KR20220007086A

KR20220007086A - T1dm 및 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항-cd40 항체

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Publication number: KR20220007086A
Application number: KR1020217039413A
Authority: KR
Inventors: 파스칼 에스피; 앨리슨 골드파인; 라이너 무스만; 제임스 러시
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2019-05-08
Filing date: 2020-05-06
Publication date: 2022-01-18
Also published as: AU2020267953A1; JP2022116272A; US20220195061A1; IL287464A; BR112021021923A2; EP3966240A1; JP2021518854A; CA3137682A1; CL2021002889A1; WO2020225736A1; TW202108617A; MX2021013631A; CN113784985A

Abstract

본 발명은 항-CD40 항체를 사용하여 T1DM을 치료하기 위한 방법, 치료 요법, 용도, 키트, 및 치료법에 관한 것이다.

Description

T1DM 및 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항-CD40 항체

본 발명은 CFZ533과 같은 항-CD40 항체를 사용하여 T1DM 또는 췌도염을 치료하기 위한 방법, 치료 요법, 용도, 키트, 및 치료법에 관한 것이다.

인슐린 대체 요법은 구명 치료로서 제1형 당뇨병(T1DM)의 증상을 치료하지만 질병 진행을 바꾸지는 않는다. 매년 전 세계적으로 약 132,600명의 아동 및 청소년에서 T1DM이 발병하고(Cho et al 2018), 유병률이 증가하고 있으며, 매년 3% 증가하는 것으로 추산된다. 유럽에서 T1DM이 있는 아동의 수는 2010년에서 2050년 사이에 3배로 증가할 것으로 예상된다(Imperatore et al 2012). 새로 발병하는 T1DM은 모든 연령에서 발생할 수 있지만 5세에서 15세 사이가 최고 발병률을 보인다. 기대 수명은 일반인에 비해 평균 12년 단축된다(Secrest et al 2010). 장기적 미소혈관 및 대혈관 합병증은 T1DM 환자, 이들의 가족, 및 사회에 계속해서 부담이 된다(Secrest et al 2010).

T1DM의 발병 및 첫 1년 동안의 진행은 성인 환자에 비해 소아 환자에서 현저하게 더 공격적이다. T1DM이 새로 발병한 소아 환자는 성인에 비해 발병 시 잔류 β세포 기능이 더 낮고 첫 1년 동안 잔류 β세포 기능이 더 빠르게 감소한다(Greenbaum et al 2012). T1DM이 새로 발병한 소아 환자는 무작위 배정 대조 시험에서 리툭시맙 및 테플리주맙과 같은 면역 조절 개입에 더 잘 반응하는 것으로 보인다(Woittiez and Roep 2015). 그러나, T1DM 치료 표준의 기술적 및 임상적 발전에도 불구하고, 대다수의 환자, 특히 소아 환자는 치료(예를 들어, 혈당) 목표를 달성하지 못하고 있다(Miller et al 2015). 잔류 β세포 기능을 보존하는 요법은 혈당 조절을 개선하고 T1DM과 관련된 심각한 장단기 합병증을 피할 가능성이 있지만, 특히 소아 환자에서 질병 진행을 변경하는 면역 조절 개입 기반의 T1DM 치료는 만족스러운 성과를 내고 있지 못하다. 따라서, 특히 소아 환자의 치료를 위한, T1DM의 효율적인 치료법의 개발이 필요하다.

CFZ533은 인간 CD40에 대한 인간 단클론 항체이다. 이는 IgG1 동형 서브클래스에 속하며, FcγR 결합을 파괴하고 ADCC 및 CDC와 같은 관련 이펙터 기능을 파괴하는 Fc 침묵화 돌연변이(N297A)를 포함한다. CFZ533은 US8828396 및 US9221913에 개시되어 있다.

본 발명자들은 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 인간 항-CD40 단클론 항체가 T1DM 및 췌도염의 치료에 적합할 것으로 예상한다. 특히, 항체 CFZ533은 새로운 방식의 T1DM 및 췌도염 치료에 특히 유용한 것으로 여겨진다.

본 발명의 제1 양태에 따르면, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체로서, 상기 항체의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 T1DM의 치료에 사용하기 위한 것으로, 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 항체가 제공된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제1 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 정맥 주사를 통해 투여되는 로딩 용량 투약, 및 피하 주사를 통해 투여되는 유지 용량 투약을 사용하여 제공된다.

일 구현예에서, 본 발명의 제1 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 제1 용량으로서 정맥 주사를 통해 투여되는 로딩 용량 투약, 및 제1 용량과 상이한 제2 용량으로서 피하 주사를 통해 투여되는 유지 용량 투약을 사용하여 제공된다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제1 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체의 로딩 용량을 사용하여 투여된다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제1 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 환자의 킬로그램당 약 10 mg 내지 약 30 mg 항체의 로딩 용량을 사용하여 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제1 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 소아 환자에게 투여된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 1일차에 정맥내 투여되는 30 mg/kg의 로딩 용량, 및 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는 유지 용량을 사용하여 투여된다.

추가 구현예, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 8일차부터 매주 1회 체중에 따라 고정된 용량인 하기 용량으로 피하 투여되는 유지 용량을 사용하여 투여된다.

a. 체중이 20 kg 내지 30 kg인 체중 카테고리 I의 환자의 경우 135 mg;

b. 체중이 30 kg 내지 50 kg인 체중 카테고리 II의 환자의 경우 195 mg; 및

c. 체중이 50 kg을 초과하는 체중 카테고리 III의 환자의 경우 300 mg.

일 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체의 유지 용량은

a) 체중 카테고리 I의 환자에게 0.9 ml의 단회 주사 형태로;

b) 체중 카테고리 II의 환자에게 1.3 ml의 단회 주사 형태로; 또는

c) 체중 카테고리 III의 환자에게 2 ml의 단회 주사 또는 1 ml의 2회 주사 형태로 투여된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 1일차 이후 최대 52주까지 지속되는 치료에 사용된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 6세 내지 21세 범위 연령의 환자에게 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및

d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체.

하나의 추가 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 CFZ533이다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여되지만, 진단 후 2주(14일)까지는 투여되지 않는다.

본 발명의 제2 양태는 본 발명의 제1 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체의 치료 유효량 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 제3 양태에서, 인간 대상체에서 T1DM을 치료하는 방법으로서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 치료 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체는 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 방법이 제공된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제3 양태에 따른 방법은 정맥 주사를 통해 투여되는 항-CD40 항체의 제1 용량의 로딩 용량 투약, 및 피하 주사를 통해 투여되는 제2 용량의 항-CD40 항체의 유지 용량 투약을 포함하고, 제2 용량은 제1 용량과 상이하다.

일 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 30 mg 항체의 항-CD40 항체의 로딩 용량을 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예의 방법에 따라 치료되는 환자는 소아 환자이다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 1일차에 정맥내 투여되는 항-CD40 항체 30 mg/kg의 로딩 용량의 투여, 및 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는 항-CD40 항체의 유지 용량의 투여를 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 8일차부터 매주 1회 체중에 따라 고정된 용량인 하기 용량으로 항-CD40 항체의 유지 용량을 피하 투여하는 단계를 포함한다.

a. 체중이 20 내지 30 kg인 체중 카테고리 I의 환자의 경우 135 mg;

b.체중이 30 내지 50 kg인 체중 카테고리 II의 환자의 경우 195 mg; 및

추가 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 항-CD40 항체를

a) 체중 카테고리 I의 환자에게 0.9 ml의 단회 주사 형태로;

c) 체중 카테고리 III의 환자에게 2 ml의 단회 주사 또는 1 ml의 2회 주사 형태로 투여하는 단계를 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 1일차 이후 최대 52주 동안 항-CD40 항체로 환자를 치료하는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법을 사용하여 치료되는 환자의 연령 범위는 6세 내지 21세이다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 CFZ533이다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제3 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여되지만, 진단 후 2주(14일)까지는 투여되지 않는다.

본 발명의 제4 양태는 T1DM 치료용 약제의 제조에 있어서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 액체 제약 조성물의 용도에 관한 것으로, 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

i. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

ii. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

iii. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

iv. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

v. 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체, 및 vi. CFZ533.

추가 구현예에서, 본 발명의 제4 양태는 T1DM 치료용 약제의 제조에 있어서, 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 액체 제약 조성물의 용도에 관한 것으로, 항-CD40 항체는

a. 제1 로딩 용량 투약으로 정맥내 투여되고,

b. 이후 제2 유지 용량 투약 요법으로 피하 투여되고, 상기 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제4 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 약제의 제조에 사용되는 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 제1 로딩 용량으로 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제4 양태의 상기 구현예에 따라 약제의 제조에 사용되는 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여되지만, 진단 후 2주(14일)까지는 투여되지 않는다.

제5 양태에서, 본 발명은 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체로서, 상기 항체의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 췌도염의 치료에 사용하기 위한 것으로, 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 항체에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명의 제5 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 제1 용량으로서 정맥 주사를 통해 투여되는 로딩 용량 투약, 및 제1 용량과 상이한 제2 용량으로서 피하 주사를 통해 투여되는 유지 용량 투약을 사용하여 제공된다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제5 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체의 로딩 용량을 사용하여 투여된다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 제5 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 환자의 킬로그램당 약 10 mg 내지 약 30 mg 항체의 로딩 용량을 사용하여 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제5 양태에 따라 사용하기 위한 항체는 소아 환자에게 투여된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 1일차에 정맥내 투여되는 30 mg/kg의 로딩 용량, 및 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는 유지 용량을 사용하여 투여된다.

추가 구현예, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 8일차부터 매주 1회 체중에 따라 고정된 용량인 하기 용량으로 피하 투여되는 유지 용량을 사용하여 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체의 유지 용량은

a) 체중 카테고리 I의 환자에게 0.9 ml의 단회 주사 형태로;

추가 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 1일차 이후 최대 52주까지 지속되는 치료에 사용된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 6세 내지 21세 범위 연령의 환자에게 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

하나의 추가 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 CFZ533이다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 환자에서 췌도염의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여되지만, 진단 후 2주(14일)까지는 투여되지 않는다.

본 발명의 제6 양태는 본 발명의 제5 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체의 치료 유효량 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 제7 양태에서, 인간 대상체에서 췌도염을 치료하는 방법으로서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 치료 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체는 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 방법이 제공된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제7 양태에 따른 방법은 정맥 주사를 통해 투여되는 항-CD40 항체의 제1 용량의 로딩 용량 투약, 및 피하 주사를 통해 투여되는 제2 용량의 항-CD40 항체의 유지 용량 투약을 포함하고, 제2 용량은 제1 용량과 상이하다.

일 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체의 항-CD40 항체의 로딩 용량을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 환자의 킬로그램당 약 10 mg 내지 약 30 mg 항체의 항-CD40 항체의 로딩 용량을 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예의 방법에 따라 치료되는 환자는 소아 환자이다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 1일차에 정맥내 투여되는 항-CD40 항체 30 mg/kg의 로딩 용량의 투여, 및 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는 항-CD40 항체의 유지 용량의 투여를 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 8일차부터 매주 1회 체중에 따라 고정된 용량인 하기 용량으로 항-CD40 항체의 유지 용량을 피하 투여하는 단계를 포함한다.

b. 체중이 30 내지 50 kg인 체중 카테고리 II의 환자의 경우 195 mg; 및

추가 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 항-CD40 항체를

a) 체중 카테고리 I의 환자에게 0.9 ml의 단회 주사 형태로;

다른 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법은 1일차 이후 최대 52주 동안 항-CD40 항체로 환자를 치료하는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법을 사용하여 치료되는 환자의 연령 범위는 6세 내지 21세이다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 CFZ533이다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항체는 환자에서 췌도염의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제7 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따른 방법에 사용되는 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여되지만, 진단 후 2주(14일)까지는 투여되지 않는다.

본 발명의 제8 양태는 췌도염 치료용 약제의 제조에 있어서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 액체 제약 조성물의 용도에 관한 것으로, 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

iv. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및

v. 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.

추가 구현예에서, 본 발명의 제8 양태는 췌도염 치료용 약제의 제조에 있어서, 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 액체 제약 조성물의 용도에 관한 것으로, 항-CD40 항체는

a. 제1 로딩 용량 투약으로 정맥내 투여되고,

다른 구현예에서, 본 발명의 제8 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 약제의 제조에 사용되는 항체는 환자에서 췌도염의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 제1 로딩 용량으로 투여된다.

다른 구현예에서, 본 발명의 제8 양태의 상기 구현예 중 어느 한 구현예에 따라 약제의 제조에 사용되는 항체는 환자에서 T1DM의 진단 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여되지만, 진단 후 2주(14일)까지는 투여되지 않는다.

도 1은 T1DM 환자에서 CFZ533에 대한 개념 증명 연구의 제1 및 제2 코호트의 연구 설계를 개략적으로 나타낸 것이다(CCFZ533X2207).
도 2는 체중(BW) 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg), 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg), 및 카테고리 III(≥50 kg)에서 예측된 PK 프로파일인 체중 카테고리별 예측 CFZ533 혈장 농도이다. 각 카테고리에서, 체중은 균일하게 샘플링되었다. 빨간색 선은 모집단 예측(개별 예측의 중앙값)이고 음영 영역은 모집단의 90%를 차지한다(개별 예측에 대한 5번째 및 95번째 백분위수). T1DM 환자에서 CFZ533의 피하 생체이용률은 건강한 지원자(CCFZ533X2101)의 PK 데이터를 사용하여 추정하였다.
도 3은 CFZ533을 사용한 진행 중이거나 완료된 임상 연구에서 관찰된 CFZ533 최저 농도와 비교하여 체중 카테고리 III의 T1DM 피험자에 대해 예측된 정상 상태 최저 혈장 CFZ533 농도(3가지 체중 카테고리 모두에 대해 유사한 CFZ533 혈장 Ctrough, ss 값이 예측됨)를 보여주는 그래프이다. 체중(BW) 카테고리 III의 T1DM 환자/피험자에 대해 예측된 최저 정상 상태 혈장 CFZ533 농도(Ctrough, ss)(중앙값 222 μg/mL; 모집단의 90%가 140~344 μg/mL; 체중 카테고리 I 및 II에 대해 유사한 Ctrough, ss 값 예측)가, 진행 중인(예비 데이터) 또는 완료된 임상 시험에서 관찰된(평균) 최저 농도와 함께 표시되어 있다.
(i) 중증 근무력증 환자에 대한 연구 CCFZ533X2204 (IV)에서 141일차의 Ctrough, (ii) 및 (iii) 각각 그레이브병 환자에 대한 연구 CCFZ533X2205(IV)에서 29일차 및 85일차의 Ctrough, (iv) 연구 CCFZ533X2203-코호트 2(IV)에서 113일차의 Ctrough, (v) 및 (vi) 각각 원발성 쇼그렌 증후군 환자에 대한 연구 CCFZ533X2203-코호트 3 Arm 2(IV/SC) 및 코호트 3 Arm 1(SC/SC)에서 85일차의 Ctrough, 및 (vii) 신장 이식 환자에 대한 연구 CCFZ533X2201-파트 2(IV)에서 337일차의 Ctrough.
도 4는 rCD154 유도성 경로 활성화의 시험관내 CFZ533 억제를 보여주는 그래프이다.
도 5은 시험관내 CFZ533 최소 자극 활성을 보여주는 그래프이다.
도 6은 CFZ533이 시험관내 세포 고갈을 매개하지 않음을 보여주는 그래프이다.
도 7은 recCD154 또는 CFZ533에 의한 결합 시 CD40 수용체의 내재화를 보여주는 개별 RI-1 B세포의 대표적 이미지이다.
도 8은 비인간 영장류에서의 CFZ533의 약동학 및 약력학(표적 결합; B세포 고갈 없음) 특성을 보여주는 그래프이다.
도 9a는 비인간 영장류에 대한 PK/PD 및 백신 접종 연구의 실험 설계 개략도이다. 도 9b는 항-KLH IgG(면역 반응) 및 혈장 CFZ533 수준(약동학)을 보여주는 그래프이다. 도 9c는 배중심의 조직학적 분석 결과를 보여준다.
도 10은 실험 결과; MR1으로 10주 치료 후 NOD 마우스의 침샘에서의 ELS의 CD40 서명 및 침샘에서의 3차 림프 기관의 감소를 보여준다.
도 11은 실험 결과; 항-CD154로 10주 치료 후 NOD 마우스의 침샘에서 AQP-5-양성 세포의 증가된 비율을 보여준다.

이론에 구애됨이 없이, 본 발명자들은 원발성 쇼그렌 증후군 환자와 같이 자가면역 질환을 앓고 있는 환자의 표적 조직에서 CD40-CD40L 경로를 차단하려면 유지 요법 동안, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(항체 의존성 세포매개 세포독성이 침묵화된 항체; Borrok et al., 2017; 예를 들어 CFZ533 항체)의 약 40 μg/mL 이상의 지속적인 혈장 농도가 필요했음을 확인하였다(PCT/IB2018/058537, 미공개).

CD40은 T1DM 및 췌도염에서 병원성 역할을 하며, 본 발명자들은 CD40:CD154 상호작용 또는 활성을 방해하는 것이 이 장애에 대한 효과적인 자가면역 치료 전략일 것으로 예상한다. T1DM은 병원성 자가반응 면역 세포가 췌도를 침범하여 인슐린 생성 β세포를 손상시킬 때 발생한다(Katsarou et al 2017). 췌도염은 공격적인 질환의 특징이며 소아 환자에서 더 높은 유병률을 보인다(Leete et al 2016).

CD40은 면역 세포 및 비면역 세포에 의해 발현되는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 막관통 당단백질이다. CD40에 대한 리간드인 CD154도 광범위하게 발현된다(Peters et al 2009). CD40:CD154 상호작용은 T-의존적 B세포 반응을 매개하고, CD4+ 자가반응 T 림프구 및 CD8+ 세포용해성 T 림프구의 프라이밍 및 활성화에 중요하다.

CD40은 항원 제시 세포(APC) 활성화 시 상향 조절되며, 나이브 T 림프구와 B 림프구와 같은 CD40+ APC 사이의 상호 작용은 이들 림프구의 표면에서 CD154의 생성을 유도한다. CD40 신호전달은 또한 흉선에서 T세포 선택 수준에서 기능할 수 있으며, 전염증성 사이토카인의 생성을 향상시키고, 이는 활성 Th17 세포로의 T세포 분화에 추가로 영향을 미칠 수 있다(Iezzi et al 2009). 비임상 데이터는 자가반응 T 림프구의 내성 결함, 췌도염 및 당뇨병의 발병에 있어서 CD40:CD154 공동자극 경로에 대한 역할을 뒷받침한다(Price et al 2014). 자발적 자가면역 당뇨병의 모델인 비비만 당뇨병(NOD) 마우스의 데이터는 NOD 마우스에서 췌도염 및 당뇨병의 개시에 있어서 CD40:CD154 경로의 인과적이고 기능적인 역할을 뒷받침한다(Balasa et al 1997; Eshima et al 2003, Vaitaitis et al 2014, Vaitaitis et al 2017).

