ES2282133T3 - Anticuerpos frente a la ctla-4 humano y sus usos. - Google Patents

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Abstract

Un anticuerpo humano terapéuticamente eficaz o parte de unión a antígeno del mismo que se une a CTLA4 sobre la superficie de células T humanas con una afinidad de unión de aproximadamente 108 M-1 o superior, comprendiendo el anticuerpo: (a) una región variable de cadena pesada de un gen de VH 3-30.3 humano; y (b) una región variable de cadena ligera de un gen de VK A-27 humano.

Description

Anticuerpos frente a CTLA-4 humano y sus usos.
Campo de la invención
La presente invención se refiere generalmente a inmunología molecular y al tratamiento de enfermedades humanas. En particular, se refiere a anticuerpos de secuencia humana novedosos frente a CTLA-4 humano y a procedimientos para tratar infecciones y enfermedades humanas usando estos anticuerpos.
Antecedentes de la invención
El sistema inmunitario de vertebrados requiere múltiples señales para lograr una activación inmunitaria óptima; véase, por ejemplo, Janeway, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 54:1-14 (1989); Paul William E., ed. Raven Press, N.Y., Fundamental Immunology, 4ª edición (1998), particularmente los capítulos 12 y 13, páginas 411 a 478. Las interacciones entre linfocitos T (células T) y células presentadoras de antígenos (CPA) son esenciales para la respuesta inmunitaria. Los niveles de muchas moléculas cohesivas encontradas en las células T y CPA aumentan durante una respuesta inmunitaria (Springer et al., A. Rev. Immunol. 5:223-252 (1987); Shaw y Shimuzu, Current Opinion in Immunology, Eds. Kindt y Long, 1:92-97 (1988)); y Hemler, Immunology Today 9:109-113 (1988)). Los niveles aumentados de estas moléculas pueden ayudar a explicar por qué las CPA activadas son más eficaces para estimular la proliferación de células T específicas de antígeno que las CPA en reposo (Kaiuchi et al., J. Immunol. 131:109-114 (1983); Kreiger et al., J Immunol. 135:2937-2945 (1985); McKenzie, J. Immunol. 141:2907-2911 (1988); y Hawrylowicz y Unanue, J. Immunol. 141:4083-4088 (1988)).
La respuesta inmunitaria de células T es un proceso complejo que implica interacciones célula-célula (Springer et al., A. Rev. Immunol. 5:223-252 (1987)), particularmente entre células T y auxiliares tales como CPA, y la producción de mediadores inmunitarios solubles (citocinas y linfocinas) (Dinarello (1987) New Engl. Jour. Med 317:940-945; Sallusto (1997) J. Exp. Med. 179:1109-1118). Esta respuesta está regulada por varios receptores de superficie de células T, incluyendo el complejo receptor de células T (Weiss (1986) Ann. Rev. Immunol. 4:593-619) y otras moléculas de superficie "auxiliares" (Allison (1994) Curr. Opin. Immunol. 6:414-419; Springer (1987) citado anteriormente). Muchas de estas moléculas auxiliares son antígenos de diferenciación (CD) de superficie celular que se producen de manera natural definidos por la reactividad de anticuerpos monoclonales sobre la superficie de células (McMichael, Ed., Leukocyte Typing III, Oxford Univ. Press, Oxford, N.Y. (1987)).
Estudios tempranos sugieren que la activación de linfocitos B requiere dos señales (Bretscher (1970) Science 169:1042-1049) y ahora se cree que todos los linfocitos requieren dos señales para su activación óptima, una señal clonal o específica de antígeno, así como una segunda señal no específica de antígeno. (Janeway, citado anteriormente). Freeman (1989) J. Immunol. 143:2714-2722) aisló y secuenció un clon de ADNc que codifica para un antígeno de activación de células B reconocido por el AcM B7 (Freeman(1987) J. Immunol. 138:3260). Se ha mostrado que las células COS transfectadas con este ADNc se tiñen tanto por AcM B7 como por AcM BB-1 marcados (Clark (1986) Human Immunol. 16:100-113; Yokochi (1981) J. Immunol. 128:823; Freeman et al., (1989) citado anteriormente; Freeman et al. (1987), citado anteriormente). Además, la expresión de este antígeno se ha detectado en células de otros linajes, tales como monocitos (Freeman et al., citado anteriormente).
La respuesta antigénica de células T cooperadoras (Th) requiere señales proporcionadas por CPA. La primera señal se inicia mediante interacción del complejo de célula T y receptor (Weiss, J. Clin. Invest. 86:1015 (1990)) con antígeno presentado en el contexto de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase II en la CPA (Allen, Immunol. Today 8:270 (1987)). Esta señal específica de antígeno no es suficiente para generar una respuesta completa, y en ausencia de una segunda señal puede conducir realmente a la inactivación clonal o anergia (Schwartz, Science 248:1349 (1990)). Se ha demostrado el requisito de una segunda señal "co-estimulante" proporcionada por el MHC en varios sistemas experimentales (Schwartz, citado anteriormente; Weaver y Unanue, Immunol. Today 11:49 (1990)). La naturaleza molecular de esta segunda señal no se entiende completamente, aunque resulta claro en algunos casos que ambas moléculas solubles tales como interleucina (IL)-1 (Weaver y Unanue, citado anteriormente) y receptores de membrana implicados en la adhesión celular (Springer, Nature 346:425 (1990)) pueden proporcionar señales co-estimulantes.
El antígeno CD28, una glucoproteína homodimérica de la superfamilia de las inmunoglobulinas (Aruffo y Seed, Proc. Natl. Acad. Sci. 84:8573-8577 (1987)), es una molécula auxiliar encontrada en la mayoría de las células T humanas maduras (Damle et al., J. Immunol. 131:2296-2300 (1983)). La evidencia actual sugiere que esta molécula funciona como una ruta de activación de células T alternativa distinta de la iniciada por el complejo receptor de células T (June et al., Mol. Célula. Biol. 7:4472-4481 (1987)). Los anticuerpos monoclonales (AcM) reactivos con antígeno CD28 pueden aumentar las respuestas de células T iniciadas por diversos estímulos policlonales (revisado por June et al., citado anteriormente). Estos efectos estimulantes pueden resultar de la producción de citoquinas inducida por AcM (Thompson et al., Proc. Natl. Acad. Sci 86:1333-1337 (1989); y Lindsten et al., Science 244:339-343 (1989)) como consecuencia de la estabilización de ARNm aumentada (Lindsten et al. (1989), citado anteriormente). Los AcM anti-CD28 también pueden tener efectos inhibitorios, es decir, pueden bloquear las reacciones de linfocitos mixtos autólogos (Damle et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 78:5096-6001(1981)) y la activación de clones de células T específicas de antígeno (Lesslauer et al., Eur. J. Immunol. 16:1289-1296 (1986)).
Algunos estudios han indicado que CD28 es un contrarreceptor para el antígeno de activación de células B, B7BB-1 (Linsley et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:5031-5035 (1990)). El antígeno B7/BB-1 se denomina a continuación en el presente documento "antígeno B7". Los ligandos de B7 también son miembros de la superfamilia de inmunoglobulinas pero tiene, al contrario que CD28, dos dominios de Ig en su región extracelular, un dominio de tipo variable (V) N-terminal seguido por un dominio de tipo constante (C).
La administración de una señal co-estimulante no específica a la célula T requiere al menos dos miembros de la familia de B7 homólogos encontrados sobre la CPA, B7-1 (también denominado B7, B7.1, o CD80) y B7-2 (también denominado B7.2 o CD86), ambos de los cuales pueden administrar señales co-estimulantes a células T mediante CD28. La co-estimulación mediante CD28 estimula la activación de células T.
Usando fusiones genéticas de las partes extracelulares de antígeno B7 y receptor de CD28, e inmunoglobulina (Ig) C gamma 1 (cadenas pesadas de la región constante), se han caracterizado interacciones entre CD28 y antígeno B7 (Linsley et al., J. Exp. Med. 173:721-730 (1991)). Se ha mostrado que la proteína de fusión B7Ig inmovilizada, así como células CHO positivas para B7, co-estimulan la proliferación de células T.
La estimulación de células T con células CHO positivas para B7 también estimula específicamente niveles aumentados de transcriptos para IL-2. Estudios adicionales han mostrado que AcM anti-CD28 inhibieron la producción de IL-2 inducida en ciertas líneas celulares de leucemia de células T mediante interacciones celulares con una línea de leucemia de células B (Kohno et al., Célula. Immunol. 131-1-10 (1990)).
CD28 tiene un único dominio de tipo región variable (V) extracelular (Aruffo y Seed, citado anteriormente). Se ha identificado una molécula homóloga, CTLA-4, mediante exploración diferencial de una biblioteca de ADNc de célula T citolítica murina (Brunet (1987) Nature 328:267-270).
CTLA-4 es una molécula de superficie de células T que se identificó originalmente mediante exploración diferencial de una biblioteca de ADNc de célula T citolítica murina (Brunet et al., Nature 328:267-270(1987)). CTLA-4 también es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas (Ig); CTLA-4 comprende un único dominio de Ig extracelular. Se han encontrado transcriptos de CTLA-4 en poblaciones de células T que tienen actividad citotóxica, lo que sugiere que CTLA-4 puede funcionar en la respuesta citolítica (Brunet et al., citado anteriormente; Brunet et al., Immunol. Rev. 103-21-36 (1988)). Los investigadores han notificado la clonación y mapeo de un gen para la contraparte humana de CTLA-4 (Dariavach et al., Eur. J. Immunol. 18: 1901-1905 (1988)) frente a la misma región cromosómica (2q33-34) que CD28 (Lafage-Pochitaloff et al., Immunogenetics 31: 198-201 (1990)). La comparación de secuencias entre este ADN de CTLA-4 humano y el que codifica para proteínas de CD28 revela una homología de secuencia significativa, con el mayor grado de homología en las regiones de yuxtamembrana y citoplasmática (Brunet et al., 1988, citado anteriormente; Dariavach et al., 1988, citado anteriormente).
Algunos estudios han sugerido que CTLA-4 tiene una función análoga como co-estimulante secundario (Linsley et al., J. Exp. Med. 176: 1595-1604 (1992); Wu et al., J Exp. Med. 185: 1327-1335 (1997) Lindsley, P. et al. patentes estadounidenses números 5.977.318; 5.968.510; 5.885.796; y 5.885.579). Sin embargo, otros han notificado que CTLA-4 tiene un papel opuesto como amortiguador de la activación de células T (Krummel (1995) J. Exp. Med. 182: 459-465); Krummel et al., Int'l Immunol. 8: 519-523 (1996); Chambers et al., Immunity. 7: 885-895 (1997)). Se ha notificado que ratones carentes de CTLA-4 padecen linfoproliferación masiva (Chambers et al., citado anteriormente). Se ha notificado que el bloqueo de CTLA-4 aumenta las respuestas de células T in vitro (Walunas et al., Immunity. 1: 405-413 (1994)) e in vivo (Kearney (1995) J. Immunol.155: 1032-1036), empeora la inmunidad antitumoral (Leach (1996) Science. 271: 1734-1736), y aumenta la enfermedad autoinmunitaria inducida (Luhder (1998) J. Exp. Med. 187: 427-432). También se ha notificado que CTLA-4 tiene un impacto alternativo o adicional sobre el carácter inicial de la respuesta inmunitaria de células T (Chambers (1997) Curr. Opin. Immunol. 9:396-404; Bluestone (1997) J. Immunol. 158: 1989-1993; Thompson (1997) Immunity 7: 445-450). Esto es consistente con la observación de que algunos pacientes autoinmunitarios tienen auto-anticuerpos frente a CTLA-4. Es posible que los anticuerpos de bloqueo de CTLA-4 tengan un papel patogénico en estos pacientes (Matsui (1999) J. Immunol. 162:
4328-4335).
Se han usado anticuerpos frente a CTLA-4 no humanos en los diversos estudios tratados anteriormente. Además, el documento WO98/42752 describe anticuerpos anti-CTLA4 murinos y humanizados. El documento WO95/33770 describe anticuerpos monoclonales murinos anti-CTLA-4 y formas humanizadas y quiméricas de estos anticuerpos murinos. El documento WO96/34096 describe anticuerpos derivados de "xenoratones" inmunizados que se generan para expresar regiones variables de anticuerpo humano. Se menciona CTLA-4 como uno de los muchos posibles antígenos frente a los que pueden generarse anticuerpos. El documento WO00/37504 se publicó el 26 de junio de 2000 y reivindica la fecha de prioridad del 23 de diciembre de 2005. Describe anticuerpos anti-CTLA-4 generados mediante inmunización de un ratón transgénico que expresa genes de anticuerpos humanos. El documento WO00/32231 se publicó el 8 de junio de 2000 y reivindica la fecha de prioridad del 3 de diciembre de 1998. Describe anticuerpos de hámster y murinos frente a CTLA-4 y procedimientos para producir anticuerpos anti-CTLA-4 humanizados.
Sin embargo, uno de los principales impedimentos a los que se enfrenta el desarrollo de aplicaciones terapéuticas y de diagnóstico in vivo para anticuerpos en seres humanos es la inmunogenicidad intrínseca de las inmunoglobulinas no humanas. Por ejemplo, cuando se administran a pacientes inmunocompetentes humanos las dosis terapéuticas de anticuerpos monoclonales de roedores, los pacientes producen anticuerpos frente a las secuencias de inmunoglobulina de roedor; estos anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA) neutralizan los anticuerpos terapéuticos y pueden provocar toxicidad aguda.
Éstas y otras deficiencias en los anticuerpos anteriores se superan proporcionando anticuerpos humanos frente a CTLA-4 por la presente invención.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un anticuerpo humano terapéuticamente eficaz o una parte de unión a antígeno del mismo que se une a CTLA4 sobre la superficie de células T humanas con una afinidad de unión de aproximadamente 10^{8} M^{-1} o superior, anticuerpo que comprende: (a) una región variable de cadena pesada de un gen VH 3-30.3 humano; y (b) una región variable de cadena ligera de un gen VK A-27 humano.
Otros aspectos de la invención se exponen en las reivindicaciones adjuntas.
El anticuerpo de secuencia humana terapéuticamente eficaz se une a CTLA-4 sobre la superficie celular de células T humanas normales. Las subpoblaciones de células T marcadas mediante antígenos CD CD4, CD8, CD25, y CD69 pue-
den permanecer estables durante y tras la administración del anticuerpo de secuencia humana terapéuticamente eficaz.
El anticuerpo de secuencia humana puede tolerarse bien en un paciente.
También se describe en el presente documento una composición de anticuerpos policlonales que comprende una pluralidad de anticuerpos de secuencia humana que se unen específicamente a CTLA-4 humano. La composición de anticuerpos policlonales puede comprender al menos aproximadamente 2, 5, 10, 50, 100, 500 ó 1000 anticuerpos de secuencia humana diferentes que se unen específicamente a CTLA-4 humano.
En el presente documento se describen anticuerpos de secuencia humana que se unen específicamente a CTLA-4 humano y que bloquean la unión de CTLA-4 humano con B7 humano o que no bloquean la unión de CTLA-4 humano con B7 humano.
La invención proporciona anticuerpos de secuencia humana que se unen a CTLA-4 humano con una constante de asociación en equilibrio (Ka) de al menos 10^{8} M^{-1}. También se proporcionan anticuerpos de secuencia humana que se unen con CTLA-4 humano con una constante de asociación en equilibrio (Ka) de al menos 10^{9} M^{-1}.
La invención también proporciona anticuerpos de secuencia humana que se unen específicamente a CTLA-4 humano que bloquea la unión de CTLA-4 humano con B7 humano en al menos aproximadamente un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99%, ó 100%.
La invención también proporciona anticuerpos de secuencia humana que se unen específicamente a CTLA-4 humano que tienen una cadena pesada de anticuerpo o bien de IgG o bien de IgM. La cadena pesada de anticuerpo de IgG puede ser IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. En el presente documento se describen anticuerpos de secuencia humana en los que la cadena ligera de anticuerpo es una cadena ligera kappa. Un anticuerpo de secuencia humana puede codificarse mediante ácidos nucleicos de cadena pesada de IgG y de cadena ligera kappa humana que comprenden secuencias de nucleótidos en sus regiones variables tal como se expone en la SEQ ID NO:2 a SEQ ID NO:23, respectivamente.
También se describe un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por ácidos nucleicos de cadena pesada de IgG humana y de cadena ligera kappa humana que comprenden las secuencias de nucleótidos en sus regiones variables tal como se expone en las SEQ ID NO:16 y SEQ ID NO:6, respectivamente.
También se describe un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por ácidos nucleicos de cadena pesada de IgG humana y de cadena ligera kappa humana que comprenden las secuencias de nucleótidos en sus regiones variables tal como se expone en las SEQ ID NO:18 y SEQ ID NO:8, respectivamente.
También se describe un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por ácidos nucleicos de cadena pesada de IgG humana y de cadena ligera kappa humana que comprenden las secuencias de nucleótidos en sus regiones variables tal como se expone en las SEQ ID NO:22 y SEQ ID NO:12, respectivamente.
La invención también proporciona un anticuerpo de secuencia humana en la que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada y cadena ligera tal como se expone en SEQ ID NO:17 y SEQ ID NO:7, respectivamente.
La invención proporciona un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada y cadena ligera tal como se expone en las SEQ ID NO:19 y SEQ ID NO:9, respectivamente.
También se describe un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada y cadena ligera tal como se expone en las SEQ ID NO:23 y SEQ ID NO:13, respectivamente.
También se describe un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por ácidos nucleicos de cadena pesada de IgG humana y cadena ligera kappa humana que comprende secuencias de cadena pesada y ligera variables de segmentos de gen V VH 3-30.3 y VK A-27, respectivamente.
También se describe un anticuerpo de secuencia humana en el que el anticuerpo de secuencia humana está codificado por ácidos nucleicos de cadena pesada de IgG humana y cadena ligera kappa humana que comprenden secuencias de cadena pesada y ligera variables de segmentos de gen V VH 3-33 y VK L-15, respectivamente.
Algunos anticuerpos de secuencia humana de la invención comprenden secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena pesada, SYTMH (SEQ ID NO:27), FISYDGNNKYYADSVKG (SEQ ID NO:32) y TGWLGPFDY (SEQ ID NO:37), respectivamente, y secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena ligera, RASQSVGSSYLA (SEQ ID NO:24), GAFSRAT (SEQ ID NO:29),y QQYGSSPWT (SEQ ID NO:35), respectivamente.
Algunos anticuerpos de secuencia humana de la invención comprenden secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena pesada, SYTMH (SEQ ID NO:27), FISYDGSNKHYADSVKG (SEQ ID NO:33) y TGWLGPFDY (SEQ ID NO:38), respectivamente, y secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena ligera, RASQSVSSSFLA (SEQ ID NO:25), GASSRAT (SEQ ID NO:30), y QQYGSSPWT (SEQ ID NO:35), respectivamente.
Otros anticuerpos de secuencia humana descritos en el presente documento comprenden secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena pesada, SYGMH (SEQ ID NO:28), VIWYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO:34) y APN
YIGAFDV (SEQ ID NO:39), respectivamente, y secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena ligera, RASQ
GISSWLA (SEQ ID NO:26), AASSLQS (SEQ ID NO:31), y QQYNSYPPT (SEQ ID NO:36), respectivamente.
Se describen en el presente documento anticuerpos de secuencia humana que se unen específicamente con CTLA-4 humano, en el que dicho anticuerpo de secuencia humana se produce por un animal no humano transgénico. El animal no humano transgénico puede ser un ratón.
También se describe en el presente documento un anticuerpo de secuencia humana que se une específicamente con CTLA-4 humano que es un fragmento Fab.
También se describe en el presente documento un complejo polivalente que comprende al menos dos anticuerpos de secuencia humana cada uno de los cuales se une específicamente con CTLA-4 humano. Los dos anticuerpos diferentes pueden unirse entre sí de manera covalente o no covalente.
Se describe en el presente documento un ácido nucleico que codifica la cadena pesada de un anticuerpo de secuen-
cia humana. El ácido nucleico puede comprender una secuencia de nucleótidos tal como se expone en SEQ ID NO:1.
Se describe en el presente documento un animal no humano transgénico que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada de secuencia humana y un transgen de cadena ligera de secuencia humana, animal que se ha inmunizado con un CTLA-4 humano, o un fragmento o un análogo del mismo, mediante lo cual el animal expresa anticuerpos de secuencia humana frente a CTLA-4 humano. El animal no humano transgénico puede ser un ratón transgénico. El ratón transgénico puede comprender HCo7 o HCo12.
Se describe en el presente documento un línea celular de hibridoma que comprende una célula B obtenida a partir de un animal no humano transgénico que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada de secuencia humana y un transgen de cadena ligera de secuencia humana, en el que el hibridoma produce un anticuerpo de secuencia humana que se une específicamente con CTLA-4 humano. El hibridoma puede secretar un anticuerpo de secuencia humana que se une específicamente con CTLA-4 humano o que se una a un fragmento del mismo, en el que el anticuerpo se selecciona del grupo constituido por: un anticuerpo de secuencia humana que comprende secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena pesada, SYTMH (SEQ ID NO:27), FISYDGNNKYYADSVKG (SEQ ID NO:32) y TGWLGPFDY (SEQ ID NO:37), respectivamente, y secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena ligera, RASQSVGSSYLA(SEQ ID NO:24), GAFSRAT (SEQ ID NO:29), y QQYGSSPWT (SEQ ID NO: 35), respectivamente, y secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada y cadena ligera tal como se expone en las SEQ ID NO:17 y SEQ ID NO:7, respectivamente, un anticuerpo de secuencia humana que comprende secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena pesada, SYTMH (SEQ ID NO:27),FISYDGSNKHYADSVKG (SEQ ID NO:33) y TGWLGPFDY (SEQ ID NO:38), respectivamente, y secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena ligera, RASQSVSSSFLA (SEQ ID NO:25), GASSRAT (SEQ ID NO:30), y QQYGSSPWT(SEQ ID NO:35), respectivamente, y secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada y cadena ligera tal como se expone en las SEQ ID NO:19 y SEQ ID NO:9, respectivamente; o un anticuerpo de secuencia humana según la reivindicación 1, que comprende secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena pesada, SYGMH (SEQ ID NO:28), VIWYDGSNKY
YADSVKG (SEQ ID NO:34) y APNYIGAFDV(SEQ ID NO:39), respectivamente, y secuencias de CDR1, CDR2, y CDR3 de cadena ligera, RASQGISSWLA (SEQID NO:26), AASSLQS (SEQ ID NO:31), y QQYNSYPPT (SEQ ID NO:36), respectivamente, y secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada y cadena ligera tal como se expone en las SEQ ID NO:23 y SEQ ID NO:13, respectivamente.
La invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede además comprender un agente eficaz para inducir una respuesta inmunitaria frente a un antígeno diana. También se proporcionan agentes quimioterapéuticos. Además, también describen anticuerpos frente a moléculas inmunosupresoras.
La invención proporciona el uso de un anticuerpo de la invención para la fabricación de un medicamento para inducir, aumentar o prolongar una respuesta inmunitaria frente a un antígeno en un paciente. El medicamento puede comprender una dosificación eficaz de un anticuerpo de secuencia humana que se une específicamente con CTLA-4 humano, en el que el anticuerpo bloquea la unión de CTLA-4 humano con B7 humano. El antígeno puede ser un antígeno tumoral, o el antígeno puede ser de un patógeno. El antígeno tumoral también puede ser telomerasa. El patógeno puede ser un virus, una bacteria, un hongo o un parásito. El patógeno también puede ser un VIH. El medicamento puede comprender además el antígeno, o un fragmento o un análogo del mismo, en el que el antígeno en combinación con el anticuerpo de secuencia humana induce, aumenta o prolonga la respuesta inmunitaria. El antígeno puede ser un antígeno tumoral o un componente de una formación amiloide en el paciente, tal como un paciente que padece la enfermedad de Alzheimer y el antígeno es péptido AB. El medicamento puede comprender además una citocina.
También se describe en el presente documento un procedimiento para suprimir la respuesta inmunitaria en un paciente, que comprende administrar al paciente una dosificación eficaz de una preparación polivalente que comprende al menos dos anticuerpos de secuencia humana frente a CTLA-4 humano unidos entre sí. También se describe en el presente documento un procedimiento para suprimir una respuesta inmunitaria en un paciente, que comprende administrar al paciente una dosificación eficaz de una preparación policlonal que comprende al menos dos anticuerpos de secuencia humana frente a CTLA-4 humano.
Se describen en el presente documento anticuerpos de secuencia humana aislados o recombinantes y anticuerpos monoclonales humanos que se unen específicamente con CTLA-4 humano, así como composiciones que contienen uno o una combinación de tales anticuerpos. Los anticuerpos de secuencia humana de la invención se caracterizan por unirse con CTLA-4 humano con gran afinidad, y en algunas realizaciones, mediante el bloqueo de la interacción de CTLA-4 humano con su ligando, las moléculas B7-1 y B7-2 humanas. Por consiguiente, pueden usarse los anticuerpos de secuencia humana y los anticuerpos monoclonales humanos de la invención como agentes de diagnóstico o terapéuticos in vivo e in vitro.
Los anticuerpos de secuencia humana de la invención pueden englobar varios isotipos de anticuerpo, o mezclas de los mismos tales como IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, e IgE. Normalmente, incluyen isotipos IgG1 (por ejemplo, IgG1k) e IgM. Los anticuerpos de secuencia humana pueden ser de longitud completa (por ejemplo, un anticuerpo IgG1 o IgG4) o pueden incluir sólo una parte que se une a antígeno (por ejemplo, un fragmento Fab, F(ab')_{2}, Fv o Fv de cadena sencilla). Algunos anticuerpos de secuencia humana son anticuerpos de secuencia humana recombinantes. Algunos anticuerpos de secuencia humana se producen por un hibridoma que incluye una célula B obtenida de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humana y un transgen de cadena ligera humana. El hibridoma puede prepararse mediante, por ejemplo, fusión de la célula B en una célula inmortalizada. Algunos anticuerpos de secuencia humana descritos en el presente documento se producen mediante hibridomas denominados como 4C8, 4E10, 4E10.5, 5A8, 5C4, 5C4.1.3, 5D7, 5D7.1, 5E10, 5E10.12, 5G1, 5G1.4, 6A10, 6C9, 6C9.6, 6D9, 6D9.7,6G4, 7E4, 7E4.4, 7E6, 7H8, 8E8, 8E8.4, 8F8, 8F8.19, 8H1, 9810, 9A10.1, 9B9, 9C1, 9G5, 105B, 10B5.8, 10B9, 10B9.2, 10D1, 10D1.3, 10E11, 10E4, 10E4.5, 11B4, 11D10, 11E4, 11E4.1, 11E8, 11F10, 11F11, 11F9, 11G1, 11G1.5, 1C7,1H8.8, 2A7, 2A7.6, 2E2, 2E2.7, 2E7, 2E7.2, 2G1, 2G1.2, 3C12, 3E10, 3E10.5, 3E6, 3E6.0, 3F10, 4A1, 4B6 y 4B6.12. Los sufijos después del punto decimal indican distintos aislados clonales de las mismas líneas celulares de hibridoma.
Algunos anticuerpos anti-CTLA-4 de secuencia humana descritos en el presente documento pueden caracterizarse por una o más de las siguientes propiedades: a) especificidad por CTLA-4 humano (que se une específicamente con CTLA-4 humano); b) una afinidad de unión con CTLA-4 humano con una constante de asociación en equilibrio (Ka) de al menos aproximadamente 10^{7} M^{-1}, o aproximadamente 10^{9} M^{-1}, o aproximadamente de 10^{10} M^{-1} a 10^{11} M^{-1} o superior; c) una constante de asociación cinética (ka) de al menos aproximadamente 10^{3}, aproximadamente 10^{4}, o aproximadamente 10^{5} m^{-1}s^{-1}; y/o, d) una constante de disociación cinética (kd) de al menos aproximadamente 10^{3}, aproximadamente 10^{4}, o aproximadamente 10^{5} m^{-1}s^{-1}.
En otro aspecto, la invención proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican los anticuerpos de secuencia humana, o partes de unión a antígeno, de la invención. Por consiguiente, los vectores de expresión recombinantes que incluyen los ácidos nucleicos que codifican el anticuerpo de la invención, y células huésped transfectadas con tales vectores, también están englobados en la invención, al igual que los procedimientos para preparar los anticuerpos de la invención cultivando estas células huésped.
También se describen en el presente documento células B aisladas a partir de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que puede expresar varios isotipos (por ejemplo, IgG, IgA y/o IgM) de anticuerpos monoclonales humanos que se unen específicamente con CTLA-4 humano. Las células B aisladas pueden obtenerse a partir de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que se ha inmunizado con una preparación purificada o enriquecida de antígeno CTLA-4 humano (o un fragmento antigénico del mismo) y/o células que expresan CTLA-4 humano. El animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, puede tener un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humana y un transgen de cadena ligera humana. Las células B aisladas pueden inmortalizarse para proporcionar una fuente (por ejemplo, un hibridoma) de anticuerpos monoclonales humanos frente a CTLA-4 humano.
Por consiguiente, se describe en el presente documento un hibridoma que puede producir anticuerpos monoclonales humanos que se unen específicamente con CTLA-4 humano. El hibridoma puede incluir una célula B célula obtenida a partir de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humana y un transgen de cadena ligera humana fusionada con una célula inmortalizada. Puede inmunizarse el animal no humano transgénico con una preparación purificada o enriquecida de antígeno frente a CTLA-4 humano y/o células que expresan CTLA-4 humano para generar hibridomas que producen anticuerpos.
También se describe en el presente documento un animal no humano transgénico, tal como un ratón transgénico, que expresa anticuerpos monoclonales humanos (también denominados en el presente documento como un "HuMAb-Mouse™") que se une específicamente con CTLA-4 humano. El animal no humano transgénico puede ser un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humana y un transgen de cadena ligera humana. Puede inmunizarse el animal no humano transgénico con una preparación purificada o enriquecida de antígeno CTLA-4 (o fragmento antigénico del mismo) y/o células que expresan el CTLA-4 humano. El animal no humano transgénico, por ejemplo, el ratón transgénico, puede producir múltiples isotipos de anticuerpos monoclonales humanos frente a CTLA-4 humano (por ejemplo, IgG, IgA y/o IgM) experimentando recombinación V-D-J y cambio de isotipos. El cambio de isotipo puede producirse, por ejemplo, mediante cambio de isotipo clásico o no clásico.
También se describen en el presente documento procedimientos para producir anticuerpos de secuencia humana y anticuerpos monoclonales de secuencia humana que reaccionan específicamente con CTLA-4 humano. Algunos procedimientos incluyen inmunizar un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humana y un transgen de cadena ligera humana, con una preparación purificada o enriquecida de antígeno CTLA-4 humano y/o células que expresan CTLA-4 humano. Las células B (por ejemplo, células B esplénicas) del animal pueden obtenerse y fusionarse con células de de mieloma para formar células de hibridoma inmortales que secretan anticuerpos monoclonales humanos frente a CTLA-4 humano.
Anticuerpos monoclonales humanos anti-CTLA-4 humano de la invención, o partes de unión a antígeno del mismo (por ejemplo, Fab), pueden derivarse o unirse con otra molécula funcional, por ejemplo, otro péptido o proteína (por ejemplo, un fragmento Fab'). Por ejemplo, un anticuerpo o parte de unión a antígeno puede unirse funcionalmente (por ejemplo, mediante acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otra manera) a una o más de otras entidades moleculares. Por ejemplo, el anticuerpo anti-CTLA-4 de secuencia humana, o parte de unión a antígeno del mismo, puede conjugarse con un resto terapéutico, por ejemplo, un fármaco citotóxico, una toxina enzimáticamente activa, o un fragmento de la misma, un radioisótopo, o un fármaco anticancerígeno de molécula pequeña. Los anticuerpos de la invención también pueden conjugarse con productos farmacéuticos citotóxicos, por ejemplo, radiomarcados con agentes citotóxicos, tales como, por ejemplo, ^{131}I (por ejemplo, Shen (1997) Cancer 80 (12 Suppl): 2553-2557), cobre-67 (por ejemplo, Deshpande (1988) J. Nucl. Med. 29:217-225) o, por ejemplo, conjugación con la proteína inactivadora de ribosomas gelonina (por ejemplo, Boyle (1996) J. of Immunol. 18:221-230).
En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas y de diagnóstico, que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos un anticuerpo monoclonal humano de la invención, o una parte de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente con CTLA-4 humano. Las composiciones pueden comprender una combinación de los anticuerpos de secuencia humana o partes de unión a antígeno de los mismos, preferiblemente cada uno de los cuales se une a un epítopo distinto. Las composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que comprenden una combinación de al menos un anticuerpo de secuencia humana o al menos un anticuerpo monoclonal humano de la invención, o partes de unión a antígeno del mismo, y al menos una molécula biespecífica o multiespecífica de la invención, también se describen en el presente documento.
Para procedimientos in vivo, el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo (o una molécula biespecífica o multiespecífica), puede administrarse a un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con células T, o una enfermedad que puede mejorarse o evitarse aumentando o suprimiendo o prolongando una respuesta inmunitaria.
También pueden administrarse anticuerpo monoclonal de secuencia humano y composiciones de anticuerpo monoclonal humano de la invención en combinación con otros tratamientos conocidos, por ejemplo, una terapia anticancerígena. Por consiguiente, se describe un procedimiento para tratar el cáncer en un sujeto que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica de un anticuerpo de secuencia humana junto con un vehículo farmacéutico al sujeto. Algunos de tales procedimientos incluyen una vacuna. Algunas de tales vacunas incluyen una vacuna frente a célula tumoral, una vacuna frente a célula tumoral modificada por FEC-GM, o vacuna frente a célula dendrítica cargada con un antígeno. En algunos de tales procedimientos, el cáncer es un cáncer de próstata, melanoma, o cáncer epitelial.
Pueden usarse los anticuerpos de secuencia humana frente a CTLA-4 humano en procedimientos de tratamiento que requieren bien estimulación de respuestas inmunitarias o bien supresión. La indicación anterior se trata usando anticuerpos que bloquean la unión de CTLA-4 humano con B7 humano. Las enfermedades susceptibles de tratamiento mediante estimulación, aumento de prolongación de respuestas inmunitarias incluyendo cáncer, que incluyen cánceres de próstata, riñón o colon, infecciones patógenas, enfermedades asociadas con auto-antígenos, por ejemplo, enfermedades amiloidogénicas, incluyendo enfermedad de Alzheimer, y enfermedades con componentes inflamatorios o alérgicos. Se logra la inmunosupresión usando una preparación polivalente que comprende al menos dos anticuerpos diferentes frente a CTLA-4 humano que están unidos entre sí. Enfermedades susceptibles de tratamiento incluyen enfermedad de injerto-contra-huésped, enfermedad huésped-contra-injerto, enfermedades autoinmunitarias e inflamación.
Los anticuerpos de la invención pueden usarse para detectar in vitro o in vivo la presencia de antígeno CTLA-4 humano en una muestra, por ejemplo, para el diagnóstico de una enfermedad relacionada con CTLA-4 humano. En algunos procedimientos, esto se consigue poniendo en contacto una muestra que va a someterse a prueba, junto con una muestra de control, con un anticuerpo de secuencia humana o un anticuerpo monoclonal humano de la invención, o una parte de unión a antígeno del mismo (o una molécula biespecífica o multiespecífica), en condiciones que permiten la formación de un complejo entre el anticuerpo y CTLA-4 humano. Después se detecta la formación de complejo (por ejemplo; usando un ELISA) en ambas muestras, y cualquier diferencia estadísticamente significativa en la formación de complejos entre las muestras es indicativa de la presencia de antígeno CTLA-4 humano en la muestra de prueba.
Puede apreciarse un entendimiento adicional de la naturaleza y ventajas de la presente invención mediante referencia a las partes restantes de la memoria descriptiva, las figuras y reivindicaciones.
Breve descripción de los dibujos
Las figuras que no se refieren específicamente a la invención reivindicada se incluyen sólo como ilustración.
La figura 1 muestra esquemas que ilustran la inserción con transporte dirigido de un casete neo en el sitio Sma I del exón \mul. La figura 1A) es un diagrama esquemático de la estructura genómica del locus \mu. Los recuadros rayados representan los exones \mu; la figura 1B) es un diagrama esquemático del vector de transporte dirigido CmD. Las líneas de puntos denotan esas secuencias genómicas \mu incluidas en el constructo. No se muestran las secuencias de plásmido; la figura 1C) es un diagrama esquemático del locus \mu de transporte dirigido en el que se inserta el casete neo en \mul. El recuadro en la parte inferior derecha muestra esos diagnósticos de RFLP de recombinación homóloga entre el constructo de transporte dirigido y el locus \mu. Se detectaron los RFLP mediante hibridación por inmunotransferencia tipo Southern usando la sonda A, el fragmento de 915 pb Sac I se muestra en la figura 1C.
La figura 2 muestra los resultados de experimentos que demuestran que los anticuerpos de secuencia humana solubles frente a CTLA-4 humano inhiben la unión de CTLA-4 humano soluble recombinante con células que expresan B7.1 de ratón, tal como se describe con detalle a continuación.
La figura 3 muestra los resultados de un ensayo de unión competitiva para identificar anticuerpos de secuencia humana que reconocen epítopos no solapantes sobre CTLA-4 humano, tal como se describe con detalle a continuación.
La figura 4 muestra datos preliminares de secuencias de nucleótidos para el fragmento de cadena pesada y ligera del anticuerpo 10D1.3 anti-CTLA-4.
La figura 5 muestra las secuencias de nucleótidos de las regiones variables de cadena ligera (V_{K}) de anticuerpos anti-CTLA-4 humano. Los anticuerpos anti-CTLA-4 10D1 (SEQ ID NO:6) y 4B6 (SEQ ID NO:8) derivados a partir de la secuencia de línea germinal V_{K} A-27 (SEQ ID NO:4) se representan en la parte superior de la figura. El anticuerpo anti-CTLA-4 1E2 (SEQ ID NO:12) derivado a partir de la secuencia de línea germinal V_{K} L-15 (SEQ ID NO:10) se muestra en la parte inferior de la figura. Las secuencias V_{K} de tres anticuerpos anti-CTLA-4 se alinean con sus secuencias génicas de V_{K} codificadas por la línea germinal. Se marcan los residuos determinantes de complementariedad (CDR). Los guiones denotan identidad de secuencia.
La figura 6 muestra las secuencias de nucleótido de las regiones variables de cadena pesada (V_{H}) de anticuerpos anti-CTLA-4 humano. Los anticuerpos anti-CTLA-4 10D1 (SEQ ID NO:16) y 4B6 (SEQ ID NO:18) derivados a partir de la secuencia de línea germinal V_{H} 3-30.3 (SEQ ID NO:14) se muestran en la parte superior de la figura. El anticuerpo anti-CTLA-4 1E2 (SEQ IDNO:22) derivado a partir de la secuencia de línea germinal V_{H} 3-33 (SEQ ID NO:20) se muestra en la parte inferior de la figura. Las secuencias V_{H} de tres anticuerpos anti -CTLA-4 se alinean con sus secuencias codificadas por la línea germinal. Se marcan los residuos determinantes de complementariedad (CDR). Los guiones denotan identidad de secuencia.
La figura 7 muestra las secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de cadena ligera de anticuerpos anti-CTLA-4 humano. Se muestran las secuencias V_{K} de aminoácidos previstas de los anticuerpos anti-CTLA-4 descritas en la figura 5. Los anticuerpos anti-CTLA-4 10D1 (SEQ ID NO:7) y 4B6 (SEQ ID NO:9) derivados a partir de la secuencia de línea germinal V_{K} A-27 (SEQ ID NO:5) se muestran en la parte superior de la figura. El anticuerpo anti-CTLA-4 1E2 (SEQ ID NO:13) derivado a partir de la secuencia de línea germinal V_{K} L-15 (SEQ ID NO:11) se muestra en la parte inferior de la figura.
La figura 8 muestra las secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de cadena pesada de anticuerpos anti-CTLA-4 humano. Se muestran las secuencias V_{H} de aminoácidos previstas de los anticuerpos anti-CTLA-4 descritos en la figura 6. Los anticuerpos anti-CTLA-4 10D1 (SEQ ID NO:17) y 4B6 (SEQ ID NO:19) derivados a partir de la secuencia de línea germinal V_{H} 3-30.3 (SEQ ID NO:15) se muestran en la parte superior de la figura. El anticuerpo anti-CTLA-4 anticuerpo 1E2 (SEQ ID NO:23) derivado a partir de la secuencia de línea germinal V_{H} 3-33 (SEQ ID NO:21) se muestra en la parte inferior de la figura.
La figura 9 muestra los resultados de experimentos de unión de AcM 10D1 con CTLA-4 humano recombinante mediante ELISA. AcM 10D1 se une con cinética saturante y dependiente de dosis con CTLA-4 recombinante purificado.
La figura 10 muestra la unión de 10D1 con una línea de células T que expresan CTLA4. Estos datos muestran que AcM 10D1 se une con cinética saturante y dependiente de dosis con células que expresan CTLA-4.
La figura 11 muestra inhibición de la unión de B7.2-Ig humana con células T que expresan CTLA-4. Estos datos muestran que AcM 10D1 puede bloquear eficazmente la unión de B7.2 con CTLA-4 si se compara con un AcM humano de control.
La figura 12 muestra los resultados para bloquear la unión de CTLA4-FITC con células que expresan B7.1 murino. Estos datos muestran que AcM 10D1 puede bloquear eficazmente la unión de CTLA-4 con B7.1 si se compara con un AcM humano de control.
La figura 13 muestra ensayos ELISA competitivos de AcM anti-CTLA-4 humanos que demuestran las clasificaciones de grupos de epítopos.
La figura 14 muestra la expresión de CTLA-4 sobre células T estimuladas con PHA. Las células T activadas, pero no en reposo, expresan niveles bajos pero detectables de CTLA-4 en la superficie celular.
La figura 15 muestra los resultados de AcM 10D1 en lisis dependiente de complemento de células T activadas. No se observa lisis de células T activadas por PHA.
La figura 16 muestra los resultados de AcM 10D1 en lisis dependiente de anticuerpo de células T activadas. No se observa lisis de células T activadas con PHA con 10D1 y células mononucleares.
La figura 17 muestra las respuestas de IgM e IgG anti-10D1 en monos cynomolgus inyectados con anticuerpo 10D1. No se observó respuesta de anticuerpo significativa frente a 10D1.
Descripción detallada
La presente invención proporciona tratamientos novedosos basados en anticuerpos que pueden usarse para tratar y diagnosticar enfermedades caracterizadas por expresión, particularmente sobre-expresión, o activación de, particularmente sobreactivación, de CTLA-4 humano y/o moléculas relacionadas. Los tratamientos descritos en el presente documento emplean anticuerpos de secuencia humana, anticuerpos monoclonales de secuencia humana, o partes de unión a antígeno del mismo, que se unen a un epítopo presente en CTLA-4 humano. Estos anticuerpos anti-CTLA-4 de secuencia humana pueden actuar como antagonistas funcionales (por ejemplo, inhibiendo la capacidad de CTLA-4 para unirse a un ligando o para activar la célula, por ejemplo, inhibiendo su capacidad para transmitir una señal a la célula) o agonistas (por ejemplo, para estimular el efecto del ligando).
Los anticuerpos de secuencia humana descritos en el presente documento pueden producirse en un animal transgénico no humano, por ejemplo, un ratón transgénico, que puede producir múltiples isotipos de anticuerpos humanos (por ejemplo, monoclonales o policlonales) frente CTLA-4 humano (por ejemplo, IgG, IgA y/o IgE) experimentando recombinación V-D-J y cambio de isotipo. Por consiguiente, se describen en el presente documento anticuerpos y fragmentos de anticuerpo, y composiciones farmacéuticas de los mismos, así como animales transgénicos no humanos, y células B e hibridomas para preparar tales anticuerpos monoclonales. También se describen procedimientos del uso de los anticuerpos de la invención para detectar una célula que expresa CTLA-4 humano o un receptor de factor de crecimiento de reactividad cruzada relacionado, o para inhibir el crecimiento, diferenciación y/o movilidad de una célula que expresa CTLA-4 humano, bien in vitro o bien in vivo.
Excepto cuando se mencione, los términos "paciente" o "sujeto" se usan indistintamente y se refieren a mamíferos tales como pacientes humanos y primates no humanos, así como animales para experimentación tales como conejos, ratas, y ratones y otros animales.
El término "tratar" incluye la administración de los compuestos o agentes descritos en presente documento para evitar o retrasar la aparición de los síntomas, complicaciones o indicios bioquímicos de una enfermedad, aliviando los síntomas o deteniendo o inhibiendo un desarrollo adicional de la enfermedad, estado o trastorno (por ejemplo, enfermedad autoinmunológica). El tratamiento puede ser profiláctico (para evitar o retrasar el comienzo de la enfermedad, o para evitar la manifestación de síntomas clínicos o subclínicos de la misma) o supresión o alivio terapéutico de síntomas tras la manifestación de la enfermedad.
En general, la frase "bien tolerado" se refiere a la ausencia de cambios adversos en el estado de salud que se produce como resultado del tratamiento y que afectará a las decisiones del tratamiento.
El término "linfocito" tal como se usa en el presente documento tiene el significado normal en la técnica y se refiere a cualquiera de los leucocitos no fagocitos mononucleares, que se encuentran en la sangre, linfa y tejidos linfoides, es decir, linfocitos B y T.
La frase "subpoblaciones de linfocitos T" o "subconjunto(s) de células T" se refiere a linfocitos T o células T caracterizadas por los marcadores de superficie celular particular de expresión (véase Barclay, A. N. et al., (eds.), 1997, The Leukocyte Antigen Facts Book, 2ª edición, Academic Press, Londres, Reino Unido). El término "estable" en referencia a células T se refiere al hecho de que la frecuencia o porcentaje de subconjunto de células T no cambia a lo largo del curso o duración de la administración de un agente.
