CN1439022A - 抗协同刺激信号转导分子ailim的人单克隆抗体及其药物用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用AILIM分子作为抗原对用遗传工程技术得到的产生人抗体的转基因小鼠进行免疫，结果得到能结合AILIM并且能控制各种与AILIM－介导的协同刺激信号(第二信号)转导相关的生物反应(例如细胞增殖，细胞因子产生，免疫胞解，细胞死亡，ADCC的诱导等)的各种人单克隆抗体。此外，本发明公开了所述人单克隆抗体对于治疗和预防与AILIM－介导的协同刺激信号转导相关的各种疾病是有效的，其能抑制这些疾病的发生和/或发展。

Description

抗协同刺激信号转导分子AILIM的 人单克隆抗体及其药物用途
                       技术领域
本发明涉及结合AILIM(激活诱导型淋巴细胞免疫刺激分子，也称之为ICOS(诱导型协同刺激物))的人抗体；结合AILIM或其一部分的人单克隆抗体；编码所述人单克隆抗体或其一部分的DNA，或所述DNA的一部分；产生所述人单克隆抗体或其一部分的细胞(包括基因重组细胞)；由所述基因重组细胞产生的人单克隆抗体或其一部分；含有所述人单克隆抗体或其一部分的药物组合物；治疗与迟发型过敏反应相关的疾病的含有抗AILIM抗体的药物组合物；鉴定，定量测定或分析结合AILIM或AILIM配体的物质的方法；和用于所述方法的试剂盒。
                       背景技术
哺乳动物活体具有排斥侵入该活体的病原性微生物(病毒，细菌，寄生虫等)或异物(下文中这两者被称为“抗原”)的免疫应答系统。其中之一被称为先天性免疫应答系统，另一个是获得性免疫应答系统。前者的排斥机理包括吞噬细胞(包括多形核白细胞，单核细胞，巨噬细胞等)的吞噬作用，自然杀伤(NK)细胞的进攻，和补体对抗原的非特异性识别例如调理作用。后者，获得性免疫应答系统，是通过淋巴细胞(主要是T细胞和B细胞)的排斥机理，所述淋巴细胞获得对抗原的特异性(即激活的淋巴细胞)。获得抗原特异性的B细胞通过产生对该抗原特异性的抗体进攻存在于这些细胞外部的抗原。获得抗原特异性的T细胞(即激活的T细胞)分为辅助T细胞和细胞毒性T细胞(细胞毒性淋巴细胞，CTL)。辅助T细胞调节B细胞的分化和抗体的产生，并且与巨噬细胞共同作用破坏抗原。后者，CTL自身进攻病毒感染的细胞等(实验药物(Experimental Medicine)：增刊，“Bio Science TermLibrary，Immunity(生物科学术语文库，免疫)”，Yodosha，pp.14-17(1995))。
T细胞的抗原特异性的获得(即T细胞的激活)是通过T细胞对抗原呈递细胞(APC)例如巨噬细胞，B细胞或树突细胞呈递的抗原的识别开始的。抗原呈递细胞处理所掺入的抗原并且通过将他们与主要组织相容性复合体(MHC)结合来呈递这些处理过的抗原。通过细胞膜表面上存在的T细胞受体(TcR)和CD3抗原之间的复合体(TcR/CD3复合体)识别抗原呈递细胞呈递的处理过的抗原，T细胞接受激活细胞的第一信号(或获得特异性)。
但是，TcR/CD3复合体-介导的第一信号单独不能充分地激活T细胞并且导致无应答性或克隆无反应性，这样这些细胞此后不能与接受的任何刺激反应。白细胞介素2(IL-2)的自分泌对于T细胞被激活，T细胞分化成抗原特异性T细胞克隆，和T细胞增殖是必需的。在克隆无反应性中，T细胞由于没有产生IL-2等物质且没有细胞分裂而失活。即，IL-2等细胞因子的产生伴随的T细胞的激活需要通过TcR/CD3复合体的第一信号之后的第二信号。此第二信号被称为协同刺激信号。
T细胞接受该第二信号并且通过T细胞表面上除TcR/CD3复合体之外的分子与抗原呈递细胞上除MHC之外的分子相互作用(细胞粘附)而将其传递到细胞中。该第二信号避免了细胞无反应性(克隆无反应性)并且激活这些细胞。
尽管还没有对抗原呈递细胞和淋巴细胞例如T细胞之间的第二信号传递的一部分机理的详细解释，但是迄今为止的研究表明第二信号传递的一个重要因素是主要在T细胞和胸腺细胞上表达的细胞表面分子CD28(也称之为Tp44，T44或9.3抗原)与在抗原呈递细胞(巨噬细胞，单核细胞，树突细胞等)上表达的细胞表面分子CD80(也称之为B7-1，B7，BB1，或B7/BB1)以及与抗原呈递细胞上的细胞表面分子CD86(也称之为B7-2或B70)的相互作用(即，通过这些细胞之间的结合发生的细胞粘附)。此外，通过实验解释了认为其表达依据第二信号而加强的细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)与CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的相互作用(即，通过这些细胞之间的结合发生的细胞粘附)在通过第二信号调节T细胞激活时起着重要作用。换句话说，通过第二信号的传递而调节T细胞激活至少涉及CD28和CD80/CD86之间的相互作用，据认为是依据该相互作用的CTLA-4表达的增强，和CTLA-4与CD80/CD86之间的相互作用。
已知CD28是传递激活T细胞和避免无反应性所需的第二信号(协同刺激信号)的协同刺激物分子。通过该分子结合抗原呈递细胞上的CD80(B7-1)和CD86(B7-2)协同刺激物分子(通过这些分子之间的结合而发生细胞粘附)所传递的第二信号稳定Th1-型细胞因子的mRNA，并且接着促进T细胞产生大量Th1-型细胞因子例如IL-2，IFNγ和TNFα。TcR/CD3传递的第一信号诱导CTLA-4的表达，并且CD28和CD80之间的结合传递的第二信号还将该表达增强。证明CTLA-4接受这些信号来抑制T细胞功能，这与CD28传递的第二信号对T细胞的激活作用相反。
人CD28和CTLA-4分别是分子量分别是44Kd和41-43Kd的I型糖蛋白。这两者都具有免疫球蛋白样区，属于免疫球蛋白超家族，并且具有作为细胞粘附分子的功能和作为信号传递分子的功能。
人CD28通过二硫键形成异二聚体，而CTLA-4以单体存在。CD28和CTLA-4基因两者都定位于人染色体上“2q33”和小鼠染色体上“1C”，都由四个(4)外显子组成。人CD28和CTLA-4分别由220和223个氨基酸组成，包括前导序列，并且它们之间的氨基酸同源性是20-30％。
CD28和CTLA-4在人和小鼠中的的配体是CD80(B7-1)和CD86(B7-2)。CTLA-4对两种配体的亲和性是CD28对两种配体的亲和性的约20倍。已经阐明了动物物种间保守的氨基酸序列结构“MYPPPY(Met-Tyr-Pro-Pro-Pro-Tyr)”对于CD28和CTLA-4与CD80(B7-1)的结合是重要的。还报道过，当CD28被刺激时，PI3激酶(磷酸肌醇3激酶，PI3K)与CD28的部分序列“YMNM(Tyr-Met-Asn-Met)”中的磷酸化酪氨酸残基结合，并且CD28在通过该“YxxM”结构的胞内信号传递中起着重要的作用。此外，报道过CTLA-4在其胞质区中还具有“YxxM”代表的序列，即“YVKM(Tyr-Val-Lys-Met)”，并且在受刺激后SYP与该序列结合。
CD28在胸腺细胞和外周血T细胞中特异表达，CTLA-4在激活的T细胞中特异表达(细胞工程(Cell Engineering)：增刊，“Hamdbook of AdhesienMolecule(粘附分子手册)”，Shujunsha，93-102页(1994)；同上120-136页；实验药物(Experimental Medicine)：增刊，“生物科学术语文库，免疫”，Yodosha，pp.94-98(1995)；实验药物(Experimental Medicine)：增刊，“生物科学术语文库，胞内信号传导”，Yodosha，pp.58-59(1995)；Nihon Rinsho，55卷，No.6，pp.215-220(1997))。
在T细胞功能的调节(T细胞功能的激活和抑制)中，多个分子例如协同刺激物分子(CD28，CD80(B7-1)，CD86(B7-2)等)和与它们一同作用的CTLA-4之间的相互作用的重要性被认识到了，这引起了人们对这些分子和疾病之间的关系以及通过调节这些分子的功能来治疗疾病的注意。
如上所述，尽管活体激活对活体(自身)来说是外物的抗原的获得性免疫应答系统，但是其也具有免疫耐受性，这样就不表现出针对其自身成分(自身抗原)的免疫应答。如果由于某些原因破坏了免疫耐受性，则发生对自身抗原的免疫应答，通过上述相同机理诱导自身抗原-反应性T细胞进入免疫异常状态，从而引发各种自身免疫疾病。
换句话说，因为当活体免疫系统正常时，正常组织中未受刺激的抗原呈递细胞(APC)不表达协同刺激分子，即使存在与自身抗原反应的自身抗原-反应T细胞，T细胞仍处于无应答状态而保持免疫耐受性。有人提出，免疫异常状态下，协同刺激分子异常过度的持续表达，更多的自身抗原-反应T细胞被激活，从而引起自身免疫疾病。
最近基于这样的观点，有人尝试通过调节协同刺激信号的传递，例如上述CD28/CTLA-4和CD80/CD86之间的信号传递，来治疗各种自身免疫疾病。
这些尝试的结果还没有详细阐明协同刺激分子与相关分子之间的相互作用激活T细胞的机理。该机理中可能涉及其它未知分子。
