JP2018527919A - 抗ｔｉｇｉｔ抗体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ならびに癌および感染症のような疾患の治療におけるこれらの抗体の使用に関する。【選択図】図１

Description

関連出願に対する相互参照
本出願は２０１５年８月１４日付け出願の米国仮特許出願第６２／２０５，０４８号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を主張するものである。
電子的に提出された配列表に対する参照
本出願の配列表は、ファイル名「２４１７８ＷＯＰＣＴＳＥＱ．ｔｘｔ」、２０１６年７月２９日の作成日および１１１ＫＢのサイズを有するＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で電子的に提出されている。ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出されたこの配列表は本明細書の一部であり、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
発明の分野
本発明は、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ならびに癌および感染症のような疾患の治療におけるこれらの抗体の使用に関する。
自己免疫寛容を維持するための免疫チェックポイントとして一般に機能する抑制性免疫調節受容体（ＩＭＲ）が、免疫を回避する腫瘍微小環境の能力の中核であるという発見から、腫瘍免疫療法を可能にする極めて重要な要因が明らかになった。抑制性ＩＭＲの遮断は、活性化サイトカインまたは腫瘍ワクチンでの腫瘍免疫の直接刺激よりも効果的に、強力な腫瘍特異的免疫応答を惹起するようであり、このアプローチはヒトの癌治療を変革する可能性がある。腫瘍臨床試験における応答者の比率を増加させ、腫瘍免疫療法が有効な腫瘍適応症を拡大させるために２以上のＩＭＲに対するアンタゴニスト抗体を組合せる可能性、および他のＩＭＲに対する新規抗体アンタゴニストを開発する可能性に関する重要な示唆および機会が今や得られている。
重要なことに、細胞性免疫を調節する抑制性ＩＭＲおよびリガンドは腫瘍細胞および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）上で一般に過剰発現される。特に、腫瘍におけるＰＤ−Ｌ１の過剰発現は腫瘍特異的Ｔ細胞の枯渇および不良予後に関連している。臨床試験におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１結合の遮断は相当な割合の患者において持続的な腫瘍退縮応答をもたらした。最近の報告は、メラノーマ患者由来の腫瘍特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞におけるＰＤ−１と別の抑制性ＩＭＲ（ＴＩＭ−３）との共発現が、いずれかのＩＭＲのみを発現する細胞と比較して機能障害性のＴ細胞枯渇表現型に関連していることを示している。更に、前臨床腫瘍モデルを用いた幾つかの報告は、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３およびＣＴＬＡ−４を含む複数のＩＭＲの遮断が、ＰＤ−１のみに拮抗する場合よりも効果的に抗腫瘍応答を誘導することを示している。これらの結果は、ＩＭＲ経路を更に研究する重要性を明確に示している。
ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）は、主に活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞上で発現される免疫調節受容体である。ＴＩＧＩＴはＶＳＩＧ９、ＶＳＴＭ３、ＷＵＣＡＭとしても公知である。その構造は１つの細胞外免疫グロブリンドメイン、１型膜貫通領域および２つのＩＴＩＭモチーフを示す。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞上の陽性（ＣＤ２２６）および陰性（ＴＩＧＩＴ）免疫調節受容体ならびにＡＰＣ上で発現されるリガンド（ＣＤ１５５およびＣＤ１１２）からなる共刺激ネットワークの一部を形成する。
ＴＩＧＩＴの構造における重要な特徴は、免疫受容体チロシンに基づく抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）がその細胞質尾部ドメインに存在することである。ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４の場合と同様に、ＴＩＧＩＴの細胞質領域内のＩＴＩＭドメインは、チロシンホスファターゼ、例えばＳＨＰ−１およびＳＨＰ−２をリクルートし、ついでＴ細胞受容体（ＴＣＲ）サブユニット上のＩＴＡＭ（免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ）内のチロシン残基を脱リン酸化すると予想される。したがって、腫瘍細胞またはＴＡＭＳにより発現される受容体−リガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２によるＴＩＧＩＴの結合（連結）は、有効な抗腫瘍免疫を惹起するのに必須であるＴ細胞活性化およびＴＣＲシグナリングの抑制に寄与しうる。したがって、ＴＩＧＩＴに特異的なアンタゴニスト抗体はＴ細胞応答のＣＤ１５５およびＣＤ１１２誘導性抑制を抑制し、抗腫瘍免疫を増強しうるであろう。本発明の目的は、単独で又は他の薬剤と組合せて癌の治療に使用されうる抗ＴＩＧＩＴ抗体を得ることである。
発明の概括
本発明は、以下に特定する構造的および機能的特徴を含む抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントを提供する。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号３、１９、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６、２２、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、該抗体は、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト化されている。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５および５６からなる群から選択される重鎖可変領域と、配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９および８０からなる群から選択される軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５または５６のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９または８０のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５または５６のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９または８０のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含み、ここで、該抗体のフレームワーク領域内にいずれかの配列変異が存在する。前記のもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト化されている。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１および１１２からなる群から選択される重鎖可変領域と、配列番号３０、３１および３２からなる群から選択される軽鎖可変領域とを含む。前記のもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号３０、３１または３２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む。前記のもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号３０、３１または３２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含み、ここで、該抗体のフレームワーク領域内にいずれかの配列変異が存在する。前記のもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、所望により、以下の特徴の少なくとも１つを有していてもよい：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号９、１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５および５６からなる群から選択される重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号１３、１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９および８０からなる群から選択される重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む。この前記実施形態においては、フレームワーク領域内に配列変異が存在する。１つの実施形態においては、該抗体は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２５、２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１および１１２からなる群から選択される重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号２９、３０、３１および３２からなる群から選択される重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む。この前記実施形態においては、フレームワーク領域内に配列変異が存在する。１つの実施形態においては、該抗体は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する。
もう１つの実施形態においては、本発明はまた、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは重鎖ＣＤＲ（配列番号１、２、３、４５、４６または４７）および／または軽鎖ＣＤＲ（配列番号４、５、６、５７、５８、５９、６０、６１または６２）における１、２または３個のアミノ酸置換を含む。１つの実施形態においては、該抗体は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する。
もう１つの実施形態においては、本発明はまた、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７および８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは重鎖ＣＤＲ（配列番号１７、１８、１９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７および８８）および／または軽鎖ＣＤＲ（配列番号２０、２１または２２）における１、２または３個のアミノ酸置換を含む。１つの実施形態においては、該抗体は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒトＴＩＧＩＴに結合する。１つの実施形態においては、該抗体は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号２４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒトＴＩＧＩＴに結合する。１つの実施形態においては、該抗体は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する。１つの実施形態においては、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは３０個以下のアミノ置換を含むその変異体および／または１２個以下のアミノ酸置換を含む配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１２個以下（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個）のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下（１、２、３、４、５、６、７または８個）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１１個以下のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、該置換は重および軽可変鎖のフレームワーク領域内に存在する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１２個以下（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個）のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下（１、２、３、４、５、６、７または８個）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１１個以下のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、該置換は重および軽可変鎖のフレームワーク領域内に存在する。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは２４個以下のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは１２個以下のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１２個以下（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個）のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号３０、３１、３２のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下（１、２、３、４、５、６、７または８個）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１１個以下のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号３０、３１、３２のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、該置換は重および軽可変鎖のフレームワーク領域内に存在する。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１２個以下（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個）のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは８個以下（１、２、３、４、５、６、７または８個）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖もしくは１１個以下のアミノ酸置換を含むその変異体および／または配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖もしくは４個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体または抗原結合性フラグメントに関する。もう１つの実施形態においては、該置換は重および軽可変鎖のフレームワーク領域内に存在する。
前記実施形態のいずれかにおいては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは単離されている。
前記実施形態のいずれかにおいては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは組換え抗体である。
前記実施形態のいずれかにおいては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは完全長抗体である。
前記実施形態のいずれかにおいては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト化抗体である。
前記実施形態のいずれかにおいては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、２本の重鎖と２本の軽鎖とを含むヒト化抗体である。１つの実施形態においては、該重鎖はＩｇＧ１アイソタイプのものであり、該軽鎖はカッパ軽鎖である。前記実施形態のいずれかにおいては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ａ）前記の可変重鎖のいずれかと、（ｂ）リーダーペプチド（例えば、配列番号４０のリーダーペプチド）とからなる可変重鎖領域を含みうる。前記実施形態のいずれかにおいては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ａ）前記の軽重鎖のいずれかと、（ｂ）リーダーペプチド（例えば、配列番号４１のリーダーペプチド）とからなる軽重鎖領域を含みうる。
前記実施形態のいずれかにおいては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、前記の可変重鎖のいずれかと任意のヒト重鎖定常ドメインとを含む抗体である。１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントはＩｇＧアイソタイプのものであり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ヒト重鎖定常ドメインを含む。１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト重鎖ＩｇＧ１定常ドメイン（配列番号４４）またはその変異体を含み、ここで、該変異体は２０個以下の修飾アミノ酸置換を含む。１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号４４のアミノ酸配列を含むヒト重鎖ＩｇＧ１定常ドメインを含む抗体である。１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト重鎖ＩｇＧ１定常ドメインを含み、ここで、該ＩｇＧ１定常ドメインはアフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）されている。１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト重鎖ＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体を含み、ここで、該変異体は２０個以下の修飾アミノ酸置換を含む。もう１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒト重鎖ＩｇＧ４定常ドメインを含み、ここで、２２８位（ＥＵ番号付け法を用いた場合）のアミノ酸はＳｅｒからＰｒｏへと置換されている。１つの実施形態においては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号４２のアミノ酸配列を含むヒト重鎖ＩｇＧ４定常ドメインを含む。
他の実施形態においては、該定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの天然重鎖定常ドメインのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。特定の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含んでいてもよく、あるいはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
他の実施形態においては、該抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せをを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントはＴＩＧＩＴに結合する。他の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含んでいてもよく、あるいはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
他の実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。もう１つの態様においては、重鎖定常ドメインはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、配列番号４２の１０８位（１０８位のセリン）に対応する２２８位（ＥＵ番号付け法を用いた場合）におけるセリン残基の、プロリンでの置換を更に含む。他の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含んでいてもよく、あるいはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
他の実施形態においては、該抗体は、配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインを含む。他の態様においては、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。他の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含んでいてもよく、あるいはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
他の実施形態においては、該抗体は、配列番号４４に示されているアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む。他の態様においては、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。他の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含んでいてもよく、あるいはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
前記実施形態のいずれかにおいては、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントは前記の可変軽鎖のいずれかとヒト軽鎖定常ドメインとを含みうる。１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントはヒトカッパ軽鎖定常ドメインまたはその変異体を含み、ここで、該変異体は２０個以下の修飾アミノ酸置換を含む。もう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異体を含み、ここで、該変異体は２０個以下の修飾アミノ酸置換を含む。１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号４３のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含む。
本発明は更に、アミノ酸配列ＳＳＴＴＡＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬ（配列番号１１３）、ＩＣＮ、ＩＹＨＴＹＰＧＴ（配列番号１１４）およびＧＲＩＦＬ（配列番号１１５）を含むＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、本発明は、アミノ酸ＳＳＴＴＡＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬ（配列番号１１３）、ＩＣＮ、ＩＹＨＴＹＰＧＴ（配列番号１１４）およびＧＲＩＦＬ（配列番号１１５）から実質的になるＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
もう１つの実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４定常ドメインまたはそれらの修飾誘導体を含む。
もう１つの実施形態においては、該ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常ドメインは、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常ドメインは、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して少なくとも１、２、３個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインは、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリンの、プロリン残基での置換を少なくとも含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常ドメインは少なくともＣ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、アミノ酸配列ＳＳＴＴＡＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬ（配列番号１１３）、ＩＣＮ、ＩＹＨＴＹＰＧＴ（配列番号１１４）およびＧＲＩＦＬ（配列番号１１５）を含むＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４定常ドメインまたはそれらの修飾誘導体を含む。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインは、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリンの、プロリン残基での置換を少なくとも含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは少なくともＣ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、２本の軽鎖と２本の重鎖とを有する四量体構造を含み、ここで、各軽鎖は、配列番号１６、１７、１８、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９または８０のいずれか１つを含む可変領域とヒトカッパ軽鎖定常領域（配列番号４３）とを含み、各重鎖は、配列番号９、１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５または５６のいずれか１つを含む可変領域とヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号４４）とを含む。
１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、２本の軽鎖と２本の重鎖とを有する四量体構造を含み、ここで、各軽鎖は、配列番号２９、３０、３１または３２のいずれか１つを含む可変領域とヒトカッパ軽鎖定常領域（配列番号４３）とを含み、各重鎖は、配列番号２５、２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のいずれか１つを含む可変領域とヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号４４）とを含む。
１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、２本の軽鎖と２本の重鎖とを有する四量体構造を含み、ここで、各軽鎖は、配列番号１３〜１６または２９〜３２のいずれか１つを含む可変領域とヒトカッパ軽鎖定常領域（配列番号４３）とを含み、各重鎖は、配列番号９〜１３または２５〜２８のいずれか１つを含む可変領域、ヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号４４）を含む。
前記実施形態のいずれかにおいては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは少なくとも１つの治療剤にコンジュゲート化（結合）されうる。１つの実施形態においては、該治療剤は第２抗体またはそのフラグメント、免疫調節剤、ホルモン、細胞毒性剤、酵素、放射性核種、第２抗体であって少なくとも１つの免疫調節剤、酵素、放射能標識、ホルモン、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは細胞毒性剤にコンジュゲート化されたもの、あるいはそれらの組合せを含む。
本発明はまた、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２のいずれか１つのアミノ酸配列または任意の前記配列の断片を含む単離されたポリペプチドを提供する。
本発明はまた、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか１つをコードする単離された核酸を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のポリペプチドのいずれか１つをコードする単離された核酸を提供し、ここで、該ポリペプチドは、所望により、リーダー配列を含んでいてもよい。本発明はまた、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のポリペプチド（ここで、該ポリペプチドは、所望により、リーダー配列を含んでいてもよい）のいずれか１つをコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。これらの単離された核酸およびそれらを含む発現ベクターは、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントを組換え宿主細胞内で発現させるために使用されうる。したがって、本発明はまた、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のポリペプチド（ここで、該ポリペプチドは、所望により、リーダー配列を含んでいてもよい）のいずれか１つをコードする単離された核酸を含む宿主細胞を提供する。１つの実施形態においては、該宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞である。１つの実施形態においては、該宿主細胞は酵母細胞、例えばピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞である。
本発明はまた、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。１つの実施形態においては、該組成物はもう１つの治療剤を含む。１つの実施形態においては、前記のもう１つの治療剤は、以下のものからなる群から選択される：抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントおよびニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントからなる群から選択される。
１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
１つの実施形態においては、本発明は、（ｉ）本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントと、（ｉｉ）配列番号３６の重鎖配列および配列番号３７の軽鎖可変配列を含む抗ＰＤ１抗体とを含む組成物を提供する。もう１つの実施形態においては、本発明は、（ａ）本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントと、（ｂ）配列番号３８の重鎖配列および配列番号３９の軽鎖可変配列を含む抗ＰＤ１抗体とを含む組成物を提供する。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は抗ＴＩＧＩＴ抗体の投与の前に投与される。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は抗ＴＩＧＩＴ抗体の投与の４〜１０日前に投与される。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１抗体での前治療は免疫細胞をモジュレーションして、抗ＴＩＧＩＴ抗体のＦｃ媒介性機能の増強をもたらしうる。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントと１つ、２つ又はそれ以上の治療剤との組合せを含み、ここで、第２の治療剤は、以下のものからなる群から選択される：抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか１つを含む容器または注射装置を提供する。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、本発明の抗体（またはその抗原結合性フラグメント）の重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、該ポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養し、所望により、該抗体または抗原結合性フラグメントを該宿主細胞および／または培地から回収することを含む、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法を提供する。１つの実施形態においては、該重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび該軽鎖をコードするポリヌクレオチドは単一のベクター内に存在する。もう１つの実施形態においては、該重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび該軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、異なるベクター内に存在する。１つの実施形態においては、該重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび該軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗体または抗原結合性フラグメントをコードしている。もう１つの実施形態においては、該重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび該軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗体または抗原結合性フラグメントをコードしている。