T1DM 환자의 임상 데이터는 또한 CD40-CD154 공동자극 경로 질환 발병기전에 대한 역할을 뒷받침한다. T1DM이 새로 발병한 소아 환자는 가용성 CD40(sCD40) 수준이 2배 상승한다(Chatzigeorgiou et al 2010b). 진단 후 질병 기간이 1~6개월인 T1DM 환자는 가장 높은 sCD40 수준을 나타낸다. T1DM이 새로 발병한 소아 환자의 sCD40 수준의 상승은 HbA1c, 고혈당증, 및 염증 마커, CRP, IL-6 및 MMP-9와 명확하게 관련이 있다(Chatzigeorgiou et al 2010b, Chatzigeorgiou et al 2010a). 종합적으로 이러한 관찰은 항체가 본원에 개시된 치료 및 투여 요법에 따라 투여되었을 때, CFZ533과 같이 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 단클론 항체를 사용한 개입에 반응할 수 있는, 일반적인 T1DM 및 소아에서 새로 발병한 T1DM에서의 CD40:CD154 경로에 대한 역할을 나타낸다.

성인 환자에 비해 소아는 T1DM의 급성 합병증, 당뇨병성 케토산증 및 중증 저혈당증(인슐린 부작용)의 위험; 및 이들 합병증으로 인한 사망의 위험이 높다(Wherrett et al 2015). 소아 환자는 또한 만성 고혈당증 및 중증 저혈당증으로 인한 신경인지 변화의 위험이 더 높다(Wherrett et al 2015). T1DM이 있는 아동에 대한 임상 결과를 개선하려면 변형 요법이 시급하다.

따라서, 본원에 개시된 치료 요법을 적용함으로써 CD40-CD154 활성화를 차단하여, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, CFZ533 항체)의 지속적이고 약리학적으로 효과적인 혈장 농도를 형성하면, 면역 매개 β세포 파괴 및 췌도염이 중단되어 잔류 β세포 기능이 보존될 수 있을 것으로 본 발명자들은 예상한다.

또한, 본원에 개시된 바와 같은 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, CFZ533 항체)의 지속적이고 약리학적으로 효과적인 혈장 농도를 제공하는 것이 T1DM 및/또는 췌도염이 새로 발병한 환자의 치료에 특히 효과적일 수 있을 것으로 본 발명자들은 예상한다.

따라서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 CD40-CD154 신호전달을 차단할 수 있는 모든 항-CD40 항체가 T1DM 및/또는 췌도염의 치료에 적합할 수 있다.

또한, CFZ533은 (표적 턴오버 및 발현과 관련된) 표적 매개 성향을 따르고 T1DM 환자는 체내에서 높은 CD40 발현을 나타내기 때문에, CD40 수준이 증가된 상태에서 이러한 환자의 CD40 수용체를 완전히 포화시키기 위해 치료 시작 시 로딩 요법이 필요하며, 치료 시작 시 보다 높은 용량 또는 보다 빈번한 요법이 필요하다. 따라서, 치료 시작 시 CD40 수용체의 빠른 포화를 제공하는 로딩 용량 투약 요법에 이어, 발병 조직의 CD40 발현이 강화되는 상황에서(병태의 중증도), 전체 치료 기간에 걸쳐 40 μg/mL 이상의 지속적인 혈장 농도를 제공하는 유지 용량 투약 요법을 사용하는 것이 치료 효과를 위해 고려된다. 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, CFZ533)를 사용한 이전 연구에서, 정상 상태에서 관찰된 최대 혈장 농도는 약 300 내지 400 μg/mL였고(코호트 3; 연구 NCT02291029; CCFZ533X2203), 일반적으로 안전하고 내약성이 우수했으며, 감염 위험 증가를 시사하는 주요 신호는 없었다. 혈전색전 사례는 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명자들은 본원에 개시된 치료 방법이 처음으로, 특히 T1DM 및/또는 췌도염의 발병 시 소아 환자에 대해, T1DM 및/또는 췌도염의 효과적이고 안전한 치료를 제공할 것으로 예상한다.

적절한 투여량은 예를 들어, 사용되는 특정 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본원에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2 또는 ASKP1240), 환자의 연력 및 체중, 질병의 병력(예를 들어, T1DM 발병 및 진행), 및 치료 중인 병태(예를 들어, 췌도염)의 특성 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 궁극적으로, 담당 의료인은 본원에 기재된 바와 같은 약리학적으로 효과적인 혈장 농도를 달성하기 위해 각 개별 환자를 치료하기 위한 연구에서 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 양을 결정할 것이다. 일부 구현예에서, 담당 의료인은 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 낮은 용량의 항-CD40 항체를 투여하고 환자의 반응을 관찰할 수 있다. 다른 구현예에서, 환자에게 투여되는 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 초기 용량(들)은 높고, 이후 재발 징후가 나타날 때까지 하향 적정된다. 환자에게 최적 치료 효과를 얻을 때까지, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 더 많은 용량이 투여될 수 있고, 투여량은 일반적으로 더 증가되지 않는다.

본 발명의 예상되는 치료 방법 또는 용도의 일부를 실현하는 데 있어서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, 본원에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 이의 항원 결합 단편의 치료 유효량이 환자, 예를 들어 포유류(예: 인간)에게 투여된다.

일반적으로, 항체 또는 단백질은 예를 들어 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 이러한 투여를 수행하는 방법은 당업자에게 알려져 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 임의의 적합한 투여 수단이 특정의 선택된 투여 경로에 적절하게 사용될 수 있다.

가능한 투여 경로의 예는 비경구(예를 들어, 정맥내(i.v., I.V., 또는 IV), 근육내, 피내, 피하(s.c., S.C., 또는 SC), 또는 주입), 경구 및 폐내(예를 들어, 흡입), 비강, 경피(국소), 경점막, 및 직장내 투여를 포함한다. 비경구, 피내, 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음의 성분을 포함될 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 긴장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 시린지, 또는 다회 용량 바이알에 봉입될 수 있다.

치료 요법을 로딩 용량 투약 부분과 유지 용량 투약 부분으로 나누는 것의 장점은 최적의 치료 효과를 얻을 수 있다는 것이다. 본원에 기재된 모든 치료 요법에 있어서, 로딩 용량 투약의 목적은 목표 포화(적어도 40 μg/mL에 가까운 혈장 농도)를 달성하여 치료 효과가 시작되도록 하는 것이고, 유지 용량 투약의 목적은 효능을 유지하는 것이다.

본원에 기재된 바와 같은 항-CD40 항체 치료법은 항-CD40 항체 치료법을 필요로 하는 대상체에게 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 로딩 요법 또는 로딩 용량 투약을 투여함으로써 개시될 수 있다. "로딩 용량 투약"은 대상체에게 1회 또는 수회 투여되는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 초기 투약을 의미하며, 투여되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용량은 더 높은 투약 범위 내이다(즉, 약 10 mg/kg 내지 약 60 mg/kg, 예를 들어 정맥내 약 30 mg/kg, 또는 최대 4주 동안 매주, 격주로 약 600 mg, 또는 약 300 mg 또는 약 150 mg). "로딩 요법"은 질환의 중증도에 따라 단회 투여 또는 다회 투여, 예를 들어 단회 또는 다회 정맥내 주입으로서 투여되거나, "로딩 용량 투약" 요법에 조합된 다회 피하 투여로서 투여될 수 있다. "로딩 요법"의 투여 후, 대상체는 이어서 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 1회 이상의 추가 치료 유효 용량을 투여받는다(유지 용량 투약/요법). 후속 치료 유효 유지 용량은, 예를 들어 매주의 투약 일정에 따라, 또는 2주마다 1회(격주로), 3주마다 1회, 또는 4주마다 1회 투여될 수 있다. 이러한 구현예에서, 후속 치료 유효 용량은 일반적으로 더 낮은 투약 범위 내이다(즉, 약 0.3 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 예를 들어 약 10 mg/kg, 예를 들어 10 mg/kg IV 또는 매주, 격주로, 또는 4주마다 약 150 mg, 약 300 mg, 또는 약 600 mg 피하 투여).

대안적으로, 일부 구현예에서, "로딩 요법" 후, 항-CD40 항체 또는 단백질의 후속 치료 유효 용량은 "유지 일정"에 따라 투여되고, 항체 또는 단백질의 치료 유효 용량은 주 1회 또는 월 1회 투여되며, 치료는 최대 6주, 10주, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 등, 최대 12개월 이상 계속될 수 있다.

일반적으로 투약 시기는 "기준선"으로도 알려져 있는, 활성 화합물(예를 들어, mAb1)의 첫 번째 투여일로부터 측정된다. 그러나, 의료인마다 상이한 명명 규칙을 사용한다.

특히, 0주차는 일부 의료인에 의해 1주차로 지칭될 수 있는 한편, 0일차는 일부 의료인에 의해 1일차로 지칭될 수 있다. 따라서, 동일한 투약 일정을 지칭하면서, 예를 들어 의사마다 용량을 3주차/21일차, 3주차/22일차, 4주차/21일차, 4주차/22일차에 제공되는 것으로 지정하는 것이 가능하다. 일관성을 위해, 본원에서는 투약의 첫째 주를 0주차로 지칭하고, 투약의 첫째 날을 1일차로 지칭한다. 그러나 이 명명 규칙은 단순히 일관성을 위해 사용되며, 제한적인 것으로 해석되어서는 안 된다는 점은 당업자가 이해할 것이다. 즉, 의사가 특정 주를 "1주차" 또는 "2주차"라 지칭하는지에 관계없이 매주의 투약은 항-CD40 항체, 예를 들어 mAb1의 매주 용량을 제공하는 것이다. 용량은 정확한 시점에 제공될 필요가 없으며, 예를 들어 대략 29일차에 예정된 용량은 적절한 주에 제공되는 한, 예를 들어 24일차 내지 34일차에, 예를 들어 30일차에 제공될 수 있음이 이해될 것이다.

따라서, T1DM 또는 췌도염의 치료에 사용하기 위한 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 상이한 방식으로, 예를 들어 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합이다. 일 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 로딩 용량은 정맥 주사를 통해 투여되고, 유지 용량 투약은 피하 주사를 통해 투여된다.

다른 특정 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 정맥내 투여되는 로딩 용량은 제1 용량이고, 피하 투여되는 유지 용량은 제1 용량과 상이한 제2 용량이다.

개시된 방법은 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1/CFZ533, mAb2, ASKP1240)를 사용하여 T1DM 및/또는 췌도염 환자의 치료를 제공하는 것으로 이해되지만, 이것이 환자가 궁극적으로 이러한 항-CD40 항체로 치료되어야 하는 경우 치료법이 반드시 단일요법이라는 것을 배제하지 않는다. 실제로, 환자가 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체를 이용한 치료 대상으로 선택되는 경우, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1/CFZ533, mAb2, ASKP1240)는 단독으로 또는 다른 제제 및 치료법과 함께 본 발명의 방법에 따라 투여될 수 있다.

특정 T1DM 또는 췌도염 환자, 예를 들어 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본원에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240)을 이용한 치료에 부적절한 반응을 나타내는 환자에 대해 요법 변경이 적절할 수 있음은 이해될 것이다. 따라서, 본원에 기재된 약리학적으로 유효한 혈장 농도를 달성하기 위한 투여(예를 들어, mAb1/CFZ533 또는 mAb2)는 매주 투약보다 더 빈번할 수 있다.

일부 환자는 로딩 요법(예를 들어, 몇 주 동안 매주 투여[예를 들어 1 내지 4주, 예를 들어, 0, 1, 2, 및/또는 3주차 투약, 예컨대 0 및 1주차의 2주 로딩 용량 투약 요법])에 이은, 예를 들어 3 또는 4주차에 시작하는 유지 요법이 도움이 될 수 있으며, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1/CFZ533, mAb2, ASKP1240)는 몇 주 동안 매주, 격주로, 또는 4주마다 투여될 수 있다. 투여 경로(예를 들어, 피하 대 정맥내) 및 항-CD40 항체의 본원에 기재된 특정 혈장 농도를 달성하는 데 필요한 주사량은 투약 요법에 대한 적응을 필요로 할 수 있는 것으로 이해된다.

예를 들어, mAb1/CFZ533 또는 mAb2에 적절한 요법은 몇 주 동안의 매주[예를 들어 1 내지 4주, 예를 들어 0, 1, 2, 및 3주차 투약] 요법에 이은 매월의 유지 요법일 수 있다.

다른 예로, mAb1/CFZ533 또는 mAb2에 적절한 요법은 몇 주 동안의 매주(예를 들어, 2 내지 8주, 예컨대 3주, 예를 들어 0, 1, 2주차 투약) 요법에 이은 격주의 유지 요법일 수 있다.

또한, (예를 들어, mAb1/CFZ533 또는 mAb2의) 투여는 매월보다 덜 빈번한 투약, 예를 들어 6주마다, 8주마다(2개월마다), 분기마다(3개월마다) 등의 투약일 수 있음이 이해될 것이다.

질환의 중증도에 근거하여, 특정 T1DM 또는 췌도염 환자, 예를 들어 CD40 경로 길항제, 예를 들어 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본원에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240)을 이용한 치료에 부적절한 반응을 나타내는 환자에 대해 용량 증량이 적절할 수 있음은 이해될 것이다. 따라서, 피하(s.c.) 투여량(로딩 또는 유지 용량)은 s.c. 약 50 mg 초과, 예를 들어 약 75 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 175 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 600 mg 등일 수 있고; 유사하게, 정맥내(i.v.) 투여량(로딩 또는 유지 용량)은 약 10 mg/kg 초과, 예를 들어 약 11 mg/kg, 12 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg, 60 mg/kg 등일 수 있다. 또한, 특정 T1DM 및/또는 췌도염 환자, 예를 들어 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체를 이용한 치료에 이상 사례 또는 이상 반응을 나타내는 환자에 대해 용량 감소가 적절할 수도 있음은 이해될 것이다.

하기 설명된 치료 요법은 (i) 진단(췌도염, 췌도의 B 및 T 림프구 침윤, 활성 이소성 배중심) 후 100일 이내의 질병의 공격성이 조직의 높은 CD40 발현과 관련될 가능성이 있는 조건에서 표적 조직(즉, 췌장 림프절)에 CD40 수용체를 빠르게 포화시키고 CFZ533의 CD40 매개 제거를 최소화하며, (ii) 잔류 β세포의 공격적인 자가면역 파괴, 췌도염, 및 병원성 자가반응 B 림프구의 국소 침윤을 빠르게 차단하는 것으로 여겨진다. 따라서, 본 발명의 특정 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본원에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240)은 환자가 T1DM 또는 췌도염으로 진단된 후 처음 100일 이내에 환자에게 투여된다.

일부 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본원에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240)은 1일차(0주차) 3 mg/kg 내지 60 mg/kg, 예를 들어 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9mg/kg, 약 10mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg, 또는 60 mg/kg의 체중에 따라 조정된 정맥내(IV) 로딩 용량에 이어서, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV로 환자에게 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 1일차(0주차) 3 mg/kg 내지 30 mg/kg의 체중에 따라 조정된 정맥내(IV) 로딩 용량에 이어서, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV로 환자에게 투여된다.

일 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 1일차(0주차) 10 mg/kg 내지 30 mg/kg의 체중에 따라 조정된 정맥내(IV) 로딩 용량에 이어서, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV로 환자에게 투여된다.

일 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 1일차(0주차) 10 mg/kg 또는 30 mg/kg의 체중에 따라 조정된 정맥내(IV) 로딩 용량에 이어서, 본원에 개시된 유지 투여 요법으로 환자에게 투여된다. 구체적으로 특정된 구현예에서, 유지 용량은 52주차까지 매주 1회 환자에게 s.c. 투여된다.

하나의 특정 구현예에서, 1일차(D1)에 3 mg/kg의 CFZ533이 i.v. 투여된 후, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV가 투여된다.

특정 구현예에서, 1일차(D1)에 10 mg/kg의 CFZ533이 i.v. 투여된 후, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV가 투여된다.

다른 특정 구현예에서, D1에 30 mg/kg의 CFZ533이 i.v. 투여된 후, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV가 투여된다.

다른 특정 구현예에서, D1에 40 mg/kg의 CFZ533이 i.v. 투여된 후, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV가 투여된다.

다른 특정 구현예에서, D1에 50 mg/kg의 CFZ533이 i.v. 투여된 후, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV가 투여된다.

다른 특정 구현예에서, D1에 60 mg/kg의 CFZ533이 i.v. 투여된 후, 본원에 개시된 유지 투여 요법, 예를 들어 유지 용량 요법 I, II, III, 또는 IV가 투여된다.

따라서, 일 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, CFZ533으로도 지칭되는 mAb1) 또는 이의 항원 결합 단편이, i.v. 전달되는 10 mg/kg 또는 30 mg/kg의 초기 용량으로 환자에게 투여되고, 이어서 8일차부터 매주 1회 s.c. 전달되는 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 유지 용량이 조정된다(유지 용량 요법 I).

일부 구현예에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체(예를 들어, CFZ533으로도 지칭되는 mAb1) 또는 이의 항원 결합 단편이 D1에 i.v. 전달되는 10 mg/kg 또는 30 mg/kg의 초기 용량으로 환자에게 투여될 수 있고, 매주 1회 s.c. 전달되는 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 유지 용량이 조정되며, 소아 환자는 하기 체중 카테고리의 고정된 유지 용량에 따라 D1부터 매주 1회 투여될 것이다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥ 50 kg): 250~350 mg (유지 용량 요법 II와 공동으로).

특정 구현예에서, 체중 등급 I 내지 III의 환자에게 투여되는 100~150 mg, 150~250 mg, 또는 250~350 mg의 매주 s.c. 유지 용량은 치료 기간 중의 체중 증가 또는 감소를 설명하기 위해 1일차/0주차, 85일차/12주차, 169일차/24주차, 253일차/36주차, 및 337일차/48주차에 3개월마다 기록된 대상체의 체중을 기준으로 정의된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 10 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 100~350 mg의 단위 용량을 포함하는 유지 용량(즉, 매주 1회 s.c. 300 mg의 CFZ533)이 투여된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 환자에게 i.v. 투여되는 CFZ533 10 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 250~350 mg.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 10 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg,

체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg,

체중 카테고리 III(≥ 50 kg): 300 mg(유지 용량 요법 III와 공동으로).