最近，鉴定出了一种新的类似上述“CD28”和“CTLA-4”的协同刺激分子，认为其实现对淋巴细胞例如T细胞的激活所必需的第二信号(协同刺激信号)的转导，并且实施与所述激活的淋巴细胞例如激活的T细胞的信号相伴的功能调节。该分子已经被指定为AILIM(激活诱导型淋巴细胞免疫调制分子)(在人体，小鼠和大鼠体内：国际免疫学(Int.Immunol.)12卷，No.1，p.51-55，2000)，也称作ICOS(可诱导型共同刺激物)(人体内：自然(Nature)，397卷，No.6716，p.263-266，1999)。
另一方面，最近已经鉴定了称为B7h，B7RP-1，GL50或LICOS的新的分子，它们是与该协同刺激传递分子AILIM(ICOS)相互作用的配体(AILIM配体)(自然(Nature)，402卷，No.6763，p.827-832，1999；天然药物(Nature Medicine)，5卷，No.12，p.1365-1369，1999；免疫学杂志(J.Immunology)，164卷，p.1653-1657，2000；当今生物学(Curr.Biol.)，10卷，No.6，p.333-336，2000)。
将这两类新的分子，即AILIM(ICOS)和B7RP-1(B7h，GL50，LICOS)鉴定为上述淋巴细胞例如T细胞的激活以及激活的T细胞的功能控制所必需的协同刺激信号的信号转导途径表明，除了已知的第一和第二信号途径，即CD28和CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之间的以及CTLA4和CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之间的转导途径之外，还存在通过AILIM(ICOS)和B7RP-1(B7h，GL50，LICOS)之间相互作用而转导信号的新的第三途径。
有关这些新分子的生物学功能，通过所述分子传导第三协同刺激信号而对淋巴细胞例如T细胞的功能控制，以及新的信号转导和疾病之间的关系的研究正在进展之中(免疫学杂志(J.Immunol.)，166(1)，1页，2001；免疫学杂志(J.Immunol.)，165(9)，5035页，2000；Biochem.Biophys.Res.Commun.，276(1)，335页，2000；免疫学(Immunity)，13(1)，95页，2000；实验药物学杂志(J.Exp.Med.)，192(1)，53页，2000；欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.)，30(4)，1040页，2000；WO01/15732)。
                        发明内容
具体地说，本发明的目的是公开被认为类似于“CD28”和“CTLA-4”的新分子AILIM，作为传递淋巴细胞例如T细胞的激活所必需的第二信号(协同刺激信号)并且通过与该信号一起作用来控制激活的淋巴细胞例如激活的T细胞的功能的生物学功能；公开AILIM的表达与疾病之间的关系；以及提供根据AILIM的表达方式能抑制各种疾病的发展的方法和药物或通过使用所述医药方法(例如单克隆抗体和低分子量化合物等药物)控制AILIM的生物功能来治疗所述疾病的方法和药物。
为了实现上述目的，本发明人主动继续研究抗哺乳动物AILIM(特别是人AILIM)的人抗体(特别是人单克隆抗体)，结果通过用AILIM(具体地是表达人AILIM的细胞的细胞膜级分)对应用基因重组技术制备的转基因小鼠进行免疫以产生人抗体，在世界上第一次成功地制备了结合人AILIM的各种单克隆抗体，特别是能调节人AILIM介导的信号转导的那些与人AILIM结合型单克隆抗体。
因为本发明的抗体(特别是单克隆抗体)是从人体得到的，所以它们根本会在宿主中由于抗人的免疫原性，HAMA(人抗小鼠抗原性)而诱导任何严重的免疫排斥，所述免疫原性是使用含有从非人哺乳动物例如小鼠得到的抗体的抗体药物进行治疗时的一个大问题(副作用)，因此本发明大大提高了抗体作为药物的价值。
因此，本发明的结合哺乳动物AILIM(特别是人AILIM)的人抗体(特别是人单克隆抗体)和含有所述人抗体(特别是人单克隆抗体)的药物组合物可用作不诱导宿主中HAMA所致免疫排斥而控制各种生理反应的药物，所述生理反应相关于AILIM介导协同刺激信号向AILIM-表达细胞的转导(例如AILIM-表达细胞的增殖，AILIM-表达细胞的细胞因子产生，AILIM-表达细胞的免疫胞解或凋亡，诱导对AILIM-表达细胞的抗体-依赖性细胞毒性的活性，等等)，和/或所述抗体和组合物可用作抑制和预防各种与所述AILIM介导之信号转导相关的疾病的症状发生和/或发展的药物，以及可用作治疗或预防所述疾病的药物。
具体地说，本发明的药物组合物能控制(抑制或刺激)AILIM-表达细胞的增殖或AILIM-表达细胞产生细胞因子(例如γ干扰素或白细胞介素-4等)，从而能够抑制各种病理症状和治疗或预防与AILIM介导的信号转导相关的生理现象引起的各种疾病。
应用本发明的药物组合物能抑制，预防和/或治疗例如，各种疾病(例如，类风湿性关节炎，多发性硬化，自身免疫性甲状腺炎，过敏性接触型皮炎，慢性炎性皮肤病例如扁平苔藓，系统性红斑狼疮，胰岛素依赖性糖尿病，牛皮癣等等)，这些疾病分为自身免疫疾病或过敏性疾病(特别是细胞免疫引起的自身免疫疾病和迟发型过敏反应)；关节病(例如类风湿性关节炎(RA)和骨关节炎(OA))，炎症(例如肝炎)；移植物抗宿主反应(GVH反应)；移植物抗宿主病(GVHD)；伴随组织(例如皮肤，角膜，骨等组织)或器官(肝脏，心脏，肺，肾，胰脏等)移植(同种移植或异种移植)的免疫排斥；外来抗原或自身抗原引发的免疫应答(例如抗所述抗原的抗体的产生，细胞增殖，细胞因子的产生)；以及可能由异常肠免疫引起的疾病(具体是炎性肠疾病(特别是结肠(clone)病和溃疡性结肠炎)和食物过敏反应)。
此外，在抑制/治疗上述组织和器官的移植伴随的免疫排斥的领域，通过将本发明的药物组合物与已知在这类移植治疗中用于抑制免疫排斥的药物联合应用，可能会加强已知免疫抑制剂对移植排斥作用的抑制效果。
此外，本发明的药物组合物能够用于治疗或预防任何能用各种甾族化合物消炎的炎症。
本发明的药物组合物能够用于炎症疾病，例如各种关节炎伴随的炎症(例如，类风湿性关节炎，骨关节炎)，肺炎，肝炎(包括病毒性肝炎)，传染病伴随的炎症，炎性结肠病，小肠性肠炎，肾炎(肾小球肾炎伴随的炎症，肾纤维化)，胃炎，脉管炎，胰腺炎，腹膜炎，支气管炎，心肌炎，脑炎，局部缺血后再灌注损伤(心肌缺血再灌注损伤)中的炎症，组织和器官移植之后免疫排斥所致炎症，烧伤，各种皮肤炎症(牛皮癣，过敏接触型皮炎，作为慢性炎症皮肤病的扁平苔藓)，多器官衰竭中的炎症，PTCA或PTCR术后炎症，和动脉硬化伴随的炎症，和自身免疫性甲状腺炎。
此外，通过应用是本发明一个方面用于鉴定结合AILIM或AILIM配体的物质的方法，使得有有可能筛选具有通过结合AILIM或AILIM配体来调节它们的相互作用所介导的信号转导来治疗各种疾病的潜在活性的药物(化学合成化合物或抗体)。
具体地说，本发明是下面(1)至(108)描述的本发明。
(1)结合AILIM的人抗体。
(2)(1)的人抗体，其中所述AILIM从人体得到。
(3)结合AILIM或其一部分的人单克隆抗体。
(4)(3)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述AILIM从人体得到。
(5)(3)或(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有抑制通过AILIM介导的信号转导到细胞中的活性。
(6)(5)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述抑制信号转导的活性是下面的(a)或(b)：
(a)抑制AILIM-表达细胞增殖的活性，或
(b)抑制细胞因子从AILIM-表达细胞产生的活性。
(7)(6)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是Th1-型或Th2-型T细胞产生的细胞因子之一。
(8)(7)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是γ干扰素或白细胞介素-4。
(9)(5)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有阻止混合淋巴细胞反应的活性。
(10)(3)或(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有诱导通过AILIM介导的信号转导到细胞中的活性。
(11)(10)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述诱导信号转导的活性是下面的(a)或(b)：
(a)诱导AILIM-表达细胞增殖的活性，或
(b)诱导细胞因子从AILIM-表达细胞产生的活性。
(12)(11)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是Th1-型或Th2-型T细胞产生的细胞因子之一。
(13)(12)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是γ干扰素或白细胞介素-4。
(14)(3)或(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有诱导对AILIM-表达细胞的抗体-依赖性细胞毒活性，和/或AILIM-表达细胞的免疫胞解或凋亡的活性。
