EA042790B1 - АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С VISTA ПРИ КИСЛОМ pH - Google Patents

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящая заявка относится к антителам, специфически связывающимся с содержащим иммуноглобулин-V-goMeH супрессором Т-клеточной активации (VISTA) при кислом рН и к их применению при лечении злокачественного новообразования.

Уровень техники и сущность изобретения

Содержащий Ig-V-домен супрессор Т-клеточной активации, или VISTA, является коингибирующим членом семейства иммунорецепторов В7, экспрессируемых миеломоноцитарными клетками и другими лейкоцитами. Однако механизм, с помощью которого VISTA подавляет иммунные ответы, изучен недостаточно.

Авторы изобретения обнаружили, что в отличие от других известных иммунорецепторов, VISTA взаимодействует со своими контр-рецепторами, действуя селективно при кислом рН и проявляя небольшую активность при физиологическом рН (например, 7,3-7,4). Таким образом, VISTA может подавлять иммунные ответы в кислой среде микроокружения, такой как ложе опухоли или места воспаления, без нарушения клеток, циркулирующих в крови или находящихся в незатронутых воспалением тканях с некислой средой. Кроме того, авторы изобретения обнаружили, что анти-VISTA антитела могут быть сконструированы таким образом, чтобы они селективно связывались с VISTA при кислом рН, практически не связываясь с ним при физиологическом рН, таким образом отражая свойственную VISTA селективность при кислом рН. Эти селективные при кислом рН антитела могут обладать свойствами, ценными для лечения заболеваний, таких как рак, по сравнению с антителами, которые связываются с VISTA при физиологическом рН.

Настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с внеклеточным доменом (ECD) VISTA, таким как VISTA человека (hVISTA или huVISTA), при кислых значениях рН (например, в кислых условиях). Настоящее изобретение также относится к антителам, которые специфически связываются с внеклеточным доменом (ECD) VISTA, таким как hVISTA, при кислых значениях рН, при этом демонстрируя слабое связывание или его отсутствие при нейтральном или физиологическом рН. Авторы настоящего изобретения отметили, что аминокислотная последовательность hVISTA-ECD включает несколько консервативных, а также неконсервативных остатков гистидина, и что частота остатков гистидина в VISTA-ECD исключительно высока по сравнению с другими членами семейства В7 и другими членами суперсемейства иммуноглобулинов (см. фиг. 1А и 1В). В растворе pK_a аминокислоты гистидина равна примерно 6,5, что означает, что при рН 6,5 или ниже его остатки в белках часто протонированы и, таким образом, заряжены положительно, в то время как при рН выше 6.5 количество непротонированных, нейтральных остатков увеличивается. Микроокружение опухоли и воспаленные ткани часто имеют кислый рН, и, таким образом, белки VISTA, обнаруживаемые в этих микроокружениях, могут быть, по меньшей мере частично, протонированными по гистидиновым остаткам. Авторы настоящего изобретения, как обсуждалось выше, предположили, что протонирование гистидина может влиять на конформацию, структуру поверхности и/или плотность заряда VISTA, что, в свою очередь, может приводить к образованию рН-специфических или рН-селективных эпитопов как для рецептор-лиганд взаимодействия(ий), так и для связывания антител. Целенаправленное воздействие на VISTA антителами, которые связываются при кислых, а не нейтральных или физиологических значениях рН может препятствовать мишень-опосредованному распределению лекарственного вещества через циркулирующие клетки и миеломоноцитарные клетки, находящиеся в лимфоидных органах, улучшая PK антител, заполнение рецепторов и активность в микроокружении опухоли. Антитела, селективные при кислом рН, также могут улучшать специфичность анти-VISTA антител в отношении внутриопухолевых, а не циркулирующих клеток-мишеней в случае терапевтических модальностей, таких как антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC), антитело-зависимый клеточный фагоцитоз (ADCP), комплемент-зависимая цитотоксичность (CDC) и доставка полезных нагрузок (конъюгатов антителолекарственное вещество).

Краткое описание чертежей

Цветная версия нескольких чертежей представлена в приоритетной предварительной заявке на патент США № 62/636746, поданной 28 февраля 2018 г. Если файл этой приоритетной заявки станет доступным после публикации настоящей заявки, полагаем, что копии цветных чертежей будут предоставлены ведомством по патентам и товарным знакам США в случае направления запроса и оплаты необходимой пошлины.

На фиг. 1А-С показано, что содержание остатков гистидина во внеклеточном домене VISTA является исключительно высоким, и что многие из этих остатков гистидина являются консервативными, и, по меньшей мере, некоторые из этих остатков гистидина могут участвовать в связывании рецептор-лиганд. На фиг. 1А показан график для белков, содержащих иммуноглобулиновый домен, с количеством аминокислотных остатков во внеклеточном домене для каждого белка, показанным на оси х, и частотой остатков гистидина во внеклеточном домене для каждого белка, показанной на оси у. Размер каждой точки данных соответствует общему количеству остатков гистидина во внеклеточном домене каждого белка. На фиг. 1В показаны выровненные аминокислотные последовательности внеклеточных доменов VISTA яванского макака, человека и мыши. Отмечены места расположения последовательностей сигнального

- 1 042790 пептида (Sig) и трансмембранного домена (TMD). Остатки гистидина, сохранившиеся у всех трех видов, показаны жирным шрифтом и подчеркнуты; остатки гистидина, сохранившиеся у человека и яванского макака, показаны только жирным шрифтом. На фиг. 1С показана модель трехмерной структуры иммуноглобулинового домена человеческого VISTA. Остатки гистидина изображены в виде шаров со стержнями.

На фиг. 2А, В показана модель, в которой остатки гистидина во внеклеточном домене VISTA обеспечивают контррецепторную селективность при кислом рН, а не при физиологическом рН. На фиг. 2А показано равновесие между отсутствием и наличием протонирования аммониевой группы (NH) пиррола в остатке гистидина. Значение рКа гистидина в растворе составляет 6,5, что указывает на то, что остатки гистидина вероятнее всего являются протонированными при рН 6,5 и менее и, таким образом, заряжены положительно, по сравнению с более высокими значениями рН. На фиг. 2В показана модель избирательного связывания VISTA с гликопротеиновым лигандом Р-селектина 1 (PSGL-1) или контррецепторами и лигандами (VISTA-R) при кислых значениях рН. Соответственно, связывание антитела с внеклеточным доменом VISTA при кислом, а не при физиологическом рН может иметь решающее значение для ингибирования или модуляции активности VISTA.

На фиг. 3 показан уровень поверхностной экспрессии VISTA (средняя интенсивность флуоресценции (MFI) при окрашивании анти-VISTA антител) на инфильтрирующих опухоль макрофагах, дендритных клетках, нейтрофилах, CD4+ эффекторных Т-клетках, CD4+ регуляторных Т-клетках, CD8+ Тклетках, натуральных киллерных (НК) клетках и В-клетках. VISTA экспрессируется на многих инфильтрирующих опухоль лейкоцитах, особенно на миелоидных клетках. Микроокружение опухоли часто является кислым, что позволяет VISTA взаимодействовать с контррецепторами и лигандами.

На фиг. 4А-Е показано, что VISTA избирательно связывается с лейкоцитами и PSGL-1 при кислых значениях рН, практически не обнаруживая связывания при нейтральном рН, и что это связывание можно блокировать анти-VISTA антителом. На фиг. 4А слева показаны типичные гистограммы флуоресцентно-конъюгированного рекомбинантного мультимера VISTA с активированными человеческими CD4+ T-клетками. Гистограммы, окрашенные цветами от темно-серого до светло-серого, демонстрируют связывание при рН 7,0, 6,5, 6,4, 6,3, 6,1 и 6,0. Некоторые гистограммы обозначены соответствующими значениями рН. Связывание не-VISTA контрольного мультимера при рН 6,0 показано в виде неокрашенной гистограммы. Справа изображено среднее значение MFI для связывания VISTA (кружки) и контрольного (треугольники) мультимеров с активированными CD4+ Т-клетками человека, полученными от двух доноров, при разных значениях рН. На фиг. 4В показаны репрезентативные гистограммы связывания рекомбинантного мультимера VISTA с мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС) при рН 6,0 и рН 7,4. Гистограммы, окрашенные цветами от темно-серого до светло-серого, демонстрируют связывание при рН 6,0 с CD19+ B-клетками, CD4+ Т-клетками, CD8+ Т-клетками, CD56+ NKклетками и CD14+ моноцитами. Неокрашенные гистограммы, изображенные сплошной и пунктирной линиями, демонстрируют связывание при рН 7,4 с общим пулом лимфоцитов и моноцитов РВМС, соответственно. На фиг. 4С показано репрезентативное связывание рекомбинантного мультимера VISTA с активированными человеческими CD4+ T-клетками в присутствии блокирующего анти-VISTA антитела (квадраты) или не специфического к VISTA контрольного антитела соответствующего изотипа (кружки). Концентрации антител представлены в логарифмическом масштабе. Также показаны нелинейные регрессии. Треугольник изображает фоновый сигнал, поступающий от активированных человеческих CD4+ Тклеток, которые не окрашены рекомбинантными мультимерами VISTA. На фиг. 4D показаны полученные методом проточной цитометрии репрезентативные двумерные графики связывания рекомбинантного мультимера VISTA при рН 6,0 с клетками яичника китайского хомячка с дефицитом гепарана (СНО) (линия pGSD-677, Американская коллекция типовых культур), которые были трансфицированы для экспрессии человеческого PSGL-1. Связывание мультимера выполняли в присутствии и в отсутствие блокирующего анти-VISTA антитела, показанного на фиг. 4С. Клетки, оставшиеся неокрашенными рекомбинантными мультимерами VISTA, показаны в качестве контроля. Окрашивание PSGL-1 антителом представлено по оси Y, а окрашивание мультимером VISTA представлено по оси X. На фиг. 4Е показаны репрезентативные гистограммы связывания рекомбинантного мышиного белка VISTA-Fc с мышиными спленоцитами при рН 6,0 и рН 7,4. Гистограммы, окрашенные цветами от темно-серого до светло-серого, демонстрируют связывание при рН 6,0 с CD8+ T-клетками, CD11b⁺ миелоидными клетками и CD4+ Тклетками. Неокрашенная гистограмма демонстрирует связывание при рН 7,4 с общим пулом спленоцитов.

На фиг. 5A-D показано, что VISTA опосредует подавление Т-клеток и межклеточную адгезию преимущественно при кислом рН, и что оба эти эффекта можно изменить с помощью блокирующего антиVISTA антитела. На фиг. 5А показано репрезентативное образование клеточного конъюгата при рН 6,0 и 7,0 между клетками 293Т, экспрессирующими hVISTA, или контрольным вектором, (по оси у) и клетками СНО, эндогенно экспрессирующими гепарансульфат клеточной поверхности, показанными на оси х. На фиг. 5В показан график частоты образования клеточных конъюгатов при рН 6,0 между теми же клетками в присутствии блокирующего анти-VISTA антитела, не блокирующего анти-VISTA антитела или не специфических к VISTA контрольных антител соответствующего изотипа. На фиг. 5С показаны репре

- 2 042790 зентативные графики активности люциферазы, генерируемой клетками Jurkat (линия Т-клеток человека), экспрессирующими репортер люциферазы NFkB, после совместного культивирования при различных значениях рН с клетками 293Т, экспрессирующими hVISTA, и одноцепочечный вариабельный фрагмент антитела-агониста человеческого Т-клеточного рецептора ОКТ3 (искусственные антигенпрезентирующие клетки). К совместно культивируемым клеткам добавляли блокирующее анти-VISTA антитело (квадраты) или не специфическое к VISTA контрольное антитело соответствующего изотипа (кружки). На фиг. 5D данные, показанные на фиг. 5А, представлены в виде кратного увеличения сигнала люциферазы при обработке анти-VISTA антителом по сравнению с контролем (величина эффекта).

На фиг. 6A-G показано, что VISTA может быть обнаружен во внутриклеточных эндосомах, в частности Rab11⁺-рециркулирующих эндосомах, и может рециркулировать на поверхность и с поверхности клетки посредством эндосомного переноса. На фиг. 6А показана совместная локализация VISTA, Rab5 (маркер ранней эндосомы), Rab7 (маркер поздней эндосомы) и Rab11 (маркер рециркулирующей эндосомы) в клетках 293Т, экспрессирующих человеческий VISTA. На фиг. 6В показана совместная локализация VISTA и Rab11 в человеческих моноцитах. Внутриклеточный VISTA локализован совместно с Rab11⁺-рециклирующими эндосомами. Не связывающее VISTA контрольное антитело того же изотипа, что и анти-VISTA антитело (cAb), не обнаруживает детектируемого связывания моноцитов. На фиг. 6С показано связывание трех анти-VISTA антител с рекомбинантным VISTA при рН 7,4 (черный), 6,7 (темно-серый) и 6 (светло-серый). На фиг. 6D показана восприимчивость клеточной линии острого миелоидного лейкоза (AML), экспрессирующей VISTA, к уничтожению одними и теми же анти-VISTA антителами 1 (перевернутые треугольники), 2 (кружки), 3 (квадраты) или не специфическими к VISTA контрольными антителами (треугольники), несущими чувствительные к катепсину В линкеры и цитотоксические полезные нагрузки. Жизнеспособность клеток (CellTiter-Glo LU) показана на оси Y, а концентрации антител показаны на оси X. На фиг. 6Е показано сравнение связывания hVISTA с анти-VISTA антителом 3 и сконструированным вариантом (VISTA mAb 3с), который не имеет нарушения связывания при кислом рН. На фиг. 6F показан анализ сравнения активности анти-VISTA антител 3 (квадраты) и 3с (ромбы) в конъюгатах антитело-лекарственное вещество. На фиг. 6G показана схема миграции эндосом с рециркуляцией VISTA на поверхность и с поверхности клетки посредством ранних эндосом и рециркулирующих эндосом.

На фиг. 7A-F показано, каким образом были построены и скринированы библиотеки вариантов анти-VISTA антител для получения антител, селективных при кислом рН. На фиг. 7А показаны аминокислотные замены, сделанные в VH-CDR3 клона Р1-061029 человеческого анти-VISTA антитела (сокращенно '029) для создания библиотеки '029 для скрининга. Для потенциального улучшения связывания с богатой гистидином областью VISTA при кислом рН в библиотеках допускались замены отрицательно заряженных аминокислот аспартата и глутамата, а также чувствительного к значению рН гистидина. Х=Н, D или Е. Заключенные в скобки последовательности были исключены из синтеза, чтобы избежать введения каких-либо негативных признаков (liabilities). Всего было синтезировано 647 уникальных последовательностей HCDR3 Р1-061029 с 1-2 мутациями. На фиг. 7В показана процедура итеративного скрининга библиотеки '029 в отношении вариантов антител, селективных при кислых рН. R обозначает цикл отбора. На фиг. 7С показаны полученные проточной цитометрией репрезентативные данные в виде двумерных графиков, показывающие пул вариантов после 9-го цикла отбора. Связывание VISTA показано на оси Y, а экспрессия варианта антитела показана на оси X. Данные по связыванию показаны для различных концентраций антител и значений рН. На фиг. 7D показана диаграмма связывания Р1-061029 и его клоновпотомков с человеческим VISTA при рН 6,0 и 7,4. На фиг. 7Е показана диаграмма скоростей диссоциации Р1-061029 и его клонов-потомков из комплекса с человеческим VISTA при рН 6,0. На фиг. 7F показаны данные связывания антител P1-068761, P1-068767 и Р1-061029 с человеческим VISTA при рН 6,0 и рН 7,4, определенные методом ППР.

На фиг. 8A-F показаны селективные при кислых рН связывание, блокирование и эффекторная активность анти-VISTA антител Р1-068761 и Р1-068767. На фиг. 8А и 8В показана средняя интенсивность флуоресценции селективных при кислых рН антител P1-068761 (фиг. 8А) и Р1-068767 (фиг. 8В), связывающихся с клетками Raji, эктопически экспрессирующими человеческий VISTA. Клетки окрашивали примерно при рН 6,0 (кружки; самая высокая кривая на фиг. 8А), 6,1 (квадраты; третья самая высокая кривая), 6,2 (треугольники; вторая самая высокая кривая), 6,4 (перевернутые треугольники; четвертая самая высокая кривая, кривая при рН, близком к 6,1), 6,6 (ромбы; четвертая кривая снизу), 7,0 (кружки; третья кривая снизу), 7,2 (квадраты; вторая кривая снизу) и 8,1 (неокрашенные треугольники; нижняя кривая на фиг. 8А). Связывание детектировали с помощью флуоресцентно конъюгированного вторичного антитела к человеческому IgG. На фиг. 8С показаны Р1-068767 (кружки) и неспецифическое контрольное антитело соответствующего изотипа (треугольники), связывающиеся с клетками Raji, эктопически экспрессирующими человеческий VISTA при 3125 нг/мл при различных значениях рН. рН₅₀, рН, при котором теряется 50% связывания Р1-068767, составляет примерно 6,6. На фиг. 8D показаны средние интенсивности флуоресценции (MFI) неспецифического контрольного антитела соответствующего изотипа (окрашенные и неокрашенные кружки для рН 7,0 и 6,0, соответственно), анти-VISTA mAb 2 (контроль, см. фиг. 6С, окрашенные и неокрашенные квадраты для рН 7,0 и 6,0, соответственно), P1-068761

- 3 042790 (окрашенные и неокрашенные треугольники для рН 7,0 и 6,0, соответственно) и Р1-068767 (окрашенные и неокрашенные перевернутые треугольники для рН 7,0 и 6,0, соответственно), связывающиеся с человеческими моноцитами. Связывание детектировали с помощью флуоресцентно конъюгированного вторичного антитела к человеческому IgG. На фиг. 8Е показано сопоставимое блокирование связывания рекомбинантного мультимера VISTA с активированными человеческими CD4+ T-клетками при рН 6,0 антителами Р1-061029 (квадраты), P1-068761 (треугольники) и Р1-068767 (перевернутые треугольники), тогда как не специфическое к VISTA контрольное антитело (кружки) не блокировало связывание VISTA. На фиг. 8F показана сниженная эффективность P1-068761 (треугольники) и Р1-068767 (перевернутые треугольники) при антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) при физиологическом рН. Также показаны Р1-061029 (квадраты), не специфическое к VISTA контрольное антитело (кружки) и не специфическое к VISTA антитело-отрицательный контроль (ромбы). Опосредованный NK-клетками специфический лизис клеток-мишеней показан на графике на оси у в виде процента общих клеток-мишеней, а концентрации антител показаны на оси х. Также показаны нелинейные регрессии.

На фиг. 9 показана улучшенная фармакокинетика (PK) селективных при кислых рН анти-VISTA антител у яванского макака. На чертеже показана временная зависимость концентрации антител в сыворотке яванского макака, получившего анти-VISTA антитело 2 (контроль, кружки, см. фиг. 6С), антиVISTA антитело 3 (чувствительное к кислому рН, квадраты, см. фиг. 6С) или Р1-068767 (треугольники).

На фиг. 10А и 10В показано влияние на связывание мутаций в селективных при кислых рН антиVISTA-антител '761 и '767. На фиг. 10А показаны данные кинетики связывания реверсионных мутантов относительно Р1-068761 при рН 7,4, рН 6,7 и рН 6,0 и положение реверсивных мутаций относительно Р1068761. На фиг. 10В показаны данные кинетики связывания реверсионных мутантов относительно Р1068767 при рН 7,4, рН 6,7 и рН 6,0 и положение реверсивных мутаций относительно Р1-068767.

На фиг. 11А-С показаны эпитоп связывания и картирование различных анти-VISTA антител. На фиг. 11А показана конкуренция Р1-068761 и Р1-068767 за связывание с эпитопом VISTA по сравнению с контрольными антителами Р1-061029 и VISTA. На фиг. 11В и 11С показаны эпитопы всех остатков блокирующего hVISTA антитела (фиг. 11В), перечисленных в табл. 14, по сравнению с неблокирующим hVISTA антителом (mAb1; фиг. 11С). Аминокислотные остатки 66(Н) и 162(А) указаны для обозначения ориентации молекулы. Остатки гистидина выделены серым, а остатки эпитопа - черным.

На фиг. 12А-С приведены данные изоэлектрической фокусировки в капиллярах (icIEF) для следующих антител: фиг. 12А: Р1-061029, фиг. 12В: Р1-068761 и фиг. 12С: Р1-068767. Указана изоэлектрическая точка основного вида (pI основная), а также маркеры pI

На фиг. 13А и В показаны выравнивания вариабельных областей клонов-потомков '029 и '015. На фиг. 13А показано выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельных областей '029 и его клонов-потомков. На фиг. 13В показано выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельных областей '015 и его клонов-потомков.

Подробное описание изобретения

Определения.

В настоящей заявке союз или означает и/или, если не указано иное. В контексте нескольких зависимых утверждений использование или относится к более чем одному предшествующему независимому или зависимому утверждению только в качестве альтернативы. Термины содержащий, включающий и имеющий могут использоваться в настоящем описании взаимозаменяемо. Согласно настоящему изобретению выделенная молекула представляет собой молекулу, которая была удалена из ее естественной среды. Как таковой, термин выделенный не обязательно отражает степень, до которой была очищена молекула.

Термин полипептид относится к полимеру, состоящему из аминокислотных остатков, и не ограничен минимальной длиной. Белок может содержать один или более полипептидов. Такие полимеры аминокислотных остатков могут содержать природные или неприродные аминокислотные остатки и включают, без ограничения, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры аминокислотных остатков. Это определение включает как полноразмерные белки, так и их фрагменты. Эти термины также включают модификации полипептида после экспрессии, например, гликозилирование, сиалилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п. Кроме того, для целей настоящего изобретения полипептид или белок относится к полипептиду или белку, соответственно, который включает модификации, такие как делеции, добавления и замены (обычно консервативные по природе), в нативной последовательности, при условии, что белок сохраняет требуемую активность. Эти модификации могут быть преднамеренными, например результатом сайт-направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например результатом мутаций хозяев, которые продуцируют белки, или ошибок вследствие амплификации ПЦР. Белок может содержать два или более полипептидов.

VISTA - это аббревиатура названия белка содержащий иммуноглобулин-V-домен супрессор Тклеточной активации (V-domain inmmunoglobullin-containing suppressor), который является членом семейства В7 регуляторов иммунных контрольных точек. VISTA также известен как гомолог PD-1 (PD1H), В7-Н5, C10orf54, вариант ESC-1 (Dies-1), предшественник тромбоцитарного рецептора Gi24 и домен

- 4 042790 смерти 1α (DD1a). Термин hVISTA или huVISTA в настоящем описании относится к человеческому белку VISTA. Аминокислотная последовательность hVISTA, включая сигнальный пептид, представлена в SEQ ID NO:1, тогда как последовательность без сигнального пептида представлена в SEQ ID NO:2 (см. таблицу последовательности ниже). Внеклеточный домен или ECD VISTA или VISTA-ECD относится к той части белка VISTA, которая находится во внеклеточном пространстве и которая, в случае hVISTA, включает аминокислоты 1-162 SEQ ID NO:2 (см. также фиг. 1В). Часть домена IgV hVISTA содержит остатки 5-135 SEQ ID NO:2.

Термин лидерный пептид или лидерная последовательность относится к последовательности аминокислотных остатков, расположенных на N-конце полипептида, которая облегчает секрецию полипептида из клетки млекопитающего. Лидерная последовательность может отщепляться при экспорте полипептида из клетки млекопитающего с образованием зрелого белка. Лидерные последовательности могут быть природными или синтетическими и могут быть гетерологичными или гомологичными по отношению к белку, к которому они присоединены.

Термин антитело или Ab в настоящем описании используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, без ограничения, моноклональные антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, если они проявляют требуемую антигенсвязывающая активность. Используемый в настоящем описании термин относится к молекуле, содержащей, по меньшей мере, определяющую комплементарность область (CDR) 1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и по меньшей мере CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, при этом молекула способна к связыванию с антигеном. Термин антитело включает, без ограничения, фрагменты, которые способны связывать антиген, такие как Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab' и (Fab')₂. Термин антитело также включает, без ограничения, химерные антитела, гуманизированные антитела, человеческие антитела и антитела различных видов, таких как мышь, яванский макак и т.д.

Термин тяжелая цепь или НС относится к полипептиду, содержащему, по меньшей мере, вариабельную область тяжелой цепи с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи. Термин полноразмерная тяжелая цепь относится к полипептиду, содержащему вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи с или без лидерной последовательностью и с или без С-концевого лизина (K).

Термин вариабельная область тяжелой цепи или VH относится к области, содержащей определяющую комплементарность область (CDR) 1 тяжелой цепи, каркасный участок (FR) 2, CDR2, FR3 и CDR3 тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи также содержит по меньшей мере часть FR1 и/или по меньшей мере часть FR4. Как указано ниже, в некоторых вариантах осуществления CDR1 тяжелой цепи содержит остатки 26-35 VH SEQ ID NO, как определено в настоящем описании; CDR2 тяжелой цепи содержит остатки 50-66 VH SEQ ID NO, как определено в настоящем описании, a CDR3 тяжелой цепи содержит остатки 99-110 VH SEQ ID NO, как определено в настоящем описании. В других вариантах осуществления, если указано, CDR1 тяжелой цепи соответствует 31-35 остаткам по Kabat; CDR2 тяжелой цепи соответствует 50-65 остаткам по Kabat; и CDR3 тяжелой цепи соответствует 95-102 остаткам по Kabat; см., например, последовательности по Kabat белков, представляющих интерес с точки зрения иммунологии (1987 и 1991, NIH, Bethesda, MD). В некоторых вариантах осуществления CDR тяжелой цепи являются такими, как определено в настоящем описании, например ниже в таблице последовательностей или в табл. 2.

Термин легкая цепь или LC относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере вариабельную область легкой цепи, с лидерной последовательностью или без нее. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь содержит по меньшей мере часть константной области легкой цепи. Термин полноразмерная легкая цепь относится к полипептиду, содержащему вариабельную область легкой цепи и константную область легкой цепи с лидерной последовательностью или без нее.

Термин вариабельная область легкой цепи или VL относится к области, содержащей CDR1, FR2, HVR2, FR3 и HVR3 легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи также содержит FR1 и/или FR4. Как указано ниже, в некоторых вариантах осуществления CDR1 легкой цепи содержит остатки 24-35 VL SEQ ID NO, как определено в настоящем описании; CDR2 легкой цепи содержит остатки 51-57 VL SEQ ID NO, как определено в настоящем описании, a CDR3 легкой цепи содержит остатки 90-98 VL SEQ ID NO, как определено в настоящем описании. В других вариантах осуществления, если указано, CDR1 легкой цепи соответствует 24-34 остаткам по Kabat; CDR2 легкой цепи соответствует 50-56 остаткам по Kabat; и CDR3 легкой цепи соответствует 89-97 остаткам по Kabat; см., например, последовательности по Kabat белков, представляющих интерес с точки зрения иммунологии (1987 и 1991, NIH, Bethesda, MD). В некоторых вариантах осуществления CDR легкой цепи являются такими, как определено в настоящем описании, например, в таблице последовательностей.

Химерное антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи получена из определенного источника или вида, тогда как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника или вида. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело относится к антителу, содержащему по меньшей мере одну вариабельную область от первого вида (такого как мышь,

- 5 042790 крыса, яванский макак и т.д). и по меньшей мере одну константную область от второго вида (такого как человек, яванский макак и т.п.). В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну мышиную вариабельную область и по меньшей мере одну человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область яванского макака и по меньшей мере одну человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления все вариабельные области химерного антитела относятся к первому виду, а все константные области химерного антитела относятся ко второму виду.

Гуманизированное антитело относится к антителу, в котором по меньшей мере одна аминокислота в каркасном участке нечеловеческой вариабельной области заменена соответствующей аминокислотой из человеческой вариабельной области. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело содержит по меньшей мере одну человеческую константную область или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело представляет собой Fab, scFv, и (Fab')2 и т.д.

Человеческое антитело в контексте настоящего описания относится к антителам, продуцируемым у людей, антителам, продуцируемым у животных, отличных от человека, которые содержат гены человеческого иммуноглобулина, такие как XenoMouse®, и антителам, выбранным методами in vitro, такими как фаговый дисплей, в которых репертуар антител основан на последовательности человеческого иммуноглобулина.

Используемое в настоящем документе антитело к VISTA или анти-VISTA антитело относится к антителу, которое специфически связывается с VISTA по меньшей мере при некоторых условиях, таких как кислый рН. В некоторых вариантах осуществления антитело может представлять собой антитело к huVISTA или антитело к huVISTA, указывающее на то, что оно специфически связывается с человеческим белком VISTA в по меньшей мере некоторых условиях, таких как кислый рН. Например, антитело к VISTA, которое специфически связывается с внеклеточным доменом (ECD) VISTA, может упоминаться как анти-VISTA-ECD антитело.

В некоторых вариантах осуществления антитело может связываться с более высоким сродством с VISTA при кислых значениях рН, чем при нейтральном и/или физиологическом рН. В некоторых вариантах осуществления антитело может связываться с более высоким сродством с VISTA при кислых значениях рН, а при нейтральном и/или физиологическом рН может связываться только незначительно или неспецифично.

K_D или константа диссоциации для связывания антитела с белком, например с белком VISTAECD, является мерой сродства или специфического связывания антитела с белком, например с белком VISTA-ECD. Более низкое значение K_D указывает на улучшенное связывание или сродство по сравнению с более высоким значением K_D. K_D представляет собой отношение между скоростью диссоциации или k_off или KD и скоростью ассоциации или kon или k_a между антителом и полипептидом. Скорости диссоциации и ассоциации - это скорости, с которыми два партнера по связыванию ассоциируют и диссоциируют в системе. Таким образом, более медленная скорость диссоциации, в случае, когда скорость ассоциации остается примерно постоянной, приводит к более высокому общему сродству и, следовательно, к более низкому значению KD. Как используется в настоящем описании, конкретное значение k_off или меньше указывает, что k_off или скорость диссоциация является такой, как указано, или происходит медленнее, чем указанная скорость.

Термины специфическое связывание или специфически связывается или аналогичные термины означают, что значение K_D для связывания двух полипептидов, таких как антитело и его полипептидмишень, меньше, чем в случае связывания двух случайных полипептидов в таких же условиях. Другими словами, значение KD меньше, чем в случае неспецифической агрегации полипептидов в системе.

В некоторых вариантах осуществления антитела специфически связываются с белком VISTA-ECD при определенном рН или диапазоне рН. Кислый рН в настоящем описании обычно относится к рН ниже 7,0, основной рН обычно относится к рН выше 7,0, а нейтральный рН обычно относится к рН, равном примерно 7,0. Термин физиологический рН в настоящем описании относится к рН в нормальных (т.е., не раковых) физиологических условиях, например, от 7,35 до 7,45 или от 7,3 до 7,4, например, примерно 7,4. Фразы, такие как связывание в кислых условиях или связывание в физиологических условиях и т.п. в настоящем описании, используемые в контексте связывания двух молекул, таких как VISTA и партнер по связыванию VISTA или VISTA и Т-клетки, относятся к связыванию при кислых значениях рН и связыванию при физиологическом рН, соответственно.

При упоминании антитела, которое блокирует связывание или ингибирует связывание лиганда (или рецептора) или конкурирующего антитела с рецептором (или лигандом) отдельно или на клетке, связывание блокируется, если наблюдается общее снижение, которое является статистически значимым по сравнению с контролем, например, общее снижение на 50% или более, например, общее снижение на 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более. Блокирующее анти-VISTA антитело, например, представляет собой антитело, которое может блокировать связывание VISTA с PSGL-1 или другим лигандом или рецептором VISTA, или гепарансульфатными протеогликанами, по меньшей мере, в некоторых условиях, таких как при кислых значениях рН.

Используемая в настоящем описании модель опухоли относится к доклиническому анализу in vi

- 6 042790 vo, который может использоваться для изучения биологической активности антитела к VISTA-ECD, и включает системы анализа опухолей ксенотрансплантата или нативной мыши. В некоторых случаях модель опухоли позволяет отслеживать размер или рост опухоли при лечении антителом и/или отслеживать наличие иммунных клеток в опухоли, таких как специфические типы Т-клеток или NK-клеток, для определения, вызвало ли антитело иммунный ответ или усилило его.

Используемый в настоящем описании термин иммуностимулятор относится к молекуле, которая стимулирует иммунную систему, действуя либо в качестве агониста иммуностимулирующей молекулы, включая костимулирующую молекулу, либо в качестве антагониста иммуностимулирующей молекулы, включая коингибирующую молекулу. Иммуностимулирующая молекула или иммуноингибирующая молекула может быть регулятором иммунной контрольной точки, таким как VISTA или другой член семейства В7 или другой молекулой, как описано далее. Иммуностимулирующий агент может быть биологическим, таким как антитело или фрагмент антитела, другим белком или вакциной, или может представлять собой низкомолекулярное лекарственное вещество. Иммуностимулирующая молекула включает рецептор или лиганд, который действует путем усиления, стимуляции, индукции или иного типа запуска иммунного ответа. Иммуностимулирующие молекулы, как определено в настоящем описании, включают костимулирующие молекулы. Иммуноингибирующая молекула включает рецептор или лиганд, который действует путем уменьшения, ингибирования, подавления или иного типа выключения иммунного ответа. Иммуноингибирующие молекулы, как определено в настоящем описании, включают коингибирующие молекулы. Такими иммуностимулирующими и иммуноингибирующими молекулами могут быть, например, рецепторы или лиганды, обнаруженные на иммунных клетках, таких как Т-клетки, или найденные на клетках, участвующих во врожденном иммунитете, таких как NK-клетки.

Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности и гомология по отношению к последовательности пептида, полипептида или антитела определяют как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной пептидной или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения, при необходимости, гэпов (зазоров) для достижения максимального процента идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые известны специалисту в данной области, например, с помощью общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программы BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALIGNTM (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить соответствующие параметры для измерения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

Термины запуск или усиление относятся к инициированию или усилению любого события (такого как связывание белкового лиганда) или к инициированию или усилению любой биологической активности (такой как иммунный ответ) или фенотипической характеристики, или к инициированию или увеличению частоты, степени или вероятности такой активности или характеристики. Запускать или усиливать означает начинать или усиливать активность, функцию и/или количество по сравнению с эталоном. Нет необходимости в том, чтобы запуск или усиление были завершены. Например, в определенных вариантах осуществления усиление означает способность вызывать общее увеличение на 20% или более. В другом варианте осуществления усиление означает способность вызывать общее увеличение на 50% или более. В другом варианте осуществления усиление означает способность вызывать общее увеличение на 75%, 85%, 90%, 95% или более.

Термины ингибирование или ингибировать в более общем смысле относятся к уменьшению или прекращению любого события (такого как связывание белкового лиганда) или к уменьшению или блокированию любого фенотипического признака или к снижению или исчезновению частоты, степени или вероятности появления этой характеристики. Уменьшить или ингибировать означает уменьшить, снизить или блокировать активность, функцию и/или количество по сравнению с эталоном. Нет необходимости в том, чтобы ингибирование или уменьшение было полным. Например, в некоторых вариантах осуществления уменьшать или ингибировать означает способность вызывать общее уменьшение на 20% или более. В другом варианте осуществления уменьшить или ингибировать означает способность вызывать общее уменьшение на 50% или более. В другом варианте осуществления уменьшить или ингибировать означает способность вызывать общее уменьшение на 75%, 85%, 90%, 95% или более.

Лечение, как используется в настоящем описании, охватывает любое введение или применение терапевтического средства для лечения заболевания у человека и включает ингибирование развития заболевания или прогрессирования заболевания или одного или более симптомов заболевания, ингибирование или замедление заболевания или его прогрессирования, или одного или более симптомов, купирование его развития, частичное или полное облегчение заболевания или одного или более его симптомов, или предотвращение рецидива одного или более симптомов заболевания.

Термины индивид и пациент используются в настоящем описании взаимозаменяемо для обозначения человека.

Термин эффективное количество или терапевтически эффективное количество относится к ко

- 7 042790 личеству лекарственного вещества, эффективному для лечения заболевания или расстройства у индивида, например, частичного или полного облегчения одного или более симптомов. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата.

Термин злокачественное новообразование используется в настоящем описании для обозначения группы клеток, которые демонстрируют аномально высокие уровни пролиферации и роста. Новообразование может быть доброкачественным (также называемым доброкачественной опухолью), предзлокачественным или злокачественным. Злокачественные клетки могут представлять собой солидные (твердые) раковые клетки или лейкозные злокачественные клетки. Термин рост опухоли используется в настоящем описании для обозначения пролиферации или роста клетки или клеток, которые составляют рак, что приводит к соответствующему увеличению размера или степени рака.

Примеры злокачественны заболеваний, к которым применимы способы лечения, описанные в настоящем описании, включают, без ограничения, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные неограничивающие примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, рак гипофиза, рак пищевода, астроцитому, саркому мягких тканей, немелкоклеточный рак легкого (включая плоскоклеточный немелкоклеточный рак легкого), аденокарциному легкого, плоскоклеточный рак легкого, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, колоректальный рак, рак эндометрия или матки, рак слюнной железы, рак почки, почечно-клеточный рак, рак печени, рак простаты, рак влагалища, рак щитовидной железы, карциному печени, рак головного мозга, рак эндометрия, рак яичка, холангиокарциному, рак желчного пузыря, рак желудка, меланому и другие виды рака головы и шеи (включая плоскоклеточный рак головы и шеи).

Введение в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами включает одновременное (параллельное) и последовательное введение в любом порядке.

Фармацевтически приемлемый носитель относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному составу или носителю, общепринятому в данной области техники для применения с терапевтическим агентом, которые вместе составляют фармацевтическую композицию для введения индивиду. Фармацевтически приемлемый носитель является нетоксичным для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и совместим с другими ингредиентами состава. Фармацевтически приемлемый носитель подходит для используемого состава. Например, если терапевтический агент вводят перорально, носитель может представлять собой гелевую капсулу. Если терапевтический агент вводят подкожно, носитель в идеале не должен раздражать кожу и вызывать реакцию в месте инъекции.

Химиотерапевтический агент представляет собой химическое соединение, подходящее для лечения злокачественного новообразования. Примеры химиотерапевтических агентов, которые можно вводить в описанных в настоящем описании способах, включают, без ограничения, алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклосфосфамид Cytoxan®; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (особенно булатацин и булатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и СВ1-ТМ1); элейтеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотистый иприт, такой как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новембицин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урацилиприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма-1 и калихеамицин-омега-1 (см., например, Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)); динемицин, включая динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарциностатиновый хромофор и родственные хромопротеиновые хромофоры энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, Adriamycin® доксорубицин (включая морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенольную кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин,

- 8 042790

6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; угнетающие функцию надпочечников средства, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; пополнитель фолиевой кислоты, такие как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидный гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; ацетат эллиптиния; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевину; лентинан; лонидайнин; мейтансиноиды, такие как мейтанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK® полисахаридный комплекс (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно токсин Т-2, верракурин А, риридин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин арабинозид; циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел Taxol® (Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси), Abraxane®, не содержащий кремофоров, состав сконструированных альбуминовых наночастиц паклитаксела (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinore) и доксетаксел Taxotere® (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); хлоранбуцил; гемцитабин Gemzar®; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; платиновые аналоги, такие как цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин; винбластин; платину; этопозид (VP-16); изофосфамид; митоксантрон, винкристин, винорелбин Navelbine®; новантрон, тенипозид, эдатрексат, дауномицин, аминоптерин, кселода, ибандронат, иринотекан (Camptosar, СРТ-11) (включая схему лечения иринотеканом с 5-FU и лейковорином); ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (ДМФО); ретиноиды, такие как ретиноидная кислота; капецитабин; комбретастатин; лейковорин (LV); оксалиплатин, включая схему лечения оксалиплатином (FOLFOX); ингибиторы РКС-альфа, Raf, H-Ras, EGFR (например, эрлотиниб (Tarceva®)) и VEGF-A, которые уменьшают пролиферацию клеток и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленного.

Другие неограничивающие примеры химиотерапевтических агентов, которые можно вводить в раскрытых в настоящем описании способах, включают антигормональные агенты, которые действуют для регуляции или ингибирования действия гормонов на злокачественное новообразование, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (SERM), включая, например, тамоксифен (в том числе тамоксифен Nolvadex®), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен Fareston®; ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, регулирулирующую выработку эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрол ацетат Megase®, эксеместан Aromasin®, форместание, фадрозол, ворозол Rivisor®, летрозол Femara® и анастрозол Arimidex®; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; а также троксацитабин (цитозиновый аналог 1,3-диоксоланового нуклеозида); антисмысловые олигонуклеотиды, в частности те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, участвующих в пролиферации аберрантных клеток, такие как, например, PKC-альфа, Ralf и H-Ras; рибозимы, такие как ингибитор экспрессии VEGF (например, рибозим Angiozyme®) и ингибитор экспрессии HER2; вакцины, такие как вакцины для генной терапии, например, вакцина Allovectin®, вакцина Leuvectin® и вакцина Vaxid®; Proleukin® rIL-2; ингибитор топоизомеразы 1 Lurtotecan®; Abarelix® rmRH; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленного.

Антиангиогенный агент или ингибитор ангиогенеза относится к веществу с низкой молекулярной массой, полинуклеотиду (включая, например, ингибирующую РНК (RNAi или siRNA)), полипептиду, выделенному белку, рекомбинантному белку, антителу или их конъюгатам или слитым белкам, которые прямо или косвенно ингибируют ангиогенез, васкулогенез или нежелательную проницаемость сосудов. Следует понимать, что антиангиогенный агент включает агенты, которые связывают и блокируют ангиогенную активность ангиогенного фактора или его рецептора. Например, антиангиогенный агент, который можно вводить в раскрытых в настоящем описании способах, может включать антитело или другой антагонист к ангиогенному агенту, например антитело к VEGF-A (например, бевацизумаб (Avastin®)) или к рецептору VEGF-A (например, рецептору KDR или рецептору Flt-1), анти-PDGFR ингибиторы, такие как Gleevec® (мезилат иматиниба), малые молекулы, которые блокируют передачу сигналов рецептора VEGF (например, PTK787/ZK2284, SU6668, Sutent®/SU11248 (сунитиниба малат), AMG706, или те, которые описаны, например, в международной заявке на патент WO 2004/113304). Антиангиогенные агенты также включают нативные ингибиторы ангиогенеза, например ангиостатин, эндостатин и т.д; см., например, Klagsbrun and D'Amore (1991) Annu. Rev. Phys. 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179 (например, в табл. 3 перечислены антиангиогенные препараты, используемые при злокачественной меланоме); Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5 (12): 1359-1364; Tonini et al., (2003) Oncogene 22:6549-6556 (например, в табл. 2 перечислены известные антиангиогенные факторы); и Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206 (например, в табл. 1 перечислены антиангиогенные агенты, ис

- 9 042790 пользованные в клинических испытаниях).

Используемый в настоящем описании термин ингибирующий рост агент относится к соединению или композиции, которая ингибирует рост клетки (такой как клетка, экспрессирующая VEGF) либо in vitro, либо in vivo. Таким образом, ингибирующий рост агент, который можно вводить способами, раскрытыми в настоящем описании, может быть агентом, который существенно уменьшает процент клеток (таких как клетки, экспрессирующие VEGF) в S-фазе. Примеры ингибирующих рост агентов включают, без ограничения, агенты, которые блокируют прогрессирование клеточного цикла (в месте, отличном от S-фазы), такие как агенты, которые вызывают остановку G1 и остановку М-фазы. Классические блокаторы М-фазы включают алкалоиды барвинка (винкристин и винбластин), таксаны и ингибиторы топоизомеразы II, такие как доксорубицин, эпирубицин, даунорубицин, этопозид и блеомицин. Агенты, которые блокируют G1, также блокируют S-фазу, например, ДНК-алкилирующие агенты, такие как тамоксифен, преднизон, дакарбазин, мехлоретамин, цисплатин, метотрексат, 5-фторурацил и ara-С. Дополнительную информацию можно найти в Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter I, озаглавленная Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs, Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), например, р. 13. Таксаны (паклитаксел и доцетаксел) являются противоопухолевыми препаратами, которые получают из тисового дерева. Доцетаксел (Taxotere®, Rhone-Poulenc Rorer), полученный из европейского тиса, является полусинтетическим аналогом паклитаксела (Taxol®, Bristol-Myers Squibb). Паклитаксел и доцетаксел способствуют сборке микротрубочек из димеров тубулина и стабилизируют микротрубочки, предотвращая деполимеризацию, которая приводит к ингибированию митоза в клетках.

Термин противоопухолевая композиция относится к композиции, используемой для лечения злокачественного новообразования, содержащей по меньшей мере один активный терапевтический агент. Примеры терапевтических агентов включают, без ограничения, например, химиотерапевтические агенты, ингибирующие рост агенты, цитотоксические агенты, агенты, используемые в лучевой терапии, антиангиогенные агенты, антираковые иммунотерапевтические средства, апоптотические агенты, антитубулиновые агенты и другие средства для лечения рака, такие как антитела к HER-2, антитела к CD20, антагонист рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (например, ингибитор тирозинкиназы), ингибитор HER1/EGFR (например, эрлотиниб (Tarceva®), ингибиторы факторов роста тромбоцитов (например, Gleevec® (Imatinib Mesylate)), ингибитор СОХ-2 (например, целекоксиб), интерфероны, ингибиторы CTLA4 (например, анти-CTLA-антитело ипилимумаб (YERVOY®)), ингибиторы PD-1 или PD-L1 (например, OPDIVO®, KEYTRUDA®, TECENTRIQ®, BAVENCIO®, IMFINZI®), ингибиторы TIM3 (например, антитела к TIM3), цитокины, антагонисты (например, нейтрализующие антитела), которые связываются с одной или более из следующих мишеней: ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-бета, BlyS, APRIL, BCMA, CTLA4, TIM3 или VEGF рецептора(ов), TRAIL/Apo2, и другие биоактивные и органические химические агенты и т.д. Их комбинации также включены в настоящее описание.

Антитела, специфически связывающиеся с VISTA-ECD при кислом рН.

Поскольку VISTA содержит большое количество остатков гистидина в своем ECD, его укладка и общая структура, а также поверхность, доступная для связывания лигандов, таких как антитела, могут отличаться при кислом рН по сравнению с нейтральным рН, в частности, равным примерно рН 6,5, который является pK_a гистидина. Поскольку микроокружение опухоли обычно является кислым, для связывания с VISTA в этих микроокружениях может потребоваться специфическое связывание антитела с VISTA при кислом рН, при котором по меньшей мере некоторые из остатков поверхностного гистидина вероятнее всего являются протонированными.

