BR112020019083A2

BR112020019083A2 - Anticorpos, ácido nucleico, composições, célula e métodos para preparar um anticorpo, para tratar câncer, para tratar uma doença infecciosa, para tratar uma inflamação, para a identificação de um anticorpo, para melhorar a eficácia antitumoral de um anticorpo, para melhorar a farmacocinética de um anticorpo, para selecionar um anticorpo, para melhorar a eficácia de anticorpos, para isolar anticorpos, para detectar vista em uma amostra e para tratar câncer

Info

Publication number: BR112020019083A2
Application number: BR112020019083-7A
Authority: BR
Inventors: Robert J. Johnston; Ginger RAKESTRAW; Jason R. Pinckney; David A. Critton; Guodong Chen; Richard Y. HUANG; Ekaterina G. Deyanova; Arvind Rajpal; Paul O. Sheppard; Luis Borges; Andrew Rankin; Keith Sadoon BAHJAT; Alan J. Korman; Xiaodi Deng; Lin Hui Su
Original assignee: Five Prime Therapeutics, Inc.; Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 2018-03-21
Filing date: 2019-03-19
Publication date: 2020-12-29
Also published as: JP2024050577A; CN111971304A; IL277331A; MX2020009786A; JP2021518133A; AU2019239747A1; CA3092589A1; KR20200135421A; EP3768716A1; US20210017283A1; CL2020002410A1; SG11202008593PA; WO2019183040A1; TW201945393A; CO2020012415A2; PE20210290A1

Abstract

o presente pedido refere-se a anticorpos que se ligam especificamente ao supressor contendo domínio v de imunoglobulina de ativação de células t (vista) em ph ácido e ao uso destes no tratamento do câncer. em alguns exemplos de realização, os anticorpos ligam-se especificamente ao vista humano em ph ácido, mas não se ligam de maneira significativa ao vista humano em ph neutro ou fisiológico.

Description

“ANTICORPOS, ÁCIDO NUCLEICO, COMPOSIÇÕES, CÉLULA E MÉTODOS PARA PREPARAR UM ANTICORPO, PARA TRATAR CÂNCER, PARA TRATAR UMA DOENÇA INFECCIOSA, PARA TRATAR UMA INFLAMAÇÃO, PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO, PARA MELHORAR A EFICÁCIA ANTITUMORAL DE UM ANTICORPO, PARA MELHORAR A FARMACOCINÉTICA DE UM ANTICORPO, PARA SELECIONAR UM ANTICORPO, PARA MELHORAR A EFICÁCIA DE ANTICORPOS, PARA ISOLAR ANTICORPOS, PARA DETECTAR VISTA EM UMA AMOSTRA E PARA TRATAR CÂNCER” CAMPO DA INVENÇÃO

[001] O presente pedido refere-se a anticorpos que se ligam especificamente ao supressor contendo domínio V de imunoglobulina de ativação de células T (VISTA) em pH ácido e ao uso destes no tratamento do câncer.

ANTECEDENTES E DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[002] O supressor contendo o domínio V de Ig de ativação de células T, ou VISTA, é um membro coinibidor da família B7 de imunorreceptores expressos por células mielomonocíticas e outros leucócitos.

No entanto, o mecanismo pelo qual o VISTA suprime as respostas imunes é pouco compreendido.

[003] Os inventores descobriram que, ao contrário de outros imunorreceptores conhecidos, o VISTA envolve seus contrarreceptores e funciona seletivamente em pH ácido, com pouca atividade em pH fisiológico (por exemplo, 7,3 - 7,4). O VISTA pode, assim, suprimir respostas imunes em microambientes ácidos, tais como leitos tumorais ou locais de inflamação, sem perturbar as células circulantes no sangue ou que residem em tecidos não ácidos e não inflamados. Adicionalmente, os inventores descobriram que os anticorpos anti-VISTA podem ser geneticamente manipulados para se ligarem seletivamente ao VISTA em pH ácido, com pouca ou nenhuma ligação em pH fisiológico, espelhando a própria seletividade em pH ácido do VISTA. Estes anticorpos seletivos em pH ácido podem oferecer propriedades desejáveis para o tratamento de doenças, tal como câncer, em relação a anticorpos que se ligam ao VISTA em pH fisiológico.

[004] A presente invenção refere-se a anticorpos que se ligam especificamente ao domínio extracelular (ECD) do VISTA, tal como o VISTA humano (“hVISTA” ou “huVISTA”) em pH ácido (por exemplo, em condições ácidas). A presente invenção também diz respeito a anticorpos que se ligam especificamente ao domínio extracelular (ECD) de VISTA, tal como hVISTA, em pH ácido, com pouca ou nenhuma ligação em condições de pH neutro ou fisiológico. Os inventores notaram aqui que a sequência de aminoácidos do hVISTA-ECD inclui diversos resíduos de histidina conservados e não conservados, e que a frequência dos resíduos de histidina no ECD do VISTA é excepcionalmente elevada em relação a outros membros da família B7 e outros membros da superfamília de imunoglobulina. (Consulte as Figuras 1A e 1B).

Em solução, o aminoácido histidina tem um pKa de cerca de 6,5, o que significa que em pH 6,5 ou abaixo deste, os resíduos de histidina em proteínas são muitas vezes protonados e assim, carregados positivamente, ao passo que em pH mais elevado do que pH 6,5 eles estão cada vez mais não protonados e neutros em carga. Os microambientes tumorais e tecidos inflamados são frequentemente ácidos e, portanto, as proteínas VISTA encontradas nesses microambientes podem ser pelo menos parcialmente protonadas em seus resíduos de histidina. Os inventores, como discutido na presente invenção, hipotetizaram que a protonação de histidina pode afetar a conformação, a estrutura de superfície e/ou a densidade de carga do VISTA, que, por sua vez, pode criar epítopos pH-específicos ou seletivos em determinado pH para ambas as interação(ões) receptor-ligante e ligação ao anticorpo. Ter o VISTA como alvo com anticorpos que se ligam em pH ácido, mas não em pH neutro ou fisiológico, pode prevenir a disposição do fármaco mediada pelo alvo via células mielomonocíticas circulantes e residentes no órgão linfoide, melhorando a farmacocinética do anticorpo, a ocupação de receptores e a atividade em microambientes tumorais. Os anticorpos seletivos em pH ácido também podem melhorar a especificidade dos anticorpos VISTA para células alvo intratumorais, em vez de circulantes, nos casos de modalidades terapêuticas tais como citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpo (ADCC), fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP), citotoxicidade dependente de complemento (CDC) e entrega de cargas úteis (conjugados anticorpo-fármaco).

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[005] Os pedidos provisórios de prioridade US ao qual este pedido reivindica benefício contêm pelo menos um desenho colorido. Uma vez que os pedidos provisórios tornarem-se disponíveis ao público, presume-se que cópias do desenhos coloridos serão fornecidos pelo Escritório de Patentes e Marcas dos EUA, mediante solicitação e pagamento da taxa necessária.

[006] As Figuras 1A-C mostram que o domínio extracelular de VISTA contém uma frequência excepcionalmente elevada de resíduos de histidina, que muitos destes resíduos de histidina são conservados e que pelo menos alguns destes resíduos de histidina podem participar na ligação receptor-ligante. A Figura 1A mostra um gráfico de proteínas contendo o domínio de imunoglobulina, com o número de resíduos de aminoácidos do domínio extracelular para cada proteína plotada no eixo x, e a frequência de resíduos de histidina no domínio extracelular para cada proteína representada graficamente no eixo y. O tamanho de cada ponto de dados corresponde ao número total de resíduos de histidina no domínio extracelular de cada proteína.

A Figura 1B mostra as sequências de aminoácidos alinhadas dos domínios extracelulares do VISTA de humano, de macaco cinomolgo e de camundongo.

Os locais das sequências do peptídeo sinal (Sig) e do domínio transmembrana (TMD) estão marcados. Os resíduos de histidina conservados em todas as três espécies são mostrados em negrito e sublinhados; os resíduos de histidina conservados em humanos e macacos cinomolgo são mostrados em negrito apenas. A Figura 1C mostra um modelo da estrutura tridimensional do domínio de imunoglobulina do VISTA humano. Os resíduos de histidina são representados como traços de bola e bastão.

[007] As Figuras 2 A-B mostram um modelo em que os resíduos de histidina no domínio extracelular de VISTA conferem seletividade de contrarreceptor para pH ácido em vez de pH fisiológico. A Figura 2A mostra o equilíbrio entre a ausência e presença de protonação do grupo pirrol amônio (NH) em um resíduo de histidina. O pKa de histidina em solução é de 6,5, indicando que os resíduos de histidina têm maior probabilidade de estarem protonados em pH 6,5 e inferior e, assim, carregados positivamente, do que em pH mais elevado. A Figura 2B mostra um modelo em que o VISTA envolve o ligante 1 da glicoproteína P selectina (PSGL-1) ou outros contrarreceptores e ligantes (“VISTA-R”) seletivamente em pH ácido. Consequentemente, a ligação do anticorpo ao domínio extracelular do VISTA em pH ácido, em vez de pH fisiológico, pode ser crítica para inibir ou modular a atividade de VISTA.

[008] A Figura 3 mostra o nível de expressão de superfície VISTA (intensidade de fluorescência média (MFI) da coloração do anticorpo anti-VISTA) em macrófagos infiltrantes de tumor, células dendríticas, neutrófilos, células T CD4+ efetoras, células T reguladoras CD4+, células T CD8+, células natural killers (NK) e células B. O VISTA é expresso em muitos leucócitos infiltrantes de tumores, particularmente em células mieloides. Os microambientes tumorais são frequentemente ácidos, permitindo que o VISTA se acople a contrarreceptores e ligantes.

[009] As Figuras 4 A-E mostram que VISTA liga-se seletivamente a leucócitos e ao PSGL-1 em pH ácido, com pouca ou nenhuma ligação em pH neutro, e que esta ligação pode ser bloqueada por um anticorpo anti-VISTA.

A

Figura 4A à esquerda mostra histogramas representativos de ligação de multímero VISTA recombinante conjugado de forma fluorescente às células T

CD4+ humanas ativadas.

Do cinza mais escuro para o mais claro, os histogramas preenchidos representam a ligação em pH 7,0, 6,5, 6,4, 6,3, 6,1 e

6,0. Alguns histogramas são rotulados com seus pH correspondentes.

A ligação a multímero controle não direcionado para VISTA em pH 6,0 é mostrada como o histograma não preenchido.

À direita, a MFI média da ligação do multímero VISTA (círculos) e controle (triângulos) às células T CD4 + humanas ativadas de dois doadores em diferentes pH é representada graficamente.

A Figura 4B mostra histogramas representativos da ligação do multímero VISTA recombinante às células mononucleares do sangue periférico

(PBMCs) em pH 6,0 e pH 7,4. Do cinza mais escuro para o mais claro, os histogramas preenchidos representam ligação em pH 6,0 às células B CD19 +,

células T CD4+, células T CD8+, células NK CD56+ e monócitos CD14+. Os histogramas não preenchidos, de borda sólida e de borda pontilhada ilustram a ligação em pH 7,4 para os linfócitos e monócitos totais de PBMC,

respectivamente.

A Figura 4C mostra a ligação do multímetro VISTA recombinante representativo às células T CD4+ humanas ativadas na presença de um anticorpo bloqueador anti-VISTA (quadrados) ou um anticorpo controle de isotipo correspondente não específico para VISTA (círculos). As concentrações de anticorpos são plotadas em escala logarítmica.

Também são mostradas regressões não lineares.

O triângulo representa o sinal de fundo de células T CD4+ humanas ativadas que não foram coradas com multímeros VISTA recombinantes.

A Figura 4D mostra gráficos representativos de citometria de fluxo bidimensional de ligação de multímero VISTA recombinante em pH 6,0 às células de Ovário de Hamster Chinês (CHO) deficientes em sulfato de heparano (linhagem pGSD-677, American Type Culture Collection) que foram transfectadas para expressar PSGL-1 humano. A ligação de multímeros foi realizada na presença e ausência do anticorpo bloqueador anti- VISTA mostrado na Figura 4C. As células não coradas por multímeros VISTA recombinantes são mostradas como um controle. A coloração do anticorpo PSGL-1 é representada graficamente no eixo y, e a coloração do multímero VISTA é representada graficamente no eixo x. A Figura 4E mostra histogramas representativos da ligação da proteína de fusão VISTA-Fc recombinante de camundongo a esplenócitos de camundongo em pH 6,0 e pH 7,4. Do cinza mais escuro para o mais claro, os histogramas preenchidos representam ligação em pH 6,0 às células T CD8+, células mieloides CD11b+ e células T CD4+. O histograma não preenchido mostra a ligação em pH 7,4 ao total de esplenócitos. As Figuras 4F e 4G mostram que o multímero VISTA liga-se a monócitos e neutrófilos, respectivamente, e o faz mais fortemente em pH 6,0 do que em pH 7,4.

[010] As Figuras 5 A-D mostram que VISTA medeia a supressão de células T e adesão célula : célula, preferencialmente em um pH ácido, e que ambos os efeitos podem ser revertidos com um anticorpo de bloqueio anti- VISTA. A Figura 5A mostra a formação de conjugado de célula : célula representativa em pH 6,0 e 7,0 entre células 293T expressando hVISTA ou vetor controle (plotados nos eixos y) e células CHO expressando endogenamente sulfato de heparano na superfície celular nos eixos x. A Figura 5B é um gráfico da frequência de conjugados de células formados em pH 6,0 entre as mesmas células na presença de um anticorpo bloqueador anti-VISTA, um anticorpo não bloqueador anti-VISTA ou um anticorpos controle específico não direcionado para VISTA de isotipo correspondente. A Figura 5C mostra gráficos representativos da atividade de luciferase gerada por células Jurkat

(linhagem de células T humanas) expressando luciferase NFkB repórter após cocultura em vários pH com células 293T expressando hVISTA e um fragmento variável de cadeia única do anticorpo agonista do receptor de células T anti- OKT3 humano (“células apresentadoras de antígenos artificiais”). Adicionou-se um anticorpo de bloqueio anti-VISTA (quadrados) ou um anticorpo controle específico não direcionado para VISTA pareado com isotipo (círculos) às células cocultivadas. Na Figura 5D, os dados apresentados na Figura 5A são representados graficamente como o aumento em vezes do sinal da luciferase com o tratamento com anticorpo anti-VISTA em relação ao controle (“tamanho do efeito”).

[011] As Figuras 6 A-G mostram que o VISTA pode ser encontrado em endossomos intracelulares, particularmente em endossomos de reciclagem Rab11+, e podem reciclar para e a partir da superfície celular por meio de tráfego endossômico. A Figura 6A mostra a colocalização de VISTA, Rab5 (marcador endossômico precoce), Rab7 (marcador endossômico tardio) e Rab11 (marcador endossômico de reciclagem) dentro de células 293T expressando VISTA humano. A Figura 6B mostra a colocalização de VISTA e Rab11 dentro de monócitos humanos. O VISTA intracelular está colocalizado com endossomos de reciclagem Rab11+. Um anticorpo controle que não se liga ao VISTA do mesmo isotipo que o anticorpo VISTA (“cAb”) não se liga de forma detectável aos monócitos. A Figura 6C mostra a ligação de três anticorpos anti- VISTA ao VISTA recombinante em pH 7,4 (preto), 6,7 (cinza mais escuro) e 6 (cinza mais claro). A Figura 6D mostra a susceptibilidade de uma linhagem celular de leucemia mieloide aguda (LMA) que expressa VISTA para matar pelos mesmos anticorpos anti-VISTA 1 (triângulos invertidos), 2 (círculos), 3 (quadrados) ou um anticorpo controle não específico para VISTA (triângulos) contendo ligantes sensíveis à catepsina B e cargas citotóxicas. A viabilidade celular (CellTiter-Glo LU) é representada graficamente no eixo y e as concentrações de anticorpos são representadas graficamente no eixo x. A Figura 6E compara a ligação de hVISTA do anticorpo anti-VISTA 3 com a de uma variante geneticamente manipulada (“VISTA mAb 3c”) que não apresenta ligação prejudicada em pH ácido. A Figura 6F mostra um ensaio de conjugado anticorpo-fármaco comparando a potência do anticorpo anti-VISTA 3 (quadrados) e 3c (diamantes). A Figura 6G mostra um esquema do tráfego endossômico, com a reciclagem do VISTA a partir de e para a superfície celular através dos endossomos iniciais e reciclagem endossômica.

[012] As Figuras 7 A-F mostram como as bibliotecas variantes do anticorpo anti-VISTA foram projetadas e rastreadas para a obtenção de anticorpos seletivos em pH ácido. A Figura 7A mostra as substituições de aminoácidos que foram feitas na VH CDR 3 do clone de anticorpo anti-VISTA humano P1-061029 (abreviado como ‘029) para a criação de uma biblioteca de ‘029 para a varredura. Para melhorar potencialmente a ligação à região rica em histidina de VISTA em pH ácido, as bibliotecas permitiram substituições dos aminoácidos negativamente carregados, aspartato e glutamato, bem como histidina responsiva ao pH. X=H, D ou E. As sequências agrupadas foram removidas da síntese para evitar a introdução de vulnerabilidades. Um total de 647 sequências únicas de P1-061029 HCDR3 com 1-2 mutações foram sintetizadas. A Figura 7B mostra o procedimento pelo qual a biblioteca ‘029 é rastreada iterativamente e selecionada para variantes de anticorpo seletivo em pH ácido. R denota a rodada de seleção. A Figura 7C mostra dados representativos de gráficos de citometria de fluxo bidimensionais mostrando o conjunto de variantes após 9 ciclos de seleção. A ligação VISTA é representada graficamente no eixo y, e a expressão de anticorpo variante é representada graficamente no eixo x. São mostrados dados de ligação em várias concentrações de anticorpo e pH. A Figura 7D mostra um diagrama de P1- 061029 e os seus clones descendentes ligando-se ao VISTA humano em pH 6,0 e 7,4. A Figura 7E mostra um diagrama das constantes de dissociação (off-rates) de P1- 061029 e de seus clones descendentes para o VISTA humano em pH 6,0. A Figura 7F mostra dados de ligação por SPR dos anticorpos P1-068761, P1-068767 e P1-061029 ao VISTA humano em pH 6,0 e pH 7,4.

[013] As Figuras 8 A-F mostram ligação celular seletiva em pH ácido, bloqueio e atividade efetora dos anticorpos VISTA P1-068761 e P1-

068767. A Figura 8A e a Figura 8B mostram a intensidade de fluorescência média dos anticorpos seletivos em pH ácido P1-068761 (Fig. 8A) e P1-068767 (Fig. 8B) que se ligam a células Raji que expressam ectopicamente VISTA humano. As células foram coradas em aproximadamente pH 6,0 (círculos; curva mais alta na Fig. 8A), 6,1 (quadrados; terceira curva mais alta), 6,2 (triângulos; segunda curva mais alta), 6,4 (triângulos invertidos; quarta curva mais alta perto de pH 6,1 curva), 6,6 (losangos; quarta curva da parte inferior), 7,0 (círculos; terceira curva da parte inferior), 7,2 (quadrados; segunda curva da parte inferior) e 8,1 (triângulos vazios; curva inferior na Fig. 8A). A ligação foi detectada com um anticorpo secundário anti-IgG humana fluorescentemente conjugado. A Fig. 8 C mostra P1-068767 (círculos) e um anticorpo de controle não específico compatível com isotipo (triângulos) que se liga a células Raji que expressam ectopicamente VISTA humano a 3125 ng/mL em diferentes pH.

O “pH50”, o pH no qual 50% da ligação P1-068767 é perdida, é de aproximadamente 6,6. A Fig. 8D mostra as intensidades de fluorescência médias (MFIs) de um anticorpo controle não específico com correspondência isotípica (círculos preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0, respectivamente), mAb 2 anti-VISTA (“controle”, consulte a Fig. 6C, quadrados preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0, respectivamente), P1- 068761 (triângulos preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0, respectivamente) e P1-068767 (triângulos invertidos preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0, respectivamente) ligando-se a monócitos humanos. A ligação foi detectada por um anticorpo secundário IgG anti- humano fluorescentemente conjugado. A Fig. 8E mostra o bloqueio comparável da ligação de multímero VISTA recombinante às células T CD4 + humanas ativadas em pH 6,0 por P1-061029 (quadrados), P1-068761 (triângulos) e P1- 068767 (triângulos invertidos), enquanto um anticorpo de controle não direcionado para VISTA específico (círculos) não bloqueou a ligação ao VISTA. A Fig. 8F mostra a potência reduzida de P1-068761 (triângulos) e P1- 068767 (triângulos invertidos) na mediação da citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) em pH fisiológico. P1-061029 (quadrados), um anticorpo de controle positivo não específico para VISTA (círculos) e um anticorpo de controle negativo não específico para VISTA (diamantes) também são mostrados. A lise de células alvo específica por células NK como uma porcentagem do total de células alvo é plotada no eixo y e as concentrações de anticorpos são poltadas no eixo x. Também são mostradas regressões não lineares.

[014] Fig. 9 mostra a farmacocinética (PK) aumentada de anticorpos anti-VISTA seletivos para o pH ácido em macacos cinomolgos. A figura mostra as concentrações de anticorpos séricos ao longo do tempo em macacos cinomolgos tratados com anticorpo VISTA 2 (“controle”, círculos, vide a Fig. 6C), anticorpo VISTA 3 (“sensível ao pH ácido”, quadrados, vide a Fig.

6C), ou P1-068767 (triângulos).

[015] As Figuras 10 A e 10B mostram os efeitos de ligação de mutações nos anticorpos anti-VISTA seletivos para pH ácido '761 e '767. A Fig.

10A mostra dados da cinética de ligação de mutantes de reversão P1-068761 em pH 7,4, pH 6,7 e pH 6,0 e a localização de suas mutações de reversão em relação ao P1-068761. A Fig. 10B mostra dados de cinética de ligação de mutantes de reversão P1-068767 em pH 7,4, pH 6,7 e pH 6,0 e a localização de suas mutações de reversão em relação a P1-068767.

[016] As Figuras 11 A-C mostram a categorização (binning) de epítopo e mapeamento de vários anticorpos anti-VISTA. A Fig. 11A mostra a competição de epítopo VISTA para P1-068761 e P1-068767 em comparação com P1-061029 e anticorpo VISTA controle. A Fig. 11B e Fig 11C. mostrar representações dos epítopos de todos os resíduos para bloqueio do anticorpo hVISTA (Figura 11B.) como listado na Tabela 14 em comparação com um anticorpo hVISTA não bloqueador (mAb1; Fig. 11C). Os resíduos de aminoácidos 66(H) e 162(A) são indicados para denotar a orientação da molécula. Os resíduos de histidina estão em cinza e os resíduos de epítopo estão em preto.

[017] As Figuras 12 A-C mostram dados de focalização isoelétrica capilar (icIEF) para os seguintes: Fig. 12A: P1-061029, Fig. 12B: P1- 068761 e Fig. 12C: P1-068767. O ponto isoelétrico das espécies principais (pI principal), bem como os marcadores pI são indicados.

[018] As Figuras 13A e B mostram alinhamentos de regiões variáveis para clones descendentes '029 e '015. A Fig. 13A mostra o alinhamento das sequências de aminoácidos das regiões variáveis de '029 e seus clones descendentes. A Fig. 13B mostra o aumento das sequências de aminoácidos das regiões variáveis de '015 e seus clones descendentes.

[019] A Fig. 14 mostra um alinhamento de sequências VH de P1- 068761 com e sem substituições K16R e T84A. Os resíduos com sublinhado duplo mostram as posições 16 e 84 das regiões estruturais e as porções sombreadas mostram as CDRs.

[020] As Figuras 15A- O: camundongos C57BL6 tipo selvagem foram implantados com tumores MC38 e tratados com anticorpos de controle isotípico de não ligação (quadrados pretos), anticorpo de bloqueio VISTA de camundongo VISTA.10 (triângulos para cima), um anticorpo de bloqueio de

PD-1 de camundongo (quadrados), ou uma combinação de anticorpos bloqueadores VISTA e PD-1 (triângulos para baixo). Todos os anticorpos eram do isotipo IgG1-D265A (Fc-inerte) de camundongo. (Consulte as Figs. 15A-D.)

Os dados são representativos de três experimentos independentes.

As Figuras

15A-D mostram os volumes tumorais ao longo do tempo. n = 10 por grupo. “TF”

indica camundongos que rejeitaram seus tumores.

As Figs. 15E e F mostram a frequência de células T CD8+ intratumorais e células T CD4+ 7 dias após o início do tratamento. n = 5 por grupo.

ANOVA unilateral com comparações múltiplas de Dunnett, P = 0,0001. As Figs. 15G e H mostram resultados para camundongos individuais mostrados nas Figs. 15A-D.

Fig. 15I: camundongos nocaute para VISTA e camundongos da mesma ninhada tipo selvagem foram implantados com tumores MC38 e tratados com anticorpos de controle isotípico não ligantes (duas curvas superiores (0/7 TF e 0/5 TF, marcadas com círculos e triângulos para baixo) ou com um anticorpo bloqueador de PD-1 de camundongo (duas curvas inferiores de 0/5 TF e 5/8 TF, marcadas com quadrados e triângulos descendentes). O crescimento tumoral mediano e o número de camundongos que estavam livres de tumores (TF) no final do estudo vs. o número total de camundongos são mostrados ao lado de cada curva (por exemplo, 0/7 TF). Estes dados são representativos de dois experimentos independentes.

Barras de erro representam o intervalo interquartil.

As Figs. 15J-M mostram os volumes de tumor de camundongos com inserção (knock-in) de VISTA humano (KI) implantados com tumores

MC38 e tratados com anticorpos de controle de mesmo isotipo não ligantes

(Fig. 15J), um anticorpo bloqueador de PD-1 de camundongo (Fig. 15K), uma combinação de PD-1 de camundongo o anticorpo bloqueador e o anticorpo bloqueador VISTA humano não seletivo pelo pH, P1-061029 (Fig. 15L), ou uma combinação de anticorpo bloqueador de PD-1 de camundongo e o anticorpo de bloqueio VISTA humano seletivo para pH ácido, P1-068767 (Fig. 15M). Todos os anticorpos eram do isotipo IgG1-D265A de camundongo. São mostrados os volumes tumorais ao longo do tempo. n = 5-8 por grupo. Os dados são representativos de três experimentos independentes. A Figura 15N mostra VISTA KI humano e concentrações de anticorpos séricos de camundongo de tipo selvagem (WT) após injeção intravenosa de 5 mg/kg de P1-061029 (WT, triângulos para baixo; KI, quadrados) ou P1-068767 (WT, triângulos para cima; KI, diamantes). Os tempos médios de permanência (MRT) no soro calculados para P1-061029 e P1-068767 em camundongos KI são estimados em 4,1 e 71 horas, respectivamente. n = 4 camundongos KI e 1-2 camundongos WT por anticorpo. Esses dados são representativos de um único experimento. A Figura 15O mostra as concentrações séricas de anticorpos em macacos cinomolgos após injeção intravenosa de 5 mg/kg de VISTA.4 (círculos) ou P1-068767 (quadrados). Os tempos médios de permanência (MRT) séricos calculados para VISTA.4 e P1-061029 são estimados em 7,6 horas e 717 horas, respectivamente. n = 1 macaco por anticorpo. Esses dados são representativos de um único experimento. As barras de erro representam o erro padrão da média quando não indicado de outra forma.

[021] As Figuras 16A-C mostram histogramas representativos da expressão intratumoral de células T CD8 + de PD-1 (Fig. 16A), LAG-3 (Fig. 16B) e TIM-3 (Fig. 16C) 7 dias após o início do tratamento. As barras de erro representam o erro padrão da média.

[022] As Figuras 17 A-C mostram que VISTA liga-se ao PSGL- 1 em pH ácido e que esta interação é bloqueada pelos anticorpos VISTA P1 - 061029, P1-068761, P1-068767 e VISTA.4. A Fig. 17A mostra sensogramas de ligação BLI para ligação de P-Selectina-Fc e VISTA-Fc ao PSGL1 capturado em pH 6,0 e pH 7,4. A Fig. 17 B é um histograma que mostra que os anticorpos P1-061029, P1-068761, P1-068767 e VISTA.4 inibem a ligação de PSGL-1 ao hVISTA. A Fig. 17C mostra que o anticorpo bloqueia a ligação VISTA-Fc em células CHO-PSGL-1 pelo anticorpo VISTA.4 (triângulos para cima) e pelo anticorpo anti-PSGL-1 KPL-1 (círculos). Estes dados são representativos de dois experimentos independentes. As barras de erro representam o erro padrão da média.

[023] As Figuras 18 A-E mostra representações da estrutura cocristalina de P1-068767 Fab e hVISTA, ou (na Fig. 18E) anticorpo não bloqueador VISTA.5 e hVISTA. O domínio IgV VISTA apresenta uma extensão incomum rica em histidina de sua folha ß central. O domínio VISTA IgV foi cocristalizado com o fragmento P1-068767 de ligação ao antígeno (Fab). A estrutura cristalina do complexo VISTA + P1-068767 foi determinada na resolução de 1,6 Å. A Figura 18 A mostra a estrutura cocristalina do domínio IgV VISTA : P1-068767 Fab. A Figura 18A mostra a estrutura geral do domínio VISTA IgV em complexo com o Fab P1-068767 (cadeia pesada, cinza escuro; cadeia leve, cinza claro). A Figura 18B most ra uma sobreposição dos domínios VISTA e PD-L1 IgV. Os resíduos de histidina do VISTA estão representados em bastão. A Figura 18B mostra que o domínio IgV de VISTA possui uma extensão incomum de folha ß rica em histidina. A Figura 18C mostra a superfície molecular do epítopo P1- 068767 (superfície eletrostática cinza claro) conforme revelado pela estrutura cristalina do VISTA + P1-068767. A Figura 18 C mostra que os anticorpos bloqueadores ligam-se à extensão de folha ß rica em histidina do VISTA. A Figura 18D mostra uma vista ampliada da interface entre VISTA (desenho de fita cinza, com resíduos de epítopo H121, H122 e H123 representados em representação em bastão) e P1-068767 (representado como uma superfície eletrostática com seus resíduos E100 e D102 em representação em bastão). A Figura 18D mostra que P1-068767 seletivo para pH ácido envolve as histidinas VISTA com resíduos ácidos. A Figura 18E mostra que o anticorpo não bloqueador VISTA.5 liga-se a uma região diferente de hVISTA de P1-068767.

[024] Fig. 19 mostra o epítopo de VISTA.4 conforme determinado por MS-HDX (traço MS).

[025] A Figura 20 mostra a localização do epítopo de VISTA.4 na sequência de aminoácidos de hVISTA com base nos dados da Fig. 19.

Os resíduos 57-68, 86-97 e 148-165, também destacados na Fig. 19, são representados em texto em cinza mais claro e sublinhados na Fig. 20.

[026] As Figuras 21A e 21B mostram a ligação do multímero VISTA às células T CD4 + humanas ativadas em pH 6,0 na presença dos anticorpos VISTA.4 (triângulos), VISTA.5 (quadrados) e um anticorpo que não se liga ao VISTA (controle, círculos). A Figura 21B mostra a eficiência de bloqueio de cada anticorpo em relação às células T não bloqueadas.

ANOVA unilateral com comparações múltiplas de Dunnett, *** P = 0,001.

Esses dados são representativos de mais de quatro experimentos independentes. As barras de erro representam o erro padrão da média.

[027] A Figura 22 mostra que os anticorpos que bloqueiam a ligação ao VISTA em pH ácido são funcionais. Os efeitos do anticorpo de bloqueio VISTA.4 (quadrados), o anticorpo de não bloqueio VISTA.5 (triângulos) e um anticorpo que não se liga ao VISTA (controle, círculos) na proliferação (Figura 22A) e produção de interferon gama (Figura 22B) de células T CD4+ humanas cocultivadas com células 293T projetadas para expressarem VISTA e um agonista de TCR (293T-OKT3-VISTA). ANOVA unilateral com comparações múltiplas de Dunnett, * P = 0,05. Esses dados são representativos de mais de quatro experimentos independentes.

[028] A Figura 23 mostra os efeitos do bloqueio de VISTA.4 na ativação de células T Jurkat (por medição da inibição de NF-kB) após a cocultura com células 293T-OKT3-VISTA em diferentes pH. Esses dados são representativos de um composto de três experimentos independentes.

[029] As Figuras 24 mostram os efeitos de pH na supressão de VISTA de células T CD4 + humanas. As células foram estimuladas com o pH indicado com placa revestida com OKT3 e VISTA-Fc na presença de VISTA.4 (triângulos voltados para cima), VISTA.5 (triângulos voltados para baixo), ou um anticorpo que não se liga ao VISTA (controle de anticorpo, quadrados). As células estimuladas com OKT3 placa revestida e IgG de controle (controle VISTA, círculos pretos) ou sem OKT3 (sem OKT3, diamante cinza) também são mostradas. Os dados são representativos de três experimentos independentes.

[030] As Figuras 25 A-E mostram que a especificidade de ligação VISTA : PSGL-1 é determinada por resíduos de histidina e sulfotirosina. Como mostrado na Fig. 25A, as proteínas recombinantes PSGL-1 19-mer-Fc humanas foram produzidas em células com ou sem decoração sialil lewis X (SLX+ e SLX- respectivamente). As grandezas de ligação BLI em pH 6,0 (branco) e 7,4 (preto) são mostrados para VISTA-Fc e P-selectina-Fc tal como indicado. Os dados são representativos de um único experimento independente. Tal como mostrado na Fig. 25B, os glicopeptídeos PSGL-1 19-mer-Fc humanos produzidos com decoração sialil lewisX foram separados em frações com mais de 90% de sulfatação de tirosina (rico em sY) e menos de 1% de sulfatação de tirosina (sY- pobre).

As grandezas de ligação BLI em pH 6,0 (branco) e 7,4 (preto) são mostrados para VISTA-Fc e P-selectina-Fc tal como indicado. Esses dados são representativos de um único experimento independente. Conforme fornecido nas Figs. 25C-25D, as proteínas recombinantes humanas VISTA-Fc foram produzidas com os resíduos de histidina nas posições 153-155 deixados intactos (WT VISTA) ou substituídos por alanina (H2A mutante), ácido aspártico (H2D mutante) ou arginina (H2R mutante). A Fig. 25C mostra as magnitudes de ligação de BLI para proteínas VISTA-Fc de tipo selvagem e mutantes que se ligam ao PSGL-1 capturado em pH 6,0 e 7,4. Esses dados são representativos de um único experimento. A Fig. 25D mostra a ligação VISTA-Fc às células CHO-PSGL-1 em pH 6,0 do WT VISTA (círculos), H2A mutante (quadrados), H2D mutante (triângulos para baixo) e H2R mutante (cinza triângulos para cima), bem como de um controle (diamantes). Estes dados são representativos de dois experimentos independentes. A Fig. 25E mostra um modelo computacional do glicopeptídeo PSGL-1 de 19-mer (topo) em complexo com a interface ligante rica em histidina do VISTA (fitas cinza, parte inferior). Os resíduos do VISTA H98, H100, H153 e H154 estão marcados. Os resíduos Y46, Y48, E56, T57 e Y58 de PSGL-1 também estão marcados.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO DEFINIÇÕES

[031] No presente pedido, o uso de “ou” significa “e/ou”, a menos que indicado de outra forma. No contexto de uma reivindicação múltipla dependente, o uso de “ou” refere-se novamente a mais de uma reivindicação anterior independente ou dependente, somente na alternativa. Os termos “compreendendo”, “incluindo” e “tendo” podem ser usados aqui de forma intercambiável. De acordo com a presente invenção, uma molécula “isolada” é uma molécula que foi removida do seu meio natural. Como tal, o termo “ isolado” se não reflete necessariamente a extensão a qual a molécula tenha sido purificada.

[032] O termo “polipeptídeo” refere-se a um polímero de resíduos de aminoácidos, e não é limitado a um comprimento mínimo. Uma “proteína” pode compreender um ou mais polipeptídeos. Tais polímeros de resíduos de aminoácidos podem conter resíduos de aminoácidos naturais ou não naturais e incluem, mas não estão limitados a, peptídeos, oligopeptídeos, dímeros, trímeros e multímeros de resíduos de aminoácidos. Tanto as proteínas de comprimento total quanto os seus fragmentos são abrangidos pela definição.

Os termos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e similares. Além disso, para os propósitos da presente invenção, um “polipeptídeo” ou “proteína” refere-se a um polipeptídeo ou proteína, respectivamente, que inclui modificações, tais como deleções, adições e substituições (geralmente de natureza conservadora), até a sequência nativa, desde que a proteína mantenha a atividade desejada. Essas modificações podem ser deliberadas, como por meio de mutagênese direcionada ao local (sítio-dirigida), ou podem ser acidentais, tal como através de mutações de hospedeiros que produzem proteínas ou erros devido à amplificação por PCR. Uma “proteína” pode compreender um ou mais polipeptídeos.

[033] “VISTA” é uma abreviatura do supressor contendo domínio V de imunoglobulina de ativação de células T, que é um membro da família B7 de reguladores do ponto de verificação imunológico. O VISTA também é conhecido como homólogo de PD-1 (PD1H), B7-H5, C10orf54, diferenciação de ESC-1 (Dies-1), precursor do receptor Gi24 de plaquetas e domínio de morte 1α (DD1α). O termo “hVISTA” ou “huVISTA” na presente invenção se refere à proteína VISTA humana. A sequência de aminoácidos do hVISTA, incluindo o seu peptídeo sinal é fornecida na SEQ ID NO: 1, enquanto que a sequência sem o peptídeo sinal é fornecida na SEQ ID NO: 2. (Veja a Tabela de Sequências abaixo). O domínio extracelular ou “ECD” de VISTA ou “VISTA- ECD” se refere à porção da proteína VISTA que está localizada no espaço extracelular, que, no caso do hVISTA, compreende o aminoácidos 1-162 de SEQ ID NO: 2. (Vide também a Figura 1B). A porção “domínio IgV” de hVISTA compreende os resíduos 5-135 da SEQ ID NO: 2.

[034] O termo “peptídeo líder” ou “sequência líder” refere-se a uma sequência de resíduos de aminoácidos localizados na extremidade N-

terminal de um polipeptídeo que facilita a secreção de um polipeptídeo a partir de uma célula de mamífero. Uma sequência líder pode ser clivada após a exportação do polipeptídeo a partir da célula de mamífero, formando uma proteína madura. As sequências líderes podem ser naturais ou sintéticas, e podem ser heterólogas ou homólogas à proteína à qual estão ligadas.

[035] O termo “anticorpo” ou “Ab” na presente invenção é utilizado no sentido mais amplo e abrange diversas estruturas de anticorpo, incluindo, mas não se limitando a anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpos, desde que eles exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada. Conforme utilizado na presente invenção, o termo refere- se a uma molécula compreendendo pelo menos a região determinante da complementaridade (CDR) 1, CDR2 e CDR3 de uma cadeia pesada e pelo menos a CDR1, CDR2 e CDR3 de uma cadeia leve, em que a molécula é capaz de se ligar ao antígeno. O termo anticorpo inclui, mas não está limitado a, fragmentos que são capazes de se ligar ao antígeno, tais como Fv, Fv de cadeia única (scFv), Fab, Fab' e (Fab')2. O termo anticorpo inclui também, mas não está limitado a, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, e anticorpos de várias espécies, tais como rato, macaco cinomolgo, etc.

[036] O termo “cadeia pesada” ou “HC” refere-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia pesada, com ou sem uma sequência líder. Em alguns exemplos de realização, uma cadeia pesada compreende pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia pesada. Os termos “cadeia pesada completa” ou “cadeia pesada de comprimento completo” utilizados na presente invenção referem-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia pesada, com ou sem uma sequência líder e com ou sem uma lisina no C terminal (K).

[037] O termo “região variável da cadeia pesada” ou “VH” se refere a uma região que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada (CDR) 1, região de quadro (FR) 2, CDR2, FR3, e CDR 3 da cadeia pesada. Em alguns exemplos de realização, uma região variável de cadeia pesada também compreende pelo menos uma porção FR1 e/ou pelo menos uma porção FR4. Como especificado abaixo, em algumas formas de realização, uma CDR1 da cadeia pesada compreende os resíduos 26-35 de uma VH de SEQ ID NO daqui; uma CDR2 de cadeia pesada compreende os resíduos 50-66 de uma VH de SEQ ID NO daqui, e uma CDR3 de cadeia pesada compreende os resíduos 99-110 de uma VH de SEQ ID NO da presente invenção. Em outros exemplos de realização, se especificado, uma CDR1 da cadeia pesada corresponde aos resíduos de Kabat 31 a 35; uma CDR2 da cadeia pesada corresponde aos resíduos de Kabat 50 a 65; e uma CDR3 de cadeia pesada corresponde aos resíduos de Kabat 95 a 102. Vide, por exemplo, Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 e 1991, NIH, Bethesda, Md.). Em alguns exemplos de realização, as CDRs de cadeia pesada são como especificadas na presente invenção, tal como na tabela de sequência abaixo ou na Tabela 2.

[038] O termo “cadeia leve” ou “LC” conforme utilizado na presente invenção diz respeito a um polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia leve, com ou sem uma sequência líder. Em alguns exemplos de realização, uma cadeia leve compreende pelo menos uma porção de uma região constante de cadeia leve. Os termos “cadeia leve completa” ou “cadeia leve de comprimento total” referem-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia leve, com ou sem uma sequência líder.

[039] O termo “região variável da cadeia leve” ou “VL” se refere a uma região compreendendo uma cadeia leve CDR1, FR2, HVR2, FR3, e HVR3. Em alguns exemplos de realização, uma região variável de cadeia leve também compreende uma porção FR1 e/ou FR4. Como especificado abaixo, em alguns exemplos de realização, uma CDR1 de cadeia leve compreende os resíduos 24-35 de uma VL DE SEQ ID NO daqui; uma CDR2 da cadeia leve compreende os resíduos 51-57 de uma VL DE SEQ ID NO daqui, e uma CDR3 da cadeia leve compreende os resíduos 90-98 de uma VL de SEQ ID NO da presente invenção. Em outros exemplos de realização, se especificado, uma CDR1 da cadeia leve corresponde aos resíduos de Kabat 24 a 34; uma cadeia leve CDR2 corresponde aos resíduos Kabat 50 a 56; e uma cadeia leve de CDR3 corresponde aos resíduos de Kabat 89 a 97. Vide, por exemplo, Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 e 1991, NIH, Bethesda, Md.). Em alguns exemplos de realização, as CDRs de cadeia leve são como aqui especificadas, tal como na tabela de sequências.

[040] Um “anticorpo quimérico” se refere a um anticorpo no qual uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie particular, enquanto o restante da cadeia pesada e/ou leve é derivado de uma fonte ou espécie diferente. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo quimérico se refere a um anticorpo compreendendo pelo menos uma região variável de uma primeira espécie (como rato, rato, macaco cinomolgo, etc) e pelo menos uma região constante de uma segunda espécie (como humano, macaco cinomolgo, etc). Em alguns exemplos de realização, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de camundongo e pelo menos uma região constante humana. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de macaco- cinomolgo e pelo menos uma região constante humana. Em alguns exemplos de realização, todas as regiões variáveis de um anticorpo quimérico são de uma primeira espécie e todas as regiões constantes do anticorpo quimérico são de uma segunda espécie.

[041] Um “anticorpo humanizado” refere-se a um anticorpo no qual pelo menos um aminoácido em uma região do arcabouço (framework) de uma região variável não humana foi substituído pelo aminoácido correspondente de uma região variável humana. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo humanizado compreende pelo menos uma região constante humana ou um fragmento desta. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo humanizado é um Fab, um scFv, um (Fab')2, etc.

[042] Um “anticorpo humano” tal como utilizado na presente invenção refere-se a anticorpos produzidos em seres humanos, anticorpos produzidos em animais não humanos que compreendem genes de imunoglobulina humana, tal como o XenoMouse ®, e anticorpos selecionados utilizando métodos in vitro, tal como exibição por fagos, em que o repertório de anticorpos é baseado em sequências de imunoglobulina humana.

[043] Um “anticorpo VISTA” ou “anticorpo anti-VISTA”, como utilizado na presente invenção, se refere a um anticorpo que se liga especificamente ao VISTA em, pelo menos, algumas condições, tais como pH ácido. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo pode ser um “anticorpo huVISTA” ou um “anticorpo anti-huVISTA”, que indica que se liga especificamente à proteína VISTA humana sob pelo menos algumas condições, como pH ácido. Um anticorpo VISTA que se liga especificamente ao domínio extracelular (ECD) do VISTA, por exemplo, pode ser denominado “anticorpo VISTA-ECD”.

[044] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo no presente documento pode conter uma ou mais “substituições conservadoras” em comparação com uma sequência particular especificada. “Substituições conservativas de aminoácidos” no presente documento referem-se a substituições de um resíduo de aminoácido por um resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral semelhante. As famílias de resíduos de aminoácidos com cadeias laterais semelhantes incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina).

Em certos exemplos de realização, um resíduo de aminoácido não essencial previsto em um anticorpo da presente invenção é substituído por outro resíduo de aminoácido da mesma família de cadeia lateral (por exemplo, básico, ácido, ramificado em beta, aromático, polar não carregado). Os métodos de identificação de substituições conservadoras de aminoácidos e nucleotídeos que não eliminam a ligação ao antígeno for desritos, por exemplo, em Brummel et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12 (10):879-884 (1999); e Burks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412- -417 (1997)).

[045] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo pode ligar-se com maior afinidade ao VISTA em pH ácido do que em pH neutro e/ou fisiológico. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo pode ligar-se com maior afinidade ao VISTA em pH ácido e pode ligar-se apenas de forma insignificante ou não especificamente em pH neutro e/ou fisiológico.

[046] “KD” ou “constante de dissociação” para ligação de um anticorpo a uma proteína, por exemplo, uma proteína VISTA-ECD é uma medida da afinidade ou ligação específica do anticorpo à proteína, por exemplo, proteína VISTA-ECD. Uma KD baixa indica uma ligação ou afinidade melhorada em relação a uma KD mais alta. A KD é composta de uma razão entre uma taxa de dissocição “off-rate” ou koff ou kd e uma taxa de associação “on-rate” ou kon ou ka para o anticorpo e o polipeptídeo. A off-rate e on-rate são as taxas em que os dois parceiros de ligação se associam e se dissociam no sistema. Assim, uma off-rate mais lenta, em que a on-rate permanece aproximadamente constante, leva a uma maior afinidade global e, assim, uma menor KD. Tal como utilizado na presente invenção, uma koff de um valor particular, “ou inferior” indica que a koff ou “off-rate” é como especificada ou é mais lenta do que a velocidade especificada.

[047] Os termos “ligação específica” ou “se liga especificamente” ou termos semelhantes significam que a KD para a ligação de dois polipeptídeos, tais como um anticorpo e o seu polipeptídeo alvo, é menos do que seria o caso, entre dois polipeptídeos aleatórios existentes sob a mesma condições. Em outras palavras, a KD é menor que aquela devido à agregação inespecífica de polipeptídeos no sistema.

[048] Em alguns exemplos de realização, os anticorpos ligam-se especificamente a uma proteína VISTA-ECD em um intervalo particular de pH.

Um pH “ácido” geralmente refere-se a um pH menor que 7,0, um pH “básico” geralmente refere-se a um pH maior que 7,0 e um pH “neutro” geralmente refere-se a um pH de aproximadamente 7,0. Um “pH fisiológico” refere-se a um pH em condições fisiológicas normais (ou seja, não canceroso), por exemplo, de 7,35 a 7,45, ou de 7,3 a 7,4, tal como de cerca de 7,4. Frases como “ligação em condições ácidas” ou “ ligação em condições fisiológicas” e construções similares utilizadas na presente invenção, usadas no contexto de ligação de duas moléculas como VISTA e um parceiro de ligação ao VISTA ou VISTA e uma célula T, referem-se à ligação em pH ácido e ligação em pH fisiológico, respectivamente.

[049] Quando se refere a um anticorpo que “bloqueia a ligação de” ou “inibe a ligação de” um ligante (ou receptor) ou um anticorpo de competição a um receptor (ou ligante) sozinho ou em uma célula, a ligação é bloqueada, se houver uma redução total isto é estatisticamente significante comparado a um controle, por exemplo, uma diminuição geral de 50% ou mais, por exemplo, uma diminuição geral de 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou maior.

Um “anticorpo bloqueador anti-VISTA”, por exemplo, é aquele que pode bloquear a ligação de VISTA ao PSGL-1 ou outro ligante ou receptor VISTA ou proteoglicanos de sulfato de heparano sob pelo menos algumas condições como em pH ácido.

[050] Um “modelo de tumor”, tal como utilizado no presente, se refere a um ensaio pré-clínico in vivo, o qual pode ser utilizado para estudar a atividade biológica de um anticorpo VISTA-ECD, e inclui sistemas de ensaio em camundongos de tumores xenoenxertados ou nativos. Em alguns casos, um modelo de tumor pode permitir o rastreamento do tamanho do tumor ou crescimento após o tratamento com o anticorpo, e/ou rastreamento da presença de células imunes no tumor, tais como tipos específicos de células T ou células NK, a fim de determinar se um anticorpo desencadeou ou intensificou uma resposta imune.

[051] O termo “agente imunoestimulante”, como usado na presente invenção, se refere a uma molécula que estimula o sistema imunológico, agindo como um agonista de uma molécula imunoestimulatória, incluindo uma molécula coestimuladora, ou atuando como um antagonista de uma molécula inibitória imune, incluindo uma molécula coinibidora. A molécula imunoestimuladora ou molécula inibitória imunológica pode ser um regulador do ponto controle imunológico, tal como VISTA ou outro membro da família B7 ou outra molécula, como descrito mais abaixo. Um agente imunoestimulante pode ser um agente biológico, tal como um anticorpo ou fragmento de anticorpo, outra proteína ou vacina, ou pode ser um fármaco de molécula pequena. Uma “molécula imunoestimuladora” inclui um receptor ou ligante que atua para aumentar, estimular, induzir ou “ativar” uma resposta imune. As moléculas imunoestimuladoras, como aqui definidas, incluem moléculas coestimuladoras. Uma “molécula inibitória imunológica” inclui um receptor ou ligante que atua para reduzir, inibir, suprimir ou “desativar” uma resposta imune. Moléculas inibitórias imunes como aqui definidas incluem moléculas coinibitórias. Tais moléculas estimuladoras imunológicas e inibidoras imunológicas podem ser, por exemplo, receptores ou ligantes encontrados em células do sistema imune, tais como células T, ou encontrados em células envolvidas em imunidade inata, tal como células NK.

[052] “Porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos” e “homologia” em relação a um peptídeo, polipeptídeo ou sequência de anticorpos são definidos como a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos no peptídeo específico ou sequência polipeptídica, depois de alinhar as sequências e introduzir intervalos, se necessário, para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não considerar quaisquer substituições conservativas como parte da identidade da sequência. O alinhamento para propósitos da determinação do percentual de identidade de sequências de aminoácidos pode ser atingido de várias formas que se encontram dentro do conhecimento da técnica, tais como o uso de softwares de computador disponíveis ao público, tal como os softwares BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 ou Megalign™ (DNASTAR). Os técnicos no assunto podem determinar parâmetros apropriados para medir o alinhamento, incluindo qualquer algoritmo necessário para atingir o alinhamento máximo ao longo do comprimento total das seqüências que estão sendo comparadas.

[053] Os termos “desencadear” ou “melhorar” se referem a uma iniciação ou aumento de qualquer evento (como ligação de ligante de proteína) ou a uma iniciação ou aumento de qualquer atividade biológica (como uma resposta imune) ou característica fenotípica ou ao início ou aumento na incidência, grau ou probabilidade dessa atividade ou característica. Para “desencadear” ou “melhorar” é começar ou aumentar uma atividade, função e/ou quantidade, em comparação com uma referência. Não é necessário que o acionamento ou aprimoramento seja completo. Por exemplo, em certos exemplos de realização, por “melhorar” pretende-se significar a capacidade para provocar um aumento total de 20% ou mais. Em uma outro exemplo de realização, por “melhorar” entende-se a capacidade de causar um aumento global de 50% ou maior. Em outro exemplo de realização, por “melhorar” entende-se a capacidade de causar um aumento global de 75%, 85%, 90%, 95% ou mais.

[054] Os termos “inibição” ou “inibir” se referem mais geralmente a uma diminuição ou cessação de qualquer evento (como a ligação do ligante proteico) ou a uma diminuição ou cessação de qualquer característica fenotípica ou à diminuição ou cessação da incidência, grau ou probabilidade dessa característica. Por “reduzir” ou “inibir” é diminuir, reduzir ou interromper uma atividade, função e/ou quantidade em comparação com uma referência.

Não é necessário que a inibição ou redução seja completa. Por exemplo, em certos exemplos de realização, por “reduzir” ou “inibir” entende-se a capacidade de causar uma diminuição global de 20% ou mais. Em outro exemplo de realização, por “reduzir” ou “inibir” entende-se a capacidade de causar um decréscimo global de 50% ou mais. Em outro exemplo de realização adicional, por “reduzir” ou “inibir” entende-se a capacidade de causar um decréscimo global de 75%, 85%, 90%, 95% ou mais.

[055] “Tratamento”, tal como aqui utilizado, abrange qualquer administração ou aplicação de um terapêutico para doença em um humano e inclui a inibição da doença ou progressão da doença ou um ou mais sintomas da doença, inibindo ou retardando a doença ou a sua progressão ou um ou mais dos seus sintomas, interrompendo o seu desenvolvimento, parcialmente ou totalmente aliviando a doença ou um ou mais dos seus sintomas, ou prevenir a recorrência de um ou mais sintomas da doença.

[056] Os termos “sujeito” e “paciente” são usados aqui de forma alternada para se referirem a um ser humano.

[057] O termo “quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade eficaz de um fármaco para o tratamento de uma doença ou distúrbio em um sujeito, tal como para aliviar parcial ou totalmente um ou mais sintomas. Em alguns exemplos de realização, uma quantidade eficaz se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar o resultado terapêutico ou profilático desejado.

[058] O termo “câncer” é usado no presente pedido para se referir a um grupo de células que exibem níveis anormalmente altos de proliferação e crescimento. Um câncer pode ser benigno (também referido como um tumor benigno), pré-maligno ou maligno. As células cancerosas podem ser células cancerosas sólidas ou células cancerosas leucêmicas. O termo “crescimento tumoral” é usado no presente pedido para se referir a proliferação ou crescimento por uma célula ou células que compreendem um câncer que leva a um correspondente aumento no tamanho ou extensão do câncer.

[059] Exemplos de câncer aplicáveis a métodos de tratamento incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Exemplos não limitantes mais específicos desses cânceres incluem câncer de células escamosas, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de glândula pituitária, câncer esofágico, astrocitoma, sarcoma de tecido mole, câncer de pulmão de células não pequenas (incluindo câncer de pulmão de células não pequenas escamosas), adenocarcinoma de pulmão, carcinoma escamoso de pulmão, câncer de peritônio, câncer hepatocelular, câncer gastrointestinal, câncer pancreático, câncer de glioblastoma cervical, câncer ovariano, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer colorretal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândula salivar, câncer de rim, carcinoma de célula renal, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer de vulva, câncer de tireoide, carcinoma hepático, câncer de cérebro, câncer de endométrio, câncer de testículo, colangiocarcinoma, carcinoma de vesícula biliar, câncer gástrico, melanoma e vários tipos de câncer de cabeça e pescoço (incluindo carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço).

[060] A administração “em combinação com” um ou mais agente(s) terapêutico(s) adicional(ais) inclui a administração simultânea (concomitante) e consecutiva (sequêncial) em qualquer ordem.

[061] Um “veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um material de preenchimento, diluente, material de encapsulamento, auxiliar de formulação ou auxiliar de enchimento não tóxico, convencional na técnica para uso com um agente terapêutico que em conjunto compreende uma “composição farmacêutica” para a administração a um sujeito. Um veículo farmaceuticamente aceitável não é tóxico para os receptores nas dosagens e concentrações utilizadas e é compatível com outros ingredientes da formulação. O veículo farmaceuticamente aceitável é adequado para a formulação empregada. Por exemplo, se o agente terapêutico for administrado por via oral, o veículo pode ser uma cápsula de gel. Se o agente terapêutico for administrado por via subcutânea, o veículo idealmente não é irritável para a pele e não causa reação no local da injeção.

[062] Um “agente quimioterápico” é um composto químico útil no tratamento do câncer. Exemplos de agentes quimioterápicos que podem ser administrados nos métodos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, agentes alquilantes, tais como tiotepa e ciclofosfamida Cytoxan ®;

sulfonatos de alquila, tais como busulfan, improsulfan e piposulfan; aziridinas,

tais como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etilenoiminas e metilamelaminas, incluindo altretamina, trietilenomelamina,

trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilolomelamina;

acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacinona); camptotecina

(incluindo o análogo sintético topotecan; briostatina; calistatina; CC-1065

(incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina);

criptoficinas (particularmente a criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina;

duocarmicina (incluindo o análogo sintético, KW-2189 e CB1-TM1);

eleuterobina; pancratistatina; sarcodictiina; espongistatina; mostardas de nitrogênio, tais como clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina,

ifosfamida, mecloretamina, cloridrato óxido de mecloretamina, melfalan,

novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila;

nitrossuréias, tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina,

nimustina, ranimustina; antibióticos, tais como os antibióticos de enedina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gama1I e caliquemicina omegaI1; vide, por exemplo, Agnew, Chem.

Intl.

Ed.

Engl., 33:

183-186 (1994); dinemicina, incluindo dinemicina A; biofosfonados, tais como clodronato, esperamicina; bem como neocarzinostatina cromóforo e cromóforos antibióticos de enedina cromoproteína relacionados), aclacinomisinas,

actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicin, carabicina,

carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina,

detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina doxorubicina (incluindo

Adriamycin®, morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-

doxorubicina e desoxidoxorubicina), epirubicina, esorubicina, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas como, por exemplo, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina,

puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina,

tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabólitos, tais como metotrexato e 5-fluorouracil (5-FU); análogos de ácido fólico, tais como denopterin, metotrexato, pteropterin, trimetrexato; análogos de purina, tais como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina, tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina,

dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos, tais como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano,

testolactona; anti-adrenais, tais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano;

reabastecedor de ácido fólico, tal como ácido frolínico; aceglatona;

aldofosfamido glicosídeo; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucil;

bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina;

acetato de eliptínio; epotilona; etoglucídeo; nitrato de gálio; hidroxiuréia;

lentinan; lonidamina; maitansinóides, tais como maitansina e ansamitocinas;

mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitacrina; pentostatina; fenamet;

pirarubicina; ácido podofilínico; 2-etilidrazida; procarbazina; PSK® complexo polissacarídico (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxin;

sizofiran; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2’0,2”-

triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A,

roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina;

mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinosida (“Ara-C”);

ciclofosfamida; tiotepa; taxóides, tais como, paclitaxel Taxol® (Bristol-Myers

Squibb Oncology, Princeton, N.J.), formulação de nanopartículas de paclitaxel construidas em albumina Abraxane® (American Pharmaceutical Partners,

Schaumberg, Illinois), e Taxotere® doxetaxel (Rhône-Poulenc Rorer, Antony,

França); clorambucil, Gemzar® gencitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina tais como cisplatina, oxilplatina e carboplatina;

vinblastina; platina; etoposida (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina;

Navelbine® vinorelbine; novantrona; teniposide, edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda, ibandronato; irinotecano (Camptosar, CPT-11) (incluindo o regime de tratamento de irinotecano com 5-FU e leucovorina), inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); ácido retinóico; capecitabina; combretastatin; leucovorina (LV); oxaliplatina, incluindo o regime de tratamento com oxaliplatina (FOLFOX); inibidores da PKC-alfa, Raf, H-Ras, EGFR (por exemplo, o erlotinibe (por exemplo, Tarceva ®) e VEGF-A que reduzem a proliferação celular e os sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de quaisquer dos acima.

[063] Outros agentes quimioterápicos exemplares não limitantes que podem ser administrados em métodos da presente invenção incluem agentes anti-hormonais que agem regulando ou inibindo a ação hormonal tal como antiestrógenos e os moduladores seletivos do receptor do estrógeno (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo o tamoxifeno Nolvadex®, raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, e toremifeno Fareston®; inibidores da aromatase que inibem enzima aromatase, que regula a produção do estrógeno nas glândulas adrenais como, por exemplo, 45-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol Megase®, exemestane Aromasin®, formestanie, fadrozole, vorozole Rivisor®, letrozole Femara®, e anastrozole Arimidex® e anti-andrógenos, tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida e goserelina, bem como troxacitabina um nucleosídeo 1,3-dioxolano análogo a citosina; oligonucleotídeos antisense, particularmente aqueles que inibem a expressão dos genes nas vias de sinalização envolvida na proliferação celular aberrante, como, por exemplo, PKC-alfa, Raf e H-Ras; ribozimas, tal como um inibidor da expressão do VEGF (por exemplo, ribozima Angiozyme ®) e um inibidor da expressão de HER2, vacinas como as vacinas para terapia gênica, por exemplo, vacina Allovectin®, vacina Leuvectin® e vacina Vaxid®; Proleukin® rIL-

2; Lurtotecan®; inibidor da topoisomerase 1; Abarelix® rmRH; Vinorelbina e Esperamicinas (vide Patente US 4.675.187), e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos compostos acima.

[064] Um “agente antiangiogênese” ou “inibidor de angiogênese” refere-se a uma substância de peso molecular pequeno, um polinucleotídeo (incluindo, por exemplo, um RNA inibidor (RNAi ou RNAsi)), um polipeptídeo, uma proteína isolada, uma proteína recombinante, um anticorpo, proteínas conjugadas ou proteínas de fusão dos mesmos, que inibem a angiogênese, vasculogênese ou permeabilidade vascular indesejável, tanto diretamente como indiretamente. Deve-se entender que os agentes antiangiogênese incluem aqueles agentes que ligam e bloqueiam a atividade do fator angiogênico ou seu receptor. Por exemplo, um agente anti-angiogênese, que pode ser administrado em métodos da presente invenção pode incluir um anticorpo ou outro antagonista de um agente angiogênico, por exemplo, anticorpos para VEGF-A (por exemplo, bevacizumabe (Avastin®)) ou para o receptor VEGF-A (por exemplo, receptor KDR ou receptor Flt-1), inibidores de anti-PDGFR como Gleevec® (mesilato de Imatinibe), moléculas pequenas que bloqueiam sinalização do receptor VEGF (por exemplo, PTK787/ZK2284, SU6668, Sutent®/SU11248 (malato de sunitinibe), AMG706, ou os descritos, por exemplo, no pedido de patente internacional documento WO 2004/113304).

Agentes antiangiogênese também incluem inibidores da angiogênese nativos, por exemplo, angiostatina, endostatina, etc. Vide, por exemplo, Klagsbrun e D’Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit e Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179 (por exemplo, a Tabela 3 listando terapias antiangiogênicas em melanoma maligno); Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556 (por exemplo, a Tabela 2 listando os fatores angiogênicos conhecidos); e Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206; e Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206

(por exemplo, Tabela 1 que lista agentes antiangiogênicos usados em ensaios clínicos).

[065] Um “agente inibidor do crescimento”, tal como aqui utilizado, se refere a um composto ou composição que inibe o crescimento de uma célula (tal como uma célula que expressa VEGF) in vitro ou in vivo.

Assim, o agente inibidor do crescimento que pode ser administrado nos métodos da presente invenção pode ser um que reduza significativamente a porcentagem de células (tal como uma célula que expressa VEGF) na fase S. Exemplos de agentes inibidores do crescimento incluem, mas não se limitam a, agentes que bloqueiam a progressão do ciclo celular (em um local, exceto na fase S), como agentes que induzem interrupção de G1 e interrupção da fase M. Os bloqueadores clássicos da fase M incluem as vincas (vincristina e vimblastina), taxanos e inibidores da topoisomerase II como doxorrubicina, epirrubicina, daunorrubicina, etoposídeo e bleomicina.

Aqueles agentes que param em G1 também extravasam para parada da fase S, por exemplo, agentes alquilantes de DNA tais como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatina, metotrexato, 5- fluorouracila e ara-C. Mais informações podem ser encontradas em Mendelsohn e Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Capítulo 1, intitulado “Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs” por Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), por exemplo, p. 13.

Os taxanos (paclitaxel e docetaxel) são drogas anticâncer ambas derivadas do teixo. O docetaxel (Taxotere ®, Rhone-Poulenc Rorer), derivado do teixo europeu é um análogo semi-sintético do paclitaxel (Taxol ®, Bristol-Myers Squibb). O paclitaxel e docetaxel promovem a montagem de microtúbulos a partir dos dímeros de tubulina e estabilizam os microtúbulos prevenindo a despolimerização, o que resulta na inibição da mitose nas células.

