CN1838968A - 针对甲状旁腺激素(pth)之抗体和其用途 - Google Patents

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Abstract

本文所述的本发明实施例涉及针对抗原甲状旁腺激素(PTH)的抗体和所述抗体的用途。具体来讲，在一些实施例中，提供针对抗原PTH的完全人类单克隆抗体。在另外的实施例中，本发明提供编码重链和轻链免疫球蛋白分子的核苷酸序列，和包含重链和轻链免疫球蛋白分子的氨基酸序列，尤其为对应于跨越构架区和/或互补判定区(CDR)，尤其为自FR1至FR4或CDR1至CDR3的相邻重链和轻链序列的序列。

Description

针对甲状旁腺激素(PTH)之抗体和其用途
技术领域
本文所述的本发明的实施例涉及针对抗原甲状旁腺激素(PTH)的抗体和所述抗体的用途。具体来讲，根据本文所述的本发明实施例，提供针对抗原PHT的完全人类单克隆抗体(mAb)。本发明提供编码重链和轻链免疫球蛋白分子的核苷酸序列，和包含重链和轻链免疫球蛋白分子的氨基酸序列，尤其为对应于跨越构架区和/或互补判定区(CDR)，尤其为自FR1至FR4或CDR1至CDR3的相邻重链和轻链序列的序列。发现本发明的抗体可用作治疗剂并用于治疗与PTH过多产生相关的疾病。
背景技术
甲状旁腺是内分泌系统的一部分并产生甲状旁腺激素(PTH)。PTH调节血流中钙、磷和镁的含量，从而维持这些物质的适当平衡，这是正常的骨矿化所必需的。长期、过多地产生PTH称为甲状旁腺功能亢进(HPT)。甲状旁腺激素的过多产生导致血钙含量上升和血磷酸盐(blood phosphate)含量下降。钙自骨中移除且胃肠(GI)道对钙的吸收增加。肾脏通过在尿中分泌过多的钙来试图补偿增加的血钙含量，这可导致形成肾结石。PTH含量增加的作用不仅可见于肾脏中，而且可见于骨骼、胃肠、神经系统和肌肉中(R.S.Cotran等人，编辑，Robbim Pathologic Basis of Disease 1246-47(第4版，W.B.Saunders Co.，Philadelphia 1989)。
在原发性甲状旁腺功能亢进中，因为存在肿瘤、甲状旁腺腺瘤(约80％)，或较为不常见由甲状旁腺(约15％)增生或癌症(约5％)而出现PTH分泌增加。由于血钙含量上升所引发的症状可包括肾结石、骨痛、疲劳、厌食、恶心和呕吐(L.M.Tiemey，Jr.，等人编辑，Current Medical Diagnosis and Treatment 1001-02(第35版，Appleton & Lange，Stamford，CT 1996))。目前对于原发性HPT的医疗处理是不能令人满意的，因为目前没有可对甲状旁腺所释放的PTH产生持续障碍的药剂。手术移除部分或全部甲状旁腺是较佳的治疗，尽管手术后可能出现诸如喉神经损伤和长时间低血钙的并发症。
在继发性甲状旁腺功能亢进中，PTH的过多产生通常是维生素D缺乏(佝偻病和骨软化症)或慢性肾衰竭(CRF)的结果。当继发性HPT是由肾衰竭引起时，病理特征为低血钙和高磷酸盐血症以及对PTH反应的相对无力。这种对PTH功能的抵抗导致甲状旁腺增生并且由于腺体努力重建正常血钙和正常血磷酸盐而过多制造PTH。对PTH含量的抵抗是由于肾脏中不能制造钙三醇(维生素D的活化形式)并且不能由肾脏分泌磷酸盐而引发。钙三醇直接作用于甲状旁腺以抑制PTH的产生并且直接作用于GI道以促进钙吸收。因此缺少钙三醇会导致血清PTH含量增加。高磷酸盐含量也直接作用于甲状旁腺组织以诱导PTH表达且可直接与钙相互作用以维持低血钙。缺少这些负反馈机制说明大多数在CRF中所见的对PTH的抵抗(Fauci，A.S.等人，编辑.，Harrison′s Principles ofInternal Medicine 2214-47(第14版，McGraw-Hill Co.1998))。在严重的继发性HPT中，极度过高的PTH含量掩盖了骨对所述激素的抵抗，从而导致高血清钙和磷酸盐含量，其可引发皮肤、软组织和动脉(钙化防御)中的弥漫性钙化。所述钙化可导致皮肤的疼痛缺血性坏死和坏疽、心律失常和肺衰竭(Tierney等人，前述于1003)。
目前，用诸如碳酸钙的磷酸盐结合剂并用超生理含量的诸如钙三醇和多西骨化醇(doxercalciferol)的维生素D类似物对继发性HPT进行医学治疗。并非所有患者皆对钙三醇产生反应并且高血钙是治疗常见的并发症(Felsenfeld，A.J.，J.Am.Soc.Nephrology8(6)：993-1004(1997))。定为钙受体别构调节剂的拟钙作用剂亦为临床研发中的可行疗法。
PTH是甲状旁腺分泌的84氨基酸的肽。其氨基酸序列(Keutman，H.T.等人，Biochemistry 17：5723-29(1978))和相关基因的核苷酸序列(Hendy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：7365-69(1981))是已知的。PTH通过PTH/甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)受体作用以促进骨再吸收并且降低钙排泄。人类甲状旁腺激素(hPTH)作为大体上完整的hPTH1-84和其片段循环。据信全长hPTH1-84和片段hPTH1-84皆具有生物活性，而据信片段hPTH35-84无活性。缺少PHT N末端的片段(hPTH7-84或hPTH7-34)不仅无活性，而且在体内抑制生物活性PTH(Horiuchi等人，Science 220：1053-55(1983))。
Lindall在美国专利第4,341,755号中描述一种哺乳动物血清中的PTH的抗体放射免疫分析。在分析中使用对于人类PTH的65-84部分具有高亲和力的鸡抗体。Adermann等人在美国专利第6,030,790号中揭示通过将hPTH1-37的各种片段注射给非指定的动物而产生的多克隆抗体，所述片段适用于生物活性PTH的分析。Japan Tobacco，Inc.在1998年11月27日申请的日本专利申请案JP 98337263中揭示对人类PTH或其片段具有反应性的人类单克隆抗体。然而，所揭示的抗体在治疗上并不适当，这可能是由于所述抗体对人类PTH的亲和力不足的事实。
研发用于治疗应用的PTH单克隆抗体或多克隆抗体的障碍已经描述并且认为是亲和力和免疫原性不足的结果((Bradwell，A.R.等人，Lancet 353：370-73(1999))。Bradwell等人成功地以PTH使患有甲状旁腺癌的患者免疫并且所述患者产生对抗PTH的自身抗体。然而，倘若存在免疫反应异质性和破坏对自体抗原耐受性的需要，由于将PTH滴定至甲状旁腺功能亢进患者群体中的个体目标范围的临床需要，临床免疫方法尚未广泛适用。因此，治疗上有效的抗PTH抗体的需要仍未满足。
发明内容
本文描述的本发明涉及结合PTH且影响PTH功能的单克隆抗体。因此本发明的实施例提供从诊断和治疗观点来看具有所要特性的人类抗PTH抗体和抗PTH抗体制备物。具体来讲，本发明的一实施例提供具有提供治疗功效特征的抗PTH抗体，所述功效包括(但不限于)与PTH的强结合亲和力，中和体外PTH的能力和在体内产生长时间PTH中和作用的能力。
本发明的一实施例为结合PTH且具有选自以下SEQ ID NO组成的群组的重链氨基酸序列的完全人类单克隆抗体：SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74和78。在一实施例中，所述抗体进一步包含选自以下SEQ ID NO组成的群组的轻链氨基酸序列：SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76和80。
本发明的另一实施例是具有包含SEQ ID NO：2的重链可变区序列和包含SEQ IDNO：4的轻链可变区序列的分离人类单克隆抗体。
本发明的另一实施例是结合PTH的完全人类抗体，其包含具有包含图3所示序列的CDR的重链氨基酸序列。应注意CDR判定可由所属领域的一般技术人员容易地完成。通常，CDR如Kabat等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest，1-3卷(第5版，NIH Publication 91-3242，Bethesda MD 1991)中所定义呈现于本文所述的本发明中。
本发明的另一实施例是结合PTH且包含具有包含图4所示序列的CDR的轻链氨基酸序列的完全人类抗体。
本发明的另一实施例是结合PTH且其包含具有包含图3所示序列的CDR的重链胺基序列和具有包含图4所示序列的CDR的轻链氨基酸序列的完全人类抗体。
本发明的另一实施例是分离的高亲和力抗PTH抗体。在本发明的另一实施例中，单剂量的所述高亲和力抗体产生血清中未结合PTH含量自甲状腺功能亢进含量至正常或接近正常含量的降低作用持续24至36小时，较佳48至60小时，更佳72至84小时。本发明的另一实施例是抗PTH抗体，其可在单次3mg/kg静脉内剂量的抗体后在通过皮下Alzet渗透泵接受50微克/公斤/天人类PTH(1-34)的正常Sprague-Dawley大鼠中降低未结合PTH含量至少50％持续至少48小时，其由直接分析或由PTH生物活性的生物标记物来测量。
本发明的另一实施例是与本发明的完全人类抗体交叉竞争结合于PTH的抗体。在本发明的另一实施例中，所述完全人类抗体为抗PTH mAb 183。
本文所述的本发明的实施例是以产生并鉴定特异性结合于PTH的分离抗体为基础的。PTH在甲状腺功能亢进中以高含量表达。抑制PTH的生物活性可推迟由原发性甲状腺功能亢进和继发性甲状腺功能亢进所引发症状的进展。
因此本文所述的本发明的一实施例提供结合于PTH的分离抗体，或所述抗体的片段。如所属领域中已知，所述抗体有利地可为(例如)单克隆、嵌合和/或人类抗体。本文所述的本发明实施例也提供用于产生这些抗体的细胞。
应了解本发明的实施例并不限于任何抗体或产生或制造方法的特殊形式。举例而言，抗PTH抗体可为全长抗体(例如具有完整的人类Fc区)或抗体片段(例如Fab、Fab’或F(ab’)2)。此外，抗体可自分泌所述抗体的杂交瘤制造，或自已用编码所述抗体的基因转型或转染的重组产生细胞制造。
本发明的其它实施例包括编码任何本文所述抗体的分离核酸分子，具有编码任何所述抗PTH抗体的分离核酸分子的载体，用任何所述核酸分子转型的宿主细胞。此外，本发明的一实施例是一种通过在一定条件下培养宿主细胞产生抗PTH抗体的方法，在所述条件下核酸分子经表达而产生抗体继而回收抗体。
本发明的另一实施例包括一种通过用人类PTH或其片段和一或多种同源序列或其片段使哺乳动物免疫来产生针对PTH的高亲和力抗体的方法。
本发明的另一实施例包括一种诊断病症或病症的方法，其中使用根据本文所述的本发明制造的抗体检测患者样本中的PTH含量。在一实施例中，患者样本为血液或血清。在另一实施例中，呈现用于鉴定危险因素、诊断疾病并将疾病分级的方法，其涉及使用抗PTH抗体(诸如下文中详细论述的mAb 183)鉴定PTH的过度表达。
本发明的其它实施例包括医药组合物，其包含有效量的本发明的抗体与医药上可接受的载剂或稀释剂。在另外的实施例中，抗PTH抗体或其片段与治疗剂结合。所述治疗剂可为毒素或放射性同位素。所述抗体较佳可用于治疗诸如(例如)原发性和继发性甲状旁腺功能亢进的疾病。
在另一实施例中，提供一种治疗与PTH过度表达相关的疾病或病症的方法，其包含投予患者有效量的抗PTH抗体。在一实施例中，患者为哺乳动物，较佳为人类患者，在另一实施例中，所述方法包含治疗原发性和继发性甲状旁腺功能亢进。
在另一实施例中，本发明包含一种用于检测哺乳动物组织或细胞中的PTH以筛选用于甲状旁腺功能亢进的分析试剂盒，其包含结合PTH的抗体和用于指示所述抗体与抗原反应的工具(若存在)。抗体较佳为单克隆抗体。在一实施例中，结合PTH的抗体是经标记的。在另一实施例中，抗体为未经标记的第一抗体并且用于指示反应的工具包含经标记的第二抗体，其为抗免疫球蛋白。抗体较佳用选自以下各物组成的群组的标记物进行标记：荧色物、酶、放射性核素和不透射线的物质。
在另一实施例中，本发明包括一种用于治疗与患者的PTH过度表达相关的疾病或病症的方法，其包含投予患者有效量的抗PTH抗体。所述方法可在体内执行。另外的实施例包括用于治疗与PTH过度表达相关的疾病或病症的方法，其可包括鉴定需要治疗的哺乳动物的PTH过度表达并且投予哺乳动物治疗有效剂量的抗PTH抗体。在另一实施例中，本发明提供一种制造物品，其包含容器，包含含有抗PTH抗体的组合物，和指示使用所述组合物治疗特征为PTH过度表达的甲状旁腺功能亢进的包装说明书或标签。哺乳动物(较佳且更佳为人类)接受抗PTH抗体。在一较佳实施例中，治疗原发性和继发性甲状旁腺功能亢进。
此外，本文所述的核酸和其片段及变异体可用于(作为非限制性实例)(a)指导相应编码蛋白、多肽、片段和变异体(作为重组体或异种基因产物)的生物合成，(b)作为用于检查并定量本文所揭示的核酸的探针，(c)作为用于制造反义分子的序列模板，和其类似物。所述用途更为完全地描述于以下揭示内容中。
此外，可以如下方式使用本文述的蛋白和多肽，和其片段及变异体，其包括(a)充当刺激产生抗PTH抗体的免疫原，(b)在致免疫分析中捕获针对所述抗体的抗原，(c)作为用于筛选结合本文所述PTH多肽的物质的目标，和(d)PTH特异性抗体的目标以使得以抗体进行的治疗影响由目标调节的分子和/或细胞功能。
在一些实施例中，投予抗PTH抗体，继而自血液清除药剂以移除循环的抗体。
在一些实施例中，可修饰抗PTH抗体以增强其固定补体并参与补体依赖性细胞毒性(CDC)的能力。在一实施例中，可(诸如)通过氨基酸取代修饰抗PTH抗体以改变抗体清除。举例而言，某些氨基酸取代可加速抗体从身体的清除。或者，氨基酸取代可减缓抗体从身体的清除。在其它实施例中，可改变抗PTH抗体使得其从身体略微快速地排除。
另一实施例是抗PTH抗体于制造供治疗诸如甲状旁腺功能亢进的疾病的医药品中的用途。在一实施例中，所述疾病为原发性甲状腺功能亢进。在一替代实施例中，所述疾病为继发性甲状旁腺功能亢进。另一实施例是抗PTH抗体于制造供降低动物中循环PTH含量的医药品中的用途。
附图说明
图1为显示由荧光成像平板阅读器(FLIPR)上的钙移动分析所测定的抗PTH mAb183中和数据的图表。
图2为显示通过逆转大鼠中对注入的人类PTH(34mer)的血钙过多反应所测量的抗PTH mAb 183对人类PTH体内中和的图表。
图3为根据本发明产生的抗PTH mAb的重链可变区的氨基酸序列比对，其中具有其相关种系可变区序列。
图4为根据本发明产生的抗PTH mAb的轻链可变区的氨基酸比对，其中具有其相关种系可变区序列。
具体实施方式
本文所述的本发明的实施例涉及完全人类抗PTH抗体和其用途。所述完全人类抗体具有相对于含有非人类序列的抗体药物动力学和安全概况经改良的优点，且因此不预期在人类中有免疫原性。通过使用本文所述的结合筛选技术的双抗原免疫策略，已发现在体内具有罕见亲和力和延长作用持续时间的单克隆抗体在治疗应用中具有功效。此外，本文提供的体内中和作用研究证明抗PTH抗体在治疗上是高度可行的，其较佳应在奈摩尔浓度(nanomolar)范围且更佳在皮摩尔浓度(picomolar)范围内拥有高亲和力。已发现本文所述的本发明的抗PTH抗体较佳且特异性地结合PTH。
因此，本发明的实施例提供结合PTH的分离抗体，或所述抗体的片段。如所属领域中所知，抗体可有利地为(例如)单克隆、嵌合和/或人类抗体。本发明的实施例也提供用于产生这些抗体的细胞。
此外，本发明的实施例提供使用这些抗体进行疾病的诊断或治疗。举例而言，本发明的实施例提供用于抑制与甲状旁腺功能亢进相关的PTH表达的方法和抗体。较佳使用所述抗体治疗原发性和继发性甲状腺功能亢进。与所述治疗相关，提供包含本文所述的本发明抗体的制造物品。此外，提供包含根据本文所述的本发明抗体的分析试剂盒用于筛选甲状腺功能亢进。
本文所述的本发明抗体(诸如抗PTH mAb 183抗体)拥有高亲和力、显著的中和潜力和持续的半衰期和延长的作用持续时间。根据本文所述的本发明抗PTH抗体(诸如抗PTH mAb 183抗体)降低在单次3mg/kg静脉内剂量的抗体后通过皮下Alzet渗透泵接受50微克/公斤/天人类PTH(1-34)的正常Sprague-Dawley大鼠中的未结合PTH含量至少50％持续至少48小时，其由直接分析或由PTH生物活性的生物标记物来测量。
因此，本文所述的本发明抗体拥有治疗功效。举例而言，单剂量的根据本发明的抗体(诸如抗PTH mAb 183抗体)将会使患者血清中的未结合PTH含量自甲状腺功能亢进含量降低至正常或接近正常含量持续24至36小时，较佳48至60小时，且更佳72至84小时。类似地，抗予至少一次剂量本发明的抗PTH抗体(诸如抗PTH mAb 183抗体)能够将患者中循环PTH含量相对于投药前的含量降低约25％，较佳约50％，且更佳为约75％，且较佳维持所述降低作用持续约24至36小时，较佳持续约48至60小时，且更佳持续约72至84小时。
下文中另外详细提供关于本发明抗体的其它实施例、特点和其类似物。
序列表
序列表中提供代表性人类抗PTH抗体的重链和轻链可变区核苷酸和氨基酸序列，其内容概括于下表1中。
                   表1
  MAbIDNo.：   序列   SEQIDNO：
  183   编码重链可变区的核苷酸序列   1
  编码重链可变区的氨基酸序列   2
  编码轻链可变区的核苷酸序列   3
  编码轻链可变区的氨基酸序列   4
  262   编码重链可变区的核苷酸序列   5
  编码重链可变区的氨基酸序列   6
  编码轻链可变区的核苷酸序列   7
  编码轻链可变区的氨基酸序列   8
  57   编码重链可变区的核苷酸序列   9
  编码重链可变区的氨基酸序列   10
  编码轻链可变区的核苷酸序列   11
  编码轻链可变区的氨基酸序列   12
  45   编码重链可变区的核苷酸序列   13
  编码重链可变区的氨基酸序列   14
  编码轻链可变区的核苷酸序列   15
  编码轻链可变区的氨基酸序列   16
  026   编码重链可变区的核苷酸序列   17
  编码重链可变区的氨基酸序列   18
  编码轻链可变区的核苷酸序列   19
  编码轻链可变区的氨基酸序列   20
  140   编码重链可变区的核苷酸序列   21
  编码重链可变区的氨基酸序列   22
  编码轻链可变区的核苷酸序列   23
  编码轻链可变区的氨基酸序列   24
  11   编码重链可变区的核苷酸序列   25
  编码重链可变区的氨基酸序列   26
  编码轻链可变区的核苷酸序列   27
  编码轻链可变区的氨基酸序列   28
  86   编码重链可变区的核苷酸序列   29
  编码重链可变区的氨基酸序列   30
  编码轻链可变区的核苷酸序列   31
  编码轻链可变区的氨基酸序列   32
  124   编码重链可变区的核苷酸序列   33
  编码重链可变区的氨基酸序列   34
  编码轻链可变区的核苷酸序列   35
  编码轻链可变区的氨基酸序列   36
  275   编码重链可变区的核苷酸序列   37
  编码重链可变区的氨基酸序列   38
  编码轻链可变区的核苷酸序列   39
  编码轻链可变区的氨基酸序列   40
  96   编码重链可变区的核苷酸序列   41
  编码重链可变区的氨基酸序列   42
  编码轻链可变区的核苷酸序列   43
  编码轻链可变区的氨基酸序列   44
238   编码重链可变区的核苷酸序列   45
  编码重链可变区的氨基酸序列   46
  编码轻链可变区的核苷酸序列   47
  编码轻链可变区的氨基酸序列   48
  214   编码重链可变区的核苷酸序列   49
  编码重链可变区的氨基酸序列   50
  编码轻链可变区的核苷酸序列   51
  编码轻链可变区的氨基酸序列   52
  225   编码重链可变区的核苷酸序列   53
  编码重链可变区的氨基酸序列   54
  编码轻链可变区的核苷酸序列   55
  编码轻链可变区的氨基酸序列   56
  195   编码重链可变区的核苷酸序列   57
  编码重链可变区的氨基酸序列   58
  编码轻链可变区的核苷酸序列   59
  编码轻链可变区的氨基酸序列   60
  168   编码重链可变区的核苷酸序列   61
  编码重链可变区的氨基酸序列   62
  编码轻链可变区的核苷酸序列   63
  编码轻链可变区的氨基酸序列   64
  163   编码重链可变区的核苷酸序列   65
  编码重链可变区的氨基酸序列   66
  编码轻链可变区的核苷酸序列   67
  编码轻链可变区的氨基酸序列   68
  113   编码重链可变区的核苷酸序列   69
  编码重链可变区的氨基酸序列   70
  编码轻链可变区的核苷酸序列   71
  编码轻链可变区的氨基酸序列   72
  302   编码重链可变区的核苷酸序列   73
  编码重链可变区的氨基酸序列   74
  编码轻链可变区的核苷酸序列   75
  编码轻链可变区的氨基酸序列   76
  168g2/183k   编码重链可变区的核苷酸序列   77
  编码重链可变区的氨基酸序列   78
  编码轻链可变区的核苷酸序列   79
  编码轻链可变区的氨基酸序列   80
定义
除非另外定义，与本文所述的本发明相关使用的科学和技术术语应具有所属领域的一般技术人员所通常理解的含义。另外，除非文中另外要求，否则单数术语应包括复数且复数术语应包括单数。通常，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学和蛋白质和寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交作用相关使用的名称和其技术为所属领域中所熟知并通常所用的那些。将标准技术(例如电穿孔、脂质转染)用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转型。根据厂商说明或如所属领域中通常所实行或如本文中所述来执行酶反应和纯化技术。通常根据所属领域中熟知的常规方法且如贯穿本发明说明书中所引用且论述的各种通用和更特定的参考文献中所述来执行前述技术和程序。参见(例如)Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第2版，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.1989)，其以引用的方式并入本文中。与本文中所述的分析化学、合成有机化学和医疗及医药化学相关所使用的名称和其实验室程序和技术为所属领域所熟知并通常所用的那些。将标准技术用于化学合成、化学分析、医药制造、配方设计和传递和治疗患者。
如根据本发明揭示内容所用，除非另外指示，否则下列术语应理解为具有以下含义：
本文中所用的术语“分离多核苷酸”应意谓基因组、cDNA或合成起源的多核苷酸或其一些组合，由于其起源，“分离多核苷酸”(1)与自然中于其中发现“分离多核苷酸”的多核苷酸的所有或一部分无关联，(2)可操作地连接至自然中不能连接的多核苷酸，或(3)自然中不作为更大序列的部分存在。
本文中引用的术语“分离蛋白”意谓cDNA、重组RNA或合成起源的蛋白质或其一些组合，由于其起源或衍生源，“分离蛋白”(1)与天然中发现的蛋白质无关联，(2)无来自相同来源的其它蛋白质，例如无鼠科蛋白，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)天然中并不存在。
本文中作为通用术语使用的术语“多肽”是指多肽序列的天然蛋白、片段或类似物。因此，天然蛋白、片段和类似物为多肽属的种类。根据本发明较佳的多肽包含人类重链免疫球蛋白分子和人类κ轻链免疫球蛋白分子，以及由包含重链免疫球蛋白分子与轻链免疫球蛋白分子(诸如κ轻链免疫球蛋白分子)的组合所形成的抗体分子，且反之亦然，以及其片段和类似物。
本文中所用，用于一事物的术语“自然存在”是指事物可在自然中找到的事实。举例而言，存在于生物体(包括病毒)中，可自自然来源分离且未由人在实验室或它处有意识地修饰的多肽或多核苷酸序列是自然存在的。
本文中所用的术语“可操作地连接”是指如此描述的组分位置处于允许其以其希望的方式发挥功能的关系中。“可操作地连接”至编码序列的控制序列以在与控制序列相适合的条件下达成编码序列表达的方式结合。
本文中所用的术语“控制序列”是指实现与其结合的编码序列的表达和处理所必需的多核苷酸序列。所述控制序列的性质取决于宿主生物体是不同的；在原核生物中，所述控制序列通常包括启动子、核糖体结合部位和转录终止序列；在真核细胞中，所述控制序列通常包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”意欲在最低限度上包括所有表达和处理中必需存在的组份，且也可包括其它的存在有利的组份，例如前导序列和融合搭配序列。
本文中引用的术语“多核苷酸”是指长度至少为10个碱基的聚合形式的核苷酸，其为核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的经修饰形式。所述术语包括DNA的单链或双链形式。
本文中引用的术语“寡核苷酸”包括自然存在和经修饰的由自然存在和非自然存在的寡核苷酸键连接在一起的核苷酸。寡核苷酸是通常包含200或更少碱基长度的多核苷酸的部分。寡核苷酸长度较佳为10至60个碱基且长度最佳为12、13、14、15、16、17、18、19或20至40个碱基。寡核苷酸通常为单链而(例如)用于探针，但寡核苷酸也可为双链而(例如)用于建构基因突变体。本发明的寡核苷酸可为正义或反义寡核苷酸。
