CN1777621A - 抗人il－21受体的抗体及其应用 - Google Patents

抗人il－21受体的抗体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1777621A
CN1777621A CNA2004800105188A CN200480010518A CN1777621A CN 1777621 A CN1777621 A CN 1777621A CN A2004800105188 A CNA2004800105188 A CN A2004800105188A CN 200480010518 A CN200480010518 A CN 200480010518A CN 1777621 A CN1777621 A CN 1777621A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
antibody
gly
leu
ala
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2004800105188A
Other languages
English (en)
Inventor
D·A·扬
M·J·惠特斯
V·瓦尔格-阿彻
M·柯林斯
A·J·威廉姆斯
J·维特克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
MedImmune Ltd
Wyeth LLC
Wyeth Inc
Original Assignee
Cambridge Antibody Technology Ltd
Wyeth Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=33029874&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN1777621(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Cambridge Antibody Technology Ltd, Wyeth Inc filed Critical Cambridge Antibody Technology Ltd
Publication of CN1777621A publication Critical patent/CN1777621A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Abstract

本发明提供了特异性结合人白细胞介素－21受体(IL－21R)的人抗体和其抗原结合片段。所述抗体可作为IL－21R活性的拮抗剂，因此在总体上调节免疫应答，特别是那些由IL－21R介导的免疫应答。所述公开的组合物和方法可用于例如诊断、治疗和预防炎性疾病、自身免疫疾病、过敏、移植排斥、癌症和其它免疫系统疾病。