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 20 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 100~350 mg의 단위 용량을 포함하는 유지 용량(즉, 매주 1회 s.c. 300 mg의 CFZ533)이 투여된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 20 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

iv. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

v. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

vi. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 250~350 mg.

ii. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg,

iii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg,

iv. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 300 mg.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 30 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 100~350 mg의 단위 용량을 포함하는 유지 용량(즉, 매주 1회 s.c. 300 mg의 CFZ533)이 투여된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 30 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 250~350 mg.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 300 mg.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 40 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 100~350 mg의 단위 용량을 포함하는 유지 용량(즉, 매주 1회 s.c. 300 mg의 CFZ533)이 투여된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 40 mg/kg의 1회 단위 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 250~350 mg.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 40 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 300 mg.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 50 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 100~350 mg의 단위 용량을 포함하는 유지 용량(즉, 매주 1회 s.c. 300 mg의 CFZ533)이 투여된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 50 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 250~350 mg.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 300 mg.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 60 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 100~350 mg의 단위 용량을 포함하는 유지 용량(즉, 매주 1회 s.c. 300 mg의 CFZ533)이 투여된다.

또 다른 특정 구현예에서, D1에 i.v. 투여되는 CFZ533 60 mg/kg의 1회 용량을 포함하는 로딩 용량에 이어, 하기 체중 카테고리의 고정된 용량을 포함하는 유지 용량이 D8부터 매주 1회(Q1W) s.c. 투여된다.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 100~150 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 150~250 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 250~350 mg.

i. 체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg,

ii. 체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg,

iii. 체중 카테고리 III(≥50 kg): 300 mg.

특정 구현예에서, 100~150 mg(체중 카테고리 I), 150~250 mg(체중 카테고리 II), 또는 250~350 mg(체중 카테고리 III)의 단위 용량을 포함하는 유지 용량이 52주차까지 매주 1회 환자에게 s.c. 투여된다.

다른 구현예에서, 135 mg(체중 카테고리 I), 195 mg(체중 카테고리 II), 또는 300 mg(체중 카테고리 III)의 단위 용량을 포함하는 유지 용량이 (유지 용량 요법 IV와 공동으로) 8일차부터 52주차까지 매주 1회 환자에게 s.c. 투여된다.

본 발명의 일 구현예에서, 로딩 투여량은 CFZ533을 100 mg/ml 내지 350 mg/ml의 농도로 포함하는 액체 제약 조성물을 사용하여 i.v. 투여된다. 특정 구현예에서, i.v. 투여용 액체 제약 조성물은 CFZ533을 150 mg/mL 또는 300 mg/mL의 농도로 포함한다.

본 발명의 일 구현예에서, 유지 투여량(예를 들어, 유지 용량 요법 I 내지 IV)은 CFZ533을 100 mg/ml 내지 350 mg/ml의 농도로 포함하는 액체 제약 조성물을 사용하여 s.c. 투여된다. 특정 구현예에서, 액체 제약 조성물은 CFZ533을 150 mg/ml 또는 300 mg/ml의 농도로 포함한다. 이로부터 다음과 같은 투여 요법이 바람직하다.

a) 체중 카테고리 I 환자: 135 mg = 0.9 mL의 단회 주사;

b) 체중 카테고리 II 환자: 195 mg = 1.3 mL의 단회 주사;

c) 체중 카테고리 III 환자: 300 mg = 2 mL의 1회 주사 또는 1 mL의 2회 주사.

항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CFZ533, 이의 기능적 유도체, 또는 이의 바이오시밀러일 수 있다.

본원에 정의된 바와 같이, "단위 용량"은 약 75 mg 내지 900 mg, 예를 들어 약 150 mg 내지 약 600 mg, 예를 들어 약 150 mg 내지 약 600 mg, 예를 들어 약 300 mg 내지 약 600 mg, 또는 예를 들어 약 150 mg 내지 약 300 mg의 약물 물질이 포함될 수 있는 용량을 의미한다. 예를 들어, 단위 s.c. 용량은 약 75 mg, 약 150 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg, 약 600 mg의 약물 물질이다.

본 발명의 특정 구현예에서, T1DM 또는 췌도염의 치료에 사용하기 위한 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 구현예에서, T1DM 또는 췌도염의 치료에 사용하기 위한 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.

다른 바람직한 구현예에서, T1DM 또는 췌도염의 치료에 사용하기 위한 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 CFZ533이다.

제약 조성물

치료용 항체는 일반적으로, 바로 투여할 수 있는 수성 형태로, 또는 투여 전에 적합한 희석제로 재구성하기 위한 동결건조물로서 제형화된다. 개시된 용도 또는 치료에 따라 사용하기 위한 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 동결건조물로서, 또는 예를 들어 사전 충전된 시린지 내의 수성 조성물로서 제형화될 수 있다. 제형은 의약품(DP)이라고도 한다.

적합한 제형은 수성 제약 조성물 또는 환자에게 전달하기 위해 고농도의 항체 활성 성분 및 낮은 수준의 항체 응집물을 갖는 용액을 제공하도록 재구성될 수 있는 동결건조물을 제공할 수 있다. 고농도의 항체는 환자에게 전달되어야 하는 물질의 양을 감소시킬 수 있으므로 유용하다. 감소된 투약 부피는 고정된 용량을 환자에게 전달하는 데 소요되는 시간을 최소화한다. 고농도의 항-CD40 항체를 갖는 수성 조성물은 피하 또는 정맥내 투여에 특히 적합하다.

침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체는 제약상 허용되는 담체와 조합될 때 제약 조성물로서 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 항-CD40 항체, 예컨대 mAb1 또는 mAb2 이외에, 담체, 다양한 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제, 및 당업계에 잘 알려진 기타 물질을 함유할 수 있다. 담체의 특성은 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 개시된 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 특정 표적 장애의 치료를 위한 추가적인 치료제를 또한 함유할 수 있다.

하나의 특정 구현예에서, 개시된 치료 및 방법에 사용하기 위한 조성물(의약품(DP))은 다음을 포함하는 pH가 6.0인 수성 제형으로부터 제조되는 동결건조 제형이다.

(i) 150 mg/mL의 mAb1 또는 mAb2,

(ii) 안정화제로서 270 mM의 수크로스,

(iii) 완충제로서 30 mM의 L-히스티딘, 및

(iv) 계면활성제로서 0.06%의 폴리소르베이트 20.

다른 특정 구현예에서, 제약 조성물(의약품(DP))은 다음을 포함하는 pH가 6.0인 제약 조성물이다.

(i) 150 mg/mL의 mAb1 또는 mAb2,

(ii) 안정화제로서 270 mM의 수크로스,

(iii) 완충제로서 30 mM의 L-히스티딘, 및

(iv) 계면활성제로서 0.06%의 폴리소르베이트 20.

환자의 T1DM 또는 췌도염 치료용 약제의 제조를 위한 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1)의 용도가 본원에 개시되며, 이러한 약제는 용기를 포함하도록 제형화되고, 각각의 용기는 단위 용량당 적어도 약 75 mg, 150 mg, 300 mg, 또는 600 mg의 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, mAb1)의 전달을 허용하기에 충분한 양의 항-CD40 항체를 갖는다.

환자의 T1DM 치료용 약제의 제조를 위한 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1)의 용도가 본원에 개시되며, 이러한 약제는 단위 용량당 75 mg, 150 mg, 300 mg, 또는 600 mg의 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, mAb1)의 전신 전달(예를 들어, i.v. 또는 s.c. 전달)을 허용하는 투여량으로 제형화된다.

본 발명은 또한, (경우에 따라) 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 mAb1로 T1DM 또는 췌도염 환자를 치료하기 위한 키트를 포함한다. 이러한 키트는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 mAb1(예를 들어, 액체 또는 동결건조된 형태) 또는 항-CD40 항체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 추가로, 이러한 키트는 항-CD40 항체를 투여하기 위한 수단(예를 들어, 시린지 및 바이알, 사전 충전된 시린지, 사전 충전된 펜, 패치/펌프) 및 T1DM 또는 췌도염에 사용하기 위한 지침을 포함할 수 있다. 지침은 본원에 개시된 특정 투약 요법의 일부로서 환자에게 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1)를 제공하는 것을 개시할 수 있다. 이들 키트는 또한, 예를 들어 봉입된 항-CD40 항체, 예를 들어 mAb1과 함께 전달하기 위한, T1DM 또는 췌도염 치료용 추가 치료제를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현예에서, T1DM 또는 췌도염 환자 치료용 키트는 a) 본원에 기재된 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물; b) 상기 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 환자에게 투여하기 위한 수단; 및 c) D1에 인간 대상체의 킬로그램당 활성 성분 약 3 내지 약 60 mg의 로딩 용량으로서 본원에 기재된 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 이를 필요로 하는 환자에게 정맥내 투여한 다음, 예를 들어 본원에 개시된 유지 요법 I 내지 IV에 따라, 항-CD40 항체를 매주 1회 피하 투약하는 지침을 포함한다.

하나의 특정 구현예에서, T1DM 또는 췌도염 치료용 약제의 제조에 있어서, 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 a) 액체 제약 조성물의 용도가 제공되며, 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

a) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

b) 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

d) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

e) 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및

f) 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.

하나의 특정 구현예에서, T1DM 또는 췌도염 치료용 약제의 제조에 있어서, 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 a) 액체 제약 조성물의 용도가 제공되며, 항-CD40 항체는

i) 1일차에, 또는 격주로 2회 또는 3회 인간 대상체 킬로그램당 활성 성분 약 3 내지 약 30 mg, 예컨대 10 mg의 용량으로 환자에게 정맥내 투여되고,

ii) 이후 8일차부터 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 매주 1회 환자에게 피하 투여되고, 상기 항-CD40 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

g) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

h) 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

i) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

j) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

k) 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및

l) 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.

정의

본원에 사용된 바와 같이, CD40은 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 5라고도 지칭되는 분화 클러스터 40(cluster of differentiation 40)을 지칭한다. 용어 CD40은 달리 설명되지 않는 한, 예를 들어 서열번호 19에 정의된 바와 같은 인간 CD40을 지칭한다.

수치 x와 관련된 용어 "약"은, 예를 들어 +/-10%를 의미한다. 수치 범위 또는 숫자 목록의 앞에 사용될 때, "약"이라는 용어는 시리즈의 각각의 숫자에 적용되고, 예를 들어 "약 1~5"라는 어구는 "약 1 내지 약 5"로 해석되어야 하거나, 예를 들어 "약 1, 2, 3, 4"라는 어구는 "약 1, 약 2, 약 3, 약 4"로 해석되어야 한다.

"포함하는"이라는 용어는 "이루어진"을 또한 포괄하고, 예를 들어 X를 "포함하는" 조성물은 X만으로 이루어질 수 있거나, 추가의 어떤 것, 예를 들어 X + Y를 포함할 수 있다.

AUC0-t는 시간 0부터 시간 't'(t는 투여 후의 정의된 시점)까지의 혈장 농도-시간 곡선 아래의 면적을 나타낸다[질량 x 시간 / 부피].

AUCtx-ty는 시간 'x'부터 시간 'y'('시간 x'와 '시간 y'는 투여 후의 정의된 시점)까지의 혈장 농도-시간 곡선 아래의 면적을 나타낸다.

C_max는 약물 투여 후 관찰된 최대 혈장 농도이다[질량 / 부피].

C_min은 약물 투여 후 관찰된 최소 혈장 농도이다.

C_trough는 투약 구간의 시작 직전 또는 투약 구간 끝에서의 관찰된 혈장 농도이다.

T_max는 약물 투여 후 최대 농도에 도달하는 시간이다[시간].

ss(아래 첨자)는 파라미터가 정상 상태에서 정의됨을 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "항체" 또는 "항-CD40 항체" 등은 (예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/불안정화, 공간 분포에 의해) CD40과 상호작용하는 전체 항체를 지칭한다. 천연 발생 "항체"는 이황화 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서는 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2, 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서는 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불리는 더 보존된 영역 사이에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역들로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카복시-말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적인 보체계의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함한, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 용어 "항체"는 예를 들어, 단클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타과 항체, 또는 키메라 항체를 포함한다. 항체는 임의의 동형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2), 또는 서브클래스, 바람직하게는 IgG, 가장 바람직하게는 IgG1일 수 있다. 예시적인 항체는 표 1에 기재된 바와 같은 CFZ533(본원에서 mAb1로도 표시됨) 및 mAb2를 포함한다.

경쇄와 중쇄는 모두 구조적 및 기능적 상동성 영역으로 나뉜다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이와 관련하여, 경쇄(VL) 및 중쇄(VH) 부분의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 점이 인정될 것이다. 역으로, 경쇄의 불변 도메인(CL) 및 중쇄의 불변 도메인(CH1, CH2, 또는 CH3)은 분비, 태반 통과 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 성질을 부여한다. 규칙에 따라, 불변 영역 도메인의 넘버링은 불변 영역 도메인이 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 멀어질수록 증가된다. N-말단은 가변 영역이고, C-말단에는 불변 영역이 있으며; CH3 및 CL 도메인은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카복시-말단을 포함한다. 특히, 용어 "항체"는 구체적으로 IgG-scFv 형태를 포함한다.

"상보성 결정 영역"("CDR")은 문헌[Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("Kabat" 넘버링 체계), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948 ("Chothia" 넘버링 체계) 및 ImMunoGenTics (IMGT) 넘버링(Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003) ("IMGT" 넘버링 체계)]에 기재된 것들을 비롯하여, 다수의 주지된 체계 중 임의의 것을 이용해 결정된 경계를 갖는 아미노산 서열이다. IMGT에 따라, 항체의 CDR 영역은 IMGT/DomainGap Align 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "Fc 영역"은 CH3, CH2, 및 항체의 불변 도메인의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 선택적으로, Fc 영역은 일부 항체 클래스에 존재하는 CH4 도메인을 포함할 수 있다. Fc 영역은 항체의 불변 도메인의 전체 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH1 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH3 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 항체의 불변 도메인으로부터의 Fc 영역, CH1 영역, 및 C_{카파/람다} 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 결합 분자는 불변 영역, 예를 들어 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 이러한 불변 영역은 야생형 불변 영역과 비교하여 변형된다. 즉, 본원 개시된 본 발명의 폴리펩티드는 3개의 중쇄 불변 도메인(CH1, CH2, 또는 CH3) 중 하나 이상 및/또는 경쇄 불변 영역 도메인(CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 변형의 예는 하나 이상의 도메인에서의 1개 이상의 아미노산의 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 이러한 변화는 이펙터 기능, 반감기 등을 최적화하기 위해 포함될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 의미한다. 각각의 항원 부위 내에서, 항체 "아암(arm)"의 가변 영역은 여러 부위에서 항원과 약한 비공유 결합력을 통해 상호작용하며; 상호작용이 많을수록 친화도는 더 강하다. 본원에 사용된 바와 같이, IgG 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab 단편)에 대한 "고친화도"라는 용어는 표적 항원에 대해 10^-8 M 이하, 10^-9 M 이하, 또는 10^-10 M, 또는 10^-11 M 이하, 또는 10^-12 M 이하, 또는 10^-13 M 이하의 K_D를 갖는 항체를 지칭한다. 그러나, 고친화도 결합은 다른 항체 동형에 대해 다를 수 있다. 예를 들어, IgM 동형에 대한 고친화도 결합은 10^-7 M 이하 또는 10^-8 M 이하의 K_D를 갖는 항체를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이, "CD40 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는" 항체 또는 단백질은 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하의 K_D로 인간 CD40 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 단백질을 지칭하는 것이다.

본원에 사용된 용어 "K_D"는 해리 상수를 지칭하는 것으로, 이는 K_a에 대한 K_d의 비(즉, K_d/K_a)로부터 얻어지고 몰 농도(M)로서 표현된다. 항체에 대한 K_D 값은 당업계의 잘 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 K_D를 결정하는 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용하거나 바이오센서 시스템, 예컨대 Biacore® 시스템을 사용하는 것이다.

본원에 사용된 용어 "ADCC" 또는 "항체 의존성 세포독성" 활성은 세포 고갈 활성을 지칭한다. ADCC 활성은 당업자에게 잘 알려진 ADCC 분석에 의해 측정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "침묵" 항체는 ADCC 분석으로 측정 시 ADCC 활성이 없거나 낮은 항체를 지칭한다.

일 구현예에서, "ADCC 활성이 없거나 낮은"이란 용어는 침묵 항체가 표준 ADCC 분석법으로 측정 시 50% 미만의 특이적인 세포 용해, 예를 들어 10% 미만의 특이적인 세포 용해의 ADCC 활성을 나타냄을 의미한다. ADCC 활성이 없음은 침묵 항체가 1% 미만의 ADCC 활성(특이적인 세포 용해)을 나타냄을 의미한다.

침묵화된 ADCC 이펙터 기능은 항체의 Fc 영역의 돌연변이에 의해 얻을 수 있고, 당해 분야의 문헌에 기재되어 있다: LALA 및 N297A(문헌[Strohl, W., 2009, Curr. Opin. Biotechnol. vol. 20(6):685-691]); 및 D265A(문헌[Baudino et al., 2008, J. lmmunol. 181:6664-69]; 상기 Strohl, W.의 문헌). 침묵 Fc IgG1 항체의 예는 IgG1 Fc 아미노산 서열에 L234A 및 L235A 돌연변이를 포함하는 소위 LALA 돌연변이체를 포함한다. 침묵 IgG1 항체의 다른 예는 D265A 돌연변이를 포함한다. 다른 침묵 IgG1 항체는 아글리코실화/비글리코실화 항체를 야기하는 N297A 돌연변이를 포함한다.

본원에서 용어 "치료"는 대상체에 대한 본 발명에 따른 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 mAb1 또는 mAb2 항체의 적용 또는 투여, 또는 대상체로부터 단리된 조직 또는 세포주에 대한 본 발명의 상기 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 적용 또는 투여(대상체는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환과 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 가짐)로서 정의되고, 목적은 특히 T1DM이 발병했거나 췌도염을 앓고 있는 환자에서 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환의 임의의 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 경감, 완화, 또는 개선하는 것이다.