(15)(3)或(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述单克隆抗体和AILIM之间的结合速度常数(ka)是1.0×103(1/M.秒)或更大。
(16)(15)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述结合速度常数(ka)是1.0×104(1/M.秒)或更大。
(17)(16)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述结合速度常数(ka)是1.0×105(1/M.秒)或更大。
(18)(3)或(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述单克隆抗体和AILIM之间的解离速度常数(kd)是1.0×10-3(1/秒)或更小。
(19)(18)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离速度常数(kd)是1.0×10-4(1/秒)或更小。
(20)(19)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离速度常数(kd)是1.0×10-5(1/秒)或更小。
(21)(3)或(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述单克隆抗体和AILIM之间的解离常数(Kd)是1.0×10-6(M)或更小。
(22)(21)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离常数(Kd)是1.0×10-7(M)或更小。
(23)(22)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离常数(Kd)是1.0×10-8(M)或更小。
(24)(23)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离常数(Kd)是1.0×10-9(M)或更小。
(25)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体的重链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白重链V基因片段1-02或3-13衍生的。
(26)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体的轻链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白轻链V基因片段L5或A27衍生的。
(27)(25)或(26)的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体的重链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白重链V基因片段1-02或3-13衍生的，并且其中编码所述人单克隆抗体的轻链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白轻链V基因片段L5或A27衍生的。
(28)(27)的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体的重链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白重链V基因片段1-02衍生的，并且其中编码所述人单克隆抗体的轻链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白轻链V基因片段L5衍生的。
(29)(27)的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体的重链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白重链V基因片段3-13衍生的，并且其中编码所述人单克隆抗体的轻链可变区的V区DNA是从人免疫球蛋白轻链V基因片段A27衍生的。
(30)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的重链可变区具有下面(a)至(f)任一项中定义的氨基酸序列：
(a)包括SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，
(b)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，
(c)包括SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列，
(d)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列，
(e)包括SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列，
(f)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列。
(31)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的重链多肽具有下面(a)至(f)任一项中定义的氨基酸序列：
(a)包括SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(b)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(c)包括SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(d)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(e)包括SEQ ID NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(f)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列。
(32)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的轻链可变区具有下面(a)至(f)任一项中定义的氨基酸序列：
(a)包括SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列，
(b)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列，
(c)包括SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列，
(d)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列，
(e)包括SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列，
(f)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列。
(33)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的轻链多肽具有下面(a)至(f)任一项中定义的氨基酸序列：
(a)包括SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列，
(b)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列，
(c)包括SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列，
(d)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列，
(e)包括SEQ ID NO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列，或
(f)包括其中一个或多个氨基酸残基被缺失或取代的或向其中插入或添加一个或多个氨基酸残基的SEQ ID NO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列。
(34)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下面的特征(a)和(b)：
(a)重链可变区具有包括SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和
(b)轻链可变区具有包括SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。
(35)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下面的特征(a)和(b)：
(a)重链多肽具有SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和
(b)轻链多肽具有SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。