Los términos "antígeno-4 asociado a linfocito T citotóxico", "CTLA-4", "CTLA4", "antígeno CTLA-4" y "CD152" (véase, por ejemplo, Murata (1999) Am. J. Pathol. 155:453-460) se usan indistintamente, e incluyen variantes, isoformas, especies homólogas de CTLA-4 humano, y análogos que tienen al menos un epítopo común con CTLA-4 (véase, por ejemplo, Balzano (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7:28-32).
La secuencia de ADNc completa de CTLA-4 tiene el número de acceso Genbank L15006. La región de aminoácidos 1-37 es el péptido líder; 38-161 es el dominio tipo V extracelular; 162-187 es el dominio transmembrana; y 188-223 es el dominio citoplásmico. Se han notificado variantes de la secuencia de nucleótidos, incluyendo una transición de G a A en la posición 49, una transición de C a T en la posición 272, y una transición de A a G en la posición 439. La secuencia de ADN completa de CTLA-4 de ratón tiene el número de acceso EMBL X05719 (Brunet et al. (1987) Nature 328:267-270). La región de aminoácidos 1-35 es el péptido líder.
La secuencia de ADN completa de B7-1 (CD80) humano tiene el número de acceso Genbank X60958; el número de acceso para la secuencia de ratón es X60958; el número de acceso para la secuencia de rata es U05593. La secuencia de ADNc completa de B7-2 (CD86) humano tiene el número de acceso Genbank L25259; el número de acceso para la secuencia de ratón es L25606.
Los genes que codifican CD28 se han caracterizado de manera extensiva. La secuencia de ARNm de pollo tiene el número de acceso Genbank X67915. la secuencia de ARNm de rata tiene el número de acceso Genbank X55288. la secuencia de ARN humano tiene el número de acceso Genbank J02988. La secuencia de ARNm de ratón tiene el número de acceso Genbank M34536.
El término "epítopo" significa una proteína determinante que puede unirse específicamente a un anticuerpo. Los epítopos normalmente están constituidos por agrupaciones de moléculas de superficie activa químicamente tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y normalmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específica. Se distinguen epítopos conformacionales y no conformacionales porque se pierde la unión con el primero pero no con el último en presencia de disolventes desnaturalizantes.
Un "anticuerpo" intacto comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas mediante enlaces disulfuro. Cada cadena pesada está compuesta de una región variable de cadena pesada (abreviada en el presente documento como HCVR o VH) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada está constituida por tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera está compuesta de una región variable de cadena ligera (abreviada en el presente documento como LC-VR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera está constituida por un dominio, CL. Las regiones VH y VL pueden subdividirse adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones de entramado (FR). Cada VH y VL está compuesta de tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amino terminal hasta el extremo carboxilo terminal en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera contienen un dominio de unión que interacciona con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina con factores o tejidos huéspedes, incluyendo diversas células del sistema inmunitario (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema de complemento clásico. El término anticuerpo incluye fragmentos que se unen a antígeno de un anticuerpo intacto que conservan la capacidad para unir CTLA-4. Ejemplos de unión incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que está constituido por los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos mediante un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que está constituido por los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que está constituido por los dominios VL y VH de un brazo sencillo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que está constituido por un dominio VH; y (vi) una región determinante de complementariedad aislada (CDR). Es más, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, están codificados por genes separados, pueden unirse, usando procedimientos recombinantes, mediante un conector que permita prepararlos como una cadena de proteína única en los que se emparejan las regiones VL y VH para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv); Véase, por ejemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; y Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Tales anticuerpos de cadena sencilla están incluidos mediante referencia con el término "anticuerpo". Pueden prepararse los fragmentos mediante técnicas recombinantes o ruptura enzimática o química de anticuerpos intactos.
Un anticuerpo biespecífico tiene dos especificidades de unión diferentes, véanse por ejemplo, las patentes estadounidenses números 5.922.845 y 5.837.243; Zeilder (1999) J. Immunol. 163: 1246-1252; Somasundaram (1999) Hum. Antibodies 9:47-54; Keler (1997) Cancer Res. 57: 4008-4014. Por ejemplo, en el presente documento se describen anticuerpos biespecíficos que tienen un sitio de unión para un antígeno de superficie celular, tal como CTLA-4 humano, y un segundo sitio de unión para un receptor Fc en la superficie de una célula efectora. También se describen en el presente documento anticuerpos multiespecíficos, que tienen al menos tres sitios de unión. El término "anticuerpos biespecíficos" incluye adicionalmente diacuerpos. Los diacuerpos son anticuerpos bivalentes biespecíficos en los que se expresan los dominios VH y VL en una cadena de polipéptidos sencilla, pero usando un conector que es demasiado corto como para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena, forzando de esta manera que los dominios se emparejen con dominios complementarios de otra cadena y creando dos sitios de unión a anticuerpo (véase, por ejemplo, Holliger, P., et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123).
El término "anticuerpo de secuencia humana" incluye anticuerpos que tienen regiones variables y constantes (si están presentes) derivados de las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos de secuencia humana descritos en el presente documento pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagenésis específicas de sitio o aleatorias in vitro o por mutación somática in vivo). Sin embargo, el término "anticuerpo de secuencia humana", tal como se usa en el presente documento, no pretende incluir anticuerpos en los que secuencias CDR derivadas a partir de la línea germinal de otras especies de mamíferos, tales como un ratón, se injertan en secuencias de entramado humanas (es decir, anticuerpos humanizados).
Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal" se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpo de composición molecular sencilla. Una composición de anticuerpo monoclonal muestra una especificidad y afinidad de unión sencilla por un epítopo particular. Consecuentemente, el término "anticuerpo monoclonal humano" se refiere a anticuerpos que muestran una especificidad de unión única que tienen regiones variables y constantes (si están presentes) derivadas a partir de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos monoclonales humanos pueden producirse por un hibridoma que incluye células B obtenidas a partir de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humano y un transgen de cadena ligera fusionado con una célula inmortalizada.
El término "anticuerpo diclonal" se refiere a una preparación de al menos dos anticuerpos frente a CTLA-4 humano. Normalmente, los anticuerpos diferentes se unen a epítopos diferentes.
El término "anticuerpo oligoclonal" se refiere a una preparación de 3 a 100 anticuerpos frente a CTLA-4 humano diferentes. Normalmente, los anticuerpos en tal preparación se unen a una variedad de epítopos diferentes.
El término "anticuerpo policlonal" se refiere a una preparación de más de 1 (dos o más) anticuerpos frente a CTLA-4 humano diferentes. Tal preparación incluye anticuerpos que se unen a una variedad de epítopos diferentes.
La invención proporciona anticuerpos de secuencia humana frente a CTLA-4 humano que bloquean o antagonizan señales transducidas por el receptor de CTLA-4 humano. Algunos de estos anticuerpos pueden unirse a un epítopo sobre CTLA-4 humano de manera que inhiben CTLA-4 interaccionando con un contrarreceptor de B7 humano. Dado que la interacción de CTLA-4 humano con B7 humano transduce una señal que da como resultado la inactivación de células T que llevan el receptor de CTLA-4 humano, el antagonismo de la interacción induce, aumenta o prolonga eficazmente la activación de células T que llevan el receptor de CTLA-4 humano, prolongando o aumentando de esta manera una respuesta inmunitaria. Un "anticuerpo bloqueante" se refiere a un anticuerpo que reduce la unión de un CTLA-4 humano soluble con ligando B7 humano expresado por células en al menos un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ó 99,9% en condiciones en las que la razón del sitio de combinación de anticuerpo con respecto al sitio de unión de ligando de CTLA-4 humano es superior a 1:1 y la concentración de anticuerpo es superior a 10^{-8} M.
Otras preparaciones de anticuerpo, en ocasiones denominadas como preparaciones multivalentes, se unen a CTLA-4 humano de tal manera como para reticular receptores de CTLA-4 humano múltiples sobre la misma célula. La reticulación de receptor tiene el mismo o similar efecto que la unión de CTLA-4 humano con B7 humano. Por tanto, la reticulación de receptores agoniza eficazmente la respuesta de CTLA-4 humano dando como resultado la inmunosupresión.
La reticulación también puede lograrse combinando anticuerpos divalentes solubles que tienen especificidades de epítopos diferentes. Estas preparaciones de anticuerpo policlonal comprenden al menos dos pares de cadenas pesadas y ligeras que se unen a epítopos diferentes sobre CTLA-4 humano de manera que puede transducirse una señal inmunosupresora como resultado de la reticulación de CTLA-4 humano.
El término "anticuerpo humano recombinante" incluye todos los anticuerpos de secuencia humana descritos en el presente documento que se preparan, expresan, crean o aíslan por medios recombinantes, tales como anticuerpos aislados a partir de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico para genes de inmunoglobulina humana (descritos adicionalmente en la sección I, a continuación); anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula huésped, anticuerpos aislados a partir de una biblioteca de anticuerpo humano combinatoria recombinante, o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados mediante cualquier otro medio que implique corte y empalme de secuencias génicas de inmunoglobulina humana con otras secuencias de ADN. Tales anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes (si están presentes) derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Sin embargo, tales anticuerpos pueden someterse a mutagénesis in vitro (o, cuando se usa un animal transgénico para secuencias de Ig humanas, mutagénesis somática in vivo) y por tanto las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivadas a partir de y relacionadas con secuencias VH y VL de línea germinal humana, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio de línea germinal in vivo.
Se define un "anticuerpo heterólogo" en relación con el organismo no humano transgénico que produce tal anticuerpo. Este término se refiere a un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos o una secuencia de ácido nucleico codificante correspondiente a la encontrada en un organismo que no está constituido por el animal no humano transgénico, y generalmente a partir de especies diferentes de las del animal no humano transgénico.
Un "anticuerpo heterohíbrido" se refiere a un anticuerpo que tiene cadenas ligeras y pesadas de diferentes orígenes de organismos. Por ejemplo, un anticuerpo que tiene una cadena pesada humana asociada con una cadena ligera murina es un anticuerpo heterohíbrido. Ejemplos de anticuerpos heterohíbridos incluyen anticuerpos quiméricos y humanizados, citados anteriormente.
El término "sustancialmente puro" o "aislado" significa que se ha identificado y separado y/o recuperado una especie objetivo (por ejemplo, un anticuerpo de la invención) a partir de un componente en su ambiente natural de manera que la especie objetivo es la especie presente predominante (es decir, en una base molar es más abundante que cualquier otra especie individual en la composición); una composición "sustancialmente pura" o "aislada" también significa cuando la especie objetivo comprende al menos aproximadamente el 50 por ciento (en una base molar) de todas las especies macromoleculares presentes. Una composición sustancialmente pura o aislada también puede comprende más de aproximadamente del 80 al 90 por ciento en peso de todas las especies macromoleculares presentes en la composición. Una especie objetivo aislada (por ejemplo, anticuerpos de la invención) también puede purificarse para lograr homogeneidad esencial (las especies contaminantes no pueden detectarse en la composición mediante procedimientos de detección convencionales) en la que la composición está constituida esencialmente por derivados de una especie macromolecular única. Un anticuerpo aislado frente a CTLA-4 humano puede estar sustancialmente libre de otros anticuerpos que carecen de unión a CTLA-4 humano y se unen a un antígeno diferente. Un anticuerpo aislado que se une específicamente a un epítopo, isoforma o variante de CTLA-4 humano puede, sin embargo, tener reactividad cruzada con otros antígenos relacionados, por ejemplo, de otras especies (por ejemplo, especies homólogas de CTLA-4). Es más, un anticuerpo aislado de la invención puede estar sustancialmente libre de otro material celular (por ejemplo, proteínas no asociadas a inmunoglobulina) y/o productos químicos.
"Unión específica" se refiere a la unión de un anticuerpo con un antígeno predeterminado. La frase "se une específicamente (o selectivamente)" a un anticuerpo se refiere a la reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína en una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos. Normalmente, el anticuerpo se une con una constante de asociación (Ka) de al menos aproximadamente 1 x 10^{6} M^{-1} o 10^{7} M^{-1}, o aproximadamente 10^{8} M^{-1} hasta 10^{9} M^{-1}, o aproximadamente 10^{10} M^{-1} a 10^{11} M^{-1} o superiores, y se une al antígeno predeterminado con una afinidad que es al menos dos veces mayor que su afinidad por la unión a un antígeno no específico (por ejemplo, BSA, caseína) diferente del antígeno predeterminado o un antígeno íntimamente relacionado. Las frases "un anticuerpo que reconoce un antígeno" y "un anticuerpo específico frente a un antígeno" se usan indistintamente en el presente documento con el término "un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno".
La frase "específicamente se une" o "se une específicamente" cuando se refiere a un péptido, se refiere a una molécula peptídica que tiene afinidad de unión intermedia o alta, exclusiva o predominantemente, a una molécula diana. La frase "se une específicamente a" se refiere a la reacción de unión que es determinante de la presencia de una proteína diana en presencia de una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos. Por tanto, en condiciones de ensayo diseñadas, los restos de unión especificados se unen preferiblemente a una proteína diana particular y no se unen en una cantidad significativa con otros componentes presentes en una muestra de prueba. La unión específica a una proteína diana en tales condiciones puede requerir un resto de unión que se selecciona por su especificidad para un antígeno diana particular. Pueden usarse una variedad de formatos de ensayo para seleccionar ligandos que son reactivos específicamente con una proteína particular. Por ejemplo, se usan inmunoensayos ELISA en fase sólida, inmunoprecipitación y ensayos de inmunotransferencia tipo Western y Biacore para identificar péptidos que reaccionan específicamente con CTLA-4. Normalmente, una reacción específica o selectiva será al menos dos veces la señal o ruido de fondo y más normalmente más de 10 veces el ruido de fondo.
El término "alta afinidad" para un anticuerpo IgG se refiere a una constante de asociación en equilibrio (Ka) de al menos aproximadamente 10^{7} M^{-1}, al menos aproximadamente 10^{8} M^{-1}, al menos aproximadamente 10^{9} M^{-1}, al menos aproximadamente 10^{10} M^{-1}, al menos aproximadamente 10^{11} M^{-1}, o al menos aproximadamente 10^{12} M^{-1} o superior, por ejemplo, hasta 10^{13} M^{-1} o 10^{14} M^{-1} o superior. Sin embargo, la unión de "alta afinidad" puede variar para otros isotipos de anticuerpos.
Se pretende que el término "K_{a}", tal como se usa en el presente documento, se refiera a la constante de asociación en equilibrio de una interacción anticuerpo-antígeno particular. Esta constante tiene unidades de 1/M.
Se pretende que el término "K_{d}", tal como se usa en el presente documento, se refiera a la constante de disociación en equilibrio de una interacción anticuerpo-antígeno particular. Esta constante tiene unidades de M.
Se pretende que el término "k_{a}", tal como se usa en el presente documento, se refiera a la constante de asociación cinética de una interacción anticuerpo-antígeno particular. Esta constante tiene unidades de 1/Ms.
Se pretende que el término "k_{d}", tal como se usa en el presente documento, se refiera a la constante de disociación cinética de una interacción anticuerpo-antígeno particular. Esta constante tiene unidades de 1/s.
Las "interacciones anticuerpo-antígeno particulares" se refieren a las condiciones experimentales en las que se miden las constantes de equilibrio y cinética.
"Isotipo" se refiere a la clase de anticuerpo (por ejemplo, IgM o IgGl) que está codificado por los genes de región constante de cadena pesada.
El "cambio de isotipo" se refiere al fenómeno mediante el que la clase, o isotipo, de un anticuerpo cambia de una clase de Ig a una de las otras clases de Ig.
"Isotipo no cambiado" se refiere a la clase isotípica de cadena pesada que se produce cuando no tiene lugar ningún cambio de isotipo; el gen de CH que codifica el isotipo no cambiado normalmente es el primer gen de CH inmediatamente en sentido 3' desde el gen VDJ reordenado funcionalmente. Se ha clasificado el cambio de isotipo como un cambio de isotipo clásico o no clásico. El cambio de isotipo clásico se produce mediante acontecimientos de recombinación que implican al menos una región de secuencia de cambio en el transgen. El cambio de isotipo no clásico puede producirse mediante, por ejemplo, recombinación homóloga entre \sigma_{\mu} humano y \Sigma_{\mu} humano (deleción asociada en \delta). Mecanismos de cambio no clásicos alternativos, tales como recombinación intertransgénica y/o intercromosómica, entre otros, pueden producirse y provocar cambio de isotipo.
El término "secuencia de cambio" se refiere a esas secuencias de ADN responsables de la recombinación de cambio. Una secuencia "donadora de cambio", normalmente una región de cambio \mu, está en 5' (es decir, en sentido 5') de la región del constructo que va a delecionarse durante la recombinación de cambio. La región "aceptora de cambio" está entre la región de constructo que va a delecionarse y la región constante de sustitución (por ejemplo, g, e, etc.). Dado que no hay un sitio específico en el que siempre se produzca la recombinación, la secuencia génica final normalmente no es predecible a partir del constructo.
Se define "patrón de glucosilación" como el patrón de las unidades de hidratos de carbono que están unidas covalentemente a una proteína, más específicamente a una proteína de inmunoglobulina. Puede caracterizarse un patrón de glucosilación de un anticuerpo heterólogo como que es sustancialmente similar a patrones de glucosilación que se producen de manera natural en anticuerpos producidos mediante las especies del animal transgénico no humano, cuando un experto en la técnica reconocería el patrón de glucosilación del anticuerpo heterólogo como que es más similar a dicho patrón de glucosilación en la especie del animal transgénico no humano que a la especie a partir de la que puede derivarse el transgen de los genes de CH.
El término "se encuentra de manera natural" tal como se aplica a un objeto se refiere al hecho de que puede encontrarse un objeto en la naturaleza. Por ejemplo, una secuencia de polipéptido o de polinucleótido que está presente en un organismo (incluyendo virus) que puede aislarse a partir de una fuente en la naturaleza y que no se ha modificado intencionadamente por el hombre en el laboratorio, se produce naturalmente.
El término "reordenado" se refiere a la configuración de un locus de inmunoglobulina de cadena pesada o cadena ligera en el que un segmento V se coloca inmediatamente adyacente a un segmento D-J o J en una conformación que codifica esencialmente un dominio VH o VL completo, respectivamente. Puede identificarse un locus de gen de inmunoglobulina reordenado mediante comparación con el ADN de la línea germinal; un locus reordenado tiene al menos un elemento de homología heptámero/nonámero recombinado.
El término "no reordenado" o "configuración de línea germinal" con respecto a un segmento V se refiere a la configuración en la que el segmento V no se recombina de manera que esté inmediatamente adyacente a un segmento D o J.
Se pretende que el término "ácido nucleico" incluya moléculas de ADN y moléculas de ARN. Un ácido nucleico puede ser de cadena sencilla o de cadena doble.
Se pretende que el término "ácido nucleico aislado" con respecto a ácidos nucleicos que codifican anticuerpos o partes de anticuerpo (por ejemplo, VH, VL, CDR3) que se unen a CTLA-4, se refiera a un ácido nucleico en el que las secuencias de nucleótido que codifican el anticuerpo o parte de anticuerpo estén libres de otras secuencias de nucleótido que codifican anticuerpos o partes de anticuerpo que se unen a antígenos diferentes de CTLA-4, secuencias que pueden flanquear de manera natural el ácido nucleico en el ADN genómico humano. Las SEQ ID NOs: 4-23 comprenden las secuencias de nucleótidos y aminoácidos que comprenden las regiones variables de cadena pesada (VH) y cadena ligera (VL) de los anticuerpos monoclonales anti-CTLA-4 humanos 10D1, 4B6 y 1E2 de la invención.
El término "sustancialmente idéntico", en el contexto de dos ácidos nucleicos o polipéptidos se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que tienen una identidad de residuo de aminoácido o nucleótido de al menos un 80%, aproximadamente un 90, aproximadamente un 95% o superior, cuando se compara y se alinea para una correspondencia máxima, si se mide usando el siguiente procedimiento de comparación de secuencia y/o mediante inspección visual. Por ejemplo, la invención proporciona ácidos nucleicos que tienen secuencias que son sustancialmente idénticas a SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2. Tales secuencias "sustancialmente idénticas" se consideran normalmente homólogas. La "identidad sustancial" puede existir en una región de secuencia que es de al menos aproximadamente 50 residuos de longitud, sobre una región de al menos aproximadamente 100 residuos, o sobre una región de al menos aproximadamente 150 residuos, o sobre la longitud total de las dos secuencias que van a compararse. Tal como se describe a continuación, dos secuencias cualesquiera de anticuerpos sólo pueden alinearse de una manera, usando el esquema de numeración en Kabat. Por tanto, para anticuerpos, la identidad en porcentaje tiene un significado único y bien definido.
Los aminoácidos de las regiones variables de las cadenas pesada y ligera maduras de inmunoglobulinas se denominan Hx y Lx respectivamente, en los que x es un número que designa la posición de un aminoácido según el esquema de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interset (Institutos Nacionales de Salud, (Nationnal Institutes de Health), Bethesda, MD, 1987 y 1991). Kabat enumera muchas secuencias de aminoácidos para anticuerpos para cada subgrupo, y enumera los aminoácidos que se producen más comúnmente para cada posición de residuo en ese subgrupo para generar una secuencia consenso. Kabat usa un procedimiento para asignar un número de residuo a cada aminoácido en una secuencia enumerada, y este procedimiento para asignar números de residuos se ha convertido en convencional en este campo. El esquema de Kabat puede extenderse a otros anticuerpos no incluidos en su compendio alineando el anticuerpo en cuestión con una de las secuencias consenso en Kabat mediante referencia a los aminoácidos conservados. El uso del sistema de numeración de Kabat identifica fácilmente aminoácidos en posiciones equivalentes en anticuerpos diferentes. Por ejemplo, un aminoácido en la posición L50 de un anticuerpo humano ocupa la posición equivalente a una posición L50 de un aminoácido de un anticuerpo de ratón. Igualmente, los ácidos nucleicos que codifican cadenas de anticuerpo están alineados cuando las secuencias de aminoácidos codificadas por los ácidos nucleicos respectivos están alineadas según la convención de numeración de Kabat.
La frase "se hibrida selectivamente (o específicamente) con" se refiere a la unión, duplicación o hibridación de una molécula con una secuencia de nucleótidos particular en condiciones de hibridación rigurosas cuando esa secuencia está presente en una mezcla compleja (por ejemplo, ADN o ARN de biblioteca o celular total), en el que la secuencia de nucleótidos particular se detecta al menos a aproximadamente 10 veces el ruido de fondo. En una realización, puede determinarse que un ácido nucleico se encuentra dentro del alcance de esta descripción (por ejemplo, es sustancialmente idéntico a SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2) por su capacidad para hibridarse en condiciones rigurosas con un ácido nucleico determinado de otra manera como que se encuentra dentro del alcance de esta descripción (tal como las secuencias ejemplares descritas en el presente documento).
La frase "condiciones de hibridación rigurosa" se refiere a condiciones en las que una sonda se hibrida con su subsecuencia diana, normalmente en una mezcla compleja de ácido nucleico, pero no con otras secuencias en cantidades significativas (una señal positiva (por ejemplo, identificación de un ácido nucleico de la invención) es aproximadamente 10 veces la hibridación del ruido de fondo). Las condiciones rigurosas son dependientes de secuencia y serán diferentes en circunstancias diferentes. Las secuencias más largas se hibridan específicamente a temperaturas superiores. Se encuentra una guía extensa para la hibridación de ácidos nucleidos en por ejemplo, Sambrook, ed., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL (2ª ED.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, (1989); CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Ausubel, ed. John Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1997); LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY: HYBRIDIZATION WrrH NUCLEIC ACID PROBES, Part I. Theory and Nucleic Acid Preparation, Tijssen, ed. Elsevier, N.Y. (1993).
Generalmente, se seleccionan condiciones rigurosas para que sean aproximadamente 5-10ºC inferiores que el punto de fusión térmico (T_{f}) para la secuencia específica a un pH de concentración iónica definida. La T_{f} es la temperatura (a la concentración iónica, pH, y concentración nucleica definidos) a la que el 50% de las sondas complementarias a la diana se hibridan a la secuencia diana en equilibrio (dado que las secuencias diana están presentes en exceso, a T_{f}, el 50% de las sondas están ocupadas en el equilibrio). Las condiciones rigurosas serán aquellas en las que la concentración de sal es inferior a aproximadamente 1,0 M de ión de sodio, normalmente una concentración de aproximadamente 0,01 a 1,0 M de ión de sodio (u otras sales) a pH de 7,0 a 8,3 y la temperatura es de al menos aproximadamente 30ºC para sondas cortas (por ejemplo, de 10 a 50 nucleótidos) y al de menos aproximadamente 60ºC para sondas largas (por ejemplo, superiores a 50 nucleótidos). También pueden lograrse condiciones rigurosas con la adición de agentes desestabilizantes tales como formamida tal como se describe en Sambrook (citado a continuación). Para hibridación de alta rigurosidad, una señal positiva es al menos dos veces el ruido de fondo, preferiblemente 10 veces la hibridación del ruido de fondo. Condiciones de hibridación rigurosa o de alta rigurosidad a modo de ejemplo incluyen: formamida al 50%, 5x SSC y SDS al 1% incubado a 42ºC o 5x SSC y SDS al 1% incubado a 65ºC, con un lavado en 0,2 x SSC y SDS al 0,1% a 65ºC. Para hibridación selectiva o específica, una señal positiva (por ejemplo, identificación de un ácido nucleico de la invención) es aproximadamente 10 veces la hibridación del ruido de fondo. Las condiciones de hibridación rigurosas que se usan para identificar ácidos nucleicos dentro del alcance de la invención incluyen, por ejemplo, hibridación en un tampón que comprende formamida al 50%, 5 x SSC, y SDS al 1% a 42ºC, o hibridación en un tampón que comprende 5 x SSC y SDS al 1% a 65ºC, ambos con un lavado de 0,2 x SSC y SDS al 0,1% a 65ºC. En la presente invención, puede identificarse ADN o ADNc genómico que comprende ácidos nucleicos de la invención en inmunotransferencias tipo Southern convencionales en condiciones rigurosas usando las secuencias de ácido nucleico descritas aquí. Otras condiciones rigurosas para tales hibridaciones (para identificar ácidos nucleicos dentro del alcance de la invención) son las que incluyen una hibridación en un tampón de formamida al 40%, NaCl 1 M, SDS al 1% a 37ºC.
Sin embargo, la selección de un formato de hibridación no es crítica, es la rigurosidad de las condiciones de lavado la que fija las condiciones que determinan si un ácido nucleico está o no dentro del alcance de esta descripción. Las condiciones de lavado usadas para identificar ácidos nucleicos dentro del alcance de esta descripción incluyen, por ejemplo: una concentración de sal de aproximadamente 0,02 molar a pH 7 y una temperatura de al menos aproximadamente 50ºC o de aproximadamente 55ºC a aproximadamente 60ºC; o, una concentración de sal de NaCl de aproximadamente 0,15 M a 72ºC durante aproximadamente 15 minutos; o, una concentración de sal de aproximadamente 0,2 X SSC a una temperatura de al menos aproximadamente 50ºC o de aproximadamente 55ºC a aproximadamente 60ºC durante de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 minutos; o, se lava el complejo de hibridación dos veces con una disolución con una concentración de sal de aproximadamente 2X SSC que contiene SDS al 0,1% a temperatura ambiente durante 15 minutos y luego se lava dos veces mediante 0,1 X SSC que contiene SDS al 0,1% a 68ºC durante 15 minutos; o, condiciones equivalentes. Véase Sambrook, Tijssen y Ausubel para una descripción del tampón SSC y condiciones equivalentes.
Los ácidos nucleicos de la invención pueden estar presentes en células completas, en un lisado celular, o en una forma parcialmente purificada o sustancialmente pura. Un ácido nucleico está "aislado" o "se vuelve sustancialmente puro" cuando se purifica a partir de otros componentes u otros contaminantes, por ejemplo, otros ácidos nucleicos celulares o proteínas, mediante técnicas convencionales, incluyendo tratamiento alcalino/SDS, bandeo de CsCl, cromatografía de columna, electroforesis en gel de agarosa y otras bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook, Tijssen y Ausubel. Las secuencias de ácido nucleico de la invención y otros ácidos nucleicos usados para llevar a la práctica esta invención, ya sea ARN, ADNc, ADN genómico, o híbridos de los mismos, pueden aislarse a partir de una variedad de fuentes, modificadas mediante ingeniería genética, amplificadas, y/o expresadas recombinantemente. Puede usarse cualquier sistema de expresión recombinante, incluyendo, además del bacteriano, por ejemplo, sistemas de levadura, insecto o mamífero. De manera alternativa, estos ácidos nucleicos pueden sintetizarse químicamente in vitro. Se describen bien técnicas para la manipulación de ácidos nucleicos, tales como, por ejemplo, subclonación en vectores de expresión, sondas de marcaje, secuenciación e hibridación en la bibliografía científica y de patentes, véase, por ejemplo, Sambrook, Tijssen y Ausubel. Pueden analizarse los ácidos nucleicos y cuantificarse mediante cualquiera de varios medios generales bien conocidos por los expertos en la técnica. Estos incluyen, por ejemplo, procedimientos analíticos bioquímicos tales como RMN, espectrofotometría, radiografía, electroforesis, electroforesis capilar, cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC), cromatografía en capa fina (CCF), y cromatografía por hiperdifusión, varios procedimientos inmunológicos, tales como reacciones de precipitina fluida o en gel, inmunodifusión (sencilla o doble), inmunoelectroforesis, radioinmunoensayos (RIA), ensayos inmunosorbentes unidos a enzima (ELISA), ensayos inmunofluorescentes, análisis por inmunotransferencia tipo Southern, análisis por inmunotransferencia tipo Northern, análisis de inmunotransferencia en mancha, electroforesis en gel (por ejemplo, SDS-PAGE), RT-PCR, PCR cuantitativa, otros procedimientos de amplificación de señal o diana o ácido nucleico, radiomarcaje, contador de centelleo y cromatografía de afinidad.
Las composiciones de ácido nucleico de la presente invención, aunque a menudo en una secuencia nativa (excepto para sitios de restricción modificados y similares), a partir de bien ADNc, genómico o bien mezclas pueden mutarse, de las mismas según las técnicas convencionales para proporcionar secuencias génicas. Para secuencias codificantes, estas mutaciones pueden afectar la secuencia de aminoácidos como se desee. En particular, se contemplan secuencias de ADN sustancialmente homólogas a o derivadas a partir de secuencias de cambio, constantes V, D, J nativas y otras descritas en el presente documento (en el que "derivada" indica que una secuencia es idéntica o modificada a partir de otra secuencia).
Un ácido nucleico se "une operativamente" cuando se coloca en una relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, un promotor o potenciador está unido operativamente a una secuencia codificante si afecta a la transcripción de la secuencia. Con respecto a secuencias reguladoras de transcripción, unidas operativamente significa que las secuencias de ADN que se unen son contiguas y, cuando es necesario unir dos regiones codificantes de proteína, contiguas y en marco de lectura. Para secuencias de cambio, unidas operativamente indica que las secuencias pueden realizar la recombinación de cambio.
Se pretende que el término "vector" se refiera a una molécula de ácido nucleico que puede transportar otro ácido nucleico con el que se ha unido. Un tipo de vector es un "plásmido", que se refiere a un bucle de ADN de cadena doble circular en el que pueden ligarse segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector viral, en el que pueden ligarse segmentos de ADN adicionales en el genoma viral. Ciertos vectores pueden replicarse de manera autónoma en una célula huésped en la que se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen de replicación bacteriano y vectores de mamíferos episomales y de replicación). Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamíferos no episomales) pueden integrarse en el genoma de una célula huésped tras la introducción en la célula huésped, y por tanto se replican junto con el genoma huésped. Es más, ciertos vectores pueden dirigir la expresión de genes a los que están unidos operativamente. Tales vectores se denominan en el presente documento como "vectores de expresión recombinante" (o simplemente, "vectores de expresión"). En general, los vectores de expresión de utilidad en técnicas de ADN recombinante son a menudo a partir de plásmidos. En la presente memoria descriptiva, "plásmido" y "vector" pueden usarse indistintamente dado que el plásmido es la forma de vector empleada más comúnmente. Sin embargo, se pretende que la invención incluya otras formas de vectores de expresión, tales como vectores virales (por ejemplo, retrovirus defectuosos para la replicación, adenovirus y virus adeno-asociados), que sirven para funciones equivalentes.
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El término "célula huésped recombinante" (o simplemente "célula huésped") se refiere a una célula en la que se introduce un vector de expresión recombinante. Debe entenderse que se pretende que tales términos se refieran no sólo a la célula sujeto particular, sino a la progenie de tal célula. Debido a que pueden producirse ciertas modificaciones en generaciones posteriores debido bien a mutación o bien a influencias ambientales, tal progenie puede, de hecho, no ser idéntica a la célula original, pero todavía se incluye dentro del alcance del término "célula huésped" tal como se usa en el presente documento.
El término "transgen minilocus" se refiere a un transgen que comprende una parte del locus de inmunoglobulina genómica que tiene al menos una deleción interna (es decir, no en el extremo terminal de la parte) de una parte de ADN no esencial (por ejemplo, secuencia de intervención; intron o parte de la misma) si se compara con el locus de Ig de línea germinal que se produce de manera natural.
Una "etiqueta" es una composición detectable mediante medios espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquímicos o químicos. Por ejemplo, etiquetas útiles incluyen ^{32}P, colorantes fluorescentes, reactivos ricos en electrones, enzimas (por ejemplo, tal como se usan comúnmente en un ensayo ELISA), biotina, digoxigenina, o haptenos y proteínas para los que hay disponibles antisuero o anticuerpos monoclonales (por ejemplo, los polipéptidos de la invención pueden volverse detectables, por ejemplo, incorporando un radiomarcador en el péptido, y usarse para detectar anticuerpos reactivos específicamente con el péptido).
El término "clasificación" en el contexto de células tal como se usa en el presente documento se refiere tanto a la clasificación física de las células, como puede lograrse usando, por ejemplo, un clasificador de células activadas por fluorescencia, como al análisis de células basándose en la expresión de marcadores de superficie celular, por ejemplo, análisis FACS en ausencia de clasificación.
La frase "respuesta celular inmunitaria" se refiere a la respuesta de las células del sistema inmunitario frente a estímulos externos o internos (por ejemplo, antígeno, citocinas, quimiocinas, y otras células) que producen cambios bioquímicos en las células inmunitarias que dan como resultado una migración celular inmunitaria, muerte de células diana, fagocitosis, producción de anticuerpos, otros efectores solubles de la respuesta inmunitaria, y similares.
Los términos "respuesta de linfocito T" y "actividad de linfocito T" se usan en el presente documento indistintamente para referirse al componente de respuesta inmunitaria dependiente de linfocitos T (es decir, la proliferación y/o diferenciación de linfocitos T en linfocitos T cooperadores, citotóxicos, citolíticos, o supresores, el suministro de señales mediante linfocitos T cooperadores a linfocitos B que provocan o evitan la producción de anticuerpos, la muerte de células diana específicas mediante linfocitos T citotóxicos, y la liberación de factores solubles tales como citocinas que modulan la función de otras células inmunitarias).
El término "respuesta inmunitaria" se refiere a la acción concertada de linfocitos, células presentadoras de antígenos, células fagocíticas, granulocitos, y macromoléculas solubles producidas por las células anteriores o el hígado (incluyendo anticuerpos, citocinas, y complemento) que dan como resultado un daño selectivo a, destrucción de, o eliminación del cuerpo humano de patógenos, invasores, células o tejidos infectados con patógenos, células cancerosas, o, en casos de autoinmunidad o inflamación patológica, células o tejidos humanos normales.
Pueden detectarse componentes de una respuesta inmunitaria in vitro mediante varios procedimientos que se conocen bien por los expertos de la técnica. Por ejemplo, (1) pueden incubarse linfocitos T citotóxicos con células diana marcadas radiactivamente y la lisis de estas células diana puede detectarse mediante la liberación de radiactividad, (2) pueden incubarse linfocitos T cooperadores con antígenos y células presentadoras de antígenos y medirse la síntesis y secreción de citocinas mediante procedimientos convencionales (Windhagen A; et al., 1995, Immunity 2(4): 373-80), (3) pueden incubarse células presentadoras de antígenos con el antígeno de proteína completo y puede detectarse la presentación de ese antígeno sobre MHC bien mediante ensayos de activación de linfocitos T o bien mediante procedimientos biofísicos (Harding et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci., 86: 4230-4), (4) pueden incubarse mastocitos con reactivos que reticulan sus receptores Fc-epsilon y medirse la liberación de histamina mediante inmunoensayo enzimático (Siraganian, et al.,1983, TIPS 4: 432-437).
De manera semejante, los productos de una respuesta inmunitaria bien en un organismo modelo (por ejemplo, ratón) o bien en un paciente humano también pueden detectarse mediante diversos métodos que se conocen bien por los expertos en la técnica. Por ejemplo, (1) la producción de anticuerpos en respuesta a la vacunación puede detectarse fácilmente mediante procedimientos convencionales actualmente usados en laboratorios clínicos, por ejemplo, ELISA; (2) la migración de células inmunitaria a sitios de inflamación puede detectarse rayando la superficie de la piel y colocando un recipiente estéril para capturar las células que migran sobre el sitio de rayado (Peters et al., 1988, Blood 72: 1310-5); (3) la proliferación de células mononucleares de sangre periférica en respuesta a mitógenos o reacción de linfocito mixta puede medirse usando ^{3}H-timidina; (4) la capacidad fagocítica de granulocitos, macrófagos, y otros fagocitos en CMSP puede medirse colocando CMSP en pocillos junto con partículas marcadas (Peters et al., 1988); y (5) la diferenciación de células del sistema inmunitario células puede medirse marcando CMSP con anticuerpos frente a moléculas CD tales como CD4 y CD8 y midiendo la fracción de las CMSP que expresan estos marcadores.
Tal como se usa en el presente documento, la frase "ruta de transducción de señal" o "acontecimiento de transducción de señal" se refiere a al menos una reacción bioquímica, pero más comúnmente a una serie de reacciones bioquímicas, que son el resultado de la interacción de una célula con un compuesto o agente estimulante. Por tanto, la interacción de un compuesto estimulante con una célula genera una "señal" que se transmite a través de la ruta de transducción de señal, dando como resultado en último lugar, una respuesta celular, por ejemplo, una respuesta inmunitaria descrita anteriormente.
Una ruta de transducción de señal se refiere a la relación bioquímica entre una variedad de moléculas de transducción de señales que desempeñan un papel en la transmisión de una señal de un fragmento de célula a otro fragmento de una célula. Las moléculas de transducción de señales descritas en el presente documento incluyen, por ejemplo, AcM 147.1 descrito en el presente documento. Tal como se usa en el presente documento, la frase "receptor de superficie celular" incluye moléculas y complejos de moléculas que pueden recibir una señal y la transmisión de tal señal a través de la membrana plasmática de una célula. Un ejemplo de un "receptor de superficie celular" de la presente invención es el receptor de célula T (TCR) o los ligandos B7 de CTLA-4.
Puede iniciarse una ruta de transducción de señal en una célula mediante interacción de una célula con un estimulante que está dentro o fuera de la célula. Si un estimulante exterior (es decir, fuera de la célula) (por ejemplo, un complejo MHC-antígeno sobre una célula que presenta antígeno) interacciona con un receptor de superficie celular (por ejemplo, un receptor de célula T), una ruta de transducción de señal puede transmitir una señal a través de la membrana de la célula, a través del citoplasma de la célula, y en algunas ocasiones hacia el núcleo. Si un estimulante interior (por ejemplo, dentro de la célula) interacciona con una molécula de transducción de señal intracelular, una ruta de transducción de señal puede dar como resultado la transmisión de una señal a través del citoplasma de la célula, y en algunas ocasiones hacia el núcleo de la célula.
La transducción de señal puede producirse a través de, por ejemplo, la fosforilación de una molécula; interacciones alostéricas no covalentes; complejación de moléculas; el cambio conformacional de una molécula; liberación de calcio; producción de fosfato de inositol; ruptura proteolítica; producción de nucleótido cíclico y producción de diacilglicérido. Normalmente, la transducción de la señal se produce a través de la fosforilación de una molécula de transducción de señal.
El término "activación de célula T no específica" se refiere a la estimulación de células T independientes de su especificidad antigénica.
Producción de anticuerpos humanos frente a CTLA-4
Los anticuerpos monoclonales (AcM) y los anticuerpos de secuencia humana de la invención pueden producirse mediante una variedad de técnicas, incluyendo metodología de anticuerpos monoclonales convencional, por ejemplo, la técnica de hibridación de células somáticas convencional de Kohler y Milstein, Nature 256: 495 (1975). Puede emplearse cualquier técnica para producir anticuerpos monoclonales por ejemplo, transformación viral u oncogénica de linfocitos B. Un sistema animal para preparar hibridomas es el sistema murino. La producción de hibridoma en el ratón es un procedimiento muy bien establecido. Los protocolos y técnicas de inmunización par el aislamiento de esplenocitos inmunizados para la fusión se conocen en la técnica. También se conocen compañeros de fusión (por ejemplo, células de mieloma murino) y procedimientos de fusión (véase, por ejemplo, Harlow y Lane (1988), Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor Nueva
York).
Los anticuerpos monoclonales humanos y anticuerpos de secuencia humana dirigidos frente a CTLA-4 humano pueden generarse usando ratones transgénicos que llevan un sistema inmunitario humano en vez del sistema de ratón. Estos ratones transgénicos, también denominados en el presente documento "HuMAb-Mouse^{TM}", contienen miniloci de un gen de inmunoglobulina humana que codifica secuencias de inmunoglobulina de cadena pesada (m y g) y ligera k humanas no reordenadas, junto con mutaciones dirigidas que inactivan los loci de cadenas \mu y \kappa endógenas (Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859 y patente estadounidense número 5.770.429). En consecuencia, los ratones muestran expresión reducida de IgM o \kappa de ratón, y en respuesta a la inmunización, los transgenes de cadena pesada y ligera humanos introducidos experimentan mutación somática y de cambio de clase para generar IgGk monoclonal humana de alta afinidad (Lonberg, N. et al. (1994), citado anteriormente; revisado en Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. y Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. Vol. 13: 65-93, y Harding, F. y Lonberg, N. (1995) Ann. N. Y. Acad. Sci 764:536-546). La preparación de ratones transgénicos se describe en detalle en la sección II a continuación y en Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al. (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Lonberg et al., (1994) Nature 368(6474): 856-859; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591; Lonberg, N. y Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. Vol. 13: 65-93; Harding, F. y Lonberg, N. (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci 764:536-546; Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851. Véanse además, las patentes estadounidenses números 5.625.126 y 5.770.429, ambas concedidas a Lonberg y Kay, y GenPharm International; patente estadounidense número 5.545.807 concedida a Surani et al.; publicaciones internacionales números WO 98/24884, publicada el 11 de junio de 1998; WO 94/25585, publicada el 10 de noviembre de 1994; WO 93/1227, publicada el 24 de junio de 1993; WO92/22645, publicada el 23 de diciembre de 1992; WO 92/03918, publicada del 19 de marzo de 1992. Alternativamente, los transgenes CMD y HCo12, descritos en los ejemplos 1 y 2 a continuación, pueden usarse para generar anticuerpos humanos anti-CTLA-4.
Procedimientos detallados para generar anticuerpos monoclonales completamente humanos frente a CTLA-4 se describen en los ejemplos siguientes. La experiencia acumulativa con diversos antígenos ha mostrado que los ratones transgénicos responden cuando se inmunizan inicialmente por vía intraperitoneal (IP) con antígeno en adyuvante de Freund completo, seguido por inmunizaciones IP cada dos semanas (hasta un total de 6) con antígeno en adyuvante de Freund incompleto. Sin embargo, también se encuentra que adyuvantes distintos de Freund son eficaces. Además, se encuentra que las células completas en ausencia de adyuvante son sumamente inmunogénicas. La respuesta inmunitaria puede controlarse a lo largo del transcurso del protocolo de inmunización con muestras de plasma que se obtienen mediante sangrados retroorbitales. El plasma puede explorarse mediante ELISA (tal como se describe a continuación), y pueden usarse los ratones con títulos suficientes de inmunoglobulina anti-CTLA-4 humano para las fusiones. Pueden realizarse inyecciones de refuerzo a los ratones por vía intravenosa con antígeno 3 días antes de sacrificarlos y extirpar el bazo. Se espera que pueda ser necesario realizar 2-3 fusiones para cada inmunización. Normalmente se inmunizan entre 6 y 24 ratones para cada antígeno. Normalmente, se usan cepas tanto HCo7 como HCo12. Además, pueden criarse juntos transgenes tanto HCo7 como HCo 12 en un único ratón que tiene dos transgenes de cadena pesada humana diferentes.
Para purificar anticuerpos humanos anti-CTLA-4, pueden hacerse crecer hibridomas seleccionados en matraces centrifugadores de dos litros para la purificación de anticuerpo monoclonal. Pueden filtrarse los sobrenadantes y concentrarse antes de la cromatografía de afinidad con proteína A-Sepharose (Pharmacia, Piscataway, NJ). Puede comprobarse la IgG eluída mediante electroforesis en gel y cromatografía de líquidos de alta resolución para garantizar la pureza. Puede cambiarse la disolución tampón por PBS, y puede determinarse la concentración mediante DO280 usando un coeficiente de extinción de 1,43. Pueden prepararse alícuotas de los anticuerpos monoclonales y almacenarse a -80ºC.
Para determinar si los anticuerpos monoclonales humanos anti-CTLA-4 seleccionados se unen a epítopos únicos, puede biotilinarse cada anticuerpo usando reactivos comercialmente disponibles (Pierce, Rockford, IL). Pueden realizarse estudios de competencia usando anticuerpos monoclonales no marcados y anticuerpos monoclonales biotinilados usando placas de ELISA recubiertas con CTLA-4 tal como se describió anteriormente. La unión de AcM biotinilado puede detectarse con una sonda de estreptavidina-fosfatasa alcalina.
