JP2023528223A - 骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ｈｊｖ）抗体 - Google Patents

骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ｈｊｖ）抗体 Download PDF

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Abstract

本出願の態様は、抗ヘモジュベリン抗体ならびに骨髄線維症および／または骨髄線維症と関連する状態の処置においてそれを使用する方法を提供する。

Description

関連出願
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下、それぞれの全内容が参照によって本明細書に組み込まれる、２０２０年５月１３日に出願された、表題「骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体」の米国仮出願第６３／０２４，４１６号、２０２０年６月５日に出願された、表題「骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体」の同第６３／０３５，６４９号、２０２０年７月２日に出願された、表題「骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体」の同第６３／０４７，８２８号、および２０２１年３月２２日に出願された、表題「骨髄線維症を処置するための抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体」の同第６３／１６４，２９４号の利益を主張する。
鉄は、ヘモグロビンおよびミオグロビンなど、酸素運搬貯蔵分子の重要な成分である。鉄欠乏症は、貧血をもたらし、一方で鉄過剰症は組織損傷および線維症をもたらす。ヘプシジンは、全身の鉄ホメオスタシスの重要なペプチドホルモン制御物質である。それは、肝細胞、十二指腸の腸細胞、マクロファージ、および脂肪細胞に存在する膜貫通タンパク質である、細胞の鉄排出タンパク質、フェロポーチンに結合することによってその制御機能を発揮する。ヘプシジンの結合は、フェロポーチンの分解を促進し、細胞からの鉄の排出および血漿への鉄の放出を防止する。
本開示の態様は、機能性鉄欠乏症をもたらす、骨髄線維症、骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、慢性腎臓病、慢性疾患の貧血または鉄制限貧血などの、高ヘプシジン障害を処置するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、一般に慢性炎症および進行性の骨髄の線維症と関連する骨髄増殖性疾患として特徴付けられる、骨髄線維症を処置するために提供される。貧血は、骨髄線維症の主要な臨床的課題であり、負の転帰と関連する。そのような貧血は、一般に、骨髄不全、脾腫および／または機能性鉄欠乏症によって引き起こされるかまたは関連し、炎症に寄与し得る。さらに、骨髄線維症では、ＩＬ－６およびオンコスタチン－Ｍなど、ヘプシジン合成を誘導する炎症促進性サイトカインが典型的には増加され、鉄封鎖、マクロファージ鉄負荷、ならびに骨髄増殖およびマクロファージ活性化と関連する（例えば図１１参照）。ヘプシジンレベルにおける結果的な増加は、貧血および負の転帰と関連する。
本開示の態様は、有益に低い最大血清濃度（Ｃｍａｘ）と共に骨髄線維症を有する対象へのヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体の皮下投与により達成される有効なバイオアベイラビリティに関する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与は、同じ抗体の静脈内投与と比較して抗ＨＪＶ抗体のより低い最大濃度（Ｃｍａｘ）において同等の薬力学効果（例えば、循環ヘプシジン－２５レベルの減少、ＴＳＡＴ％の増加、および／または血清鉄レベルの増加）をもたらす。Ｃｍａｘは、薬剤／抗体が投与された後および第２の用量の投与の前の薬物（例えば、抗ＨＪＶ抗体）の最大（またはピーク）血清濃度である。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与後の短い時間的期間内（例えば、１２時間以内、２４時間以内など）の低いＣｍａｘの達成は、血清鉄応答における望ましくない増加を最小化し、および／または抗体のオフターゲット効果（例えば、ＲＧＭａへの結合）の可能性を最小化する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与による鈍化性Ｃｍａｘは、血清鉄応答における望ましくなく鋭い増加を回避する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与による鈍化性Ｃｍａｘは抗体のオフターゲット効果を減少させる。
本開示の態様はまた、骨髄線維症を有する対象を処置する方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、対象が単離抗体を皮下投与により投与され、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、使用のための抗体に関する。
本開示の態様はまた、骨髄線維症を有する対象においてＨＪＶ活性を阻害する方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、対象が単離抗体を皮下投与により投与され、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、使用のための抗体に関する。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与（例えば、静脈内注射または皮下注射）は、ヘプシジンの活性形態である循環ヘプシジン－２５（例えば、血清または血漿ヘプシジン－２５）を減少させる。
一部の態様では、本開示は、骨髄線維症を有する対象においてヘプシジン－２５を減少させる方法であって、対象に、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、方法を提供する。一部の態様では、本開示は、骨髄線維症を有する対象においてヘプシジン－２５を減少させる方法における使用のためのヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、対象は、皮下注射を介して投与される。一部の実施形態では、投与は、投与の４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、または２週間以内にヘプシジン－２５を減少させる。一部の実施形態では、投与は、投与前の対象におけるヘプシジンレベルと比較して少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のヘプシジンだけヘプシジン－２５を減少させる。
本開示のある特定の態様は、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）がヘプシジン合成の制御物質であり、ヘモジュベリン機能の欠如が鉄過剰症と関連し得るという観察に関する。例えば、一部の実施形態では、ホモ接合型ＨＪＶノックダウン動物は、ＩＬ－６に応答してヘプシジン合成を増幅できず、急性炎症への有効な低鉄血症応答を開始することができない。したがって、一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、高ヘプシジン障害を処置するのに有効な量のヘプシジンアンタゴニストを、それを必要とする対象に投与することを含み、それはヘモジュベリンアンタゴニストであってもよい。一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニストは抗ヘモジュベリン抗体である。一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、作用のその原発性様式としてＲＧＭｃに結合する（ＲＧＭａおよびＲＧＭｂと比較して）。したがって、一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに対してＲＧＭｃに優先的に結合する。一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、１００ナノモル（ｎＭ）より低い（ＫＤ＜１００ｎＭ）平衡解離定数（ＫＤ）でＲＧＭｃに結合する。しかしながら、一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂと類似の親和性でＲＧＭｃに結合する。
一部の態様では、本開示は、骨髄線維症を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、対象に、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、抗体は、Ｘ１ＹＧＭＮ（配列番号１０５）（ここで、Ｘ１はＮもしくはＹであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）；ＭＩＹＹＤＳＳＸ２ＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０６）（ここで、Ｘ２はＥもしくはＤであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）；ＧＸ３ＴＰＤＸ４（配列番号１０７）（ここで、Ｘ３はＴもしくはＳであり得、Ｘ４はＹ、Ｖ、もしくはＫであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；および／またはＲＳＳＱＳＬＸ５Ｘ６ＳＤＧＸ７ＴＦＬＸ８（配列番号１０８）（ここで、Ｘ５はＡもしくはＥであり得、Ｘ６はＴ、Ｓ、Ｅ、もしくはＤであり得、Ｘ７はＤ、Ｙ、もしくはＧであり得、Ｘ８はＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、Ｘ９ＶＳＸ１０ＲＦＳ（配列番号１０９）（ここで、Ｘ９はＥ、ＤもしくはＡであり得、Ｘ１０はＮ、Ｓ、Ｔ、ＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、Ｘ１１ＱＸ１２ＴＸ１３ＤＰＸ１４Ｘ１５（配列番号１１０）（ここで、Ｘ１１はＦもしくはＭであり得、Ｘ１２はＶもしくはＡであり得、Ｘ１３はＨもしくはＹであり得、Ｘ１４はＭ、ＬもしくはＶであり得、Ｘ１５はＴもしくはＳであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む。
一部の実施形態では、抗体は、配列番号３８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３９と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨおよび／またはヒト化ＶＬを含む。
一部の実施形態では、抗体は、全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される。
一部の実施形態では、抗体は、全長ＩｇＧである。一部の実施形態では、抗体は、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４６、４８、１１２または１１３に記載の重鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４７に記載の軽鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６１もしくは１１７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；または（ｉｉ）配列番号６３もしくは１１８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６１または１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６３または１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、対象は、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、ＡＳＸＬ１、ＴＥＴ２、ＮＦＥ２、ＳＨ２Ｂ３、ＳＦ３Ｂ１、またはＣＡＬＲにおいて骨髄線維症惹起突然変異を有する。一部の実施形態では、骨髄線維症は、対象における炎症促進性サイトカイン（例えばＩＬ－６、オンコスタチン－Ｍ）のレベルの増加と関連する。一部の実施形態では、対象は、１０ｇ／ｄＬよりも低い血清ヘモグロビンレベルを示す。一部の実施形態では、対象は、８ｇ／ｄＬよりも低い血清ヘモグロビンレベルを示す。一部の実施形態では、対象は、赤血球輸血依存性である。一部の実施形態では、対象は、貧血である。
一部の実施形態では、対象はエリスロポエチン刺激剤、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤、増殖因子リガンドトラップ、または抗線維化剤を以前に受けている。
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、対象にエリスロポエチン刺激剤、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤、増殖因子リガンドトラップ、および抗線維化剤のうちの１つまたはそれ以上を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、エリスロポエチン刺激剤は、ダナゾール、プレドニゾン、サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤は、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択される。一部の実施形態では、増殖因子リガンドトラップは、ソタテルセプトまたはラスパテルセプトである。一部の実施形態では、抗線維化剤は、ＰＲＭ－１５１である。
一部の態様では、本開示はまた、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体およびそれを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ１ＹＧＭＮ（配列番号１０５）（ここで、Ｘ１はＮもしくはＹであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）；および／またはＭＩＹＹＤＳＳＸ２ＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０６）（ここで、Ｘ２はＥもしくはＤであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）；および／またはＧＸ３ＴＰＤＸ４（配列番号１０７）（ここで、Ｘ３はＴもしくはＳであり得、Ｘ４はＹ、Ｖ、もしくはＫであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、ＲＳＳＱＳＬＸ５Ｘ６ＳＤＧＸ７ＴＦＬＸ８（配列番号１０８）（ここで、Ｘ５はＡもしくはＥであり得、Ｘ６はＴ、Ｓ、Ｅ、もしくはＤであり得、Ｘ７はＤ、Ｙ、もしくはＧであり得、Ｘ８はＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）；および／またはＸ９ＶＳＸ１０ＲＦＳ（配列番号１０９）（ここで、Ｘ９はＥ、ＤもしくはＡであり得、Ｘ１０はＮ、Ｓ、Ｔ、ＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）；および／またはＸ１１ＱＸ１２ＴＸ１３ＤＰＸ１４Ｘ１５（配列番号１１０）（ここで、Ｘ１１はＦもしくはＭであり得、Ｘ１２はＶもしくはＡであり得、Ｘ１３はＨもしくはＹであり得、Ｘ１４はＭ、ＬもしくはＶであり得、Ｘ１５はＴもしくはＳであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）。
一部の態様では、本開示はまた、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号４のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号６のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号４のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号４９のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２４のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３０と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；（ｉｉ）ならびに／または配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号４のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２５のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１４のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１９のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２５のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１５のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２０のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２６のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３３と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号９のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１６のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２７のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３４と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３５と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号１０のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号１１のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１７のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２８のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３６と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１７のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２７のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３９と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号５０のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２２のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２８のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号４１と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号１２のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１５のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２７のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号４３と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、（ｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；ならびに／または（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号１３のＨＣ ＣＤＲ３、および／または配列番号１６のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２９のＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４４と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号４５と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の態様では、本開示は、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、表１に列挙される抗体のいずれか１つのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３と比較して、合わせて１０個以下のアミノ酸バリエーション、好ましくは８個以下のアミノ酸バリエーション、より好ましくは５個以下のアミノ酸バリエーション、より好ましくは２個以下のアミノ酸バリエーションを含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含み；ならびに／または表１に列挙される抗体のいずれか１つのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３と比較して、合わせて１０個以下のアミノ酸バリエーション、好ましくは８個以下のアミノ酸バリエーションを含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む、抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される任意の抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨおよび／またはヒト化ＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗体は、全長ＩｇＧである。一部の実施形態では、抗体は、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４６、４８、１１２または１１３に記載の重鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４７に記載の軽鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号５１もしくは１１４と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号５２～５６と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｉｉ）配列番号５７もしくは１１５と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号５８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｉｉｉ）配列番号５９もしくは１１６と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６０と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｉｖ）配列番号６１もしくは１１７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｖ）配列番号６３もしくは１１８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｖｉ）配列番号６１もしくは１１７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６５と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；（ｖｉｉ）配列番号６６もしくは１１９と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；または（ｖｉｉｉ）配列番号６８もしくは１２０と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６９と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、１００ｎＭより低い平衡解離定数（ＫＤ）と共にＨＪＶに結合する。一部の実施形態では、抗体は、１ｎＭより低い平衡解離定数（ＫＤ）と共にＨＪＶに結合する。
一部の実施形態では、抗体は、分子ペイロードにコンジュゲートされている。一部の実施形態では、分子ペイロードは、検出可能な薬剤、診断剤、または治療剤である。
一部の態様では、本開示はまた、本明細書に記載される単離抗体をコードする核酸を提供する。
一部の態様では、本開示はまた、本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含むベクターを提供する。一部の実施形態では、ベクターは、表３に記載されている核酸配列のうちの核酸配列を含む。
一部の態様では、本開示はまた、本明細書に記載される単離抗体をコードする核酸および／またはそれを含むベクターを含む宿主細胞を提供する。
一部の態様では、本開示はまた、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
一部の態様では、本開示はまた、抗ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体を産生する方法であって、（ｉ）請求項４４に記載の宿主細胞を、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する抗体の発現を可能とする条件下で培養すること；および（ｉｉ）ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する抗体の収集のために、培養された宿主細胞または培養培地を採取することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する抗体を精製することを含む。
一部の態様では、本開示はまた、宿主細胞中で、（ｉ）配列番号９２と少なくとも９０％同一の、重鎖をコードする核酸配列；および／または（ｉｉ）配列番号９３と少なくとも９０％同一の、軽鎖をコードする核酸配列を発現させることにより産生された、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を提供する。一部の態様では、本開示はまた、宿主細胞中で、（ｉ）配列番号９４と少なくとも９０％同一の、重鎖をコードする核酸配列；および／または（ｉｉ）配列番号９３と少なくとも９０％同一の、軽鎖をコードする核酸配列を発現させることにより産生された、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を提供する。一部の実施形態では、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）－２９３細胞、ｖｅｒｄａ ｒｅｎｏ（ＶＥＲＯ）細胞、非分泌性ヌル（ＮＳ０）細胞、ヒト胚性網膜（ＰＥＲ．Ｃ６）細胞、Ｓｐ２／０細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞、またはＳＶ４０形質転換サル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ）細胞である。
一部の態様では、本開示は、骨髄線維症を有する対象を処置する方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、使用のための単離抗体を提供する。
一部の実施形態では、骨髄線維症を有する対象は、炎症促進性サイトカインにより誘導されるヘプシジン合成からもたらされる貧血を有し、抗体の投与は、貧血を減少させる。
一部の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、インターロイキン－６（ＩＬ－６）を含む。
前述のおよび他の態様、実施、作用、機能性、特徴、および本教示の実施形態は、添付の図面と併せて、以下の説明からより完全に理解され得る。
本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する添付の図面は、ある特定の実施形態を示し、記載した説明と共に、本明細書に開示される組成物および方法のある特定の態様の非限定的な例を提供する。
図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ａは、抗ヘモジュベリン抗体の生成、ヒト化、および親和性成熟の概略的なプロセスを示す。 図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ｂ～１Ｇは、抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを示す。 図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ｂ～１Ｇは、抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを示す。 図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ｂ～１Ｇは、抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを示す。 図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ｂ～１Ｇは、抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを示す。 図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ｂ～１Ｇは、抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを示す。 図１Ａ～１Ｇは、抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付けを示すグラフである。図１Ｂ～１Ｇは、抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを示す。 図２Ａ～２Ｃは、抗ＨＪＶ抗体のためのＢＭＰレポーター遺伝子アッセイを示すグラフである。図２Ａは、ＨＪＶ ＢＭＰレポーターアッセイの一般的原理を示す。 図２Ａ～２Ｃは、抗ＨＪＶ抗体のためのＢＭＰレポーター遺伝子アッセイを示すグラフである。図２Ｂは、ＲＧＭｃ ＢＭＰシグナル伝達の阻害における抗ＨＪＶ抗体の効果を示す。 図２Ａ～２Ｃは、抗ＨＪＶ抗体のためのＢＭＰレポーター遺伝子アッセイを示すグラフである。図２Ｃは、ＲＧＭａ ＢＭＰシグナル伝達の阻害における抗ＨＪＶ抗体の効果を示す。 図３は、抗ＨＪＶ抗体のＨＥＫ２９３細胞に対する非特異的結合を示すグラフである。バーは左から右に各群において１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌ。 図４Ａ～４Ｃは、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの構造および設計を示す概略図である。図４Ａは、ｈＨＡ－００８の構造を示す。 図４Ａ～４Ｃは、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの構造および設計を示す概略図である。図４Ｂは、ｈＨＡ－００８－ＱＬの構造を示す。 図４Ａ～４Ｃは、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの構造および設計を示す概略図である。図４Ｃは、ｈＨＡ－００８とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間の抗体構造における比較を示す。 図５は、ｈＨＡ－００８またはｈＨＡ－００８－ＱＬを負荷された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のＣＤ４＋ Ｔ細胞応答を示すグラフである。 図６Ａ～６Ｃは、ラットおよびカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ；ｃｙｎｏ）におけるｈＨＡ－００８のＰＫ／ＰＤ分析を示すグラフである。図６Ａは、処置後４～８日の間に起こったＴＳＡＴ％により測定されたｈＨＡ－００８の最大効果を示す。 図６Ａ～６Ｃは、ラットおよびカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ；ｃｙｎｏ）におけるｈＨＡ－００８のＰＫ／ＰＤ分析を示すグラフである。図６Ｂは、ｈＨＡ－００８は、雌カニクイザルにおける注射の約１～４日後にＴＳＡＴ％により測定された場合の最大効果に達したことを示す。 図６Ａ～６Ｃは、ラットおよびカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ；ｃｙｎｏ）におけるｈＨＡ－００８のＰＫ／ＰＤ分析を示すグラフである。図６Ｃは、ｈＨＡ－００８は、雄カニクイザルにおける注射の約１～４日後にＴＳＡＴ％により測定された場合の最大効果に達したが、雄のうちの１匹はｈＨＡ－００８処置に応答しなかったことを示す。 図７Ａ～７Ｆは、６ｍｐｋの単回ＩＶ用量を用いたカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ相関を示す。図７Ａは、最大ＴＳＡＴ％増加は注射の１～４日後に起こり（Ｔｍａｘ＝１～４日）、試験された動物のうちの１匹は３４日目の辺りでＴＳＡＴの劇的な低下を有したことを示す。 図７Ａ～７Ｆは、６ｍｐｋの単回ＩＶ用量を用いたカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ相関を示す。図７Ｂは、血漿ヘプシジン－２５濃度はｈＨＡ－００８注射後に経時的に変化することを示す。 図７Ａ～７Ｆは、６ｍｐｋの単回ＩＶ用量を用いたカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ相関を示す。図７Ｃは、血漿ｈＨＡ－００８濃度はｈＨＡ－００８注射後に経時的に変化することを示す。 図７Ａ～７Ｆは、６ｍｐｋの単回ＩＶ用量を用いたカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ相関を示す。図７Ｄ～７Ｆは、ｈＨＡ－００８は、ＴＳＡＴ％および血漿ヘプシジン－２５濃度に対するＰＫ（血漿抗体濃度）の堅牢なＰＫ／ＰＤ相関を有したことを示す。各試験されたカニクイザルの結果を図７Ｄ（カニクイザル１）、図７Ｅ（カニクイザル２）、および図７Ｆ（カニクイザル３）に示す。 図７Ａ～７Ｆは、６ｍｐｋの単回ＩＶ用量を用いたカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ相関を示す。図７Ｄ～７Ｆは、ｈＨＡ－００８は、ＴＳＡＴ％および血漿ヘプシジン－２５濃度に対するＰＫ（血漿抗体濃度）の堅牢なＰＫ／ＰＤ相関を有したことを示す。各試験されたカニクイザルの結果を図７Ｄ（カニクイザル１）、図７Ｅ（カニクイザル２）、および図７Ｆ（カニクイザル３）に示す。 図７Ａ～７Ｆは、６ｍｐｋの単回ＩＶ用量を用いたカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ相関を示す。図７Ｄ～７Ｆは、ｈＨＡ－００８は、ＴＳＡＴ％および血漿ヘプシジン－２５濃度に対するＰＫ（血漿抗体濃度）の堅牢なＰＫ／ＰＤ相関を有したことを示す。各試験されたカニクイザルの結果を図７Ｄ（カニクイザル１）、図７Ｅ（カニクイザル２）、および図７Ｆ（カニクイザル３）に示す。 図８Ａ～８Ｃは、ｈＨＡ－００８抗体は、用量依存的な方式でＴＳＡＴ％をモジュレートすることを示す。図８Ａは、動物が０（媒体対照）または０．６ｍｐｋのｈＨＡ－００８を用いて処置された後のＴＳＡＴ％およびｈＨＡ－００８濃度を示す。 図８Ａ～８Ｃは、ｈＨＡ－００８抗体は、用量依存的な方式でＴＳＡＴ％をモジュレートすることを示す。図８Ｂは、動物が０（媒体対照）または３ｍｐｋのｈＨＡ－００８を用いて処置された後のＴＳＡＴ％およびｈＨＡ－００８濃度を示す。 図８Ａ～８Ｃは、ｈＨＡ－００８抗体は、用量依存的な方式でＴＳＡＴ％をモジュレートすることを示す。図８Ｃは、動物が０（媒体対照）または６０ｍｐｋのｈＨＡ－００８を用いて処置された後のＴＳＡＴ％およびｈＨＡ－００８濃度を示す。 図９Ａ～９Ｃは、ｈＨＡ－００８とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間のＰＫ／ＰＤの比較を示すグラフである。図９Ａは、ｈＨＡ－００８またはｈＨＡ－００８－ＱＬの処置後のカニクイザルにおける経時的なＴＳＡＴ％変化を示す。図９Ａは、ｈＨＡ－００８またはｈＨＡ－００８－ＱＬの処置後のカニクイザルにおける経時的なＴＳＡＴ％変化を示す。 図９Ａ～９Ｃは、ｈＨＡ－００８とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間のＰＫ／ＰＤの比較を示すグラフである。図９Ｂは、ｈＨＡ－００８またはｈＨＡ－００８－ＱＬの処置後のカニクイザルにおける経時的な抗体の血漿濃度を示す。 図９Ａ～９Ｃは、ｈＨＡ－００８とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間のＰＫ／ＰＤの比較を示すグラフである。図９Ｃは、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの血漿濃度の低下の時間経過を示す。 図１０Ａ～１０Ｂは、ｐＨ ６．０または７．４におけるｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬのＦｃＲｎの結合を示すグラフである。図１０Ａは、ｐＨ ６．０におけるｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬのＦｃＲｎの結合を示す。Ｘ軸：時間。Ｙ軸：応答。 図１０Ａ～１０Ｂは、ｐＨ ６．０または７．４におけるｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬのＦｃＲｎの結合を示すグラフである。図１０Ｂは、ｐＨ ７．４におけるｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬのＦｃＲｎの結合を示す。Ｘ軸：時間。Ｙ軸：応答。 図１は、ある特定の高ヘプシジン障害特有の骨髄増殖サイクルを示す。 図２は、ヘプシジン刺激経路およびヘプシジンによる鉄ホメオスタシスの生理学的制御を示す。 図１３は、ＩＬ－６は、カニクイザルにおいてヘプシジン発現を誘導し、ｈＨＡ－００８処置は、カニクイザルにおいて用量依存的な方式で炎症誘導（ＩＬ ６）ヘプシジン－２５増加を予防することを示すグラフである。 図１４は、ｈＨＡ－００８は、３７２０－ＲＧ－０５０上のアミノ酸１７０～１８３［ＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）］と相互作用することを示す。相互作用は、３７２０－ＲＧ－０５０上のアミノ酸１７０、１７１、１８０、１８２、１８３において起こる。 図１５は、３７２０－ＲＧ－０５０およびｈＨＡ－００８の相互作用を示す。３７２０－ＲＧ－０５０ ＰＤＢ構造は、Ｓｗｉｓｓ Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して相同性により生成された。３７２０－ＲＧ－０５０アミノ酸１７０～１８３［ＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）］をＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅに示す：前面図（Ａ）；背面図（Ｂ）、側面図１（Ｃ）、側面図２（Ｄ）および上面図（Ｅ）のリボン／表面表現。Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ：前面図（Ｆ）；背面図（Ｇ）、側面図１（Ｈ）、側面図２（Ｉ）および上面図（Ｊ）のリボン表現。 図１６は、ｈＨＡ－００８－ＱＬは３７２０－ＲＧ－０５０のアミノ酸１６９～１８２［ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）］および２８９～３００［ＳＱＲＬＳＲＳＥＲＮＲＲ（配列番号１２７）］と相互作用することを示す。相互作用は、３７２０－ＲＧ－０５０上のアミノ酸１６９、１７１、１８０、１８２；２８９、２９３、２９４、２９５、２９７、３００において起こる。 図１７は、相互作用３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８－ＱＬを示す。３７２０－ＲＧ－０５０ ＰＤＢ構造は、Ｓｗｉｓｓ Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して相同性により生成された。３７２０－ＲＧ－０５０アミノ酸１６９～１８２［ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）］および２８９～２９１（ＳＱＲ）をＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅに示す：前面図（Ａ）；背面図（Ｂ）、側面図１（Ｃ）、側面図２（Ｄ）および上面図（Ｅ）のリボン／表面表現。Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ：前面図（Ｆ）；背面図（Ｇ）、側面図１（Ｈ）、側面図２（Ｉ）および上面図（Ｊ）のリボン表現。 図１８は、ｈＨＡ－００８は、カニクイザルにおいて用量依存的な方式でのＩＬ－６誘導血清鉄抑制の予防において有効であったことを示す。 図１９は、ＰＤ応答（例えば、ヘプシジン－２５濃度およびＴＳＡＴ％）における低下は、スプラーグドーリーラットへのｈＨＡ－００８の皮下投与後のｈＨＡ－００８血清濃度の減少と合致したことを示す（図１９）。 図２０Ａ～２０Ｄは、ｈＨＡ－００８の皮下投与後のカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ分析を示す。図２０Ａは、血清濃度－時間プロファイルは投与の４日後にＳＣ注射とＩＶ注射との間で区別不可能となったことを示す。 図２０Ａ～２０Ｄは、ｈＨＡ－００８の皮下投与後のカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ分析を示す。図２０Ｂ～２０Ｄは、ベースラインレベルへの血清鉄の復帰は、皮下注射または静脈内注射のいずれかによるｈＨＡ－００８の０．３ｍｐｋ、０．６ｍｐｋおよび１ｍｐｋの注射後のｈＨＡ－００８血清濃度における低下と合致したことを示す。 図２０Ａ～２０Ｄは、ｈＨＡ－００８の皮下投与後のカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ分析を示す。図２０Ｂ～２０Ｄは、ベースラインレベルへの血清鉄の復帰は、皮下注射または静脈内注射のいずれかによるｈＨＡ－００８の０．３ｍｐｋ、０．６ｍｐｋおよび１ｍｐｋの注射後のｈＨＡ－００８血清濃度における低下と合致したことを示す。 図２０Ａ～２０Ｄは、ｈＨＡ－００８の皮下投与後のカニクイザルにおけるＰＫ／ＰＤ分析を示す。図２０Ｂ～２０Ｄは、ベースラインレベルへの血清鉄の復帰は、皮下注射または静脈内注射のいずれかによるｈＨＡ－００８の０．３ｍｐｋ、０．６ｍｐｋおよび１ｍｐｋの注射後のｈＨＡ－００８血清濃度における低下と合致したことを示す。