本発明はまた、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を、所望によりもう１つの治療剤または治療手技と組合せて、対象に投与することを含む、癌の治療を要する対象における癌の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、治療される対象はヒト対象である。１つの実施形態においては、前記のもう１つの治療剤は、以下のものからなる群から選択される：抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントおよびニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントからなる群から選択される。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与し、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントを更に投与することを含む、癌の治療を要する対象における癌の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントおよびニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントからなる群から選択される。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を、所望によりもう１つの治療剤または治療手技と組合せて、対象に投与することを含む、対象における感染または感染症の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、治療される対象はヒト対象である。１つの実施形態においては、前記のもう１つの治療剤は、以下のものからなる群から選択される：抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントおよびニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）またはその抗原結合性フラグメントからなる群から選択される。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントを含むワクチンを提供する。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、サンプルを本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触させ、該抗体またはフラグメントと該ペプチドとの複合体の存在を検出することを含む、サンプルにおけるＴＩＧＩＴペプチドまたはその断片の存在を検出するための方法を提供し、ここで、該複合体の検出はＴＩＧＩＴペプチドの存在を示す。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、免疫細胞を本発明の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか１つと接触させることを含む、免疫細胞の活性を増強する方法を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、免疫細胞の活性を増強する必要のある対象に、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を投与することを含む、免疫細胞の活性を増強する方法を提供する。１つの実施形態においては、該方法は、癌の治療、感染または感染症の治療のために、あるいはワクチンアジュバントとして使用される。１つの実施形態においては、免疫細胞の活性の増強は、免疫細胞の増殖を測定することにより検出されうる。例えば、Ｔ細胞の活性の増強は、Ｔ細胞の増殖を測定することにより検出されうる。１つの実施形態においては、免疫細胞の活性の増強は、対象由来のサンプルにおいてエクスビボでＴ細胞活性化を測定することにより検出されうる。１つの実施形態においては、Ｔ細胞活性の増強は、（ｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３からなる群から選択されるサイトカインの産生を誘導するためのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナリングの直接抗ＣＤ３ ｍＡｂ刺激または混合リンパ球反応を測定し、（ｉｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３からなる群から選択される１以上のサイトカインのＳＥＢ誘導性産生を測定し、あるいは（ｉｉｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３からなる群から選択されるサイトカインのＴＴ誘導性産生を測定することにより決定される。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本発明はまた、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体およびアンタゴニスト抗ＰＤ１抗体の有効量を対象に投与することを含む、対象における癌または感染症の治療方法を含み、ここで、抗ＴＩＧＩＴ抗体はアフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）されている。１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。１つの実施形態においては、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
詳細な説明
略語
本発明の詳細な説明および実施例の全体にわたって、以下の略語を用いる。
ＡＤＣＣ 抗体依存性細胞傷害；
ＣＤＣ 補体依存性細胞傷害；
ＣＤＲ Ｋａｂａｔ（カバト）番号付け系を用いて定められた、免疫グロブリン可変領域内の相補性決定領域；
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣；
ＥＬＩＳＡ 酵素結合イムノソルベントアッセイ；
ＦＲ 抗体フレームワーク領域：ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域；
ＨＲＰ ホースラディッシュペルオキシダーゼ；
ＩＦＮ インターフェロン；
ＩＣ５０ ５０％の抑制をもたらす濃度；
ＩｇＧ 免疫グロブリンＧ；
Ｋａｂａｔ Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ（（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）により開発された免疫グロブリンアライメントおよび番号付け系；
ｍＡｂまたはＭａｂまたはＭＡｂ モノクローナル抗体；
ＳＥＢ スタヒロコッカスエンテロトキシンＢ；
ＴＴ 破傷風トキソイド；
Ｖ領域 異なる抗体間で配列が可変性であるＩｇＧ鎖のセグメント。それは軽鎖内のＫａｂａｔ残基１０９および重鎖内の１１３まで伸長する；
ＶＨ 免疫グロブリン重鎖可変領域；
ＶＫ 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域。
定義
本発明がより容易に理解されうるように、幾つかの科学技術用語を以下に具体的に定義する。本明細書中の他の箇所で特に定義されていない限り、本明細書中で用いる他の全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる単数形の語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、その対応複数対象物を含む。
「投与」および「治療（処理）」は、それが動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官または生物学的流体に適用される場合には、該動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官または生物学的流体との外因性医薬、治療剤、診断剤または組成物の接触を意味する。細胞の処理は、該細胞との試薬の接触、および該細胞に接触している流体との試薬の接触を含む。「投与」および「処理（治療）」は、試薬、診断剤、結合性化合物または別の細胞による、例えば細胞の、インビトロおよびエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）処理をも意味する。
「治療する」または「治療」は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療剤を、該治療剤が治療活性を示す疾患の症状の１以上を有する又は該疾患を有する疑いのある対象または患者に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、該治療剤は、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療剤の量は患者の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられるいずれかの臨床的尺度により評価されうる。
ＴＩＧＩＴ
ＴＩＧＩＴなる語はヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴおよびアカゲザルＴＩＧＩＴ、ならびにそれらの断片、例えば、シグナルペプチドを欠くそれらの成熟断片を含む。本発明の１つの実施形態においては、ヒトＴＩＧＩＴのアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ ７７６１６０．２（配列番号３３）のアミノ酸残基２５〜２４４において開示されているアミノ酸配列を含む（配列番号３３のアミノ酸残基１〜２４は、成熟ＴＩＧＩＴタンパク質から除去されるリーダーペプチドに対応する）。
本発明の１つの実施形態においては、カニクイザル、例えばマカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＴＩＧＩＴのアミノ酸配列は、配列番号３４に開示されているアミノ酸配列を含む。Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＸＰ ００５５４８１５７を参照されたい。アカゲザルＴＩＧＩＴのアミノ酸配列はカニクイザルＴＩＧＩＴのアミノ酸配列と同一である（配列番号３４のアミノ酸残基１〜２４は、成熟ＴＩＧＩＴタンパク質から除去されるリーダーペプチドに対応する）。
抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント
本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント、およびそのような抗体またはフラグメントの用途を提供する。幾つかの実施形態においては、抗ＴＩＧＩＴ抗体は単離されている。
本明細書中で用いる抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを意味する。「ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する」抗体またはその抗原結合性フラグメントは、約１ｎＭのＫＤまたはより高いアフィニティ（例えば、１ｎＭ〜２ｐＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭまたは２ｐＭ）でヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。例えば、ヒトＴＩＧＩＴに「特異的に結合する」抗体はヒトＣＤ２２６、ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２には結合しない。もう１つの例としては、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＴＩＧＩＴのＦＬＡＧ（登録商標）タグ付き形態には結合しうるが、ヒトＴＩＧＩＴエピトープを欠く他のＦＬＡＧ（登録商標）タグ付きタンパク質には結合しない。１つの実施形態においては、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する本発明の抗体はカニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴに対しても交差反応性である。本明細書中で用いる「交差反応性」は、抗体が他の種由来の相同タンパク質と反応する能力を意味し、これは、当技術分野で公知の任意のアッセイを用いて決定されうる。抗体がヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するかどうかは、当技術分野で公知の任意のアッセイを用いて判定されうる。結合アフィニティおよび交差反応性を決定するための当技術分野で公知のアッセイの例には、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）が含まれる。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその使用方法を含む。本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を意味する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、所望の生物活性を示すモノクローナル抗体（２本の軽鎖と２本の重鎖とを含む完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体を含むが、これらに限定されるものではない。
本発明は非ヒト親（例えば、マウスおよびげっ歯類）抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントならびにそれらの使用方法を含む。これらの抗体は、ヒト治療用抗体またはフラグメントとしての使用のための抗体のヒト化のように、意図される使用のために修飾されうる。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントおよびその使用方法を含む。本明細書中で用いる「抗体フラグメント」または「抗原結合性フラグメント」は、特に示されていない限り、抗体の抗原結合性フラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗原結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、例えばｓｃＦｖ；ならびに完全長抗体鎖から又は抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体およびナノボディが含まれるが、これらに限定されるものではない。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ Ｆａｂフラグメントおよびその使用方法を含む。「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖ならびに１個の重鎖の可変領域およびＣＨ１から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合を形成し得ない。「Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
本発明は、抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（Ｆｃ領域を含む）ならびにそれらの使用方法を含む。「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１およびＣＨ２ドメインを含む２個の重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは２以上のジスルフィド結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ Ｆａｂフラグメントおよびその使用方法を含む。「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１個の重鎖の部分またはフラグメント、そしてまた、ＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の領域を含有し、その結果、２個のＦａｂフラグメントの、２個の重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成しうる。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびその使用方法を含む。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分を含有する２個の重鎖を含有し、その結果、それらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィド結合により連結された２個のＦａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は抗体のペプシン切断の産物でありうる。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ Ｆｖフラグメントおよびその使用方法を含む。「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ ｓｃＦｖフラグメントおよびその使用方法を含む。「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体なる語は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体フラグメントであって、これらのドメインが単一ポリペプチド鎖内に存在するものを意味する。一般に、Ｆｖポリペプチドは更に、抗原結合のための所望の構造をｓｃＦｖが形成することを可能にする、ＶＨおよびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖの総説としては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ ＯＦ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。また、国際特許出願公開番号ＷＯ ８８／０１６４９ならびに米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２６０，２０３号を参照されたい。
本発明は抗ＴＩＧＩＴドメイン抗体およびその使用方法を含む。「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能性の免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの場合には、２以上のＶＨ領域がペプチドリンカーにより共有結合されて２価ドメイン抗体を形成する。２価ドメイン抗体の、２個のＶＨ領域は、同じまたは異なる抗原を標的化しうる。
本発明は抗ＴＩＧＩＴ二価抗体およびその使用方法を含む。「二価抗体」は２個の抗原結合部位を含む。幾つかの場合には、それらの２個の結合部位は同じ抗原特異性を有する。しかし、二価抗体は二重特異性でありうる（後記を参照されたい）。
本発明は抗ＴＩＧＩＴジアボディおよびその使用方法を含む。本明細書中で用いる「ジアボディ」なる語は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上で２個のドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、２個の抗原結合部位を生成する。ジアボディは、例えばＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８に、より詳細に記載されている。操作された抗体変異体の総説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
典型的には、何らかの方法で修飾された本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、活性がモル基準で表された場合、（親抗体と比較した場合に）その結合活性の少なくとも１０％を保有する。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは親抗体としてのＴＩＧＩＴ結合アフィニティの少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％またはそれ以上を保有する。また、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異体」と称される）を含みうると意図される。
本発明は、単離された抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントならびにそれらの使用方法を含む。「単離（された）」抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それらが産生された細胞または細胞培養からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含有しない。そのような生物学的分子には、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地のような他の物質が含まれる。単離された抗体または抗原結合性フラグメントは更に、宿主細胞からの生物学的分子または宿主細胞の増殖培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に含有しない。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような生物学的分子の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在、または該抗体もしくはフラグメントを含む医薬製剤の成分を指すことを意図したものではない。
本発明はモノクローナル抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。また、本発明は、多くの（ｐｌｕｒａｌｉｔｙ）単離されたモノクローナル抗体を含むモノクローナル組成物を含む。本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」なる語は実質的に均一な抗体の集団を意味し、すなわち、該集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる可能な自然突然変異以外は、アミノ酸配列において同一である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープに対してしばしば特異的である可変ドメイン（特にＣＤＲ）内に異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという該抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による該抗体の製造を要するとは解釈されない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ２２２：５８１−５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
本発明は抗ＴＩＧＩＴキメラ抗体（例えば、ヒト定常ドメイン／マウス可変ドメイン）およびその使用方法を含む。本明細書中で用いる「キメラ抗体」は、第１抗体からの可変ドメインと第２抗体からの定常ドメインとを有する抗体であり、ここで、第１抗体および第２抗体は異なる種からのものである（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５）。典型的には、可変ドメインはげっ歯類のような実験動物からの抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列はヒト抗体から得られ、その結果、生じるキメラ抗体は、ヒト対象において有害な免疫応答を惹起する可能性が、親（例えば、マウス）抗体より低いであろう。
本発明は抗ＴＩＧＩＴヒト化抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化されたラットまたはマウス抗体）ならびにそれらの使用方法を含む。本発明は、１４Ｄ７抗体（配列番号７および８を含む）または２６Ｂ１０抗体（配列番号２３および２４を含む）の任意のヒト化形態を含む。本明細書中で用いる「ヒト化抗体」なる語は、ヒト抗体および非ヒト（例えば、マウスまたはラット）抗体の両方からの配列を含有する抗体の形態を意味する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含み、ここで、超可変ループの全部または実質的に全部は非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全部または実質的に全部はヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、ヒト免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含みうる。
一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとしての、抗体のアイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。
典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方はＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３の定義に基づいている。
本明細書中で用いる「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす、抗体またはその抗原結合性フラグメントのアミノ酸残基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変ドメイン内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３ならびに重鎖可変ドメイン内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（配列により抗体のＣＤＲ領域を定めている）を参照されたい。また、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（構造により抗体のＣＤＲ領域を定めている）も参照されたい。本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基なる語は、ＣＤＲ残基として本明細書中で定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。
「単離された核酸分子」または「単離されたポリヌクレオチド」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っていない、あるいはそれが天然で連結していないポリヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは合成由来のＤＮＡまたはＲＮＡあるいはそれらの何らかの組合せを意味する。本開示の目的においては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定されている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、および／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。
「制御配列」なる語は、特定の宿主生物における機能的に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を意味する。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが公知である。
核酸またはポリヌクレオチドが「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の転写に影響を及ぼす場合であり、あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、翻訳を促進するようにそれが位置している場合である。一般に（しかし常にそうであるわけではないが）、「機能的に連結（されている）」は、連結されているそれらのＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ、リーディングが合致していることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は簡便な制限部位における連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、通常の慣例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。
本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用いられ、全てのそのような表示は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」なる語は、導入（トランスファー）の数には無関係に、初代対象細胞、およびそれに由来する培養を含む。また、意図的な又は故意でない突然変異のため、全ての後代が厳密に同一のＤＮＡ含量を有するわけではないと理解される。元の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体後代も含まれる。異なる名称が示される場合、それは文脈から明らかであろう。
本明細書中で用いる「生殖系列配列」は未再構成免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を意味する。いずれかの適当な未再構成免疫グロブリン配列源が用いられうる。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ ａｎｄ Ｓｋｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈのウェブサイト上でＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ生殖系列データベースから得られうる。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉら，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：Ｄ２５６−Ｄ２６１に記載されているとおりに得られうる。
典型的な抗ＴＩＧＩＴ抗体の物理的および機能的特性
本発明は、特定されている構造的および機能的特徴を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント、ならびに疾患（例えば、癌または感染症）の治療または予防における該抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用方法を提供する。
「本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント」は、本明細書に記載されている任意の抗体もしくはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２８Ｂ１０またはこれらの抗体のヒト化形態）を含む。
交差遮断性抗体およびその抗原結合性フラグメントは、標準的な結合アッセイ（例えば、ＢＩＡＣｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー）において本発明の抗体と交差競合するそれらの能力に基づいて特定されうる。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイが使用可能であり、該アッセイにおいては、組換えＴＩＧＩＴ（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ）タンパク質をプレート上に固定化し、該抗体の１つを蛍光標識し、該標識抗体の結合に関して競合する非標識抗体の能力を評価する。追加的または代替的に、交差競合する該抗体の能力を評価するために、ＢＩＡｃｏｒｅ分析が用いられうる。試験抗体がＴＩＧＩＴ（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ）への別の抗体（例えば、抗体１４Ｄ７または２６Ｂ１０）の結合を抑制しうることは、該試験抗体がＴＩＧＩＴ（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ）への結合に関して別の抗体（例えば、１４Ｄ７または２６Ｂ１０）と競合可能であり、したがって幾つかの場合には、抗体１４Ｄ７または２６Ｂ１０と同じＴＩＧＩＴ（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ）上のエピトープあるいは重複エピトープに結合しうることを示している。
