-068775之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068775之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (m)   由(i) P1-069059之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069059之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (n)    由(i) P1-069061之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069061之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (o)    由(i) P1-069063之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069063之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (p)    由(i) P1-069065之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069065之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (q)    由(i) P1-069067之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069067之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (r)    由(i) P1-069069之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069069之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (s)    由(i) P1-069071之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069071之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (t)    由(i) P1-069073之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069073之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (u)    由(i) P1-069075之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069075之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (v)    由(i) P1-069077之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069077之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (w)   由(i) P1-068736之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068736之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (x)    由(i) P1-068738之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068738之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (y)    由(i) P1-068740之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068740之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (z)    由(i) P1-068742之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068742之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aa)  由(i) P1-068744之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bb)  由P1-068746之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068746之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cc)  由(i) P1-068748之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dd)  由(i) P1-068750之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068750之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ee)  由(i) P1-068752之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068752之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ff)   由(i) P1-068754之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068754之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gg)  由(i) P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hh)  由(i) P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ii)   由(i) P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jj)   由(i) P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kk)  由(i) P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ll)   由(i) P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mm) 由(i) P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nn)  由(i) P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oo)  由(i) P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pp)  由(i) P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qq)  由(i) P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rr)   由(i) P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ss)   由(i) P1-068761_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tt)   由(i) P1-068761_E56N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uu)  由(i) P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vv)  由(i) P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ww) 由(i) P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xx)  由(i) P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yy)  由(i) P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zz)  由(i) P1-068761_E32Y_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaa) 由(i) P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbb) 由(i) P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ccc) 由(i) P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ddd) 由(i) P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eee) 由(i) P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (fff)  由(i) P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ggg) 由(i) P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhh) 由(i) P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iii)  由(i) P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjj)  由(i) P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkk) 由(i) P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (lll)  由(i) P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmm)   由(i) P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnn) 由(i) P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ooo) 由(i) P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ppp) 由(i) P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqq) 由(i) P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrr)  由(i) P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (sss) 由(i) P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ttt)  由(i) P1-061029_Y32E_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_Y32E_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuu) 由(i) P1-068744_E31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvv) 由(i) P1-068744_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (www)   由(i) P1-068744_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xxx) 由(i) P1-068744_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yyy) 由(i) P1-068744_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zzz) 由(i) P1-068744_E31S_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaaa)    由(i) P1-068744_H50I_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbbb)    由(i) P1-068744_E59Y_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E59Y_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cccc)    由(i) P1-068744_E100S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dddd)    由(i) P1-068744_E31S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eeee)    由(i) P1-068744_E31S_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ffff) 由(i) P1-068744_E31S_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gggg)    由(i) P1-068744_H50I_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhhh)    由(i) P1-068744_H50I_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iiii) 由(i) P1-068744_E59Y_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及VL及由P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjjj) 由(i) P1-068748_H31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkkk)    由(i) P1-068748_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (llll) 由(i) P1-068748_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmmm) 由(i) P1-068748_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnnn)    由(i) P1-068748_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oooo)    由(i) P1-068748_H31S_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pppp)    由(i) P1-068748_H32Y_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqqq)    由(i) P1-068748_D57K_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrrr) 由(i) P1-068748_D58Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ssss) 由(i) P1-068748_H31S_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tttt) 由(i) P1-068748_H31S_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuuu)    由(i) P1-068748_H31S_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvvv)    由(i) P1-068748_H32Y_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (wwww) 由(i) P1-068748_H32Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈；或 (xxxx)    由(i) P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈， 其中VH之C-末端胺基酸及SEQ ID NO: 183之N-末端胺基酸形成肽鍵；且 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)中之任一者之VL包括T85V取代。
在一些實施例中，本發明涵蓋包括以下各項之抗VISTA mAb： 重鏈，其由(i)上文所列示(a)至(xxxx)之VH之胺基酸序列、(ii) SEQ ID NO: 183之胺基酸序列及(iii) Lys殘基組成，其中VH之C-末端胺基酸及SEQ ID NO: 183之N-末端胺基酸形成肽鍵且其中SEQ ID NO: 183之C-末端胺基酸接合至Lys之N-末端；及 輕鏈，其由上文所列示(a)至(xxxx)之輕鏈胺基酸序列組成； 其中VH及輕鏈胺基酸序列係選自來自上文所列示(a)至(xxxx)之相同抗體物質。
本發明之其他實施例包含含有以下各項之抗VISTA Ab： (a)    包括(i) P1-061029之VH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 67)及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO: 70)之輕鏈； (b)    包括(i) P1-061015之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061015之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (c)    包括(i) P1-068757之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068757之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (d)    包括(i) P1-068759之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068759之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (e)    包括(i) P1-068761之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (f)    包括(i) P1-068763之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068763之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (g)    包括(i) P1-068765之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068765之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (h)    包括(i) P1-068767之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (i)    包括(i) P1-068769之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068769之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (j)    包括(i) P1-068771之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068771之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (k)    包括(i) P1-068773之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068773之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (l)    包括(i) P1-068775之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068775之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (m)   包括(i) P1-069059之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069059之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (n)    包括(i) P1-069061之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069061之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (o)    包括(i) P1-069063之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069063之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (p)    包括(i) P1-069065之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069065之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (q)    包括(i) P1-069067之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069067之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (r)    包括(i) P1-069069之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069069之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (s)    包括(i) P1-069071之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069071之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (t)    包括(i) P1-069073之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069073之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (u)    包括(i) P1-069075之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069075之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (v)    包括(i) P1-069077之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-069077之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (w)   包括(i) P1-068736之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068736之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (x)    包括(i) P1-068738之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068738之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (y)    包括(i) P1-068740之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068740之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (z)    包括(i) P1-068742之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068742之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aa)  包括(i) P1-068744之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bb)  包括P1-068746之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068746之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cc)  包括(i) P1-068748之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dd)  包括(i) P1-068750之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068750之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ee)  包括(i) P1-068752之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068752之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ff)   包括(i) P1-068754之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068754之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gg)  包括(i) P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hh)  包括(i) P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ii)   包括(i) P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jj)   包括(i) P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kk)  包括(i) P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ll)   包括(i) P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mm) 包括(i) P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nn)  包括(i) P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oo)  包括(i) P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pp)  包括(i) P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qq)  包括(i) P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rr)   包括(i) P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ss)   包括(i) P1-068761_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tt)   包括(i) P1-068761_E56N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uu)  包括(i) P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vv)  包括(i) P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ww) 包括(i) P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xx)  包括(i) P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yy)  包括(i) P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zz)  包括(i) P1-068761_E32Y_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaa) 包括(i) P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbb) 包括(i) P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ccc) 包括(i) P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ddd) 包括(i) P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eee) 包括(i) P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (fff)  包括(i) P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ggg) 包括(i) P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhh) 包括(i) P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iii)  包括(i) P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjj)  包括(i) P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkk) 包括(i) P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (lll)  包括(i) P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmm)   包括(i) P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnn) 包括(i) P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ooo) 包括(i) P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ppp) 包括(i) P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqq) 包括(i) P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrr)  包括(i) P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (sss) 包括(i) P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ttt)  包括(i) P1-061029_Y32E _F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-061029_Y32E _F100fE之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuu) 包括(i) P1-068744_E31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvv) 包括(i) P1-068744_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (www)   包括(i) P1-068744_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (xxx) 包括(i) P1-068744_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (yyy) 包括(i) P1-068744_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (zzz) 包括(i) P1-068744_E31S_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (aaaa)    包括(i) P1-068744_H50I_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (bbbb)    包括(i) P1-068744_E59Y_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E59Y_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (cccc)    包括(i) P1-068744_E100S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (dddd)    包括(i) P1-068744_E31S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (eeee)    包括(i) P1-068744_E31S_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ffff) 包括(i) P1-068744_E31S_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (gggg)    包括(i) P1-068744_H50I_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (hhhh)    包括(i) P1-068744_H50I_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (iiii) 包括(i) P1-068744_E59Y_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及VL及包括P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (jjjj) 包括(i) P1-068748_H31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (kkkk)    包括(i) P1-068748_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (llll) 包括(i) P1-068748_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (mmmm) 包括(i) P1-068748_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nnnn)    包括(i) P1-068748_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (oooo)    包括(i) P1-068748_H31S_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (pppp)    包括(i) P1-068748_H32Y_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (qqqq)    包括(i) P1-068748_D57K_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (rrrr) 包括(i) P1-068748_D58Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (ssss) 包括(i) P1-068748_H31S_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (tttt) 包括(i) P1-068748_H31S_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (uuuu)    包括(i) P1-068748_H31S_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (vvvv)    包括(i) P1-068748_H32Y_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (wwww) 包括(i) P1-068748_H32Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈；或 (xxxx)    包括(i) P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列之輕鏈，且 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)中之任一者之VL包括T85V取代。
本發明之其他實施例包含含有以下各項之抗VISTA Ab： (a)    由(i) P1-061029之VH之胺基酸序列(SEQ ID NO: 67)及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO: 70)組成之輕鏈； (b)    由(i) P1-061015之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061015之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (c)    由(i) P1-068757之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068757之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (d)    由(i) P1-068759之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068759之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (e)    由(i) P1-068761之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (f)    由(i) P1-068763之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068763之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (g)    由(i) P1-068765之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068765之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (h)    由(i) P1-068767之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (i)    由(i) P1-068769之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068769之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (j)    由(i) P1-068771之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068771之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (k)    由(i) P1-068773之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068773之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (l)    由(i) P1-068775之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068775之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (m)   由(i) P1-069059之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069059之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (n)    由(i) P1-069061之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069061之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (o)    由(i) P1-069063之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069063之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (p)    由(i) P1-069065之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069065之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (q)    由(i) P1-069067之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069067之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (r)    由(i) P1-069069之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069069之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (s)    由(i) P1-069071之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069071之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (t)    由(i) P1-069073之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069073之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (u)    由(i) P1-069075之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069075之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (v)    由(i) P1-069077之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-069077之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (w)   由(i) P1-068736之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068736之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (x)    由(i) P1-068738之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068738之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (y)    由(i) P1-068740之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068740之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (z)    由(i) P1-068742之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068742之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aa)  由(i) P1-068744之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bb)  由P1-068746之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068746之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cc)  由(i) P1-068748之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dd)  由(i) P1-068750之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068750之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ee)  由(i) P1-068752之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068752之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ff)   由(i) P1-068754之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068754之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gg)  由(i) P1-068761_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hh)  由(i) P1-068761_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ii)   由(i) P1-068761_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jj)   由(i) P1-068761_E55A_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kk)  由(i) P1-068761_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ll)   由(i) P1-068761_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mm) 包括(i) P1-068761_E56N_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列之重鏈；及包括P1-068761_E56N_H100G之輕鏈胺基酸序列之輕鏈； (nn)  由(i) P1-068761_E30D_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oo)  由(i) P1-068761_E30D_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pp)  由(i) P1-068761_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qq)  由(i) P1-068761_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rr)   由(i) P1-068761_H100G_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_H100G_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ss)   由(i) P1-068761_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tt)   由(i) P1-068761_E56N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E56N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uu)  由(i) P1-068761_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vv)  由(i) P1-068761_E32Y_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ww) 由(i) P1-068761_E32Y_E56N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E56N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xx)  由(i) P1-068761_E30D_E32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E30D_E32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yy)  由(i) P1-068761_E32Y_H100G之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_H100G之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zz)  由(i) P1-068761_E32Y_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068761_E32Y_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaa) 由(i) P1-068767_D52N_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbb) 由(i) P1-068767_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ccc) 由(i) P1-068767_D52N_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ddd) 由(i) P1-068767_E55A_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eee) 由(i) P1-068767_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (fff)  由(i) P1-068767_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ggg) 由(i) P1-068767_E30D_D52N之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_D52N之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhh) 由(i) P1-068767_E30D_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iii)  由(i) P1-068767_E30D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjj)  由(i) P1-068767_E30D_E55A之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_E55A之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkk) 由(i) P1-068767_E100fF_D102V之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E100fF_D102V之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (lll)  由(i) P1-068767_E55A_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E55A_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmm)   由(i) P1-068767_D52N_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_D52N_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnn) 由(i) P1-068767_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ooo) 由(i) P1-068767_E30D_E100fF之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068767_E30D_E100fF之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ppp) 由(i) P1-061029_F100fE_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_F100fE_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqq) 由(i) P1-061029_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrr)  由(i) P1-061029_V102D之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_V102D之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (sss) 由(i) P1-061029_Y32E之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_Y32E之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ttt)  由(i) P1-061029_Y32E_F100fE之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-061029_Y32E_F100fE之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuu) 由(i) P1-068744_E31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvv) 由(i) P1-068744_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (www)   由(i) P1-068744_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (xxx) 由(i) P1-068744_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (yyy) 由(i) P1-068744_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (zzz) 由(i) P1-068744_E31S_H50I之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_H50I之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (aaaa)    由(i) P1-068744_H50I_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (bbbb)    由(i) P1-068744_E59Y_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E59Y_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (cccc)    由(i) P1-068744_E100S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E100S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (dddd)    由(i) P1-068744_E31S_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (eeee)    由(i) P1-068744_E31S_E59Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E59Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ffff) 由(i) P1-068744_E31S_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_E31S_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (gggg)    由(i) P1-068744_H50I_E100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (hhhh)    由(i) P1-068744_H50I_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068744_H50I_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (iiii) 由(i) P1-068744_E59Y_E102Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及VL及由P1-068744_E59Y_E102Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (jjjj) 由(i) P1-068748_H31S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (kkkk)    由(i) P1-068748_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (llll) 由(i) P1-068748_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (mmmm) 由(i) P1-068748_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (nnnn)    由(i) P1-068748_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (oooo)    由(i) P1-068748_H31S_H32Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_H32Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (pppp)    由(i) P1-068748_H32Y_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (qqqq)    由(i) P1-068748_D57K_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (rrrr) 由(i) P1-068748_D58Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D58Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (ssss) 由(i) P1-068748_H31S_D57K之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D57K之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (tttt) 由(i) P1-068748_H31S_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (uuuu)    由(i) P1-068748_H31S_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H31S_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (vvvv)    由(i) P1-068748_H32Y_D58Y之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D58Y之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈； (wwww) 由(i) P1-068748_H32Y_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_H32Y_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈；或 (xxxx)    由(i) P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列及(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列組成之重鏈；及由P1-068748_D57K_D100S之輕鏈胺基酸序列組成之輕鏈， 其中VH之C-末端胺基酸及SEQ ID NO: 184之N-末端胺基酸形成肽鍵；且 視情況其中(a)或(c)至(ttt)中之任一者中之VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況其中(b)或(uuu)至(xxxx)中之任一者之VL包括T85V取代。