В приведенной ниже таблице последовательностей представлена аминокислотная последовательность VISTA человека (hVISTA) с сигнальным пептидом или без него (SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2 (зрелый hVISTA)), соответственно. Сигнальный пептид состоит из аминокислотных остатков 1-32 SEQ ID NO:1. Внеклеточный домен (ECD) состоит из аминокислотных остатков 1-162 SEQ ID NO:2). Домен IgV состоит из аминокислотных остатков 37-167 SEQ ID NO:1 и аминокислотных остатков 5-135 из SEQ ID NO:2. Стеблевая область находится в пределах аминокислотных остатков 172-194 SEQ ID NO:1 и аминокислотных остатков 136-162 SEQ ID NO:2; трансмембранный домен находится в пределах аминокислотных остатков 195-216 SEQ ID NO:1 и аминокислотных остатков 163-184 SEQ ID NO:2. Аминокислотные остатки 187 SEQ ID NO:1 и 155 SEQ ID NO:2 (отмечены жирным шрифтом и подчеркнуты) могут представлять собой либо D, либо Е, что указывает на полиморфизм в hVISTA. Этот остаток выделен жирным шрифтом и подчеркнут. Соответственно, SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2 охватывают оба полиморфизма у человека в этом остатке. Остатки гистидина в ECD VISTA окрашены серым цветом.

Анти-VISTA антитела (Ab) могут специфически связываться при кислом рН с VISTA-ECD или его фрагментами, например, содержащими домен IgV VISTA или область из hVISTA, содержащую, например, аминокислоты 20-95, 20-70 35-70, 35-95, 35-127 или 37-125 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН менее 7,0. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже 6,8. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже 6,5. В

- 10 042790 некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже 6,3. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже 6,0. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже 5,8. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTAECD при рН ниже 5,5. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже рН 5,3. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН ниже рН 5,0.

Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне от 5,0 до 7,0. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне от 5,0 до 6,5. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне от 5,0 до 6,0. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне от 5,5 до 7,0. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне от 5,5 до 6,5. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне от 6,0 до 6,5.

В настоящей заявке также представлены Ab, которые связываются при рН 6,5 или ниже с белком VISTA-ECD, таким как hVISTA-ECD или его фрагментами, содержащими домен IgV VISTA или область из hVISTA, содержащую, например, аминокислоты 20-95, 20-70 35-70, 35-95, 35-127 или 37-125 SEQ ID NO:2, с KD 10^-6 М или менее. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с KD 10^-7 М или менее. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с KD 10^-8 М или менее. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с KD 10^-9 М. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с KD 10^-10 М или менее. Например, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М ИЛИ менее.

В настоящей заявке также представлены Ab, которые связываются с белком VISTA-ECD при рН в диапазоне 6,0-6,5 с KD 10^-6 М или менее. В некоторых вариантах осуществления Ab связываются с KD 10^-7 М или менее. В некоторых вариантах осуществления Ab связываются с KD 10^-8 М ИЛИ менее. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с KD 10^-9 М. В некоторых вариантах осуществления Ab связываются с KD 10^-10 М ИЛИ менее. Например, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже, например при рН в диапазоне 6,0-6,5, с KD 10^-7 М или менее. Кроме того, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или менее, например при рН в диапазоне 6,0-6,5, с KD 10^-8 М или менее. Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или менее, например в при рН диапазоне 6,0-6,5, с K_D 10^-9 М или менее.

В настоящей заявке также представлены Ab, которые специфически связываются с белком VISTAECD, таким как hVISTA-ECD или его фрагментами, содержащими домен IgV VISTA или область из hVISTA, содержащую, например, аминокислоты 20-95, 20-70, 35-70, 35-95, 35-127 или 37-125 SEQ ID NO:2, например, при рН 6,5 или ниже с k_off 10^-5 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 10^-4 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 2χ10^-4 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 5x10 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 7χ10’⁴ с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 10^-3 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 2χ10^-3 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 5χ10^-3 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 7χ10^-3 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют k_off 10^-2 с^-1 при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab имеют koff 10^-1 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. Например, Ab может специфически связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с koff 10^-3 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. Ab может специфически связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с koff 10^-3 с^-1 или менее при 25°С или 37°С. Кроме того, Ab может специфически связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с koff- 10^-2 с^-1 или менее при 25°С или 37°С.

В настоящей заявке представлены Ab, которые связываются с белком VISTA-ECD, таким как hVISTA-ECD, или его фрагментами, содержащими домен IgV VISTA или область из hVISTA, содержащую, например, аминокислоты 20-95, 20-70, 35-70 или 35-95, 35-95, 35-127 или 37-125 SEQ ID NO:2, например, при рН 6,5 или ниже с (i) KD 10^-6 М или менее, 10^-7 М или менее, 10^-8 М или менее, 10^-9 М или менее или 10^-10 М или менее и (ii) скоростью koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 (или 2, 5 или 7χ10^-4) с^-1 или менее, 10^-3 (или 2, 5 или 7χ10^-4) с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Например, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 М или менее и скоростью koff 10^-3 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее и скоростью koff 10^-3 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее и скоростью koff 10^-2 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Например, Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 М или менее и скоростью ko_ff 10^-3 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с

- 11 042790 hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-9 М или менее и скоростью koff 10^-3 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-9 М или менее и скоростью koff 10^-2 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее и скоростью koff 10^-4 (или 2, 5 или 7х10^-4) с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее и скоростью koff 10^-5 (или 2, 5 или 7х10^-5) с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-9 М или менее и скоростью koff 10^-4 (или 2, 5 или 7х10^-4) с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-9 М или менее и скоростью koff 10^-5 (или 2, 5 или 7х10^-5) с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С.

В настоящей заявке представлены Ab, которые специфически связываются с белком VISTA-ECD, например, при рН 6,5 или ниже с k_on 10⁴ М^-1 с^-1 или выше при 25°С или 37°С. В некоторых таких вариантах осуществления Ab могут связываться с kon 105 М^-1 с^-1 или выше. В некоторых таких вариантах осуществления Ab могут связываться с kon 106 М^-1 с^-1 или выше. В некоторых таких вариантах осуществления Ab может связываться с kon 10⁷ М^-1 с^-1 или выше. Например, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с kon 106 М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Например, Ab может связываться с ECD hVISTA при рН 6,5 или ниже с ko_n 106 М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С.

В настоящей заявке представлены Ab, которые связываются с белком VISTA-ECD, например, при рН 6,5 или ниже с (i) KD 10^-6 М или менее, 10^-7 М или менее, 10^-8 М или менее, 10^-9 М или менее или 10^-10 М или менее и (ii) kon 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Например, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 М или менее и скоростью kon 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Например, Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее и скоростью kon 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. Например, Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 M или менее и скоростью kon 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25 °С или 37°С. Например, Ab может связываться с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее и скоростью k_on 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С.

В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 М или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 2х10^-5 с^-1 или менее, 5х10^-5 с^-1 или менее, 7х10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 2х10^-4 с^-1 или менее, 5х10^-4 с^-1 или менее, 7х10^-4 с^-1 или менее, 10^-3 с^-1 или менее, 2х10^-3 с^-1 или менее, 5х10^-3 с^-1 или менее, 7х10^-3 с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-9 M или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 10^-3 с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых таких вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-10 М или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 10^-3 с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С.

В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 М или менее, а также с kon 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее, а также с kon 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-9 М или менее, а также с kon 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых таких вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-10 M или менее, а также с k_on 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 10⁶ М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С.

В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-7 М или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 10^-3 с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С, и kon 10⁴ M^-1c^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 10⁶ M^-1 c^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10^-8 М или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 10^-3 с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С, и kon 10⁴ М^-1 c^-1 или выше, 105 М^-1 c^-1 или выше, 10⁶ М^-1 c^-1 или выше, 10⁷ М^-1 c^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или

- 12 042790

37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10^-9 M или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 10^- с^-1 или менее, 10^- с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С, и kon 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 М^-1 с^-1 или выше, 106 М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С. В некоторых таких вариантах осуществления Ab может связываться с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с KD 10-10 М или менее, а также с koff 10^-5 с^-1 или менее, 10^-4 с^-1 или менее, 10^-3 с^-1 или менее, 10^-2 с^-1 или менее или 10^-1 с^-1 или менее, измеренной, например, при 25°С или 37°С, и kon 10⁴ М^-1 с^-1 или выше, 105 M^-1c^-1 или выше, 106 М^-1 с^-1 или выше, 10⁷ М^-1 с^-1 или выше, измеренной, например, при 25°С или 37°С.

Как отмечалось выше, в некоторых из приведенных выше вариантов осуществления белок VISTAECD представляет собой hVISTA-ECD или представляет собой часть hVISTA-ECD, такую как, например, домен IgV. В некоторых из приведенных выше вариантов осуществления Ab может специфически связываться с эпитопом, содержащим аминокислоты 20-95 SEQ ID NO:2. В некоторых из приведенных выше вариантов осуществления Ab может специфически связываться с эпитопом, содержащим аминокислоты 20-70 SEQ ID NO:2. В некоторых из приведенных выше вариантов осуществления Ab может специфически связываться с эпитопом, содержащим аминокислоты 35-95 SEQ ID NO:2. В некоторых из приведенных выше вариантов осуществления Ab может специфически связываться с эпитопом, содержащим аминокислоты 35-70 SEQ ID NO:2. В некоторых из приведенных выше вариантов осуществления эпитоп представляет собой трехмерный эпитоп, который содержит не только одну из указанных выше частей SEQ ID NO:2, состоящих из остатков 20-95, 20-70, 35-95 или 35-70, но также другую часть SEQ ID NO:2, такую как остатки 95-105 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с эпитопом hVISTA, с которым связывается Ab, описанный в WO 2015/097536. Например, Ab может конкурировать или перекрестно конкурировать за связывание с hVISTA с Ab, описанным в WO 2015/097536. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с конформационным эпитопом человеческого VISTA. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с конформационным эпитопом, который содержит или присутствует в остатках 103-111 SEQ ID NO:2 и 136-146 SEQ ID NO:2 человеческого VISTA. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с конформационным эпитопом, который содержит или присутствует в остатках 24-36, 54-65 и 100-102 SEQ ID NO:2 человеческого VISTA. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с конформационным эпитопом, который содержит аминокислотные остатки в петле FG человеческого VISTA. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с полипептидом, содержащим аминокислотные остатки 35-127 и/или 37-125 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с полипептидом VISTA ECD или его частью, содержащей аминокислотные остатки 350-127 SEQ ID NO:2, при этом антитело не связывается или связывается с пониженным сродством с полипептидом VISTA ECD или его частью, содержащей аминокислотную замену, где замена (1) представляет собой замену одного из следующих аминокислотных остатков: Т35, Y37, K38, Т39, Y41, R54, Т61, F62, Q63, L65, Н66, L67, Н68, Н69, F97, L115, V117, I119, Н121, Н122, S124, Е125, R127 и SEQ ID NO:2 или (2) представляет собой замену одного из следующих аминокислотных остатков: Y37, Т39, R54, F62, Q63, Н66, L115, V117, I119, S124 или Е125. В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело имеет такие же характеристики связывания (или по существу такие же характеристики связывания), что и антитело, описанное в настоящей заявке, например, как изложено в примерах.

Некоторые из вышеуказанных антител могут проявлять разное сродство связывания с белками VISTA-ECD в зависимости от рН. Некоторые Ab, специфически связывающиеся с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже, также специфически связываются с белком VISTAECD при нейтральном и/или щелочном рН с аналогичным средством (т.е. они являются пансвязывающими веществами). Например, некоторые такие Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с K_D 10^-7 M или менее как при рН 6,5, так и при рН 7,0 (при постоянной температуре, например, 25°С или 37°С), так что KD при рН 6,5 находится в пределах 1,5-кратного значения KD при рН 7,0. Некоторые такие Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с KD 10^-8 М или менее как при рН 6,5, так и при рН 7,0 (при постоянной температуре, например, 25°С или 37°С), так что KD при рН 6,5 находится в пределах 1,5-кратного значения KD при рН 7,0. Некоторые такие Ab могут связываться с hVISTA-ECD с KD 10^-8 М или менее как при рН 6,5, так и при рН 7,0 (при постоянной температуре, например, 25°С или 37°С), так что KD при рН 6,5 находится в пределах 1,5-кратного значения KD при рН 7,0.

Некоторые Ab, специфически связывающиеся с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже, могут связывать белок VISTA-ECD в нейтральных, физиологических и/или щелочных условиях с более низким сродством (рН-чувствительные связывающие вещества или рНчувствительные Ab). Некоторые Ab, специфически связывающееся с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже, могут иметь незначительное, например, практически недетектируемое, связывание с белком VISTA-ECD в нейтральных, физиологических и/или щелочных условиях. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с K_D 10^-8 М или менее при рН 6,5 и с KD более 10^-8 М при рН 7,0 и/или рН 7,4. В некоторых таких вариантах осу

- 13 042790 ществления Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с K_D 10^-8 М или менее при рН 6,5, а при рН 7,0 и/или рН 7,4 с KD, более чем в 1,5 раза превышающей значение при рН 6,5. В некоторых вариантах осуществления предоставляется рН-чувствительное Ab, которое специфически связывается с белком VISTA-ECD с KD, значение которой при рН 6,5 по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз или 5000 раз ниже значения при рН 7,0 (при постоянной температуре, например, 25°С или 37°С).

Например, в некоторых случаях Ab связывается с белком VISTA-ECD с KD, значение которой при рН 6,0 по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз или 5000 раз меньше значения при рН 7,0 и/или рН 7,4 или выше (при постоянной температуре, например, 25°С или 37°С).

В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD с koff, которая в кислых условиях ниже, чем в нейтральных, физиологических или щелочных условиях. В некоторых вариантах осуществления предоставляется Ab, которое связывается с белком VISTA-ECD в кислых условиях с koff, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз или 1000 раз ниже при рН 6,5, чем k_off при рН 7,0 и/или рН 7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С. Другими словами, при кислом рН скорость диссоциации ниже, чем при нейтральном рН. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD со скоростью koff, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз или 1000 раз ниже при рН 6,0, чем k_off при рН 7,0 и/или рН 7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления предоставляется Ab, которое связывается с белком VISTA-ECD с koff, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз или 1000 раз ниже при рН 6,5, чем k_off при рН 7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD со скоростью koff, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз или 1000 раз ниже при рН 6,0, чем k_off при рН 7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С. В некоторых вариантах осуществления предоставляется Ab, которое связывается с белком VISTA-ECD с k_off, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз или 1000 раз ниже при рН 6,0-6,5, чем k_off при рН 7,0-7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С.

В некоторых вариантах осуществления предоставляется Ab, которое специфически связывается с белком VISTA-ECD с k_on, которая выше в кислых условиях по сравнению с k_on в нейтральных, физиологических или щелочных условиями. В некоторых вариантах осуществления предоставляется Ab, которое связывается с белком VISTA-ECD в кислых условиях с k_on, которая по меньшей мере в 2 раза, 5, 10, 20, 50, 100 или 1000 раз выше при рН 6,5, чем k_on при рН 7,0 и/или рН 7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком aVISTA-ECD с k_on, которая по меньшей мере в 2 раза, 5, 10, 20, 50, 100 или 1000 раз выше при рН 6,0, чем k_on при рН 7,0 и/или рН 7,4, измеренная, например, при 25°С или 37°С.

В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН, при котором происходит протонирование по меньшей мере одного остатка гистидина, например His98 в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTAECD при рН, при котором происходит протонирование большинства остатков гистидина в ECD, которое, как ожидается, представляет собой рН, равный 6,5 или ниже, например, при рН в пределах от 6,0 до 6,5.

В объем настоящего изобретения также включены Ab, которые специфически связываются с белком VISTA-ECD со сродством, которое выше при нейтральном, физиологическом или щелочном рН по сравнению с кислым рН, при условии, что сродство связывания при кислом рН остается высоким. Например, Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с KD 10^-8 М или менее как при рН 6,5, так и при рН 7,0, даже если Ab связываются с KD, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз ниже при рН 7,0 чем при рН 6,5.

В объем настоящего изобретения также включены Ab, которые имеют одно или более из свойств, указанных выше в этом разделе. Вышеуказанные свойства, такие как эпитопы с конкретными KD, k_off, k_on, не должны рассматриваться изолированно. Таким образом, Ab может связываться с эпитопом, содержащим одну из областей SEQ ID NO:2, описанной выше, а также может иметь свойства пан-связывания или рН-чувствительного или рН-селективного связывания, как описано выше, как показано на примере одного или более вариантов поведения его K_D, k_off или k_on при различных рН.

В любом из приведенных выше вариантов осуществления Ab может представлять собой, например, полноразмерное антитело (т.е. содержащее полноразмерную тяжелую цепь (с С-концевым лизином или без него) и полноразмерную легкую цепь) или антигенсвязывающий фрагмент такой как фрагмент Fab, фрагмент Fab', фрагмент (Fab')₂, фрагмент scFv, фрагмент Fv, или Ab может представлять собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело, или Ab может представлять собой биспецифическое или мультиспецифическое антитело.

Определение того, насколько хорошо Ab связывается с белком VISTA-ECD при данном рН, может быть проведено несколькими различными методами, например, методом поверхностного плазмонного

- 14 042790 резонанса (ППР, SPR), такого как анализы на BIACORE®. Пример анализа ППР включает иммобилизацию одного или более антител на сенсорном чипе СМ4 с иммобилизованным реагентом захвата (например, с использованием набора Biacore® для иммобилизации анти-человеческого Fc, GE Healthcare кат. № BR-1008-39; или набор Biacore® для иммобилизации антимышиного Fc, GE Healthcare кат. № BR1008-39), а затем антигена VISTA в качестве аналита в нескольких концентрациях для определения кинетики и сродства связывания в рабочем буфере с требуемым рН. В одном из вариантов осуществления VISTA вводят при двух-пяти концентрациях в диапазоне от 0,1 нМ до 500 нМ (например, 0,1 нМ, 1 нМ, 10 нМ, 100 нМ, 500 нМ) со скоростью потока 30 мкл/мин, со временем ассоциации до 4 мин и временем диссоциации до 10 мин. Между циклами связывания поверхность захвата восстанавливают в соответствии с инструкциями производителя для соответствующего набора иммобилизации. Все данные соответствуют двум повторам с использованием эталонной проточной кюветы и пустой инъекции. Данные с простой 1:1 кинетикой подгоняют к модели связывания Ленгмюра с переносом вещества с помощью оценочного программного обеспечения Biacore® T200. Также могут быть использованы методы ППР, описанные в примерах.

Сродство Ab к полипептиду VISTA ECD может быть определено с использованием клеток, экспрессирующих полипептид VISTA ECD, PSGL-1 или гепарансульфат на своей поверхности, причем этот метод включает проточную цитометрию, и при этом связывание Ab с VISTA-ECD, связанным с клеткой, определяют при заданном рН, например рН 6,5 или ниже. Пример анализа методом проточной цитометрии включает следующее: клетки 293Т или другие клетки, эктопически экспрессирующие ECD hVISTA, ресуспендируют в буфере, состоящем из HBSS+1% BSA с рН, доведенным до требуемого значения, например, рН 6,0 с помощью MES или рН 7,4 с помощью HEPES. Ab (например, человеческий IgG) к hVISTA серийно разводят, начиная примерно с 20 мкг/мл, и инкубируют с ресуспендированными клетками в течение 30 мин при 4°С. Затем клетки дважды промывают одними и теми же буферами, поддерживая требуемый рН, например рН 6,0 или 7,4, и инкубируют с конъюгированным с флуорофором вторичным антителом, которое распознает первичное антитело (например, человеческий IgG) и является стабильным при пониженном рН. Затем клетки промывают, как и раньше, и сразу, без фиксации, анализируют на BD Fortessa или другом проточном цитометре. Сродство Ab к полипептиду VISTA ECD может быть определено, как описано в примерах.

В некоторых вариантах осуществления Ab, которые связываются с ECD hVISTA, блокируют связывание hVISTA с его партнером по связыванию (например, рецептором VISTA), например, на клетках. Ингибирование или блокирование может составлять 100% или по меньшей мере 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% или 50%. В некоторых вариантах осуществления Ab связывается с белком VISTA-ECD при кислом рН, например рН 6,5 или менее, и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50%, например, по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 7,0. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 6,8. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 6,5. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 6,3. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 6,0. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 5,8. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 5,5. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 5,3. В некоторых вариантах осуществления Ab специфически связывается с белком VISTA-ECD и ингибирует связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН ниже 5,0.

Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD и ингибируют связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН в диапазоне от 5,0 до 7,0. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD и ингибируют связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН в диапазоне от 5,0 до 6,5. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD и ингибируют связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН в диапазоне от 5,0 до 6,0. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD и ингибируют связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН в диапазоне от 5,5 до 7,0. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD и ингибируют связывание VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН в диапазоне от 5,5 до 6,5. Некоторые Ab специфически связываются с белком VISTA-ECD и ингибируют связывание

- 15 042790

VISTA с партнером по связыванию по меньшей мере на 50% при рН в диапазоне от 6,0 до 6,5. Ингибирование связывания можно определить, как описано в примерах.

Партнером VISTA по связыванию может быть PSGL-1, такой как человеческий PSGL-1. Последовательности изоформ PSGL-1 человека представлены в настоящем описании в виде SEQ ID NO:3-10. Это также могут быть гепарансульфатные протеогликаны, например, присутствующие в определенных клетках.

Ингибирование связывания с партнером VISTA по связыванию, может быть определено путем измерения ингибирования связывания VISTA (или VISTA ECD, или домена IgV VISTA, или VISTAпозитивных клеток) с клетками, с которыми связывается VISTA, например, Т-клетками (например, CD4+ Т-клетками, CD8+ Т-клетками, активированными или неактивированными), NK-клетками или другими клетками, с которыми связывается VISTA, в присутствии и в отсутствие антитела. Пример эксперимента, который можно использовать для определения, ингибирует ли антитело связывание VISTA с его партнером по связыванию или с Т-клетками, экспрессирующими партнера по связыванию, представляет собой анализ методом проточной цитометрии, например анализ, который включает следующее: мононуклеарные клетки периферической крови человека, полученные из крови донора, лейкоцитарную пленку или лейкопак ресуспендируют в буфере, состоящем из HBSS+1% BSA с рН, доведенным до требуемого значения, например, рН 6,0 с помощью MES или рН 7,4 с помощью HEPES. Затем клетки инкубируют в течение 30 мин при 4°С с 20 мкг/мл рекомбинантного химерного белка, состоящего из ECD hVISTA, слитого с Fc человеческого IgG1 (VISTA-Fc), и с различными концентрациями кандидатов антител, блокирующих VISTA, или контрольных антител. Затем клетки дважды промывают в тех же самых буферах, поддерживая требуемый рН, например рН 6,0 или 7,4, и инкубируют в течение еще 30 мин при 4°С с конъюгированным с флуорофором вторичным антителом, которое распознает VISTA-Fc, но не является кандидатом блокирующего антитела или контрольным антителом и которое является стабильным при пониженном рН. Затем клетки промывают, как и раньше, и сразу, без фиксации, анализируют на BD Fortessa или другом проточном цитометре. Ингибирование связывания может быть определено, например, как описано в примерах.

В конкретных вариантах осуществления раскрытые в настоящем описании Ab могут запускать или усиливать иммунный ответ, такой как антиген-специфический иммунный ответ. В некоторых вариантах осуществления Ab стимулируют активность Т-клеток, особенно при кислом рН, таком как в микроокружении опухоли. Стимуляцию активности Т-клеток можно измерить, например, в реакции смешанной культуры лимфоцитов (MLR) или в анализе in vitro с антигенпрезентирующей клеткой (природной или искусственной) и Т-клетками. Стимуляция активности Т-клеток также может быть измерена с помощью, например, анализа Jurkat, описанного в примерах.

В конкретных вариантах осуществления Ab, описанные в настоящем описании, ингибируют межклеточную адгезию, что может быть измерено, как описано в примерах.

Активность анти-VISTA Ab также может быть показана в анализах моноцитов, анализах ADCC и анализах ADCP, в частности при кислом рН, таком как в микроокружении опухоли.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA Ab ингибируют рост опухоли на модели опухоли, например, на модели опухоли с нокином (добавлением) человеческого VISTA.

Как показано в приведенных ниже примерах, для рециркуляции анти-VISTA Ab в эндосоме, например, для усиления фармакокинетических (PK) свойств, т.е. периода полувыведения антитела, требуется, чтобы анти-VISTA антитело связывалось с VISTA в кислых условиях. Таким образом, ожидается, что анти-VISTA Ab, которые связываются при низком рН с VISTA, например рН 6,5 или ниже, как далее описано в настоящем описании, также будут иметь более длительный приемлемый период полувыведения по сравнению с периодом полувыведения анти-VISTA антитела, которое не связывается с VISTA при кислом рН.

Примеры hVISTA-ECD-связывающих Ab.

В настоящей заявке представлены Ab, которые предпочтительно связываются с hVISTA (ECD) при кислом рН (например, в кислых условиях) относительно физиологического рН или нейтрального рН.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую VH CDR1, CDR2 и/или CDR3 любого из анти-hVISTA антител, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VH любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антител. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как

- 16 042790

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069. Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, P1-O68761_E55A, Pl-068761_H1OOG, P1-068761_E56N, Pl06876 1_E55A_E56N, P1-06876 l_E30D. Pl-068761_E30D_E55A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl-068761_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl06876 l_E55A_E100fF, Pl-06876 l_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E100fF, Pl06876 l_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55 A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876 l_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G. Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl068767_D52N_D102V, Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A, Pl068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E1001E, Pl-068767_D52N_E100fF, Pl068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF. CDR1, CDR2 и CDR3 VH каждого из этих видов содержат положения аминокислот 26-35 (VH CDR1), 50-66 (VH CDR2) и 99110 (VH CDR3) последовательностей VH каждого из указанных выше видов антител, представленных ниже в таблице последовательностей. CDR также подчеркнуты и выделены жирным шрифтом в каждой из последовательностей VH указанных выше видов антител, представленных ниже в таблице последовательностей.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VH любого из анти-hVISTA антител, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VH одного из

Pl-061029, Pl-068757, Р1-068759,

Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767. Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl068761_E55A, Pl-068761_H100G, P1-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl068761_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl-06876l_E56N_H100G. PI06876 l_E30D_H100G, Pl-068761_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl06876 l_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl-06876 l_E30D_E100fF, Pl06876 l_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876 l_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl068767_D52N_D102V, Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A. Pl068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl-068767_D52N_E100fF, Pl068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF. CDR1, CDR2 и CDR3 VL каждого из этих видов содержат положения аминокислот 24-35 (VL CDR1), 51-57 (VL CDR2) и 9098 (VL CDR3) последовательностей VL каждого из указанных выше видов антител, представленных ниже в таблице последовательностей. CDR также подчеркнуты и выделены жирным шрифтом в каждой из этих последовательностей.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и/или CDR3 любого из анти-hVISTA Ab предоставленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VH любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как Pl-061029. Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Р1-068765.

Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077. Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-06876l_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl068761_E56N_H100G, P1-06876 l_E30D_H100G, P1-06876 l_E30D_E56N. Pl068761_E100fF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl068761_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl06876 1_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876 l_E30D_E32Y, Pl068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF. Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL Pl-061029 или Pl-061015 или их клоновпотомков, таких как Pl-061029. Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765. Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077. Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-06876l_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl068761_E56N_H100G, P1-06876 l_E30D_H100G, Pl-06876 l_E30D_E56N, Pl068761_E100fF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl-06876 l_H100G_E100fF, Pl068761_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl06876 1_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876 l_E30D_E32Y, Pl- 17 042790

06876 l_E32Y_H100G, Pl-06876 l_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D. Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E1001E, Pl068767_D52N_E1001F, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать:

(a) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-061029, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-061029;

(b) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-061015 и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-061015;

(c) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068757, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068757;

(d) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068759, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068759;

(e) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068761, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761;

(f) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1 -068763, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068763;

(g) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068765, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068765;

(h) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068767, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767;

(i) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068769 и VL, содержащую VL CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068769;

(j) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068771, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068771;

(k) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068773, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068773;

(l) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068775, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068775;

(m) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-069059, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069059;

(n) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-069061, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069061;

(о) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-069063, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069063;

(р) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-069065, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069065;

(q) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-069067, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069067;

(r) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-069069, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069069;

(s) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-069071, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069071;

(t) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1 -069073, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069073;

(u) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-069075, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069075;

(v) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-069077, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-069077;

(w) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068736, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068736;

(х) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068738, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068738;

(у) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068740 и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068740;

(z) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068742, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068742;

(аа) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068744, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068744;

(bb) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068746, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VLP1-068746;

(сс) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068748, и

- 18 042790

VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068748;

(dd) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068750, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068750;

(ее) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH Р1-068752, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068752;

(ff) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-068754, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068754;

(gg) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E55A, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL Р1-068761_Е55А;

(hh) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_H100G, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_H100G;

(ii) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E56N, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E56N;

(jj) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E55A_E56N, и VL, содержащую VL CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3

VH P1-068761_E30D, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E30D;

(ll) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E30D_E55A, и VL, содержащую VL CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E30D_E55A;

(mm) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E56N_H100G, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E56N_H100G;

(nn) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E30D_H100G, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E30D_H100G;

(oo) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E30D_E56N, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E30D_E56N;

(pp) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E100fF;

(qq) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E55A_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_H100G_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E30D_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E56N_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E32Y, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E32Y;

(vv) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E32Y_E55A, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E32Y_E56N, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E30D_E32Y, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E32Y_H100G, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068761_E32Y_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_D52N_D102V, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_D52N, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_D52N;

(ccc) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_D52N_E55A, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E55A_D102V, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E55A_D102V;

(eee) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_D102V, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_D102V;

(fff) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E55A, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL Р1-068767_Е55А;

(ggg) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E30D_D52N, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1

- 19 042790

068767_E30D_D102V, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E30D_D102V;

(iii) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E30D, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E30D;

(jjj) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E30D_E55A, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E100fF_D102V, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E55A_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_D52N_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E100fF;

(ooo) VH, содержащую аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1068767_E30D_E100fF, и VL, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 VL P1-068767_E30D_E100fF.

В этом случае, в приведенной ниже таблице последовательностей представлены последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепи и последовательности полноразмерных тяжелой и легкой цепей перечисленных выше антител с константной областью тяжелой цепи IgG1.3 (если в таблице не указана другая константная область НС), а также указаны расположения их CDR1, CDR2 и CDR3 VH и CDR1, CDR2 и CDR3 VL по аминокислотному остатку путем выделения жирным шрифтом и подчеркивания CDR в каждой из последовательностей VH и VL. Так, например, CDR1 VH P1-061029 содержит аминокислоты 26-35 SEQ ID NO:67, тогда как CDR2 VH содержит аминокислоты 50-66 SEQ ID NO:67, a CDR3 VH содержит аминокислоты 99-110 SEQ ID NO:67 и т.д., аминокислоты которых в SEQ ID NO:67, представленной в таблице последовательностей, отмечены жирным шрифтом и подчеркнуты.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность VH любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антител. Отдельные последовательности VH у конкретных видов антител, представленных в настоящем описании, перечислены в таблице последовательностей. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность

VH Р1-061029 или Pl061015 или их клонов-потомков, таких как Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Р1-068761, Pl-068763, Pl-068765. Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773. Pl-068775, Pl069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067. Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl06876 l_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl06876 l_E30D_E55 A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF. Pl-06876 l_E55A_E100fF, Pl068761_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A. Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876l_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G, P1 -068761_E32Y_E100fF, P1-O68767_D52N_D1O2V, P1068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100£F_D102V, Pl-068767_E55A_E1001F, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит CDR1, CDR2 и CDR3 VH, содержащие аминокислотные последовательности CDR VH любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании, и содержит VH, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной VH любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной аминокислотной последовательности

VH Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Р1-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl068761_H100G, Pl-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl06876 l_E30D_E55A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl06876 l_E30D_E56N, P1-06876 l.ElOOfF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl068761_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876 l_E30D_E32Y, Pl-068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E1001F, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

- 20 042790

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность VH любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антител. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Р1-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771. Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073. Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl068761_H100G, Pl-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl068761_E30D_E55A, Pl-068761_E56N_H100G, P1-06876 l_E30D_H100G, Pl068761_E30D_E56N, P1-06876 l_E100fF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl068761_H100G_E100fF, Pl-06876 l_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-068761_E30D_E32Y, P1 -06876 1_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767 ElOOfF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность VL любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антител. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность

VL Pl061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как Pl-061029, Pl-068757, Pl068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769. Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065. Pl-069067, Pl-069069, Pl069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736. Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl068761_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl068761_E30D_H100G, Pl-068761_E30D_E56N, P1-06876 l_E1001E.Pl068761_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E100fF, Pl068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-068761_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl068767_D52N_D102V. Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A,Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A,Pl068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E1001E, Pl-068767_D52N_E1001E, Pl068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит CDR1, CDR2 и CDR3 VL, содержащие аминокислотные последовательности CDR VL любого из анти-hVISTA антител, представленных в настоящем описании, и содержит VL, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной VL любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной аминокислотной последовательности

VL Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Р1-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl069059, Pl-069061. Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069. Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-06876 l_E30D, Pl068761 _E30D_E55 A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl-06876 l_E30D_H100G, Pl06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl068761_H100G_E100fF, P1-06876 l_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-06876 l_E30D_E32Y, Pl-068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность VL любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антител. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как

- 21 042790

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736. Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742. Pl-068744, Pl068766, Pl-068748. Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl06876 1_E3OD_E55 A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl068761_H100G_E100fF, Pl-06876 l_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-068761_E30D_E32Y, Pl-068761_E32Y_H100G, P1-06876 l_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, P1-O68767_D52N_E55A. Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность VH любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании, и содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность VL любого из анти-hVISTA Ab, предоставленных в настоящем описании. В некоторых из этих вариантов осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759. Pl-068761, Р1-068763.

Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075. Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl06876 l_E30D_E55 A, P1-06876 l_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl

06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl-068761_E55A_E1001F, Pl06876 l_H100G_E100IE, Pl-068761_E30D_E1001F, Pl-068761_E56N_E100IE, Pl068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876l_E30D_E32Y, Pl-068761_E32Y_H100G, P1-06876 l_E32Y_E100fF, P1-O68767_D52N_D1O2V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF; и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-061029 или Р1-061015. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последова тельности

VH и VL Р1-061029 или Р1-061015, или их клоновпомков, таких как Р1-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Р1-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-06876l_E30D, Pl-06876l_E30D_E55A, Pl068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl-06876 l_E30D_E56N, Pl068761_E100fF, Pl-06876 l_E55A_E100fF, P1-06876 l_H100G_E100fF, Pl06876 l_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-068761_E30D_E32Y. Pl068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A. Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит CDR1, CDR2 и CDR3 VH, содержащие аминокислотные последовательности CDR VH любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA Ab, а также CDR1, CDR2 и CDR3 VL, содержащие аминокислотные последовательности CDR VL любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антител, а также содержат VH и VL, каждая из которых является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной соответствующим VH и VL любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит все 6 CDR анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем описании, а также содержит аминокислотные последовательности VH и VL, каждая из которых является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной соответствующим VH

- 22 042790 и VL анти-hVISTA Ab, таким как VH и VL Pl-061029 или Pl-061015 или их клоновпотомков, такие как Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763. Р1-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771. Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061. Pl069063, Pl-069065, Р1-069067, Pl-069069, Pl-069071, P1-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl06876 l_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl-068761_E30D_E56N, Pl06876 l_E100fF, Pl-068761_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl068761_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl06876 1_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-06876 l_E30D_E32Y, Pl06876 l_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N. Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V. Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_El00fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767 ElOOfF или Pl-068767 E30D ElOOfF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH и VL, содержащие аминокислотные последовательности VH и VL любого из представленных в настоящем описании анти-hVISTA антитела. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит VH и VL, каждая из которых содержит аминокислотную последовательность

VH и VL Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, таких как Pl-061029, Pl068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771,
Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, P1-06876 l_E30D_E55 A. P1-06876 l_E56N_H100G, Pl- 068761_E30D_H100G, Pl-068761_E30D_E56N, P1-06876 l_E100fF, Pl- 06876 1_E55A_E1 OOfF, Pl-068761 _H100G_El OOfF, Pl-06876 l_E30D_El OOfF, Pl068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A. P1-068761_E32Y_E56N. Pl-068761_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G, P1-06876 l_E32Y_E100fF, Pl068767_D52N_D102V, Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl- 068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A, Pl- 068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl-068767_D52N_E100fF, Pl- 068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E1001F. анти-hVISTA Ab может содержать: (a) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-061029,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-061029; (b) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-061015,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL Р1-061015; (c) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068757,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068757; (d) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068759,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068759; (e) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068761; (f) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068763,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068763; (g) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068765,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068765; (h) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068767,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068767; (i) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068769,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068769; (j) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068771,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VLP1-068771; (k) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068773,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL -068773; (l) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068775,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-068775; (m) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-069059,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-069059; (n) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-069061,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-069061; (о) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-069063,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-069063; (р) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-069065,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-069065; (q) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-069067,	и	VL, содержащую	ами-
нокислотную последовательность VL P1-069067;

- 23 042790 (r) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-069069, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-069069;

(s) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-069071, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-069071;

(t) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-069073, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-069073;

(u) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-069075, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-069075;

(v) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-069077, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-069077;

(w) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068736, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068736;

(х) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068738, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068738;

(у) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068740, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068740;

(z) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068742, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068742;

(аа) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068744, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068744;

(bb) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH f Р1-068746, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068746;

(cc) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068748, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068748;

(dd) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068750, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068750;

(ее) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068752, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068752;

(ff) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068754, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068754;

(gg) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068761_Е55А, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-068761_Е55А;

(hh) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-O68761_H1OOG, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068761_H100G;

(ii) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E56N, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VLP1-068761_E56N;

(jj) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E55A_E56N, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068761_E30D;

(ll) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E3OD_E55A, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068761_E30D_E55A;

(mm) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E56N_H1OOG и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D_H100G, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D_E56N, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-О68761_Е1ОО{Р, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068761_E100fF;

(qq) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E55A_E1OO£F, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-О68761_Е55А_Е1ОО{Е;

(rr) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068761_Ш00G_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Ρ1-Ο68761_Ε56Ν_Ε1ΟΟ1Ε, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Ρ1-Ο68761_Ε56Ν_Ε1ΟΟ{Ε;

(uu) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E32Y, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068761_E32Y;

(vv) VH, включающий аминокислотную последовательность VH P1-068761_E32Y_E55A и VL, включающий аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E32Y_E55A;

- 24 042790 (ww) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E32Y_E56N, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068761_E32Y_E56N;

(хх) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D_E32Y, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E32Y_H1OOG, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068761_E32Y_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL Р1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-O68767_D52N_D1O2V, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_D52N, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_D52N;

(ccc) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_D52N_E55A и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E55A_D102V, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E55A_D102V;

(eee) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_D102V, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_D102V;

(fff) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-068767_Е55А, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E55A;

(ggg) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D_D52N, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D_D102V, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E30D_D102V;

(iii) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E30D;

(jjj) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D_E55A и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E100fF_D102V, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E55A_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_D52N_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E100fF; или (ooo) VH, содержащую аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D_E100fF, и VL, содержащую аминокислотную последовательность VL P1-068767_E30D_E100fF.

Анти-hVISTA Ab может содержать:

(a) VH, содержащую CDR VH P1-061029, и VL, содержащую CDR VL P1-061029, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-061029;

(b) VH, содержащую CDR VH P1-061015, и VL, содержащую CDR VL P1-061015, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-061015;

(c) VH, содержащую CDR VH P1-068757, и VL, содержащую CDR VL P1-068757, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068757;

(d) VH, содержащую CDR VH P1-068759, и VL, содержащую CDR VL P1-068759, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068759;

(e) VH, содержащую CDR VH P1-068761, и VL, содержащую CDR VL P1-068761, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей

- 25 042790 мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761;

(f) VH, содержащую CDR VH P1-068763, и VL, содержащую CDR VL P1-068763, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068763;

(g) VH, содержащую CDR VH P1-068765, и VL, содержащую CDR VL P1-068765, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068765;

(h) VH, содержащую CDR VH P1-068767, и VL, содержащую CDR VL P1-068767, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767;

(i) VH, содержащую CDR VH P1-068769, и VL, содержащую CDR VL P1-068769, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068769;

(j) VH, содержащую CDR VH P1-068771, и VL, содержащую CDR VL P1-068771, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068771;

(k) VH, содержащую CDR VH P1-068773, и VL, содержащую CDR VL P1-068773, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068773;

(l) VH, содержащую CDR VH P1-068775, и VL, содержащую CDR VL P1-068775, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068775;

(m) VH, содержащую CDR VH P1-069059, и VL, содержащую CDR VL P1-069059, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069059;

(n) VH, содержащую CDR VH P1-069061, и VL, содержащую CDR VL P1-069061, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069061;

(о) VH, содержащую CDR VH P1-069063, и VL, содержащую CDR VL P1-069063, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069063;

(р) VH, содержащую CDR VH P1-069065, и VL, содержащую CDR VL P1-069065, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069065;

(q) VH, содержащую CDR VH P1-069067, и VL, содержащую CDR VL P1-069067, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069067;

- 26 042790 (r) VH, содержащую CDR VH P1-069069, и VL, содержащую CDR VL P1-069069, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069069;

(s) VH, содержащую CDR VH P1-069071, и VL, содержащую CDR VL P1-069071, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069071;

(t) VH, содержащую CDR VH P1-069073, и VL, содержащую CDR VL P1-069073, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069073;

(u) VH, содержащую CDR VH P1-069075, и VL, содержащую CDR VL P1-069075, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069075;

(v) VH, содержащую CDR VH P1-069077, и VL, содержащую CDR VL P1-069077, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-069077;

(w) VH, содержащую CDR VH P1-068736, и VL, содержащую CDR VL P1-068736, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068736;

(х) VH, содержащую CDR VH P1-068738, и VL, содержащую CDR VL P1-068738, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL Р1-068738;

(у) VH, содержащую CDR VH P1-068740, и VL, содержащую CDR VL P1-068740, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068740;

(z) VH, содержащую CDR VH P1-068742, и VL, содержащую CDR VL P1-068742, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068742;

(аа) VH, содержащую CDR VH P1-068744, и VL, содержащую CDR VL P1-068744, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068744;

(bb) VH, содержащую CDR VH P1-068746, и VL, содержащую CDR VL P1-068746, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068746;

(cc) VH, содержащую CDR VH P1-068748, и VL, содержащую CDR VL P1-068748, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068748;

(dd) VH, содержащую CDR VH P1-068750, и VL, содержащую CDR VL P1-068750, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по

- 27 042790 меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068750;

(ее) VH, содержащую CDR VH P1-068752, и VL, содержащую CDR VL P1-068752, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068752;

(ff) VH, содержащую CDR VH P1-068754, и VL, содержащую CDR VL P1-068754, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068754;

(gg) VH, содержащую CDR VH Р1-068761_Е55А, и VL, содержащую CDR VL Р1-О68761_Е55А, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL Р1-068761_Е55А;

(hh) VH, содержащую CDR VH P1-068761_H100G, и VL, содержащую CDR VL P1-068761_H100G, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68761_H1OOG;

(ii) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E56N, и VL, содержащую CDR VL P1-O68761_E56N, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68761_E56N;

(jj) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E55A_E56N и VL, содержащую CDR VL P1068761_E55A_E56N, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E55A_E56N;

(kk) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E30D, и VL, содержащую CDR VL P1-068761_E30D, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68761_E3OD;

(ll) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E30D_E55A и VL, содержащую CDR VL P1068761_E30D_E55A, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E30D_E55A;

(mm) VH, содержащую VH CDR VH P1-068761_E56N_H100G и VL, содержащую VL CDR P1068761_E56N_H100G, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E56N_H100G;

(nn) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E30D_H100G и VL, содержащую CDR VL P1068761_E30D_H100G, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E30D_H100G;

(оо) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E30D_E56N и VL, содержащую CDR VL P1068761_E30D_E56N, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E30D_E56N;

(рр) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E100fF, и VL, содержащую CDR VL P1-068761_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%

- 28 042790 идентичными VH и VL P1-068761_E100fF;

(qq) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E55A_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068761_E55A_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) VH, содержащую CDR VH P1-068761_H100G_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068761_H100G_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E30D_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068761_E30D_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E56N_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068761_E56N_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E32Y, и VL, содержащую CDR VL P1-068761_E32Y, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68761_E32Y;

(vv) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E32Y_E55A и VL, содержащую CDR VL P1068761_E32Y_E55A, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E32Y_E56N, и VL, содержащую CDR VL P1068761_E32Y_E56N, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E32Y_E56N;

(хх) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E30D_E32Y и VL, содержащую CDR VL P1068761_E30D_E32Y, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E30D_E32Y;

(уу) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E32Y_H100G и VL, содержащую CDR VL P1068761_E32Y_H100G, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) VH, содержащую CDR VH P1-068761_E32Y_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068761_E32Y_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа) VH, содержащую CDR VH P1-068767_D52N_D102V и VL, содержащую CDR VL P1068767_D52N_D102V, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) VH, содержащую CDR VH P1-068767_D52N, и VL, содержащую CDR VL P1-068767_D52N, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68767_D52N;

(ссс) VH, содержащую CDR VH P1-068767_D52N_E55A и VL, содержащую CDR VL P1

- 29 042790

068767_D52N_E55A, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E55A_D102V и VL, содержащую CDR VL P1068767_E55A_D102V, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E55A_D102V;

(еее) VH, содержащую CDR VH P1-068767_D102V, и VL, содержащую CDR VL P1-068767_D102V, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68767_D1O2V;

(fff) VH, содержащую CDR VH P1-068767E55A, и VL, содержащую CDR VL P1-068767_E55A, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL Р1-068767_Е55А;

(ggg) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E30D_D52N и VL, содержащую CDR VL P1068767_E30D_D52N, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E30D_D102V и VL, содержащую CDR VL P1068767_E30D_D102V, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E30D_D102V;

(iii) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E30D, и VL, содержащую CDR VL P1-068767_E30D, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-O68767_E3OD;

(jjj) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E30D_E55A и VL, содержащую CDR VL P1068767_E30D_E55A, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E100fF_D102V и VL, содержащую CDR VL P1068767_E100fF_D102V, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E55A_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068767_E55A_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) VH, содержащую CDR VH P1-068767_D52N_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068767_D52N_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E100fF, и VL, содержащую CDR VL P1-068767_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL Р1-068767_E100fF; или (ooo) VH, содержащую CDR VH P1-068767_E30D_E100fF и VL, содержащую CDR VL P1068767_E30D_E100fF, и аминокислотные последовательности VH и VL, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере

- 30 042790

94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными VH и VL P1-068767_E30D_E100fF.