(36)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下面的特征(a)和(b)：
(a)重链可变区具有包括SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和
(b)轻链可变区具有包括SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。
(37)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下面的特征(a)和(b)：
(a)重链多肽具有包括SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和
(b)轻链多肽具有包括SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。
(38)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下面的特征(a)和(b)：
(a)重链可变区具有包括SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和
(b)轻链可变区具有包括SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。
(39)(4)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下面的特征(a)和(b)：
(a)重链多肽具有包括SEQ 1D NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列，和
(b)轻链多肽具有包括SEQ ID NO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列的氨基酸序列。
(40)(3)-(29)任一项的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体是从能产生人抗体的转基因非人哺乳动物产生的单克隆抗体。
(41)(40)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体是通过用AILIM-表达细胞，从所述细胞衍生的膜级分，构成AILIM的完整分子或其一部分，或编码AILIM或其一部分的基因对能够产生人抗体的转基因非人哺乳动物进行免疫而获得的。
(42)(40)或(41)的人单克隆抗体或其一部分，其中所述转基因非人哺乳动物是转基因小鼠。
(43)编码选自下面(a)-(f)的多肽的DNA或其一部分：
(a)包括SEQ ID NO：28的氨基酸20-117的氨基酸序列的多肽，
(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸23-116的氨基酸序列的多肽，
(c)包括SEQ ID NO：32的氨基酸20-116的氨基酸序列的多肽，
(d)包括SEQ ID NO：34的氨基酸21-11 6的氨基酸序列的多肽，
(e)包括SEQ ID NO：36的氨基酸20-116的氨基酸序列的多肽，
(f)包括SEQ ID NO：38的氨基酸21-116的氨基酸序列的多肽。
(44)编码选自下面(a)-(f)的多肽的DNA或其一部分：
(a)包括SEQ ID NO：28的氨基酸20-470的氨基酸序列的多肽，
(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸23-236的氨基酸序列的多肽，
(c)包括SEQ ID NO：32的氨基酸20-470的氨基酸序列的多肽，
(d)包括SEQ ID NO：34的氨基酸21-236的氨基酸序列的多肽，
(e)包括SEQ ID NO：36的氨基酸20-470的氨基酸序列的多肽，
(f)包括SEQ ID NO：38的氨基酸21-236的氨基酸序列的多肽。
(45)选自下面(a)-(f)的DNA或其一部分：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸126-419的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，
(c)包括SEQ ID NO：31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，
(d)包括SEQ ID NO：33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA，
(e)包括SEQ ID NO：35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA，和
(f)包括SEQ ID NO：37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。
(46)选自下面(a)-(f)的DNA或其一部分：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：29的核苷酸39-749的核苷酸序列的DNA，
(c)包括SEQ ID NO：31的核苷酸94-1506的核苷酸序列的DNA，
(d)包括SEQ ID NO：33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA，
(e)包括SEQ ID NO：35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA，和
(f)包括SEQ ID NO：37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。
(47)包含(43)-(46)任一项的DNA的载体。
(48)包含下面(a)-(c)任一项的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸126-419的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，或
(c)包括SEQ ID NO：35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA。
(49)包含下面(a)-(c)任一项的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：31的核苷酸94-1506的核苷酸序列的DNA，或
(c)包括SEQ ID NO：35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA。
(50)包含下面(a)-(c)任一项的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA，或
(c)包括SEQ ID NO：37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。
(51)包含下面(a)-(c)任一项的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：29的核苷酸39-749的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA，或
(c)包括SEQ ID NO：37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。
(52)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸126-419的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA。
(53)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：29的核苷酸39-749的核苷酸序列的DNA。
(54)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸88-357的核苷酸序列的DNA。
(55)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：31的核苷酸94-1506的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA。
(56)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。
(57)包含下面(a)和(b)的DNA的(47)的载体：
(a)包括SEQ ID NO：35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。
(58)产生(3)-(42)任一项的人单克隆抗体的细胞。
(59)(58)的细胞，其中所述细胞是通过融合来自能产生所述人单克隆抗体的哺乳动物的B细胞和来自哺乳动物的骨髓瘤细胞而获得的融合细胞。
(60)通过转移下面(a)中描述的DNA或包含所述DNA的载体，下面(b)中描述的DNA或包含所述DNA的载体，或下面(a)和(b)中描述的两个DNA或包含所述两个DNA的载体而转化的基因重组宿主：
(a)编码结合人AILIM的单克隆抗体的重链多肽或其一部分的DNA；或