前記のとおり、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントのいずれかと同じエピトープに結合する抗体およびフラグメントも本発明の一部を構成する。更に、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれかにより結合されるエピトープと重複するエピトープに結合する抗体も本発明の一部を構成する。標的抗原上の抗体エピトープを位置決定（マッピング）するために幾つかの方法が利用可能であり、それらには、Ｈ／Ｄ−Ｅｘ、質量分析、Ｘ線結晶解析、ペプスキャン（ｐｅｐｓｃａｎ）分析および部位特異的突然変異誘発が含まれる。例えば、タンパク質分解および質量分析と組合されたＨＤＸ（水素重水素交換）が、特異的抗原Ｙ上の抗体のエピトープを決定するために用いられうる。ＨＤＸ−ＭＳは、Ｄ２Ｏ中で単独で又はその抗体の存在下で種々の時間間隔でインキュベートした場合の、抗原による重水素取り込みの度合の正確な測定および比較に基づいている。重水素は露出領域内のタンパク質のアミドバックボーン上の水素と交換されるが、抗体に結合した抗原の領域は保護され、タンパク質分解断片のＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析の後で僅かな交換しか又は交換を全く示さないであろう。
本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体の免疫グロブリン鎖およびそれらのＣＤＲの例には、表４に開示されているものが含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明は、配列番号１〜３２、４５〜１１２のアミノ酸配列を含む又はそれらからなる任意のポリペプチド、およびそのようなポリペプチドをコードする組換えヌクレオチドを含む。
本発明の範囲は、本明細書に記載されている免疫グロブリン鎖の変異体（例えば、配列番号７〜１６、４８〜５６、６３〜８０、２３〜３２および８９〜１１２のいずれか）を含む単離された抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化抗体）を含み、ここで、該変異体は以下の特徴の１以上を示す：（ｉ）ヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
他の実施形態においては、本発明は、配列番号７〜１６、４８〜５６、６３〜８０、２３〜３２および８９〜１１２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化抗体）を提供し、ここで、該変異体は所望の結合および特性、例えば以下のものを示す：（ｉ）表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する；（ｉｉ）カニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴと交差反応する；（ｉｉｉ）ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する；（ｉｖ）Ｔ細胞活性化を増強する；（ｖ）ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を刺激する；（ｖｉ）コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導される活性化のＴ細胞抑制の誘導を遮断する。
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質におけるアミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、この場合、そのような変化は、しばしば、該タンパク質の生物活性を変化させることなく施されうる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を表１に示す。
Figure 2018527919
本発明の抗体の機能保存的変異体も本発明に含まれる。本明細書中で用いる「機能保存的変異体」は、所望の特性、例えば抗原アフィニティおよび／または特異性を改変することなく１以上のアミノ酸残基が変化している、抗体またはフラグメントを意味する。そのような変異体は、類似特性を有するアミノ酸でのアミノ酸の置換、例えば、表１の保存的アミノ酸置換を含むが、これらに限定されるものではない。また、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個まで又はそれ以上のアミノ酸置換を有する、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体のＶＬドメインを含む単離されたポリペプチド（例えば、配列番号８、１３〜１６、２４、２９〜３３、６３〜８０）、および本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体のＶＨドメインを含む単離されたポリペプチド（例えば、配列番号７、９〜１２、２４、２６〜２９、４８〜５６、８９〜１１２）を提供する。
もう１つの実施形態においては、本明細書に記載されているＶＬドメインまたはＶＨドメインの１以上に対して少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％または７５％の配列同一性を有するＶＬドメインおよびＶＨドメインを有し、ＴＩＧＩＴへの特異的結合を示し、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、本発明の結合性抗体またはその抗原結合性フラグメントは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個まで又はそれ以上のアミノ酸置換を有するＶＬおよびＶＨドメイン（シグナル配列を有する及び有さない）を含み、ＴＩＧＩＴへの特異的結合を示す。
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド
本発明は更に、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントのポリペプチドまたは免疫グロブリン鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む。例えば、本発明は、配列番号１〜３２または４５〜１１２に記載されているアミノ酸をコードするポリヌクレオチド、ならびにそれらにハイブリダイズするポリヌクレオチド、そしてまた、そのようなハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる任意のポリペプチドを含む。
一般に、該ポリヌクレオチドは低度、中等度または高度なストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズし、ＴＩＧＩＴ（ヒト、アカゲザルおよび／またはカニクイザル、例えばマカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））に結合する能力を維持する抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードしている。第１ポリヌクレオチド分子が第２ポリヌクレオチド分子に「ハイブリダイズ可能」と言えるのは、温度および溶液イオン強度の適当な条件下（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲を参照されたい）、第１ポリヌクレオチド分子の一本鎖形態が第２ポリヌクレオチド分子にアニーリングしうる場合である。温度およびイオン強度の条件はハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。典型的な低度ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は５５℃、５×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳおよびホルムアミドの非存在；または３０％ ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．５％ ＳＤＳ、４２℃を含む。典型的な中等度ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は５×または６×ＳＳＣの存在下の４０％ ホルムアミド、および０．１％ ＳＤＳ、４２℃である。高度ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は５０％ ホルムアミド、５×または６×ＳＳＣ、４２℃、または所望により、より高い温度（例えば、５７℃、５９℃、６０℃、６２℃、６３℃、６５℃または６８℃）である。一般に、ＳＳＣは０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび０．０１５Ｍ クエン酸Ｎａである。ハイブリダイゼーションは、それらの２つのポリヌクレオチドが相補的配列を含有することを要する。尤も、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに応じて、塩基間のミスマッチが可能である。ポリヌクレオチドのハイブリダイゼーションのための適当なストリンジェンシーはポリヌクレオチドの長さ、および相補性の度合、当技術分野でよく知られた変数に左右される。２つのヌクレオチド配列間の類似性または相同性の度合が大きければ大きいほど、それらの核酸がハイブリダイズしうるストリンジェンシーは高くなる。１００ヌクレオチドを超える長さのハイブリッドの場合、融解温度を計算するための式が導き出されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲，９．５０−９．５１を参照されたい）。より短いポリヌクレオチド、例えばオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションの場合、ミスマッチの位置がより重要となり、オリゴヌクレオチドの長さがその特異性を決定する（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前掲，１１．７−１１．８を参照されたい）。
もう１つの実施形態においては、本明細書に記載されている単離された抗体または抗原結合性フラグメントのポリペプチド鎖をコードする単離されたポリヌクレオチド、例えばＤＮＡを提供する。１つの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは、本発明の少なくとも１つの成熟免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメインおよび／または本発明の少なくとも１つの成熟免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードしている。幾つかの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは単一ポリヌクレオチド分子上で軽鎖および重鎖の両方をコードしており、他の実施形態においては、該軽鎖および重鎖は別々のポリヌクレオチド分子上でコードされる。もう１つの実施形態においては、該ポリヌクレオチドは更に、シグナル配列をコードしている。
１つの実施形態においては、本発明は、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号３、４５、４６または４７）を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインまたはその抗原結合性フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号５）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号６、５７、５８、５９，６０、６１または６２）を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインまたはその抗原結合性フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号７の免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号８の免疫グロブリン重鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号９〜１２のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号４８〜５６のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１３〜１６のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６３〜８０のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１７）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号１９）を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインまたはその抗原結合性フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号２０）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号２１）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号２２）を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインまたはその抗原結合性フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２３の免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２４の免疫グロブリン重鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２５〜２８のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号８９〜１１２のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号２９〜３２のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む。
本発明はまた、本発明の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター、例えば発現ベクター、例えばプラスミドを提供し、ここで、該ポリヌクレオチドは、宿主細胞が該ベクターでトランスフェクトされた場合に宿主細胞により認識される制御配列に機能的に連結されている。また、本発明のベクターを含む宿主細胞も提供する。また、該抗体またはその抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン鎖をコードする発現ベクターまたは核酸を含有する宿主細胞を培地内で培養し、該宿主細胞または培地から該抗原またはその抗原結合性フラグメントを単離することを含む、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはポリペプチドの製造方法も提供する。
同様に本発明に含まれるものは、ＢＬＡＳＴアルゴリズム［ここで、該アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列の間で最大マッチを与えるように選択される（例えば、予想閾値：１０；ワードサイズ：３；クエリ範囲内の最大マッチ：０；ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス；ギャップコスト：存在１１、伸長１；条件付き組成スコアマトリックス補正（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｓｃｏｒｅ ｍａｔｒｉｘ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ））］により比較を行った場合、本発明で提供される抗体のアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％同一である、８０％同一である、より好ましくは、少なくとも約９０％同一である、最も好ましくは、少なくとも約９５％（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、例えば免疫グロブリンポリペプチドである。
配列同一性は、２つの配列が最適にアライメントされた場合に２つのポリペプチドのアミノ酸が同等位置において同一である度合を意味する。
以下の参考文献は、配列分析にしばしば使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関するものである：ＢＬＡＳＴアルゴリズム：Ａｌｔｓｃｈｕｌら（２００５）ＦＥＢＳ Ｊ．２７２（２０）：５１０１−５１０９；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．ら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６−２７２；Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１−１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ら（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９−６５６；Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．ら（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９−１６３；Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ら（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｉ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：６７−７０；アライメント・スコアリング・システム：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．ら，“Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３４５−３５２，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｍ．ら，“Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ”，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．“Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（編），ｐｐ．３５３−３５８，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５−５６５；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．ら（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ３：６６−７０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ．ら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５−１０９１９；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０−３００；アライメント統計学：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４−２２６８；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７；Ｄｅｍｂｏ，Ａ．ら（１９９４）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２−２０３９；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．“Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ編），（１９９７）ｐｐ．１−１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
結合アフィニティ
限定的なものではなく一例に過ぎないが、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に少なくとも約１×１０−９ＭのＫＤ値（すなわち、１×１０−９Ｍ以下のＫＤ値）でヒトＴＩＧＩＴに結合しうる。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に少なくとも約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合しうる。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合しうる。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、ＢＩＡＣＯＲＥまたは類似技術により測定された場合に少なくとも約５０ｐＭのＫＤ値（すなわち、約５０ｐＭ以下のＫＤ値）でヒトＴＩＧＩＴに結合しうる。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、ＢＩＡＣＯＲＥまたは類似技術により測定された場合に少なくとも約１０ｐＭのＫＤ値（すなわち、約１０ｐｍ以下のＫＤ値）でヒトＴＩＧＩＴに結合しうる。１つの実施形態においては、本発明の抗体および抗原結合性フラグメントは、ＢＩＡＣＯＲＥまたは類似技術により測定された場合に約５０ｐＭ〜約１ｐＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合しうる。
免疫細胞活性化
幾つかの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは免疫細胞の活性を増強する。免疫細胞の活性の増強は、当技術分野で公知のいずれかの方法を用いて検出されうる。１つの実施形態においては、免疫細胞の活性の増強は、免疫細胞の増殖を測定することにより検出されうる。例えば、Ｔ細胞の活性の増強は、シグナル伝達事象、例えば、転写調節因子にシグナルを伝達する免疫受容体もしくは下流キナーゼのチロシンリン酸化、またはＴ細胞の増殖を測定することにより検出されうる。他の実施形態においては、免疫細胞の活性の増強は、特定の標的細胞に対するＣＴＬもしくはＮＫ細胞の細胞傷害機能、またはＩＦＮγサイトカイン応答（これは抗腫瘍免疫の刺激に関連している）を測定することにより検出されうる。更に他の実施形態においては、免疫細胞の活性の増強は、対象由来のサンプルにおいてエクスビボでＴ細胞活性化を測定することにより検出されうる。１つの実施形態においては、Ｔ細胞活性の増強は、（ｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３からなる群から選択される１以上の炎症性サイトカインのＳＥＢ（スタヒロコッカスエンテロトキシンＢ）誘導性産生を測定し、あるいは（ｉｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３からなる群から選択されるサイトカインの産生を誘導するためのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナリングの直接抗ＣＤ３ ｍＡｂ刺激または混合リンパ球反応を測定することにより決定される。ある実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントはＩＬ−２および／またはＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産生を少なくとも１．５倍刺激する。
本発明はアンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントならびにそれらの使用方法を含む（例えば、ヒト化アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体およびフラグメント）。アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、例えば、ＣＤ１５５およびＣＤ１１２へのＴＩＧＩＴ結合を抑制すること、ならびにＣＤ１５５およびＣＤ１１２への結合の際のＴＩＧＩＴによる機能的ＩＴＩＭシグナル伝達を抑制することにより、ヒトＴＩＧＩＴの活性に拮抗する。抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト活性の測定は、コグネイトリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２とのＴＩＧＩＴ結合により誘導されるＴＣＲ活性化の後のＴ細胞抑制の遮断を実証することにより評価されうる。したがって、応答の増強の実施形態の１つにおいては、アンタゴニスト抗ＴＩＧＩＴ抗体での治療（処理）は、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５またはＣＤ１１２誘導によっては抑制されないＴ細胞において観察されるレベルへとＩＬ−２応答をレスキューしうる。より好ましいレベルの活性化においては、抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体での治療の後の応答は、ＣＤ１５５またはＣＤ１１２によっては抑制されないＴ細胞応答より高いレベルへと応答を増強しうる。
ｈＣＤ１５５およびｈＣＤ１１２への結合を遮断する抗ｈＴＩＧＩＴ抗体の能力
幾つかの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断しうる。ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する能力は、当技術分野で公知のいずれかの方法を用いて測定されうる。１つの実施形態においては、ヒトＣＤ１５５およびヒトＣＤ１１２へのヒトＴＩＧＩＴの結合を遮断する能力は、実施例２に記載されているとおり、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定される。
抗体およびその抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に記載されている親（例えば、ラットまたはマウス）モノクローナル抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントを産生するハイブリドーマ細胞は当技術分野で一般に公知の方法により製造されうる。そのような単離されたハイブリドーマは本発明の一部である。これらの方法には、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）（Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７）により最初に開発されたハイブリドーマ技術およびトリオーマ技術（Ｈｅｒｉｎｇら（１９８８）Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．４７：２１１−２１６およびＨａｇｉｗａｒａら（１９９３）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ４：１５）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２およびＣｏｔｅら（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ８０：２０２６−２０３０）、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６，１９８５）およびサイトパルス大チャンバ細胞融合エレクトロポレーター（Ｃｙｔｏ Ｐｕｌｓｅ ｌａｒｇｅ ｃｈａｍｂｅｒ ｃｕｌｌ ｆｕｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｏｒ）（Ｃｙｔｏ Ｐｕｌｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ，ＭＤ）を使用する電場に基づく電気融合が含まれるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、マウス脾細胞を単離し、標準的なプロトコールに従い、ＰＥＧで又は電気融合によりマウス骨髄腫細胞系と融合させる。ついで、生じたハイブリドーマを抗原特異的抗体の産生に関してスクリーニングすることが可能である。例えば、免疫化マウスからの脾臓リンパ球の単細胞浮遊液を、５０％ ＰＥＧを使用して、Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ １５８０）の数の６分の１と融合させることが可能である。細胞を平底マイクロタイタープレート内で約２×１０５細胞／ｍＬでプレーティングし、ついで、２０％ 胎児クローン血清、１８％「６５３」馴らし培地、５％ オリジン（ｏｒｉｇｅｎ）（ＩＧＥＮ）、４ｍＭ Ｌ−グルタミン、１ｍＭ Ｌ−グルタミン、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、５０単位／ｍｌ ペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌ ストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌ ゲンタマイシンおよび１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；該融合の２４時間後にＨＡＴを加える）を含有する選択培地内で２週間のインキュベーションを行うことが可能である。２週間後、該ＨＡＴがＨＴで置換された培地内で細胞を培養することが可能である。ついで個々のウェルを抗ＴＩＧＩＴモノクローナルＩｇＧ抗体に関してＥＬＩＳＡによりスクリーニングすることが可能である。十分なハイブリドーマ増殖が生じたら、培地を通常１０〜１４日後に観察することが可能である。該抗体分泌ハイブリドーマを再プレーティングし、再びスクリーニングし、ヒトＩｇＧに関して尚も陽性である場合には、抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を限界希釈により少なくとも２回サブクローニングすることが可能である。ついで、特徴づけのために組織培養培地内で少量の抗体を産生させるために安定サブクローンをインビトロで培養することが可能である。
したがって、本発明は、抗体またはフラグメントを発現するハイブリドーマ細胞をそのような発現に好ましい条件下で培養し、所望により、該抗体またはフラグメントを該ハイブリドーマおよび／または増殖培地（例えば、細胞培養培地）から単離することを含む、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントの製造方法を含む。
本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体は組換え法によって（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／Ｔ７発現系、哺乳類細胞発現系または下等真核生物発現系において）も製造されうる。この実施形態においては、本発明の抗体免疫グロブリン分子（例えば、ＶＨまたはＶＬ）をコードする核酸をｐＥＴ系プラスミド内に挿入し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／Ｔ７系内で発現させることが可能である。例えば、本発明は、抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖を宿主細胞（例えば、細菌宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、例えば、ＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３）内で発現させるための方法を含み、該方法は、Ｔ７プロモーターに機能的に連結された免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドをも含む細胞内でＴ７ ＲＮＡポリメラーゼを発現させることを含む。例えば、本発明の１つの実施形態においては、細菌宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、ｌａｃプロモーターに機能的に連結されたＴ７ ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、ＩＰＴＧ（イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）の存在下の該宿主細胞のインキュベーションにより該ポリメラーゼおよび該鎖の発現が誘導される。
当技術分野で公知である組換え抗体を製造するための幾つかの方法が存在する。抗体の組換え製造のための方法の一例は米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。
形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入するためのいずれかの公知方法により行われうる。哺乳類細胞内に異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は当技術分野でよく知られており、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム内へのポリヌクレオチドの封入、遺伝子銃注入および核内へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションを包含する。また、ウイルスベクターにより哺乳類細胞内に核酸分子を導入することが可能である。細胞を形質転換する方法は当技術分野でよく知られている。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号および第４，９５９，４５５号を参照されたい。
