TW202346338A

TW202346338A - pH依賴性抗硫酸化醣胺聚醣抗體及抗體藥物複合體

Info

Publication number: TW202346338A
Application number: TW112112255A
Authority: TW
Inventors: 石川俊平; 加藤洋人; 古谷弦太; 千賀匠悟
Original assignee: 國立大學法人東京大學; 日商大鵬藥品工業股份有限公司
Priority date: 2022-03-30
Filing date: 2023-03-30
Publication date: 2023-12-01
Also published as: WO2023190827A1

Abstract

本發明提供一種顯示pH依賴性之特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣(sGAG)之抗體。本發明之抗體係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣者，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3；以及 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3。

Description

pH依賴性抗硫酸化醣胺聚醣抗體及抗體藥物複合體

本發明係關於一種特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣(以下為sGAG)之抗體、及包含該抗體之抗體藥物結合體(ADC)。

醣胺聚醣係具有胺基醣及醣醛酸或半乳醣之二醣之重複單元的長鏈多醣，根據組成醣之種類、硫酸化度及硫酸化部位、組成醣之結合樣式等進行分類。作為具有代表性者，已知有硫酸乙醯肝素及肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質素、透明質酸，發現鏈長及硫酸化度具有多樣性。於細胞表面，醣胺聚醣以結合於核心蛋白之蛋白多醣之形式存在，作為生長因子等之受體而承擔著重要作用。

已知細胞表面之醣胺聚醣之組成醣、硫酸化度、鏈長在腫瘤組織與正常組織中大不相同，多次報告了醣胺聚醣能夠成為腫瘤之治療標的(非專利文獻1～3)。已明確對與富含硫酸軟骨素之腫瘤特異性硫酸化醣胺聚醣結合之源自瘧疾之VAR2CSA結合具有細胞毒性之化合物而成之藥物複合體於體內模型中顯示出抗腫瘤效果(非專利文獻3)。雖提示了硫酸化醣胺聚醣之作為治療標的之有效性，但另一方面，關於腫瘤特異性醣鏈結構或標的標定之理解並不充分。

對於與表現於細胞表面且能夠於細胞中內化之抗原結合之抗體，使具有細胞毒性之藥物與之結合而形成抗體藥物複合體(Antibody-Drug Conjugate；ADC)，該抗體藥物複合體由於能夠對標的表現細胞選擇性地傳遞藥物，故而可期待選擇性地使癌細胞死滅(參照非專利文獻4、5)。提示了藉由彌漫型胃癌(DGC，Diffuse-type gastric carcinoma)之腫瘤浸潤B細胞之組庫分析、生物資訊學(Bioinformatics)分析而得知硫酸化醣胺聚醣為腫瘤特異性B細胞抗原，故期待腫瘤浸潤B細胞所產生之抗硫酸化醣胺聚醣抗體或其抗體藥物複合體在癌症治療中之有效性，但投予時對腫瘤之聚集性及抗腫瘤效果等並不明確(專利文獻1、非專利文獻6)。又，由於硫酸化醣胺聚醣亦大量存在於正常組織中，故而就安全性方面而言，期待開發一種識別腫瘤特異性醣鏈結構、或腫瘤特異性地進行活化之藥劑。 [先前技術文獻] [專利文獻]

專利文獻1：WO2018/235855 [非專利文獻]

非專利文獻1：Int J Mol Sci. (2020)21(17), 5983. 非專利文獻2：Biomolecules. (2021)11(3), 395. 非專利文獻3：Cancer Cell. (2015)28(4), 500-514. 非專利文獻4：Bioconjugate Chem. (2010)21, 5-13. 非專利文獻5：Current Opinion in Chemical Biology (2010)14, 529-537. 非專利文獻6：Cell Rep. (2017)20(5), 1073-1087.

[發明所欲解決之問題]

本發明應解決之課題在於提供一種顯示pH依賴性之特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣(sGAG)之抗體。進而，本發明應解決之課題在於提供一種可用作抗腫瘤劑之包含該抗體之抗體藥物結合體(ADC)。 [解決問題之技術手段]

本發明提供一種pH依賴性地結合於sGAG之抗體及包含該抗體之抗體藥物結合體(ADC)。

因此，本發明具有以下特徵。 [1]一種抗體，其係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣者，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3；以及 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3。 [2]如[1]之抗體，其係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈。 [3]如[1]或[2]之抗體，其係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號36所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號36所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號38所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號38所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號40所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號40所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號42所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號42所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號44所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號44所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號46所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號46所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號48所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號50所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈。 [4]如[1]至[3]中任一項之抗體，其係人類抗體。 [5]如[1]至[4]中任一項之抗體，其亞型為IgG1抗體。 [6]如[1]至[5]中任一項之抗體，其特徵在於：於酸性pH區域內以較高之親和性結合。

[7]一種抗體藥物複合體(ADC)，其由下述通式1表示： Ab-(L-D)p (1) [式中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3； L係6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)、或MC-CL2， D係單甲基澳瑞他汀(monomethyl auristatin)、美登木素生物鹼(maytansinoid)、或喜樹鹼(camptothecine)衍生物， p為選自1～12之整數]。 [8]如[7]之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈。 [9]如[7]或[8]之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號36所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號36所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號38所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號38所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號40所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號40所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號42所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號42所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號44所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號44所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號46所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號46所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號48所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號50所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈。 [10]如[7]至[9]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3。 [11]如[7]至[10]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區。 [12]如[7]至[11]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列。 [13]如[7]至[10]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區。 [14]如[7]至[10]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列。 [15]如[7]至[14]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係IgG1抗體。 [16]如[7]至[15]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係人類抗體。 [17]如[7]至[16]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係於酸性pH區域內以高於中性pH區域之親和性結合之抗體。 [18]如[7]至[17]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中L係6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)或MC-CL2。 [19]如[7]至[18]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中D係MMAE、MMAF、DM1、DM4、Dx8951、Dxd或SN-38。 [20]如[7]至[19]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中L-D係SMCC-DM1、SPDB-DM4、MC-Val-Cit-PAB-MMAE、MC-Val-Cit-PAB-MMAF、MC-GGFG-Dx8591或MC-CL2-SN-38。 [21]如[7]至[10]或[15]至[20]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。 [22]如[7]至[10]或[15]至[20]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。 [23]如[7]至[10]或[15]至[20]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。 [24]如[7]至[10]或[15]至[20]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。 [25]如[7]至[24]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中p為3～8。 [26]一種醫藥組合物，其含有如[7]至[25]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)、及載體。 [27]一種抗腫瘤劑，其含有如[7]至[25]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)作為有效成分。 [28]如[27]之抗腫瘤劑，其用於治療表現硫酸化醣胺聚醣之癌症。 [29]如[27]之抗腫瘤劑，其用於治療胃癌、胰臟癌、乳癌、大腸癌或肺癌。 [30]一種腫瘤之治療方法，其包括對患者投予如[7]至[25]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)。 [31]如[30]之治療方法，其中腫瘤係表現硫酸化醣胺聚醣之癌症。 [32]如[30]之治療方法，其中腫瘤係胃癌、胰臟癌、乳癌、大腸癌或肺癌。 [33]如[7]至[25]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其用於治療腫瘤。 [34]如[33]之抗體藥物複合體(ADC)，其中腫瘤係表現硫酸化醣胺聚醣之癌症。 [35]如[33]之抗體藥物複合體(ADC)，其中腫瘤係胃癌、胰臟癌、乳癌、大腸癌或肺癌。 [36]一種如[7]至[25]中任一項之抗體藥物複合體(ADC)之用途，其用於製造抗腫瘤劑。 [37]如[36]之用途，其中腫瘤係表現硫酸化醣胺聚醣之癌症。 [38]如[36]之用途，其中腫瘤係胃癌、胰臟癌、乳癌、大腸癌或肺癌。本說明書包含成為本案之優先權之基礎的日本專利申請號2022-057542號之揭示內容。 [發明之效果]

