ES2340280T3 - Anticuerpos dirigidos contra el receptor de il-21 humano y uso de los mismos. - Google Patents
Anticuerpos dirigidos contra el receptor de il-21 humano y uso de los mismos. Download PDFInfo
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Abstract
Un anticuerpo aislado que ejerce antagonismo sobre la actividad de IL-21R, comprendiendo el anticuerpo una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos en 95% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) SEQ ID NO: 1 y 2; (b) SEQ ID NO: 3; (c) SEQ ID NO: 19 y 20; (d) SEQ ID NO: 21; (e) SEQ ID NO: 47 y 48; (f) SEQ ID NO: 4 9; (g) SEQ ID NO: 65 y 66; (h) SEQ ID NO: 67; (i) SEQ ID NO: 83 y 84; (j) SEQ ID NO: 85; (k) SEQ ID NO: 101 y 102; (l) SEQ ID NO: 103; (m) SEQ ID NO: 119 y 120; (n) SEQ ID NO: 121; (o) SEQ ID NO: 137 y 138; y (p) SEQ ID NO: 139, donde el anticuerpo se une selectivamente sobre un dominio extracelular de un receptor de IL-21 humano o de un receptor de IL-21 que es idéntico al menos en 85% a una secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO: 45.
Description
Anticuerpos dirigidos contra el receptor de
IL-21 humano y uso de los mismos.
Esta invención se refiere a anticuerpos, p. ej.,
anticuerpos humanos, y a sus fragmentos de unión a antígenos que se
unen al receptor de interleuquina-21
(IL-21), en particular, al receptor de
IL-21 humana, y a su uso en la regulación de las
respuestas inmunitarias mediadas por el receptor de
IL-21. Los anticuerpos descritos en la presente
memoria son útiles en el diagnóstico, prevención, y/o el tratamiento
de trastornos inmunitarios, p. ej., trastornos autoinmunitarios.
Los antígenos inician las respuestas
inmunitarias y activan las dos poblaciones más grandes de
linfocitos: las células T y las células B. Después de encontrar el
antígeno, las células T proliferan y se diferencian en células
efectoras, mientras las células B proliferan y se diferencian en
células del plasma secretoras de anticuerpos. La proliferación y
diferenciación de linfocitos están reguladas por proteínas
extracelulares. Algunas de estas proteínas se denominan citoquinas,
que son pequeñas proteínas (<30 kDa) secretadas por los
linfocitos y otros tipos de células.
La interleuquina 21 (IL-21) es
una citoquina descubierta recientemente, que está íntimamente
relacionada con la IL-2, la IL-4 y
la IL-15 (Parrish-Novak et
al. (2000) Nature 408:57-63). La
IL-21 humana tiene un peso molecular de
aproximadamente 15 kDa, consiste en 131 aminoácidos, y comparte una
identidad de aproximadamente 57% con la IL-21 de
ratón. La IL-21 es producida principalmente por las
células T CD4+ activadas.
El receptor de IL-21
(IL-21 R) es una proteína de unión a
IL-21, transmembrana, que pertenece a la clase I de
la familia de receptores de citoquinas. Tanto la
IL-21 humana como la de ratón han sido descritas en
el documento WO 01/85792, en la presente memoria incorporado como
referencia. El tamaño pronosticado de IL-21 R es de
aproximadamente 52 9 aminoácidos. El IL-21R muestra
una elevada homología de secuencia con la cadena \beta del
receptor de IL-2 y la cadena \alpha del receptor
de IL-4 (Ozaki et al. (2000) Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 97:11439-114.44). Las secuencias de
aminoácidos de IL-21R humano y de ratón comparten
una identidad de aproximadamente 62%. Tras la unión al ligando, el
IL-21R se asocia con la cadena gamma del receptor de
citoquina común (\gammac) que es compartida por los receptores de
IL-2, IL-3, IL-4,
IL-7, IL-9, IL-13 y
IL-15 (Ozaki et al. (2000) supra; Asao
et al. (2001) J. Immunol. 167:1-5).
El IL-21 R es expresado
principalmente en tejidos linfoides, tales como células B, células
T, y células asesinas naturales (NK). La amplia distribución
linfoide del IL-21 R sugiere que
IL-21 puede jugar un papel en la regulación
inmunitaria. En efecto, los estudios in vitro han demostrado
que la IL-21 modula significativamente la función
de las células B, las células T CD4+ y CD8+, y las células NK
(Parrish-Novak et al. (2000) supra;
Kasaian, M.T. et al. (2002) Immunity.
16:559-569). También se ha demostrado que la
IL-21 y el IL-21 R son importantes
para modular la actividad de los macrófagos, y las células
sinoviales. Por ejemplo, la IL-21 aumenta la
proliferación de las células B estimuladas con anticuerpo
anti-CD40, y suprime la proliferación de las células
B estimuladas con anti-IgM e IL-4.
La IL-21 aumenta la proliferación y la actividad
citolítica de las células T de las células NK humanas. La
IL-21 también media la expresión de las citoquinas,
las quimioquinas, o una combinación de las mismas, secretadas por
las células T, las células NK, los macrófagos, y las células
sinoviales. Debido a la dependencia de las células B, las células
T, las células NK, los macrófagos, y las células sinoviales de
IL-21, la alteración de la unión de
IL-21 a IL-21 R puede afectar a
ciertas respuestas inmunitarias. Semejante manipulación proporciona
un medio para tratar trastornos del sistema inmunitario, tales como
trastornos por enfermedades autoinmunitarias, trastornos
inflamatorios, alergias, rechazo de transplantes, cáncer, déficit
inmunitario, y otros trastornos.
En el documento WO 01/77171 A1 se describen
anticuerpos anti-z alfa 11 que tienen actividad no
limitante (antagonistas de z alfa 11). Dichos anticuerpos se
utilizan para la detección de la distribución del receptor z alfa en
diferentes células.
En el documento US 200210128446 A1) se describen
anticuerpos anti-z alfa 11 utilizados en los métodos
para estimular la proliferación y/o desarrollo de células
hematopoyéticas.
La presente solicitud proporciona anticuerpos
que ejercen antagonismo sobre la actividad de IL-21R
como se define en la reivindicación 1 con una elevada afinidad y
especificidad. El anticuerpo reduce, inhibe o ejerce antagonismo
sobre la actividad de IL-21 R. Tales anticuerpos
pueden ser utilizados para regular las respuestas inmunitarias o
los trastornos asociados a las células inmunitarias ejerciendo
antagonismo sobre la actividad de IL-21R. En otras
realizaciones, se puede utilizar un anticuerpo
anti-IL-21R como diagnóstico, o como
anticuerpo diana para liberar un agente terapéutico o citotóxico en
una célula que expresa IL-21 R. De este modo, los
anticuerpos anti-IL-21 R de la
invención son útiles en el diagnóstico y el tratamiento de
patologías asociadas con las células inmunitarias (p. ej.,
patologías asociadas con la actividad de al menos uno de: células T
(células T CD8+, CD4+), células NK, células B, macrófagos y
megacariocitos, incluyendo el rechazo de transplantes y los
trastornos autoinmunitarios).
Por consiguiente, en un aspecto, la invención
ofrece un anticuerpo aislado que se une a IL-21R
como se expone en la reivindicación 1. Un anticuerpo
anti-IL-21R puede tener al menos una
de las siguientes características: (1) es un anticuerpo monoclonal
o con una única especificidad; (2) es un anticuerpo humano o
generado in vitro; (3) se une a IL-21 R, en
particular, al dominio extracelular de IL-21R
humano, con una constante de afinidad (K_{a}) de al menos
10^{6} M^{-1}; y (4) inhibe la unión de IL-21 a
IL-21R con una CI_{50} de 10 nM o menos como IgG,
por ejemplo, medida mediante un análisis basado en células descrito
en el Ejemplo 9, o inhibe la unión de un anticuerpo a
IL-21 R con una CI_{50} de 10 nM o menos, por
ejemplo, medida por medio de un análisis de unión al epítopo
descrito en el Ejemplo 11.
Las realizaciones ilustrativas no limitantes de
los anticuerpos de la invención son referidas en la presente
memoria como "MUF", "línea germinal MUF","MU11",
"18G4", "18A5", "19F5", "CP5G2" y "R18".
Los anticuerpos de la invención se unen específicamente al dominio
extracelular de un IL-21 R, p. ej., aproximadamente
del aminoácido 20 al 235 del SEQ ID NO:43 (IL-21 R
humano), o una secuencia que es idéntica al menos en un 85%, 90%,
95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más a ésta. Los anticuerpos se unen
específicamente a un fragmento de un IL-21 R, p.
ej., un fragmento de al menos 10, 20, 50, 75, 100, 150, o 200
aminoácidos contiguos a la secuencia de aminoácidos mostrada en el
SEQ ID NO: 43, o una secuencia que es idéntica al menos en un 95%,
96%, 97%, 98%, 99% o más a ésta. El anticuerpo se une al dominio
extracelular de un IL-21 R e inhibe competitivamente
la unión de "MUF", la "línea germinal MUF", "MU11",
"18G4", "18A5", "19F5", "CP5G2" o "R18" a
su epítopo diana. En otras realizaciones más, un anticuerpo se une
al dominio extracelular de un IL-21 R e inhibe
competitivamente la unión de IL-21 a
IL-21 R. Semejante inhibición de la unión de
IL-21 a su receptor por un anticuerpo de la
invención se puede medir mediante uno o más análisis proporcionados
en la presente memoria.
En una realización, un anticuerpo de la presente
invención incluye un dominio V_{H}, y un dominio V_{L}, o el
fragmento scF_{v} de "MUF", "línea germinal MUF",
"MU11", "18G4", "18A5", "19F5", "CP5G2" o
"R18". Por ejemplo, un anticuerpo incluye un dominio V_{H}
y/o un dominio V_{L} que tiene una secuencia de aminoácidos
mostrada en las Tablas 1A y 1B (SEQ ID NO: 1, 19,47, 65, 83, 101,
119 o 137 para V_{H} y SEQ ID NO: 2, 20, 48, 66, 84, 102, 120 o
138 para V_{L}), o una secuencia esencialmente idéntica a ésta (p.
ej., una secuencia idéntica al menos aproximadamente en un 95%,
96%, 97%, 98%, 99% o más a ésta, o que difiere en no más de 1, 2,
5, 10 o 15 restos aminoácido del SEQ ID NO: 1, 2, 19, 20, 47, 48,
65, 66, 83, 84, 101, 102, 119, 120, 137 o 138). En otra
realización, el anticuerpo incluye un dominio V_{H} y V_{L}
codificado por un ácido nucleico que tiene una secuencia de
nucleótidos mostrada en las Tablas 1A y 1 B (SEQ ID NO: 10, 28, 56,
74, 92, 110, 128, o 146 para V_{H} y SEQ ID NO: 11, 29, 57, 75,
93, 111, 129, o 147 para V_{L}), o una secuencia esencialmente
idéntica a ésta (p. ej., una secuencia idéntica al menos
aproximadamente en un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más a ésta, o que
difiere en no más de 3, 6, 15, 30 o 45 nucleótidos del SEQ ID NO:
10, 11, 28, 29, 56, 57, 74, 75, 92, 93, 110, 111, 128, 129, 146 o
147). Típicamente, los dominios V_{H} y V_{L} de un fragmento
scFv están unidos por una secuencia conectora.
En otras realizaciones, el anticuerpo incluye un
dominio scFv que tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en las
Tablas 1A y 1B (SEQ ID NO: 3, 21, 49, 67, 85, 103, 121, o 139) o una
secuencia esencialmente idéntica a ésta (p. ej., una secuencia
idéntica al menos aproximadamente en un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o
más a ésta, o que difiere en no más de 1, 2, 5, 10, 15, 20, 30 o 35
restos aminoácido del SEQ ID NO: 3, 21, 49, 67, 85, 103, 121, o
139). En otra realización, el anticuerpo incluye un dominio scFv
codificado por un ácido nucleico que tiene una secuencia de
nucleótidos mostrada en las Tablas 1A y 1B (SEQ ID NO: 12, 30, 58,
76, 94, 112, 130, o 148), o una secuencia esencialmente idéntica a
ésta (p. ej., una secuencia idéntica al menos aproximadamente en un
95%, 96%. 97%, 98%, 99% o más a ésta, o que difiere en no más de 3,
6, 15, 30, 45, 60, 90 o 105 nucleótidos del SEQ ID NO: 12, 30, 58,
76, 94, 112, 130, o 148). También se describe un anticuerpo que
comprende al menos una región determinante de la complementariedad
(CDR) de estos dominios V_{H} y V_{L}. Por ejemplo, el
anticuerpo puede incluir una, dos, o tres CDR del dominio V_{H}
(esto es, H1, H2, y H3) que tiene una secuencia de aminoácidos
mostrada en las Tablas 1A y 1B (SEQ ID NO: 4, 5, 6, 22, 23, 24, 50,
51, 52, 68, 69, 70, 86, 87, 88, 104, 105, 106, 122, 123, 124, 140,
141, o 142), o una secuencia esencialmente homóloga a ésta (p. ej.,
una secuencia idéntica en al menos aproximadamente un 95%, 96%, 97%,
98%, 99% o más a ésta). También se describe, una secuencia que es
esencialmente homóloga a las secuencias de aminoácidos de H1, H2, o
H3 mostradas en el SEQ ID NO: 4, 5, 6, 22, 23, 24, 50, 51, 52, 68,
69, 70, 86, 87, 88, 104, 105, 106, 122, 123, 124, 140, 141, o 142
que incluye una o más sustituciones de aminoácidos, por ejemplo, una
o más sustituciones conservativas de aminoácidos. El anticuerpo
puede incluir una, dos, o tres CDR del dominio V_{L} (esto es, L1,
L2 y L3) que tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en las
Tablas 1A y 1B (SEQ ID NO: 7, 8, 9, 25, 26, 27, 53, 54, 55, 71, 72,
73, 89, 90, 91, 107, 108, 109, 125, 126, 127, 143, 144, o 145), o
una secuencia esencialmente idéntica a esta (p. ej., una secuencia
al menos aproximadamente idéntica a ésta en un 95%, 96%, 97%, 98%,
99% o más). También se describe una secuencia que es esencialmente
homóloga a las secuencias de aminoácidos de L1, L2, o L3 mostradas
en el SEQ ID NO: 7, 8, 9, 25, 26, 27, 53, 54, 55, 71, 72, 73, 89,
90, 91, 107, 108, 109, 125, 126, 127, 143, 144 o 145 que incluye
una o más sustituciones de aminoácidos, por ejemplo, una o más
sustituciones conservativas de aminoácidos.
También se describe un anticuerpo que comprende
una CDR del dominio V_{H} de MUF, MU11, línea germinal MUF, 18G4,
18A5, 19F5, CP5G2, o R18, que tiene la secuencia de aminoácidos
mostrada en las Tablas 1A y 1B (SEQ ID NO: 6, 24, 52, 70, 88, 106,
124, o 142), o una secuencia esencialmente idéntica a ésta (p. ej.,
una secuencia al menos aproximadamente idéntica a esta en un 95%,
96%, 97%, 98%, 99% o más), que incluye una o más sustituciones de
aminoácidos, por ejemplo, una o más sustituciones conservativas de
aminoácidos. El anticuerpo puede comprender una región variable de
la cadena pesada que incluye una única CDR, tal como H3, o cualquier
combinación de H1, H2 y H3. Por ejemplo, un anticuerpo puede
incluir una CDR (H3) combinada con una CDR2 (H2). Un anticuerpo
puede incluir una CDR3 (H3) combinada con una CDR1 (H1), o una
combinación de CDR H1 y H2. No obstante, preferiblemente, un
anticuerpo incluye una región variable de la cadena pesada que
comprende una CDR3 (H3), mostrada en cualquiera de los SEQ ID NO:
6, 24, 52, 70, 88, 106, 124, 142, y sus sustituciones de
aminoácidos, por ejemplo, una o más sustituciones conservativas de
aminoácidos, ya sea sola o combinada con una o ambas H1 y H2.
De un modo similar, también se describe un
anticuerpo que comprende una CDR del dominio V_{L} de MUF, MU11,
línea germinal MUF, 18G4, 18A5, 19F5, CP5G2, o R18, p. ej., una CDR
L3 que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en las Tablas 1A
y 18 (SEQ. ID NO: 9, 27, 55, 73, 91, 109, 127, o 145), o una
secuencia esencialmente idéntica a ésta (p. ej., una secuencia
idéntica al menos aproximadamente en un 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o
más a ésta), que incluye una o más sustituciones de aminoácidos,
por ejemplo, una o más sustituciones conservativas de aminoácidos.
Un anticuerpo puede comprender una región variable de la cadena
ligera incluyendo una única CDR, tal como L3, o cualquier
combinación de L1, L2 y L3. Por ejemplo, un anticuerpo puede incluir
una L3 combinada con una L2. Un anticuerpo puede incluir una L3
combinada con una L1. Incluso, un anticuerpo puede incluir una
combinación de CDR L1 y L2. Sin embargo, preferiblemente, un
anticuerpo comprende una región variable de la cadena ligera que
comprende una L3, como se muestra en cualquiera de los SEQ ID NO: 9,
27, 55, 73, 91, 109, 127, 145 y sus sustituciones de aminoácidos,
por ejemplo, una o más de sus sustituciones conservativas de
aminoácidos, ya sea solas o combinadas con una o ambas de L1 y
L2.
Un anticuerpo compite por la unión a
IL-21 R con un anticuerpo que incluye un dominio
V_{H} que es idéntico al menos un 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más
de un 99% a una secuencia de aminoácidos mostrada en el SEQ ID NO:
1, 19, 47, 65, 83, 101, 119 o 137, y un dominio V_{L} que es
idéntico al menos en un 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más de un 99% a
una secuencia de aminoácidos mostrada en el SEQ ID NO: 2, 20, 48,
66, 84, 102, 120 o 138. Un anticuerpo compite por la unión a
IL-21 R con un anticuerpo que incluye una región
variable de una cadena pesada que comprende al menos una CDR de la
cadena pesada seleccionada entre los SEQ ID NO: 6, 24, 52, 70, 88,
106, 124, 142 y sus sustituciones de aminoácidos, por ejemplo, una o
más de sus sustituciones conservativas de aminoácidos. Un
anticuerpo compite por la unión a IL-21 R, la unión
a IL-21 R humano, con un anticuerpo que incluye una
región variable de la cadena ligera que comprende al menos una CDR
de la cadena ligera seleccionada entre los SEQ ID NO: 9, 27, 55,
73, 91, 109, 127, 145 y sus sustituciones de aminoácidos, por
ejemplo, una o más de sus sustituciones conservativas de
aminoácidos. Un anticuerpo con el cual compite un anticuerpo de la
invención por la unión a IL-21 R, por ejemplo,
IL-21 R humano, puede incluir tanto una CDR de la
cadena pesada seleccionada entre los SEQ ID NO: 6, 24, 52, 70, 88,
106, 124, y 142, como una CDR de la cadena ligera seleccionada
entre los SEQ ID NO: 9, 27, 55, 73, 91, 109, 127, y 145. Un
anticuerpo incluye más de una CDR de la cadena pesada seleccionada
entre los SEQ ID NO: 4, 5, 6 para MUF; SEQ ID NO: 22, 23, 24 para
MU11; SEQ ID NO: 50, 51, 52 para 18G4; SEQ ID NO:68, 69, 70 para
18A5; SEQ ID NO: 86, 87, 88 para la línea germinal MUF; SEQ ID NO:
104, 105, 106 para 19F5; SEQ ID NO: 122, 123, 124 para CP5G2; y SEQ
ID NO: 140, 141, 142 para R18, y/o una o más CDR de la región
variable de la cadena ligera seleccionada entre los SEQ ID NO: 7,
8, 9 para MUF; SEQ ID NO: 25, 26, 27 para MU11; SEQ ID NO: 53, 54,
55 para 18G4; SEQ ID NO: 71, 72, 73 para 18A5; SEQ ID NO: 89, 90,
91 para la línea germinal MUF; SEQ ID NO: 107,
108, 109 para 19F5; SEQ ID NO: 125, 126, 127 para CP5G2; y SEQ ID NO: 143, 144, 145 para R18.
108, 109 para 19F5; SEQ ID NO: 125, 126, 127 para CP5G2; y SEQ ID NO: 143, 144, 145 para R18.
En otras realizaciones, un anticuerpo de acuerdo
con la invención compite con IL-21, por ejemplo,
IL-21 humana, por la unión a IL-21R,
por ejemplo, IL-21 R humano.
Un anticuerpo de la invención puede ser completo
(p. ej., incluir al menos una cadena pesada completa y al menos una
cadena ligera completa) o puede incluir solamente un fragmento de
unión al antígeno (p. ej., un fragmento Fab, F(ab')_{2},
Fv o FV de cadena sencilla (scFv)). Un anticuerpo puede incluir una
región constante, o una de sus porciones, seleccionadas entre
cualquiera de: los genes de la región constante de kappa, lambda,
alfa, gamma, delta, épsilon y mu. Por ejemplo, se pueden utilizar
las regiones constantes de la cadena pesada de los diferentes
isotipos, incluyendo: IgG_{1}, IgG_{2}, IgG_{3}, IgG_{4},
IgM, IgA_{1}, IgA_{2}, IgD, e IgE. La región constante de la
cadena ligera se puede seleccionar entre kappa o lambda. Un
anticuerpo puede ser una IgG, o también puede ser una
IgG_{1\kappa} o IgG_{1\lambda}.
Un anticuerpo
anti-IL-21 R descrito en la presente
memoria puede ser derivatizado o conectado a otra molécula
funcional (tal como otro péptido o proteína (p. ej., un fragmento
Fab)). Por ejemplo, un anticuerpo de la invención se puede conectar
funcionalmente (p. ej., mediante acoplamiento químico, fusión
genética, asociación no covalente o de otro modo) a al menos otra
entidad molecular, tal como otro anticuerpo (p. ej., un anticuerpo
biespecífico o multiespecífico), toxina, radioisótopo, agente
citotóxico o citostático, entre otros.