Description

抗人IL-21受体的抗体及其应用
                   优选权信息
本申请要求2003年3月14日提交的美国临时专利申请号60/454,336的优选权的利益。
                     技术领域
本发明涉及抗体，例如人抗体，和其片段，它们与白细胞介素-21(IL-21)受体结合，特别是与人IL-21受体结合，以及涉及其在调节由IL-21受体介导的免疫应答中的用途。此处公开的抗体可用于诊断、预防和/或治疗免疫疾病，例如自身免疫疾病。
                      发明背景
抗原引发免疫应答并且激活两个最大的淋巴细胞群体：T细胞和B细胞。在遭遇抗原后，T细胞增殖并且分化成效应细胞，而B细胞增殖并且分化成抗体分泌浆细胞。淋巴细胞的增殖和分化由细胞外蛋白调控。其中一些蛋白称为细胞因子，其是由淋巴细胞和其它细胞类型分泌的小蛋白(＜30kDa)。
白细胞介素-21(IL-21)是最近发现的细胞因子，其与IL-2、IL-4和IL-5紧密相关(Parrish-Novak等人(2000)Nature 408：57-63)。人IL-21具有大约15kDa的分子量，由131个氨基酸组成，并且与小鼠IL-21有着大约57％的同一性。IL-21主要由被激活的CD4+T细胞产生。
IL-21受体(IL-21R)是属于I类细胞因子受体家族的跨膜IL-21结合蛋白。人和小鼠的IL-21R都已在WO01/85792中得以描述，此处引用作为参考。预测的人IL-21R的大小大约为529个氨基酸。IL-21R显示与IL-2受体β链和IL-4受体α链具有很高的序列同源性(Ozaki等人(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：11439-11444)。人和小鼠IL-21R序列具有大约62％的同一性。在与配体结合时，IL-21R与由IL-2、IL-3、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13和IL-15受体共享的共有γ细胞因子受体链(γc)结合(Ozaki等人(2000)同上；Asao等人(2001)J.Immunol.167：1-5)。
IL-21R主要在淋巴组织例如B细胞、T细胞和天然杀伤(NK)细胞中表达。IL-21R的广泛淋巴分布暗示着IL-21可能在免疫调控中起作用。事实上，体外研究已经显示出，IL-21显著地调节B细胞、CD4+和CD8+T细胞以及NK细胞的功能(Parrish-Novak等人(2000)同上；Kasaian，M.T.等人(2002)Immnunity.16：559-569)。IL-21和IL-21R还显示对调节巨噬细胞和滑膜细胞的活性具有重要作用。例如，IL-21促进由抗CD40抗体刺激的B细胞增殖，和抑制由抗IgM和IL-4刺激的B细胞增殖。IL-21促进T细胞和人NK细胞的增殖和细胞溶解活性。IL-21也介导由T细胞、NK细胞、巨噬细胞和滑膜细胞分泌的细胞因子、趋化因子或其组合的表达。由于B细胞、T细胞、NK细胞、巨噬细胞和滑膜细胞对于IL-21的依赖性，因此改变IL-21对IL-21R的结合可能会影响某些免疫应答。这样的操作提供了治疗免疫系统疾病的方法，例如自身免疫疾病、炎性疾病、过敏、移植排斥、癌症、免疫缺陷和其它疾病。
                       发明简述
本申请提供结合IL-21受体(“IL-21R”)，特别是人IL-21受体的抗体，所述抗体对IL-21受体具有很高的亲和力和特异性。在一个实施方案中，抗体减少、抑制或拮抗IL-21R的活性。通过拮抗IL-21R的活性，这类抗体可用来调节免疫应答或免疫细胞相关的疾病。在另一个实施方案中，抗IL-21R抗体可作诊断使用或作为靶向抗体向表达IL-21R的细胞传递治疗性或细胞毒性试剂。因而，本发明的抗IL-21R抗体在诊断和治疗免疫细胞相关的病理学症状(例如，与T细胞(CD8+，CD4+T细胞)、NK细胞、B细胞、巨噬细胞和巨核细胞中的至少一种的活性相关的病理学症状，包括移植排斥和自身免疫疾病)。
因此，在一个方面，本发明表征了与IL-21R特别是人IL-21R结合的分离的抗体。抗IL-21R抗体可具有至少一个下列特性：(1)其是单克隆或单一的特异性抗体；(2)其是人或在体外产生的抗体；(3)其结合IL-21R，特别是结合人IL-21R的细胞外结构域，并具有至少106M-1的亲和常数(Ka)；和(4)其如同IgG一样以10nM或更低的IC50抑制IL-21与IL-21R的结合，例如由实施例9中所描述的基于细胞的测定法所测量，或其以10nM或更低的IC50抑制抗体与IL-21R的结合，例如由实施例11中所描述的抗原决定部位结合测定法所测量的。
本发明抗体的非限制性说明性实施方案此处被称为“MUF”、“MUF种系”、“MU11”、“18G4”、“18A5”、“19F5”、“CP5G2”和“R18”。本发明的抗体可特异性地结合IL-21R的细胞外结构域，例如SEQ ID NO：43(人IL-21R)的大约20到235的氨基酸，或与其有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列。在另一个实施方案中，抗体特异性地结合IL-21R的片段，例如与SEQ ID NO：43所列氨基酸序列相邻的至少10、20、50、75、100、150或200个氨基酸的片段，或与其有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列。在其他实施方案中，抗体结合IL-21R的细胞外结构域并且竞争性地抑制“MUF”、“MUF种系”、“MU11”、“18G4”、“18A5”、“19F5”、“CP5G2”或“R18”与其靶抗原决定部位的结合。在另外的实施方案中，抗体结合IL-21R的细胞外结构域并且竞争性地抑制IL-21与IL-21R的结合。这种本发明抗体对于IL-21与其受体的结合的抑制可通过一个或多个此处提供的测定法进行测量。
在一个实施方案中，本发明的抗体包括“MUF”、“MUF种系”、“MU11”、“18G4”、“18A5”、“19F5”、“CP5G2”或“R18”的scFv片段的VH结构域、VL结构域或其组合。例如，抗体包括这样的VH结构域和/或VL结构域，即所述结构域具有表1A和1B中所列氨基酸序列(对于VH为SEQ ID NO：1，19，47，65，83，101，119或137，和对于VL为SEQ ID NO：2，20，48，66，84，102，120或138)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列，或与SEQ ID NO：1，2，19，20，47，48，65，66，83，84，101，102，119，120，137或138相异不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的序列)。在另一个实施方案中，抗体包括这样的VH结构域和/或VL结构域，即所述结构域由下列核酸编码，该核酸具有表1A和1B中所列核苷酸序列(对于VH为SEQ IDNO：10，28，56，74，92，110，128或146，和对于VL为SEQ ID NO：11，29，57，75，93，111，129或147)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列，或与SEQ ID NO：10，11，28，29，56，57，74，75，92，93，110，111，128，129，146或147相异不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列)。通常，scFv片段上的VH和VL结构域通过连接体序列连接。
在其他实施方案中，所述抗体包括这样的scFv结构域，即所述scFv结构域具有表1A和1B中所列氨基酸序列(SEQ ID NO：3，21，49，67，85，103，121或139)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列，或与SEQ ID NO：3，21，49，67，85，103，121或139相异不超过1、2、5、10、15、20、30或35个氨基酸残基的序列)。在另一个实施方案中，所述抗体包括这样的scFv结构域，即所述scFv结构域由下列核酸编码，该核酸具有表1A和中所列核苷酸序列1B(SEQ ID NO：12，30，58，76，94，112，130或148)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列，或与SEQ ID NO：12，30，58，76，94，112，130或148相异不超过3，6，15，30，45，60，90，或105个核苷酸的序列)。在另外的实施方案中，抗体包含至少一个这些VH和VL结构域的互补性决定区(CDR)。例如，所述抗体可包括VH结构域的1、2或3个CDR(即H1、H2和H3)，所述CDR具有表1A和1B中所列氨基酸序列(SEQ ID NO：4，5，6，22，23，24，50，51，52，68，69，70，86，87，88，104，105，106，122，123，124，140，141或142)，或基本与其同源的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列)。在一些实施方案中，基本上与SEQ ID NO：4，5，6，22，23，24，50，51，52，68，69，70，86，87，88，104，105，106，122，123，124，140，141或142中所列的H1、H2或H3氨基酸序列同源的序列包括一个或多个氨基酸替代，例如一个或多个保守氨基酸替代。在另一个实施方案中，所述抗体可包括VL结构域的1、2或3个CDR(即L1、L2和L 3)，所述CDR具有表1A和1B中所列氨基酸序列(SEQ ID NO：7，8，9，25，26，27，53，54，55，71，72，73，89，90，91，107，108，109，125，126，127，143，144或145)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列)。在一些实施方案中，基本上与SEQ ID NO：7，8，9，25，26，27，53，54，55，71，72，73，89，90，91，107，108，109，125，126，127，143，144或145所示的L1、L2和L3氨基酸序列同源的序列包括一个或多个氨基酸替代，例如一个或多个保守氨基酸替代。
在另外一个实施方案中，抗体包括MUF、MU11、MUF种系、18G4、18A5、19F5、CP5G2或R18的VH结构域的CDR，所述CDR具有表1A和1B中所列氨基酸序列(SEQ ID NO：6，24，52，70，88，106，124或142)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列)，所述基本与其一致的序列包括一个或多个氨基酸替代，例如一个或多保守氨基酸替代。根据本发明的抗体可包括包含单个CDR例如H3，或H1、H2和H3的任意组合的重链可变区。例如，在一些实施方案中，抗体可包含与CDR2(H2)组合的CDR(H3)。在其他实施方案中，抗体可包含与CDR1(H1)组合的CDR3(H3)，或H1和H2CDR的组合。然而，优选地，抗体包括这样的重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO：6，24，52，70，88，106，124，142中任意一个所示的CDR3(H3)和其具有氨基酸替代例如一个或多个保守氨基酸替代的序列，H3可以是单独地存在或与H1和H2中一个或两个组合存在。
类似地，在一些实施方案中，抗体包括MUF、MU11、MUF种系、18G4、18A5、19F5、CP5G2或R18的VL结构域的CDR，例如，具有如表1A和1B中所列氨基酸序列(SEQ ID NO：9，27，55，73，91，109，127或145)，或基本与其一致的序列(例如，与其具有至少大约85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列)的L3CDR，所述基本与其一致的序列包括一个或多个氨基酸替代，例如一个或多保守氨基酸替代。根据本发明的抗体可包括包含单个CDR例如L3，或L1、L2和L3的任意组合的轻链可变区。例如，在一些实施方案中，抗体可包含与L2组合的L3。在其它实施方案中，抗体可包含与L1组合的L3。在另外一个实施方案中，抗体可包含与L1和L2CDR的组合。然而，优选地，抗体包括这样的轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：9，27，55，73，91，109，127，145中任意一个所示的L3和其具有氨基酸替代例如一个或多个保守氨基酸替代的序列，L3可以是单独地存在或与L1和L2中一个或两个组合存在。
在一些实施方案中，本发明的抗体与包含与SEQ ID NO：1，19，47，65，83，101，119或137所示氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或超过99％同一性的VH结构域和与SEQ ID NO：2，20，48，66，84，102，120或138所示氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或超过99％同一性的VL结构域的抗体竞争结合IL-21R。在某些实施方案中，抗体与含有包含至少一个重链CDR的重链可变区的抗体竞争结合IL-21R，所述重链CDR选自SEQ ID NO：6，24，52，70，88，106，124，142和其中有氨基酸替代例如一个或多个保守氨基酸替代的序列。在某些实施方案中，根据本发明的抗体与含有包含至少一个轻链CDR的轻链可变区的抗体竞争结合IL-21R例如人IL-2R，所述轻链CDR选自SEQ ID NO：9，27，55，73，91，109，127，145和其中有氨基酸替代例如一个或多个保守氨基酸替代的序列。与本发明的抗体竞争结合IL-21R例如人IL-21R的抗体可同时包含一个选自SEQ ID NO：6，24，52，70，88，106，124和142的重链CDR和一个选自SEQ ID NO：9，27，55，73，91，109，127和145的轻链CDR。在一些实施方案中，根据本发明的抗体包括超过一个的重链CDR和/或一个或多个轻链可变区CDR，所述重链CDR对于MUF选自SEQ ID NO：4，5，6；对于MU11选自SEQ ID NO：22，23，24；对于18G4选自SEQ ID NO：50，51，52；对于18A5选自SEQ ID NO：68，69，70；对于MUF-种系选自SEQ ID NO：86，87，88；对于19F5选自SEQ ID NO：104，105，106；对于CP5G2选自SEQ ID NO：122，123，124；和对于R18选自SEQ ID NO：140，141，142，所述轻链可变区CDR对于MUF选自SEQ ID NO：7，8，9；对于MU11选自SEQ ID NO：25，26，27；对于18G4选自SEQ ID NO：53，54，55；对于18A5选自SEQ IDNO：71，72，73；对于MUF-种系选自SEQ ID NO：89，90，91；对于19F5选自SEQ ID NO：107，108，109；对于CP5G2选自SEQ ID NO：125，126，127；和对于R18选自SEQ ID NO：143，144，145。
在另外的实施方案中，根据本发明的抗体与IL-21例如L-21竞争结合IL-21R例如人IL-21R。
本发明的抗体可以是全长(例如，包含至少一个完整的重链和至少一个完整的轻链)，或可仅包含抗原结合片段(例如，Fab，F(ab’)2，Fv或单链Fv片段(scFv))。抗体可包含选自κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因中的任一个的恒定区或其部分。例如，可使用各种同种型的重链恒定区，所述同种型包括：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE。所述轻链恒定区可选自κ或λ。抗体可以是IgG，或其也可以是IgG1κ或IgG1λ。
可将此处描述的抗IL-21R抗体进行衍生或连接到另一个功能性分子(例如另一个肽或蛋白质(例如，Fab片段))上。例如，本发明的抗体可功能性地连接(例如通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其它方式)到至少一个其他分子实体上，除了其他以外，例如另一个抗体(例如，双特异性或多特异性抗体)、毒素、放射性同位素、细胞毒性剂或细胞抑制剂。
在另一个方面，本发明表征了含有至少一种抗IL-2R抗体和药物学可接受载体的药物组合物。所述药物组合物可进一步包含至少一种抗IL-21R抗体和至少一种治疗性试剂(例如，此处更详细描述的细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂、细胞毒性剂、细胞抑制剂或其组合)的组合。抗IL-21R抗体和治疗性试剂的组合也在本发明范围内。本发明的组合物和组合可用于调节IL-21依赖性免疫细胞，例如B细胞、T细胞、NK细胞、巨噬细胞和滑膜细胞。
在另一方面，本发明表征了治疗患有免疫细胞相关疾病的受试者的方法。所述方法包括给受试者施用剂量足以抑制免疫细胞的至少一种IL-21R活性的抗IL-21R抗体，从而治疗免疫细胞相关疾病。
所述抗IL-21R抗体可单独或与此处描述的其他治疗性试剂组合施用给受试者。所述受试者可以是患有免疫细胞相关病理学症状(例如，与T细胞、NK细胞、B细胞、巨噬细胞和巨核细胞中的至少一种细胞的异常活性相关的病理学症状)的哺乳动物。所述受试者可以是人。例如，所述方法可用于治疗具有免疫细胞相关疾病例如移植排斥和自身免疫疾病的受试者。自身免疫疾病可包括糖尿病(I型)、关节炎(包括类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎和强直性脊柱炎)、多发性硬化、重症肌无力、脉管炎、全身性红斑狼疮、自身免疫性甲状腺炎、皮炎(包括特应性皮炎和湿疹性皮炎)、牛皮癣、硬皮病、哮喘、过敏、炎性肠病(IBD)和克罗恩病。使用本发明的抗IL-21R抗体治疗关节炎疾病(例如，选自类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎和强直性脊柱炎中的至少一种的疾病)是本发明的一个实施方案。
在另一方面，本发明提供了用于在体外检测样品中存在IL-21R的方法。样品可包括生物学样品例如血清、血浆、组织和活组织切片。本方法可用于诊断疾病，例如此处描述的免疫细胞相关疾病。所述方法包括：(1)将所述样品和对照样品与抗IL-21R抗体接触，和(2)检测抗IL-21R抗体和所述样品或对照样品之间的复合物的形成，其中相对于对照样品，在所述样品中复合物的形成在统计学上发生显著改变表示IL-21R存在于所述样品中。
在另一方面，本发明提供了在体内检测IL-21R的存在的方法(例如，在受试者中的体内成像)。所述方法可用于诊断疾病，例如此处所描述的免疫细胞相关疾病。所述方法包括：(1)在允许所述抗体与IL-21R结合的条件下给受试者或对照受试者施用抗IL-21R抗体，和(2)检测所述抗体和IL-21R之间的复合物的形成，其中相对于对照例如对照受试者，在所述受试者中复合物的形成在统计学上发生显著改变表示存在IL-21R。
根据本发明的抗体可以直接或间接地用有助于检测结合或未结合的抗体的可检测物质进行标记。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。
在另一方面，本发明提供了用于在体内将试剂例如治疗性或细胞毒性试剂递送或靶向表达IL-21R的细胞的方法。所述方法包括在允许所述抗体与IL-21R结合的条件下对受试者施用抗IL-21R抗体。可将所述抗体与第二治疗性部分例如毒素偶联。
本公开内容提供了来自MUF、MUF种系、MU11、18G4、18A5、19F5、CP5G2和R18的VH和VL结构域的核酸序列。也提供了包含至少一个来自MUF、MUF种系、MU11、18G4、18A5、19F5、CP5G2和R18的CDR的核酸序列。本公开内容也提供了包含这类核酸的载体和宿主细胞。
本公开内容进一步提供了产生新的VH和VL结构域以及功能性抗体的方法，所述功能性抗体包含所有或部分这类来源于MUF、MUF种系、MU11、18G4、18A5、19F5、CP5G2和R18的VH或VL结构域的结构域。
本公开内容的另外方面部分将在描述中列出，和部分可明显地从描述中看出或可从实施本发明中获知。提出本发明，并且在权利要求中特别地加以指出，和本公开内容不应当被解释为限制所述权利要求的范围。下列详细描述包括本发明各种实施方案中的举例性的代表方案，它们不是对所要求保护的本发明的限制。附图与该描述一起构成了本说明书的一部分，仅起举例说明实施方案的作用并不限制本发明。
                      附图简述
图1A描述了ELISA的结果，其显示MU11特异性结合人IL-21R。
图1B描述了通过FACS进行分析而得到的结合测定法的结果，其显示MUF和MU11都结合到人IL-21R的表面上。
图1C描述了通过FACS进行分析而得到的结合测定法的结果，其显示MUF与小鼠B细胞上的IL-21R结合。
图2描述了ELISA的结果，其显示MUF抑制人IL-21与人IL-21R的结合。
图3A描述了细胞增殖测定法的结果，其显示MUF的加入阻断了IL-21增加人CD4+T细胞的增殖的能力。
图3B描述了细胞增殖测定法的结果，其显示MU11阻断了COS细胞培养基中的IL-21增加小鼠CD4+T细胞的增殖的能力。
图3C描述了细胞增殖测定法的结果，其显示MU11以剂量依赖方式阻断了COS细胞培养基中的IL-21增加小鼠CD8+T细胞的增殖的能力。
图4描述了细胞增殖测定法的结果，其显示MUF scFv和MUF IgG均阻断了IL-21增加Baf3Mu-1细胞的增殖的能力，所述Baf3Mu-1细胞表达IL-21R。
图5A描述了将IL-21加入到从关节炎患者中分离的人成纤维样滑膜细胞中而导致趋化因子MCP-1和GRO的分泌增加。
图5B描述了将IL-21加入到从关节炎患者中分离的人成纤维样滑膜细胞中而导致趋化因子1-309、TARC、Eotaxin、MDC、Lymph、SDFIB、IP-10、I-TAC、MG和MP3B的分泌增加。
图5C和5D描述了将IL-21加入到从关节炎患者中分离的人成纤维样滑膜细胞中而导致细胞因子IFN-α和TNF-α(图5C)以及IL-6和IL8(图5D)的分泌增加。
图5E显示了，如通过对CIA指征的测量，IL-21在关节炎小鼠模型中加重了胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)。
图6显示了，在移植排斥的体外模型即混合淋巴细胞反应中，IL-21增加了C57BL/6J细胞的增殖。
                         发明详述
定义
为了使本发明能更易理解，首先定义一些术语。另外的定义在整个详述中提出。
“抗体”是指免疫球蛋白或其片段，并且包括任何含有抗原结合位点的多肽。该术语不限于多克隆的、单克隆的、单特异性的、多特异性的、非特异性的、人源化的、人的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂交的、突变的、移植的和体外产生的抗体。除非在之前冠以修饰词“完整的”，所述术语“抗体”包括抗体片段例如Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd、dAb和其它保留抗原结合功能的抗体片段。通常，这类片段包含抗原结合结构域。
术语“抗原结合结构域”和“抗原结合片段”是指包含负责抗体与抗原之间特异性结合的氨基酸的抗体分子的部分。所述被抗体特异性识别和结合的抗原的部分称为“抗原决定部位”。抗原结合结构域可包含一个抗体轻链可变区(VL)和一个抗体重链可变区(VH)；然而，其不必两者都包含。例如，Fd片段具有2个VH区并且通常保留一些完整的抗原结合结构域的抗原结合功能。抗体的抗原结合片段的例子包括(1)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域构成的单价片段；(2)F(ab’)2片段，包含两个在铰链区通过二硫键连接的Fab片段的二价片段；(3)由两个VH和CH1结构域构成的Fd片段；(4)由抗体的单个臂的VL和VH结构域构成的FV片段；(5)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341：544-546)，其由VH结构域构成；和(6)分离的互补性决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但它们可通过采用重组方法经合成的连接体连接起来，所述连接体能使它们成为单个的蛋白链，在该蛋白链中VL和VH区域配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人(1988)Science 242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。通过使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并且以和完整的抗体相同的方式筛选所述片段加以使用。
术语“有效量”是指这样的剂量或数量，即其足以调节IL-21R活性以改善临床症状或获得想要的生物学效果，例如降低的T细胞和/或B细胞活性、自身免疫的抑制、移植排斥的抑制等。
术语“人抗体”包括具有基本上对应于Kabat等人(参见Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242)描述的人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。本发明的人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过在体外的随机或定点诱变或体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，并且特别是在CDR3中。所述人抗体可具有至少1、2、3、4、5或更多个被不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基替代的位置。
术语“IL-21R活性”是指至少一个由于IL-21结合细胞上的IL-21R而引发或中断的细胞过程。IL-21R的活性包括下列中的至少一个，但不限于此：(1)结合IL-21(例如，人IL-21)；(2)与信号转导分子(例如，γc和/或JAK-1)相联合；(3)刺激STAT蛋白(例如，STAT5、STAT3或其组合)的磷酸化；(4)激活STAT蛋白；和(5)调节(例如，增加或减少)免疫细胞的增殖、分化、效应细胞功能、细胞溶解活性、细胞因子分泌、存活或其组合。免疫细胞可包括CD8+和CD4+T细胞、NK细胞、B细胞、巨噬细胞和巨核细胞。IL-21R活性可在体外例如通过使用实施例8和9中描述的T细胞增殖测定法进行测定。IL-21R活性也可在体内例如通过实施例12中描述的免疫应答或疾病的进程计分法进行测定。
短语“抑制”或“拮抗”IL-21R活性和其同源词汇是指由于结合抗IL-21R抗体而减少、抑制或减弱IL-21R的至少一种活性，其中所述减少是相对于相同抗体不存在的情况下IL-21R的活性而言的。可如实施例7、8、9和11中所描述的方法测量所述活性。抑制或拮抗并不一定表示完全消除IL-21R多肽的生物学活性。活性减少可以为大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
术语“白细胞介素-21受体”或“IL-21R”是指I类细胞因子受体，也称为NILR(WO 01/85792；Parrish-Novak等人(2000)Nature408：57-63；Ozaki等人(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97：11439-114444)。在配体结合时，IL-21R就与共有的γ细胞因子受体链(γc)(Asao等人(2001)J.Immunol.167：1-5)相互作用，并且引起STAT1和STAT3(Asao等人(2001)同上)或STAT5(Ozaki等人(2000)同上)的磷酸化。IL-21R显示出广泛的淋巴组织分布。术语“IL-21R”是指能与IL-21结合的受体(可以是哺乳动物的)，并且具有至少一个下列特征：(1)天然发生的哺乳动物IL-21R多肽或其片段的氨基酸序列，例如SEQ ID NO：43(人)或SEQ ID NO：45(鼠科动物)或其片段所示的氨基酸序列；(2)与SEQ ID NO：43(人)或SEQ ID NO：45(鼠科动物)或其片段所示的氨基酸序列基本一致，例如具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；(3)由天然发生的哺乳动物IL-21R核苷酸序列或其片段(例如，SEQ ID NO：44(人)或SEQ ID NO：46(鼠科动物)或其片段)编码的氨基酸序列；(4)由与SEQ ID NO：44(人)或SEQ ID NO：46(鼠科动物)或其片段所示的核苷酸序列基本一致，例如具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列；(5)由与天然发生的IL-21R核苷酸序列或其片段例如SEQ ID NO：44(人)或SEQ IDNO：46(鼠科动物)或其片段简并的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或(6)与前述核苷酸序列中的一个在严紧条件下，例如在高度严紧条件下杂交的核苷酸序列。IL-21R可结合到哺乳动物来源例如人或小鼠的IL-21上。(Parrish-Novak等人(2000)同上)。
在此处使用时，“体外产生的抗体”是指全部或部分可变区(例如，至少一个CDR)产生于非免疫细胞选择(例如，体外噬菌体展示、蛋白质芯片或任何其他可以测试候选序列结合抗原的能力的方法)的抗体。该术语不包括通过在免疫细胞中基因组重排产生的序列。
术语“分离的”是指基本上脱离其天然环境的分子。例如，分离的蛋白基本不含有来自其所来源的细胞或组织源的细胞材料或其他蛋白质。该术语也指这样的制剂，该制剂中分离的蛋白质的纯度足以用于药物组合物；或具有至少70-80％(w/w)的纯度；或具有至少80-90％(w/w)的纯度；或具有至少90-95％(w/w)的纯度；或具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％(w/w)的纯度。
人IL-21R的核苷酸序列和预测的氨基酸序列分别显示于SEQ IDNO：44和SEQ ID NO：43中。人IL-21R氨基酸序列(SEQ ID NO：43)的分析揭示了下列结构特征：前导序列(SEQ ID NO：43的大约第1-19位氨基酸)；WSXWS基元(SEQ ID NO：43的大约第213-217位氨基酸)；跨膜结构域(SEQ ID NO：43的大约第236-252位氨基酸)；细胞外结构域(SEQ ID NO：43的大约第1-235位氨基酸，和成熟的IL-21R序列的大约第20-235位氨基酸)；和来自SEQ ID NO：43的大约第253-538位氨基酸的细胞内结构域。据信成熟的人IL-21R具有SEQ ID NO：43的第20-538位氨基酸的序列。
术语“库集(repertoire)”是指全部或部分来源于编码免疫球蛋白的序列的核苷酸序列的遗传多样性集合。所述序列可以通过重链的V、D和J片段以及轻链的V和J片段在体内重排产生。作为另一种选择，所述序列可在响应例如体外刺激而发生重排的细胞中产生。可选择地，通过DNA拼接、核苷酸合成、诱变和其它方法(参见例如美国专利5,565,332)可获得所述序列的部分或全部。
术语“特异性结合”、“选择性结合”和“选择性地结合”是指两个分子形成在生理学状况下相对稳定的复合物。选择性结合的特征在于高亲和力和低至中等的容量，这与通常具有低亲和力及中等至高容量的非特异性结合不同。通常，当亲和常数Ka高于106M-1时，结合被认为是特异性的或选择性的。如果必要，通过改变结合条件可将非特异结合减小而基本上不影响选择性结合。通过使用常规技术，本领域技术人员可优化合适的结合条件，例如抗体浓度、溶液的离子强度、温度、结合时间、封闭剂浓度(例如血清白蛋白、乳酪蛋白)等。说明性的条件列于实施例1-11中，但本领域技术人员已知的其他条件也落在本发明的范围内。
在此处使用时，术语“严紧”描述用于杂交和洗涤的条件。严紧条件对本领域技术人员来说是已知的，并且可在Current Protocolsin Molecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中查见。含水和无水的方法描述于该文献中并且二者都可使用。一个严紧杂交条件的例子是在大约45℃下于6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)溶液中进行杂交，接着在50℃下用0.2×SSC、0.1％SDS洗涤至少一次。第二个严紧杂交条件的例子是在大约45℃下于6×SSC溶液中进行杂交，接着在55℃下用0.2×SSC、0.1％SDS洗涤至少一次。另一个严紧杂交条件的例子是在大约45℃下于6×SSC溶液中进行杂交，接着在60℃下用0.2×SSC、0.1％SDS洗涤至少一次。另外一个严紧杂交条件的例子是在大约45℃下于6×SSC溶液中进行杂交，接着在65℃下用0.2×SSC、0.1％SDS洗涤至少一次。高度严紧条件包括在65℃下于0.5M磷酸钠、7％SDS中杂交，接着在65℃下用0.2×SSC、1％SDS洗涤至少一次。
短语“基本如列出的”、“基本一致”或“基本同源”的意思是，相关的氨基酸或核苷酸序列(例如，CDR(s)、VH或VL结构域)与列出的序列相比基本一致或具有不显著的差异(通过保守氨基酸替代)。不显著的差异包括少量氨基酸变化，例如在特定区域的5个氨基酸序列上的1或2个替代。在抗体的情况下，第二个抗体具有相同的特异性，并且具有原抗体的至少50％的亲和力。
与此处公开的序列基本一致或同源(例如，至少大约85％的序列同一性)的序列也是本申请的一部分。在一些实施方案中，序列同一性可达大约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高。可选择地，当所述核酸区段在选择的杂交条件下(例如，高度严紧条件)与所述链的互补链杂交时，就认为存在基本同一性或同源性。所述核酸可以存在于整个细胞中、存在于细胞裂解物中或者以部分纯化或基本纯的形式存在。
可通过标准的比对算法，例如由Altshul等人((1990)J.Mol.Biol.，215：403-410)描述的Basic Local Alignment Tool(BLAST)；Needleman等人((1970)J.Mol.Biol.，48：444-453)的算法；或Meyers等人((1988)Comput.Appl.Biosci.，4：11-17)的算法来确定同一性百分数。一组参数可以是具有缺口罚分(gap penalty)为12、缺口延伸罚分(gap extend penalty)为4和移码缺口罚分(frameshift gap penalty)为5的Blosum 62计分矩阵。两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分数可通过使用已整合入ALIGN程序(2.0版本)中的计E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS，4：11-17)的算法，使用PAM120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分(gap length penalty)和4的缺口罚分(gap penalty)来确定。
术语“治疗性试剂”是治疗或辅助治疗医学疾病的物质。在此处使用时，治疗性试剂是指当给具有抗IL-21R抗体的受试者施用时，与单独施用治疗性试剂或抗IL-21R抗体相比提供更好的治疗效果的物质。这些治疗性试剂可包括但不限于以补充抗IL-21R抗体的IL-21R活性的方式调节免疫细胞或免疫应答的物质。此处描述了治疗性试剂的非限定性实例和用途。
在此处使用时，抗IL-21R抗体的“治疗有效量”是指，当以单剂或多剂方式施用给受试者(例如病人)时，对于治疗、预防、医治、延缓疾病或复发性疾病的至少一个症状，减轻疾病或复发性疾病的至少一个症状的严重度，改善疾病或复发性疾病的至少一个症状，或延长受试者的存活时间至超过在缺少这种治疗的情况下所预期的存活时间有效的抗体数量。
术语“治疗”是指治疗性或预防性措施。所述治疗可以是给患有医学疾病的受试者或最终可能会得病的人施用药物以预防、医治、延缓疾病或复发性疾病的一个或多个症状，减轻疾病或复发性疾病的一个或多个症状的严重度，或改善疾病或复发性疾病的一个或多个症状，或者延长受试者的存活时间至超过在缺少这种治疗的情况下所预期的存活时间。
抗IL-21R抗体
本公开内容提供了包含新的抗原结合片段的新型抗IL-21R抗体。
通常，通过采用例如常规的杂交瘤技术(Kohler和Milstein(1975)Nature，256：495-499)、重组DNA方法(美国专利4,816,567)或使用抗体文库的噬菌体展示(Clackson等人(1991)Nature，352：624-628)；Marks等人(1991)J.Mol.Biol.，222：581-597)来制备抗体。为查找另外的抗体生产技术，可参考“Antibodies：A Laboratory Manual”，Harlow等人(编者)，ColdSpring Harbor Laboratory，1988。本发明不受限于任何特定的原料、生产方法或抗体的其它特殊的特征。
完整的抗体是免疫球蛋白(Ig)，其通常是由两条轻链(各为～25kDa)和2条重链(各为～50kDa)组成的四聚体糖基化蛋白。轻链分为两类同种型(λ和κ)而重链分为5类同种型(A、D、E、G和M)。一些重链同种型进一步分为同种型亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
不同抗体的结构域和三维结构在本领域是已知的(Harlow等人，同上)。简而言之，轻链由恒定结构域(CL)和N末端可变结构域(VL)构成。重链由三个或四个恒定结构域(CH)、铰链区和N末端可变结构域(VH)构成。紧邻VH结构域的CH称为CH1。VH和VL结构域包含4个称作构架(FR)区(FR1、FR2、FR3和FR4)的序列保守区域，所述区域为三个称作互补性决定区(CDR)的超可变序列区域形成支架。所述CDR(CDR1、CDR2和CDR3)包含绝大部分特异性结合抗原的抗体氨基酸。重链CDR表示为H1、H2和H3，而轻链CDR表示为L1、L2和L3。
Fab片段(抗原结合片段)由VH-CH1和VL-CL结构域通过恒定区之间的二硫键共价连接构成。Fv片段较小，和由VH和VL结构域通过非共价连接构成。为克服非共价连接的结构域易于解离的趋势，可构建单链Fv片段(scFv)。所述scFv包含(1)将VH的C末端连接到VL的N末端，或(2)将VL的C末端连接到VH的N末端的柔性多肽。15聚体(Gly4Ser)3肽可用作连接体，但其他连接体在本领域是已知的。
通过使用编码可变区的多个种系基因和各种体细胞事件可产生抗体多样性。所述体细胞事件包括可变基因区段以及多样性(D)和连接(J)基因区段的重组以产生完整的VH区域，和可变以及连接基因区段的重组以产生完整的VL区域。CDR3(H3)是在抗体序列内最大的分子多样性来源。例如，H3可以短至2个氨基酸残基或大于26个氨基酸残基。最小的抗原结合片段是Fv，其由VH和VL结构域构成。
具有与此处公开的CDR序列一致或相似的CDR序列的抗体和组合物不可能是独立产生的。在组装和体细胞突变后抗体基因的序列是高度变化的，并且据估计这些变化的基因编码1010个不同的抗体分子(Immunoglobulin Genes，第二版，Jonio等人(编者)，Academic Press，San Diego，CA，1995)。
本公开内容提供了来源于人免疫球蛋白基因文库的新CDR。具有CDR的结构通常是抗体的重链或轻链或其部分，其中所述CDR位于天然产生的CDR区域。如Kabat等人的“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”，No.91-3242，National Institutes ofHealth Publications，Bethesda，MD(1991)中的描述，可确定可变结构域的结构和位置。
本发明的抗IL-21R抗体(包括其scFv片段、VH和VL结构域和CDR)的说明性实施方案的DNA和氨基酸(AA)序列于序列列表中和列举于表1A和表1B中。将所述抗体的特殊实施方案确定为MUF、MUF-种系、MU11、18G4、18A5、19F5、CP5G2和R18。抗体的VH和VL结构域中的CDR位置列于表2。
表1A： VH和VL结构域、Fv和CDR的AA和DNA序列
  区域   类型   MUF   MU11   18G4   18A5
  VH   AA   SEQ ID NO：1   SEQ ID NO：19   SEQ ID NO：47   SEQ D NO：65
  VL   AA   SEQ ID NO：2   SEQ ID NO：20   SEQ ID NO：48   SEQ ID NO：66
  scFv   AA   SEQ ID NO：3   SEQ ID NO：21   SEQ ID NO：49   SEQ ID NO：67
  H1   AA   SEQ ID NO：4   SEQ ID NO：22   SEQ ID NO：50   SEQ ID NO：68
  H2   AA   SEQ ID NO：5   SEQ ID NO：23   SEQ ID NO：51   SEQ ID NO：69
  H3   AA   SEQ ID NO：6   SEQ ID NO：24   SEQ ID NO：52   SEQ ID NO：70
  L1   AA   SEQ ID NO：7   SEQ ID NO：25   SEQ ID NO：53   SEQ ID NO：71
  L2   AA   SEQ ID NO：8   SEQ ID NO：26   SEQ ID NO：54   SEQ ID NO：72
  L3   AA   SEQ ID NO：9   SEQ ID NO：27   SEQ ID NO：55   SEQ ID NO：73
  VH   DNA   SEQ ID NO：10   SEQ ID NO：28   SEQ ID NO：56   SEQ ID NO：74
  VL   DNA   SEQ ID NO：11   SEQ ID NO：29   SEQ ID NO：57   SEQ ID NO：75
  scFv   DNA   SEQ ID NO：12   SEQ ID NO：30   SEQ ID NO：58   SEQ ID NO：76
  H1   DNA   SEQ ID NO：13   SEQ ID NO：31   SEQ ID NO：59   SEQ ID NO：77
  H2   DNA   SEQ ID NO：14   SEQ ID NO：32   SEQ ID NO：60   SEQ ID NO：78
  H3   DNA   SEQ ID NO：15   SEQ ID NO：33   SEQ ID NO：61   SEQ ID NO：79
  L1   DNA   SEQ ID NO：16   SEQ ID NO：34   SEQ ID NO：62   SEQ ID NO：80
  L2   DNA   SEQ ID NO：17   SEQ ID NO：35   SEQ ID NO：63   SEQ ID NO：81
  L3   DNA   SEQ ID NO：18   SEQ ID NO：36   SEQ ID NO：64   SEQ ID NO：82
表1B： VH和VL结构域、Fv和CDR的AA和DNA序列
  区域   类型   MUF种系   19F5   CP5G2   R18
  VH   AA   SEQ ID NO：83   SEQ ID NO：101   SEQ ID NO：119   SEQ D NO：137
  VL   AA   SEQ ID NO：84   SEQ ID NO：102   SEQ ID NO：120   SEQ ID NO：138
  scFv   AA   SEQ ID NO：85   SEQ ID NO：103   SEQ ID NO：121   SEQ ID NO：139
  H1   AA   SEQ ID NO：86   SEQ ID NO：104   SEQ ID NO：122   SEQ ID NO：140
  H2   AA   SEQ ID NO：87   SEQ ID NO：105   SEQ ID NO：123   SEQ ID NO：141
  H3   AA   SEQ ID NO：88   SEQ ID NO：106   SEQ ID NO：124   SEQ ID NO：142
  L1   AA   SEQ ID NO：89   SEQ ID NO：107   SEQ ID NO：125   SEQ ID NO：143
  L2   AA   SEQ ID NO：90   SEQ ID NO：108   SEQ ID NO：126   SEQ ID NO：144
  L3   AA   SEQ ID NO：91   SEQ ID NO：109   SEQ ID NO：127   SEQ ID NO：145
  VH   DNA   SEQ ID NO：92   SEQ ID NO：110   SEQ ID NO：128   SEQ ID NO：146
  VL   DNA   SEQ ID NO：93   SEQ ID NO：111   SEQ ID NO：129   SEQ ID NO：147
  scFv   DNA   SEQ ID NO：94   SEQ ID NO：112   SEQ ID NO：130   SEQ ID NO：148
  H1   DNA   SEQ ID NO：95   SEQ ID NO：113   SEQ ID NO：131   SEQ ID NO：149
  H2   DNA   SEQ ID NO：96   SEQ ID NO：114   SEQ ID NO：132   SEQ ID NO：150
  H3   DNA   SEQ ID NO：97   SEQ ID NO：115   SEQ ID NO：133   SEQ ID NO：151
  L1   DNA   SEQ ID NO：98   SEQ ID NO：116   SEQ ID NO：134   SEQ ID NO：152
  L2   DNA   SEQ ID NO：99   SEQ ID NO：117   SEQ ID NO：135   SEQ ID NO：153
  L3   DNA   SEQ ID NO：100   SEQ ID NO：118   SEQ ID NO：136   SEQ ID NO：154
表2： AA序列中CDR的位置
 CDR   MUF(SEQ ID NO：1)   MUF(SEQ ID NO：2)  MU11(SEQ ID NO：21)  18G4(SEQ ID NO：49)
 H1   31-35  31-35  31-35
 H2   50-66  50-66  50-66
 H3   99-105  99-106  99-105
 L1   23-33  156-166  156-166
 L2   49-55  182-188  182-188
 L3   88-100  221-229  221-231
  CDR  18A5(SEQ ID NO：67)   19F5(SEQ ID NO：103)   CP5G2(SEQ ID NO：121)   R18(SEQ ID NO：139)
  H1   31-36   31-35   31-35   31-35
  H2   51-66   50-66   50-66   50-66
  H3   99-107   99-109   99-107   99-110
  L1   158-168   160-170   158-168   161-171
  L2   184-190   186-192   184-190   187-193
  L3   223-234   225-236   223-234   226-236
  CDR  MUF种系(SEQ ID NO：85)
  H1  31-35
  H2  50-66
  H3  99-105
  L1  156-166
  L2  182-188
  L3  221-233
本发明的抗IL-21R抗体可任选地包含抗体恒定区或其部分。例如，可将VL结构域于其C末端处附着到轻链恒定结构域如Cκ或Cλ。类似地，VH结构域或其部分可附着到整个或部分重链上，如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM以及任何同种型亚类。恒定区在本领域是已知的(参见，例如，Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，No.91-3242，National Institutes of HealthPublications，Bethesda，MD(1991)。
在示例性实施方案中，MUF包含人IgG1λ重链和轻链恒定结构域，而MU11包含人IgG1κ的重链和轻链恒定结构域。在这些抗体中，VH结构域外的重链序列是一致的。所述λ轻链的C末端片段的DNA和氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：40和SEQ ID NO：39。所述κ链的C末端片段的DNA和氨基酸序列分别列于SEQ ID NO：42和SEQ IDNO：41。IgG1重链的C末端片段的DNA和氨基酸序列分别列于SEQ IDNO：38和SEQ ID NO：37。
某些实施方案包含来自MUF、MUF-种系、MU11、18G4、18A5、19F5、CP5G2或R18的Fv片段的VH结构域、VL结构域或其组合。进一步的实施方案包含1、2、3、4、5或6个来自VH和VL结构域的互补性决定区(CDR)。具有列于SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、19、20、21、22、23、24、25、26、27、47、48、49、50、51、52、53、54、55、65、66、67、68、69、70、71、72、73、83、84、85、86、87、88、89、90、91、101、102、103、104、105、106、107、108、109、119、120、121、122、123、124、125、126、127、137、138、139、140、141、142、143、144或145中的CDR序列的抗体包括在本发明的范围内。例如，在一个实施方案中，抗体包含MUF、MUF-种系、MU11、18G4、18A5、19F5、CP5G2或R18的VH结构域的CDR3(H3)片段。
在某些实施方案中，VH和/或VL结构域可以进行种系转化(germline)，即可使用常规的分子生物学技术对这些结构域的构架区(FR)进行突变以匹配由种系细胞产生的那些。在其他实施案中FR序列保留着从共有种系序列中分出的状态。
一个实施方案中，本发明提供了种系转化的(germlined)MUF的氨基酸和核酸序列。所述种系转化的MUF的VH结构域的氨基酸序列描述于SEQ ID NO：83和85。所述种系转化的MUF的VL结构域的氨基酸序列描述于SEQ ID NO：84和85。所述种系转化的MUF的VH结构域的核酸序列描述于SEQ ID NO：92和94，而所述种系转化的MUF的VL结构域的核酸序列描述于SEQ ID NO：93和94。通过将氨基酸和核酸序列与VBASE数据库(MRC Center for Protein Engineering，UK)进行比对可确定VH和VL结构域的种系序列。在一些实施方案中，按照与VBASE数据库中最匹配的序列对scFv的FR区域进行突变，并且将CDR部分保持完整。
在某些实施方案中，本发明的抗体特异性地与人IL-21R的细胞外结构域中的抗原决定部位反应。所预测的细胞外结构域由SEQ IDNO：43的从大约第20位氨基酸到大约第235位氨基酸的序列组成。在进一步实施方案中，抗IL-21R抗体阻断IL-21与IL-21R的结合。在其他实施方案中，抗IL-21R抗体特异性地与小鼠IL-21R的细胞外结构域中的抗原决定部位反应。鼠科动物IL-21R的细胞外结构域由SEQ IDNO：45的从大约第20个氨基酸到大约第236个氨基酸的序列组成。小鼠IL-21R的细胞外结构域与人的对应物有大约65％的同一性。
预期本发明的抗体可结合其他蛋白质，例如包含所有或部分IL-21R细胞外结构域的重组蛋白。
本领域技术人员会意识到，所公开的抗体可用于检测、测量和/或抑制与IL-21R稍有不同的蛋白质。例如，这些蛋白质可能是IL-21R的同源物。预期抗IL-21R抗体能结合含有与SEQ ID NO：43所列序列中的至少100、80、60、40或20个连续氨基酸的任一序列具有至少大约60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的蛋白质。
除了序列同源性分析外，还可进行抗原决定部位作图(参见，例如，Epitope Mapping Protocols，Morris(编者)，Humana Press，1996)，以及二级和三组结构分析以鉴定由目前公开的抗体和其与抗原形成的复合物推测的特异性3D结构。这类方法包括但不限于本抗体的X射线晶体学(Engstom(1974)Biochem.Exp.Biol.，11：7-13)和虚拟图象的计算机模建(computer modeling of vitualrepresentations)(Fletterick等人(1986)Computer Graphics andMolecular Modeling，Current Communications in Molecular Biology，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY)。