本文引用的术语“自然存在的核苷酸”包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。本文引用的术语“经修饰的核苷酸”包括具有经修饰或经取代的糖基的核苷酸和其类似物。本文所引用的术语“寡核苷酸键”包括诸如以下的寡核苷酸键：硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯、磷酰氨酸酯和其类似物。参见(例如)LaPlanche等人，Nucl.Acids Res.14：9081(1986)；Stec等人，J.Am.Chem.Soc.106：6077(1984)；Stein等人，Nucl.Acids Res.16：3209(1988)；Zon等人，Anti-Cancer DrugDesign 6：539(1991)；Zon等人，Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach，87-108页(F.Eckstein，Ed.，Oxford University Press，Oxford England(1991))；Stec等人，美国专利第5,151,510号；Uhlmann和Peyman Chemical Reviews 90：543(1990)，其揭示内容以引用的方式并入本文中。若需要，寡核苷酸可包括用于检测的标记。
本文中所引用的术语“选择性杂交”意谓可检测且特异性的结合。在将可检测的对非特异性核酸结合的可估计量降至最低的杂交和洗涤条件下，将根据本发明的多核苷酸、寡核苷酸和其片段选择性杂交至核酸链。可使用高度严格的条件达成所属领域中已知且于本文中论述的选择杂交条件。通常，本发明的多核苷酸、寡核苷酸和片段与相关核酸序列之间的核酸序列同源性为至少80％，且更通常具有较佳至少85％、90％、95％、99％和100％的增加的同源性。若两氨基酸序列之间部分或完全相同，则其为同源的。举例而言，85％同源性意谓当将两序列比对进行最大匹配时85％的氨基酸相同。在最大匹配中允许存在间隙(在进行匹配的两序列的任一者中)，间隙长度较佳为5或更小，更佳为2或更小。或者且较佳，两蛋白序列(或源自长度为至少30个氨基酸的所述序列的多肽序列)同源，当本文中使用此术语时，其具有大于5(标准偏差单位)的比对分值(使用具有突变数据矩阵的ALIGN程序)和6或更大的间隙罚分。参见M.O.Dayhoff，于Atlas of Protein Sequence and Structure，第5卷，101-110和附录2至第5卷，1-10(National Biomedical Research Foundation 1972)中。若两序列或其部分的氨基酸在使用ALIGN程序最佳比对时大于或等50％相同，则两序列或其部分更佳为同源的。本文中所用的术语“对应于”意谓多核苷酸序列与参考多核苷酸序列全部或部分同源(意即相同，进化上不绝对相关)，或多核苷酸序列与参考多核苷酸序列相同。相反，本文所用的术语“互补于”意谓互补序列与参考多核苷酸序列的全部或部分同源。举例而言，核苷酸序列“TATAC”对应于参考序列“TATAC”且互补于“GTATA”。
使用下列术语描述两个或两个以上多核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系：“参考序列”、“比较窗”、“序列相同(sequence identity)”、“序列相同百分数”和“大体上相同”。“参考序列”是用作序列比较基础的定义序列，参考序列可为更大序列的部分，例如作为全长cDNA或序列表中给出的基因序列的片段，或可包含完整cDNA或基因序列。通常，参考序列的长度为至少18个核苷酸或6个氨基酸，长度常为至少24个核苷酸或8个氨基酸，且长度经常为至少48个核苷酸或16个氨基酸。由于两多核苷酸或氨基酸序列可各自(1)包含两分子之间相类似的序列(意即完整多核苷酸或氨基酸序列的部分)，且(2)可进一步包含两多核苷酸或氨基酸序列之间相异的序列，两(或两个以上)分子之间的序列比较通常通过经“比较窗”比较两分子的序列以鉴定且比较序列相似性的局部区域来执行。本文中所用的“比较窗”是指至少18个相邻核苷酸位置或6个氨基酸的概念上的片段，其中多核苷酸序列或氨基酸序列可与至少18个相邻核苷酸或6个胺基序列的参考序列比较，且其中比较窗中的多核苷酸序列的部分与用于两序列最佳比对的参考序列(其不包含添加或缺失)相比可包含20％或更少的添加、缺失、取代其类似情况(意即间隙)。用于比对比较窗的最佳序列比对可由如下算法进行：Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同源算法，Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源比对算法，Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：2444(1988)的寻找相似性方法，通过计算机化执行这些算法(Wisconsin遗传学软件包版本7.0中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，(Genetics Computer Group，575Science Dr.，Madison，Wis.)，Geneworks或MacVector软件包)或通过检查；且选择由各种方法所产生的最佳比对(意即，产生比较窗上最高同源性百分数)。
术语“序列相同”意谓两核苷酸或氨基酸序列在比较窗上相同(意即以逐一核苷酸或逐一残基为基础)。术语“序列相同百分数”如下计算：通过经比较窗的比较比较两最佳比对序列，测定两序列中出现相同核酸碱基(例如A、T、C、G、U或I)或残基的位置数目而产生匹配位置的数目，以比较窗中的位置总数(意即窗大小)除匹配位置的数目，且将结果乘以100而产生序列相同百分数。本文中所用的术语“大体上相同”表示多核苷酸或氨基酸序列的特征，其中所述多核苷酸或氨基酸包含经至少18个核苷酸(6个氨基酸)位置的比较窗，常经至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位置的视窗与参考序列比较，具有至少85％序列相同性，较佳至少90至95％序列相同性，更通常为至少99％序列相同性的序列，其中序列相同性的百分数通过将参考序列经比较窗与可包括缺失或添加总计为参考序列20％或更少的序列比较来计算。参考序列可为更大序列的部分。
如本文所用，20种常规氨基酸和其缩写遵循常规用法。参见Immunology-A Synthesis(第2版，Golub，E.S.and Gren，D.R.编辑，Sinauer Associates，Sunderland，Mass.1991)，其以引用的方式并入本文中。20种常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)，人造氨基酸，诸如α-、α-双取代的氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其它非常规氨基酸也可为本文所述的本发明多肽的适宜组份。非常规氨基酸的实例包括：4-羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰基丝氨酸、N-甲酰基甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸和其它类似氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟基脯氨酸)。在本文中所用的多肽符号中，根据标准用法和常规，左手方向为氨基末端方向且右手方向为羧基末端方向。
类似地，除非另外规定，否则单链多核苷酸序列的左手端为5′端，双链多核苷酸序列的左手方向称为5′方向。初生RNA转录物的5′至3′的添加方向称为转录方向，DNA链工具有与RNA相同的序列且为RNA转录物的5′至5′端的序列区称为“上游序列”，DNA链上具有与RNA相同的序列且为RNA转录物的3′至3′端的序列区称为“下游序列”。
当用于多肽时，术语“大体上相同”意谓两肽序列在(诸如)通过GAP或BESTFTT程序使用缺陷间隙加权进行最佳比对时，共享至少80％序列相同性，较佳至少90％序列相同性，更佳至少95％序列相同性，且最佳至少99％序列相同性。较佳地，不相同的残基位置因保守氨基酸取代而不同。保守氨基酸取代是指具有类似侧链残基的互换性。举例而言，具有脂族侧链的氨基酸组群为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂族-羟基侧链的氨基酸组群为丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的氨基酸组群为天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳族侧链的氨基酸组群为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的氨基酸组群为赖氨酸、精氨酸和组氨酸；且具有含硫侧链的氨基酸组群为半胱氨酸和甲硫氨酸。较佳保守氨基酸取代组群为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。
如本文所论述，预期抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中较小变化包含于本文所述的本发明中，其限制条件为氨基酸序列中的变化维持至少75％，更佳至少80％、90％、95％，且最佳99％。具体来讲，涵盖保守氨基酸置换。保守性置换是发生于其侧链中相关的氨基酸家族中的置换。基因编码氨基酸通常分为以下家族：(1)酸性＝天冬氨酸、谷氨酸，(2)碱性＝赖氨酸、精氨酸、组氨酸，(3)非极性＝丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，和(4)不带电极性＝甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。更佳家族为：丝氨酸和苏氨酸为脂族-羟基家族，天冬酰胺和谷氨酰胺为含酰胺家族，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸为脂族家族，且苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸为芳族家族。举例而言，合理预期以异亮氨酸或缬氨酸对亮氨酸，以谷氨酸对天冬氨酸，以丝氨酸对苏氨酸的单独置换，或以结构上相关的氨基酸对氨基酸的类似置换(尤其)将不会对所得分子的结合或特性产生重要影响，若所述置换不涉及构架部位内的氨基酸。氨基酸变化是否产生功能性肽可通过分析多肽衍生物的特定活性来容易地判定。将分析详细描述于本文中。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可由所属领域的一般技术人员容易地制备。片段或类似物的较佳胺基-和羧基末端存在于功能域边界的附近。结构和功能域可通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或私人序列数据库比较来鉴定。较佳使用计算化比较方法鉴定存在于已知结构和/或功能的其它蛋白质中的序列基元或经预测的蛋白构造域。鉴定折成已知三维结构的蛋白序列的方法是已知的。Bowie等人，Science 253：164(1991)。因此，前述实例证明所属领域的技术人员可识别可用于界定根据本发明的结构和功能域的序列基元和结构构造。
较佳氨基酸取代为以下者：(1)降低蛋白水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改变形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)给予或修饰所述类似物的其它物理化学或功能特性。类似物可包括除自然存在的肽序列外的序列的各种突变蛋白质。举例而言，可(较佳在形成分子间接触的域外的多肽部分中)在自然存在的序列中进行单个或多个氨基酸取代(较佳为保守氨基酸取代)。保守氨基酸取代应大体上不改变亲本序列的结构特征(例如，置换氨基酸应不倾向于破坏亲本序列中存在的螺旋，或不倾向于毁坏作为亲本序列特征的二级结构的其它类型)。技术上识别的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton，编辑，W.H.Freeman and Company，New York 1984)，Introduction to Protein Structure(Branden，C.and Tooze，J.编辑.，Garland Publishing，New York，N.Y.1991)和Thornton等人，Nature 354：105(1991)，其以引用的方式并入本文中。
本文中所用的术语“多肽片段”是指具有胺基末端和/或羧基末端缺失，但其中剩余氨基酸序列与(例如)自全长cDNA序列推导的自然存在序列中的相应位置相同的多肽。片段通常为至少5、6、8或10个氨基酸长，较佳至少14个氨基酸长，更佳至少20个氨基酸长，通常至少50个氨基酸长，且甚至更佳至少70个氨基酸长。本文中所用术语“类似物”是指包含与推导氨基酸序列的一部分大体上相同的至少25个氨基酸的片段且具有至少一种以下特性的多肽：(1)在适当的结合条件下特异性结合PTH，(2)阻断适当PTH结合的能力，或(3)在体外或体内抑制PTH表达细胞生长的能力。通常，多肽类似物包含相对于自然存在的序列的保守氨基酸取代(或添加或缺失)。类似物通常为至少20个氨基酸长，较佳至少50个氨基酸长或更长，且通常可与全长自然存在的多肽一样长。
肽类似物常作为具有与模板肽相类似特性的非肽药物用于医药产业中。这些类型的非肽化合物称为“肽模拟物”。Fauchere，J.Adv.Drug Res.15：29(1986)，Veber和Freidinger，TINS 392页(1985)和Evans等人，J.Med Chem.30：1229(1987)，其以引用的方式并入本文中。所述化合物通常借助计算机化分子模型化来研发。可使用与治疗上可用的肽结构上类似的肽模拟物产生等效的治疗或预防作用。通常，肽模拟物与诸如人类抗体的范型(paradigm)多肽(意即具有生物化学特性或药理活性的多肽)在结构上类似，但具有一个或一个以上的肽键，其视情况通过此项领域中熟知的方法由选自以下各键组成的群组的键置换：--CH2NH--、--CH2S--、-CH2-CH2-、--CH＝CH--(顺或反)--COCH2--、--CH(OH)CH2-和--CH2SO--。可使用以相同类型的D-氨基酸对一致序列的一个或一个以上的氨基酸进行系统取代(例如D-赖氨酸代替L-赖氨酸)产生更稳定的肽。此外，包含一致序列或大体上相同的一致序列变异体的限定肽可通过此项领域中已知的方法(Rizo和Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992)，以引用的方式并入本文中)产生，例如通过添加能够形成环化肽的分子内二硫桥的内部半胱氨酸残基而产生。
“抗体”或“抗体肽”是指完整抗体，或其与完整抗体竞争特异性结合的结合片段。结合片段由重组DNA技术，或由完整抗体的酶或化学裂解来产生。结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和单链抗体。除“双特异性”或“双功能性“抗体外的抗体应理解为各自具有其结合部位相同性。当过量的抗体使受体结合于反受体的量降低至少约20％、40％、60％或80％，且更通常大于约85％(根据体外竞争结合分析测量)时，则抗体大体上抑制受体与反受体的附着。
术语“表位”包括任何能够特异性结合免疫球蛋白或T细胞受体的蛋白决定子(determinant)。表位决定子通常由分子(诸如氨基酸或糖侧链)的化学活性表面基团组成，且通常具有特定的三维结构特征，以及特定的电荷特征。据称抗体在离解常数≤1μM，较佳≤100nM且最佳≤10nM时特异性结合抗原。
本文中所用的术语“药剂”表示化合物、化合物的混合物、生物大分子或自生物材料制造的提取物。
对于本文来讲“活化”或“活性”是指保持天然或自然存在的PTH多肽的生物和/或免疫活性的PTH多肽形式，其中“生物”活性是指由天然或自然存在的PTH多肽产生的生物功能(抑制或刺激)而非诱导产生对抗天然或自然存在的PTH多肽所拥有的抗原表位的抗体的能力，且“免疫”活性是指诱导产生对抗由天然或自然存在的PTH多肽所拥有的抗原表位的抗体的能力。
“治疗”是指治疗处理和预防或防御手段，其中目标为防止或减缓(减轻)目标病理症状或病症。需要治疗者包括已患有病症者以及有倾向患有所述病症者或待防止所述病症者。
“哺乳动物”是指任何分类为哺乳动物的动物，包括人类，其它灵长类，诸如猴、黑猩猩和大猩猩，家养和畜牧动物和动物园动物、运动动物、实验室动物或宠物，诸如犬、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、家兔、啮齿动物等等。对于治疗来讲，哺乳动物较佳为人类。
本文中所用的“载剂”包括医药上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂，其在所用剂量和浓度下对暴露于其的细胞或哺乳动物无毒性。生理学上可接受的载剂经常为pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载剂的实例包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸和赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐平衡离子，诸如钠离子；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
抗体的木瓜蛋白酶消化产生两种相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，其各自具有单个表位，和残基“Fc”片段，其命名反映了其易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生“F(ab′)2”片段，其具有两个表位且仍能够交联抗原。
“Fv”是最小的抗体片段，其含有抗体完整的抗原识别和结合部位。此区域由一个重链与一个轻链可变区的紧密二聚物(非共价结合)组成。在此构型中各可变区的3个CDR相互作用而界定VH-VL二聚物表面上的表位。六个CDR共同给予抗体的抗原结合特异性。然而，举例而言，甚至单一的可变区(例如，Fv二聚物的VH或VL部分或仅包含3个特定于抗原的CDR的Fv的一半)可具有识别并结合抗原的能力，尽管与完全结合部位相比可能亲和力较低。
Fab片段也含有轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。Fab片段与Fab′片段的不同之处在于在重链CH1域的羧基末端添加几个包括一个或一个以上来自抗体铰链区的半胱氨酸的残基。F(ab′)2抗体片段最初作为成对的Fab′片段产生，所述片段之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶合也是已知的。
“固相”意谓本文所述的抗体可附着的非水性基质。本文所涵盖的固相的实例包括部分或全部由以下材料形成者：玻璃(例如可控多孔玻璃)、多糖(例如琼脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和聚硅氧。在某些实施例中，视具体情形而定，固相可包含分析盘的孔；在其它实施例中，其为纯化柱(例如亲和力色谱柱)。此术语也包括离散微粒的不连续固相，诸如美国专利第4,275,149号中所描述者。
本文中所用的术语“脂质体”表示包含各种类型脂质、磷脂和/或表面活性剂的小囊，其可用于将药物(诸如PTH多肽或针对其的抗体)传递给哺乳动物。脂质体的组份通常排列为双层构型，类似于生物膜的脂质排列。
本文中所用的术语“小分子”用于描述所具分子量低于约500道尔顿(Dalton)的分子。
如本文中所用，术语“标记”或“经标记的”是指并入可检测的标记物，这是(例如)通过并入放射性同位素标记的氨基酸或附着于可由经标记的抗生物素蛋白(例如含有可由光学或比色分析方法检测的荧光标记物或酶活性的抗生物素蛋白链菌素)检测的生物素基部分的多肽来实现。在某些情形中，标记或标记物也可具有治疗性。此项领域中已知且可使用标记多肽和糖蛋白的各种方法。用于多肽的标记的实例包括(但不限于)以下各物：放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)，荧光标记(例如FITC、若丹明、镧系磷)，酶标记(例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光酶、碱性磷酸酶)，化学荧光剂，生物素基，由第二报道体识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、第二受体的结合部位、金属结合域、附加表位)。在一些实施例中，由各种长度的间隔臂附加标记以减少潜在的位阻现象。
本文中所用的术语“医药剂或药剂”是指能够在适当投予患者时诱导所要的治疗作用的化合物或组合物。本文中所用的其它化学术语根据此项领域中的常规用法使用，如The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker，S.，编辑，McGraw-Hill，SanFrancisco(1985))，以引用的方式并入本文中)中例示。
如本文中所用，“大体上纯的”意谓目标物质是占优势存在的物质(意即在组合物中以摩尔浓度为基础其比任何其它个体物质更加大量)，且大体上纯净的部分较佳为如下的组合物，其中目标物质包含所有存在的大分子物质的至少约50％(以摩尔浓度为基础)。通常，大体上纯的组合物将包含组合物中存在的所有大分子物质的约80％以上，更佳约85％、90％、95％和99％以上。最佳，将目标物质纯化成为基本均质(在组合物中不能由常规检测方法检测到污染物质)，其中组合物基本上由单一大分子物质组成。
术语“患者”包括人类和牲畜受检者。
抗体结构
已知基本抗体结构单元包含四聚物。各四聚物包含两对相同的多肽链对，各对具有一“轻”链(约25kDa)和一“重”链(约50至70kDa)。各链的胺基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110或更多氨基酸的可变区。各链的羧基末端部分界定主要负责效应物功能的恒定区。人类轻链分为κ和λ轻链。重链分为μ、δ、γ、α或ε，且界定抗体的同种型分别为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中，可变区和恒定区与约12或更多氨基酸的“J”区相连，其中重链还包括约10或更多氨基酸的“D”区。通常参见，Fundamental Immunology Ch.7(Paul，W.，编辑，第2版，Raven Press，N.Y.(1989))(其全文以引用的方式并入用于所有目的)。各轻/重链对的可变区形成抗体结合部位。因此，完整抗体具有两结合部位。除双功能或双特异性抗体外，两结合部位是相同的。
所述链皆展示出由3个超变区(也称互补判定区或CDR)相连的相对保守的构架区(FR)的相同通用结构。来自各对的两条链的CDR由构架区比对，得以能够结合特异性表位。自N-末端至C-末端，两轻链和重链包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。各域的氨基酸分配是根据Kabat，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(National Institutes of Health，Bethesda，Md.1991)(1987)或Chothia and Lesk，J.Mol.Biol.196：901-17(1987)，Chothia等人.，Nature 342：878-83(1989)中的定义。
双特异性或双功能抗体是具有两对不同的重链/轻链对和两不同结合部位的人造杂交抗体。双特异性抗体可通过包括杂交瘤融合或Fab′片段连接的各种方法产生。参见(例如)Songsivilai and Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-21(1990)，Kostelny等人，，J.Immunol.148：1547-53(1992)。与产生常规抗体相比，产生双特异性抗体是相对费力的过程，且双特异性抗体的产量和纯度通常较低。双特异性抗体不以具有单结合部位的片段(例如Fab、Fab′和Fv)的形式存在。
人类抗体和抗体人化
人类抗体避免某些与拥有鼠科或大鼠可变和/或恒定区的抗体相关的问题。所述源自鼠科或大鼠的蛋白质的存在可导致抗体的快速清除或可导致患者产生对抗所述抗体的免疫反应。为避免利用源自鼠科或大鼠的抗体，可通过将人类抗体功能引入啮齿动物使得啮齿动物产生出完全人类抗体来生成完全人类抗体。
                          人类抗体
一种用于产生完全人类抗体的方法是通过使用已经设计而在其基因组中含有人类重链和轻链基因的XerioMouse小鼠菌株。举例而言，含有245kb和190kb大小的人类重链基因座和κ轻链基因座的种系构型片段的XenoMouse小鼠描述于Green等人，Nature Genetics 7：13-21(1994)中。延伸Green等人的工作通过分别利用成兆碱基大小的人类重链基因座和κ轻链基因座的种系构型YAC片段引入人类抗体所有组成部分的大约80％以上。参见Mendez等人，Nature Genetics 15：146-56(1997)和1996年12月3日申请的美国专利申请案第08/759,620号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。另外，已经生成含有全部λ轻链基因座(2001年11月30日申请的美国专利申请案第60/334,508号)的XenoMouse小鼠。而且，已经生成产生出多种同种型的XenoMouse小鼠(参见例如WO 00/76310)。XenoMouse菌株可自Abgenix，Inc.(Fremont，CA)获得。