在一些實施例中，本發明涵蓋包括以下各項之抗VISTA mAb： 重鏈，其由(i)上文所列示(a)至(xxxx)之VH之胺基酸序列、(ii) SEQ ID NO: 184之胺基酸序列及(iii) Lys殘基組成，其中VH之C-末端胺基酸及SEQ ID NO: 184之N-末端胺基酸形成肽鍵且其中SEQ ID NO: 184之C-末端胺基酸接合至Lys之N-末端；及 輕鏈，其由上文所列示(a)至(xxxx)之輕鏈胺基酸序列組成； 其中VH及輕鏈胺基酸序列係選自來自上文所列示(a)至(xxxx)之相同抗體物質。
在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括與P1-061029之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸VH序列，其中該抗體包括P1-061029之VH CDR1、CDR2及/或CDR3且其中至少一個殘基已經D、E或H取代。在一些實施例中，P1-061029之VH CDR1、CDR2及CDR3中之每一者所含之一個、兩個或三個殘基經D、E或H取代。在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括與P1-061029之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸VH序列，其中該抗體包括在CDR1之胺基酸位置4、5或7含有一或兩個D或E殘基之VH CDR1，及/或包括在CDR2之位置3、5、6或7具有一個、兩個或三個D、E或H殘基之VH CDR2，及/或包括在CDR 3之位置6、12或14具有一個、兩個或三個D、E或H殘基之VH CDR3。(該等實施例內之抗體實例可參見下表5。)  在一些實施例中，P1-061015之VH CDR1、CDR2及CDR3中之每一者含有一個、兩個或三個經D、E或H取代之殘基。在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括與P1-061015之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸VH序列，其中該抗體包括在CDR1之胺基酸位置4、5、6或7包括一或兩個D或E殘基(例如位置5之H或E殘基及/或位置5及/或6之H殘基)之VH CDR1，及/或包括在CDR2之位置1、5、9及/或10(例如在1及9或10或在9及/或10)具有一個、兩個或三個D、E或H殘基之VH CDR2，及/或包括在CDR 3之位置6及/或12具有一個、兩個或三個D、E或H殘基之VH CDR3。在該等情形下，輕鏈可變區可包括P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之CDR1、CDR2及/或CDR3，及/或輕鏈可變區可與P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之輕鏈可變區至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。
在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括與P1-061015之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸VH序列，其中該抗體包括P1-061015之VH CDR1、CDR2及/或CDR3且其中至少一個殘基已經D、E或H取代。在一些實施例中，P1-061015之VH CDR1、CDR2及CDR3中之每一者所含之一個、兩個或三個殘基經D、E或H取代。在一些實施例中，抗hVISTA Ab可包括與P1-061015之序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸VH序列，其中該抗體包括在CDR1之胺基酸位置6、7、8及9含有一或兩個D、E或H殘基之VH CDR1，及/或包括在CDR2之位置1、2、4或8-11具有一個、兩個或三個D、E或H殘基之VH CDR2，及/或包括在CDR 3之位置2、3、6、7或12具有一個、兩個或三個D、E或H殘基之VH CDR3。(該等實施例內之抗體實例可參見下表6。)  在該等情形下，輕鏈可變區可包括P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之CDR1、CDR2及/或CDR3，及/或輕鏈可變區可與P1-061029或P1-061015或其子代(例如P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)之輕鏈可變區至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。
在一些實施例中，該等經修飾抗hVISTAP1-061029或P1-061015子代擁有下列特性中之一或多者： -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)特異性結合hVISTA (例如ECD之富組胺酸區域或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35-127之多肽)； -  於生理pH或中性pH (例如pH 7.4或pH 7.0)並不顯著結合hVISTA (例如ECD之富組胺酸區域或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35-127之多肽)； -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)特異性結合食蟹獼猴VISTA (例如ECD之富組胺酸區域)； -  於生理pH或中性pH (例如pH 7.4或pH 7.0)並不顯著結合食蟹獼猴VISTA (例如ECD之富組胺酸區域)； -  相對於具有SEQ ID NO: 2之hVISTA ECD，較小程度地結合在下列胺基酸中之一或多者處具有取代之hVISTA-ECD：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127； -  與P1-061029、P1-068761、P1-068767、P1-061015、P1-068744及/或P1-068748交叉競爭結合hVISTA； -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)抑制hVISTA與表現VISTA之人類T細胞(例如初始或活化T細胞)之結合； -  於酸性pH (例如pH 6.0或pH 6.5)抑制hVISTA與PSGL-1之結合(例如抑制具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之H153及H154與PSGL-1酪胺酸Y46及Y48之間之相互作用)，其中PSGL-1含有或不含唾液醯基路易斯X，且其中酪胺酸較佳係磺基酪胺酸； -  抑制hVISTA與VSIG-3之結合； -  食蟹獼猴中之平均滯留時間(MRT)為至少100、200、300、350、400、450、500、600或700小時(例如至少350小時)，如實例中所闡述來量測； -  藉由(例如)增強T細胞增殖、增強IFN-γ自T細胞之產生及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導來刺激T細胞活化； -  抑制VISTA調介之細胞:細胞黏附； -  特異性結合表現VISTA之人類腫瘤細胞試樣或發炎人類組織試樣中之hVISTA； -  經由一或多個(例如至少1-3、1-5、1-10、5-10、5-15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124(表21)接觸hVISTA，如(例如)使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定；且其中編號係成熟hVISTA (SEQ ID NO: 2)之編號； -  結合具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之區域1：57 LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566)；區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567)；及區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568)，且視情況其中與區域2之結合最強，如藉由如實例中所闡述之MS-HDX所測定； -  結合hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，如(例如)藉由例如在實例中所闡述之結晶學所測定； -  經由(例如)氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及/或H123 (4.0埃(Å)或更小之距離)，如(例如)藉由結晶學所測定且如(例如)實例中所闡述； -  經由位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之至少一個或多個麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA； -  與具有MC38腫瘤之人類VISTA基因嵌入小鼠中之骨髓樣細胞相比、與其血液相比及/或與其肝、肺及脾細胞相比，較佳累積於腫瘤組織中，如實例中所闡述； -  與患者之骨髓樣細胞相比、與其血液相比及/或與其肝、肺及脾細胞相比，較佳累積於腫瘤中(如例如藉由投與經PET示蹤劑標記之Ab所檢測)； -  在酸性條件下(例如在pH 6.5下)以至少低於hVISTA於中性或生理pH之結合KD 或k解離 10倍、100倍或1000倍之KD (及/或k解離 )特異性結合hVISTA，如藉由如本文實例30中所闡述之表面電漿共振(SPR)所測定； -  抑制hVISTA與hVISTA所結合細胞(例如表現PSGL-1之細胞)之結合，其中根據本文實例31中所闡述之方案來測定結合(視情況其中細胞係人類白血球、PBMC或T細胞)； -  阻斷或交叉阻斷本文所闡述之任一抗體之結合，如使用如本文實例32中所闡述之競爭性SPR表位分類所測定；及 -  申請專利範圍及/或實例中所陳述之任一其他特性。
實例性抗體恆定區 在一些實施例中，本文所闡述之抗體包括一或多個人類恆定區。在一些實施例中，人類重鏈恆定區係選自IgA、IgG及IgD之同型之恆定區。在一些實施例中，人類輕鏈恆定區係選自κ及λ之同型之恆定區。在一些實施例中，本文所闡述之抗體包括人類IgG恆定區，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些實施例中，本文所闡述之抗體包括人類IgG4重鏈恆定區。在一些該等實施例中，本文所闡述之抗體在人類IgG4恆定區中包括S241P突變。在一些實施例中，本文所闡述之抗體包括人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。
重鏈恆定區之選擇可測定抗體是否具有活體內效應功能。在一些實施例中，該效應功能包含抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，且可使得殺死抗體所結合之細胞。在一些治療方法(包含治療一些癌症之方法)中，可期望細胞殺死，例如在抗體結合支持腫瘤之維持或生長之細胞時。可支持腫瘤之維持或生長之實例性細胞包含(但不限於)腫瘤細胞自身、有助於使血管系統募集至腫瘤之細胞及提供支持或促進腫瘤生長或腫瘤存活之配體、生長因子或反受體之細胞。在一些實施例中，在期望效應功能時，抗體包括人類IgG1重鏈或選擇人類IgG3重鏈。
在某些實施例中，改變本文所提供抗體以增加或降低抗體經醣基化之程度。抗體醣基化位點之添加或缺失可方便地藉由改變胺基酸序列以產生或去除一或多個醣基化位點來實現。
在抗體包括Fc區時，其所附接之碳水化合物可能有所變化。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包括具支鏈、二分枝寡醣，其通常藉由N-鍵聯附接至Fc區之CH2結構域的Asn297。例如參見Wright等人，TIBTECH 15:26-32 (1997)。該寡醣可包含多種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及附接至二分枝寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可修飾本發明抗體中之寡醣以產生具有某些改良性質之抗體。舉例而言，在一些實施例中，可(例如)藉由使通常含岩藻糖醣基化或經由其他方式進行醣基化之殘基(例如Asn297)發生突變來使抗體變得無岩藻醣基化。在一些實施例中，本文之抗體可包括無岩藻醣基化人類IgG1恆定區。
進一步提供二等分寡醣之抗體，例如，其中附接至抗體Fc區之二分枝寡醣由GlcNAc二等分。該等抗體可具有減少之岩藻醣基化及/或改良之ADCC功能。該等抗體之實例闡述於(例如) WO 2003/011878 (Jean-Mairet等人)、美國專利第6,602,684號(Umana等人)及US 2005/0123546 (Umana等人)中。亦提供在附接至Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基的抗體。該等抗體可具有改良之CDC功能。該等抗體闡述於(例如) WO 1997/30087 (Patel等人)、WO 1998/58964 (Raju, S.)及WO 1999/22764 (Raju, S.)中。
抗體亦提供有胺基-末端前導延伸體。舉例而言，胺基-末端前導序列之一或多個胺基酸殘基存在於抗體之任一條或多條重鏈或輕鏈之胺基-末端處。實例性胺基-末端前導延伸體包括三個存在於抗體之一或兩條輕鏈之胺基酸殘基VHS或由其組成。
可(例如)在投與具有變體Fc區之多肽之轉基因小鼠、人類或非人類靈長類動物中分析人類FcRn高親和力結合多肽之活體內或血清半衰期。亦例如參見Petkova等人，International Immunology 18(12):1759-1769 (2006)。
在本發明之一些實施例中，與包括岩藻糖之親代抗體相比，無岩藻醣基化抗體在人類效應細胞存在下更有效地介導ADCC，通常，可使用如本文所揭示之活體外ADCC分析來測定ADCC活性，但涵蓋測定ADCC活性之其他分析或方法(例如在動物模型中等)。
在某些實施例中，藉由使用不同胺基酸殘基代替至少一個胺基酸殘基來改變Fc區以改變抗體之效應功能。舉例而言，一或多個選自胺基酸殘基234、235、236、237、297、318、320、322、330及/或331之胺基酸可經不同胺基酸殘基代替，從而抗體具有改變之對效應物配體之親和力，但保留親代抗體之抗原結合能力。對其親和力改變之效應物配體可為(例如) Fc受體或補體之C1組分。此方式進一步詳細闡述於Winter等人之美國專利第5,624,821號及第5,648,260號中。
在一些實例中，一或多個選自胺基酸殘基329、331及322之胺基酸可經不同胺基酸殘基代替，從而抗體具有經改變之C1q結合及/或降低或消除補體依賴性細胞毒性(CDC)。此方式進一步詳細闡述於Idusogie等人之美國專利第6,194,551號中。
在一些實例中，改變胺基酸位置231及239內之一或多個胺基酸殘基以藉此改變抗體結合補體之能力。此方法進一步闡述於Bodmer等人之PCT公開案WO 94/29351中。在一些實例中，可藉由修飾下列位置之一或多個胺基酸來修飾Fc區以降低抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及/或降低對Fcγ受體之親和力：234、235、236、238、239、240、241 、243、244、245、247、248、249、252、254、255、256、258、262、263、264、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、299、301、303、305、307、309、312、313、315、320、322、324、325、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、433、434、435、436、437、438或439。實例性取代包含236A、239D、239E、268D、267E、268E、268F、324T、332D及332E。實例性變體包含239D/332E、236A/332E、236A/239D/332E、268F/324T、267E/268F、267E/324T及267E/268F7324T。可對Fc進行之其他Fc修飾係用於降低或除去與FcγR及/或補體蛋白之結合者，藉此降低或除去Fc介導之效應功能(例如ADCC、ADCP及CDC)。實例性修飾包含(但不限於)在位置234、235、236、237、267、269、325、328、330及/或331 (例如330及331)之取代、插入及缺失，其中編號係根據EU索引。實例性取代包含(但不限於) 234A、235E、236R、237A、267R、269R、325L、328R、330S及331S (例如330S及331S)，其中編號係根據EU索引。Fc變體可包括236R/328R。用於減小FcγR及補體相互作用之其他修飾包含取代297A、234A、235A、237A、318A、228P、236E、268Q、309L、330S、331 S、220S、226S、229S、238S、233P及234V以及藉由突變或酶促方式或藉由在並不使蛋白質醣基化之生物體(例如細菌)中產生來去除位置297之醣基化。該等及其他修飾綜述於Strohl, 2009,Current Opinion in Biotechnology 20:685-691。舉例而言，人類IgG1.3 Fc恆定區含有L234A、L235E及G237A取代。IgG1fa.P238K (或IgG1.P238K)含有P238K取代。IgG1.1f包括L234A、L235E、G237A、A330S及P331S取代。
亦可使用增強對抑制性受體FcγRIIb之親和力之Fc變體。該等變體可提供具有與FcγRIIb細胞(例如包含B細胞及單核球)相關之免疫調節活性之Fc融合蛋白。在一實施例中，Fc變體提供相對於一或多種活化受體與FcγRIIb選擇性增強之親和力。用於改變FcγRIIb結合之修飾包含在選自由以下組成之群之位置的一或多種修飾：234、235、236、237、239、266、267、268、325、326、327、328、330、331及332 (根據EU索引)。用於增強FcγRllb親和力之實例性取代包含(但不限於) 234A、234D、234E、234F、234W、235D、235E、235F、235R、235Y、236D、236N、237A、237D、237N、239D、239E、266M、267D、267E、268D、268E、327D、327E、328F、328W、328Y、330S、331S及332E。實例性取代包含235Y、236D、239D、266M、267E、268D、268E、328F、328W及328Y。用於增強FcγRIIb結合之其他Fc變體包含235Y/267E、236D/267E、239D/268D、239D/267E、267E/268D、267E/268E及267E/328F。
用於增強FcγR及補體相互作用之其他修飾包含(但不限於)取代298 A、333A、334A、326A、2471、339D、339Q、280H、290S、298D、298V、243L、292P、300L、396L、3051及396L。該等及其他修飾綜述於Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691中。增加Fcγ受體結合之Fc修飾包含在以下Fc區胺基酸位置中之任一者或多者之胺基酸修飾：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、279、280、283、285、298、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、312、315、324、327、329、330、335、337、338、340、360、373、376、379、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，其中Fc區中之殘基編號係EU索引之編號，如在專利公開案第WO 00/42072號中。
視情況，Fc區可在其他及/或替代位置包括熟習此項技術者已知之非天然胺基酸殘基(例如參見美國專利第5,624,821號、第6,277,375號、第6,737,056號、第6,194,551號、第7,317,091號、第8,101,720號；PCX專利公開案WO 00/42072；WO 01/58957；WO 02/06919；WO 04/016750；WO 04/029207；WO 04/035752；WO 04/074455；WO 04/099249；WO 04/063351；WO 05/070963；WO 05/040217；WO 05/092925及WO 06/0201 14)。
Fc區對其配體之親和力及結合性質可藉由業內已知之多種活體外分析方法(基於生物化學或免疫學之分析)來測定，該等方法包含(但不限於)平衡方法(例如，酶聯免疫吸附分析(ELISA)或放射免疫分析(RIA))或動力學(例如，BIACORE分析)及其他方法，例如間接結合分析、競爭抑制分析、螢光共振能量轉移(FRET)、凝膠電泳及層析(例如，凝膠過濾)。該等及其他方法可在所檢查組分之一或多者上利用標記及/或採用多種檢測方法，其包含(但不限於)發色、螢光、發光或同位素標記。結合親和力及動力學之詳細描述可參見Paul, W. E.編輯，Fundamental immunology，第4版，Lippincott-Raven,Philadelphia (1999)，其針對抗體-免疫原相互作用。
在某些實施例中，抗體經修飾以延長其生物半衰期。多種方式係可能的。舉例而言，此可藉由增加Fc區對FcRn之結合親和力來達成，舉例而言，下列殘基中之一或多者可發生突變：252、254、256、433、435、436，如美國專利第6,277,375號中所闡述。具體實例性取代包含下列中之一或多者：T252L、T254S及/或T256F。或者，為增加生物半衰期，可在CH1或CL區內改變抗體以含有自IgG之Fc區中CH2結構域之兩個環所獲取之補救受體結合表位，如Presta等人之美國專利第5,869,046號及第6,121,022號中所闡述。增加與FcRn之結合及/或改良藥物動力學特性之其他實例性變體包含在位置259、308、428及434之取代，包含(例如) 2591、308F、428L、428M、434S、4341 1. 434F、434Y及434X1。增加Fc與FcRn之結合之其他變體包含：250E、250Q、428 L、428F、250Q/428L (Hinton等人，2004,J. Biol. Chem . 279(8): 6213-6216；Hinton等人，2006Journal of Immunology 176:346-356)、256A、272A、286A、305A、307A、307Q、31 1A、312A、376A、378Q、380A、382A、434A (Shields等人，Journal of Biological Chemistry , 2001, 276(9):6591-6604)、252F、252T、252Y、252W、254T、256S、256R、256Q、256E、256D、256T、309P、31 1 S、433R、433S、4331、433P、433Q、434H、434F、434Y、252Y/254T/256E、433K/434F/436H、308T/309P/311S (Dall Acqua等人，Journal of Immunology , 2002, 169:5171-5180；Dall'Acqua等人，2006,Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524)。用於調節FcRn結合之其他修飾闡述於Yeung等人，2010,J Immunol , 182:7663-7671中。
在某些實施例中，可使用具有特定生物特性之雜合IgG同型。舉例而言，可藉由使用來自IgG3之兩個同種型不同之位置之胺基酸取代CH2及/或CH3區中的IgG1位置來構築IgG1/IgG3雜合變體。因此，可構築包括一或多個取代(例如274Q、276K、300F、339T、356E、358M、384S、392N、397M、4221、435R及436F)之雜合變體IgG抗體。在本文所闡述之一些實施例中，可藉由使用來自IgG1之兩個同種型不同之位置之胺基酸取代CH2及/或CH3區中的IgG2位置來構築IgG1/IgG2雜合變體。因此，可構築包括一或多個取代之雜合變體IgG抗體，該等取代係(例如)以下胺基酸取代中之一或多者：233E、234L、235L、-236G (係指在位置236插入甘胺酸)及327A。
另外，已定位人類IgG1上針對FcγRI、FcγRII、FcγRIII及FcRn之結合位點，且已闡述具有經改良結合之變體(參見Shields, R.L.等人(2001)J. Biol. Chem. 276:6591-6604)。展示位置256、290、298、333、334及339之改良FcγRIII結合之特異性突變。另外，展示改良FcγRIII結合之下列組合突變體：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A及S298A/E333A/K334A，該等組合突變體已展示可展現增強之FcγRIIIa結合及ADCC活性(Shields等人，2001)。已鑑別具有強烈增強之與FcγRIIIa之結合的其他IgG1變體，包含具有S239D/I332E及S239D/I332E/A330L突變之變體，其在食蟹獼猴中展示對FcγRIIIa之親和力最大增加、FcγRIIb結合減少及強的細胞毒性活性(Lazar等人，2006)。向抗體(例如阿倫單抗(alemtuzumab) (CD52特異性)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (HER2/neu特異性)、利妥昔單抗(rituximab) (CD20特異性)及西妥昔單抗(cetuximab) (EGFR特異性))中引入三重突變轉譯成大大增強之活體外ADCC活性，且S239D/I332E變體展示在猴中增強之缺失B細胞之能力(Lazar等人，2006)。另外，已鑑別含有L235V、F243L、R292P、Y300L及P396L突變之IgG1突變體，其在B細胞惡性病及乳癌之模型中在表現人類FcγRIIIa之轉基因小鼠中展現增強之與FcγRIIIa之結合及同時增強之ADCC活性(Stavenhagen等人，2007；Nordstrom等人，2011)。可使用之其他Fc突變體包含：S298A/E333A/L334A、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L、L235V/F243L/R292P/Y300L/ P396L及M428L/N434S。
在某些實施例中，選擇具有降低之與FcγR之結合之Fc。具有降低之FcγR結合之實例性Fc (例如IgG1 Fc)包括下列三個胺基酸取代：L234A、L235E及G237A。
在某些實施例中，選擇具有降低之補體結合之Fc。具有降低之補體結合之實例性Fc (例如IgG1 Fc)具有下列兩個胺基酸取代：A330S及P331S。
在某些實施例中，選擇基本上不具效應功能之Fc，亦即，其具有降低之與FcγR之結合及降低之補體固定。無效應之實例性Fc (例如IgG1 Fc)包括下列五個突變：L234A、L235E、G237A、A330S及P331S。
在使用IgG4恆定結構域時，其可包含取代S228P，該取代模擬IgG1中之鉸鏈序列且藉此穩定IgG4分子。
亦可使用WO 2017/087678或WO2016081746中所闡述之Fc修飾。
在某些實施例中，修飾抗體之醣基化。舉例而言，可製備無醣基化抗體(亦即，抗體缺少醣基化)。可改變醣基化以(例如)增加抗體對抗原之親和力。該等碳水化合物修飾可藉由(例如)改變抗體序列內之一或多個醣基化位點來達成。舉例而言，可進行一或多個胺基酸取代以消除一或多個可變區框架醣基化位點，由此消除該位點處之醣基化。該無醣基化可增加抗體對抗原之親和性。此一方式進一步詳細闡述於Co等人之美國專利第5,714,350號及第6,350,861號中。
可藉由將N297殘基突變成另一殘基(例如N297A)及/或藉由突變毗鄰胺基酸(例如298)以藉此降低N297上之醣基化來防止N297上恆定區之醣基化。
另外或替代地，可製備具有經改變醣基化類型之抗體，例如具有降低量之岩藻糖基殘基之低岩藻醣基化抗體或具有增加之二等分GlcNac結構的抗體。已證實，該等經改變醣基化模式增加抗體之ADCC能力。該等碳水化合物修飾可藉由(例如)在具有經改變之醣基化機構之宿主細胞中表現抗體來達成。具有經改變醣基化機構之細胞已於業內有所闡述且可用作其中表現本文所闡述重組抗體之宿主細胞以由此產生具有經改變醣基化之抗體。舉例而言，Hanai等人之EP 1,176,195闡述具有編碼岩藻糖基轉移酶之功能被破壞之FUT8基因的細胞系，從而在該細胞系中表現之抗體展現低岩藻醣基化。Presta之PCT公開案WO 03/035835闡述將岩藻糖附接至Asn(297)連接之碳水化合物之能力降低的變體CHO細胞系Led 3細胞，亦導致在該宿主細胞中表現之抗體的低岩藻醣基化(亦參見Shields, R.L.等人(2002)J. Biol. Chem . 277:26733-26740)。Umana等人之PCT公開案WO 99/54342闡述經改造以表現修飾醣蛋白之醣基轉移酶{例如，β(1,4)-N-乙醯基葡萄糖胺基轉移酶III (GnTIII))的細胞系，使得在經改造細胞系中表現之抗體展現增加之二等分GlcNac結構，從而增強抗體之ADCC活性(亦參見Umana等人(1999)Nat. Biotech. 17 :176-180)。
本文所闡述抗體之另一修飾係聚乙二醇化。抗體可經聚乙二醇化以(例如)延長抗體之生物(例如血清)半衰期。為聚乙二醇化抗體，通常在一或多個PEG基團附接至抗體或抗體片段之條件下使抗體或其片段與聚乙二醇(PEG) (例如PEG之反應性酯或醛衍生物)反應。在一些實施例中，聚乙二醇化係藉由與反應性PEG分子(或類似反應性水溶性聚合物)之醯化反應或烷基化反應來實施。如本文中所使用，術語「聚乙二醇」意欲涵蓋PEG之已用於衍生其他蛋白質之任一形式，例如單(CI-CIO)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-馬來醯亞胺。在某些實施例中，擬經聚乙二醇化之抗體係無醣基化抗體。用於聚乙二醇化蛋白質之方法在業內已知且可應用於本文所闡述之抗體。例如參見Nishimura等人之EP 0 154 316及Ishikawa等人之EP 0 401 384。
在各個實施例中，本文所闡述結合VISTA之抗體經修飾以選擇性阻斷其中抗原結合將有害之組織及環境中之抗原結合，但容許其中其將有益之抗原結合(「可活化抗體」)。在一實施例中，產生特異性結合抗體之抗原結合表面且干擾抗原結合之封阻肽「遮罩」，該遮罩藉由肽酶可裂解連接體連接至抗體之每一結合臂。例如參見頒予CytomX之美國專利第8,518,404號。該等構築體可用於治療在腫瘤微環境中蛋白酶含量與非腫瘤組織相比極大增加之癌症。選擇性裂解腫瘤微環境中之可裂解連接體容許遮蔽/封阻肽解離，此使得能夠在腫瘤而非抗原結合可引起不期望副效應之外周組織中進行選擇性抗原結合。連接至抗體之阻斷肽之實例提供於WO 2018/08555中。
或者，在相關實施例中，研發出包括兩個抗原結合結構域之二價結合化合物(「遮蔽配體」)，其結合(二價)抗體之兩個抗原結合表面且干擾抗原結合，其中兩個結合結構域遮罩藉由(例如)可經肽酶裂解之可裂解連接體彼此連接(而非與抗體連接)。例如參見頒予Tegopharm Corp之國際專利申請公開案第WO 2010/077643號。遮蔽配體可包括或源自抗體意欲結合之抗原或可獨立地產生。該等遮蔽配體可用於治療在腫瘤微環境中蛋白酶含量與非腫瘤組織相比極大增加之癌症。選擇性裂解腫瘤微環境中之可裂解連接體容許兩個結合結構域彼此解離，從而降低對抗體之抗原結合表面之親合力。遮蔽配體與抗體之所得解離使得能夠在腫瘤而非抗原結合可能引起不期望副效應之外周組織中進行選擇性抗原結合。
核酸及宿主細胞 亦提供編碼抗體或其重鏈或輕鏈或其部分之核酸。實例性核酸提供於序列表中。本文涵蓋任一與序列表中之核酸至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%一致之核酸。亦涵蓋包括編碼本文所提供抗體之核酸之組合物以及包括該等組合物之細胞及製備抗體之方法，該等方法包括培養使用編碼抗VISTA抗體之核酸轉變之細胞，及自培養基或細胞分離抗體。
使用 VISTA-ECD 結合 Ab 及相關醫藥組合物之治療方法 在某些實施例中，在低pH結合VISTA且(例如)於中性或生理pH並不顯著結合之抗VISTA抗體可為VISTA拮抗劑抗體，亦即抑制VISTA作用以便刺激免疫反應之抗體。該等抗體可用於治療其中期望刺激免疫系統或免疫反應之疾病，例如增殖性疾病(良性或惡性)、癌症及傳染性疾病(例如病毒感染)。
在某些實施例中，在低pH結合VISTA且(例如)於中性或生理pH並不顯著結合之抗VISTA抗體可為VISTA激動劑抗體，亦即增加VISTA作用以便抑制免疫反應之抗體。該等抗體可用於治療其中期望抑制免疫系統或免疫反應之疾病，例如自體免疫疾病及發炎性病狀，例如類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、乳糜瀉、薛格連氏症候群(Sjoigren’s syndrome)、格雷夫斯氏病(Grave’s disease)、發炎性腸病、牛皮癬、關節黏連性脊椎炎、移植物抗宿主病、過敏及氣喘。
本文所闡述之抗體可用於(例如)治療癌症。在一些實施例中，提供治療癌症之方法，其包括向患者投與有效量之本文所闡述之抗體。在一些實施例中，Ab可觸發或增強患者中之免疫反應(例如抗原特異性免疫反應)。在一些實施例中，Ab可刺激T細胞活性。在一些實施例中，Ab可抑制患者中之至少一種腫瘤之生長。
本文提供治療患有癌症之受試者之方法，其包括向受試者投與治療有效量之本文所闡述之抗VISTA抗體，從而治療受試者。抗VISTA抗體可單獨使用。或者，抗VISTA抗體可與另一藥劑聯合使用，如下文進一步所闡述。
可使用如本文所闡述於酸性條件下特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab治療之癌症之實例包含(但不限於)癌、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病。可使用本文所闡述Ab治療之癌症亦包含通常對免疫療法具有反應之癌症及通常並不對免疫療法具有反應者。可治療之癌症亦包含VISTA陽性癌症，例如具有VISTA陽性腫瘤浸潤細胞(例如淋巴球、骨髓樣細胞或單核球細胞)之癌症。癌症可為具有實體腫瘤或血液惡性病(液體腫瘤)之癌症。
用於治療之癌症之非限制性實例包含鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、鱗狀非小細胞肺癌(NSCLC)、非鱗狀NSCLC、神經膠質瘤、胃腸癌、腎癌(例如透明細胞癌)、卵巢癌、肝癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、腎癌(例如，腎細胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素難治性前列腺腺癌)、甲狀腺癌、神經胚細胞瘤、胰臟癌、神經膠母細胞瘤(多形性神經膠母細胞瘤)、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝瘤、乳癌、結腸癌及頭頸癌(或癌瘤)、胃癌、生殖細胞腫瘤、兒科肉瘤、鼻竇天然殺傷、黑色素瘤(例如，轉移性惡性黑色素瘤，例如皮膚或眼內惡性黑色素瘤)、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛區癌、睪丸癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、食管癌、小腸癌、內分泌系統癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、兒童期實體腫瘤、輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統之贅瘤(CNS)、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊軸腫瘤、腦癌、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導之癌症(包含由石棉誘導者)、病毒相關癌症或病毒起源之癌症(例如，人類乳頭瘤病毒(HPV相關或起源之腫瘤))及源自兩種主要血球譜系(亦即骨髓細胞系(其產生顆粒球、紅血球、血栓細胞、巨噬球及肥胖細胞)或淋巴細胞系(其產生B、T、NK及漿細胞))中之任一者之血液學惡性病，例如所有類型之白血病、淋巴瘤及骨髓瘤，例如急性、慢性、淋巴球性及/或骨髓性白血病，例如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)及慢性骨髓性白血病(CML)、未分化之AML (MO)、骨髓母細胞性白血病(Ml)、骨髓母細胞性白血病(M2；細胞成熟)、前髓球性白血病(M3或M3變體[M3V])、骨髓單核球性白血病(具有嗜酸性球增多症之M4或M4變體[M4E])、單核球性白血病(M5)、紅白血病(M6)、巨核母球性白血病(M7)、分離之顆粒球性肉瘤及綠色瘤；淋巴瘤，例如何傑金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma) (HL)、非何傑金氏淋巴瘤(NHL)、B細胞血液學惡性病(例如B細胞淋巴瘤)、T細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞樣淋巴瘤、單核球樣B細胞淋巴瘤、黏膜相關之淋巴組織(MALT)淋巴瘤、退行性(例如，Ki 1+)大細胞淋巴瘤、成人T細胞淋巴瘤/白血病、外套細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、血管中心淋巴瘤、腸T細胞淋巴瘤、原發性縱膈B細胞淋巴瘤、前體T-淋巴母細胞性淋巴瘤、T-淋巴母細胞性腫瘤；及淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、周邊T細胞淋巴瘤、淋巴母細胞性淋巴瘤、移植後淋巴增殖病症、真實組織細胞性淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、淋巴母細胞性淋巴瘤(LBL)、淋巴譜系之造血性腫瘤、急性淋巴母細胞性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、濾泡性淋巴瘤、瀰漫性組織細胞性淋巴瘤(DHL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前體B-淋巴母細胞性淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤(CTLC) (亦稱為蕈樣真菌病或塞紮裡症候群(Sezary syndrome))及具有瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)之淋巴漿細胞樣淋巴瘤(LPL)；骨髓瘤，例如IgG骨髓瘤、輕鏈骨髓瘤、非分泌骨髓瘤、燜燃型骨髓瘤(亦稱為無痛骨髓瘤)、孤立性漿細胞瘤及多發性骨髓瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、多毛細胞淋巴瘤；類骨髓譜系之造血性腫瘤、間質起源之腫瘤(包含纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤)；精細胞瘤、畸形癌、中樞及周圍神經腫瘤，包含星細胞瘤、神經鞘瘤；間質起源之腫瘤，包含纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤及骨肉瘤；及其他腫瘤，包含黑色素瘤、著色性乾皮病、角質棘皮瘤、精細胞瘤、甲狀腺濾泡性癌及畸形癌、淋巴譜系之造血性腫瘤，例如T細胞及B細胞腫瘤，包含(但不限於) T細胞病症，例如T前淋巴球性白血病(T-PLL)，包含小細胞及腦回狀細胞類型；T細胞類型之大的顆粒性淋巴球白血病(LGL)；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；周邊/胸腺後T細胞淋巴瘤(多型及免疫母細胞亞型)；血管中心(鼻) T細胞淋巴瘤；頭或頸癌、腎癌、直腸癌、甲狀腺癌；急性類骨髓性淋巴瘤以及該等癌症之任何組合。本文所闡述方法亦可用於治療轉移性癌症、不可切除性癌症、難治性癌症(例如，對例如使用封阻性CTLA-4或PD-1抗體之先前免疫療法具有難治性之癌症)及/或復發性癌症。
在一些實施例中，提供治療癌症之方法，其中該等方法包括向患有癌症之受試者投與如本文所闡述於酸性條件中特異性結合huVISTA之經分離抗體。在一些實施例中，提供本文所闡述之抗體用於治療癌症之用途。
在某些實施例中，將本文所闡述之抗體投與患有針對先前治療(例如使用免疫腫瘤學或免疫療法藥物之先前治療)展現不適當反應或有所進展之癌症之患者。在一些實施例中，癌症針對先前治療具有難治性或抗性，該難治性或抗性係固有的(例如針對PD-1路徑拮抗劑之難治性)，或獲得抗性或難治性狀態。舉例而言，可單獨或與另一療法(例如抗PD-1路徑拮抗劑療法)組合將本文所闡述之抗體投與對第一療法無反應或反應不足或在治療(例如抗PD-1路徑拮抗劑治療)後具有疾病進展之受試者。在其他實施例中，向先前未接受(亦即，經治療)免疫-腫瘤藥劑(例如PD-1路徑拮抗劑)之患者投與本文所闡述之抗體。
在某些實施例中，治療受試者之癌症之方法包括首先測定受試者中腫瘤之腫瘤突變負荷(TMB)，且基於結果(例如)向發現具有高TMB之受試者投與抗VISTA抗體。
與免疫刺激劑之組合 在一些實施例中，組合投與如本文所闡述之抗體(例如本文所闡述之拮抗劑VISTA抗體)與至少一種免疫刺激劑。舉例而言，該等治療劑可在大致相同時間一起輸注或注射。在一些實施例中，依序投與抗體及至少一種免疫刺激劑。舉例而言，在一些實施例中，在至少一種免疫刺激劑之前或之後依序投與抗體，從而間隔30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘、3小時、6小時、12小時、24小時、36小時、48小時、3天、5天、7天或兩週來投與兩種治療劑。
在一些實施例中，在投與至少一種免疫刺激劑之前投與至少一個劑量、至少兩個劑量、至少三個劑量、至少五個劑量或至少十個劑量之抗體。在一些實施例中，在投與抗體之前投與至少一個劑量、至少兩個劑量、至少三個劑量、至少五個劑量或至少十個劑量之至少一種免疫刺激劑。在一些實施例中，在抗體之第一劑量之前至少一天、兩天、三天、五天或十天或一週、兩週、三週、五週、十二週或二十四週投與免疫刺激劑之最後劑量。在一些實施例中，在至少一種免疫刺激劑之第一劑量之前至少一天、兩天、三天、五天或十天或一週、兩週、三週、五週、十二週或二十四週投與抗體之最後劑量。在一些實施例中，受試者已接受或正接受使用至少一種免疫刺激劑之療法且將VISTA-ECD結合抗體添加至治療方案中。
在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括T細胞活化抑制因子之拮抗劑，而在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括T細胞活化刺激因子之激動劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括CTLA4、LAG-3、PD-1、PD-L1、半乳糖凝集(Galectin) 1、半乳糖凝集9、CEACAM-1、BTLA、CD25、CD69、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM1、TIM3、TIM4、ILT4、IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF、KIR、LAG-3、腺苷A2A受體、PI3Kδ或IDO之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括B7-1、B7-2、CD28、4-1BB (CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD27、CD40、CD40L、DR3、CD28H、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNα、STING之激動劑或類鐸受體激動劑(例如TLR2/4激動劑)。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括結合膜結合蛋白之B7家族之另一成員(例如B7-1、B7-2、B7-H2 (ICOS-L)、B7-H3、B7-H4及B7-H6)之藥劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括結合TNF受體家族成員之藥劑或結合TNF受體家族成員之共刺激或共抑制分子，該TNF受體家族成員係(例如) CD40、CD40L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137 (4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、EDA1、EDA2、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DeR3、HVEM、VEGL/TL1A、TRAMP/DR3、TNFR1、TNFβ、TNFR2、TNFα、1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY或NGFβ。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括拮抗或抑制抑制T細胞活化之細胞介素(例如IL-6、IL-10、TGFβ、VEGF)之藥劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括刺激T細胞活化之細胞介素(例如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21及IFNα)之激動劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括趨化介素(例如CXCR2、CXCR4、CCR2或CCR4)之拮抗劑。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑包括抗體。在一些實施例中，至少一種免疫刺激劑可包括疫苗，例如間皮素靶向疫苗或減毒利斯特菌(listeria)癌症疫苗(例如CRS-207)。
舉例而言，本文所闡述之抗VISTA抗體可與下列藥劑中之一或多者一起投與： (1)抑制T細胞活化之蛋白質(例如免疫檢查點抑制劑，例如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2及LAG-3、半乳糖凝集9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集-1、TIGIT、CD113、GPR56、B7-H3、B7-H4、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1、TIM-3及TIM-4)之拮抗劑(抑制劑或阻斷劑)；及/或(2)刺激T細胞活化之蛋白質(例如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB (CD137)、4-1BBL、GITR、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、CD70、CD27、CD40、DR3及CD28H)之激動劑。
可與本文所闡述之抗VISTA抗體組合用於治療癌症之實例性藥劑包含：YERVOY® (伊匹單抗)或曲美目單抗(Tremelimumab) (針對CTLA-4)、加利昔單抗(galiximab) (針對B7.1)、BMS-936558 (針對PD-1)、MK-3475 (針對PD-1)、阿替珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ® )、阿維魯單抗(Avelumab)、德瓦魯單抗(Durvalumab)、PDR001 (Novartis)、AMP224 (針對B7DC)、BMS-936559 (針對B7-H1)、MPDL3280A (針對B7-H1)、MEDI-570 (針對ICOS)、AMG557 (針對B7H2)、MGA271 (針對B7H3)、IMP321 (針對LAG-3)、BMS-663513 (針對CD137)、PF-05082566 (針對CD137)、CDX-1127 (針對CD27)、抗OX40 (Providence Health Services)、huMAbOX40L (針對OX40L)、阿塞西普(Atacicept) (針對TACI)、CP-870893 (針對CD40)、魯卡木單抗(Lucatumumab) (針對CD40)、達西珠單抗(Dacetuzumab) (針對CD40)、莫羅單抗(Muromonab)-CD3 (針對CD3)；抗GITR抗體MK4166、TRX518、Medi1873、INBRX-110、LK2-145、GWN-323、GITRL-Fc或其任一組合。
可與抗VISTA抗體組合治療癌症之其他分子包含NK細胞上抑制性受體之拮抗劑或NK細胞上活化受體之激動劑(例如KIR激動劑，例如利麗魯單抗(lirilumab))。
亦可藉由可溶性細胞介素來調控T細胞活化。在一些實施例中，抗VISTA抗體可與意欲抑制T細胞活化之細胞介素拮抗劑或刺激T細胞活化之細胞介素激動劑組合投與。舉例而言，抗VISTA抗體可與以下各項組合使用：(i)抑制T細胞活化之IgSF家族或B7家族或TNF家族蛋白質之拮抗劑(或抑制劑或阻斷劑)或抑制T細胞活化之細胞介素(例如IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF；「免疫抑制性細胞介素」)之拮抗劑，及/或(ii) IgSF家族、B7家族或TNF家族之刺激性受體或刺激T細胞活化之細胞介素的激動劑。
用於組合療法之其他藥劑包含抑制或耗竭巨噬球或單核球之藥劑，包含(但不限於) CSF-1R拮抗劑，例如CSF-1R拮抗劑抗體，包含RG7155 (WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、W013/87699、W013/119716、WO13/132044)或FPA-008 (WO11/140249；W013169264；WO14/036357)。
抗VISTA抗體亦可與抑制TGF-β信號傳導之藥劑一起投與。
可與抗VISTA抗體組合之其他藥劑包含增強腫瘤抗原呈遞之藥劑，例如樹突狀細胞疫苗、GM-CSF分泌細胞疫苗、CpG寡核苷酸及咪喹莫特(imiquimod)，或增強腫瘤細胞之免疫原性之療法(例如蒽環)。
可與抗VISTA抗體組合之其他療法包含清除或阻斷Treg細胞之療法，例如特異性結合CD25之藥劑。
可與抗VISTA抗體組合之另一療法係抑制代謝酶(例如吲哚胺雙加氧酶(IDO)、雙加氧酶、精胺酸酶或一氧化氮合成酶)之療法。
可與抗VISTA抗體一起使用之另一類藥劑包含抑制腺苷形成(例如CD73抑制劑)或抑制腺苷A2A受體之藥劑。
可與抗VISTA抗體組合治療癌症之其他療法包含逆轉/預防T細胞無效能或耗竭之療法及觸發腫瘤位點處之固有免疫活化及/或發炎之療法。
可與抗VISTA抗體組合用於治療癌症之其他療法包含阻斷IL-8之療法，例如HuMax®-IL8。
抗VISTA抗體可與一種以上免疫-腫瘤藥劑組合，且可(例如)與意欲靶向免疫路徑之多個要素之組合方法組合，例如以下各項中之一或多者：增強腫瘤抗原呈遞之療法(例如，樹突狀細胞疫苗、GM-CSF分泌細胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特)；藉由(例如)抑制CTLA-4及/或PD1/PD-L1/PD-L2路徑及/或耗盡或阻斷Treg或其他免疫抑制細胞抑制陰性免疫調控之療法；利用(例如)刺激CD-137、OX-40及/或CD40或GITR路徑及/或刺激T細胞效應功能之激動劑刺激陽性免疫調控的療法；全身性增加抗腫瘤T細胞之頻率的療法；使用(例如) CD25之拮抗劑(例如，達利珠單抗(daclizumab))或藉由離體抗CD25珠粒耗盡來耗盡或抑制Treg (例如腫瘤中之Treg)的療法；影響腫瘤中之抑制劑骨髓細胞之功能的療法；增強腫瘤細胞之免疫原性之療法(例如蒽環)；包含經遺傳修飾之細胞(例如由嵌合抗原受體修飾之細胞)的授受性T細胞或NK細胞轉移(CAR-T療法)；抑制代謝酶(例如吲哚胺加雙氧酶(IDO)、加雙氧酶、精胺酸酶或一氧化氮合成酶)之療法；逆轉/防止T細胞無反應或耗竭之療法；在腫瘤位點處觸發先天免疫活化及/或發炎之療法；投與免疫刺激性細胞介素；或阻斷免疫抑制性細胞介素。
本文所闡述之抗VISTA抗體可與以下試劑中之一或多者一起使用：接合陽性共刺激性受體之激動試劑、減弱經由抑制性受體信號傳導之阻斷劑、拮抗劑及一或多種全身性增加抗腫瘤T細胞之頻率之藥劑、克服腫瘤微環境內之不同免疫抑制性路徑(例如，阻斷抑制性受體接合(例如，PD-L1/PD-1相互作用)、耗盡或抑制Treg (例如，使用抗CD25單株抗體(例如達利珠單抗)或藉由離體抗CD25珠粒耗盡)、抑制代謝酶(例如IDO)或逆轉/防止T細胞無反應或耗竭)的藥劑及在腫瘤位點處觸發先天免疫活化及/或發炎之藥劑。
在某些實施例中，若受試者呈BRAF V600突變陽性，則將抗VISTA抗體與BRAF抑制劑一起投與受試者。
適用於本文所闡述組合療法中之PD-1拮抗劑包含(但不限於)配體、抗體(例如，單株抗體及雙特異性抗體)及多價試劑。在一實施例中，PD-1拮抗劑係融合蛋白，例如Fc融合蛋白，例如AMP-244。在一實施例中，PD-1拮抗劑係抗PD-1或抗PD-L1抗體。
實例性抗PD-1抗體係尼沃魯單抗(nivolumab) (BMS-936558)或包括WO 2006/121168中所闡述抗體17D8、2D3、4H1、5C4、7D3、5F4及4A11中之一者之CDR或可變區之抗體。在某些實施例中，抗PD-l抗體係WO2012/ 145493中所闡述之MK-3475 (蘭布魯珠單抗(Lambrolizumab))、WO 2012/145493中所闡述之AMP-514或PDR001。其他已知PD-1抗體及其他PD-1抑制劑包含闡述於WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335、WO 2011/066389、WO 2011/161699、WO 2012/145493、美國專利第7,635,757號及第8,217,149號及美國專利公開案第2009/0317368號中者。亦可使用WO2013/173223中所揭示之任一抗PD-1抗體。與該等抗體中之一者競爭結合及/或結合與該等抗體中之一者相同之PD-1表位的抗PD-1抗體亦可用於組合治療中。
在一些實施例中，可用於組合療法之抗PD-L1抗體係BMS-936559 (在WO 2007/005874及美國專利第7,943,743號中稱為12A4)或包括3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7及13G4 (其闡述於PCT公開案WO 07/005874及美國專利第7,943,743號中)之CDR或可變區之抗體。在某些實施例中，抗PD-L1抗體係MEDI4736 (亦稱為德瓦魯單抗及抗B7-H1)、MPDL3280A (亦稱為阿替珠單抗及RG7446)、MSB0010718C (亦稱為阿維魯單抗；WO2013/79174)或rHigM12B7。亦可使用揭示於WO2013/173223、WO2011/066389、WO2012/ 145493、美國專利第7,635,757號及第8,217,149號及美國公開案第2009/145493號中之任一抗PD-L1抗體。與該等抗體中之任一者競爭及/或結合與該等抗體中之任一者相同之表位的抗PD-L1抗體亦可用於組合治療中。
在某些實施例中，本發明之抗VISTA抗體可與CTLA-4拮抗劑(例如抗CTLA-4抗體)一起使用。在一實施例中，抗CTLA-4抗體係選自以下群之抗體：YERVOY® (伊匹單抗或抗體10D1，闡述於PCT公開案WO 01/14424中)、曲美目單抗(先前之替西木單抗(ticilimumab)，CP-675,206)、闡述於下列出版物中之任一者中之單株或抗CTLA-4抗體：WO 98/42752；WO 00/37504；美國專利第6,207,156號；Hurwitz等人(1998)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071；Camacho等人(2004)J. Clin. Oncology 22(145)：文摘號2505 (抗體CP-675206)；及Mokyr等人(1998)Cancer Res. 58:5301-5304。亦可使用WO2013/173223中所揭示之抗CTLA-4抗體中之任一者。
在一些實施例中，組合使用本發明之抗VISTA抗體與LAG3拮抗劑。抗LAG3抗體之實例包含含有抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5 (其闡述於美國專利公開案第US2011/0150892號、WO10/19570及WO2014/008218中)之CDR或可變區之抗體。在一實施例中，抗LAG-3抗體係BMS-986016。可使用之其他業內所認可抗LAG-3抗體包含闡述於US 2011/007023、WO08/132601及WO09/44273中之IMP731及IMP-321。與該等抗體中之任一者競爭及/或結合相同表位之抗LAG-3抗體亦可用於組合治療中。
在一些實施例中，本發明之抗VISTA抗體可與CD137 (4-1BB)激動劑(例如激動性CD137抗體)組合投與。適宜CD137抗體包含(例如)烏瑞魯單抗(urelumab)或PF-05082566 (W012/32433)。
在一些實施例中，抗VISTA抗體可與OX40激動劑(例如激動性OX40抗體)組合投與。適宜OX40抗體包含(例如) MEDI-6383、MEDI-6469或MOXR0916 (RG7888；WO06/029879)。
在一實施例中，組合投與抗VISTA抗體與CD40激動劑(例如激動性CD40抗體)。在某些實施例中，腫瘤免疫劑係CD40拮抗劑，例如拮抗性CD40抗體。適宜CD40抗體包含(例如)魯卡木單抗(HCD122)、達西珠單抗(SGN-40)、CP-870,893或Chi Lob 7/4。
在一實施例中，組合投與抗VISTA抗體與CD27激動劑(例如激動性CD27抗體)。適宜CD27抗體包含(例如)瓦利珠單抗(varlilumab，CDX-1127)。
在某些實施例中，抗VISTA抗體係與抗GITR抗體一起投與，例如具有6C8之CDR序列之抗體，例如具有如例如WO2006/105021中所闡述之6C8之CDR的人類化抗體；包括WO2011/028683中所闡述之抗GITR抗體之CDR的抗體；包括JP2008278814中所闡述之抗GITR抗體之CDR的抗體；包括WO2015/031667、WO2015/187835、WO2015/184099、WO2016/054638、WO2016/057841或WO2016/057846中所闡述之抗GITR抗體之CDR的抗體或本文所闡述或提及之其他抗GITR抗體。
在一些實施例中，組合投與抗VISTA抗體與MGA271 (針對B7H3) (WO11/109400)。
在一些實施例中，組合投與抗VISTA抗體與KIR拮抗劑(例如利麗魯單抗)。
在一些實施例中，組合投與抗VISTA抗體與IDO拮抗劑。適宜IDO拮抗劑包含(例如) INCB-024360 (WO2006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、吲哚莫德(indoximod)、NLG-919 (WO09/73620、WO09/1156652、WO11/56652、WO12/142237)或F001287。
在一些實施例中，組合投與抗VISTA抗體與類鐸受體激動劑，例如TLR2/4激動劑(例如卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin))；TLR7激動劑(例如喜通諾(Hiltonol)或咪喹莫特)；TLR7/8激動劑(例如瑞喹莫德(resiquimod))；或TLR9激動劑(例如CpG7909)。