本開示は、少なくとも部分的には、ヒトヘモジュベリンに対する高い結合親和性および特異性を示す、抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体、例えば、表１に列挙される抗体およびそれらの変異体の開発に基づく。研究、診断／検出、および治療応用における抗ＨＪＶ抗体およびそれらの変異体の使用もまた提供される。一部の実施形態では、本開示は、特には骨髄線維症および／またはその１つもしくはそれ以上の症状もしくは合併症の処置のために鉄ホメオスタシスをモジュレートするために、ヘプシジン機能を阻害しおよび／または細胞中のヘプシジン発現を減少させるために有効であるヘプシジン経路を標的化するための抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体を提供する。したがって、関連する態様では、本開示は、原発性骨髄線維症、骨髄増殖性腫瘍から生じる骨髄線維症および／または骨髄線維症関連貧血、炎症、骨髄不全、脾腫、異化亢進症、および／または疲労などの１つもしくはそれ以上の症状またはそれらの合併症を含む、骨髄線維症を処置するための組成物および方法を提供する。
一部の実施形態では、（ＲＧＭａおよびＲＧＭｂと比較して）主要な作用モードとしてＲＧＭｃに結合する抗ヘモジュベリン抗体が提供される。よって、一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂと比べてＲＧＭｃに優先的に結合する。一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、１００ナノモル濃度（ｎＭ）より低い平衡解離定数（ＫＤ）（ＫＤ＜１００ｎＭ）と共にＲＧＭｃに結合する。しかしながら、一部の実施形態では、抗ヘモジュベリン抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂと類似した親和性と共にＲＧＭｃに結合する。
本教示の以上のおよび他の態様、実施態様、行為、機能性、特色および実施形態は、添付の図面と組み合わせて以下の記載からより完全に理解され得る。
Ｉ．定義
投与：本明細書で使用される場合、用語「投与すること」または「投与」は、生理学的および／または薬理学的に有用である方法で対象に複合体を提供することを意味する（例えば対象において状態を処置する）。
親和性成熟抗体：「親和性成熟抗体」は、本明細書で使用され、１つまたはそれ以上のＣＤＲに１つまたはそれ以上の変更を有する抗体を指し、それは変更（複数可）を持たない親抗体と比較して、標的抗原への抗体の親和性（すなわち、ＫＤ、ｋｄまたはｋａ）の改善をもたらす。例示的な親和性成熟抗体は、標的抗原へのナノモルまたはピコモルさえもの親和性を有するであろう。バイオディスプレイを使用して調製されたコンビナトリー抗体ライブラリーのスクリーニングを含む、親和性成熟抗体を産生するための様々な手順が当技術分野で公知である。例えば、Marks et al., BioTechnology, 10: 779-783 (1992)は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載する。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異生成は、Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91: 3809-3813 (1994)；Schier et al., Gene, 169: 147-155 (1995)；Yelton et al., J. Immunol., 155: 1994-2004 (1995)；Jackson et al., J. Immunol., 154(7)；3310-3319 (1995)；およびHawkins et al, J. Mol. Biol., 226: 889-896 (1992)によって記載される。活性増強アミノ酸残基による、選択的突然変異生成位置および定常または超突然変異位置での選択的突然変異は、米国特許第６９１４１２８Ｂ１号に記載される。
抗体：本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメインまたは少なくとも１つの抗原決定基、例えば抗原に特異的に結合するパラトープを含むポリペプチドを指す。一部の実施形態では、抗体は全長抗体である。一部の実施形態では、抗体はキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体はヒト化抗体である。しかしながら、一部の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片またはｓｃＦｖ断片である。一部の実施形態では、抗体はラクダ抗体由来のナノボディまたはサメ抗体由来のナノボディである。一部の実施形態では、抗体は二重特異性抗体である。一部の実施形態では、抗体はヒト生殖系列配列を有するフレームワークを含む。別の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ２Ｃ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ定常ドメインからなる群から選択される重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）、および／または軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）を含む。一部の実施形態では、抗体は、定常ドメイン、例えばＦｃ領域を含む。免疫グロブリン定常ドメインは、重または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列およびそれらの機能的バリエーションが公知である。重鎖に関して、一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（Δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（Δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖を含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトガンマ１ ＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列、例えば当技術分野で公知のいずれかを含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野で記載されており、例えば、米国特許第５６９３７８０号および上記のKabat E A et al., (1991)を参照されたい。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、本明細書に提供される可変鎖定常領域のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は修飾され、例えばグリコシル化、リン酸化、ＳＵＭＯ化、および／またはメチル化により修飾される。一部の実施形態では、抗体は、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子にコンジュゲートされるグリコシル化抗体である。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、Ｎ－グリコシル化、Ｏ－グリコシル化、Ｃ－グリコシル化、グリピエーション（ＧＰＩアンカー結合）、および／またはホスホグリコシル化により抗体にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、単糖、二糖、オリゴ糖、またはグリカンである。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、分岐オリゴ糖または分岐グリカンである。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、マンノース単位、グルコース単位、Ｎ－アセチルグルコサミン単位、またはリン脂質単位を含む。一部の実施形態では、抗体は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結した本開示の１つまたはそれ以上の抗原結合断片を含むポリペプチドを含むコンストラクトである。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって接合された２つまたはそれ以上のアミノ酸残基を含み、１つまたはそれ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。リンカーポリペプチドの例が報告されている［例えば、Holliger, P., et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R. J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123参照］。さらに、抗体は、１つまたはそれ以上の他のタンパク質もしくはペプチドとの抗体もしくは抗体部分の共有または非共有結合によって形成された大きな免疫接着分子の一部であってもよい。そのような免疫接着分子の例としては、四量体ｓｃＦｖ分子を作成するストレプトアビジンコア領域の使用［Kipriyanov, S. M., et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101］および二価およびビオチン化ｓｃＦｖ分子を作成するシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用［Kipriyanov, S. M., et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058］が挙げられる。
およそ：本明細書で使用される場合、用語「およそ」または「約」は、目的の１つまたはそれ以上の値に適用される場合、記載した参照値と類似している値を指す。ある特定の実施形態では、用語「およそ」または「約」は、他に記載されない限り、または他に文脈から明らかでない限り、記載した参照値のいずれの方向でも（より高いかまたは低い）１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下内にある値の範囲を指す（そのような数が可能値の１００％を超えるであろう場合を除く）。
ＣＤＲ：本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。典型的な抗体分子は、通常抗原結合に関与する重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）として公知のより保存されている領域が散在している、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）としても公知の超可変領域へとさらに細分類され得る。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には３個のＣＤＲおよび４個のＦＲから構成され、以下の順でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、当技術分野で公知の方法を使用して、例えば、その全てが当技術分野で周知であるＫａｂａｔ定義、ＩＭＧＴ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、および／または接触定義により、正確に同定され得る。例えば、Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242；IMGT（登録商標）, the international ImMunoGeneTics information system（登録商標） http://www.imgt.org, Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 27:209-212 (1999)；Ruiz, M. et al., Nucleic Acids Res., 28:219-221 (2000)；Lefranc, M.-P., Nucleic Acids Res., 29:207-209 (2001)；Lefranc, M.-P., Nucleic Acids Res., 31:307-310 (2003)；Lefranc, M.-P. et al., In Silico Biol., 5, 0006 (2004) [Epub], 5:45-60 (2005)；Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 33:D593-597 (2005)；Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 37:D1006-1012 (2009)；Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 43:D413-422 (2015)；Chothia et al., (1989) Nature 342:877; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917, Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948；およびAlmagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004)参照。また、hgmp.mrc.ac.uk andおよびbioinf.org.uk/absも参照。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは当技術分野で公知の任意の方法によって定義されたＣＤＲを指し得る。同じＣＤＲを有する２つの抗体は、２つの抗体が、同じ方法、例えばＩＭＧＴ定義によって決定される場合、ＣＤＲの同じアミノ酸配列を有することを意味する。
通常、重鎖および軽鎖のそれぞれの可変領域に３個のＣＤＲがあり、それぞれの可変領域についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と示される。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲセット」は、抗原に結合することができる単一の可変領域に生じる３個のＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムによって異なって定義されている。Ｋａｂａｔ［Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991)］によって記載されたシステムは、抗体の任意の可変領域に適用可能である明確な残基の番号付システムを提供するだけでなく、３個のＣＤＲを定義する正確な残基の境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれてもよい。ＣＤＲの下位部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と示されてもよく、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれてもよく、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ［FASEB J. 9:133-139 (1995)］およびＭａｃＣａｌｌｕｍ［J Mol Biol 262(5):732-45 (1996)］によって記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記のシステムの１つに厳密に従わなくてもよいが、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するにもかかわらず、それらは特定の残基もしくは残基の群もしくはＣＤＲ全体でさえも、抗原結合に著しく影響しない予測または実験的発見を考慮して短縮または延長されてもよい。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用し得るが、好ましい実施形態はＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義されたＣＤＲを使用する。
ＣＤＲ移植抗体：用語「ＣＤＲ移植抗体」は、１つの種から重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬの１つまたはそれ以上のＣＤＲ領域の配列が別の種のＣＤＲ配列と置き換えられている抗体、例えば１つまたはそれ以上のマウスＣＤＲ（例えばＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列と置き換えられたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
キメラ抗体：用語「キメラ抗体」は、１つの種からの重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種からの定常領域配列を含む抗体、例えばヒト定常領域に連結したマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
相補性：本明細書で使用される場合、用語「相補性」は、２つのヌクレオチドまたはヌクレオチドの２つのセット間で正確に対合する能力を指す。特に、相補性は、２つのヌクレオチドまたはヌクレオチドの２つのセット間の結合をもたらす水素結合対の程度を特徴付ける用語である。例えば、オリゴヌクレオチドの１つの位置の塩基が、標的核酸（例えばｍＲＮＡ）の相当する位置の塩基と水素結合することができる場合、塩基は、その位置で互いに相補性であると考えられる。塩基対は、古典的なワトソン－クリック塩基対と非ワトソン－クリック塩基対（例えば、ゆらぎ塩基対およびフーグスティーン塩基対）の両方を含み得る。例えば、一部の実施形態では、相補性塩基対のため、アデノシン型塩基（Ａ）はチミジン型塩基（Ｔ）またはウラシル型塩基（Ｕ）と相補性であり、シトシン型塩基（Ｃ）はグアノシン型塩基（Ｇ）と相補性であり、ユニバーサル塩基、例えば３－ニトロピロールまたは５－ニトロインドールは、Ａ、Ｃ、Ｕ、またはＴのいずれかとハイブリダイズし、相補性であると考えられる。イノシン（Ｉ）もまた、当技術分野でユニバーサル塩基であると考えられており、Ａ、Ｃ、ＵまたはＴのいずれかと相補性であると考えられる。
保存的アミノ酸置換：本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換が行われたタンパク質の相対的電荷またはサイズ特徴を変えないアミノ酸置換を指す。変異体は、当業者に公知のポリペプチド配列を変更する方法に従って調製することができ、例えばそのような方法を集める参照、例えばMolecular Cloning: A Laboratory Manual, J. Sambrook, et al., eds., Fourth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2012、またはCurrent Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel, et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., New Yorkに見出される。アミノ酸の保存的置換は、以下の群：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ，Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；および（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸中で行われる置換を含む。
公差反応性：本明細書で使用される場合、および標的化剤（例えば抗体）の文脈で、用語「公差反応性」は、類似の親和性または結合活性により類似の型またはクラスの１つ以上の抗原（例えば、多様なホモログ、パラログ、またはオルソログの抗原）に特異的に結合することができる薬剤の特性を指す。例えば、一部の実施形態では、類似の型またはクラスのヒトおよび非ヒト霊長類抗原（例えばヒトヘモジュベリンおよび非ヒト霊長類ヘモジュベリン）に対して公差反応性である抗体は、類似の親和性または結合活性でヒト抗原および非ヒト霊長類抗原に結合することができる。一部の実施形態では、抗体は、類似の型またはクラスのヒト抗原および齧歯類抗原に対して交差反応性である。一部の実施形態では、抗体は、類似の型またはクラスの齧歯類抗原および非ヒト霊長類抗原に対して交差反応性である。一部の実施形態では、抗体は、類似の型またはクラスのヒト抗原、非ヒト霊長類抗原、および齧歯類抗原に対して交差反応性である。
有効量：本明細書で使用される場合、「有効量」は、単独かまたは１つもしくはそれ以上の他の活性剤と組み合わせてのいずれかで、対象に治療効果を与えるのに必要な各活性剤（例えば抗ＨＪＶ抗体）の量を指す。一部の実施形態では、治療効果は、ヘプシジンレベルもしくは活性の減少、トランスフェリン飽和のレベル（ＴＳＡＴ％）の増加、循環トランスフェリンレベルの減少したレベル、および／または疾患状態の軽減（例えば、貧血の減少もしくは骨髄線維症の進行の減少）である。
フレームワーク：本明細書で使用される場合、用語「フレームワーク」または「フレームワーク配列」は、ＣＤＲを除いた可変領域の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステムによって決定され得るため、フレームワーク配列の意味は対応して異なる解釈を仮定される。６個のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３ならびに重鎖のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）はまた、軽鎖および重鎖のフレームワーク領域を、各鎖の４個の下位領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）へと分け、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間、およびＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定の下位領域を特定することなく、他に言及されるように、フレームワーク領域は、単一の、自然発生の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わせたＦＲｓを表す。本明細書で使用される場合、ＦＲは、４個の下位領域の１個を表し、ＦＲｓはフレームワーク領域を構成する４個の下位領域の２個またはそれ以上を表す。ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列が当技術分野で公知である。一実施形態では、当技術分野で公知のアクセプター配列は、本明細書に開示される抗体で使用され得る。
ヘモジュベリン（ＨＪＶ）：本明細書で使用される場合、用語「ヘモジュベリン（ＨＪＶ）」（反発性ガイダンス分子Ｃ（ＲＧＭｃ）または２型ヘモクロマトーシスタンパク質（ＨＦＥ２）としても公知）は、ＢＭＰ／ＳＭＡＤシグナル伝達経路によりヘプシジン産生を制御する膜結合可溶性形態タンパク質を指す。ＨＦＥ２遺伝子は、ＧＰＩアンカーおよびグリコシル化ＨＪＶ分子の２つの公知のクラスをコードし、それは膜へと標的化され、異なる運命を受ける。ＨＪＶは、２つの可溶性アイソフォームおよび２つの膜結合性アイソフォームを含む、多様なアイソフォームで存在する。一部の実施形態では、優勢な膜結合性アイソフォームは、Ｎ末端断片およびＣ末端断片から構成されるジスルフィド結合した２つの鎖形態である。一部の実施形態では、全長の一本鎖アイソフォームは膜と結合するが、細胞表面から放出され、細胞外液中に蓄積する。一部の実施形態では、ＨＪＶはヒト（ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ１４８７３８）、非ヒト霊長類（例えばＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ ６９８８０５）、または齧歯類（例えばＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ６９５８５またはＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ３１０６８１）起源であり得る。ＨＪＶ（ＲＧＭｃ）に加えて、反発性ガイダンス分子ファミリーは、反発性ガイダンス分子Ａ（ＲＧＭａ）および反発性ガイダンス分子Ｂ（ＲＧＭｂ）を含む。ＲＧＭａおよびＲＧＭｂは、発生の間、中枢神経系で発現され、軸索パターン形成および神経生存の調節に関与すると考えられるが、ＨＪＶは肝臓ならびに心筋および骨格筋で産生される。
ヘプシジン：本明細書で使用される場合、「ヘプシジン」は、ＨＡＭＰ遺伝子によりコードされる主に肝臓において産生される鉄調節性ペプチドホルモンを指す。一部の実施形態では、ヘプシジンは、鉄を吸収する腸細胞から、赤血球を再利用するマクロファージから、および鉄を貯蔵する肝細胞から血漿への鉄のデリバリーを制御する。一部の実施形態では、ヘプシジンは、腸細胞の基底外側表面上および網内皮系細胞（マクロファージ）の形質膜上に位置する鉄エクスポートチャネルフェロポーチンに結合することにより鉄輸送を阻害する。一部の実施形態では、フェロポーチンの阻害は、鉄がエクスポートされることを予防し、鉄は細胞中に隔離される。一部の実施形態では、フェロポーチンを阻害することにより、ヘプシジンは、腸細胞が鉄を肝門脈系中に入れることを予防し、それにより食物性鉄吸収を減少させる。ヘプシジン発現は、例えば、ＨＡＭＰ遺伝子の転写、転写されたｍＲＮＡの翻訳、および生物活性ヘプシジン－２５ペプチド［ＤＴＨＦＰＩＣＩＦＣＣＧＣＣＨＲＳＫＣＧＭＣＣＫＴ（配列番号１２９）］へのヘプシジン前駆体の翻訳後プロセシングを含む、複数の態様を伴う。一部の実施形態では、ヘプシジン発現は、ヘモジュベリン誘導ＢＭＰシグナル伝達経路を介してモジュレートされる。一部の実施形態では、ヘプシジン発現は、ＩＬ－６－ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介してモジュレートされる。
ＨＪＶ誘導ＢＭＰシグナル伝達：本明細書で使用される場合、用語「ＨＪＶ誘導ＢＭＰシグナル伝達」は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達の膜結合共受容体である、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）によって誘導されるＢＭＰ受容体を介するシグナル伝達を指す。Xia Y, et al., Hemojuvelin regulates hepcidin expression via a selective subset of BMP ligands and receptors independently of neogenin, Blood. 2008 May 15; 111(10): 5195-5204に記載されるように、肝細胞において、ＨＪＶ誘導ＢＭＰシグナル伝達はヘプシジンｍＲＮＡ発現を正に制御する。一部の実施形態では、ＨＪＶはＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、またはＢＭＰ６に結合し、ＢＭＰシグナル伝達を誘導する、例えば肝細胞におけるヘプシジンレベルを正に制御する。一部の実施形態では、マトリプターゼ－２によるＨＪＶの切断は、ＢＭＰシグナル伝達に参加するために利用できる細胞表面ＨＪＶの量を減らす。一部の実施形態では、ＨＪＶによるＢＭＰシグナル伝達の誘導は、ネオゲニンに依存しない。しかしながら、一部の実施形態では、Zhao et al, Neogenin Facilitates the Induction of Hepcidin Expression by Hemojuvelin in the Liver, J Biol Chem. 2016 Jun 3; 291(23): 12322-12335に記載されるように、ネオゲニンはＨＪＶによるＢＭＰシグナル伝達の誘導を促進する。一部の実施形態では、ＢＭＰ６は、Ｓｍａｄシグナル伝達の鉄依存的活性化を担う。一部の実施形態では、ＢＭＰ６は肝臓の類洞内皮細胞から分泌され、肝細胞のＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）に結合し、それによりＳＭＡＤシグナル伝達カスケードを活性化する。そのような実施形態では、ＨＪＶはそのようなＢＭＰ６の共受容体として寄与し、例えば肝細胞のヘプシジンレベルを正に制御する。一部の実施形態では、ＢＭＰは、Ｉ型およびＩＩ型セリン／スレオニンキナーゼ受容体の１つまたは組合せに結合することによりシグナルを伝達する。ＢＭＰ ＩＩ型受容体は、ＢＭＰＲＩＩ、ＡｃｔＲＩＩＡ、およびＡｃｔＲＩＩＢを含む。ＢＭＰ Ｉ型受容体は、ＡＬＫ３、ＡＬＫ６、およびＡＬＫ２を含む。一部の実施形態では、リガンドが結合すると、構成的に活性なＩＩ型受容体はＩ型受容体をリン酸化し、次いでＩ型受容体は細胞内受容体活性化Ｓｍａｄ（Ｒ－Ｓｍａｄ）、主にＳｍａｄ１、Ｓｍａｄ５および／またはＳｍａｄ８をリン酸化する。そのような実施形態では、活性化されたＲ－Ｓｍａｄは共通のパートナーＳｍａｄ４と複合体を形成し、遺伝子の転写、例えば、ヘプシジン発現の誘導を制御するために核に移行する。
ヘプシジンアンタゴニスト：本明細書で使用される場合、「ヘプシジンアンタゴニスト」は、ヘプシジン発現および／またはヘプシジン活性を（直接的または間接的に）減少させる薬剤を指す。一部の実施形態では、ヘプシジンアンタゴニストは、ヘプシジン－２５レベルおよび／または活性を（直接的または間接的に）減少させる。一部の実施形態では、ヘプシジンアンタゴニストは、ヘプシジン誘導フェロポ－チン分解を阻害する。したがって、一部の実施形態では、ヘプシジンアンタゴニストは、ヘプシジン刺激経路を通して間接的にヘプシジン機能を標的化し、ヘプシジン発現を減少させる。一部の実施形態では、ヘプシジンアンタゴニストは、例えばヘプシジンペプチドに結合してフリーのヘプシジンを捕捉することにより、またはフェロポーチンに結合してヘプシジン－フェロポーチン結合相互作用を阻害することにより、直接ヘプシジン機能を標的化し、それによりヘプシジン誘導フェロポーチン分解を減少させる。一部の実施形態では、ヘプシジンアンタゴニストは、例えば、そのそれぞれの関連する内容が参照によって本明細書に組み込まれる、Ross SL, et al., Identification of Antibody and Small Molecule Antagonists of Ferroportin-Hepcidin Interaction. Front Pharmacol. 2017 Nov 21;8:838；Fung E., et al., High-Throughput Screening of Small Molecules Identifies Hepcidin Antagonists. Molecular Pharmacology March 2013, 83 (3) 681-690；およびAngeliki Katsarou and Kostas Pantopoulos, Hepcidin Therapeutics. Pharmaceuticals (Basel). 2018 Dec; 11(4): 127に開示されるように、フェロポーチン－ヘプシジン相互作用を破壊する、フェロポーチン阻害剤である。
ヒト抗体：本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えばインビトロで無作為もしくは部位特異的突然変異導入によるかまたはインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図しない。
ヒト化抗体：用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えばマウス）からの重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部がより「ヒト様」に、すなわちヒト生殖系列可変配列により類似するように変更された抗体を指す。ヒト化抗体の１つの型は、ＣＤＲ移植抗体であり、ヒトＣＤＲ配列が非ヒトＶＨおよびＶＬ配列に導入され、相当する非ヒトＣＤＲ配列を置き換える。一実施形態では、ヒト化抗ヘモジュベリン抗体および抗原結合部分が提供される。そのような抗体は、古典的なハイブリドーマ技術の後、例えばKasaian et alの国際出願ＰＣＴ２００５／１２３１２６Ａ２に開示されるものなどインビトロでの遺伝子工学を使用するヒト化を使用してマウス抗ヘモジュベリンモノクローナル抗体を得ることによって生成され得る。
単離抗体：本明細書で使用される場合、「単離抗体」は、異なる抗原特性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図する（例えば、ヘモジュベリンに特異的に結合する単離抗体は、ヘモジュベリン以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。ヘモジュベリンに特異的に結合する単離抗体は、しかしながら、他の反発性ガイダンス分子（ＲＧＭ）タンパク質（例えばＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂ）などの他の抗原に交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。
ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達：本明細書で使用される場合、用語「ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達」は、例えばＪａｎｕｓキナーゼ１（ＪＡＫ１）またはＪａｎｕｓキナーゼ２（ＪＡＫ２）などのＪａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）を動員し、例えばＳＴＡＴ３などのシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）を活性化する、細胞受容体を介するシグナル伝達を指す。一部の実施形態では、Maliken, BD, et al., The Hepcidin Circuits Act: Balancing Iron and Inflammation, Hepatology. 2011 May; 53(5): 1764-1766に記載されるように、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達は、サイトカインインターロイキン－６（ＩＬ－６）のその同種の細胞受容体への結合を含み、次いでＪａｎｕｓキナーゼ２（ＪＡＫ２）を動員してＳＴＡＴ３をリン酸化する。一部の実施形態では、次いで（ＪＡＫ２活性化／リン酸化後）、ＳＴＡＴ３は核へと移行する。一部の実施形態では、次いで、活性化されたＳＴＡＴ３は、例えばヘプシジンプロモーター領域のＳＴＡＴ３結合モチーフへの結合により、ヘプシジン転写を誘導する。したがって、一部の実施形態では、ヘプシジン発現は、ＩＬ－６によるＳＴＡＴ３活性化による炎症中にＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達を介して誘導される。
Ｋａｂａｔ番号付け：用語「Ｋａｂａｔ番号付け」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」は、本明細書において交換可能に使用される。当技術分野で認識されるこれらの用語は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域、またはその抗原結合部分の他のアミノ酸残基よりも可変（すなわち超可変）であるアミノ酸残基を番号付けるシステムを指す［Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad, Sci. 190:382-391 and, Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242］。重鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸３１位から３５位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０位から６５位、およびＣＤＲ３のアミノ酸９５位から１０２位の範囲である。軽鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸２４位から３４位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０位から５６位、およびＣＤＲ３のアミノ酸８９位から９７位の範囲である。
骨髄線維症：本明細書で使用される場合、用語「骨髄線維症」は、進行性線維症、対象の骨髄ニッチの炎症および／または機能障害をもたらす、病理学的骨髄増殖および異常なサイトカイン産生により特徴付けられる障害を指す。骨髄線維症と関連する線維症は、巨核球などの異常なクローン骨髄細胞によって産生された炎症および線維形成サイトカインへの非クローン線維芽細胞性応答から生じることが多い。骨髄線維症は、典型的には、骨髄不全、脾腫、異化亢進症、および貧血を生じる。一部の実施形態では、骨髄線維症は、対象においてデノボで生じる。そのような実施形態では、骨髄線維症は、「原発性」骨髄線維症と考えられる。しかしながら、一部の実施形態では、骨髄線維症は、既存の骨髄増殖性腫瘍から生じる。一部の実施形態では、既存の骨髄増殖性腫瘍は赤血球増加症である。一部の実施形態では、既存の骨髄増殖性腫瘍は本態性血小板減少症である。
骨髄線維症関連貧血：本明細書で使用される場合、用語「骨髄線維症関連貧血」は、骨髄性線維症の文脈で、または骨髄性線維症の合併症で生じ、酸素を輸送する血液の能力の欠乏によって特徴付けられる状態を指す。一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、赤血球の欠乏、ヘモグロビンの欠乏、および／または全血液量の欠乏の結果である。一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、鉄欠乏貧血または骨髄癆性貧血である。一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、慢性炎症性疾患とさらに関連する。一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、対象における高い循環ヘプシジンレベルと関連する。一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、対象における炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６）誘導の高い循環ヘプシジンレベルと関連する。骨髄線維症関連貧血以外の貧血の例としては、リュウマチ性関節炎と関連する貧血、感染症の貧血、自己免疫性溶血性貧血、再生不良性貧血、低形成性貧血、腎不全または内分泌障害から生じる赤芽球癆および貧血、巨赤芽球性貧血、ヘムまたはグロビン合成の欠損から生じる貧血、赤血球の構造欠陥によって引き起こされる貧血、例えば、鎌状赤血球貧血、鉄芽球性貧血、慢性感染症、例えばマラリア、トリパノソーマ感染症、ＨＩＶ、肝炎ウイルスまたは他のウイルスと関連する貧血、骨髄線維症の不在下での骨髄欠乏によって引き起こされる貧血、および化学療法誘導性貧血が挙げられる。