XenoMouse小鼠的产生另外论述并描述于1990年1月12日申请的美国专利申请案第07/466,008号，1990年11月8日申请的第07/610,515号，1992年7月24日申请的第07/919,297号，1992年7月30日申请的第07/922,649号，1993年5月15日申请的第08/031,801号，1993年8月27日申请的08/112,848号，1994年4月28日申请的第08/234,145号，1995年1月20日申请的第08/376,279号，1995年4月27日申请的第08/430,938号，1995年6月5日申请的第08/464,584号，1995年6月5日申请的第08/464,582号，1995年6月5日中请的第08/463,191号，1995年6月5日申请的第08/462,837号，1995年6月5日申请的第08/486,853号，1995年6月5日申请的第08/486,857号，1995年6月5日申请的第08/486,859号，1995年6月5日申请的第08/462,513号，1996年10月2日中请的第08/724,752号和1996年12月3日申请的第08/759,620号，和美国专利第6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181和5,939,598号，和日本专利第3 068 180 B2、3 068 506 B2和3 068 507 B2号。也可参见Mendez等人，Nature Genetics 15：146-156(1997)和Green和Jakobovits J.Exp.Med，188：483-495(1998)。也可参见1996年6月12日颁予公开的欧洲专利第EP 463,151 B1号，1994年2月3日公开的国际专利申请案第WO 94/02602号，1996年10月31日公开的国际专利申请案第WO 96/34096号，1998年6月11日公开的WO 98/24893号，2000年12月21日公开的WO 00/76310号。上述引用的各专利案、申请案和参考文献揭示内容的全文以引用的方式并入本文中。
在替代方法中，包括GenPharm International，Inc.的其它者已利用“微小基因座”方法。在微小基因座方法中，通过来自Ig基因座片段(个体基因)的包含物模拟外源性Ig基因座。因此，一个或一个以上VH基因，一个或一个以DH基因，一个或一个以JH基因，μ恒定区和第二恒定区(较佳为γ恒定区)形成用于插入动物体内的构造。此方法描述于颁予Surani等人的美围专利第5,545,807号和各自颁予Lonberg和Kay的美国专利第5,545,806、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,877,397、5,874,299及6,255,458号，颁予Krimpenfort和Berns的美国专利第5,591,669和6,023,010号，颁予Berns等人的美国专利第5,612,205、5,721,367和5,789,215号，和颁予Choi和Dunn的美国专利第5,643,763号，和Genpharm International 1990年8月29日申请的美国专利申请案第07/574,748号，1990年8月31日申请的07/575,962号，1991年12月17日申请的07/810,279号，1992年3月18日申请的07/853,408号，1992年6月23日申请的07/904,068号，1992年12月16日申请的07/990,860号，1993年4月26日申请的08/053,131号，1993年7月22日申请的08/096,762号，1993年11月18日申请的08/155,301号，1993年12月3日申请的08/161,739号，1993年12月10日申请的08/165,699号，1994年3月9日申请的08/209,741号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。也可参见欧洲专利第546,073B1号，国际专利申请案第WO 92/03918、WO92/22645、WO 92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852和WO 98/24884号，和美国专利第5,981,175号，其揭示内容的全文以引用的方式并入本文中。另外参见Taylor等人(1992)，Chen等人(1993)，Tuaillon等人(1993)，Choi等人(1993)，Lonberg等人(1994)，Taylor等人(1994)和Tuaillon等人(1995)，Fishwild等人(1996)，其揭示内容的全文以引用的方式并入本文中。
Kirin已证明自己通过微细胞融合引入染色体的大片段或全部染色体的小鼠产生人类抗体。参见欧洲专利申请案第773,288及843,961号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
Lidak Pharmaceuticals(现在为Xenorex)也已证明在通过注射来自人类供体的非恶性成熟外周白细胞而修饰的SCID小鼠中产生人类抗体。经修饰的小鼠展示出人类供体经免疫原刺激的免疫反应特征，其由产生人类抗体组成。参见美国专利第5,476,996和5,698,767号，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
人类抗小鼠抗体(HAMA)反应已使在工业上可制备嵌合或其它形式的人类抗体。尽管嵌合抗体具有人类恒定区及鼠科可变区，但预期(尤其)慢性或多剂量的抗体利用可观察到某些人类抗嵌合抗体(HACA)反应。因此，需要提供对抗PTH的完全人类抗体用以消除HAMA或HACA反应的顾虑及/或作用。
                        人化及展示技术
如以上关于人类抗体产生的论述，产生免疫原性降低的抗体存在优点。在一定程度上，此可在使用适当库的人化技术和展示技术方面实现。应了解鼠科抗体或来自其它物种的抗体可使用此项领域中熟知的技术人化或灵长化。参见(例如)Winter和Harris，Immunol Today 14：43-46(1993)和Wright等人，Crit，Reviews in Immunol.12：125-168(1992)。相关抗体可通过重组DNA技术进行设计以用相应人类序列取代CH1、CH2、CH3、铰链域和/或构架域(参见WO 92/02190和美国专利第5,530,101、5,585,089、5,693,76l、5,693,792、5,714,350及5,777,085号)。而且，Ig cDNA对于构造嵌合免疫球蛋白基因的用途在此项领域中是已知的(Liu等人，P.N.A.S.84：3439(1987)和J.Immunol.139：3521(1987))。自杂交瘤或其它产生抗体的细胞分离mKNA并使用mKNA产生cDNA。相关cDNA可使用特异性引物通过聚合酶链式反应来扩增(美国专利第4,683,195和4,683,202号)。或者，制成并筛选库以分离相关序列。接着将编码所述抗体可变区的DNA序列融合至人类恒定区序列。人类恒定区基因序列可见于Kabat等人，”Sequencesof Proteins of Immunological Interest，”N.I.H.publication no.91-3242(1991)中。人类C区基因可容易自已知克隆得到。同种型的选择将受到所要的效应物功能引导，所述功能诸如补体固定或在抗体依赖性细胞毒性中的活性。较佳的同种型为IgG1、IgG3和IgG4。可使用任一人类轻链恒定区(κ或λ)。接着通过常规方法表达嵌合、人化抗体。
可通过(例如)以蛋白酶或化学裂解来裂解完整蛋白质而制备诸如Fv、F(ab′)2的抗体片段。或者，设计截断基因。举例而言，编码F(ab′)2片段一部分的嵌合基因可包括编码H链的CH1域及铰链区的DNA序列，其后为转译终止密码子用于产生截断分子。
可使用H和LJ区的一致序列设计用作引物的寡核苷酸，所述引物用于将适用的限制部位引入J区用于随后V区片段与人类C区片段的键合。C区cDNA可由定部位诱变来修饰以将限制部位置于人类序列中的类似位置。
表达载体包括质粒、反转录病毒、YACs、源自EBV的附加体和其类似物。方便的载体为编码功能完整的人类CH或CL免疫球蛋白序列者，设计其适当的限制部位以便任何VH或VL序列可容易地插入并表达。在所述载体中，剪接通常发生在插入J区中的剪接供体部位与人类C区前的剪接受体部位之间，且也可发生在存在于人类CH外显子内的剪接区中。多聚腺苷酸化及转录终止发生在编码区下游的天然染色体部位。所得的嵌合抗体可连接至任何强启动子，包括反转录病毒LTR，例如SV-40早期启动子(Okayama等人，Mol.Cell.Bio.3：280(1983))，劳氏(Rous)肉瘤病毒LTR(Gorman等人，P.N.A.S.79：6777(1982))和莫洛尼氏(moloney)鼠科白血病病毒LTR(Grosschedl等人，Cell 41：885(1985))。而且应了解，可使用天然Ig启动子和其类似物。
另外，可使用此项领域中熟知的技术，通过展示型技术产生人类抗体或来自其它物种的抗体，所述技术包括(不限于)噬菌体展示、反转录病毒展示、核糖体展示和其它技术，且所得分子可经历另外成熟，诸如亲和力成熟，所述技术在此项领域中是熟知的。Wright和Harris，上述。Hanes和Plucthau，PNAS USA 94：4937-4942(1997)(核糖体展示)，Parmley和Smith，Gene 73：305-318(1988)(噬菌体展示)，Scott，TIBS 17：241-245.(1992)，Cwirla等人，PNAS USA 87：6378-6382(1990)，Russel等人，Nucl.Acids Res.21：1081-1085(1993)，Hoganboom等人Immunol.Reviews 130：43-68(1992)，Chiswell和McCafferty，TIBTECH 10：80-84(1992)，和美国专利第5,733,743号。若使用展示技术产生非人类抗体，可如上所述将所述抗体人化。
可使用这些技术产生对抗PTH表达细胞、PTH本身、多种形式的PTH、其表位或肽，和对应于其的表达库的抗体(参见例如美国专利第5,703,057号)，随后可如上所述就上述活性对其进行筛选。
                              抗体的制备
如下所述，通过利用XenoMouse技术制备根据本发明的抗体。所述小鼠接着能够产生人类免疫球蛋白分子和抗体而不足以产生鼠科免疫球蛋白分子和抗体。用于达成此的技术揭示于本文前述段落中揭示的专利案、申请案和参考文献中。然而，具体来讲，转基因产生小鼠及来自其的抗体的较佳实施例揭示于1996年12月申请的美国专利申请案第08/759,620号和1998年6月11日申请的国际专利申请案第WO 98/24893号和2000年12月21日公开的WO 00/76310号中，其揭示内容以引用的方式并入本文中。也可参见Mendez等人，Nature Genetics 15：146-156(1997)，其揭示内容以引用的方式并入本文。
本文中所述的抗体是针对于人类PTH的中和高亲和力抗体。另外，在一些实施例中，所述抗体与大鼠PTH交叉反应。早先已使用几种不同的方法产生对抗人类PTH N末端的单克隆抗体或多克隆抗体。这些方法包括用全长人类PTH(hPTH)或牛PTH(bPTH)(Vieira等人，Braz.J.Med Biol.Res.21：1005-1011(1988))，人类PTH的合成肽(1-34或1-37)(Visser等人，Acta Endocrinol.90：90-102(1979)，Logue等人，J.Immunol Methods137：159-66(1991))，利hPTH(1-10)、hPTH(9-18)和hPTH(24-37)的多抗原肽(MAP)(Magerlein等人，Drug Res.48：783-87(1998))进行免疫。这些方法不能产生适用于人类治疗的抗体(参见本文作为治疗标准的题为“治疗投药和配方”的段落)。由于B细胞对所述肽的耐受性，所以针对hPTH的高亲和力抗体难于制造。然而，Bradwell等人(1999)已证明用人类PTH(1-34)与牛PTH(1-34)MAP的混合物随后用定靶于hPTH(51-84)和bPTH(51-86)的人类和牛MAP的混合物进行免疫可有效破坏患有不宜动手术的的甲状旁腺肿瘤的人类患者中B细胞对PTH的耐受性。
发计本文所述的方法以克服B细胞对hPTH的耐受性并且产生适用于治疗和诊断用途的完全人类单克隆抗体。因为已成功地使用合成肽产生特异于外源性人类PTH的抗体(Visser等人(1979))，所以用PTH(hPTH(1-34)和rPTH(1-34))的合成肽使XenoMouse动物免疫。此外，因为用人类PTH(85％相同性)和大鼠PTH(91％)高度保留鼠科PTH的N末端，所以使用肽组合作为免疫原通过分子模拟来破坏B细胞对鼠科PTH的耐受性，由此允许产生高亲和力人类抗人类PTH抗体。这些肽皆可与钥孔血蓝蛋白偶合且以完全弗氏(Freund′s)佐剂或不完全弗氏佐剂乳化以增强这些蛋白质的免疫原性。
致免疫后，自表达抗体的小鼠回收淋巴细胞(诸如B细胞)，且将所述经回收的细胞系与脊髓类型细胞系融合以制备永生化杂交瘤细胞系。筛选并选择所述杂交瘤细胞系以鉴定产生特异于相关抗原的抗体的杂交瘤细胞系。本文中，描述产生特异于PTH的抗体的多杂交瘤细胞系的产生。另外，提供由所述细胞系产生的抗体的表征，包括所述抗体的重链和轻链的核苷酸和氨基酸序列分析。
或者，可直接分析B细胞，而非将其融合至骨髓瘤细胞以产生杂交瘤。举例而言，可自超免疫XenoMouse小鼠分离CD 19+B细胞，且允许其繁殖并分化为分泌抗体的浆细胞。接着由ELISA就对抗PTH免疫原的反应性筛选来自细胞上清液的抗体。并且就对抗PTH片段的免疫反应性筛选上清液以进一步表位定位不同抗体，且以大鼠PTH筛选上清液以测定物种交叉反应性。接着使用PTH特异性溶血空斑分析分离具有所要特异性的分泌抗体的单种浆细胞(Babcook等人，Proc.Nad.Acad.Sci.USA 93：7843-48(1996))。目标定位于溶解的细胞较佳为涂有PTH抗原的绵羊红细胞(SRBC)。在含有分泌相关免疫球蛋白和补体的浆细胞的B细胞培养物的存在下，空斑的形成表明相关浆细胞周围绵羊红细胞的特异性PTH介导的溶解。可分离空斑中心的单种抗原特异性浆细胞且可自所述单种浆细胞分离编码抗体特异性的基因信息。作为B细胞培养物的替代，可直接自超免疫动物的CD 138+脾细胞或淋巴细胞分离抗原特异性浆细胞。可在执行反转录酶PCR后克隆编码抗体的重链和轻链可变区的DNA，此与分离方法无关。接着将经克隆的DNA另外插入适当的表达载体中，较佳为诸如pcDNA的载体盒，更佳为含有免疫球蛋白重链和轻链的恒定域的所述pcDNA载体。可将所产生的载体转染至宿主细胞(较佳为CHO细胞)中，且将其培养于经改质而适用于诱导启动子，选择转化体或扩增编码所要序列的基因的常规营养培养基中。以下描述产生特异于PTH的抗体的多个单种浆细胞的分离。另外，可分离编码抗PTH抗体特异性的基因物质，将其引入适当的表达载体中，接着将所述载体转染至宿主细胞中。
通常，由上述细胞系产生的抗体拥有完全人类IgG2重链和人类κ轻链。所述抗体拥有高亲和力，通常在由固相和液相测量时拥有约10-6至约10-12M的离解常数(KD)。拥有至少10-9KD的抗体较佳，拥有10-10、10-11或10-12KD的抗体非常佳。由于与经分泌抗原的单克隆抗体互相作用的动力学，当抗体KD超过抗原浓度时结合功效大为降低。为有效抑制抗原的含量，抗体KD应小于抗原浓度。
关于相对于抗PTH抗体的治疗功效亲和力的重要性，应理解可(例如)组合产生抗PTH抗体，且评定所述抗体的结合亲和力。一种可利用的方法是自如上述制备且发现对于PTH具有良好亲和力的抗体提取重链cDNA，且将其与来自如上述制备且也发现对于PTH具有良好亲和力的第二抗体的轻链cDNA组合，以产生第三抗体。如本文所述测量所得第三抗体的亲和力且分离并表征具有所要离解常数者。举例而言，以抗PTH mAb183与抗PTH mAb 168抗体的高结合亲和力为基础，可将来自抗PTHmAb 168的重链cDNA连接至来自抗PTH mAb 183的轻链cDNA且可评定所得抗体的结合。或者，可使用任何上述抗体的轻链作为辅助产生如下重链的工具，所述重链在与轻链配对时将展示出对PTH的高亲和力，反之亦然。举例而言，抗PTH mAb 183的轻链或轻链可变区可用重链或重链可变区的库表达。此库中的这些重链可变区可自天然动物分离，自超免疫动物分离，自含有在CDR区中不同的可变重链序列的库人工产生，或通过在任何重链可变区基因的CDR区内产生多样性的其它任何方法(诸如随机或定向诱变)产生。这些CDR区(且尤其为CDR3)可具有与最初与抗PTH mAb 183配对的重链显著不同的长度或序列相同性。接着就与PTH的高亲和力结合来筛选所得库以产生具有与抗PTHmAb 183类似特性(高亲和力和中和作用)的治疗上相关的抗体分子。使用重链或重链可变区的类似方法可用于产生具有独特轻链可变区的治疗上相关的抗体分子。此外，接着可以与上述类似的方式使用新颖重链可变区，或轻链可变区鉴定允许产生新颖抗体分子的新颖轻链可变区或重链可变区。
另一种可利用的组合方法为在已证明待用于根据本文所述的本发明的抗体中的种系重链和/或轻链上，尤其在互补判定区(CDR)中执行诱变。如本文所述测量所得抗体的亲和力且分离并表征具有所要离解常数者。经过选择较佳的结合剂，可如上所述使用编码其的序列产生重组抗体。在寡核苷酸上执行诱变的适当方法是所属领域的技术人员已知的且包括化学诱变(例如以亚硫酸氢钠盐)、酶错误插入和暴露于辐射。应理解本文中所述的本发明涵盖具有与本文明确列出的抗体大体上相同性(如本文中所定义)的抗体，无论其由诱变还是由其它方法产生。另外，本文中所述的本发明的实施例包括在本文中明确列出的抗体中进行保守或非保守氨基酸取代(如本文中所定义)的抗体。
另一种可用的组合方法为在源自其它可变区基因的构架区范围内表达上述抗体的CDR区(且尤其为CDR3)。举例而言，可在其它重链可变基因的构架区范围内表达抗PTH mAb 183重链的CDR1(GYSFTSYWIG(SEQ ID NO：89))、CDR2(HSPGDSDTRYSPSFQG(SEQ ID NO：90))和CDR3(QGDYVWGSYDS(SEQ ID NO：91))。类似地，可在其它轻链可变基因的构架区范围内表达抗PTH mAb 183轻链的CDR1(KSSQSLLDSDGKTYLY(SEQ ID NO：92))、CDR2(EVSNRFS(SEQ ID NO：93))和CDR3(MPSIHLWT(SEQ ID NO：94))。另外，可在其它重链或轻链可变区基因范围内表达这些CDR区的种系序列(例如，重链CDR2：IIYPGDSDTRYSPSFQG(SEQ ID NO：95))。可就特异性和亲和力来分析所得抗体且其可允许产生新颖抗体分子。
此外，可自种系D-区21-10产生具有与PTH相互作用能力的重链CDR3。此D-区的种系形式的一种阅读码框编码CDR3的核心结合区(YY DYVWGSYAYT(SEQ ID NO：96))(如下划线)。可表达具有随机旁侧氨基酸的标有下划线的核心序列或其片段以产生具有与在抗PTH mAb 183中鉴定出的CDR3类似特异性的新颖CDR3。新重链可产生与初始抗PTH mAb 183相比具有类似或改良结合特性的抗体。也可使此编码CDR3的D-区突变以产生功能上与抗PTH mAb 183等效的抗体。举例而言，所述序列(DYVWGSY(SEQ ID NO：97))的天冬氨酸(“D”)可突变为任何其它氨基酸且在与相应轻链配对时可分析新抗体的特异性和高亲和力。类似地，可通过轻微改变V区与J区的连接并且改变用于连接这两个轻链片段的核苷酸的数目和相同性而增加和/或移除轻链CDR3中编码的氨基酸。
在较佳实施例中，抗PTH mAb 183的特性包括(例如)抗体对于PTH的高亲和力(KD为10-10或更佳)，对人类PTH或同源蛋白质的N末端上的中和表位的特异性，中和PTH反应性细胞中的钙流量的能力，和抑制注入人类PTH的大鼠中的血钙过多的能力。所述实例说明在当明技术下使用本发明的序列辅助产生具有与抗PTH mAb 183类似特性的抗体的多种可行方法。任何当前技术的改良或任何通过未来或常规技术产生具有前述归属于抗PTH mAb 183特性的独特抗体据信与抗PTH mAb 183在“功能上等效”，且由此其包括于本文中所述的本发明的实施例中。
应了解，可在各种细胞系中表达本文中所述的根据本发明的抗体。可使用编码特定抗体的序列转化适当的哺乳动物宿主细胞。转化作用可通过任何已知用于将多核苷酸引入宿主细胞的方法完成，包括例如将多核苷酸包装于病毒(或进入病毒载体)中且用病毒(或载体)转导宿主细胞，或通过如美国专利第4,399,216、4,912,040、4,740,461和4,959,455号(以引用的方式并入本文中)例示的此项领域中已知的转染程序完成。所用的转化程序取决于待转化的宿主。用于将异种多核苷酸引入哺乳动物细胞中的方法在此项领域中是熟知的且包括右旋糖酐介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、将多核苷酸封入脂质体中和直接将DNA微注射至核中。
此项领域中熟知可用作表达宿主的哺乳动物细胞系且其包括多种可自美国典型菌种保藏中心(ATCC)获得的永生化细胞系，包括(但不限于)中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、海拉(HeLa)细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人类肝细胞癌细胞(例如Hep G2)和多种其它细胞系。通过判定何种细胞系具有高表达水平且产生具有结构的PTH结合特性的抗体来选择尤其较佳的细胞系。
表位定位
                           免疫印迹分析
可通过多种方法检测本文所述的抗体与PTH的结合。举例而言，可使PTH经历SDS-PAGE并通过免疫印迹法进行分析。SDS-PAGE可在有或无还原剂存在下执行。所述化学修饰可导致半胱氨酸残基甲基化。因此，可判定本文中所述的抗PTH抗体是否结合PTH上的线性表位。
                       表面增强激光解吸/离子化
本文所述的PTH抗体的表位的表位定位也可使用SELDI来执行。使用SELDIProteinChip阵列界定蛋白质间相互作用的部位。通过最初培育和洗涤在共价固定至蛋白质芯片阵列表面上的抗体上特异性捕获抗原。可通过激光诱导的解吸方法检测结合抗原并对其直接进行分析以测定其质量。所述可结合的抗原片段命名为蛋白的“表位”。
SELDI方法以快速、高敏感性和可扩充的方式使得复合分子组合物中的个体组份待直接检测且相对于其它组份定量定位。SELDI利用不同表面化学阵列捕获并递呈大量用于通过激光诱导的解吸方法进行检测的个体蛋白质分子。SELDI方法的成功部分地详细说明为表面(“芯片”)上多种功能的小型化和整合，多种功能各自取决于不同技术。SELDIBioChips和其它类型的SELDI探针为“增强”的表面以便成为捕获、纯化(分离)、递呈、检测和表征待评估的个体目标分子(例如蛋白质)或分子群中的活性参与者。
仅装载原样的单个SELDI蛋白质BioChips可被阅读上千次。LumiCyte公司的SELDI蛋白质BioChips每1平方厘米保存多达10,000的可寻址蛋白质对接位置。各位置可显示许多个体蛋白质的存在。当比较来自各位置的蛋白质组成信息且将独特信息集组合时，所得复合映射揭示具有数组特点的图像，所述特点可共同用于界定特定图案的或分子“指纹图谱”。不同指纹图谱可与各健康阶段——发病或与投予适当疗法相关的疾病消退——相关。
SELDI方法可以4个部分另外详细描述。首先，一种或一种以上相关蛋白质直接自最初源物质捕获或“对接”于ProteinChip阵列上，无需制备样本且无需标记样本。在第二步骤中，通过降低化学和生物分子“噪声”来提高“信噪”比。所述“噪声”通过洗去不当物质而选择性地在芯片上的保留目标来降低。另外，通过提供关于目标的直接信息(分子量)的快速、敏感的激光诱导方法(SELDI)来阅读所捕获的一种或一种以上目标蛋白质。最后，阵列内任何一个或一个以上位置处的目标蛋白质可原位通过执行一种或一种以上用于表征蛋白质结构和功能的芯片上结合或修饰反应来表征。
                               噬菌体展示
本文中所述的抗PTH抗体的表位可通过将ProteinChip阵列暴露于Filamentous噬菌体(New England Biolabs)上展示的随机肽12-mer的组合库来判定。
噬菌体展示描述一种选择技术，其中肽以与噬菌体的外壳蛋白融合的形式得以表达，从而导致融合蛋白在病毒粒子表面上展示。选淘通过以下过程进行：以涂有目标的板或试管培育噬菌体展示肽的库，洗去未结合的噬菌体，且洗脱特异性结合的噬菌体。接着扩增经洗脱的噬菌体且使其进行另外的结合和扩增循环以使支持结合序列的池富集。在3或4轮之后，进一步通过在涂覆抗体的孔上执行噬菌体ELISA分析测试个体克隆的结合，且通过阳性克隆的特异性DNA定序来表征。
在多轮所述的针对本文所述的抗PTH抗体的选淘后，可洗脱结合的噬菌体且使其经历另外的用于鉴定并表征结合肽的研究。
诊断用途
本文中所述的根据本发明的抗体适用于(例如)用于测定血流中循环PTH含量的诊断分析，且尤其为体外分析。可根据PTH抗原的表达水平测定受检者中甲状旁腺功能亢进的存在和/或严重性。自经诊断处于甲状旁腺功能亢进各进展水平和/或处于所述疾病治疗处理的各点的受检者提取患者样本，较佳为血液，且更佳为血清。使用具体测定抗原存在量的方法测定血液样本中存在的PTH抗原浓度。所述方法包括ELISA方法，其中(例如)本发明的抗体可方便地固定于不溶性基质(诸如聚合物基质)上。使用对于已知水平的进展或治疗提供统计学上显著结果的样本群，指定可视为表示各水平特征的抗原浓度范围。