Анти-hVISTA Ab может содержать:

(a) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-061029, и VL, состоящую из VL P1-061029;

(b) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-061015, и VL, состоящую из VL P1-061015;

(c) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068757, и VL, состоящую из VL P1-068757;

(d) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068759, и VL, состоящую из VL P1-068759;

(e) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761, и VL, состоящую из VL P1-068761;

(f) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068763, и VL, состоящую из VL P1-068763;

(g) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068765, и VL, состоящую из VL P1-068765;

(h) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767, и VL, состоящую из VL P1-068767;

(i) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068769, и VL, состоящую из VL P1-068769;

(j) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068771, и VL, состоящую из VL P1-068771;

(k) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068773, и VL, состоящую из VL P1-068773;

(1) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068775, и VL, состоящую из VL P1-068775;

(m) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-069059, и VL, состоящую из VL P1-069059;

(n) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-069061, и VL, состоящую из VL P1-069061;

(о) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-069063, и VL, состоящую из VL P1-069063;

(р) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-069065, и VL, состоящую из VL P1-069065;

(q) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-069067, и VL, состоящую из VL P1-069067;

(r) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-069069, и VL, состоящую из VL P1-069069;

(s) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-069071, и VL, состоящую из VL P1-069071;

(t) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-069073, и VL, состоящую из VL P1-069073;

(u) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-069075, и VL, состоящую из VL P1-069075;

(v) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-069077, и VL, состоящую из VL P1-069077;

(w) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068736, и VL, состоящую из VL P1-068736;

(х) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068738, и VL, состоящую из VL P1-068738;

(у) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068740, и VL, состоящую из VL P1-068740;

(z) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068742, и VL, состоящую из VL P1-068742;

(аа) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068744, и VL, состоящую из VL P1-068744;

(bb) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH f PI-068746, и VL, состоящей из VL P1-068746;

(cc) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068748, и VL, состоящую из VL P1-068748;

(dd) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068750, и VL, состоящую из

- 31 042790

VL P1-068750;

(ее) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068752, и VL, состоящую из VL P1-068752;

(ff) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068754, и VL, состоящую из VL P1-068754;

(gg) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068761_Е55А, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL Р1-068761_Е55А;

(hh) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68761_H1OOG, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_H100G;

(ii) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E56N, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E56N;

(jj) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E55A_E56N, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E55A_E56N;

(kk) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E30D, и VL, состоящую из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E30D;

(ll) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E30D_E55A, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E56N_H1OOG, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E30D_H100G, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E3OD_E56N, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E30D_E56N;

(рр) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL Р1-068761_E100fF;

(qq) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068761_E55A_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_H100G_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068761_E30D_E100fF, и VL, состоящую из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E56N_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL Р1-068761_E56N_E100fF;

(uu) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E32Y, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E32Y;

(vv) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E32Y_E55A, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E32Y_E56N, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E3OD_E32Y, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068761_E30D_E32Y;

(уу) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068761_E32Y_H100G, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068761_E32Y_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL Р1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_D52N_D102V, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68767_D52N, и VL, состоящую из аминокислотной последовательности VL P1-068767_D52N;

(ссс ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_D52N_E55A, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68767_E55A_D1O2V, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_D102V, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_D1O2V;

(fff ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH Р1-068767_Е55А, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL Р1-068767_Е55А;

(ggg ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-O68767_E3OD_D52N, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E30D_D102V, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii ) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E30D, и VL, состоящей

- 32 042790 из аминокислотной последовательности VL P1-068767_E30D;

(jjj) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E30DE55A, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E100fF_D102V, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E55A_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_D52N_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E100fF, и VL, состоящую из аминокислотной последовательности VL P1-068767_E100fF; или (ooo) VH, состоящую из аминокислотной последовательности VH P1-068767_E30D_E100fF, и VL, состоящей из аминокислотной последовательности VL P1-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA Ab содержит любую из вариабельных областей и/или CDR 1-3 вариабельных областей антител, описанных выше и в других местах в настоящем описа нии, такие как:

(1) одна или более CDR1, CDR2 и CDR3 VH;

(2) CDR1, CDR2 и CDR3 VH;

(3) VH;

(4) одна или более CDR1, CDR2 и CDR3 VH и одна или более CDR1, CDR2 и CDR3 VL;

(5) CDR1, CDR2 и CDR3 VH и CDR1, CDR2 и CDR3 VL или (6) VH и VL:

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Р1-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl068750, Pl-068752 Pl-068754, P1-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-06876 l_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G. Pl-068761_E3OD_E56N, Pl068761_E1001F. Pl-06876 l_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E1001F, Pl06876 l_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl06876 1_E32Y_E55 A, P1-068761_E32Y_E56N, Pl-06876 l_E30D_E32Y, Pl068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V, Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A. Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF; и анти-VISTA Ab также является антителом IgG, таким как антитело IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, или его модифицированной формой, как описано в разделе ниже. В некоторых вариантах осуществления константная область имеет эффекторную функцию, и в некоторых вариантах осуществления константная область не обладает эффекторной функцией. В некоторых вариантах осуществления константная область представляет собой область IgG1.3.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA Ab содержит любую из вариабельных областей и/или CDR 1-3 вариабельных областей антител, описанных выше и в других местах в настоящем описа нии, такие как:

(1) одна или более из VH CDR1, CDR2 и CDR3;

(2) CDR1, CDR2 и CDR3 VH;

(3) VH;

(4) одна или более из CDR1, CDR2 и CDR3 VH и одна или более из CDR1, CDR2 и CDR3 VL;

(5) CDR1, CDR2 и CDR3 VH и CDR1, CDR2 и CDR3 VL или (6) VH и VL:

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759. Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Р1-068767.

Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775. Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl068750, Pl-068752 Pl-068754, P1-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N,

Pl-068761_E55A_E56N, Pl-06876 l_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, Pl068761_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, Pl-068761_E3OD_E56N,Pl068761_E100fF, Pl-06876 l_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF,Pl06876 l_E30D_E100fF, Pl-068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y,Pl068761_E32Y_E55 A. Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-06876 l_E30D_E32Y.Pl068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl-068767_D52N_D102V,Pl068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl-068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl-068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl068767_E30D_E55A, Pl-068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl068767_D52N_E100fF, Pl-068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF, и дополнительно содержит одну или более из следующих характеристик:

специфическое связывание с hVISTA, например богатой гистидином областью ECD или полипептидом, содержащим аминокислотные остатки 35-127 SEQ ID NO:2, при кислом рН, например рН 6,0 или рН 6,5;

- 33 042790 отсутствие значимого связывания с hVISTA, например богатой гистидином областью ECD или полипептидом, содержащим аминокислотные остатки 35-127 SEQ ID NO:2, при физиологическом рН или нейтральном рН, например, рН 7,4 или рН 7,0;

специфическое связывание с cynoVISTA (VISTA яванского макака), например богатой гистидином областью ECD, при кислом рН, например, 6,0 или 6,5;

отсутствие значимого связывания с cynoVISTA, например богатой гистидином областью ECD, при физиологическом рН или нейтральном рН, например, 7,4 или 7,0;

сниженное связыванием с hVISTA-ECD, содержащим замену одной или более из следующих аминокислот: Т35, Y37, K38, Т39, Y41, R54, Т61, F62, Q63, L65, Н66, L67, Н68, Н69, F97, L115, V117, I119, Н121, Н122, S124, Е125, R127, относительно ECD hVISTA с SEQ ID NO:2;

перекрестная конкуренция за связывание с hVISTA с P1-061029, P1-068761, Р1-068767 и/или Р1061015;

ингибирование связывания hVISTA с Т-клетками человека при кислом рН, например 6,0 или 6,5; ингибирование связывания hVISTA с PSGL-1 при кислом рН, например 6,0 или 6,5;

среднее время пребывания в организме яванского макака не менее 350 ч; стимулирование активации Т-клеток;

ингибирование VISTA-опосредованной межклеточной адгезии и специфическое связывание с hVISTA в образцах опухолевых клеток человека или в образцах воспаленной ткани человека.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит тяжелую цепь (НС), содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи любого из анти-hVISTA антител, представленных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи Р1-061029 или Р1-061015 или их клонов-потомков, как показано ниже в таблице последовательностей, содержащих константную область тяжелой цепи IgG1.3, таких как

Pl-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO:69), Pl-068757.IgG1.3, Pl068759.IgG1.3, Pl-068761.IgG1.3, Pl-068763.IgG 1.3, Pl-068765.IgG1.3, Pl-068767.IgG1.3, Pl-068769.IgG1.3, Pl-068771.IgG1.3. Pl-068773.IgG1.3, Pl-068775.IgG 1.3, PlO69O59.IgG1.3, Pl-069061.IgG1.3, Pl-069063.IgG 1.3, Pl-069065.IgG1.3, Pl-069067.IgG1.3, Pl-069069.IgG 1.3, Pl-069071.IgG1.3, Pl-069073.IgG1.3. Pl-069075.IgG 1.3, Pl069077. IgG 1.3, Pl-061015.IgG1.3, Pl-068736.IgG1.3, Pl-068738.IgG1.3, Pl-068740.IgG1.3, Pl-068742.IgG1.3, Pl-068744.IgG1.3. Pl-068766.IgG1.3, Pl-068748.IgG 1.3, PlO6875O.IgG1.3, Pl-068752.IgG1.3. Pl-068754.IgG1.3, Pl-068761_E55A.IgG1.3, Pl068761_H100G.IgG1.3. Pl-068761_E56N.IgG1.3, Pl-068761_E55A_E56N.IgG1.3, Pl06876 l_E30D.IgG 1.3, Pl-068761_E30D_E55A.IgG1.3, Pl-068761_E56N_H100G.IgG1.3, Pl-068761_E30D_H100G.IgG1.3, Pl-068761_E30D_E56N.IgG1.3, Pl068761_E100fF.IgG1.3, Pl-068761_E55A_E100fF.IgG1.3,Pl068761_H100G_E100fF.IgG1.3. Pl-068761_E30D_E100fF.IgG1.3,Pl068761_E56N_E100fF.IgG1.3, Pl-068761_E32Y.IgG1.3, Pl-06876 l_E32Y_E55A.IgG 1.3, Pl-068761_E32Y_E56N.IgG1.3, Pl-06876 l_E30D_E32Y.IgG1.3,Pl068761_E32Y_H100G.IgG1.3, Pl-06876l_E32Y_E100fF.IgG1.3,Pl068767_D52N_D102V.IgGl .3, Pl-068767_D52N.IgGl .3, Pl-068767_D52N_E55A.IgGl .3, Pl-068767_E55A_D102V.IgG1.3, Pl-068767_D102V.IgG1.3, Pl-068767_E55A.IgG1.3, Pl068767_E30D_D52N.IgG1.3, Pl-068767_E30D_D102V.IgG1.3, Pl-068767_E30D.IgG1.3, Pl-068767_E30D_E55A.IgG1.3, Pl-068767_E100fF_D102V.IgG1.3, Pl068767_E55A_E100fF.IgG1.3, Pl-068767_D52N_E100fF.IgG1.3, Pl-068767_E100fF.IgG1.3 или Pl-068767_E30D_E100fF.IgG1.3.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи любого из анти-hVISTA антител, представленных в настоящем описании, которые содержат константную область тяжелой цепи IgG1.3, и аминокислотную последовательность легкой цепи любого из анти-hVISTA Ab, представленных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность VH Р1-061029 или Р1-061015, или их клонов-потомков, которые содержат константную область

- 34 042790

HC IgG1.3, таких как Pl-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO:69), Pl-068757.IgG1.3, Pl-068759.IgG1.3, Pl-O68761.IgG1.3, Pl-068763.IgG1.3, Pl068765.IgG 1.3. Pl-068767.IgG1.3, Pl-068769.IgG1.3, Pl-068771.IgG1.3, Pl-068773.IgG1.3, Pl-068775.IgG1.3, Pl-069059.IgG1.3, Pl-069061.IgG1.3, Pl-069063.IgG1.3, Pl069065.IgG 1.3. Pl-069067.IgG1.3, Pl-069069.IgG1.3, Pl-069071.IgG1.3, Pl-069073.IgG1.3, Pl-069075.IgG1.3, Pl-069077.IgG1.3, Pl-O61O15.IgG1.3, Pl-O68736.IgG1.3, Pl06873 8.IgG 1.3. Pl-068740.IgG1.3, Pl-068742.IgG1.3, Pl-068744.IgG1.3, Pl-O68766.IgG1.3, Pl-068748.IgG1.3, Pl-068750.IgG1.3, Pl-O68752.IgG1.3, Pl-068754.IgG1.3, Pl06876 l_E55A.IgG1.3, Pl-068761_H100G.IgG1.3, Pl-06876 l_E56N.IgG1.3, Pl068761_E55A_E56N.IgG1.3, P1-06876 l_E30D.IgG 1.3, Pl-06876l_E30D_E55A.IgG1.3, Pl068761_E56N_H100G.IgG1.3, Pl-068761_E30D_H100G.IgG1.3, Pl068761_E30D_E56N.IgG1.3, Pl-06876 l_E100fF.IgG1.3, Pl-068761_E55A_E100fF.IgG1.3, Pl-068761_H100G_E100fF.IgG1.3, Pl-068761_E30D_E100fF.IgG1.3,Pl068761_E56N_E100fF.IgG1.3, Pl-06876 l_E32Y.IgG1.3, Pl-068761_E32Y_E55A.IgG1.3, Pl-06876 l_E32Y_E56N.IgG1.3, Pl-06876 l_E30D_E32Y.IgG1.3,Pl068761_E32Y_H100G.IgG1.3, Pl-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3,Pl068767_D52N_D102V.IgG1.3, Pl-068767_D52N.IgG1.3, Pl-068767_D52N_E55A.IgG1.3, Pl-068767_E55A_D102V.IgG1.3, Pl-068767_D102V.IgG1.3. Pl-068767_E55A.IgG1.3, Pl068767_E30D_D52N.IgG1.3, Pl-068767_E30D_D102V.IgG1.3, Pl-068767_E30D.IgG1.3, Pl-068767_E30D_E55A.IgGl .3, Pl-068767_E100fF_D102V.TgGl .3, P1068767_E55A_E100fF.IgG1.3, Pl-068767_D52N_E100fF.IgG1.3, Pl-068767_E100fF.IgG1.3 или Pl-068767_E30D_E100fF.IgG1.3;

и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061029 или Pl061015.

Анти-hVISTA Ab может содержать:

(а) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1061029.IgG1.3 (SEQ ID NO:69), и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

(b) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1061015.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1061015;

(c) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068757.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068757;

(d) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068759.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068759;

(e) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068761;

(f) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068763.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068763;

(g) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068765.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068765;

(h) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068767;

(i) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068769.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068769;

(j) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068771.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068771;

(k) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068773.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068773;

(l) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068775.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068775;

(m) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069059.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069059;

(n) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069061.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069061;

(о) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1

- 35 042790

069063.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Pl069063;

(р) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069065.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069065;

(q) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069067.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069067;

(r) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069069.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069069;

(s) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069071.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069071;

(t) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069073.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069073;

(u) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069075.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069075;

(v) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1069077.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1069077;

(w) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068736.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068736;

(х) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068738.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068738;

(у) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068740.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068740;

(z) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068742.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068742;

(аа) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068744.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068744;

(bb) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1-068746.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068746;

(cc) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068748.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068748;

(dd) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068750.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068750;

(ее) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068752.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068752;

(ff) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068754.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068754;

(gg) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_H100G.IgG1.3 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1068761_H100G;

(ii) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068761_E56N;

- 36 042790 (jj) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E55A_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E30D.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068761_E30D;

(ll) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E30D_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E56N_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E56N_H100G;

(nn) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E30D_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E30D_H100G;

(оо) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E30D_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E55A_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E55A_E100fF;

(rr) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_H100G_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E30D_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E56N_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E56N_E100fF;

(uu) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E32Y.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E32Y_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E32Y_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E30D_E32Y.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E32Y_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068761_E32Y_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_D52N_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D52N_D102V;

(bbb ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_D52N.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1068767_D52N;

(ссс ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_D52N_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D52N_E55A;

(ddd ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E55A_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой

- 37 042790 цепи P1-068767_E55A_D102V;

(еее ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D102V;

(fff ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1068767_Е55А;

(ggg ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E30D_D52N.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D_D52N;

(hhh ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E30D_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D_D102V;

(iii ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E30D.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1068767_E30D;

(jjj ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E30D_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D_E55A;

(kkk ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E100fF_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E100fF_D102V;

(lll ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E55A_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_D52N_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E100fF; или (ооо ) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи P1068767_E30D_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D_E100fF.

Анти-hVISTA Ab может содержать:

(a) тяжелую цепь (НС), содержащую CDR НС Р1-061029, и легкую цепь (LC), содержащую CDR LC P1-061029, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-061029.IgG1.3, соответственно;

(b) НС, содержащую CDR НС Р1-061015, и LC, содержащую CDR LC P1-061015, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-061015.IgG1.3, соответственно;

(c) НС, содержащую CDR НС Р1-068757, и LC, содержащую CDR LC P1-068757, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068757.IgG1.3, соответственно;

(d) НС, содержащую CDR НС Р1-068759, и LC, содержащую CDR LC P1-068759, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068759.IgG1.3, соответственно;

(e) НС, содержащую CDR НС Р1-068761, и LC, содержащую CDR LC P1-068761, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761.IgG1.3, соответственно;

(f) НС, содержащую CDR НС Р1-068763, и LC, содержащую CDR LC P1-068763, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по

- 38 042790 меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068763.IgG1.3, соответственно;

(g) НС, содержащую CDR НС Р1-068765, и LC, содержащую CDR LC P1-068765, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-068765.IgG1.3, соответственно;

(h) НС, содержащую CDR НС Р1-068767, и LC, содержащую CDR LC P1-068767, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767.IgG1.3, соответственно;

(i) НС, содержащую CDR НС Р1-068769, и LC, содержащую CDR LC P1-068769, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068769.IgG1.3, соответственно;

(j) НС, содержащую CDR НС Р1-068771, и LC, содержащую CDR LC P1-068771, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068771.IgG1.3, соответственно;

(k) НС, содержащую CDR НС Р1-068773, и LC, содержащую CDR LC P1-068773, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068773.IgG1.3, соответственно;

(l) НС, содержащую CDR НС Р1-068775, и LC, содержащую CDR LC P1-068775, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068775.IgG1.3, соответственно;

(m) НС, содержащую CDR НС Р1-069059, и LC, содержащую CDR LC P1-069059, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069059.IgG1.3, соответственно;

(n) НС, содержащую CDR НС Р1-069061, и LC, содержащую CDR LC P1-069061, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере

90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-069061.IgG1.3, соответственно;

(о) НС, содержащую CDR НС Р1-069063, и LC, содержащую CDR LC P1-069063, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069063.IgG1.3, соответственно;

(р) НС, содержащую CDR НС Р1-069065, и LC, содержащую CDR LC P1-069065, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069065.IgG1.3, соответственно;

(q) НС, содержащую CDR НС Р1-069067, и LC, содержащую CDR LC P1-069067, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069067.IgG1.3, соответственно;

(r) НС, содержащую CDR НС Р1-069069, и LC, содержащую CDR LC P1-069069, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей

- 39 042790 мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069069.IgG1.3, соответственно;

(s) НС, содержащую CDR НС Р1-069071, и LC, содержащую CDR LC P1-069071, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069071.IgG1.3, соответственно;

(t) НС, содержащую CDR НС Р1-069073, и LC, содержащую CDR LC P1-069073, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069073.IgG1.3, соответственно;

(u) НС, содержащую CDR НС Р1-069075, и LC, содержащую CDR LC P1-069075, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069075.IgG1.3, соответственно;

(v) НС, содержащую CDR НС Р1-069077, и LC, содержащую CDR LC P1-069077, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-069077.IgG1.3, соответственно;

(w) НС, содержащую CDR НС Р1-068736, и LC, содержащую CDR LC P1-068736, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068736.IgG1.3, соответственно;

(х) НС, содержащую CDR НС Р1-068738, и LC, содержащую CDR LC P1-068738, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068738.IgG1.3, соответственно;

(у) НС, содержащую CDR НС Р1-068740, и LC, содержащую CDR LC P1-068740, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068740.IgG1.3, соответственно;

(z) НС, содержащую CDR НС Р1-068742, и LC, содержащую CDR LC P1-068742, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068742.IgG1.3, соответственно;

(аа) НС, содержащую CDR НС Р1-068744, и LC, содержащую CDR LC P1-068744, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068744.IgG1.3, соответственно;

(bb) НС, содержащую CDR НС Р1-068746, и LC, содержащую CDR LC P1-068746, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068746.IgG1.3, соответственно;

(cc) НС, содержащую CDR НС Р1-068748, и LC, содержащую CDR LC P1-068748, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068748.IgG1.3, соответственно;

(dd) НС, содержащую CDR НС Р1-068750, и LC, содержащую CDR LC P1-068750, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и

- 40 042790

LC P1-068750.IgG1.3, соответственно;

(ее) НС, содержащую CDR НС Р1-068752, и LC, содержащую CDR LC P1-068752, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068752.IgG1.3, соответственно;

(ff) НС, содержащую CDR НС Р1-068754, и LC, содержащую CDR LC P1-068754, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068754.IgG1.3, соответственно;

(gg) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E55A.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E55A, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-068761_E55A.IgG1.3, соответственно;

(hh) НС, содержащую CDR НС P1-068761_H100G.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_H100G, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_H100G.IgG1.3, соответственно;

(ii) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E56N.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E56N, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-068761_E56N.IgG1.3, соответственно;

(jj) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E55A_E56N, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3, соответственно;

(kk) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E30D.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E30D, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-068761_E30D.IgG1.3, соответственно;

(ll) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E30D_E55A, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3, соответственно;

(mm) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E56N_H100G, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3, соответственно;

(nn) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E30D_H100G, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3, соответственно;

(оо) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E30D_E56N, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3, соответственно;

(рр) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E100fF.IgG1.3, соответственно;

- 41 042790 (qq) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E55A_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(rr) НС, содержащую CDR НС P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_H100G_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(ss) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E30D_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(tt) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E56N_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(uu) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E32Y.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E32Y, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E32Y.IgG1.3, соответственно;

(vv) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E32YE55A, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3, соответственно;

(ww) НС, содержащую CDR HC P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E32Y_E56N, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3, соответственно;

(хх) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E30D_E32Y, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3, соответственно;

(уу) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E32Y_H100GIgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E32Y_H100G, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3, соответственно;

(zz) НС, содержащую CDR НС P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068761_E32Y_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(ааа) НС, содержащую CDR НС P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_D52N_D102V, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3, соответственно;

(bbb) НС, содержащую CDR НС P1-068767_D52N.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_D52N, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-068767_D52N.IgG1.3, соответственно;

(ссс) НС, содержащую CDR HC P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_D52N_E55A, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей

- 42 042790 мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3, соответственно;

(ddd) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E55A_D102V, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3, соответственно;

(еее) НС, содержащую CDR НС P1-068767_D102V.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_D102V, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_D102V.IgG1.3, соответственно;

(fff) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E55A.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767E55A, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC Р1-068767Е55 A.IgG1.3, соответственно;

(ggg) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E30D_D52N, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3, соответственно;

(hhh) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E30D_D102V, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3, соответственно;

(iii) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E30D.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E30D, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E30D.IgG1.3, соответственно;

(jjj) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E30D_E55A, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3, соответственно;

(kkk) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E100fF_D102V, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3, соответственно;

(lll) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E55A_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(mmm) НС, содержащую CDR НС P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_D52N_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3, соответственно;

(nnn) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E100fF.IgG1.3, соответственно; или (ооо) НС, содержащую CDR НС P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3, и LC, содержащую CDR LC P1068767_E30D_E100fF, и аминокислотные последовательности НС и LC, которые являются на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по

- 43 042790 меньшей мере 99% идентичными НС и LC P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3, соответственно.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать:

(a) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1061029.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1061029;

(b) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1061015.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1061015;

(c) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068757.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068757;

(d) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068759.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068759;

(e) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068761;

(f) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068763.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068763;

(g) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068765.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068765;

(h) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068767;

(i) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068769.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068769;

(j) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068771.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068771;

(k) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068773.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068773;

(l) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068775.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068775;

(m) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи Р1069059.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069059;

(n) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069061.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069061;

(о) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069063.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069063;

(р) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069065.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069065;

(q) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069067.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069067;

(r) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069069.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069069;

(s) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069071.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069071;

(t) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069073.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069073;

- 44 042790 (u) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069075.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069075;

(v) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1069077.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1069077;

(w) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи Р1-068736, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068738.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068738;

(у) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068740.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068740;

(z) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068742.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068744.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068744;

(bb) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068746.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068746;

(cc) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068748.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068748;

(dd) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068750.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068750;

(ее) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068752.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068752;

(ff) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи Р1-068754, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_H100G;

(ii) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E55A_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E30D.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1068761_E30D;

(ll) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E30D_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E30D_E55A;

(mm) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E56N_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E56N_H100G;

(nn) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E30D_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E30D_H100G;

(оо) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E30D_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1

- 45 042790

068761_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E55A_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_H100G_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E30D_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E56N_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E32Y.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E32Y_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E32Y_E56N.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E30D_E32Y.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E32Y_H100G.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068761_E32Y_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_D52N_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D52N_D102V;

(bbb ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_D52N.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D52N;

(ссс ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_D52N_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D52N_E55A;

(ddd ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E55A_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E55A_D102V;

(еее ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D102V;

(fff ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1068767_Е55А;

(ggg ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E30D_D52N.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E30D_D52N;

(hhh ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E30D_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E30D_D102V;

(iii ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E30D.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1068767_E30D;

(jjj ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E30D_E55A.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E30D_E55A;

- 46 042790 (kkk ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E100fF_D102V.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E100fF_D102V;

(lll ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E55A_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_D52N_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E100fF; или (ооо ) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи P1068767_E30D_E100fF.IgG1.3, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к анти-VISTA mAb, содержащим: тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи из указанных выше (а)-(ооо), за которой следует остаток Lys; и легк ую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи из указанных выше (а)-(ооо);

причем аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи выбраны из одного и того же вида антитела из перечисленных выше (а)-(ооо).

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать аминокислотную последовательность тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность VH раскрытых в настоящем описании видов антител, но не константную область тяжелой цепи IgG1.3, как предусмотрено в последовательностях НС в приведенной в настоящем описании таблице последовательностей (и см. SEQ ID NO:163), при этом антитело может содержать другую последовательность константной области тяжелой цепи, такую как константная область человеческого IgG1 дикого типа, такая как аллотип f человеческого IgG1 (IgG1f) (SEQ ID NO:182), или модифицированную константную область человеческого IgG1, такую как IgG1.If (SEQ ID NO:183), или модифицированную константную область человеческого IgG1, такую как IgG1.P238K (SEQ ID NO:184). Соответственно, варианты осуществления настоящего изобретения включают анти-VISTA Ab, содержащие:

(а) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-061029 (SEQ ID NO:67) и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

(b) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-061015 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061015;

(c) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068757 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068757;

(d) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068759 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1- 068759;

(e) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761;

(f) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068763 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068763;

(g) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068765 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068765;

(h) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767;

(i) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068769 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068769;

(j) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068771 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068771;

- 47 042790 (k) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068773 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068773;

(l) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068775 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068775;

(m) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069059 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069059;

(n) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069061 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069061;

(о) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069063 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069063;

(р) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069065 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1- 069065;

(q) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069067 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069067;

(r) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069069 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069069;

(s) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-

069071 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069071;

(t) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069073 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069073;

(u) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069075 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069075;

(v) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069077 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069077;

(w) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068736 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068738 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068738;

(у) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068740 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068740;

(z) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068742 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068744 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068744;

(bb) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи Р1-068746 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068746;

(cc) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068748 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068748;

(dd) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068750 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068750;

(ее) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068752 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную после

- 48 042790 довательность легкой цепи Р1-068752;

(ff) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068754 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068761_Е55А и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_H100G;

(ii) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E55A_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E30D;

(ll) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E56N_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068761_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E55A_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E55A_E100fF;

(rr) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_H100G_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E30D_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E56N_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E56N_E100fF;

(uu) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_E32Y и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E32Y_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E32Y_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E32Y и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E32Y_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1

- 49 042790

068761_E32Y_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_D52N_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_D52N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D52N;

(ссс) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_D52N_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E55A_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D102V;

(fff) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068767_Е55А и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_Е55А;

(ggg) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E30D_D52N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E30D_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D;

(jjj) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E30D_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E100fF_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E100fF_D102V;

(lll) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E55A_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_D52N_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068767_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E100fF; или (ooo) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E30D_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_E1OOIF.

Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения включают анти-VISTA Ab, содержащие:

(a) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-061029 (SEQ ID NO:67) и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

(b) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-061015 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-061015;

(c) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068757 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068757;

(d) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068759 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068759;

(e) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068761 и (ii) ами

- 50 042790 нокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761;

(f) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068763 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068763;

(g) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068765 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068765;

(h) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767;

(i) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068769 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068769;

(j) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068771 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068771;

(k) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068773 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068773;

(l) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068775 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068775;

(m) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069059 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069059;

(n) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069061 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069061;

(о) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069063 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069063;

(р) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069065 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069065;

(q) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069067 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069067;

(r) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069069 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069069;

(s) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069071 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069071;

(t) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069073 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069073;

(u) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069075 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069075;

(v) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069077 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069077;

(w) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068736 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068738 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068738;

(у) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068740 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068740;

- 51 042790 (z) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068742 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068744 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068744;

(bb) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи Р1-068746 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1- 068746;

(ее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068748 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068748;

(dd) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068750 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068750;

(ее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068752 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068752;

(ff) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068754 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068761_Е55А и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_H1OOG;

(ii) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E55A_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E3OD и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E30D;

(ll) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E56N_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30DH100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068761_Е1001Р и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E55A_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_Е55А_Е1001Р;

(rr) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_H100G_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E30D_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E56N_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, со

- 52 042790 стоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_E32Y и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E32Y и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_D52N_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68767_D52N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D521N;

(ссс) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_D52N_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E55A_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68767_D1O2V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D102V;

(fff) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068767_Е55А и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_Е55А;

(ggg) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_D52N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767_E30D и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E30D;

(jjj) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E30D_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E100fF_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E100fF_D102V;

(lll) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E55A_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_D52N_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068767_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_Е100fF; или (ооо) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-

- 53 042790

068767_E30D_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:182, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E30D_E100fF, причем Сконцевая аминокислота VH и N-концевая аминокислота SEQ ID NO:182 образуют пептидную связь.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к анти-VISTA mAb, содержащим:

тяжелую цепь, состоящую из аминокислотных последовательностей (i) VH из перечисленных выше (а)-(ооо), (ii) SEQ ID NO:182 и (m) остатка Lys, причем С-концевая аминокислота VH и N-концевая аминокислота SEQ ID NO:182 образуют пептидную связь, при этом С-концевая аминокислота SEQ ID NO:182 присоединена к N-концевому Lys; и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи из перечисленных выше (а)-(ооо);

причем аминокислотные последовательности VH и легкой цепи выбирают из одного и того же вида антитела из перечисленных выше (а)-(ооо).

Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения включают анти-VISTA Ab, содержащие:

(a) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-061029 (SEQ ID NO:67) и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

(b) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-061015 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061015;

(c) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068757 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068757;

(d) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068759 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068759;

(e) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761;

(f) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068763 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068763;

(g) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068765 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068765;

(h) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068767 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767;

(i) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068769 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068769;

(j) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068771 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068771;

(k) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068773 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068773;

(l) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068775 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068775;

(m) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069059 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069059;

(n) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069061 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069061;

(о) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069063 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069063;

(р) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069065 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069065;

- 54 042790 (q) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069067 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069067;

(r) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069069 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069069;

(s) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069071 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069071;

(t) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069073 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069073;

(u) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069075 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069075;

(v) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069077 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069077;

(w) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068736 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068738 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068738;

(у) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068740 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068740;

(z) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068742 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068744 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068744;

(bb) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи Р1-068746 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068746;

(cc) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068748 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068748;

(dd) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068750 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068750;

(ее) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068752 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068752;

(ff) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068754 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-О68761_Е55А и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68761_H1OOG и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_H100G;

(ii) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E55A_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E3OD и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную

- 55 042790 последовательность легкой цепи P1-068761_E30D;

(ll) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E30D_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E56N_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E30D_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E30D_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1- 068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E55A_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E55A_E100fF;

(rr) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_H100G_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E56N_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E56N_E100fF;

(uu) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E32Y и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E32Y_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E32Y_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E30D_E32Y и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E32Y_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E32Y_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_D52N_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_D52N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D52N;

(ссс) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_D52N_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E55A_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D102V;

(fff) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-О68767_Е55А и

- 56 042790 (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_Е55А;

(ggg) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E30D_D52N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E30D_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68767_E3OD и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D;

(jjj) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E30D_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E100fF_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E100fF_D102V;

(lll) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E55A_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_D52N_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E100fF; или (ооо) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E30D_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E30D_E100fF.

Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения включают анти-VISTA Ab, содержащие:

(a) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-061029 (SEQ ID NO:67) и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

(b) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-061015 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-061015;

(c) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068757 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068757;

(d) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068759 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068759;

(e) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761;

(f) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068763 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068763;

(g) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068765 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068765;

(h) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068767 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767;

(i) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068769 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068769;

(j) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068771 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068771;

(k) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068773 и (ii) ами

- 57 042790 нокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068773;

(l) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068775 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068775;

(m) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069059 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069059;

(n) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069061 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069061;

(о) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069063 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069063;

(р) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069065 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069065;

(q) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069067 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069067;

(r) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069069 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069069;

(s) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069071 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069071;

(t) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069073 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069073;

(u) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069075 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069075;

(v) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069077 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069077;

(w) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068736 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068738 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068738;

(у) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068740 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068740;

(z) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068742 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068744 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068744;

(bb) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи Р1-068746 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1- 068746;

(cc) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068748 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068748;

(dd) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068750 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068750;

(ее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068752 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068752;

- 58 042790 (ff) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068754 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-О68761_Е55А и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68761_H1OOG и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_H1OOG;

(ii) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E55A_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E3OD и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD;

(ll) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E30D_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E56N_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E30D_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E55A_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_Е55А_Е1001Р;

(rr) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_H100G_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E56N_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Ρ1-068761_Ε56Ν_Ε100ϊΡ;

(uu) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E32Y и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E32Y_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E32Y и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E32Y_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E32Y_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, со

- 59 042790 стоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_E32Y_E100fF;

(ааа) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_D52N_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767_D52N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D521N;

(ссс) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_D52N_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VHP1068767_E55A_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68767_D1O2V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D1O2V;

(fff) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-О68767_Е55А и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_Е55А;

(ggg) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E30D_D52N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68767_E3OD и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD;

(jjj) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E100fF_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E100fF_D102V;

(lll) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E55A_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_D52N_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E100fF; или (ооо) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E30D_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:183, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E30D_E100fF, причем Сконцевая аминокислота VH и N-концевая аминокислота SEQ ID NO:183 образуют пептидную связь.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к анти-VISTA mAb, содержащим:

тяжелую цепь, состоящую из аминокислотных последовательностей (i) VH из перечисленных выше (а)-(ооо), (ii) SEQ ID NO:183 и (iii) остатка Lys, причем С-концевая аминокислота VH и N-концевая аминокислота SEQ ID NO:183 образуют пептидную связь, при этом С-концевая аминокислота SEQ ID NO:183 присоединена к N-концевому Lys; и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи из перечисленных выше (а)-(ооо);

причем аминокислотные последовательности VH и легкой цепи выбирают из одного и того же вида антитела из перечисленных выше (а)-(ооо).

Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения включают анти-VISTA Ab, содержащие:

(a) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-061029 (SEQ ID NO:67) и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

- 60 042790 (b) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-061015 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-061015;

(c) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068757 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068757;

(d) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068759 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068759;

(e) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068761 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761;

(f) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068763 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068763;

(g) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068765 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068765;

(h) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767;

(i) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068769 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068769;

(j) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068771 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068771;

(k) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068773 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068773;

(l) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068775 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068775;

(m) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069059 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069059;

(n) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069061 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069061;

(о) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069063 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069063;

(р) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069065 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069065;

(q) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069067 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069067;

(r) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069069 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069069;

(s) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069071 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069071;

(t) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069073 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069073;

(u) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-069075 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-069075;

(v) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-069077 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную после

- 61 042790 довательность легкой цепи Р1-069077;

(w) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068736 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068738 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068738;

(у) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068740 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068740;

(z) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068742 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068744 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068744;

(bb) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность тяжелой цепи Р1-068746 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068746;

(cc) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068748 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068748;

(dd) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068750 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068750;

(ее) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068752 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068752;

(ff) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068754 и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068761_Е55А и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_H100G;

(ii) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68761_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E55A_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_E30D и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E30D;

(ll) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E56N_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068761_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1

- 62 042790

068761_E55A_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E55A_E1OOIF;

(rr) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_H100G_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_Ш00G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E30D_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E56N_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E56N_E1OOIF;

(uu) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068761_E32Y и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E32Y_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068761_E32Y_E56N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(xx) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E30D_E32Y и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E32Y_H100G и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068761_E32Y_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68761_E32Y_E1OOIF;

(ааа) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_D52N_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-O68767_D52N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D52N;

(ссс) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_D52N_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E55A_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_D102V;

(fff) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068767_Е55А и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_Е55А;

(ggg) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E30D_D52N и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E30D_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1-068767_E30D и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E30D;

(jj) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E30D_E55A и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E100fF_D102V и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E100fF_D102V;

- 63 042790 (lll) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1068767_E55A_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_D52N_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH Р1-068767_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи P1-068767_E100fF; или (ооо) тяжелую цепь, содержащую: (i) аминокислотную последовательность VH P1068767_E30D_E100fF и (ii) аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность легкой цепи Р1-068767_E30D_E100fF.

Другие варианты осуществления настоящего изобретения включают анти-VISTA Ab, содержащие:

(a) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-061029 (SEQ ID NO:67) и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-061029 (SEQ ID NO:70);

(b) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-061015 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-061015;

(c) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068757 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068757;

(d) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068759 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068759;

(e) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068761 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761;

(f) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068763 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068763;

(g) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068765 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068765;

(h) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767;

(i) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068769 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068769;

(j) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068771 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068771;

(k) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068773 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068773;

(1) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068775 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068775;

(m) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069059 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069059;

(n) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069061 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069061;

(о) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069063 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069063;

(р) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069065 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069065;

(q) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069067 и (ii) ами

- 64 042790 нокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069067;

(r) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069069 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069069;

(s) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069071 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069071;

(t) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069073 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069073;

(u) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-069075 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069075;

(v) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-069077 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-069077;

(w) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068736 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068736;

(х) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068738 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068738;

(у) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068740 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068740;

(z) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068742 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068742;

(аа) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068744 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068744;

(bb) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности тяжелой цепи Р1-068746 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068746;

(cc) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068748 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068748;

(dd) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068750 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068750;

(ее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068752 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068752;

(ff) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068754 и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068754;

(gg) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068761_Е55А и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_Е55А;

(hh) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068761_H100G;

(ii) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68761_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E56N;

(jj) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E55A_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E55A_E56N;

(kk) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_E30D и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD;

- 65 042790 (ll) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E55A;

(mm) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E56N_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E56N_H1OOG;

(nn) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_H1OOG;

(оо) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E56N;

(рр) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E100fF;

(qq) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E55A_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E55A_E100fF;

(rr) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_H100G_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_H100G_E100fF;

(ss) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E30D_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E30D_E100fF;

(tt) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E56N_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E56N_E100fF;

(uu) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068761_E32Y и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y;

(vv) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E55A;

(ww) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_E56N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_E56N;

(хх) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E30D_E32Y и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E3OD_E32Y;

(уу) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068761_E32Y_H100G и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68761_E32Y_H1OOG;

(zz) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068761_E32Y_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_D52N_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D52N_D1O2V;

(bbb) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-O68767_D52N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D52N;

(ссс) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_D52N_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D52N_E55A;

(ddd) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E55A_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E55A_D1O2V;

(еее) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_D1O2V;

(fff) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1-068767_Е55А и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной

- 66 042790 последовательности легкой цепи Р1-068767_Е55А;

(ggg) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_D52N и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_D52N;

(hhh) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_D1O2V;

(iii) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767_E30D и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD;

(jjj) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E30D_E55A и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-O68767_E3OD_E55A;

(kkk) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E100fF_D102V и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи Р1-068767_E100fF_D102V;

(lll) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH Р1068767_E55A_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E55A_E100fT;

(mmm) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_D52N_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1-068767_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E100fT; или (ооо) тяжелую цепь, состоящую из: (i) аминокислотной последовательности VH P1068767_E30D_E100fF и (ii) аминокислотной последовательности SEQ ID NO:184, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи P1-068767_E30D_E100fF, причем Сконцевая аминокислота VH и N-концевая аминокислота SEQ ID NO:184 образуют пептидную связь.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к анти-VISTA mAb, содержащим:

тяжелую цепь, состоящую из аминокислотных последовательностей (i) VH из перечисленных выше (а)-(ооо), (ii) SEQ ID NO:184 и (m) остатка Lys, причем С-концевая аминокислота VH и N-концевая аминокислота SEQ ID NO:184 образуют пептидную связь, при этом С-концевая аминокислота SEQ ID NO:184 присоединена к N-концевому Lys; и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности легкой цепи из перечисленных выше (а)-(ооо);

причем аминокислотные последовательности VH и легкой цепи выбирают из одного и того же вида антитела из перечисленных выше (а)-(ооо).

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать аминокислотную последовательность VH, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной аминокислотной последовательности Р1-061029, причем антитело содержит CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH P1-061029, в которой по меньшей мере один остаток замещен D, Е или Н. В некоторых вариантах осуществления каждая из CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-061029 содержит один, два или три остатка, замещенных D, Е или Н. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать аминокислотную последовательность VH, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной аминокислотной последовательности Р1-061029, причем антитело содержит CDR1 VH, содержащую один или два остатка D или Е в положениях аминокислот 4, 5 или 7 CDR1, и/или содержит CDR2 VH с одним, двумя или тремя остатками D, Е или Н в положениях 3, 5, 6 или 7 CDR2, и/или CDR3 VH с одним, двумя или тремя остатками D, Е или Н в положениях 6, 12 или 14 CDR 3 (см. табл. 5 ниже в отношении примеров антител, попадающих в эти варианты). В таких случаях вариабельная область легкой цепи может содержать CDR1, CDR2 и/или CDR3 Р1-061029 или Р1-061015 или их клона-потомка, такого как

- 67 042790

Pl

061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl06876 1_E55A_E56N, P1-06876 l_E30D, Pl-06876 l_E30D_E55A, Pl-06876l_E56N_H100G, Pl-068761_E30D_H100G, P1-06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl

06876 l_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E100fF,Pl06876 l_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-06876 l_E30D_E32Y, Pl-068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF,Pl068767_D52N_D102V, Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A,Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A,Pl068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_El00fF, Pl-068767_D52N_E100fF,P1068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100ff, и/или вариабельная область легкой цепи может быть на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной таковой у Р1-061029 или Р1-061015 или их клона-потомка, такого как

Pl-061029, Pl068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl-06876 l_E30D_E55A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl06876 l_E30D_H100G, Pl-06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl068761_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl-06876 l_E30D_E100fF, Pl068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, Pl-068761_E30D_E32Y, Pl-068761_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E1001E, Pl068767_D52N_D102V, Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A, Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N. Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A, Pl068767_EI00fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl-068767_D52N_E1001E, Pl068767 E1 OOfF или P1 -068767_E30D_E 1 OOfF.

В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать аминокислотную последовательность VH, которая является на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной аминокислотной последовательности Р1-061015, причем антитело содержит CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH P1-061015, в которой по меньшей мере один остаток замещен D, Е или Н. В некоторых вариантах осуществления каждая из CDR1, CDR2 и CDR3 VH P1-061015 содержит один, два или три остатка, замещенных D, Е или Н. В некоторых вариантах осуществления анти-hVISTA Ab может содержать аминокислотную последовательность VH, которая на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной аминокислотной последовательности Р1-061015, причем антитело содержит CDR1 VH, содержащую один или два остатка D, Е или Н в положениях аминокислот 6, 7, 8 и 9 CDR1, и/или содержит VH CDR2 с одним, двумя или тремя D, Е или Н остатками в положениях 1, 2, 4 или 8-11 CDR2, и/или CDR3 VH с одним, двумя или тремя остатками D, Е или Н в положениях 2, 3, 6, 7 или 12 CDR3 (см. табл. 6 ниже в отношении примеров антител, попадающих в эти варианты осуществления). В таких случаях вариабельная область легкой цепи может содержать CDR1, CDR2 и/или CDR3 Р1-061029 или Р1-061015 или их клона-потомка, такого как

Pl-061029, Pl-068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl-069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075. Pl-069077, Pl-061015, Pl068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl-068754, Pl-068761_E55A. Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl068761 _E55A_E56N, Pl-068761_E30D, Pl-068761_E30D_E55A, P1-06876l_E56N_Hl00G, Pl-06876 l_E30D_H100G, P1-06876 l_E30D_E56N, P1-06876 l_E100fF, Pl068761_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E100fF, Pl068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, Pl-06876 l_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl068767_D52N_D102V, Pl-068767_D52N. Pl-068767_D52N_E55A, Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A, Pl068767_E100fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl-068767_D52N_E100fF, Pl068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF, и/или вариабельная область легкой цепи может быть на по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичной таковой у Р1-061029 или Р1-061015 или их клона-потомка, такого как

- 68 042790

Pl-061029, Pl068757, Pl-068759, Pl-068761, Pl-068763, Pl-068765, Pl-068767, Pl-068769, Pl-068771, Pl-068773, Pl-068775, Pl-069059, Pl-069061, Pl-069063, Pl-069065, Pl-069067, Pl069069, Pl-069071, Pl-069073, Pl-069075, Pl-069077, Pl-061015, Pl-068736, Pl-068738, Pl-068740, Pl-068742, Pl-068744, Pl-068766, Pl-068748, Pl-068750, Pl-068752 Pl068754, Pl-068761_E55A, Pl-068761_H100G, Pl-068761_E56N, Pl-068761_E55A_E56N, P1-06876 l_E30D, Pl-06876 l_E30D_E55A, Pl-068761_E56N_H100G, Pl06876 l_E30D_H100G, P1-06876 l_E30D_E56N, Pl-068761_E100fF, Pl068761_E55A_E100fF, Pl-068761_H100G_E100fF, Pl-068761_E30D_E1001E, Pl068761_E56N_E100fF, Pl-068761_E32Y, Pl-068761_E32Y_E55A, Pl-068761_E32Y_E56N, P1-06876 l_E30D_E32Y, Pl-06876 l_E32Y_H100G, Pl-068761_E32Y_E100fF, Pl068767_D52N_D102V. Pl-068767_D52N, Pl-068767_D52N_E55A. Pl068767_E55A_D102V, Pl-068767_D102V, Pl-068767_E55A, Pl-068767_E30D_D52N, Pl068767_E30D_D102V, Pl-068767_E30D, Pl-068767_E30D_E55A, Pl068767_El00fF_D102V, Pl-068767_E55A_E100fF, Pl-068767_D52N_E100fF, P1068767_E100fF или Pl-068767_E30D_E100fF.