オリゴヌクレオチド：本明細書で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、２００ヌクレオチド長までのオリゴマー核酸化合物を指す。オリゴヌクレオチドの例としては、限定はされないが、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、ギャップマー、ミックスマー、ホスホロジアミデートモルホリノ、ペプチド核酸、アプタマー、ガイド核酸（例えばＣａｓ９ガイドＲＮＡ）等が挙げられる。オリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは１つまたはそれ以上の修飾ヌクレオチド（例えば２’－Ｏ－メチル糖修飾、プリンまたはピリミジン修飾）を含み得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の修飾されたヌクレオチド間結合を含み得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲｐまたはＳｐ立体化学構造であり得る、１つまたはそれ以上のホスホロチオエート結合を含み得る。
組換え抗体：本明細書で使用される場合、用語「組換えヒト抗体」は、宿主細胞へとトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体などの組換え手段によって調製、発現、作成もしくは単離される全てのヒト抗体（本開示により詳細に記載される）、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体［Hoogenboom H. R., (1997) TIB Tech. 15:62-70；Azzazy H., and Highsmith W. E., (2002) Clin. Biochem. 35:425-445；Gavilondo J. V., and Larrick J. W. (2002) BioTechniques 29:128-145；Hoogenboom H., and Chames P. (2000) Immunology Today 21:371-378］、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックである動物（例えばマウス）から単離された抗体［例えばTaylor, L. D., et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295；Kellermann S-A., and Green L. L. (2002) Current Opinion in Biotechnology 13:593-597；Little M. et al (2000) Immunology Today 21:364-370参照］、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作成もしくは単離された抗体を含むことを意図する。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体はインビトロ突然変異導入にかけられ（またはヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異導入）、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列由来であるかまたは関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しなくてもよい配列である。本開示の一実施形態は、限定はされないが、例えばJermutus et al.の国際出願ＰＣＴ２００５／００７６９９Ａ２に開示されるものなどのヒトＩｇファージライブラリーを使用する、当技術分野で周知の技術を使用して生成され得る、ヒトヘモジュベリンに結合することができる完全なヒト抗体を提供する。
選択的：本明細書で使用される場合、用語「選択的（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ）」または「選択的に（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ）」は、参照分子と比較してその標的分子と関連する効果を産生する分子の能力を指す。例えば、その標的分子を選択的に阻害する分子は、この分子が、阻害アッセイまたは他の阻害環境において参照分子から区別できる程度でその標的分子を阻害することができることを意味する。例えば、阻害剤に関して、用語「選択的に阻害する」は、阻害アッセイにおいて実質的に阻害しない参照分子と区別できる程度で、例えば本明細書に記載されるように、標的分子の選択的阻害を可能にする程度まで、その標的分子を阻害する阻害剤の能力を指す。例えば、標的分子および／または参照分子の半数阻害濃度（ＩＣ５０）は、Asshoff, M. et al., Momelotinib inhibits ACVR1/ALK2, decreases hepcidin production, and ameliorates anemia of chronic disease in rodents. Blood. 2017 Mar 30; 129(13): 1823-1830に記載されるように、キナーゼ抗力アッセイで試験され得る（例えばＣａｒｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによるキナーゼ効力アッセイ）。このアッセイでは、阻害剤溶液（例えば試験される選択的阻害剤を含有する溶液）／キナーゼ基質が標的分子溶液（例えばＡＬＫ２）または参照分子溶液（例えばＪＡＫ１またはＪＡＫ２）と混合され、１時間室温下でインキュベートされる。反応が終わると、基質への酵素活性によって産生されたシグナルが測定され得る。標的分子および参照分子の半数阻害濃度が算出され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される分子は、標的分子に選択的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される分子は、標的分子を選択的に阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載される分子は、標的分子を選択的にアンタゴナイズする。一部の実施形態では、本明細書に記載される分子は、標的分子を選択的に中和する。
特異的に結合する：本明細書で使用される場合、用語「特異的に結合する」は、分子を結合アッセイまたは他の結合環境において適当な対照から結合パートナーを区別するために使用されるようにするある程度の親和性または結合力で結合パートナーに結合する分子の能力を指す。抗体に関して、用語、「特異的に結合する」は、適当な参照抗原（複数可）と比較して、例えば本明細書に記載されるように、抗原への結合を介して、ある特定の細胞、例えば筋肉細胞の選択的標的化を可能にする程度まで、抗体が他から特定の抗原を区別するために使用されるようにする、ある程度の親和性または結合力で特定の抗原に結合する抗体の能力を指す。一部の実施形態では、抗体が少なくとも約１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、またはそれ以下の標的を結合するためのＫＤを有する場合、抗体は標的に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体はヘモジュベリンに特異的に結合する。
対象：本明細書で使用される場合、用語「対象」は、哺乳動物を指す。一部の実施形態では、対象は非ヒト霊長類、または齧歯類である。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は患者、例えば疾患を有するかまたは有する疑いがあるヒト患者である。一部の実施形態では、対象は骨髄線維症および／または骨髄線維症の結果として生じる１つまたはそれ以上の状態を有するかまたは有する疑いがあるヒト患者である。
処置：本明細書で使用される場合、用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、障害、疾患の症状、または疾患もしくは障害に対する素因を治療、治癒、緩和、軽減、変化、療法、寛解、改善、または影響する目的で、標的疾患または障害、疾患／障害の症状、または疾患／障害に対する素因を有する対象への、１つまたはそれ以上の活性剤を含む組成物（例えば、抗ＨＪＶ抗体）の適用または投与を指す。標的疾患／障害を緩和することは、疾患の発症もしくは進行を遅延または防止させること、または疾患の重症度を減少させることを含む。
ＩＩ．抗ヘモジュベリン（ＨＪＶ）抗体
一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニストは、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、およびＲＧＭｃ（ＨＪＶ）を含む、反発性ガイダンス分子（ＲＧＭ）ファミリーの１つまたはそれ以上のタンパク質に結合する。一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニストは、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもヘモジュベリン（ＲＧＭｃ）に選択的に結合する。一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニストは、ヘモジュベリンの発現を減少させるアンチセンスオリゴヌクレオチドである（例えば、米国特許第７，５３４，７６４号；米国特許出願公開第２０１４／１２７３２５号；および国際公開第２０１６／１８０７８４号を参照；これらは参照によって本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニストは、例えばヘモジュベリンの競合的結合および／または化学修飾によって、ヘモジュベリンを阻害する小分子化合物である。
一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニストは、ヘモジュベリンおよび／またはＲＧＭタンパク質ファミリーの１つもしくはそれ以上のタンパク質（例えば、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ）に対して特異的な抗体（例えば、ＨＡ００１－ＨＡ０１２）である。本明細書に提供されるある特定の方法において有用であり得るヘモジュベリンおよび／または１つもしくはそれ以上のＲＧＭタンパク質に対して特異的な適切な抗体は、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第１０，１１８，９５８号；および同第８，５０７，４３５号；米国特許出願公開第２０１３／３３０３４３号；米国特許出願公開第２０１５／１６６６７２号；および米国特許出願公開第２０１７／０２９４９９号；および国際公開第２０１５／１７１６９１号；および国際公開第２０１８／００９６２４号に提供される。一部の態様では、高い特異性および親和性と共にヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する抗体が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ＨＪＶの任意の細胞外エピトープまたは抗体に露出されるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＨＪＶ抗体は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラットなどからのＨＪＶに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＨＪＶ抗体は、ヒトＨＪＶに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ヒトまたは非ヒト霊長類ＨＪＶのアミノ酸セグメントに結合する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ヒトＨＪＶ上のエピトープに特異的に結合する。ヒトＨＪＶは、３１アミノ酸の予測されるＮ末端シグナルペプチドおよび４５アミノ酸のＣ末端ＧＰＩ取付けシグナルを有する４２６アミノ酸のタンパク質である。例示的なヒトＨＪＶアミノ酸配列は、配列番号１２８：
MGEPGQSPSPRSSHGSPPTLSTLTLLLLLCGHAHSQCKILRCNAEYVSSTLSLRGGGSSGALRGGGGGGRGGGVGSGGLCRALRSYALCTRRTARTCRGDLAFHSAVHGIEDLMIQHNCSRQGPTAPPPPRGPALPGAGSGLPAPDPCDYEGRFSRLHGRPPGFLHCASFGDPHVRSFHHHFHTCRVQGAWPLLDNDFLFVQATSSPMALGANATATRKLTIIFKNMQECIDQKVYQAEVDNLPVAFEDGSINGGDRPGGSSLSIQTANPGNHVEIQAAYIGTTIIIRQTAGQLSFSIKVAEDVAMAFSAEQDLQLCVGGCPPSQRLSRSERNRRGAITIDTARRLCKEGLPVEDAYFHSCVFDVLISGDPNFTVAAQAALEDARAFLPDLEKLHLFPSDAGVPLSSATLLAPLLSGLFVLWLCIQ（配列番号１２８）に記載される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ヒトＨＪＶの断片に結合してもよい。ＨＪＶの断片は、約５～約４２５アミノ酸、約１０～約４００アミノ酸、約５０～約３５０アミノ酸、約１００～約３００アミノ酸、約１５０～約２５０アミノ酸、約２００～約３００アミノ酸、または約７５～約１５０アミノ酸の長さであってもよい。断片は、ＲＧＭｃからの連続する数のアミノ酸を含んでもよい。ＨＪＶ断片の例示的なアミノ酸は、配列番号１２３：
QCKILRCNAEYVSSTLSLRGGGSSGALRGGGGGGRGGGVGSGGLCRALRSYALCTRRTARTCRGDLAFHSAVHGIEDLMIQHNCSRQGPTAPPPPRGPALPGAGSGLPAPDPCDYEGRFSRLHGRPPGFLHCASFGDPHVRSFHHHFHTCRVQGAWPLLDNDFLFVQATSSPMALGANATATRKLTIIFKNMQECIDQKVYQAEVDNLPVAFEDGSINGGDRPGGSSLSIQTANPGNHVEIQAAYIGTTIIIRQTAGQLSFSIKVAEDVAMAFSAEQDLQLCVGGCPPSQRLSRSERNRRGAITIDTARRLCKEGLPVEDAYFHSCVFDVLISGDPNFTVAAQAALEDARAFLPDLEKLHLFPSD（配列番号１２３）に記載される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ヒトＨＪＶまたはヒトＨＪＶ断片内の異なるエピトープに結合する。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１６０～１９０内のエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１７０～１８３のアミノ酸配列を有するエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、ＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を有するエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、ＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）内の異なるセグメントと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１７０～１７１、アミノ酸１７１～１８０、アミノ酸１８０～１８２、およびアミノ酸１８２～１８３と相互作用する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１７０（Ｓ）、１７１（Ｓ）、１８０（Ｔ）、１８２（Ｔ）および１８３（Ｒ）と相互作用する。一部の実施形態では、ｈＨＡ－００８は、エピトープＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）と相互作用する。一部の実施形態では、ｈＨＡ－００８は、配列番号１２３のアミノ酸１７０（Ｓ）、１７１（Ｓ）、１８０（Ｔ）、１８２（Ｔ）および１８３（Ｒ）と相互作用する。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１６０～１９０および／または配列番号１２３のアミノ酸２８０～３１０内のエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１６９～１８２および／または配列番号１２３のアミノ酸２８９～３００内のエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１６９～１８２および配列番号１２３のアミノ酸２８９～３００内のエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）のアミノ酸配列およびアミノ酸配列ＳＱＲＬＳＲＳＥＲＮＲＲ（配列番号１２７）を有するエピトープと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）およびＳＱＲＬＳＲＳＥＲＮＲＲ（配列番号１２７）内の異なるセグメントと相互作用する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１６９～１７１、アミノ酸１７１～１８０、およびアミノ酸１８０～１８２、ならびに配列番号１２３のアミノ酸２８９～２９３、アミノ酸２９３～２９４、アミノ酸２９４～２９５、アミノ酸２９５～２９７およびアミノ酸２９７～３００と相互作用する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１２３のアミノ酸１６９（Ｔ）、１７０（Ｓ）、１７１（Ｓ）、１８０（Ｔ）、１８２（Ｔ）、２８９（Ｓ）、２９３（Ｓ）、２９４（Ｒ）、２９５（Ｓ）、２９７（Ｒ）、および３００（Ｒ）と相互作用する。一部の実施形態では、ｈＨＡ－００８－ＱＬは、ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）およびＳＱＲＬＳＲＳＥＲＮＲＲ（配列番号１２７）内の異なるセグメントと相互作用する。一部の実施形態では、ｈＨＡ－００８－ＱＬは、配列番号１２３のアミノ酸１６９（Ｔ）、１７０（Ｓ）、１７１（Ｓ）、１８０（Ｔ）、１８２（Ｔ）、２８９（Ｓ）、２９３（Ｓ）、２９４（Ｒ）、２９５（Ｓ）、２９７（Ｒ）、および３００（Ｒ）と相互作用する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、親和性成熟したクローンである。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、少なくとも約１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、またはそれより低い結合親和性（例えば、ＫＤにより指し示される）と共にＨＪＶ（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類ＨＪＶ）に特異的に結合する。例えば、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、５ｐＭ～５００ｎＭ、例えば、５０ｐＭ～１００ｎＭ、例えば、５００ｐＭ～５０ｎＭの親和性と共にヘモジュベリンタンパク質（例えば、ヒトヘモジュベリン）に結合することができる。本開示はまた、ヘモジュベリンタンパク質（例えば、ヒトヘモジュベリン）への結合について本明細書に記載される抗体のいずれかと競合し、１００ｎＭまたはより低い（例えば、８０ｎＭもしくはより低い、５０ｎＭもしくはより低い、２０ｎＭもしくはより低い、１０ｎＭもしくはより低い、５００ｐＭもしくはより低い、５０ｐＭもしくはより低い、または５ｐＭもしくはより低い）親和性を有する抗体を含む。抗ＨＪＶ抗体の親和性および結合動態は、バイオセンサー技術（例えば、ＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ）を含むがそれに限定されない、任意の好適な方法を使用して試験することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ナノモル濃度未満の範囲のＫＤと共にＨＪＶに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ＲＧＭｃに選択的に結合するが、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂには選択的に結合しない。
結合親和性（または結合特異性）は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または分光法（例えば、蛍光アッセイを使用する）を含む様々な方法により決定することができる。結合親和性を評価するための例示的な条件は、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液［１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤Ｐ２０］およびＰＢＳ緩衝液（１０ｍＭのＰＯ４－３、１３７ｍＭのＮａＣｌ、および２．７ｍＭのＫＣｌ）中のものである。これらの技術は、標的タンパク質濃度の関数として結合したタンパク質の濃度を測定するために使用することができる。結合したタンパク質（［結合］）の濃度は、一般に、以下の式：
［結合］＝［遊離］／（Ｋｄ＋［遊離］）
により遊離標的タンパク質（［遊離］）の濃度に関する。
ＫＡの正確な決定を行うことは必ずしも必要ではなく、場合によっては、例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ分析などの方法を使用して決定される、親和性の定量的な指標を得ることで十分であり、それはＫＡに比例しているため比較、例えばより高い親和性、例えば２倍高い親和性であるかどうかの決定のために使用することができ、例えば機能アッセイ、例えば、インビトロまたはインビボアッセイにおける活性により、親和性の定性的な指標が得られ、または親和性の推測が得られる。
抗ＨＪＶ抗体の非限定的な例の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）配列、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、ＣＤＲ配列、ならびに重鎖および軽鎖定常領域配列は表１に提供される。
Figure 2023528223000002
Figure 2023528223000003
Figure 2023528223000004
Figure 2023528223000005
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Figure 2023528223000007
Figure 2023528223000008
Figure 2023528223000009
Figure 2023528223000010
Figure 2023528223000011
Figure 2023528223000012
Figure 2023528223000013
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体の重鎖のＮ末端は、グルタミン酸（Ｅ）である。一部の実施形態では、グルタミン酸は、翻訳後修飾により自発的にピログルタミン酸に環化することができる。グルタミン酸のピログルタミン酸への自発的な環化は、例えば、Chelius et al., Formation of Pyroglutamic Acid From N-terminal Glutamic Acid in Immunoglobulin Gamma Antibodies, Anal Chem. 2006;78(7):2370-2376において以前に記載されている。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体の重鎖のＮ末端は、ピログルタミン酸である。一部の実施形態では、Ｎ末端ピログルタミン酸を有する抗ＨＪＶ抗体は、抗ＨＪＶ抗体の集団中の抗ＨＪＶ抗体の集団中の不純物（例えば、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、または０．０１％未満）である。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の集団は、重鎖のＮ末端においてグルタミン酸またはピログルタミン酸を有する抗ＨＪＶ抗体の混合物を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つからのＨＣ ＣＤＲ（例えば、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、またはＨＣ ＣＤＲ３）アミノ酸配列のうちの１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗体のいずれか１つについて提供されているＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つからのＬＣ ＣＤＲ（例えば、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３）アミノ酸配列のうちの１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つについて提供されているＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つに従ってＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体重鎖および軽鎖ＣＤＲ３ドメインは抗原に対する抗体の結合特異性／親和性に特に重要な役割を果たし得る。したがって、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つの少なくとも重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３を含み得る。
一部の実施形態では、単離抗ＨＪＶ抗体は、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣ ＣＤＲ２）、および重鎖ＣＤＲ３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義により、ＨＣ ＣＤＲ１は、Ｘ１ＹＧＭＮ（配列番号１０５）（ここで、Ｘ１はＮまたはＹであり得る）のアミノ酸配列を含んでもよい。代替的または追加的に、ＨＣ ＣＤＲ２は、ＭＩＹＹＤＳＳＸ２ＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０６）（ここで、Ｘ２はＥまたはＤであり得る）のアミノ酸配列を含んでもよい。代替的または追加的に、ＨＣ ＣＤＲ３は、ＧＸ３ＴＰＤＸ４（配列番号１０７）（ここで、Ｘ３はＴまたはＳであり得、Ｘ４はＹ、Ｖ、またはＫであり得る）のアミノ酸配列を含んでもよい。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義により、抗ＨＪＶ抗体は、軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣ ＣＤＲ２）、および軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。一部の実施形態では、ＬＣ ＣＤＲ１は、ＲＳＳＱＳＬＸ５Ｘ６ＳＤＧＸ７ＴＦＬＸ８（配列番号１０８）（ここで、Ｘ５はＡまたはＥであり得、Ｘ６はＴ、Ｓ、Ｅ、またはＤであり得、Ｘ７はＤ、Ｙ、またはＧであり得、Ｘ８はＥまたはＨであり得る）のアミノ酸配列を含んでもよい。代替的または追加的に、ＬＣ ＣＤＲ２は、Ｘ９ＶＳＸ１０ＲＦＳ（配列番号１０９）（ここで、Ｘ９はＥ、ＤまたはＡであり得、Ｘ１０はＮ、Ｓ、Ｔ、ＥまたはＨであり得る）のアミノ酸配列を含んでもよい。代替的または追加的に、ＬＣ ＣＤＲ３は、Ｘ１１ＱＸ１２ＴＸ１３ＤＰＸ１４Ｘ１５（配列番号１１０）（ここで、Ｘ１１はＦまたはＭであり得、Ｘ１２はＶまたはＡであり得、Ｘ１３はＨまたはＹであり得、Ｘ１４はＭ、ＬまたはＶであり得、Ｘ１５はＴまたはＳであり得る）のアミノ酸配列を含んでもよい。
また本開示の範囲内にあるのは、本明細書に開示される任意の例示的な抗ＨＪＶ抗体の機能的変異体である。機能的な変異体は、参照抗体と実質的に類似した結合および生物学的活性（例えば、実質的に類似した結合親和性、結合特異性、阻害活性、抗炎症活性、またはこれらの組合せ）を保持しながら、参照抗体と比べてＶＨおよび／もしくはＶＬ中、またはＨＣ ＣＤＲのうちの１つもしくはそれ以上および／もしくはＬＣ ＣＤＲのうちの１つもしくはそれ以上中の１つまたはそれ以上のアミノ酸残基バリエーションを含有してもよい。
一部の実施形態では、本開示の任意の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体の１つからのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３配列のいずれかに実質的に類似の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えばＨＣ ＣＤＲまたはＬＣ ＣＤＲ）配列を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＶＨ（例えばＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、またはＨＣ ＣＤＲ３）および／またはＶＬ（例えばＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３）領域の１つまたはそれ以上のＣＤＲの位置は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、１個、２個、３個、４個、５個、または６個のアミノ酸位置が変わり得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載される任意の抗体のＣＤＲを定義する位置は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される抗体のいずれか１つのＣＤＲ位置と比較して１個、２個、３個、４個、５個、または６個のアミノ酸がＣＤＲのＮ末端および／またはＣ末端境界をシフトすることにより変わり得る。別の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＶＨ（例えばＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、またはＨＣ ＣＤＲ３）および／またはＶＬ（例えばＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３）領域の１つまたはそれ以上のＣＤＲの長さは、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸によって変わり得る（例えば短いかまたは長い）。
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）より１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸が短くてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）より１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸が長くてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３のアミノ部分は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）と比較して１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸が伸長され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３のカルボキシ部分は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）と比較して１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸が伸長され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３のアミノ部分は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）と比較して１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸が短縮され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、および／またはＬＣ ＣＤＲ３のカルボキシ部分は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）と比較して１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸が短縮され得る。任意の方法が使用され、例えば、当技術分野に記載される結合アッセイおよび条件を使用して、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持されるかどうか確かめることができる。
一部の例では、本開示の任意の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つと実質的に類似の１つまたはそれ以上のＣＤＲ（例えばＨＣ ＣＤＲまたはＬＣ ＣＤＲ）配列を有する。例えば、抗体は、ヘモジュベリン（例えばヒトヘモジュベリン）への免疫特異的結合が維持される限り（例えばそれが由来するオリジナル抗体の結合と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％が実質的に維持される）、本明細書に提供されるＣＤＲのいずれか１つ（例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれかからのＣＤＲ）の相当するＣＤＲ領域と比較して、最大５個、４個、３個、２個、または１個のアミノ酸残基バリエーションを含有する、表１から選択される任意の抗ＨＪＶ抗体からの１つまたはそれ以上のＣＤＲ配列（複数可）を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に提供される任意のＣＤＲにおける任意のアミノ酸バリエーションは、保存バリエーションであり得る。保存バリエーションは、例えば結晶構造に基づいて決定された場合、残基がヘモジュベリンタンパク質（例えばヒトヘモジュベリンタンパク質）との相互作用に関与しないであろう位置でＣＤＲに導入され得る。本開示の一部の態様は、本明細書に提供される１つまたはそれ以上の重鎖可変（ＶＨ）および／または軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗ＨＪＶ抗体を提供する。一部の実施形態では、本明細書に提供される任意のＶＨドメインは、本明細書に提供される１つまたはそれ以上のＨＣ ＣＤＲ配列（例えばＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３）、例えば表１から選択される抗ＨＪＶのいずれか１つに提供される任意のＣＤＲ－Ｈ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される任意のＶＬドメインは、本明細書に提供される１つまたはそれ以上のＣＤＲ－Ｌ配列（例えばＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３）、例えば表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つに提供される任意のＬＣ ＣＤＲ配列を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つの重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメイン、ならびにそれらの変異体を含む任意の抗体を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される任意の抗ＨＪＶ抗体の重鎖可変および軽鎖可変対を含む任意の抗体を含む。
本開示の態様は、本明細書に記載される任意のものと相同な重鎖可変（ＶＨ）および／または軽鎖可変（ＶＬ）ドメインアミノ酸配列を有する抗ＨＪＶ抗体を提供する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つの重鎖可変配列および／または軽鎖可変配列と少なくとも７５％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一である重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含む。一部の実施形態では、相同な重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列は、本明細書に提供される任意のＣＤＲ配列内で変わらない。例えば、一部の実施形態では、配列バリエーションの程度（例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）は、本明細書に提供される任意のＣＤＲ配列を除く重鎖可変および／または軽鎖可変配列内で起こり得る。一部の実施形態では、本明細書に提供される任意の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される任意の抗ＨＪＶ抗体のフレームワーク配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であるフレームワーク配列を含む重鎖可変配列および軽鎖可変配列を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、ヒト化抗体（例えば、表１の１つまたはそれ以上のＣＤＲを含有するヒト化変異体）である。一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１に示されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３と同じＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含み、ならびにヒト化重鎖可変領域および／またはヒト化軽鎖可変領域を含む。
ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望される特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えばマウス、ラット、またはウサギのＣＤＲからの残基により置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、相当する非ヒト残基により置き換えられる。さらには、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも移入されるＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも見出されないが、抗体性能をさらに精密化および最適化するために含まれる残基を含んでもよい。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの、および典型的には２つの、可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適にはまた、典型的にはヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも部分を含む。抗体は、国際公開第９９／５８５７２号に記載されるように改変されたＦｃ領域を有してもよい。ヒト化抗体の他の形態は、オリジナル抗体に関して変更された１つまたはそれ以上のＣＤＲ（１個、２個、３個、４個、５個、６個）を有し、これはまた、オリジナル抗体からの１つまたはそれ以上のＣＤＲに由来する１つまたはそれ以上のＣＤＲと称される。ヒト化抗体はまた、親和性成熟を伴ってもよい。