本發明之抗體係pH依賴性且特異性地結合於腫瘤組織中所存在之硫酸化醣胺聚醣的抗體，不僅可用作sGAG之檢測等之試劑，而且亦可用作抗體藥物結合體(ADC)之抗體部分。又，本發明之抗體藥物結合體(ADC)基於上述抗體之pH依賴性，而對正常組織之副作用較少，發揮優異之抗腫瘤效果。

以下，對本發明進行詳細說明。本發明提供一種針對硫酸化醣胺聚醣之抗體及用於治療癌症之該抗體與藥物之複合體(ADC：Antibody-drug conjugate)。

＜抗體＞本發明提供一種於酸性pH區域內以較高之親和性結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體。

本發明之抗體具有於酸性pH區域內以較高之親和性結合於硫酸化醣胺聚醣之特徵，因此可用作用於在酸性pH條件下對硫酸化醣胺聚醣進行檢測、診斷或單離等之試劑。又，就基於該pH依賴性之腫瘤組織選擇性而言，可用作具有抗腫瘤活性之抗體藥物複合體(ADC)中之抗體部分。

本發明中之「硫酸化醣胺聚醣」意指用於構成之二醣單元之一部分接受了硫酸化修飾之醣胺聚醣，用於構成之二醣單元之種類(透明質酸、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質素、硫酸乙醯肝素及肝素等)、硫酸化度及硫酸化部位並無限定。

本發明中，「於酸性pH區域內以較高之親和性結合」意指於酸性pH區域內以高於中性pH區域之親和性結合。具體而言，本發明之抗體結合於sGAG時之親和性意指較血中之pH區域(7.4)而言，於酸性pH區域(5.0～6.8、較佳為5.5～6.4、更佳為6.0)內為4倍以上、較佳為8倍以上、更佳為10倍以上。本發明之抗體結合於sGAG時之親和性可藉由公知之方法、例如如下述實施例2所述藉由流式細胞分析法測定為Alexa Fluor 488之訊號(MFI：Mean Fluorescence Intensity(平均螢光強度))。如此，將結合親和性因pH而變動之抗體稱為pH依賴性抗體。

本發明之抗體亦具有內化能力，結合於腫瘤組織之硫酸化醣胺聚醣，被引入至腫瘤細胞中。

本發明之抗體係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種。

(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1(complementarity determining region，互補決定區)、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3。

(2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3。

(3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3。

其中，較佳為下述抗體， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3。

又，較佳之本發明之抗體係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種。 (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區。 (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區。 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區。 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區。

其中，更佳為下述抗體， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區；或者 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區；尤佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區。

重鏈可變區不僅包括包含上述序列編號所表示之胺基酸序列之重鏈可變區，亦包括包含下述蛋白質之重鏈可變區，該蛋白質包含在該胺基酸序列中除CDR以外之部分之胺基酸序列中缺失、置換、附加1個或多個、例如1～10個、較佳為1～5個、進而較佳為1或2個、進而較佳為1個胺基酸之胺基酸序列，且具有抗體之重鏈可變區之活性、即對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。輕鏈可變區不僅包括包含上述序列編號所表示之胺基酸序列之輕鏈可變區，亦包括包含下述蛋白質之輕鏈可變區，該蛋白質包含在該胺基酸序列中除CDR以外之部分之胺基酸序列中缺失、置換、附加1個或多個、例如1～10個、較佳為1～5個、進而較佳為1或2個、進而較佳為1個胺基酸之胺基酸序列，且具有抗體之輕鏈可變區之活性、即對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。再者，可藉由公知之方法來測定對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之有無。

作為此種上述序列編號所表示之胺基酸序列中缺失、置換或附加1個或多個胺基酸之胺基酸序列，可例舉下述胺基酸序列：其於使用上述序列編號所表示之胺基酸序列中除CDR以外之部分之胺基酸序列、及BLAST(Basic Local Alignment Search Tool at the National Center for Biological Information(美國國立生物學資訊中心之基本區域排比搜尋工具))等(例如預設值，即初始設定之參數)進行計算時，具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性。

具有此種在上述序列編號所表示之胺基酸序列中缺失、置換或附加1個或多個胺基酸之胺基酸序列的蛋白質與包含上述序列編號所表示之胺基酸序列之蛋白質實質上同一。

又，較佳之本發明之抗體係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種。

(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性之可變區； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區。

其中，更佳為下述抗體， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性之可變區；或者 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區；進而較佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區；進而較佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區。

尤佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區。

又，較佳之本發明之抗體係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種。 (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體1)，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列。 (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體2)，上述重鏈包含序列編號40所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號42所表示之胺基酸序列。 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體3)，上述重鏈包含序列編號44所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號46所表示之胺基酸序列。 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列。

其中，更佳為下述抗體， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體1)，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列；或者 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列；就生產效率較高或凝集性較低之觀點而言，尤佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列。

重鏈不僅包括包含上述序列編號所表示之胺基酸序列之重鏈，亦包括包含下述蛋白質之重鏈，該蛋白質包含在該胺基酸序列中除CDR以外之部分之胺基酸序列中缺失、置換、附加1個或多個、例如1～10個、較佳為1～5個、進而較佳為1或2個、進而較佳為1個胺基酸之胺基酸序列，且具有抗體之重鏈之活性、即對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。輕鏈不僅包括包含上述序列編號所表示之胺基酸序列之輕鏈，亦包括包含下述蛋白質之輕鏈，該蛋白質包含在該胺基酸序列中除CDR以外之部分之胺基酸序列中缺失、置換、附加1個或多個、例如1～10個、較佳為1～5個、進而較佳為1或2個、進而較佳為1個胺基酸之胺基酸序列，且具有抗體之輕鏈之活性、即對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。再者，可藉由公知之方法來測定對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之有無。

(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號36所表示之胺基酸序列、或與序列編號36所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號38所表示之胺基酸序列、或與序列編號38所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

(2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號40所表示之胺基酸序列、或與序列編號40所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號42所表示之胺基酸序列、或與序列編號42所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

(3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號44所表示之胺基酸序列、或與序列編號44所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號46所表示之胺基酸序列、或與序列編號46所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

(4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號48所表示之胺基酸序列、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號50所表示之胺基酸序列、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

其中，更佳為下述抗體， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號36所表示之胺基酸序列、或與序列編號36所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號38所表示之胺基酸序列、或與序列編號38所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性；或者 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號48所表示之胺基酸序列、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號50所表示之胺基酸序列、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性；進而較佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號48所表示之胺基酸序列、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號50所表示之胺基酸序列、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少85%、進而較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

進而較佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號48所表示之胺基酸序列、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號50所表示之胺基酸序列、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

尤佳為下述抗體， (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號48所表示之胺基酸序列、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少98%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且包含序列編號50所表示之胺基酸序列、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少98%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性。

具有此種在上述序列編號所表示之胺基酸序列中缺失、置換或附加1個或多個胺基酸之胺基酸序列之蛋白質與包含上述序列編號所表示之胺基酸序列之蛋白質實質上同一。

作為本發明中之較佳之抗體的「抗體1」「抗體2」「抗體3」「抗體4」之序列資訊如表1所示。

[表1]