Para determinar el isotipo de los anticuerpos purificados, pueden realizarse ELISA de isótopos. Pueden recubrirse los pocillos de placas de microtitulación con 1 \mug/ml de IgG anti-humana durante la noche a 4ºC. Tras bloquear con BSA al 1%, se hacen reaccionar las placas con 1 \mug/ml o menos de anticuerpos monoclonales o controles de isótopo purificado, a temperatura ambiente durante de una a dos horas. Entonces pueden hacerse reaccionar los pocillos con sondas conjugadas con fosfatasa alcalina específicas bien para IgG1 humana o bien para IgM humana. Se revelan las placas y se analizan tal como se describió anteriormente.
Para demostrar la unión de anticuerpos monoclonales frente a células vivas que expresan el CTLA-4, puede usarse citometría de flujo. En resumen, se mezclan líneas celulares que expresan CTLA-4 (hechas crecer en condiciones de crecimiento habituales) con diversas concentraciones de anticuerpos monoclonales en PBS que contiene BSA al 0,1% y suero de ternera fetal 10%, y se incuban a 37ºC durante 1 hora. Tras el lavado, se hacen reaccionar las células con anticuerpo anti-IgG humana marcado con fluoresceína en las mismas condiciones que la tinción de anticuerpo primario. Pueden analizarse las muestras mediante un instrumento FACScan usando propiedades de dispersión lateral y de la luz para activar células únicas. Puede usarse un ensayo alternativo usando microscopia de fluorescencia (además o en vez de) el ensayo de citometría de flujo. Pueden teñirse las células exactamente tal como se describió anteriormente y examinarse mediante microscopía de fluorescencia. Este procedimiento permite la visualización de células individuales, pero puede tener sensibilidad disminuida dependiendo de la densidad del antígeno.
Pueden someterse a prueba adicionalmente las IgG humanas anti-CTLA-4 para determinar su reactividad con antígeno CTLA-4 mediante inmunotransferencia tipo Western. En resumen, pueden prepararse extractos celulares a partir de células que expresan CTLA-4 y someterse a electroforesis en gel de poliacrilamida y dodecilsulfato de sodio. Tras la electroforesis, se transfieren los antígenos separados a membranas de nitrocelulosa, se bloquean con suero de ternera fetal al 10%, y se examinan con sondas de anticuerpos monoclonales que van a someterse a prueba. Puede detectarse la unión a IgG humana usando fosfatasa alcalina anti-IgG humana y revelarse con comprimidos de sustrato de BCIP/NBT (Sigma Chem. Co., St. Louis, MO).
Producción de animales no humanos transgénicos que generan anticuerpos monoclonales ANTI-CTLA-4 humanos
Se describen en el presente documento animales no humanos transgénicos, por ejemplo, ratones transgénicos, que pueden expresar anticuerpos monoclonales humanos que se unen específicamente a CTLA-4. Algunos animales no humanos transgénicos, por ejemplo, los ratones transgénicos, tienen un genoma que comprende un transgen de cadena pesada y un transgen de cadena ligera humanos. Algunos animales no humanos transgénicos se inmunizan con una preparación purificada o enriquecida de antígeno CTLA-4 y/o células que expresan CTLA-4. Algunos animales no humanos transgénicos pueden producir múltiples isotipos de anticuerpos monoclonales humanos frente a CTLA-4 (por ejemplo, IgG, IgA y/o IgE) sometiéndose a recombinación V-D-J y cambio de isótopos. El cambio de isotipos puede producirse mediante, por ejemplo, cambio de isotipos clásico o no clásico.
El diseño de un animal no humano transgénico que responde a la estimulación de antígenos foráneos con un repertorio de anticuerpos heterólogos, requiere que los transgenes de inmunoglobulina heterólogos contenidos dentro del animal transgénico funcionen correctamente a lo largo de la ruta de desarrollo de células B. En algunos ratones, la función correcta de un transgen de cadena pesada heterólogo incluye el cambio de isotipos. En consecuencia, los transgenes de la invención se construyen de modo que producen cambio de isotipos y uno o más de los siguientes: (1) expresión específica de tipo celular y de nivel alto, (2) transposición génica funcional, (3) activación de y respuesta a la exclusión alélica, (4) expresión de un repertorio principal suficiente, (5) transducción de la señal, (6) hipermutación somática, y (7) dominación del locus de anticuerpo del transgen durante la respuesta inmunitaria.
No se necesita cumplir todos los criterios anteriores. Por ejemplo, en un animal transgénico en el que los loci de inmunoglobulina endógenos de los animales transgénicos se alteran funcionalmente, el transgen no necesita activar la exclusión alélica. Además, en animales transgénicos en los que el transgen comprende un gen de inmunoglobulina de cadena pesada y/o ligera transpuesta funcionalmente, el segundo criterio de transposición génica funcional no es necesario, al menos para ese transgen que ya está transpuesto. Para los antecedentes de inmunología molecular, véase, por ejemplo, Fundamental Immunology, 4ª edición (1998), Paul, William E., ed. Lippencott-Raven Press, N. Y.
Algunos animales no humanos transgénicos usados para generar los anticuerpos monoclonales humanos de la invención contienen transgenes de cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina heterólogos transpuestos, no transpuestos, o una combinación de transpuestos y no transpuestos en la línea germinal del animal transgénico. Cada uno de los transgenes de cadena pesada comprende al menos un gen de CH. Además, el transgen de cadena pesada puede contener secuencias de cambio de isotipos funcionales, que pueden soportar el cambio de isotipos de un transgen heterólogo que codifica múltiples genes de CH en las células B del animal transgénico. Tales secuencias de cambio pueden ser las que se producen de forma natural en el locus de inmunoglobulina de la línea germinal de las especies que sirven como la fuente de genes de CH transgénicos, o tales secuencias de cambio pueden derivarse de las que se producen en las especies que van a recibir el constructo transgénico (el animal transgénico). Por ejemplo, un constructo transgénico humano que se usa para producir un ratón transgénico puede producir una frecuencia superior de acontecimientos de cambio de isotipos si incorpora secuencias de cambio similares a las que se producen de forma natural en el locus de cadena pesada de ratón, puesto que presumiblemente las secuencias de cambio de ratón están optimizadas para funcionar con el sistema de cambio de enzima recombinasa de ratón, mientras que las secuencias de cambio humanas no. Las secuencias de cambio pueden aislarse y clonarse mediante métodos de clonación convencionales, o pueden sintetizarse de nuevo solapando oligonucleótidos sintéticos diseñados basándose en la información de secuencia publicada con respecto a secuencias de región de cambio de inmunoglobulinas (Mills et al., Nucl. Acids Res. 15:7305-7316 (1991); Sideras et al., Intl. Immunol. 1:631-642 (1989).
Para cada uno de los animales transgénicos anteriores, los transgenes de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera heterólogos transpuestos funcionalmente se encuentran en una fracción significativa de células B del animal transgénico (al menos el 10 por ciento).
Los transgenes usados para generar los animales transgénicos de la invención incluyen un transgen de cadena pesada que comprende ADN que codifica al menos un segmento génico variable, un segmento génico de diversidad, un segmento génico de unión y al menos un segmento génico de región constante. El transgen de cadena ligera de inmunoglobulinas comprende ADN que codifica al menos un segmento génico variable, un segmento génico de unión y al menos un segmento génico de región constante. Los segmentos génicos que codifican los segmentos génicos de cadena ligera y pesada son heterólogos para el animal no humano transgénico porque se derivan de, o corresponden a, ADN que codifica segmentos génicos de cadena pesada y ligera de inmunoglobulinas de especies que no consisten en el animal no humano transgénico.
El transgen puede construirse de manera que los segmentos génicos individuales no se transponen, es decir, no se transponen de modo que codifican una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina funcional. Tales transgenes no transpuestos soportan la recombinación de los segmentos génicos V, D y J (transposición funcional) y preferiblemente soportan la incorporación de todo o una parte de un segmento génico de región D en la cadena pesada de inmunoglobulina transpuesta resultante dentro del animal no humano transgénico cuando se expone al antígeno CTLA-4.
Tales transgenes comprenden normalmente una parte sustancial de los segmentos C, D, y J así como un subconjunto de los segmentos génicos V. En tales constructos transgénicos, las diversas secuencias reguladoras, por ejemplo, promotores, potenciadores, regiones de cambio de clase, secuencias donantes de corte y empalme y aceptoras de corte y empalme para el procesamiento de ARN, las señales de recombinación y similares, comprenden las secuencias correspondientes derivadas del ADN heterólogo. Tales secuencias reguladoras pueden incorporarse dentro del transgen de la misma especie o relacionada del animal no humano usado. Por ejemplo, pueden combinarse segmentos génicos de inmunoglobulina humana en un transgen con una secuencia potenciadora de inmunoglobulina de roedor para su uso en un ratón transgénico. Alternativamente, pueden incorporarse secuencias reguladoras sintéticas dentro del transgen, en el que tales secuencias reguladoras sintéticas no son homólogas para una secuencia de ADN funcional que se sabe que se produce de forma natural en los genomas de mamíferos. Se designan las secuencias reguladoras sintéticas según reglas de consenso, tales como, por ejemplo, las que especifican las secuencias permitidas de un sitio aceptor de corte y empalme o un motivo promotor/potenciador. El transgen puede comprender un minilocus.
Algunos animales transgénicos usados para generar anticuerpos humanos frente a CTLA-4 contienen al menos una, normalmente 2-10, y algunas veces 25-50 o más copias del transgen descrito en el ejemplo 37 de la patente estadounidense número 5.770.429, o el transgen descrito en el ejemplo 2 a continuación (por ejemplo, HCo12), al menos una copia de un transgen de cadena ligera descrito en el ejemplo 38 de la patente estadounidense número 5.770.429, dos copias de la deleción de Cmu descrita en el ejemplo 1 a continuación, y dos copias de la deleción JKappa descrita en el ejemplo 9 de la patente estadounidense. número 5.770.429. Se inyectan los animales resultantes con antígenos y se usan para la producción de anticuerpos monoclonales humanos frente a estos antígenos.
Algunos animales transgénicos muestran producción de inmunoglobulina con un repertorio significativo, sustancialmente similar de manera ideal al de un ratón nativo. Así, por ejemplo, los animales en los que se han inactivado los genes de Ig endógenos, los niveles de inmunoglobulina totales oscilan de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/ml de suero.
Las inmunoglobulinas expresadas por los ratones transgénicos normalmente reconocen aproximadamente la mitad o más de las proteínas sumamente antigénicas, por ejemplo, proteína A de estafilococos. Normalmente, las inmunoglobulinas muestran una constante de asociación para antígenos preseleccionados de al menos aproximadamente 10^{7} M^{-1}, 10^{8} M^{-1}, 10^{9} M^{-1}, 10^{10} M^{-1}, 10^{11} M^{-1}, 10^{12} M^{-1}, 10^{13} M^{-1}, o superior.
Los ratones transgénicos pueden inmunizarse con una preparación enriquecida o purificada de antígeno CTLA-4 humano (o fragmento antigénico del mismo) y/o células que expresan CTLA-4 humano tal como se describió anteriormente. Los ratones producen células B que experimentan cambio de clase mediante recombinación de cambio intratransgénico (cambio cis) y expresan inmunoglobulinas reactivas con CTLA-4. Las inmunoglobulinas pueden ser anticuerpos de secuencia humana, en los que los polipéptidos de cadena pesada y ligera se codifican mediante secuencias transgénicas humanas, que pueden incluir secuencias derivadas mediante mutación somática y uniones recombinatorias de región V, así como secuencias codificadas por la línea germinal; estas inmunoglobulinas de secuencia humanas pueden referirse como que son sustancialmente idénticas a una secuencia polipeptídica codificada por un segmento génico de VL o VH humano y un segmento de JL o JH humano, incluso aunque pueden presentarse otras secuencias distintas a la línea germinal como un resultado de la mutación somática y empalmes de recombinación V-J y V-D-J. Con respecto a tales anticuerpos de secuencia humanos, las regiones variables de cada cadena se codifican normalmente al menos en el 80% por la línea germinal humana V, J, y, en el caso de segmentos génicos, D, cadenas pesadas; con frecuencia se codifican al menos el 85% de las regiones variables por secuencias de la línea germinal humana presentes en el transgen; a menudo, el 90 ó 95% o más de las secuencias de región variable se codifican por secuencias de la línea germinal humana presentes en el transgen. Sin embargo, puesto que se introducen secuencias distintas a la línea germinal mediante mutación somática y unión de VJ y VDJ, los anticuerpos de secuencia humana tienen frecuentemente algunas secuencias de región variable (y menos frecuentemente secuencias de región constante) que no se codifican por segmentos génicos V, D o J tal como se encuentra en el/los transgen(es) humano(s) en la línea germinal de los ratones. Normalmente, tales secuencias distintas a la línea germinal (o posiciones de nucleótidos individuales) se agrupan en o cerca de CDR, o en regiones en las que se sabe que se agrupan las mutaciones
somáticas.
Los anticuerpos de secuencia humana que se unen al antígeno predeterminado pueden resultar del cambio de isotipos, de tal manera que se producen anticuerpos humanos que comprenden una cadena \gamma de secuencia humana (tales como \gamma1, \gamma2, \gamma3, o \gamma4) y una cadena ligera de secuencia humana (tal como kappa o lambda). Tales anticuerpos de secuencia humana de isotipo cambiado contienen a menudo una o más mutación(es) somática(s), normalmente en la región variable y a menudo en o dentro de aproximadamente 10 residuos de una CDR como resultado de maduración de afinidad y selección de células B mediante antígenos, particularmente tras la exposición al antígeno secundario (o posterior). Algunos anticuerpos de secuencia humana de alta afinidad tienen constantes de asociación en equilibrio de al menos aproximadamente 1 x 10^{7} M^{-1}, o de al menos aproximadamente 1 x 10^{8} M^{-1}, o más de aproximadamente 1 x 10^{9} M^{-1}, o de 5 x 10^{9} M^{-1} a 1 x 10^{11} M^{-1} o superior.
Otro aspecto de la descripción en el presente documento se relaciona con las células B de ratones de ese tipo que pueden usarse para generar hibridomas que expresan los anticuerpos monoclonales humanos que se unen con alta afinidad (por ejemplo, teniendo una constante de asociación superior a 10^{7} M^{-1}) a CTLA-4. Estos hibridomas se usan para generar una composición que comprende una inmunoglobulina que tiene una constante de asociación (Ka) de al menos 10^{7} M^{-1} para unirse a CTLA-4. Tal inmunoglobulina contiene una cadena ligera de secuencia humana compuesta de una región variable de cadena ligera que tiene una secuencia polipeptídica que es sustancialmente idéntica a una secuencia polipeptídica codificada por un segmento génico Vk o V\lambda humano y un segmento Jk o J\lambda humano, y una región constante de cadena ligera que tiene una secuencia polipeptídica que es sustancialmente idéntica a una secuencia polipeptídica codificada por un segmento CK o C\lambda humano. También contiene una cadena pesada de secuencia humana compuesta de una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia polipeptídica que es sustancialmente idéntica a una secuencia polipeptídica codificada por un segmento génico de VH humano, opcionalmente una región D, y un segmento de JH humano, y una región constante que tiene una secuencia polipeptídica que es sustancialmente idéntica a una secuencia polipeptídica codificada por un segmento génico de CH humano. También se describen en el presente documento anticuerpos monoclonales humanos y anticuerpos de secuencia humana frente a CTLA-4 humano derivatizados o unidos a otra molécula funcional, por ejemplo, otro péptido o proteína (por ejemplo, citocina, un agente citotóxico, un agente estimulador o inhibidor inmunitario, un fragmento Fab', y similares, tal como se trató anteriormente) para generar una molécula biespecífica o multiespecífica que se une a múltiples sitios de unión o epítopos diana. Por ejemplo, un anticuerpo o parte de unión al antígeno de la invención puede unirse funcionalmente (por ejemplo, mediante acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otra manera) a una o más moléculas de unión distintas, tales como otro anticuerpo, fragmento de anticuerpo, péptido o mimético de unión.
En consecuencia, se describen en el presente documento composiciones biespecíficas y multiespecíficas que comprenden al menos un anticuerpo de secuencia humana o fragmento de unión a antígeno con una primera especificidad de unión para el CTLA-4 humano y una segunda especificidad de unión para un segundo epítopo diana. El segundo epítopo diana puede ser un receptor de Fc, por ejemplo Fc\gammaRI o un receptor de Fc\gamma humano. Por tanto se dan a conocer moléculas biespecíficas y multiespecíficas, que pueden unirse a células efectoras que expresan tanto Fc\gammaRI, Fc\gammaR como Fc\varepsilonR (por ejemplo, monocitos, macrófagos o células polimorfonucleares (PMN)), y a células diana humanas que expresan CTLA-4 humano. Estas moléculas multiespecíficas (por ejemplo, biespecíficas o multiespecíficas) seleccionan como diana células que expresan CTLA-4 humano frente a células efectoras, y desencadenan actividades de células efectoras mediadas por el receptor de Fc, tales como fagocitosis de células que expresan CTLA-4 humano, citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), liberación de citocina, o generación de anión de superóxido.
Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas pueden comprender una especificidad de unión de al menos un anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, incluyendo, por ejemplo, un Fab, Fab', F(ab')^{2}, Fv, o un Fv de cadena única. El anticuerpo puede ser también un dímero de cadena ligera o cadena pesada, o un fragmento mínimo del mismo tal como un Fv o constructo de cadena única tal como se describe en, por ejemplo, Ladner et al., patente estadounidense número 4.946.778. Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas de la invención pueden comprender una especificidad de unión para un Fc\gammaR o un Fc\gammaR presente en la superficie de una célula efectora, y una segunda especificidad de unión para un antígeno de célula diana, por ejemplo CTLA-4 humano.
Se proporciona la especificidad de unión para un receptor de Fc mediante un anticuerpo monoclonal, cuya unión no se bloquea por la inmunoglobulina G (IgG9. Tal como se usa en el presente documento, el término "receptor de IgG" se refiere a cualquiera de los ocho genes de cadena \gamma ubicados en el cromosoma 1. Estos genes codifican un total de veinte isoformas de receptores solubles o transmembrana que se agrupan dentro de tres clases de receptores de Fc\gamma: Fc\gammaRI (CD64), Fc\gammaRII (CD32), y Fc\gammaRIII (CD16). Por ejemplo, el receptor de Fc\gamma puede ser un Fc\gammaRI humano de alta afinidad. El Fc\gammaRI humano es una molécula de 72 KDa, que muestra alta afinidad para IgG monomérica (10^{8} a 10^{9} M^{-1}).
La producción y caracterización de estos anticuerpos monoclonales preferidos se describen por Fanger et al. en la solicitud PCT WO 88/00052 y en la patente estadounidense número 4.954.617. Estos anticuerpos se unen a un epítopo de Fc\gammaRI, Fc\gammaRII o Fc\gammaRIII en un sitio que es distinto del sitio de unión a Fc\gamma del receptor y, por tanto, su unión no se bloquea sustancialmente por niveles fisiológicos de IgG. Anticuerpos anti-Fc\gammaRI específicos útiles en esta invención son AcM 22, AcM 32, AcM 44, AcM 62 y AcM 197. El hibridoma que produce AcM 32 está disponible de la colección americana de cultivos tipo, ATCC número de acceso HB9469. Pueden obtenerse AcM 22 anti-Fc\gammaRI, fragmentos F(ab')_{2} de AcM 22 de Medarex, Inc. (Annandale, N.J.). El anticuerpo receptor anti-Fc\gamma también puede ser una forma humanizada de un anticuerpo 22 monoclonal (H22). La producción y caracterización del anticuerpo H22 se describe en Graziano (1995) J. Immunol 155:4996-5002 y PCT/US93/10384 (WO 94/10332). La línea celular que produce el anticuerpo H22 se deposito en la colección americana de cultivos tipo el 4 de noviembre de 1992 bajo la denominación HA022CL1 y tiene el número de acceso CRL 11177.
La especificidad de unión para un receptor de Fc puede proporcionarse mediante un anticuerpo que se une a un receptor de IgA humano, por ejemplo un receptor de Fc-alfa (Fc\alphaR (CD89)). Preferiblemente, el anticuerpo se une al receptor de IgA humano en un sitio que no está bloqueado por IgA endógeno. El término "receptor de IgA" pretende incluir el producto génico de un gen \alpha (Fc\alphaRI) ubicado en el cromosoma 19. Se sabe que este gen codifica varias isoformas transmembrana cortadas y empalmadas alternativamente de 55 a 110 kDa. Se expresa Fc\alphaRI (CD89) de manera constitutiva en monocitos/macrófagos, granulocitos neutrófilos y eosinófilos, pero no en poblaciones de células no efectoras. Fc\alphaRI tiene una afinidad media (\approx 5 10^{7} M^{-1}) tanto para IgA1 como IgA2, que aumenta tras la exposición a citocinas tales como G-CSF o GM-CSF (Morton (1996) Critical Reviews in Immunology 16:423-440). Se han descrito cuatro anticuerpos monoclonales específicos frente a FcocRI, identificados como A3, A59, A62 y A77, que se unen a Fc\alphaRI fuera del dominio de unión a ligando de IgA por, por ejemplo, Monteiro (1992) J. Immunol. 148:1764.
Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas pueden comprender adicionalmente una especificidad de unión que reconoce, por ejemplo, se une a, un antígeno de célula diana, por ejemplo, CTLA-4 humano. La especificidad de unión se proporciona mediante un anticuerpo de secuencia humana o un anticuerpo monoclonal humano de la presente invención.
Un "anticuerpo específico de células efectoras" tal como se usa en el presente documento se refiere a un anticuerpo o fragmento de anticuerpo funcional que se une al receptor de Fc o células efectoras. Los anticuerpos preferidos para su uso junto con la invención objeto se unen al receptor de Fc de células efectoras en un sitio que en el que no se unen inmunoglobulinas endógenas.
Tal como se usa en el presente documento, el término "célula efectora" se refiere a una célula inmunitaria que está implicada en la fase efectora de una respuesta inmunitaria, opuesta a las fases de activación y cognitiva de una respuesta inmunitaria. Células inmunitarias a modo de ejemplo incluyen una célula de origen mieloide o linfoide, por ejemplo, linfocitos (por ejemplo, células B y T incluyendo células citolíticas (CTL), linfocitos citolíticos, linfocitos citolíticos naturales, macrófagos, monocitos, eosinófilos, neutrófilos, células polimorfonucleares, granulocitos, mastocitos, y basófilos. Las células efectoras expresan receptores de Fc específicos y llevan a cabo funciones inmunitarias específicas. Una célula efectora puede inducir citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), por ejemplo, un neutrófilo que puede inducir ADCC. Por ejemplo, monocitos, macrófagos, neutrófilos, eosinófilos, y linfocitos que expresan Fc\alphaR están implicados en la destrucción específica de células diana y presentación de antígenos a otros componentes del sistema inmunitario, o en la unión a células que presentan antígenos. Una célula efectora también puede fagocitar un antígeno diana, célula diana o microorganismo.
La expresión de un FcR particular sobre una célula efectora puede regularse mediante factores humorales tales como citocinas. Por ejemplo, se ha encontrado que la expresión de Fc\gammagRI está regulada por incremento mediante interferón gamma (IFN-\gamma). Esta expresión potenciada aumenta la actividad citotóxica (incluyendo, por ejemplo, la fagocitosis) por células que llevan Fc\gammaRI frente a células diana.
"Célula diana" significará cualquier célula indeseable en un sujeto (por ejemplo, un ser humano o un animal) a la que puede transportarse la composición de manera dirigida (por ejemplo, un anticuerpo de secuencia humana o un anticuerpo monoclonal humano de la invención, una molécula biespecífica o multiespecífica de la invención). La célula diana puede ser una célula que expresa o sobreexpresa CTLA-4 humano. Las células que expresan CTLA-4 humano pueden incluir células tumorales, por ejemplo linfomas.
Además de anticuerpos de secuencia humana y anticuerpos monoclonales humanos de la invención, también pueden emplearse otros anticuerpos en las moléculas biespecíficas o multiespecíficas, incluyendo, por ejemplo, anticuerpos monoclonales murinos, quiméricos y humanizados.
Los anticuerpos monoclonales quiméricos de ratón-ser humano (es decir, anticuerpos quiméricos) pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante conocidas en la técnica. Por ejemplo, un gen que codifica la región constante Fc de una molécula de anticuerpo monoclonal murino (o de otra especie) se digiere con enzimas de restricción para eliminar la región que codifica la Fc murina, y se sustituye por la parte equivalente de un gen que codifica la región Fc humana. (Véase, por ejemplo, Robinson et al., publicación de patente internacional PCT/US86/02269 (documento WO 87/02671); Akira et al., solicitud de patente europea 184.187; Taniguchi, M., solicitud de patente europea 171.496; Morrison et al., solicitud de patente europea 173.494; Neuberger et al., solicitud internacional WO 86/01533; Cabilly et al. patente estadounidense número 4.816.567; Cabilly et al., solicitud de patente europea 125.023; Better (1988) Science 240:1041-1043; Liu (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu (1987) J. Immunol. 139:3521-3526; Sun (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura (1987) Canc. Res. 47:999-1005; Wood (1985) Nature 314:446-449; Shaw (1988) J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559).
El anticuerpo quimérico puede humanizarse adicionalmente sustituyendo secuencias de la región variable Fv que no están directamente implicadas en la unión a antígeno con secuencias equivalentes de regiones variables Fv humanas. Se proporcionan revisiones generales de anticuerpos quiméricos humanizados por Morrison (1985) Science 229:1202-1207 y por Oi (1986) BioTechniques 4:214. Esos procedimientos incluyen aislar, manipular, y expresar las secuencias de ácido nucleico que codifican todas o parte de las regiones variables Fv de la inmunoglobulina de al menos una de la cadena pesada o ligera. Las fuentes de tal ácido nucleico se conocen bien por los expertos en la técnica y, por ejemplo, pueden obtenerse de 7E3, un hibridoma que produce anticuerpo anti-GPII_{b}III_{a}. El ADN recombinante que codifica el anticuerpo quimérico, o fragmento del mismo, puede clonarse entonces en un vector de expresión apropiado. Pueden producirse anticuerpos humanizados adecuados alternativamente mediante sustitución de CDR patente estadounidense número 5.225.539; Jones (1986) Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239:1534; y Beidler (1988) J. Immunol. 141:4053-4060.
Todas las CDR de un anticuerpo humano particular pueden sustituirse con al menos una parte de una CDR no humana o pueden sustituirse sólo algunas de las CDR con CDR no humanas. Sólo es necesario sustituir el número de CDR requeridas para la unión del anticuerpo humanizado al receptor de Fc. Un anticuerpo puede humanizarse mediante cualquier procedimiento, que pueda sustituir al menos una parte de una CDR de un anticuerpo humano con una CDR derivada de un anticuerpo no humano. Winter describe un procedimiento que puede usarse para preparar los anticuerpos humanizados de la presente invención, véase la solicitud de patente británica GB 2188638A, presentada el 26 de marzo de 1987. La CDR humanas pueden sustituirse con CDR no humanas usando mutagénesis dirigida al sitio de oligonucleótidos tal como se describe, por ejemplo, en el documento WO 94/10332 titulado, "Humanized Antibodies to Fc Receptors for Immunoglobulin G on Human Mononuclear Phagocytes".
Los anticuerpos quiméricos y humanizados en los que se han sustituido, delecionado o añadido aminoácidos específicos, también están dentro del alcance de esta descripción. Por ejemplo, los anticuerpos humanizados pueden tener sustituciones de aminoácidos en la región de entramado, tales como para mejorar la unión al antígeno. En un anticuerpo humanizado que tiene CDR de ratón, los aminoácidos ubicados en la región de entramado humana pueden sustituirse por los aminoácidos ubicados en las posiciones correspondientes en el anticuerpo de ratón. Se sabe que tales substituciones mejoran la unión de anticuerpos humanizados frente al antígeno en algunos casos. Los anticuerpos en los que se han añadido, delecionado o sustituido aminoácidos se denominan en el presente documento anticuerpos modificados o anticuerpos alterados.
Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas tal como se describen en el presente documento pueden incluir adicionalmente una tercera especificidad de unión, además de una especificidad de unión anti-Fc y una especificidad de unión anti-CTLA-4 humano. La tercera especificidad de unión puede ser una parte anti-factor de potenciación (EF), por ejemplo, una molécula que se une a una proteína superficial implicada en la actividad citotóxica y aumenta así la respuesta inmunitaria frente a la célula diana. La "parte anti-factor de potenciación" puede ser un anticuerpo, fragmento funcional de anticuerpo o un ligando que se une a una molécula dada, por ejemplo, un antígeno o un receptor, y de ese modo da como resultado una potenciación del efecto de los determinantes de unión para el antígeno de célula diana o receptor de Fc. La "parte anti-factor de potenciación" puede unirse a antígeno de célula diana o receptor de Fc. Alternativamente, la parte anti-factor de potenciación puede unirse a una entidad que es diferente de la entidad a la que se unen la primera y segunda especificidades de unión. Por ejemplo, la parte anti-factor de potenciación puede unirse a una célula T citotóxica mediante, por ejemplo, CD2, CD3, CD8, CD28, CD4, CD40, ICAM-1 u otras moléculas de célula inmunitaria que están implicadas en una respuesta inmunitaria aumentada frente a la célula diana.
Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas tal como se describen en el presente documento pueden prepararse usando técnicas químicas (véase, por ejemplo, Kranz (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:5807), técnicas de "polidoma" (véase, por ejemplo, la patente estadounidense número 4.474.893), o técnicas de ADN recombinante. Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas también pueden prepararse conjugando las especificidades de unión constituyentes, por ejemplo, las especificidades de unión anti-FcR y anti-CTLA-4 humano, usando procedimientos conocidos en la técnica y tal como se describen en el presente documento. Por ejemplo, cada especificidad de unión en la molécula biespecífica y multiespecífica puede generarse por separado y luego conjugarse entre sí. Cuando las especificidades de unión son proteínas o péptidos, puede usarse una variedad de agentes de acoplamiento o reticulación para la conjugación covalente. Ejemplos agentes de reticulación incluyen proteína A, carbodiimida, N-succinimidil-S-acetil-tioacetato (SATA), N-succinimidil-3-(2-piridilditio)propionato (SPDP), y 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo (sulfo-SMCC) (véase, por ejemplo, Karpovsky (1984) J. Exp. Med. 160:1686; Liu (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648). Otros procedimientos incluyen los descritos por Paulus (Behring Ins. Mitt. (1985) No. 78, 118-132; Brennan (1985) Science 229:81-83), Glennie (1987) J. Immunol.139: 2367-2375). Otros agentes de conjugación son SATA y sulfo-SMCC, ambos disponibles de Pierce Chemical Co. (Rockford, IL).
Cuando las especificidades de unión son anticuerpos (por ejemplo, dos anticuerpos humanizados), pueden conjugarse mediante unión de sulfhidrilo a las regiones bisagra del extremo C-terminal de las dos cadenas pesadas. La región bisagra puede modificarse para contener un número impar de residuos sulfhidrilo, por ejemplo, uno, antes de la conjugación.
Alternativamente, ambas especificidades de unión pueden codificarse por el mismo vector y expresarse y unirse en la misma célula huésped. Este procedimiento es particularmente útil cuando la molécula biespecífica y multiespecífica es una proteína de fusión AcM x AcM, AcM x Fab, Fab x F(ab')_{2} o ligando x Fab. Una molécula biespecífica y multiespecífica de la invención, por ejemplo, una molécula biespecífica puede ser una molécula de cadena sencilla, tal como un anticuerpo biespecífico de cadena sencilla, una molécula biespecífica de cadena sencilla que comprende un anticuerpo de cadena sencilla y un determinante de unión, o una molécula biespecífica de cadena sencilla que comprende dos determinantes de unión. Las moléculas biespecíficas y multiespecíficas también pueden ser moléculas de cadena sencilla o pueden comprender al menos dos moléculas de cadena sencilla. Los procedimientos para preparar moléculas bi- y multiespecíficas se describen, por ejemplo, en la patente estadounidense número 5.260.203; patente estadounidense número 5.455.030; patente estadounidense número 4.881.175; patente estadounidense número 5.132.405; patente estadounidense número 5.091.513; patente estadounidense número 5.476.786; patente estadounidense número 5.013.653; patente estadounidense número 5.258.498; y patente estadounidense número 5.482.858.
La unión de las moléculas biespecíficas y multiespecíficas a sus dianas específicas puede confirmarse mediante ensayo inmunoadsorbente ligado a enzimas (ELISA), un radioinmunoensayo (RIA), o un ensayo de inmunotransferencia tipo Western. Cada uno de estos ensayo detecta generalmente la presencia de complejos proteína-anticuerpo de interés particular empleando un reactivo marcado (por ejemplo, un anticuerpo) específico para el complejo de interés. Por ejemplo, los complejos de FcR-anticuerpo pueden detectarse usando, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo o anticuerpo unido a enzima que reconoce y se une específicamente a los complejos anticuerpo-FcR. Alternativamente, los complejos pueden detectarse usando una variedad de otros inmunoensayos. Por ejemplo, el anticuerpo puede marcarse radiactivamente y usarse en un radioinmunoensayo (RIA) (véase, por ejemplo, Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, marzo de 1986). El isótopo radiactivo puede detectarse por medios tales como el uso de un contador g o un contador de centelleo o mediante autorradiografía.
También se incluyen en la presente descripción anticuerpos modificados. El término "anticuerpo modificado" incluye anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales, anticuerpos quiméricos, y anticuerpos humanizados que se han modificado, por ejemplo, mediante deleción, adición o sustitución de partes del anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo puede modificarse delecionando la región constante y sustituyéndola por una región constante que se pretende que aumente la semivida, por ejemplo, semivida en suero, estabilidad o afinidad del anticuerpo.
Los conjugados de anticuerpo descritos en el presente documento pueden usarse para modificar una respuesta biológica dada o crear una respuesta biológica (por ejemplo, para reclutar células efectoras). El resto de fármaco no debe entenderse como limitado a agentes terapéuticos químicos clásicos. Por ejemplo, el resto de fármaco puede ser una proteína o polipéptido que tiene una actividad biológica deseada. Tales proteínas pueden incluir, por ejemplo, una toxina enzimáticamente activa, o un fragmento activo de la misma, tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, o toxina de difteria; una proteína tal como factor de necrosis tumoral o interferón-alfa; o modificadores de la respuesta biológica tales como, por ejemplo, linfocinas, interleucina-1 ("IL-1"), interleucina-2 ("IL-2"), interleucina-6 ("IL-6"), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos ("FEC-GM"), factor estimulante de colonias de granulocitos ("FEC-G"), u otros factores.
Las técnicas para conjugar tal resto terapéutico con anticuerpos se conocen bien, véase, por ejemplo, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", en Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), págs. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", en Controlled Drug Delivery (2ª Ed.), Robinson et al. (eds.), págs. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", en Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applicationes, Pinchera et al. (eds.), págs. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", en Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), págs. 303-16 (Academic Press 1985), y Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62:119-58 (1982).
Composiciones farmacéuticas
La invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden uno o una combinación de anticuerpos monoclonales humanos y/o anticuerpos de secuencia humana (intactos o fragmentos de unión) formulados junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Algunas composiciones pueden incluir una combinación de (por ejemplo, dos o más) anticuerpos humanos aislados múltiples y/o anticuerpo de secuencia humana o partes de unión a antígeno del mismo de la invención. En algunas composiciones, cada uno de los anticuerpos o partes de unión a antígeno del mismo de la composición es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo de secuencia humana que se une a un epítopo diferenciado, seleccionado previamente de CTLA-4 humano.
A. Dosificaciones eficaces
Los regimenes de dosificación se ajustan para proporcionar una respuesta deseada óptima (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo, puede administrarse un único bolo, pueden administrarse varias dosis divididas en el tiempo o puede reducirse o aumentarse proporcionalmente la dosis según se indica por las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma farmacéutica unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La forma farmacéutica unitaria tal como se usa en el presente documento se refiere a unidades físicamente diferenciadas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos que deben tratarse; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de principio activo para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación de las formas farmacéuticas unitarias de la invención está dictada por, y depende directamente de, (a) las características únicas del principio activo y el efecto terapéutico particular que debe lograrse, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de componer tal principio activo para el tratamiento de la sensibilidad en individuos.
Ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato ascórbico, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y (3) agentes quelatantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, y similares.
Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que pueden usarse en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas farmacéuticas farmacéuticamente aceptables mediante procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la técnica.
Los niveles de dosificación reales de los principios activos en las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden variarse para obtener una cantidad del principio activo que es eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición, y modo de administración particulares, sin ser tóxico para el paciente. El nivel de dosificación seleccionado depende de una variedad de factores farmacocinéticos incluyendo la actividad de las composiciones particulares de la presente invención empleadas, o el éster, sal o amida de la misma, la vía de administración, el momento de la administración, la tasa de excreción del compuesto particular que está empleándose, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con las composiciones particulares empleadas, la edad, sexo, peso, estado, salud general e historia clínica anterior del paciente que está tratándose, y factores similares.
Un médico o veterinario puede iniciar dosis con los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica a niveles inferiores que los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta que se logra el efecto deseado. En general, una dosis diaria adecuada de composiciones de la invención es la cantidad del compuesto que es la dosis inferior eficaz para producir un efecto terapéutico. Tal dosis terapéutica depende generalmente de los factores descritos anteriormente. Se prefiere que la administración sea intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, o subcutánea, o se administre proximal al sitio de la diana. Si se desea, la dosis diaria eficaz de las composiciones terapéuticas puede administrarse como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más sub-dosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente en formas farmacéuticas unitarias. Aunque es posible administrar un compuesto de la presente invención sólo, es preferible administrar el compuesto como una formulación (composición) farmacéutica.
Las dosis eficaces de las composiciones de la presente invención, para el tratamiento de estados y enfermedades relacionados con el sistema inmunitario descritos en el presente documento varían dependiendo de muchos factores diferentes, incluyendo medios de administración, sitio diana, estado fisiológico del paciente; si el paciente es un ser humano o un animal, otras medicaciones administradas, y si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. Es necesario ajustar las dosificaciones de tratamiento para optimizar la seguridad y eficacia.
Para la administración con un anticuerpo, la dosificación oscila de aproximadamente 0,0001 a 100 mg/kg, y más habitualmente de 0,01 a 5 mg/kg, del peso corporal del huésped. Por ejemplo, las dosificaciones pueden ser de 1 mg/kg de peso corporal o 10 mg/kg de peso corporal o en el intervalo de 1-10 mg/kg. Un régimen de tratamiento a modo de ejemplo implica la administración una vez cada dos semanas o una vez al mes o una vez cada de 3 a 6 meses. En algunos procedimientos, dos o más anticuerpos monoclonales con especificidades de unión diferentes se administran simultáneamente, en cuyo caso la dosificación de cada anticuerpo administrado está en los intervalos indicados. El anticuerpo se administra habitualmente en múltiples ocasiones. Los intervalos entre dosificaciones únicas pueden ser semanales, mensuales o anuales. Los intervalos también pueden ser irregulares tal como se indica midiendo los niveles en sangre de anticuerpo frente a CTLA-4 en el paciente. En algunos procedimientos, la dosificación se ajusta para lograr una concentración de anticuerpo en plasma de 1-1000 mg/ml y en algunos procedimientos de 25-300 mg/ml. Alternativamente, puede administrarse el anticuerpo como una formulación de liberación sostenida, en la que se requiere una administración menos frecuente. La dosificación y frecuencia varían dependiendo de la semivida del anticuerpo en el paciente. En general, los anticuerpos humanos muestran la semivida más larga, seguido por anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, y anticuerpos no humanos. La dosificación y frecuencia de administración puede variar dependiendo de si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. En aplicaciones profilácticas, se administra una dosificación relativamente baja a intervalos relativamente poco frecuentes durante un largo periodo de tiempo. Algunos pacientes continúan recibiendo tratamiento durante el resto de su vida. En aplicaciones terapéuticas, a veces se requiere una dosificación relativamente elevada a intervalos relativamente cortos hasta que se reduce o termina la progresión de la enfermedad, y preferiblemente hasta que el paciente muestra una mejora parcial o completa de los síntomas de la enfermedad. A continuación, puede administrarse un régimen profiláctico al paciente.
Las dosis de ácidos nucleicos que codifican inmunógenos oscilan de aproximadamente 10 ng a 1 g, de 100 ng a 100 mg, de 1 \mug a 10 mg, o de 30-300 \mug de ADN por paciente. Las dosis de vectores virales infecciosos varían de 10-100, o más, viriones por dosis.
Algunos anticuerpos de secuencia humana y anticuerpos monoclonales humanos de la invención pueden formularse para garantizar una distribución apropiada in vivo. Por ejemplo, la barrera hematoencefálica (BBB) excluye muchos compuestos sumamente hidrófilos. Para garantizar que los compuestos terapéuticos de la invención cruzan la BBB (si se desea), pueden formularse, por ejemplo, en liposomas. Para procedimientos de fabricación de liposomas, véase, por ejemplo, las patentes estadounidenses números 4.522.811; 5.374.548; y 5.399.331. Los liposomas pueden comprender uno o más restos que se transportan selectivamente dentro de células u órganos específicos, potenciando así la administración de fármacos con transporte dirigido (véase, por ejemplo, V. V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685). Restos de transporte dirigido a modo de ejemplo incluyen folato o biotina (véase, por ejemplo, la patente estadounidense número 5.416.016 concedida a Low et al.); manósidos (Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038); anticuerpos (P. G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180); receptor de proteína A tensioactivo (Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134), las formulaciones de las invenciones pueden comprender diferentes especies de las mismas, así como componentes de las moléculas inventadas; p120 (Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090); véase también K. Keinanen; M. L.
Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J. J. Killion; I. J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273. En algunos procedimientos, los compuestos terapéuticos de la invención se formulan en liposomas; en una realización más preferida, los liposomas incluyen un resto de transporte dirigido. En algunos procedimientos, los compuestos terapéuticos en los liposomas se administran mediante inyección en bolo a un sitio proximal al tumor o infección. La composición debe ser fluida hasta el grado en que exista jeringabilidad fácil. Debe ser estable en condiciones de fabricación y almacenamiento y debe conservarse contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos.
Para aplicaciones terapéuticas, las composiciones farmacéuticas se administran a un paciente que padece enfermedad establecida en una cantidad suficiente para detener o inhibir el desarrollo adicional o invertir o eliminar, la enfermedad, sus síntomas o marcadores bioquímicos. Para aplicaciones profilácticas, las composiciones farmacéuticas se administran a un paciente susceptible o con riesgo de una enfermedad en una cantidad suficiente para retrasar, inhibir o prevenir el desarrollo de la enfermedad, sus síntomas y marcadores bioquímicos. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como una "dosis terapéutica o profilácticamente eficaz". La dosificación depende de la enfermedad que está tratándose, el tamaño del sujeto, la gravedad de los síntomas del sujeto, y la composición particular o vía de administración seleccionada. Específicamente, en el tratamiento de tumores, una "dosificación terapéuticamente eficaz" puede inhibir el crecimiento tumoral en al menos aproximadamente el 20%, o al menos aproximadamente el 40%, o al menos aproximadamente el 60%, o al menos aproximadamente el 80% con respecto a sujetos sin tratar. La capacidad de un compuesto para inhibir el cáncer puede evaluarse en un sistema de modelo animal predictivo de la eficacia en tumores humanos. Alternativamente, esta propiedad de una composición puede evaluarse examinando la capacidad del compuesto para inhibir mediante ensayos convencionales in vitro. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto terapéutico puede disminuir el tamaño del tumor, o mejorar de otro modo los síntomas en un sujeto.
La composición debe ser estéril y fluida hasta el grado en que puede administrarse la composición mediante jeringuilla. Además de agua, el vehículo puede ser una solución salina tamponada isotónica, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante uso de recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de tensioactivos. En muchos casos, es preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol o sorbitol, y cloruro de sodio en la composición. La absorción a largo plazo de composiciones inyectables puede producirse incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio o gelatina.
Cuando el principio activo está adecuadamente protegido, tal como se describió anteriormente, el compuesto puede administrarse por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o un vehículo comestible asimilable.
B. Vías de administración
Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden administrarse en terapia de combinación, es decir, combinadas con otros agentes. Por ejemplo, en el tratamiento de cáncer, la terapia de combinación puede incluir una composición de la presente invención con al menos un agente antitumoral u otro tratamiento convencional, tal como tratamiento por radiación.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y agentes retardantes de la absorción, y similares que son fisiológicamente compatibles. El vehículo puede ser adecuado para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, parenteral, espinal o epidérmica (por ejemplo, mediante inyección o infusión). Dependiendo de la vía de administración, el principio activo, es decir, anticuerpo, molécula biespecífica y multiespecífica, puede recubrirse con un material para proteger el compuesto de la acción de ácidos y otras condiciones naturales que pueden inactivar el compuesto.
Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal que conserva la actividad biológica deseada del compuesto original y no confiere efectos toxicológicos no deseados (véase, por ejemplo, Berge, S. M., et al., (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19). Ejemplos de tales sales incluyen sales de adición de ácido y sales de adición de base. Las sales de adición de ácido incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos no tóxicos, tales como clorhídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromhídrico, yodhídrico, fosforoso y similares, así como de ácidos orgánicos no tóxicos tales como ácidos mono y dicarboxílcios alifáticos, ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos y similares. Las sales de adición de base incluyen las derivadas de metales alcalinotérreos, tales como sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, así como de aminas orgánicas no tóxicas, tales como N,N'-dibenciletilendiamina, N-metilglucamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, procaína y similares.
Una composición de la presente invención puede administrarse mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica. La vía y/o modo de administración varían dependiendo de los resultados deseados. Los principios activos pueden prepararse con vehículos que protegen el compuesto frente a la liberación rápida, tal como formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, parches transdérmicos, y sistemas de administración microencapsulados. Pueden usarse polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, poli(ácido glicólico), colágeno, poliortoésteres, y poli(ácido láctico). Muchos procedimientos para la preparación de tales formulaciones se describen, por ejemplo, en Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978. Las composiciones farmacéuticas se fabrican preferiblemente en las condiciones de BPF.