"치료"는 또한 대상체에 대한 본 발명의 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 mAb1 또는 mAb2 항체를 포함하는 제약 조성물의 적용 또는 투여, 또는 대상체로부터 단리된 조직 또는 세포주에 대한 본 발명의 상기 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 적용 또는 투여(대상체는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환과 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 가짐)를 의도한 것으로, 목적은 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환의 임의의 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 경감, 완화, 또는 개선하는 것이다.

용어 "예방"은 예방적 또는 방지적 처치를 의미하며, 이는 질환, 장애, 및/또는 이와 연관된 증상의 발병을 지연시키는 것 또는 예방하는 것과 관련된다.

본원에 사용된 바와 같이, 대상체가 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어서 이러한 치료에서 이익을 얻는 경우 이러한 대상체는 치료를 "필요로 한다".

"제약상 허용되는"이라는 용어는 활성 성분(들)의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 비독성 물질을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, 대상 화합물의 "투여"라는 용어는 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 화합물 및 이의 전구약물을 제공하는 것을 의미한다. 하나 이상의 추가 치료제와 "병용한" 투여는 임의의 순서 및 임의의 투여 경로로의 동시(병행) 및 연속 투여를 포함한다. 하나의 투여는 치료 효과를 달성하기 위해 투여해야 하는 약물 물질의 양에 따라 단회 주사, 또는 서로 함께 전달되는 다회 주사일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "치료 유효량"은 환자(예컨대, 인간)에게 단회 또는 다회 용량 투여 시 장애 또는 재발성 장애의 적어도 하나의 증상의 치료, 예방, 발병 예방, 치유, 지연, 중증도 경감, 완화에 효과적이거나, 이러한 치료의 부재 시 예상되는 것 이상으로 환자의 생존을 연장시키는 데 효과적인 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 mAb1의 양을 지칭한다. 단독으로 투여되는 개별 활성 성분(예를 들어, 항-CD40 항체, 예를 들어 mAb1)에 적용되는 경우, 이 용어는 그 성분만을 지칭한다. 조합에 적용되는 경우, 조합으로, 연속적으로, 또는 동시에 투여되는지에 관계없이, 이 용어는 치료 효과를 가져오는 활성 성분들을 합한 양을 지칭한다.

어구 "치료 요법"은 병을 치료하는 데 사용되는 요법, 예를 들어 T1DM 치료 중에 사용되는 투약 프로토콜을 의미한다. 치료 요법은 로딩 요법(또는 로딩 용량 투약)에 이은 유지 요법(또는 유지 용량 투약)을 포함할 수 있다.

어구 "로딩 요법" 또는 "로딩 기간"은 질환의 초기 치료에 사용되는 치료 요법(또는 치료 요법의 일부)를 지칭한다. 일부 구현예에서, 개시된 방법, 용도, 키트, 공정, 및 요법(예를 들어, T1DM 치료 방법)은 로딩 요법(또는 로딩 용량 투약)을 사용한다. 경우에 따라, 로딩 기간은 최대 효능에 도달할 때까지의 기간이다. 로딩 요법의 일반적인 목표는 치료 요법의 초기 기간 동안 환자에게 높은 수준의 약물을 제공하는 것이다. 로딩 요법은 의사가 유지 요법 중에 사용하는 것보다 더 많은 용량의 약물을 투여하는 것, 의사가 유지 요법 중에 약물을 투여하는 것보다 더 자주 약물을 투여하는 것, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 로딩 요법 중에 또는 후에 용량 증량이 발생할 수 있다.

어구 "유지 요법" 또는 "유지 기간"은 로딩 요법 또는 기간 후 병의 치료 중에 환자의 유지를 위해, 예를 들어 오랫동안(수개월 또는 수년 동안) 환자를 관해 상태로 유지하기 위해 사용되는 치료 요법(또는 치료 요법의 일부)을 지칭한다. 일부 구현예에서, 개시된 방법, 용도, 및 요법은 유지 요법을 사용한다. 유지 요법은 연속 치료법(예를 들어, 약물을 정기적인 간격으로, 예를 들어 매주, 격주로, 또는 매월(4주마다), 매년 등 투여하는 것) 또는 단속적 치료법(예를 들어, 비연속적 치료, 간헐적 치료, 재발시 치료, 또는 특정한 소정의 기준[예를 들어, 통증, 질환 발현 등] 달성시의 치료)을 사용할 수 있다. 유지 요법 중에 용량 증량이 발생할 수 있다.

어구 "투여하기 위한 수단"은 환자에게 약물을 전신 투여하기 위해 이용 가능한 임의의 도구(사전 충전된 시린지, 바이알 및 시린지, 주사 펜, 자동주사기, i.v. 드립 및 백, 펌프, 패치 펌프 등을 포함하나 이에 한정되지 않음)를 나타내기 위해 사용된다. 이러한 물품을 이용해, 환자가 약물을 자가 투여(즉, 스스로 약물을 투여)할 수 있거나, 의사가 약물을 투여할 수 있다.

본원에 사용된 어구 "[표시된 용량]의 전달을 허용하기에 충분한 양의 항-CD40 항체를 갖는 용기"는 주어진 용기(예를 들어, 바이알, 펜, 시린지) 내에 목적하는 용량을 제공하는 데 사용될 수 있는 부피의 (예를 들어, 제약 조성물의 일부로서) 항-CD40 항체가 배치되어 있음을 의미하기 위해 사용된다. 예로서, 목적하는 용량이 500 mg인 경우, 임상의는 250 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형을 함유하는 용기로부터 2 ml, 500 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형을 함유하는 용기로부터 1 ml, 1000 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형을 함유하는 용기로부터 0.5 ml 등을 사용할 수 있다. 이러한 각각의 경우, 이들 용기는 목적하는 500 mg 용량의 전달을 허용하기에 충분한 양의 항-CD40 항체를 갖는다.

본원에 사용된 어구 "[표시된 용량]의 [투여 경로] 전달을 허용하는 투여량으로 제형화된"은 주어진 제약 조성물이 표시된 투여 경로(예를 들어, s.c. 또는 i.v.)를 통해 목적하는 용량의 항-CD40 항체, 예를 들어 mAb1을 제공하는 데 사용될 수 있음을 의미하기 위해 사용된다. 예로서, 목적하는 피하 용량이 500 mg인 경우, 임상의는 250 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형 2 ml, 500 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형 1 ml, 1000 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형 0.5 ml 등을 사용할 수 있다. 이러한 각각의 경우, 이들 항-CD40 항체 제형은 항-CD40 항체의 피하 전달을 허용하기에 충분히 높은 농도이다. 피하 전달은 일반적으로 약 2 ml 미만의 부피, 바람직하게는 약 1 ml 이하의 부피의 전달을 필요로 한다. 그러나, 예를 들어 패치/펌프 메커니즘을 이용해 시간이 지남에 따라 더 많은 부피가 전달될 수 있다.

어구 "투여하기 위한 수단"은 환자에게 약물을 전신 투여하기 위해 이용 가능한 임의의 도구(사전 충전된 시린지, 바이알 및 시린지, 주사 펜, 자동주사기, i.v. 드립 및 백, 펌프, 패치/펌프 등을 포함하나 이에 한정되지 않음)를 나타내기 위해 사용된다. 이러한 물품을 이용해, 환자가 약물을 자가 투여(즉, 스스로 약물을 투여)할 수 있거나, 간병인 또는 의사가 약물을 투여할 수 있다.

항-CD40 항체

침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 mAb는 특허 US8828396 및 US9221913에 개시되었다. 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 mAb는 다른 항-CD40 항체에 비해 개선된 안전성 프로파일을 가질 것으로 예측되며, 특히 T1DM 및/또는 췌도염과 같은 비종양 적응증에 더욱 적합할 수 있다.

본 발명자들의 구속력 없는 가설에 따르면, 특허 US8828396 및 US9221913에서 mAb1 및 mAb2로 표시된 두 개의 mAb가 T1DM 및/또는 췌도염의 치료에 적합한 화합물인 것으로 여겨진다. CFZ533으로도 지칭되는 항체 mAb1이 특히 바람직하다. CFZ533(이스칼리맙)은, 재조합(r) CD154 유도성 CD40 신호전달을 차단하고 CD40 발현 세포 유형의 고갈을 일으키지 않는(즉, Fc-침묵; 침묵화된 ADCC 활성) 완전 인간 면역글로불린 G1(IgG1) 항-CD40 항체이다.

mAb1은 시험관 내에서 CD154 유도성 활성화를 억제하고 생체 내에서 T세포 의존성 항체 형성과 배중심 형성을 억제한다. T1DM 또는 췌도염 환자에서, mAb1을 이용한 CD40 차단은 새로운 치료 방식을 제공할 것으로 예상된다(실시예 7).

당업자가 본 발명을 실시할 수 있도록 하기 위해, mAb1 및 mAb2의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열을 아래 표 1에 제공하였다.

당업계에 알려진 다른 항-CD40 mAb는, 예를 들어 US8568725B2에 기재된 바와 같은, Astellas Pharma/Kyowa Hakko Kirin Co의 ASKP1240이다.

당업계에 알려진 또 다른 항-CD40 mAb는, 예를 들어 US8591900에 기재된 바와 같은, Boehringer Ingelheim의 BI655064이다.

당업계에 알려진 추가의 항-CD40 mAb는, 예를 들어 US8669352에 기재된 바와 같은, Forward Pharmaceuticals의 FFP104이다.

본 개시의 하나 이상의 구현예의 세부 사항은 상기 첨부된 설명에 기재되어 있다. 본원에 기술되는 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 개시의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 이제 기술된다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 설명 및 청구범위로부터 명확할 것이다. 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 문맥이 명확히 달리 지시하지 않는 한, 단수 형태는 복수의 지시어를 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 속하는 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 하기 실시예는 본 개시의 바람직한 구현예를 보다 완전하게 예시하기 위해 제시된다. 이러한 실시예는 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 개시된 요지의 범위를 제한하는 것으로 결코 해석되어서는 안 된다.

실시예

일반 방법론

실시예 1: 발현 시스템

경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)는 표준 기술에 의해 숙주 세포 내로 전달감염된다. 용어 "전달감염"의 다양한 형태는 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 외인성 DNA를 도입하기 위해 일반적으로 사용되는 광범위한 기술, 예컨대 전기천공, 칼슘-포스페이트 침전, DEAE-덱스트란 전달감염 등을 포괄하는 것이다. 이론적으로는 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 발명의 항체를 발현하는 것이 가능하다. 진핵 세포, 특히 포유류 세포가 원핵 세포에서보다 더 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 수 있기 때문에 이러한 진핵 세포, 예를 들어 포유류 숙주 세포, 효모 또는 사상 진균에서 항체의 발현이 논의된다.

특히 클로닝 또는 발현 벡터는 적합한 프로모터 서열에 작동 가능하게 연결되는, 다음의 암호화 서열 (a) 내지 (b) 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.

(a) mAb1의 전장 중쇄 및 경쇄를 각각 암호화하는 서열번호 15 및 서열번호 16; 또는

(b) mAb2의 전장 중쇄 및 경쇄를 각각 암호화하는 서열번호 17 및 서열번호 18.

본 발명의 재조합 항체를 발현하기 위한 포유류 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어, 문헌[R.J. Kaufman and P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621]에 기재된 DH FR 선별 마커와 함께 사용되는, 문헌[Urlaub and Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr- CHO 세포 포함), CHOK1 dhfr+ 세포주, NSO 골수종 세포, COS 세포, 및 SP2 세포를 포함한다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하기 위한 다른 발현 시스템은 PCT 공보 WO 87/04462, WO 89/01036, 및 EP0338841에 제시된 GS 유전자 발현 시스템이다.

항체 유전자를 암호화하는 재조합 발현 벡터가 포유류 숙주 세포 내로 도입되는 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체의 발현 또는 숙주 세포가 성장되는 배양 배지 내로의 항체의 분비를 허용하기에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생성된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다(예를 들어, 문헌[Abhinav et al. 2007, Journal of Chromatography 848: 28-37] 참조).

숙주 세포는 mAb1 또는 mAb2의 발현 및 생성에 적합한 조건에서 배양될 수 있다.

실시예 2. 약리학

1. 1차 약리학

mAb1은 높은 친화도(0.3 nM의 K_d)로 인간 CD40에 결합한다. 그러나, mAb1은 Fcγ 수용체(CD16 포함)에 결합하거나 항체 의존성 세포독성 또는 보체 의존성 세포독성을 매개하지 않는다. mAb1은 인간 백혈구의 재조합 CD154(rCD154) 유도성 활성화를 억제하지만, 단핵구 유래 수지상 세포(DC)에 의한 PBMC 증식 또는 사이토카인 생성을 유도하지 않는다. mAb1은 매우 유사한 친화도로 인간 및 비인간 영장류 CD40에 결합한다.

생체 내에서, mAb1은 1차 및 2차 T세포 의존성 항체 반응(TDAR)을 차단하고, 비인간 영장류에서 신장 동종이식편의 생존을 연장시킬 수 있다(Cordoba et al 2015). 또한, mAb1은 생체 내에서 확립된 배중심(GC)을 교란시킬 수 있다.

인간 전혈 배양물을 사용하여 시험관 내에서 CD40 수용체 점유율 및 기능적 활성을 동시에 평가하였다. CD20 양성 세포(B세포)에서의 CD69(활성화 마커)의 CD154 유도성 발현을 통해 기능적 활성을 정량화하고, 형광 표지된 mAb1을 사용하여 CD40 점유율을 모니터링하였다. rCD154 유도성 CD69 발현의 완전 억제를 위해 mAb1에 의한 거의 완전한 CD40 점유가 요구되었다.

2. 2차 약리학

혈소판 기능 및 혈액 지혈에 미치는 mAb1의 영향을 조사한 결과, mAb1은 혈소판 응집 반응을 유도하지 않고 오히려 고농도에서 혈소판 응집에 약간의 억제 효과를 보이는 것으로 나타났다.

실시예 3. 비임상 독성학 및 안전성 약리학

mAb1을 이용한 독성학 연구는, 항-CD154 mAb를 이용한 임상시험에서 보고된 바와 같은 혈전색전 사례의 증거가 없었다는 점을 비롯하여, 임의의 유의한 장기 독성을 나타내지 않았다(문헌[Kawai et al 2000]). 시노몰구스 원숭이의 26주 만성 독성 연구에서, 부정적인 mAb1 관련 결과는 발견되지 않았다. 이러한 데이터에 기초하여, NOAEL을 150 mg/kg(26주)으로 설정하였다. 평균(모든 동물) C_max,ss는 매주의 1, 50, 및 150(NOAEL) mg/kg S.C.에서 각각 44, 3235, 및 9690 μg/mL이었다. 26주 간의 시노몰구스 원숭이 연구로부터 유래된 NOAEL은 임상 투약 요법을 뒷받침하는 데 가장 적절한 것으로 간주된다.

T세포 의존성 항체 반응(TDAR)의 완전한 억제로 인해, KLH, 즉 mAb1에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성이 예상되지 않으므로, mAb1의 농도가 계속해서 약리적 수준으로 유지될 때 ADA 관련 부작용은 거의 없을 것으로 여겨진다.

조직 교차반응성 연구 결과, CD40은 면역세포뿐만 아니라 다양한 조직에도 존재함이 밝혀졌다. 이는 CD40이 상처 치유 과정에 대한 반응, 바이러스 방어의 상향 조절, 및 염증 관련 매개체와 같은 신호전달에 관여하는 내피 및 상피 세포에서의 발현에 주로 기인한다. mAb1과 같은 길항적 항-CD40 단클론 항체는 염증 과정에 기여할 것으로 예상되지 않으며, 이는 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)를 이용한 시험관내 연구에 의해 확인되었다.

결론적으로, 비임상 데이터는 원발성 T1DM 환자에서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체를 사용한 연구를 뒷받침한다.

실시예 4: 연구 설계

이는 제1형 당뇨병(T1DM)이 새로 발병한 소아 및 청년을 대상으로 CFZ533의 안전성, 내약성, 약동학, 및 효능을 평가하기 위한 임상시험자- 및 피험자-맹검, 무작위 배정, 위약 대조 연구이다.

1. 목적 및 근거

본 연구의 목적은 새로 발병한 T1DM에서 CFZ533의 발달을 가능하게 하는 임상 데이터를 제공하는 것이다.

2. 일차 목적(들)

이상 사례(AE) 및 표준 안전성 실험을 평가하여, 새로 발병한 T1DM에서 CFZ533의 안전성 및 내약성을 평가.

혼합식 내성 검사(MMTT)에 의해 자극된 C-펩티드 AUC를 평가하여, 1년 후 새로 발병한 T1DM에서 췌장 베타 세포 기능에 대한 CFZ533의 치료 효과를 평가.

혼합식 내성 검사(MMTT)는 잔류 인슐린 분비와 베타 세포 기능을 검출하는 데 적절한 감도를 가지고 있다. MMTT에서, 6 mL/kg(최대 360 mL)의 혼합식으로 제공되는 체중에 따른 유동식(liquid meal)을 5분에 걸쳐 섭취시키고, 글루코스 및 C-펩티드 측정을 위해 예정된 혈액 샘플을 섭취 10분 전(t = -10), 기준선(t = 0), 유동식 섭취 완료 15, 30, 60, 90, 및 120분 후에 채취하였다(Leighton et al 2017).

혈액 샘플 수집은 곡선 아래 면적(AUC0-2시간) 및 최대 C-펩티드 값의 측정을 가능하게 할 것이다. MMTT는 기준선, 치료 12, 24, 36, 및 52주차, 및 치료 후 18, 24, 및 36개월차에 수집된다. 1차 효능 평가변수는 12개월 후 혼합식 내성 검사(MMTT)에 의해 자극된 C-펩티드 AUC0-2시간에 대한 치료 효과이다. C-펩티드가 검출되는 피험자의 비율, 기준선 C-펩티드로부터의 감소율, C-펩티드가 검출되지 않을 때까지의 시간이 평가된다. C-펩티드:크레아티닌 비에 대한 예정된 소변도 베타 세포 기능의 척도로서 평가된다.

3. 이차 목적(들)

기준선, 치료 및 추적 기간 동안의 유리 CFZ533 혈장 농도를 측정하여, 새로 발병한 T1DM에서 CFZ533의 약동학(PK)을 평가.

외인성 인슐린의 사용이 없는 6.5%(48 mmol/mol) 이하의 HbA1c에 의한 완전 관해, 또는 1년 후 새로 발병한 T1DM에서 총 일일 인슐린 용량 0.5 단위/kg/일 미만의, 인슐린 용량 조정된 9.0 이하의 HbA1c(IDAA1c) 또는 7.0%(53 mmol/mol) 미만의 HbA1c에 의한 부분 관해에 대한 CFZ533의 치료 효과를 평가.