[066] O termo “composição antineoplásica” refere-se a uma composição útil no tratamento de câncer que compreende pelo menos um agente terapêutico ativo. Exemplos de agentes terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, por exemplo, agentes quimioterápicos, agentes inibidores do crescimento, agentes citotóxicos, agentes utilizados em terapia de radiação, agentes anti-angiogênese, agentes imunoterapêuticos de câncer, agentes apoptóticos, agentes anti-tubulina e outros agentes para tratar o câncer, tais como anticorpos anti-HER-2, anticorpos anti- CD20, um antagonista do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) (por exemplo, um inibidor da tirosina quinase), inibidor de HER1/EGFR (por exemplo, erlotinib (Tarceva ® ), inibidores do fator de crescimento derivado de plaquetas (por exemplo, Gleevec ® (mesilato de Imatinibe)), um inibidor de COX-2 (por exemplo, celecoxib), interferons, inibidores de CTLA4 (por exemplo, anticorpo anti-CTLA ipilimumab (YERVOY® )), inibidores da PD-1 ou PD-L1 (por exemplo, OPDIVO ® , KEYTRUDA®, TECENTRIQ ®, BAVENCIO ®, IMFINZI ®), inibidores de TIM3 (por exemplo, anticorpos anti-TIM3), citocinas, antagonistas (por exemplo, anticorpos neutralizantes) que se ligam a um ou mais dos seguintes alvos: receptor(es) ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-beta, BlyS, APRIL, BCMA, CTLA4, TIM3 ou VEGF, TRAIL/Apo2 e outros agentes químicos bioativos e orgânicos, etc. As combinações dos mesmos também estão incluídas nesta invenção.

ANTICORPOS QUE SE LIGAM ESPECIFICAMENTE AO VISTA-ECD EM PH ÁCIDO

[067] Como o VISTA possui um grande número de resíduos de histidina em seu ECD, sua estrutura geral e dobrável, bem como a superfície disponível para a ligação de ligantes, como anticorpos, podem diferir em pH ácido comparado ao pH neutro, em particular, próximo ao pH 6,5, que é o pKa da histidina. Uma vez que os microambientes do tumor são geralmente ácidos, para ligarem ao VISTA nesses microambientes, um anticorpo pode precisar se ligar com especificidade ao Vista em pH ácido em que pelo menos alguns dos resíduos de histidina de superfície são mais susceptíveis de serem protonados.

[068] A Tabela de Sequências abaixo fornece a sequência de aminoácidos do VISTA (hVISTA) humano com ou sem o peptídeo sinal (SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 (hVISTA maduro)), respectivamente. O peptídeo sinal constitui nos resíduos de aminoácidos 1-32 de SEQ ID NO: 1. O domínio extracelular (ECD) consiste nos resíduos de aminoácidos 1-162 de SEQ ID NO: 2). O domínio IgV constitui os resíduos de aminoácidos 37-167 de SEQ ID NO: 1 e os resíduos de aminoácidos 5-135 de SEQ ID NO: 2. A região do pedúnculo está nos resíduos de aminoácidos 172-194 de SEQ ID NO: 1 e nos resíduos de aminoácidos 136-162 de SEQ ID NO: 2; o domínio transmembrana está nos resíduos de aminoácidos 195-216 de SEQ ID NO: 1 e nos resíduos de aminoácidos 163-184 de SEQ ID NO: 2. O resíduo de aminoácido 187 de SEQ ID NO: 1 e 155 de SEQ ID NO: 2 (negrito e sublinhado) pode ser D ou E, o que representa um polimorfismo no hVISTA. Esse resíduo é mostrado em negrito, sublinhado. Consequentemente, as SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 abrangem ambos os polimorfismos humanos nesse resíduo. Os resíduos de histidina no ECD do VISTA são sombreados em cinza.

[069] Os anticorpos anti-VISTA (Abs) podem se ligar especificamente ao VISTA-ECD ou fragmentos dos mesmos, por exemplo, compreendendo o domínio IgV de VISTA ou uma região de hVISTA compreendendo, por exemplo, aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70, 35-95, 35-127 ou 37-125 de SEQ ID NO: 2 em pH ácido. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 7,0. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 6,8. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 6,5. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 6,3. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 6,0. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 5,8. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 5,5. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 5,3. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH que é inferior ao pH 5,0.

[070] Certos Abs ligam-se especificamente a uma proteína VISTA-ECD a um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 7,0. Certos Abs ligam- se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 6,5. Certos Abs ligam-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 6,0. Certos Abs ligam-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH dentro do intervalo de pH 5,5 a pH 7,0. Certos Abs ligam-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH dentro do intervalo de pH 5,5 a pH 6,5. Certos Abs ligam-se especificamente à proteína VISTA-ECD a um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 6,5.

[071] Também são fornecidos Abs que se ligam a uma proteína VISTA-ECD, tal como hVISTA-ECD ou fragmentos dos mesmos compreendendo o domínio IgV de VISTA ou uma região de hVISTA compreendendo, por exemplo, aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70, 35-95, 35-127 ou 37-125 de SEQ ID NO: 2, em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-6 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-7 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-8 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-9 M. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-10 M ou menos. Por exemplo, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA- ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos.

[072] Também são fornecidos Abs que se ligam à proteína VISTA-ECD dentro de um intervalo de pH de 6,0 a 6,5 com uma KD de 10-6 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-7 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-8 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-9 M. Em alguns exemplos de realização, os Abs ligam-se a uma KD de 10-10 M ou menos. Por exemplo, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA- ECD em um pH de 6,5 ou inferior, por exemplo, dentro de um intervalo de pH 6,0 a 6,5, com uma KD de 10-7 M ou menos. Além disso, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, por exemplo, dentro de um intervalo de pH 6,0 a 6,5, com uma KD de 10-8 M ou menos. Um Ab pode se ligar ao hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, por exemplo, dentro de um intervalo de pH de 6,0 a 6,5, com uma KD de 10-9 M ou menos.

[073] Também são fornecidos Abs que se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD, tal como hVISTA-ECD ou fragmentos dos mesmos compreendendo o domínio IgV de VISTA ou uma região de hVISTA compreendendo, por exemplo, aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70, 35-95, 35-127 ou 37-125 de SEQ ID NO: 2, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, com uma koff de 10-5 s-1 ou inferior em ambos os 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 10-4 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 2 x 10-4 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 5 x 10-4 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 7 x 10-4 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os

Abs têm uma koff de 10-3 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 2 x 10-3 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 5 x 10-3 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 7 x 10-3 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 10-2 s-1 tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, os Abs têm uma koff de 10-1 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode se ligar especificamente à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma koff de 10-3 s -1 ou inferior em ambos os 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode se ligar especificamente ao hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma koff de 10-3 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC. Além disso, um Ab pode se ligar especificamente à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma koff de 10-2 s-1 ou inferior tanto a 25ºC quanto a 37ºC.

[074] São fornecidos na presente invenção Abs que se ligam a uma proteína VISTA-ECD, tal como hVISTA-ECD ou fragmentos dos mesmos compreendendo o domínio IgV de VISTA ou uma região de hVISTA compreendendo, por exemplo, aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70, ou 35-95, 35- 95, 35-127 ou 37-125 de SEQ ID NO: 2, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, com (i) uma KD de 10-6 M ou menos, 10-7 M ou menos, 10-8 M ou menos, 10-9 M ou menos ou 10-10 M ou menos e (ii) uma taxa de koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 (ou 2, 5 ou 7 x 10-4) s-1 ou inferior, 10-3 (ou 2, 5 ou 7 x 10-4) s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou menor, ou 10-1 s-1 ou inferior, como medido, por exemplo, em 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menos e uma taxa de koff de 10-3 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos e uma koff de 10-3 s-1 ou inferior,

conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos e uma koff de 10-2 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menos e uma taxa de koff de 10- 3 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos e uma taxa de koff de 10-3 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos e uma taxa de koff de 10-2 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos e uma taxa de koff de 10-4 s-1 (ou 2, 5 ou 7 10-4) ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos e uma taxa de koff de 10-5 s-1 (ou 2, 5 ou 7 10-5) ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos e uma taxa de koff de 10-4 s-1 (ou 2, 5 ou 7 10-4) ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Um Ab pode ligar-se à proteína hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos e uma taxa de koff de 10-5 s-1 (ou 2, 5 ou 7 10-5) ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[075] São fornecidos na presente invenção Abs que se ligam especificamente à proteína VISTA-ECD, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, com uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior a 25ºC ou a 37ºC. Em algumas de tais exemplos de realização, os Abs podem se ligar com uma k on de 105 M-1 s-1 ou superior. Em algumas de tais exemplos de realização, os Abs podem se ligar com uma kon de 106 M-1 s-1 ou superior. Em algumas de tais exemplos de realização, os Abs podem se ligar com uma k on de 107 M-1 s-1 ou superior. Por exemplo, um Ab pode se ligar a proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma kon de 106 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode se ligar ao ECD de hVISTA em um pH de 6,5 ou inferior, com uma kon de 106 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37º C .

[076] São fornecidos na presente invenção os Abs que se ligam à proteína VISTA- ECD, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, com (i) uma KD de 10-6 M ou inferior, 10-7 M ou menos, 10-8 M ou menos, 10-9 M ou menos ou 10-10 M ou menos e (ii) uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-7 M ou menos e uma taxa kon de 106 M-1 s- 1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-8 M ou menos e uma taxa kon de 106 M-1 s- 1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode se ligar ao hVISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-7 M ou menos e uma taxa kon de 106 M-1 s- 1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, um Ab pode se ligar ao hVISTA- ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-8 M ou menos e uma taxa kon de 106 M-1 s- 1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[077] Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menos, bem como com um koff de 10-5 s-1 ou inferior, 2 x 10-5 s-1 ou inferior, 5 x 10-5 s-1 ou inferior, 7 x 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 s-1 ou inferior, 2 x 10- 4 s-1 ou inferior, 5 x 10-4 s-1 ou inferior, 7 x 10-4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 2 x 10-3 s-1 ou inferior, 5 x 10-3 s-1 ou inferior, 7 x 10- 3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos, bem como com um koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns destes exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-10 M ou menos, bem como com um koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[078] Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-7 M ou menos, bem como com uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-8 M ou menos, bem como com uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-9 M ou menos, bem como com uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns destes exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-10 M ou menos, bem como com uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[079] Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menos, bem como com uma koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC e uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos, bem como com uma koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10- 4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC e uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos, bem como com uma koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC e uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

Em tais exemplos de realização, um Ab pode ligar-se à proteína VISTA-ECD em um pH de 6,5 ou inferior com uma KD de 10-10 M ou menos, bem como com uma koff de 10-5 s-1 ou inferior, 10-4 s-1 ou inferior, 10-3 s-1 ou inferior, 10-2 s-1 ou inferior, ou 10-1 s-1 ou inferior, conforme medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC e uma kon de 104 M-1 s-1 ou superior, 105 M-1 s-1 ou superior, 106 M-1 s-1 ou superior, de 107 M-1 s-1 ou superior, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[080] Como notado acima, em alguns dos exemplos de realização acima, a proteína VISTA-ECD é hVISTA-ECD ou é uma porção de hVISTA- ECD tal como, por exemplo, o domínio IgV.

Em alguns dos exemplos de realização acima, o Ab pode se ligar especificamente a um epítopo compreendendo os aminoácidos 20-95 de SEQ ID NO: 2. Em alguns dos exemplos de realização acima, o Ab pode se ligar especificamente a um epítopo compreendendo os aminoácidos 20-70 de SEQ ID NO: 2. Em alguns dos exemplos de realização acima, o Ab pode se ligar especificamente a um epítopo compreendendo os aminoácidos 35-95 de SEQ ID NO: 2. Em alguns dos exemplos de realização acima, o Ab pode se ligar especificamente a um epítopo compreendendo os aminoácidos 35-70 de SEQ ID NO: 2. Em alguns algumas formas de realização acima, o epítopo é um epítopo tridimensional que compreende não apenas uma das porções acima de SEQ ID NO: 2 a partir dos resíduos 20- 95, 20-70, 35-95 ou 35-70, mas também outra porção de SEQ

ID NO: 2, tais como os resíduos 95-105 de SEQ ID NO: 2. Em certos exemplos de realização, um Ab liga-se ao epítopo de hVISTA ao qual um Ab descrito no documento WO 2015/097536 se liga.

Por exemplo, um Ab pode competir ou competir de forma cruzada pela ligação ao hVISTA com um Ab divulgado no documento WO 2015/097536. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga a um epítopo conformacional do VISTA humano.

Em certos exemplos de realização, um Ab se liga a um epítopo conformacional que compreende, ou está presente nos resíduos 103-111 de SEQ ID NO: 2 e 136-146 de SEQ ID

NO: 2 para VISTA humano.

Em certos exemplos de realização, um Ab se liga a um epítopo conformacional que compreende, ou está presente nos resíduos

24-36, 54-65 e 100-102 de SEQ ID NO: 2 para VISTA humano.

Em certos exemplos de realização, um Ab se liga a um epítopo conformacional que compreende resíduos de aminoácidos na alça FG do VISTA humano.

Em alguns exemplos de realização, um Ab se liga a um polipeptídeo compreendendo os resíduos de aminoácidos 35 a 127 e/ou 37-125 de SEQ ID

NO: 2. Em alguns exemplos de realização, um Ab se liga a um polipeptídeo

VISTA ECD ou porção do mesmo compreendendo resíduos de aminoácidos 350-127 de SEQ ID NO: 2, mas o anticorpo não se liga ou se liga com afinidade reduzida ao polipeptídeo VISTA ECD ou porção do mesmo compreendendo uma substituição de aminoácido, em que a substituição (1) é a substituição de um dos seguintes resíduos de aminoácidos: T35, Y37, K38, T39, Y41, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119, H121, H122, S124, E125, R127 e SEQ ID NO: 2 ou (2) é uma substituição de um dos seguintes resíduos de aminoácidos: Y37, T39, R54, F62, Q63, H66, L115, V117, I119, S124 ou E125. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti-VISTA possui as mesmas características de ligação (ou significativamente as mesmas características de ligação) que um anticorpo aqui descrito, por exemplo, tal como estabelecido nos Exemplos e/ou nas reivindicações.

[081] Alguns dos anticorpos acima referidos podem mostrar afinidade de ligação diferencial para a proteína VISTA-ECD, dependendo do pH. Alguns Abs que se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em pH 6,5 ou inferior, também se ligam especificamente à proteína VISTA-ECD com pH neutro e/ou alcalino com afinidade semelhante (isto é, são “pan-aglutinantes”). Por exemplo, alguns, tais Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-7 M ou menos em ambos pHs, 6,5 e 7,0, (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC) de tal modo que a KD em pH 6,5 é cerca de 1,5 vezes o número de KD em pH 7,0. Alguns desses Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, tanto em pH 6,5 quanto em pH 7,0 (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC) de modo que a KD em pH 6,5 é cerca de 1,5 vezes a KD em pH 7,0. Alguns destes Abs podem se ligar ao hVISTA- ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, tanto em pH 6,5 quanto em pH 7,0 (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a

37ºC) de tal forma que a KD em pH 6,5 é cerca de 1,5 vezes a KD em pH 7,0.

[082] Certos Abs especificamente se ligam a uma proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, podem se ligar a proteína VISTA-ECD em condições neutra, fisiológica e/ou alcalinas com menor afinidade (“ligantes sensíveis ao pH” ou “Abs Sensíveis ao pH”). Alguns Abs que se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, podem ter ligação não significativa, por exemplo, quase indetectável, para a proteína VISTA-ECD em condições neutras, fisiológicas e/ou alcalinas. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, os Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 e com uma KD de mais do que 10-8 M em pH 7,0 e/ou pH 7,4. Em algumas de tais exemplos de realização, os Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 e com uma KD em pH 7,0 e/ou pH de 7,4, que é mais do que 1,5 vezes mais elevada do que em pH 6,5. Em certos exemplos de realização, um Ab sensível ao pH é fornecido que se liga especificamente à proteína VISTA-ECD com uma KD que é, pelo menos, 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes 500 vezes, 1000 vezes, ou 5000 vezes inferiores em pH 6,5 do que em pH 7,0 (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC). Por exemplo, em alguns casos um Ab se liga à proteína VISTA-ECD com uma KD que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou 5000 vezes menor em pH 6,0, em relação ao pH 7,0 e/ou pH 7,4 ou superior (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC).

[083] Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD com uma koff que é inferior em condições ácidas em relação àquela em condições neutras, fisiológicas ou alcalinas. Em certos exemplos de realização, é fornecido um Ab que se liga à proteína VISTA-ECD em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes inferior em pH 6,5 do que a koff em pH 7,0 e/ou pH 7,4, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em outras palavras, a taxa de Koff é mais lenta em pH ácido do que em pH neutro. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD com uma taxa koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais baixa em pH 6,0, em relação ao pH 7,0 e/ou pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em certos exemplos de realização, é fornecido um Ab que se liga à proteína VISTA-ECD em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes inferior em pH 6,5 do que a koff em pH 7,0 e/ou pH 7,4, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em alguns exemplos de realização, é fornecido um Ab que se liga à proteína VISTA-ECD com uma koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais baixa em pH 6,0 do que a koff em pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Em certos exemplos de realização, é fornecido um Ab que se liga à proteína VISTA-ECD com uma koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais baixa em pH 6,0- 6.5 do que a koff em pH 7,0 a 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[084] Em certos exemplos de realização, um Ab que se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD com uma kon que é maior em condições ácidas em relação a condições neutras, fisiológicas ou alcalinas.

Em certos exemplos de realização, é fornecido um Ab que se liga a uma proteína VISTA-ECD em condições ácidas com uma kon que é pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais elevada em pH 6,5 do que a kon em pH 7,0 e/ou pH 7,4, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um Ab especificamente se liga a uma proteína VISTA-ECD com uma kon que é pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais elevada em pH 6,0 do que em pH 7,0 e/ou pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[085] Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD a um pH ao qual pelo menos um resíduo de histidina, por exemplo, His 98 na SEQ ID NO: 1, é protonado. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD a um pH ao qual a maioria dos resíduos de histidina no ECD são protonados, o que se espera que seja pH 6,5 ou inferior, por exemplo, entre pH 6,0 e pH 6,5.

[086] Também englobados na presente invenção os Abs que se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD com uma afinidade que é superior em pH neutro, fisiológico ou alcalino em relação ao pH ácido, desde que a afinidade de ligação em pH ácido permaneça elevada. Por exemplo, os Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos tanto em pH 6,5 como em pH 7,0, embora os Abs se liguem a uma KD que seja pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 dobrar, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes, 500 vezes, 1000 vezes inferiores em pH 7,0 do que em pH 6,5.

[087] Também são englobados pela presente invenção Abs que compartilham uma ou mais das propriedades acima desta seção. As propriedades acima, tais como KD, koff, kon particulares de epítopos específicos não devem ser tratadas isoladamente. Assim, um Ab pode se ligar a um epítopo compreendendo uma das regiões de SEQ ID NO: 2 descrita acima, e também pode ter propriedades de ligação pan ou propriedades de ligação seletiva pH ou sensível ao pH tal como descrito acima, como mostrado por um ou mais dos comportamentos de seu KD, koff, ou kon em diferentes pHs.

[088] Em qualquer dos exemplos de realização acima, o Ab pode ser, por exemplo, um anticorpo de comprimento total (isto é, compreendendo uma cadeia pesada de comprimento completo (com ou sem lisina C terminal) e uma cadeia leve de comprimento completo) ou um fragmento de ligação ao antígeno tal como um fragmento Fab, um fragmento Fab’, fragmento (Fab’)2, um fragmento scFv, um fragmento Fv, ou o Ab pode ser um anticorpo quimérico, humanizado, ou humano, ou o Ab pode ser um anticorpo biespecífico ou multiespecífico.

[089] Determinar quão bem um Ab se liga a uma proteína VISTA- ECD a um determinado pH pode ser conduzido usando vários métodos diferentes. Por exemplo, por ressonância de plasmon de superfície (SPR), tais como por ensaios de BIACORE®. Um ensaio exemplificativo de SPR compreende capturar um ou vários anticorpos sobre um chip sensor CM4 com o reagente de captura imobilizado (por exemplo, usando kit de captura de anti- Fc humano da Biacore®, GE Healthcare catálogo # BR-1008-39, ou kit de captura anti-camundongo Biacore®, GE Healthcare catálogo # BR-1008-39), e fluindo o antígeno VISTA como analito em uma série de concentração para determinar a cinética de ligação e afinidades em um tampão de corrida com o pH desejado. Em um exemplo de realização, o VISTA é injetado a duas a cinco concentrações no intervalo de 0,1 nM a 500 nM (por exemplo, 0,1 nM, 1 nM, 10 nM, 100 nM, 500 nM) com uma velocidade de fluxo de 30 µL/min, até quatro minutos de tempo de associação e até dez minutos de tempo de dissociação.

Entre os ciclos de ligação, a superfície de captura é regenerada seguindo as instruções do fabricante para o respectivo kit de captura. Todos os dados são referenciados em dobro usando uma célula de fluxo de referência e uma injeção em branco. Dados com cinética simples de 1:1 são ajustados a um modelo de ligação de Langmuir com transferência de massa usando o software de avaliação Biacore® T200. Os métodos SPR descritos nos Exemplos também podem ser usados.

[090] A afinidade de um Ab para um polipeptídeo VISTA ECD pode ser determinada utilizando células que expressam um polipeptídeo VISTA ECD, PSGL-1 ou sulfato de heparano na sua superfície, método esse que compreende a citometria de fluxo, e em que a ligação de um Ab à célula ligada ao VISTA-ECD é determinado a um determinado pH, por exemplo, pH 6,5 ou inferior. Um ensaio exemplificativo de citometria de fluxo compreende o seguinte: células 293T ou outras células expressando ectopicamente ECD de hVISTA são ressuspensas em um tampão consistindo em HBSS + BSA a 1% ajustado ao pH desejável, por exemplo, pH 6,0 com MES ou pH 7,4 com HEPES. Os Abs (por exemplo, IgG humana) contra o hVISTA são diluídos em série a partir de aproximadamente 20 μg/mL e incubados com as células ressuspensas durante 30 minutos a 4ºC. As células são então lavadas duas vezes com os mesmos tampões, mantendo o pH desejado, por exemplo, pH a 6,0 ou 7,4 e incubadas com um anticorpo secundário conjugado com fluoróforo que reconhece o anticorpo primário (por exemplo, IgG humana) e é estável em pH reduzido. As células são então lavadas como antes e adquiridas imediatamente, sem fixação, em um BD Fortessa ou outro citômetro de fluxo. A afinidade de um Ab para um polipeptídeo VISTA ECD pode ser determinada como descrito nos Exemplos.

[091] Em certos exemplos de realização, os Abs que se ligam ao ECD de hVISTA bloqueiam a ligação de hVISTA ao seu parceiro de ligação (por exemplo, um receptor VISTA), por exemplo, nas células. A inibição ou bloqueio pode ser de 100% ou pelo menos de 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% ou 50%. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga a uma proteína VISTA-ECD em pH ácido, por exemplo, pH 6,5 ou inferior, e inibe a ligação de

VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50%, tal como pelo menos 75%, 80% 85%, 90%, 95% ou 100%. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente à proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 7,0. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 6,8. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 6,5. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 6,3. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 6,0. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 5,8. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 5,5. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 5,3. Em certos exemplos de realização, um Ab se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% a um pH que é inferior em pH 5,0.

[092] Certos Abs se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibem a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% em um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 7,0. Certos Abs se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibem a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% em um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 6,5. Certos Abs se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibem a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% em um pH dentro do intervalo de pH 5,0 a pH 6,0. Certos Abs se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibem a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% em um pH dentro do intervalo de pH 5,5 a pH 7,0. Certos Abs se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibem a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% em um pH dentro do intervalo de pH 5,5 a pH 6,5. Certos Abs se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD e inibem a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação em pelo menos 50% em um pH dentro do intervalo de pH 6,0 a pH 6,5. A inibição da ligação pode ser determinada tal como descrito nos Exemplos.

[093] Um parceiro de ligação VISTA pode ser o PSGL-1, tal como ao PSGL-1 humano. As sequências das isoformas de PSGL-1 humano são fornecidas aqui como SEQ ID NOs: 3-10. VISTA liga-se ao PSGL-1 com ou sem siail lewis X. Um parceiro de ligaçao de VISTA também pode ser proteoglicanos de sulfato de heparano, por exemplo, presentes em certas células.

[094] A inibição da ligação a um parceiro de ligação VISTA pode ser determinada medindo a inibição da ligação do VISTA (ou VISTA ECD ou domínio Ig V de VISTA ou células positivas para VISTA), para as células às quais VISTA se liga, por exemplo, as células T (por exemplo, Células T CD4 +, células T CD8+, ativadas ou não, células NK ou outras células às quais o VISTA se liga, na presença e ausência do anticorpo. Um experimento exemplificativo que pode ser utilizado para determinar se um anticorpo inibe a ligação de VISTA ao seu parceiro de ligação ou células T que expressam um parceiro de ligação é um ensaio de citometria de fluxo, por exemplo, um ensaio que compreende o seguinte: células mononucleares de sangue periférico humano de dador sangue, a camada leuco-plaquetária (buffy coat) ou leukopak são ressuspensos em um tampão consistindo em HBSS + BSA a 1% ajustado ao pH desejável, por exemplo, pH 6,0 com MES ou pH 7,4 com HEPES. As células são então incubadas durante 30 minutos a 4ºC com 20 μg/mL de proteína quimérica recombinante que consiste em ECD de hVISTA fundida com Fc de IgG1 humana (VISTA-Fc) e com concentrações variáveis de anticorpos de bloqueio de VISTA candidatos ou anticorpos controle. As células são então lavadas duas vezes nos mesmos tampões, mantendo o pH desejado, por exemplo, pH a 6,0 ou 7,4 e incubadas por mais 30 minutos a 4ºC com um anticorpo secundário conjugado com fluoróforo que reconhece VISTA-Fc, mas não os anticorpos de bloqueio candidatos ou anticorpos controle, e é estável em pH reduzido. As células são então lavadas como antes e adquiridas imediatamente, sem fixação, em um BD Fortessa ou outro citômetro de fluxo. A inibição da ligação pode ser determinada, por exemplo, tal como descrito nos Exemplos.

[095] Em exemplos de realização específicas, os Abs aqui descritos podem desencadear ou intensificar uma resposta imune, tal como uma resposta imune antígeno-específica. Em certos exemplos de realização, os Abs estimulam a atividade das células T, particularmente em pH ácido tal como é encontrado em microambientes tumorais. A estimulação da atividade das células T pode ser medida, por exemplo, em uma reação mista de linfócitos (MLR) ou em um ensaio in vitro com uma célula apresentadora de antígeno (natural ou artificial) e células T. A estimulação da atividade das células T pode também ser medida utilizando, por exemplo, o ensaio Jurkat descrito nos Exemplos. A estimulação da atividade das células T também pode ser medida determinando a secreção de IFN-γ das células T, em que uma secreção aumentada de IFN-γ indica a estimulação das células T. A secreção de outras citocinas de células T ativadas também pode ser medida. Em certos exemplos de realização, a transdução de sinal de células T ativadas é medida, como os níveis de NF-kB. Em exemplos de realização específicas, o Abs descritos na presente invenção inibe a adesão de células, que pode ser medida conforme descrito nos Exemplos.

[096] A atividade dos Abs anti-VISTA também pode ser mostrada em ensaios de monócitos, ensaios de ADCC e ensaios de ADCP, particularmente em pH ácido tal como se encontra em microambientes tumorais.

[097] Em certos exemplos de realização, os anticorpos Ab anti- VISTAs inibem o crescimento do tumor em um modelo de tumor, por exemplo, um modelo de tumor knock-in de VISTA humano.

[098] Como mostrado nos exemplos aqui, a reciclagem de um Ab anti-VISTA no endossomo, de modo a aumentar as propriedades farmacocinéticas (PK), isto é, a meia-vida do anticorpo, requer que o anticorpo anti-VISTA se ligue ao VISTA em condições ácidas. Assim, é também esperado que os Abs anti-VISTA que se ligam em pH baixo ao VISTA, por exemplo, um pH de 6,5 ou inferior, como descrito adicionalmente aqui, tenha uma meia-vida mais longa aceitável em relação a um anticorpo VISTA que não se liga ao VISTA em pH ácido.

ABS DE LIGAÇÃO AO HVISTA-ECD EXEMPLARES

[099] São fornecidos na presente invenção os Abs que se ligam preferencialmente ao hVISTA (ECD) em pH ácido (por exemplo, em condições ácidas) em relação ao pH fisiológico ou pH neutro.

[100] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma região variável de cadeia pesada (“VH”) compreendendo

CDR1 de VH, CDR2 e/ou CDR3 de qualquer um dos Abs anti-hVISTA aqui fornecidos.

Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção.

Em certos exemplos de realização, um Ab anti- hVISTA compreende uma VH compreendendo CDR1 de VH, CDR2 e/ou CDR3 de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes (progênie), tais como P1-061029, P1-068757, P1-

068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-

068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-

069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-

069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-

068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-

068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-

068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-

068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N,

P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF,

P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-

068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-

068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V,

P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-

068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-

068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-

068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1-

068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1-

061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1-

061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

As CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de cada uma destas espécies compreendem as posições de aminoácidos 26-

35 (CDR1 de VH), 50-66 (CDR2 de VH) e 99-110 (CDR3 de VH), das sequências VH para cada uma das espécies de anticorpo acima fornecidas na tabela de Sequências abaixo. As CDRs são também sublinhadas e em negrito em cada uma das sequências VH para as espécies de anticorpo acima fornecidas na Tabela de Sequências abaixo.

[101] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VL compreendendo a CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VL selecionada dentre P1- 061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1- 068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1- 069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1- 069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1- 068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1- 068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.. A CDR1, CDR2, e CDR3 de VL de cada uma destas espécies compreendem as posições de aminoácidos 24- 35 (VL CDR1), 51-57 (VL CDR2) e 90-98 (VL CDR3), das sequências de VL para cada uma das espécies de anticorpo acima fornecidas na Tabela de Sequência abaixo. As CDRs também estão sublinhadas e em negrito em cada uma dessas sequências.

[102] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo CDR1 de VH, CDR2 e/ou CDR3 de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção e uma VL compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo CDR1 de VH, CDR2 e CDR3 de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção e uma VL compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo CDR1, CDR2 e/ou CDR3 da VH de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tais como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1- 068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1- 069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1- 069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1- 068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1- 068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V,

P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE e uma VL compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tal como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1- 068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1- 069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1- 069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1- 068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1- 068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1- 068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1- 068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1- 068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1- 068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1- 068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1- 068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1- 068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1- 061029_V102D, P1-061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE.

[103] Em alguns exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA pode compreender:

(a) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061029;

(b) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061015 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061015;

(c) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068757 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068757;

(d) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068759 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068759;

(e) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761;

(f) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068763 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068763;

(g) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068765 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068765;

(h) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767;

(i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068769 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068769;

(j) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068771 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068771;

(k) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068773 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068773;

(l) uma VH que compreende a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068775 e uma VL que compreende a

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068775;

(m) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069059 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069059;

(n) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069061 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069061;

(o) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069063 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069063;

(p) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069065 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069065;

(q) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069067 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069067;

(r) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de V1 de P1-069069 e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069069;

(s) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069071 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069071;

(t) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069073 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069073;

(u) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-069075 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069075;

(v) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de V1 de P1-069077 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-069077;

(w) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068736 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068736;

(x) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068738 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068738;

(y) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068740 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068740;

(z) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068742 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068742;

(aa) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068744 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068744; (bb) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068746 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068746;

(cc) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068748 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068748;

(dd) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068750 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068750;

(ee) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068752 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068752;

(ff) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068754 e uma VL compreendendo as

CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068754;

(gg) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E55A e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E55A;

(hh) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_H100G e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_H100G;

(ii) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E56N e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E56N;

(jj) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E55A_E56N e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E30D e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E30D;

(ll) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de V1-068761_E30D_E55A e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E56N_H100G e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E30D_H100G e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E30D_E56N e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E100fF;

(qq) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E55A_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma VH que compreende a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH da P 1-068761_H100G_E100fF e uma VL que compreende a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E30D_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E56N_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E32Y e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E32Y;

(vv) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de V1-068761_E32Y_E55A e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E32Y_E56N e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E30D_E32Y e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E32Y_H100G e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068761_E32Y_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_D52N_D102V e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_D52N e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_D52N;

(ccc) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_D52N_E55A e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_D52N_E55A; (ddd) uma VH que compreende a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH da P 1-068767_E55A_D102V e uma VL que;

compreende a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL da P 1-

068767_E55A_D102V;

(eee) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_D102V e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_D102V;

(fff) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E55A e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E55A;

(ggg) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E30D_D52N e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E30D_D102V e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos das

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E30D e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E30D;

(jjj) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E30D_E55A e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E100fF_D102V e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-

068767_E100fF_D102V;

(lll) uma VH que compreende a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E55A_E100fF e uma VL que compreende a CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_D52N_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1- 068767_D52N_E100fF; (nnn) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E100fF; (ooo) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-068767_E30D_E100fF e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-068767_E30D_E100fF; (ppp) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029_F100fE_V102D e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1- 061029_F100fE_V102D; (qqq) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029_F100fE e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061029_F100fE; (rrr) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029_ V102D e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061029_ V102D; (sss) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029_Y32E e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061029_Y32E; e (ttt) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029_Y32E_F100fE e uma VL compreendendo as CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de P1-061029_Y32E_F100fE.

[104] Novamente, a Tabela de Sequências abaixo fornece as Sequências da região variável da cadeia pesada e leve e Sequências de cadeia pesada e leve de comprimento total dos anticorpos listados acima com uma região constante da cadeia pesada de IgG1.3 (a menos que uma região constante de HC diferente seja notada na tabela) e observa as localizações das suas CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de VL, por resíduo de aminoácido e com negrito e sublinhado das CDRs em cada sequência VH e VL. Assim, por exemplo, a CDR1 de VH de P1-061029 compreende os aminoácidos 26-35 de SEQ ID NO: 67, enquanto a CDR2 de VH compreende os aminoácidos 50-66 de SEQ ID NO: 67, e a CDR3 de VH compreende os aminoácidos 99-110de SEQ ID NO: 67. SEQ ID NO: 67, e assim por diante, como observado pelos aminoácidos em negrito e sublinhados de SEQ ID NO: 67 mostrados na Tabela de Sequências.

[105] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção. As sequências individuais de VH para espécies de anticorpos particulares aqui fornecidos estão listadas na Tabela de Sequências. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1- 068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1- 068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1- 068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1- 068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1- 068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-

068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

[106] Em alguns exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende o VH de qualquer um dos anticorpos P1-061029, P1-068757, P1- 068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1- 068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1- 069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1- 069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1- 068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1- 068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1- 068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1-

068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1-

061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1-

061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, mas com 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos nas regiões estruturais (framework) da sequência

VH, tal como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras.

Em alguns exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende a VH de qualquer um dos anticorpos P1-061029 ou derivados deste como, P1-068757, P1-068759, P1-

068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-

068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-

069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-

068766, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-

068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-

068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N,

P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF,

P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-

068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-

068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V,

P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-

068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-

068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-

068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1-

068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1-

061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1-

061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, mas com uma ou mais substituições de reversão da linhagem germinal, por exemplo, um ou ambas as substituições K16R e/ou T84A, nas regiões estruturais das sequências VH mostradas na Tabela de Sequências.

Sequências VH exemplares com tais substituições de aminoácidos são fornecidas na Tabela de Sequências com os resíduos 16 e 84 destacados em negrito e sublinhado. Observe que P1- 061015 contém R na posição 16 e A na posição 84 de suas regiões estruturais da VH.

[107] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 de VH compreendendo as sequências de aminoácidos das CDRs de VH de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção e compreende uma VH que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH de qualquer dos Abs anti-hVISTAs fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos da VH do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1- 069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1- 069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1- 068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1- 068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1- 068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-

068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE Em certos exemplos de realização, a VH do anticorpo difere daquelas sequências VH mostradas na Tabela de Sequências devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos nas regiões estruturais da sequência VH, tal como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras, ou tal como uma ou ambas as substituições K16R e/ou T84A em P1-061029 ou seu descendente.

[108] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH consistindo na sequência de aminoácidos da VH de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1- 061029 ou P1-061015 ou seu descendente, tal como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1- 068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1- 068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1- 068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-

068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE opcionalmente com uma ou ambas as substituições K16R e/ou T84A.

[109] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029 ou P1- 061015 ou seu descendente, como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1- 068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1- 068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1- 069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1- 061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1- 068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1- 068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-

068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-

068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-

068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1-

068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1-

061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1-

061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 de VL compreendendo as sequências de aminoácidos das CDRs de VL de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção e compreende uma

VL que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos

93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%,

pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VL de qualquer dos Abs anti-

hVISTAs fornecidos na presente invenção.

Em certos exemplos de realização,

um Ab anti-hVISTA compreende uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, menos 96%, pelo menos 97%,

pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos da

VL do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-

068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-

069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-

069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-

068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-

068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-

068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-

068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G,

P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-

068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1-

068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1- 068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1- 068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1- 068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1- 061029_V102D, P1-061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE Em certos exemplos de realização, a VL do anticorpo difere daquela das sequências de VL mostradas na Tabela de Sequências devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos nas regiões estruturais da sequência VL, tal como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras.

[110] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VL consistindo na sequência de aminoácidos da VL de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-061029 ou P1-061015 ou seu descendente, como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1- 068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1- 068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1- 068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1- 068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1- 068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-

068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

[111] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção e compreende uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção. Em alguns desses exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 ou P1- 061015 ou seus descendentes, como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1- 068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1- 068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1- 069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1- 061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1- 068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1- 068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-

068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029 ou P1-061015.

[112] Em certos exemplos de realização, no entanto, a VH do anticorpo é do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1- 069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1- 069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1- 068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1- 068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1- 068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1- 068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1- 068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1- 068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1- 068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1- 068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1- 068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-

061029_V102D, P1-061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, mas com 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos nas regiões estruturais (framework) da sequência VH, tal como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras, e a VL é aquela do P1-061029 ou P1-061015. Em certos exemplos de realização, no entanto, a VH do anticorpo é o do P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1- 068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1- 068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-068766, P1- 068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1- 068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, mas com uma ou ambas substituições, K16R e/ou T84A, e a VL é aquela do P1 -061029 ou P1-061015.

[113] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH e uma VL compreendendo as sequências de aminoácidos de VH e VL do P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tal como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1- 068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-

069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1- 069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1- 068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1- 068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1- 068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1- 068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1- 068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1- 068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1- 068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1- 068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1- 068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1- 061029_V102D, P1-061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, e, opcionalmente, em que a VH compreende uma ou ambas as substituições, K16R e/ou T84A.

[114] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH CDR1, CDR2 e CDR3 compreendendo as sequências de aminoácidos das CDRs de VH de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos neste documento, bem como uma VL CDR1, CDR2 e CDR3 compreendendo as sequências de aminoácidos das CDRs de VL de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos neste documento, e também compreende uma VH e uma VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL correspondente de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, a VH e a VL do anticorpo diferem das sequências VH e VL mostradas na Tabela de Sequências devido a 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos nas sequências das regiões estruturais, tal como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras, ou tal como uma ou ambas as substituições K16R e/ou T84A na sequência VH.

[115] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH e uma VL consistindo na sequência de aminoácidos da VH e VL de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma VH e uma VL em que cada uma consiste nas sequências de aminoácidos de VH e VL do P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tal como P1- 061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1- 068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1- 069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1- 069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1- 068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1- 068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1-

068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, e, opcionalmente, em que a VH compreende uma ou ambas as substituições, K16R e/ou T84A.

[116] Um Ab anti-hVISTA Ab pode compreender: (a) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029; (b) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061015; (c) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068757; (d) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068759 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068759; (e) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761; (f) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068763; (g) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068765 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068765; (h) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068767;

(i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068769 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068769;

(j) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068771 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068771;

(k) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068773 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL of -068773;

(l) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068775 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068775;

(m) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069059 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069059;

(n) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069061 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069061;

(o) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069063 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069063;

(p) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069065 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069065;

(q) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-069067 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069067;

(r) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069069 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069069;

(s) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069071 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069071;

(t) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069073 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069073;

(u) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069075 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069075;

(v) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069077 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-069077;

(w) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068736 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068736;

(x) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068738 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068738;

(y) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068740 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068740;

(z) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068742 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068742;

(aa) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068744 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068744;

(bb) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH f P1-068746 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068746;

(cc) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068748 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068748;

(dd) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068750 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068750;

(ee) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068752 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068752;

(ff) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068754 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da

VL de P1-068754;

(gg) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E55A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E55A;

(hh) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_H100G e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_H100G;

(ii) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E56N e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E56N; (jj) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E55A_E56N e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D;

(ll) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E55A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E56N_H100G e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_H100G e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E56N e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E100fF;

(qq) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E55A_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_H100G_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E56N_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y;

(vv) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_E55A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_E56N e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E32Y e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_H100G e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D52N_D102V e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D52N e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N;

(ccc) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D52N_E55A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E55A_D102V e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D102V e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D102V;

(fff) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E55A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E55A;

(ggg) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_D52N e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_D102V e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D;

(jjj) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_E55A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E100fF_D102V e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E100fF_D102V; (lll) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E55A_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E55A_E100fF; (mmm) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N_E100fF; (nnn) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E100fF; (ooo) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_E100fF; (ppp) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_F100fE_V102D; (qqq) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_F100fE; (rrr) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_V102D; (sss) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_Y32E; ou (ttt) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_Y32E_F100fE.

[117] Um Ab anti-hVISTA Ab pode compreender: (a) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029;

(b) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068757 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068757;

(c) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068759 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068759;

(d) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761;

(e) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068763 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068763;

(f) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068765 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068765;

(g) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767;

(h) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068769 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068769;

(i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068771 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068771;

(j) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068773 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068773;

(k) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068775 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068775;

(l) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069059 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069059;

(m) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069061 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069061;

(n) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069063 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069063;

(o) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069065 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069065;

(p) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069067 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069067;

(q) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069069 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069069;

(r) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069071 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069071;

(s) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069073 modificada por substituições K16R e/ou T84A, uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069073;

(t) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069075 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069075;

(u) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-069077 modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-069077;

(v) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E55A modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E55A;

(w) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_H100G modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_H100G;

(x) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E56N modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E56N;

(y) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E55A_E56N modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E55A_E56N;

(z) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D;

(aa) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E55A modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E30D_E55A; (bb) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E56N_H100G modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E56N_H100G;

(cc) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_H100G modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E30D_H100G;

(dd) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E56N modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E30D_E56N;

(ee) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E100fF modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E100fF;

(ff) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E55A_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E55A_E100fF;

(gg) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_H100G_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_H100G_E100fF;

(hh) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E30D_E100fF; (ii) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E56N_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E56N_E100fF;

(jj) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y;

(kk) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_E55A modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E32Y_E55A;

(ll) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_E56N modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E32Y_E56N;

(mm) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E30D_E32Y modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E30D_E32Y;

(nn) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_H100G modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E32Y_H100G;

(oo) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068761_E32Y_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068761_E32Y_E100fF;

(pp) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_D52N_D102V;

(qq) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D52N modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N;

(rr) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D52N_E55A modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_D52N_E55A;

(ss) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E55A_D102V modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E55A_D102V;

(tt) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D102V modificada por substituições K16R e/ou T84A, uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D102V;

(uu) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E55A modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E55A;

(vv) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_D52N modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E30D_D52N;

(ww) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_D102V modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E30D_D102V; (xx) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D modificada por substituições K16R e/ou T84A, e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D;

(yy) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_E55A modificada por substituições K16R e/ou T84A,

e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E30D_E55A;

(zz) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E100fF_D102V modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E100fF_D102V;

(aaa) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E55A_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E55A_E100fF;

(bbb) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_D52N_E100fF modificada por substituições K16R e/ou

T84A, e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_D52N_E100fF;

(ccc) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E100fF modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma

VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E100fF;

(ddd) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-068767_E30D_E100fF modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

068767_E30D_E100fF;

(eee) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da

VH de P1-061029_F100fE_V102D modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-

061029_F100fE_V102D;

(fff) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_F100fE; (ggg) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_V102D; (hhh) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_Y32E; ou (iii) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE modificada por substituições K16R e/ou T84A e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos da VL de P1- 061029_Y32E_F100fE.

[118] Um Ab anti-hVISTA Ab pode compreender: (a) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 061029 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-061029 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-061029; (b) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 061015 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-061015 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-061015; (c) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068757 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068757 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068757;

(d) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068759 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068759 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068759;

(e) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068761;

(f) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068763 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068763 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068763;

(g) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068765 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068765 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068765;

(h) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068767 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068767;

(i) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068769 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068769 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068769;

(j) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068771 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068771 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068771;

(k) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068773 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068773 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068773;

(l) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 068775 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068775 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068775;

(m) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069059 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069059 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069059;

(n) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069061 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069061 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069061;

(o) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069063 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069063 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069063;

(p) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069065 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069065 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-069065;

(q) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069067 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069067 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069067;

(r) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069069 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069069 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069069;

(s) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069071 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069071 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069071;

(t) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069073 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069073 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069073;

(u) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069075 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069075 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069075;

(v) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

069077 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-069077 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-069077;

(w) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068736 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068736 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068736;

(x) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068738 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068738 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068738;

(y) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068740 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068740 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068740;

(z) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 068742 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068742 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068742;

(aa) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068744 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068744 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068744;

(bb) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068746 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068746 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068746;

(cc) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068748 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068748 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068748;

(dd) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068750 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068750 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068750;

(ee) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068752 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068752 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068752;

(ff) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068754 e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068754 e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de

P1-068754;

(gg) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E55A e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761_E55A e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068761_E55A;

(hh) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_H100G e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761_H100G e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068761_H100G;

(ii) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E56N e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761_E56N e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068761_E56N;

(jj) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E55A_E56N e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E55A_E56N e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E30D e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761_E30D e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068761_E30D;

(ll) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E30D_E55A e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E30D_E55A e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E56N_H100G e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E56N_H100G e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 068761_E30D_H100G e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E30D_H100G e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E30D_E56N e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E30D_E56N e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068761_E100fF;

(qq) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E55A_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E55A_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_H100G_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_H100G_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E30D_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E30D_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E56N_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E56N_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E32Y e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068761_E32Y e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068761_E32Y;

(vv) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E32Y_E55A e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E32Y_E55A e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E32Y_E56N e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E32Y_E56N e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E30D_E32Y e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E30D_E32Y e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E32Y_H100G e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E32Y_H100G e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068761_E32Y_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068761_E32Y_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_D52N_D102V e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_D52N_D102V e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 068767_D52N e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068767_D52N e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068767_D52N;

(ccc) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_D52N_E55A e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_D52N_E55A e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E55A_D102V e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E55A_D102V e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_D102V e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068767_D102V e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068767_D102V;

(fff) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E55A e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068767_E55A e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E55A;

(ggg) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E30D_D52N e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E30D_D52N e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E30D_D102V e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E30D_D102V e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E30D e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068767_E30D e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068767_E30D;

(jjj) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E30D_E55A e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E30D_E55A e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E100fF_D102V e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E100fF_D102V e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E55A_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E55A_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_D52N_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_D52N_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-068767_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

068767_E30D_E100fF e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

068767_E30D_E100fF e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1- 061029_F100fE_V102D e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

061029_F100fE_V102D e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

061029_F100fE e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-061029_F100fE e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-061029_F100fE;

(rrr) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

061029_V102D e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-061029_V102D e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-061029_V102D;

(sss) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

061029_Y32E e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-061029_Y32E e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos

91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,

pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%

idênticas à VH e VL de P1-061029_Y32E; ou

(ttt) uma VH compreendendo as CDRs VH da VH de P1-

061029_Y32E_F100fE e uma VL compreendendo as CDRs VL de P1-

061029_Y32E_F100fE e sequências de aminoácidos VH e VL que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à VH e VL de P1-061029_Y32E_F100fE; e

- opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a

(ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[119] Em alguns dos exemplos de realização acima, a VH e/ou VL pode diferir da sequência de cada uma das espécies de (a) a (ttt) pela presença de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras. Em alguns exemplos de realização, a VH pode compreender uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[120] Um Ab anti-hVISTA Ab pode compreender: (a) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 e uma VL que consiste na VL de P1-061029; (b) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e uma VL que consiste na VL de P1-061015; (c) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e uma VL que consiste na VL de P1-068757; (d) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068759 e uma VL que consiste na VL de P1-068759; (e) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761 e uma VL que consiste na VL de P1-068761; (f) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e uma VL que consiste na VL de P1-068763; (g) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068765 e uma VL que consiste na VL de P1-068765; (h) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767 e uma VL que consiste na VL de P1-068767; (i) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068769 e uma VL que consiste na VL de P1-068769; (j) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068771 e uma VL que consiste na VL de P1-068771; (k) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068773 e uma VL que consiste na VL de P1-068773;

(l) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068775 e uma VL que consiste na VL de P1-068775;

(m) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069059 e uma VL que consiste na VL de P1-069059;

(n) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069061 e uma VL que consiste na VL de P1-069061;

(o) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069063 e uma VL que consiste na VL de P1-069063;

(p) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069065 e uma VL que consiste na VL de P1-069065;

(q) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069067 e uma VL que consiste na VL de P1-069067;

(r) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069069 e uma VL que consiste na VL de P1-069069;

(s) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069071 e uma VL que consiste na VL de P1-069071;

(t) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069073 e uma VL que consiste na VL de P1-069073;

(u) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069075 e uma VL que consiste na VL de P1-069075;

(v) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-069077 e uma VL que consiste na VL de P1-069077;

(w) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068736 e uma VL que consiste na VL de P1-068736;

(x) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068738 e uma VL que consiste na VL de P1-068738;

(y) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068740 e uma VL que consiste na VL de P1-068740;

(z) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068742 e uma VL que consiste na VL de P1-068742;

(aa) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068744 e uma VL que consiste na VL de P1-068744;

(bb) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH f P1-068746 e uma VL que consiste na VL de P1-068746;

(cc) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068748 e uma VL que consiste na VL de P1-068748;

(dd) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068750 e uma VL que consiste na VL de P1-068750;

(ee) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068752 e uma VL que consiste na VL de P1-068752;

(ff) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068754 e uma VL que consiste na VL de P1-068754;

(gg) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068761_E55A;

(hh) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068761_H100G;

(ii) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068761_E56N;

(jj) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068761_E30D;

(ll) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068761_E100fF;

(qq) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E100fF; (tt) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068761_E32Y;

(vv) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068767_D52N;

(ccc) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D102V e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068767_D102V;

(fff) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068767_E55A;

(ggg) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da

VL de P1-068767_E30D;

(jjj) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_D52N_E100fF; (nnn) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E100fF; (ooo) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-068767_E30D_E100fF; (ppp) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_F100fE_V102D; (qqq) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_F100fE; (rrr) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_V102D; (sss) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_Y32E; ou (ttt) uma VH que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e uma VL que consiste na sequência de aminoácidos da VL de P1-061029_Y32E_F100fE; e - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[121] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-VISTA compreende qualquer uma das regiões variáveis e/ou CDRs 1-3 de região variável dos anticorpos descritos acima e em outros lugares na presente invenção, tais como:

(1) uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de:

(2) a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de:

(3) a VH de:

(4) uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de:

(5) a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de

VL;

(6) a VH e VL de: ou

(7) a VL e a VH, com exceção de uma ou ambas as substituições K16R e T84A em VH (no caso da P1-061029 ou seus descendentes), de:

- P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-

068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-

068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-

069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-

068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-

068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-

068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-

068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-

068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-

068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-

068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-

068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-

068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V,

P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-

068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-

068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE; e o Ab anti-VISTA também é um anticorpo IgG, tal como anticorpo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 ou uma forma modificada do mesmo, conforme descrito na seção abaixo. Em alguns exemplos de realização, a região constante tem função efetora e, em alguns exemplos de realização, a região constante carece de função efetora. Em certos exemplos de realização, a região constante é a da IgG1.3.

[122] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-VISTA compreende qualquer uma das regiões variáveis e/ou CDRs 1-3 de região variável dos anticorpos descritos acima e em outros lugares na presente invenção, tais como: (1) uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de: (2) a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de: (3) a VH de: (4) uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e uma ou mais de CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: (5) a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH e CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: (6) a VH e VL de: ou (7) a VL e a VH, com exceção de uma ou ambas as substituições K16R e T84A em VH (no caso da P1-061029 e seus descendentes), de: - P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1- 068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1- 068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-

068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-

068748, P1-068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-

068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-

068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-

068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-

068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-

068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-

068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-

068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V,

P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-

068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-

068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-

068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1-

068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1-

061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1-

061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE;

- e compreende ainda uma ou mais das seguintes características:

- se liga especificamente ao hVISTA, por exemplo, região rica em histidina do ECD ou um polipeptídeo compreendendo os resíduos de aminoácidos 35-127 de SEQ ID NO: 2, em pH ácido, por exemplo, pH 6,0 ou pH 6,5;

- carece de ligação significativa ao hVISTA, por exemplo,

região rica em histidina do ECD ou um polipeptídeo compreendendo os resíduos de aminoácidos 35-127 de SEQ ID NO: 2, em pH fisiológico ou pH neutro, por exemplo, pH 7,4 ou pH 7,0;

- liga-se especificamente ao VISTA de cinomolgos, por exemplo, região rica em histidina do ECD, em pH ácido, por exemplo, pH 6,0 ou pH 6,5;

- carece de ligação significativa ao VISTA de cinomolgos

(cyno), por exemplo, região rica em histidina do ECD, em pH fisiológico ou pH neutro, por exemplo, pH 7,4 ou pH 7,0;

- tem uma ligação reduzida ao hVISTA-ECD com uma substituição em um ou mais dos seguintes aminoácidos: T35, Y37, K38, T39,

Y41, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119,

H121, H122, S124, E125, R127 em relação ao ECD de hVISTA com a SEQ ID

NO: 2;

- compete cruzadamente pela ligação ao hVISTA com P1-

061029, P1- 068761, P1-068767 e/ou P1-061015;

- inibe a ligação do hVISTA às células T humanas em pH ácido, por exemplo, pH 6,0 ou pH 6,5;

- inibe a ligação do hVISTA ao PSGL-1 em pH ácido, por exemplo, pH 6,0 ou pH 6,5;(por exemplo, inibindo a interação entre H153 e

H154 do hVISTA com a SEQ ID NO: 1 e tirosinas Y46 e Y48 do PSGL-1), em que o PSGL-1 é com ou sem siail lewis X, e em que as tirosinas são preferencialmente sulfotirosinas;

- tem um tempo médio de permanência (MRT) de pelo menos 100, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 600 ou 700 horas (por exemplo, pelo menos 350 horas) em macacos cinomolgos, medido, por exemplo, conforme descrito no Exemplos;

- estimula a ativação de células T, por exemplo, pelo aumento da proliferação de células T; aumento da produção de IFN-γ a partir de células T; e/ou estimulação da sinalização de NF-kB mediada por receptor de células T;

- inibe a adesão célula:célula mediada por VISTA; - liga-se especificamente ao hVISTA em amostras de células tumorais humanas ou de um tecido humano inflamado;

- contata o hVISTA através de um ou mais (por exemplo, pelo menos 1-3, 1-5, 1-10, 5-10, 5-15 ou todos) resíduos de contato energeticamente importantes Y37, T39, R54, F62, H66, V117, I119 ou S124, conforme determinado, por exemplo, usando a exibição da superfície de levedura e o ensaio NGS descrito no Exemplo 15; e em que a numeração é àquela do hVISTA maduro; - liga-se à Região 1: 57LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566); Região 2: 86RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567); e Região 3: 148VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568) do hVISTA possuindo a SEQ ID NO: 1, e opcionalmente em que a ligação é mais forte à Região 2, conforme determinado por MS-HDX, tal como descrito no Exemplo 21; - liga-se à extensão em folha -β rica em histidina do hVISTA, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, tal como descrito, por exemplo, nos Exemplos; - faz contato com H121, H122 e/ou H123 do hVISTA maduro (distância de 4,0 angstroms (Å) ou menos), tal como através de ligações de hidrogênio, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, como descrito, por exemplo, nos Exemplos; - contata o hVISTA através de pelo menos um ou mais resíduos de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina que estão localizados na CDR1, CDR2 ou CDR3 da VH; e - qualquer conjunto característica adicional apresentada nas reivindicações e/ou nos Exemplos.

[123] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma cadeia pesada (HC) compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada do P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, conforme mostrado abaixo na Tabela de Sequências, compreendendo uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, tal como P1-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 69), P1-068757.IgG1.3, P1-068759.IgG1.3, P1-068761.IgG1.3, P1-068763.IgG1.3, P1-068765.IgG1.3, P1-

068767.IgG1.3, P1-068769.IgG1.3, P1-068771.IgG1.3, P1-068773.IgG1.3, P1-068775.IgG1.3, P1-069059.IgG1.3, P1-069061.IgG1.3, P1-069063.IgG1.3, P1-069065.IgG1.3, P1-069067.IgG1.3, P1-069069.IgG1.3, P1-

069071.IgG1.3, P1-069073.IgG1.3, P1-069075.IgG1.3, P1-069077.IgG1.3, P1-

061015.IgG1.3, P1-068736.IgG1.3, P1-068738.IgG1.3, P1-068740.IgG1.3, P1-

068742.IgG1.3, P1-068744.IgG1.3, P1-068766.IgG1.3, P1-068748.IgG1.3, P1-

068750.IgG1.3, P1-068752.IgG1.3, P1-068754.IgG1.3, P1- 068761_E55A.IgG1.3, P1-068761_H100G.IgG1.3, P1-068761_E56N.IgG1.3, P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3, P1-068761_E30D.IgG1.3, P1- 068761_E30D_E55A.IgG1.3, P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3, P1- 068761_E30D_H100G.IgG1.3, P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3, P1- 068761_E100fF.IgG1.3, P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3, P1- 068761_H100G_E100fF.IgG1.3, P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3, P1- 068761_E56N_E100fF.IgG1.3, P1-068761_E32Y.IgG1.3, P1- 068761_E32Y_E55A.IgG1.3, P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3, P1- 068761_E30D_E32Y.IgG1.3, P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3, P1- 068761_E32Y_E100fF.IgG1.3, P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3, P1- 068767_D52N.IgG1.3, P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3, P1- 068767_E55A_D102V.IgG1.3, P1-068767_D102V.IgG1.3, P1- 068767_E55A.IgG1.3, P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3, P1- 068767_E30D_D102V.IgG1.3, P1-068767_E30D.IgG1.3, P1- 068767_E30D_E55A.IgG1.3, P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3, P1- 068767_E55A_E100fF.IgG1.3, P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3, P1-

068767_E100fF.IgG1.3, P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3, P1- 061029_F100fE_V102D.IgG1.3, P1-061029_F100fE.IgG1.3, P1- 061029_V102D.IgG1.3, P1-061029_Y32E.IgG1.3, ou P1- 061029_Y32E_F100fE.IgG1.3, opcionalmente em que a VH compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[124] Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de qualquer um dos Abs anti-hVISTA fornecidos na presente invenção, que compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3 e a sequência de aminoácidos da cadeia leve de qualquer um dos Abs anti- hVISTA fornecidos na presente invenção. Em certos exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, que compreende uma região constante HC de IgG1.3, tal como P1-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 69), P1-068757.IgG1.3, P1-068759.IgG1.3, P1-068761.IgG1.3, P1-068763.IgG1.3, P1-068765.IgG1.3, P1-

069071.IgG1.3, P1-069073.IgG1.3, P1-069075.IgG1.3, P1-069077.IgG1.3, P1-

061015.IgG1.3, P1-068736.IgG1.3, P1-068738.IgG1.3, P1-068740.IgG1.3, P1-

068742.IgG1.3, P1-068744.IgG1.3, P1-068766.IgG1.3, P1-068748.IgG1.3, P1-

068750.IgG1.3, P1-068752.IgG1.3, P1-068754.IgG1.3, P1- 068761_E55A.IgG1.3, P1-068761_H100G.IgG1.3, P1-068761_E56N.IgG1.3, P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3, P1-068761_E30D.IgG1.3, P1- 068761_E30D_E55A.IgG1.3, P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3, P1- 068761_E30D_H100G.IgG1.3, P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3, P1- 068761_E100fF.IgG1.3, P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3, P1-

068761_H100G_E100fF.IgG1.3, P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3, P1- 068761_E56N_E100fF.IgG1.3, P1-068761_E32Y.IgG1.3, P1- 068761_E32Y_E55A.IgG1.3, P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3, P1- 068761_E30D_E32Y.IgG1.3, P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3, P1- 068761_E32Y_E100fF.IgG1.3, P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3, P1- 068767_D52N.IgG1.3, P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3, P1- 068767_E55A_D102V.IgG1.3, P1-068767_D102V.IgG1.3, P1- 068767_E55A.IgG1.3, P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3, P1- 068767_E30D_D102V.IgG1.3, P1-068767_E30D.IgG1.3, P1- 068767_E30D_E55A.IgG1.3, P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3, P1- 068767_E55A_E100fF.IgG1.3, P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3, P1- 068767_E100fF.IgG1.3, P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3, P1- 061029_F100fE_V102D.IgG1.3, P1-061029_F100fE.IgG1.3, P1- 061029_V102D.IgG1.3, P1-061029_Y32E.IgG1.3 ou P1- 061029_Y32E_F100fE.IgG1.3, opcionalmente em que a VH compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de cadeia leve do P1-061029 ou P1-061015.