Para administrar un compuesto de la invención por ciertas vías de administración, puede ser necesario recubrir el compuesto con, o coadministrar el compuesto con, un material para evitar su inactivación. Por ejemplo, el compuesto puede administrarse a un sujeto en un vehículo apropiado, por ejemplo, liposomas, o un diluyente. Los diluyentes farmacéuticamente aceptables incluyen solución salina y disoluciones de tampón acuoso. Los liposomas incluyen emulsiones de CGF de agua en aceite en agua tales como liposomas convencionales (Strejan et al. (1984) J.
Neuroimmunol. 7:27).
Vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen dispersiones o disoluciones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de dispersiones o disoluciones inyectables estériles. El uso de tales medios y agentes para principios farmacéuticamente activos se conoce en la técnica. A menos que algún agente o medio convencional sea incompatible con el principio activo, se contempla el uso de los mismos en las composiciones farmacéuticas de la invención. También pueden incorporarse principios activos complementarios en las composiciones.
Normalmente las composiciones terapéuticas deben ser estériles, sustancialmente isotónicas, y estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse como una disolución, microemulsión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión, y mediante el uso de tensioactivos. En muchos casos, es preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede provocarse incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.
Pueden prepararse disoluciones inyectables estériles incorporando el principio activo en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con uno o una combinación de componentes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de microfiltración de esterilización. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando el principio activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros componentes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los procedimientos de preparación preferidos son secado a vacío y secado por congelación (liofilización) que da un polvo del principio activo mas cualquier compuesto adicional deseado a partir de una disolución previamente filtrada a esterilidad de los mismos. Las composiciones terapéuticas también pueden administrarse con dispositivos médicos conocidos en la técnica. Por ejemplo, una composición terapéutica de la invención puede administrarse con un dispositivo de inyección hipodérmica sin aguja, tal como los dispositivos descritos en, por ejemplo, las patentes estadounidenses números 5.399.163, 5.383.851, 5.312.335, 5.064.413, 4.941.880, 4.790.824, ó 4.596.556. Ejemplos de implantes y módulos útiles en la presente invención incluyen: patente estadounidense número 4.487.603, que describe una bomba de micro-infusión implantable para administrar medicación a una velocidad controlada; patente estadounidense número 4.486.194, que describe un dispositivo terapéutico para administrar medicamentos a través de la piel; patente estadounidense número 4.447.233, que describe una bomba de infusión de medicación para administrar medicación con una velocidad de infusión precisa; patente estadounidense número 4.447.224, que describe un aparato de infusión implantable de flujo variable para la administración continua de fármaco; patente estadounidense número 4.439.196, que describe un sistema de administración de fármaco osmótico que tiene compartimientos de múltiples cámaras; y patente estadounidense número 4.475.196, que describe un sistema de administración de fármacos osmótico. Se conocen muchos otros implantes, sistemas de administración y
módulos.
C. Formulación
Para las composiciones terapéuticas, las formulaciones de la presente invención incluyen las adecuadas para la administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en una forma farmacéutica unitaria y pueden prepararse mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica de la farmacia. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material vehículo para producir una forma farmacéutica única varia dependiendo del sujeto que está tratándose, y el modo de administración particular. La cantidad de principio activo que puede combinarse con un material vehículo para producir una forma farmacéutica única es generalmente la cantidad de la composición que produce un efecto terapéutico. Generalmente, de un cien por ciento, esta cantidad oscila de aproximadamente 0,01 por ciento a aproximadamente noventa y nueve por ciento de principio activo, de aproximadamente 0,1 por ciento a aproximadamente 70 por ciento, o de aproximadamente 1 por ciento a aproximadamente 30 por ciento.
Las formulaciones de la presente invención que son adecuadas para la administración vaginal también incluyen formulaciones de óvulo vaginal, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o aerosol que contienen tales vehículos como se conocen en la técnica que son apropiados. Las formas farmacéuticas para la administración tópica o transdérmica de composiciones de esta invención incluyen polvos, aerosoles, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, disoluciones, parches e inhaladores. El principio activo puede mezclarse en condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y con cualquier conservante, tampón, o propelente que puedan requerirse.
Las frases "administración parenteral" y "administrado por vía parenteral" se refieren a modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, normalmente mediante inyección, e incluyen, sin limitación, infusión e inyección intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural e intraesternal.
Ejemplos de vehículos acuosos y no acuosos adecuados que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos.
Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La prevención de la presencia de microorganismos puede garantizarse tanto mediante procedimientos de esterilización, mencionados anteriormente, como mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenolsórbico, y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio, y similares en las composiciones. Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede provocarse mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
Cuando los compuestos de la presente invención se administran como productos farmacéuticos, a seres humanos y animales, pueden administrarse solos o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, de 0,01 a 99,5% (o de 0,1 a 90%) de principio activo en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
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Las composiciones farmacéuticas se formulan generalmente como estériles, sustancialmente isotónicas, y en total cumplimiento con todos los reglamentos de las buenas prácticas de fabricación (BPF) de la U. S. Food and Drug Administration.
Procedimientos y usos de la invención A. Procedimientos
Las composiciones (por ejemplo, anticuerpos de secuencia humana y anticuerpos monoclonales humanos frente a CTLA-4 humano y derivados/conjugados del mismo) descritas en el presente documento utilidades terapéuticas y de diagnóstico in vitro e in vivo. Por ejemplo, estas moléculas pueden administrarse a células en cultivo, por ejemplo in vitro o ex vivo, o en un sujeto, por ejemplo, in vivo, para tratar, evitar o diagnosticar una variedad de trastornos. El término "sujeto" incluye seres humanos y animales no humanos. Los animales no-humanos incluyen vertebrados, por ejemplo, mamíferos y no mamíferos, tales como primates no humanos, ovejas, perros, vacas, pollos, anfibios, y reptiles. Los procedimientos son particularmente adecuados para tratar a pacientes humanos que tienen un trastorno que puede tratarse aumentando o reduciendo la respuesta inmunológica mediada por células T.
Cuando se administran anticuerpos frente a CTLA-4 junto con otro agente, pueden administrarse los dos bien en cualquier orden o bien simultáneamente. Los procedimientos pueden usarse para tratar cualquier clase de cáncer incluyendo melanoma, cáncer de colon, cáncer de próstata, y cáncer renal.
Por ejemplo, las microesferas de látex recubiertas con anti-CTLA-4 (para aumentar la valencia del anticuerpo) pueden inhibir la proliferación y activación de células T. Agentes que tienen el mismo sitio de combinación de anticuerpo pueden actuar como antagonistas de CTLA-4 cuando se presentan como un Fab o una IgG soluble, y un agonista de CTLA-4 cuando está sumamente reticulado. Por tanto, formas multivalentes de anticuerpos anti-CTLA-4 son agentes terapéuticos útiles para modulación por disminución de respuestas inmunitarias.
Además de unirse a microesferas de látex u otras partículas insolubles, los anticuerpos pueden reticularse entre ellos o modificarse por ingeniería genética para formar multímeros. La reticulación puede ser mediante unión química directa, o mediante unión indirecta tal como un complejo anticuerpo-biotina-avidina. La reticulación puede ser covalente, en la que se emplean grupos de unión química o no covalente, en la que se emplean interacciones proteína-proteína u otras proteína-ligando. Los enfoques de ingeniería genética para la unión incluyen, por ejemplo, la re-expresión de las regiones variables de anticuerpos IgG de alta afinidad en vectores de expresión de IgM o cualquier resto de proteína (por ejemplo, polilisina, y similares). Convertir un anticuerpo IgG en un anticuerpo IgM puede crear un complejo decavalente con una muy alta avidez. También pueden usarse los vectores de expresión de IgA_{2} para producir complejos de anticuerpo multivalentes. IgA_{2} puede formar polímeros junto con la cadena J y el componente secretor. La IgA_{2} puede tener la ventaja añadida de estar reticulada adicionalmente mediante el receptor CD89 de IgA, que se expresa en neutrófilos, macrófagos y monocitos.
También puede obtenerse agonismo usando algunas preparaciones de anticuerpos policlonales frente a CTLA-4 que comprenden anticuerpos frente a al menos dos epítopos no solapantes de CTLA-4. Un anticuerpo en tal preparación que contiene dos sitios de unión puede unirse a dos moléculas de CTLA-4 para formar un aglomerado pequeño. Un segundo anticuerpo que posee sitios de unión diferentes puede entonces unir (agregar) estos pequeños aglomerados para formar aglomerados grandes, formando de esta manera un complejo de CTLA-4 (sobre la superficie celular) que puede transducir una señal a la célula T para inhibir, reducir o evitar la activación de la célula T que lleva (que expresa) CTLA-4. Por tanto, algunas preparaciones de anticuerpos policlonales muestran agonismo similar al de las preparaciones polivalentes descritas anteriormente.
Así pues, preparaciones polivalentes o policlonales de anticuerpos anti CTLA-4 son útiles para agonizar el receptor de CTLA-4, suprimiendo de esta manera las respuestas inmunitarias mediadas por células T que marcan el receptor de CTLA-4. Algunos ejemplos de enfermedades que pueden tratarse usando tales preparaciones polivalentes o policlonales de anticuerpos incluyen enfermedades autoinmunes, rechazo de transplante e inflamación.
B. Usos 1. Activación de respuestas inmunitarias a. Cáncer
Algunos procedimientos terapéuticos para tratar pacientes con cáncer. El bloqueo de CTLA-4 mediante anticuerpos puede potenciar su respuesta inmunitaria a células cancerosas en el paciente. Opcionalmente, pueden combinarse anticuerpos frente a CTLA-4 con un agente inmunogénico, tal como células cancerosas, antígenos tumorales purificados (incluyendo moléculas de proteínas recombinantes, péptidos y de hidratos de carbono), células, y células transfectadas con genes que codifican para citocinas inmunológicas inmunitarias y antígenos de superficie celular tales como B7 (véase, por ejemplo, Hurwitz, A. et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 95, 10067-10071).
En sistemas experimentales murinos, la implantación de algunos tumores seguida por la administración de anticuerpos anti-CTLA-4 puede dar como resultado el rechazo de tumores. En algunos casos se produce el rechazo tumoral de tumores establecidos; en otros casos el crecimiento del tumor se ralentiza mediante el uso de anticuerpos anti-CTLA-4. En general, el bloqueo de CTLA-4 es eficaz contra tumores inmunogénicos. Operacionalmente estos se definen como los tumores para los cuales la vacunación que usa el propio tumor puede conducir a inmunidad frente a exposición tumoral. En seres humanos, algunos tumores han demostrado ser inmunogénicos tales como melanomas. Se anticipa que aumentando el umbral de activación de células T mediante el bloqueo de CTLA-4, se puede esperar la activación de respuestas tumorales en el huésped.
El bloqueo de CTLA-4 es más eficaz cuando se combina con un protocolo de vacunación. Se han creado muchas estrategias experimentales para la vacunación contra tumores (véase Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; véase también Restifo, N. y Sznol, M., Cancer Vaccines, Capítulo 61, págs. 3023-3043 en DeVita, V. et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Quinta Edición). En una de estas estrategias, se prepara una vacuna usando células tumorales autólogas o alogénicas. Estas vacunas celulares han demostrado ser más eficaces cuando las células tumorales se transducen para expresar GM-CSF. Se ha demostrado que el GM-CSF es un activador potente de presentación de antígeno para vacunación tumoral (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90 (80: 3539-43).
El bloqueo anti-CTLA-4 junto con el uso de vacunas de células tumorales modificadas por GMCSF ha demostrado ser eficaz en varios modelos experimentales de tumor tales como carcinoma de mama (Hurwitz et al. (1998) citado anteriormente), cáncer de próstata primario (Hurwitz A. et al. (2000) Cancer Research 60 (9): 2444-8) y melanoma (van Elsas, A et al. (1999)J. Exp. Med. 190: 355-66). En estos ejemplos, los tumores no inmunogénicos, tales como el melanoma B 16, han resultado susceptibles a la destrucción mediante el sistema inmunitario. La vacuna de célula tumoral también puede modificarse para expresar otros activadores inmunitarios tales como IL2, y moléculas coestimuladoras, entre otros.
El estudio de expresión génica y patrones de expresión génica a gran escala en varios tumores ha conducido a la definición de los denominados antígenos específicos de tumor (Rosenberg, SA (1999) Immunity 10: 281-7). En muchos casos, estos antígenos específicos de tumor son antígenos de diferenciación expresados en los tumores y en la célula a partir de la que creció el tumor, por ejemplo antígenos gp 100 de melanocito, antígenos MAGE, Trp-2. De manera más importante, muchos de estos antígenos pueden resultar ser las dianas de células T específicas de tumor en el huésped. Puede usarse el bloqueo de CTLA-4 junto con una colección de proteínas recombinantes y/o péptidos expresados en un tumor con el fin de generar una respuesta inmunitaria para estas proteínas. Estas proteínas normalmente son vistas por el sistema inmunitario como antígenos propios y por tanto son tolerantes a ellas. El antígeno tumoral también puede incluir la proteína telomerasa, que se requiere para la síntesis de telómeros de cromosomas y que se expresa en más del 85% de cánceres humanos y sólo en un número limitado de tejidos somáticos (Kim, N et al. (1994) Science 266, 2011-2013). (Pueden protegerse estos tejidos somáticos del ataque inmunitario mediante diversos medios). El antígeno tumoral también puede ser "neo-antígenos" expresados en células cancerosas debido a mutaciones somáticas que alteran la secuencia de proteínas o crean proteínas de fusión entre dos secuencias no relacionadas. (es decir, bcr-abl en el cromosoma Philadelphia), o el idiotipo a partir de tumores de célula B. Otras vacunas tumorales pueden incluir las proteínas de virus implicados en cánceres humanos tales como el virus del papiloma humano (VPH), virus de la hepatitis (VHB y VHC) y virus herpes asociado al sarcoma de Kaposi (VHSK). Otra forma de antígeno específico de tumor que puede usarse junto con el bloqueo de CTLA-4 son proteínas de choque térmico (HSP) purificadas aisladas a partir del propio tejido tumoral. Estas proteínas de choque térmico contienen fragmentos de proteínas de las células tumorales y estas HSP son sumamente eficaces en la administración a células presentadoras de antígenos para provocar inmunidad tumoral (Suot,R & Srivastava, P (1995) Science 269: 1585-1588; Tamura, Y. et al. (1997) Science 278: 117-120).
Las células dendríticas (DC) son células presentadoras de antígenos potentes que pueden usarse para preparar respuestas específicas de antígeno. Las DC pueden producirse ex vivo y cargarse con diversos antígenos de proteína y de péptido así como extractos de células tumorales (Nestle, F. et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). Las DC también pueden transducirse por medios genéticos para expresar también estos antígenos tumorales. Las DC también se han fusionado directamente con células tumorales con fines de inmunización (Kugler, A. et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). Como procedimiento de vacunación, puede combinarse eficazmente la inmunización de DC con el bloqueo de CTLA-4 para activar respuestas antitumorales más potentes.
El bloqueo de CTLA-4 también puede combinarse con tratamientos de cáncer convencionales. El bloqueo de CTLA-4 puede combinarse eficazmente con regímenes quimioterapéuticos. En estos ejemplos, es posible reducir la dosis de reactivo quimioterapéutico administrado (Mokyr, M. et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Los fundamentos científicos detrás del uso combinado de bloqueo de CTLA-4 y quimioterapia es la muerte celular, que es una consecuencia de la acción citotóxica de la mayoría de los compuestos quimioterapéuticos, lo que debería dar como resultado niveles aumentados de antígenos tumorales en la ruta de presentación antigénica. Otras terapias de combinación que pueden dar como resultado la sinergia con el bloqueo de CTLA-4 a través de la muerte celular son radiación, cirugía y privación hormonal (Kwon, E. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 96 (26): 15074-9). Cada uno de estos protocolos crea una fuente de antígeno tumoral en el huésped. Los inhibidores de angiogénesis también pueden combinarse con el bloqueo de CTLA-4. La inhibición de la angiogénesis conduce a la muerte de la célula tumoral que puede alimentar el antígeno tumoral en la ruta de presentación de antígeno huésped.
También pueden usarse anticuerpos de bloqueo de CTLA-4 en combinación con anticuerpos biespecíficos que dirigen células efectoras que expresan receptores alfa Fc o gamma Fc frente a células tumorales (véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses números 5.922.845 y 5.837.243). Pueden usarse anticuerpos biespecíficos para seleccionar como diana dos antígenos separados. Por ejemplo, se han usado anticuerpos biespecíficos anti receptor Fc/anti antígeno tumoral (es decir, Her-2/neu) para seleccionar como diana macrófagos para sitios de tumor. Esta selección como diana puede activar más eficazmente las respuestas tumorales específicas. Se aumentará el brazo de células T de estas respuestas mediante el uso del bloqueo de CTLA-4. Alternativamente, puede administrarse el antígeno directamente a las DC mediante el uso de anticuerpos biespecíficos que se unen al antígeno tumoral y un marcador de superficie celular específico de células dendríticas.
Los tumores eluden la vigilancia inmunitaria del huésped mediante una gran variedad de mecanismos. Muchos de estos mecanismos pueden superarse mediante la inactivación de proteínas que se expresan por los tumores y que son inmunosupresoras. Estas incluyen entre otras Tgf\beta (Kehrl, J. et al. (1986) J. Exp. Med. 163:1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200), y ligando de Fas (Hahne, M. et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Pueden usarse anticuerpos frente a cada una de estas entidades en combinación con anti-CTLA-4 para contrarrestar los efectos del agente inmunosupresor y favorecer las respuestas inmunitarias tumorales del huésped.
Otros anticuerpos que pueden usarse para activar la respuesta inmunológica del huésped pueden usarse en combinación con anti-CTLA-4. Estos incluyen moléculas sobre la superficie de células dendríticas que activan la función de las DC y la presentación de antígenos. Los anticuerpos anti-CD40 pueden sustituir eficazmente la actividad de las células T auxiliares (Ridge, J. et al. (1998) Nature 393: 474-478) y pueden usarse en junto con anticuerpos CTLA-4 (Ito, N. et al. (2000) Immunobiology 201 (5)527-40). Los anticuerpos de activación frente a moléculas coestimuladoras de células T tales como OX-40 (Weinberg, A. et al. (2000) J Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997), y ICOS (Hutloff, A. et al. (1999) Nature 397: 262-266) también pueden proporcionar niveles aumentados de activación de las células T.
Actualmente se está usando el transplante de médula ósea para tratar una variedad de tumores de origen hematopoyético. Aunque la enfermedad injerto-contra-huésped es una consecuencia de este tratamiento, puede obtenerse un beneficio terapéutico a partir de respuestas de injerto frente a tumor. Puede usarse el bloqueo de CTLA-4 para aumentar la eficacia de las células T específicas de tumor injertadas donadoras (Blazar, B. et al. (1999) J Immunol 162: 6368-6377).
También existen varios protocolos de tratamiento experimental que implican la activación ex vivo y expansión de células T específicas de antígenos y la transferencia adoptiva de estas células en receptores con el fin de crear células T específicas de antígeno contra tumores (Greenberg, R. & Riddell, S. (1999) 285: 546-51). Estos procedimientos también pueden usarse para activar respuestas de células T frente a agentes infecciosos tales como CMV (véase a continuación). Puede esperarse que la activación ex vivo en presencia de anticuerpos anti-CTLA-4 aumente la frecuencia y actividad de las células T transferidas de manera adoptiva.
b. Enfermedades infecciosas
Se usan otros procedimientos para tratar pacientes que han estado expuestos a toxinas o patógenos particulares. De manera similar a su aplicación en tumores tal como se trató anteriormente, puede usarse el bloqueo de CTLA-4 mediado por anticuerpos por separado o como un adyuvante, en combinación con vacunas, para estimular la respuesta inmunitaria frente a patógenos, toxinas y antígenos propios. El bloqueo de CTLA-4 ha demostrado ser eficaz en la fase aguda de infecciones por Nippostrongylus brasiliensis (McCoy, K. et al. (1997)186(2); 183-187) y Leishmania donovani (Murphy, M. et al. (1998) J. Immunol. 161:4153-4160). Ejemplos de patógenos para los cuales este enfoque terapéutico puede ser particularmente útil, incluyen patógenos para los cuales actualmente no existe una vacuna eficaz, o patógenos para los cuales las vacunas convencionales no llegan a ser completamente eficaces. Estos incluyen, pero no se limitan a, VIH, hepatitis (A, B, & C), gripe, herpes, Giardia, malaria, Leishmania, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. El bloqueo de CTLA-4 es particularmente útil contra infecciones establecidas por agentes tales como VIH que presentan antígenos alterados en el curso de las infecciones. Estos epítopos novedosos se reconocen como extraños en el momento de administración de anti-CTLA-4 humano, provocando así una respuesta de células T fuerte que no está amortiguada por señales negativas a través de CTLA-4.
Algunos ejemplos de virus patógenos que causan infecciones tratables mediante procedimientos de la invención incluyen hepatitis (A, B, o C), virus herpes (por ejemplo, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, y CMV, virus de Epstein Barr), adenovirus, virus influenza, flavivirus, echovirus, rinovirus, virus coxsackie, coronavirus, virus sincitial respiratorio, virus de las paperas, rotavirus, virus del sarampión, virus de la rubeola, parvovirus, virus vaccinia, virus VLTH, virus del dengue, papilomavirus, virus molluscum, poliovirus, virus de la rabia, virus JC y virus de la encefalitis arboviral.
Algunos ejemplos de bacterias patógenas que causan infecciones tratables mediante procedimientos de la invención incluyen Chlamidia, bacterias Rickettsia, micobacterias, estafilococos, estreptococos, pneumococos, meningococos y conococos, Klebsiella, Proteus, Serratia, Pseudomonas, Legionella, difteria, salmonela, bacilos, Cholera, tetanos, botulismo, carbunco, peste, leptospirosis, y bacteria de la enfermedad de Lymes.
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Algunos ejemplos de hongos patógenos que causan infecciones tratables mediante procedimientos de la invención incluyen Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Los géneros del grupo Mucorales (Mucor, Absidia, Rhizophus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum.
Algunos ejemplos de parásitos patógenos que causan infecciones tratables mediante procedimientos de la invención incluyen Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleria fowleri, Acanthamoeba sp., Giardia lamblia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondi, Nippostrongylus brasiliensis.
En todos los procedimientos anteriores, puede combinarse un bloqueo de CTLA-4 con otras formas de inmunoterapia tal como tratamiento con citocinas (por ejemplo interferones, GM-CSF, GCSF, IL-2), o terapia con anticuerpos biespecíficos, que proporcionan un aumento de la presentación de antígenos tumorales (véase, por ejemplo, Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123).
c. Promoción de reacciones "autoinmunológicas" beneficiosas para el tratamiento de enfermedad e intervención terapéutica
Se ha documentado la capacidad de anticuerpos anti-CTLA-4 para provocar y amplificar respuestas autoinmunológicas en diversos sistemas experimentales (EAE - encefalomielitis autoinmune experimental, un modelo murino de EM (Perrin, P. et al. (1996) J Immunol 157 (4): 1333-1336); diabetes (Luhder, F. et al., (1998) citado anteriormente). De hecho, la inducción de respuestas antitumorales usando células tumorales y vacunas peptídicas revela que muchas respuestas antitumorales implican reactividades anti-propias (despigmentación observada en anti-CTLA-4 + melanoma B16 modificado con GM-CSF en van Elsas et al. citado anteriormente; despigmentación en ratones vacunados con Trp-2 (Overwijk, W. et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96: 2982-2987); prostatitis autoninmune provocada por vacunas de células tumorales TRAMP (Hurwitz, A. (2000) citado anteriormente), vacunación con antígenos de péptidos de melanoma y vitíligo observado en ensayos clínicos humanos (Rosenberg, SA y White, DE (1996) J Immunother Emphasis Tumor Immunol 19(1): 81-4).
Por tanto, es posible considerar el uso del bloqueo anti-CTLA-4 junto con diversas proteínas propias con el fin de diseñar protocolos de vacunación para generar eficazmente respuestas inmunológicas contra estas proteínas propias para el tratamiento de enfermedad. Por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer implica acumulación inapropiada de péptido A\beta en depósitos amiloides en el cerebro; las respuestas de anticuerpos frente a amiloide pueden limpiar estos depósitos amiloides (Schenk et al., (1999) Nature 400: 173-177).
También pueden usarse otras proteínas propias como dianas tales como IgE para el tratamiento de alergia y asma, y TNF para artritis reumatoide. Finalmente, pueden inducirse respuestas de anticuerpos frente a diversas hormonas mediante el uso de anticuerpos anti-CTLA-4. Pueden usarse respuestas de anticuerpos neutralizantes como anticonceptivos. También pueden considerarse como posibles dianas de vacunación respuestas de anticuerpos neutralizantes frente a hormonas y otros factores solubles que se necesitan para el crecimiento de tumores particulares.
Pueden usarse procedimientos análogos a los descritos anteriormente para el uso de anticuerpo anti-CTLA-4 para la inducción de respuestas autoinmunitarias terapéuticas para tratar pacientes que tienen una acumulación inapropiada de otros antígenos propios, tales como depósitos amiloides, incluyendo el A\beta de la enfermedad de Alzheimer, citocinas tales como TNF\alpha, e IgE.
2. Inactivación de respuestas inmunitarias
Los trastornos causados por respuestas inmunitarias se denominan enfermedades por hipersensibilidad. Los trastornos causados por el fallo de la tolerancia propia y las posteriores respuestas inmunitarias contra antígenos propios o autólogos se denominan enfermedades autoinmunes. Las enfermedades por hipersensibilidad también pueden ser el resultado de respuestas no controladas o excesivas contra antígenos extraños, tales como microbios.
Aunque se ha demostrado que los anticuerpos solubles frente a CTLA-4 humano promueven la expansión y activación de las células T (es decir, cuando se inhibe la función de CTLA-4 (por ejemplo, unión a ligando); en este escenario los anticuerpos son antagonistas de la función de CTLA-4), el aumento de la valencia de estos mismos anticuerpos produce el efecto contrario (cuando ahora, al contrario, los anticuerpos están actuando como agonistas CTLA-4 para suprimir la respuesta inmunitaria) (véase, por ejemplo, Krummel y Allison, 1996, J. Exp. Med. 183, 2533-2540). Con el fin de inactivar las respuestas de las células T específicas de antígeno, tales como son las dianas de células T autorreactivas patógenas, debe administrarse el antígeno diana que es específico para estas células T, (es decir, antígeno y/o complejos MHC/antígeno) con la forma polivalente de anticuerpo anti-CTLA-4.
a. Inflamación
La inflamación representa la consecuencia de la dilatación capilar con acumulación de fluido y migración de leucocitos fagocitos, tales como granulocitos y monocitos. La inflamación es importante para defender un huésped contra una variedad de infecciones pero también puede tener consecuencias indeseables en trastornos inflamatorios, tales como choque anafiláctico, artritis, gota e isquemia-reperfusión de isquemia. Las células T activadas tienen un papel modulador importante en la inflamación, liberando interferón \gamma y factor estimulante de colonias que a su vez activan leucocitos fagocitos. Los leucocitos fagocitos están inducidos para expresar varias moléculas de superficie de células específicas denominadas receptores buscadores, que sirven para unir los fagocitos a células endoteliales diana. Las respuestas inflamatorias pueden reducirse o eliminarse mediante tratamiento con los agentes terapéuticos de la presente invención. Por ejemplo, preparaciones polivalentes de anticuerpos frente a CTLA-4 bloquean la activación de células T activadas, evitando así la liberación de moléculas necesarias para la activación de tipos celulares fagocíticos por parte de estas células.
b. Enfermedades autoinmunes
Una situación adicional en la que es deseable la supresión inmunológica es en el tratamiento de enfermedades autoinmunes tales como diabetes melitus dependiente de insulina, esclerosis múltiple, síndrome del hombre rígido, artritis reumatoide, miastenia grave y lupus eritematoso. En estas enfermedades, el cuerpo desarrolla una respuesta inmunitaria celular y/o humoral contra uno de sus propios antígenos que conduce a la destrucción de ese antígeno, y a consecuencias fatales y/o potencialmente agobiantes. Se cree que las células T activadas desempeñan un papel principal en enfermedades autoinmunitarias tales como la diabetes melitus. Las enfermedades autoinmunes pueden tratarse administrando uno de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento que inhibe la activación de las células T. Opcionalmente, puede administrarse el autoantígeno, o un fragmento del mismo, contra el que se dirige la enfermedad autoinmune justo antes, a la vez que, o justo después del agente inmunosupresor. De esta manera, puede inducirse la tolerancia para el autoantígeno al amparo del tratamiento supresor, obviando de esta manera la necesidad de inmunosupresión continuada. Véase, por ejemplo, Cobbold et al., WO 90/15152 (1990).
c. Enfermedad injerto-contra-huésped
Un uso relacionado para los agentes terapéuticos descritos en el presente documento es la modulación de la respuesta inmunitaria implicada en la enfermedad "injerto-contra-huésped" (EICH). La EICH es una enfermedad potencialmente mortal que se produce cuando las células inmunológicamente competentes se transfieren a un receptor alogénico. En esta situación, las células inmunocompetentes del donante pueden atacar tejidos en el receptor. Los tejidos de la piel, del epitelio intestinal y del hígado son dianas frecuentes y pueden destruirse durante el transcurso de la EICH. La enfermedad presenta un problema especialmente grave cuando se está transplantando un tejido inmunitario, tal como un transplante de médula ósea; pero también se ha notificado EICH menos grave en otros casos, incluyendo transplantes de corazón y de hígado. Los agentes terapéuticos descritos en el presente documento pueden usarse para inhibir la activación de leucocitos donadores, inhibiendo así su capacidad para lisar células diana en el huésped.
d. Rechazo de transplante
Durante los últimos años se ha producido una mejora considerable en la eficacia de técnicas quirúrgicas para el transplante de tejidos y órganos tales como piel, riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas y médula ósea. Quizá el principal problema pendiente sea la falta de agentes satisfactorios para inducir tolerancia inmunológica en el recipiente para el aloinjerto u órgano transplantado. Cuando se transplantan órganos o células alógenas en un huésped (es decir, el donante y el receptor son individuos de la misma especie), es probable que el sistema inmunitario huésped fije una respuesta inmunitaria frente a antígenos extraños en el transplante (enfermedad huésped-contra-injerto) conduciendo a la destrucción del tejido transplantado. Las células CD8^{+}, las células CD4^{+} y los monocitos están todos implicados en el rechazo de tejidos transplantados. Los agentes terapéuticos descritos en el presente documento son útiles para inhibir respuestas inmunitarias inducidas por aloantígeno mediadas por células T en el receptor evitando así que estas células participen en la destrucción del tejido u órgano transplantado.
B. Procedimientos para detectar/medir la presencia de CTLA-4 en una muestra
También se describen en el presente documento procedimientos para detectar la presencia del antígeno de CTLA-4 humano en una muestra, o medir la cantidad de antígeno de CTLA-4 humano, que comprende poner en contacto la muestra y una muestra de control, con un anticuerpo monoclonal humano, o un antígeno que se une a una parte del mismo, que se une específicamente a CTLA-4 humano, en condiciones que permiten la formación de un complejo entre el anticuerpo o fracción del mismo y CTLA-4 humano. Después se detecta la formación de un complejo, en el que una diferencia en la formación del complejo entre la muestra comparada con la muestra de control es indicativa de la presencia de antígeno de CTLA-4 humano en la muestra.
C. Kits
También se describen en el presente documento kits que comprenden las composiciones (por ejemplo, anticuerpos de secuencia humana, anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas y biespecíficas) descritas en el presente documento e instrucciones para su uso. El kit además puede contener al menos un reactivo adicional, o uno o más anticuerpos humanos adicionales (por ejemplo, un anticuerpo humano que tiene actividad complementaria que se une a un epítopo en antígeno de CTLA-4 distinto del primer anticuerpo humano). Los kits normalmente incluyen una etiqueta que indica el uso pretendido de los contenidos del kit. El término etiqueta incluye cualquier material escrito o registrado suministrado en o con el kit, o que de otra manera acompaña al kit.
Ejemplos
Se incluyen aspectos de los ejemplos que no están relacionados específicamente con la invención reivindicada sólo como comparación.
Ejemplo 1 Generación de ratones seleccionados con Cmu Construcción de un vector de transporte dirigido a CMD
El plásmido pICEmu contiene un fragmento de EcoRI/XhoI del locus de cadena pesada de Ig murino, extendiendo el gen mu, que se obtuvo a partir de una biblioteca de fagos lambda genómica Balb/C (Marcu et al. Cell 22: 187, 1980). Se subclonó este fragmento genómico en los sitios de XhoI/EcoRI del plásmido pICEMI9H (Marsh et al.; Gene 32, 481-485, 1984). Las secuencias de cadena pesada incluidas en el pICEmu se extienden en sentido 3' del sitio EcoRI ubicado justo en 3' del potenciador intrónico mu, para el sitio XhoI ubicado aproximadamente 1 kb en sentido 3' del último exón transmembrana del gen mu; sin embargo, gran parte de la región de repetición de intercambio mu se ha delecionado por el paso en E. coli.
El vector de transporte dirigido se construyó tal como sigue (véase la figura 1). Se escindió un fragmento HindIII/SmaI de 1,3 kb de pICEmu y se subclonó dentro de pBluescript digerido con HindIII/SmaI (Stratagene, La Jolla, CA). Este fragmento de pICEmu se extiende desde el sitio HindIII ubicado aproximadamente 1 kb en 5' de Cmu1 hasta el sitio SmaI ubicado dentro de Cmu1. Se digirió el plásmido resultante con SmaI/SpeI y se insertó el fragmento de SmaI/XbaI de aproximadamente 4 kb a partir de pICEmu, que se extiende desde el sitio Sma I en Cmu1 en 3' hasta el sitio XbaI ubicado justo en sentido 3' del último exón Cmu. Se linealizó el plásmido resultante pTAR1, en el sitio SmaI, y se insertó un casete de expresión neo. Este casete consiste en el gen neo bajo control transcripcional del promotor quinasa fosfoglicerato de ratón (pgk) (fragmento XbaI/TaqI; Adra et al. (1987) Gene 60: 65-74) y que contiene el sitio de poliadenilación pgk (fragmento PvuII/HindlU; Boer et al.(1990) Biochemical Genetics 28: 299-308). Se obtuvo este casete a partir del plásmido pKJ1 (descrito por Tybulewicz et al. (1991) Cell 65: 1153-1163) a partir del cual se escindió el casete neo como un fragmento EcoRI/HindIII y se subclonó en pGEM-7Zf (+) digerido con EcoRI/HindIII para generar pGEM-7 (KJ1). Se escindió el casete neo desde pGEM-7 (KJ1) mediante digestión con EcoRI/SaII, extremo romo y se subclonó en el sitio SmaI del plásmido pTAR1, en la orientación contraria de las secuencias Cmu genómicas. Se linealizó el plásmido resultante con Not I, y se insertó un casete de timidina quinasa (tk) del virus del herpes simple para permitir el enriquecimiento de clones ES que soportan recombinantes homólogos, tal como se describe por Mansour et al. (1988) Nature 336: 348-352. Este casete constituido por las secuencias codificantes del gen tk entre paréntesis mediante el promotor pgk de ratón y sitio de poliadenilación, tal como se describe por Tybulewicz et al. (1991) Cell 65: 1153-1163. El vector de transporte dirigido a CMD resultante contiene un total de aproximadamente 5,3 kb de homología al locus de cadena pesada y se diseña para generar un gen mu mutante dentro del que se ha insertado un casete de expresión neo en el sitio SmaI único del primer exón de Cmu. Se linealizó el vector dirigido con PvuI, que corta dentro de las secuencias de plásmido, antes de la electroporación en células ES.
Generación y análisis de células ES seleccionadas
Se hicieron crecer células ES AB-1 (McMahon, A. P. y Bradley, A., (1990) Cell 62: 1073-1085) en capas alimentadoras de células SNL76/7 inactivas mitóticamente (véase la referencia anterior) esencialmente tal como se describió (Robertson, E. J. (1987) en Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: a Practical Approach (E. J. Robertson, ed.) Oxford: IRL Press, p. 71-112). Se electroporó el vector de transporte dirigido a CMD linealizado dentro de células AB-1 mediante los procedimientos que describieron Hasty et al. (Hasty, P. R. et al. (1991) Nature 350:243-246). Se colocaron en placas células electroporadas en placas de 100 mm a una densidad de 1-2 x 106 células/placa. Tras 24 horas, se añadieron al medio G418 (200 microgramos/ml de principio activo) y FIAU (5 x 10-7 M), y se dejó que clones resistentes a fármaco se desarrollaran durante 8-9 días. Los clones se seleccionaron, tripsinizaron y se dividieron en dos partes y además se expandieron. Entonces se congelaron la mitad de las células derivadas de cada clon y la otra mitad se analizaron para determinar la recombinación homóloga entre el vector y secuencias diana.
Se realizó un análisis de ADN mediante una hibridación de inmunotransferencia tipo Southern. Se aisló ADN a partir de los clones tal como describen Laird et al. (Laird, P. W. et al., (1991) Nucleic Acids Res. 19: 4293). Se digirió el ADN genómico aislado con SpeI y se sondó con un fragmento SacI de 915 pb, sonda A (figura 1), que se hibrida con una secuencia entre el potenciador intrónico mu y la región de cambio mu. La sonda A detecta un fragmento SpeI de 9,9 kb a partir del locus de tipo natural, y una banda de 7,6 kb de diagnóstico a partir de un locus mu que se ha recombinado homólogamente con el vector de transporte dirigido a CMD (el casete de expresión neo contiene un sitio SpeI). De 1132 clones resistentes de G418 y FIAU seleccionados por análisis de inmunotransferencia tipo Southern, 3 mostraron la banda Spe I de 7,6 kb indicativa de recombinación homóloga en el locus mu. Estos 3 clones se digirieron adicionalmente con las enzimas BglI, BstXI, y EcoRI para verificar que el vector se integraba homólogamente en el gen mu. Cuando se hibridan con sonda A, inmunotransferencias de tipo Southern de ADN de tipo natural digeridas con BglI, BstXI, o EcoRI producen fragmentos de 15,7, 7,3, y 12,5 kb, respectivamente, mientras que la presencia de un alelo mu dirigido está indicada por fragmentos de 7,7, 6,6, y 14,3 kb, respectivamente. Los 3 clones positivos detectados por digestión con SpeI mostraron los fragmentos de restricción BglI, BstXI, y EcoRI esperados, lo que indica la inserción del casete neo en el exón Cmu1.
Generación de ratones que soportan el gen mu mutado
Los tres clones ES de transporte dirigidos, número asignado 264, 272, y 408, se congelaron y se inyectaron dentro de blastocitos C57BL/6J tal como se describió por Bradley (Bradley, A. (1987) en Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: a Practical Approach. (E. J. Robertson, ed.) Oxford: IRL Press, p. 113-151). Se transfirieron los blastocitos inyectados dentro del útero de hembras pseudoembarazadas para generar ratones quiméricos que representan una mezcla de células derivadas de células ES de entrada y blastocitos huésped. Puede estimarse visualmente el grado de contribución de célula ES a la quimera por la cantidad de coloración de capa de agutí, derivado de la línea celular ES, en el fondo C57BL/6J negro. Los clones 272 y 408 sólo produjeron un bajo porcentaje de quimeras (es decir bajo porcentaje de pigmentación de agutí) pero el clon 264 produjo un alto porcentaje de quimeras macho. Estas quimeras se alimentaron con hembras C57BL/6J y se generaron crías agutí, lo que es indicativo de la transmisión de la línea germinal del genoma de célula ES. Se llevó a cabo la selección del gen mu dirigido mediante análisis de inmunotransferencia tipo Southern de ADN digerido con BglI a partir de biopsias de colas (tal como se describió anteriormente para el análisis de ADN de células ES). Aproximadamente el 50% de las crías agutí mostraron una banda BglI de hibridación de 7,7 kb además de la banda de tipo natural de 15,7 kb, que demuestra una transmisión de la línea germinal del gene mu seleccionado.
Análisis de ratones transgénicos para la inactivación funcional del gen mu
Para determinar si la inserción del casete neo en Cmu1 tiene inactivado el gen de cadena pesada Ig, se alimentó una quimera de clon 264 con un ratón homocigótico para la mutación JHD, que inactiva la expresión de cadena pesada como un resultado de la deleción de segmentos de gen JH (Chen et al., (1993) Immunol. 5: 647-656). Se generaron cuatro crías agutí. Se obtuvo suero a partir de estos animales a la edad de 1 mes y se analizaron mediante ELISA para determinar la presencia de IgM murina. Dos de las cuatro crías carecían completamente de IgM (tabla 1). La determinación de genotipo de los cuatro animales mediante análisis de inmunotransferencia tipo Southern a partir del análisis de ADN de las biopsias de colas mediante digestión con BglI e hibridación con sonda A (figura 1), y mediante digestión con StuI e hibridación con un fragmento de EcoRI/StuI de 475 pb (véase la referencia anterior) demostró que los animales que no expresaban IgM sérico son en los que un alelo del locus de la cadena pesada realiza la mutación JHD, el otro alelo la mutación Cmu1. Ratones heterocigóticos para la mutación JHD muestran niveles de tipo natural de Ig en suero. Estos datos demuestran que la mutación Cmu1 inactiva la expresión del gen mu.
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TABLA 1 Nivel de IgM sérico, detectado mediante ELISA, para ratones que realizan tanto las mutaciones CMD como JHD (CMD/JHD), para ratones heterocigóticos para la mutación JHD (+/JHD), ratones (+/+) de tipo natural (129Sv x C57BL/6J)F1 y para ratones homocigóticos para la mutación JHD (JHD/JHD) deficientes en células B
1 
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Ejemplo 2 Generación de ratones transgénicos HCo12 El transgen de cadena pesada humano HCo12
Se generó el transgen HCo12 mediante coinyección del inserto de pHC2 de 80 kb (Taylor et al., 1994, Int. Immunol., 6: 579-591) y del inserto de pVx6 de 25 kb. El plásmido pVx6 se construyó tal como se describe a continuación.
Se subclonó un fragmento de ADN de HindIII/SalI de 8,5 kb, que comprende el gen VHI-18 (DP-14) humano de la línea germinal junto con aproximadamente 5 kb de secuencia genómica flanqueante en 3' y 2,5 kb de flanqueante en 5', dentro del vector plásmido pSP72 (Promega, Madison, WI) para generar el plásmido p343.7.16. Se clonó un fragmento de ADN de BamHI/HindIII de 7 kb, que comprende el gen VH5-51 (DP-73) humano de la línea germinal junto con aproximadamente 1 kb de secuencia genómica flanqueante en 3' y 5 kb de flanqueante en 5', en el vector de clonación de plásmido basado en pBR322 pGP1f (Taylor et al. 1992, Nucleic Acids Res. 20:6287-6295), para generar el plásmido p251f. Se digirió un nuevo vector de clonación derivado a partir de pGP1f, pGP1k (SEQ. ID NO 1), con EcoRV/BamHI, y se ligó a un fragmento de ADN de EcoRV/BamHI de 10 kb, que comprende el gen VH3-23 (DP47) humano de línea germinal junto con aproximadamente 5 kb de secuencia genómica flanqueante en 3' y 4 kb de flanqueante en 5'. Se digirió el plásmido resultante, p112.2RR.7, con BamHI/SalI y se ligó con el inserto BamHI/SalI purificado de 7 kb de p251f. Se digirió el plásmido resultante, pVx4, con XhoI y se ligó con el inserto XhoI/SalI de 8.5 kb de p343.7.16. Se obtuvo un clon con el gen VH1-18 en la misma orientación que los otros dos genes V. Este clon, denominado pVx6, se digirió entonces con NotI y el inserto de 26 kb purificado coinyectado junto con el inserto de NotI de 80 kb purificado de pHC2 a una razón molar 1:1 dentro de los pronúcleos de embriones (C57BL/6J x DBA/2J)F2 de medio día tal como se describe por Hogan et al. (B. Hogan et al., Manipulating the Mouse Embryo, A Laboratory Manual, 2ª edición, 1994, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview NY). Se establecieron tres líneas independientes de ratones transgénicos que comprenden secuencias de ambos Vx6 y HC2 a partir de ratones que se desarrollaron a partir de los embriones inyectados. Estas líneas se denominan (HCo12)14881, (HCo12)15083, y (HCo12)15087. Cada una de las tres líneas se alimentó con ratones que comprenden la mutación CMD descrita en el ejemplo 1, la mutación JKD (Chen et al. 1993, EMBO J. 12: 811-820), y el transgen (KCo5)9272 (Fishwild et al. 1996, Nature Biotechnology 14: 845-851). Los ratones resultantes expresan los transgenes de cadena pesada y ligera kappa en un antecedente homocigótico para la disrupción de los locus de cadena pesada de ratón endógeno y cadena ligera kappa.
Ejemplo 3 Generación de anticuerpos monoclonales CTLA-4 anti-humanos kappa de IgG humana Antígeno basado en célula
Un segmento de ADN que codifica una proteína de fusión que comprende secuencias a partir del CTLA-4 humano y se construyeron los genes CD3zeta murino mediante amplificación por PCR de clones de ADNc junto con oligonucleótidos sintéticos de puente. La proteína de fusión codificada contiene las siguientes secuencias: i. CTLA-4 humano que codifica aminoácidos 1-190 (que contiene el péptido señal, el domino extracelular de CTLA-4 humano y la totalidad de la supuesta secuencia de transmembrana de CTLA-4 humana) y ii. CD3zeta murino desde el aminoácido 52 hasta el extremo carboxi terminal (Weissman et al. (1988) Science 239: 1018-1021). El producto amplificado por PCR se clonó en un vector de plásmido y se determinó la secuencia de ADN. El inserto clonado se subclonó a continuación en el vector pBABE (que contiene un gen que codifica la resistencia a puromicina (Morganstern, JP y Land, H Nucl. Acids Res. 18: 3587-96 (1990)) para producir pBABE-huCTLA-4/CD3z. Se transfectó pBABE-huCTLA-4/CD3z en la línea de empaquetamiento retroviral \psi-2, y se seleccionó una reserva de células resistentes a puromicina. Se cocultivaron estas células con el hibridoma BW5147 (ATCC nº TIB-47) de la célula T murina. Tras 2 días de cocultivo se retiraron las células BW5147 no adherentes y se seleccionaron para determinar la resistencia a la puromicina. La reserva de células resistentes a puromicina se subclonó limitando la dilución y se sometió a prueba para determinar la expresión superficial de CTLA-4 humano mediante FACS. Se seleccionó un clon que expresa altos niveles de CTLA-4 humano en la superficie celular.