MMTT에 의해 자극된 C-펩티드 AUC를 평가하여 마지막 투여 2년 후 T1DM이 새로 발병한 피험자에서 췌장 베타 세포 기능에 대한 CFZ533 효과의 지속성을 평가.

4. 연구 설계 CCFZ533X2207

CCFZ533X2207(연구)은 소아 및 청년 피험자를 대상으로 새로 발병한 T1DM에서 잔류 췌장 β세포 기능의 보존에 대한 CFZ533의 안전성, 내약성, 약동학, 및 효능을 평가하기 위한 2상, 비확정, 임상시험자- 및 피험자-맹검, 무작위 배정, 위약 대조 연구이다.

새로 진단된 T1DM 환자는 미국 당뇨병 협회 진단 기준 및 NICE(National Institute for Health and Care Excellence)(Johnston 2004), 및 아래 모집단 섹션에 명시된 적어도 하나의 당뇨병 관련 자가항체의 존재를 기반으로 식별된다. 시험 등록은 진단 및 첫 번째 연구 약물 투여 시점으로부터 최소 2주 후 및 100일 이내에 이루어져야 한다. 등록은 스크리닝 및 기준선 결과 둘 다에 따라 이루어진다. 스크리닝 방문은 (본원에 기재된 바와 같은) 피험자의 체중에 따라 1회 또는 2회 방문에 걸쳐 진행될 수 있다.

약 81명의 피험자가 연구를 완료하도록 하기 위해 6~21세의 피험자 약 102명이 등록된다. 5개의 순차 연구 코호트(연령 및 체중 기준)가 계획되지만, 등록 목표가 충족될 때까지 이전 코호트에 대한 등록은 계속된다. 모든 체중 및 연령 코호트에 대한 적절한 등록을 가능하게 하기 위해, 코호트 1에 대한 등록은 약 50명의 피험자 등록 후에 중단된다.

코호트는 연령 및 체중 그룹의 내림 차순을 기반으로 한다(도 1).

연구는 1차 효능(12개월) 및 안전성 평가변수(16개월)에 대해 16개월 시점 81명의 완료자를 대상으로 계획되어 있다. 약 102명의 피험자가 등록된다.

적격의 피험자가 등록되고 2:1의 비로 활성 또는 위약에 무작위 배정된다.

연구 일정에는 6주의 스크리닝 기간, 2주의 기준선 기간, 12개월의 치료 기간, 및 CFZ533의 마지막 투여 후 4개월 내지 최대 2년의 추적 기간이 포함된다. 각 피험자는 최소 약 1.5년에서 최대 3년 동안 연구에 참여한다.

이 연구는 모든 적응증의 소아 모집단에서 CFZ533을 평가하는 첫 번째 연구일 것이다. 따라서, 순차적으로 안전성 및 내약성을 평가하고 더 어린 연령 및 더 낮은 체중 그룹의 점진적 등록을 가능하게 하기 위해 등록은 시차를 두게 된다.

CFZ533의 PK 프로파일은 연구 전반(3, 6, 및 9개월차)에 걸쳐 평가된다. 이 모집단의 새로운 PK 데이터(PK 중간 분석)를 기반으로, 특히 코호트 5(20 kg의 최저 체중 제한)에 대해, 용량 조정이 도입될 수 있다. 연령 및 체중(BW) 카테고리별 순차 등록은 다음을 포함한다.

코호트 1: 연령 ≥15 내지 ≤21세(고연령 청소년부터 청년까지), BW 40 내지 125 kg.

코호트 2: 연령 ≥8 내지 ≤21세(저연령 청소년부터 청년까지), BW 40 내지 95 kg.

코호트 3 내지 코호트 5는 연령 및 체중 제한이 다르다.

코호트 3: 연령 ≥8 내지 ≤21세, BW ≥40 내지 <50 kg.

코호트 4: 연령 ≥6 내지 ≤21세, BW ≥30 내지 <40 kg.

코호트 5: 연령 ≥6 내지 ≤21세, BW ≥20 내지 <30 kg.

후속 코호트(코호트 2의 경우, 코호트 3 및 코호트 4)의 공개는 4주 후의 안전성 및 내약성 검토를 기반으로 한다. 후속 코호트의 공개 전에, 코호트 1의 6명 이상의 피험자 및 다른 모든 코호트의 10명의 피험자의 안전성 및 내약성 데이터가 의뢰자 및 임상시험 책임자에 의해 검토되고 진행하기에 안전한 것으로 간주되어야 한다. 또한, 체중이 40 kg 이상~50 kg 미만인 10명 이상의 피험자를 코호트 4로 진행하기 전에 등록하고 평가해야 한다. 이러한 체중 범위의 10명의 피험자가 코호트 1 및 2에서 평가 가능한 경우, 코호트 3은 생략될 수 있다. 코호트 4와 코호트 5 사이의 전환은 30~40 kg 체중의 10명 이상의 피험자가 첫 8주의 치료(8주차의 피하(SC) 투약 포함)를 완료할 때 발생하며, 8주 후의 안전성과 내약성 및 PK 데이터(PK 중간 분석)를 기반을 한다. 코호트 5에서의 용량 조정은 PK 중간 분석 및 안전성 분석을 기반으로 구현될 수 있다. 등록 목표가 충족될 때까지 이전 코호트에 대한 등록은 계속된다.

가장 중요한 목표는 T1DM 진단 후 가능한 한 빨리 치료를 시작하는 것이지만, 최대 42일의 스크리닝 및 기준선 기간 후, 등록을 위해 공개된 코호트에 적격인 피험자는 집중적인 인슐린 요법에 의한 백그라운드 표준 치료에 추가하여 1년 동안 CFZ533 또는 위약(2:1 비율)을 투여받도록 무작위 배정된다. 피험자가 현지 지침에 따라 권장되는 모든 예방 접종을 받지 않은 경우, 이러한 예방 접종이 투여될 수 있도록 스크리닝 기간을 42일 넘게 연장할 수 있지만, 연구 약물의 첫 번째 용량은 T1DM 진단 후 100일 이내에 투여되어야 한다.

치료에는 초기 로딩 용량의 CFZ533(1일차/0주차에 말초 정맥내(IV) 라인을 통해 30 mg/kg의 용량으로 투여; 모든 피험자는 동일한 용량(mg/kg)을 투여받음) 또는 상응하는 위약이 포함된다. 8일차(1주차)부터 365일차(52주차; 마지막 투여)까지의 모든 후속 용량의 CFZ533(또는 상응하는 위약)은 체중을 기준으로 한 용량으로 매주 피하(SC) 주사로 투여된다(용량/요법 및 치료 기간의 근거 세부사항 참조).

본원에 설명된 바와 같이, 연구 기간 동안 기준선, 12, 24, 36, 52주차, 및 18, 24, 및 36개월차(또는 연구 종료 시)에, C-펩티드를 사용하여 β세포 기능을 평가하기 위한 표준화된 액체 MMTT가 수행된다. 다음과 같은 당뇨병 관련 평가변수도 연구 기간 동안 모니터링된다: HbA1c, 요중 C-펩티드 대 크레아티닌 비율, 총 일일 인슐린 용량, 순차 연속적 글루코스 측정, 및 당뇨병성 케토산증 및 저혈당 사례.

81명 이상의 무작위 배정되어 치료를 받은 피험자가 1년 평가 방문을 완료했을 때 수행된 1차 분석에서 베타 세포 기능에 대한 긍정적인 약물 효과가 나타나는 경우, β세포 보존에 대한 효능의 지속성을 평가하기 위해 모든 피험자는 추가로 최대 2년의 기간 동안 추적 관찰된다. 1차 분석을 위한 약 1년의 치료 기간에 긍정적인 약물 효과가 나타나지 않은 경우, CFZ533 또는 위약의 마지막 투여 최소 4개월 후에 각 피험자에 대한 안전성 모니터링을 위한 추적 평가가 수행된다.

코호트 확장은 다음을 기반으로 한다.

코호트 2 공개: 해당 시점까지 등록된 모든 피험자에 대한 안전성 데이터와 함께 4주 동안 CFZ533 또는 위약으로 치료를 받은 코호트 1의 6명 이상의 피험자(15세~21세 이하)는 검토되어 만족스러운 것으로 간주되어야 한다. 다른 코호트의 10명과 대조적으로 이 코호트의 6명에 대한 평가는 이 연령 및 체중 범위 모집단의 피험자에 대한 기존 안전성 데이터가 더 로버스트하기 때문이다.

코호트 3 공개: 해당 시점까지 등록된 모든 피험자에 대한 안전성 데이터와 함께 4주 동안 CFZ533 또는 위약으로 치료를 받은 코호트 2의 10명 이상의 저연령 청소년 내지 청년(8세 이상~21세 이하)이 검토되어 만족스러운 것으로 간주되어야 이후 코호트 3(8세 이상~21세 이하의 연령 및 40 kg 이상~50 kg 미만의 체중(BW))이 등록을 위해 공개될 수 있다. 그러나, 이러한 체중 범위의 10명의 피험자가 코호트 1 및 2에서 평가 가능한 경우, 코호트 3은 생략될 수 있다.

코호트 4 공개: 해당 시점까지 등록된 모든 피험자에 대한 안전성 데이터와 함께 4주 동안 CFZ533 또는 위약으로 치료를 받은 10명 이상의 어린이 내지 청년(8세 이상~21세 이하, 40 kg 이상~50 kg 미만의 체중(BW))이 검토되어 만족스러운 것으로 간주되어야 이후 코호트 4(6세 이상~21세 이하의 연령 및 30 kg 이상~40 kg 이하의 체중)가 등록을 위해 공개될 수 있다.

코호트 5 공개: 해당 시점까지 등록된 모든 피험자에 대한 안전성 데이터와 함께 8주 치료를 완료한 30 kg 이상~40 kg 이하 BW의 10명 이상의 어린이/청년(코호트 4)의 PK 데이터가 정식 PK 중간 분석(PK-IA; 섹션 4.4)을 시작하며, 검토되어 만족스러운 것으로 간주되어야 이후 코호트 5(6세 이상~21세 이하의 연령 및 20 kg 이상~30 kg 미만의 체중)가 등록을 위해 공개될 수 있다.

이전 코호트에 대한 등록은 연구 전반에 걸쳐 계속되며, 약 50명의 피험자로 제한될 코호트 1을 제외하고, 등록을 위해 다음 코호트가 공개될 때 중단되지 않는다. 각 코호트에 최소 10명의 피험자가 등록된다. 그러나, 상기 언급한 바와 같이, 40 kg 이상~50 kg 미만 체중 범위의 10명의 피험자가 코호트 1 및 2에서 평가 가능한 경우, 코호트 3은 생략될 수 있다.

등록된 피험자의 50% 이상이 6개월의 치료를 완료하면 무익에 대한 중간 분석이 계획된다. 등록된 피험자의 2/3 이상이 12개월의 치료를 완료하면 무익 및 효능에 대한 중간 분석이 수행될 수 있다.

임상적으로 관련된 기간 동안 β세포 기능의 감소에 대한 잠재적인 약물 효과(감소의 둔화)를 자연적인 질병 진행과 구별할 수 있으려면 1년의 치료가 필요하다.

5. 모집단

연구 모집단은 새로 진단된 T1DM 소아 및 청년 피험자로 구성된다. 6세 이상~21세 이하의 약 102명의 피험자가 연구 설계에 요약된 바와 같이 순차적인 순서로 연구에 등록되고 무작위 배정된다.

6. 주요 포함 기준

적어도 하나의 양성 자가 항체(글루탐산 데카복실라제(항-GAD); 단백질 티로신 포스파타제 유사 단백질(항-IA-2); 아연 수송체 8(항-ZnT8); 췌도 세포(세포질)(항-ICA))에 의해 확인된 새로 진단된 자가면역 T1DM.

무작위 배정 전 1개월 이내에 표준 액체 MMTT 후 0.2 pmol/mL(0.6 ng/mL) 이상의 최대 자극된 C-펩티드 수준.

연구 참여자는 현지 면역 지침에 따라 연구 약물의 첫 번째 투여 전, 최소 4주 시점에 모든 권장된 비활성화(사멸) 면역조치를 완료해야 하고 최소 4개월 시점에 약독화(생) 면역조치를 완료해야 한다.

7. 주요 배제 기준

자가면역 T1DM 이외의 당뇨병 형태, 예컨대 청소년기 성인발병 당뇨병(MODY), 성인의 잠복성 자가면역 당뇨병(LADA), 후천성 당뇨병(약물 또는 수술에 부차적), 제2형 당뇨병.

기준선 MMTT 검사 2주 이내의 당뇨병성 케토산증.

다선성 자가면역 질환, 에디슨병, 악성 빈혈, 셀리악 스프루의 병력.

HyperIgM 증후군과 같은 면역결핍 장애의 병력; 면역결핍 장애를 암시하는 재발성 감염의 병력.

CFZ533 정맥내 로딩 투여 전 8일 이내의 주요 치과 치료; 첫 번째 투여 전 48시간 이내의 열병.

등록 시, 또는 등록 후 5 반감기 이내, 또는 예상되는 약리학적 효과가 기준선으로 돌아올 때까지 중 더 긴 기간 동안; 또는 현지 규정에 의해 요구되는 경우 더 오랫동안 다른 연구용 약물의 사용 또는 면역억제제의 사용.

B형 간염(HBV) 또는 C형 간염(HCV)에 의한 만성 감염. 양성 HBV 표면 항원(HBsAg) 검사, 또는 표준 현지 실무의 경우, 양성 HBV 코어 항원 검사는 피험자를 배제한다. 양성 HCV 항체 검사를 받은 피험자는 측정된 HCV RNA 수치가 있어야 한다. 양성(검출 가능) HCV RNA가 있는 피험자는 배제되어야 한다.

활성 감염을 암시하는 실험 임계값보다 높은 바이러스 수치에 의한 엡스타인-바 바이러스(EBV), 거대세포 바이러스(CMV), 또는 단순 헤르페스 바이러스(HSV)의 증거.

스크리닝 시 다음과 같은 비정상적인 실험 값 중 하나: 1,500~15,000/mm3(1.5~15.0 x 109/L) 범위를 벗어난 총 백혈구 수(WBC).

호중구 수(<1500/mm3) (<1.5 X 109 / L).

림프구 수 <500/mm3 (<0.5 X 109 / L).

헤모글로빈(Hgb) <8.0 g/dL.

혈소판 <100,000/mm3 (<100 x 109/L).

8. 연구 치료

피험자는 2:1의 비로 CFZ533 또는 상응하는 위약, 2개의 치료군 중 하나에 할당된다.

단회 정맥내(IV) 로딩 용량의 경우, 모든 피험자는 연구 1일차(0주차)에 CFZ533 30 mg/kg IV의 동일한 용량을 투여받는다.

피하(SC) 유지 요법의 경우, 체중(BW) 카테고리별 고정된 CFZ533 용량이 8일차(1주차)부터 52주차(마지막 투여)까지 매주 투여된다.

BW 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 매주 135 mg(0.9 mL의 1회 주사) SC.

BW 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 매주 195 mg(1.3 mL의 1회 주사) SC.

BW 카테고리 III(≥ 50 kg): 매주 300 mg(2 mL의 1회 주사, 또는 1 mL의 2회 주사) SC.

9. 효능 평가

MMTT 중의 C-펩티드

10. 약력학적 평가

기준선, 치료 및 추적 기간 동안의 혈장 내 가용성 CD40(sCD40) 농도(전혈 내 표적 생태 및 표적 결합).

11. 약동학적 평가

혈장 내 CFZ533 농도(기준선, 치료 및 추적 기간 동안).

12. 기타 평가

지속적인 글루코스 모니터링

잠재적 작용 방식, 질환 및 초기 효능 바이오마커(여포 T 헬퍼 세포, 혈청 CXCL13, 혈청 및 소변 CD40에서 표적화된 T1DM 자가항체 패널을 포함하나 이에 한정되지 않음).

CFZ533의 면역원성(기준선, 치료 및 추적 기간 동안의 혈장 내 항-CFZ533 항체).

13. 데이터 분석

1차 안전성 및 효능 분석은 81명 이상의 피험자가 12개월의 치료를 완료한 후에 수행된다. 12개월 후 효능의 증거가 없는 경우, 투약 후 안전성 및 휴약 평가를 가능하게 하기 위해 각 피험자가 최종 투여로부터 적어도 4개월이 경과했을 때 모든 피험자는 연구 방문을 종료하는 것으로 예정된다.

모든 분석에 대해, 피험자는 받은 연구 치료(들)에 따라 분석된다. 안전성 분석 세트에는 임의의 연구 치료를 받은 모든 피험자가 포함된다.

PK 분석 세트에는 PK 데이터에 영향을 미치는 프로토콜 편차 없이 임의의 연구 약물을 투여받은, 적어도 하나의 이용 가능한 유효한 CFZ533 농도 측정을 한 모든 피험자가 포함된다. PD 분석 세트에는 PD 결과에 영향을 미치는 주요 프로토콜 편차 없이 이용 가능한 PD 데이터가 있는 모든 피험자가 포함된다.

14. 용량/요법 및 치료 기간에 대한 근거

T1DM이 새로 발병한 피험자에서 CFZ533에 대한 투여 근거는

신장 이식(신장 Tx; 연구 CCFZ533X2201-파트 2),

원발성 쇼그렌 증후군(pSS; 연구 CCFZ533X2203),

그레이브병(GD; 연구 CCFZ533X2205),

중증 근무력증(MG; 연구 CCFZ533X2204),

류마티스 관절염(RA) 피험자(인간 대상의 첫 번째 연구 CCFZ533X2101)에서의 CFZ533을 사용한 시험의 노출, 안전성, 및 내약성 데이터에 기초하고, 신장 이식, 원발성 쇼그렌 증후군, 및 그레이브병에서의 효능 데이터에 기초한다.

투약 요법은

시험의 모든 피험자에 대한 1일차(0주차) 30 mg/kg의 체중에 따라 조정된 정맥내(IV) 로딩 용량에 이어서

하기 체중 카테고리를 기준으로 한, 8주차(1주차)부터 52주차(마지막 투여)까지 매주 투여되는 고정된 피하(SC) 용량을 포함한다.

체중 카테고리 I(≥20 내지 <30 kg): 135 mg(0.9 mL의 1회 주사),

체중 카테고리 II(≥30 내지 <50 kg): 195 mg(1.3 mL의 1회 주사),

체중 카테고리 III(≥ 50 kg): 300 mg(2 mL의 1회 주사 또는 1 mL의 2회 주사).