一部の実施形態では、ヒト化は、ＣＤＲ（例えば、表１に示されるもの）をヒト可変ドメイン（例えば、ＩＧＫＶ１－ＮＬ１＊０１およびＩＧＨＶ１－３＊０１ヒト可変ドメイン）中に移植することにより達成される。一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つと比較して１つもしくはそれ以上のアミノ酸置換（例えば、ＶＨフレームワーク領域中）、および／または表１に列挙されるＶＬのいずれか１つと比較して１つもしくはそれ以上のアミノ酸置換（例えば、ＶＬフレームワーク領域中）を含む、ヒト化変異体である。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙される抗ＨＪＶ抗体のいずれかのＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含むヒト化抗体である。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つのＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含むヒト化抗体である。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号８に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号８に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３０に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３０に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３１に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。あるいは、またはさらに、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３１に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３２に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３２に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３３に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号７に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３３に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３４に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３５に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３４に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３５に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号１０のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号１１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３６に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３７に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３６に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３７に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３９に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３９に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２８のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４１に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号３８に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４１に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２７のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４２に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４３に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４２に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４３に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義システムにより、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。「合わせて」は、本開示のいずれかの箇所において使用される場合、３つの重鎖ＣＤＲの全てにおけるアミノ酸バリエーションの総数が定義された範囲内にあることを意味する。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して合わせて５個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、５個、４個、３個、２個または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、およびＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２、および配列番号２９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と合わせて少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一の、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号１３のアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＨＣ ＣＤＲ３を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ２と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ２；および／または配列番号２９のアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ３と比較して３個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、３個、２個、もしくは１個以下のアミノ酸バリエーション）を有するＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４４に記載のＶＨと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４５に記載のＶＬと比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有するＶＬを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４４に記載のＶＨと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号４５に記載のＶＬと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
抗体のＣＤＲは、異なる定義システムが使用される場合（例えば、ＩＭＧＴ定義、Ｋａｂａｔ定義、またはＣｈｏｔｈｉａ定義）、異なるアミノ酸配列を有し得る。定義システムは、番号により所与の抗体配列（例えばＶＨまたはＶＬ配列）の各アミノ酸に注釈をつけ、重鎖および軽鎖ＣＤＲに相当する番号は表２に提供する。表１に列挙されるＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義により定義される。当業者は、異なる番号付けシステムを使用して表１に提供した抗ＨＪＶ抗体のＣＤＲ配列を得ることができる。
Figure 2023528223000014
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、ヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得るキメラ抗体である。キメラ抗体は、第１の種からの可変領域または可変領域の部分および第２の種からの定常領域を有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、哺乳動物の１つの種（例えば、非ヒト哺乳動物、例えばマウス、ウサギ、およびラット）に由来する抗体の可変領域を模倣し、定常部分は、別の哺乳動物、例えばヒトに由来する抗体中の配列に相同的である。一部の実施形態では、アミノ酸改変は可変領域および／または定常領域中で為され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得るキメラ抗体である。キメラ抗体は、第１の種からの可変領域または可変領域の部分および第２の種からの定常領域を有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、哺乳動物の１つの種（例えば、非ヒト哺乳動物、例えばマウス、ウサギ、およびラット）に由来する抗体の可変領域を模倣し、定常部分は、別の哺乳動物、例えばヒトに由来する抗体中の配列に相同的である。一部の実施形態では、アミノ酸改変は可変領域および／または定常領域中で為され得る。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、表１から選択される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つのＶＬドメインおよび／またはＶＨドメインを含み、ならびにＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡもしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ヒト定常領域の非限定的な例は、当技術分野において記載されており、例えば、上掲のKabat E A et al., (1991)を参照。ヒトＩｇＧ１定常領域の例は以下に与えられる：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（配列番号１０３）
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体のいずれかの重鎖は、突然変異体ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。例えば、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン中のＬＡＬＡ突然変異（下ヒンジ残基Ｌｅｕ２３４ Ｌｅｕ２３５をＡｌａ２３４およびＡｌａ２３５で置き換えるように突然変異させたｍＡｂ ｂ１２に由来する突然変異体）の導入は、Ｆｃｇ受容体結合を減少させることが公知である［Bruhns, P., et al. (2009)およびXu, D. et al. (2000)］。突然変異体ヒトＩｇＧ１定常領域は以下に提供される（突然変異を太字とし、下線を引いている）：
Figure 2023528223000015
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体のいずれかの重鎖は、ヒトＩｇＧ１定常領域中の突然変異をさらに含む。例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ置換の導入。一部の実施形態では、そのような置換は、ＦｃＲｎ結合および血清半減期に影響してもよい（国際公開第２００５０４７３０７号および国際公開第２０１３０６３１１０号）。ＬＡＬＡ突然変異およびＱＬ突然変異を含む例示的なＩｇＧ１定常領域は以下に提供される（突然変異を太字とし、下線を引いている）：
Figure 2023528223000016
一部の実施形態では、特にはチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）を用いる、抗体の産生の間に、重鎖のＣ末端におけるリジンが切断されることが理解され得る。よって、分泌される抗体内のヒトＩｇＧ１定常領域は以下であり得る：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号１１１）
一部の実施形態では、分泌される抗体中のＬＡＬＡ突然変異を含む突然変異体ヒトＩｇＧ１は以下であり得る：
Figure 2023528223000017
一部の実施形態では、ＬＡＬＡ突然変異およびＱＬ突然変異を含む突然変異体ヒトＩｇＧ１は以下であり得る：
Figure 2023528223000018
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体のいずれかの軽鎖は、当技術分野において公知の任意の軽鎖定常領域（ＣＬ）であり得るＣＬをさらに含んでもよい。一部の例では、ＣＬは、カッパ軽鎖である。他の例では、ＣＬは、ラムダ軽鎖である。一部の実施形態では、ＣＬはカッパ軽鎖であり、その配列は以下に提供される：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（配列番号４７）
他の抗体重鎖および軽鎖定常領域は当技術分野において周知であり、例えば、両方とも参照によって本明細書に組み込まれる、ＩＭＧＴデータベース（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）またはｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ／ｖｂｓｔａｔ．ｐｈｐ．において提供されるものがある。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４６、配列番号４８、配列番号１１２、または配列番号１１３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４６、配列番号４８、配列番号１１２、または配列番号１１３と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４６に記載の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４８に記載の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号１１２に記載の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＨのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号１１３に記載の重鎖定常領域を含む重鎖を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＬのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４７と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一の軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＬのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４７と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、表１に列挙されるＶＬのいずれか１つまたはその任意の変異体および配列番号４７に記載の軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。
記載される抗ＨＪＶ抗体のＩｇＧ重鎖および軽鎖アミノ酸配列の例は、上記の表１に提供される。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１、５７、５９、６１、６３、６６、６８、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９または１２０のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５８、６０、６２、６５、６７または６９のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１、５７、５９、６１、６３、６６、６８、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９または１２０のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５８、６０、６２、６５、６７または６９のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１、５７、５９、６１、６３、６６、６８、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９または１２０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５８、６０、６２、６５、６７または６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５２のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５２のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５３のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５３のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５４のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５４のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５５のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５５のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５６のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５６のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５１または１１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５７または１１５のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５８のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５７または１１５のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５８のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５７または１１５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５９または１１６のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６０のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５９または１１６のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６０のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号５９または１１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６１または１１７のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６２のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６１または１１７のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６２のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６１または１１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６３または１１８のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６２のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６３または１１８のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６２のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６３または１１８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６１または１１７のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６５のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６１または１１７のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６５のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６１または１１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６６または１１９のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６７のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６６または１１９のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６７のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６６または１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６８または１２０のいずれか１つに記載の重鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する重鎖を含む。代替的または追加的に、本開示の抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６９のいずれか１つに記載の軽鎖と比較して２０個以下のアミノ酸バリエーション（例えば、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個以下のアミノ酸バリエーション）を含有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６８または１２０のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６９のいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６８または１２０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖を含む。代替的または追加的に、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、配列番号６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、インタクトな（すなわち、全長）抗体、その抗原結合断片（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖抗体、二特異性抗体、またはナノボディを含むがこれらに限定されない、任意の抗体形態であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ（例えば、定常領域の部分に融合したｓｃＦｖ）である。
一部の実施形態では、保存的突然変異は、例えば、結晶構造に基づいて決定される場合に、標的抗原（例えば、ヘモジュベリン）との相互作用に残基が関与している可能性が低い位置において抗体配列（例えば、ＣＤＲまたはフレームワーク配列）中に導入され得る。一部の実施形態では、１つ、２つまたはより多くの突然変異（例えば、アミノ酸置換）は、抗体の１つまたはそれ以上の機能的特性、例えば血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合および／または抗原依存性細胞傷害性を変更するために、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体のＦｃ領域中［例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステム（例えば、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス）による番号付けを用いて、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）および／またはヒンジ領域中］に導入される。
一部の実施形態では、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号に記載されるように、１つ、２つまたはより多くの突然変異（例えば、アミノ酸置換）は、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域中に導入され、その結果、ヒンジ領域中のシステイン残基の数は変更（例えば、増加または減少）される。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを促すため、または抗体の安定性を変更（例えば、増加もしくは減少）するためまたはリンカーコンジュゲーションを促すために変更され得る。
一部の実施形態では、１つ、２つまたはより多くの突然変異（例えば、アミノ酸置換）は、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化されたＦｃ受容体）に対する抗体の親和性を増加または減少させるために、本明細書に記載される筋肉標的化抗体のＦｃ領域中［例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステム（例えば、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス）による番号付けを用いて、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）および／またはヒンジ領域中］に導入される。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を減少または増加させる抗体のＦｃ領域中の突然変異およびそのような突然変異をＦｃ受容体またはその断片中に導入するための技術は当業者に公知である。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を変更するために為され得る抗体のＦｃ受容体中の突然変異の例は、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Smith P et al., (2012) PNAS 109: 6181-6186、米国特許第６，７３７，０５６号、および国際公開第０２／０６０９１９号；国際公開第９８／２３２８９号；および国際公開第９７／３４６３１号に記載される。
一部の実施形態では、１つ、２つまたはより多くのアミノ酸突然変異（すなわち、置換、挿入または欠失）は、インビボで抗体の半減期を変更（例えば、減少または増加）するために、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃもしくはヒンジ－Ｆｃドメイン断片）中に導入される。例えば、インビボで抗体の半減期を変更（例えば、減少または増加）する突然変異の例について、国際公開第０２／０６０９１９号；国際公開第９８／２３２８９号；および国際公開第９７／３４６３１号；および米国特許第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第６，２７７，３７５号および同第６，１６５，７４５号を参照。
一部の実施形態では、１つ、２つまたはより多くのアミノ酸突然変異（すなわち、置換、挿入または欠失）は、インビボで抗ＨＪＶ抗体の半減期を減少させるために、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃもしくはヒンジ－Ｆｃドメイン断片）中に導入される。一部の実施形態では、１つ、２つまたはより多くのアミノ酸突然変異（すなわち、置換、挿入または欠失）は、インビボで抗体の半減期を増加させるために、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃもしくはヒンジ－Ｆｃドメイン断片）中に導入される。一部の実施形態では、抗体は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス［上掲のKabat E A et al., (1991)］による番号付けを用いて、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／または第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）中に１つまたはそれ以上のアミノ酸突然変異（例えば、置換）を有することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＩｇＧ１の定常領域は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスによる番号付けで、２５２位におけるメチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換、２５４位におけるセリン（Ｓ）からスレオニン（Ｔ）への置換、および２５６位におけるスレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換を含む。参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第７，６５８，９２１号を参照。「ＹＴＥ突然変異体」として参照される、この種類の突然変異体ＩｇＧは、同じ抗体の野生型バージョンと比較して半減期の４倍の増加を示すことが示されている［Dall'Acqua W F et al., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24］。一部の実施形態では、抗体は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスによる番号付けで、位置２５１～２５７、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、および４２８～４３６におけるアミノ酸残基の１つ、２つ、３つまたはより多くのアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
一部の実施形態では、１つ、２つまたはより多くのアミノ酸置換は、抗ＨＪＶ抗体のエフェクター機能を変更するためにＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域中に導入される。それに対する親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載される。一部の実施形態では、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点突然変異または他の手段を通じて）は、循環抗体のＦｃ受容体結合を減少させ、それにより腫瘍局在化を増加させることができる。例えば、定常ドメインを欠失させるかまたは不活性化し、それにより腫瘍局在化を増加させる突然変異の記載について米国特許第５，５８５，０９７号および同第８，５９１，８８６号を参照。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体結合を減少させ得るＦｃ領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去するために、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域中に導入されてもよい［例えば、Shields R L et al., (2001) J Biol Chem 276: 6591-604を参照］。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体の定常領域中の１つまたはそれ以上のアミノ酸は、抗体が、変更されたＣｌｑ結合および／または減少もしくは消失された補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を有するように異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ）にさらに詳細に記載される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＨ２ドメインのＮ末端領域中の１つまたはそれ以上のアミノ酸残基は、それにより補体を固定する抗体の能力を変更するために変更される。このアプローチは、国際公開第９４／２９３５１号にさらに記載される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介するおよび／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増加させる抗体の能力を増加させるために改変される。このアプローチは、国際公開第００／４２０７２号にさらに記載される。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体の重鎖および／または軽鎖可変ドメイン配列は、例えば、本明細書の他の箇所において記載されているＣＤＲ移植、キメラ、ヒト化、または複合ヒト抗体または抗原結合断片を生成するために使用され得る。当業者により理解されるように、本明細書に提供される任意の抗体に由来する任意の変異体、ＣＤＲ移植、キメラ、ヒト化、または複合抗体は、本明細書に記載される組成物および方法において有用なことがあり、ヘモジュベリンに特異的に結合する能力を維持し、その結果、変異体、ＣＤＲ移植、キメラ、ヒト化、または複合抗体は、その由来となるオリジナル抗体と比べてヘモジュベリンに対する少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％またはより高い結合を有する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、望ましい特性を抗体に付与する突然変異を含む。例えば、ネイティブなＩｇＧ４ ｍＡｂを用いて起こることが公知である、Ｆａｂ－アーム交換に起因する潜在的な合併症を回避するために、本明細書に提供される抗体は、安定化「Ａｄａｉｒ」突然変異を含んでもよく［Angal S., et al., "A single amino acid substitution abolishes the heterogeneity of chimeric mouse/human (IgG4) antibody," Mol Immunol 30, 105-108; 1993］、セリン２２８（ＥＵ番号付け；残基２４１、Ｋａｂａｔの番号付け）はプロリンに変換されてＩｇＧ１様ヒンジ配列をもたらす。よって、抗体のいずれも、安定化「Ａｄａｉｒ」突然変異を含み得る。
一部の実施形態では、抗体は修飾され、例えばグリコシル化、リン酸化、ＳＵＭＯ化、および／またはメチル化により修飾される。一部の実施形態では、抗体は、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子にコンジュゲートされるグリコシル化抗体である。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、Ｎ－グリコシル化、Ｏ－グリコシル化、Ｃ－グリコシル化、グリピエーション（ＧＰＩアンカー結合）、および／またはホスホグリコシル化により抗体にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、単糖、二糖、オリゴ糖、またはグリカンである。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、分岐オリゴ糖または分岐グリカンである。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の糖または炭水化物分子は、マンノース単位、グルコース単位、Ｎ－アセチルグルコサミン単位、Ｎ－アセチルガラクトサミン単位、ガラクトース単位、フコース単位、またはリン脂質単位を含む。一部の実施形態では、約１～１０、約１～５個、約５～１０個、約１～４個、約１～３個、または約２個の糖分子が存在する。一部の実施形態では、グリコシル化抗体は、完全にまたは部分的にグリコシル化されている。一部の実施形態では、抗体は、化学反応によりまたは酵素的手段によりグリコシル化される。一部の実施形態では、抗体は、インビトロでまたは細胞の内側でグリコシル化され、該細胞は、Ｎ－またはＯ－グリコシル化経路中の酵素、例えばグリコシルトランスフェラーゼを欠損していてもよい。一部の実施形態では、２０１４年５月１日に公開された、表題「修飾された抗体、抗体－コンジュゲートおよびその調製方法」の国際特許出願公開第２０１４０６５６６１号に記載されるように、抗体は、糖または炭水化物分子で機能化される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体のいずれか１つは、重鎖および／または軽鎖配列中のシグナルペプチド（例えば、Ｎ末端シグナルペプチド）を含んでもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、本明細書に記載されるＶＨおよびＶＬ配列のいずれか１つ、ＩｇＧ重鎖および軽鎖配列のいずれか１つ、またはＦ（ａｂ’）重鎖および軽鎖配列のいずれか１つを含み、ならびにシグナルペプチド（例えば、Ｎ末端シグナルペプチド）をさらに含む。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含む。
ＩＩＩ．抗ＨＪＶ抗体の調製
本明細書に記載されているヘモジュベリンに結合する能力を有する抗体は、当技術分野において公知の任意の方法により作製され得る。例えば、Harlow and Lane, (1998) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New Yorkを参照。
一部の実施形態では、標的抗原（例えば、ＨＪＶ）に特異的な抗体は、従来のハイブリドーマ技術により作製され得る。キャリアタンパク質、例えばＫＬＨに連結していてもよい、全長標的抗原またはその断片は、その抗原に結合する抗体を生成するために宿主動物を免疫化するために使用され得る。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは、本明細書にさらに記載されるように、抗体刺激および産生のための確立された従来技術に従って一般に行われる。マウス、ヒト化、およびヒト抗体の産生のための一般的技術は当技術分野において公知であり、本明細書に記載される。ヒトを含む任意の哺乳動物対象またはそれからの抗体産生細胞は、ヒトハイブリドーマ細胞系を含む、哺乳動物ハイブリドーマ細胞系の産生のための基礎として役立つように操作され得ることが想定される。典型的には、宿主動物は、腹腔内に、筋肉内に、経口的に、皮下に、足底内に、および／または皮内に、本明細書に記載されるものを含む、免疫原の量を接種される。
所望される場合、関心対象の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）（例えば、ハイブリドーマにより産生される）は、シークエンシングされてもよく、ポリヌクレオチド配列は次に、発現または繁殖のためにベクター中にクローニングされてもよい。関心対象の抗体をコードする配列は、宿主細胞中でベクター中に維持されてもよく、宿主細胞は次に、拡大増殖され、将来的な使用のために凍結され得る。代替的に、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化する」ためまたは抗体の親和性（親和性成熟）、もしくは他の特徴を向上させるための遺伝子操作のために使用されてもよい。例えば、定常領域は、抗体がヒトにおける臨床試験および処置において使用される場合に免疫応答を回避するようにヒト定常領域により似たものとなるように操作されてもよい。抗体配列を遺伝学的に操作して、標的抗原に対するより高い親和性およびより高い有効性を得ることが望ましいことがある。１つまたはそれ以上のポリヌクレオチド変化を抗体に対して行い、依然として標的抗原に対するその結合特異性を維持できることは当業者に明らかである。
他の実施形態では、完全ヒト抗体は、特有のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された商業的に入手可能なマウスを使用することにより得られ得る。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）またはより堅牢な免疫応答を生成するように設計されたトランスジェニック動物もまた、ヒト化またはヒト抗体の生成のために使用され得る。そのような技術の例は、Ａｍｇｅｎ， Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）からのＸｅｎｏｍｏｕｓｅＲＴＭおよびＭｅｄａｒｅｘ， Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）からのＨｕＭＡｂ－ＭｏｕｓｅＲＴＭおよびＴＣ ＭｏｕｓｅＴＭまたはＨａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ＢＶ（Ｈｏｌｌａｎｄ）からのＨ２Ｌ２マウスである。別の代替として、抗体は、ファージディスプレイまたは酵母技術により組換えにより作製されてもよい。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号；同第５，５８０，７１７号；同第５，７３３，７４３号；および同第６，２６５，１５０号；ならびにWinter et al., (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:433-455を参照。代替的に、ファージディスプレイ技術［McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-553］を使用して、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体および抗体断片を産生することができる。