[125] Um Ab anti-hVISTA Ab pode compreender: (a) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 69) e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70); (b) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061015.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015; (c) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068757.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757;

(d) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068759.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759;

(e) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761;

(f) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068763.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

(g) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068765.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

(h) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767;

(i) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068769.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

(j) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068771.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

(k) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068773.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

(l) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068775.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

(m) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069059.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

(n) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069061.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

(o) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069063.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

(p) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069065.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

(q) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069067.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

(r) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069069.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

(s) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069071.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

(t) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069073.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

(u) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069075.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075; (v) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069077.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

(w) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068736.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

(x) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068738.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

(y) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068740.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

(z) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068742.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

(aa) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068744.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

(bb) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada f P1-068746.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

(cc) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068748.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

(dd) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068750.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

(ee) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068752.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

(ff) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068754.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

(gg) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_H100G;

(ii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D102V;

(fff) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de

P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 068767_E100fF; ou

(ooo) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF; (ppp) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_F100fE_V102D e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_F100fE_V102D; (qqq) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_F100fE.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_F100fE; (rrr) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_V102D.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_V102D; (sss) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_Y32E.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_Y32E; ou (ttt) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE; e - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[126] Um Ab anti-hVISTA Ab pode compreender: (a) uma cadeia pesada (HC) compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-061029 e uma cadeia leve (LC) compreendendo as CDRs LC de

P1-061029 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%,

pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-061029.IgG1.3, respectivamente;

(b) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

061015 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-061015 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-061015.IgG1.3, respectivamente;

(c) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068757 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068757 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068757.IgG1.3, respectivamente;

(d) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068759 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068759 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068759.IgG1.3, respectivamente;

(e) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068761 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068761.IgG1.3, respectivamente;

(f) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068763 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068763 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068763.IgG1.3, respectivamente;

(g) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068765 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068765 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068765.IgG1.3, respectivamente;

(h) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068767 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068767.IgG1.3, respectivamente;

(i) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068769 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068769 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068769.IgG1.3, respectivamente;

(j) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068771 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068771 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068771.IgG1.3, respectivamente;

(k) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068773 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068773 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068773.IgG1.3, respectivamente;

(l) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068775 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068775 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068775.IgG1.3, respectivamente;

(m) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069059 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069059 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069059.IgG1.3, respectivamente;

(n) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069061 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069061 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069061.IgG1.3, respectivamente; (o) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069063 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069063 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069063.IgG1.3, respectivamente;

(p) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069065 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069065 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069065.IgG1.3, respectivamente;

(q) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069067 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069067 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069067.IgG1.3, respectivamente;

(r) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069069 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069069 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069069.IgG1.3, respectivamente;

(s) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069071 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069071 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

P1-069071.IgG1.3, respectivamente;

(t) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069073 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069073 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069073.IgG1.3, respectivamente;

(u) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069075 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069075 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069075.IgG1.3, respectivamente;

(v) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

069077 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-069077 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-069077.IgG1.3, respectivamente;

(w) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068736 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068736 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068736.IgG1.3, respectivamente;

(x) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068738 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068738 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068738.IgG1.3, respectivamente;

(y) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068740 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068740 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068740.IgG1.3, respectivamente;

(z) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068742 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068742 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068742.IgG1.3, respectivamente;

(aa) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068744 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068744 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068744.IgG1.3, respectivamente;

(bb) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068746 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068746 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068746.IgG1.3, respectivamente; (cc) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068748 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068748 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068748.IgG1.3, respectivamente;

(dd) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068750 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068750 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068750.IgG1.3, respectivamente;

(ee) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068752 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068752 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068752.IgG1.3, respectivamente;

(ff) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068754 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-068754 e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos

92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%,

pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de

P1-068754.IgG1.3, respectivamente;

(gg) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E55A.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E55A e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E55A.IgG1.3,

respectivamente;

(hh) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_H100G.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_H100G e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_H100G.IgG1.3,

respectivamente;

(ii) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E56N.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E56N e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E56N.IgG1.3,

respectivamente;

(jj) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E55A_E56N.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E55A_E56N e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3,

respectivamente;

(kk) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E30D.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E30D e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E30D.IgG1.3,

respectivamente;

(ll) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E30D_E55A.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E30D_E55A e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3,

respectivamente;

(mm) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E56N_H100G.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E56N_H100G e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3,

respectivamente;

(nn) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E30D_H100G.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E30D_H100G e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3,

respectivamente;

(oo) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E30D_E56N.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E30D_E56N e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3,

respectivamente;

(pp) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(qq) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E55A_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E55A_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(rr) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_H100G_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_H100G_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-

068761_H100G_E100fF.IgG1.3, respectivamente;

(ss) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E30D_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E30D_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(tt) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E56N_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E56N_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(uu) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E32Y.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E32Y e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E32Y.IgG1.3,

respectivamente;

(vv) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E32Y_E55A.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E32Y_E55A e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3,

respectivamente;

(ww) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E32Y_E56N.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E32Y_E56N e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3,

respectivamente;

(xx) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E30D_E32Y.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E30D_E32Y e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3,

respectivamente;

(yy) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E32Y_H100G.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E32Y_H100G e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3,

respectivamente;

(zz) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068761_E32Y_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068761_E32Y_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(aaa) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_D52N_D102V.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_D52N_D102V e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3,

respectivamente;

(bbb) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_D52N.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_D52N e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_D52N.IgG1.3,

respectivamente;

(ccc) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_D52N_E55A.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_D52N_E55A e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3,

respectivamente;

(ddd) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E55A_D102V.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E55A_D102V e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3,

respectivamente;

(eee) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_D102V.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_D102V e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_D102V.IgG1.3,

respectivamente;

(fff) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E55A.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E55A e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E55A.IgG1.3,

respectivamente;

(ggg) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E30D_D52N.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E30D_D52N e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3,

respectivamente;

(hhh) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E30D_D102V.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E30D_D102V e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3,

respectivamente;

(iii) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E30D.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E30D e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E30D.IgG1.3,

respectivamente;

(jjj) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E30D_E55A.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E30D_E55A e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3,

respectivamente;

(kkk) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E100fF_D102V.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E100fF_D102V e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-

068767_E100fF_D102V.IgG1.3, respectivamente;

(lll) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E55A_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E55A_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(mmm) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de

P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de

P1-068767_D52N_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(nnn) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%,

pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(ooo) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

068767_E30D_E100fF.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

068767_E30D_E100fF e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3,

respectivamente;

(ppp) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

061029_F100fE_V102D.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

061029_F100fE_V102D e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,

ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-

061029_F100fE_V102D.IgG1.3, respectivamente;

(qqq) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1-

061029_F100fE.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1-

061029_F100fE e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-061029_F100fE.IgG1.3,

respectivamente; (rrr) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1- 061029_V102D.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1- 061029_V102D e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-061029_V102D.IgG1.3, respectivamente; (sss) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1- 061029_Y32E.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1- 061029_Y32E e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-061029_Y32E.IgG1.3, respectivamente; ou (ttt) uma HC compreendendo as CDRs de HC da HC de P1- 061029_Y32E_F100fE.IgG1.3 e uma LC compreendendo as CDRs LC de P1- 061029_Y32E_F100fE e sequências de aminoácidos HC e LC que são pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idênticas à HC e LC de P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3, respectivamente.

[127] Em alguns dos exemplos de realização acima, a HC e/ou LC pode diferir da sequência de cada uma das espécies de (a) a (ttt) pela presença de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos, tais como 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras. Em alguns exemplos de realização, por exemplo, a HC de P1-061029 ou um de seus descendentes pode compreender uma ou ambas as substituições K16R e T84A na região VH da HC (P1-061015 e seu descendente já têm um R e um A nessas posições, respectivamente).

[128] Em alguns exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA pode compreender: (a) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029; (b) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061015.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015; (c) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068757.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757; (d) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068759.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759; (e) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761; (f) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068763.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763; (g) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068765.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765; (h) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767; (i) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068769.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

(j) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068771.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

(k) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068773.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

(l) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068775.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

(m) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069059.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

(n) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069061.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

(o) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069063.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

(p) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069065.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

(q) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069067.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067; (r) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069069.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

(s) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069071.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

(t) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069073.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

(u) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069075.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

(v) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-069077.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

(w) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068736 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

(x) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068738.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

(y) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068740.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

(z) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068742.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

(aa) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068744.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

(bb) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada f P1-068746.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

(cc) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068748.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

(dd) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068750.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

(ee) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068752.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

(ff) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068754 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

(gg) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_H100G;

(ii) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E55A_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E55A_E56N;

(kk) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E56N_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E55A_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_H100G_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E56N_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E56N_E100fF;

(uu) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_E56N.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E30D_E32Y.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_H100G.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068761_E32Y_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D52N_D102V;

(bbb) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E55A_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 068767_E55A_D102V;

(eee) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D102V;

(fff) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_D52N.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E30D_D102V;

(iii) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_E55A.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E100fF_D102V.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E55A_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_D52N_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-068767_E30D_E100fF.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_F100fE_V102D.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_F100fE.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-

061029_F100fE;

(rrr) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_V102D.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_V102D;

(sss) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_Y32E.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_Y32E; ou (ttt) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia pesada de P1-061029_Y32E_F100fE.IgG1.3 e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1- 061029_Y32E_F100fE; e - em que, opcionalmente a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[129] Em alguns exemplos de realização, a invenção contempla mAbs anti-VISTA compreendendo: - uma cadeia pesada que consiste nas sequências de aminoácidos da cadeia pesada de (a) a (ttt) listadas acima, seguida por um resíduo de Lys; - uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de cadeia leve de (a) a (ttt) listadas acima; e - em que as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e da cadeia leve são escolhidas a partir da mesma espécie de anticorpo entre (a) a (ttt) listadas acima.

[130] Em alguns exemplos de realização, um Ab anti- hVISTA pode compreender uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos VH da espécie de anticorpo aqui descritos, mas em vez de uma região constante de cadeia pesada de IgG1.3, como fornecida nas sequências HC na Tabela de Sequências aqui descritas (e ver SEQ ID NO: 163), o anticorpo pode compreender uma sequência de região constante de cadeia pesada diferente, tal como uma região constante de IgG1 de tipo selvagem humana tal como alotipo f de IgG1 humana (IgG1f) (SEQ ID NO: 182) ou uma região constante de IgG1 humana modificada, tal como

IgG1.1f (SEQ ID NO: 183), ou uma região constante de IgG1 humana modificada, tal como IgG1.P238K (SEQ ID NO: 184). Consequentemente, os exemplos de realização desta invenção incluem Abs anti-VISTA compreendendo:

(a) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 (SEQ ID NO: 67) e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70);

(b) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015;

(c) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757;

(d) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068759 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759;

(e) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761;

(f) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

(g) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068765 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

(h) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767;

(i) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068769 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

(j) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068771 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

(k) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068773 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

(l) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068775 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

(m) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069059 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

(n) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069061 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

(o) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069063 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

(p) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069065 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

(q) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069067 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

(r) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069069 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

(s) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069071 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

(t) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069073 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

(u) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069075 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

(v) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069077 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

(w) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068736 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

(x) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068738 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

(y) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068740 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

(z) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068742 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

(aa) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068744 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

(bb) uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da VH de P1-068746 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

(cc) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068748 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

(dd) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068750 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

(ee) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068752 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

(ff) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068754 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

(gg) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G;

(ii) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D102V;

(fff) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE;

(rrr) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_V102D; (sss) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E; ou (ttt) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE; - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[131] Em alguns exemplos de realização, a LC pode ser conforme especificado em (a) a (ttt) acima, mas a HC pode diferir da sequência de cada uma das espécies de (a) a ttt) pela presença de 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos, tal como por 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições conservadoras. Em alguns exemplos de realização, por exemplo, a HC de P1- 061029 ou um de seus descendentes pode compreender uma ou ambas as substituições K16R e T84A na região VH da HC (P1-061015 e seu descendente já têm um R na posição VH 16 e um A na posição VH 84).

[132] Alguns exemplos de realização da presente invenção incluem Abs anti-VISTA compreendendo: (a) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 (SEQ ID NO: 67) e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70);

(b) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015;

(c) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757;

(d) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068759 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759;

(e) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761;

(f) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

(g) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068765 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

(h) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767;

(i) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068769 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

(j) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068771 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

(k) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068773 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

(l) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068775 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

(m) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069059 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

(n) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069061 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

(o) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069063 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

(p) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069065 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

(q) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069067 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

(r) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069069 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

(s) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069071 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

(t) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069073 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

(u) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069075 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

(v) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069077 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

(w) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068736 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

(x) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068738 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

(y) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068740 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

(z) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068742 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

(aa) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068744 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

(bb) uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos da VH de P1-068746 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

(cc) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068748 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

(dd) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068750 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

(ee) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068752 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

(ff) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068754 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

(gg) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G;

(ii) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E56N;

(kk) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_E100fF;

(uu) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_D102V;

(bbb) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D102V;

(fff) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D102V;

(iii) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE;

(rrr) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_V102D;

(sss) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E; ou

(ttt) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 182, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE; - em que o aminoácido C-terminal da VH e o aminoácido N- terminal de SEQ ID NO: 182 formam uma ligação peptídica; e - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[133] Em alguns exemplos de realização, a invenção contempla mAbs anti-VISTA compreendendo: - uma cadeia pesada que consiste nas sequências de aminoácidos de (i), uma VH de (a) a (ttt) listadas acima, (ii) SEQ ID NO: 182 e (iii) um resíduo de Lys, em que o aminoácido C-terminal da VH e o aminoácido N-terminal de SEQ ID NO: 182 formam uma ligação peptídica e em que o aminoácido C-terminal de SEQ ID NO: 182 está ligado ao N-terminal da Lys; - uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de cadeia leve de (a) a (ttt) listadas acima; e - em que a VH e as sequências de aminoácidos da cadeia leve são escolhidas a partir da mesma espécie de anticorpo entre (a) a (ttt) listadas acima.

[134] Alguns exemplos de realização da presente invenção incluem Abs anti-VISTA compreendendo: (a) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 (SEQ ID NO: 67) e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70); (b) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761;

(f) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767; (i) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068769 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

(m) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069059 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063; (p) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069065 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

(t) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069073 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077; (w) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068736 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

(aa) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068744 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748; (dd) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068750 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E56N; (kk) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E100fF; (rr) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_E100fF;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E32Y; (yy) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_D102V;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_D102V;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D102V; (fff) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D102V;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_E100fF; (mmm) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE;

(rrr) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_V102D;

(sss) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E; ou (ttt) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE; e - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[135] Alguns exemplos de realização da presente invenção incluem Abs anti-VISTA compreendendo: (a) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 (SEQ ID NO: 67) e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70); (b) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015; (c) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757; (d) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068759 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759; (e) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761; (f) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

(h) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775; (m) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069059 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

(o) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069063 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071; (t) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069073 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

(v) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069077 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742; (aa) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068744 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

(cc) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068748 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A; (hh) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E56N;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_H100G; (oo) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_E100fF;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y; (vv) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_D102V;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N; (ccc) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_D102V;

(eee) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D102V;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D102V;

SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D; (jjj) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE_V102D; (qqq) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE; (rrr) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_V102D; (sss) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E; ou (ttt) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 183, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE; - em que o aminoácido C-terminal da VH e o aminoácido N- terminal de SEQ ID NO: 183 formam uma ligação peptídica; e - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[136] Em alguns exemplos de realização, a invenção contempla mAbs anti-VISTA compreendendo: - uma cadeia pesada que consiste nas sequências de aminoácidos de (i), uma VH de (a) a (ttt) listadas acima, (ii) SEQ ID NO: 183 e (iii) um resíduo de Lys, em que o aminoácido C-terminal da VH e o aminoácido N-terminal de SEQ ID NO: 183 formam uma ligação peptídica e em que o aminoácido C-terminal de SEQ ID NO: 183 está ligado ao N-terminal da Lys; - uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de cadeia leve de (a) a (ttt) listadas acima; e - em que a VH e as sequências de aminoácidos da cadeia leve são escolhidas a partir da mesma espécie de anticorpo entre (a) a (ttt) listadas acima.

[137] Exemplos de realização adicionais da presente invenção incluem Abs anti-VISTA compreendendo: (a) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 (SEQ ID NO: 67) e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70); (b) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015; (c) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757; (d) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068759 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759; (e) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761; (f) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068763 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

(m) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069059 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

(t) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-069073 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

(aa) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068744 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E56N;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_E100fF;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE;

(rrr) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_V102D; (sss) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E; ou (ttt) uma cadeia pesada compreendendo (i) a sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE; e opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a (ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[138] Exemplos de realização adicionais da presente invenção incluem Abs anti-VISTA compreendendo: (a) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029 (SEQ ID NO: 67) e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029 (SEQ ID NO: 70); (b) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061015 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061015; (c) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068757 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068757;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068759;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068763;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068765;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068769;

(j) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068771 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068771;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068773;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068775;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069059;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069061;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069063;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069065;

(q) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-069067 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069067;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069069;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069071;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069073;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069075;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-069077;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068736;

(x) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068738 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068738;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068740;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068742;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068744;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068746;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068748;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068750;

(ee) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068752 e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068752;

ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068754;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A;

(hh) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N;

(jj) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E56N;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D;

(ll) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E55A;

(mm) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_H100G;

(nn) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_H100G;

(oo) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E56N;

(pp) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E100fF;

(qq) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E55A_E100fF;

(rr) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_H100G_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_H100G_E100fF;

(ss) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E100fF;

(tt) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E56N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E56N_E100fF;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y;

(vv) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E55A;

(ww) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E56N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E56N;

(xx) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E30D_E32Y e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E30D_E32Y;

(yy) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_H100G e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_H100G;

(zz) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068761_E32Y_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068761_E32Y_E100fF;

(aaa) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N;

(ccc) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E55A;

(ddd) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A;

(ggg) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D52N e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D52N;

(hhh) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_D102V;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D;

(jjj) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E55A e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E55A;

(kkk) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF_D102V e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF_D102V;

(lll) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E55A_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E55A_E100fF;

(mmm) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_D52N_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_D52N_E100fF;

(nnn) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E100fF;

(ooo) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-068767_E30D_E100fF e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-068767_E30D_E100fF;

(ppp) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE_V102D e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE_V102D;

(qqq) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_F100fE;

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_V102D;

(sss) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E e (ii) a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E; ou

(ttt) uma cadeia pesada que consiste (i) na sequência de aminoácidos da VH de P1-061029_Y32E_F100fE e (ii) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 184, e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos da cadeia leve de P1-061029_Y32E_F100fE;

- em que o aminoácido C-terminal da VH e o aminoácido N-

terminal de SEQ ID NO: 184 formam uma ligação peptídica; e - opcionalmente em que a VH em qualquer um dos itens de (a) a

(ttt) compreende uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

[139] Em alguns exemplos de realização, a invenção contempla mAbs anti-VISTA compreendendo: - uma cadeia pesada que consiste nas sequências de aminoácidos de (i), uma VH de (a) a (ttt) listadas acima, (ii) SEQ ID NO: 184 e (iii) um resíduo de Lys, em que o aminoácido C-terminal da VH e o aminoácido N-terminal de SEQ ID NO: 184 formam uma ligação peptídica e em que o aminoácido C-terminal de SEQ ID NO: 184 está ligado ao N-terminal da Lys; - uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de cadeia leve de (a) a (ttt) listadas acima; e - em que a VH e as sequências de aminoácidos da cadeia leve são escolhidas a partir da mesma espécie de anticorpo entre (a) a (ttt) listadas acima.

[140] Em alguns exemplos de realização, um Ab anti- hVISTA pode compreender uma sequência de aminoácidos de VH que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à de P1-061029, em que o anticorpo compreende uma CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de P1-061029 em que pelo menos um resíduo foi substituído por um D, um E ou um H. Em alguns exemplos de realização, cada uma das CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061029 contém um, dois ou três resíduos substituídos por D, E ou H. Em alguns exemplos de realização, um Ab anti-hVISTA pode compreender uma sequência de aminoácidos de VH que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à de P1- 061029, em que o anticorpo compreende uma CDR1 de VH compreendendo um ou dois resíduos D ou E nas posições de aminoácidos 4, 5, ou 7 de CDR1, e/ou compreende uma CDR2 de VH com um, dois ou três resíduos D, E ou H nas posições 3, 5, 6 ou

7 de CDR2 e/ou uma CDR3 de VH com um, dois ou três resíduos D, E ou H nas posições 6, 12 ou 14 do CDR3. (consulte a Tabela 5 abaixo para exemplos de anticorpos que caem dentro destes exemplos de realização de realização).

Nesses casos, a região variável de cadeia leve pode compreender as CDR1, CDR2, e/ou CDR3 de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tais como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1- 068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1- 069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1- 069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1- 068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1- 068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1- 068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1- 068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1- 068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1- 068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1- 068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1- 068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1- 068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1- 061029_V102D, P1-061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE, e/ou a região variável da cadeia leve pode ser pelo menos 90%, em menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à de P1- 061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tais como P1-061029, P1-

068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1- 068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1- 069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1- 069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1- 068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1- 068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1- 068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

[141] Em alguns exemplos de realização, um Ab anti- hVISTA pode compreender uma sequência de aminoácidos de VH que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à de P1-061015, em que o anticorpo compreende uma CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de P1-061015 em que pelo menos um resíduo foi substituído por um D, um E ou um H. Em alguns exemplos de realização, cada uma das CDR1, CDR2 e CDR3 de VH de P1-061015 contém um, dois ou três resíduos substituídos por D, E ou H. Em alguns exemplos de realização,

um Ab anti-hVISTA pode compreender uma sequência VH de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à de P1-061015, em que o anticorpo compreende uma CDR1 de VH compreendendo um ou dois resíduos D, E ou H nas posições de aminoácidos 6, 7, 8 e 9 da CDR1, e/ou compreende uma CDR2 de VH com um, dois ou três resíduos D, E, ou H nas posições 1, 2, 4 ou 8-11 da CDR2 e/ou uma CDR3 de VH com um, dois ou três resíduos D, E ou H nas posições 2, 3, 6, 7 ou 12 da CDR3. (consulte a Tabela 6 abaixo, por exemplos de anticorpos que caem dentro destes exemplos de realização de realização).

Nesses casos, a região variável de cadeia leve pode compreender as CDR1, CDR2, e/ou CDR3 de P1-061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tais como P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1- 068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1- 069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1- 069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1- 068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1- 068750, P1-068752 P1-068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1- 068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1- 068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1- 068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1- 068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1- 068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1- 068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1-

068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1- 061029_V102D, P1-061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE, e/ou a região variável da cadeia leve pode ser pelo menos 90%, em menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à de P1- 061029 ou P1-061015 ou seus descendentes, tais como P1-061029, P1- 068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1- 068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1- 069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1- 069075, P1-069077, P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1- 068742, P1-068744, P1-068766, P1-068748, P1-068750, P1-068752 P1- 068754, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1- 068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G, P1-068761_E30D_H100G, P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

[142] Em alguns exemplos de realização, tal anticorpo descendente anti-hVISTA P1-061029 ou P1-061015 modificado possui uma ou mais das seguintes características:

- carece de ligação significativa ao hVISTA, por exemplo,

- carece de ligação significativa ao VISTA de cinomolgos

Y41, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119,

H121, H122, S124, E125, R127 em relação ao ECD de hVISTA com a SEQ ID

NO: 2;

- compete cruzadamente pela ligação ao hVISTA com P1-

061029, P1- 068761, P1-068767 e/ou P1-061015;

- inibe a ligação do hVISTA ao PSGL-1 em pH ácido, por exemplo, pH 6,0 ou pH 6,5;(por exemplo, inibindo a interação entre H153 e H154 do hVISTA com a SEQ ID NO: 1 e tirosinas Y46 e Y48 do PSGL-1), em que o PSGL-1 é com ou sem siail lewis X, e em que as tirosinas são preferencialmente sulfotirosinas;

- estimulação da ativação de células T, por exemplo, pelo aumento da proliferação de células T; aumento da produção de IFN-γ a partir de células T; e/ou estimulação da sinalização de NF-kB mediada por receptor de células T;

- inibe a adesão célula:célula mediada por VISTA;

- liga-se especificamente ao hVISTA em amostras de células tumorais humanas ou de um tecido humano inflamado;

- contata o hVISTA através de um ou mais (por exemplo,

pelo menos 1-3, 1-5, 1-10, 5-10, 5-15 ou todos) resíduos de contato energeticamente importantes Y37, T39, R54, F62, H66, V117, I119 ou S124,

conforme determinado, por exemplo, usando a exibição da superfície de levedura e o ensaio NGS descrito no Exemplo 15; e em que a numeração é àquela do hVISTA maduro;

- liga-se à Região 1: 57LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO:

566); Região 2: 86RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567); e Região 3:

148VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568) do hVISTA possuindo a

SEQ ID NO: 1, e opcionalmente em que a ligação é mais forte à Região 2,

conforme determinado por MS-HDX, tal como descrito no Exemplo 21;

- liga-se à extensão em folha-β rica em histidina do hVISTA,

conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, tal como descrito, por exemplo, nos Exemplos; - faz contato com H121, H122 e/ou H123 do hVISTA maduro

(distância de 4,0 angstroms (Å) ou menos), tal como através de ligações de hidrogênio, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, como descrito, por exemplo, nos Exemplos; - contata o hVISTA através de pelo menos um ou mais resíduos de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina que estão localizados na CDR1, CDR2 ou CDR3 da VH; e - qualquer conjunto característica adicional apresentada nas reivindicações e/ou nos Exemplos.

EXEMPLOS DE REGIÕES CONSTANTES DE ANTICORPO

[143] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo descrito na presente invenção compreende uma ou mais regiões constantes humanas.

Em alguns exemplos de realização, a região constante de cadeia pesada humana é de um isotipo selecionado a partir da IgA, IgG e IgD. Em alguns exemplos de realização, a região constante da cadeia leve humana é de um isotipo selecionado a partir de κ e λ. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo aqui descrito compreende uma região constante de IgG humana, tal como uma IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo descrito na presente invenção compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana. Em alguns destes exemplos de realização, um anticorpo descrito na presente invenção compreende uma mutação S241P na região constante de IgG4 humana. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo descrito na presente invenção compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG4 humana e uma de cadeia leve κ humana.

[144] A escolha da região constante de cadeia pesada pode determinar se um anticorpo terá ou não uma função efetora in vivo. Tal função efetora, em alguns exemplos de realização, inclui citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC) e/ou citotoxicidade dependente do complemento (CDC), e pode resultar na morte da célula à qual o anticorpo está ligado. Em alguns métodos de tratamento, incluindo métodos para tratar alguns câncers, a morte celular pode ser desejável, por exemplo, quando o anticorpo se liga a uma célula que suporta a manutenção ou o crescimento do tumor. Exemplos de células que podem suportar a manutenção ou o crescimento de um tumor incluem, mas não se limitam as, próprias células tumorais, células que auxiliam no recrutamento de vasculatura para o tumor e células que fornecem ligantes, fatores de crescimento ou contrarreceptores que suportam ou promovem o crescimento tumoral ou a sobrevivência do tumor.

Em alguns exemplos de realização, quando a função efetora é desejável, é selecionado um anticorpo que compreende uma cadeia pesada de IgG1 humana ou uma cadeia pesada de IgG3 humana.

[145] Em determinados exemplos de realização, um anticorpo fornecido na presente invenção é alterado para aumentar ou diminuir a extensão em que o anticorpo é glicosilado. A adição ou deleção de sítios de glicosilação em um anticorpo pode ser convenientemente realizada alterando a sequência de aminoácidos de tal modo que um ou mais sítios de glicosilação é criado ou removido.

[146] Quando o anticorpo compreende uma região Fc, os carboidratos ligados a estes podem ser alterados. Anticorpos nativos produzidos por células de mamíferos geralmente compreendem um oligossacarídeo ramificado, bianternário que geralmente está ligado por uma ligação N a um Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Vide, por exemplo, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Os oligossacarídeos podem incluir vários carboidratos, por exemplo, manose, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada a um GlcNAc no “tronco” da estrutura do oligossacarídeo bianternário. Em alguns exemplos de realização, as modificações dos oligossacarídeos em um anticorpo da invenção podem ser feitas a fim de criar anticorpos com certas propriedades melhoradas.

Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um anticorpo pode ser afucosilado, por exemplo, por mutação de resíduos tais como Asn297 que são normalmente glicosilados com glicosilações contendo fucose, ou através de outros meios. Em alguns exemplos de realização, os anticorpos aqui incluídos podem compreender uma região constante de IgG1 humana afucosilada.

[147] Os anticorpos são fornecidos adicionalmente com oligossacarídeos divididos, por exemplo, onde um oligossacarídeo bianternário anexado a região Fc do anticorpo é cortado pela GlcNAc. Tais anticorpos podem possuir fucosilação reduzida e/ou função ADCC melhorada. Exemplos de tais anticorpos são descritos, por exemplo, no documento WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al); (Umana et al) na Patente US 6.602.684, e US 2005/0123546 (Umana et al.). Também são fornecidos anticorpos com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc. Esses anticorpos podem ter a função CDC melhorada. Tais anticorpos estão descritos, por exemplo, no documento WO 1997/30087 (Patel et al.); documento WO 1998/58964 (Raju, S.) e documento WO 1999/22764 (Raju, S.).

[148] Os anticorpos também são fornecidos com extensões líderes no amino-terminal. Por exemplo, um ou mais resíduos de aminoácidos da sequência líder do terminal amino estão presentes no terminal amino de qualquer uma ou mais cadeias pesadas ou leves de um anticorpo. Uma extensão líder amino-terminal exemplar compreende ou consiste em três resíduos de aminoácidos, VHS, presentes em uma ou em ambas as cadeias leves de um anticorpo.

[149] A meia-vida in vivo ou sérica de polipeptídeos de ligação de alta afinidade ao FcRn humano pode ser testada, por exemplo, em camundongos transgênicos, em humanos ou em primatas não humanos aos quais os polipeptídeos com uma região Fc variante são administrados. Veja também, por exemplo, Petkova et al. International Immunology 18 (12):1759- 1769 (2006).

[150] Em alguns exemplos de realização da invenção, um anticorpo afucosilado medeia ADCC na presença de células efetoras humanas mais eficazmente do que um anticorpo parental que carece de fucose.

Geralmente, a atividade ADCC pode ser determinada utilizando o ensaio ADCC in vitro conforme divulgado na presente invenção, mas outros ensaios ou métodos para determinar a atividade ADCC, por exemplo, em um modelo animal, etc., também são contemplados.

[151] Em certos exemplos de realização, a região Fc é alterada substituindo pelo menos um resíduo de aminoácido por um resíduo de aminoácido diferente para alterar a(s) função(ões) efetoras do anticorpo. Por exemplo, um ou mais aminoácidos selecionados a partir dos resíduos de aminoácidos 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320, 322, 330 e/ou 331 podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente, de tal modo que o anticorpo tenha uma afinidade alterada para um ligante efetor, mas retém a capacidade de ligação ao antígeno do anticorpo parental. O ligante efetor ao qual a afinidade é alterada pode ser, por exemplo, um receptor Fc ou o componente C1 do complemento. Esta abordagem é descrita em maior detalhe nas Patentes U.S. 5.624,821 e 5.648.260, ambas por Winter et al.

[152] Em alguns exemplos, um ou mais aminoácidos selecionados a partir dos resíduos de aminoácidos 329, 331 e 322 podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente, de tal modo que o anticorpo alterou a ligação a C1q e/ou reduziu ou aboliu a citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Esta abordagem é descrita em maiores detalhes na Patente US 6.194.551 por Idusogie et al.

[153] Em alguns exemplos, um ou mais resíduos de aminoácidos nas posições de aminoácidos 231 e 239 são alterados para desse modo alterar a capacidade do anticorpo para fixar o complemento. Esta abordagem é descrita na publicação PCT WO 94/29351 por Bodmer et al. Em alguns exemplos, a região Fc pode ser modificada para diminuir a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou para diminuir a afinidade para um receptor Fcγ modificando um ou mais aminoácidos nas seguintes posições: 234, 235, 236, 238, 239, 240, 241 , 243, 244, 245, 247, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 313, 315, 320, 322, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 433, 434, 435, 436, 437, 438 ou 439. As substituições exemplares incluem 236A, 239D, 239E, 268D, 267E, 268E, 268F, 324T, 332D e 332E. Exemplos de variantes incluem 239D/332E, 236A/332E, 236A/239D/332E, 268F/324T, 267E/268F, 267E/324T e 267E/268F7324T. Outras modificações de Fc que podem ser feitas em Fcs são aquelas para reduzir ou ablacionar a ligação a proteínas FcγR e/ou de complemento, reduzindo assim ou ablacionando funções efetoras mediadas por Fc, tais como ADCC, ADCP e CDC.

Modificações exemplificativas incluem, mas não estão limitadas a substituições, inserções e deleções limitadas nas posições 234, 235, 236, 237, 267, 269, 325, 328, 330 e/ou 331 (por exemplo, 330 e 331), em que a numeração de acordo com o índice EU. Substituições exemplificativas incluem, mas não estão limitadas a 234A, 235E, 236R, 237A, 267R, 269R, 325L, 328R, 330S e 331S (por exemplo, 330S e 331S), em que a numeração é de acordo com o índice EU. Uma variante Fc pode compreender 236R/328R. Outras modificações para reduzir FcγR e interações do complemento incluem as substituições 297A, 234A, 235A, 237A, 318A, 228P, 236E, 268Q, 309L, 330S, 331S, 220S, 226S, 229S, 238S, 233P e 234V, bem como a remoção da glicosilação na posição 297 por meios mutacionais ou enzimáticos ou por produção em organismos tais como bactérias que não glicosilam proteínas.

Estas e outras modificações são revistas em Strohl, 2009, Current Opinion in

Biotechnology 20: 685-691. Por exemplo, a região constante de IgG1.3 Fc humana contém substituições L234A, L235E e G237A. O IgG1fa.P238K (ou IgG1.P238K) contém uma substituição de P238K. O IgG1.1f compreende as substituições L234A, L235E, G237A, A330S, e P331S .

[154] As variantes de Fc que aumentam a afinidade para um receptor inibitório FcγRIIb também podem ser usadas. Tais variantes podem fornecer uma proteína de fusão Fc com atividades imunomoduladoras relacionadas com células FcγRIIb, incluindo, por exemplo, células B e monócitos. Em um exemplo de realização, as variantes Fc fornecem uma afinidade seletivamente aumentada para FcγRIIb em relação a um ou mais receptores de ativação. As modificações para alterar a ligação ao FcγRIIb incluem uma ou mais modificações em uma posição selecionada a partir do grupo que consiste em 234, 235, 236, 237, 239, 266, 267, 268, 325, 326, 327, 328, 330, 331 e 332, de acordo com o índice EU. As substituições exemplares para aumentar a afinidade ao FcγRllb incluem, mas não se limitam a 234A, 234D, 234E, 234F, 234W, 235D, 235E, 235F, 235R, 235Y, 236D, 236N, 237A, 237D, 237N, 239D, 239E, 266M, 267D, 267E, 268D, 268E, 327D, 327E, 328F, 328W, 328Y, 330S, 331S, e 332E. Substituições exemplificativas incluem 235Y, 236D, 239D, 266M, 267E, 268D, 268E, 328F, 328W, e 328Y. Outras variantes de Fc para aumentar a ligação a FcγRIIb incluem 235Y/267E, 236D/267E, 239D/268D, 239D/267E, 267E/268D, 267E/268E, e 267E/328F.

[155] Outras modificações para melhorar as interações FcγR e complemento incluem, mas não se limitam às substituições 298 A, 333A, 334A, 326A, 2471, 339D, 339Q, 280H, 290S, 298D, 298V, 243L, 292P, 300L, 396L, 3051 e 396L. Estas e outras modificações são revistas em Strohl, 2009, Current Opinion in Biotechnology 20: 685-691. As modificações de Fc que aumentam a ligação a um receptor Fcγ incluem modificações de aminoácidos em qualquer uma ou mais das posições de aminoácidos 238, 239, 248, 249,

252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 279, 280, 283, 285, 298, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 312, 315, 324, 327, 329, 330, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 379, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ou 439 da região Fc, em que a numeração dos resíduos na região Fc é a do índice EU como na Publicação de Patente No.

WO 00/42072.

[156] Opcionalmente, a região Fc pode compreender um resíduo de aminoácido que não ocorre naturalmente em posições adicionais e/ou alternativas conhecidas de um técnico no assunto (ver, por exemplo, Patentes US 5.624.821; 6.277.375; 6.737.056; 6.194.551; 7.317.091; 8.101.720; Publicações de Patente PCT WO 00/42072; WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 e WO 06/0201 14).

[157] As afinidades e propriedades de ligação de uma região Fc para o seu ligante podem ser determinadas por uma variedade de métodos de ensaio in vitro (ensaios bioquímicos ou imunológicos) conhecidos na técnica incluindo, mas não limitados a métodos de equilíbrio (por exemplo, ensaio imuno-absorvente ligado a enzima (ELISA) ou radioimunoensaio (RIA)) ou cinética (por exemplo, análise BIACORE) e outros métodos tais como ensaios de ligação indireta, ensaios de inibição competitiva, transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET), eletroforese em gel e cromatografia (por exemplo, filtragem em gel). Estes e outros métodos podem utilizar um marcador em um ou mais dos componentes a serem examinados e/ou empregam uma variedade de métodos de detecção, incluindo, mas não limitados a marcadores cromogênicos, fluorescentes, luminescentes ou isotópicos. Uma descrição detalhada das afinidades e cinéticas de ligação pode ser encontrada em Paul, W. E., ed., Fundamental immunology, 4th Ed.,

Lippincott-Raven, Philadelphia (1999), que se concentra nas interações anticorpo-imunogênio.

[158] Em certos exemplos de realização, o anticorpo é modificado para aumentar a sua meia-vida biológica. Várias abordagens são possíveis. Por exemplo, isto pode ser feito aumentando a afinidade de ligação da região Fc para FcRn. Por exemplo, um ou mais dos seguintes resíduos podem ser mutados: 252, 254, 256, 433, 435, 436, como descrito na Patente US 6.277.375. Substituições exemplares específicas incluem uma ou mais dos seguintes: T252L, T254S e/ou T256F. Alternativamente, para aumentar a meia- vida biológica, o anticorpo pode ser alterado dentro da região CH1 ou CL para conter um epítopo de ligação ao receptor selvagem de duas voltas de um domínio CH2 de uma região Fc de uma IgG, como descrito nas Patentes US

5.869.046 e 6.121.022 de Presta et al. Outras variantes exemplificativas que aumentam a ligação ao FcRn e/ou melhoram as propriedades farmacocinéticas incluem substituições nas posições 259, 308, 428 e 434, incluindo, por exemplo, 2591, 308F, 428L, 428M, 434S, 4341 1. 434F, 434Y e 434X1. Outras variantes que aumentam a ligação de Fc a FcRn incluem: 250E, 250Q, 428 L, 428F, 250Q/428L (Hinton et al. 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216, Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356), 256A, 272A, 286A, 305A, 307A, 307Q, 31 1A, 312A, 376A, 378Q, 380A, 382A, 434A (Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604), 252F, 252T, 252Y, 252W, 254T, 256S, 256R, 256Q, 256E, 256D, 256T, 309P, 31 1 S, 433R, 433S, 4331, 433P, 433Q, 434H, 434F, 434Y, 252Y/254T/256E, 433K/434F/436H, 308T/309P/311S (Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171- 5180, Dall'Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514- 23524). Outras modificações para modular a ligação ao FcRn são descritas em Yeung et al., 2010, J Immunol, 182: 7663-7671.

[159] Em certos exemplos de realização, podem ser utilizados isotipos híbridos de IgG com características biológicas particulares. Por exemplo, uma variante híbrida de IgG1/IgG3 pode ser construída substituindo as posições de IgG1 na região CH2 e/ou CH3 pelos aminoácidos de IgG3 nas posições em que os dois isotipos diferem. Assim, pode ser construído um anticorpo de IgG variante híbrido que compreende uma ou mais substituições, por exemplo, 274Q, 276K, 300F, 339T, 356E, 358M, 384S, 392N, 397M, 4221, 435R e 436F. Em alguns exemplos de realização aqui descritas, pode ser construída uma variante híbrida de IgG1/IgG2 substituindo as posições de IgG2 na região CH2 e/ou CH3 por aminoácidos de IgG1 nas posições em que os dois isotipos diferem. Assim, pode ser construído um anticorpo de IgG variante híbrido que compreende uma ou mais substituições, por exemplo, uma ou mais das seguintes substituições de aminoácidos: 233E, 234L, 235L, -236G (referindo-se a uma inserção de uma glicina na posição 236), e 327A.

[160] Além disso, os sítios de ligação da IgG1 humana para FcγRI, FcγRII, FcγRIII e FcRn foram mapeados e variantes com ligação melhorada foram descritas (ver Shields, R. L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276: 6591-6604). Mutações específicas nas posições 256, 290, 298, 333, 334 e 339 mostraram melhorar a ligação a FcγRIII. Adicionalmente, os seguintes mutantes de combinação mostraram melhorar a ligação de FcγRIII: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A e S298A/E333A/K334A, que demonstrou exibir uma ligação aumentada de FcγRIIIa e atividade ADCC (Shields et al., 2001).). Outras variantes de IgG1 com ligação fortemente aumentada a FcγRIIIa foram identificadas, incluindo variantes com mutações S239D/I332E e S239D/I332E/A330L que mostraram o maior aumento na afinidade para FcγRIIIa, uma diminuição na ligação de FcγRIIb e forte atividade citotóxica em macacos cinomolgo (Lazar et al., 2006). A introdução das triplas mutações em anticorpos como o alentuzumabe (específico para CD52), trastuzumabe (específico para HER2/neu), rituximabe (específico para CD20) e cetuximabe (específico para EGFR) se traduziu em atividade ADCC altamente aumentada in vitro, e a variante S239D/I332E mostrou uma capacidade aumentada de depleção de células B em macacos (Lazar et al., 2006).

Adicionalmente, foram identificados mutantes de IgG1 contendo as mutações L235V, F243L, R292P, Y300L e P396L que exibiram uma ligação aumentada a FcγRIIIa e uma atividade ADCC concomitantemente aumentada em camundongos transgênicos que expressam FcγRIIIa humana em modelos de malignidades de células B e câncer da mama (Stavenhagen et al., 2007; Nordstrom et al., 2011). Outros mutantes de Fc que podem ser utilizados incluem: S298A/E333A/L334A, S239D/I332E, S239D/I332E/A330L, L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L e M428L/N434S.

[161] Em certos exemplos de realização, é escolhido um Fc que tenha ligação reduzida a FcγRs. Um exemplo de Fc, por exemplo, IgG1 Fc, com ligação reduzida a FcγR, compreende as seguintes três substituições de aminoácidos: L234A, L235E e G237A.

[162] Em certos exemplos de realização, é escolhido um Fc que tenha fixação do complemento reduzida. Um exemplo de Fc, por exemplo, IgG1 Fc, com fixação reduzida do complemento, tem as seguintes duas substituições de aminoácidos: A330S e P331S.

[163] Em certos exemplos de realização, é escolhido um Fc que não tem essencialmente função efetora, isto é, tem ligação reduzida a FcγRs e fixação reduzida a complemento. Um exemplo de Fc, por exemplo, IgG1 Fc, que é não eficaz compreende as seguintes cinco mutações: L234A, L235E, G237A, A330S e P331S.

[164] Quando se utiliza um domínio constante de IgG4, pode incluir a substituição S228P, que imita a sequência de articulação em IgG1 e estabiliza assim as moléculas de IgG4.

[165] As modificações Fc descritas no documento WO

2017/087678 ou WO 2016/081746 também podem ser utilizadas.

[166] Em certos exemplos de realização, a glicosilação de um anticorpo é modificada. Por exemplo, um anticorpo aglicolisado pode ser produzido (isto é, o anticorpo não possui glicosilação). A glicosilação pode ser alterada para, por exemplo, aumentar a afinidade do anticorpo pelo antígeno.

Tais modificações de carboidratos podem ser conseguidas, por exemplo, alterando um ou mais locais de glicosilação na sequência de anticorpo. Por exemplo, podem ser feitas uma ou mais substituições de aminoácidos que resultam na eliminação de um ou mais locais de glicosilação da região variável para desse modo eliminar a glicosilação nesses locais. Tal glicosilação pode aumentar a afinidade do anticorpo pelo antígeno. Tal abordagem é descrita com mais detalhe nas Patentes US 5.714.350 e 6.350.861 de Co et al.

[167] A glicosilação da região constante em N297 pode ser evitada pela mutação do resíduo N297 para outro resíduo, por exemplo, N297A, e/ou por mutação de um aminoácido adjacente, por exemplo, 298 para assim reduzir a glicosilação em N297.

[168] Adicionalmente ou alternativamente, pode ser produzido um anticorpo que possua um tipo alterado de glicosilação, tal como um anticorpo hipofucosilado possuindo quantidades reduzidas de resíduos fucosil ou um anticorpo possuindo estruturas GlcNac bissectoras aumentadas. Tais padrões de glicosilação alterados demonstraram aumentar a capacidade de ADCC de anticorpos. Tais modificações de carboidratos podem ser realizadas, por exemplo, expressando o anticorpo em uma célula hospedeira com maquinaria de glicosilação alterada. As células com maquinaria de glicosilação alterada foram descritas na técnica e podem ser utilizadas como células hospedeiras nas quais expressam anticorpos recombinantes aqui descritos para assim produzir um anticorpo com glicosilação alterada. Por exemplo, EP 1,176,195 de Hanai et al. descreve uma linhagem celular com um gene FUT8 funcionalmente destruído, que codifica uma fucosil transferase, de tal modo que os anticorpos expressos nessa linhagem celular exibem hipofucosilação. A Publicação PCT WO 03/035835 de Presta descreve uma linhagem de células CHO variante, células Led 3, com capacidade reduzida de se ligar fucose a carboidratos ligados a Asn(297), resultando também na hipofucosilação de anticorpos expressos nessa célula hospedeira (consulte também Shields, R.L.

et al., (2002) J. Biol. Chem. 277: 26733-26740). A Publicação PCT WO 99/54342 de Umana et al. descreve linhagens celulares manipuladas geneticamente para expressar glicosil-transferases modificadoras de glicoproteínas {por exemplo, beta (1,4)-N-acetilglucosaminiltransferase III (GnTIII)) tais que os anticorpos expressos nas linhagens celulares manipuladas geneticamente exibem estruturas GlcNac bissectoras aumentadas que resultam no aumento da atividade ADCC dos anticorpos (consulte também Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180).

[169] Outra modificação dos anticorpos aqui descritos é a peguilação. Um anticorpo pode ser peguilado para, por exemplo, aumentar a meia-vida biológica (por exemplo, sérica) do anticorpo. Para peguilar um anticorpo, o anticorpo, ou fragmento do mesmo, tipicamente é reagido com polietileno glicol (PEG), tal como um derivado de éter ou aldeído reativo de PEG, sob condições em que um ou mais grupos PEG se tornam ligados ao anticorpo ou fragmento de anticorpo. Em alguns exemplos de realização, a peguilação é realizada através de uma reação de acilação ou uma reação de alquilação com uma molécula de PEG reativa (ou um polímero solúvel em água reativo análogo). Como aqui utilizado, o termo “polietileno glicol” pretende abranger qualquer uma das formas de PEG que foram utilizadas para derivar outras proteínas, tais como mono(CI-CIO) alcoxi- ou ariloxi-polietileno glicol ou polietileno glicol-maleimida. Em certos exemplos de realização, o anticorpo a ser peguilado é um anticorpo aglicilado. Os métodos para a pegilação de proteínas são conhecidos na técnica e podem ser aplicados aos anticorpos aqui descritos. Consulte, por exemplo, EP 0154316 de Nishimura et al. e EP 0401384 de Ishikawa et al.

[170] Em vários exemplos de realização, uma ligação de anticorpo ao VISTA aqui descrita é modificada para bloquear seletivamente a ligação ao antígeno em tecidos e ambientes onde a ligação ao antígeno seria prejudicial, mas permite a ligação ao antígeno onde seria benéfico (“anticorpo ativável”). Em um exemplo de realização, uma “máscara” de peptídeo de bloqueio é gerada que se liga especificamente à superfície de ligação ao antígeno do anticorpo e interfere com a ligação do antígeno, cuja máscara está ligada a cada um dos braços de ligação do anticorpo por um ligante clivável por peptidase. Vide, por exemplo, a Patente US 8.518.404 para CytomX. Tais construções são úteis para o tratamento de cânceres nos quais os níveis de protease são muito aumentados no microambiente tumoral em comparação com tecidos não tumorais. A clivagem seletiva do ligante clivável no microambiente tumoral permite a dissociação do peptídeo de mascaramento/bloqueio, permitindo a ligação do antígeno seletivamente no tumor, em vez de em tecidos periféricos nos quais a ligação ao antígeno pode causar efeitos colaterais indesejados. Exemplos de peptídeos bloqueadores ligados a anticorpos são fornecidos em WO 2018/08555.

[171] Alternativamente, em um exemplo de realização relacionado, é desenvolvido um composto de ligação bivalente (“ligante de mascaramento”) que compreende dois domínios de ligação ao antígeno que se liga a ambas superfícies de ligação ao antígeno do anticorpo (bivalente) e interfere com a ligação ao antígeno, em que os dois domínios de ligação de mascaramento estão ligados entre si (mas não ao anticorpo) por um ligante clivável, por exemplo, clivável por uma peptidase. Veja, por exemplo, o pedido de patente interacional WO 2010/077643 para Tegopharm Corp. Os ligantes de mascaramento podem compreender, ou ser derivados do antígeno ao qual o anticorpo se destina a se ligar, ou podem ser gerados de maneira independente. Tais ligantes de mascaramento são úteis para o tratamento de cânceres nos quais os níveis de protease são muito aumentados no microambiente tumoral em comparação com tecidos não tumorais. A clivagem seletiva do ligante clivável no microambiente tumoral permite a dissociação entre os dois domínios de ligação, reduzindo a avidez para as superfícies de ligação ao antígeno do anticorpo. A dissociação resultante do ligante de mascaramento a partir do anticorpo permite a ligação do antígeno no tumor de maneira seletiva, em vez de ocorrer nos tecidos periféricos nos quais a ligação do antígeno pode causar efeitos colaterais indesejados.

ÁCIDOS NUCLEICOS E CÉLULAS HOSPEDEIRAS

[172] Também são fornecidos ácidos nucleicos que codificam um anticorpo ou uma cadeia pesada ou leve do mesmo ou uma porção do mesmo.

Ácidos nucleicos exemplares são fornecidos na Tabela de Sequências.

Qualquer ácido nucleico que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% semelhante a um ácido nucleico na Tabela de Sequências está englobado pela presente invenção. As composições compreendendo ácidos nucleicos que codificam um anticorpo aqui fornecidos são também englobadas, assim como células compreendendo estas e métodos para preparar anticorpos, compreendendo cultivar uma célula transformada com um ácido nucleico codificando um anticorpo anti-VISTA e isolando o anticorpo do meio ou da célula.

[173] Métodos De Tratamento Utilizando Abs De Ligação ao VISTA-ECD e Composições Farmacêuticas Relacionadas

[174] Em certos exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA que se liga ao VISTA em um pH baixo e, por exemplo, não tem ligação significativa em pH neutro ou fisiológico, pode ser um anticorpo antagonista para VISTA, isto é, um anticorpo que inibe a ação de VISTA, tal que uma resposta imune é estimulada. Tais anticorpos podem ser utilizados para o tratamento de doenças em que estimular o sistema imune ou uma resposta imune é desejada, tais como doenças proliferativas (benignas ou malignas), câncer, e doenças infecciosas (por exemplo, infecções virais).

[175] Em certos exemplos de realização, de um anticorpo anti- VISTA que se liga ao VISTA em um pH baixo e, por exemplo, não tem ligação significativa em pH neutro ou fisiológico pode ser um anticorpo agonista para VISTA, isto é, um anticorpo que aumenta a ação de VISTA, de tal modo que uma resposta imune é inibida. Tais anticorpos podem ser usados para o tratamento de doenças em que a inibição do sistema imune ou de uma resposta imune é desejada, tais como doenças auto-imunes e condições inflamatórias, tais como artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistémico, doença celíaca, síndrome de Sjoigren, doença de Grave, doença inflamatória do intestino, psoríase, espondilite anquilosante, doença de enxerto versus hospedeiro, alergia, e asma.

[176] Os anticorpos descritos na presente invenção podem ser utilizados, por exemplo, para o tratamento do câncer. Em alguns exemplos de realização, são fornecidos métodos para tratar câncer, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um anticorpo aqui descrito a um paciente. Em alguns exemplos de realização, os Abs podem desencadear ou intensificar uma resposta imune no paciente, tal como uma resposta imune antígeno-específica. Em alguns exemplos de realização, os Abs podem estimular a atividade das células T. Em alguns exemplos de realização, os Abs podem inibir o crescimento de pelo menos um tumor no paciente.

[177] São fornecidos aqui métodos para tratar um sujeito com câncer, que compreende administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-VISTA aqui descrito, de tal modo que o sujeito é tratado. Um anticorpo anti-VISTA pode ser usado sozinho.

Alternativamente, um anticorpo anti-VISTA pode ser utilizado em conjunto com outro agente, como descrito mais abaixo.

[178] Exemplos de cânceres que podem ser tratados com um Ab que se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD sob condições ácidas como aqui descritas incluem, mas não se limitam a carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Os cânceres que podem ser tratados com um Ab aqui descrito também incluem cânceres tipicamente responsivos a imunoterapia e aqueles que tipicamente não respondem a imunoterapia. Os cânceres que podem ser tratados incluem também cânceres positivos para VISTA, por exemplo, cânceres possuindo células que infiltram o tumor positivo para VISTA, por exemplo, linfócitos, células mieloides ou monocíticas.

Cânceres podem ser cânceres com tumores sólidos ou malignidades sanguíneas (tumores líquidos).

[179] Exemplos não limitantes de cânceres para tratamento incluem carcinoma de células escamosas, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas escamosas (NSCLC), NSCLC não escamoso, glioma, câncer gastrointestinal, câncer renal (por exemplo, carcinoma de células claras), câncer de ovário, câncer de fígado, câncer colorretal, câncer de endométrio, câncer de rim (por exemplo, carcinoma de células renais (RCC)), câncer de próstata (por exemplo, adenocarcinoma de próstata de hormônio refratário), câncer de tireoide, neuroblastoma, câncer pancreático, glioblastoma (glioblastoma multiforme), câncer cervical, câncer do estômago, câncer da bexiga, hepatoma, câncer da mama, carcinoma do cólon, e câncer de cabeça e pescoço (ou carcinoma), câncer gástrico, tumor de células germinativas, o sarcoma pediátrico, natural killer sinonasal, melanoma (por exemplo, melanoma maligno metastático, tal como melanoma maligno cutâneo ou intraocular), câncer ósseo, câncer de pele, câncer uterino, câncer da região anal, câncer testicular, carcinoma das tubas uterinas, carcinoma do endométrio, carcinoma do colo do útero, carcinoma da vagina, carcinoma da vulva, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sistema endócrino, câncer da glândula paratiroide, câncer da glândula supra-renal,

sarcoma dos tecidos moles, câncer da uretra, câncer do pênis, tumores sólidos da infância, câncer do ureter, carcinoma da pelve renal, neoplasia do sistema nervoso central (SNC), linfoma primário do SNC, angiogênese tumoral, tumor do eixo espinhal, câncer cerebral, glioma do tronco cerebral, adenoma pituitário, sarcoma de Kaposi, câncer epidermoide, câncer de células escamosas, linfoma de células T, cânceres induzidos ambientalmente,

incluindo aqueles induzidos por asbestos, cânceres relacionados ao vírus ou cânceres de origem viral (por exemplo, vírus do papiloma humano (tumores relacionados a ou originados por HPV), e neoplasias hematológicas derivadas de uma das duas principais linhagens de células sanguíneas, isto é, a linhagem celular mieloide (que produz granulócitos, eritrócitos, trombócitos, macrófagos e mastócitos) ou linhagem celular linfoide (que produz células B, T, NK e plasmáticas), como todos os tipos de leucemias, linfomas e mielomas, por exemplo, leucemias agudas, crônicas, linfocíticas e/ou mielógenas, como a leucemia aguda (LLA), leucemia mielógena aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (CLL) e leucemia mielógena crônica (CML), AML indiferenciada (MO),

leucemia mieloblástica (M1), leucemia mieloblástica (M2; com maturação celular), leucemia promielocítica (M3 ou variante M3 [M3V]), leucemia mielomonocítica (M4 ou variante M4 com eosinofilia [M4E]), leucemia monocítica (M5), eritroleucemia (M6), leucemia megacarioblástica (M7),

sarcoma de granulócitos isolados e cloroma; linfomas, como linfoma de Hodgkin (HL), linfoma não-Hodgkin (NHL), malignidade hematológica de células B, por exemplo, linfomas de células B, linfomas de células T, linfoma linfoplasmacitoide, linfoma de células B monocitoide, linfoma de tecido linfoide associado à mucosa (MALT), linfoma anaplásico (por exemplo, Ki 1+) de células grandes, linfoma/leucemia de células T do adulto, linfoma de células do manto, linfoma de células T de imunoblastos de angio, linfoma angiocêntrico,

linfoma intestinal de células T, linfoma de células B primárias do mediastino,

linfoma linfoblástico do precursor T, linfoblástico T; e linfoma/leucemia (T-

Lbly/T-ALL), linfoma de célula T periférico, linfoma linfoblástico, distúrbio linfoproliferativo pós-transplante, linfoma histiocítico verdadeiro, linfoma primário do sistema nervoso central, linfoma de efusão primário, linfoma de células B, linfoma linfoblástico (LBL), tumores hematopoiéticos de linhagem linfoide, leucemia linfoblástica aguda, linfoma difuso de células B grandes,

linfoma de Burkitt, linfoma folicular, linfoma histiocítico difuso (DHL), linfoma imunoblástico de células grandes, linfoma linfoblástico de precursor B, linfoma cutâneo de células T (CTLC) (também denominada micose fungoide ou síndrome de Sezary) e linfoma linfoplasmacitoide (LPL) com macroglobulinemia de Waldenstrom; mielomas, tais como mieloma de IgG, mieloma de cadeia leve, mieloma não secretor, mieloma latente (também denominado mieloma indolente), plasmocitoma solitário e mielomas múltiplos, leucemia linfocítica crônica (LLC), linfoma das células pilosas; tumores hematopoiéticos de linhagem mieloide, tumores de origem mesenquimatosa, incluindo fibrossarcoma e rabdomiossarcoma; seminoma, teratocarcinoma, tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma, schwannomas;

tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, rabdomiossarcoma e osteossarcoma; e outros tumores, incluindo melanoma, xeroderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, câncer folicular da tireoide e teratocarcinoma, tumores hematopoiéticos de linhagem linfoide, por exemplo, tumores de células T e de células B, incluindo, mas não se limitando a distúrbios de células T, tais como T- leucemia prolinfocítica (T-PLL), incluindo o tipo de célula pequena e cerebriforme; leucemia linfocítica granular grande (LGL) do tipo de célula T; linfoma hepatoesplênico a/d T-NHL; linfoma de células T periféricas/pós-tímicas (subtipos pleomórfico e imunoblástico); linfoma angiocêntrico (nasal) de células T; câncer da cabeça ou pescoço, câncer renal, câncer retal, câncer da glândula tiroide; linfoma mieloide agudo, bem como quaisquer combinações dos referidos cânceres. Os métodos descritos na presente invenção também podem ser utilizados para o tratamento de cânceres metastáticos, cânceres refratários irresecáveis (por exemplo, cânceres refratários a imunoterapia anterior, por exemplo, com um anticorpo CTLA-4 ou bloqueador de PD-1), e/ou cânceres recorrentes.

[180] Em alguns exemplos de realização, são fornecidos métodos para o tratamento do câncer, em que os métodos compreendem a administração de um anticorpo isolado que se liga especificamente ao huVISTA em condições ácidas, como descrito na presente invenção, a um sujeito com câncer. Em alguns exemplos de realização, é fornecido o uso de um anticorpo descrito na presente invenção para o tratamento de câncer.

[181] Em certos exemplos de realização, um anticorpo descrito na presente invenção é administrado aos pacientes que têm um câncer que têm exibido uma resposta inadequada a, ou progrediu em, um tratamento anterior, por exemplo, um tratamento prévio com um fármaco de imuno- oncologia ou de imunoterapia. Em alguns exemplos de realização, o câncer é refratário ou resistente a um tratamento anterior, intrinsecamente refratário ou resistente (por exemplo, refratário a um antagonista da via de PD-1), ou um estado de resistência ou refratário é adquirido. Por exemplo, um anticorpo descrito na presente invenção pode ser administrado a sujeitos que não são responsivos ou não são suficientemente responsivos para uma primeira terapia ou que têm a progressão da doença após o tratamento, por exemplo, tratamento com antagonista da via anti-DP-1, quer isoladamente ou em combinação com outra terapia (por exemplo, com uma terapia com antagonista de via anti-PD-1). Em outros exemplos de realização, um anticorpo aqui descrito é administrado a pacientes que não tenham recebido anteriormente (isto é, foram tratados com) um agente de imuno-oncologia, por exemplo, um antagonista da via de DP-1.

[182] Em certos exemplos de realização, uns métodos para o tratamento do câncer em um sujeito compreende determinar primeiro a carga mutacional do tumor (TMB) de um tumor em um sujeito e administrar um anticorpo anti-VISTA com base nos resultados, por exemplo, em sujeitos que se encontram com uma elevada TMB.

COMBINAÇÕES COM AGENTES IMUNOESTIMULANTES

[183] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo como descrito na presente invenção, por exemplo, um anticorpo antagonista de VISTA aqui descrito, é administrado em combinação com e pelo menos um agente imunoestimulante. Por exemplo, a terapêutica pode ser infundida em conjunto ou injetada aproximadamente ao mesmo tempo. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo e o pelo menos um agente imuno-estimulante são administrados sequencialmente. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, o anticorpo é administrado sequencialmente antes ou depois de pelo menos um agente imuno-estimulante de tal forma que os dois agentes sejam administrados 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias ou duas semanas de intervalo.

[184] Em alguns exemplos de realização, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três doses, pelo menos, cinco doses, ou, pelo menos, dez doses do anticorpo é/são administrada(s) antes da administração de pelo menos um agente imunoestimulante. Em alguns exemplos de realização, pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três doses, pelo menos, cinco doses, ou, pelo menos dez doses de, pelo menos, um agente imunoestimulante é/são administrada(s) antes da administração do anticorpo. Em alguns exemplos de realização, a última dose de agente imunoestimulante é administrado, pelo menos, um, dois, três, cinco, dias ou dez, ou um, dois, três, cinco, doze ou vinte e quatro semanas antes da primeira dose de anticorpo.

Em alguns exemplos de realização, a última dose de anticorpo é administrada, pelo menos, um, dois, três, cinco, dias ou dez, ou um, dois, três, cinco, doze ou vinte e quatro semanas antes da primeira dose de pelo menos um agente imunoestimulante. Em alguns exemplos de realização, um sujeito recebeu, ou está recebendo, terapia com pelo menos um agente imunoestimulante e um anticorpo de ligação VISTA-ECD é adicionado ao regime terapêutico.

[185] Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um antagonista de um inibidor da ativação de células T, enquanto em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agonista de um estimulador da ativação de células T. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um antagonista de CTLA4, LAG-3, PD-1, PD-L1, Galectina 1, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD25, CD69, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, B7-H3, B7-H4, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM1, TIM3, TIM4, ILT4, IL-6, IL-10, TGFβ, VEGF, KIR, LAG-3, receptor de adenosina A2A, PI3KDelta ou IDO. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agonista de B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD27, CD40, CD40L, DR3, CD28H, IL-2, IL-7, IL-12, IL- 15, IL-21, IFNα, STING ou um agonista do receptor do tipo Toll (Toll-like receptor), tal como um agonista de TLR2/4. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agente que se liga a um outro membro da família B7 de proteínas ligadas à membrana, tais como

B7-1, B7-2, B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4 e B7-H6. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agente que se liga a um membro da família de receptores de TNF ou uma molécula coestimuladora ou coinibidora que se liga a um membro da família de receptores de TNF, tais como CD40, CD40L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, EDA1, EDA2, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DeR3, HVEM, VEGL/TL1A, TRAMP/DR3, TNFR1, TNFβ, TNFR2, TNFα, 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, ou NGFβ. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agente que antagoniza ou inibe uma citocina que inibe a ativação de células T, tais como IL-6, IL-10, TGFβ, VEGF. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um agonista de uma citocina que estimula a ativação de células T, tais como IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 e IFNα. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um antagonista de uma quimiocina, tal como CXCR2, CXCR4, CCR2 ou CCR4.

Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante compreende um anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o pelo menos um agente imunoestimulante pode compreender uma vacina, tal como uma vacina dirigida a mesotelina ou uma vacina de câncer de listeria atenuada, tal como CRS-207.

[186] Por exemplo, um anticorpo anti-VISTA aqui descrito pode ser administrado com um ou mais dos seguintes agentes: (1) Um antagonista (inibidor ou agente bloqueador) de uma proteína que inibe a ativação de células T (por exemplo, inibidores do ponto de verificação imunológico), como CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2 e LAG-3,

Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectina-1, TIGIT, CD113, GPR56, B7- H3, B7-H4, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, TIM-3 e TIM-4; e/ou (2) Um agonista de uma proteína que estimula a ativação de células T, tal como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, GITR, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, DR3 e CD28H.

[187] Exemplos de agentes que podem ser combinados com anticorpos anti-VISTA aqui descritos para tratar o câncer incluem: YERVOY ® (ipilimumabe) ou Tremelimumabe (para CTLA-4), galiximabe (para B7.1), BMS-936558 (para DP-1), MK-3475 (para DP-1), atezolizumabe (TECENTRIQ®), Avelumabe, Durvalumabe, AMP224 (para B7DC), BMS- 936559 (para B7-H1), MPDL3280A (para B7-H1), MEDI-570 (para ICOS), AMG557 (para B7H2), MGA271 (para B7H3), IMP321 (para LAG-3), BMS- 663513 (para CD137), PF-05082566 (para CD137), CDX-1127 (para CD27), anti-OX40 (Providence Health Services), huMAbOX40L (para OX40L), Atacicept (para TACI), CP-870893 (para CD40), Lucatumumabe (para CD40), Dacetuzumabe (para CD40), Muromonab-CD3 (para CD3); anticorpos anti- GITR MK4166, TRX518, Medi1873, INBRX-110, LK2-145, GWN-323, GITRL- Fc, ou qualquer combinação dos mesmos.

[188] Outras moléculas que podem ser combinadas com anticorpos anti-VISTA para o tratamento de câncer incluem antagonistas de receptores inibitórios em células NK ou agonistas de receptores ativadores em células NK, por exemplo, antagonistas de KIR (por exemplo, lirilumabe).

[189] A ativação de células T também pode ser regulada por citocinas solúveis. Em alguns exemplos de realização, os anticorpos anti- VISTA podem ser administrados em combinação com antagonistas de citocinas que se destinam a inibir a ativação de células T ou agonistas de citocinas que estimulam a ativação de células T. Por exemplo, os anticorpos anti-VISTA podem ser utilizados em combinação com (i) antagonistas (ou inibidores ou agentes de bloqueio) de proteínas da família IgSF ou da família B7 ou da família TNF que inibem a ativação de células T ou antagonistas de citocinas que inibem ativação de células T (por exemplo, IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, “citocinas imunossupressoras”) e/ou (ii) agonistas de receptores estimulatórios da família IgSF, da família B7 ou da família TNF ou de citocinas que estimulam a ativação de célula T.