En otro aspecto, la invención ofrece una
composición farmacéutica que contiene al menos un anticuerpo
anti-IL-21 R y un portador
farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede
incluir adicionalmente una combinación de al menos un anticuerpo
anti-IL-21R y al menos un agente
terapéutico (p. ej., citoquina e inhibidores del factor de
crecimiento, inmunosupresores, agentes
anti-inflamatorios, inhibidores metabólicos,
inhibidores de enzimas, agentes citotóxicos, agentes citostáticos,
o sus combinaciones, como se describe con más detalle en la
presente memoria). Las combinaciones del anticuerpo
anti-IL-21 R y un agente terapéutico
también están dentro del alcance de la invención. Las composiciones
y combinaciones de la invención se pueden utilizar para regular las
células inmunitarias dependientes de IL-21, tales
como las células B, las células T, las células NK, los macrófagos, y
las células sinoviales.
En otro aspecto, la invención ofrece un
anticuerpo de acuerdo con la invención para la fabricación de un
medicamento para tratar una enfermedad asociada con las células
inmunitarias como se define en la reivindicación 21. El uso incluye
administrar al sujeto un anticuerpo
anti-IL-21 R en una cantidad
suficiente para inhibir al menos una actividad de
IL-21 R de las células inmunitarias, tratando de ese
modo la enfermedad asociada a las células inmunitarias.
El anticuerpo
anti-IL-21 R se puede administrar a
un sujeto, solo o combinado, con otros agentes terapéuticos como se
describe en la presente memoria. El sujeto puede ser un mamífero que
padece una patología asociada con células inmunitarias (p. ej., una
patología asociada con la actividad aberrante de al menos una de:
las células T, las células NK, las células B, los macrófagos y los
megacariocitos). El sujeto puede ser un ser humano. Por ejemplo, el
anticuerpo se puede utilizar para tratar a un sujeto con un
trastorno asociado a células inmunitarias tal como el rechazo de
transplantes y las enfermedades autoinmunitarias. Las enfermedades
autoinmunitarias pueden incluir diabetes melitus (tipo I), artritis
(incluyendo artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil,
osteoartritis, artritis psoriásica, y espondilitis anquilosante),
esclerosis múltiple, miastenia grave, vasculitis, lupus eritematoso
generalizado, tiroiditis autoinmunitaria, dermatitis (incluyendo
dermatitis atópica y dermatitis eccematosa), psoriasis,
esclerodermia, asma, alergia, enfermedad inflamatoria del intestino
(IBD), y enfermedad de Crohn. El tratamiento de un trastorno
artrítico (p. ej., un trastorno seleccionado entre al menos uno de
artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis,
artritis psoriásica, y espondilitis anquilosante) utilizando los
anticuerpos anti-IL-21 R de la
presente invención es una realización de la invención.
Los anticuerpos de la invención se pueden
utilizar para detectar la presencia de IL-21R en una
muestra, in vitro. Las muestras pueden incluir muestras
biológicas tales como suero, plasma, tejido y biopsia. Los
anticuerpos se pueden utilizar para diagnosticar un trastorno, tal
como un trastorno asociado a células inmunitarias como se describe
en la presente memoria (1) poniendo en contacto la muestra o una
muestra de control con un anticuerpo
anti-IL-21 R, y (2) detectando la
formación de un complejo entre el anticuerpo
anti-IL-21 R y la muestra o la
muestra de control, donde un cambio estadísticamente significativo
en la formación del complejo en la muestra con respecto a la
muestra de control, es indicativo de la presencia de
IL-21 R en la muestra.
Los anticuerpos de la invención se pueden
utilizar para detectar la presencia de IL-21R in
vivo (p. ej., la formación de imágenes in vivo en un
sujeto) para diagnosticar un trastorno, p. ej., un trastorno
asociado a células inmunitarias como se describe en la presente
memoria (1) administrando un anticuerpo
anti-IL-21R a un sujeto o a un
sujeto de control en condiciones que permitan la unión del
anticuerpo a IL-21 R, y (2) detectando la formación
de un complejo entre el anticuerpo e IL-21 R, donde
un cambio estadísticamente significativo en la formación del
complejo en el sujeto con respecto a un control, p. ej., un sujeto
de control, es indicativo de la presencia de
IL-21R.
Un anticuerpo de acuerdo con la invención puede
estar marcado directamente o indirectamente con una sustancia
detectable para facilitar la detección del anticuerpo unido o no
unido. Las sustancias detectables adecuadas incluyen diferentes
enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales
luminescentes y materiales radiactivos.
Los anticuerpos de la invención se pueden
utilizar para liberar o dirigir un agente, p. ej., un agente
terapéutico o citotóxico, a una célula que expresa
IL-21 R in vivo administrando un anticuerpo
anti-IL-21 R a un sujeto en
condiciones que permitan la unión del anticuerpo a
IL-21 R. El anticuerpo se puede acoplar a un segundo
radical terapéutico, tal como una toxina.
La descripción proporciona secuencia de ácido
nucleico de los dominios V_{H} y V_{L} de MUF, línea germinal
MUF, MU11, 18G4, 18A5, 19F5, CP5G2 y R18. Asimismo se proporcionan
secuencias de ácido nucleico que comprenden al menos una CDR de
MUF, línea germinal MUF, MU11, 18G4, 18A5, 19F5, CP5G2 y R18. La
descripción también proporciona vectores y células anfitrionas que
comprenden tales ácidos nucleicos.
La descripción proporciona adicionalmente
métodos de producción de nuevos dominios V_{H} y V_{L} y
anticuerpos funcionales que comprenden todos o una porción de tales
dominios derivados de los dominios V_{H} o V_{L} de MUF, línea
germinal MUF, MU11, 18G4, 18A5, 19F5, CP5G2 o R18.
Los aspectos adicionales de la descripción se
expondrán en parte en la explicación, y en parte serán obvios a
partir de la explicación, o se pueden aprender poniendo en práctica
la invención. La invención se expone y concretamente se muestra en
las reivindicaciones, y la explicación no se debe considerar
limitante del alcance de las reivindicaciones. La siguiente
explicación detallada incluye representaciones ilustrativas de
diferentes realizaciones de la invención, que no son restrictivas
de la invención reivindicada. Las figuras adjuntas constituyen una
parte de esta memoria y, junto con la descripción, sirven solamente
para ilustrar las realizaciones y no limitan la invención.
La Figura 1A describe el resultado de un ELISA
que muestra que MU11 se une específicamente a IL-21
R humano.
La Figura 1B describe el resultado de un
análisis de unión analizado mediante FACS que muestra que tanto MUF
como MU11 se unen sobre la superficie del IL-21 R
humano.
La Figura 1C describe el resultado de un
análisis de unión analizado mediante FACS que muestra que MUF se une
a IL-21 R sobre células B de ratón.
La Figura 2 describe el resultado de un ELISA
que muestra que MUF inhibe la unión de IL-21 humana
a IL-21 R humano.
\newpage
La Figura 3A describe el resultado de un
análisis de proliferación celular que muestra que la adición de MUF
bloqueaba la capacidad de IL-21 para incrementar la
proliferación de células T CD4+ humanas.
La Figura 3B describe el resultado de un
análisis de proliferación celular que muestra que MU11 bloqueaba la
capacidad de IL-21 en medios de cultivo de células
COS para incrementar la proliferación de células T CD4+ de
ratón.
La Figura 3C describe el resultado de un
análisis de proliferación celular que muestra que MU11 bloqueaba la
capacidad de IL-21 en medios de cultivo de células
COS para incrementar la proliferación de células T CD8+ de ratón, de
una manera dependiente de la dosis.
La Figura 4 describe el resultado de un análisis
de proliferación celular que muestra que tanto MUF scFv como MUF IgG
bloqueaban la capacidad de IL-21 para incrementar la
proliferación de células Baf3Mu-1 que expresan un
IL-21 R.
La Figura 5A describe que la adición de
IL-21 a sinoviocitos de tipo fibroblasto humanos
aislados de pacientes con artritis conduce a un aumento de la
secreción de las quimioquinas MCP-1 y GRO.
La Figura 5B describe que la adición de
IL-21 a sinoviocitos de tipo fibroblasto humanos
aislados de pacientes con artritis conduce a un incremento en la
secreción de las quimioquinas 1-309, TARC, Eotaxina,
MDC, Linf, SDFIB, IP-10, I-TAC, MG y
MP3B.
Las Figuras 5C y 5D describen que la adición de
IL-21 a sinoviocitos de tipo fibroblasto humanos
aislados de pacientes con artritis conduce a un incremento en la
secreción de las citoquinas IFN-alfa y
TNF-alfa (Fig. 5C) e IL-6 e IL8
(Fig. 5D).
La Figura 5E muestra que IL-21
exacerba la artritis inducida por colágeno (AIC) en un modelo de
ratón para artritis, medida por los indicios de AIC.
La Figura 6 muestra que IL-21
aumenta la proliferación de células C57BU6J en una reacción de
linfocitos mixtos, en un modelo in vitro para el rechazo de
transplantes.
Con el fin de comprender más fácilmente la
presente invención, se definen primero ciertos términos. Las
definiciones adicionales se exponen a lo largo de toda la
descripción detallada.
"Anticuerpo" hace referencia a una
inmunoglobulina o uno de sus fragmentos, y abarca cualquier
polipéptido que comprende un sitio de unión a un antígeno. El
término no está limitado a anticuerpos policlonales, monoclonales,
monoespecíficos, poliespecíficos, no específicos, humanizados,
humanos, de cadena sencilla, quiméricos, sintéticos, recombinantes,
híbridos, mutados, injertados, y generados in vitro. A menos
que esté precedido por la palabra "intacto", el término
"anticuerpo" incluye fragmentos de anticuerpo tales como Fab,
F(ab')_{2}, Fv, scFv, Fd, dAb, y otros fragmentos de
anticuerpo que conservan la función de unión al antígeno.
Típicamente, tales fragmentos comprenderían un dominio de unión a un
antígeno.
Los términos "dominio de unión a un
antígeno" y "fragmento de unión a un antígeno"
hacen referencia a una parte de una molécula de anticuerpo que
comprende los aminoácidos responsables de la unión específica entre
el anticuerpo y el antígeno. La porción del antígeno que es
específicamente reconocida y unida por el anticuerpo es referida
como "epítopo". Un dominio de unión a un antígeno puede
comprender una región variable de la cadena ligera del anticuerpo
(V_{L}) y una región variable de la cadena pesada del anticuerpo
(V_{H}); sin embargo, no tiene que comprender ambas. Los
fragmentos Fd, por ejemplo, tienen dos regiones V_{H} y a menudo
conservan una cierta función de unión al antígeno del dominio de
unión al antígeno intacto. Los ejemplos de los fragmentos de unión
a un antígeno de un anticuerpo incluyen (1) un fragmento Fab, un
fragmento monovalente que consiste en los dominios V_{L},
V_{H}, C_{L} y C_{H}1; (2) un fragmento F(ab')_{2},
un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por
un puente disulfuro en la región bisagra; (3) un fragmento Fd que
consiste en los dos dominios V_{H} y C_{H}1; (4) un fragmento Fv
que consiste en los dominios V_{L }y V_{H} de un brazo sencillo
de un anticuerpo, (5) un fragmento dAb (Ward et al., (1989)
Nature 341:544-546), que consiste en un dominio
V_{H}; y (6) una región determinante de la complementariedad
aislada (CDR). Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv,
V_{L} y V_{H}, están codificados por genes separados, estos se
pueden unir, utilizando métodos recombinantes, por medio de un
conector sintético que les permite ser formados como una única
cadena de proteína en la que las regiones V_{L} y V_{H} se
emparejan para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de
cadena sencilla (scFv); véanse p. ej., Bird et al. (1988)
Science 242:423-426; y Huston et al. (1988)
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Estos
fragmentos de anticuerpo se obtienen utilizando técnicas
convencionales conocidas por los expertos en la técnica, y los
fragmentos se escrutan en busca de su utilidad de la misma manera
que los anticuerpos intactos.
\newpage
El término "cantidad eficaz" hace
referencia a una dosificación o una cantidad que es suficiente para
regular la actividad de IL-21 R para aliviar los
síntomas clínicos o lograr un resultado biológico deseado, p. ej.,
disminución de la actividad de las células T y/o las células B,
supresión de la autoinmunidad, supresión del rechazo de
transplantes, etc.
El término "anticuerpo humano"
incluye anticuerpos que tienen regiones variables y constantes
correspondientes esencialmente a secuencias de inmunoglobulina de
la línea germinal humana como describen Kabat et al. (Véase
Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological
Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human
Services, NIH Publication No. 91-3242). Los
anticuerpos humanos de la invención pueden incluir restos
aminoácido no codificados por secuencias de inmunoglobulina de la
línea germinal humana (p. ej., mutaciones introducidas al azar o
mutagénesis específica del sitio in vitro o mediante mutación
somática in vivo), por ejemplo en las CDR, y en particular,
CDR3. El anticuerpo humano puede tener al menos una, dos, tres,
cuatro, cinco, o más posiciones remplazadas por un resto aminoácido
que no codificado por la secuencia de inmunoglobulina de la línea
germinal humana.
El término "actividad
IL-21R" hace referencia a al menos un proceso
celular iniciado o interrumpido como resultado de la unión de
IL-21 a IL-21 R sobre la célula. Las
actividades de IL-21 R incluyen al menos una de,
pero no están limitadas a: (1) unión a IL-21 (p.
ej., IL-21 humana); (2) asociación con moléculas
transductoras de señales (p. ej., \gammac y/o
JAK-1); (3) estimulación de la fosforilación de las
proteínas STAT (p. ej., STAT5, STAT3, o una de sus combinaciones);
(4) activación de proteínas STAT; y (5) modulación (p. ej., aumento
o disminución) de la proliferación, diferenciación, función de
células efectoras, actividad citolítica, secreción de citoquinas,
supervivencia, o sus combinaciones, de las células inmunitarias. Las
células inmunitarias pueden incluir células T CD8+ y CD4+, células
NK, células B, macrófagos, y megacariocitos. La actividad de
IL-21 R se puede determinar in vitro, por
ejemplo, utilizando análisis de proliferación de células T como los
descritos en los Ejemplos 8 y 9. La actividad de
IL-21R también se puede determinar in vivo,
por ejemplo, puntuando el progreso de una respuesta inmunitaria o
un trastorno como se describe en el Ejemplo 12.
La frase "inhibir" o "ejercer
antagonismo" sobre la actividad de IL-21R o
sus cognados hace referencia a una reducción, inhibición, o
disminución de otro modo de al menos una actividad de
IL-21 R debido a la unión a un anticuerpo
anti-IL-21 R, donde la reducción es
con respecto a la actividad de IL-21 R en ausencia
del mismo anticuerpo. La actividad se puede medir como se describe
en los Ejemplos 7, 8, 9 y 11. La inhibición o antagonismo no
indican necesariamente una eliminación total de la actividad
biológica del polipéptido IL-21 R. La reducción de
la actividad puede ser de aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40%, 50%,
60%, 70%, 80%, 90%, o más.
El término "receptor de interleuquina
1" o "IL-21R" hace referencia a
una clase de receptor de citoquina I, también conocido como NILR
(documento WO 01/85792; Parrish-Novak et al.
(2000) Nature 408:57-63; Ozaki et al. (2000)
Proc. Natl. Acad Sci. USA 97:11439-114444). Tras la
unión al ligando, IL-21 R interacciona con una
cadena receptora de citoquina \gamma común (\gammac) (Asao
et al. (2001) J. Immunol. 167:1-5), e induce
la fosforilación de STAT1 y STAT3 (Asao et al. (2001)
supra o STAT5 (Ozaki et al. (2000) supra). El
IL-21 R muestra una amplia distribución en el tejido
linfoide. El término "IL-21R" hace referencia
a un receptor (que puede ser de mamífero) que es capaz de unirse a
IL-21, y tiene al menos una de las siguientes
características: (1) una secuencia de aminoácidos de un polipéptido
IL-21 R de mamífero de origen natural o uno de sus
fragmentos, p. ej., una secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ
ID NO: 43 (humana) o SEQ ID NO: 45 (murina) o uno de sus fragmentos;
(2) una secuencia de aminoácidos esencialmente idéntica, p. ej.,
idéntica al menos en un 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, a una
secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO: 43 (humana) o SEQ
ID NO: 45 (murina) o uno de sus fragmentos; (3) una secuencia de
aminoácidos que es codificada por una secuencia de nucleótidos de
IL-21 R de mamífero de origen natural o uno de sus
fragmentos (p. ej., SEQ ID NO: 44 (humana) o SEQ ID NO: 4 6 (murina)
o uno de sus fragmentos); (4) una secuencia de aminoácidos
codificada por una secuencia de nucleótidos que es esencialmente
idéntica, p. ej., idéntica al menos en un 85%, 90%, 95%, 96%, 97%,
98%, 99%, a una secuencia de nucleótidos mostrada como SEQ ID NO:
44 (humana) o SEQ ID NO: 46 (murina) o uno de sus fragmentos; (5)
una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de
nucleótidos degenerada con respecto a una secuencia de nucleótidos
de IL-21 R de origen natural o uno de sus
fragmentos, p. ej., SEQ ID NO: 44 (humana) o SEQ ID NO: 46 (murina)
o uno de sus fragmentos; o (6) una secuencia de nucleótidos que
hibrida con una de las secuencias de nucleótidos anteriores en
condiciones restrictivas, p. ej., condiciones muy restrictivas. El
IL-21R se puede unir a la IL-21 de
origen mamífero, p. ej., humana o de ratón
(Parrish-Novak et al. (2000)
supra).
Según se utiliza en la presente memoria,
"anticuerpo generado in vitro " hace referencia a
un anticuerpo en el que toda o parte de la región variable (p. ej.,
al menos una CDR) es generada en una selección de células no
inmunitarias (p. ej., una presentación en fagos in vitro, un
chip de proteína o cualquier método en el cual se puedan someter a
ensayo secuencias candidato en cuanto a su capacidad para unirse a
un antígeno). Este término excluye secuencias generadas mediante
transposición genómica en una célula inmunitaria.
El término "aislado" hace referencia
a una molécula que está esencialmente libre de de su entorno
natural. Por ejemplo, una proteína aislada está esencialmente libre
de material celular u otras proteínas de la célula o tejido de
origen de la cual derivaba. El término también hace referencia a
preparaciones en las que la proteína aislada es suficientemente
pura para las composiciones farmacéuticas; o pura al menos en un
70-80% (p/p); o pura al menos en un
80-90% (p/p); o pura al menos en un
90-95%; o pura al menos en un 95%, 96%, 97%, 98%,
99%, o pura en un 100% (p/p).
La secuencia de nucleótidos y la secuencia de
aminoácidos pronosticada del IL-21R humano se
muestran en el SEQ ID NO: 44 y el SEQ ID NO: 43, respectivamente.
El análisis de la secuencia de aminoácidos de IL-21R
humano (SEQ ID NO: 43) reveló las siguientes características
estructurales: una secuencia líder (aproximadamente aminoácidos
1-19 del SEQ ID NO: 43); un motivo WSXWS
(aproximadamente aminoácidos 213-217 del SEQ ID NO:
43); un dominio transmembrana (aproximadamente aminoácidos
236-252 del SEQ ID NO:43); un dominio extracelular
(aproximadamente aminoácidos 1-235 del SEQ ID NO:
43 y aproximadamente 20-235 de la secuencia de
IL-21R madura); y un dominio intracelular desde
aproximadamente los aminoácidos 253-538 del SEQ ID
NO: 43. Se cree que el IL-21R humano maduro tiene la
secuencia de aminoácidos 20-538 del SEQ ID NO:
43.
El término "repertorio" hace
referencia a una colección genéticamente diversa de secuencias de
nucleótidos derivadas total o parcialmente de secuencias que
codifican inmunoglobulinas. Las secuencias pueden ser generadas
mediante transposición in vivo de los segmentos V, D, y J de
las cadenas pesadas, y los segmentos V y J de las cadenas ligeras.
Alternativamente, las secuencias se pueden generar a partir de una
célula en respuesta a la cual se produce la transposición, p. ej.,
estimulación in vitro. Alternativamente, parte o todas las
secuencias se pueden obtener mediante empalme de ADN, síntesis de
nucleótidos, mutagénesis, y otros métodos, véase, p. ej., la Patente
de los Estados Unidos Núm. 5.565.332.
Los términos "unión específica",
"unión selectiva" y "se une selectivamente"
hacen referencia a dos moléculas que forman un complejo que es
relativamente estable en condiciones fisiológicas. La unión
selectiva se caracteriza por una elevada afinidad y una capacidad
baja a moderada que se distingue de la unión no específica que tiene
normalmente una baja afinidad con una capacidad moderada a elevada.
Típicamente, la unión se considera específica o selectiva cuando la
constante de afinidad K_{a} es mayor de 10^{6}\cdotM^{-1}.
Si es necesario, se puede reducir la unión no específica sin
afectar esencialmente la unión selectiva variando las condiciones de
unión. Las condiciones de unión apropiadas, tales como la
concentración de anticuerpos, la fuerza iónica de la solución, la
temperatura, el tiempo permitido para la unión, la concentración de
agente de bloqueo (p. ej., albúmina de suero, caseína de la leche),
etc., pueden ser optimizados por un experto en la técnica utilizando
técnicas rutinarias. Las condiciones ilustrativas se exponen en los
Ejemplos 1-11, pero otras condiciones conocidas por
el experto en la técnica están dentro del alcance de esta
invención.