インタクトな抗体（全長抗体）の抗原結合断片は、日常的な方法を介して調製され得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体分子のペプシン消化により産生することができ、Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成することができる。遺伝子操作された抗体、例えばヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、および二特異性抗体は、例えば、従来の組換え技術を介して、産生され得る。１つの例において、標的抗原に特異的なモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合する能力を有するオリゴヌクレオチドプローブを使用することによる）を使用して容易に単離し、シークエンシングすることができる。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離されたら、ＤＮＡは、１つまたはそれ以上の発現ベクター中に入れられてもよく、それは次に宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒトＨＥＫ２９３細胞、またはそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞中にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体の合成が得られる。例えば、ＰＣＴ国際公開第８７／０４４６２号を参照。ＤＮＡは次に、例えば、相同マウス配列の場所にヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコーディング配列を置換することにより［Morrison et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851］、または免疫グロブリンコーディング配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコーディング配列の全体もしくは部分を共有結合的に接合することにより改変され得る。その方式において、標的抗原の結合特異性を有する遺伝子操作された抗体、例えば「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製され得る。
単鎖抗体は、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を連結することにより組換え技術を介して調製され得る。好ましくは、柔軟性リンカーが２つの可変領域の間に組み込まれる。
代替的に、単鎖抗体の産生のために記載された技術（米国特許第４，９４６，７７８号および同第４，７０４，６９２号）を応用して、ファージまたは酵母ｓｃＦｖライブラリーを産生し、ＨＪＶに特異的なｓｃＦｖクローンを、日常的な手順に従ってライブラリーから同定することができる。陽性クローンをさらなるスクリーニングに供して、高いＨＪＶ結合親和性を有するクローンを同定することができる。
当技術分野において公知のおよび本明細書に記載される方法に従って得られた抗体は、当技術分野において周知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、１つの方法は、抗原が結合するエピトープを同定する、または「エピトープマッピング」である。タンパク質上のエピトープの位置をマッピングするためおよび特徴付けるために当技術分野において公知の多くの方法があり、例えば、Chapter 11 of Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999に記載されるように、抗体－抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドベースアッセイが含まれる。１つの例では、エピトープマッピングは、タンパク質加水分解および質量分析と連結されたＨ／Ｄ－Ｅｘ（水素重水素交換）を使用して達成され得る。追加の例において、エピトープマッピングは、抗体が結合する配列を決定するために使用され得る。エピトープは、リニアエピトープ、すなわち、アミノ酸の単一のストレッチ中に含有されるもの、または単一のストレッチ（一次構造直鎖状配列）中に必ずしも含有されなくてもよいアミノ酸の３次元相互作用により形成されるコンホメーショナルエピトープであり得る。変動的な長さ（例えば、少なくとも４～６アミノ酸の長さ）のペプチドが単離または合成（例えば、組換えによる）され、抗体を用いた結合アッセイのために使用され得る。別の例では、抗体が結合するエピトープは、標的抗原配列に由来するオーバーラップペプチドを使用することおよび抗体による結合を決定することにより体系的スクリーニングにおいて決定され得る。遺伝子断片発現アッセイに従って、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、無作為にまたは特有の遺伝子構成により断片化され、試験されるべき抗体との抗原の発現された断片の反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲにより産生され、次にインビトロで転写され、放射性アミノ酸の存在下でタンパク質に翻訳されてもよい。放射性標識された抗原断片への抗体の結合は次に、免疫沈降およびゲル電気泳動により決定される。ある特定のエピトープはまた、ファージ粒子の表面上に提示されたランダムペプチド配列の大きいライブラリー（ファージライブラリー）を使用することにより同定され得る。代替的に、オーバーラップペプチド断片の定義されたライブラリーは、単純な結合アッセイにおいて試験抗体への結合について試験され得る。追加の例では、抗原結合性ドメインの突然変異誘発、ドメインスワッピング実験およびアラニンスキャニング突然変異誘発が、エピトープ結合のために要求される、十分な、および／または必要な残基を同定するために行われ得る。代替的に、競合アッセイは、抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために同じ抗原に結合することが既知である他の抗体を使用して行われ得る。競合アッセイは当業者に周知である。
一部の例では、抗ＨＪＶ抗体は、以下に例示されるように組換え技術により調製される。本明細書に記載されている抗ＨＪＶ抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸は、１つの発現ベクター中にクローニングすることができ、各ヌクレオチド配列は、好適なプロモーターに作動可能に連結されている。１つの例では、重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列の各々は、別個のプロモーターに作動可能に連結されている。代替的に、重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、単一のプロモーターと作動可能な連結状態にあることができ、その結果、重鎖および軽鎖の両方は同じプロモーターから発現される。必要な場合、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）が、重鎖をコードする配列と軽鎖をコードする配列との間に挿入され得る。
一部の例では、抗体の２つの鎖をコードするヌクレオチド配列は、２つのベクター中にクローニングされ、２つのベクターは同じまたは異なる細胞中に導入され得る。２つの鎖が異なる細胞中で発現される場合、それらの各々は、それを発現する宿主細胞から単離することができ、単離された重鎖および軽鎖は混合され、抗体の形成を可能とする好適な条件下でインキュベートされ得る。
一般に、抗体の１つまたは全ての鎖をコードする核酸配列は、当技術分野において公知の方法を使用して好適なプロモーターと作動可能に連結された好適な発現ベクター中にクローニングされ得る。例えば、ヌクレオチド配列およびベクターは、好適な条件下で制限酵素と接触させることができ、それにより、互いと対合し、リガーゼと共に接合され得る各分子上の相補的な末端が作出される。代替的に、合成核酸リンカーは、遺伝子の末端にライゲートされ得る。これらの合成リンカーは、ベクター中の特定の制限部位に相当する核酸配列を含有する。発現ベクター／プロモーターの選択は、抗体の産生における使用のための宿主細胞の種類に依存する。
様々なプロモーターが、本明細書に記載される抗体の発現のために使用可能であり、これには、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中初期プロモーター、ウイルスＬＴＲ、例えばラウス肉腫ウイルスＬＴＲ、ＨＩＶ－ＬＴＲ、ＨＴＬＶ－１ ＬＴＲ、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、大腸菌ｌａｃ ＵＶプロモーター、および単純ヘルペスｔｋウイルスプロモーターが含まれるがこれらに限定されない。
調節可能なプロモーターもまた使用され得る。そのような調節可能なプロモーターとしては、大腸菌からのｌａｃリプレッサーを転写モジュレーターとして使用してｌａｃオペレーター保有哺乳動物細胞プロモーターからの転写を調節するもの［Brown, M. et al., Cell, 49:603-612 (1987)］、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を使用するもの［Gossen, M., and Bujard, H., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-555115 (1992); Yao, F. et al., Human Gene Therapy, 9:1939-1950 (1998); Shockelt, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:6522-6526 (1995)］を含む。他のシステムは、エストラジオール、ＲＵ４８６、ジフェノールムリスレロン（ｄｉｐｈｅｎｏｌ ｍｕｒｉｓｌｅｒｏｎｅ）、またはラパマイシンを使用するＦＫ５０６二量体、ＶＰ１６またはｐ６５を含む。誘導性システムは、数ある中でも、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣｌｏｎｔｅｃｈおよびＡｒｉａｄから入手可能である。
オペロンと共にリプレッサーを含む調節可能なプロモーターが使用され得る。１つの実施形態では、大腸菌からのｌａｃリプレッサーは、ｌａｃオペレーター保有哺乳動物細胞プロモーターからの転写を調節するための転写モジュレーターとして機能することができ［M. Brown et al., Cell, 49:603-612 (1987)]; Gossen and Bujard (1992); [M. Gossen et al., Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551(1992)］、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を転写活性化因子（ＶＰ １６）と組み合わせてｔｅｔＲ－哺乳動物細胞転写活性化因子融合タンパク質、ｔＴａ（ｔｅｔＲ－ＶＰ １６）が作出され、ｔｅｔＯは、哺乳動物細胞中での遺伝子発現を制御するためのｔｅｔＲ－ｔｅｔオペレーターシステムを作出するためのヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）プロモーターに由来する最小プロモーターを有する。１つの実施形態では、テトラサイクリン誘導性スイッチが使用される。ｔｅｔＲ－哺乳動物細胞転写因子融合誘導体ではなく、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）は単独で、テトラサイクリンオペレーターがＣＭＶＩＥプロモーターのＴＡＴＡエレメントの下流に適切に配置された場合に哺乳動物細胞中で遺伝子発現を調節するための強力なトランスモジュレーターとして機能することができる（Yao et al., Human Gene Therapy）。このテトラサイクリン誘導性スイッチの１つの特定の利点は、その調節可能な効果を達成するために、一部の事例では細胞に対して毒性であり得る［Gossen 5 et al., Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992); Shockett et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:6522-6526 (1995)］、テトラサイクリンリプレッサー－哺乳動物細胞トランスアクチベーターまたはリプレッサー融合タンパク質の使用を要求しないことである。
追加的に、ベクターは、例えば、以下の一部または全てを含有することができる：選択マーカー遺伝子、例えば哺乳動物細胞中の安定なまたは一過性のトランスフェクタントの選択のためのネオマイシン遺伝子；高いレベルの転写のためのヒトＣＭＶの最初期遺伝子からのエンハンサー／プロモーター配列；ｍＲＮＡ安定性のためのＳＶ４０からの転写終結およびＲＮＡプロセシングシグナル；適切なエピソーム複製のためのＳＶ４０ポリオーマ複製起点およびＣｏｌＥ１；内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）、汎用性マルチプルクローニングサイト；ならびにセンスおよびアンチセンスＲＮＡのインビトロ転写のためのＴ７およびＳＰ６ ＲＮＡプロモーター。導入遺伝子を含有するベクターを産生するための好適なベクターおよび方法は、当技術分野において周知および利用可能である。本明細書に記載される方法を実施するために有用なポリアデニル化シグナルの例は、ヒトコラーゲンＩポリアデニル化シグナル、ヒトコラーゲンＩＩポリアデニル化シグナル、およびＳＶ４０ポリアデニル化シグナルを含むがこれらに限定されない。
抗体のいずれかをコードする核酸（例えば、表３に列挙される核酸コーディング配列）を含む１つまたはそれ以上のベクター（例えば、発現ベクター）は、抗体を産生するために好適な宿主細胞中に導入されてもよい。宿主細胞の非限定的な例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）－２９３細胞、ｖｅｒｄａ ｒｅｎｏ（ＶＥＲＯ）細胞、非分泌性ヌル（ＮＳ０）細胞、ヒト胚性網膜（ＰＥＲ．Ｃ６）細胞、Ｓｐ２／０細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞、およびＳＶ４０形質転換サル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ）細胞を含む。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体を発現する宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。宿主細胞は、抗体またはその任意のポリペプチド鎖の発現のために好適な条件下で培養され得る。そのような抗体またはそのポリペプチド鎖は、培養された細胞により（例えば、細胞または培養上清から）従来の方法、例えば、アフィニティー精製を介して回収され得る。必要な場合、抗体のポリペプチド鎖は、抗体の産生を可能とする好適な時間的期間にわたり好適な条件下でインキュベートされ得る。一部の実施形態では、宿主細胞は、抗ＨＪＶ抗体の重鎖をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、抗ＨＪＶ抗体の軽鎖をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、重鎖をコードする核酸および軽鎖をコードする核酸を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を調製する方法は、これも本明細書に記載されるように、抗ＨＪＶ抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを伴う。組換え発現ベクターは、従来の方法、例えば、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションにより好適な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞）中に導入され得る。陽性形質転換体宿主細胞が選択され、抗体を形成する２つのポリペプチド鎖の発現を可能とする好適な条件下で培養可能であり、２つの鎖は細胞または培養培地から回収され得る。必要な場合、宿主細胞から回収された２つの鎖は、抗体の形成を可能とする好適な条件下でインキュベートされ得る。
１つの例では、２つの組換え発現ベクターが提供され、１つは抗ＨＪＶ抗体の重鎖をコードし、他方は抗ＨＪＶ抗体の軽鎖をコードする。２つの組換え発現ベクターの両方は、従来の方法、例えば、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションにより好適な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞）中に導入され得る。
代替的に、発現ベクターの各々は、好適な宿主細胞中に導入され得る。陽性形質転換体が選択され、抗体のポリペプチド鎖の発現を可能とする好適な条件下で培養され得る。２つの発現ベクターが同じ宿主細胞中に導入される場合、該細胞中で産生された抗体は、宿主細胞または培養培地から回収され得る。必要な場合、ポリペプチド鎖は、宿主細胞または培養培地から回収され、次に抗体の形成を可能とする好適な条件下でインキュベートされ得る。２つの発現ベクターが異なる宿主細胞中に導入される場合、それらの各々は、相当する宿主細胞または相当する培養培地から回収され得る。２つのポリペプチド鎖は次に、抗体の形成のための好適な条件下でインキュベートされ得る。
組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収するために標準的な分子生物学技術が使用される。例えば、一部の抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧ連結マトリックスを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより単離され得る。
本明細書に記載されている（例えば、表３に提供されている）抗ＨＪＶ抗体の重鎖、軽鎖、または両方をコードする核酸、それを含有するベクター（例えば、発現ベクター）；ベクターを含む宿主細胞のいずれも本開示の範囲内である。
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一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号７１と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号７３と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号７１と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号７５と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号７１と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号７７と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号７１と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号７９と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号７１と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号８１と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号８４と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号８５と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号８８と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号８９と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号９２と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号９３と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号９４と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号９３と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号９２と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号９６と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号９９と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号１００と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶは、（ｉ）配列番号４０と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸、および／または（ｉｉ）配列番号６４と少なくとも６０％（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）同一の核酸を発現させることにより産生される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、標的細胞または標的組織（例えば、ＨＪＶを発現する細胞または組織）に分子ペイロードをデリバリーするために使用され得る。よって、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体は、分子ペイロードに連結され得る。本明細書に記載される複合体は、様々な応用、例えば、診断または治療応用において使用されてもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載される複合体は、少なくとも１つの遺伝子、タンパク質、および／または核酸の活性または機能をモジュレートするために使用される。一部の実施形態では、分子ペイロードは、遺伝子、タンパク質、および／または核酸のモジュレーションの原因となる。分子ペイロードは、細胞中での遺伝子、タンパク質、および／または核酸の活性または機能をモジュレートする能力を有する小分子、タンパク質、核酸、オリゴヌクレオチド、または任意の分子実体であってもよい。一部の実施形態では、分子ペイロードは、筋肉細胞中の疾患関連リピートを標的化するオリゴヌクレオチドである。
ＩＶ．医薬組成物
本明細書に記載されている抗体の他に、コードする核酸もしくは核酸セット、それを含むベクター、またはベクターを含む宿主細胞は、標的疾患の処置における使用のための医薬組成物を形成するために医薬的に許容される担体（賦形剤）と混合され得る。「許容される」は、担体が、組成物の活性成分と適合性（および好ましくは、活性成分を安定化させる能力を有する）でなければならず、処置される対象に対して有害であってはならないことを意味する。医薬的に許容される賦形剤（担体）は、当技術分野において周知の緩衝剤を含む。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hooverを参照。
本明細書に開示される抗ＨＪＶ抗体含有医薬組成物は、好適な緩衝剤をさらに含んでもよい。緩衝剤は、別の酸または塩基の添加の後に選択された値の近くに溶液のｐＨを維持するために使用される弱酸または塩基である。一部の例では、本明細書に開示される緩衝剤は、二酸化炭素濃度における変化（細胞呼吸により生成される）にかかわらず生理的ｐＨを維持する能力を有する緩衝剤であり得る。例示的な緩衝剤は、ＨＥＰＥＳ［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸］緩衝剤、ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（ＤＰＢＳ）緩衝剤、またはリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）緩衝剤を含むがこれらに限定されない。そのような緩衝剤は、リン酸水素二ナトリウムおよび塩化ナトリウム、またはリン酸二水素カリウムおよび塩化カリウムを含んでもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物中の緩衝剤は、約５～８のｐＨ値を維持してもよい。例えば、医薬組成物のｐＨは、約７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０であり得る。他の例では、医薬組成物は、７より低いｐＨ値、例えば、約７、６．８、６．５、６．３、６、５．８、５．５、５．３、または５を有してもよい。
本明細書に記載される医薬組成物は、１つまたはそれ以上の好適な塩を含む。塩は、酸および塩基の中和反応により形成され得るイオン性化合物である［Skoog, D.A; West, D.M.; Holler, J.F.; Crouch, S.R. (2004). "chapters 14-16". Fundamentals of Analytical Chemistry (8th ed.)］。塩は、関連する数の陽イオン（正に荷電したイオン）および陰イオン（負イオン）から構成されるため、生成物は電気的に中性（正味電荷を有しない）である。
一部の実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態において医薬的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤を含むことができる。［Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover］。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内注射のために製剤化され得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、皮下注射のために製剤化され得る。
インビボ投与のために使用される医薬組成物は無菌でなければならない。これは、例えば、無菌濾過膜を通じた濾過により、容易に達成される。治療抗体組成物は、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針により貫通可能なストッパーを有する静脈内または皮下溶液バッグまたはバイアル中に一般に入れられる。
Ｖ．使用の方法
本開示の態様は、対象において骨髄線維症および／または骨髄線維症の結果として生じる１つもしくはそれ以上の状態を処置するための組成物および方法に関する。
図１２は、ヘプシジン刺激性経路およびヘプシジンによる鉄ホメオスタシスの生理学的調節を描写する。一般的に示されているように、ヘプシジンは、鉄放出性標的細胞（例えば、肝細胞、十二指腸細胞、組織マクロファージ、および他の細胞タイプ）中の鉄エクスポーターフェロポーチンに結合することにより機能する。ヘプシジンの結合は、鉄流出を遮断し、フェロポーチンのユビキチン化、内部移行、およびリソソーム分解を誘発する。これは、細胞内の鉄保有および最終的には全身の鉄レベルの減少をもたらす。
ＨＡＭＰ遺伝子は、ヘプシジン前駆体タンパク質をコードし、主に肝臓の肝細胞より、肝臓外の組織の他の細胞よりも低いレベルで発現される。前駆体タンパク質は、その後切断され、生理活性のヘプシジンを生じる。一部の実施形態では、本開示のヘプシジンアンタゴニストは、ＨＡＭＰアンタゴニストであり、ＨＡＭＰまたはそれらの転写産物もしくは翻訳産物に結合することにより、またはＨＡＭＰの転写もしくは翻訳調節因子を阻害してＨＡＭＰ発現を減らすことにより、ヘプシジン機能をアンタゴナイズする。ＨＡＭＰの転写調節因子の例は、ＳＭＡＤ１／５／８（例えば、ＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路）およびＳＴＡＴ３（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路）を含むがこれらに限定されない。よって、一部の実施形態では、ＨＡＭＰアンタゴニストは、ＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路阻害剤またはＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路阻害剤である。
血清または組織の鉄における増加は、ＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路を介するヘプシジンの転写誘導のトリガーとなる。機序は、肝臓洞様内皮細胞からの骨形態形成タンパク質６（ＢＭＰ６）の分泌を伴い、ＢＭＰ６は肝細胞上のＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）に結合し、それによりＳＭＡＤシグナル伝達カスケードを活性化させる。ＢＭＰ受容体の例は、Ｉ型（例えば、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＡＬＫ６）およびＩＩ型（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＢＭＰＲＩＩ）ＢＭＰ受容体を含む。ヘプシジン刺激のためのＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路の中心的な調節因子は、ＢＭＰ補助受容体、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）である。よって、一部の態様では、本開示は、ヘプシジンを標的化するため、例えば、骨髄線維症および／または骨髄線維症の結果として生じる１つもしくはそれ以上の状態の処置のために鉄ホメオスタシスをモジュレートするためのヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）に関する。一部の実施形態では、本開示は、鉄エクスポーターフェロポーチンへのヘプシジンの結合の直接的な阻害を伴う骨髄線維症の処置のために鉄ホメオスタシスをモジュレートする方法を提供する。一部の実施形態では、ヘプシジンアンタゴニストは、抗ＨＪＶ抗体である。
骨髄線維症（ＭＦ）は、骨髄の線維症をもたらす異常な血液幹細胞の増殖によって特徴付けられる骨髄増殖性障害である。健康な血液細胞（血小板産生を担う巨核球および赤血球）の産生が損なわれる。ＭＦは、原発性ＭＦ（ＰＭＦ）および二次性ＭＦ（ＳＭＦ）として分類され得る。ＰＭＦおよびＳＭＦは、共通の主症状である貧血、疲労、および脾腫を含む類似した臨床的プロファイルを有する。原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）は、それ自体で生じるＭＦとして特徴付けられる。一部の実施形態では、ＰＭＦは、対象における炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６）のレベルの増加と関連してもよい［例えば、Cokic et al. Proinflammatory Cytokine IL-6 and JAK-STAT Signaling Pathway in Myeloproliferative Neoplasms, Mediators Inflamm. 2015; 2015: 453020を参照］。二次性骨髄線維症（ＳＭＦ）は、別の疾患、例えば自己免疫疾患の合併症として骨髄の瘢痕組織の結果として生じる。一部の実施形態では、本明細書に記載される対象は、ＰＭＦを有するかまたは有する疑いがある。一部の実施形態では、本明細書に記載される対象は、ＳＭＦを有するかまたは有する疑いがある。
一部の実施形態では、骨髄線維症（例えば、ＰＭＦおよび／またはＳＭＦ）を有するかまたは有することが疑われる対象は、１つまたはそれ以上の遺伝子（例えば、ＪＡＫ２遺伝子、トロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子、カルレチクリン（ＣＡＬＲ）遺伝子、リンパ球特異的アダプタータンパク質Ｌｎｋ（ＬＮＫ）遺伝子、ＡＳＸＬ転写調節因子１（ＡＳＸＬ１）遺伝子、セリン・アルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）遺伝子、プロテインホスファターゼ、Ｍｇ２＋／Ｍｎ２＋依存性１Ｄ（ＰＰＭ１Ｄ）遺伝子、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））１／イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））２（ＩＤＨ１／２）遺伝子、Ｔｅｔメチルシトシンジオキシゲナーゼ２（ＴＥＴ２）遺伝子、Ｚｅｓｔｅ ２ポリコーム抑制複合体２サブユニットエンハンサー（ＥＺＨ２）遺伝子、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１（Ｕ２ＡＦ１）遺伝子、核因子赤血球２（ＮＦＥ２）遺伝子、ＳＨ２Ｂアダプタータンパク質３（ＳＨ２Ｂ３）遺伝子、スプライシング因子３ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）遺伝子、Ｃｂｌがん原遺伝子（ＣＢＬ）遺伝子またはこれらの組合せ中の１つまたはそれ以上の突然変異を含む。
一部の実施形態では、対象は、ＪＡＫ２遺伝子に１つまたはそれ以上の突然変異を有する。ＪＡＫ２は、ＥＰＯ、ＴＰＯ、および／またはＧ－ＣＳＦによる骨髄細胞系列の増殖に関与する受容体からのシグナルの伝達に重要な役割を果たす［例えば、Alshemmari et al., Molecular Pathogenesis and Clinical Significance of Driver Mutations in Primary Myelofibrosis: A Review, Med Princ Pract, 2016;25(6):501-509参照］。一部の実施形態では、対象は、エクソン１２またはエクソン１４に惹起突然変異を有するヒトＪＡＫ２遺伝子を含有する。一部の実施形態では、ＪＡＫ２遺伝子における惹起突然変異はエクソン１４にあり、Ｖ６１７Ｆ置換を生じる。一部の実施形態では、Ｖ６１７Ｆ突然変異はＪＡＫ２およびその関連するシグナル伝達経路の過剰活性化をもたらす。一部の実施形態では、ＪＡＫ２の過剰活性化は骨髄線維症（例えばＰＭＦおよび／またはＳＭＦ）をもたらす。
一部の実施形態では、対象は、トロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子に１つまたはそれ以上の突然変異を有する。ＭＰＬはトロンボポエチン（ＴＰＯ）の同族受容体であり、ＭＰＬ遺伝子の機能の増大を生じる突然変異は巨核球産生の障害をもたらす。一部の実施形態では、対象は、ＭＰＬのＷ５１５Ｌ／Ｋ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＭＰＬ遺伝子に１つまたはそれ以上の突然変異を有する対象は、ＭＦを有する対象全体と比較して、貧血を発症する頻度が高い（例えば、１０％より高い、２０％より高い、３０％より高い、４０％より高い、５０％より高い、６０％より高い、７０％より高い、８０％より高い、９０％より高い、２倍より高い、３倍より高い、４倍より高い、５倍より高い、６倍より高い、７倍より高い、８倍より高い、９倍より高い、または１０倍より高い）（Guglielmelli P et al., Anaemia characterises patients with myelofibrosis harboring Mpl mutation. Br J Haematol 2007; 137: 244-247）。
一部の実施形態では、対象は、カルレチキュリン（ＣＡＬＲ）遺伝子に１つまたはそれ以上の突然変異を有する。ＣＡＬＲ遺伝子は、カルシウム恒常性、細胞シグナル伝達、遺伝子発現、細胞接着、自己免疫およびアポトーシスを制御する多因子タンパク質である、カルレチキュリンタンパク質をコードする。約１４０個のＣＡＬＲ突然変異が、１９個の変異体で同定され、ＭＦと関連する。一部の実施形態では、対象は、ＣＡＬＲ遺伝子においてエクソン９の突然変異を有するＭＦを有するかまたは有する疑いがある。
ＭＦと関連する他の遺伝子におけるさらなる突然変異が同定されている。ＭＦと関連する遺伝子の非限定的な例としては、例えばＪＡＫ２、ＭＰＬ、ＣＬＡＲ、ＬＮＫ、ＡＳＸＬ１、ＳＲＳＦ２、ＰＰＭ１Ｄ、ＩＤＨ１／２、ＴＥＴ２、ＥＺＨ２、Ｕ２ＡＦ１、ＮＦＥ２、ＳＨ２Ｂ３、ＳＦ３Ｂ１またはＣＢＬが挙げられる。一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載される１つまたはそれ以上の遺伝子において１つまたはそれ以上の突然変異を含むＭＦを有するかまたは有する疑いがある。
一部の実施形態では、対象は、エピジェネティック制御またはスプライシングに関与する遺伝子に１つまたはそれ以上の突然変異を有する。一部の実施形態では、エピジェネティック制御またはスプライシングに関与する遺伝子の１つまたはそれ以上の突然変異は、ＡＳＸＬ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＴＥＴ２、ＳＲＳＦ２、Ｕ２ＡＦ１、ＥＺＨ２またはＳＦ３Ｂ１である。一部の実施形態では、対象は、ＭＢＮ－ＢＰヘの進行のリスクと関連するＩＤＨ１／２に突然変異を有する。
一部の態様では、本開示は、対象において骨髄線維症を処置するための組成物（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）および方法に関する。一部の実施形態では、本開示に従って処置される対象は、適切な診断または予後予測方法に基づいて同定され得る。例えば、ダイナミック国際予後予測スコアリングシステム（Dynamic International Prognostic Scoring System）（ＤＩＰＳＳ）および年齢調整ＤＩＰＳＳは、年齢、ヘモグロビンレベル、白血球細胞数、末梢血芽球、および全身症状を含むいくつかの患者特異的な変数に基づく患者の転帰のモデルを提供する［例えば、参照によって本明細書に組み込まれるPassamonti, F., et al. Blood. 2010 Mar 4;115(9):1703-8参照］。ＤＩＰＳＳモデルは、ＤＩＰＳＳスコアを算出し、予後予測目的のリスクカテゴリーへと患者を割り当てることを可能にする。ＤＩＰＳＳスコアが０は「低リスク」患者を示し、ＤＩＰＳＳスコアが１～２は「中間－１リスク」患者を示し、ＤＩＰＳＳスコアが３～４は「中間－２リスク」患者を示し、ＤＩＰＳＳスコアが５～６は「高リスク」患者を示す。したがって、一部の実施形態では、本出願に従って処置を必要とする対象は、ＤＩＰＳＳスコアが少なくとも１であり得る。一部の実施形態では、対象はＤＩＰＳＳスコアが１～４（例えば１、２、３、または４）である。一部の実施形態では、ＤＩＰＳＳスコアが５または６（例えば５または６）である。
一部の実施形態では、本開示に従って処置される対象は、適切な診断または予後予測方法によって評価され得る。例えば、骨髄増殖性腫瘍症状評価フォーム総症状スコア（Myeloproliferative Neoplasm-Symptom Assessment Form Total Symptom Score）(ＭＰＮ－ＳＡＦ ＴＳＳ）は、ＭＰＮを有する患者間でほとんどの代表的なおよび臨床的に関連する症状を評価するために設計された１０項目の手段を提供する。ツールは、これらの疾患に関連する症状の発生率および重症度の患者の評価を記録する。それは経時的に症状を追跡するために使用され、その後の管理の決定を導くことができる［例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Emanuel RM, et al. Myeloproliferative neoplasm (MPN) symptom assessment form total symptom score: prospective international assessment of an abbreviated symptom burden scoring system among patients with MPNs, J Clin Oncol. 2012;30(33):4098-4103参照］。ＭＰＮ－ＳＡＦ ＴＳＳは、疲労、早期満腹感、無気力、集中力の欠如、腹部不快感、寝汗、骨痛、かゆみ、意図しない体重減少、および発熱などの症状を含む。各症状は、０（無い／できる限り良い）から１０（考えられる最悪／できる限り悪い）スケールの症状重症度によって評価される。ＭＰＮ－ＳＡＦ ＴＳＳは、０から１００の可能な範囲を有し、１００は最高レベルの症状の重症度を表す。一部の実施形態では、骨髄線維症症状評価フォーム（Myelofibrosis Symptom Assessment Form）（ＭＦＳＡＦ）はＭＰＮ－ＳＡＦ ＴＳＳ由来である。ＭＦＳＡＦは、１０％より多くのＭＦ患者によって報告された症状を測定する手段であり、生活の質（ＱｏＬ）の測定を含む。ＭＦＳＡＦは、疲労の総合評価、脾腫および関連する器質的な症状のアセスメント、ならびに寝汗、かゆみ（掻痒症）、骨痛、発熱、意図しない体重減少および全体的な生活の質などの他の症状の評価を含む［例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Mesa et al., The Myelofibrosis Symptom Assessment Form (MFSAF): An Evidence-based Brief Inventory to Measure Quality of Life and Symptomatic Response to Treatment in Myelofibrosis, Leuk Res. 2009 Sep; 33(9): 1199-1203参照］。ＭＦＳＡＦは、経時的に症状を追跡するためおよびその後の管理の決定をガイドするために使用され得る。一部の実施形態では、患者は、０～１００（例えば、０～１００の任意のスコア数）、１０～１００（例えば、１０～１００の任意のスコア数）、２０～１００（例えば、２０～１００の任意のスコア数）、３０～１００（例えば、３０～１００の任意のスコア数）、４０～１００（例えば、４０～１００の任意のスコア数）、５０～１００（例えば、５０～１００の任意のスコア数）、６０～１００（例えば、６０～１００の任意のスコア数）、７０～１００（例えば、７０～１００の任意のスコア数）、８０～１００（例えば、８０～１００の任意のスコア数）、または９０～１００（例えば、００～１００の任意のスコア数）のＭＰＮ－ＳＡＦ ＴＳＳを有する。