(b)编码结合人AILIM的单克隆抗体的轻链多肽或其一部分的DNA。
(61)(60)的基因重组宿主，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体。
(62)(60)或(61)的基因重组宿主，其中所述宿主是哺乳动物细胞。
(63)(60)或(61)的基因重组宿主，其中所述宿主是哺乳动物受精卵。
(64)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链多肽选自下面(a)-(c)的重链多肽之一：
(a)包括SEQ ID NO：28的氨基酸20-117的氨基酸序列的重链多肽，
(b)包括SEQ ID NO：32的氨基酸20-116的氨基酸序列的重链多肽，和
(c)包括SEQ ID NO：36的氨基酸20-116的氨基酸序列的重链多肽。
(65)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链多肽选自下面(a)-(c)的重链多肽之一：
(a)包括SEQ ID NO：28的氨基酸20-470的氨基酸序列的重链多肽，
(b)包括SEQ ID NO：32的氨基酸20-470的氨基酸序列的重链多肽，和
(c)包括SEQ ID NO：36的氨基酸20-470的氨基酸序列的重链多肽。
(66)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述轻链多肽选自下面(a)-(c)的轻链多肽之一：
(a)包括SEQ ID NO：30的氨基酸23-116的氨基酸序列的轻链多肽，
(b)包括SEQ ID NO：34的氨基酸21-116的氨基酸序列的轻链多肽，和
(c)包括SEQ ID NO：38的氨基酸21-116的氨基酸序列的轻链多肽。
(67)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述轻链多肽选自下面(a)-(c)的轻链多肽之一：
(a)包括SEQ ID NO：30的氨基酸23-236的氨基酸序列的轻链多肽，
(b)包括SEQ ID NO：34的氨基酸21-236的氨基酸序列的轻链多肽，和
(c)包括SEQ ID NO：38的氨基酸21-236的氨基酸序列的轻链多肽。
(68)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别是下面(a)和(b)中定义的那些：
(a)包括SEQ ID NO：28的氨基酸20-117的氨基酸序列的重链多肽，和
(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸23-116的氨基酸序列的轻链多肽。
(69)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别是下面(a)和(b)中定义的那些：
(a)包括SEQ ID NO：28的氨基酸20-470的氨基酸序列的重链多肽，和
(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸23-236的氨基酸序列的轻链多肽。
(70)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别是下面(a)和(b)中定义的那些：
(a)包括SEQ ID NO：32的氨基酸20-116的氨基酸序列的重链多肽，和
(b)包括SEQ ID NO：34的氨基酸21-116的氨基酸序列的轻链多肽。
(71)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别是下面(a)和(b)中定义的那些：
(a)包括SEQ ID NO：32的氨基酸20-470的氨基酸序列的重链多肽，和
(b)包括SEQ ID NO：34的氨基酸21-236的氨基酸序列的轻链多肽。
(72)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别是下面(a)和(b)中定义的那些：
(a)包括SEQ ID NO：36的氨基酸20-116的氨基酸序列的重链多肽，和
(b)包括SEQ ID NO：38的氨基酸21-116的氨基酸序列的轻链多肽。
(73)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别是下面(a)和(b)中定义的那些：
(a)包括SEQ ID NO：36的氨基酸20-470的氨基酸序列的重链多肽，和
(b)包括SEQ ID NO：38的氨基酸21-236的氨基酸序列的轻链多肽。
(74)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)-(c)任一项中定义的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸126-419的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，和
(c)包括SEQ ID NO：35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA。
(75)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)-(c)任一项中定义的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：31的核苷酸94-1506的核苷酸序列的DNA，和
(c)包括SEQ ID NO：35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA。
(76)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述轻链多肽的DNA是下面(a)-(c)任一项中定义的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA，和
(c)包括SEQ ID NO：37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。
(77)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述轻链多肽的DNA是下面(a)-(c)任一项中定义的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：29的核苷酸39-749的核苷酸序列的DNA，
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA，和
(c)包括SEQ ID NO：37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。
(78)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸126-419的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：29的核苷酸105-386的核苷酸序列的DNA。
(79)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：27的核苷酸69-1481的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：29的核苷酸39-749的核苷酸序列的DNA。
(80)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：31的核苷酸151-441的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸88-375的核苷酸序列的DNA。
(81)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：31的核苷酸94-1506的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：33的核苷酸28-738的核苷酸序列的DNA。
(82)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：35的核苷酸153-443的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：37的核苷酸93-380的核苷酸序列的DNA。
(83)(60)-(63)任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下面(a)中描述的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下面(b)中描述的DNA：
(a)包括SEQ ID NO：35的核苷酸96-1508的核苷酸序列的DNA，和
(b)包括SEQ ID NO：37的核苷酸33-743的核苷酸序列的DNA。
(84)(60)-(62)任一项，或(64)-(83)任一项的基因重组宿主(前提是排除所述宿主是受精卵的情况)产生的人单克隆抗体或其一部分。
(85)含有(1)或(2)的人抗体和可药用载体的药物组合物。
(86)含有(3)-(42)任一项的人单克隆抗体或其一部分和可药用载体的药物组合物。