Según se utiliza en la presente memoria, el
término "restrictivo" describe las condiciones de la
hibridación y el lavado. Las condiciones restrictivas son conocidas
por los expertos en la técnica y se pueden encontrar en Current
Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989),
6.3.1-6.3.6. Los métodos acuosos y no acuosos se
describen en esa referencia y se puede utilizar cualquiera. Un
ejemplo de condiciones de hibridación restrictivas es la
hibridación en 6X cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) a
aproximadamente 45ºC, seguida de al menos un lavado en 0,2X SSC,
SDS al 0,1%, a 50ºC. Un segundo ejemplo de condiciones de
hibridación restrictivas es la hibridación en 6X SSC a
aproximadamente 45ºC, seguido de al menos un lavado en 0,2X SSC, SDS
al 0,1% a 55ºC. Otro ejemplo de condiciones de hibridación
restrictivas es la hibridación en 6X SSC a aproximadamente 45ºC,
seguida de al menos un lavado en 0,2X SSC, SDS al 0,1% a 60ºC. Un
ejemplo adicional de condiciones de hibridación restrictivas es la
hibridación en 6X SSC a aproximadamente 45ºC, seguida de al menos un
lavado en 0,2X SSC, SDS al 0,1% a 65ºC. Las condiciones muy
restrictivas incluyen hibridación en fosfato de sodio 0,5 M, SDS al
7% a 65ºC, seguida de al menos un lavado a 0,2X SSC, SDS al 1% a
65ºC.
La frase "como se expone
esencialmente", "esencialmente idéntico" o
"esencialmente homólogo" significa que la secuencia de
aminoácidos o nucleótidos relevante, (p. ej., CDR, dominio V_{H},
o V_{L}) será idéntica o tendrá diferencias insustanciales (por
medio de sustituciones de aminoácidos conservadas) en comparación
con las secuencias que se exponen. Las diferencias insustanciales
incluyen cambios de aminoácidos minoritarios, tales como 1 o 2
sustituciones en una secuencia de 5 aminoácidos de una región
especificada. En el caso de los anticuerpos, el segundo anticuerpo
tiene la misma especificidad y tiene al menos una afinidad del 50%
con la misma.
Las secuencias esencialmente idénticas u
homólogas (p. ej., una identidad de secuencia de al menos
aproximadamente 85%) con las secuencias descritas en la presente
memoria también son parte de esta solicitud. La identidad de
secuencia puede ser de aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,
96%, 97%, 98%, 99% o superior. Alternativamente, existe una
identidad u homología esenciales cuando los segmentos de ácido
nucleico hibridan en condiciones de hibridación selectivas (p. ej.,
condiciones de hibridación altamente restrictivas), con el
complemento de la hebra. Los ácidos nucleicos pueden estar
presentes en células completas, en un producto lisado celular, o en
una forma parcialmente purificada o esencialmente pura.
El porcentaje de identidad puede ser determinado
mediante algoritmos de alineamiento convencionales, por ejemplo, la
Herramienta de Alineamiento Local Básica (BLAST) descrita por
Altshul et al. ((1990) J. Mol. Biol., 215:
403-410); el algoritmo de Needleman et al.
((1970) J. Mol. Biol., 48: 444-453); o el algoritmo
de Meyers et al. ((1988) Comput. Appl. Biosci., 4:
11-17). Un grupo de parámetros puede ser la matriz
de puntuación Blosum 62 con una penalización del espacio de 12, una
penalización de la extensión del espacio de 4, y una penalización
del espacio del desplazamiento del marco de 5. El porcentaje de
identidad entre dos secuencias de aminoácidos o de nucleótidos
también se puede determinar utilizando el algoritmo de E. Meyers y
W. Miller ((1989) CABIOS, 4: 11-17) que ha sido
incorporado el programa ALIGN (versión 2.0), utilizando una tabla de
restos de peso PAM120, una penalización de la longitud del espacio
de 12 y una penalización del espacio de 4.
El término "agente terapéutico" es
una sustancia que trata o ayuda al tratamiento de un trastorno
médico. Según se utiliza en la presente memoria, un agente
terapéutico hace referencia a una sustancia que, cuando se
administra a un sujeto con el anticuerpo
anti-IL-21R, proporciona una
tratamiento mejor en comparación con la administración del agente
terapéutico o el anticuerpo
anti-IL-21R solos. Estos agentes
terapéuticos pueden incluir, pero no están limitados a, sustancias
que modulan las células inmunitarias o las respuestas inmunitarias
de una manera que complementa la actividad IL-21R de
los anticuerpos anti-IL-21R. Los
ejemplos no limitantes y los usos de los agentes terapéuticos se
describen en la presente memoria.
Según se utiliza en la presente memoria, una
"cantidad terapéuticamente eficaz" de un anticuerpo
anti-IL-21R hace referencia a una
cantidad de un anticuerpo que es eficaz, tras la administración de
una dosis sencilla o múltiple a un sujeto (tal como un paciente
humano) en tratamiento, prevención, curación, retraso, reducción de
la gravedad de, alivio de al menos un síntoma de un trastorno o un
trastorno recurrente, o prolongación de la supervivencia del sujeto
más allá de lo esperado en ausencia de semejante tratamiento.
El término "tratamiento" hace
referencia a una medida terapéutica o preventiva. El tratamiento se
puede administrar a un sujeto que tiene un trastorno médico o que
puede adquirir a la larga el trastorno, con el fin de prevenir,
curar, retrasar, reducir la gravedad de, o aliviar uno o más
síntomas de un trastorno o trastorno recurrente, o con el fin de
prolongar la supervivencia de un sujeto más allá de los esperado en
ausencia de semejante tratamiento.
\vskip1.000000\baselineskip
La descripción proporciona anticuerpos
anti-IL-21R novedosos que comprenden
fragmentos de unión al antígeno novedosos.
En general, se pueden elaborar anticuerpos, por
ejemplo, utilizando técnicas de hibridoma tradicionales (Kohler y
Milstein (1975) Nature, 256: 495-499), métodos de
ADN recombinante (Patente de los Estados Unidos 4.816.567), o
presentación en fagos utilizando genotecas de anticuerpos (Clackson
et al. (1991) Nature, 352: 624-628; Marks
et al. (1991) J. Mol. Biol., 222: 581-597).
Para las técnicas de producción de anticuerpos adicionales, véase
Antibodies: A Laboratory Manual, eds. Harlow et al., Cold
Spring Harbor Laboratory, 1988. La presente invención no está
limitada a ninguna fuente concreta, método de producción, u otras
características especiales de un anticuerpo.
Los anticuerpos intactos son las
inmunoglobulinas (Ig), y éstas son típicamente proteínas
glicosiladas tetraméricas compuestas por dos cadenas ligeras (-25
kDa cada una) y dos cadenas pesadas (-50 kDa cada una). Las cadenas
ligeras se clasifican en dos isotipos (\lambda y k), y las cadenas
pesadas se clasifican en cinco isotipos (A, D, E, G, y M). Algunos
isotipos de cadenas pesadas se dividen adicionalmente en subclases
de isotipo, p. ej., IgGi, IgG_{2}, IgG_{3}, y IgG_{4}.
El dominio y las estructuras tridimensionales de
los diferentes anticuerpos son conocidos en la técnica (Harlow
et al., supra). En resumen, la cadena ligera está compuesta
por un dominio constante (CL) y un dominio variable
N-terminal (V_{L}). La cadena pesada está
compuesta por tres o cuatro dominios constantes (C_{H}), una
región bisagra, y un dominio variable N-terminal
(V_{H}). El C_{H} adyacente al dominio V_{H} se denomina
C_{H}1. Los dominios V_{H} y V_{L} contienen cuatro regiones
de secuencia conservada denominadas regiones marco (FR) (FR1, FR2,
FR3, y FR4), que forman un armazón para tres regiones de secuencia
hipervariable denominadas regiones determinantes de la
complementariedad (CDR). Las CDR (CDR1, CDR2, y CDR3) contienen la
mayor parte de los aminoácidos del anticuerpo que se unen
específicamente al antígeno. Las CDR de la cadena pesada se indican
como H1, H2, y H3, mientras las CDR de la cadena ligera se indican
como L1, L2, y L3.
El fragmento Fab (de Fragment
antigen-binding en inglés, fragmento de unión al
antígeno) consiste en los dominios V_{H}-C_{H}1
y V_{L}-C_{L} conectados covalentemente por un
enlace disulfuro entre las regiones constantes. El fragmento
F_{v} es más pequeño y consiste en los dominios V_{H} y V_{L}
conectados no covalentemente. Para superar la tendencia de dominios
no covalentes a disociarse, se puede construir un fragmento Fv de
cadena sencilla (scF_{v}). El scF_{v} contiene un polipéptido
flexible que conecta (1) el extremo C de V_{H} al extremo N de
V_{L}, o (2) el extremo C de V_{L} al extremo N de V_{H}. Se
puede utilizar un péptido (Gly_{4}Ser)_{3} de 15 unidades
como conector, pero se conocen otros conectores en la técnica.
La diversidad de anticuerpos se crea mediante el
uso de múltiples genes de la línea germinal que codifican regiones
variables y una variedad de eventos somáticos. Los eventos somáticos
incluyen la recombinación de segmentos de genes variables y
segmentos de genes de diversidad (D) y unión (J) para elaborar una
región V_{H }completa y la recombinación de segmentos de genes
variables y de unión para elaborar una región V_{L} completa. La
CDR3 (H3) es la mayor fuente de diversidad molecular de una
secuencia de anticuerpo. H3, por ejemplo, puede ser tan corta como
dos restos aminoácido o mayor de 26. El fragmento de unión al
antígeno más pequeño es Fv, que consiste en los dominios V_{H} y
V_{L}.
No es probable que los anticuerpos y las
composiciones que tienen una secuencia de CDR idéntica o similar a
las descritas en la presente memoria hayan sido generados
independientemente. La secuencia de los genes del anticuerpo
después del ensamblaje y la mutación somática varía enormemente, y
se estima que estos genes variados codifican 10^{10} moléculas de
anticuerpo diferentes (Immunoglobulin Genes, 2ª ed., eds. Jonio
et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995).
\newpage
La presente descripción proporciona CDR
novedosas derivadas de genotecas de genes de inmunoglobulina humana.
La estructura para portar una CDR es generalmente una cadena pesada
o ligera de un anticuerpo o una de sus porciones, donde la CDR está
localizada en la región de una CDR de origen natural. Las
estructuras y localizaciones de los dominios variables se pueden
determinar como describen Kabat et al., Sequences of Proteins
of Immunological Interest, No. 91-3242, National
Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991).
Las secuencias de ADN y aminoácidos (AA) de las
realizaciones ilustrativas de los anticuerpos
anti-IL-21R de esta invención,
incluyendo sus fragmentos scF_{v}, dominios V_{H} y V_{L}, y
CDR, se exponen en la Lista de Secuencias y se enumeran en las
Tablas 1A y 1B. Las realizaciones específicas de los anticuerpos se
identifican como MUF, línea germinal MUF, MU11, 18G4, 18A5, 19F5,
CP5G2 y R18. Las posiciones de CDR en los dominios V_{H} y V_{L}
de los anticuerpos se enumeran en la Tabla 2.
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Los anticuerpos
anti-IL-21R de esta invención pueden
comprender opcionalmente regiones constantes de anticuerpos o sus
porciones. Por ejemplo, se puede anclar un dominio V_{L} en su
extremo C-terminal a un dominio constante de la
cadena ligera como Ck o C\lambda. De un modo similar, se puede
anclar un dominio V_{H} o una de sus porciones a toda o parte de
una cadena pesada como IgA, IgD, IgE, IgG, y IgM, y cualquier
subclase de isotipo. Las regiones constantes son conocidas en la
técnica (véase, por ejemplo, Kabat et al., Sequences of
Proteins of Immunological Interest, No. 91-3242,
National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991).
En realizaciones ilustrativas, MUF comprende
dominios constantes de la cadena pesada y ligera de IgG_{1\lambda}
humana, y MU11 comprende los dominios constantes de la cadena pesada
y ligera de IgG_{1\kappa} humana. En estos anticuerpos, las
secuencias de las cadenas pesadas fuera del dominio V_{H} son
idénticas. Las secuencias de ADN y de aminoácidos para el fragmento
C terminal de la cadena ligera \lambda se exponen en el SEQ ID
NO: 40 y el SEQ ID NO: 39, respectivamente. Las secuencias de ADN y
de aminoácidos para el fragmento C terminal de la cadena \kappa
se exponen en el SEQ ID NO: 42 y el SEQ ID NO: 41, respectivamente.
Las secuencias de ADN y de aminoácidos para el fragmento C terminal
de la cadena pesada de IgG_{1} se exponen en el SEQ ID NO: 38 y el
SEQ ID NO: 37, respectivamente.
Ciertas realizaciones comprende un dominio
V_{H} y un dominio V_{L}, o un fragmento scF_{v} del fragmento
F_{v} de MUF, línea germinal MUF, MU11, 18G4, 18A5, 19F5, CP5G2,
o R18. Asimismo se describen anticuerpos que comprenden una, dos,
tres, cuatro, cinco o seis regiones determinantes de la
complementariedad (CDR) de los dominios V_{H} y V_{L}. Los
anticuerpos cuyas secuencias de CDR se exponen en los SEQ ID NO: 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 47, 48,
49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 83,
84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107,
108, 109, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 137, 138,
139, 140, 141, 142, 143, 144, o 145 están incluidos en el alcance
de esta invención. Por ejemplo, un anticuerpo comprende un fragmento
de CDR3 (H3) del dominio V_{H} de MUF, línea germinal MUF, MU11,
18G4, 18A5, 19F5, CP5G2, o R18.
Los dominios V_{H} y/o V_{L} pueden ser
asimilados a la línea germinal, esto es, las regiones marco (FR) de
estos dominios se mutan utilizando técnicas de biología molecular
convencionales para que correspondan a las producidas por las
células de la línea germinal. Las secuencias de FR permanecen
diferentes de las secuencias de la línea germinal consenso.
Se proporcionan las secuencias de aminoácidos y
ácido nucleico para MUF asimilado a la línea germinal. La secuencia
de aminoácidos para el dominio V_{H} de MUF asimilado a la línea
germinal se representa en el SEQ ID NO: 83 y 85. La secuencia de
aminoácidos para el dominio V_{L} de MUF asimilado a la línea
germinal MUF se representa en el SEQ ID NO: 84 y 85. La secuencia
de ácido nucleico para el dominio V_{H} de MUF asimilado a la
línea germinal se representa en el SEQ ID NO: 92 y 94 y la del
dominio V_{L} asimilado a la línea germinal se representa en el
SEQ ID NO: 93 y 94. Las secuencias de la línea germinal para los
dominios V_{H} y V_{L} pueden ser identificadas realizando
alineamientos de la secuencia de aminoácidos y ácido nucleico
frente a la base de datos VBASE (MRC Center for Protein Engineering,
UK). Las regiones FR de los scFvs se mutan en conformidad con los
emparejamientos más próximos de la base de datos VBASE y las
porciones CDR se mantienen intactas.
Los anticuerpos reaccionan específicamente con
un epítopo del dominio extracelular del IL-21R
humano. El dominio extracelular pronosticado consiste en una
secuencia de aproximadamente el aminoácido 20 a aproximadamente el
aminoácido 235 del SEQ ID NO: 43. Los anticuerpos
anti-IL-21R bloquean la unión de
IL-21 a IL-21R. Los anticuerpos
anti-IL-21R reaccionan
específicamente con un epítopo del dominio extracelular de
IL-21R de ratón. El dominio extracelular de
IL-21R murino consiste en una secuencia de
aproximadamente el aminoácido 20 a aproximadamente el aminoácido 236
del SEQ ID NO: 45. El dominio extracelular del
IL-21R de ratón es idéntico en aproximadamente un
65% a la contraparte humana.
Se contempla que los anticuerpos de esta
invención se puedan unir a otras proteínas, tales como, por ejemplo,
proteínas recombinantes que comprenden todo o una porción del
dominio extracelular de IL-21R.
Un experto normal en la técnica reconocerá que
los anticuerpos descritos se pueden usar para detectar, medir, y/o
inhibir proteínas que difieren algo del IL-21R. Por
ejemplo, estas proteínas pueden ser homólogos de
IL-21R. Se espera que los anticuerpos
anti-IL-21R se unan a proteínas que
comprenden una secuencia que es idéntica al menos aproximadamente
en un 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más a cualquier
secuencia de al menos 100, 80, 60, 40, o 20 aminoácidos contiguos
de la secuencia mostrada en el SEQ ID NO: 43.
Además de los análisis de homología de la
secuencia, se pueden llevar a cabo el mapeo epitópico (véase, p.
ej., Epitope Mapping Protocols, ed. Morris, Humana Press, 1996), y
los análisis de la estructura secundaria y terciaria para
identificar estructuras 3D específicas adoptadas por los anticuerpos
descritos actualmente y sus complejos con antígenos. Tales métodos
incluyen, pero no están limitados a, cristalografía de rayos X
(Engstom (1974) Biochem. Exp. Biol., 11:7-13) y
modelado por ordenador de representaciones virtuales de los
presentes anticuerpos (Fletterick et al. (1986) Computer
Graphics y Molecular Modeling, in Current Communications in
Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring
Harbor, NY).
Se pueden obtener los anticuerpos
anti-IL-21R producidos creando
anticuerpos con las secuencias de V_{H} y/o V_{L} alteradas de
las Tablas 1A y 1B. Tales anticuerpos pueden ser obtenidos por el
experto en la técnica utilizando mecanismos conocidos en la
técnica. Por ejemplo, se pueden introducir sustituciones,
deleciones, o adiciones de aminoácidos en las regiones FR y/o CDR.
Los cambios en FR se diseñan normalmente para mejorar la
estabilidad y la inmunogenicidad del anticuerpo, si bien los cambios
en las CDR se diseñan típicamente para aumentar la afinidad del
anticuerpo por su antígeno. Los cambios que aumentan la afinidad se
pueden someter a ensayo alterando la secuencia de CDR y midiendo la
afinidad del anticuerpo por su diana (véase Antibody Engineering, 2ª
ed., Oxford University Press, ed. Borrebaeck, 1995).
Los anticuerpos cuyas secuencias de CDR difieren
insustancialmente de los expuestos en los SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 47, 48, 49, 50, 51,
52, 53, 54, 55, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 83, 84, 85, 86,
87, 88, 89, 90, 91, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109,
119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 137, 138, 139, 140,
141, 142, 143, 144, o 145 se describen dentro del alcance de esta
invención. Típicamente, esto implica la sustitución de un aminoácido
por un aminoácido que tiene características de carga,
hidrofobicidad, o estereoquímica similares. También se pueden
realizar sustituciones más drásticas en las regiones FR, en
contraste con las regiones CDR, con tal que no afecten adversamente
a las propiedades de unión del anticuerpo. Asimismo se pueden
realizar sustituciones para asimilar a la línea germinal el
anticuerpo o estabilizar el sitio de unión al antígeno.
Las modificaciones conservativas producirán
moléculas con características funcionales y químicas similares a
las de la molécula a partir de la cual se realizan tales
modificaciones. En contraste, se pueden lograr modificaciones
sustanciales en las características funcionales y/o químicas de las
moléculas seleccionando las sustituciones de la secuencia de
aminoácidos que difieren significativamente en su efecto sobre el
mantenimiento (1) de la estructura del esqueleto molecular en la
zona de la sustitución, por ejemplo, en forma de una lámina o una
conformación helicoidal, (2) de la carga o hidrofobicidad de la
molécula en el sitio diana, o (3) del tamaño de la molécula.
Por ejemplo, una "sustitución de aminoácidos
conservativa" puede implicar una sustitución de un resto
aminoácido nativo por un resto no nativo de manera que haya un
efecto pequeño o no haya efecto sobre la polaridad o la carga del
resto aminoácido de esa posición. Además, cualquier resto nativo del
polipéptido también puede ser sustituido por alanina, como se ha
descrito previamente para la "mutagénesis de barrido con
alanina" (véase, por ejemplo, MacLennan et al., 1998,
Acta Physiol. Scand. Supl. 643:55-67; Sasaki et
al., 1998, Adv. Biophys. 35:1-24).
Las sustituciones de aminoácidos deseadas (ya
sean conservativas o no conservativas) pueden ser determinadas por
los expertos en la técnica en el momento en el que se desean tales
sustituciones. Por ejemplo, se pueden utilizar sustituciones de
aminoácidos para identificar restos importantes de la secuencia de
la molécula, o para incrementar o disminuir la afinidad de las
moléculas descritas en la presente memoria. Las sustituciones de
aminoácidos ilustrativas se exponen en la Tabla 3.
\vskip1.000000\baselineskip
En ciertas realizaciones, las sustituciones de
aminoácidos conservativas también abarcan restos aminoácido de
origen no natural que se incorporan típicamente mediante síntesis
peptídica química en lugar de mediante síntesis en sistemas
biológicos.
Un método para elaborar un dominio V_{H}
variante puede comprender añadir, suprimir, o sustituir al menos un
aminoácido en los dominios V_{H} descritos, o combinar los
dominios V_{H} descritos con al menos un dominio V_{L}, y
someter a ensayo el dominio V_{H} variante para la unión de
IL-21R o la modulación de la actividad de
IL-21R.
Un método análogo para elaborar un dominio
V_{L} variante puede comprender añadir, suprimir, o sustituir al
menos un aminoácido en los dominios V_{L} descritos, o combinar
los dominios V_{L} descritos con al menos un dominio V_{H}, y
someter a ensayo el dominio V_{L} variante en cuanto a la unión a
IL-21R o la modulación de la actividad de
IL-21R.
Un método para preparar fragmentos de unión a un
antígeno que se unen a IL-21R puede comprender:
(a) proporcionar un repertorio de partida de
ácidos nucleicos que codifican un dominio V_{H} que carece de una
o más de las CDR1, 2 o 3 o contiene una CDR1, 2 o 3 que va a ser
remplazada;
(b) insertar en o remplazar la región CDR1, 2 o
3 del repertorio de partida por un ácido nucleico que codifica una
secuencia de aminoácidos esencialmente como la expuesta en la
presente memoria para una CDR1, 2, o 3 de V_{H}, dando lugar a un
repertorio de productos;
(c) expresar los ácidos nucleicos del repertorio
de productos;
(d) seleccionar un fragmento de unión al
antígeno específico que se une a IL-21R; y
(e) recuperar el fragmento de unión al antígeno
específico o un ácido nucleico que lo codifica.