	CDR1	CDR2	CDR3	可變區	全長
抗體1	IgH	GGFITSHH (序列編號1)	LHHTGTT (序列編號2)	VREDSSSWHPGRYIQL (序列編號3)	核苷酸序列：序列編號19、胺基酸序列：序列編號20	核苷酸序列：序列編號35、胺基酸序列：序列編號36
IgK	QSLLQNNRYNR (序列編號4)	LGS	MHALEPPYT (序列編號6)	核苷酸序列：序列編號21、胺基酸序列：序列編號22	核苷酸序列：序列編號37、胺基酸序列：序列編號38
抗體2	IgH	GFTFNTYT (序列編號7)	ISLSSNTI (序列編號8)	ARAESYYDSHYYYNGLDV (序列編號9)	核苷酸序列：序列編號23、胺基酸序列：序列編號24	核苷酸序列：序列編號39、胺基酸序列：序列編號40
IgK	QSVGGRY (序列編號10)	AAS	QQTGSSPRT (序列編號12)	核苷酸序列：序列編號25、胺基酸序列：序列編號26	核苷酸序列：序列編號41、胺基酸序列：序列編號42
抗體3	IgH	GFTFSDYY (序列編號13)	ISISGTTR (序列編號14)	ARGPELLSQNTYYYYGMDV (序列編號15)	核苷酸序列：序列編號27、胺基酸序列：序列編號28	核苷酸序列：序列編號43、胺基酸序列：序列編號44
IgK	ETLLYRSNNKNY (序列編號16)	WAS	QQYYTTPRT (序列編號18)	核苷酸序列：序列編號29、胺基酸序列：序列編號30	核苷酸序列：序列編號45、胺基酸序列：序列編號46
抗體4	IgH	GGFITSHH (序列編號1)	LHHTGTT (序列編號2)	VREDSSSWHPGRYIQL (序列編號3)	核苷酸序列：序列編號31、胺基酸序列：序列編號32	核苷酸序列：序列編號47、胺基酸序列：序列編號48
IgK	QSLLQNNRYNR (序列編號4)	LGS	MHALEPPYT (序列編號6)	核苷酸序列：序列編號33、胺基酸序列：序列編號34	核苷酸序列：序列編號49、胺基酸序列：序列編號50

本發明之抗體之形態只要為具有一對重鏈與輕鏈且能夠結合於抗原之分子，便無特別限制，例如除了免疫球蛋白以外，亦可包含具有完全抗體所具有之全部或一部分功能之其抗原結合性片段或衍生物(Fab片段、F(ab') ₂片段、單鏈抗體片段(作為將scFv、可變區(Fv)、dF(ab') ₂於還原條件下進行了處理之抗體之可變區之一價片段的Fab'iabody)等或雙特異性抗體等)。

本發明之抗體之來源並無特別限制，可例舉：人類、大鼠、小鼠、兔、倉鼠、豚鼠、馬、猴、狗、豬、牛、山羊、綿羊等。本發明之抗體較佳為重組單株抗體，於源自人類以外之物種之情形時，可使用眾所周知之技術進行嵌合化或人類化。嵌合抗體係具有人類之恆定區之抗體，人類化抗體係以人類以外之動物之抗硫酸化醣胺聚醣抗體之CDR來移植人類抗體之CDR(互補決定區)所得之抗體(CDR移植抗體)。進而，包含作為源自人類之抗體基因之表現產物的人類抗體。本發明中，較佳為人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體，更佳為人類抗體。又，於本發明之抗體為人類抗體之情形時，其亞型並無特別限制，較佳為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，更佳為IgG1。作為重鏈恆定區，可例舉Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4，作為輕鏈恆定區，可例舉Cκ或Cλ。

本發明之抗體可使用各種公知之方法進行製作，製作方法並無特別限定。作為該公知之方法，可例舉融合瘤法或噬菌體展示法等。

本發明之抗體可於無損本發明之效果之範圍內，藉由公知之重組方法進行修飾。例如可將抗體之恆定區中之至少1個胺基酸用不同之殘基進行置換。此種變化係用於降低不期望之活性、例如補體依賴性細胞毒殺性。

本發明之抗體可製作成重組抗體。即，可將編碼抗體之各區域之DNA(編碼重鏈可變區、輕鏈可變區、重鏈可變區及重鏈恆定區之DNA)插入至表現載體，對使用該表現載體之宿主細胞進行轉形，培養該細胞而產生。此時，可對於由編碼各區域之DNA連結而成之DNA，功能性地連結啟動子、多聚腺苷酸化訊號、強化子等元素而使用。所謂功能性地連結，意指以各元素發揮功能之方式進行連結。於供將各區域插入至載體中之DNA中，可存在促進抗體自宿主細胞分泌之訊息肽。藉由在產生抗體後將訊息肽去除，能夠獲得成熟蛋白質。作為表現載體，可使用公知之質體或噬菌體等。作為宿主細胞，可使用大腸桿菌或枯草桿菌等原核細胞、酵母或動物細胞等真核細胞。其中，較佳為使用醣鏈結合於抗體之真核細胞。作為動物細胞，可適宜地使用中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、HEK293細胞等。表現載體只要藉由電穿孔法、DEAE(diethylaminoethyl，二乙胺基乙基)-葡聚醣轉染法(Dextran transfection method)、磷酸鈣沈澱法等導入至宿主細胞，對宿主細胞進行轉形即可。產生之抗體藉由使用各種層析儀之方法等公知之方法進行純化即可。再者，已知由哺乳類培養細胞所生產之抗體之重鏈之羧基末端之離胺酸殘基缺失，本發明亦包括重鏈羧基末端之離胺酸殘基缺失之抗體。

＜抗體藥物複合體(ADC)＞本發明提供一種下述通式1所表示之抗體藥物複合體(ADC)。 Ab-(L-D)p [式中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3；

(2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3；

(3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3；

L係6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)、或MC-CL2， D係單甲基澳瑞他汀、美登木素生物鹼、或喜樹鹼衍生物， p為選自1～12之整數]。

作為本發明之ADC中之Ab，較佳為上述抗體。

本發明之ADC中之L係連接抗體與藥物之連接子，可包含亦可不包含基於酵素之切斷部位。作為連接子，可例舉：6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB：MC-VC-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)、MC-CL2(J Med Chem. 2008 November 13; 51(21): 6916-6926)等。例如Val-Cit(纈胺酸-瓜胺酸)係使纈胺酸與瓜胺酸結合而成之胜肽連接子，被組織蛋白酶等半胱胺酸蛋白酶酵素切斷。

本發明之ADC中之D係藥物，可例舉作為抗癌劑之單甲基澳瑞他汀(MMA：monomethyl auristatin)、美登木素生物鹼、喜樹鹼衍生物等。單甲基澳瑞他汀包含單甲基澳瑞他汀E(MMAE：monomethyl auristatin E)、單甲基澳瑞他汀D(MMAD：monomethyl auristatin D)、單甲基澳瑞他汀F(MMAF：monomethyl auristatin F)等，其中，較佳為單甲基澳瑞他汀E(MMAE：monomethyl auristatin E)。作為美登木素生物鹼，可例舉M1(N2'-去乙醯基-N2'-(3-巰基-1-氧代丙基)美登素)、DM4等。作為喜樹鹼衍生物，可例舉：拓樸替康(topotecan)、伊立替康(Irinotecan)、Dx-8951、Dx-d、SN-38等。

作為本發明之ADC中之較佳之L與D之組合，為SMCC-美登木素生物鹼、SPDB-美登木素生物鹼、MC-Val-Cit-PAB-單甲基澳瑞他汀、MC-Val-Cit-PAB-單甲基澳瑞他汀、MC-GGFG-喜樹鹼衍生物或MC-CL2-喜樹鹼衍生物，進而較佳為SMCC-DM1、SPDB-DM4、MC-Val-Cit-PAB-MMAE、MC-Val-Cit-PAB-MMAF、MC-GGFG-Dx8591或MC-CL2-SN-38，進而較佳為SMCC-DM1、SPDB-DM4、MC-Val-Cit-PAB-MMAE、MC-Val-Cit-PAB-MMAF、或MC-GGFG-Dx8591，進而較佳為MC-Val-Cit-PAB-MMAE。