一部の態様では、ＭＦ（例えば、ＰＭＦまたはＳＭＦ）を有する対象は、貧血を発症する。ＭＦにおける貧血は、多因子性プロセスの結果である。
一部の実施形態では、ＭＦでの貧血は、治療関連であり得る。一部の実施形態では、ＭＦ患者は、以前にＪＡＫ阻害剤（例えばルキソリチニブまたはフェドラチニブ）によって処置されている。一部の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤（例えばルキソリチニブまたはフェドラチニブ）を受ける患者は、ＭＦ関連貧血を発症する頻度が高い。ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の阻害は、赤血球生成に必須であるエリスロポエチン媒介ＪＡＫ２シグナル伝達の阻害をもたらす。一部の実施形態では、初発貧血は、ＪＡＫ阻害剤（例えばルキソリチニブ）処置と関連する主な有害事象として同定されている［例えば、そのそれぞれの全内容が参照によって本明細書に組み込まれる、Verstovsek S, Kantarjian H, Mesa RA, et al. Safety and efficacy of INCB018424, a JAK1 and JAK2 inhibitor, in myelofibrosis. N Engl J Med. 2010;363(12):1117-1127；Verstovsek S, Mesa RA, Gotlib J, et al. A doubleblind, placebo-controlled trial of ruxolitinib for myelofibrosis. N Engl J Med. 2012;366(9):799-807；Parganas E, Wang D, Stravopodis D, et al. Jak2 is essential for signaling through a variety of cytokine receptors. Cell. 1998;93(3):385-395；Neubauer H, Cumano A, M¨ uller M, Wu H, Huffstadt U, Pfeffer K. Jak2 deficiency defines an essential developmental checkpoint in definitive hematopoiesis. Cell. 1998;93(3):397-409参照］。
一部の実施形態では、対象は、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）と関連する全身症状または微小血管症状を有するかまたは有するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、血栓塞栓性合併症または出血性合併症を有するかまたは有するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、ＭＰＮ急性転換期急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有するかまたは有するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、巨核球においてリボソーム病を示す。一部の実施形態では、対象は、特に巨核球においてＧＡＴＡ１発現の減少を示す。一部の実施形態では、対象は、巨核球の機能または成熟の欠損を示す。一部の実施形態では、対象は栄養性鉄欠乏症を有さない。一部の実施形態では、対象は、血小板減少症、貧血、および／または好中球減少症を示す。
一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、骨髄抑制および鉄代謝における欠損に起因する有効でない赤血球生成、脾腫に起因する赤血球細胞の破壊の増加、血漿容量の増加、骨髄における異常な炎症促進性環境、またはこれらの組合せにより引き起こされる。
一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、異常な鉄代謝と関連する。一部の実施形態では、ＭＦ患者における異常な鉄代謝は、機能性鉄欠乏症（ＦＩＤ）である。ＦＩＤは、有効な赤血球生成のために必要とされる鉄と容易に利用可能な血清鉄の間の不均衡によって特徴付けられる鉄制限赤血球生成の状態を表す。ＦＩＤでは、身体が十分なまたは増加した全身の鉄貯蔵を有する場合でさえも、鉄は隔離され、赤血球生成には利用できない。一部の実施形態では、ＦＩＤは、鉄貯蔵レベルと比較してヘプシジンの増加によって引き起こされる。一部の実施形態では、ヘプシジン発現の増加は、炎症促進性サイトカインの上方調節により引き起こされる。例えば、ＩＬ－６は、貧血性ＭＦ患者においてより高いことが報告された［Birgegard et al., Inflammatory Functional Iron Deficiency Common in Myelofibrosis, Contributes to Anaemia and Impairs Quality of Life. From the Nordic MPN Study Group, Eur J Haematol. 2019 Mar;102(3):235-240］。
一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、高い血清炎症促進性サイトカインレベルにより特徴付けられる。
骨髄線維症（例えば、ＰＭＦ）において、ヘプシジン合成を誘導する炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ－６およびオンコスタチン－Ｍが典型的には増加し、鉄隔離、マクロファージの鉄ローディングの他に、骨髄増殖およびマクロファージ活性化と関連する。これらの増加したヘプシジンレベルは、貧血に繋がり得る。
一部の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－６である。ＩＬ－６の正常な範囲（例えば、疾患を有しない対象において）は、１．８ｐｇ／ｍｌに等しいかまたはそれより低い。一部の実施形態では、対象は、正常より高い血清ＩＬ－６レベル、例えば、１．８ｐｇ／ｍｌより高い血清ＩＬ－６レベルを有する。
一部の実施形態では、本開示は、骨髄線維症を有する対象を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、炎症促進性サイトカインにより誘導されるヘプシジン合成からもたらされる貧血を有する。一部の実施形態では、ヘプシジン合成を増加させる炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－６である。一部の実施形態では、対象への抗ＨＪＶ抗体の投与は、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６）により誘導されるヘプシジン合成を減少させる。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与は、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６）により誘導されるヘプシジン合成の増加と関連するＦＩＤを寛解させる。
抗体（例えば抗ＨＪＶ抗体）の量が治療効果を達成したかどうかの決定は、本明細書に提供される教示に基づいて当業者に明らかである。有効量は、当業者によって認識されるように、処置される特定の状態、状態の重症度、年齢、健康状態、サイズ、性別および体重を含む個々の患者のパラメーター、処置の期間、併用療法の性質（もしあれば）、投与の特定の経路ならびに医療関係者の知識および専門知識内の因子によって変わる。これらの因子は、当業者に周知であり、単に日常の実験によって対処され得る。本明細書に記載される方法で使用される特定の投与レジメン、すなわち用量、タイミングおよび頻度は、本明細書に記載されるように、特定の対象およびその対象の病歴によるであろう。
経験的考察、例えば最大効果までの時間、半減期、および／または特定の濃度を超える時間は、通常投与量の決定に寄与するであろう。例えば、ヒト免疫系と適合性の抗体、例えばヒト化抗体または完全ヒト抗体は、抗体の半減期を長期化させるためおよび抗体が宿主免疫系により攻撃されることを予防するために使用されてもよい。用量調整のための他の理由は、性別、年齢、個々の応答、抗体標的における多型および／または抗体クリアランスに関与する受容体により駆動される薬物動態または薬力学的応答における差異を含む。投与の頻度は、療法の過程にかけて決定および調整されてもよく、必ずしもそうではないが、一般に、標的疾患／障害の処置および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づく。代替的に、抗体の持続連続放出製剤が適切なことがある。持続放出を達成するための様々な製剤およびデバイスは、当技術分野において公知である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体の投与量は、抗体の１回またはそれ以上の投与を与えられた個体において経験的に決定され得る。個体は、漸増投与量のアンタゴニストが与えられる。アンタゴニストの有効性を評価するため、疾患／障害の指標がフォローされ得る。
投与頻度は、特許請求される方法に従って変わり得る。一部の実施形態では、組成物は、１回投与されてもよい。一部の実施形態では、組成物は、複数の機会に投与される。一部の実施形態では、投与頻度は、毎週、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、もしくは１０週間ごと；または毎月１回、２ヶ月ごと、もしくは３ヶ月ごと、またはそれ以上である。一部の実施形態では、組成物は、毎日、週２回、週１回、月２回、月１回、または好適な（例えば最大の）有効性を提供するが対象への安全性のリスクを最小にする任意の時間間隔で投与されるであろう。一般に、有効性および処置および安全性のリスクが処置の過程にわたりモニターされ得る。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与は、循環ヘプシジン－２５濃度における減少をもたらしおよび／または血清ＴＳＡＴ％を増加させ（例えば、図７Ｄ～７Ｅを参照）、一部の実施形態では、これらの効果は、時間的期間（例えば、１ヶ月またはより長く）にわたり持続する。よって、一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与のタイミングおよび頻度は、１つまたはそれ以上のバイオマーカー、例えば、鉄利用能を評価するためまたは起こり得る鉄過負荷を判定するための基準をモニターすることにより決定され得る。例えば、一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、間欠的にまたは特定のバイオマーカーのレベル、例えば循環ヘプシジン－２５レベル、循環トランスフェリンレベル、もしくはトランスフェリン飽和パーセンテージ（ＴＳＡＴ％）に従って投与される。一部の実施形態では、バイオマーカーレベルは、対象が処置の候補であるかどうか決定するために使用され得る。しかしながら、一部の実施形態では、バイオマーカーは、処置を継続するべきかどうか、または処置を再開するべきかどうか、または処置を停止するべきかどうか、例えば、抗ＨＪＶ抗体を用いる処置を停止するべきかどうかを決定するために使用されてもよい。
例えば、一部の実施形態では、対象のＴＳＡＴ％が７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、または９５％以上である場合、対象は処置の候補ではないと考えられ得る。一部の場合では、対象のＴＳＡＴ％が７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、または９５％以上である場合、抗ＨＪＶ抗体による進行中の処置は、例えば鉄過剰症を防止するため、停止されるかまたは一時的に停止され得る。他の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与は、対象のＴＳＡＴ％が９５％以下、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、または３０％以下である場合、実施され得る。したがって、一部の実施形態では、対象のＴＳＡＴ％が、例えば継続的または定期的にモニターされ得るが、患者は、例えば貧血のための処置を受けるかまたは処置する医師にかかり、鉄過剰症を防ぐか、あるいはさらなる処置が適切であるか評価する。しかしながら、当然のことながら、他の好適なマーカー（例えばフェリチンレベル、血清鉄レベル、クレアチニンレベル等を含む）が、本明細書に提供される方法に従って、投与量および投与頻度を決定するためにモニターされ得る。
一部の実施形態では、対象は、一定期間、１またはそれ以上の間隔で、本明細書に提供される組成物（例えば抗ＨＪＶ抗体）を投与され得る。一部の場合では、１またはそれ以上の間隔で、対象が組成物を投与される期間は、対象が組成物を投与されない期間によって分けられ得る。一部の実施形態では、それぞれの期間の相対的な継続期間は、処置または疾患の重症度または両方への対象の応答に依存し、および／または処置する医師の判断に基づいて決定され得る。例えば、一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、２ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は１０ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、３ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は９ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、４ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は８ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、５ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は７ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、６ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は６ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、７ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は５ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、８ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は４ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、９ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は３ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、１０ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、次いで投与は２ヶ月間停止される。一部の実施形態では、１年を通してみると、対象は、２ヶ月間毎週、隔週または毎月組成物を投与され得、２ヶ月間投与されず；または３ヶ月間投与され、３ヶ月間投与されず；または４ヶ月間投与され、４ヶ月間投与されない。
一般に、本明細書に記載される抗体のいずれかの投与のために、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投薬量は、最大０．０１ｍｇ／ｋｇ、最大０．０５ｍｇ／ｋｇ、最大０．１ｍｇ／ｋｇ、最大０．２ｍｇ／ｋｇ、最大０．３ｍｇ／ｋｇ、最大０．４ｍｇ／ｋｇ、最大０．５ｍｇ／ｋｇ、最大０．６ｍｇ／ｋｇ、最大１ｍｇ／ｋｇ、ｍｇ／ｋｇ、最大２ｍｇ／ｋｇ、最大３ｍｇ／ｋｇ、最大４ｍｇ／ｋｇ、最大５ｇ／ｋｇ、最大６ｍｇ／ｋｇ、最大７ｍｇ／ｋｇ、最大８ｍｇ／ｋｇ、最大９ｍｇ／ｋｇ、最大１０ｍｇ／ｋｇ、最大２０ｍｇ／ｋｇ、最大３０ｍｇ／ｋｇ、最大４０ｍｇ／ｋｇ、最大５０ｍｇ／ｋｇ、最大６０ｍｇ／ｋｇ、最大７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、最大９０ｍｇ／ｋｇ、最大１００ｍｇ／ｋｇまたはより多い。
しかしながら、一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ～４０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ～６０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ～７５ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、処置を必要とする対象に、標的抗原の活性をインビボで少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはより大きく）阻害するために十分な量（例えば、ＨＪＶ誘導ＢＭＰシグナル伝達を阻害するために十分な量）で投与される。他の実施形態では、抗体は、標的抗原の活性レベルを少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはより大きく）減少させるために有効な量で投与される。
一部の実施形態では、抗体は、非経口的に投与され得る。例えば、非経口投与される組成物は、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、腫瘍内、筋肉内、関節内、動脈内、または点滴技術によって投与され得る。さらに、それは、１、３、または６ヶ月の蓄積注射可能または生分解性の物質および方法を使用するなど、投与の注射可能な蓄積経路を介して対象に投与され得る。
一部の実施形態では、抗体（例えば、抗ＨＪＶ抗体）は、静脈内に投与される。一部の実施形態では、抗体（例えば、抗ＨＪＶ抗体）は、皮下に投与される。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与は、同じ用量での同じ抗体の静脈内投与と比較して類似したバイオアベイラビリティをもたらす。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与は、同じ抗体の静脈内投与と比較して抗ＨＪＶ抗体のより低い最大濃度（Ｃｍａｘ）において同等の薬力学効果（例えば、循環ヘプシジン－２５レベルの減少、ＴＳＡＴ％の増加、および／または血清鉄レベルの増加）をもたらす。Ｃｍａｘは、薬物が投与された後および第２の用量の投与の前の薬物（例えば、抗ＨＪＶ抗体）の最大（またはピーク）血清濃度である。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の投与後の短い時間的期間内（例えば、１２時間以内、２４時間以内など）の低いＣｍａｘの達成は、血清鉄応答における望ましくない増加を最小化し、および／または抗体のオフターゲット効果（例えば、ＲＧＭａへの結合）の可能性を最小化する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与による鈍化性Ｃｍａｘは、血清鉄応答における望ましくなく鋭い増加を回避する。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体の皮下投与による鈍化性Ｃｍａｘは抗体のオフターゲット効果を減少させる。一部の実施形態では、皮下投与により達成されるＣｍａｘは、抗ＨＪＶ抗体の静脈内投与により達成されるＣｍａｘより少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低い。
静脈内注射のために、水溶性の抗体は、点滴法により投与可能であり、抗体および生理学的に許容される賦形剤を含有する薬学的製剤が注入される。生理学的に許容される賦形剤は、例えば、５％のデキストロース、０．９％の食塩水、リンゲル溶液または他の好適な賦形剤を含んでもよい。他の注射可能な組成物は、様々な担体、例えば植物油、ジメチルアセトアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｔａｍｉｄｅ）、ジメチルフルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、ならびにポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）を含有してもよい。一部の場合には、好適な可溶性塩形態の抗体の調製物、例えば、無菌製剤は、薬学的賦形剤、例えば注射用水、０．９％食塩水、または５％グルコース溶液中に溶解して投与することができる。
１つの実施形態では、抗体は、部位特異的または標的化局所デリバリー技術を介して投与される。部位特異的または標的化局所デリバリー技術の例は、抗体の様々なインプラント挿入可能なデポー供給源または局所デリバリーカテーテル、例えば注入カテーテル、留置カテーテル、もしくは針カテーテル、合成グラフト、外膜ラップ、シャントおよびステントまたは他のインプラント挿入可能なデバイス、部位特異的キャリア、直接的な注射、または直接的な適用を含む。例えば、ＰＣＴ国際公開第００／５３２１１号および米国特許第５，９８１，５６８号を参照。
一部の実施形態では、１つより多くの抗体、または抗体および別の好適な治療剤の組合せが、処置を必要とする対象に投与されてもよい。抗体はまた、薬剤の有効性を増強しおよび／または補完するために役立つ他の薬剤と組み合わせて使用され得る。標的疾患／障害に対する処置有効性は、当技術分野において周知の方法により評価され得る。
本開示に記載されている抗ＨＪＶ抗体およびそれを伴う処置方法は、本明細書に開示される標的疾患または障害に対する他の種類の療法と組み合わせて利用されてもよい。この文脈において、抗体組成物および治療剤は、同時または逐次的のいずれかで与えられてもよい。例は、化学療法、免疫療法（例えば他のヘプシジンアンタゴニストを伴う療法）、手術、放射線、遺伝子療法など、または抗感染症療法を含む。そのような療法は、本開示による処置と同時にまたは逐次的（任意の順序で）に投与され得る。
例えば、併用療法は、少なくとも１つの追加の治療剤と共に製剤化されたおよび／または併用投与される、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体および医薬組成物を含むことができる。そのような併用療法は、有利には、投与される治療剤のより低い投薬量を利用してもよく、そのため様々な単剤療法と関連する起こり得る毒性または合併症を予防し得る。さらに、本明細書に開示される追加の治療剤は、ヘプシジン／ＢＭＰ経路に加えたまたはそれとは別個の経路において作用してもよく、そのため抗ＨＪＶ抗体の効果を増強しおよび／またはそれと協同し得る。
一部の態様では、本開示は、骨髄線維症関連貧血を処置するための組成物（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）ならびに方法に関する。骨髄線維症関連貧血は、適切な診断閾値パラメーターに従って軽度から中程度の貧血または重度の貧血として特徴付けられ得る。例えば、一部の実施形態では、骨髄線維症関連貧血は、ヘモグロビン（Ｈｇｂ）のレベルに基づいて特徴付けられ、貧血の重症度は、Ｈｇｂのレベルの減少に伴い増加する。一部の実施形態では、軽度から中程度の貧血は、少なくとも８ｇ／ｄＬおよび正常の下限値以下のＨｇｂレベルと関連する（例えば、約８ｇ／ｄＬと約１４ｇ／ｄＬの間、約８ｇ／ｄＬと約１２ｇ／ｄＬの間、約８ｇ／ｄＬと約１０ｇ／ｄＬの間、約１０ｇ／ｄＬと約１４ｇ／ｄＬの間、または約１０ｇ／ｄＬと約１２ｇ／ｄＬの間）。一部の実施形態では、重度の貧血は、約８ｇ／ｄＬまたはそれ以下のＨｇｂレベルと関連する（例えば、約２ｇ／ｄＬと約８ｇ／ｄＬの間、約４ｇ／ｄＬと約８ｇ／ｄＬの間、または約６ｇ／ｄＬと約８ｇ／ｄＬの間）。一部の実施形態では、重度の貧血は、赤血球輸血依存性と関連する。一部の実施形態では、重度の貧血は、治療介入（例えば輸血依存性状態の治療回復）から生じる赤血球輸血非依存性と関連し、対象は、輸血非依存性を維持する進行中の治療処置に依存する。
一部の態様では、本開示は、低い全身鉄レベルにより特徴付けられる血液障害を有することが既知であるか、または有することが疑われる対象を処置するための組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、骨髄線維症および／または本明細書に他に記載される骨髄線維症の結果として生じる１つまたはそれ以上の状態を有する。一部の実施形態では、対象は、赤血球輸血依存性である。一部の実施形態では、対象は、赤血球輸血非依存性である。
したがって、一部の実施形態では、本開示に従って処置を必要とする対象は、血液障害のための治療介入を以前に受けている。一部の実施形態では、対象は、１つまたはそれ以上の血液障害を処置するための外科的処置を以前に受けている。一部の実施形態では、対象は、脾臓摘出を以前に受けている。一部の実施形態では、対象は、１つまたはそれ以上の血液障害を処置する治療剤を以前に受けている。
一部の実施形態では、対象は、エリスロポエチン刺激剤を以前に与えられている。一部の実施形態では、エリスロポエチン刺激剤は、ダナゾール、プレドニゾン、サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドからなる群から選択される。
一部の実施形態では、対象は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤を以前に与えられている。一部の実施形態では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤またはＳＴＡＴ阻害剤である。一部の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、サブタイプＪＡＫ１およびＪＡＫ２の１つまたは両方に選択的である（例えばＪＡＫ１／２阻害剤）。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ阻害剤は、ＳＴＡＴ３阻害剤である。一部の実施形態では、ＪＡＫ１／２またはＳＴＡＴ３阻害剤は、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択される。
一部の実施形態では、対象は、増殖因子リガンドトラップを以前に受けている。一部の実施形態では、増殖因子リガンドトラップは形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）リガンドトラップである。一部の実施形態では、ＴＧＦ－βリガンドトラップはソタテルセプトまたはラスパテルセプトである。一部の実施形態では、対象は、抗線維化剤を以前に受けている。一部の実施形態では、抗線維化剤はＰＲＭ－１５１である。
一部の実施形態では、本開示による処置を必要とする対象は、血液障害に対する治療的処置を受けることを継続する。本開示は、したがって、一部の態様では、それを必要とする対象に血液障害に対する１つまたはそれ以上の治療的処置と組み合わせてヘプシジンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）を投与することにより骨髄線維症および／または骨髄線維症の結果として生じる１つもしくはそれ以上の状態を処置するための組成物および方法を提供する。
一部の実施形態では、対象は、エリスロポエチン刺激剤と組み合わせてヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）を投与される。一部の実施形態では、エリスロポエチン刺激剤は、ダナゾール、プレドニゾン、サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドからなる群から選択される。
一部の実施形態では、対象は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤と組み合わせてヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）を投与される。一部の実施形態では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤またはＳＴＡＴ阻害剤である。一部の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、サブタイプＪＡＫ１およびＪＡＫ２の１つまたは両方に選択的である（例えばＪＡＫ１／２阻害剤）。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ阻害剤は、ＳＴＡＴ３阻害剤である。一部の実施形態では、ＪＡＫ１／２またはＳＴＡＴ３阻害剤は、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択される。一部の実施形態では、対象は、ルキソリチニブと組み合わせてヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）を投与される。
一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）は、対象がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤に対して貧血性応答を呈する程度を減少させる。例えば、一部の実施形態では、単剤療法としてＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤によって処置された対象は、対象の処置前の状態と比較して酸素を輸送する血液の能力の欠乏、対象の処置前の状態と比較して赤血球の欠乏、対象の処置前の状態と比較してヘモグロビンの欠乏、および／または対象の処置前の状態と比較して総血液量の欠乏を有することを特徴とされ得る。よって、一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）は、対象が、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択されるＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路阻害剤に対して貧血性応答を呈する程度を減少させる。一部の実施形態では、ヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）は、対象がルキソリチニブ投与に対して貧血性応答を呈する程度を減少させる。
一部の実施形態では、対象は、増殖因子リガンドトラップと組み合わせてヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）を投与される。一部の実施形態では、増殖因子リガンドトラップは、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）リガンドトラップである。一部の実施形態では、ＴＧＦ－βリガンドトラップは、ソタテルセプトまたはラスパテルセプトである。一部の実施形態では、対象は、抗線維化剤と組み合わせてヘモジュベリンアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）を投与される。一部の実施形態では、抗線維化剤は、ＰＲＭ－１５１である。
本開示による対象の処置の成功は、当技術分野において公知の方法によりまたは当業者により決定されてもよい。一部の実施形態では、ＨＪＶアンタゴニスト（例えば、抗ＨＪＶ抗体およびその組成物）処置は、対象におけるヘプシジンレベル（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）に基づいて評価される。例えば、一部の実施形態では、対象におけるベースラインヘプシジンレベル（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）が決定され（例えば、抗ＨＪＶ抗体を用いた処置の前にまたは他に決定の時点において抗ＨＪＶ抗体処置の非存在下で）、対象における処置前のヘプシジンレベル（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）と比較される。一部の実施形態では、対象は、成功裏に処置され、抗ＨＪＶ抗体は、対象におけるヘプシジンレベル（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）を約１ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ減少させる。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、対象におけるヘプシジンレベル（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）を約１ｎｇ／ｍＬ～約２００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１００ｎｇ／ｍＬ、または約１０ｎｇ／ｍＬ～約５０ｎｇ／ｍＬ減少させる。一部の実施形態では、本開示は、骨髄線維症を有する対象においてヘプシジン（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）を減少させる方法を提供する。一部の実施形態では、投与は、投与の４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、または２週間以内にヘプシジン－２５を減少させる。一部の実施形態では、投与は、ヘプシジン（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）を、投与前の対象におけるヘプシジン（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）レベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％のヘプシジン（例えば、循環ヘプシジン－２５レベル）だけ減少させる。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体処置は、対象における血清フェリチンレベルに基づいて評価される。例えば、一部の実施形態では、対象におけるベースライン血清フェリチンレベルが決定され（例えば、抗ＨＪＶ抗体を用いた処置の前にまたは他に決定の時点において抗ＨＪＶ抗体処置の非存在下で）、対象における処置後の血清フェリチンレベルと比較される。一部の実施形態では、対象は、成功裏に処置され、抗ＨＪＶ抗体は、対象における血清フェリチンレベルを約１ｎｇ／ｍＬ～約２００ｎｇ／ｍＬ減少させる。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、対象における血清フェリチンレベルを約１ｎｇ／ｍＬ～約１００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１００ｎｇ／ｍＬ、または約１０ｎｇ／ｍＬ～約５０ｎｇ／ｍＬ減少させる。
一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体処置は、対象における血清ヘモグロビンレベルに基づいて評価される。例えば、一部の実施形態では、対象におけるベースライン血清ヘモグロビンレベルが決定され（例えば、抗ＨＪＶ抗体を用いた処置の前にまたは他に決定の時点において抗ＨＪＶ抗体処置の非存在下で）、対象における処置後の血清ヘモグロビンレベルと比較される。一部の実施形態では、対象は、成功裏に処置され、抗ＨＪＶ抗体は、対象における血清ヘモグロビンレベルを約０．０１ｇ／ｄＬ～約５ｇ／ｄＬ減少させる。一部の実施形態では、抗ＨＪＶ抗体は、対象における血清フェリチンレベルを約０．０１ｇ／ｄＬ～約１ｇ／ｄＬ、約０．１ｇ／ｄＬ～約５ｇ／ｄＬ、約１ｇ／ｄＬ～約５ｇ／ｄＬ、約０．０１ｇ／ｄＬ～約０．１ｇ／ｄＬ、約０．５ｇ／ｄＬ～約２．５ｇ／ｄＬ、または約０．１ｇ／ｄＬ～約１ｇ／ｄＬ減少させる。
一部の態様では、他のヘプシジンアンタゴニストは、ヘプシジン阻害剤であり得る。一部の実施形態では、ヘプシジン阻害剤は、ヘプシジンに特異的に結合する分子である（例えば抗体、アンチカリン、またはアプタマー）。ヘプシジンに特異的に結合する分子の例としては、限定はされないが、ＰＲＳ－０８０、ＬＹ２７８７１０６、ＮＯＸ－Ｈ９４（Ｌｅｘａｐｔｅｐｉｄ Ｐｅｇｏｌ）、１２Ｂ９ｍ、ＬＳ－Ｂ４５３４、リポカリン突然変異タンパク質、およびｈＮＧＡＬ突然変異タンパク質が挙げられる（参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第８６２９２５０号；同第９３１５５７７号；同第９０５１３８２号；同第９６５７０９８号；同第９６１０３５６号；同第８５３０６１９号；および米国特許出願公開第２０１５／０２９１６７５号、同第２０１８／００５７８１２号、および同第２０１７／０２４７４４８号も参照）。
一部の実施形態では、他のヘプシジンアンタゴニストは、フェロポーチンに特異的に結合する分子（例えば、抗体、アンチカリン、またはアプタマー）であり得る。一部の実施形態では、フェロポーチンに特異的に結合する分子はＬＹ２９２８０５７である。フェロポーチン活性に影響せずにヘプシジン結合を阻害する、フェロポーチンに結合する分子が記載されている（参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第８，１８３，３４６号も参照）。ヘプシジン阻害剤は、ヘプシジンまたはフェロポーチンを修飾してヘプシジン－フェロポーチン結合相互作用を阻害する化学修飾剤化合物である。例えば、一部の実施形態では、ヘプシジン阻害剤はフルスルチアミンである［例えばFung and Nemeth. Haematologica. 2013 Nov; 98(11):1667-76参照］。
さらに他の態様では、本開示の他のヘプシジンアンタゴニストは、ＨＡＭＰまたはその転写もしくは翻訳産物に結合するＨＡＭＰアンタゴニストであり得る。そのようなＨＡＭＰアンタゴニストの例は、ＨＡＭＰ転写または翻訳産物に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子阻害剤化合物、および抗体、アンチカリン、またはアプタマーを含むがこれらに限定されない。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であってもよい。非限定的な例のセットとして、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｄｉｃｅｒ基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、短鎖ｓｉＲＮＡ、または一本鎖ｓｉＲＮＡであってもよいがこれらに限定されない。一部の実施形態では、二本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドはＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。ＨＡＭＰアンチセンスオリゴヌクレオチドの特有の例は、ｓｉＨｅｐｃｉｄｉｎおよびＸＥＮ７０１を含むがこれらに限定されない（参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７２号および米国特許出願公開第２０１２／０１１５９３０号も参照）。
一部の実施形態では、ＨＡＭＰアンタゴニストは、ＢＭＰ－ＳＭＡＤおよび／またはＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関与する分子に結合するか、または他に下方調節する。一部の実施形態では、ＨＡＭＰアンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子化合物、抗体、アンチカリン、またはアプタマーである。本開示のＨＡＭＰアンタゴニストにより標的化される分子の例は、ＨＦＥ、ＢＭＰ６、ＢＭＰ受容体、トランスフェリン、トランスフェリン受容体、ＳＭＡＤ１／５／８およびＳＭＡＤ４、ＩＬ－６、ＩＬ－６受容体、ＪＡＫ１／２、ならびにＳＴＡＴ３を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、本開示のヘプシジンアンタゴニストは、これらの分子の任意の１つまたはそれ以上のアンタゴニスト（例えば、阻害剤）である。