\vskip1.000000\baselineskip
Un método análogo en el que se combinan la CDR1,
2 o 3 de V_{L} con un repertorio de ácidos nucleicos que codifican
un dominio V_{L} que carece de CDR1, 2 o 3 o contiene una CDR1, 2
o 3 que va a ser remplazada.
Utilizando la metodología del ADN recombinante,
se puede introducir una secuencia de CDR descrita en un repertorio
de dominios V_{H} o V_{L} que carecen de la respectiva CDR
(Marks et al. (BioTechnology (1992) 10:
779-783). Por ejemplo, se puede utilizar un cebador
adyacente al extremo 5' del dominio variable y un cebador para la
tercera FR para generar un repertorio de secuencias de dominios
variables que carecen de CDR3. Este repertorio se puede combinar
con una CDR3 de un anticuerpo descrito. Utilizando técnicas
análogas, se pueden barajar porciones de una secuencia de CDR
descrita con porciones de secuencias de CDR de otros anticuerpos
para proporcionar un repertorio de fragmentos de unión al antígeno
que se unen a IL-21R. Cualquier repertorio puede ser
expresado en un sistema anfitrión tal como una presentación en
fagos (descrita en el documento WO 92/01047) de manera que se
puedan seleccionar los fragmentos de unión al antígeno adecuados que
se unan a IL-21R.
Una alternativa adicional utiliza la mutagénesis
al azar de las secuencias de V_{H} o V_{L} descritas para
generar dominios V_{H} o V_{L} variantes capaces todavía de
unirse a IL-21R. Gram et al. (Proc. Nat.
Acad. Sci. U.S.A. (1992) 89: 3576-3580) describen
una técnica que utiliza una PCR con predisposición a errores.
Otro método utiliza la mutagénesis directa de
las secuencias V_{H} o V_{L} descritas. Tales técnicas son
descritas por Barbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.
(1994) 91: 3809-3813) y Schier et al. (J.
Mol. Biol. (1996) 263: 551-567).
Una porción de un dominio variable comprenderá
al menos una región CDR esencialmente como se muestra en la
presente memoria y, opcionalmente, regiones marco intermedias de los
dominios V_{H} o V_{L} como se expone en la presente memoria.
La porción puede incluir la mitad C terminal de FR1 y/o la mitad N
terminal de FR4. Los restos adicionales del extremo N terminal o C
terminal del dominio variable pueden no ser los mismos restos
encontrados en los anticuerpos de origen natural. Por ejemplo, la
construcción de anticuerpos mediante técnicas de ADN recombinante a
menudo introduce restos No C terminales de su uso como conectores.
Algunos conectores pueden ser utilizados para unir dominios
variables a otros dominios variables (p. ej., fragmentos
bivalentes), dominios constantes, o marcas proteináceas.
Aunque las realizaciones ilustradas en los
Ejemplos comprenden un par de "emparejamiento" de los dominios
V_{H} y V_{L}, un experto en la técnica reconocerá que las
realizaciones alternativas pueden comprender fragmentos de unión a
antígenos que contienen solamente una única CDR de cualquiera de los
dominios V_{L} o V_{H}. Se puede utilizar cualquiera de los
dominios de unión al antígeno específico de cadena sencilla para
escrutar en busca de dominios complementarios capaces de formar un
fragmento de unión al antígeno específico de dos dominios capaz,
por ejemplo, de unirse a IL-21R. El escrutinio se
puede completar mediante métodos de escrutinio de presentación en
fagos utilizando el denominado enfoque combinatorio dual jerárquico
descrito en el documento WO 92/01047. En este enfoque, se utiliza
una colonia individual que contiene un clon de la cadena H o L para
infectar una genoteca completa de clones que codifican la otra
cadena (L o H), y el dominio de unión al antígeno específico de dos
cadenas resultante se selecciona de acuerdo con las técnicas de
presentación en fagos descritas.
En algunas realizaciones alternativas, los
anticuerpos anti-IL-21R se pueden
unir a una proteína (p. ej., albúmina) mediante entrecruzamiento
químico métodos recombinantes. Los anticuerpos descritos también se
pueden conectar a una variedad de polímeros no proteináceos (p.
ej., polietilenglicol, polipropilen-glicol, o
polioxialquilenos) de las maneras expuestas en las Patentes de los
Estados Unidos Núms. 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417;
4.791.192; o 4.179.337. Los anticuerpos pueden ser modificados
químicamente mediante conjugación covalente con un polímero, por
ejemplo, para incrementar su vida media en la circulación sanguínea.
Los polímeros y los métodos de anclaje ilustrativos se muestran en
las Patentes de los Estados Unidos Núms. 4.766.106; 4.179.337;
4.495.285; y 4.609.546.
Los anticuerpos descritos pueden ser modificados
para alterar su glicosilación; esto es, se puede suprimir o añadir
al menos un radical carbohidrato al anticuerpo. La deleción o
adición de sitios de glicosilación se puede completar cambiando la
secuencia de aminoácidos para suprimir o crear sitios consenso de
glicosilación, que son bien conocidos en la técnica. Otro método
para añadir radicales carbohidrato es el acoplamiento químico o
enzimático de glicósidos a restos aminoácido del anticuerpo (véase
el documento WO 87/05330 y Aplin et al. (1981) CRC Crit.
Rev. Biochem., 22: 259-306). La eliminación de
radicales carbohidrato también se puede completar químicamente o
enzimáticamente (véanse Hakimuddin et al. (1987) Arch.
Biochem. Biophys., 259: 52; Edge et al. (1981) Anal.
Biochem., 118: 131; Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol.,
138: 350).
Los métodos para alterar una región constante de
un anticuerpo son conocidos en la técnica. Los anticuerpos con una
función alterada (p. ej., afinidad alterada por un ligando efector
tal como FcR en una célula o el componente C1 del complemento)
pueden ser producidos remplazando al menos un resto aminoácido de la
porción constante del anticuerpo por un resto diferente (véanse p.
ej., los documentos EP 388.151 A1, US 5.624.821 y US 5.648.260). Se
podrían describir tipos similares de alteraciones que si se
aplicaran a un anticuerpo murino o de otra especie reducirían o
eliminarían funciones similares.
Por ejemplo, es posible alterar la afinidad de
una región Fc de un anticuerpo (p. ej., una IgG, tal como una IgG
humana) por FcR (p. ej., Fc gamma R1) o C1q. La afinidad puede ser
alterada remplazando al menos un resto especificado por al menos un
resto que tiene una funcionalidad apropiada en su cadena lateral, o
introduciendo un grupo funcional cargado, tal como glutamato o
aspartato, o quizás un resto no polar aromático tal como
fenilalanina, tirosina, triptófano o alanina (véase p. ej., el
documento US 5.624.821).
Por ejemplo, remplazando el resto 297
(asparragina) por alanina en la región constante de la IgG se inhibe
significativamente el reclutamiento de células efectoras, aunque
solo se reduce ligeramente (aproximadamente tres veces más débil)
la afinidad por Clq (véase p. ej., el documento US 5.624.821). La
numeración de los restos de la cadena pesada es la del índice EU
(véase Kabat et al., 1991 supra). Esta alteración
destruye el sitio de glicosilación y se cree que se requiere la
presencia de carbohidrato para la unión al receptor Fc. Se cree que
cualquier otra sustitución en este sitio que destruya el sitio de
glicosilación causa un descenso similar en la actividad lítica.
También se sabe que otras sustituciones de aminoácidos, p. ej., el
cambio de uno cualquiera de los restos 318 (Glu), 320 (Lys) y 322
(Lys), por Ala, abole la unión de Clq a la región Fc de los
anticuerpos IgG (véase p. ej., el documento US 5.624.821). La
numeración de los restos en la cadena pesada es la del indice UE
(véase Kabat et al., 1991 supra). Esta alteración
destruye el sitio de glicosilación y se cree que se requiere la
presencia del carbohidrato para la unión al receptor Fc. Se cree que
cualquier otra sustitución en este sitio que destruya el sitio de
glicosilación ocasiona un descenso similar de la actividad lítica.
También se sabe que otras sustituciones de aminoácidos, p. ej., el
cambio de uno cualquiera de los restos 318 (Glu), 320 (Lys) y 322
(Lys), por Ala, abole la unión de Clq a la región Fc de los
anticuerpos IgG (véase p. ej., el documento US 3.624.821).
Se pueden producir anticuerpos modificados que
tienen una interacción reducida con un receptor Fc. Por ejemplo, se
ha demostrado que en la IgG_{3} humana, que se une al receptor R1
gamma Fc, el cambio de Leu 235 por Glu destruye su interacción con
el receptor. La mutación en sitios adyacentes o próximos en la
región de unión a la bisagra de un anticuerpo (p. ej., remplazando
los restos 234, 236 o 237 por Ala) también pueden ser utilizadas
para afectar a la afinidad del anticuerpo hacia el receptor R1 gamma
Fc. La numeración de los restos en la cadena pesada se basa en el
índice EU (véase Kabat et al., 1991 supra).
Los métodos adicionales para alterar la
actividad lítica de un anticuerpo, por ejemplo, alterado al menos un
aminoácido de la región N terminal del dominio CH2, son descritos en
el documento WO 94/29351 de Morgan et al. y en el documento
US 5.624.821.
\newpage
Los anticuerpos de esta invención pueden ser
etiquetados con una marca detectable o funcional. Estas marcas
incluyen radiomarcas (p. ej., I^{131} o Tc^{99}), marcas
enzimáticas (p. ej., peroxidasa de rábano picante o fosfatasa
alcalina), y otros radicales químicos (p. ej., biotina).
Un experto en la técnica apreciará que las
modificaciones descritas antes no son del todo exhaustivas, y que
muchas otras modificaciones son obvias para el experto en la técnica
a la luz de las enseñanzas de la presente descripción.
\vskip1.000000\baselineskip
La descripción proporciona ácidos nucleicos
aislados que codifican los anticuerpos descritos. Los ácidos
nucleicos pueden comprender ADN o ARN, y pueden ser sintéticos
(completamente o parcialmente) o recombinantes (completamente o
parcialmente). La referencia a una secuencia de nucleótidos expuesta
en la presente memoria incluye una molécula de ADN con la secuencia
especificada, e incluye una molécula de ARN con la secuencia
especificada en la que U está sustituido por T.
También se proporcionan ácidos nucleicos que
comprenden una secuencia codificante para una, dos o tres CDR, un
dominio V_{H}, un dominio V_{L}, o sus combinaciones, como se
describe en la presente memoria, o una secuencia esencialmente
idéntica a esta (p. ej., una secuencia idéntica al menos en un 85%,
90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más a esta, o que es capaz de
hibridar en condiciones restrictivas con las secuencias
descritas).
Los ácidos nucleicos aislados tienen secuencias
de nucleótidos que codifican regiones variables de la cadena pesada
y la cadena ligera de un anticuerpo
anti-IL-21R que tiene al menos una
CDR seleccionada entre las secuencias de aminoácidos del SEQ ID NO:
4, 5, 6, 7, 8, 9, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 50, 51, 52, 53, 54, 55,
68, 69, 70, 71, 72, 73, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 104, 105, 106, 107,
108, 109, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 140, 141, 142, 143, 144 y
145 o una secuencia que codifica una CDR que difiere en uno o dos
aminoácidos de las secuencias descritas en la presente memoria. La
secuencia de aminoácidos de una CDR incluye sustituciones de
aminoácidos conservativas de uno o más aminoácidos en las
secuencias mostradas en los SEQ ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 22, 23,
24, 25, 26, 27, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 86,
87, 88, 89, 90, 91, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 122, 123, 124,
125, 126, 127, 140, 141, 142, 143, 144 y 145.
Un ácido nucleico puede codificar solamente la
región variable de la cadena ligera o la cadena pesada, o puede
codificar también una región constante de la cadena ligera o pesada
de un anticuerpo, conectado operativamente a la correspondiente
región variable. Una región variable de la cadena ligera (V_{L})
está conectada a una región constante seleccionada entre una región
constante kappa o una lambda. La región constante de la cadena
ligera también puede ser del tipo kappa o lambda humano. Una región
variable de la cadena pesada (V_{H}) está conectada a una región
constante de la cadena pesada de un isotipo de anticuerpo
seleccionado entre IgG (p. ej., IgG_{1}, IgG_{2}, IgG_{3},
IgG_{4}), IgM, IgA_{1}, IgA_{2}, IgD, e IgE. La región
constante de la cadena pesada puede ser un isotipo de IgG (p. ej.,
una IgG_{1}).
Las composiciones de ácido nucleico aunque están
a menudo en la secuencia nativa (de ADNc o ADN genómico o sus
mezclas), excepto para los sitios de restricción modificados y
similares, pueden ser mutadas de acuerdo con las técnicas
convencionales para proporcionar secuencias génicas. Para las
secuencias codificantes, estas mutaciones, pueden afectar a la
secuencia de aminoácidos según se desee. En particular, se
contemplan las secuencias de nucleótidos esencialmente idénticas o
derivadas de V, D, J nativas, constantes, con intercambios y otras
secuencias semejantes descritas en la presente memoria (donde
"derivadas" indica que una secuencia es idéntica o está
modificada a partir de otra secuencia).
En una realización, un ácido nucleico difiere
(p. ej., difiere por sustitución, inserción, o deleción) de aquel
que tiene las secuencias proporcionadas (p. ej., como sigue: en al
menos uno pero menos de 10, 20, 30, o 40 nucleótidos; al menos uno
pero menos de 1%, 5%, 10% o 20% de los nucleótidos del ácido
nucleico sujeto). Si es necesario para este análisis las secuencias
se deben alinear para su máxima homología. Las secuencias "que
forman bucles" a partir de deleciones o inserciones, o
emparejamientos erróneos, se consideran diferencias. La diferencia
puede estar en uno o varios nucleótidos que codifican uno o varios
restos no esenciales, o la diferencia puede ser una o varias
sustituciones conservativas. La descripción también proporciona
constructos de ácido nucleico en forma de plásmidos, vectores,
casetes de
transcripción o expresión, que comprenden al menos un ácido nucleico como se describe en la presente memoria.
transcripción o expresión, que comprenden al menos un ácido nucleico como se describe en la presente memoria.
La descripción proporciona adicionalmente una
célula anfitriona que comprende al menos un constructo de ácido
nucleico descrito en la presente memoria. Asimismo se proporcionan
los métodos de elaboración de las proteínas codificadas a partir de
los ácidos nucleicos que comprenden la secuencia descrita en la
presente memoria. El método comprende cultivar células anfitrionas
en condiciones apropiadas de manera que expresen la proteína a
partir del ácido nucleico. Tras la expresión y la producción, se
puede aislar y/o purificar el dominio V_{H} o V_{L}, o un
miembro de unión específica utilizando cualquier técnica adecuada,
utilizándolo después según sea apropiado.
Los fragmentos de unión al antígeno, los
dominios V_{H} y/o V_{L}, y las moléculas y vectores de ácido
nucleico codificantes pueden ser aislados y/o purificados de su
entorno natural, en una forma esencialmente pura u homogénea, o, en
el caso del ácido nucleico, libre o esencialmente libre de ácido
nucleico o genes de un origen distinto al de la secuencia que
codifica un polipéptido con la función requerida.
Los sistemas para clonar y expresar polipéptidos
en una variedad de células anfitrionas son conocidos en la técnica.
Las células adecuadas para producir anticuerpos son descritas, por
ejemplo, por Fernández et al. (1999) Gene Expression
Systems, Academic Press, eds. En resumen, las células anfitrionas
adecuadas incluyen células de mamífero, células de insecto, células
vegetales, células de levadura, o células procarióticas, p. ej.,
E. coli. Las células de mamífero asequibles en la técnica
para la expresión de polipéptidos heterólogos incluyen líneas
celulares linfocíticas (p. ej., NSO), células HEK293, células de
ovario de hámster Chino (CHO), células COS, células HeLa, células
de riñón de cría de hámster, oocitos, y células de un animal
transgénico, p. ej., células epiteliales mamarias. Los anticuerpos
MUF y MU11 se expresan en células HEK293 o CHO. Los ácidos
nucleicos que codifican los anticuerpos de la invención se colocan
bajo el control de un promotor específico del tejido (p. ej., un
promotor específico mamario) y los anticuerpos se producen en
animales transgénicos. Por ejemplo, los anticuerpos se secretan en
la leche del animal transgénico, tal como una vaca, cerdo, caballo,
oveja, cabra o roedor transgénicos. Se pueden construir o
seleccionar vectores adecuados para que contengan secuencias
reguladoras apropiadas, incluyendo secuencias promotoras, secuencias
terminadoras, secuencias de poliadenilación, secuencias
intensificadoras, genes marcadores, y otras secuencias. Los vectores
también pueden contener un esqueleto plasmídico o viral. Para los
detalles, véase Sambrook et al., Molecular Cloning: A
Laboratory Manual, 2ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press
(1989). Muchas de las técnicas establecidas utilizadas con
vectores, incluyendo la manipulación, preparación, mutagénesis,
secuenciación, y transfección de ADN, se describen en Current
Protocols in Molecular Biology, Segunda Edición, Ausubel et
al. eds., John Wiley & Sons (1992).
Un aspecto adicional de la descripción
proporciona un método para introducir el ácido nucleico en una
célula anfitriona. Para las células eucarióticas, las técnicas de
transfección adecuadas pueden incluir el fosfato de calcio, el
DEAE-Dextrano, la electroporación, la transfección
mediada por liposomas, y la transducción utilizando retrovirus u
otros virus, p. ej., vaccinia o baculovirus. Para las células
bacterianas, las técnicas adecuadas pueden incluir transformación
con cloruro de calcio, electroporación, y transfección utilizando
bacteriófagos. La introducción de ADN puede estar seguida de un
método de selección (p. ej., resistencia a fármacos) para
seleccionar las células que contienen el ácido nucleico.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células CHO transformadas con los vectores
que contienen la cadena pesada y ligera de MUF, y las células CHO
transformadas con los vectores que contienen la cadena pesada y
ligera de MU11, fueron depositadas el 5 de marzo de 2003, en la
Colección de Cultivos Tipo Americana (ATCC) con los respectivos
Números de Designación del Depósito PTA-5031 y
PTA-5030. La dirección del depósito es 10801
University Blvd, Manassas, VA 20110, EEUU.
\vskip1.000000\baselineskip
Los anticuerpos
anti-IL-21R que actúan como
antagonistas de IL-21R se utilizan para regular al
menos una respuesta inmunitaria mediada por IL-21R,
donde la respuesta inmunitaria comprende la proliferación celular,
la secreción de citoquinas, la secreción de quimioquinas, y la
actividad citolítica, de las células T, las células B, las células
NK, los macrófagos, o las células sinoviales. Por consiguiente, los
anticuerpos de la invención se pueden utilizar para inhibir la
actividad (p. ej., proliferación, diferenciación, y/o supervivencia)
de una célula inmunitaria o hematopoyética (p. ej., una célula de
linaje mieloide, linfoide, o eritroide, o sus células precursoras),
y, de este modo, se pueden utilizar para tratar una variedad de
trastornos inmunitarios y trastornos hiperproliferativos. Los
ejemplos no limitantes de los trastornos inmunitarios que se pueden
tratar incluyen, pero no están limitados a, rechazo de
transplantes, enfermedad de anfitrión frente a injerto, alergias
(por ejemplo, alergia atópica) y enfermedades autoinmunitarias. Las
enfermedades autoinmunitarias pueden incluir diabetes melitus,
trastornos artríticos (incluyendo artritis reumatoide, artritis
reumatoide juvenil, osteoartritis, artritis psoriásica, y
espondilitis anquilosante), espondiloartropatías, esclerosis
múltiple, encefalomielitis, miastenia grave, lupus eritematoso
generalizado, lupus eritematoso cutáneo, tiroiditis autoinmunitaria,
dermatitis (incluyendo dermatitis atópica y dermatitis eccematosa),
psoriasis, Síndrome de Sjogren, IBD (incluyendo enfermedad de Crohn
y colitis ulcerativa), asma (incluyendo asma intrínseca y asma
alérgica), esclerodermia y vasculitis.
La esclerosis múltiple es una enfermedad del
sistema nervioso central que se caracteriza por inflamación y
pérdida de vainas de mielina - la materia grasa que aísla los
nervios y es necesaria para el funcionamiento apropiado de los
nervios. La inflamación que resulta de una respuesta inmunitaria que
es dependiente de IL-21 se puede tratar con los
anticuerpos y composiciones de esta invención. En el modelo en ratón
de encefalitis autoinmunitaria experimental (EEA) para la
esclerosis múltiple (Tuohy et al. (J. Immunol. (1988) 141:
1126-1130), Sobel et al. (J. Immunol. (1984)
132: 2393-2401), y Traugott (Cell Immunol. (1989)
119: 114-129), el tratamiento de los ratones con
inyecciones de MU11 antes (y continuamente) de la inducción de EEA
retrasa profundamente el comienzo de la enfermedad. Los anticuerpos
de esta invención se pueden utilizar de un modo similar para tratar
la esclerosis múltiple en seres humanos.
La artritis es una enfermedad caracterizada por
la inflamación de las articulaciones. La Artritis Reumatoide (AR)
es la forma más común de artritis, implicando inflamación del tejido
conectivo y de la membrana sinovial, una membrana que reviste la
articulación. La membrana sinovial inflamada a menudo infiltra las
articulaciones y daña el cartílago y el hueso de la articulación.
Los estudios demuestran que el tratamiento de las células
sinoviales y los macrófagos con IL-21 induce a estas
células a secretar citoquinas y quimioquinas asociadas con la
inflamación. En el modelo en ratón de artritis inducida por colágeno
(AIC) para artritis reumatoide (Courtenay et al. (Nature
(1980) 283: 666-628) y Williams et al.