本公开内容提供了获得抗IL-21R抗体的方法，包括用改变的表1A和1B中的VH和/或VL序列产生抗体。这类抗体可由本领域技术人员通过使用本领域已知的技术进行衍生。例如，可在FR和/或CDR区域中引入氨基酸替代、缺失或插入。通常对FR改变进行设计以提高抗体的稳定性和免疫原性，而通常对CDR改变进行设计以增加抗体对其抗原的亲和力。通过改变CDR序列并测量抗体对其靶目标的亲和力可测试出增加亲和力的改变(参见Antibody Engineering，第二版，Oxford University Press，Borrebaeck(编者)，1995)。
具有与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、19、20、21、22、23、24、25、26、27、47、48、49、50、51、52、53、54、55、65、66、67、68、69、70、71、72、73、83、84、85、86、87、88、89、90、91、101、102、103、104、105、106、107、108、109、119、120、121、122、123、124、125、126、127、137、138、139、140、141、142、143、144或145所列序列无实质不同的CDR序列的抗体包括在本发明的范围内。通常，这包括用一个具有相似电荷、疏水性或立体化学特征的氨基酸来替代一个氨基酸。与CDR区域相反，只要替代不会不利地影响所述抗体的结合特性，在FR区域也可以发生更强烈的替代。替代也可用来对所述抗体进行种系转化或稳定抗原结合位点。
保守修饰将产生具有与从中进行这类修饰的分子相似的功能和化学特征的分子。相反地，通过选择在氨基酸序列中的替代可实现对所述分子的功能和/或化学特征的本质性修饰，所述在氨基酸序列中的替代在其保持(1)替代区域中的分子主链的结构，例如折叠片或螺旋构象，(2)分子在靶位点的电荷或疏水性，或(3)分子的大小的效果上显著不同。
例如，“保守氨基酸替代”可能涉及用非天然的残基替代天然的氨基酸残基，这样对在该位点的氨基酸残基的极性或电荷影响很小或没有影响。此外，正如以前对于“丙氨酸扫描诱变(alanine scanningmutagenesis)”(参见，例如，MacLennan等人，1998，Acta Physiol.Scand.Suppl.643：55-67；Sasaki等人，1998，Adv.Biophys.35：1-24)曾描述的，多肽中的任何天然氨基酸也可用丙氨酸替代。
所想要的氨基酸替代(无论是保守还是非保守的)可由本领域技术人员在想要进行这类替代的时候确定。例如，氨基酸替代可用来鉴定分子序列的重要残基，或者增加或减少此处描述的分子的亲和力。
表3列出了示例性的氨基酸替代。
表3： 氨基酸替代
  初始残基   示例性取代   更保守的取代
  Ala(A)   Val，Leu，Ile   Val
  Arg(R)   Lys，Gln，Asn   Lys
  Asn(N)   Gln   Gln
  Asp(D)   Glu   Glu
  Cys(C)   Ser，Ala   Ser
  Gln(Q)   Asn   Asn
  Gly(G)   Pro，Ala   Ala
  His(H)   Asn，Gln，Lys，Arg   Arg
  Ile(I)   Leu，Val，Met，Ala，Phe，正亮氨酸   Leu
  Leu(L)   正亮氨酸，Ile，Val，Met，Ala，Phe   Ile
  Lys(K)   Arg，1，4二氨基丁酸，Gln，Asn   Arg
  Met(M)   Leu，Phe，Ile   Leu
  Phe(F)   Leu，Val，Ile，Ala，Tyr   Leu
  Pro(P)   Ala   Gly
  Ser(S)   Thr，Ala，Cys   Thr
  Thr(T)   Ser   Ser
  Trp(W)   Tyr Phe   Tyr
  Tyr(Y)   Trp，Phe，Thr，Ser   Phe
  Val(V)   Ile，Met，Leu，Phe，Ala，正亮氨酸   Leu
在某些实施方案中，保守氨基酸替代也包括非天然发生的氨基酸残基，所述氨基酸残基通常通过化学的肽合成而不是通过生物系统中的合成而被整合的。
在一个实施方案中，用于制备变体VH结构域的方法包括加入、缺失或替代公开的VH结构域中的至少一个氨基酸，或将公开的VH结构域与至少一个VL结构域组合，并且测试变体VH结构域结合I1-21R或调节IL-21R的活性的能力。
用于制备变体VL结构域的类似方法包括加入、缺失或替代公开的VL结构域中的至少一个氨基酸，或将公开的VL结构域与至少一个VH结构域组合，并且测试变体VL结构域结合I1-21R或调节IL-21R活性的能力。
公开内容的更进一步方面提供了制备结合IL-21R的抗原结合片段的方法。所述方法包括：
(a)提供编码VH结构域的核酸的起始库集，所述VH结构域缺少一个或多个CDR1、2、3，或者含有要被替代的CDR1、2或3；
(b)用编码基本上如此处列出的VHCDR1、2或3的氨基酸序列的核酸插入或替代所述起始库集的CDR1、2或3区域，产生产物库集；
(c)表达所述产物库集的核酸；
(d)选择与IL-21R结合的特异性抗原结合片段；
(e)回收所述特异性抗原结合片段或编码其的核酸。
类似的方法为，其中用将本发明的VLCDR1、2或3与编码VL结构域的核酸的库集进行组合，所述VL结构域缺少CDR1、2或3或者含有要被替代的CDR1、2或3。
通过使用重组DNA方法学，可将公开的CDR序列导入缺少相应CDR的VH或VL结构域的库集中(Marks等人(BioTechnology(1992)10：779-783)。例如，可用靠近可变结构域5’末端的引物和靠近第三个FR的引物产生缺少CDR3的可变结构域序列的库集。该库集可与公开的抗体的CDR3组合。使用类似的技术，用来自其它抗体的CDR序列的一部分可改组公开的CDR序列的一部分以提供结合IL-21R的抗原结合片段的库集。任一库集都可在宿主系统例如噬菌体展示(描述于WO92/01047)中表达，因而可选择合适的结合IL-21R的抗原结合片段。
进一步的可选择方案对公开的VH或VL序列使用随机诱变以产生仍能与IL-21R结合的变体VH或VL结构域。使用易错PCR的技术由Gram等人进行了描述(Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.(1992)89：3576-3580)。
另一方法对公开的VH或VL序列使用定向诱变。该技术由Barbas等人(Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.(1992)91：3809-3813)和Schier等人(J.Mol.Biol.(1996)263：551-567)公开。
可变结构域的一部分包含至少一个基本上如此处列出的CDR区域，并且可选地插入来自此处列出的VH或VL结构域的构架区。所述一部分可包括FR1的C末端半部分和/或FR4的N末端半部分。在可变结构域的N末端或C末端端的另外的残基可以与在天然产生的抗体中发现的残基不相同。例如，通过重组DNA技术的抗体构建通常由于使用连接体而引入N或C末端残基。一些连接体可用于将可变结构域连接到其它可变结构域(例如，diabodies)、恒定结构域或蛋白质标记上。
尽管在实施例中说明的实施方案包含“匹配”的VH和VL结构域对，但本领域技术人员会认识到可选择的实施方案可包含仅含有单个来自VH或VL结构域的CDR的抗原结合片段。任意一个单链特异性抗原结合结构域可用来筛选能够形成两结构域特异性抗原结合片段的互补结构域，所述两结构域特异性抗原结合片段能够例如与IL-2R结合。所述筛选可通过使用公开于WO 92/01047中的所谓等级双重组合方法(hierarchical dual combinatorial approach)的噬菌体展示筛选方法来完成。在该方法中，将含有H或L链克隆的单个菌落用于感染编码其它链(L或H)的克隆的完全文库，并且按照所描述的噬菌体展示技术来筛选所得的两链特异性抗原结合结构域。
在一些可选择的实施方案中，通过化学交联或重组方法可将抗IL-21R抗体连接到蛋白质(例如，白蛋白)上。公开的抗体也可以以美国专利号4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337提出的方式连接到各种非蛋白质的聚合物上(例如，聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯)。例如，抗体可通过共价缀合到聚合物上而进行化学修饰，以增加其血液循环中的半寿期。示例性的聚合物和附着方法显示于美国专利号4,766,106；4,179,337；4,495,285和4,609,546。
可修饰公开的抗体以改变其糖基化；即，可以向抗体删除或添加至少一个糖部分。通过改变氨基酸序列以删除或建立糖基化共有位点(glycosylation consensus site)来实现糖基化位点的删除和添加，所述糖基化共有位点在本领域是众所周知的。另一个添加糖部分的方法是将糖苷以化学或酶促方式偶联到抗体的氨基酸残基上(参见WO87/05330，和Aplin等人(1981)CRC Crit.Rev.Biochem.，22：259-306)。也可以化学或酶促地实现糖部分的去除(参见Hakimuddin等人(1987)Arch.Biochem.Biophys.，259：52；Edge等人(1981)Anal.Biochem.，118：131；Thotakura等人(1987)Meth. Enzymol.，138：350)。
用于改变抗体恒定区的方法在本领域是已知的。通过用不同的残基在抗体的恒定部分替代至少一个氨基酸残基可产生具有改变的功能(例如，改变的对于细胞上的效应器配体如FcR或补体的C1成分的亲和力)的抗体(参见例如，EP 388,151A1，US 5,624,821和US 5,648,260，所述所有文献的内容在此引用作为参考)。可以描述当应用于鼠科动物或其他物种抗体时会减少或清除类似功能的类似类型的改变。
例如，可以改变抗体(例如，IgG，例如人IgG)的Fc区域对FcR(例如，FcγR1)或Clq的亲和力。通过用至少一个在其侧链具有合适官能度的残基替换至少一个特定残基，或者通过引入带电荷的官能团(例如，谷氨酸或天冬氨酸)或可能的芳香族非极性残基(例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或丙氨酸)可改变亲和力(参见例如，US5,624,821)。
例如，在IgG恒定区中用丙氨酸替代残基297(天冬酰胺)显著地抑制了对效应细胞的募集，而只是轻微地降低(大约减弱3倍)对Clq的亲和力(参见例如，US 5,624,821)。所述残基在重链中的编号就是EU索引的编号(参见Kabat等人，1991同上)。该变化破坏了糖基化位点，并且据信所述糖的存在对于Fc受体结合是必需的。据信，在该位点破坏糖基化位点的任何其它替代均导致相似的裂解活性降低。其它氨酸替代，例如，还已知将残基318(Glu)、320(Lys)和322(Lys)变成Ala会完全破坏Clq与IgG抗体的Fc区域结合(参见例如，US5,624,821)。
可产生具有减弱的与Fc受体的相互作用的经修饰的抗体。例如，已证明在与人FcγR1受体结合的人IgG3中，将Leu235变成Glu会破坏其与受体的相互作用。对于在抗体的铰链连接区域内的邻近或紧邻位点的突变(例如，用Ala替代残基234、236或237)也可用于影响抗体对FcγR1受体的抗体亲和力。在重链中残基的编号是基于EU索引(参见Kabat等人，1991同上)的。
另外的用于改变抗体的裂解活性的方法，例如通过改变CH2结构域N末端区域中的至少一个氨基酸，描述于Morgan等人的WO94/29351和US 5,624,821，所有文献的内容在此引用作为参考。
本发明的抗体可用可检测或功能性标记进行标记。这些标记包括放射性标记(例如，131I或99Tc)，酶标记(例如，辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)，和其它化学部分(例如，生物素)。
本领域技术人员会意识到上述改变是无法穷举的，根据本公开内容的教导，许多其它改变对本领域技术人员来说是显而易见的。
核酸、克隆和表达系统
所述公开内容提供了编码公开的抗体的分离的核酸。核酸可包括DNA或RNA，并且其可以是合成的(完全或部分)或重组的(完全或部分)。此处列出的核酸序列的参考包括具有特定序列的DNA分子和包括具有用U替换T的特定序列的RNA分子。
也提供了包含编码序列的核酸，所述编码序列编码此处公开的1、2或3个CDR、VH结构域、VL结构域或其组合，或与其基本一致的序列(例如，与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列，或在严紧条件下能与所述公开的序列杂交的序列)。
在一个实施方案中，分离的核酸具有编码抗IL-21R抗体的重链和轻链可变区的核苷酸序列，所述抗IL-21R抗体具有至少一个选自SEQID NO：4、5、6、7、8、9、22、23、24、25、26、27、50、51、52、53、54、55、68、69、70、71、72、73、86、87、88、89、90、91、104、105、106、107、108、109、122、123、124、125、126、127、140、141、142、143、144和145的氨基酸序列的CDR，或具有编码与此处描述的序列相异1或2个氨基酸的CDR的序列。在一些实施方案中，CDR的氨基酸序列包括SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、22、23、24、25、26、27、50、51、52、53、54、55、68、69、70、71、72、73、86、87、88、89、90、91、104、105、106、107、108、109、122、123、124、125、126、127、140、141、142、143、144和145所列序列中一个或多个氨基酸的保守氨基酸替代。
核酸可以只编码轻链或重链可变区，或也可以编码与相应的可变区有效地连接的抗体轻链或重链恒定区。在一个实施方案中，轻链可变区(VL)连接到选自κ或λ恒定区的恒定区。轻链恒定区也可以是人κ或λ类型。在另一个实施方案中，重链可变区(VH)连接到选自IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的抗体同种型的重链恒定区。所述重链恒定区可以是IgG(例如，IgG1)同种型。
本发明的核酸组合物，通常在除了经修饰的限制性位点等之外的(cDNA或基因组DNA或其混合物的)天然序列上，可根据标准技术进行突变以提供基因序列。对于编码序列，这些突变可以按想要的效果影响氨基酸序列。特别地，期望基本上与天然的V、D、J、恒定区、转换区和其它此处描述的这类序列一致或源自这些序列的核苷酸序列(其中“源自”表示序列与另一序列一致或从另一序列进行了修饰)。
在一个实施方案中，核酸与所提供的序列的核酸不同(例如，由于替代、插入或缺失而导致的不同)(例如，如下：至少一个但少于10、20、30或40个核苷酸不同；在受试者核酸中至少一个但低于1％、5％、10％或20％的核苷酸不同)。如果有必要进行该分析，应当将所述序列进行比对以求最大同源性。因缺失或插入或者错配而“成环的”序列被认为是差异所在。所述差异可以是在编码非必需残基的核苷酸上，或所述差异可以是保守替代。本公开内容也提供了以质粒、载体、转录或表达盒形式的核酸构建体，所述核酸包含至少一个此处所描述的核酸。
本公开内容进一步提供了包含至少一个此处描述的核酸构建体的宿主细胞。也提供了制备由包含此处所述序列的核酸编码的蛋白质的方法。所述方法包括在适合条件下培养宿主细胞以使其表达来自所述核酸的蛋白质。在表达和产生后，用任何合适的技术可分离和/或纯化VH或VL结构域或者特异结合成员，然后进行适当应用。
抗原结合片段、VH和/或VL结构域和编码核酸分子以及载体可以从其天然环境中，以基本纯的或均一的形式，或者在核酸的情况下以不含或基本不含除了编码具有所需功能的多肽的序列之外的起始核酸或基因的状态分离和/或纯化出来。
用于在各种宿主细胞中克隆和表达多肽的系统在本领域是已知的。适合于生产抗体的细胞描述于例如Fernandez等人(编者)(1999)的“Gene Expression Systems”，Academic Press之中。简而言之，合适的宿主细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母细胞或原核细胞例如大肠杆菌(E.coli)。在本领域可获得的用于异源多肽表达的哺乳动物细胞包括淋巴细胞细胞系(例如，NSO)、HEK293细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、COS细胞、HeLa细胞、幼年仓鼠肾细胞、卵母细胞和来自转基因动物的细胞例如乳腺上皮细胞。在一个实施方案中，MUF和MU11抗体在HEK293或CHO细胞中表达。在其他实施方案中，编码本发明抗体的核酸被置于组织特异性启动子(例如，乳腺特异性启动子)的控制之下，并且在转基因动物中生产所述抗体。例如，将抗体分泌到转基因动物例如转基因奶牛、猪、马、绵羊、山羊或啮齿动物的奶中。可以选择或构建合适的载体以含有合适的调控序列，包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、标记基因和其它序列。载体也可含有质粒或病毒主链。详细内容可参阅Sambrook等人的“Molecular Cloning：A Laboratory Manual”，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)。许多已建立的应用于载体的技术，包括DNA的操作、制备、诱变、测序和转染，描述于“Current Protocols in Molecular Biology”，第二版，Ausubel等人(编者)，John Wiley和Sons(1992)。
本公开内容的进一方面提供了将核酸导入宿主细胞的方法。对于真核细胞，合适的转染技术可包括磷酸钙、DEAE-Dextran、电穿孔、脂质体介导的转染，和使用逆转录病毒或其它病毒例如痘苗病毒或杆状病毒进行的转导。对于细菌细胞，合适的技术可包括氯化钙转化、电穿孔和使用噬菌体进行的转染。DNA导入之后可施行选择方法(例如，药物抗性)以筛选出含有所述核酸的细胞。
生物保藏
2003年3月5日在美国组织培养物保藏所(American TissueCulture Collection)(ATCC)分别以保藏号PTA-5031和PTA-5030保藏了用含有MUF重链和轻链的载体转化的CHO细胞和用含有MU11重链和轻链的载体转化的CHO细胞。所述保藏所的地址是10801University Blvd，Manassas，VA 20110，U.S.A。
抗IL-21R抗体的用途
作为IL-21R的拮抗剂的抗IL-21R抗体可用于调节至少一种IL-21R介导的免疫应答，例如，T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞或滑膜细胞的细胞增殖、细胞因子分泌、趋化因子分泌和细胞溶解活性中的一种或多种。因此，本发明的抗体可用于抑制免疫或造血细胞(例如，骨髓细胞、淋巴细胞或红细胞谱系细胞或者其前体细胞)的活性(例如，增殖、分化和/或存活)，并因此可用于治疗各种免疫疾病和过度增殖性疾病。可治疗的免疫疾病的非限制性例子包括但不限于：移植排斥、移植物抗宿主疾病、过敏(例如，特应性过敏)和自身免疫疾病。自身免疫疾病可包括糖尿病、关节炎病症(包括类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎和强直性脊柱炎)、脊柱关节病、多发性硬化、脑脊髓炎、重症肌无力、全身性红斑狼疮、皮肤红斑狼疮、自身免疫性甲状腺炎、皮炎(包括特应性皮炎和湿疹性皮炎)、牛皮癣、斯耶格伦综合征、IBD(包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、哮喘(包括内源性哮喘和过敏性哮喘)、硬皮病和脉管炎。
多发性硬化是一种中枢神经系统疾病，其特征在于髓鞘(将神经隔离且对于正常神经功能必需的脂肪物质)的炎症和缺失。用本发明的抗体和组合物可治疗由依赖IL-21的免疫应答所造成的炎症。在有关多发性硬化的实验性自身免疫脑炎(EAE)小鼠模型(Tuohy等人(J.Immunol.(1988)141：1126-1130)，Sobel等人(J.Immunol.(1984)132：2393-2401)，和Traugott(Cell Immunol.(1989) 119：114-129)中，在EAE诱导前(立刻)用MU11注射剂处理小鼠可大大延缓所述疾病的发生。本发明的抗体可类似地用于治疗人中的多发性硬化。
关节炎是一种特征在于关节处有炎症的疾病。类风湿性关节炎(RA)是最常见的关节炎形式，涉及结缔组织和滑膜(沿关节排列的膜)的炎症。发炎的滑膜通常渗透入关节并且破坏关节软骨和骨。研究显示，用IL-21处理滑膜细胞和巨噬细胞会诱导这些细胞分泌与炎症相关的细胞因子和趋化因子。在有关类风湿性关节炎的胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)小鼠模型(Courtenay等人(Nature(1980)283：666-628)和Williams等人(Immunol.(1995)84：433-439))中，在CIA诱导后(立刻)用IL-21处理小鼠会加重所述疾病。可用本发明的抗体治疗增加的炎性细胞因子和趋化因子分泌，并且更重要地是增加的由依赖IL-21的免疫应答造成的疾病。类似地，本发明的抗体和组合物可用于治疗人的RA或其它关节炎疾病。
移植排斥是一种免疫学现象，其中来自供体的组织被宿主的免疫细胞特异性地“攻击”。主要的“攻击”细胞是T细胞，其T细胞受体认为供体的MHC分子是“外来的”。这种识别激活T细胞，所述T细胞增殖并且分泌最终破坏移植物的各种细胞因子和细胞溶解蛋白。当补充以IL-21时，在混合淋巴细胞反应(MLR)(移植排斥的体外测定法)中的T细胞将更强烈地增殖。MLR和移植模型已由“CurrentProtocols in Immunology”，第二版，Coligan等人(编者)，JohnWiiey & Sons，1994；Kasaian等人(Immunity(2002)16：559-569)；Fulmer等人(Am.J.Anat.(1963)113：273-285)，和Lenschow等人(Science(1992)257：789-792)描述。本发明的抗体和组合物可用于减少MLR和治疗人中依赖IL-21的移植排斥和相关疾病(例如，移植物抗宿主疾病)。
全身性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫疾病，其特征在于存在自身抗体，包括抗DNA、核抗原和核糖核蛋白的抗体。这些自身抗体与组织和器官的破坏相关。导致SLE的原因尚不清楚，但自身抗体的出现说明对自身反应性T细胞或B细胞的抑制不够。本发明的抗体和组合物可用于抑制IL-21介导的自身反应性T细胞和B细胞的活性，并且可在NZB X NZW小鼠(有关SLE的小鼠模型)(ImmunologicDefects in Laboratory Animals，Gershwin等人(编者)，PlenumPress，1981)或人中治疗SLE或相关疾病。
本发明的抗体也可用于治疗与IL-21应答细胞和IL-21R应答细胞的异常活性相关的过度增殖性疾病。这类细胞的例子包括造血来源的致瘤性细胞，例如源于骨髓细胞、淋巴细胞或红细胞谱系细胞或者其前体细胞的细胞。这类致瘤性疾病包括白血病癌症以及血液、骨髓(例如，骨髓瘤)和淋巴组织(例如，淋巴瘤)的肿瘤。在某些实施方案中，本发明旨在治疗各种白血病癌症，包括但不限于急性早幼粒细胞性白血病(APML)、急性髓细胞性白血病(AML)和慢性髓细胞性白血病(CML)(综述于Vaickus，L.(1991)Crit.Rev.inOncol./Hemotol.11：267-97)。可通过本发明方法治疗的淋巴恶性肿瘤的例子包括但不限于急性成淋巴细胞性白血病(ALL，包括B谱系ALL和T谱系ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、前淋巴细胞性白血病(PLL)、毛细胞性白血病(HLL)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)。可用本发明治疗的恶性淋巴瘤的另外形式包括但不限于非何杰金淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞性白血病/淋巴瘤(ATL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、大颗粒淋巴细胞性白血病(LGF)、何杰金淋巴瘤和其变体。
组合治疗
在一个实施方案中，在组合治疗中可施用包含至少一种抗IL-21R抗体和至少一种治疗性试剂的药物组合物。所述治疗可用于治疗病理学状况或疾病，例如免疫或炎性疾病。在本文中的术语“以组合方式”的意思是，基本上同期即同时或顺次给出抗体组合物和治疗性试剂。如果是顺次给出，在施用第二种化合物的开始，两种化合物中的第一种仍可以在治疗位点处以有效浓度被检测到。
例如，组合治疗可包括至少一种抗IL-21R抗体，其与至少一种另外的治疗性试剂共配制和/或共施用。所述另外的试剂可以包括至少一种如下面将更加详细描述的细胞因子抑制剂、生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎性试剂、代谢抑制剂、酶抑制剂、细胞毒性剂和细胞抑制剂。这样的组合治疗可有利地利用更低的所施用的治疗性试剂的剂量，因而避免与各种单一疗法相关的可能毒性或并发症。此外，此处公开的治疗性试剂在不同于IL-21/IL-21R途径的途径上起作用，因而预期可增强和/或协同加强抗IL-21R抗体的效果。
用于与抗IL-21R抗体组合的治疗性试剂可为在自身免疫和随后的炎性反应的不同阶段进行干预的那些试剂。在一个实施方案中，可以将至少一种此处描述的抗IL-21R抗体与至少一种细胞因子和/或生长拮抗剂共配制和/或共施用。所述拮抗剂可包括可溶性受体、肽抑制剂、小分子、配体融合物、抗体(结合细胞因子或生长因子或其受体或者其它细胞表面分子)和“抗炎性细胞因子”及其激动剂。
能用于与此处描述的抗IL-21R抗体组合的试剂的非限制性例子包括但不限于，至少一种白细胞介素(例如，IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18和IL-22)、细胞因子(例如，TNFα、LT、EMAP-II和GM-CSF)和生长因子(例如，FGF和PDGF)的拮抗剂。所述试剂也可包括但不限于至少一种白细胞介素、细胞因子和生长因子的受体的拮抗剂。抗IL-21R抗体也可与细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90或其配体(例如，CD154(gp39，CD40L))或LFA-1/ICAM-1和VLA-4/VCAM-1的抑制剂组合(Yusuf-Makagianser等人(2002)Med Res Rev 22(2)：146-67))。可用于与此处描述的抗IL-21R抗体组合的拮抗剂可包括IL-1、IL-2、TNFα、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22和其受体的拮抗剂。
这些试剂的例子包括IL-12拮抗剂(例如结合IL-12的抗体(参见例如，WO 00/56772，Genetics Institute/BASF))、IL-12受体抑制剂(例如IL-12受体的抗体)和可溶性IL-12受体及其片段。IL-15拮抗剂的例子包括抗IL-15或其受体的抗体、IL-15受体的可溶性片段和IL-15结合蛋白。IL-18拮抗剂的例子包括IL-18的抗体、IL-18受体的可溶性片段和IL-18结合蛋白(IL-18BP，Mallet等人(2001)Circ.Res.28)。IL-1拮抗剂的例子包括白细胞介素-1-转化酶(ICE)抑制剂(例如Vx740)、IL-1拮抗剂(例如，IL-1RA(ANIKINRA，AMGEN))、sIL-1RII(Immunex)和抗IL-1受体抗体。
TNF拮抗剂的例子包括TNF(例如人TNFα)的抗体，例如D2E7(人抗TNFα抗体，美国6,258,562，HumiraTM，BASF)；CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356(人源化的抗TNFα抗体，Celltech/Pharmacia)；cA2(嵌合型抗TNFα抗体，RemicadeTM，Centocor)；和抗TNF抗体片段(例如，CPD870)。其它例子包括可溶性TNF受体(例如，人p55或p75)片段和衍生物，例如p55kdTNFR-IgG(55kD TNF受体-IgG融合蛋白，LenerceptTM)和75kdTNFR-IgG(75kD TNF受体-IgG融合蛋白，EnbrelTM，Immunex，参见例如Arthritis & Rheumatism(1994)第37卷，S295；J.Invest.Med.(1996)第44卷，235A)。进一步的例子包括酶拮抗剂(例如，TNFα转化酶抑制剂(TACE)，如α-磺酰基异羟肟酸衍生物(WO 01/55112)或N-羟甲酰胺抑制剂(GW 3333，-005，或-022)和TNF-bp/s-TNFR(可溶性TNF结合蛋白，参见例如Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增刊)，S284；和Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol.(1995)第268卷，第37-42页)。TNF拮抗剂可以是可溶性TNF受体(例如，人p55或p75)片段和衍生物，例如75 kdTNFR-IgG；和TNFα转化酶(TACE)抑制剂。
在其他实施方案中，此处描述的抗IL-21R抗体可以与至少一种下列药物组合施用，所述药物是：IL-13拮抗剂，例如可溶性IL-13受体和/或抗IL-13抗体；和IL-2拮抗剂，例如IL-2融合蛋白(例如，DAB 486-IL-2和/或DAB 389-IL-2，Seragen，参见例如Arthritis & Rheumatism(1995)第36卷，1223)和抗IL-2R抗体(例如，抗Tac(人源化抗体，Protein Design Labs，参见Cancer Res.1990 Mar 1；50(5)：1495-502))。另一组合包括与非损耗性抗CD4抑制剂例如IDEC-CE9.1/SB 210396(抗CD4抗体，IDEC/SmithKline)组合的抗IL-21R抗体。其它组合包括具有CD80(B7.1)和CD86(B7.2)共刺激途径拮抗剂(例如抗体、可溶性受体或拮抗性配体)的抗-IL-21R；P选择蛋白糖蛋白配体(PSGL)；和抗炎性细胞因子和其激动剂(例如，抗体)组合的抗IL-21R抗体。抗炎性细胞因子包括IL-4(DNAX/Schering)；IL-10(SCH 52000，重组IL-10，DNAX/Schering)；IL-13；和TGF。
在其它实施方案中，至少一种抗IL-21R可与至少一种抗炎性药物、免疫抑制剂、代谢抑制剂和酶抑制剂共配制和/或共施用。可与此处描述的IL-21拮抗剂组合使用的药物或抑制剂的非限制性例子包括但不限于下列药物中的至少一种：非类固醇抗炎性药物(NSAID)(例如布洛芬，替尼达普(参见例如，Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增刊)，S280)、萘普生(参见例如，NeuroReport(1996)第7卷，第1209-1213页)、美洛昔康、吡罗昔康、双氯芬酸和吲哚美辛)；柳氮磺吡啶(参见例如，Arthritis &Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增刊)，S281)；皮质类固醇(例如泼尼松龙)；细胞因子抑制性抗炎药物(CSAID)；和核苷酸生物合成抑制剂(例如嘌呤生物合成抑制剂(例如，叶酸拮抗剂例如甲氨蝶呤)和嘧啶生物合成抑制剂(例如，二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)抑制剂例如来氟米特(参见例如，Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增刊)，S131；Inflammation Research(1996)第45卷，第103-107页))。用于与IL-21/IL-21R拮抗剂组合使用的治疗性试剂可包括NSAID、CSAID、DHODH抑制剂(例如来氟米特)和叶酸拮抗剂(例如甲氨蝶呤)。
另外的抑制剂的例子包括下列药物中的至少一种：皮质类固醇(口服、吸入和局部注射)；免疫抑制剂(例如环孢素和他克莫司(FK-506))；mTOR抑制剂(例如西罗莫司(雷帕霉素)或雷帕霉素衍生物(雷帕霉素酯衍生物例如CCI-779(Elit.L.(2002)CurrentOpinion Investig.Drugs 3(8)：1249-53；Huang，S.等人(2002)Current Opinion Investig.Drugs 3(2)：295-304)))；干扰前炎性(proinflammatory)细胞因子例如TNFα和IL-1信号传导的试剂(例如，IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)；COX2抑制剂(例如，塞来考昔和其变体(MK-966)，参见例如，Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增刊)，S81)；磷酸二酯酶抑制剂(例如R973401，参见例如，Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增刊)，S282))；磷脂酶抑制剂(例如，胞质磷脂酶2抑制剂(cPLA2)例如三氟甲基酮类似物(美国6,350,892))；血管内皮细胞生长因子(VEGF)的抑制剂；VEGF受体的抑制剂；和血管发生的抑制剂。用于与抗IL-21R抗体组合使用的治疗性试剂可包括免疫抑制剂(例如环孢素和他克莫司(FK-506))；和mTOR抑制剂(例如西罗莫司(雷帕霉素)或雷帕霉素衍生物(例如，雷帕霉素酯衍生物例如CCI-779))；COX2抑制剂(例如，塞来考昔和其变体)；和磷脂酶抑制剂(例如，胞质磷脂酶2抑制剂(cPLA2)(例如，三氟甲基酮类似物))。
可与至少一种抗IL-21R抗体共施用和/或共配制的治疗性试剂的例子包括但不限于下列药物中的至少一种：TNF拮抗剂(例如抗TNF抗体)；TNF受体(例如，人p55或p75)的可溶性片段和其衍生物(例如p55kdTNFR-IgG(55kD TNF受体-IgG融合蛋白，LenerceptTM)和75 kdTNFR-IgG(75 kD TNF受体-IgG融合蛋白，EnbrelTM))；TNF酶拮抗剂(例如TACE抑制剂)；IL-12、IL-15、IL-17、IL-18和IL-22的拮抗剂；T细胞和B细胞损耗性试剂(例如抗CD4或抗CD22抗体)；小分子抑制剂(例如甲氨蝶呤和来氟米特)；西罗莫司(雷帕霉素)和其类似物(例如CCI-779)；COX2和cPLA2抑制剂；p38、TPL-2、Mk-2和NFκB抑制剂；RAGE和可溶性RAGE；P选择蛋白和PSGL-1抑制剂(例如抗体和小分子抑制剂)；以及雌激素受体-β(ERB)激动剂和ERB-NFkb拮抗剂。可与至少一种抗IL-21R抗体共施用和/或配制的治疗性试剂可包括下列药物中的至少一种：TNF受体(例如，人p55或p75)的可溶性片段例如75 kdTNFR-IgG(75kD TNF受体-IgG融合蛋白，EnbrelTM)；甲氨蝶呤；来氟米特；和西罗莫司(雷帕霉素)及其类似物(例如CCI-779)。
此处公开的抗IL-21R抗体与其它治疗性试剂组合使用来治疗下面将进一步详细讨论的特定免疫疾病。
用于治疗关节炎病症(例如，类风湿性关节炎、炎性关节炎、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎)的并且可与抗IL-21R抗体组合使用的试剂的非限制性例子包括下列药物中的至少一种：TNF拮抗剂(例如抗TNF抗体)；TNF受体(例如，人p55或p75)的可溶性片段和其衍生物(例如p55 kdTNFR-IgG(55 kDTNF受体-IgG融合蛋白，LenerceptTM)和75 kdTNFR-IgG(75 kD TNF受体-IgG融合蛋白，EnbrelTM)；TNF酶拮抗剂(例如TACE抑制剂)；IL-12、IL-15、IL-17、IL-18和IL-22的拮抗剂；T细胞和B细胞损耗性试剂(例如抗CD4或抗CD22抗体)；小分子抑制剂(例如甲氨蝶呤和来氟米特)；西罗莫司(雷帕霉素)和其类似物(例如CCI-779)；COX2和cPLA2抑制剂；NSAID；p38、TPL-2、Mk-2和NFκB抑制剂；RAGE和可溶性RAGE；P选择蛋白或PSGL-1抑制剂(例如小分子抑制剂和抗体)；雌激素受体-β(ERB)激动剂和ERB-NFkb拮抗剂。可与至少一种IL-21/IL-21R拮抗剂共施用和/或共配制的治疗性试剂可包括下列药物中的至少一种：TNF受体(例如，人p55或p75)的可溶性片段例如75 kdTNFR-IgG(75 kD TNF受体-IgG融合蛋白，EnbrelTM)；甲氨蝶呤；来氟米特；和西罗莫司(雷帕霉素)或其类似物(例如CCI-779)。
用于治疗多发性硬化的并且可与抗IL-21R抗体组合的试剂的非限制性例子包括干扰素-β(例如，IFNβ-1a和IFNβ-1b)、copaxone、皮质类固醇、IL-1抑制剂、TNF抑制剂、CD40配体的抗体、CD80的抗体和IL-12拮抗剂。
用于治疗炎性肠病或克罗恩病的并且可与抗IL-21R抗体组合的试剂的非限制性例子包括budenoside；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢素；柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂肪氧化酶抑制剂；5-氨基水杨酸；奥沙拉秦；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1单克隆抗体；抗IL-6单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；描述的TNF拮抗剂；IL-4、IL-10、IL-13和/或TGFβ或其激动剂(例如，激动剂抗体)；IL-11；泼尼松龙、地塞米松或布地奈德的葡糖苷酸或葡聚糖缀合的前体药物；ICAM-1反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals，Inc.)；可溶性互补受体1(TP10；T Cell Sciences，Inc.)；缓效美沙拉秦；甲氨蝶呤；血小板活化因子(PAF)的拮抗剂；环丙沙星；和利多卡因。
在其他实施方案中，抗IL-21R抗体可与至少一个旨在其它涉及调节免疫应答例如移植排斥或移植物抗宿主疾病的目的的抗体组合使用。用于治疗免疫应答的并且可与本发明的IL-21/IL-21R拮抗剂组合的试剂的非限制性例子包括下列：抗细胞表面分子的抗体，包括但不限于CD25(IL-2受体α)、CD11a(LFA-1)、CD54(ICAM-1)、CD4、CD45、CD28/CTLA4、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)或其组合。在另一实施方案中，抗IL-21R抗体与至少一种通用免疫抑制剂例如环孢素A或FK506组合使用。
因而，本发明的另一方面涉及用于进行抗IL-21R抗体与其它治疗性试剂组合施用的试剂盒。在一个实施方案中，所述试剂盒包括至少一种配制在药用载体中的抗IL-21R抗体和至少一种治疗性试剂，所述治疗性试剂以合适的方式配制在一种或多种分开的药物制剂中。
诊断用途
根据本发明的抗体也可用于检测IL-21R在生物样品中的存在。通过将这些蛋白质的存在或水平与医学状况联系起来，本领域技术人员可诊断出相关的医学状况。例如，经刺激的T细胞会增加其IL-21R的表达，并且通常在关节中表达高浓度的IL-21R的T细胞可能表示关节炎症和可能还有关节炎。可通过本发明的抗体诊断的示例性的医学状况包括多发性硬化、类风湿性关节炎和移植排斥。
基于抗体的检测方法在本领域是众所周知的，并且包括ELISA、放射免疫测定法、免疫印迹法、Western印迹法、流式细胞测量术、免疫荧光、免疫沉淀和其它相关技术。抗体可由整合有至少一种这些检测IL-21R的方法的诊断试剂盒提供。所述试剂盒可含有其它成分、包装、说明书或其它帮助检测所述蛋白质和使用所述试剂盒的材料。
抗体可用可检测的标记进行修饰，所述可检测的标记包括配体基团(例如，生物素)、荧光团和发色团、放射性同位素、电子致密试剂或酶。酶可通过其活性进行检测。例如，辣根氧化物酶可通过其将四甲基联苯胺(TMB)转变成蓝色色素的能力进行检测，用分光光度计进行定量检测。其它合适的结合配偶体包括生物素和抗生物素蛋白、IgG和A蛋白，和其它本领域已知的受体-配体对。
也可将抗体功能性地连接(例如，通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其它)到至少一个其他分子实体上，除了其他以外，例如另一抗体(例如，双特异性或多特异性抗体)、毒素、放射性同位素、细胞毒剂或细胞抑制剂或其它。其它的改变和可能性对本领域技术人员来说是显而易见的，并且认为它们在本发明范围内是等价的。
药物组合物和施用方法
本发明的某些实施方案包括包含公开的抗体的组合物。所述组合物可适合于药物使用和对患者施用。所述组合物包含本发明的抗体和药物赋形剂。在此处使用时，“药物赋形剂”包括与药物施用相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和真菌剂、等渗和吸收延缓试剂等。这些对于药物活性物质的试剂的用途在本领域是众所周知的。组合物也可以含有其它提供补充、附加或增强的治疗功能的活性化合物。所述药物组合物也可以连同施用说明书一起置于容器、包装或分配器中。
配制本发明的药物组合物以与其想要的施用途径相容。进行施用的方法对本领域技术人员来说是已知的。也可以制造新的组合物，该新的组合物可进行局部或口服施用，或有可能能够穿过粘膜传递。例如，施用可以是静脉内、腹膜内、肌内、腔内、皮下或经皮肤的施用。
用于皮内或皮下应用的溶液或悬浮液通常包括至少一种下列成分：灭菌的稀释剂例如水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成的溶剂；抗细菌剂例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和涨度剂(tonicity)例如氯化钠或葡萄糖。pH可用酸或碱调节。这些制剂可封装于安瓿、一次性注射器或多剂小瓶中。
用于静脉内施用的溶液或悬浮液包括载体例如生理学盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)、乙醇或多元醇。在所有情况下，所述组合物必需灭菌，并且是流动的以便注射。通常使用卵磷脂或表面活性剂可获得合适的流动性。所述组合物在生产和贮存的条件下也必需稳定。微生物的防止可用抗细菌和抗真菌试剂例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸和硫柳汞等获得。在许多情况下，等渗试剂(糖类)、多元醇(甘露醇和山梨醇)或氯化钠可包含于所述组合物中。通过加入延缓吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶可实现对所述组合物的延长的吸收。
口服组合物包括惰性稀释剂或可食用的载体。所述组合物可封装在明胶中或挤压成片剂。为了口服施用的目的，可将抗体与赋形剂整合并置入片剂、锭剂或胶囊中。药物相容性粘合试剂或佐剂材料可包含于所述组合物中。片剂、锭剂和胶囊可含有(1)粘合剂例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；(2)赋形剂例如淀粉或乳糖；(3)崩解剂例如褐藻酸、Primogel或玉米淀粉；(4)润滑剂例如硬脂酸镁；(5)助流剂例如胶体二氧化硅；或(6)增甜剂或调味剂。
组合物也可以通过经粘膜或经皮肤途径施用。例如，含有Fc部分的抗体有可能能够穿过肠、嘴或肺的粘膜(通过Fc受体)。通过使用锭剂、鼻喷雾剂、吸入剂或栓剂可进行经粘膜施用。也可通过使用含有本领域已知的软膏、药膏、凝胶或乳膏的组合物进行经皮肤施用。对于经粘膜或经皮肤施用，使用适合于待穿过的屏障的渗透剂。对于通过吸入的施用，抗体通过来自加压的容器或分配器的气雾剂喷雾进行递送，所述容器或分配器包含推进剂(例如，液体或气体)或喷雾器。
在某些实施方案中，用载体制备本发明抗体以防止抗体从体内快速消除。经常使用生物可降解聚合物(例如，乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯(polyorthoester)、聚乳酸)。本领域技术人员已知用于制备这类制剂的方法。脂质体悬浊液也可用作药物上可接受的载体。根据本领域已知的已建立的方法可制备脂质体(美国专利号4,522,811)。
本发明的抗体或抗体组合物可以以所述的治疗有效量进行施用。治疗有效量可根据受试者的年龄、状态、性别和医学状况的严重程度而变化。医生根据临床指标可确定合适的剂量。可以以大丸药剂给药来提供抗体或组合物以最大化抗体的循环水平而获取最长的作用时间。也可在大丸药剂给药后使用连续输注。
在此处使用时，术语“受试者”是想要包括人和非人类动物。受试者可包括具有以表达IL-21R的细胞例如癌细胞或免疫细胞为特征的疾病的病人。本发明的术语“非人类动物”包括所有的脊椎动物、例如非人类灵长类动物、绵羊、狗、奶牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
可对受试者施用的剂量范围的例子可选自：1μg/kg至20mg/kg、1μg/kg至10mg/kg、1μg/kg至1mg/kg、10μg/kg至1mg/kg、10μg/kg至100μg/kg、100μg/kg至1mg/kg、500μg/kg至1mg/kg。
以剂量单位形式配制组合物对方便施用和剂量的一致性可以是有利的。此处所使用的剂量单位形式是指适合于患者的物理上分开的单位。每个剂量单位包含预先确定量的与载体缔合的抗体，所述抗体量经计算可产生治疗效果。剂量单位由所述抗体的特征和要达到的特定治疗效果来确定。
通过对细胞培养物或实验动物进行标准的药物学流程，例如测定LD50(50％群体的致死剂量)和ED50(50％群体的治疗有效剂量)，可确定所述组合物的毒性和治疗功效。毒性和治疗功效之间的剂量比例就是治疗指数，其可表示为LD50/ED50。表现大的治疗指数的抗体可能毒性较小和/或治疗功效较高。
获自细胞培养物测定法和动物研究的数据可用来制定人使用的剂量范围。这些化合物的剂量可位于血液中循环抗体浓度的范围(包括具有较少或没有毒性的ED50)之内。所述剂量可在这种由所使用的剂量组合物形式和施用途径来确定的范围内变动。对于任何在本发明中使用的抗体，开始时通过使用细胞培养物测定法可对治疗有效剂量进行估计。在动物模型中可制定一个剂量以达到包括IC50(即，达到症状的半最大抑制时的抗体浓度)的循环血浆浓度范围。任何特定剂量的效果可通过合适的生物学测定法进行监控。合适的生物学测定法的例子包括DNA复制测定法、基于转录的测定法、IL-21R/IL-21结合测定法和其它免疫测定法。
下列实施无论如何不是限定本发明的范围。本领域技术人员会认识到，在不改变本发明的精神和范围的情况下可进行大量的修改和变化。这种修改和变化包括在本发明的范围内。本申请中所引用的所有文献、专利和出版的专利申请的全部内容被引用作为参考。
                          实施例
实施例1：MUF和MU11抗IL-21R scFv的选择
使用scFv噬菌粒文库筛选对于人IL-21R特异的抗体，所述scFv噬菌粒文库是由Vaughan等人((1996)Nature Biotech.，14：309-314)描述的1.38×1010文库的扩增版。用可溶性IL-21R融合蛋白或对照融合蛋白(5-20μg/ml，于磷酸缓冲盐溶液(PBS)中)涂覆微量滴定板的小孔，并在4℃下孵育过夜。用PBS洗涤小孔，然后在MPBS(3％的奶粉溶于PBS)中于37℃下封闭1小时。将用MPBS封闭1小时的纯化的噬菌体(1012转导单位)加入到对照融合蛋白涂覆的小孔中并孵育1小时。然后将未结合的噬菌体转移到IL-21R融合蛋白小孔中并孵育1小时。用PBST(含有0.1％v/v Tween 20的PBS)洗涤小孔5次，然后用PBS洗涤5次。将结合的噬菌体洗脱，并用来感染呈指数生长的大肠杆菌TG1。将感染的细胞在2TY液体培养中于37℃下培养1小时，然后在2TYAG板上划线并于30℃下孵育过夜。第二天，将菌落转移到10ml加有15％甘油的2TY液体培养基中，并于-70℃下贮存。以后，将来自第一轮选择的菌落融解，并用辅助噬菌体超感染以便为第二轮选择拯救出(产生)表达scFv抗体的噬菌体。
实施例2：R18和19F5抗IL-21R scFv的选择
使用200nM生物素化的人IL-21R融合蛋白(bio.hIL21R)(Wyeth，Giralda Farms，NJ)溶液分离抗IL21R scFv(R18)。如上面实施例1中所描述的，用MPBS和125μg/ml对照融合蛋白封闭纯化的scFv噬菌体(1012tu)。将生物素化的IL-21R融合蛋白加入到经封闭的噬菌体中至终浓度为200nM，并在室温下孵育1小时。将噬菌体/抗原加入到75μl已用1ml 3％MPBS在室温下封闭90分钟的Dynal M289链霉抗生物素蛋白磁珠(Dynal Biotech Inc.，Lake Success，NY)中。将所述混合物在室温下以不断混合的方式孵育15分钟。使用磁性支架捕获磁珠，并用1mlPBST洗涤5次，接着用PBS洗涤3次。用500μl10μg/ml存在于0.2M pH7.0的磷酸钠缓冲液中的胰蛋白酶洗脱下结合的噬菌体，并在37℃下孵育30分钟。如上所述将洗脱下的噬菌体用来感染10ml呈指数生长的大肠杆菌TG-1细胞。在三轮选择后分离出scFv克隆。
通过加入1mM IPTG到呈指数生长的培养物中并在30℃下孵育过夜来诱导scFv产生。就抑制人IL-21R融合蛋白与人IL-21-FLAG标记的蛋白质结合的能力来筛选含有scFv的粗制周质提取物。简而言之，将抗FLAG抗体固定在塑料上并用来捕获FLAG标记的人IL-21蛋白。用针对IL-21R融合蛋白的铕标记的抗体来检测人IL-21R融合蛋白的结合，并用DELFIA试剂盒(PerkinElmer，Boston，MA)检测时间分辨荧光。纯化的scFv R18克隆就抑制IL-21R融合蛋白与IL-21-FLAG标记的蛋白结合来说展现出770nM的IC50值。
通过用于R18的选择方法分离抗IL21R克隆19F5，除了在第三轮选择中使用50nM人IL-21R融合蛋白。
实施例3：18A5和18G4抗IL-21R scFv的选择
通过在溶液中选择表达IL-21R的细胞系和IL-21R融合蛋白来分离抗IL21R scFv(18A5和18G4)。使用标准的组织培养方法培养在细胞表面上表达人IL-21R的转染的hBaf3Mu-1细胞(Wyeth，GiraldaFarms，NJ)。用1×108个未感染的Baf3细胞在MPBS中于室温下封闭纯化的scFv噬菌体(1012tu)1小时。
将经封闭的噬菌体加入到已在MPBS中预孵育1小时的1×107个hBaf3Mu-1细胞中。然后在室温下以不断混合的方式孵育1小时。然后用PBST洗涤hBaf3Mu-1细胞6次。使用10μg/ml存在于0.2M pH7.0的磷酸钠缓冲液中的胰蛋白酶从细胞中洗脱下特异性地结合的噬菌体，并于37℃下摇动孵育30分钟。如上所述，将洗脱下的噬菌体上清液用于感染大肠杆菌TG-1细胞。
如上所述产生用于第二轮选择的表达scFv的噬菌体。用MPBS和125μg/ml对照融合蛋白封闭噬菌体。根据对于R18所描述的选择方法在溶液中用生物素化的人IL-21R融合蛋白(Wyeth)进行选择，除了在用1ml MPBS/0.1％(v/v)Tween 20洗涤磁珠5次后用PBS洗涤3次。
如上所述，接着采用使用hBaf3Mu-1细胞的筛选方法进一步对表达scFv抗体的噬菌体颗粒进行筛选。
实施例4：CP5G2抗IL-21R scFv的选择
通过对用六组氨酸(hexahistidine)和Flag亲和标记所标记的鼠科动物IL-21R(hIL21R.His.Flag)(Wyeth，Giralda Farms，NJ)进行筛选来分离克隆CP5G2。用加入了30μl抗Flag琼脂糖小珠的MPBS在室温下封闭纯化的scFv噬菌体(1012tu)1小时。以MPBS中的25nM的终浓度将hIL-21R.His.Flag加入到经封闭的噬菌体中，并在室温下孵育1小时。然后将文库/抗原混合物加入到100μl已用MPBS在室温下封闭了2小时的抗Flag琼脂糖小珠中，用PBS洗涤3次，并进一步混合孵育30分钟。如上所述，用PBST洗涤小珠4次，接着用PBS洗涤4次，并用0.5μg/ml存在于50mM Tris，pH8.0，1mM CaCl2中的胰蛋白酶将噬菌体从小珠中洗脱出来。通过离心收集小珠。如上所述，将洗脱下的噬菌体用于感染10ml大肠杆菌TG-1细胞。同样如上所述，进行第二轮可溶性筛选。
将菌落挑入含有100μl 2TYAG的96孔板中。如上所述产生含有scFv的粗制周质提取物，除了所使用的缓冲液含有20％(w/v)蔗糖，50mM Tris-HCl，pH7.5，1mM EDTA。在96孔微量滴定板测定法中，就抑制16ng/ml生物素化的鼠科动物IL-21(bio.mIL21)与固定在塑料上的鼠科动物IL-21R蛋白结合的能力来筛选含有scFv的粗制提取物。通过采用使用DELFIA试剂盒(PerkinElmer，Boston，MA)检测的TRF和铕标记的链霉抗生物素蛋白检测bio.mIL21的结合。