本發明之ADC中之p為選自1～12之整數，較佳為1～10，更佳為2～9，尤佳為3～8。

本發明之ADC可藉由眾所周知之製法來製造。例如，於ADC中，藥物經由連接子而結合於抗體，連接子經由抗體之胺基或半胱胺酸殘基而結合於抗體，具體而言，藉由經由半胱胺酸之硫氫基與馬來醯亞胺之麥可加成反應、雙硫鍵形成反應進行之鍵形成、基於離胺酸胺基與羧酸之縮合進行之醯胺鍵形成等而結合。上述通式1之p表示能夠結合於1分子之抗體之藥物之分子數。將該分子數稱為DAR(Drug Antibody ratio，藥物抗體比)。

又，較佳之本發明之ADC係如下所述之ADC，即，於通式1中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性之可變區； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區。

L係6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)、或MC-CL2， D係單甲基澳瑞他汀、美登木素生物鹼、或喜樹鹼衍生物， p為選自1～12之整數。

進而較佳為如下所述之ADC，即，於通式1中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區。

L-D係SMCC-DM1、SPDB-DM4、MC-Val-Cit-PAB-MMAE、MC-Val-Cit-PAB-MMAF、MC-GGFG-Dx8591或MC-CL2-SN-38， p為選自1～12之整數。

L-D係SMCC-DM1、SPDB-DM4、MC-Val-Cit-PAB-MMAE、MC-Val-Cit-PAB-MMAF、或MC-GGFG-Dx8591， p為選自1～12之整數。

進而較佳為如下所述之ADC，即，於通式1中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體1)，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列。 (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體2)，上述重鏈包含序列編號40所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號42所表示之胺基酸序列。 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體3)，上述重鏈包含序列編號44所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號46所表示之胺基酸序列。 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列。

又，較佳之本發明之ADC係下述通式2所表示之ADC， [化1] [式中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3；以及 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3； p為選自1～12之整數]

進而較佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性之可變區； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區； p為選自1～12之整數；

進而較佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區； (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區； p為選自1～12之整數；

尤佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體1)，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體2)，上述重鏈包含序列編號40所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號42所表示之胺基酸序列； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體3)，上述重鏈包含序列編號44所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號46所表示之胺基酸序列； (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列； p為選自1～12之整數。

又，較佳之本發明之ADC係下述通式3所表示之ADC， [化2] [式中，Ab係下述(1)之抗體：(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； p為選自1～12之整數]

進而較佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係下述(4)之抗體：(4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、及包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3，且含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少85%、較佳為至少90%、進而較佳為至少91%、進而較佳為至少92%、進而較佳為至少93%、進而較佳為至少94%、進而較佳為至少95%、進而較佳為至少96%、進而較佳為至少97%、進而較佳為至少98%、尤佳為至少99%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區； p為選自1～12之整數；

進而較佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係下述(4)之抗體：(4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區； p為選自1～12之整數；

尤佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係下述(4)之抗體：(4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列； p為選自1～12之整數。

又，較佳之本發明之ADC係下述通式4所表示之ADC， [化3] [式中，Ab係下述(1)之抗體：(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； p為選自1～12之整數]

進而較佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係下述(4)之抗體，(4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區； p為選自1～12之整數；

尤佳為如下所述之ADC，即，於式中，Ab係下述(4)之抗體，(4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體(抗體4)，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列； p為選自1～12之整數。

又，較佳之本發明之ADC係下述通式5所表示之ADC， [化4] [式中、Ab係下述(1)之抗體：(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； p為選自1～12之整數]

又，較佳之本發明之ADC係下述通式6所表示之ADC， [化5] [式中、Ab係下述(1)之抗體：(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； p為選自1～12之整數]

又，較佳之本發明之ADC係下述通式7所表示之ADC， [化6] [式中，Ab係下述(1)之抗體：(1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； p為選自1～12之整數]

以下，示出本發明之ADC中所使用之連接子-藥物之結構及連接子之結構。再者，於連接子之圖中，經由虛線部在左側結合於抗體，在右側結合於藥物。

ADC1～4 (SMCC-DM1) [化7]

SMCC [化8]

DM1 [化9]

ADC5(SPDB-DM4) [化10]

SPDB [化11]

DM4 [化12]

ADC6(MC-Val-Cit-PAB-MMAE) [化13]

MC-Val-Cit-PAB [化14]

MMAE [化15]

ADC7(MC-GGFG-Dxd) [化16]

MC-GGFG [化17]

Dxd [化18]

ADC8(MC-GGFG-Dx8951) [化19]

MC-GGFG [化20]

DX8951 [化21]

ADC9(MC-Val-Cit-PAB-MMAF) [化22]

MC-Val-Cit-PAB [化23]

MMAF [化24]

ADC10(MC-CL2-SN-38) [化25]

MC-CL2 [化26]

SN-38 [化27]

＜抗癌劑＞本發明亦包含一種抗癌劑，其包含上述ADC作為有效成分。

本發明之抗體藥物複合體(ADC)發揮抗腫瘤效果之癌症只要為表現sGAG之癌症，便無特別限制。具體而言，可例舉：胃癌、胰臟癌、大腸癌、肝癌、肺癌、乳癌、皮膚癌、口腔癌、食道癌、膽管癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巢癌、腎細胞癌、尿路上皮癌、前列腺癌。較佳為實體癌，更佳為乳癌、卵巢癌、子宮癌、子宮頸癌、神經母細胞瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、膀胱癌、黑色素瘤、結腸癌、大腸癌、胃癌、肺癌、胰臟癌、前列腺癌、肝癌、鼻咽癌、腎癌、多發性骨髓瘤、口腔鱗狀上皮細胞癌、食道腺癌、食管鱗狀細胞癌、周邊神經鞘腫瘤(Int. J. Mol. Sci. 2020, 21(17), 5983)，尤佳為胃癌、胰臟癌、乳癌、大腸癌或肺癌。

本發明之ADC被引入至上述癌細胞中，從而發揮治療效果。

再者，在正常組織中亦表現少許sGAG，但本發明之ADC中所使用之抗體具有pH依賴性，因此於作為中性pH環境之正常組織中不結合於sGAG，故很大程度上不易引入至正常組織之細胞中，亦不產生對正常組織之副作用。

包含本發明之ADC之抗癌劑之投予形態並無限定，可藉由經口投予、非經口投予等進行投予。作為非經口投予，可例舉靜脈內投予、肌內投予、皮下投予等。進而，亦可藉由經黏膜投予(例如舌下或口腔投予)、經皮投予、直腸投予進行投予。投予可謂全身投予，亦可為對癌組織之局部投予。作為製劑之投予形態，可例舉：錠劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆粒劑、注射劑等。錠劑、膠囊劑、丸劑、散劑、顆粒劑等經口製劑可使用下述添加劑來製造：葡萄醣、蔗醣、乳醣、甘露醇等賦形劑；澱粉、海藻酸鈉等崩解劑；硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑；聚乙烯醇、明膠、羥丙基纖維素等結合劑；脂肪酸酯等界面活性劑；甘油等塑化劑等。注射劑可使用下述添加劑：水、蔗醣、山梨醇、木醣、海藻醣、果醣等醣類；山梨醇、甘露醇、木醣醇等醣醇；磷酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、麩胺酸緩衝液等緩衝液；脂肪酸酯等界面活性劑等。