したがって、本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖の組換え製造方法であって、該抗体またはフラグメントの免疫グロブリン鎖（例えば、重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン）の１以上をコードするポリヌクレオチドを導入し、そのような発現に好ましい条件下で宿主細胞（例えば、ＣＨＯまたはピチア（Ｐｉｃｈｉａ）またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ））を培養し、所望により、該宿主細胞から、および／または該宿主細胞を増殖させた培地から、該抗体またはフラグメントまたは鎖を単離することを含む製造方法を含む。
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、米国特許第６，３３１，４１５号に記載されている方法のいずれかによっても合成されうる。
本明細書に開示されている抗体またはフラグメントまたは免疫グロブリン鎖の発現のための宿主としての、哺乳類細胞を含む真核宿主細胞および原核宿主細胞は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細胞系を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞および多数の他の細胞系を包含する。哺乳類宿主細胞はヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスター細胞を包含する。特に好ましい細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞が挙げられる。真菌細胞には、例えば以下のものを含む酵母および糸状菌細胞が含まれる：ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピチア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピチア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピチア・コクラメ（Ｐｉｃｈｉａ ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピチア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピチア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ ｍｉｎｕｔａ）、ピチア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピチア・オプンチエ（Ｐｉｃｈｉａ ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピチア・テルモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピチア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピチア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピチア・ピエペリ（Ｐｉｃｈｉａ ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピチア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、クライベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）。ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．）、任意のサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、任意のクライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐ．）、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）。重鎖またはその抗原結合性部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合性フラグメントをコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞内に導入する場合、該宿主細胞における該抗体もしくはフラグメントもしくは鎖の発現、または該宿主細胞が培養される培地内への分泌を可能にするのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することにより、該抗体を製造する。
抗体およびその抗原結合性フラグメントおよび免疫グロブリン鎖は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収されうる。更に、生産細胞系からの本発明の抗体およびその抗原結合性フラグメントおよび免疫グロブリン鎖（またはそれからの他の部分）の発現は、幾つかの公知技術を用いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。ＧＳ系は欧州特許第０ ２１６ ８４６号、第０ ２５６ ０５５号および第０ ３２３ ９９７号ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号において全体的または部分的に考察されている。したがって、本発明の１つの実施形態においては、哺乳類宿主細胞（例えば、ＣＨＯ）はグルタミンシンテターゼ遺伝子を欠いており、グルタミンの非存在下の培地内で増殖されるが、この場合、該免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドは、宿主細胞における該遺伝子の欠如を相補するグルタミンシンテターゼ遺伝子を含む。
本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントを精製するための方法を含み、該方法は、該抗体またはフラグメントを含むサンプルを精製媒体（例えば、カチオン交換媒体、アニオン交換媒体、疎水性交換媒体、アフィニティ精製媒体（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、プロテインＬ））に導入し、該媒体に結合しない該サンプルのフロースルー画分からの精製抗体またはフラグメントを集め、あるいは該フロースルー画分を廃棄し、結合抗体またはフラグメントを該媒体から溶出し、溶出液を集めることを含む。本発明の１つの実施形態においては、媒体は、サンプルが適用されるカラム内に存在する。本発明の１つの実施形態においては、宿主細胞における該抗体またはフラグメントの組換え発現の後で該精製方法を行い、例えば、この場合、まず、宿主細胞を細胞溶解し、所望により、ライセートを不溶物から精製した後、媒体上の精製を行う。
一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンを有するであろう。したがって、抗体の個々のグリコシル化パターンは、該抗体を製造するために使用される個々の細胞系またはトランスジェニック動物に左右されるであろう。しかし、本発明で提供される核酸分子によりコードされる、または本発明で提供されるアミノ酸を含む全ての抗体は、該抗体が有しうるグリコシル化パターンには無関係に、本発明を構成する。同様に、特定の実施形態においては、非フコシル化Ｎ−グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体が有利でありうる。なぜなら、これらの抗体は、インビトロおよびインビボの両方において、それらのフコシル化対応物より高い効力を典型的に示すことが示されているからである（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい）。非フコシル化Ｎ−グリカンを有するこれらの抗体が免疫原性である可能性は低い。なぜなら、それらの炭水化物構造は、ヒト血清ＩｇＧにおいて存在する集団の正常成分であるからである。
本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントの１以上を含むポリクローナル抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、複数の抗ＴＩＧＩＴ抗体およびフラグメントを含む組成物）、ならびにその使用方法を含む。ポリクローナル抗体は、１以上の他の非同一抗体のなかで又は存在下で産生された抗体である。一般に、ポリクローナル抗体は、例えば、関心のある免疫原（これは、全てが該免疫原に対するものである異なる抗体の集団を産生する）で処理された動物のＢ−リンパ球のような異なるＢ−リンパ球の集合体から産生される。通常、ポリクローナル抗体は、免疫化動物、例えば脾臓、血清または腹水から直接得られる。
本発明は、ＴＩＧＩＴおよび別の抗原、例えばＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１またはＬＡＧ−３に対する結合特異性を有する二重特異性および二官能性抗体ならびに抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を含む。本発明の１つの実施形態においては、抗ＴＩＧＩＴ鎖は、表４に記載されているＶＨ／ＶＬ配列のいずれか１つを含み、ＰＤ１鎖は配列番号３６および３７のアミノ酸配列または配列番号３８および３９のアミノ酸配列（または該配列のいずれかの抗原結合性フラグメント）を含む。二重特異性または二官能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖ペアおよび２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む種々の方法により製造されうる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉら（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３を参照されたい。また、二重特異性抗体は「ジアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８）または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５−３６５９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２）として形成されうる。
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体の抗ＴＩＧＩＴ抗原結合性フラグメントを含む。該抗体フラグメントにはＦ（ａｂ）２フラグメントが含まれ、これは例えばペプシンによるＩｇＧの酵素的切断により製造されうる。Ｆａｂフラグメントは、例えば、ジチオトレイトールまたはメルカプトエチルアミンでのＦ（ａｂ）２の還元により製造されうる。
免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、種々のクラスに帰属されうる。免疫グロブリンの、少なくとも５つの主要クラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらの幾つかは更に、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４；ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類されうる。本発明は抗体のこれらのクラスまたはサブクラスのいずれかの抗体および抗原結合性フラグメントを含む。
１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは重鎖定常領域、例えばヒト定常領域、例えばγ１、γ２、γ３もしくはγ４ヒト重鎖定常領域またはそれらの変異体を含む。もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、軽鎖定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域、例えばラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはそれらの変異体を含む。例えば、限定的なものではないが、ヒト重鎖定常領域はγ４であることが可能であり、ヒト軽鎖定常領域はカッパであることが可能である。もう１つの実施形態においては、該抗体のＦｃ領域は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異を有するγ４である（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ，Ｊら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１−８，２００１）。
１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントはＩｇＧ１サブタイプの重鎖定常領域を含む。
幾つかの実施形態においては、種々の定常ドメインが、本発明で提供されるＣＤＲに由来するヒト化ＶＬおよびＶＨ領域に連結されうる。例えば、本発明の抗体（またはフラグメント）の個々の意図される使用がエフェクター機能の改変を求めるものである場合には、ヒトＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用可能であり、あるいはハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ４が使用可能である。
ヒトＩｇＧ１抗体は長い半減期およびエフェクター機能、例えば補体活性化および抗体依存性細胞傷害性をもたらすが、そのような活性は該抗体の全ての用途に望ましいとは限らない可能性がある。そのような場合、例えばヒトＩｇＧ４定常ドメインが使用されうる。本発明は、ＩｇＧ定常ドメインを含む抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント、例えば、アンタゴニストヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体およびフラグメント、ならびにそれらの使用方法を含む。１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインはＥＵ系における２２８位およびＫＡＢＡＴ系における２４１位に対応する位置において天然ヒトＩｇＧ４定常ドメイン（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８６１．１）とは異なることが可能であり、この場合、適切な鎖内ジスルフィド結合形成を妨げうるＣｙｓ１０６およびＣｙｓ１０９（ＥＵ系におけるＣｙｓ２２６およびＣｙｓ２２９位ならびにＫＡＢＡＴ系におけるＣｙｓ２３９およびＣｙｓ２４２位に対応する）間の潜在的鎖間ジスルフィド結合を妨げるために天然Ｓｅｒ１０８はＰｒｏで置換される。Ａｎｇａｌら（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５を参照されたい。他の場合においては、半減期を増加させるために又はエフェクター機能を低減するために修飾された修飾ＩｇＧ１定常ドメインが使用されうる。
抗体の改変
親（例えば、マウスまたはラット）モノクローナル抗体の可変ドメイン内のフレームワーク残基に対する修飾を含むように、例えば、該抗体またはフラグメントの特性を改善するために、該抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性タンパク質が、改変（操作）された抗体である実施形態が更に含まれる。典型的には、そのようなフレームワーク修飾は、該抗体またはフラグメントの免疫原性を低下させるために行われる。これは通常、親（例えば、げっ歯類）抗体またはフラグメント（ドナー抗体またはフラグメント）における可変ドメイン内の非ＣＤＲ残基（すなわち、フレームワーク残基）を、該抗体が使用されることになる種の免疫レパトワからの類似残基、例えば、ヒト用治療剤の場合にはヒト残基（アクセプター抗体）で置換することにより達成される。そのような抗体またはフラグメントは「ヒト化」抗体またはフラグメントと称される。幾つかの場合には、改変（例えば、ヒト化）抗体の特異性を変化させ、またはアフィニティを増強することが望ましい。所望の免疫グロブリン特性は親抗体およびアクセプター抗体からのフレームワーク残基の選択および組合せにより得られうる。１つのアプローチは親抗体における１以上のフレームワーク残基を対応ヒト生殖系列配列へと突然変異させることである。より詳しくは、体細胞突然変異を受けた抗体またはフラグメントは、該抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含有しうる。そのような残基は、該抗体またはフラグメントが由来するヒト生殖系列配列と親抗体またはフラグメントのフレームワーク配列を比較すること、および該抗体における１以上のフレームワーク残基を対応ヒト生殖系列配列のものへと突然変異させることにより特定されうる。もう１つのアプローチは、該改変（例えば、ヒト化）抗体の位置の１以上において元の親（例えば、げっ歯類）残基へと復帰突然変異（「逆突然変異（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅ）」）させること、例えば、フレームワーク残基の置換の過程において喪失した可能性がある結合アフィニティを回復させることである（例えば、米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，５３０，１０１号、ＷＯ９２２２６５３およびＷＯ９４０４６７９を参照されたい）。
ある実施形態においては、抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントを、それらの特性を改善するためにフレームワークおよび／またはＣＤＲに対する修飾を含むように、操作する。そのような操作される変化は分子モデリングに基づくことが可能である。該抗体の構造的特徴を理解するために、親（非ヒト）抗体配列の可変領域に関する分子モデルを構築し、それを使用して、抗原と相互作用しうる抗体上の潜在的領域を特定することが可能である。通常のＣＤＲは免疫グロブリン配列のアライメントおよび可変領域の特定に基づく。Ｋａｂａｔら，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら，；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６。Ｃｈｏｔｈｉａらは抗体の結晶構造におけるループのコンホメーションを注意深く調べ、超可変ループを提示した。Ｃｈｏｔｈｉａら，（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３。「ＣＤＲ」および「超可変ループ」として分類されている領域の間には変異が存在する。後の研究（Ｒａｇｈｕｎａｔｈａｎら，（２０１２）Ｊ．Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇ．２５，３，１０３−１１３）は幾つかの抗体−抗原結晶複合体を分析し、抗体内の抗原結合性領域が「ＣＤＲ」残基または「超可変」ループに必ずしも厳密には合致しないことを観察した。抗原に潜在的に結合しうる領域の選択を導くために、非ヒト抗体の可変領域に関する分子モデルが使用されうる。実際、モデルに基づく潜在的抗原結合領域は通常の「ＣＤＲ」または「超可変」ループとは異なる。市販の科学用ソフトウェア、例えばＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ）が分子モデリングに使用されうる。フレームワーク内およびＣＤＲ内の両方の非ヒト配列との最良マッチに基づいて、ヒトフレームワークが選択されうる。ＶＨ内のＦＲ４（フレームワーク４）に関しては、ヒト生殖系列におけるＶＪ領域を対応非ヒト領域と比較する。ＶＬにおけるＦＲ４（フレームワーク４）の場合、ヒト生殖系列配列のＪ−カッパおよびＪ−ラムダ領域を対応非ヒト領域と比較する。適当なヒトフレームワークが特定されたら、選択されたヒトフレームワーク内にＣＤＲをグラフティングする。幾つかの場合には、ＶＬ−ＶＨ境界における或る残基が非ヒト（親）配列の場合と同様に保持されうる。ＣＤＲのコンホメーション、ひいては抗原への結合を潜在的に改変しうる残基を特定するためにも、分子モデルが使用されうる。幾つかの場合には、これらの残基は非ヒト（親）配列の場合と同様に保持される。望ましくない効果、例えばグリコシル化、脱アミド化および酸化をもたらしうる溶媒露出アミノ酸を特定するためにも、分子モデルが使用されうる。これらの潜在的問題を排除／最小化するために、設計段階の初期に、デベロパビリティフィルターが導入されうる。
もう１つのタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内または更には１以上のＣＤＲ領域内の１以上の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより該抗体の潜在的免疫原性を低下させることを含む。このアプローチは「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも称され、米国特許第７，１２５，６８９号に更に詳細に記載されている。
特定の実施形態においては、脱アミド化または異性化を避けるために、最終的な抗体の、より高い化学的安定性を得るために、露出側鎖を含有する或るアミノ酸を別のアミノ酸残基へと変化させることが望ましいであろう。アスパラギンの脱アミド化はＮＧ、ＤＧ、ＮＧ、ＮＳ、ＮＡ、ＮＴ、ＱＧまたはＱＳ配列上で生じ、イソアスパラギン酸残基の生成をもたらす可能性があり、該残基はポリペプチド鎖内にねじれ（キンク）を導入し、その安定性を低下させる（イソアスパラギン酸効果）。ＤＧ、ＤＳ、ＤＡまたはＤＴ配列において異性化が生じうる。ある実施形態においては、本開示の抗体は脱アミド化またはアスパラギン異性部位を含有しない。
例えば、特にＣＤＲ内の、いずれかのＡｓｎ−Ｇｌｙ配列におけるイソアスパルタートの形成の可能性を低減するために、アスパラギン（Ａｓｎ）残基はＧｌｎまたはＡｌａへと改変されうる。同様の問題はＡｓｐ−Ｇｌｙ配列においても生じうる。ＲｅｉｓｓｎｅｒおよびＡｓｗａｄ（２００３）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６０：１２８１。イソアスパルタート形成は抗体のその標的抗原への結合を減弱し、または完全に阻止しうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４を参照されたい。１つの実施形態においては、該アスパラギンはグルタミン（Ｇｌｎ）へと改変される。小さなアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンに隣接して存在する場合にはより高い率で生じる脱アミド化の可能性を低減するために、アスパラギン（Ａｓｎ）またはグルタミン（Ｇｌｎ）残基に隣接したアミノ酸を改変することも望ましいかもしれない。Ｂｉｓｃｈｏｆｆ ＆ Ｋｏｌｂｅ（１９９４）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．６６２：２６１を参照されたい。また、抗原結合アフィニティを低減し、そしてまた、最終抗体調製物における分子不均一性に寄与しうるメチオニン硫黄の酸化の可能性を低減するために、ＣＤＲ内のいずれかのメチオニン残基（典型的には溶媒露出Ｍｅｔ）またはトリプトファン残基がＬｙｓ、Ｌｅｕ、ＡｌａまたはＰｈｅまたは他のアミノ酸へと改変されうる（同誌）。また、Ａｓｎ−Ｐｒｏペプチド結合の潜在的な切断を妨げ又は最小にするために、ＣＤＲにおいて見出されるいずれかのＡｓｎ−Ｐｒｏの組合せをＧｌｎ−Ｐｒｏ、Ａｌａ−ＰｒｏまたはＡｓｎ−Ａｌａへと改変することが望ましいかもしれない。ついで、そのような置換を有する抗体をスクリーニングして、該置換がＴＩＧＩＴに対する抗体のアフィニティもしくは特異性または他の所望の生物活性を、許容し得ないレベルに低減しないことを確認する。
Figure 2018527919
Ｆｃ領域の抗体改変
本明細書に開示されている抗体（例えば、ヒト化抗体）およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）はまた、Ｆｃ領域内の修飾を含むように、典型的には、該抗体の特性、例えば血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合および／またはエフェクター機能（例えば、抗原依存性細胞傷害性）の１以上を変化させるために改変（操作）されうる。更に、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は化学的に修飾可能であり（例えば、１以上の化学的部分が該抗体に結合可能である）、あるいは、再び該抗体またはフラグメントの特性の１以上を改変するために、そのグリコシル化を改変するように修飾されうる。これらの実施形態のそれぞれは後記に更に詳細に記載されている。Ｆｃ領域内の残基の番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）はまた、改変されたエフェクター機能をもたらすための、修飾（または遮断）されたＦｃ領域を有する抗体およびフラグメントをも含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って、免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。Ｆｃに対する変化はまた、治療用抗体における抗体の半減期を改変することが可能であり、それほど頻繁でない投与ならびにそれによる便利さの向上および物資の使用の減少を可能にする。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４−３５を参照されたい。
１つの実施形態においては、本発明の抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、重鎖定常領域のヒンジ領域内の２２８位に対応する位置におけるセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体またはフラグメントである。この突然変異はヒンジ領域内の重鎖間ジスルフィド架橋の不均一性を排除することが報告されている（Ａｎｇａｌら，前掲；２４１位はＫａｂａｔ番号付け系に基づく）。
本発明の１つの実施形態においては、ＣＨ１のヒンジ領域は、該ヒンジ領域内のシステイン残基の数が増加または減少するように修飾される。このアプローチは米国特許第５，６７７，４２５号に更に詳細に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進させるために、または抗体の安定性を増強もしくは低減するために改変される。
もう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）のＦｃヒンジ領域は、該抗体またはフラグメントの生物学的半減期を減少させるために突然変異される。より詳細には、該抗体またはフラグメントが、天然ＦｃヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて低減したスタヒロコッカスプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を示すように、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン境界領域内に１以上のアミノ酸突然変異が導入される。このアプローチは米国特許第６，１６５，７４５号に更に詳細に記載されている。
もう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、その生物学的半減期を増加させるために修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、米国特許６，２７７，３７５号に記載されているとおり、以下の突然変異の１以上が導入されうる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、米国特許第５，８６９，０４６号および第６，１２１，０２２号に記載されているとおり、生物学的半減期を増加させるために、該抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）受容体結合性エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で改変されうる。
更に他の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントのエフェクター機能を改変するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することにより、Ｆｃ領域を改変する。例えば、該抗体がエフェクターリガンドに対する改変されたアフィニティを有し、親抗体の抗原結合能を保有するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１以上のアミノ酸が異なるアミノ酸残基で置換されうる。アフィニティが改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。このアプローチは米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されている。
もう１つの例においては、該抗体がＣ１ｑ結合の変化および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の低減もしくは消失を示すように、アミノ酸残基３２９、３３１および３３２から選択される１以上のアミノ酸が別のアミノ酸残基で置換されうる。このアプローチは米国特許第６，１９４，５５１号に詳細に記載されている。
もう１つの例においては、アミノ酸２３１位および２３９位における１以上のアミノ酸残基を改変して、それにより、補体を固定する該抗体の能力を改変する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１に更に詳細に記載されている。
更にもう１つの例においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）をもたらす能力を低減するために、および／またはＦｃγ受容体に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティを低減するために、以下の位置：２３８、２３９、２４３、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位における１以上のアミノ酸を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ ００／４２０７２に更に詳細に記載されている。更に、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位が位置決定されており、改善した結合を示す変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照されたい）。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗体（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）がエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３および２６４を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、２４３位および２６４位における残基をアラニンへと変化させることにより、該抗体またはフラグメントのＦｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、該抗体またはフラグメントがエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３、２６４、２６７および３２８を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。
エフェクター機能の増強
幾つかの実施形態においては、エフェクター機能をもたらす該抗体もしくは抗原結合性フラグメントの能力を増強するために、および／またはＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）へのそれらの結合を増強するために、抗ＴＩＧＩＴ抗体のＦｃ領域を修飾する。
本明細書中で用いる「エフェクター機能」なる語は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介性応答、Ｆｃ媒介性食作用または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介した抗体リサイクリングの１以上を意味すると意図される。
抗体結合性タンパク質の定常領域と種々のＦｃ受容体（ＦｃＲ）［ＦｃガンマＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃガンマＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃガンマＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を含む］との間の相互作用が抗原結合性タンパク質のエフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよびＣＤＣをもたらすと考えられている。Ｆｃ受容体は抗体架橋にも重要であり、これは抗腫瘍免疫に重要でありうる。