在一實施例中，組合投與抗VISTA與TGF-β抑制劑(例如GC1008、LY2157299、TEW7197或IMC-TR1)。
在某些實施例中，將抗VISTA藥劑(例如抗體)與抗PSGL-1抗體一起投與。
其他組合療法 亦可在其他治療模式(例如手術、化學療法、輻射療法或投與生物劑，例如另一治療抗體)之前、實質上同時或之後提供本文之Ab。在一些實施例中，在選自手術、化學療法及輻射療法或其組合之療法後，癌症已復發或進展。舉例而言，在存在可存在微轉移之風險時及/或為了降低復發之風險，可以附加療法形式投與如本文所闡述之抗VISTA抗體。
為治療癌症，該等組合可與一或多種其他抗癌劑(例如化學治療劑、生長抑制劑、抗癌疫苗(例如基因療法疫苗)、抗血管生成劑及/或抗腫瘤組合物)聯合投與。可與本發明抗體組合使用之化學治療劑、生長抑制劑、抗癌疫苗、抗血管生成劑及抗腫瘤組合物之非限制性實例在本文中提供於「定義」下。
在一些實施例中，抗發炎性藥物可與該組合一起投與，例如類固醇或非類固醇抗發炎性藥物(NSAID)。在期望結合使用本文所闡述抗VISTA抗體治療或在其之前使異常增殖細胞靜止之情形下，亦可向患者投與激素及類固醇(包含合成類似物)，例如17a-炔雌醇、乙烯雌酚、睪固酮、潑尼松、氟甲睪酮(Fluoxymesterone)、丙屈他雄酮酸、睪內酯、乙酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲基潑尼松龍(Methylprednisolone)、甲基-睪固酮、潑尼松龍(Prednisolone)、安西諾隆(Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羥基孕酮、胺魯米特、雌莫司汀、乙酸甲羥孕酮(Medroxyprogesteroneacetate)、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、ZOLADEX® 。在採用本文所闡述之方法或組合物時，亦可視需要投與用於調節臨床環境中之腫瘤生長或轉移之其他藥劑，例如抗模擬物。
本文所闡述之抗體亦可與免疫原性劑(例如癌性細胞、經純化腫瘤抗原(包含重組蛋白、肽及碳水化合物分子)、細胞及經編碼免疫刺激細胞介素之基因轉染之細胞)組合(He等人(2004)J. Immunol. 173:4919-28)。可使用之腫瘤疫苗之非限制性實例包含黑色素瘤抗原之肽，例如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1及/或酪胺酸酶或經轉染以表現細胞介素GM-CSF之腫瘤細胞之肽(進一步論述於下文中)。
在人類中，一些腫瘤已展示免疫原性，例如黑色素瘤。經由VISTA抑制減小T細胞活化之臨限值，可活化宿主中之腫瘤反應，從而容許治療非免疫原性腫瘤或具有有限免疫原性之彼等。
本文所闡述之抗VISTA抗體亦可與接種疫苗方案進行組合。已設計許多用於針對腫瘤接種疫苗之實驗策略(參見Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62；Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302；Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428；Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738；亦參見 Restifo, N.及Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61,Pp.3023-3043，DeVita等人(編輯), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology，第五版)。在該等策略中之一者中，使用自體或異基因腫瘤細胞製備疫苗。該等細胞疫苗已展示在腫瘤細胞經轉導以表現GM-CSF時最有效。已展示GM-CSF係用於腫瘤疫苗接種之抗原呈遞之有效力之活化劑(Dranoff等人(1993)Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43)。
不同腫瘤中之基因表現及大規模基因表現模式之研究已產生所謂的腫瘤特異性抗原之定義(Rosenberg, S A (1999)Immunity 10: 281-7)。在許多情形下，該等腫瘤特異性抗原係表現於腫瘤及產生腫瘤之細胞中之分化抗原，例如黑色素細胞抗原gp100、MAGE抗原及Trp-2。更重要的是，許多該等抗原可展示為宿主中所發現腫瘤特異性T細胞之靶。VISTA抑制可與在腫瘤中表現之重組蛋白及/或肽之集合體聯合使用以產生針對該等蛋白質之免疫反應。該等蛋白質通常由免疫系統視為自身抗原且由此對其耐受。腫瘤抗原可包含蛋白端粒酶，其係染色體之端粒之合成所需的且在85%以上人類癌症及僅有限數量之體細胞組織中表現(Kim等人(1994)Science 266: 2011-2013)。由於改變蛋白質序列或在兩條不相關序列(亦即費城染色體(Philadelphia chromosome)中之bcr-abl)之間產生融合蛋白或來自B細胞腫瘤之受試者基因型的體細胞突變，腫瘤抗原亦可為在癌細胞中表現之「新抗原」。
其他腫瘤疫苗可包含來自參與人類癌症之病毒(例如人類乳頭瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV及HCV)及卡波西氏皰疹肉瘤病毒(Kaposi's Herpes Sarcoma Virus，KHSV))之蛋白質。可與VISTA抑制聯合使用之另一形式之腫瘤特異性抗原係自腫瘤組織自身分離之經純化熱休克蛋白(HSP)。該等熱休克蛋白含有來自腫瘤細胞之蛋白之片段且該等HSP高度有效地遞送至抗原呈遞細胞以用於引發腫瘤免疫性(Suot及Srivastava (1995)Science 269:1585-1588；Tamura等人(1997)Science 278: 117-120)。
溶瘤病毒亦可與VISTA抗體組合使用。
樹突狀細胞(DC)係可用於引發抗原特異性反應之強力抗原呈遞細胞。DC可離體產生且載有各種蛋白質及肽抗原以及腫瘤細胞提取物(Nestle等人 (1998)Nature Medicine 4: 328-332)。DC亦可藉由遺傳方式轉導以亦表現該等腫瘤抗原。DC亦直接融合至腫瘤細胞以用於免疫化目的(Kugler等人(2000)Nature Medicine 6:332-336)。作為疫苗接種之方法，DC免疫可有效地與VISTA抑制組合來活化更強效的抗腫瘤反應。
傳染性疾病治療 本文所闡述方法亦可用於治療已暴露於特定毒素或病原體之患者。因此，本發明亦涵蓋治療受試者之傳染性疾病之方法，其包括向受試者投與如本文所闡述之抗體(例如拮抗劑VISTA抗體)，從而治療受試者之傳染性疾病。類似於如上文所論述抗體調介之VISTA抑制對於腫瘤之應用，其可單獨使用或作為佐劑與疫苗組合使用以刺激對病原體、毒素及自身抗原之免疫反應。此治療方式可尤其有用之病原體之實例包含當前並無有效疫苗之病原體或習用疫苗不能完全有效之病原體。該等病原體包含(但不限於) HIV、肝炎(A、B及C型)、流行性感冒、皰疹、賈第蟲(Giardia)、瘧疾、利什曼蟲(Leishmania)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)。VISTA抑制可針對由在感染過程中呈遞改變抗原之試劑(例如HIV)之確立感染有用。
引起可由本文所闡述方法治療之感染之病原體病毒的一些實例包含HIV、肝炎(A、B或C型)、皰疹病毒(例如，VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II及CMV、艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein Barr virus))、腺病毒、流行性感冒病毒、蟲媒病毒、埃可病毒(echovirus)、鼻病毒、柯薩奇病毒(coxsackie virus)、冠狀病毒、呼吸道融合病毒、腮腺炎病毒、輪狀病毒、麻疹病毒、風疹病毒、小病毒、痘瘡病毒、HTLV病毒、登革熱病毒(dengue virus)、乳頭瘤病毒、軟疣病毒、脊髓灰白質炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒及蟲媒病毒腦炎病毒。
引起可由本文所闡述方法治療之感染之病原體細菌的一些實例包含披衣菌屬(chlamydia)、立克次體細菌(rickettsial bacteria)、分枝桿菌(mycobacteria)、葡萄球菌(staphylococci)、鏈球菌(streptococci)、肺炎球菌(pneumonococci)、腦膜炎球菌(meningococci)及淋球菌(gonococci)、克留氏菌屬(klebsiella)、變形桿菌屬(proteus)、沙雷菌屬(serratia)、假單胞菌屬(pseudomonas)、軍團病桿菌屬(legionella)、白喉(diphtheria)、沙門桿菌屬(salmonella)、桿菌、霍亂(cholera)、破傷風(tetanus)、肉毒中毒、炭疽(anthrax)、瘟疫、鉤端螺旋體病(leptospirosis)及萊姆病細菌(Lymes disease bacteria)。
引起可由本文所闡述方法治療之感染之病原體真菌的一些實例包含念珠菌屬(Candida) (白色念珠菌(albicans)、克魯斯氏念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、熱帶念珠菌(tropicalis)等)、新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)、 曲黴菌屬(Aspergillus) (煙曲黴菌(fumigatus)、黑曲黴菌(niger)等)、毛黴菌屬(Genus Mucorales) (毛黴(mucor)、犁頭黴(absidia)、根黴菌(rhizopus))、申克孢子絲菌(Sporothrix schenkii )、 皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis )、 巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis )、 粗球孢子菌(Coccidioides immitis )及莢膜組織漿菌(Histoplasma capsulatum )。
引起可由本文所闡述方法治療之感染之病原體寄生蟲的一些實例包含溶組織內阿米巴(Entamoeba histolytica )、大腸纖毛蟲(Balantidium coli )、福氏耐格裡原蟲(Naegleriafowleri )、棘狀變形蟲屬(Acanthamoeba sp. )、藍氏賈第蟲(Giardia lambia )、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium sp. )、肺泡囊蟲(Pneumocystis carinii )、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax )、焦蟲(Babesia microti )、布魯氏錐蟲(Trypanosoma brucei )、克魯氏錐蟲(Trypanosoma cruzi )、黑熱病利什曼原蟲(Leishmania donovani )、弓蟲(Toxoplasma gondii )及巴西鼠鉤蟲(Nippostrongylus brasiliensis )。
在所有上述方法中，VISTA抑制可與其他形式之免疫療法(例如本文所闡述者，例如細胞介素治療(例如干擾素、GM-CSF、G-CSF、IL-2))或可提供增強之腫瘤抗原呈遞之雙特異性抗體療法組合(例如參見Holliger (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448；Poljak (1994)Structure 2:1121-1123)。
投與途徑及載劑 在各個實施例中，可在活體內藉由各種途徑投與抗體，包含(但不限於)口服、動脈內、非經腸、鼻內、肌內、心臟內、心室內、氣管內、經頰、直腸、腹膜腔內、真皮內、局部、經皮及鞘內或另外藉由植入或吸入。可將標的組合物調配成呈固體、半固體、液體或氣態形式之製劑；包含(但不限於)錠劑、膠囊、粉劑、粒劑、軟膏、溶液、栓劑、灌腸劑、注射、吸入劑及氣溶膠。可將編碼抗體之核酸分子塗覆於金微顆粒上並藉由顆粒轟擊裝置或「基因槍」經真皮內遞送，如文獻中所闡述(例如參見Tang等人，Nature 356:152-154 (1992))。可根據預期應用來選擇適當調配物及投與途徑。
在各個實施例中，將包括抗體之組合物與各種醫藥上可接受之載劑一起提供於調配物中(例如參見Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus，第20版(2003)；Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippencott Williams and Wilkins (2004)；Kibbe等人，Handbook of Pharmaceutical Excipients，第3版，Pharmaceutical Press (2000))。可利用各種醫藥上可接受之載劑，其包含媒劑、佐劑及稀釋劑。此外，亦可利用各種醫藥上可接受之輔助物質(例如pH調節劑及緩衝劑、張力調節劑、穩定劑、潤濕劑及諸如此類)。非限制性實例性載劑包含鹽水、緩衝鹽水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其組合。
在各個實施例中，可藉由以下方式來調配包括抗體之組合物以用於注射(包含皮下投與)：將其及(若期望)習用添加劑(例如增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩定劑及防腐劑)溶解、懸浮或乳化於水性或非水性溶劑(例如植物油或其他油、合成脂肪族酸甘油酯、高級脂肪族酸之酯或丙二醇)中。在各個實施例中，可(例如)使用加壓可接受推進劑(例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮及諸如此類)調配組合物以用於吸入。在各個實施例中，亦可(例如)使用生物可降解或生物不可降解聚合物將組合物調配成持續釋放微膠囊。非限制性實例性生物可降解調配物包含聚乳酸-乙醇酸聚合物。非限制性實例性生物不可降解調配物包含聚甘油脂肪酸酯。製備該等調配物之某些方法闡述於(例如) EP 1 125 584 A1中。
亦提供包括一或多個容器之醫藥包裝及套組，每一容器含有一或多個劑量之抗體或抗體組合。在一些實施例中，提供單位劑量，其中單位劑量含有預定量之包括抗體或抗體組合且含有或不含一或多種其他藥劑之組合物。在一些實施例中，以注射用單用途預填充注射器形式供應此一單位劑量。在各個實施例中，含於單位劑量中之組合物可包括鹽水、蔗糖或諸如此類；緩衝劑，例如磷酸鹽或諸如此類；及/或在穩定及有效之Ph範圍內調配。或者，在一些實施例中，組合物可提供為凍乾粉末，其可在添加適當液體(例如無菌水)後發生重構。在一些實施例中，組合物包括一或多種抑制蛋白質聚集之物質，包含(但不限於)蔗糖及精胺酸。在一些實施例中，本發明組合物包括肝素及/或蛋白多糖。
以有效治療或預防特定適應症之量投與醫藥組合物。治療有效量通常取決於所治療受試者之體重、其身體或健康狀況、擬治療病狀之擴展性或所治療受試者之年齡。一般而言，可以約10 μg/kg體重/劑量至約100 mg/kg體重/劑量範圍之量投與抗體。在一些實施例中，可以約50 μg/kg體重/劑量至約5 mg/kg體重/劑量範圍之量投與抗體。在一些實施例中，可以約100 μg/kg體重/劑量至約10 mg/kg體重/劑量範圍之量投與抗體。在一些實施例中，可以約100 μg/kg體重/劑量至約20 mg/kg體重/劑量範圍之量投與抗體。在一些實施例中，可以約0.5 mg/kg體重/劑量至約20 mg/kg體重/劑量範圍之量投與抗體。
可視需要向受試者投與抗體組合物。投與頻率可由熟習此項技術者(例如主治醫師)基於以下考慮來確定：所治療病狀、所治療受試者之年齡、所治療病狀之嚴重程度、所治療受試者之一般健康狀態及諸如此類。在一些實施例中，向受試者投與有效劑量之抗體一或多次。在各個實施例中，每月一次、每月小於一次(例如每兩個月一次或每三個月一次)向受試者投與有效劑量之抗體。在其他實施例中，每月一次以上(例如每三週一次、每兩週一次或每週一次)投與有效劑量之抗體。在一些實施例中，每1、2、3、4或5週一次投與有效劑量之抗體。在一些實施例中，每週兩次或三次投與有效劑量之抗體。向受試者投與有效劑量之抗體至少一次。在一些實施例中，可投與有效劑量之抗體多次，包含至少一個月、至少6個月或至少一年之時段。
在某些實施例中，抗VISTA抗體及本文所論述之第二藥劑之組合可以於醫藥上可接受之載劑中之單一組合物形式同時投與，或以抗VISTA抗體及第二藥劑於醫藥上可接受之載劑中之單獨組合物形式同時投與。在一實施例中，可依序投與抗VISTA抗體及第二藥劑之組合。兩種藥劑之投與可開始於(例如)間隔30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘、3小時、6小時、12小時、24小時、36小時、48小時、3天、5天、7天或一或多週之時間，或第二藥劑之投與可開始於在已投與第一藥劑之後(例如) 30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘、3小時、6小時、12小時、24小時、36小時、48小時、3天、5天、7天或一或多週。
鑑別低 pH 結合性 hVISTA-ECD Ab 之方法 本文亦提供鑑別於酸性(或低pH)條件中特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab之方法。在某些實施例中，鑑別在pH 6.5或更小pH下特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab之方法包括使一個測試Ab或複數個測試Ab與VISTA-ECD蛋白在pH 6.5或更小pH下接觸，且選擇以10-7 M、10-8 M、10-9 M或更小之KD 結合VISTA蛋白之ECD之測試Ab。在一些實施例中，該方法係在pH 6.5下實施，而在其他實施例中，其係在pH 6.0下或在pH 5.5下或在pH 5.0下實施。在一些實施例中，VISTA-ECD蛋白係hVISTA-ECD蛋白，或包括hVISTA IgV結構域，或係包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95或SEQ ID NO:2之胺基酸20-70、35-95或35-70之多肽。在一些實施例中，多肽亦包括SEQ ID NO:2之胺基酸95-105。在一些實施例中，多肽包括SEQ ID NO: 2之胺基酸35-127或37-125。
在一些實施例中，該方法進一步包括測試測試Ab或複數個測試Ab於中性、生理或鹼性pH (例如在pH 7.0或pH 7.4下)之結合。在一些實施例中，該方法進一步包括選擇不僅在pH 6.5或更低pH下以10-7 M、10-8 M、10-9 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白且亦在pH 7.0或pH 7.4下特異性結合多肽之抗體。在一些實施例中，選擇於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)特異性結合VISTA-ECD蛋白且亦於中性及/或鹼性pH以類似親和力特異性結合VISTA-ECD蛋白之測試Ab (亦即其係「泛結合劑」)。舉例而言，一些該等Ab可在pH 6.5下及在pH 7.0或pH 7.4下(在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)以10-7 M、10-8 M、10-9 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白，從而pH 6.5下之KD 在pH 7.0下之KD 之1.5倍內。
可選擇某些於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)以高於中性或鹼性pH之親和力特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab (「pH敏感性結合劑」或「pH敏感性Ab」)。舉例而言，在一些實施例中，Ab可以10-8 M或更小之KD 在pH 6.5下及以大於10-8 M之KD 在pH 7.0或pH 7.4下結合VISTA-ECD蛋白。在一些該等實施例中，Ab可在pH 6.5下以10-8 M或更小之KD 及在pH 7.0或pH 7.4下以係pH 6.5下1.5倍以上之KD 結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，選擇在pH 6.5下以低於pH 7.0或pH 7.4下至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍或5000倍之KD (在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)特異性結合VISTA-ECD蛋白之pH敏感性Ab。舉例而言，在一些情形下，選擇在pH 6.0下以小於pH 7.0或pH 7.4或更高pH至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍或5000倍之KD (在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
在某些實施例中，選擇於酸性條件中以低於中性、生理或鹼性條件之k解離 特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在某些實施例中，選擇於酸性條件中在pH 6.5下以低於pH 7.0或pH 7.4下之k解離 至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。舉例而言，在一些實施例中，選擇在pH 6.0下以低於pH 7.0或pH 7.4至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
在某些實施例中，選擇於酸性條件中以高於中性或鹼性條件之k締合 結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在某些實施例中，選擇於酸性條件中在pH 6.5下以低於pH 7.0或pH 7.4下之k締合 至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。舉例而言，在一些實施例中，選擇在pH 6.0下以低於pH 7.0或pH 7.4至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
改良 VISTA-ECD 結合 Ab 之 pH 敏感性之方法 可改造結合VISTA-ECD蛋白但在pH 6.5或更小pH下並不結合或在pH 6.5或更小pH下並不以高親和力結合之Ab以增加其在pH 6.5或更低pH下之結合親和力。舉例而言，可(例如)藉由取代一或多個胺基酸殘基來使Ab上之互補位發生突變。舉例而言，在一些實施例中，Ab重鏈或輕鏈中作為VISTA-ECD接觸殘基之1至8 (例如1至6、1至4、1至3、1至2或1)個胺基酸殘基(例如一或多個CDR中之殘基)可經不同胺基酸殘基代替。然後，可測試突變Ab在pH 6.5或更小pH下與VISTA-ECD蛋白之結合且可選擇以高於親代抗體之親和力結合之Ab物質。若期望，可重複上述步驟，從而對Ab實施兩輪或更多輪誘變及選擇且選擇於酸性pH之最高親和力結合劑。在一些實施例中，該等選擇可改良所得抗體較其親代之抗腫瘤效能。
上述選擇方法亦可經設計以遵循VISTA-ECD蛋白特異性結合抗體之前述一般選擇。亦即，在某些實施例中，選擇在pH 6.5下以10-8 M或更小之KD 結合VISTA蛋白之ECD之經改良Ab。在一些實施例中，在pH 6.0下或在pH 5.5下或在pH 5.0下而非在pH 6.5下實施選擇。在一些實施例中，用於選擇製程之VISTA-ECD蛋白係完整hVISTA-ECD蛋白，或係包括hVISTA IgV結構域之多肽，或係包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95或SEQ ID NO:2之胺基酸20-70、35-95或35-70之多肽。在一些實施例中，多肽亦包括SEQ ID NO:2之胺基酸95-105。在一些實施例中，使用包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35-127之多肽。
在一些實施例中，改良VISTA抗體於酸性pH與VISTA ECD之結合之方法包括增加一或多個VH或VL CDR (例如VH CDR1、CDR2及CDR3或僅VH CDR1及CDR3)中之麩胺酸、天門冬胺酸及/或組胺酸殘基之數量。在某些實施例中，該方法包括增加接觸hVISTA之抗體區域中之麩胺酸、天門冬胺酸及/或組胺酸殘基之數量，如(例如)藉由結晶學所測定。
在一些實施例中，該方法進一步包括測試所選Ab於中性、鹼性或生理pH (例如在pH 7.0或7.4下)之結合。在一些實施例中，該方法進一步包括選擇不僅在pH 6.5或更低pH下以10-8 M或更小之KD 結合VISTA-ECD蛋白且亦在pH 7.0或7.4下特異性結合多肽之抗體。在一些該等實施例中，選擇於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)特異性結合VISTA-ECD蛋白且亦於中性及/或鹼性或生理pH以類似親和力特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab (亦即其係「泛結合劑」)。舉例而言，一些該等Ab可以10-8 M或更小之KD 在pH 6.5及pH 7.0下(在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合VISTA-ECD蛋白，從而pH 6.5下之KD 在pH 7.0下或pH 7.4下之KD 之1.5倍內。
可選擇某些於酸性條件中(例如在pH 6.5或更小pH下)以高於中性、生理或鹼性pH之親和力特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab (「pH敏感性結合劑」或「pH敏感性Ab」)。舉例而言，在一些實施例中，Ab可以10-8 M或更小之KD 在pH 6.5下及以大於10-8 M之KD 在pH 7.0下結合VISTA-ECD蛋白。在一些該等實施例中，Ab可在pH 6.5下以10-8 M或更小之KD 及在pH 7.0下以係pH 6.5下1.5倍以上之KD 結合VISTA-ECD蛋白。在某些實施例中，選擇pH敏感性Ab，其在pH 6.5下以低於pH 7.0或pH 7.4下至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍或5000倍之KD (在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)特異性結合VISTA-ECD蛋白。舉例而言，在一些情形下，選擇在pH 6.0下以小於pH 7.0或pH 7.4或更高pH至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、300倍、500倍、1000倍或5000倍之KD (在恆定溫度下，例如在25℃或37℃下)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
在某些實施例中，該方法進一步包括在兩種pH值下測定k解離 。在一些該等實施例中，選擇於酸性條件中以低於中性、生理或鹼性條件之k解離 特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在某些實施例中，選擇於酸性條件中在pH 6.5下以低於pH 7.0或pH 7.4下之k解離 至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。舉例而言，在一些實施例中，選擇在pH 6.0下以低於pH 7.0至少1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k解離 (如例如在25℃下或在37℃所量測)特異性結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
在某些實施例中，該方法進一步包括在兩種pH值下測定k締合 。在一些該等實施例中，選擇於酸性條件中以高於中性、生理或鹼性條件之k締合 結合VISTA-ECD蛋白之Ab。在某些實施例中，選擇於酸性條件中在pH 6.5下以低於pH 7.0或pH 7.4下之k締合 至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。舉例而言，在一些實施例中，選擇在pH 6.0下以低於pH 7.0或pH 7.4至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍或100倍之k締合 (如例如在25℃下或在37℃所量測)結合VISTA-ECD蛋白之Ab。
可藉由以下方式來鑑別相對於中性或生理pH於酸性pH優先結合huVISTA之抗體：正向篩選於酸性pH (例如pH 6.0或6.5)結合之VISTA抗體或Fab或scFv之庫，且負向篩選於中性pH (例如pH 7.0)或生理pH (例如pH 7.4)並不結合之庫。庫可富集麩胺酸、天門冬胺酸及組胺酸殘基以(例如)選擇可帶電且更可能於酸性pH結合VISTA之結合結構域。該篩選可涉及於酸性pH之正向選擇及於中性或生理pH之負向選擇。正向及負向選擇可交替進行。
或者，可改造於中性及酸性pH結合VISTA之抗體以於中性pH並不結合且維持或甚至增強於酸性pH之結合。舉例而言，可藉由取代(例如)一或多個CDR中之VH及視情況VL胺基酸殘基且篩選庫(藉由正向選擇於酸性pH結合hVISTA之抗體且負向選擇於中性(或生理) pH不結合VISTA之抗體)來產生庫。可使用類似方法來改造具有期望pH選擇性、pH依賴性或pH獨立性VISTA結合特徵之VISTA結合抗體。
具體實例性實施例 本發明之其他實施例包含下列各項： 1. 一種經分離抗體，其於酸性條件中特異性結合人類VISTA (hVISTA)。 2. 如實施例1之經分離抗體，其於酸性條件中特異性結合hVISTA，但於中性或生理條件中並不顯著結合。 3. 如實施例1或2之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之KD 至少10倍之KD 結合hVISTA。 4. 如實施例1至3中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之KD 至少100倍之KD 結合hVISTA。 5. 如實施例1至4中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之KD 至少1000倍之KD 結合hVISTA。 6. 如實施例1至5中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以10-5 M或更大之KD 結合hVISTA。 7. 如實施例1至6中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以10-4 M或更大之KD 結合hVISTA。 8. 如實施例1至7中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以10-3 M或更大之KD 結合hVISTA。 9. 如實施例1至8中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA。 10.   如實施例1至9中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-8 M或更小之KD 結合hVISTA。 11.   如實施例1至10中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-9 M或更小之KD 結合hVISTA。 12.   如實施例1至11中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-7 或更小之KD 結合hVISTA且於中性或生理條件中以10-4 或更大之KD 結合hVISTA。 13.   如實施例1至12中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-7 或更小之KD 結合hVISTA且於中性或生理條件中以10-5 或更大之KD 結合hVISTA。 14.   如實施例1至13中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之k解離 至少5倍之k解離 結合hVISTA。 15.   如實施例1至14中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之k解離 至少10倍之k解離 結合hVISTA。 16.   如實施例1至15中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之k解離 至少50倍之k解離 結合hVISTA。 17.   如實施例1至16中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以低於中性或生理條件中之k解離 至少100倍之k解離 結合hVISTA。 18.   如實施例1至17中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以7 × 10-3 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 19.   如實施例1至18中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以5 × 10-3 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 20.   如實施例1至19中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以3 × 10-3 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 21.   如實施例1至20中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-3 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 22.   如實施例1至21中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以7 × 10-4 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 23.   如實施例1至22中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以5 × 10-4 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 24.   如實施例1至23中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以3 × 10-4 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 25.   如實施例1至24中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-4 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 26.   如實施例1至25中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以7 × 10-5 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 27.   如實施例1至26中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以5 × 10-5 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 28.   如實施例1至21中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以3 × 10-5 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 29.   如實施例1至28中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-5 s-1 或更小之k解離 結合hVISTA。 30.   如實施例1至29中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以10-3 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 31.   如實施例1至30中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以3 × 10-3 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 32.   如實施例1至31中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以5 × 10-3 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 33.   如實施例1至32中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以7 × 10-3 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 34.   如實施例1至33中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 35.   如實施例1至34中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以3 × 10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 36.   如實施例1至35中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以5 × 10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 37.   如實施例1至36中任一項之經分離抗體，其中該抗體於中性或生理條件中以7 × 10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 38.   如實施例1至37中任一項之經分離抗體，其中該抗體與hVISTA於中性或生理條件中之結合經由例如表面電漿共振(SPR)無法檢測到。 39.   如實施例1至38中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以5 × 10-3 s-1 或更小之k解離 且於中性或生理條件中以7 × 10-3 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 40.   如實施例1至39中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-4 s-1 或更小之k解離 且於中性或生理條件中以10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 41.   如實施例1至40中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-8 M或更小之KD 及5 × 10-3 s-1 或更小之k解離 且於中性或生理條件中以10-6 M或更大之KD 及7 × 10-3 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 42.   如實施例1至41中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-8 M或更小之KD 及3 × 10-3 s-1 或更小之k解離 且於中性或生理條件中以10-6 M或更大之KD 及10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 43.   如實施例1至42中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-12 至10-8 M之KD 及10-4 至5 × 10-3 s-1 之k解離 且於中性或生理條件中以10-7 至10-4 M之KD 及3 × 10-3 至10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA。 44.   如實施例1至43中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-12 至10-8 M之KD 及10-4 至5 × 10-3 s-1 之k解離 且於中性或生理條件中以10-7 至10-4 M之KD 及3 × 10-3 至10-2 s-1 或更大之k解離 結合hVISTA；且其中該抗體以10-7 或更小之KD 結合食蟹獼猴VISTA。 45.   如實施例1至44中任一項之經分離抗體，其中該抗體以在pH 6.9下低於在pH 7.4下至少10倍之KD 及/或在pH 6.5下低於在pH 7.4下至少100倍及在pH 6.0下低於在pH 7.4下至少1000倍之KD 結合hVISTA。 46.   如實施例1至45中任一項之經分離抗體，其中該抗體結合食蟹獼猴(cyno) VISTA。 47.   如實施例46之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中相對於生理條件以較高親和力結合食蟹獼猴VISTA。 48.   如實施例45至47中任一項之經分離抗體，其中該抗體於酸性條件中以10-8 或更小之KD 及/或10-2 或更小之k解離 且於生理條件中以10-6 或更大之KD 及/或10-2 或更大之k解離 結合食蟹獼猴VISTA。 49.   如實施例1至48中任一項之經分離抗體，其中酸性條件係pH為6.5或更小之條件。 50.   如實施例1至49中任一項之經分離抗體，其中酸性條件係pH為6.0至6.5之條件。 51.   如實施例1至50中任一項之經分離抗體，其中中性條件係pH為7.0之條件。 52.   如實施例1至51中任一項之經分離抗體，其中生理條件係pH為7.35至7.45之條件。 53.   如實施例1至52中任一項之經分離抗體，其中生理條件係pH為7.4之條件。 54.   如實施例1至53中任一項之經分離抗體，其中該抗體抑制hVISTA與人類T細胞、例如人類CD4+ T細胞之結合(拮抗劑抗體)。 55.   如實施例54之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中抑制hVISTA與人類T細胞之結合。 56.   如實施例1至55中任一項之經分離抗體，其中該抗體抑制hVISTA與人類PSGL-1 (huPSGL-1)之結合及/或與huPSGL1競爭結合hVISTA。 57.   如實施例56之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中抑制hVISTA與huPSGL-1之結合。 58.   如實施例1至57中任一項之經分離抗體，其中該抗體抑制hVISTA與硫酸乙醯肝素蛋白多醣之結合。 59.   如實施例58之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中抑制hVISTA與硫酸乙醯肝素蛋白多醣之結合。 60.   如實施例55、57或59中任一項之經分離抗體，其中pH小於pH 7.0之條件係受試者中之腫瘤或pH小於pH 7.0之任一患病區域且其中期望免疫刺激。 61.   如實施例1至60中任一項之經分離抗體，其中該抗體刺激T細胞活化，如藉由例如以下各項所證實：增強T細胞增殖；增強IFN-γ自T細胞之產生；及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導。 62.   如實施例61之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中刺激T細胞活化。 63.   如實施例1至62中任一項之經分離抗體，其中該抗體減小VISTA介導之細胞-細胞黏附。 64.   如實施例1至53中任一項之經分離抗體，其中該抗體刺激VISTA之活性(激動劑抗體)。 65.   如實施例1至53及64中任一項之經分離抗體，其中該抗體刺激hVISTA與人類T細胞、例如人類CD4+ T細胞之結合。 66.   如實施例65之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中刺激hVISTA與人類T細胞之結合。 67.   如實施例1至53及64至66中任一項之經分離抗體，其中該抗體刺激hVISTA與huPSGL-1之結合。 68.   如實施例67之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中刺激hVISTA與huPSGL-1之結合。 69.   如實施例1至53及64至68中任一項之經分離抗體，其中該抗體刺激hVISTA與硫酸乙醯肝素蛋白多醣之結合。 70.   如實施例69之經分離抗體，其中該抗體在pH小於pH 7.0之條件中刺激hVISTA與硫酸乙醯肝素蛋白多醣之結合。 71.   如實施例66、68及70中任一項之經分離抗體，其中pH小於pH 7.0之條件係受試者中之自體免疫(例如類風濕性關節炎及狼瘡)環境、發炎部位或pH小於pH 7.0之任一患病區域且其中期望免疫抑制。 72.   如實施例1至71中任一項之經分離抗體，其中該抗體在食蟹獼猴中具有至少100、200、300、400或500天之平均滯留時間(MRT)。 73.   如實施例1至72中任一項之經分離抗體，其中該抗體並不顯著結合投與其之受試者之周邊血中之VISTA陽性細胞、例如嗜中性球。 74.   如實施例1至73中任一項之經分離抗體，其中該抗體並不顯著耗竭投與其之受試者之周邊血中之VISTA陽性細胞、例如嗜中性球。 75.   如實施例1至74中任一項之經分離抗體，其中該抗體已經改造以於酸性pH結合hVISTA，但於中性或生理pH並不結合。 76.   如實施例75之經分離抗體，其中該抗體已藉由使用麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基代替hVISTA結合抗體之VH CDR1、CDR2及/或CDR3中之1至8個胺基酸來進行改造。 77.   如實施例1至63及72至76中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061029或其變體之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，該變體相對於抗體P1-061029在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至6或1至8個胺基酸差異，其中至多1、2或3個胺基酸變化存在於任一CDR中；或替代地，其中該抗體包括P1-061015或其變體之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，該變體相對於抗體P1-061015在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至6或1至8個胺基酸差異，其中至多1、2或3個胺基酸變化存在於任一CDR中。 78.   如實施例77之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061029或其變體之VH CDR1、CDR2及CDR3，該變體相對於P1-061029在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至6或1至8個胺基酸差異；或替代地，其中該抗體包括P1-061015或其變體之VH CDR1、CDR2及CDR3，該變體相對於P1-061015在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至6或1至8個胺基酸差異。 79.   如實施例77或78之經分離抗體，其中胺基酸變化係麩胺酸殘基(E)、天門冬胺酸殘基(D)或組胺酸殘基(H)之取代。 80.   如實施例77至79中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括： -包括GFTX1 X2 DX3 AMH之CDR1，其中X1 係D或L，X2 係E或D且X3 係E或Y (SEQ ID NO: 563)； -包括GIX4 WX5 SX6 X7 IGYADSVKG之CDR2，其中X4 係D或N，X5 係D或N，X6 係D、E、H或A且X7 係D、E、H或N (SEQ ID NO: 564)；及/或 -包括VPGYSX8 GWIDAX9 DX10 之CDR3，其中X8 係E、H或G，X9 係E、D或F且X10 係D、E或V (SEQ ID NO: 565)。 81.   如實施例80之抗體，其中該抗體包括： -包括GFTX1 X2 DX3 AMH之CDR1，其中X1 係D或L，X2 係E或D且X3 係E或Y (SEQ ID NO: 563)； -包括GIX4 WX5 SX6 X7 IGYADSVKG之CDR2，其中X4 係D或N，X5 係D或N，X6 係D、E、H或A且X7 係D、E、H或N (SEQ ID NO: 564)；及 -包括VPGYSX8 GWIDAX9 DX10 之CDR3，其中X8 係E、H或G，X9 係E、D或F且X10 係D、E或V (SEQ ID NO: 565)。 82.   如實施例80或81之經分離抗體，其中X3 係E且X9 係E。 83.   如實施例80至82中任一項之經分離抗體，其中X2 係E，X7 係E，及/或X8 係H。 84.   如實施例83之經分離抗體，其中滿足下列三個條件中之兩者或更多者：X2 係E，X7 係E，及/或X8 係H。 85.   如實施例84之經分離抗體，其中X2 係E，X7 係E且X8 係H。 86.   如實施例80至85中任一項之經分離抗體，其中X6 係E。 87.   如實施例80至85中任一項之經分離抗體，其中X6 係A。 88.   如實施例80至86中任一項之經分離抗體，其中X1 係L，X4 係N，X5 係N及/或X10 係V。 89.   如實施例88之經分離抗體，其中滿足下列4個條件中之兩者或更多者：X1 係L，X4 係N，X5 係N及/或X10 係V。 90.   如實施例89之經分離抗體，其中滿足下列4個條件中之三者或更多者：X1 係L，X4 係N，X5 係N及/或X10 係V。 91.   如實施例90之經分離抗體，其中X1 係L，X4 係N，X5 係N及/或X10 係V。 92.   如實施例80至91中任一項之經分離抗體，其中X10 係D。 93.   如實施例80至92中任一項之經分離抗體，其中X9 係E。 94.   如實施例80至93中任一項之經分離抗體，其中X2 係E，X4 係D及/或X6 係E。 95.   如實施例94之經分離抗體，其中下列條件中之兩者或更多者：X2 係E，X4 係D及/或X6 係E。 96.   如實施例95之經分離抗體，其中X2 係E，X4 係D且X6 係E。 97.   如實施例80至96中任一項之經分離抗體，其中X1 係L，X3係Y，X5 係N，X7 係N及/或X8 係G。 98.   如實施例97之經分離抗體，其中滿足下列條件中之兩者或更多者：X1 係L，X3係Y，X5 係N，X7 係N及/或X8 係G。 99.   如實施例98之經分離抗體，其中滿足下列條件中之三者或更多者：X1 係L，X3係Y，X5 係N，X7 係N及/或X8 係G。 100.  如實施例99之經分離抗體，其中滿足下列條件中之四者或更多者：X1 係L，X3係Y，X5 係N，X7 係N及/或X8 係G。 101.  如實施例100之經分離抗體，其中X1 係L，X3係Y，X5 係N，X7 係N且X8 係G。 102.  如實施例77至101中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G或P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S、P1-068748_D57K_D100S、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及/或CDR3。 103.  如實施例102之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3。 104.  如實施例77至103中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061029或P1-061015之VL之VL CDR1、CDR2及CDR3。 105.  如實施例1至63及72至104中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有與P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S、或P1-068748_D57K_D100S之胺基酸序列至少90%、95%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列之VH； 或 包括P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH，該VH由1、2、3、4或5個胺基酸取代修飾、由1、2、3、4或5個保守胺基酸取代修飾或(在P1-061029或一種其子代之情形下)由K16R及T84A取代中之一或兩者修飾。 106.  如實施例1至63及72至105中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G或P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列之VH；或 包括P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH，該VH (在P1-061029或其子代之情形下)由K16R及T84A取代中之一或兩者修飾。 107.  如實施例1至106中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有與P1-061029之序列至少90%、95%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列之VL。 108.  如實施例107之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061029之VL。 109.  如實施例1至63及72至76中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015或其變體之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，該變體相對於P1-061015在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至6或1至8個胺基酸差異，其中至多1、2或3個胺基酸變化存在於任一CDR中。 110.  如實施例109之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015或其變體之VH CDR1、CDR2及CDR3，該變體相對於該P1-061015在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至6個胺基酸差異，其中至多1、2或3個胺基酸變化存在於任一CDR中。 111.  如實施例108或109之經分離抗體，其中胺基酸變化係麩胺酸殘基(E)、天門冬胺酸殘基(D)或組胺酸殘基(H)之取代。 112.  如實施例108至111中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括 -包括GFTFX1 X2 X3 MH之CDR1，其中X1 係E、D、H或S；X2 係H或Y；且X3 係D或A； -包括X4 X5 WX6 DGSX7 X8 X9 X10 ADSVKG之CDR2，其中X4 係E、H或I；X5 係D或I；X6 係D或Y；X7 係D或N；X8 係D、H或K；X9 係D、H或Y；且X10 係E或Y；及/或 -包括DX11 X12 FYX13 X14 YYDFX15 之CDR3，其中X11 係E或S；X12 係E或G；X13 係D、E或S；X14 係D或S；且X15 係D、E或Y。 113.  如實施例108至112中任一項之抗體，其中該抗體包括 -包括GFTFX1 X2 X3 MH之CDR1，其中X1 係E、D、H或S；X2 係H或Y；且X3 係D或A； -包括X4 X5 WX6 DGSX7 X8 X9 X10 ADSVKG之CDR2，其中X4 係E、H或I；X5 係D或I；X6 係D或Y；X7 係D或N；X8 係D、H或K；X9 係D、H或Y；且X10 係E或Y；及 -包括DX11 X12 FYX13 X14 YYDFX15 之CDR3，其中X11 係E或S；X12 係E或G；X13 係D、E或S；X14 係D或S；且X15 係D、E或Y。 114.  如實施例98至102中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及/或CDR3。 115.  如實施例114之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3。 116.  如實施例98至115中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015之VL之VL CDR1、CDR2及CDR3。 117.  如實施例98至116中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有與P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752或P1-068754之胺基酸序列至少90%、95%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列之VH;或 其VH包括P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列，該胺基酸序列由1、2、3、4或5個胺基酸取代修飾或由1、2、3、4或5個保守胺基酸取代修飾。 118.  如實施例98至117中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列之VH;或 其VH包括P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列，該胺基酸序列由1、2、3、4或5個胺基酸取代修飾或由1、2、3、4或5個保守胺基酸取代修飾。 119.  如實施例98至118中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有與P1-061015之序列至少90%、95%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列之VL。 120.  如實施例119之經分離抗體，其中該抗體包括含有P1-061015之胺基酸序列之VL，該VL視情況由T85V取代修飾。 121.  如實施例1至120中任一項之經分離抗體，其中該抗體在hVISTA之富組胺酸區域或其附近、例如富組胺酸ß褶板延伸處進行結合。 122.  如實施例121之經分離抗體，其中該抗體在pH為6.0至6.5之條件中在hVISTA之富組胺酸區域或其附近、例如富組胺酸ß褶板延伸處進行結合。 123.  如實施例1至122中任一項之經分離抗體，其中該抗體與一或多種本文所闡述例如包括以下各項之VH及VL之抗體競爭或交叉競爭結合hVISTA：P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-069077、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G或P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)，如例如藉由實例中所闡述之競爭性生物層干涉術(BLI)表位分類分析所測定。 124.  如實施例1至123中任一項之經分離抗體，其中該抗體分類(bins)至表位組A，例如藉由實例中所闡述之競爭性生物層干涉術(BLI)表位分類分析所測定。 125.  如實施例1至124中任一項之經分離抗體，其中該抗體並不顯著結合因下列胺基酸殘基中之一或多者已發生突變而修飾之hVISTA：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127，例如如藉由實例中所闡述之酵母突變分析所測定。 126.  一種經分離抗體，其結合由SEQ ID NO: 1或2組成之hVISTA，但不顯著結合因下列胺基酸殘基中之一或多者已發生突變而修飾之hVISTA：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127。 127.  如實施例1至126中任一項之經分離抗體，其中該抗體不顯著結合因下列胺基酸殘基中之2、3、4、5或更多者已發生突變而修飾之hVISTA：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127。 128.  如實施例125至127中任一項之經分離抗體，其中該抗體並不結合因下列殘基中之一或多者已突變為表22中所展示相應殘基中之一者而修飾之hVISTA：H68、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127。 129.  一種經分離抗體(Ab)，其在酸性條件下、例如在pH 6.5下結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)，其中該Ab抑制hVISTA與(a) T細胞及/或(b) PSGL-1之間之相互作用，且其中該Ab經由本文所闡述抗體、例如P1-061015、P1-068744、P1-068748、P1-061029、P1-068761或P1-068767之一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或所有)能量上重要之接觸殘基接觸hVISTA，例如一或多個選自下列能量上重要之接觸殘基之群中之一者的胺基酸：(i) V34、T35、Y37、K38、T39、Y41、S52、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127；(ii) V34、T35、Y37、T39、Y41、S52、R54、F62、L65、H66、H68、L115、V117、I119、R120、H121、H122、S124、E125；或(iii) Y37、T39、R54、F62、H66、L115或V117，如例如使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定，且其中編號係成熟hVISTA之編號。 