[190] Ainda outros agentes para terapias combinadas incluem agentes que inibem ou destroem macrófagos ou monócitos, incluindo, mas não limitados a antagonistas do CSF-1R, tais como anticorpos antagonistas de CSF-1R incluindo RG7155 (WO 11/70024, WO 11/107553, WO 11/131407, WO 13/87699, WO 13/119716, WO 13/132044) ou FPA-008 (WO 11/140249; WO 13169264; WO 14/036357).

[191] Anticorpos anti-VISTA também podem ser administrados com agentes que inibem a sinalização de TGF-β.

[192] Os agentes adicionais que podem ser combinados com um anticorpo anti-VISTA incluem agentes que aumentam a apresentação de antígenos tumorais, por exemplo, vacinas de células dendríticas, vacinas celulares secretoras de GM-CSF, oligonucleotídeos CpG e imiquimod, ou terapias que aumentam a imunogenicidade de células tumorais (por exemplo, antraciclinas).

[193] Ainda outras terapias que podem ser combinadas com um anticorpo anti-VISTA incluem terapias que destroem ou bloqueiam as células Treg, por exemplo, um agente que se liga especificamente ao CD25.

[194] Outra terapia que pode ser combinada com um anticorpo anti-VISTA é uma terapia que inibe uma enzima metabólica tal como indoleamina dioxigenase (IDO), dioxigenase, arginase ou óxido nítrico sintetase.

[195] Outra classe de agentes que podem ser utilizados com um anticorpo anti-VISTA inclui agentes que inibem a formação de adenosina, por exemplo, inibidores de CD73, ou inibem o receptor de adenosina A2A.

[196] Outras terapias que podem ser combinadas com um anticorpo anti-VISTA para o tratamento de câncer incluem terapias que invertem/previnem a anergia ou exaustão das células T e terapias que desencadeiam uma ativação imune inata e/ou inflamação no local do tumor.

[197] Outras terapias que podem ser combinadas com um anticorpo anti-VISTA para tratar câncer incluem tratamentos que bloqueiam a IL-8, por exemplo, com HuMax®-IL8.

[198] Um anticorpo anti-VISTA pode ser combinado com mais do que um agente de imuno-oncológico, e pode ser, por exemplo, combinado com uma abordagem combinatória que se destina a atingir múltiplos elementos da via imune, como um ou mais dos seguintes: uma terapia que aumenta a apresentação do antígeno tumoral (por exemplo, vacina de células dendríticas, vacinas celulares secretoras de GM-CSF, oligonucleosídeos CpG, imiquimod); uma terapia que inibe a regulação imunológica negativa, por exemplo, inibindo a via CTLA-4 e/ou PD1/PD-L1/PD-L2 e/ou esgotando ou bloqueando as Tregs ou outras células imunossupressoras; uma terapia que estimula a regulação imunológica positiva, por exemplo, com agonistas que estimulam a via CD-137, OX-40 e/ou CD40 ou GITR e/ou estimulam a função efetora da célula T; uma terapia que aumenta sistemicamente a frequência de células T antitumorais; uma terapia que esgota ou inibe Tregs, tais como Tregs no tumor, por exemplo, usando um antagonista de CD25 (por exemplo, daclizumab) ou por depleção de grânulo anti-CD25 ex vivo; uma terapia que afeta a função das células mieloides supressoras no tumor; uma terapia que aumenta a imunogenicidade das células tumorais (por exemplo, antraciclinas); transferência de células T ou células NK adotivas, incluindo células geneticamente modificadas, por exemplo, células modificadas por receptores de antígeno quiméricos (terapia

CAR-T); uma terapia que inibe uma enzima metabólica tal como dioxigenase de indoleamina (IDO), dioxigenase, arginase ou sintetase de ácido nítrico; uma terapia que reverte/previne a anergia ou exaustão das células T; uma terapia que desencadeia uma ativação imune inata e/ou inflamação no local do tumor; administração de citocinas imunoestimuladoras; ou bloqueio de citocinas imuno-repressoras.

[199] Os anticorpos anti-VISTA aqui descritos podem ser utilizados em conjunto com um ou mais agentes agonistas que ligam receptores coestimulatórios positivos, agentes bloqueadores que atenuam a sinalização através de receptores inibitórios, antagonistas e um ou mais agentes que aumentam sistemicamente a frequência de células T antitumorais, agentes que superam vias imunossupressoras distintas dentro do microambiente tumoral (por exemplo, bloquear o envolvimento do receptor inibitório (por exemplo, interações PD-L1/PD-1), esgotar ou inibir Tregs (por exemplo, usando um anticorpo monoclonal anti-CD25 (por exemplo, daclizumab) ou pela depleção ex vivo de esferas de anti-CD25), inibir enzimas metabólicas tais como IDO, ou reverter/prevenir a anergia ou exaustão de células T) e agentes que desencadeiam ativação imune inata e/ou inflamação em locais de tumores.

[200] Em certos exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA é administrado a um sujeito juntamente com um inibidor de BRAF se o sujeito for positivo para mutação V600 do gene BRAF.

[201] Os antagonistas de PD-1 adequados para utilização na terapia combinada aqui descrita, incluem, sem limitação, ligantes, anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais e anticorpos biespecíficos) e agentes multivalentes. Em um exemplo de realização, o antagonista de PD-1 é uma proteína de fusão, por exemplo, uma proteína de fusão Fc, tal como AMP-244.

Em um exemplo de realização, o antagonista de PD-1 é um anticorpo anti- PD-

1 ou anti-PD-L1.

[202] Um anticorpo anti-PD-1 exemplificativo é nivolumab (BMS- 936558) ou um anticorpo que compreende as CDRs ou regiões variáveis de um dos anticorpos 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 7D3, 5F4 e 4A11 descritos no documento WO 2006/121168. Em certos exemplos de realização, um anticorpo anti-PD-1 é MK-3475 (Lambrolizumabe) descrito no documento WO 2012/145493; AMP- 514 descrito no documento WO 2012/145493; ou PDR001. Outros anticorpos PD-1 conhecidos e outros inibidores de PD-1 incluem os descritos no documento WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, Patentes US 7.635.757 e

8.217.149, e Publicação de Patente US 2009/0317368. Qualquer um dos anticorpos anti-PD-1 divulgados no documento WO 2013/173223 também pode ser usado. Um anticorpo anti-PD-1 que compete pela ligação com, e/ou se liga ao mesmo epítopo na PD-1, como um destes anticorpos também pode ser usado em tratamentos combinados.

[203] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti- PD-L1 útil para a terapia combinada é o BMS-936559 (referido como 12A4 no documento WO 2007/005874 e Patente US 7.943.743), ou um anticorpo que compreende as CDRs ou regiões variáveis de 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7 e 13G4, que estão descritos na Publicação PCT WO 07/005874 e na Patente US 7.943.743. Em certos exemplos de realização, um anticorpo anti-PD-L1 é MEDI4736 (também conhecido como durvalumabe e Anti-B7-H1), MPDL3280A (também conhecido como atezolizumabe e RG7446), MSB0010718C (também conhecido como avelumabe; WO 2013/79174) ou rHigM12B7. Qualquer um dos anticorpos anti-PD-L1 divulgados no documento WO 2013/173223, WO 2011/066389, WO 2012/145493, nas Patentes US

7.635.757 e 8.217.149 e na Publicação US 2009/145493 também pode ser usado. Anticorpos anti-PD-L1 que competem com e/ou se ligam ao mesmo epítopo tal qual qualquer um destes anticorpos podem também ser utilizados em tratamentos combinados.

[204] Em certos exemplos de realização, o anticorpo anti- VISTA da invenção pode ser utilizado com um antagonista de CTLA-4, por exemplo, um anticorpo anti-CTLA-4. Em um exemplo de realização, um anticorpo anti- CTLA-4 é um anticorpo selecionado a partir do grupo de: YERVOY® (ipilimumabe ou anticorpo 10D1, descrito na Publicação PCT WO 01/14424), tremelimumabe (anteriormente ticilimumabe, CP-675,206), ou anticorpo monoclonal ou um anti-CTLA-4 descrito em qualquer uma das seguintes publicações: WO 98/42752; WO 00/37504; Patentes US 6.207.156; Hurwitz et al. (1998) Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071; Camacho et al.

(2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract 2505 (anticorpo CP-675206); e Mokyr et al. (1998) Cancer Res. 58:5301-5304. Qualquer um dos anticorpos anti-CTLA-4 divulgados no documento WO 2013/173223 também pode ser usado.

[205] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA da invenção é utilizado em combinação com um antagonista de LAG3. Exemplos de anticorpos anti-LAG3 incluem anticorpos compreendendo as CDRs ou regiões variáveis de anticorpos 25F7, 26H10, 25E3, 8B7, 11F2 ou 17E5, que são descritos na Publicação de Patente US 2011/0150892, WO 10/19570 e WO 2014/008218. Em um exemplo de realização, um anticorpo anti-LAG-3 é BMS-986016. Outros anticorpos anti- LAG-3 reconhecidos na técnica que podem ser utilizados incluem o IMP731 e o IMP-321, descritos nos documentos US 2011/007023, WO 08/132601 e WO 09/44273. Anticorpos anti- LAG-3 que competem com e/ou se ligam ao mesmo epítopo tal qual qualquer um destes anticorpos podem também ser utilizados em tratamentos combinados.

[206] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti-

VISTA da invenção pode ser administrado em combinação com um agonista de CD137 (4-1BB), tal como um anticorpo CD137 agonista. Os anticorpos CD137 adequados incluem, por exemplo, urelumabe ou PF- 05082566 (WO 12/32433).

[207] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA pode ser administrado em combinação com um agonista de OX40, tal como um anticorpo OX40 agonista. Os anticorpos OX40 adequados incluem, por exemplo, MEDI-6383, MEDI-6469 ou MOXR0916 (RG7888; WO 06/029879).

[208] Em um exemplo de realização, um anticorpo anti-VISTA é administrado em combinação com um agonista de CD40, tal como um anticorpo CD40 agonista. Em certos exemplos de realização, o agente imuno-oncológico é um antagonista de CD40, tal como um anticorpo antagonista de CD40. Os anticorpos CD40 adequados incluem, por exemplo, lucatumumabe (HCD122), dacetuzumabe (SGN-40), CP-870,893 ou Chi Lob 7/4.

[209] Em um exemplo de realização, um anticorpo anti-VISTA é administrado em combinação com um agonista de CD27, tal como um anticorpo CD27 agonista. Os anticorpos CD27 adequados incluem, por exemplo, varlilumabe (CDX-1127).

[210] Em certos exemplos de realização, o anticorpo anti- VISTA é administrado juntamente com um anticorpo anti-GITR, por exemplo, um anticorpo tendo as sequências CDR de 6C8, por exemplo, um anticorpo humanizado com as CDRs de 6C8, como descrito, por exemplo, no documento WO 2006/105021; um anticorpo compreendendo as CDRs de um anticorpo anti-GITR descrito no documento WO 2011/028683; um anticorpo compreendendo as CDRs de um anticorpo anti-GITR descrito em JP 2008278814, um anticorpo compreendendo as CDRs de um anticorpo anti-

GITR descrito no documento WO 2015/031667, WO 2015/187835, WO 2015/184099, WO 2016/054638, WO 2016/057841 ou WO 2016/057846 ou outro anticorpo anti-GITR descrito ou referido na presente invenção.

[211] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA é administrado em combinação com MGA271 (visando B7H3) (WO 11/109400).

[212] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA é administrado em combinação com um antagonista de KIR, tal como lirilumabe.

[213] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA é administrado em combinação com um antagonista de IDO. Os antagonistas de IDO adequados incluem, por exemplo, INCB-024360 (WO 2006/122150, WO 07/75598, WO 08/36653, WO 08/36642), indoximod, NLG-919 (WO 09/73620, WO 09/1156652, WO 11/56652, WO 12/142237) ou F001287.

[214] Em alguns exemplos de realização, um anticorpo anti- VISTA é administrado em combinação com um agonista do receptor do tipo Toll, por exemplo, um agonista de TLR2/4 (por exemplo, Bacillus Calmette - Guerin); um agonista de TLR7 (por exemplo, Hiltonol ou Imiquimod); um agonista de TLR7/8 (por exemplo, Resiquimod); ou um agonista de TLR9 (por exemplo, CpG7909).

[215] Em um exemplo de realização, um anti-VISTA é administrado em combinação com um inibidor de TGF-β, por exemplo, GC1008, LY2157299, TEW7197 ou IMC-TR1.

[216] Em certos exemplos de realização, um agente anti- VISTA, por exemplo, um anticorpo é administrado com um anticorpo anti- PSGL-1.

TERAPIA COMBINADA ADICIONAL

[217] Os Abs da presente invenção também podem ser fornecidos antes, substancialmente ao mesmo tempo ou após outros modos de tratamento, por exemplo, cirurgia, quimioterapia, radioterapia ou a administração de um produto biológico, tal como outro anticorpo terapêutico.

Em alguns exemplos de realização, o câncer reincidiu ou progrediu após uma terapia selecionada a partir de cirurgia, quimioterapia e radioterapia, ou uma combinação das mesmas. Por exemplo, um anticorpo anti-VISTA como descrito na presente invenção pode ser administrado como terapia adjuvante quando existe um risco de que micrometástases possam estar presentes e/ou a fim de reduzir o risco de uma recaída.

[218] Para o tratamento de câncer, as combinações podem ser administradas em conjunto com um ou mais agentes anticâncer adicionais, tais como um agente quimioterápico, agente inibidor de crescimento, vacina anticâncer tal como uma vacina de terapia gênica, agente anti-angiogênese e/ou composição antineoplásica. Exemplos não limitantes de agentes quimioterápicos, agentes inibidores do crescimento, vacinas anticâncer, agente antiangiogênese, e composição antineoplásicas que podem ser usados em combinação com os anticorpos da presente invenção são fornecidos no presente pedido na seção “Definições”.

[219] Em alguns exemplos de realização, um fármaco anti- inflamatório pode ser administrado com a combinação, tal como um esteroide ou um fármaco anti-inflamatório não esteroidal (NSAID). Nos casos em que é desejável tornar as células aberrantemente proliferativas quiescentes em conjunto com ou antes do tratamento com anticorpos anti-VISTA aqui descritos, hormônios e esteroides (incluindo análogos sintéticos), tais como 17a- Etinilestradiol, Dietilestilbestrol, Testosterona, Prednisona, Fluoximesterona, Propionato de Dromostanolona, Testolactona, Megestrolacetato, Metilprednisolona, Metil-Testosterona, Prednisolona, Triancinolona,

Clorotrianiseno, Hidroxiprogesterona, Aminoglutetimida, Estramustina, Acetato de Medroxiprogesterona, Leuprolida, Flutamida, Toremifeno, ZOLADEX®, também podem ser administrados ao paciente. Quando se empregam os métodos ou composições aqui descritas, outros agentes utilizados na modulação do crescimento tumoral ou metástase em um contexto clínico, tal como antimiméticos, podem também ser administrados como desejado.

[220] Os anticorpos descritos na presente invenção também podem ser combinados com um agente imunogênico, tais como células cancerosas, antígenos de tumor purificado (incluindo proteínas recombinantes, peptídeos, e moléculas de carboidratos), células, e células transfectadas com genes que codificam citocinas estimulantes imunes (He et al., (2004) J.

Immunol, 173: 4919-28). Exemplos não limitantes de vacinas tumorais que podem ser utilizadas incluem peptídeos de antígenos de melanoma, tais como peptídeos de antígenos gp100, antígenos MAGE, Trp-2, MART1 e/ou tirosinase, ou células tumorais transfectadas para expressar a citocina GM-CSF (discutido adicionalmente abaixo).

[221] Em humanos, alguns tumores demonstraram ser imunogênicos, como os melanomas. Ao diminuir o limiar de ativação de células T através da inibição de VISTA, as respostas tumorais no hospedeiro podem ser ativadas, permitindo o tratamento de tumores não imunogênicos ou os que têm imunogenicidade limitada.

[222] Um anticorpo anti-VISTA descrito na presente invenção também pode ser combinado com um protocolo de vacinação. Muitas estratégias experimentais para a vacinação contra tumores foram concebidas (consulte Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300- 302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; consulte também

Restifo, N. e Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 em DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Quinta Edição).

Em uma dessas estratégias, uma vacina é preparada usando células tumorais autólogas ou alogênicas. Estas vacinas celulares demonstraram ser mais eficazes quando as células tumorais são transduzidas para expressarem GM- CSF. Demonstrou-se que o GM-CSF é um potente ativador da apresentação de antígenos para a vacinação contra tumores (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 90: 3539-43).

[223] O estudo da expressão gênica e padrões de expressão gênica em larga escala em vários tumores levou à definição dos chamados antígenos específicos de tumor (ou antígenos tumor-específicos) (Rosenberg, S.A. (1999) Immunity 10: 281-7). Em muitos casos, estes antígenos específicos do tumor são antígenos de diferenciação expressos nos tumores e na célula da qual o tumor surgiu, por exemplo, antígenos de melanócitos gp100, antígenos MAGE e Trp-2. De modo mais importante, muitos desses antígenos podem ser mostrados como sendo os alvos de células T específicas para tumor encontradas no hospedeiro. A inibição de VISTA pode ser usada em conjunto com uma coleção de proteínas recombinantes e/ou peptídeos expressos em um tumor para gerar uma resposta imune a estas proteínas. Estas proteínas são normalmente vistas pelo sistema imunológico como auto-antígenos e, portanto, são tolerantes a elas. O antígeno do tumor pode incluir a proteína telomerase, que é necessária para a síntese de telômeros de cromossomos e que é expressa em mais de 85% dos cânceres humanos e em um número limitado de tecidos somáticos (Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013). O antígeno tumoral pode também ser “neoantígenos” expressos em células cancerosas devido a mutações somáticas que alteram a sequência proteica ou criam proteínas de fusão entre duas sequências não relacionadas (isto é, bcr- abl no cromossoma Filadélfia) ou idiotipos de tumores de células B.

[224] Outras vacinas tumorais podem incluir as proteínas dos vírus implicados em cânceres humanos, tais como vírus do papiloma humano (HPV), vírus da hepatite (HBV e HCV) e vírus do sarcoma do herpes de Kaposi (KHSV). Outra forma de antígeno específico do tumor que pode ser utilizada em conjunto com a inibição de VISTA são proteínas de choque térmico purificadas (HSP) isoladas a partir do próprio tecido tumoral. Estas proteínas de choque térmico contêm fragmentos de proteínas das células tumorais e estas HSPs altamente eficientes na distribuição a células apresentadoras de antígeno para induzir imunidade tumoral (Suot & Srivastava (1995) Science 269: 1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278: 117-120).

[225] Os vírus oncolíticos também podem ser utilizados em combinação com anticorpos VISTA.

[226] Células dendríticas (DC) são células apresentadoras de antígenos potentes que podem ser usadas para iniciar respostas específicas de antígeno. As DC podem ser produzidas ex vivo e carregadas com vários antígenos proteicos e peptídicos, bem como extratos de células tumorais (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). As DC também podem ser transduzidas por meios genéticos para também expressar estes antígenos tumorais. As DCs também foram fundidas diretamente a células tumorais para fins de imunização (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6: 332- 336). Como método de vacinação, a imunização DC pode ser eficazmente combinada com a inibição de VISTA para ativar respostas antitumorais mais potentes.

TRATAMENTOS PARA DOENÇAS INFECCIOSAS

[227] Os métodos descritos aqui também podem ser usados para tratar pacientes que foram expostos a toxinas ou patógenos particulares.

Consequentemente, a presente invenção contempla também métodos para o tratamento de uma doença infecciosa em um sujeito, compreendendo a administração ao sujeito de um anticorpo como aqui descrito, por exemplo, um anticorpo antagonista de VISTA, de tal modo que o sujeito é tratado para a doença infecciosa. Semelhante à sua aplicação a tumores como discutido acima, a inibição de VISTA mediada por anticorpo pode ser usada sozinha, ou como um adjuvante, em combinação com vacinas, para estimular a resposta imune a patógenos, toxinas e autoantígenos. Exemplos de patógenos para os quais esta abordagem terapêutica pode ser particularmente útil, incluem patógenos para os quais atualmente não há vacina efetiva, ou patógenos para os quais as vacinas convencionais são menos que completamente eficazes.

Estes incluem, mas não se limitam a, HIV, Hepatite (A, B, & C), Influenza, Herpes, Giardia, Malária, Leishmania, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. A inibição do VISTA pode ser útil contra infecções estabelecidas por agentes como o HIV que apresentam antígenos alterados ao longo do curso das infecções.

[228] Alguns exemplos de vírus patogênicos que causam infecções que podem ser tratáveis pelos métodos descritos aqui incluem HIV, hepatite (A, B ou C), vírus do herpes (por exemplo, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II e CMV, Vírus Epstein-Barr), adenovírus, vírus da influenza, flavivírus, ecovírus, rinovírus, vírus coxsackie, coronavírus, vírus sincicial respiratório, vírus da caxumba, rotavírus, vírus do sarampo, vírus da rubéola, parvovírus, vírus vaccinia, vírus de HTLV, vírus da dengue, papilomavírus, vírus de molusco, poliovírus, vírus da raiva, vírus JC e vírus da encefalite arboviral.

[229] Alguns exemplos de bactérias patogênicas causadoras de infecções que podem ser tratadas pelos métodos descritos na presente invenção incluem clamídia, bactérias rickettsiais, micobactérias, estafilococos, estreptococos, pneumonococos, meningococos e gonococos, Klebsiella, Proteus, Serratia, Pseudomonas, Legionella, difteria, Salmonela, bacilos, cólera, tétano, botulismo, antrax, peste, leptospirose e bactérias da doença de Lymes.

[230] Alguns exemplos de fungos patogênicos causadores de infecções que podem ser tratáveis pelos métodos descritos aqui incluem Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Gênero Mucorales (mucor, absidia, rizopus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum.

[231] Alguns exemplos de parasitas patogênicos que causam infecções que podem ser tratáveis pelos métodos aqui descritos incluem Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lambia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii e Nippostrongylus brasiliensis.

[232] Em todos os métodos acima, a inibição de VISTA pode ser combinada com outras formas de imunoterapia, por exemplo, aquelas aqui descritas, tais como tratamento com citocinas (por exemplo, interferons, GM- CSF, G-CSF, IL-2) ou terapia com anticorpos biespecíficos, que pode fornecer uma apresentação melhorada de antígenos tumorais (ver, por exemplo, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123).

VIAS DE ADMINISTRAÇÃO E VEÍCULOS

[233] Em vários exemplos de realização, os anticorpos podem ser administrados in vivo por diversas vias, incluindo, mas não se limitando a, oral, intra-arterial, parenteral, intranasal, intramuscular, intracardíaca, intraventricular, intratraqueal, bucal, retal, intraperitoneal, intradérmica, tópica, transdérmica, e intratecal, ou de outra forma por implantação ou inalação. As composições da presente invenção podem ser formuladas em preparações nas formas sólidas, semissólidas, líquidas ou gasosas; incluindo, mas não limitando a, comprimidos, cápsulas, pó, grânulos, pomadas, soluções, supositórios,

enemas, injeções, inalantes e aerossóis. Uma molécula de ácido nucleico que codifica um anticorpo pode ser revestida sobre micropartículas de ouro e administrada por via intradérmica por um dispositivo de bombardeamento de partículas, ou “arma de genes”, como descrito na literatura (vide, por exemplo, Tang et al., Nature 356: 152-154 (1992)). A formulação apropriada e a via de administração podem ser selecionadas de acordo com a aplicação pretendida.

[234] Em vários exemplos de realização, são proporcionadas composições compreendendo anticorpos em formulações com uma grande variedade de veículos farmaceuticamente aceitáveis (vide, por exemplo, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20ª ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a ed., Lippencott Williams & Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3ª ed., Pharmaceutical Press (2000)). Vários transportadores farmaceuticamente aceitáveis, que incluem veículos, adjuvantes e diluentes, estão disponíveis.

Além disso, também estão disponíveis várias substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de ajuste e tamponamento de pH, agentes de ajuste de tonicidade, estabilizantes, agentes umectantes e similares. Exemplos de veículos não limitantes da invenção incluem solução salina, solução salina tamponada, dextrose, água, glicerol, etanol e combinações dos mesmos.

[235] Em vários exemplos de realização, as composições que compreendem anticorpos podem ser formuladas para injeção, incluindo administração subcutânea, dissolvendo, suspendendo ou emulsionando-as em um solvente aquoso ou não aquoso, tais como óleos vegetais ou outros óleos, glicerídeos de ácido alifático sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores, ou propileno glicol; e se desejado, com aditivos convencionais tais como solubilizantes, agentes isotônicos, agentes de suspensão, agentes emulsionantes, estabilizadores e conservantes. Em diversos exemplos de realização, as composições podem ser formuladas para inalação, por exemplo, utilizando propulsores aceitáveis pressurizados, tais como diclorodifluorometano, propano, nitrogênio e similares. As composições também podem ser formuladas, em vários exemplos de realização, em microcápsulas de libertação sustentada, tais como com polímeros biodegradáveis ou não biodegradáveis. Uma formulação biodegradável exemplificativa não limitante inclui polímero de ácido polilático-ácido glicólico.

Uma formulação não biodegradável exemplificativa não limitante inclui um éster de ácido graxo de poliglicerina. Alguns métodos para produção de tais formulações estão descritos, por exemplo, na EP 1 125 584 A1.

[236] Embalagens farmacêuticas e kits compreendendo um ou mais recipientes, contendo cada uma ou mais doses de um anticorpo ou combinação de anticorpos também são fornecidos. Em alguns exemplos de realização, é proporcionada uma dosagem unitária em que a dosagem unitária contém uma quantidade predeterminada de uma composição compreendendo um anticorpo ou combinação de anticorpos, com ou sem um ou mais agentes adicionais. Em alguns exemplos de realização, tal dose unitária é fornecida em uma seringa pré-cheia de uso único para injeção. Em vários exemplos de realização, a composição contida na dosagem unitária pode compreender solução salina, sacarose ou similar; um tampão, tal como fosfato, ou similar; e/ou ser formulada dentro de um intervalo de pH estável e eficaz.

Alternativamente, em alguns exemplos de realização, a composição pode ser proporcionada como um pó liofilizado que pode ser reconstituído após a adição de um líquido apropriado, por exemplo, água estéril. Em alguns exemplos de realização, a composição compreende uma ou mais substâncias que inibem a agregação de proteínas, incluindo, mas não se limitando a, sacarose e arginina. Em alguns exemplos de realização, uma composição da invenção compreende heparina e/ou um proteoglicano.

[237] As composições farmacêuticas são administradas em uma quantidade eficaz para tratamento ou profilaxia da indicação específica. A quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente dependente do peso do sujeito a ser tratado, do seu estado físico ou de saúde, da extensividade da condição a ser tratada ou idade do sujeito a ser tratado. Em geral, os anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 10 μg/kg de peso corporal a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em alguns exemplos de realização os anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 50 μg/kg de peso corporal a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Em alguns exemplos de realização os anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em alguns exemplos de realização os anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 100 μg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose. Em alguns exemplos de realização os anticorpos podem ser administrados em uma quantidade na faixa de cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dose.

[238] As composições de anticorpos podem ser administradas conforme necessário aos sujeitos. A determinação da frequência de administração pode ser feita por especialistas na técnica, tal como um médico, com base em considerações sobre a condição a ser tratada, a idade do sujeito sendo tratado, a gravidade da condição a ser tratada, o estado geral de saúde do sujeito sendo tratado e similares. Em alguns exemplos de realização, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada a um indivíduo por uma ou mais vezes. Em diversos exemplos de realização, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada ao sujeito uma vez por mês, menos de uma vez por mês, como, por exemplo, a cada dois meses ou a cada três meses. Em outros exemplos de realização, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada mais de uma vez por mês, como, por exemplo, a cada três semanas, a cada duas semanas ou a cada semana. Em alguns exemplos de realização, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada uma vez por 1, 2, 3, 4 ou 5 semanas. Em alguns exemplos de realização, uma dose eficaz de um anticorpo é administrada duas ou três vezes por semana. Uma dose eficaz de um anticorpo é administrada ao sujeito pelo menos uma vez. Em alguns exemplos de realização, a dose eficaz de um anticorpo pode ser administrada várias vezes, incluindo por períodos de pelo menos um mês, pelo menos, seis meses ou pelo menos um ano.

[239] Em certos exemplos de realização, a combinação do anticorpo anti-VISTA e um segundo agente aqui discutido pode ser administrada concorrentemente como uma composição única em um veículo farmaceuticamente aceitável, ou concorrentemente como composições separadas com o anticorpo anti-VISTA e o segundo agente em um veículo farmaceuticamente aceitável. Em um exemplo de realização, a combinação do anticorpo anti-VISTA e do segundo agente podem ser administrados sequencialmente. A administração dos dois agentes pode começar em momentos que são, por exemplo, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias, ou uma ou mais semanas de intervalo, ou a administração do segundo agente pode começar, por exemplo, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 3 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 3 dias, 5 dias, 7 dias, ou uma ou mais semanas após o primeiro agente ter sido administrado.

MÉTODOS DE IDENTIFICAÇÃO DE ABS HVISTA-ECD QUE SE LIGAM EM PH BAIXO

[240] Também são fornecidos métodos para a identificação de Abs que se ligam especificamente a uma proteína VISTA-ECD em condições ácidas (ou pH baixo). Em certos exemplos de realização, um método para identificar um Ab que se liga especificamente a uma proteína VISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior compreende o contato de um teste de Ab ou pluralidade de testes de Abs com uma proteína VISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior, e selecionando o teste de Ab liga-se ao ECD da proteína VISTA com uma KD de 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou menos. Em alguns exemplos de realização, o método é realizado em pH 6,5, enquanto em outros é realizado em pH 6,0, ou em pH 5,5, ou em pH 5,0. Em alguns exemplos de realização, a proteína VISTA-ECD é uma proteína VISTA-ECD, ou compreende o domínio hVISTA IgV, ou é um polipeptídeo compreendendo os aminoácidos 20-95 de SEQ ID NO: 2, ou aminoácidos 20-70, 35-95 ou 35-70 de SEQ ID NO: 2. Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo também compreende os aminoácidos 95-105 de SEQ ID NO: 2. Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo compreende os aminoácidos 35-127 ou 37-125 de SEQ ID NO: 2.

[241] Em alguns exemplos de realização, o método compreende ainda testar a ligação do Ab teste ou da pluralidade de Abs de teste em pH neutro, fisiológico ou alcalino, tal como em pH 7,0 ou pH 7,4. Em alguns exemplos de realização, o método compreende ainda selecionar um anticorpo se ele não só se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD, de 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou menos em pH 6,5 ou inferior, mas também se ligar especificamente ao polipeptídeo em pH 7,0 ou pH 7,4. Em alguns exemplos de realização, o teste de Abs é selecionado se eles se ligarem especificamente à proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em pH 6,5 ou inferior, também se ligar especificamente a proteína VISTA-ECD em pH neutro e/ou alcalino com afinidade semelhante (isto é, eles são “pan-ligantes”). Por exemplo, alguns, tais Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou menos, tanto em pH 6,5 quanto em pH 7,0 ou pH 7,4 (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC) de tal forma que a K D em pH 6,5 é cerca de 1,5 vezes o número de KD em pH 7,0.

[242] Certos Abs podem ser selecionados se eles se ligarem especificamente à proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, com maior afinidade do que em pH neutro ou alcalino (“ligantes sensíveis ao pH” ou “Abs sensíveis a pH”). Por exemplo, em alguns exemplos de realização, os Abs podem se ligar a proteína VISTA- ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 e com uma KD de mais do que 10-8 M em pH 7,0 ou pH 7,4. Em algumas de tais exemplos de realização, os Abs podem se ligar a proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 e com uma KD em pH 7,0 ou pH 7,4 que é mais do que 1,5 vezes mais elevada do que aquela em pH 6,5. Em certos exemplos de realização, um Ab sensível em pH é selecionado se ele se ligar especificamente à proteína VISTA- ECD com uma KD que é, pelo menos, 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou 5000 vezes inferior em pH 6,5 do que em pH 7,0 ou pH 7,4 (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC). Por exemplo, em alguns casos, um Ab é selecionado se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes 500 vezes, 1000 vezes, ou 5000 vezes menor em pH 6,0, em relação ao pH 7,0 ou pH 7,4 ou superior (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC).

[243] Em certos exemplos de realização, um Ab é selecionado se ele se ligar especificamente à proteína VISTA-ECD com uma Koff que é mais baixa em condições ácidas em relação àquela nas condições neutra, fisiológicas ou alcalinas. Em certos exemplos de realização, um Ab é selecionado, se ele se ligar à proteína VISTA-ECD em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais baixa em pH 6,5 do que a koff em pH 7,0 ou pH 7,4,

tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um Ab se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma taxa koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais baixa em pH 6,0, em relação ao pH 7,0 ou pH 7,4, medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[244] Em certos exemplos de realização, um Ab é selecionado se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma kon que é mais elevada em condições ácidas em relação a condições neutras ou alcalinas. Em certos exemplos de realização, um Ab é selecionado, se ele se ligar à proteína VISTA- ECD em condições ácidas com uma kon que é pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais elevada em pH 6,5 do que a kon em pH 7,0 ou pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um Ab é selecionado se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma kon que é pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes maior em pH 6,0 do que em pH 7,0 ou pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

MÉTODOS PARA MODIFICAR A SENSIBILIDADE DE PH DOS ABS DE LIGAÇÃO AO VISTA-ECD

[245] Um Ab que se liga a uma proteína VISTA-ECD, mas não o faz em pH 6,5 ou inferior, ou não o faz com alta afinidade em pH 6,5 ou inferior, pode ser modificado geneticamente para aumentar sua afinidade de ligação em pH 6,5 ou inferior. Por exemplo, o parátopo de um Ab pode ser mutado, por exemplo, pela substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, 1 a 8, por exemplo, 1 a 6, 1 a 4, 1 a 3, 1 a 2 ou 1 resíduos de aminoácidos na cadeia pesada ou leve do Ab que são resíduos de contato com VISTA-ECD (por exemplo, resíduos em uma ou mais das CDRs) podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente. Então, o Ab mutado pode ser testado quanto a ligação à proteína

VISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior e a ligação da espécie Ab com afinidade maior do que o anticorpo parental pode ser selecionada. Se desejado, as etapas acima podem ser repetidas de modo que dois ou mais ciclos de mutagênese e seleção sejam realizados nos Abs e os ligantes de afinidade mais elevados ao pH ácido sejam selecionados. Em alguns exemplos de realização, essas seleções podem melhorar a eficácia antitumoral do anticorpo resultante em relação ao seu parental.

[246] O método de seleção acima também pode ser concebido para seguir a seleção geral anteriormente descrita para anticorpos de se ligam especificamente a proteína VISTA-ECD. Designadamente, em certos exemplos de realização, o Ab melhorado é selecionado se ele se ligar ao ECD da proteína VISTA com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5. Em alguns exemplos de realização, a seleção é realizada em pH 6,0, ou em pH 5,5, ou em pH 5,0 em vez de em pH 6,5. Em alguns exemplos de realização, a proteína VISTA-ECD utilizada para o processo de seleção é uma proteína hVISTA-ECD completa, ou é um polipeptídeo que compreende o domínio hVISTA IgV, ou é um polipeptídeo compreendendo os aminoácidos 20-95 de SEQ ID NO: 2, ou os aminoácidos 20-70, 35-95 ou 35-70 de SEQ ID NO: 2. Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo também compreende os aminoácidos 95-105 de SEQ ID NO: 2. Em alguns exemplos de realização, utiliza-se um polipeptídeo compreendendo os resíduos de aminoácidos 35-127 de SEQ ID NO: 2.

[247] Em alguns exemplos de realização, um método para melhorar a ligação de um anticorpo VISTA ao VISTA ECD em pH ácido compreende o aumento do número de resíduos de ácido glutâmico, ácido aspártico e/ou histidina em uma ou mais CDRs de VH ou VL, por exemplo, CDR1, CDR2 e CDR3 de VH ou apenas CDR1 e CDR3 de VH. Em certos exemplos de realização, um método compreende aumentar o número de resíduos de ácido glutâmico, ácido aspártico e/ou histidina em áreas do anticorpo que faz contato com hVISTA conforme determinado, por exemplo, por cristalografia.

[248] Em alguns exemplos de realização, o método compreende ainda testar a ligação do Ab selecionado em pH neutro, alcalino ou fisiológico, tal como em pH 7,0 ou 7,4. Em alguns exemplos de realização, o método compreende ainda selecionar um anticorpo que se liga não só à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 ou inferior, mas também se liga especificamente ao polipeptídeo em pH 7,0 ou 7,4. Em alguns destes exemplos de realização, os Abs são selecionados se eles se ligarem especificamente à proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em pH 6,5 ou inferior, e também se ligarem especificamente a proteína VISTA- ECD em pH neutro e/ou alcalino ou fisiológico com uma afinidade semelhante (ou seja, eles são “pan-ligantes”). Por exemplo, alguns, tais Abs podem se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos em ambos pHs, 6,5 e 7,0, (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC) de tal modo que a KD em pH 6,5 é cerca de 1,5 vezes o número de KD em pH 7,0 ou em pH 7,4.

[249] Certos Abs podem ser selecionados se eles se ligarem especificamente à proteína VISTA-ECD em condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5 ou inferior, com maior afinidade do que em pH neutro, fisiológico ou alcalino (“ligantes sensíveis ao pH” ou “Abs sensíveis ao pH”). Por exemplo, em alguns exemplos de realização, os Abs podem se ligar a proteína VISTA- ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 e com uma KD de mais do que 10-8 M em pH 7,0. Em algumas de tais exemplos de realização, os Abs podem se ligar a proteína VISTA-ECD com uma KD de 10-8 M ou menos, em pH 6,5 e com uma KD em pH 7,0 que é mais do que 1,5 vezes mais elevada do que a aquela em pH 6,5. Em certos exemplos de realização, um Ab sensível ao pH é selecionado se ele se ligar especificamente à proteína VISTA- ECD com uma KD que é, pelo menos, 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes, 500 vezes, 1000 vezes, ou 5000 vezes inferior em pH 6,5 do que em pH 7,0 ou pH 7,4 (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC). Por exemplo, em alguns casos, um Ab é selecionado se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma KD que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes, 100 vezes, 300 vezes 500 vezes, 1000 vezes, ou 5000 vezes menor em pH 6,0, em relação ao pH 7,0 ou pH 7,4 ou superior (a uma temperatura constante, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC).

[250] Em certos exemplos de realização, o método compreende ainda a determinação de koff em dois valores de pH. Em tais exemplos de realização, um Ab é selecionado se ele se ligar especificamente à proteína VISTA-ECD com uma Koff que é mais baixa em condições ácidas em relação àquela nas condições neutra, fisiológicas ou alcalinas. Em certos exemplos de realização, um Ab é selecionado, se ele se ligar à proteína VISTA-ECD em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais baixa em pH 6,5 do que a koff em pH 7,0 ou pH 7,4, tal como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um Ab se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma taxa koff que é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais baixa em pH 6,0, em relação ao pH 7,0, medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[251] Em certos exemplos de realização, o método compreende ainda a determinação de kon em dois valores de pH. Em alguns desses exemplos de realização, um Ab é selecionado se ele se ligar à proteína VISTA- ECD com uma kon que é mais elevada em condições ácidas em relação a condições neutras, fisiológicas ou alcalinas. Em certos exemplos de realização, um Ab é selecionado, se ele se ligar à proteína VISTA-ECD em condições ácidas com uma kon que é pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes mais elevada em pH 6,5 do que a kon em pH 7,0 ou pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, um Ab é selecionado se ele se ligar à proteína VISTA-ECD com uma kon que é pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes maior em pH 6,0 do que em pH 7,0 ou pH 7,4, como medido, por exemplo, a 25ºC ou a 37ºC.

[252] Os anticorpos que se ligam preferencialmente ao huVISTA em pH ácido, versus pH neutro ou fisiológico podem ser identificados varrendo positivamente uma biblioteca de anticorpos VISTA ou Fabs ou scFv para ligação em pH ácido, por exemplo, pH 6,0 ou 6,5, e varrendo negativamente a biblioteca para a falta de ligação em pH neutro, por exemplo, pH 7,0 ou pH fisiológico, por exemplo, pH 7,4. Uma biblioteca pode ser enriquecida em ácido glutâmico, ácido aspártico e resíduos de histidina, tal como para selecionar domínios de ligação que são carregados positivamente e mais propensos a ligarem ao VISTA em pH ácido. A triagem/varredura pode envolver seleção positiva em pH ácido e triagens/varreduras negativas em pH neutro ou fisiológico. As seleções positivas e negativas podem ser alternadas.

[253] Alternativamente, um anticorpo que se liga ao VISTA em pH neutro e/ou que carece de ligação em pH ácido pode ser geneticamente manipulado para não ter ligação em pH neutro e ligação em pH ácido. Por exemplo, uma biblioteca pode ser criada substituindo resíduos de aminoácidos da VH e opcionalmente VL , como em uma ou mais CDRs e triando a biblioteca por seleção positiva de anticorpos que se ligam ao hVISTA em pH ácido e seleção negativa de anticorpos que não se ligam ao VISTA em pH neutro (ou fisiológico). Um método semelhante pode ser usado para desenvolver anticorpos de ligação ao VISTA que possuem o perfil de ligação ao VISTA seletivo no pH desejado, dependente de pH ou independente de pH.

EXEMPLOS DE REALIZAÇÃO ESPECÍFICOS:

[254] Exemplos de realização adicionais da presente invenção incluem os seguintes:

1. Um anticorpo isolado (Ab) que se liga especificamente ao domínio extracelular (ECD) do supressor contendo domínio V de imunoglobulina de ativação de células T humano (hVISTA), em que o Ab: a. Se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma constante de afinidade (KD) de 10-7 M ou menos; b. Se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma constante cinética de dissociação (koff) de 10-3 seg-1 ou menos; ou c. Se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menos e uma koff de 10-3 seg-1 ou menos;

2. O Ab isolado do exemplo de realização 1, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma KD de 10-8 M ou menos;

3. O Ab isolado do exemplo de realização 2, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma KD de 10-9 M ou menos;

4. O Ab isolado de qualquer um dos exemplos de realização de 1 a 3, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma Koff de 10-4 seg-1 ou menos;

5. O Ab isolado de qualquer um dos exemplos de realização de 1 a 4, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 7,0 ou superior com; a. uma KD de 10-7 M ou menos; b. uma koff de 10-3 seg-1 ou menos; ou c. uma KD de 10-7 M ou menos e uma koff de 10-3 seg-1 ou menos;

6. O Ab isolado do exemplo de realização 5, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 7,0 ou superior com uma KD de 10-8 M ou menos;

7. O Ab isolado do exemplo de realização 6, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 7,0 ou superior com uma KD de 10-9 M ou menos;

8. O Ab isolado de qualquer um dos exemplos de realização de 5 a 7, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 7,0 ou superior com uma Koff de 10-4 seg-1 ou menos;

9. O Ab isolado de qualquer um dos exemplos de realização de 5 a 8, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com afinidade similar à ligação em pH 7,0;

10. O Ab isolado do exemplo de realização 9, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com afinidade maior do que em pH 7,0;

11. O Ab isolado do exemplo de realização 10, em que o Ab se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com uma KD que é pelo menos 1,5 vezes inferior do que em pH 7,0;

12. O Ab isolado do exemplo de realização 11, em que o Ab se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com uma KD que é pelo menos 2 vezes inferior do que em pH 7,0;

13. O Ab isolado do exemplo de realização 11, em que o Ab se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com uma KD que é pelo menos 5 vezes inferior do que em pH 7,0;

14. O Ab isolado de qualquer um dos exemplos de realização de 10 a 13, em que o Ab liga-se ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com um koff que é menor do que aquela em pH 7,0;

15. O Ab isolado do exemplo de realização 14, em que o Ab se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com uma Koff que é pelo menos 1,5 vezes inferior do que em pH 7,0;

16. O Ab isolado do exemplo de realização 15, em que o Ab se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com uma Koff que é pelo menos 2 vezes inferior do que em pH 7,0;

17. O Ab isolado do exemplo de realização 16, em que o Ab se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com uma Koff que é pelo menos 5 vezes inferior do que em pH 7,0;

18. O Ab isolado de qualquer uma dos exemplos de realização de 1 a 17, em que o Ab se liga especificamente ao hVISTA-ECD sob condições nas quais pelo menos um resíduo de histidina de hVISTA-ECD está protonado;

19. O Ab isolado do exemplo de realização 18, em que o Ab liga-se ao domínio IgV do hVISTA-ECD;

20. O Ab isolado do exemplo de realização 19, em que o Ab liga-se a uma região localizada dentro dos aminoácidos 20 e 95 de SEQ ID NO: 2;

21. O Ab isolado do exemplo de realização 20, em que o Ab liga-se a uma região localizada dentro dos aminoácidos 20 e 70 de SEQ ID NO: 2;

22. O Ab isolado do exemplo de realização 21, em que o Ab liga-se a uma região localizada dentro dos aminoácidos 35 e 70 de SEQ ID NO:

2.;

23. O Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização 20 a 22, em que o Ab liga-se ainda a outra região do ECD de hVISTA;

24. O Ab isolado do exemplo de realização 23, em que o Ab liga-se a uma região localizada dentro dos aminoácidos 95 e 105 de SEQ ID NO: 2;

25. O Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização de 18 a 24, em que a ligação é determinada por espectrometria de massa com troca de hidrogênio-deutério (HDX-MS);

26. O Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização de 1 a 25, em que o Ab inibe a ligação do hVISTA a uma célula na qual o hVISTA se ligaria de outro modo;

27. O Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização de 1 a 26, em que o Ab desencadeia ou aumenta uma resposta imune em um modelo de tumor;

28. O Ab isolado do exemplo de realização 27, em que o Ab desencadeia ou aumenta a atividade de células T em um modelo de tumor;

29. O Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização de 1a 28, em que o Ab inibe o crescimento do tumor em um modelo de tumor;

30. O Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização de 1 a 29, em que o Ab inibe a ligação do hVISTA às células T;

31. O Ab do exemplo de realização 30, em que o Ab inibe mais fortemente a ligação do hVISTA às células T em pH 6,5 ou inferior do que em pH 7,0 ou superior, tal como em que o anticorpo inibe mais fortemente a ligação do hVISTA às células T em pH 6,5 do que em pH 7,0;

32. Uma composição compreendendo um Ab isolado de acordo com qualquer um dos exemplos de realização de 1 a 31 e um veículo farmaceuticamente aceitável;

33. Um método para tratar um sujeito com câncer, compreendendo administrar ao sujeito uma composição do exemplo de realização 32;

34. Um método para a identificação de um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-7 M ou menos, compreendendo o contato de um Ab teste ou uma pluralidade de Abs teste com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento compreendendo o domínio IgV de hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, ou 35-70 de SEQ ID NO: 2 em pH 6,5 ou inferior, e selecionando o Ab teste ou Abs teste que se liga(m) ao polipeptídeo com uma KD de 10-7 M ou menos;

35. Um método para a identificação de um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior, com uma koff de 10-3 seg-1 ou menos, compreendendo o contato de um Ab teste ou uma pluralidade de Abs teste com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento compreendendo o domínio IgV de hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, ou 35-70 de SEQ ID NO: 2 em pH 6,5 ou inferior, e selecionando o Ab teste ou Abs teste que se liga(m) ao polipeptídeo com uma koff de 10-3 seg-1 ou menos;

36. Um método para identificar um Ab que se liga especificamente ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com afinidade similar à ligação que ocorre em pH 7,0 compreendendo: a. contatar um Ab teste ou pluralidade de Abs teste em pH 6,5 com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento do mesmo compreendendo o domínio IgV de hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, ou 35-70 de SEQ ID NO: 2; b. contatar o Ab teste ou a pluralidade de Abs teste em pH 7,0 com o polipeptídeo de (a); e c. selecionar um Ab teste se ele se ligar ao polipeptídeo com uma KD de 10-7 M ou menos, em pH 6,5 e em pH 7,0;

37. Um método para identificar um Ab que se liga com maior afinidade ao hVISTA-ECD em pH 6,5 do que em pH 7,0 compreendendo: a. contatar um Ab teste ou pluralidade de Abs teste em pH 6,5 com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento do mesmo compreendendo o domínio IgV de hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, ou 35-70 de SEQ ID NO: 2;

b. contatar o Ab teste ou a pluralidade de Abs teste em pH 7,0 com o polipeptídeo de (a); e c. selecionar um Ab teste se ele se ligar ao polipeptídeo com uma KD pelo menos 2 vezes mais baixa em pH 6,5 do que em pH 7,0;

38. Um método para identificar um Ab que se liga especificamente ao hVISTA-ECD para uso no tratamento de câncer, compreendendo: a. identificar os Abs que se ligam especificamente ao hVISTA- ECD em pH 6,5 ou inferior, tal como de acordo com os métodos dos exemplos de realização de 32 a 35; e b. selecionar os Abs de (a) que desencadeiam ou melhoram uma resposta imune em um modelo tumoral ou que inibem o crescimento tumoral em pH 6,5 ou inferior;

39. O método do exemplo de realização 38, em que a etapa (b) compreende medir a atividade das células T;

40. O método do exemplo de realização 38 ou 39, compreendendo ainda a medição do efeito antitumoral do Ab;

41. Um método para melhorar a eficácia antitumoral de um Ab que se liga ao hVISTA-ECD, compreendendo: a. o fornecimento de um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma afinidade que é menor do que um valor desejado, por exemplo, com uma KD de 10-7 M ou mais, por exemplo, 10-6 M, 10-5 M ou mais e/ou koff de 10-2 seg-1 ou mais; b. a substituição de 1 a 5 resíduos de aminoácidos na cadeia pesada ou leve do Ab com um resíduo de aminoácido diferente, em que os 1 a 5 resíduos de aminoácidos são resíduos de contato com hVISTA-ECD; c. a determinação se o Ab obtido em (b) tem maior afinidade para o hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior em relação ao Ab de (a); e d. a repetição das etapas (a) - (c), por uma série de vezes suficientes para se obter um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-7 M ou menos;

42. Um método para melhorar a eficácia antitumoral de um Ab que se liga ao hVISTA-ECD, compreendendo: a. o fornecimento de um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma afinidade que é menor do que um valor desejado, por exemplo, com uma KD de 10-7 M ou mais, por exemplo, 10-6 M, 10-5 M ou mais e/ou koff de 10-2 seg-1 ou mais; b. a preparação de uma biblioteca de variantes do Ab de (a), em que cada variante compreende uma substituição de 1 a 5 resíduos de aminoácidos na cadeia pesada ou leve do Ab com um resíduo de aminoácido diferente, em que os 1 a 5 resíduos de aminoácidos são resíduos de contato com hVISTA- ECD; c. a seleção dos Abs da biblioteca de variantes de (b) que se ligam ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menor; e opcionalmente; d. o teste da eficácia antitumoral dos Abs de (c) em um modelo de tumor;

43. Um método para melhorar a farmacocinética de um anticorpo que se liga ao VISTA ECD humano, compreendendo o aumento da capacidade do anticorpo para se ligar ao VISTA humano em condições ácidas, por exemplo, em um pH igual ou inferior ao pH 6,5; e

44. Método para selecionar um anticorpo que se liga ao VISTA humano e que possui uma meia-vida prolongada (boas propriedades farmacocinéticas), em que o método compreende selecionar um anticorpo que se liga ao VISTA humano em condições ácidas, por exemplo, em um pH igual ou inferior ao pH 6,5.

[255] Outras realizações exemplares são fornecidas nas reivindicações abaixo.

EXEMPLOS

[256] Os exemplos discutidos abaixo pretendem ser puramente exemplificativos da invenção e não devem ser considerados como limitantes da invenção. Os exemplos não pretendem representar que os experimentos abaixo foram todos ou os únicos experimentos realizados. Esforços foram feitos para garantir a precisão em relação aos números usados (por exemplo, quantidades, temperatura, etc), mas alguns erros e desvios experimentais devem ser considerados. Salvo quando indicado de outra forma, as partes são partes em peso, o peso molecular é o peso molecular médio, a temperatura está em graus Centígrados e a pressão é a atmosférica ou próxima desta.

EXEMPLO 1

O DOMÍNIO EXTRACELULAR DO VISTA É EXCEPCIONALMENTE RICO EM HISTIDINAS

[257] Este exemplo mostra que o domínio extracelular do VISTA é excepcionalmente rico em resíduos de histidina, que estes resíduos de histidina são evolutivamente conservados e que podem contribuir para interações receptor-ligante envolvendo VISTA.

[258] As sequências de aminoácidos dos domínios extracelulares (ECDs) de proteínas contendo o domínio de imunoglobulina foram extraídas das bases de dados uniprot e swiss-prot e analisadas quanto ao teor de histidina. A Figura 1A mostra os resultados desta análise como um gráfico.

Para cada proteína, a frequência de resíduos de histidina como uma porcentagem de todos os resíduos de aminoácidos do domínio extracelular é representada graficamente no eixo y, e o número total de resíduos de aminoácidos do domínio extracelular é representado graficamente no eixo x. O diâmetro de cada ponto de dados corresponde ao número total de resíduos de histidina no domínio extracelular de cada proteína. O VISTA (marcado) contém uma alta frequência excepcional de resíduos de histidina no seu domínio extracelular.

[259] A conservação evolutiva dos resíduos de histidina no VISTA foi então avaliada. A Figura 1B mostra as sequências de referência de aminoácidos de VISTA de humano, de macaco cinomolgo e de camundongo alinhadas, excluindo os peptídeos sinal (“Sig”), domínios transmembranas (“TMD”) e domínios intracelulares. Os resíduos de histidina que são conservados em todas as três espécies estão em negrito e sublinhados. Os resíduos de histidina que são conservados através do VISTA humano e cino estão em negrito sem sublinhar. Muitos dos resíduos de histidina do domínio extracelular do VISTA são evolutivamente conservados, sugerindo um importante papel biológico para o elevado teor de histidina do VISTA.

[260] Um modelo tridimensional do domínio hVISTA IgV foi criado com base na análise de homologia de sequência para as estruturas resolvidas disponíveis no banco de dados PDB. O modelo, mostrado na Figura 1C, indica que muitas histidinas no ECD do VISTA estão expostas na superfície da molécula, onde podem desempenhar um papel na ligação do ligante bem como no reconhecimento do anticorpo. Os resíduos de histidina são representados como bolas e bastões.

EXEMPLO 2

A PROTONAÇÃO DE HISTIDINA PODE REGULAR A LIGAÇÃO DO LIGANTE E RECEPTOR VISTA E A ATIVIDADE IMUNOSSUPRESSORA EM TUMORES E OUTROS MICROAMBIENTES ÁCIDOS

[261] Este Exemplo descreve a protonação de histidina em resposta ao pH ácido fisiologicamente relevante, bem como um modelo em que histidinas de domínio extracelular de VISTA conferem seletividade de contrarreceptor ou ligante para pH ácido em vez de pH fisiológico.

[262] A Figura 2A mostra o equilíbrio entre a ausência e presença de protonação do grupo pirrol amônio (NH) em um resíduo de histidina. O pKa de histidina em solução é de 6,5, indicando que os resíduos de histidina têm maior probabilidade de estarem protonados em pH 6,5 e inferior e, assim, carregados positivamente, do que em pH mais elevado. O aumento da carga positiva na superfície do VISTA ECD como resultado da protonação pode afetar a ligação do receptor ou do ligante, bem como a estrutura e/ou função do VISTA. Assim, alterações no pH também podem modificar epítopos de ligação a anticorpos e/ou resultar em afinidades de anticorpos variadas.

[263] A Figura 2B mostra um modelo em que o VISTA envolve PSGL-1 ou outros contrarreceptores e ligantes (“VISTA-R”) seletivamente em pH ácido. Em pH fisiológico, tal como no sangue, espera-se que os resíduos de histidina no ECD do VISTA não sejam protonados. Como resultado, a ligação do VISTA ao PSGL-1 ou a outros contrarreceptores e ligantes é insignificante em pH fisiológico. Em contrapartida, em locais que tendem a ter um pH extracelular ácido, tais como microambientes tumorais ou locais de inflamação, o pH ácido pode parcialmente ou totalmente conduzir a protonação de histidina do ECD do VISTA e assim permitir a ligação de VISTA ao PSGL- 1 ou a outros contrarreceptores e ligantes. Consequentemente, os anticorpos que se ligam fortemente às proteínas VISTA-ECD em intervalos de pH ácido podem ser mais eficazes na inibição da atividade de VISTA em tumores.

EXEMPLO 3

VISTA É EXPRESSO POR CÉLULAS MIELOMONOCÍTICAS EM TUMORES

[264] Este exemplo mostra que VISTA é frequentemente expresso por células mielomonocíticas em tumores, incluindo macrófagos, células dendríticas e granulócitos.

[265] Amostras de carcinoma pulmonar de células não pequenas ressecado cirurgicamente, carcinoma de células claras renais, melanoma, carcinoma colorretal e outras amostras de tumores foram lavadas em PBS gelado, cortadas em pedaços de aproximadamente 15 mm 3 e suspensas em meio RPMI-1640 gelado (número de catálogo da Fisher Scientific 11875093)

suplementado com 2% de FBS inativado pelo calor e 2 mM de EDTA (Fisher

Scientific 15575020). Cada amostra foi transferida para um grande copo de depuração dounce (Tenbroeck Tissue Grinders) e moída até que as partes do tecido fossem visualmente dissociadas.

As suspensões foram filtradas em malha de nylon 70 μM e centrifugadas.

Os sobrenadantes foram descartados e os sedimentos celulares foram ressuspensos em PBS à temperatura ambiente,

suplementado com PBS com 0,1% de albumina de soro bovino e 250 mg/mL de DNase 1 filtrada estéril (grau II, de pâncreas bovino, número de catálogo da

Roche 10104159001) durante 3 minutos à temperatura ambiente.

As células foram então lavadas em meio RPMI suplementado resfriado em gelo e ressuspensas em PBS gelado.

Adicionou-se um corante de viabilidade celular e as células foram incubadas em gelo no escuro.

Após 20 minutos, a coloração de anticorpo não específico foi bloqueada pela adição de 4% de soro de rato normal, 4% de soro de camundongo normal, 20% de soro humano a partir de plasma AB e TruStain FcX™ diluído em 1: 125 (número de catálogo da

Biolegend 422302). As células foram coradas com anticorpos conjugados com fluoróforo contra HLA-DR (número de catálogo da BD Biosciences 564040),

CD8 (número de catálogo da Fisher Scientific 46-0087-42), CD14 (número de catálogo da Biolegend 325620), CD45 (número de catálogo da Biolegend

304017), CD4 (número de catálogo da BD Biosciences 563875), CD11c

(número de catálogo da BD Biosciences 744439), CD15 (número de catálogo da BD Biosciences 563142), PD-1 (número de catálogo da BD Biosciences

565299), CD3 (número de catálogo da BD Biosciences 565515), CD56 (número de catálogo da Fisher Scientific 61-0567-42), CD19 (número de catálogo da BD Biosciences 564977) e VISTA (anticorpo VISTA 3 conjugado com AlexaFluor™

647, número de catálogo da Fisher Scientific A20186) suspenso em tampão de coloração Brilliant Stain Buffer (número de catálogo da BD Biosciences 562794) por 30 minutos no gelo no escuro. As células coradas foram lavadas em PBS gelado, fixadas (número de catálogo da Fisher Scientific 00-5523-00) e adquiridas em um citômetro de fluxo. Os dados foram analisados usando o software FlowJo™ (BD Biosciences). Como mostrado na Figura 3, a expressão de VISTA na superfície celular foi mais alta em macrófagos e granulócitos, moderada em células dendríticas e baixa em células T, células natural killer e células B.

EXEMPLO 4

LIGAÇÃO DE VISTA À CÉLULAS EXIBE UMA SELETIVIDADE EM PH ÁCIDO

[266] Este exemplo mostra que o ECD do VISTA multimerizado humano se liga de forma mais eficiente às células T CD4 + humanas estimuladas e células mononucleares do sangue periférico humano em pH ácido do que em pH neutro ou fisiológico, e que essa ligação pode ser bloqueada por um anticorpo de bloqueio VISTA anti-humano. A ligação do ECD do VISTA dimerizado de camundongo seletivo em pH ácido aos esplenócitos de camundongo também é mostrada.

[267] As células T CD4+ humanas foram enriquecidas a partir de sangue de doadores saudáveis por RosetteSep™ (número de catálogo da Stemcell 15062) e estimuladas in vitro durante aproximadamente quatro dias com Ativator CD3/CD28 de T Humano Dynabeads™ (número de catálogo da Fisher Scientific 111.32D) e IL-2 humana recombinante (número de catálogo da Peproteh 200-02) em RPMI-1640 suplementado com 10% de SBF inativado pelo calor, Glutamax™ (número de catálogo da Fisher Scientific 35050061), aminoácidos não essenciais (Fisher Scientific 11140050), piruvato de sódio (número de catálogo da Fisher Scientific 11360070) e 2- mercaptoetanol (Fisher Scientific 21985023). As células T CD4+ ativadas foram coradas com moléculas de ECD de hVISTA monobiotiniladas (Phe 33 - Ala 194 (# de Acesso

AAH20568) - poli- histidina; AcroBiosystems, Inc. B75- H82F3) carregadas em uma razão molar de 28: 1 em dextrâmeros de estreptavidina conjugados com ficoeritrina (PE) (número de catálogo da DX01-PE) diluída em solução salina tamponada de Hank Solution (HBSS, número de catálogo da Fisher Scientific 14025134) acidificou-se a vários pH com mM MES (Sigma, 1317-100ML) durante 30 minutos à temperatura ambiente. Como controle, as células T CD4+ ativadas foram coradas com dextrâmeros de estreptavidina conjugados com PE que não foram carregados com hVISTA. As células coradas foram lavadas com HBSS + MES e adquiridas em um citômetro de fluxo. Os dados foram analisados usando o software FlowJo™ (BD Biosciences). Os resultados, mostrados na Figura 4A, mostram que hVISTA não se ligou às células T CD4 + melhor do que o controle em pH > 6,5. Em contraste, hVISTA exibiu ligação progressivamente mais forte a células T CD4+ em pH < 6,5. À esquerda, de cinza mais escuro a mais claro, os histogramas preenchidos mostram ligação em pH 7,0, 6,5, 6,4, 6,3, 6,1 e 6,0. Alguns histogramas são rotulados com seus pH correspondentes. A ligação a multímero controle não direcionado para VISTA em pH 6,0 é mostrada como o histograma não preenchido. À direita, as intensidades médias de fluorescência (MFI) de PE no gráfico de células CD4 + marcadas com dextrâmeros carregados com hVISTA (círculos azuis) ou com dextrâmeros não carregados (triângulos) em diferentes pH.

[268] As células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram enriquecidas a partir de sangue de doadores saudáveis por centrifugação de gradiente ficoll (Ficoll-Paque Plus, número de catálogo da GE Life Sciences 17144003) e coradas com dextrâmeros carregados com hVISTA (também referidos como multímeros) e conjugados de fluoróforo diluídos em Tampões HBSS + MES como descrito acima. A Figura 4B mostra histogramas preenchidos que representam, de cinza mais escuro a mais claro, a ligação em pH 6,0 a células B CD19+, células T CD4+, células T CD8+, células NK CD56+ e monócitos CD14+. Os histogramas não preenchidos, de borda sólida e de borda pontilhada ilustram a ligação em pH 7,4 aos linfócitos e monócitos totais de PBMC, respectivamente. As Figuras 4F e 4G mostram que VISTA se liga a monócitos e neutrófilos, e tal ligação ocorre mais fortemente em pH 6,0 do que em pH 7,4. Os resultados mostram que hVISTA pode se ligar a muitos leucócitos em pH ácido, mas não significativamente em pH fisiológico.

[269] As células T CD4+ humanas ativadas foram coradas com multímeros de hVISTA em pH 6 na presença de anticorpo anti-VISTA humano titulado ou um anticorpo específico não direcionado para VISTA com correspondência de isotipo. Os resultados, representados graficamente na Figura 4C, mostram o multímero MFI de VISTA em relação à concentração de anticorpos.

Um anticorpo anti-hVISTA (anticorpo VISTA 3; quadrados), mas não o anticorpo controle não específico de VISTA (círculos), bloqueou a ligação de hVISTA a células T CD4+ ativadas de um modo dependente da concentração. O PE MFI de células T CD4+ que não foram coradas com multímeros carregados com hVISTA é incluso como um controle (triângulo único).