エフェクター機能は、例えば、ＡＤＣＣエフェクター機能を測定するための、ナチュラルキラー細胞へのＦｃガンマＲＩＩＩの結合または単球／マクロファージへのＦｃガンマＲＩの結合による方法を含む幾つかの方法で測定されうる。例えば、本発明の抗原結合性タンパク質はナチュラルキラー細胞アッセイにおいてＡＤＣＣエフェクター機能に関して評価されうる。そのようなアッセイの例はＳｈｉｅｌｄｓら，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６，ｐ ６５９１−６６０４；Ｃｈａｐｐｅｌら，１９９３ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ ２６８，ｐ ２５１２４−２５１３１；Ｌａｚａｒら，２００６ ＰＮＡＳ，１０３；４００５−４０１０において見出されうる。
本発明の抗体のＡＤＣＣもしくはＣＤＣの特性またはそれらの架橋特性は幾つかの方法で増強されうる。
残基Ａｓｎ２９７におけるグリコシル化の改変または特異的突然変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域はＦｃ受容体への結合を増強することが示されている。幾つかの場合においては、これらの突然変異はＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することも示されている（Ｌａｚａｒら，ＰＮＡＳ ２００６，１０３；４００５−４０１０；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００１，２７６；６５９１−６６０４；Ｎｅｃｈａｎｓｋｙら，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，４４；１８１５−１８１７）。
本発明の１つの実施形態においては、そのような突然変異は、２３９、３３２および３３０位（ＩｇＧ１）または他のＩｇＧアイソタイプにおける同等位置から選択される位置の１以上に存在する。適当な突然変異の例としては、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌが挙げられる。１つの実施形態においては、本明細書に記載されている本発明の抗原結合性タンパク質は２３９および３３２位において突然変異しており（例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ）、またはもう１つの実施形態においては、それは、２３９および３３２および３３０から選択される３以上の位置において突然変異している（例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌ（ＥＵインデックスの番号付け））。
本発明のもう１つの実施形態においては、抗原結合性タンパク質がエフェクター機能の増強を示すようにグリコシル化プロファイルの改変を有する重鎖定常領域を含む抗体を提供する。例えば、この場合、該抗体はＡＤＣＣの増強またはＣＤＣの増強を示し、あるいはそれはＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能の両方の増強を示す。グリコシル化プロファイルの改変を有する抗原結合性タンパク質を製造するための適当な方法の例はＷＯ２００３０１１８７８、ＷＯ２００６０１４６７９およびＥＰ１２２９１２５に記載されている。
もう１つの態様においては、本発明は「非フコシル化」または「アフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」抗体を提供する。非フコシル化抗体は、フコース残基を有さないＦｃの複合型Ｎ−グリカンのトリ−マンノシルコア構造を含有する。Ｆｃ Ｎ−グリカンからのコアフコース残基を欠くこれらの糖操作抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩａ結合能の増強により、フコシル化等価体より強力なＡＤＣＣを示しうる。
本発明はまた、ａ）本明細書に記載されている単離された核酸を含む発現ベクターを含み、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼを含まない組換え宿主細胞を培養し、ｂ）抗原結合性タンパク質を回収する工程を含む本発明の抗体の製造方法を提供する。該組換え宿主細胞は、通常、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含有していなくてもよく（例えば、酵母宿主細胞、例えば、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ ｓｐ．））、あるいはアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼを不活性化するように遺伝的に修飾されていてもよい。アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を不活性化するように遺伝的に修飾された組換え宿主細胞が入手可能である。例えば、ＢｉｏＷａ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）から入手可能なＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）技術システムを参照されたい。それにおいては、ＦＵＴ８遺伝子の機能的コピーを欠くＣＨＯＫ１ＳＶ細胞が、機能的ＦＵＴ８遺伝子を含有する細胞において産生される同一モノクローナル抗体と比べて増強した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示すモノクローナル抗体を産生する。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）技術システムの種々の態様がＵＳ７２１４７７５、ＵＳ６９４６２９２、ＷＯ００６１７３９およびＷＯ０２３１２４０に記載されている。他の適当なシステムも当業者に認識されるであろう。
そのような修飾は単独で用いられうるだけでなく、エフェクター機能を更に増強するために互いに組合せて用いられうることも当業者に明らかであろう。
修飾グリコシル化を有する抗体の製造
更にもう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、アフコシル化または非グリコシル化（アグリコシル化）（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体またはフラグメント（すなわち、該抗体は、それぞれ、フコースまたはグリコシル化を欠く）が製造されうる。抗体またはフラグメントのグリコシル化パターンは、例えば、ＴＩＧＩＴ抗原に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強するために改変されうる。そのような修飾は、例えば、該抗体またはフラグメント配列内のグリコシル化部位の１以上を改変することにより達成されうる。例えば、可変領域フレームワークグリコシル化部位の１以上の除去をもたらし、それによりその部位におけるグリコシル化を排除する１以上のアミノ酸置換が施されうる。そのような非グリコシル化は抗原に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強しうる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号を参照されたい。
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は更に、哺乳類またはヒト様グリコシル化パターンを有する糖タンパク質を産生するように遺伝的に操作された下等真核宿主細胞、特に真菌宿主細胞、例えば酵母および糸状菌において産生されるものを含む（例えば、Ｃｈｏｉら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：５０２２−５０２７；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０１：１２４４−１２４６；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１３：１４４１−１４４３；Ｎｅｔｔら，Ｙｅａｓｔ ２８（３）：２３７−５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｏｃｔ；１８（５）：３８７−９２（２００７）を参照されたい）。現在使用されている哺乳類細胞系と比較した場合の、これらの遺伝的に修飾された宿主細胞の格別な利点は、該細胞内で産生される糖タンパク質のグリコシル化プロファイルの制御が可能なことであり、その結果、特定のＮ−グリカン構造が優勢な糖タンパク質の組成物が製造されうる（例えば、米国特許第７，０２９，８７２号および米国特許第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これらの遺伝的に修飾された宿主細胞は、特定のＮ−グリカン構造を主に有する抗体を製造するために使用されている（例えば、Ｌｉら（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：２１０−２１５を参照されたい）。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は更に、二分岐および多アンテナ（ｍｕｌｔｉａｎｔｅｎｎａｒｙ）種を含むフコシル化および非フコシル化ハイブリッドおよび複合Ｎ−グリカン（例えば、ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡ（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２のようなＮ−グリカンを含むが、これらに限定されるものではない）を含む、下等真核宿主細胞において産生されるものを含む。
特定の実施形態においては、本発明において提供する抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、複合Ｎ−グリカンを含む抗体およびフラグメントを含み、ここで、複合Ｎ−グリカンの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％が構造ＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２を含み、ここで、そのような構造はアフコシル化されている。そのような構造は、例えば、操作されたピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞において産生されうる。
本明細書中で用いる「Ｎ−グリカン」および「グリコフォーム（糖形態）」なる語は互換的に用いられ、Ｎ−結合オリゴ糖を意味し、例えば、ポリペプチドのアスパラギン残基にアスパラギン−Ｎ−アセチルグルコサミン結合により結合しているＮ−結合オリゴ糖を意味する。Ｎ−結合糖タンパク質は、タンパク質中のアスパラギン残基のアミド窒素に結合したＮ−アセチルグルコサミン残基を含有する。糖タンパク質上で見出される主な糖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）およびシアル酸（例えば、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸（ＮＡＮＡ））が挙げられる。糖基のプロセシングは翻訳と同時にＥＲの内腔において生じ、翻訳後はＮ−結合糖タンパク質のためにゴルジ装置において継続する。
Ｎ−グリカンはＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２の共通の五糖コアを有する（「Ｍａｎ」はマンノースを意味し、「Ｇｌｃ」はグルコースを意味し、「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを意味し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを意味する）。通常、Ｎ−グリカン構造は、非還元末端を左側に、そして還元末端を右側にして表される。Ｎ−グリカンの還元末端は、該タンパク質上のグリコシル化部位を含むＡｓｎ残基が結合している末端である。Ｎ−グリカンは、「トリマンノースコア」、「五糖コア」または「少（ｐａｕｃｉ）マンノースコア」とも称されるＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（「Ｍａｎ３」）コア構造に付加される周辺糖（例えば、ＧｌｃＮＡｃ、ガラクトース、フコースおよびシアル酸）を含む分岐（アンテナ）の数において異なる。Ｎ−グリカンは、その分岐（分枝）構成成分に従い分類される（例えば、高マンノース、複合またはハイブリッド）。「高マンノース」型Ｎ−グリカンは５個以上のマンノース残基を有する。「複合」型Ｎ−グリカンは、典型的には、「トリマンノース」コアの１，６マンノースアームに結合した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃと、１，３マンノースアームに結合した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃとを有する。複合Ｎ−グリカンは、シアル酸または誘導体（例えば、「ＮＡＮＡ」または「ＮｅｕＡｃ」が挙げられ、ここで、「Ｎｅｕ」はノイラミン酸を意味し、「Ａｃ」はアセチルを意味する）で修飾されていてもよいガラクトース（「Ｇａｌ」）またはＮ−アセチルガラクトサミン（「ＧａｌＮＡｃ」）残基をも有しうる。複合Ｎ−グリカンは、コアフコース（「Ｆｕｃ」）および「二分岐（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）」ＧｌｃＮＡｃを含む鎖内置換をも有しうる。複合Ｎ−グリカンはまた、「トリマンノース・コア」上に複数のアンテナを有することが可能であり、これは、しばしば、「多アンテナグリカン」と称される。「ハイブリッド」Ｎ−グリカンは、トリマンノースコアの１，３マンノースアームの末端における少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃと、トリマンノースコアの１，６マンノースアーム上の０個以上のマンノースとを有する。前記の種々のＮ−グリカンは「グリコフォーム（糖形態）」とも称される。
抗体の物理特性
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は更に、軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域内に１以上のグリコシル化部位を含有しうる。そのようなグリコシル化部位は抗原結合の変化による該抗体のｐＫの変化または該抗体もしくはフラグメントの免疫原性の増強をもたらしうる（Ｍａｒｓｈａｌｌら（１９７２）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ４１：６７３−７０２；ＧａｌａおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ（２００４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７２：５４８９−９４；Ｗａｌｌｉｃｋら（１９８８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６８：１０９９−１０９；Ｓｐｉｒｏ（２００２）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １２：４３Ｒ−５６Ｒ；Ｐａｒｅｋｈら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１６：４５２−７；Ｍｉｍｕｒａら（２０００）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３７：６９７−７０６）。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフにおいて生じることが公知である。
各抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は、一般には６〜９．５のｐＨ範囲内である特有の等電点（ｐＩ）を有する。ＩｇＧ１抗体のｐＩは典型的には７〜９．５のｐＨ範囲内であり、ＩｇＧ４抗体のｐＩは典型的には６〜８のｐＨ範囲内である。
各抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は特徴的な融解温度を有し、より高い融解温度は、より大きなインビボ総安定性を示す（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ ＲおよびＭａｎｎｉｎｇ ＭＣ（２００２）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３：３６１−７１）。一般に、ＴＭ１（初期アンフォールディングの温度）は６０℃より高い、６５℃より高い、または７０℃より高いことが可能である。抗体またはフラグメントの融点は、示差走査熱量測定（Ｃｈｅｎら（２００３）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２０：１９５２−６０；Ｇｈｉｒｌａｎｄｏら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ６８：４７−５２）または円二色性（Ｍｕｒｒａｙら（２００２）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｓｃｉ ４０：３４３−９）を用いて測定されうる。
もう１つの実施形態においては、急速には分解しない抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）を選択する。抗体またはフラグメントの分解は、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）およびＭＡＬＤＩ−ＭＳ（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＡＪおよびＨｕｇｈｅｓ ＤＥ（１９９５）Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ ６７：３６２６−３２）を用いて測定されうる。
もう１つの実施形態においては、望ましくない免疫応答の誘発および／または変化した若しくは好ましくない薬物動態特性を招きうる凝集作用が最小である抗体（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）およびその抗原結合性フラグメントを選択する。一般に、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下または５％以下の凝集を示す抗体およびフラグメントが許容される。凝集は、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および光散乱を含む幾つかの技術により測定されうる。
抗体コンジュゲート
本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は化学的部分にコンジュゲート化（結合）されることも可能である。該化学的部分は、とりわけ、重合体、放射性核種、細胞毒性因子でありうる。特定の実施形態においては、該化学的部分は、対象の体内の該抗体またはフラグメントの半減期を増加させる重合体である。適当な重合体には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）（これらに限定されるものではない）を包含する親水性重合体が含まれるが、これらに限定されるものではない。Ｌｅｅら（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３−９８１）はＰＥＧコンジュゲート化一本鎖抗体を開示している。Ｗｅｎら，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５−５５３）は、放射性金属キレーター（ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））に結合したＰＥＧに対して抗体をコンジュゲート化することを開示している。
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）はまた、例えば９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈおよび４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒおよび５６Ｆｅのような標識に対してコンジュゲート化されうる。
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、例えば、その生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅ）されることも可能である。抗体またはフラグメントをペグ化するためには、典型的には、１以上のＰＥＧ基が該抗体または抗体フラグメントに結合する条件下、該抗体またはフラグメントを、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の反応性形態、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。特定の実施形態においては、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似反応性水溶性高分子）でのアルキル化反応またはアシル化反応により行われる。本明細書中で用いる「ポリエチレングリコール」なる語は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれか、例えばモノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを含むと意図される。ある実施形態においては、ペグ化されるべき抗体またはフラグメントは非グリコシル化抗体またはフラグメントである。タンパク質をペグ化するための方法は当技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用されうる。例えば、ＥＰ ０ １５４ ３１６およびＥＰ ０ ４０１ ３８４を参照されたい。
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、蛍光または化学発光標識、例えば発蛍光団、例えば希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアナート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレスカミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェリン、ルミナール標識、イソルミナール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム塩標識、シュウ酸エステル標識、エクオリン標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識および安定フリーラジカルに対してコンジュゲート化されることも可能である。
本発明の抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、細胞毒性因子、例えばジフテリア毒素、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質および化合物（例えば、脂肪酸）、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトイアッカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｉａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ、モモルディカ・カランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシンおよびエノマイシンにコンジュゲート化されることも可能である。
本発明の抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）を種々の部分にコンジュゲート化するための当技術分野で公知のいずれかの方法が利用可能であり、該方法は、Ｈｕｎｔｅｒら（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ １４４：９４５；Ｄａｖｉｄら（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：１０１４；Ｐａｉｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７に記載されている方法を包含する。抗体およびフラグメントのコンジュゲート化方法は常套手段であり、当技術分野において非常によく知られている。
抗ＴＩＧＩＴ抗体の治療用途
更に、本明細書に開示されている単離された抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）での治療を要する対象（ヒト対象を含む）の治療方法を提供する。本発明の１つの実施形態においては、そのような対象は感染または感染症に罹患している。本発明のもう１つの実施形態においては、そのような対象は癌に罹患している。１つの実施形態においては、該癌は、ＴＩＧＩＴを発現する腫瘍浸潤性リンパ球により浸潤する固形腫瘍である。１つの実施形態においては、該癌としては、例えば以下のものが挙げられる：骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓癌、白血病、腎移行細胞癌、膀胱癌、ウィルムス癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、骨癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、胃癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉腫、頭頸部癌、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳腫瘍、神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星細胞腫、退形成性星細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性筋線維症、軟部組織肉腫、甲状腺癌、子宮内膜癌、カルチノイド癌または肝臓癌、乳癌または胃癌。本発明の１つの実施形態においては、該癌は、例えば前記の種々のものの、転移癌である。
１つの実施形態においては、本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）を使用する対象の治療方法を提供し、ここで、該対象はウイルス感染に罹患している。１つの実施形態においては、ウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスまたはアルボウイルス性脳炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスによる感染である。
１つの実施形態においては、本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、該対象は細菌感染に罹患している。１つの実施形態においては、細菌感染は、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、桿菌、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、クロストリジウム・テタン（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、バシラス・アンスリシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）およびボリエラ（Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ）からなる群から選択される細菌による感染である。
１つの実施形態においては、本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、該対象は真菌感染に罹患している。１つの実施形態においては、真菌感染は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）（アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ムコラーレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）属（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属）、スポロスリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストマイセス・デルマチチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラスマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）からなる群から選択される真菌による感染である。
１つの実施形態においては、本発明は、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、該対象は寄生虫感染に罹患している。１つの実施形態においては、寄生虫感染は、エンタモエバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォウレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカンタモエバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロッティ（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラスマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）およびニッポストロンジルス・ブラシリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される寄生虫による感染である。
また、本発明は、対象（例えば、ヒト）におけるＭＨＣクラスＩＩへのＴＩＧＩＴ結合の予防もしくは抑制、抗原特異的Ｔ細胞活性化の増強、またはインターロイキン２のＴ細胞産生の刺激のための方法を提供し、例えば、ここで、該対象は癌または感染症（例えば、本明細書に記載されているとおり）に罹患しており、該方法は、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）の有効量を、もう１つの化学療法剤と所望により組合せて投与することを含む。
「対象」は哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、サル［例えば、カニクイザル、例えば、マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）］またはウサギである。本発明の好ましい実施形態においては、対象はヒト対象である。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、いずれかの疾患、例えば癌（例えば、本明細書に記載されているもの）を治療または予防するために、そのような治療または予防を要する対象において、単独で、あるいは他の治療剤および／または治療手技と組合せて使用されうる。そのような抗体およびフラグメントを他の治療剤と共に含む組成物、例えば、医薬上許容される担体を含む医薬組成物も本発明の一部である。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は単独で、または腫瘍ワクチンと組合せて使用されうる。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は単独で、または化学療法剤と組合せて使用されうる。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は単独で、または放射線療法と組合せて使用されうる。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は単独で、または標的化療法と組合せて使用されうる。標的化療法の例には以下のものが含まれる：ホルモン療法、シグナル伝達インヒビター（例えば、ＥＧＦＲインヒビター、例えば、セツキィマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ）およびエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ））；ＨＥＲ２インヒビター（例えば、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）およびペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（Ｐｅｒｊｅｔａ））；ＢＣＲ−ＡＢＬインヒビター（例えば、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇｌｅｅｖｅｃ）およびダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ））；ＡＬＫインヒビター（例えば、クリゾチニブ（ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）（Ｘａｌｋｏｒｉ）およびセリチニブ（ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ）（Ｚｙｋａｄｉａ））；ＢＲＡＦインヒビター（例えば、ベムラフェニブ（ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）（Ｚｅｌｂｏｒａｆ）およびダブラフェニブ（ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ）（Ｔａｆｉｎｌａｒ））、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導物質（例えば、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ）およびカルフィルゾミブ（ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ）（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ））、血管新生インヒビター（例えば、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ）およびラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）（Ｃｙｒａｍｚａ）、毒素に結合したモノクローナル抗体（例えば、ブレンツキシマブ・ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）およびアド−トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）（Ｋａｄｃｙｌａ））。