一部の実施形態では、本開示の他のヘプシジンアンタゴニストは、ＢＭＰ６および／またはＢＭＰ受容体に結合してＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路の活性化を阻害することによりヘプシジン機能を減少させるＢＭＰ６アンタゴニストであり得る。一部の実施形態では、ＢＭＰ６アンタゴニストは、ＡＬＫ２阻害剤、例えば、ＬＤＮ－２１２８５４、ＬＤＮ－１９３１８９、ＬＤＮ－２１４１１７、ＢＬＵ－７８２、ならびにHudson, L. et al., Novel Quinazolinone Inhibitors of ALK2 Flip between Alternate Binding Modes: Structure-Activity Relationship, Structural Characterization, Kinase Profiling, and Cellular Proof of Concept. Med. Chem.2018, 61, 16, 7261-7272およびCarvalho D, et al., ALK2 inhibitors display beneficial effects in preclinical models of ACVR1 mutant diffuse intrinsic pontine glioma. Communications Biologyvolume 2, Article number: 156 (2019)（これらの各々の関連する内容は参照によって本明細書に組み込まれる）において開示されているその他である。一部の実施形態では、ＢＭＰ６アンタゴニストは、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５３４，７６４号；米国特許出願公開第２０１２／０６４０７６号；ならびに国際公開第２００８／１２４７６８号および国際公開第２０１２／１５０９７３号に記載されている、その断片および／または融合分子（例えば、ＨＪＶ－Ｆｃ）を含む、可溶性ＨＪＶポリペプチドである。ＢＭＰ６アンタゴニストの追加の例は、ＴＰ－０１８４、ＦＫＢＰ１２、ツイスト原腸形成タンパク質、ドルソモルフィン、ノギン、コーディン、ベントロプチン、フォリスタチン、フォリスタチン関連遺伝子（ＦＬＲＧ）、ヘパリン、硫酸化グリコサミノグリカン、およびスクレロスチンドメイン含有１タンパク質（ＳＯＳＴＤＣ１）を含むがこれらに限定されない。本明細書に提供されるある特定の方法において有用であり得るＢＭＰ６アンタゴニストの追加の例は、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第８，３１８，１６７号；同第９，５５６，２５１号；同第９，８６２，７６４号；同第１０，２０２，３５６号；同第９，６８２，９８３号；同第８，５０７，５０１号；同第９，７３８，６３６号；および同第８，７９５，６６５号；米国特許出願公開第２０１０／００９３７６０号；米国特許出願公開第２０１４／０１９９３１４号；米国特許出願公開第２０１４／００８６９１９号；米国特許出願公開第２０１６／０２６３１１７号；米国特許出願公開第２０１６／０１１５１６７号；米国特許出願公開第２０１７／０１９７９６８号；米国特許出願公開第２０１７／０１９０７０５号；米国特許出願公開第２０１７／０３０５８８３号；米国特許出願公開第２０１８／００２１３４０号；および米国特許出願公開第２０１８／０１１８８３５号；ならびにＰＣＴ国際公開第２０１７／２１６７２４号；国際公開第２０１８／１３６６３４号；国際公開第２０１８／０５３２３４号；国際公開第２０１８／１８５３４１号；国際公開第２０１６／１４６６５１号；および国際公開第２０１８／２００８５５号に提供される。
ＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路を介する効率的な鉄シグナル伝達は、補助因子、例えばヘプシジン発現を刺激するための二鉄（Ｔｆ）センサートランスフェリン受容体２（ＴｆＲ）を伴う（図１２）。一部の実施形態では、本開示のヘプシジンアンタゴニストはトランスフェリンアンタゴニストであり、トランスフェリンおよび／またはトランスフェリン受容体２に結合することによりヘプシジン機能をアンタゴナイズし、ＢＭＰ－ＳＭＡＤシグナル伝達経路の活性化を阻害する。一部の実施形態では、トランスフェリンアンタゴニストは、ｓｉＴｆＲ２などのＴｆおよび／またはＴｆＲを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチドである（例えば、参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第９２２８１８８号を参照）。
上記に詳述されるように、ＳＴＡＴ３は、ＨＡＭＰ発現の転写調節因子である。よって、一部の実施形態では、ＨＡＭＰアンタゴニストは、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路阻害剤である。一部の実施形態では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤またはＳＴＡＴ阻害剤である。一部の実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、サブタイプＪＡＫ１およびＪＡＫ２の１つまたは両方に選択的である（例えば、ＪＡＫ１／２阻害剤）。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ阻害剤は、ＳＴＡＴ３阻害剤である。ＪＡＫ１／２およびＳＴＡＴ３阻害剤の例は、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫを含むがこれらに限定されない。
ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路は、炎症性サイトカインＩＬ－６により活性化される。ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）へのＩＬ－６の結合は、肝細胞上の受容体二量体化のトリガーとなり、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路の活性化に繋がる（図１２）。したがって、一部の実施形態では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路阻害剤はＩＬ－６アンタゴニストであり、ＩＬ－６および／またはＩＬ－６受容体に結合し、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路の活性化を阻害することによりヘプシジン機能をアンタゴナイズする。一部の実施形態では、ＩＬ－６アンタゴニストは、インフリキシマブ、クルクミン、３，３’－ジインドリル－メタン、トシリズマブ、およびシルツキシマブからなる群から選択される。本明細書に提供されるある特定の方法において有用であり得るＩＬ－６およびＩＬ－６Ｒ阻害剤の追加の例は、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１７／００２９４９９号に提供される。
本明細書に開示される任意の抗ＨＪＶ抗体はまた、インビトロまたはインビボでＨＪＶ（例えば、可溶性ＨＪＶ）の存在を検出するために使用され得る。そのような検出方法から得られる結果は、診断目的（例えば、ＨＪＶと関連する疾患の診断）のためまたは科学研究目的（例えば、新たなＨＪＶ分泌細胞タイプの同定、分泌されたＨＪＶの生物活性および／もしくは調節の研究）のために使用され得る。診断用途などのアッセイ用途のために、本明細書に記載されている抗ＨＪＶ抗体は、インビボまたはインビトロのいずれかで、ＨＪＶ（例えば、可溶性ＨＪＶ）の存在を検出するための検出可能な標識（例えば、イメージング剤、例えば造影剤）とコンジュゲートされてもよい。本明細書で使用される場合、「コンジュゲートされる」または「取り付けられる」は、好ましくは２つの実体の間の会合の治療的／診断的利益が実現される十分な親和性と共に、２つの実体が会合していることを意味する。２つの実体の間の会合は、直接的なものまたはリンカー、例えばポリマーリンカーを介するもののいずれかであり得る。
コンジュゲートされるまたは取り付けられるは、共有結合または非共有結合の他に、他の形態の会合、例えば捕捉、例えば、１つの実体の、他の実体上もしくは内の捕捉、またはいずれかもしくは両方の実体の、第３の実体、例えばミセル上もしくは内の捕捉を含むことができる。
他の実施形態では、本明細書に記載されている抗ＨＪＶ抗体は、検出可能な標識に取り付けることができ、該標識は、直接的または間接的のいずれかで、検出可能なシグナルを放出する能力を有する化合物であり、その結果、アプタマーは、インビトロまたはインビボで、検出、測定、および／または定性評価され得る。そのような「検出可能な標識」の例は、蛍光標識、化学発光標識、比色標識、酵素マーカー、放射活性同位体、およびアフィニティータグ、例えばビオチンを含むことが意図されるがこれらに限定されない。そのような標識は、従来の方法により、直接的または間接的に、アプタマーにコンジュゲートされ得る。
一部の実施形態では、検出可能な標識は、インビトロでＨＪＶ発現細胞を検出するために好適な薬剤であり、放射性分子、放射性医薬品、または酸化鉄粒子であり得る。インビボイメージングのために好適な放射性分子は、１２２Ｉ、１２３Ｉ，１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、２１１Ａｔ、２２５Ａｃ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、６７Ｃｕ、２１３Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、および６７Ｇａを含むがこれらに限定されない。インビボイメージングのために好適な例示的な放射性医薬品は、１１１Ｉｎオキシキノリン、１３１Ｉヨウ化ナトリウム、９９ｍＴｃメブロフェニン、および９９ｍＴｃ赤血球細胞、１２３Ｉヨウ化ナトリウム、９９ｍＴｃエキサメタジム、９９ｍＴｃ大凝集アルブミン、９９ｍＴｃメドロネート、９９ｍＴｃメルチアチド、９９ｍＴｃオキシドロネート、９９ｍＴｃペンテテート、９９ｍＴｃパーテクネテート、９９ｍＴｃセスタミビ、９９ｍＴｃ硫黄コロイド、９９ｍＴｃテトロフォスミン、タリウム－２０１、またはキセノン－１３３を含む。
レポート剤はまた、色素、例えば、フルオロフォアであり得、これは、組織試料におけるＨＪＶ発現細胞により媒介される疾患の検出において有用である。
インビトロで診断アッセイを行うために、抗ＨＪＶ抗体は、ＨＪＶを含有することが疑われる試料、例えば、疾患微環境中のＨＪＶ発現細胞または可溶性ＨＪＶと接触させることができる。抗体および試料は、ＨＪＶ抗原への抗体の結合を可能とするために好適な条件下で好適な期間にわたりインキュベートされてもよい。そのような相互作用は次に、日常的な方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、組織学的染色またはＦＡＣＳを介して検出され得る。
インビボで診断アッセイを行うために、標識（例えば、イメージング剤または造影剤）とコンジュゲートされた好適な量の抗ＨＪＶ抗体が、検査を必要とする対象に投与され得る。標識された抗体の存在は、日常的な方法により標識から放出されたシグナルに基づいて検出され得る。
科学研究アッセイを行うために、抗ＨＪＶ抗体は、ＨＪＶの生物活性を研究するため、細胞内のＨＪＶの存在を検出するため、およびまたはＨＪＶの効果を調節するために使用され得る。例えば、好適な量の抗ＨＪＶは、ＨＪＶを産生することが疑われる試料（例えば、ＨＪＶ産生細胞として以前に同定されていない新たな細胞タイプ）と接触させることができる。細胞は、抗ＨＪＶ抗体を接触させる前に透過処理される。抗体および試料は、ＨＪＶ抗原への抗体の結合を可能とするために好適な条件下で好適な期間にわたりインキュベートされてもよい。そのような相互作用は次に、日常的な方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、組織学的染色またはＦＡＣＳを介して検出され得る。
ＶＩ．治療的および診断的応用のためのキット
本開示はまた、本明細書に開示されている治療的または診断的応用のためのキットを提供する。そのようなキットは、抗ＨＪＶ抗体、例えば、本明細書に記載されるもののいずれかを含む１つまたはそれ以上の容器を含むことができる。
一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法のいずれかによる使用のための指示書を含むことができる。含まれる指示書は、本明細書に記載されている標的疾患を処置し、発病を遅延させ、または軽減するための抗ＨＪＶ抗体の投与の説明を含むことができる。キットは、個体が標的疾患を有するかどうかの同定に基づいて処置のために好適な個体を選択する説明をさらに含んでもよい。さらに他の実施形態において、指示書は、標的疾患のリスクがある個体に抗体を投与する説明を含む。
抗ＨＪＶ抗体の使用に関する指示書は、一般に、意図される処置のための投薬量、投薬スケジュール、および投与の経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）または部分単位用量であってもよい。本発明のキット中に供給される指示書は、典型的には、標識またはパッケージ挿入物（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面での指示書であるが、機械読取り可能な指示書（例えば、磁気的または光学的ストレージディスク上の指示書）もまた許容される。
標識またはパッケージ挿入物は、組成物は、疾患または障害を処置し、発病を遅延させおよび／または軽減するために使用されることを指し示す。指示書は、本明細書に記載される方法のいずれかを実施するために提供されてもよい。
本発明のキットは、好適なパッケージング中にある。好適なパッケージングは、バイアル、ボトル、ジャー、および柔軟性パッケージング（例えば、密閉されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などを含むがこれらに限定されない。
特有のデバイス、例えば注入デバイス、例えばミニポンプと組み合わせた使用のためのパッケージもまた想定される。キットは、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。容器はまた、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載されている抗ＨＪＶ抗体である。
キットは、追加の構成要素、例えば緩衝剤および判断情報を提供してもよい。通常、キットは、容器および容器上のまたは容器に付随する標識またはパッケージ挿入物を含む。一部の実施形態では、本発明は、上記されるキットの内容物を含む製品を提供する。
試料中のヘモジュベリンの検出における使用のためのキットもまた本明細書に提供される。そのようなキットは、本明細書に記載される抗ＨＪＶ抗体のいずれかを含んでもよい。一部の事例では、抗ＨＪＶ抗体は、本明細書に記載されている検出可能な標識とコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、「コンジュゲートされる」または「取り付けられる」は、好ましくは２つの実体の間の会合の治療的／診断的利益が実現される十分な親和性と共に、２つの実体が会合していることを意味する。２つの実体の間の会合は、直接的なものまたはリンカー、例えばポリマーリンカーを介するもののいずれかであり得る。コンジュゲートされるまたは取り付けられるは、共有結合または非共有結合の他に、他の形態の会合、例えば捕捉、例えば、１つの実体の、他の実体上もしくは内の捕捉、またはいずれかもしくは両方の実体の、第３の実体、例えばミセル上もしくは内の捕捉を含むことができる。
代替的または追加的に、キットは、抗ＨＪＶ抗体に結合する能力を有する二次抗体を含んでもよい。キットは、ヘモジュベリンを検出するために抗ＨＪＶ抗体を使用するための指示書をさらに含んでもよい。
［実施例１］
抗ＨＪＶ抗体の生成および特徴付け
ヒトヘモジュベリンを用いて免疫化されたラットから、ヒトヘモジュベリンに結合する能力を有するハイブリドーマクローンを同定した。抗ヘモジュベリンモノクローナル抗体（ラットＩｇＧ１／κを有するｍＡｂ）をＣＤＲ移植によりヒト化した（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異を有するｈＩｇＧ１定常領域を有するｈＨＡ抗体）。親和性成熟抗ＨＪＶ（例えば、ＨＡ－００１～ＨＡ－０１１）インビトロ酵母ディスプレイアッセイ。ヒト化親和性成熟抗ＨＪＶ抗体の生成のための一般的方法を図１Ａに示す。
可溶性ヒトＲＧＭａ、ラットＲＧＭａおよびヒトＲＧＭｃに対する抗ＨＪＶ抗体の結合親和性をＢＩＡｃｏｒｅ分析により測定した。表４は、ヒトＲＧＭａに対する抗ヘモジュベリン抗体の親和性を示す。表５は、ラットＲＧＭａに対する抗ヘモジュベリン抗体の親和性を示す。表６は、ヒトＲＧＭｃに対する抗ヘモジュベリン抗体の親和性を示す。
Figure 2023528223000030
Figure 2023528223000031
Figure 2023528223000032
これらの抗体中で、少なくともｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１は、ヒトＲＧＭｃに対する強い結合を示し、さらなる試験のために選択された。抗体ＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００９およびｈＨＡ－０１１のＢＩＡｃｏｒｅ分析によるセンサーグラムを図１Ｂ～１Ｇに示す。ｈＨＡ－００８をヒトＲＧＭａ、カニクイザルＲＧＭａ、ラットＲＧＭａ、ヒトＲＧＭｃ、カニクイザルＲＧＭｃ、ラットＲＧＭｃ、およびヒトＲＧＭｂに対するその結合親和性についてさらに試験を、それぞれの結合親和性を表７に示す。ｈＨＡ－００８は、カニクイザルおよび齧歯動物種に対する強い交差反応性と共にヒトＲＧＭａおよびＲＧＭｃに対する高親和性結合を示した。
Figure 2023528223000033
ＲＧＭｃ（ＨＪＶ）ＢＭＰレポーター遺伝子アッセイを、抗ＨＪＶ抗体のスクリーニングおよび膜結合型ＲＧＭｃ誘導ＢＭＰ／Ｓｍａｄ１／５／８シグナル伝達の遮断におけるその効力の特徴付けのために使用した。アッセイは、鉄ホルモンヘプシジン遺伝子発現の誘導の原因となるＲＧＭｃ／ＢＭＰ／Ｓｍａｄ１／５／８シグナル伝達経路の阻害における抗ＨＪＶ ｍＡｂの作用の機序に直接的に関する。ＨＪＶ ＢＭＰレポーターアッセイの原理を図２Ａに示す。
Korchynskyi and Dijke (J. Biol. Chem. 2002; 277:4883c)により最初に記載されたＢＲＥ－Ｌｕｃレポーター遺伝子ベクターを使用して、Babbit et al (J. Biol. Chem. 2005; 280:29820)によるＲＧＭａ発現ベクターの共トランスフェクションありまたはなしでブタ腎臓上皮細胞系ＬＬＣ－ＰＫ１に一過的にトランスフェクトし、ＲＧＭａ発現がＢＭＰシグナル伝達をモジュレートするかどうかを決定した。ＢＲＥ－Ｌｕｃ一過性トランスフェクト細胞において、ＲＧＭａは、Ｓｍａｄ１／５／８シグナル伝達経路を通じてＢＭＰシグナル伝達を増強することが実証され、ＢＭＰ補助受容体としてのＲＧＭａの役割と合致した。全てのＲＧＭメンバー（ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、およびＲＧＭｃ）はＢＭＰ補助受容体として作用し、ＢＭＰシグナル伝達を増強する。ＢＲＥ－Ｌｕｃレポーターベクターを構築し、ＨＥＫ２９３細胞におけるＲＧＭ ＢＭＰレポーター遺伝子アッセイで確立した。アッセイにおいて使用されたヒトＲＧＭｃ発現ベクターはｐｃＤＮＡ－ｈＲＧＭｃであった。
ＨＥＫ２９３細胞を増殖培地［１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ ＃１０４３８－０２６）および１％のピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃ １１３６０－０７０）を含有する基礎培地ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ カタログ＃１１９６５－０９２）］中で培養した。トランスフェクションのための細胞を調製するために、９×１０６個のＨＥＫ２９３細胞を１０ｃｍのディッシュ中にプレーティングし、３７℃、５％のＣＯ２で６時間インキュベートした。細胞を次に、２：１のＰｏｌｙＪｅｔ（μＬ）：ＤＮＡ（μｇ）比、特に５μｇのｐＧＬ［ｌｕｃ２Ｐ／ＢＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］ＤＮＡ（Ａｂｂｖｉｅ）および５μｇのｐｃＤＮＡ－ｈＲＧＭｃ（Ａｂｂｖｉｅ）と共に２０μｌのＰｏｌｙＪｅｔ（ＳｉｇｎａＧｅｎ、カタログ＃ ＳＬ１００６８８）を使用して３７℃、５％のＣＯ２で１６時間トランスフェクトした。培地を新鮮なＨＥＫ２９３増殖培地を用いて６時間で置き換えられた。細胞を次にＴｒｐＬＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ＃ １２６０５０１０）を用いてトリプシン処理し、カウントし、９６ウェル白色アッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｎｕｎｃｌｏｎ ｄｅｌｔａ Ｆ９６、カタログ＃１３６１０２）中に１×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。細胞を抗ＲＧＭｃ ｍＡｂ、抗ＢＭＰ２／４ ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ＃ ＭＡＢ３５５２）（陽性対照として）、またはアイソタイプ対照ｍＡｂを用いて３７℃、５％のＣＯ２で１６時間処置した。Ｏｎｅ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃ Ｅ６１２０）およびＴｏｐＣｏｕｎｔ発光カウンターでの測定を使用してルシフェラーゼ活性を検出した。結果は、抗ＨＪＶ抗体は、ＲＧＭｃ増強ＢＭＰシグナル伝達を用量依存的に阻害することを示した（図２Ｂ）。ＢＭＰレポーターアッセイにおけるＲＧＭｃシグナル伝達の阻害において試験された抗体の各々のＩＣ５０（ｎＭ）を表８に示す。
Figure 2023528223000034
さらに、抗ＨＪＶ抗体を、ＢＭＰレポーターアッセイにおいてＲＧＭａシグナル伝達を阻害するそれらの能力について試験した。ｈＨＡ－００４およびｈＨＡ－０１１は、ＲＧＭａ ＢＭＰレポーター遺伝子アッセイにおいて膜結合型ヒトＲＧＭａに対する強力な阻害を示した一方、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００９は、ＲＧＭａ活性に対する阻害を示さなかったか、または最小の阻害を示した。ｈＨＡ抗体は、膜結合型ＲＧＭａに対する阻害を示さなかった。ラットｍＡｂ ＨＡは、ＲＧＭａに対する阻害を示したが、ｈＨＡ－００４およびｈＨＡ－０１１と比較してはるかに低い程度であった。図２Ｃ。ＢＭＰレポーターアッセイにおけるＲＧＭａシグナル伝達の阻害において試験された抗体の各々のＩＣ５０（ｎＭ）を表９に示す。
Figure 2023528223000035
上記のデータは、ＢＭＰレポーターアッセイにおける膜ＲＧＭｃの中和における抗ＨＪＶ抗体の効力は、可溶性ＲＧＭｃに対する結合親和性と相関することを示した。抗ＨＪＶ抗体の可溶性ヒトＲＧＭｃに対する結合親和性、ならびに膜結合型ＲＧＭｃおよびＲＧＭａシグナル伝達を阻害するそれらの能力の要約を表１０に示す。
Figure 2023528223000036
ｈＨＡ、ｈＨＡ－００４、ｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００８－ＱＬ、ｈＨＡ－００９、およびｈＨＡ－０１１を含む抗体を、ＨＥＫ２９３細胞に対する非特異的な細胞結合についてＦＡＣＳ分析により試験した。データは、ｈＨＡならびにそのｈＨＡ－００８、ｈＨＡ－００８－ＱＬおよびｈＨＡ－０１１は、最大１００ｕｇ／ｍｌの濃度においてＨＥＫ２９３細胞に対する非特異的細胞結合を示さないか、または最小の非特異的細胞結合を示すことを示した。ｈＨＡ－００４およびｈＨＡ－００９は、より高い濃度においてある程度の非特異的細胞結合を示したが、陽性対照ＩｇＧと比較してはるかに低い程度であった（図３）。
［実施例２］
ｈＨＡ－００８－ＱＬの生成
ＩｇＧ血清半減期（ＩｇＧ ｓｅｒｕｍ ｈａｌｆ－ｌｉｎｅ）（ｔ１／２）を長期化させるためにｈＨＡ－００８－ＱＬを開発した。先行する研究は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）はＩｇＧを異化から保護し、それによりＩｇＧ血清半減期を増加させることを示している。よって、ｈＨＡ－００８－ＱＬのＦｃ部分を、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ突然変異（ＱＬ突然変異）を有するように操作して、ＦｃＲｎに対する増強した結合を有するようにした。図４Ａおよび図４Ｂは、それぞれｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの構造を図示する。ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬのさらなる実例を図４Ｃに示す。
最初に、ｈＨＡ－００８－ＱＬをそのＲＧＭａおよびＲＧＭｃ結合能力について試験したところ、データは、ｈＨＡ－００８－ＱＬは、ｈＨＡ－００８と同等のＲＧＭａおよびＲＧＭｃに対する結合親和性を有することを示した（表１１）。
Figure 2023528223000037
 ［実施例３］
ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの免疫原性研究
ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答アッセイにおいてｈＨＡ－００８またはｈＨＡ－００８－ＱＬを負荷された５０ドナー（全ての主要なＨＬＡ０ＤＲおよびＨＬＡ－ＤＱハプロタイプを表す）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用してｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬをそれらの免疫原性について試験した。結果は、５０ドナーのうちの４％のみ（２／５０）がＴ細胞応答を示すことを示し、両方の抗体は免疫原性の低いリスクを有することを示唆した。このアッセイにおいて、ハーセプチンを陰性対照として使用し、それに対してドナーの８％がＴ細胞応答を有した。ビデュリオンおよびキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）を陽性対照として使用した。ドナーの３２％はビデュリオンに対してＴ細胞応答を示し、１００％のドナーはＫＬＨに対してＴ細胞応答を有した。図５は、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬについての５０ドナーにおけるＴ細胞応答を示した。
さらに、ＦｃγＲ結合を、免疫原性の別のパラメーターとしてｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬについて試験した。対照群、野生型無関連ＩｇＧ１は、高親和性Ｆｃガンマ受容体および低親和性Ｆｃガンマ受容体の両方に対して有意な結合を有した。予想されたように、野生型無関連ＩｇＧ４の結合は、野生型無関連ＩｇＧ１のそれよりも有意に低い。高親和性および低親和性受容体に対する結合は、野生型ＩｇＧ１と比較してｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの両方について有意に減少しており、両方の抗体についての低い免疫原性を示唆する。
［実施例４］
ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モデリング
ｈＨＡ－００８のＰＫ／ＰＤについての初期研究において、雄ラットを単回用量のｈＨＡ－００８を用いて５ｍｇ／キログラム体重（ｍｐｋ）において静脈内注射により処置した。トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ％；血清総鉄結合能力に対する血清鉄のパーセンテージとして決定される）を経時的に試験した。データは、増加したＴＳＡＴの最大効果は処置後４～８日の間に起こることを示した（図６Ａ）。
さらに、類似した研究を非ヒト霊長類カニクイザルにおいて実行した。雌（ｎ＝２）および雄（ｎ＝２）カニクイザルの両方に単回用量のｈＨＡ－００８を５ｍｇ／キログラム体重（ｍｐｋ）において静脈内注射により与えた。トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ％）を経時的に試験した。両方の雌カニクイザルは、増加したＴＳＡＴ％の最大効果を注射の約１～４日後に示した（図６Ｂ）。雄の１頭は同じ効果を示したが、他方はｈＨＡ－００８処置に応答しなかった（図６Ｃ）。この雄の血液学的プロファイルを調べることにより、応答の欠如は、このカニクイザルが検出限度未満（２ｎｇ／ｍＬ未満）の血漿ヘプシジン－２５レベルを有することの結果であることがその後に決定された。さらに、注射の前に、この雄カニクイザルは、群中の他のカニクイザルよりも低いベースラインＴＳＡＴ％および血清鉄レベルを有し、注射の２日前に、１８％のベースラインＴＳＡＴ％レベルおよび７７μｇ／ｄＬの血清鉄レベルを有し；注射の１日前に、１４％のベースラインＴＳＡＴ％レベルおよび６１μｇ／ｄＬの血清鉄レベルを有した。低いベースラインＴＳＡＴ％および血清鉄レベルは、低いヘプシジン－２５レベルと組み合わせて、この雄カニクイザルは、機能性鉄欠乏症ではなく絶対性鉄欠乏症を有することの指標となった。
７０頭より多くのカニクイザルにおけるｈＨＡ－００８投与の効果を調べたさらなる研究は、正常なベースライン血清鉄レベル（例えば、８０μｇ／ｄＬ～１８０μｇ／ｄＬの範囲内）および２ｎｇ／ｍＬより高いヘプシジン－２５レベルを有する動物は、ヘプシジン－２５発現の減少に応答して注射の直後（例えば、処置後１～２日以内）にＴＳＡＴ％レベルにおける著しい増加を呈したという点においてｈＨＡ－００８処置に対して応答性であることを明らかにした。
追加の実験をカニクイザルにおいて実行した。６ｍｐｋの単回用量のｈＨＡ－００８を３頭のカニクイザルに静脈内注射を介して投与し、ＴＳＡＴ％（総鉄結合能力に対する血清鉄として決定される）、血漿ヘプシジン－２５濃度、および血漿ｈＨＡ－００８濃度を各々の動物および時点について試験した。同様に、データは、増加したＴＳＡＴ％の最大効果は注射の１～４日後に起こることを示し（Ｔｍａｘ＝１～４日）、これはｈＨＡ－００８濃度の増加と合致した。動物のうちの１頭は３４日目頃にＴＳＡＴ％の劇的な低下を有し（図７Ａ）、これはその時点頃の血漿ｈＨＡ－００８濃度の低下と合致した。血漿ヘプシジン－２５濃度はｈＨＡ－００８の濃度と逆相関し、ヘプシジン－２５は抗体注射後に検出不可能であり、ＴＳＡＴ％の劇的な低下を有した動物について、ヘプシジンレベルは同じ時点頃に増加した（図７Ｂ）。このカニクイザルにおいて、ｈＨＡ－００８は、約５日の血漿ｔ１／２を有した。該動物は、約３４日目においてＴＳＡＴ％の低下およびヘプシジン－２５レベルの増加を示し、血漿からのｈＨＡ－００８の減少と良好に相関した（図７Ｃ）。カニクイザルにおける約７日のＴ１／２はヒトにおける月当たり１回以上の投薬頻度をサポートする。
さらに、ｈＨＡ－００８は、ＴＳＡＴ％および血漿ヘプシジン－２５濃度に対するＰＫ（血漿抗体濃度）の堅牢なＰＫ／ＰＤ相関を示した。各試験されたカニクイザルの結果を図７Ｄ（カニクイザル１）、図７Ｅ（カニクイザル２）、および図７Ｆ（カニクイザル３）に示す。ｈＨＡ－００８は、カニクイザル１において１０．３日のｔ１／２、カニクイザル２において８．８日のｔ１／２、およびカニクイザル３において５．１日のｔ１／２を示した。ヘプシジンレベルはｈＨＡ－００８処置後に検出不可能（＜２ｎｇ／ｍｌ）まで低下する。興味深いことに、循環へのヘプシジンレベルの復帰は、カニクイザル３においてｈＨＡ－００８のｔ１／２と良好に相関した（図７Ｆ）。
ｈＨＡ－００８抗体は、用量依存的な方式でＴＳＡＴ％をモジュレートする。複数用量研究をカニクイザルにおいて実行した。カニクイザル（用量レベル当たりｎ＝４、２頭の雄および２頭の雌）を０（媒体対照）、０．６ｍｐｋのｈＨＡ－００８、３ｍｐｋのｈＨＡ－００８、または６０ｍｐｋのｈＨＡ－００８のいずれかを用いて処置した。ｈＨＡ－００８の結果的な濃度および相当するＴＳＡＴ％応答を０．６、３および６０ｍｐｋでの処置についてそれぞれ図８Ａ、図８Ｂおよび図８Ｃにおいて提示しており、全ては媒体対照に対してプロットしている。カニクイザルに１４日毎に投薬した。点線は投薬日を表す。ＴＳＡＴ％は投薬後に増加し、モジュレーションパーセントは用量レベルと合致し、０．６ｍｐｋにおいて、ＴＳＡＴは約６０％に達し、３ｍｐｋおよび６０ｍｐｋにおいて、ＴＳＡＴ％は飽和し、ｈＨＡ－００８は用量依存性の方式でＴＳＡＴ％をモジュレートすることを指し示した。さらに、０．６ｍｐｋでの第１の投薬後に、ＴＳＡＴ％レベルは約６０％において維持され、より高い用量レベルにおいて、ＴＳＡＴ％は１００％に達し、ＴＳＡＴは、適切な用量レベル／レジメンの選択によりモジュレートされ得ることを示唆した（図８Ａ～８Ｃ）。
［実施例５］
ｈＨＡ－００８－ＱＬはｈＨＡ－００８と比較してより長い血清半減期を付与し、最大効果に達するまでにより長い時間を要する
この研究は、ｈＨＡ－００８またはｈＨＡ－００８－ＱＬを６ｍｐｋにおいてカニクイザルの静脈内に投与するために設計された（ｎ＝３）。試料を各動物から処置の４８および２４時間前、ならびに処置の０、０．０４、０．０８、０．１６７、０．３３３、０．５、１、２、４、８、１４、２１、２８、３５および４２日後に収集した。ＴＳＡＴ％および血漿ヘプシジン－２５レベルを各試料において測定した。データは、ｈＨＡ－００８はｈＨＡ－００８－ＱＬと比較して増加したＴＳＡＴ％の最大効果（Ｔｍａｘ）に達するまでにより短い時間を要することを示した（図９Ａ）。ｈＨＡ－００８－ＱＬを用いて処置された動物においてノンレスポンダーがいたことが留意される。上記で議論したように、ノンレスポンダーは、抗体処置の前のベースラインにおいて低いヘプシジンレベルおよび低い血清鉄を有した。他方、ｈＨＡ－００８－ＱＬは、ｈＨＡ－００８（Ｔ１／２＝６．７６日）と比較してより長い血清半減期（Ｔ１／２＝１２．１日）を有した（図９Ｂ）。図９Ｃに示されるように、両方の抗体の血漿濃度を経時的に測定した。ピーク血漿濃度を決定した。ｈＨＡ－００８とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間のデータの要約を表１２に示す。
Figure 2023528223000038
ｈＨＡ－００８－ＱＬについてのより長い血清寿命はＦｃＲｎに対するより高い親和性に帰せられるかどうかを調べるために、両方の抗体をｐＨ ６．０およびｐＨ ７．４におけるＦｃＲｎへの結合についてＢＩＡｃｏｒｅを使用して分析した。非特異的なＩｇＧ１およびＩｇＧ４を対照として使用した。ｐＨ ６．０および７．４におけるＦｃＲｎに対する抗体および対照の各々の解離定数（ＫＤ）を表１３に示し、応答曲線を図１０Ａ～１０Ｂに示した。ｐＨ ７．４においていずれの抗体についても結合は観察されなかった（図１０Ｂ）。
Figure 2023528223000039
突然変異Ｌ２４７ＡおよびＬ２４８Ａ（Ｋａｂａｔ）（Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ、ＥＵ番号付け）は、ＦｃＲｎ結合に有意に影響しないようである。ｐＨ ６．０におけるＦｃＲｎの結合についての全体的な親和性および応答（ＲＭａｘ）はｈＨＡ－００８と比較してｈＨＡ－００８－ＱＬについて増加しており、ＱＬ突然変異は受容体への結合を介してより長いｔ１／２を付与することを示唆する。
［実施例６］
非ヒト霊長類においてｈＨＡ－００８はＩＬ－６誘導ヘプシジン発現を減少させる
図１１に示すように、骨髄線維症では、ＩＬ－６およびオンコスタチン－Ｍなど、ヘプシジン合成を誘導する炎症促進性サイトカインが典型的には増加され、鉄封鎖、マクロファージ鉄負荷、ならびに骨髄増殖およびマクロファージ活性化と関連する。ＩＬ－６が確かにヘプシジン発現を増加させるかどうかおよび抗ＨＪＶ抗体が非ヒト霊長類においてＩＬ－６によって誘導されるヘプシジン発現を阻害することができるかどうか試験するため、１日目にサイナスはＩＬ－６を負荷され、３つの群に分けられた。４日目に、群１のサイナスは媒体対照を受け、群２のサイナスは０．６ｍｇ／ｋｇでｈＨＡ－００８抗体を受け、群３のサイナスはｈＨＡ－００８抗体を６．０ｍｇ／ｋｇで受けた。１１日目に、３つの群全てのサイナスは、再びＩＬ－６を負荷され、全てのサイナスにおける血漿ヘプシジン－２５が測定された。図１３に示すように、ＩＬ－６負荷は、３つの群全てのサイナスにおける負荷前ベースライン（ＢＬ）と比較して、１日目に血漿ヘプシジン－２５濃度を増加させた。１１日目の第２のＩＬ－６負荷後、群１のサイナスは、１日目に観察されたのと類似した血漿ヘプシジン－２５の増加を示した。しかしながら、群２（０．６ｍｇ／ｋｇのｈＨＡ－００８）および群３（６ｍｇ／ｋｇのｈＨＡ－００８）のサイナスについては、ｈＨＡ－００８の存在が、用量依存的な様式で１１日目に血漿ヘプシジン－２５のＩＬ－６誘導性増加を防止した。すなわち、ｈＨＡ－００８は、サイナスにおいて用量依存的な様式で炎症誘導性（ＩＬ６）ヘプシジン増加の防止に有効であった。これらの結果は、抗ＨＪＶ抗体が、ＩＬ－６シグナル伝達経路によって誘導されるヘプシジン発現を阻害することができることを示す。
［実施例７］
エピトープマッピング
３７２０－ＲＧ－０５０［ヘモジュベリン（ＨＪＶ）断片、配列番号１２３］を使用して、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬに対してエピトープマッピングを行った。
エピトープマッピングの前に、高質量ＭＡＬＤＩ質量分析および化学架橋を使用して、ｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬの非共有結合性凝集物がないことを確認し、３７２０－ＲＧ－０５０のマルチマーが試料調製物中に検出された。
高分解能と共に３７２０－ＲＧ－０５０上のｈＨＡ－００８およびｈＨＡ－００８－ＱＬのエピトープを決定するために、３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８および３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８－ＱＬ複合体を重水素化クロスリンカーと共にインキュベートし、多重酵素切断に供した。架橋されたペプチドの濃縮後に、試料を高分解能質量分析（ｎＬＣ－ＬＴＱ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ）により分析し、生成されたデータをＸＱｕｅｓｔおよびＳｔａｖｒｏｘソフトウェアを使用して分析した。
３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８（ＨＪＶ断片／ｈＨＡ－００８）
重水素化ｄ０ｄ１２を有するタンパク質複合体３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８のトリプシン、キモトリプシン、ＡＳＰ－Ｎ、エラスターゼおよびサーモリシンタンパク質加水分解後に、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析により３７２０－ＲＧ－０５０とｈＨＡ００８との間に８つの架橋されたペプチドが検出された。
架橋の配列および位置を以下の表１４に提示する。
Figure 2023528223000040
化学架橋、高質量ＭＡＬＤＩ質量分析およびｎＬＣ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析を使用して、３７２０－ＲＧ－０５０とｈＨＡ－００８との間の分子インターフェースを特徴付けた。図１４は、ｈＨＡ－００８は、３７２０－ＲＧ－０５０上のアミノ酸１７０～１８３［ＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）］と相互作用することを示す。相互作用は、３７２０－ＲＧ－０５０上のアミノ酸１７０、１７１、１８０、１８２、１８３において起こる。図１５は、３７２０－ＲＧ－０５０およびｈＨＡ－００８の相互作用を示す。３７２０－ＲＧ－０５０ ＰＤＢ構造は、Ｓｗｉｓｓ Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して相同性により生成された。３７２０－ＲＧ－０５０配列の３７２０－ＲＧ－０５０アミノ酸１７０～１８３［ＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴＲ（配列番号１２１）］を図１５に示す：前面図（Ａ）；背面図（Ｂ）、側面図１（Ｃ）、側面図２（Ｄ）および上面図（Ｅ）のリボン／表面表現。Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ：前面図（Ｆ）；背面図（Ｇ）、側面図１（Ｈ）、側面図２（Ｉ）および上面図（Ｊ）のリボン表現。
３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８－ＱＬ（ＨＪＶ断片／ｈＨＡ－００８－ＱＬ）
重水素化ｄ０ｄ１２を有するタンパク質複合体３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８－ＱＬのトリプシン、キモトリプシン、ＡＳＰ－Ｎ、エラスターゼおよびサーモリシンタンパク質加水分解後に、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析により３７２０－ＲＧ－０５０とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間に１６個の架橋されたペプチドが検出された。
架橋の配列および位置を以下の表１５に提示する。
Figure 2023528223000041
化学架橋、高質量ＭＡＬＤＩ質量分析およびｎＬＣ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析を使用して、３７２０－ＲＧ－０５０とｈＨＡ－００８－ＱＬとの間の分子インターフェースを特徴付けた。図１６は、ｈＨＡ－００８－ＱＬは３７２０－ＲＧ－０５０のアミノ酸１６９～１８２［ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）］および２８９～３００［ＳＱＲＬＳＲＳＥＲＮＲＲ（配列番号１２７）］と相互作用することを示す。相互作用は、３７２０－ＲＧ－０５０上のアミノ酸１６９、１７１、１８０、１８２；２８９、２９３、２９４、２９５、２９７、３００において起こる。図１７は、相互作用３７２０－ＲＧ－０５０／ｈＨＡ－００８－ＱＬを示す。３７２０－ＲＧ－０５０ ＰＤＢ構造は、Ｓｗｉｓｓ Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して相同性により生成された。３７２０－ＲＧ－０５０アミノ酸１６９～１８２（ＴＳＳＰＭＡＬＧＡＮＡＴＡＴ（配列番号１２２）および２８９～２９１（ＳＱＲ）を図１７として示す：前面図（Ａ）；背面図（Ｂ）、側面図１（Ｃ）、側面図２（Ｄ）および上面図（Ｅ）のリボン／表面表現。Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ：前面図（Ｆ）；背面図（Ｇ）、側面図１（Ｈ）、側面図２（Ｉ）および上面図（Ｊ）のリボン表現。
［実施例８］
ｈＨＡ－００８－ＱＬは循環トランスフェリンレベルを減少させる