130.  一種經分離Ab，其於酸性條件下、例如在pH 6.5下結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)，其中該Ab抑制hVISTA與(a) T細胞及/或(b)PSGL-1之間之相互作用，且其中該Ab經由一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124接觸hVISTA，如例如使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定，且其中編號係成熟hVISTA之編號。 131.  一種經分離Ab，其於酸性條件下、例如在pH 6.5下結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)，其中該Ab抑制hVISTA與(a) T細胞及/或(b)PSGL-1之間之相互作用，且其中該Ab經由P1-061015、P1-068744、P1-068748、P1-061029、P1-068761或P1-068767或本文所闡述之其他抗體之一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或全部)能量上重要之接觸殘基接觸hVISTA，如例如使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定，且其中編號係成熟hVISTA之編號。 132.  如實施例1至131中任一項之經分離Ab，其中該Ab結合hVISTA之FG環。 133.  如實施例1至132中任一項之經分離Ab，其中該Ab結合hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，如例如藉由如例如在實例中所闡述之結晶學所測定。 134.  如實施例1至133中任一項之經分離Ab，其中該Ab經由例如氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及H123 (組胺酸三聯體) (例如4.0埃(Å)或更小之距離)，如例如藉由如例如在實例中所闡述之結晶學所測定。 135.  如實施例1至134中任一項之經分離Ab，其中該Ab經由VH CDR1及VH CDR3接觸hVISTA，且並不經由例如VH CDR2及/或經由VL CDR顯著結合。 136.  如實施例1至135中任一項之經分離Ab，其中該抗體之胺基酸殘基110及112分別與hVISTA之H121及H122形成氫鍵，且視情況，其中該抗體之胺基酸殘基與hVISTA之H123形成氫鍵。 137.  如實施例1至136中任一項之經分離Ab，其中該Ab經由至少一個或多個位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA。 138.  如實施例1至137中任一項之經分離Ab，其中該Ab於中性或生理pH並不顯著結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)。 139.  如實施例1至138中任一項之經分離Ab，其中該Ab於酸性條件下、例如在pH 6.5下以低於其於中性或生理pH結合hVISTA之KD 及/或k解離 至少10倍、100倍或1000倍之KD (或k解離 )結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)。 140.  如實施例1至139中任一項之經分離Ab，其中該Ab於中性或生理pH並不顯著結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)。 141.  一種經分離抗體(Ab)，其於酸性條件下、例如在pH 6.5下結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)，其中該Ab： ○ 抑制hVISTA與(a) T細胞及/或(b)PSGL-1之間之相互作用(例如抑制具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之H153及H154與PSGL-1酪胺酸Y46及Y48之間之相互作用)； ○ 藉由例如增強T細胞增殖、增強IFN-γ自T細胞之產生及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導來增強T細胞活化； ○ 經由關於SEQ ID NO: 2之一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124 (表21)接觸hVISTA，如例如使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定；且其中編號係成熟hVISTA之編號； ○ 結合hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，如例如藉由例如在實例中所闡述之結晶學所測定； ○ 經由例如氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及/或H123 (4.0埃(Å)或更小之距離)，如例如藉由如例如在實例中所闡述之結晶學所測定； ○ 結合具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之區域1：57 LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566)；區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567)；及區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568)，且視情況其中與區域2之結合最強，如藉由如實例中所闡述之MS-HDX所測定； ○ 與本文所闡述之一或多種抗體、例如P1-061015、P1-068744、P1-068748、P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4競爭結合hVISTA (雙向競爭)； ○ 經由位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之至少一個或多個麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA； ○ 在具有MC38腫瘤之人類VISTA基因嵌入小鼠中，與肺、肝及脾組織相比或與血液相比，較佳累積於腫瘤組織中； ○ 在投與抗體(例如藉由投與具有PET示蹤劑之抗體)之患者中，與肺、肝及脾組織相比或與血液相比，較佳累積於腫瘤中；及/或 ○ 具有低靶介導之藥物體內動向，從而得到至少100、200、300、400、500、600或700小時之平均滯留時間(MRT)，如例如如實例中所闡述來量測。 142.  一種經分離抗體(Ab)，其於酸性條件下、例如在pH 6.5下以低於其於中性或生理pH結合hVISTA之KD 或k解離 至少10倍、100倍或1000倍之KD (及/或k解離 )結合hVISTA (如例如藉由實例中所闡述分析中之一者所量測)，其中該Ab： ○ 抑制hVISTA與(a) T細胞及/或(b)PSGL-1之間之相互作用(例如抑制具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之H153及H154與PSGL-1酪胺酸Y46及Y48之間之相互作用)； ○ 藉由例如增強T細胞增殖、增強IFN-γ自T細胞之產生及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導來增強T細胞活化； ○ 經由關於SEQ ID NO: 2之一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124 (表21)接觸hVISTA，如例如使用實例中所闡述之酵母表面展示及NGS分析所測定；且其中編號係成熟hVISTA之編號； ○ 結合hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，如例如藉由例如在實例中所闡述之結晶學所測定； ○ 經由例如氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及/或H123 (4.0埃(Å)或更小之距離)，如例如藉由如例如在實例中所闡述之結晶學所測定； ○ 結合具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之區域1：57 LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566)；區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567)；及區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568)，且視情況其中與區域2之結合最強，如藉由如實例中所闡述之MS-HDX所測定； ○ 與本文所闡述之一或多種抗體、例如P1-061015、P1-068744、P1-068748、P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4競爭結合hVISTA (雙向競爭)； ○ 經由位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之至少一個或多個麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA；及/或 ○ 具有低靶介導之藥物體內動向，從而得到至少100、200、300、400、500、600或700小時之平均滯留時間(MRT)，如例如如實例中所闡述來量測。 143.  如實施例1至142中任一項之經分離抗體，其中該抗體具有介於6.5與6.8之間之等電點(pI)，如例如藉由icIEF所量測。 144.  如實施例1至143中任一項之經分離抗體，其中該抗體展現低聚集，例如類似或低於抗體‘029、‘761或‘767 (分別係P1-061015、P068744、P1-068748、P1-061029、P1-068761或P1-068767)之聚集，例如如在實例中所測定。 145.  如實施例1至144中任一項之經分離抗體，其中該抗體展現類似或低於‘029、‘761或‘767之黏度，例如如在實例中所測定。 146.  如實施例1至145中任一項之經分離抗體，其中該抗體展現類似或低於‘029、‘761或‘767之流體動力學半徑，例如如在實例中所測定。 147.  如實施例1至146中任一項之經分離抗體，其中該抗體展現類似或高於‘029、‘761或‘767之熔融溫度(Tm1)，例如如在實例中所測定。 148.  如實施例1至147中任一項之經分離抗體，其中該抗體展現類似或低於‘029、‘761或‘767之高分子量物質之量，例如如在實例中所測定。 149.  如實施例1至148中任一項之經分離抗體，其係IgG抗體。 150.  如實施例149之經分離抗體，其係IgG1、IgG2或IgG4抗體(視情況具有S228P之IgG4)。 151.  如實施例1至150中任一項之經分離抗體，其中該抗體係無效應(effectorless)抗體，例如缺乏ADCC及/或CDC；及/或並不顯著結合一或多種FcγR、例如FcγRIII之抗體。 152.  如實施例151之經分離抗體，其中恆定區包括野生型重鏈恆定區中之1至5個突變，該等突變相對於該相應野生型重鏈恆定區可減小該抗體之效應功能及/或結合一或多種FcγR、例如FcγRIII之能力。 153.  如實施例1至152中任一項之經分離抗體，其中該抗體之該恆定區係IgG1.3、IgG1.1或係具有P238K取代之IgG1 (例如IgG1.P238K)。 154.  如實施例1至150中任一項之經分離抗體，其中該抗體具有效應功能及/或結合一或多種FcγR、例如FcγRIII。 155.  如實施例154之經分離抗體，其中該抗體係無岩藻醣基化的(例如無岩藻醣基化IgG1抗體)。 156.  如實施例154或155之經分離抗體，其中恆定區包括1至5個突變，該等突變相對於相應野生型恆定區可增強該抗體之效應功能及/或結合一或多種FcγR、例如FcγRIII之能力。 157.  如實施例1至156中任一項之經分離抗體，其係全長抗體或包括全長重鏈(含有或不含C-末端離胺酸)及全長輕鏈之抗體。 158.  如實施例1至156中任一項之經分離抗體，其係該抗體之抗原結合片段。 159.  如實施例1至158中任一項之經分離抗體，其係多聚體(例如二聚體或三聚體)抗體。 160.  如實施例1至159中任一項之經分離抗體，其連接(例如以共價方式)至另一分子。 161.  如實施例160之經分離抗體，其中該另一分子係標記。 162.  如實施例160或161之經分離抗體，其中該另一分子係肽。 163.  如實施例1至162中任一項之經分離抗體，其係抗體藥物偶聯物(ADC)或可活化抗體。 164.  一種經分離核酸，其編碼如實施例1至163或206至212中任一項之抗體。 165.  一種經分離核酸，其編碼如實施例1至163或206至212中任一項之抗體之重鏈及/或輕鏈。 166.  一種組合物，其包括編碼如實施例1至163或206至212中任一項之抗體之重鏈之經分離核酸及編碼該抗體之輕鏈的核酸。 167.  一種細胞，其包括如實施例164至166中任一項之經分離核酸。 168.  一種製備抗體之方法，其包括在表現該抗體之條件中培養如實施例167之細胞。 169.  一種組合物，其包括如實施例1至168中任一項之經分離抗體、核酸、組合物或細胞及醫藥上可接受之載劑。 170.  如實施例169之組合物，其包括第二治療劑。 171.  如實施例170之組合物，其中該第二治療劑係免疫刺激劑或化學治療劑。 172.  如實施例171之組合物，其中該第二治療劑係免疫刺激劑，其係免疫抑制分子、例如PD-1/PD-L1、CTLA-4及LAG-3之拮抗劑或免疫刺激分子、例如GITR及OX40之激動劑。 173.  一種治療受試者之癌症之方法，其包括向該受試者投與治療有效量之如實施例1至172或206至212中任一項之組合物或經分離抗體，該組合物或經分離抗體刺激免疫反應及/或係VISTA拮抗劑抗體。 174.  如實施例173之方法，其中該受試者例如在癌症腫瘤中具有VISTA陽性細胞。 175.  如實施例174之方法，其中細胞係VISTA陽性浸潤淋巴球性(例如T細胞)或骨髓單核球性細胞。 176.  如實施例173至175中任一項之方法，其中首先測試該受試者之腫瘤中VISTA陽性細胞之存在。 177.  如實施例173至176中任一項之方法，其中該方法進一步包括投與第二療法。 178.  如實施例177之方法，其中該第二療法係化學療法、放射療法、手術或投與第二藥劑。 179.  如實施例178之方法，其中該第二療法係第二藥劑且該第二藥劑係免疫刺激劑或化學治療劑。 180.  如實施例179之方法，其中該第二治療劑係免疫刺激劑，其係免疫抑制分子、例如PD-1/PD-L1、CTLA-4及LAG-3之拮抗劑或免疫刺激分子、例如GITR及OX40之激動劑。 181.  一種治療受試者之傳染性疾病(例如病毒性疾病)之方法，其包括向該受試者投與治療有效量之如實施例1至172或206至212中任一項之組合物或經分離抗體，該組合物或經分離抗體刺激免疫反應及/或係VISTA拮抗劑。 182.  一種治療發炎、發炎性病狀及自體免疫疾病、移植物抗宿主病或受益於減小免疫反應之疾病之方法，其包括向該受試者投與治療有效量之如實施例1至172或206至212中任一項之組合物或經分離抗體，該組合物或經分離抗體抑制免疫反應、例如T細胞活化或係VISTA激動劑。 183.  一種鑑別在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之方法，其包括使一個測試Ab或複數個測試Ab與包括hVISTA-ECD之多肽或其包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20至95、20至70、35至70至127或35至127的片段在pH 6.5或更小pH下接觸，及選擇以10-7 M或更小之KD 結合該多肽之該一或多個測試Ab。 184.  一種鑑別在pH 6.5或更小pH下以5 × 10-3 sec-1 或更小之k解離 結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之方法，其包括使一個測試Ab或複數個測試Ab與包括hVISTA-ECD之多肽或包括hVISTA-ECD之IgV結構域或其包括SEQ ID NO:2之胺基酸20至95、20至70、35至70或35至127的片段在pH 6.5或更小pH下接觸，及選擇以5 × 10-3 sec-1 或更小之k解離 結合該多肽之該一或多個測試Ab。 185.  一種鑑別在pH 6.5下以類似於pH 7.0下之親和力結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之方法，其包括： a. 使一個測試Ab或複數個測試Ab在pH 6.5下與包括hVISTA-ECD之多肽或其包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20至95、20至70或35至70或35至127之片段接觸； b. 使該測試Ab或複數個測試Ab在pH 7.0下與(a)之該多肽接觸；及 c. 選擇在pH 6.5下及在pH 7.0下以10-7 M或更小之KD 結合該多肽之測試Ab。 186.  一種鑑別在pH 6.5下以高於pH 7.0下之親和力結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之方法，其包括： a. 使一個測試Ab或複數個測試Ab在pH 6.5下與包括hVISTA-ECD之多肽或其包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20至95、20至70、35至70或35至127之片段接觸； b. 使該測試Ab或複數個測試Ab在pH 7.0下與(a)之該多肽接觸；及 c. 選擇在pH 6.5下以低於在pH 7.0下至少2倍之KD 或k解離 結合該多肽之測試Ab。 187.  一種鑑別用於治療癌症之特異性結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之方法，其包括 a. 根據(例如)如實施例183-186之方法鑑別在pH 6.5或更小pH下特異性結合hVISTA-ECD之Ab；及 b. 選擇在pH 6.5或更小pH下觸發或增強腫瘤模型中之免疫反應或抑制腫瘤生長之Ab。 188.  如實施例187之方法，其中步驟(b)包括量測T細胞活性。 189.  如實施例187或188之方法，其進一步包括量測該Ab之抗腫瘤效應。 190.  一種改良結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之抗腫瘤效能之方法，其包括 a. 提供在pH 6.5或更小pH下以小於期望值之親和力結合hVISTA-ECD之Ab； b. 使用不同胺基酸殘基(例如使用麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基)取代該Ab之重鏈或輕鏈中之1至5個胺基酸殘基，其中該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基，例如胺基酸殘基31、32、50、57、58、59、100或102中之一或多者(SEQ ID NO：67、51或55中之編號； c. 測定(b)中所獲得之該Ab是否在pH 6.5或更小pH下具有高於(a)之該Ab之hVISTA-ECD親和力；及 d.     重複步驟(a)至(c)多輪以足以獲得在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD之Ab。 191.  一種改良結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之抗腫瘤效能之方法，其包括： a. 提供在pH 6.5或更小pH下以小於期望值之親和力結合hVISTA-ECD之Ab； b. 製備(a)之該Ab之變體庫，其中每一變體在該Ab之重鏈或輕鏈中之1至5個胺基酸殘基經不同胺基酸殘基(例如經麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基)取代，其中該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基，例如胺基酸殘基31、32、50、57、58、59、100或102中之一或多者(SEQ ID NO：67、51或55中之編號； c. 在(b)之該變體庫中選擇在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD之Ab；及 d.     視情況在腫瘤模型中測試(c)之該等Ab之抗腫瘤效能。 192.  一種改良結合人類VISTA細胞外結構域(ECD)之抗體之藥物動力學之方法，其包括增強該抗體於酸性條件中、例如在等於或低於pH 6.5下結合人類VISTA之能力。 193.  一種選擇結合人類VISTA且具有延長半衰期(良好藥物動力學性質)之抗體之方法，其中該方法包括選擇於酸性條件、例如等於或低於pH 6.5中結合人類VISTA之抗體。 194.  一種改良結合人類VISTA (hVISTA)之抗體之效能之方法，其包括增加該抗體之一或多個VH CDR中天門冬胺酸、麩胺酸及/或組胺酸殘基之數量以增強該抗體於酸性pH與hVISTA之結合。 195.  一種分離結合人類VISTA (hVISTA)且在人類血液中具有長半衰期及/或刺激腫瘤環境中之T細胞之抗體之方法，其包括篩選結合hVISTA之抗體庫中於酸性pH結合但於中性pH不結合者。 196.  如實施例183至195中任一項之方法，其包括反選擇彼等於生理pH結合之抗體。 197.  如實施例183至196中任一項之方法，其進一步包括選擇為VISTA拮抗劑或VISTA激動劑之抗體。 198.  如實施例183至197中任一項之方法，其包括選擇彼等抑制VISTA與VISTA共受體(例如PSGL-1)之間之相互作用及/或VISTA與T細胞或骨髓單核球性細胞之間之相互作用的抗體。 199.  如實施例183至198中任一項之方法，其進一步包括選擇具有P1-068761或P1-068767之一或多種性質之抗體。 200.  一種改良結合人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之抗腫瘤效能之方法，其包括 a. 提供在pH 7.0下結合hVISTA-ECD但在pH 6.5下不顯著結合之Ab； b. 使用不同胺基酸殘基取代該Ab之重鏈或輕鏈、例如CDR中之1至5個胺基酸殘基，其中舉例而言，該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基，例如胺基酸殘基31、32、50、57、58、59、100或102中之一或多者(SEQ ID NO：67、51或55中之編號； c. 測定(b)中所獲得之該Ab在pH 6.5下對hVISTA-ECD是否具有高於在pH 7.0下之親和力，及/或測定(b)中所獲得之該Ab在pH 6.5下是否具有類似於或高於親代抗體((a)之抗體)之親和力且在pH 7.0下是否具有低於(a)之該抗體之親和力；及 d. 重複步驟(a)至(c)多輪以足以獲得在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD且在pH 7.0或更大pH下以10-6 M或更大之KD 結合hVISTA-ECD之Ab。 201.  一種檢測試樣中之VISTA之方法，其包括使試樣與如實施例1至163或206至212中任一項之VISTA抗體接觸。 202.  一種治療受試者之癌症之方法，其包括向該受試者投與結合人類VISTA (hVISTA)且抑制hVISTA之活性(例如T細胞活化)之經分離抗體及PD1/PD-L1路徑拮抗劑，此使得增加例如該受試者之腫瘤中之CD4+及CD8+ T細胞之數量。 203.  一種治療受試者之癌症之方法，其包括向該受試者投與結合人類VISTA (hVISTA)且抑制hVISTA之活性(例如T細胞活化)之經分離抗體及PD1/PD-L1路徑拮抗劑，此使得減小例如該受試者之腫瘤中之耗竭T細胞及/或表現PD-1、LAG3及/或TIM-3之T細胞之數量。 204.  一種治療受試者之癌症之方法，其包括向該受試者投與結合人類VISTA (hVISTA)且抑制hVISTA之活性(例如T細胞活化)之經分離抗體及PD1/PD-L1路徑拮抗劑，此使得增加例如該受試者之腫瘤中之CD4+及CD8+ T細胞之數量且減小例如該受試者之腫瘤中之耗竭T細胞及/或表現PD-1、LAG3及/或TIM-3之T細胞之數量及/或產生本文所闡述之其他特徵。 205.  如實施例202至204中任一項之方法，其中該結合hVISTA之抗體係本文所闡述之抗體，例如如實施例1至163或206至212中任一項之抗體。 206.  如實施例1至205中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體包括與表21中所列示hVISTA殘基處之hVISTA之一或多種(例如1至5、5至10、10至15、10至20或15至20種)相互作用。 207.  如實施例1至206中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體在位置31、32、50、57、58、59、100或102中之一或多者包括麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸，其中該編號係根據SEQ ID NO: 67、51及55中之編號。 208.  一種經分離抗體，其在pH 6.5下結合人類VISTA細胞外結構域且視情況在pH 7.0下不顯著結合，其中該抗體在位置31、32、50、57、58、59、100或102中之一或多者包括麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸，其中該編號係根據SEQ ID NO: 67、51及55中之編號。 209.  如實施例1至208中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體不包括以下各項中之任一者之重鏈可變區：P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-068761、P1-068767、P1-068773、P1-068765、P1-061029、P1-068757、P1-068771、P1-068775、P1-068769、P1-068759、P1-068763、P1-061015、P1-068748、P1-068744、P1-068736、P1-068752、P1-068740、P1-068742、P1-068746、P1-068750、P1-068738、P1-068754、P1-069293、P1-069298、P1-069302、P1-069312、P1-069309、P1-069307、P1-070864、P1-070866、P1-070868、P1-070870、P1-070872、P1-070874、P1-070876、P1-070878、P1-070880、P1-070882、P1-070884、P1-070886、P1-070888、P1-070890、P1-070892、P1-070894、P1-070896、P1-070898、P1-070900、P1-070902、P1-070904、P1-070906、P1-070908、P1-070910、P1-070912、P1-070914、P1-070916、P1-070918、P1-070920、P1-070922、P1-070924、P1-070926、P1-070928、P1-070930、P1-070932、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S，或不包括國際公開案WO2018/169993中所揭示任一抗體之重鏈可變區。 210.  如實施例1至209中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體抑制hVISTA細胞外結構域(ECD)與PSGL-1之間之相互作用。 211.  如實施例1至210中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體與本文所闡述之抗體、例如‘761及‘767競爭結合hVISTA ECD (例如使用本文所闡述之BLI)，及/或與本文所闡述之抗體、例如‘761及‘767經由相同胺基酸殘基結合hVISTA ECD。 212.  如實施例1至211中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體與組胺酸三聯體(成熟hVISTA之H121、122及123)相互作用，如藉由X射線結晶學所測定，例如如本文所測定。 213.  如實施例1至212中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體接觸hVISTA ECD之SEQ ID NO: 2之至少一個胺基酸殘基Y37、T39、R54、H65、L114、V116、S123及E124。 214.  如實施例1至213中任一項之抗體、組合物或方法，其中在具有MC38腫瘤之人類VISTA基因嵌入小鼠中，與骨髓樣細胞相比、與血液相比及/或與肝、肺及脾細胞相比，該抗體優先累積於腫瘤組織中。 215.  如實施例1至215中任一項之抗體、組合物或方法，其中在投與該抗體之後，與患者之骨髓樣細胞相比、與其血液相比及/或與其肝、肺及脾細胞相比，該抗體優先累積於腫瘤中(如例如藉由投與經PET示蹤劑標記之Ab所檢測)。 216.  一種本文所闡述之經分離抗體，其在重鏈及/或輕鏈中包括1、2、3個或更多個種系回復突變。
其他實施例包含： 1. 一種鑑別在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD之Ab之方法，其包括使一個測試Ab或複數個測試Ab與包括hVISTA-ECD之多肽或包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70或35-70的其片段在pH 6.5或更小pH下接觸，及選擇以10-7 M或更小之KD 結合該多肽之一或多種測試Ab。 2. 一種鑑別在pH 6.5或更小pH下以10-3 sec-1 或更小之k解離 結合hVISTA-ECD之Ab之方法，其包括使一個測試Ab或複數個測試Ab與包括hVISTA-ECD之多肽或包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70或35-70的其片段在pH 6.5或更小pH下接觸，及選擇以10-3 sec-1 或更小之k解離 結合該多肽之一或多種測試Ab。 3. 一種鑑別在pH 6.5下以類似於在pH 7.0下之親和力特異性結合hVISTA-ECD之Ab之方法，其包括： a. 使一個測試Ab或複數個測試Ab在pH 6.5下與包括hVISTA-ECD之多肽或包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70或35-70之其片段接觸； b. 使該測試Ab或複數個測試Ab在pH 7.0下與(a)之該多肽接觸；及 c. 選擇在pH 6.5下及在pH 7.0下以10-7 M或更小之KD 結合該多肽之測試Ab。 4. 一種鑑別在pH 6.5下較在pH 7.0下以較高親和力結合hVISTA-ECD之Ab之方法，其包括： a. 使一個測試Ab或複數個測試Ab在pH 6.5下與包括hVISTA-ECD之多肽或包括hVISTA-ECD之IgV結構域或包括SEQ ID NO:2之胺基酸20-95、20-70或35-70之其片段接觸； b. 使該測試Ab或複數個測試Ab在pH 7.0下與(a)之該多肽接觸；及 c. 選擇在pH 6.5下以低於在pH 7.0下至少2倍之KD 結合該多肽之測試Ab。 5. 一種鑑別用於治療癌症之特異性結合hVISTA-ECD之Ab之方法，其包括 a. 根據(例如)如實施例32-35之方法鑑別在pH 6.5或更小pH下特異性結合hVISTA-ECD之Ab；及 b. 選擇(a)在pH 6.5或更小pH下觸發或增強腫瘤模型中之免疫反應或抑制腫瘤生長之Ab。 6. 如實施例38之方法，其中步驟(b)包括量測T細胞活性。 7. 如實施例38或39之方法，其進一步包括量測該Ab之抗腫瘤效應。 8. 一種改良結合hVISTA-ECD之Ab之抗腫瘤效能之方法，其包括 a. 提供在pH 6.5或更小pH下以小於期望值之親和力、例如以10-7 M或更大、例如10-6 M、10-5 M或更大之KD 及/或10-2 sec-1 或更大之k解離 結合hVISTA-ECD之Ab； b. 使用不同胺基酸殘基代替該Ab之重鏈或輕鏈中之1至5個胺基酸殘基，其中該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基； c. 測定(b)中所獲得之該Ab是否在pH 6.5或更小pH下具有高於(a)之該Ab之hVISTA-ECD親和力；及 d.     重複步驟(a)至(c)多輪以足以獲得在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD之Ab。 9. 一種改良結合hVISTA-ECD之Ab之抗腫瘤效能之方法，其包括： a. 提供在pH 6.5或更小pH下以小於期望值之親和力、例如以10-7 M或更大、例如10-6 M、10-5 M或更大之KD 及/或10-2 sec-1 或更大之k解離 結合hVISTA-ECD之Ab； b. 製備(a)之該Ab之變體庫，其中每一變體在該Ab之重鏈或輕鏈中之1至5個胺基酸殘基經不同胺基酸殘基取代，其中該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基； c. 選擇(b)之該變體庫中在pH 6.5或更小pH下以10-7 M或更小之KD 結合hVISTA-ECD之Ab；及視情況， d.     在腫瘤模型中測試(c)之該等Ab之抗腫瘤效能。 10.   一種改良抗體結合人類VISTA ECD之藥物動力學之方法，其包括增強該抗體於酸性條件中、例如在等於或低於pH 6.5下結合人類VISTA之能力。 11.   一種選擇結合人類VISTA且具有延長半衰期(良好藥物動力學性質)之抗體之方法，其中該方法包括選擇於酸性條件、例如等於或低於pH 6.5中結合人類VISTA之抗體。 其他實例性實施例進一步提供於下文之申請專利範圍中。
實例 下文所論述實例僅意欲示範本發明且不應視為以任一方式限制本發明。該等實例並不意欲表示下文實驗係所實施之所有實驗或唯一實驗。已努力確保所用數值(例如量、溫度等)之精確度，但應慮及一些實驗誤差及偏差。除非另外指明，否則份數係重量份數，分子量係平均分子量，溫度以℃表示，且壓力為大氣壓力或接近大氣壓力。
實例 1 ： VISTA 之細胞外結構域格外富含組胺酸 此實例展示，VISTA之細胞外結構域格外富含組胺酸殘基，該等組胺酸殘基在進化中保守，且其可有助於涉及VISTA之受體-配體相互作用。
自uniprot及swiss-prot資料庫提取含有免疫球蛋白結構域之蛋白質之細胞外結構域(ECD)之胺基酸序列且分析組胺酸含量。圖1A將此分析之結果繪示成圖。對於每一蛋白質而言，組胺酸殘基之頻率(以佔所有細胞外結構域胺基酸殘基之百分比形式)繪示於y軸上，且細胞外結構域胺基酸殘基之總數繪示於x軸上。每一數據點之直徑對應於每一蛋白質之細胞外結構域中之組胺酸殘基之總數。VISTA (經標記)在其細胞外結構域中含有格外高頻率之組胺酸殘基。
然後評價VISTA中之組胺酸殘基之進化保守。圖1B展示人類VISTA、食蟹獼猴VISTA及小鼠VISTA之比對胺基酸參考序列，不包含信號肽(「Sig」)、跨膜結構域(「TMD」)及細胞內結構域。在所有三個物種中皆保守之組胺酸殘基加粗體且加下劃線。在人類VISTA及食蟹獼猴VISTA中保守之組胺酸殘基加粗體且並不加下劃線。許多VISTA細胞外結構域組胺酸殘基在進化中保守，從而表明其對於VISTA之高組胺酸含量具有重要生物作用。
基於對PDB資料庫中之可用解析結構之序列同源性分析來產生hVISTA IgV結構域之三維模型。圖1C中所展示之模型指示，VISTA ECD中之許多組胺酸暴露於分子表面處，在此其可在配體結合以及抗體識別中發揮作用。組胺酸殘基繪示為球及桿。
實例 2 ： 組胺酸質子化可調控腫瘤及其他酸性微環境中之 VISTA 受體 - 配體接合及免疫抑制活性 此實例闡述因應於生理相關酸性pH之組胺酸質子化以及其中VISTA細胞外結構域組胺酸於酸性pH而非生理pH賦予反受體或配體選擇性之模型。
圖2A展示組胺酸殘基中之吡咯銨基團(NH)缺乏質子化與存在質子化之間之平衡。組胺酸在溶液中之pKa為6.5，從而指示組胺酸殘基相對於在較高pH下更可能在pH 6.5及更低pH下發生質子化且由此帶正電。VISTA ECD表面因質子化而產生之正電荷增加可影響受體或配體結合以及VISTA結構及/或功能。因此，pH變化亦可修飾抗體結合表位及/或使得抗體親和力有所變化。
圖2B展示其中VISTA於酸性pH選擇性接合PSGL-1或其他反受體及配體(「VISTA-R」)之模型。於生理pH (例如在血液中)，VISTA ECD上之組胺酸殘基預計並不質子化。因此，VISTA於生理pH與PSGL-1或其他反受體及配體之結合可忽略不計。與之相比，在往往具有酸性細胞外pH之位置(例如腫瘤微環境或發炎部位)，酸性pH可部分地或完全驅動VISTA ECD組胺酸質子化且由此使得VISTA能夠接合PSGL-1或其他反受體及配體。因此，於酸性pH範圍強烈結合VISTA-ECD蛋白之抗體可更有效地抑制腫瘤中之VISTA活性。
實例 3 ： 藉由腫瘤中之骨髓單核球性細胞表現 VISTA 此實例展示，通常藉由腫瘤中之骨髓單核球性細胞(包含巨噬球、樹突狀細胞及顆粒球)表現VISTA。
在冰冷PBS中洗滌手術切除之非小細胞肺癌、腎透明細胞癌、黑色素瘤、結腸直腸癌及其他腫瘤試樣，切割成大約15 mm3 大小之切片，並懸浮於補充有2%熱滅活FBS及2 mM EDTA (Fisher Scientific 15575020)之冰冷RPMI-1640培養基(Fisher Scientific目錄號11875093)中。將每一試樣轉移至大間隙玻璃杜恩斯裝置(dounce) (Tenbroeck Tissue Grinders)中並研磨直至組織切片目測分離為止。經由70 μM耐綸(nylon)網過濾懸浮液並離心。棄除上清液且將細胞糰粒在室溫下再懸浮於補充有0.1%牛血清白蛋白及250 mg/mL無菌過濾之DNase 1 (等級II，來自牛胰臟，Roche目錄號10104159001)之室溫PBS中保持3分鐘。然後在冰冷經補充RPMI中洗滌細胞並再懸浮於冰冷PBS中。添加細胞活力染料且將細胞於暗處在冰上培育。在20分鐘之後，藉由添加4%正常大鼠血清、4%正常小鼠血清、20%來自AB血漿之人類血清及1:125經稀釋人類TruStain FcX™ (Biolegend目錄號422302)來阻斷非特異性抗體染色。於暗處在冰上使用懸浮於Brilliant染色緩衝液(BD Biosciences目錄號562794)中之針對HLA-DR (BD Biosciences目錄號564040)、CD8 (Fisher Scientific目錄號46-0087-42)、CD14 (Biolegend目錄號325620)、CD45 (Biolegend目錄號304017)、CD4 (BD Biosciences目錄號563875)、CD11c (BD Biosciences目錄號744439)、CD15 (BD Biosciences目錄號563142)、PD-1 (BD Biosciences目錄號565299)、CD3 (BD Biosciences目錄號565515)、CD56 (Fisher Scientific目錄號61-0567-42)、CD19 (BD Biosciences目錄號564977)及VISTA (偶聯至AlexaFluor™ 647之VISTA抗體3，Fisher Scientific目錄號A20186)之螢光團偶聯之抗體將細胞染色30分鐘。在冰冷PBS中洗滌經染色細胞，固定(Fisher Scientific目錄號00-5523-00)，並獲取於流式細胞儀上。使用FlowJo™軟體(BD Biosciences)分析數據。如圖3中所展示，巨噬球及顆粒球上之VISTA細胞表面表現最高，樹突狀細胞上之表現為中等，且T細胞、天然殺手細胞及B細胞上之表現較低。
實例 4 ： VISTA 細胞結合展現酸性 pH 選擇性 此實例展示，多聚合人類VISTA ECD於酸性pH較於中性或生理pH更有效地結合至經刺激之人類CD4+ T細胞及人類周邊血單核細胞，且此結合可藉由抗人類VISTA阻斷性抗體來阻斷。亦展示結合小鼠脾細胞之酸性pH選擇性二聚合小鼠VISTA ECD。
藉由RosetteSep™ (Stemcell目錄號15062)自健康供體血液富集人類CD4+ T細胞並在活體外使用人類T-活化因子CD3/CD28 Dynabeads™ (Fisher Scientific目錄號111.32D)及重組人類IL-2 (Peprotech目錄號200-02)在補充有10%熱滅活FBS、Glutamax™ (Fisher Scientific目錄號35050061)、非必需胺基酸(Fisher Scientific 11140050)、丙酮酸鈉(Fisher Scientific目錄號11360070)及2-巰基乙醇(Fisher Scientific 21985023)之RPMI-1640中刺激大約4天。使用以28:1莫耳比率加載於藻紅素(PE)偶聯之鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)迪克拉美(dextramer) (目錄號DX01-PE)之單生物素化hVISTA ECD分子(Phe 33 - Ala 194 (登錄號AAH20568)-聚組胺酸；AcroBiosystems, Inc. B75- H82F3) (稀釋至使用mM MES (Sigma, 1317-100ML)酸化至各種pH之漢克氏緩衝鹽溶液(Hank’s Buffered Salt Solution) (HBSS, Fisher Scientific目錄號14025134)中)將經活化CD4+ T細胞在室溫下染色30分鐘。作為對照，使用未加載hVISTA之PE偶聯之鏈黴抗生物素蛋白迪克拉美將活化CD4+ T細胞染色。使用HBSS + MES洗滌經染色細胞並獲取於流式細胞儀上。使用FlowJo™軟體(BD Biosciences)分析數據。圖4A中所繪示之結果展示，hVISTA在pH ＞ 6.5下與對照相比並不更佳地結合CD4+ T細胞。與之相比，hVISTA在pH ＜ 6.5下展現漸強之CD4+ T細胞結合。在左側，自較深灰色至較淺色，填充直方圖繪示在pH 7.0、6.5、6.4、6.3、6.1及6.0下之結合。一些直方圖經其相應pH標記。pH 6.0下之非VISTA對照多聚體結合展示為未填充直方圖。在右側，將經加載hVISTA之迪克拉美(圓)或未加載迪克拉美(三角形)染色之CD4+ T細胞在各種pH下之PE平均螢光強度(MFI)繪圖。
藉由ficoll梯度離心(Ficoll-Paque Plus, GE Life Sciences目錄號17144003)自健康供體血液富集周邊血單核細胞(PBMC)並使用如上文所闡述稀釋於HBSS + MES緩衝液中之加載hVISTA之迪克拉美(亦稱為多聚體)及螢光團偶聯抗體之染色。圖4B展示填充直方圖，其自較深灰色至較淺色繪示在pH 6.0下與CD19+ B細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、CD56+ NK細胞及CD14+單核球之結合。未填充、實線邊界及虛線邊界直方圖分別繪示在pH 7.4下與總PBMC淋巴球及單核球之結合。圖4F及4G展示，VISTA結合單核球及嗜中性球，且在pH 6.0下之結合強於在pH 7.4下。結果展示，hVISTA可於酸性pH結合許多白血球，但於生理pH之結合並不顯著。
使用hVISTA多聚體在pH 6下於經滴定抗人類VISTA抗體或同型匹配非VISTA特異性抗體存在下將經活化人類CD4+ T細胞染色。圖4C中所繪示結果展示相對於抗體濃度之VISTA多聚體MFI。抗hVISTA抗體(VISTA抗體3；正方形)以濃度依賴性方式阻斷hVISTA與經活化CD4+ T細胞之結合，但非VISTA特異性對照抗體(圓)並不阻斷。包含未經加載hVISTA之多聚體染色之CD4+ T細胞之PE MFI作為對照(單一三角形)。
圖4D展示經轉染以表現全長人類PSGL-1 (SEQ ID NO: 3；核酸NM_003006.4)之硫酸乙醯肝素突變中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(細胞系pGSD-677，美國模式培養物保藏所)在pH 6.0下之VISTA多聚體染色之代表性二維流式細胞術繪圖。在存在或不存在經滴定抗VISTA阻斷性抗體(mAb 3)下實施染色。未由VISTA多聚體染色之細胞展示為對照。PSGL-1抗體(BD Biosciences目錄號562758)染色繪示於y軸上，且VISTA多聚體染色繪示於x軸上。
自C57BL6/J小鼠(Jackson實驗室目錄號000664)收集脾細胞並使用mVISTA ECD /人類IgG Fc (片段，可結晶)嵌合融合蛋白、隨後使用螢光團偶聯之抗人類IgG Fc二級抗體(Jackson Immunoresearch目錄號109-065-098)在pH 6.0或7.4下染色。由圖4E中之直方圖繪示之結果展示，mVISTA在pH 6.0下較於生理pH (大約pH 7.4)更有效地結合鼠類脾細胞。自較深灰色至較淺色，填充直方圖繪示在pH 6.0下結合CD8+ T細胞、CD11b+骨髓樣細胞及CD4+ T細胞。未填充直方圖繪示在pH 7.4下結合總脾細胞。
實例 5 ： VISTA 於酸性 pH 選擇性調介細胞 : 細胞黏附及免疫阻抑 此實例展示，VISTA於酸性pH較在中性或生理pH更強力地調介細胞:細胞黏附並阻抑T細胞活化。
確立基於酸性pH相容性流式細胞術之細胞/細胞偶聯分析。使用CFSE (羧基螢光黃琥珀醯亞胺基酯；Fisher Scientific目錄號C34554)標記異位表現全長人類VISTA之293T細胞(永生化人類胚胎腎細胞系，ATCC目錄號CRL-3216)或載體。使用CellTrace™ Far紅色 (Fisher Scientific目錄號C34564)標記CHO細胞。然後將載體或VISTA 293T細胞與CHO細胞以1:1比率混合於pH7.0或pH6.0緩衝液中並在室溫下培育1小時。藉由流式細胞術評價CHO及293T細胞/細胞偶聯物之形成。圖5A-B中所展示之結果證實，表現VISTA之293T細胞於酸性pH優先黏附至CHO細胞且納入抗VISTA阻斷性抗體(VISTA mAb 3；白色條)會抑制VISTA調介之細胞/細胞黏附。
確立酸性pH相容性T細胞抑制分析。將表現NFkB啟動子驅動之螢光素酶報告基因之Jurkat細胞(永生化人類T細胞系，ATCC目錄號TIB-152)與異位表現全長人類VISTA及抗人類T細胞受體激動劑抗體純系OKT3之單鏈可變片段之293T細胞(永生化人類胚胎腎細胞系，ATCC目錄號CRL-3216)一起以10 : 1 Jurkat : 293T細胞比率共培養於各種pH的HBSS + MES緩衝液中。將抗VISTA阻斷性抗體(VISTA mAb 3)或同型匹配非VISTA特異性對照抗體以10 μg/mL添加至共培養物中。在培育之後，藉由量測螢光素酶活性(1秒間隔，Promega目錄號G7940)量化Jurkat T細胞活化。結果展示於圖5C-D中。圖5C展示經抗VISTA (正方形)或對照抗體(圓)在不同pH下處理之Jurkat之螢光素酶單位之繪圖。圖5D展示在每一測試pH下經抗VISTA抗體處理之共培養物之螢光素酶信號除以經對照抗體處理之共培養物之螢光素酶信號的繪圖。結果展示，VISTA調介之T細胞抑制於酸性pH下最為強力。
實例 6 ： VISTA 經由細胞內再循環胞內體進行輸送 此實例展示，VISTA可發現於細胞內胞內體、尤其Rab11+再循環胞內體中，且可經由胞內體輸送再循環進出細胞表面。抗VISTA抗體於酸性pH結合VISTA之強度會影響其在胞內體輸送期間保持結合VISTA之能力。
藉由磁活化細胞分選自PBMC分離單核球。然後將單核球及293T細胞固定於4%低聚甲醛中並針對Rab5、Rab7或Rab11且使用抗VISTA或對照抗體進行細胞內染色。對照抗體(「cAb」，其係與抗VISTA抗體具有相同同型之非VISTA結合抗體)並不可檢測地結合表現人類VISTA之單核球或293T細胞。使用Alexa488直接標記抗VISTA及對照抗體。使用Alexa594抗兔Ig二級抗體檢測Rab抗體。實施Hoescht 33342染色以鑑別細胞核。使用轉盤式共聚焦顯微鏡捕獲影像。圖 6A 展示VISTA、Rab5 (早期胞內體標記物)、Rab7 (晚期胞內體標記物)及Rab11 (再循環胞內體標記物)在表現人類VISTA之293T細胞內之共局部化。圖 6B 展示VISTA及Rab11在人類單核球內之共局部化。細胞內VISTA與Rab11+再循環胞內體共局部化。
為評價VISTA經由胞內體再循環之能力，使用三種於生理及酸性pH具有不同VISTA結合性質之抗hVISTA抗體(VISTA mAb 1、2及3)實施內吞溶酶體依賴性抗體藥物偶聯殺死分析。首先實施SPR分析以比較所有三種VISTA抗體在pH 7.4、6.7及6.0下之hVISTA結合特徵。在含有固定蛋白質A之Biacore® T100 (GE Healthcare) CM5生物感測器上捕獲VISTA抗體，然後使100nM hVISTA-ECD (具有7xHis尾部之SEQ ID NO: 1之胺基酸32-193，亦即AFKVATPYSL YVCPEGQNVT LTCRLLGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVYPSSSQESENI TAHHHHHHH；SEQ ID NO: 325)在37℃於指示pH之PBST電泳緩衝液中流動。將扣除參考之感測圖正規化至「結合」報告點並繪圖。VISTA抗體3 「mAb 3」 (圖6C頂部)於酸性pH展現最大程度之VISTA結合缺損，隨後係VISTA抗體2 「mAb 2」 (圖6C，中間)，其僅中等受損。VISTA抗體1 「mAb 1」於酸性及生理pH條件下維持強VISTA結合(圖6C，底部)。
內吞溶酶體依賴性抗體藥物偶聯殺死分析實施如下。將內源性表現人類VISTA之AML3細胞(永生化人類單核球細胞系，ATCC CRL-9589)與經滴定抗VISTA抗體或非VISTA特異性對照抗體及偶聯至細胞自溶酶B敏感性連接體及細胞毒性微管溶素(tubulysin)酬載之抗人類IgG二級抗體一起培養。由於細胞自溶酶B主要在晚期胞內體及溶酶體中有活性，故利用VISTA經由早期胞內體及再循環胞內體再循環之抗VISTA抗體將經歷低程度之連接體裂解及由此低程度之細胞毒性酬載釋放及細胞死亡。於酸性胞內體中自VISTA解離並分選至晚期胞內體及溶酶體中之抗VISTA抗體將經歷較高程度之連接體裂解。在5天之後於培養物中藉由Cell Titer Glo® (Promega目錄號G7573)量測細胞活力。圖6D展示此分析之結果，其中AML3活力(Cell Titer Glo)繪示於y軸上且一級抗體濃度繪示於x軸上。一級抗體之計算EC50如下：VISTA抗體1，倒三角形，0.485 μg/mL；VISTA抗體2，圓，0.092 μg/mL；VISTA抗體3，正方形，0.006 μg/mL；對照，三角形，1.085 μg/mL。抗體功效與於酸性pH之抗VISTA抗體結合逆相關。
為證實於酸性pH之結合負責功效差異，將VISTA抗體3親和力最佳化，從而改良其於酸性pH結合VISTA之能力。圖6E展示SPR分析，其使用針對圖6C所闡述之分析條件比較VISTA抗體3與此變體VISTA抗體3c之hVISTA抗體結合特徵。VISTA抗體3同樣於酸性pH展現VISTA結合缺損，而變體VISTA抗體3c於酸性及生理pH展現相當之VISTA結合。圖6F展示VISTA抗體3c (菱形)在針對圖6D所闡述之殺死分析中之活性。VISTA抗體3之酸性pH最佳化變體展現低於原始抗體31倍之功效，從而指示，於酸性pH結合之受損抗VISTA抗體在VISTA再循環期間損失抗體結合。
基於該等發現，提出再循環模型，其中VISTA經由早期胞內體及再循環胞內體再循環進出細胞表面。此模型繪示於圖6G中。可使用VISTA經由該等胞內體再循環抗VISTA抗體，從而維持靶接合。然而，於酸性pH具有受損VISTA結合之VISTA抗體、尤其於酸性pH具有迅速解離速率者可在再循環期間自VISTA解離且在細胞內部捕集或降解，從而產生較差靶接合且連續消耗循環抗體。與之相比，於酸性pH結合VISTA且保持結合之抗體可維持較高程度之靶接合、尤其於酸性微環境(例如腫瘤)中且展現較長活體內平均滯留時間。
實例 7 ： 於生理 pH 並不結合之 VISTA 抗體之優良性 發明人已展示，VISTA係酸性pH選擇性免疫受體，從而證實了使用於酸性pH充分結合之抗體靶向VISTA之重要性及用途。另外，出於若干原因，於生理pH不結合或可忽略地結合VISTA之抗體較為有利。首先，因VISTA相對大量地表現於循環骨髓單核球性細胞、尤其單核球及嗜中性球中，故於生理pH結合VISTA之抗體受試者在血液中具有較高程度之靶介導之藥物體內動向(TMDD)。此效應可因VISTA傾向於經由細胞內胞內體再循環而加劇，從而產生抗VISTA抗體內化及降解。此二級效應對於於酸性pH具有受損結合之抗體而言尤其成問題，如可針對結合VISTA之富組胺酸配體界面之抗體所觀察。兩種效應皆將減小循環中之抗VISTA抗體量，從而減小到達腫瘤之抗體量且由此減小抗體之預期生物學活性。第二，於生理pH結合VISTA且擁有效應功能(例如誘導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)或遞送免疫調節性酬載)之抗體將使循環骨髓單核球性細胞經受該等效應功能，從而潛在地產生不期望效應(例如循環嗜中性球耗竭或活化)。因此，發明人發現，於酸性pH結合huVISTA但於生理pH可忽略之抗體具有以下雙重優點：(1)較佳暴露於相關位點(例如腫瘤)及(2)減小具有效應功能(例如ADCC、ADCP或遞送免疫調節性酬載)之抗體情形之毒性。另外，因VISTA本身係酸性pH選擇性免疫受體，故於生理pH阻斷VISTA之配體界面很可能不能調節VISTA受體-配體活性。因此，如下文所闡述來生成於酸性pH結合huVISTA但於生理pH並不顯著結合之抗體。
實例 8 ： 於酸性 pH 較生理 pH 優先結合人類 VISTA 之抗 VISTA 抗體之分離 此實例闡述在低(酸性) pH相對於中性或生理pH優先結合人類VISTA之抗體之生成。
如下所述來構築抗體之抗VISTA抗原結合片段之庫並篩選。使用自全長人類VISTA (hVISTA)免疫之HuMab小鼠分離之基因物質產生抗體庫。將該等抗體格式化為scFv且經由mRNA顯示針對在低pH (pH 6.0)全長hVISTA結合進行選擇(Xu L等人(2002)Chemistry & Biology 9: 933；Roberts RW及JW Szostak (1997)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297；Kurz等人(2000)Nucleic Acids Res. 28(18): E83)。經由次世代測序(NGS)分析選擇輸出，且鑑別顯示在低pH富集VISTA結合之庫成員，再格式化為IgG 1.3 (由具有胺基酸突變L234A、L235E及G237A之IgG1 Fc組成之無效應IgG1恆定區)，並藉由SPR針對VISTA結合進行篩選。
使用Biacore® T200儀器(GE Healthcare)實施表面電漿共振(SPR)分析以量測VISTA Ab於酸性及生理pH之締合速率(定義為ka或k締合 ，單位1/Ms)、解離速率(定義為kd或k解離 ，單位s-1 )及親和力常數(定義為KD ，單位M)。將蛋白質A (Fisher Scientific目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 ug/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽6,000 RU之蛋白質A固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4及6.0實施SPR實驗。將抗體在pH 7.4 PBST中稀釋至20 nM，且以5 ul/min通過活性生物感測器流動槽50秒捕獲。在pH 7.4及6.0電泳緩衝液中製備50 - 0.2 nM濃度系列之單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)，且以40 ul/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩次15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白-扣除感測圖導出速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。對於每一VISTA抗體，計算pH 6下k解離 /pH 7.4下k解離 之比率以鑑別於酸性pH展現緩慢解離速率且於生理pH展現迅速解離速率之抗體。
六種再格式化為IgG1.3抗體之抗體在pH 6及pH 7.4顯示接近相等之親和力。特定而言，兩種抗體在pH 6.0之解離速率慢於在pH 7.4(亦即在pH 7.4之k解離 快於pH 6.0)。該兩種huVISTA抗體之可變區稱為P1-061015及P1-061029且包括該等可變區且格式化為IgG1.3抗體之抗體分別稱為P1-061015.IgG1.3及P1-061029.IgG1.3。P1-061015.IgG1.3及P1-061029.IgG1.3之k解離 速率提供於表1中。 表1：所選抗體在pH 6.0及pH 7.0下之k解離
抗體名稱 pH 6 k解離 (s-1 ) pH 7 k解離 (s-1 ) pH 6/pH 7 k解離
P1-061015.IgG1.3 1.4 × 10-3 2.3 × 10-3 0.6
P1-061029.IgG1.3 4.8 × 10-3 9.1 × 10-3 0.5
P1-061015及P1-061029之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列提供於下文表2中且亦展示於在本發明實例部分後之序列表中。 表2：在pH 6.0下較pH 7.4優先結合huVISTA之huVISTA抗體之胺基酸序列
P1 ID VH-基因 VH CDR1 VH CDR2 VH CDR3
P1-061015.IgG1.3 3-33 GFTFSSYAMH (SEQ ID NO: 95殘基26-35) IIWYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO: 95殘基50-66) DSGFYSSYYFDY (SEQ ID NO: 95殘基99-110)
P1-061029.IgG1.3 3-09 GFTLDDYAMH (SEQ ID NO: 67殘基26-35) GINWNSANIGYADSVKG (SEQ ID NO: 67殘基50-66) VPGYSGGWIDAFDV (SEQ ID NO: 67殘基99-112)
   VL-基因 VL CDR1 VL CDR2 VL CDR3
P1-061015.IgG1.3 L6 RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 96殘基24-35) DASNRAT (SEQ ID NO: 96殘基51-57) QQYNSYPYT (SEQ ID NO: 96殘基90-98)
P1-061029.IgG1.3 A27 RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 68殘基24-35) GASSRAT (SEQ ID NO: 68殘基51-57) QQYGSSPFT (SEQ ID NO: 68殘基90-98)
實例 9 ： 進一步改造 P1-061015 及 P1-061029 抗 VISTA Ab 以產生酸性 pH 選擇性抗體 此實例闡述進一步改造實例2中所鑑別之可變區P1-061015及P1-061029以獲得在pH 6.0下之結合相對於pH 7.4具有較高k解離 比率之抗huVISTA可變區。
藉由分別在P1-061015及P1-061029之VH CDR中引入特異性突變來構建兩個庫。該等庫僅容許最可能改良低pH下之結合之胺基酸取代，亦即天門冬胺酸、麩胺酸及組胺酸。該庫亦容許每一CDR中之單一及雙胺基酸取代及CDR中之重組(每條鏈中最多6個胺基酸取代)。圖7A展示引入P1-061029之重鏈CDR3胺基酸序列中以形成P1-061029庫之突變。該圖指示，排除特定序列以避免引入易感性(例如DG)。
藉由在pH 6.0下結合全長hVISTA數輪經由酵母表面展示來篩選’029及‘015庫。藉由在正向(pH 6.0 huVISTA結合)及負向(pH 7.4 huVISTA結合) (展示於圖7B中)選擇之間雙態切換來實施其他輪選擇，其中在負向選擇輪中收集並不在pH 7.4下結合VISTA之庫成員。藉由NGS分析選擇輸出。經由流式細胞術分析在第9輪選擇之後在pH 6.0下結合huVISTA之’029庫成員在pH 6.0及pH 7.4下與人類VISTA之結合。圖7C展示代表性二維流式細胞術繪圖，其展示在第9輪選擇之後之變體池。VISTA結合繪示於y軸上，且變體抗體表現繪示於x軸上。展示各種抗體濃度及pH下之結合數據。該等結果證實了尤其在20 nM下與人類VISTA之極強pH 6選擇性結合。
使用不同方法自‘029庫分離其他‘029子代純系。一些純系與藉由第一方法所鑑別者相同，且分離9種其他純系。
將自‘029庫分離且選擇用於進一步分析之19種純系再格式化為IgG1.3抗體。該等純系之重鏈CDR相對於‘029 VH CDR之胺基酸差異展示於表5中。 表5：衍生自‘029親代抗體之抗體之VH CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列(由下劃線隔開)
Figure 02_image001
藉由表面電漿共振(SPR)量測製備‘029子代純系及親代‘029抗體(格式化為IgG1.3抗體)中之每一者之若干製劑在pH 6.0及7.4下與人類VISTA之結合。使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)實施SPR分析以量測VISTA Ab於酸性及中性pH之k解離 及KD 結合親和力。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 ug/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽2,000 RU之蛋白質A靶固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween® 20)電泳緩衝液在pH 7.4及6.0下實施SPR實驗。將抗體在pH 7.4 PBST中稀釋至25 nM，且以5 ul/min在活性生物感測器流動槽中捕獲60秒。在pH 7.4及6.0電泳緩衝液中製備50 - 5 nM濃度系列之單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)，且以40 ul/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。每一VISTA抗體之親和力常數KD 計算為速率常數比率k解離 /k締合 。