特定の実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、抗癌治療剤または免疫調節薬、例えば免疫調節受容体インヒビター、例えば、該受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて使用されうる。
したがって、本発明は、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）と組合された本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）を含む組成物を含む。また、本発明は、有効量の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントおよびペンブロリズマブを対象に投与することを含む、対象における癌の治療または予防方法を含む。所望により、対象にはもう１つの治療剤も投与される。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖と配列番号３７のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖とを含む単離された抗体と組合される。配列番号３６および３７はペンブロリズマブの重鎖および軽鎖をコードしている。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖と配列番号３９のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖とを含む単離された抗体と組合される。配列番号３８および３９はニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）の重鎖および軽鎖をコードしている。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は以下のものの１以上と組合される：抗ＰＤ１抗体（例えば、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ−０１１））、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＣＳ１抗体（例えば、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ））、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体（例えば、リリルマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ））、抗ＣＤ１３７抗体（例えば、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ））、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ）、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＩＬＴ１抗体、抗ＩＬＴ２抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＩＬＴ５抗体、抗ＩＬＴ６抗体、抗ＩＬＴ７抗体、抗ＩＬＴ８抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体、抗４−１ＢＢ抗体（例えば、ＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＩＬ−１０抗体、ＩＬ−１０またはペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅｄ）ＩＬ−１０、あるいはそのような標的の任意の小さな有機分子インヒビター。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＰＤ１抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＰＤＬ１抗体（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ）と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＣＴＬＡ４抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＣＳ１抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＣＤ１３７（例えば、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ））抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＧＩＴＲ（例えば、ＴＲＸ５１８）抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ１抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ２抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ３抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ４抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ５抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ６抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ７抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＴＬ８抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＣＤ４０抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＯＸ４０抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＮＫＧ２Ａ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＮＫＧ２Ｃ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＣＯＳ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＳＩＲＰα抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗４−１ＢＢ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＩＬ−１０抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗ＴＳＬＰ抗体と組合される。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）はＩＬ−１０またはペグ化ＩＬ−１０と組合される。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は、１以上のインヒビター（例えば、小さな有機分子または抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）、例えばＭＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳類標的）インヒビター、細胞毒性物質、白金物質、ＥＧＦＲインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、微小管安定化剤、タキサン、ＣＤ２０インヒビター、ＣＤ５２インヒビター、ＣＤ３０インヒビター、ＲＡＮＫ（核因子カッパＢの受容体アクチベーター）インヒビター、ＲＡＮＫＬ（核因子カッパＢリガンドの受容体アクチベーター）インヒビター、ＥＲＫインヒビター、ＭＡＰキナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＭＥＫインヒビター、ＰＩ３Ｋインヒビター、ＨＥＲ１インヒビター、ＨＥＲ２インヒビター、ＨＥＲ３インヒビター、ＨＥＲ４インヒビター、Ｂｃｌ２インヒビター、ＣＤ２２インヒビター、ＣＤ７９ｂインヒビター、ＥｒｂＢ２インヒビターまたはファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビターと組合される。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は以下のものの任意の１以上と組合される：１３−シス−レチノイン酸、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、４−ヒドロキシタモキシフェン、５−デオキシウリジン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、７−ヒドロキシスタウロスポリン、Ａ−４４３６５４、アビラテロンアセタート（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、アブラキサン（ａｂｒａｘａｎｅ）、ＡＢＴ−５７８、アコルビフェン（ａｃｏｌｂｉｆｅｎｅ）、ＡＤＳ−１００３８０、ＡＬＴ−１１０、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、アナグレリド（ａｎａｇｒｅｌｉｄｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、ＡＰ−２３５７３、ＡＲＱ−１９７、アルゾキシフェン（ａｒｚｏｘｉｆｅｎｅ）、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、アスパラギナーゼ、ＡＴ−９２６３、アトラセンタン（ａｔｒａｓｅｎｔａｎ）、アキシチニブ（ａｘｉｔｉｎｉｂ）、ＡＺＤ１１１５、カルメットゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）ワクチン、バタブリン（ｂａｔａｂｕｌｉｎ）、ＢＣ−２１０、ベソデュトクス（ｂｅｓｏｄｕｔｏｘ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、Ｂｉｏ１１１、ＢＩＯ１４０、ブレオマイシン、ＢＭＳ−２１４６６２、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−２７５２９１、ＢＭＳ−３１０７０５、ボルテジミブ（ｂｏｒｔｅｚｉｍｉｂ）、ブセレリン（ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カルシトリオール（ｃａｌｃｉｔｒｉｏｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、カネルチニブ（ｃａｎｅｒｔｉｎｉｂ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ＣＣ８４９０、セジラニブ（Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ）、ＣＧ−１５２１、ＣＧ−７８１、クラミドシン（ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロロトキシン（ｃｈｌｏｒｏｔｏｘｉｎ）、シレンジチド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、シスプラチン、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、クロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）、ＣＯＬ−３、ＣＰ−７２４７１４、シクロホスファミド、シプロテロン（ｃｙｐｒｏｔｅｒｏｎｅ）、シプロテロンアセタート、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ダシノスタット（ｄａｃｉｎｏｓｔａｔ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダヌセルチブ（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デカタニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、デグエリン（ｄｅｇｕｅｌｉｎ）、デニロイキン（ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ）、デオキシコホルマイシン（ｄｅｏｘｙｃｏｆｏｒｍｙｃｉｎ）、デプシペプチド（ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ）、ジアリールプロピオニトリル、ジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ）、ジフチトックス（ｄｉｆｔｉｔｏｘ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、エドテカリン（ｅｄｏｔｅｃａｒｉｎ）、イットリウム−９０標識エドトレオチド（ｅｄｏｔｒｅｏｔｉｄｅ）、エドトレオチド、ＥＫＢ−５６９、ＥＭＤ１２１９７４、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、エンザルタミド（ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ）、エンザスタウリン（ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エピチロン（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ）Ｂ、ＥＲＡ−９２３、エルビツクス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、エストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）、フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルドロコルチゾン（ｆｌｕｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、フルオキシメステロン（ｆｌｕｏｘｙｍｅｓｔｅｒｏｎｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ＦＯＬＦＯＸレジメン、フルベストラント（Ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、ガレテロン（ｇａｌｅｔｅｒｏｎｅ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ギマテカン（ｇｉｍａｔｅｃａｎ）、ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）、酢酸ゴセレリン、ゴシポール（ｇｏｓｓｙｐｏｌ）、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＳＫ６９０６９３、ＨＭＲ−３３３９、ヒドロキシプロゲステロンカプロアート、ヒドロキシウレア、ＩＣ８７１１４、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、イドキシフェン（ｉｄｏｘｙｆｅｎｅ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＩＭ８６２、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＩＮＣＢ２４３６０、ＩＮＯ１００１、インターフェロン、インターロイキン１２、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ＪＮＪ−１６２４１１９９、ケトコナゾール、ＫＲＸ−０４０２、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ラソホキシフェン（ｌａｓｏｆｏｘｉｆｅｎｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）、酢酸ロイプロリド、レバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、リポソーム封入パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ロナファルニブ（ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ）、ルカントン（ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ）、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６４６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３１７６１５、マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メドロキシプロゲステロンアセタート（ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、メゲストロールアセタート（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、メスナ（ｍｅｓｎａ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、トザセルチブ（ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＭＬＮ８０５４、ネオバスタット（ｎｅｏｖａｓｔａｔ）、ネラチニブ（Ｎｅｒａｔｉｎｉｂ）、ニューラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）、ニルチミド（ｎｉｌｕｔｉｍｉｄｅ）、ノラトレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、オブリメルセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）、オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、オレゴボマブ（ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）、オルテロネル（ｏｒｔｅｒｏｎｅｌ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、ＰＥＧ−インターフェロン、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ペリホシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、フェニルアラニンマスタード（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｍｕｓｔａｒｄ）、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ（ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩＫ−７５、ピペンドキシフェン（ｐｉｐｅｎｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＰＫＩ−１６６、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、プロゲスチン（ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ）、ＰＸ−８６６、Ｒ−７６３、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、ラゾキシン（ｒａｚｏｘｉｎ）、リダホロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、ＲＴＡ７４４、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、スクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、Ｓｄｘ１０２、セリシクリブ（ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ）、セルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、セマキサニブ（ｓｅｍａｘａｎｉｂ）、ＳＦ１１２６、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ＳＮ３６０９３、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、スピロノラクトン（ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、ＳＲ１３６６８、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ＳＵ６６６８、スベロイルアナリド（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎａｌｉｄｅ）ヒドロキサム酸、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、合成エストロゲン、タランパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、タリモゲン ラヘルパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、テスミリフェン（ｔｅｓｍｉｌｉｆｅｎｅ）、テストステロン、テトランドリン（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ）、ＴＧＸ−２２１、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チシリムマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）、チピファルニブ（ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ）、チボザニブ（ｔｉｖｏｚａｎｉｂ）、ＴＫＩ−２５８、ＴＬＫ２８６、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、クエン酸トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、トラベクテジン（ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ）、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、トリコスタチン（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ）Ａ、トリシリビンホスファート（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）一水和物、トリプトレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）パモアート、ＴＳＥ−４２４、ウラシルマスタード、バルプロ酸、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）、バタラニブ（ｖａｔａｌａｎｉｂ）、ＶＥＧＦトラップ、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、ＶＸ−７４５、ウォートマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）、Ｘｒ３１１、ザノリムマブ（ｚａｎｏｌｉｍｕｍａｂ）、ＺＫ１８６６１９、ＺＫ−３０４７０９、ＺＭ３３６３７２、ＺＳＴＫ４７４。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は、以下のもの（それらに限定されるものではない）を含む１以上の抗嘔吐物質と組合される：カソピタント（ｃａｓｏｐｉｔａｎｔ）（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ネツピタント（Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ）（ＭＧＩ−Ｈｅｌｓｉｎｎ）および他のＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン（ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ）（ＭＧＩ ＰｈａｒｍａによりＡｌｏｘｉとして販売されている）、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＥｍｅｎｄとして販売されている）、ジフェンヒドラミン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＢｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）として販売されている）、ヒドロキシジン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｔａｒａｘ（登録商標）として販売されている）、メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）（ＡＨ Ｒｏｂｉｎｓ Ｃｏ，；Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡによりＲｅｇｌａｎ（登録商標）として販売されている）、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）（Ｗｙｅｔｈ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪによりＡｔｉｖａｎ（登録商標）として販売されている）、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＸａｎａｘ（登録商標）として販売されている）、ハロペリドール（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ；Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪによりＨａｌｄｏｌ（登録商標）として販売されている）、ドロペリドール（ｄｒｏｐｅｒｉｄｏｌ）（Ｉｎａｐｓｉｎｅ（登録商標））、ドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）（Ｓｏｌｖａｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｍａｒｉｅｔｔａ，ＧＡによりＭａｒｉｎｏｌ（登録商標）として販売されている）、デキサメタゾン（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）として販売されている）、メチルプレドニゾロン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＭｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売されている）、プロクロルペラジン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣによりＣｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）として販売されている）、グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｉｎｃ．；Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪによりＫｙｔｒｉｌ（登録商標）として販売されている）、オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣによりＺｏｆｒａｎ（登録商標）として販売されている）、ドラセトロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｎｚｅｍｅｔ（登録商標）として販売されている）、トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｅａｓｔ Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪによりＮａｖｏｂａｎ（登録商標）として販売されている）。
癌治療の他の副作用には、赤血球および白血球の欠乏症が含まれる。したがって、本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は、そのような欠乏症を治療または予防する物質、例えばフィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、ＰＥＧ−フィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンアルファまたはダルベポエチンアルファと組合される。
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は抗癌放射線療法と組合せて投与される。例えば、本発明の１つの実施形態においては、放射線療法は外部照射療法（ＥＢＴ）であり、これは、腫瘍の位置に高エネルギーＸ線のビームを放出するための方法である。該ビームは患者の外部で（例えば、線形加速装置により）生成され、腫瘍部位を標的化する。これらのＸ線は癌細胞を破壊することが可能であり、注意深い治療計画は周辺の正常組織が救われることを可能にする。患者の体内には放射能源は配置されない。本発明の１つの実施形態においては、放射線療法は、Ｘ線ではなく陽子を罹患組織に照射する原体（ｃｏｎｆｏｒｍａｌ）治療の一種である陽子線治療である。本発明の１つの実施形態においては、放射線療法は原体外部ビーム放射線療法であり、これは、放射線療法を個々の身体構造に適合させる先進的技術を用いる方法である。本発明の１つの実施形態においては、放射線療法は密封小線源治療であり、この場合、放射線の余分の線量、つまりブーストを或る領域に与えるために通常使用される放射性物質が体内に一時的に配置される。
本発明の１つの実施形態においては、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態、）と組合せて適用される外科的手技は外科的腫瘍摘出術である。
「組合される」なる語は、本発明の方法において投与される成分（例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）およびペンブロリズマブ）が、同時運搬のために単一組成物へと製剤化されることが可能であり、あるいは２以上の組成物（例えば、キット）に別々に製剤化されることが可能であることを示す。各成分は、その他の成分が投与される時点とは異なる時点で対象に投与されうる。例えば、各投与は、ある時間にわたって、幾つかの間隔をあけて非同時（例えば、別々または連続的）に行われうる。更に、そのような別々の成分は、同じ経路または異なる経路によって対象に投与されうる。
実験的および診断的用途
本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）はアフィニティ精製剤として使用されうる。このプロセスにおいては、当技術分野でよく知られた方法を用いて、該抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメントを固相、例えばセファデックス、ガラスもしくはアガロース樹脂または濾紙上に固定化する。該固定化抗体またはフラグメントを、精製すべきＴＩＧＩＴタンパク質（またはその断片）を含有するサンプルと接触させ、ついで、該固定化抗体またはフラグメントに結合したＴＩＧＩＴタンパク質以外のサンプル中の実質的に全ての物質を除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、該結合ＴＩＧＩＴ（例えば、プロテインＡ）を溶出する溶媒で該支持体を洗浄する。そのような固定化抗体およびフラグメントは本発明の一部を構成する。
更に、例えば、ウエスタンブロットおよび本明細書に記載されている他のイムノアッセイを行うのに有用である二次抗体を産生させるための抗原を提供する。特に、本明細書に開示されている治療用抗体（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０）の可変領域および／またはＣＤＲ配列を含み、例えば治療場面において該抗体の存在を特異的に検出するために使用される抗イディオタイプ抗体を産生させるために使用されうるポリペプチドを開示する。
抗ＴＩＧＩＴ抗体（例えば、ヒト化抗体）およびその抗原結合性フラグメントはまた、ＴＩＧＩＴタンパク質に関する検出アッセイにおいて、例えば、特定の細胞、組織または血清、例えば腫瘍細胞、例えば黒色腫細胞におけるその発現を検出するのに有用でありうる。そのような診断方法は種々の疾患診断において有用でありうる。