在上述测定法中，纯化的CP5G2scFv表现出抑制IL-21与IL-21R结合的590nM的IC 50值。
实施例5：鉴定来自MUF和MU11噬菌体克隆的scFv
为确定针对IL-21R的scFv的特异性，进行抗IL-21R融合蛋白的噬菌体ELISA。将来自第二轮筛选的单个的TG1细胞菌落转移至含有100μl 2TYAG培养基的微量滴定孔中。将M13K07辅助噬菌体(10moi)加入到呈指数生长的TG1培养物中，并将所述样品在37℃下孵育1小时。将板离心并移去上清液，然后将所剩下的沉淀在100μl 2TYAG中悬浮并于30℃下摇动孵育过夜。第二天，将板离心并将噬菌体上清液转移到新的微量滴定板小孔中。在ELISA之前用MPBS封闭噬菌体。
用IL-21R融合蛋白或对照融合蛋白(0.5-2.5μg/ml)涂覆微量滴定板的小孔并在4℃下孵育过夜。第二天，移走融合蛋白溶液，并用MPBS封闭小孔1小时。用PBS洗涤小孔，接着加入50μl的经封闭的噬菌体。将板孵育1小时，然后用PBST洗涤3次并用PBS洗涤3次。向小孔中加入抗MB-HRP缀合物(Pharmacia，Peapack，NJ)，并将样品孵育1小时。用PBST洗涤3次小孔并用PBS洗涤3次。在小孔中加入TMB并孵育样品直至产生颜色。用25μl 0.5M H2SO4终止反应。通过使用微量滴定板读取器在450nm读取吸光度来测量颜色信号。两个噬菌体克隆显示与IL-21R融合蛋白的特异性结合而不与对照融合蛋白结合，在本申请中将这两个克隆称为MUF和MU11噬菌体克隆。
将单个含有MUF和MU11噬菌体克隆的TG-1克隆在2TYAG平板上划线并于30℃下孵育过夜。通过使用pCANTAB6载体特异性寡核苷酸，用PCR对所述噬菌体的VH和VL区域进行扩增，并进行测序。数据库搜索显示，MUF噬菌体克隆的VL区域来自λ链，而MU11噬菌体克隆的VL区域来自κ链。
实施例6：将scFv转变成IgG
使用克隆特异性引物通过PCR对来自MUF和MU11噬菌体克隆的VH和VL区域进行扩增。用限制性酶消化所述PCR产物并亚克隆入合适的载体(参见实施例2)，所述载体含有人IgG1重链恒定结构域(Takahashi等人(1982)Cell 29，671)或人λ轻链恒定结构域或人κ轻链恒定结构域(Hieter等人(1982)Nature 294：536)。所述四个构建体编码在本申请中称作MUF重链、MUF轻链、MU11重链和MU11轻链的多肽。
对含有MUF重链、MUF轻链、MU11重链和MU11轻链的载体进行制备、测序并使用标准技术将其用于感染HEK293或CHO细胞。表达MUF重链和轻链的细胞产生MUF抗体，所述MUF抗体在本申请中称为“MUF”，而表达MU11重链和轻链的细胞产生MU11抗体，所述MU11抗体在本申请中称为“MU11”。使用A蛋白Sepharose(Pharmacia)纯化分泌的抗体，接着用PBS进行透析。
如下确定抗体的结合特异性：用2.5μg/ml的IL-21R融合蛋白涂覆ELISA板过夜。用PBSB(PBS+1％牛血清白蛋白)洗涤板，然后于25℃下用各种浓度的MUF或MU11孵育2小时。洗涤板，接着加入饱和量的HRP缀合的山羊抗人抗体。将板于25℃下孵育1小时，接着用PBSB洗涤并用TMB显色。图1A展示了通过ELISA获得的结果的例子。
通过细胞表面染色进一步确定所述抗体的结合特异性。用纯化的或生物素化的MUF或MU11(1mg/ml)结合人IL-21R转导的TF-1细胞。将细胞在冰上孵育30分钟，用PBSB洗涤，接着悬浮于含有PE缀合的抗人IgG抗体或PE缀合的抗生物素蛋白的溶液中。将细胞在冰上孵育30分钟，洗涤，接着在FACScan上进行分析。所述结果呈现于图1B中。类似地用MUF对纯化的小鼠B细胞进行染色，结果呈现于图1C中。
实施例7：MUF阻断IL-21与IL-21R的结合
施行抑制测定法以估测所述抗体阻断IL-21与IL-21R结合的能力。以实施例3中所描述的并具有下列改变的方法进行ELISA。在用MUF或MU11于25℃下孵育2小时后，加入生物素缀合的IL-21(1μg/ml)，并将所述样品于25℃下孵育1小时。洗涤后，加入饱和量的抗生物素蛋白-HRP，并将样品于25℃下进一步孵育1小时。用PBSB洗涤小孔，并将样品用TMB进行显色。结果显示于图2中。在这些条件下，MUF阻断IL-21与IL-21R的结合，而MU11却不阻断IL-21与IL-21R的结合。这些数据表示MUF和MU11识别IL-21R的不同抗原决定部位
实施例8：MUF和MU11减弱T细胞应答
施行增殖测定法以估测所述抗体阻断IL-21介导的T细胞增殖的能力。用PHA(植物凝集素)和人IL-21刺激人CD4+T细胞(5×104个细胞/孔)。将COS细胞培养基(COS CM)中的IL-21以各种浓度加入到不同的样品中。在指定的样品中，加入MUF、MU11或人IgG1同种型对照。72小时后，加入3H-胸苷，并通过使用LKB 1205液闪计数器测量整合的放射活性来测量细胞的增殖。如图3A中所显示的，IL-21增加了PHA-刺激的T细胞的增殖。在大约1∶500和1∶10,000之间的范围内，MUF的加入阻断了IL-21增加增殖的能力。以更高剂量的IL-21可克服MUF的阻断。MU11或同种型对照抗体的加入不会显著影响IL-21促进的人T细胞的增殖。
在图3B中，用PLP肽(1μg/ml)和SJL小鼠脾细胞刺激PLP-特异性小鼠CD4+T细胞系。如X轴上所示对COS细胞培养基(COS IL-21)中的IL-21进行滴定。“Cos Mock”是指不含IL-21的COS培养基。在指定的样品中，加入MU11(1μg/ml)。72小时后，加入3H-胸苷，并通过整合的放射活性来测量细胞的增殖。如图3B所显示的，IL-21增加了受刺激的小鼠T细胞的增殖。加入MU11阻断了IL-21增加小鼠CD4+T细胞增殖的能力。这些数据显示MU11起着非竞争性抑制剂的作用：其阻断IL-21增加殖殖的能力，即使其不阻碍IL-21与受体结合。
在图3C中，用包被有抗CD3抗体的甲苯磺酰基小珠(Dynal，Great Neck，NY)刺激纯化的CD8+小鼠T细胞。如X轴上所示，对COS细胞培养基(COS s/n)中的IL-21进行滴定。将标记为“无抗体”的样品用作对照。在指定的样品中，以标明的浓度加入MU11。72小时后，加入3H-胸苷，并通过整合的放射活性来测量细胞的增殖。如图3C所显示的，MU11的加入以剂量依赖方式阻断了IL-21增加CD8+T细胞增殖的能力。
实施例9：通过scFv和IgG抑制细胞增殖
在基于细胞的测定法中检测本发明的抗体对IL-21R的拮抗作用。在一个这样的实验中，在基于细胞的测定法中对如实施例1-3所述分离得到的各种scFv噬菌体克隆就其通过阻断IL-21与IL-21R结合来抑制细胞增殖的能力进行测试。将表达人IL-21R的hBaf3Mu-1细胞悬浮物用于这样的测定法。洗涤hBaf3Mu-1细胞(Wyeth)以除去来自其培养基中的痕量鼠科动物IL-3，并在含有10％无IL-3的胎牛血清的生长RPMI Glutamax中于37℃下在5％CO2培养箱中温育2小时。向96孔组织培养板中的每个孔中加入大约10,000到20,000个Baf3Mu-1细胞，然后用scFv或IgG在37℃下孵育30分钟。然后加入IL-21(Wyeth，Giralda Farms，NJ)至浓度为5ng/ml，并将细胞孵育24小时。然后将细胞用0.1mCi/孔的3H胸苷于37℃脉冲标记过夜，然后收集细胞，以测量作为细胞增殖指标的胸苷的整合。作为可选择的方法，加入IL-21至浓度为0.3ng/ml，并将细胞孵育48小时。然后将细胞加温至室温，并加入15ml/孔的CellTiter-Glo(Promega，WI)。在混合和10分钟的孵育后，在Wallac MicroBeta 1450 TriLux计数器上(PerkinElmer，Boston，MA)测量作为细胞增殖或活力指标的发光。
通过绘制细胞增殖的测量值(例如胸苷整合)相对IL-21浓度的对数值的曲线图可确定对于每种scFv的IC50值(即，达到50％竞争所需的抗体浓度)。通常，IC50越低，抗体具有的对IL-21R的亲和力越高。在一个描述于图4的实验中，MUF抑制细胞对IL-21的应答，作为scFv时具有268nM的IC50值而作为IgG时为3nM。如下面表4所概括的，随后将其它scFv克隆的IC50值与MUF的IC50值进行比较。
表4： 各种scFv的IC50值
  克隆   IC50值(nM)ScFv
  MUF   140
  hIL21R18   473
  18A5   213
  18G4   522
  19F5   91
  CP5G2   329
实施例10：MUF种系转化
通过使用VBASE，将scFv克隆的序列数据用于鉴定对于MUF克隆的重链和轻链来说最相近的种系序列。应用标准的定点诱变技术并使用合适的诱变引物来制造突变。通过序列分析确认scFv序列的突变。经种系转化的scFv和MUF的VH和VL结构域序列分别列于SEQ ID NO：85、83和84。
接着在此处描述的测定法中测定所述MUF scFv种系转化的序列阻断IL-2诱导hBaf3Mu-1细胞系增殖的能力。当与非种系转化的MUFscFv相比较时，种系转化的MUF阻断Baf3Mu-1细胞增殖的能力并无显著差别。
实施例11：抗原决定部分竞争测定法
在抗原决定部位竞争测定法中，进一步检验所述scFv克隆18A5、19F5和18G4以确定其与MUF相比是否结合相同或不同的抗原决定部分。如上所述制备各种克隆的包含scFv的周质提取物。最终使用的缓冲液是50mM MOPS，pH7.4，0.5mM EDTA，0.5M山梨醇的溶液。在96孔微量滴定板测定法中，对包含scFv的粗制周质提取物就抑制生物素化的人IL-21R融合蛋白(bio.hIL21R)与固定在塑料上的MUF IgG蛋白结合的能力进行筛选。通过采用使用DELFIA试剂盒(PerkinElmer)检测的TRF和铕标记的链霉抗生物素蛋白来检测bio.hIL21R的结合。将阳性克隆用于此处描述的抗原决定部位竞争测定法。
在抗原决定部位竞争测定法中获得的各克隆的IC50值概括于表5中。
表5： 抗原决定部位竞争测定法
 克隆   IC50(nM)
 MUF IgG   0.4
 负对照   0.0
 18A5   114
 18G4   1.4
 19F5   弱抑制
实施例12：治疗关节类
将IL-21用于研究其对来自滑膜的细胞的影响，所述滑膜是沿关节排列的膜。从进行关节手术的类风湿性关节炎患者的滑膜组织中分离人成纤维样滑膜细胞(HFLS)(Cell Applications(San Diego，CA))。将HFLS细胞用人IL-21培养48小时，然后除去上清液并通过ELISA检测趋化因子MCP-1(单核细胞化学引诱蛋白或CCL11)、GRO(生长调节的癌基因或CXC配体1)、I-309(CCL1)、TARC(胸腺和活化调节的趋化因子)、Eotaxin、MDC(巨噬细胞来源的趋化因子或CCL22)、LYMPH(lymphotactin或XCL1)、SDF-1B(基质来源的因子-1B或CXC配体12)、IP-10(CXC配体10)、I-TAC(T吸引细胞的趋化因子或CXC配体11)、MG(由干扰素或CXC配体9诱导的单核因子)、MP3B(巨噬细胞抑制蛋白)和细胞因子IFN-α、TNF-α、IL-6和IL-8。这些趋化因子和细胞因子在本域已知是通过许多活性促进炎症的，并且在关节中由IL-21引起的增加的浓度加重炎症和RA。
如图5A-5D所示，IL-21反复增加HFLS分泌趋化因子MCP-1、GRO、I-309、TARC、Eotaxin、MDC、LYMPH、SDF-1B、IP-10、I-TAC、MG、MP3B和细胞因子IFN-α、TNF-α、IL-6和IL-8。IL-21被用于调节CIA(胶原蛋白诱导的关节炎)的临床进程。CIA是用于研究类风湿性关节炎的标准的小鼠和大鼠模型，参见例如，Holmdahl等人，(2002)Ageing Res.Rev.，1：135。在第0天，用100μg存在于完全弗氏佐剂中的II型胶原蛋白注射小鼠，并在第21天，用100μg存在于不完全弗氏佐剂中的II型胶原蛋白增强对小鼠的免疫刺激。在第21天，小鼠每天还用1μg的IL-21进行注射，并且每天对小鼠进行疾病检查。对临床症状如下进行评分：0＝没有肿胀，1＝1到2个肿胀的脚趾或肿胀的踝，2＝超过2个肿胀的脚趾或中度的爪子肿胀，3＝强烈的爪肿胀，和4＝爪关节强硬。如图5E所示，在胶原蛋白注射后用PBS注射的小鼠逐渐发展出疾病。在胶原蛋白注射后用IL-21注射的小鼠逐渐发展出更严重的疾病。因为用IL-21的处理特异性地加重CIA，所以预期用抗IL-21R抗体的处理可抑或延缓CIA。因此，由该模型预知对RA具有治疗功效，所以用抗IL-21R抗体的处理也预期可抑制或延缓人中的RA。
实施例13：治疗移植排斥
移植排斥是这样一种免疫学现象，即其中来自供体的组织特异性地遭受到宿主免疫细胞的“攻击”。体外研究移植排斥的一个测定法是混合淋巴细胞反应(MLR)。在MLR测定法中，将“供体”细胞和“宿主”细胞在体外混合，而且所述宿主细胞逐渐被激活并增殖。在第3和第5天之间，加入3H-胸苷并通过使用液闪计数器测量整合的放射活性来测量增殖。
在图6中，将C57BL/6J小鼠脾细胞(500,000)和被辐射的BDF1小鼠脾细胞(500,000)悬浮在200μl微量滴定板小孔中的培养基中。向3×2孔中补充以不同量的小鼠IL-21。第四天，加入3H-胸苷，并在第5天用LKB 1205液体闪烁计数器测量整合的放射活性。样品“0”和“mock”表示不含IL-21的培养物。在IL-21不存在的情况下，C57BL/6J细胞适度地增殖(～6000拉德)。在IL-21存在的情况下，C57BL/6J细胞更加强烈地增殖(～28,000-38,000拉德)。使用IL-21的处理促进C57BL/6J细胞(所述“宿主”或同种异体反应性细胞)的增殖，表明IL-21介导MLR。因此，预期加入抗IL-21R抗体或用抗IL-21R抗体处理可抑制或延缓MLR和移植排斥和相关疾病(例如，移植物抗宿主疾病)。
在本说明书内引用的文献教导下本说明书是最容易明白的，所有的文献在此全文引用作为参考。本说明书中的实施方案提供本发明的实施方案的举例说明，不应当被认为限制本发明的范围。本领域技术人员会认识到，许多其它实施方案包含于要求保护的本发明中，并且理解本说明书和实施例仅是作为示例，本发明的真正范围和精神由下面的权利要求表明。
                        序列表
<110>WYETH
CAMBRIDGE ANTIBODY TECHNOLOGY
<120>抗人IL-21受体的抗体及其应用
<130>01997.043500.PC
<140>
<141>
<150>60/454,336
<151>2003-03-14
<160>154
<170>PatentIn Ver.3.2
<210>1
<211>113
<212>PRT
<213>智人
<400>1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ile Tyr
             20                  25                  30
Ser Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Gly Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr
<210>2
<211>113
<212>PRT
<213>智人
<400>2
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Gly Leu Gly Gln
  1               5                  10                  15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Arg Gln Tyr Tyr Ala
             20                  25                  30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr
         35                  40                  45
Gly Lys Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Thr
     50                  55                  60
Thr Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His
                 85                  90                  95
Pro Leu Tyr Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Glu
            100                 105                 110
Ser
<210>3
<211>253
<212>PRT
<213>智人
<400>3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ile Tyr
             20                  25                  30
Ser Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Gly Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser
    130                 135                 140
Val Gly Leu Gly Gln Thr Val Thr Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu
145                 150                 155                 160
Arg Gln Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
                165                 170                 175
Val Val Val Ile Tyr Gly Lys Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp
            180                 185                 190
Arg Phe Ser Gly Thr Thr Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Arg Asp
    210                 215                 220
Ser Ser Gly Asn His Pro Leu Tyr Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu
225                 230                 235                 240
Thr Val Leu Gly Ala Ala Ala His His His His His His
                245                 250
<210>4
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>4
Ile Tyr Ser Val Ser
  1               5
<210>5
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>5
Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
  1               5                  10                  15
Gly
<210>6
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>6
Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser
  1               5
<210>7
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>7
Gln Gly Gly Ser Leu Arg Gln Tyr Tyr Ala Ser
  1               5                  10
<210>8
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>8
Gly Lys Asn Lys Arg Pro Ser
  1               5
<210>9
<211>13
<212>PRT
<213>智人
<400>9
Lys Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Pro Leu Tyr Val
  1               5                  10
<210>10
<211>339
<212>DNA
<213>智人
<400>10
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac atctatagtg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcgtgatat tgcaaactac 180
gcgcagaggt tccagggcag ggtcacactt accgcggaca agtcctcggg gacagcctac 240
atggagttgc gcggcctgag atctgacgac acggccgtct attggtgtgc gacattggct 300
ggccccttgg actcctgggg ccagggcacc ctggtcacc                        339
<210>11
<211>339
<212>DNA
<213>智人
<400>11
tcgtctgagc tgactcagga cccagctgtg tctgtgggct tgggacagac agtcacgatc 60
acatgtcaag gcggcagcct cagacaatat tatgcaagtt ggtaccaaca gaagccagga 120
caggcccctg tggttgtcat ctatggtaaa aataagcgac cctcagggat cccagaccga 180
ttctctggca ccacctcagg caacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actactattg taagtcccgg gacagcagtg gtaaccatcc cctttatgtc 300
ttcggagcag ggaccaagct gaccgtccta ggtgagtca                        339
<210>12
<211>759
<212>DNA
<213>智人
<400>12
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac atctatagtg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcgtgatat tgcaaactac 180
gcgcagaggt tccagggcag ggtcacactt accgcggaca agtcctcggg gacagcctac 240
atggagttgc gcggcctgag atctgacgac acggccgtct attggtgtgc gacattggct 300
ggccccttgg actcctgggg ccagggcacc ctggtcaccg tctcgagtgg aggcggcggt 360
tcaggcggag gtggctctgg cggtggcgga agtgcacttt cttctgagct gactcaggac 420
ccagctgtgt ctgtgggctt gggacagaca gtcacgatca catgtcaagg cggcagcctc 480
agacaatatt atgcaagttg gtaccaacag aagccaggac aggcccctgt ggttgtcatc 540
tatggtaaaa ataagcgacc ctcagggatc ccagaccgat tctctggcac cacctcaggc 600
aacacagctt ccttgaccat cactggggct caggcggaag atgaggctga ctactattgt 660
aagtcccggg acagcagtgg taaccatccc ctttatgtct tcggagctgg gaccaagctg 720
accgtcctag gtgcggccgc acatcatcat caccatcac                        759
<210>13
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>13
atctatagtg tcagc                                                  15
<210>14
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>14
aggatcatcc ctatgcgtga tattgcaaac tacgcgcaga ggttccaggg c          51
<210>15
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>15
ttggctggcc ccttggactc c                                           21
<210>16
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>16
caaggcggca gcctcagaca atattatgca agt                              33
<210>17
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>17
ggtaaaaata agcgaccctc a                                           21
<210>18
<211>39
<212>DNA
<213>智人
<400>18
aagtcccggg acagcagtgg taaccatccc ctttatgtc                        39
<210>19
<211>118
<212>PRT
<213>智人
<400>19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg His Gly Gln Tyr Ala Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Gly
        115
<210>20
<211>108
<212>PRT
<213>智人
<400>20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
  1               5                  10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
             20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Lys Val Leu Ile
         35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
     50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
 65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp
                85                  90                   95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
            100                 105
<210>21
<211>242
<212>PRT
<213>智人
<400>21
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg His Gly Gln Tyr Ala Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser
    130                 135                 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly
145                 150                 155                 160
Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro
                165                 170                 175
Lys Val Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
            180                 185                 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
        195                 200                  205
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
    210                 215                 220
Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
225                 230                 235                 240
Ala Ala
<210>22
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>22
Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>23
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>23
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>24
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>24
His Gly Gln Tyr Ala Leu Asp Ile Trp
  1               5
<210>25
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>25
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
  1               5                  10
<210>26
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>26
Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser
  1               5
<210>27
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>27
 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
   1               5
<210>28
<211>417
<212>DNA
<213>智人
<400>28
atgaaattct tagtcaacgt tgcccttgtt tttatggtcg tgtacatttc ttacatctat 60
gcccaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga 120
ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag 180
gctccaggca aggggctgga gtgggtggca gttatatcat atgatggaag taataaatac 240
tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 300
tatctgcaaa tgaacagcct gagagacgag gacacggctg tgtattactg tgcgaggcat 360
ggtcagtacg ctcttgatat ctgggggcaa gggacaatgg tcaccgtctc ctcaggt    417
<210>29
<211>381
<212>DNA
<213>智人
<400>29
atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgc gcactccgac 60
atccagatga cccagtctcc ttccaccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 120
acttgccggg ccagtcaggg tattagtagc tggttggcct ggtatcagca gaaaccaggg 180
agagccccta aggtcttgat ctataaggca tctactttag aaagtggggt cccatcaagg 240
ttcagcggca gtggatctgg gacagatttc actctcacca tcagcagtct gcaacctgaa 300
gattttgcaa cttactactg tcaacagagt tacagtaccc cgtggacgtt cggccaaggg 360
accaagctcg agatcaaacg t                                           381
<210>30
<211>728
<212>DNA
<213>智人
<400>30
gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gaggcatggt 300
cagtacgctc ttgatatctg ggggcaaggg acaatggtca ccgtctcttc aggtggaggc 360
ggttcaggcg gaggtggcag cggcggtggc ggatcggaca tcgtgatgac ccagtctcct 420
tccaccctgt ctgcatctgt aggagacaga gtcaccatca cttgccgggc cagtcagggt 480
attagtagct ggttggcctg gtatcagcag aaaccaggga gagcccctaa ggtcttgatc 540
tataaggcat ctactttaga aagtggggtc ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg 600
acagatttca ctctcaccat cagcagtctg caacctgaag attttgcaac ttactactgt 660
caacagagtt acagtacccc gtggacgttc ggccaaggga ccaagctgga gatcaaacgt 720
gcggccgc                                                          728
<210>31
<211>18
<212>DNA
<213>智人
<400>31
agtagctatg gcatgcac                                               18
<210>32
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>32
gttatatcat atgatggaag taataaatac tatgcagact ccgtgaaggg c          51
<210>33
<211>30
<212>DNA
<213>智人
<400>33
aggcatggtc agtacgctct tgatatctgg                                  30
<210>34
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>34
cgggccagtc agggtattag tagctggttg gcc                              33
<210>35
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>35
aaggcatcta ctttagaaag t                                           21
<210>36
<211>27
<212>DNA
<213>智人
<400>36
caacagagtt acagtacccc gtggacg                                     27
<210>37
<211>329
<212>PRT
<213>智人
<400>37
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Gly
  1               5                  10                  15
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
             20                  25                  30
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
         35                  40                  45
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
     50                  55                  60
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
 65                  70                  75                  80
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
                 85                  90                  95
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
            100                 105                 110
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
        115                 120                 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
    130                 135                 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
145                 150                 155                 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
                165                 170                 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
            180                 185                 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
        195                 200                 205
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
    210                 215                 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
225                 230                 235                 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
                245                 250                 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
            260                 265                 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
        275                 280                 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
    290                 295                 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305                 310                 315                 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325
<210>38
<211>1599
<212>DNA
<213>智人
<400>38
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtc cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtagtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttggtgag 300
aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagcgctc ctgcctggac 360
gcatcccggc tatgcagccc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtct gcctcttcac 420
ccggaggcct ctgcccgccc cactcatgct cagggagagg gtcttctggc tttttcccca 480
ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc taacccaggc cctgcacaca aaggggcagg 540
tgctgggctc agacctgcca agagccatat ccgggaggac cctgcccctg acctaagccc 600
accccaaagg ccaaactctc cactccctca gctcggacac cttctctcct cccagattcc 660
agtaactccc aatcttctct ctccagagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc 720
accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc 780
tagggtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc acctccatct 840
cttcctcagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca 900
aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc 960
acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca 1020
agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg 1080
tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc 1140
tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccgt ggggtgcgag 1200
ggccacatgg acagaggccg gctcggccca ccctctgccc tgagagtgac cgctgtacca 1260
acctctgtcc ctacagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1320
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1380
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1440
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1500
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1560
tacacgcaga agagcctctc cttaagtccg ggaaaataa                        1599
<210>39
<211>106
<212>PRT
<213>智人
<400>39
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
  1               5                  10                  15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
             20                  25                  30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
         35                  40                  45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
     50                  55                  60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
 65                  70                  75                  80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
                 85                  90                  95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
            100                 105
<210>40
<211>321
<212>DNA
<213>智人
<400>40
ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa 60
gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg 120
gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa 180
caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag 240
tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg 300
gcccctacag aatgttcata g                                           321
<210>41
<211>105
<212>PRT
<213>智人
<400>41
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
  1               5                  10                  15
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
             20                  25                  30
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
         35                  40                  45
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
     50                  55                  60
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
 65                  70                  75                  80
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
                 85                  90                  95
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            100                 105
<210>42
<211>324
<212>DNA
<213>智人
<400>42
ggaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagttcacc ggtgacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg ttag                                        324
<210>43
<211>538
<212>PRT
<213>智人
<400>43
Met Pro Arg Gly Trp Ala Ala Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln Gly
  1               5                  10                  15
Gly Trp Gly Cys Pro Asp Leu Val Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Gln Thr
             20                  25                  30
Val Ile Cys Ile Leu Glu Met Trp Asn Leu His Pro Ser Thr Leu Thr
         35                  40                  45