В некоторых вариантах осуществления такое модифицированное анти-hVISTA клона-потомка Pl06 1029 или Р1 -061015 обладает одной или более из следующих характеристик:

специфическое связывание с hVISTA, например богатой гистидином областью ECD или полипептидом, содержащим аминокислотные остатки 35-127 SEQ ID NO:2, при кислом рН, например, рН 6,0 или рН 6,5;

отсутствие значимого связывания с hVISTA, например богатой гистидином областью ECD или полипептидом, содержащим аминокислотные остатки 35-127 SEQ ID NO:2, при физиологическом рН или нейтральном рН, например, рН 7,4 или рН 7,0;

специфическое связывание с cynoVISTA, например богатой гистидином облатью ECD, при кислом рН, например, 6,0 или 6,5;

отсутствие значимого связывания с cynoVISTA, например богатой гистидином областью ECD, при физиологическом рН или нейтральном рН, например, 7,4 или 7,0;

сниженное связывание с hVISTA-ECD, имеющим замену одной или более из следующих аминокислот: : Т35, Y37, K38, Т39, Y41, R54, Т61, F62, Q63, L65, Н66, L67, Н68, Н69, F97, L115, V117, I119, Н121, Н122, S124, Е125, R127 относительно ECD hVISTA с SEQ ID NO:2;

перекрестная конкуренция за связывание с hVISTA с P1-061029, P1-068761, Р1-068767 и/или Р1061015;

ингибирование связывания hVISTA с Т-клетками человека при кислом рН, например, 6,0 или 6,5; ингибирование связывания hVISTA с PSGL-1 при кислом рН, например, 6,0 или 6,5;

среднее время пребывания в организме яванского макака не менее 350 ч;

стимулирование активации Т-клеток;

ингибирование VISTA-опосредованной межклеточной адгезии и специфическое связывание с hVISTA в образцах опухолевых клеток человека или в образцах воспаленной ткани человека.

Примеры константных областей антитела.

В некоторых вариантах осуществления антитело, раскрытое в настоящем описании, содержит одну или более человеческих константных областей. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область тяжелой цепи имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область легкой цепи имеет изотип, выбранный из к и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело, раскрытое в настоящем описании, содержит константную область человеческого IgG, такого как IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело, раскрытое в настоящем описании, содержит константную область тяжелой цепи человеческого IgG4. В некоторых таких вариантах осуществления антитело, раскрытое в настоящем описании, содержит мутацию S241P в константной области человеческого IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело, раскрытое в настоящем описании, содержит константную область человеческого IgG4 и человеческую легкую к-цепь.

Выбор константной области тяжелой цепи может определить, будет ли антитело иметь эффекторную функцию in vivo. Такая эффекторная функция в некоторых вариантах осуществления включает антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и/или комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) и может приводить к гибели клетки, с которой связывается антитело. В некоторых способах лечения, включая способы лечения некоторых видов рака, может быть желательной гибель клеток, например, когда антитело связывается с клеткой, которая обеспечивает поддержание или рост опухоли. Типичные клетки, которые способны обеспечивать поддержание или рост опухоли, включают, без ограничения, сами опухолевые клетки, клетки, которые содействуют развитию сосудистой сети опухоли, и клетки, которые обеспечивают лиганды, факторы роста или контррецепторы, поддерживающие или способствующие росту опухоли или выживанию опухоли. В некоторых вариантах осуществления, в которых требуется эффекторная функция, выбирают антитело, содержащее тяжелую цепь человеческого IgG1 или тяжелую цепь человеческого IgG3.

В некоторых вариантах осуществления антитело, представленное в настоящей заявке, модифицировано для увеличения или уменьшения степени гликозилирования. Добавление или удаление участков

- 69 042790 гликозилирования в антитело можно с легкостью осуществить путем замены аминокислотной последовательности, таким образом создавая или удаляя один или более участков гликозилирования.

Если антитело содержит Fc-фрагмент, углевод, присоединенный к ней, может быть изменен. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный двухантенный олигосахарид, который обычно присоединен посредством N-связи к Asn297 домена СН2 Fcфрагмента; см., например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать различные углеводы, например маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в стволе двухантенной структуры олигосахарида. В некоторых вариантах осуществления олигосахарид в антителе по изобретению может быть модифицирован для создания антител с некоторыми улучшенными свойствами. Например, в некоторых вариантах осуществления антитело может быть афукозилировано, например, с помощью мутации остатков, таких как Asn297, которые обычно гликозилируют, используя фукозосодержащие соединения, или с помощью других средств. В некоторых вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению могут содержать афукозилированную константную область человеческого IgG1.

Антитела дополнительно содержат раздвоенные олигосахариды, например, в которых двухантенный олигосахарид, присоединенный к Fc-фрагменту антитела, раздвоен с помощью GlcNAc. Такие антитела могут иметь сниженный уровень фукозилирования и/или улучшенную функцию ADCC. Примеры таких антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США № 6602684 (Umana et al.); и US 2005/0123546 (Umana et al.). Также предоставляются антитела с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к Fc-фрагменту. Такие антитела могут иметь улучшенную функцию CDC. Такие антитела описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); и WO 1999/22764 (Raju, S.).

Антитела также имеют удлиненные аминоконцевые лидерные последовательности. Например, на аминоконце любой одной или более тяжелых или легких цепей антитела может присутствовать одна или более аминокислотных остатков находящейся на аминоконце лидерной последовательности. Типичное удлинение аминоконцевой лидерной последовательности содержит или состоит из трех аминокислотных остатков VHS, присутствующих на одной или обеих легких цепях антитела.

Период полувыведения in vivo или из сыворотки полипептидов, связывающихся с высоким сродством с человеческим FcRn, можно определить, например, у трансгенных мышей, людей или приматов, не являющихся человеком, которым введены полипептиды с измененным Fc-фрагментом; см. также, например, Petkova et al. International Immunology 18(12):1759-1769(2006).

В некоторых вариантах осуществления изобретения афукозилированное антитело опосредует ADCC в присутствии человеческих эффекторных клеток более эффективно, чем родительское антитело, которое содержит фукозу. Как правило, ADCC активность определяют с помощью анализа ADCC in vitro, как описано в настоящем описании, но также возможны другие анализы или методы определения активности ADCC, например на модели животного и т.д.

В некоторых вариантах осуществления Fc-фрагмент изменяют путем замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка другим аминокислотным остатком для изменения эффекторной функции (функций) антитела. Например, одна или более аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 234, 235, 236, 237, 297, 318, з2о, 322, 330 и/или 331, могут быть заменены другим аминокислотным остатком таким образом, чтобы сродство антитела к эффекторному лиганду изменилось, но сохранилась антигенсвязывающая способность родительского антитела. Эффекторный лиганд, к которому изменяют сродство, может представлять собой, например, рецептор Fc или компонент С1 комплемента. Этот подход более подробно описан в патентах США №№ 5624821 и 5648260, авторами которых являются Winter et al.

В некоторых примерах одну или более аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 329, 331 и 322, можно заменить другим аминокислотным остатком с тем, чтобы изменить связывание C1q антителом и/или уменьшить или удалить комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) антитела. Этот подход более подробно описан Idusogie et al. в патенте США № 6194551.

В некоторых примерах один или более аминокислотных остатков в аминокислотных положениях 231 и 239 заменяют, чтобы тем самым изменить способность антитела фиксировать комплемент. Этот подход более подробно описан в публикации РСТ WO 94/29351, Bodmer et al. В некоторых примерах Fcфрагмент может быть модифицирован для уменьшения антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или для уменьшения сродства к рецептору Fcy путем модификации одной или более аминокислот в следующих положениях: 234, 235, 236, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 248, 249, 252, 254,

255, 256, 258, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293,

294, 295, 296, 298, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 313, 315, 320, 322, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331,

332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 433, 434, 435,

436, 437, 438 или 439. Примеры замен включают 236А, 239D, 239Е, 268D, 267Е, 268Е, 268F, 324Т, 332D и 332Е. Примеры вариантов включают 239D/332E, 236А/332Е, 236A/239D/332E, 268F/324T, 267E/268F, 267Е/324Т и 267E/268F7324T. Другие модификации Fc, которые могут быть выполнены в Fcs, представ

- 70 042790 ляют собой модификации, которые уменьшают или устраняют связывание с FcyR и/или комплементарными белками, тем самым уменьшая или устраняя Fc-опосредованные эффекторные функции, такие как ADCC, ADCP и CDC. Примеры модификаций включают, без ограничения, замены, вставки и делеции в положениях 234, 235, 236, 237, 267, 269, 325, 328, 330 и/или 331 (например, 330 и 331), согласно системе нумерации ЕС. Примеры замен включают, без ограничения, 234А, 235Е, 236R, 237А, 267R, 269R, 325L, 328R, 330S и 331S (например, 330S и 331S), согласно системе нумерации ЕС. Вариант Fc может содержать 236R/328R. Другие модификации для уменьшения взаимодействия с FcyR и комплементом включают замены 297A, 234А, 235А, 237А, 318А, 228Р, 236Е, 268Q, 309L, 330S, 331S, 220S, 226S, 229S, 238S, 233Р и 234V, а также удаление участка гликозилирования в положении 297 с помощью мутации или ферментов или путем продуцирования в организмах, таких как бактерии, которые не гликозилируют белки. Обзор этих и других модификаций можно найти в Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691. Например, константный Fc-фрагмент человеческого IgG1.3 содержит замены L234A, L235E и G237A. IgG1fa.P238K (или IgG1.P238K) содержит замену Р238К. IgG1.lf содержит замены L234A, L235E, G237A, A330S И P331S.

Также могут быть использованы варианты Fc, которые усиливают сродство к ингибирующему рецептору FcyRIIb. Такие варианты могут обеспечивать Fc-рекомбинантный белок с иммуномодулирующими активностями, сопоставимыми с таковыми у клеток с FcyRIIb, включая, например, В-клетки и моноциты. В одном из вариантов осуществления варианты Fc обеспечивают селективно повышенное сродство к FcyRIIb относительно одного или более активирующих рецепторов. Модификации для изменения связывания с FcyRIIb включают одну или более модификаций в положении, выбранном из группы, состоящей из 234, 235, 236, 237, 239, 266, 267, 268, 325, 326, 327, 328, 330, 331 и 332, согласно системе нумерации ЕС. Типичные замены для усиления сродства к FcyRllb включают, без ограничения, 234А, 234D, 234Е, 234F, 234W, 235D, 235Е, 235F, 235R, 235Y, 236D, 236N, 237А, 237D, 237N, 239D, 239Е, 266М, 267М. 267Е, 268D, 268Е, 327D, 327Е, 328F, 328 Вт, 328Y, 330S, 331S и 332Е. Примеры замен включают 235Y, 236D, 239D, 266М, 267Е, 268D, 268Е, 328F, 328W и 328Y. Другие варианты Fc для усиления связывания с FcyRIIb включают 235Y/267E, 236D/267E, 239D/268D, 239D/267E, 267E/268D, 267Е/268Е и 267E/328F.

Другие модификации для усиления взаимодействия между FcyR и комплементом включают, без ограничения, замены 298А, 333А, 334А, 326А, 2471, 339D, 339Q, 280Н, 290S, 298D, 298V, 243L, 292Р, 300L, 396L, 3051 и 396L. Эти и другие модификации описаны Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20:685-691. Модификации Fc, которые усиливают связывание с рецептором Fcy, включают модификации аминокислот в любом одном или более положениях аминокислот 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 279, 280, 283, 285, 298, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 312, 315, 324, 327, 329, 330, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 379, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 или 439 Fc-фрагмента, где нумерация остатков в Fc-фрагменте приведена согласно системе нумерации ЕС, как указано в публикации заявки на патент WO00/42072.

Необязательно, Fc-фрагмент может содержать не встречающийся в природе аминокислотный остаток в дополнительных и/или альтернативных положениях, известных специалисту в данной области (см., например, патенты США № 5624821; 6277375; 6737056; 6194551; 7317091; 8101720; публикации заявок РСТ на патент WO 00/42072; WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 и WO 06/0201 14).

Сродство и свойства связывания Fc-фрагмента с лигандом могут быть определены различными методами анализа in vitro (биохимическими или иммунологическими анализами), известными в данной области, включая, без ограничения, равновесные методы (например, твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) или радиоиммуноанализ (RIA)), или кинетические (например, анализ BIACORE) и другие методы, такие как анализы непрямого связывания, анализы конкурентного ингибирования, флуоресцентный резонансный перенос энергии (FRET), гель-электрофорез и хроматография (например, гельфильтрация). В этих и других способах можно использовать метку на одном или более исследуемых компонентах и/или использовать различные способы детектирования, включая, без ограничения, хромогенные, флуоресцентные, люминесцентные или изотопные метки. Подробное описание сродства и кинетики связывания можно найти у Paul, W.E., ed., Fundamentalmunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999), в котором основное внимание уделяется взаимодействиям антитело-иммуноген.

В некоторых вариантах осуществления антитело модифицировано для увеличения его биологического периода полувыведения. Возможны разные подходы. Например, это может быть сделано путем увеличения сродства связывания Fc-фрагмента с FcRn. Например, один или более из следующих остатков могут быть мутированы: 252, 254, 256, 433, 435, 436, как описано в патенте США № 6,277,375. Конкретные примеры замен включают одну или более из следующих: T252L, T254S и/или T256F. Альтернативно, для увеличения биологического периода полувыведения антитело может быть изменено в области СН1 или CL таким образом, чтобы оно содержало эпитоп, связывающий рецептор реутилизации, взятый из двух петель домена СН2 Fc-фрагмента IgG, как описано в патентах США №№ 5869046 и 6121022,

- 71 042790

Presta et al. Другие примеры вариантов, которые увеличивают связывание с FcRn и/или улучшают фармакокинетические свойства, включают замены в положениях 259, 308, 428 и 434, включая, например, 2591, 308F, 428L, 428М, 434S, 4341 1, 434F, 434Y и 434X1. Другие варианты, которые увеличивают связывание Fc с FcRn, включают: 250Е, 250Q, 428L, 428F, 250Q/428L (Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604), 256A, 272A, 286A, 305A, 307A, 307Q, 311A, 312A, 376A, 378Q, 380A, 382A, 434A (Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604), 252F, 252T, 252Y, 252W, 254T, 256S, 256R, 256Q, 256E, 256D, 256T, 309P, 311S, 433R, 433S, 4331, 433P, 433Q, 434H, 434F, 434Y, 252Y/254T/256E, 433K/434F/436H, 308T/309P/311S (Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, DallAcqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524). Другие модификации для модуляции связывания FcRn описаны в Yeung et al., 2010, J Immunol, 182:7663-7671.

В некоторых вариантах осуществления могут быть использованы гибридные изотипы IgG с конкретными биологическими характеристиками. Например, гибридный вариант IgG1/IgG3 может быть сконструирован путем замены положений в IgG1 в области СН2 и/или СН3 аминокислотами из IgG3 в положениях, в которых эти два изотипа различаются. Таким образом, может быть сконструирован гибридный вариант антитела IgG, который содержит одну или более замен, например, 274Q, 276K, 300F, 339Т, 356Е, 358М, 384S, 392N, 397М, 4221, 435R и 436F. В некоторых вариантах осуществления, описанных в настоящем описании, гибридный вариант IgG1/IgG2 может быть сконструирован путем замены аминокислот в положениях в IgG2 в области СН2 и/или СН3 аминокислотами из IgG1 в положениях, по которым эти два изотипа различаются. Таким образом, может быть сконструирован гибридный вариант антитела IgG, который содержит одну или более замен, например, одну или более из следующих аминокислотных замен: 233Е, 234L, 235L, -236G (относится к вставке глицина в положении 236), и 327А.

Кроме того, были картированы участки связывания FcyRI, FcyRII, FcyRIII и FcRn в человеческом IgG1, и были описаны варианты с улучшенным связыванием (см. Shields, RL et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604). Было показано, что специфические мутации в положениях 256, 290, 298, 333, 334 и 339 улучшают связывание с FcyRIII. Также было показано, что следующие комбинированные мутанты улучшают связывание FcyRIII: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A и S298A/E333A/K334A, которые, как было продемонстрировано, усиливают связывание FcyRIIIa и активность ADCC (Shields et al., 2001). Были идентифицированы другие варианты IgG1 со значительно усиленным связыванием с FcyRIIIa, включая варианты с мутациями S239D/I332E и S239D/I332E/A330L, которые показали наибольшее увеличение сродства к FcyRIIIa, снижение связывания с FcyRIIb и сильную цитотоксическую активность у яванского макака (Lazar et al., 2006). Введение тройных мутаций в антитела, такие как алемтузумаб (CD52-специфичный), трастузумаб (HER2/neu-специфичный), ритуксимаб (CD20-специфичный) и цетуксимаб (EGFR-специфичный), транслировали в сильно увеличенную активность ADCC in vitro, и вариант S239D/I332E показал повышенную способность истощать В-клетки у обезьян (Lazar et al., 2006). Кроме того, были идентифицированы мутанты IgG1, содержащие мутации L235V, F243L, R292P, Y300L и P396L, которые демонстрировали усиленное связывание с FcyRIIIa и одновременно повышенную активность ADCC у трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий FcyRIIIa, на моделях Вклеточных злокачественных опухолей и рака молочной железы (Stavenhagen et al., 2007; Nordstrom et al., 2011). Другие мутанты Fc, которые можно использовать, включают: S298A/E333A/L334A, S239D/I332E, S239D/I332E/A330L, L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L и M428L/N434S.

В некоторых вариантах осуществления выбирают Fc, который имеет пониженное связывание с FcyR. Типичный Fc, например Fc IgG1 с пониженным связыванием FcyR, содержит следующие три аминокислотные замены: L234A, L235E и G237A.

В некоторых вариантах осуществления выбирают Fc, который имеет пониженную фиксацию комплемента. Типичный Fc, например Fc IgG1 с пониженной фиксацией комплемента, имеет следующие две аминокислотные замены: A330S и P331S.

В некоторых вариантах осуществления выбирают Fc, который по существу не имеет эффекторную функцию, т.е. имеет пониженное связывание с FcyR и пониженную фиксацию комплемента. Типичный Fc, например Fc IgG1, который не имеет эффекторную функцию, содержит следующие пять мутаций: L234A, L235E, G237A, A330S И P331S.

В случае использования константного домена IgG4 он может включать замену S228P, которая имитирует последовательность петли в IgG1 и тем самым стабилизирует молекулы IgG4.

Также могут быть использованы модификации Fc, описанные в WO 2017/087678 или WO2016081746.

В некоторых вариантах осуществления гликозилирование антитела является модифицированным. Например, можно получить агликозилированное антитело (т.е. антитело без гликозилирования). Гликозилирование может быть изменено, например, для увеличения сродства антитела к антигену. Такие модификации углеводов могут быть выполнены, например, путем изменения одного или более участков гликозилирования в последовательности антитела. Например, может быть введена одна или более аминокислотных замен, которые приводят к удалению одного или более участков гликозилирования в каркасном участке вариабельной области, тем самым исключая гликозилирование в этом участке. Такое аг- 72 042790 ликозилирование может увеличивать сродство антитела к антигену. Такой подход более подробно описан в патентах США №№ 5714350 и 6350861, Со et al.

Гликозилирование константной области в N297 можно предотвратить путем мутирования остатка N297 в другой остаток, например N297A, и/или путем мутирования соседней аминокислоты, например 298, тем самым снижая гликозилирование в N297.

Дополнительно или в качестве альтернативы, может быть получено антитело, которое имеет измененный тип гликозилирования, такое как гипофукозилированное антитело, имеющее уменьшенное количество фукозильных остатков, или антитело, имеющее увеличенные раздвоенные структуры GlcNac. Было показано, что такие измененные паттерны гликозилирования увеличивают способность антител индуцировать ADCC. Такие модификации углеводов могут быть выполнены, например, путем экспрессии антитела в клетке-хозяине с измененным механизмом гликозилирования. Клетки с измененным механизмом гликозилирования описаны в данной области техники и могут использоваться в качестве клетокхозяев, экспрессирующих рекомбинантные антитела, описанные в настоящем документе, тем самым продуцируя антитело с измененным гликозилированием. Например, ЕР 1176195, Hanai et al. описывает клеточную линию с функционально нарушенным геном FUT8, который кодирует фукозилтрансферазу, так что антитела, экспрессируемые в такой клеточной линии, являются гипофукозилированными. В публикации РСТ WO 03/035835 Presta описан вариант клеточной линии СНО, клетки Led 3, с пониженной способностью присоединять фукозу к Asn(297)-связанным углеводам, что также приводит к гипофукозилированию антител, экспрессируемых в этой клетке-хозяине (см. также Shields, R.L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740). В публикации РСТ WO 99/54342, Umana et al., описаны клеточные линии, сконструированные для экспрессии гликопротеин-модифицирующих гликозилтрансфераз (например, бета(1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII)), в результате чего антитела, экспрессируемые в сконструированных клеточных линиях, имеют повышенное количество раздвоенных структур GlcNac, что приводит к повышенной активности ADCC антитела (см. также Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180).

Другой модификацией антител, описанных в настоящем описании, является пегилирование. Антитело может быть пегилировано, например, для увеличения биологического (например, в сыворотке) периода полураспада антитела. Для пегилирования антитело или его фрагмент обычно подвергают взаимодействию с полиэтиленгликолем (ПЭГ), таким как реакционноспособное эфирное или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, в которых одна или более групп ПЭГ присоединяются к антителу или фрагменту антитела. В некоторых вариантах осуществления пегилирование выполняют с помощью реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой ПЭГ (или аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). Используемый в настоящем описании термин полиэтиленгликоль включает любой из форм ПЭГ, которые используются для дериватизации других белков, например моно(CI-CЮ)алкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или полиэтиленгликольмалеимид. В некоторых вариантах осуществления антитело, подлежащее пегилированию, представляет собой агликозилированное антитело. Способы пегилирования белков известны в данной области и могут применяться к антителам, описанным в настоящей заявке; см., например, ЕР 0154316, Nishimura et al., и ЕР 0401384, Ishikawa et al.

Нуклеиновые кислоты и клетки-хозяева.

Также представлены нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело или его тяжелую или легкую цепь или ее часть. Типичные нуклеиновые кислоты представлены в таблице последовательностей. Любая нуклеиновая кислота, которая составляет по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% или 99% нуклеиновой кислоты, приведенной в таблице последовательностей, включена в настоящее описание. Также включены композиции, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело, представленные в настоящем описании, а также клетки, содержащие их, и способы получения антител, включающие культивирование клетки, трансформированной нуклеиновой кислотой, кодирующей анти-VTSTA антитело, и выделение антитела из среды или клетки.

Способы лечения с помощью VISTA-ECD-связывающих Ab и соответствующих фармацевтических композиций.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело, которое связывается с VISTA при низком рН и, например, не демонстрирует значимого связывания при нейтральном или физиологическом рН, может быть антагонистическим антителом к VISTA, т.е. антителом, которое ингибирует действие VISTA настолько, что происходит стимуляция иммунного ответа. Такие антитела можно использовать для лечения заболеваний, при которых требуется стимуляция иммунной системы или иммунного ответа, таких как пролиферативные заболевания (доброкачественные или злокачественные), рак и инфекционные заболевания (например, вирусные инфекции).

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело, которое связывается с VISTA при низком рН и, например, не демонстрирует значимого связывания при нейтральном или физиологическом рН, может представлять собой агонистическое антитело к VISTA, т.е. антитело, которое усиливает действие VISTA настолько, что происходит подавление иммунного ответа. Такие антитела можно использовать для лечения заболеваний, при которых желательно подавить иммунную систему или иммунный от

- 73 042790 вет, таких как аутоиммунные заболевания и воспалительные состояния, такие как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, целиакия, синдром Шегрена, болезнь Грейвса, воспалительное заболевание кишечника, псориаз, анкилозирующий спондилит, болезнь трансплантат-против-хозяина, аллергия и астма.

Раскрытые в настоящем описании антитела могут быть использованы, например, для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления предлагаются способы лечения рака, включающие введение пациенту эффективного количества описанного в настоящем описании антитела. В некоторых вариантах осуществления Ab могут запускать или усиливать иммунный ответ у пациента, такой как антигенспецифический иммунный ответ. В некоторых вариантах осуществления Ab могут стимулировать активность Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления Ab могут ингибировать рост по меньшей мере одной опухоли у пациента.

В настоящем документе предлагаются способы лечения индивида, страдающего раком, включающие введение индивиду терапевтически эффективного количества описанного в настоящем описании анти-VISTA антитела такого, что происходит лечение индивида. Анти-VISTA антитело можно использовать отдельно. Альтернативно, анти-VISTA антитело можно использовать в комбинации с другим агентом, что более подробно описано ниже.

Примеры раковых заболеваний, которые можно лечить с помощью Ab, специфически связывающегося с белком VISTA-ECD в кислых условиях, как описано в настоящем описании, включают, без ограничения, рак, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Раковые заболевания, которые можно лечить с помощью описанного в настоящем описании Ab также включают раковые заболевания, обычно реагирующие на иммунотерапию, и те, которые обычно не реагируют на иммунотерапию. Раковые заболевания, которые можно лечить, также включают VISTA-положительные раковые заболевания, например, раковые заболевания, имеющие VISTA-положительные инфильтрирующие опухоль клетки, например лимфоциты, миелоидные или моноцитарные клетки. Раковые заболевания могут представлять собой раковые заболевания с солидными опухолями или злокачественными новообразованиями крови (опухолями жидких тканей).

Неограничивающие примеры злокачественных заболеваний для лечения включают плоскоклеточную карциному, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), неквамозный NSCLC, глиому, рак желудочно-кишечного тракта, почечный рак (например, светлоклеточную карциному), рак яичников, рак печени, колоректальный рак, рак эндометрия, рак почки (например, почечно-клеточный рак (RCC)), рак простаты (например, гормонорефрактерную аденокарциному простаты), рак щитовидной железы, нейробластому, рак поджелудочной железы, глиобластому (мультиформную глиобластому), рак шейки матки, рак желудка, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки и рак головы и шеи (или карциному), опухоли желудка, опухоли из зародышевых клеток, детскую саркому, синоназальные новообразования из натуральных киллеров, меланому (например, метастатическую злокачественную меланому, такую как кожная или внутриглазная злокачественная меланома), рак костей, рак кожи, рак матки, рак анальной области, рак яичка, карциному маточных труб, рак эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному вульвы, карциному пищевода, рак тонкой кишки, рак эндокринной системы, рак паращитовидной железы, рак надпочечников, саркому мягких тканей, рак мочеиспускательного канала, рак полового члена, солидные опухоли у детей, рак мочеточника, карциному почечной лоханки, новообразования центральной нервной системы (ЦНС), первичную лимфому ЦНС, ангиогенез опухоли, опухоли вдоль оси позвоночника, рак головного мозга, глиому ствола головного мозга, аденому гипофиза, саркому Капоши, эпидермоидный рак, плоскоклеточный рак, Т-клеточную лимфому, раковые заболевания, индуцированные окружающей средой, включая раковые заболевания, вызванные асбестом, вирусные раковые заболевания или раковые заболевания, инициированные вирусом (например, вирусом папилломы человека (HPV-связанные или -инициированные опухоли)), и гематологические злокачественные новообразования, происходящие из любой из двух основных линий клеток крови, т.е. линии миелоидных клеток (которая продуцирует гранулоциты, эритроциты, тромбоциты, макрофаги и мастоциты) или линии лимфоидных клеток (которая продуцирует В, Т, NK и плазматические клетки), такие как все типы лейкозов, лимфом и миелом, например, острые, хронические, лимфоцитарные и/или миелогенные лейкозы, такие как острый лейкоз (ALL), острый миелогенный лейкоз (AML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL) и хронический миелогенный лейкоз (CML), недифференцированный AML (МО), миелобластный лейкоз (ML), миелобластный лейкоз (М2; с созреванием клеток), промиелоцитарный лейкоз (вариант М3 или вариант М3 [M3V]), миеломоноцитарный лейкоз (М4 или вариант М4 с эозинофилией [М4Е]), моноцитарный лейкоз (М5), эритролейкоз (М6), мегакариобластный лейкоз, изолированная гранулоцитарная саркома и хлорома; лимфомы, такие как лимфома Ходжкина (HL), неходжкинская лимфома (NHL), В-клеточное гематологическое новообразование, например, В-клеточные лимфомы, Тклеточные лимфомы, лимфоплазмоцитоидная лимфома, моноцитоидная В-клеточная лимфома, лимфома лимфоидных тканей, ассоциированных со слизистыми оболочками (MALT), анапластическая (например, Ki 1+) крупноклеточная лимфома, Т-клеточная лимфома/лейкемия взрослых, лимфома мантийных клеток, ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома, ангиоцентрическая лимфома, кишечная Т-клеточная

- 74 042790 лимфома, первичная медиастинальная В-клеточная лимфома, лимфобластная лимфома из предшественников Т-клеток, Т-лимфобластная; и лимф ому/лейкоз (Т-Lbly/T-ALL), периферическую Т-клеточную лимфому, лимфобластную лимфому, посттрансплантационное лимфопролиферативное заболевание, истинную гистиоцитарную лимфому, первичную лимфому центральной нервной системы, первичную эффузионную лимфому, В-клеточную лимфому, лимфобластную лимфому (LBL), гематопоэтические опухоли лимфоидного происхождения, острый лимфобластный лейкоз, диффузную В-клеточную крупноклеточную лимфому, лимфому Беркитта, фолликулярную лимфому, диффузную гистиоцитарную лимфому (DHL), крупноклеточную иммунобластную лимфому, В-клеточную лимфобластную лимфому, кожную Т-клеточную лимфому (CTLC) (также называемую грибовидным микозом или синдромом Сезари) и лимфоплазмацитоидную лимфому (LPL) с макроглобулинемией Вальденстрема; миеломы, такие как миелома IgG, миелома легких цепей, несекреторная миелома, тлеющая миелома (также называемая индолентной миеломой), солитарная плазмоцитома и множественные миеломы, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), лимфома волосковых клеток; гематопоэтические опухоли миелоидного происхождения, опухоли мезенхимного происхождения, включая фибросаркому и рабдомиоскаркому; семиному, тератокарциному, опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, шванномы; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому, рабдомиоскарому и остеосаркому; и другие опухоли, включая меланому, пигментную ксеродерму, кератоакантому, семиному, фолликулярный рак щитовидной железы и тератокарциному, гематопоэтические опухоли лимфоидной линии, например Т-клеточные и В-клеточные опухоли, включая, без ограничения, Т-клеточные нарушения, такие как Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз (T-PLL), включая мелкоклеточный и церебриформный тип клеток; лейкоз из крупных гранулярных лимфоцитов (LGL) Т-клеточного типа; a/d T-NHL гепатоспленальную лимфому; периферическую/пост-тимусную Т-клеточную лимфому (плеоморфный и иммунобластный подтипы); ангиоцентрическую (назальную) Т-клеточную лимфому; рак головы или шеи, рак почки, рак прямой кишки, рак щитовидной железы; острую миелоидную лимфому, а также любые комбинации указанных раковых заболеваний. Способы, раскрытые в настоящем описании, также можно использовать для лечения метастатического рака, неоперабельных, резистентных раковых заболеваний (например, раковых заболеваний, невосприимчивых к предыдущей иммунотерапии, например, с помощью антитела блокирующего рецептор CTLA-4 или PD-1) и/или рецидивирующих раковых заболеваний.

В некоторых вариантах осуществления представлены способы лечения злокачественного новообразования, включающие введение индивиду, страдающему онкологическим заболеванием, выделенного антитела, которое специфически связывается с huVISTA в кислых условиях, как описано в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления представлено применение антитела, описанного в настоящем описании, для лечения рака.

В некоторых вариантах осуществления описанное в настоящем описании антитело вводят пациентам, страдающим злокачественным заболеванием, который проявляет неадекватный ответ на предшествующее лечение, или прогрессирует после предшествующего лечения, например предшествующего лечения иммуноонкологическим или иммунотерапевтическим препаратом. В некоторых вариантах осуществления рак является резистентным или устойчивым к предшествующему лечению, либо резистентным или устойчивым по своей природе (например, устойчивым к антагонисту пути PD-1), либо становится устойчивым или резистентным. Например, антитело, описанное в настоящем описании, можно вводить индивидам, которые не реагируют или демонстрируют недостаточный ответ на первое терапевтическое лечение или у которых наблюдается прогрессирование заболевания после лечения, например, лечения антагонистом сигнального пути PD-1, отдельно или в комбинации с другим терапевтическим агентом (например, терапии антагонистом сигнального пути PD-1). В других вариантах осуществления антитело, описанное в настоящем описании, вводят пациентам, которые ранее не получали (т.е. не подвергались лечению) иммуноонкологический агент, например антагонист пути PD-1.

В некоторых вариантах осуществления способ лечения злокачественного новообразования у индивида включает сначала определение мутационного бремени опухоли (ТМВ) у индивида и введение антиVISTA антитела на основании результатов, например индивидам, которые определены, как имеющие опухоль с высоким ТМВ.

Комбинации с иммуностимулирующими агентами.

В некоторых вариантах осуществления антитело, раскрытое в настоящем описании, например антагонистическое антитело к VISTA, раскрытое в настоящем описании, вводят в комбинации с и по меньшей мере одним иммуностимулирующим агентом. Например, терапевтические агенты могут вводиться вместе или примерно в одно и то же время. В некоторых вариантах осуществления антитело и по меньшей мере один иммуностимулирующий агент вводят последовательно. Например, в некоторых вариантах осуществления антитело вводят последовательно до или после введения по меньшей мере одного иммуностимулирующего агента таким образом, что два введение терапевтических агентов происходит с разницей по времени в 30 мин, 60 мин, 90 мин, 120 мин, 3 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 36 ч, 48 ч, 3 дня, 5 дней, 7 дней или две недели.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одну, по меньшей мере две, по меньшей

- 75 042790 мере три дозы, по меньшей мере пять доз или по меньшей мере десять доз антитела вводят до введения по меньшей мере одного иммуностимулирующего агента. В некоторых вариантах осуществления перед введением антитела вводят по меньшей мере одну, по меньшей мере две, по меньшей мере три дозы, по меньшей мере пять доз или по меньшей мере десять доз по меньшей мере одного иммуностимулирующего агента. В некоторых вариантах осуществления последнюю дозу иммуностимулирующего агента вводят по меньшей мере за один, два, три, пять или десять дней или одну, две, три, пять, двенадцать или двадцать четыре недели до введения первой дозы антитела. В некоторых вариантах осуществления последнюю дозу антитела вводят по меньшей мере за один, два, три, пять или десять дней или одну, две, три, пять, двенадцать или двадцать четыре недели до введения первой дозы по меньшей мере одного иммуностимулирующего агента. В некоторых вариантах осуществления индивид получал или получает терапию по меньшей мере одним иммуностимулирующим агентом, и VISTA-ECD-связывающее антитело добавляют к терапевтическому режиму.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит антагонист ингибитора активации Т-клеток, при этом в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит агонист стимулятора активации Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит антагонист CTLA4, LAG-3, PD-1, PD-L1, галектина 1, галектина 9, СЕАСАМ-1, BTLA, CD25, CD69, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, B7-H3, В7-Н4, 2В4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM1, TIM3, TIM4, ILT4, IL6, IL-10, TGFe, VEGF, KIR, LAG-3, аденозинового рецептора А2А, PI3Kdelta или IDO. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит агонист В7-1, В7-2, CD28, 4-1ВВ (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD27, CD40, CD40L, DR3, CD28H, IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, IFNa, STING или агонист Toll-подобного рецептора, такой как агонист TLR2/4. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит агент, который связывается с другим членом семейства мембраносвязанных белков В7, таким как В7-1, В7-2, В7-н2 (ICOS-L), B7-H3, В7-Н4 и В7-Н6. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, один иммуностимулирующий агент содержит агент, который связывается с членом семейства рецепторов TNF, или костимулирующую или коингибирующую молекулу, связывающуюся с членом семейства рецепторов TNF, таким как CD40, CD40L, ОХ40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1ВВ), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, EDA1, EDA2, TACI, APRIL, BCMA, LTeR, LIGHT, DeR3, HVEM, VEGL/TL1A, TRAMP/DR3, TNFR1, TNFe, TNFR2, TNFa, 1β2, FFA FASL, RELT, DR6, TROY или NGFe. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит агент, который противодействует или ингибирует активность цитокина, ингибирующего активацию Т-клеток, такого как IL-6, IL-10, TGFe, VEGF. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит агонист цитокина, стимулирующего активацию Т-клеток, такого как IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 и IFNa. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент содержит антагонист хемокина, такой как CXCR2, CXCR4, CCR2 или CCR4. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, один иммуностимулирующий агент содержит антитело. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один иммуностимулирующий агент может содержать вакцину, такую как вакцина, направленная на мезотелин, или противораковую вакцину аттенуированной листерии, такую как CRS-207.

Например, анти-VISTA антитело, раскрытое в настоящем описании, можно вводить с одним или более из следующих агентов:

(1) антагонистом (ингибитором или блокирующим агентом) белка, который ингибирует активацию Т-клеток (например, ингибитором иммунной контрольной точки), таким как CTLA-4, PD-1, PD-L1, PDL2 и LAG-3, галектин 9, СЕАСАМ-1, BTLA, CD69, галектин-1, TIGIT, CD113, GPR56, В7-Н3, В7-Н4, 2В4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, TIM-3 и TIM-4; и/или (2) агонистом белка, который стимулирует активацию Т-клеток, таким как В7-1, В7-2, CD28, 4-1ВВ (CD137), 4-1BBL, GITR, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, DR3 и CD28H.

Типичные агенты, которые можно комбинировать с анти-VISTA антителами, раскрытыми в настоящем описании, для лечения рака, включают: YERVOY® (ипилимумаб) или тремелимумаб (для CTLA-4), галиксимаб (для В7.1), BmS-936558 (для PD-1), МК-3475 (для PD-1), атезолизумаб (TECENTRIQ®), авелумаб, дурвалумаб, АМР224 (для B7DC), BMS-936559 (для В7-Н1), MPDL3280A (для В7Н1), MEDI-570 (для ICOS), AMG557 (для В7Н2), MGA271 (для В7Н3), IMP321 (для LAG-3), BMS-663513 (для CD137), PF-05082566 (для CD137), CDX-1127 (для CD27), анти-ОХ40 (Providence Health Services), huMAbOX40L (для OX40L), атацицепт (для TACI), СР-870893 (для CD40), лукатумумаб (для CD40), дацетузумаб (для CD40), муромонаб-CD3 (для CD3); анти-GITR антитела MK4166, TRX518, Medi1873, INBRX-110, LK2-145, GWN-323, GITRL-Fc или любую их комбинацию.

Другие молекулы, которые можно комбинировать с анти-VISTA антителами для лечения рака, включают антагонисты ингибирующих рецепторов на NK-клетках или агонисты активирующих рецеп

- 76 042790 торов на NK-клетках, например, антагонисты KIR (например, лирилумаб).

Активацию Т-клеток также можно регулировать с помощью растворимых цитокинов. В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитела можно вводить в комбинации с антагонистами цитокинов, которые предназначены для ингибирования активации Т-клеток, или агонистами цитокинов, которые стимулируют активацию Т-клеток. Например, анти-VISTA антитела можно использовать в комбинации с (i) антагонистами (или ингибиторами или блокирующими агентами) белков семейства IgSF или семейства В7 или семейства TNF, которые ингибируют активацию Т-клеток, или антагонистов цитокинов, которые ингибируют активацию Т-клеток (например, IL-6, IL-10, TGF-P, VEGF; иммуносупрессивных цитокинов), и/или (ii) агонистами стимулирующих рецепторов семейства IgSF, семейства В7 или семейства TNF или цитокинов, которые стимулируют активацию Т-клеток.

Другие агенты для комбинированной терапии включают агенты, которые ингибируют или истощают макрофаги или моноциты, включая, без ограничения, антагонисты CSF-1R, такие как антителаантагонисты CSF-1R, включая RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) или FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).

Анти-VISTA антитела также можно вводить с агентами, которые ингибируют передачу сигналов TGF-β.

Дополнительные агенты, которые можно комбинировать с анти-VISTA антителом, включают агенты, которые усиливают презентацию опухолевого антигена, например, вакцины на основе дендритных клеток, вакцины на основе клеток, секретирующих GM-CSF, олигонуклеотиды CpG и имиквимод, или терапевтические агенты, которые усиливают иммуногенность опухолевых клеток (например, антрациклины).

Другие терапевтические агенты, которые можно комбинировать с анти-VISTA антителом, включают терапевтические агенты, которые истощают или блокируют клетки Treg-клетки, например, агент, которое специфически связывается с CD25.

Другой терапевтический агент, который можно комбинировать с анти-VISTA антителом, является терапевтическим агентом, который ингибирует метаболический фермент, такой как индоламинодиоксигеназу (IDO), диоксигеназу, аргиназу или синтетазу оксида азота.

Другой класс агентов, которые можно использовать с анти-VISTA антителом, включает агенты, которые ингибируют образование аденозина, например ингибиторы CD73, или ингибируют рецептор аденозина А2А.

Другие терапевтические агенты, которые можно комбинировать с анти-VISTA антителом для лечения рака, включают терапевтические агенты, которые устраняют/предотвращают анергию или истощение Т-клеток, и терапевтические агенты, которые запускают активацию врожденной иммунной системы и/или воспаление в месте опухоли.

Другие терапевтические агенты, которые можно комбинировать с анти-VISTA антителом для лечения рака, включают терапевтические агенты, блокирующие IL-8, например HuMax®-IL8.

Анти-VISTA антитело может быть объединено с более чем одним иммуноонкологическим агентом и может быть объединено, например, с комбинаторным подходом, предназначенным для нацеливания на несколько элементов иммунного пути, таким как один или более из следующих: терапевтический агент, который усиливает презентацию опухолевого антигена (например, вакцина из дендритных клеток, вакцины на основе клеток, секретирующих GM-CSF, олигонуклеотиды CpG, имиквимод); терапевтический агент, который ингибирует негативную иммунную регуляцию, например, путем ингибирования пути CTLA-4 и/или PD1/PD-L1/PD-L2 и/или истощения или блокирования Treg-клеток или других иммуносупрессивных клеток; терапевтический агент, который стимулирует положительную иммунную регуляцию, например, агонисты, которые стимулируют пути CD-137, ОХ-40 и/или CD40 или GITR и/или стимулируют эффекторную функцию Т-клеток; терапевтический агент, который системно увеличивает частоту противоопухолевых Т-клеток; терапевтический агент, который истощает или ингибирует Tregклетки, такие как Treg-клетки в опухоли, например, с помощью антагониста CD25 (например, даклизумаба) или путем истощения ex vivo с помощью анти-CD25 шариков; терапевтический агент, который влияет на функцию супрессорных миелоидных клеток в опухоли; терапевтический агент, который усиливает иммуногенность опухолевых клеток (например, антрациклины); перенос адоптивных Т-клеток или NK-клеток, включая генетически модифицированные клетки, например клетки, модифицированные химерными антигенными рецепторами (терапия CAR-T); терапевтический агент, который ингибирует метаболический фермент, такой как индоламиндиоксигеназу (IDO), диоксигеназу, аргиназу или синтетазу оксида азота; терапевтический агент, который устраняет/предотвращает анергию или истощение Тклеток; терапевтический агент, который вызывает активацию врожденного иммунитета и/или воспаление в месте опухоли; введение иммуностимулирующих цитокинов; или блокирование иммунорепрессивных цитокинов.

Раскрытые в настоящем описании анти-VISTA антитела можно использовать вместе с одним или более агонистическими агентами, которые лигируют позитивные костимуляторные рецепторы, блокирующими агентами, которые ослабляют передачу сигналов через ингибирующие рецепторы, антагони

- 77 042790 стами и одним или более агентами, которые системно увеличивают частоту противоопухолевых Тклеток, агентами, которые преодолевают различные иммуносупрессивные пути в микроокружении опухоли (например, блокируют рекрутирование ингибирующего рецептора (например, взаимодействия PDL1/PD-1), истощают или ингибируют Treg-клетки (например, с помощью моноклонального антитела к CD25 (например, даклизумаба)) или путем ex vivo истощения с помощью анти-CD 25 гранул), ингибируют метаболические ферменты, такие как H₂O, или устраняют/предотвращают анергию или истощение Т-клеток) и агенты, которые запускают активацию врожденного иммунитета и/или воспаление в местах опухоли.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело вводят индивиду вместе с ингибитором BRAF, если индивид является положительным по мутации BRAF V600.

Антагонисты PD-1, подходящие для применения в раскрытой в настоящем описании комбинированной терапии включают, без ограничения, лиганды, антитела (например, моноклональные антитела и биспецифические антитела) и поливалентные агенты. В одном из вариантов осуществления антагонист PD-1 представляет собой рекомбинантный белок, например Fc-рекомбинантный белок, такой как АМР244. В одном из вариантов осуществления антагонист PD-1 представляет собой антитело к PD-1 или к PD-L1.

Типичным антителом к PD-1 является ниволумаб (BMS-936558) или антитело, которое содержит CDR или вариабельные области одного из антител 17D8, 2D3, 4Н1, 5С4, 7D3, 5F4 и 4А11, описанных в WO 2006/121168. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-1 представляет собой MK-3475 (ламбролизумаб), описанное в WO2012/145493; АМР-514, описанное в WO 2012/145493; или PDR001. Другие известные антитела к PD-1 и другие ингибиторы PD-1 включают агенты, описанные в WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, патентах США № 7635757 и 8217149 и публикации заявки на патент США № 2009/0317368. Также может быть использовано любое из антител к PD-1, раскрытых в WO2013/173223. Антитело к PD-1, которое конкурирует за связывание и/или связывается с тем же эпитопом на PD-1, что и одно из этих антител, также можно использовать в комбинированной терапии.