(Immunol. (1995) 84: 433-439)), el tratamiento de
los ratones con IL-21 posteriormente (y
continuamente) a la inducción de AIC exacerba la enfermedad. El
aumento de secreción de citoquinas y quimioquinas inflamatorias, y
muy importantemente, el recrudecimiento de la enfermedad resultante
de las respuestas inmunitarias que dependen de IL-21
pueden ser tratados con los anticuerpos de esta invención. De un
modo similar, los anticuerpos y composiciones de esta invención
pueden ser utilizados para tratar la AR u otras enfermedades
artríticas en seres humanos.
El rechazo de transplantes es el fenómeno
inmunológico en el que los tejidos de un donante son atacados
"específicamente" por las células inmunitarias del anfitrión.
Las principales células "atacantes" son las células T, cuyos
receptores de las células T reconocen las moléculas del MHC del
donante como "foráneas". Este reconocimiento activa las
células T, que proliferan y secretan una variedad de citoquinas y
proteínas citolíticas que destruyen por último el transplante. Las
células T en una reacción de linfocitos mezclados (MLR), un análisis
in vitro del rechazo de transplantes, proliferan más
fuertemente cuando se suplementan con IL-21. Los
modelos de MLR y transplantes han sido descritos en Current
Protocols in Immunology, Segunda Edición, Coligan et al.
eds., John Wiley & Sons, 1994; Kasaian et al. (Immunity
(2002) 16: 559-569); Fulmer et al. (Am. J.
Anat. (1963) 113: 273-285), y Lenschow et
al. (Science (1992) 257: 789-792). Se puede
utilizar los anticuerpos y composiciones de esta invención para
reducir la MLR y tratar el rechazo de transplantes y las
enfermedades relacionadas (p. ej., la enfermedad de anfitrión versus
injerto) en seres humanos que son dependientes de
IL-21.
El Lupus Eritematoso Generalizado (LEG) es una
enfermedad autoinmunitaria caracterizada por la presencia de
auto-anticuerpos, incluyendo anticuerpos para el
ADN, antígenos nucleares, y ribonucleoproteínas. Estos
autoanticuerpos se asocian con lesiones en los tejidos y los
órganos. La causa de LEG es desconocida, pero la aparición de
auto-anticuerpos sugiere una inhibición inadecuada
de las células T o las células B auto-reactivas. Los
anticuerpos y composiciones de esta invención se pueden utilizar
para inhibir las actividades mediadas por IL-21 de
las células T y las células B auto-reactivas, y
tratar el LEG o enfermedades relacionadas en ratones NZB X NZW (el
modelo de ratón para LEG) (Immunologic Defects in Laboratory
Animals, Gershwin et al. eds., Plenum Press, 1981) o en seres
humanos.
Los anticuerpos de esta invención también se
pueden utilizar para tratar trastornos hiperproliferativos asociados
con la actividad aberrante de las células sensibles a
IL-21 y las células sensibles a
IL-21R. Los ejemplos de tales células incluyen
células neoplásicas de origen hematopoyético, p. ej., células que
surgen de linajes mieloides, linfoides o eritroides, o sus células
precursoras. Los ejemplos de tales trastornos neoplásicos incluyen
cánceres leucémicos, y tumores de la sangre, médula ósea (p. ej.,
mieloma), y tejido linfático (p. ej., linfomas). En ciertas
realizaciones, la presente invención está dirigida al tratamiento de
diferentes cánceres leucémicos incluyendo, pero no limitados a,
leucemia promieloide aguda (LPMA), leucemia mielógena aguda (LMA) y
leucemia mielógena crónica (LMC) (revisado por Vaickus, L. (1991)
Crit. Rev. in Oncol./Hemotol. 11:267-97). Los
ejemplos de las malignidades linfoides que se pueden tratar mediante
los métodos sujeto incluyen, pero no están limitados a, leucemia
linfoblástica aguda (LLA, que incluye LLA de linaje B y LLA de
linaje T), leucemia linfocítica crónica (LCC), leucemia
prolinfocítica (LPL), leucemia de células vellosas (LCV), y
macroglobulinemia de Waldenstrom (MW). Las formas adicionales de
linfomas malignos que se pueden tratar por medio de la presente
invención incluyen, pero no están limitadas a, linfoma no Hodgkin,
linfomas de células T periféricas, leucemia/linfoma de células t
adultas (LTA), linfoma de células T cutáneas (LCTC), leucemia
linfocítica de células granulares grandes (LGL), linfoma de Hodgkin,
y sus variantes.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización, se administra una
composición farmacéutica que comprende al menos un anticuerpo
anti-IL-21R de la invención y al
menos un agente terapéutico en una terapia combinada. La terapia es
útil para tratar estados patológicos o trastornos, tales como
trastornos inmunitarios e inflamatorios. El término "combinada"
en este contexto significa que la composición de anticuerpo y el
agente terapéutico se administran esencialmente al mismo tiempo, ya
sea simultáneamente o sucesivamente. Si se administran
sucesivamente, al comienzo de la administración del segundo
compuesto, el primero de los dos compuestos todavía puede ser
detectable a concentraciones eficaces en el lugar del
tratamiento.
Por ejemplo, la terapia combinada puede incluir
al menos un anticuerpo anti-IL-21R
co-formulado con, y/o
co-administrado con, al menos un agente terapéutico
adicional. Los agentes adicionales pueden incluir al menos un
inhibidor de citoquina, un inhibidor de un factor de crecimiento, un
inmunosupresor, un agente anti-inflamatorio, un
inhibidor metabólico, un inhibidor enzimático, un agente citotóxico,
y un agente citostático, como se describe con más detalle más
abajo. Semejantes terapias combinadas se pueden utilizar
ventajosamente dosis más bajas de los agentes terapéuticos
administrados, evitando de ese modo posibles toxicidades o
complicaciones asociadas con las diferentes monoterapias. Por otro
lado, los agentes terapéuticos descritos en la presente memoria
actúan sobre las rutas que difieren de la ruta
IL-21/IL-21R, y de este modo se
espera que aumenten y/o ejerzan un efecto sinérgico con los efectos
de los anticuerpos anti-IL-21R.
Los agentes terapéuticos utilizados combinados
con los anticuerpos anti-IL-21R
pueden ser aquellos agentes que interfieren en diferentes fases de
la respuesta autoinmunitaria y en la inflamatoria posterior. En una
realización, al menos un anticuerpo
anti-IL-21R descrito en la presente
memoria puede ser formulado simultáneamente con, y/o administrado
simultáneamente con, al menos un antagonista de citoquinas y/o
factores de crecimiento. Los antagonistas pueden incluir
receptores, solubles, inhibidores peptídicos, moléculas pequeñas,
fusiones con ligandos, anticuerpos (que se unen a citoquinas o
factores de crecimiento o sus receptores u otras moléculas de la
superficie celular), y citoquinas
"anti-inflamatorias" y sus agonistas.
Los ejemplos no limitantes de los agentes que se
pueden utilizar combinados con los anticuerpos
anti-IL-21R descritos en la
presente memoria, incluyen, pero no están limitados a, antagonistas
de al menos una interleuquina (p. ej., IL-1,
IL-2, IL-6, IL-7,
IL-8, IL-12, IL-13,
IL-15, IL-16, IL-17,
IL-18, y IL-22); citoquina (p. ej.,
TNF\alpha, LT, EMAP-II, y GM-CSF);
y factor de crecimiento (p. ej., FGF y PDGF). Los agentes también
pueden incluir, pero no están limitados a, antagonistas de al menos
un receptor para una interleuquina, citoquina, y factor de
crecimiento. Los anticuerpos
anti-IL-21R también se pueden
combinar con inhibidores (p. ej., anticuerpos) para las moléculas
de la superficie celular tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28,
CD30, CD4 0, CD4 5, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, o sus
ligandos (p. ej., CD154 (gp39, CD40L)), o
LFA-1/ICAM-1 y
VLA-4/VCAM-1
(Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med Res Rev
22(2):146-67)). Los antagonistas que se
pueden utilizar combinados con los anticuerpos
anti-IL-21R descritos en la presente
memoria pueden incluir antagonistas de IL-1,
IL-12, TNF\alpha, IL-15,
IL-17, IL-18, IL-22,
y sus receptores.
Los ejemplos de estos agentes incluyen los
antagonistas de IL-12 (tales como los anticuerpos
que se unen a IL-12 (véase p. ej., el documento WO
00/56772, Genetics Institute/BASF)); los inhibidores del receptor de
IL-12 (tales como los anticuerpos para el receptor
de IL-12); y el receptor de IL-12
soluble y sus fragmentos. Los ejemplos de los antagonistas de
IL-15 incluyen anticuerpos contra
IL-15 o su receptor, fragmentos solubles del
receptor de IL-15, y proteínas de unión a
IL-15. Los ejemplos de los antagonistas de
IL-18 incluyen los anticuerpos para
IL-18, los fragmentos solubles del receptor de
IL-18, y las proteínas de unión a
IL-18 (IL-18BP, Mallet et
al. (2001) Circ. Res. 28). Los ejemplos de los antagonistas de
IL-1 incluyen los inhibidores de la Enzima
Conversora de Interlequina I (ICE) (tales como Vx740), los
antagonistas de IL-1 (p. ej., IL-1
RA (ANIKINRA, AMGEN)), sIL-1RII (Immunex), y los
anticuerpos anti-receptor de
IL-1.
Los ejemplos de los antagonistas de TNF incluyen
los anticuerpos para TNF (p. ej., TNF\alpha humano), tales como
D2E7 (anticuerpo anti-TNF\alpha humano, documento
U.S. 6.258.562, Humira®, BASF);
CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356
(anticuerpos anti-TNF\alpha humanizados,
Celltech/Pharmacia); cA2 (anticuerpo
anti-TNF\alpha quimérico, Remicade®, Centocor); y
fragmentos de anticuerpos anti-TNF (p. ej., CPD870).
Otros ejemplos incluyen fragmentos y derivados del receptor de TNF
soluble (p. ej., p55 o p75 humano), tales como p55
kdTNFR-IgG (proteína de fusión de receptor de
TNF-IgG de 55 kD, Lenercept®) y 75
kdTNFR-IgG (proteína de fusión de receptor de
TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®, Immunex, véase, p. ej.,
Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med.
(1996) Vol. 44, 235A). Los ejemplos adicionales incluyen
antagonistas de enzimas (p. ej., inhibidores de la enzima
conversora de TNF\alpha (TACE) tales como derivado de ácido
alfa-sulfonil-hidroxámico (documento
WO 01/55112) o inhibidor de N-hidroxiformamida (GW
3333, -005, o -022)) y TNF-bp/s-TNFR
(proteína de unión a TNF soluble, véanse p. ej., Arthritis &
Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S284; y Am. J.
Physiol. Heart Circ. Physiol. (1995) Vol. 268, págs.
37-42). Los antagonistas de TNF pueden ser
fragmentos y derivados del receptor de TNF soluble (p. ej., p55 o
p75 humano), tales como 75 kdTNFR-IgG; e inhibidores
de la enzima conversora de TNF\alpha (TACE).
Los anticuerpos
anti-IL-21R descritos en la presente
memoria se pueden administrar combinados con al menos uno de los
siguientes: antagonistas de IL-13, tales como
receptores de IL-13 solubles y/o anticuerpos
anti-IL-13; y antagonistas de
IL-2, tales como las proteínas de fusión con
IL-2 (p. ej., DAB
486-IL-2 y/o DAB
389-IL-2, Seragen, véase p. ej.,
Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223) y los anticuerpos
anti-IL-2R (p. ej.,
anti-Tac (anticuerpo humanizado, Protein Design
Labs, véase Cancer Res. 1990 Mar
1;50(5):1495-502)). Otra combinación incluye
anticuerpos anti-IL-21R combinados
con inhibidores anti-CD4 sin depleción tales como
IDEC-CE9.1/SB 210396 (anticuerpo
anti-CD4, IDEC/SmithKline). Otras combinaciones
incluyen anticuerpos anti-IL-21R con
antagonistas de la ruta co-estimuladora CD80 (B7.1)
y CD86 (B7.2) (tales como anticuerpos, receptores solubles, o
ligandos antagónicos); ligando de la glicoproteína
P-selectina (PSGL); y citoquinas
anti-inflamatorias y sus agonistas (p. ej.,
anticuerpos). Las citoquinas anti-inflamatorias
pueden incluir IL-4 (DNAX/Schering);
IL-10 (SCH 52000, IL-10
recombinante, DNAX/Schering); IL-13; y TGF.
Se puede formular simultáneamente al menos un
anticuerpo anti-IL-21R con, y/o
administrar simultáneamente con, al menos un fármaco
anti-inflamatorio, inmunosupresor, inhibidor
metabólico, e inhibidor enzimático. Los ejemplos no limitantes de
los fármacos o inhibidores que se pueden utilizar combinados con
los antagonistas de IL-21 descritos en la presente
memoria, incluyen, pero no están limitados a, al menos uno de: un
fármaco anti-inflamatorio no esteroide (AINES)
(tales como ibuprofeno, Tenidap (véase p. ej., Arthritis &
Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S280)), Naproxeno
(véase p. ej., Neuro Report (1996) Vol. 7, págs.
1209-1213), Meloxicam, Piroxicam, Diclofenaco, e
Indometacina); Sulfasalazina (véase p. ej., Arthritis &
Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S281); un
corticosteroide (tal como prednisolona); un fármaco
anti-inflamatorio supresor de citoquinas (CSAID); y
un inhibidor de la biosíntesis de nucleótidos (tal como un
inhibidor de la biosíntesis de purina (p. ej., un antagonista de
folato tal como el metotrexato) y un inhibidor de la biosíntesis de
pirimidina (p. ej., un inhibidor de la dihidroorotato deshidrogenasa
(DHODH) tal como leflunomida (véanse p. ej., Arthritis &
Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S131; Inflammation
Research (1996) Vol. 45, págs. 103-107)). Los
agentes terapéuticos para su uso combinado con los antagonistas de
IL-21/IL-21R pueden incluir AINES,
CSAID, inhibidores de DHODH (tales como leflunomida), y antagonistas
de folato (tales como metotrexato).
Los ejemplos de los inhibidores adicionales
incluyen al menos uno de: corticosteroides (orales, inhalados e
inyectado localmente); inmunosupresores (tales como ciclosporina y
tacrolimus (FK-506)); inhibidores de mTOR (tales
como sirolimus (rapamicina) o un derivado de rapamicina (p. ej., un
derivado éster de rapamicina tal como CCI-779
(Elit. L. (2002) Current Opinion Investig. Drugs 3(8):12
49-53; Huang, S. et al. (2002) Current
Opinion Investig. Drugs 3(2):295-304))); un
agente que interfiere en la señalización de las citoquinas
proinflamatorias tales como TNF\alpha e IL-1 (p.
ej., IRAK, NIK, IKK, p38 o un inhibidor de la quinasa MAP); un
inhibidor de COX2 (p. ej., celecoxib y sus variantes
(MK-966), véase p. ej., Arthritis & Rheumatism
(1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S81); un inhibidor de
fosfodiesterasa (tal como R973401, véase p. ej., Arthritis &
Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282)); un inhibidor
de fosfolipasa (p. ej., un inhibidor de fosfolipasa 2 citosólica
(cPLA2) tal como los análogos de trifluorometilcetona (documento
U.S. 6.350.892)); un inhibidor del factor de crecimiento de las
células endoteliales vasculares (VEGF); un inhibidor del receptor de
VEGF; y un inhibidor de la angiogénesis. Los agentes terapéuticos
para su uso combinado con anticuerpos
anti-IL-21R pueden incluir
inmunosupresores (tales como ciclosporina y tacrolimus
(FK-506)); y los inhibidores de mTOR (tales como
sirolimus (rapamicina) o derivados de rapamicina (p. ej., derivados
éster de rapamicina tales como CCI-779));
inhibidores de COX2 (tales como celecoxib y sus variantes); e
inhibidores de fosfolipasa (tales como inhibidores de fosfolipasa 2
citosólica (cPLA2) (p. ej., análogos de
trifluorometil-
cetona)).
cetona)).
Los ejemplos de los agentes terapéuticos que se
pueden administrar simultáneamente y/o formular simultáneamente con
al menos un anticuerpo anti-IL-21R,
incluyen, pero no están limitados a, al menos uno de: antagonistas
de TNF (tales como anticuerpos anti-TNF); fragmentos
solubles de receptores de TNF (p. ej., p55 y p75 humanos) y sus
derivados (tales como p55 kdTNFR-IgG (proteína de
fusión de receptor de TNF-IgG de 55 kD, Lenercept®)
y 75 kdTNFR-IgG (proteína de fusión de receptor de
TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®)); antagonistas
enzimáticos de TNF (tales como los inhibidores TACE); antagonistas
de IL-12, IL-15,
IL-17, IL-18, y
IL-22; agentes de depleción de las células T y las
células B (tales como los anticuerpos anti-CD4 o
anti-CD22); inhibidores de molécula pequeña (tales
como metotrexato y leflunomida); sirolimus (rapamicina) y sus
análogos (tales como CCI-779); inhibidores de
Cox-2 y cPLA2; inhibidores de p38,
TPL-2, Mk-2 y NFkB; RAGE y RAGE
soluble; inhibidores de P-selectina y
PSGL-1 (tales como anticuerpos e inhibidores de
molécula pequeña); y agonistas del receptor beta de estrógenos
(ERB), y antagonistas de ERB-NFkb. Los agentes
terapéuticos que se pueden administrar simultáneamente y/o formular
simultáneamente con al menos un anticuerpo
anti-IL-21R pueden incluir al menos
uno de: un fragmento soluble de un receptor de TNF (p. ej., p55 o
p75 humanos) tal como 75 kdTNFR-IgG (proteína de
fusión de receptor de TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®);
metotrexato; leflunomida; y sirolimus (rapamicina) y sus análogos
(tales como
CCI-779).
CCI-779).
Los anticuerpos
anti-IL-21R descritos en la presente
memoria se pueden utilizar combinados con otros agentes terapéuticos
para tratar trastornos inmunitarios específicos como se comenta con
más detalle más abajo.
Los ejemplos no limitantes de los agentes para
tratar los trastornos artríticos (p. ej., artritis reumatoide,
artritis inflamatoria, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis y
artritis psoriásica), con los cuales se puede combinar un
anticuerpo anti-IL-21R incluyen al
menos uno de los siguientes: antagonistas de TNF (tales como
anticuerpos anti-TNF); fragmentos solubles de
receptores de TNF (p. ej., p55 y p75 humanos) y sus derivados
(tales como p55 kdTNFR-IgG (proteína de fusión de
receptor de TNF-IgG de 55 kD, Lenercept®) y 75
kdTNFR-IgG (proteína de fusión de receptor de
TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®)); antagonistas
enzimáticos de TNF (tales como inhibidores TACE); antagonistas de
IL-12, IL-15, IL-17,
IL-18, y IL-22; agentes para la
depleción de células T y células B (tales como los anticuerpos
anti-CD4 o anti-CD22); inhibidores
de molécula pequeña (tales como metotrexato y leflunomida);
sirolimus (rapamicina) y sus análogos (p. ej.,
CCI-779); inhibidores de Cox-2 y
cPLA2; AINES; inhibidores de p38, TPL-2,
Mk-2, y NFkB; RAGE o RAGE soluble; inhibidores de
P-selectina o PSGL-1 (tales como
inhibidores de molécula pequeña y anticuerpos); agonistas del
receptor beta de estrógenos (ERB), y antagonistas de
ERB-NF\kappaB. Los agentes terapéuticos que se
pueden administrar simultáneamente y/o formular simultáneamente con
al menos un antagonista de
IL-21/IL-21R pueden incluir al menos
uno de: un fragmento soluble de un receptor de TNF (p. ej., p55 o
p75 humanos) tales como 75 kdTNFR-IgG (proteína de
fusión de receptor de TNF-IgG de 75 kD, Enbrel®);
metotrexato; leflunomida; y sirolimus (rapamicina) o uno de sus
análogos (p. ej., CCI-779).
Los ejemplos no limitantes de los agentes para
el tratamiento de la esclerosis múltiple con los cuales se puede
combinar el anticuerpo anti-IL-21R
incluyen interferón-\beta (por ejemplo,
IFN\beta-1a y IFN\beta-1b),
copaxona, corticosteroides, inhibidores IL-I,
inhibidores TNF, anticuerpos para el ligando CD40, anticuerpos para
CD80, y antagonistas de IL-12.
Los ejemplos no limitantes de los agentes para
el tratamiento de la enfermedad inflamatoria del intestino o de la
enfermedad de Crohn con los cuales se puede combinar el anticuerpo
anti-IL-21R incluyen budenosida;
factor de crecimiento epidérmico; corticosteroides; ciclosporina;
sulfasalazina; aminosalicilatos; 6-mercaptopurina;
azatioprina; metronidazol; inhibidores de lipoxigenasa; mesalamina;
olsalazina; balsalazida; antioxidantes; inhibidores de tromboxano;
antagonistas del receptor de IL-1; anticuerpos
monoclonales anti-IL-1; anticuerpos
monoclonales anti-IL-6; factores de
crecimiento; inhibidores de elastasa; compuestos de
piridinil-imidazol; antagonistas de TNF como los
descritos en la presente memoria; IL-4,
IL-10, IL-13, y/o TNF\beta o sus
agonistas (p. ej., anticuerpos agonistas); IL-11;
profármacos de predinisolona, dexametasona o budesonida conjugados
con glucurónido o dextrano;
fosforotioato-oligodesoxinucleótidos antisentido
para ICAM-I (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals,
Inc.); receptor 1 del complemento soluble (TP10; T Cell Sciences,
Inc.); mesalazina de liberación lenta; metotrexato; antagonistas del
Factor Activador de Plaquetas (PAF); ciprofloxacina; y
lignocaína.