Leu Thr Trp Gln Asp Gln Tyr Glu Glu Leu Lys Asp Glu Ala Thr Ser
     50                  55                  60
Cys Ser Leu His Arg Ser Ala His Asn Ala Thr His Ala Thr Tyr Thr
 65                  70                  75                  80
Cys His Met Asp Val Phe His Phe Met Ala Asp Asp Ile Phe Ser Val
                 85                  90                  95
Asn Ile Thr Asp Gln Ser Gly Asn Tyr Ser Gln Glu Cys Gly Ser Phe
            100                 105                 110
Leu Leu Ala Glu Ser Ile Lys Pro Ala Pro Pro Phe Asn Val Thr Val
        115                 120                 125
Thr Phe Ser Gly Gln Tyr Asn Ile Ser Trp Arg Ser Asp Tyr Glu Asp
    130                 135                 140
Pro Ala Phe Tyr Met Leu Lys Gly Lys Leu Gln Tyr Glu Leu Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Arg Asn Arg Gly Asp Pro Trp Ala Val Ser Pro Arg Arg Lys Leu Ile
                165                 170                 175
Ser Val Asp Ser Arg Ser Val Ser Leu Leu Pro Leu Glu Phe Arg Lys
            180                 185                 190
Asp Ser Ser Tyr Glu Leu Gln Val Arg Ala Gly Pro Met Pro Gly Ser
        195                 200                 205
Ser Tyr Gln Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Asp Pro Val Ile Phe Gln
    210                 215                 220
Thr Gln Ser Glu Glu Leu Lys Glu Gly Trp Asn Pro His Leu Leu Leu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Leu Leu Val Ile Val Phe Ile Pro Ala Phe Trp Ser Leu Lys
                245                 250                 255
Thr His Pro Leu Trp Arg Leu Trp Lys Lys Ile Trp Ala Val Pro Ser
            260                 265                 270
Pro Glu Arg Phe Phe Met Pro Leu Tyr Lys Gly Cys Ser Gly Asp Phe
        275                 280                 285
Lys Lys Trp Val Gly Ala Pro Phe Thr Gly Ser Ser Leu Glu Leu Gly
    290                 295                 300
Pro Trp Ser Pro Glu Val Pro Ser Thr Leu Glu Val Tyr Ser Cys His
305                 310                 315                 320
Pro Pro Arg Ser Pro Ala Lys Arg Leu Gln Leu Thr Glu Leu Gln Glu
                325                 330                 335
Pro Ala Glu Leu Val Glu Ser Asp Gly Val Pro Lys Pro Ser Phe Trp
            340                 345                 350
Pro Thr Ala Gln Asn Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp
        355                 360                 365
Arg Pro Tyr Gly Leu Val Ser Ile Asp Thr Val Thr Val Leu Asp Ala
    370                 375                 380
Glu Gly Pro Cys Thr Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro
385                 390                 395                 400
Ala Leu Asp Leu Asp Ala Gly Leu Glu Pro Ser Pro Gly Leu Glu Asp
                405                 410                 415
Pro Leu Leu Asp Ala Gly Thr Thr Val Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser
            420                 425                 430
Ala Gly Ser Pro Gly Leu Gly Gly Pro Leu Gly Ser Leu Leu Asp Arg
        435                 440                 445
Leu Lys Pro Pro Leu Ala Asp Gly Glu Asp Trp Ala Gly Gly Leu Pro
    450                 455                 460
Trp Gly Gly Arg Ser Pro Gly Gly Val Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser
465                 470                 475                 480
Pro Leu Ala Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Val Gly
                485                 490                 495
Ser Asp Cys Ser Ser Pro Val Glu Cys Asp Phe Thr Ser Pro Gly Asp
            500                 505                 510
Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg Gln Trp Val Val Ile Pro Pro
        515                 520                 525
Pro Leu Ser Ser Pro Gly Pro Gln Ala Ser
    530                 535
<210>44
<211>2665
<212>DNA
<213>智人
<400>44
gtcgactgga ggcccagctg cccgtcatca gagtgacagg tcttatgaca gcctgattgg 60
tgactcgggc tgggtgtgga ttctcacccc aggcctctgc ctgctttctc agaccctcat 120
ctgtcacccc cacgctgaac ccagctgcca cccccagaag cccatcagac tgcccccagc 180
acacggaatg gatttctgag aaagaagccg aaacagaagg cccgtgggag tcagcatgcc 240
gcgtggctgg gccgccccct tgctcctgct gctgctccag ggaggctggg gctgccccga 300
cctcgtctgc tacaccgatt acctccagac ggtcatctgc atcctggaaa tgtggaacct 360
ccaccccagc acgctcaccc ttacctggca agaccagtat gaagagctga aggacgaggc 420
cacctcctgc agcctccaca ggtcggccca caatgccacg catgccacct acacctgcca 480
catggatgta ttccacttca tggccgacga cattttcagt gtcaacatca cagaccagtc 540
tggcaactac tcccaggagt gtggcagctt tctcctggct gagagcatca agccggctcc 600
ccctttcaac gtgactgtga ccttctcagg acagtataat atctcctggc gctcagatta 660
cgaagaccct gccttctaca tgctgaaggg caagcttcag tatgagctgc agtacaggaa 720
ccggggagac ccctgggctg tgagtccgag gagaaagctg atctcagtgg actcaagaag 780
tgtctccctc ctccccctgg agttccgcaa agactcgagc tatgagctgc aggtgcgggc 840
agggcccatg cctggctcct cctaccaggg gacctggagt gaatggagtg acccggtcat 900
ctttcagacc cagtcagagg agttaaagga aggctggaac cctcacctgc tgcttctcct 960
cctgcttgtc atagtcttca ttcctgcctt ctggagcctg aagacccatc cattgtggag 1020
gctatggaag aagatatggg ccgtccccag ccctgagcgg ttcttcatgc ccctgtacaa 1080
gggctgcagc ggagacttca agaaatgggt gggtgcaccc ttcactggct ccagcctgga 1140
gctgggaccc tggagcccag aggtgccctc caccctggag gtgtacagct gccacccacc 1200
acggagcccg gccaagaggc tgcagctcac ggagctacaa gaaccagcag agctggtgga 1260
gtctgacggt gtgcccaagc ccagcttctg gccgacagcc cagaactcgg ggggctcagc 1320
ttacagtgag gagagggatc ggccatacgg cctggtgtcc attgacacag tgactgtgct 1380
agatgcagag gggccatgca cctggccctg cagctgtgag gatgacggct acccagccct 1440
ggacctggat gctggcctgg agcccagccc aggcctagag gacccactct tggatgcagg 1500
gaccacagtc ctgtcctgtg gctgtgtctc agctggcagc cctgggctag gagggcccct 1560
gggaagcctc ctggacagac taaagccacc ccttgcagat ggggaggact gggctggggg 1620
actgccctgg ggtggccggt cacctggagg ggtctcagag agtgaggcgg gctcacccct 1680
ggccggcctg gatatggaca cgtttgacag tggctttgtg ggctctgact gcagcagccc 1740
tgtggagtgt gacttcacca gccccgggga cgaaggaccc ccccggagct acctccgcca 1800
gtgggtggtc attcctccgc cactttcgag ccctggaccc caggccagct aatgaggctg 1860
actggatgtc cagagctggc caggccactg ggccctgagc cagagacaag gtcacctggg 1920
ctgtgatgtg aagacacctg cagcctttgg tctcctggat gggcctttga gcctgatgtt 1980
tacagtgtct gtgtgtgtgt gtgcatatgt gtgtgtgtgc atatgcatgt gtgtgtgtgt 2040
gtgtgtctta ggtgcgcagt ggcatgtcca cgtgtgtgtg tgattgcacg tgcctgtggg 2100
cctgggataa tgcccatggt actccatgca ttcacctgcc ctgtgcatgt ctggactcac 2160
ggagctcacc catgtgcaca agtgtgcaca gtaaacgtgt ttgtggtcaa cagatgacaa 2220
cagccgtcct ccctcctagg gtcttgtgtt gcaagttggt ccacagcatc tccggggctt 2280
tgtgggatca gggcattgcc tgtgactgag gcggagccca gccctccagc gtctgcctcc 2340
aggagctgca agaagtccat attgttcctt atcacctgcc aacaggaagc gaaaggggat 2400
ggagtgagcc catggtgacc tcgggaatgg caattttttg ggcggcccct ggacgaaggt 2460
ctgaatcccg actctgatac cttctggctg tgctacctga gccaagtcgc ctcccctctc 2520
tgggctagag tttccttatc cagacagtgg ggaaggcatg acacacctgg gggaaattgg 2580
cgatgtcacc cgtgtacggt acgcagccca gagcagaccc tcaataaacg tcagcttcct 2640
tcaaaaaaaa aaaaaaaaat ctaga                                       2665
<210>45
<211>529
<212>PRT
<213>Mus musculus
<400>45
Met Pro Arg Gly Pro Val Ala Ala Leu Leu Leu Leu Ile Leu His Gly
  1               5                  10                  15
Ala Trp Ser Cys Leu Asp Leu Thr Cys Tyr Thr Asp Tyr Leu Trp Thr
             20                  25                  30
Ile Thr Cys Val Leu Glu Thr Arg Ser Pro Asn Pro Ser Ile Leu Ser
         35                  40                  45
Leu Thr Trp Gln Asp Glu Tyr Glu Glu Leu Gln Asp Gln Glu Thr Phe
     50                  55                  60
Cys Ser Leu His Arg Ser Gly His Asn Thr Thr His Ile Trp Tyr Thr
 65                  70                  75                  80
Cys His Met Arg Leu Ser Gln Phe Leu Ser Asp Glu Val Phe Ile Val
                 85                  90                  95
Asn Val Thr Asp Gln Ser Gly Asn Asn Ser Gln Glu Cys Gly Ser Phe
            100                 105                 110
Val Leu Ala Glu Ser Ile Lys Pro Ala Pro Pro Leu Asn Val Thr Val
        115                 120                 125
Ala Phe Ser Gly Arg Tyr Asp Ile Ser Trp Asp Ser Ala Tyr Asp Glu
    130                 135                 140
Pro Ser Asn Tyr Val Leu Arg Gly Lys Leu Gln Tyr Glu Leu Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Arg Asn Leu Arg Asp Pro Tyr Ala Val Arg Pro Val Thr Lys Leu Ile
                165                 170                 175
Ser Val Asp Ser Arg Asn Val Ser Leu Leu Pro Glu Glu Phe His Lys
            180                 185                 190
Asp Ser Ser Tyr Gln Leu Gln Val Arg Ala Ala Pro Gln Pro Gly Thr
        195                 200                 205
Ser Phe Arg Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Asp Pro Val Ile Phe Gln
    210                 215                 220
Thr Gln Ala Gly Glu Pro Glu Ala Gly Trp Asp Pro His Met Leu Leu
225                 230                 235                 240
Leu Leu Ala Val Leu Ile Ile Val Leu Val Phe Met Gly Leu Lys Ile
                245                 250                 255
His Leu Pro Trp Arg Leu Trp Lys Lys Ile Trp Ala Pro Val Pro Thr
            260                 265                 270
Pro Glu Ser Phe Phe Gln Pro Leu Tyr Arg Glu His Ser Gly Asn Phe
        275                 280                 285
Lys Lys Trp Val Asn Thr Pro Phe Thr Ala Ser Ser Ile Glu Leu Val
    290                 295                 300
Pro Gln Ser Ser Thr Thr Thr Ser Ala Leu His Leu Ser Leu Tyr Pro
305                 310                 315                 320
Ala Lys Glu Lys Lys Phe Pro Gly Leu Pro Gly Leu Glu Glu Gln Leu
                325                 330                 335
Glu Cys Asp Gly Met Ser Glu Pro Gly His Trp Cys Ile Ile Pro Leu
            340                 345                 350
Ala Ala Gly Gln Ala Val Ser Ala Tyr Ser Glu Glu Arg Asp Arg Pro
        355                 360                 365
Tyr Gly Leu Val Ser Ile Asp Thr Val Thr Val Gly Asp Ala Glu Gly
    370                 375                 380
Leu Cys Val Trp Pro Cys Ser Cys Glu Asp Asp Gly Tyr Pro Ala Met
385                 390                 395                 400
Asn Leu Asp Ala Gly Arg Glu Ser Gly Pro Asn Ser Glu Asp Leu Leu
                405                 410                 415
Leu Val Thr Asp Pro Ala Phe Leu Ser Cys Gly Cys Val Ser Gly Ser
            420                 425                 430
Gly Leu Arg Leu Gly Gly Ser Pro Gly Ser Leu Leu Asp Arg Leu Arg
        435                 440                 445
Leu Ser Phe Ala Lys Glu Gly Asp Trp Thr Ala Asp Pro Thr Trp Arg
    450                 455                 460
Thr Gly Ser Pro Gly Gly Gly Ser Glu Ser Glu Ala Gly Ser Pro Pro
465                 470                 475                 480
Gly Leu Asp Met Asp Thr Phe Asp Ser Gly Phe Ala Gly Ser Asp Cys
                485                 490                 495
Gly Ser Pro Val Glu Thr Asp Glu Gly Pro Pro Arg Ser Tyr Leu Arg
            500                 505                 510
Gln Trp Val Val Arg Thr Pro Pro Pro Val Asp Ser Gly Ala Gln Ser
        515                 520                 525
Ser
<210>46
<211>2628
<212>DNA
<213>智人
<400>46
gtcgacgcgg cggtaccagc tgtctgccca cttctcctgt ggtgtgcctc acggtcactt 60
gcttgtctga ccgcaagtct gcccatccct ggggcagcca actggcctca gcccgtgccc 120
caggcgtgcc ctgtctctgt ctggctgccc cagccctact gtcttcctct gtgtaggctc 180
tgcccagatg cccggctggt cctcagcctc aggactatct cagcagtgac tcccctgatt 240
ctggacttgc acctgactga actcctgccc acctcaaacc ttcacctccc accaccacca 300
ctccgagtcc cgctgtgact cccacgccca ggagaccacc caagtgcccc agcctaaaga 360
atggctttct gagaaagacc ctgaaggagt aggtctggga cacagcatgc cccggggccc 420
actggctgcc ttactcctgc tgattctcca tggagcttgg agctgcctgg acctcacttg 480
ctacactgac tacctctgga ccatcacctg tgtcctggag acacggagcc ccaaccccag 540
catactcagt ctcacctggc aagatgaata tgaggaactt caggaccaag agaccttctg 600
cagcctacac aggtctggcc acaacaccac acatatatgg tacacgtgcc atatgcgctt 660
gtctcaattc ctgtccgatg aagttttcat tgtcaatgtg acggaccagt ctggcaacaa 720
ctcccaagag tgtggcagct ttgtcctggc tgagagcatc aaaccagctc cccccttgaa 780
cgtgactgtg gccttctcag gacgctatga tatctcctgg gactcagctt atgacgaacc 840
ctccaactac gtgctgaggg gcaagctaca atatgagctg cagtatcgga acctcagaga 900
cccctatgct gtgaggccgg tgaccaagct gatctcagtg gactcaagaa acgtctctct 960
tctccctgaa gagttccaca aagattctag ctaccagctg caggtgcggg cagcgcctca 1020
gccaggcact tcattcaggg ggacctggag tgagtggagt gaccccgtca tctttcagac 1080
ccaggctggg gagcccgagg caggctggga ccctcacatg ctgctgctcc tggctgtctt 1140
gatcattgtc ctggttttca tgggtctgaa gatccacctg ccttggaggc tatggaaaaa 1200
gatatgggca ccagtgccca cccctgagag tttcttccag cccctgtaca gggagcacag 1260
cgggaacttc aagaaatggg ttaatacccc tttcacggcc tccagcatag agttggtgcc 1320
acagagttcc acaacaacat cagccttaca tctgtcattg tatccagcca aggagaagaa 1380
gttcccgggg ctgccgggtc tggaagagca actggagtgt gatggaatgt ctgagcctgg 1440
tcactggtgc ataatcccct tggcagctgg ccaagcggtc tcagcctaca gtgaggagag 1500
agaccggcca tatggtctgg tgtccattga cacagtgact gtgggagatg cagagggcct 1560
gtgtgtctgg ccctgtagct gtgaggatga tggctatcca gccatgaacc tggatgctgg 1620
ccgagagtct ggccctaatt cagaggatct gctcttggtc acagaccctg cttttctgtc 1680
ttgcggctgt gtctcaggta gtggtctcag gcttggaggc tccccaggca gcctactgga 1740
caggttgagg ctgtcatttg caaaggaagg ggactggaca gcagacccaa cctggagaac 1800
tgggtcccca ggagggggct ctgagagtga agcaggttcc ccccctggtc tggacatgga 1860
cacatttgac agtggctttg caggttcaga ctgtggcagc cccgtggaga ctgatgaagg 1920
accccctcga agctatctcc gccagtgggt ggtcaggacc cctccacctg tggacagtgg 1980
agcccagagc agctagcata taataaccag ctatagtgag aagaggcctc tgagcctggc 2040
atttacagtg tgaacatgta ggggtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 2100
tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtcttgggt tgtgtgttag cacatccatg ttgggatttg 2160
gtctgttgct atgtattgta atgctaaatt ctctacccaa agttctaggc ctacgagtga 2220
attctcatgt ttacaaactt gctgtgtaaa ccttgttcct taatttaata ccattggtta 2280
aataaaattg gctgcaacca attactggag ggattagagg tagggggctt ttgagttacc 2340
tgtttggaga tggagaagga gagaggagag accaagagga gaaggaggaa ggagaggaga 2400
ggagaggaga ggagaggaga ggagaggaga ggagaggaga ggagaggaga ggctgccgtg 2460
aggggagagg gaccatgagc ctgtggccag gagaaacagc aagtatctgg ggtacactgg 2520
tgaggaggtg gccaggccag cagttagaag agtagattag gggtgacctc cagtatttgt 2580
caaagccaat taaaataaca aaaaaaaaaa aaaagcggcc gctctaga              2628
<210>47
<211>116
<212>PRT
<213>智人
<400>47
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ile Tyr
             20                  25                  30
Ser Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Gly Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>48
<211>109
<212>PRT
<213>智人
<400>48
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
  1               5                  10                  15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala
             20                  25                  30
Ser Trp Tyr Gln Lys Arg Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Val Met Tyr
         35                  40                  45
Gly Arg Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Phe Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Arg Ala Tyr Ser Gly Asn Leu
                 85                  90                  95
Val Glu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>49
<211>242
<212>PRT
<213>智人
<400>49
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ile Tyr
             20                  25                  30
Ser Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Gly Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser
    130                 135                 140
Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu
145                 150                 155                 160
Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Lys Arg Pro Gly Gln Ala Pro
                165                 170                 175
Ile Leu Val Met Tyr Gly Arg Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp
            180                 185                 190
Arg Phe Ser Gly Ser Phe Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Arg Ala
    210                 215                 220
Tyr Ser Gly Asn Leu Val Glu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val
225                 230                 235                 240
Leu Gly
<210>50
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>50
Ile Tyr Ser Val Ser
  1               5
<210>51
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>51
Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
  1               5                  10                  15
Gly
<210>52
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>52
Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser
  1               5
<210>53
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>53
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser
  1               5                  10
<210>54
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>54
Gly Arg Asn Lys Arg Pro Ser
  1               5
<210>55
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>55
Lys Ser Arg Ala Tyr Ser Gly Asn Leu Val Glu
  1               5                  10
<210>56
<211>348
<212>DNA
<213>智人
<400>56
gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac atctatagtg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcgtgatat tgcaaactac 180
gcgcagaggt tccagggcag ggtcacactt accgcggaca agtcctcggg gacagcctac 240
atggagttgc gcagcctgag atctgacgac acggccgtct attggtgtgc gacattggct 300
ggccccttgg actcctgggg cagaggaacc ctggtcaccg tctcgagt              348
<210>57
<211>327
<212>DNA
<213>智人
<400>57
tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60
acatgccagg gagacagcct cagaacttat tatgcgagct ggtaccagaa gaggccagga 120
caggccccta tacttgtcat gtatggtaga aataagaggc cctcagggat cccagaccga 180
ttctctggct ccttctcagg gaacagagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actattactg taaatcccgg gcctacagtg gtaacctcgt agaattcggc 300
ggagggacca agctgaccgt cctaggt                                     327
<210>58
<211>726
<212>DNA
<213>智人
<400>58
gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac atctatagtg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcgtgatat tgcaaactac 180
gcgcagaggt tccagggcag ggtcacactt accgcggaca agtcctcggg gacagcctac 240
atggagttgc gcagcctgag atctgacgac acggccgtct attggtgtgc gacattggct 300
ggccccttgg actcctgggg cagaggaacc ctggtcaccg tctcgagtgg aggcggcggt 360
tcaggcggag gtggctctgg cggtggcgga agtgcacttt cttctgagct gactcaggac 420
cctgctgtgt ctgtggcctt gggacagaca gtcaggatca catgccaggg agacagcctc 480
agaacttatt atgcgagctg gtaccagaag aggccaggac aggcccctat acttgtcatg 540
tatggtagaa ataagaggcc ctcagggatc ccagaccgat tctctggctc cttctcaggg 600
aacagagctt ccttgaccat cactggggct caggcggaag atgaggctga ctattactgt 660
aaatcccggg cctacagtgg taacctcgta gaattcggcg gagggaccaa gctgaccgtc 720
ctaggt                                                            726
<210>59
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>59
atctatagtg tcagc                                                  15
<210>60
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>60
aggatcatcc ctatgcgtga tattgcaaac tacgcgcaga ggttccaggg c          51
<210>61
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>61
ttggctggcc ccttggactc c                                           21
<210>62
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>62
cagggagaca gcctcagaac ttattatgcg agc                              33
<210>63
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>63
ggtagaaata agaggccctc a                                           21
<210>64
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>64
aaatcccggg cctacagtgg taacctcgta gaa                              33
<210>65
<211>118
<212>PRT
<213>智人
<400>65
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu
  1               5                  10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly
             20                  25                  30
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
         35                  40                  45
Ile Gly Ser Ile Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu
     50                  55                  60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
 65                  70                  75                  80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Gly Ile Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>66
<211>110
<212>PRT
<213>智人
<400>66
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Pro Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
  l               5                  10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala
             20                  25                  30
Ser Trp Tyr Gln Gln Ls Ser Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Leu Tyr
         35                 40                  45
Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
                 85                  90                  95
His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu Ser
            100                 105                 110
<210>67
<211>245
<212>PRT
<213>智人
<400>67
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Thr Ser Glu
  1               5                  10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly
             20                  25                  30
Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
         35                  40                  45
Ile Gly Ser Ile Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu
     50                  55                  60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
 65                  70                  75                  80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Gly Ile Ser Arg Pro Glu Tyr Trp Gly Lys Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Pro
    130                 135                 140
Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Thr Leu Thr Cys Gln Gly Asp
145                 150                 155                 160
Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln
                165                 170                 175
Ala Pro Ile Leu Leu Leu Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly Ile
            180                 185                 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr
        195                 200                 205
Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser
    210                 215                 220
Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gln
225                 230                 235                 240
Leu Thr Val Leu Ser
                245
<210>68
<211>6
<212>PRT
<213>智人
<400>68
Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly
  1               5
<210>69
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>69
Ser Ile Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Pro Leu Lys Ser
  1               5                  10                  15
<210>70
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>70
Gly Gly Gly Ile Ser Arg Pro Glu Tyr
  1               5
<210>71
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>71
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser
  1               5                  10
<210>72
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>72
Gly Lys His Lys Arg Pro Ser
  1               5
<210>73
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<400>73
Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro His Val Leu
  1               5                  10
<210>74
<211>354
<212>DNA
<213>智人
<400>74
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120
cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180
aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240
ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300
ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagt       354
<210>75
<211>330
<212>DNA
<213>智人
<400>75
tcttctgagc tgactcagga ccctcctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcacgctc 60
acatgccaag gagacagcct cagaacctat tatgcaagct ggtaccagca gaagtcagga 120
caggccccta tacttctcct ctatggtaaa cacaaacggc cctcagggat cccagaccgc 180
ttctctggct ccacctcagg agacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gacgaggctg actattactg taactcccgg gactccagtg gcaaccccca tgttctgttc 300
ggcggaggga cccagctcac cgttttaagt                                  330
<210>76
<211>735
<212>DNA
<213>智人
<400>76
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaga cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actggggctg gatccggcag 120
cccccaggga aggggttgga gtggattggg agtatctctc atactgggaa cacctactac 180
aacccgcccc tcaagagtcg cgtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240
ctgaaactga gctctgtgac cgccgcagac acggccgtgt attactgtgc gcgaggtggg 300
ggaattagca ggccggagta ctggggcaaa ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420
caggaccctc ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca cgctcacatg ccaaggagac 480
agcctcagaa cctattatgc aagctggtac cagcagaagt caggacaggc ccctatactt 540
ctcctctatg gtaaacacaa acggccctca gggatcccag accgcttctc tggctccacc 600
tcaggagaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagacga ggctgactat 660
tactgtaact cccgggactc cagtggcaac ccccatgttc tgttcggcgg agggacccag 720
ctcaccgttt taagt                                                  735
<210>77
<211>18
<212>DNA
<213>智人
<400>77
agtggttact actggggc                                               18
<210>78
<211>48
<212>DNA
<213>智人
<400>78
agtatctctc atactgggaa cacctactac aacccgcccc tcaagagt              48
<210>79
<211>27
<212>DNA
<213>智人
<400>79
ggtgggggaa ttagcaggcc ggagtac                                     27
<210>80
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>80
caaggagaca gcctcagaac ctattatgca agc                              33
<210>81
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>81
ggtaaacaca aacggccctc a                                           21
<210>82
<211>36
<212>DNA
<213>智人
<400>82
aactcccggg actccagtgg caacccccat gttctg                           36
<210>83
<211>116
<212>PRT
<213>智人
<400>83
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ile Tyr
             20                  25                  30
Ser Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>84
<211>111
<212>PRT
<213>智人
<400>84
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
  1               5                  10                  15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu Arg Gln Tyr Tyr Ala
             20                  25                  30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
         35                  40                  45
Gly Lys Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His
                 85                  90                  95
Pro Leu Tyr Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>85
<211>244
<212>PRT
<213>智人
<400>85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ile Tyr
             20                  25                  30
Ser Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser
    130                 135                 140
Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Gly Ser Leu
145                 150                 155                 160
Arg Gln Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
                165                 170                 175
Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp
            180                 185                 190
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr
        195                 200                 205
Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ser Arg Asp
    210                 215                 220
Ser Ser Gly Asn His Pro Leu Tyr Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu
225                 230                 235                 240
Thr Val Leu Gly
<210>86
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>86
Ile Tyr Ser Val Ser
  1               5
<210>87
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>87
Arg Ile Ile Pro Met Arg Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
  1               5                  10                  15
Gly
<210>88
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>88
Leu Ala Gly Pro Leu Asp Ser
  1               5
<210>89
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>89
Gln Gly Gly Ser Leu Arg Gln Tyr Tyr Ala Ser
  1               5                  10
<210>90
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>90
Gly Lys Asn Lys Arg Pro Ser
  1               5
<210>91
<211>13
<212>PRT
<213>智人
<400>91
Lys Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Pro Leu Tyr Val
  1               5                  10
<210>92
<211>348
<212>DNA
<213>智人
<400>92
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac atctatagtg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcgtgatat tgcaaactac 180
gcgcagaggt tccagggcag ggtcacaatt accgcggaca agtccacgag cacagcctac 240
atggagttga gcagcctgag atctgaagac acggccgtct attattgtgc gacattggct 300
ggccccttgg actcctgggg ccagggcacc ctggtcaccg tctcgagt              348
<210>93
<211>333
<212>DNA
<213>智人
<400>93
tcttctgagc tgactcagga cccagctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60
acatgtcaag gcggcagcct cagacaatat tatgcaagtt ggtaccaaca gaagccagga 120
caggcccctg tgcttgtcat ctatggtaaa aataagcgac cctcagggat cccagaccga 180
ttctctggct cctcctcagg caacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actactattg taagtcccgg gacagcagtg gtaaccatcc cctttatgtc 300
ttcggagctg ggaccaagct gaccgtccta ggt                              333
<210>94
<211>732
<212>DNA
<213>智人
<400>94
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcaac atctatagtg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcgtgatat tgcaaactac 180
gcgcagaggt tccagggcag ggtcacaatt accgcggaca agtccacgag cacagcctac 240
atggagttga gcagcctgag atctgaagac acggccgtct attattgtgc gacattggct 300
ggccccttgg actcctgggg ccagggcacc ctggtcaccg tctcgagtgg aggcggcggt 360
tcaggcggag gtggctctgg cggtggcgga agtgcacttt cttctgagct gactcaggac 420
ccagctgtgt ctgtggcctt gggacagaca gtcaggatca catgtcaagg cggcagcctc 480
agacaatatt atgcaagttg gtaccaacag aagccaggac aggcccctgt gcttgtcatc 540
tatggtaaaa ataagcgacc ctcagggatc ccagaccgat tctctggctc ctcctcaggc 600
aacacagctt ccttgaccat cactggggct caggcggaag atgaggctga ctactattgt 660
aagtcccggg acagcagtgg taaccatccc ctttatgtct tcggagctgg gaccaagctg 720
accgtcctag gt                                                     732
<210>95
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>95
atctatagtg tcagc                                                  15
<210>96
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>96
aggatcatcc ctatgcgtga tattgcaaac tacgcgcaga ggttccaggg c          51
<210>97
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>97
ttggctggcc ccttggactc c                                           21
<210>98
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>98
caaggcggca gcctcagaca atattatgca agt                              33
<210>99
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>99
ggtaaaaata agcgaccctc a                                           21
<210>100
<211>39
<212>DNA
<213>智人
<400>100
aagtcccggg acagcagtgg taaccatccc ctttatgtc                        39
<210>101
<211>120
<212>PRT
<213>智人
<400>101
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
  1               5                  10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asp Asn
             20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Ser Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Arg Ser Leu Ser Pro Tyr Gly Gly Gln Leu Leu Tyr Trp Gly Arg
            100                 105                 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>102
<211>110
<212>PRT
<213>智人
<400>102
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
  1               5                  10                  15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Arg Tyr Tyr Ala
             20                  25                  30
Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Phe
         35                  40                  45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser
     50                  55                  60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Thr Ser Ile Asn His
                 85                  90                  95
Pro Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>103
<211>247
<212>PRT
<213>智人
<400>103
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
  1               5                  10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asp Asn
             20                  25                  30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Ser Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Arg Ser Leu Ser Pro Tyr Gly Gly Gln Leu Leu Tyr Trp Gly Arg
            100                 105                 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp
    130                 135                 140
Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln
145                 150                 155                 160
Gly Asp Ser Leu Arg Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro
                165                 170                 175
Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Phe Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser
            180                 185                 190
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser
        195                 200                 205
Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220
Asn Ser Arg Asp Thr Ser Ile Asn His Pro Val Ile Phe Gly Gly Gly
225                 230                 235                 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
                245
<210>104
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>104
Asp Asn Tyr Ile His
  1               5
<210>105
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>105
Trp Ile Asn Pro Lys Thr Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
  1               5                  10                  15
Gly
<210>106
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>106
Ser Leu Ser Pro Tyr Gly Gly Gln Leu Leu Tyr
  1               5                  10
<210>107
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>107
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Arg Tyr Tyr Ala Ser
  1               5                  10
<210>108
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>108
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser
  1               5
<210>109
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<400>109
Asn Ser Arg Asp Thr Ser Ile Asn His Pro Val Ile
  1               5                  10
<210>110
<211>360
<212>DNA
<213>智人
<400>110
gaggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgtaagg cttccggata cgccttcacc gacaactata tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgaatg gatgggatgg atcaacccta agactggtgg cacaaactat 180
ccacaaaagt ttcagggcag ggtcagcatg accagggaca cgtccatcaa cacagcctac 240
atggacctaa gtaggctgac atctgacgac acggccgtct attactgtac gagaagcctt 300
tccccatatg gtggccaact cctctactgg ggccggggga caatggtcac cgtctcgagt 360
<210>111
<211>330
<212>DNA
<213>智人
<400>111
tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60
acatgccaag gagacagcct cagaagatat tatgcaagct ggttccagca gaagccagga 120
caggcccctg tacttgtcat ctttggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180
ttctctgcct ccagttcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actattactg taactcccgg gacaccagta ttaaccatcc cgtgatattc 300
ggcgggggga ccaagctgac cgtcctaggt                                  330
<210>112
<211>741
<212>DNA
<213>智人
<400>112
gaggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgtaagg cttccggata cgccttcacc gacaactata tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgaatg gatgggatgg atcaacccta agactggtgg cacaaactat 180
gcacaaaagt ttcagggcag ggtcagcatg accagggaca cgtccatcaa cacagcctac 240
atggacctaa gtaggctgac atctgacgac acggccgtct attactgtac gagaagcctt 300
tccccatatg gtggccaact cctctactgg ggccggggga caatggtcac cgtctcgagt 360
ggaggcggcg gttcaggcgg aggtggctct ggcggtggcg gaagtgcact ttcttctgag 420
ctgactcagg accctgctgt gtctgtggcc ttgggacaga cagtcaggat cacatgccaa 480
ggagacagcc tcagaagata ttatgcaagc tggttccagc agaagccagg acaggcccct 540
gtacttgtca tctttggtaa aaacaaccgg ccctcaggga tcccagaccg attctctgcc 600
tccagttcag gaaacacagc ttccttgacc atcactgggg ctcaggcgga agatgaggct 660
gactattact gtaactcccg ggacaccagt attaaccatc ccgtgatatt cggcgggggg 720
accaagctga ccgtcctagg t                                           741
<210>113
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>113
gacaactata tacac                                                  15
<210>114
<211>54
<212>DNA
<213>智人
<400>114
tggatcaacc ctaagactgg tggcacaaac tatgcacaaa agtttcaggg cagg       54
<210>115
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>115
agcctttccc catatggtgg ccaactcctc tac                              33
<210>116
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>116
caaggagaca gcctcagaag atattatgca agc                              33
<210>117
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>117
ggtaaaaaca accggccctc a                                           21
<210>118
<211>36
<212>DNA
<213>智人
<400>118
aactcccggg acaccagtat taaccatccc gtgata                           36
<210>119
<211>118
<212>PRT
<213>智人
<400>119
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Gly Gly Trp Lys Leu Pro Phe Phe Ala Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
            100             105                     110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>120
<211>110
<212>PRT
<213>智人
<400>120
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
  1               5                  10                  15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Phe Tyr Ala
             20                  25                  30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Val Ile Tyr
         35                  40                  45
Gly Lys Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Arg Asp Arg Ser Gly Asn His
                 85                  90                  95
Leu Gly Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>121
<211>245
<212>PRT
<213>智人
<400>121
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Gly Gly Trp Lys Leu Pro Phe Phe Ala Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala
    130                 135                 140
Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp
145                 150                 155                 160
Ser Leu Arg Thr Phe Tyr Ala Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
                165                 170                 175
Ala Pro Ile Leu Val Ile Tyr Gly Lys Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile
            180                 185                 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr
        195                 200                 205
Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser
    210                 215                 220
Arg Asp Arg Ser Gly Asn His Leu Gly Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225                 230                 235                 240
Leu Thr Val Leu Gly
                245
<210>122
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>122
Ser Tyr Ala Met Ser
  1               5
<210>123
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>123
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>124
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>124
Gly Trp Lys Leu Pro Phe Phe Ala Tyr
  1               5
<210>125
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>125
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Phe Tyr Ala Asn
  1               5                  10
<210>126
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>126
Gly Lys Ser Asn Arg Pro Ser
  1               5
<210>127
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<400>127
Tyr Ser Arg Asp Arg Ser Gly Asn His Leu Gly Met
  1               5                  10
<210>128
<211>354
<212>DNA
<213>智人
<400>128
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gggggggtgg 300
aaacttccat tttttgccta ctggggccgg ggcaccctgg tcaccgtctc gagt       354
<210>129
<211>330
<212>DNA
<213>智人
<400>129
tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60
acatgccaag gagacagcct cagaaccttt tatgcaaact ggtaccagca gaagccagga 120
caggccccta tacttgtcat ctatggtaaa agcaaccgtc cctcagggat cccagaccga 180
ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actattactg ttactcccgg gacagaagtg gtaaccatct agggatgttc 300
ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggt                                  330
<210>130
<211>735
<212>DNA
<213>智人
<400>130
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gggggggtgg 300
aaacttccat tttttgccta ctggggccgg ggcaccctgg tcaccgtctc gagtggaggc 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggaagtg cactttcttc tgagctgact 420
caggaccctg ctgtgtctgt ggccttggga cagacagtca ggatcacatg ccaaggagac 480
agcctcagaa ccttttatgc aaactggtac cagcagaagc caggacaggc ccctatactt 540
gtcatctatg gtaaaagcaa ccgtccctca gggatcccag accgattctc tggctccagc 600
tcaggaaaca cagcttcctt gaccatcact ggggctcagg cggaagatga ggctgactat 660
tactgttact cccgggacag aagtggtaac catctaggga tgttcggcgg agggaccaag 720
ctgaccgtcc taggt                                                  735
<210>131
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>131
agctatgcca tgagc                                                  15
<210>132
<211>54
<212>DNA
<213>智人
<400>132
gctattagtg gtagtggtgg tagcacatac tacgcagact ccgtgaaggg ccgg       54
<210>133
<211>27
<212>DNA
<213>智人
<400>133
gggtggaaac ttccattttt tgcctac                                     27
<210>134
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>134
caaggagaca gcctcagaac cttttatgca aac                              33
<210>135
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>135
ggtaaaagca accgtccctc a                                           21
<210>136
<211>36
<212>DNA
<213>智人
<400>136
tactcccggg acagaagtgg taaccatcta gggatg                           36
<210>137
<211>121
<212>PRT
<213>智人
<400>137
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr His Ile Ser Glu Arg Pro Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly
            100                 105                 110
Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>138
<211>109
<212>PRT
<213>智人
<400>138
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
  1               5                  10                  15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Lys Tyr His Ala
             20                  25                  30
Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
         35                  40                  45
Gly Lys Asn Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Gly
 65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Thr Ser Gly Leu His
                 85                  90                  95
Tyr Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>139
<211>247
<212>PRT
<213>智人
<400>139
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Thr His Ile Ser Glu Arg Pro Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly
            100                 105                 110
Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gln
    130                 135                 140
Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys
145                 150                 155                 160
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Lys Tyr His Ala Thr Trp Tyr Gln Gln Ly
                165                 170                 175
Pro Arg Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Gly Lys Asn Arg Arg Pro
            180                 185                 190
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala
        195                 200                 205
Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala gln Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
    210                 215                 220
Cys Asn Ser Arg Asp Thr Ser Gly Leu His Tyr Val Phe Gly Ala Gly
225                 230                 235                 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
                245
<210>140
<211>5
<212>PRT
<213>智人
<400>140
Ser Tyr Ala Met Ser
  1               5
<210>141
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>141
Gly Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>142
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<400>142
His Ile Ser Glu Arg Pro Arg Gly Ala Phe Asp Ile
  1               5                  10
<210>143
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>143
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Lys Tyr His Ala Thr
  1               5                  10
<210>144
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>144
Gly Lys Asn Arg Arg Pro Ser
  1               5
<210>145
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>145
Asn Ser Arg Asp Thr Ser Gly Leu His Tyr Val
  1               5                  10
<210>146
<211>363
<212>DNA
<213>智人
<400>146
caggtgcagc tgcaggagtc ggggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtactag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtat attactgtgc gacacatatc 300
tcggaacgtc cacgtggtgc ttttgatatc tggggccggg ggacaatggt caccgtctcg 360
agt                                                               363
<210>147
<211>327
<212>DNA
<213>智人
<400>147
tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggccc tgggacagac agtcaggatc 60
acatgccaag gagacagcct cagaaagtat catgcaactt ggtaccagca gaagccaagg 120
caggcccctg tacttgtcgt ctatggtaaa aacaggcgcc cctcagggat ccccgaccga 180
ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccctgacca tcactggggc tcaggcggga 240
gatgaggctg actattactg taactcccgg gacaccagtg gtcttcatta tgtcttcgga 300
gctgggacca agctgaccgt cctaggt                                     327
<210>148
<211>741
<212>DNA
<213>智人
<400>148
caggtgcagc tgcaggagtc ggggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtactag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtat attactgtgc gacacatatc 300
tcggaacgtc cacgtggtgc ttttgatatc tggggccggg ggacaatggt caccgtctcg 360
agtggaggcg gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcggaagtgc actttcttct 420
gagctgactc aggaccctgc tgtgtctgtg gccctgggac agacagtcag gatcacatgc 480
caaggagaca gcctcagaaa gtatcatgca acttggtacc agcagaagcc aaggcaggcc 540
cctgtacttg tcgtctatgg taaaaacagg cgcccctcag ggatccccga ccgattctct 600
ggctccagct caggaaacac agcttccctg accatcactg gggctcaggc gggagatgag 660
gctgactatt actgtaactc ccgggacacc agtggtcttc attatgtctt cggagctggg 720
accaagctga ccgtcctagg t                                           741
<210>149
<211>15
<212>DNA
<213>智人
<400>149
agctatgcca tgagc                                                  15
<210>150
<211>51
<212>DNA
<213>智人
<400>150
ggtattagtg gtagtggtac tagcacatac tacgcagact ccgtgaaggg c          51
<210>151
<211>36
<212>DNA
<213>智人
<400>151
catatctcgg aacgtccacg tggtgctttt gatatc                           36
<210>152
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>152
caaggagaca gcctcagaaa gtatcatgca act                              33
<210>153
<211>21
<212>DNA
<213>智人
<400>153
ggtaaaaaca ggcgcccctc a                                           21
<210>154
<211>33
<212>DNA
<213>智人
<400>154
aactcccggg acaccagtgg tcttcattat gtc                              33