В некоторых вариантах осуществления антитело к PD-L1, применимое в комбинированной терапии, представляет собой BMS-936559 (обозначенное как 12А4 в WO 2007/005874 и патенте США № 7943743) или антитело, которое содержит CDR или вариабельные области 3G10, 12А4, 10А5, 5F8, 10Н10, 1В12, 7Н1, 11Е6, 12В7 и 13G4, которые описаны в РСТ публикации WO 07/005874 и патенте США № 7943743. В определенном варианте осуществления антитело к PD-L1 представляет собой MEDI4736 (также известное как дурвалумаб и анти-В7-Н1), MPDL3280A (также известное как атезолизумаб и RG7446), MSB0010718C (также известное как авелумаб; WO2013/79174) или rHigM12B7. Также может быть использовано любое из антител к PD-L1, раскрытых в WO2013/173223, WO2011/066389, WO2012/145493, патентах США №№ 7635757 и 8217149 и публикации заявки на патент США № 2009/145493. Антитела к PD-L1, которые конкурируют и/или связываются с тем же эпитопом, что и любое из этих антител, также можно использовать в комбинированной терапии.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело по изобретению может быть использовано с антагонистом CTLA-4, например анти-CTLA-4 антителом. В одном из вариантов осуществления анти-CTLA-4 антитело представляет собой антитело, выбранное из группы: YERVOY® (ипилимумаб или антитело 10D1, описанное в РСТ публикации WO 01/14424), тремелимумаб (ранее известное как тицилимумаб, СР-675,206), моноклональное или анти-CTLA-4 антитело, описанное в любой из следующих публикаций: WO 98/42752; WO 00/37504; патенте США № 6207156; Hurwitz et al. (1998) Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071; Camacho et al. (2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract No. 2505 (антитело СР-675206); и Mokyr et al. (1998) Cancer Res. 58:5301-5304. Также может быть использовано любое из анти-CTLA-4 антител, раскрытых в WO2013/173223.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело по изобретению используется в комбинации с антагонистом LAG3. Примеры анти-LAG3 антител включают антитела, содержащие CDR или вариабельные области антител 25F7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11F2 или 17Е5, которые описаны в публикации заявки на патент США №№ US2011/0150892, WO10/19570 и WO2014/008218. В одном из вариантов осуществления анти-LAG-3 антитело представляет собой BMS-986016. Другие известные в данной области анти-LAG-3 антитела, которые можно использовать, включают IMP731 и IMP-321, описанные в US 2011/007023, WO08/132601 и WO09/44273. Ahtu-LAG-3 антитела, которые конкурируют и/или связываются с тем же эпитопом, что и любой из этих антител, также можно использовать в комбинированной терапии.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело по изобретению может быть введено в комбинации с агонистом CD137 (4-1BB), таким как агонистическое антитело к CD137. Подходящие анти-CD137 антитела включают, например, урелумаб или PF-05082566 (W012/32433).

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело можно вводить в комбинации с агонистом ОХ40, таким как агонистическое антитело к ОХ40. Подходящие анти-ОХ40 антитела включают, например, MEDI-6383, MEDI-6469 или MOXR0916 (RG7888; WO06/029879).

В одном из вариантов осуществления анти-VISTA антитело вводят в комбинации с агонистом

- 78 042790

CD40, таким как агонистическое антитело к CD40. В некоторых вариантах осуществления иммуноонкологический агент представляет собой антагонист CD40, такой как антагонистическое антитело к CD40. Подходящие анти-CD40 антитела включают, например, люкатумумаб (HCD122), дацетузумаб (SGN-40), СР-870,893 или Chi Lob 7/4.

В одном из вариантов осуществления анти-VISTA антитело вводят в комбинации с агонистом CD27, таким как антитело-агонист к CD27. Подходящие анти-CD27 антитела включают, например, варлилумаб (CDX-1127).

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело вводят вместе с анти-GITR антителом, например антителом, имеющим последовательности CDR 6C8, например гуманизированным антителом, имеющим CDR 6C8, описанным, например, в WO 2006/105021; антителом, содержащим CDR анти-GITR антитела, описанного в WO 2011/028683; антителом, содержащим CDR анти-GITR антитела, описанного в JP2008278814, антителом, содержащим CDR анти-GITR антитела, описанного в WO2015/031667, WO2015/187835, WO2015/184099, WO2016/054638, WO2016/057841 или

WO2016/057846, или другим анти-GITR антителом, описанным или упомянутым в настоящем описании.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело вводят в комбинации с MGA271 (к В7Н3) (WO11/109400).

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело вводят в комбинации с антагонистом KIR, таким как лирилумаб.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело вводят в комбинации с антагонистом IDO. Подходящие антагонисты IDO включают, например, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), индоксимод, NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237) или F001287.

В некоторых вариантах осуществления анти-VISTA антитело вводят в комбинации с агонистом Toll-подобного рецептора, например, агонистом TLR2/4 (например, Bacillus Calmette-Guerin); агонистом TLR7 (например, хилтонолом или имиквимодом); агонистом TLR7/8 (например, резиквимодом); или агонистом TLR9 (например, CpG7909).

В одном из вариантов осуществления анти-VISTA вводят в комбинации с ингибитором TGF-β, например, GC1008, LY2157299, TEW7197 или IMC-TR1.

Дополнительная комбинированная терапия.

Раскрытые в настоящем описании Ab также могут быть введены до, по существу одновременно или после применения других режимов лечения, например, хирургического вмешательства, химиотерапии, лучевой терапии или введения биологического средства, такого как другое терапевтическое антитело. В некоторых вариантах осуществления рак рецидивировал или прогрессировал после терапии, выбранной из хирургического вмешательства, химиотерапии и лучевой терапии или их комбинации. Например, раскрытое в настоящем описании анти-VISTA антитело можно вводить в качестве дополнительной терапии, когда существует риск наличия микрометастазов и/или для снижения риска рецидива.

Для лечения рака можно вводить комбинации в сочетании с одним или более дополнительными противораковыми агентами, такими как химиотерапевтический агент, агент, ингибирующий рост, противораковая вакцина, такая как вакцина для генной терапии, анти-ангиогенный агент и/или противоопухолевая композиция. Неограничивающие примеры химиотерапевтического агента, агента, ингибирующего рост, противораковой вакцины, анти-ангиогенного агента и противоопухолевой композиции, которые можно использовать в комбинации с антителами по настоящему изобретению, представлены в настоящем описании в разделе Определения.

В некоторых вариантах осуществления можно вводить комбинацию с противовоспалительным лекарственным веществом, таким как стероидное или нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID). В случаях, когда желательно перевести аберрантно пролиферативные клетки в покоящееся состояние пациенту можно также вводить в комбинации или до лечения раскрытыми в настоящем описании анти-VISTA антителами гормоны и стероиды (включая синтетические аналоги), такие как 17а-этинилэстрадиол, диэтилстилбестрол, тестостерон, преднизон, флуоксиместерон, дромостанолона пропионат, тестолактон, мегестролацетат, метилпреднизолон, метил-тестостерон, преднизолон, триамцинолон, хлортрианизен, гидроксипрогестерон, аминоглутетимид, эстрамустин, медроксипрогестеронацетат, леупролид, флутамид, торемифен, ZOLADEX®. При использовании способов или композиций, раскрытых в настоящем описании, в клинических условиях при необходимости также можно вводить другие агенты, используемые для модуляции роста опухоли или метастазирования, такие как антимиметики.

Раскрытые в настоящем описании антитела также можно комбинировать с иммуногенным агентом, таким как злокачественные клетки, очищенные опухолевые антигены (включая рекомбинантные белки, пептиды и молекулы углеводов), клетки и клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины (He et al., (2004) J. Immunol. 173:4919-28). Неограничивающие примеры противоопухолевых вакцин, которые можно использовать, включают пептиды антигенов меланомы, такие как пептиды gp100, антигены MAGE, Trp-2, MART1 и/или тирозиназу, или опухолевые клетки, трансфи

- 79 042790 цированные для экспрессии цитокина GM-CSF (обсуждается ниже).

Было показано, что у людей некоторые опухоли являются иммуногенными, такие как меланомы. При снижении порога активации Т-клеток путем ингибирования VISTA можно активировать опухолевые реакции у хозяина, что позволяет лечить неиммуногенные опухоли или опухоли с ограниченной иммуногенностью.

Раскрытое в настоящем описании анти-VISTA антитело также можно комбинировать с протоколом вакцинации. Было разработано много экспериментальных стратегий вакцинации против опухолей (см. Rosenberg S., 2000 г., Development of Cancer Vaccines, ASCO Education Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000 г., учебная книга ASCO Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Education Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; см. также Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043, DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition). В соответствии с одной из этих стратегий, вакцину готовят с использованием аутологичных или аллогенных опухолевых клеток. Было показано, что эти клеточные вакцины наиболее эффективны, когда опухолевые клетки трансдуцированы для экспрессии GM-CSF. Было показано, что GM-CSF является сильным активатором презентации антигена для противоопухолевой вакцинации (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90:3539-43).

Изучение экспрессии генов и крупномасштабных паттернов экспрессии генов в различных опухолях привело к определению так называемых опухолеспецифических антигенов (Rosenberg, S.A. (1999) Immunity 10:2817). Во многих случаях эти опухолеспецифические антигены являются антигенами дифференцировки, экспрессируемыми в опухолях и в клетке, из которой возникла опухоль, например, антигенами меланоцитов gp100, антигенами MAGE и Trp-2. Более важной является возможность демонстрации того, что многие из этих антигенов являются мишенями опухолеспецифических Т-клеток, обнаруженных у хозяина. Ингибирование VISTA можно использовать в сочетании с коллекцией рекомбинантных белков и/или пептидов, экспрессируемых в опухоли, для создания иммунного ответа на эти белки. Эти белки обычно рассматриваются иммунной системой как собственные антигены и, следовательно, она является толерантной по отношению к ним. Опухолевый антиген может включать белок теломеразу, который необходим для синтеза теломер хромосом и который экспрессируется более чем в 85% случаев рака человека и только в ограниченном количестве соматическими тканями (Kim et al. (1994) Science 266:2011-2013). Опухолевый антиген также может быть неоантигеном, экспрессируемым в раковых клетках из-за соматических мутаций, которые изменяют белковую последовательность или создают слитые белки между двумя неродственными последовательностями (т.е. bcr-abl в хромосоме Филадельфии), или идиотипом из В-клеточных опухолей.

Другие противоопухолевые вакцины могут включать белки вирусов, вовлеченных в злокачественных заболевания человека, таких как вирусы папилломы человека (HPV), вирусы гепатита (HBV и HCV) и вирус саркомы Капоши (KHSV). Другой формой опухолеспецифического антигена, которую можно использовать в сочетании с ингибированием VISTA, являются очищенные белки теплового шока (HSP), выделенные из самой опухолевой ткани. Эти белки теплового шока содержат фрагменты белков из опухолевых клеток, и эти HSP являются очень эффективными при доставке в антигенпрезентирующие клетки для индуцирования противоопухолевого иммунитета (Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120).

Дендритные клетки (DC) являются мощными антигенпрезентирующими клетками, которые можно использовать для инициации антигенспецифических ответов. DC могут быть получены ex vivo и нагружены различными белковыми и пептидными антигенами, а также экстрактами опухолевых клеток (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4:328-332). DC также могут быть трансдуцированы генетическими способами для экспрессии этих опухолевых антигенов. Также осуществляли слияние DC непосредственно с опухолевыми клетками для целей иммунизации (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). В качестве метода вакцинации, иммунизацию DC можно эффективно комбинировать с ингибированием VISTA для активации более сильных противоопухолевых ответов.

Лечение инфекционных заболеваний.

Описанные в настоящей заявке способы также могут быть использованы для лечения пациентов, которые подверглись воздействию конкретных токсинов или патогенов. Соответственно, настоящее изобретение также относится к способам лечения инфекционного заболевания у индивида, включающим введение индивиду раскрытого в настоящем описании антитела, например, антагонистического антитела к VISTA, для лечения инфекционного заболевания у индивида. Подобно его применению к опухолям, как обсуждалось выше, опосредуемое антителами ингибирование VISTA можно использовать отдельно или в качестве адъюванта в сочетании с вакцинами для стимуляции иммунного ответа на патогены, токсины и аутоантигены. Примеры патогенов, в отношении которых этот терапевтический подход может быть особенно полезен, включают патогены, для которых в настоящее время отсутствуют эффективные вакцины, или патогены, для которых обычные вакцины не являются эффективными. К ним относятся, помимо прочего, ВИЧ-инфекция, гепатит (А, В и С), грипп, герпес, Giardia, малярия, лейшмания, золотистый стафилококк, Pseudomonas aeruginosa. Ингибирование VISTA может оказаться полезным для лечения агентами установленных инфекций, таких как ВИЧ, которые презентируют измененные антигены в ходе инфекций.

- 80 042790

Некоторые примеры патогенных вирусов, вызывающих инфекции, которые можно лечить описанными в настоящем описании способами, включают ВИЧ, гепатит (А, В или С), вирус герпеса (например, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II и CMV, Вирус Эпштейна-Барра), аденовирус, вирус гриппа, флавивирусы, эховирус, риновирус, вирус Коксаки, коронавирус, респираторно-синцитиальный вирус, вирус паротита, ротавирус, вирус кори, вирус краснухи, парвовирус, вирус коровьей оспы, вирус HTLV, вирус денге, вирус папилломы, вирус molluscum, полиовирус, вирус бешенства, вирус JC и вирус арбовирусного энцефалита.

Некоторые примеры патогенных бактерий, вызывающих инфекции, которые можно лечить раскрытыми в настоящем описании способами, включают хламидиоз, риккетсиозную бактерию, микобактерию, стафилококк, стрептококк, пневмококк, менингококк и гонококк, Klebsiella, Proteus, Serratia, Pseudomonas, Legionella, дифтерию, сальмонеллы, микобактерию, холеру, столбняк, ботулизм, сибирскую язву, чуму, лептоспироз и бактерии болезни Лайма.

Некоторые примеры патогенных грибков, вызывающих инфекции, которые можно лечить раскрытыми в настоящем описании способами, включают Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis и т.д.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger и т.д.), род Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis и Histoplasma capsulatum.

Некоторые примеры патогенных паразитов, вызывающих инфекции, которые можно лечить раскрытыми в настоящем описании способами, включают Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Tripanosoma brucei, Tripanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii и Nippostrongylus brasiliensis.

Во всех вышеописанных способах ингибирование VISTA можно сочетать с другими формами иммунотерапии, например, описанными в настоящем описании, такими как лечение цитокинами (например, интерферонами, GM-CSF, G-CSF, IL-2) или терапией биспецифическими антителами, что может обеспечить улучшенную презентацию опухолевых антигенов (см., например, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123).

Способы введения и носители.

В различных вариантах осуществления антитела могут вводиться in vivo различными путями, включая, без ограничения, перорально, внутриартериально, парентерально, интраназально, внутримышечно, внутрисердечно, интравентрикулярно, интратрахеально, буккально, ректально, интраперитонеально, внутрикожно, местно, трансдермально и интратекально, или иным способом путем имплантации или ингаляции. Композиции по настоящему изобретению могут быть приготовлены в виде лекарственных форм в твердом, полутвердом, жидком или газообразном виде; включая, без ограничения, таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, клизмы, инъекции, формы для ингаляции и аэрозоли. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело, может быть нанесена на золотые микрочастицы и доставлена внутрикожно с помощью устройства для бомбардировки частицами или генной пушки, как описано в литературе (см., например, Tang et al., Nature 356:152-154 (1992)). Соответствующий состав и способ введения могут быть выбраны в соответствии с предполагаемым применением.

В различных вариантах осуществления композиции, содержащие антитела, предоставляют в составах с широким разнообразием фармацевтически приемлемых носителей (см., например, Gennaro, Remington: Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20^th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe er al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3^rd ed., Pharmaceutical Press (2000)). Доступны различные фармацевтически приемлемые носители, которые включают несущую среду, адъюванты и разбавители. Кроме того, также доступны различные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как регуляторы рН и буферные агенты, регуляторы тоничности, стабилизаторы, смачивающие агенты и т.п. Неограничивающие примеры носителей включают физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации.

В различных вариантах осуществления композиции, содержащие антитела, могут быть приготовлены для инъекции, включая подкожное введение, путем растворения, суспендирования или эмульгирования их в водном или неводном растворителе, таком как растительные или другие масла, синтетические глицериды алифатических кислот, сложные эфиры высших алифатических кислот, или пропиленгликоль; и, необязательно, с обычными добавками, такими как солюбилизаторы, регуляторы тоничности, суспендирующие агенты, эмульгирующие агенты, стабилизаторы и консерванты. В различных вариантах осуществления композиции могут быть приготовлены для ингаляции, например, с использованием приемлемых пропеллентов под давлением, таких как дихлордифторметан, пропан, азот и т.п. В различных вариантах осуществления композиции также могут быть приготовлены в виде микрокапсул с замедленным высвобождением, таких как биоразлагаемые или небиоразлагаемые полимеры. Неограничивающий пример биоразлагаемого состава включает полимер поли(молочная-со-гликолевая кислота). Неограничивающий пример небиоразлагаемого состава включает сложный эфир полиглицерина и жирной кислоты. Некоторые способы приготовления таких составов описаны, например, в ЕР 1155584 А1.

- 81 042790

Также предоставляются фармацевтические упаковки и наборы, содержащие один или более контейнеров, каждый из которых содержит одну или более доз антитела или комбинаций антител. В некоторых вариантах осуществления предоставляется единичная дозировка, содержащая заданное количество композиции, содержащей антитело или комбинацию антител с одним или более дополнительными агентами или без них. В некоторых вариантах осуществления такая единичная дозировка поставляется в заполненном шприце для инъекций одноразового использования. В различных вариантах осуществления композиция, содержащаяся в единичной дозировке, может содержать физиологический раствор, сахарозу или т.п.; буфер, такой как фосфатный или т.п.; и/или может быть приготовлена в стабильном и эффективном диапазоне рН. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления композиция может быть представлена в виде лиофилизированного порошка, который может быть восстановлен путем добавления подходящей жидкости, например, стерильной воды. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более веществ, которые подавляют агрегацию белка, включая, без ограничения, сахарозу и аргинин. В некоторых вариантах осуществления композиция по изобретению содержит гепарин и/или протеогликан.

Фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения или профилактики конкретного показания. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса индивида, получающего лечение, его или ее физического состояния или состояния здоровья, степени тяжести состояния, подлежащего лечению, или возраста индивида, получающего лечение. Обычно антитела можно вводить в количестве от примерно 10 мкг/кг массы тела до примерно 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела можно вводить в количестве от примерно 50 мкг/кг массы тела до примерно 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела можно вводить в количестве от примерно 100 мкг/кг массы тела до примерно 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела можно вводить в количестве от примерно 100 мкг/кг массы тела до примерно 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела можно вводить в количестве от примерно 0,5 мг/кг массы тела до примерно 20 мг/кг массы тела на дозу.

Композиции антител можно вводить индивидам при необходимости. Специалисты в данной области, например лечащий врач, могут определить частоту введения, исходя из информации о состоянии, подлежащего лечению, возрасте индивида, получающего лечение, тяжести состояния, подлежащего лечению, общего состояния здоровья пациента, получающего лечение, и т.п. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу антитела вводят индивиду один или более раз. В различных вариантах осуществления эффективную дозу антитела вводят индивиду один раз в месяц, реже одного раза в месяц, например, каждые два месяца или каждые три месяца. В других вариантах осуществления эффективную дозу антитела вводят более одного раза в месяц, например, каждые три недели, каждые две недели или каждую неделю. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу антитела вводят один раз в 1, 2, 3, 4 или 5 недель. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу антитела вводят два или три раза в неделю. Эффективную дозу антитела вводят индивиду по меньшей мере один раз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза антитела может вводиться несколько раз, включая в течение периода, например, по меньшей мере одного месяца, по меньшей мере шести месяцев или по меньшей мере года.

В некоторых вариантах осуществления комбинация анти-VISTA антитела и второго агента, обсуждаемого в настоящем описании, может вводиться одновременно в виде одной композиции в фармацевтически приемлемом носителе или одновременно в виде отдельных композиций анти-VISTA антитела и второго агента в фармацевтически приемлемом носителе. В одном из вариантов осуществления комбинацию анти-VISTA антитела и второго агента можно вводить последовательно. Введение двух агентов можно начинать с разницей во времени, например, в 30 мин, 60 мин, 90 мин, 120 мин, 3 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 36 ч, 48 ч, 3 дня, 5 дней, 7 дней или одну или более недель, или прием второго агента можно начинать, например, через 30 мин, 60 мин, 90 мин, 120 мин, 3 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 36 ч, 48 ч, 3 дней, 5 дней, 7 дней или одной или более недель после введения первого агента.

Методы идентификации связывания hVISTA-ECD Ab при низком рН.

В настоящем описании также представлены способы идентификации Ab, которые специфически связываются с белком VISTA-ECD в кислых (или при низком рН) условиях. В некоторых вариантах осуществления способ идентификации Ab, который специфически связывается с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или менее, включает контактирование тестируемого Ab или множества тестируемых Ab с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или менее и выбор тестируемого Ab, если оно связывается с ECD белка VISTA с K_D 10^-7 М, 10^-8 М, 10^-9 М или менее. В некоторых вариантах осуществления способ осуществляют при рН 6,5, в то время как в других вариантах осуществления его осуществляют при рН 6,0, или при рН 5,5, или при рН 5,0. В некоторых вариантах осуществления белок VISTA-ECD представляет собой белок hVISTA-ECD или содержит домен IgV hVISTA, или представляет собой полипептид, содержащий аминокислоты 20-95 SEQ ID NO:2 или аминокислоты 20-70, 35-95 или 35-70 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления полипептид также содержит аминокислоты 95-105 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит аминокислоты 35-127 или 37-125 SEQ ID NO:2.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает тестирование связывания

- 82 042790 тестируемого Ab или множества тестируемых Ab при нейтральном, физиологическом или щелочном рН, например, при рН 7,0 или рН 7,4. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает выбор антитела, если оно не только связывается с белком VISTA-ECD с K_D 10^-7 М, 10^-8 М, 10^-9 М или менее при рН 6,5 или ниже, но также если оно специфически связывается с полипептидом при рН 7,0 или рН 7,4. В некоторых вариантах осуществления тестируемые Ab выбирают, если они специфически связываются с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже, и также специфически связываются с белком VISTA-ECD при нейтральном и/или щелочном рН с аналогичным сродством (т.е. являются пан-связывающими веществами). Например, некоторые такие Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с KD 10^-7 М, 10^-8 М, 10^-9 М или менее как при рН 6,5, так и при рН 7,0 или рН 7,4 (при постоянной температуре например, при 25°С или при 37°С), причем значение KD при рН 6,5 находится в пределах 1,5-кратного значения K_D при рН 7,0.

Некоторые Ab могут быть выбраны, если они специфически связываются с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже с более высоким сродством, чем при нейтральном или щелочном рН (рН-чувствительные связывающие вещества или рН-чувствительные Ab). Например, в некоторых вариантах осуществления Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с K_D 10^-8 М или менее при рН 6,5 и с KD более 10^-8 М при рН 7,0 или рН 7,4. В некоторых таких вариантах осуществления Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с KD 10^-8 М или менее при рН 6,5 и с K_D при рН 7,0 или рН 7,4, которая более чем в 1,5 раза превышает K_D при рН 6,5. В некоторых вариантах осуществления рНчувствительное Ab выбирают, если оно специфически связывается с белком VISTA-ECD с KD, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз или 5000 раз ниже при рН 6,5, чем при рН 7,0 или рН 7,4 (при постоянной температуре, например, 25°С или при 37°С). Например, в некоторых случаях Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD с KD, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз или 5000 раз ниже или выше при рН 6,0, чем при рН 7,0 или рН 7,4 (при постоянной температуре, например, 25°С или при 37°С).

В некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно специфически связывается с белком VISTA-ECD со значением koff, которое в кислых условиях ниже, чем в нейтральных, физиологических или щелочных условиях. В некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD в кислых условиях с k_off, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз или 100 раз ниже при рН 6,5, чем при рН 7,0 или рН 7,4. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD со скоростью koff, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз или 100 раз ниже при рН 6,0, чем при рН 7,0 или рН 7,4.

В некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD с k_on, которая выше в кислых условиях по сравнению с нейтральными или щелочными условиями. В некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD в кислых условиях с k_on, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 2 раза, 5, 10, 20, 50 или 100 раз выше при рН 6,5, чем при рН 7,0 или рН 7,4. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD с kon, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 2 раза, 5, 10, 20, 50 или 100 раз выше при рН 6,0, чем при рН 7,0 или рН 7,4.

Методы модификации рН-чувствительности VISTA-ECD-связывающих Ab.

Ab, которое связывается с белком VISTA-ECD, но не связывается с ним при рН 6,5 или ниже или не связывается с ним с высоким сродством при рН 6,5 или ниже, может быть использовано для увеличения его сродства связывания при рН 6,5 или ниже. Например, паратоп Ab может быть мутирован, например, путем замены одного или более аминокислотных остатков. Например, в некоторых вариантах осуществления от 1 до 8, например от 1 до 6, от 1 до 4, от 1 до 3, от 1 до 2 или 1 аминокислотный остаток в тяжелой или легкой цепи Ab, который является остатком, контактирующим с VISTA-ECD (например, остатком в одной или более CDR), может быть заменен другим аминокислотным остатком. Затем мутированный Ab может быть протестирован в отношении связывания с белком VISTA-ECD при рН 6,5 или ниже, и могут быть выбраны варианты Ab, демонстрирующие более высокое сродство связывания по сравнению с родительским антителом. При необходимости описанные выше этапы можно повторять путем осуществления двух или более циклов мутагенеза и селекции Ab и отбора антител с наивысшим сродством связывания при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления такие циклы отбора могут улучшить противоопухолевую эффективность полученного антитела по сравнению с родительским антителом.

Вышеупомянутый способ отбора также может быть разработан согласно ранее описанному общему отбору антител, специфически связывающихся с белком VISTA-ECD. А именно, в некоторых вариантах осуществления улучшенное Ab выбирают, если оно связывается с ECD белка VISTA с K_D 10^-8 M или менее при рН 6,5. В некоторых вариантах осуществления отбор осуществляют при рН 6,0 или при рН 5,5

- 83 042790 или при рН 5,0, а не при рН 6,5. В некоторых вариантах осуществления белок VISTA-ECD, используемый для процесса селекции, представляет собой полноразмерный белок hVISTA-ECD или представляет собой полипептид, который включает домен IgV hVISTA, или представляет собой полипептид, содержащий аминокислоты 20-95 SEQ ID NO:2, или аминокислоты 20-70, 35-95 или 35-70 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления полипептид также содержит аминокислоты 95-105 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления используется полипептид, содержащий аминокислотные остатки 35-127 SEQ ID NO:2.

В некоторых вариантах осуществления способ улучшения связывания анти-VISTA антитела с ECD VISTA при кислом рН включает увеличение количества остатков глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты и гистидина в одной или более CDR VH, например, CDR1, CDR2 и CDR3 VH.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает тестирование связывания выбранного Ab при нейтральном, щелочном или физиологическом рН, таком как при рН 7,0 или 7,4. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает выбор антитела, если оно не только связывается с белком VISTA-ECD с K_D 10^-8 М ИЛИ менее при рН 6,5 или ниже, но также если оно специфически связывается с полипептидом при рН 7,0 или 7.4. В некоторых таких вариантах осуществления Ab выбирают, если они специфически связываются с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже, а также специфически связываются с белком VISTA-ECD при нейтральном и/или щелочном или физиологическом рН с аналогичным сродством (т.е. являются пан-связывающими веществами). Например, некоторые такие Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с K_D 10^-8 М или менее как при рН 6,5, так и при рН 7,0 (при постоянной температуре, например, 25°С или при 37°С), при этом KD при рН 6,5 находится в пределах 1,5-кратного значения KD при рН 7,0 или при рН 7,4.

Некоторые Ab могут быть выбраны, если они специфически связываются с белком VISTA-ECD в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже с более высоким сродством, чем при нейтральном, физиологическом или щелочном рН (рН-чувствительные связывающие вещества или рН-чувствительные Ab). Например, в некоторых вариантах осуществления Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с KD 10^-8 М или менее при рН 6,5 и с KD более 10^-8 М при рН 7,0. В некоторых таких вариантах осуществления Ab могут связываться с белком VISTA-ECD с KD 10^-8 М ИЛИ менее при рН 6,5 и с KD при рН 7,0, которая более чем в 1,5 раза выше, чем при рН 6,5. В некоторых вариантах осуществления рН-чувствительное Ab выбирают, если оно специфически связывается с белком VISTA-ECD с KD, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз или 5000 раз ниже при рН 6,5, чем при рН 7,0 или рН 7,4 (при постоянной температуре, например, 25°С или при 37°С). Например, в некоторых случаях Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD с KD, которая по меньшей мере, в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз, 100 раз, 300 раз, 500 раз, 1000 раз или 5000 раз ниже или выше при рН 6,0, чем при рН 7,0 или рН 7,4 (при постоянной температуре, например, 25°С или при 37°С).

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение koff при двух значениях рН. В некоторых таких вариантах осуществления Ab выбирают, если оно специфически связывается с белком VISTA-ECD с k_off, которая ниже в кислых условиях, чем в нейтральных, физиологических или щелочных условиях. В некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD в кислых условиях с koff, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз или 100 раз ниже при рН 6,5, чем при рН 7,0 или рН 7,4. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD со скоростью koff, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 1,5 раза, 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 50 раз или 100 раз ниже при рН 6,0, чем при рН 7,0.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает определение k_on при двух значениях рН. В некоторых таких вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD с ko_n, которая выше в кислых условиях по сравнению с нейтральными, физиологическими или щелочными условиями. В некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTA-ECD в кислых условиях с ko_n, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 2 раза, 5, 10, 20, 50 или 100 раз выше при рН 6,5, чем при рН 7,0 или рН 7,4. Например, в некоторых вариантах осуществления Ab выбирают, если оно связывается с белком VISTAECD с ko_n, измеренной, например, при 25°С или при 37°С, которая по меньшей мере в 2 раза, 5, 10, 20, 50 или 100 раз выше при рН 6,0 чем при рН 7,0 или рН 7,4.

Антитела, которые связываются с huVISTA преимущественно при кислом рН, по сравнению с нейтральным или физиологическим рН, могут быть идентифицированы путем положительного скрининга библиотеки анти-VISTA антител или Fab или scFv в отношении связывания при кислом рН, например, рН 6,0 или 6,5, и отрицательного скрининга библиотеки для определения отсутствия связывания при нейтральном рН, например, рН 7,0 или физиологическом рН, например, рН 7,4. Библиотека может быть обогащена остатками глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты и гистидина, например, для отбора связывающих доменов, которые заряжены положительно и с большей вероятностью связываются с VISTA при кислом рН. Скрининг может включать положительный отбор при кислом рН и отрицатель

- 84 042790 ный отбор при нейтральном или физиологическом рН. Этапы положительного и отрицательного отбора могут чередоваться.

Альтернативно, антитело, связывающееся с VISTA при нейтральном рН и/или не связывающееся при кислом рН, может быть спроектировано таким образом, чтобы оно не связывалось при нейтральном рН, а связывалось при кислом рН.

Конкретные варианты осуществления

Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения включают следующее.

1. Выделенное антитело (Ab), которое специфически связывается с внеклеточным доменом (ECD) человеческого содержащего иммуноглобулин-V-домен супрессора Т-клеточной активации (hVISTA), где Ab:

a) связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с константой сродства (KD) 10^-7 М или менее;

b) связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с константой скорости диссоциации (koff) 10^-3 с^-1 или менее; или

c) связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10^-7 М или менее и k_off 10^-3 с^-1 или менее.

2. Выделенное Ab по варианту осуществления 1, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10^-8 М или менее.

3. Выделенное Ab по варианту осуществления 2, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10^-9 М или менее.

4. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-3, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с ko_ff 10^-4 с^-1 или менее.

5. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-4, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 7,0 или выше с:

a) K_D 10^-7 М или менее;

b) koff 10^-3 с^-1 или менее; или

c) K_D 10^-7 М или менее и kf 10^-3 с^-1 или менее.

6. Выделенное Ab по варианту осуществления 5, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 7,0 или выше с K_D 10^-8 М или менее.

7. Выделенное Ab по варианту осуществления 6, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 7,0 или выше с K_D 10^-9 М или менее.

8. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 5-7, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 7,0 или выше с k_off 10^-4 с^-1 или менее.

9. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 5-8, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с таким же сродством, как при рН 7,0.

10. Выделенное Ab по варианту осуществления 9, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с более высоким сродством чем при рН 7,0.

11. Выделенное Ab по варианту осуществления 10, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с KD, которая по меньшей мере в 1,5 раза ниже чем при рН 7,0.

12. Выделенное Ab по варианту осуществления 11, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с KD, которая по меньшей мере в 2 раза ниже чем при рН 7,0.

13. Выделенное Ab по варианту осуществления 11, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с KD, которая по меньшей мере в 5 раз ниже чем при рН 7,0.

14. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 10-13, где Ab связывается с hVISTAECD при рН 6,5 с koff, которая ниже чем при рН 7,0.

15. Выделенное Ab по варианту осуществления 14, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с koff, которая по меньшей мере в 1,5 раза ниже чем при рН 7,0.

16. Выделенное Ab по варианту осуществления 15, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с koff, которая по меньшей мере в 2 раза ниже чем при рН 7,0.

17. Выделенное Ab по варианту осуществления 16, где Ab связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 с k_off, которая по меньшей мере в 5 раз ниже чем при рН 7,0.

18. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-17, где Ab специфически связывается с hVISTA-ECD в условиях, в которых по меньшей мере один остаток гистидина hVISTA-ECD является протонированным.

19. Выделенное Ab по варианту осуществления 18, где Ab связывается с доменом IgV hVISTAECD.

20. Выделенное Ab варианта осуществления 19, где Ab связывается с областью, расположенной в пределах аминокислот 20 и 95 SEQ ID NO:2.

21. Выделенное Ab по варианту осуществления 20, где Ab связывается с областью, расположенной в пределах аминокислот 20 и 70 SEQ ID NO:2.

22. Выделенное Ab по варианту осуществления 21, где Ab связывается с областью, расположенной в пределах аминокислот 35 и 70 SEQ ID NO:2.

23. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 20-22, где Ab дополнительно связывается с другой областью ECD hVISTA.

- 85 042790

24. Выделенное Ab по варианту осуществления 23, где другая область расположена в пределах аминокислот 95 и 105 SEQ ID NO:2.

25. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 18-24, где связывание определяют методом дейтеро-водородного обмена в сочетании с масс-спектрометрией (HDX-MS).

26. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-25, где Ab ингибирует связывание hVISTA с клеткой, с которой hVISTA связался бы в других условиях.

27. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-26, где Ab запускает или усиливает иммунный ответ в модели опухоли.

28. Выделенное Ab по варианту осуществления 27, где Ab запускает или усиливает активность Т-клеток в модели опухоли.

29. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-28, где Ab ингибирует рост опухоли на модели опухоли.

30. Выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-29, где Ab ингибирует связывание hVISTA с Т-клетками.

31. Ab по варианту осуществления 30, где Ab более сильно ингибирует связывание hVISTA с Т-клетками при рН 6,5 или ниже, чем при рН 7,0 или выше, например, когда антитело более сильно ингибирует связывание hVISTA с Т-клетками рН 6,5, чем при рН 7,0.

32. Композиция, содержащая выделенное Ab по любому из вариантов осуществления 1-31 и фармацевтически приемлемый носитель.

33. Способ лечения индивида, страдающего раком, включающий введение индивиду композиции по варианту осуществления 32.

34. Способ идентификации Ab, которое связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10- М или менее, включающий приведение в контакт тестируемого Ab или множества тестируемых Ab с полипептидом, содержащим hVISTA-ECD или его фрагмент, содержащий домен IgV hVISTA-ECD или содержащий аминокислоты 20-95, 20-70 или 35-70 SEQ ID NO:2 при рН 6,5 или ниже, и выбор одного или более тестируемых Ab, которые связываются с полипептидом с K_D 10^-7 М или менее.

35. Способ идентификации Ab, которое связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с k_off 10^-3 с^-1 или менее, включающий приведение в контакт тестируемого Ab или множества тестируемых Ab с полипептидом, содержащим hVISTA-ECD или его фрагмент, содержащий домен IgV hVISTA-ECD или содержащий аминокислоты 20-95, 20-70 или 35-70 SEQ ID NO:2 при рН 6,5 или ниже, и выбор одного или более тестируемых Ab, которые связываются с полипептидом с kf 10^-3 с^-1 или менее.

36. Способ идентификации Ab, которое специфически связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 со сродством, аналогичным таковому при рН 7,0, включающий:

а) приведение в контакт тестируемого Ab или множества тестируемых Ab при рН 6,5 с полипептидом, содержащим hVISTA-ECD или его фрагмент, содержащий домен IgV hVISTA-ECD или содержащий аминокислоты 20-95, 20-70 или 35-70 SEQ ID NO:2;

b) приведение в контакт тестируемого Ab или множества тестируемых Ab при рН 7,0 с полипептидом из (а); и

c) выбор тестируемого Ab, если оно связывается с полипептидом с KD 10^-7 М ИЛИ менее при рН 6,5 и при рН 7,0.

37. Способ идентификации Ab, которое связывается с hVISTA-ECD с более высоким сродством при рН 6,5, чем при рН 7,0, включающий:

а) приведение в контакт тестируемого Ab или множества тестируемых Ab при рН 6,5 с полипептидом, содержащим hVISTA-ECD или его фрагмент, содержащий домен IgV hVISTA-ECD или содержащий аминокислоты 20-95, 20-70 или 35-70 SEQ ID NO:2;

b) приведение в контакт тестируемого Ab или множества тестируемых Ab при рН 7,0 с полипептидом из (а) и

c) выбор тестируемого Ab, если оно связывается с полипептидом с KD по меньшей мере в 2 раза ниже при рН 6,5, чем при рН 7,0.

38. Способ идентификации Ab, которое специфически связывается с hVISTA-ECD, для применения при лечении рака, включающий:

а) идентификацию Ab, которое специфически связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже, например, в соответствии со способами по вариантам осуществления 32-35; и

b) выбор Ab из (а), которые запускают или усиливают иммунный ответ в модели опухоли или которые ингибируют рост опухоли при рН 6,5 или ниже.

39. Способ по варианту осуществления 38, в котором этап (b) включает измерение активности Т-клеток.

40. Способ по варианту осуществления 38 или 39, дополнительно включающий измерение противоопухолевого эффекта Ab.

41. Способ улучшения противоопухолевой эффективности Ab, которое связывается с hVISTA-ECD, включающий:

а) предоставление Ab, которое связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже со сродством, ко

- 86 042790 торое меньше требуемого значения;

b) замену 1-5 аминокислотных остатков в тяжелой или легкой цепи Ab другим аминокислотным остатком, где 1-5 аминокислотных остатков являются остатками контактирования с hVISTA-ECD;

c) определение, имеет ли Ab, полученное в (b), более высокое сродство к hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже по сравнению с Ab из (а); и

d) повторение этапов (а)-(с) в количестве циклов, достаточных для получения Ab, которое связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10^-7 M или менее.

42. Способ улучшения противоопухолевой эффективности Ab, которое связывается с hVISTA-ECD, включающий:

a) предоставление Ab, которое связывается с hVISTA-ECD при рН 6,5 или менее со сродством, которое меньше требуемого значения;

b) получение библиотеки вариантов Ab из (а), где каждый вариант содержит замену от 1 до 5 аминокислотных остатков в тяжелой или легкой цепи Ab на другой аминокислотный остаток, причем указанные от 1 до 5 аминокислотных остатков являются остатками, контактирующими с hVISTA-ECD;

c) выбор Ab из библиотеки вариантов из (b), которые связываются с hVISTA-ECD при рН 6,5 или ниже с K_D 10^-7 М или менее; и

d) тестирование противоопухолевой эффективности Ab из (с) на модели опухоли.

43. Способ улучшения фармакокинетического профиля антитела, которое связывается с человеческим ECD VISTA, включающий усиление способности антитела связываться с человеческим VISTA в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже.

44. Способ выбора антитела, которое связывается с человеческим VISTA и имеет увеличенный период полувыведения (хорошие фармакокинетические свойства), при этом способ включает выбор антитела, которое связывается с человеческим VISTA в кислых условиях, например, при рН 6,5 или ниже.

Примеры

Приведенные ниже примеры предназначены исключительно для иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Примеры не означают, что приведенные ниже эксперименты являются всеми или единственными проведенными экспериментами. Точность используемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.) гарантирована, но следует учитывать ошибки эксперимента и отклонения. Если не указано иное, части представляют собой части по массе, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура представлена в градусах по Цельсию, а давление равно атмосферному или близкому к нему.

Пример 1. Внеклеточный домен VISTA исключительно богат гистидинами.

В этом примере показано, что внеклеточный домен VISTA исключительно богат остатками гистидина, что эти остатки гистидина являются эволюционно консервативными, и что они могут участвовать во взаимодействиях рецептор-лиганд, в которых задействован VISTA.

Аминокислотные последовательности внеклеточных доменов (ECD) белков, содержащих иммуноглобулиновый домен, выделяли из баз данных uniprot и swiss-prot и анализировали на содержание гистидина. На фиг. 1А показано графическое представление результатов этого анализа. Для каждого белка на оси Y показана частота остатков гистидина в процентах от всех аминокислотных остатков внеклеточного домена, а общее количество аминокислотных остатков во внеклеточном домене показано на оси X. Диаметр каждой точки данных соответствует общему количеству остатков гистидина во внеклеточном домене каждого белка. VISTA (помеченный) содержит исключительно высокую частоту остатков гистидина во внеклеточном домене.

Затем оценивали эволюционную консервативность остатков гистидина в VISTA. На фиг. 1В показаны эталонные аминокислотные последовательности VISTA человека, яванского макака и мыши, за исключением сигнальных пептидов (Sig), трансмембранных доменов (TMD) и внутриклеточных доменов. Остатки гистидина, которые сохранились у всех трех видов, выделены жирным шрифтом и подчеркнуты. Остатки гистидина, которые консервативны у VISTA человека и яванского макака, выделены жирным шрифтом без подчеркивания. Многие из остатков гистидина внеклеточного домена VISTA являются эволюционно консервативными, что свидетельствует о важной биологической роли высокого содержания гистидина в VISTA.

На основании результатов анализа гомологии последовательностей для структур, доступных в базе данных PDB, создавали трехмерную модель домена IgV hVISTA.

Модель, приведенная на фиг. 1С, показывает, что многие гистидины в ECD VISTA экспонированы на поверхности молекулы, где они могут играть роль в связывании лиганда, а также в распознавании антител. Остатки гистидина изображены в виде шариков и стержней.

Пример 2. Протонирование гистидина может регулировать VISTA лиганд-рецепторное взаимодействие и иммуносупрессивную активность в опухолях и других кислых микроокружениях.

В этом примере описано протонирование гистидина в ответ на физиологически релевантный кислый рН, а также описана модель, в которой гистидины внеклеточного домена VISTA обеспечивают селективность контррецептора или лиганда в кислом, а не физиологическом, рН.

На фиг. 2А показано равновесие между отсутствием и наличием протонирования аммониевой груп

- 87 042790 пы (NH) пиррола в остатке гистидина. Значение рКа гистидина в растворе составляет 6,5, что указывает на то, что по всей вероятности при рН 6,5 и ниже, в отличие от более высоких значений рН, происходит протонирование остатков гистидина и, таким образом, они становятся положительно заряженными. Увеличение положительного заряда на поверхности ECD VISTA в результате протонирования может влиять на связывание рецептора с лигандом, а также на структуру и/или функцию VISTA. Таким образом, изменение рН также может модифицировать антитело-связывающие эпитопы и/или приводить к изменению сродства антитела.

На фиг. 2В показана модель, в которой VISTA селективно связывается с PSGL-1 или другими контррецепторами и лигандами (VISTA-R) при кислом рН. Ожидается, что при физиологическом рН, например в крови, остатки гистидина в ECD VISTA являются непротонированными, и, в результате, уровень связывания VISTA с PSGL-1 или другими контррецепторами и лигандами при физиологическом рН будет незначительным. Напротив, в местах с тенденцией к снижению внеклеточного рН до кислого, таких как микроокружение опухоли или места воспаления, кислый рН может частично или полностью управлять протонированием гистидина в ECD VISTA и, таким образом, обеспечивать взаимодействие VISTA с PSGL-1 или другими контррецепторами и лигандами. Соответственно, антитела, которые сильно связываются с белками VISTA-ECD в кислых диапазонах рН, могут оказаться более эффективными в отношении ингибирования активности VISTA в опухолях.

Пример 3. VISTA экспрессируется миеломоноцитарными клетками в опухолях.

В этом примере показано, что VISTA часто экспрессируется миеломоноцитарными клетками в опухолях, включая макрофаги, дендритные клетки и гранулоциты.

Резецированные хирургическим путем немелкоклеточную карциному легкого, почечно-клеточный рак, меланому, колоректальный рак и другие образцы опухолей промывали в ледяном PBS, разрезали на кусочки размером примерно 15 мм³ и суспендировали в охлажденной льдом среде RPMI-1640 (Fisher Scientific кат. № 11875093) с добавлением 2% инактивированной нагреванием FBS и 2 мМ ЭДТА (Fisher Scientific 15575020). Каждый образец переносили в гомогенизатор Даунса с большим прозрачным стеклянным окном (Tenbroeck Tissue Grinders) и измельчали до визуальной диссоциации кусочков ткани. Суспензии фильтровали через 70 мкМ нейлоновую сетку и центрифугировали. Супернатанты отбрасывали, и клеточные осадки ресуспендировали в среде PBS комнатной температуры, дополненном 0,1% бычьим сывороточным альбумином и 250 мг/мл стерильно-отфильтрованной ДНКазы 1 (степень II, из поджелудочной железы крупного рогатого скота, Roche кат. № 10104159001) в течение 3 мин при комнатной температуре. Затем клетки промывали в охлажденном льдом RPMI и ресуспендировали в охлажденной льдом среде PBS. Добавляли краситель для определения жизнеспособных клеток, и клетки инкубировали на льду в темноте. Через 20 мин окрашивание неспецифических антител блокировали путем добавления 4% нормальной крысиной сыворотки, 4% нормальной мышиной сыворотки, 20% человеческой сыворотки из плазмы АВ и разбавляли Human TruStain FcX™ в отношении 1:125 (Biolegend кат. № 422302). Клетки окрашивали анти-HLA-DR антителами, конъюгированными с флуорофором (BD Biosciences кат. № 564040), CD8 (Fisher Scientific кат. № 46-0087-42), CD14 (Biolegend кат. 325620), CD45 (Biolegend кат. № 304017), CD4 (BD Biosciences кат. № 563875), CD11c (BD Biosciences кат. № 744439), CD15 (BD Biosciences кат. № 563142), PD-1 (BD Biosciences кат. № 565299), CD3 (BD Biosciences кат. № 565515), CD56 (Fisher Scientific кат. № 61-0567-42), CD19 (BD Biosciences кат. № 564977) и VISTA (VISTA антитело 3, конъюгированное с AlexaFluor™ 647, Fisher Scientific кат. № A20186), суспендировали в буфере Brilliant Stain (BD Biosciences кат. № 562794) в течение 30 мин на льду в темноте. Окрашенные клетки промывали в ледяной PBS, фиксировали (Fisher Scientific кат. № 00-5523-00) и собирали на проточном цитометре. Данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJoT (BD Biosciences). Как показано на фиг. 3, экспрессия VISTA на клеточной поверхности была самой высокой у макрофагов и гранулоцитов, у дендритных клеток была умеренной, и низкой оказалась у Т-клеток, натуральных киллерных клеток и В-клеток.