[270] A Figura 4D mostra gráficos representativos de citometria de fluxo bidimensional da coloração de multímero VISTA em pH 6,0 com células de ovário de hamster chinês (CHO) mutante para sulfato de heparano (linhagem pGSD-677, American Type Culture Collection) que foram transfectadas para expressar PSGL-1 humano de comprimento total (SEQ ID NO: 3; ácido nucleico NM_003006.4). A coloração foi realizada na presença ou ausência de um anticorpo bloqueador anti-VISTA titulado (mAb 3). As células deixadas sem coloração pelos multímeros VISTA são mostradas como um controle. A coloração do anticorpo PSGL-1 (número de catálogo da BD Biosciences 562758) é representada graficamente no eixo y, e a coloração de multímero VISTA é representada graficamente no eixo x.

[271] Os esplenócitos foram colhidos de camundongos C57BL6/J

(número de catálogo da Jackson Laboratory 000664) e corados com proteínas de fusão quimérica mVISTA ECD/Fc de IgG humana (Fragmento, cristalizável) seguidas por anticorpos secundários Fc anti-IgG humana conjugados com fluoróforo (número de catálogo da Jackson Immunoresearch 109-065-098) em pH 6,0 ou 7,4. Os resultados, representados por histograma na Figura 4E, mostram que mVISTA se liga a esplenócitos murinos mais eficientemente em pH 6,0 do que em pH fisiológico (aproximadamente pH 7,4). Do cinza mais escuro para o mais claro, os histogramas preenchidos representam ligação em pH 6,0 às células T CD8+, células mieloides CD11b+ e células T CD4+. O histograma não preenchido mostra a ligação em pH 7,4 ao total de esplenócitos.

EXEMPLO 5 VISTA MEDEIA SELETIVAMENTE A ADESÃO CÉLULA: CÉLULA E SUPRESSÃO IMUNE

EM PH ÁCIDO

[272] Este exemplo mostra que VISTA medeia a adesão célula: célula e suprime a ativação de células T mais potentemente em pH ácido do que em pH neutro ou fisiológico.

[273] Foi estabelecido um ensaio de conjugado célula/célula baseado em citometria de fluxo compatível com pH ácido. Células 293T (uma linhagem de células de rim embrionário humano imortalizadas, número de catálogo ATCC CRL-3216) expressando ectopicamente de VISTA ou vector humano de comprimento completo foram marcadas com CFSE (éster de succinimidil carboxifluoresceína; número de catálogo da Fisher Scientific C34554). As células CHO foram marcadas com Cell Trace™ Far Red (número de catálogo da Fisher Scientific C34564). As células de vector ou VISTA 293T foram então misturadas a uma proporção de 1: 1 com células CHO em tampões em pH 7,0 ou em pH 6,0 e foram incubadas durante 1 hora à temperatura ambiente. A formação de conjugados célula/célula 293T e CHO foi avaliada por citometria de fluxo.

Os resultados mostrados nas Figuras 5A-B demonstram que células 293T expressando VISTA se aderem preferencialmente a células CHO, em pH ácido e que a inclusão de um anticorpo de bloqueio anti-VISTA (VISTA mAb 3; barras brancas) inibe a adesão célula/célula mediada por VISTA.

[274] Um ensaio de supressão de células T compatível com pH ácido foi estabelecido. As células Jurkat (uma linhagem de células T humanas imortalizadas, número de catálogo ATCC TIB-152) expressando um repórter luciferase dirigido pelo promotor NFkB foram cocultivadas em tampões HBSS + MES de vários pH com células 293T (uma linhagem celular de rim embrionário humano imortalizada, número de catálogo ATCC CRL- 3216) expressando ectopicamente VISTA humano de comprimento completo e um fragmento variável de cadeia única do clone OKT3 do anticorpo anti-agonista receptor de células T humano na proporção de 10:1 de Jurkat:células 293T. Um anticorpo de bloqueio anti-VISTA (VISTA mAb 3) ou um anticorpo controle específico não-VISTA pareado com isotipo foram adicionados a 10 μg/mL às coculturas. Após incubação, a ativação das células T de Jurkat foi quantificada medindo a atividade da luciferase (intervalo de 1 segundo de Promega, número de catálogo G7940). Os resultados são mostrados nas Figuras 5C-D. A Figura 5C mostra um gráfico de unidades de luciferase em Jurkats tratadas com anti-VISTA (quadrados vermelhos) ou anticorpo controle (círculos azuis) em diferentes pH. A Figura 5D mostra um gráfico do sinal de luciferase em coculturas tratadas com anticorpo anti-VISTA dividido pelo sinal de luciferase em coculturas tratadas com anticorpo controle a cada pH testado. Os resultados mostram que a supressão de células T mediada por VISTA é mais potente em pH ácido.

EXEMPLO 6

VISTA TRAFEGA ATRAVÉS DE ENDOSSOMOS DE RECICLAGEM INTRACELULARES

[275] Este exemplo mostra que o VISTA pode ser encontrado em endossomos intracelulares, particularmente em endossomos de reciclagem Rab11+, e pode reciclar de e para a superfície da célula por meio de tráfego endossomal. A força com que um anticorpo anti-VISTA se liga ao VISTA em pH ácido influencia sua capacidade de permanecer ligado ao VISTA durante o tráfego endossomal.

[276] Os monócitos foram isolados de PBMCs por triagem de células ativadas magnéticas. Ambos os monócitos e células 293T foram então fixados em paraformaldeído a 4% e corados intracelularmente para Rab5, Rab7 ou Rab11 e com um anticorpo anti-VISTA ou controle. O anticorpo controle (“cAb”), que é um anticorpo ligante ao não direcionado para VISTA do mesmo isotipo que o anticorpo anti-VISTA, não se liga de forma detectável a monócitos ou células 293T que expressam o VISTA humano. Os anticorpos anti-VISTA e controle foram diretamente marcados com Alexa488. Os anticorpos Rab foram detectados utilizando um anticorpo secundário Ig anti- coelho Alexa594. A coloração de Hoescht 33342 foi realizada para identificar os núcleos das células. As imagens foram capturadas usando um microscópio confocal de disco giratório. A Figura 6A mostra a colocalização de VISTA, Rab5 (marcador endossômico precoce), Rab7 (marcador endossômico tardio) e Rab11 (marcador endossômico de reciclagem) dentro de células 293T expressando VISTA humano. O VISTA intracelular está colocalizado com endossomos de reciclagem Rab11+.

[277] Para avaliar a capacidade do VISTA para reciclar por meio de endossomos, um ensaio de morte dependente de endolisossomo com conjugado de fármaco e anticorpo foi realizado com três anticorpos anti- hVISTA (VISTA mAb 1, 2 e 3), com diferentes propriedades de ligação de VISTA em pH fisiológico e ácido. Um ensaio de SPR foi realizado primeiro para comparar os perfis de ligação de hVISTA para todos os três anticorpos VISTA em pH 7,4, 6,7 e 6,0. Os anticorpos VISTA foram capturados sobre um biosensor CM5 Biacore® T100 (GE Healthcare) contendo Proteína A imobilizada, em seguida, 100 nM de hVISTA-ECD (aminoácidos 32-193 de SEQ ID NO: 1 com uma cauda 7xHis, ou seja, AFKVATPYSL YVCPEGQNVT

LTCRLLGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH

GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVY PSSSQESENI TAHHHHHHH; SEQ ID NO: 325) foi fluída em tampão de corrida PBST no pH indicado a 37ºC.

Sensogramas de subtração de referência foram normalizados para o ponto de relatório de ‘ligação’ e representados graficamente. O anticorpo VISTA 3, “m Ab 3”, (Figura 6C, parte superior) exibiu o maior grau de comprometimento de ligação ao VISTA em pH ácido, seguido pelo anticorpo VISTA 2, “mAb 2 “(Figura 6C, meio), que foi apenas moderadamente prejudicado. O anticorpo VISTA 1, “mAb 1”, manteve forte ligação ao VISTA em condições de pH ácido e fisiológico (Figura 6C, em baixo).

[278] O ensaio de morte de conjugado de anticorpo-fármaco dependente de endolisossomo foi realizado da seguinte forma. Células AML3 (uma linhagem celular de monócito humano imortalizada, ATCC CRL- 9589), que expressam endogenamente VISTA humano, foram cultivadas com anticorpos anti-VISTA titulados ou um anticorpo controle não específico de VISTA e um anticorpo secundário anti-IgG humana que foi conjugado a um ligante sensível a catepsina B e a uma carga útil de tubulisina citotóxica. Como a catepsina B é predominantemente ativa em endossomos e lisossomos tardios, os anticorpos anti-VISTA que reciclam com VISTA através dos endossomos iniciais e endossomos de reciclagem experimentarão baixos níveis de clivagem do ligante e, como resultado, baixos níveis de liberação de carga citotóxica e morte celular. Anticorpos anti-VISTA que se desassociam do VISTA em endossomos ácidos e são classificados em endossomos e lisossomas tardios, experimentarão níveis mais elevados de clivagem do ligante. A viabilidade celular foi medida pela Cell Titer Glo® (número de catálogo da Promega G7573), após cinco dias em cultura. A Figura 6D mostra os resultados deste ensaio, com viabilidade de AML3 (Cell Titer Glo) representada graficamente no eixo y e concentrações de anticorpo primário representadas graficamente no eixo x. EC50s calculados para anticorpos primários: anticorpo VISTA 1, triângulos invertidos, 0,485 μg/mL; anticorpo VISTA 2, círculos, 0,092 μg/mL; anticorpo VISTA 3, quadrados, 0,006 μg/mL; Controle, triângulos, 1,085 μg/mL. A potência do anticorpo foi inversamente correlacionada com a ligação do anticorpo anti-VISTA em pH ácido.

[279] Para confirmar que a ligação em pH ácido era responsável pelas diferenças na potência, o anticorpo VISTA 3 foi otimizado por afinidade de tal modo que a sua capacidade de se ligar ao VISTA em pH ácido foi melhorada. A Figura 6E mostra um ensaio de SPR comparando os perfis de ligação do anticorpo hVISTA do anticorpo VISTA 3 com esta variante, anticorpo VISTA 3c, utilizando as condições de ensaio descritas para a Figura 6C. O anticorpo VISTA 3 novamente exibiu ligação ao VISTA prejudicada em pH ácido, enquanto que o anticorpo VISTA variante 3c exibiu ligação ao VISTA comparável em pH ácido e fisiológico. A Figura 6F mostra a atividade do anticorpo VISTA 3c (losangos) no ensaio de morte descrito para a Figura 6D.

A variante do anticorpo VISTA 3 otimizada para pH ácido exibiu uma potência 31 vezes menor do que a do anticorpo original, indicando que a ligação deficiente do anticorpo anti-VISTA em pH ácido resulta em uma perda de ligação do anticorpo durante a reciclagem de VISTA.

[280] Com base nessas descobertas, é proposto um modelo de reciclagem no qual o VISTA é reciclado de e para a superfície da célula por meio de endossomos iniciais e endossomos de reciclagem. Este modelo é representado na Figura 6G. Os anticorpos anti-VISTA podem reciclar com o VISTA através destes endossomos, mantendo a ligação com o alvo. No entanto, os anticorpos VISTA com comprometimento da ligação ao VISTA em pH ácido, particularmente aqueles com uma velocidade de dissociação rápida em pH ácido, podem se desassociar do VISTA durante a reciclagem e ficarem aprisionados ou degradados dentro das células, resultando em baixa ligação com o alvo e consumo contínuo de anticorpos circulantes. Em contraste, os anticorpos que se ligam e permanecem ligados ao VISTA em pH ácido podem manter níveis mais elevados de ligação com o alvo, particularmente em microambientes ácidos, tais como tumores, e exibem tempos médios de permanência mais longos in vivo.

EXEMPLO 7

SUPERIORIDADE DOS ANTICORPOS VISTA QUE CARECEM DE LIGAÇÃO EM PH FISIOLÓGICO

[281] Os inventores demonstraram que o VISTA é um imunorreceptor seletivo ao pH ácido, demonstrando a importância e utilidade de ter como alvo o VISTA com anticorpos que se ligam bem em pH ácido.

Além disso, os anticorpos que não se ligam, ou se ligam de forma insignificante ao VISTA em pH fisiológico são vantajosos para várias razões. Primeiramente, devido à expressão relativamente abundante de VISTA em células circulantes mielomonocíticas, particularmente monócitos e neutrófilos, os anticorpos que se ligam VISTA em pH fisiológico estão sujeitos a níveis elevados de disposição de fármaco mediada pelo alvo (TMDD) no sangue. Este efeito é exacerbado pela propensão do VISTA a reciclar através dos endossomos intracelulares, levando à internalização e degradação do anticorpo anti-VISTA.

Este efeito secundário é particularmente problemático para anticorpos que têm ligação prejudicada em pH ácido, como pode ser observado em anticorpos que ligam a interface de ligante rica em histidina de VISTA. Ambos os efeitos reduzirão a quantidade de anticorpo anti-VISTA em circulação, reduzindo a quantidade de anticorpo que atingirá o tumor e, portanto, a atividade biológica pretendida do anticorpo. Em segundo lugar, os anticorpos que se ligam ao VISTA em pH fisiológico e que possuem funções efetoras, tais como indução de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC), fagocitose celular dependente de anticorpos (ADCP), ou entrega de carga útil imunomoduladora sujeitarão células mielomonocíticas circulantes àquelas funções efetoras, resultando potencialmente em efeitos indesejáveis, como a depleção ou ativação de neutrófilos circulantes. Assim, os inventores descobriram que os anticorpos que se ligam ao huVISTA em pH ácido, mas de forma não negligenciável em pH fisiológico, têm a dupla vantagem de (1) melhor exposição em locais relevantes tais como tumores e (2) toxicidades reduzidas no caso de anticorpos com funções efetoras, como ADCC, ADCP, ou entrega de carga útil imunomoduladora. Adicionalmente, porque o próprio VISTA é um imunorreceptor seletivo em pH ácido, o bloqueio da interface do ligante de VISTA em pH fisiológico é provavelmente desnecessário para modular a atividade do ligante do receptor VISTA. Portanto, os anticorpos que se ligam ao huVISTA em pH ácido, mas não significativamente em pH fisiológico, foram gerados como descrito abaixo.

EXEMPLO 8 ISOLAMENTO DE ANTICORPOS ANTI-VISTA QUE SE LIGAM PREFERENCIALMENTE AO

VISTA HUMANO EM PH ÁCIDO EM RELAÇÃO AO PH FISIOLÓGICO

[282] Este exemplo descreve a geração de anticorpos que se ligam preferencialmente ao VISTA humano em pH baixo (ácido) em relação ao pH neutro ou fisiológico.

[283] Uma biblioteca de fragmentos de ligação ao antígeno anti- VISTA foi construída e triada/rastreada da seguinte forma. As bibliotecas de anticorpos foram criadas utilizando material genético isolado de camundongos HuMab imunizados com VISTA humano de comprimento total (hVISTA). Estes anticorpos foram formatados como scFv e foram selecionados contra o hVISTA de comprimento total com ligação em pH baixo (pH 6,0) através de apresentação de RNAm (Xu L et al. (2002) Chemistry & Biology 9: 933; Roberts RW e JW Szostak (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 12297; Kurz et al. (2000) Nucleic Acids Res.

28 (18): E83). O resultado de seleção foi analisado através de sequenciamento de próxima geração (NGS), e membros da biblioteca que demonstraram um enriquecimento para a ligação ao VISTA em pH baixo foram identificados, reformatados como IgG 1.3 (uma região constante IgG1 efetora que consiste em um IgG1 Fc com mutações de aminoácidos L234A, L235E e G237A), e rastreados quanto à ligação ao VISTA por SPR.

[284] A análise por ressonância plasmônica de superfície (SPR) foi realizada para medir as velocidades de associação (definidas como ka ou kon, unidades de 1/Ms), velocidades de dissociação (definidas como KD ou koff, s-1 unidades) e constantes de afinidade (definidas como KD, unidades M) para Abs VISTA em pHs ácidos e fisiológicos usando um instrumento Biacore ® T200 (GE Healthcare). A proteína A (número de catálogo da Fisher Scientific 21181) foi diluída para 20 μg/mL em 10 mM de acetato de sódio, pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biosensor CM5 seguindo o protocolo do fabricante de acoplamento de amina (GE Healthcare), tendo como alvo 6.000 RU de densidade de imobilização de Proteína A por célula de fluxo. As experimentos de SPR foram realizados a 37ºC utilizando PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, Tween 20 a 0,05%), em um pH de 7,4 e 6,0. Os anticorpos foram diluídos para 20 nM em PBST pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo a 5 μl/min durante 50 segundos. Preparou-se uma série de concentrações de hVISTA-ECD monovalente de 50 - 0,2 nM (SEQ ID NO: 325) em tampões de corrida em pH 7,4 e 6,0 e injetou-se sobre os anticorpos capturados a 40 μl/min para medir a associação e a dissociação. Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. As constantes cinéticas ka (kon) e KD (koff) foram derivadas a partir de célula de fluxo de referência e sensogramas com 0 nM subtraídos com branco, e foram ajustados a um modelo de ligação 1:1 em software de avaliação Biacore® T200 v. 2.0. Para cada anticorpo VISTA, a proporção de koff em pH 6/koff em pH 7,4 foi calculada para identificar anticorpos que exibem taxas off lentas em pH ácido e taxas off rápidas em pH fisiológico.

[285] Seis anticorpos, reformatados como anticorpos IgG1.3, demonstraram afinidade quase equivalente tanto em pH 6 quanto em pH7,4.

Em particular, dois anticorpos tinham uma taxa off mais lenta em pH 6,0 do que em pH 7.4 (ou seja, koff mais rápida em pH 7,4 do que em pH 6,0). As regiões variáveis destes dois anticorpos huVISTA são referidas como P1-061015 e P1- 061029 e os anticorpos compreendendo estas regiões variáveis e formatados como anticorpos IgG1.3 são referidos como P1-061015.IgG1.3 e P1-

061029.IgG1.3, respectivamente. As taxas de koff do P1-061015.IgG1.3 e P1-

061029.IgG1.3 são fornecidas na Tabela 1.

TABELA 1 KOFF DE ANTICORPOS SELECIONADOS EM PH 6,0 E EM PH 7,0 Nome do anticorpo pH 6 koff (s-1) pH 7 koff (s-1) pH 6/pH 7 koff P1-061015.IgG1.3 1,4 x 10-3 2,3 x 10-3 0,6 P1-061029.IgG1.3 4,8 x 10-3 9,1 x 10-3 0,5

[286] As Sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e leve de P1-061015 e P1-061029 são apresentadas na Tabela 2 abaixo e também são mostradas na Tabela de Sequências após a seção de Exemplos da presente divulgação.

TABELA 2

SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE ANTICORPOS HUVISTA QUE SE LIGAM AO HUVISTA MAIS EM PH 6,0 DO QUE EM PH 7,4 VH- P1 ID VH CDR1 VH CDR2 VH CDR3 gene

VH- P1 ID VH CDR1 VH CDR2 VH CDR3 gene P1- 3-33 GFTFSSYAMH IIWYDGSNKYYADSVKG DSGFYSSYYFDY

061015.IgG1.3 (SEQ ID NO: 95 (SEQ ID NO: 95 (SEQ ID NO: 95 Resíduos 26-35) Resíduos 50-66) Resíduos 99-110) P1- 3-09 GFTLDDYAMH GINWNSANIGYADSVKG VPGYSGGWIDAFDV

061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 67 (SEQ ID NO: 67 (SEQ ID NO: 67 Resíduos 26-35) Resíduos 50-66) Resíduos 99-112) VL- VL CDR1 VL CDR2 VL CDR3 gene P1- L6 RASQSVSSSYLA DASNRAT QQYNSYPYT

061015.IgG1.3 (SEQ ID NO: 96 (SEQ ID NO: 96 (SEQ ID NO: 96 Resíduos 24-35) Resíduos 51-57) Resíduos 90-98) P1- A27 RASQSVSSSYLA GASSRAT QQYGSSPFT

061029.IgG1.3 (SEQ ID NO: 68 (SEQ ID NO: 68 (SEQ ID NO: 68 Resíduos 24-35) Resíduos 51-57) Resíduos 90-98) EXEMPLO 9 OUTRAS MODIFICAÇÕES GENÉTICAS DOS ABS ANTI-VISTA P1-061015 E P1- 061029 PARA DESENVOLVER ANTICORPOS SELETIVOS EM PH ÁCIDO

[287] Este Exemplo descreve a modificação genética adicional de regiões variáveis P1-061015 e P1-061029 identificados no Exemplo 2 para se obter regiões variáveis de anti-huVISTA que têm uma maior relação de koff entre a ligação em pH 6,0 em relação ao pH 7,4.

[288] Duas bibliotecas foram construídas pela introdução de mutações específicas nas CDRs de VH de P1-061015 e P1-061029, respectivamente. As bibliotecas permitiram somente substituições de aminoácidos que foram os mais susceptíveis para melhorar a ligação em um pH baixo, isto é, aspartato, glutamato e histidina. A biblioteca também permitiu substituições de aminoácidos simples e duplas em cada CDR e recombinações através de CDRs (máximo de 6 substituições de aminoácidos por cadeia). A Figura 7A mostra as mutações que foram introduzidas nas sequências de aminoácidos de CDR3 da cadeia pesada de P1-061029 para formar a biblioteca P1-061029. A Figura indica que sequências específicas foram excluídas para evitar a introdução de susceptibilidades (por exemplo, DG).

[289] As bibliotecas ‘029 e ‘015 foram rastreadas por vários ciclos de ligação ao hVISTA de comprimento total em pH 6,0 através de exibição de superfície de levedura. Outras rodadas de seleção foram conduzidas alternando entre seleções positivas (pH 6,0 para huVISTA) e negativas (pH 7,4 para huVISTA) (mostradas na Figura 7B), onde os membros da biblioteca que não se ligaram ao VISTA em pH 7,4 foram coletados nas rodadas de seleção negativa. O resultado da seleção foi analisado pelo NGS.

Os membros da biblioteca ‘029 que se ligaram ao huVISTA em pH 6,0 após a rodada número 9 de seleção foram analisados quanto à ligação ao VISTA humano em pH 6,0 e pH 7,4 através de citometria de fluxo. A Figura 7C mostra gráficos de citometria de fluxo bidimensionais representativos mostrando o conjunto de variantes após 9 ciclos de seleção. A ligação VISTA é representada graficamente no eixo y, e a expressão de anticorpo variante é representada graficamente no eixo x. São mostrados dados de ligação em várias concentrações de anticorpo e pH. Os resultados demonstraram ligação seletiva em pH 6 muito forte ao VISTA humano, particularmente a 20 nM.

[290] Clones descendentes adicionais do ‘029 foram isolados a partir da biblioteca ‘029 utilizando um método diferente. Alguns clones foram os mesmos identificados pelo primeiro método e nove clones adicionais foram isolados.

[291] Os 19 clones isolados da biblioteca ‘029 selecionada para análise posterior foram reformatados como anticorpos IgG1.3. As diferenças de aminoácidos nas CDRs de cadeia pesada destes clones em relação às das CDR de VH de ‘029 são mostradas na Tabela 5.

TABELA 5 SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE CDR1, CDR2 E CDR3 DE VH (SEPARADAS POR UM SUBLINHADO) DE ANTICORPOS DERIVADOS DO ANTICORPO PARENTAL ‘029 Nome CDR1 CDR2 CDR3 SEQ ID NO (pos 26-35) (pos 50-66) (pos 99-110)

P1-061029 GFTLDDYAMH_GINWNSANIGYADSVKG_VPGYSGGWIDAFDV 67 P1-068757 ----E-E---_------EE---------_-----------E-D 71 P1-068759 ----E-E---_--D---E----------_-----------E-D 87 P1-068761 ----E-E---_------EE---------_-----H-----E—- 51 P1-068763 ----E-----_--D---E----------_-----H-----E-- 91 P1-068765 ---DE-----_------EE---------_-----------E-D 63 P1-068767 ----E-----_--D---E----------_-----------E-D 55 P1-068769 ----E-E---_------DH---------_-----------E-D 83 P1-068771 ----E-E---_------HE---------_-----------E-D 75 P1-068773 ----E-----_--D---D----------_-----------E-D 59 P1-068775 ----E-E---_--D---EE---------_-----H-----E-D 79 P1-069059 ----E-----_------DH---------_-----------E-D 11 P1-069061 ----E-----_-------E---------_-----------E-D 15 P1-069063 ----E-----_-------E---------_-----------D-E 19 P1-069065 ----E-E---_------DD---------_-------------- 23 P1-069067 ----------_------EE---------_-----------D-E 27 P1-069069 ----------_------EE---------_-----------D-- 31 P1-069071 ----E-E---_-------D---------_-----E-------- 35 P1-069073 ----E-----_--D---D----------_-----------E-D 39 P1-069075 ----E-----_----D--E---------_-----H-----E-- 43 P1-069077 ----E-E---_------DE---------_-------------- 47

[292] A ligação de várias preparações de cada um dos clones descendentes de ‘029 e dos anticorpos parentais de ‘029, formatados como anticorpos IgG1.3, para VISTA humano em pH 6,0 e 7,4 foi medida por ressonância plasmônica de superfície (SPR). A análise SPR foi realizada para medir medições de afinidade de ligação koff e KD para o Ab VISTA a valores de pH ácidos e neutros, utilizando um instrumento Biacore® T100 (GE

Healthcare). A proteína A (catalogo # da ThermoFisher Scientific 21181) foi diluída para 20 μg/mL em acetato de sódio a 10 mM em pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biossensor CM5 seguindo o protocolo de acoplamento de amina do fabricante (GE Healthcare), visando densidade de imobilização de 2.000 RU de Proteina A por célula de fluxo. Os experimentos de SPR foram conduzidos a 37ºC, utilizando tampão de corrida PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, 0,05% de Tween® 20) em pH 7,4 e 6,0. Os anticorpos foram diluídos a 25 nM em PBST em pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo cruzado a 5 μl/min durante 60 segundos. Preparou-se uma série de concentrações de 50 - 5 nM de hVISTA-ECD monovalente (SEQ ID NO: 325) em tampões de corrida em pH 7,4 e 6,0 e injetou-se sobre os anticorpos capturados a 40 μl/min para medir a associação e a dissociação.

Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. As constantes cinéticas Ka (kon) e KD (koff) foram derivadas a partir de célula de fluxo de referência e sensogramas a 0 nM subtraídos com branco, e foram ajustados a um modelo 1: 1 de ligação usando o software T200 Evaluation v.2.0. A constante de afinidade, KD foi calculada como a razão entre as constantes cinéticas koff/kon para cada anticorpo VISTA.

[293] A resposta de ligação VISTA humana máxima (ou magnitude) é definida como a resposta do ponto de referência de ‘ligação’ subtraída de referência no final da injeção de VISTAa 50 nM para cada anticorpo e é relatada em unidades de resposta (RU). A resposta de ligação (RUs) ao VISTA humano máxima a cada anticorpo é representada na Figura 7D. A média da resposta de ligação (entre dois a quatro anticorpos replicados) é representada graficamente, e as barras de erro representam o desvio padrão. Os resultados indicam que os clones descendentes selecionados de ‘029 se ligam ao hVISTA em pH 6,0, mas não em pH 7,4 (círculos vazios que representam de ligação em pH 7,4 estão todos localizados na parte inferior do gráfico, exceto para o clone ‘029 parental).

[294] As taxas de koff em pH 6,0 do ‘029 e seus descendentes foram determinadas por SPR utilizando o método descrito acima, e estão representadas na Figura 7E. A linha tracejada na Figura representam a taxa de koff de ‘029, e os clones para a esquerda da linha tracejada têm uma taxa de koff mais lenta em pH 6,0 em relação àquela do anticorpo parental ‘029, ao passo que aqueles no lado direito tem uma taxa de koff mais rápida em pH 6,0 em relação àquela do anticorpo parental ‘029.

[295] Os sensorgramas de ligação de SPR representativos do hVISTA para os anticorpos ‘029, ‘761 e ‘767 em pH neutro e ácido são mostrados na Figura 7F. Sensogramas hVISTA subtraídos de 50 nM e 5 nM da referência são representados graficamente. Em pH neutro, foi observado sinal de ligação ao VISTA < 10 RU para ‘761 e ‘767, assim, a fim de medir de forma adequada e comparar a k off e KD para ‘761 e ‘767 de ‘029, em um ensaio de cinética de SPR utilizando concentrações de μM de VISTA em pH fisiológico foram necessárias.

[296] Para este ensaio, ‘029’, ‘761 e ‘767 foram reformatados como isotipo hIgG1f e foram expressos como formatos afucosilados padrão de hlgG1f e hlgG1f para comparação com a IgG1.3f Fc. Um ensaio cinético de SPR foi realizado para medir as medições de afinidade koff e KD de ligação para o Ab VISTA em pH ácido e fisiológico usando um instrumento Biacore® T100 (GE Healthcare). A proteína A (número de catálogo da ThermoFisher Scientific 21181) foi diluído para 20 μg/mL em 10 mM de acetato de sódio em pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biosensor CM5 seguindo o protocolo de acoplamento de amina do fabricante (GE Healthcare), tendo como alvo densidade imobilização de 2000 RU de proteína A por célula de fluxo. Os experimentos de SPR foram realizados a 37ºC utilizando tampão de corrida PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, Tween 20 a 0,05%), em pH 7,4 e 6,0. Os anticorpos foram diluídos a 25 nM em PBST em pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo cruzado a 5 μl/min durante 45 segundos. Concentrações seriadas de 1600 - 0,78 nM (pH 7,4) e 100 - 0,78 nM (pH 6,0) de hVISTA-ECD monovalente (SEQ ID NO: 325) foram preparadas com tampão de corrida e foram injetadas sobre os anticorpos capturados a 40 μl/min para medir associação e dissociação.

Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. As constantes cinéticas Ka (kon) e KD (koff) foram derivadas a partir de célula de fluxo de referência e sensogramas a 0 nM subtraídos com branco, e foram ajustados a um modelo 1: 1 de ligação usando o software T200 Evaluation v.2.0. A constante de afinidade, KD foi calculada como a razão entre as constantes cinéticas koff/kon para cada anticorpo VISTA. As razões de koff e KD em pH 7,4/pH 6,0 foram calculadas para comparar a taxa de dissociação e melhora de afinidade em pH ácido em relação ao pH fisiológico. Embora as constantes cinéticas da ligação em pH neutro não foram previamente capazes de ser determinadas para ‘761 e ‘767 usando 50 nM de hVISTA (Figuras 7D e 7F), o aumento da taxa de concentração de VISTA em pH neutro para 1,6 µM resultou em respostas de ligação (> 10 RU) para estes clones que se ajustam a um modelo de ligação 1: 1. Os dados cinéticos para estes anticorpos VISTA seletivos em pH ácido são mostrados na Tabela 6. O parental ‘029 exibe koff equivalente em ambos os valores de pH, enquanto ‘761 e ‘767 apresentam mais de 10 vezes a seletividade para o pH 6 em relação ao pH 7,4 em koff e ao mais do que 2000 vezes de seletividade em pH 6 em relação ao pH 7,4 em KD. As constantes cinéticas de ligação ao VISTA humano são conservadas através das variantes do isotipo hIgG1.3f, hIgG1f e hIgG1f aflucosilado.

TABELA 6 CARACTERÍSTICAS DE LIGAÇÃO DOS ANTICORPOS VISTA, CONFORME

DETERMINADO POR SPR Anticorpo Isotipo pH 7,4 pH 6,0 relação Relação KD KD kd ka (1/Ms) KD (M) ka (1/Ms) KD (M) (7,4/6) KD (7,4/6) (1/s) (1/s) 6,8E- 4,2E- 7,9E- 7,2E- hIgG1,3f 1,6E+05 1,1E+06 0,9 5,8 03 08 03 09 7,4E- 4,2E- 8,0E- 7,1E- P1-061029 hIgG1f 1,7E+05 1,1E+06 0,9 5,9 03 08 03 09 hIgG1f 7,2E- 4,1E- 7,8E- 6,9E- 1,7E+05 1,1E+06 0,9 5,9 afucisilado 03 08 03 09 4,2E- 1,1E- 1,6E- 4,3E- hIgG1,3f 3,8E+03 3,7E+05 26,3 2558,1 02 05 03 09 4,2E- 3,5E- 1,5E- 4,2E- P1-068761 hIgG1f 1,2E+03 3,6E+05 28,0 8333,3 02 05 03 09 hIgG1f 4,2E- 8,2E- 1,5E- 4,1E- 5,1E+03 3,7E+05 28,0 2000,0 afucisilado 02 06 03 09 3,6E- 1,9E- 2,6E- 7,8E- hIgG1,3f 1,9E+03 3,3E+05 13,8 2435,9 02 05 03 09 3,2E- 2,2E- 2,6E- 8,0E- P1-068767 hIgG1f 1,5E+03 3,2E+05 12,3 2750,0 02 05 03 09 hIgG1f 3,3E- 2,4E- 2,6E- 7,9E- 1,3E+03 3,3E+05 12,7 3038,0 afucisilado 02 05 03 09 α-VISTA sensível 7,8E- 3,6E- 9,0E- 3,2E- hIgG1,3f 2,2E+05 2,8E+06 0,01 0,1 em pH 04 09 02 08 ácido

[297] As cinéticas de ligação ao VISTA humano de ‘029, ‘761 e ‘767 (como anticorpos IgG1.3) foram medidas para valores de pH entre pH 7,4 e pH 6,0, ou seja, em pH 6,9 e pH 6,45 utilizando um instrumento Biacore® T100 (GE Healthcare). A proteína A (catalogo # da ThermoFisher Scientific 21181) foi diluída para 20 μg/mL em acetato de sódio a 10 mM em pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biossensor CM5 seguindo o protocolo de acoplamento de amina do fabricante (GE Healthcare), visando densidade de imobilização de 2.000 RU de Proteina A por célula de fluxo. O ensaio foi realizado a 37ºC utilizando tampão de corrida PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, 0,05% de Tween® 20) em pH 7,4, 6,9, 6,45 e 6,0. Os anticorpos foram diluídos a 25 nM em PBST em pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo cruzado a 5 μl/min durante 45 segundos.

Concentrações seriadas de 100 - 0,78 nM de hVISTA-ECD monovalente (SEQ ID NO: 325) foram preparadas com tampões de corrida em pH 7,4, 6,9, 6,45 e 6,0 e foram injetadas sobre os anticorpos capturados a 40 μl/min para medir a associação e dissociação. Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. As constantes cinéticas Ka (kon) e Kd (koff) foram derivadas a partir de célula de fluxo de referência e sensogramas a 0 nM subtraídos com branco, e foram ajustados a um modelo 1: 1 de ligação usando o software T200 Evaluation v.2.0. A constante de afinidade, KD foi calculada como a razão entre as constantes cinéticas koff/kon para cada anticorpo VISTA. As relações de koff e KD em cada pH em relação ao pH 6,0 foram calculados para avaliar como as constantes koff e KD do VISTA mudam à medida que o pH do tampão muda para fisiológico, e estão mostradas na Tabela 7. O ‘029 parental exibiu koff consistente a cada pH testado, enquanto o descendente ‘761 e ‘767 exibiram, koff de VISTA pelo menos 10 vezes mais rápida e KD de VISTA 100 vezes mais fraca em pH 6,9 em comparação com pH 6,0. À medida que o pH do tampão muda de ácido para fisiológico, asa koff e KD de VISTA enfraquecem tanto para ‘761 quanto ‘767. Os dados fisiológicos de pH para ‘761 e ‘767 para comparação são referenciados na Tabela 7 e anotados com um asterisco (*).

TABELA 7 CARACTERÍSTICAS DE LIGAÇÃO CINÉTICA DE ANTICORPOS ‘029, ‘761 E ‘767 EM

DIFERENTES VALORES DE PH relação koff / Relação KD/ Anticorpo pH ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) pH 6,0 pH 6,0 6,0 2,9E+06 5,7E-03 2,0E-09 1,0 1,0 P1-061029 6,45 7,4E+05 4,0E-03 5,3E-09 0,7 2,7 (parental) 6,9 4,1E+05 5,7E-03 1,4E-08 1,0 7,1 relação koff / Relação KD/ Anticorpo pH ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) pH 6,0 pH 6,0 7,4 2,5E+05 6,4E-03 2,6E-08 1,1 13,2 6,0 6,0E+05 6,6E-04 1,1E-09 1,0 1,0 6,45 1,1E+05 2,1E-03 2,0E-08 3,2 18,4 P1-068761 6,9 4,8E+04 8,9E-03 1,9E-07 13,4 170 7,4 * 3,8E+03 4,2E-02 1,1E-05 ~ 63,6 ~10000 6,0 5,6E+05 1,9E-03 3,4E-09 1,0 1,0 6,45 1,3E+05 4,8E-03 3,8E-08 2,5 11,0 P1-068768 6,9 7,4E+04 2,9E-02 4,0E-07 15,3 115,1 7,4 * 1,9E+03 3,6E-02 1,9E-05 ~ 19,0 ~5000

[298] Os dados na Tabela 7 indicam uma afinidade de ligação pelo menos de 10 vezes inferior de ‘761 e ‘767 ao hVISTA em pH 6,45 em comparação com pH 6,0; uma afinidade de ligação de pelo menos 100 vezes menor de ‘761 e ‘767 para o hVISTA em pH 6,9 em comparação com a ligação em pH 6,0; e uma afinidade de ligação pelo menos 1000 vezes menor de ‘761 e ‘767 para o hVISTA em pH 7,4 em comparação com ligação em pH 6,0.

[299] A biblioteca ‘015 também demonstrou uma ligeira preferência pela ligação seletiva em pH 6 ao VISTA. As diferenças de aminoácidos dos clones descendentes em relação às CDRs da VH de ‘015 são mostradas na Tabela 8. A ligação de várias preparações de cada um dos clones ‘015 descendentes do ‘015 parental (todos como anticorpos IgG1.3) ao VISTA humano em pH 6,0 e 7,4 foi medida via SPR usando o método idêntico ao descrito para a análise do ‘029 acima, e é mostrado na Tabela 8.

TABELA 8 SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE CDR1, CDR2 E CDR3 DE VH (SEPARADAS POR SUBLINHADO) DE ANTICORPOS DERIVADOS DO ANTICORPO PARENTAL ‘015 Nome CDR1 CDR2 CDR3 SEQ ID NO (pos 26-35) (pos 50-66) (pos 99-110) P1-061015 GFTFSSYAMH_IIWYDGSNKYYADSVKG_DSGFYSSYYFDY 95 P1-068736 -----E----_-D-------D-------_-----D-----D 107

P1-068738 -----E—-H-_---D----H--------_-----ED----- 131 P1-068740 -----D----_-------D-D-------_-----D-----D 115 P1-068742 -----D----_-------D-D-------_-----ED----- 119 P1-068744 -----E----_H---------E------_-----E-----E 103 P1-068746 ----------_--------HH-------_-----D------ 123 P1-068748 -----HH---_--------DD-------_-----D------ 99 P1-068750 -----D-D--_E--D------------_-EE--------- 127 P1-068752 ----------_E--------D-------_-----D-----E 111 P1-068754 -----D-D--_E--D-------------_----H-D----- 135

[300] Um resumo das cinéticas da ligação do ‘029 e ‘015 e de seus descendentes para clones huVISTA em pH 6,0 e 7,4, determinadas por SPR, é mostrado nas Tabelas 9 e 10.

TABELA 9 RESUMO DAS CINÉTICAS DE HUVISTA E SEQUÊNCIAS CDR DE VH DO CLONE ‘029

E SEUS DESCENDENTES Méd SE Méd Méd Méd Méd Méd 7,4 VH CDR 1 Q 7,4 7,4 6,0 ka 6,0 6,0 VH CDR 2 VH CDR 3 ID ka (pos 26- ID kd KD (1/Ms kd KD (pos 50-66) (pos 99-110) (1/Ms 35) N (1/s) (M) ) (1/s) (M) ) O P1- 6,0E+ 1,9E- 3,1E- 6,3E+ 1.2E- 1.9E- ....E.E... ......DE......... .............. 47 069077 04 03 08 05 04 10 P1- 5,9E+ 2,3E- 3,9E- 5,7E+ 2.2E- 3.8E- ....E.E... ......DD......... .............. 23 069065 04 03 08 05 04 10 P1- 1,3E+ 2,3E- 1,8E- 1,3E+ 2.9E- 2.2E- ....E..... ....D..E......... .....H.....E.. 43 069075 05 03 08 06 04 10 P1- 4,3E+ 4,0E- 9,3E- 7,0E+ 5.1E- 7.3E- ....E.E... .......D......... .....E........ 35 069071 04 03 08 05 04 10 P1- 4,3E+ 1,1E- 2,5E- Fraca, kd rápida ....E..... .......E......... ...........E.D 15 069061 05 03 09 P1- 9,0E+ 7,5E- 8,4E- 1,4E+ 1.2E- 8,6E- .......... ......EE......... ...........D.. 31 069069 04 03 08 06 03 10 P1- 3,8E+ 1,4E- 3,8E- Fraca, kd rápida ....E.E... ......EE......... .....H.....E.. 51 068761 05 03 09 P1- 3,4E+ 1,6E- 4,8E- Fraca, kd rápida ....E..... ......DH......... ...........E.D 11 069059 05 03 09

Méd SE Méd Méd Méd Méd Méd 7,4 VH CDR 1 Q 7,4 7,4 6,0 ka 6,0 6,0 VH CDR 2 VH CDR 3 ID ka (pos 26- ID kd KD (1/Ms kd KD (pos 50-66) (pos 99-110) (1/Ms 35) N (1/s) (M) ) (1/s) (M) ) O P1- 3,4E+ 2,6E- 7,6E- Fraca, kd rápida ....E..... ..D...E.......... ...........E.D 55 068767 05 03 09 P1- 3,0E+ 2,9E- 9,4E- Fraca, kd rápida ....E..... ..D...D.......... ...........E.D 59 068773 05 03 09 P1- 1,2E+ 2,7E- 2,3E- 1,9E+ 4,4E- 2,4E- ....E..... .......E......... ...........D.E 19 069063 05 02 07 06 03 09 P1- 1,0E+ 2,7E- 2,9E- 1,7E+ 4,5E- 2,7E- .......... ......EE......... ...........D.E 27 069067 05 02 07 06 03 09 P1- 6,1E+ 5,8E- 9,4E- Fraca, kd rápida ....E.E... .......E......... ...........E.. 39 069073 05 03 09 P1- 2,9E+ 5,6E- 1,9E- 1,6E+ 5,8E- 3,6E- GFTLDDY GINWNSANIGYA VPGYSGGWI 67 061029 05 03 08 06 03 09 AMH DSVKG DAFDV P1- 3,7E+ 7,0E- 1,9E- Sem ligação ...DE..... ......EE......... ...........E.D 63 068765 05 03 08 P1- 8,9E+ 1,7E- 1,9E- Sem ligação ....E.E... ......EE......... ...........E.D 71 068757 05 02 08 P1- 7,6E+ 1,8E- 2,5E- Sem ligação ....E.E... ......HE......... ...........E.D 75 068771 05 02 08 P1- 8,1E+ 4,0E- 5,5E- Sem ligação ....E.E... ......DH......... ...........E.D 83 068769 05 02 08 P1- 1,8E+ 4,7E- 2,3E- Sem ligação ....E.E... ..D...EE......... .....H.....E.D 79 068775 06 02 08 P1- 1,3E+ 8,0E- 6,0E- Sem ligação ....E.E... ..D...E.......... ...........E.D 87 068759 06 02 08 TABELA 10 RESUMO DAS CINÉTICAS DE HUVISTA E SEQUÊNCIAS CDR DE VH DO CLONE ‘015

E SEUS DESCENDENTES Méd SE Méd Méd Méd Méd 7,4 Méd 6,0 Q 7,4 7,4 6,0 6,0 Sequência HCDR Clone ka ka ID kd KD kd KD (pos 26-35) (pos 50-66) (pos 99-110) (1/Ms (1/Ms) N (1/s) (M) (1/s) (M) ) O P1- 2,3E 2,0E- 8,8E- 9,5E- 5,4E- GFTFSSYAMH_IIWYDGSNKYYADSVKG 1,8E+06 95 061015 +05 03 09 04 10 _DSGFYSSYYFDY P1- 1,5E- 1,0E- 1,4E+06 .....HH..._........DD......._.....D...... 99 068748 03 09 P1- 1,8E- 1,3E- 10 1,3E+06 .....E...._H.........E......_.....E.....E 068744 Sem ligação 03 09 3 P1- 9,5E- 1,1E- 10 8,4E+06 .....E...._.D.......D......._.....D.....D 068736 03 09 7 P1- 6,1E+06 3,4E- 5,6E- .........._E........D......._.....D.....E 11

Méd SE Méd Méd Méd Méd 7,4 Méd 6,0 Q 7,4 7,4 6,0 6,0 Sequência HCDR Clone ka ka ID kd KD kd KD (pos 26-35) (pos 50-66) (pos 99-110) (1/Ms (1/Ms) N (1/s) (M) (1/s) (M) ) O 068752 02 09 1 P1- Muito 4,7E- 11 ND .....D...._.......D.D......._.....D.....D 068740 Rápida 02 5 P1- Muito >1E- 11 ND .....D...._.......D.D......._.....ED..... 068742 Rápida 02 9 P1- Muito >1E- 12 ND .........._........HH......._.....D...... 068746 Rápida 02 3 P1- 12 Fraca .....D.D.._E..D............._.EE......... 068750 7

[301] Assim, foram identificados vários clones descendentes de ‘029 que mantiveram ou melhoraram a koff para VISTA-ECD em pH 6,0 em comparação com o ‘029 parental, e também que demonstraram koff mais fraca ou uma perda de ligação para o VISTA em pH fisiológico. A progênie (descendente) de ‘015 exibiu ligação seletiva em pH ácido para VISTA-ECD, sem ligação detectada ao VISTA em pH neutro, mas toda a progênie de ‘015 testada produziu uma koff mais rápida em pH 6,0 em comparação com o ‘015 parental.

EXEMPLO 10 PROGÊNIE DE ‘029 SELETIVA EM PH ÁCIDO DEMONSTRA LIGAÇÃO CELULAR

DEPENDENTE DE PH ÁCIDO E FUNÇÃO EFETORA ENQUANTO MANTÊM ATIVIDADE BLOQUEADORA DE VISTA

[302] Foi medida a ligação dependente de pH dos clones ‘761 e ‘767 a células Raji manipuladas geneticamente para expressar ectopicamente o VISTA humano de comprimento total (SEQ ID NO: 1 com substituição D187E). Para este experimento, ‘761 e ‘767 foram formatados como anticorpos IgG1.3 e a ligação foi medida por um anticorpo secundário anti-IgG humana (número de catálogo da Jackson Immunoresearch 109-065- 098). Os resultados, que estão apresentados nas Figuras 8A-8B, indicam que os clones ‘761 (Figura 8A) e ‘767 (Figura 8B) se ligam fracamente em pH 7,2 e 8,1, mas melhor em pH ácido, particularmente em pH 6,0, 6,1, 6,2 e 6,4. As MFIs de ligação são representadas graficamente no eixo y e as concentrações primárias de anticorpo são representadas graficamente no eixo x em escala logarítmica.

Também são mostradas regressões não lineares.

[303] A Figura 8C mostra dados do experimento descrito nas Figuras 8A-B medindo P1-068767 (círculos) e um anticorpo controle não específico combinado com o isotipo (triângulos) que se liga a células Raji que expressam VISTA humano a 3125 ng/mL em pH diferente. O “pH 50”, o pH no qual 50% da ligação de P1-068767 é perdida, é de aproximadamente 6,6.

MFIs de ligação são representados graficamente no eixo y, e o pH do tampão é representado graficamente no eixo x. Também são mostradas regressões não lineares.

[304] A Figura 8D mostra o MFI de um anticorpo controle não específico combinado com o isotipo (círculos preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0 respectivamente), mAb 2 anti-VISTA (“controle” ver Figura 6C, quadrados preenchidos e não preenchidos em pH 7,0 e 6,0 respectivamente), P1-068761 (triângulos preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0 respectivamente), e P1-068767 (triângulos invertidos preenchidos e não preenchidos para pH 7,0 e 6,0 respectivamente) que se ligam a monócitos humanos. A ligação foi detectada como descrito nas Figuras 8A-B.

O anticorpo controle VISTA não seletivo em pH (mAb 2) se ligou a monócitos a ambos os pHs. Ambos os anticorpos modificados geneticamente seletivos em pH ácido foram ligados a monócitos em pH 6,0, mas não ligaram-se melhor do que o controle não específico combinado com o isotipo em pH 7,0. Assim, os clones ‘761 e ‘767 têm fraca ligação ou não se ligam ao VISTA em pH neutro, e se ligam seletivamente ao VISTA nas células em pH ácido.

[305] A Figura 8E mostra o bloqueio comparável de ligação do multímero VISTA recombinante a células T CD4+ humanas ativadas em pH 6,0 por ‘029 (quadrados), ‘761 (triângulos) e ‘767 (triângulos invertidos), enquanto um anticorpo controle não específico de VISTA (círculos) não bloqueou a ligação ao VISTA. Este ensaio de bloqueio foi realizado como descrito no Exemplo 4.

Estes dados mostram que os anticorpos VISTA modificados geneticamente seletivos em pH ácidos são ainda capazes de bloquear a ligação do ligante ao receptor VISTA em pH ácido.

[306] A lise específica de células NK de células alvo (as mesmas células Raji expressando VISTA humana descrita nas Figuras 8A-B) através de citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) em pH fisiológico foi medida para os anticorpos P1-061029.IgG1f, P1-068761.IgG1f, P1-

068767.IgG1f, um anticorpo específico não direcionado para VISTA e um anticorpo controle negativo específico não direcionado para VISTA, todos expressos como anticorpos IgG1 afucosilados. As células NK foram enriquecidas a partir de PBMCs por meio de seleção negativo com esferas (número de catálogo da StemCell Technologies 19055) e cultivadas durante a noite em meio Myelocult™ (número de catálogo da StemCell Technologies 05150) suplementado com 1 μM de hidrocortisona (número de catálogo da StemCell Technologies 07904) e 500 U/mL de IL-2 recombinante humana (número de catálogo da Peprotech 200-02). No dia do ensaio, as células Raji que expressavam ectopicamente o VISTA humano (descritas nas Figuras 8A- B) foram marcadas com Calcein AM (número de catálogo da Life Technologies C3100MP) e cocultivadas com as células NK cultivadas a uma razão NK:células alvo de 10:1 e com os anticorpos P1- 061029.IgG1f, P1-

068761.IgG1f, P1-068767.IgG1f, um anticorpo específico não direcionado para VISTA e um anticorpo controle negativo específico não direcionado para VISTA durante 2 horas em pH fisiológico. A lise específica foi interpolada a partir do sinal de fluorescência do sobrenadante (leitor de placas EnVisionTM). O sinal de lise espontânea obtido a partir de cocultura sem anticorpos e o sinal de lise máximo foi determinado por lise de células alvo com tampão de lise Delfia® (número de catálogo da PerkinElmer 4005-0010). A lise específica do anticorpo foi calculada como sendo a porcentagem de lise observada dividida pelo (sinal de lise máximo menos o sinal de lise espontâneo).

[307] Os resultados, que são fornecidos na Figura 8F, mostram a potência reduzida de P1-068761.IgG1f e P1-068767.IgG1f, em relação ao P1- 061029 e ao controle positivo na mediação da citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em pH fisiológico.

EXEMPLO 11 PK EM CINOMOLGOS (CYNO) DE ANTICORPOS VISTA

[308] Os macacos cinomolgo virgens para anticorpos humanos (naïves) foram injetados intravenosamente com uma dose única de 5 mpk de um anticorpo VISTA que se liga comparativamente em pH ácido e neutro (“controle”; mAb2), um anticorpo VISTA com comprometimento da ligação em pH ácido (“sensível em pH ácido”, mAb3), ou anticorpo ‘767 seletivo em pH ácido, para determinar o PK de cino desses anticorpos.

[309] As cinéticas de ligação por SPR dos anticorpos utilizados neste exemplo são fornecidos na Tabela 11, e foram determinados da seguinte forma. A reatividade cruzada de VISTA de cinomolgos (cyno VISTA) para anticorpos anti- VISTA controle e seletivos em pH ácido foi avaliada em pH ácido e neutro. As medições de afinidade de ligação para o Ab VISTA foram realizadas utilizando um instrumento Biacore® T100 (GE Healthcare). A proteína A (número de catalogo da ThermoFisher Scientific 21181) foi diluída para 20 μg/mL em acetato de sódio a 10 mM em pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biossensor CM5 seguindo o protocolo de acoplamento de amina do fabricante (GE Healthcare), visando densidade de imobilização de

2.000 RU de Proteina A por célula de fluxo. O ensaio foi realizado a 37ºC utilizando tampão de corrida PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, 0,05% de Tween® 20) em pH 7,4 e 6,0. Os anticorpos (formatados como anticorpos IgG1.3) foram diluídos a 25 nM em PBST em pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo cruzado a 5 μl/min durante 45 segundos. Concentrações seriadas de 1600 - 0,78 nM (pH 7,4) e hVISTA-ECD monovalente de 100 - 0,78 nM (pH 6,0) (SEQ ID NO: 325) e VISTA-ECD de cino (AFKVATLYSL

YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS

GLYCCLVVEIRHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY PSSSQESENI TAHHHHHHH; (SEQ ID NO: 326) foram preparadas em tampão de corrida e as soluções foram injetadas sobre os anticorpos capturados a 40 μl/min para medir a associação e dissociação. Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. As constantes cinéticas Ka (kon) e kd (koff) foram derivadas a partir de célula de fluxo de referência e sensogramas a 0 nM subtraídos com branco, e foram ajustados a um modelo 1: 1 de ligação usando o software T200 Evaluation v.2.0. A constante de afinidade, KD foi calculada como a razão entre as constantes cinéticas koff/kon para cada anticorpo VISTA.

As razões koff e KD em pH 7,4/pH 6,0 foram calculadas para comparar as diferenças de velocidade de dissociação e afinidade em pH ácido em relação ao pH neutro, e são mostrados na Tabela 11. Todos os anticorpos anti-VISTA testados exibiram parâmetros de ligação cinética ao VISTA humano e de cinomolgo comparáveis (dentro de 2 vezes) em ambos os pHs testados, confirmando a reatividade cruzada com VISTA de cinomolgo. Ambos os anticorpos de controle anti-VISTA exibiram kd melhorada e KD mais forte em pH fisiológico em relação ao pH ácido, e o controle sensível ao pH ácido exibiu uma kd do VISTA mais rápida em pH ácido em comparação com o anticorpo controle.

TABELA 11

CINÉTICA DE LIGAÇÃO POR SPR DOS ANTICORPOS VISTA AO VISTA DE CINOMOLGOS (CYNO) pH 7,4 pH 6,0 razão razão Anicorpo VISTA ka ka kd KD kd (1/s) KD (M) kd (1/s) KD (M) (7,4/6) (7,4/6) (1/Ms) (1/Ms) humano 1,2E+05 7,5E-03 6,2E-08 9,8E+05 6,6E-03 6,8E-09 1,1 9,1 P1-061029 Cyno 1,4E+05 6,7E-03 4,7E-08 6,2E+05 6,2E-03 1,0E-08 1,1 4,7 humano 4,3E+03 3,7E-02 8,7E-06 3,5E+05 1,4E-03 4,1E-09 26,4 2122,0 P1-068761 Cyno 6,5E+03 3,6E-02 5,5E-06 2,1E+05 1,7E-03 7,9E-09 21,2 696,2 humano 1,6E+03 3,5E-02 2,3E-05 3,2E+05 2,4E-03 7,5E-09 14,6 3066,7 P1-068767 Cyno 1,3E+03 3,4E-02 2,6E-05 1,9E+05 2,5E-03 1,3E-08 13,6 2000,0 α-VISTA humano 4,4E+05 1,3E-03 3,0E-09 9,6E+05 6,0E-03 6,2E-09 0,2 0,5 controle (mAb 3) Cyno 4,9E+05 1,7E-03 3,4E-09 5,5E+05 7,1E-03 1,3E-08 0,2 0,3 α-VISTA humano 1,8E+05 7,8E-04 4,3E-09 1,8E+06 5,0E-02 2,8E-08 0,02 0,2 sensível em pH ácido (mAb Cyno 1,9E+05 6,8E-04 3,5E-09 1,2E+06 5,2E-02 4,4E-08 0,01 0,08 2)

[310] Os macacos cinomolgo virgens para anticorpo humano (naïves) foram injetados intravenosamente com uma dose única de 5 mpk de VISTA mAb2 (“controle”), VISTA mAb3 (“sensível em pH ácido”), ou P1-

068767.IgG1.3. A concentração de soro de cada anticorpo após a injeção é mostrada na Figura 9. Os tempos médios de permanência para P1-

068767.IgG1.3 e o anticorpo controle anti-VISTA foram 717 e 22 horas respectivamente, indicando que a seletividade em pH ácido reduziu grandemente o TMDD do anticorpo VISTA. Embora o anticorpo controle (mAb 2) e o anticorpo sensível ao pH ácido (mAb 3) se liguem ao VISTA comparativamente em pH fisiológico, o anticorpo sensível ao pH ácido teve um tempo médio de permanência inferior de 7,6 horas, demonstrando a importância da ligação em pH ácido para reciclagem do anticorpo VISTA como descrito nos Exemplos 6 e 7. Os resultados mostram que os anticorpos seletivos em pH ácidos têm PK superior e assim atingirão mais facilmente o envolvimento do alvo em tumores ou outros microambientes.

EXEMPLO 12 PROGÊNIE ‘029 SELETIVA PARA PH NÃO SE LIGA NÃO ESPECIFICAMENTE A

PROTEÍNAS COM PI ELEVADO

[311] A especificidade de ligação dos clones ‘029, ‘761 e ‘767 para VISTA e para outras proteínas de pI elevado foi avaliada por SPR em pH neutro e ácido utilizando um instrumento Biacore ® T100 (GE Healthcare). A proteína A (catalogo # da ThermoFisher Scientific 21181) foi diluída para 20 μg/mL em acetato de sódio a 10 mM em pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biossensor CM3 seguindo o protocolo de acoplamento de amina do fabricante (GE Healthcare), visando densidade de imobilização de 800 RU de Proteina A por célula de fluxo. Os experimentos de SPR foram conduzidos a 25ºC, utilizando tampão de corrida PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, 0,05% de Tween ® 20) em pH 7,4 e 6,0. Os anticorpos (formatados como anticorpos IgG1.3) foram diluídos a 50 nM em PBST pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo cruzado a 5 μl/min durante 60 segundos. Concentrações seriadas de 100 - 10 nM de hVISTA-ECD monovalente (SEQ ID NO: 325), avidina (número de catálogo da ThermoFisher Scientific 21128), citocromo C (número de catálogo da Sigma C2867), BSA (número de catálogo da Calbiochem 126593) e antígeno controle monovalente (“Ag”) foram preparados em tampões de corrida em pH 7,4 e 6,0, e foram injetados sobre os anticorpos capturados em 50 μL/min para avaliar a especificidade de ligação. Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. Célula de fluxo de referência e sensogramas subtraídos de branco a 0 nM foram inspecionadas utilizando software de avaliação Biacore ® T200 v.2.0 . Os resultados são demonstrados na

Tabela 12.

TABELA 12

LIGAÇÃO DE CLONES VISTA ÀS PROTEÍNAS COM PI ELEVADO PBS (sem Ponto ‘029 ‘761 ‘767 Anti-Ag Ab) Amostra Isoelétr. (pI) pH pH pH pH pH pH 6 pH 6 pH 6 pH 6 pH 6 7,4 7,4 7,4 7,4 7,4 huVISTA 6,9 -His Avidina 10 Citocromo C 10,7 BSA 4,7 Ag-His 6,5

[312] Na Tabela 12, a ligação específica, definida como respostas de ligação em SPR de > 10 RU no final da injeção da amostra indicada por caixas cinzentas preenchidas. “Anti-Ag” é um Ab de controle de ligação ao VISTA. O clone ‘029 foi específico para VISTA em pH ácido e neutro. Os clones descendentes ‘029, ‘761 e ‘767 foram específicos para VISTA em pH ácido, enquanto o anticorpo controle também manteve a especificidade ao antígeno. A ligação não específica (“NSB”) de proteínas controle de pI à superfície de referência da Proteína A não foi observada neste ensaio. Assim, os aminoácidos carregados introduzidos nas CDRs de VH de ‘761 e ‘767 não provocam a ligação destes anticorpos eletrostaticamente a outras proteínas com pI elevado, como avidina e citocromo C, ou proteínas de pI baixo, como BSA.

EXEMPLO 13 INIBIÇÃO DA ATIVAÇÃO DE CÉLULAS T POR ANTICORPOS ‘761 E ‘767

[313] Este Exemplo descreve um ensaio que pode ser conduzido para determinar a capacidade dos anticorpos ‘761 e ‘767 de bloquear a inibição por hVISTA da ativação de células Jurkat.

[314] O mesmo ensaio como descrito no Exemplo 5 é usado. Resumidamente, células Jurkat (linhagem de células T humanas) que expressam um repórter de luciferase NFkB são cocultivadas a vários pH com células 293T que expressam VISTA humano e um fragmento variável de cadeia simples do anticorpo agonista do receptor de células T anti-humano OKT3. Anticorpos anti-VISTA ‘761 e ‘767 ou um anticorpo controle não específico para VISTA de isotipo correspondente são adicionados às células cocultivadas. A ativação de Jurkat é mostrada como unidades de luciferase e como o aumento em vezes do sinal da luciferase com o tratamento com anti-VISTA em relação ao controle.

EXEMPLO 14

ANÁLISE MULTIDIMENSIONAL IDENTIFICOU OS RESÍDUOS CHAVE QUE CONFEREM PROPRIEDADES DE LIGAÇÃO DEPENDENTES DE PH AOS ANTICORPOS VISTA

[315] Os anticorpos P1-068761.IgG1.3 e P1-068767.IgG1.3 contêm 5 a 6 mutações de P1-061029 (Tabela 7). Foi realizada uma análise mutacional para identificar os principais resíduos importantes para conferir as propriedades dependentes do pH dos anticorpos VISTA. Como tal, foram sintetizados um painel de variantes de N-1 (reversão de 1 aminoácido para P1- 061029) e N-2 (reversão de 2 aminoácidos para P1-061029) de P1- 068761 e P1- 068767, expressos como IgG1.3., e analisadas quanto à sua ligação ao huVISTA em pH 6, pH 6,7, e em pH 7,4.

[316] A cinética de ligação foi medida usando um instrumento Biacore® T100 (GE Healthcare). A proteína A (catalogo # da ThermoFisher Scientific 21181) foi diluída para 20 μg/mL em acetato de sódio a 10 mM em pH 4,5 e imobilizada em células de fluxo de um biossensor CM5 seguindo o protocolo de acoplamento de amina do fabricante (GE Healthcare), visando densidade de imobilização de 2.000 RU de Proteina A por célula de fluxo. O ensaio foi realizado a 37ºC utilizando tampão de corrida PBST (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, 0,05% de Tween® 20) em pH 7,4, 6,7 e 6,0. Os anticorpos foram diluídos a 25 nM em PBST pH 7,4 e foram capturados através de células de fluxo de biossensor ativo cruzado a 5 μl/min durante 40 segundos. Preparou-se uma série de concentrações de 100 - 10 nM de hVISTA-ECD monovalente (SEQ ID NO: 325) em tampões de corrida em pH 7,4, 6,7 e 6,0 e injetou-se sobre os anticorpos capturados a 40 μl/min para medir a associação e a dissociação. Duas injeções de 15 segundos de glicina a 10 mM, em pH 1,5, foram utilizadas para regenerar a superfície de captura da Proteina A entre os ciclos de ensaio. As constantes cinéticas Ka (kon) e kd (koff) foram derivadas a partir de célula de fluxo de referência e sensogramas a 0 nM subtraídos com branco, e foram ajustados a um modelo 1: 1 de ligação usando o software T200 Evaluation v.2.0.

[317] A constante de afinidade, KD foi calculada como a razão entre as constantes cinéticas koff/kon para cada anticorpo VISTA. A % de Rmax foi calculada para comparar como o pH afeta a capacidade de ligação de um anticorpo ao VISTA e representa a resposta máxima de ligação ao VISTA medida em relação à resposta máxima de ligação ao VISTA esperada. A % de Rmax é definida como a razão entre a resposta do ponto de referência de “ligação” subtraída da referência no final da injeção de VISTA a 100 nM para cada anticorpo (R max) em relação à resposta de ligação ao VISTA esperada (Rexp). Rexp é calculado como R exp = [(peso molecular de VISTA-ECD/peso molecular do mAb) x (resposta do ponto repórter de “captura” de mAb (RUs)] x 2 sítios de ligação por mAb.