每一抗體之最大(或量級)人類VISTA結合反應定義為在50nM VISTA注射結束時之扣除參考之「結合」報告點反應，且以反應單位(RU)來報告。每一抗體之最大人類VISTA結合反應(RU)繪示於圖7D中。將平均結合反應(二至四個重複抗體之間)繪圖，且誤差槓代表標準偏差。結果指示，所選‘029子代純系在pH 6.0下結合hVISTA，但在pH 7.4下並不結合(代表pH 7.4下之結合之空圓皆位於圖形底部，親代‘029純系除外)。
藉由SPR使用上述方法測定‘029及其子代在pH 6.0下之k解離 速率，且表示於圖7E中。圖中之虛線代表‘029之k解離 速率，且虛線左側之純系在pH 6.0下之k解離 速率慢於親代‘029抗體，而在右側者在pH 6.0下之k解離 速率快於親代‘029抗體。
‘029、‘761及‘767抗體於中性及酸性pH之代表性hVISTA SPR結合感測圖展示於圖7F中。繪示扣除參考之50 nM及5 nM huVISTA感測圖。於中性pH，觀察到‘761及‘767具有＜10 RU之VISTA結合信號，由此適當量測及比較‘761及‘767與‘029之k解離 及KD ，需要利用μM VISTA濃度於生理pH之SPR動力學分析。
對於此分析而言，將‘029、‘761及‘767再格式化為hIgG1f同型且表示為標準hIgG1f及hIgG1f無岩藻醣基化形式以與hIgG1.3f Fc進行比較。使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)實施SPR動力學分析以量測VISTA Ab於酸性及生理pH之k解離 及KD 結合親和力。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 μg/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽2,000 RU之蛋白質A固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4及6.0下實施SPR實驗。將抗體在pH 7.4 PBST中稀釋至25 nM，且以5 ul/min在活性生物感測器流動槽中捕獲45秒。在電泳緩衝液中製備1600 - 0.78 nM (pH 7.4)及100 - 0.78 nM (pH 6.0)之濃度系列之單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)，且以40 ul/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。每一VISTA抗體之親和力常數KD 計算為速率常數比率k解離 /k締合 。計算在pH 7.4/pH 6.0下之k解離 及KD 比率以比較於酸性pH相對於生理pH之解離速率及親和力改良。儘管先前不能使用50 nM hVISTA測定‘761及‘767之中性pH結合速率常數(圖7D及7F)，但增加中性pH VISTA濃度範圍至1.6 μM使得該等純系產生擬合至1:1結合模型之結合反應(＞ 10 RU)。該等酸性選擇性VISTA抗體之動力學數據展示於表6中。‘029親代在兩種pH下展現等效k解離 ，而‘761及‘767展現pH 6較pH 7.4具有10倍以上之k解離 選擇性且pH 6較pH 7.4具有2000倍以上之KD 選擇性。人類VISTA結合速率常數在hIgG1.3f、hIgG1f及無岩藻醣基化hIgG1f同型變體中係保守的。 表6：如藉由SPR所測定之VISTA抗體之結合特性
抗體 同型 pH 7.4 pH 6.0 kd 比率 (7.4/6) KD 比率 (7.4/6)
ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
P1-061029 hIgG1.3f 1.6E+05 6.8E-03 4.2E-08 1.1E+06 7.9E-03 7.2E-09 0.9 5.8
hIgG1f 1.7E+05 7.4E-03 4.2E-08 1.1E+06 8.0E-03 7.1E-09 0.9 5.9
hIgG1f無岩藻醣基化 1.7E+05 7.2E-03 4.1E-08 1.1E+06 7.8E-03 6.9E-09 0.9 5.9
P1-068761 hIgG1.3f 3.8E+03 4.2E-02 1.1E-05 3.7E+05 1.6E-03 4.3E-09 26.3 2558.1
hIgG1f 1.2E+03 4.2E-02 3.5E-05 3.6E+05 1.5E-03 4.2E-09 28.0 8333.3
hIgG1f無岩藻醣基化 5.1E+03 4.2E-02 8.2E-06 3.7E+05 1.5E-03 4.1E-09 28.0 2000.0
P1-068767 hIgG1.3f 1.9E+03 3.6E-02 1.9E-05 3.3E+05 2.6E-03 7.8E-09 13.8 2435.9
hIgG1f 1.5E+03 3.2E-02 2.2E-05 3.2E+05 2.6E-03 8.0E-09 12.3 2750.0
hIgG1f無岩藻醣基化 1.3E+03 3.3E-02 2.4E-05 3.3E+05 2.6E-03 7.9E-09 12.7 3038.0
α-VISTA酸性pH敏感性 hIgG1.3f 2.2E+05 7.8E-04 3.6E-09 2.8E+06 9.0E-02 3.2E-08 0.01 0.1
使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)在介於pH 7.4與pH 6.0之間之pH值下(亦即在pH 6.9及pH 6.45下)量測P1-061029 (「‘029」)、P1-068761 (「‘761」)及P1-068767 (「‘767」) (呈IgG1.3抗體形式)之人類VISTA結合動力學。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 ug/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽2,000 RU之蛋白質A靶固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4、6.9、6.45及6.0下實施分析。將抗體在pH 7.4 PBST中稀釋至25 nM，且以5 ul/min在活性生物感測器流動槽中捕獲45秒。在pH 7.4、6.9、6.45及6.0電泳緩衝液中製備100 - 0.78 nM濃度系列之單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)，且以40 ul/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。每一VISTA抗體之親和力常數KD 計算為速率常數比率k解離 /k締合 。計算k解離 及KD 在每一pH下相對於pH 6.0之比率以評估VISTA k解離 及KD 如何隨緩衝液pH移位至生理pH而變化，且展示於表7中。‘029親代在每一測試pH下展現一致之k解離 ，而‘761及‘767子代展現在pH 6.9下與pH 6.0相比VISTA k解離 迅速至少10倍且VISTA KD 弱100倍。隨著緩衝液pH自酸性值移位至生理值，‘761及‘767之VISTA k解離 及KD 皆變弱。自表7參考用於對比之‘761及‘767之生理pH數據且使用星號(*)指出。 表7： ‘029、‘761及‘767抗體在不同pH值下之動力學結合特性
抗體 pH ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) 對 pH 6.0 之 k 解離 比率 對 pH 6.0 之 KD 比率
P1-061029 (親代) 6.0 2.9E+06 5.7E-03 2.0E-09 1.0 1.0
6.45 7.4E+05 4.0E-03 5.3E-09 0.7 2.7
6.9 4.1E+05 5.7E-03 1.4E-08 1.0 7.1
7.4 2.5E+05 6.4E-03 2.6E-08 1.1 13.2
P1-068761 6.0 6.0E+05 6.6E-04 1.1E-09 1.0 1.0
6.45 1.1E+05 2.1E-03 2.0E-08 3.2 18.4
6.9 4.8E+04 8.9E-03 1.9E-07 13.4 170
7.4 * 3.8E+03 4.2E-02 1.1E-05 ~ 63.6 ~10000
P1-068768 6.0 5.6E+05 1.9E-03 3.4E-09 1.0 1.0
6.45 1.3E+05 4.8E-03 3.8E-08 2.5 11.0
6.9 7.4E+04 2.9E-02 4.0E-07 15.3 115.1
7.4 * 1.9E+03 3.6E-02 1.9E-05 ~ 19.0 ~5000
表7中之數據指示，‘761及‘767在pH 6.45下對hVISTA之結合親和力低於pH 6.0至少10倍；‘761及‘767在pH 6.9下對hVISTA之結合親和力低於pH 6.0至少100倍；且‘761及‘767在pH 7.4下對hVISTA之結合親和力低於pH 6.0至少1000倍。
‘015庫亦顯示與VISTA之pH 6選擇性結合之輕微偏好。子代純系相對於‘015 VH CDR之胺基酸差異展示於表8中。經由SPR使用與針對上述‘029分析所闡述相同之方法來量測‘015子代純系及親代‘015 (皆呈IgG1.3抗體形式)中之每一者之若干製劑與人類VISTA在pH 6.0及7.4下的結合，且展示於表8中。 表8：衍生自‘015親代抗體之抗體之VH CDR1、CDR2及CDR3胺基酸序列(由下劃線隔開)
Figure 02_image003
‘029及’015及其子代純系與huVISTA在pH 6.0及7.4下之結合動力學(如藉由SPR所測定)之匯總展示於表9及10中。 表9： ‘029純系及其子代之huVISTA動力學匯總及VH CDR序列
ID Avg 7.4 ka (1/Ms) Avg 7.4 kd (1/s) Avg 7.4 KD (M) Avg 6.0 ka (1/Ms) Avg 6.0 kd (1/s) Avg 6.0 KD (M) VH CDR 1 (pos 26-35) VH CDR 2 (pos 50-66) VH CDR 3 (pos 99-110) SEQ ID NO
P1-069077 6 .0 E+04 1.9E-03 3.1E-08 6.3E+05 1.2E-04 1.9E-10 .... E . E … ...... DE ......… .............. 47
P1-069065 5.9E+04 2.3E-03 3.9E-08 5.7E+05 2.2E-04 3.8E-10 .... E . E … ...... DD ......… .............. 23
P1-069075 1.3E+05 2.3E-03 1.8E-08 1.3E+06 2.9E-04 2.2E-10 .... E ..… .... D .. E ......… ..... H .....E.. 43
P1-069071 4.3E+04 4 .0 E-03 9.3E-08 7 .0 E+05 5.1E-04 7.3E-10 .... E . E … ....... D ......… ..... E .....… 35
P1-069061 弱、迅速 kd 4.3E+05 1.1E-03 2.5E-09 .... E ..… ....... E ......… ...........E.D 15
P1-069069 9.0E+04 7.5E-03 8.4E-08 1.4E+06 1.2E-03 8.6E-10 .......... ...... EE ......… ...........D.. 31
P1-068761 弱、迅速 kd 3.8E+05 1.4E-03 3.8E-09 .... E . E … ...... EE ......… ..... H .....E.. 51
P1-069059 弱、迅速 kd 3.4E+05 1.6E-03 4.8E-09 .... E ..… ...... DH ......… ...........E.D 11
P1-068767 弱、迅速 kd 3.4E+05 2.6E-03 7.6E-09 .... E ..… .. D ... E .......… ...........E.D 55
P1-068773 弱、迅速 kd 3 .0 E+05 2.9E-03 9.4E-09 .... E ..… .. D ... D .......… ...........E.D 59
P1-069063 1.2E+05 2.7E-02 2.3E-07 1.9E+06 4.4E-03 2.4E-09 .... E ..… ....... E ......… ...........D.E 19
P1-069067 1 .0 E+05 2.7E-02 2.9E-07 1.7E+06 4.5E-03 2.7E-09 .......... ...... EE ......… ...........D.E 27
P1-069073 弱、迅速 kd 6.1E+05 5.8E-03 9.4E-09 .... E . E … ....... E ......… ...........E.. 39
P1-061029 2.9E+05 5.6E-03 1.9E-08 1.6E+06 5.8E-03 3.6E-09 GFTLDDYAMH GINWNSANIGYADSVKG VPGYSGGWIDAFDV 67
P1-068765 不結合 3.7E+05 7 .0 E-03 1.9E-08 ... DE ..… ...... EE ......… ...........E.D 63
P1-068757 不結合 8.9E+05 1.7E-02 1.9E-08 .... E . E … ...... EE ......… ...........E.D 71
P1-068771 不結合 7.6E+05 1.8E-02 2.5E-08 .... E . E … ...... HE ......… ...........E.D 75
P1-068769 不結合 8.1E+05 4 .0 E-02 5.5E-08 .... E . E … ...... DH ......… ...........E.D 83
P1-068775 不結合 1.8E+06 4.7E-02 2.3E-08 .... E . E … .. D ... EE ......… ..... H .....E.D 79
P1-068759 不結合 1.3E+06 8 .0 E-02 6 .0 E-08 .... E . E … .. D ... E .......… ...........E.D 87
表10： ‘015純系及其子代之huVISTA動力學匯總及VH CDR序列
純系 Avg 7.4 ka (1/Ms) Avg 7.4 kd (1/s) Avg 7.4 KD (M) Avg 6.0 ka (1/Ms) Avg 6.0 kd (1/s) Avg 6.0 KD (M) HCDR 序列 (pos 26-35)  (pos 50-66)     (pos 99-110) SEQ ID NO
P1-061015 2.3E+05 2E-03 8.8E-09 1.8E+06 9.5E-04 5.4E-10 GFTFSSYAMH_IIWYDGSNKYYADSVKG_DSGFYSSYYFDY 95
P1-068748 不結合 1.4E+06 1.5E-03 1 .0 E-09 .....HH..._........DD......._.....D..... 。 99
P1-068744 1.3E+06 1.8E-03 1.3E-09 .....E...._H.........E......_.....E.....E 103
P1-068736 8.4E+06 9.5E-03 1.1E-09 .....E...._.D.......D......._.....D.....D 107
P1-068752 6.1E+06 3.4E-02 5.6E-09 .........._E........D......._.....D.....E 111
P1-068740 過快 4.7E-02 ND .....D...._.......D.D......._.....D.....D 115
P1-068742 過快 ＞1E-02 ND .....D...._.......D.D......._.....ED..... 119
P1-068746 過快 ＞1E-02 ND .........._........HH......._.....D...… 123
P1-068750 弱 .....D.D.._E..D............._.EE........ 。 127
因此，鑑別若干如下‘029子代純系：其與‘029親代相比維持或改良在pH 6.0下關於VISTA-ECD之k解離 ，且亦於生理pH顯示較弱k解離 或損失VISTA結合。‘015子代對VISTA-ECD展現酸性pH選擇性結合，且於中性pH未檢測到VISTA結合，但所有‘015子代分析皆在pH 6.0下產生快於‘015親代之k解離 。
實例 10 ： P1-061015 子代 P1-068744 及 P1-068748 重鏈之進一步改造 為進一步測試‘015子代P1-068744及P1-068748之pH選擇性，使‘744及‘748抗體中之每一者之重鏈CDR內之特定胺基酸選擇性回復至親代P1-061015胺基酸殘基。下表展示‘744及‘748子代中之每一者之細節及其CDR自其親代抗體之彼等之變化形式。
比較P1-068744重鏈與其親代抗體P1-061015之重鏈(比較SEQ ID No: 95及103)，如下文表11中所展示，其中P1-068744在重鏈CDR中之特定位置含有若干鹼性殘基。該等殘基係CDR1位置31之E殘基、CDR2位置50之H殘基、CDR2位置60之E (此變化之回復在本文中稱為E59Y -參見下表)、CDR3位置104之E (此變化之回復在本文中稱為E100S -參見下表)及CDR3位置110 (CDR3之最後位置)之E (此變化之回復在本文中稱為E102Y)。
比較P1-068748重鏈與抗體P1-061015之重鏈，如下文表12中所展示(且比較SEQ ID No. 95及99)，其中前者亦在重鏈CDR中含有若干鹼性殘基。具體而言，CDR1位置31及32之H殘基、CDR2位置58及59之D殘基(然而，回復體在本文中稱為D57K及D58Y)及CDR3位置104之D殘基(此變化之回復體在本文中稱為D100S)。 表11：  P1-068744子代之重鏈胺基酸序列與P1-061015及P1-068744重鏈胺基酸序列(前兩列)之對比。HC CDR序列加有下劃線。
Figure 02_image005
Figure 02_image007
表12：  P1-068748子代之重鏈胺基酸序列與P1-061015及P1-068748重鏈胺基酸序列(前兩列)之對比。HC CDR序列加有下劃線。
Figure 02_image009
Figure 02_image011
可以各種方式來測試所得回復體抗體。舉例而言，使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)根據下列方案來量測結合動力學。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 μg/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽2,000 RU之蛋白質A靶固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4、6.7及6.0下實施分析。將抗體在pH 7.4 PBST中稀釋至25 nM，且以5 μl/min在活性生物感測器流動槽中捕獲40秒。在pH 7.4、6.7及6.0電泳緩衝液中製備100 - 10 nM濃度系列之單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)，且以40 μl/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。
每一VISTA抗體之親和力常數KD 計算為速率常數比率k解離 /k締合 。計算Rmax%以比較pH如何影響抗體對VISTA之結合能力，且代表相對於預計最大VISTA結合反應之所量測最大VISTA結合反應。Rmax%定義為每一抗體在100 nM VISTA注射結束時扣除參考之「結合」報告點反應(Rmax)相對於預計VISTA結合反應(Rexp)之比率。Rexp計算如下：Rexp = [ (VISTA-ECD分子量/mAb分子量) × (mAb 「捕獲」報告點反應(RU) ] × 2個結合位點/mAb。
實例 11 ： VISTA 抗體純系與人類 VISTA 之 pH 依賴性結合 可量測抗體純系與經改造以異位表現全長人類VISTA (具有D187E取代之SEQ ID NO: 1)之Raji細胞之pH依賴性結合。可(例如)在pH 6.0 - 8.1(例如pH 6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.6、7.0、7.2、7.4、8.0及/或8.1)下量測結合。
舉例而言，預先量測純系‘761及‘767與經改造以異位表現全長人類VISTA (具有D187E取代之SEQ ID NO: 1)之Raji細胞之pH依賴性結合。在此實驗中，將‘761及‘767格式化為IgG1.3抗體，且藉由抗人類IgG二級抗體(Jackson Immunoresearch目錄號109-065-098)量測結合。展示於圖8A-8B中之結果指示，‘761 (圖8A)及‘767純系(圖8B)在pH 7.2及8.1下具有較差結合，但於酸性pH、尤其在pH 6.0、6.1、6.2及6.4下具有較佳結合。結合MFI繪示於y軸上且一級抗體濃度以對數標度繪示於x軸上。亦展示非線性回歸。
圖8C展示來自圖8A-B中所闡述之實驗之數據，該試驗量測P1-068767 (圓)及同型匹配非特異性對照抗體(三角形)在不同pH下與表現3125 ng/mL人類VISTA之Raji細胞之結合。「pH50 」 (損失50%之P1-068767結合之pH)大約為6.6。結合MFI繪示於y軸上，且緩衝液pH繪示於x軸上。亦展示非線性回歸。
圖8D展示結合人類單核球之同型匹配非特異性對照抗體(pH 7.0及6.0分別為填充圓及未填充圓)、抗VISTA mAb 2 (「對照」，參見圖6C，pH 7.0及6.0分別為填充正方形及未填充正方形)、P1-068761 (pH 7.0及6.0分別為填充三角形及未填充三角形)及P1-068767 (pH 7.0及6.0分別為填充倒三角形及未填充倒三角形)之MFI。如圖8A-B中所闡述來檢測結合。非pH選擇性VISTA對照抗體(mAb 2)在兩種pH下皆結合單核球。兩種經改造酸性pH選擇性抗體皆在pH 6.0下充分結合單核球，但在pH 7.0下之結合並不優於非特異性同型匹配對照。因此，純系‘761及‘767於中性pH對VISTA具有弱結合或並不結合，而於酸性pH選擇性結合細胞上之VISTA。
圖8E展示‘029 (正方形)、‘761 (三角形)及‘767 (倒三角形)同等阻斷重組VISTA多聚體在pH 6.0下與活化人類CD4+ T細胞之結合，而非VISTA特異性對照抗體(圓)並不阻斷VISTA結合。如實例4中所闡述來實施此阻斷分析。該等數據展示，經改造酸性pH選擇性VISTA抗體仍能夠於酸性pH阻斷VISTA受體-配體結合。
量測P1-061029.IgG1f、P1-068761.IgG1f、P1-068767.IgG1f抗體、非VISTA特異性抗體及非VISTA特異性陰性對照抗體(皆表示為無岩藻醣基化IgG1抗體)經由抗體依賴性細胞毒性(ADCC)於生理pH對靶細胞(與圖8A-B中所闡述相同之表現人類VISTA之Raji細胞)之NK細胞特異性裂解。自PBMC經由負向珠粒選擇(StemCell Technologies目錄號19055)富集NK細胞並在補充有1 μM氫化可的松(hydrocortisone) (StemCell Technologies目錄號07904)及500 U/mL重組人類IL-2 (Peprotech目錄號200-02)之Myelocult™培養基(StemCell Technologies目錄號05150)中過夜培養。在分析當天，將異位表現人類VISTA之Raji細胞(闡述於圖8A-B中)與上述抗體及NK細胞一起培養。自上清液螢光信號(EnVision™讀板儀)來內插特異性裂解。自不含抗體之共培養物獲得自發性裂解信號，且藉由使用Delfia®裂解緩衝液(PerkinElmer目錄號4005-0010)裂解靶細胞來測定最大裂解信號。抗體特異性裂解計算為所觀察裂解除以(最大裂解信號減去自發性裂解信號)之百分比。
圖8F中所提供之結果展示P1-068761.IgG1f及P1-068767.IgG1f於生理pH介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)之功效小於P1-061029及陽性對照。
實例 12 ： VISTA 抗體在食蟹獼猴中之食蟹獼猴 VISTA 親和力及藥物動力學 可(例如)在食蟹獼猴如此實例中所闡述來測定本文之抗VISTA抗體之藥物動力學。
舉例而言，向人類抗體初始食蟹獼猴經靜脈內注射單一5 mpk劑量之於酸性及中性pH同等結合之VISTA抗體(「對照」；mAb2)、於酸性pH具有受損結合之VISTA抗體(「酸性pH敏感」，mAb3)或酸性pH選擇性抗體‘767以測定該等抗體之食蟹獼猴PK。每一抗體在注射後之血清濃度展示於圖9中。P1-068767.IgG1.3及對照抗VISTA抗體之平均滯留時間分別為717及22小時，從而指示酸性pH選擇性大大減小了VISTA抗體之靶標介導之藥物體內動向(TMDD)。儘管對照抗體(mAb 2)及酸性pH敏感性抗體(mAb 3)於生理pH等效結合VISTA，但酸性pH敏感性抗體具有7.6小時之較低平均滯留時間，從而證實了酸性pH結合對VISTA抗體再循環之重要性，如實例6及7中所闡述。結果展示，酸性pH選擇性抗體具有優良PK且由此更容易地在腫瘤或其他微環境中達成靶接合。
可於酸性及中性pH評估酸性pH選擇性及對照抗VISTA抗體之食蟹獼猴VISTA交叉反應性。可如本文所闡述使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)來量測VISTA Ab之結合親和力。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 ug/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽2,000 RU之蛋白質A固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4及6.0下運行分析。將抗體(格式化為IgG1.3抗體)在pH 7.4 PBST中稀釋至25 nM，且以5 μl/min在活性生物感測器流動槽中捕獲45秒。在電泳緩衝液中製備1600 - 0.78 nM (pH 7.4)及100 - 0.78 nM (pH 6.0)單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)及食蟹獼猴VISTA-ECD (AFKVATLYSL YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEIRHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY PSSSQESENI TAHHHHHHH；(SEQ ID NO: 326)之濃度系列，且以40 μl/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。每一VISTA抗體之親和力常數KD 計算為速率常數比率k解離 /k締合 。計算在pH 7.4/pH 6.0下之k解離 及KD 比率以比較於酸性pH相對於中性pH之解離速率及親和力差異。
為測試藥物動力學，向人類抗體初始食蟹獼猴經靜脈內注射單一5 mpk劑量之VISTA mAb2 (「對照」)、VISTA mAb3 (「酸性pH敏感」)或測試抗體。測定每一抗體在注射後之血清濃度。可如(例如)圖9中所展示來測定測試抗體及對照抗VISTA抗體之平均滯留時間。
實例 13 ： 與高 pI 蛋白質之 pH 選擇性結合特異性 可藉由SPR於中性及酸性pH使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)根據下列方案來評估抗體純系與VISTA及其他高pI蛋白質之結合特異性。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 μg/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM3生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽800 RU之蛋白質A靶固定密度。在25℃下使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4及6.0下實施SPR實驗。將抗體(例如格式化為IgG1.3抗體)在pH 7.4 PBST中稀釋至50 nM，且以5 μl/min在活性生物感測器流動槽中捕獲60秒。在pH 7.4及6.0電泳緩衝液中製備100 - 10 nM單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)、抗生物素蛋白(ThermoFisher Scientific目錄號21128)、細胞色素C (Sigma目錄號C2867)、BSA (Calbiochem目錄號126593)及單價對照抗原(「Ag」)之濃度系列，且以50 μl/min注射於經捕獲抗體上以評估結合特異性。在分析循環之間，可使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。使用Biacore® T200評估軟體v.2.0檢查參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖。
針對P1-061029及兩種其子代抗體P1-068761及P1-068767實施之此一實驗之結果展示於表13中。 表13：VISTA純系與具有高pI之蛋白質之結合
試樣 等電點(pI) ‘029 ‘761 ‘767 抗Ag PBS (無Ab)
pH 6 pH 7.4 pH 6 pH 7.4 pH 6 pH 7.4 pH 6 pH 7.4 pH 6 pH 7.4
huVISTA -His 6.9                              
抗生物素蛋白 10                              
Cyto- Chrome C 10.7                              
BSA 4.7                              
Ag-His 6.5                              
在表13中，藉由填充灰色盒指示特異性結合(定義為在試樣注射結束時＞10 RU之SPR結合反應)。「抗Ag」係結合VISTA之對照Ab。‘029純系於酸性及中性pH對VISTA具有特異性。‘029子代純系‘761及‘767於酸性pH對VISTA具有特異性，而對照抗體亦維持抗原特異性。在此分析中未觀察到pI對照蛋白與蛋白質A參考表面之非特異性結合(「NSB」)。因此，引入‘761及‘767之VH CDR中之帶電胺基酸並不導致該等抗體靜電結合其他高pI蛋白質(例如抗生物素蛋白及細胞色素C)或低pI蛋白質(例如BSA)。
實例 14 ： T 細胞活化之抑制 此實例闡述可經實施以測定抗體阻斷Jurkat T細胞活化之hVISTA抑制之能力之分析。
使用與實例5中所闡述相同之分析。簡言之，將表現NFkB螢光素酶報告基因之Jurkat (人類T細胞系)細胞在各種pH下與表現人類VISTA及抗人類T細胞受體激動劑抗體OKT3之單鏈可變片段之293T細胞一起共培養。將抗VISTA抗體或同型匹配非VISTA特異性對照抗體添加至經共培養細胞中。Jurkat活化展示為螢光素酶單位及在使用抗VISTA治療相對於對照時螢光素酶信號之倍數增加。
實例 15 ： 突變分析鑑別賦予 VISTA 抗體 pH 依賴性結合性質之關鍵殘基
抗體P1-068761.IgG1.3及P1-068767.IgG1.3含有5-6個來自P1-061029之突變(表7)。實施突變分析以鑑別賦予VISTA抗體pH依賴性性質之重要關鍵殘基。因此，合成P1-068761及P1-068767之N-1 (相對於P1-061029具有1個胺基酸回復)及N-2 (相對於P1-061029具有2個胺基酸回復)變體組，表示為IgG1.3，且分析其在pH 6、pH 6.7及pH 7.4下與huVISTA之結合。
使用Biacore® T100儀器(GE Healthcare)量測結合動力學。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 ug/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上，目標為每一流動槽2,000 RU之蛋白質A靶固定密度。在37℃使用PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)電泳緩衝液在pH 7.4、6.7及6.0下實施分析。將抗體在pH 7.4 PBST中稀釋至25 nM，且以5 ul/min在活性生物感測器流動槽中捕獲40秒。在pH 7.4、6.7及6.0電泳緩衝液中製備100 - 10 nM濃度系列之單價hVISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)，且以40 ul/min注射於經捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15秒注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k締合 )及kd (k解離 )，且在Biacore® T200評估軟體v.2.0中擬合至1:1結合模型。
每一VISTA抗體之親和力常數KD 計算為速率常數比率k解離 /k締合 。計算Rmax%以比較pH如何影響抗體對VISTA之結合能力，且代表相對於預計最大VISTA結合反應之所量測最大VISTA結合反應。Rmax%定義為每一抗體在100 nM VISTA注射結束時扣除參考之「結合」報告點反應(Rmax)相對於預計VISTA結合反應(Rexp)之比率。Rexp計算如下：Rexp = [ (VISTA-ECD分子量 mAb分子量) × (mAb 「捕獲」報告點反應(RU) ] × 2個結合位點/mAb。
針對P1-068761回復變體所獲得之SPR結果展示於圖10A中，其根據pH 6.0 k解離 自最緩慢至最迅速進行分級。在表格中，將對100 nM hVISTA展現弱或不結合反應(＜ 10 RU)之抗體歸類為非結合性(NB)。結果指示，需要位置32之E (亦即‘761之VH CDR1中之胺基酸殘基7)及100f (‘761之VH CDR3中之胺基酸殘基12)二者來維持酸性pH選擇性，此乃因相對於P1-061029親代序列之該等回復容許於生理pH顯著結合hVISTA (Rmax%＞ 10)。進一步之分析揭示，具有E55A (‘761之VH CDR2中之胺基酸殘基6)回復之變體維持酸性pH選擇性且展現在P1-068761 2倍內之相當之結合動力學。與之相比，儘管具有H100G、E56N及E30D (分別為‘761之VH CDR3之胺基酸殘基12、VH CDR2之胺基酸殘基7及VH CDR1之胺基酸殘基4)回復之變體維持酸性pH選擇性，但該等mAb亦展現於酸性pH之k解離 快於P1-068761約3倍，從而使得該等突變體於酸性pH之解離速率較接近P1-061029親代。因此，向原始P1-061029純系中添加G100H、N56E及/或D30E突變有助於觀察於酸性選擇性P1-068761純系中之酸性pH VISTA親和力改良。
針對P1-068767回復變體所獲得之SPR結果展示於圖10B中，其根據pH 6.0 k解離 自最緩慢至最迅速進行分級。結果指示，需要位置102之D (‘767之VH CDR3中之胺基酸殘基14)來維持酸性pH選擇性，且D102V回復至P1-061029親代序列容許於中性pH顯著結合hVISTA (Rmax%＞ 10)。進一步之分析揭示，具有E30D、D52N及E55A (分別為‘767之VH CDR1之胺基酸殘基4、VH CDR2之胺基酸殘基3及VH CDR3之胺基酸殘基6)回復之變體維持酸性pH選擇性且展現在P1-068767 2倍內之相當之pH 6.0結合動力學。與之相比，具有E100fF (‘767之VH CDR3之胺基酸殘基12)回復之變體維持酸性pH選擇性，但於酸性pH之k解離 快於P1-068767 3倍以上。顯而易見，具有E100fF回復之變體於酸性pH所展現之k解離 遠快於親代mAbP1-061029。
實例 16 ： VISTA 抗體之生物物理性質 可藉由如此實例中所闡述之下列分析及生物物理技術來比較P1-068744、P1-068748及其各別子代抗體與親代P1-061015抗體(例如皆具有IgG1.3恆定區)之物理及化學性質。
使用Agilent 1260 HPLC儀器且使用Shodex™ KW403-4F管柱(4.6mmID × 300mmL)在含有100mM磷酸鈉、150mM氯化鈉之緩衝液(pH7.3，0.2 um過濾，以0.30 mL/min之流速運行)中獲取分析型SEC數據。藉由經設定在280nm下收集之Agilent 1260 Infinity二極體陣列檢測器收集數據並藉由Agilent Chemstation軟體(Agilent, Santa Clara, CA)分析。
在具有Alcott 720NV自動採樣儀之ProteinSimple iCE3儀器上獲取成像毛細管等電聚焦(icIEF)數據。將抗體試樣與分離混合物混合以產生以下最終濃度：0.2 mg/ml抗體、0.35%甲基纖維素、2.0 M脲、1% v/v Pharmalyte pI 5-8及3% v/v Pharmalyte pI 8-10.5。使用1500V下之1min預聚集時間及3000V下之10min聚焦時間在ProteinSimple cIEF FC塗覆柱(產品號101701)中分析該等試樣。使用iCE CFR軟體V4.3.1.5352分析數據。
藉由動態光散射(DLS)測定抗體流體動力學大小且藉由螢光光譜術及靜態光散射(SLS)使用UNcle分子表徵儀器(Unchained Labs)來表徵熱穩定性。以2mg/ml濃度在1×PBS緩衝液中製備抗體，且然後在不同pH下使用40 mM Tris 1:1稀釋於1× PBS中或使用40 mM檸檬酸鹽稀釋於1×PBS中以產生1mg/ml抗體在pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0或9.0下於20mM Tris / 1×PBS或20mM檸檬酸鹽/ 1×PBS中之最終試樣。將該等試樣加載至UNi比色柱中並在稀釋成不同pH調配物1小時內進行分析。在25℃下收集DLS數據，每5 s獲取4次。使用UNcle分析軟體V2.0版擬合強度自相關函數。藉由自25℃至90℃掃描試樣來獲得熱變性數據，掃描速率為0.5°/min且在266 nm及473 nm下激發。在250 nm - 720 nm之範圍內獲取螢光數據。使用UNcle分析軟體V2.0版分析螢光及SLS數據。
在UNcle分子表徵儀器(Unchained Labs)上使用基於珠粒之DLS方法(其量測聚苯乙烯珠粒在所調配抗體溶液存在下之擴散速率)根據Unchained Labs推薦方案來量測抗體之表觀黏度。簡言之，在含有0.5% Tween 80之調配緩衝液中製備100 nm聚苯乙烯珠粒(Thermo Scientific目錄號3100A)之10%溶液。將3μl此聚苯乙烯珠粒混合物添加至30μl調配抗體(不同Ab濃度，於20 mM組胺酸、260 mM pH 6.0蔗糖中)中且將所得蛋白質/珠粒混合物加載至UNi比色柱之3個單獨泳道(每一泳道9 μl)以用於一式三份分析。使用UNcle分析軟體V2.0版且使用1.3 cP之參考黏度來分析數據。
在加速應力條件下藉由在20 mM組胺酸、260 mM pH 6.0蔗糖中製備50 mg/ml抗體試樣且暴露於40℃熱應力4週來研究抗體之物理穩定性。在40℃培育之前即刻(時間0 = t0)以及在1週(1 w)及4週(4 w)熱應力之後取出試樣，且使用調配緩衝液將試樣稀釋至2 mg/ml並藉由aSEC分析。使用Agilent 1260 HPLC儀器且使用Shodex™ KW403-4F管柱(4.6mmID × 300mmL)在含有100mM磷酸鈉、150mM氯化鈉之緩衝液(pH7.3，0.2 um過濾，以0.30 mL/min之流速運行)中獲取aSEC數據。藉由經設定在280nm下收集之Agilent 1260 Infinity二極體陣列檢測器收集數據並藉由Agilent Chemstation軟體(Agilent, Santa Clara, CA)分析。
在pH 3-9範圍內使用動態光散射(DLS)於不同pH之緩衝液中來測定抗體之寡聚狀態。單體抗體試樣之流體動力學半徑(Rh)值通常在4.8 - 5.7 nM範圍內。
可在pH 3-9範圍內藉由監測在不同pH之緩衝液中隨溫度而變化之螢光及靜態光散射來量測熱穩定性。藉由螢光來測定第一熱變性轉變溫度(Tm1) (其通常代表IgG1抗體之CH2結構域之變性)，且藉由靜態光散射來量測聚集起始溫度(Tagg) (其通常代表IgG1抗體之FAB結構域之變性)。
舉例而言，針對P1-061029及其P1-061761及P1-061767子代抗體實施之實驗之結果如下所述。分析型粒徑篩析層析(aSEC)數據展示，所有三種抗體皆可純化至高純度，其中每一抗體試樣由大於99.3%之單體(主峰)、小於0.7%之高分子量(HMW)物質及不可檢測含量之低分子量(LMW)物質組成(表14)。 表14：抗VISTA抗體之分析型SEC數據，其展示高分子量物質百分比(HMW%)、單體/主要物質百分比(主要%)及低分子量物質百分比(LMW%)。
試樣名稱 HMW% 主要 % LMW%
P1-061029 0.4 99.6 0.0
P1-068761 0.6 99.4 0.0
P1-068767 0.5 99.5 0.0
如藉由成像毛細管等電聚焦(icIEF)針對抗體P1-061029所測定之電荷變體特徵展示存在等電點(pI)為8.56之主要物質(69.4%)及30.6%之酸性物質。(圖12A-C.) P1-068761顯示pI為6.69之主要物質(66.4%)及33.6%之酸性物質。P1-068767顯示pI為6.63之主要物質(61.4%)及38.6%之酸性物質。因此，三種抗體中之酸性、鹼性及主要物質之分佈係類似的，但經改造抗體P1-068761及P1-068767之等電點顯著低於親代P1-061029抗體。
在pH 3-9範圍內使用動態光散射(DLS)於不同pH之緩衝液中來測定P1-061029、P1-068761及P1-068767之寡聚狀態。每一抗體之所有流體動力學半徑(Rh)值皆在4.8 - 5.7 nM範圍內，此係單體抗體試樣之典型值(表15)。此表明，該等抗體在1 mg/ml下於稀釋至pH介於3 - 9之間之調配物中之後第一小時內並不形成可檢測含量之高分子量聚集物質。 表15：如藉由DLS針對1 mg/ml抗VISTA抗體試樣在之pH3 - pH9範圍內所測定之流體動力學半徑。
pH 緩衝液 Rh (nm) Rh (nm) Rh (nm)
P1-061029 P1-068761 P1-068767
9 20mM Tris / 1 ×PBS 5.2 4.8 5.2
8 20mM Tris / 1 ×PBS 5.2 5.2 5.2
7 20mM Tris / 1 ×PBS 4.8 5.2 5.2
7 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 4.8 5.2 5.7
6 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 5.2 5.2 4.8
5 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 5.2 4.8 5.2
4 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 4.8 4.8 5.2
3 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 5.2 5.2 5.2
在pH 3-9範圍內藉由監測在不同pH之緩衝液中隨溫度而變化之螢光及靜態光散射來量測P1-061029、P1-068761及P1-068767之熱穩定性。藉由螢光測定第一熱變性轉變溫度(Tm1) (其通常代表IgG1抗體之CH2結構域之變性)且展示於表16中，且藉由靜態光散射量測聚集起始溫度(Tagg) (其通常代表IgG1抗體之FAB結構域之變性)且展示於表17中。於中性pH (pH 7.0)在Tris/PBS調配物中，三種抗體之Tm1值為P1-061029 (67.4℃)、P1-068761 (67.0℃)及P1-068767 (65.3℃)，其中Tagg值為P1-061029 (67.8℃)、P1-068761 (67.5℃)及P1-068767 (65.8℃)。每一抗體在檸檬酸鹽/PBS調配物中於相同中性pH 7.0或略高酸性pH 6.0下之Tm1皆在Tris /PBS pH 7.0值之0.7o 內。然而，對於每一抗體而言，Tm1值在較鹼性pH 8-9下略低(低0.3o - 1.1o )，且在較酸性pH 3-5下顯著更低。與中性pH相比，P1-061029之Tagg在較鹼性pH 8.0 - 9.0下在pH 7.0值之0.1o 內，在pH 5.0下低1.0o ，且在最酸性pH條件pH 3.0 - 4.0下更低(低6.1o - 19.6o )。P1-068761及P1-068767在pH 3.0 - 4.0下之Tagg亦顯著較低。然而，在pH 5.0下，P1-068761之Tagg僅低於pH 6.0下之Tagg 0.2o ，而P1-068767在pH 5.0下之Tagg低於在pH 6.0下2.2o ，從而證實每一抗體之Tagg具有一定差異(表17)。 表16：P1-061029、P1-068761、P1-068767在pH3 -pH 9之pH範圍內之熱穩定性(Tm1值)，如藉由螢光光譜術所測定
pH 緩衝液 Tm1 (℃) P1-061029 Tm1 (℃) P1-068761 Tm1 (℃) P1-068767
9 20mM Tris / 1 ×PBS 66.6 65.9 65.0
8 20mM Tris / 1 ×PBS 67.0 66.5 64.8
7 20mM Tris / 1 ×PBS 67.4 67.0 65.3
7 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 67.2 66.9 64.8
6 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 67.6 67.5 65.0
5 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 64.4 64.7 62.1
4 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 51.8 52.0 50.8
3 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 30.7 28.1 28.7
表17： P1-061029、P1-068761、P1-068767在pH3 -pH 9之pH範圍內之熱穩定性(Tagg值)，如藉由靜態光散射所測定
pH 緩衝液 Tagg (℃) P1-061029 Tagg (℃) P1-068761 Tagg (℃) P1-068767
9 20mM Tris / 1 ×PBS 67.7 67.1 66.0
8 20mM Tris / 1 ×PBS 67.8 67.5 65.8
7 20mM Tris / 1 ×PBS 67.8 68.2 65.9
7 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 67.8 68.1 65.7
6 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 68.1 68.9 65.6
5 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 66.8 68.7 63.7
4 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 61.7 63.6 56.9
3 20mM檸檬酸鹽 / 1 ×PBS 48.2 48.8 41.0
使用基於珠粒之DLS方法量測P1-061029、P1-068761及P1-068767之表觀黏度，該方法量測聚苯乙烯珠粒在經調配抗體溶液存在下之擴散速率。所有三種抗體在44 mg/ml下之對比展示，兩種經改造抗體與親代抗體在該等條件下具有類似黏度(表18)。在第二研究中，將P1-068761及P1-068767之其他蛋白質材料濃縮至較高濃度以分析在136 mg/ml、100 mg/ml及50 mg/ml下之黏度。該等數據展示在較高抗體濃度下具有增加之表觀黏度，其中P1-068761在136 mg/ml下之最大表觀黏度為5.7 ± 0.7且P1-068767為5.3 ± 0.6。 表18：抗體在25℃下於20mM組胺酸、260mM pH 6.0蔗糖中之表觀黏度(以cP表示)，如藉由基於珠粒之DLS方法所測定。該等值代表來自三個UNi泳道之數據之平均值及標準偏差
抗體 在 136 mg/ml 下之表觀黏度 (cP) 在 100 mg/ml 下之表觀黏度 (cP) 在 50 mg/ml 下之表觀黏度 (cP) 在 44 mg/ml 下之表觀黏度 (cP)
P1-061029 1.6 ± 0.1
P1-068761 5.7 ± 0.7 3.1 ± 0.0 1.4 ± 0.2 1.5 ± 0.4
P1-068767 5.3 ± 0.6 3.0 ± 0.3 1.7 ± 0.2 1.6 ± 0.2
在40℃之加速應力條件下研究P1-061029、P1-068761及P1-068767之50 mg/ml試樣在20 mM組胺酸、260 mM pH 6.0蔗糖中之物理穩定性4週。藉由aSEC在40℃培育之前即刻(時間0 = t0)以及在40℃應力1週(1w)及4週(4w)之後監測抗體試樣之寡聚狀態。該等數據展示，所有三種抗體皆在40℃下4週之後保留96%以上之單體以及低含量HMW物質(＜ 1.6 % HMW)及低含量LMW物質(＜ 2.0 % LMW) (表19)。 表19：抗VISTA抗體加速穩定性試樣之aSEC數據，其展示t0、1w及4w試樣之高分子量物質百分比(HMW%)、單體/主要物質百分比(主要%)及低分子量物質百分比(LMW%)。
抗體 試樣 HMW% 主要 % LMW%
P1-061029 t0 0.4 99.7 0.0
1w 0.5 99.4 0.2
4w 0.8 97.2 2.0
P1-068761 t0 0.6 99.4 0.0
1w 0.9 98.8 0.3
4w 1.6 96.4 2.0
P1-068767 t0 0.5 99.5 0.0
1w 0.8 98.9 0.3
4w 1.6 96.4 2.0
實例 17 ： 具有種系重鏈或輕鏈框架區取代之抗 VISTA 抗體之生成 可使抗VISTA抗體在其可變區框架序列中進一步發生突變。舉例而言，可將其進一步修飾，從而框架區更接近類似於發現於人類種系序列中者。
舉例而言，P1-061015、P1-068744、P1-068748及其各別子代中者輕鏈胺基酸殘基85係T，而在人類種系序列中其係V。因此，在一些實施例中，此殘基可突變回V。舉例而言，在某些實施例中，抗體P1-061015、P1-068744、P1-068748及其衍生物包括胺基酸殘基85係V之輕鏈。在該等抗體中，輕鏈包括含有序列D82 FAVYY87 (SEQ ID NO:569之位置82-87)而非D82 FATYY87 (SEQ ID NO: 96之位置82-87)之框架區。
實例 18 ： 抗 VISTA 抗體及抗 PD-1 抗體協同作用以誘發腫瘤排斥 為表徵阻斷VISTA之酸性pH選擇性配體界面在腫瘤中之效應，產生小鼠代用抗體VISTA.10，該抗體阻斷小鼠VISTA於酸性pH與小鼠T細胞之結合。(VISTA.10亦於生理pH結合mVISTA。)為避免Fc受體接合及任何後續效應功能，將VISTA.10轉化成具有點突變D265A之IgG1同型以避免Fc受體接合及效應功能{Clynes, 2000}。將MC38腫瘤經皮下植入小鼠中，且在腫瘤達到約70mm2 時，每三天向小鼠投與下列治療：組1：4個劑量之抗KLH mIgG1-D265A，30 mpk；組2：兩個劑量之抗PD-1 mIgG1-D265A，5 mg/kg；組3：4個劑量之抗VISTAmIgG1-D265A，30 mg/kg；及組4：抗PD-1 +抗VISTA組合。VISTA.10及PD-1阻斷性抗體之組合治療可在大部分植入MC38結腸直腸腺癌腫瘤之小鼠中誘發腫瘤排斥(圖15A-D)。抗PD-1及VISTA.10單一藥劑治療適當延遲腫瘤進展，但並不預防(圖15A-D)。
與該等結果一致，來自治療小鼠之腫瘤之離體分析展示，在經VISTA.10及抗PD-1治療之小鼠中，腫瘤浸潤性CD8+ T細胞及CD4+ T細胞之頻率分別增加5倍及10倍(圖15E-F)。其他白血球子組大多不受影響。組合療法亦使得顯著降低PD-1、LAG-3及TIM-3、T細胞耗竭及功能障礙之所有標記物在腫瘤浸潤性CD8+ T細胞上之表現(圖15E)。使用PD-1或VISTA抗體單獨治療僅對T細胞頻率及表型具有中等效應(圖15E-F)。腫瘤內骨髓樣細胞子組頻率(包含巨噬球、單核球骨髓樣源抑制細胞(MDSC)及顆粒球性MDSC之頻率)大多不受VISTA抗體治療影響。
為情景化VISTA抗體活性，向VISTA敲除小鼠植入MC38腫瘤並使用PD-1阻斷性或對照抗體治療。如圖15I中所展示，在對照治療組中，MC38腫瘤在VISTA敲除小鼠及其野生型同胎幼仔中等效生長。VISTA敲除小鼠對抗PD-1展現增加之反應性，從而暗示VISTA及PD-1組合效能。此反應性同樣與增加之腫瘤內CD4+及CD8+ T細胞相關。該等數據指示，於酸性pH阻斷VISTA結合之抗體足以逆轉VISTA調介之免疫抑制。
因VISTA於酸性pH選擇性發揮作用，故假設VISTA調介之抗腫瘤反應抑制主要發生於腫瘤床自身內。測試酸性pH選擇性人類VISTA阻斷性抗體P1-068767 (ʼ767)及其非pH選擇性親代抗體P1-061029 (ʼ029)在表現人類VISTA細胞外結構域而非內源性VISTA細胞外結構域之轉基因小鼠(人類VISTA基因嵌入小鼠，genOway)中之活性。與上述組合及VISTA敲除實驗一致，P1-061029及P1-068767在與小鼠PD-1阻斷性抗體組合時誘發相當之效能(圖15J-M)。
量測P1-068767及P1-061029在人類VISTA基因嵌入小鼠中之半衰期。如圖15N中所展示，P1-068767展現長於P1-061029幾乎20倍之平均滯留時間(MRT)，此指示在pH 7.4下之弱VISTA結合及由此減小之TMDD (分別為71小時及4.1小時)。
為在非轉基因模型中評價周邊VISTA之抗體接合，使用P1-068767及中性pH偏好抗體(稱為VISTA.4，相同申請者之單獨專利申請案系列進一步闡述VISTA.4)如下所述來治療食蟹獼猴。在經靜脈內向蛋白質初始食蟹獼猴中以5 mg/kg之劑量(n = 1/抗體)輸注10分鐘後評估VISTA.4及P1-068767。在輸注後0.17、0.5、2、4、6、24、48、72、168、216、240、336小時收集連續血樣。隨後，獲得血清試樣以用於使用配體結合分析進行抗體濃度分析，該分析採用重組VISTA作為捕獲劑且使用抗人類IgG Fc mAb作為檢測劑。分析之量化下限為1 ng/mL。藉由血清mAb濃度-時間數據之非分室分析使用Kinetica軟體(5.0版，Thermo Fisher Scientific)估計平均滯留時間。結果展示，P1-068767同樣展現極長之MRT (分別為717小時及7.6小時，圖6O)。該等結果表明，腫瘤微環境(而非在血液及非酸性組織中)中之VISTA阻斷可驅動抗腫瘤效能。
實例 19 ： VISTA.4 抑制 VISTA 與 PSGL-1 之結合 免疫受體P-選擇蛋白醣蛋白配體-1 (PSGL-1)在先前鑑別為VISTA配體(參見WO2018132476)。PSGL-1係選擇蛋白、尤其P-選擇蛋白之受體，且結合其一級配體，P-選擇蛋白係充分描述之白血球、血小板及內皮細胞之間之黏附相互作用之促進劑(Carlow, D.A.,等人，PSGL-1 function in immunity and steady state homeostasis. Immunol Rev, 2009. 230(1): p. 75-96，以及Abadier, M.及K. Ley, P-selectin glycoprotein ligand-1 in T cells. Curr Opin Hematol, 2017. 24(3): p. 265-273. 18)。PSGL-1亦已在慢性病毒感染、癌症腫瘤免疫性及一些自體免疫疾病之背景中鑑別為T細胞反應之負性調控劑(Angiari, S.等人，Regulatory T cells suppress the late phase of the immune response in lymph nodes through P-selectin glycoprotein ligand-1. J Immunol, 2013. 191(11): p. 5489-500；Matsumoto, M., M. Miyasaka及T. Hirata, P-selectin glycoprotein ligand-1 negatively regulates T-cell immune responses. J Immunol, 2009. 183(11): p. 7204-11；Nunez-Andrade, N.等人，P-selectin glycoprotein ligand-1 modulates immune inflammatory responses in the enteric lamina propria. J Pathol, 2011. 224(2): p. 212-21；Perez-Frias, A.等人，Development of an autoimmune syndrome affecting the skin and internal organs in P-selectin glycoprotein ligand 1 leukocyte receptor-deficient mice. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(11): p. 3178-89；Tinoco, R.等人，PSGL-1 Is an Immune Checkpoint Regulator that Promotes T Cell Exhaustion. Immunity, 2016. 44(5): p. 1190-203)。此免疫阻抑性功能似乎獨立於已知PSGL-1配體(Tinoco, R.等人，PSGL-1: A New Player in the Immune Checkpoint Landscape. Trends Immunol, 2017. 38(5): p. 323-335)。
在基於細胞之分析中，重組PSGL-1及重組P-選擇蛋白展示皆能夠阻斷VISTA多聚體與經活化人類CD4+ T細胞之結合。藉由CRISPR自經活化CD4+ T細胞缺失PSGL-1亦消融VISTA多聚體結合。另外，PSGL-1之異位表現展示足以使得VISTA能夠於酸性pH結合CHO細胞，且VISTA表現足以使得PSGL-1能夠於酸性pH結合293T細胞。
此實例展示，PSGL-1於酸性及生理pH等效結合P-選擇蛋白，但僅於酸性pH結合VISTA (圖17A)。使用Octet生物感測器分析利用VISTA、P-選擇蛋白及先前展示支持高親和力P-選擇蛋白結合之最小PSGL-1醣肽(胺基酸1-19，具有磺基酪胺酸及唾液醯基路易斯X碳水化合物轉譯後修飾)來實施實驗(Sako, D.等人，A sulfated peptide segment at the amino terminus of PSGL-1 is critical for P-selectin binding. Cell, 1995. 83(2): p. 323-319)。
PSGL-1之配體界面依賴於帶負電磺基酪胺酸及唾液醯基路易斯-X轉譯後修飾來以高親和力結合P-選擇蛋白(Sako等人，1995 Cell 83(2): p. 323-319)，且表現經非唾液醯基路易斯X修飾之PSGL-1之初始T細胞由此不能有效接合P-選擇蛋白。經唾液醯基路易斯X修飾之PSGL-1組成型表現於循環單核球及嗜中性球上，且誘導型表現於經活化T細胞上，此與VISTA與該等細胞類型於酸性pH之強結合一致。然而，發現VISTA結合初始及活化T細胞，從而表明，不同於P-選擇蛋白，VISTA獨立於唾液醯基路易斯X結合PSGL-1。在其他Octet生物感測器分析中發現，儘管VISTA及P-選擇蛋白二者優先結合具有唾液醯基路易斯X修飾之PSGL-1醣肽，但僅VISTA結合不含唾液醯基路易斯X之PSGL-1醣肽。另外，在不表現酶葡萄糖胺基(N-乙醯基)轉移酶(GCNT1)及α (1,3)-岩藻糖基轉移酶-7酶(FUT7)之細胞中產生之PSGL-1缺乏唾液醯基路易斯X修飾且較差地結合P-選擇蛋白(圖25A)。與之相比，VISTA獨立於唾液醯基路易斯X結合PSGL-1 (圖25A)。此結果與VISTA (而非P-選擇蛋白)結合缺乏唾液醯基路易斯X之初始T細胞一致。
亦類似於P-選擇蛋白，VISTA於酸性pH適當結合硫酸乙醯肝素。
另外，阻斷P-選擇蛋白結合之PSGL-1抗體並不阻斷VISTA結合。該等數據指示，VISTA結合類似於但不同於由P-選擇蛋白所結合界面之PSGL-1界面。
此實例另外展示，阻斷VISTA與T細胞之結合之抗體P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4亦阻斷VISTA與PSGL-1醣肽之結合。
實施競爭性Octet分析以評估酸性pH選擇性α-VISTA抗體P1-068761及P1-068767、P1-061029 pH獨立性親代及酸性pH敏感性VISTA.4是否阻斷VISTA與PSGL1之結合。在OctetRed384生物層干涉術(BLI)儀器(PALL/ForteBio)上實施結合分析。在30℃及1000 rpm振盪速度下實施所有分析步驟，且所用緩衝液係pH 6.0 PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)。將人類VISTA-Fc (R&D Systems 7126-B7號)在pH 6.0 PBST中稀釋至400 nM且與0 nM、40 nM及400 nM滴定系列之P1-068761、P1-068767、P1-061029及VISTA.4預混合30分鐘。將人類PSGL1 19聚體-huFc蛋白(由融合至人類Fc之成熟PSGL1之胺基-末端19胺基酸組成)捕獲於抗人類IgG-Fc感測器(AHC, PALL/ForteBio)上。接下來使用總人類IgG (Jackson 009-000-002號)阻斷抗人類捕獲感測器。接下來量測經捕獲PSGL1與VISTA-Fc/α-VISTA抗體混合物之結合以評價α-VISTA抗體是否防止VISTA結合PSGL1。對於每一抗體滴定系列而言，將VISTA與PSGL1之結合量級(nm位移)正規化至設定於100%之0nM未阻斷VISTA:PSGL1反應。來自此分析之結果匯總於圖17B中。在此分析中，400 nM濃度之P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4皆顯示阻斷活性。可防止VISTA-Fc蛋白結合經捕獲人類PSGL1-19聚體-huFc蛋白，如藉由觀察到之減小之VISTA結合所指示。