ADC對需要治療之患者之投予量係根據所投予之患者之年齡、性別、嚴重程度等發生變動，可由主治醫師決定。例如，只要每次以0.05～10 mg/kg體重、較佳為0.1～2 mg/kg體重之量投予ADC即可。又，亦可以MMAE等之藥物當量計，每次投予0.001 nM～1000 nM、較佳為0.001 nM～100 nM。

投予量可僅1次，亦可每天分為2次、3次、4次或4次以上之次數進行投予。於該情形時，只要持續1天至數年，以適當之間隔進行投予即可。

包含本發明之ADC作為有效成分之抗癌劑亦可與其他抗癌劑或其他療法併用。作為其他療法，例如可例舉外科手術、放射治療、化學療法等。

本發明進而包含腫瘤之治療方法，其包括將上述ADC投予至需要治療之患者。成為治療對象之腫瘤如上所述，投予方法亦如上所述。

本發明進而包含上述ADC，其用於治療腫瘤。成為治療對象之腫瘤如上所述，投予方法亦如上所述。

本發明進而包含上述ADC之用途，其用於製造抗腫瘤劑。成為治療對象之腫瘤如上所述，投予方法亦如上所述。 [實施例]

其次，例舉實施例來詳細地說明本發明，但本發明並不限於其。

[實施例1：使用重組DNA方法之pH依賴性抗sGAG抗體單株抗體(mAB)之製作] 由表2中所記載之編碼抗體1～4之重鏈及輕鏈基因製作cDNA構建物。將編碼重鏈及輕鏈之cDNA構建物各者組入至pcDNA3質體(LifeTechnologies公司)，以各自克隆之組合導入至HEK293細胞而強制表現重鏈及輕鏈。利用0.22 μm過濾器對培養上清液進行過濾後，實施Protein A純化、凝膠過濾純化，從而獲取pH依賴性抗sGAG抗體。

[表2]

	CDR1	CDR2	CDR3	可變區	全長
抗體1	IgH	GGFITSHH (序列編號1)	LHHTGTT (序列編號2)	VREDSSSWHPGRYIQL (序列編號3)	核苷酸序列：序列編號19、胺基酸序列：序列編號20	核苷酸序列：序列編號35、胺基酸序列：序列編號36
IgK	QSLLQNNRYNR (序列編號4)	LGS	MHALEPPYT (序列編號6)	核苷酸序列：序列編號21、胺基酸序列：序列編號22	核苷酸序列：序列編號37、胺基酸序列：序列編號38
抗體2	IgH	GFTFNTYT (序列編號7)	ISLSSNTI (序列編號8)	ARAESYYDSHYYYNGLDV (序列編號9)	核苷酸序列：序列編號23、胺基酸序列：序列編號24	核苷酸序列：序列編號39、胺基酸序列：序列編號40
IgK	QSVGGRY (序列編號10)	AAS	QQTGSSPRT (序列編號12)	核苷酸序列：序列編號25、胺基酸序列：序列編號26	核苷酸序列：序列編號41、胺基酸序列：序列編號42
抗體3	IgH	GFTFSDYY (序列編號13)	ISISGTTR (序列編號14)	ARGPELLSQNYYYYYGMDV (序列編號15)	核苷酸序列：序列編號27、胺基酸序列：序列編號28	核苷酸序列：序列編號43、胺基酸序列：序列編號44
IgK	ETLLYRSNNKNY (序列編號16)	WAS	QQYYTTPRT (序列編號13)	核苷酸序列：序列編號29、胺基酸序列：序列編號30	核苷酸序列：序列編號45、胺基酸序列：序列編號46
抗體4	IgH	GGFITSHH (序列編號1)	LHHTGTT (序列編號2)	VREDSSSWHPGRYIQL (序列編號3)	核苷酸序列：序列編號31、胺基酸序列：序列編號32	核苷酸序列：序列編號47、胺基酸序列：序列編號48
IgK	QSLLQNNRYNR (序列編號4)	LGS	MHALEPPYT (序列編號6)	核苷酸序列：序列編號33、胺基酸序列：序列編號34	核苷酸序列：序列編號49、胺基酸序列：序列編號50

[實施例2：抗sGAG抗體之pH依賴性之對癌細胞之結合] 利用PBS(Phosphate Buffered Saline，磷酸鹽緩衝液)對胃癌細胞株NUGC-3(HSRRB)進行清洗後，利用刮板進行回收。測定細胞數，以成為1×10 ⁶細胞/孔之方式回收至96孔板。使用調整為各pH之1% BSA/PBS(pH 8.0～5.0)，對實施例1中所獲取之抗sGAG抗體及人IgG同種型對照(Invitrogen)進行稀釋，使之最終成為15 μg/mL，添加至NUGC-3中，於室溫下靜置30分鐘。sGAG抗體反應後，利用PBS(pH 8.0～5.0)來清洗細胞，添加溶解於1% BSA/PBS(pH 8.0～5.0)中之抗人IgG-Alexa Fluor 488(Invitrogen)。2次抗體反應後，利用PBS(pH 8.0～5.0)來清洗細胞，使用流式細胞儀(CytoFLEX S、Beckman Coulter公司)來檢測Alexa Fluor 488之訊號(MFI：Mean Fluorescence Intensity(平均螢光強度))。結果為，對於所評價之全部sGAG抗體，於pH6.8～5.5之低pH環境下發現了pH依賴性結合能力之上升(圖1)。

已知PNP-xyl(P- NITROPHENYL- BETA-D- XYLOPYRANOSIDE，對硝基苯基-β-吡喃木醣苷)藉由競爭性抑制而減少細胞表面之GAG量(Biochemical Pharmacology, 1991, 42, (10), pp. 1987-1995, Oncotarget, 2017, 8, (40), pp. 66960-66974)。sGAG抗體之pH依賴性結合係藉由對培養細胞進行PNP-Xyl(4 mM，48小時)處理而得到明顯抑制，因此表示pH依賴性之對細胞之結合並非由非特異性作用引起(圖2)。

[實施例3：sGAG抗體對複數種癌細胞株之結合能力之評價] 藉由與實施例2相同之方法來評價抗體1對複數種癌細胞株之結合性。對pH6.0下之同種型對照抗體與抗體1對胃癌細胞株(NCI-N87(ATCC)、NUGC-3(HSRRB))、胰臟癌細胞株(PANC-1(大日本製藥股份有限公司)、AsPC-1(JCRB)、KP-4(HSRRB)、SUIT2(JCRB))、乳癌細胞株(MDA-MB-231(ATCC))、大腸癌細胞株(SK-CO-1(ATCC)、HCT116(ATCC))、肺癌細胞株(NCI-H460(ATCC)、DMS273(ECACC)、A549(大日本製藥股份有限公司))之結合能力進行評價，結果為，在所評價之全部癌細胞株中發現了抗體1標的抗原之表現，顯示出可用於治療複數種癌症種類(圖3)。

[實施例4：抗sGAG抗體之抗體藥物複合體化] 本發明之ADC可藉由下述方法，使所附加之藥物連接子、與具有胺基、硫氫基之抗體進行反應而製作。關於使用抗sGAG抗體所獲取之ADC，將與抗體結合之藥物連接子之組合示於圖4。對於所製造之ADC，可藉由以下之共通操作來進行濃縮、緩衝液更換、純化、抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定，進行ADC之鑑定。