Пример 4. Связывание клеток с VISTA демонстрирует селективность при кислом рН.

В этом примере показано, что мультимеризованный ECD человеческого VISTA более эффективно связывается со стимулированными человеческими CD4+ Т-клетками и мононуклеарными человеческими клетками периферической крови при кислом рН, чем при нейтральном или физиологическом рН, и что блокирующее человеческий VISTA антитело может блокировать это связывание. Также показано рНселективное связывание димеризованного мышиного ECD VISTA с мышиными спленоцитами.

Обогащение человеческих CD4+ Т-клеток выполняли из здоровой донорской крови, используя RosetteSep™ (Stemcell кат. № 15062), и стимулировали in vitro в течение примерно четырех дней с помощью человеческого CD3/CD28 Т-активатора Dynabeads™ (Fisher Scientific кат. № 111.32D) и рекомбинантного человеческого IL-2 (Peprotech кат. № 200-02) в RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием FBS, Glutamax™ (Fisher Scientific кат. № 35050061), незаменимых аминокислот (Fisher Scientific 11140050), пирувата натрия (Fisher Scientific кат. № 11360070) и 2-меркаптоэтанола (Fisher Scientific 21985023). Активированные CD4+ Т-клетки окрашивали в течение 30 мин при комнатной температуре монобиотинилированными молекулами ECD hVISTA (Phe 33 - Ala 194 (Accession # ААН20568)

- 88 042790 полигистидин; AcroBiosystems, Inc. B75-H82F3), загруженными в 28:1 молярном отношении к декстрамерам стрептавидина, конъюгированного с фикоэритрином (РЕ) (кат. № DXO1-PE), разведенным в забуференном солевом растворе Хэнка (HBSS, Fisher Scientific кат. № 14025134), подкисленном до различных значений рН с помощью мМ MES (Sigma 1317-100ML). В качестве контроля использовали активированные CD4+ Т-клетки, окрашенные РЕ-конъюгированными декстрамерами стрептавидина, которые не были загружены hVISTA. Окрашенные клетки промывали HBSS+MES и собирали на проточном цитометре. Данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo™ (BD Biosciences). Результаты, изображенные на фиг. 4А, показывают, что hVISTA не связывается с CD4+ Т-клетками лучше, чем контроль при рН> 6,5. Напротив, связывание hVISTA с CD4+ Т-клетками значимо усиливалось при рН <6,5. На чертеже слева, гистограммы, окрашенные цветами от темно-серого до светло-серого, демонстрируют связывание при рН 7,0, 6,5, 6,4, 6,3, 6,1 и 6,0. Некоторые гистограммы обозначены соответствующими значениями рН. Связывание не-VISTA контрольного мультимера при рН 6,0 показано в виде неокрашенной гистограммы. Справа, на графике показана средняя интенсивность флуоресценции (MFI) РЕ для CD4+ Т-клеток, окрашенных hVISTA-загруженными декстрамерами (синие кружки) или незагруженными декстрамерами (треугольники), при различных значениях рН.

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) обогащали из крови здорового донора центрифугированием в градиенте фиколла (Ficoll-Paque Plus, GE Life Sciences кат. № 17144003) и окрашивали hVISTA-загруженными декстрамерами (также называемыми мультимерами) и конъюгированными с флуорофором, разведенными в буферах HBSS+MES, как описано выше. Представленные на фиг. 4В гистограммы, окрашенные цветами от темно-серого до светло-серого, показывают связывание с CD19+ В-клетками, CD4+ Т-клетками, CD8+ Т-клетками, CD56+ NK-клетками и CD14+ моноцитами при рН 6,0. Неокрашенные гистограммы, изображенные сплошной и пунктирной линиями, показывают связывание при рН 7,4 с общим пулом лимфоцитов и моноцитов РВМС, соответственно. Результаты показывают, что hVISTA связывается с большим количеством лейкоцитов при кислом рН и незначительным при физиологическом рН.

Активированные человеческие CD4+ Т-клетки окрашивали hVISTA мультимерами при рН 6 в присутствии оттитрованного человеческого анти-VISTA антитела или не специфического к VISTA антитела соответствующего изотипа. Результаты, представленные на фиг. 4С, показывают MFI мультимерного VISTA относительно концентрации антител. Анти-hVISTA антитело (антитело 3 к VISTA; квадраты), а не неспецифическое к VISTA контрольное антитело (кружки), блокировало связывание hVISTA с активированными CD4+ Т-клетками зависимым от концентрации образом. MFI РЕ, наблюдаемый в CD4+ Тклетках, не окрашенных hVISTA-загруженными мультимерами, включен в качестве контроля (один треугольник).

На фиг. 4D показаны построенные по результатам проточной цитометрии репрезентативные двумерные графики окрашивания мультимером VISTA при рН 6,0 в мутантных в отношении гепарансульфата клетках яичника китайского хомячка (СНО) (линия pGSD-677, Американская коллекция типовых культур), которые были трансфицированы для экспрессии полноразмерного человеческого PSGL-1 (SEQ ID NO:3; нуклеиновая кислота NM_003006.4). Окрашивание выполняли в присутствии или в отсутствие оттитрованного антитела, блокирующего VISTA (mAb 3). Клетки, оставшиеся неокрашенными мультимерами VISTA, приведены в качестве контроля. Окрашивание анти-PSGL-1 антителом (BD Biosciences № 562758) показано на оси Y, а окрашивание мультимером VISTA показано на оси X.

У мышей C57BL6/J (Jackson Laboratory, кат. № 000664) собирали спленоциты, которые окрашивали рекомбинантными химерными белками ECD mVISTA/IgG человека (фрагмент, кристаллизуемый), а затем конъюгированными с флуорофором вторичными антителами к человеческому Fc IgG (Jackson Immunoresearch кат. № 109-065-098) при рН 6,0 или 7,4. Результаты, представленные в виде гистограммы на фиг. 4Е, показывают, что mVISTA связывается с мышиными спленоцитами более эффективно при рН 6,0, чем при физиологическом рН (примерно рН 7,4). Гистограммы, окрашенные цветами от темносерого до светло-серого, демонстрируют связывание с CD8+ Т-клетками, CD11b⁺ миелоидными клетками и CD4+ Т-клетками при рН 6,0. Неокрашенная гистограмма демонстрирует связывание с общим пулом спленоцитов при рН 7,4.

Пример 5. VISTA селективно опосредует межклеточную адгезию и иммуносупрессию при кислом рН.

В этом примере показано, что VISTA опосредует межклеточную адгезию и подавляет активацию Тклеток более сильно при кислом рН, чем при нейтральном или физиологическом рН.

Выполняли анализ проточной цитометрии межклеточных конъюгатов в кислом рН. Клетки 293Т (иммортализованная клеточная линия эмбриональной почки человека, кат. № АТСС CRL-3216), эктопически экспрессирующие полноразмерный человеческий VISTA или Vector, метили CFSE (карбоксифлуоресцеин сукцинимидиловый эфир; Fisher Scientific кат. № С34554). Клетки СНО метили CellTrace™ Far Red (Fisher Scientific кат. № C34564). Затем экспрессирующие Vector или VISTA клетки 293Т смешивали в соотношении 1:1с клетками СНО в буфере с рН 7,0 или рН 6,0 и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Образование межклеточных конъюгатов между СНО и 293Т оценивали с помощью

- 89 042790 проточной цитометрии. Результаты на фиг. 5А, В показывают, что при кислом рН адгезия происходит предпочтительно между экспрессирующими VISTA клетками 293T и клетками СНО, и что введение антитела, блокирующего VISTA (VISTA mAb 3; красные столбики), ингибирует опосредованную VISTA межклеточную адгезию.

Выполняли анализ супрессии Т-клеток в кислой среде. Клетки Jurkat (иммортализованная линия человеческих Т-клеток, кат. № ATCC TIB-152), экспрессирующие репортер люциферазы, управляемый промотором NFkB, культивировали в буферах HBSS+MES с разными значениями рН совместно с клетками 293Т (иммортализованная линия клеток эмбриональной почки человека, АТСС кат. № CRL-3216), эктопически экспрессирующими полноразмерный человеческий VISTA и одноцепочечный вариабельный фрагмент клона ОКТ3 агонистического антитела к рецептору человеческих Т-клеток, при 10:1 соотношении клеток Jurkat:293T. К совместным культурам добавляли блокирующее VISTA антитело (VISTA mAb 3) или не специфическое к VISTA контрольное антитело соответствующего изотипа в концентрации 10 мкг/мл. После инкубации выполняли количественное определение активации Т-клеток Jurkat путем измерения активности люциферазы (1-секундный интервал, Promega, кат. № G7940). Результаты показаны на фиг. 5C, D. На фиг. 5С показан график единиц люциферазы в клетках Jurkat, обработанных анти-VISTA антителом (красные квадраты) или контрольным антителом (синие кружки) при различных значениях рН. На фиг. 5D показан график сигнала люциферазы в совместных культурах, обработанных анти-VISTA антителом, разделенных в зависимости от сигнала люциферазы в контрольных совместных культурах, обработанных антителом, при каждом протестированном рН. Результаты показывают, что опосредованная VISTA супрессия Т-клеток наиболее эффективна при кислом рН.

Пример 6. Перенос VISTA происходит посредством внутриклеточных рециркулирующих эндосом.

В этом примере показано, что VISTA может быть обнаружен во внутриклеточных эндосомах, в частности Rab11⁺ рециркулирующих эндосомах, и может рециркулировать на клеточную поверхность и с клеточной поверхности посредством эндосомного транспорта. Сила, с которой анти-VISTA антитело связывается с VISTA при кислом рН, влияет на его способность оставаться связанным с VISTA во время эндосомного транспорта.

Моноциты выделяли из РВМС методом магнитно-активированного сортинга клеток. Затем и моноциты, и клетки 293Т фиксировали в 4% параформальдегиде и окрашивали внутриклеточно на Rab5, Rab7 или Rab11 и анти-VISTA антитело или контрольное антитело. Контрольное антитело (сАЬ), которое является не связывающим VISTA антителом того же изотипа, что и анти-VISTA антитело, не обнаруживает связывания с моноцитами или клетками 293Т, экспрессирующими человеческий VISTA. АнтиVISTA и контрольное антитела метили непосредственно А1еха488. Антитела к Rab детектировали с помощью вторичного антитела А1еха594 к кроличьему Ig. Окрашивание Hoescht 33342 выполняли для идентификации клеточных ядер. Изображения получали с помощью конфокального микроскопа с вращающимся диском. На фиг. 6А показана совместная локализация VISTA, Rab5 (маркер ранней эндосомы), Rab7 (маркер поздней эндосомы) и Rab11 (маркер рециркулирующей эндосомы) в клетках 293Т, экспрессирующих человеческий VISTA. На фиг. 6В показана совместная локализация VISTA и Rab11 в человеческих моноцитах. Внутриклеточный VISTA расположен вместе с Rab11⁺ рециклирующими эндосомами.

Для оценки способности VISTA рециркулировать посредством эндосом выполняли анализ уничтожения эндолизосомо-зависимого конъюгата лекарственного средства с антителом, используя три антитела к hVISTA (VISTA mAb 1, 2 и 3) с разными свойствами связывания VISTA при физиологическом и кислом рН. Сначала выполняли анализ ППР для сравнения профилей связывания hVISTA всех трех антиVISTA антител при рН 7,4, 6,7 и 6,0. Анти-VISTA антитела иммобилизовали на биосенсоре Biacore® T100 (GE Healthcare) CM5, содержащим иммобилизованный белок А, затем вводили 100 нМ hVISTAECD (аминокислоты 32-193 SEQ ID NO:1 с 7xHis хвостом, т.е. AFKVATPYSL YVCPEGQNVT LTCRLLGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES SDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVY PSSSQESENI ТАННННННН; SEQ ID NO:325) в подвижном буфере PBST при указанном рН при 37°С. Сенсограммы с вычтенным эталонным значением нормализовали по точке связывания и наносили на график. Антитело VISTA 3, mAb 3 (фиг. 6С, сверху), показало наибольшую степень нарушения связывания с VISTA при кислом рН, за которым следовало антитело VISTA 2, mAb 2 (фиг. 6С, посередине), связывание которого было нарушено в умеренной степени. Анти-VISTA антитело 1, mAb 1, сохраняло сильное связывание с VISTA в кислых и физиологических рН (фиг. 6С, снизу).

Анализ уничтожения эндолизосомо-зависимых конъюгатов лекарственного вещества с антителом выполняли следующим образом. Клетки AML3 (иммортализованная клеточная линия моноцитов человека, АТСС CRL-9589), эндогенно экспрессирующие человеческий VISTA, культивировали с оттитрованными антителами к VISTA или не специфическим к VTSTA контрольным антителом и вторичным антителом к человеческому IgG, которое было конъюгировано с чувствительным к катепсину В линкером и цитотоксической полезной нагрузкой, тубулизином. Поскольку катепсин В является активным преимущественно в поздних эндосомах и лизосомах, анти-VISTA антитела, которые рециркулируют с VISTA

- 90 042790 через ранние эндосомы и рециркулирующие эндосомы, будут иметь низкие уровни расщепления линкера и, как следствие, низкие уровни высвобождения цитотоксической полезной нагрузки и гибели клеток. Анти-VISTA антитела, которые диссоциируют из комплекса с VISTA в кислых эндосомах и группируются в поздних эндосомах и лизосомах, будут демонстрировать более высокие уровни расщепления линкера. Жизнеспособность клеток измеряли с помощью Cell Titer Glo® (Promega, кат. № G7573) через пять дней культивирования. На фиг. 6D представлены результаты этого анализа в графическом виде, где на оси Y показана жизнеспособность AML3 (Cell Titer Glo), а концентрация первичных антител показана на оси X. Вычисляли значения ЕС50 для первичных антител: анти-VISTA антитело 1, перевернутые треугольники, 0,485 мкг/мл; анти-VISTA антитело 2, кружки, 0,092 мкг/мл; анти-VISTA антитело 3, квадраты, 0,006 мкг/мл; контроль, треугольники, 1,085 мкг/мл. При кислом рН наблюдалась обратная корреляция между эффективностью антител и связыванием анти-VISTA антител.

Для подтверждения того, что связывание при кислом рН является причиной различий в эффективности, анти-VISTA антитело 3 оптимизировали по сродству с тем, чтобы улучшить его способность связываться с VISTA при кислом рН. На фиг. 6Е показан анализ ПНР, в котором выполнено сравнение профилей связывания hVISTA анти-VISTA антитела 3 с этим вариантом, анти-VISTA антителом 3с, в условиях анализа, описанных для фиг. 6С. Анти-VISTA антитело 3 снова демонстрирует нарушение связывания с VISTA при кислом рН, тогда как вариантное анти-VISTA антитело 3с демонстрирует сопоставимое связывание с VISTA при кислом и физиологическом рН. На фиг. 6F показана активность анти-VISTA антитела 3с (ромбы) в анализе уничтожения, описанном для фиг. 6F. Оптимизированный в отношении кислого рН вариант анти-VISTA антитела 3 показал в 31 раз более низкую активность, чем исходное антитело, что указывает на то, что нарушение связывания анти-VISTA антитела при кислом рН приводит к потере связывания с антителом во время рециркуляции VISTA.

Основываясь на этих выводах, была предложена модель рециклинга, согласно которой VISTA рециркулирует на поверхность клетки и с поверхности клетки через ранние эндосомы и рециркулирующие эндосомы. Эта модель изображена на фиг. 6G. Анти-VISTA антитела могут рециркулировать с VISTA через эти эндосомы, сохраняя взаимодействие с мишенью. Однако анти-VISTA антитела с нарушенным связыванием с VISTA при кислом рН, в частности антитела с высокой скоростью диссоциации при кислом рН, могут диссоциировать из комплекса с VISTA во время рециркуляции и оказаться захваченными клеткой или подвергаться расщеплению внутри клетки, что приводит к слабому захвату мишени и непрерывному потреблению циркулирующих антител. Напротив, антитела, которые связываются и остаются связанными с VISTA при кислом рН, могут сохранять более высокие уровни взаимодействия с мишенью, особенно в кислой среде микроокружения, такой как опухоли, и демонстрировать более длительное среднее время пребывания in vivo.

Пример 7. Превосходство анти-VISTA антител, не связывающихся при физиологическом рН.

Авторы изобретения показали, что VISTA является иммунорецептором, селективным при кислом рН, что демонстрирует важность и полезность нацеливания на VISTA антител, которые хорошо связываются при кислом рН. Кроме того, антитела, которые не связываются или демонстрируют незначительное связывание с VISTA при физиологическом рН, являются предпочтительными по нескольким причинам. Во-первых, из-за относительно высокой экспрессии VISTA в циркулирующих миеломоноцитарных клетках, в частности, в моноцитах и нейтрофилах, антитела, которые связываются с VISTA при физиологическом рН, подвержены воздействию эффекта высоких уровней мишень-опосредованного распределения препарата (TMDD) в крови. Этот эффект усугубляется склонностью VISTA рециркулировать через внутриклеточные эндосомы, что приводит к интернализации и деградации анти-VISTA. антител. Этот вторичный эффект особенно проблематичен для антител с нарушенным связыванием при кислом рН, что можно наблюдать для антител, которые связываются с поверхностью богатого гистидином лиганда VISTA. Оба эффекта приводят к уменьшению количества анти-VISTA антител в кровотоке, уменьшая количество антител, которые попадут в опухоль, и, следовательно, предполагаемую биологическую активность антитела. Во-вторых, антитела, которые связываются с VISTA при физиологическом рН и обладают эффекторными функциями, такими как индукция антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), антитело-зависимого клеточного фагоцитоза (ADCP) или доставка иммуномодулирующей полезной нагрузки, будут подвергать циркулирующие миеломоноцитарные клетки воздействию этих эффекторных функций, потенциально приводящих к нежелательным эффектам, таким как истощение или активация циркулирующих нейтрофилов. Таким образом, авторы изобретения обнаружили, что антитела, связывающиеся с huVISTA при кислом рН, и незначительно при физиологическом рН, имеют двойное преимущество: (1) они лучше воздействуют на соответствующие участки, такие как опухоли, и (2) они снижают токсичность при наличии эффекторных функций, таких как ADCC, ADCP или доставка иммуномодулирующей полезной нагрузки. Кроме того, поскольку VISTA сам по себе является иммунорецептором, селективным при кислом рН, то для модуляции VISTA лиганд-рецепторной активности, вероятно, нет необходимости в блокаде поверхности связывания лиганда VISTA при физиологическом рН. Следовательно, антитела, которые связываются с huVISTA при кислом рН, но незначительно при физиологическом рН, были получены, как описано ниже.

- 91 042790

Пример 8. Выделение анти-VISTA антител, связывающихся с человеческим VISTA преимущественно при кислом рН по сравнению с физиологическим рН.

В этом примере описано получение антител, которые связываются с человеческим VISTA преимущественно при низком (кислом) рН, а не нейтральном или физиологическом рН.

Конструировали библиотеку анти-VISTA антигенсвязывающих фрагментов антител, которые подвергали скринингу следующим образом. Библиотеки антител создавали с использованием генетического материала, полученного от мышей HuMab, иммунизированных полноразмерным человеческим VISTA (hVISTA). Эти антитела форматировали как scFv и отбирали по связыванию с полноразмерным hVISTA при низком рН (рН 6,0) с помощью мРНК дисплея (Xu L et al. (2002) Chemistry & Biology 9:933; Roberts RW и JW Szostak (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297; Kurz et al. (2000) Nucleic Acids Res. 28 (18):E83). Результаты отбора анализировали путем секвенирования следующего поколения (NGS), и идентифицировали членов библиотеки, демонстрирующих улучшенное связывание VISTA при низком рН, которые затем переформатировали как IgG1.3 (константная область IgG1 без эффектора, состоящая из Fc IgG1, имеющего аминокислотные мутации L234A, L235E и G237A) и выполняли скрининг в отношении связывания с VISTA методом ППР.

Анализ с помощью поверхностного плазмонного резонанса (ППР, SPR) выполняли для измерения скоростей ассоциации (определяемых как ka или k_on, 1/Мс), скоростей диссоциации (определяемых как K_D или koff, с^-1) и констант сродства (определяемых как K_D, М) ДЛЯ анти-VISTA Ab при кислых и физиологических значениях рН на приборе Biacore® T200 (GE Healthcare). Белок A (Fisher Scientific, кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ5 в соответствии с протоколом производителя для связывания амина (GE Healthcare), с целевой плотностью иммобилизации белка А 6000 RU на проточную кювету. Эксперименты ППР проводились при 37°С с использованием подвижного буфера PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% твин 20) при рН 7,4 и 6,0. Антитела разводили до 20 нМ в PBST с рН 7,4 и иммобилизовали в активных проточных кюветах биосенсора при 5 мкл/мин в течение 50 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 50-0,2 нМ моновалентного hVISTAECD (SEQ ID NO:325), используя подвижный буфер с рН 7,4 и 6,0, и вводили поверх иммобилизованных антител со скоростью 40 мкл/мин для измерения ассоциации и диссоциации. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина с рН 1,5. Константы скоростей ka (k_on) и K_D (koff) получали из эталонной проточной кюветы и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ и подгоняли к модели связывания 1:1 с помощью программного обеспечения Biacore® T200 Evaluation v.2.0. Для каждого анти-VISTA антитела рассчитывали отношение k_off при рН 6/koff при рН 7,4 для определения антител, имеющих медленные скорости диссоциации при кислом рН и быстрые скорости диссоциации при физиологическом рН.

Шесть антител, переформатированных как антитела IgG1.3, продемонстрировали почти одинаковое сродство как при рН 6, так и при рН 7,4. В частности, два антитела имели более низкую скорость диссоциации при рН 6,0, чем при рН 7,4 (т.е. более высокую k_off при рН 7,4, чем рН 6,0). Вариабельные области этих двух анти-huVISTA антител обозначали как Р1-061015 и Р1-061029, а антитела, содержащие эти вариабельные области и отформатированные как антитела IgG1.3, обозначали как P1-061015.IgG1.3 и P1061029.IgG1.3, соответственно. Показатели k_off для P1-061015.IgG1.3 и Р1-061029.IgG1.3 представлены в табл. 1.

Таблица 1

Значения k_off выбранных антител при рН 6,0 и 7,0

Обозначение антитела	рН=6 koff (s 1)	pH=7 kOff (s’1)	pH=6/pH=7 koff
Pl-061015.IgG1.3	1ДхЮ’3	2,3x1 O’3	0,6
Pl-061029.IgG1.3	4,8 χ IO’3	9,1 x IO’3	0,5

Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой и легкой цепей Р1-061015 и Р1-061029 представлены в табл. 2 ниже, а также приведены в таблице последовательностей в конце раздела Примеры.

- 92 042790

Таблица 2 Аминокислотные последовательности анти-huVISTA антител, связывающихся с huVISTA предпочтительно при рН 6,0, а не рН 7,4

IDP1	VH- ген	VH CDR1	VH CDR2	VH CDR3
Р1- 061015.IgG1.3	3-33	GFTFSSYAMH (остатки 26-35 SEQ ГО NO:95)	IIWYDGSNKYYADS VKG (остатки 50-66 SEQ ID NO:95)	DSGFYSSYYFDY (остатки 99-110 SEQ ID NO:95)
Р1- O61O29.IgG1.3	3-09	GFTLDDYAMH (остатки 26-35 SEQ ID NO:67)	GINWNSANIGYADS VKG (остатки 50-66 SEQ ID NO:67)	VPGYSGGWIDAF DV (остатки 99-112 SEQ ID NO:67)
	VLген	VL CDR1	VL CDR2	VL CDR3
Р1- 061015.IgG1.3	L6	RASQSVSSSYLA (остатки 24-35 SEQ ID NO:96)	DASNRAT (остатки 51-57 SEQ ID NO:96)	QQYNSYPYT (остатки 90-98 SEQ ID NO:96)
Р1- O61O29.IgG1.3	А27	RASQSVSSSYLA (остатки 24-35 SEQ ID NO:68)	GASSRAT (остатки 51-57 SEQ ID NO:68)	QQYGSSPFT (остатки 90-98 SEQ ID NO:68)

Пример 9. Дальнейшее конструирование анти-VISTA Ab P1-061015 и Р1-061029 для разработки антител, селективных при кислых рН.

В этом примере описано дальнейшее конструирование вариабельных областей Р1-061015 и Р1061029, идентифицированных в примере 2, для получения вариабельных областей анти-huVISTA антител с более высоким отношением koff· между связыванием при рН 6,0 и 7,4.

Конструировали две библиотеки путем введения специфических мутаций в CDR VH P1-061015 и Р1-061029, соответственно. В библиотеках допускались только аминокислотные замены, которые с наибольшей вероятностью улучшают связывание при низком рН, т.е. аспартат, глутамат и гистидин. В библиотеке также учитывались одинарные и двойные аминокислотные замены в каждой CDR и рекомбинации между CDR (максимум 6 аминокислотных замен на цепь). На фиг. 7А показаны мутации, введенные в аминокислотные последовательности CDR3 тяжелой цепи Р1-061029 для формирования библиотеки Р1-061029. На чертеже показано, что определенные последовательности были исключены, чтобы избежать введения каких-либо негативных признаков (liabilities) (например, DG).

Библиотеки '029 и '015 подвергали скринингу в течение нескольких циклов связывания с полноразмерным hVISTA при рН 6,0 путем представление на поверхности дрожжей. Дальнейшие циклы отбора проводили путем чередования циклов положительного (связывание с huVISTA при рН 6,0) и отрицательного (связывание с huVISTA при рН 7,4) (показано на фиг. 7В) отбора, при котором члены библиотеки, которые не связывались с VISTA при рН 7,4, собирали в циклах отрицательного отбора. Результаты отбора анализировали с помощью NGS-секвенирования. Члены библиотеки '029, которые связывались с huVISTA при рН 6,0 после 9-го цикла отбора, анализировали на связывание с человеческим VISTA при рН 6,0 и рН 7,4 методом проточной цитометрии. На фиг. 7С представлены типичные двумерные графики, полученные по результатам проточной цитометрии, показывающие пул вариантов после 9 циклов отбора. Связывание VISTA показано на оси Y, а экспрессия варианта антитела показана на оси X. Показаны результаты связывания при различных концентрациях антител и рН. Согласно приведенным результатам, связывание с человеческим VISTA является в высокой степени селективным при рН 6, в частности при 20 нМ.

Из библиотеки '029 были выделены дополнительные клоны-потомки '029 с помощью другого метода. Некоторые клоны были такими же, как те, которые были идентифицированы первым методом, и было выделено девять дополнительных клонов.

клонов, выделенных из библиотеки '029, отобранных для дальнейшего анализа, переформатировали как антитела IgG1.3. Аминокислотные различия в CDR тяжелых цепей этих клонов относительно различий в CDR VH '029 показаны в табл. 5.

- 93 042790

Таблица 5

Аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH (разделенные знаком подчеркивания) антител, полученных из родительского антитела '029

Р1-061029 GFTLDDYAMHGINWNSANIGYADSVKGVPGYSGGWIDAFDV 67

Р1-068757-	---Е-Е--	—	-ЕЕ----		—	-E-D 71
Р1-068759-	---Е-Е--	-D-	—Е---		—	—E-D 87
Р1-068761-	---Е-Е--	—	-ЕЕ----		Н--	—Е—51
Р1-068763-	---Е----_-	-D—	—Е----		Н--	—Е—91
Р1-068765-	--DE---- -	—	—ЕЕ---		—	—E-D 63
Р1-068767-	---Е----_-	-D—	—Е----		—	-E-D 55
Р1-068769-	---Е-Е--	—	-DH---		—	—E-D 83
Р1-068771-	---Е-Е--		-НЕ---			—E-D 75
Р1-068773-	---Е----_-	-D—	—D---		—	—E-D 59
Р1-068775-	---Е-Е--	-D-	—ЕЕ---	—	Н—	—E-D 79
Р1-069059	---Е----		—DH--	—		---E-D 11
Р1-069061	---Е----	—	--Е---		—	--E-D 15
Р1-069063	---Е----	—	--Е---		—	--D-E 19
Р1-069065	---Е-Е--	—	—DD--		—	-------23
Р1-069067			—ЕЕ--			--D-E 27
Р1-069069		—	—ЕЕ--		—	--D—31
Р1-069071	---Е-Е--		--D--		---Е	-------35
Р1-069073	----Е----- -	—D-	--D---		—	---E-D 39
Р1-069075	---Е----		D—Е--		—н	---Е—43
Р1-069077	----Е-Е--- -		—DE--	—		------47

Название CDR1 CDR2 CDR3 SEQ ID NO (положение 26-35) (положение 50-66) (положение 99-110).

Связывание нескольких препаратов каждого из клонов-потомков '029 и родительских антител '029, отформатированных как IgG1.3 антитело, с человеческим VISTA при рН 6,0 и 7,4 измеряли методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР, SPR). Анализ ППР выполняли для измерения koff и KD сродства связывания для VISTA Ab при кислых и нейтральных рН на приборе Biacore® T100 (GE Healthcare). Белок А (ThermoFisher Scientific, кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ5 в соответствии с инструкциями производителя для связывания амина (GE Healthcare) с целевой плотностью иммобилизации белка А 2000 RU на проточную ячейку. Эксперименты ППР выполняли при 37°С с использованием подвижного буфера PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% Tween® 20) при рН 7,4 и 6,0. Антитела разводили до 25 нМ в PBST рН 7,4 и иммобилизовали в активных проточных кюветах биосенсора при 5 мкл/мин в течение 60 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 50-5 нМ моновалентного hVISTA-ECD (SEQ ID NO:325), используя подвижный буфер с рН 7,4 и 6,0, и вводили поверх иммобилизованных антител со скоростью 40 мкл/мин для измерения ассоциации и диссоциации. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина рН 1,5. Константы скоростей ka (kon) и K_D (koff) получали из эталонной проточной кюветы и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ и подгоняли к модели связывания 1:1 с помощью пргограммного обеспечения Biacore® Т200 Evaluation v.2.0. Для каждого антитела VISTA рассчитывали константу сродства, K_D, как отношение констант скоростей koff/k_on.

Для каждого антитела определяли максимальный (или величину) ответ связывания с человеческим VISTA как точечный ответ связывания с вычтенным эталонным сигналом в конце инъекции 50 нМ VISTA и записывали в единицах ответа (RU). Максимальный ответ связывания человеческого VISTA (RU) для каждого антитела показан на фиг. 7D. Среднее значение ответа связывания (для 2-4 копий антител) наносили на график, где планка погрешностей представляет стандартное отклонение. Результаты показывают, что отобранные клоны потомства '029 связываются с hVISTA при рН 6.0, но не при рН 7,4 (все пустые кружки, представляющие связывание при рН 7,4, расположены в нижней части графика, за исключением родительского клона '029).

Скорости k_off при рН 6,0 для '029 и его клонов-потомков определяли методом ППР, как описано выше, которые показаны на фиг. 7Е. Пунктирная линия на чертеже означает скорость ko_ff '029; клоны слева от пунктирной линии имеют более низкую скорость k_off при рН 6,0 по сравнению с таковой у родительского антитела '029, в то время как клоны, расположенные с правой стороны имеют более высокую скорость k_off при рН 6,0 по сравнению с таковой у родительского антитела '029.

Типичные полученные ППР сенсограммы связывания hVISTA с антителами '029, '761 и '767 при нейтральном и кислом рН показаны на фиг. 7F. Сенсограммы huVISTA при 50 нМ и 5 нМ с вычтенным эталонным сигналом представлены в виде графика. При нейтральном рН сигнал связывания VISTA с '761

- 94 042790 и '767 был <10 RU, и для возможности адекватного измерения и выполнения сравнения значений koff и KD У '761 и '767 с соответствующими значениями у '029 потребовался кинетический анализ ППР с использованием мкМ концентраций VISTA при физиологическом рН.

Для этого анализа '029, '761 и '767 переформатировали как изотип hlgGlf и экспрессировали как в стандартном hlgGlf, так и в афукозилированном формате hlgGlf для сравнения с Fc hIgG1.3f. Кинетический анализ НИР проводили для измерения k_off и KD сродства связывания для VISTA Ab при кислом и физиологическом рН на приборе Biacore® T100 (GE Healthcare). Белок A (ThermoFisher Scientific, кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ5 в соответствии с протоколом производителя для связывания амина (GE Healthcare) с целевой плотностью иммобилизации белка А 2000 RU на проточную кювету. Эксперименты ППР проводили при 37°С с использованием подвижного буфера PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% твин 20) при рН 7,4 и 6,0. Антитела разбавляли до 25 нМ в PBST, рН 7,4 и иммобилизовали в активных проточных клетках биосенсора при 5 мкл/мин в течение 45 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 1600-0,78 нМ (рН 7,4) и 100-0,78 нМ (рН 6,0) моновалентного hVISTA-ECD (SEQ ID NO:325), используя подвижный буфер, и вводили поверх иммобилизованных антител со скоростью 40 мкл/мин для измерения ассоциации и диссоциации. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина с рН 1,5. Константы скоростей ka (kon) и K_D (koff) получали из эталонной проточной кюветы и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ и подгоняли к модели связывания 1:1 с помощью программного обеспечения Biacore® T200 Evaluation v.2.0. Константу сродства, KD, рассчитывали для каждого анти-VISTA антитела в виде отношения скоростей koff/koff. Для сравнения скоростей диссоциации и улучшения сродства при кислом рН относительно физиологического рН рассчитывали соотношения koff и KD при рН 7,4/рН 6,0. В то время как ранее, в случае использования 50 нМ hVISTA, для '761 и '767 невозможно было определить константы скорости связывания при нейтральном рН (фиг. 7D и 7F), увеличение диапазона концентрации VISTA при нейтральном рН до 1,6 мкМ обеспечило ответное связывание (> 10 RU) этих клонов, которое соответствовало модели связывания 1:1. Кинетические данные для этих анти-VISTA антител, селективных при кислом рН, приведены в табл. 6. Родительское антитело '029 демонстрирует эквивалентный k_off при обоих рН, в то время как '761 и '767 демонстрируют селективность, выраженную более чем 10^-кратным увеличением значения k_off при рН 6 по сравнению с таковым при рН 7,4, и более чем в 2000-кратным увеличением значения K_D при рН 6 по сравнению с таковой при рН 7,4. Константы скорости связывания человеческого VISTA у вариантов изотипа hIgG1.3f, hIgG1f и афукозилированного hIgG1f являются одинаковыми.

Таблица 6

Характеристики связывания анти-VISTA антител, определенные методом ПНР

Антитело	Изотип	pH 7,4	pH 6,0	Отнош ение kd (7.4/6)	Отноше ние KD (7.4/6)
ka (1/Mc )	kd (1/c)	KD (M)	ka (1/Mc)	kd (1/c)	KD (M)
Р1- 061029	h!gG1.3f	1,6E+ 05	6,8E -03	4,2E- 08	1ДЕ+0 6	7,9E -03	7,2E -09	0,9	5,8
hlgGlf	1,7E+ 05	7,4E -03	4,2E- 08	1ДЕ+0 6	8,0E -03	7,IE -09	0,9	5,9
hlgGlf афукозилирова иное	1,7E+ 05	7,2E -03	4,1E- 08	1ДЕ+0 6	7,8E -03	6,9E -09	0,9	5,9
Р1- 068761	h!gG1.3f	3,8E+ 03	4,2E -02	1ДЕ- 05	3,7E+0 5	1,6E -03	4,3E -09	26,3	2558,1
hlgGlf	1,2E+ 03	4,2E -02	3,5E- 05	3,6E+0 5	1,5E -03	4,2E -09	28,0	8333,3
hlgGlf афукозилирова иное	5,1E+ 03	4,2E -02	8,2E- 06	3,7E+0 5	1,5E -03	4,IE -09	28,0	2000,0
Pl- 068767	h!gG1.3f	1,9E+ 03	3,6E -02	1,9E- 05	3,3E+0 5	2,6E -03	7,8E -09	13,8	2435,9
hlgGlf	1,5E+ 03	3,2E -02	2,2E- 05	3,2E+0 5	2,6E -03	8,0E -09	12,3	2750,0
hlgGlf афуко-	1,3E+ 03	3,3E -02	2,4E- 05	3.3E+0 5	2,6E -03	7,9E -09	12,7	3038,0

- 95 042790

Кинетику связывания человеческого VISTA у '029, '761 и '767 (в виде антител IgG1.3) измеряли при значениях рН между рН 7,4 и рН 6,0, т.е. при рН 6,9 и рН 6,45 с помощью прибора Biacore® T100 (GE Healthcare). Белок A (ThermoFisher Scientific, кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ5 в соответствии с протоколом производителя для связывания амина (GE Healthcare) с целевой плотностью иммобилизации белка А 2000 RU на проточную кювету. Анализ выполняли при 37°С с помощью подвижного буфера PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% Твин 20) при рН 7,4, 6,9, 6,45 и 6,0. Антитела разбавляли до 25 нМ в PBST рН 7,4 и иммобилизовали в активных проточных кюветах биосенсора при 5 мкл/мин в течение 45 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 100-0,78 нМ моновалентного hVISTA-ECD (SEQ ID NO:325), используя подвижный буфер с рН 7,4, 6,9, 6,45 и 6,0, и вводили поверх иммобилизованных антител со скоростью 40 мкл/мин для измерения ассоциации и диссоциации. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина с рН 1,5. Константы скоростей ka (k_on) и K_D (koff) получали из эталонной проточной кюветы и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ и подгоняли к модели связывания 1:1 с помощью программного обеспечения Biacore® T200 Evaluation v.2.0. Константу сродства, K_D, рассчитывали для каждого анти-VISTA антитела в виде отношения скоростей koff/koff. Для оценки характера изменения k_off и K_D VISTA по мере смещения рН буфера к физиологическому значению вычисляли отношения k_off и K_D при каждом рН относительно рН 6.0, которые приведены в табл. 7. Родительское антитело '029 демонстрировало постоянную k_off при каждом протестированном рН, тогда как у клонов-потомков '761 и '767 k_off в отношении VISTA было, по меньшей мере, в 10 раз выше, a K_D в 100 раз слабее при рН 6,9 по сравнению с рН 6,0. По мере изменения рН буфера от кислого к физиологическому, у '761 и '767 наблюдали ослабление как koff, так и K_D В отношении VISTA. Данные сравнения для '761 и '767 при физиологическом рН приведены в табл. 7 и отмечены звездочкой (*).

Таблица 7

Кинетические характеристики связывания антител '029, '761 и '767 при различных значениях рН

Антитело	pH	ka (1/Мс)	kd (1/с)	KD (М)	Отношение kOff для pH 6,0	Отношение Kd для pH 6,0
Р1-061029 (родительс кое)	6,0	2,9Е+06	5,7Е-03	2,0Е-09	1,0	1,0
6,45	7,4Е+05	4,0Е-03	5,ЗЕ-09	0,7	2,7
6,9	4ДЕ+05	5,7Е-03	1,4Е-08	1,0	7Д
7,4	2,5Е+05	6,4Е-03	2,6Е-08	1Д	13,2
Р1-068761	6,0	6,0Е+05	6,6Е-04	1ДЕ-09	1,0	1,0
6,45	1ДЕ+05	2ДЕ-03	2,0Е-08	3,2	18,4
6,9	4,8Е+04	8,9Е-03	1,9Е-07	13,4	170
7,4*	3,8Е+О3	4,2Е-02	1ДЕ-05	-63,6	-10000
Р1-068768	6,0	5,6Е+05	1,9Е-03	3,4Е-09	1,0	1,0
6,45	1,ЗЕ+О5	4,8Е-03	3,8Е-08	2,5	11,0
6,9	7,4Е+04	2,9Е-02	4,0Е-07	15,3	115,1
7,4*	1,9Е+03	3,6Е-02	1,9Е-05	-19,0	-5000

Данные в табл. 7 показывают, что сродство связывания у '761 и '767 с hVISTA при рН 6,45 ниже по меньшей мере более чем в 10 раз по сравнению с рН 6,0; сродство связывания у '761 и '767 с hVISTA при рН 6,9 по меньшей мере, более чем в 100 раз ниже по сравнению с рН 6,0; и сродство связывания у '761 и '767 с hVISTA при рН 7,4 по меньшей мере более чем в 1000 раз ниже по сравнению с рН 6,0.

Библиотека '015 также продемонстрировала небольшое предпочтение селективного связывания с VISTA при рН 6. Аминокислотные различия клонов-потомков относительно CDR VH '015 показаны в табл. 8. Связывание нескольких препаратов каждого из клонов-потомков '015 и родительского '015 (все в виде антител IgG1.3) с человеческим VISTA при рН 6,0 и 7,4 измеряли методом ППР аналогично тому, как описано для анализа '029 выше, и данные приведены в табл. 8.

- 96 042790

Таблица 8

Аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH антител (разделенных знаком подчеркивания), полученных из родительского антитела '015 Pl-061015 GFTFSSYAMHIIWYDGSNKYYADSVKGDSGFYSSYYFDY 95 Pl-068736----Е---_-D------D------_----D----D 107

Pl-068738 ----EH---D---H-------_----ED----131 Pl-068740----D---_------D-D------_----DD 115

Pl-068742----D---_------D-D------_----ED119

Pl-068744----E---_H--------E-----_----EE 103

Pl-068746---------_-------HH------_----D123

Pl-068748----HH--_-------DD------_----D-----99 Pl-068750----D-D—_E—D----------_-EE127

Pl-068752---------_E-------D------_----DE 111

Pl-068754----D-D—_E—D-----------_---H-D135

Название CDR1 CDR2 CDR3 SEQ ID NO (полож. 26-35) (полож. 50-66) (полож. 99-110).

Сводные данные по кинетике связывания '029 и '015 и их клонов-потомков с huVISTA при рН 6,0 и 7,4, определенные методом ППР, показаны в табл. 9 и 10. Таблица 9

Сводные данные по кинетике huVISTA и последовательности CDR VH клона '029 и его потомства

ID	Cp. 7,4 ka (1/Mc)	Cp. 7,4 kd (1/c)	Cp. 7.4 KD (M)	Cp. 6,0 ka (1/ Me)	Cp. 6.0 kd (1/c)	Cp. 6.0 KD (M)	VH CDR 1 (пол. 26-35)	VH CDR 2 (полож ение 50-66)	VH CDR3 (полож ение 99110)	SEQ ID NO
Pl- 0690 77	6,0E+ 04	1,9E -03	3,1E -08	6.3E+ 05	1,2E -04	1,9E- 10	....E.E...	......DE.		47
Pl 0690 65	5,9E+ 04	2,3E -03	3,9E -08	5.7E+ 05	2,2E -04	3,8E- 10	....E.E...	......DD.		23
Pl- 0690 75	1.3E+ 05	2.3E -03	1,8E -08	1.3E+ 06	2,9E -04	2,2E- 10	....E.....	....D..E.	.....Η..... E..	43
Pl- 0690 71	4,3E+ 04	4,0E -03	9,3E -08	7.0E+ 05	5,IE -04	7,ЗЕ- 10	....E.E...	.......D...	.....E.....	35
Pl 0690 61	Слабая, быстрая kd	4.3E+ 05	1,1E -03	2,5E- 09	....E.....	.......E...	ED	15
Pl- 0690 69	9,0E+ 04	7,5E -03	8,4E -08	1.4E+ 06	1,2E -03	8,6E- 10	..........	......EE..	D..	31
Pl- 0687 61	Слабая, быстрая kd	3.8E+ 05	1,4E -03	3,8E- 09	....E.E...	......EE..	.....H..... E..	51

- 97 042790

Pl- 0690 59	Слабая, быстрая kd	3,4Е+ 05	1,6Е -03	4,8Е- 09	....Е.....	......DH.	E.D	11
Pl- 0687 67	Слабая, быстрая kd	3,4Е+ 05	2,6Е -03	7,6Е- 09	....Е.....	..D...E..	E.D	55
Pl- 0687 73	Слабая, быстрая kd	3,0Е+ 05	2,9Е -03	9,4Е- 09	....Е.....	..D...D..	E.D	59
Pl 0690 63	1,2Е+ 05	2,7Е -02	2,ЗЕ -07	1,9Е+ 06	4,4Е -03	2,4Е- 09	....Е.....	.......Е...	D.E	19
Pl 0690 67	1,0Е+ 05	2,7Е -02	2,9Е -07	1,7Е+ 06	4,5Е -03	2,7Е- 09	..........	......ЕЕ..	D.E	27
Pl 0690 73	Слабая, быстрая kd	6,1Е+ 05	5,8Е -03	9,4Е- 09	....Е.Е...	.......Е...	Е..	39
Pl 0610 29	2,9Е+ 05	5,6Е -03	1,9Е -08	1,6Е+ 06	5,8Е -03	3,6Е- 09	GFTLD DYAM Н	GINW NSANI GYAD SVKG	VPGY SGGW 1DAFD V	67
Pl- 0687 65	Связывание отсутствует	3,7Е+ 05	7,0Е -03	1,9Е- 08	...DE....	......ЕЕ..	E.D	63
Pl- 0687 57	Связывание отсутствует	8,9Е+ 05	1,7Е -02	1,9Е- 08	....Е.Е...	......ЕЕ..	E.D	71
Pl- 0687 71	Связывание отсутствует	7,6Е+ 05	1,8Е -02	2,5Е- 08	....Е.Е...	......НЕ.	E.D	75
Pl- 0687 69	Связывание отсутствует	8ДЕ+ 05	4,0Е -02	5,5Е- 08	....Е.Е...	......DH.	E.D	83
Pl- 0687 75	Связывание отсутствует	1,8Е+ 06	4,7Е -02	2,ЗЕ- 08	....Е.Е...	..D...EE	.....Н..... E.D	79
Pl- 0687 59	Связывание отсутствует	1,ЗЕ+ 06	8,0Е -02	6,0Е- 08	....Е.Е...	..D...E..	E.D	87

Таблица 10

Сводные данные по кинетике huVISTA и последовательности

CDR VH клона '015 и его потомства

Клон	Cp. 7,4 ka (1/Mc)	Ср. 7.4 kd (1/s)	Cp. 7,4 KD (M)	Cp. 6,0 ka (1/Mc)	Ср. 6,0 kd (1/с)	Ср. 6,0 KD (М)	Последовател ьность HCDR (пол. 26-35) (пол. 50-66) (пол. 99-110)	SE Q ID NO
Pl- 061015	2,3E+0 5	2.0E- 03	8,8E- 09	l,8E+06	9,5Е- 04	5,4Е-10	GFTFSSYAM H_HWYDGS NKYYADSV KG_DSGFYS SYYFDY	95
Pl- 068748	Связывание отсутствует	l,4E+06	1,5Е- 03	1,0Е-09	.....НН..._........ DD......._.....D..	99
Pl- 068744	l,3E+06	1,8Е- 03	1,ЗЕ-09	.....E.... H........ .E......_.....E..... E	103
Pl- 068736	8.4E+06	9,5Е- 03	1ДЕ-09	.....E...._.D....... D....... .....D..... D	107
Pl- 068752	6ДЕ+06	3,4Е- 02	5,6Е-09	.........._E........ D......._.....D..... E	111
Pl- 068740	Очень быстрое	4,7Е- 02	ND	.....D...._.......D. D......._.....D..... D	115
Pl- 068742	Очень быстрое	>1Е 02	ND	.....D...._.......D. D......._.....ED..	119

- 98 042790

Pl068746

Pl068750

Таким образом, было идентифицировано несколько клонов-потомков '029, которые либо сохраняли, либо улучшали koff в отношении VISTA-ECD при рН 6,0 по сравнению с родительским '029, а также демонстрировали более слабую koff или потерю связывания с VISTA при физиологическом рН. Клоныпотомки '015 показали связывание с VISTA-ECD, селективное при кислом рН, при этом не было обнаружено связывание с VISTA при нейтральном рН, но все проанализированные клоны-потомки '015 имели более быструю koff при рН 6,0 по сравнению с родительским '015.