为判定研究中受检者的甲状旁腺功能亢进程度，或为表征受检者对一段治疗过程的反应，自所述受检者提取血液样本且测定所述样本中存在的PTH抗原的浓度。使用如此获得的浓度鉴定值降低的浓度范围。如此鉴定的范围与在各经诊断的受检者群中鉴定的疾病进展水平或治疗水平相关联，由此提供研究中受检者的水平。
基于本文中提供的序列可在样本中直接(例如)通过以下方法来测量基因扩增和/或表达：用于定量mRNA转录的常规南方印迹、北方印迹(Thomas，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：5201-5205(1980))，斑点印迹(DNA分析)或原位杂交(使用适当的标记探针)。或者，可使用可识别特异性双链体的抗体，包括DNA双链体、RNA双链体和DNA-RNA杂交双链体或DNA-蛋白质双链体。所述抗体又可经标记且分析可在双链体结合于表面处进行，以便在表面上形成双链体时，可检测与双链体结合的抗体的存在。
举例而言，可使用抗体(包括抗体片段)定性或定量地检测PTH蛋白的表达。如上文所提及，抗体较佳可配备有可检测的(例如荧光)标记，且可通过光学显微术、流式细胞测量术、荧光测定法或此项领域中已知的其它技术监测结合。若经扩增的基因编码细胞表面蛋白(例如生长因子)，则这些技术尤其适宜。如此项领域所已知的执行所述结合分析。
可(例如)通过免疫荧光法或免疫电子显微检测法执行结合于PTH蛋白的抗体的原位检测。为达成此目的，自患者移除组织标本，且将经标记的抗体(较佳)通过将抗体覆盖于生物样本上而施加于标本。此程序也允许测定标记基因产物在所检查组织中的分布。显然所属领域的技术人员可容易地使用种类广泛的组织学方法进行原位检测。
一种最灵敏且最灵活的用于定量差别基因表达的定量方法是RT-PCR，其可用于比较正常和肿瘤组织中经或未经药物治疗的不同样本群中的mRNA含量，以表征基因表达的模式，用于在非常相关的mRNA之间进行辨别，并用于分析RNA结构。
第一步骤是自目标样本分离mRNA。原始材料通常为分别自疾病组织和相应的正常组织分离的总RNA。因此可(例如)自冷冻或经保存的石蜡包埋并经固定(例如经福尔马林(formalin)固定)的疾病组织样本提取mRNA用于与相同类型正常组织进行比较。mRNA提取方法在此项领域中是熟知的并揭示于分子生物学标准教科书中，包括Ausubel等人，Current Protocols of Molecular Biology，John Wiley and Sons(1997)。自石蜡包埋组织中提取RNA的方法(例如)揭示于Rupp和Locker，Lab Invest.，56：A67(1987)，和De Andrés等人，BioTechniques，18：42044(1995)中。具体来讲，可使用来自诸如Qiagen的工业制造商的纯化试剂盒、缓冲装置和蛋白酶，根据制造商的说明书执行RNA分离。举例而言，可使用Qiagen RNeasy微柱自培养物中的细胞分离总RNA。可使用RNAStat-60(Tel-Test)自组织样本分离总RNA。
当RNA不能充当PCR的模板时，由RT-PCR进行的差别基因表达分析的第一步骤为将RNA模板反转录成cDNA，随后以PCR反应使其指数扩增。两种最常用的反转录酶为禽类(avilo)成髓细胞瘤病毒反转录酶(AMV-RT)和莫洛尼氏(Moloney)鼠科白血病病毒反转录酶(MMLV-RT)。反转录步骤通过视表达谱的环境和目标而定使用特异性引物、随机六聚物或oligo-dT引物预备。举例而言，可使用GeneAmp RNA PCR试剂盒(Perkin Elmer，CA，USA)，依照制造商的说明书反转录经提取的RNA。接着可使用衍生的cDNA作为随后PCR反应的模板。
尽管PCR步骤可使用各种热稳定的DNA依赖性DNA聚合酶，但通常使用Taq DNA聚合酶，其具有5′-3′核酸酶活性但缺少3′-5′核酸内切酶活性。因此，TaqMan PCR通常利用Taq或Tth聚合酶的5′-核酸酶活性以水解结合至其目标扩增子的杂交探针，但可使用任何具有等效5′核酸酶活性的酶。使用两寡核苷酸引物产生代表PCR反应特征的扩增子。设计第三寡核苷酸或探针用于检测位于两PCR引物之间的核苷酸序列。所述探针不能由Taq DNA聚合酶延长，且用报道荧光染料和淬灭荧光染料标记。由淬灭染料在两种染料处于探针上而位置靠近在一起时淬灭任何来自报道染料的激光诱导的放射。在扩增反应的过程中，Taq DNA聚合酶以模板依赖方式裂解探针。产生的探针片段在溶液中分离，且来自经释放的报道染料的信号不具有第二荧光团的淬灭作用。对于各新合成分子释放出一种报道染料分子，且未经淬灭报道染料的检测提供数据定量解释的基础。
可使用市售装备执行TaqMan RT-PCR，诸如(例如)ABI PRIZM 7700TM SequenceDetection SystemTM(Perkin-Elmer-Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)或Lightcycler(Roche Molecular Biochemicals，Mannheim，Germany)。在一较佳实施例中，在诸如ABI PRIZM 7700TM Sequence Detection SystemTM的即时定量PCR装置上运行5′核酸酶程序。所述系统由温度循环器、激光器、电荷耦合装置(CCD)、照相机和计算机组成。所述系统在温度循环器上以96孔模式扩增样本。在扩增过程中，通过所有96孔的光纤电缆即时收集激光诱导的荧光信号，且以CCD检测。所述系统包括用于运行仪器和用于分析数据的软件。
5′-核酸酶分析数据最初表示为Ct或阈循环数。如上文论述，在每个循环过程中记录荧光值且其表示扩增反应中扩增至该点的产物量。首次记录的具有统计学显著性的荧光信号时的点为阈循环数(Ct)。使用ACt值作为当将来自疾病组织细胞中的RNA表达与来自正常细胞者比较时核酸样本中特殊目标序列起始样板相对数目的定量测量值。
为将样本间差异的误差和效果降到最低，通常使用内标准执行RT-PCR。理想的内标准以不同组织间的恒定水平来表示，且不受实验处理的影响。最常用于标准化基因表达模式的RNA为管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和β-肌动蛋白的mRNA。
也可使用微阵列技术鉴定或证实差别基因表达。在此方法中，在微芯片基板上涂布或排列相关核苷酸序列。接着用来自相关细胞或组织的特异性DNA探针杂交所排列的序列。
在微阵列技术的一特定实施例中，将cDNA克隆的PCR扩增插入物施加于密集阵列中的基质。较佳将至少10,000个核苷酸序列施加于基质。固定于微芯片(各自10,000个元件)上的微阵列基因适用于在严格的条件下杂交。可通过自相关组织所提取的RNA的反转录作用由并入荧光核苷酸来产生经荧光标记的cDNA探针。将经标记的cDNA探针施加于分别选择性杂交至阵列上各DNA斑点的芯片。在严格洗涤而移除未特异性结合的探针后，以共焦激光显微镜扫描芯片。各排列元件杂交的定量允许评估相应的mRNA丰度。以双色荧光法，将经单独标记的自两RNA源产生的cDNA探针成对杂交至所述阵列。因此同时测定对应于各指定基因的来自两来源的转录物的相对丰度。小型化规模的杂交作用提供大量基因表达模式的方便且快速的评估。所述方法已显示出具有检测极少转录物(其以每细胞中少数样板进行表达)和可重现地检测表达水平中至少大约2倍差异所需的灵敏性(Schena等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93(20)L106-49)。核酸杂交方法和微阵列技术中此项领域中是熟知的。
PTH激动剂和拮抗剂
本文所述的本发明的实施例也涉及充当PTH激动剂(模拟物)或充当PTH拮抗剂的PTH蛋白的变异体。PTH蛋白的变异体可通过诱变产生，例如PTH蛋白的离散点突变或截断。PTH蛋白的激动剂可大体上保留与自然存在形式的PTH蛋白相同的生物活性或保留所述生物活性的部分。PTH蛋白的拮抗剂可通过(例如)与细胞信号级联(包括PTH蛋白)的下游或上游成员竞争性结合来抑制自然存在形式的PTH蛋白的一种或一种以上活性。因此，可通过用有限功能的变异体进行治疗来引出特异性生物作用。在一实施例中，用具有部分自然存在形式的蛋白生物活性的变异体治疗受检者相对于用自然存在形式的PTH蛋白进行治疗在受检者中产生较少的副作用。
充当PTH激动剂(模拟物)或充当PTH拮抗剂的PTH蛋白变异体可通过就蛋白质激动剂或拮抗剂活性筛选PTH蛋白的突变体(例如截断突变体)组合库来鉴定。在一实施例中，PTH变异体的多样库由核酸水平的组合诱变产生且由多样基因库编码。PTH变异体的多样库可通过如下方法产生：例如，将合成寡核苷酸的混合物以酶接合至基因序列使得一组退化的潜在PTH序列可表达为个体多肽，或者表达为一组其中含有所述PTH序列组的较大融合蛋白(例如用于噬菌体展示)。存在多种可用于自退化的寡核苷酸序列产生潜在PTH变异体库的方法。可在自动DNA合成器中执行退化基因序列的化学合成，且接着将合成基因接合至适当的表达载体。使用一组退化基因允许在一种混合物中提供编码所要的潜在PTH变异体序列组的所有序列。用于合成退化寡核苷酸的方法在此项领域中是已知的(参见例如Narang，Tetrahedron 39：3(1983)，Itakura等人，Amu.Rev.Biochem.53：323(1984)，Itakura等人，Science 198：1056(1984)，Ike等人，Nucl.Acid Res.11：477(1983))。
抗体疗法的其它标准
如本文中论述，PTH抗体的功能对于至少一部分其操作方式显得重要。功能意谓(举例而言)抗PTH抗体在结合PTH方面的活性。因此，在某些方面，关于产生对抗PTH的作为治疗候选物的抗体，可需要所述抗体能够固定补体并参与补体依赖性细胞毒性(CDC)。举例而言，根据本文所述的根据本发明实施例的抗PTH抗体可经制成而能够具有效应物功能，包括CDC和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。存在许多能够如此的抗体同种型，包括(不限于)以下：鼠科IgM、鼠科IgG2a、鼠科IgG2b、鼠科IgG3、人类IgM、人类IgG1和人类IgG3。应了解所产生的抗体不必最初拥有所述同种型，而是抗体在产生时可拥有任何同种型且可随后使用此项领域中熟知的常规技术将所述抗体进行同种型转换。所述技术尤其包括使用直接重组技术(参见例如美国专利第4,816,397号和美国专利第6,331,415号)，细胞与细胞的融合技术(参见例如美国专利第5,916,771和5,916,771号)
在细胞与细胞的融合技术中，制备拥有具有任何所要同种型的重链的骨髓瘤或其它细胞系且制备拥有轻链的另一骨髓瘤或其它细胞系。随后可融合所述细胞且可分离表达完整抗体的细胞系。
举例而言，本文中所述的本发明的某些抗PTH抗体为人类抗PTH IgG2抗体。若所述抗体拥有与PTH分子的所要结合，则其可容易地进行同种型转换以产生人类IgM、人类IgG1或人类IgG3同种型，尽管仍拥有相同的可变区(其界定抗体的特异性和其一些亲和力)。
因此，当如上文论述产生满足所要“结构”属性的抗体候选物时，其通常可通过同种型转换而具有某些替代的“功能”属性。
其它疗法的设计和产生
根据本文所述的本发明的实施例并以本文中关于PTH产生并表征的抗体活性为基础，可促进其它抗体部分以外的治疗形式的设计。所述形式包括(不限于)高级抗体疗法，诸如双特异性抗体、免疫毒素和放射性同位素标记的疗法、肽产生疗法、基因疗法，尤其是内抗体、反义疗法和小分子。
关于高级抗体疗法(其中补体固定是所要的属性)的产生，可能通过使用(例如)双特异性、免疫毒素或放射性同位素标记避免对补体杀伤细胞的依赖。
举例而言，关于双特异性抗体，可产生的双特异性抗体包含(i)两结合在一起的抗体，一个具有对PTH的特异性且另一个具有对第二分子的特异性；(ii)单个抗体，其具有一个特异于PTH的链和一个特异于第二分子的第二链；或(iii)单链抗体，其具有对于PTH和其它分子的特异性。所述双特异性抗体可使用熟知技术产生，例如关于(i)和(ii)参见(例如)Fanger等人，Immunol Methods 4：72-81(1994)和Wright and Harris，上述，且关于(iii)参见(例如)Traunecker等人，Int.J.Cancer(Suppl.)7：51-52(1992)。在各情形中，可形成相对于重链活化受体的第二特异性，所述受体包括(不限于)CD16或CD64(参见例如Deo等人18：127(1997))或CD89(参见例如Valerius等人，Blood90：4485-4492(1997))。
关于免疫毒素，可利用此项领域中熟知的技术将抗体修饰以充当免疫毒素。参见(例如)Vitetta Immunol Today 14：252(1993)。也请参见美国专利第5,194,594号。关于制备经放射性同位素标记的抗体，也可利用此项领域中熟知的技术容易地制备所述经修饰的抗体。参见(例如)Junghans等人，于Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686中(第2版，Chafner和Longo编辑，Lippincott Raven(1996))。也请参见美国专利第4,681,581、4,735,210、5,101,827、5,102,990(RE 35,500)、5,648,471和5,697,902号。
治疗投药和配方
本文中所述的根据本发明的生物活性抗PTH抗体可用于无菌医药制备物或配方中，其用于降低血清PTH含量，由此有效治疗(例如)血清PTH异常升高的病理状况。所述病况包括(例如)甲状旁腺功能亢进(诸如原发性、继发性和三发性甲状旁腺功能亢进)、血钙过多和高磷酸盐血症。抗PTH抗体较佳拥有足以将PTH强效抑制至目标治疗范围内的亲和力，且较佳具有足以允许不经常给药的作用持续时间。在治疗血透析患者的继发性甲状旁腺功能亢进中，PTH应较佳通过以至少两天的最短持续时间投予抗体得以抑制以提供透析时期(其每周进行3次)之间的持续功效。所述的作用持续时间允许在血透析时静脉内给药，此导致对于患者和医疗人员的顺应性和方便性增加。在其它甲状旁腺功能亢进患者群中，两天以上，较佳3至5天以上，更佳7至10天以上的延长作用持续时间将允许通过替代非经肠途径(诸如皮下或肌肉内注射)的较不频繁并更为方便的给药进程。
高亲和力和延长作用持续时间的较佳选择延伸至甲状旁腺功能亢进的所有病况，诸如原发性甲状旁腺功能亢进，继发性甲状旁腺功能亢进和三发性甲状旁腺功能亢进。方便、延长的作用持续时间根据抗体的单剂量为较佳超过2天者，较佳为超过5至7天者，更佳为超过10天者。本发明的较佳抗体具有10-10M的KD，超过1.5天，较佳2至4天，更佳6至10天的半衰期，且对循环PTH的含量的抑制大于50％，较佳大于60％、65％或70％，更佳大于75％、80％或85％。在一较佳实施例中，提供显示出持续大于1.5天的大于75％抑制的抗体。
本发明的生物活性抗PTH抗体可单独使用或组合其它治疗剂使用。举例而言，目前认可的对由于慢性肾衰竭(CRF)引起的继发性甲状旁腺功能亢进的疗法由以下物质组成：(1)钙三醇(活性形式的维生素D)和类似物，其作用于促进胃肠道中钙的吸收，(2)与食物共进的碳酸钙，其用于结合磷酸盐并防止其在肠中的吸收(3)其它磷酸盐结合剂。CRF中继发性甲状旁腺功能亢进的一主要原因是直接作用于甲状旁腺使其产生PTH的血清磷酸盐的高含量。由于肾衰竭，磷酸盐含量由于磷酸盐排泄不足而增加。上述目前的治疗方法作用于防止骨再吸收并可在治疗方法中与本文中所述的本发明的抗体组合使用。
当体内投药使用时，抗体配方应该是无菌的。此可(例如)在冻干和重新形成之前或之后通过无菌过滤膜过滤来容易地完成。所述抗体通常以冻干形式或在溶液中储存。通常将治疗抗体组合物置于具有无菌进入孔的容器中，例如具有允许取回配方的接合器的静脉内溶液袋或管瓶，所述接合器为诸如可由皮下注射针刺透的塞子。
抗体的投药途径是根据已知方法，例如经静脉内、腹腔内、脑内、肌肉内、眼内、动脉内、鞘内、吸收或病灶内途径注射或灌输，或通过以下提及的持续释放系统。抗体较佳通过灌输或快速注射连续投予。
治疗上使用的抗体有效量取决于(例如)治疗目标、投药途径和患者病况。因此临床治疗医生必须滴定剂量并根据获得最佳治疗效果的要求修改投药途径。通常，临床医生投予抗体至所达到的剂量达成所要效果。此疗法进展可容易地通过常规分析或通过本文中所述的分析进行监测。
根据本发明的抗体可以具有医药上可接受的载剂的混合物形式来制备。此治疗组合物可静脉内或通过鼻或肺，较佳作为液体或粉末气溶胶(冻干形式)投予。所述组合物也可根据需要非经肠或皮下投予。当系统投药时，所述治疗组合物应是无菌、无热原的且处于适当考虑pH值、等渗性和稳定性的非经肠可接受溶液中。这些条件为所属领域的技术人员所知。
简而言之，通过将具有所要纯度的本文所述的本发明化合物与生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂混合来制备所述化合物剂量配方以用于储存或投药。所述材料在所用剂量和浓度下对于接受者无毒性，且包括缓冲液，诸如TRIS HCl、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐或其它有机酸盐；抗氧化剂，诸如抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)肽，诸如聚精氨酸；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露糖醇或山梨糖醇；平衡离子，诸如钠离子和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN、PLURONICS或聚乙二醇。
可根据常规医药实践调配用于注射的无菌组合物，如Remington′s PharmaceuticalSciences(第18版，Mack Publishing Company，Easton，PA 1990)所述。举例而言，需要将活性化合物溶解或悬浮于媒剂中，所述媒剂诸如水或自然存在的植物油，像芝麻油、花生油或棉花籽油或合成脂肪媒剂，像油酸乙酯和其类似物。可根据已接受的医药实践并入缓冲液、防腐剂、抗氧化剂和其类似物。
持续释放制备物的适当实例包括固体疏水性聚合物(含有多肽)的半渗透基质，所述基质为成形物品、膜或微胶囊的形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如Langer等人，J.Biomed Mater.Res.，15：167-277(1981)和Langer，Chem.Tech.，12：98-105(1982)描述的聚(丙烯酸2-羟乙酯)，或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利第3,773,919号、EP58,481)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等人，Biopolymers，22：547-56(1983))、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯(Langer等人，上述)、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物(诸如LUPRON DepotTM)(包含乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)的注射用微球体)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。
尽管诸如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸的聚合物能够使用分子释放超过100天，但某些水凝胶释放蛋白质持续较短的时期。当经封囊的蛋白质在体内保持持续长时间时，其可因在37℃下暴露于水份而变性或聚集，从而导致生物活性损失和免疫原性可能改变。可取决于所涉及的机制设计使蛋白质稳定的合理策略。举例而言，若发现聚集机制为通过二硫化物互换形成分子间S-S键，则可通过如下方法达成稳定：修饰巯基残基，自酸性溶液冻干，控制水份含量，使用适宜的添加剂并形成特定的聚合物基质细合物。
持续释放组合物也包括脂质体封闭的本发明抗体。含有所述抗体的脂质体根据本身已知的方法制备：美国专利第DE 3,218,121号，Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688-92(1985)，Hwang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：4030-34(1980)，EP 52,322、EP 36,676、EP 88,046、EP 143,949、142,641，日本专利申请案83-118008，美国专利第4,485,045和4,544,545号和EP 102,324。
通过主治医师考虑已知可改变药物作用的各种因素来判定对于既定患者的抗体配方剂量，所述因素包括疾病的严重度和类型、体重、性别、饮食、投药时间和途径，其它医药品和其它相关临床因素。治疗有效剂量可通过体外或体内方法来判定。
治疗上使用的本发明抗体的有效量将取决于(例如)治疗目标、投药途径和患者病况。因此，临床治疗医生必须滴定剂量并根据获得最佳治疗效果的要求修改投药途径。典型日剂量的范围可为约0.001mg/kg至高达100mg/kg或更多，此取决于上述因素。所要剂量浓度包括0.001mg/kg、0.005mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg和100mg/kg或更多。通常，临床医生投予治疗性抗体至所达到的剂量达成所要效果。此疗法的进展可容易地通过常规分析或通过本文中所述进行监测。
                            实例
仅出于说明的目的提供下列实例，包括所进行的实验和达成的结果，且不应将其解释为对本文中所述的本发明的限制。
                            实例1
                          PTH抗原制备
本文描述的实验中使用下列PTH肽。
人类PTH(1-84)：
SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVJINFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ(SEQ ID NO：81)
人类PTH(1-34)：
SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLKKKLQDVHNF(SEQ ID NO：82)
人类PTH(7-84)：
LMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPKKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ(SEQ ID NO：83)
人类PTH(18-48)：
MERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGS(SEQ ID NO：84)
人类PTH相关肽(1-34)：
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTA(SEQ ID NO：85)
大鼠PTH(1-84)：
AVSEIQLMHNLGKHLASVERMQWLRKKLQDVHNFVSLGVQMAAREGSYQRPTKKEENVLVDGNSKSLGEGDKADVDVLVKAKSQ(SEQ ID NO：86)
大鼠PTH(1-34)：
AVSEIQLMHNLGKHLAS VERMQWLRKKLQDVHNF(SEQ ID NO：87)
猕猴PTH(1-84)：
SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFIALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNILVESHEKSLGEADKADVDVLTKAKSQ(SEQ ID NO：88)。
这些肽皆可自Bachem California Inc.，Torrance，CA.购得。猕猴PTH(1-84)也可自CS Bio Company，Inc.，San Carlos，CA.购得。
抗原制备如下制备用于XenoMouse动物免疫的抗原。将人类PTH 1-34(500mcg)与大鼠PTH 1-34(500mcg)混合且将其溶解于500mcL结合缓冲液(0.1M MES，0.9MNaCl，pH 4.7)中。将两毫克钥孔血蓝蛋白(KLH；Pierce，Rockford，IL)溶解于200mcL蒸馏水中且接着添加至PTH混合物中。通过添加50mcL 10mg/mL 1-乙基-3-[3-二甲氨丙基]碳化二亚胺盐酸盐(EDC，Pierce，Rockford，IL)的储备溶液且在室温下将混合物培育2小时使PTH与KLH交联。通过经1kDa截止膜对抗PBS pH7.4进行隔夜透析来移除未反应的EDC。
                            实例2
                          抗PTH抗体
抗体产生
动物免疫通过相继免疫XenoMouse小鼠(XenoMouseXG2，Abgenix，Inc.Fremont，CA)形成对抗PTH的单克隆抗体。使用如上所述偶合于KLH的合成34mer人类和大鼠PTH(50/50)作为抗原。每只小鼠用10μg与完全福氏佐剂(CFA，Sigma，Oakville，ON)1∶1体积比混合的抗原进行初始免疫。首先每只小鼠用10μg与不完全福氏佐剂(IFA，Sigma，Oakville，ON)1∶1体积比混合的抗原进行随后推进，继而注射3次10μg与IFA1∶1体积比混合的抗原，且接着将每只小鼠最后推进10μg与IFA 1∶1体积比混合的抗原。具体来讲，各小鼠通过尾根部皮下注射进行免疫。在第0、14、28、42和54天免疫动物。在第49天抽取动物血液以获得用于下述采集选择的血清。