共通操作A：抗體或ADC溶液之濃縮向Amicon Ultra(100,000 MWCO，Millipore Co.)之容器內放入抗體或ADC溶液，藉由使用離心機(himac CF5RE，HITACHI)之離心操作(於2000 G～15000 G下進行5～20分鐘離心)使抗體或ADC溶液濃縮。共通操作B：抗體之濃度測定使用UV測定器(Nanodrop 8000，Thermo Fisher Scientific Inc.)，依據製造商規定之方法進行抗體濃度之測定。共通操作C：抗體/ADC之緩衝液更換及純化使用Zeba(商標)旋轉脫鹽管柱(Spin Desalting Column)(7K MWCO～40K MWCO，Cat.89890，Thermo Scientific)，依據製造商規定之方法，以D-PBS(Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline，杜氏磷酸鹽緩衝液)(Nacalai Tesque Inc.)進行平衡化。裝入抗體/ADC溶液後，以製造商規定之量之D-PBS使其溶出，藉由共通操作B來測定濃度。共通操作D-1：ADC中之抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定與抗體結合之DM1之藥物抗體比可藉由以下方式算出：測定ADC溶液在280 nm及252 nm之二波長下之UV吸光度後，進行下述計算。

此處，R表示ADC之A252/A280＝吸光度比，及表示使用抗體在252 nm或280 nm下之莫耳吸光計數，及表示DM1在252 nm或280 nm下之莫耳吸光計數。

及使用：、。

關於，根據各抗體之胺基酸序列，藉由已知之計算方法(Protein Science, 1995, 4, pp2411-2423)進行推定，抗體1使用214460 M ^-1cm ^-1，抗體2與3使用207360 M ^-1cm ^-1。

關於，使用各抗體之實測平均值。

共通操作D-2：ADC中之抗體每一分子之藥物平均結合數之測定關於藥物抗體比，藉由天然體積排阻色譜-質譜(SEC-MS)進行解析。於SEC-MS解析中，能夠基於抗體與藥物連接子結合後所導致之質量變化來測定藥物抗體比。將2 mg/mL之ADC注入至Acquity LC Xevo G2-S Q Tof MS(Waters Corporation)中，藉由等度洗提(100 mM乙酸銨水溶液，20 min)自管柱洗提ADC。對於所獲得之資料，使用MassLynx軟體(Waters Corporation)進行解析。管柱使用ACQUITY UPLC Protein BEH SEC Column, 200Å, 1.7 μm, 4.6 mm X 150 mm (Waters)，於流速為0.1～0.3 mL/min、管柱溫度為25℃之條件下實施測定。

[製造例1：抗體藥物複合體1(ADC1)] [化28]

步驟1：抗體與藥物連接子之接合對於包含0.15 mg之實施例1中所製作之抗體1的溶液，將包含10 mM之SMCC-DM1(MedChemExpress)之DMSO(Dimethyl sulfoxi，二甲基亞碸)溶液於室溫下以相對於抗體一分子成為10當量之方式添加至其中，以最終成為10%之方式添加DMA(N,N-二甲基乙醯胺)。使用旋轉器於室溫下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體1(ADC1)。

步驟2：純化及特性評價將含有步驟1中所獲得之抗體藥物複合體1(ADC1)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-1獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：0.255 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.5

[製造例2：抗體藥物複合體2(ADC2)] [化29]

步驟1：抗體與藥物連接子之接合對於包含0.29 mg之實施例1中所製作之抗體2之溶液，將包含10 mM之SMCC-DM1(MedChemExpress)之DMSO溶液於室溫下以相對於抗體一分子成為10當量之方式添加於其中，以最終成為10%之方式添加DMA。使用旋轉器於室溫下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體2(ADC2)。

步驟2：純化及特性評價將含有步驟1中所獲得之抗體藥物複合體2(ADC2)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-1而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：2.24 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5

[製造例3：抗體藥物複合體3(ADC3)] [化30]

步驟1：抗體與藥物連接子之接合對於包含0.18 mg之實施例1中所製作之抗體3之溶液，將包含10 mM之SMCC-DM1(MedChemExpress)之DMSO溶液於室溫下以相對於抗體一分子成為10當量之方式添加於其中，以最終成為10%之方式添加DMA。使用旋轉器於室溫下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體3(ADC3)。

步驟2：純化及特性評價將含有步驟1中所獲得之抗體藥物複合體3(ADC3)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-1而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：0.182 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5

[製造例4：抗體藥物複合體4(ADC4)] [化31]

步驟1：抗體與藥物連接子之接合對於包含1 mg之實施例1中所製作之抗體4之溶液，將包含10 mM之SMCC-DM1(MedChemExpress)之DMSO溶液於室溫下以相對於抗體一分子成為9.6當量之方式添加於其中，以最終成為10%之方式添加DMA。使用旋轉器於室溫下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體4(ADC4)。

步驟2：純化及特性評價將含有步驟1中所獲得之抗體藥物複合體4(ADC4)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：0.503 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.9

[製造例5：抗體藥物複合體5(ADC5)] [化32]

步驟1：抗體與藥物連接子之接合對於包含1 mg之實施例1中所製作之抗體4之溶液，將包含10 mM之SPDB-DM4(MedChemExpress)之DMSO溶液於室溫下以相對於抗體一分子成為16當量之方式添加於其中，以最終成為20%之方式添加DMA。使用旋轉器於室溫下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體5(ADC5)。

步驟2：純化及特性評價將含有步驟1中所獲得之抗體藥物複合體5(ADC5)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：0.500 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1

[製造例6：抗體藥物複合體6(ADC6)] [化33]

步驟1：抗體之還原對於包含64.8 mg之實施例1中所製作之抗體4之溶液，添加5 mM TCEP(Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride，三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽)水溶液(相對於抗體一分子為20當量)，於37℃下進行2小時培養，藉此使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。

步驟2：抗體與藥物連接子之接合向步驟1中所獲得之溶液中，於室溫下添加包含10 mM之MC-VC-PAB-MMAE(MedChemExpress)之DMSO溶液(相對於抗體一分子為10當量)，使用旋轉器於4℃下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體6(ADC6)。

步驟3：純化及特性評價將含有步驟2中所獲得之抗體藥物複合體6(ADC6)之溶液藉由共通操作A、C進行純化、濃縮、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：4.38 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.8

[製造例7：抗體藥物複合體7(ADC7)] [化34]

步驟1：抗體之還原向包含6.5 mg之實施例1中所製作之抗體4之溶液中，添加5 mM TCEP水溶液(相對於抗體一分子為30當量)，於37℃下進行2小時培養，藉此使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。

步驟2：抗體與藥物連接子之接合相對於上述溶液中之抗體1 mg量，於室溫下添加包含10 mM之MC-GGFG-Dxd(MedChemExpress)之DMSO溶液(相對於抗體一分子為9.6當量)，使用旋轉器於4℃下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體7(ADC7)。

步驟3：純化及特性評價將含有步驟2中所獲得之抗體藥物複合體7(ADC7)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：1.17 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.5

[製造例8：抗體藥物複合體8(ADC8)] [化35]

步驟2：抗體與藥物連接子之接合相對於步驟1中所獲得之溶液中之抗體1 mg量，於室溫下添加包含10 mM之MC-GGFG-Dx8951(MedChemExpress)之DMSO溶液(相對於抗體一分子為9.6當量)，使用旋轉器於4℃下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體8(ADC8)。

步驟3：純化及特性評價將含有步驟2中所獲得之抗體藥物複合體8(ADC8)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：1.07 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.9

[製造例9：抗體藥物複合體9(ADC9)] [化36]

步驟2：抗體與藥物連接子之接合相對於步驟1中所獲得之溶液中之抗體1 mg量，於室溫下添加包含10 mM之MC-VC-PAB-MMAF(MedChemExpress)之DMSO溶液(相對於抗體一分子為9.6當量)，使用旋轉器於4℃下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體9(ADC9)。

步驟3：純化及特性評價將含有步驟2中所獲得之抗體藥物複合體9(ADC9)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：1.64 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：1.2