Пример 10. Клоны-потомки '029, селективные при кислом рН, демонстрируют связывание клеток, зависимое от кислого рН, и эффекторную функцию при сохранении блокирующей VISTA активности.

Измеряли рН-зависимое связывание клонов '761 и '767 с клетками Raji, сконструированными для эктопической экспрессии полноразмерного человеческого VISTA (SEQ ID NO:1 с заменой D187E). Для этого эксперимента '761 и '767 были отформатированы как антитела IgG1.3, и связывание измеряли с помощью вторичного антитела к человеческому IgG (Jackson Immunoresearch кат. № 109-065-098). Результаты, приведенные на фиг. 8А, 8В, показывают, что клоны '761 (фиг. 8А) и '767 (фиг. 8В) плохо связываются при рН 7,2 и 8,1, но лучше при кислом рН, особенно при рН 6,0, 6,1, 6,2 и 6,4. Значения MFI связывания показаны на оси Y, а концентрации первичных антител показаны на оси X в логарифмическом масштабе. Также показаны нелинейные регрессии.

На фиг. 8С показаны данные из эксперимента, описанного на фиг. 8А, В, по измерению связывания Р1-068767 (кружки) и неспецифического контрольного антитела соответствующего изотипа (треугольники) с клетками Raji, экспрессирующими человеческий VISTA, при 3125 нг/мл при различных рН. РН50, рН, при котором теряется 50% связывания Р1-068767, составляет примерно 6,6. Значения MFI связывания показаны на оси Y, а рН буфера - на оси X. Также показаны нелинейные регрессии.

На фиг. 8D показана MFI связывания неспецифического контрольного антитела соответствующего изотипа (окрашенные и неокрашенные кружки для рН 7,0 и 6,0, соответственно), анти-VISTA mAb 2 (контроль, см. фиг. 6С, окрашенные и неокрашенные кружки квадраты для рН 7,0 и 6,0, соответственно), Р1-068761 (окрашенные и неокрашенные кружки треугольники для рН 7,0 и 6,0, соответственно) и Р1-068767 (окрашенные и неокрашенные кружки перевернутые треугольники для рН 7,0 и 6,0, соответственно) с человеческими моноцитами. Связывание определяли, как описано на фиг. 8А, В. Неселективное контрольное антитело VISTA (mAb 2) связывалось с моноцитами при обоих значениях рН. Оба сконструированных антитела, селективных при кислом рН, хорошо связывались с моноцитами при рН 6,0, но не связывались при рН 7,0 лучше, чем неспецифическое контрольное антитело соответствующего изотипа. Таким образом, клоны '761 и '767 имеют слабое связывание или не связываются с VISTA при нейтральном рН, но селективно связываются с VISTA на клетках при кислом рН.

На фиг. 8Е показано сопоставимое блокирование связывания рекомбинантного мультимера VISTA с активированными человеческими CD4+ Т-клетками при рН 6,0 антителами '029 (квадраты), '761 (треугольники) и '767 (перевернутые треугольники), в то время как не специфическое к VISTA контрольное антитело (кружки) не блокирует связывание VISTA. Этот анализ блокирования выполняли, как описано в Примере 4. Эти данные показывают, что сконструированные анти-VISTA антитела, селективные при кислом рН, все еще способны блокировать VISTA лиганд рецепторное связывание при кислом рН.

Опосредованный NK-клетками специфический лизис клеток-мишеней (те же самые клетки Raji, экспрессирующие человеческий VISTA, описанные на фиг. 8А, В) через антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) при физиологическом рН измеряли для P1-061029.IgGlf, P1-068761.IgGlf, P1-068767.IgGlf антител, не специфического к VISTA антитела и не специфического к VISTA антитела отрицательного контроля, причем все антитела экспрессируются как афукозилированные антитела IgG1. NK-клетки обогащали из РВМС путем отрицательного отбора гранул (StemCell Technologies, кат. № 19055) и культивировали в течение ночи в среде Myelocult™ (StemCell Technologies кат. № 05150) с добавлением 1 мкМ гидрокортизона (StemCell Technologies кат. № 07904) и 500 ед./мл рекомбинантного человеческого IL-2 (Peprotech кат. № 200-02). В день анализа клетки Raji, эктопически экспрессирующие человеческий VISTA (описанные на фиг. 8А, В), метили Calcein AM (Life Technologies кат. № C3100MP) и совместно культивировали с культивируемыми NK-клетками при 10:1 отношение NK:клетки-мишени и с антителами P1-061029.IgGlf, P1-068761.IgGlf, P1-068767.IgGlf, не специфическим к VISTA антителом и не специфическим к VISTA антителом отрицательного контроля в течение 2 ч при физиологическом рН. Специфический лизис интерполировали по сигналу флуоресценции супернатанта (планшетный ридер EnVision™). Сигнал спонтанного лизиса, полученный при совместном культивировании без антител, и максимальный сигнал лизиса определяли по лизису клеток-мишеней с помощью буфера для лизиса Delfia® (PerkinElmer, кат. № 4005-0010). Антитело-специфический лизис рассчитывали в виде процента от

- 99 042790 наблюдаемого лизиса, деленного на (максимальный сигнал лизиса минус сигнал спонтанного лизиса).

Результаты, представленные на фиг. 8F, показывают пониженную активность Р1-068761.IgGlf и P1068767.IgGlf по сравнению с активностью Р1-061029 и положительного контроля, опосредованную антитело-зависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC), при физиологическом рН.

Пример 11. PK анти-VISTA антител яванского макака.

Яванским макакам, наивным по человеческим антителам, вводили внутривенно однократную дозу, равную 5 мг/кг массы тела, либо анти-VISTA антитело, которое сопоставимо связывается при кислом и нейтральном рН (контроль; mAb2), либо анти-VISTA антитело с нарушенным связыванием при кислом рН (чувствительное к кислому рН, MAb3), либо селективное при кислом рН антитело 767 для определения фармакокинетических параметров (PK) этих антител у яванского макака.

Представленную в табл. 11 кинетику связывания использованных в этом примере антител, полученную методом ППР определяли следующим образом. Перекрестную реактивность Cyno VISTA для селективного при кислом рН антитела и контрольного анти-VISTA антитела оценивали при кислом и нейтральном рН. Измерения сродства связывания для VISTA Ab выполняли с помощью прибора Biacore® T100 (GE Healthcare). Белок A (ThermoFisher Scientific кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ5 в соответствии с протоколом производителя для связывания амина (GE Healthcare) с целевой плотностью иммобилизации белка 2000 RU на проточную кювету. Анализ выполняли при 37°С, используя подвижный буфер PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% Твин 20) при рН 7,4 и 6,0. Антитела (отформатированные как антитела IgG1.3) разводили до 25 нМ в PBST, рН 7,4, и иммобилизовали в активных проточных кюветах биосенсора при 5 мкл/мин в течение 45 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 1600-0,78 нМ (рН 7,4) и 100-0,78 нМ (рН 6,0) моновалентного hVISTA-ECD (SEQ ID NO:325) и cyno VISTA-ECD (AFKVATLYSL YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEIRHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY PSSSQESENI TAHHHHHHH (SEQ ID NO:326), используя подвижный буфер, и вводили поверх иммобилизованных антител со скоростью 40 мкл/мин для измерения ассоциации и диссоциации. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина с рН 1,5. Константы скоростей ka (k_on) и K_D (koff) получали из эталонной проточной кюветы и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ и подгоняли к модели связывания 1:1 с помощью программного обеспечения Biacore® T200 Evaluation v.2.0. Для каждого анти-VISTA антитела рассчитывали константу сродства, KD, как отношение koff/koff. Для сравнения различий между скоростью диссоциации и сродством при кислом рН относительно нейтрального рН вычисляли отношения k_off и KD при рН 7,4/рН 6,0, которые представлены в табл. 11. Все протестированные анти-VISTA антитела показали сопоставимые (в пределах 2-кратного значения) параметры кинетического связывания человеческого и cyno VISTA при обоих протестированных значениях рН, что является подтверждением наличия перекрестной реактивности с cyno VISTA. Оба контрольных анти-VISTA антитела показали улучшенные KD и более сильные KD при физиологическом рН по сравнению с кислым рН, а контроль, чувствительный к кислому рН, показал более быстрый KD для VISTA при кислом рН по сравнению с контрольным антителом.

- 100 042790

Таблица 11

ППР кинетика связывания анти-VISTA антител с cyno VISTA

Антит ело	VIST А	pH 7.4	pH 6.0	Отнош ение kd (7,4/6)	Отнош ение Kd (7,4/6)
ка (1/Мс)	kd (1/с)	KD(M)	ка (1/Мс)	kd (1/с)	KD (М)
Р1- 06102 9	челов.	1,2Е+0 5	7,5Е -03	6,2Е-08	9,8Е+0 5	6,6Е- 03	6,8Е- 09	1Д	9Д
яванс к. макак	1,4Е+0 5	6,7Е -03	4,7Е-08	6,2Е+0 5	6,2Е- 03	1,0Е- 08	1Д	4,7
Pl- 06876 1	челов.	4,ЗЕ+0 3	3,7Е -02	8,7Е-06	3,5Е+0 5	1,4Е- 03	4ДЕ- 09	26,4	2122,0
яванс к. макак	6,5Е+0 3	3,6Е -02	5,5Е-06	2ДЕ+0 5	1 ДЕ- ОЗ	7,9Е- 09	21,2	696,2
Pl- 06876 7	челов.	1,6Е+0 3	3,5Е -02	2,ЗЕ-05	3,2Е+0 5	2,4Е- 03	7,5Е- 09	14,6	3066,7
яванс к. макак	1,ЗЕ+0 3	3,4Е -02	2,6Е-05	Ц9Е+0 5	2,5Е- 03	1,ЗЕ- 08	13,6	2000,0
αVIST A контр оль (mAb 3)	челов.	4,4Е+0 5	ЦЗЕ -03	3,0Е-09	9,6Е+0 5	6,0Е- 03	6,2Е- 09	0,2	0,5
яванс к. макак	4,9Е+0 5	1,7Е -03	3,4Е-09	5,5Е+0 5	7ДЕ- 03	1,ЗЕ- 08	0,2	0,3
α- VIST A, чувст в. к кисло	челов.	Ц8Е+0 5	7,8Е -04	4,ЗЕ-09	Ц8Е+0 6	5,0Е- 02	2,8Е- 08	0,02	0,2
яванс к. макак	1,9Е+0 5	6,8Е -04	3,5Е-09	1,2Е+0 6	5,2Е- 02	4,4Е- 08	0,01	0,08
му pH (mAb 2)

Яванским макакам, наивным по человеческим антителам, вводили внутривенно однократную дозу, равную 5 мг/кг массы тела, либо VISTA mAb2 (контроль), либо VISTA mAb3 (чувствительное к кислой среде), либо P1-068767.IgG1.3. Концентрация каждого антитела в сыворотке после инъекции показана на фиг. 9. Среднее время пребывания P1-068767.IgG1.3 и контрольного анти-VISTA антитела составило 717 и 22 ч, соответственно, что указывает на то, что селективность при кислом рН значительно снижала TMDD антитела к человеческому VISTA. Хотя контрольное антитело (mAb 2) и чувствительное к кислому рН антитело (mAb 3) связывались с VISTA на сопоставимом уровне при физиологическом рН, чувствительное к кислому рН антитело имело более низкое среднее время пребывания, равное 7,6 ч, что демонстрирует важность связывания при кислом рН для рециркуляции анти-VISTA антитела, как описано в примерах 6 и 7. Результаты показывают, что селективные к кислому рН антитела демонстрируют превосходный РК-профиль и, таким образом, легче связываются с мишенью в опухолях или других микроокружениях.

Пример 12. рН-Селективные клоны-потомки '029 не связываются неспецифическим образом с белками с высоким pI.

Специфичность связывания клонов '029, '761 и '767 с VISTA и другими белками с высоким pI оценивали методом ПНР при нейтральном и кислом рН на приборе Biacore® Т100 (GE Healthcare). Белок A (ThermoFisher Scientific кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ3 в соответствии с протоколом производителя для связывания амина (GE Healthcare) с целевой плотностью иммобилизации белка 800 RU на проточную кювету. Эксперименты НИР проводили при 25°С с использованием подвижного буфера PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% Твин 20) при рН 7,4 и 6,0. Антитела (отформатированные как антитела IgG1.3) разводили до 50 нМ в PBST рН 7,4 и иммобилизовали в активных проточных кюветах биосенсора при 5 мкл/мин в течение 60 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 100-10 нМ моновалентного hVISTA-ECD (SEQ ID NO:325), авидина (ThermoFisher Scientific кат. № 21128), цитохрома С (Sigma кат. № С2867), BSA (Calbiochem кат. № 126593) и моновалентного контрольного антигена (Ag), используя подвижный буфер с рН 7,4 и 6,0, и вводили

- 101 042790 поверх иммобилизованных антител со скоростью 50 мкл/мин для оценки специфичности связывания. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина с рН 1,5. Эталонную проточную кювету и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ проверяли с помощью программного обеспечения Biacore® T200 Evaluation v.2.0. Результаты показаны в табл. 12.

Таблица 12

Связывание клонов VISTA с белками, имеющими высокий pI

Образец	Изоэл. точка (р!)	‘029	‘761	‘767	Анти-Ag	PBS (без АЬ)
pH 6	pH 7,4	pH 6	pH 7,4	pH 6	рн 7,4	pH 6	pH 7,4	рн 6	pH 7,4
huVISTA -His	6.9
Авидин	10
цитохром С	10.7
BSA	4.7
Ag-His	6.5

В табл. 12 специфическое связывание, определенное как детектируемый ППР ответ связывания >10 RU в конце введения образца, показано серыми прямоугольниками. Анти-Ag представляет собой контрольное Ab, связывающее VISTA. Клон '029 был специфичным к VISTA при кислом и нейтральном рН. Клоны '761 и '767, являющиеся потомками '029, были специфичными к VISTA при кислом рН, при этом контрольное антитело также сохраняло антигенную специфичность. Неспецифическое связывание (NSB) pI-контрольных белков с поверхностью с иммобилизованным эталонным белком А в этом анализе не наблюдали.

Таким образом, заряженные аминокислоты, введенные в CDR VH '761 и '767, не вызывают электростатического связывания этих антител с другими белками с высоким pI, такими как авидин и цитохром С, или белками с низким pI, такими как BSA.

Пример 13. Ингибирование активации Т-клеток антителами '761 и '767.

В этом примере описан анализ, который можно выполнять для определения способности антител '761 и '767 блокировать вызываемое hVISTA ингибирование активации Т-клеток Jurkat.

Был использован тот же анализ, что описан в примере 5. Вкратце, клетки Jurkat (линия человеческих Т-клеток), экспрессирующие репортер люциферазы NFkB, совместно культивируют при различных значениях рН с клетками 293Т, экспрессирующими человеческий VISTA и одноцепочечный вариабельный фрагмент агонистического антитела к Т-клеточному рецептору человека, ОКТ3. Анти-VISTA антитела '761 и '767 или не специфические к VISTA контрольные антитела соответствующего изотипа добавляли к совместно культивируемым клеткам. Активация Jurkat показана в виде единиц люциферазы и в виде кратного увеличения сигнала люциферазы при обработке анти-VISTA антителом относительно контроля.

Пример 14. Мутационный анализ выявил ключевые остатки, наделяющие анти-VISTA антитела свойствами рН-зависимого связывания.

Антитела P1-068761.IgG1.3 и P1-068767.IgG1.3 содержат 5-6 мутаций относительно Р1-061029 (табл. 7). Мутационный анализ выполняли для выявления ключевых остатков, важных для придания рНзависимых свойств анти-VISTA антителам. Таким образом, синтезировали панели N-1 (одна реверсия аминокислот в Р1-061029) и N-2 (2 реверсии аминокислот в Р1-061029) вариантов Р1-068761 и Р1068767, выраженные как IgG1.3, и проанализировали их связывание с huVISTA при рН 6, рН 6,7 и рН 7,4.

Кинетику связывания измеряли на приборе Biacore® T100 (GE Healthcare). Белок А (ThermoFisher Scientific, кат. № 21181) разбавляли до 20 мкг/мл в 10 мМ ацетата натрия, рН 4,5, и иммобилизовали на проточных кюветах биосенсора СМ5 в соответствии с протоколом производителя для связывания амина (GE Healthcare) с целевой плотностью иммобилизации белка А 2000 RU на проточную кювету. Анализ проводили при 37°С, используя подвижный буфер PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% Твин 20) при рН 7,4, 6,7 и 6,0. Антитела разводили до 25 нМ в PBST рН 7,4 и иммобилизовали в активных проточных кюветах биосенсора при 5 мкл/мин в течение 40 с. Готовили серийные разведения в пределах концентраций 100-10 нМ моновалентного hVISTA-ECD (SEQ ID NO:325), используя подвижный буфер с рН 7,4, 6,7 и 6,0, и вводили поверх иммобилизованных антител со скоростью 40 мкл/мин для измерения ассоциации и диссоциации. Для регенерации поверхности захвата белка А между циклами анализа использовали две 15-секундные инъекции 10 мМ глицина с рН 1,5. Константы скоростей ka (k_on) и K_D (koff) получали из эталонной проточной кюветы и сенсограмм с вычтенным эталонным сигналом при 0 нМ и подгоняли к модели связывания 1:1 с помощью программного обеспечения Biacore® T200 Evaluation v.2.0.

Константу сродства, K_D, рассчитывали для каждого анти-VISTA антитела в виде отношения скоро

- 102 042790 стей koff/k_off. Для сравнения, каким образом рН влияет на способность антитела связываться с VISTA рассчитывали % Rmax, и получали измеренный максимальный ответ связывания VISTA относительно ожидаемого максимального ответа связывания VISTA. % Rmax определяли как отношение ответа в точке связывания с вычтенным референсным сигналом в конце инъекции 100 нМ VISTA для каждого антитела (Rmax) относительно ожидаемого ответа связывания VISTA (Rexp). Rexp вычисляли как Rexp = [(молекулярная масса VISTA-ECD/молекулярная масса mAb) х (ответ в точке захвата mAb (RU)] х 2 участка связывания на mAb.

Результаты НИР, полученные для вариантов реверсии Р1-068761, показаны на фиг. 10А, которые ранжированы по величине k_off при рН 6,0, от самой медленной до самой быстрой. В таблице антитела, которые проявляли слабый ответ или не обнаруживали связывания (<10 RU) с 100 нМ hVISTA, классифицированы как не связывающие (NB). Результаты показывают, что Е в положениях 32 (т.е. аминокислотный остаток 7 в CDR1 VH 761) и 100f (аминокислотный остаток 12 в CDR3 VH '761), оба необходимы для сохранения селективности при кислом рН, поскольку эти реверсии в родительской последовательности Р1-061029 допускали значимое связывание hVISTA при физиологическом рН (% Rmax >10). Дальнейший анализ показал, что варианты с реверсией Е55А (аминокислотный остаток 6 в CDR2 VH '761) сохраняли селективность при кислом рН и демонстрировали сопоставимую кинетику связывания в пределах 2-кратного значения по сравнению с Р1-068761. Напротив, в то время как варианты с реверсиями H100G, E56N и E30D (аминокислотные остатки 12 в CDR3 VH, 7 в CDR2 VH и 4 в CDR1 VH '761, соответственно) сохраняли селективность при кислом рН, эти mAb также демонстрировали koff, которая была примерно в 3 раза быстрее при кислых значениях рН по сравнению с таковой у Р1-068761, в результате чего скорости диссоциации у этих мутантов при кислых рН приближаются к таковым у родительского Р1-061029. Таким образом, добавление мутаций G100H, N56E и/или D30E к исходному клону Р1-061029 способствовало улучшению сродства при кислом рН VISTA, наблюдаемого в селективном при кислом рН клоне Р1-068761.

Результаты ППР, полученные для вариантов реверсии Р1-068767, показаны на фиг. 10В, которые ранжированы по величине k_off при рН 6,0, от самой медленной до самой быстрой. Результаты показывают, что D в положении 102 (аминокислотный остаток 14 в CDR3 VH '767) необходим для сохранения селективности при кислом рН, а реверсия D102V назад в родительскую последовательность Р1-061029 допускала значимое связывание hVISTA при нейтральном рН (% Rmax >10). Дальнейший анализ показал, что варианты с реверсиями E30D, D52N и Е55А (аминокислотные остатки 4 в CDR1 VH, 3 в CDR2 VH и 6 в CDR3 VH '767, соответственно) сохраняли селективность при кислом рН и демонстрировали сопоставимую кинетику связывания при рН 6,0 в пределах 2-кратного значения, наблюдаемого у Р1068767. Напротив, варианты с реверсией E100fF (аминокислотный остаток 12 в CDR3 VH '767) способствовал сохранению селективности при кислом рН, хотя с более чем 3-кратным увеличением k_off при кислом рН по сравнению с таковой у Р1-068767. Примечательно, что варианты с реверсией E100IF демонстрировали еще более быструю k_off при кислом рН по сравнению с исходным mAb Р1-061029.

Таким образом, сводные данные по мутантам с реверсией Р1-068761 и Р1-068767 (селективным при кислом рН) относительно Р1-061029 (рН-толерантного) приведены в табл. 13 (HCDR1, HCDR2 и HCDR3 разделены знаком подчеркивания).

Таблица 13

SEQ ID.

Pl-061029 GFTLDDYAMH_GINWNSANIGYADSVKG_VPGYSGGWIDAFDV 67

Pl-068761 ....E.E..._......EE........._.....H.....E.. 51

Pl-068767 ....E....._..D...E.........._...........ED 55 aa полож. 26-35 50-66 99-110

Описанные выше последовательности CDR VH P1-061029, Р1-068761 и Р1-068767 указаны в табл. 13 для аминокислот (полож. аа) 26-35, 50-66 и 99-110 в SEQ ID NO:67. 51, 55 соответственно. Ключевые мутации, необходимые для селективности при кислом рН, выделены жирным шрифтом, а мутации с более чем 3-кратным увеличением влияния на K_D при рН 6,0 по сравнению с Р1-068761 и Р1-068767 подчеркнуты.

Пример 15. Картирование эпитопов антител VISTA.

Эпитопы hVISTA в '015, '029, 761 и '767, отформатированные как антитела IgG1.3, определяли двумя различными методами: конкуренцией методом BLI (биослойной интерферометрии) и представления на поверхности дрожжей.

BLI конкурентные анализы связывания эпитопа выполняли для оценки сохранения у селективных при кислых рН анти-VISTA антител Р1-068761 и Р1-068767 аналогичных или перекрывающихся эпитопов VISTA по сравнению с родительскими P1-061029, P1-061015 и соответствующими контрольными анти-VISTA антителами 1, 2 и 3. Анализы биннинга в формате сэндвич и тандемном формате выполняли на приборе OctetRed384 BLI (PALL/ForteBio). Все этапы анализа выполняли при 30°С и скорости встряхивания 1000 об/мин, и в качестве буфера использовали кислый (рН 6,0) или нейтральный (рН 7,4) PBST (137 мМ хлорид натрия, 2,7 мМ хлорид калия, 10 мМ фосфатный буфер, 0,05% Твин 20). Для сэндвичформата на сенсоры античеловеческого IgG-Fc (AHC, PALL/ForteBio) сначала иммобилизовали панель

- 103 042790 анти-VISTA антител при рН 7,4, затем сенсоры захвата античеловеческих антител блокировали общими человеческими IgG (Jackson кат. № 009-000-002). После этого при рН 6,0 иммобилизовали человеческий VISTA-ECD и, наконец, при рН 6,0 анализировали конкуренцию для всех возможных комбинаций антител. В анализе в тандемном формате на покрытые стрептавидином (SAX, PALL/ForteBio) биосенсоры сначала иммобилизовали биотинилированный hVISTA-ECD при рН 7,4, затем на сенсорах иммобилизовали полную панель анти-VISTA антител при рН 6,0 для гарантии полного насыщения связывания VISTA для каждого антитела перед оценкой конкуренции со всеми возможными комбинациями антител при рН 6,0.

Результаты BLI анализа конкурентного связывания эпитопа суммировали с помощью матрицы конкуренции, фиг. 11А. На этом чертеже первое иммобилизованное антитело указано в строке, а его связывающая или блокирующая активность с (вторыми) конкурентными антителами показана в каждом столбце. Матрица конкуренции была идентичной для обоих форматов анализа. Для сэндвич-анализа связывание (светло-серое) конкурирующего антитела определяли по сигналу в диапазоне 0,4-1,2 нм, а блокированные антитела (черный) демонстрировали сигнал отсутствия связывания <0,1 нм. Для тандемного анализа связывание конкурирующего антитела определяли по сигналу в диапазоне от 0,3 до 0,8 нм, а блокированные антитела демонстрировали отсутствие сигнала связывания <0,2 нм. Хотя VISTA mAb 3 показало быструю диссоциацию из комплекса с hVISTA-ECD при кислом рН по данным ППР при 37°С (фиг. 6С), оно не продемонстрировало быструю диссоциацию ни в одном из форматов BLI анализа (проведенном при 30°С). Эти конкурентные анализы показали, что P1-061015, P1-061029, антитела, селективные при кислом рН антитела Р1-068761 и Р1-068767, а также анти-VISTA антитела 2 и 3, все конкурируют друг с другом за сходные или перекрывающиеся эпитопы на VISTA. Тем не менее, анти-VISTA антитело 1 связывается с отдельным отличающимся эпитопом. Таким образом, заряженные аминокислотные мутации, введенные в CDR VH Р1-061029 для генерации селективных при кислом рН клонов Р1068761 и Р1-068767, существенно не изменили связывание с эпитопом VISTA.

Эпитопы антител '029, '015, '761 и '767 также картировали, используя представление на поверхности дрожжей и NGS в соответствии с методом, описанным у Chao et al. (2004) J. Mol. Biol. 342:539-550, Oliphant et al. (2006) J. Virol. 80:12149-12159 и Kowalsky et al. (2015) J. Biol. Chem. 290:26457-26470. Вкратце, создавали библиотеку мутагенеза насыщения отдельных точечных мутантов ECD VISTA и представляли на поверхности дрожжей. Мутанты VISTA, которые потеряли связывание с картируемым антителом, но сохранили связывание с неблокирующим антителом (mAb1), отсортировывали и секвенировали. Поскольку они сохраняли связывание с mAb1, эти мутанты, вероятно, имели правильную укладку, и потеря связывания, наблюдаемая с картируемым антителом, вероятно, связана с потерей остатка, энергетически важного для формирования контакта. Положения этих мутаций обозначали как энергетически важные остатки в эпитопе антитела, которые показаны в табл. 14.

Таблица 14

Остатки huVISTA, которые идентифицированы как эпитопные остатки анти-VISTA mAb

irtAb

I :

v w

К

r h

T 4'

R ; M

T Я

1 i и

a

L <5

H M

L r

H

F

1 11«

V MF

1 t·

H

ii : И

s IM

ί < 45

я II·

Pt. 0ЫЙ15

X

a

X

•

: Ϊ

*

*

a

X

1

X

Ϊ

X

PI oswa

1

1!

X

:

a

: X

*

X

X

X

г

X

a

X

ж

X

P1. 06BWI

X

a

X

X

a

:

a

X

a

1

ж

1

X

X

X

X

pl· 06BW

>

a

X

X

a

: X

: I

X

я

I

ж

a

: ж

я

к

х

В табл. 15 приведены подробные данные, показанные в табл. 14, и перечислены аминокислотные остатки hVISTA, которые могут уменьшать связывание каждого из перечисленных антител, исходя из частоты остатков, наблюдаемой в методе представления на поверхности дрожжей/NGS.

- 104 042790

Таблица 15

Аминокислотные замены VISTA, которые могут уменьшать связывание перечисленных антител

	Р1-061015 pH 6	Р1-061015 pH 7	Р1-061029 pH 6	Р1-061029 pH 7	Р1-068761 pH 6	Р1-068767 pH 6
Т35					Р, Y, W
Y37	Р, G, A, S, Т, К, R, Н, N, D, Е, Q	Р, G, S, N, D,EQ	Y, S, Т, V, L, I, М, К, R, N, D, Q	Р, G, S, Т, V, L, I, М, К, R, N, D, Е, Q	Р, G, A, S, Т, V, L, I, М, К, R, N, D, Е, Q	G, Т, V, L, I, М, К, R, N, Q
КЗ 8	р, G, A, S, V
Т39	G, М, R, Н, F, Y, W, N, D, Е, Q	М, К, R, Н, F, Y, W, D, Е, Q	G, A, S, М, Y, W, N, D, Е, Q	G, A, S, V, L, М, R, Н, F, Y, W, N, D, Е, Q	G, Y, D, Е	G, A, S, Н, Y, W, N, D, Е, Q
Y41				A, S, Т, I, М		Р, I, М, Н
R54	L, М, F, Y, Е	Μ, Е	Р, А, Т, V, I, М, F, Y, N, D, Е, Q	Р, G, A, S, Т, V, L, I, Μ, Н, F, Y, W, N, D, Е, Q	А, Т, V, L, I, М, К, F, Y, Е, Q	Р, A, S, Т, V, L, I, М, F, Y, W, D, Е, Q
Т61			G, L, R, Н, F, Y, D, Е, Q	V, L, К, R, Н, F, Y	G, V, Η, Y, D	L, R, Н, F, Y, D, Е
F62	G, A, S, М, К, R, N, D, Е, Q	G, К, R, D, Е, Q	Р, G, A, S, Т, V, I, М, Η, Y, W, D, Е, Q	Р, G, A, S, Т, V, L, I, М, К, R, Н, Y, W, N, D, Е, Q	Р, G, A, S, Т, V, М, Н, Y, W, D, Е, Q	Р, G, A, S, Т, V, L, М, Η, Y, W, N, D, Е, Q
Q63	G, R, W, D, Е	W, D, Е	G, A, S, Т, V, К, R, Н, Y, W, N, D, Е	Р, G, S, Т, L, М, К, R, Н, F, Y, W, N, D, Е	G, S, Т, К, Η, Y, N, D, Е	Р, G, A, S, Т, V, L, I, М, К, Н, F, Y, W, N, D, Е

- 105 042790

	Pl-061015 pH 6	Pl-061015 pH 7	Pl-061029 pH 6	Pl-061029 pH 7	Pl-068761 pH 6	Pl-068767 pH 6
L65	P, G, A, S, T, K, R, H, W, N, D, E, Q	P, G, S, K, W, D, E, Q	G, T, Y, D, E, Q	p, G, A, S, T, H, Y, w, N, D, E, Q,		P, G, S, H, D, E, Q
Н66	P, T, V, L, I, Μ, K, R, F, Y, W	P, T, V, L, I, Μ, K, R, F, Y, W	T, V, L, I, Y, D, E, Q	G, S, T, V, L, I, Μ, K, R, W, N, D, E, Q	T, I, K, W, D	T, V, I, K, W, D, E
L67					G, A
Н68			L, I, M, F, E	L, I, E	G, T, V, L, I, Y, W, D, E, Q
F97	G, D, E
L115	R, W		A, T, K, N, Q	A, T, K, F, N, Q	A, T, Μ, K, F, N	A, T, K, F, N, Q
Vil 7	Μ, K, N, D	Μ, K, R, W, E	T, Μ, K, R, W, E	T, L, I, M, K, R, W, E	T, I, M, K, w	T, L, I, M, K, R, W, E
1119	F, P	P, N	P, Μ, E	P, Μ, E	M, H	P, Μ, H, F, N, E
H12 1						V, E, Q
H12 2						P, Y, N, D
S124	P, V, L, I, K, F, D, E	L, I, Μ, H, W, Q	L, I, Μ, H, W, Q		L, I, M, Q	L, I,M
E125	A, S, T, L, M, K, H, Y, D	A, T, V, I, M, K, H, F, Y, W, N, D	T, V, I, M, H, F, Y, W	G, T, К, H, Y, W, N, D	V, I, Η, N	T, V, I, F, Y, W, N
R127			S, V, M, H	P, S, V, M, K, Η, N	P, V, Μ, N	P, S, V, M, Η, N

На фиг. 11В и 11С показан вид эпитопа, охватывающего все остатки для блокирования антиhVISTA антитела, как указано в табл. 14 (фиг. 11В), по сравнению с эпитопом неблокирующего антиhVISTA антитела (mAb1; фиг. 11С). Аминокислотные остатки 66(Н) и 162(А) указаны для обозначения ориентации молекулы. Остатки гистидина выделены серым, а остатки эпитопа - черным. Примечательно, что все блокирующие анти-VISTA mAb занимают одну и ту же область эпитопа, что согласуется с данными биннинга октетов (показывающими, что они конкурируют друг с другом), с небольшими различиями остатков среди протестированных антител. Напротив, неблокирующее анти-hVISTA антитело (mAb1) занимает отдельную область эпитопа на молекуле hVISTA, и это дополнительно подтверждается данными биннинга октетов, которые показывают, что ни одно из блокирующих mAb не конкурирует с mAb1.

Пример 16. Биофизические свойства '761 и '767.

Физические и химические свойства Р1-068761 и Р1-068767 сравнивали со свойствами родительского Р1-061029 (все с константной областью IgG1.3) с помощью следующих аналитических и биофизических методов.

Аналитические данные SEC получали с помощью прибора для ВЭЖХ Agilent 1260 с использованием колонки Shodex™ KW403-4F (4,6 мм ID х 300 ммл) в буфере, содержащем 100 мМ фосфат натрия, 150 мМ хлорид натрия, рН 7,3 (с 0,2-мкм фильтром), текущем со скоростью потока 0,30 мл/мин. Данные собирали с помощью детектора Agilent 1260 Infinity Diode Array Detector, установленного для сбора данных при 280 нм, и анализировали с помощью программного обеспечения Agilent Chemstation (Agilent, Санта-Клара, Калифорния).

Визуализированные данные изоэлектрической фокусировки в капиллярах (icIEF) получали на приборе ProteinSimple iCE3 с автосэмплером Alcott 720NV. Образцы антител смешивали со смесью для разделения для получения конечных концентраций антител 0,2 мг/мл, содержащей 0,35% метилцеллюлозы, 2,0 М мочевины, 1% об./об. фармалита pI 5-8 и 3% об./об. фармалита pI 8-10,5. Эти образцы анализировали со временем предварительной фокусировки 1 мин при 1500 В и временем фокусировки 10 мин при 3000 В в картридже ProteinSimple cIEF с FC-покрытием (продукт № 101701). Данные анализировали с помощью программного обеспечения iCE CFR V4.3.1.5352.

Гидродинамический размер антител определяли с помощью динамического рассеяния света (DLS), а термостабильность характеризовали с помощью флуоресцентной спектроскопии и статического рассеяния света (SLS) с использованием прибора для молекулярной характеристики Uncle (Unchained Labs).

- 106 042790

Антитела P1-061029, P1-068761 и P1-068767 получали в концентрации 2 мг/мл в 1X буфере PBS, а затем разводили 1:1 либо 40 мМ Трис в 1X PBS, либо 40 мМ цитратом в 1X PBS при разных значениях рН с получением конечных образцов антител с концентрацией 1 мг/мл в 20 мМ Трис/1Х PBS или 20 мМ цитрате/1X PBS при рН 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0 или 9,0. Эти образцы загружали в кюветный картридж UNi и анализировали в течение 1 ч после разбавления в составах с разными рН. Данные DLS собирали при 25°С, используя 4 сбора по 5 сек каждый. Функции автокорреляции интенсивности устанавливали с помощью программного обеспечения для анализа UNcle V2.0. Данные по термической денатурации получали путем сканирования образцов при температуре от 25°С до 90°С со скоростью сканирования 0,5°/мин при возбуждении при 266 нм и 473 нм. Данные флуоресценции получали в диапазоне от 250 нм до 720 нм. Данные флуоресценции и SLS анализировали с помощью программного обеспечения UNcle V2.0.

Кажущуюся вязкость антител P1-061029, P1-068761 и Р1-068767 измеряли на приборе для молекулярной характеристики UNcle (Unchained Labs), используя метод DLS на основе сфер, который измеряет скорость диффузии полистирольных сфер в присутствии приготовленного раствора антител, в соответствии с протоколом Unchained Labs. Вкратце, 10% раствор 100 нм полистирольных сфер (Thermo Scientific кат. № 3100А) готовили в буфере для приготовления состава, содержащем 0,5% Твина 80, 3 мкл этой смеси полистирольных сфер добавляли к 30 мкл приготовленного антитела (различные концентрации Ab в 20 мМ гистидина, 260 мМ сахарозы, рН 6,0), и полученную смесь белок/сферы загружали на 3 отдельные дорожки кюветного картриджа UNi (по 9 мкл на каждую дорожку) для трехкратного анализа. Данные анализировали с помощью программного обеспечения для анализа UNcle версии V2.0, используя эталонную вязкость 1,3 сП.

Физическую стабильность антител P1-061029, P1-068761 и Р1-068767 изучали в условиях ускоренного стресса путем приготовления 50 мг/мл образцов антител в 20 мМ гистидина, 260 мМ сахарозы, рН 6,0 и воздействия теплового стресса 40°С в течение 4 недель. Аликвоты удаляли непосредственно перед инкубацией при 40°С (время ноль=t0), а также через 1 неделю (1 н) и 4 недели (4 н) термического стресса, и образцы разбавляли до 2 мг/мл буфером для приготовления состава и анализировали по aSEC. Данные aSEC получали на приборе для ВЭЖХ Agilent 1260 с использованием колонки Shodex KW403-4F (4,6 мм ID х 300 мм) в буфере, содержащем 100 мМ фосфат натрия, 150 мМ хлорид натрия, рН 7,3 (с 0,2-мкм фильтром), текущем со скоростью потока 0,30 мл/мин. Данные собирали с помощью детектора Agilent 1260 Infinity Diode Array Detector, установленного для сбора при 280 нм, и анализировали с помощью программного обеспечения Agilent Chemstation (Agilent, Санта-Клара, Калифорния).

Результаты были следующими. Данные аналитической эксклюзионной хроматографии (aSEC) показали, что все три антитела могут быть очищены до высокой степени, причем каждый образец антитела состоит из более чем 99,3% мономеров (основной пик), менее чем 0,7% высокомолекулярных (HMW) видов, и недетектируемых уровней низкомолекулярных (LMW) видов, табл. 16.

Таблица 16 Аналитические данные SEC для анти-VISTA антител, показывающие процент видов с высокой молекулярной массой (% HMW), процент мономерных/доминирующих видов (% Main) и процент видов с низкой молекулярной массой (% LMW)

Название образца	%HMW	%Основной	%LMW
Р1-061029	0,4	99,6	0,0
Р1-068761	0,6	99,4	0,0
Р1-068767	0,5	99,5	0,0

Профиль изменения заряда, определенный с помощью визуализированной изоэлектрической фокусировки в капиллярах (icIEF) для антитела Р1-061029, показал присутствие основного вида (69,4%) с изоэлектрической точкой (pI) 8,56 и 30,6% кислых частиц (фиг. 12А-С). Р1-068761 продемонстрировал основной вид (66,4%) с pI 6,69 и 33,6% кислых видов. Р1-068767 продемонстрировал основной вид (61,4%) с pI 6,63 и 38,6% кислых видов. Следовательно, распределение кислых, щелочных и основных (доминирующих) видов является одинаковым для трех антител, но сконструированные антитела Р1068761 и Р1-068767 имеют значительно более низкую изоэлектрическую точку, чем родительское антитело Р1-061029.

Олигомерное состояние P1-061029, P1-068761 и Р1-068767 определяли в диапазоне рН 3-9 с использованием динамического рассеяния света (DLS) в буферах с разными значениями рН. Все значения гидродинамического радиуса (Rh) для каждого антитела находились в диапазоне 4,8-5,7 нМ, что типично для образцов мономерных антител, табл. 17. Это свидетельствует о том, что эти антитела не образуют обнаруживаемых уровней высокомолекулярных агрегированных частиц при 1 мг/мл в течение первого часа после разбавления составами с рН в диапазоне от 3 до 9.

- 107 042790

Таблица 17

Гидродинамический радиус, определенный DLS, для образцов 1 мг/мл анти-VISTA антител в диапазоне рН от 3-9

pH	Буфер	Rh (нм) Р1-061029	Rh (нм) Р1-068761	Rh (нм) Р1-068767
9	20 мМ Трис/1 XPBS	5,2	4,8	5,2
8	20 мМ Трис/1 XPBS	5,2	5,2	5,2
7	20 мМ Трис/1 XPBS	4,8	5,2	5,2
7	20 мМ цитрат/1 X PBS	4,8	5,2	5,7
6	20 мМ цитрат/1 X PBS	5,2	5,2	4,8
5	20 мМ цитрат/1 X PBS	5,2	4,8	5,2
4	20 мМ цитрат/1 X PBS	4,8	4,8	5,2
3	20 мМ цитрат/1 X PBS	5,2	5,2	5,2

Термостабильность P1-061029, P1-068761 и Р1-068767 измеряли в диапазоне рН 3-9 путем мониторинга флуоресценции и статического рассеяния света как функции температуры в буферах с разными значениями рН. Первый термический денатурационный переход (Tm1), который обычно представляет собой денатурацию домена СН2 антител IgG1, определяли по флуоресценции, который показан в табл. 18, а начало агрегации (Tagg), которое обычно представляет денатурацию домена FAB антител IgG1, измеряли по статическому рассеянию света, данные показаны в табл. 19. При нейтральном рН (рН 7,0) в составе Трис/PBS значения Tm1 для трех антител были следующими: Р1-061029 (67,4°С), Р1068761 (67,0°С) и Р1-068767 (65,3°С), а значения Tagg - Р1-061029 (67,8°С), Р1-068761 (67,5°С) и P1068767 (65,8°C). Tm1 для каждого антитела в составе цитрат/PBS при том же нейтральном рН 7,0 или чуть более кислом рН 6,0 находились в пределах 0,7° от значений в составе Tris/PBS, рН 7,0. Однако для каждого антитела значения Tm1 были несколько ниже (в пределах 0,3-1,1° и ниже) при более щелочном рН 8-9 и значительно ниже при более кислом рН 3-5. По сравнению с нейтральным рН, значение Tagg для Р1-061029 при более щелочных рН 8,0-9,0 находилось в пределах 0,1° значения при рН 7,0, и было на 1,0° ниже при рН 5,0 и намного ниже (на 6,1-19,6° ниже) в самых кислых условиях при рН рН 3,0-4,0. Значение Tagg для Р1-068761 и Р1-068767 также было значительно ниже при рН 3,0-4,0. Однако при рН 5,0 значение Tagg для Р1-068761 было только на 0,2° ниже, чем при рН 6,0, тогда как значение Tagg для Р1-068767 было на 2,2° ниже при рН 5,0 чем при рН 6,0, что показывает некоторые различия в Tagg каждого антитела, табл. 19.

Таблица 18

Термостабильность (значения Tm1) для P1-061029, P1-068761, P1-068767 в диапазоне рН 3-9, определенная методом флуоресцентной спектроскопии

рн	Буфер	Tml (°C) Р1-061029	Tml (°C) Р1-068761	Tml (°C) Р1-068767
9	20 мМ Трис/1 XPBS	66,6	65,9	65,0
8	20 мМ Трис/1 XPBS	67,0	66,5	64,8
7	20 мМ Трис/1 XPBS	67,4	67,0	65,3
7	20 мМ цитрат/1 X PBS	67,2	66,9	64,8
6	20 мМ цитрат/1 X PBS	67,6	67,5	65,0
5	20 мМ цитрат/1 X PBS	64,4	64,7	62,1
4	20 мМ цитрат/1 X PBS	51,8	52,0	50,8
3	20 мМ цитрат/1 X PBS	30,7	28,1	28,7

Таблица 19

Термическая стабильность (значения Tagg) для P1-061029, P1-068761, P1-068767 в диапазоне рН от 3 до 9, определенная статическим рассеянием света

рн	Буфер	Tagg (°C) Pl-061029	Tagg (°C) Pl-068761	Tagg (°C) Pl-068767
9	20 мМ Трис/1 XPBS	67,7	67,1	66,0
8	20 мМ Трис/1 XPBS	67,8	67,5	65,8
7	20 мМ Трис/1 XPBS	67,8	68,2	65,9
7	20 мМ цитрат/1 X PBS	67,8	68,1	65,7
6	20 мМ цитрат/1 X PBS	68,1	68,9	65,6
5	20 мМ цитрат/1 X PBS	66,8	68,7	63,7
4	20 мМ цитрат/1 X PBS	61,7	63,6	56,9
3	20 мМ цитрат/1 X PBS	48,2	48,8	41,0

Кажущуюся вязкость P1-061029, P1-068761 и Р1-068767 измеряли методом DLS на основе сфер, который измеряет скорость диффузии полистирольных сфер в присутствии растворов, содержащих антитела. Сравнение всех трех антител при 44 мг/мл показывает сходную вязкость для обоих сконструированных антител относительно исходного антитела в этих условиях, табл. 20. Во втором исследовании до

- 108 042790 полнительный белковый материал для Р1-068761 и Р1-068767 концентрировали до более высоких концентраций для анализа вязкости при 136 мг/мл, 100 мг/мл и 50 мг/мл. Эти данные показывают увеличение кажущейся вязкости при более высоких концентрациях антител, с максимальной кажущейся вязкостью 5,7±0,7 для Р1-068761 и 5,3±0,6 для Р1-068767 при 136 мг/мл.