采集选择动物通过ELISA测定抗PTH抗体的滴定度。在4度下隔夜将抗PTH抗体滴定度(84mer；1μg/mL)涂覆至Costar Labcoat通用结合聚苯乙烯96孔板(Corning，Acton，MA)上。移除含有未结合PTH的溶液且用UV光(365nm)将板处理4分钟(4000微焦)。用dH2O将板洗涤5次。在来自1∶100初始稀释液一式两份(duplicate)的1∶2稀释的2％牛乳/PBS中滴定来自经PTH免疫动物，或天然XenoMouse动物的XenoMouse血清。最后的孔留下空白。用dH2O将板洗涤5次。在室温下以1μg/mL的最终浓度添加山羊抗人类IgG Fc特异性辣根过氧化物酶(HRP，Pierce，Rockford，IL)结合抗体持续1小时。用dH2O将板洗涤5次。添加TMB产色底物(Gaithersburg，MD)持续30分钟而使板显影，且通过添加1M磷酸来终止ELISA。自450nm下的光密度测定个体XenoMouse动物的特定滴定度且示于表2中。滴定度表示为血清稀释的倒数，且因此数值越高对PTH的体液免疫反应越强。
       表2
  小鼠标号   滴定度
  M469-1   16000
  M469-2   4000
  M469-3   16000
  M469-4   32000
  M469-5   8000
  M469-6   32000
  M469-7   8000
  M469-8   32000
  M469-9   ＞32000
  M469-10   3200
  天然   1000
以表2中所示的血清学数据为基础采集选择XenoMouse动物(M469-4、M469-6、M469-8和M469-9)。
B细胞的培养和选择培养来自采集动物的B细胞且如Babcook等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：7843-48(1996)中所述分离分泌PTH特异性抗体的那些细胞。使用如上述执行的ELISA鉴定主要的PTH特异性孔。相对于PTH筛选以500、250、125或50个细胞/孔培养的100个板以鉴定抗原特异性孔且98个孔显示出显著超出背景(0.1)的OD，其中的代表性样本示于表3中。
                                    表3
  组织   如下截止OD之上的阳性
  0.1   0.2   0.3   0.4   0.5   0.6   0.7   0.8   0.9   1.0   1.5   2.0
  500个细胞/孔的混合LN(板#279-303)   861   133   52   30   23   16   11   9   8   6   1   1
  250个细胞/孔的混合LN(板#304-328)   436   90   34   23   17   13   8   7   6   5   1   0
  125个细胞/孔的混合LN(板#329-353)   32   8   7   3   3   1   1   1   1   1   0   0
  50个细胞/孔的混合LN(板#354-378)   31   7   5   5   2   2   1   1   1   0   0   0
  总数阳性：   1360   238   98   61   45   32   21   18   16   12   2   1
这些数据指示出非常低的命中率且指示所述孔在所有细胞稀释下对于抗原特异性为单克隆的。关于抗原对这些98个阳性孔进行再筛选(表4)且发现仅48个孔重复作为明显的抗原特异性孔。分析这些48个孔与hPTH7-84或hPTH18-48的结合。需要特异于hPTH7-34的抗体，因为其不可能与人类PTHrp交叉反应。鉴定出总计14个孔具有与hPTH7-84或hPTH18-48的反应性且随后分析这些孔用于如下所述的有限抗原ELISA分析中的相对亲和力。292A10孔为抗PTH mAb 183的来源。此孔与人类PTH 1-84(OD 1.4)、人类PTH 7-48(OD 1.95)、人类PTH 18-48(OD 3.26)和大鼠PTH 1-48(OD3.26)良好地结合。这些数据是定性的且可用于指示此抗体结合氨基酸18与34之间的PTH(因为免疫原仅为N末端片段1-34)且指示此抗体能够结合大鼠PTH。
有限抗原分析有限抗原分析为一种亲和力将B细胞培养物上清液中的抗原特异性抗体相对于所有其它抗原特异性抗体归类的方法。概念为在仅具有最高亲和力的抗体能够结合的非常低的抗原涂层存在下，平衡状态的任何可检测含量。(参见例如2001年12月3日申请的U.S.S.N.60/337,250)。在96孔培养板上于室温下使生物素酰化的PTH以25ng/mL与抗生蛋白链菌素板结合持续30分钟。将各板用dH2O洗涤5次，之后将40μL于具有0.05％叠氮化钠的PBS中的1％牛乳添加至所述板，继而将10μL B细胞上清液添加至各孔。在振荡器上室温下经18小时后，再次将各板用dH2O洗涤5次。向各孔中添加50μL 1μg/mL Gt抗人类(Fc)-HRP。室温下1小时后，再次将各板用dH2O洗涤5次且将50μL TMB底物添加至各孔。通过将50μL 1M磷酸添加至各孔终止反应且在波长450nm下阅读各板得出表4中所示的结果。
对B细胞培养物上清液中的抗原特异性抗体的定量已指示出浓度范围为10ng/mL至500ng/mL。因为难以测定每个抗原特异性孔中抗原特异性抗体的浓度，所以将自有限抗原分析产生的结果在可比较的浓度(2ng/mL至100ng/mL)下与重组抗体的滴定相比较。在此分析中，少于一半的抗体能够呈现可检测的结合且根据O.D.测量在所有浓度下292A10孔(抗PTH mAb 183)皆明显优于其它培养物上清液和重组抗体(表4)。
                                        表4
  板标号   有限Ag OD   1′OD   Hu 84mer   7-84mer   18-48mer   大鼠84mer
  292A10(XG2-1S31J   2.747   0.992   1.40   1.95   3.26   0.62
  302A7(XG2-168)   1.376   0.317   0.35   0.36   2.66   0.19
  361B2   0.747   0.416   0.48   0.37   0.26   0.49
  331H6   0.322   0.312   0.52   0.45   2.40   0.24
  287E7   0.261   0.682   0.71   0.13   0.36   1.03
  315D8   0.221   0.441   0.14   0.17   0.29   0.31
  279E6   0.213   0.379   0.31   0.10   0.17   0.19
  313D5   0.170   0.664   0.12   0.29   0.43   0.30
  339F5   0.120   0.319   0.40   0.21   0.11   0.25
  279D2   0.114   0.353   0.31   0.11   0.27   0.18
  307H1   0.084   0.401   0.10   0.14   0.30   0.42
  308A1   0.079   0.312   0.19   0.22   0.30   0.45
  284D9(XG2-262)   ND   0.585   1.46   0.07   0.25   2.11
  322F2   ND   1.87   1.01   0.15   0.34   1.41
PTH特异性溶血空斑分析需要多种专用试剂用以进行所述分析。这些试剂如下制备。
绵羊红细胞(SRBC)的生物素酰化将SRBC储存于RPMI培养基中作为25％的原料。通过将1.0mL原料等分至15mL falcon试管中，旋转沉淀细胞且移除上清液来获得250μL SRBC装有细胞的球粒。接着在50mL试管中将细胞球粒再悬浮于pH8.6的4.75mL PBS中。在单独的50mL试管中，将2.5mg Sulfo-NHS生物素添加至pH 8.6的45mLPBS中。生物素一旦完全溶解时，即添加5mL SRBC且将试管在室温下旋转1小时。将SRBC以3000g离心5分钟，排出上清液且用pH 7.4的25mL PBS洗涤。将洗涤循环重复3次，接着将4.75mL免疫细胞培养基(具有10％FCS的RPMI 1640)添加至250μL生物素酰化的SRBC(B-SRBC)球粒中以缓和地再悬浮B-SRBC(5％B-SRBC原料)。将原料储存于4℃下直至需要。
B-SRBC的抗生蛋白链菌素(SA)涂层将1mL 5％B-SRBC原料转移至新鲜eppendorf试管中。在微量离心机中8000rpm(6800rcf)下以脉冲旋转使B-SRBC细胞成球粒，排出上清液，将球粒再悬浮于pH7.4的1.0mLPBS中，且重复离心。将洗涤循环重复2次，接着将B-SRBC球粒再悬浮于pH7.4的1.0mLPBS中而得到5％的最终浓度(体积比)。添加10μL10mg/mL抗生蛋白链菌素(CalBiochem，San Diego，CA)储备溶液且将试管混合且在室温下旋转20分钟。重复洗涤步骤且将SA-SRBC再悬浮于pH 7.4的1mLPBS(5％(体积比))中。
SA-SRBC的人类PTH1-34涂层将SA-SRBC用10μg/mL生物素酰化的人类PTH 1-34涂覆，混合并在室温下旋转20分钟。如上用pH 7.4的1.0mLPBS洗涤SRBC两次。将涂覆PTH的SRBC再悬浮于RPMI(+10％FCS)达成5％的最终浓度(体积比)。
通过免疫荧光法(IF)测定PTH-SRBC的质量分别将10μL 5％SA-SRBC和10μL 5％涂覆PTH的SRBC添加至单独的新鲜1.5mL含有40μL PBS的eppendorf试管中。将对照人类抗PTH抗体以45μg/mL添加至各SRBC样本。将试管在室温下旋转25分钟，且接着用100μL PBS洗涤细胞3次。将细胞再悬浮于50μL PBS且用2mcg/mL与Alexa488(Molecular Probes，Eugene，OR)结合的Gt抗人类IgG Fc抗体培育。将试管在室温下旋转25分钟，且接着用100μL PBS洗涤且将细胞再悬浮于10μL PBS中。将10μL染色细胞点至清洁的玻璃显微镜载玻片上，盖上玻璃盖玻片，在荧光下观察，且定级为0-4个任意标度。
浆细胞的制备预先通过各种分析鉴定单个微量培养孔的内容物，采集含有分泌相关免疫球蛋白的B细胞克隆者。使用100-1000μL微量吸管，通过添加37C RPMI(+10％FCS)回收孔的内容物。通过移液操作再悬浮细胞且接着将其转移至新鲜的1.5mLeppendorf试管中(最终体积大约为500-700μL)。室温下在微量离心机中以1500rpm(240rcf)将细胞离心2分钟，接着将试管转动180度且再次以1500rpm旋转2分钟。排出冷冻的培养基且将免疫细胞再悬浮于100μL RPMI(10％FCS)中，接着离心。重复这种用RPMI(10％FCS)进行的洗涤且将细胞再悬浮于60μL RPMI(FCS)中并且冰上储存直到预备使用。
空斑分析预先用聚硅氧边缘制备玻璃载玻片(2×3英寸)且允许其在室温下隔夜固化。在使用前，在玻璃表面上用大约5μL SigmaCoat(Sigma，Oakville，ON)均匀擦拭对载玻片进行处理，允许其干燥且接着用力擦拭。向60μL细胞样本中添加各60μL的涂覆PTH的SRBC(5％体积比原料)，在RPMI(FCS)中制备4倍的几内亚(guina)猪补体(Sigma，Oakville，ON)原料，和4倍的增强血清原料(RPMI(FCS)中1∶900)。将混合物(3-5μL)点至制备的载玻片上且用未经稀释的石蜡油覆盖斑点。在37℃下将载玻片培育最短45分钟。
空斑分析结果用人类PTH 1-34对绵羊红细胞的涂覆操作非常良好。与单独的第二检测试剂(0/4)相比，使用检测涂层的对照人类抗PTH抗体通过免疫荧光显微镜定性测定涂层非常高(4/4)。在仅涂覆抗生蛋白链菌素的红细胞上不存在使用对照人类抗PTH抗体检测的信号(0/4)。接着使用这些红细胞自292A10孔鉴定抗原特异性浆细胞(参见表5)。在显微操纵收回抗原特异性浆细胞后，在单浆细胞上通过RT-PCR回收编码可变区基因的基因。
                 表5
  板标号   单细胞数
  292A10   PTH-SCX-179-190
  302A7   PTH-SCX-164-178
                 抗PTH mAb 183的表达、纯化和表征
表达在分离单浆细胞后，提取mRNA并执行反转录酶PCR产生cDNA。使用聚合酶链式反应特定扩增编码可变重链和轻链的cDNA。将可变重链区克隆至IgG2表达载体中。此载体通过将人类IgG2的恒定域克隆至pcDNA3.1+/Hygro(Invitrogen，Burlington，ON)的多个克隆部位来产生。将可变轻链区克隆至IgK表达载体。此载体通过将人类IgK的恒定域克隆至pcDNA3.1+/Neo(Invitrogen，Burlington，ON)的多个克隆部位来产生。接着将重链和轻链表达载体共脂转染至70％融合人类胚胎肾293细胞的60mm培养皿中且允许经转染的细胞作为原始浆细胞分泌具有相同特异性的重组抗体持续24小时。自HEK293细胞采集上清液(3mL)且用特定检测人类IgG的夹心ELISA证明完全抗体(抗PTH mAb 183)的分泌(表7)。使用ELISA通过重组抗体与PTH的结合来评定抗PTH mAb 183的特异性(表6)。此抗体结合大鼠PTH的能力也使用ELISA方法(表7)根据O.D.测量来证明。
                     表6
  克隆   细胞号   分泌   结合
  292A10   SC-PTH-XG2-183   ＞1∶64   1∶16
             表7
  浓度   抗-PTH mAb 183
  净   3.291   3.432
  1/2   3.266   3.384
  1/4   3.397   3.456
  1/8   3.123   3.272
  1/16   2.722   3.006
  1/32   2.569   2.691
  1/64   1.893   2.362
  空白   0.215   0.182
如下执行分泌ELISA测试。用2mg/mL山羊抗人类IgG H+L O/N如同结合板涂覆对照板。将人类或大鼠PTH(84mer，1μg/mL)涂覆于Costar Labcoat通用结合聚苯乙烯96孔板上且4度下隔夜保存。将板用dH2O洗涤5次。自未经稀释的微脂转染上清液以1∶2滴定7个孔的重组抗体。将板用dH2O洗涤5次。室温下以1μg/mL的最终浓度添加山羊抗人类IgG Fc特异性HRP结合抗体持续1小时用于进行分泌和两种结合分析。将板用dH2O洗涤5次。添加TMB 30分钟使板显影且通过添加1M磷酸终止ELISA。分析各ELISA板测定450nm下各孔的光密度。
抗PTH mAb 183的纯化为更大规模产生抗PTH mAb 183，将重链和轻链表达载体(每培养皿2.5μg各条链)脂转染至10个100mm培养皿中，所述培养皿为70％融合HEK293细胞。将经转染的细胞在37℃下培育4天，采集上清液(6mL)且用6mL新鲜培养基替换。在第7天，移除上清液且与初始采集物(来自10个板共120mL)混合。使用Protein-A Sepharose(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)亲和力色谱(1mL)自上清液纯化抗PTH mAb 183抗体。自Protein-A柱用500mcL pH 2.5的0.1M甘氨酸洗脱抗体。将洗出液在pH 7.4的PBS中透析且过滤杀菌。通过用于评定纯度和产率的非降低性SDS-PAGE分析抗体。
在美国典型菌种保藏中心，1080University Blvd.，Manassas，VA 20110-2209，在布达佩斯(Budapest)条约条件下已制成编码抗PTH mAb 183重链和轻链的质粒DNA的寄存物，重链的ATCC寄存号为PTA-4311且轻链的ATCC寄存号为PTA-4310。材料寄存不允许承认本文所含的书面说明不足以能够实施本发明的任何实施例，包括其最佳模式，也不应将其解释为将权利要求的范围限定于其提供的特定说明。将根据适用的法律和/或规则要求取消对允许使用寄存物的所有限制。
抗PTH mAb 183结合PTH相关肽(1-34)的失效抗PTH mAb 183结合PTH相关蛋白(PTHrP)的能力通过其在饱和含量PTH相关肽的存在下经3-log滴定结合人类PTH1-34的能力来间接评定。室温下使生物素酰化的人类PTH 1-34以1μg/mL与抗生蛋白链菌素板结合持续30分钟。将板用dH2O洗涤5次。接着在5μg/mL PTH相关蛋白1-34的存在或不存在下自1μg/mL以1∶2滴定抗PTH mAb 183。接着将经滴定的抗体转移至涂有人类PTH 1-34的板中且允许在室温下结合1小时。在将板用dH2O洗涤5次后，向各板添加1μg/mL的50μL Gt抗人类(Fc)-HRP且将板保持在室温下1小时。在将板用dH2O洗涤5次后，向各孔添加50μLTMB底物。为终止反应，向各孔添加50μL 1M磷酸。在450nm波长下阅读板。如表8中所示在5000ng/mL PTHrp存在下甚至在1ng/mL抗PTH mAb 183下不存在抗PTH mAb 183结合人类PTH 1-34的抑制。
                             表8
                      抗PTH mAb 183的稀释
  1μg/mL   500ng/mL   250ng/mL   125ng/mL   62.5ng/mL   31.3ng/mL   15.6ng/mL
  +PTHrp(5μg/mL)   2.248   2.184   2.110   2.026   1.908   1.903   1.788
  2.298   2.229   2.095   2.012   1.968   1.950   1.753
  -PTHrp   2.269   2.205   2.063   2.067   J.946   1.854   1.848
  2.342   2.188   2.105   2.019   1.975   1.880   1.715
                       抗PTH mAb 183的稀释
  7.8ng/mL   3.9ng/mL   2.0ng/mL   1ng/mL   空白
  +PTHrp(5μg/mL)   1.600   1.251   0.860   0.542   0.077
  1.598   1.316   0.900   0.583   0.087
  -PTHrp   1.461   1.115   0.800   0.496   0.069
  1.508   1.203   0.758   0.500   0.077
动力学分析使用KinExA技术评估抗PTH抗体(抗PTH mAb 183)的动力学测量值。此种方法涉及以溶液为基础测定平衡状态下的克式量亲和力测量值。使用两种已知抗体浓度和未知抗原浓度的对偶曲线分析测定人类34mer、人类84mer、猕猴84mer和大鼠84mer的KD测量值。室温下对于合成人类PTH(1-84或1-34)和猕猴PTH(1-84)(CSBio Company，Inc.，San Carlos，CA)测定KD大约为10-30pM。室温下合成大鼠PTH 1-84的抗PTH mAb 183的KD较低(3000pM)。
同样测定抗PTH mAb 183对于来自末期肾衰竭血透析患者的混合血清中的人类PTH的亲和力。使用以免疫分析为基础的斯卡查德(Scatchard)分析测定结合亲和力。对于外源性人类PTH的结合亲和力为60pM，此与使用KinExA技术观察到的相对于合成人类PTH的高亲和力一致。
同样测定其它PTH特异性单克隆抗体的亲和力(KD))(表9)。根据使用BiaCore(Amersham Pharmacia)技术所测定，发现这些抗体具有显著低于抗PTH mAb 183(80pM)的亲和力(350-5000pM)。还发现这些重组抗体中的大多数定位于氨基酸(18-34)内所含PTH上的与抗PTH mAb 183类似的区域或表位(表10)。此区域或表位已显示出与受体结合有关，且因此对抗此表位的抗体具有很强的展示中和活性的可能性(Duvos等人，Bone，(1995)17：403-406)。
                    表9
  抗原   KD   KD高   KD低
  人类PTH(1-84)   22pM   39pM   12pM
  人类PTH(1-34)   33pM   65pM   14pM
  猕猴PTH(1-84)   10pM   18pM   5pM
  大鼠PTH(1-84)   3nM   5nM   2nM
                                表10
孔标号   抗-PTH mAb标号   25℃下的KD(nM)-34mer   37℃下的KD(nM)-34mer   37℃下的KD(nM)-84mer   重组bin
  133A8   011   1.0   3.5   ND   18-34
  126B1   026   3.0   9.5   ND   18-34
  123B12   045   0.5   2.0   ND   18-34
  H9G2   057   1.0   1.0   ND   18-34
  133D2   086   4.7   16.7   ND   18-34
  135H11   124   0.5   3.3   ND   18-34
  132G12   140   0.8   5.2   ND   18-34
  130A1   163   3.0   7.9   41.1   18-34
  302A7   168   2.7   2.6   9.9   18-34
  NA   168g2/183k   0.28   0.64   ND   ND
  292A10   183   0.08   0.1   1.0   18-34
  267D10   214   0.8   0.4   1.6   1-7
  275A4   225   0.35   0.6   7.1   1-7
  264E5   238   0.6   0.2   3.9   1-7
  284D9   262   ND   ND   ND   18-34
  252G11   275   ND   ND   ND   1-7
  130C6   302   ND   ND   ND   1-34
其它的动力学常数可使用其产品文献中所述的方法自BiaCore数据计算。结合速度常数(ka)为表示抗体与目标抗原的结合强度(程度)以抗原-抗体反应动力学为基础所计算的值。离解速度常数(kd)为表示此单克隆抗体自目标抗原离解的强度(程度)以抗原-抗体反应动力学所计算的值。离解常数(KD)是通过将离解速度常数(kd)值除以结合速度常数(ka)算得的值。使用这些常数作为表示抗体对于抗原的亲和力和抗原的中和活性的指标。计算表10中所示抗体的ka和kd值且显示于表11中。
                              表11
AB-PTH-XG2-Xxx   25℃下的ka(nM)-34mer   25℃下的kd(nM)-34mer   37℃下的ka(nM)-34mer   37℃下的kd(nM)-34mer   37℃下的ka(nM)-84mer   37℃下的kd(nM)-84mer
  011   2.3×106   2.2×10-3   3.6×106   1.3×10-2   ND   ND
  026   1.9×106   5.8×10-3   3.1×106   2.9×10-2   ND   ND
  045   1.1×107   5.5×10-3   1.1×107   2.2×10-2   ND   ND
  057   5.6×106   5.7×10-3   1.1×107   1.1×10-2   ND   ND
  086   2.2×106   1.0×10-2   4.3×106   7.2×10-2   ND   ND
  124   7.9×106   4.3×10-3   7.3×106   2.4×10-2   ND   ND
  140   5.9×106   4.6×10-3   5.2×106   2.7×10-2   ND   ND
  163   1.5×106   4.5×10-3   3.4×106   2.7×10-2   3.8×105   1.6×10-2
  168   9.3×105   2.5×10-4   3.1×106   8.1×10-3   5.2×105   5.2×10-3
  168g2/183k   3.0×106   8.3×10-4   5.3×106   3.4×10-3   ND   ND
  183   4.2×106   3.5×10-4   1.5×107   1.3×10-4   2.0×106   2.0×10-3
  214   1.5×105   1.2×10-4   2.6×105   1.1×10-4   1.6×105   2.5×1-4
  225   2.9×105   1.0×10-4   8.9×105   5.5×10-4   2.7×105   1.9×10J