本発明は、本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）の使用を含むＥＬＩＳＡアッセイ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）を含む。
例えば、そのような方法は以下の工程を含む：
（ａ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントで基体（例えば、マイクロタイタープレートウェル、例えばプラスチックプレートの表面）をコーティングすること；
（ｂ）ＴＩＧＩＴの存在に関して試験されるべきサンプルを該基体に適用すること；
（ｃ）該プレートを洗浄して、該サンプル中の未結合物質を除去すること；
（ｄ）ＴＩＧＩＴ抗原に同様に特異的である検出可能な様態で標識された抗体（例えば、酵素結合抗体）を適用すること；
（ｅ）該基体を洗浄して、未結合標識抗体を除去すること；
（ｆ）標識抗体が酵素結合体である場合には、酵素により蛍光シグナルに変換される化学物質を適用すること；および
（ｇ）標識抗体の存在を検出すること。
該基体に結合した標識の検出はＴＩＧＩＴタンパク質の存在を示す。
もう１つの実施形態においては、該標識抗体またはその抗原結合性フラグメントはペルオキシダーゼで標識され、これはＡＢＴＳ（例えば、２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸））または３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンと反応して、検出可能な変色をもたらす。あるいは、該標識抗体またはフラグメントは、検出可能な放射性同位体（例えば、３Ｈ）で標識され、これは、シンチラントの存在下、シンチレーションカウンターにより検出されうる。
本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）はウエスタンブロットまたは免疫−タンパク質ブロット法において使用されうる。そのような方法は本発明の一部を構成し、例えば以下のことを含む。（１）当技術分野で公知の方法（例えば、半乾燥ブロッティングまたはタンクブロッティング）を用いて、ＴＩＧＩＴの存在に関して試験すべきサンプル由来の（例えば、サンプル中のタンパク質のＰＡＧＥまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動分離からの）タンパク質を膜または他の固体基体上へ所望により移し、結合ＴＩＧＩＴまたはその断片の存在に関して試験すべき膜または他の固体基体を本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触させること。
そのような膜は、例えば、非変性ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルにおいてＴＩＧＩＴの存在に関して試験すべきタンパク質が（例えば、該ゲルにおける電気泳動分離の後で）トランスファー（転移）されたニトロセルロースまたはビニル系（例えば、ポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ））膜の形態をとりうる。該膜を該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはフラグメントと接触させる前に、所望により、該膜上の非特異的タンパク質結合部位に結合するように、該膜を例えば脱脂乾燥乳などでブロッキングしてもよい。（２）該膜を１回以上洗浄して、未結合抗ＴＩＧＩＴ抗体またはフラグメントおよび他の未結合物質を除去すること；ならびに（３）結合した抗ＴＩＧＩＴ抗体またはフラグメントを検出すること。
結合抗体またはフラグメントの検出は、該膜または基体上および該サンプル中にＴＩＧＩＴタンパク質が存在することを示す。該結合抗体またはフラグメントの検出は、検出可能な様態で標識された二次抗体（抗免疫グロブリン抗体）に該抗体またはフラグメントを結合させ、該二次抗体の存在を検出することによるものでありうる。
本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は免疫組織化学的方法にも使用されうる。そのような方法は本発明の一部を構成し、例えば、（１）ＴＩＧＩＴタンパク質の存在に関して試験すべき細胞（例えば、腫瘍細胞、例えば、黒色腫細胞）を本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触させ、（２）該細胞上または細胞内の該抗体またはフラグメントを検出することを含む。
該抗体またはフラグメント自体が検出可能な様態で標識されている場合、それは直接的に検出されうる。あるいは、検出可能な様態で標識された二次抗体に該抗体またはフラグメントを結合させ、該標識二次抗体を検出することが可能である。
本明細書に開示されている或る抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）はインビボ腫瘍イメージングにも使用されうる。そのような方法は、放射能標識された抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントを、ＴＩＧＩＴ発現に関連した（例えば、ＴＩＧＩＴを、例えば腫瘍細胞表面上で発現する）腫瘍の存在に関して試験すべき患者の体内に注射し、ついで該患者の身体の核イメージングを行って、例えば、該腫瘍に結合した高濃度の該抗体またはフラグメントを含む部位において、該標識抗体またはフラグメントの存在を検出することを含みうる。該部位の検出はＴＩＧＩＴ＋ 腫瘍および腫瘍細胞の存在を示す。
イメージング技術には、ＳＰＥＣＴイメージング（単一光子放出型コンピュータ断層撮影）またはＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）が含まれる。標識には、例えばヨウ素−１２３（１２３Ｉ）およびテクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）（例えば、ＳＰＥＣＴイメージングと組合されるもの）、または１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏまたは１８Ｆ（例えば、ＰＥＴイメージングと組合されるもの）、またはインジウム−１１１が含まれる（例えば、Ｇｏｒｄｏｎら（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．６７：３８５−４４０を参照されたい）。
医薬組成物および投与
本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）の医薬組成物または無菌組成物を製造するためには、該抗体またはその抗原結合性フラグメントを医薬上許容される担体または賦形剤と混合する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。
治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液または懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
単独で又は別の治療剤と組合せて投与される本発明の抗体の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。該投与量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。
もう１つの実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０）と組合せて対象に投与されるもう１つの治療剤は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２年１１月１日））に従い、対象に投与される。
投与様式は様々でありうる。投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が含まれる。
特定の実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）は、侵襲的経路、例えば注射により投与されうる。本発明の更に詳細な実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物は静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内に、または吸入、エアゾール運搬により投与される。非侵襲性経路（例えば、経口的、例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も本発明の範囲内である。
本発明は、本発明の抗体もしくは抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびそれらのヒト化形態）またはその医薬組成物のいずれかを含む容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば、キャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空穿孔針またはシリンジシリンダーを有するもの）を提供する。本発明はまた、本発明の抗体もしくは抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）またはその医薬組成物のいずれかを含む注射装置を提供する。注射装置は、非経口経路、例えば筋肉内、皮下または静脈内経路により患者の体内に物質を導入する装置である。例えば、注射装置はシリンジ（例えば、医薬組成物が予め充填されたもの、例えば、自動注入装置）であることが可能であり、これは、例えば、注射すべき流体（例えば、抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物）を保持するためのシリンダーまたは筒状物、該流体の注射のために皮膚および／または血管を穿刺するための針、ならびに該シリンダーから及び針穿孔を介して該流体を押出すプランジャーを含む。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む注射装置は静脈内（ＩＶ）注射装置である。そのような装置は、カニューレまたはトロカール／針を介して患者の体内に導入される流体（例えば、生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、所望によりグルコースを含む乳酸リンゲル液）を保持するためのバッグ（袋）またはリザーバ（貯蔵容器）に接続されうるチューブに接続されうるカニューレまたはトロカール／針の中に該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を含む。本発明の１つの実施形態においては、トロカールおよびカニューレが対象の静脈内に挿入され、挿入カニューレからトロカールが取り外されたら、該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物が装置内に導入されうる。ＩＶ装置は、例えば、（例えば、手または腕における）末梢静脈内；上大静脈または下大静脈、または心臓の右心房（例えば、中央ＩＶ）内；あるいは鎖骨下、内頚、または大腿静脈に挿入されることが可能であり、例えば、それが上大静脈または右心房（例えば、中心静脈線）に達するまで、心臓に向けて進入可能である。本発明の１つの実施形態においては、注射装置は自動注入装置、ジェットインジェクターまたは外部注入ポンプである。ジェットインジェクターは、該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を患者の体内へ導入するために、表皮に浸透する液体の高圧ナロー（ｎａｒｒｏｗ）ジェットを使用する。外部注入ポンプは、制御された量の該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を患者の体内に運搬する医療装置である。外部注入ポンプは電気的または機械的に駆動されうる。ポンプは、ポンプによって異なる様態で作動する。例えば、シリンジポンプはシリンジのリザーバ内に流体を保持し、可動式ピストンが流体運搬を制御し、弾性（ｅｌａｓｔｏｍｅｒｉｃ）ポンプは伸縮性バルーンリザーバ内に流体を保持し、バルーンの弾性壁からの圧力が流体運搬を駆動する。蠕動ポンプにおいては、１組のローラーが可撓性チューブの或る長さを絞り込んで、流体を前方へ押出す。マルチチャネルポンプにおいては、流体は複数のリザーバから複数の速度で運搬されうる。
本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。該医薬組成物を含むそのような無針装置も本発明の一部である。本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなインプラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られており、本発明の医薬組成物を含むものは本発明の範囲内である。
あるいは、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）を全身的ではなく局所的に、例えば、腫瘍（例えば、ＴＩＧＩＴ＋ 腫瘍）内に該抗体またはフラグメントを直接注射することにより投与することが可能である。更に、標的化薬物運搬系により、例えば、組織特異的抗体（例えば、免疫病理学的に特徴づけられる腫瘍、例えば、ＴＩＧＩＴ＋ 腫瘍を標的化するもの）で被覆されたリポソーム中に含有させて、該抗体またはフラグメントを投与することが可能である。該リポソームは罹患組織に標的化され、罹患組織により選択的に取り込まれるであろう。そのような方法およびリポソームは本発明の一部である。
投与レジメンは、該治療用抗体または抗原結合性フラグメントの血清または組織代謝回転速度、症状の程度、該治療用抗体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、望ましくない副作用を最小にすると同時に標的罹患状態の改善をもたらす十分な治療用抗体またはフラグメントを運搬する。したがって、運搬される生物学的物質の量は、部分的には、個々の治療用抗体および治療される状態の重症度に左右される。治療量抗体またはフラグメントの適当な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている又は疑われているパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。一般に、用量は、最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適効果が得られるまで、少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。一般に、使用される生物学的物質を、治療のために標的化される動物と同じ種から誘導し、それにより該薬剤に対する免疫応答を最小にすることが望ましい。例えば、ヒト対象の場合には、ヒト化抗体および完全ヒト抗体が望ましいかもしれない。
本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は、連続的注入により、または例えば、毎日、週１〜７回、毎週、隔週、毎月、隔月、年４回、年２回、毎年などで投与される用量で投与される。投与は、例えば、静脈内、皮下、局所、経口、鼻腔内、直腸内、筋肉内、大脳内、髄腔内投与または吸入により行われうる。毎週の全用量は、一般には、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ以上である（例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照されたい）。また、用量は、対象の血清中の抗ＴＩＧＩＴ抗体の所定の目標濃度、例えば、０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌまたはそれ以上を達成するように投与されうる。他の実施形態においては、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、例えば、皮下または静脈内に、毎週、隔週、「４週間ごと」、毎月、隔月または年４回、１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００または２５００ｍｇ／対象で投与される。
本明細書中で用いる「有効量」なる語は、単独で又は追加的な治療剤と共に細胞、組織または対象に投与された場合に、疾患、例えば癌の症状の１以上または癌の進行における測定可能な改善を引き起こすのに有効である、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化１４Ｄ７またはヒト化２６Ｂ１０）の量を意味する。有効量は更に、症状の少なくとも部分的な改善、例えば腫瘍の退縮または排除、腫瘍成長の欠如、生存期間の延長における増加をもたらすのに十分な該抗体またはフラグメントの量を意味する。有効量は、単独で投与される個々の有効成分に適用される場合には、その成分のみに関するものである。有効量は、組合せ体に適用される場合には、連続投与または同時投与のいずれで組合せ投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、有効成分の組合された量を意味する。治療用物質の有効量は、少なくとも１０％、通常は少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％の、診断尺度またはパラメータの改善をもたらす。有効量はまた、疾患の重症度を評価するために主観的尺度が用いられる場合には、主観的尺度における改善をもたらしうる。
キット
更に、本明細書に記載されているもう１つの治療剤および／または医薬上許容される担体（これらに限定されるものではない）を含む１以上の追加的成分と共に、本明細書に開示されている抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化１４Ｄ７またはヒト化２６Ｂ１０）（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキットを提供する。該抗体もしくはフラグメントおよび／または該治療剤は、純粋な組成物として、または医薬組成物において医薬上許容される担体と組合せて製剤化されうる。
１つの実施形態においては、該キットは、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化１４Ｄ７またはヒト化２６Ｂ１０）またはその医薬組成物を１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に、そしてその医薬組成物および／またはもう１つの治療剤をもう１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に含む。
もう１つの実施形態においては、該キットは、単一の共通の容器内に、所望により医薬組成物において、一緒に製剤化された１以上の治療剤と所望により組合されていてもよい、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合性フラグメント（例えば、ヒト化１４Ｄ７またはヒト化２６Ｂ１０）と医薬上許容される担体とを含む、本発明の組合せを含む。
該キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、該キットは、そのような投与を行うための装置を含みうる。例えば、該キットは前記の１以上の皮下針または他の注射装置を含みうる。
該キットは、該キットにおける医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬組成物および剤形を有効かつ安全に使用することにおいて患者および医師を補助する。例えば、本発明の組合せに関する以下の情報が添付文書（インサート）において供給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存条件、参考資料、製造業者／流通業者情報ならびに特許情報。
検出用キットおよび治療用キット
便宜上、本発明の抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１４Ｄ７、２６Ｂ１０またはそれらのヒト化形態）は、キットとして、すなわち、診断用または検出用アッセイを行うための説明を伴う所定量の試薬のパッケージ化された組合せとして提供されうる。該抗体またはフラグメントが酵素で標識されている場合には、該キットは、該酵素により要求される基質および補因子（例えば、検出可能な発色団または発蛍光団を与える基質前駆体）を含む。また、他の添加物、例えば安定剤、バッファー（例えば、ブロッキングバッファーまたは細胞溶解バッファー）などが含まれうる。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中濃度をもたらすように大きく変動しうる。特に、該試薬は、適当な濃度を有する試薬溶液を溶解時に与える賦形剤を含む乾燥粉末、通常は凍結乾燥粉末として提供されうる。
また、例えばＥＬＩＳＡ（サンドイッチ型または競合形態）のようなイムノアッセイを含む種々の検出アッセイにおいて使用される１以上のそのような試薬を含む診断用または検出用試薬およびキットを提供する。キットの成分は固体支持体に予め結合していることが可能であり、あるいはキットが使用される際に固体支持体の表面に適用されることが可能である。本発明の幾つかの実施形態においては、シグナル生成手段は、本発明の抗体またはフラグメントが予め結合した状態で提供されることが可能であり、あるいは使用前に１以上の成分、例えばバッファー、抗体−酵素コンジュゲート、酵素基質などと一緒にすることを要しうる。キットはまた、追加的な試薬、例えば、固相表面への非特異的結合を低減するためのブロッキング試薬、洗浄試薬、酵素基質などを含みうる。該固相表面はチューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、ミクロスフェア、またはタンパク質、ペプチドもしくはポリペプチドを固定化するのに適した他の材料の形態でありうる。特定の態様においては、化学発光性もしくは発色性産物の形成または化学発光性もしくは発色性基質の還元を触媒する酵素がシグナル生成手段の成分の１つである。そのような酵素は当技術分野でよく知られている。キットは、本明細書に記載されている捕捉剤および検出試薬のいずれかを含みうる。所望により、キットは、本発明の方法を実施するための説明をも含みうる。
また、容器、例えばバイアルまたはボトル内にパッケージングされた抗ＴＩＧＩＴ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性フラグメントを含み、更に、該容器に貼付またはパッケージングされたラベルを含むキットを提供し、該ラベルは該容器の内容物を記載し、本明細書に記載されている１以上の病態を治療するための該容器の内容物の使用に関する指示および／または説明を提供する。
１つの態様においては、該キットは、癌を治療するためのものであり、抗ＴＩＧＩＴ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性フラグメントおよびもう１つの治療剤またはワクチンを含む。該キットは、所望により、更に、非経口投与用、例えば静脈内投与用のシリンジを含みうる。もう１つの態様においては、該キットは、該ワクチンまたはもう１つの治療剤と共に、該抗体またはフラグメントを使用することを示す、容器に貼付またはパッケージングされたラベル、および抗ＴＩＧＩＴ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性フラグメントを含む。更にもう１つの態様においては、該キットは、該抗ＴＩＧＩＴ抗体またはフラグメントと共に、該ワクチンまたはもう１つの治療剤を使用することを示す、容器に貼付またはパッケージングされたラベル、および該ワクチンまたはもう１つの治療剤を含む。ある実施形態においては、抗ＴＩＧＩＴ抗体およびワクチンまたはもう１つの治療剤は別個のバイアル内に存在し、あるいは同じ医薬組成物中で一緒になっている。
併用療法の節において前記したとおり、２つの治療剤の同時投与は、それらの治療剤がそれらの治療効果を奏する期間の重複が存在する限り、それらの治療剤が同時に又は同じ経路によって投与されることを要しない。異なる日または週の投与と同様に、同時または連続投与が想定される。
本明細書に開示されている抗体、ペプチド、抗原結合性フラグメントまたはポリヌクレオチドの少なくとも１つと、検出試薬または治療剤として該組成物を使用するための説明とを含む、本明細書に開示されている治療用キットおよび検出用キットも調製されうる。そのようなキットにおいて使用される容器は、典型的には、該検出用および／または治療用組成物の１以上が配置されうる、そして好ましくは、適切にアリコート化されうる、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の適当な容器を含みうる。第２の治療剤も提供される場合には、該キットは、この第２の検出用および／または治療用組成物が配置されうる第２の異なる容器をも含有しうる。あるいは複数の化合物が単一医薬組成物において調製可能であり、単一収容手段、例えばバイアル、フラスコ、シリンジ、ボトルまたは他の適当な単一容器内にパッケージングされうる。本明細書に開示されているキットはまた、典型的には、商業的販売のために密封された、該バイアルを収容するための手段、例えば、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形プラスチック容器を含む。放射能標識、発色性、蛍光性または他のタイプの検出可能な標識または検出手段が該キット内に含まれる場合、標識剤は検出用または治療用組成物自体と同じ容器において提供されることが可能であり、あるいは、第２の組成物が配置されうる、そして適切にはアリコート化されうる第２の異なる収容手段内に配置されうる。あるいは検出試薬および標識は単一収容手段において調製されることが可能であり、ほとんどの場合、該キットは、典型的には、商業的販売および／または簡便な包装および運搬のために密封して該バイアルを収容するための手段をも含む。
本明細書に記載されている検出またはモニタリング方法を実施するための装置または器具をも提供する。そのような装置は、サンプルが入れられうるチャンバーまたはチューブ、サンプルの流れを装置に通すためのバルブまたはポンプを所望により含んでいてもよい流体処理系、血液から血漿または血清を分離するための所望により含まれていてもよいフィルター、捕捉剤または検出試薬の添加のための混合チャンバー、および捕捉剤免疫複合体に結合した検出可能な標識の量を検出するための所望により含まれていてもよい検出装置を含みうる。サンプルの流れは受動的（例えば、サンプルが適用されたら該装置の更なる操作を要しない毛管力、流体静力または他の力）または能動的（例えば、機械ポンプ、電気浸透ポンプ、遠心力または空気圧の増加により生じる力の適用によるもの）、または能動的力と受動的力との組合せでありうる。
他の実施形態においては、プロセッサ、コンピュータ可読メモリおよびルーチンをも提供し、これは、該コンピュータ可読メモリ上で保存され、本明細書に記載されている方法のいずれかを実施するために該プロセッサ上で実行されるように適合化される。適当なコンピューティングシステム、環境および／または設定の例には、パーソナルコンピュータ、サーバコンピュータ、ハンドヘルドまたはラップトップデバイス、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサベースシステム、セットトップボックス、プログラマブルコンシューマエレクトロニクス、ネットワークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、前記のシステムまたはデバイスのいずれかを含む分散コンピューティング環境、あるいは当技術分野で公知のいずれかの他のシステムが含まれる。
一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２ ＆ １９８９ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１ ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１−４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９）。
一本鎖抗体およびジアボディが記載されている（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１７７−１８９；ならびに米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。二官能性抗体が提供される（例えば、Ｍａｃｋら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：７０２１−７０２５；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：７−１５；Ｖｏｌｋｅｌら（２００１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １４：８１５−８２３；Ｓｅｇａｌら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：１−６；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１−８３；Ｒａｓｏら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２７６２３；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５−３６５９；ならびに米国特許第５，９３２，４４８号、第５，５３２，２１０号および第６，１２９，９１４号を参照されたい）。
二重特異性抗体も提供される（例えば、Ａｚｚｏｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３４９３；Ｋｉｔａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：６９０１；Ｍｅｒｃｈａｎｔら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．７４：９１１５；Ｐａｎｄｅｙら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３８６３３；Ｚｈｅｎｇら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６：１２９９９；Ｐｒｏｐｓｔら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：２２１４；Ｌｏｎｇ（１９９９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８７５を参照されたい）。
抗原の精製は抗体の製造に必要ではない。関心のある抗原を含有する細胞で動物を免疫化することが可能である。ついで該免疫化動物から脾細胞を単離し、該脾細胞を骨髄腫細胞系と融合させてハイブリドーマを得ることが可能である（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら，前掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４を参照されたい）。
抗体は例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照されたい）。
蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照されたい）。
図１はヒトおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴへの本発明の抗体の結合を示す。 図２は、細胞に基づくＥＬＩＳＡブロッキングアッセイにより測定された場合、本発明の抗体がｈＴＩＧＩＴとのｈＣＤ１５５の相互作用を遮断することを示している。 図３はインビトロＴ細胞アッセイにおける本発明の抗体の活性を示す。 図４は、マウス抗ヒトＴＩＧＩＴ １４Ｄ７抗体に結合したヒトＴＩＧＩＴアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。
実施例１
マウス抗ｈＴＩＧＩＴ抗体の作製
ヒトＴＩＧＩＴに対する抗体を作製するために、ＲＩＢＩアジュバントおよび足蹠注射を隔週のスケジュールで用いて、Ｂａｌｂ／ＣマウスをヒトＦｃタグ付きヒトＴＩＧＩＴ組換えタンパク質で免疫化した。免疫化動物を採血し、細胞に基づくＥＬＩＳＡ（後記）を用いてヒトＴＩＧＩＴトランスフェクト化ＣＨＯＫ１細胞への結合に関して血清力価を決定した。最高力価を有する動物に組換えタンパク質で最終ブーストを行い、４日後、流入領域膝窩リンパ節を単離した。Ｃｙｔｏｐｕｌｓｅ Ｈｙｂｒｉｍｍｕｎｅ電気融合系を使用して、単離リンパ球を骨髄腫融合相手Ｐ３Ｘ６３−ＡＧ８．６５３と電気融合させることにより、ハイブリドーマを作製した。融合した細胞をＤＭＥＭ／Ｆ１２、１５％ ＢＣＳ、ＨＡＴ、ＩＬ−６、ＯＰＩサプリメントおよびゲンタマイシン中で９６ウェルプレートにおいてプレーティングした。