IV 로딩 용량은 임상시험 현장에서 투여된다. 매주 SC 용량(135, 195, 또는 300 mg)은 치료 기간 중의 체중 증가 또는 감소를 설명하기 위해 1일차/0주차, 85일차/12주차, 169일차/24주차, 253일차/36주차, 및 337일차/48주차에 현장 방문에서 3개월마다 기록된 피험자의 체중을 기준으로 정의된다. 매주 SC 용량은 집이나 임상시험 현장에서 투여될 수 있다.

T1DM이 새로 발생한 피험자의 체중 카테고리별 예측 PK 프로파일(3가지 체중 카테고리 모두에 대해 유사한 CFZ533 혈장 농도가 달성됨)이 도 2에 제시되어 있다.

1일차 정맥내(IV) 로딩 용량에 대한 근거

1일차 30 mg/kg의 IV 로딩 용량은

진단(췌도염, 췌도의 B 및 T 림프구 침윤, 활성 이소성 배중심) 후 100일 이내의 질병의 공격성이 조직의 높은 CD40 발현과 관련될 가능성이 있는 조건에서 표적 조직(즉, 췌장 림프절)에 CD40 수용체를 빠르게 포화시키고 CFZ533의 CD40 매개 제거를 최소화하며,

잔류 β세포의 공격적인 자가면역 파괴, 췌도염, 및 병원성 자가반응 B 림프구의 국소 침윤을 빠르게 차단할 것으로 예측된다.

T1DM이 새로 발병한 환자에서의 CD40 발현:

자가면역 질환(T1DM 포함)이 있는 환자는 일반적으로 표적 조직의 CD40 발현 증가 및 혈청/혈장 가용성 CD40(sCD40; 쉐드 수용체) 수준의 상승을 나타낸다.

T1D 환자에서, 상승된 혈장 sCD40 수준은 표적 조직의 높아진 CD40 발현을 반영하는 것으로 추정된다.

문헌[Chatzigeorgiou et al (2010a)]에서,

소아 T1DM 환자는 건강한 대조군(66 pg/mL)에 비해 유의하게 더 높은 혈장 sCD40 수준(93 pg/mL)을 나타냈으며, 이는 혈장 인터류킨-6(IL-6), 기질 메탈로프로테이나제-9(MMP-9), 및 CRP 수준의 상승과 관련이 있었다.

소변 sCD40 수준도 건강한 대조군과 비교하여 T1DM에서 상승했으며(각각 335 pg/mL 및 150 pg/mL), 이는 이들 환자에서 sCD40의 높아진 혈장 수준이 신장 배설의 감소보다는 CD40 생성의 증가를 반영한다는 것을 시사한다.

세포 CD40(말초 혈액 단핵 세포)의 상향 조절도 관찰되었으며, 혈장 sCD40, IL-6, CRP, 및 헤모글로빈 A1c(HbA1c)와 양(+)의 상관관계가 있었다.

혈장 및 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) CD40 수준은 소아 T1DM 환자에서 높아지는 것으로 보이며, 염증과 양의 상관관계가 있다.

문헌[Chatzigeorgiou et al (2010b)]에서, 혈장 CD40 농도도 건강한 대조군보다 당뇨병 환자에서 유의하게 더 높았으며(55 pg/mL 대비 약 110 mg/mL), HbA1c와 양의 상관관계가 있었다. 또한, 질병 기간이 1개월 미만, 1~6개월, 또는 6개월 초과인 환자의 경우, 혈장 CD40은 각각 약 75, 190, 및 88 pg/mL였다.

IV 로딩 용량을 통해 치료(진단 후 100일 이내에 투여) 시작 시 췌도에서 효과적인 포화 상태를 달성하는 것은 잔류 β세포 기능을 보존하는 데 효과적인 면역 개입에 중요하다.

CFZ533이 CD40 매개 약물 성향(또는 표적 매개 약물 성향 - TMDD; (용량에 비해) 약물의 상당한 부분이 CD40 수용체에 결합되어 CFZ533 소거율에 영향을 미치는 과정)을 따르는 것을 고려하면 CFZ533 30 mg/kg의 IV 로딩 용량은 더욱 타당하다.

TMDD의 정도는 조직의 CD40 수용체 수준 및 이러한 수용체의 포화 수준에 따라 결정된다. 높아진 CD40 발현은 CD40이 완전히 포화되지 않은 경우 표적 조직에서의 높은 CFZ533 제거율 및 표적 결합 손실과 관련될 수 있다.

로딩 용법은 치료 시작 시 완전한 CD40-CD154 경로 차단을 제공할 것으로 예상된다. 이러한 조건에서, CFZ533의 전체 소거에 대한 CD40의 기여도는 최소한이고, CFZ533의 성향은 주로 CFZ533이 FcRn 수용체에 결합한 결과이다.

조직의 CD40 발현이 크게 향상되는 조건에서 CD40 수용체를 포화시키지 못하면 임상 효능 실패로 이어질 수 있다.

이는 항-CD40 항체 ASKP1240으로 입증되었다(블레셀루맙; Goldwater et al 2013).

블레셀루맙은 신장 이식(Tx) 피험자(2상 시험; Harland et al 2017) 및 이식된 원숭이(Ma et al 2014)에서 조사되었다.

블레셀루맙을 사용한 2상 시험에서, 칼시뉴린 억제제가 없는 군에서 대부분의 거부 반응은 60일차 이전에 발생했다. 본 발명자들은 처음 1 또는 2개월 동안 조직의 증가된 수준의 CD40 발현을 완전히 포화시키는 데 실패한 투약으로 인해 블레셀루맙의 효율적인 CD40 매개 제거, 차선적인 조직 노출, 및 높은 이식 실패율을 초래하며 블레셀루맙이 CNI가 없는 요법에 실패한 것으로 가정한다.

이 가정은 이식된 원숭이의 전임상 데이터에 의해 뒷받침된다. 이식된 원숭이가 동종이식 신장을 받았을 때, 수혜자의 면역 체계가 빠르게 활성화되어, B 림프구, 수지상 세포, 및 대식세포뿐만 아니라 선택된 동종이식 실질세포에서 CD40 발현 수준이 증가했다. 동종 항원에 대한 면역 반응의 결과로서, 활성화된 세포 및 비점유 CD40 부위의 수가 증가하였고, 블레셀루맙의 더 높은 용량 및/또는 더 빈번한 투여가 필요하게 될 것이다(이식된 동물에서 관찰된 블레셀루맙의 증가된 소거율에 의해 입증된 개념).

30 mg/kg의 IV 로딩 용량 후 CFZ533 노출

CFZ533 30 mg/kg의 IV 로딩 용량은 류마티스 관절염(RA) 및 신장 이식 환자에서 사용된 용량 및 요법에 해당하는 노출(약 826 μg/mL의 중앙값 Cmax 포함)에 도달할 것으로 예상된다.

류마티스 관절염 피험자(N=4; 인간 대상의 첫 번째 연구)에서, 848 μg/mL(635 내지 1120 μg/mL의 범위)의 평균 Cmax가 관찰되었다. 이 용량은 안전하고 내약성이 우수했다.

신장 이식(N=33 완전 분석 세트; CCFZ533X2201-파트 2)에서, 로딩 요법은 1, 3, 7(첫 주 동안 높은 빈도), 15, 29, 43, 및 57일차에 10 mg/kg IV였고, 이어서 57일차부터 유지 요법은 4주마다 10 mg/kg IV였다. 이 로딩 요법은 내약성이 우수했고, 백그라운드 면역 억제 요법에서의 대조군에 비해 CFZ533 치료 피험자에 대해 증가된 감염율과 관련되지 않았으며, 호중구 감소증의 보고는 없었다. 관찰된 가장 높은 평균 최저 혈장 CFZ533 농도는 로딩 요법의 마지막 57일차 306 μg/mL(161~419 μg/mL 범위)였다.

레서스 원숭이에서 CFZ533(150 mg/kg/주 IV)을 사용한 13주 독성 연구에서, Cmax(1일차) 및 정상상태(ss)의 Cmax(13주차)는 각각 4060 및 11650 μg/mL였다. 이 연구에서 NOAEL은 백그라운드 감염에 의한 것으로 간주되는 여러 기관의 염증 변화로 인해 10 mg/kg으로 설정되었다. CFZ533의 약리학적 특성에 근거하여 예상할 수 있는 면역억제 관련 감염을 제외하고 독성 연구에서 다른 소견은 없었다.

피하(SC) 유지 요법에 대한 근거

IV 로딩 용량에 대한 체중(BW)에 따라 조정된 접근법과 달리, 8일차부터 52주차 마지막 투여까지의 매주 SC 유지 요법은 하기 3가지 체중 카테고리에 따라 선택되는 고정된 SC 용량을 기반으로 한다.

체중 카테고리 I(20 내지 <30 kg): 매주 135 mg SC.

체중 카테고리 II(30 내지 <50 kg): 매주 195 mg SC.

체중 카테고리 III(≥ 50 kg): 매주 300 mg SC.

고정된 투약 전략을 가정하여, 이 연구에서 체중 범위에 걸쳐 모든 피험자에 대해 유사한 노출 수준을 유지하도록 체중 카테고리를 생성하였다. 이는 CFZ533의 소거율에 대한 체중의 예상되는 효과에 근거하여 정당화된다. 이는 CFZ533과 같은 단클론 Ab에 대해 일반적이며, 고정 용량 전략이 사용되는 상대성장 원칙과 일치한다(Wang et al 2009, Wang and Prueksaritanont 2010).

3가지 체중 카테고리가 제안된다(20 내지 30 kg 미만, 30 내지 50 kg 미만, 및 50 kg 이상). 이는 각 카테고리 내에서 피험자 변동성 사이에 유사성을 보장하기 위해 정당화되고 체중 카테고리 내에서 각 경계 사이의 유사한 배수-노출 차이를 기반으로 한다(체중에 대한 0.75의 상대성장 계수를 가정하면 1.4 내지 1.6배, 이는 IgG1 유형 항체에도 일반적임).

카테고리 III(50 kg 이상의 체중)에서, 정상 상태에서 예측되는 일반적인 최저 CFZ533 혈장 농도(Ctrough, ss)는 약 222 μg/mL이다(모집단의 90%는 140~344 μg/ml; 도 4-1). 카테고리 I(20 내지 30 kg 미만) 및 카테고리 II(30 내지 50 kg 미만)에 대해 유사한 CFZ533 혈장 정상 상태(ss) Ctrough 값이 예측된다.

T1DM에서 예측된 CFZ533 혈장 Ctrough, ss 값은 원발성 쇼그렌 증후군, 신장 이식, 그레이브병, 및 중증 근무력증 환자를 대상으로 CFZ533을 사용한 진행 중이거나 완료된 임상 연구에서 이미 평가되었으며, 전반적으로 안전하고 내약성이 우수했다.

도 3에서, 체중 카테고리 III의 T1DM 환자/피험자에 대해 예측된 CFZ533 혈장 Ctrough, ss 값(카테고리 I 및 II에 대해 유사한 Ctrough, ss 예측)이 이전 임상 시험에서 CFZ533에 대해 관찰된 최저 농도와 비교된다. 또한, 상기 언급된 바와 같이, 신장 이식(N=33; CCFZ533X2201-파트 2)에서, 로딩 기간(비정상 상태 조건) 후, 57주차에 관찰된 평균 최저 혈장 CFZ533 농도는 306 μg/mL(161~419 μg/mL, 도 3에는 표시되지 않음)였다.

체중이 50 kg 이상인 T1DM 환자(카테고리 III)에 대한 CFZ5533 300 mg 매주 SC 요법이 최근 연구 CCFZ533X2203-코호트 3(N=25; IV 로딩 용량 후 또는 SC 로딩 요법 후)으로부터 원발성 쇼그렌 증후군 환자에서 평가되었다.

카테고리 III의 T1DM 환자/피험자에 대해 예측된 정상 상태 중앙값 CFZ533 최저 농도 222 μg/mL는

연구 CCFZ533X2203-코호트 2(10 mg/kg IV 요법; 도 3의 (i))의 원발성 쇼그렌 증후군 피험자에서 관찰된 평균 최저 수준과 유사하고,

연구 CCFZ533X2203-코호트 3(도 3의 (vi))의 CFZ533에 대해 관찰된 평균 Ctrough 값보다 약간 높다. 이러한 예상된 차이는 원발성 쇼그렌 증후군과 비교하여 T1DM에서 CFZ533에 대해 예상된 약간 더 높은 피하 생체이용률의 결과이다. 실제로, (임파계와 같은) 전-전신 구획의 상승된 CD40 수준으로 인해, CFZ533의 전-전신 CD40 매개 제거의 결과로 원발성 쇼그렌 증후군 피험자에서 CFZ533의 더 낮은 SC 생체 이용률이 예상된다. T1DM이 새로 발병한 환자/피험자에서, 염증이 있는 췌장에서 높은 CD40 발현이 예상되며, CD40 수용체의 전-전신 풀이 원발성 쇼그렌 증후군 피험자에 비해 더 낮을 가능성이 있다.

카테고리 I(매주 135 mg SC), II(매주 195 mg SC), 및 III(매주 300 mg SC)에 대해 CFZ533의 유사한 정상 상태 최저 혈장 농도가 예측된다.

정상 상태에서 예측된 최대 CFZ533 혈장 농도(중앙값 Cmax, ss)는 약 294 μg/mL(체중 카테고리 III; 예측 간격: 207(5번째 백분위수)~453(95번째 백분위수) μg/mL)이다. 이러한 Cmax는 비인간 영장류를 대상으로 한 13주 또는 26주 독성 연구에서 측정된 Cmax, ss 값보다 최소 19배 더 낮다.

T1DM 환자/피험자에서 예측된 혈장 CFZ533 노출은 원발성 쇼그렌 증후군 및 신장 이식 피험자에서 효과적인 것으로 입증된 관찰된 노출 이내이다.

원발성 쇼그렌 증후군 피험자에서, 연구 CCFZ533X2203-코호트 2(10 mg/kg IV 요법)에서의 약 203 μg/mL(113일차) 및 135 μg/mL(141일차; 치료 기간의 마지막)의 평균 최저 혈장 농도는 12주 및 24주 후의 임상 효능과 관련이 있었다(위약과 비교하여 CFZ533 치료 피험자에서의 유럽 류마티스 학회 쇼그렌 증후군 질병 활성 지표(ESSDAI)의 명백한 개선). 전반적으로, 원발성 쇼그렌 증후군 피험자에서 10 mg/kg IV CFZ533의 다회 용량(21주에 걸쳐 총 8회 용량을 포함)은 안전하고 내약성이 우수했다.

연구 CCFZ533X2201-파트 2(57일차까지의 10 mg/kg IV 로딩 요법에 이어 337일차 마지막 투여까지 4주마다 10 mg/kg IV - 337일차에 약 156 μg/mL의 평균 Ctrough) CFZ533 혈장 농도는 내약성이 우수했고 효과적이었다. CFZ533 치료군의 피험자는 연구 전체에 걸쳐 훨씬 더 나은 신장 기능을 나타냈고(eGFR의 차이는 약 10 mL/분이었음), 급성 거부반응의 위험은 타크롤리무스로 치료를 받은 피험자(표준치료군)와 유사했다.

실시예 5. 비임상 약동학 및 약력학

1. 약동학(PK)

IgG 면역글로불린에 전형적인, mAb1의 주요 제거 경로는 혈장과 평형을 이루는 부위에서 발생하는 단백질분해 이화작용을 통한 것일 가능성이 높다. 또한, mAb1-CD40 복합체의 결합 및 내재화는 신속하고 포화 가능한 소거 경로를 가져왔다. 이는 약 10~20 μg/mL에서 변곡점을 나타내는 비선형 mAb1 혈청 농도-시간 프로파일에 의해 설명되었다. 전체 소거에 대한 CD40 매개 소거의 기여도는 CD40 발현 수준, 내재화, 및 수용체 전환율과 함께 mAb1 농도에 의존한다. 10~20 μg/mL를 초과하는 mAb1의 혈청 농도의 경우, 선형 동역학이 예상되는 반면 비선형 동역학은 더 낮은 농도에서 나타났다.

2. 약력학(PD)

시노몰구스 원숭이의 PK/PD 연구에서, PK 프로파일의 변곡점(약 10 μg/mL)은 독립적인 림프구 표적 포화 분석에서 결정된 바와 같이 CD40 포화도의 감소와 관련이 있었다. 이와 같이 이러한 변곡점은 CD40의 포화 수준에 대한 마커 및 표적 결합에 대한 증거로 간주된다.

CD40 점유율과 약력학적 활성 사이의 연관성은 KLH로 면역시킨 레서스 원숭이에서 추가로 입증되었다. 원숭이를 KLH로 3회 면역시켰다(첫 번째는 투약 약 3주 전, 두 번째는 mAb1 투여 2주 후, 세 번째는 mAb1의 완전 세척 후였다). 제2 KLH 백신접종 시 40 μg/mL 초과의 혈장 농도에서 mAb1에 의한 CD40 점유는 리콜 항체 반응을 완전히 방지하였다. mAb1이 소거되자, 모든 동물은 제3 KLH에 대해 완전 기억 항체 반응을 나타냈다. 이러한 결과는 기존의 기억 B세포의 기능이 영향을 받지 않았음을 시사한다. mAb1의 완전한 제거 후, 파상풍 변성독소(TTx)를 이용한 면역화는 처치되지 않은 동물과 유사한 항-TTx-IgG/IgM 역가를 나타냈고, mAb1 제거 후 전체 TDAR이 회복되었음을 입증하였다.

3. 면역원성

면역억제 약물로부터 예상되는 바와 같이, 레서스 원숭이(단회 용량)의 면역원성 데이터는 KLH-TDAR 경험으로부터의 결과와 일치하며, mAb1에 의한 완전 CD40 점유하에서 mAb1에 대한 면역 반응이 나타나지 않을 수 있음을 확인시켜 주었다.