(87)含有(84)的人单克隆抗体或其一部分和可药用载体的药物组合物。
(88)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来抑制AILIM介导的转导到细胞中的信号转导。
(89)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来预防AILIM-表达细胞的增殖。
(90)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来预防AILIM-表达细胞产生细胞因子。
(91)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来诱导AILIM介导的转导到细胞中的信号转导。
(92)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来诱导AILIM-表达细胞的增殖。
(93)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来诱导AILIM-表达细胞产生细胞因子。
(94)(85)-(87)任一项的药物组合物，其中所述药物组合物用来诱导针对AILIM-表达细胞的抗体-依赖性细胞毒活性，和/或针对AILIM-表达细胞的免疫胞解或凋亡。
(95)用来阻止，治疗或预防迟发型过敏的药物组合物，含有在调节AILIM介导的信号转导中有活性的物质，和可药用载体。
(96)(95)的药物组合物，其中所述物质是一种蛋白物质。
(97)(96)的药物组合物，其中所述蛋白物质选自下面的物质：
(a)结合AILIM的抗体或其一部分；
(b)包括AILIM胞外区的全部或部分的多肽；
(c)包括AILIM胞外区的全部或部分，以及免疫球蛋白重链恒定区的全部或部分的融合多肽；和
(d)结合AILIM的多肽。
(98)(97)的药物组合物，其中所述结合AILIM的抗体是(1)或(2)的人抗体。
(99)(97)的药物组合物，其中所述结合AILIM的抗体是(3)-(42)任一项的人单克隆抗体。
(100)(97)的药物组合物，其中所述抗AILIM的抗体是(84)的人单克隆抗体。
(101)(95)的药物组合物，其中所述物质是非蛋白物质。
(102)(101)的药物组合物，其中所述非蛋白物质是DNA，RNA，或一种化学合成的化合物。
(103)一种鉴定结合AILIM或AILIM配体的物质的方法，包括下面的步骤：
(a)制备不溶性载体，AILIM的全部胞外区或其一部分都固定在上面；
(b)制备包括用发出可检测信号的标记材料标记的AILIM配体的全部胞外区或其一部分的多肽；
(c)使步骤(a)中的不溶性载体与步骤(b)中的多肽反应；
(d)使步骤(a)的不溶性载体，步骤(b)的多肽，以及所述物质以任何顺序相互反应；
(e)分别检测步骤(c)中制备的复合体中包含的所述标记材料发出的信号，和步骤(d)中制备的复合体中包含的所述标记材料发出的信号；和
(f)比较步骤(e)中检测到的各个信号的大小。
(104)一种鉴定结合AILIM或AILIM配体的物质的方法，包括下面的步骤：
(a)制备不溶性载体，AILIM的全部胞外区或其一部分都固定在上面；
(b)制备包括用发出可检测信号的标记材料标记的AILIM的全部胞外区或其一部分的多肽；
(c)使步骤(a)中的不溶性载体与步骤(b)中的多肽反应；
(d)使步骤(a)的不溶性载体，步骤(b)的多肽，以及所述物质以任何顺序相互反应；
(e)分别检测步骤(c)中制备的复合体中包含的所述标记材料发出的信号，和步骤(d)中制备的复合体中包含的所述标记材料发出的信号；和
(f)比较步骤(e)中检测到的各个信号的大小。
(105)(103)或(104)的方法，其中所述包括AILIM的全部胞外区或其一部分的多肽是一种包括AILIM的全部胞外区或其一部分，和免疫球蛋白重链的全部恒定区或其一部分的融合多肽。
(106)(103)或(104)的方法，其中所述包括AILIM配体的全部胞外区或其一部分的多肽是一种包括AILIM配体的全部胞外区或其一部分，和免疫球蛋白重链的全部恒定区或其一部分的融合多肽。
(107)(103)-(106)任一项的方法，其中所述AILIM是人AILIM。
(108)(103)-(107)任一项的方法，其中所述AILIM配体是人AILIM配体。
下面通过定义本发明的术语详细描述本发明。
本文中“哺乳动物”指人，牛，山羊，兔，小鼠，大鼠，仓鼠和豚鼠；优选指人，兔，大鼠，仓鼠或小鼠并且特别优选指人，大鼠，仓鼠或小鼠。
这里使用的术语“除人以外的哺乳动物”和“非人哺乳动物”彼此是同义词，指上文定义的人之外的所有哺乳动物。
这里使用的术语“氨基酸”指自然界存在的每一种氨基酸，优选根据下面给出的三字母缩写或单字母缩写描述的那些氨基酸：
甘氨酸(Gly/G)，丙氨酸(Ala/A)，缬氨酸(Val/V)，亮氨酸(Leu/L)，异亮氨酸(Ile/L)，丝氨酸(Ser/S)，苏氨酸(Thr/T)，天冬氨酸(Asp/D)，谷氨酸(Glu/E)，天冬酰胺(Asn/N)，谷氨酰胺(Gln/Q)，赖氨酸(Lys/K)，精氨酸(Arg/R)，半胱氨酸(Cys/C)，蛋氨酸(Met/M)，苯丙氨酸(Phe/F)，酪氨酸(Tyr/Y)，色氨酸(Trp/W)，组氨酸(His/H)，脯氨酸(Pro/P)。
这里使用的术语“AILIM”是激活诱导型淋巴细胞免疫调制分子的缩写，指具有先前报告中已经描述的结构和功能的哺乳动物细胞表面分子，更优选地，特别是来自人的AILIM(例如，国际免疫学(InternationalImmunology)，12卷，No.1，p.51-55；基因库登记号：BAA82129(人)，BAA82128(大鼠)，BAA82127(大鼠变种)，和BAA82126(小鼠))。
或，此AILIM也被称为ICOS(待审公开的日本专利申请(JP-A)平11-29599，国际专利申请WO98/38216)，这些缩写指相同的分子。
这里使用的“AILIM配体”指与所述协同刺激分子AILIM(ICOS)相互作用，并被称为B7h，B7RP-1，GL50或LICOS的细胞表面分子(自然(Nature)，402卷，No.6763，p.827-832；1999；天然药物(Nature Medicine)，5卷，No.12，p.1365-1369，1999；免疫学杂志(J.Immunology)，164卷，p.1653-1657，2000；当今生物学(Curr.Biol.)，10卷，No.6，p.333-336，2000)。
此外，这里使用的“AILIM”也包括与参考文献中描述的各哺乳动物的AILIM，特别优选人AILIM，具有基本上相同的氨基酸序列的多肽。此外，与已经报道过的大鼠AILIM变体(基因库登记号BAA82127)相似的人AILIM变体也包括在本发明的“AILIM”之内。
这里使用的“AILIM配体”也具有上述相似意义。
这里  “具有基本上相同的氨基酸序列的多肽”指下文所述变体多肽。
即，只要这些变体多肽具有基本上等价于天然型AILIM(特别优选来自人的AILIM)的生物学性质，则它们就是本发明的多肽。如具有天然型AILIM的氨基酸序列，且其中多个氨基酸残基，优选1-10个氨基酸残基，最优选1-5个氨基酸残基被缺失和/或修饰，或已向其中添加多个氨基酸残基，优选1-10个氨基酸残基，最优选1-5个氨基酸残基的那些变体。
此外，它们可以是分子中具有所述多个氨基酸取代，缺失，修饰和添加的变体多肽。
本发明中的“AILIM配体”也具有上述相似意义。
除了基因重组技术之外，通过适当地使用本技术领域公知的方法例如化学合成方法，细胞培养方法等，或这些的改进方法，能够制备本发明中的AILIM(特别是人AILIM)和AILIM配体(特别是人AILIM配体)。
根据常规方法(实验药物：增刊，“遗传工程手册”(1992)；等等)实现氨基酸的这些取代，缺失，或插入。
用来制备上述突变多肽的方法的例子是合成寡核苷酸定点诱变(缺口双链法)，用亚硝酸盐或亚硫酸盐处理随机导入点突变的点诱变法，利用Bal31酶等制备缺失突变体的方法，盒式诱变，接头分区方法，错掺方法，错配引物方法，DNA片段合成方法等等。
例如可以如下进行合成寡核苷酸定点诱变(缺口双链方法)。将要诱变的区克隆到具有琥珀突变的M13噬菌体载体中来制备单链噬菌体DNA。通过限制酶处理将没有琥珀突变的M13载体的RFIDNA线性化之后，将DNA与上述单链噬菌体DNA混合，变性，退火，从而形成“缺口双链DNA”。其中导入了突变的合成寡核苷酸与该缺口双链DNA杂交，并且通过DNA聚合酶和DNA连接酶进行的反应制备闭合环双链DNA。用该DNA转染错配修复活性有缺陷的大肠杆菌mutS细胞。用成熟噬菌体感染没有抑制活性的大肠杆菌细胞，只筛选出没有琥珀突变的噬菌体。
用亚硝酸盐导入点突变的方法应用例如下文所述原理。如果用亚硝酸盐处理DNA，碱基经脱氨基作用将腺嘌呤变为次黄嘌呤，胞嘧啶变为尿嘧啶，鸟嘌呤变为黄嘌呤。如果将脱氨基化DNA导入细胞，则“A：T”和“G：C”分别被“G：C”和“A：T”置换，因为在DNA复制中，次黄嘌呤，尿嘧啶和黄嘌呤分别与胞嘧啶，腺嘌呤和胸腺嘧啶形成碱基对。实际上，用亚硝酸盐处理过的单链DNA片段与“缺口双链DNA”杂交，然后通过与合成寡核苷酸定点诱变(缺口双链方法)相同的方法操作来分离突变株。
另外，“AILIM”在这里也包括所述AILIM的“一部分”。这里，“一部分”指包括上面定义的AILIM氨基酸序列的任何部分序列的多肽。
优选地，所述部分指上面定义的AILIM(特别优选人AILIM)的胞外区或其任何部分。