另外證實，VISTA與CHO-PSGL-1細胞之結合由VISTA.4及P-選擇蛋白阻斷性PSGL-1抗體KPL-1阻斷(圖17C)。在PSGL-1抗體阻斷分析中，將細胞與指示抗體KPL-1 (BD Biosciences或Biolegend)或PL2 (MBL)一起預培育，然後使用32 nM加載之VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白進行標記。藉由抗IgG (Jackson ImmunoResearch)或抗6xhis (Columbia Biosciences)抗體檢測VISTA-Fc結合。藉由流式細胞術或均相時間解析螢光(HTRF)獲取細胞。
實例 20 ： 結合 hVISTA 之 P1-068767 之晶體結構 為表徵VISTA之結構及VISTA抗體結合之分子決定子，製備hVISTA IgV結構域與P1-068767抗原結合片段(Fab)之共晶體。在1.6 Å解析度下測定所得複合物之結構(圖18)。VISTA IgV結構域通常係其家族之特性，其與PD-L1具有一定相似之處(圖18B)。然而，不同於PD-L1及大部分其他B7家族或免疫球蛋白超家族成員，VISTA IgV結構域之兩個C-末端β鏈含有多個其他殘基，從而產生異常狹長及富組胺酸之中心β褶板(圖18B)。P1-068767 (阻斷性抗體)在此β褶板延伸處結合VISTA (圖18C)，而非阻斷性抗體VISTA.5結合不同區域(圖18E)。VISTA之β褶板延伸由三個組胺酸殘基：H121、H122及H123封端。P1-068767殘基E110及D112分別與VISTA殘基H121及H122形成氫鍵(圖18D)。該等相互作用與先前實例中所闡述之發現非常吻合，亦即，需要P1-068767殘基E110及D112來達成酸性pH選擇性且其足以勝任。在共晶體中，VISTA殘基H123與來自沈澱劑之硫酸鹽分子相互作用且與P1-068767殘基E1形成鹽橋；但VISTA H123可與P1-068767在不存在硫酸鹽下形成真正的氫鍵(圖18D)。其他相互作用提供於表13中。該等數據表明，VISTA IgV結構域之異常、富組胺酸β褶板延伸係VISTA之酸性pH選擇性受體-配體界面之關鍵組分。 表20詳述在VISTA原子4埃(Å)內之‘767 Fab HC原子之間之距離(以Å表示)。
Figure 02_image013
實例 21 ： 表位定位 先前藉由2種不同方法：BLI (生物層干涉術)競爭及酵母表面展示來測定‘015、‘029、‘761及‘767 (格式化為IgG1.3抗體)之hVISTA表位。
實施競爭性BLI表位分類分析以評估酸性pH選擇性VISTA抗體P1-068761及P1-068767與P1-061029親代、P1-061015及相關VISTA對照抗體1、2及3相比是否保留VISTA上之類似或重疊表位。在OctetRed384 BLI儀器(PALL/ForteBio)上實施夾心形式及串聯形式之分類分析。所有分析步驟皆係在30℃及1000 rpm振盪速度下實施，且所用緩衝液係酸性(pH 6.0)或中性(pH 7.4) PBST (137 mM氯化鈉、2.7 mM氯化鉀、10 mM磷酸鹽緩衝液、0.05% Tween 20)。對於夾心形式而言，抗人類IgG-Fc感測器(AHC, PALL/ForteBio)首先在pH 7.4下捕獲VISTA抗體組，然後抗人類捕獲感測器經總人類IgG (Jackson 009-000-002號)阻斷。接下來在pH 6.0下捕獲人類VISTA-ECD，且最後在pH 6.0下評價所有可能抗體組合之競爭。在串聯形式分析中，經鏈黴抗生物素蛋白塗覆之生物感測器(SAX, PALL/ForteBio)首先在pH 7.4下捕獲生物素化hVISTA-ECD，然後感測器在pH 6.0下捕獲全VISTA抗體組，從而確保每一抗體在VISTA上之完全結合飽和，然後使用所有可能抗體組合在pH 6.0下評估競爭。
藉由競爭矩陣匯總競爭性BLI表位分類分析之結果(圖11A)。在此圖中，以列來列示第一捕獲抗體，且其對(第二)競爭劑抗體之結合或阻斷活性展示於每一行中。兩種分析形式之競爭矩陣相同。對於夾心式分析而言，藉由介於0.4 - 1.2 nm之間之信號來定義競爭劑抗體之結合(淺灰色)，且阻斷性抗體(黑色)展現＜ 0.1 nm之非結合信號。對於串聯分析而言，藉由介於0.3 - 0.8 nm之間之信號來定義競爭劑抗體之結合，且阻斷性抗體展現＜ 0.2 nm之非結合信號。儘管「VISTA mAb 3」藉由SPR在37℃自hVISTA-ECD展現迅速酸性pH解離(圖6C)，但其在任一BLI分析形式(實施於30℃下)中並不快速解離。該等競爭性分析指示，P1-061015、P1-061029、酸性-pH選擇性抗體P1-068761及P1-068767及VISTA抗體2及3皆彼此競爭VISTA上之類似或重疊表位。然而，VISTA抗體1結合單獨且不同之表位。因此，引入P1-061029之VH CDR中以生成酸性選擇性純系P1-068761及P1-068767之帶電胺基酸突變並不顯著改變VISTA結合表位。
亦使用酵母表面展示及NGS根據以下文獻之方法來定位抗體‘029、‘015、‘761及‘767之表位：Chao等人(2004)J. Mol. Biol. 342:539-550；Oliphant等人(2006)J. Virol. 80:12149-12159；及Kowalsky等人(2015)J. Biol. Chem. 290:26457-26470。簡言之，生成VISTA ECD之單一點突變體之飽和誘變庫且顯示於酵母表面上。分選並不結合定位抗體但保持結合非阻斷性抗體(mAb1)之VISTA突變體並測序。因保持結合mAb1，故該等突變體很可能正確摺疊，且可見於定位抗體中之結合損失很可能係由於損失能量上重要之接觸殘基。該等突變之位置在抗體表位中指定為在能量上重要之殘基且展示於下文表21中。 表21：huVISTA中鑑別為抗VISTA mAb之表位殘基之殘基
mAb V 34 T 35 Y 37 K 38 T 39 Y 41 S 52 R 54 T 61 F 62 Q 63 L 65 H 66 L 67 H 68 H 69 F 97 L 115 V 117 E 118 I 119 R 120 H 121 H 122 S 124 E 125 R 127
VISTA.4 x x x x x x x x x x x x x x x x x x x
‘015 x x x x x x x x x x x x x x
‘029 x x x x x x x x x x x x x x x x x
‘761 x x x x x x x x x x x x x x x x x
‘767 x x x x x x x x x x x x x x x x x
表22包含來自表21之詳述數據，且列示hVISTA中很可能減小每一列示抗體之結合之胺基酸殘基(基於在酵母表面展示/NGS方法中所觀察之殘基頻率) 表22：很可能減小所列示抗體之結合之VISTA胺基酸取代
P1-061015 pH 6 P1-061015 pH 7 P1-061029 pH 6 P1-061029 pH 7 P1-068761 pH 6 P1-068767 pH 6
T35 P, Y, W
Y37 P, G, A, S, T, K, R, H, N, D, E, Q P, G, S, N, D, E Q Y, S, T, V, L, I, M, K, R, N, D, Q P, G, S, T, V, L, I, M, K, R, N, D, E, Q P, G, A, S, T, V, L, I, M, K, R, N, D, E, Q G, T, V, L, I, M, K, R, N, Q
K38 P, G, A, S, V
T39 G, M, R, H, F, Y, W, N, D, E, Q M, K, R, H, F, Y, W, D, E, Q G, A, S, M, Y, W, N, D, E, Q G, A, S, V, L, M, R, H, F, Y, W, N, D, E, Q G, Y, D, E G, A, S, H, Y, W, N, D, E, Q
Y41 A, S, T, I, M P, I, M, H
R54 L, M, F, Y, E M, E P, A, T, V, I, M, F, Y, N, D, E, Q P, G, A, S, T, V, L, I, M, H, F, Y, W, N, D, E, Q A, T, V, L, I, M, K, F, Y, E, Q P, A, S, T, V, L, I, M, F, Y, W, D, E, Q
T61 G, L, R, H, F, Y, D, E, Q V, L, K, R, H, F, Y G, V, H, Y, D L, R, H, F, Y, D, E
F62 G, A, S, M, K, R, N, D, E, Q G, K, R, D, E, Q P, G, A, S, T, V, I, M, H, Y, W, D, E, Q P, G, A, S, T, V, L, I, M, K, R, H, Y, W, N, D, E, Q P, G, A, S, T, V, M, H, Y, W, D, E, Q P, G, A, S, T, V, L, M, H, Y, W, N, D, E, Q
Q63 G, R, W, D, E W, D, E G, A, S, T, V, K, R, H, Y, W, N, D, E P, G, S, T, L, M, K, R, H, F, Y, W, N, D, E G, S, T, K, H, Y, N, D, E P, G, A, S, T, V, L, I, M, K, H, F, Y, W, N, D, E
L65 P, G, A, S, T, K, R, H, W, N, D, E, Q P, G, S, K, W, D, E, Q G, T, Y, D, E, Q P, G, A, S, T, H, Y, W, N, D, E, Q, P, G, S, H, D, E, Q
H66 P, T, V, L, I, M, K, R, F, Y, W P, T, V, L, I, M, K, R, F, Y, W T, V, L, I, Y, D, E, Q G, S, T, V, L, I, M, K, R, W, N, D, E, Q T, I, K, W, D T, V, I, K, W, D, E
L67 G, A
H68 L, I, M, F, E L, I, E G, T, V, L, I, Y, W, D, E, Q
F97 G, D, E
L115 R, W A, T, K, N, Q A, T, K, F, N, Q A, T, M, K, F, N A, T, K, F, N, Q
V117 M, K, N, D M, K, R, W, E T, M, K, R, W, E T, L, I, M, K, R, W, E T, I, M, K, W T, L, I, M, K, R, W, E
I119 F, P P, N P, M, E P, M, E M, H P, M, H, F, N, E
H121 V, E, Q
H122 P, Y, N, D
S124 P, V, L, I, K, F, D, E L, I, M, H, W, Q L, I, M, H, W, Q L, I, M, Q L, I, M
E125 A, S, T, L, M, K, H, Y, D A, T, V, I, M, K, H, F, Y, W, N, D T, V, I, M, H, F, Y, W G, T, K, H, Y, W, N, D V, I, H, N T, V, I, F, Y, W, N
R127 S, V, M, H P, S, V, M, K, H, N P, V, M, N P, S, V, M, H, N
VISTA.4亦用於前述競爭性BLI表位分類分析中。結果指示，VISTA.4與上述抗體P1-061015、P1-061029、P1-068761及P1-068767競爭結合人類VISTA，且由此與該等抗體屬相同表位組(組A)。VISTA.4並不與VISTA mAb 1競爭結合人類VISTA。
亦使用如上文所闡述之酵母表面展示及NGS來定位VISTA.4之表位。分選並不結合定位抗體但保持結合非阻斷性抗體(mAb1)之VISTA突變體並測序。因保持結合mAb1，故該等突變體很可能正確摺疊，且可見於定位抗體中之結合損失很可能係由於損失能量上重要之接觸殘基。使得損失結合且指定為抗體表位中之在能量上重要之殘基之突變位置展示於表16中，且展示抗體P1-061015、P1-061029、P1-068761及P1-068767之能量上重要之接觸殘基(亦展示於上文表21中)。
圖11B及圖11C展示如表21中所列示涵蓋所有阻斷性hVISTA抗體之殘基之表位(圖11B)與非阻斷性hVISTA抗體之表位(mAb1；圖11C)相比之代表圖。胺基酸殘基66(H)及162(A)用於表示分子定向。組胺酸殘基呈灰色，且表位殘基呈黑色。顯而易見，所有阻斷性抗VISTA mAb皆佔據相同表位區域，此與octet分類數據(展示其彼此競爭)一致，其中在查詢抗體中具有微小殘基差異。與之相比，非阻斷性hVISTA抗體(mAb1)佔據hVISTA分子上之不同表位區域，且此可藉由octet分類數據進一步支持，該octet分類數據展示，並無阻斷性mAb與mAb1競爭。
實例 22 ： VISTA.4 抑制 VISTA 於酸性 pH 與 T 細胞之結合 此實例展示，表位組A中之VISTA.4及其他抗體阻斷VISTA於酸性pH與T細胞之結合，而表位組B中之VISTA.5 (mAb1)及其他抗體則不阻斷(圖21A及B)。
基本上如實例4中所闡述來實施此實例。
實例 23 ： VISTA.4 增強 T 細胞增殖及 IFN- γ 產生 此實例展示，VISTA阻斷性Ab (表位組A)增強T細胞增殖及IFN-γ產生(圖22)。並非阻斷性抗體之VISTA.5 (mAb1)則不增強T細胞增殖或IFN-γ產生。在將T細胞與不表現VISTA之293T-OKT3細胞共培養時，VISTA.4並無效應。
藉由將VISTA抗體添加至與經改造以表現人類VISTA及T細胞受體激動劑抗體OKT3之單鏈可變片段之293T細胞(293T-OKT3-VISTA)一起共培養之CD4+ T細胞中來實施此實驗。
實例 24 ： VISTA 抑制 T 細胞受體介導之 NF-kB 信號傳導 實施此實例以進一步評價pH對VISTA功能之效應，且展示，VISTA於酸性pH較於中性pH更強力地抑制T細胞受體介導之NF-kB信號傳導(圖23A)。在低於pH 6.5下達到最大阻抑，此類似於VISTA : T細胞結合(圖23A及圖4A)。
使用報告NFkB之Jurkat T細胞基本上如實例5及13中所闡述來量測NF-kB信號傳導。改造Jurkat細胞以在NF-kB-誘導型啟動子之控制下表現螢光素酶。將該等Jurkat NFkB-螢光素酶細胞與未輻照293T-OKT3-VISTA細胞一起以4:1之比率在使用MES酸化至各種pH之HBSS (ThermoFisher)中以及人類抗人類VISTA抗體共培養4小時。藉由螢光素酶受質分析(Promega)量測Jurkat細胞活化。
VISTA調介之抑制於酸性pH最為強力，但在pH 7.0及以上維持中等活性程度。類似地，重組VISTA於酸性pH較在pH 7.4下更強烈地抑制T細胞NFkB磷酸化(圖23B)。該等結果指示，VISTA優先於酸性pH抑制T細胞，且此活性由於酸性pH阻斷T細胞結合之抗體逆轉。
因此，該等數據表明，阻斷VISTA之酸性pH選擇性受體-配體界面可逆轉免疫抑制。
實例 25 ： 藉由組胺酸及磺基酪胺酸殘基測定 VISTA :PSGL-1 結合特異性 為表徵PSGL-1結合特異性，除藉由唾液醯基路易斯X所提供外，亦檢驗有助於P-選擇蛋白結合之酪胺酸硫酸化轉譯後修飾。為測試酪胺酸硫酸化之作用，藉由陰離子交換液相層析將PSGL-1醣肽分級分離成富磺基酪胺酸峰(＞ 90%)及磺基酪胺酸缺乏峰(＜ 1%)。VISTA或P-選擇蛋白皆不可檢測地結合缺乏磺基酪胺酸之PSGL-1 (圖25B)。VISTA亦不能結合其中酪胺酸經丙胺酸取代之PSGL-1醣肽(未展示於圖中)。該等結果指示，磺基酪胺酸殘基係PSGL-1與VISTA之結合之關鍵媒介。
假設VISTA結合特異性係由發現於VISTA阻斷性抗體表位內之相同組胺酸殘基：H153、H154及H155調介。使用不帶電丙胺酸或帶負電天門冬胺酸代替該等組胺酸殘基可顯著減小VISTA與重組PSGL-1及CHO-PSGL-1細胞之結合(圖25C-D)。藉由瞬時轉染Expi293細胞來產生H153、H154及H155殘基突變成丙胺酸、天門冬胺酸或精胺酸之VISTA-Fc蛋白。該等突變體亦不能在功能上抑制T細胞(未展示於圖中)。與之相比，使用帶正電精胺酸殘基進行代替可保留VISTA結合及功能(圖25C-D)。阻斷性抗體VISTA.4及P1-068767充分結合丙胺酸及精胺酸突變VISTA，但較差地結合天門冬胺酸突變VISTA (未展示)。非阻斷性抗體VISTA.5等效結合野生型及突變VISTA蛋白(未展示)。
然後使用PSGL-1結合P-選擇蛋白及VISTA結合P1-068767 Fab (圖18)之解析結構來研發銜接至VISTA之PSGL-1 19聚體醣肽之計算模型(圖25E)。在此模型中，PSGL-1酪胺酸殘基Y46及Y48與VISTA組胺酸殘基H153及H154 (2.5 - 3.0 Å距離)產生離子相互作用。PSGL-1 Y51較遠離VISTA (約4.5 Å)，但可與VISTA H100顯著相互作用。PSGL-1 E56亦與VISTA H98及H100形成離子相互作用。可經唾液醯基路易斯X修飾之PSGL-1 T57之羥基遠離VISTA，此與唾液醯基路易斯X對VISTA :PSGL-1結合之可忽略影響一致。總而言之，該等數據及建模表明，VISTA於酸性pH與PSGL-1之結合主要由VISTA組胺酸殘基H153、H154及H155以及PSGL-1硫酸化酪胺酸殘基Y46及Y48驅動。
利用氫/氘交換質譜(HDX-MS)來探究人類VISTA與mAb VISTA.4之結合表位。HDX-MS在溶液中藉由監測主鏈醯胺氫原子之氘交換速率及程度來探究蛋白質構形及構形動力學(Huang及Chen (2014) Analytical and Bioanalytical Chemistry 406, 6541-6558；Wei等人，Drug Discovery Today (2014) 19, 95-102)。HDX之程度取決於主鏈醯胺氫原子及蛋白質氫鍵之溶劑可及性。可藉由MS精確地量測HDX時蛋白質之質量增加。在此技術與酶消解配對時，可解析肽層面之結構特徵，從而使得能夠區分表面暴露之肽與內部摺疊者或隔離於蛋白質－蛋白質複合物界面處者。通常，實施氘標記及隨後驟冷實驗，隨後實施酶促消解、肽分離及MS分析。
在表位定位實驗之前，實施非氘化實驗以生成重組人類VISTA (15 µM)及VISTA與mAb VISTA.4之蛋白質複合物(1:1莫耳比率)之常用肽之清單。在HDX-MS實驗中，將5 µL每一試樣(VISTA或VISTA與mAb VISTA.4)稀釋至55 µL D2 O緩衝液(10 mM磷酸鹽緩衝液，D2 O, pH7.0)中以開始標記反應。經以下不同時間段實施反應：1 min、10 min及240 min。截至每一標記反應時段結束，藉由添加驟冷緩衝液(含有4M GdnCl及0.4M TCEP之100 mM磷酸鹽緩衝液，pH 2.5，1:1，v/v)來驟冷反應，且將50 μL驟冷試樣注射至Waters HDX-MS系統中以供分析。在VISTA.4不存在/存在下監測常見胃蛋白酶解肽之氘攝取量。獲得序列覆蓋率為82%。
HDX-MS實驗提供人類VISTA之85%序列覆蓋率。如圖19中所展示，在人類VISTA中針對VISTA.4之HDX-MS數據分析指示，VISTA.4之表位包括人類VISTA之三個區域，其中區域2係一級表位(殘基編號對應於天然人類VISTA序列，圖20)： 區域1：57 LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566) 區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567) 區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568) 抗體VISTA.4於酸性及中性充分等效pH結合。其他輪選擇產生在pH 6.0下以高於在pH 7.4下200倍之親和力結合VISTA之變體。使用VISTA阻斷性抗體之類似工作產生在pH 6.0下之選擇性最高10,000倍於pH 7.4之變體。使用該等抗體於酸性及中性pH來定位VISTA之受體-配體結合界面。pH獨立性、中性pH選擇性及酸性pH選擇性VISTA阻斷性抗體結合幾乎相同之表位，從而表明僅組胺酸質子化(不含所標誌構形變化)即控制VISTA於酸性pH接合其反受體之能力。(VISTA.4進一步闡述於相同申請者之另一申請案系列中。)
實例 26 ： 藉由組胺酸及磺基酪胺酸殘基測定 VISTA :PSGL-1 結合特異性 為表徵PSGL-1結合特異性，除藉由唾液醯基路易斯X所提供外，亦檢驗有助於P-選擇蛋白結合之酪胺酸硫酸化轉譯後修飾。為測試酪胺酸硫酸化之作用，藉由陰離子交換液相層析將PSGL-1醣肽分級分離成富磺基酪胺酸峰(＞ 90%)及磺基酪胺酸缺乏峰(＜ 1%)。VISTA或P-選擇蛋白皆不可檢測地結合缺乏磺基酪胺酸之PSGL-1 (圖25B)。VISTA亦不能結合其中酪胺酸經丙胺酸取代之PSGL-1醣肽(未展示於圖中)。該等結果指示，磺基酪胺酸殘基係PSGL-1與VISTA之結合之關鍵媒介。
假設VISTA結合特異性係由發現於VISTA阻斷性抗體表位內之相同組胺酸殘基：H153、H154及H155調介(參見實例20)。使用不帶電丙胺酸或帶負電天門冬胺酸代替該等組胺酸殘基可顯著減小VISTA與重組PSGL-1及CHO-PSGL-1細胞之結合(圖25C-D)。藉由瞬時轉染Expi293細胞來產生H153、H154及H155殘基突變成丙胺酸、天門冬胺酸或精胺酸之VISTA-Fc蛋白。該等突變體亦不能在功能上抑制T細胞(未展示於圖中)。與之相比，使用帶正電精胺酸殘基進行代替可保留VISTA結合及功能(圖25C-D)。阻斷性抗體VISTA.4及P1-068767充分結合丙胺酸及精胺酸突變VISTA，但較差地結合天門冬胺酸突變VISTA (未展示)。非阻斷性抗體VISTA.5等效結合野生型及突變VISTA蛋白(未展示)。
然後使用PSGL-1結合P-選擇蛋白及VISTA結合P1-068767 Fab (圖18)之解析結構來研發銜接至VISTA之PSGL-1 19聚體醣肽之計算模型(圖25E)。在此模型中，PSGL-1酪胺酸殘基Y46及Y48與VISTA組胺酸殘基H153及H154 (2.5 - 3.0 Å距離)產生離子相互作用。PSGL-1 Y51較遠離VISTA (約4.5 Å)，但可與VISTA H100顯著相互作用。PSGL-1 E56亦與VISTA H98及H100形成離子相互作用。可經唾液醯基路易斯X修飾之PSGL-1 T57之羥基遠離VISTA，此與唾液醯基路易斯X對VISTA :PSGL-1結合之可忽略影響一致。總而言之，該等數據及建模表明，VISTA於酸性pH與PSGL-1之結合主要由VISTA組胺酸殘基H153、H154及H155以及PSGL-1硫酸化酪胺酸殘基Y46及Y48驅動。
實例 27 ： 抗體對 VISTA-VSIG-3 結合之影響 最近已報導，VISTA結合含V-set免疫球蛋白結構域蛋白3 (VSIG-3)，該蛋白質係表現於腦、睪丸及一些癌症組織中之表面受體。
實施BLI結合實驗以評估VISTA與VSIG-3、CD42b/GP1Bα、PSGL-1及VISTA之多pH相互作用。所有分析步驟皆實施於如所指示含有0.05% V/V Tween 20且pH調節至5.8、6.2、6.6、7.0或7.4之DPBS緩衝液(Gibco)中。應用上述實驗條件，只是首先將200 nM人類VISTA-Fc捕獲至AHC感測器上，且代之以量測與500 nM野生型人類PSGL-1 19聚體Fc融合蛋白、500 nM及Y2A突變體人類PSGL-1 19聚體Fc融合蛋白、500 nM人類VSIG-3-Fc融合蛋白(R&D Systems)、500 nM人類CD42b/GP1Bα (R&D Systems)或500 nM人類VISTA-Fc融合蛋白(R&D Systems)之結合。
在競爭實驗中測定抗VISTA抗體對hVISTA與hVSIG-3之間之相互作用之效應。對於抗體及VSIG-3之競爭實驗而言，將人類VISTA-Fc稀釋至400 nM並與0 nM、200 nM、400 nM或800 nM之每一測試抗體或人類VSIG-3-Fc融合蛋白(R&D Systems)預混合30分鐘，然後評價結合。對於KPL-1及人類P-選擇蛋白之競爭實驗而言，使用400 nM KPL-1 (Millipore Sigma)或400 nM人類P-選擇蛋白(R&D Systems)阻斷所捕獲人類PSGL-1 19聚體Fc融合蛋白，然後浸泡至經滴定人類VISTA-Fc中。展示於圖26中之結果指示，重組VISTA與重組VSIG-3之結合具有中等pH選擇性(圖26C)，且P1-061029及P1-068767以及(在較小程度上) VISTA.5抑制hVISTA結合hVSIG-3 (圖26D)。並無VSIG-3與PSGL-1之間之競爭證據。
實例 28 ： VISTA 抗體在腫瘤組織中之累積 如圖28中所展示，向人類VISTA基因嵌入小鼠植入MC38腫瘤並經螢光標記之P1-061029 (左圖)或P1-068767 (右圖)進行治療。展示指示器官在注射後51小時之輻射效率(× 109 )。該等數據代表單一實驗。如圖中所展示，pH敏感性抗體P1-068767優先累積於腫瘤中，而P1-061029則主要局部化至富白血球器官(例如肺、肝、脾)中。(亦參見圖27E。)  儘管與周邊VISTA具有低效咬合，但在與抗PD-1組合投與時P1-068767之治療益處與P1-061029旗鼓相當(參見圖15J-M)。此結果表明，VISTA之免疫抑制活性主要出現於酸性微環境內，且pH選擇性可用於針對VISTA及腫瘤中之其他活性靶來研發治療劑。關於抗VISTA抗體之組織累積之其他數據展示於圖27E中。
共抑制受體之活化誘導性表現通常使得優先限制成熟免疫反應而非初生反應。VISTA反而似乎依賴於pH選擇性來達成此結果，其中抑制發生於發炎組織(例如腫瘤床)中，但不發生於血液或淋巴樣器官中。儘管腫瘤酸中度之存在及免疫抑制效應已眾所周知，但該等發現證實，pH亦可直接調節免疫檢查點咬合。
實例 29 ： VISTA 抗體之其他結合動力學數據 在不同pH下藉由SPR針對本文所闡述之VISTA抗體實施其他結合動力學實驗，如上文實例9中所概述。將抗體在PBST (pH 7.4)中正規化至50 nM濃度並藉由以5 µL/min流速注射45秒捕獲於蛋白質A CM5晶片(ID 4931)上。在pH 7.4、6.9、6.45及6.0下於PBST中製備8點人類VISTA滴定液(100 - 7.8 nM)。將滴定液以30 µL/min經180秒注射於所捕獲抗體上。將感測圖在T200評估軟體中擬合至1:1結合模型且報告動力學常數。
所得數據提供於下文表23-26中。每一表格報告在4種所測試pH (分別為7.4、6.9、6.45及6.0)中之一者下之數據。選擇該等分析中所使用之8點hVISTA滴定來增加在中性pH條件下報告之動力學值之可信度。在此分析中應用相對嚴格之非結合截止值。P1-061029抗體之某些子代(P1-068757、‘759、‘765、‘771及‘775)在微莫耳濃度及pH 7.4下展示不結合hVISTA；而‘761及‘767在100 nM及pH 7.4下展示不結合hVISTA，但在微莫耳濃度下展示結合hVISTA。表 23 ： pH 7.4 下之結合動力學。
配體 說明 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) 7.4 kd/ 6.0 kd 7.4 KD/ 6.0 KD
P1-061029-18 VPGYSGGWIDAFDV 4.63E+05 6.03E-03 1.30E-08 1.1 4.5
P1-068765-10 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068775-8 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068757-9 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068771-10 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068759-9 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 1.4E+04 3.8E-02 2.7E-06 14.2 257.5
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 2.4E+04 3.2E-02 1.4E-06 12.4 237.3
P1-068761-20 P1-061029 HC: D30E_Y32E_A55E_N56E_G100H_F100fE 低或無結合 N/A N/A
P1-070864-3 P1-068761_E30D 低或無結合 N/A N/A
P1-070890-3 P1-068761_E30D_E55A 低或無結合 N/A N/A
P1-070868-6 P1-068761_E55A 1.3E+04 4.4E-02 3.4E-06 18.9 625.2
P1-070878-3 P1-068761_E55A_E56N 低或無結合 N/A N/A
P1-070870-3 P1-068761_E56N 低或無結合 N/A N/A
P1-070900-3 P1-068761_E56N_H100G 低或無結合 N/A N/A
P1-070872-4 P1-068761_H100G 低或無結合 N/A N/A
P1-068767-22 P1-061029 HC: D30E_N51D_A55E_F100fE_V102D 低或無結合 N/A N/A
P1-070906-6 P1-068767_D52N 6.5E+03 2.9E-02 4.4E-06 15.3 731.3
P1-070916-6 P1-068767_D52N_E55A 1.0E+04 3.8E-02 3.7E-06 19.4 562.9
P1-070904-3 P1-068767_E30D 低或無結合 N/A N/A
P1-070914-3 P1-068767_E30D_D52N 8.4E+03 3.5E-02 4.2E-06 14.6 396.3
P1-070922-3 P1-068767_E30D_E55A 低或無結合 N/A N/A
P1-070908-6 P1-068767_E55A 6.7E+04 2.4E-02 3.5E-07 8.6 34.5
P1-061015 DSGFYSSYYFDY 3.29E+05 1.68E-03 5.12E-09 1.1 8.2
P1-068744-7 P1-061015 HC: S31E_I50H_Y59E_S100E_Y102E 低或無結合 N/A N/A
P1-068748-6 P1-061015 HC: S31HY32H_K57D_Y58D_S100D 4.0E+04 3.6E-02 9.2E-07 9.9 211.8
P1-061520-21 41F11 VK_A64G 6.13E+05 8.71E-04 1.42E-09 0.0 0.1
P1-070976-11 41F11_VH_T28P_Y50W_S55E_D95H_L96E_P97E_Y100E ； Vk_A64G 2.4E+03 1.6E-02 6.9E-06 7.0 695.7
表 24 ： pH 6.9 下之結合動力學
配體 說明 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) 7.4 kd/ 6.0 kd 7.4 KD/ 6.0 KD
P1-061029-18 VPGYSGGWIDAFDV 5.83E+05 4.16E-03 7.13E-09 0.8 2.5
P1-068765-10 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068775-8 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068757-9 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068771-10 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-068759-9 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 3.9E+04 1.1E-02 2.8E-07 4.1 26.0
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 4.2E+04 1.1E-02 2.5E-07 4.0 43.0
P1-068761-20 P1-061029 HC: D30E_Y32E_A55E_N56E_G100H_F100fE 5.87E+04 8.32E-03 1.42E-07 4.1 52.4
P1-070864-3 P1-068761_E30D 4.2E+03 3.4E-02 8.1E-06 4.9 522.7
P1-070890-3 P1-068761_E30D_E55A 9.0E+03 4.0E-02 4.4E-06 4.9 211.0
P1-070868-6 P1-068761_E55A 2.3E+03 1.5E-02 6.7E-06 6.5 1237.5
P1-070878-3 P1-068761_E55A_E56N 2.9E+03 2.8E-02 9.8E-06 4.5 300.9
P1-070870-3 P1-068761_E56N 4.9E+03 4.9E-02 1.0E-05 7.9 315.6
P1-070900-3 P1-068761_E56N_H100G 8.5E+03 3.1E-02 3.7E-06 3.7 221.7
P1-070872-4 P1-068761_H100G 1.9E+03 2.8E-02 1.5E-05 5.1 1820.4
P1-068767-22 P1-061029 HC: D30E_N51D_A55E_F100fE_V102D 2.67E+04 1.03E-02 3.85E-07 3.5 56.8
P1-070906-6 P1-068767_D52N 3.8E+04 8.4E-03 2.2E-07 4.4 36.5
P1-070916-6 P1-068767_D52N_E55A 4.1E+04 9.3E-03 2.3E-07 4.8 35.1
P1-070904-3 P1-068767_E30D 1.1E+05 2.8E-02 2.5E-07 7.2 14.9
P1-070914-3 P1-068767_E30D_D52N 4.8E+04 1.1E-02 2.3E-07 4.4 21.1
P1-070922-3 P1-068767_E30D_E55A 1.8E+04 1.4E-02 7.9E-07 3.4 45.9
P1-070908-6 P1-068767_E55A 5.1E+04 1.2E-02 2.4E-07 4.4 23.0
P1-061015 DSGFYSSYYFDY 4.17E+05 1.33E-03 3.19E-09 0.9 5.1
P1-068744-7 P1-061015 HC: S31E_I50H_Y59E_S100E_Y102E 7.1E+03 3.4E-02 4.8E-06 7.9 958.4
P1-068748-6 P1-061015 HC: S31HY32H_K57D_Y58D_S100D 8.2E+04 1.8E-02 2.2E-07 4.8 50.0
P1-061520-21 41F11 VK_A64G 6.46E+05 1.39E-03 2.15E-09 0.0 0.1
P1-070976-11 41F11_VH_T28P_Y50W_S55E_D95H_L96E_P97E_Y100E ； Vk_A64G 1.1E+04 1.0E-02 9.7E-07 4.4 98.2
表 25 ： :  pH 6.45 下之結合動力學
配體 說明 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) 7.4 kd/ 6.0 kd 7.4 KD/ 6.0 KD
P1-061029-18 VPGYSGGWIDAFDV 8.76E+05 4.50E-03 5.13E-09 0.9 1.8
P1-068765-10 029 子代 3.1E+04 1.3E-02 4.2E-07 2.8 14.2
P1-068775-8 029 子代 7.7E+04 1.7E-02 2.2E-07 1.8 2.8
P1-068757-9 029 子代 1.3E+05 1.8E-02 1.4E-07 1.7 5.8
P1-068771-10 029 子代 6.1E+04 2.2E-02 3.7E-07 2.2 11.6
P1-068759-9 029 子代 低或無結合 N/A N/A
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 1.1E+05 5.3E-03 4.7E-08 2.0 4.4
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 1.6E+05 4.4E-03 2.7E-08 1.7 4.7
P1-068761-20 P1-061029 HC: D30E_Y32E_A55E_N56E_G100H_F100fE 1.90E+05 3.09E-03 1.62E-08 1.5 6.0
P1-070864-3 P1-068761_E30D 4.1E+05 4.6E-02 1.1E-07 6.8 7.4
P1-070890-3 P1-068761_E30D_E55A 2.4E+05 3.2E-02 1.3E-07 3.9 6.3
P1-070868-6 P1-068761_E55A 2.4E+05 8.7E-03 3.6E-08 3.7 6.7
P1-070878-3 P1-068761_E55A_E56N 7.8E+04 1.2E-02 1.6E-07 2.0 4.9
P1-070870-3 P1-068761_E56N 8.0E+04 1.2E-02 1.5E-07 1.9 4.6
P1-070900-3 P1-068761_E56N_H100G 4.5E+05 6.0E-02 1.3E-07 7.1 8.0
P1-070872-4 P1-068761_H100G 3.6E+05 2.5E-02 6.8E-08 4.5 8.3
P1-068767-22 P1-061029 HC: D30E_N51D_A55E_F100fE_V102D 1.41E+05 4.47E-03 3.18E-08 1.5 4.7
P1-070906-6 P1-068767_D52N 1.3E+05 3.9E-03 3.1E-08 2.1 5.1
P1-070916-6 P1-068767_D52N_E55A 1.2E+05 4.0E-03 3.5E-08 2.1 5.4
P1-070904-3 P1-068767_E30D 1.3E+05 8.6E-03 6.8E-08 2.3 4.1
P1-070914-3 P1-068767_E30D_D52N 1.1E+05 4.9E-03 4.6E-08 2.0 4.3
P1-070922-3 P1-068767_E30D_E55A 9.3E+04 7.0E-03 7.6E-08 1.7 4.4
P1-070908-6 P1-068767_E55A 1.1E+05 6.0E-03 5.4E-08 2.2 5.2
P1-061015 DSGFYSSYYFDY 8.03E+05 1.47E-03 1.83E-09 1.0 2.9
P1-068744-7 P1-061015 HC: S31E_I50H_Y59E_S100E_Y102E 2.2E+05 1.4E-02 6.4E-08 3.2 12.6
P1-068748-6 P1-061015 HC: S31HY32H_K57D_Y58D_S100D 6.8E+05 1.2E-02 1.8E-08 3.4 4.1
P1-061520-21 41F11 VK_A64G 9.75E+05 5.54E-03 5.69E-09 0.2 0.3
P1-070976-11 41F11_VH_T28P_Y50W_S55E_D95H_L96E_P97E_Y100E ； Vk_A64G 9.0E+04 3.9E-03 4.4E-08 1.7 4.4
表 26 ： pH 6.0 下之結合動力學
配體 說明 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
P1-061029-18 VPGYSGGWIDAFDV 1.81E+06 5.27E-03 2.91E-09
P1-068765-10 029 子代 1.5E+05 4.5E-03 2.9E-08
P1-068775-8 029 子代 1.2E+05 9E-03 7.7E-08
P1-068757-9 029 子代 4.2E+05 1.0E-02 2.4E-08
P1-068771-10 029 子代 3.2E+05 1.0E-02 3.2E-08
P1-068759-9 029 子代 6.0E+05 5.8E-02 9.6E-08
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 2.5E+05 2.7E-03 1.1E-08
P1-072000-3 P1-061029_F100fE_V102D 4.5E+05 2.6E-03 5.8E-09
P1-068761-20 P1-061029 HC: D30E_Y32E_A55E_N56E_G100H_F100fE 7.45E+05 2.02E-03 2.71E-09
P1-070864-3 P1-068761_E30D 4.4E+05 6.8E-03 1.5E-08
P1-070890-3 P1-068761_E30D_E55A 3.9E+05 8.1E-03 2.1E-08
P1-070868-6 P1-068761_E55A 4.3E+05 2.3E-03 5.4E-09
P1-070878-3 P1-068761_E55A_E56N 1.9E+05 6.3E-03 3.3E-08
P1-070870-3 P1-068761_E56N 2.0E+05 6.3E-03 3.2E-08
P1-070900-3 P1-068761_E56N_H100G 5.0E+05 8.4E-03 1.7E-08
P1-070872-4 P1-068761_H100G 6.8E+05 5.6E-03 8.2E-09
P1-068767-22 P1-061029 HC: D30E_N51D_A55E_F100fE_V102D 4.38E+05 2.97E-03 6.78E-09
P1-070906-6 P1-068767_D52N 3.1E+05 1.9E-03 6.0E-09
P1-070916-6 P1-068767_D52N_E55A 3.0E+05 1.9E-03 6.5E-09
P1-070904-3 P1-068767_E30D 2.3E+05 3.8E-03 1.7E-08
P1-070914-3 P1-068767_E30D_D52N 2.3E+05 2.4E-03 1.1E-08
P1-070922-3 P1-068767_E30D_E55A 2.3E+05 4.0E-03 1.7E-08
P1-070908-6 P1-068767_E55A 2.7E+05 2.8E-03 1.0E-08
P1-061015 DSGFYSSYYFDY 2.47E+06 1.54E-03 6.22E-10
P1-068744-7 P1-061015 HC: S31E_I50H_Y59E_S100E_Y102E 8.6E+05 4.3E-03 5.1E-09
P1-068748-6 P1-061015 HC: S31HY32H_K57D_Y58D_S100D 8.4E+05 3.6E-03 4.3E-09
P1-061520-21 41F11 VK_A64G 1.93E+06 3.23E-02 1.68E-08
P1-070976-11 41F11_VH_T28P_Y50W_S55E_D95H_L96E_P97E_Y100E ； Vk_A64G 2.4E+05 2.3E-03 9.9E-09
實例 30 ： 用於分析抗 VISTA 抗體與人類 VISTA 之結合之 SPR 方案 可藉由表面電漿共振(SPR)根據下列方案來分析結合抗VISTA抗體與人類VISTA (hVISTA)之親和力及結合動力學。在該等分析中，使用具有組胺酸標籤之hVISTA-ECD構築體(SEQ ID NO: 325)。於酸性及中性pH下於Biacore® T200儀器(GE Healthcare)上量測結合。將蛋白質A (ThermoFisher目錄號21181)在10 mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至20 µg/ml並遵循製造商之胺偶合方案固定於CD5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上。在37℃使用PBST (137 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM磷酸鹽緩衝液及0.05% Tween® 20)電泳緩衝液在指示pH下實施所有SPR實驗。將抗體在PBST (pH 7.4)中稀釋至20 nM並捕獲於蛋白質A表面上。將100 nM至0.8 nM濃度系列之單價人類VISTA-ECD (SEQ ID NO: 325)以40 µl/min注射於所捕獲抗體上以量測締合及解離。在分析循環之間，使用10 mM pH 1.5甘胺酸之兩個15 s注射來再生蛋白質A捕獲表面。自參考流動槽及0 nM空白扣除感測圖推導速率常數ka (k 締合 ，締合速率)及kd (k 解離 ，解離速率)，且在Biacore® T200評估軟體3.1版中擬合至1:1結合模型。
在其他實驗中，可將hVISTA-ECD構築體捕獲於蛋白質A表面上並將抗VISTA抗體注射於所捕獲蛋白質上。對於此分析中之應用而言，藉由木瓜酶消解遵循ThermoFisher目錄號44985之方案來製備抗體Fab片段。使用相同電泳緩衝液(PBST)在pH 7.4及pH 6.0下來實施Fab結合。將前述hVISTA-ECD構築體稀釋至25 nM並以10 µl/min使用抗人類CM5感測器晶片(GE Healthcare)捕獲60秒，隨後以介於0.8 nM至100 nM之間之濃度注射Fab。使用30秒脈衝之3M MgCl2 以30 µl/min再生表面。Fab結合之Rmax% (正規化SPR結合反應)計算為(觀察Rmax/計算Rmin) × 100，其中觀察Rmin =締合期結束時之RU (結合反應單位)反應；計算Rmax = (捕獲量/配體分子質量)×分析物分子質量。
實例 31 ： 細胞結合及阻斷分析方案 可根據下列方案來實施用以測定本文之抗VISTA抗體是否抑制hVISTA結合細胞(其中該細胞係hVISTA所結合者)及抑制程度之分析。在人類VISTA結合及阻斷分析中，將與藻紅素(PE)偶聯之鏈黴抗生物素蛋白多聚體(Klickmers®, Immudex)在漢克氏緩衝鹽溶液(HBSS，含有鈣及鎂且使用2-(N -嗎啉基)乙烷磺酸(MES)調節至指示pH)中稀釋至32 nM。向所稀釋迪克拉美中加載32-900 nM重組單生物素化人類VISTA (ACRO Biosystems)以促進VISTA-迪克拉美捕獲。使用未與VISTA一起培育之「空」多聚體作為陰性對照。使用VISTA多聚體在室溫下將人類白血球、未刺激周邊血單核細胞(PBMC) T細胞、經抗CD3/CD28珠粒刺激劑(人類T活化劑Dynabeads®, ThermoFisher)刺激72-96小時之PBMC T細胞或中國倉鼠卵巢(CHO)細胞標記30 min，然後使用相同HBSS + MES緩衝液洗滌。或者，使用人類VISTA-Fc嵌合蛋白標記細胞，且使用稀釋至相同HBSS + MES緩衝液中之抗IgG二級抗體(Jackson Immuno Research)檢測結合。使經標記細胞保持不固定或使用甲醛(FoxP3固定緩衝液，eBioscience)固定並獲取於流式細胞儀上。
在VISTA抗體阻斷分析中，在細胞結合之前，將100 nM加載之VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白與指示抗體一起預培育。在重組蛋白阻斷分析中，將細胞與所指示重組蛋白一起預培育，然後使用100 nM加載之VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白進行標記。
在PSGL-1抗體阻斷分析中，將細胞與KPL-1 (BD Biosciences或Biolegend)或PL2 (MBL)一起預培育，然後使用32 nM加載之VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白進行標記。藉由抗IgG (Jackson Immuno Research)或6×His (Columbia Biosciences)抗體檢測VISTA-Fc結合。藉由流式細胞術或均相時間解析螢光(HTRF)獲取細胞。
在小鼠VISTA結合及阻斷分析中，直接離體使用小鼠脾細胞及淋巴結駐留細胞或首先使用抗CD3/CD28珠粒刺激劑(小鼠T活化劑Dynabeads, ThermoFisher)刺激48小時。使用小鼠VISTA-Fc嵌合蛋白在pH 6.0 HBSS或PBS中標記細胞。使用抗IgG二級抗體(Jackson Immuno Research)檢測VISTA-Fc及結合。在抗體阻斷分析中，在標記細胞之前，將小鼠VISTA-Fc與VISTA.10抗體一起預培育。藉由針對CD4、CD8、B220及CD11b (ThermoFisher)染色來測定VISTA與個別白血球子組之結合。在流式細胞儀上獲取細胞。
在VSIG-3結合分析中，改造CHO及HEK293細胞以分別異位表現人類VSIG-3及VISTA蛋白。可藉由流式細胞術使用抗VSIG-3 (pAb AF4915, R&D Systems)來證實VSIG-3表現。可藉由流式細胞術使用抗VISTA (純系740804, R&D Systems)來證實VISTA表現。在PBS緩衝液(含有0.9 mM CaCl2 、0.05 mM MgCl2 及0.5% BSA且藉由改變緩衝液中Na2 HPO4 及KH2 PO4 之比率來調節至期望pH)中實施細胞結合分析。使用10 μg/ml之VISTA-Fc及VSIG-3-Fc。使用抗人類IgG (Fab′)2 -PE (Invitrogen)檢測結合。
實例 32 ： 抗體表位分類競爭分析及 pH 敏感性方案 使用競爭性SPR表位分類且使用Biacore® T200儀器來鑑別交叉阻斷期望VISTA抗體表位(例如VISTA.4或P1-068767之表位)或不期望VISTA抗體表位(例如抗VISTA抗體VISTA.5之表位)之VISTA特異性抗體。將測試及對照抗體在10 mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至10 µg/mL並遵循製造商之胺偶合方案固定於CM5生物感測器(GE Healthcare)之流動槽上。在25℃下使用HBS-P+電泳緩衝液(10 mM HEPES、150 mM NaCl及0.05% v/v表面活性劑P20，pH 7.4)評價競爭。藉由固定抗體捕獲100 nM單價人類加his標籤VISTA ECD (SEQ ID NO: 325)，然後注射100 nM每一抗體篩以評估針對針對第二抗VISTA抗體(例如VISTA.4或VISTA.5)之共結合或阻斷活性。在分析循環之間，使用10 mM甘胺酸(pH 2.0)之兩個30秒注射再生第二抗VISTA抗體(例如VISTA.4或VISTA.5)之表面。使用Biacore® T200評估軟體2.0版分析感測圖。亦可在此分析中於pH 7.4及6.0下評價經阻斷(例如藉由VISTA.4或P1-068767)抗體及未阻斷者(亦即具有不同表位者)之pH依賴性VISTA結合。
實例 33 ： P1-068744 及 P1-068748 回復突變抗體 SPR 結合動力學 為測定相對於P1-061015 (SEQ ID NO: 95) P1-068744 (SEQ ID NO: 103)及P1-068748 (SEQ ID NO: 99)之重鏈CDR中之何種胺基酸變化係維持高親和力結合人類VISTA所需且對於賦予酸性pH選擇性性質較為重要，製備P1-068744及P1-068748之回復突變體，且藉由SPR在pH 6.0下及在pH 7.4下測試其結合動力學。P1-068744、P1-068748及P1-061015之重鏈CDR之胺基酸序列之比對展示於(例如)上文表8及圖29C中。
比較P1-068744重鏈與其親代抗體P1-061015之重鏈(比較SEQ ID No: 95及103)，其中P1-068744在重鏈CDR中含有若干鹼性胺基酸殘基(參見表8、11及27且比較SEQ ID No: 95及103)。基於SEQ ID No: 95及103，P1-068744在重鏈CDR1中之位置31含有E殘基而非S，在重鏈CDR2中之位置50含有H殘基而非I，在重鏈CDR2之位置60含有E而非Y (此變化之回復在本文中稱為E59Y)，在重鏈CDR3中之位置104含有E而非S (此變化之回復在本文中稱為E100S)，且在重鏈CDR3之位置110 (CDR3之最後位置)含有E而非Y (此變化之回復在本文中稱為E102Y)。
在37℃於PBST電泳緩衝液中在pH 6.0或7.4下來實施SPR分析，且包含下列步驟：以10µL/min流速經30秒在蛋白質A晶片上捕獲抗體；以40 µL/min經180秒注射試樣，然後解離600秒；使用甘胺酸1.5以30 µL/min進行2次15秒再生注射。結果陳述於圖29A及表27中。
比較P1-068748重鏈與抗體P1-061015之重鏈，如表8、12及28中所展示(且比較SEQ ID No. 95及99)，其中前者亦在重鏈CDR中含有若干鹼性殘基。具體而言，在比較SEQ ID No: 95及99後獲知，P1-068748在CDR1之位置31及32含有H殘基，在CDR2之位置58及59含有D殘基(回復體在本文中稱為D57K及D58Y)，且在CDR3之位置104含有D殘基(此變化之回復體在本文中稱為D100S)。如上文針對P1-068744回復突變體所陳述來實施SPR實驗。P1-068748回復突變抗體之結果陳述於圖29B及表28中。表 27 ： P1-061015 及 P1-068744 回復突變體之結合動力學。
P1 ID 回復突變 7.4 ka (1/Ms) 7.4 kd (1/s) 7.4 KD (M) 7.4 配體含量 (RU) 7.4 %Rmax HCDR1 HCDR2 HCDR3
P1-061015 3.4E+05 2.2E-03 6.4E-09 712 122 GFTFSSYAMH IIWYDGSNKYYADSVKG DSGFYSSYYFDY
P1-077835 E31S 3.9E+04 2.6E-02 6.6E-07 549 31 .......... H.........E...... .....E.....E
P1-077853 E31S E102Y 2.1E+04 2.4E-02 1.2E-06 484 25 .......... H.........E...... .....E......
P1-077845 E31S H50I 2.8E+05 3.8E-03 1.4E-08 547 122 .......... ..........E...... .....E.....E
P1-077861 H50I E102Y 1.0E+05 2.7E-03 2.6E-08 507 112 .....E.... ..........E...... .....E......
P1-077837 H50I 1.3E+05 3.3E-03 2.6E-08 541 112 .....E.... ..........E...... .....E.....E
P1-077859 H50I E100S 4.6E+05 4.4E-03 9.5E-09 590 121 .....E.... ..........E...... ...........E
P1-077847 H50I E59Y 1.2E+05 3.5E-03 2.9E-08 677 109 .....E.... ................. .....E.....E
P1-068744 3.5E+04 3.6E-02 1.1E-06 565 17 .....E.... H.........E...... .....E.....E
P1-077843 E102Y 1.8E+04 3.4E-02 2.0E-06 576 13 .....E.... H.........E...... .....E......
P1-071765 E31S E59Y 1.2E+04 6.1E-02 5.2E-06 689 11 .......... H................ .....E.....E
P1-077863 E59Y E102Y 6.3E+04 5.5E-02 1.1E-06 666 7 .....E.... H................ .....E......
P1-077839 E59Y 7.1E+04 9.3E-02 1.3E-06 671 8 .....E.... H............... 。 .....E.....E
P1-077851 E100S E102Y 1.5E+05 3.0E-01 2.2E-06 558 20 .....E.... H.........E...... ............
P1-077857 E31S E100S 3.0E+05 1.6E-01 5.2E-07 628 38 .......... H.........E...... ...........E
P1-077841 E100S 3.3E+05 3.0E-01 9.1E-07 543 21 .....E.... H.........E...... ...........E
P1-077849 E59Y E100S 5.3E+04 3.5E-01 6.6E-06 569 14 .....E.... H................ ...........E
P1 ID 回復突變 6.0 ka (1/Ms) 6.0 kd (1/s) 6.0 KD (M) 6.0 配體 含量 (RU) 6.0 %Rmax HCDR1 HCDR2 HCDR3
P1-061015 8.3E+05 1.6E-03 1.9E-09 967 133 GFTFSSYAMH IIWYDGSNKYYADSVKG DSGFYSSYYFDY
P1-077835 E31S 2.2E+05 1.7E-03 7.7E-09 763 123 .......... H.........E...... .....E.....E
P1-077853 E31S E102Y 1.1E+05 1.9E-03 1.8E-08 690 104 .......... H.........E...... .....E......
P1-077845 E31S H50I 1.2E+06 2.0E-03 1.7E-09 743 141 .......... ..........E...... .....E.....E
P1-077861 H50I E102Y 8.7E+05 2.3E-03 2.6E-09 718 137 .....E.... ..........E...... .....E......
P1-077837 H50I 1.2E+06 3.0E-03 2.5E-09 750 136 .....E.... ..........E...... .....E.....E
P1-077859 H50I E100S 1.4E+06 3.2E-03 2.3E-09 821 135 .....E.... ..........E...... ...........E
P1-077847 H50I E59Y 1.2E+06 3.2E-03 2.7E-09 903 132 .....E.... ................. .....E.....E
P1-068744 2.3E+05 4.6E-03 2.0E-08 788 106 .....E.... H.........E...... .....E.....E
P1-077843 E102Y 1.5E+05 4.8E-03 3.3E-08 797 90 .....E.... H.........E...... .....E......
P1-077855 E31S E59Y 2.1E+05 7.7E-03 3.6E-08 1007 82 .......... H................ .....E.....E
P1-077863 E59Y E102Y 1.4E+05 1.7E-02 1.3E-07 947 47 .....E.... H................ .....E......
P1-077839 E59Y 6.3E+05 5.4E-02 8.5E-08 899 59 .....E.... H................ .....E.....E
P1-077851 E100S E102Y 3.8E+05 8.5E-02 2.2E-07 776 30 .....E.... H.........E...... ............
P1-077857 E31S E100S 8.2E+05 9.7E-02 1.2E-07 915 44 .......... H.........E...... ...........E
P1-077841 E100S 5.2E+05 1.1E-01 2.0E-07 752 33 .....E.... H.........E...... ...........E
P1-077849 E59Y E100S 5.0E+05 1.1E-01 2.2E-07 783 24 .....E.... H................ ...........E
表 28 ： P1-061015 及 P1-068748 回復突變體之結合動力學。
P1 ID 回復突變 7.4 ka (1/Ms) 7.4 kd (1/s) 7.4 KD (M) 7.4 配體含量 (RU) 7.4 %Rmax HCDR1 HCDR2 HCDR3
P1-077893 D57K D100S 4.0E+05 1.9E-03 4.7E-09 640 126 .....HH… ...........D. 。 ............
P1-077891 H32Y D100S 1.2E+06 2.5E-03 2.1E-09 550 124 .....H.... ...... DD ........ 。 ............