실시예 6. 차단 및 비고갈 항-CD40 단클론 항체 CFZ533의 시험관내 및 생체내 특성의 특성화

1. 방법

CD40에 대한 CFZ533의 친화도의 표면 플라즈몬 공명 분석

러닝 완충액으로서 HBS-EP+를 사용하여 25℃에서 재조합 CFZ533의 결합 분석을 수행하였다. 일반적인 결합 분석 주기는 다음의 세 단계로 구성되었다. (i) 칩 표면에 고정된 단백질 A를 통한 항체의 포획, (ii) 포획된 항-CD40 항체에 대한 CD40 항원의 결합, 및 (iii) 단백질 A 표면의 재생. 항원-항체 결합 상호작용의 반응 속도 상수를 결정하기 위해, 결합 데이터를 처리하고, 블랭크 주사로부터의 반응으로 이중 참조하였다. 반응 속도 상수를 결정하기 위해 Biacore T100 평가 소프트웨어의 1:1 상호작용 모델을 사용하여 결합 곡선을 국소적으로 피팅하였다. 평형 해리 상수(KD)의 값은 속도 상수의 비 kd/ka로서 계산하였다. 모든 결합 측정은 2개의 독립적인 실험에서 수행되었다.

FcγRIIIA에 대한 CFZ533의 친화도의 표면 플라즈몬 공명 분석

4-아미노산 정제 태그(4APP; Novartis) 및 Avi 비오틴화 태그(GLNDIFEAQKIEWHE; Avidity)로 태깅된 인간 FcγRIIIA의 세포외 도메인은 HEK293 세포에서 발현되고 항-4APP 친화성 크로마토그래피로 정제된 Geneart: 인간 FcγRIIIA(CD16a) 158V(Uniprot: P08637, 17-199), 인간 FcγRIIIA 158F(Uniprot: P08637, 17-199)에 의해 합성되었다. 수용체는 BirA(Avidity)로 부위 특이적 비오틴화하고, 스트렙타비딘 센서 칩(General Electric)에 결합시켰고, 상이한 Ab의 평형 결합 수준을 기술된 바와 같이(문헌[Warncke et al. 2012]) 표면 플라즈몬 공명(T100, General Electric)에 의해 분석하였다. 평형 해리 상수(K_D)는 1:1 모델에 의해 계산하였다.

인간 백혈구 배양

전혈 버피 코트는 건강한 지원자로부터 얻었다. 인간 편도선 샘플은 Ergolz Klinik(스위스 리스탈)(연구 프로토콜 번호 1000244 v.03; Ethikkommission beider Basel; EKBB에 의해 승인됨) 및 Kantonspital(스위스 리스탈)(연구 프로토콜 번호 TRI0149 v.01; EKNZ에 의해 승인됨)로부터 얻었다. 생체외 배양 실험의 경우, 자세한 방법은 보충 자료를 참조. 간략하게, 전혈, 단리된 PBMC, 시험관내 유래 단핵구 DC 또는 인간 편도선 B세포를 CFZ533 또는 관련 대조군 항체의 단일 농도 또는 용량 적정과 함께 인큐베이션하였다. 경로 차단 실험의 경우, 이들 배양물은 EC80 농도의 재조합 인간 CD154(5 μg/ml) 및 IL-4(75 ng/ml)도 포함하였다. 시험관내 분석에 대한 판독은 티미딘 혼입(³H-TdR)에 의해 평가된 증식, B세포의 활성화 분자 CD69의 발현에 대한 유세포 분석 기반 평가, 및 ELISA에 의해 평가된 사이토카인 분비를 포함하였다. NHP 전혈 및 PBMC에 대해 유사한 분석이 사용되었다. 일부 인간 전혈 실험에서, 형광 태그 부착된 CFZ533을 사용하여 CD40 수용체 점유율도 조사하였다. 적절한 경우, GraphPad Prism® 소프트웨어에서 선형 회귀 기반 곡선 피팅을 사용하여 IC50 값을 추정하였다.

시험관내 세포 고갈 분석

자세한 방법은 보충 자료를 참조. 간략하게, CD20^pos B세포의 매개성 고갈에 대한 CFZ533의 능력을 B세포 고갈 항체 리툭시맙과 비교하여 3일 동안 인간 전혈에서 모니터링하였다. CDC의 경우, 토끼 보체의 존재 또는 부재하에 CFZ533을 RAJI B세포와 함께 인큐베이션하고, 발광에 의해 세포 용해를 평가하였다.

CFZ533의 내재화

형광 태그 부착된 CFZ533 및 rCD154의 내재화를 인간 B세포주 RI-1을 사용하여 시험관 내에서 평가하였다(문헌[Th’ng et al, 1987]). CFZ533 내재화의 CD40 의존성을 CD40 녹아웃 RI-1 세포주를 사용하여 평가하였다. 제조사의 지시에 따라 Amnis® 이미지 유세포 분석기(Merck KHaA, Darnstadt)를 사용하여 내재화를 평가하고, ImageStream®^X 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다.

생체내 연구

단회 용량 약동학/약력학(PK/PD) 연구는 7.5~8.5세(6.5 ± 2.6 kg)로, 필리핀(Siconbrec, 필리핀 마카티 시티)으로부터 인공 사육된 생물제제 처리 미경험 시노몰구스 원숭이(마카크 원숭이, Macaca fascicularis)를 이용하였다. 본 연구는 동물 복지법 및 허용된 동물 복지 표준에 관한 국가 법률 규정을 엄격히 준수하는 공인된 연구 프로토콜 및 현지 표준 운영 절차에 따라 수행되었다.

PK 연구에서, CFZ533은 16.2(5532), 18.5(5531) 및 20(5530) mg/kg의 계산된 단회 용량으로 3마리의 동물에게 투여되었다. CFZ533 혈청 농도, 말초 T 및 B 림프구의 수, 및 CFZ533에 의한 말초 B세포에서의 CD40 점유율 분석을 위해 혈액을 샘플링하였다. 리콜 TDAR 실험의 경우, 각각 연구 8일차(프라이밍) 및 43일차(리콜; CFZ533 치료 중)에 알룸(Alum) 중의 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)으로 동물을 면역시켰다. 프라이밍 및 리콜 면역화 1일 전 및 7, 14, 및 21일 후에 혈청을 샘플링하였다. 표준물질로서 시노몰구스 원숭이 항-KLH IgM/IgG 기준 혈청을 사용하여 샌드위치 ELISA로 KLH 특이적 IgM/IgG 역가를 결정하였다. 전술한 바와 같이 PK 평가를 수행하였다. PK 및 TDAR 실험에 대한 자세한 내용은 보충 자료를 참조.

배중심의 조직학적 분석

포르말린 고정, 파라핀 왁스(FFPE) 포매된 비장 및 림프절(액와, 하악 및 장간막) 절편을 헤마톡실린 및 에오신, 그리고 다음의 마커를 이용한 간접적인 면역-과산화효소 방법(Dako의 HRP+DAB)으로 염색하였다: 항-CD20 항체(M0755, Dako), 항-CD8 항체(RM-9116-SO, Medac) 및 Ki67(M7240, Dako). 모든 슬라이드를 염색의 강도(음성부터 강력까지)에 따라 평가하고 등급을 매겼다. 또한, 조직 내에서 임의의 면역조직화학 염색 세포의 염색 패턴 및 분포 또한 기술하였다.

실시예 7. CFZ533은 인간 CD40에 결합하고 다수의 CD40 발현 세포 유형의 rCD154 유도성 활성화를 억제한다

표 3은 재조합 인간 CD40에 대한 CFZ533의 KD가 표면 플라즈몬 공명에 의해 0.3 nM로 결정되어, 이의 모항체 HCD122(CFZ533의 야생형 IgG1 버전)와 매우 유사함을 나타낸다.

도 4a는 인간 전혈 배양물, PBMC 및 다수의 공여자(각각 5명, 32명, 및 6명의 공여자)로부터 단리된 편도선 B세포의 rCD154 및 IL-4 매개성 증식(3H-TdR)에 미치는 CFZ533의 영향을 보여준다. 데이터는 정규화된 cpm(rCD154 + IL-4 = 100; 점선)으로 표시된다. 도 4b는 밤새 배양 후 rCD154 자극 moDC에 의한 TNF-알파 생성을 CFZ533이 억제하였음을 보여준다. 도 4c는 지연된 CFZ533의 첨가가 rCD154 + IL-4 매개성 인간 PBMC 증식을 억제하였음을 보여준다. rCD154 + IL-4로 자극하기 1시간 전, 자극과 동시에, 또는 2시간 및 6시간 후에 CFZ533을 인간 PBMC에 첨가하고, 이후 4일 배양 후 증식(3H-TdR)을 평가하였다(점선 및 파선은 rCD154 + IL-4 및 세포 + 배지 대조군을 나타낸다). 모든 데이터에 대해, rCD154 유도성 자극의 판독치의 평균 및 SD를 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로서 그래프화 하였다. 적절한 경우, 선형 회귀 기반 곡선 피팅을 사용하여 IC50 값을 결정하였다. 도 4d는 CFZ533에 의한 CD40 점유와 경로 차단 사이의 관계를 보여준다. CFZ533의 용량 적정의 존재하에 10명의 공여자로부터의 인간 전혈을 rCD154와 함께 밤새 배양하였다. 경로 활성화 정도(B세포에서의 CD69pos(%)) 및 CD40 점유 정도(알렉사플루오르(AlexaFlour) 488 표지된 CFZ533으로 염색)를 평가하였다. 채워지지 않은 원과 채워진 원은 각각 CFZ533에 의해 점유된 CD40의 백분율 및 CD20pos B세포에서의 CD69pos 발현 세포의 백분율을 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로서 나타낸 것이다(평균 및 SD 도시). 점선 및 파선은 모든 공여자에 걸쳐 정규화된 rCD154 유도성 CD69 발현 및 세포 + 배지 대조군 배양물을 나타낸다.

도 4는 CFZ533이 각각 0.024 μg/ml(0.16 nM), 0.017 μg/ml(0.12 nM), 및 0.071 μg/ml(0.47 nM)의 효능(IC50 값)을 갖는 다수의 공여자로부터의 정제된 편도선 B세포 및 인간 전혈 배양물, PBMC의 rCD154 유도성 증식을 완전히 억제하였음을 나타낸다. 또한, CFZ533이 0.04 μg/ml(0.27 nM)의 IC50으로 1차 단핵구 유래 수지상 세포(moDC)에 의한 rCD154 유도성 TNF 생성을 완전히 차단하였음을 증명할 수 있었다(도 4b).

이전에 발표된 바와 같이, CFZ533은 시노몰구스 원숭이로부터의 PBMC의 rCD154 유도성 증식을 억제하였다(문헌[Cordoba et al., 2015]). CFZ533은 인간, 레서스 및 시노몰구스 동물로부터의 PBMC의 rCD154 유도성 증식을 유사한 효능(각각 0.02, 0.03, 및 0.01 μg/ml의 IC50)으로 억제하였고, 이들 종으로부터의 B세포 상의 CD40과 대략 0.2 μg/ml의 EC50 값으로 결합할 수 있었다(표 4 참조).

위의 세포 데이터는 CFZ533이 rCD154 전에 또는 rCD154와 동시에 첨가된 실험으로부터 유래되었으며, 항체가 내인성 리간드의 결합을 방지할 수 있음을 나타냈다. 또한, rCD154를 함유하는 백혈구 배양 개시 후 6시간까지 CFZ533을 첨가하자 최소한의 효능 손실을 나타내며 세포 활성화가 완전히 억제되어, CFZ533이 CD40으로부터 내인성 리간드를 밀어낼 수 있음을 증명할 수 있었다(도 4c).

또한, CFZ533에 의한 CD40 점유도와 경로 억제 정도 사이의 관계를 평가하고자 했다. 이를 위해, 다수의 공여자의 전혈에서 CFZ533에 의한 CD40 수용체 점유와 rCD154 유도성 CD69를 동시에 평가하였다. 도 4d는 CD40 경로 활성화의 완전한 차단에는 CFZ533에 의한 CD40 수용체 점유가 적어도 90% 필요함을 나타낸다. 또한, CD40 경로 활성화의 판독치로서 CD23 및 CD54를 사용하여 수용체 점유와 경로 억제 사이의 유사한 관계가 관찰되었다(데이터 미도시).

실시예 8: CFZ533은 시험관 내에서 최소 자극 전위를 나타낸다

전혈의 B세포에서 활성화 분자 CD69의 증식 및 상향 조절을 사용하여 인간 백혈구의 활성화를 자극하는 CFZ533의 능력을 평가하였다. 도 5a는 i. 다수의 공여자(n=13)의 인간 전혈을 CFZ533의 용량 적정으로 인큐베이션하고, 3일의 배양 후 증식(³H-TdR)을 평가한 것, ii. 다수의 공여자(n=26)의 인간 PBMC를 CFZ533의 용량 적정으로 인큐베이션하고, 3일의 배양 후 증식(³H-TdR)을 평가한 것에 관한 데이터를 보여준다. 두 그래프 모두, 데이터는 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로서 정규화된 cpm의 평균 및 SD로 제시된다(rCD154 + IL-4 = 100; 점선, 세포 + 배지 = 0; 파선). 도 5b는 CFZ533이 추가 자극의 존재하에서 인간 PBMC 증식을 유도하지 않음을 보여준다. 인간 PBMC를 (i) IL-4 또는 (ii) 항-IgM F(ab')2의 존재하에 CFZ533의 용량 적정으로 3일 동안 자극하였다. 3H-TdR(cpm)의 평균 및 SD를 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로 표시하였다. 도 5c에, 무자극, CFZ533, 동형 대조군 또는 rCD154와 함께 인간 전혈(41명의 공여자)을 밤새 배양하고, B세포에서의 CD69 발현을 FACS에 의해 평가한 방법이 도시되어 있다. 각각의 점은 단일 공여자의 데이터를 나타내며, 평균 CD69(%) 값을 빨간색 수평선으로 표시하였다.

도 5a는 rCD154와 대조적으로, CFZ533이 인간 전혈(1:10 희석) 또는 PBMC에 의한 티미딘 혼입을 유도할 수 없었음을 보여준다. CFZ533이 증식을 유도할 수 없다는 점은 IL-4와 같은 추가의 공동 자극, 또는 항-IgM의 추가에 의해 영향을 받지 않았다(도 5b). 또한, 다시 rCD154와 대조적으로, CFZ533이 다수의 공여자의 전혈 B세포에서 CD69의 상향 조절을 유도할 수 없었음을 증명할 수 있었다(도 5c). 마지막으로, CFZ533은 CD40 발현 단핵구 유래 DC 또는 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)에 의해 사이토카인 생성을 유도할 수 없었다(데이터 미도시).

실시예 9: CFZ533은 세포 고갈을 매개하지 않는다

CFZ533을 N297A 돌연변이를 함유하도록 조작하였고, 사전에 이것이 FcγR 결합을 무력화시켜 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 매개할 수 없게 함을 증명하였다. CFZ533은 HCD122(야생형 IgG1)와 비교하여 FcγRIIIA에 결합할 수 없었으며(표 5), 이러한 결합 결여가 CFZ533이 세포 고갈을 매개하는 능력에 어떻게 영향을 미치는지 조사하고자 했다.

도 6a는 CFZ533의 용량 적정 또는 50 μg/ml의 리툭시맙의 존재하에 72시간 동안 인큐베이션된 인간 전혈 배양물의 데이터를 보여준다. 림프구 FSC/SSC 게이트 내에 해당되는 CD45pos 및 CD19pos 사례에 기초하여 B세포의 수를 결정하였다. 개별 항체 농도에 대한 결과는 처리되지 않은 샘플을 참조하여 잔존 B세포 백분율로서 계산하고 로그 변형된 항체 농도의 함수로서 그래프화 하였다(100%로 조정하고 점선으로 나타냄). 데이터는 8명의 독립적인 공여자의 평균과 SD를 나타낸다. 도 6b는 상이한 농도의 리툭시맙 또는 CFZ533 및 고정된 농도의 토끼 보체와 함께 인큐베이션된 Raji B세포의 결과를 보여준다. Raji 세포의 농도 의존적 사멸을 2시간 후에 분석하였고, 여기서 루시퍼라제를 사용하여 각 웰에서 ATP 농도를 결정함으로써 세포의 생존력을 측정하였다. 결과를 로그 변형된 항체 농도의 함수로서 동형 대조군 정규화된 상대 루시퍼라제 단위(RLU)로서 제시하였다.

도 6a는 고갈 항-CD20 항체 리툭시맙은 인간 전혈에서 대략 80%의 B세포를 제거할 수 있었지만, CFZ533은 임의의 세포 고갈을 매개할 수 없었음을 나타낸다. 또한, CFZ533은 리툭시맙과 대조적으로 Raji B세포의 보체 의존성 세포독성(CDC)을 매개할 수 없었다(도 6b).

실시예 10: CFZ533은 CD40 의존적 방식으로 B세포에 의해 내재화된다

다음으로 CFZ533이 CD40 발현 인간 B세포주 RI-1에 의해 내재화될 수 있는지를 조사하고자 했다. 도 7a는 rCD154가 비허용 조건(4℃)과 비교하여 허용 조건(37℃)에서 내재화되었으며, 여기서 rCD154의 약한 염색이 원형질 막에서 관찰될 수 있었음을 나타낸다. 37℃에서 잔류막 염색이 있는 것처럼 보였지만 CFZ533도 내재화되었다. 도 7b에서는 rCD154의 내재화 정도가 CFZ533에서 관찰된 것보다 더 큰 것처럼 보이는 것으로 나타났다. CD40 녹아웃 RI-1 B세포주를 사용하여, CFZ533(도 7c) 및 rCD154(데이터 미도시)의 결합 및 내재화가 CD40 의존적임을 증명할 수 있었다.

도 7a는 37℃ 또는 4℃에서 3시간 동안 알렉사플루오르 488로 표지된 rCD154 또는 CFZ533과 함께 배양된 개별 RI-1 B세포의 대표적인 이미지를 보여준다. 도 7b. 허용 조건에서의 CFZ533 및 rCD154의 상대적인 내재화 약화(비허용 약화 값을 감산함). 각각의 점은 개별 실험의 데이터를 나타내며 모집단 평균은 빨간색 수평선로 표시하였다. 도 7c. 37℃에서 3시간 동안 알렉사488 표지된 CFZ533과 함께 배양된 개별 CD40 발현 또는 CD40 녹아웃 RI-1 세포의 대표적인 이미지. 모든 실험에서, 세포막의 경계를 표시하기 위해 알렉사플루오르 647 표지된 CD45로 세포를 공동 염색하였다.

실시예 11: 비인간 영장류에서의 CFZ533의 약동학적 특성

도 8a. 정맥 내로 16.2(5532), 18.5(5531), 및 20(5530) mg/kg의 계산된 용량으로 단회 용량 투여 후 3마리의 시노몰구스 원숭이에서의 CFZ533의 혈청 농도. 도 8b. CD40 점유율: (i) 유효 CD40 백분율 및 (ii) 총 CD40 백분율 C. 말초 B/T세포: 단회 용량 후 말초 혈액 B세포의 백분율. 0일차는 CFZ533이 투여된 때이다.