Se puede utilizar un anticuerpo
anti-IL-21R combinado con al menos
un anticuerpo dirigido a otras dianas implicadas en la regulación
de las respuestas inmunitarias, p. ej., el rechazo de transplantes o
la enfermedad de anfitrión versus injerto. Los ejemplos no
limitantes de los agentes para el tratamiento de las respuestas
inmunitarias con los que se puede combinar un antagonista de
IL-21/IL-21R incluyen los
siguientes: anticuerpos contra moléculas de la superficie celular,
incluyendo pero no limitadas a CD25 (receptor \alpha de
IL-2), CD11a (LFA-1), CD54
(ICAM-1), CD4, CD45, CD2 8/CTLA4, CD80
(B7-1), CD86 (B7-2), o sus
combinaciones. Se utiliza un anticuerpo
anti-IL-21R combinado con al menos
un agente inmunosupresor general, tal como ciclosporina A o
FK506.
Otro aspecto de la presente descripción se
refiere por consiguiente a kits para llevar a cabo la administración
combinada de anticuerpos anti-IL-21R
con otros agentes terapéuticos. El kit comprende al menos un
anticuerpo anti-IL-21R formulado en
un portador farmacéutico, y al menos un agente terapéutico,
formulado como sea apropiado en una o más preparaciones
farmacéuticas separadas.
\vskip1.000000\baselineskip
Los anticuerpos de acuerdo con esta invención
también se pueden utilizar para detectar la presencia de
IL-21R en muestras biológicas. Correlacionando la
presencia o el nivel de estas proteínas con una afección médica, un
experto en la técnica puede diagnosticar la afección médica
asociada. Por ejemplo, las células T estimuladas aumentan su
expresión de IL-21R, y una concentración
inusualmente elevada de células T que expresan
IL-21R en las articulaciones puede indicar
inflamación de la articulación y posible artritis. Las afecciones
médicas ilustrativas que se pueden diagnosticar por medio de los
anticuerpos de esta invención incluyen esclerosis múltiple, artritis
reumatoide, y rechazo de transplantes.
Los métodos de detección basados en anticuerpos
son bien conocidos en la técnica, e incluyen ELISA,
radioinmunoanálisis, inmunotransferencias, transferencias Western;
citometría de flujo, inmunofluorescencia, inmunoprecipitación, y
otras técnicas relacionadas. Los anticuerpos pueden ser
proporcionados en un kit de diagnóstico que incorpora al menos uno
de estos procedimientos para detectar IL-21R. El kit
puede contener otros componentes, envases, instrucciones, u otro
material para ayudar a la detección de la proteína y al uso del
kit.
Los anticuerpos pueden estar modificados con
marcadores detectables, incluyendo grupos ligando (p. ej., biotina),
fluoróforos y cromóforos, radioisótopos, reactivos densos a los
electrones, o enzimas. Las enzimas se detectan por su actividad.
Por ejemplo, la peroxidasa de rábano picante se detecta por su
capacidad para convertir la tetrametilbenzidina (TMB) en un
pigmento azul, cuantificable con un espectrofotómetro. Otros
patrones de unión adecuados incluyen biotina y avidina, IgG y
proteína A, y otros pares de receptor-ligando
conocidos en la técnica.
Los anticuerpos también se pueden unir
funcionalmente (p. ej., mediante acoplamiento químico, fusión
genética, asociación no covalente o de otro modo) a al menos otra
entidad molecular, tal como otro anticuerpo (p. ej., un anticuerpo
biespecífico o multiespecífico), toxinas, radioisótopos, agentes
citotóxicos o citostáticos, entre otros. Otras permutaciones y
posibilidades resultan evidentes para los expertos en la técnica, y
se consideran equivalentes en el alcance de esta invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Ciertas realizaciones de la invención incluyen
composiciones que comprenden los anticuerpos deseados. Las
composiciones pueden ser adecuadas para uso farmacéutico y para la
administración a los pacientes. Las composiciones comprenden un
anticuerpo de la presente invención y un excipiente farmacéutico.
Según se utiliza en la presente memoria, "excipiente
farmacéutico" incluye disolventes, medios de dispersión,
recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes
isotónicos y retardadores de la absorción, etc., que son compatibles
con la administración farmacéutica. El uso de estos agentes para
sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica.
Las composiciones también pueden contener otros compuestos activos
que proporcionan funciones terapéuticas suplementarias,
adicionales, o intensificadas. Las composiciones farmacéuticas
también pueden ser incluidas en un recipiente, paquete, o
dispensador junto con las instrucciones para su administración.
Una formulación farmacéutica de la invención se
formula para que sea compatible con su ruta de administración
pretendida. Los métodos para completar la administración son
conocidos por los expertos en la técnica. También puede ser posible
crear composiciones que pueden ser administradas tópicamente u
oralmente, o que pueden ser susceptibles de transmisión a través de
las membranas mucosas. Por ejemplo, la administración puede ser
intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intracavital,
subcutánea, o transdérmica.
Las soluciones o suspensiones utilizadas para la
aplicación intradérmica o subcutánea incluyen típicamente al menos
uno de los siguientes componentes: un diluyente estéril tal como
agua, solución salina, aceites fijados, polietilenglicol,
glicerina, propilenglicol, u otro disolvente sintético; agentes
antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabenos;
antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio;
agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético
(EDTA); tampones tales como acetato, citrato, o fosfato; y agentes
de tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH se puede
ajustar con ácidos o bases. Tales preparaciones pueden estar
incluidas en ampollas, jeringas desechables, o viales de múltiples
dosis.
Las soluciones o suspensiones utilizadas para la
administración intravenosa incluyen un portador tal como solución
salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor EL® (BASF,
Parsippany, NJ), etanol, o polioles. En todos los casos, la
composición debe ser estéril y fluida para una fácil jeringabilidad.
La fluidez apropiada se puede obtener a menudo utilizando lecitina
o tensioactivos. La composición también debe ser estable en las
condiciones de fabricación y almacenamiento. Se pueden evitar los
microorganismos con agentes antibacterianos y antifúngicos, p. ej.,
parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, etc. En
muchos casos, se pueden incluir en la composición agentes
isotónicos (azúcar), polialcoholes (manitol y sorbitol), o cloruro
de sodio. La absorción prolongada de la composición se puede lograr
añadiendo un agente que retrase la absorción, p. ej., monoestearato
de aluminio y gelatina.
Las composiciones orales incluyen un diluyente
inerte o un portador comestible. La composición puede estar
incluida en gelatina o comprimida en comprimidos. Para la
administración oral, se pueden incorporar los anticuerpos a
excipientes y colocarlos en comprimidos, trociscos, o cápsulas. Se
pueden incluir en la composición agentes de unión o materiales
coadyuvantes farmacéuticamente compatibles. Los comprimidos,
trociscos, y cápsulas, pueden contener (1) un aglutinante tal como
celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; (2) un
excipiente tal como almidón o lactosa, (3) un agente disgregante tal
como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; (4) un lubricante
tal como estearato de magnesio; (5) un antiapelmazante tal como
dióxido de silicio coloidal; o (6) un agente edulcorante o un agente
aromatizante.
Las composiciones también se pueden administrar
por ruta transmucosal o transdérmica. Por ejemplo, los anticuerpos
que comprende una porción Fc pueden ser capaces de atravesar las
membranas mucosas del intestino, la boca, o los pulmones (por medio
de los receptores de Fc). La administración transmucosal se puede
completar por medio del uso de grageas, pulverizaciones nasales,
inhaladores, o supositorios. También se puede lograr la
administración transdérmica por medio del uso de composiciones que
contienen pomadas, ungüentos, geles, o cremas conocidos en la
técnica. Para la administración transmucosal o transdérmica, se
utilizan penetrantes apropiados para la barrera que va a ser
penetrada. Para la administración por inhalación, se liberan los
anticuerpos en forma de pulverización en aerosol desde un
recipiente o dispensador presurizado, que contiene un propelente (p.
ej., líquido o gas) o un nebulizador.
En ciertas realizaciones, los anticuerpos de
esta invención se preparan con portadores para proteger a los
anticuerpos de la rápida eliminación del organismo. A menudo se
utilizan polímeros biodegradables (p. ej., acetato de
vinilo/etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno,
poliortoésteres, poli(ácido láctico). Los métodos para la
preparación de tales formulaciones son conocidos por los expertos en
la técnica. También se pueden utilizar suspensiones liposomales
como portadores farmacéuticamente aceptables. Los liposomas se
preparan de acuerdo con los métodos establecidos en la técnica
(Patente de los Estados Unidos Núm. 4.522.811).
Los anticuerpos o las composiciones de
anticuerpo de la invención se administran en cantidades
terapéuticamente eficaces como se ha descrito. Las cantidades
terapéuticamente eficaces pueden variar con la edad, el estado, el
sexo y la gravedad del estado médico del paciente. La dosificación
apropiada puede ser determinada por un médico basándose en las
indicaciones clínicas. Los anticuerpos o las composiciones se pueden
administrar como una dosis de bolo para maximizar los niveles
circulantes de anticuerpos durante la mayor extensión de tiempo.
También se puede utilizar la infusión continua después de la dosis
de bolo.
Según se utiliza en la presente memoria, se
pretende que el término "sujeto" incluya seres humanos y
animales no humanos. Los sujetos pueden incluir un paciente humano
que tenga un trastorno caracterizado por células que expresen
IL-21R, p. ej., una célula cancerosa o una célula
inmunitaria. El término "animales no humanos" de la invención
incluye todos los vertebrados, tales como primates no humanos,
ovejas, perros, vacas, pollos, anfibios, reptiles, etc.
Los ejemplos de los intervalos de dosificación
que se pueden administrar a un sujeto se pueden seleccionar entre:
1 \mug/kg a 20 mg/kg, 1 \mug/kg a 10 mg/kg, 1 \mug/kg a 1
mg/kg, 10 \mug/kg a 1 mg/kg, 10 \mug/kg a 100 \mug/kg, 100
\mug a 1 mg/kg, 500 \mug/kg a 1 mg/kg.
Puede resultar ventajoso formular composiciones
en una forma de dosificación unitaria y con uniformidad de las
dosis. La forma de dosificación unitaria según se utiliza en la
presente memoria hace referencia a unidades físicamente discretas
adecuadas para el paciente. Cada unidad de dosificación contiene una
cantidad predeterminada de anticuerpo calculada para producir un
efecto terapéutico asociado con el portador. La unidad de
dosificación depende de las características de los anticuerpos y del
efecto terapéutico concreto que se vaya a alcanzar.
La toxicidad y la eficacia terapéutica de la
composición se pueden determinar mediante procedimientos
farmacéuticos convencionales en los cultivos celulares o los
animales experimentales, p. ej., determinando la DL_{50} (dosis
letal para el 50% de la población) y la DE_{50} (dosis
terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La razón entre
los efectos tóxicos y los terapéuticos de la dosis es el índice
terapéutico y se puede expresar como la razón DL_{50}/DE_{50}.
Los anticuerpos que muestran índices terapéuticos elevados pueden
ser menos tóxicos y/o más eficaces terapéuticamente.
Los datos obtenidos de los análisis en cultivos
celulares y los estudios en animales se pueden utilizar para
formular un intervalo de dosificación en seres humanos. La
dosificación de estos compuestos puede encontrarse en el intervalo
de las concentraciones de anticuerpo circulante en la sangre, que
incluyen una DE_{50} con poca o ninguna toxicidad. La
dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la
forma de la composición de dosificación empleada y de la ruta de
administración. Para cualquier anticuerpo utilizado en la presente
invención, se puede estimar inicialmente la dosis terapéuticamente
eficaz utilizando análisis en cultivo celular. Se puede formular
una dosis en modelos en animales para lograr un intervalo de
concentración en plasma circulante que incluya la CI_{50} (esto
es, la concentración de anticuerpo que logra una inhibición
semi-máxima de los síntomas). Los efectos de
cualquier dosificación concreta pueden ser controlados mediante un
bioanálisis adecuado. Los ejemplos de tales bioanálisis adecuados
incluyen análisis de replicación de ADN, análisis basados en la
transcripción, análisis de unión
IL-21R/IL-21 y otros análisis
inmunológicos.
Los siguientes ejemplos no limitan en modo
alguno el alcance de la invención. Un experto en la técnica
reconocerá las numerosas modificaciones y variaciones que se pueden
realizar sin alterar el alcance de la presente invención. Tales
modificaciones y variaciones están incluidas en el alcance de la
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Se utilizó una genoteca de fagémidos de
scF_{v}, que es una versión ampliada de la genoteca de
1,38x10^{10} descrita por Vaughan et al. ((1996) Nature
Biotech., 14: 309-314), para seleccionar anticuerpos
específicos para el IL-21R humano. Los pocillos de
las placas de microtitulación se recubrieron con proteína de fusión
con IL-21R soluble o proteína de fusión de control
(5-20 \mug/ml en solución salina tamponada con
fosfato (PBS)) y se incubaron durante la noche a 4ºC. Los pocillos
se lavaron en PBS, después se bloquearon durante 1 hora a 37ºC en
MPBS (leche en polvo en PBS al 3%). El fago purificado (10^{12}
unidades de transducción), bloqueado durante 1 hora en MPBS, fue
añadido a los pocillos recubiertos con la proteína de fusión de
control e incubado durante 1 hora. El fago no unido se transfirió
después a los pocillos con la proteína de fusión con
IL-21R y se incubó durante una hora. Los pocillos se
lavaron 5 veces con PBST (Tween 20 0,1% v/v en PBS), después 5
veces con PBS. Los fagos unidos se hicieron eluir y se utilizaron
para infectar exponencialmente E. coli TG1 en crecimiento.
Las células infectadas se hicieron crecer en caldo 2TY durante 1
hora a 37ºC, después se sembraron en estrías sobre placas 2TYAG y
se incubaron durante la noche a 30ºC. Al día siguiente, las
colonias se transfirieron a 10 ml de caldo 2TY más glicerol al 15% y
se almacenaron a -70ºC. Más tarde, las colonias de esta primera
ronda de selección se descongelaron y se superinfectaron con fago
coadyuvante para rescatar (generar) el fago que expresa el
anticuerpo scF_{v} para una segunda ronda de selección.
\vskip1.000000\baselineskip
Se aisló scFv anti-IL21R (R18)
utilizando 200 nM de proteína de fusión con IL-21R
humano biotinilado
(bio.hIL21R) (Wyeth, Giralda Farms, NJ) en solución. El fago scFv purificado (10^{12} tu) se bloqueó con MPBS y 125 \mug/ml de proteína de fusión de control, como se ha descrito antes en el Ejemplo 1. La proteína de fusión a IL-21R biotinilada se añadió al fago bloqueado a una concentración final de 200 nM y se incubó durante 1 hora a la temperatura ambiente. Se añadió el fago/antígeno a 75 \mul de cuentas magnéticas Dynal M280 Streptavidin (Dynal Biotech Inc., Lake Success, NY) que habían sido bloqueadas durante 90 minutos a la temperatura ambiente en 1 ml de MPBS al 3%. La mezcla se incubó durante 15 minutos a la temperatura ambiente mezclando. Las cuentas fueron capturadas utilizando una gradilla magnética y se lavaron 5 veces en 1 ml de PBST seguido de tres lavados en PBS. Los fagos unidos se hicieron eluir con 500 \mul de tripsina de 10 \mug/ml en tampón de fosfato de sodio 0,2 M, pH 7,0 y se incubaron a 37ºC durante 30 minutos. Los fagos eluidos se utilizaron para infectar 10 ml de células de E. coli TG-1 en crecimiento exponencial como se ha descrito antes. Los clones de scFv se aislaron después de tres rondas de selección.
(bio.hIL21R) (Wyeth, Giralda Farms, NJ) en solución. El fago scFv purificado (10^{12} tu) se bloqueó con MPBS y 125 \mug/ml de proteína de fusión de control, como se ha descrito antes en el Ejemplo 1. La proteína de fusión a IL-21R biotinilada se añadió al fago bloqueado a una concentración final de 200 nM y se incubó durante 1 hora a la temperatura ambiente. Se añadió el fago/antígeno a 75 \mul de cuentas magnéticas Dynal M280 Streptavidin (Dynal Biotech Inc., Lake Success, NY) que habían sido bloqueadas durante 90 minutos a la temperatura ambiente en 1 ml de MPBS al 3%. La mezcla se incubó durante 15 minutos a la temperatura ambiente mezclando. Las cuentas fueron capturadas utilizando una gradilla magnética y se lavaron 5 veces en 1 ml de PBST seguido de tres lavados en PBS. Los fagos unidos se hicieron eluir con 500 \mul de tripsina de 10 \mug/ml en tampón de fosfato de sodio 0,2 M, pH 7,0 y se incubaron a 37ºC durante 30 minutos. Los fagos eluidos se utilizaron para infectar 10 ml de células de E. coli TG-1 en crecimiento exponencial como se ha descrito antes. Los clones de scFv se aislaron después de tres rondas de selección.
La producción de scFv fue inducida mediante la
adición de IPTG 1 mM a cultivos que crecen exponencialmente e
incubación durante la noche a 30ºC. Los extractos periplásmicos que
contienen scFv bruto (Griffiths et al. (1993) EMBO J.,
12:725-734) se escrutaron en busca de la capacidad
para inhibir la unión de la proteína de fusión a
IL-21R humano a la proteína etiquetada con
IL-21-FLAG humana. En resumen, se
inmovilizó el anticuerpo anti-FLAG sobre plástico y
se utilizó para capturar la proteína IL-21 humana
etiquetada con FLAG. La unión de la proteína de fusión con
IL-21R humano se detectó con un anticuerpo marcado
con Europio para la proteína de fusión IL-21R, y se
detectó la fluorescencia resuelta con el tiempo con el kit reactivo
DELFIA (PerkinElmer, Boston, MA). El clon de scFv R18 purificado
mostró un valor de CI_{50} de 770 nM para la inhibición de la
unión de la proteína de fusión de IL-21R a la
proteína etiquetada con
IL-21-FLAG.
Se aisló un clon anti-IL21R 19F5
mediante el método de selección utilizado para R18, excepto que se
utilizaron 50 nM de proteína de fusión a IL-21R
humano en la tercera ronda de selección.
\vskip1.000000\baselineskip
Se aislaron los scFv anti-IL21R
scFv, 18A5 y 18G4, mediante selección en líneas celulares que
expresaban IL-21R y proteína de fusión a
IL-21R en solución. Las células
hBaf3Mu-1 transfectadas (Wyeth, Giralda Farms, NJ)
que expresaban el IL-21R humano sobre la superficie
celular se cultivaron utilizando métodos de cultivo de tejidos
convencionales. Los fagos de scFv purificados (10^{12} tu) fue ron
bloqueados con 1x10 células Baf3 no transfectadas durante 1 hora a
la temperatura ambiente en MPBS.
Los fagos bloqueados se añadieron a 1x10^{7}
células hBaf3Mu-1, que habían sido
pre-incubadas en MPBS durante 1 hora. Esto estuvo
seguido de incubación durante una hora a la temperatura ambiente
mezclando. Las células hBaf3Mu-1 se lavaron con
posterioridad 6 veces en PBST. Los fagos unidos específicamente se
hicieron eluir de las células utilizando 10 \mug/ml de tripsina
en tampón de fosfato de sodio 0,2 M, pH 7,0, y se incubaron a 37ºC
durante 30 minutos con sacudimiento. El sobrenadante de los fagos
eluidos se utilizó para infectar células E. coli
TG-1 como se ha descrito antes.
Se produjeron fagos que expresaban scFv para la
segunda ronda de selección como se ha descrito antes. Los fagos se
bloquearon con MPBS y 125 \mug/ml de proteína de fusión de
control. La selección se llevó a cabo en una solución con proteína
de fusión a IL-21R humano biotinilada (Wyeth)
siguiendo el método se selección descrito para R18, excepto que las
cuentas se lavaron 5 veces en 1 ml de MPBS/Tween 20 al 0,1% (v/v)
seguido de tres lavados en PBS.
Las partículas de fago que expresaban el
anticuerpo scFv se seleccionaron después adicionalmente utilizando
el método de selección que empleaba células
hBaf3Mu-1, como se ha descrito antes.
\vskip1.000000\baselineskip
Se aisló el clon CP5G2 mediante selección en
IL-21R murino etiquetado con hexahistidina y una
etiqueta de afinidad Flag (hIL21R.His.Flag) (Wyeth, Giralda Farms,
NJ). Los fagos scFv purificados (10^{12} tu) se bloquearon con
MPBS más 30 \mul de cuentas de agarosa anti-Flag
durante 1 hora a la temperatura ambiente. Se añadió
hIL-21R.His.Flag, a una concentración final de 25 nM
en MPBS, a los fagos bloqueados y se incubó a la temperatura
ambiente durante 1 hora. Después se añadió la mezcla de
genoteca/antígeno a 100 \mul de cuentas de agarosa
anti-Flag que habían sido bloqueadas en MPBS durante
2 horas a la temperatura ambiente, se lavó 3 veces en PBS, y se
incubó 20 minutos más mezclando. Las cuentas se lavaron 4 veces con
PBST, seguido de 4 veces con PBS y los fagos se hicieron eluir de
las cuentas con 0,5 \mug/ml de tripsina en Tris 50 mM, pH 8,0,
CaCl_{2} 1 mM, como se ha descrito antes. Las cuentas se
recogieron utilizando centrifugación. Los fagos eluidos se
utilizaron para infectar 10 ml de células E. coli
TG-1, como se ha descrito antes. Se llevó a cabo una
segunda ronda de selección soluble, también como se ha descrito
antes.
Las colonias fueron seleccionadas en placas de
96 pocillos que contenían 100 \mul de 2TYAG. Se produjeron
extractos periplásmicos que contenían scFv bruto como se ha descrito
antes, excepto que el tampón utilizado fue sacarosa al 20% (p/v),
Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, EDTA 1 mM. Los extractos que
contenían scFv bruto se escrutaron en busca de la capacidad para
inhibir la unión de 16 ng/ml de IL-21 murina
biotinilada (bio.mIL21) a la proteína IL-21R murina
inmovilizada sobre plástico en un análisis en placas de
microtitulación de 96 pocillos. Se detectó la unión de bio.mlL21
con estreptavidina marcada con Europio, y se detectó TRF utilizando
el kit de reactivos DELFIA (PerkinElmer, Boston, MA).