本发明中的“AILIM配体”也具有上述相似意义。
所述AILIM的“部分”(优选AILIM的胞外区或其任何部分)可根据下述本领域公知方法或其改良法，经基因重组技术或化学合成，或使用蛋白水解酶适当裂解从细胞培养分离的AILIM(特别优选人AILIM)等等而制备。
通过上述相似方法也可以制备“AILIM配体的部分”。
本发明的“人抗体”是结合上面定义的AILIM或其一部分(特别优选来自人的AILIM或其一部分)的人抗体。具体地说，它指来自人的多克隆抗体(人多克隆抗体，人抗血清)或来自人的单克隆抗体(人单克隆抗体)。
本发明的“人单克隆抗体”是结合上面定义的AILIM或其一部分(特别优选来自人的AILIM或其一部分)的人单克隆抗体。
更具体地说，包括重链(H-链)的可变区和恒定区，和轻链(L-链)的可变区和恒定区的所有区都由编码所述人免疫球蛋白的基因衍生的人免疫球蛋白组成。L-链举例来说是人κ链或人λ链。
本发明的结合AILIM(特别优选来自人的AILIM)或其一部分的人单克隆抗体是具有上述(5)-(42)或(84)任一项中定义的特征的人单克隆抗体。
更具体地说，包括具有实施例和附图中描述的各种特征和工业实用性的各种人单克隆抗体。
本发明的人单克隆抗体的优选实施方案是上述(5)-(42)或(84)任一项中定义的结合AILIM或其一部分的人单克隆抗体。
最优选的实施方案是上述(30)或(39)中描述的结合人AILIM的人单克隆抗体。
通过用下述任何免疫原(抗原)免疫下面的产生人抗体的转基因非人哺乳动物能够制备本发明的“人单克隆抗体”。
(a)在细胞表面表达上述AILIM(特别优选来自人的AILIM)的天然细胞或人工建立的细胞系；
(b)利用基因重组技术制备的使之在细胞表面表达上面定义的AILIM(特别优选来自人的AILIM)的基因重组细胞；
(c)通过将上述(a)或(b)中的细胞溶解而获得的细胞溶胞产物，或从所述细胞溶胞产物纯化的AILIM(特别优选来自人的AILIM)的多肽片段；
(d)利用基因重组技术制备的以可溶性多肽形式表达上述AILIM(特别优选来自人的AILIM)的一部分(特别优选胞外区或其任何优选的肽)的基因重组细胞；
(e)通过培养上述(d)中基因重组细胞获得的培养上清液或从该培养上清液纯化的AILIM(特别优选来自人的AILIM)的胞外区多肽(可溶性AILIM)；或
(f)化学合成的AILIM(特别优选来自人的AILIM)的一部分(特别优选胞外区或其任何优选的肽)。
此外，通过培养“基因重组宿主”[这里，所述宿主是除了受精卵之外的真核细胞(优选哺乳动物细胞，例如CHO，淋巴细胞，和骨髓瘤细胞)]，从培养上清液也可以获得本发明的单克隆抗体，其中所述宿主可以应用基因重组技术将编码本发明人单克隆抗体的各重链和轻链的cDNA(优选包含所述cDNA的载体)转化宿主来制备，其产生基因重组型人单克隆抗体。
具体地说，通过培养本发明的上述(60)-(62)或(64)-(80)任一项中描述的基因重组宿主能够获得本发明的单克隆抗体(这里，所述宿主是除了受精卵之外的真核细胞(优选哺乳动物细胞，例如CHO，淋巴细胞，和骨髓瘤细胞))。
另外，本发明的人单克隆抗体可以是具有属于IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)，IgM，IgA(IgA1和IgA2)，IgD或IgE的任何同种型的人单克隆抗体。优选地，所述单克隆抗体属于IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)，更优选IgG1，IgG2或IgG4。
根据已知的常用方法，用上述(a)-(f)中任一种免疫原(抗原)免疫能产生人抗体的转基因非人哺乳动物例如下述能产生人抗体的转基因小鼠，能够制备本发明的人单克隆抗体。
即，例如，根据情况要求用与弗氏佐剂混合的所述抗原免疫能产生人抗体的所述转基因非人哺乳动物。从所述免疫动物采集血清可以获得多克隆抗体。使从所述免疫动物分离的所述抗体产生细胞与不能产生自身抗体的骨髓瘤细胞制备融合细胞(杂交瘤)，并且克隆所述杂交瘤，从而筛选产生对用来免疫所述哺乳动物的抗原具有特异亲和力的多克隆抗体的克隆，最终制备单克隆抗体。
更具体地说，如下所述制备单克隆抗体。即，通过皮内，肌内，静脉内，足垫中，或腹膜内将上面(a)-(c)中提到的任何免疫原注射一次至几次，或将所述免疫原移植到所述哺乳动物体内，来免疫所述产生人抗体的转基因非人哺乳动物(特别优选“产生人抗体的转基因小鼠”)。通常，第一次接种之后，每隔1-14天对每只小鼠接种一至四次。在最后一次接种的约1-5天后从这样免疫过的哺乳动物获得产生抗体的细胞。接种的次数和时间间隔可以适当根据，例如，使用的免疫原的特性而安排。
通过Kohler和Milstein的方法(自然(Nature)，256卷，p.495-497(1975))或其改良法可以制备分泌人单克隆抗体的杂交瘤。也就是说，从根据上述免疫的产生人抗体的转基因非人哺乳动物获得脾，淋巴结，骨髓或扁桃体(优选脾)，使其中含有的产生抗体的细胞与优选从哺乳动物例如小鼠，大鼠，豚鼠，仓鼠，兔或人，更优选小鼠，大鼠或人获得的没有产生自身抗体能力的骨髓瘤融合，来制备杂交瘤。
例如，来自小鼠的骨髓瘤P3/X63-AG8.653(ATCC No.CRL-1580)，P3/NSI/1-Ag4-1(NS-1)，P3/X63-Ag8.U1(P3U1)，SP2/0-Ag14(Sp2/0，Sp2)，NSO，PAI，F0，或BW5147，来自大鼠的骨髓瘤210RCY3-Ag.2.3.，或来自人的骨髓瘤U-266AR1，GM1500-6TG-A1-2，UC729-6，CEM-AGR，D1R11或CEM-T15可以作为用于细胞融合的骨髓瘤。
通过，例如，在微量滴定板中培养细胞和通过测定有杂交瘤生长的孔中的培养上清液对用于上述接种的免疫原的反应性，可以筛选产生单克隆抗体的细胞(例如，杂交瘤)，所用方法如酶免疫方法分析例如放射免疫分析(RIA)和酶联免疫-溶剂试验(ELISA)。
通过体外或体内，例如在小鼠，大鼠，豚鼠，仓鼠或兔，优选小鼠或大鼠，更优选小鼠的腹水中培养杂交瘤，并且从所得培养上清液或哺乳动物的腹水分离抗体，能够从杂交瘤产生单克隆抗体。
通过下面的方法能够大规模制备本发明的单克隆抗体：
(1)从所述杂交瘤分别克隆出编码所述单克隆抗体的重链和轻链的相应基因(cDNA等)；
(2)将分别编码重链和轻链的克隆基因插入不同载体或单个载体中，以制备表达载体；
(3)将所述表达载体转移到目标非人哺乳动物(例如山羊)的受精卵中；
(4)将转移有所述基因的所述受精卵移植到代孕母体的子宫中获得嵌合非人动物；
(5)通过进一步使所述嵌合山羊与另一个非人哺乳动物交配，产生转基因非人哺乳动物(牛，山羊，绵羊或猪)，其中编码重链和轻链的基因已分别插入到内源基因中；和
(6)从所述转基因非人哺乳动物的奶中大规模获得从所述人单克隆抗体基因衍生的单克隆抗体(Nikkei Science，1997年4月，p.78-84)。
根据，例如，要培养的细胞的性质，研究目的，和培养方法的各种条件，通过应用公知的营养培养基或从已知用于培养，维持和贮存杂交瘤的基础培养基衍生的任何营养培养基，能够进行产单克隆抗体的细胞的体外培养，来在培养上清液中产生单克隆抗体。
基础培养基的例子是低钙浓度培养基，例如Ham’F12培养基，MCDB153培养基，或低钙浓度MEM培养基，和高钙浓度培养基，例如MCDB104培养基，MEM培养基，D-MEM培养基，RPMI1640培养基，ASF104培养基，或RD培养基。基础培养基可以根据目的含有，例如，血清，激素，细胞因子，和/或各种无机或有机物。
通过饱和硫酸铵沉淀，优球蛋白沉淀方法，己酸方法，辛酸方法，离子交换层析(DEAE或DE52)，使用抗免疫球蛋白柱或蛋白A柱的亲和层析，可以从上述培养上清液或腹水中分离和纯化单克隆抗体。
本发明的人单克隆抗体包括由重链和/或轻链组成的人单克隆抗体，其中每条链的氨基酸序列中有一个或多个氨基酸残基缺失，被取代或添加。
这里，“多个氨基酸残基”指多个氨基酸，特别是1-10个氨基酸残基，优选1-5个氨基酸残基。
通过部分改变编码本发明的人单克隆抗体的氨基酸序列的碱基序列，可以向所述氨基酸序列引入如上所述部分修饰(缺失，取代，插入或添加)。所述对碱基序列的部分改变可通过标准方法使用已知的定点诱变技术(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，81卷，p.5662-5666，1984)导入。
根据公开的文献可以制备“转基因的产生人抗体的非人哺乳动物”，特别是产生人抗体的转基因小鼠，其是一个优选的实施方案(自然遗传(NatureGenetics)，7卷，p.13-21，1994；自然遗传(Nature Genetics)，15卷，p.146-156，1997；国际公开号平4-504365的公开的日文译本；国际公开号平7-509137的公开的日文译本；Nikkei Science，1995年6月，p.40-50；国际专利公开号WO94/25585；自然(Nature)，368卷，p.856-859，1994；和国际公开号平6-500233的公开的日文译本等等)。
具体地说，例如，应用由下面过程组成的技术，能够制备所述产生人抗体的转基因小鼠：
(1)制备基因敲除小鼠，其内源免疫球蛋白重链基因已功能性失活，方法是通过同源重组用抗药性标记基因(例如新霉素耐药基因)取代小鼠内源免疫球蛋白κ重链的基因座位的至少一部分；