Таблица 20

Кажущаяся вязкость (в сП) для антител в 20 мМ гистидина, 260 мМ сахарозы, рН 6,0, при 25°С, определенная методом DLS на основе сфер. Значения представляют среднее арифметическое и стандартное отклонение данных, полученных из трех полос UNi

Антитело	Кажущаяся вязкость (сП) @ 136 мг/мл	Кажущаяся вязкость (сП) @100 мг/мл	Кажущаяся вязкость (сП) @ 50 мг/мл	Кажущаяся вязкость (сП) @ 44 мг/мл
Р1-061029				1,6 ±0Д
Р1-068761	5,7 ±0,7	3,1 ±0,0	1,4 ±0,2	1,5 ±0,4
Р1-068767	5,3 ±0,6	3,0 ±0,3	1,7 ±0,2	1,6 ±0,2

Физическую стабильность образцов 50 мг/мл P1-061029, P1-068761 и Р1-068767 в 20 мМ гистидине, 260 мМ сахарозе, рН 6,0, изучали в условиях ускоренного стресса при 40°С в течение 4 недель. Олигомерное состояние антител отслеживали с помощью aSEC для образцов непосредственно перед инкубацией при 40°С (нулевой момент времени=Ю), а также через 1 неделю (1 н) и 4 недели (4 н) стресса при 40°С. Эти данные показывают, что все три антитела остаются мономерными более чем на 96% через 4 недели при 40°С с низкими уровнями HMW видов (<1,6% HMW) и низкими уровнями LMW видов (<2,0% LMW), табл. 21.

Таблица 21

Данные aSEC для образцов в ускоренных тестах стабильности анти-VISTA-антител, показывающие процент высокомолекулярных видов (% HMW), процент мономерных/основных видов (% Main) и процент низкомолекулярных видов (% LMW), для образцов в t0, 1 н и 4 н

Антитело	Образец	%HMW	% Основной	% LMW
Р1-061029	Ю	0,4	99,7	0,0
1н	0,5	99,4	0,2
4н	0,8	97,2	2,0
Р1-068761	Ю	0,6	99,4	0,0
1н	0,9	98,8	0,3
4н	1,6	96,4	2,0
Р1-068767	Ю	0,5	99,5	0,0
1н	0,8	98,9	0,3
4н	1,6	96,4	2,0

Таблица последовательности

Ниже приведена таблица некоторых последовательностей, упомянутых в настоящей заявке. В SEQ ID NO:2 положение аминокислоты 187 может представлять собой D или Е.

В приведенных ниже последовательностях антител последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH расположены в аминокислотных положениях, содержащих аминокислоты 26-35, 50-66 и 99-110, соответственно, а последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VL расположены в аминокислотных положениях, содержащих аминокислоты 24-35, 51-57 и 90-98, соответственно. CDR1 VH пронумеровано в соответствии с AbM (АА 26-35; Abhinandan and Martin (2008) Mol. Immunol. 45:3832-3839; Swindells et al. (2017) J. Mol. Biol. 429: 356-364), и все другие CDR (CDR2, VH CDR3 VH, CDR1-3 VL) пронумерованы в соответствии с Cabat. Последовательности CDR конкретных видов антител выделены жирным шрифтом и подчеркнуты в своих последовательностях VH и VL.

- 109 042790

SEQ ID NO	Название	Последовательность
1	hVISTA (с лидерной последовательностью)	MGVPTALEAG SWRWGSLLFA LFLAASLGPV AAFKVATPYS LYVCPEGONV TLTCRLLGPV DKGHDVTFYK
TWYRSSRGEV OTCSERRPIR NLTFODLHLH HGGHOAANTS
HDLAORHGLE SASDHHGNFS ITMRNLTLLD SGLYCCLVVE
IRHHHSEHRV HGAMELQVQT GKDAPSNCVV YPSSSQDSEN ITAAALATGA CIVGILCLPL __ _ILLLVYKQRQ AASNRRAQEL VRMDSNIQGI ENPGFEASPP AQGIPEAKVR HPLSYVAQRQ PSESGRHLLS EPSTPLSPPG PGDVFFPSLD PVPDSPNFEV I
2	hVISTA (без лидерной последовательности)	FKVATPYSLY VCPEGONVTL TCRLLGPVDK
GHDVTFYKTW YRSSRGEVOT CSERRPIRNL
TFODLHLHHG GHOAANTSHD LAORHGLESA
SDHHGNFSIT MRNLTLLDSG LYCCLVVEIR
		HHHSEHRVHG AMELQVQTGK DAPSNCVVYP SSSQiD/EISENn AAALATGACI _ _ VGILCLPLIL LLVYKQRQAA SNRRAQELVR MDSNIQGIEN PGFEASPPAQ GIPEAKVRHP LSYVAQRQPS ESGRHLLSEP STPLSPPGPG DVFFPSLDPV PDSPNFEVI
3	Предшественник изоформы 2 человеческого PSGL-1 с сигнальным пептидом	MPLQLLLLLI LLGPGNSLQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSVNYPVG APDHISVKQC LLAILILALV ATIFFVCTVV LAVRLSRKGH MYPVRNYSPT EMVCISSLLP DGGEGPSATA NGGLSKAKSP GLTPEPREDR EGDDLTLHSF LP
4	Изоформа 2 человеческого PSGL-1 без сигнального пептида	LQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSVNYPVG APDHISVKQC LLAILILALV ATIFFVCTVV LAVRLSRKGH MYPVRNYSPT EMVCISSLLP DGGEGPSATA NGGLSKAKSP GLTPEPREDR EGDDLTLHSF LP
5	ECD изоформы 2 человеческого PSGL-1 с сигнальным пептидом	MPLQLLLLLI LLGPGNSLQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE

- 110 042790

		AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQT
6	ECD изоформы 2 человеческого PSGL-1 без сигнального пептида	LQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQT
7	ECD человеческого PSGL-1 (N- терминальные положения с 42 по 295 полноразмерного человеческого PSGL-1, № доступа ААС50061)	QATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSV
8	Предшественник изоформы 1 HumPSGL-1 с сигнальным пептидом NP_001193538	MAVGASGLEG DKMAGAMPLQ LLLLLILLGP GNSLQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QTTAMEAQTT APEATEAQTT QPTATEAQTT PLAAMEALST EPSATEALSM EPTTKRGLFI PFSVSSVTHK GIPMAASNLS VNYPVGAPDH ISVKQCLLAI LILALVATIF

- 111 042790

		FVCTVVLAVR LSRKGHMYPV RNYSPTEMVC ISSLLPDGGE GPSATANGGL SKAKSPGLTP EPREDREGDD LTLHSFLP
9	Человеческий PSGL-1 без сигнального пептида	LQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QTTAMEAQTT APEATEAQTT QPTATEAQTT PLAAMEALST EPSATEALSM EPTTKRGLFI PFSVSSVTHK GIPMAASNLS VNYPVGAPDH ISVKQCLLAI LILALVATIF FVCTVVLAVR LSRKGHMYPV RNYSPTEMVC ISSLLPDGGE GPSATANGGL SKAKSPGLTP EPREDREGDD LTLHSFLP
10	ECD человеческого PSGL-1 с сигнальным пептидом	MAVGASGLEG DKMAGAMPLQ LLLLLILLGP GNSLQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QT
111	VH Р1-069059	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
112	VL Р1-069059	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
113	НС Pl-069059 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA

- 112 042790

		MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
114	LC Pl-069059	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
115	VH Pl-069061	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
116	VL Pl-069061	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
117	HC Pl-069061 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
118	LC Pl-069061	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

- 113 042790

		VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
119	VH Pl-069063	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDADDEWGQGTMVTVSS
220	VL Pl-069063	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
221	HC Pl-069063 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDADDEWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
222	LC Pl-069063	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
223	VH Pl-069065	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSDDIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
224	VL Pl-069065	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
225	HC Pl-069065 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDDIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGP

- 114 042790

		SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
226	LC Pl-069065	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
227	VH Pl-069067	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDADDEWGOGTMVTVSS
228	VL Pl-069067	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA W YQQKPGQ APRLLIYGASSRATGIPDRFS GS GS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
229	HC Pl-069067 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDADDEWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
330	LC Pl-069067	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS

- 115 042790

		SPVTKSFNRGEC
331	VH Pl-069069	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDADDVWGQGTMVTVSS
332	VL Pl-069069	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
333	HC Pl-069069 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDADDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
334	LC Pl-069069	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
335	VH Pl-069071	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSADIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSEGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
336	VL Pl-069071	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
337	HC Pl-069071 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSADIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSEGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH

- 116 042790

		TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
338	LC Pl-069071	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
339	VH Pl-069073	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
440	VL Pl-069073	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
441	HC Pl-069073 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
442	LC Pl-069073	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
443	VH Pl-069075	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWDSAEIGYADSV

- 117 042790

		KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
444	VL Pl-069075	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
445	НС Pl-069075 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWDSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
446	Pl-069075 LC	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
447	VH Pl-069077	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSDEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
448	VL Pl-069077	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
449	HC Pl-069077 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS

- 118 042790

		NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
50	LC Pl-069077	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
51	VH Pl-068761	EVOLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
52	VL Pl-068761	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
53	HC Pl-068761 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
54	Pl-068761 LC	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
55	Pl-068767 VH	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
56	Pl-068767 VL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

- 119 042790

		WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
57	Pl-068767 IgG 1.3 НС	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
58	LC Pl-068767	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
59	VH Pl-068773	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSDNIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
60	VL Pl-068773	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
61	HC Pl-068773 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSDNIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF

- 120 042790

		SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
62	LC Pl-068773	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
63	VH Pl-068765	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTDEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
64	VL Pl-068765	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
65	HC Pl-068765 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTDEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
66	LC Pl-068765	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
67	VH Pl-061029	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
68	VL Pl-061029	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK

- 121 042790

69	НС Pl-061029 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
70	LC Pl-061029	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
71	VH Pl-068757	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
72	VL Pl-068757	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
73	HC Pl-068757 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
74	LC Pl-068757	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

- 122 042790

		TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
75	VH Pl-068771	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSHEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
76	VL Pl-068771	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
77	HC Pl-068771 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSHEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
78	LC Pl-068771	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
79	VH Pl-068775	EVOLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
80	VL Pl-068775	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
81	HC Pl-068775 IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK

- 123 042790

		VPGYSHGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
82	LC Pl-068775	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
83	VH Pl-068769	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
84	VL Pl 068769	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
85	HC Pl-068769 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
86	LC Pl-068769	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK

- 124 042790

		DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
87	VH Pl-068759	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
88	VL Pl-068759	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
89	HC Pl-068759 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
90	LC Pl-068759	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
91	VH Pl-068763	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
92	VL Pl-068763	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASOSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
93	HC Pl-068763 IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS

- 125 042790

		LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
94	LC Pl-068763	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
95	VH Pl-061015	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYSSYYFDYWGQGTLVTVSS
96	VL Pl-061015	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIK
97	HC Pl-061015 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYSSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
98	LC Pl-061015	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
99	VH Pl-068748	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHHA

- 126 042790

		MHW VROAPGKGLEWV All WYDGSNDD YAPS V KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDYWGQGTLVTVSS
100	VL Pl-068748	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCOQYNSYPYTFGOG TKLEIK
101	HC Pl-068748 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHHA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNDDYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
102	LC Pl-068748	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA W YQQKPGQ APRLLIYD AS NRATGIP ARFS GS GS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
103	VH Pl-068744	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA MHW VROAPGKGLEWV AHIWYDGSNKYEADS VKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC ARDSGFYESYYFDEWGOGTLVTVSS
104	VL Pl-068744	EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYOQKPGOAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCOQYNSYPYTFGOG TKLEIK
105	HC Pl-068744 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA MHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYESYYFDEWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE

- 127 042790

		QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
106	LC Pl-068744	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
107	VH Pl-068736	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA MHW VRO APGKGLEWV AID WYDGSNKD YAPS VKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC ARPSGFYPSYYFPPWGQGTLVTVSS
108	VL Pl-068736	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYPASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCOQYNSYPYTFGOG TKLEIK
109	HC Pl-068736 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA MHWVRQAPGKGLEWVAIDWYDGSNKDYADSV KGRFTISRDNS KNTLYLQMNS LRAEDT A VYYC A RDSGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
ПО	LC Pl-068736	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
111	VH Pl-068752	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA MHW VRO APGKGLEWV AEI WYDGSNKD YAPS VKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC ARPSGFYPSYYFPEWGOGTLVTVSS

- 128 042790

112	VL Pl-068752	EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCOQYNSYPYTFGOG TKLEIK
113	НС Pl-068752 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA MHWVRQAPGKGLEWVAEIWYDGSNKDYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDEWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
114	LC Pl-068752	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPRE AKVQWKVDNALQS GNS QES VTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
115	VH Pl-068740	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA MHW VROAPGKGLEWV All WYDGSDKD YAPS V KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSS
116	VL Pl-068740	EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCOQYNSYPYTFGOG TKLEIK
117	HC Pl-068740 IgG 1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT

- 129 042790

		TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
118	LC Pl-068740	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
119	VH Pl-068742	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA MHW VRQAPGKGLEWV All WYDGSDKD YAPS V KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYEDYYFDYWGQGTLVTVSS
120	VL Pl-068742	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIK
121	HC Pl-068742 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYEDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTS G VHTFP A VLQS S GLYS LS S V VT VPS S S LG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
122	LC Pl-068742	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
123	VH Pl-068746	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNHHYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDYWGQGTLVTVSS
124	VL Pl-068746	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG

- 130 042790

		TKLEIK
125	НС Pl-068746 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNHHYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYDSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
126	LC Pl-068746	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
127	VH Pl-068750	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADS VKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC ARDEEFYSSYYFDYWGQGTLVTVSS
128	VL Pl-068750	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIK
129	HC Pl-068750 IgG1.3	Q VQLVES GGG V VQPGRS LRLS C A AS GFTFS D YD MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDEEFYSSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
130	LC Pl-068750	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

- 131 042790

		WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
131	VH Pl-068738	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA HHWVROAPGKGLEWVAIIWDDGSNHYYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYEDYYFDYWGQGTLVTVSS
132	VL Pl-068738	EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGOG TKLEIK
133	HC Pl-068738 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA HHWVRQAPGKGLEWVAIIWDDGSNHYYADSV KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFYEDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
134	LC Pl-068738	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
135	VH Pl-068754	OVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD MHWVROAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADS VKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC ARDSGFHSDYYFDYWGQGTLVTVSS
136	VL Pl-068754	EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCOQYNSYPYTFGOG TKLEIK
137	HC Pl-068754 IgG1.3	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSV

- 132 042790

		KGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA RDSGFHSDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLG TQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV VVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG
138	LC Pl-068754	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGS GTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQG TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC
139	VH Pl-069293 (Pl-068761.IgGlf)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
140	VL Pl-069293 (Pl-068761.IgGlf)	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
141	HC Pl-069293 (Pl-068761.IgGlf)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
142	LC Pl-069293 (Pl-068761.IgGlf)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN

- 133 042790

		NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
143	VH Pl-069298 (Pl-068767.IgGlf)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
144	VL Pl-069298 (Pl-068767.IgGlf)	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
145	HC Pl-069298 (Pl-068767.IgGlf)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
146	LC Pl-069298 (Pl-068767.IgGlf)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
147	VH Pl-069302 (Pl-061029.IgGlf)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
148	VL Pl-069302 (Pl-061029.IgGlf)	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
149	HC Pl-069302 (Pl-061029.IgGlf)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS

- 134 042790

		WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
150	LC Pl-069302 (Pl-061029.IgGlf)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
151	VH Pl-069312 (Pl-068761.IgGlf афукозилированное)	EVOLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
152	VL Pl-069312 (Pl-068761.IgGlf афукозилированное)	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
153	HC Pl-069312 (Pl-068761.IgGlf афукозилированное)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
154	LC Pl-069312 (Pl-068761.IgGlf афукозилированное)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC

- 135 042790

155	VH Pl-069309 (Pl-068767.IgGlf афукозилированное)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
156	VL Pl-069309 (Pl-068767.IgGlf афукозилированное)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
157	НС Pl-069309 (Pl-068767.IgGlf афукозилированное)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
158	LC Pl-069309 (Pl-068767.IgGlf афукозилированное)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
159	VH Pl-069307 (Pl-061029.IgGlf афукозилированное)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
160	VL Pl-069307 (Pl-061029.IgGlf афукозилированное)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
161	НС Pl-069307 (Pl-061029.IgGlf афукозилированное)	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV

- 136 042790

		TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
162	LC Pl-069307 (Pl-061029.IgGlf афукозилированное)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA W YQQKPGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFS GS GS G TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
163	IgG1.3 (или IgG1.3f) константная область тяжелой цепи (L234A, L235E, G237A)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
164	Пример константной области легкой цепи	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVT KSFNRGEC
165	человеческий VISTA NP_071436.1 (Fig. IB)	See Fig. IB
166	Cyno VISTA XP_005565644.1 (Fig. IB)	See Fig. IB
167	Мышиный VISTA NP_O83OO8.1 (Fig. IB)	See Fig. IB
168	Олиго-чип HDR3 Pl-061029 (Фиг. 7A)	XPGYSGGWIDAFDV
169	Олиго-чип HDR3 Pl-061029 (Фиг. 7A)	XXGYSGGWIDAFDV
170	Олиго-чип HDR3	XPXYSGGWIDAFDV

- 137 042790

	Pl-061029 (Фиг. 7A)
171	Олиго-чип HDR3 Pl-061029 (Фиг. 7А)	XPGXSGGWIDAFDV
172	Олиго-чип HDR3 Pl-061029 (Фиг. 7А)	XPGYXGGWIDAFDV
173	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Fig. 7А)	XPGYSXGWIDAFDV
174	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPG YS GXWID AFD V
175	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPGYSGGXIDAFDV
176	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPGYSGGWXDAFDV
177	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPGYSGGWIXAFDV
178	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPGYSGGWIDXFDV
179	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPGYSGGWIDAXDV
180	Олиго-чип HDR3 Р1-061029 (Фиг. 7А)	XPG YS GGWID AFX V
181	Олиго-чип HDR3 Р1-061029	XPGYSGGWIDAFDX

- 138 042790

	(Фиг. 7А)
182	IgGlf (аллотип f дикого типа человека) константная область тяжелой цепи	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
183	IgGl.lf Константная область тяжелой цепи (L234A, L235E, G237A, A33OS,P331S)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
184	Константная область тяжелой цепи IgGlfa.P238K (или IgGl.P238K)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHTCPPCPAPELLGGKSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
185	VH Pl-070864 Pl-068761_E30D	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
186	VL Pl-070864 Pl-068761_E30D	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
187	HC Pl-070864 Pl-068761_E30D IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS

- 139 042790

		LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
188	LC Pl-070864 Pl-068761_E30D	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
189	VH Pl-070866 Pl-068761_E32Y	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
190	VL Pl-070866 Pl-068761_E32Y	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
191	HC Pl-070866 Pl-068761_E32Y IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
192	LC Pl-070866 Pl-068761_E32Y	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
193	VH Pl-070868	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA

- 140 042790

	Ρ1-068761_Ε55Α	MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
194	VL Pl-070868 Pl-068761_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
195	HC Pl-070868 Pl-068761_E55A IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
196	LC Pl-070868 Pl-068761_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA W YQQKPGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFS GS GS G TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
197	VH Pl-070870 Pl-068761_E56N	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
198	VL Pl-070870 Pl-068761_E56N	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYOQKPGOAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
199	HC Pl-070870 Pl-068761_E56N IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR

- 141 042790

		EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
200	LC Pl-070870 Pl-068761_E56N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
201	VH Pl-070872 Pl-068761_H100G	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
202	VL Pl-070872 Pl-068761_H100G	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
203	HC Pl-070872 Pl-068761_H100G IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
204	LC Pl-070872 Pl-068761_H100G	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
205	VH Pl-070874 Pl-068761_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS

- 142 042790

206	VL Pl-070874 Pl-068761_E100fF	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
207	HC Pl-070874 Pl-068761_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
208	LC Pl-070874 Pl-068761_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPRE AKVQWKVDNALQS GNS QES VTEQDS К DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
209	VH Pl-070876 P1-06876 l_E30D_E32Y	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
210	VL Pl-070876 P1-06876 l_E30D_E32Y	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
211	HC Pl-070876 P1-06876 l_E30D_E32Y IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY

- 143 042790

		KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
212	LC Pl-070876 P1-06876 l_E30D_E32Y	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
213	VH Pl-070878 P1-068761_E55A_E56N	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
214	VL Pl-070878 Pl-068761_E55A_E56N	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
215	HC Pl-070878 P1-068761_E55A_E56N IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNS GALTS G VHTFPA VLQS S GLYS LS S V VT VPS S SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
216	LC Pl-070878 P1-068761_E55A_E56N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
217	VH Pl-070880 Pl- 068761_H100G_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
218	VL Pl-070880 Pl-	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG

- 144 042790

	068761_H100G_E100fF	TKVDIK
219	Pl-070880 HC Pl- 068761_H100G_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
220	LC Pl-070880 Pl- 068761_H100G_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
221	VH Pl-070882 Pl-068761_E32Y_E55A	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
222	VL Pl-070882 Pl-068761_E32Y_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
223	HC Pl-070882 Pl-068761_E32Y_E55A IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
224	LC Pl-070882	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

- 145 042790

	Ρ1-068761_Ε32Υ_Ε55Α	WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
225	VH Pl-070884 Pl-068761_E32Y_E56N	EVOLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
226	VL Pl-070884 P1-068761_E32Y_E56N	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
227	HC Pl-070884 Pl-068761_E32Y_E56N IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
228	LC Pl-070884 P1-068761_E32Y_E56N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
229	VH Pl-070886 Pl-068761_E32Y_H100G	EVOLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
230	VL Pl-070886 Pl-068761_E32Y_H100G	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
231	HC Pl-070886 Pl-068761_E32Y_H100G	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK

- 146 042790

	IgG1.3	GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
232	LC Pl-070886 Pl-068761_E32Y_H100G	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
233	VH Pl-070888 Pl-068761_E32Y_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAFDVWGOGTMVTVSS
234	VL Pl-070888 Pl-068761_E32Y_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
235	HC Pl-070888 Pl-068761_E32Y_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
236	LC Pl-070888 Pl-068761_E32Y_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN

- 147 042790

		NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
237	VH Pl-070890 Pl-068761_E30D_E55A	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
238	VL Pl-070890 Pl-068761_E30D_E55A	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
239	HC Pl-070890 Pl-068761_E30D_E55A IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
240	LC Pl-070890 P1-06876 l_E30D_E55 A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
241	VH Pl-070892 Pl-068761_E30D_E56N	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
242	VL Pl-070892 P1-06876 l_E30D_E56N	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYOQKPGOAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
243	HC Pl-070892 Pl-068761_E30D_E56N IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW

- 148 042790

		NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
244	LC Pl-070892 Pl-068761_E30D_E56N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
245	VH Pl-070894 Pl-068761_E30D_H100G	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
246	VL Pl-070894 Pl-068761_E30D_H100G	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
247	HC Pl-070894 Pl-068761_E30D_H100G IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
248	LC Pl-070894 Pl-068761_E30D_H100G	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC

- 149 042790

249	VH Pl-070896 Pl-068761_E30D_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
250	VL Pl-070896 Pl-068761_E30D_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
251	HC Pl-070896 Pl-068761_E30D_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
252	LC Pl-070896 Pl-068761_E30D_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
253	VH Pl-070898 Pl-068761_E55A_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
254	VL Pl-070898 Pl-068761_E55A_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
255	HC Pl-070898 Pl-068761_E55A_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT

- 150 042790

		CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
256	LC Pl-070898 Pl-068761_E55A_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
257	VH Pl-070900 Pl-068761_E56N_H100G	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
258	VL Pl-070900 Pl-068761_E56N_H100G	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
259	HC Pl-070900 Pl-068761_E56N_H100G IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
260	LC Pl-070900 Pl-068761_E56N_H100G	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
261	VH Pl-070902 Pl-068761_E56N_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA

- 151 042790

		KVPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
262	VL Pl-070902 Pl-068761_E56N_E100fF	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
263	HC Pl-070902 Pl-068761_E56N_E100fF IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
264	LC Pl-070902 Pl-068761_E56N_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
265	VH Pl-070904 Pl-068767_E30D	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
266	VL Pl-070904 Pl-068767_E30D	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
267	HC Pl-070904 Pl-068767_E30D IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM

- 152 042790

		TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
268	LC Pl-070904 Pl-068767_E30D	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPRE AKVQWKVDNALQS GNS QES VTEQDS К DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
269	VH Pl-070906 Pl-068767_D52N	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
270	VL Pl-070906 Pl-068767_D52N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
271	HC Pl-070906 Pl-068767_D52N IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
272	LC Pl-070906 Pl-068767_D52N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
273	VH Pl-070908 Pl-068767_E55A	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
274	VL Pl-070908 Pl-068767_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS

- 153 042790

		GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
275	HC Pl-070908 Р1-068767_Е55А IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
276	LC Pl-070908 Pl-068767_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
277	VH Pl-070910 Pl-068767_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
278	VL Pl-070910 Pl-068767_E100fF	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
279	HC Pl-070910 Pl-068767_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

- 154 042790

280	LC Pl-070910 Pl-068767_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
281	VH Pl-070912 Pl-068767_D102V	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
282	VL Pl-070912 Pl-068767_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
283	HC Pl-070912 Pl-068767_D102V IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
284	LC Pl-070912 Pl-068767_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA W YQQKPGQAPRLLIYGAS SRATGIPDRFS GS GS G TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
285	VH Pl-070914 Pl-068767_E30D_D52N	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
286	VL Pl-070914 Pl-068767_E30D_D52N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
287	HC Pl-070914	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA

- 155 042790

	Pl-068767_E30D_D52N IgG1.3	MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
288	LC Pl-070914 Pl-068767_E30D_D52N	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
289	VH Pl-070916 Pl-068767_D52N_E55A	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS
290	VL Pl-070916 Pl-068767_D52N_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
291	HC Pl-070916 Pl-068767_D52N_E55A IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
292	LC Pl-070916 Pl-068767_D52N_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

- 156 042790

		VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
293	VH Pl-070918 Pl-068767_E55A_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDDWGOGTMVTVSS
294	VL Pl-070918 Pl-068767_E55A_E100fF	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
295	HC Pl-070918 Pl-068767_E55A_E100fF IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
296	LC Pl-070918 Pl-068767_E55A_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
297	VH Pl-070920 Pl- 068767_E100fF_D102V	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS
298	VL Pl-070920 Pl- 068767_E100fF_D102V	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
299	HC Pl-070920 Pl- 068767_E100fF_D102V	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPS

- 157 042790

	IgG1.3	VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
300	LC Pl-070920 Pl- 068767_E100fF_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
301	VH Pl-070922 Pl-068767_E30D_E55A	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGOGTMVTVSS
302	VL Pl-070922 Pl-068767_E30D_E55A	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA W YQQKPGQ APRLLIYGASSRATGIPDRFS GS GS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
303	HC Pl-070922 Pl-068767_E30D_E55A IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
304	LC Pl-070922 Pl-068767_E30D_E55A	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS

- 158 042790

		SPVTKSFNRGEC
305	VH Pl-070924 Pl-068767_E30D_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
306	VL Pl-070924 Pl-068767_E30D_E100fF	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
307	HC Pl-070924 Pl-068767_E30D_E100fF IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
308	LC Pl-070924 Pl-068767_E30D_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
309	VH Pl-070926 Pl-068767_E30D_D102V	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVROAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGOGTMVTVSS
310	VL Pl-070926 Pl-068767_E30D_D102V	EIVLTOSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPG TKVDIK
311	HC Pl-070926 Pl-068767_E30D_D102V IgG1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT

- 159 042790

		CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
312	LC Pl-070926 Pl-068767_E30D_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
313	VH Pl-070928 Pl-068767_D52N_E100fF	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS
314	VL Pl-070928 Pl-068767_D52N_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
315	HC Pl-070928 Pl-068767_D52N_E100fF IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
316	LC Pl-070928 Pl-068767_D52N_E100fF	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
317	VH Pl-070930 Pl-068767_D52N_D102V	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSV

- 160 042790

		KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
318	VL Pl-070930 Pl-068767_D52N_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
319	HC Pl-070930 Pl-068767_D52N_D102V IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVK GRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAK VPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSS LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
320	LC Pl-070930 Pl-068767_D52N_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
321	VH Pl-070932 Pl-068767_E55A_D102V	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS
322	VL Pl-070932 Pl-068767_E55A_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGS GTDFTLTISRLEPEDFAVYYCOQYGSSPFTFGPG TKVDIK
323	HC Pl-070932 Pl-068767_E55A_D102V IgG 1.3	EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYA MHWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSV KGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCA KVPGYSGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTH TCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV

- 161 042790

		SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
324	LC Pl-070932 Pl-068767_E55A_D102V	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLN NFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
325	hVISTA-ECD 6-His метка	AFKVATPYSL YVCPEGQNVT LTCRLLGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVY PSSSQESENI TAHHHHHHH
326	Cyno VISTA-ECD 6-His метка	AFKVATLYSL YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY PSSSQESENI TAHHHHHHH
327	ДНК VH Pl-069059	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGACCATATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
328	ДНК VL Pl-069059	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA

- 162 042790

		GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
329	ДНК VHP 1-069061	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
330	ДНК VLP1-069061	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
331	ДНК VHP 1-069063	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGACGATGAATGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
332	ДНК VL Pl-069063	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC

- 163 042790

		TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
333	ДНК VHP 1-069065	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAA GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGACGACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
334	ДНК VL Pl-069065	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
335	ДНК VH Pl-069067	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGACGATGAATGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
336	ДНК VL Pl-069067	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT

- 164 042790

		CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
337	ДНК VHP 1-069069	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGACGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
338	ДНК VL Pl-069069	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
339	ДНК VHP 1-069071	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAA GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGAAGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
340	ДНК VLP1-069071	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT

- 165 042790

		GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
341	ДНК VH Pl-069073	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAA GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
342	ДНК VL Pl-069073	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
343	ДНК VH Pl-069075	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGG ACAGTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA

- 166 042790

344	ДНК VL Pl-069075	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
345	ДНК VH Pl-069077	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAA GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGACGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
346	ДНК VL Pl-069077	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
347	ДНК VHP 1-068761	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA

- 167 042790

		ATGGTCACCGTCTCTTCA
348	ДНК VLP1-068761	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
349	ДНК VHP 1-068767	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
350	ДНК VL Pl-068767	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
351	ДНК VHP 1-068773	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGATAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT

- 168 042790

		TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
352	ДНК VL Pl-068773	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
353	ДНК VHP 1-068765	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCGATGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
354	ДНК VLP 1-068765	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
355	ДНК VH Pl-061029	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT

- 169 042790

		GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
356	ДНК VL Pl-061029	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
357	ДНК VHP 1-068757	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
358	ДНК VL Pl-068757	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
359	ДНК VHP 1-068771	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTCATGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC

- 170 042790

		TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
360	ДНК VLP1-068771	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
361	ДНК VHP 1-068775	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
362	ДНК VL Pl-068775	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
363	ДНК VHP 1-068769	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGATCACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC

- 171 042790

		CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
364	ДНК VLP1-068769	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
365	ДНК VHP 1-068759	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
366	ДНК VL Pl-068759	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
367	ДНК VHP 1-068763	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG

- 172 042790

		AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
368	ДНК VLP1-068763	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
369	ДНК VH Pl-061015	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTAT GATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACTCCTCGTACT ACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
370	ДНК VL Pl-061015	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
371	ДНК VHP 1-068748	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTCACCA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTAT

- 173 042790

		GATGGAAGTAATGACGACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACT ACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
372	ДНК VLP1-068748	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
373	ДНК VHP 1-068744	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCACATATATGGTAT GATGGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCG TGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAG CCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACT GTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAATCGTAC TACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT CACCGTCTCCTCA
374	ДНК VL Pl-068744	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
375	ДНК VH Pl-068736	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA

- 174 042790

		AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTGATTGGTAT GATGGAAGTAATAAAGACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACT ACTTTGACGACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
376	ДНК VL Pl-068736	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
377	ДНК VHP 1-068752	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGAGATATGGTA TGATGGAAGTAATAAAGACTATGCAGACTCCG TGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAG CCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACT GTGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGACTCGTAC TACTTTGACGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGT CACCGTCTCCTCA
378	ДНК VLP1-068752	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
379	ДНК VHP 1-068740	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTA

- 175 042790

		TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTAT GATGGAAGTGATAAAGACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACT ACTTTGACGACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
380	ДНК VL Pl-068740	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
381	ДНК VHP 1-068742	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTAT GATGGAAGTGATAAAGACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAAGATTACT ACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
382	ДНК VL Pl-068742	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
383	ДНК VHP 1-068746	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC

- 176 042790

		TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTA TGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTAT GATGGAAGTAATCACCACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACT ACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
384	ДНК VL Pl-068746	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
385	ДНК VHP 1-068750	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTA TGACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGAGATATGGGA TGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCG TGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAG CCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACT GTGCGAGAGATGAGGAATTTTACTCCTCGTAC TACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGT CACCGTCTCCTCA
386	ДНК VL Pl-068750	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
387	ДНК VHP 1-068738	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG

- 177 042790

		TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTA TGCCCATCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGGAT GATGGAAGTAATCACTACTATGCAGACTCCGT GAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGC CTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTG TGCGAGAGATAGTGGTTTTTACGAAGATTACT ACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCCTCA
388	ДНК VLP 1-068738	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA
389	ДНК VHP 1-068754	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCG TGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCC TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTA TGACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCA AGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGAGATATGGGA TGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCG TGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAG CCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACT GTGCGAGAGATAGTGGTTTTCACTCCGATTAC TACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGT CACCGTCTCCTCA
390	ДНК VLP 1-068754	GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCA ACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGC GGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAA CTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCG TACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAAA

- 178 042790

391	ДНК VHP 1-070864	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
392	ДНК VL Pl-070864	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
393	ДНК VHP 1-070866	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
394	ДНК VL Pl-070866	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT

- 179 042790

		CAAA
395	ДНК VHP 1-070868	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
396	ДНК VL Pl-070868	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
397	ДНК VHP 1-070870	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
398	ДНК VL Pl-070870	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA

- 180 042790

		TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
399	ДНК VH Pl-070872	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
400	ДНК VL Pl-070872	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
401	ДНК VH Pl-070874	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
402	ДНК VL Pl-070874	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG

- 181 042790

		TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
403	ДНК VHP 1-070876	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
404	ДНК VL Pl-070876	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
405	ДНК VHP 1-070878	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
406	ДНК VL Pl-070878	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC

- 182 042790

		CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
407	ДНК VH Pl-070880	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
408	ДНК VL Pl-070880	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
409	ДНК VH Pl-070882	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
410	ДНК VL Pl-070882	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT

- 183 042790

		GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
411	ДНК VH Pl-070884	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
412	ДНК VL Pl-070884	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
413	ДНК VH Pl-070886	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
414	ДНК VL Pl-070886	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA

- 184 042790

		GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
415	ДНК VH Pl-070888	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
416	ДНК VL Pl-070888	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
417	ДНК VHP 1-070890	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
418	ДНК VL Pl-070890	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA

- 185 042790

		GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
419	ДНК VHP 1-070892	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
420	ДНК VL Pl-070892	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
421	ДНК VHP 1-070894	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
422	ДНК VL Pl-070894	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC

- 186 042790

		TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
423	ДНК VHP 1-070896	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
424	ДНК VL Pl-070896	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
425	ДНК VHP 1-070898	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
426	ДНК VL Pl-070898	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT

- 187 042790

		CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
427	ДНК VHP 1-070900	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
428	ДНК VL Pl-070900	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
429	ДНК VH Pl-070902	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAG GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
430	ДНК VL Pl-070902	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT

- 188 042790

		GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
431	ДНК VH Pl-070904	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
432	ДНК VL Pl-070904	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
433	ДНК VH Pl-070906	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA

- 189 042790

434	ДНК VL Pl-070906	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
435	ДНК VH Pl-070908	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
436	ДНК VL Pl-070908	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
437	ДНК VH Pl-070910	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAA

- 190 042790

		TGGTCACCGTCTCTTCA
438	ДНК VL Pl-070910	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
439	ДНК VH Pl-070912	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
440	ДНК VL Pl-070912	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
441	ДНК VH Pl-070914	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT

- 191 042790

		TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
442	ДНК VL Pl-070914	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
443	ДНК VHP 1-070916	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
444	ДНК VLP1-070916	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
445	ДНК VHP 1-070918	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT

- 192 042790

		GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
446	ДНК VLP 1-070918	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
447	ДНК VH Pl-070920	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
448	ДНК VL Pl-070920	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
449	ДНК VH Pl-070922	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC

- 193 042790

		TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGACTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
450	ДНК VL Pl-070922	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
451	ДНК VH Pl-070924	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
452	ДНК VL Pl-070924	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
453	ДНК VH Pl-070926	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC

- 194 042790

		CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
454	ДНК VL Pl-070926	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
455	ДНК VH Pl-070928	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTTTTGATGACTGGGGCCAAGGGACAA TGGTCACCGTCTCTTCA
456	ДНК VL Pl-070928	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
457	ДНК VHP 1-070930	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGA ACAGTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG

- 195 042790

		AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
458	ДНК VL Pl-070930	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
459	ДНК VHP 1-070932	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTAT GCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGA ACAGTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTG AAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGC CAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTC TGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGT GCAAAAGTTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGAT TGACGCTGAAGATGTCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA
460	ДНК VL Pl-070932	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCT GTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCT CCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGC TACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCA GGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGT GGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAC CATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAG TGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCA TTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATAT CAAA
461	ДНК константной области тяжелой цепи IgG 1.3	GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCT GGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCA CAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTAC TTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTC AGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCC

- 196 042790

		CGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAG CTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGA ATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAA GAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTC ACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCC GAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGA CCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTG AGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTG GTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA AGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAG CACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCC TGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTA CAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAA GGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCT GCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAAC CAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTT CTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGA GCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGAC CACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCT TCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGCGTCG ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACC CTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGG CCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTG TCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGC AGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGG CACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACA AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGT TGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACAT GCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGG GGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACC CAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTG AGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC GAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGT GGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGT ACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCAC CAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCC ATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGC AGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGG TCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTAT CCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCA ATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCAC GCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTT CCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCA GGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCC GTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC GCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA
462	Пример ДНК константной области легкой цепи	CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTC CCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAAC TGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTA TCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTG GATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGA GAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGC ACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAG CAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTAC GCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTC GCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAG TGTTAG

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (16)

1. Выделенное антитело, которое специфически связывается с Ig-V-домен супрессором Т-клеточной активации человека (hVISTA), где антитело связывается с hVISTA в кислых условиях, кислые условия представляют собой условия с рН, равным от 6,0 до 6,5, антитело содержит:

(i) VL CDR1, CDR2 и CDR3 Р1-061029, где VL CDR1, CDR2 и CDR3 Р1-061029 содержит положения 24-35, 51-57 и 90-98 SEQ ID NO:68 и VH CDR1, CDR2 и CDR3

Р1-068767 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:55),

Р1-068761 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:51),

P1-069061 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:15),

- 197 042790

P1-069059 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:11),

P1-068773 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:59),

P1-069073 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:39),

P1-068765 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:63),

P1-068757 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:71),

P1-068771 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:75),

P1-068769 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:83),

P1-068775 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:79),

P1-068759 (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:87),

Р1-068761_Е55А (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:193), P1-068761_H100G (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:201), P1-068761_E56N (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:197), P1-068761_E55A_E56N (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:213), P1-068761_E30D (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:185), P1-068761_E30D_E55A (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:237), P1-068761_E56N_H100G (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:257), P1-068761_E30D_H100G (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:245), P1-068761_E30D_E56N (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:241), P1-068767_D52N (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:269), P1-068767_D52N_E55A (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:289), Р1-068767_Е55А (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:273), P1-068767_E30D_D52N (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:285), P1-068767_E30D (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:265), P1-068767_E30D_E55A (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:301), P1-068767_E55A_E100fF (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:293), P1-068767_D52N_E100fF (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:313), P1-068767_E100fF (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:277) или P1-068767_E30D_E100fF (положения 26-35, 50-66 и 99-112 SEQ ID NO:305); или антитело содержит:

(ii) VL CDR1, CDR2 и CDR3 P1-061015 (положения 24-35, 51-57 и 90-98 SEQ ID NO:96) и VH CDR1, CDR2 и CDR3

P1-068748 (положения 26-35, 50-66 и 99-110 SEQ ID NO:99),

P1-068744 (положения 26-35, 50-66 и 99-110 SEQ ID NO:103),

P1-068736 (положения 26-35, 50-66 и 99-110 SEQ ID NO: 107) или

P1-068752 (положения 26-35, 50-66 и 99-110 SEQ ID NO:111).

2. Выделенное антитело по п.1, где указанное антитело связывается с hVISTA в кислых условиях со значением KD, которое по меньшей мере в 10 раз меньше, по меньшей мере в 100 раз меньше или по меньшей мере в 1000 раз меньше, чем его значение KD в нейтральных или физиологических условиях, где нейтральные условия представляют собой условия с рН 7,0 и физиологические условия представляют собой условия с рН 7,4.

3. Выделенное антитело по п.1 или 2, где антитело связывается с hVISTA в нейтральных или физиологических условиях со значением KD, равным 10^-5 М или более, с KD 10^-4 М или более или с KD 10^-3 М или более, и необязательно, где антитело связывается с hVISTA в кислых условиях со значением Kd, равным 10^-7 М или менее, со значением KD, равным 10^-8 М или менее, или со значением K_D 10^-9 М или менее.

4. Выделенное антитело по любому из пп.1-3, где указанное антитело связывается с hVISTA в кислых условиях с koff, которое по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 50 раз или по меньшей мере в 100 раз меньше его значения k_off в нейтральных или физиологических условиях.

5. Выделенное антитело по пп.1-4, которое связывается в богатой гистидином области hVISTA или около нее в условиях, имеющих рН 6,0-6,5.

6. Выделенное антитело по любому из пп.1-5, которое конкурирует или перекрестно конкурирует за связывание с hVISTA с одним или более антителами, содержащими:

(a) VH, содержащим SEQ ID NO:67, 71, 87, 51, 91, 63, 55, 83, 75, 59, 79, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 193, 201, 197, 213, 185, 237, 257, 245, 241, 205, 253, 217, 249, 261, 189, 221, 225, 209, 229, 233, 317, 269, 289, 321, 281, 273, 285, 309, 265, 301, 297, 293, 313, 277 или 305, и VL, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:68, или содержащими:

(b) VH, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95, 107, 131, 115, 119, 103, 99, 127, 111 или 135, и VL, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96.

7. Выделенное антитело по любому из пп.1-6, которое не демонстрирует значительного связывания с hVISTA, в котором мутирован один или более из следующих аминокислотных остатков: Т35, Y37, K38, Т39, Y41, R54, Т61, F62, Q63, L65, Н66, L67, Н68, Н69, F97, L115, V117, I119, Н121, Н122, S124, Е125, R127.

- 198 042790

8. Выделенное антитело по любому из пп.1-7, где выделенное антитело обладает одним или несколькими из следующих свойств:

a) специфически связывается с hVISTA в кислых условиях, но незначительно в нейтральных или физиологических условиях;

b) связывается с cynoVISTA;

c) ингибирует связывание hVISTA с человеческими Т-клетками в условиях, имеющих рН менее 7,0;

d) ингибирует связывание hVISTA с huPSGL-1 в условиях, имеющих рН менее 7,0;

e) ингибирует связывание hVISTA с гепарансульфатными протеогликанами;

f) ингибирует связывание hVISTA с гепарансульфатными протеогликанами в условиях, имеющих рН менее 7,0;

g) стимулирует активацию Т-клеток в условиях, имеющих рН менее 7,0;

h) снижает VISTA-опосредованную клеточную адгезию;

i) имеет среднее время пребывания антитела в организме яванского макака по меньшей мере 500 дней;

j) не имеет значимого связывания с VISTA-положительными клетками, например нейтрофилами, в периферической крови индивида, которому оно введено;

k) не приводит к существенному истощению VISTA-положительных клеток, например нейтрофилов, в периферической крови индивида, которому оно введено; и

l) имеет изоэлектрическую точку (pI) от 6,5 до 6,8, как измерено с помощью icIEF.

9. Выделенное антитело по любому из пп.1-8, которое представляет собой антитело IgG.

10. Выделенное антитело по п.9, которое содержит IgG1, IgG2 или IgG4 константную область тяжелой цепи человека.

11. Выделенное антитело по п.9, которое содержит IgG4 константную область тяжелой цепи человека с заменой S228P.

12. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп.1-11.

13. Композиция для экспрессии антитела по любому из пп.1-11, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь указанного антитела, и нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь указанного антитела.

14. Клетка, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по п.12 или композиции по п.13.

15. Способ получения выделенного антитела, которое специфически связывается с Ig-V-домен супрессором Т-клеточной активации (hVISTA) в кислых условиях, включающий культивирование клетки по п.14 в условиях, при которых экспрессируется антитело.

16. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенное антитело по любому из пп.1-11, которое специфически связывается с Ig-V-домен супрессором Т-клеточной активации (hVISTA) в кислых условиях, или содержит выделенную нуклеиновую кислоту, композицию или клетку по любому из пп.12-14, кодирующую или экспрессирующую антитело, и также содержащая фармацевтически приемлемый носитель.