El scFv CP5G2 purificado mostró un valor de
CI_{50} de 590 nM en el análisis anterior para la inhibición de la
unión de IL-21 a IL-21R.
\vskip1.000000\baselineskip
Para establecer la especificidad de los
scF_{v} para IL-21R, se realizó un ELISA con fagos
frente a la proteína de fusión a IL-21R. Se
transfirieron colonias de células TG1 individuales de la segunda
selección a pocillos de microtitulación que contenían 100 \mul de
medio 2TYAG. Se añadió fago coadyuvante M13K07 (10 moi) al cultivo
TG1 en crecimiento exponencial, y las muestras se incubaron durante
una hora a 37ºC. Las placas se centrifugaron y se sobrenadante se
separó, después se suspendieron los sedimentos restantes en 100
\mul de 2TYAG y se incubaron durante la noche a 30ºC con
sacudimiento. Al día siguiente, las placas se centrifugaron y el
sobrenadante con los fagos se transfirió a los pocillos de nuevas
placas de microtitulación. El fago se bloqueó en MPBS antes del
ELISA.
Los pocillos de las placas de microtitulación se
recubrieron con proteína de fusión a IL-21R o
proteína de fusión de control (0,5-2,5 \mug/ml) y
se incubaron a 4ºC durante la noche. Al día siguiente, la solución
de proteína de fusión se separó y los pocillos se bloquearon durante
1 hora en MPBS. Los pocillos se lavaron con PBS, después se
añadieron 50 \mul de fago bloqueado. Las placas se incubaron
durante 1 hora, después se lavaron 3 veces con PBST y 3 veces con
PBS. Se añadió a los pocillos producto conjugado
anti-M13-HRP (Pharmacia, Peapack,
NJ), y las muestras se incubaron durante una hora. Los pocillos se
lavaron 3 veces con PBST y 3 veces con PBS. Se añadió TMB a los
pocillos, y las muestras se incubaron hasta que se desarrolló color.
La reacción se detuvo con 25 \mul de H_{2}SO_{4} 0,5M. Se
midió la señal de color mediante lectura de la absorbancia a 450 nm
utilizando un lector de placa de microtitulación. Dos clones de
fagos mostraron unión específica a la proteína de fusión a
IL-21R y no a la proteína de fusión de control, y
estos clones son referidos en esta solicitud como clones de fagos
MUF y MU11.
Las colonias TG-1 individuales
que contenían los clones de fagos MUF y MU11 se sembraron en estrías
sobre placas 2TYAG y se incubaron durante la noche a 30ºC.
Utilizando oligos específicos del vector pCANTAB6, se amplificaron
las regiones V_{H} y V_{L} del fago mediante PCR y se
secuenciaron. Las búsquedas en las bases de datos revelaron que la
región V_{L} del clon del fago MUF se originaba a partir de la
cadena lambda, y la región V_{L} del clon del fago MU11 se
originaba a partir de la cadena kappa.
\vskip1.000000\baselineskip
Las regiones V_{H} y V_{L} de los clones de
fagos MUF y MU11 fueron amplificadas mediante PCR utilizando
cebadores específicos del clon. Los productos de la PCR fueron
digeridos con enzimas de restricción y subclonados en los vectores
apropiados (véase el Ejemplo 2) que contenían el dominio constante
de la cadena pesada de la IgG_{1} humana (Takahashi et al.
(1982) Cell 29, 671) o el dominio constante de la cadena ligera
lambda humana o el dominio constante de la cadena ligera kappa
humana (Hieter et al. (1982) Nature 294: 536). Los cuatro
constructos codifican los polipéptidos referidos en esta solicitud
como cadena pesada MUF, cadena ligera MUF, cadena pesada MU11, y
cadena ligera MU11.
Los vectores que contenían la cadena pesada MUF,
la cadena ligera MUF, la cadena pesada MU11, y la cadena ligera
MU11, fueron preparados, secuenciados, y utilizados para transfectar
células HEK293 o CHO utilizando técnicas convencionales. Las
células que expresaban las cadenas pesada y ligera MUF produjeron el
anticuerpo MUF, que es referido en esta solicitud como "MUF",
y las células que expresaban las cadenas pesada y ligera MU11
produjeron el anticuerpo MU11, que es referido en esta solicitud
como "MU11". Los anticuerpos secretados fueron purificados
utilizando proteína A-Sefarosa (Pharmacia), después
se sometieron a diálisis con PBS.
La especificidad de unión de los anticuerpos se
determinó como sigue: se recubrieron placas de ELISA durante la
noche con 2,5 \mug/ml de proteína de fusión a
IL-21R. Las placas se lavaron con PBSB (PBS + 1%
albúmina de suero bovino), después se incubaron con diferentes
concentraciones de MUF o MU11 durante 2 horas a 25ºC. Las placas se
lavaron, después se añadió una cantidad saturante de
anti-anticuerpo humano de cabra conjugado con HRP.
Las placas se incubaron durante 1 hora a 25ºC, luego se lavaron con
PBSB, y se revelaron utilizando TMB. Un ejemplo de los resultados
obtenidos por medio de ELISA se presenta en la Figura 1A.
La especificidad de unión de los anticuerpos se
confirmó adicionalmente mediante tinción en la superficie celular.
Las células TF-1 transducidas con
IL-21R humano se unieron con MUF o MU11 purificado o
biotinilado (1 mg/ml). Las células se incubaron sobre hielo durante
30 minutos, se lavaron con PBSB, después se suspendieron en una
solución que contenía anticuerpo anti-IgG humana
conjugado con PE o avidina conjugada con PE. Las células se
incubaron sobre hielo durante 30 minutos, se lavaron, después se
analizaron en un FACScan. Los resultados se presentan en la Figura
1B. Las células B de ratón purificadas se tiñeron de un modo similar
con MUF, y los resultados se presentan en la Figura 1C.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizaron análisis de inhibición para
evaluar la capacidad de los anticuerpos para bloquear la unión de
IL-21 a IL-21R. El ELISA se realizó
como se ha descrito en el Ejemplo 3 con las siguientes
modificaciones. Tras la incubación con MUF o MU11 durante 2 horas a
25ºC, se añadió IL-21 conjugada con biotina (1
\mug/ml), y las muestras se incubaron durante 1 hora a 25ºC.
Después de lavar, se añadió una cantidad saturante de
avidina-HRP, y las muestras se incubaron
adicionalmente durante 1 hora a 25ºC. Los pocillos se lavaron con
PBSB, y las muestras se revelaron utilizando TMB. Los resultados se
presentan en la Figura 2. En estas condiciones, MUF bloqueó la
unión de IL-21 a IL-21R, mientras
MU11 no lo hizo. Estos datos sugieren que MUF y MU11 reconocen
diferentes epítopos de IL-21R.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizaron análisis de proliferación para
evaluar la capacidad del anticuerpo para bloquear la proliferación
de células T mediada por IL-21. Las células T CD4+
humanas (5 x 10^{4} células/pocillo) se estimularon con PHA
(fitohemaglutinina) e IL-21 humana. Se añadió
IL-21 en medio de cultivo de células COS (COS CM) a
diferentes muestras a diferentes concentraciones. En las muestras
indicadas, se añadieron MUF, MU11, o control de isotipo IgG_{1}
humano. Después de 72 horas, se añadió
timidina-H^{3}, y se midió la proliferación
celular mediante la radiactividad incorporada utilizando un
contador de centelleo líquido LKB 1205. Como se muestra en la Figura
3A, la IL-21 aumentó la proliferación de células T
estimuladas con PHA. La adición de MUF bloqueó la capacidad de
IL-21 para aumentar la proliferación en el intervalo
entre aproximadamente 1:500 y 1:10.000. El bloqueo con MUF fue
superado a dosis superiores de IL-21. La adición de
MU11 o anticuerpo de control de isotipo no afectó significativamente
a la proliferación de células T humanas aumentada por
IL-21.
En la Figura 3B, se estimuló una línea de
células T CD4+ de ratón específica de PLP con el péptido PLP (1
\mug/ml) y células de bazo de ratón SJL. Se tituló la
IL-21 en medio de cultivo de células COS (COS
IL-21) como se muestra en el eje de las X. "Cos
Simulado" es un medio de cultivo COS sin IL-21.
En las muestras indicadas, se añadió MU11 (1 \mug/ml). Después de
72 horas, se añadió timidina H^{3}, y se midió la proliferación
mediante la radiactividad incorporada. Como se muestra en la Figura
3B, IL-21 aumentó la proliferación de las células T
de ratón estimuladas. La adición de MU11 bloqueó la capacidad de
IL-21 para incrementar la proliferación de las
células T CD4+ de ratón. Estos datos sugieren que MU11 actúa como un
inhibidor no competitivo: bloquea la capacidad de
IL-21 para incrementar la proliferación incluso
aunque no bloquee la unión de IL-21 al receptor.
En la Figura 3C, las células T de ratón CD8+
purificadas fueron estimuladas con cuentas de tosilo (Dynal, Great
Neck, NY) recubiertas con anticuerpo anti-CD3. La
IL-21 del medio de cultivo de células COS (COS s/n)
fue titulada como se indica en el eje de las X. La muestra marcada
como "no anticuerpo" se utilizó cómo control. En las muestras
indicadas, se añadió MU11 a la concentración marcada. Después de 72
horas, se añadió timidina-H^{3}, y se midió la
proliferación por medio de la radiactividad incorporada. Como se
muestra en la Figura 3C, la adición de MU11 bloqueó, de una manera
dependiente de la dosis, la capacidad de IL-21 para
incrementar la proliferación de las células T CD8+.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sometieron a ensayo los anticuerpos de la
invención en un análisis basado en las células para el antagonismo
de IL-21R. En uno de tales experimentos, se
sometieron a ensayo diferentes clones del fago scFv que habían sido
aislados como se describe en los Ejemplos 1-3, en un
análisis basado en células en busca de su potencia para inhibir la
proliferación celular mediante el bloqueo de la unión de
IL-21 a IL-21R. Para semejante
análisis se utilizó una suspensión de células
hBaf3Mu-1 que expresaban IL21R humano. Se lavaron
las células hBaf3Mu-1 (Wyeth) para separar los
vestigios de IL-3 murina de su medio de crecimiento
y se incubaron durante 2 horas en medio de crecimiento RPMI
Glutamax con suero bovino fetal al 10% sin IL-3 a
37ºC en una incubadora con CO_{2} al 5%. Se añadieron
aproximadamente de 10.000 a 20.000 células Baf3Mu-1
a cada pocillo de una placa de cultivo de tejidos de 96 pocillos y
después se incubaron con scFv o IgG durante 30 minutos a 37ºC. Luego
se añadió IL-21 (Wyeth, Giralda Farms, NJ) a una
concentración de 5 ng/ml y las células se incubaron durante 24
horas. Después las células se marcaron con pulsos con 0,1
mCi/pocillo de timidina-H^{3} durante la noche a
37ºC y con posterioridad se cosecharon para medir la incorporación
de timidina como indicación de proliferación de las células. En un
protocolo alternativo, se añadió IL-21 a una
concentración de 0,3 ng/ml y las células se incubaron durante 48
horas. Después las células se calentaron a la temperatura ambiente,
y se añadieron 15 ml/pocillo de CellTiter-Glo
(Promega, WI). Después de mezclar y de un período de incubación de
10 minutos, se midió la luminescencia en un contador Wallac
MicroBeta 1450 TriLux (Perkin Elmer, Boston, MA) como indicación de
la proliferación o la viabilidad celular.
Se puede determinar el valor de la CI_{50}
(esto es, la concentración de anticuerpo requerida para una
competición del 50%) para cada scFv trazando una medida de la
proliferación celular, p. ej., la incorporación de timidina, frente
al log de la concentración de IL-21. Típicamente, a
menor CI_{50}, mejor afinidad tiene el anticuerpo por
IL-21R. En un experimento representado en la Fig. 4,
MUF inhibió la respuesta celular a IL-21 con una
CI_{50} de 2 68 nM en forma de scFv y de 3 nM en forma de IgG. Los
valores de la CI_{50} de otros clones de scFv fueron comparados
con posterioridad con el de MUF, como se resume en la siguiente
Tabla 4.
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos de la secuencia para los clones de
scFv se utilizaron para identificar la secuencia de la línea
germinal más próxima para la cadena pesada y ligera del clon MUF
utilizando VBASE. Se realizaron mutaciones utilizando técnicas de
mutagénesis dirigida al sitio convencionales con los cebadores
mutagénicos apropiados. La mutación de las secuencias de scFv se
confirmó mediante análisis de la secuencia. Las secuencias de los
dominios scFv y V_{H} y V_{L} asimilados a la línea germinal
para MUF se exponen en los SEQ ID NO: 85, 83 y 84,
respectivamente.
La secuencia asimilada a la línea germinal de
scFv de MUF se analizó con posterioridad en cuanto a su capacidad
para bloquear la proliferación de la línea celular
hBaf3Mu-1 inducida por IL-21 en el
análisis descrito en la presente memoria. No hubo diferencia
significativa en la potencia de MUF asimilado a la línea germinal
para bloquear la proliferación de las células
Baf3Mu-1 cuando se comparó con scFv de MUF no
asimilado a la línea germinal.
\vskip1.000000\baselineskip
Los clones de scFv 18A5, 19F5 y 18G4 fueron
sometidos a ensayo adicionalmente en un análisis de competición por
el epítopo para determinar si se unían al mismo o diferente epítopo
que MUF. Se prepararon los extractos periplásmicos que contenían
scFv como se ha descrito antes para los diferentes clones. El tampón
final utilizado fue MOPS 50 mM, pH 7,4, EDTA 0,5 mM, sorbitol 0,5
M. Los extractos periplásmicos brutos que contenían scFv fueron
escrutados en busca de su capacidad para inhibir la unión de la
proteína de fusión a IL-21R humano biotinilada
(bio.hIL21R) a la proteína IgG MuF inmovilizada sobre plástico en un
análisis en una placa de microtitulación de 96 pocillos. La unión
de bio.hIL21R se detectó con estreptavidina marcada con Europio y
se detectó TRF utilizando el kit de reactivos DELFIA (PerkinElmer).
Se utilizaron los clones positivos en un análisis de competición por
epítopos descrito en la presente memoria.
Los valores de la CI_{50} obtenidos para los
diferentes clones en el análisis de competición por los epítopos se
resumen en la Tabla 5.
\vskip1.000000\baselineskip
Se utilizó la IL-21 para
estudiar su efecto sobre las células de la membrana sinovial, la
membrana que reviste las articulaciones. Se aislaron sinoviocitos
de tipo fibroblasto humanos (HFLS) (Cell Applications (San Diego,
CA)) de tejidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoide que
habían sido sometidos a cirugía en las articulaciones. Las células
HFLS se cultivaron con IL-21 humana durante 48
horas, y los sobrenadantes se separaron y se sometieron a ensayo en
busca de las quimioquinas MCP-1 (proteína
quimioatrayente de monocitos o CCL11), GRO (oncogén regulado por el
crecimiento o ligando 1 de CXC), I-309 (CCL1), TARC
(quimioquina reguladora de la actividad del timo), Eotaxina, MDC
(quimioquina derivada de macrófagos o CCL22), LYMPH (linfotactina o
XCL1), SDF-1 B (factor 1B derivado de células
estromáticas o ligando 12 de CXC), IP-10 (ligando 10
de CXC), I-TAC (quimioquina atrayentes de células T
o ligando 11 de CXC), MG (monoquina inducida por el interferón o
ligando 9 de CXC), MP3B (proteína inhibidora de macrófagos) y
citoquinas IFN-\alpha,
TNF-\alpha, IL-6, y
IL-8 mediante ELISA. Se sabe en la técnica que estas
quimioquinas y citoquinas promueven la inflamación a través de
numerosas actividades, y que el incremento de concentraciones en las
articulaciones causado por la IL-21 exacerba la
inflamación y la AR.
Como se muestra en las Figuras
5A-5D, la IL-21 aumentaba
repetidamente la secreción por los HFLS de las quimioquinas
MCP-1, GRO, 1-309, TARC, Eotaxina,
MDC, LYMPH, SDF-1B, IP-10,
I-TAC, MG, MP3B y las citoquinas
IFN-\alpha, TNF-\alpha,
IL-6, e IL-8. Se utilizó la
IL-21 para regular el progreso clínico de la AIC
(Artritis Inducida por Colágeno). La AIC es el modelo convencional
en ratón y rata para estudiar la artritis reumatoide, véase p. ej.,
Holmdahl et al., (2002) Ageing Res. Rev., 1:135. El día 0, se
inyectaron a los ratones 100 \mug de colágeno de Tipo II en
coadyuvante completo de Freund, y el día 21, los ratones fueron
sensibilizados con 100 \mug de Colágeno de Tipo II en coadyuvante
incompleto de Freund. El día 21, también se inyectó diariamente a
los ratones 1 \mug de IL-21, y cada día, los
ratones fueron examinados en busca de la enfermedad. Los signos
clínicos se puntuaron como sigue: 0 = sin hinchazón, 1 = 1 a 2 dedos
hinchados o tobillo hinchado, 2 = más de dos dedos hinchados o leve
hinchazón de la pata, 3 = considerable hinchazón de la pata, y 4 =
anquilosamiento de la pata. Como se muestra en la Figura 5E, los
ratones a los que se había inyectado PBS después de las inyecciones
de colágeno desarrollaron progresivamente la enfermedad. Los ratones
a los que se había inyectado IL-21 después de las
inyecciones de colágeno desarrollaron progresivamente una enfermedad
más grave. Debido a que el tratamiento con IL-21
exacerba específicamente la AIC, se espera que el tratamiento con
anticuerpos anti-IL-21R suprima o
retrase la AIC. De este modo, puesto que este modelo pronostica la
eficacia del tratamiento para la AR, también cabría esperar que el
tratamiento con anticuerpos
anti-IL-21R suprimiera o retrasara
la AR en seres humanos.
\vskip1.000000\baselineskip
El rechazo de transplantes es el fenómeno
inmunológico en el que los tejidos de un donante son "atacados"
específicamente por las células inmunitarias del anfitrión. Un
análisis para estudiar el rechazo de transplantes in vitro
es la reacción de linfocitos mezclados (MLR). En el análisis de MLR,
se mezclan las células del "donante" y las células del
"anfitrión" in vitro, y las células del anfitrión se
activan y proliferan. Entre el día 3 y el 5, se añade
timidina-H^{3}, y se mide la proliferación por
medio de la radiactividad incorporada utilizando un contador de
centelleo líquido.
\newpage
En la Figura 6, se suspendieron en 200 \mul de
medio de cultivo en un pocillo de una placa de microtitulación
células de bazo de ratón C57BL/6J (500.000) y células de bazo de
ratón BDF1 irradiadas (500.000). A tres pocillos por duplicado se
les añadió un suplemento de diferentes cantidades de
IL-21 de ratón. El día 4, se añadió
timidina-H^{3}, y el día 5 se midió la
radiactividad incorporada utilizando un contador de centelleo
líquido LKB 1205. Las muestras "0" y "simulado" indican
cultivos sin IL-21. En ausencia de
IL-21, las células C57BL/6J proliferaron
modestamente (-6000 rads). En presencia de IL-21,
las células C57BL/6J proliferaron más fuertemente
(~28.000-38.000 rads). El tratamiento con
IL-21 aumenta la proliferación de las células
C57BL/6J (las células del "anfitrión" o alorreactiva),
sugiriendo que IL-21 media en la MLR. Se espera por
lo tanto que la adición o el tratamiento con anticuerpos
anti-IL-21R suprima o retrase la MLR
y el rechazo de transplantes y las enfermedades relacionadas (p.
ej., la enfermedad injerto versus anfitrión).