[製造例10：抗體藥物複合體10(ADC10)] [化37]

步驟2：抗體與藥物連接子之接合相對於步驟1中所獲得之溶液中之抗體1 mg量，於室溫下添加包含10 mM之MC-CL2-SN38(MedChemExpress)之DMSO溶液(相對於抗體一分子為9.6當量)，使用旋轉器於4℃下攪拌24小時，使藥物連接子與抗體結合，獲得抗體藥物複合體10(ADC10)。

步驟3：純化及特性評價將含有步驟2中所獲得之抗體藥物複合體10(ADC10)之溶液藉由共通操作C進行純化、濃度測定，藉由共通操作D-2而獲得下述特性值。對於製造物，藉由動態光散射法而確認到不含凝集體。抗體濃度：1.65 mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.0

[實施例5：ADC對複數種癌細胞株之結合能力之評價] 關於實施例4中所製作之ADC1～10與實施例1中所製作之抗體1～4，與實施例2同樣地藉由流式細胞分析來評價對胃癌細胞株NUGC-4之結合能力及pH依賴性。將抗體及ADC自300 μg/mL起以公比3進行連續稀釋，評價pH7.4及pH6.0下之Median fluorescence intensity(MFI，平均螢光強度)。根據所獲取之資料，使用XLfit軟體(IDBS公司)來分析資料，決定對NUGC-4之EC ₅₀。結果為，對於抗體1～4均未發現由ADC化所導致之活性降低(圖5)。

[實施例6：ADC之體外(Ex vivo)血漿中穩定性評價] 對於試驗例4中所製作之ADC6～10，評價小鼠及人類之血漿中穩定性。將調整為1 mg/mL之各ADC以最終濃度成為20 μg/mL之方式添加至人類及BALB/c小鼠血漿(抗凝固劑：Heparin Na)中，並進行48小時培養。利用乙醇或乙腈/甲醇(9/1，v/v)對培養試樣進行去蛋白質後，使用LC/MS/MS(Liquid Chromatography with tandem mass spectrometry，液相色譜串聯質譜法)來測定來自所提取之ADC之釋放藥劑。根據下式求出自由有效載荷擴散(Free payload release)(%)。結果可知，ADC6～9在小鼠及人類之血漿中穩定(圖6)。

[實施例7：由ADC傳播之細胞毒殺性] 使用實施例4中所示之步序來製作ADC1～3，利用CellTiter-Glo 2.0發光法細胞活力檢測套組(luminescent cell viability assay)(Promega公司)來評價對胃癌細胞株NUGC-3之細胞毒性。於96孔板中將各細胞以1000細胞/孔進行接種，添加ADC，於37℃下進行5天培養。5天後，根據製造者之建議，實施CellTiter-Glo 2.0 luminescent cell viability assay。相對發光量係使用EnSpire多模式讀板儀(Multimode Plate Reader)(PerkinElmer公司)而測定，使用XLfit軟體(IDBS公司)來分析資料，針對各癌細胞株決定IC ₅₀(圖7)。結果為，儘管僅抗體1～3未對NUGC-3顯示出細胞毒殺性，但藉由將抗體1～3進行ADC化，使得任一ADC均顯示出對NUGC-3之細胞毒性，從而提示了本發明ADC之作為抗腫瘤劑之有用性。

又，使用實施例4中所示之步序來製作藥物連接子不同之ADC4～10，藉由與上述相同之方法來評價在胰臟癌細胞株(Capan-1)及胃癌細胞株(NUGC-4)中之細胞毒性(圖8)。結果確認到，在除ADC7以外之所有實施例中，呈現出對NUGC-4及Capan-1之增殖抑制效果。再者，關於作為ADC7中所使用之藥物連接子之MC-GGFG-Dxd，例如與作為抗腫瘤劑而投入市場之trastuzumab deruxtecan(抗HER2抗體之ADC)中所使用之藥物連接子相同，該藥劑連接子本身並非無活性。即，即便作為藥物連接子具有活性，但就與抗體之相關性之觀點而言，在進行ADC化時未必顯示活性。又，MC-GGFG-Dx8951係在結構上與ADC7之藥物連接子相近之藥物連接子，由於使用該MC-GGFG-Dx8951之ADC8顯示出增殖抑制效果，故而很難預測在進行ADC化時是否實際上顯示活性。

[實施例8：ADC之抗腫瘤效果(體內)] 使用胃癌(NUGC-4)、胰臟癌(BxPC-3)之細胞株來製作帶癌動物模型。首先，準備各癌細胞，對裸小鼠之右側胸部進行皮下接種(BxPC-3：5×10 ⁶個/100 ul、NUGC-4：2×10 ⁶個/100 ul)。於所接種之腫瘤體積達到100-300 mm ³左右之時間點，將裸小鼠隨機分配成對照群(投予PBS)及試驗群，將上述ADC6以5 mg/kg、10 mg/kg或20 mg/kg之量進行靜脈內注射。作為投予頻度，如圖9中所示，採用每週投予、隔週投予及單次投予。每週測定2次腫瘤之大小，藉由以下式計算出腫瘤之大小：腫瘤之大小(mm ³)＝(長軸×短軸 ²)/2

如圖9所示，自試驗開始後7天起，確認到與對照群相比，ADC6之投予群中之腫瘤之生長得到抑制。該結果顯示了本發明ADC之明顯之胰臟癌及胃癌生長抑制效果。又，關於抗體4，於pH6條件下在正常細胞株(MSC、HUVEC)中亦發現標的之表現，相對於此，即便於本發明ADC之高劑量投予群中亦未發現體重減少等。根據該結果，認為本發明ADC藉由其pH依賴性而選擇性地結合於腫瘤組織，提示了本發明ADC具有較高之安全性，可用於治療。 [序列表非關鍵文字]

序列編號1：抗體1及抗體4之重鏈之CDR1之胺基酸序列序列編號2：抗體1及抗體4之重鏈之CDR2之胺基酸序列序列編號3：抗體1及抗體4之重鏈之CDR3之胺基酸序列序列編號4：抗體1及抗體4之輕鏈之CDR1之胺基酸序列 LGS：抗體1及抗體4之輕鏈之CDR2之胺基酸序列序列編號6：抗體1及抗體4之輕鏈之CDR3之胺基酸序列序列編號7：抗體2之重鏈之CDR1之胺基酸序列序列編號8：抗體2之重鏈之CDR2之胺基酸序列序列編號9：抗體2之重鏈之CDR3之胺基酸序列序列編號10：抗體2之輕鏈之CDR1之胺基酸序列 AAS：抗體2之輕鏈之CDR2之胺基酸序列序列編號12：抗體2之輕鏈之CDR3之胺基酸序列序列編號13：抗體3之重鏈之CDR1之胺基酸序列序列編號14：抗體3之重鏈之CDR2之胺基酸序列序列編號15：抗體3之重鏈之CDR3之胺基酸序列序列編號16：抗體3之輕鏈之CDR1之胺基酸序列 WAS：抗體3之輕鏈之CDR2之胺基酸序列序列編號18：抗體3之輕鏈之CDR3之胺基酸序列序列編號19：編碼抗體1之重鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號20：抗體1之重鏈之可變區之胺基酸序列序列編號21：編碼抗體1之輕鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號22：抗體1之輕鏈之可變區之胺基酸序列序列編號23：編碼抗體2之重鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號24：抗體2之重鏈之可變區之胺基酸序列序列編號25：編碼抗體2之輕鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號26：抗體2之輕鏈之可變區之胺基酸序列序列編號27：編碼抗體3之重鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號28：抗體3之重鏈之可變區之胺基酸序列序列編號29：編碼抗體3之輕鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號30：抗體3之輕鏈之可變區之胺基酸序列序列編號31：編碼抗體4之重鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號32：抗體4之重鏈之可變區之胺基酸序列序列編號33：編碼抗體4之輕鏈之可變區之cDNA之核苷酸序列序列編號34：抗體4之輕鏈之可變區之胺基酸序列序列編號35：抗體1之重鏈之核苷酸序列序列編號36：抗體1之重鏈之胺基酸序列序列編號37：抗體1之輕鏈之核苷酸序列序列編號38：抗體1之輕鏈之胺基酸序列序列編號39：抗體2之重鏈之核苷酸序列序列編號40：抗體2之重鏈之胺基酸序列序列編號41：抗體2之輕鏈之核苷酸序列序列編號42：抗體2之輕鏈之胺基酸序列序列編號43：抗體3之重鏈之核苷酸序列序列編號44：抗體3之重鏈之胺基酸序列序列編號45：抗體3之輕鏈之核苷酸序列序列編號46：抗體3之輕鏈之胺基酸序列序列編號47：抗體4之重鏈之核苷酸序列序列編號48：抗體4之重鏈之胺基酸序列序列編號49：抗體4之輕鏈之核苷酸序列序列編號50：抗體4之輕鏈之胺基酸序列本說明書中所引用之全部發行物、專利及專利申請案係以引用之形式直接併入至本說明書中。