  238   1.7×105   1.0×10-4   7.6×105   1.8×10-4   2.1×105   8.2×10-4
  262   7.4×106   6.8×10-3   1.7×107   4.2×10-2   ND   ND
  275   4.9×105   9.8×10-5   ND   ND   ND   ND
  302   ND   ND   ND   ND   ND   ND
抗PTH mAb 183对PTH生物活性的体外中和PTH通过N末端34氨基酸将其生物信号传递至反应细胞。抗PTH mAb 183结合氨基酸18-34且因此可能够抑制生物活性。使用大鼠成骨细胞系UMR-106作为模型系统。人类和大鼠PTH结合UMR-106细胞且活化PTH受体。受体经活化后即使细胞内钙含量增加。通过负载钙敏感性荧光染料的细胞中的荧光改变来监测细胞内钙，所述荧光由荧光成像平板阅读器(FLIPR)测量。为判定抗PTH mAb 183是否可中和PTH的作用，用PTH预先培育抗体且通过FLIPR检测UMR-106细胞中其对PTH诱导的钙流量的作用。抗PTH mAb 183以剂量依赖方式阻断由200nM人类PTH 1-34诱导的钙流量。如图1中所证明抗PTH mAb 183的IC50值大约为100nM。
抗PTH mAb 183对PTH生物活性的体内中和通过将合成人类PTH 34mer注入大鼠中且随后投予抗PTH mAb 183或PBS来评定抗PTH mAb 183体内中和人类PTH的能力。在研究的第1天开始经1周的渗透泵(50微克/公斤/天)皮下投予34mer。使用对注入的PTH血钙过多反应作为评定抗PTH抗体中和PTH生物活性的生物标记。在大鼠中形成严重的血钙过多症后，在研究的第3天投予抗PTH mAb 183(3或10mg/kg)或同种型匹配的对照抗体(PK 16.3.1，10mg/kg)。抗PTH mAb 183在两种剂量水平下皆逆转整个实验过程中所注入的PTH的血钙过多作用(图2)。
                             实例3
                       抗PTH抗体的结构分析
定序上表1中所示抗体的可变重链和可变轻链以测定其DNA序列。所有抗PTH抗体的完全序列信息显示于同此呈递的序列表中，包括各γ和κ链组合的核苷酸和氨基酸序列。
分析可变重链核苷酸序列以测定VH家族、D区序列和J区序列。接着转译所述序列以测定基本氨基酸序列且与种系VH、D和J区序列比较以评定体细胞的超突变。所有抗PTH重链的基本氨基酸序列显示于图3中。种系序列显示于上文且用新的氨基酸序列指示突变。序列中与所示种系序列相同的氨基酸用虚线(-)表示。类似地分析轻链以测定V和J区并鉴定来自种系序列的任何体细胞突变(图4)。
                          实例4
                  抗PTH抗体作为诊断剂的用途
样本中PTH抗原的检测
可进行酶联免疫吸附分析(ELISA)以检测样本中PTH抗原。在所述分析中，使微量滴定板(诸如96孔微量滴定板或384孔微量滴定板)的孔吸附针对所述抗原的第一单克隆抗体历经几小时。固定抗体充当对于可存在于测试样本中的任何抗原的捕获抗体。冲洗孔且用诸如乳蛋白质或白蛋白的阻断剂进行处理以防止分析物的非特异性吸附。
随后用怀疑含有抗原的测试样本或用含有标准量抗原的溶液处理孔。所述样本可(例如)为来自怀疑具有应视为病理诊断的循环抗原含量的受检者的血清样本。
在冲洗掉测试样本或标准物后，将孔用通过与生物系结合而经标记的第二完仝人类单克隆抗PTH抗体处理。经标记的抗PTH抗体充当检测抗体。在冲洗掉过量的第二抗体后，将孔用抗生物素蛋白结合的辣根过氧化物酶(HRP)和适当的产色底物处理。通过与自标准样本形成的标准曲线比较来测定测试样本中抗原的浓度。
此ELISA分析提供用于检测测试样本中PTH抗原的高特异性和非常灵敏的分析。
患者样本中PTH浓度的测定
可进行夹心ELISA以定量人类血清中的PTH含量。在夹心ELISA中使用的两种单克隆抗PTH抗体识别PTH分子上不同的表位。如下执行ELISA：将50μl涂覆缓冲液(0.1M NaHC03，pH 9.6)中的捕获抗PTH抗体以2μg/mL的浓度涂覆至ELISA板(Fisher)上。在4℃下隔夜培育后，25℃下将板用200μl阻断缓冲液(PBS中0.5％BSA、0.1％Tween 20、0.01％硫柳汞(Thimerosal))处理1小时。使用PBS中的0.05％Tween 20(洗涤缓冲液，WB)洗涤板(3次)。将正常或患者血清(Clinomics，Bioreclaimation)稀释于含有50％人类血清的阻断缓冲液中。在4℃下用血清样本隔夜培育板，用WB洗涤，且接着在25℃下用100微升/孔的生物素酰化的检测抗PTH抗体培育1小时。洗涤后，将板用HRP-抗生蛋白链菌素培育15分钟，如前进行洗涤，且接着用100微升/孔的H2O2中的间-苯二胺(Sigma显影溶液)处理板以使色彩产生。用50微升/孔的H2S04(2M)终止反应且使用ELISA板阅读器在492nm下分析。通过使用4参数曲线拟合程序与纯化PTH抗原的稀释物比较来计算血清样本中PTH抗原的浓度。
                            实例5
           抗PTH抗体于治疗继发性甲状旁腺功能亢进的用途
为测定抗PTH抗体治疗患有继发性甲状旁腺功能亢进人类患者的体内作用，在此项研究中招募多名患有末期肾病的人类患者。所选患者在招募前经历透析至少4个月。各患者皆具有未接受治疗时大于400pg/mL的高血清PTH值的病史。
经一定量的时间给患者注射有效量的抗PTH抗体或安慰剂，所述安慰剂含有与调配抗PTH抗体所用相类似的赋形剂。在治疗过程中，周期监测患者以测定血清钙、磷、骨钙素、骨碱性磷酸酶、未结合的活性PTH、总PTH(与抗体结合或未结合)的含量和桡骨、髋骨和椎骨的骨矿物密度。
临床数据分析显示抗PTH抗体显著降低根据上述实例中所测定的循环活性PTH的含量。经治疗患者还显示出骨钙素和骨碱性磷酸酶血清含量的显著减少。经治疗的患者可证明在第一剂量后或在剂量逐步增加时血清钙的短暂性降低。随着时间流逝，与未经治疗患者的基线相比桡骨、髋骨和椎骨的骨矿物密度将增加。与此相反，用安慰剂治疗的患者维持增加的循环PTH含量和持久不变或减少的骨矿物密度。
前述书面说明应视为足以使所属领域的技术人员能够实施本发明。本文中所述的本发明不受寄存结构范围的限制，因为希望寄存实施例作为本发明的某些实施例的单一说明且任何功能上等效的结构在本发明的范围内。本文中材料寄存不允许承认本文所含的书面说明不足以能够实施本发明的任何实施例，包括其最佳模式，也不应将其解释为将权利要求的范围限定于其提供的特定说明。
本文中引用的所有参考文献，包括专利、专利申请案、论文、教科书和其类似物和其中所引用的参考文献全部(如同其还未曾引用过的程度)以引用的方式并入本文中。
前述说明和实例详述本发明的某些较佳实施例，且描述本发明者预期的最佳模式。然而，应了解无论文章中前述内容如何详细，但本发明仍可以多种方式实施且应根据附属的权利要求和其任何等效物进行解释。
                序列表
<110>艾伯吉尼斯公司
<120>针对甲状旁腺激素(PTH)
     之抗体和其用途
<130>ABGENIX.092VPC
<160>97
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>360
<212>DNA
<213>智人
<400>1
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctctcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagacagggg 300
gattacgttt gggggagcta tgactcctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210>2
<211>120
<212>PRT
<213>智人
<400>2
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
 1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Ile Ile Ser Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Ieu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr Asp Ser Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>3
<211>333
<212>DNA
<213>智人
<400>3
gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggacg gccggcctcc 60
atctcctgta agtctagtca gagcctcctg gatagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc caaccggttc 180
tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgagaatc 240
agccgggtgg aggctgagga tgttgggatt tatttctgca tgccaagtat acatctgtgg 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa                              333
<210>4
<211>111
<212>PRT
<213>智人
<400>4
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Phe Cys Met Pro Ser
                85                  90                  95
Ile His Leu Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>5
<211>351
<212>DNA
<213>智人
<400>5
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc aacatctcaa gagatgattc aaaaaatacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a          351
<210>6
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Asn Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>7
<211>337
<212>DNA
<213>智人
<400>7
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaaata tttggattgg 120
ttcctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc tattcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct gcaaactccg 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaac                          337
<210>8
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Ile Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>9
<211>352
<212>DNA
<213>智人
<400>9
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggagtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
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gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag         352
<210>10
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>11
<211>337
<212>DNA
<213>智人
<400>11
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtaatg gatacaaata tttggattgg 120
tacctgcaga agccaggtca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc ttatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaac                          337
<210>12
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Ash Gly Tyr Lys Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln A la
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>13
<211>352
<212>DNA
<213>智人
<400>13
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
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ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccttgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactgctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc tg         352
<210>14
<211>117
<212>PRT
<213>智人
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
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<212>DNA
<213>智人
<400>15
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120
ttcctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc ttatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttgggatt tattattgca tgcaagctcg acaaactccg 300
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<212>PRT
<213>智人
<400>16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Arg Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<212>DNA
<213>智人
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caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
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gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagaccat 300
tgggagctac ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag         352
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<212>PRT
<213>智人
<400>18
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
        35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp His Trp Glu Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
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gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cacctggaca gccggcctcc 60
atctcctgca agtctagtca gagcctcctg gatagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120
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tctggagtgc catataggtt cattggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240
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<213>智人
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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile SerCys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Arg Ser Gly Gln Pro
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile His Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Tyr Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ala Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
                85                  90                  95
Lys Gln Phe Pro Phe Ile Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
            100                 105                 110
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<212>PRT
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<400>22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
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Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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Val Thr Val Ser Ser
        115
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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ccagggaagg ggctggactg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactaGgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a          351
<210>26
<211>117
<212>PRT
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<400>26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
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Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
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ttcctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc ttatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggccgt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaac                          337
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<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>28
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaaaacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag         352
<210>30
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
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Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Lys Thr
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Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
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Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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Val Thr Val Ser Ser
        115
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<211>112
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Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210>34
<211>117
<212>PRT
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<400>34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
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Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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        115
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 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Phe Lys Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>37
<211>370
<212>DNA
<213>智人
<400>37
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggact cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