[318] Os resultados obtidos por SPR para as variantes de reversão de P1-068761 são mostrados na Figura 10A, que é classificada pela koff em pH 6,0, mais lento para mais rápido. Na tabela, os anticorpos que exibiram fraca ou nenhuma resposta de ligação (< 10 RU) a 100 nM de hVISTA foram categorizados como não ligantes (NB). Os resultados indicam que E nas posições 32 (isto é, o resíduo de aminoácido 7 em CDR1 de VH de ‘761) e 100f (resíduo de aminoácido 12 em CDR3 de VH de ‘761) são, ambos, necessários para manter a seletividade em pH ácido, uma vez que estas reversões para a sequência parental de P1-061029 permitiu ligação significativa ao hVISTA em pH fisiológico (% Rmax > 10). Análises posteriores revelaram que variantes com reversão de E55A (resíduo de aminoácido 6 em CDR2 de VH de ‘761) mantiveram a seletividade em pH ácido e exibiram cinética de ligação comparável dentro de 2 vezes de P1-068761. Em contraste, enquanto variantes com reversões de H100G, E56N e E30D (resíduo de aminoácido 12 de CDR3 de VH, 7 de CDR2 de VH e 4 de CDR1 de VH de ‘761, respectivamente) mantiveram seletividade em pH ácido, estes mAbs também exibiram koff ~ 3 vezes mais rápido em pHs ácidos em comparação com P1-068761, trazendo as taxas off destes mutantes em pH ácido mais perto do P1-061029 parental. Assim, adicionando as mutações G100H, N56E e/ou D30E ao clone P1- 061029 original contribuiu para melhorias de afinidade ao VISTA em pH ácido observadas no clone seletivo de P1-068761.

[319] Os resultados obtidos por SPR para as variantes de reversão de P1-068767 são mostrados na Figura 10B, que é classificada pela koff em pH 6,0, mais lento para mais rápido. Os resultados indicam que D na posição 102 (resíduo de aminoácido 14 em CDR3 de VH de ‘767) foi necessário para manter a seletividade em pH ácido, e a reversão de D102V de volta para a sequência parental de P1-061029 permitiu ligação significativa ao hVISTA em pH neutro (% Rmax > 10). Análises posteriores revelaram que as variantes com reversões E30D, D52N e E55A (resíduos de aminoácido 4 de CDR1 de VH, 3 de CDR2 de VH e 6 de CDR3 de VH de 767, respectivamente) mantiveram a seletividade em pH ácido e exibiram uma cinética de ligação comparável ao pH 6,0 em 2 vezes de P1-068767.

Em contraste, as variantes com reversão E100fF (resíduo de aminoácido 12 de CDR3 de VH de ‘767) mantiveram a seletividade em pH ácido, embora com koff > 3 vezes mais rápido em pH ácido em comparação com P1-

068767. Notavelmente, as variantes com reversão E100fF exibiram ainda koff mais rápido em pH ácido em comparação com o mAb P1-061029 parental.

[320] Dados confirmatórios da ligação cinética obtida foram obtidos (utilizando a metodologia descrita no Exemplo 9) com alguns dos mutantes de reversão, e os dados são apresentados nas Tabelas 22 e 23.

[321] Assim, um resumo dos mutantes de reversão de P1- 068761 e P1-068767 (seletivo em pH ácido) em relação ao P1-061029 (tolerante ao pH) é como segue na Tabela 13 (HCDR1, HCDR2 e HCDR3 são separados por um sublinhado).

TABELA 13 Tabela 13: Seq Id.

P1-061029 GFTLDDYAMH_GINWNSANIGYADSVKG_VPGYSGGWIDAFDV 67 P1-068761 ....E.E..._......EE........._.....H.....E.. 51 P1-068767 ....E....._..D...E.........._...........E.D 55 aa pos. 26-35 50-66 99-110

[322] As sequências de CDR de VH acima para P1- 061029, P1- 068761 e P1-068767 na Tabela 13 estão em aminoácidos (“aa pos.”) 26-35, 50-66 e 99-110 de SEQ ID NO: 67, 51, 55, respectivamente. Mutações principais necessárias para seletividade em pH ácido estão indicadas em negrito, e mutações com impacto maior que três vezes na Kd em pH 6,0 em comparação com P1- 068761 e P1-068767 estão sublinhados.

[323] Em seguida, as mutações F100fE, V102D e Y32E foram introduzidas no '029 sozinhas ou juntas para determinar se essas substituições de aminoácidos são suficientes para tornar o '029 seletivo para pH (pH-seletivo). Os seguintes anticorpos foram criados: P1-061029_F100fE_V102D (P1-072000); P1- 061029_F100fE (P1-072002); P1-061029_V102D (P1-072004); P1-061029_Y32E

(P1-072006) e P1-061029_Y32E_F100fE (P1-072008), e suas cinéticas de ligação foram determinadas conforme descrito no Exemplo 9. As sequências de aminoácidos de suas CDRs são mostradas na Tabela 23. Os resultados, que são mostrados na Tabela 22, indicam que V102D é suficiente para tornar '029 pH- seletivo, mas a cinética de ligação é melhorada se F100fE também estiver presente.

No entanto, F100fE ou Y32E sozinhos não tornam o '029 pH-seletivo.

EXEMPLO 15

MAPEAMENTO DE EPÍTOPOS DE ANTICORPOS VISTA

[324] Os epítopos de hVISTA de ‘015, ‘029, ‘761 e ‘767, formatados como anticorpos IgG1.3, foram determinados por 2 métodos diferentes: competição de BLI (interferometria de bio-camada) e apresentação de superfície de levedura.

[325] Os ensaios de categorização (binning) de epítopo BLI competitivos foram conduzidos para avaliar se os anticorpos VISTA P1 - 068761 e P1-068767 seletivos em pH ácido mantiveram epítopos semelhantes ou sobrepostos no VISTA em comparação com o P1-061029 parental, P1- 061015 e anticorpos controle VISTA relevantes 1, 2 e 3. Os ensaios de colocação em sanduíche e em formato tandem foram realizados em um instrumento OctetRed384 BLI (PALL/ForteBio). Todas as etapas do ensaio foram realizadas a 30 a 1000 rpm de velocidade de agitação e o tampão PBST utilizado era ácido (pH 6,0) ou neutro (pH 7,4) (cloreto de sódio a 137 mM, cloreto de potássio a 2,7 mM, tampão fosfato a 10 mM, 0,05% Tween 20). Para o formato sanduíche, os sensores anti-IgG-Fc humanos (AHC, PALL/ForteBio) capturaram primeiro o painel de anticorpo VISTA em pH 7,4, depois os sensores de captura anti-humanos foram bloqueados com IgG humana total (Jackson # 009-000-002). O VISTA-ECD humano foi capturado a seguir em pH 6,0 e finalmente a competição para todas as combinações possíveis de anticorpos foi avaliada em pH 6,0. No ensaio de formato tandem, biossensores revestidos com estreptavidina (SAX, PALL/ForteBio) primeiro capturaram hVISTA-ECD biotinilado em pH 7,4, em seguida os sensores capturaram o painel de anticorpo VISTA completo em pH 6,0, assegurando a completa saturação de ligação de cada anticorpo no VISTA antes de avaliar a competição com todas as combinações possíveis de anticorpos em pH 6,0.

[326] Os resultados dos ensaios de categorização (binning) de epítopo BLI competitivo estão resumidos por uma matriz de competição, na Figura 11A. Nesta Figura, o primeiro anticorpo capturado é listado por linha, e sua atividade de ligação ou bloqueio aos (segundo) anticorpos competidores é mostrada em cada coluna. A matriz de competição foi idêntica para ambos os formatos de ensaio. Para o ensaio em sanduhe, a ligação (cinza claro) do anticorpo competidor foi definida por um sinal que varia entre 0,4 e 1,2 nm e os anticorpos bloqueados (preto) exibiram um sinal não ligante < 0,1 nm. Para o ensaio em tandem, a ligação do anticorpo competidor foi definida por um sinal variando entre 0,3 e 0,8 nm e os anticorpos bloqueados exibiram um sinal não ligante < 0,2 nm.

Enquanto o “VISTA mAb 3” exibiu uma dissociação rápida em pH ácido de hVISTA-ECD pelo SPR a 37ºC (Figura 6C), ele não se dissociou rapidamente em qualquer dos formatos de ensaio de BLI (realizado a 30ºC). Estes ensaios competitivos indicaram que os anticorpos P1-061015, P1-061029; P1-068761 e P1-068767 seletivos em pH ácido; e os anticorpos VISTA 2 e 3 competem entre si por epítopos semelhantes ou sobrepostos em VISTA. No entanto, o anticorpo VISTA 1 se liga a um epítopo separado e distinto. Assim, as mutações de aminoácidos carregadas introduzidas para as CDRs de VH de P1-061029 para gerar os clones P1-068761 e P1- 068767 seletivos em pH ácido, não alterou significativamente o epítopo de ligação VISTA.

[327] Os epítopos dos anticorpos ‘029,’ 015, ‘761 e ‘767 também foram mapeados utilizando apresentação de superfície de levedura e NGS de acordo com o método de Chao et al, (2004) J. Mol. Biol.

342: 539- 5 50, Oliphant et al, (2006) J. Virol. 80: 12149-12159 e Kowalsky et al. (2015) J. Biol. Chem. 290: 26457-26470. Resumidamente, uma biblioteca de mutagênese de saturação de mutantes de ponto único do VISTA ECD foi gerada e apresentada na superfície da levedura. Os mutantes VISTA que perderam ligação ao anticorpo sendo mapeado, mas retiveram a ligação a um anticorpo não bloqueador (mAb1) foram separados e sequenciados. Uma vez que mantiveram a ligação ao mAb1, estes mutantes foram provavelmente dobrados corretamente e a perda de ligação observada no anticorpo sendo mapeado foi provavelmente devido à perda de um resíduo de contato energeticamente importante. As posições destas mutações foram designadas como resíduos energicamente importantes no epítopo do anticorpo e são mostradas na Tabela 14.

TABELA 14

RESÍDUOS DE HUVISTA QUE SÃO IDENTIFICADOS COMO RESÍDUOS DE EPÍTOPO DE MABS ANTI-VISTA

[328] A Tabela 15 inclui dados detalhados da Tabela 14 e lista os resíduos de aminoácidos de hVISTA que provavelmente reduzirão a ligação de cada anticorpo listado, com base na frequência de resíduos observada no método de exibição em superfície de levedura/NGS.

TABELA 15

SUBSTITUIÇÕES DE AMINOÁCIDOS DO VISTA SUSCEPTÍVEIS DE REDUZIR A LIGAÇÃO

DOS ANTICORPOS LISTADOS P1-061015 P1-061015 P1-061029 P1-061029 P1-068761 P1-068767 pH 6 pH 7 pH 6 pH 7 pH 6 pH 6

T 3 P, Y, W 5 Y P, G, A, S, T, Y, S, T, V, L, P, G, S, T, V, L, I, P, G, A, S, T, P, G, S, N, G, T, V, L, I, M, 3 K, R, H, N, I, M, K, R, N, M, K, R, N, D, E, V, L, I, M, K, D, E Q K, R, N, Q 7 D, E, Q D, Q Q R, N, D, E, Q

K 3 P, G, A, S, V 8 T G, M, R, H, M, K, R, H, G, A, S, V, L, M, G, A, S, M, Y, G, A, S, H, Y, W, 3 F, Y, W, N, F, Y, W, D, R, H, F, Y, W, N, G, Y, D, E W, N, D, E, Q N, D, E, Q 9 D, E, Q E, Q D, E, Q

Y 4 A, S, T, I, M P, I, M, H 1 R P, A, T, V, I, P, G, A, S, T, V, A, T, V, L, I, P, A, S, T, V, L, 5 L, M, F, Y, E M, E M, F, Y, N, D, L, I, M, H, F, Y, M, K, F, Y, E, I, M, F, Y, W, D, 4 E, Q W, N, D, E, Q Q E, Q

T G, L, R, H, F, L, R, H, F, Y, D, 6 V, L, K, R, H, F, Y G, V, H, Y, D Y, D, E, Q E 1 F G, A, S, M, P, G, A, S, T, P, G, A, S, T, V, P, G, A, S, T, P, G, A, S, T, V, G, K, R, D, 6 K, R, N, D, V, I, M, H, Y, L, I, M, K, R, H, Y, V, M, H, Y, W, L, M, H, Y, W, N, E, Q 2 E, Q W, D, E, Q W, N, D, E, Q D, E, Q D, E, Q Q G, A, S, T, V, P, G, S, T, L, M, P, G, A, S, T, V, G, R, W, D, G, S, T, K, H, 6 W, D, E K, R, H, Y, W, K, R, H, F, Y, W, L, I, M, K, H, F, E Y, N, D, E 3 N, D, E N, D, E Y, W, N, D, E L P, G, A, S, T, P, G, S, K, G, T, Y, D, E, P, G, A, S, T, H, P, G, S, H, D, E, 6 K, R, H, W, W, D, E, Q Q Y, W, N, D, E, Q, Q 5 N, D, E, Q H P, T, V, L, I, P, T, V, L, I, G, S, T, V, L, I, M, T, V, L, I, Y, T, V, I, K, W, D, 6 M, K, R, F, M, K, R, F, K, R, W, N, D, E, T, I, K, W, D D, E, Q E 6 Y, W Y, W Q

L 6 G, A 7

H G, T, V, L, I, Y, 6 L, I, M, F, E L, I, E W, D, E, Q 8

F 9 G, D, E 7

L 1 A, T, M, K, F, R, W A, T, K, N, Q A, T, K, F, N, Q A, T, K, F, N, Q 1 N 5

P1-061015 P1-061015 P1-061029 P1-061029 P1-068761 P1-068767 pH 6 pH 7 pH 6 pH 7 pH 6 pH 6

V 1 M, K, R, W, T, M, K, R, W, T, L, I, M, K, R, T, L, I, M, K, R, M, K, N, D T, I, M, K, W 1 E E W, E W, E 7 I1 1 F, P P, N P, M, E P, M, E M, H P, M, H, F, N, E 9

H 1 V, E, Q 2 1

H 1 P, Y, N, D 2 2

S 1 P, V, L, I, K, L, I, M, H, L, I, M, H, W, L, I, M, Q L, I, M 2 F, D, E W, Q Q 4

E A, T, V, I, 1 A, S, T, L, M, T, V, I, M, H, G, T, K, H, Y, W, T, V, I, F, Y, W, M, K, H, F, V, I, H, N 2 K, H, Y, D F, Y, W N, D N Y, W, N, D 5

R 1 P, S, V, M, K, H, S, V, M, H P, V, M, N P, S, V, M, H, N 2 N 7

[329] A Figura 11B e a Figura 11C mostram uma representação de um epítopo que abrange todos os resíduos para bloquear o anticorpo hVISTA como listado na Tabela 14 (Figura 11B) em comparação com o epítopo de um anticorpo hVISTA não bloqueador (mAb1; Figura 11C). Os resíduos de aminoácidos 66(H) e 162(A) são indicados para denotar a orientação da molécula. Os resíduos de histidina estão em cinza e os resíduos de epítopo estão em preto. Notavelmente, todos os mAbs anti-VISTA bloqueadores ocupam a mesma região do epítopo, de acordo com os dados de categorização de octetos (mostrando que eles competiam uns com os outros), com diferenças sutis de resíduos entre os anticorpos consultados. Em contraste, o anticorpo hVISTA não bloqueador (mAb1) ocupa uma região de epítopo distinta na molécula hVISTA, e isto é ainda suportado pelos dados de categorização de octetos que mostra que nenhum dos mAbs de bloqueio competiu com mAb1.

EXEMPLO 16 PROPRIEDADES BIOFÍSICAS DE ‘761 E ‘767

[330] As propriedades físicas e químicas do P1-068761 e P1- 068767 foram comparadas com aquelas do P1-061029 parental (todas com uma região constante de IgG1.3) pelas seguintes técnicas analíticas e biofísicas.

[331] Os dados SEC analíticos foram adquiridos usando um instrumento HPLC 1260 da Agilent usando uma coluna Shodex™ KW403- 4F (4,6 mmID X 300 mmL), em tampão contendo 100 mM de Fosfato de Sódio, 150 mM de Cloreto de Sódio, em pH 7,3 (filtrado 0,2 µm) operando a uma velocidade de fluxo de 0,30 mL/min. Os dados foram coletados por um Detector de Matriz de Diodo Infinito Agilent 1260 ajustado para coleta a 280 nm e analisado pelo software Agilent Chemstation (Agilent, Santa Clara, CA).

[332] Os dados de focalização isoelétrica capilar com imagem (icIEF) foram adquiridos em um instrumento ProteinSimple iCE3 com amostrador automático Alcott 720NV. As amostras de anticorpos foram misturadas com uma mistura de separação para originar concentrações finais de 0,2 mg/mL de anticorpo, 0,35% de metil celulose, 2,0 M de ureia, 1% v/v farmalito pI 5-8 e 3% v/v farmalito pI 8-10,5. Estas amostras foram analisadas utilizando um tempo de pré-focalização de 1 min a 1500 V e tempo de focalização de 10 min a 3000 V, em um cartucho ProteinSimple cIEF revestido com FC (produto # 101701). Os dados foram analisados usando o software iCE CFR V4.3.1.5352.

[333] O tamanho hidrodinâmico do anticorpo foi determinado por dispersão dinâmica de luz (DLS) e a estabilidade térmica foi caracterizada por espectroscopia de fluorescência e dispersão estática de luz (SLS) usando um instrumento de caracterização molecular UNcle (Unchained Labs). Os anticorpos P1-061029, P1-068761 e P1-068767 foram preparados a uma concentração de 2 mg/mL em tampão PBS 1X, e depois diluídos 1: 1 com Tris a 40 mM em 1X PBS, ou citrato a 40 mM em 1X PBS, em pH diferente para produzir amostras finais de 1 mg/mL de anticorpo em 20 mM Tris/1X PBS, ou 20 mM de citrato/1X PBS em pH 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0 ou 9,0. Estas amostras foram carregadas em um cartucho de cuvete UNi e analisadas dentro de 1 hora de diluição nas diferentes formulações de pH. Os dados de DLS foram coletados a 25ºC, utilizando 4 aquisições de 5 s cada. As funções de autocorrelação de intensidade foram ajustadas usando o software de análise UNcle versão V2.0. Os dados de desnaturação térmica foram obtidos por varredura de amostras de 25ºC a 90ºC a uma taxa de varredura de 0,5ºC/min, com excitação em 266 nm e 473 nm. Os dados de fluorescência foram adquiridos em um intervalo de 250 nm a 720 nm. Os dados de fluorescência e SLS foram analisados usando o software de análise UNcle versão V2.0.

[334] A viscosidade aparente dos anticorpos P1-061029, P1- 068761 e P1-068767 foi medida em um instrumento de caracterização molecular UNcle (Unchained Labs), usando um método DLS baseado em esferas que mede a taxa de difusão de esferas de poliestireno na presença de soluções de anticorpos formuladas, de acordo com o protocolo recomendado pela Unchained Labs. Resumidamente, uma solução a 10% de esferas de poliestireno de 100 nm (número de catálogo da Thermo Scientific 3100A) foi preparada em tampão de formulação contendo 0,5% de tween 80. 3 µl desta mistura de esferas de poliestireno foram adicionadas a 30 µl de anticorpo formulado (várias concentrações de Ab em 20 mM de histidina, 260 mM de sacarose em pH 6,0) e a mistura proteína/esferas resultante foi carregada em 3 pistas separadas de um cartucho de cuvete UNi (9 µl cada pista) para análise em triplicata. Os dados foram analisados utilizando o software de análise UNcle versão V2.0, utilizando uma viscosidade de referência de 1,3 cP.

[335] A estabilidade física dos anticorpos P1-061029, P1- 068761 e P1-068767 foi estudada sob condições de estresse acelerado pela preparação de 50 mg/mL de amostras de anticorpo em 20 mM de histidina, 260 mM de sacarose em pH 6,0 e exposição a 40ºC de estresse térmico por 4 semanas. As alíquotas foram removidas imediatamente antes de 40ºC de incubação (tempo zero = t0), bem como após 1 semana (1 w) e 4 semanas (4 w) de estresse térmico, e as amostras foram diluídas para 2 mg/mL usando tampão de formulação e analisadas por aSEC. Os dados de aSEC foram adquiridos usando um instrumento HPLC da Agilent 1260 usando uma coluna Shodex KW403-4F (4,6 mmID X 300 mm L), em tampão contendo 100 mM de fosfato de sódio, 150 mM de cloreto de sódio, em pH 7,3 (0,2 µm de filtrado) correndo a uma velocidade de fluxo de 0,30 mL/min. Os dados foram coletados por um Detector de Matriz de Diodo Infinito Agilent 1260 ajustado para coleta a 280 nm e analisado pelo software Agilent Chemstation (Agilent, Santa Clara, CA).

[336] Os resultados são os seguintes: Dados de cromatografia de exclusão por tamanho analítica (aSEC) mostraram que todos os três anticorpos puderam ser purificados com alta pureza, com cada amostra de anticorpo que consiste em mais de 99,3% de monômero (pico principal), menos de espécies 0,7% de alto peso molecular (HMW) e níveis indetectáveis de espécies de baixo peso molecular (LMW), Tabela 16.

TABELA 16 DADOS SEC ANALÍTICA PARA ANTICORPOS ANTI-VISTA, MOSTRANDO A PORCENTAGEM DE ESPÉCIES DE ELEVADO PESO MOLECULAR (% HMW), PORCENTAGEM DE ESPÉCIES MONOMÉRICAS/PRINCIPAIS (% PRINCIPAL) E PORCENTAGEM DE ESPÉCIES DE BAIXO PESO MOLECULAR (% LMW).

Nome da amostra %HMW %Principal %LMW P1-061029 0,4 99,6 0,0

Nome da amostra %HMW %Principal %LMW P1-068761 0,6 99,4 0,0 P1-068767 0,5 99,5 0,0

[337] O perfil da variante de carga como determinado por focalização isoelétrica capilar (icIEF) para o anticorpo P1-061029 mostrou a presença de uma espécie principal (69,4%) com ponto isoelétrico (pI) de 8,56 e 30,6% de espécies ácidas. (Fig. 12A-C). O P1-068761 demonstrou uma espécie principal (66,4%) com pI de 6,69 e 33,6% de espécies ácidas. O P1- 068761 demonstrou uma espécie principal (61,4%) com pI de 6,63 e 38,6% de espécies ácidas. Portanto, a distribuição de espécies ácidas, básicas e principais é semelhante para os três anticorpos, mas os anticorpos manipulados geneticamente P1-068761 e P1-068767 têm ponto isoelétrico significativamente menor do que o anticorpo P1-061029 parental.

[338] O estado oligomérico de P1-061029, P1-068761 e P1- 068767 foi determinado ao longo do intervalo de pH de 3-9 utilizando dispersão dinâmica de luz (DLS) em tampões de pH diferente. Todos os valores do raio hidrodinâmico (Rh) para cada anticorpo estavam na faixa de 4,8- 5,7 nM, o que é típico para amostras de anticorpos monoméricos, Tabela 17. Isto sugere que estes anticorpos não formam níveis detectáveis de espécies agregadas de elevado peso molecular a 1 mg/mL na primeira hora após a diluição em formulações com pH entre 3-9.

TABELA 17 O RAIO HIDRODINÂMICO, CONFORME DETERMINADO POR DLS, PARA AMOSTRAS DE 1 MG/ML DE ANTICORPOS ANTI-VISTA NO INTERVALO DE PH DE PH3 - PH9. Rh (nm) Rh (nm) Rh (nm) pH Tampão P1-061029 P1-068761 P1-068767 9 20mM Tris /1 X PBS 5,2 4,8 5,2 8 20mM Tris /1 X PBS 5,2 5,2 5,2 7 20mM Tris /1 X PBS 4,8 5,2 5,2 7 20mM citrato /1 X PBS 4,8 5,2 5,7

Rh (nm) Rh (nm) Rh (nm) pH Tampão P1-061029 P1-068761 P1-068767 6 20mM citrato /1 X PBS 5,2 5,2 4,8 5 20mM citrato /1 X PBS 5,2 4,8 5,2 4 20mM citrato /1 X PBS 4,8 4,8 5,2 3 20mM citrato /1 X PBS 5,2 5,2 5,2

[339] A estabilidade térmica de P1-061029, P1-068761 e P1-068767 foi medida ao longo do intervalo de pH de 3-9, monitorando a fluorescência e a dispersão estática de luz em função da temperatura em tampões com pH diferentes. A primeira transição de desnaturação térmica (Tm1) que tipicamente representa a desnaturação do domínio CH2 dos anticorpos IgG1 foi determinada por fluorescência e é mostrada na Tabela 18, e o início da agregação (Tagg) que tipicamente representa a desnaturação do domínio FAB de anticorpos IgG1 foi medida por dispersão estática de luz e é mostrada na Tabela 19. Em pH neutro (pH 7,0) na formulação Tris/PBS, os valores de Tm1 para os três anticorpos foram P1- 061029 (67,4ºC), P1-068761 (67,0ºC) e P1-068767 (65,3ºC), com valores Tagg de P1-061029 (67,8ºC), P1-068761 (67,5ºC) e P1-068767 (65,8ºC). A Tm1 para cada anticorpo na formulação Citrato/PBS no mesmo pH neutro 7,0 ou pH ligeiramente mais ácido de 6,0 foram todos dentro de 0,7 ° dos valores de Tris/PBS em pH 7,0.

No entanto, os valores Tm1 foram ligeiramente menores (entre 0,3° - 1,1° mais baixo) a um pH mais básico de 8-9, e significativamente mais baixo com um pH mais ácido de 3-5, para cada anticorpo. Em comparação com pH neutro, o Tagg para P1-061029 estava dentro de 0,1° de valor de pH 7,0 em pH mais básico 8,0 a 9,0, foi 1,0° mais baixo, em pH 5,0, e muito mais baixo (6,1° - 19,6° mais baixo) para condições mais ácidas de pH pH 3,0 - 4,0. O Tagg para P1-068761 e P1- 068767 também foram significativamente menores em pH 3,0 - 4,0. Entretanto, em pH 5,0, o Tagg para P1-068761 foi apenas 0,2° mais baixo que o Tagg em pH 6,0, enquanto o Tagg para P1-068767 foi 2,2° mais baixo em pH 5,0 do que em pH 6,0, demonstrando algumas diferenças no Tagg para cada anticorpo, Tabela 19.

TABELA 18 ESTABILIDADE TÉRMICA (VALORES TM1) PARA P1-061029, P1- 068761, P1- 068767 EM TODO O INTERVALO DE PH (PH3 - PH 9) DETERMINADA POR

ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA o o o Tm1 ( C) Tm1 ( C) Tm1 ( C) pH Tampão P1-061029 P1-068761 P1-068767 9 20mM Tris /1 X PBS 66,6 65,9 65,0 8 20mM Tris /1 X PBS 67,0 66,5 64,8 7 20mM Tris /1 X PBS 67,4 67,0 65,3 7 20mM citrato /1 X PBS 67,2 66,9 64,8 6 20mM citrato /1 X PBS 67,6 67,5 65,0 5 20mM citrate /1 X PBS 64,4 64,7 62,1 4 20mM citrato /1 X PBS 51,8 52,0 50,8 3 20mM citrato /1 X PBS 30,7 28,1 28,7 TABELA 19 ESTABILIDADE TÉRMICA (VALORES TAGG) PARA P1-061029, P1- 068761, P1- 068767 EM TODO O INTERVALO DE PH (PH3 - PH 9) DETERMINADA POR DISPERSÃO

ESTÁTICA DE LUZ o o o Tagg ( C) Tagg ( C) Tagg ( C) pH Tampão P1-061029 P1-068761 P1-068767 9 20mM Tris /1 X PBS 67,7 67,1 66,0 8 20mM Tris /1 X PBS 67,8 67,5 65,8 7 20mM Tris /1 X PBS 67,8 68,2 65,9 7 20mM citrato /1 X PBS 67,8 68,1 65,7 6 20mM citrato /1 X PBS 68,1 68,9 65,6 5 20mM citrato /1 X PBS 66,8 68,7 63,7 4 20mM citrato /1 X PBS 61,7 63,6 56,9 3 20mM citrato /1 X PBS 48,2 48,8 41,0

[340] A viscosidade aparente de P1-061029, P1-068761 e P1- 068767 foi medida utilizando um método DLS baseado em esferas que mede a taxa de difusão de esferas de poliestireno na presença de soluções de anticorpo formuladas. A comparação dos três anticorpos a 44 mg/mL mostra uma viscosidade semelhante para ambos os anticorpos manipulados geneticamente tal como o anticorpo parental sob estas condições, Tabela 20. Em um segundo estudo, o material proteico adicional para P1-068761 e P1- 068767 foi concentrado para concentrações mais elevadas para analisar a viscosidade a 136 mg/mL, 100 mg/mL e 50 mg/mL. Estes dados mostram uma viscosidade aparente aumentada a concentrações de anticorpo mais elevadas, com uma viscosidade aparente máxima de 5,7 ± 0,7 para o P1-068761 e 5,3 ± 0,6 para o P1-068767 a 136 mg/mL.

TABELA 20 V ISCOSIDADE APARENTE (EM C P) P ARA ANTICORPOS EM 20 MM DE HISTIDINA , 260 MM DE S ACAROSE , P H 6,0 A 25º C, CONFORME DETERMINADO PELO MÉTODO DE DLS BASEADO E M ESFERAS.

[341] Os valores representam a média e o desvio padrão dos dados de três faixas UNi. Anticorpo Viscosidade Viscosidade Viscosidade Viscosidade Aparente (cP) Aparente (cP) Aparente (cP) Aparente (cP) a 136 mg/mL a 100 mg/mL a 50 mg/mL a 44 mg/mL P1-061029 1,6 ± 0,1 P1-068761 5,7 ± 0,7 3,1 ± 0,0 1,4 ± 0,2 1,5 ± 0,4 P1-068767 5,3 ± 0,6 3,0 ± 0,3 1,7 ± 0,2 1,6 ± 0,2

[342] A estabilidade física de 50 mg/mL de amostras de P1- 061029, P1-068761, e P1-068767 em 20 mM de histidina, 260 mM de sacarose em pH 6,0 foi estudada sob condições aceleradas de e stresse a 40ºC durante 4 semanas. O estado oligomérico dos anticorpos foi monitorado por aSEC para amostras imediatamente antes de 40ºC de incubação (tempo zero = t0), bem como após 1 semana (1w) e 4 semanas (4w) de 40ºC de estresse. Estes dados mostram que todos os três anticorpos permanecem mais de 96% monoméricos após 4 semanas a 40ºC, com baixos níveis de espécies HMW (< 1,6% HMW) e baixos níveis de espécies LMW (< 2,0% LMW), Tabela 21.

TABELA 21

DADOS ASEC PARA PARA AMOSTRAS DE ESTABILIDADE ACELERADA DE ANTICORPOS ANTI-VISTA, MOSTRANDO A PORCENTAGEM DE ESPÉCIES DE ELEVADO PESO MOLECULAR (% HMW), PORCENTAGEM DE ESPÉCIES MONOMÉRICAS/PRINCIPAIS (% PRINCIPAL) E PORCENTAGEM DE ESPÉCIES DE BAIXO PESO MOLECULAR (% LMW), PARA AMOSTRAS DE T0, 1 SEMANA (1W) E 4 SEMANAS (4W). Anticorpo Amostra % HMW % Principal % LMW P1-061029 t0 0,4 99,7 0,0 1w 0,5 99,4 0,2 4w 0,8 97,2 2,0 P1-068761 t0 0,6 99,4 0,0 1w 0,9 98,8 0,3 4w 1,6 96,4 2,0 P1-068767 t0 0,5 99,5 0,0 1w 0,8 98,9 0,3 4w 1,6 96,4 2,0 EXEMPLO 17 GERAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-VISTA COM SUBSTITUIÇÕES DA REGIÃO

ESTRUTURAL DA CADEIA PESADA DA LINHA GERMINATIVA

[343] Anticorpos anti-VISTA P1-061029 ou descendência dos mesmos, especificamente P1-068761, P1-068767, P1-068761_E55A (P1- 070868), P1-068767_D52N (P1-070906), P1-068767_E55A (P1-070908) e P1- 070908) e P1-068767_E55A52 (P1-070916), foram preparados, cujas regiões estruturais da região variável de cadeia pesada foram modificadas por uma ou ambas as substituições, K16R e T84A. (Em outras palavras, o anticorpo P1- 070868 tem as sequências de aminoácidos da VH e VL do anticorpo P1- 068761 E55A, mas com as substituições K16R e T84A na região estrutural da cadeia pesada). Estas substituições foram feitas de modo a que os anticorpos se assemelhassem mais à sequência da região estrutural de cadeia pesada da linhagem germinal, que compreende os resíduos 16R e 84A. A Fig. 14 provê um alinhamento mostrando a localização de cada um destes resíduos de aminoácidos em relação a VH do P1-068761 e às suas sequências de CDR.

As substituições de K16R e T84A na VH do P1-068761 e outros anticorpos estão representadas na Tabela de Sequências.

[344] Essas substituições alteram os resíduos de aminoácidos nessas duas posições de tal modo que elas contenham os mesmos aminoácidos como àqueles na linhagem germinal dos quais a cadeia pesada do '029 é derivada. Os resíduos 16R e 84A também estão presentes nas regiões estruturais da VH do P1-61015 VH (vide a SEQ ID NO: 95).

[345] A ligação ao hVISTA destes anticorpos foi medida conforme descrito no Exemplo 9. Os resultados são fornecidos na Tabela 22 e as substituições de aminoácidos dos anticorpos são mostradas na Tabela 23.

Os resultados indicam que K16R e T84A não afetam significativamente a cinética de ligação da progênie '029.

[346] Por esse motivo, qualquer um dos anticorpos anti-hVISTA descrito na presente invenção pode compreender K16R e/ou T84A. Os anticorpos P1-061029_F100fE_V102D (P1-072000); P1-061029_F100fE (P1- 072002); P1-061029_V102D (P1-072004); P1-061029_Y32E (P1-072006) e P1-061029_Y32E_F100fE (P1-072008) com K16R e/ou T84A serão construídos e sua ligação testada tal como descrito na presente invenção.

TABELA 22

CINÉTICA DE LIGAÇÃO DA ABS SELECIONADOS PARA HVISTA pH 7,4 pH 7,4 pH 6,0 pH 6,0 pH 7,4 pH 6,0 ID Descrição ka kd ka kd KD (M) KD (M) (1/Ms) (1/s) (1/Ms) (1/s) P1- P1-061029_HC_K16R_T84A (FW 1,3E+0 5,9E- 4,5E- 8,1E+0 5,9E- 7,3E- 071757 revertente) 5 03 08 5 03 09 P1- 1,3E+0 6,0E- 4,6E- 8,0E+0 5,9E- 7,4E- P1-061029_HC_K16R (FW revertente) 071759 5 03 08 5 03 09 pH 7,4 pH 7,4 pH 6,0 pH 6,0 pH 7,4 pH 6,0 ID Descrição ka kd ka kd KD (M) KD (M) (1/Ms) (1/s) (1/Ms) (1/s) P1- 1,5E+0 6,0E- 4,0E- 8,7E+0 6,0E- 6,9E- P1-061029_HC_T84A (FW revertente) 071761 5 03 08 5 03 09 P1- P1-068761_HC_K16R_T84A (FW 2,9E+0 1,4E- 4,9E- Sem ligação a 100nM 071763 revertente) 5 03 09 P1- 2,8E+0 1,4E- 5,0E- P1-068761_HC_K16R (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071765 5 03 09 P1- 3,1E+0 1,6E- 5,1E- P1-068761_HC_T84A (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071767 5 03 09 P1- P1-068767_HC_K16R_T84A (FW 2,4E+0 2,6E- 1,1E- Sem ligação a 100nM 071769 revertente) 5 03 08 P1- 2,5E+0 2,6E- 1,1E- P1-068767_HC_K16R (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071771 5 03 08 P1- 2,7E+0 2,6E- 9,8E- P1-068767_HC_T84A (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071773 5 03 09 P1- P1-070868_HC_K16R_T84A (FW 2,5E+0 1,7E- 6,9E- Sem ligação a 100nM 071775 revertente) 5 03 09 P1- 2,7E+0 1,7E- 6,4E- P1-070868_HC_K16R (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071777 5 03 09 P1- 2,6E+0 1,8E- 7,0E- P1-070868_HC_T84A (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071779 5 03 09 P1- P1-070906_HC_K16R_T84A (FW 2,2E+0 1,7E- 7,7E- Sem ligação a 100nM 071781 revertente) 5 03 09 P1- 2,2E+0 1,7E- 7,6E- P1-070906_HC_K16R (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071783 5 03 09 P1- 2,5E+0 1,7E- 6,7E- P1-070906_HC_T84A (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071785 5 03 09 P1- P1-070908_HC_K16R_T84A (FW 2,1E+0 2,7E- 1,3E- Sem ligação a 100nM 071787 revertente) 5 03 08 P1- 2,1E+0 2,6E- 1,3E- P1-070908_HC_K16R (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071789 5 03 08 P1- 2,4E+0 2,7E- 1,1E- P1-070908_HC_T84A (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071791 5 03 08 P1- P1-070916_HC_K16R_T84A (FW 2,1E+0 1,7E- 8,1E- Sem ligação a 100nM 071793 revertente) 5 03 09 P1- 2,1E+0 1,7E- 8,1E- P1-070916_HC_K16R (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071795 5 03 09 P1- 2,2E+0 1,7E- 7,7E- P1-070916_HC_T84A (FW revertente) Sem ligação a 100nM 071797 5 03 09 P1- 2,0E+0 2,3E- 1,2E- P1-061029_F100fE_V102D Sem ligação a 100nM 072000 5 03 08 P1- 4,4E+0 8,5E- 1,9E- 6,5E+0 1,6E- 2,5E- P1-061029_F100fE 072002 4 03 07 5 03 09 P1- 1,4E+0 2,5E- 1,8E- P1-061029_V102D Sem ligação a 100nM 072004 5 02 07 P1- 1,2E+0 6,3E- 5,4E- 3,4E+0 1,2E- 3,5E- P1-061029_Y32E 072006 4 03 07 5 03 09 P1- 2,7E+0 2,4E- 8,8E- P1-061029_Y32E_F100fE Sem ligação a 100nM 072008 5 02 08 pH 7,4 pH 7,4 pH 6,0 pH 6,0 pH 7,4 pH 6,0 ID Descrição ka kd ka kd KD (M) KD (M) (1/Ms) (1/s) (1/Ms) (1/s) P1- 2,3E+0 1,7E- 7,4E- P1-068767_D52N_E55A Sem ligação a 100nM 070916 5 03 09 P1- 2,2E+0 2,5E- 1,1E- P1-068767_E55A Sem ligação a 100nM 070908 5 03 08 P1- 2,4E+0 1,6E- 6,7E- P1-068767_D52N Sem ligação a 100nM 070906 5 03 09 P1- 2,6E+0 1,8E- 7,0E- P1-068761_E55A Sem ligação a 100nM 070868 5 03 09 P1- 2,6E+0 2,6E- 1,0E- progênie de '767 seletiva em pH ácido Sem ligação a 100nM 0687677 5 03 08 P1- 2,8E+0 1,5E- 5,5E- progênie de '761 seletiva em pH ácido Sem ligação a 100nM 0687617 5 03 09 P1- 1,8E+0 6,4E- 3,6E- 7,8E+0 5,8E- 7,4E- parental GI 0610296 5 03 08 5 03 09 TABELA 23 SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DAS CDRS DA VH DOS ANTICORPOS DA TABELA 22

LCD ID Descrição HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCDR1 LCDR3 R2 P1- P1- 07175 061029_HC_K16R_T84 .......... ................. .............. ............ ....... ......... 7 A (FW revertente) P1- P1-061029_HC_K16R 07175 .......... ................. .............. ............ ....... ......... (FW revertente) 9 P1- P1-061029_HC_T84A 07176 .......... ................. .............. ............ ....... ......... (FW revertente) 1 P1- P1- 07176 068761_HC_K16R_T84 ....E.E... ......EE......... .....H.....E.. ............ ....... ......... 3 A (FW revertente) P1- P1-068761_HC_K16R 07176 ....E.E... ......EE......... .....H.....E.. ............ ....... ......... (FW revertente) 5 P1- P1-068761_HC_T84A 07176 ....E.E... ......EE......... .....H.....E.. ............ ....... ......... (FW revertente) 7 P1- P1- 07176 068767_HC_K16R_T84 ....E..... ..D...E.......... ...........E.D ............ ....... ......... 9 A (FW revertente) P1- P1-068767_HC_K16R 07177 ....E..... ..D...E.......... ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 1 P1- P1-068767_HC_T84A 07177 ....E..... ..D...E.......... ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 3 P1- P1- ....E.E... .......E......... .....H.....E.. ............ ....... ......... 07177 070868_HC_K16R_T84

LCD ID Descrição HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCDR1 LCDR3 R2 5 A (FW revertente) P1- P1-070868_HC_K16R 07177 ....E.E... .......E......... .....H.....E.. ............ ....... ......... (FW revertente) 7 P1- P1-070868_HC_T84A 07177 ....E.E... .......E......... .....H.....E.. ............ ....... ......... (FW revertente) 9 P1- P1- 07178 070906_HC_K16R_T84 ....E..... ......E.......... ...........E.D ............ ....... ......... 1 A (FW revertente) P1- P1-070906_HC_K16R 07178 ....E..... ......E.......... ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 3 P1- P1-070906_HC_T84A 07178 ....E..... ......E.......... ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 5 P1- P1- 07178 070908_HC_K16R_T84 ....E..... ..D.............. ...........E.D ............ ....... ......... 7 A (FW revertente) P1- P1-070908_HC_K16R 07178 ....E..... ..D.............. ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 9 P1- P1-070908_HC_T84A 07179 ....E..... ..D.............. ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 1 P1- P1- 07179 070916_HC_K16R_T84 ....E..... ................. ...........E.D ............ ....... ......... 3 A (FW revertente) P1- P1-070916_HC_K16R 07179 ....E..... ................. ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 5 P1- P1-070916_HC_T84A 07179 ....E..... ................. ...........E.D ............ ....... ......... (FW revertente) 7 P1- P1- 07200 .......... ................. ...........E.D ............ ....... ......... 061029_F100fE_V102D 0 P1- 07200 P1-061029_F100fE .......... ................. ...........E.. ............ ....... ......... 2 P1- 07200 P1-061029_V102D .......... ................. .............D ............ ....... ......... 4 P1- 07200 P1-061029_Y32E ......E... ................. .............. ............ ....... ......... 6 P1- P1- 07200 ......E... ................. ...........E.. ............ ....... ......... 061029_Y32E_F100fE 8 P1- P1-068767_D52N_E55A .....E..... ................. ..........E.D ............ ....... .........

LCD ID Descrição HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCDR1 LCDR3 R2 07091 6 P1- 07090 P1-068767_E55A .....E..... ..D.............. ..........E.D ............ ....... ......... 8 P1- 07090 P1-068767_D52N .....E..... ......E.......... ..........E.D ............ ....... ......... 6 P1- 07086 P1-068761_E55A .....E.E... .......E......... ....H.....E.. ............ ....... ......... 8 P1- progênie '767 seletiva 06876 .....E..... ..D...E.......... ..........E.D ............ ....... ......... em pH ácido 77 P1- progênie '761 seletiva 06876 .....E.E... ......EE......... ....H.....E.. ............ ....... ......... em pH ácido 17 P1-

GFTLD GINWNSANI VPGYSGG RASQSV GAS QQYG 06102 parental GI

DYAMH GYADSVKG WIDAFDV SSSYLA SRAT SSPFT 96

[347] Assim, este Exemplo identificou anticorpos anti-VISTA humano que se ligam ao VISTA humano com afinidade 200-10.000 vezes maior em pH ácido do que em pH fisiológico. Em ensaios de ligação de células, estes anticorpos VISTA seletivos para o pH ácido exibiram um ponto de inflexão na intensidade de ligação em aproximadamente pH 6,5, semelhante ao que foi observado para a ligação de VISTA às células T.

EXEMPLO 18 ANTICORPO ANTI-VISTA E O ANTICORPO ANTI-PD-1 AGEM SINERGICAMENTE PARA

PROVOCAR A REJEIÇÃO DO TUMOR

[348] Para caracterizar os efeitos do bloqueio da interface de ligante seletivo em pH ácido do VISTA em um tumor, foi produzido um anticorpo substituto de camundongo, VISTA.10, que bloqueia a ligação do VISTA de camundongo às células T de camundongo em pH ácido. (VISTA.10 também se liga ao mVISTA em pH fisiológico). Para evitar o envolvimento do receptor Fc e quaisquer funções efetoras subsequentes, VISTA.10 foi convertido em um isotipo IgG1 com uma mutação pontual, D265A, para evitar o envolvimento do receptor Fc e funções efetoras {Clynes, 2000}. Os tumores MC38 foram implantados subcutaneamente nos camundongos, e quando os tumores atingiram cerca de 70 mm2, os seguintes tratamentos foram administrados a cada três dias aos camundongos: Grupo 1: 4 doses de anti- KLH mIgG1-D265A a 30 mpk; Grupo 2: duas doses de anti-PD-1 mIgG1-D265A a 5 mg/kg; Grupo 3: 4 doses de anti-VISTAmIgG1-D265A a 30 mg/kg; e Grupo 4: uma combinação anti-PD-1 + anti-VISTA. O tratamento combinado de VISTA.10 e um anticorpo bloqueador de PD-1 suscitou a rejeição do tumor na maioria dos camundongos implantados com tumores de adenocarcinoma colorretal MC38 (Figura 15A-D), os tratamentos com anti-PD-1 e e VISTA.10 como agentes únicos atrasaram modestamente, mas não preveniram, a progressão do tumor (Figura 15 A-D).

[349] Consistente com esses resultados, a análise ex vivo de tumores de camundongos tratados mostrou aumentos de 5 e 10 vezes nas frequências de células T CD8+ e células T CD4+ infiltrantes de tumor, respectivamente, em camundongos tratados com VISTA.10 e anti-PD-1 (Figura 15E-F). Outros subconjuntos de leucócitos não foram afetados. A terapia combinada também resultou em expressão significativamente mais baixa de PD-1, LAG-3 e TIM-3, todos marcadores de exaustão e disfunção de células T, em células T CD8+ infiltrantes de tumor (Figura 15E). O tratamento com anticorpos PD-1 ou VISTA como tratamentos únicos teve efeitos modestos nas frequências e fenótipo das células T (Figuras 15E-F). As frequências de subconjunto de células mieloides intratumorais, incluindo aquelas de macrófagos, células supressoras derivadas de mieloides monocíticas (MDSC) e MDSC granulocíticas, não foram afetadas pelo tratamento com anticorpos VISTA.

[350] Para contextualizar a atividade do anticorpo VISTA,

camundongos nocautes para VISTA foram implantados com tumores MC38 e tratados com bloqueio de PD-1 ou anticorpos de controle. Como mostrado na Fig. 15I, nos grupos de tratamento de controle, os tumores MC38 cresceram comparativamente em camundongos nocauteados para VISTA e seus companheiros de ninhada tipo selvagem. Os camundongos nocautes para VISTA exibiram maior responsividade ao anti-PD-1, uma reminiscência da eficácia da combinação de VISTA e PD-1. Esta responsividade foi novamente correlacionada com o aumento de células T CD4 + e CD8+ intratumorais. Estes dados indicam que os anticorpos que bloqueiam a ligação ao VISTA em pH ácido são suficientes para reverter a supressão imunológica mediada por VISTA.

[351] Como o VISTA funciona seletivamente em pH ácido, formulamos a hipótese de que a supressão das respostas antitumorais mediada pelo VISTA ocorre predominantemente nos próprios leitos tumorais.

Testamos a atividade do anticorpo bloqueador de VISTA humano seletivo para pH ácido P1-068767 (ʼ767) e seu anticorpo parental não seletivo para pH, P1- 061029 (ʼ029), em camundongos transgênicos que expressam o domínio extracelular do VISTA humano no lugar do Domínio extracelular VISTA endógeno (camundongos knock-in para VISTA humano, genOway).

Consistente com os experimentos de combinação e nocaute de VISTA descritos acima, P1-061029 e P1-068767 suscitaram eficácia comparável em combinação com um anticorpo bloqueador de PD-1 de camundongo (Fig. 15J- M).

[352] A meia-vida do P1-068767 e P1-061029 em camundongos com inserção do gene (knock-in) do VISTA humano foi medida. Como mostrado na Fig. 15N, o P1-068767 exibiu um tempo médio de permanência (MRT) quase 20 vezes maior do que o P1-061029, indicativo de ligação fraca ao VISTA em pH 7,4 e, consequentemente, TMDD reduzido (71 horas e 4,1 horas, respectivamente).

[353] Para avaliar o envolvimento de anticorpos de VISTA periférico em um modelo não transgênico, tratamos macacos cinomolgos com P1-068767 e um anticorpo com preferência para pH neutro chamado VISTA.4 (uma família de pedido de patente separada para os mesmos requerentes fornece uma descrição adicional do VISTA. 4) da seguinte forma. VISTA.4 e P1-06 8767 foram avaliados após infusões intravenosas de 10 minutos em macacos cinomolgos virgens de proteína a uma dose de 5 mg/kg (n = 1 por anticorpo). Amostras de sangue em série foram coletadas em 0,17, 0,5, 2, 4, 6, 24, 48, 72, 168, 216, 240, 336 horas após a infusão. Em seguida, as amostras séricas foram obtidas para análise de concentração de anticorpo usando um ensaio de ligação de ligante que empregou o VISTA recombinante como um agente de captura e um mAb anti-Fc de IgG humana como agente de detecção. O limite inferior de quantificação para o ensaio foi de 1 ng/mL. Os tempos médios de permanência foram estimados por análise não compartimental dos dados de concentração-tempo de mAb sérico usando o software Kinetica (Versão 5.0, Thermo Fisher Scientific). Os resultados mostram que P1-068767 novamente exibiu um MRT muito mais longo (717 horas e 7,6 horas, respectivamente, Fig 6O). Estes resultados sugerem que o bloqueio do VISTA no microambiente tumoral, ao invés do sangue e tecidos não ácidos, leva a eficácia antitumoral.

EXEMPLO 19 VISTA.4 INIBE A LIGAÇÃO DE VISTA AO PSGL-1

[354] O imunorreceptor ligante 1 da glicoproteína P selectina (PSGL-1) foi identificado anteriormente como um ligante VISTA (consulte o documento WO2018132476). O PSGL-1 é um receptor para selectinas, particularmente P-selectina, e a ligação ao seu ligante primário, P-selectina, é um facilitador bem caracterizado de interações de adesão entre leucócitos,

plaquetas e células endoteliais (Carlow, D.A., et al., PSGL-1 function in immunity and steady state homeostasis. Immunol Rev, 2009. 230(1): págs. 75- 96, e Abadier, M. and K. Ley, P-selectin glycoprotein ligand-1 in T cells. Curr Opin Hematol, 2017. 24(3): págs. 265-273. 18). O PSGL-1 também foi identificado como um regulador negativo de respostas de células T em contextos de infecção viral crônica, imunidade tumoral de câncer e algumas doenças autoimunes (Angiari, S., et al., Regulatory T cells suppress the late phase of the immune response in lymph nodes through P-selectin glycoprotein ligand-1. J Immunol, 2013. 191(11): p. 5489-500; Matsumoto, M., M. Miyasaka, and T. Hirata, P-selectin glycoprotein ligand-1 negatively regulates T-cell immune responses. J Immunol, 2009. 183(11): p. 7204-11; Nunez-Andrade, N., et al., P-selectin glycoprotein ligand-1 modulates immune inflammatory responses in the enteric lamina propria. J Pathol, 2011. 224(2): p. 212-21; Perez-Frias, A., et al., Development of an autoimmune syndrome affecting the skin and internal organs in P-selectin glycoprotein ligand 1 leukocyte receptor- deficient mice. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(11): p. 3178-89; Tinoco, R., et al., PSGL-1 Is an Immune Checkpoint Regulator that Promotes T Cell Exhaustion.

Immunity, 2016. 44(5): p. 1190-203). Esta função imunossupressora parece ser independente de ligantes PSGL-1 conhecidos (Tinoco, R., et al., PSGL-1: A New Player in the Immune Checkpoint Landscape. Trends Immunol, 2017.

38(5): p. 323-335).

[355] Em ensaios baseados em células, demonstrou-se que PSGL-1 e P-selectina recombinantes são capazes de bloquear a ligação de multímeros VISTA às células T CD4+ humanas ativadas. A deleção de PSGL-1 de células T CD4+ ativadas por CRISPR também eliminou a ligação de multímero VISTA. Além disso, a expressão ectópica de PSGL-1 mostrou ser suficiente para permitir a ligação de VISTA às células CHO em pH ácido e a expressão de VISTA foi suficiente para permitir a ligação de PSGL-1 às células

293T em pH ácido.

[356] Este exemplo mostra que o PSGL-1 ligou-se à P-selectina comparativamente em pH ácido e fisiológico, mas ligou-se ao VISTA apenas em pH ácido (Figura 17 A). O experimento foi conduzido usando ensaios de biossensor Octet com VISTA, P-selectina e glicopeptídeo mínimo do PSGL-1 (aminoácidos 1-19, com sulfotirosina e modificações pós-traducionais de carboidrato siayl lewis X) anteriormente mostrado para suportar a ligação de alta afinidade de P-selectina (Sako, D., et al., A sulfated peptide segment at the amino terminus of PSGL-1 is critical for P-selectin binding. Cell, 1995. 83(2): p.

323-319)..

[357] A interface de ligante de P SGL-1 baseia-se em modificações pós-tradução de sulfotirosina carregada negativamente e siail Lewis-X para ligar P-selectina com alta afinidade (Sako et al. 1995 Cell 83 (2): p. 323-319), e células T naïves, que expressam PSGL-1 não decorado com siail-lewis-X, são consequentemente incapazes de envolver a P-selectina de forma eficiente. O PSGL-1 decorado com Siayl lewis X é expresso constitutivamente em monócitos e neutrófilos circulantes e indutivelmente expresso em células T ativadas, consistente com a forte ligação de VISTA a esses tipos de células em pH ácido. Entretanto, VISTA se ligou àscélulas T naïves e ativadas, sugerindo que, ao contrário da P-selectina, VISTA se liga ao PSGL-1 independentemente de sialil lewis X. Em ensaios adicionais de biossensores Octet, verificou-se que, enquanto VISTA e P-selectina ambos se ligaram preferencialmente a glicopeptídeos PSGL-1 com decoração sialil lewis X, apenas VISTA se ligou a glicopeptídeos PSGL-1 sem sialil lewis X. Além disso, PSGL-1 produzido em células que não expressam as enzimas glucosaminil (N-acetil) transferase (GCNT1) e enzimas alfa (1,3)- fucosiltransferase-7 (FUT7) não tinham decoração sialil lewis X e ligavam-se mal à P-selectina (Fig. 25A). Em contraste, VISTA ligou PSGL-1 independentemente de sialil lewis X (Fig. 25A). Este resultado é consistente com VISTA, mas não com a P-selectina, ligando-se a células T naïves que carecem de sialil lewis X.

[358] Também similar à P-selectina, VISTA ligou-se modestamente ao sulfato de heparano em pH ácido.

[359] Adicionalmente, os anticorpos PSGL-1 que bloqueiam a ligação da P-selectina não bloquearam a ligação ao VISTA. Esses dados indicam que VISTA liga-se a uma interface PSGL-1 que é semelhante, mas distinta daquela ligada pela P-selectina.

[360] Este exemplo mostra ainda que os anticorpos P1-061029, P1- 068761, P1-068767 e VISTA.4, que bloqueiam a ligação de VISTA às células T, também bloqueiam a ligação de VISTA ao glicopeptídeo PSGL-1.

[361] Ensaios de Octet competitivos foram conduzidos para avaliar se os anticorpos α-VISTA seletivos para pH ácido P1-068761 e P1-068767, o parental independente de pH P1-061029 e VISTA.4 sensível ao pH ácido bloquearam a ligação do VISTA ao PSGL-1. Os ensaios de ligação foram realizados em um instrumento de interferometria de bio-camada OctetRed384 (BLI) (PALL/ForteBio). Todas as etapas do ensaio foram realizadas a 30ºC a 1000 rpm de velocidade de agitação e o tampão usado foi PBST, pH 6,0 (cloreto de sódio 137 mM, cloreto de potássio 2,7 mM, tampão fosfato 10 mM, Tween 20 0,05%). VISTA- Fc humano (R&D Systems # 7126-B7) foi diluído para 400 nM em PBST pH 6,0 e pré-misturado por 30 minutos com uma titulação seriada de 0 nM, 40 nM e 400 nM de P1-068761, P1-068767, P1- 061029 e VISTA.4. A proteína PSGL1 19-mer-huFc humana, consistindo nos 19 aminoácidos amino-terminais de PSGL1 maduro fundido ao Fc humano, foi capturada em sensores anti-Fc de IgG humana (AHC, PALL/ForteBio). Os sensores de captura anti-humano foram bloqueados em seguida com IgG humana total (Jackson # 009-000-002). A ligação do PSGL1 capturado à mistura de anticorpos VISTA-Fc/α-VISTA foi medida em seguida para avaliar se os anticorpos α-VISTA impediram que VISTA se ligasse ao PSGL1. Para cada série de titulação de anticorpo, a magnitude da ligação de VISTA ao PSGL1 (mudança de nm) foi normalizada para a resposta de VISTA:PSGL1 não bloqueada de 0 nM, definida como 100%. Os resultados deste ensaio estão resumidos na Figura 17B. Neste ensaio, as concentrações de 400 nM de P1-061029, P1-068761, P1-068767 e VISTA.4 demonstraram atividade de bloqueio. A proteína VISTA-Fc foi impedida de se ligar à proteína PSGL1-19-mer-huFc humana capturada, conforme indicado pela ligação reduzida ao VISTA observado.

[362] Além disso, foi demonstrado que a ligação do VISTA às células CHO-PSGL-1 foi bloqueada por VISTA.4 e o anticorpo KPL-1 para PSGL-1 bloqueador de P-selectina (Fig. 17C). Em ensaios de bloqueio de anticorpo PSGL- 1, as células foram pré-incubadas com KPL-1 (BD Biosciences ou Biolegend) ou PL2 (MBL) os anticorpos indicados antes da marcação com multímeros VISTA carregados com 32 nM ou proteínas quiméricas VISTA-Fc. A ligação de VISTA-Fc foi detectada por anticorpos anti-IgG (Jackson ImmunoResearch) ou anti-6xhis (Columbia Biosciences). As células foram adquiridas por citometria de fluxo ou fluorescência homogênea por tempo resolvido (HTRF).

EXEMPLO 20 ESTRUTURA CRISTALINA DE P1-068767 LIGADO AO HVISTA

[363] Para caracterizar a estrutura do VISTA e os determinantes moleculares da ligação do anticorpo VISTA, foi feito um cocristal do domínio IgV do hVISTA com o fragmento de ligação ao antígeno P1-068767 (Fab). A estrutura do complexo resultante foi determinada com resolução de 1,6 Å (Figura 18). O domínio IgV do VISTA é geralmente característico de sua família, com alguma semelhança com PD-L1 (Figura 18B). No entanto, ao contrário de PD-L1 e da maioria das outras famílias B7 ou membros da superfamília de imunoglobulina, as duas fitas β do C-terminal no domínio IgV do VISTA contêm vários resíduos adicionais, resultando em uma folha β central incomumente alongada e r ica em histidina (Figura 18B). P1-068767, um anticorpo bloqueador, liga-se ao VISTA nesta extensão de folha β (Figura 18C), enquanto o anticorpo não bloqueador VISTA.5 liga-se a uma região diferente (Figura 18 E). A extensão da folha β do VISTA é coberta por três resíduos de histidina: H121, H122 e H123. Os resíduos P1-068767 E110 e D112 formam ligações de hidrogênio com os resíduos VISTA H121 e H122, respectivamente (Figura 18D). Estas interações se encaixam bem com as descobertas descritas nos Exemplos anteriores de que os resíduos E110 e D112 de P1-068767 são necessários e suficientes para seletividade em pH ácido. No cocristal, o resíduo VISTA H123 interage com uma molécula de sulfato do precipitante e forma uma ponte de sal com o resíduo E1 de P1 - 068767; embora seja possível que H123 do VISTA possa formar uma ligação de hidrogênio genuína com P1-068767 na ausência de sulfato (Figura 18D). Interações adicionais são fornecidas na Tabela 24. Estes dados sugerem que a extensão em folha β rica em histidina do domínio IgV do VISTA é um componente chave da interface receptor-ligante seletivo em pH ácido do VISTA.

TABELA 24 DETALHA AS DISTÂNCIAS EM ÅNGSTRÖMS (Å), ENTRE ÁTOMOS DA HC FAB DO '767 EM 4 Å DE ÁTOMOS DO VISTA.

[364] VISTA.4 foi usado no ensaio de categorização (binning) de epítopos BLI competitivo anteriormente descrito no Exemplo 15. Os resultados indicam que VISTA.4 compete pela ligação ao VISTA humano com os anticorpos descritos acima P1-061015, P1-061029, P1-068761 e P1-068767 e, portanto, pertence ao mesmo grupo de epítopo que esses anticorpos (Grupo A). VISTA.4 não compete pela ligação ao VISTA humano com o mAb 1 VISTA (consulte a Fig. 11A).

[365] O epítopo de VISTA.4 também foi mapeado usando exibição de superfície de levedura e NGS, conforme descrito no Exemplo

15 para os anticorpos P1-061015, P1-061029, P1-068761 e P1-068767.

Os mutantes VISTA que perderam ligação ao anticorpo sendo mapeado, mas retiveram a ligação a um anticorpo não bloqueador (mAb1) foram separados e sequenciados. Uma vez que mantiveram a ligação ao mAb1, estes mutantes foram provavelmente dobrados corretamente e a perda de ligação observada no anticorpo sendo mapeado foi provavelmente devido à perda de um resíduo de contato energeticamente importante. As posições das mutações que resultaram em perda de ligação, e que foram designadas como resíduos energeticamente importantes no epítopo do anticorpo, são mostradas na Tabela 31, juntamente com os resíduos de contato energeticamente importantes dos anticorpos P1-061015, P1- 061029, P1 -068761 e P1-068767 (também mostrado na Tabela 14 acima).

TABELA 31

RESÍDUOS DE CONTATO ENERGETICAMENTE IMPORTANTES DE ANTICORPOS VISTA.4, '029, '015, '761 E '767 mA V T Y K T Y S R T F Q L H L H H F L V E I R H H S E R b 3 3 3 3 3 4 5 5 6 6 6 6 6 6 6 6 9 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 4 5 7 8 9 1 2 4 1 2 3 5 6 7 8 9 7 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 5 7 8 9 0 1 2 4 5 7 VIS x x x x x x x x x x x x x x x x x x x TA. 4 ‘015 x x x x x x x x x x x x x x ‘029 x x x x x x x x x x x x x x x x x ‘761 x x x x x x x x x x x x x x x x x ‘767 x x x x x x x x x x x x x x x x x

[366] A espectrometria de massa de troca de hidrogênio/deutério (HDX-MS) foi utilizada para sondar epítopos de ligação de VISTA humano com o mAb VISTA.4. O HDX-MS testa a conformação da proteína e a dinâmica conformacional em solução monitorando a taxa e a extensão da troca de deutério dos átomos de hidrogênio da amida da estrutura principal (Huang e Chen (2014)

Analytical and Bioanalytical Chemistry 406, 6541-6558; Wei, et al. Drug Discovery Today (2014) 19, 95-102). O nível de HDX depende da acessibilidade ao solvente dos átomos de hidrogênio da amida da estrutura principal e das ligações de hidrogênio da proteína. O aumento de massa da proteína no HDX pode ser medido com precisão por MS. Quando esta técnica é combinada com a digestão enzimática, as características da estrutura no nível do peptídeo podem ser resolvidas, permitindo a diferenciação dos peptídeos expostos na superfície daqueles dobrados no interior ou daqueles sequestrados na interface de um complexo proteína-proteína. Normalmente, a marcação de deutério e subsequentes experimentos de extinção são realizados, seguidos por digestão enzimática, separação de peptídeos e análise de MS.