P1-077887 H31S D100S 9.1E+05 2.7E-03 3.0E-09 493 127 ......H… ...... DD ........ 。 ............
P1-077873 D100S 8.5E+05 3E-03 3.6E-09 589 124 .....HH… ...... DD ........ 。 ............
P1-061015 3.4E+05 2.2E-03 6.4E-09 712 122 GFTFSSYAMH IIWYDGSNKYYADSVKG DSGFYSSYYFDY
P1-077875 H31S H32Y 1.6E+05 2.1E-02 1.3E-07 521 82 .......... ........DD....... .....D......
P1-077877 H32Y D57K 8.8E+04 2.4E-02 2.7E-07 714 54 .....H.... .........D....... .....D......
P1-077883 H31S D57K 6.8E+04 3.5E-02 5.1E-07 688 34 ......H… .........D....... .....D......
P1-077869 D57K 2.8E+04 2.7E-02 9.8E-07 588 30 .....HH… .........D....... .....D......
P1-077865 H31S 6.9E+04 2.8E-02 4.1E-07 525 46 ......H… ........DD....... .....D......
P1-077867 H32Y 1.2E+05 2.6E-02 2.3E-07 625 63 .....H.... ........DD....... .....D......
P1-077881 D58Y D100S 1.6E+05 3.6E-03 2.2E-08 511 116 .....HH… ........D........ ............
P1-068748 5.4E+04 3.2E-02 6.0E-07 574 38 .....HH… ........DD....... .....D......
P1-077889 H32Y D58Y 3.1E+04 7.3E-02 2.4E-06 589 16 .....H.... ........D........ .....D......
P1-077871 D58Y 未獲得/分析 0 0 .....HH… ........D........ .....D......
P1-077879 D57K D58Y 不適用 600 3 .....HH… ................. .....D......
P1-077885 H31S D58Y 不適用 510 5 ......H… ........D........ .....D......
P1 ID 回復突變 6.0 ka (1/Ms) 6.0 kd (1/s) 6.0 KD (M) 6.0 配體 含量 (RU) 6.0 %Rmax HCDR1 HCDR2 HCDR3
P1-077893 D57K D100S 1.4E+06 5.8E-04 4.3E-10 900 138 .....HH… .........D....... ............
P1-077891 H32Y D100S 2.7E+06 9.9E-04 3.6E-10 795 133 .....H.... ........DD....... ............
P1-077887 H31S D100S 2.1E+06 1.1E-03 5.2E-10 716 136 ......H… ........DD....... ............
P1-077873 D100S 1.8E+06 1.2E-03 7.1E-10 822 134 .....HH… ........DD....... ............
P1-061015 8.3E+05 1.6E-03 1.9E-09 967 133 GFTFSSYAMH IIWYDGSNKYYADSVKG DSGFYSSYYFDY
P1-077875 H31S H32Y 1.9E+06 1.8E-03 9.4E-10 745 139 .......... ........DD....... .....D......
P1-077877 H32Y D57K 8.4E+05 1.9E-03 2.2E-09 963 131 .....H.... .........D....... .....D......
P1-077883 H31S D57K 3.1E+05 2.0E-03 6.7E-09 920 118 ......H… .........D....... .....D......
P1-077869 D57K 1.7E+05 2.6E-03 1.5E-08 772 104 .....HH… .........D....... .....D......
P1-077865 H31S 5.4E+05 2.8E-03 5.2E-09 744 124 ......H… ........DD....... .....D......
P1-077867 H32Y 1.3E+06 2.9E-03 2.2E-09 831 130 .....H.... ........DD....... .....D......
P1-077881 D58Y D100S 6.2E+04 3.4E-03 5.3E-08 719 81 .....HH… ........D........ ............
P1-068748 3.1E+05 3.5E-03 1.1E-08 780 114 .....HH… ........DD....... .....D......
P1-077889 H32Y D58Y 1.8E+05 2.2E-02 1.3E-07 852 44 .....H.... ........D........ .....D......
P1-077871 D58Y 未獲得/分析 0 0 .....HH… ........D........ .....D......
P1-077879 D57K D58Y 不適用 815 7 .....HH… ................. .....D......
P1-077885 H31S D58Y 不適用 701 11 ......H… ........D........ .....D......
圖29C展示抗體重鏈CDR之比對結果之匯總。P1-068744及P1-068748中加粗體之所描繪胺基酸殘基係P1-061015中之相應殘基回復維持pH選擇性且與P1-068744或P1-068748抗體相比改良pH 6.0下之kd 者。具有雙下劃線之胺基酸殘基係P1-061015中之相應殘基回復導致損失P1-068744或P1-068748之pH選擇性者，且由此係該等抗體中對於pH選擇性結合hVISTA較為重要之殘基。具有鋸齒狀下劃線之胺基酸殘基係P1-061015中之相應殘基回復有害於P1-068744或P1-068748與hVISTA之動力學及/或結合者，其由此係該等抗體中對於結合hVISTA較為重要之殘基。特定而言，如同P1-061015抗體，包含H50I回復之P1-068744回復突變體具有pH耐受性。P1-068744 E31S突變維持pH選擇性性質且相對於‘744抗體改良pH 6.0下之解離速率(約2-3倍)。在E31S突變與E59Y或E100S組合時，改良之解離速率會失去。E59Y及E100S回復似乎有害於動力學。如同P1-061015親代抗體，包含D100S回復之P1-068748回復突變體具有pH耐受性。H31S、H32Y及D57K回復(單獨或以雙取代形式)可維持pH選擇性且與‘748抗體相比在pH 6.0下之解離速率略有(≤ 2倍)改良。包含D58Y回復之P1-068748雙回復突變體展示較差結合及/或較差動力學。未表現單一D58Y回復突變體且不能進行評估。
實例 34 ： 抗 hVISTA 抗體與表現 hVISTA-ECD 之細胞之結合 為測試抗hVISTA抗體與穩定表現hVISTA細胞外結構域(ECD)之293T細胞在pH 6.0及pH 7.4下之結合，使用下列方案。藉由向溶液中逐滴添加MES直至達到期望pH為止來將酸性(pH 6.0)及中性(pH 7.4) HBSS緩衝液調節至適當pH。將293-OKT3-VISTA表現細胞以約40,000個細胞/孔平鋪於96孔板上。使用各別pH緩衝液洗滌細胞。向板孔中添加抗體(以10 µg/ml)且將板在冰上培育45分鐘，然後使用各別緩衝液洗滌兩次。然後以1:200比率添加APC偶聯之抗人類IgG二級抗體(例如APC山羊抗人類)且將板在冰上進一步培育45分鐘，且然後使用各別緩衝液洗滌兩次。然後在流式細胞儀上讀取螢光。
來自此實驗之數據展示於圖30A-D中且顯示為與抗體P-061029在每一pH下之結合(其設定於100%)相比之結合百分比。所測試抗體皆展示不結合不表現hVISTA之293T親代細胞。圖30A展示P1-068744及P1-068748抗體以及抗體P1-068767、P1-061029及若干其子代抗體之數據。圖30B展示其他P1-068767或P1-061029子代抗體及若干VISTA.4子代抗體之數據。圖30C及30D展示各個P1-068744及P1-068748子代抗體之數據。
序列表 下文係本申請案中所提及之某些序列之表格。在SEQ ID NO: 2中，胺基酸位置187可為D或E。
在下文之抗體序列中，VH CDR1、CDR2及CDR3序列分別位於包括胺基酸26-35、50-66及99-110之胺基酸位置，且VL CDR1、CDR2及CDR3序列分別位於包括胺基酸24-35、51-57及90-98之胺基酸位置。VH CDR1係根據AbM來編號(AA 26-35；Abhinandan及Martin (2008) Mol. Immunol. 45:3832-3839；Swindells等人(2017) J. Mol. Biol. 429:356-364)且所有其他CDR (VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1-3)係根據Kabat來編號。對於特定抗體物質之CDR序列而言，其VH及VL序列在下文中加粗體及加下劃線。
SEQ ID NO 名稱 序列
1 hVISTA (具有前導序列) MGVPTALEAG SWRWGSLLFA LFLAASLGPV AA FKVATPYS LYVCPEGQNV TLTCRLLGPV DKGHDVTFYK TWYRSSRGEV QTCSERRPIR NLTFQDLHLH HGGHQAANTS HDLAQRHGLE SASDHHGNFS ITMRNLTLLD SGLYCCLVVE IRHHHSEHRV HGAMELQ VQT GKDAPSNCVV YPSSSQ D SEN ITAA ALATGA CIVGILCLPL ILLLVY KQRQ AASNRRAQEL VRMDSNIQGI ENPGFEASPP AQGIPEAKVR HPLSYVAQRQ PSESGRHLLS EPSTPLSPPG PGDVFFPSLD PVPDSPNFEV I
2 hVISTA (無前導序列) FKVATPYSLY VCPEGQNVTL TCRLLGPVDK GHDVTFYKTW YRSSRGEVQT CSERRPIRNL TFQDLHLHHG GHQAANTSHD LAQRHGLESA SDHHGNFSIT MRNLTLLDSG LYCCLVVEIR HHHSEHRVHG AMELQ VQTGK DAPSNCVVYP SSSQ[ D/E] SENIT AA ALATGACI VGILCLPLIL LLVY KQRQAA SNRRAQELVR MDSNIQGIEN PGFEASPPAQ GIPEAKVRHP LSYVAQRQPS ESGRHLLSEP STPLSPPGPG DVFFPSLDPV PDSPNFEVI
3 人類PSGL-1同種型2前體，具有信號肽    MPLQLLLLLI LLGPGNSLQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAMEIQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATEAQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSVNYPVG APDHISVKQC LLAILILALV ATIFFVCTVV LAVRLSRKGH MYPVRNYSPT EMVCISSLLP DGGEGPSATA NGGLSKAKSP GLTPEPREDR EGDDLTLHSF LP
4 人類PSGL-1同種型2，無信號肽 LQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAMEIQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSVNYPVG APDHISVKQC LLAILILALV ATIFFVCTVV LAVRLSRKGH MYPVRNYSPT EMVCISSLLP DGGEGPSATA NGGLSKAKSP GLTPEPREDR EGDDLTLHSF LP
5 人類PSGL-1同種型2 ECD，具有信號肽    MPLQLLLLLI LLGPGNSLQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQT
6 人類PSGL-1同種型2 ECD，無信號肽 LQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQT
7 人類PSGL-1 ECD (全長人類PSGL-1登錄號AAC50061之N-末端位置42至295) QATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSV
8 HumPSGL-1同種型1前體，具有信號肽 NP_001193538    MAVGASGLEG DKMAGAMPLQ LLLLLILLGP GNSLQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QTTAMEAQTT APEATEAQTT QPTATEAQTT PLAAMEALST EPSATEALSM EPTTKRGLFI PFSVSSVTHK GIPMAASNLS VNYPVGAPDH ISVKQCLLAI LILALVATIF FVCTVVLAVR LSRKGHMYPV RNYSPTEMVC ISSLLPDGGE GPSATANGGL SKAKSPGLTP EPREDREGDD LTLHSFLP
9 人類PSGL-1，無信號肽 LQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QTTAMEAQTT APEATEAQTT QPTATEAQTT PLAAMEALST EPSATEALSM EPTTKRGLFI PFSVSSVTHK GIPMAASNLS VNYPVGAPDH ISVKQCLLAI LILALVATIF FVCTVVLAVR LSRKGHMYPV RNYSPTEMVC ISSLLPDGGE GPSATANGGL SKAKSPGLTP EPREDREGDD LTLHSFLP
10 人類PSGL-1 ECD，具有信號肽 MAVGASGLEG DKMAGAMPLQ LLLLLILLGP GNSLQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QT
11 P1-069059 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSDHIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
12 P1-069059 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
13 P1-069059 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
14 P1-069059 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
15 P1-069061 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
16 P1-069061 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
17 P1-069061 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
18 P1-069061 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
19 P1-069063 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDADDE WGQGTMVTVSS
20 P1-069063 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
21 P1-069063 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDADDEWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
22 P1-069063 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
23 P1-069065 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSDDIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
24 P1-069065 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
25 P1-069065 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDDIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
26 P1-069065 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
27 P1-069067 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDADDE WGQGTMVTVSS
28 P1-069067 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
29 P1-069067 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDADDEWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
30 P1-069067 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
31 P1-069069 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDADDV WGQGTMVTVSS
32 P1-069069 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
33 P1-069069 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDADDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
34 P1-069069 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
35 P1-069071 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSADIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSEGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
36 P1-069071 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
37 P1-069071 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSADIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSEGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
38 P1-069071 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
39 P1-069073 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
40 P1-069073 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
41 P1-069073 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
42 P1-069073 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
43 P1-069075 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWDSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
44 P1-069075 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
45 P1-069075 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWDSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
46 P1-069075 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
47 P1-069077 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSDEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
48 P1-069077 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
49 P1-069077 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
50 P1-069077 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
51 P1-068761 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
52 P1-068761 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
53 P1-068761 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
54 P1-068761 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
55 P1-068767 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
56 P1-068767 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
57 P1-068767 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
58 P1-068767 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
59 P1-068773 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSDNIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
60 P1-068773 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
61 P1-068773 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSDNIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
62 P1-068773 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
63 P1-068765 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTDEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
64 P1-068765 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
65 P1-068765 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTDEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
66 P1-068765 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
67 P1-061029 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
68 P1-061029 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
69 P1-061029 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
70 P1-061029 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
71 P1-068757 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
72 P1-068757 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
73 P1-068757 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
74 P1-068757 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
75 P1-068771 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSHEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
76 P1-068771 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
77 P1-068771 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSHEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
78 P1-068771 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
79 P1-068775 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
80 P1-068775 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
81 P1-068775 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
82 P1-068775 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
83 P1-068769 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSDHIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
84 P1-068769 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
85 P1-068769 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
86 P1-068769 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
87 P1-068759 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
88 P1-068759 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
89 P1-068759 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
90 P1-068759 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
91 P1-068763 VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
92 P1-068763 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
93 P1-068763 IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
94 P1-068763 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
95 P1-061015 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSSYAMH WVRQAPGKGLEWVA IIWYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYSSYYFDY WGQGTLVTVSS
96 P1-061015 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
97 P1-061015 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYSSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
98 P1-061015 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
99 P1-068748 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSHHAMH WVRQAPGKGLEWVA IIWYDGSNDDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYDSYYFDY WGQGTLVTVSS
100 P1-068748 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
101 P1-068748 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHHAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNDDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYDSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
102 P1-068748 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
103 P1-068744 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSEYAMH WVRQAPGKGLEWVA HIWYDGSNKYEADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYESYYFDE WGQGTLVTVSS
104 P1-068744 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
105 P1-068744 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAMHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYESYYFDEWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
106 P1-068744 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
107 P1-068736 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSEYAMH WVRQAPGKGLEWVA IDWYDGSNKDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYDSYYFDD WGQGTLVTVSS
108 P1-068736 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
109 P1-068736 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAMHWVRQAPGKGLEWVAIDWYDGSNKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
110 P1-068736 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
111 P1-068752 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSSYAMH WVRQAPGKGLEWVA EIWYDGSNKDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYDSYYFDE WGQGTLVTVSS
112 P1-068752 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
113 P1-068752 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAEIWYDGSNKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYDSYYFDEWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
114 P1-068752 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
115 P1-068740 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSDYAMH WVRQAPGKGLEWVA IIWYDGSDKDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYDSYYFDD WGQGTLVTVSS
116 P1-068740 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
117 P1-068740 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
118 P1-068740 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
119 P1-068742 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSDYAMH WVRQAPGKGLEWVA IIWYDGSDKDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYEDYYFDY WGQGTLVTVSS
120 P1-068742 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
121 P1-068742 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYEDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
122 P1-068742 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
123 P1-068746 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSSYAMH WVRQAPGKGLEWVA IIWYDGSNHHYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYDSYYFDY WGQGTLVTVSS
124 P1-068746 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
125 P1-068746 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNHHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYDSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
126 P1-068746 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
127 P1-068750 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSDYDMH WVRQAPGKGLEWVA EIWDDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DEEFYSSYYFDY WGQGTLVTVSS
128 P1-068750 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
129 P1-068750 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYDMHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDEEFYSSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
130 P1-068750 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
131 P1-068738 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSEYAHH WVRQAPGKGLEWVA IIWDDGSNHYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFYEDYYFDY WGQGTLVTVSS
132 P1-068738 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
133 P1-068738 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAHHWVRQAPGKGLEWVAIIWDDGSNHYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYEDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
134 P1-068738 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
135 P1-068754 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSDYDMH WVRQAPGKGLEWVA EIWDDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR DSGFHSDYYFDY WGQGTLVTVSS
136 P1-068754 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY DASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQYNSYPYT FGQGTKLEIK
137 P1-068754 IgG1.3 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYDMHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFHSDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
138 P1-068754 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
139 P1-069293 VH (P1-068761.IgG1f) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
140 P1-069293 VL (P1-068761.IgG1f) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
141 P1-069293 HC (P1-068761.IgG1f) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
142 P1-069293 LC (P1-068761.IgG1f) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
143 P1-069298 VH (P1-068767.IgG1f) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
144 P1-069298 VL (P1-068767.IgG1f) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
145 P1-069298 HC (P1-068767.IgG1f) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
146 P1-069298 LC (P1-068767.IgG1f) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
147 P1-069302 VH (P1-061029.IgG1f) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
148 P1-069302 VL (P1-061029.IgG1f) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
149 P1-069302 HC (P1-061029.IgG1f) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
150 P1-069302 LC (P1-061029.IgG1f) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
151 P1-069312 VH (P1-068761.IgG1f無岩藻糖基化)    EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
152 P1-069312 VL (P1-068761.IgG1f無岩藻糖基化)    EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
153 P1-069312 HC (P1-068761.IgG1f無岩藻糖基化)    EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
154 P1-069312 LC (P1-068761.IgG1f無岩藻糖基化)    EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
155 P1-069309 VH (P1-068767.IgG1f無岩藻糖基化)    EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
156 P1-069309 VL (P1-068767.IgG1f無岩藻糖基化)    EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
157 P1-069309 HC (P1-068767.IgG1f無岩藻糖基化)    EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
158 P1-069309 LC (P1-068767.IgG1f無岩藻糖基化)    EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
159 P1-069307 VH (P1-061029.IgG1f無岩藻糖基化) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
160 P1-069307 VL (P1-061029.IgG1f無岩藻糖基化) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
161 P1-069307 HC (P1-061029.IgG1f無岩藻糖基化) EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
162 P1-069307 LC (P1-061029.IgG1f無岩藻糖基化) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
163 IgG1.3 (或IgG1.3f)重鏈恆定區 (L234A, L235E, G237A) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
164 實例性輕鏈恆定區 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
165 人類VISTA NP_071436.1 (圖1B) 參見圖1B
166 食蟹獼猴VISTA XP_005565644.1 (圖1B) 參見圖1B
167 小鼠VISTA NP_083008.1 (圖1B) 參見圖1B
168 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGWIDAFDV
169 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) XX GYSGGWIDAFDV
170 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X P X YSGGWIDAFDV
171 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PG X SGGWIDAFDV
172 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGY X GGWIDAFDV
173 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYS X GWIDAFDV
174 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSG X WIDAFDV
175 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGG X IDAFDV
176 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGW X DAFDV
177 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGWI X AFDV
178 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGWID X FDV
179 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGWIDA X DV
180 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGWIDAF X V
181 P1-061029 HDR3晶片寡聚物 (圖7A) X PGYSGGWIDAFD X
182 IgG1f (人類野生型異型f)重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
183 IgG1.1f 重鏈恆定區 (L234A, L235E, G237A, A330S, P331S) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
184 IgG1fa.P238K (或IgG1.P238K)重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGKSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
185 P1-070864 P1-068761_E30D VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
186 P1-070864 P1-068761_E30D VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
187 P1-070864 P1-068761_E30D IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
188 P1-070864 P1-068761_E30D LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
189 P1-070866 P1-068761_E32Y VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
190 P1-070866 P1-068761_E32Y VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
191 P1-070866 P1-068761_E32Y IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
192 P1-070866 P1-068761_E32Y LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
193 P1-070868 P1-068761_E55A VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
194 P1-070868 P1-068761_E55A VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
195 P1-070868 P1-068761_E55A IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
196 P1-070868 P1-068761_E55A LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
197 P1-070870 P1-068761_E56N VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
198 P1-070870 P1-068761_E56N VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
199 P1-070870 P1-068761_E56N IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
200 P1-070870 P1-068761_E56N LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
201 P1-070872 P1-068761_H100G VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
202 P1-070872 P1-068761_H100G VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
203 P1-070872 P1-068761_H100G IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
204 P1-070872 P1-068761_H100G LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
205 P1-070874 P1-068761_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
206 P1-070874 P1-068761_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
207 P1-070874 P1-068761_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
208 P1-070874 P1-068761_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
209 P1-070876 P1-068761_E30D_E32Y VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
210 P1-070876 P1-068761_E30D_E32Y VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
211 P1-070876 P1-068761_E30D_E32Y IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
   212 P1-070876 P1-068761_E30D_E32Y LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
213 P1-070878 P1-068761_E55A_E56N VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
214 P1-070878 P1-068761_E55A_E56N VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
215 P1-070878 P1-068761_E55A_E56N IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
216 P1-070878 P1-068761_E55A_E56N LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
217 P1-070880 P1-068761_H100G_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
218 P1-070880 P1-068761_H100G_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
219 P1-070880 P1-068761_H100G_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
220 P1-070880 P1-068761_H100G_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
221 P1-070882 P1-068761_E32Y_E55A VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
222 P1-070882 P1-068761_E32Y_E55A VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
223 P1-070882 P1-068761_E32Y_E55A IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
224 P1-070882 P1-068761_E32Y_E55A LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
225 P1-070884 P1-068761_E32Y_E56N VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
226 P1-070884 P1-068761_E32Y_E56N VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
227 P1-070884 P1-068761_E32Y_E56N IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
228 P1-070884 P1-068761_E32Y_E56N LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
229 P1-070886 P1-068761_E32Y_H100G VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
230 P1-070886 P1-068761_E32Y_H100G VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
231 P1-070886 P1-068761_E32Y_H100G IgG1.3 HC    EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
232 P1-070886 P1-068761_E32Y_H100G LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
233 P1-070888 P1-068761_E32Y_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
234 P1-070888 P1-068761_E32Y_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
235 P1-070888 P1-068761_E32Y_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
236 P1-070888 P1-068761_E32Y_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
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238 P1-070890 P1-068761_E30D_E55A VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
239 P1-070890 P1-068761_E30D_E55A IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
240 P1-070890 P1-068761_E30D_E55A LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
241 P1-070892 P1-068761_E30D_E56N VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
242 P1-070892 P1-068761_E30D_E56N VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
243 P1-070892 P1-068761_E30D_E56N IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
244 P1-070892 P1-068761_E30D_E56N LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
245 P1-070894 P1-068761_E30D_H100G VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
246 P1-070894 P1-068761_E30D_H100G VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
247 P1-070894 P1-068761_E30D_H100G IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
248 P1-070894 P1-068761_E30D_H100G LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
249 P1-070896 P1-068761_E30D_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSEEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
250 P1-070896 P1-068761_E30D_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
251 P1-070896 P1-068761_E30D_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
252 P1-070896 P1-068761_E30D_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
253 P1-070898 P1-068761_E55A_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSAEIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
254 P1-070898 P1-068761_E55A_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
255 P1-070898 P1-068761_E55A_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
256 P1-070898 P1-068761_E55A_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
257 P1-070900 P1-068761_E56N_H100G VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
258 P1-070900 P1-068761_E56N_H100G VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
259 P1-070900 P1-068761_E56N_H100G IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
260 P1-070900 P1-068761_E56N_H100G LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
261 P1-070902 P1-068761_E56N_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDEAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
262 P1-070902 P1-068761_E56N_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
263 P1-070902 P1-068761_E56N_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
264 P1-070902 P1-068761_E56N_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
265 P1-070904 P1-068767_E30D VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
266 P1-070904 P1-068767_E30D VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
267 P1-070904 P1-068767_E30D IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
268 P1-070904 P1-068767_E30D LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
269 P1-070906 P1-068767_D52N VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
270 P1-070906 P1-068767_D52N VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
271 P1-070906 P1-068767_D52N IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
272 P1-070906 P1-068767_D52N LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
273 P1-070908 P1-068767_E55A VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
274 P1-070908 P1-068767_E55A VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
275 P1-070908 P1-068767_E55A IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
276 P1-070908 P1-068767_E55A LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
277 P1-070910 P1-068767_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDD WGQGTMVTVSS
278 P1-070910 P1-068767_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
279 P1-070910 P1-068767_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
280 P1-070910 P1-068767_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
281 P1-070912 P1-068767_D102V VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
282 P1-070912 P1-068767_D102V VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
283 P1-070912 P1-068767_D102V IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
284 P1-070912 P1-068767_D102V LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
285 P1-070914 P1-068767_E30D_D52N VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
286 P1-070914 P1-068767_E30D_D52N VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
287 P1-070914 P1-068767_E30D_D52N IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
288 P1-070914 P1-068767_E30D_D52N LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
289 P1-070916 P1-068767_D52N_E55A VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
290 P1-070916 P1-068767_D52N_E55A VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
291 P1-070916 P1-068767_D52N_E55A IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
292 P1-070916 P1-068767_D52N_E55A LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
293 P1-070918 P1-068767_E55A_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDD WGQGTMVTVSS
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295 P1-070918 P1-068767_E55A_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
296 P1-070918 P1-068767_E55A_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
297 P1-070920 P1-068767_E100fF_D102V VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMHW VRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDV WGQGTMVTVSS
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299 P1-070920 P1-068767_E100fF_D102V IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
300 P1-070920 P1-068767_E100fF_D102V LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
301 P1-070922 P1-068767_E30D_E55A VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDD WGQGTMVTVSS
302 P1-070922 P1-068767_E30D_E55A VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
303 P1-070922 P1-068767_E30D_E55A IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
304 P1-070922 P1-068767_E30D_E55A LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
305 P1-070924 P1-068767_E30D_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDD WGQGTMVTVSS
306 P1-070924 P1-068767_E30D_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYL AWYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
307 P1-070924 P1-068767_E30D_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
308 P1-070924 P1-068767_E30D_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
309 P1-070926 P1-068767_E30D_D102V VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLDDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDV WGQGTMVTVSS
310 P1-070926 P1-068767_E30D_D102V VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
311 P1-070926 P1-068767_E30D_D102V IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
312 P1-070926 P1-068767_E30D_D102V LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
313 P1-070928 P1-068767_D52N_E100fF VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDD WGQGTMVTVSS
314 P1-070928 P1-068767_D52N_E100fF VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
315 P1-070928 P1-068767_D52N_E100fF IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
316 P1-070928 P1-068767_D52N_E100fF LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
317 P1-070930 P1-068767_D52N_D102V VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GINWNSENIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAED VWGQGTMVTVSS
318 P1-070930 P1-068767_D52N_D102V VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
319 P1-070930 P1-068767_D52N_D102V IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
320 P1-070930 P1-068767_D52N_D102V LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
321 P1-070932 P1-068767_E55A_D102V VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAAS GFTLEDYAMH WVRQAPGKGLEWVS GIDWNSANIGYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAED VWGQGTMVTVSS
322 P1-070932 P1-068767_E55A_D102V VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPFT FGPGTKVDIK
323 P1-070932 P1-068767_E55A_D102V IgG1.3 HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
324 P1-070932 P1-068767_E55A_D102V LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
325 hVISTA-ECD 6-His標籤 AFKVATPYSL YVCPEGQNVT LTCRLLGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVY PSSSQESENI TAHHHHHHH
326 食蟹獼猴VISTA-ECD 6-His標籤 AFKVATLYSL YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY PSSSQESENI TAHHHHHHH
327 P1-069059 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGACCATATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
328 P1-069059 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
329 P1-069061 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
330 P1-069061 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
331 P1-069063 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGACGATGAATGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
332 P1-069063 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
333 P1-069065 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGACGACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
334 P1-069065 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
335 P1-069067 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGACGATGAATGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
336 P1-069067 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
337 P1-069069 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGACGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
338 P1-069069 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
339 P1-069071 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTGACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGAAGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
340 P1-069071 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
341 P1-069073 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
342 P1-069073 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
343 P1-069075 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGGACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
344 P1-069075 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
345 P1-069077 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGACGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
346 P1-069077 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
347 P1-068761 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
348 P1-068761 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
349 P1-068767 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
350 P1-068767 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
351 P1-068773 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGATAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
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450 P1-070922 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
451 P1-070924 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
452 P1-070924 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
453 P1-070926 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
454 P1-070926 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
455 P1-070928 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
456 P1-070928 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
457 P1-070930 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
458 P1-070930 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
459 P1-070932 VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
460 P1-070932 VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
461 IgG1.3重鏈恆定區DNA GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
462 實例性輕鏈恆定區DNA CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
463 P1-068761 VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
464 P1-068761 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
465 P1-068761 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