tattactttg atagtagtgg ttttcctttt gactactgga gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctcag                                                        370
<210>38
<211>123
<212>PRT
<213>智人
<400>38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Tyr Phe Asp Ser Ser Gly Phe Pro Phe Asp Tyr
            100                 105                 110
Trp Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>39
<211>337
<212>DNA
<213>智人
<400>39
gatattgtaa tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaagta tttggagtgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggccgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaactct acaaattccg 300
ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaac                          337
<210>40
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>40
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Thr
                85                  90                  95
Leu Gln Ile Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>41
<211>352
<212>DNA
<213>智人
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc cgggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc agaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacgg cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag         352
<210>42
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Glu Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Gly Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
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<212>DNA
<213>智人
<400>43
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg cgtagtaatg gatacaacta tttggattgg 120
ttcctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc tgttcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcgggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
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<212>PRT
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Arg Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Val Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<212>DNA
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggact cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaagtgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
tattactttg atagtagtgg ttttcctttt gactactgga gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctcag                                                        370
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<212>PRT
<213>智人
<400>46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Ash Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Ser Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
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Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Tyr Phe Asp Ser Ser Gly Phe Pro Phe Asp Tyr
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Trp Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
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<211>337
<212>DNA
<213>智人
<400>47
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaagta tttggagtgg 120
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tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaactct acaaattccg 300
ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaac                          337
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<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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65                  70                  75                  80
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                85                  90                  95
Leu Gln Ile Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<213>智人
<400>49
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gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattt aaaaaaaacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
tattactttg atagtagtgg ttttcctttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctcag                                                        370
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<212>PRT
<213>智人
<400>50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Arg Ile Lys Ser Arg Thr Asp Gly Gly Thr Ala Asp Tyr Ala Ala
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Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Leu Lys Lys Thr
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Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
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Tyr Cys Thr Thr Tyr Tyr Phe Asp Ser Ser Gly Phe Pro Phe Asp Tyr
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Tyr Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
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<400>54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asn Ala
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<211>337
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gagattgtga tgacgcagtc tccactcaac ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
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tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
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agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaactct acaaattccg 300
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Asn Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
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Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
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            100                 105                 110
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<211>352
<212>DNA
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<400>57
gaaatgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agcgcctgga tgaactgggt ccgccaggct 120
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gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gggatgattc aaaaaactca 240
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            20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
His Cys Ser Thr Gly Ala Val Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>59
<211>338
<212>DNA
<213>智人
<400>59
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtccagtca gaacctcctg cgtagtaatg gatacaacta tttggaatgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagatttttc actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaatctct acaaactcct 300
ctcactttcg gcggtgggac caaggtggag atcaaacg                         338
<210>60
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<211>361
<212>DNA
<213>智人
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gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctagata catctttacc aactactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatat 180
agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca tgtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagacagggg 300
gattacgttt gggggagctt tgactcctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
g                                                                 361
<210>62
<211>120
<212>PRT
<213>智人
<400>62
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
 1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Arg Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Met Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Asp Tyr Val Trp Gly Ser Phe Asp Ser Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
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<211>334
<212>DNA
<213>智人
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gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60
atctcctgca agtctagtca gagcctcctg gatagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc caaccggttc 180
tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240
agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaagtat acagctgtgg 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaac                             334
<210>64
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<212>PRT
<213>智人
<400>64
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
            20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
                85                  90                  95
Ile Gln Leu Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<212>DNA
<213>智人
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaagtgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag         352
<210>66
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<212>PRT
<213>智人
<400>66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Ser Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
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gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagaaatg gatacaaata tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc ttatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattctac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaac                          337
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<212>PRT
<213>智人
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ser Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<212>DNA
<213>智人
<400>69
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaatgc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggactg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccacg 300
ggagctactt ttgactcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcatc tcc        353
<210>70
<211>117
<212>PRT
<213>智人
<400>70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Met Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
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<211>337
<212>DNA
<213>智人
<400>71
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctccta catagtaatg gatacaaatt tttggattgg 120
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tccggggtcc ctgacaggtt cagtggccgt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaac                          337
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<211>112
<212>PRT
<213>智人
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Lys Phe Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
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<212>DNA
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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctacgaca tgtactgggt ccgccaagct 120
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ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240
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ttcgtccgag ggctttttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag   358
<210>74
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>74
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Mer Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Glu Gln Phe Val Arg Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
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<212>DNA
<213>智人
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gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
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gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa ac                                          322
<210>76
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
 1               5                  10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
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<211>361