[367] Antes dos experimentos de mapeamento de epítopos, experimentos não deuterados foram realizados para gerar uma lista de peptídeos comuns para VISTA humano recombinante (15 µM) e complexos de proteína de VISTA com mAb VISTA.4 (razão molar de 1:1). No experimento HDX-MS, 5 µL de cada amostra (VISTA ou VISTA com mAb VISTA.4) foram diluídos em 55 µL de tampão D2O (tampão fosfato 10 mM, D2O, pH 7,0) para iniciar as reações de marcação. As reações foram realizadas em diferentes períodos de tempo: 1 min, 10 min e 240 min. Ao final de cada período de reação de marcação, a reação foi extinta pela adição de tampão de extinção (tampão de fosfato 100 mM com GdnCl 4M e TCEP 0,4M, pH 2,5, 1: 1, v/v) e 50 µL de amostra extinta foram injetados no Sistema Waters HDX-MS para análise. Os níveis de captação de deutério de peptídeos pépticos comuns foram monitorados na ausência/presença de VISTA.4. A cobertura da sequência obtida foi de 82%.

[368] Os experimentos de HDX-MS forneceram 85% de cobertura de sequência para VISTA humano. Como mostrado na Figura 19, a análise de dados HDX-MS em VISTA.4 em VISTA humano indica que o epítopo de VISTA.4 é composto por três regiões de VISTA humano, com a região 2 sendo o epítopo primário (os números dos resíduos correspondem à sequência VISTA humana nativa, Figura 20): - Região 1: 57LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566); - Região 2: 86RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567); e - Região 3: 148VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568).

[369] O anticorpo VISTA.4 ligou-se igualmente bem em pH ácido e neutro. Outras rodadas de seleção produziram uma variante que se ligou ao VISTA com afinidade 200 vezes maior em pH 6,0 do que em pH 7,4. Esforços semelhantes com anticorpos bloqueadores VISTA produziram variantes com seletividade de até

10.000 vezes para pH 6,0 em relação ao pH 7,4. Usamos esses anticorpos para mapear a interface de ligação receptor-ligante de VISTA em pH ácido e neutro. Os anticorpos bloqueadores de VISTA independentes do pH, neutros e seletivos ao pH ácido se ligaram a epítopos quase idênticos, sugerindo que a protonação da histidina sozinha, sem alterações conformacionais marcadas, controla a capacidade do VISTA de envolver seu contrarreceptor em pH ácido. (VISTA.4 é descrito em outra família de pedido de patente pelos mesmos requerentes).

EXEMPLO 22 VISTA.4 INIBE A LIGAÇÃO DE VISTA ÀS CÉLULAS T EM PH ÁCIDO

[370] Este exemplo mostra que VISTA.4 e outros anticorpos no grupo de epítopo A bloquearam a ligação de VISTA às células T em pH ácido, enquanto VISTA.5 (mAb1) e outros anticorpos no grupo de epítopo B não bloquearam (Figura 21A e B).

[371] Este exemplo foi realizado essencialmente como descrito no Exemplo 4.

EXEMPLO 23 VISTA.4 AUMENTA A PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS T E A PRODUÇÃO DE IFN-Γ

[372] Este exemplo mostra que Abs que bloqueiam VISTA (epítopo

Grupo A) aumentam a proliferação de células T e a produção de IFN-γ (Fig. 22).

VISTA.5 (mAb1), que não é um anticorpo bloqueador, não aumentou a proliferação de células T ou a produção de IFN-γ. VISTA.4 não teve efeito quando as células T foram cocultivadas com células 293T-OKT3 que não expressaram VISTA.

[373] Este experimento foi conduzido adicionando anticorpos VISTA às células T CD4+ cocultivadas com células 293T modificadas para expressarem VISTA humano e um fragmento variável de cadeia única do anticorpo agonista de receptor de células T OKT3 (293T-OKT3-VISTA).

EXEMPLO 24 VISTA SUPRIME A SINALIZAÇÃO DE NF-KB MEDIADA POR RECEPTOR DE CÉLULAS T

[374] Este Exemplo foi conduzido para avaliar ainda mais os efeitos do pH na função VISTA, e mostra que VISTA suprimiu a sinalização de NF-kB mediada pelo receptor de células T de maneira mais potente em pH ácido do que em pH neutro (Figura 23A). A supressão máxima foi alcançada abaixo de pH 6,5, semelhante à supressão obtica pela ligaçao VISTA:células T (Figura 23A e Figura 4A).

[375] A sinalização de NF-kB foi medida usando células T Jurkat repórteres de NFkB, essencialmente como descrito nos Exemplos 5 e 13. As células Jurkat foram projetadas para expressar luciferase sob o controle de um promotor induzível por NF-kB. Estas células Jurkat NFkB-luciferase foram cocultivadas com células 293T-OKT3-VISTA não irradiadas a uma razão de 4:1 em HBSS (ThermoFisher) acidificado a vários pH com MES e anticorpos humanos anti-VISTA humanos por 4 horas. A ativação de células Jurkat foi medida por ensaio de substrato de luciferase (Promega).

[376] A supressão mediada por VISTA foi mais potente em pH ácido, embora um nível modesto de atividade foi mantido em pH 7,0 e superior. Da mesma forma, VISTA recombinante suprimiu a fosforilação de NFkB por células T em pH ácido mais do que em pH 7,4 (Fig. 23B). Estes resultados indicam que VISTA suprime células T preferencialmente em pH ácido e que esta atividade é revertida por anticorpos que bloqueiam a ligação de células T em pH ácido.

[377] Assim, esses dados sugerem que o bloqueio da interface receptor-ligante seletivo em pH ácido do VISTA pode reverter a imunossupressão.

EXEMPLO 25 ESPECIFICIDADE DE LIGAÇÃO DE VISTA:PSGL-1 É DETERMINADA POR RESÍDUOS

DE HISTIDINA E SULFOTIROSINA

[378] Para caracterizar a especificidade de ligação do PSGL-1, além daquela fornecida por sialil lewis X (descrito no Exemplo 19), examinamos as modificações pós-tradução da sulfatação da tirosina que contribuem para a ligação da P-selectina. Para testar o papel de sulfatação da tirosina, glicopeptídeo PSGL-1 foram fracionados em picos ricos em sulfotirosina (> 90%) e pobres em sulfotirosina (<1%) por cromatografia líquida de troca aniônica. Nem VISTA nem P-selectina se ligam de forma detectável ao PSGL-1 pobre em sulfotirosina (Fig. 2 5B). VISTA também não foi capaz de ligar-se aos glicopeptídeos PSGL-1 nos quais as tirosinas foram substituídas por alaninas (não mostrado nas figuras). Estes resultados indicam que os resíduos de sulfotirosina são mediadores chave da ligação de PSGL-1 ao VISTA.

[379] Nós hipotetizamos que a especificidade de ligação VISTA é mediada pelo mesmo resíduos de histidina encontrados dentro do epítopo do anticorpo que bloqueia VISTA: H153, H154, H155 (vide o Exemplo 20). A substituição destes resíduos de histidina por alanina não carregada ou ácido aspártico carregado negativamente reduziu significativamente a ligação do VISTA às células PSGL-1 e CHO-PSGL-1 recombinantes (Figs. 25C-D). As proteínas VISTA-Fc com resíduos H153, H154 e H155 mutados para alanina, ácido aspártico ou arginina foram produzidas por transfecção transitória de células Expi293. Essas mutantes também foram incapazes de suprimir funcionalmente as células T (não mostrado nas figuras). Em contraste, a substituição com resíduos de arginina carregados positivamente preservou a ligação e função de VISTA (Fig. 25C-D). Os anticorpos bloqueadores VISTA.4 e P1-068767 ligaram-se bem ao VISTA mutante (alanina e arginina), mas fracamente ao VISTA mutante de ácido aspártico (não mostrado). O anticorpo não bloqueador VISTA.5 ligou-se comparativamente às proteínas VISTA tipo selvagem e mutantes (não mostrado).

[380] Em seguida, utilizamos as estruturas resolvidas de PSGL-1 ligada à P-selectina e VISTA ligado ao Fab P1-068767 (Fig. 18) para desenvolver um modelo computacional do glicopeptídeo PSGL-1 de 19-mer acoplado ao VISTA (Fig. 25E). Neste modelo, os resíduos de tirosina Y46 e Y48 do PSGL-1 fazem interações iônicas com os resíduos de histidina H153 e H154 do VISTA (distâncias de 2,5 - 3,0 Å). A Y51 do PSGL-1 é mais distante do VISTA (~ 4,5 Å), mas pode interagir significativamente com a H100 do VISTA. O E56 do PSGL-1 também forma interações iônicas com as histidinas H98 e H100 do VISTA. O grupo hidroxila de T57 PSGL-1, que pode ser decorado com sialil lewis X, aponta para longe de VISTA, consistente com a influência desprezível de sialil lewis X na ligação entre VISTA:PSGL-1. Em conjunto, estes dados e modelagem sugerem que a ligação de VISTA ao PSGL-1 em pH ácido é dirigida principalmente pelos resíduos de histidina H153, H154 e H155 do VISTA, e pelos resíduos de tirosina sulfatada Y46 e Y48 do PSGL-1.

TABELA DE SEQUÊNCIAS

[381] A tabela seguinte é uma tabela de algumas sequências referidas nesse pedido. Na SEQ ID NO: 2, a posição de aminoácido 187 pode ser um D ou um E.

[382] Nas sequências de anticorpo abaixo, as sequências de

CDR1, CDR2 e CDR3 da VH estão localizadas nas posições de aminoácidos compreendendo os aminoácidos 26-35, 50-66 e 99-110, respectivamente, e as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 da VL estão localizadas nas posições de aminoácidos compreendendo os aminoácidos 24- 35, 51-57 e 90-98, respectivamente. A CDR1 de VH é numerada de acordo com AbM (AA 26-35; Abhinandan e Martin (2008) Mol. Immunol. 45: 3832- 3839; Swindells et al.

(2017) J. Mol. Biol. 429: 356-364) e todas as outras CDRs (CDR2 de VH, CDR3 de VH, CDR1-3 de VL) são numeradas de acordo com Kabat. As sequências de CDR de espécies de anticorpos particulares estão em negrito e sublinhadas abaixo de suas sequências VH e VL.

SEQ Nome Sequência

ID

NO 1 hVISTA (com MGVPTALEAG SWRWGSLLFA LFLAASLGPV sequência líder) AAFKVATPYS LYVCPEGQNV TLTCRLLGPV

DKGHDVTFYK TWYRSSRGEV QTCSERRPIR NLTFQDLHLH HGGHQAANTS HDLAQRHGLE SASDHHGNFS ITMRNLTLLD SGLYCCLVVE IRHHHSEHRV HGAMELQVQT GKDAPSNCVV YPSSSQDSEN ITAAALATGA CIVGILCLPL ILLLVYKQRQ AASNRRAQEL VRMDSNIQGI ENPGFEASPP AQGIPEAKVR HPLSYVAQRQ PSESGRHLLS EPSTPLSPPG PGDVFFPSLD

PVPDSPNFEV I 2 hVISTA (sem FKVATPYSLY VCPEGQNVTL TCRLLGPVDK sequência líder) GHDVTFYKTW YRSSRGEVQT CSERRPIRNL

TFQDLHLHHG GHQAANTSHD LAQRHGLESA SDHHGNFSIT MRNLTLLDSG LYCCLVVEIR

SEQ Nome Sequência

ID NO HHHSEHRVHG AMELQVQTGK DAPSNCVVYP SSSQ[D/E]SENIT AAALATGACI VGILCLPLIL LLVYKQRQAA SNRRAQELVR MDSNIQGIEN PGFEASPPAQ GIPEAKVRHP LSYVAQRQPS ESGRHLLSEP STPLSPPGPG DVFFPSLDPV PDSPNFEVI MPLQLLLLLI LLGPGNSLQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME

IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE PSGL-1 humano

AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE isoforma 2

AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME 3 precursora, com

AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE peptídeo sinal

AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSVNYPVG APDHISVKQC LLAILILALV ATIFFVCTVV LAVRLSRKGH MYPVRNYSPT EMVCISSLLP DGGEGPSATA NGGLSKAKSP GLTPEPREDR EGDDLTLHSF LP

LQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR PSGL-1 humano RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT 4 isoforma 2, sem PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT peptídeo sinal ELTTELANMG NLSTDSAAME

IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE

SEQ Nome Sequência

ID NO AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS VTHKGIPMAA SNLSVNYPVG APDHISVKQC LLAILILALV ATIFFVCTVV LAVRLSRKGH MYPVRNYSPT EMVCISSLLP DGGEGPSATA NGGLSKAKSP GLTPEPREDR EGDDLTLHSF LP MPLQLLLLLI LLGPGNSLQL WDTWADEAEK

ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP PSGL-1 humano EMLRNSTDTT PLTGPGTPES TTVEPAARRS isoforma 2 ECD, TGLDAGGAVT ELTTELANMG NLSTDSAAME 5 com peptídeo sinal IQTTQPAATE AQTTQPVPTE AQTTPLAATE

AQTTRLTATE AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQT LQL WDTWADEAEK ALGPLLARDR RQATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT

PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT PSGL-1 humano

ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE 6 isoforma 2 ECD,

AQTTQPVPTE AQTTPLAATE AQTTRLTATE sem peptídeo sinal

AQTTPLAATE AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQT

SEQ Nome Sequência

ID NO

QATEYEYLD YDFLPETEPP EMLRNSTDTT PSGL-1 humano

PLTGPGTPES TTVEPAARRS TGLDAGGAVT ECD (posições N-

ELTTELANMG NLSTDSAAME IQTTQPAATE terminais 42 a 295

AQTTPLAATE AQTTRLTATE AQTTPLAATE de um PSGL-1 7 AQTTPPAATE AQTTQPTGLE AQTTAPAAME humano de

AQTTAPAAME AQTTPPAAME AQTTQTTAME comprimento total

AQTTAPEATE AQTTQPTATE AQTTPLAAME nº de acesso:

ALSTEPSATE ALSMEPTTKR GLFIPFSVSS AAC50061)

VTHKGIPMAA SNLSV MAVGASGLEG DKMAGAMPLQ LLLLLILLGP GNSLQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT

ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT HumPSGL-1

QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT isoforma 1

PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT precursora, com 8 APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT peptídeo sinal

QTTAMEAQTT APEATEAQTT QPTATEAQTT NP_001193538

PLAAMEALST EPSATEALSM EPTTKRGLFI PFSVSSVTHK GIPMAASNLS VNYPVGAPDH ISVKQCLLAI LILALVATIF FVCTVVLAVR LSRKGHMYPV RNYSPTEMVC ISSLLPDGGE GPSATANGGL SKAKSPGLTP EPREDREGDD

LTLHSFLP 9 PSGL-1 humano, LQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT

SEQ Nome Sequência

ID

NO sem peptídeo sinal EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG

PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QTTAMEAQTT APEATEAQTT QPTATEAQTT PLAAMEALST EPSATEALSM EPTTKRGLFI PFSVSSVTHK GIPMAASNLS VNYPVGAPDH ISVKQCLLAI LILALVATIF FVCTVVLAVR LSRKGHMYPV RNYSPTEMVC ISSLLPDGGE GPSATANGGL SKAKSPGLTP EPREDREGDD LTLHSFLP MAVGASGLEG DKMAGAMPLQ LLLLLILLGP GNSLQLWDTW ADEAEKALGP LLARDRRQAT

EYEYLDYDFL PETEPPEMLR NSTDTTPLTG PSGL-1 humano

PGTPESTTVE PAARRSTGLD AGGAVTELTT 10 ECD, com

ELANMGNLST DSAAMEIQTT QPAATEAQTT peptídeo sinal

QPVPTEAQTT PLAATEAQTT RLTATEAQTT PLAATEAQTT PPAATEAQTT QPTGLEAQTT

APAAMEAQTT APAAMEAQTT PPAAMEAQTT QT 11 VH do P1-069059 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 12 VL do P1-069059 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 13 HC do P1-069059 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 14 LC do P1-069059 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 15 VH do P1-069061 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 16 VL do P1-069061 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 17 HC do P1-069061 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 18 LC do P1-069061 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID NO TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 19 VH do P1-069063 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDADDEWGQGTMVTVSS 20 VL do P1-069063 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 21 HC do P1-069063 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDADDEWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 22 LC do P1-069063 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 23 VH do P1-069065 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDDIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 24 VL do P1-069065 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 25 HC do P1-069065 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDDIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

ID NO ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 26 LC do P1-069065 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 27 VH do P1-069067 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDADDEWGQGTMVTVSS 28 VL do P1-069067 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 29 HC do P1-069067 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDADDEWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 30 LC do P1-069067 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 31 VH do P1-069069 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDADDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 32 VL do P1-069069 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 33 HC do P1-069069 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDADDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 34 LC do P1-069069 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 35 VH do P1-069071 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSADIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SEGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 36 VL do P1-069071 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 37 HC do P1-069071 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSADIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SEGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 38 LC do P1-069071 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

SFNRGEC 39 VH do P1-069073 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 40 VL do P1-069073 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 41 HC do P1-069073 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 42 LC do P1-069073 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 43 VH do P1-069075 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWDSAEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 44 VL do P1-069075 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 45 HC do P1-069075 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWDSAEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 46 LC do P1-069075 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 47 VH do P1-069077 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 48 VL do P1-069077 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 49 HC do P1-069077 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 50 LC do P1-069077 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 51 VH do P1-068761 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 52 VL do P1-068761 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 53 HC do P1-068761 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 54 LC do P1-068761 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 55 VH do P1-068767 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 56 VL do P1-068767 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 57 HC do P1-068767 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 58 LC do P1-068767 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

SFNRGEC 59 VH do P1-068773 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSDNIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 60 VL do P1-068773 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 61 HC do P1-068773 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSDNIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 62 LC do P1-068773 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 63 VH do P1-068765 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTDEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 64 VL do P1-068765 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 65 HC do P1-068765 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTDEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 66 LC do P1-068765 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 67 VH do P1-061029 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 68 VL do P1-061029 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 69 HC do P1-061029 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 70 LC do P1-061029 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 71 VH do P1-068757 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 72 VL do P1-068757 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 73 HC do P1-068757 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 74 LC do P1-068757 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 75 VH do P1-068771 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSHEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 76 VL do P1-068771 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 77 HC do P1-068771 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSHEIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 78 LC do P1-068771 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

SFNRGEC 79 VH do P1-068775 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSEEIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 80 VL do P1-068775 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 81 HC do P1-068775 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SHGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 82 LC do P1-068775 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 83 VH do P1-068769 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 84 VL do P1-068769 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 85 HC do P1-068769 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSDHIGYADSVKGR

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 86 LC do P1-068769 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 87 VH do P1-068759 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 88 VL do P1-068759 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 89 HC do P1-068759 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 90 LC do P1-068759 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 91 VH do P1-068763 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 92 VL do P1-068763 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 93 HC do P1-068763 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

QKSLSLSPG 94 LC do P1-068763 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 95 VH do P1-061015 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA

MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS

GFYSSYYFDYWGQGTLVTVSS 96 VL do P1-061015 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 97 HC do P1-061015 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYYADSVKG

RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS GFYSSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 98 LC do P1-061015 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID NO TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK LEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 99 VH do P1-068748 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHHA

MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNDDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS

GFYDSYYFDYWGQGTLVTVSS 100 VL do P1-068748 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 101 HC do P1-068748 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHHA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNDDYADSVKG

RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS GFYDSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 102 LC do P1-068748 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK LEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 103 VH do P1-068744 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA

MHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD

SGFYESYYFDEWGQGTLVTVSS 104 VL do P1-068744 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 105 HC do P1-068744 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAHIWYDGSNKYEADSVK

GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD SGFYESYYFDEWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 106 LC do P1-068744 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 107 VH do P1-068736 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA

MHWVRQAPGKGLEWVAIDWYDGSNKDYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD

SGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSS 108 VL do P1-068736 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 109 HC do P1-068736 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYA

SEQ Nome Sequência

ID

NO IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAIDWYDGSNKDYADSVK

GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD SGFYDSYYFDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 110 LC do P1-068736 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 111 VH do P1-068752 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA

MHWVRQAPGKGLEWVAEIWYDGSNKDYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD SGFYDSYYFDEWGQGTLVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 112 VL do P1-068752 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 113 HC do P1-068752 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAEIWYDGSNKDYADSVK

GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD SGFYDSYYFDEWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 114 LC do P1-068752 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK LEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 115 VH do P1-068740 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA

MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS

GFYDSYYFDDWGQGTLVTVSS 116 VL do P1-068740 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 117 HC do P1-068740 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSVKG

RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS GFYDSYYFDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 118 LC do P1-068740 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

SFNRGEC 119 VH do P1-068742 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA

MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS

GFYEDYYFDYWGQGTLVTVSS 120 VL do P1-068742 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 121 HC do P1-068742 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDKDYADSVKG

RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS GFYEDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 122 LC do P1-068742 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 123 VH do P1-068746 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA

MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNHHYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS

GFYDSYYFDYWGQGTLVTVSS 124 VL do P1-068746 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 125 HC do P1-068746 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYA IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNHHYADSVKG

RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDS GFYDSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI

SEQ Nome Sequência

ID NO CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 126 LC do P1-068746 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 127 VH do P1-068750 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD

MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD

EEFYSSYYFDYWGQGTLVTVSS 128 VL do P1-068750 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 129 HC do P1-068750 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD

SEQ Nome Sequência

ID

NO IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSVK

GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD EEFYSSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 130 LC do P1-068750 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SFNRGEC 131 VH do P1-068738 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAH

HWVRQAPGKGLEWVAIIWDDGSNHYYADSVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGF YEDYYFDYWGQGTLVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 132 VL do P1-068738 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 133 HC do P1-068738 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSEYAH IgG1.3 HWVRQAPGKGLEWVAIIWDDGSNHYYADSVKGR

FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGF YEDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAE GAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK

SLSLSPG 134 LC do P1-068738 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 135 VH do P1-068754 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD

MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSVK GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD

SGFHSDYYFDYWGQGTLVTVSS 136 VL do P1-068754 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG TDFTLTISSLEPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTK

LEIK 137 HC do P1-068754 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYD IgG1.3 MHWVRQAPGKGLEWVAEIWDDGSNKYYADSVK

GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD SGFHSDYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 138 LC do P1-068754 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA

WYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

SFNRGEC 139 VH do P1-069293 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM (P1-068761.IgG1f) HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 140 VL do P1-069293 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068761.IgG1f) WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 141 P1-069293 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM (P1-068761.IgG1f) HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 142 LC do P1-069293 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068761.IgG1f) WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 143 VH do P1-069298 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1-068767.IgG1f) HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 144 VL do P1-069298 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068767.IgG1f) WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 145 P1-069298 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1-068767.IgG1f) HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

SEQ Nome Sequência

ID NO ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 146 LC do P1-069298 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068767.IgG1f) WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SFNRGEC 147 VH do P1-069302 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029.IgG1f) HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 148 VL do P1-069302 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029.IgG1f) WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 149 P1-069302 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO (P1-061029.IgG1f) HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 150 LC do P1-069302 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029.IgG1f) WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SFNRGEC 151 VH do P1-069312 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM (P1-068761.IgG1f HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR afucosilado) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 152 VL do P1-069312 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068761.IgG1f WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG afucosilado) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 153 P1-069312 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM (P1-068761.IgG1f HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR afucosilado) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 154 LC do P1-069312 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068761.IgG1f WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG afucosilado) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 155 VH do P1-069309 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1-068767.IgG1f HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR afucosilado) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 156 VL do P1-069309 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068767.IgG1f WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG afucosilado) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 157 P1-069309 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1-068767.IgG1f HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR afucosilado) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 158 LC do P1-069309 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-068767.IgG1f WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO afucosilado) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 159 VH do P1-069307 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029.IgG1f HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR afucosilado) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 160 VL do P1-069307 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029.IgG1f WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG afucosilado) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 161 P1-069307 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029.IgG1f HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR afucosilado) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 162 LC do P1-069307 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029.IgG1f WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG afucosilado) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 163 IgG1.3 (ou ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE IgG1.3f) região PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV constante de TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC cadeia pesada DKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISR (L234A, L235E, TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT G237A) KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV

SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS

VMHEALHNHYTQKSLSLSPG 164 Região constante RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR de cadeia leve EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL exemplar SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN

RGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 165 VISTA humano veja a Fig. 1B NP_071436.1 (Fig. 1B) 166 VISTA de veja a Fig. 1B cinomolgo XP_005565644.1 (Fig. 1B) 167 VISTA de veja a Fig. 1B camundongo NP_083008.1 (Fig. 1B) 168 chip oligo HDR3 XPGYSGGWIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 169 chip oligo HDR3 XXGYSGGWIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 170 chip oligo HDR3 XPXYSGGWIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 171 chip oligo HDR3 XPGXSGGWIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 172 chip oligo HDR3 XPGYXGGWIDAFDV

SEQ Nome Sequência

ID

NO de P1-061029 (Fig. 7A) 173 chip oligo HDR3 XPGYSXGWIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 174 chip oligo HDR3 XPGYSGXWIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 175 chip oligo HDR3 XPGYSGGXIDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 176 chip oligo HDR3 XPGYSGGWXDAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 177 chip oligo HDR3 XPGYSGGWIXAFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 178 chip oligo HDR3 XPGYSGGWIDXFDV de P1-061029 (Fig. 7A) 179 chip oligo HDR3 XPGYSGGWIDAXDV de P1-061029 (Fig. 7A) 180 chip oligo HDR3 XPGYSGGWIDAFXV

SEQ Nome Sequência

ID

NO de P1-061029 (Fig. 7A) 181 chip oligo HDR3 XPGYSGGWIDAFDX de P1-061029 (Fig. 7A) 182 IgG1f (alótipo f tipo ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE selvagem humana) PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV região constante TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC de cadeia pesada DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR

TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS

VMHEALHNHYTQKSLSLSPG 183 Região constante ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE de cadeia pesada PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV de IgG1.1f TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC (L234A, L235E, DKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISR G237A, A330S, TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT P331S) KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV

SNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCS

SEQ Nome Sequência

ID NO

VMHEALHNHYTQKSLSLSPG 184 Região constante ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE de cadeia pesada PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV de IgG1fa.P238K TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC (ou IgG1.P238K) DKTHTCPPCPAPELLGGKSVFLFPPKPKDTLMISR

TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSPG 185 P1-070864 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM P1-068761_E30D HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

VH FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 186 P1-070864 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA P1-068761_E30D WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

VL TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 187 P1-070864 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM P1-068761_E30D HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

SEQ Nome Sequência

ID NO TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 188 P1-070864 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 189 P1-070866 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E32Y FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 190 VL do P1-070866 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA P1-068761_E32Y WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK VDIK

SEQ Nome Sequência

ID

NO 191 P1-070866 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1-068761_E32Y HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 192 P1-070866 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 193 P1-070868 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E55A FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 194 P1-070868 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E55A TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 195 P1-070868 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1-068761_E55A HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

QKSLSLSPG 196 P1-070868 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E55A TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SEQ Nome Sequência

ID

NO 197 P1-070870 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E56N FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 198 P1-070870 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E56N TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 199 P1-070870 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1-068761_E56N HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

QKSLSLSPG 200 P1-070870 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068761_E56N TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 201 P1-070872 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_H100G FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 202 P1-070872 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_H100G TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 203 P1-070872 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_H100G FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY IgG1.3 SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA

PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 204 P1-070872 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_H100G TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 205 P1-070874 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E100fF FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 206 P1-070874 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E100fF TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 207 P1-070874 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E100fF FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY IgG1.3 SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA

PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 208 P1-070874 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E100fF TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 209 P1-070876 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E30D_E3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 2Y SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 210 P1-070876 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA Vl de P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E3 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 2Y VDIK 211 P1-070876 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E30D_E3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 2Y SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG P1-070876 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA 212 LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E3 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 2Y VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 213 P1-070878 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 068761_E55A_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 6N SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 214 P1-070878 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E55A_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 6N VDIK 215 P1-070878 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 068761_E55A_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 6N SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 216 P1-070878 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E55A_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 6N VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 217 P1-070880 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_H100G_E FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 100fF SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 218 P1-070880 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_H100G_E TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 100fF VDIK 219 P1-070880 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_H100G_E FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 100fF SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 220 P1-070880 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068761_H100G_E TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 100fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 221 P1-070882 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM Vh de P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E32Y_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 222 P1-070882 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIK 223 P1-070882 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E32Y_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 224 P1-070882 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 225 P1-070884 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E32Y_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 6N SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 226 P1-070884 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 6N VDIK 227 P1-070884 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E32Y_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 6N SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 228 P1-070884 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 6N VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 229 P1-070886 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E32Y_H1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00G SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 230 P1-070886 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_H1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00G VDIK 231 P1-070886 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E32Y_H1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00G SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 232 P1-070886 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_H1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00G VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 233 P1-070888 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E32Y_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 234 P1-070888 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 235 P1-070888 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E32Y_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 236 P1-070888 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E32Y_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 237 P1-070890 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E30D_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 238 P1-070890 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIK 239 P1-070890 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E30D_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 240 P1-070890 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068761_E30D_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 241 P1-070892 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E30D_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 6N SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 242 P1-070892 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 6N VDIK 243 P1-070892 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E30D_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 6N SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 244 P1-070892 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 6N VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 245 P1-070894 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E30D_H1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00G SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 246 P1-070894 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_H1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00G VDIK 247 P1-070894 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E30D_H1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00G SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 248 P1-070894 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_H1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00G VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 249 P1-070896 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E30D_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 250 P1-070896 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 251 P1-070896 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR 068761_E30D_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 252 P1-070896 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E30D_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 253 P1-070898 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E55A_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 254 P1-070898 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E55A_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 255 P1-070898 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E55A_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 256 P1-070898 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E55A_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 257 P1-070900 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E56N_H1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00G SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 258 P1-070900 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E56N_H1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00G VDIK 259 P1-070900 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E56N_H1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00G SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 260 P1-070900 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068761_E56N_H1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00G VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 261 P1-070902 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E56N_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 262 P1-070902 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E56N_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 263 P1-070902 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068761_E56N_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SHGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 264 P1-070902 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068761_E56N_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 265 P1-070904 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 266 P1-070904 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 267 P1-070904 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM P1-068767_E30D HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 268 P1-070904 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 269 P1-070906 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_D52N FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 270 P1-070906 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 271 P1-070906 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO P1-068767_D52N HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 272 P1-070906 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 273 P1-070908 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E55A FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 274 P1-070908 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E55A TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 275 P1-070908 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1-068767_E55A HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

QKSLSLSPG 276 P1-070908 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E55A TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SEQ Nome Sequência

ID

NO 277 P1-070910 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E100fF FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS 278 P1-070910 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E100fF TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 279 P1-070910 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E100fF FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY IgG1.3 SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA

PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 280 P1-070910 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068767_E100fF TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 281 P1-070912 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_D102V FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 282 P1-070912 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D102V TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 283 P1-070912 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1-068767_D102V HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR IgG1.3 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 284 P1-070912 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D102V TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 285 P1-070914 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D_D5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 2N SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 286 P1-070914 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_D5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 2N VDIK 287 P1-070914 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D_D5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 2N SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 288 P1-070914 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_D5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 2N VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 289 P1-070916 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 068767_D52N_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 290 P1-070916 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIK 291 P1-070916 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 068767_D52N_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 292 P1-070916 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 293 P1-070918 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E55A_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 294 P1-070918 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E55A_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 295 P1-070918 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E55A_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 296 P1-070918 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E55A_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 297 P1-070920 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E100fF_D FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 102V SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 298 P1-070920 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E100fF_D TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 102V VDIK 299 P1-070920 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E100fF_D FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 102V SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 300 P1-070920 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068767_E100fF_D TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 102V VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 301 P1-070922 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E30D_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 302 P1-070922 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIK 303 P1-070922 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E30D_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 5A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 304 P1-070922 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_E5 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 5A VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 305 P1-070924 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS 306 P1-070924 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 307 P1-070924 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

SEQ Nome Sequência

QKSLSLSPG 308 P1-070924 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 309 P1-070926 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D_D1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 02V SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 310 P1-070926 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_D1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 02V VDIK 311 P1-070926 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM

SEQ Nome Sequência

ID

NO P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR 068767_E30D_D1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 02V SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 312 P1-070926 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E30D_D1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 02V VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 313 P1-070928 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_D52N_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 314 P1-070928 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIK 315 P1-070928 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_D52N_E1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fF SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 316 P1-070928 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N_E1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 00fF VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 317 P1-070930 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_D52N_D1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 02V SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 318 P1-070930 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_D52N_D1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 02V VDIK 319 P1-070930 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_D52N_D1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 02V SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

QKSLSLSPG 320 P1-070930 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 068767_D52N_D1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 02V VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 321 P1-070932 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM VH do P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E55A_D1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 02V SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 322 P1-070932 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA VL do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E55A_D1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 02V VDIK 323 P1-070932 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E55A_D1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 02V SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA IgG1.3 PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL

SEQ Nome Sequência

ID NO GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 324 P1-070932 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA LC do P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 068767_E55A_D1 TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 02V VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 325 hVISTA-ECD AFKVATPYSL YVCPEGQNVT LTCRLLGPVD 6-His tag KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN

LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSNCVVY

PSSSQESENI TAHHHHHHH 326 VISTA-ECD de AFKVATLYSL YVCPEGQNVT LTCRVFGPVD cinomolgo KGHDVTFYKT WYRSSRGEVQ TCSERRPIRN 6-His tag LTFQDLHLHH GGHQAANTSH DLAQRHGLES

ASDHHGNFSI TMRNLTLLDS GLYCCLVVEI RHHHSEHRVH GAMELQVQTG KDAPSSCVAY

PSSSQESENI TAHHHHHHH 327 VH do P1-069059, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGACCATATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 328 VL do P1-069059, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 329 VH do P1-069061, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA

SEQ Nome Sequência

ID NO GTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 330 VL do P1-069061, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 331 VH do P1-069063, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA

SEQ Nome Sequência

ID NO CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG ACGATGAATGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 332 VL do P1-069063, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 333 VH do P1-069065, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGACGACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

SEQ Nome Sequência

ID NO

GTCTCTTCA 334 VL do P1-069065, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 335 VH do P1-069067, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG ACGATGAATGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 336 VL do P1-069067, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 337 VH do P1-069069, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG ACGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 338 VL do P1-069069, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG

SEQ Nome Sequência

ID NO CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 339 VH do P1-069071, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGAAGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 340 VL do P1-069071, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC

SEQ Nome Sequência

ID NO AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 341 VH do P1-069073, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 342 VL do P1-069073, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 343 VH do P1-069075, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGGACA GTGCTGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 344 VL do P1-069075, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 345 VH do P1-069077, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAAGATGAAGC

SEQ Nome Sequência

ID NO CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGACGAAATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 346 VL do P1-069077, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 347 VH do P1-068761, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 348 VL do P1-068761, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 349 VH do P1-068767, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG

SEQ Nome Sequência

ID NO TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 350 VL do P1-068767, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 351 VH do P1-068773, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGATAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 352 VL do P1-068773, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 353 VH do P1-068765, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCGATGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 354 VL do P1-068765, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

SEQ Nome Sequência

ID NO CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 355 VH do P1-061029, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 356 VL do P1-061029, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC

SEQ Nome Sequência

ID NO AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 357 VH do P1-068757, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 358 VL do P1-068757, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 359 VH do P1-068771, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTCATGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 360 VL do P1-068771, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 361 VH do P1-068775, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 362 VL do P1-068775, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 363 VH do P1-068769, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGATCACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 364 VL do P1-068769, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 365 VH do P1-068759, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA

SEQ Nome Sequência

ID NO ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 366 VL do P1-068759, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 367 VH do P1-068763, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 368 VL do P1-068763, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 369 VH do P1-061015, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGAT GGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACTCCTCGTACTACTTTGAC TACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC CTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 370 VL do P1-061015, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGC TCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAG GGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCA GTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCA GCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATT ACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTT

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 371 VH do P1-068748, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTCACCATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGAT GGAAGTAATGACGACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACTACTTTGAC TACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC

CTCA 372 VL do P1-068748, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

SEQ Nome Sequência

ID NO CTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGC TCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAG GGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCA GTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCA GCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATT ACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTT

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 373 VH do P1-068744, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCACATATATGGTATGAT GGAAGTAATAAATACGAGGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGAATCGTACTACTTTGAC GAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC

CTCA 374 VL do P1-068744, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA CTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGC TCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAG GGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGCGGCA

SEQ Nome Sequência

ID NO GTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCA GCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATT ACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCGTACACTTT

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 375 VH do P1-068736, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTGATTGGTATGAT GGAAGTAATAAAGACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACTACTTTGAC GACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC

CTCA 376 VL do P1-068736, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 377 VH do P1-068752, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAGAGATATGGTATGA TGGAAGTAATAAAGACTATGCAGACTCCGTGAA GGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAG AGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGA GAGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACTACTTTGA CGAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCT

CCTCA 378 VL do P1-068752, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 379 VH do P1-068740, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGAT GGAAGTGATAAAGACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACTACTTTGAC GACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC

CTCA 380 VL do P1-068740, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 381 VH do P1-068742, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG

SEQ Nome Sequência

ID NO GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGAT GGAAGTGATAAAGACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGAAGATTACTACTTTGAC TACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC

CTCA 382 VL do P1-068742, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 383 VH do P1-068746, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATG CCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGAT GGAAGTAATCACCACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG

SEQ Nome Sequência

ID NO AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGACTCGTACTACTTTGAC TACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC

CTCA 384 VL do P1-068746, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 385 VH do P1-068750, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATG ACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAGAGATATGGGATGA TGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAA GGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAG AGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGA GAGATGAGGAATTTTACTCCTCGTACTACTTTGA

SEQ Nome Sequência

ID NO CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCT

CCTCA 386 VL do P1-068750, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 387 VH do P1-068738, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGAGTATG CCCATCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGGATGAT GGAAGTAATCACTACTATGCAGACTCCGTGAAG GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAG AACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGA GCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAG AGATAGTGGTTTTTACGAAGATTACTACTTTGAC TACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC CTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 388 VL do P1-068738, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 389 VH do P1-068754, CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGT

DNA GGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCT GTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATG ACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAG GGGCTGGAGTGGGTGGCAGAGATATGGGATGA TGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAA GGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAG AGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGA GAGATAGTGGTTTTCACTCCGATTACTACTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCT

CCTCA 390 VL do P1-068754, GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

SEQ Nome Sequência

TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA 391 VH do P1-070864, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 392 VL do P1-070864, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 393 VH do P1-070866, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 394 VL do P1-070866, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 395 VH do P1-070868, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 396 VL do P1-070868, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 397 VH do P1-070870, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 398 VL do P1-070870, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 399 VH do P1-070872, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 400 VL do P1-070872, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 401 VH do P1-070874, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA

SEQ Nome Sequência

ID NO ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 402 VL do P1-070874, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 403 VH do P1-070876, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 404 VL do P1-070876, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 405 VH do P1-070878, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 406 VL do P1-070878, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 407 VH do P1-070880, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 408 VL do P1-070880, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 409 VH do P1-070882, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 410 VL do P1-070882, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 411 VH do P1-070884, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 412 VL do P1-070884, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 413 VH do P1-070886, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 414 VL do P1-070886, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 415 VH do P1-070888, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 416 VL do P1-070888, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 417 VH do P1-070890, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 418 VL do P1-070890, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 419 VH do P1-070892, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA

SEQ Nome Sequência

ID NO ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 420 VL do P1-070892, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 421 VH do P1-070894, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 422 VL do P1-070894, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 423 VH do P1-070896, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 424 VL do P1-070896, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 425 VH do P1-070898, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 426 VL do P1-070898, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 427 VH do P1-070900, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 428 VL do P1-070900, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 429 VH do P1-070902, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 430 VL do P1-070902, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 431 VH do P1-070904, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 432 VL do P1-070904, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 433 VH do P1-070906, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 434 VL do P1-070906, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 435 VH do P1-070908, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 436 VL do P1-070908, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 437 VH do P1-070910, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA

SEQ Nome Sequência

ID NO ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 438 VL do P1-070910, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 439 VH do P1-070912, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 440 VL do P1-070912, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 441 VH do P1-070914, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 442 VL do P1-070914, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 443 VH do P1-070916, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 444 VL do P1-070916, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

DNA TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 445 VH do P1-070918, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 446 VL do P1-070918, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 447 VH do P1-070920, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 448 VL do P1-070920, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 449 VH do P1-070922, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 450 VL do P1-070922, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 451 VH do P1-070924, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

SEQ Nome Sequência

ID NO DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 452 VL do P1-070924, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 453 VH do P1-070926, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 454 VL do P1-070926, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 455 VH do P1-070928, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA

SEQ Nome Sequência

GTCTCTTCA 456 VL do P1-070928, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 457 VH do P1-070930, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG

SEQ Nome Sequência

ID NO AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 458 VL do P1-070930, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 459 VH do P1-070932, GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT

DNA GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AAGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 460 VL do P1-070932, GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 461 Região constante GCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCT de cadeia pesada GGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCA da IgG1.3, DNA CAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTAC

TTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCA GGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCT CAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCT TGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATC ACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGA GTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACAT GCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAAGGG GCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCC AAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAG GTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGA AGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGA

SEQ Nome Sequência

ID NO CGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGC CGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGT GTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGA CTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGT CTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAA AACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAG AACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGG GAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGAC CTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCG GAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTG GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAG CTCACCGTGGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGT CTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC

SEQ Nome Sequência

ID NO CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGA GCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGT ACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCAC GTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCG TGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATA GCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCAT GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAG

CCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 462 Região constante CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTC de cadeia leve CCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACT exemplar, DNA GCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATC

CCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGAT AACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGT GTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTA CAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG

SEQ Nome Sequência

ID NO CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCG AAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTC

ACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 463 VH do P1-068761 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDEAM K16R T84A HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 464 VH do P1-068761 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDEAM K16R HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 465 VH do P1-068761 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM T84A HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 466 P1-068761 K16R GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATGAGGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAGAGATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCCATGGCTGGATTGACGCTGA AGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 467 VH do P1-061029 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM K16R T84A HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 468 VH do P1-061029 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM K16R HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 469 VH do P1-061029 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM T84A HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 470 VH do P1-061029 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT K16R T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTT TGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 471 VH do P1-068767 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM K16R T84A HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 472 VH do P1-068767 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM K16R HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 473 VH do P1-068767 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM T84A HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSENIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 474 VH do P1-068767 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT K16R T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA AGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 475 VH do P1-070868 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDEAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR 068761_E55A) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY K16R T84A SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 476 VH do P1-070868 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDEAM K16R HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 477 VH do P1-070868 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAM T84A HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSAEIGYADSVKGR

FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 478 VH do P1-070868 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT K16R T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA AGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 479 VH do P1-70906 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR 068767_D52N) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY K16R T84A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 480 P1-70906 K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 481 P1-70906 T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSENIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 482 P1-70906 K16R GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGAAAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA AGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 483 VH do P1-70908 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR 068767_E55A) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY K16R T84A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 484 P1-70908 K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 485 P1-70908 T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGIDWNSANIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 486 P1-70908 K16R GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTGATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA AGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 487 VH do P1-70916 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 068767_D52N_E5 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY 5A) K16R T84A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 488 P1-70916 K16R EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 489 P1-70916 T84A EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDYAM

HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 490 P1-70916 K16R GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT T84A, DNA GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG

TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGAGGATTATGC CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA AGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 491 P1-72000 (P1- EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM 061029_F100fE_V HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 102D) VH FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 492 P1-72000 (P1- EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA 061029_F100fE_V WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 102D) VL TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 493 HC do P1-72000 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE_V FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 102D) SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA

SEQ Nome Sequência

ID NO

QKSLSLSPG 494 LC do P1-72000 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 061029_F100fE_V TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK 102D) VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 495 VH do P1-72000 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1- GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG 061029_F100fE_V TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC 102D), DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AGGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 496 VL do P1-72000 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1- TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC 061029_F100fE_V TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA 102D), DNA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG

SEQ Nome Sequência

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 497 HC do P1-72000 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1- GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG 061029_F100fE_V TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC 102D, DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AGGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTC TTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC

SEQ Nome Sequência

ID NO GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGA GCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGT ACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCAC GTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCG TGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATA GCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCAT GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAG

CCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 498 LC do P1-72000 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1- TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC

SEQ Nome Sequência

ID

NO 061029_F100fE_V TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA 102D, DNA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG

CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTA CGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCT CTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAG AGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC CTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGA CTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAA

AGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 499 VH do P1-72000 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE_V FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY 102D) K16R T84A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 500 VH do P1-72000 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE_V FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SEQ Nome Sequência

ID

NO 102D) K16R SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 501 VH do P1-72000 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE_V FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY 102D) T84A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 502 VH do P1-72000 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1- GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG 061029_F100fE_V TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC 102D) K16R T84A, CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

DNA GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA GGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 503 VH do P1-72002 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 504 VL do P1-72002 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 061029_F100fE) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SEQ Nome Sequência

ID NO

VDIK 505 HC do P1-72002 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 506 LC do P1-72002 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1- WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG 061029_F100fE) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 507 VH do P1-72002 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1- GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG

SEQ Nome Sequência

ID

NO 061029_F100fE), TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC

DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 508 VL do P1-72002 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1- TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC 061029_F100fE), TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

DNA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 509 HC do P1-72002 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1- GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG 061029_F100fE), TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC

DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA

SEQ Nome Sequência

ID NO GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTC TTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGA GCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGT ACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCAC GTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT

SEQ Nome Sequência

ID NO GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCG TGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATA GCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCAT GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAG

CCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 510 LC do P1-72002 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1- TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC 061029_F100fE), TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

DNA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTA CGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCT CTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAG

SEQ Nome Sequência

ID NO AGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC CTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGA CTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAA

AGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 511 VH do P1-72002 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY K16R T84A SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 512 VH do P1-72002 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY K16R SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 513 VH do P1-72002 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY T84A SGGWIDAEDDWGQGTMVTVSS 514 VH do P1-72002 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1- GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG 061029_F100fE) TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC K16R T84A, DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA

SEQ Nome Sequência

ID NO GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTGA GGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 515 VH do P1-72004 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_V102D) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS 516 VL do P1-72004 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029_ WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG V102D) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 517 HC do P1-72004 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR V102D) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY

SEQ Nome Sequência

ID NO RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 518 LC do P1-72004 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029_ WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG V102D) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 519 VH do P1-72004 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG V102D), DNA TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC

CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 520 VL do P1-72004 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1-061029_ TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC V102D), DNA TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 521 HC do P1-72004 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG V102D, DNA TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC

CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTC TTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT

SEQ Nome Sequência

ID NO GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGA GCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGT ACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCAC GTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCG TGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATA GCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCAT

SEQ Nome Sequência

ID NO GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAG

CCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 522 LC do P1-72004 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1-061029_ TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC V102D), DNA TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTA CGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCT CTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAG AGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC CTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGA CTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAA

AGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 523 VH do P1-72004 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR V102D) K16R FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SEQ Nome Sequência

ID

NO T84A SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS 524 VH do P1-72004 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR V102D) K16R FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS 525 VH do P1-72004 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDYAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR V102D) T84A FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDDWGQGTMVTVSS 526 VH do P1-72004 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG V102D) K16R TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATTATGC T84A, DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTT TGATGACTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 527 VH do P1-72006 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_Y32E) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SEQ Nome Sequência

ID NO

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 528 VL do P1-72006 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029_ WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG Y32E) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 529 HC do P1-72006 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 530 LC do P1-72006 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029_ WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG Y32E) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST

SEQ Nome Sequência

ID NO YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC 531 VH do P1-72006 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG Y32E), DNA TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC

CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 532 VL do P1-72006 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1-061029_ TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC Y32E), DNA TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA

SEQ Nome Sequência

ID

NO 533 HC do P1-72006 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG Y32E), DNA TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC

CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTT TTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC GTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTC TTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGA

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGT ACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCAC GTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCG TGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATA GCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCAT GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAG

CCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 534 LC do P1-72006 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1-061029_ TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC Y32E), DNA TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT

SEQ Nome Sequência

ID NO TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTA CGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCT CTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAG AGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC CTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGA CTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAA

AGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 535 VH do P1-72006 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E) K16R T84A FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 536 VH do P1-72006 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E) K16R FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS 537 VH do P1-72006 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E) T84A FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAFDVWGQGTMVTVSS

SEQ Nome Sequência

ID

NO 538 VH do P1-72006 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG Y32E) K16R T84A, TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC

DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

TGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGT TCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTTT TGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG

TCTCTTCA 539 VH do P1-72008 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1- HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR 061029_Y32E_F1 FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY 00fE) SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 540 VL do P1-72008 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029_ WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG Y32E_F100fE) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

VDIK 541 HC do P1-72008 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY

SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLA

SEQ Nome Sequência

ID NO PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT

QKSLSLSPG 542 LC do P1-72008 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLA (P1-061029_ WYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSG Y32E_F100fE) TDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGPGTK

SFNRGEC 543 VH do P1-72008 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG Y32E_F100fE), TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC

DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAA

SEQ Nome Sequência

ID NO CTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAG TTCCTGGGTATAGCGGTGGCTGGATTGACGCTG AGGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACC

GTCTCTTCA 544 VL do P1-72008 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1-061029_ TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC Y32E_F100fE), TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA 545 HC do P1-72008 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAAGTCCCTGAGACTCTCCTG Y32E_F100fE), TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC

SEQ Nome Sequência

ID NO GTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTC TTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAA GGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTC TACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAAC GTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT CACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGC CGAAGGGGCCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCC AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGA GCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGT ACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCAC GTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGC CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGC CTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGC GACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCA

SEQ Nome Sequência

ID NO GCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCG TGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATA GCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCAT GAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAG

CCTCTCCCTGTCCCCGGGTTGA 546 LC do P1-72008 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTG (P1-061029_ TCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC Y32E_F100fE), TGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTA

DNA CTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGG CTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCA GGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGC AGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATC AGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTAT TACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCATTCACTT TCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTA CGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCT CTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAG AGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACG CCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGC CTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGA CTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGT CACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAA

SEQ Nome Sequência

ID NO

AGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 547 VH do P1-72008 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY K16R T84A SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 548 VH do P1-72008 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKVPGY K16R SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 549 VH do P1-72008 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLDDEAM (P1-061029_ HWVRQAPGKGLEWVSGINWNSANIGYADSVKGR Y32E_F100fE) FTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKVPGY T84A SGGWIDAEDVWGQGTMVTVSS 550 VH do P1-72008 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTT (P1-061029_ GGTACAGCCTGGCAgGTCCCTGAGACTCTCCTG Y32E_F100fE) TGCAGCCTCTGGATTCACCCTTGATGATGAGGC K16R T84A, DNA CATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGG

GCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAATTGGAACA GTGCTAACATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGG

GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGA ACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAgC

SEQ Nome Sequência

ID NO

TCTCTTCA 551 VISTA.4 MEFGLSWVFLVAIIKGVQCQVQLVESGGGLVKPG 41F11 GSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVS Com sequência YISNSGSPIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMN sinal, que está SLRAEDTAVYYCARDLPGWYFDLWGRGTLVTVSS sublinhada 552 VISTA.4 VK1 MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPG 41F11 ERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD Com sequência ASNRATGIPARFSASGSGTDFTLTISSLEPEDFAVY sinal, que está YCQQRNNWPRTFGQGTKVEIK sublinhada 553 VISTA.4 VK2 MDMRVLAQLLGLLLLCFPGARCDIQMTQSPSSLS 41F11 ASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKS Com sequência LIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPE sinal, que está DFATYYCQQYNSYPRTFGQGTKVEIK sublinhada 554 VISTA.4 VK3 METPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPGTLSLSPG 41F11 ERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY Com sequência GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFA sinal, que está VYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK sublinhada 555 VISTA.4, DNA ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTTGTT 41F11 GCTATTATAAAAGGTGTCCAGTGTCAGGTGCAG Com sequência TTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCC

SEQ Nome Sequência

ID

NO sinal, que está TGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTC sublinhada TGGATTCACCTTCAGTGACTATTACATGAGCTG

GATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGT GGGTTTCATACATTAGTAATAGTGGTAGTCCCAT ATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCAC CATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTA TCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACAC GGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCTCCCGG GCTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACC

CTGGTCACTGTCTCCTCA 556 VISTA.4 VK1, ATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTG

DNA CTACTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATT Com sequência GTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTG sinal, que está TCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAG sublinhada GGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTG

GTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGC TCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTG GCATCCCAGCCAGGTTCAGTGCCAGTGGGTCT GGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTA GAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGC AGCGTAACAACTGGCCTCGGACGTTCGGCCAA

GGGACCAAGGTGGAAATCAAA 557 VISTA.4.A64G MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPG VK1 ERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD Com sequência ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAV

SEQ Nome Sequência

ID

NO sinal, que está YYCQQRNNWPRTFGQGTKVEIK sublinhada 558 VISTA.4.A64G LC MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVLTQSPATLSLSPG Com sequência ERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD sinal, que está ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAV sublinhada YYCQQRNNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFP

PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE

KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 559 VISTA.5 AVQLQESGPGLVRPSQSLSLTCTVTDYSITSDYA

WNWIRQFPGSKLEWLGFIGYSGNTNYNPSLESRI SITRHTSKNQFFLHLNSMTTEDTATYYCARSLYGG

SHWYFDVWGAGTTVTVSS 560 VISTA.5 VK1, VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRGSESVEYYGTIL

MQWYQQKPGQPPKLLIYGASNVESGVPARFSGS GSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPWTFG

GGTKLEIK 561 VISTA.5, DNA GCTGTGCAGCTTCAGGAGTCGGGACCTGGCCT

GGTGAGACCTTCTCAGTCTCTGTCCCTCACCTG CACTGTCACTGACTACTCAATCACCAGTGATTAT GCCTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAG CAAACTGGAGTGGCTGGGCTTCATAGGCTACAG TGGTAACACTAACTACAACCCATCTCTCGAAAGT CGAATCTCTATCACTCGACACACATCCAAGAAC

SEQ Nome Sequência

ID NO CAGTTCTTCCTGCACTTGAATTCTATGACTACTG AGGACACAGCCACATATTACTGTGCAAGATCCC TCTACGGTGGTAGTCACTGGTACTTCGATGTCT

GGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 562 VISTA.5 VK1, VL, GACATTGTGCTCACCCAATCTCCAGCTTCTTTG

DNA GCTGTGTCTCTAGGGCAGAGAGCCACCATCTCC TGCAGAGGCAGTGAAAGTGTTGAATATTATGGC ACAATTTTAATGCAGTGGTACCAACAGAAACCA GGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATGGTGCA TCCAACGTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTT AGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAGCCT CAACATCCATCCTGTGGAGGAGGATGATATTGC AATGTATTTCTGTCAGCAAAGTAGGAAGGTTCC GTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAA TCAAA

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. ANTICORPO (Ab) isolado, caracterizado por ligar-se especificamente ao hVISTA em condições ácidas.

2. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ligar-se especificamente ao hVISTA em condições ácidas, mas não liga-se significativamente em condições neutras ou fisiológicas.

3. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 2, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD que é pelo menos 10 vezes inferior do que a sua KD em condições neutras ou fisiológicas.

4. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD que é pelo menos 100 vezes inferior do que a sua KD em condições neutras ou fisiológicas.

5. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD que é pelo menos 1000 vezes inferior do que a sua KD em condições neutras ou fisiológicas.

6. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10- 5 M ou mais.

7. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10- 4 M ou mais.

8. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-3 M ou mais.

9. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-7 M ou menos.

10. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-8 M ou menos.

11. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-9 M ou menos.

12. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-7 ou menos e ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-4 ou mais.

13. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 12, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-7 ou menos e ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-5 ou mais.

14. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 13, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 5 vezes inferior do que a sua koff em condições neutras ou fisiológicas.

15. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 10 vezes inferior do que a sua koff em condições neutras ou fisiológicas.

16. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 15, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 50 vezes inferior do que a sua koff em condições neutras ou fisiológicas.

17. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 15, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff que é pelo menos 100 vezes inferior do que a sua koff em condições neutras ou fisiológicas.

18. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 7 x 10-3 s-1 ou menos.

19. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 18, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 5 x 10-3 s-1 ou menos.

20. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 19, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 3 x 10-3 s-1 ou menos.

21. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 20, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 10-3 s-1 ou menos.

22. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 21, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 7 x 10-4 s-1 ou menos.

23. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 22, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 5 x 10-4 s-1 ou menos.

24. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 23, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 3 x 10-4 s-1 ou menos.

25. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 24, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 10-4 s-1 ou menos.

26. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 25, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 7 x 10-5 s-1 ou menos.

27. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 26, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 5 x 10-5 s-1 ou menos.

28. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 21, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 3 x 10-5 s-1 ou menos.

29. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 28, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 10-5 s-1 ou menos.

30. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 29, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 10-3 s-1 ou mais.

31. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 30, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 3 x 10-3 s-1 ou mais.

32. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 31, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 5 x 10-3 s-1 ou mais.

33. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 32, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 7 x 10-3 s-1 ou mais.

34. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 33, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 10-2 s-1 ou mais.

35. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 34, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 3 x 10-2 s-1 ou mais.

36. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 35, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 5 x 10-2 s-1 ou mais.

37. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 36, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 7 x 10-2 s-1 ou mais.

38. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 37, caracterizado pela ligação do anticorpo ao hVISTA em condições neutras ou fisiológicas não ser detectável, por exemplo, por ressonância plasmônica de superfície (SPR).

39. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 38, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 5 x 10-3 s-1 ou menos e em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 7 x 10-3 s-1 ou mais.

40. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 39, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma koff de 10-4 s-1 ou menos e em condições neutras ou fisiológicas com uma koff de 10-2 s-1 ou mais.

41. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 40, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-8 M ou menos e uma koff de 5 x 10-3 s-1 ou menos, e em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-6 M ou mais e uma koff de 7 x 10-3 s-1 ou mais.

42. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 41, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-8 M ou menos e uma koff de 3 x 10-3 s-1 ou menos, e em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-6 M ou mais e uma koff de 10-2 s-1 ou mais.

43. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 42, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-12 a 10-8 M e uma koff de 10-4 a 5 x 10-3 s-1 e em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-7 a 10-4 M e uma koff de 3 x 10-3 a 10-2 s-1 ou mais.

44. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 43, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA em condições ácidas com uma KD de 10-12 a 10-8 M e uma koff de 10-4 a 5 x 10-3 s-1 e em condições neutras ou fisiológicas com uma KD de 10-7 a 10-4 M e uma koff de 3 x 10-3 a 10-2 s-1 ou mais; e em que o anticorpo se liga ao VISTA de cinomolgo (cyno) com uma KD de 10-7 ou menos.

45. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 44, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao hVISTA com uma KD que é pelo menos 10 vezes inferior em pH 6,9 do que em pH 7,4 e/ou uma KD que é pelo menos 100 vezes inferior em pH 6,5 do que em pH 7,4; e pelo menos 1000 vezes inferior em pH 6,0 do que em pH 7,4.

46. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 45, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao VISTA de cinomolgos (cyno).

47. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao VISTA de cino com maior afinidade em condições ácidas em relação às condições fisiológicas.

48. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 45 a 47, caracterizado pelo anticorpo ligar-se ao VISTA de cino em condições ácidas com uma KD de 10-8 ou menos e/ou uma koff de 10-2 ou menos e em condições fisiológicas, com uma KD de 10-6 ou mais e/ou uma koff de 10-2 ou mais.

49. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, caracterizado pelas condições ácidas serem condições com um pH de 6,5 ou menos.

50. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizado pelas condições ácidas serem condições com um pH de 6,0 a 6,5.

51. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, caracterizado pelas condições neutras serem condições com um pH de 7,0.

52. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizado pelas condições neutras serem condições com um pH de 7,35 a 7,45.

53. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 52, caracterizado pelas condições fisiológicas serem condições tendo um pH de 7,4.

54. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 53, caracterizado pelo anticorpo inibir a ligação do hVISTA às células T humanas, tais como células T CD4 + humanas (um anticorpo antagonista).

55. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo anticorpo inibir a ligação de hVISTA às células T humanas em condições com um pH inferior ao pH 7,0.

56. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 55, caracterizado pelo anticorpo inibir a ligação de hVISTA ao PSGL-1 humano (huPSGL-1) e/ou competir com o huPSGL-1 pela ligação ao hVISTA.

57. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 56,

caracterizado pelo anticorpo inibir a ligação do hVISTA à huPSGL-1 em condições com um pH inferior ao pH 7,0.

58. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 57, caracterizado pelo anticorpo inibir a ligação de hVISTA a proteoglicanos de sulfato de heparano.

59. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo anticorpo inibir a ligação do hVISTA a proteoglicanos de sulfato de heparano em condições tendo um pH inferior ao pH 7,0.

60. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 55, 57 ou 59, caracterizado por uma condição tendo um pH inferior ao pH 7,0 ser um tumor ou qualquer área com doença tendo um pH inferior ao pH 7,0 em um sujeito no qual uma estimulação imunológica é desejada.

61. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 60, caracterizado pelo anticorpo estimular a ativação de células T, como evidenciado, por exemplo, pela melhora na proliferação de células T; aumento da produção de IFN-γ a partir de células T; e/ou estimulo do receptor de células T mediado pela sinalização de NF-kB.

62. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo anticorpo estimular a ativação de células T em condições com um pH inferior ao pH 7,0.

63. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 62, caracterizado pelo anticorpo reduzir a adesão célula- célula mediada por VISTA.

64. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 53, caracterizado pelo anticorpo estimular a atividade de VISTA (um anticorpo agonista).

65. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 53 e 64, caracterizado pelo anticorpo estimular a ligação de hVISTA às células T humanas, tais como células T CD4+ humanas.

66. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo anticorpo estimular a ligação do hVISTA às células T humanas em condições com um pH inferior ao pH 7,0.

67. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 53 e 64 a 66, caracterizado pelo anticorpo estimular a ligação do hVISTA à huPSGL-1.

68. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo anticorpo estimular a ligação do hVISTA à huPSGL-1 em condições com um pH menor do que o pH 7,0.

69. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 53 e 64 a 68, caracterizado pelo anticorpo estimular a ligação de hVISTA a proteoglicanos de sulfato de heparano.

70. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo anticorpo estimular a ligação do hVISTA a proteoglicanos de sulfato de heparano em condições tendo um pH menor do que o pH 7,0.

71. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 66, 68 e 70, caracterizado por uma condição tendo um pH menor do que o 7,0 ser um meio encontrado em doença autoimune (por exemplo, artrite reumatoide e lúpus), um local de inflamação ou qualquer área em uma doença tendo um pH menor do que o pH 7,0 em um sujeito no qual uma inibição imunológica é desejada.

72. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 71, caracterizado pelo anticorpo ter um tempo médio de permanência de pelo menos 500 dias em macacos Cinomolgos.

73. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 72, caracterizado pelo anticorpo não se ligar de forma significativa às células positivas para VISTA, por exemplo, neutrófilos, no sangue periférico de um sujeito a quem ele é administrado.

74. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 73, caracterizado pelo anticorpo não depletar significativamente células VISTA positivas, por exemplo, neutrófilos, no sangue periférico de um sujeito a quem ele é administrado.

75. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 74, caracterizado pelo anticorpo ter sido manipulado geneticamente para ligar-se ao hVISTA em pH ácido, mas não em pH neutro ou fisiológico.

76. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo anticorpo ter sido modificado geneticamente por substituição de 1 a 8 aminoácidos em CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH com um ácido glutâmico, ácido aspártico ou resíduo de histidina.

77. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 63 e 72 a 76, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH de P1-061029 ou uma variante do mesmo compreendendo 1 a 6 ou 1 a 8 diferenças de aminoácidos em CDR1, CDR2 e/ou CDR3 em relação ao P1-061029, em que no máximo 1, 2 ou 3 variações de aminoácidos estão presentes em qualquer uma das CDRs.

78. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e CDR3 de VH do P1- 061029 ou uma variante do mesmo compreendendo 1 a 6 ou 1 a 8 diferenças de aminoácidos na CDR1, CDR2 e/ou CDR3 em relação ao P1-061029.

79. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 77 ou 78, caracterizado por uma variação de aminoácidos ser uma substituição a um resíduo de ácido glutâmico (E), resíduo de ácido aspártico (D) ou um resíduo de histidina (H).

80. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 77 a 79, caracterizado pelo anticorpo compreender: - uma CDR1 compreendendo GFTX1X2DX3AMH, em que X1 é D ou L, X2 é E ou D e X3 é E ou Y (SEQ ID NO: 563); - uma CDR2 compreendendo GIX4WX5SX6X7IGYADSVKG, em que X4 é D ou N, X5 é D ou N, X6 é D, E, H ou A e X7 é D, E, H ou N (SEQ ID NO: 564); e/ou - uma CDR3 compreendendo VPGYSX8GWIDAX9DX10, em que X8 é E, H ou G, X9 é E, D ou F e X10 é D, E ou V (SEQ ID NO: 565).

81. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: - uma CDR1 compreendendo GFTX1X2DX3AMH, em que X1 é D ou L, X2 é E ou D e X3 é E ou Y (SEQ ID NO: 563); - uma CDR2 compreendendo GIX4WX5SX6X7IGYADSVKG, em que X4 é D ou N, X5 é D ou N, X6 é D, E, H ou A e X7 é D, E, H ou N (SEQ ID NO: 564); e - uma CDR3 compreendendo VPGYSX8GWIDAX9DX10, em que X8 é E, H ou G, X9 é E, D ou F e X10 é D, E ou V (SEQ ID NO: 565).

82. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 80 ou 81, caracterizado por X3 ser E e X9 ser E.

83. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 82, caracterizado por X2 ser E, X7 ser E, e/ou X8 ser H.

84. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 83, caracterizado por duas ou mais das seguintes condições serem satisfeitas: X2 ser E, X7 ser E e/ou X8 ser H.

85. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado por X2 ser E, X7 ser E e X8 ser H.

86. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 85, caracterizado por X6 ser E.

87. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 85, caracterizado por X6 ser A.

88. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 86, caracterizado por X1 ser L, X4 ser N, X5 ser N e/ou X10 ser V.

89. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado por duas ou mais das quatro seguintes condições serem satisfeitas: X1 é L, X4 é N, X5 é N e/ou X10 é V.

90. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado por três ou mais das quatro seguintes condições serem satisfeitas: X1 é L, X4 é N, X5 é N e/ou X10 é V.

91. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 90, caracterizado por X1 ser L, X4 ser N, X5 ser N e/ou X10 ser V.

92. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 91, caracterizado por X10 ser D.

93. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 92, caracterizado por X9 ser E.

94. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 93, caracterizado por X2 ser E, X4 ser D, e/ou X6 ser E.

95. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado por duas ou mais das seguintes condições serem satisfeitas: X2 é E, X4 é D e/ou X6 é E.

96. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 95, caracterizado por X2 ser E, X4 ser D, e X6 ser E.

97. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 80 a 96, caracterizado por X1 ser L, X3 ser Y, X5 ser N, X7 ser N e/ou X8 ser G.

98. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado por duas ou mais das seguintes condições serem satisfeitas: X 1 é L, X3 é Y, X5 é N, X7 é N e/ou X8 é G.

99. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado por três ou mais das seguintes condições serem satisfeitas: X 1 é L, X3 é Y, X5 é N, X7 é N e/ou X8 é G.

100. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado por quatro ou mais das seguintes condições serem satisfeitas: X1 é L, X3 é Y, X5 é N, X7 é N e/ou X8 é G.

101. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado por X1 ser L, X3 ser Y, X5 ser N, X7 ser N e X8 ser G.

102. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 77 a 101, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de VH do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075,P1-069077, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G,P1- 068761_E30D_H100G, ou P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, ou P1-068761_E32Y_E100fF, P1- 068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1- 068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1-068767_E55A, P1- 068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1- 068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF,

P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

103. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo anticorpo compreender a CDR1, CDR2 e CDR3 de VH do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1- 069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1- 069073, P1-069075, P1-069077, P1-069077, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G,P1- 068761_E30D_H100G, ou P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E ou P1-061029_Y32E_F100fE.

104. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 77 a 103, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e CDR3 de VL da VL do P1-061029.

105. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 63 e de 72 a 104, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% idêntica àquela do P1-061029, P1-

068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-

068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1-

069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1-

069075, P1-069077, P1-069077, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-

068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-

068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G,P1-068761_E30D_H100G, ou

P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-

068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-

068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1-

068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, P1-

068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-

068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1-

068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1-

068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1-

068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-

068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-

061029_V102D, P1-061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE; ou compreende a VH do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-

068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-

068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-

069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-069077, P1-

068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-

068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-

068761_E56N_H100G,P1-068761_E30D_H100G, ou P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF,

P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-

068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, modificada por 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos, modificada por 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições aminoácidos conservadoras, ou modificada por uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

106. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 63 e 72 a 105, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1-069061, P1- 069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1-069073, P1- 069075, P1-069077, P1-069077, P1-068761_E55A, P1-068761_H100G, P1- 068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1- 068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G,P1-068761_E30D_H100G, ou P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1- 068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1- 068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1-068761_E32Y_E55A, P1- 068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1-068761_E32Y_H100G, ou P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1- 068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1-068767_D102V, P1- 068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1-068767_E30D_D102V, P1-

068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1-068767_E100fF_D102V, P1- 068767_E55A_E100fF, P1-068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1- 068767_E30D_E100fF, P1-061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1- 061029_V102D, P1-061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE; ou compreende a VH do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1- 068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1- 068775, P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1- 069069, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-069077, P1- 068761_E55A, P1-068761_H100G, P1-068761_E56N, P1- 068761_E55A_E56N, P1-068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1- 068761_E56N_H100G,P1-068761_E30D_H100G, ou P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1-068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1-068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, modificada por uma ou ambas as substituições K16R e T84A.

107. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 106, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% idêntica àquela do P1-061029.

108. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 107,

caracterizado pelo anticorpo compreender a VL do P1-061029.

109. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 63 e 72 a 76, caracterizado pelo anticorpo compreender a CDR1, CDR2 e/ou CDR3 da VH de P1-061015 ou uma variante da mesma compreendendo 1 a 6 ou 1 a 8 diferenças de aminoácidos na CDR1, CDR2 e/ou CDR3 em relação ao P1-061015, em que no máximo 1, 2 ou 3 variações de aminoácidos estão presentes em qualquer CDR.

110. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo anticorpo compreender a CDR1, CDR2 e CDR3 da VH de P1- 061015 ou uma variante da mesma compreendendo 1 a 6 diferenças de aminoácidos na CDR1, CDR2 e/ou CDR3 em relação ao P1-061015, em que no máximo 1 de 2 ou 3 variações de aminoácidos estão presentes em qualquer CDR.

111. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 108 ou 109, caracterizado por uma variação de aminoácidos ser uma substituição a um resíduo de ácido glutâmico (E), resíduo de ácido aspártico (D) ou um resíduo de histidina (H).

112. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 77 a 111, caracterizado pelo anticorpo compreender: - uma CDR1 compreendendo GFTFX1X2X3MH, em que X1 é E, D, H ou S; X2 é H ou Y; e X3 é D ou A (SEQ ID NO: 569); - uma CDR2 compreendendo X4X5WX6DGSX7X8X9X10ADSVKG, em que X4 é E, H ou I; X5 é D ou I; X6 é D ou Y; X7 é D ou N; X8 é D, H ou K; X9 é D, H ou Y; e X10 é E ou Y (SEQ ID NO: 570); e/ou - uma CDR3 compreendendo DX11X12FYX13X14YYDFX15, em que X11 é E ou S; X12 é E ou G; X13 é D, E ou S; X14 é D ou S; e X15 é D, E ou Y (SEQ ID NO: 571).

113. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 108-112, caracterizado pelo anticorpo compreender - uma CDR1 compreendendo GFTFX1X2X3MH, em que X1 é E, D, H ou S; X2 é H ou Y; e X3 é D ou A (SEQ ID NO: 569); - uma CDR2 compreendendo X4X5WX6DGSX7X8X9X10ADSVKG, em que X4 é E, H ou I; X5 é D ou I; X6 é D ou Y; X7 é D ou N; X8 é D, H ou K; X9 é D, H ou Y; e X10 é E ou Y (SEQ ID NO: 570); e - uma CDR3 compreendendo DX11X12FYX13X14YYDFX15, em que X11 é E ou S; X12 é E ou G; X13 é D, E ou S; X14 é D ou S; e X15 é D, E ou Y (SEQ ID NO: 571).

114. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 98-102, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e/ou CDR3 da VH do P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068748, P1-068750, P1-068752 ou P1-068754.

115. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 114, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e CDR3 da VH do P1- 061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1- 068748, P1-068750, P1-068752 ou P1-068754.

116. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 98-115, caracterizado pelo anticorpo compreender CDR1, CDR2 e CDR3 de VL da VL do P1-061015.

117. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 98-116, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% idêntica àquela do P1-061015, P1-068736, P1-068738, P1- 068740, P1-068742, P1-068744, P1-068748, P1-068750, P1-068752 ou P1- 068754; ou

- compreendendo uma sequência de aminoácidos da VH do P1- 061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1- 068748, P1-068750, P1-068752 ou P1-068754, modificada por 1, 2, 3, 4, ou 5 substituições de aminoácidos, ou modificada por 1, 2, 3, 4, ou 5 substituições conservadoras de aminoácidos.

118. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 98-117, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos da VH do P1-061015, P1- 068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068748, P1- 068750, P1-068752 ou P1-068754; ou - compreendendo a sequência de aminoácidos da VH do P1- 061015, P1-068736, P1-068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1- 068748, P1-068750, P1-068752 ou P1-068754, modificada por 1, 2, 3, 4, ou 5 substituições de aminoácidos, ou modificada por 1, 2, 3, 4, ou 5 substituições conservadoras de aminoácidos.

119. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 98-118, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% idêntica àquela do P1-061015.

120. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo anticorpo compreender uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de P1-061015.

121. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 120, caracterizado pelo anticorpo ligar-se à região rica em histidina do hVISTA ou próximo dela, tal como a extensão em folha β rica em histidina.

122. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 121, caracterizado pelo anticorpo ligar-se à região rica em histidina do hVISTA ou próximo dela, tal como a extensão em folha β rica em histidina, em condições com um pH de 6,0 a 6,5.

123. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 122, caracterizado pelo anticorpo competir ou competir de maneira cruzada pela ligação ao hVISTA com um ou mais anticorpos descritos na presente invenção, por exemplo, compreendendo a VH e VL do P1-061029, P1-068757, P1-068759, P1-068761, P1-068763, P1-068765, P1-068767, P1-068769, P1-068771, P1-068773, P1-068775, P1-069059, P1- 069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069069, P1-069071, P1- 069073, P1-069075, P1-069077, P1-069077, P1-068761_E55A, P1- 068761_H100G, P1-068761_E56N, P1-068761_E55A_E56N, P1- 068761_E30D, P1-068761_E30D_E55A, P1-068761_E56N_H100G, P1- 068761_E30D_H100G, ou P1-068761_E30D_E56N, P1-068761_E100fF, P1- 068761_E55A_E100fF, P1-068761_H100G_E100fF, P1- 068761_E30D_E100fF, P1-068761_E56N_E100fF, P1-068761_E32Y, P1- 068761_E32Y_E55A, P1-068761_E32Y_E56N, P1-068761_E30D_E32Y, P1- 068761_E32Y_H100G, P1-068761_E32Y_E100fF, P1-068767_D52N_D102V, P1-068767_D52N, P1-068767_D52N_E55A, P1-068767_E55A_D102V, P1- 068767_D102V, P1-068767_E55A, P1-068767_E30D_D52N, P1- 068767_E30D_D102V, P1-068767_E30D, P1-068767_E30D_E55A, P1- 068767_E100fF_D102V, P1-068767_E55A_E100fF, P1- 068767_D52N_E100fF, P1-068767_E100fF, P1-068767_E30D_E100fF, P1- 061029_F100fE_V102D, P1-061029_F100fE, P1-061029_V102D, P1- 061029_Y32E, ou P1-061029_Y32E_F100fE, P1-061015, P1-068736, P1- 068738, P1-068740, P1-068742, P1-068744, P1-068748, P1-068750, P1- 068752 ou P1-068754), conforme determinado, por exemplo, pelo ensaio de categorização (binning) de epítopo por interferometria de biocamada competitiva (BLI) descrito no Exemplo 15.

124. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1-123, caracterizado pelo anticorpo estar categorizado no grupo de epítopos A, conforme determinado, por exemplo, pelo ensaio de categorização (binning) de epítopo por interferometria de biocamada competitiva (BLI) descrito no Exemplo 15.

125. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 124, caracterizado pelo anticorpo não ligar-se significativamente ao hVISTA, em que um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos foram mutados: T35, Y37, K38, T39, Y41, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119, H121, H122, S124, E125, R127, por exemplo, conforme determinado pela análise mutacional em levedura descrita nos Exemplos.

126. ANTICORPO isolado, caracterizado por ligar-se ao hVISTA consistindo na SEQ ID NO: 1 ou 2, mas que não se liga significativamente a um hVISTA modificado em que um ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos foram mutados: T35, Y37, K38, T39, Y41, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119, H121, H122, S124, E125, R127.

127. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 126, caracterizado pelo anticorpo não ligar-se significativamente a um hVISTA modificado em que 2, 3, 4, 5 ou mais dos seguintes resíduos de aminoácidos foram mutados: T35, Y37, K38, T39, Y41, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119, H121, H122, S124, E125, R127.

128. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 124 a 127, caracterizado pelo anticorpo não ligar-se a um hVISTA em que um ou mais dos seguintes resíduos foram mutados para um dos resíduos correspondentes apresentados na Tabela 15: H68, F97, L115,

V117, I119, H121, H122, S124, E125, R127.

129. ANTICORPO isolado que se liga ao hVISTA sob condições ácidas, por exemplo, caracterizado por um pH de 6,5 (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos), em que o Ab inibe a interação entre hVISTA e (a) células T e/ou (b) PSGL-1, e em que o Ab contata o hVISTA através de um ou mais (por exemplo, pelo menos 1-3, 1-5, 1-10, 5- 10, 5-15 ou todos) resíduos de contato energeticamente importantes de um anticorpo descrito na presente invenção, como P1-061015, P1-061029, P1- 068761 ou P1-068767, como um ou mais aminoácidos selecionados a partir de um dos seguintes grupos de resíduos de contato energeticamente importante: (i) V34, T35, Y37, K38, T39, Y41, S52, R54, T61, F62, Q63, L65, H66, L67, H68, H69, F97, L115, V117, I119, H121, H122, S124, E125, R127; (ii) V34, T35, Y37, T39, Y41, S52, R54, F62, L65, H66, H68, L115, V117, I119, R120, H121, H122, S124, E125; ou (iii) Y37, T39, R54, F62, H66, L115 ou V117, conforme determinado, por exemplo, usando a exibição na superfície de levedura e o ensaio NGS descrito no Exemplo 15, e em que a numeração é aquela do hVISTA maduro.

130. ANTICORPO isolado que se liga ao hVISTA sob condições ácidas, por exemplo, caracterizado por um pH de 6,5 (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos), em que o Ab inibe a interação entre hVISTA e (a) células T e/ou (b) PSGL-1, e em que o Ab contata o hVISTA através de um ou mais (por exemplo, pelo menos 1-3, 1-5, 1-10, 5- 10, 5-15 ou todos) resíduos de contato energeticamente importantes Y37, T39, R54, F62, H66, V117, I119 ou S124, conforme determinado, por exemplo, usando a exibição na superfície de levedura e o ensaio NGS descrito no Exemplo 15, e em que a numeração é aquela do hVISTA maduro.

131. ANTICORPO isolado que se liga ao hVISTA sob condições ácidas, por exemplo, caracterizado por um pH de 6,5 (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos), em que o Ab inibe a interação entre hVISTA e (a) células T e/ou (b) PSGL-1, e em que o Ab contata o hVISTA através de um ou mais (por exemplo, pelo menos 1-3, 1-5, 1-10, 5- 10, 5-15 ou todos) resíduos de contato energeticamente importantes do P1- 061015, P1-061029, P1-068761 ou P1-068767 ou outro anticorpo descrito na presente invenção, conforme determinado, por exemplo, usando a exibição na superfície de levedura e o ensaio NGS descrito no Exemplo 15, e em que a numeração é aquela do hVISTA maduro.

132. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 131, caracterizado pelo Ab ligar-se a alça FG (FG loop) do hVISTA.

133. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 132, caracterizado pelo Ab ligar-se a extensão em folha - β rica em histidina do hVISTA, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, tal como descrito, por exemplo, nos Exemplos.

134. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 133, caracterizado pelo Ab contatar H121, H122 e H123 (tríade de histidina) do hVISTA maduro (distância de, por exemplo, 4,0 Angstroms (Å) ou menos), tal como por meio de ligações de hidrogênio, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, como descrito, por exemplo, nos Exemplos.

135. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 134, caracterizado pelo Ab contatar o hVISTA através da CDR1 e CDR3 VH da VH, e, por exemplo, não contatar de forma significativa pela CDR2 da VH e/ou por uma CDR da VL.

136. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 135, caracterizado pelos resíduos de aminoácidos 110 e 112 do anticorpo formarem ligações de hidrogênio com H121 e H122 do hVISTA, respectivamente, e opcionalmente, um resíduo de aminoácido do anticorpo forma uma ligação de hidrogênio com H123 do hVISTA.

137. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 136, caracterizado pelo Ab contatar hVISTA através de, pelo menos, um ou mais resíduo de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina que está(ão) localizado(s) na CDR1, CDR2 ou CDR3 da VH.

138. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 137, caracterizado pelo Ab não se ligar significativamente ao hVISTA em pH neutro ou fisiológico (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos).

139. ANTICORPO (Ab) isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 138, caracterizado pelo Ab ligar-se ao hVISTA sob condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5, com uma K D (ou koff) que é pelo menos 10 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais baixa do que sua K D (e/ou Koff) ao ligar-se ao hVISTA em pH neutro ou fisiológico (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos).

140. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 139, caracterizado pelo Ab não se ligar significativamente ao hVISTA em pH neutro ou fisiológico (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos).

141. ANTICORPO isolado que se liga ao hVISTA sob condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5 (tal como medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos), caracterizado pelo Ab: ▪ inibir a interação entre hVISTA e (a) células T e/ou (b) PSGL-1 (por exemplo, inibir a interação entre H153 e H154 do hVISTA possuindo a SEQ ID NO: 1 e as tirosinas Y46 e Y48 de PSGL-1); ▪ melhorar a ativação de células T, por exemplo, pelo aumento da proliferação de células T; aumento da produção de IFN-γ a partir de células T; e/ou estimulação da sinalização de NF-kB mediada por receptor de células T;

▪ - contatar hVISTA através de um ou mais (por exemplo,

▪ ligar-se à extensão em folha-β rica em histidina do hVISTA,

conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, tal como descrito, por exemplo, nos Exemplos;

▪ contatar H121, H122 e/ou H123 do hVISTA maduro

(distância de 4,0 angstroms (Å) ou menos), tal como através de ligações de hidrogênio, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, como descrito, por exemplo, nos Exemplos;

▪ ligar-se à Região 1: 57LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO:

566); Região 2: 86RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567); e Região 3:

148VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568) do hVISTA possuindo a

SEQ ID NO: 1, e opcionalmente em que a ligação é mais forte à Região 2,

conforme determinado por MS-HDX, tal como descrito no Exemplo 21;

▪ competir pela ligação ao hVISTA (competição bidirecional)

com um ou mais anticorpos descritos no presente documento, por exemplo,

P1-061015, P1-061029, P1-068761, P1-068767 e VISTA.4;

▪ contatar hVISTA através de pelo menos um ou mais resíduos de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina que estão localizados na CDR1, CDR2 ou CDR3 da VH; e/ou ▪ ter baixa disposição de fármaco mediada pelo alvo,

levando a um tempo médio de permanência (MRT) de pelo menos 100, 200,

300, 400, 500, 600 ou 700 horas, tal como medido, por exemplo, como descritos nos Exemplos.

142. ANTICORPO isolado (Ab) que se liga ao hVISTA sob condições ácidas, por exemplo, em um pH de 6,5 com uma KD (e/ou koff) que é pelo menos 10 vezes, 100 vezes ou 1000 vezes mais baixa do que sua K D ou koff de ligação ao hVISTA sob pH neutro ou fisiológico (conforme medido, por exemplo, por um dos ensaios descritos nos Exemplos), em que o Ab é caracterizado por: ▪ inibir a interação entre hVISTA e (a) células T e/ou (b) PSGL-1 (por exemplo, inibir a interação entre H153 e H154 do hVISTA possuindo a SEQ ID NO: 1 e as tirosinas Y46 e Y48 de PSGL-1); ▪ melhorar a ativação de células T, por exemplo, pelo aumento da proliferação de células T; aumento da produção de IFN-γ a partir de células T; e/ou estimulação da sinalização de NF-kB mediada por receptor de células T; ▪ contatar hVISTA através de um ou mais (por exemplo, pelo menos 1-3, 1-5, 1-10, 5-10, 5-15 ou todos) resíduos de contato energeticamente importantes Y37, T39, R54, F62, H66, V117, I119 ou S124, conforme determinado, por exemplo, usando a exibição da superfície de levedura e o ensaio NGS descrito no Exemplo 15; e em que a numeração é àquela do hVISTA maduro; ▪ ligar-se à extensão em folha-β rica em histidina do hVISTA, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, tal como descrito, por exemplo, nos Exemplos; ▪ contatar H121, H122 e/ou H123 do hVISTA maduro (distância de 4,0 Angstroms (Å) ou menos), tal como através de ligações de hidrogênio, conforme determinado, por exemplo, por cristalografia, como descrito, por exemplo, nos Exemplos;

▪ ligar-se à Região 1: 57LGPVDKGHDVTF68 (SEQ ID NO: 566); Região 2: 86RRPIRNLTFQDL97 (SEQ ID NO: 567); e Região 3: 148VVEIRHHHSEHRVHGAME165 (SEQ ID NO: 568) do hVISTA possuindo a SEQ ID NO: 1, e opcionalmente em que a ligação é mais forte à Região 2, conforme determinado por MS-HDX, tal como descrito no Exemplo 21; ▪ competir pela ligação ao hVISTA (competição bidirecional) com um ou mais anticorpos descritos no presente documento, por exemplo, P1-061015, P1-061029, P1-068761, P1-068767 e VISTA.4; ▪ contatar hVISTA através de pelo menos um ou mais resíduos de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina que estão localizados na CDR1, CDR2 ou CDR3 da VH; e/ou ▪ ter baixa disposição de fármaco mediada pelo alvo, levando a um tempo médio de permanência (MRT) de pelo menos 100, 200, 300, 400, 500, 600 ou 700 horas, tal como medido, por exemplo, como descritos nos Exemplos.

143. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 142, caracterizado pelo anticorpo ter um ponto isoelétrico (pI) entre 6,5 e 6,8, conforme medido, por exemplo, por icIEF.

144. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 143, caracterizado pelo anticorpo exibir baixa agregação, por exemplo, uma agregação que é semelhante ou inferior de ‘029, ‘761 ou ‘767 (P1-061015, P1-061029, P1-068761, ou P1-068767, respectivamente), por exemplo, como determinado nos Exemplos.

145. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 144, caracterizado pelo anticorpo exibir uma viscosidade que é semelhante ou inferior à do ‘029, ‘761 ou ‘767, por exemplo, como determinado nos Exemplos.

146. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 145, caracterizado pelo anticorpo exibir um raio hidrodinâmico que é semelhante ou inferior ao do ‘029, ‘761 ou ‘767, por exemplo, como determinado nos Exemplos.

147. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 146, caracterizado pelo anticorpo exibir um Tm1 que é semelhante ou superior àquele do ‘029, ‘761 ou ‘767, por exemplo, como determinado nos Exemplos.

148. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 147, caracterizado pelo anticorpo exibir uma quantidade de espécies de elevado peso molecular que é semelhante ou inferior àquela do ‘029, ‘761 ou ‘767, por exemplo, como determinado nos Exemplos.

149. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 148, caracterizado por ser um anticorpo IgG.

150. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 149, caracterizado por ser um anticorpo IgG1, IgG2 ou IgG4 (IgG4 opcionalmente com S228P).

151. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 150, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo sem função efetora, por exemplo, carece de ADCC e/ou CDC, e/ou um anticorpo que não se liga de forma significativa a um ou mais FcγRs, por exemplo, FcγRIII.

152. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 151, caracterizado pela região constante compreender 1 a 5 mutações em uma região constante de cadeia pesada do tipo selvagem que reduz a função efetora do anticorpo e/ou a capacidade de ligação a um ou mais FcγRs, por exemplo, FcγRIII, em relação à região constante de cadeia pesada tipo selvagem correspondente.

153. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 152, caracterizado pela região constante do anticorpo ser IgG1.3, IgG1.1 ou ser uma IgG1 com uma substituição de P238K (por exemplo, , IgG1.P238K).

154. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 150, caracterizado pelo anticorpo ter função efetora e/ou ligar-se a um ou mais FcγRs, por exemplo, FcγRIII.

155. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 154, caracterizado pelo anticorpo ser afucosilado (por exemplo, um anticorpo IgG1 afucosilado).

156. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 154 ou 155, caracterizado pela região constante compreender 1 a 5 mutações que aumentam a função efetora do anticorpo e/ou a capacidade de ligação a um ou mais FcγRs, por exemplo, FcγRIII, em relação à região constante tipo selvagem correspondente.

157. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 156, caracterizado por ser um anticorpo de comprimento total ou um anticorpo que compreende uma cadeia pesada de comprimento total (com ou sem uma lisina C-terminal) e um de cadeia leve de comprimento total.

158. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 156, caracterizado por ser um fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo.

159. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 158, caracterizado por ser um anticorpo multimérico (por exemplo, dimérico ou trimérico).

160. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 159, caracterizado por estar ligado (por exemplo, covalentemente) a outra molécula.

161. ANTICORPO isolado, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pela outra molécula ser um marcador.

162. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 160 a 161, caracterizado pela outra molécula ser um peptídeo.

163. ANTICORPO isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 162, caracterizado por ser um conjugado de anticorpo e fármaco (ADC).

164. ÁCIDO NUCLEICO isolado, caracterizado por codificar um anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 163 ou de 206 a 212.

165. ÁCIDO NUCLEICO isolado, caracterizado por codificar a cadeia pesada e/ou a cadeia leve de um anticorpo conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 163 ou de 206 a 212.

166. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender um ácido nucleico codificando a cadeia pesada de um anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 163 ou de 206 a 212, e um ácido nucleico codificando a cadeia leve do anticorpo.

167. CÉLULA, caracterizada por compreender o ácido nucleico isolado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 164 a 166.

168. MÉTODO PARA PREPARAR UM ANTICORPO, caracterizado por compreender a cultura da célula definida na reivindicação 167, em condições sob as quais o anticorpo é expresso.

169. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender um anticorpo isolado, ácido nucleico, composição ou célula, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 168, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

170. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 169,

caracterizada por compreender um segundo agente terapêutico.

171. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 170, caracterizada pelo segundo agente terapêutico ser um agente imunoestimulante ou um agente quimioterápico.

172. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 171, caracterizada pelo agente imunoestimulante ser um antagonista de uma molécula imunossupressora, por exemplo, a PD-1/PD-L1, CTLA-4 e LAG- 3, ou um agonista de uma molécula imunoestimulante, por exemplo, GITR e OX40.

173. MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER em um sujeito, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição ou anticorpo isolado ao sujeito, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 172 ou 206 a 212, que estimula uma resposta imune e/ou um anticorpo antagonista de VISTA.

174. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 173, caracterizado pelo sujeito ter células positivas para VISTA em um tumor do câncer.

175. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 174, caracterizado pelas células serem células linfocíticas (por exemplo, células T) infiltrantes ou células mielomonocíticas positivas para VISTA.

176. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 173 a 175, caracterizado pelo sujeito ser primeiro testado quanto à presença de células positivas para VISTA em um tumor.

177. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 173 a 176, caracterizado pelo método compreender ainda a administração de uma segunda terapia.

178. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 177, caracterizado pela segunda terapia ser radioterapia, cirurgia ou administração de um segundo agente.

179. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 178, caracterizado pela segunda terapia ser um segundo agente e o segundo agente ser um agente imunoestimulante ou um agente quimioterápico.

180. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 179, caracterizado pelo segundo agente terapêutico ser um agente imunoestimulante que é antagonista de uma molécula imunossupressora, por exemplo, a PD-1/PD-L1, uma CTLA-4 e LAG- 3, ou um agonista de uma molécula imunoestimulante, por exemplo, GITR e OX40.

181. MÉTODO PARA TRATAR UMA DOENÇA INFECCIOSA (por exemplo, doença viral) em um sujeito, caracterizado por compreender a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição ou anticorpo isolado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 172 ou 206 a 212, que estimula uma resposta imune e/ou é um anticorpo antagonista de VISTA.

182. MÉTODO PARA TRATAR UMA INFLAMAÇÃO, uma condição inflamatória e doença autoimune, doença do enxerto versus hospedeiro ou uma doença que se beneficia da redução de uma resposta imune, caracterizado por compreender a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição ou anticorpo isolado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 172 e de 206 a 212, que inibem uma resposta imune, por exemplo, ativação de células T ou é um agonista de VISTA.

183. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO (Ab) que se liga ao domínio extracelular do VISTA humano (hVISTA-ECD) em um pH de 6,5 ou menos, com uma KD de 10-7 M ou menos, caracterizado por compreender o contato de um Ab de teste ou uma pluralidade de Abs teste com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento deste compreendendo o domínio IgV do hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70-127 ou 35-127 de SEQ ID NO: 2 em pH 6,5 ou menos, e selecionando o Ab ou Abs teste que se ligam ao polipeptídeo com uma KD de 10-7 M ou menos.

184. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO (Ab) que se liga ao domínio extracelular do VISTA humano (hVISTA-ECD) em um pH de 6,5 ou menos, com uma Koff de 5 x 10-3 s-1 ou menos, caracterizado por compreender o contato de um Ab de teste ou uma pluralidade de Abs teste com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento deste compreendendo o domínio IgV do hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70 ou 35-127 de SEQ ID NO: 2 em pH 6,5 ou menos, e selecionando o Ab ou Abs teste que se ligam ao polipeptídeo com uma Koff de 5 x 10-3 s-1 ou menos.

185. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO, que se liga especificamente ao hVISTA-ECD em pH 6,5 com afinidade similar em pH 7,0 caracterizado por compreender: a. contatar um Ab teste ou pluralidade de Abs teste em pH 6,5 com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento do mesmo compreendendo o domínio IgV de hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, ou 35-70 ou 35-127 de SEQ ID NO: 2; b. contatar o Ab teste ou a pluralidade de Abs teste em pH 7,0 com o polipeptídeo de (a); e c. selecionar um Ab teste se ele se ligar ao polipeptídeo com uma KD de 10-7 M ou menos, em pH 6,5 e em pH 7,0.

186. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO, com maior afinidade ao hVISTA-ECD em pH 6,5 do que em pH 7,0 caracterizado por compreender: a. contatar um Ab teste ou pluralidade de Abs teste em pH 6,5 com um polipeptídeo compreendendo hVISTA-ECD ou um fragmento do mesmo compreendendo o domínio IgV de hVISTA-ECD ou compreendendo os aminoácidos 20-95, 20-70, 35-70 ou 35-127 de SEQ ID NO: 2; b. contatar o Ab teste ou a pluralidade de Abs teste em pH 7,0 com o polipeptídeo de (a); e c. selecionar um Ab teste se ele se ligar ao polipeptídeo com uma KD ou Koff pelo menos 2 vezes mais baixa em pH 6,5 do que em pH 7,0.

187. MÉTODO PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM ANTICORPO que se liga especificamente ao domínio extracelular do VISTA humano (hVISTA-ECD) para uso no tratamento do câncer, caracterizado por compreender: a. identificar os Abs que se ligam especificamente ao hVISTA- ECD em pH 6,5 ou inferior, tal como de acordo com as reivindicações de 183 a 186; e b. selecionar os Abs de (a) que desencadeiam ou melhoram uma resposta imune em um modelo tumoral ou que inibem o crescimento tumoral em pH 6,5 ou inferior.

188. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 187, caracterizado pela etapa (b) compreender medir a atividade de células T.

189. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 187 a 188, caracterizado por compreender ainda a medição do efeito antitumoral do Ab.

190. MÉTODO PARA MELHORAR A EFICÁCIA ANTITUMORAL DE UM ANTICORPO, que se liga ao hVISTA-ECD, caracterizado por compreender: a. fornecer um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma afinidade que é menor do que um valor desejado; b. substituir 1 a 5 resíduos de aminoácidos na cadeia pesada ou leve do Ab por resíduos de aminoácido diferentes (por exemplo, por um resíduo de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina), em que os 1 a 5 resíduos de aminoácidos são resíduos de contato com hVISTA-ECD, por exemplo, um ou mais dos resíduos de aminoácidos 26, 30, 31, 32, 110 e 112 (mostrado na Tabela 24; numeração nas SEQ ID NOs: 67, 51 ou 55; c. determinar se o Ab obtido em (b) tem maior afinidade para o hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior em relação ao Ab de (a); e d. repetir as etapas (a) - (c), por uma série de vezes suficientes para se obter um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior, com uma KD de 10-7 M ou menos.

191. MÉTODO PARA MELHORAR A EFICÁCIA ANTITUMORAL DE UM ANTICORPO, que se liga ao hVISTA-ECD, caracterizado por compreender: a. fornecer um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma afinidade que é menor do que um valor desejado; b. preparar uma biblioteca de variantes do Ab de (a), em que cada variante compreende uma substituição de 1 a 5 resíduos de aminoácidos na cadeia pesada ou leve do Ab por um resíduo de aminoácido diferente, (por exemplo, por um resíduo de ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina), em que os 1 a 5 resíduos de aminoácidos são resíduos de contato com hVISTA- ECD, por exemplo, um ou mais dos resíduos de aminoácidos 26, 30, 31, 32, 110 e 112 (mostrado na Tabela 24; numeração nas SEQ ID NOs: 67, 51 ou 55; c. selecionar dos Abs da biblioteca de variantes de (b) que se ligam ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou inferior com uma KD de 10-7 M ou menor; e d. opcionalmente, testar a eficácia antitumoral dos Abs de (c) em um modelo de tumor.

192. MÉTODO PARA MELHORAR A FARMACOCINÉTICA DE UM ANTICORPO que se liga ao VISTA ECD humano, caracterizado por compreender o aumento da capacidade do anticorpo para se ligar ao VISTA humano em condições ácidas, por exemplo, em um pH igual ou inferior ao pH 6,5.

193. MÉTODO PARA SELECIONAR UM ANTICORPO que se liga ao VISTA humano e que possui uma meia-vida prolongada (boas propriedades farmacocinéticas), caracterizado por compreender a seleção de um anticorpo que se liga ao VISTA humano em condições ácidas, por exemplo, em um pH igual ou inferior ao pH 6,5.

194. MÉTODO PARA MELHORAR A EFICÁCIA DE ANTICORPOS que se ligam ao hVISTA, caracterizado por compreender aumentar o número de ácido aspártico, ácido glutâmico e/ou resíduos de histidina em uma ou mais CDRs de VH do anticorpo, para aumentar a ligação do anticorpo ao hVISTA em pH ácido.

195. MÉTODO PARA ISOLAR ANTICORPOS que se ligam ao hVISTA e têm uma meia-vida longa no sangue humano e/ou que estimulam células T em um ambiente de tumor, caracterizado por compreender triagem de uma biblioteca de anticorpos que se ligam ao hVISTA para aqueles que se ligam em pH ácido, mas não em pH neutro.

196. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 183 a 195, caracterizado por compreender a contrasseleção daqueles anticorpos que se ligam em pH fisiológico.

197. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 183 a 196, caracterizado por compreender ainda a seleção de anticorpos que são antagonistas de VISTA ou agonistas de VISTA.

198. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 183 a 197, caracterizado por compreender a seleção daqueles anticorpos que inibem a interação entre VISTA e um correceptor de VISTA (por exemplo, PSGL-1) e/ou a interação entre células VISTA e células T ou células mielomonocíticas.

199. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 183 a 198, caracterizado por compreender ainda a seleção de anticorpos que possuem uma ou mais das propriedades do P1-068761 ou P1-068767.

200. MÉTODO PARA MELHORAR A EFICÁCIA ANTITUMORAL DE UM ANTICORPO, que se liga ao hVISTA-ECD, caracterizado por compreender: a. fornecer um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 7,0, mas não de forma significativa em pH 6,5; b. substituir 1 a 5 resíduos de aminoácidos na cadeia pesada ou leve, por exemplo, CDRs, do Ab por um resíduo de aminoácido diferente, em que, por exemplo, os 1 a 5 resíduos de aminoácidos são resíduos de contato com hVISTA-ECD, por exemplo, um ou mais dos resíduos de aminoácidos 26, 30, 31, 32, 110 e 112 (mostrado na Tabela 24; numeração nas SEQ ID NOs: 67, 51 ou 55; c. determinar se o Ab obtido em (b) tem maior afinidade para o hVISTA-ECD em pH 6,5 do que em pH 7,0 e/ou determinar se o Ab obtido em (b) tem afinidade semelhante ou maior em pH 6,5 em relação ao anticorpo parental (anticorpo de (a) e menor afinidade em pH 7,0 em relação ao anticorpo de (a); e d. repetir as etapas (a) - (c), para uma série de rodadas suficientes para se obter um Ab que se liga ao hVISTA-ECD em pH 6,5 ou menos, com uma KD de 10-7 M ou inferior e se liga ao hVISTA-ECD em pH 7,0 ou mais com um KD de 10-6 M ou mais.

201. MÉTODO PARA DETECTAR VISTA EM UMA AMOSTRA, caracterizado por compreender o contato da amostra com um anticorpo VISTA de qualquer uma das reivindicações de 1- 163 ou 206-212.

202. MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER em um sujeito,

caracterizado por compreender a administração ao sujeito de um anticorpo isolado que se liga ao VISTA humano (hVISTA) e inibe a atividade do hVISTA (por exemplo, ativação de células T) e um antagonista da via PD1/PD-L1, que resulta no aumento do número de células T CD4+ e CD8+, por exemplo, em um tumor do sujeito.

203. MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER em um sujeito, caracterizado por compreender a administração ao sujeito de um anticorpo isolado que se liga ao VISTA humano (hVISTA) e inibe a atividade do hVISTA (por exemplo, ativação de células T) e um antagonista da via PD1/PD-L1, que resulta na redução do número de células T exauridas e/ou células T que expressam PD-1, LAG3 e/ou TIM-3, por exemplo, em um tumor do sujeito.

204. MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER em um sujeito, caracterizado por compreender a administração ao sujeito de um anticorpo isolado que se liga ao VISTA humano (hVISTA) e inibe a atividade do hVISTA (por exemplo, ativação de células T) e um antagonista da via PD1/PD-L1, que resulta no aumento do número de células T CD4+ e CD8+, por exemplo, em um tumor do sujeito e uma redução do número de células T exauridas e/ou células T que expressam PD-1, LAG3 e/ou TIM-3, por exemplo, em um tumor do sujeito e/ou outras características aqui descritas.

205. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 202 a 204, caracterizado pelo anticorpo que se liga ao hVISTA ser um anticorpo descrito na presente invenção, tal como um anticorpo de qualquer uma das reivindicações de 1 a 163 ou de 206 a 212.

206. ANTICORPO, composição ou método de qualquer uma das reivindicações de 1 a 205, caracterizado pelo anticorpo compreender uma ou mais (por exemplo, 1-5, 5-10, 10-15, 10-20 ou 15-20) interações com hVISTA listadas na Tabela 24.

207. ANTICORPO, composição ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 206, caracterizado pelo anticorpo compreender um ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina em uma ou mais das posições 26, 30, 31, 110, 111 e 112 (por exemplo, os resíduos de contato identificados por cristalografia na Tabela 24), em que a numeração está de acordo com aquela nas SEQ ID NOs: 67, 51 e 55.

208. ANTICORPO isolado, que se liga ao domínio extracelular do VISTA humano em um pH de 6,5 e, opcionalmente, não se liga de forma significativa em pH 7,0, caracterizado pelo anticorpo compreender um ácido glutâmico, ácido aspártico ou histidina em uma ou mais das posições 26, 30, 31, 110, 111 e 112 (por exemplo, os resíduos de contato identificados por cristalografia na Tabela 24), em que a numeração está de acordo com aquela nas SEQ ID NOs: 67, 51 e 55.

209. ANTICORPO, composição ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 208, caracterizado pelo anticorpo não compreender a região variável de cadeia pesada de qualquer um dos anticorpos dentre P1-069059, P1-069061, P1-069063, P1-069065, P1-069067, P1-069071, P1-069073, P1-069075, P1-069077, P1-068761, P1-068767, P1- 068773, P1-068765, P1-061029, P1-068757, P1-068771, P1-068775, P1- 068769, P1-068759, P1-068763, P1-061015, P1-068748, P1-068744, P1- 068736, P1-068752, P1-068740, P1-068742, P1-068746, P1-068750, P1- 068738, P1-068754, P1-069293, P1-069298, P1-069302, P1-069312, P1- 069309, P1-069307, P1-070864, P1-070866, P1-070868, P1-070870, P1- 070872, P1-070874, P1-070876, P1-070878, P1-070880, P1-070882, P1- 070884, P1-070886, P1-070888, P1-070890, P1-070892, P1-070894, P1- 070896, P1-070898, P1-070900, P1-070902, P1-070904, P1-070906, P1- 070908, P1-070910, P1-070912, P1-070914, P1-070916, P1-070918, P1- 070920, P1-070922, P1-070924, P1-070926, P1-070928, P1-070930, P1- 070932 (ou seja, das SEQ ID NOs: 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51,

55, 59, 63, 67, 71, 75, 79, 83, 87, 91, 95, 99, 103, 107, 111, 115, 119, 123, 127, 131, 135, 139, 143, 147, 151, 155, 159, 185, 189, 193, 197, 201, 205, 209, 213, 217, 221, 225, 229, 233, 237, 241, 245, 249, 253, 257, 261, 265, 269, 273, 277, 281, 285, 289, 293, 297, 301, 305, 309, 313, 317, 321), ou não compreender a região variável de cadeia pesada de qualquer anticorpo divulgado na publicação internacional WO2018/169993.

210. ANTICORPO, composição ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 209, caracterizado pelo anticorpo inibir a interação entre o domínio extracelular (ECD) do hVISTA e o PSGL-1.

211. ANTICORPO, composição ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 210, caracterizado pelo anticorpo competir pela ligação ao ECD do hVISTA com um anticorpo descrito na presente invenção (por exemplo, usando a técnica de BLI aqui descrita), tal como os anticorpos '761 e '767, e/ou pelo anticorpo ligar-se ao ECD do hVISTA através dos mesmos resíduos de aminoácidos que um anticorpo descrito na presente invenção, tal como '761 e '767.

212. ANTICORPO, composição ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 211, caracterizado pelo anticorpo interagir com a tríade de histidina (H121, 122 e 123 do hVISTA maduro), conforme determinado por cristalografia de raios-X, por exemplo, conforme determinado na presente invenção.

ÍH* Contagem de His Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1076/1149

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Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1080/1149 PSGL-1 / VISTA R VISTA pH fisiológico (" 7,4)

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CD 5/67 -J • * •* *• pH ácido (microambiente tumoral ou outro tecido inflamado) Vx"# Figura 2B

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1081/1149 3 tQ 3 Co VISTAAF647 MFI % o § G o o «fc Q -J 1 1 t 1 t n l L 1 . I i I I ll A I I i i lilp \o:\ O; 4- / % % 'a

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6.1 VISTA

6.0 í ^ 1000- o 7/67 -vi Controle IOO- - t - i SS 60 62 64 66 Ligação ao hVISTA pH do Tampão Figura 4A

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Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1085/1149 Multímero de VISTA + Sem multímero Multímero de VISTA anticorpo de bloqueio fm ( \ SJt • ' 1 o

CD 10/67 iI 4*r'j} • WlBP» • •11^ 2

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Ligação ao mVISTA Esplenócitos

Figura 4E à monócitos neutrófilos

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1087/1149 m m M «k VISTA, pH 6.0 r VISTA, pH 6.0 VISTA, pH 7.4 Í P v-j-VISTA, pH 7.4 í -M-controle, pH 6.0 controle, 6.G w I V I / I ^ controle, pH 7.4 controle, pH 7.4 \i l FMO, pH 6.0 K) FMO, pH 6.0 li O) 12/67

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MFI PE multímero VISTA Figura 4F Figura 4G

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1088/1149 Ensaio (k> Conjugado Celular Formação de Conjugados 293 4/ O o ] 0*N TÍ 1 4SN l/l pH7.0 • 1 E o Kl < f g- m •1 o o •é (/> • s •a « . >> V V > i s H co O) 15 J R1 Cl 293T_P««rM • • 13/67 i m -vi 11% »3T VISTA 9 UM pH6 0 Reakzado a pH 6,0 . ^ f ^ • 1 Aí bloqueio de ant-VISTA Q mAb de Ir 4 V 'V 1_1 # ^ . 4 Q rr .7 .. r fAt Q iMb não Ooqueadorde anti-VISTA

CHO Figura 5A Figura 5B

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1089/1149 Unidades de Luoferase m I OI ii o - J • a. ••

H - o ^ • Figura 5C u> -i Tamanho efetivo de anti-VISTA (Jl X 2 £ t 2 £ ? 31 c - 9 & Figura 5D

D

I JJ o o •S u< o 14/67 19

VISTA Rab Fundido RabS

IMS Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1090/1149 Endossemos precoces <-• « Rab7 A 1 • A A é cn Endossemos % o 15/67 -'SÍL- -vi tardios 1 i9 Rabll r % Endossemos de I reciclagem JÉKkf • . »^ Figura 6A

VISTA/cAb RAB11 Fundido

F7 rfjM

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1091/1149 (£? SL\ i Anti-VISTA

É n O) O) 16/67

-vl

Anticorpo Controle

Figura 6B

D mAb 3 de VISTA cr — m .Ü Hj

E o k. •,ü < (o > •• 400 MO •00 o rc

O mAb 2 de VISTA o .2» 100 <D

TI • pH 7.4 5 • pH 6.7 8 50

CL co pH 6.0

CL 200 400 000 100 mAb 1 de VISTA -00 10 o 400 000 000 Tempo (s) Figura 6C

6*10 6 I Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1093/1149 S 5" 10® A o

O k. 4K106, i-r i5 W m A b l d e VISTA mAb 2 de VISTA "i o a^io6' s mAb 3 de VISTA oo o cc CD A Controle 18/67 % 2*10®' -vi =J ^ 1K108- \ 0

0.0001 0.001 001 01 1 TO [mAb] (ug/mL) Figura 6D 6D mAb 3 de VISTA 100 3 Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1094/1149 a: "O n SO rj

E o < 0 h- </) 200 400 600 800 > • pH 7.4 -C o # pH 6.0 CD o mAb 3c de VISTA o 19/67 -vi o ioo o o D) <D "D 2 oi

M Qi 0 200 400 600 800 Tempo (s) Figura 6E

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1095/1149 6x1 Obi =) 5x10® O 4K 106- mAb 1 de VISTA 13 = 3*10®- mAb2de VISTA 4) O| • mAb 3 de VISTA K)

T O « 2x106- • mAb 3c de VISTA o 20/67 -vi o Controle rj ixio 6 - 0

0.0001 0.001 001 01 10 [mAb] (ug/mL) Figura 6F

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1096/1149 VISTA Superfície celular

VISTA

VISTA Endossem o de reciclagem Rab11+ i K) O) 21/67 -vi Endossomo precoce Rab5+ Endossomo tardio Lisossomo Rab7+ Figura 6G

&£& n rilllfllisiiiii iiiíiil S ÍÍ § â ^ ill 1 Os íj 8 6 >$ & $ Í |É|||g|||||li| Q âa a ÒÒ«»aao««o 11

II illlflllllllll d) O . «• 11 I is If » ^ 8 8 i| S 8 S I •S I a | P 2 1N 2 S S 2 3 i g i g i i i i8g l l i t s g g O (/) 3 0) : 3J « Sí Í R K Í S S Í R K a W K : "D 'O o o .? f SC5 LJUJ ^ 2 Li. c 3 '5 E fc. CM <Z ' lillfllilillli 1E 5 8 § 8; llf . 6R e j| i • •' • [' u §.£ d) Q Cfl ü Si i|li||iiiiilll .E o (/) TJ <TJ O "D CM l> i O Q. ° E Q) 0) T3 illill liiliii i|ispiippi|i

E S 2| >2 -3 i8 l 8i l8l IHl H illll P 8 S P </) </) 5 .2 0) o o .S llliiliiiiiiii 0) •

II = !5 UJ Q> to o a> g] • - « S Q ^ S õ S^ I= 2 ao O li J E Ic O X (/) 3

OI T- cvj co

RI. R2. ...Rn pH 6 j Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1098/1149 r Rn +l Seleção negativa a pH 7,4, Rn+1 pH 7 checagem de ligação a pH 6 K)

CO Rn-f2 O) 23/67 -vi \ r Seleção negativa a pH 7,4 Rn+3 Rn* 3 checagem de ligação a pH 6 1 Figura 7B

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1099/1149 Ligação ao VISTA Ligação ao VISTA *

X X * í < * -2. •a m « ' % V) 3 O í " 3

O

I 4 l i :• * -i ; 1 £ 4rc-4 v ^ JL-Í K '» t 1 k -:

I l« ss Ilí a t *• * • i « 5 i ». . J -r -T -T- y W V _rf •iff fr^ f l pi 3! m J jv

CQ e n :• r 2 P - I : n o

JIJ V j" V V V • m 09 t S Ni § ? c A « i a < -ík. \_J

L y j. * II § !» * »kJ i

B i L 24/67 Z9 172

PI-061029 180 Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1100/1149 160 Qí T 140 •'i.

x Ligação a < 120 hVISTA

CO O > 100 0) (. pH 6.0 80 «3 K) O 60 i O pH 7.4 cn O) -vi 25/67 o 40 (Ü U) 20 0 o A e © c? o w w o> r- y*- <o r- o> •v- V ! OÍ vo <D O r- r- f- r- fc fc CJ:: o:» <P í? $ 8 s M) 9 v 9 o Cp o 9 9 9 9 «w

0. a a a a. a a a a a. o.

Figura 7D

Melhora em relação ao parental ptonm Píxmm H Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1101/1149 1*1 «wrn i# Pívmrm tit p'-owe' PI-OM/t»

M

CD

CD -v] 26/67 mmm PIOMfJ/ i eioeitt» kd rápido OOQO* 0001 0004 0 01 OM 11 04 1 « «0 «O •M «oo kd a pH 6,0 (1/s) Figura 7E

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1102/1149 Resposta de ligação a hVISTA (RU) pH 6.0 PH 7.4 . i i n i f i f . l t i i t S I f " D i ó

Í i S -j f cn

I i i • a i V,-i s fl f • i •o 5 T: «

O Í m I •4 <Q CD e Í J

S I M i

TI

I I I S B S I . Í I H I M Í

I •o

I I k I o I IV)

I

I 27/67 19 LZ

Pl-068761 Pl-068767

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1103/1149 75000-1 750001 • pH 6.0 60000- • pH 6.1 60000 LL -- pH 6.2 -• í • pH 6.4 l Ü 45000- • pH 6.6 % 45000- fe, • pH 7.0 % 30000- • pH 7.2 % 30000- K) 00 A pH 8.1 o -vi 28/67

15000- 1 15000-

2 3 4 S 2 3 4 5 [mAb] loQ(r>g/mL) [mAO] log(ng/mL)

Figura 88 Figura 8A lôOOOn Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1104/1149 12000- U- a % 8000- -pH^ - 6 6

Z

I 1 nj 4000- K)

CD O) -vl 29/67 )

T T 55 60 65 7.0 7.5 80 85 ph do Tampão # PI-068767 Controle Figura 8C lOOOOOn * Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1105/1149 Isotípo a pH 7,0 Controle de VISTA a pH 7,0

LL P1-068761 a pH 7,0 2 CD * P1-068767 a pH 7,0 en sz O Isotipo a pH 6,0 c • Controle de VISTA a pH 6,0

CO P1-068761 a pH 6,0 o 10000- O) -vl 30/67 PI-068767 a pH 6,0 T T T 1 30 36 40 45 50 55 (mAb) log(ng/mL) Figura 8D

100! Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1106/1149 • I 75-

CO 2 =£ Controle I PI-061029 í V) 50- > PI-068761 CO (0 O) o -vl 31/67 "13 PI-068767 i-> S. 25- 0 T 0 1 2 3 [mAb] log(ng/mL) Figura 8E

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1107/1149 75 g 60 5 H • PI-061029 P1-068761 45 £ PI-068767 w

UJ CO Controle Negativo K) ^ 30 • Controle Positivo o -vi 32/67 15 • 0

0.001 0.01 0.1 1 10 100 mAb [ug/mLl Figura 8F

* Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1108/1149 1• • • •

E o> C 1000 100t

CO

CO 10i O) -vl 33/67 0 100 200 300 400 Tempo (horas) Controle anti-VISTA anti-VISTA sensível a pH ácido antl-VISTA de P1-068767 Figura 9 pH 7.4 pH 6.7 pH 6.0 Anticorpo PI ID HCDR1 HCDR2 HCDR3 kd KD hVISTA kd hVISTA kd KD hVISTA KD (M) (1/s) (M) %Rmax (1/s) %Rmax (1/s) (M) %Rmax Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1109/1149 P1-068761_E lOOfF P1-070874 1.3E-03 2.0E-08 73.3 2.2E-04 1.3E-09 117.0 1.3E-04 1.9E-10 130.1 E.E EE H Pl-068761_E55A_E100fF P1-070898 1.7E-03 1.4E-08 82.3 2.8E-04 1.5E-09 119.8 1.8E-04 2.6E-10 133.7 E.E E H P1-068761_H 100G_E100fF P1-070880 2.3E-03 4.1E-08 61.8 4.0E-04 2.3E-09 116.7 2.1E-04 2.3E-10 126.

7 E.E EE Pl-068761_E30D_E100fF P1-070896 3.5E-03 4.8E-08 65.2 5.7E-04 3.7E-09 112.6 3.3E-04 4.3E-10 130.4 . .E EE H P1-068761_E56N_E lOOfF P1-070902 3.0E-03 5.5E-08 47.4 6.1E-04 6.5E-09 85.9 3.8E-04 1.4E-09 116.5 E.E E H P1-068761_E32Y Pl-070866 2.5E-03 1.8E-08 102.5 6.4E-04 1.6E-09 120.9 4.1E-04 2.1E-10 123.1 E. ....EE.... H E P1-068761_E32Y_E55A P1-070882 2.7E-03 2.3E-08 89.3 6.0E-04 2.0E-09 116.3 5.7E-04 3.1E-10 117.6 E. E H E P1-068761_E32 Y_E5 6N P1-070884 3.2E-03 4.2E-08 73.7 8.3E-04 5.1E-09 104.4 7.0E-04 1.2E-09 115.

8 E. E H E

GO P1-068761_E30D_E32Y P1-070876 3.5E-03 2.1E-08 110.8 9.9E-04 2.0E-09 124.0 7.1E-04 2.4E-10 124.9 EE H E -1^ P1-068761_E32Y_H100G P1-070886 5.5E-03 7.2E-08 68.0 1.3E-03 5.0E-09 113.4 9.2E-04 4.8E-10 120.4 E. EE E CD 34/67 P1-068761 E32Y ElOOfF P1-070888 1.9E-03 3.7E-09 132.1 9.5E-04 1.1E-09 125.0 1.1E-03 2.5E-10 120.8 E. EE H P1-068761 Pl-068761 NB NB 0.7 6.6E-03 7.1E-08 49.7 1.4E-03 2.6E-09 122.5 E.E EE H E P1-068761_E55A P1-070868 NB NB 2.8 6.4E-03 1.2E-07 42.2 1.7E-03 3.4E-09 113.1 E.E E H E P1-068761_H100G P1-070872 NB NB 2.9 1.4E-02 2.3E-07 36.1 5.2E-03 4.4E-09 121.0 E.E ....EE.... E P1-068761_E56N P1-070870 NB NB 1.7 >lE-02 ~8.2E-06 17.6 5.5E-03 1.9E-08 86.3 E.E E H E P1-068761_E55A_E56N P1-070878 NB NB 0.9 2.9E-02 2.1E-07 16.4 5.6E-03 2.1E-08 79.3 E.E H E P1-068761_E30D Pl-070864 NB NB 0.4 1.8E-02 3.7E-07 25.6 6.2E-03 8.3E-09 109.9 . .E EE H E P1-068761_E30D_E55A P1-070890 NB NB 1.8 >lE-02 ~l.lE-07 22.1 7.4E-03 1.2E-08 99.1 . .E E H P1-061029 Pl-061029 7.5E-03 3.2E-08 93.4 4.4E-03 1.1E-08 96.9 8.2E-03 4.5E-09 98.5 GFTLDDYAMH GINWNSANIGYADSVKG VPGYS GGWIDAFDV P1-068761_E56N_H100G P1-070900 NB NB 4.4 NB NB 19.4 8.1E-03 1.0E-08 110.9 E.E E E P1-068761_E30D_H100G P1-070894 NB NB 3.1 >lE-02 ~8.1E-08 14.6 2.1E-02 1.5E-08 91.9 . .E EE E P1-068761_E30D_E56N Pl-070892 NB NB 0.4 >lE-02 ~3.2E-08 8.3 3.4E-02 5.0E-08 56.3 . .E E H E Figura 10A pH 7.4 pH 6.7 pH 6.0 Anticorpo PI ID HCDR1 HCDR2 HCDR3 Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1110/1149 kd KD hVISTA kd hVISTA kd hVISTA KD (M) KD (M) (1/s) (M) %Rmax (1/s) %Rmax (1/s) %Rmax P1-068767_D52N_D102V P1-0709 30 6.7E-03 8.7E-08 60.0 1.8E-03 7.5E-09 101.0 1.2E-03 8.8E-10 114.6 E E E P1-068767_D52N P1-070906 NB NB 3.9 6.7E-03 2.1E-07 38.9 1.5E-03 3.2E-09 116.6 E E E.D P1-068767_D52N_E55A PI-070916 NB NB 2.3 5.5E-03 1.2E-07 33.7 1.5E-03 4.0E-09 112.0 E E.D P1-068767_E55A_D102V Pl-070932 1.0E-02 2.8E-07 35.4 3.1E-03 1.5E-08 85.7 2.0E-03 1.9E-09 111.3 E D E P1-068767_D102V P1-070912 9.2E-03 1.7E-07 44.7 2.8E-03 1.4E-08 98.5 2.0E-03 1.3E-09 111.

9 E D. . .E E P1-068767_E55A Pl-070908 NB NB 2.8 8.5E-03 3.8E-07 26.8 2.3E-03 5.7E-09 108.0 E D E.D

GO Pl-068767 E30D D52N Pl-070914 NB NB 4.5 1.1E-02 1.2E-07 35.8 2.3E-03 5.8E-09 105.7 E E.D Ol

CD Pl-068767 Pl-068767 NB NB 1.9 7.2E-03 1.8E-07 31.1 2.4E-03 5.2E-09 111.7 E D. . .E E.D 35/67 P1-068767_E 30D_D102V Pl-070926 1.1E-02 2.2E-07 40.8 3.5E-03 1.7E-08 95.7 3.0E-03 2.1E-09 114.8 D. . .E E P1-068767_E30D Pl-070904 NB NB 5.8 NB NB 21.0 3.2E-03 9.6E-09 99.8 D. . .E E.D Pl-068767 E30D E55A Pl-070922 NB NB 3.5 NB NB 22.6 3.5E-03 8.3E-09 108.8 D E.D P1-061029 Pl-061029 7.5E-03 3.2E-08 93.4 4.4E-03 1.1E-08 96.9 8.2E-03 4.5E-09 98.5 GFTLDDYAMH GINWNSANIGYADSVKG VPGYSGGWIDAFDV P1-068767_E lOOf F_D102 V Pl-070920 8.3E-03 4.1E-08 86.8 4.7E-03 1.1E-08 103.4 8.2E-03 2.7E-09 103.4 E D. . .E P1-068767_E55 A_E lOOf F Pl-070918 NB NB 1.8 NB NB 8.6 1.3E-02 6.2E-08 42.5 E D D P1-068767_D5 2 N_ElOOf F Pl-070928 NB NB 9.4 >lE-02 ~3.9E-08 22.7 6.6E-02 2.0E-08 64.0 E E D P1-068767_E lOOf F P1-070910 NB NB 1.8 2.6E-02 5.2E-06 9.6 >lE-02 ~4.2E-08 49.4 E D. . .E D P1-068767_E30D_E lOOfF Pl-070924 NB NB 1.0 2.7E-02 1.0E-05 7.0 >lE-02 ~8.2E-08 32.9 D. . .E D Figura 10 B mAb competidor Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1111/1149 (segundo) r* vc KO > •> > 2 2 S « * • •

ÍÍUÍÍÍ PI 0€101S

O — PI 061029 co a o t o PI 068761 Som sinal do ligaçáo do segundo 3 •- o -vi 36/67 mAb (bloqueio/ competição) PI •068767

II n Q mAb 3 <!• VSSTA <~ Ligaçáo do segundo mAb (som E mWD 2 <te V-STA bloqueio/ competição) rttAe 1 <1* VtSTA Figura 11A mAb bloqueador A1U N A1U *1*2 Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1112/1149 M* t m V \ m \*4 v_ Figura 11B c [ tfe * \ 00

CD 37/67 mAb não bloqueador A1W AUi âl41 <S )*J m • fa • Figura 11C > H H?

pi principal = 8,56 Figura 12A pi 5,95 do marcador pi 10,1 do marcador pi principal = 6,69 Figura 12B pi 5.95 do marcador pi 10,1 do marcador pi principal = 6,63 Figura 12C pi 5,95 do marcador pi 10,1 do marcador

I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Pl-061029 EVQLVES GGGLVQPGKS LRLS CAAS GFTLDD YAMHWVRQAPGKGLEWVS GINWNSANIGYADSVKGRFTISRDNAKNS LY LQMNS LRTEDTALY Y CAKVPGY S GGWIDAFDVWGQGTMVTVSS Pl-068757 E.E EE E.D Pl-068759 E.E D...E E.D Pl-068761 E.E EE H E Pl-068763 E D...E H E Pl-068765 DE EE E.D Pl-068767 E D...E E.D Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1114/1149 Pl-068769 E.E DH E.D Pl-068771 E.E HE E.D Pl-068773 E D...D. E.D Pl-068775 E.E D...EE H E.D Pl-069059 E DH E.D Pl-069061 E E E.D Pl-069063 E E D.E Pl-069065 E.E DD Pl-069067 EE D.E Pl-069069 EE D Pl-069071 E.E D E Pl-069073 E.E E E Pl-069075 E D..E H E GO

CD Pl-069077 E.E DE Pl-069293 E.E EE H E CD 39/67 Pl-069298 E D...E E.D Pl-069302 Pl-069312 E.E EE H E Pl-069309 E D...E E.D Pl-069307 Pl-070864 E EE H E Pl-070866 E EE H E Pl-070868 E.E E H E Pl-070870 E.E E H E Pl-070872 E.E EE E Pl-070874 E.E EE H Pl-070876 EE H E Pl-070878 E.E H E Pl-070880 E.E EE Pl-070882 E E H E Pl-070884 E E H E Pl-070886 E EE E Pl-070888 E EE H Pl-070890 E E H E Figura 13A

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1115/1149 Pl-070892 E E H E Pl-070894 E EE E Pl-070896 E EE H Pl-070898 E.E E H Pl-070900 E.E E E Pl-070902 E.E E H Pl-070904 D...E E.D Pl-070906 E E E.D Pl-070908 E D E.D Pl-070910 E D...E D Pl-070912 E D...E E Pl-070914 E E.D 4^

O Pl-070916 E E.D G) Pl-070918 E D D -vj 40/67 Pl-070920 E D...E Pl-070922 D E.D Pl-070924 D...E D Pl-070926 D...E E Pl-070928 E E D Pl-070930 E E E Pl-070932 E D E Figura 13A (cont)

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1116/1149 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120

I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I Pl-061015 QVQLVESGGGWQPGRS LRLSCAASGFTFSS YAMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDSGFYSSYYFDYWGQGTLVTVSS Pl-068736 E D D D D Pl-068738 E..H D H ED Pl-0687 40 D D.D D D Pl-0687 42 D D.D ED Pl-068744 E H E E E Pl-068746 HH D O) 41/67 Pl-0687 48 HH DD D -vi Pl-068750 D.D E..D EE Pl-068752 E D D E Pl-068754 D.D E..D H.D Figura 13B

Petição 870200118398, de 23/09/2020, pág. 1117/1149 761 EVQLVESGGGLVQPGKSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLY

P1-068761_VH_K16R_T84A EVQLVESGGGLVQPGBSLRLSCAASGFTLEDEAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSEEIGYADSVKGRFTISRDNAKIMSLY

Coluna n0 10 20 30 40 50 60 70 80

761 LQMNSLRIEDTALYYCAKVPGYSHGWIOAEDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO: 51) 4^ K) O) P1-068761_VH_K16R_T84A LQMNSLRAEDTALYYCAKVPGYSHGWIDAEDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO; 463) 42/67

-vi

Coluna n0 90 100 110 120

Figura 14