<110> WYETH
\hskip1cmCAMBRIDGE ANTIBODY TECHNOLOGY
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<120> ANTICUERPOS CONTRA EL RECEPTOR DE
IL-21 HUMANO Y SUS USOS
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<130> 08702.0137-00304
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<140>
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<141>
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<150> 60/454,336
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<151>
2003-03-14
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<160> 154
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<170> PatentIn Ver. 3.2
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<210> 1
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<211> 113
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<400> 1
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<211> 113
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<210> 3
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<211> 253
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<212> ADN
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\hskip-.1em\dddseqskipaaggcatcta ctttagaaag t
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<212> ADN
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<212> PRT
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\vskip0.400000\baselineskip
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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\hskip1cm
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\hskip1cm
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<212> PRT
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<213> Homo sapiens
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<212>PRT
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\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 141
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 142
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 142
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 143
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 143
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 144
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 144
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 145
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 145
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 146
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 363
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 146
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 147
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 327
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 147
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 148
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 741
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 148
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 149
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 149
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipagctatgcca tgagc
\hfill15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 150
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 51
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 150
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 151
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 151
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcatatctcgg aacgtccacg tggtgctttt gatatc
\hfill36
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 152
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 152
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcaaggagaca gcctcagaaa gtatcatgca act
\hfill33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 153
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 153
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggtaaaaaca ggcgcccctc a
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 154
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 154
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipaactcccggg acaccagtgg tcttcattat gtc
\hfill33
Claims (30)
1. Un anticuerpo aislado que ejerce antagonismo
sobre la actividad de IL-21R, comprendiendo el
anticuerpo una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos en
95% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que
consiste en:
- (a)
- SEQ ID NO: 1 y 2;
- (b)
- SEQ ID NO: 3;
- (c)
- SEQ ID NO: 19 y 20;
- (d)
- SEQ ID NO: 21;
- (e)
- SEQ ID NO: 47 y 48;
- (f)
- SEQ ID NO: 4 9;
- (g)
- SEQ ID NO: 65 y 66;
- (h)
- SEQ ID NO: 67;
- (i)
- SEQ ID NO: 83 y 84;
- (j)
- SEQ ID NO: 85;
- (k)
- SEQ ID NO: 101 y 102;
- (l)
- SEQ ID NO: 103;
- (m)
- SEQ ID NO: 119 y 120;
- (n)
- SEQ ID NO: 121;
- (o)
- SEQ ID NO: 137 y 138; y
- (p)
- SEQ ID NO: 139,
donde el anticuerpo se une selectivamente sobre
un dominio extracelular de un receptor de IL-21
humano o de un receptor de IL-21 que es idéntico al
menos en 85% a una secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO:
45.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un anticuerpo aislado que ejerce antagonismo
sobre la actividad de IL-21R, codificado el
anticuerpo por una secuencia de nucleótidos que es idéntica al menos
en 95% a una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que
consiste en:
- (a)
- SEQ ID NO: 10 y 11;
- (b)
- SEQ ID NO: 12;
- (c)
- SEQ ID NO: 2 8 y 29;
- (d)
- SEQ ID NO: 30;
- (e)
- SEQ ID NO: 56 y 57;
- (f)
- SEQ ID NO: 58;
- (g)
- SEQ ID NO: 74 y 75;
- (h)
- SEQ ID NO: 76;
- (i)
- SEQ ID NO: 92 y 93; (j) SEQ ID NO: 94;
- (k)
- SEQ ID NO: 110 y 111;
- (l)
- SEQ ID NO: 112;
- (m)
- SEQ ID NO: 128 y 129;
- (n)
- SEQ ID NO: 130;
- (o)
- SEQ ID NO: 14 6 y 147; y
- (p)
- SEQ ID NO: 148,
donde el anticuerpo se une selectivamente sobre
un dominio extracelular de un receptor de IL-21
humano o de un receptor de IL-21 que es idéntico al
menos en 85% a una secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO:
45.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Un anticuerpo aislado que ejerce antagonismo
sobre la actividad de IL-21R, comprendiendo el
anticuerpo:
- (a)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 4, 5, y 6, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 7, 8 y 9;
- (b)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 22, 23, y 24, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 25, 26, y 27;
- (c)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 50, 51, y 52, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 53, 54, y 55;
- (d)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 68, 69, y 70, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 71, 72, y 73;
- (e)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 86, 87, y 88, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 89, 90, y 91;
- (f)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 104, 105, y 106, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 107, 108, y 109;
- (g)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 122, 123, y 124, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 125, 126, y 127; o
- (h)
- un dominio V_{H} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NO: 140, 141, y 142, y un dominio V_{L} que comprende secuencias de CDR idénticas al menos en 95% a las secuencias de aminoácidos mostradas en los SEQ ID NOs: 143, 144, y 145,
donde el anticuerpo se une selectivamente sobre
un dominio extracelular de un receptor de IL-21
humano o de un receptor de IL-21 que es idéntico al
menos en un 85% a una secuencia de aminoácidos mostrada en el SEQ ID
NO: 45.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Un anticuerpo aislado que ejerce antagonismo
sobre la actividad de IL-21R y compite con un
anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada
del grupo que consiste en:
- (a)
- SEQ ID NO: 1 y 2;
- (b)
- SEQ ID NO: 3;
- (c)
- SEQ ID NO: 19 y 20;
- (d)
- SEQ ID NO: 21;
- (e)
- SEQ ID NO: 47 y 48;
- (f)
- SEQ ID NO: 49;
- (g)
- SEQ ID NO: 65 y 66;
- (h)
- SEQ ID NO: 67;
- (i)
- SEQ ID NO: 83 y 84;
- (j)
- SEQ ID NO: 85;
- (k)
- SEQ ID NO: 101 y 102;
- (l)
- SEQ ID NO: 103;
- (m)
- SEQ ID NO: 119 y 120;
- (n)
- SEQ ID NO: 121;
- (o)
- SEQ ID NO: 137 y 138; y
- (p)
- SEQ ID NO: 139,
donde el anticuerpo se une selectivamente sobre
un dominio extracelular de un receptor de IL-21
humano o un receptor de IL-21 que es idéntico al
menos en 85% a una secuencia de aminoácidos mostrada en el SEQ ID
NO: 45.
\vskip1.000000\baselineskip
5. El anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3, o
4, donde el anticuerpo se une selectivamente al dominio extracelular
del polipéptido mostrado en el SEQ ID NO: 43.
6. El anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3, o
4, donde el anticuerpo inhibe la unión de IL-21 a un
dominio extracelular de un receptor de IL-21 humano
o de un receptor de IL-21 que es idéntico al menos
en 85% a una secuencia de aminoácidos mostrada como SEQ ID NO:
45.
7. El anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3, o
4, donde el anticuerpo es humano.
8. El anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3, o
4, donde el anticuerpo es un anticuerpo IgG_{1}.
9. El anticuerpo de la reivindicación 8, donde
el anticuerpo es IgG_{1\lambda} o IgG_{1\kappa}.
10. Un anticuerpo aislado que ejerce antagonismo
sobre la actividad de IL-21R, expresado el
anticuerpo por una célula anfitriona que tiene un Núm. de
Designación de Depósito en la ATCC PTA-5030 o
PTA-5031.
11. Una composición farmacéutica que comprende
el anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3, o 4, y un excipiente
farmacéutico.
12. Un ácido nucleico aislado que codifica el
anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3, o 4.
13. Un vector de expresión que comprende el
ácido nucleico de la reivindicación 12.
14. Una célula anfitriona transformada con el
vector de la reivindicación 13.
15. La célula anfitriona de la reivindicación
14, donde el anfitrión es una bacteria, una célula de mamífero, una
célula de levadura, una célula vegetal, o una célula de insecto.
16. Una célula anfitriona que tiene un Núm. de
Designación de Depósito en la ATCC PTA-5030 o
PTA-5031.
17. Un método de producción de un anticuerpo que
se une a un receptor de IL-21, comprendiendo el
método cultivar la célula anfitriona de la reivindicación 16 en
condiciones que permiten la expresión del anticuerpo, y aislar el
anticuerpo del cultivo celular.
18. El uso del anticuerpo de la reivindicación
1, 2, 3 o 4 para la fabricación de un medicamento para regular una
respuesta inmunitaria, donde la respuesta inmunitaria comprende
proliferación, actividad citolítica, secreción de citoquinas, o
secreción de quimioquinas de una célula.
19. El uso de la reivindicación 18, donde la
célula es un leucocito o una célula sinovial.
20. El uso de la reivindicación 19, donde el
leucocito es una célula T, una célula B, una célula NK, o un
macrófago.
21. El uso del anticuerpo de la reivindicación
1, 2, 3 o 4, en una cantidad suficiente para tratar o prevenir un
trastorno asociado a las células inmunitarias en un sujeto para la
fabricación de un medicamento para tratar o prevenir el trastorno
asociado a las células inmunitarias en el sujeto, donde el trastorno
asociado a las células inmunitarias se selecciona del grupo que
consiste en esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus
eritematoso generalizado, artritis reumatoide juvenil,
osteoartritis, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante,
rechazo de transplantes, enfermedad inflamatoria del intestino,
psoriasis y enfermedad de Crohn.
22. El uso de la reivindicación 21, donde el
trastorno asociado a las células inmunitarias se selecciona del
grupo que consiste en artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria
del intestino, enfermedad de Crohn y psoriasis.
23. El uso de la reivindicación 21, donde el
medicamento comprende adicionalmente un agente terapéutico
adicional.
24. El uso de la reivindicación 23, donde el
agente terapéutico adicional se selecciona entre un inhibidor de
citoquina, un inhibidor de un factor de crecimiento, un
inmunosupresor, un agente anti-inflamatorio, un
inhibidor metabólico, un inhibidor enzimático, un agente citotóxico,
y un agente citostático.
25. El uso de la reivindicación 24, donde el
agente terapéutico adicional se selecciona entre un antagonista de
TNF, un antagonista de IL-12, un antagonista de
IL-15, un antagonista de IL-17, un
antagonista de IL-18, un antagonista de
IL-22, un agente de depleción de células T, un
agente de depleción de células B, metotrexato, leflunomida,
rapamicina, o uno de sus análogos, un inhibidor de
Cox-2, un inhibidor de cPLA2, un AINE, y un
inhibidor de p38.
26. El uso del anticuerpo de la reivindicación
1, 2, 3 o 4, para la fabricación de un medicamento para tratar o
prevenir un trastorno hiperproliferativo en un sujeto en una
cantidad suficiente para inhibir o reducir la hiperproliferación de
células sensibles a IL-21 y/o receptor de
IL-21 en el sujeto, donde el trastorno
hiperproliferativo se selecciona del grupo que consiste en cánceres
leucémicos y tumores de la sangre, la médula ósea, y el tejido
linfático.
27. El uso de la reivindicación 26, donde el
sujeto es un mamífero.
28. El uso de la reivindicación 27, donde el
sujeto es un ser humano.
29. El uso de acuerdo con la reivindicación 21 o
la reivindicación 25, donde el anticuerpo se utiliza en un intervalo
seleccionado entre 1 \mug/kg a 20 mg/kg, 1 \mug/kg a 10 mg/kg, 1
\mug/kg a 1 mg/kg, 10 \mug/kg a 1 mg/kg, 10 \mug/kg a 100
\mug/kg, 100 \mug/kg a 1 mg/kg, y 500 \mug/kg a 1 mg/kg.
30. Un kit de diagnóstico que comprende el
anticuerpo de la reivindicación 1, 2, 3 o 4.
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CA2868867A1 (en) * | 2005-03-25 | 2006-09-28 | National Research Council Of Canada | Method of isolation of soluble polypeptides |
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CA2632218A1 (en) * | 2005-11-28 | 2007-10-11 | Zymogenetics, Inc. | Il-21 receptor antagonists |
WO2007067032A1 (en) | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Academisch Medisch Cemtrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for influencing the stability of cells |
CA2633157C (en) | 2005-12-09 | 2018-10-09 | Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for influencing the stability of antibody producing cells |
EP2001907A2 (en) * | 2006-03-21 | 2008-12-17 | Wyeth a Corporation of the State of Delaware | Methods and compositions for antagonism of rage |
WO2008092084A2 (en) * | 2007-01-26 | 2008-07-31 | Centocor, Inc. | Injectable non-aqueous suspension with high concentration of therapeutic agent |
US8314225B2 (en) | 2007-06-29 | 2012-11-20 | Hoffman-La Roche Inc. | Heavy chain mutant leading to improved immunoglobulin production |
US20110212100A1 (en) * | 2007-08-15 | 2011-09-01 | Tracy Keller | Methods for modulating development and expansion of il-17 expressing cells |
WO2010055366A2 (en) * | 2007-12-07 | 2010-05-20 | Zymogenetics, Inc. | Anti-human il-21 monoclonal antibodies |
US20110091447A1 (en) * | 2008-03-13 | 2011-04-21 | The Hospital For Sick Children | Lymphocyte control of obesity and insulin resistance |
AR072136A1 (es) * | 2008-05-23 | 2010-08-11 | Wyeth Corp | Metodos de tratamiento que utilizan proteinas de union del receptor de in-terleuquina 21 |
PE20100141A1 (es) * | 2008-05-23 | 2010-02-22 | Wyeth Corp | Proteina de union al receptor de interleuquina 21 |
EP2344180A2 (en) * | 2008-09-23 | 2011-07-20 | Wyeth LLC | Methods for predicting production of activating signals by cross-linked binding proteins |
WO2010132532A1 (en) * | 2009-05-15 | 2010-11-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | B cell surface reactive antibodies |
EP2454283B1 (en) | 2009-07-15 | 2018-03-14 | AIMM Therapeutics B.V. | Means and methods for producing high affinity antibodies |
US20130224109A1 (en) * | 2010-07-20 | 2013-08-29 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Compositions and methods featuring il-6 and il-21 antagonists |
NZ611600A (en) | 2010-12-02 | 2015-02-27 | Aimm Therapeutics Bv | Means and methods for producing high affinity antibodies |
CA3182519A1 (en) * | 2011-04-29 | 2012-11-01 | Selecta Biosciences, Inc. | Tolerogenic synthetic nanocarriers for antigen-specific deletion of t effector cells |
US9309318B2 (en) * | 2012-10-17 | 2016-04-12 | Amgen, Inc. | Compositions relating to anti-IL-21 receptor antibodies |
CA2916421A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Bayer Healthcare Llc | Monoclonal antibodies against antithrombin beta complexed with heparin |
DK3099709T3 (da) | 2014-01-31 | 2020-02-03 | Aimm Therapeutics Bv | Midler og fremgangsmåder til fremstilling af stabile antistoffer |
AR099625A1 (es) * | 2014-03-21 | 2016-08-03 | Lilly Co Eli | Anticuerpos de il-21 |
KR102546611B1 (ko) * | 2014-04-08 | 2023-06-22 | 보스턴 파마슈티칼즈, 아이엔씨. | Il-21에 특이적인 결합 분자 및 이들 용도 |
WO2017075440A1 (en) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Targeted cancer therapy |
US11267882B2 (en) * | 2016-03-31 | 2022-03-08 | Eli Lilly And Company | Methods of detecting human IL-21 |
US11732020B2 (en) * | 2016-06-17 | 2023-08-22 | Medigene Immunotherapies Gmbh | T cell receptors and uses thereof |
US20190185559A1 (en) * | 2016-09-02 | 2019-06-20 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Compositions and methods for treating neoplasias |
WO2019052562A1 (zh) * | 2017-09-15 | 2019-03-21 | 科济生物医药(上海)有限公司 | Il-4r的融合蛋白及其应用 |
CA3145242A1 (en) * | 2019-06-26 | 2020-12-30 | The Johns Hopkins University | Methods and materials for targeted expansion of regulatory t cells |
WO2021129656A1 (en) * | 2019-12-24 | 2021-07-01 | Dizal (Jiangsu) Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel anti-fgfr2b antibodies |
WO2023023150A2 (en) * | 2021-08-18 | 2023-02-23 | Hifibio (Hk) Limited | Methods and compositions related to neutralizing antibodies against human coronavirus |
WO2024040195A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Capstan Therapeutics, Inc. | Conditioning for in vivo immune cell engineering |
Family Cites Families (62)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
JPS6023084B2 (ja) | 1979-07-11 | 1985-06-05 | 味の素株式会社 | 代用血液 |
JPS5896026A (ja) | 1981-10-30 | 1983-06-07 | Nippon Chemiphar Co Ltd | 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤 |
US4640835A (en) | 1981-10-30 | 1987-02-03 | Nippon Chemiphar Company, Ltd. | Plasminogen activator derivatives |
US4609546A (en) | 1982-06-24 | 1986-09-02 | Japan Chemical Research Co., Ltd. | Long-acting composition |
US4522811A (en) | 1982-07-08 | 1985-06-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4496689A (en) | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
JPS63502716A (ja) | 1986-03-07 | 1988-10-13 | マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー | 糖タンパク安定性の強化方法 |
US4791192A (en) | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
US5011912A (en) | 1986-12-19 | 1991-04-30 | Immunex Corporation | Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system |
AU600575B2 (en) | 1987-03-18 | 1990-08-16 | Sb2, Inc. | Altered antibodies |
GB8905669D0 (en) | 1989-03-13 | 1989-04-26 | Celltech Ltd | Modified antibodies |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US5565332A (en) | 1991-09-23 | 1996-10-15 | Medical Research Council | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
US5667988A (en) | 1992-01-27 | 1997-09-16 | The Scripps Research Institute | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
EP0714409A1 (en) | 1993-06-16 | 1996-06-05 | Celltech Therapeutics Limited | Antibodies |
MX9700764A (es) | 1994-07-29 | 1997-05-31 | Smithkline Beecham Plc | Compuestos novedosos. |
FR2724182B1 (fr) * | 1994-09-02 | 1996-12-13 | Pasteur Institut | Obtention d'un anticorps monoclonal recombinant a partir d'un anticorps monoclonal humain anti-rhesus d, sa production en cellules d'insecte, et ses utilisations |
HU230048B1 (hu) | 1996-02-09 | 2015-06-29 | Abbvie Biotechnology Ltd | Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása |
GB9610967D0 (en) | 1996-05-24 | 1996-07-31 | Cambridge Antibody Tech | Specific binding members,materials and methods |
WO1997047742A1 (en) | 1996-06-12 | 1997-12-18 | Smithkline Beecham Corporation | Hr-1 receptor |
EP0812913A3 (en) | 1996-06-12 | 1999-08-04 | Smithkline Beecham Corporation | HR-1 receptor, a receptor of the cytokine receptors family |
AU6175696A (en) | 1996-06-12 | 1998-01-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Hr-1 receptor |
AUPO224696A0 (en) | 1996-09-11 | 1996-10-03 | Amrad Operations Pty. Limited | A novel haemopoietin receptor and genetic sequences encoding same |
JP2001508309A (ja) | 1997-01-16 | 2001-06-26 | ジェネティックス・インスチチュート・インコーポレーテッド | ヘマトポイエチン受容体スーパーファミリーのメンバー |
US6350892B1 (en) | 1997-09-23 | 2002-02-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Trifluoromethyl ketone analogs as selective cPLA2 inhibitors |
US20010025022A1 (en) | 1997-11-26 | 2001-09-27 | Kikly Kristine Kay | Hnovilr |
US6057128A (en) | 1998-03-17 | 2000-05-02 | Genetics Institute, Inc. | MU-1, member of the cytokine receptor family |
US7198789B2 (en) | 1998-03-17 | 2007-04-03 | Genetics Institute, Llc | Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity |
US7189400B2 (en) | 1998-03-17 | 2007-03-13 | Genetics Institute, Llc | Methods of treatment with antagonists of MU-1 |
EP1088831A4 (en) | 1998-06-24 | 2003-01-02 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | HEMOPOIETIN RECEPTOR PROTEINS |
WO2000008152A1 (en) | 1998-08-04 | 2000-02-17 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Novel orphan cytokine receptors |
US6803451B2 (en) * | 1998-09-23 | 2004-10-12 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine receptor zalpha11 polypeptides |
US6576744B1 (en) | 1998-09-23 | 2003-06-10 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine receptor zalpha11 |
PL349068A1 (en) | 1998-09-23 | 2002-07-01 | Zymogenetics Inc | Cytokine receptor zalpha11 |
US6355788B1 (en) * | 1998-10-15 | 2002-03-12 | Zymogenetics, Inc. | Follistatin-related protein zfsta2 |
EP1124851A1 (en) | 1998-11-06 | 2001-08-22 | Smithkline Beecham Corporation | Hnovilr |
US6307024B1 (en) | 1999-03-09 | 2001-10-23 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine zalpha11 Ligand |
HU229148B1 (en) * | 1999-03-09 | 2013-09-30 | Zymogenetics Inc Seattle | Human cytokine as ligand of the zalpha receptor and uses thereof |
KR20140094647A (ko) | 1999-03-25 | 2014-07-30 | 아비에 도이치란트 게엠베하 운트 콤파니 카게 | 사람 il-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법 |
WO2000069880A1 (en) | 1999-05-18 | 2000-11-23 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Il-9/il-2 receptor-like molecules and uses thereof |
US20020090680A1 (en) | 1999-05-18 | 2002-07-11 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Novel IL-9/IL-2 receptor-like molecules and uses thereof |
ES2282133T3 (es) | 1999-08-24 | 2007-10-16 | Medarex, Inc. | Anticuerpos frente a la ctla-4 humano y sus usos. |
WO2001027279A1 (en) | 1999-10-12 | 2001-04-19 | Cambridge Antibody Technology | Human anti-adipocyte monoclonal antibodies and their use |
AU1919201A (en) | 1999-11-18 | 2001-05-30 | Schering Corporation | Mammalian receptor proteins; related reagents and methods |
JP2003520852A (ja) | 2000-01-27 | 2003-07-08 | アメリカン・サイアナミド・カンパニー | α−スルホニルヒドロキサム酸誘導体を製造する方法 |
DE60125543T2 (de) * | 2000-04-05 | 2007-10-04 | Zymogenetics, Inc., Seattle | Löslicher zytokinrezeptor zalpha11 |
EP1787997A1 (en) * | 2000-05-11 | 2007-05-23 | Genetics Institute, LLC | MU-1, member of the cytokine receptor family |
CA2407910C (en) * | 2000-06-16 | 2013-03-12 | Steven M. Ruben | Antibodies that immunospecifically bind to blys |
DK1432431T3 (en) | 2001-10-04 | 2017-07-10 | Genetics Inst Llc | Methods and compositions for modulating interleukin-21 activity |
WO2003040313A2 (en) | 2001-11-05 | 2003-05-15 | Zymogenetics, Inc | Il-21 antagonists |
US20040016010A1 (en) | 2002-04-17 | 2004-01-22 | Marion Kasaian | IL-21 receptor knockout animal and methods of use thereof |
WO2004007682A2 (en) | 2002-07-15 | 2004-01-22 | Wyeth | Methods and compositions for modulating t helper (th) cell development and function |
BRPI0408315A (pt) | 2003-03-14 | 2006-03-07 | Wyeth Corp | anticorpo isolado, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de gerar um anticorpo ou fragmento de ligação de antìgeno, de regular uma resposta imune, de tratar ou prevenir um distúrbio associado com célula imune em um paciente, de tratar ou prevenir um distúrbio hiperproliferativo em um paciente, e, kit de diagnóstico |
ZA200507235B (en) | 2003-03-21 | 2007-03-28 | Wyeth Corp | Treating immunological disorders using agonists of interleukin-21/interleukin-21 receptor |
JP2008501042A (ja) | 2004-05-19 | 2008-01-17 | ワイス | 免疫グロブリン産生の調節とアトピー性疾患 |
KR20070057789A (ko) | 2004-08-05 | 2007-06-07 | 와이어쓰 | 인터루킨-21 수용체 활성의 상쇄 |
GT200600148A (es) | 2005-04-14 | 2006-11-22 | Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis | |
WO2009100035A2 (en) | 2008-02-01 | 2009-08-13 | Wyeth | Interleukin-21 (il-21) and il-21 receptor (il-21r) modulation of regulatory t cells and forkhead box p3 (foxp3) |
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Also Published As
Publication number | Publication date |
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