圖1係表示各sGAG抗體之pH依賴性結合活性之圖。圖2A～C係表示各sGAG抗體之pH依賴性結合因sGAG之形成抑制而依賴於標的抗原之圖。圖3係使用抗體1來表示正常細胞株及癌細胞株中之標的表現之圖。圖4-1係表示各ADC之抗體與連接子-有效載荷(Linker-Payload)之組合之圖(其1)。圖4-2係表示各ADC之抗體與連接子-有效載荷之組合之圖(其2)。圖5係對於各抗體及其ADC，表示將pH6.0之最大結合活性設為100%時之對NUGC-4細胞株之50%有效濃度的圖。圖6係對於各ADC，表示小鼠及人類血漿中之藥物連接子之穩定性的圖。圖7係表示抗體1～3及其ADC1～3對NUGC-3之殺細胞效果之圖。圖8係表示ADC4～10對NUGC-4及Capan-1之殺細胞效果之圖。圖9-1A、B係表示ADC6對人類胰腺癌細胞株BxPC-3皮下移植小鼠模型之抗腫瘤效果之圖。圖9-2A、B係表示ADC6對人類硬質胃癌細胞株NUGC-4皮下移植小鼠模型之抗腫瘤效果之圖。圖10係表示序列編號1～4、6～10之序列之圖。圖11係表示序列編號12～16、18～20之序列之圖。圖12係表示序列編號21～26之序列之圖。圖13係表示序列編號27～32之序列之圖。圖14係表示序列編號33～36之序列之圖。圖15係表示序列編號37～39之序列之圖。圖16係表示序列編號40～42之序列之圖。圖17係表示序列編號43～45之序列之圖。圖18係表示序列編號46～48之序列之圖。圖19係表示序列編號49及50之序列之圖。

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Claims

一種抗體，其係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣者，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3；以及 (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3。
如請求項1之抗體，其係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈。
如請求項1或2之抗體，其係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號36所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號36所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號38所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號38所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號40所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號40所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號42所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號42所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號44所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號44所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號46所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號46所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號48所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號50所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈。
如請求項1至3中任一項之抗體，其係人類抗體。
如請求項1至4中任一項之抗體，其亞型為IgG1抗體。
如請求項1至5中任一項之抗體，其於酸性pH區域內以較高之親和性結合。
一種抗體藥物複合體(ADC)，其由下述通式1表示： Ab-(L-D)p (1) [式中，Ab係特異性地結合於硫酸化醣胺聚醣之抗體，且係選自由以下之(1)～(3)所組成之群中之至少任一種， (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號7所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號8所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號9所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號10所表示之胺基酸序列之CDR1、包含AAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號12所表示之胺基酸序列之CDR3； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號13所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號14所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號15所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號16所表示之胺基酸序列之CDR1、包含WAS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號18所表示之胺基酸序列之CDR3； L係6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)、或MC-CL2， D係單甲基澳瑞他汀、美登木素生物鹼、或喜樹鹼衍生物， p為選自1～12之整數]。
如請求項7之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號20所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號22所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號24所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號24所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號26所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號26所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號28所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號28所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號30所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號30所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區的重鏈、或含有與序列編號32所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的重鏈，上述輕鏈為含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區的輕鏈、或含有與序列編號34所表示之胺基酸序列具有至少90%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之可變區的輕鏈。
如請求項7或8之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係選自由以下之(1)～(4)所組成之群中之至少任一種： (1)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號36所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號36所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號38所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號38所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (2)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號40所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號40所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號42所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號42所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈； (3)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號44所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號44所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號46所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號46所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈；以及 (4)包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈為包含序列編號48所表示之胺基酸序列之重鏈、或與序列編號48所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之重鏈，上述輕鏈為包含序列編號50所表示之胺基酸序列之輕鏈、或與序列編號50所表示之胺基酸序列具有至少95%之序列同一性且具有對硫酸化醣胺聚醣之結合活性之輕鏈。
如請求項7至9中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號1所表示之胺基酸序列之CDR1、包含序列編號2所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號3所表示之胺基酸序列之CDR3，上述輕鏈含有包含序列編號4所表示之胺基酸序列之CDR1、包含LGS所表示之胺基酸序列之CDR2、包含序列編號6所表示之胺基酸序列之CDR3。
如請求項7至10中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區。
如請求項7至11中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列。
如請求項7至10中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區。
如請求項7至10中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列。
如請求項7至14中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係IgG1抗體。
如請求項7至15中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係人類抗體。
如請求項7至16中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係於酸性pH區域內以高於中性pH區域之親和性結合之抗體。
如請求項7至17中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中L係6-馬來醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄氧基羰基(MC-Val-Cit-PAB)、6-馬來醯亞胺基己醯基-甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(MC-GGFG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸-N-羥基丁二醯亞胺酯(SPDB)或MC-CL2。
如請求項7至18中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中D係MMAE、MMAF、DM1、DM4、Dx8951、Dxd或SN-38。
如請求項7至19中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中L-D係SMCC-DM1、SPDB-DM4、MC-Val-Cit-PAB-MMAE、MC-Val-Cit-PAB-MMAF、MC-GGFG-Dx8591或MC-CL2-SN-38。
如請求項7至10或請求項15至20中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號20所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號22所表示之胺基酸序列之可變區， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。
如請求項7至10或請求項15至20中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號36所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號38所表示之胺基酸序列， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。
如請求項7至10或請求項15至20中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈含有包含序列編號32所表示之胺基酸序列之可變區，上述輕鏈含有包含序列編號34所表示之胺基酸序列之可變區， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。
如請求項7至10或請求項15至20中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中Ab係包含下述重鏈及下述輕鏈之抗體，上述重鏈包含序列編號48所表示之胺基酸序列，上述輕鏈包含序列編號50所表示之胺基酸序列， L-D係MC-Val-Cit-PAB-MMAE。
如請求項7至24中任一項之抗體藥物複合體(ADC)，其中p為3～8。
一種醫藥組合物，其含有如請求項7至25中任一項之抗體藥物複合體(ADC)、及載體。
一種抗腫瘤劑，其含有如請求項7至25中任一項之抗體藥物複合體(ADC)作為有效成分。
如請求項27之抗腫瘤劑，其用於治療表現硫酸化醣胺聚醣之癌症。
如請求項27之抗腫瘤劑，其用於治療胃癌、胰臟癌、乳癌、大腸癌或肺癌。