위의 데이터는 CFZ533이 NHP CD40에 결합하였고, NHP B세포의 rCD154 유도성 활성화를 유사한 효능으로 억제할 수 있었음을 나타냈다. 이는 시노몰구스 원숭이와 레서스 원숭이가 CFZ533 PK와 PD 사이의 관계를 조사하는 생체내 연구에 적합한 종이라는 것을 시사하였다. 도 8a의 데이터는 CFZ533 단회 정맥내 용량(16.2, 18.5, 및 20 mg/kg의 계산된 용량) 후 3마리의 시노몰구스 원숭이의 PK 프로파일을 보여준다. 내재화 막결합 항원을 표적으로 하는 단클론 항체에 일반적인 바와 같이(Mager et al. 2006 및 Ng et al. 2006), CFZ533 농도의 시간 경과는 결과적으로 비선형 PK 프로파일 및 농도 의존적 소거율 및 반감기를 야기하는 명확한 표적 매개 성향을 나타냈다. PK 프로파일에서 관찰된 변곡점은 표적 결합의 마커로서, CFZ533의 전체 소거에 대한 CD40의 증가된 기여도 및 더 짧은 반감기와 관련이 있다. 또한, PK 변곡점은 CD40 포화도 감소가 관찰된 시간과 일치하였다(도 8b, i). 이는 CFZ533이 더 빨리 제거될 때 대략 10~20 μg/ml에서 일어났다. 모든 동물에서, 세포에서의 CD40 수용체 발현의 손실은 없었다(도 8b, ii). 또한, CFZ533은 연구 전반에 걸쳐 일부 관찰된 변동에도 불구하고, 말초 혈액 B세포(도 8c) 또는 T세포(데이터 미도시)를 고갈시키지 않았다.

실시예 12: CFZ533은 리콜 T세포 의존성 항체 생성을 억제한다

도 9a는 리콜 TDAR에 미치는 CFZ533의 영향을 평가하기 위한 실험 설계의 개략도를 보여준다. x축 아래의 화살표는 1차 및 2차 KLH 면역화를 강조 표시한 것이다. 10 mg/kg의 CFZ533 단회 용량 타이밍은 위에 표시되어 있다. 별표는 항-KLH IgG 및/또는 CFZ533 수준을 측정한 시점을 나타낸다. 도 9b. 각각의 그래프는 개별 동물에 대한 항-KLH IgG(채워진 기호) 및 혈장 CFZ533 수준(로그 스케일; 실선)을 보여준다. 대조군 동물(채워지지 않은 기호)로부터의 평균 항-KLH IgG 수준을 비교의 목적으로 각 그래프에 겹쳐 표시하였다. 도 9c. CFZ533을 이용한 1 mg/kg/주의 피하 다회 용량 26주 연구의 레서스 원숭이의 mLN에서의 배중심의 조직학적 분석(Ki67 염색). (i) 6마리의 동물로부터의 대표적인 mLN 절편을 (ii) 대조군 이미지와 함께 표시하였다. iii. 치료 기간의 끝에서의 개별 동물로부터의 투약 구간에 걸친 평균 정상 상태 CFZ533 혈청 농도.

CD40 차단의 예상된 정확한 PD 효과는 TDAR의 억제이다(문헌[Kawabe et al. 1994]). CFZ533은 NHP 및 인간에서 1차 TDAR을 억제하며, 또한 이 항체가 리콜 TDAR에 미치는 영향을 조사하고자 하였다. 실험 설계를 도 9a에 요약하였다. 간략하게, 4마리의 레서스 원숭이를 연구 1일차의 10 mg/kg의 CFZ533 단회 정맥내 용량 전, 연구 -28일차(프라이밍)에 알룸 중의 KLH로 면역시킨 후, 연구 15일차에 제2 KLH 면역화를 수행하였다.

도 9b는 면역화된 대조군(CFZ533 없음)의 데이터와 비교하여, 4마리의 개별 동물에서 항-KLH IgG 리콜 반응에 미치는 CFZ533의 영향을 예시한 것이다. CFZ533의 PK 프로파일에는 동물간 변동성이 있었고, CFZ533의 더 빠른 제거가 동물 #1과 #3에서 관찰되었다. 더 높은 혈장 농도는 동물 #2 및 #4에서 더 오랜 시간 동안 관찰되었다. 흥미롭게도, 이들 동물은 연구 15일차에 항-KLH IgG(및 IgM; 데이터 미도시) 리콜 반응의 완전한 억제를 나타냈다(모든 동물이 KLH에 대해 1차 TDAR을 나타냈음에 유의한다). 대조적으로, 특히 혈청 CFZ533 수준이 제2 KLH 면역화 시점에 약 40 μg/ml 미만인 경우, 더 빠른 CFZ533 소거율을 나타내는 동물에서 (일부 지연은 있었으나) 항-KLH IgG 반응이 관찰되었다(동물 #1과 비교하여 동물 #3의 경우 더 지연됨). 이식된 동물(Cordoba et al. 2015) 및 이식되지 않은 동물(도 8b)에서 CFZ533을 이용한 이전의 생체내 실험에서 관찰된 바와 같이, 말초 B세포 고갈은 관찰되지 않았다(데이터는 미도시).

상기 결과는 NHP에서 리콜 TDAR의 완전한 억제를 위해 대략 40 μg/ml보다 높은 CFZ533 혈청 농도가 요구됨을 나타냈다. CFZ533 노출과 CD40 경로 관련 조직 약력학적 효과 사이의 관계를 추가로 조사하고자 하였다. 26주 독성학 연구 종료 시, 1 mg/kg/주의 피하 CFZ533에서, 장간막 림프절(mLN) GC의 조직학적 분석 및 분자 분석을 수행하였다. 도 9c는 (i)은 투약된 6마리의 동물 중 3마리의 개체에서 GC의 완전한 억제를 관찰할 수 있었던 반면, 나머지 동물의 mLN에서 GC가 여전히 관찰될 수 있었음을 나타낸다. 도 9c (iii)은 적어도 38 μg/mL의 혈청 농도(투약 구간에 걸친 평균 정상 상태 농도)가 림프절의 피질 B세포 영역에서 GC 발달의 완전한 억제와 관련이 있지만, 20 μg/mL 미만의 혈청 농도에서는 전혈 CD20^pos B세포의 완전 CD40 점유(동물 26842 및 26772; 데이터 미도시)에도 불구하고, GC의 불완전한 억제(동물 26842) 또는 억제 없음(동물 26772 및 26837)이 관찰되었음을 나타낸다. 말초 B세포 고갈의 증거는 없었다(데이터 미도시).

추가의 바람직한 구현예

A. 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체로서, 상기 항체의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 췌도염의 치료에 사용하기 위한 것으로, 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 항체.

B. 구현예 A에 있어서, 로딩 용량 투약은 제1 용량으로 정맥 주사를 통해 투여되고, 유지 용량 투약은 제1 용량과 상이한 제2 용량으로 피하 주사를 통해 투여되는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

C. 구현예 A 또는 B에 있어서, 로딩 용량은 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체인, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

D. 구현예 A 내지 C에 있어서, 환자는 소아 환자인, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

E. 구현예 D에 있어서, 로딩 용량은 1일차에 정맥내 투여되는 30 mg/kg이고, 유지 용량은 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

F. 구현예 E에 있어서, 유지 용량은 8일차부터 매주 체중에 따라 고정된 용량, 즉

c. 체중이 50 kg을 초과하는 체중 카테고리 III의 환자의 경우 300 mg

의 용량으로 피하 투여되는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

G. 구현예 F에 있어서,

a. 체중 카테고리 I의 환자는 0.9 ml의 단회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받고;

b. 체중 카테고리 II의 환자는 1.3 ml의 단회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받거나;

c. 체중 카테고리 III의 환자는 2 ml의 단회 주사 또는 1 ml의 2회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

H. 구현예 A 내지 G에 있어서, 치료는 1일차 이후 최대 52주까지 계속되는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

I. 구현예 D에 있어서, 환자의 연령 범위는 6세 내지 21세인, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

J. 구현예 A 내지 I 중 어느 한 구현예에 있어서,

d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체

로 이루어진 군으로부터 선택되는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

K. 구현예 J에 있어서, 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 항체.

L. 구현예 J 또는 K에 있어서, 췌도염의 치료에 사용하기 위한 CFZ533인 항체.

M. 구현예 A 내지 L 중 어느 한 구현예에 따라 사용하기 위한 항체의 치료 유효량 및 제약상 허용되는 하나 이상의 담체를 포함하는 제약 조성물.

N. 인간 대상체에서 췌도염을 치료하는 방법으로서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 치료 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체는 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 방법.

O. 구현예 N에 있어서, 로딩 용량 투약은 제1 용량의 정맥 주사를 통해 투여되고, 유지 용량 투약은 제1 용량과 상이한 제2 용량의 피하 주사를 통해 투여되는, 방법.

P. 구현예 O에 있어서, 로딩 용량은 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체인, 방법.

Q. 구현예 N 내지 O에 있어서, 환자는 소아 환자인, 방법.

R. 구현예 Q에 있어서, 로딩 용량은 1일차에 정맥내 투여되는 30 mg/kg이고, 유지 용량은 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는, 방법.

S. 구현예 R에 있어서, 유지 용량은 8일차부터 매주 체중에 따라 고정된 용량, 즉

의 용량으로 피하 투여되는, 방법.

T. 구현예 S에 있어서,

c. 체중 카테고리 III의 환자는 2 ml의 단회 주사 또는 1 ml의 2회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받는, 방법.

U. 구현예 T에 있어서, 치료는 1일차 이후 최대 52주 동안 계속되는, 방법.

V. 구현예 Q 내지 U에 있어서, 환자의 연령 범위는 6세 내지 21세인, 방법.

W. 구현예 N 내지 V에 있어서, 항체는

로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.

X. 구현예 W에 있어서, 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 치료 방법.

Y. 구현예 W 또는 X에 있어서, 항체는 CFZ533인, 치료 방법.

Z. T1DM 치료용 약제의 제조에 있어서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 액체 제약 조성물의 용도로서, 항-CD40 항체는

1. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

2. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;

3. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;

4. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및

5. 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체

로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.

AA. 췌도염 치료용 약제의 제조에 있어서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제, 및 가용화제를 포함하는 액체 제약 조성물의 용도로서, 항-CD40 항체는

로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.

참고문헌

SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> ANTI-CD40 ANTIBODIES FOR USE IN TREATMENT OF T1DM AND INSULITIS <130> PAT058516 <150> <151> <150> <151> <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapeins <400> 8 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Val Leu Ile Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Arg 100 105 110 <210> 9 <211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 10 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Val Leu Ile Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Arg 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 11 <211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 12 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Val Leu Ile Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Arg 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 13 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 14 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 15 <211> 1350 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 caggtgcagc tggtggaatc tggcggcgga gtggtgcagc ctggccggtc cctgagactg 60 tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agctacggca tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggccgtg atctcctacg aggaatccaa cagataccac 180 gctgactccg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca actccaagat caccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg gaccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggacgga 300 ggaatcgccg ctcctggacc tgattattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcctcc 360 gctagcacca agggcccctc cgtgttccct ctggccccct ccagcaagtc cacctctggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac ctccggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccctcta gctctctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaaccc 660 aagtcctgcg acaagaccca cacctgtccc ccctgccctg cccctgaact gctgggcgga 720 ccttccgtgt tcctgttccc cccaaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggaccccc 780 gaagtgacct gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga acagtacgcc 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaaa 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggccaagg gccagccccg cgagccacag gtgtacacac tgccccccag ccgggaagag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtcaaag gcttctaccc ctccgatatc 1140 gccgtggagt gggagtccaa cggacagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagtccc tgtccctgag ccccggcaag 1350 <210> 16 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 gacatcgtga tgacccagtc ccccctgtcc ctgaccgtga cacctggcga gcctgcctct 60 atctcctgca gatcctccca gtccctgctg tactccaacg gctacaacta cctggactgg 120 tatctgcaga agcccggcca gtccccacag gtgctgatct ccctgggctc caacagagcc 180 tctggcgtgc ccgaccggtt ctccggctct ggctctggca ccgacttcac actgaagatc 240 tcacgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgca tgcaggcccg gcagaccccc 300 ttcaccttcg gccctggcac caaggtggac atccggcgta cggtggccgc tcccagcgtg 360 ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 agcggcaaca gccaggagag cgtcaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540 agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc ataaggtgta cgcctgcgag 600 gtgacccacc agggcctgtc cagccccgtg accaagagct tcaacagggg cgagtgc 657 <210> 17 <211> 1350 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 caggtgcagc tggtggaatc tggcggcgga gtggtgcagc ctggccggtc cctgagactg 60 tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agctacggca tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggccgtg atctcctacg aggaatccaa cagataccac 180 gctgactccg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca actccaagat caccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg gaccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggacgga 300 ggaatcgccg ctcctggacc tgattattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcctcc 360 gctagcacca agggcccctc cgtgttccct ctggccccct ccagcaagtc cacctctggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac ctccggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccctcta gctctctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaaccc 660 aagtcctgcg acaagaccca cacctgtccc ccctgccctg cccctgaact gctgggcgga 720 ccttccgtgt tcctgttccc cccaaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggaccccc 780 gaagtgacct gcgtggtggt ggccgtgtcc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaaa 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggccaagg gccagccccg cgagccacag gtgtacacac tgccccccag ccgggaagag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtcaaag gcttctaccc ctccgatatc 1140 gccgtggagt gggagtccaa cggacagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagtccc tgtccctgag ccccggcaag 1350 <210> 18 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 gacatcgtga tgacccagtc ccccctgtcc ctgaccgtga cacctggcga gcctgcctct 60 atctcctgca gatcctccca gtccctgctg tactccaacg gctacaacta cctggactgg 120 tatctgcaga agcccggcca gtccccacag gtgctgatct ccctgggctc caacagagcc 180 tctggcgtgc ccgaccggtt ctccggctct ggctctggca ccgacttcac actgaagatc 240 tcacgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgca tgcaggcccg gcagaccccc 300 ttcaccttcg gccctggcac caaggtggac atccggcgta cggtggccgc tcccagcgtg 360 ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 agcggcaaca gccaggagag cgtcaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540 agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc ataaggtgta cgcctgcgag 600 gtgacccacc agggcctgtc cagccccgtg accaagagct tcaacagggg cgagtgc 657 <210> 19 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 165 170 175 Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 195 200 205 Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 210 215 220 Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 225 230 235 240 Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 245 250 255 Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 260 265 270 Val Gln Glu Arg Gln 275

Claims

침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체로서, 상기 항체의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 T1DM의 치료에 사용하기 위한 것으로, 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 항체.
제1항에 있어서, 로딩 용량 투약은 정맥 주사를 통해 투여되고 유지 용량 투약은 피하 주사를 통해 투여되는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 또는 제2항에 있어서, 로딩 용량은 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체인, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 소아 환자인, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제4항에 있어서, 로딩 용량은 1일차에 정맥내 투여되는 30 mg/kg이고, 유지 용량은 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제5항에 있어서, 유지 용량은 8일차부터 매주 1회 체중에 따라 고정된 용량, 즉
a. 체중이 20 kg 내지 30 kg인 체중 카테고리 I의 환자의 경우 135 mg;
b. 체중이 30 kg 내지 50 kg인 체중 카테고리 II의 환자의 경우 195 mg; 및
c. 체중이 50 kg을 초과하는 체중 카테고리 III의 환자의 경우 300 mg
의 용량으로 피하 투여되는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제6항에 있어서,
a. 체중 카테고리 I의 환자는 0.9 ml의 단회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받고;
b. 체중 카테고리 II의 환자는 1.3 ml의 단회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받거나;
c. 체중 카테고리 III의 환자는 2 ml의 단회 주사 또는 1 ml의 2회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 치료는 1일차 이후 최대 52주까지 계속되는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제4항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 연령 범위는 6세 내지 21세인, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체
로 이루어진 군으로부터 선택되는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제10항에 있어서, 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제10항 또는 제11항에 있어서, 항체는 CFZ533인, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 항체의 치료 유효량 및 제약상 허용되는 하나 이상의 담체를 포함하는 제약 조성물.
인간 대상체에서 T1DM을 치료하는 방법으로서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체의 치료 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체는 로딩 용량 투약에 이어서 유지 용량 투약을 통해 투여되고, 투여 경로는 피하 또는 정맥내, 또는 피하 또는 정맥내의 조합인, 방법.
제14항에 있어서, 로딩 용량 투약은 제1 용량의 정맥 주사를 통해 투여되고, 유지 용량 투약은 제1 용량과 상이한 제2 용량의 피하 주사를 통해 투여되는, 방법.
제15항에 있어서, 로딩 용량은 환자의 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 60 mg 항체인, 방법.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 소아 환자인, 방법.
제17항에 있어서, 로딩 용량은 1일차에 정맥내 투여되는 30 mg/kg이고, 유지 용량은 8일차부터 매주 1회 100 mg 내지 350 mg의 고정된 용량으로 피하 투여되는, 방법.
제18항에 있어서, 유지 용량은 8일차부터 매주 1회 체중에 따라 고정된 용량, 즉
a. 체중이 20 내지 30 kg인 체중 카테고리 I의 환자의 경우 135 mg;
b. 체중이 30 내지 50 kg인 체중 카테고리 II의 환자의 경우 195 mg; 및
c. 체중이 50 kg을 초과하는 체중 카테고리 III의 환자의 경우 300 mg
의 용량으로 피하 투여되는, 방법.
제19항에 있어서,
a. 체중 카테고리 I의 환자는 0.9 ml의 단회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받고;
b. 체중 카테고리 II의 환자는 1.3 ml의 단회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받거나;
c. 체중 카테고리 III의 환자는 2 ml의 단회 주사 또는 1 ml의 2회 주사 형태로 각 유지 용량을 투여받는, 방법.
제20항에 있어서, 치료는 1일차 이후 최대 52주 동안 계속되는, 방법.
제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 연령 범위는 6세 내지 21세인, 방법.
제14항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는
a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체
로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제23항에 있어서, 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 치료 방법.
제23항 또는 제24항에 있어서, 항체는 CFZ533인, 치료 방법.
제1항 내지 제25항에 있어서, 환자는 T1DM의 진단 후 100일 이내에 치료되는, T1DM의 치료에 사용하기 위한 항체.