Claims (38)

1.分离的抗体，其包含与选自SEQ ID NO：1，2，3，19，20，21，47，48，49，65，66，67，83，84，85，101，102，103，119，120，121，137，138和139的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体选择性地与IL-21受体结合。
2.分离的抗体，其由与选自SEQ ID NO：10，11，12，28，29，30，56，57，58，74，75，76，92，93，94，110，111，112，128，129，130，146，147和148的核苷酸序列具有至少95％同一性的核苷酸序列编码，其中所述抗体选择性地与IL-21受体结合。
3.分离的抗体，其包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域具有与选自SEQ ID NO：1，19，47，65，83，101，119和137的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述VL结构域具有与选自SEQ ID NO：2，20，48，66，84，102，120和138的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体选择性地与IL-21受体结合。
4.分离的抗体，其包含含有一个或多个CDR的VH结构域，所述CDR选自SEQ ID NO：4，5，6，22，23，24，50，51，52，68，69，70，86，87，88，104，105，106，122，123，124，140，141和142以及其保守氨基酸替代物，其中所述抗体选择性地与IL-21受体结合。
5.分离的抗体，其包含含有一个或多个CDR的VL结构域，所述CDR选自SEQ ID NO：7，8，9，25，26，27，53，54，55，71，72，73，89，90，91，107，108，109，125，126，127，143，144和145以及其保守氨基酸替代物，其中所述抗体选择性地与IL-21受体结合。
6.分离的抗体，其与包含选自SEQ ID NO：1，2，3，19，20，21，47，48，49，65，66，67，83，84，85，101，102，103，119，120，121，137，138和139的氨基酸序列的抗体竞争结合IL-21受体。
7.分离的抗体，其与包含选自SEQ ID NO：1，2，3，19，20，21，47，48，49，65，66，67，83，84，85，101，102，103，119，120，121，137，138和139的氨基酸序列的抗体结合IL-21受体上相同的抗原决定部位。
8.权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体，其中所述抗体选择性地结合到与包含SEQ ID NO：43所列至少100个连续氨基酸的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列上。
9.权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体，其中所述抗体选择性地结合人IL-21受体的细胞外结构域。
10.权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体，其中所述抗体抑制I L-21与I L-21受体的结合。
11.权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体，其中所述抗体是人抗体。
12.权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体，其中所述抗体是IgG1抗体。
13.权利要求12的抗体，其中所述抗体是IgG1λ和IgG1κ。
14.由具有ATCC保藏号PTA-5030或PTA-5031的宿主细胞所表达的分离的抗体。
15.包含权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体的药物组合物。
16.编码权利要求1，2，3，4，5，6或7的抗体的分离的核酸。
17.包含权利要求16的核酸的表达载体。
18.用权利要求17的载体转化的宿主细胞。
19.权利要求18的宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌、哺乳动物细胞、酵母细胞、植物细胞或昆虫细胞。
20.具有ATCC保藏号PTA-5030或PTA-5031的宿主细胞。
21.生产与IL-21受体结合的抗体的方法，所述方法包括在允许所述抗体表达的条件下培养权利要求20的宿主细胞，并且从细胞培养物中分离所述抗体。
22.产生选择性结合IL-21受体的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括：
(a)提供编码可变结构域的核酸的库集，所述可变结构域包括要被替代的CDR1、2或3，或者缺少CDR1，2，3编码区域；
(b)将所述库集与供体核酸组合，所述供体核酸编码基本上如SEQ  ID NO：4、5、6、7、8、9、22、23、24、25、26、27、50、51、52、53、54、55、68、69、70、71、72、73、86、87、88、89、90、91、104、105、106、107、108、109、122、123、124、125、126、127、140、141、142、143、144或145中所列的氨基酸序列，这样所述供体核酸就插入到所述库集的CDR1、2或3中，如此提供了编码可变结构域的核酸的产物库集。
(c)表达所述产物库集的核酸；
(d)选择对于IL-21受体特异的抗原结合片段；
(e)回收所述抗原结合片段或编码该抗原结合片段的核酸。
23.由权利要求22的方法产生的抗体。
24.权利要求22的方法，所述方法进一步包括种系转化的步骤。
25.调节免疫应答的方法，所述方法包括用权利要求1，2，3，4，5，6，7或23的抗体与细胞接触，从而调节所述免疫应答。
26.权利要求25的方法，其中所述细胞是白细胞或滑膜细胞。
27.权利要求26的方法，其中所述白细胞是T细胞、B细胞、NK细胞或巨噬细胞。
28.权利要求25的方法，其中所述免疫应答包括细胞增殖、细胞溶解活性、细胞因子分泌或趋化因子分泌。
29.在受试者中治疗或预防免疫细胞相关疾病的方法，所述方法包括以足以抑制或减少受试者体内免疫细胞活性的剂量给受试者施用权利要求1，2，3，4，5，6，7或23的抗体，从而治疗或预防所述疾病。
30.权利要求29的方法，其中所述免疫细胞相关疾病选自多发性硬化、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、青少年类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎、移植排斥、炎性肠病、牛皮癣和克罗恩疾病。
31.权利要求30的方法，其中所述免疫细胞相关疾病选自类风湿性关节炎、炎性肠病、克罗恩病和牛皮癣。
32.权利要求29的方法，所述方法进一步包括给受试者施用选自细胞因子抑制剂、生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂、细胞毒性剂和细胞抑制剂的其它治疗性试剂。
33.权利要求32的方法，基中所述治疗性试剂选自TNF拮抗剂、IL-12拮抗剂、IL-15拮抗剂、IL-17拮抗剂、IL-18拮抗剂、IL-22拮抗剂、T细胞消耗性试剂、B细胞消耗性试剂、甲氨蝶呤、来氟米特、雷帕霉素、或其类似物、Cox-2抑制剂、cPLA2抑制剂、NSAID和p38抑制剂。
34.在受试者中治疗或预防过度增殖性疾病的方法，所述方法包括以足以抑制或减少受试者体内IL-21和/或IL-21受体应答细胞过度增殖的量给受试者施用权利要求1，2，3，4，5，6，7或23的抗体，从而允许所述抗体治疗或预防所述疾病。
35.权利要求34的方法，其中所述受试者是哺乳动物。
36.权利要求34的方法，其中所述受试者是人。
37.权利要求29、30或33的方法，其中所述抗体以选自1μg/kg至20mg/kg、1μg/kg至10mg/kg、1μg/kg至1mg/kg、10μg/kg至1mg/kg、10μg/kg至100μg/kg、100μg/kg至1mg/kg以及500μg/kg至1mg/kg的范围进行施用。
38.包含权利要求1，2，3，4，5，6，7或23的抗体的诊断试剂盒。
CNA2004800105188A 2003-03-14 2004-03-12 抗人il－21受体的抗体及其应用 Pending CN1777621A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US45433603P 2003-03-14 2003-03-14
US60/454,336 2003-03-14