Antígeno soluble
Se adquirió la proteína de fusión de CTLA-4 recombinante que comprende el dominio extracelular de CTLA-4 humano de R&D Systems (Nº de Cat. 325-CT-200). Se preparó un fragmento de CTLA-4 extracelular mediante escisión proteolítica de la proteína de fusión de CTLA-4 en un sitio de ruptura de proteasa factor Xa ubicado después del extremo C-terminal de del dominio extracelular de CTLA-4. Se trató la proteína de fusión con factor Xa a una razón de 50:1 de proteína de fusión con respecto a factor Xa, y se aisló el fragmento CTLA-4 mediante el paso sobre HPLC de proteína G-Sepharose y Mono Q. Se sometieron a prueba fracciones para determinar la presencia de dímero de CTLA-4 humano mediante SDS-PAGE y mediante unión a células que expresan moléculas B7 de ratón (LtkmB7.1: células Ltk(-) de ratón transfectadas con un vector de expresión de clon de ADNc B7.1). Se agruparon las fracciones positivas y se sometieron a diálisis en tampón PBS.
Ratones transgénicos
Se usaron dos cepas diferentes para generar anticuerpos monoclonales reactivos CTLA-4. Cepa ((CMD)++;
(JKD)++; (HCo7)11952+/++; (KCo5)9272+/++), y cepa ((CMD)++; (JKD)++; (HCo12)15087+/++; (KCo5)
9272+/++). Cada una de estas cepas son homocigóticas para las disrupciones de los loci de cadena ligera kappa (JKD) y de cadena pesada (CMD) endógenos. Ambas cepas además comprenden un transgen de cadena ligera kappa humano (KCo5), con animales individuales bien hemicigóticos o bien homocigóticos para la inserción nº 11952. Las dos cepas difieren en el transgen de cadena pesada humana usado. Los ratones eran hemicigóticos u homocigóticos para bien el transgen HCo7 o bien HCo12. La mutación CMD se describió anteriormente en el ejemplo 1. La generación de ratones (HCo12)15087 se describió en el ejemplo 2. La mutación JKD (Chen et al. 1993, EMBO J. 12: 811-820) y los ratones (KCo5)9272 (Fishwild et al. 1996, Nature Biotechnology 14: 845-851) y (HCo7)11952, se describen en la patente de los EE.UU. número 5.770.429 (Lonberg & Kay, 6/23/98).
Inmunización
En primer lugar se inmunizaron ratones transgénicos por vía i.p. con 1-3 x 10^{7} células en PBS, o con 10-50 \mug de proteína de fusión en adyuvante (bien completo de Freund o bien Ribi). Posteriormente los ratones inmunizados se impulsaron cada de 2 a 4 semanas por vía i.p. con 1-3 x 10^{7} células en PBS. Se mantuvieron los animales en protocolo durante de 2 a 5 meses. Antes de la fusión, se impulsaron los animales por vía i.v. en los días -3 y -2 con aproximadamente 10^{6} células, o con 10-20 \mug de antígeno soluble (proteína de fusión o proteína de fusión y fragmento extracelular). Algunos animales también recibieron proteína de fusión por vía i.v. en el día -4. Las fusiones satisfactorias que dieron como resultado anticuerpos monoclonales kappa IgG reactivos de CTLA-4 se obtuvieron a partir de ratones inmunizados mediante una variedad de protocolos diferentes, incluyendo sólo células, sólo antígeno soluble, e inmunizaciones celulares seguidas por antígeno soluble administrado por vía i.v. antes de la fusión.
Fusiones
Se fusionaron células de bazo a células de mieloma de ratón (línea P3 X63 Ag8.6.53, ATCC CRL 1580, o SP2/0-Agl4, ATCC CRL 1581) mediante procedimientos convencionales (Harlow y Lane, 1988, Anticuerpos, A Laboratory Manual, Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. Nueva York; Kennett et al. 1980, Monoclonal Antibodies, Hibridomas: A New Dimension in Biological Analysis. Plenum, Nueva York; Oi y Hertzenberg, 1980, Immunoglobulin Producing Hybrid Cell Lines, en Selected Methods In Cellular Immunology, ed. Mishell y Shiigi, págs. 357-372. Freeman, San Francisco; Halk, 1984, Methods in Enzymology: Plant Molecular Biology, ed. Weissbach y Weissbach, págs. 766-780, AcademicPress, Orlando, FL). Se cultivaron las células en DMEM, FBS al 10%, OPI (Sigma O-5003), BME (Gibco 21985-023), factor de clonación de hibridoma origen al 3% (Igen IG50-0615), y medio acondicionado (ATCC TIB 63) P388d1 al 5%. Se añadió complemento HAT o HT al medio durante el crecimiento inicial y selección.
Selección de hibridoma
Para identificar hibridomas que secretan anticuerpos kappa de IgG humano, se cubrieron durante la noche placas de ELISA (Nunc MaxiSorp) a 4°C con 100 \mul/pocillo de anticuerpo específico \gamma Fcgamma anti-humano de cabra (Jackson Immuno Research nº 109-006-098) a 1 \mug/ml en PBS. Se lavaron y bloquearon las placas con 100 \mul/pocillo de PBS-Tween que contenían BSA al 1%. Se añadieron cincuenta \mul de sobrenadante de cultivo celular seguido de una incubación de 1-2 horas. Se lavaron las placas y luego se incubaron durante una hora con 100 \mul/pocillo de cadena ligera anti-Kappa de cabra conjugada con fosfatasa alcalina o peroxidasa de rábano (Sigma nº A-3813, o nº A-7164). Se lavaron las placas tres veces en PBS-Tween entre cada etapa. Se usó un ensayo análogo para identificar hibridomas que secretan anticuerpos humanos reactivos con CTLA-4 humano. Este ensayo fue idéntico salvo que las placas de ELISA estaban cubiertas con proteína de fusión de CTLA-4 recombinante en lugar de anticuerpo Fcgamma de cabra antihumano.
Caracterización de anticuerpos monoclonales
Se subclonaron setenta y dos hibridomas que mostraron por ELISA que secretaban IgG kappa humanos que se unen a CTLA-4 humano. Cuarenta y siete de estos subclones se sometieron a prueba para determinar si los anticuerpos humanos secretados se unen a las células que expresan CTLA-4, y si los anticuerpos inhiben CTLA-4 soluble de unirse a células que expresan B7. Se determinó la unión mediante citometría de flujo. Para medir la inhibición, se incubaron 50 microlitros de cada sobrenadante con 10^{5} células LtkmB7.1 y 25 ng de proteína de fusión de CTLA-4 recombinante. Luego se determinó el canal medio de fluorescencia mediante citometría de flujo. La figura 2 muestra la inhibición de CTLA-4 soluble que se une a células que expresan B7.1. Se determinó el canal medio de fluorescencia (CMF) de células LtkmB7.1 teñidas con proteína de fusión de CTLA-4 humano en presencia de sobrenadante de hibridoma. Los hibridomas que secretaron anticuerpos de bloqueo dieron como resultado valores de CMF inferiores. Se usó BNI3.1 (Nº de Cat. 34580D, Pharmingen, San Diego, CA) como un anticuerpo monoclonal de ratón de control positivo que bloquea la unión GTLA-4/B7.
Aproximadamente el 40% de los hibridomas parece que inhiben fuertemente la unión de CTLA-4 con el ligando B7.
Luego se sometieron a ensayo los anticuerpos de clones 10D1.3, 4B6.12, y 11E8, mediante BIAcore (Biacore AB, Uppsala, Suecia) para determinar la cinética de la unión. Se acopló el fragmento extracelular de CTLA-4 recombinante purificado con el microprocesador del detector CM5 a 1200 RU. La medición de la unión se realizó añadiendo anticuerpo a concentraciones de 0,25, 0,5, 1, 2,5, y 5 \mug/ml a una velocidad de flujo de 5 \mul/min. Se ajustaron las curvas de unión a un modelo de unión de Langmuir usando el software BIAevaluation (BiacoreAB, Uppsala, Suecia). Se purificaron los anticuerpos mediante cromatografía en Sepharose de proteína A. Las velocidades directas y inversas ("on y off") se muestran en la tabla 2:
TABLA 2 Cinética de la unión de anticuerpos kappa de IgG humanos para determinar CTLA-4 recombinante inmovilizado sobre una superficie
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Se añadieron diluciones en serie de 10 anticuerpos monoclonales CTLA-4 antihumanos de IgG kappa humanos diferentes (3A4, 9A5, 2E2, 2E7, 4B6, 4E10, 5C4, 5G1, 11E8, y 11G1) a pocillos de microtitulación recubiertos con proteína de fusión de CTLA-4 recombinante. Tras una incubación de 2 horas, se añadió anticuerpo biotinilado 11E8 a cada pocillo a una concentración de 0,1 \mug/ml. Se incubaron las muestras durante 30 minutos, se lavaron y se detecto el anticuerpo unido con conjugado de estreptavidina/fosfatasa alcalina. Las titulaciones se muestran en la figura 3. Se bloqueó la unión del anticuerpo 11 E8 por sí misma y 7 de los otros anticuerpos humanos. Sin embargo, la unión no se bloqueó por los anticuerpos 3A4 o 9A5. Experimentos de unión recíproca mostraron que la unión de 11E8 no bloqueaba la unión de ni 3A4 ni 9A5 con CTLA-4.
Secuencia de ADN
Se extrajo ARN de aproximadamente 2 x 10^{6} células de cada línea celular de hibridoma subclonado y se usó para sintetizar ADNc usando reactivos y protocolos de Invitrogen (Micro-FastTrack y cDNA Cycle: Nº de Cat. L1310-01, y Nº K1520-02, Invitrogen, Carlsbad, CA). Se amplificaron fragmentos de región V de cadena pesada y cadena ligera kappa de inmunoglobulina humana mediante PCR usando pfu polimerasa (Stratagene, La Jolla, CA), cebadores FR1 degenerados y cebadores de región constante única. Se clonaron los fragmentos de PCR resultantes en el vector pCR-Blunt (Invitrogen, Carlsbad, CA) y se determinó la secuencia del inserto. Las secuencias preliminares para el fragmento de cadena pesada y cadena ligera del hibridoma 10D1.3 se muestran en la figura 4. Las secuencias determinadas para el fragmento de cadena pesada y ligera del hibridoma 10D1.3 se muestran de la figura 5 a la figura 8.
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TABLA 3 Secuencias CDR de cadenas ligera y pesada para AcM, 10D1, 4B6 y 1E2
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Ejemplo 4 Uso de secuencias de anticuerpos parciales para expresar anticuerpos intactos
Los anticuerpos interaccionan con antígenos diana predominantemente a través de restos de aminoácidos que están ubicados en las seis regiones que determinan complementariedad de cadena pesada y ligera (CDR). Por esta razón, las secuencias de aminoácidos en CDR son más diversas entre los anticuerpos individuales que secuencias fuera de las CDR. Dado que las secuencias CDR son responsables de la mayoría de las interacciones anticuerpo-antígeno, es posible expresar anticuerpos recombinantes que imitan las propiedades de anticuerpos específicos que se producen de manera natural construyendo vectores de expresión que incluyen secuencias CDR a partir del anticuerpo que se produce de manera natural específico injertado en secuencias de entramado a partir de un anticuerpo diferente con propiedades diferentes (Jones et al. 1986, Nature 321, 522-525). Pueden obtenerse tales secuencias de entramado a partir de bases de datos de ADN públicas que incluyen secuencias génicas de línea germinal. Estas secuencias de línea germinal diferirán de las secuencias génicas de anticuerpo maduro porque no incluirán genes variables completamente ensamblados, que se forman uniendo V(D)J durante la maduración de célula B. Las secuencias génicas de línea germinal también diferirán de la secuencia de un anticuerpo repertorio secundario de alta afinidad de nucleótidos individuales debido a mutaciones somáticas. Sin embargo, las mutaciones somáticas no están distribuidas uniformemente a lo largo de la región variable. Por ejemplo, las mutaciones somáticas son relativamente infrecuentes en la parte amino terminal de una región 1 de entramado y en la parte carboxilo terminal de la región 4 de entramado. Además, muchas mutaciones somáticas no alteran significativamente las propiedades de unión del anticuerpo. Por esta razón, no es necesario obtener la secuencia de ADN entera de un anticuerpo particular con el fin de recrear un anticuerpo recombinante intacto que tiene propiedades de unión similares a las del anticuerpo original (véase el documento PCT/US99/05535 (el documento WO 9945962) presentado el 12 de marzo de 1999. La secuencia parcial de cadena pesada y ligera que abarca las regiones CDR normalmente es suficiente para este propósito. Se usa la secuencia parcial para determinar que segmentos variables de línea germinal y de gen que se une contribuyeron a los genes variables del anticuerpo recombinado. La secuencia de línea germinal se usa entonces para llenar las partes que faltan de la región variable. Las secuencias líder de cadena pesada y ligera se rompen durante la maduración y no contribuyen a las propiedades del anticuerpo final. Por esta razón no es necesario usar la secuencia líder de línea germinal correspondiente para constructos de expresión. Para añadir las secuencias que faltan, pueden combinarse secuencias de ADNc clonadas con oligonucleótidos sintéticos mediante ligación o amplificación por PCR. Como alternativa, la región variable entera puede sintetizarse como un conjunto de oligonucleótidos cortos, que solapan y que se combinan mediante amplificación por PCR para producir un clon de región variable sintética. Este procedimiento presenta ciertas ventajas tales como eliminación o inclusión de sitios de restricción particulares, o codones particulares de optimización.
Las secuencias de nucleótidos de transcriptos de cadena pesada y ligera de hibridomas se usan para diseñar un conjunto solapante de oligonucleótidos sintéticos para crear secuencias V sintéticas con capacidades codificantes de aminoácidos idénticas a las secuencias naturales. Las secuencias sintéticas de cadena pesada y ligera kappa pueden diferir de las secuencias naturales de tres maneras: cadenas de bases de nucleótidos repetidas se interrumpen para facilitar la síntesis de oligonucleótidos y amplificación por PCR; los sitios de iniciación de traducción óptimos se incorporan según las reglas de Kozak (Kozak, 1991, J. Biol. Chem. 266, 19867-19870); y, los sitios HindIII se modifican mediante ingeniería en sentido 5' de los sitios de iniciación de la traducción.
Para las regiones variables tanto de cadena pesada como ligera, las secuencias de cadena, la codificante optimizada y la no codificante correspondiente, se rompen en segmentos de 30-50 nucleótidos de tal manera las rupturas entre nucleótidos para la secuencia de cadena codificante se produce en aproximadamente el punto medio del oligonucleótido no codificante correspondiente. Por tanto, para cada cadena, los oligonucleótidos pueden ensamblarse dentro de conjuntos de cadena doble solapantes que expanden completamente la secuencia deseada. Estos oligonucleótidos se reúnen en combinaciones que expanden los segmentos de 150-400 nucleótidos. Luego se usan las combinaciones como moldes para producir productos de amplificación por PCR de 150-400 nucleótidos. Normalmente, un conjunto de oligonucleótidos de región variable se romperá en dos combinaciones que se amplifican por separado para generar dos productos PCR solapantes. Después se combinan estos productos solapantes mediante amplificación por PCR para formar una región variable completa. También puede ser deseable incluir un fragmento solapante de la región constante de cadena pesada o ligera (incluyendo el sitio BbsI de la cadena ligera kappa, o el sitio AgeI de la cadena pesada gamma) en la amplificación por PCR para generar fragmentos que pueden clonarse fácilmente en constructos de vectores de expresión.
Luego se combinan las regiones variables de cadena pesada y ligera reconstruidas con promotor clonado, iniciación de traducción, región constante, no traducida en 3', poliadenilación y terminación de transcripción, secuencias para formar constructos de vectores de expresión. Los constructos de expresión de cadena pesada y ligera pueden combinarse dentro de un único vector, cotransfectarse, transfectarse en serie o transfectarse por separado dentro de células huésped que después se fusionan para formar una célula huésped que expresa ambas cadenas.
Los plásmidos para usar en la construcción de vectores de expresión para IgGk humana se describen a continuación. Los plásmidos se construyeron de manera que las secuencias de ADNc de cadena pesada V y ligera kappa V amplificadas por PCR pudieran usarse para reconstruir minigenes de cadena pesada y ligera completos. Estos plásmidos pueden usarse para expresar anticuerpos IgG1k o IgG4k completamente humanos, o quiméricos. Pueden construirse plásmidos similares para expresar otros isotipos de cadena pesada, o para expresar anticuerpos que comprenden cadenas ligeras lambda.
El plásmido de cadena ligera kappa, pCK7-96 (SEQ ID NO:40), incluye la región constante kappa y el sitio de poliadenilación, de manera que las secuencias kappa amplificadas con cebadores 5' que incluyen sitios HindIII en sentido 5' del iniciador metionina que puede digerirse con HindIII y BbsI, y clonarse en pCK7-96 digerido con HindIII y BbsI para reconstruir una secuencia codificante de cadena ligera completa con un sitio de poliadenilación. Puede aislarse este casete como un fragmento HindIII/NotI y ligarse a secuencias promotoras de transcripción para producir un minigen funcional para transfectarse en células.
El plásmido de cadena pesada gamma1, pCG7-96 (SEQ ID NO:41), incluye la región constante gamma1 humana y el sitio de poliadenilación, de manera que las secuencias gamma amplificadas con cebadores en 5' que incluyen sitios HindIII en sentido 5' del iniciador metionina pueden digerirse con HindIII y AgeI, y clonarse en pCG7-96 digerido con HindIII y AgeI para reconstruir una secuencia codificante de cadena pesada gamma1 completa junto con un sitio de poliadenilación. Puede aislarse este casete como un fragmento HindIII/SalI y ligarse a secuencias promotoras de transcripción para producir un minigen funcional para transfectarse en células.
El plásmido de cadena pesada gamma4, pG4HE (SEQ ID NO:42), incluye la región constante gamma4 humana y un sitio de poliadenilación, de manera que las secuencias gamma amplificadas con cebadores en 5' que incluyen sitios HindIII en sentido 5' del iniciador metionina puedan digerirse con HindIII y AgeI, y clonarse en pG4HE digerido con HindIII y AgeI para reconstruir una secuencia codificante de cadena pesada gamma4 completa junto con un sitio de poliadenilación. Puede aislarse este casete como un fragmento HindIII/EcoRI y ligarse a secuencias promotoras de transcripción para producir un minigen funcional para transfectarse en células.
Puede usarse una variedad de promotores diferentes (incluyendo pero sin limitarse a CMV, ubiquitina, SRalfa, y beta-actina) para expresar los genes de cadena pesada y ligera reconstruidos. Por ejemplo el vector pCADN3.1+ (Invitrogen, Carlsbad, CA), puede romperse con HindIII y o bien NotI, o bien XhoI, o bien EcoRI, para ligarse con cualquiera de los casetes gamma1, o gamma4 descritos anteriormente, para formar vectores de expresión que pueden transfectarse directamente en células de mamífero.
Ejemplo 5 Unión de 10D.1 a CTLA-4 A. Unión de 10D1 a CTLA-4 humano recombinante purificado
Se demostró la unión de 10D1 con CTLA-4 humano recombinante purificado mediante ELISA usando métodos y procedimientos convencionales (figura 9 y figura 10). Se incubaron las placas de microtitulacion recubiertas con CTLA-4 purificado con concentraciones variables de 10D1, y luego se revelaron con F(ab')_{2} de IgG de cabra antihumano conjugado con fosfatasa alcalina. Los datos demuestran que la unión dependiente de dosis de 10D1 se ajusta bien a una curva de 4 parámetros (el coeficiente de correlación es -1,0). La mitad de la unión máxima a 15 ng/ml refleja la alta capacidad de unión de 10D1 con CTLA-4. Se observó la saturación de la unión a aproximadamente 0,1 \mug/ml.
B. Unión de 10D.1 a CTLA-4 expresado en la membrana plasmática de células T
Con el fin de demostrar la unión de 10D1 con CTLA-4 expresado en la membrana plasmática de células T, se muestran los resultados de un ensayo citométrico de flujo en la figura 10. El ensayo citométrico de flujo se usó con una línea de células T transfectada para expresar los elevados niveles CTLA-4 humano (denominadas células 58\alpha\betaCTLA-4/CD3zeta). Se incubaron concentraciones variables de 10D1 fluorescinado (10D1-FITC) con células 58\alpha\betaCTLA-4. Se determinó la fluorescencia asociada a célula mediante citometría de flujo. Tal como se observó con el CTLA4 purificado, 10D1 unido a células que expresan CTLA4 en una manera dependiente de dosis que se ajustaba bien a una ecuación de 4 parámetros (el coeficiente de correlación es -0,999). La mitad de la unión máxima fue 190 ng/ml, y se alcanzó la saturación a 2 \mug/ml. 10D1 no se unió a ninguna de las líneas celulares negativas para CTLA4 sometidas a prueba, incluyendo tumores epiteliales de pecho MCF10A, SKBR-3 y BT474 y células de tumor de Hodgkin L540, ni tampoco se unió a células que expresaban CTLA-4 murino. Estos datos indican la especificidad de 10D1 hacia CTLA humano. Sin embargo, 10D1 demostró que reaccionaba de manera cruzada con CTLA-A de macaco (véase a continuación).
C. Reactividad cruzada de 10D1 con tejidos humanos normales
En este estudio, se usó una forma fluorescinada de el artículo de prueba (10D1-FITC) para evaluar la unión. El objetivo del estudio era evaluar la reactividad cruzada potencial de 10D1-FITC con criosecciones de tejidos humanos normales. No se observó reactividad cruzada sin anticipar.
El estudio se realizó según la normativa de la buena práctica de laboratorio (GLP) de la Food y Drug Administración (21 CFR Part 58). El panel de tejido humano incluía todos los tejidos en la lista sugerida de tejidos humanos para usarse para investigaciones inmunohistoquímicas de reactividad cruzada'' en el anexo II de EC CPMP Guideline III/5271/94, "Production and quality control of monoclonal antibodies" y todos los tejidos recomendados en USFDA/CBER de 1997 "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monclonal Antibody Products for Human Use".
Usando un procedimiento de inmunoperoxidasa indirecto, 10D1-FITC tiñó específicamente células
58\alpha\betaCTLA4CD3zeta de control positivo que expresan CTLA4 humano, así como linfocitos de control positivo en amígdalas humanas. La reactividad de 10D1-FITC fue de moderada a intensa y se examinaron dos concentraciones de anticuerpo (10 \mug/ml y 2.5 \mug/ml). Tanto en 58\alpha\betaCTLA4CD3zeta de control positivo como los linfocitos de las amígdalas humanas de control positivo, 10D1-FITC tiñó específicamente, gránulos redondos y discretos en la membrana y en el citoplasma inmediatamente debajo de la membrana. Se observó reactividad con linfocitos foliculares, interfoliculares y subepiteliales ocasionales. Menos de un 1-2% de todos los linfocitos de las amígdalas reaccionaron con 10D1-FITC.
10D1-FITC no reaccionó con cerebro humano de control negativo (cerebelo). Un anticuerpo de control negativo que ajusta a un isotipo (HulgG1-k-FITC) no se unió específicamente a ninguno de 58\alpha\betaCTLA4CD3zeta de control positivo que expresa CTLA4 o amígdalas humanas; tampoco se unió específicamente al cerebro humano de control negativo (cerebelo).
Para determinar la reactividad cruzada, se aplicó 10D1-FITC a un panel de tejido humanos normales a dos concentraciones (10 \mug/ml y 2,5 \mug/ml). Se observó reactividad de 10D1-FITC específica para linfocitos en las amígdalas (3/3 donadores), nódulo linfático submucosal en el colon (tracto gastrointestinal -colon [1/3 donadores]), y extensiones de sangre (2/3 donadores).
Se identificaron células inmunoreactivas como linfocitos basándose en la morfología típica (células moleculares redondas con núcleos grandes: razón de citoplasma y citoplasma escaso, falta de procedimientos dendríticos, 10-15 \mum de diámetro) y ubicación dentro de los tejidos (por ejemplo, ubicación típica dentro de los tejidos linfáticos). En las amígdalas de los tres donadores (tejidos de prueba), linfocitos, 10D1-FITC tiñeron específicamente gránulos discretos, redondos en la membrana y en citoplasma inmediatamente debajo de la membrana. Se observó reactividad con linfocitos foliculares, interfoliculares y subepiteliales ocasionales. Menos de un 1-2% de todos los linfocitos de las amígdalas reaccionaron con 10D1-FITC.
En 1/3 de los donadores examinados, 10D1-FITC también tiñó específicamente gránulos discretos en linfocitos foliculares e interfoliculares ocasionales ubicados en los nódulos linfáticos submucosales en el colon (tracto gastrointestinal-colon [intestino grueso]). De nuevo, se tiñeron gránulos de membrana discretos.
En extensiones de sangre periférica de dos de los tres donadores examinados, 10D1-FITC tiñó específicamente gránulos discretos de aproximadamente 1 \mum de diámetro asociado con la membrana de linfocitos raros. Los gránulos se dispusieron en un anillo o patrón curvo. Menos de un 1-2% de todos los leucocitos de sangre periférica reaccionaron con 10D1-FITC.
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TABLA 4 Reactividad cruzada de AcM para 10D1 con tejidos humanos normales
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D. Reactividad específica de 10D.1 con CTLA-4 de macaco
Se demostró la reactividad específica con CTLA-4 de macaco usando células T transfectadas para expresar el CTLA-4 de macaco a altos niveles (tabla 5). Estos datos sugieren que el epítopo de CTLA-4 para 10D1 se conserva entre macacos y seres humanos, por tanto, el macaco es un buen modelo para evaluar la seguridad in vivo de AcMHu anti-CTLA4 de 10D1.
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TABLA 5
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Se incubó AcM de 10D1 (10 \mug/ml) con líneas celulares que expresan CTLA-4 recombinante de varias especies y se detecto mediante IgG de FITC antihumana. La fluorescencia asociada a célula se determinó mediante exploración FAC y se notificó como intensidad de fluorescencia media (IFM). Estos datos muestran que AcM de 10D1 reacciona bien con CTLA-4 de macaco y humano, pero no con CTLA-4 murino.
Ejemplo 6 Bloqueo mediante 10D1 de CTLA-4 de la unión a los ligandos B7
Con el fin de mostrar que la unión de 10D1 con CTLA-4 bloquea la interacción de CTLA-4 con ligandos de CTLA-4, B7.1 y B7.2, se realizaron ensayos de competencia mediante citometría de flujo (figura 11 y figura 12). Tal como se muestra en la figura 11, la proteína de fusión B7.2-Ig humana marcada con FITC se incubó con células T 58\alpha\betaCTLA4 y diversas concentraciones de AcM 10D1. En la figura 12, la proteína de fusión CTLA4-Ig marcada con FITC se incubó con células transfectadas con B7.1 murino y diversas concentraciones de AcM 10D1.
Los ensayos de competencia demuestran la capacidad de 10D1 para inhibir eficazmente las interacciones CTLA4-B7 a bajas concentraciones (1-10 \mug/ml). La concentración eficaz sería probablemente mucho menor en condiciones fisiológicas, que tendría concentraciones bastante inferiores de moléculas de CTLA-4 y B7. Se obtuvieron datos similares usando reactivos biotinilados en ensayos ELISA.
Estos estudios in vitro demuestran que el AcM 10D1 se une con CTLA-4 humano con alta afinidad y especificidad y que la unión de 10D1 abroga la interacción entre moléculas coestimulantes de B7 y CTLA-4. Estos datos para 10D1 concuerdan con los perfiles de actividad in vitro para anticuerpos anti-CTLA-4 murino que tienen eficacia demostrada en modelos tumorales murinos.
Ejemplo 6 Mapeo del epítopo de 10D.1
Se realizaron ensayos ELISA competitivos con anticuerpos no marcados y marcados con biotina para determinar la especificad del epítopo de CTLA-4. Se identificaron cuatro grupos de unión al epítopo anti-CTLA-4 entre los anticuerpos humanos, y se definieron otros dos epítopos mediante los anticuerpos monoclonales murinos comerciales BNI3 (Pharmingen, San Diego, Ca), y 8H5 (Ancell Corp. Bayport, Mn). Las figuras 3, y 13A-13G muestran los resultados de ensayos de unión competitiva que demuestran la competencia diferencial entre los anticuerpos por la unión a CTLA-4. Estos resultados se resumen en la tabla 6.
Los anticuerpos en los grupos 4a y 4b de unión al epítopo anti-CTLA-4 tienen características de unión similares, y de manera adicional son bloqueantes fuertes de CTLA-4-Ig que se une a B7.1 expresado en la superficie celular (tabla 6). Por ejemplo, la figura 3 muestra los resultados con el anticuerpo 11E8 marcado con biotina y 10 anticuerpos no marcados (3A4, 9A5, 2E2, 2E7, 4B6, 4E10, 5C4, 5G1, 11E8 y 11G1). La unión del anticuerpo 11E8 se bloqueó por sí mismo y 7 de los otros anticuerpos humanos en los grupos 4a y 4b de epítopos. Sin embargo, la unión de 11E8 no se bloqueó por los anticuerpos 3A4 o 9A5 (grupos de epítopos 1 y 2). Experimentos de unión recíprocos mostraron que la unión de 11E8 no bloqueaba la unión de 9A5 ni 3A4 a CTLA-4 (figura 13A y 13B). Se muestran resultados similares para el anticuerpo murino 147 y anticuerpos 10D1 del grupo de epítopos 4a (figuras 13D y 13F). Los anticuerpos en el grupo de epítopos 4b (figura 13E) son similares a los anticuerpos del grupo 4a con la excepción de que los anticuerpos del epítopo 4b compiten con los anticuerpos del grupo 2 de epítopos en experimentos de unión recíprocos (figura 13B). Los anticuerpos humanos que pertenecen a los grupos de epítopos 3, 4a y 4b son bloqueantes eficaces de la unión CTLA-4/B7.1 (figura 3, y tabla 6).
TABLA 5 AcM de CTLA-4: Propiedades bloqueantes de epítopo y CTLA-4/B7.1
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Ejemplo 7 10D1 Se une a células T humanas activadas
Se investigó la capacidad del anticuerpo 10D1 para unirse con CTLA-4 expresado por células T humanas normales mediante análisis citométrico de flujo de las células T en reposo y activadas (figura 14). Se incubaron las células mononucleares de sangre periférica humana recientemente aisladas a 2 x 10^{6}/ml en presencia o ausencia de 2 \mug/ml del mitógeno de célula T, fitohemaglutinina (PHA). Tras cuatro días de incubación, se lavaron las células y se tiñeron con los siguientes anticuerpos: 1) sin anticuerpo; 2) HuIgG1-FITC, un anticuerpo IgG1 humano anti receptor EGF; 3) 10D1-FITC, anticuerpo IgG1 humano anti-CTLA-4; y 4) 147-FTTC - anticuerpo de ratón anti-CTLA-4 humano. Tras la incubación durante 1 h, se lavaron las células y se tiñeron con IgG de conejo anti-FITC seguido por PE de cabra anti-conejo. Se realizó un análisis sobre los linfocitos regulados por dispersión directa frente a lateral. Tal como se muestra en la figura 14, los linfocitos en reposo no se unen al anticuerpo 10D1, mientras que las células T activadas por PHA expresan bajos niveles de CTLA-4 en la superficie celular.
Ejemplo 8 10D1 no media la lisis de células T activadas dependiente de complemento o dependiente de anticuerpo
Se investigó la capacidad del AcM 10D1 para mediar la citotoxicidad celular dependiente de complemento (CDCC) o citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) de células que expresan CTLA-4.
Para experimentos de CDCC, se usó suero de conejo como fuente de complemento, con el fin de proporcionar las condiciones óptimas para la CDCC. Se ha demostrado que el complemento de conejo es más eficaz mediando la CDCC con IgG_{1} humana que con complemento humano (Jurianz, Maslak et al. 1999). Se marcaron las células T estimuladas por PHA con ^{51}Cr y se incubaron con diversas concentraciones de AcM 10D1 anti-CTLA4 o AcM anti-CD3 con o sin suero de conejo como fuente de complemento. Tras una incubación de 1 hora, se determinó el ^{51}Cr liberado por las células que se estaban muriendo usando un contador gamma. Las células diana incubadas con SDS al 2% sirvieron como controles del 100% de la lisis. El AcM 10D1 anti-CTLA-4 no medió la CDCC de las células T activadas (figura 15). En las mismas condiciones, AcM IgG2_{a} murino anti-CD3 condujo a CDCC significativa. Tanto IgG2_{a} murino como IgG_{1} humano fijan eficazmente el complemento de conejo; por tanto lo más probable es que estas diferencias reflejen la expresión sumamente reducida de CTLA-4 si se compara con CD3 en células T activadas.
De manera similar, no se observó actividad de ADCC para AcM 10D1 usando células mononucleares autólogas como células efectoras (figura 16). Se marcaron las células T estimuladas por PHA con ^{51}Cr y se incubaron con diversas concentraciones de AcM 10D1 anti-CTLA4 o AcM anti-CD3 y células mononucleares autólogas nuevas. La razón de célula efectora con respecto a diana fue de 100:1. Tras una incubación de 4 horas, se determinó el ^{51}Cr liberado por las células que se estaban muriendo usando un contador gamma. Las células diana incubadas con SDS al 2% sirvieron como controles del 100% de la lisis. Aunque AcM anti-CD3 es una IgG2_{a} murina, que puede mediar la ADCC eficaz con células efectoras humanas, sólo se observaron niveles bajos de ADCC. Estos datos concuerdan con el requisito de altos niveles de expresión de antígeno sobre la superficie de células diana para una ADCC eficaz. Dado que AcM 10D1 es una IgG_{1} humana, un isotipo que generalmente puede mediar la CDCC y la ADCC, la falta de estas actividades se debe probablemente a la muy baja expresión de CTLA-4 en células T activadas. Además, la observación del aumento del número de células T activadas en los estudios de toxicología en primates (véase a continuación) concuerda con la falta de actividad de ADCC y CDCC de las células T activadas por AcM 10D1 in vivo.
Ejemplo 9 Estudios de toxicidad preclínicos de 10D1 en monos cynomolgus
Se realizaron dos estudios de toxicología independiente del anticuerpo 10D1 y macacos. Se analizaron un total de ocho monos. Cuatro monos (dos machos y dos hembras) toleraron tres dosis de bolo por vía i.v. de 3 mg/kg de anti-CTLA4 humano, y cuatro monos (dos machos y dos hembras) toleraron tres dosis de bolo por vía i.v. de 10 mg/kg de anti-CTLA4 humano sin descubrimientos clínicos, inmunotoxicológicos o histopatológicos significativos.
A. Estudio de toxicología en primates por 10D1 (3,0 mg/Kg)
Para investigar los efectos de 10D1 in vivo, se realizó un estudio de toxicología en primates con dos macacos. En un estudio de toxicidad de dosis múltiples de AcM 10D1, se administró este anticuerpo por una inyección por vía intravenosa de macacos. El objetivo de este estudio era determinar la tolerabilidad del AcM 10D1 en dos monos dados a una dosis y un programa compatible con un tratamiento eficaz en un modelo de regresión de tumor murino y dosis propuesta en estudios clínicos en humanos. Se trataron dos monos cynomolgus hembra (Macaca fascicilaris) con tres dosis de bolo intravenosas de 3,0 mg/kg de 10D1 en los días 1, 4, y 7 para evaluar la seguridad y la activación de las células T en estos animales. Se observaron los animales para determinar cualquier reacción adversa, pérdida/ganancia de peso, y morbimortalidad hasta 14 días posteriores a la administración de la primera dosis. Siete días después de la última dosis se sacrificaron los animales y se necropsiaron para examinar sus órganos de manera individual. Se tomaron muestras de sangre antes de cada dosis y antes de la necropsia para examinar las poblaciones de células T y la expresión de los marcadores de activación mediante citometría de flujo. También se recogió plasma a partir de muestras
de sangre para determinar las respuestas de los niveles de anticuerpo 10D1 y anticuerpo anti-10D1 mediante ELISA.
Los animales toleraron tres dosis de anticuerpo 10D1 sin ningún síntoma clínico durante el transcurso del tratamiento. El peso de estos animales no cambió significativamente. No se documentaron grandes descubrimientos en los 47 órganos/tejidos examinados en la necropsia para ningún animal.
Los estudios de histopatología se realizaron en los laboratorios Redfield, Redfield, AR. Los resultados de estos estudios indican que las dosis múltiples de AcM 10D1 no produjeron toxicidad aguda en ninguno de los órganos y tejidos examinados.
Los análisis farmacocinéticos revelaron la presencia de niveles significativos (hasta 97,3 \mug/ml) de AcM 10D1 en el plasma de los dos monos (véase la tabla 7). Se determinaron los niveles de plasma de 10D1 mediante un ensayo de competencia con FITC-10D1 usando citometría de flujo y células T 58\alpha\betaCTLA-4.
TABLA 7 Niveles de 10D1 en plasma
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Se realizó la evaluación de la respuesta del anticuerpo anti-10D1 mediante ELISA. No se observó respuesta anti-10D1 significativa en ninguno de los animales durante el curso del estudio (figura 17). Se recubrieron las placas de microtitulación con AcM 10D1 (para ensayo de IgM) o F(ab')2 de 10D1 (para ensayo de IgG). Se incubaron diluciones de muestras de plasma de diversos puntos de tiempo con las placas, y se detectaron anticuerpos anti-10D1 con reactivos de fosfatasa alcalina específicos de o bien anti-IgM o bien de Fc de IgG. A pesar de que los anticuerpos IgM anti-10D1 parece que se han desarrollado en el día 14, los títulos son muy bajos. Estos datos demuestran que los monos no desarrollaron respuestas del anticuerpo anti-10D1 tras 3 dosis del anticuerpo.
Estos datos demuestran que los animales no desarrollaron una respuesta de anticuerpo significativa frente al AcM 10D1 durante el transcurso de este estudio.
Se investigó la inmunotoxicidad mediante análisis citométrico de flujo de las poblaciones de linfocitos durante el transcurso del estudio. Los subconjuntos de linfocitos examinados incluían CD3 como marcador de células T totales y CD20 como marcador de células B totales. Se subdividieron adicionalmente las células T para la expresión de CD4 (marcador de célula T cooperadora) y CD8 (marcador de célula T citotóxico), así como para los marcadores de activación CD25, CD29, CD69 y HLA-DR. No se observó ningún cambio notable en las poblaciones de células T o expresión de marcadores de activación. Los resultados se resumen en la tabla 8 a continuación.
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TABLA 8 Análisis citométrico de flujo de poblaciones de linfocitos
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Se analizaron muestras de sangre heparinizada recientes mediante citometría de flujo usando reactivos antilinfocitos marcados con FITC- o PE. Los %CD3 y %CD20 están basados en una regulación de linfocitos. Todos los marcadores de célula T adicionales y los marcadores de activación están basados en células positivas para CD3. Estos datos indican que las dosis múltiples de AcM 10D1 no tienen efecto significativo sobre las poblaciones de células B y T o marcadores de activación de células T.
B. Estudio de toxicología en primates por 10D1 (3,0 y 10,0 mg/Kg)
Se asignaron seis monos cynomolgus (cuatro machos y dos hembras), que se trataron experimentalmente y que pesaban de 2,4 a 3,8 kg al principio del estudio, a grupos de tratamiento tal como se muestra en la tabla 9 a
continuación.
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TABLA 9
15 
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Cada animal recibió una dosis de anti-CTLA4 humano (concentración 5 mg/ml) por inyección intravenosa (es decir, inyección de bolo "de empuje retardado") cada tres día durante una semana (es decir, los días 1, 4 y 7). Se llevaron a cabo observaciones clínicas detalladas al menos dos veces al día ("observaciones laterales de jaula"), y se realizó un examen físico meticuloso en cada animal antes del estudio y el día 12. Se midieron los pesos corporales semanalmente (antes del estudio y los días 7 y 14), y se realizó un examen oftalmoscópico en todos los animales antes del estudio y el día 12. Se tomaron muestras de sangre para la evaluación los parámetros de coagulación, hematología y de la química del suero de todos los animales antes del estudio y el día 14. Se tomaron otras muestras para los parámetros de hematología seleccionados (sólo glóbulos blancos totales y diferenciales) antes de dosificar en cada día de dosificación (días 1, 4, y 7). Se obtuvieron muestras de orina para análisis de orina convencionales mediante drenaje de bandejas de jaula especialmente diseñadas antes de la dosificación y el día 13. También se tomaron muestras de sangre antes de cada dosis (días 1, 4 y 7) y antes de la terminación (día 14) para diversos análisis realizados por Medarex. Estos incluían análisis de la concentración del artículo de prueba (farmacocinética), determinación de la presencia de anticuerpos frente al artículo de prueba, y análisis de citometría de flujo. Se sometió a todos los animales a eutanasia el día 14, momento en el que se realizó una necropsia macroscópica completa, se pesaron los órganos principales, y se recogió un conjunto completo convencional de tejidos de cada animal y se trató para el examen mediante microscopía óptica.
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La administración por vía intravenosa de anti-CTLA4 humano a niveles de dosis de 3 mg/kg y 10 mg/kg administrado cada tres días para un total de tres dosis se toleró muy bien por los monos cynomolgus. No hubo signos clínicos de toxicidad a partir las observaciones laterales de jaula y de los exámenes físicos, y ningún efecto sobre el peso corporal, ni descubrimientos en los exámenes oculares, ni parámetros de patología clínica, descubrimientos de necropsia macroscópica, pesos de los órganos o histomorfología tisular.
Los resultados de los análisis de la concentración del artículo de prueba en las muestras de suero (es decir, a través de los niveles medidos en muestras obtenidas antes de la dosificación en los días 4 y 7, y antes de la necropsia el día 14) indicaron la exposición dependiente de dosis al artículo de prueba. El día 7, las concentraciones medias previas a la dosis fueron aproximadamente de 84 y 240 \mug/ml para los grupos de dosis de 3 y 10 mg/kg, respectivamente.
Un potencial para la acumulación del artículo de prueba en suero con el programa de dosificación cada tres días en monos era evidente a partir de la diferencia entre los niveles mínimos del día 4 y del día 7 (es decir, las concentraciones medias el día 7 eran aproximadamente dos veces más altas que las del día 4), así como a partir de los altos niveles residuales el día 14 (una semana después de la última dosis), que fueron similares a los niveles mínimos del día 7. Se detectó evidencia de la formación de anticuerpo contra el artículo de prueba en dos de los seis animales de estudio (uno del grupo 1 y otro del grupo 2). En el primer caso, parecía que la respuesta del anticuerpo podía haber afectado el aclaramiento del artículo de prueba de la circulación. Un análisis citométrico de flujo de los subconjuntos de linfocitos reveló un aumento moderado en células positivas para CD3 totales entre los días 1 y día 14, lo que correspondía a un aumento en células positivas para CD3/CD4, y un descenso respectivo en células positivas para CD3/CD8 (sólo grupo 2). El porcentaje de células CD3 que expresan CD29 y HLA-DR aumentó moderadamente a lo largo del transcurso del estudio, lo cual concordaba con descubrimientos previos de que anticuerpos anti-CTLA4 pueden potenciar las células T específicas de antígeno.
Como conclusión, aparte de cambios menores en subpoblaciones de linfocitos que circulan, el nivel de dosis más alto sometido a prueba en este estudio (es decir, tres dosis de 10 mg/kg dadas a intervalos de tres días) era un nivel de dosis sin efecto absoluto en monos cynomolgus.
Ejemplo 10 Un ensayo clínico en seres humanos en fase I de AcM 10D1 en cáncer de próstata (MDXCTLA4-01) y melanoma (MDXCTLA4-02)
MDXCTLA4-01 es un estudio abierto del anticuerpo monoclonal 10D1 (AcM para 10D1) anti antígeno-4 (anti-CTLA-4) asociado a linfocitos T citotóxicos en pacientes con cáncer de próstata que no responde a hormonas, progresivo y metastásico. El tratamiento es una dosis única del AcM 10D1 que se administra por vía intravenosa como una infusión, a una dosificación de 3,0 mg/Kg.
Los objetivos de este ensayo son determinar si i. la administración de AcM 10D1 causa activación de las células T no específicas, ii. establecer un perfil de seguridad/tolerancia del AcM 10D1 en estos pacientes y, iii. determinar el perfil farmacocinético del AcM 10D1 y valorar el desarrollo de una respuesta inmunitaria del huésped para el AcM 10D1. Además, el estudio tratará de identificar la evidencia preliminar de la eficacia. El estudio es un estudio multicéntrico, abierto de una dosis única de AcM 10D1 en 14 sujetos. El estudio consiste en cuatro fases: selección, infusión, post-infusion, y seguimiento (véase la tabla 10 a continuación).
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(Tabla pasa a página siguiente)
16
Se están seleccionando los pacientes con diagnóstico histológico de adenocarcinoma primario de la próstata y carcinoma metastásico progresivo de la próstata tras la privación de andrógenos y al menos una manipulación no hormonal sistémica, para su participación en este estudio. Los sujetos deben tener una enfermedad medible progresiva, PSA progresiva, PSA > 5 ng/ml, testosterona <50 ng/dl, supresión de andrógenos de gónada primaria, esperanza de vida > 12 semanas y estado de la actuación de Karnofsky \geq al 60%.