循環トランスフェリンレベルは、他のマーカー（例えば、総鉄結合能力、血清フェリチンレベルなど）と共に身体中の鉄レベルの指標として使用することができる。循環トランスフェリンは、タンパク質および鉄の両方の状態を反映する鉄輸送タンパク質である。トランスフェリンは、鉄欠乏と共に増加し、鉄状態が改善する場合に減少する［例えば、Litchford et al., NUTRITIONAL ISSUES IN THE PATIENT WITH DIABETES AND FOOT ULCERS, Levin and O’Neal’s The Diabetic Foot (Seventh Edition), 2008; Ogun et al., Biochemistry, Transferrin, Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021 Janを参照］。
循環トランスフェリンレベルがｈＨＡ－００８－ＱＬ処置の後に減少するかどうかを試験するために、ベースライントランスフェリンレベルを、１日目におけるｈＨＡ－００８－ＱＬの投薬の１１日前に実験における各々の健常カニクイザルについて確立した。カニクイザルに０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１６０ｍｇ／ｋｇのｈＨＡ－００８－ＱＬを１日目、１５日目および２９日目に投薬した（各群中にｎ＝５）。各カニクイザルからの血液を１日目の投薬の９６時間、１９２時間、および３３６時間後；１５日目の投薬の４８時間、９６時間、１９２時間、および３３６時間後；ならびに２９日目の投薬の４８時間後に収集した。１日目の投薬後３３６時間の時点の血液は１５日目の投薬の２時間前に収集され、１５日目の投薬後３３６時間の時点の血液は２９日目の投薬の２時間前に収集されたことが留意される。トランスフェリンレベルを各カニクイザルについての全ての試料において測定し、それ自体のベースラインと比較して各時点におけるパーセント変化を算出した。表１６におけるデータは、ｈＨＡ－００８－ＱＬの処置はベースラインレベルと比較して循環トランスフェリンレベルを減少させたことを示す。
Figure 2023528223000042
Figure 2023528223000043
Figure 2023528223000044
 ［実施例９］
ｈＨＡ－００８はカニクイザルにおいて炎症誘導（ＩＬ－６）鉄抑制を予防する
ＩＬ－６負荷後のｈＨＡ－００８による鉄抑制の予防をこの研究において調べた。０日目に、カニクイザルの３つの群（Ｎ＝３／群）に６×１０４国際単位（ＩＵ）のＩＬ－６／ｋｇを皮下に負荷した。３日目に、３頭の動物の各群にそれぞれ０（媒体）、０．６または６ｍｇ／ｋｇのｈＨＡ－００８を静脈内に与えた。１０日目に全ての群に６×１０４ＩＵのＩＬ－６／ｋｇの第２の負荷を皮下に与えた。血液を全てのカニクイザルから収集し、各ＩＬ－６負荷の４８時間および２４時間前、ならびに各ＩＬ－６投薬の２、４、８および２４時間後に血清鉄レベルを評価した。各ＩＬ－６投薬の４８および２４時間前に採取された試料の平均ベースライン値をＤ０値として使用した。結果は、ｈＨＡ－００８は、カニクイザルにおいて用量依存的な方式でのＩＬ－６誘導血清鉄抑制の予防において有効であることを示した（図１８）。
［実施例１０］
スプラーグドーリーラットにおけるｈＨＡ－００８の皮下注射
スプラーグドーリーラット（６匹の雌および６匹の雄）にｈＨＡ－００８を皮下に６ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）において注射した。薬物動態（ＳＣ ＰＫ）および薬力学（ＳＣ ＰＤ）を投薬の３５日後に評価した。血清平均薬物動態パラメーター（例えば、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ｔ１／２、およびＡＵＣ０－ｉｎｆ）を表１７に示す：
Figure 2023528223000045
ｈＨＡ－００８の皮下注射バイオアベイラビリティ（ＳＣバイオアベイラビリティ）はｈＨＡ－００８の静脈内注射バイオアベイラビリティ（ＩＶバイオアベイラビリティ）の約８４．７％であったこと（ＳＣバイオアベイラビリティ＝ＳＣ ＤＮ＿ＡＵＣ０－ｉｎｆ／ＩＶ ＤＮ＿ＡＵＣ０－ｉｎｆ×１００；ＤＮ：正規化された用量）により立証されるように、皮下投与後のｈＨＡ－００８のバイオアベイラビリティは、６ｍｇ／ｋｇにおける静脈内投与後のｈＨＡ－００８のバイオアベイラビリティに類似していた。さらに、最大濃度（Ｃｍａｘ）に達するまでの時間はＳＣ投与後に３．６～４日であり、ＩＶ投与後のＣｍａｘと比較してはるかにより低いＣｍａｘであった。
類似した用量レベルにおいて、ＩＶまたはＳＣの間のＰＤ応答は区別不可能であり、血清ｈＨＡ－００８濃度は投薬の１～２日後に飽和し、少なくとも２１日を通じて上昇したままであり、ＰＤ応答（例えば、ヘプシジン－２５濃度およびＴＳＡＴ％）における低下は、ｈＨＡ－００８血清濃度の減少と合致した（図１９）。
［実施例１１］
カニクイザルにおける皮下用量投与
皮下ｈＨＡ－００８処置のＰＫ／ＰＤもまたカニクイザルにおいて評価した。カニクイザルにｈＨＡ－００８を皮下に０．３ｍｐｋ、０．６ｍｐｋ、１ｍｐｋおよび６ｍｐｋにおいて注射した。
６ｍｐｋ投薬群において、２頭の雄および１頭の雌カニクイザルにｈＨＡ－００８の単回皮下注射を与え、血液試料を６１日間収集した。６ｍｐｋにおいてｈＨＡ－００８のＩＶ注射を与えたカニクイザルを比較のために使用した。
０．３ｍｐｋ、０．６ｍｐｋ、および１．０ｍｐｋ群において、各群は、ｈＨＡ－００８の単回皮下注射を与えられた３頭の雄カニクイザルを含んだ。血液試料を２７日間収集した。ＩＶにより同じ用量のｈＨＡ－００８を与えたカニクイザルを各群について比較のために使用した。
カニクイザルにおけるｈＨＡ－００８のＳＣ投与後に、同じ用量においてＩＶを介して注射された動物と比較した場合に、バイオアベイラビリティは高く、用量レベルと共に増加した（０．３ｍｐｋにおいて５５．０％、０．６ｍｐｋにおいて８１．９％、１ｍｐｋにおいて８９．５％および６ｍｇ／ｋｇにおいて１００％）。Ｔｍａｘは、用量依存性の方式で投薬後に迅速に達成された（１．３３～２．６７日）。表１８は、カニクイザルにおける単回ＳＣ投与後のｈＨＡ－００８の血清平均薬物動態（ＰＫ）パラメーターを示す。ｈＨＡ－００８血清濃度－時間プロファイルは投与の４日後にＳＣ注射とＩＶ注射との間で区別不可能となった（図２０Ａ）。
Figure 2023528223000046
ＳＣ投薬後のＰＤ応答は動物の間で変動的であり、相対的に用量レベルに比例しており、０．１ｍｐｋ、０．６ｍｐｋ、および１．０ｍｐｋにおけるＩＶ投薬後に観察されたＰＤ応答に類似していた。全ての動物について、ＰＤ応答は投薬の１～２日後に機能的に最大であった（ＴＳＡＴ＞８０％およびヘプシジン－２５＜ＬＯＱ）。ベースラインレベルへのＰＤマーカー（例えば、血清鉄）の復帰はｈＨＡ－００８血清濃度における低下と合致した（図２０Ｂ～２０Ｄ）。６ｍｐｋにおいて、ＳＣ注射群およびＩＶ注射群の両方における血清鉄濃度は、変化を反映するには飽和しすぎていた（データ示さず）。
他の実施形態
本明細書に開示される特色の全ては任意の組合せにおいて組み合わせることができる。本明細書に開示される各特色は、同じ、同等の、または類似した目的のために役立つ代替的な特色により置き換えられてもよい。そのため、他に明示的に記載されなければ、開示される各特色は、同等のまたは類似した特色の一般的なシリーズの例に過ぎない。
上記の記載から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができ、その精神および範囲から離れることなく、本発明の様々な変更および修飾を行って、それを様々な用途および条件に適合させることができる。そのため、他の実施形態はまた以下のように記載される：
１．骨髄線維症を有する対象を処置する方法であって、対象に、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、抗体が、Ｘ１ＹＧＭＮ（配列番号１０５）（ここで、Ｘ１はＮもしくはＹであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）；ＭＩＹＹＤＳＳＸ２ＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０６）（ここで、Ｘ２はＥもしくはＤであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）；ＧＸ３ＴＰＤＸ４（配列番号１０７）（ここで、Ｘ３はＴもしくはＳであり得、Ｘ４はＹ、Ｖ、もしくはＫであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；および／またはＲＳＳＱＳＬＸ５Ｘ６ＳＤＧＸ７ＴＦＬＸ８（配列番号１０８）（ここで、Ｘ５はＡもしくはＥであり得、Ｘ６はＴ、Ｓ、Ｅ、もしくはＤであり得、Ｘ７はＤ、Ｙ、もしくはＧであり得、Ｘ８はＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、Ｘ９ＶＳＸ１０ＲＦＳ（配列番号１０９）（ここで、Ｘ９はＥ、ＤもしくはＡであり得、Ｘ１０はＮ、Ｓ、Ｔ、ＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、Ｘ１１ＱＸ１２ＴＸ１３ＤＰＸ１４Ｘ１５（配列番号１１０）（ここで、Ｘ１１はＦもしくはＭであり得、Ｘ１２はＶもしくはＡであり得、Ｘ１３はＨもしくはＹであり得、Ｘ１４はＭ、ＬもしくはＶであり得、Ｘ１５はＴもしくはＳであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）を含む、方法。
２．抗体が、配列番号３８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３９と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態１に記載の方法。
３．抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態２に記載の方法。
４．抗体が、ヒト化抗体である、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．ヒト化抗体が、ヒト化ＶＨおよび／またはヒト化ＶＬを含む、実施形態４に記載の方法。
６．抗体が、全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．抗体が、全長ＩｇＧである、実施形態６に記載の方法。
８．抗体が、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む、実施形態９に記載の方法。
９．抗体が、配列番号４６または配列番号４８に記載の重鎖定常領域をさらに含む、実施形態８に記載の方法。
１０．抗体が、配列番号４７に記載の軽鎖定常領域をさらに含む、実施形態９に記載の方法。
１１．抗体が、（ｉ）配列番号６１と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；または（ｉｉ）配列番号６３と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．抗体が、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１１に記載の方法。
１３．抗体が、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１１に記載の方法。
１４．対象が、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、ＡＳＸＬ１、ＴＥＴ２、ＮＦＥ２、ＳＨ２Ｂ３、ＳＦ３Ｂ１、またはＣＡＬＲにおいて骨髄線維症惹起突然変異を有する、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１５．骨髄線維症が、対象における炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－６、オンコスタチン－Ｍ）のレベルの増加と関連する、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の方法。
１６．対象が、１０ｇ／ｄＬより低い血清ヘモグロビンレベルを示す、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．対象が、８ｇ／ｄＬより低い血清ヘモグロビンレベルを示す、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．対象が、赤血球輸血依存性である、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．対象が、貧血である、実施形態１８に記載の方法。
２０．対象が、エリスロポエチン刺激剤、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤、増殖因子リガンドトラップ、または抗線維化剤を以前に受けている、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．対象にエリスロポエチン刺激剤、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤、増殖因子リガンドトラップ、および抗線維化剤のうちの１つまたはそれ以上を投与することをさらに含む、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。
２２．エリスロポエチン刺激剤が、ダナゾール、プレドニゾン、サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドからなる群から選択される、実施形態２０または実施形態２１に記載の方法。
２３．ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤が、ルキソリチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択される、実施形態２０または実施形態２１に記載の方法。
２４．増殖因子リガンドトラップが、ソタテルセプトまたはラスパテルセプトである、実施形態２０または実施形態２１に記載の方法。
２５．抗線維化剤が、ＰＲＭ－１５１である、実施形態２０または実施形態２１に記載の方法。
２６．配列番号３８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３９と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体。
２７．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態２６に記載の単離抗体。
２８．ヒト化抗体である、実施形態２６または実施形態２７に記載の単離抗体。
２８．ヒト化抗体が、ヒト化ＶＨおよび／またはヒト化ＶＬを含む、実施形態２８に記載の単離抗体。
２９．全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の単離抗体。
３０．全長ＩｇＧである、実施形態２９に記載の単離抗体。
３１．アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む、実施形態３０に記載の単離抗体。
３２．配列番号４６、４８、１１２または１１３に記載の重鎖定常領域をさらに含む、実施形態３１に記載の単離抗体。
３３．配列番号４７に記載の軽鎖定常領域をさらに含む、実施形態３２に記載の単離抗体。
３４．（ｉ）配列番号６１もしくは１１７と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖；または（ｉｉ）配列番号６３もしくは１１８と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、および／もしくは配列番号６２と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態２６～３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
３５．配列番号６１または１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態３４に記載の単離抗体。
３６．配列番号６３または１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態３４に記載の単離抗体。
３７．宿主細胞中で、（ｉ）配列番号９２と少なくとも９０％同一の、重鎖をコードする核酸配列；および／または（ｉｉ）配列番号９３と少なくとも９０％同一の、軽鎖をコードする核酸配列を発現させることにより産生された、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体。
３８．宿主細胞中で、（ｉ）配列番号９４と少なくとも９０％同一の、重鎖をコードする核酸配列；および／または（ｉｉ）配列番号９３と少なくとも９０％同一の、軽鎖をコードする核酸配列を発現させることにより産生された、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体。
３９．宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）－２９３細胞、ｖｅｒｄａ ｒｅｎｏ（ＶＥＲＯ）細胞、非分泌性ヌル（ＮＳ０）細胞、ヒト胚性網膜（ＰＥＲ．Ｃ６）細胞、Ｓｐ２／０細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞、またはＳＶ４０形質転換サル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ）細胞である、実施形態３７または３８に記載の単離抗体。
均等物および範囲
特許請求の範囲では、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」などの冠詞は、反対に示されないかまたは文脈から明らかでない限り、１つおよび１つより多くを意味し得る。群の１つまたはそれ以上のメンバーの間に「ｏｒ」を含む請求項または説明は、１つ、１つより多く、または全ての群のメンバーが、反対に示されないかまたは文脈から明らかでない限り、所与の産物または方法に存在する、用いられるかまたは関連する場合、満たされると考えられる。本発明は、正確に群の１つのメンバーが所与の産物または方法に存在する、用いられるかまたは関連する実施形態を含む。本発明は、１つより多くの、または全ての群のメンバーが所与の産物または方法に存在する、用いられるかまたは関連する実施形態を含む。
さらに、本発明は、１つまたはそれ以上の列挙した請求項からの１つまたはそれ以上の制限、要素、項目、および説明的用語が別の請求項に導入される、全てのバリエーション、組合せ、および並び替えを包含する。例えば、別の請求項に依存する任意の請求項は、同じベースの請求項に依存する任意の他の請求項に見出される１つまたはそれ以上の制限を含むように改変され得る。要素が、例えばマーカッシュ形式でリストとして示される場合、要素の各下位群も開示され、任意の要素（複数可）が群から除かれ得る。一般に、本発明、または本発明の態様が、特定の要素および／または特徴を含むと言われる場合、本発明のある特定の実施形態または本発明の態様は、そのような要素および／または特徴からなる、またはから基本的になることが理解されるはずである。簡素化のため、これらの実施形態は本明細書にこれらの言葉で特に記載されていない。
語句「および／または」は、本明細書および特許請求の範囲において、本明細書で使用される場合、結合される要素の「いずれかまたは両方」、すなわち一部の場合では結合的に存在し、別の場合では非結合的に存在する要素を意味すると理解されるべきである。「および／または」を用いて列挙された複数の要素は、同じ様式、すなわち結合される要素の「１つまたはそれ以上」で解釈されるべきである。他の要素は、「および／または」節によって特に同定される要素以外を表し、特に同定されたそれらの要素に関連しても関連しなくてもよい。したがって、非限定的な例としては、「Ａおよび／またはＢ」との言及は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの制限のない言葉と合わせて使用される場合、一実施形態では、Ａのみ（Ｂ以外の要素を含んでもよい）；別の実施形態では、Ｂのみ（Ａ以外の要素を含んでもよい）；さらに別の実施形態では、ＡとＢの両方（他の要素を含んでもよい）；等を指すことができる。
本明細書および特許請求の範囲において、本明細書で使用される場合、「または」は、上記のように「および／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト中の項目を分ける場合、「または」または「および／または」は、包括的である、すなわち少なくとも１つの包括であるが、要素の１つより多く、多くまたはリストも含み、さらなるリストされていない項目も含んでもよいと解釈されるものとする。「の１つのみ（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」もしくは「の確実に１つ（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」、または特許請求の範囲において使用される場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」など、明確に反対に示す用語だけが、多くの要素またはリストの要素の確実に１つの要素の包括を指すであろう。一般に、本明細書で使用される用語「または」は、「いずれか（ｅｉｔｈｅｒ）」、「の１つ（ｏｎｅ ｏｆ）」、「の１つのみ（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」または「の確実に１つ（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」などの、排他性の用語によって先行される場合、排他的な代替（すなわち、「１つまたはその他であるが両方ではない」）を示すと解釈されるものとする。特許請求の範囲で使用される場合、「から基本的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」は、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有するものとする。
本明細書および特許請求の範囲において、本明細書で使用される場合、語句「少なくとも１つ」は、１つまたはそれ以上の要素のリストを参照して、要素のリストの任意の１つまたはそれ以上の要素から選択される少なくとも１つの要素を意味するが、要素のリスト内に特に列挙された各および全ての要素の少なくとも１つを必ずしも含まず、要素のリストの要素の任意の組合せを除外しないと理解されるべきである。この定義は、要素が、語句「少なくとも１つ」が指す要素のリスト内で特に同定された要素以外に、特に同定されたこれらの要素に関連するかまたは関連しない要素を表してもよいことも可能にする。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」（または言い換えると「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または言い換えると「Ａおよび／またはＢの少なくとも１つ」）は、一実施形態では、Ｂが存在しない、１つより多くを含んでもよい少なくとも１つのＡ（およびＢ以外の要素を含んでもよい）；別の実施形態では、Ａが存在しない、１つより多くを含んでもよい少なくとも１つのＢ（およびＡ以外の要素を含んでもよい）；さらに別の実施形態では、１つより多くを含んでもよい少なくとも１つのＡ、および１つより多くを含んでもよい少なくとも１つのＢ（および他の要素を含んでもよい）；等を指すことができる。
反対に明確に示さない限り、１つより多くの工程または作用を含む本明細書で請求される任意の方法において、方法の工程または作用の順番は、方法の工程または作用が列挙される順番に必ずしも限定されないことも理解されるはずである。
特許請求の範囲において、ならびに上記の明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「持つ（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「持つ（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「から構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」などの全ての移行句は、制限がないと理解され、すなわち含むが限定されないことを意味する。移行句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および「から基本的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」だけは、米国特許局特許審査便覧２１１１．０３項に記載されるように、それぞれ制限されたまたは一部制限された移行句であるものとする。制限のない移行句（例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」）を使用してこの文書に記載される実施形態も、代替の実施形態では、制限のない移行句によって記載される特徴「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および「から基本的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」と考えられることが理解されるべきである。例えば、本出願が「ＡおよびＢを含む組成物」を記載する場合、本出願は代替の実施形態「ＡおよびＢからなる組成物」および「ＡおよびＢから基本的になる組成物」も考える。
範囲が与えられる場合、終点が含まれる。さらに、他に示されないかまたは文脈および当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表される値は、本発明の異なる実施形態に記載した範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、文脈が明確に他に示さない限り、範囲の下限の単位の１０分の１まで仮定することができる。
本出願は、様々な発行された特許、公開された特許出願、刊行物、および他の論文を参照し、その全てが参照によって本明細書に組み込まれる。任意の組み込まれた参照と本明細書の間に矛盾がある場合、本明細書が優先する。さらに、先行技術内にある、本発明の任意の特定の実施形態は、任意の１つまたはそれ以上の請求項からはっきりと除外され得る。そのような実施形態は、当業者に公知であると思われるため、それらは除外が本明細書にはっきりと記載されない場合でさえも除外され得る。本発明の任意の特定の実施形態は、任意の理由のため、先行技術の存在と関連するかどうかに関わらす、任意の請求項から除外され得る。
当業者は、通常の実験だけを使用して、本明細書に記載される特定の実施形態の多くの等価物を認識するかまたは確かめることができるであろう。本明細書に記載される本実施形態の範囲は、上記の説明に限定されることを意図せず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載される。当業者は、この説明への様々な変更および改変が、以下の特許請求の範囲に定義されるように、本発明の精神または範囲から逸脱することなく行われ得ることを認識するであろう。
本明細書の任意の変数の定義における化学基の列挙の詳述は、任意の単一の基または列挙した基の組合せとして変数の定義を含む。本明細書の変数のための実施形態の詳述は、任意の単一の実施形態または任意の他の実施形態との組合せまたはその部分としてその実施形態を含む。本明細書の実施形態の詳述は、任意の単一の実施形態または任意の他の実施形態との組合せまたはその部分としてその実施形態を含む。

Claims (52)

  1. 骨髄線維症を有する対象を処置する方法であって、
    対象に、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、
    抗体が、
    Ｘ１ＹＧＭＮ（配列番号１０５）（ここで、Ｘ１はＮもしくはＹであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）；
    ＭＩＹＹＤＳＳＸ２ＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０６）（ここで、Ｘ２はＥもしくはＤであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）；
    ＧＸ３ＴＰＤＸ４（配列番号１０７）（ここで、Ｘ３はＴもしくはＳであり得、Ｘ４はＹ、Ｖ、もしくはＫであり得る）として記載される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）；および／または
    ＲＳＳＱＳＬＸ５Ｘ６ＳＤＧＸ７ＴＦＬＸ８（配列番号１０８）（ここで、Ｘ５はＡもしくはＥであり得、Ｘ６はＴ、Ｓ、Ｅ、もしくはＤであり得、Ｘ７はＤ、Ｙ、もしくはＧであり得、Ｘ８はＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、
    Ｘ９ＶＳＸ１０ＲＦＳ（配列番号１０９）（ここで、Ｘ９はＥ、ＤもしくはＡであり得、Ｘ１０はＮ、Ｓ、Ｔ、ＥもしくはＨであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、
    Ｘ１１ＱＸ１２ＴＸ１３ＤＰＸ１４Ｘ１５（配列番号１１０）（ここで、Ｘ１１はＦもしくはＭであり得、Ｘ１２はＶもしくはＡであり得、Ｘ１３はＨもしくはＹであり得、Ｘ１４はＭ、ＬもしくはＶであり得、Ｘ１５はＴもしくはＳであり得る）として記載される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）
    を含む、方法。
  2. 対象が、皮下注射を介して投与される、請求項１に記載の方法。
  3. 骨髄線維症を有する対象が、炎症促進性サイトカインにより誘導されるヘプシジン発現から生じる貧血を有し、抗体の投与が、貧血を減少させる、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 炎症促進性サイトカインが、インターロイキン－６（ＩＬ－６）を含む、請求項３に記載の方法。
  5. 抗体が、配列番号１のＨＣ ＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ ＣＤＲ２、配列番号３のＨＣ ＣＤＲ３、および配列番号１７のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号５のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号２７のＬＣ ＣＤＲ３を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 抗体が、ヒト化ＶＨおよび／またはヒト化ＶＬを含むヒト化抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 抗体が、全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 抗体が、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む全長ＩｇＧである、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 抗体が、配列番号６１または１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項９に記載の方法。
  11. 抗体が、配列番号６３または１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項９に記載の方法。
  12. 対象が、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、ＡＳＸＬ１、ＴＥＴ２、ＮＦＥ２、ＳＨ２Ｂ３、ＳＦ３Ｂ１、またはＣＡＬＲにおいて骨髄線維症惹起突然変異を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 対象が、原発性骨髄線維症を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 対象が、１より高いＤＩＰＳＳスコアを有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 対象が、１０ｇ／ｄＬより低い血清ヘモグロビンレベルを示す、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 対象が、８ｇ／ｄＬより低い血清ヘモグロビンレベルを示す、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 対象が、赤血球輸血依存性である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 対象が、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択される選択的ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤を以前に受けている、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および／または配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体。
  20. ヒト化抗体である、請求項１９に記載の単離抗体。
  21. 全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される、請求項１９または２０に記載の単離抗体。
  22. アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む全長ＩｇＧである、請求項２１に記載の単離抗体。
  23. 配列番号６１または１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２２に記載の単離抗体。
  24. 配列番号６３または１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２２に記載の単離抗体。
  25. 骨髄線維症を有する対象を処置する方法であって、
    対象に、皮下投与により、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、抗体が、
    配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、方法。
  26. 骨髄線維症を有する対象においてＨＪＶ活性を阻害する方法であって、
    対象に、皮下投与により、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、抗体が、
    配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、方法。
  27. 骨髄線維症を有する対象においてヘプシジン－２５を減少させる方法であって、対象に、有効量の、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体を投与することを含み、抗体が、
    配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、方法。
  28. 対象が、皮下注射を介して投与される、請求項２７に記載の方法。
  29. 投与が、投与の４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、または２週間以内にヘプシジン－２５を減少させる、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
  30. 投与が、投与前の対象におけるヘプシジンレベルと比較して少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のヘプシジンだけヘプシジン－２５を減少させる、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 骨髄線維症を有する対象を処置する方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、使用のための単離抗体。
  32. 対象が、皮下投与により投与される、請求項３１に記載の使用のための単離抗体。
  33. 骨髄線維症を有する対象が、炎症促進性サイトカインにより誘導されるヘプシジン発現から生じる貧血を有し、抗体の投与が、貧血を減少させる、請求項３１または３２に記載の使用のための単離抗体。
  34. 炎症促進性サイトカインが、インターロイキン－６（ＩＬ－６）を含む、請求項３３に記載の使用のための単離抗体。
  35. ヒト化ＶＨおよび／またはヒト化ＶＬを含むヒト化抗体である、請求項３１～３４のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  36. 全長ＩｇＧ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦｖからなる群から選択される、請求項３１～３５のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  37. アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む全長ＩｇＧである、請求項３１～３６のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  38. 配列番号６１または１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３７に記載の使用のための単離抗体。
  39. 配列番号６３または１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３７に記載の使用のための単離抗体。
  40. 対象が、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、ＡＳＸＬ１、ＴＥＴ２、ＮＦＥ２、ＳＨ２Ｂ３、ＳＦ３Ｂ１、ＣＡＬＲ、またはこれらの組合せにおいて骨髄線維症惹起突然変異を有する、請求項３１～３９のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  41. 対象が、原発性骨髄線維症を有する、請求項３１～４０のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  42. 対象が、１より高い、適宜１～４、または適宜５～６のＤＩＰＳＳスコアを有する、請求項３１～４１のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  43. 対象が、１０ｇ／ｄＬより低い血清ヘモグロビンレベルを示し、適宜、対象が、８ｇ／ｄＬより低い血清ヘモグロビンレベルを示す、請求項３１～４２のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  44. 対象が、赤血球輸血依存性である、請求項３１～４３のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  45. 対象が、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、パクリチニブ、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＡＧ４９０、およびＰｐＹＬＫＴＫからなる群から選択される選択的ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤を以前に受けている、請求項３１～４４のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  46. 方法が、対象にエリスロポエチン刺激剤、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤、増殖因子リガンドトラップ、および抗線維化剤のうちの１つまたはそれ以上を投与することをさらに含む、請求項３１～４５のいずれか一項に記載の使用のための単離抗体。
  47. 骨髄線維症を有する対象を処置する方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、対象が、単離抗体を皮下投与により投与され、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、使用のための単離抗体。
  48. 骨髄線維症を有する対象においてＨＪＶ活性を阻害する方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、対象が、単離抗体を皮下投与により投与され、抗体が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、使用のための単離抗体。
  49. 骨髄線維症を有する対象においてヘプシジン－２５を減少させる方法における使用のための、ヒトヘモジュベリン（ＨＪＶ）に結合する単離抗体であって、
    配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、使用のための単離抗体。
  50. 対象が、皮下注射を介して投与される、請求項４９に記載の使用のための単離抗体。
  51. 投与が、投与の４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、または２週間以内にヘプシジン－２５を減少させる、請求項４９または請求項５０に記載の使用のための単離抗体。
  52. 投与が、投与前の対象におけるヘプシジンレベルと比較して少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のヘプシジンだけヘプシジン－２５を減少させる、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の方法。
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