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010101657309A Division CN102040662A (zh) 2003-03-14 2004-03-12 抗人il-21受体的抗体及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1777621A true CN1777621A (zh) 2006-05-24

Family

ID=33029874

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2004800105188A Pending CN1777621A (zh) 2003-03-14 2004-03-12 抗人il－21受体的抗体及其应用
CN2010101657309A Pending CN102040662A (zh) 2003-03-14 2004-03-12 抗人il-21受体的抗体及其应用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010101657309A Pending CN102040662A (zh) 2003-03-14 2004-03-12 抗人il-21受体的抗体及其应用

Country Status (20)

Country Link
US (2) US7495085B2 (zh)
EP (2) EP1603949B9 (zh)
JP (1) JP4914209B2 (zh)
KR (1) KR20050119120A (zh)
CN (2) CN1777621A (zh)
AR (1) AR043616A1 (zh)
AT (1) ATE456581T1 (zh)
AU (1) AU2004221876B2 (zh)
BR (1) BRPI0408315A (zh)
CA (1) CA2518371A1 (zh)
CL (1) CL2004000534A1 (zh)
CO (1) CO5660297A2 (zh)
DE (1) DE602004025332D1 (zh)
ES (1) ES2340280T3 (zh)
MX (1) MXPA05009556A (zh)
NO (1) NO20054170L (zh)
NZ (1) NZ542306A (zh)
RU (1) RU2005131852A (zh)
WO (1) WO2004083249A2 (zh)
ZA (1) ZA200507067B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102105491A (zh) * 2008-05-23 2011-06-22 惠氏有限责任公司 白介素-21受体结合蛋白
CN106794129A (zh) * 2014-04-08 2017-05-31 波士顿制药有限公司 对il‑21具有特异性的结合分子及其用途
CN107261151A (zh) * 2011-04-29 2017-10-20 西莱克塔生物科技公司 用于降低抗体应答的致耐受性合成纳米载体
CN108473950A (zh) * 2015-10-30 2018-08-31 美国政府卫生与公众服务部 靶向癌症治疗

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6057128A (en) 1998-03-17 2000-05-02 Genetics Institute, Inc. MU-1, member of the cytokine receptor family
US7314623B2 (en) * 2002-07-15 2008-01-01 Wyeth Methods and compositions for modulating T helper (Th) cell development and function
KR20050119120A (ko) 2003-03-14 2005-12-20 와이어쓰 인간 ⅰｌ-21 수용체에 대한 항체 및 그것의 용도
JP2006523682A (ja) * 2003-03-21 2006-10-19 ワイス インターロイキン−２１／インターロイキン−２１受容体のアゴニストを用いた免疫学的障害の治療
DE602004013825D1 (de) 2003-11-21 2008-06-26 Ucb Pharma Sa Verfahren zur behandlung von multipler sklerose durch hemmung der il-17-aktivität
RU2006138704A (ru) * 2004-05-19 2008-06-27 Вайет (Us) Модуляция производства иммуноглобулина и атопические расстройства
BRPI0514138A (pt) * 2004-08-05 2008-05-27 Wyeth Corp método para tratar, melhorar, ou prevenir um distúrbio, proteìna de fusão, vetor, célula hospedeira recombinante, método para produzir uma proteìna de fusão, composição farmacêutica, e, métodos para transplantar/enxertar um órgão, tecido, célula ou grupo de células em um indivìduo mamìfero, e para tratar, prevenir ou melhorar rejeição de transplante/enxerto em um receptor de transplante/enxerto mamìfero
EP2386638A3 (en) 2005-03-25 2012-08-15 National Research Council Of Canada Method for isolation of soluble polypeptides
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
EP2805971A1 (en) 2005-11-28 2014-11-26 ZymoGenetics, Inc. IL-21 antagonists
WO2007114861A2 (en) * 2005-11-28 2007-10-11 Zymogenetics, Inc. Il-21 receptor antagonists
ES2444465T5 (es) 2005-12-09 2023-11-30 Academisch Medisch Centrum Bij De Univ Van Amsterdam Medios y procedimientos para influenciar la estabilidad de las células productoras de anticuerpos
WO2007067032A1 (en) 2005-12-09 2007-06-14 Academisch Medisch Cemtrum Bij De Universiteit Van Amsterdam Means and methods for influencing the stability of cells
BRPI0708970A2 (pt) * 2006-03-21 2011-06-21 Wyeth Corp método para o tratamento de um sujeito com uma doença ou transtorno caracterizado por depósito amilóide de a-beta; método de inibição ou redução da acumulação de depósito amilóide de a-beta em um sujeito; método de inibição ou redução da neurodegeneração em um sujeito; e método de inibição ou redução do declìnio cognitivo, ou de melhora da cognição, em um sujeito
US20090022727A1 (en) * 2007-01-26 2009-01-22 Alza Corp. Injectable, nonaqueous suspension with high concentration of therapeutic agent
MX2009013340A (es) 2007-06-29 2010-01-18 Hoffmann La Roche Mutante de cadena pesada que lleva a produccion de inmunoglobulina mejorada.
WO2009023267A2 (en) * 2007-08-15 2009-02-19 President And Fellows Of Harvard College Methods for modulating development and expansion of il-17 expressing cells
WO2010055366A2 (en) * 2007-12-07 2010-05-20 Zymogenetics, Inc. Anti-human il-21 monoclonal antibodies
WO2009111889A1 (en) * 2008-03-13 2009-09-17 The Hospital For Sick Children Lymphocyte control of obesity and insulin resistance
EP2296689A1 (en) * 2008-05-23 2011-03-23 Wyeth LLC Methods of treatment utilizing binding proteins of the interleukin-21 receptor
JP2012504939A (ja) * 2008-09-23 2012-03-01 ワイス・エルエルシー 架橋結合タンパク質による活性化シグナルの産生を予測するための方法
WO2010132532A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services B cell surface reactive antibodies
JP5781508B2 (ja) 2009-07-15 2015-09-24 アイム・セラピューティクス・べー・フェー 高親和性抗体を産生させるための手段および方法
WO2012012531A2 (en) * 2010-07-20 2012-01-26 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Compositions and methods featuring il-6 and il-21 antagonists
ES2626671T3 (es) 2010-12-02 2017-07-25 Aimm Therapeutics B.V. Medios y métodos para producir anticuerpos de alta afinidad
US9309318B2 (en) * 2012-10-17 2016-04-12 Amgen, Inc. Compositions relating to anti-IL-21 receptor antibodies
SG11201506886TA (en) 2013-03-14 2015-09-29 Bayer Healthcare Llc Monoclonal antibodies against antithrombin beta complexed with heparin
AU2015211480B2 (en) 2014-01-31 2020-05-14 Kling Biotherapeutics B.V. Means and methods for producing stable antibodies
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
CA3018792C (en) * 2016-03-31 2023-03-28 Eli Lilly And Company Il-21 antibodies and uses thereof
CA3022129A1 (en) * 2016-06-17 2017-12-21 Medigene Immunotherapies Gmbh T cell receptors and uses thereof
US20190185559A1 (en) * 2016-09-02 2019-06-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Compositions and methods for treating neoplasias
WO2019052562A1 (zh) * 2017-09-15 2019-03-21 科济生物医药（上海）有限公司 Il-4r的融合蛋白及其应用
EP3990004A4 (en) * 2019-06-26 2023-06-07 The Johns Hopkins University METHODS AND SUBSTANCES FOR THE TARGETED EXPANSION OF REGULATORY T LYMPHOCYTES
US20230052256A1 (en) * 2019-12-24 2023-02-16 Dizal (Jiangsu) Pharmaceutical Co., Ltd. Novel anti-fgfr2b antibodies
WO2023023150A2 (en) * 2021-08-18 2023-02-23 Hifibio (Hk) Limited Methods and compositions related to neutralizing antibodies against human coronavirus
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
JPS5896026A (ja) 1981-10-30 1983-06-07 Nippon Chemiphar Co Ltd 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤
US4609546A (en) 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JPS63502716A (ja) 1986-03-07 1988-10-13 マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー 糖タンパク安定性の強化方法
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
GB8905669D0 (en) 1989-03-13 1989-04-26 Celltech Ltd Modified antibodies
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
MX9700764A (es) 1994-07-29 1997-05-31 Smithkline Beecham Plc Compuestos novedosos.
FR2724182B1 (fr) * 1994-09-02 1996-12-13 Pasteur Institut Obtention d'un anticorps monoclonal recombinant a partir d'un anticorps monoclonal humain anti-rhesus d, sa production en cellules d'insecte, et ses utilisations
HU230515B1 (hu) 1996-02-09 2016-10-28 Abbvie Biotechnology Ltd Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai
GB9610967D0 (en) 1996-05-24 1996-07-31 Cambridge Antibody Tech Specific binding members,materials and methods
EP0812913A3 (en) 1996-06-12 1999-08-04 Smithkline Beecham Corporation HR-1 receptor, a receptor of the cytokine receptors family
AU6450196A (en) 1996-06-12 1998-01-07 Human Genome Sciences, Inc. Hr-1 receptor
WO1997047741A1 (en) 1996-06-12 1997-12-18 Smithkline Beecham Corporation Hr-1 receptor
AUPO224696A0 (en) 1996-09-11 1996-10-03 Amrad Operations Pty. Limited A novel haemopoietin receptor and genetic sequences encoding same
EP1005552A1 (en) 1997-01-16 2000-06-07 Genetics Institute, Inc. Member of the hematopoietin receptor superfamily
US6350892B1 (en) 1997-09-23 2002-02-26 Bristol-Myers Squibb Company Trifluoromethyl ketone analogs as selective cPLA2 inhibitors
US20010025022A1 (en) 1997-11-26 2001-09-27 Kikly Kristine Kay Hnovilr
US7198789B2 (en) 1998-03-17 2007-04-03 Genetics Institute, Llc Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
US7189400B2 (en) 1998-03-17 2007-03-13 Genetics Institute, Llc Methods of treatment with antagonists of MU-1
US6057128A (en) 1998-03-17 2000-05-02 Genetics Institute, Inc. MU-1, member of the cytokine receptor family
EP1088831A4 (en) 1998-06-24 2003-01-02 Chugai Pharmaceutical Co Ltd HEMOPOIETIN RECEPTOR PROTEINS
AU5104799A (en) 1998-08-04 2000-02-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Novel orphan cytokine receptors
US6803451B2 (en) * 1998-09-23 2004-10-12 Zymogenetics, Inc. Cytokine receptor zalpha11 polypeptides
ES2329741T3 (es) 1998-09-23 2009-11-30 Zymogenetics, Inc. Receptor de citoquinas zalpha11.
US6576744B1 (en) 1998-09-23 2003-06-10 Zymogenetics, Inc. Cytokine receptor zalpha11
US6355788B1 (en) * 1998-10-15 2002-03-12 Zymogenetics, Inc. Follistatin-related protein zfsta2
EP1124851A1 (en) 1998-11-06 2001-08-22 Smithkline Beecham Corporation Hnovilr
US6307024B1 (en) * 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
KR100743640B1 (ko) * 1999-03-09 2007-07-27 지모제넥틱스, 인코포레이티드 신규한 사이토킨 ｚａｌｐｈａ 11 리간드
KR20120091477A (ko) 1999-03-25 2012-08-17 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
US20020090680A1 (en) 1999-05-18 2002-07-11 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel IL-9/IL-2 receptor-like molecules and uses thereof
WO2000069880A1 (en) 1999-05-18 2000-11-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Il-9/il-2 receptor-like molecules and uses thereof
CN1371416B (zh) 1999-08-24 2012-10-10 梅达里克斯公司 人ctla-4抗体及其应用
WO2001027279A1 (en) 1999-10-12 2001-04-19 Cambridge Antibody Technology Human anti-adipocyte monoclonal antibodies and their use
MXPA02005058A (es) 1999-11-18 2002-11-07 Schering Corp Proteinas de mamiferos receptoras, reactivos y metodos relacionados.
EP1252143A1 (en) 2000-01-27 2002-10-30 American Cyanamid Company Method for preparing alpha-sulfonyl hydroxamic acid derivatives
AU2001253127A1 (en) 2000-04-05 2001-10-23 Zymogenetics Inc. Soluble zalpha11 cytokine receptors
AU6308801A (en) * 2000-05-11 2001-11-20 Genetics Inst Mu-1, member of the cytokine receptor family
ES2609016T3 (es) * 2000-06-16 2017-04-18 Human Genome Sciences, Inc. Anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a BLyS
NZ532021A (en) 2001-10-04 2008-05-30 Genetics Inst Llc Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
ES2334338T3 (es) 2001-11-05 2010-03-09 Zymogenetics, Inc. Antagonistas de il-21.
US20040016010A1 (en) 2002-04-17 2004-01-22 Marion Kasaian IL-21 receptor knockout animal and methods of use thereof
US7314623B2 (en) 2002-07-15 2008-01-01 Wyeth Methods and compositions for modulating T helper (Th) cell development and function
KR20050119120A (ko) 2003-03-14 2005-12-20 와이어쓰 인간 ⅰｌ-21 수용체에 대한 항체 및 그것의 용도
JP2006523682A (ja) 2003-03-21 2006-10-19 ワイス インターロイキン−２１／インターロイキン−２１受容体のアゴニストを用いた免疫学的障害の治療
RU2006138704A (ru) 2004-05-19 2008-06-27 Вайет (Us) Модуляция производства иммуноглобулина и атопические расстройства
BRPI0514138A (pt) 2004-08-05 2008-05-27 Wyeth Corp método para tratar, melhorar, ou prevenir um distúrbio, proteìna de fusão, vetor, célula hospedeira recombinante, método para produzir uma proteìna de fusão, composição farmacêutica, e, métodos para transplantar/enxertar um órgão, tecido, célula ou grupo de células em um indivìduo mamìfero, e para tratar, prevenir ou melhorar rejeição de transplante/enxerto em um receptor de transplante/enxerto mamìfero
GT200600148A (es) 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
WO2009100035A2 (en) 2008-02-01 2009-08-13 Wyeth Interleukin-21 (il-21) and il-21 receptor (il-21r) modulation of regulatory t cells and forkhead box p3 (foxp3)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102105491A (zh) * 2008-05-23 2011-06-22 惠氏有限责任公司 白介素-21受体结合蛋白
CN107261151A (zh) * 2011-04-29 2017-10-20 西莱克塔生物科技公司 用于降低抗体应答的致耐受性合成纳米载体
CN107343959A (zh) * 2011-04-29 2017-11-14 西莱克塔生物科技公司 用于降低抗体应答的致耐受性合成纳米载体
CN106794129A (zh) * 2014-04-08 2017-05-31 波士顿制药有限公司 对il‑21具有特异性的结合分子及其用途
US10588969B2 (en) 2014-04-08 2020-03-17 Boston Pharmaceuticals, Inc. Antibodies specific for IL-21 and uses thereof
CN106794129B (zh) * 2014-04-08 2020-05-12 波士顿制药有限公司 对il-21具有特异性的结合分子及其用途
US11529415B2 (en) 2014-04-08 2022-12-20 Boston Pharmaceuticals Inc. Antibodies specific for IL-21 and uses thereof
CN108473950A (zh) * 2015-10-30 2018-08-31 美国政府卫生与公众服务部 靶向癌症治疗

Also Published As

Publication number Publication date
AU2004221876B2 (en) 2011-05-26
NO20054170L (no) 2005-12-05
CO5660297A2 (es) 2006-07-31
CA2518371A1 (en) 2004-09-30
ATE456581T1 (de) 2010-02-15
EP1603949A2 (en) 2005-12-14
JP4914209B2 (ja) 2012-04-11
US20040265960A1 (en) 2004-12-30
JP2007525159A (ja) 2007-09-06
US7495085B2 (en) 2009-02-24
RU2005131852A (ru) 2006-04-20
NO20054170D0 (no) 2005-09-07
US20100297151A1 (en) 2010-11-25
NZ542306A (en) 2008-04-30
DE602004025332D1 (de) 2010-03-18
KR20050119120A (ko) 2005-12-20
AR043616A1 (es) 2005-08-03
CN102040662A (zh) 2011-05-04
AU2004221876A1 (en) 2004-09-30
WO2004083249A3 (en) 2004-12-09
ZA200507067B (en) 2006-12-27
ES2340280T3 (es) 2010-06-01
CL2004000534A1 (es) 2005-03-04
WO2004083249A2 (en) 2004-09-30
EP1603949B8 (en) 2010-03-10
EP1603949B9 (en) 2011-02-02
EP1603949B1 (en) 2010-01-27
US8143385B2 (en) 2012-03-27
EP2184298A1 (en) 2010-05-12
MXPA05009556A (es) 2005-11-16
BRPI0408315A (pt) 2006-03-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1777621A (zh) 抗人il－21受体的抗体及其应用
CN1788019A (zh) 抗gdf－8 的中和抗体及其用途
CN1753912A (zh) 抗pd－1抗体及其用途
EP1810979B1 (en) STABILIZED HUMAN IgG4 ANTIBODIES
CN101426816B (zh) 抗人白介素22的抗体及其用途
CN110082533B (zh) 用于免疫相关疾病的治疗的新组合物和方法
KR20200083574A (ko) Cd137 및 psma에 결합하는 분자
KR20180132751A (ko) Bcma 결합 분자 및 그의 사용 방법
JP2020515251A (ja) Ｂ７−ｈ３抗体、その抗原結合フラグメント、及びそれらの医学的使用
CN103958547A (zh) 具有促进抗原清除的FcRn结合结构域的治疗性抗原结合分子
CN1820026A (zh) 作为选择性IFN－γ途径抑制剂的人抗IFN－γ中和性抗体
CN1656122A (zh) 人源抗白细胞介素5单克隆抗体及其制备方法和包含这些抗体的组合物
CN1620468A (zh) 新的抗igf－ir抗体及其应用
CN1950399A (zh) 免疫原性较弱的结合分子
CN1839157A (zh) 抗白介素－22抗体及其应用
CN1439022A (zh) 抗协同刺激信号转导分子ailim的人单克隆抗体及其药物用途
TW201202419A (en) Antigen-binding molecules that promote antigen clearance
CN101076542A (zh) 特异性针对肝细胞癌和其他癌的抗体及其用途
CN1838968A (zh) 针对甲状旁腺激素(pth)之抗体和其用途
CN103339147A (zh) 抗il-18抗体和其用途
CN102149403A (zh) 利用白介素-21受体结合蛋白的治疗方法
CN1780911A (zh) 人抗人白介素－18抗体及其片断和它们的利用方法
CN1809589A (zh) Gitr配体和gitr配体相关分子和抗体及其应用
US20230203157A1 (en) Bispecific molecules for selectively modulating t cells
KR20230078657A (ko) 자가면역 질환 및 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1087128

Country of ref document: HK

C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Open date: 20060524

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1087128

Country of ref document: HK