Los sujetos se someten a un examen físico, ECG, radiografía de pecho, formación de imágenes de diagnóstico y toma de muestra de sangre para valoración hematológica, bioquímica y de función inmunitaria y se les monitorizan los signos vitales. Se utilizan entrevistas telefónicas mensuales para recoger y registrar la información en un subconjunto de acontecimientos adversos, incluyendo acontecimientos adversos autoinmunitarios, tras la progresión de la enfermedad, hasta seis meses después del tratamiento. Se monitorizan PSA (declive, duración del declive, progresión, tiempo de progresión) y respuesta de la enfermedad (completa, parcial, estable, progresiva). Se evalúan las concentraciones de AcM 10D1 en plasma inmediatamente antes de, durante y hasta dos meses después de la infusión.
En la tabla 11 se muestran los datos de cuatro sujetos con cáncer de próstata que se han tratado. No se han registrado acontecimientos adversos. Para todos los sujetos tratados, parece que AcM 10D1 se tolera bien.
Debido a la importancia de monitorizar el estado inmunológico de los pacientes en el ensayo y el objetivo específico de monitorizar los efectos generales sobre la activación de las células T mediante el anticuerpo anti-CTLA-4, los criterios de entrada en este estudio incluyen niveles mínimos de células T CD4 y CD8 de \geq 500/ml y \geq 500/ml respectivamente. Sin embargo, se observó durante el reclutamiento inicial en el estudio que los pacientes con cáncer de próstata tienen un número de células T significativamente reducido aunque las células T para CD4 y CD8 están claramente presentes. Inicialmente se rechazaron muchos pacientes basándose en los criterios anteriores (véase la tabla 11). Las cuentas de células T aparentemente reducidas observadas son una observación no documentada previamente en pacientes con cáncer de próstata que puede tener relevancia en los tratamientos que implican vacunación contra el cáncer en estos pacientes. Posteriormente a estas observaciones, se corrigieron los criterios de entrada para incluir a pacientes que tienen cuentas de CD4 y CD8 de \geq 300/ml y \geq 200/ml respectivamente.
Con el fin de evaluar si la administración de AcM 10D1 puede inducir la activación indeseable de células T no específicas, se analizaron linfocitos de sangre periférica de sujetos con cáncer de próstata mediante citometría de flujo para cada uno de los siguientes marcadores: CD4, CD8, CD25, CD44, CD69 y HLA-DR. Se tomaron las muestras de sangre en los puntos de tiempo indicados en la tabla 10. No se observó ningún cambio significativo en la frecuencia de estos marcadores durante el curso del tratamiento para cada uno de los sujetos con cáncer de próstata tratados hasta ahora. En la tabla 12 se muestra un ejemplo de este análisis, que muestra la frecuencia de células positivas con CD4, CD25, CD69 y células positivas con CD8, CD25, CD69 a tiempos anteriores a, durante y posteriores a la administración de AcM 10D1 en dos de los sujetos. Estos datos demuestran que la administración de AcM 10D1 no da como resultado la activación de células T no específicas.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 12 Análisis citométrico de flujo de marcadores de activación de células T en sujetos tratados con 3,0 mg/Kg de AcM 10D1
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También se ha iniciado un segundo ensayo clínico (MDXCTLA4-02) usando AcM 10D1 en sujetos con melanoma maligno en estado IV. Se administrará una dosis única de AcM 10D1 por vía intravenosa, como una infusión, a una dosificación de 3,0 mg/Kg. Este estudio también está constituido por cuatro fases (selección, infusión, post-infusión y seguimiento) tal como se describió en la tabla 9, anteriormente.
Los objetivos de este estudio son como los que se refieren en el estudio anteriormente descrito de los cánceres de próstata, así como establecer específicamente un perfil de seguridad/tolerancia para AcM 10D1 en pacientes con melanoma maligno en estado IV. Se ha tratado un paciente en este estudio (véase la tabla 13). Como en el estudio del cáncer de próstata, parece que AcM 10D1 se tolera bien. El análisis citométrico de flujo de marcadores de activación de células T en este sujeto, análogo al realizado para el ensayo de tumor prostático, tampoco mostró ninguna evidencia de activación de células T no específicas.
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20
21 
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30 
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<110> MEDAREX, INC.
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<120> Anticuerpos frente a CTLA-4 humanos y sus usos
\vskip0.400000\baselineskip
<130> P033834EP
\vskip0.400000\baselineskip
<140> EP 00959399.7
\vskip0.400000\baselineskip
<141> 24-08-2000
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/150.452
\vskip0.400000\baselineskip
<151> 24-08-1999
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 42
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3159
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
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<223> Descripción de secuencia artificial: vector de clonación pGP1k
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<400> 1
31
310 
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<210> 2
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<211> 349
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<212> ADN
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia preliminar para fragmento de cadena pesada 10D1.3
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
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32 
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<210> 3
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<211> 321
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<212> ADN
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia preliminar para fragmento de cadena ligera 10D1.3
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
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33 
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<210> 4
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<211> 287
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<212> ADN
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<213> Homo sapiens 
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia de línea germinal Vk A-27
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<400> 4
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34 
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<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 95
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena ligera para línea germinal Vk A-27
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
35 
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<210> 6
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<211> 325
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<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> región variable de cadena ligera (Vk), 10D1 de Vk A-27
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<400> 6
36 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
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<211> 108
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena ligera para 10D1 de Vk A-27
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
37 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 325
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> región variable de cadena ligera (Vk) 4B6 de Vk A-27
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
38 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 108
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena ligera para 4B6 de Vk A-27
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
39 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
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<211> 287
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia de línea germinal Vk L-15
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<400> 10
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41 
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<210> 11
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<211> 94
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena ligera para línea germinal Vk L-15
\newpage
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<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
42 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 322
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<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> región variable de cadena ligera Vk 1E2 de Vk L-15
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
43 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 107
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena ligera 1E2 de Vk L-15
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
44 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 294
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia de línea germinal VH 3-30.3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
45 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 98
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena pesada para línea germinal VH 3-30.3
\newpage
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<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
46 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 355
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> región variable de cadena pesada VH 10D1 de VH 3-30.3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
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47 
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<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 118
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena pesada para 10D1 de VH 3-30.3
\newpage
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<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
48 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 355
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> región variable de cadena pesada VH 4B6 de VH 3-30.3
\vskip1.000000\baselineskip
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<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
49 
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<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 118
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena pesada para 4B6 de VH 3-30.3
\newpage
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<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
50 
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<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 296
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<212> ADN
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<213> Homo sapiens 
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia de línea germinal VH 3-33
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<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
51 
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<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 98
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena pesada para línea germinal VH 3-33
\newpage
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<400> 21
\vskip1.000000\baselineskip
52 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 358
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> región variable de cadena pesada VH 1E2 de VH 3-33
\vskip1.000000\baselineskip
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<400> 22
\vskip1.000000\baselineskip
53 
\vskip1.000000\baselineskip
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<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 119
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> secuencia prevista de región variable de cadena pesada para 1E2 de VH 3-33
\newpage
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<400> 23
\vskip1.000000\baselineskip
54 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR1 (AcMHu 10D1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR1 (AcMHu 4B6)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR1 (AcMHu 1E2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR1 (AcMHu 10D1, 4B6)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Tyr Thr Met His}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR1 (AcMHu 1E2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Tyr Gly Met His}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR2 (AcMHu 10D1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR2 (AcMHu 4B6)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR2 (AcMHu 1E2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR2 (AcMHu 10D1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys}
\sac{Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR2 (AcMHu 4B6)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 33
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys}
\sac{Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 34
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR2 (AcMHu 1E2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 34
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys}
\sac{Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR3 (AcMHu 10D1, 4B6)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 35
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena ligera CDR3 (AcMHu 1E2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 36
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 37
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR3 (AcMHu 10D1)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 37
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens 
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<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR3 (AcMHu 4B6)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 38
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 39
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 10
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens 
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cadena pesada CDR3 (AcMMu 1E2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 39
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\sa{Ala Pro Asn Tyr Ile Gly Ala Phe Asp Val}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 506
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de secuencia artificial: plásmido de cadena ligera kappa pCK7-96 (parcial)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 40
\vskip1.000000\baselineskip
55 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 41
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4723
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de secuencia artificial: plásmido de cadena pesada gamma1 pCG-96
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 41
56
57 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 42
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4694
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de secuencia artificial: plásmido de cadena pesada gamma4 pG4HE
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 42
58
59

Claims (82)

  1. \global\parskip0.950000\baselineskip
    1. Un anticuerpo humano terapéuticamente eficaz o parte de unión a antígeno del mismo que se une a CTLA4 sobre la superficie de células T humanas con una afinidad de unión de aproximadamente 10^{8} M^{-1} o superior, comprendiendo el anticuerpo:
    (a) una región variable de cadena pesada de un gen de VH 3-30.3 humano; y
    (b) una región variable de cadena ligera de un gen de VK A-27 humano.
  2. 2. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo puede unirse a CTLA4 humano con una afinidad de unión de aproximadamente 10^{9} M^{-1} o superior.
  3. 3. Anticuerpo según la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que el anticuerpo inhibe la unión de CTLA4 humano a R7-1 o B7-2.
  4. 4. Anticuerpo según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo reduce la unión de CTLA4 humano a B7-1 en al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, o al menos el 90%.
  5. 5. Anticuerpo según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo reduce la unión de CTLA4 humano a B7-2 en al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, o al menos el 90%.
  6. 6. Anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo no se une a CTLA4 de ratón.
  7. 7. Anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo puede unirse a CTLA4 de mono cynomolgus.
  8. 8. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene secuencias de región determinante de la complementariedad expuestas en SEQ ID NOs: 27, 32 y 37.
  9. 9. Anticuerpo según la reivindicación 8, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 17.
  10. 10. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera que tiene secuencias de región determinante de la complementariedad expuestas en SEQ ID NOs: 24, 29 y 35.
  11. 11. Anticuerpo según la reivindicación 10, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 7.
  12. 12. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene secuencias de región determinante de la complementariedad expuestas en SEQ ID NOs: 27, 33 y 38.
  13. 13. Anticuerpo según la reivindicación 12, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 19.
  14. 14. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera que tiene secuencias de región determinante de la complementariedad expuestas en SEQ ID NOs: 25, 30 y 35.
  15. 15. Anticuerpo según la reivindicación 14, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 9.
  16. 16. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 que comprende:
    (a) una secuencia de aminoácidos variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 19; y
    (b) una secuencia de aminoácidos variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 9.
  17. 17. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 que comprende:
    (a) una secuencia de aminoácidos variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 17; y
    \global\parskip1.000000\baselineskip
    (b) una secuencia de aminoácidos variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 7.
  18. 18. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la cadena pesada de anticuerpo es IgG.
  19. 19. Anticuerpo según la reivindicación 18 en el que la cadena pesada de anticuerpo es IgG_{1}, IgG_{2}, IgG_{3}, o IgG_{4}.
  20. 20. Anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1-17 en el que la cadena pesada de anticuerpo es IgM.
  21. 21. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo no provoca la activación de células T no específicas.
  22. 22. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo disminuye el tamaño del tumor o ralentiza el crecimiento del tumor.
  23. 23. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo no tiene reacción cruzada con el tejido humano no linfoide.
  24. 24. Un ácido nucleico aislado que codifica el dominio variable de cadena ligera o cadena pesada de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23.
  25. 25. Ácido nucleico aislado según la reivindicación 24, en el que dicho ácido nucleico comprende la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 6 ó 8.
  26. 26. Ácido nucleico aislado según la reivindicación 24, en el que dicho ácido nucleico comprende la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 16 ó 18.
  27. 27. Un vector que comprende el ácido nucleico según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26.
  28. 28. Vector según la reivindicación 27, en el que dicho vector es un plásmido.
  29. 29. Vector según la reivindicación 27, en el que dicho vector es un vector viral.
  30. 30. Una célula huésped recombinante aislada transformada con un vector según la reivindicación 27, la reivindicación 28 o la reivindicación 29.
  31. 31. Una línea celular o célula aislada que puede producir un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23.
  32. 32. Línea celular o célula aislada según la reivindicación 31, en la que dicha línea celular o célula se transforma con un vector según la reivindicación 27, 28 ó 29.
  33. 33. Una composición farmacéutica que comprende:
    (a) un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 en una cantidad eficaz para inducir, aumentar o prolongar la respuesta inmunitaria frente al antígeno; y
    (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.
  34. 34. Composición farmacéutica según la reivindicación 33, en la que el antígeno es:
    (a) un antígeno tumoral, o
    (b) un antígeno de un patógeno.
  35. 35. Composición farmacéutica según la reivindicación 33, en la que el antígeno es un antígeno de un patógeno seleccionado del grupo constituido por un virus, una bacteria, un hongo o un parásito.
  36. 36. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 33-35 que además comprende un antígeno o agente quimioterapéutico.
  37. 37. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 33-35, en la que el antígeno y/o antígeno adicional se deriva de un virus seleccionado del grupo constituido por: VIH, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, virus del herpes, adenovirus, virus influenza, flavivirus, echovirus, rinovirus, virus de coxsackie, coronavirus, virus sincitial respiratorio, virus de las paperas, rotavirus, virus del sarampión, virus de la rubeola, parvovirus, virus vaccinia, virus HTLV, virus del dengue, virus del papiloma, virus del molusco, poliovirus, virus de la rabia, virus JC y virus de la encefalitis arboviral.
  38. 38. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 33-35, en la que el antígeno y/o antígeno adicional se deriva de una bacteria seleccionada del grupo constituido por: clamidias, bacterias rickettsiales, micobacterias, estafilococos, estreptococos, neumococos, meningococos y conococos, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, legionela, difteria, salmonela, bacilos, cólera, tétanos, botulismo, anthrax, plaga, leptospirosis, y de la enfermedad de Lymes.
  39. 39. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 33-35, en la que el antígeno y/o antígeno adicional se deriva de un hongo seleccionado del grupo constituido por: Candida, Cryptococcus neoformans, Aspergillus, Genus Mucorales, Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis y Histoplasma capsulatum.
  40. 40. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 33-35, en la que el antígeno y/o antígeno adicional se deriva de un parásito seleccionado del grupo constituido por: Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleria fowleri, Acanthamoeba, Giardia lambia, Cryptosporidium, Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondi, y Nippostrongylus brasiliensis.
  41. 41. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 33-35, en la que el antígeno y/o antígeno adicional es un antígeno tumoral.
  42. 42. Composición farmacéutica según la reivindicación 41, en la que dicho antígeno tumoral es de un tumor seleccionado del grupo constituido por: un tumor de cáncer de próstata, un tumor de melanoma, y un tumor epitelial.
  43. 43. Composición farmacéutica según la reivindicación 41, en la que el antígeno es gp100, MAGE, Trp-2, telomerasa o proteína de choque térmico (HSP).
  44. 44. Composición farmacéutica según la reivindicación 41, en la que el antígeno es péptido Ab de amiloide en un paciente que padece enfermedad de Alzheimer.
  45. 45. Composición farmacéutica según la reivindicación 41, que además comprende una preparación de células completas.
  46. 46. Composición farmacéutica según la reivindicación 41, en la que las células de la preparación de células completas es una preparación de células tumorales completas.
  47. 47. Composición farmacéutica según las reivindicaciones 45 ó 46, en la que las células de la preparación de células completas expresan GM-CSF, GCSF, IL-2, IL-1 o IL-6.
  48. 48. Uso del anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 para la fabricación de un medicamento para inducir, aumentar o prolongar, en un individuo, una respuesta inmunitaria frente a un antígeno.
  49. 49. Uso según la reivindicación 48, en el que el antígeno es:
    (a) un antígeno tumoral, o
    (b) un antígeno de un patógeno.
  50. 50. Uso según la reivindicación 49, en el que el antígeno es un antígeno de un patógeno, siendo dicho patógeno un virus, una bacteria, un hongo o un parásito.
  51. 51. Uso según la reivindicación 50, en el que el patógeno es VIH.
  52. 52. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 48-51, en el que el antígeno del medicamento se usa en dicho medicamento con el anticuerpo.
  53. 53. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 48-51, en el que se usa un agente quimioterapéutico en dicho medicamento con el anticuerpo.
  54. 54. Uso según la reivindicación 49, en el que el antígeno tumoral es un antígeno de tumor de próstata, un antígeno de melanoma, o un antígeno de cáncer epitelial.
  55. 55. Un procedimiento para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 con un vehículo farmacéuticamente aceptable en condiciones estériles.
  56. 56. Procedimiento según la reivindicación 55, en el que el vehículo es un disolvente o medio de dispersión.
  57. 57. Procedimiento según la reivindicación 56, en el que la composición es una disolución.
  58. 58. Procedimiento según la reivindicación 55, que comprende además incorporar un tensioactivo en la composición.
  59. 59. Procedimiento según la reivindicación 55, que comprende además esterilizar la composición.
  60. 60. Procedimiento según la reivindicación 59, en el que la composición se esteriliza mediante microfiltración.
  61. 61. Procedimiento según la reivindicación 55, que comprende además incorporar agentes antibacterianos y/o antifúngicos en la composición.
  62. 62. Procedimiento según la reivindicación 61, en el que los agentes antibacterianos y/o antifúngicos se seleccionan del grupo constituido por parabeno, clorobutanol, y ácido fenolsórbico.
  63. 63. Procedimiento según la reivindicación 55, en el que el vehículo se selecciona del grupo constituido por agua, etanol, poliol, y mezclas adecuadas de los mismos.
  64. 64. Procedimiento según la reivindicación 63, en el que el poliol se selecciona del grupo constituido por glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido, y mezclas adecuadas de los mismos.
  65. 65. Procedimiento según la reivindicación 57, en el que la disolución es sustancialmente isotónica.
  66. 66. Procedimiento según la reivindicación 56, que comprende además incorporar un agente isotónico.
  67. 67. Procedimiento según la reivindicación 66, en el que el agente isotónico se selecciona del grupo constituido por azúcar, un polialcohol, y cloruro de sodio.
  68. 68. Procedimiento según la reivindicación 67, en el que el polialcohol es manitol o sorbitol.
  69. 69. Procedimiento según la reivindicación 55, que comprende además formular la composición para dar una forma farmacéutica farmacéuticamente aceptable.
  70. 70. Procedimiento según la reivindicación 69, en el que la forma de dosificación es una forma de dosificación unitaria.
  71. 71. Procedimiento según la reivindicación 55, en el que el anticuerpo anti-CTLA-4 está presente en una dosificación de aproximadamente 0,0001 a 100 mg/kg.
  72. 72. Procedimiento según la reivindicación 71, en el que la dosificación es de 0,01 mg/kg a 5 mg/kg.
  73. 73. Procedimiento según la reivindicación 71, en el que la dosificación es de 1 mg/kg a 10 mg/kg.
  74. 74. Procedimiento según la reivindicación 55, en el que la composición es una disolución inyectable.
  75. 75. Procedimiento según la reivindicación 55, en el que la composición es una disolución para administración intravenosa.
  76. 76. Procedimiento según la reivindicación 56, que comprende además secar la composición para producir polvos.
  77. 77. Procedimiento según la reivindicación 76, que comprende secar a vacío o liofilizar la disolución.
  78. 78. Procedimiento según la reivindicación 76, que comprende además incorporar un agente que retrasa la absorción.
  79. 79. Procedimiento según la reivindicación 78, en el que el agente es una sal de monoestearato o gelatina.
  80. 80. Procedimiento según la reivindicación 79, en el que la sal de monoestearato es monoestearato de aluminio.
  81. 81. Procedimiento según la reivindicación 55, que comprende preparar un anticuerpo anti-CTLA-4 cultivando una célula huésped según una cualquiera de las reivindicaciones 30, 31 ó 32.
  82. 82. Procedimiento según la reivindicación 81, en el que las células huésped son células huésped de mamíferos.
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Families Citing this family (948)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
AU774962B2 (en) * 1998-12-03 2004-07-15 Regents Of The University Of California, The Stimulation of T cells against self antigens using CTLA-4 blocking agents
NZ512553A (en) * 1998-12-23 2004-02-27 Pfizer Human monoclonal antibodies to cytotoxic T lymphocyte antigen 4 (CTLA-4)
US6682736B1 (en) 1998-12-23 2004-01-27 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
US7109003B2 (en) 1998-12-23 2006-09-19 Abgenix, Inc. Methods for expressing and recovering human monoclonal antibodies to CTLA-4
KR100942863B1 (ko) * 1999-08-24 2010-02-17 메다렉스, 인코포레이티드 인간 씨티엘에이-4 항체 및 그의 용도
US7605238B2 (en) * 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP1261376A1 (en) * 2000-01-27 2002-12-04 Genetics Institute, LLC Antibodies against ctla4(cd152), conjugates comprising same, and uses thereof
US7323311B2 (en) * 2000-03-03 2008-01-29 Cambridge Antibody Technology Limited Methods of obtaining a specific binding member that binds eotaxin
US6946546B2 (en) 2000-03-06 2005-09-20 Cambridge Antibody Technology Limited Human antibodies against eotaxin
ES2549767T3 (es) 2000-05-26 2015-11-02 Immunex Corporation Uso de anticuerpos de interleuquina-4 y composiciones de los mismos
US7981420B2 (en) 2000-12-22 2011-07-19 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foederung Der Wissenschaften E.V. Therapeutic use of antibodies directed against repulsive guidance molecule (RGM)
WO2002079447A2 (en) 2001-03-30 2002-10-10 Avigenics, Inc. Avian lysozyme promoter
US7541512B2 (en) 2001-03-30 2009-06-02 Synageva Biopharma Corp. Avians containing a lysozyme promoter transgene
IL149701A0 (en) * 2001-05-23 2002-11-10 Pfizer Prod Inc Use of anti-ctla-4 antibodies
AR038568A1 (es) * 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
NZ536420A (en) * 2002-04-12 2008-04-30 Medarex Inc Methods of treatment using CTLA-4 antibodies
JP2005533015A (ja) * 2002-05-02 2005-11-04 ユニバーシティー オブ コネティカット ヘルス センター 抗体療法の有効性を増強するための熱ショックタンパク質の使用
DK2298278T3 (en) 2002-06-07 2016-02-01 Dyax Corp Prevention and reduction of blood loss and inflammatory response
US7153829B2 (en) 2002-06-07 2006-12-26 Dyax Corp. Kallikrein-inhibitor therapies
DE10161767T1 (de) 2002-07-03 2018-06-07 Honjo Tasuku Immunopotenzierende Zusammensetzungen, die einen Anti-PD-L1 Antikörper enthalten
CA2496789C (en) 2002-08-28 2013-12-17 Dyax Corp. Methods for preserving organs and tissues
US20060134109A1 (en) * 2002-09-09 2006-06-22 Nura Inc. G protein coupled receptors and uses thereof
US20080260744A1 (en) 2002-09-09 2008-10-23 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
WO2004029629A1 (en) * 2002-09-27 2004-04-08 Janssen Pharmaceutica N.V. N-11 truncated amyloid-beta nomoclonal antibodies, compositions, methods and uses
EP1549678A4 (en) * 2002-09-30 2006-01-18 Pfizer Prod Inc HYBRIDOMAS THAT PRODUCE HIGH CONCENTRATIONS OF ANTIBODIES TO THE HUMAN SEQUENCE
KR100944575B1 (ko) 2002-10-17 2010-02-25 젠맵 에이/에스 Ｃｄ20에 대한 인간 모노클로날 항체
JP4739763B2 (ja) 2002-12-16 2011-08-03 ゲンマブ エー／エス インターロイキン８（ｉｌ−８）に対するヒトモノクローナル抗体
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
ES2340280T3 (es) 2003-03-14 2010-06-01 Wyeth Llc Anticuerpos dirigidos contra el receptor de il-21 humano y uso de los mismos.
ATE549359T1 (de) 2003-04-02 2012-03-15 Hoffmann La Roche Antikörper gegen den insulinähnlichen wachstumsfaktor i-rezeptor und deren verwendungen
CN100409897C (zh) 2003-04-23 2008-08-13 梅达雷克斯公司 1型干扰素拮抗剂在制备治疗患有炎症性肠病的患者的药物中的用途
US7465446B2 (en) 2003-05-30 2008-12-16 Medarex, Inc. Surrogate therapeutic endpoint for anti-CTLA4-based immunotherapy of disease
EP1638514A4 (en) * 2003-06-06 2009-11-18 Medimmune Inc USE OF EPHA4 AND MODULATOR OR EPHA4 FOR THE DIAGNOSIS, TREATMENT AND PREVENTION OF CANCER
US7579157B2 (en) 2003-07-10 2009-08-25 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody selection method against IGF-IR
AR045563A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
US8101720B2 (en) * 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
EP1531162A1 (en) * 2003-11-14 2005-05-18 Heinz Vollmers Adenocarcinoma specific antibody SAM-6, and uses thereof
EP1533617A1 (en) 2003-11-19 2005-05-25 RMF Dictagene S.A. Angiogenesis inhibiting molecules, their selection, production and their use in the treatment and diagnosis of cancer
US7642341B2 (en) 2003-12-18 2010-01-05 Merck Serono S.A. Angiogenesis inhibiting molecules, their selection, production and their use in the treatment of cancer
CN102838675B (zh) 2003-12-10 2014-07-30 梅达雷克斯有限责任公司 Ip-10抗体及其用途
DK1711207T3 (da) 2003-12-10 2013-03-11 Medarex Inc Interferon-alpha-antistoffer og anvendelse heraf
DK1766093T3 (da) 2004-02-06 2011-10-03 Univ Massachusetts Antistoffer mod clostridium difficile-toksiner og anvendelse deraf
EP1732600A2 (en) * 2004-03-26 2006-12-20 Pfizer Products Incorporated Uses of anti-ctla-4 antibodies
DK1737891T3 (da) 2004-04-13 2013-03-25 Hoffmann La Roche Anti-p-selectin-antistoffer
AU2005258336A1 (en) 2004-06-03 2006-01-05 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to Fc gamma receptor I (CD64)
US7494779B2 (en) 2004-06-14 2009-02-24 Li-Te Chin Method for producing human antibodies to human CD152 with properties of agonist, antagonist, or inverse agonist
CA2570563A1 (en) * 2004-06-15 2006-09-28 Centocor, Inc. Method for screening agents against human prostate disease
ES2526194T3 (es) 2004-06-21 2015-01-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos del receptor 1 de interferón alfa, y sus usos
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US7235530B2 (en) 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
WO2006056464A2 (en) 2004-11-26 2006-06-01 Pieris Ag Compound with affinity for the cytotoxic t lymphocyte-associated antigen (ctla-4)
AU2005313020A1 (en) * 2004-12-09 2006-06-15 Neuro Therapeutics Ab Materials and methods related to Dickkopfs (DKK) and Neurogenesis
CN101155832B (zh) 2005-02-08 2013-02-06 一般财团法人化学及血清疗法研究所 抗体的改良方法
AU2012200203B2 (en) * 2005-03-08 2014-07-03 Pfizer Products Inc. Anti-CTLA-4 Antibody Compositions
WO2006096488A2 (en) * 2005-03-08 2006-09-14 Pharmacia & Upjohn Company Llc Composition comprising human igg2 antibody and chelating agent
AU2014240252B2 (en) * 2005-03-08 2016-10-06 Pfizer Products Inc Anti-CTLA-4 Antibody Compositions
RS59399B1 (sr) 2005-03-23 2019-11-29 Genmab As Antitela protiv cd38 za lečenje multiplog mijeloma
AU2006227879A1 (en) * 2005-03-23 2006-09-28 Pfizer Products Inc. Therapy of prostate cancer with CTLA4 antibodies and hormonal therapy
US20060240006A1 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Chishih Chu Novel antibody structures derived from human germline sequences
DE102005019845A1 (de) * 2005-04-28 2006-11-02 Li-Te Chin Neue aus humanen Keimbahnsequenzen gewonnene Antikörperstrukturen
AU2006244885B2 (en) 2005-05-09 2011-03-31 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SI1907000T2 (sl) 2005-06-08 2020-07-31 Dana-Farber Cancer Institute Postopki in sestavki za zdravljenje persistentne HIV infekcije z inhibicijo programiranih celični smrtnih 1 (PD-1) poti
HUE026039T2 (en) 2005-07-01 2016-05-30 Squibb & Sons Llc Human monoclonal antibodies programmed for death ligand 1 (PD-L1)
BRPI0612408A2 (pt) * 2005-07-07 2010-11-03 Pfizer terapia para tratamento de cáncer em combinação com anticorpo anti-ctla-4 e oligodesoxinucleotìdeo sintético contendo o motivo cpg
CN100443503C (zh) * 2005-07-18 2008-12-17 四川大学华西医院 人源化ctla-4单链抗体与人穿孔素通道形成肽p34的重组免疫毒素
EP2397496A3 (en) 2005-07-18 2013-05-29 Amgen, Inc Human anti-B7RP1 neutralizing antibodies
NL1029605C2 (nl) * 2005-07-25 2007-01-26 Li-Te Chin Nieuwe uit menselijke kiemlijnsequenties gewonnen antilichaamstructuren.
AU2006277785B2 (en) * 2005-08-11 2012-07-12 Matossian-Rogers Arpi TCR-V-beta related peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease
CA2623236A1 (en) 2005-09-26 2007-04-05 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to cd70
US7700567B2 (en) 2005-09-29 2010-04-20 Supergen, Inc. Oligonucleotide analogues incorporating 5-aza-cytosine therein
CA2624562A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (rgm) protein family and functional fragments thereof, and their use
RU2421464C2 (ru) 2005-10-21 2011-06-20 Новартис Аг Человеческие антитела к il-13 и их терапевтическое применение
CA2626859A1 (en) * 2005-11-08 2007-05-18 Medarex, Inc. Tnf-alpha blocker treatment for enterocolitis associated with immunostimulatory therapeutic antibody therapy
KR20180058863A (ko) 2005-11-30 2018-06-01 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
US8691224B2 (en) 2005-11-30 2014-04-08 Abbvie Inc. Anti-Aβ globulomer 5F7 antibodies
CA2630157C (en) 2005-12-07 2018-01-09 Medarex, Inc. Ctla-4 antibody dosage escalation regimens
CA2638902C (en) 2005-12-08 2014-09-23 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to fucosyl-gm1 and methods for using anti-fucosyl-gm1 antibodies
US20090175886A1 (en) 2006-01-17 2009-07-09 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against cd30 lacking in fucosyl and xylosyl residues
JP6092497B2 (ja) 2006-03-30 2017-03-08 ユニバーシティー オブ カリフォルニア 抗ｃｔｌａ−４抗体の限局性分泌のための方法および組成物
US7919079B2 (en) * 2006-03-31 2011-04-05 Biosante Pharmaceuticals, Inc. Cancer immunotherapy compositions and methods of use
EP2003960B1 (en) 2006-03-31 2015-06-10 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
US9044461B2 (en) 2006-04-07 2015-06-02 The Research Foundation Of State University Of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
EP2010226B1 (en) * 2006-04-07 2014-01-15 The Research Foundation of State University of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
BRPI0709481A2 (pt) 2006-04-07 2011-07-19 Government Of The Us Secretary Dept Of Health And Human Services anticorpo monoclonal isolado, anticorpo monoclonal humano isolado, composição farmacêutica, anticorpo anti-igf-i e anti-igf-ii recombinante isolado ou fragmento de ligação ao antìgeno do mesmo, método para detectar o fator i e o fator ii de crescimento insulina humana em uma amostra, método para dectetar o fator i de crescimento insulina humana em uma amostra, ácido nucléico isolado, célula recombinante , célula hospedeira ,método para preparar um anticorpo, método para preparar um anticorpo, método para tratar uma doença neoplásica em um indivìduo mamìfero, método para diagnosticar doença neoplásica em um indivìduo mamìfero e método para classificar um composto candidato a fármaco
US7846724B2 (en) 2006-04-11 2010-12-07 Hoffmann-La Roche Inc. Method for selecting CHO cell for production of glycosylated antibodies
TW200817437A (en) 2006-08-11 2008-04-16 Medarex Inc Monoclonal antibodies against stromal cell derived factor-1 (SDF-1)
CN101627055A (zh) 2006-09-05 2010-01-13 梅达雷克斯公司 骨形成蛋白及其受体的抗体以及它们的使用方法
LT2081595T (lt) 2006-09-26 2019-07-10 Genmab A/S Anti-cd38 plius kortikosteroidai, plius nekortikosteroidinis chemoterapinis agentas, skirti vėžio gydymui
EP2068928A2 (en) 2006-09-28 2009-06-17 Merck Serono SA Junctional adhesion molecule-c (jam-c) binding compounds and methods of their use
SI2066351T1 (sl) 2006-10-02 2016-02-29 E.R. Squibb & Sons, L.L.C. Humana protitelesa, ki vežejo cxcr4 in njihova uporaba
US8613925B2 (en) 2006-10-19 2013-12-24 Csl Limited Anti-IL-13Rα1 antibodies and their uses thereof
US8618248B2 (en) 2006-10-31 2013-12-31 President And Fellows Of Harvard College Phosphopeptide compositions and anti-phosphopeptide antibody compositions and methods of detecting phosphorylated peptides
EA200970477A1 (ru) 2006-11-15 2009-12-30 Медарекс, Инк. Человеческие моноклональные антитела к btla и способы применения
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
KR20150067395A (ko) 2006-12-01 2015-06-17 메다렉스, 엘.엘.시. 씨디22에 결합하는 인간 항체 및 이의 용도
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
NZ578354A (en) 2006-12-14 2012-01-12 Medarex Inc Antibody-partner molecule conjugates that bind cd70 and uses thereof
KR101598229B1 (ko) 2007-02-16 2016-02-26 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. Ｅｒｂｂ3에 대한 항체 및 이의 용도
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
WO2008109075A2 (en) * 2007-03-05 2008-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to ctla-4 antagonists
US9212230B2 (en) 2007-03-29 2015-12-15 Genmab A/S Bispecific antibodies and methods for production thereof
FI20075278A0 (fi) 2007-04-20 2007-04-20 Biotie Therapies Corp Uudet täysin ihmisperäiset anti-VAP-1 monoklonaaliset vasta-aineet
AU2008255352B2 (en) 2007-05-31 2014-05-22 Genmab A/S Stable IgG4 antibodies
EP3255144A1 (en) 2007-08-10 2017-12-13 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Recombineering construct for preparing transgenic mice capable of producing human immunoglobulin
WO2009026274A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 Medarex, Inc. Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions
JP6035009B2 (ja) 2007-08-22 2016-11-30 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 活性化可能な結合ポリペプチドおよびその同定方法ならびに使用
PT2769729T (pt) 2007-09-04 2019-05-08 Compugen Ltd Polipéptidos e polinucleótidos, e utilizações dos mesmos como um alvo de fármacos para produzir fármacos e agentes biológicos
EP2033971A1 (de) * 2007-09-06 2009-03-11 Abbott GmbH & Co. KG Bone Morphogenetic Protein (BMP)-bindende Domänen von Proteinen der Repulsive Guidance Molecule (RGM) Proteinfamilie und funktionale Fragmente davon sowie deren Verwendung
AR068767A1 (es) 2007-10-12 2009-12-02 Novartis Ag Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina
PL2567709T3 (pl) 2007-11-02 2018-06-29 Novartis Ag Cząsteczki i sposoby modulowania białka związanego z receptorem dla lipoproteiny o niskiej gęstości 6 (LRP6)
CA3102704A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Novo Nordisk A/S Antibodies against human nkg2d and uses thereof
EP2227296B1 (en) * 2008-01-08 2015-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-ctla4 antibody with tubulin modulating agents for the treatment of proliferative diseases
WO2009100140A1 (en) * 2008-02-04 2009-08-13 Medarex, Inc. Anti-clta-4 antibodies with reduced blocking of binding of ctla-4 to b7 and uses thereof
EP2650017A3 (en) 2008-02-05 2014-01-22 Bristol-Myers Squibb Company Alpha 5 - beta 1 antibodies and their uses
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
AU2009255357A1 (en) * 2008-05-29 2009-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Methods for predicting patient response to modulation of the co-stimulatory pathway
US8119129B2 (en) 2008-08-01 2012-02-21 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-CTLA4 antibody with dasatinib for the treatment of proliferative diseases
SG10201405377XA (en) 2008-08-05 2014-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c5
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
WO2010042433A1 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Bristol-Myers Squibb Company Combination of cd137 antibody and ctla-4 antibody for the treatment of proliferative diseases
AU2009319701B2 (en) * 2008-11-28 2014-10-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for the treatment of infections and tumors
CA3053156A1 (en) 2008-12-03 2010-06-10 Genmab A/S Antibody variants having modifications in the constant region
CA2745492A1 (en) 2008-12-08 2010-06-17 Compugen Ltd. A polyclonal or monoclonal antibody or antibody binding fragment that binds to a tmem154 polypeptide
UA109633C2 (uk) 2008-12-09 2015-09-25 Антитіло людини проти тканинного фактора
AU2010203712A1 (en) 2009-01-06 2010-07-15 Dyax Corp. Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors
JP5851842B2 (ja) 2009-01-12 2016-02-03 サイトムエックス セラピューティクス, インク.CytomX Therapeutics, Inc. 改変した抗体組成物、それを作製および使用する方法
EP2387627B1 (en) * 2009-01-15 2016-03-30 Adaptive Biotechnologies Corporation Adaptive immunity profiling and methods for generation of monoclonal antibodies
WO2010096838A2 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Cytomx Therapeutics, Llc Proproteins and methods of use thereof
GB0903325D0 (en) 2009-02-26 2009-04-08 Univ Aberdeen Antibody molecules
PT2403878T (pt) 2009-03-05 2017-09-01 Squibb & Sons Llc Anticorpos completamente humanos específicos a cadm1
KR20120057563A (ko) 2009-03-31 2012-06-05 노파르티스 아게 Ｉｌ-１２ 수용체 베타ｌ 서부유닛에 대해 특이적인 치료용 항체를 사용하는 조성물 및 방법
AU2010235238B2 (en) 2009-04-08 2015-01-29 Lipum Ab New methods for treatment of inflammatory diseases
WO2010124113A1 (en) 2009-04-23 2010-10-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Anti-fatty acid amide hydrolase-2 antibodies and uses thereof
HUE035240T2 (hu) 2009-04-27 2018-05-02 Novartis Ag Készítmények és eljárások az izomerõ növelésére
EP2445925A1 (en) 2009-06-25 2012-05-02 Bristol-Myers Squibb Company Protein purification by caprylic acid (octanoic acid) precipitation
JP5589077B2 (ja) 2009-07-20 2014-09-10 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 増殖性疾患の相乗的処置のための抗ｃｔｌａ４抗体と多様な治療レジメンとの組み合わせ
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
WO2011021146A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Pfizer Inc. Osteopontin antibodies
US20120178910A1 (en) 2009-09-23 2012-07-12 Medarex, Inc. Cation exchange chromatography (methods)
US8709417B2 (en) * 2009-09-30 2014-04-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Combination immunotherapy for the treatment of cancer
AU2010308030B2 (en) 2009-10-12 2014-05-29 Pfizer Inc. Cancer treatment
KR101436219B1 (ko) 2009-10-26 2014-09-01 에프. 호프만-라 로슈 아게 글리코실화된 면역글로불린의 제조 방법
EP3431608A3 (en) 2009-11-17 2019-02-20 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Method for enhanced protein production
US9428586B2 (en) 2009-12-01 2016-08-30 Compugen Ltd Heparanase splice variant
CA2780069C (en) 2009-12-08 2018-07-17 Abbott Gmbh & Co. Kg Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration
ES2688093T3 (es) 2010-01-06 2018-10-30 Dyax Corp. Proteínas de unión a calicreína plasmática
EP3511342B1 (en) 2010-03-10 2024-01-17 Genmab A/S Monoclonal antibodies against c-met
WO2011119773A1 (en) 2010-03-23 2011-09-29 Roeth Jeremiah F Vectors conditionally expressing therapeutic proteins, host cells comprising the vectors, and uses thereof
CA3079122A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Trustees Of Dartmouth College Vista regulatory t cell mediator protein, vista binding agents and use thereof
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US8987419B2 (en) 2010-04-15 2015-03-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Amyloid-beta binding proteins
WO2011140151A1 (en) 2010-05-04 2011-11-10 Dyax Corp. Antibodies against epidermal growth factor receptor (egfr)
CN103189073B (zh) 2010-05-04 2015-08-12 梅里麦克制药股份有限公司 抗表皮生长因子受体(egfr)的抗体及其用途
ES2659406T3 (es) 2010-05-06 2018-03-15 Novartis Ag Composiciones y procedimientos de uso para anticuerpos terapéuticos contra la proteína 6 relacionada con las lipoproteínas de baja densidad (LRP6)
AU2011249782B2 (en) 2010-05-06 2014-10-02 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein - related protein 6 (LRP6) multivalent antibodies
EP2571577A1 (en) 2010-05-17 2013-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Improved immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof
EP2576621B1 (en) 2010-05-27 2019-04-10 Genmab A/S Monoclonal antibodies against her2
JP6082344B2 (ja) 2010-05-27 2017-02-15 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２エピトープに対するモノクローナル抗体
EP3613774A1 (en) 2010-06-09 2020-02-26 Genmab A/S Antibodies against human cd38
RS56599B1 (sr) 2010-06-15 2018-02-28 Genmab As Konjugati humanog antitela sa lekom protiv tkivnog faktora
WO2011163401A2 (en) 2010-06-22 2011-12-29 Neogenix Oncology, Inc. Colon and pancreas cancer specific antigens and antibodies
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CN103298833B (zh) 2010-08-14 2015-12-16 Abbvie公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
CN103080134B (zh) 2010-08-20 2015-11-25 诺华股份有限公司 表皮生长因子受体3(her3)的抗体
EP2616100B1 (en) 2010-09-17 2016-08-31 Compugen Ltd. Compositions and methods for treatment of drug resistant multiple myeloma
EP2622091B1 (en) 2010-09-23 2019-03-13 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer peptidomimetics
CA2813466A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids that disrupt major groove binding partner interactions
EP2625203A1 (en) 2010-10-05 2013-08-14 Novartis AG Anti-il12rbeta1 antibodies and their use in treating autoimmune and inflammatory disorders
EP2643353A1 (en) 2010-11-24 2013-10-02 Novartis AG Multispecific molecules
US9221885B2 (en) 2010-12-02 2015-12-29 Pieris Ag Muteins of human lipocalin 2 with affinity for CTLA-4
KR101781546B1 (ko) 2010-12-14 2017-09-26 내셔널 유니버시티 오브 싱가포르 뎅기 바이러스 세로타입 1 e 프로틴에 특이적인 인간 단일클론 항체 및 그들의 용도
EP2661450A4 (en) 2011-01-06 2014-04-23 Dyax Corp PROTEINS BINDING TO PLASMA KALLIKREINE
WO2012118693A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Northshore University Healthsystem Methods of diagnosing clostridium difficile infection
GB201103955D0 (en) 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
WO2012136552A1 (en) 2011-04-08 2012-10-11 H. Lundbeck A/S ANTIBODIES SPECIFIC TO PYROGLUTAMATED Αβ
US9150644B2 (en) 2011-04-12 2015-10-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that bind insulin-like growth factor (IGF) I and II
EP2697256A1 (en) 2011-04-15 2014-02-19 Compugen Ltd. Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof for treatment of immune related disorders and cancer
CN103796678B (zh) 2011-04-20 2018-02-27 健玛保 针对her2的双特异性抗体
US20140170149A1 (en) 2011-04-20 2014-06-19 Genmab A/S Bispecific antibodies against her2 and cd3
JP6240063B2 (ja) 2011-04-28 2017-11-29 ザ ブロード インスティテュート， インコーポレイテッド ヒストンデアセチラーゼ阻害剤
MX347514B (es) 2011-05-25 2017-04-28 Innate Pharma Sa Anticuerpos anti-receptores tipo inmunoglobulina citoliticos (kir) para el tratamiento de trastornos inflamatorios.
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
US8691231B2 (en) 2011-06-03 2014-04-08 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Methods of treatment of tumors expressing predominantly high affinity EGFR ligands or tumors expressing predominantly low affinity EGFR ligands with monoclonal and oligoclonal anti-EGFR antibodies
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
AU2012277376B2 (en) 2011-06-30 2016-11-24 Compugen Ltd. Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection
SI2726099T1 (sl) 2011-07-01 2018-11-30 Novartis Ag Postopek za zdravljenje metaboličnih motenj
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
JP2014526886A (ja) 2011-07-15 2014-10-09 モルフォシス・アー・ゲー マクロファージ遊走阻止因子（ｍｉｆ）とｄ−ドーパクロームトートメラーゼ（ｄ−ｄｔ）に交差反応性がある抗体
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
BR112014004779B1 (pt) 2011-08-30 2022-01-18 Astex Pharmaceuticals, Inc Formulações de derivados de decitabina, kit e processos relacionados
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CN110511939A (zh) 2011-10-03 2019-11-29 现代泰克斯公司 修饰的核苷、核苷酸和核酸及其用途
RS53496B1 (en) * 2011-10-04 2015-02-27 Affiris Ag PROCEDURE FOR THE DETECTION OF Aβ-SPECIFIC ANTIBODIES IN A BIOLOGICAL SAMPLE
CN104080471B (zh) 2011-10-14 2018-08-10 诺华股份有限公司 用于Wnt途径相关疾病的抗体和方法
JP6243345B2 (ja) 2011-12-05 2017-12-06 ノバルティス アーゲー 上皮細胞増殖因子受容体３（ｈｅｒ３）に対する抗体
KR20140103135A (ko) 2011-12-05 2014-08-25 노파르티스 아게 Her3의 도메인 ii에 대해 지시된 표피 성장 인자 수용체 3 (her3)에 대한 항체
WO2013090635A2 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
WO2013090633A2 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
CN106831985A (zh) 2011-12-21 2017-06-13 诺华股份有限公司 用于抗体靶定p因子的组合物和方法
NZ625403A (en) 2012-01-27 2016-03-31 Abbvie Inc Composition and method for diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration
MX2014009289A (es) 2012-02-01 2015-09-08 Compugen Ltd Anticuerpos c1orf32 y usos de los mismos para el tratamiento del cancer.