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agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca tgtccatcag caccgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagacagggg 300
gattacgttt gggggagctt tgactcctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
g                                                                 361
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<211>120
<212>PRT
<213>智人
<400>78
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
 1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Arg Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Met Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
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Ala Arg Gln Gly Asp Tyr Val Trp Gly Ser Phe Asp Ser Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
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gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggacg gccggcctcc 60
atctcctgta agtctagtca gagcctcctg gatagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaagtttc caaccggttc 180
tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgagaatc 240
agccgggtgg aggctgagga tgttgggatt tatttctgca tgccaagtat acatctgtgg 300
acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa                              333
<210>80
<211>111
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<400>80
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
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        35                  40                  45
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Phe Cys Met Pro Ser
                85                  90                  95
Ile His Leu Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>81
<211>84
<212>PRT
<213>智人
<400>81
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
 1               5                  10                  15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
            20                  25                  30
Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser
        35                  40                  45
Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu
    50                  55                  60
Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys
65                  70                  75                  80
Ala Lys Ser Gln
<210>82
<211>34
<212>PRT
<213>智人
<400>82
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
 1               5                  10                  15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
            20                  25                  30
Asn Phe
<210>83
<211>78
<212>PRT
<213>智人
<400>83
Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu
 1               5                  10                  15
Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe Val Ala Leu Gly
            20                  25                  30
Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser Gln Arg Pro Arg Lys Lys
        35                  40                  45
Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu Lys Ser Leu Gly Glu Ala
    50                  55                  60
Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys Ala Lys Ser Gln
65                  70                  75
<210>84
<211>31
<212>PRT
<213>智人
<400>84
Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His Asn
 1               5                  10                  15
Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser
            20                  25                  30
<210>85
<211>34
<212>PRT
<213>智人
<400>85
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
 1               5                  10                  15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
            20                  25                  30
Thr Ala
<210>86
<211>84
<212>PRT
<213>智人
<400>86
Ala Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Ala
 1               5                  10                  15
Ser Val Glu Arg Met Gln Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
            20                  25                  30
Asn Phe Val Ser Leu Gly Val Gln Met Ala Ala Arg Glu Gly Ser Tyr
        35                  40                  45
Gln Arg Pro Thr Lys Lys Glu Glu Asn Val Leu Val Asp Gly Asn Ser
    50                  55                  60
Lys Ser Leu Gly Glu Gly Asp Lys Ala Asp Val Asp Val Leu Val Lys
65                  70                  75                  80
Ala Lys Ser Gln
<210>87
<211>34
<212>PRT
<213>智人
<400>87
Ala Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Ala
 1               5                  10                  15
Ser Val Glu Arg Met Gln Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
            20                  25                  30
Asn Phe
<210>88
<211>84
<212>PRT
<213>智人
<400>88
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
 1               5                  10                  15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
            20                  25                  30
Asn Phe Ile Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser
        35                  40                  45
Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Ile Leu Val Glu Ser His Glu
    50                  55                  60
Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asp Val Leu Thr Lys
65                  70                  75                  80
Ala Lys Ser Gln
<210>89
<211>10
<212>PRT
<213>智人
<400>89
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly
 1               5                  10
<210>90
<2l1>17
<212>PRT
<213>智人
<400>90
Ile Ile Ser Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
 1               5                  10                  15
Gly
<210>91
<211>11
<212>PRT
<213>智人
<400>91
Gln Gly Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr Asp Ser
 1               5                  10
<210>92
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>92
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr
 1               5                  10                  15
<210>93
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>93
Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>94
<211>8
<212>PRT
<213>智人
<400>94
Met Pro Ser Ile His Leu Trp Thr
 1               5
<210>95
<211>17
<212>PRT
<213>智人
<400>95
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
 1               5                  10                  15
Gly
<210>96
<211>12
<212>PRT
<213>智人
<400>96
Tyr Tyr Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr Ala Tyr Thr
 1               5                  10
<210>97
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>97
Asp Tyr Val Trp Gly Ser Tyr
 1               5
1
1

Claims (52)

1.一种人类单克隆抗体，其结合甲状旁腺激素(PTH)且包含选自由SEQ ID NO S：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70和74组成的群组的重链氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体，其进一步包含选自由SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72和76组成的群组的轻链氨基酸序列。
3.一种人类单克隆抗体，其结合人类PTH且包含选自由SEQ ID NOS：4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72和76组成的群组的轻链氨基酸序列。
4.根据权利要求3所述的抗体，其进一步包含选自由SEQ ID NOS：2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70和74组成的群组的重链氨基酸序列。
5.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ IDNO：2序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：4序列。
6.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ IDNO：6序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：8序列。
7.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：10序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：12序列。
8.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：14序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：16序列。
9.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：18序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：20序列。
10.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：22序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：24序列。
11.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：26序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：28序列。
12.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：30序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：32序列。
13.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：34序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：36序列。
14.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：38序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：40序列。
15.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：42序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：44序列。
16.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：46序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：48序列。
17.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：50序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：52序列。
18.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：54序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：56序列。
19.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：58序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：60序列。
20.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：62序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：64序列。
21.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：66序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：68序列。
22.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：70序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：72序列。
23.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：74序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：76序列。
24.根据权利要求2所述的人类单克隆抗体，其中所述重链氨基酸序列包含SEQ ID NO：62序列且所述轻链氨基酸包含SEQ ID NO：4序列。
25.一种抗甲状旁腺激素(PTH)抗体，其以小于约10-9M的离解常数KD结合人类PTH。
26.根据权利要求25所述的抗PTH抗体，其中所述离解常数KD小于约10-10M。
27.根据权利要求26所述的抗PTH抗体，其中所述抗PTH抗体为抗PTH mAb 183。
28.一种人类抗甲状旁腺激素(PTH)抗体，其包含SEQ ID NO：2重链氨基酸序列且包含SEQ ID NO：4轻链氨基酸序列。
29.一种在不可溶性基质上固定的抗体，其中所述抗体为根据权利要求2所述的抗体。
30.一种用于分析患者样本中的甲状旁腺激素(PTH)含量的改良方法，其中所述改良方法包含在所述患者样本分析中使用根据权利要求2所述的抗PTH抗体检测PTH含量。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述患者样本为血液。
32.一种组合物，其包含根据权利要求2所述的抗体或其片段和医药上可接受的载剂。
33.一种抗体于制备医药品的用途，所述医药品用于有效治疗动物的甲状旁腺功能亢进，其中所述单克隆抗体特异性结合甲状旁腺激素(PTH)。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述抗体为完全人类抗体。
35.根据权利要求33所述的用途，其中所述医药品将所述动物的循环PTH含量降低约25％。
36.根据权利要求33所述的用途，其中所述医药品将所述动物的循环PTH含量降低约50％。
37.根据权利要求33所述的用途，其中所述医药品将所述动物的循环PTH含量降低约75％。
38.根据权利要求33所述的用途，其中所述医药品降低所述动物的循环PTH含量约24至约36小时。
39.根据权利要求33所述的用途，其中所述医药品降低所述动物的循环PTH含量约48至约60小时。
40.根据权利要求33所述的用途，其中所述医药品降低所述动物的循环PTH含量约72至约84小时。
41.根据权利要求33所述的用途，其中所述甲状旁腺功能亢进为原发性甲状旁腺功能亢进。
42.根据权利要求33所述的用途，其中所述甲状旁腺功能亢进为继发性甲状旁腺功能亢进。
43.一种有效治疗患有甲状旁腺功能亢进的哺乳动物的方法，其包含：
鉴定需要治疗治疗甲状旁腺功能亢进的动物；
向所述动物投予治疗有效剂量的特异性结合甲状旁腺激素(PTH)的单克隆抗体。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述抗体为完全人类抗体。
45.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效剂量的单克隆抗体将所述动物的循环PTH含量降低约25％。
46.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效剂量的单克隆抗体将所述动物的循环PTH含量降低约50％。
47.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效剂量的单克隆抗体将所述动物的循环PTH含量降低约75％。
48.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效剂量的单克隆抗体降低所述动物的循环PTH含量约24至约36小时。
49.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效剂量的单克隆抗体降低所述动物的循环PTH含量约48至约60小时。
50.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效剂量的单克隆抗体降低所述动物的循环PTH含量约72至约84小时。
51.根据权利要求43所述的方法，其中所述甲状旁腺功能亢进为原发性甲状旁腺功能亢进。
52.根据权利要求43所述的方法，其中所述甲状旁腺功能亢进为继发性甲状旁腺功能亢进。
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