466 P1-068761 K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
467 P1-061029 VH K16R T84A    EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
468 P1-061029 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
469 P1-061029 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
470 P1-061029 VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
471 P1-068767 VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
472 P1-068767 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
473 P1-068767 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
474 P1-068767 VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
475 P1-070868 (P1-068761_E55A) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
476 P1-070868 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
477 P1-070868 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
478 P1-070868 VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
479 P1-70906 (P1-068767_D52N) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
480 P1-70906 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
481 P1-70906 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
482 P1-70906 VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
483 P1-70908 (P1-068767_E55A) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
484 P1-70908 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
485 P1-70908 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
486 P1-70908 VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
487 P1-70916 (P1-068767_D52N_E55A) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
488 P1-70916 VH K16R EVQLVESGGGLVQPG R SLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
489 P1-70916 VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR A EDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
490 P1-70916 VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
491 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
492 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIK
493 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
494 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
495 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
496 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
497 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) HC DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
498 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) LC DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
499 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
500 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VH K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
501 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
502 P1-72000 (P1-061029_F100fE_V102D) VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
503 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
504 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIK
505 P1-72002 (P1-061029_F100fE) HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
506 P1-72002 (P1-061029_F100fE) LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
507 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
508 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
509 P1-72002 (P1-061029_F100fE) HC DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
510 P1-72002 (P1-061029_F100fE) LC DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
511 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
512 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VH K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
513 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
514 P1-72002 (P1-061029_F100fE) VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
515 P1-72004 (P1-061029_V102D) VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
516 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIK
517 P1-72004 (P1-061029_ V102D) HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
518 P1-72004 (P1-061029_ V102D) LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
519 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
520 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
521 P1-72004 (P1-061029_ V102D) HC DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
522 P1-72004 (P1-061029_ V102D) LC DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
523 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
524 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VH K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
525 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
526 P1-72004 (P1-061029_ V102D) VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
527 P1-72006 (P1-061029_Y32E) VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
528 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIK
529 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
530 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
531 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
532 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
533 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) HC DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
534 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) LC DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
535 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
536 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VH K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
537 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
538 P1-72006 (P1-061029_ Y32E) VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
539 P1-72008 (P1-061029_Y32E_F100fE) VH EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
540 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIK
541 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) HC EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
542 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
543 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VH DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
544 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VL DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
545 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) HC DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
546 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) LC DNA GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
547 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VH K16R T84A EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
548 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VH K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
549 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VH T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
550 P1-72008 (P1-061029_ Y32E_F100fE) VH K16R T84A DNA GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGAGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
551 VISTA.4 VH 41F11 具有加下劃線之信號序列 MEFGLSWVFLVAIIKGVQC QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISNSGSPIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLPGWYFDLWGRGTLVTVSS
552 VISTA.4 VK1 VL 41F11 具有加下劃線之信號序列 MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSASGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNNWPRTFGQGTKVEIK
553 VISTA.4 VK2 VL 41F11 具有加下劃線之信號序列 MDMRVLAQLLGLLLLCFPGARC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPRTFGQGTKVEIK
554 VISTA.4 VK3 VL 41F11 具有加下劃線之信號序列 METPAQLLFLLLLWLPDTTG EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK
555 VISTA.4 VH DNA 41F11 具有加下劃線之信號序列 ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTTGTTGCTATTATAAAAGGTGTCCAGTGT CAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAATAGTGGTAGTCCCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCTCCCGGGCTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCA
556 VISTA.4 VK1 VL DNA 具有加下劃線之信號序列 ATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTACTCTGGCTCCCAGATACCACCGGA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGCCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAACAACTGGCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
557 VISTA.4.A64G VK1 VL 具有加下劃線之信號序列 MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSG SGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNNWPRTFGQGTKVEIK
558 VISTA.4.A64G LC 具有加下劃線之信號序列 MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSG SGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
559 VISTA.5 VH AVQLQESGPGLVRPSQSLSLTCTVTDYSITSDYAWNWIRQFPGSKLEWLGFIGYSGNTNYNPSLESRISITRHTSKNQFFLHLNSMTTEDTATYYCARSLYGGSHWYFDVWGAGTTVTVSS
560 VISTA.5 VK1, VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRGSESVEYYGTILMQWYQQKPGQPPKLLIYGASNVESGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPWTFGGGTKLEIK
561 VISTA.5 VH DNA GCTGTGCAGCTTCAGGAGTCGGGACCTGGCCTGGTGAGACCTTCTCAGTCTCTGTCCCTCACCTGCACTGTCACTGACTACTCAATCACCAGTGATTATGCCTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAGCAAACTGGAGTGGCTGGGCTTCATAGGCTACAGTGGTAACACTAACTACAACCCATCTCTCGAAAGTCGAATCTCTATCACTCGACACACATCCAAGAACCAGTTCTTCCTGCACTTGAATTCTATGACTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGCAAGATCCCTCTACGGTGGTAGTCACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
562 VISTA.5 VK1, VL DNA GACATTGTGCTCACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGAGCCACCATCTCCTGCAGAGGCAGTGAAAGTGTTGAATATTATGGCACAATTTTAATGCAGTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATGGTGCATCCAACGTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTTAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGATGATATTGCAATGTATTTCTGTCAGCAAAGTAGGAAGGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
563 具有取代之P1-061029之CDR1 GFTX1X2DX3AMH，其中X1 = D或L，X2 = E或D，X3 = E或Y
564 具有取代之P1-061029之CDR2 GIX4WX5SX6X7IGYADSVK，其中X4 = D或N，X5 = D或N，X6 = D、E、H或A，X7 = D、E、H或N
565 具有取代之P1-061029之CDR3 VPGYSX8GWIDAX9DX10，其中X8 = E、H或G，X9 = E、D或F，X10 = D、E或V
566 區域1 hVISTA表位 LGPVDKGHDVTF
567 區域2 hVISTA表位 RRPIRNLTFQDL
568 區域3 hVISTA表位 VVEIRHHHSEHRVHGA
569 具有T85V取代之P1-061015 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA V YCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
570 P1-077835 (P1-068744 E31S)VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYESYYFDEWGQGTLVTVSS
571 P1-077835 (P1-068744 E31S)VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACATATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAATCGTACTACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
572 P1-077835 (P1-068744 E31S)VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
573 P1-077835 (P1-068744 E31S)VL DNA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
574 P1-077837 (P1-068744 H50I)VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYEADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYESYYFDEWGQGTLVTVSS
575 P1-077837 (P1-068744 H50I) VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAATCGTACTACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
576 P1-077837 (P1-068744 H50I)VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
577 P1-077837 (P1-068744 H50I)VL DNA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
578 P1-077839 (P1-068744 E59Y)VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAMHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYESYYFDEWGQGTLVTVSS
579 P1-077839 (P1-068744 E59Y) VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACATATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAATCGTACTACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
580 P1-077839 (P1-068744 E59Y)VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
581 P1-077839 (P1-068744 E59Y)VL DNA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
582 P1-077841 (P1-068744 E100S)VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAMHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYSSYYFDEWGQGTLVTVSS
583 P1-077841 (P1-068744 E100S) VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACATATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACTCCTCGTACTACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
584 P1-077841 (P1-068744 E100S)VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
585 P1-077841 (P1-068744 E100S)VL DNA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
586 P1-077843 (P1-068744 E102Y)VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAMHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYESYYFDYWGQGTLVTVSS
587 P1-077843 (P1-068744 E102Y) VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACATATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAATCGTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
588 P1-077843 (P1-068744 E102Y)VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
589 P1-077843 (P1-068744 E102Y)VL DNA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
590 P1-077845 (P1-068744 E31S H50I)VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYEADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYESYYFDEWGQGTLVTVSS
591 P1-077845 (P1-068744 E31S H50I) VH DNA CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAATCGTACTACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
592 P1-077845 (P1-068744 E31S H50I)VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
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689 P1-077893 (P1-068748 D57K D100S) VL DNA GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
690 基於P1-061015及P1-068744之CDR1 GFTFSX1 YAMH，其中X1 係E或S
691 基於P1-061015及P1-068744之CDR2 X2 IWYDGSNKYX3 ADSVKG，其中X2 係H或I，且X3 係E或Y
692 基於P1-061015及P1-068744之CDR3 DSGFYX4 SYYFDX5 ，其中X4 係E或S且X5 係E或Y
693 基於P1-061015及P1-068748之CDR1 GFTFSX1 X2 AMH，其中X1 係H或S，且X2 係H或Y
694 基於P1-061015及P1-068748之CDR2 IIWYDGSNX3 X4 YADSVKG，其中X3 係D或K，且X4 係D或Y
695 基於P1-061015及P1-068748之CDR3 DSGFYX5 SYYFDY，其中X5 係D
使本申請案主張優先權權益之美國臨時申請案含有至少一張彩圖。假設臨時申請案隨後可供公眾使用，則在要求並支付必要費用之後可自美國專利及商標局(United States Patent and Trademark Office)獲得帶彩圖之複本。圖 1A-C 展示，VISTA之細胞外結構域含有格外高頻率之組胺酸殘基，該等組胺酸殘基中之許多係保守的，且該等組胺酸殘基中之至少一些可參與受體-配體結合。圖 1A 展示含有免疫球蛋白結構域之蛋白質之圖形，其中每一蛋白質之細胞外結構域胺基酸殘基之數量繪示於x軸上，且每一蛋白質之細胞外結構域內之組胺酸殘基之頻率繪示於y軸上。每一數據點之大小對應於每一蛋白質之細胞外結構域中之組胺酸殘基之總數。圖 1B 展示人類VISTA、食蟹獼猴VISTA及小鼠VISTA之細胞外結構域之比對胺基酸序列。標誌出信號肽(Sig)及跨膜結構域(TMD)序列位置。所有三個物種中之保守組胺酸殘基皆係以粗體及下劃線展示；人類及食蟹獼猴中之保守組胺酸殘基僅以粗體展示。圖 1C 展示人類VISTA免疫球蛋白結構域之三維結構之模型。組胺酸殘基繪示為球及桿跡線。圖 2A-B 展示其中VISTA細胞外結構域中之組胺酸殘基賦予針對酸性pH而非生理pH之反受體選擇性之模型。圖 2A 展示組胺酸殘基中之吡咯銨基團(NH)在缺乏質子化及存在質子化之間之平衡。溶液中之組胺酸之pKa為6.5，從而指示組胺酸殘基相對於較高pH在pH 6.5及更低下更可能質子化，且由此帶正電。圖 2B 展示展示其中VISTA於酸性pH選擇性接合P-選擇蛋白醣蛋白配體1 (PSGL-1)或其他反受體及配體(「VISTA-R」)之模型。因此，於酸性pH而非於生理pH結合VISTA之細胞外結構域之抗體可對於抑制或調節VISTA活性至關重要。圖 3 展示腫瘤浸潤性巨噬球、樹突狀細胞、嗜中性球、CD4+效應T細胞、CD4+調控性T細胞、CD8+T細胞、天然殺手(NK)細胞及B細胞上之VISTA表面表現程度(抗VISTA抗體染色之平均螢光強度(MFI))。VISTA表現於許多腫瘤浸潤性白血球、尤其骨髓樣細胞上。腫瘤微環境通常係酸性，從而使得VISTA能夠接合反受體及配體。圖 4A-G 展示，VISTA選擇性於酸性pH結合白血球及PSGL-1且於中性pH具有較小結合或並無結合，且此結合可由抗VISTA抗體阻斷。圖 4A 在左側展示結合活化人類CD4+ T細胞之螢光偶聯之重組VISTA多聚體之代表性直方圖。自較深灰色至較淺色，填充直方圖繪示在pH 7.0、6.5、6.4、6.3、6.1及6.0下之結合。一些直方圖經其相應pH標記。pH 6.0下之非VISTA對照多聚體結合展示為未填充直方圖。在右側，將在不同pH下結合來自兩種供體之活化人類CD4+ T細胞之VISTA (圓)及對照(三角形)多聚體之平均MFI繪圖。圖 4B 展示在pH 6.0及pH 7.4下結合周邊血單核細胞(PBMC)之重組VISTA多聚體之代表性直方圖。自較深灰色至較淺色，填充直方圖繪示在pH 6.0下結合CD19+ B細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、CD56+ NK細胞及CD14+單核球。未填充實線邊界及未填充虛線邊界直方圖分別繪示在pH 7.4下結合總PBMC淋巴球及單核球。圖 4C 展示在抗VISTA阻斷性抗體(正方形)或非VISTA特異性同型匹配對照抗體(圓)存在下結合活化人類CD4+ T細胞之代表性重組VISTA多聚體。抗體濃度係以對數標度繪示。亦展示非線性回歸。三角形繪示來自未經重組VISTA多聚體染色之活化人類CD4+ T細胞之背景信號。圖 4D 展示在pH 6.0下結合經轉染以表現人類PSGL-1之硫酸乙醯肝素缺陷型中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(細胞系pGSD-677，美國模式培養物保藏所(American Type Culture Collection))之重組VISTA多聚體之代表性二維流式細胞術繪圖。在存在及不存在圖4C中所展示之抗VISTA阻斷性抗體下實施多聚體結合。未由重組VISTA多聚體染色之細胞展示為對照。PSGL-1抗體染色繪示於y軸上，且VISTA多聚體染色繪示於x軸上。圖 4E 展示在pH 6.0及pH 7.4下結合小鼠脾細胞之重組小鼠VISTA-Fc融合蛋白之代表性直方圖。自較深灰色至較淺色，填充直方圖繪示在pH 6.0下結合CD8+ T細胞、CD11b+骨髓樣細胞及CD4+ T細胞。未填充直方圖繪示在pH 7.4下結合總脾細胞。圖 4F 及G 展示，VISTA多聚體分別結合單核球及嗜中性球，且在pH 6.0下之結合強於在pH 7.4下之結合。圖 5A-D 展示，VISTA優先於酸性pH調介T細胞阻抑及細胞:細胞黏附，且兩種效應皆可經抗VISTA阻斷性抗體逆轉。圖 5A 展示表現hVISTA之293T細胞或載體對照(繪示於y軸上)及內源性表現細胞表面硫酸乙醯肝素之CHO細胞(在x軸上)之間在pH 6.0及7.0下之代表性細胞:細胞偶聯物形成。圖 5B 係相同細胞之間在pH 6.0下在抗VISTA阻斷性抗體、抗VISTA非阻斷性抗體或同型匹配非VISTA特異性對照抗體存在下所形成細胞偶聯物之頻率之圖形。圖 5C 展示藉由表現NFkB螢光素酶報告基因之Jurkat (人類T細胞系)細胞在各種pH下於表現h VISTA及抗人類T細胞受體激動劑抗體OKT3之單鏈可變片段之293T細胞(「人工抗原呈遞細胞」)共培養之後所生成螢光素酶活性之代表性繪圖。將抗VISTA阻斷性抗體(正方形)或同型匹配非VISTA特異性對照抗體(圓)添加至共培養細胞中。在圖 5D 中，將圖5A中所展示之數據繪示為使用抗VISTA抗體治療相對於對照之螢光素酶信號之倍數增加(「效應大小」)。圖 6A-G 展示，VISTA可發現於細胞內胞內體、尤其Rab11+再循環胞內體中，且可經由胞內體輸送再循環進出細胞表面。圖 6A 展示VISTA、Rab5 (早期胞內體標記物)、Rab7 (晚期胞內體標記物)及Rab11 (再循環胞內體標記物)在表現人類VISTA之293T細胞內之共局部化。圖 6B 展示VISTA及Rab11在人類單核球內之共局部化。細胞內VISTA與Rab11+再循環胞內體共局部化。與VISTA抗體為相同同型之非VISTA結合對照抗體(「cAb」)並不可檢測地結合單核球。圖 6C 展示三種抗VISTA抗體與重組VISTA在pH 7.4 (黑色)、6.7 (較深灰色)及6 (較淺灰色)下之結合。圖 6D 展示相同抗VISTA抗體1 (倒三角形)、2 (圓)、3 (正方形)或具有細胞自溶酶B敏感性連接體及細胞毒性酬載之非VISTA特異性對照抗體(三角形)殺死表現VISTA之急性骨髓樣白血病(AML)細胞系之易感性。將細胞活力(CellTiter-Glo LU)繪示於y軸上且將抗體濃度繪示於x軸上。圖 6E 比較抗VISTA抗體3與於酸性pH不展現受損結合之經改造變體(「VISTA mAb 3c」)之hVISTA結合。圖 6F 展示比較抗VISTA抗體3 (正方形)及3c (菱形)之功效之抗體藥物偶聯物分析。圖 6G 展示胞內體輸送之示意圖，其中VISTA經由早期胞內體及再循環胞內體再循環進出細胞表面。圖 7A-F 展示設計及篩選抗VISTA抗體變體庫以獲得酸性pH選擇性抗體之方式。圖 7A 展示在抗人類VISTA抗體純系P1-061029 (縮寫為‘029)之VH CDR 3中所進行用於產生篩選用‘029庫之胺基酸取代。為潛在地改良於酸性pH與VISTA之富組胺酸區域之結合，該等庫容許取代帶負電胺基酸天門冬胺酸及麩胺酸以及pH反應性組胺酸。X=H、D或E。在合成中去除加括號序列以避免引入易感性。合成具有1-2個突變之P1-061029 HCDR3之總共647個獨特序列。圖 7B 展示迭代性篩選及選擇‘029庫之酸性pH選擇性抗體變體之程序。R表示選擇輪數。圖 7C 展示展現9輪選擇後之變體池之代表性二維流式細胞術繪圖數據。VISTA結合繪示於y軸上，且變體抗體表現繪示於x軸上。展示在各種抗體濃度及pH下之結合數據。圖 7D 展示P1-061029及其子代純系在pH 6.0及7.4下與人類VISTA之結合之圖。圖 7E 展示P1-061029及其子代純系與人類VISTA在pH 6.0下之解離速率之圖。圖 7F 展示抗體P1-068761、P1-068767及P1-061029與人類VISTA在pH 6.0及pH 7.4下之SPR結合數據。圖 8A-F 展示VISTA抗體P1-068761及P1-068767之酸性pH選擇性細胞結合、阻斷及效應活性。圖 8A 及圖 8B 展示結合異位表現人類VISTA之Raji細胞之酸性pH選擇性抗體P1-068761 (圖 8A )及P1-068767 (圖 8B )之平均螢光強度。將細胞在大約pH 6.0 (圓；圖8A中之最高曲線)、6.1 (正方形；第三高曲線)、6.2 (三角形；第二高曲線)、6.4 (倒三角形；第四高曲線且靠近pH 6.1曲線)、6.6 (菱形；自底部之第四曲線)、7.0 (圓；自底部之第三曲線)、7.2 (正方形；自底部之第二曲線)及8.1 (未填充三角形；圖8A中之底部曲線)下染色。使用螢光偶聯之抗人類IgG二級抗體檢測結合。圖 8C 展示P1-068767 (圓)及同型匹配非特異性對照抗體(三角形)在各種pH下與異位表現3125 ng/mL人類VISTA之Raji細胞之結合。「pH50 」 (損失50%之P1-068767結合之pH)大約為6.6。圖 8D 展示結合人類單核球之同型匹配非特異性對照抗體(pH 7.0及6.0分別為填充圓及未填充圓)、抗VISTA mAb 2 (「對照」，參見圖6C，pH 7.0及6.0分別為填充正方形及未填充正方形)、P1-068761 (pH 7.0及6.0分別為填充三角形及未填充三角形)及P1-068767 (pH 7.0及6.0分別為填充倒三角形及未填充倒三角形)之平均螢光強度(MFI)。藉由螢光偶聯之抗人類IgG二級抗體檢測結合。圖 8E 展示P1-061029 (正方形)、P1-068761 (三角形)及P1-068767 (倒三角形)在pH 6.0下對結合活化人類CD4+ T細胞之重組VISTA多聚體之相當之阻斷，而非VISTA特異性對照抗體(圓)並不阻斷VISTA結合。圖 8F 展示P1-068761 (三角形)及P1-068767 (倒三角形)於生理pH介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)之減小之功效。亦展示P1-061029 (正方形)、非VISTA特異性陽性對照抗體(圓)及非VISTA特異性陰性對照抗體(菱形)。靶細胞之NK細胞特異性裂解(以總靶細胞之百分比之形式)繪示於y軸上且抗體濃度繪示於x軸上。亦展示非線性回歸。圖 9 展示酸性pH選擇性抗VISTA抗體在食蟹獼猴中之增強之藥物動力學(PK)。該圖展示經VISTA抗體2 (「對照」，圓，參見圖6C)、VISTA抗體3 (「酸性pH敏感性」，正方形，參見圖6C)或P1-068767 (三角形)治療之食蟹獼猴中之隨時間之血清抗體濃度。圖 10A 及 10B 展示酸性pH選擇性抗VISTA抗體‘761及‘767中之突變之結合效應。圖 10A 展示P1-068761回復突變體在pH 7.4、pH 6.7及pH 6.0下之動力學結合數據及其反向突變相對於P1-068761之位置。圖 10B 展示P1-068767回復突變體在pH 7.4、pH 6.7及pH 6.0下之動力學結合數據及其反向突變相對於P1-068767之位置。圖 11A-C 展示各種抗VISTA抗體之表位分類(epitope binning)及定位。圖 11A 展示P1-068761及P1-068767與P1-061029及VISTA抗體對照相比之VISTA表位競爭。圖 11B 及圖 11C 展示阻斷性hVISTA抗體(圖11B)與非阻斷性hVISTA抗體(mAb1；圖11C)相比之所有殘基之表位(如表14中所列示)。胺基酸殘基66(H)及162(A)用於表示分子定向。組胺酸殘基呈灰色，且表位殘基呈黑色。圖 12A-C 展示下列各項之成像毛細管等電聚焦(icIEF)數據：圖12A：P1-061029，圖12B：P1-068761，及圖12C：P1-068767。指示主要物質(pI主要)以及pI標記物之等電點。圖 13A 及 B 展示‘029及‘015子代純系之可變區之比對。圖 13A 展示‘029及其子代純系之可變區之胺基酸序列之比對。圖13B 展示‘015及其子代純系之可變區之胺基酸序列之比對。圖 14 展示含有及不含K16R及T84A取代之P1-068761之VH序列之比對。雙下劃線殘基展示框架區之位置16及84且陰影部分展示CDR。圖 15A-O ：向野生型C57BL6小鼠植入MC38腫瘤並使用非結合性同型匹配對照抗體(黑色正方形)、小鼠VISTA阻斷性抗體VISTA.10 (向上三角形)、小鼠PD-1阻斷性抗體(正方形)或VISTA及PD-1阻斷性抗體之組合(向下三角形)進行治療。所有抗體皆係小鼠IgG1-D265A (Fc-惰性)同型。(參見圖15A-D。)該等數據代表三個獨立實驗。圖15A-D展示隨時間之腫瘤體積。n = 10/組。「TF」表示排斥腫瘤之小鼠。圖15E及F展示在開始治療之後7天腫瘤內CD8+ T細胞及CD4+ T細胞之頻率。n = 5/組。單因子ANOVA以及鄧奈特多重對比(Dunnett’s multiple comparison)，P = 0.0001。圖15G及H展示圖15A-D中所展示個別小鼠之結果。圖15I：向VISTA敲除小鼠及野生型同胎幼仔植入MC38腫瘤並使用非結合性同型匹配對照抗體(上方之兩條曲線0/7 TF及0/5 TF，使用圓及向下三角形標誌)或小鼠PD-1阻斷性抗體(下方之兩條曲線0/5 TF及5/8 TF，使用正方形及向下三角形標誌)進行治療。鄰接每一曲線展示中值腫瘤生長及在研究結束時無腫瘤(TF)小鼠之數量與小鼠總數(例如0/7 TF)。該等數據代表兩個獨立實驗。誤差槓繪示四分位距。圖15J-M展示植入MC38腫瘤並使用非結合性同型匹配對照抗體(圖15J)、小鼠PD-1阻斷性抗體(圖15K)、小鼠PD-1阻斷性抗體及非pH選擇性人類VISTA阻斷性抗體P1-061029之組合(圖15L)或小鼠PD-1阻斷性抗體及酸性pH選擇性人類VISTA阻斷性抗體P1-068767之組合(圖15M)治療之人類VISTA基因嵌入(knock-in) (KI)小鼠之腫瘤體積。所有抗體皆係小鼠IgG1-D265A同型。展示隨時間變化之腫瘤體積。n = 5-8/組。該等數據代表一個獨立實驗。圖15N展示在經靜脈內注射5 mg/kg P1-061029 (WT，向下三角形；KI，正方形)或P1-068767 (WT，向上三角形；KI，菱形)之後人類VISTA KI及野生型同胎幼仔(WT)小鼠血清抗體濃度。P1-061029及P1-068767在KI小鼠中之計算血清平均滯留時間(MRT)據估計分別為4.1小時及71小時。針對每一抗體，n = 4隻KI小鼠及1-2隻WT小鼠。該等數據代表單一實驗。圖15O展示在經靜脈內注射5 mg/kg VISTA.4 (圓)或P1-068767 (正方形)之後之食蟹獼猴血清抗體濃度。VISTA.4及P1-061029之計算血清平均滯留時間(MRT)據估計分別為7.6小時及717小時。n = 1隻獼猴/抗體。該等數據代表單一實驗。若未指示另外，則誤差槓繪示平均值之標準誤差。圖 16A-C 展示在開始治療之後7天PD-1 (圖16A)、LAG-3 (圖16B)及TIM-3 (圖16C)之腫瘤內CD8+ T細胞表現之代表性直方圖。誤差槓繪示平均值之標準誤差。圖 17A-C 展示，VISTA於酸性pH結合PSGL-1且此相互作用由VISTA抗體P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4阻斷。圖 17A 展示在pH 6.0及pH 7.4下結合捕獲PSGL1之P-選擇蛋白-Fc及VISTA-Fc之BLI結合感測圖。圖 17B 係展示抗體P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4抑制PSGL-1與hVISTA之結合之直方圖。圖 17C 展示VISTA.4 (向上三角形)及抗PSGL-1抗體KPL-1 (圓)對VISTA-Fc與CHO-PSGL-1細胞之結合之抗體阻斷。該等數據代表兩個獨立實驗。誤差槓繪示平均值之標準誤差。圖 18A-E 展示P1-068767 Fab及hVISTA或(在圖18E中)非阻斷性抗體VISTA.5及hVISTA之共晶體結構之代表圖。VISTA IgV結構域之特徵在於其中心β褶板之異常、富組胺酸延伸體。VISTA IgV結構域與P1-068767抗原結合片段(Fab)共結晶。在1.6 Å解析度下測定VISTA +P1-068767複合物之晶體結構。圖18A展示VISTA IgV結構域: P1-068767 Fab共晶體結構。圖18A展示VISTA IgV結構域與P1-068767 Fab之複合物之整體結構(重鏈，深灰色；輕鏈，淺灰色)。圖18B展示VISTA及PD-L1 IgV結構域之疊加。VISTA組胺酸殘基係以棒圖繪示。圖18B展示，VISTA IgV結構域擁有異常富組胺酸β褶板延伸。圖18C展示如由VISTA +P1-068767晶體結構揭示之P1-068767表位之分子表面(淺灰色靜電表面)。圖18C展示，阻斷性抗體結合VISTA之富組胺酸β褶板延伸。圖18D展示VISTA (灰色絲帶卡通，其中以棒圖繪示表位殘基H121、H122及H123)及P1-068767 (繪示為靜電表面，其中其殘基E100及D102呈棒圖形式)之間之界面之放大視圖。圖18D展示，酸性pH選擇性P1-068767使用酸性殘基接合VISTA組胺酸。圖18E展示，非阻斷性抗體VISTA.5與P1-068767結合hVISTA之不同區域。圖 19 展示如藉由MS-HDX (MS跡線)測定之VISTA.4之表位。圖 20 展示基於圖19中之數據之hVISTA胺基酸序列中之VISTA.4表位的位置。圖19中亦突出顯示之殘基57-68、86-97及148-165在圖20中以較淺灰色文字及下劃線繪示。圖 21A 及 21B 展示在pH 6.0下於抗體VISTA.4 (三角形)、VISTA.5 (正方形)及非VISTA結合抗體(對照，圓)存在下結合活化人類CD4+ T細胞之VISTA多聚體。圖21B展示每一抗體相對於非阻斷T細胞之阻斷效率。單因子ANOVA以及鄧奈特多重對比，***，P ＜ 0.001。該等數據代表4個以上之獨立實驗。誤差槓繪示平均值之標準誤差。圖 22 展示，於酸性pH阻斷VISTA結合之抗體係功能性的。阻斷性抗體VISTA.4 (正方形)、非阻斷性抗體VISTA.5 (三角形)及非VISTA結合(對照，圓)抗體對與經改造以表現VISTA及TCR激動劑之293T細胞(293T-OKT3-VISTA)一起共培養之人類CD4+ T細胞之增殖(圖22A)及干擾素γ產生(圖22B)的效應。單因子ANOVA以及鄧奈特多重對比，*，P ＜ 0.05。該等數據代表4個以上之獨立實驗。圖 23 展示在與293T-OKT3-VISTA細胞共培養後在不同pH下VISTA.4阻斷對Jurkat T細胞活化之效應(藉由量測NF-kB抑制)。該等數據代表三個獨立實驗之組合。圖 24 展示pH對人類CD4+ T細胞之VISTA抑制之效應。在指示pH下使用板塗覆OKT3及VISTA-Fc在VISTA.4 (向上三角形)、VISTA.5 (向下三角形)或非VISTA結合抗體(抗體對照，正方形)存在下刺激細胞。亦展示使用板塗覆OKT3及對照IgG (VISTA對照，黑色圓)或不使用OKT3 (無OKT3，灰色菱形)刺激之細胞。該等數據代表一個獨立實驗。圖 25 A-E 展示，藉由組胺酸及磺基酪胺酸殘基測定VISTA :PSGL-1結合特異性。如圖25A中所展示，在具有或不具有唾液醯基路易斯(lewis) X修飾(分別為SLX+及SLX-)之細胞中產生人類PSGL-1 19聚體-Fc重組蛋白。展示所指示VISTA-Fc及P-選擇蛋白-Fc在pH 6.0 (白色)及7.4 (黑色)下之BLI結合強度。數據代表單一獨立實驗。如圖25B中所展示，使用唾液醯基路易斯X修飾產生之人類PSGL-1 19聚體-Fc醣肽分離成具有大於90%酪胺酸硫酸化(sY-富含)及小於1%酪胺酸硫酸化(sY-貧乏)之部分。展示所指示VISTA-Fc及P-選擇蛋白-Fc在pH 6.0 (白色)及7.4 (黑色)下之BLI結合強度。該等數據代表單一獨立實驗。如圖25C-25D中所提供，產生人類VISTA-Fc重組蛋白，其中位置153-155之組胺酸殘基保持完整(WT VISTA)或由丙胺酸(H2A突變體)、天門冬胺酸(H2D突變體)或精胺酸(H2R突變體)代替。圖25C展示野生型及突變VISTA-Fc蛋白在pH 6.0及7.4下結合捕獲PSGL-1之BLI結合強度。該等數據代表單一實驗。圖25D展示WT VISTA (圓)、H2A突變體(正方形)、H2D突變體(向下三角形)及H2R突變體(灰色向上三角形)以及對照(菱形)在pH 6.0下與CHO-PSGL-1細胞之VISTA-Fc結合。該等數據代表兩個獨立實驗。圖25E展示PSGL-1 19聚體醣肽(頂部)與VISTA之富組胺酸配體界面(灰色絲帶，底部)之複合物之計算模型。標誌VISTA殘基H98、H100、H153及H154。亦標誌PSGL-1殘基Y46、Y48、E56、T57及Y58。圖 26A-F ： 圖 26A 展示GP1BA-his (正方形)及PSGL-1 19聚體-Fc (圓)與捕獲VISTA-Fc在指示pH下之BLI結合強度。該等數據代表一個實驗。圖 26B 展示VISTA多聚體與人類血小板之結合直方圖。在非VISTA結合性對照抗體(在pH 7.4及pH 6.0下)或VISTA.4阻斷性抗體(在pH 6.0下)存在下實施結合。亦展示未染色血小板(灰色填充直方圖)。該等數據代表兩個獨立實驗。圖 26C 展示VSIG-3-Fc在指示pH下結合捕獲VISTA-Fc之BLI結合強度。該等數據代表兩個獨立實驗。圖26D 展示VSIG-3-Fc在指示濃度及pH 6.0下結合捕獲VISTA-Fc之BLI結合強度。藉由單獨緩衝液(最左側條)、非結合性同型匹配對照抗體、人類PSGL-1 19聚體-Fc、P1-061029、P1-061767或VISTA.5 (最右側)來提供競爭。該等數據代表一個獨立實驗。圖26E 展示VSIG-3-Fc與活化人類PBMC T細胞在pH 6.0 (圓)或pH 7.4 (正方形)之結合。亦展示同型匹配對照抗體在pH 6.0 (黑色菱形)及pH 7.4 (灰色三角形)之結合。該等數據代表兩個獨立實驗。誤差槓繪示平均值之標準誤差。圖26F 展示VISTA-Fc (左圖)及PSGL-1 19聚體-Fc (右圖)在指示pH下結合捕獲VISTA-Fc之BLI結合強度。該等數據代表一個獨立實驗。圖 27A-F ： 圖 27A-D 展示抗體VISTA.4及P1-068767在pH 7.4 (左圖)及pH 6.0 (右圖)下之人類及食蟹獼猴感測圖。該等數據代表兩個獨立實驗。圖 27A ： VISTA.4之人類VISTA感測圖。圖 27B ： P1-068767之人類VISTA感測圖。圖 27C ： VISTA.4之食蟹獼猴VISTA感測圖。圖 27D ： P1-068767之食蟹獼猴VISTA感測圖。圖27E 展示植入MC38腫瘤且使用各別抗體治療之人類VISTA基因嵌入小鼠之各種器官、血液或腫瘤中之經標記P1-061029或P1-068767抗體的含量。圖27F 展示僅使用P1-061029 (左圖，向下三角形)或僅使用P1-068767 (右圖，向上三角形)治療之小鼠中之腫瘤生長。n = 16/組。該等數據係兩個獨立實驗之組合。誤差槓繪示平均值之標準誤差。圖 28 展示其中向人類VISTA基因嵌入小鼠植入MC38腫瘤且使用經螢光標記之P1-061029 (左圖)或P1-068767 (右圖)治療之實驗之結果。展示在注射後51小時指示器官中之輻射效率(× 109 )。該等數據代表單一實驗。圖 29A-C 展示抗hVISTA抗體與hVISTA結合之SPR分析之結果。圖29A 展示根據P1-068744回復突變體與親代P1-061015抗體相比之結合SPR在pH 6.0 (黑色條)及pH 7.4 (灰色條)下之相對hVISTA結合(Rmax%)。圖29B 展示根據P1-068748回復突變體與親代P1-061015抗體相比之結合SPR在pH 6.0 (黑色條)及pH 7.4 (灰色條)下之相對hVISTA結合(Rmax%)。圖29C展示抗體重鏈CDR之比對結果之匯總。P1-068744及P1-068748中加粗體之所描繪胺基酸殘基係P1-061015中之相應殘基回復維持pH選擇性且與P1-068744或P1-068748抗體相比改良pH 6.0下之kd 者。具有雙下劃線之胺基酸殘基係P1-061015中之相應殘基回復導致損失P1-068744或P1-068748之pH選擇性者，且由此係該等抗體中對於pH選擇性結合hVISTA較為重要之殘基。具有鋸齒狀下劃線之胺基酸殘基係P1-061015中之相應殘基回復有害於P1-068744或P1-068748與hVISTA之動力學及/或結合者，其由此係該等抗體中對於結合hVISTA較為重要之殘基。展示P1-068744及P1-068748抗體中之所描繪胺基酸殘基之別名。圖 30A-D 展示抗hVISTA抗體(10 µg/ml)與經改造以表現hVISTA細胞外結構域之293T細胞在pH 6.0 (黑條)及pH 7.4 (白條)下於HBSS/MES緩衝液中之結合之測試結果。結果展示為正規化至P1-061029結合(設定為100%)之結合百分比。圖 30A 、30B 、30C 及30D 各自展示一組特定抗體之結果，如下文之每一條形圖所展示。

Claims (93)

  1. 一種特異性結合人類VISTA (hVISTA)之經分離抗體，其中已藉由使用發現於抗體P1-061015中之相同位置之胺基酸殘基替代抗體P1-068744或抗體P1-068748之VH CDR中的1至5個麩胺酸(E)、天門冬胺酸(D)或組胺酸(H)胺基酸來改造該抗體，其中視為整體之該經分離抗體之HV CDR1、VH CDR2及VH CDR3之胺基酸序列不同於抗體P1-061015之胺基酸序列。
  2. 如請求項1之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015或其變體之VH CDR1、CDR2及/或CDR3，該變體相對於P1-061015在VH CDR1、CDR2及/或CDR3中包括1至3個或1至2個胺基酸差異。
  3. 如請求項2之經分離抗體，其中相對於P1-061015之相應VH CDR，沒有一個VH CDR包括2個以上胺基酸差異。
  4. 如請求項2或3之經分離抗體，其中該等胺基酸差異包括P1-061015中之胺基酸殘基對麩胺酸殘基(E)、天門冬胺酸殘基(D)或組胺酸殘基(H)之取代。
  5. 如請求項2至4中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括： 包括GFTFSX1 X2 AMH之VH CDR1，其中X1 係E、H或S，且其中X2 係H或Y； 包括X3 IWYDGSNX4 X5 X6 ADSVKG之VH CDR2，其中X3 係H或I，X4 係D或K；X5 係D或Y，且X6 係E或Y；及/或 包括DSGFYX7 SYYFDX8 之VH CDR3，其中X7 係D、E或S，且X8 係E或Y。
  6. 如請求項2至4中任一項之抗體，其中該抗體包括 包括GFTFSX1 YAMH之VH CDR1，其中X1 係E或S； 包括X2 IWYDGSNKYX3 ADSVKG之VH CDR2，其中X2 係H或I，且X2 係E或Y；及/或 包括DSGFYX4 SYYFDX5 之VH CDR3，其中X4 係E或S，且X5 係E或Y。
  7. 如請求項2至4中任一項之抗體，其中該抗體包括 包括GFTFSX1 X2 AMH之VH CDR1，其中X1 係H或S，且X2 係H或Y； 包括IIWYDGSNX3 X4 YADSVKG之VH CDR2，其中X3 係D或K，且X4 係D或Y；及/或 包括DSGFYX5 SYYFDY之VH CDR3，其中X5 係D或S。
  8. 如請求項1至7中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及/或CDR3。
  9. 如請求項1至7中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH CDR1、CDR2及CDR3。
  10. 如請求項8或9中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015之VL之VL CDR1、CDR2及CDR3。
  11. 如請求項1至10中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有與P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之胺基酸序列至少90%、95%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列之VH； 或 包括P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH，該VH由1、2、3、4或5個胺基酸取代修飾。
  12. 如請求項1至10中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH之胺基酸序列之VH； 或 包括P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S之VH，該VH在框架區中由1、2、3、4或5個胺基酸取代修飾。
  13. 如請求項1至12中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有與P1-061015之胺基酸序列至少90%、95%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列之VL。
  14. 如請求項13之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015之VL。
  15. 如請求項13之經分離抗體，其中該抗體包括含有P1-061015之VL之胺基酸序列由T85V取代修飾的VL。
  16. 如請求項1至15中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括含有SEQ ID NO: 182、183或184之胺基酸序列之重鏈恆定區。
  17. 如請求項1至15中任一項之經分離抗體，其中該抗體包括P1-061015之LC，或由T85V取代修飾之P1-061015之LC。
  18. 如請求項1至17中任一項之經分離抗體，其中該抗體結合在hVISTA之富組胺酸區域或其附近、例如富組胺酸ß褶板延伸處。
  19. 如請求項18之經分離抗體，其中該抗體在pH 6.0至6.5之條件下結合在hVISTA之富組胺酸區域或其附近、例如富組胺酸ß褶板延伸處。
  20. 如請求項1至19中任一項之經分離抗體，其中該抗體與一或多種本文所述例如包括以下之VH及VL之抗體競爭或交叉競爭結合hVISTA：P1-061015、P1-068744、P1-068748、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S)，例如藉由實例中所述之競爭性生物層干涉術(BLI)表位分類(epitope binning)分析所測定，或如使用實例中所述之競爭性表面電漿共振(SPR)表位分類所測定。
  21. 如請求項1至20中任一項之經分離抗體，其中該抗體分類(bins)至表位組A，例如藉由實例中所述之競爭性生物層干涉術(BLI)表位分類分析所測定。
  22. 如請求項1至21中任一項之經分離抗體，其中該抗體不顯著結合因下列胺基酸殘基中之一或多者已發生突變而經修飾之hVISTA：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127，例如藉由實例中所述之酵母突變分析所測定。
  23. 如請求項1至22中任一項之經分離抗體(Ab)，其於酸性條件下、例如在pH 6.5下特異性結合至hVISTA (例如藉由實例中所述分析中之一者所量測)，其中該Ab： 抑制hVISTA與以下之間之相互作用：(a) T細胞及/或(b)PSGL-1 (例如抑制具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之H153及H154與PSGL-1酪胺酸Y46及Y48之間之相互作用)及/或(c) VSIG-3； 藉由例如增強T細胞增殖、增強IFN-γ自T細胞之產生及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導來增強T細胞活化； 經由一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124接觸hVISTA，例如使用實例中所述之酵母表面展示及NGS分析所測定；且其中編號係成熟hVISTA (SEQ ID NO: 2)之編號； 結合至hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，例如藉由例如在實例中所述之結晶學所測定； 經由例如氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及/或H123 (4.0埃(Å)或更小之距離)，例如藉由例如在實例中所述之結晶學所測定； 結合至具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之區域1：57 LGPVDKGHDV TF68 (SEQ ID NO: 566)；區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567)；及區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568)，且視情況其中與區域2之結合最強，如藉由實例中所述之MS-HDX所測定； 與本文所述之一或多種抗體、例如P1-061015、P1-068744、P1-068748、P1-061029、P1-068761、P1-068767及VISTA.4競爭結合至hVISTA (雙向競爭)； 經由位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之至少一個或多個麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA； 具有低靶介導之藥物體內動向，導致至少100、200、300、400、500、600或700小時之平均滯留時間(MRT)，如例如實例中所述量測； 在具有MC38腫瘤之hVISTA基因嵌入(knock-in)小鼠中，與肺、肝及脾相比，較佳累積於腫瘤組織中；及/或 在投與該抗體之個體中，與肺、肝及脾相比，較佳累積於腫瘤組織中。
  24. 如請求項1至23中任一項之經分離抗體(Ab)，其於酸性條件下、例如在pH 6.5特異性結合至hVISTA之KD (及/或k解離 )低於其於中性或生理pH結合至hVISTA之KD 或k解離 至少10倍、100倍或1000倍之 (例如藉由實例中所述分析中之一者所量測)，其中該Ab： 於酸性pH、例如pH 6.0或pH 6.5特異性結合至hVISTA、例如ECD之富組胺酸區域或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35至127之多肽； 於生理pH或中性pH、例如pH 7.4或pH 7.0不顯著結合至hVISTA、例如ECD之富組胺酸區域或包括SEQ ID NO: 2之胺基酸殘基35至127之多肽； 於酸性pH、例如pH 6.0或pH 6.5特異性結合至食蟹獼猴VISTA、例如ECD之富組胺酸區域； 於生理pH或中性pH、例如pH 7.4或pH 7.0不顯著結合至食蟹獼猴VISTA、例如ECD之富組胺酸區域； 相對於具有SEQ ID NO: 2之hVISTA ECD，對在下列胺基酸中之一或多者具有取代之hVISTA-ECD之結合減小：T35、Y37、K38、T39、Y41、R54、T61、F62、Q63、L65、H66、L67、H68、H69、F97、L115、V117、I119、H121、H122、S124、E125、R127； 與P1-061015、P1-068744及/或P1-068748交叉競爭結合至hVISTA； 於酸性pH、例如pH 6.0或pH 6.5抑制hVISTA與表現VISTA之人類T細胞(例如初始(naïve)或活化T細胞)之結合； 於酸性pH、例如pH 6.0或pH 6.5抑制hVISTA與PSGL-1之結合(例如抑制具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之H153及H154與PSGL-1酪胺酸Y46及Y48之間之相互作用)，其中PSGL-1含有或不含唾液醯基路易斯X，且其中該等酪胺酸較佳係磺基酪胺酸； 在食蟹獼猴中之平均滯留時間(MRT)為至少100、200、300、350、400、450、500、600或700小時(例如至少350小時)，如實例中所述來量測； 藉由例如增強T細胞增殖、增強IFN-γ自T細胞之產生及/或刺激T細胞受體介導之NF-kB信號傳導來刺激T細胞活化； 抑制VISTA介導之細胞:細胞黏附； 在表現VISTA之人類腫瘤細胞試樣或發炎人類組織試樣中，特異性結合至hVISTA； 經由一或多個(例如至少1至3、1至5、1至10、5至10、5至15個或全部)能量上重要之接觸殘基Y37、T39、R54、F62、H66、V117、I119或S124接觸hVISTA，例如使用實例中所述之酵母表面展示及NGS分析所測定；且其中編號係成熟hVISTA (SEQ ID NO: 2)之編號； 結合至具有SEQ ID NO: 1之hVISTA之區域1：57 LGPVDKGHDV TF68 (SEQ ID NO: 566)；區域2：86 RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567)；及區域3：148 VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568)，且視情況其中與區域2之結合最強，如藉由實例中所述之MS-HDX所測定； 結合至hVISTA之富組胺酸β褶板延伸，例如藉由例如在實例中所述之結晶學所測定； 經由例如氫鍵接觸成熟hVISTA之H121、H122及/或H123 (4.0埃(Å)或更小之距離)，例如藉由例如實例中所述之結晶學所測定；及/或 經由位於VH CDR1、CDR2或CDR3中之至少一個或多個麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基接觸hVISTA。
  25. 如請求項1至24中任一項之經分離抗體，其中該抗體具有介於6.5與6.8之間之等電點(pI)，例如藉由icIEF所量測。
  26. 如請求項1至25中任一項之經分離抗體，其係IgG抗體。
  27. 如請求項26之經分離抗體，其係IgG1、IgG2或IgG4抗體(視情況具有S228P之IgG4)。
  28. 如請求項1至27中任一項之經分離抗體，其中該抗體係無效應(effectorless)抗體，例如缺乏ADCC及/或CDC，及/或並不顯著結合至一或多種FcγR、例如FcγRIII之抗體。
  29. 如請求項28之經分離抗體，其中恆定區包括野生型重鏈恆定區中之1至5個突變，相對於該相應野生型重鏈恆定區，該等突變減小該抗體之效應功能及/或結合至一或多種FcγR、例如FcγRIII之能力。
  30. 如請求項1至29中任一項之經分離抗體，其中該抗體之恆定區係IgG1.3、IgG1.1或係具有P238K取代之IgG1 (例如IgG1.P238K)。
  31. 如請求項1至30中任一項之經分離抗體，其中該抗體具有效應功能及/或結合至一或多種FcγR、例如FcγRIII。
  32. 如請求項31之經分離抗體，其中該抗體係無岩藻醣基化(例如無岩藻醣基化IgG1抗體)。
  33. 如請求項31或32之經分離抗體，其中恆定區包括1至5個突變，相對於相應野生型恆定區，該等突變增強該抗體之效應功能及/或結合至一或多種FcγR、例如FcγRIII之能力。
  34. 如請求項1至33中任一項之經分離抗體，其係全長抗體或包括全長重鏈(含有或不含C端離胺酸)及全長輕鏈之抗體。
  35. 如請求項1至33中任一項之經分離抗體，其係該抗體之抗原結合片段。
  36. 如請求項1至35中任一項之經分離抗體，其係多聚體(例如二聚體或三聚體)抗體。
  37. 如請求項1至36中任一項之經分離抗體，其連接(例如以共價)至另一分子。
  38. 如請求項37之經分離抗體，其中該另一分子係標記。
  39. 如請求項37或38之經分離抗體，其中該另一分子係肽。
  40. 如請求項1至39中任一項之經分離抗體，其係抗體藥物偶聯物(ADC)或可活化抗體。
  41. 一種經分離核酸，其編碼如請求項1至40中任一項之抗體。
  42. 一種經分離核酸，其編碼如請求項1至40中任一項之抗體之重鏈及/或輕鏈。
  43. 一種組合物，其包括編碼如請求項1至40中任一項之抗體之重鏈之經分離核酸及編碼該抗體之輕鏈的核酸。
  44. 一種細胞，其包括如請求項41至43中任一項之經分離核酸。
  45. 一種製備抗體之方法，其包括如請求項44之細胞在表現該抗體之條件下培養。
  46. 一種組合物，其包括如請求項1至40中任一項之經分離抗體、核酸、組合物或細胞及醫藥上可接受之載劑。
  47. 如請求項46之組合物，其包括第二治療劑。
  48. 如請求項47之組合物，其中該第二治療劑係免疫刺激劑或化學治療劑。
  49. 如請求項48之組合物，其中該第二治療劑係免疫刺激劑，其係免疫抑制分子、例如PD-1/PD-L1、CTLA-4及LAG-3之拮抗劑，或免疫刺激分子、例如GITR及OX40之激動劑。
  50. 一種治療個體之癌症之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至40中任一項之組合物或經分離抗體，該組合物或經分離抗體刺激免疫反應及/或係VISTA拮抗劑抗體。
  51. 如請求項50之方法，其中該個體具有VISTA陽性細胞，例如在癌症之腫瘤中。
  52. 如請求項51之方法，其中該等VISTA陽性細胞係VISTA陽性浸潤淋巴球(例如T細胞)或骨髓單核球細胞。
  53. 如請求項50至52中任一項之方法，其中首先測試該個體之腫瘤中VISTA陽性細胞之存在。
  54. 如請求項50至53中任一項之方法，其中該方法進一步包括投與第二療法。
  55. 如請求項54之方法，其中該第二療法係化學療法、放射療法、手術或投與第二藥劑。
  56. 如請求項55之方法，其中該第二療法係第二藥劑且該第二藥劑係免疫刺激劑或化學治療劑。
  57. 如請求項55之方法，其中該第二治療劑係免疫刺激劑，其係免疫抑制分子、例如PD-1/PD-L1、CTLA-4及LAG-3之拮抗劑，或免疫刺激分子、例如GITR及OX40之激動劑。
  58. 一種治療個體之傳染性疾病(例如病毒性疾病)之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至40中任一項之經分離抗體，其中該抗體刺激免疫反應及/或係VISTA拮抗劑。
  59. 一種治療發炎、發炎性病狀及自體免疫疾病、移植物抗宿主疾病或受益於免疫反應減小之疾病之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至40中任一項之經分離抗體，其中該抗體抑制免疫反應、例如T細胞活化，或係VISTA激動劑。
  60. 如請求項50至59中任一項之方法，其中該結合至hVISTA之抗體係如請求項1至40中任一項之抗體。
  61. 一種改良特異性結合至人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之抗腫瘤效能之方法，其包括 a. 提供Ab P1-061015、P1-068744或P1-068748； b. 使用不同胺基酸殘基(例如使用麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基或在P1-06844及P1-06848之情形下使用P1-061015之相應殘基)取代該Ab之重鏈或輕鏈中之1至5個胺基酸殘基，其中該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基； c. 測定(b)中所獲得之Ab是否在pH 6.5或更小pH具有高於(a)之Ab之hVISTA-ECD親和力；及 d. 多次重複步驟(a)至(c)，至足以獲得在pH 6.5或更小pH以10-7 M或更小之KD 結合至hVISTA-ECD之Ab。
  62. 一種改良特異性結合至人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之抗腫瘤效能之方法，其包括： a. 提供Ab P1-061015、P1-068744或P1-068748； b. 製備(a)之Ab之變體庫，其中各變體在該Ab之重鏈或輕鏈中之1至5個胺基酸殘基經不同胺基酸殘基(例如經麩胺酸、天門冬胺酸或組胺酸殘基或在P1-06844及P1-06848之情形下經P1-061015之相應殘基)取代，其中該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基； c. 在(b)之變體庫中選擇在pH 6.5或更小pH以10-7 M或更小之KD 結合至hVISTA-ECD之Ab；及 d. 視情況在腫瘤模型中測試(c)之Ab之抗腫瘤效能。
  63. 一種改良結合至人類VISTA (hVISTA)之抗體之效能之方法，其包括增加Ab P1-061015、P1-068744或P1-068748之一或多個VH CDR中天門冬胺酸、麩胺酸及/或組胺酸殘基之數量以增強該抗體於酸性pH與hVISTA之結合。
  64. 如請求項61至63中任一項之方法，其進一步包括反向選擇於生理pH結合VISTA之抗體。
  65. 如請求項61至64中任一項之方法，其進一步包括選擇為VISTA拮抗劑或VISTA激動劑之抗體。
  66. 如請求項61至65中任一項之方法，其進一步包括選擇抑制VISTA與VISTA共受體(例如PSGL-1及/或VSIG-3)之間相互作用及/或VISTA與T細胞或骨髓單核球細胞之間相互作用的抗體。
  67. 如請求項61至66中任一項之方法，其進一步包括選擇具有抗體P1-068744或P1-068748之一或多種性質之抗體。
  68. 一種改良特異性結合至人類VISTA細胞外結構域(hVISTA-ECD)之抗體(Ab)之抗腫瘤效能之方法，其包括 a. 提供Ab P1-061015、P1-068744或P1-068748； b. 使用不同胺基酸殘基取代該Ab之重鏈或輕鏈、例如CDR中之1至5個胺基酸殘基，其中例如該1至5個胺基酸殘基係hVISTA-ECD之接觸殘基，例如胺基酸殘基31、32、50、57、58、59、100或102中之一或多者； c. 測定(b)中所獲得之Ab對hVISTA-ECD之親和力在pH 6.5是否高於在pH 7.0，及/或測定(b)中所獲得之Ab在pH 6.5是否具有類似於或高於(a)之抗體之親和力及/或在pH 7.0是否具有低於(a)之抗體之親和力；及 d. 多次重複步驟(a)至(c)，至足以獲得在pH 6.5以10-7 M或更小之KD 結合至hVISTA-ECD且在pH 7.0以10-6 M或更大之KD 結合至hVISTA-ECD之Ab。
  69. 一種檢測試樣中VISTA之方法，其包括使該試樣與如請求項1至40中任一項之VISTA抗體接觸。
  70. 如請求項1至69中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體抑制hVISTA細胞外結構域(ECD)與PSGL-1之間之相互作用。
  71. 如請求項1至70中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體與本文所述之抗體競爭結合至hVISTA ECD (例如使用本文所述之BLI)。
  72. 如請求項1至71中任一項之抗體、組合物或方法，其中該抗體與組胺酸三聯體(成熟hVISTA之H121、122及123)相互作用，如藉由X射線結晶學所測定，例如本文所測定。
  73. 一種使抗VISTA Ab選擇性靶向個體中之腫瘤之方法，其包括向具有至少一種腫瘤之人類投與在酸性條件中特異性結合至人類VISTA之Ab。
  74. 如請求項73之方法，其中與骨髓細胞相比、與血液相比及/或與肝、肺及脾細胞相比，該抗VISTA Ab較佳累積於腫瘤細胞中。
  75. 如請求項73或74之方法，其中在向該個體投與該Ab之後24至51小時，該抗VISTA Ab在該腫瘤中累積至至少兩倍於血液中之含量。
  76. 如請求項73至75中任一項之方法，其中相對於該個體之血液，該抗VISTA Ab不會顯著更多的累積於肝或肺中。
  77. 如請求項73至76中任一項之方法，其中該抗VISTA Ab已顯示在VISTA基因嵌入小鼠中較佳累積在腫瘤超過血液。
  78. 如請求項73至77中任一項之方法，其中該抗VISTA Ab在該腫瘤中之累積隨時間持續，例如在該VISTA Ab投與個體後長達至少51小時。
  79. 如請求項73至78中任一項之方法，其中藉由向該個體投與經PET示蹤劑標記之Ab來測定該抗VISTA Ab在該個體中之累積。
  80. 如請求項73至79中任一項之方法，其中該抗VISTA Ab在pH 6.5特異性結合VISTA，但在pH 7.0不顯著結合。
  81. 如請求項73中80中任一項之方法，其中與血液相比及/或與肺、肝及脾相比，該抗VISTA Ab較佳累積於具有MC-38腫瘤之hVISTA基因嵌入小鼠之腫瘤組織中。
  82. 如請求項73至81中任一項之方法，其中該抗VISTA Ab係以下中任一者：VISTA.4、P1-061015、P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S，視情況在P1-061029或其子代之情形下，其中VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況在P1-061015或其子代之情形下，其中VL包括T85V取代。
  83. 一種經分離抗體，其於酸性條件下、例如在pH 6.5特異性結合人類VISTA (hVISTA)之KD (及/或k解離 )低於其於中性或生理pH結合hVISTA之KD 或k解離 至少10倍、100倍或1000倍，如藉由本文實例30中所述之表面電漿共振(SPR)所測定，視情況其中該抗VISTA Ab係(a)如請求項1至40中任一項之抗體，或(b)其中該抗體包括以下抗體中之任一者之重鏈及輕鏈CDR： VISTA.4、P1-061015、P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S，視情況在P1-061029或其子代之情形下，其中VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況在P1-061015或其子代之情形下，其中VL包括T85V取代。
  84. 一種特異性結合人類VISTA (hVISTA)之經分離抗體，其中該抗體抑制hVISTA結合至hVISTA所結合之細胞、例如表現人類PSGL-1之細胞，其中根據本文實例31中所述之方案來測定結合，視情況其中該抗VISTA Ab係(a)如請求項1至40中任一項之抗體，或(b)其中該抗體包括以下抗體中之任一者之重鏈及輕鏈CDR： VISTA.4、P1-061016、P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S，視情況在P1-061029或其子代之情形下，其中VH包括K16R及T84A取代中之一或兩者，且視情況在P1-061015或其子代之情形下，其中VL包括T85V取代。
  85. 如請求項84之經分離抗體，其中hVISTA所結合之細胞係人類白血球、人類PBMC或人類T細胞，其中使用抗CD3/CD28珠粒刺激將該細胞刺激72至96小時，且其中該結合方案之hVISTA係VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白。
  86. 如請求項84或85之經分離抗體，其中該抗體抑制hVISTA與該細胞之結合至少50%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
  87. 如請求項84至86中任一項之經分離抗體，其中該抗體抑制第一細胞上之hVISTA結合至第二細胞上之人類VSIG-3，其中該第二細胞係表現人類VSIG-3之細胞，且其中根據實例31中所述之方案來測定該第一細胞與該第二細胞之結合。
  88. 如請求項87之經分離抗體，其中該第一細胞係異位表現hVISTA之HEK293細胞；該第二細胞係異位表現人類VSIG-3之CHO細胞，且其中該第一細胞表現之hVISTA係VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白。
  89. 如請求項87或88之經分離抗體，其中該抗體抑制該第一細胞與該第二細胞之結合至少50%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
  90. 一種特異性結合人類VISTA (hVISTA)之經分離抗體，其中該抗體阻斷(亦即單向)或交叉阻斷(亦即雙向)以下抗體中之任一者結合hVISTA：VISTA.4、P1-061015、P1-061029、P1-068757、P1-068759、P1-068761、P1-068763、P1-068765、P1-068767、P1-068769、P1-068771、P1-068773、P1-068775、P1-069059、P1-069061、P1-069063、P1-069065、P1-069067、P1-069069、P1-069071、P1-069073、P1-069075、P1-069077、P1-061015、P1-068736、P1-068738、P1-068740、P1-068742、P1-068744、P1-068766、P1-068748、P1-068750、P1-068752、P1-068754、P1-068761_E55A、P1-068761_H100G、P1-068761_E56N、P1-068761_E55A_E56N、P1-068761_E30D、P1-068761_E30D_E55A、P1-068761_E56N_H100G、P1-068761_E30D_H100G、P1-068761_E30D_E56N、P1-068761_E100fF、P1-068761_E55A_E100fF、P1-068761_H100G_E100fF、P1-068761_E30D_E100fF、P1-068761_E56N_E100fF、P1-068761_E32Y、P1-068761_E32Y_E55A、P1-068761_E32Y_E56N、P1-068761_E30D_E32Y、P1-068761_E32Y_H100G、P1-068761_E32Y_E100fF、P1-068767_D52N_D102V、P1-068767_D52N、P1-068767_D52N_E55A、P1-068767_E55A_D102V、P1-068767_D102V、P1-068767_E55A、P1-068767_E30D_D52N、P1-068767_E30D_D102V、P1-068767_E30D、P1-068767_E30D_E55A、P1-068767_E100fF_D102V、P1-068767_E55A_E100fF、P1-068767_D52N_E100fF、P1-068767_E100fF、P1-068767_E30D_E100fF、P1-061029_F100fE_V102D、P1-061029_F100fE、P1-061029_V102D、P1-061029_Y32E、P1-061029_Y32E_F100fE、P1-068744_E31S、P1-68744_H50I、P1-68744_E59Y、P1-068744_E100S、P1-068744_E102Y、P1-068744_E31S_H50I、P1-068744_H50I_E59Y、P1-068744_E59Y_E100S、P1-068744_E100S_E102Y、P1-068744_E31S_E102Y、P1-068744_E31S_E59Y、P1-068744_E31S_E100S、P1-068744_H50I_E100S、P1-068744_H50I_E102Y、P1-068744_E59Y_E102Y、P1-068748_H31S、P1-068748_H32Y、P1-068748_D57K、P1-068748_D58Y、P1-068748_D100S、P1-068748_H31S_H32Y、P1-068748_H32Y_D57K、P1-068748_D57K_D58Y、P1-068748_D58Y_D100S、P1-068748_H31S_D57K、P1-068748_H31S_D58Y、P1-068748_H31S_D100S、P1-068748_H32Y_D58Y、P1-068748_H32Y_D100S或P1-068748_D57K_D100S，如使用本文實例32中所述之競爭性SPR表位分類所測定。
  91. 一種抑制人類VISTA (hVISTA)結合至細胞之經分離抗PSGL-1抗體，其中該細胞係hVISTA所結合之細胞、例如表現人類PSGL-1之細胞，且其中根據本文實例31中所述之方案來測定結合。
  92. 如請求項91之經分離抗PSGL-1抗體，其中hVISTA所結合之該細胞係人類白血球、人類PBMC或人類T細胞，其中使用抗CD3/CD28珠粒刺激將該細胞刺激72至96小時，且其中該結合方案之hVISTA係VISTA多聚體或VISTA-Fc嵌合蛋白。
  93. 如請求項91或92之經分離抗PSGL-1抗體，其中該抗體抑制hVISTA與該細胞之結合至少50%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。
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