DK2814829T3 (en) 2012-02-13 2017-03-20 Bristol Myers Squibb Co RELATIONSHIPS, CONJUGATES THEREOF AND USES AND RELATED PROCEDURES
ES2662128T3 (es) 2012-03-05 2018-04-05 Adaptive Biotechnologies Corporation Determinación de cadenas de receptor inmunitario emparejadas a partir de la frecuencia de subunidades coincidentes
US20150110779A1 (en) 2012-03-15 2015-04-23 Bristol-Myers Squibb Company Methods for predicting gastrointestinal immune-related adverse events (gi-irae) in patients treated with modulation of the co-stimulatory pathway
US20150079100A1 (en) 2012-03-23 2015-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treatments using ctla-4 antibodies
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
EP2833923A4 (en) 2012-04-02 2016-02-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
MX359257B (es) 2012-05-04 2018-09-19 Pfizer Antígenos asociados a próstata y regímenes de inmunoterapia basados en vacuna.
ES2582554T3 (es) 2012-05-08 2016-09-13 Adaptive Biotechnologies Corporation Composiciones y método para medir y calibrar el sesgo de la amplificación en reacciones de PCR multiplexadas
WO2013169971A1 (en) 2012-05-10 2013-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Anti-tumor antibodies as predictive or prognostic biomarkers of efficacy and survival in ipilimumab-treated patients
SG11201407190TA (en) 2012-05-15 2014-12-30 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
WO2013192504A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The Trustees Of Dartmouth College Novel vista-ig constructs and the use of vista-ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
WO2014006217A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
JP6337255B2 (ja) 2012-07-27 2018-06-06 ザ ブロード インスティテュート, インコーポレーテッドThe Broad Institute, Inc. ヒストンデアセチラーゼの阻害剤
US9382329B2 (en) * 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
EP3981791A1 (en) 2012-08-30 2022-04-13 Amgen Inc. A method for treating melanoma using a herpes simplex virus and an immune checkpoint inhibitor
JP6368308B2 (ja) 2012-09-07 2018-08-01 トラスティーズ・オブ・ダートマス・カレッジ 癌の診断および治療のためのｖｉｓｔａ調節剤
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
EP2911669B1 (en) 2012-10-26 2024-04-10 The University of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
SG11201502876RA (en) 2012-11-08 2015-06-29 Eleven Biotherapeutics Inc Il-6 antagonists and uses thereof
PT2922554T (pt) 2012-11-26 2022-06-28 Modernatx Inc Arn modificado nas porções terminais
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
CN116637183A (zh) 2012-12-03 2023-08-25 百时美施贵宝公司 强化免疫调变性Fc融合蛋白的抗癌活性
CN104968678B (zh) 2012-12-05 2018-12-11 诺华股份有限公司 靶向epo的抗体的组合物和方法
MX2015007931A (es) 2012-12-18 2015-10-05 Novartis Ag Composiciones y metodos que utilizan una etiqueta de peptido que se une a hialuronano.
EP2938633B1 (en) 2012-12-28 2018-02-07 Precision Biologics, Inc. Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
KR20200134340A (ko) 2013-01-10 2020-12-01 젠맵 비. 브이 인간 IgG1 Fc 영역 변이체 및 그의 용도
PL2953969T3 (pl) 2013-02-08 2020-02-28 Novartis Ag Przeciwciała anty-il-17a i ich zastosowanie w leczeniu zaburzeń autoimmunologicznych i zapalnych
WO2015198217A2 (en) 2013-02-08 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long-acting antibodies targeting il-17
LT2956173T (lt) 2013-02-14 2017-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Tubulizino junginiai, gavimo ir panaudojimo būdai
RU2019138702A (ru) 2013-03-01 2020-01-27 Астекс Фармасьютикалз, Инк. Комбинации лекарственных средств
US9458246B2 (en) 2013-03-13 2016-10-04 Amgen Inc. Proteins specific for BAFF and B7RP1
JOP20140087B1 (ar) 2013-03-13 2021-08-17 Amgen Inc بروتينات مخصصة ل baff و b7rp1 وإستخداماتها
EP2970479B1 (en) 2013-03-14 2019-04-24 Novartis AG Antibodies against notch 3
WO2014153150A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 Lee Delphine J Methods of predicting anti ctla-4 response and recurrence of cancer
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
RU2015147696A (ru) 2013-04-09 2017-05-12 Бостон Байомедикал, Инк. Способы лечения злокачественной опухоли
KR101472903B1 (ko) 2013-05-16 2014-12-16 (주)케어젠 T 세포 활성 억제 펩타이드 및 이의 용도
US10053510B2 (en) 2013-05-24 2018-08-21 Promis Neurosciences Inc. FasR antibodies and methods of use
ES2753419T3 (es) 2013-06-07 2020-04-08 Univ Duke Inhibidores del factor H del complemento
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
US9708657B2 (en) 2013-07-01 2017-07-18 Adaptive Biotechnologies Corp. Method for generating clonotype profiles using sequence tags
KR102457731B1 (ko) 2013-08-08 2022-10-21 싸이튠 파마 병용 약학 조성물
KR102564207B1 (ko) 2013-08-08 2023-08-10 싸이튠 파마 Ｉｌ―１５ 및 ｉｌ―１５ｒ 알파 스시 도메인 기반 모듈로카인
EA201690388A1 (ru) 2013-08-14 2016-07-29 Уильям Марш Райс Юниверсити Новые производные унциаламицина, способы их синтеза и их применение в качестве противоопухолевых агентов
TW201536318A (zh) 2013-08-14 2015-10-01 Novartis Ag 治療偶發性包涵體肌炎之方法
SG11201601763SA (en) 2013-09-20 2016-04-28 Bristol Myers Squibb Co Combination of anti-lag-3 antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat tumors
CA2925421C (en) 2013-09-24 2023-08-29 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
EP3757130A1 (en) 2013-09-26 2020-12-30 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US9968674B2 (en) 2013-10-18 2018-05-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising a combination of a VEGF Trap and an anti-CTLA-4 antibody
SG10201910889VA (en) 2013-11-01 2020-01-30 Pfizer Vectors for expression of prostate-associated antigens
WO2015069770A1 (en) 2013-11-05 2015-05-14 Cognate Bioservices, Inc. Combinations of checkpoint inhibitors and therapeutics to treat cancer
EP3066127A1 (en) 2013-11-06 2016-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
SI3712174T1 (sl) 2013-12-24 2022-06-30 Janssen Pharmaceutica Nv Protitelesa in delci proti VISTA
EP3094650A2 (en) 2014-01-13 2016-11-23 Pieris Pharmaceuticals GmbH Multi-specific polypeptide useful for localized tumor immunomodulation
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
WO2015134605A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and another anti-cancer agent
US10066265B2 (en) 2014-04-01 2018-09-04 Adaptive Biotechnologies Corp. Determining antigen-specific t-cells
US11390921B2 (en) 2014-04-01 2022-07-19 Adaptive Biotechnologies Corporation Determining WT-1 specific T cells and WT-1 specific T cell receptors (TCRs)
CN104974253A (zh) * 2014-04-01 2015-10-14 上海中信国健药业股份有限公司 抗ctla-4/pd-1双特异性抗体、其制备方法及应用
IL292311A (en) 2014-04-03 2022-06-01 Igm Biosciences Inc J-chain qualified
ES2777529T3 (es) 2014-04-17 2020-08-05 Adaptive Biotechnologies Corp Cuantificación de genomas de células inmunitarias adaptativas en una mezcla compleja de células
EP3134102B1 (en) 2014-04-24 2019-07-03 The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
TW201622746A (zh) 2014-04-24 2016-07-01 諾華公司 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法
MX2016014434A (es) 2014-05-13 2017-02-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno redirigida a celulas t para celulas que tienen funcion de inmunosupresion.
WO2015176033A1 (en) 2014-05-15 2015-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of lung cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and another anti-cancer agent
MA47849A (fr) 2014-05-28 2020-01-29 Agenus Inc Anticorps anti-gitr et leurs procédés d'utilisation
WO2015187835A2 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
WO2015191881A2 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Green Kathy A Use of vista agonists and antagonists to suppress or enhance humoral immunity
EP3160990A2 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Novartis AG Compositions and methods for long acting proteins
US20170327553A1 (en) 2014-06-25 2017-11-16 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
US10132818B2 (en) 2014-07-08 2018-11-20 New York University Tau imaging ligands and their uses in the diagnosis and treatment of tauopathy
AU2015289081B2 (en) 2014-07-16 2020-02-06 Transgene Sa Combination of oncolytic virus with immune checkpoint modulators
HUE045108T2 (hu) 2014-07-16 2019-12-30 Transgene Sa Onkolitikus vírus immunellenõrzõpont-modulátorok expresszálására
WO2016016442A1 (en) 2014-08-01 2016-02-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) An anti-cd45rc antibody for use as drug
CN105296433B (zh) 2014-08-01 2018-02-09 中山康方生物医药有限公司 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途
AU2015300006B2 (en) 2014-08-07 2018-08-30 Haruki Okamura Therapeutic agent for cancer which comprises combination of IL-18 and molecule-targeting antibody
JP6649358B2 (ja) 2014-08-07 2020-02-19 ノバルティス アーゲー アンジオポエチン様４抗体および使用法
US9988443B2 (en) 2014-08-07 2018-06-05 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (ANGPTL4) antibodies and methods of use
ES2743458T5 (es) * 2014-08-08 2023-06-08 Us Health Eliminación fotocontrolada de dianas in vitro e in vivo
WO2016025647A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
JP6800141B2 (ja) 2014-08-12 2020-12-16 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｉｌ−２およびインテグリン結合性ｆｃ融合タンパク質による相乗的な腫瘍処置
WO2016033555A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Halozyme, Inc. Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor
US11344620B2 (en) 2014-09-13 2022-05-31 Novartis Ag Combination therapies
PL3110447T3 (pl) 2014-09-16 2020-10-19 Synermore Biologics Co., Ltd. Przeciwciało anty-EGFR i jego zastosowania
WO2016057898A1 (en) 2014-10-10 2016-04-14 Idera Pharmaceuticals, Inc. Treatment of cancer using tlr9 agonist with checkpoint inhibitors
JP6625627B2 (ja) 2014-10-14 2019-12-25 ハロザイム インコーポレイテッド アデノシンデアミナーゼ−２（ａｄａ２）、その変異体の組成物およびそれを使用する方法
WO2016059220A1 (en) 2014-10-16 2016-04-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Tcr-activating agents for use in the treatment of t-all
US10392663B2 (en) 2014-10-29 2019-08-27 Adaptive Biotechnologies Corp. Highly-multiplexed simultaneous detection of nucleic acids encoding paired adaptive immune receptor heterodimers from a large number of samples
US10738078B2 (en) 2014-11-03 2020-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Use of caprylic acid precipitation for protein purification
WO2016073894A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Eleven Biotherapeutics, Inc. Therapeutic agents with increased ocular retention
PE20171107A1 (es) 2014-11-07 2017-08-07 Eleven Biotherapeutics Inc Anticuerpos mejorados contra il-6
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
US10246701B2 (en) 2014-11-14 2019-04-02 Adaptive Biotechnologies Corp. Multiplexed digital quantitation of rearranged lymphoid receptors in a complex mixture
CA2968382A1 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
MY189836A (en) 2014-11-21 2022-03-11 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against cd73 and uses thereof
DK3223845T3 (da) 2014-11-26 2021-08-16 Xencor Inc Heterodimere antistoffer, der binder cd3 og cd20
EP3227335A1 (en) 2014-12-04 2017-10-11 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-cs1 and anti-pd1 antibodies to treat cancer (myeloma)
AU2015357463B2 (en) 2014-12-05 2021-10-07 Immunext, Inc. Identification of VSIG8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/VSIG8 modulators
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EA201791382A1 (ru) 2014-12-18 2017-10-31 Эмджен Инк. Стабильная лекарственная форма замороженного вируса простого герпеса
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
KR102644115B1 (ko) 2014-12-23 2024-03-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tigit에 대한 항체
CN104479019B (zh) * 2014-12-26 2020-07-21 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 一种抗ctla-4人源抗体
PL3240801T3 (pl) 2014-12-31 2021-06-14 Checkmate Pharmaceuticals, Inc. Skojarzona immunoterapia nowotworów
ES2747386T3 (es) 2015-01-14 2020-03-10 Bristol Myers Squibb Co Dímeros de benzodiacepina unidos por heteroarileno, conjugados de los mismos y métodos de preparación y uso
MA41414A (fr) 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
EP3250588A1 (en) 2015-01-29 2017-12-06 Board of Trustees of Michigan State University Cryptic polypeptides and uses thereof
WO2016130986A1 (en) * 2015-02-13 2016-08-18 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind ctla4
ES2858306T3 (es) 2015-02-24 2021-09-30 Adaptive Biotechnologies Corp Método para determinar el estado de HLA mediante secuenciación del repertorio inmunitario
CA2978095C (en) 2015-03-13 2022-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Use of alkaline washes during chromatography to remove impurities
WO2016146143A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Amal Therapeutics Sa Cell penetrating peptides and complexes comprising the same
US10196445B1 (en) 2015-03-17 2019-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Ipilimumab variant with enhanced ADCC
US20180105555A1 (en) 2015-03-20 2018-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Use of dextran for protein purification
US20180105554A1 (en) 2015-03-20 2018-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Use of dextran sulfate to enhance protein a affinity chromatography
CN114907481A (zh) 2015-03-23 2022-08-16 震动疗法股份有限公司 Icos的抗体
CA2981068C (en) 2015-03-26 2021-12-14 Women & Infants Hospital Of Rhode Island Therapy for malignant disease comprising the inhibition of human epididymal secretory protein e4 and immune checkpoint inhibitors
WO2016161273A1 (en) 2015-04-01 2016-10-06 Adaptive Biotechnologies Corp. Method of identifying human compatible t cell receptors specific for an antigenic target
EP3281641B1 (en) 2015-04-07 2020-12-16 Cytlimic Inc. Adjuvant for cancer vaccines
EP3281010B1 (en) 2015-04-10 2020-12-30 The Regents of The University of California Methods of determining patient populations amenable to immunomodulatory treatment of cancer
LT3283107T (lt) 2015-04-17 2020-09-10 Bristol-Myers Squibb Company Kompozicija apimanti ipilimumabo ir nivolumabo kombinaciją
CN107534262B (zh) 2015-04-20 2019-10-15 三菱电机株式会社 激光器装置及极端远紫外光生成装置
ES2861352T3 (es) 2015-04-28 2021-10-06 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento del melanoma positivo para PD-L1 utilizando un anticuerpo anti-PD-1
EP3988571A1 (en) 2015-04-28 2022-04-27 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of pd-l1-negative melanoma using an anti-pd-1 antibody and an anti-ctla-4 antibody
SG11201708706YA (en) 2015-05-06 2017-11-29 Snipr Tech Ltd Altering microbial populations & modifying microbiota
EP3736287A1 (en) 2015-05-11 2020-11-11 The Johns Hopkins University Autoimmune antibodies for use in inhibiting cancer cell growth
CA3025145A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 Translational Drug Development Llc Benzamide and active compound compositions and methods of use
WO2016191751A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of pd-l1 positive lung cancer using an anti-pd-1 antibody
WO2016196389A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
JP6797137B2 (ja) 2015-05-29 2020-12-09 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｏｘ４０に対する抗体およびその使用
EA201792623A1 (ru) 2015-06-03 2018-04-30 Бостон Биомедикал, Инк. Композиции, содержащие ингибитор стволовости рака и иммунотерапевтический агент, для применения в лечении рака
AU2016273028B2 (en) 2015-06-05 2019-02-14 Novartis Ag Antibodies targeting bone morphogenetic protein 9 (BMP9) and methods therefor
CA2990360C (en) 2015-06-24 2024-02-13 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-vista antibodies and fragments
BR112017028353A2 (pt) 2015-06-29 2018-09-04 The Rockfeller University anticorpos para cd40 com atividade agonista melhorada
ES2886657T3 (es) 2015-06-29 2021-12-20 Bristol Myers Squibb Co Regímenes de dosificación inmunoterapéutica que comprenden pomalidomida y un anticuerpo anti-CS1 para el tratamiento de cáncer
CA2991164A1 (en) 2015-07-02 2017-01-05 Celgene Corporation Combination therapy for treatment of hematological cancers and solid tumors
MX2018000016A (es) 2015-07-02 2019-01-31 Otsuka Pharma Co Ltd Composiciones farmaceuticas liofilizadas.
JO3711B1 (ar) 2015-07-13 2021-01-31 H Lundbeck As أجسام مضادة محددة لبروتين تاو وطرق استعمالها
GB201512203D0 (en) 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
GB201512215D0 (en) 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
JP2018522887A (ja) 2015-07-14 2018-08-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 免疫チェックポイント阻害剤を使用する癌の処置法
WO2017009842A2 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
WO2017011831A1 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Bioxcel Corporation A novel approach for treatment of cancer using immunomodulation
WO2017023753A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 University Of Florida Research Foundation, Inc. Hematopoietic stem cells in combinatorial therapy with immune checkpoint inhibitors against cancer
US11236159B2 (en) 2015-08-03 2022-02-01 Novartis Ag Methods of treating FGF21-associated disorders
EP3331917A1 (en) 2015-08-04 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination treatments and uses and methods thereof
US20180230431A1 (en) 2015-08-07 2018-08-16 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination Therapy
KR102114562B1 (ko) * 2015-08-11 2020-05-26 노파르티스 아게 암의 치료에 사용하기 위한 5-브로모-2,6-디-(1h-피라졸-1-일)피리미딘-4-아민
CN108137679B (zh) 2015-08-13 2022-07-19 纽约大学 对Tau的{p}Ser404表位有选择性的基于抗体的分子和它们在诊断和治疗Tau疾病中的用途
EP3341732B1 (en) 2015-08-27 2023-07-12 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for predicting the survival time of patients suffering from a lung cancer
BR112018003186A2 (pt) 2015-09-01 2018-09-25 Agenus Inc. anticorpos anti-pd-1 e seus métodos de uso
CN108025069B (zh) * 2015-09-03 2021-11-12 小野药品工业株式会社 使用变应素-1拮抗剂的癌症免疫增强剂
CA2996635A1 (en) 2015-09-09 2017-03-16 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (tslp)-binding molecules and methods of using the molecules
US10000561B2 (en) 2015-09-09 2018-06-19 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (TSLP)-binding molecules and methods of using the molecules
RU2638457C2 (ru) 2015-09-28 2017-12-13 Общество С Ограниченной Ответственностью "Онкомакс" Антитела, специфически связывающие рецептор 1 типа фактора роста фибробластов, применение антител для лечения онкологического заболевания, способ получения антител
WO2017055325A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of nk cells in a tissue sample
WO2017055326A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of myeloid dendritic cells in a tissue sample
WO2017055322A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of neutrophils in a tissue sample
WO2017055319A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of b cells in a tissue sample
WO2017055320A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of cytotoxic lymphocytes in a tissue sample
WO2017055321A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of fibroblasts in a tissue sample
WO2017055327A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of endothelial cells in a tissue sample
WO2017055324A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of cells of monocytic origin in a tissue sample
JP7058213B2 (ja) * 2015-09-30 2022-04-21 アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 改変ｊ鎖を有する結合分子
CN108463245A (zh) 2015-09-30 2018-08-28 Igm生物科学有限公司 具有修饰的j链的结合分子
WO2017060397A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from melanoma metastases
CN108135934A (zh) 2015-10-19 2018-06-08 永恒生物科技股份有限公司 通过组合疗法治疗实体或淋巴肿瘤的方法
CN108350505A (zh) 2015-10-22 2018-07-31 震动疗法股份有限公司 用于测定icos表达的基因标志
SI3370733T1 (sl) 2015-11-02 2021-11-30 Board Of Regents The University Of Texas System Postopek za aktivacijo CD40 in blokada imunske nadzorne točke
CN108350077A (zh) 2015-11-03 2018-07-31 糖模拟物有限公司 产生单克隆抗体、造血干细胞的方法和组合物以及利用所述抗体和造血干细胞的方法
AU2016349632A1 (en) 2015-11-07 2018-05-24 Multivir Inc. Compositions comprising tumor suppressor gene therapy and immune checkpoint blockade for the treatment of cancer
JP2018538263A (ja) 2015-11-18 2018-12-27 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体および抗ｃｔｌａ−４抗体の組合せを用いる肺癌の処置法
WO2017086367A1 (ja) 2015-11-18 2017-05-26 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
EP3378488A4 (en) 2015-11-18 2019-10-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha METHOD FOR ENHANCING THE HUMORAL IMMUNE RESPONSE
EA201891121A1 (ru) 2015-11-19 2018-12-28 Бристол-Майерс Сквибб Компани Антитела к глюкокортикоид-индуцированному рецептору фактора некроза опухоли (gitr) и их применения
EP3383904A4 (en) * 2015-11-19 2019-12-04 Zeling Cai CTLA-4 ANTIBODIES AND USES THEREOF
EP3383903A1 (en) 2015-11-30 2018-10-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti human ip-10 antibodies and their uses
US10946106B2 (en) 2015-11-30 2021-03-16 The Regents Of The University Of California Tumor-specific payload delivery and immune activation using a human antibody targeting a highly specific tumor cell surface antigen
BR112018011228A2 (pt) 2015-12-01 2019-01-15 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd tratamentos de combinação e seus usos e métodos
US11447557B2 (en) 2015-12-02 2022-09-20 Agenus Inc. Antibodies and methods of use thereof
RU2020113165A (ru) 2015-12-03 2020-06-09 Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед Циклические пуриновые динуклеотиды в качестве модуляторов sting
CN108699136B (zh) 2015-12-07 2022-03-18 Xencor股份有限公司 结合cd3和psma的异二聚抗体
WO2017098421A1 (en) 2015-12-08 2017-06-15 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Benzothiadiazine compounds
CA2994447A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 Dyax Corp. Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
EP3389714A4 (en) * 2015-12-14 2019-11-13 MacroGenics, Inc. BISPECIFIC MOLECULES HAVING IMMUNOREACTIVITY TO PD-1 AND CTLA-4 AND METHODS OF USE
JP2019506844A (ja) 2015-12-18 2019-03-14 ノバルティス アーゲー ＣＤ３２ｂを標的とする抗体およびその使用方法
EP3394096A1 (en) 2015-12-21 2018-10-31 Bristol-Myers Squibb Company Variant antibodies for site-specific conjugation
PT3394093T (pt) 2015-12-23 2022-05-30 Modernatx Inc Métodos de utilização de polinucleotídeos que codificam ligandos ox40
ES2957477T3 (es) 2016-01-08 2024-01-19 Celgene Corp Compuestos antiproliferativos para usar en el tratamiento de leucemia
AU2017205167B2 (en) 2016-01-08 2021-07-01 Celgene Corporation Formulations of 2-(4-chlorophenyl)-N-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl)methyl)-2,2-difluoroacetamide
CN108712904B (zh) 2016-01-08 2022-08-02 细胞基因公司 2-(4-氯苯基)-n-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)甲基)-2,2-二氟乙酰胺的固体形式以及其药物组合物和用途
MA43587A (fr) * 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
PL3405212T3 (pl) 2016-01-19 2020-11-16 Pfizer Inc. Szczepionki przeciwnowotworowe
EP3851457A1 (en) 2016-01-21 2021-07-21 Novartis AG Multispecific molecules targeting cll-1
EP3407912B1 (en) 2016-01-28 2022-05-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for enhancing the potency of the immune checkpoint inhibitors
EP3407911B1 (en) 2016-01-28 2022-05-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancer
JP2019509993A (ja) 2016-02-12 2019-04-11 ヤンセン ファーマシューティカ エヌブイ 抗ｖｉｓｔａ（ｂ７ｈ５）抗体
MX2018010295A (es) 2016-02-26 2019-06-06 Inst Nat Sante Rech Med Anticuerpos que tienen especificidad para atenuador de linfocitos b y t (btla) y usos de los mismos.
IL295230A (en) 2016-03-04 2022-10-01 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy with anti-cd73 antibodies
CN116063494A (zh) 2016-03-04 2023-05-05 洛克菲勒大学 具有增强的激动剂活性的cd40的抗体
EP3426271A4 (en) 2016-03-10 2019-10-16 Cold Genesys, Inc. METHODS OF TREATING SOLID OR LYMPHATIC TUMORS BY POLYTHERAPY
WO2017153952A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited 5-sulfamoyl-2-hydroxybenzamide derivatives
WO2017160599A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of cd300b antagonists to treat sepsis and septic shock
AU2017234163B2 (en) 2016-03-15 2023-01-19 Mersana Therapeutics, Inc. NaPi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof
FI3429618T3 (fi) 2016-03-16 2024-03-15 Amal Therapeutics Sa Immuunijäjestelmän tarkistuspisteen modulaattorin ja soluun tunkeutuvan peptidin, cargon ja tlr-peptidiagonistin kompleksin yhdistelmä lääketieteelliseen käyttöön
TW201735949A (zh) 2016-03-24 2017-10-16 千禧製藥公司 治療抗ctla4及抗pd-1組合治療中的胃腸道免疫相關不良事件之方法
EP3433275A1 (en) 2016-03-24 2019-01-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating gastrointestinal immune-related adverse events in immune oncology treatments
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
EP3436480A4 (en) 2016-03-30 2019-11-27 Musc Foundation for Research Development METHOD FOR THE TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER BY TARGETING GLYCOPROTEIN A REPETITION PREDOMINANT (GARP) AND FOR EFFECTIVE IMMUNOTHERAPY ALONE OR IN COMBINATION
US11209441B2 (en) 2016-04-05 2021-12-28 Bristol-Myers Squibb Company Cytokine profiling analysis
SG11201808621TA (en) 2016-04-07 2018-10-30 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Heterocyclic amides useful as protein modulators
JP2019510802A (ja) 2016-04-07 2019-04-18 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ タンパク質調節物質として有用な複素環アミド
CA3020848A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Anti-human vista antibodies and use thereof
MA44723A (fr) 2016-04-18 2019-02-27 Celldex Therapeutics Inc Anticorps agonistes se liant au cd40 humain et leurs utilisations
US11459617B2 (en) 2016-04-29 2022-10-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Targeted measure of transcriptional activity related to hormone receptors
US20190298824A1 (en) 2016-05-04 2019-10-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Serv Albumin-binding immunomodulatory compositions and methods of use thereof
CN109476742B (zh) 2016-05-09 2023-04-14 百时美施贵宝公司 Tl1a抗体及其用途
EP3454909A1 (en) 2016-05-10 2019-03-20 Bristol-Myers Squibb Company Antibody-drug conjugates of tubulysin analogs with enhanced stability
SG10201603721TA (en) 2016-05-10 2017-12-28 Agency Science Tech & Res Anti-CTLA-4 Antibodies
EP3458092A1 (en) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx, Inc. Mrna combination therapy for the treatment of cancer
DK3458083T3 (da) 2016-05-18 2023-01-30 Modernatx Inc Polynukleotider, der koder for interleukin-12 (il12), og anvendelser heraf
LT3458474T (lt) 2016-05-18 2022-10-10 Modernatx, Inc. Imunitetą moduliuojančius polipeptidus koduojančių mrnr deriniai ir jų naudojimas
CN107400166A (zh) * 2016-05-19 2017-11-28 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对ctla4的单域抗体及其衍生蛋白
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
WO2017201502A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Biohaven Pharmaceutical Holding Company Ltd. Use of glutamate modulating agents with immunotherapies to treat cancer
KR20230003387A (ko) 2016-05-25 2023-01-05 엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔 암 치료 방법 및 조성물
US11052148B2 (en) 2016-05-30 2021-07-06 Geo Vax, Inc. Compositions and methods for generating an immune response to hepatitis B virus
WO2017210335A1 (en) 2016-06-01 2017-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Imaging methods using 18f-radiolabeled biologics
RS64388B1 (sr) 2016-06-02 2023-08-31 Bristol Myers Squibb Co Pd-1 blokada nivolumabom kod refraktornog hočkinovog limfoma
CN109475634A (zh) 2016-06-03 2019-03-15 百时美施贵宝公司 用于治疗复发性小细胞肺癌的方法的抗-pd-1抗体
CN109476754A (zh) 2016-06-03 2019-03-15 百时美施贵宝公司 抗-pd-1抗体在治疗结肠直肠癌患者中的用途
GB201609811D0 (en) 2016-06-05 2016-07-20 Snipr Technologies Ltd Methods, cells, systems, arrays, RNA and kits
EP3468948A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Chemical compounds
BR112018075598A2 (pt) 2016-06-08 2019-03-26 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited compostos químicos
US11472856B2 (en) 2016-06-13 2022-10-18 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
WO2017218707A2 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
WO2017216724A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Novartis Ag Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
WO2017220989A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
US11147818B2 (en) 2016-06-24 2021-10-19 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
SG11201811600PA (en) 2016-06-30 2019-01-30 Oncorus Inc Pseudotyped oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
SG11201811015RA (en) 2016-07-12 2019-01-30 H Lundbeck As Antibodies specific for hyperphosphorylated tau and methods of use thereof
WO2018011166A2 (en) 2016-07-12 2018-01-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for quantifying the population of myeloid dendritic cells in a tissue sample
SG11201900026TA (en) 2016-07-14 2019-01-30 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
EP3484516A4 (en) 2016-07-14 2020-03-18 Fred Hutchinson Cancer Research Center MULTIPLE CONSTRUCTIONS OF BI-SPECIFIC LINK AREAS HAVING A DIFFERENT EPITOPE LINK TO TREAT CANCER
US20190241573A1 (en) 2016-07-20 2019-08-08 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Isoquinoline derivatives as perk inhibitors
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
CN109689056A (zh) * 2016-08-01 2019-04-26 亚尼塔公司 用于治疗癌症的组合
NL2017270B1 (en) * 2016-08-02 2018-02-09 Aduro Biotech Holdings Europe B V New anti-hCTLA-4 antibodies
WO2018025221A1 (en) 2016-08-04 2018-02-08 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-icos and anti-pd-1 antibody combination therapy
WO2018029586A1 (en) 2016-08-07 2018-02-15 Novartis Ag Mrna-mediated immunization methods
KR20230044038A (ko) 2016-08-09 2023-03-31 키맵 리미티드 항-icos 항체
WO2018029336A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for determining whether a subject was administered with an activator of the ppar beta/delta pathway.
CN109790201A (zh) 2016-08-12 2019-05-21 百时美施贵宝公司 纯化蛋白质的方法
KR102493853B1 (ko) 2016-08-19 2023-01-30 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 세코-시클로프로파피롤로인돌 화합물, 그의 항체-약물 접합체, 및 제조 및 사용 방법
TWI739887B (zh) 2016-08-19 2021-09-21 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 使用包含btk抑制劑的組合產品治療癌症
WO2018035710A1 (en) * 2016-08-23 2018-03-01 Akeso Biopharma, Inc. Anti-ctla4 antibodies
US10981976B2 (en) 2016-08-31 2021-04-20 University Of Rochester Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus K envelope (HERV-K) and use thereof
WO2018046736A1 (en) 2016-09-12 2018-03-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of patients suffering from cancer
WO2018046738A1 (en) 2016-09-12 2018-03-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of patients suffering from cancer
WO2018053506A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Oncoimmune, Inc. Cd80 and cd86 binding protein compositions and uses thereof
KR20190057345A (ko) 2016-09-21 2019-05-28 아말 테라퓨틱스 에스에이 암 치료를 위한, 세포 투과 펩타이드, 멀티 에피토프 및 tlr 펩타이드 작용제를 포함하는 융합체
US10428325B1 (en) 2016-09-21 2019-10-01 Adaptive Biotechnologies Corporation Identification of antigen-specific B cell receptors
EP3515453A1 (en) 2016-09-22 2019-07-31 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for reprograming immune environment in a subject in need thereof
CN117510643A (zh) 2016-09-23 2024-02-06 美勒斯公司 调节细胞表达的生物活性的结合分子
AU2017335732A1 (en) 2016-09-27 2019-04-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for enhancing immune checkpoint blockade therapy by modulating the microbiome
EP3519824A1 (en) 2016-10-03 2019-08-07 Abbott Laboratories Improved methods of assessing uch-l1 status in patient samples
US10618962B2 (en) * 2016-10-10 2020-04-14 Crown Bioscience (Taicang) Inc. Anti-CTLA4 antibodies
WO2018068201A1 (en) * 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
MA46529A (fr) 2016-10-11 2019-08-21 Agenus Inc Anticorps anti-lag-3 et leurs procédés d'utilisation
WO2018070069A1 (ja) 2016-10-11 2018-04-19 サイトリミック株式会社 医薬
RU2755903C2 (ru) 2016-10-12 2021-09-22 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Способы и композиции для tusc2-иммунотерапии
WO2018075842A1 (en) 2016-10-20 2018-04-26 Bristol-Myers Squibb Company Condensed benzodiazepine derivatives and conjugates made therefrom
EP3532504A1 (en) 2016-10-28 2019-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
JP7039582B2 (ja) 2016-11-03 2022-03-22 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 活性化可能な抗ｃｔｌａ－４抗体およびその使用
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
EP3534933A4 (en) 2016-11-04 2020-06-24 Aximmune, Inc. BETA-ALETHINE, IMMUNE MODULATORS AND USES THEREOF
WO2018089423A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Musc Foundation For Research Development Cd38-nad+ regulated metabolic axis in anti-tumor immunotherapy
MA46770A (fr) 2016-11-09 2019-09-18 Agenus Inc Anticorps anti-ox40, anticorps anti-gitr, et leurs procédés d'utilisation
JP2020500020A (ja) 2016-11-14 2020-01-09 ノバルティス アーゲー 融合誘導性タンパク質ｍｉｎｉｏｎに関連する組成物、方法、および治療上の使用
EP3538140A1 (en) 2016-11-14 2019-09-18 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and pharmaceutical compositions for modulating stem cells proliferation or differentiation
JP7217229B2 (ja) 2016-11-15 2023-02-02 ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット シヌクレイノパチーの治療のための薬剤、使用および方法
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
CA3082255A1 (en) 2016-11-23 2020-06-10 Translational Drug Development, Llc Benzamide and active compound compositions and methods of use
CN106432499A (zh) * 2016-11-24 2017-02-22 上海美迪西生物医药股份有限公司 Ctla‑4抗体fab在昆虫表达系统中的制备方法
WO2018099539A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Horst Lindhofer Combination of t-cell redirecting multifunctional antibodies with immune checkpoint modulators and uses thereof
US11299469B2 (en) 2016-11-29 2022-04-12 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Naphthofuran derivatives, preparation, and methods of use thereof
KR20190090822A (ko) 2016-12-01 2019-08-02 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 조합 요법
AU2017369994A1 (en) 2016-12-01 2019-06-13 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination therapy
JP6992068B2 (ja) * 2016-12-07 2022-02-03 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｃｔｌａ－４抗体およびそれらの使用方法
WO2018107178A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for sequencing t cell receptors and uses thereof
KR20190112263A (ko) 2016-12-12 2019-10-04 멀티비르 인코포레이티드 암 및 감염성 질환의 치료 및 예방을 위한 바이러스 유전자 치료요법 및 면역 체크포인트 억제제를 포함하는 방법 및 조성물
KR20190095280A (ko) 2016-12-12 2019-08-14 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-약물 콘주게이트와 면역 체크 포인트 저해제의 조합
WO2018112266A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Il-13 superkine: immune cell targeting constructs and methods of use thereof
WO2018112360A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Evelo Biosciences, Inc. Combination therapies for treating cancer
JP7144755B2 (ja) 2016-12-16 2022-09-30 ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット 薬剤、使用および方法
US10364286B2 (en) 2016-12-22 2019-07-30 H. Lundbeck A/S Monoclonal anti-alpha-synuclein antibodies for preventing tau aggregation
KR20190095946A (ko) 2016-12-23 2019-08-16 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 개선된 바이오분석 및 바이오프로세싱 성질을 위한 치료용 면역글로불린 g4의 디자인
JP2020501589A (ja) 2016-12-23 2020-01-23 ウイルツ・バイオロジクス・リミテッド がんの治療
WO2018122245A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting the survival time of patients suffering from cms3 colorectal cancer
WO2018122249A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of patients suffering from a microsatellite stable colorectal cancer
EP3565836A1 (en) 2017-01-04 2019-11-13 H. Lundbeck A/S Antibodies specific for hyperphosphorylated tau for the treatment of ocular diseases
TW201833140A (zh) 2017-01-09 2018-09-16 美商莫瑞麥克製藥公司 抗fgfr抗體及使用方法
JP2020505438A (ja) 2017-01-10 2020-02-20 ノダス・セラピューティクスＮｏｄｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ インテグリン結合性ポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質および免疫調節物質を用いる併用がん治療法
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
WO2018140671A1 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Celgene Corporation 3-(1-oxo-4-((4-((3-oxomorpholino) methyl)benzyl)oxy)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione and isotopologues thereof
WO2018146128A1 (en) 2017-02-07 2018-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Detection of kit polymorphism for predicting the response to checkpoint blockade cancer immunotherapy
WO2018146148A1 (en) 2017-02-07 2018-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A method for predicting the response to checkpoint blockade cancer immunotherapy
AU2018219862B2 (en) 2017-02-07 2020-09-17 Nant Holding IP, LLC Maximizing T-cell memory and compositions and methods therefor
WO2018146594A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Novartis Ag Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
TWI674261B (zh) 2017-02-17 2019-10-11 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 Nlrp3 調節劑
MX2019009117A (es) 2017-02-17 2019-09-13 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti alfa-sinucleina y usos de los mismos.
WO2018156973A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Assay for detection of early stage pancreatic cancer
CA3052767A1 (en) 2017-02-27 2018-08-30 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Heterocyclic amides as kinase inhibitors
EP3366703B1 (en) 2017-02-28 2019-04-03 Ralf Kleef Immune checkpoint therapy with hyperthermia
US20180271996A1 (en) 2017-02-28 2018-09-27 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
MX2019009660A (es) * 2017-02-28 2019-10-02 Bristol Myers Squibb Co Uso de anticuerpos antigeno 4 del linfocito t (ctla-4) con citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (adcc) mejorada para mejorar la respuesta inmune a una vacuna.
WO2018167780A1 (en) 2017-03-12 2018-09-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of prognosing and treating cancer
EP3596469A1 (en) 2017-03-12 2020-01-22 Yeda Research and Development Co., Ltd. Methods of diagnosing and prognosing cancer
MX2019010797A (es) 2017-03-15 2019-10-24 Amgen Inc Uso de virus oncoliticos, solos o en combinacion con un inhibidor de punto de control, para el tratamiento del cancer.
CN106916226B (zh) * 2017-03-17 2020-01-14 信达生物制药(苏州)有限公司 以ctla-4为靶点的免疫调节药物治疗结核病的应用
JP7346300B2 (ja) 2017-03-23 2023-09-19 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１を使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の程度の診断及び決定の一助となるための方法
AU2018240117A1 (en) 2017-03-24 2019-09-19 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for preventing and treating heart disease
US11359005B2 (en) 2017-03-30 2022-06-14 The Johns Hopkins University Supramolecular high affinity protein-binding system for purification of biomacromolecules
SG10202110594UA (en) 2017-03-31 2021-11-29 Bristol Myers Squibb Co Methods of treating tumor
KR20200020662A (ko) 2017-04-03 2020-02-26 온콜로지, 인크. 면역-종양학 제제와 함께 ps-표적화 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
JP2020516590A (ja) 2017-04-14 2020-06-11 コールド ジェネシス， インコーポレイテッド 膀胱癌の治療方法
JP7344797B2 (ja) 2017-04-15 2023-09-14 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の、超急性の診断及び決定の一助となるための方法
AU2018254626B2 (en) 2017-04-21 2023-12-21 Sillajen, Inc. Oncolytic vaccinia virus and checkpoint inhibitor combination therapy
EP3615070A1 (en) 2017-04-26 2020-03-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods of antibody production that minimize disulfide bond reduction
CN110603449A (zh) 2017-04-28 2019-12-20 雅培实验室 用同一人受试者的至少两种样品的早期生物标记物帮助超急性诊断确定创伤性脑损伤的方法
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
US10543271B2 (en) 2017-05-12 2020-01-28 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
US10646464B2 (en) 2017-05-17 2020-05-12 Boston Biomedical, Inc. Methods for treating cancer
CA3063723A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (il12) polypeptides and uses thereof
CA3060618A1 (en) 2017-05-19 2018-11-22 Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. Novel monoclonal antibodies to cytotoxic t-lymphocyte-associated protein 4 (ctla-4)
CN116333129A (zh) 2017-05-25 2023-06-27 百时美施贵宝公司 包含经修饰的重链恒定区的抗体
WO2018218169A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
LT3631454T (lt) 2017-05-30 2023-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 atžvilgiu teigiamų navikų gydymas
AU2018275209A1 (en) 2017-05-30 2019-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising an anti-LAG-3 antibody or an anti-LAG-3 antibody and an anti-PD-1 or anti-PD-L1 antibody
US10849548B2 (en) 2017-05-30 2020-12-01 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin I and early biomarkers
WO2018222711A2 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
WO2018225093A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Chemical compounds as atf4 pathway inhibitors
WO2018226336A1 (en) 2017-06-09 2018-12-13 Providence Health & Services - Oregon Utilization of cd39 and cd103 for identification of human tumor reactive cells for treatment of cancer
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
CA3067909A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Medicenna Therapeutics Inc. Uses and methods for il-2 superagonists, agonists, and fusions thereof
CN111032025A (zh) 2017-06-20 2020-04-17 居里研究所 Suv39h1组蛋白甲基转移酶的抑制剂在癌症联合治疗中的用途
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
CN110996955A (zh) 2017-06-22 2020-04-10 细胞基因公司 以乙型肝炎病毒感染为特征的肝细胞癌的治疗
WO2018237157A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag CD73 BINDING ANTIBODY MOLECULES AND USES THEREOF
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CN110785433A (zh) 2017-06-28 2020-02-11 诺华股份有限公司 预防和治疗尿失禁的方法
CA3068591A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Celgene Corporation Compositions and methods of use of 2-(4-chlorophenyl)-n-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-5-yl) methyl)-2,2-difluoroacetamide
WO2019008507A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited 2- (4-CHLOROPHENOXY) -N - ((1- (2- (4-CHLOROPHENOXY) ETHYNAZETIDIN-3-YL) METHYL) ACETAMIDE DERIVATIVES AND RELATED COMPOUNDS AS INHIBITORS OF ATF4 FOR THE TREATMENT OF CANCER AND D OTHER DISEASES
WO2019010131A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories IMPROVED METHODS FOR MEASURING CARBOXY TERMINATION HYDROLASE LEVELS OF UBIQUITIN L1 IN BLOOD
CA3068753A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited N-(3-(2-(4-chlorophenoxy)acetamido)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)-2-cyclobutane-1-carboxamide derivatives and related compounds as atf4 inhibitors for treating cancer and other diseases
CN107325181A (zh) * 2017-07-05 2017-11-07 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗ctla4蛋白单克隆抗体及其用途
TWI791552B (zh) 2017-07-10 2023-02-11 美商西建公司 抗增生化合物及其使用方法
EP3651792A1 (en) 2017-07-11 2020-05-20 Pfizer Inc Immunogenic compositions comprising cea muc1 and tert
KR20200028434A (ko) 2017-07-14 2020-03-16 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
US10894833B2 (en) 2017-07-20 2021-01-19 H. Lundbeck A/S Agents, uses and methods for treatment
EP3658173A1 (en) 2017-07-25 2020-06-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for modulating monocytopoiesis
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
WO2019021208A1 (en) 2017-07-27 2019-01-31 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited USEFUL INDAZOLE DERIVATIVES AS PERK INHIBITORS
KR20200035438A (ko) 2017-08-03 2020-04-03 오쓰까 세이야꾸 가부시키가이샤 약물 화합물 및 이의 정제 방법
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
KR20200040819A (ko) 2017-08-16 2020-04-20 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항체를 표적화하기 위한 항 ctla-4 프로바디 치료제
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US11745165B2 (en) 2017-08-18 2023-09-05 The Johns Hopkins University Supramolecular filamentous assemblies for protein purification
AU2018317865B2 (en) 2017-08-18 2023-03-16 Cothera Bioscience, Inc. Polymorphic form of TG02
CN111511762A (zh) 2017-08-21 2020-08-07 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
UY37866A (es) 2017-09-07 2019-03-29 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Nuevos compuestos derivados de benzoimidazol sustituidos que reducen la proteína myc (c-myc) en las células e inhiben la histona acetiltransferasa de p300/cbp.
WO2019053617A1 (en) 2017-09-12 2019-03-21 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited CHEMICAL COMPOUNDS
EP3684410A1 (en) 2017-09-19 2020-07-29 Institut Curie Agonist of aryl hydrocarbon receptor for use in cancer combination therapy
MX2020003204A (es) 2017-09-20 2020-07-20 Regeneron Pharma Metodos de inmunoterapia para pacientes cuyos tumores portan una carga mutacional alta de un gen pasajero.