細胞ベースＥＬＩＳＡ法を用いて、ヒトＴＩＧＩＴ発現ＣＨＯＫ１細胞への結合ならびにカニクイザルおよびアカゲザルＴＩＧＩＴ発現ＣＨＯ細胞に対する交差反応性に関して、ハイブリドーマ上清をアッセイした。ヒトＴＩＧＩＴおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、５０μｌのＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ ＢＣＳおよびゲンタマイシン（ＣＨＯ−Ｋ１培地）中で９６ウェル組織培養プレートにおいてプレーティングした。アッセイの２日前に２×１０４細胞／ウェルで、またはアッセイの前日に４×１０４細胞／ウェルのいずれかで、細胞をプレーティングした。アッセイ前にウェルから培地を除去し、５０μｌのハイブリドーマ上清を加えた。ハイブリドーマ上清を室温で３０〜６０分間インキュベートし、細胞ＥＬＩＳＡ洗浄プロトコールを用い、Ｂｉｏｔｅｋ ＥＬ４０５ｘ Ｓｅｌｅｃｔ ＣＷプレート洗浄機を使用して、ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。５０マイクロリットルの検出抗体（ＨＲＰ結合ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ｃａｔ＃３０３０−０５）またはＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ｃａｔ＃１０４３−０５））をＣＨＯ−Ｋ１培地内に１：２０００希釈で加え、室温で３０〜６０分間インキュベートした。アッセイプレートを前記のとおりに洗浄し、ＴＭＢで現像し、ＴＭＢ停止溶液（ＫＰＬ ｃａｔ＃５０−８５−０６）または０．１Ｎ リン酸で反応停止させた。４５０ｎｍ〜６２０ｎｍにおける吸光度を測定した。陽性クローンは、ヒトＴＩＧＩＴおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴの両方のトランスフェクト化ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対して反応性であり、親ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合に関しては陰性であった。これらのアッセイにおいては、抗体が親（未トランスフェクト化）ＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合を示した場合には、ＴＩＧＩＴに特異的ではないものとしてスクリーニングにおいてその抗体を廃棄した。
陽性ハイブリドーマを限界希釈によりサブクローニングし、または半固体培地内でのハイブリドーマのプレーティングによりサブクローニングし、ＣｌｏｎｅＰｉｘ（登録商標）（Ｇｅｎｅｔｉｘ）でクローンを採取した。２ラウンドのサブクローニングを該親ハイブリドーマに関して行った。最終サブクローンを小規模培養において無血清ハイブリドーマ産生培地内で増殖させ、精製して、更なる特徴づけのために精製抗体を得た。
実施例２
抗ｈＴＩＧＩＴ抗体の特徴づけ
陽性クローンからの上清を、ｈＴＩＧＩＴ ＣＯＫ１細胞への組換えヒトＣＤ１５５−ｈｕＦｃタンパク質の結合を遮断するそれらの能力に関して、細胞ベースＥＬＩＳＡ法で試験した。ヒトＴＩＧＩＴ−ＣＨＯ−Ｋ１細胞を前記のとおりに９６ウェルプレート内でプレーティングした。該プレートから培地を除去し、５０μｌのハイブリドーマ上清をヒトＴＩＧＩＴ ＣＨＯ−Ｋ１細胞と共に４℃で３０分間インキュベートした。５０マイクロリットルのヒトＣＤ１５５−ｈｕＦｃを、ヒトＣＤ１５５−ｈｕＦｃの最終濃度が０．５μｇ／ｍｌになるように該プレートに加え、それを４℃で３０分間インキュベートした。前記のとおりにアッセイプレートをＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。ＨＲＰ結合Ｆ（ａｂ）’２ヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ １０９−０３６−０９８）をＣＨＯ−Ｋ１培地内の１：２０００希釈で使用して、ｈＴＩＧＩＴ−ＣＨＯＫ１細胞へのヒトＣＤ１５５−ｈｕＦｃの結合を検出した。ＴＭＢを使用してプレートを現像し、前記のとおりにＴＭＢ停止溶液を使用して、それを停止させ、Ａ４５０〜６２０ｎｍを測定した。
前記方法に従い作製されたマウス抗体は１４Ｄ７と称され、クローンＭＥＢ１２５．１４Ｄ７から誘導された。このマウス抗体（１４Ｄ７）はＩｇＧ１／カッパアイソタイプのものであり、配列番号６の重鎖可変領域および配列番号７の軽鎖可変領域を含む。前記方法を用いるヒトＴＩＧＩＴおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴ−ＣＨＯＫ１細胞への細胞ベースＥＬＩＳＡ結合による測定によると、精製１４Ｄ７抗体はヒトＴＩＧＩＴおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴ−ＣＨＯＫ１細胞に結合する（図１）。前記方法を用いて細胞ベースＥＬＩＳＡ遮断アッセイを用いた場合、精製１４Ｄ７抗体はまた、ｈＴＩＧＩＴおよびｈＣＤ１５５相互作用を遮断する（図２）。
前記方法に従い作製されたもう１つのマウス抗体は２６Ｂ１０と称され、クローンＭＥＢ１２５．２６Ｂ１０から誘導された。このマウス抗体（２６Ｂ１０）はＩｇＧ１／カッパアイソタイプのものであり、配列番号２３の重鎖可変領域および配列番号２４の軽鎖可変領域を含む。前記方法を用いるヒトＴＩＧＩＴおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴ−ＣＨＯＫ１細胞への細胞ベースＥＬＩＳＡ結合による測定によると、精製２６Ｂ１０抗体はヒトＴＩＧＩＴおよびカニクイザル／アカゲザルＴＩＧＩＴに結合する（図１）。前記方法を用いて細胞ベースＥＬＩＳＡ遮断アッセイを用いた場合、精製２６Ｂ１０抗体はまた、ｈＴＩＧＩＴおよびｈＣＤ１５５相互作用を遮断する（図２）。
ヒトＴＩＧＩＴ組換えタンパク質への親（非ヒト）抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合に関するアフィニティの決定
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システム（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用する表面プラズモン共鳴により、抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体１４Ｄ７および２６Ｂ１０（実施例１に記載されているとおりに製造されたもの）ならびに市販抗体ＭＢＳＡ４３の動力学的結合活性を測定した。約５０００ ＲＵの抗マウスＩｇＧ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号ＢＲ−１００８−３８）または約１３，０００ ＲＵのヤギ抗ラットＩｇＧ Ｆｃガンマ、フラグメント特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１２−００６−０７１）を、アミンカップリング化学法により、シリーズ（Ｓｅｒｉｅｓ）Ｓ ＣＭ５センサーチップ（カタログ番号ＢＲ−１００５−３０）上に固定化した。マウス抗ヒトＴＩＧＩＴクローン１４Ｄ７、２６Ｂ１０およびＭＢＳＡ４３のそれぞれを４０ＲＵの捕捉レベルのための１μｇ／ｍＬで該固定化抗マウス表面上に注入した。ラット抗ヒトＴＩＧＩＴクローン１４Ａ６を４０ＲＵの捕捉レベルのための１μｇ／ｍＬで該固定化抗ラット表面上に注入した。ＨＢＳ−ＥＰ＋バッファー（ＢＲ−１００６−６９）を３０μＬ／分の流速でランニングバッファーとして使用した。０．２９ｎＭ〜４０ｎＭの範囲の種々の濃度のヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓタンパク質を４５μＬ／分の流速で抗体表面上に注入した。各マウス抗ヒトＴＩＧＩＴ注入サイクルの後、１０μＬ／分の流速での１０ｍＭ グリシン（ｐＨ１．７）溶液の３分間の１回の注入により、シリーズＳ ＣＭ５チップ表面を再生させた。
会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）の速度定数ならびに平衡解離定数ＫＤを分析するために、バックグラウンド減算結合センサーグラムを使用した。得られたデータセットを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア（バージョン２．０）を使用して、１：１ラングミュア結合モデルでフィットさせた。表３はヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓタンパク質に対する抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体のアフィニティを要約する。
Figure 2018527919
アンタゴニスト抗ｈＴＩＧＩＴ抗体のインビトロＴ細胞活性アッセイ
遮断性ヒトＴＩＧＩＴ受容体の機能的結果を特徴づけるために本発明者らが開発した１つのアッセイは、ヒトＴＩＧＩＴを過剰発現するように操作されたヒトＴリンパ球細胞（クローン，Ｅ６−１；ＡＴＣＣ ＴＩＢ−１５２）の不死化系であるＪｕｒｋａｔ細胞（ｈＴＩＧＩＴ−Ｊｕｒｋａｔ）を使用するものであった。該細胞を、ヒト単球細胞系であるＴＨＰ−１細胞と共に、ＴＩＧＩＴリガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２の１つの存在下または非存在下で共培養した。ＴＨＰ−１細胞と共に共培養されプレート結合抗ＣＤ３ ｍＡｂで刺激されたｈＴＩＧＩＴ−Ｊｕｒｋａｔ細胞はＩＬ−２を産生するが、ＴＩＧＩＴリガンド（ＣＤ１５５またはＣＤ１１２）を該共培養に加えた場合には、ＩＬ−２レベルがリガンド依存的に低下した。ＣＤ１５５−またはＣＤ１１２−ＴＩＧＩＴ相互作用を遮断した抗体［例えば、商業的に入手可能なｈＴＩＧＩＴ Ａｂ，クローンＭＢＳＡ４３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｃａｔ＃ １２−９５００−４２；１０μｇ／ｍＬ）］での処理は、ＣＤ１５５またはＣＤ１１２の非存在下で活性化ｈＴＩＧＩＴ Ｊｕｒｋａｔ細胞をＴＨＰ−１と共に培養した場合と同等なレベルまで、ＩＬ−２をレスキューする（図３）。
９６ウェル平底プレートをマウス抗ヒトＣＤ３抗体（ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌ；Ｃｌｏｎｅ ＨＩＴ３ａ；ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｃａｔ＃ ５５５３３６）で４℃で一晩コーティングした。翌日、ｈＴＩＧＩＴ−Ｊｕｒｋａｔ細胞（５０，０００個）を、前記の予めコーティングされたプレート内でプレーティングし、種々の濃度のｍＡｂと共に３０〜６０分間プレインキュベートした。ＴＨＰ−１細胞（５０，０００個）を該培養に加え、ついでＣＤ１５５−Ｆｃ（ヒトＦｃに融合したヒトＣＤ１５５のＥＣＤ；１．０μｇ／ｍｌ）またはＣＤ１１２−Ｆｃ（ヒトＦｃに融合したヒトＣＤ１１２のＥＣＤ；０．５μｇ／ｍｌ）のいずれかを加えた。３７℃および５．０％ ＣＯ２で１８〜２４時間のインキュベーションの後、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ（Ｈｕｍａｎ ＩＬ−２ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＭＥＳＯ Ｋｉｔ：Ｃａｔ＃Ｋ１５１ＡＨＢ−２）により、培養上清においてＩＬ−２レベルを評価した。
図３に示されているとおり、３０μｇ／ｍｌから０．０４μｇ／ｍｌまでの抗ｈＴＩＧＩＴクローン１４Ｄ７および２６Ｂ１０の滴定はそれぞれ０．１７μｇ／ｍｌおよび０．１９μｇ／ｍｌのＥＣ５０を示し、一方、このアッセイを用いたＭＢＳＡ４３の場合には０．２４μ／ｍｌを示した。
実施例３
抗体のヒト化
本明細書に記載されている方法を用いて、１４Ｄ７および２６Ｂ１０マウス抗体をヒト化した。抗体１４Ｄ７から、ヒト化可変重鎖、すなわち、配列番号９〜１２を構築し、ヒト化可変軽鎖、すなわち、配列番号１３〜１６を構築した。マウス抗体２６Ｂ１０から、ヒト化可変重鎖、すなわち、配列番号２５〜２８を構築し、ヒト化可変軽鎖、すなわち、配列番号２９〜３２を構築した。
実施例４
水素重水素交換質量分析によるヒトＴＩＧＩＴ抗体のエピトープマッピング
抗ＴＩＧＩＴ抗体１４Ｄ７とヒトＴＩＧＩＴとの接触領域を、水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）分析を用いて決定した。ＨＤＸ−ＭＳはタンパク質のアミドバックボーン内への水素との重水素の交換を測定する。交換速度に影響を及ぼす要因の１つは溶媒への水素の曝露である。抗体が結合する際の抗原における交換レベルの比較は、抗体が結合するタンパク質の領域を特定しうる。
材料
・ヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（配列番号３５） − ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３３の残基２５〜１４５）およびヒスチジンタグを含む。
・マウス抗ヒトＴＩＧＩＴ １４Ｄ７抗体（ロット＃２６ＡＨＢ）（マウスｘ［ＴＩＧＩＴ Ｈ］ｍＡｂ（ＭＥＢ１２５．１４Ｄ７．Ｃ１．Ｃ１）ＩｇＧ１／カッパ（ＨＹ））（配列番号６の重鎖可変領域および配列番号７の軽鎖可変領域を含む）。
液体クロマトグラフィー−質量分析
質量分析計はＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔｒａｐ−Ｅｌｉｔｅであった。重水素標識サンプルの測定のために、１２０，０００の分解能、１Ｅ６の標的イオン数、５００ミリ秒の最大イオン注入時間および２マイクロスキャンで、オービトラップ（ｏｒｂｉｔｒａｐ）において１つのフルスキャンＭＳデータを取得するように、質量分析計を設定した。ペプチド同定のためのＭＳ／ＭＳデータの取得のために、１２０，０００の分解能で１つのフルスキャンスペクトルを取得するように、ついでイオントラップにおいて１０個のデータ依存性ＭＳ／ＭＳスペクトルを取得するように、質量分析計を設定した。
液体クロマトグラフィー系は分析カラム勾配にはＷａｔｅｒｓ ｎａｎｏＡＣＱＵＩＴＹであり、サンプルの消化およびローディングにはＷａｔｅｒｓ ５１５アイソクラティックポンプであった。サンプルの消化およびローディングに使用したバッファーは流速８０μｌ／分の２％ アセトニトリルおよび０．０５％ トリフルオロ酢酸であった。分析勾配のためのバッファーは、バッファーＡ）：水中の０．１％ 蟻酸、およびバッファーＢ）：アセトニトリル中の０．１％ 蟻酸であった。
勾配は、４０μｌ／分で２％ Ｂから３６％ Ｂまでの１０分間であり、ついで８０％ Ｂでの２分間の洗浄および２％ Ｂで３分間の再平衡化を行った。ついで、２％〜８０％ Ｂの３回（各工程は１分間）の勾配の循環によりカラムを洗浄し、ついで２％ Ｂで５分間の最終平衡化を行った。トラップカラムはＷａｔｅｒｓ Ｖａｎｇｕａｒｄ ＣＳＨ Ｃ１８ １．７μｍ Ｇｕａｒｄ Ｃｏｌｕｍｎであり、分析カラムはＷａｔｅｒｓ ＣＳＨ Ｃ１８，１．７μｍ １×５０ｍｍカラムであった。
重水素標識のためのサンプル処理をＬｅａｐｔｅｃ Ｈ／ＤＸ ＰＡＬシステムにより行った。標識サンプルトレイを２５℃の温度に設定し、クエンチングトレイを１．５℃に設定し、トラップおよび分析カラムチャンバーを１．５℃に設定した。固定化ペプシンカラム（Ｅｎｚｙｍａｔｅ ＢＥＨ Ｐｅｐｓｉｎ，Ｗａｔｅｒｓ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を該カラムチャンバーの外に室温で維持した。
重水素標識
ヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓを抗体１４Ｄ７と、ヒトＴＩＧＩＴ−ｈｉｓに関しては３０μＭおよび１４Ｄ７に関しては１５μＭの最終濃度まで混合した。ヒトＴＩＧＩＴ−ｈｉｓを５０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中でインキュベートすることにより、非結合対照を調製した。該抗体結合サンプルおよび該非結合対照を室温で１時間インキュベートした後、標識実験を開始した。
サンプルを重水素標識するために、２μＬのサンプルを重水（ｐＨ７．６）中の２５μＬのＰＢＳと混合した。標識の時点は３０、３００、１５００、４５００または９０００秒であった。該時点の後、２５μＬの標識混合物を３５μＬの冷クエンチバッファー（８Ｍ 尿素，１００ｍＭ ＴＣＥＰ）に加えた。クエンチしたサンプルを１．５℃で１分間インキュベートし、ついで５５μＬをカラム冷却チャンバ内に注入し、ここでサンプルをペプシンカラムに通し、得られたペプチドをトラップカラムにローディングした。２分後、バルブスイッチによりペプシンカラムをラインから外し、トラップを更に９０秒間洗浄した。その後、トラップを分析カラムに対してインラインに切り換え、分析勾配および質量分析計データ取得を開始させた。各時点は、無作為な順で３回の重複実験において獲得された。
２μＬのｈＴＩＧＩＴ（６０ｐｍｏｌ／μＬ）を１０８μＬの重水素化変性バッファー（４Ｍ 尿素，１００ｍＭ ＴＣＥＰ，０．０１％ ＤＤＭ（９９．５％ 重水素中））と共にインキュベートすることにより、完全に重水素化されたサンプルを得た。該サンプルを室温で一晩インキュベートした。ついで５０μＬをカラムチャンバー内に直接注入し、前記のとおりにデータを取得した。
データ分析
タンパク質の消化が成功したことを確認するために、そしてペプシン消化からのペプチドの一覧を作製するために、未標識サンプルのＬＣ−ＭＳ／ＭＳデータを取得し、データベースを検索した。Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ １．４およびＳＥＱＵＥＳＴ ＨＴ検索アルゴリズム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、データベース検索を行った。使用したタンパク質データベースは、酵母サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ユニプロット（Ｕｎｉｐｒｏｔ）（５／２０／１３）データベースに連結されたヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓおよび抗ヒトｈＴＩＧＩＴ抗体配列であった。
重水素標識実験からのＭＳデータをＨＤ Ｅｘａｍｉｎｅｒ（バージョン１．３，Ｓｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ）により処理した。各ペプチドに関して該ソフトウェアにより選択された質量および保持時間を手動で検証した。
結果
１４Ｄ７抗体により保護されたヒトＴＩＧＩＴペプチドはヒートマップ（図４）に示されており、配列番号３３に示されているヒトＴＩＧＩＴのアミノ酸残基２４〜４１（ＳＳＴＴＡＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬ，配列番号１１３）、４４〜４６（ＩＣＮ）、８５〜９３（ＩＹＨＴＹＰＤＧＴ，配列番号１１４）および９６〜１００（ＧＲＩＦＬ，配列番号１１５）に対応する。
本明細書中に引用されている全ての参考文献を、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、参照により本明細書に組み入れることとする。参照により組み入れるというこの陳述は、そのような引用が、参照により組み入れるという宣誓陳述の直前直後にない場合であっても、３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（１）に従い、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許［それらのそれぞれは３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従い明らかに特定されるものである］に関連づけることを出願人が意図しているものである。参照により組み入れるという宣誓陳述が明細書中に含まれている場合、それは、参照により組み入れるというこの一般的（ｇｅｎｅｒａｌ）陳述を何ら弱めるものではない。本明細書における参考文献の引用は、該参考文献が関連先行技術であると自認するものではなく、また、それは、これらの刊行物または文書の内容または日付に関して何ら自認するものでもない。
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態により範囲において限定されるものではない。実際、本明細書に記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明および添付図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような修飾は添付の特許請求の範囲の範囲に含まれると意図される。
前記の明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分なものであるとみなされる。本明細書に示され記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
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Claims (27)

  1. ａ．配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗体または抗原結合性フラグメント；ならびに
    ｂ．配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗体または抗原結合性フラグメント
    からなる群から選択される、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  2. 該抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号３、４５、４６または４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号６、５７、５８、５９、６０、６１または６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、請求項１記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  3. 該抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、請求項１記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  4. ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｂ．配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号１３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｃ．配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号２４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｄ．配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号２９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｅ．配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５もしくは５６からなる群から選択される可変重鎖および／または配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９もしくは８０のいずれか１つからなる群から選択される可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｆ．配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１および１１２からなる群から選択される可変重鎖ならびに／または配列番号３０、３１および３２のいずれか１つからなる群から選択される可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｇ．配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５もしくは５６のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変重鎖および／または配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９もしくは８０のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｈ．配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１もしくは１１２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変重鎖および／または配列番号３０、３１もしくは３２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメント；
    ｉ．配列番号１０、１１、１２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５もしくは５６のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変重鎖および／または配列番号１４、１５、１６、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９もしくは８０のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、該抗体のフレームワーク領域内にいずれかの配列変異が存在する抗体またはその抗原結合性フラグメント；ならびに
    ｊ．配列番号２６、２７、２８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１もしくは１１２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変重鎖および／または配列番号３０、３２もしくは３２のいずれか１つに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、該抗体のフレームワーク領域内にいずれかの配列変異が存在する抗体またはその抗原結合性フラグメント
    からなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含む、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  5. 該抗体が、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）または類似技術（例えば、ＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）により測定された場合に約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１２ＭのＫＤ値でヒトＴＩＧＩＴに結合する、請求項１〜５のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  6. ２本の重鎖と２本の軽鎖とを含むヒト化抗体である、請求項１〜５のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  7. ヒトＩｇＧ１定常ドメインとヒトカッパ定常ドメインとを含むヒト化抗体である、請求項１〜６のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  8. ＣＨＯ細胞において産生される抗体である、請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  9. 配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、６３、５４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
  10. 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントのいずれか１つ又は請求項９記載のポリペプチドのいずれか１つをコードする単離された核酸。
  11. 請求項１０記載の単離された核酸を含む発現ベクター。
  12. 請求項１〜１１のいずれか１項記載の抗体、結合性フラグメント、ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含む宿主細胞。
  13. ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項１２記載の宿主細胞。
  14. 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物。
  15. ａ．抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｂ．抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｃ．抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｄ．抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｅ．抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｆ．抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｇ．抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｈ．抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｉ．抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｊ．抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｋ．抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｌ．抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｍ．抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｎ．抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｏ．抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｐ．抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｑ．抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｒ．抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、
    ｓ．抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、および
    ｔ．抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント
    からなる群から選択される物質を更に含む、請求項１４記載の組成物。
  16. 該抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ペンブロリズマブまたはその抗原結合性フラグメントおよびニボルマブまたはその抗原結合性フラグメントからなる群から選択される、請求項１５記載の組成物。
  17. ａ．請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、該ポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養し、
    ｂ．所望により、該抗体または抗原結合性フラグメントを該宿主細胞および／または培地から回収することを含む、抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法。
  18. 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を、所望によりもう１つの治療剤または治療手技と組合せて対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法。
  19. 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を、所望によりもう１つの治療剤または治療手技と組合せて対象に投与することを含む、ヒト対象における感染または感染症の治療方法。
  20. 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントと抗原とを含むワクチン。
  21. サンプルにおけるＴＩＧＩＴペプチドまたはその断片の存在を検出するための方法であって、該方法が、サンプルを請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体またはフラグメントと接触させ、該抗体またはフラグメントと該ペプチドとの複合体の存在を検出することを含み、該複合体の検出がＴＩＧＩＴペプチドの存在を示す、方法。
  22. 免疫細胞を請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか１つと接触させることを含む、免疫細胞の活性を増強する方法。
  23. 請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を、免疫細胞の活性の増強を要する対象に投与することを含む、免疫細胞の活性を増強する方法。
  24. 該方法が、
    ａ．癌の治療のために、
    ｂ．感染もしくは感染症の治療のために、または
    ｃ．ワクチンアジュバントとして使用される、請求項２３記載の方法。
  25. ａ．免疫細胞活性化を増強する、
    ｂ．癌を治療する、または
    ｃ．感染もしくは感染症を治療するための医薬の製造における使用のための、請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  26. 免疫細胞活性化の増強、癌の治療、または感染もしくは感染症の治療のための癌治療用医薬の製造用の請求項１〜８のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
  27. アミノ酸ＳＳＴＴＡＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬ（配列番号１１３）、ＩＣＮ、ＩＹＨＴＹＰＧＴ（配列番号１１４）およびＧＲＩＦＬ（配列番号１１５）を含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメント。
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