EP3692033A1 (en) 2017-10-05 2020-08-12 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Modulators of stimulator of interferon genes (sting) useful in treating hiv
EP3692034A1 (en) 2017-10-05 2020-08-12 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Modulators of stimulator of interferon genes (sting)
US20200239577A1 (en) 2017-10-15 2020-07-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
EP3704159A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Bristol-Myers Squibb Company Immunostimulatory agonistic antibodies for use in treating cancer
CN111315398A (zh) 2017-11-10 2020-06-19 阿尔莫生物科技股份有限公司 白介素-10与免疫检查点途径抑制剂的组合的组合物和使用方法
JP7201400B2 (ja) 2017-11-14 2023-01-10 ファイザー・インク Ｅｚｈ２阻害剤組合せ療法
WO2019101956A1 (en) 2017-11-24 2019-05-31 Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) Methods and compositions for treating cancers
WO2019104289A1 (en) 2017-11-27 2019-05-31 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
US11254980B1 (en) 2017-11-29 2022-02-22 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods of profiling targeted polynucleotides while mitigating sequencing depth requirements
CA3067057A1 (en) 2017-12-09 2019-06-13 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (tbi), using glial fibrillary acidic protein (gfap) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (uch-l1)
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
WO2019122882A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
DK3710484T3 (da) 2017-12-20 2023-11-27 Harbour Biomed Shanghai Co Ltd Ctla-4-bindende antistoffer og anvendelser deraf
WO2019126691A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
KR20200103761A (ko) 2017-12-27 2020-09-02 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-cd40 항체 및 그의 용도
US11905327B2 (en) 2017-12-28 2024-02-20 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against TIGIT
US11865081B2 (en) 2017-12-29 2024-01-09 Virogin Biotech Canada Ltd. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
CN112135610A (zh) 2018-01-12 2020-12-25 KDAc治疗股份有限公司 用于治疗癌症的选择性组蛋白去乙酰酶3(hdac3)抑制剂及免疫治疗剂的组合
US11572405B2 (en) 2018-01-12 2023-02-07 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy with anti-IL-8 antibodies and anti-PD-1 antibodies for treating cancer
WO2019140229A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
US11713353B2 (en) 2018-01-15 2023-08-01 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against PD-1
KR20200109339A (ko) 2018-01-16 2020-09-22 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tim3에 대한 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법
SG11202006823XA (en) 2018-01-22 2020-08-28 Bristol Myers Squibb Co Compositions and methods of treating cancer
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
WO2019160755A1 (en) * 2018-02-13 2019-08-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for treating cancer with anti pd-1 antibodies and anti ctla4 antibodies
EP3762105A1 (en) 2018-03-06 2021-01-13 Institut Curie Inhibitor of setdb1 histone methyltransferase for use in cancer combination therapy
US20210030703A1 (en) 2018-03-12 2021-02-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of caloric restriction mimetics for potentiating chemo-immunotherapy for the treatment of cancers
CA3092635A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Surface Oncology, Inc. Antibodies that bind cd39 and uses thereof
AU2019322487B2 (en) 2018-03-19 2024-04-18 Multivir Inc. Methods and compositions comprising tumor suppressor gene therapy and CD122/CD132 agonists for the treatment of cancer
CA3092589A1 (en) 2018-03-21 2019-09-26 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
WO2019183551A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
US10760075B2 (en) 2018-04-30 2020-09-01 Snipr Biome Aps Treating and preventing microbial infections
CA3094458A1 (en) 2018-03-25 2019-10-31 Snipr Biome Aps. Treating & preventing microbial infections
WO2019185792A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Philogen S.P.A Cancer treatment using immunoconjugates and immune check-point inhibitors
CN112313248A (zh) 2018-03-29 2021-02-02 百时美施贵宝公司 纯化单体单克隆抗体的方法
EP3774911A1 (en) 2018-03-30 2021-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2019193540A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Heteroaryl derivatives of formula (i) as atf4 inhibitors
WO2019193541A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Bicyclic aromatic ring derivatives of formula (i) as atf4 inhibitors
PE20212327A1 (es) 2018-04-09 2021-12-14 Eisai Randd Man Co Ltd Ciertos compuestos de pladienolida y metodos de uso
JOP20200244A1 (ar) 2018-04-12 2020-09-29 Eisai R&D Man Co Ltd مشتقات بلاديينوليد كعوامل تستهدف جسيمات الوصل لعلاج السرطان
US11485741B2 (en) 2018-04-24 2022-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic toll-like receptor 7 (TLR7) agonists
KR20210005106A (ko) 2018-04-25 2021-01-13 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
AU2019266205A1 (en) 2018-05-07 2020-10-22 Genmab A/S Methods of treating cancer with a combination of an anti-PD-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
JP7460608B2 (ja) 2018-05-07 2024-04-02 ジェンマブ エー／エス 抗ｐｄ－１抗体と抗組織因子抗体－薬物コンジュゲートとの組み合わせを用いるがんの治療方法
GB201807924D0 (en) 2018-05-16 2018-06-27 Ctxt Pty Ltd Compounds
MX2020012548A (es) 2018-05-23 2021-05-13 Celgene Corp Métodos para el tratamiento de mieloma múltiple y uso de biomarcadores para 4-(4-(4-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1-oxoiso indolin-4-il)oxi)metil)bencil)piperazin-1- il)-3-fluorobenzonitril o.
BR112020023704A2 (pt) 2018-05-23 2021-02-17 Celgene Corporation compostos antiproliferativos e anticorpo bispecífico contra bcma e cd3 para uso combinado
EA202092747A1 (ru) 2018-05-29 2021-03-16 Бристол-Маерс Сквибб Компани Модифицированные саморазрушающиеся фрагменты для применения в пролекарствах и конъюгатах и способы применения и изготовления
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
JP7388635B2 (ja) 2018-05-31 2023-11-29 小野薬品工業株式会社 免疫チェックポイント阻害薬の有効性判定バイオマーカー
WO2019232319A1 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Peloton Therapeutics, Inc. Compositions and methods for inhibiting cd73
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
US20210214410A1 (en) 2018-06-01 2021-07-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Il-13/il-4 superkines: immune cell targeting constructs and methods of use thereof
CN112367996A (zh) 2018-06-01 2021-02-12 卫材R&D管理有限公司 使用剪接调节剂的方法
GB201809050D0 (en) 2018-06-01 2018-07-18 E Therapeutics Plc Modulators of tryptophan catabolism
TW202015739A (zh) 2018-06-01 2020-05-01 日商衛材R&D企管股份有限公司 剪接調節抗體-藥物結合物及其使用方法
EP3807410A1 (en) 2018-06-15 2021-04-21 MiNA Therapeutics Limited Combination therapies comprising c/ebp alpha sarna
WO2019245817A1 (en) 2018-06-19 2019-12-26 Armo Biosciences, Inc. Compositions and methods of use of il-10 agents in conjunction with chimeric antigen receptor cell therapy
EP3820904A2 (en) 2018-07-09 2021-05-19 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to ilt4
US20210253528A1 (en) 2018-07-09 2021-08-19 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Chemical compounds
CA3106143A1 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Actym Therapeutics, Inc. Engineered immunostimulatory bacterial strains and uses thereof
KR20210031722A (ko) 2018-07-11 2021-03-22 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 산성 pH에서 VISTA에 결합하는 항체
US20210277135A1 (en) 2018-07-13 2021-09-09 Bristol-Myers Squibb Company Ox-40 agonist, pd-1 pathway inhibitor and ctla-4 inhibitor combination for use in a method of treating a cancer or a solid tumor
US11554120B2 (en) 2018-08-03 2023-01-17 Bristol-Myers Squibb Company 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor
CN112703011A (zh) 2018-08-06 2021-04-23 国家医疗保健研究所 用于治疗癌症的方法和组合物
WO2020031107A1 (en) 2018-08-08 2020-02-13 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Chemical compounds
WO2020033791A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Verseau Therapeutics, Inc. Oligonucleotide compositions for targeting ccr2 and csf1r and uses thereof
US20210308123A1 (en) 2018-08-16 2021-10-07 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
BR112021002642A2 (pt) 2018-08-16 2021-05-04 Innate Tumor Immunity, Inc. compostos de 4-amino-1h-imidazo[4,5-c]quinolina substituídos e métodos aprimorados para a preparação dos mesmos
WO2020037092A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Innate Tumor Immunity, Inc. Imidazo[4,5-c]quinoline derived nlrp3-modulators
EP3617230A1 (en) 2018-09-03 2020-03-04 BioInvent International AB Novel antibodies and nucleotide sequences, and uses thereof
WO2020048942A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for enhancing cytotoxic t lymphocyte-dependent immune responses
WO2020049534A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Novartis Ag Sting agonist and combination therapy thereof for the treatment of cancer
KR20210089143A (ko) 2018-09-18 2021-07-15 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. 항-tnfr2 항체 및 그의 용도
WO2020061376A2 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
WO2020058372A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy
JP2022501009A (ja) 2018-09-21 2022-01-06 イノベント バイオロジックス （スウツォウ） カンパニー，リミテッド 新規インターロイキン２およびその使用
CN112105633B (zh) 2018-09-21 2024-03-12 信达生物制药(苏州)有限公司 新型白介素2及其用途
JP7425049B2 (ja) 2018-09-25 2024-01-30 ハープーン セラピューティクス，インク． Ｄｌｌ３結合タンパク質および使用方法
MX2021003435A (es) 2018-09-28 2021-06-15 Massachusetts Inst Technology Moleculas inmunomoduladoras localizadas en el colageno y metodos de las mismas.
WO2020070053A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of inhibitors of stress granule formation for targeting the regulation of immune responses
TW202028212A (zh) 2018-10-11 2020-08-01 日商小野藥品工業股份有限公司 Ｓｔｉｎｇ促效化合物
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
US20210340240A1 (en) 2018-10-18 2021-11-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Combination of a big-h3 antagonist and an immune checkpoint inhibitor for the treatment of solid tumor
EP3870609A1 (en) 2018-10-23 2021-09-01 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
KR20210084546A (ko) 2018-10-29 2021-07-07 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 펩티드 함유 링커를 갖는 시스테인 조작된 항체-약물 접합체
TW202034958A (zh) 2018-10-30 2020-10-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
NZ775959A (en) * 2018-10-31 2022-08-26 Bioatla Inc Anti-ctla4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
WO2020097409A2 (en) 2018-11-08 2020-05-14 Modernatx, Inc. Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients
TW202033555A (zh) 2018-11-16 2020-09-16 美商必治妥美雅史谷比公司 抗nkg2a抗體及其用途
KR20210093950A (ko) 2018-11-16 2021-07-28 네오이뮨텍, 인코퍼레이티드 Il-7 단백질 및 면역 관문 저해제의 조합으로 종양을 치료하는 방법
CA3119742A1 (en) 2018-11-16 2020-05-22 Arqule, Inc. Pharmaceutical combination for treatment of cancer
JP2022513076A (ja) 2018-11-19 2022-02-07 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｃａｒおよびｔｃｒ形質導入用のモジュール式ポリシストロニックベクター
US11279698B2 (en) 2018-11-20 2022-03-22 Cornell University Macrocyclic complexes of alpha-emitting radionuclides and their use in targeted radiotherapy of cancer
CN113453678A (zh) 2018-11-26 2021-09-28 德彪药业国际股份公司 Hiv感染的联合治疗
KR20210095868A (ko) 2018-11-27 2021-08-03 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 면역 체크포인트 저해약 및 폴피리녹스 요법과의 병용에 의한 암 치료
WO2020109355A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and kit for assaying lytic potential of immune effector cells
BR112021010297A2 (pt) 2018-11-28 2021-08-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Edição de genomas multiplexadores de células imunes para aumentar a funcionalidade e resistência ao ambiente supressivo
WO2020112781A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
AU2019386830A1 (en) 2018-11-29 2021-06-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for ex vivo expansion of natural killer cells and use thereof
PL3886914T3 (pl) 2018-11-30 2023-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Przeciwciało zawierające c-końcowe rozszerzenie łańcucha lekkiego zawierające glutaminę, jego koniugaty oraz metody i zastosowania
TWI824069B (zh) 2018-11-30 2023-12-01 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產發展有限公司 用於hiv治療之化合物
US20220018835A1 (en) 2018-12-07 2022-01-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Use of cd26 and cd39 as new phenotypic markers for assessing maturation of foxp3+ t cells and uses thereof for diagnostic purposes
AU2019396360A1 (en) 2018-12-11 2021-05-27 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Naphthyridine and quinoline derivatives useful as ALK5 inhibitors
KR20210102334A (ko) 2018-12-12 2021-08-19 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도
PE20211473A1 (es) 2018-12-13 2021-08-05 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo-farmaco de herboxidieno y metodos de uso
US20220047556A1 (en) 2018-12-17 2022-02-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of sulconazole as a furin inhibitor
TW202039835A (zh) 2018-12-27 2020-11-01 美商安進公司 凍乾病毒配製物
MX2021007860A (es) 2018-12-28 2021-10-26 Transgene Poxvirux deficiente en m2.
BR112021013157A8 (pt) 2019-01-03 2022-12-06 Inst Nat Sante Rech Med Usos de um inibidor de nrp-1, uso de uma combinação, uso de um anticorpo multiespecífico, método ex vivo para predizer, uso de um inibidor, anticorpo multiespecífico, população de células modificadas, método ex vivo de produção e uso de uma população de células t
SG11202107413YA (en) 2019-01-09 2021-08-30 Celgene Corp Antiproliferative compounds and second active agents for use in treating multiple myeloma
AU2020206692A1 (en) 2019-01-09 2021-07-29 Celgene Corporation Pharmaceutical compositions comprising (S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-4-yl)oxy)methyl) benzyl)piperazin-1-yl)-3-fluorobenzonitrile and methods of using the same
WO2020146463A1 (en) 2019-01-09 2020-07-16 Celgene Corporation Solid forms comprising (s)-4-(4-(4-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-4-yl)oxy)methyl) benzyl)piperazin-1-yl)-3-fluorobenzonitrile and salts thereof, and compositions comprising and methods of using the same
EP3911641A1 (en) 2019-01-14 2021-11-24 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
KR20210114983A (ko) 2019-01-14 2021-09-24 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
CN113301962A (zh) 2019-01-14 2021-08-24 先天肿瘤免疫公司 用于治疗癌症的杂环nlrp3调节剂
KR20210114456A (ko) 2019-01-14 2021-09-23 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 암의 치료에 사용하기 위한 nlrp3-조정제로서의 치환된 퀴나졸린
SG11202107606VA (en) 2019-01-15 2021-08-30 Inst Nat Sante Rech Med Mutated interleukin-34 (il-34) polypeptides and uses thereof in therapy
CN113396162A (zh) 2019-01-22 2021-09-14 百时美施贵宝公司 抗IL-7Rα亚基的抗体及其用途
EP3914289A1 (en) 2019-01-23 2021-12-01 Massachusetts Institute of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
US20220098303A1 (en) 2019-02-01 2022-03-31 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination treatments for cancer comprising belantamab mafodotin and an anti ox40 antibody and uses and methods thereof
WO2020169472A2 (en) 2019-02-18 2020-08-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of inducing phenotypic changes in macrophages
EP3930846A1 (en) 2019-03-01 2022-01-05 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anti-tnfr2 antibodies and uses thereof
JP2022522817A (ja) 2019-03-05 2022-04-20 アムジエン・インコーポレーテツド がんを治療するための腫瘍溶解性ウイルスの使用
WO2020183011A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Institut Curie Htr1d inhibitors and uses thereof in the treatment of cancer
MA55516A (fr) 2019-03-26 2022-02-09 Univ Michigan Regents Agents de dégradation, à petites molécules, de stat3
WO2020198676A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
CN113677402A (zh) 2019-03-28 2021-11-19 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
EP3947403A1 (en) 2019-03-29 2022-02-09 The Regents Of The University Of Michigan Stat3 protein degraders
EP3946424A1 (en) 2019-03-29 2022-02-09 Institut Curie Interleukin-2 variants with modified biological activity
US20220042954A1 (en) 2019-03-29 2022-02-10 Bristol-Myers Squibb Company Methods of measuring hydrophobicity of chromatographic resins
TW202102543A (zh) 2019-03-29 2021-01-16 美商安進公司 溶瘤病毒在癌症新輔助療法中之用途
WO2020201362A2 (en) 2019-04-02 2020-10-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
US20220160692A1 (en) 2019-04-09 2022-05-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of sk2 inhibitors in combination with immune checkpoint blockade therapy for the treatment of cancer
WO2020212484A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treatment of nlrp3 inflammasome mediated il-1beta dependent disorders
JP2022534555A (ja) 2019-05-09 2022-08-02 フジフィルム セルラー ダイナミクス，インコーポレイテッド ヘパトサイトの作製方法
JP2022533390A (ja) 2019-05-16 2022-07-22 スティングセラ インコーポレイテッド オキソアクリジニル酢酸誘導体および使用方法
CN114391015A (zh) 2019-05-16 2022-04-22 斯汀塞拉股份有限公司 苯并[b][1,8]萘啶乙酸衍生物和使用方法
JP2022532766A (ja) 2019-05-17 2022-07-19 キャンサー プリベンション ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 家族性腺腫性ポリポーシスを処置するための方法
KR20220010525A (ko) 2019-05-20 2022-01-25 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 보론산 에스테르 전구약물 및 그의 용도
CN114174538A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 适合于免疫肿瘤学疗法的多肿瘤基因特征
JP2022534981A (ja) 2019-05-30 2022-08-04 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 細胞局在化シグネチャーおよび組み合わせ治療
WO2020243568A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
BR112021024402A2 (pt) 2019-06-03 2022-02-15 Univ Chicago Métodos e composições para tratamento de câncer com adjuvantes direcionados ao câncer
AU2020289485A1 (en) 2019-06-03 2022-02-03 The University Of Chicago Methods and compositions for treating cancer with collagen binding drug carriers
US11246906B2 (en) 2019-06-11 2022-02-15 Alkermes Pharma Ireland Limited Compositions and methods for subcutaneous administration of cancer immunotherapy
JP2022536898A (ja) 2019-06-12 2022-08-22 アスクジーン・ファーマ・インコーポレイテッド 新規ｉｌ－１５プロドラッグおよびその使用方法
CA3141414A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 Vanderbilt University Dibenzylamines as amino acid transport inhibitors
JP2022536419A (ja) 2019-06-12 2022-08-16 ヴァンダービルト ユニバーシティー アミノ酸輸送阻害剤及びその使用
US11642409B2 (en) 2019-06-26 2023-05-09 Massachusetts Insttute of Technology Immunomodulatory fusion protein-metal hydroxide complexes and methods thereof
CN114222760A (zh) 2019-06-26 2022-03-22 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司 Il1rap结合蛋白
JP2022539248A (ja) 2019-07-02 2022-09-07 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 組換えａｄ３５ベクター及び関連遺伝子治療改善
CA3138560A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Shaomeng Wang Imidazopyrimidines as eed inhibitors and the use thereof
GB201910304D0 (en) 2019-07-18 2019-09-04 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201910305D0 (en) 2019-07-18 2019-09-04 Ctxt Pty Ltd Compounds
JP2022542863A (ja) 2019-07-24 2022-10-07 ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット 抗ｍＧｌｕＲ５抗体及びその使用
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
EP3778875A1 (en) 2019-08-14 2021-02-17 MaxiVax SA Immortalized myoblast cell lines and uses thereof
US11851490B2 (en) 2019-08-15 2023-12-26 Northwestern University Methods and compositions for treating, inhibiting, and/or preventing heterotopic ossification
GB201912107D0 (en) 2019-08-22 2019-10-09 Amazentis Sa Combination
AU2020336381A1 (en) 2019-08-27 2022-03-03 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon E3 ligase inhibitors
WO2021046293A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Dosing regimen for the treatment of cancer with an anti icos agonistic antibody and tremelimumab
WO2021043961A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Dosing regimen for the treatment of cancer with an anti icos agonistic antibody and chemotherapy
JP2022548484A (ja) 2019-09-16 2022-11-21 サーフィス オンコロジー インコーポレイテッド 抗ｃｄ３９抗体の組成物及び方法
WO2021055306A1 (en) 2019-09-16 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Dual capture method for analysis of antibody-drug conjugates
US20220380314A1 (en) 2019-09-17 2022-12-01 Bial - R&D Investments, S.A. Substituted, saturated and unsaturated n-heterocyclic carboxamides and related compounds for their use in the treatment of medical disorders
MX2022003237A (es) 2019-09-17 2022-07-04 Bial R&D Invest S A Imidazol carboxamidas sustituidas y su uso en el tratamiento de trastornos medicos.
JP2022548747A (ja) 2019-09-17 2022-11-21 バイアル－アールアンドディー インベストメンツ ソシエダッド アノニマ 酸性セラミダーゼ阻害剤としての置換されたｎ－複素環式カルボキサミド及び医薬としてのその使用
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
CA3155010A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 The Regents Of The Universtiy Of Michigan Spirocyclic androgen receptor protein degraders
US20230192860A1 (en) 2019-09-19 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies Binding to Vista at Acidic pH
AU2020350795A1 (en) 2019-09-22 2022-03-31 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for LAG-3 antagonist therapy
US11667709B2 (en) 2019-09-24 2023-06-06 Industrial Technology Research Institute Anti-TIGIT antibodies and methods of use
TW202128752A (zh) 2019-09-25 2021-08-01 美商表面腫瘤學公司 抗ｉｌ﹘２７抗體及其用途
EP3800201A1 (en) 2019-10-01 2021-04-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd28h stimulation enhances nk cell killing activities
US20220363776A1 (en) 2019-10-04 2022-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
WO2021078910A1 (en) 2019-10-22 2021-04-29 Institut Curie Immunotherapy targeting tumor neoantigenic peptides
WO2021080682A1 (en) 2019-10-24 2021-04-29 Massachusetts Institute Of Technology Monoclonal antibodies that bind human cd161 and uses thereof
JPWO2021079958A1 (es) 2019-10-25 2021-04-29
NL2024108B1 (en) 2019-10-26 2021-07-19 Vitroscan B V Methods and apparatus for measuring immune-cell mediated anti-tumoroid responses
NL2024107B1 (en) 2019-10-26 2021-07-19 Vitroscan B V Compositions for Patient Specific Immunotherapy
US20220380765A1 (en) 2019-11-02 2022-12-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Targeting nonsense-mediated decay to activate p53 pathway for the treatment of cancer
JP2022554356A (ja) 2019-11-04 2022-12-28 シージェン インコーポレイテッド 抗ｃｄ３０抗体薬物コンジュゲート及びｈｉｖ感染の処置のためのその使用
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
JP2023500888A (ja) 2019-11-07 2023-01-11 ジェンマブ エー／エス 抗ｐｄ－１抗体と抗組織因子抗体－薬物コンジュゲートとの組み合わせを用いるがんの治療方法
TW202131954A (zh) 2019-11-07 2021-09-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 利用鉑類劑與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合來治療癌症之方法
MX2022005474A (es) 2019-11-08 2022-06-02 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento de melanoma con antagonistas del gen 3 de activacion de linfocitos (lag-3).
EP3824954A1 (en) 2019-11-22 2021-05-26 Centre National de la Recherche Scientifique Device, apparatus and method for minibeam radiation therapy
EP4061809A1 (en) 2019-11-22 2022-09-28 Theravance Biopharma R&D IP, LLC Substituted 1,5-naphthyridines or quinolines as alk5 inhibitors
JPWO2021106978A1 (es) 2019-11-27 2021-06-03
WO2021113644A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Multivir Inc. Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer
WO2021127554A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 Bristol-Myers Squibb Company Combinations of dgk inhibitors and checkpoint antagonists
AU2019479791A1 (en) 2019-12-27 2022-07-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
BR112022012918A2 (pt) 2020-01-07 2022-09-06 Univ Texas Variantes de enzima de exaustão de metiltioadenosina/adenosina humana melhorada para terapia do câncer
US20230348458A1 (en) 2020-01-10 2023-11-02 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
US20230067202A1 (en) 2020-01-28 2023-03-02 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination Treatments and Uses and Methods Thereof
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
WO2021167908A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
JP2023517011A (ja) 2020-03-05 2023-04-21 ネオティーエックス セラピューティクス リミテッド 免疫細胞を用いて癌を治療するための方法および組成物
EP3878446A1 (en) 2020-03-09 2021-09-15 Universite De Geneve Hsd11b1 inhibitors for use in immunotherapy and uses thereof
US20230093147A1 (en) 2020-03-09 2023-03-23 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions relating to improved combination therapies
US20230140384A1 (en) 2020-03-09 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to cd40 with enhanced agonist activity
US20230159573A1 (en) 2020-03-26 2023-05-25 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule stat protein degraders
US11673879B2 (en) 2020-03-31 2023-06-13 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Substituted pyrimidines and methods of use
US20230151024A1 (en) 2020-04-10 2023-05-18 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Sting agonistic compound
EP4134098A1 (en) 2020-04-10 2023-02-15 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Method of cancer therapy
CA3175523A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Antti Virtanen Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample
WO2021216572A1 (en) 2020-04-20 2021-10-28 Massachusetts Institute Of Technology Lipid compositions for delivery of sting agonist compounds and uses thereof
EP4139289A1 (en) 2020-04-21 2023-03-01 University of Rochester Inhibitors of human epididymus protein 4
WO2021216920A1 (en) 2020-04-22 2021-10-28 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy
US20230167193A1 (en) 2020-05-01 2023-06-01 Novartis Ag Immunoglobulin variants
EP4143236A1 (en) 2020-05-01 2023-03-08 Novartis AG Engineered immunoglobulins
WO2021224186A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Institut Curie New pyridine derivatives as radiosensitizers
WO2021231732A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
CA3182333A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Institut Curie Single domain antibodies and their use in cancer therapies
US20230212256A1 (en) 2020-05-21 2023-07-06 Board Of Regents, The University Of Texas System T cell receptors with vgll1 specificity and uses thereof
CN115803343A (zh) * 2020-05-26 2023-03-14 百奥泰生物制药股份有限公司 多特异性抗体及其应用
US20230233474A1 (en) 2020-05-28 2023-07-27 Modernatx, Inc. Use of mrnas encoding ox40l, il-23 and il-36gamma for treating cancer
EP4157923A2 (en) 2020-05-29 2023-04-05 President And Fellows Of Harvard College Living cells engineered with polyphenol-functionalized biologically active nanocomplexes
WO2021247836A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for targeting shp-2 to overcome resistance
CN115768885A (zh) 2020-06-03 2023-03-07 Mv生物治疗股份有限公司 Atp水解酶和免疫检查点调节剂的组合及其应用
US20210387983A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Crystalline alk5 inhibitors and uses thereof
WO2021260675A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Yeda Research And Development Co. Ltd. Agents for sensitizing solid tumors to treatment
BR112022026090A2 (pt) 2020-06-25 2023-01-17 Celgene Corp Métodos para tratar câncer com terapias de combinação
BR112022025105A2 (pt) 2020-06-29 2023-01-17 Genmab As Método para o tratamento de câncer cervical em um indivíduo, conjugado anticorpo-fármaco, e, uso de um conjugado anticorpo-fármaco
EP4172621A1 (en) 2020-06-30 2023-05-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the risk of recurrence and/or death of patients suffering from a solid cancer after preoperative adjuvant therapies
CN116133679A (zh) 2020-06-30 2023-05-16 门德斯有限公司 白血病衍生细胞在卵巢癌疫苗中的用途
CN115843335A (zh) 2020-06-30 2023-03-24 国家医疗保健研究所 用于预测患有实体癌的患者在术前辅助治疗和根治性手术后复发和/或死亡风险的方法
WO2022003156A1 (en) 2020-07-02 2022-01-06 Oncurious Nv Ccr8 non-blocking binders
JP2023532768A (ja) 2020-07-07 2023-07-31 バイオエヌテック エスエー Ｈｐｖ陽性癌の治療用ｒｎａ
CA3184940A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Jennifer Donglan WU Mic antibodies and binding agents and methods of using the same
AU2021305052A1 (en) 2020-07-07 2023-02-09 Celgene Corporation Pharmaceutical compositions comprising (S)-4-(4-(4-(((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolin-4-yl)oxy)methyl) benzyl)piperazin-1-yl)-3-fluorobenzonitrile and methods of using the same
US20230233690A1 (en) 2020-07-10 2023-07-27 The Regents Of The University Of Michigan Androgen receptor protein degraders
WO2022011204A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule androgen receptor protein degraders
AU2021311701A1 (en) 2020-07-21 2023-02-16 Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd. Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
US20230295146A1 (en) 2020-07-24 2023-09-21 The University Of Rochester Inhibitors of interleukin-1 receptor-associated kinases 1 and 4
KR20230084469A (ko) 2020-08-04 2023-06-13 애보트 라피드 다이어그노스틱스 인터내셔널 언리미티드 컴퍼니 Sars-cov-2를 검출하기 위한 검정법
KR20230042301A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 애벗트 라보라토리이즈 샘플에서 sars-cov-2 단백질을 검출하기 위한 개선된 방법 및 키트
CN116419747A (zh) 2020-08-07 2023-07-11 福蒂斯治疗公司 靶向cd46的免疫偶联物及其使用方法
KR20230058442A (ko) 2020-08-28 2023-05-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 간세포성 암종에 대한 lag-3 길항제 요법
WO2022047412A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
EP4229090A1 (en) 2020-10-16 2023-08-23 Université d'Aix-Marseille Anti-gpc4 single domain antibodies
US20230303604A1 (en) 2020-10-20 2023-09-28 Institut Curie Metallic trans-(n-heterocyclic carbene)-amine-platinum complexes and uses thereof for treating cancer
JP2023548051A (ja) 2020-10-23 2023-11-15 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 肺がんのためのｌａｇ－３アンタゴニスト療法
CA3195572A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Heidelberg Pharma Research Gmbh Composition comprising a combination of immune checkpoint inhibitor and antibody-amatoxin conjugate for use in cancer therapy
CN116472288A (zh) 2020-11-06 2023-07-21 诺华股份有限公司 抗体Fc变体
AU2021376218A1 (en) 2020-11-08 2023-06-15 Seagen Inc. Combination Therapy
US20230051406A1 (en) 2020-11-13 2023-02-16 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
WO2022102731A1 (ja) 2020-11-13 2022-05-19 小野薬品工業株式会社 Ｅｐ４拮抗薬と免疫チェックポイント阻害物質との併用によるがん治療
JP2023549581A (ja) 2020-11-17 2023-11-27 シージェン インコーポレイテッド ツカチニブ及び抗ｐｄ－１／抗ｐｄ－ｌ１抗体の組み合わせによりがんを治療する方法
WO2022106505A1 (en) 2020-11-18 2022-05-27 Institut Curie Dimers of biguanidines and their therapeutic uses
AU2021388155A1 (en) 2020-11-25 2023-06-15 Catamaran Bio, Inc. Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof
WO2022119841A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
EP4256067A2 (en) 2020-12-04 2023-10-11 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
US20240052042A1 (en) 2020-12-14 2024-02-15 Novartis Ag Reversal binding agents for anti-natriuretic peptide receptor i (npri) antibodies and uses thereof
WO2022130206A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Pfizer Inc. TGFβr1 INHIBITOR COMBINATION THERAPIES
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022136647A1 (en) 2020-12-24 2022-06-30 Oncurious Nv Human ccr8 binders
WO2022136650A1 (en) 2020-12-24 2022-06-30 Oncurious Nv Murine cross-reactive human ccr8 binders
EP4267618A1 (en) 2020-12-24 2023-11-01 Vib Vzw Non-blocking human ccr8 binders
US20220233689A1 (en) 2020-12-28 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumors
AU2021411486A1 (en) 2020-12-28 2023-06-29 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
WO2022150788A2 (en) 2021-01-11 2022-07-14 Synthekine, Inc. Compositions and methods related to receptor pairing
JP2024505428A (ja) 2021-01-14 2024-02-06 アンスティテュ キュリー Ｈｅｒ２単一ドメイン抗体バリアントおよびそのｃａｒ
WO2022159492A1 (en) 2021-01-19 2022-07-28 William Marsh Rice University Bone-specific delivery of polypeptides
WO2022159575A1 (en) * 2021-01-20 2022-07-28 Bioentre Llc Ctla4-binding proteins and methods of treating cancer
WO2022157715A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 Dcprime B.V. Methods of tumor vaccination
CA3206549A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Frederick G. Vogt Methods of making modified tumor infiltrating lymphocytes and their use in adoptive cell therapy
WO2022187419A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule degraders of androgen receptor
WO2022187423A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon ligands
EP4304633A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Mendus B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
WO2022189618A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Institut Curie Nitrogen-containing heterocycles as radiosensitizers
WO2022212876A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
EP4070799A1 (en) 2021-04-08 2022-10-12 Nuvamid SA Compositions for the improvement of sport performance
EP4319820A1 (en) 2021-04-10 2024-02-14 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4079310A1 (en) 2021-04-20 2022-10-26 Nuvamid SA Nmn and derivatives for its use in the treatment of alpha-synucleinopathies
EP4079311A1 (en) 2021-04-20 2022-10-26 Nuvamid SA Nmn and derivatives for its use in the treatment of depression and/or anxiety in patients having a form of parkinsonism
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
WO2022229644A1 (en) 2021-04-28 2022-11-03 Mina Therapeutics Limited Combination therapies comprising c/ebp alpha sarna
EP4337763A1 (en) 2021-05-10 2024-03-20 Institut Curie Methods for the treatment of cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
AU2022279156A1 (en) 2021-05-18 2023-11-02 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
CA3218590A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 Providence Health & Services - Oregon Cxcr5, pd-1, and icos expressing tumor reactive cd4 t cells and their use
JPWO2022260132A1 (es) 2021-06-10 2022-12-15
BR112023026199A2 (pt) 2021-06-14 2024-03-05 Abbott Lab Métodos para diagnosticar ou auxiliar no diagnóstico de lesão cerebral causada por energia acústica, energia eletromagnética, onda de sobrepressurização e/ou rajada de vento
AR126236A1 (es) 2021-06-25 2023-10-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Uso del anticuerpo anti-ctla-4
CN117616123A (zh) 2021-06-25 2024-02-27 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体
WO2023280790A1 (en) 2021-07-05 2023-01-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Gene signatures for predicting survival time in patients suffering from renal cell carcinoma
IL309831A (en) 2021-07-13 2024-02-01 BioNTech SE Multispecific binding agents against CD40 and CD137 in combined cancer therapy
WO2023014922A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
CA3227880A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Marios SOTIROPOULOS Scanning dynamic device for minibeams production
IL310662A (en) 2021-08-23 2024-04-01 Immunitas Therapeutics Inc Anti-CD161 antibodies and their uses
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023041744A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Institut Curie Bet inhibitors for treating pab1 deficient cancer
CA3232176A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Beth MCQUISTON Methods and systems of diagnosing brain injury
CA3234457A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Cytovia Therapeutics, Llc Natural killer cells and methods of use thereof
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
TW202330612A (zh) 2021-10-20 2023-08-01 日商武田藥品工業股份有限公司 靶向ｂｃｍａ之組合物及其使用方法
WO2023076880A1 (en) 2021-10-25 2023-05-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Foxo1-targeted therapy for the treatment of cancer
WO2023077034A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing immune cells
CA3224890A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
WO2023076989A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Seagen Inc. Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-cd30 antibody-drug conjugate
CN113907045B (zh) * 2021-11-09 2023-01-06 派生特（福州）生物科技有限公司 一种新品系猪的培育方法及其应用
WO2023089032A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Institut Curie Methods for the treatment of hrd cancer and brca-associated cancer
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023097024A1 (en) * 2021-11-24 2023-06-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antibodies against ctla-4 and methods of use thereof
WO2023099763A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Institut Curie Sirt6 inhibitors for use in treating resistant hrd cancer
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
WO2023129942A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023130081A1 (en) 2021-12-30 2023-07-06 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and vegf antagonist
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023154799A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Combination immunotherapy for treating cancer
WO2023161453A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Amazentis Sa Uses of urolithins
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023178192A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023180552A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Institut Curie Immunotherapy targeting tumor transposable element derived neoantigenic peptides in glioblastoma
WO2023187024A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Institut Curie Modified rela protein for inducing interferon expression and engineered immune cells with improved interferon expression
WO2023194607A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Institut Curie Myeloid cells modified by chimeric antigen receptor with cd40 and uses thereof for anti-cancer therapy
WO2023196988A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Modernatx, Inc. Methods of use of mrnas encoding il-12
WO2023194608A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Institut Curie Myeloid cells modified by chimeric antigen receptor and uses thereof for anti-cancer therapy
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20230357381A1 (en) 2022-04-26 2023-11-09 Novartis Ag Multispecific antibodies targeting il-13 and il-18
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023213764A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Transgene Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf
WO2023213763A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Transgene Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab
WO2023213960A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Genmab A/S Methods of treating cancer with anti-tissue factor antibody-drug conjugates
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
WO2023230541A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Viiv Healthcare Company Piperazine derivatives useful in hiv therapy
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
US20240002331A1 (en) 2022-06-08 2024-01-04 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
WO2023240287A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Bioentre Llc Combinations of ctla4 binding proteins and methods of treating cancer
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
WO2024003353A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Transgene Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf
WO2024023750A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Astrazeneca Uk Limited Combination of antibody-drug conjugate and bispecific checkpoint inhibitor
WO2024028794A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Temple Therapeutics BV Methods for treating endometrial and ovarian hyperproliferative disorders
WO2024040175A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Pulmatrix Operating Company, Inc. Methods for treating cancer using inhaled angiogenesis inhibitor
WO2024046389A1 (zh) * 2022-08-31 2024-03-07 百奥泰生物制药股份有限公司 抗tigit抗体和抗ctla-4抗体联合用于治疗肿瘤中的应用
WO2024052356A1 (en) 2022-09-06 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitors of the ceramide metabolic pathway for overcoming immunotherapy resistance in cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024068617A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Institut Curie Myeloid cells expressing il-2 and uses thereof for quick anticancer therapy

Family Cites Families (129)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
US4681581A (en) 1983-12-05 1987-07-21 Coates Fredrica V Adjustable size diaper and folding method therefor
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
EP0216846B2 (en) 1985-04-01 1995-04-26 Celltech Limited Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
US5101827A (en) 1985-07-05 1992-04-07 Immunomedics, Inc. Lymphographic and organ imaging method and kit
US5776093A (en) 1985-07-05 1998-07-07 Immunomedics, Inc. Method for imaging and treating organs and tissues
US4735210A (en) 1985-07-05 1988-04-05 Immunomedics, Inc. Lymphographic and organ imaging method and kit
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4954617A (en) 1986-07-07 1990-09-04 Trustees Of Dartmouth College Monoclonal antibodies to FC receptors for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4881175A (en) 1986-09-02 1989-11-14 Genex Corporation Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
DE3708238A1 (de) 1987-03-16 1988-09-29 Motoren Werke Mannheim Ag Kraft-waerme-kopplungsanlage
US5013653A (en) 1987-03-20 1991-05-07 Creative Biomolecules, Inc. Product and process for introduction of a hinge region into a fusion protein to facilitate cleavage
EP0623679B1 (en) 1987-05-21 2003-06-25 Micromet AG Targeted multifunctional proteins
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US5750172A (en) 1987-06-23 1998-05-12 Pharming B.V. Transgenic non human mammal milk
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5648471A (en) 1987-12-03 1997-07-15 Centocor, Inc. One vial method for labeling antibodies with Technetium-99m
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
GB8912497D0 (en) 1989-05-31 1989-07-19 Cobbold Stephen P Monoclonal antibodies
WO1991001754A1 (en) 1989-08-09 1991-02-21 Rhodes Buck A Direct radiolabeling of antibodies and other proteins with technetium or rhenium
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
US5151510A (en) 1990-04-20 1992-09-29 Applied Biosystems, Inc. Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
DK0814159T3 (da) 1990-08-29 2005-10-24 Genpharm Int Transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer
WO1992003917A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International Homologous recombination in mammalian cells
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5194594A (en) 1990-09-07 1993-03-16 Techniclone, Inc. Modified antibodies
WO1992022670A1 (en) 1991-06-12 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Early detection of transgenic embryos
AU2235992A (en) 1991-06-14 1993-01-12 Genpharm International, Inc. Transgenic immunodeficient non-human animals
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5770197A (en) 1991-06-27 1998-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Methods for regulating the immune response using B7 binding molecules and IL4-binding molecules
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
EP0606217B2 (en) 1991-06-27 2008-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Ctl4a receptor, fusion proteins containing it and uses thereof
EP0593592B1 (en) 1991-07-08 1998-03-25 The University Of Massachusetts At Amherst Thermotropic liquid crystal segmented block copolymer
AU2515992A (en) 1991-08-20 1993-03-16 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
JPH07503132A (ja) 1991-12-17 1995-04-06 ジェンファーム　インターナショナル，インコーポレイティド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
US5777085A (en) 1991-12-20 1998-07-07 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with GPIIB/IIIA
DE69331089T2 (de) 1992-02-18 2002-07-18 Otsuka Kagaku Kk Beta-Laktam und Cepham Verbindungen und Ihre Herstellung
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
ES2301158T3 (es) 1992-07-24 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Produccion de anticuerpos xenogenicos.
GB9223377D0 (en) 1992-11-04 1992-12-23 Medarex Inc Humanized antibodies to fc receptors for immunoglobulin on human mononuclear phagocytes
US5773253A (en) 1993-01-22 1998-06-30 Bristol-Myers Squibb Company MYPPPY variants of CTL A4 and uses thereof
JP3801196B2 (ja) 1993-03-09 2006-07-26 ジェンザイム・コーポレイション 乳からの対象化合物の単離
EP0754225A4 (en) 1993-04-26 2001-01-31 Genpharm Int HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS
DE69425890D1 (de) 1993-06-04 2000-10-19 Us Health Verfahren zur behandlung von kaposi-sarcoma mit antisense-oligonukleotide
AU7326594A (en) 1993-07-09 1995-02-06 Synergen, Inc. Recombinant ctla4 polypeptides and methods for making the same
WO1995003408A1 (en) 1993-07-26 1995-02-02 Dana-Farber Cancer Institute B7-2: ctl a4/cd 28 counter receptor
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
WO1995024217A1 (en) 1994-03-08 1995-09-14 Dana-Farber Cancer Institute Methods for modulating t cell unresponsiveness
US6719972B1 (en) * 1994-06-03 2004-04-13 Repligen Corporation Methods of inhibiting T cell proliferation or IL-2 accumulation with CTLA4- specific antibodies
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
EP0804604A2 (en) 1995-01-20 1997-11-05 Cell Genesys, Inc. Method to improve screening efficiency in fused cells
US5703057A (en) 1995-04-07 1997-12-30 Board Of Regents The University Of Texas System Expression library immunization
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
AU2466895A (en) * 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5618912A (en) * 1995-05-04 1997-04-08 Pennzoil Products Company Tire sealer and inflator compositions
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5855887A (en) 1995-07-25 1999-01-05 The Regents Of The University Of California Blockade of lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
CN101333516A (zh) * 1995-08-29 2008-12-31 麒麟医药株式会社 嵌合体动物及其制备方法
US6025130A (en) 1996-04-04 2000-02-15 Mercator Genetics, Inc. Hereditary hemochromatosis gene
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
CA2722378C (en) 1996-12-03 2015-02-03 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that bind tnf.alpha.
DE69835145T2 (de) 1997-02-28 2007-06-14 Kirin Beer K.K. Transgene Mäuse die ein menschliches Antikörper exprimieren
WO1998042752A1 (en) 1997-03-21 1998-10-01 Brigham And Women's Hospital Inc. Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
AU7228398A (en) 1997-04-11 1998-11-11 John P. Robarts Research Institute, The Lck serine phosphorylation assay for t-cell activation and activation-induced cell death
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
CA2205680A1 (en) 1997-05-16 1998-11-16 The University Of Western Ontario Clip immunomodulatory peptide
US6509057B2 (en) 1998-04-01 2003-01-21 Sumitomo Osaka Cement, Co., Ltd. Antibacterial, antifungal or antialgal article and process for producing same
CA2241621A1 (en) 1998-06-26 1999-12-26 National Silicates Ltd. A lubricating method for silicate drilling fluids
AU774962B2 (en) * 1998-12-03 2004-07-15 Regents Of The University Of California, The Stimulation of T cells against self antigens using CTLA-4 blocking agents
NZ512553A (en) * 1998-12-23 2004-02-27 Pfizer Human monoclonal antibodies to cytotoxic T lymphocyte antigen 4 (CTLA-4)
US6682736B1 (en) * 1998-12-23 2004-01-27 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
KR100942863B1 (ko) * 1999-08-24 2010-02-17 메다렉스, 인코포레이티드 인간 씨티엘에이-4 항체 및 그의 용도
IT1395574B1 (it) 2009-09-14 2012-10-16 Guala Dispensing Spa Dispositivo di erogazione
US9169311B2 (en) 2013-03-15 2015-10-27 Applied Food Biotechnology, Inc. Feline bitter taste receptors and methods
KR102264548B1 (ko) 2014-11-21 2021-06-16 삼성전자주식회사 반도체 패키지 및 그 제조 방법

Also Published As

Publication number Publication date
FR12C0004I1 (es) 2012-02-24
US6984720B1 (en) 2006-01-10
ATE354655T1 (de) 2007-03-15
CY1107628T1 (el) 2013-04-18
DE60033530T2 (de) 2007-10-31
CY2012002I2 (el) 2020-05-29
EP1212422B1 (en) 2007-02-21
KR20060100950A (ko) 2006-09-21
WO2001014424A2 (en) 2001-03-01
CN102766210A (zh) 2012-11-07
HK1048831A1 (en) 2003-04-17
MXPA02001911A (es) 2003-07-21
KR100942863B1 (ko) 2010-02-17
IL189629A0 (en) 2008-06-05
IL148079A (en) 2008-04-13
AU2006201520B2 (en) 2009-03-19
JP2004512005A (ja) 2004-04-22
JP2009213478A (ja) 2009-09-24
EP3214175A1 (en) 2017-09-06
NZ517202A (en) 2004-05-28
CA2589418A1 (en) 2001-03-01
LU91928I2 (fr) 2012-03-09
EP1792991A1 (en) 2007-06-06
KR20020047132A (ko) 2002-06-21
JP2012100674A (ja) 2012-05-31
EP2829609A1 (en) 2015-01-28
FR12C0004I2 (fr) 2013-01-11
IL148079A0 (en) 2002-09-12
DE122012000001I1 (de) 2012-03-15
JP4093757B2 (ja) 2008-06-04
ZA200201190B (en) 2003-05-28
PT1212422E (pt) 2007-04-30
AU2006201520A1 (en) 2006-05-11
AU2009202447B2 (en) 2011-11-24
CN1371416B (zh) 2012-10-10
JP2006151993A (ja) 2006-06-15
DE60033530D1 (de) 2007-04-05
CN102766210B (zh) 2015-07-08
WO2001014424A3 (en) 2001-09-20
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