(2)制备基因敲除小鼠，其内源免疫球蛋白轻链基因(特别是κ链基因)已功能性失活，方法是通过同源重组用抗药性标记基因(例如新霉素耐药基因)取代小鼠内源免疫球蛋白轻链的基因座位的至少一部分；
(3)制备转基因小鼠，其中已通过诸如能携带大基因的酵母人工染色体(YAC)等载体将人免疫球蛋白重链基因座位的所需区整合到小鼠染色体中；
(4)制备转基因小鼠，其中已通过诸如能携带大基因的酵母人工染色体(YAC)等载体将人免疫球蛋白轻链基因座位(特别是κ链基因)的所需区整合到小鼠染色体中；和
(5)制备转基因小鼠，其内源免疫球蛋白重链和轻链基因座位都功能性失活，并且已将人免疫球蛋白重链和轻链基因座位的所需区整合到其染色体中，方法是使上述(1)至(4)的基因敲除小鼠和转基因小鼠以任意顺序交配。
上述基因敲除小鼠可如下制备：通过同源重组，用外源标记基因(例如新霉素耐药基因)取代小鼠内源免疫球蛋白基因座位的适当区，以失活所述基因座位，从而避免重排。利用所述同源重组进行的失活可以使用例如称之为阳性阴性选择(PNS)的方法(Nikkei Science，1994年5月，p.52-62)。
通过在J-或C-区的一部分(例如，Cμ区)中导入损伤，可以实现免疫球蛋白重链基因座位的功能失活。通过在J-或C-区的一部分中导入损伤，或在跨越了J-和C-区的一个区中导入损伤，可以实现免疫球蛋白轻链(例如κ链)功能失活。
根据通常用于产生转基因动物的方法(例如，参见“动物细胞实验最新手册(Newest Manual of Animal Cell Experiment)”，LIC出版社，第7章，p.361-408(1990))，能够制备转基因小鼠。具体地说，应用原生质球融合技术，将例如来自正常小鼠胚泡的HPRT-阴性(次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因缺陷)ES细胞(胚胎干细胞)与包含插入了编码所述人免疫球蛋白重链基因座位或轻链基因座位或其一部分的基因和HPRT基因的YAC载体的酵母融合。通过HAT筛选方法筛选其小鼠内源基因与所述外源基因整合的ES细胞。然后，将筛选到的ES细胞显微注射到从另一个正常小鼠获得的受精卵(胚泡)中(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，77卷，p.7380-7384，1980；美国专利No.4873191)。将该胚泡移植到作为代孕母体的另一只正常小鼠的子宫中。然后，从代孕母体小鼠生出嵌合的转基因小鼠。通过使该嵌合的转基因小鼠与正常小鼠交配，得到异基因转基因小鼠。根据Mendel法则，通过使该异基因转基因小鼠彼此交配，得到同基因转基因小鼠。
本发明中使用的“单克隆抗体的部分”指本发明上述人单克隆抗体的一部分，具体地说，包括F(ab’)2，Fab’，Fab，Fv(抗体的可变区片段)，sFv，dsFv(二硫键稳定型Fv)，或dAb(单一结构域抗体)(Exp.Opin.Ther.Patents，6卷，No.5，p.441-456(1996))。
“F(ab’)2”和“Fab’”可通过用蛋白酶例如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶处理免疫球蛋白(单克隆抗体)来制备，它们表示通过在两条H链之间的绞链区中接近二硫键处消化免疫球蛋白产生的抗体片段。例如，木瓜蛋白酶裂解IgG两条H链之间的绞链区中二硫键的上游，产生两个同源抗体片段，其中由VL(L链可变区)和CL(L链恒定区)组成的L链，和由VH(H链可变区)和CHγ1(H链的恒定区中的γ1区)组成的H链片段通过二硫键在它们的C末端区连接。这两个同源抗体片段都称为Fab’。胃蛋白酶也裂解IgG两条H链之间绞链区中二硫键的下游，产生比由上述两个Fab’在绞链区连接形成的片段稍微大一些的抗体片段。该抗体片段称为F(ab’)2。
“结合速度常数(ka)”表示根据抗体抗原反应动力学计算的所述单克隆抗体与靶抗原的结合强度(程度)。“解离速度常数(kd)”表示所述单克隆抗体与靶抗原解离的强度(程度)。“解离常数(Kd)”是通过将所述“解离速度常数(kd)”除以“结合速度常数(ka)”得到的值。这些常数用来代表所述单克隆抗体对抗原的亲和力及它们中和抗原的活性。
所述常数可以根据各种方法来分析，并可使用商售分析试剂盒BiacoreX(Amersham Pharmacia)或类似的试剂盒，根据试剂盒所附的说明和实验方法，容易地分析所述常数。使用所述试剂盒得到的ka，kd和Kd分别以1/M.秒，1/秒和M(摩尔)单位表示。ka值越高表明所测单克隆抗体的抗原结合活性越强，Kd值越小表明抗体的抗原中和活性越强。
本发明的人单克隆抗体包括那些具有下面(1)-(3)所示ka，kd和Kd值的人单克隆抗体：
(1)以1.0×104(1/M.秒)或更大，优选1.0×105(1/M.秒)或更大的结合速度常数(ka)结合人AILIM或其一部分的人单克隆抗体。
(2)以1.0×10-4(1/秒)或更小，优选1.0×10-5(1/秒)或更小的解离速度常数(kd)结合人AILIM或其一部分的人单克隆抗体。
(3)具有对人AILIM或其一部分的反应性，解离常数(Kd)是1.0×10-7(M)或更小，优选1.0×10-8(M)或更小，更优选1.0×10-9(M)或更小的人单克隆抗体。
在该情况下，预期上述ka，kd和Kd各个值随着在测定时不同的条件而稍有波动，有误差范围，但是一般情况下特定指数没有波动。
本发明的“产生单克隆抗体的细胞”或产生人单克隆抗体的基因重组的“基因重组宿主”(这里，所述宿主是除受精卵以外的细胞)指产生上述本发明人单克隆抗体的任何细胞。
具体地说，例如，它包括下面(1)-(3)任一项中描述的细胞，但是不局限于它们：
(1)通过用上面定义的免疫原(抗原)免疫上述产生人抗体的转基因非人哺乳动物并且从所述接受免疫的动物收集细胞而获得的产生人单克隆抗体的B细胞。
(2)通过使这样获得的产生人单克隆抗体的B细胞与来自哺乳动物的骨髓瘤细胞融合得到的上述融合细胞(杂交瘤)。
(3)通过用编码从所述产生人单克隆抗体的B细胞或产生人单克隆抗体的融合细胞(杂交瘤)分离的所述人单克隆抗体的基因(编码重链的基因或编码轻链的基因，或两者)转化除所述B细胞和杂交瘤以外的细胞(例如CHO(中国仓鼠卵巢)细胞，BHK(仓鼠胚肾)细胞，淋巴细胞例如骨髓瘤)，获得的产生人单克隆抗体的基因重组细胞。
这里，(3)中提到的产生人单克隆抗体的基因重组细胞即指产生由上述(1)中B细胞或上述(2)中杂交瘤产生的人单克隆抗体的基因重组体的基因重组细胞。
本发明的“基因重组宿主”中的“宿主”除了上述各种哺乳动物细胞之外，包括任何非人哺乳动物(山羊，猪，绵羊，牛，等)的受精卵。通过将本发明编码抗人AILIM的任何单克隆抗体(优选人单克隆抗体)的基因(编码重链的基因或编码轻链的基因，或两者)转移到该受精卵中，能够获得本发明的基因重组受精卵。该基因重组受精卵被能制备能大规模从奶中生产蛋白质的转基因动物(Nikkei Science，1997年4月，p.78-84)。
本发明包括的“物质”，具体地说“在调节AILIM介导的信号转导方面有活性的物质”，更具体地说“在抑制AILIM-表达细胞的增殖方面，或在抑制AILIM-表达细胞产生细胞因子的方面有活性的物质”指自然界存在的天然物质，或人工制备的任意物质。
与“结合AILIM的物质”和“结合AILIM配体的物质”相关的“物质”在这里也指自然界存在的任何天然物质，或人工制备的任意物质。
这里，“AILIM介导的信号转导”指导致AILIM-表达细胞的任意表型变化(细胞增殖，细胞的激活，细胞的失活，凋亡，和/或从AILIM-表达细胞产生任意细胞因子的能力改变)的经由AILIM的信号转导。
“物质”可以主要分类为“蛋白质物质”和“非蛋白质物质”。
“蛋白质物质”的例子是下面的多肽，抗体(多克隆抗体，单克隆抗体，或单克隆抗体的一部分，并且特别优选上述人抗体)。
当所述物质是一种抗体时，所述物质优选是一种单克隆抗体。当所述物质是一种单克隆抗体时，所述物质不仅包括来自非人哺乳动物的单克隆抗体，还包括重组嵌合单克隆抗体，重组人源化单克隆抗体和人单克隆抗体。
这里，“重组嵌合单克隆抗体”是一种通过基因工程制备的单克隆抗体，具体地指一种嵌合抗体例如小鼠/人嵌合单克隆抗体，其可变区来自非人哺乳动物(小鼠，大鼠，仓鼠等)的免疫球蛋白，其恒定区来自人免疫球蛋白。
本发明的“人源化单克隆抗体(CDR-移植型抗体)”是一种通过基因工程制备的单克隆抗体，具体地指其中高变区中互补决定区的部分或全部来自非人哺乳动物(小鼠，大鼠，仓鼠等)单克隆抗体高变区的互补决定区，可变区的框架区来自人免疫球蛋白可变区的框架区，恒定区来自人免疫球蛋白恒定区的人源化单克隆抗体。
高变区的互补决定区存在于抗体可变区的高变区中，并且指直接结合并互补于抗原的三个区(互补决定区残基，CDR1，CDR2，和CDR3)。可变区的框架区指位于这三个互补决定区的上游，下游或之间的四个比较保守的区(框架区，FR1，FR2，FR3，和FR4)。
换句话说，人源化单克隆抗体指其中除了来自非人哺乳动物单克隆抗体高变区的互补决定区的部分或全部之外所有的区被它们相应的来自人免疫球蛋白的区置换的单克隆抗体。
来自人免疫球蛋白的恒定区具有各种同种型例如IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)，IgM，IgA，IgD和IgE中固有的氨基酸序列。本发明的人源化单克隆抗体的恒定区可以是来自属于任何同种型的人免疫球蛋白。优选地，其是人IgG的恒定区。对来自人免疫球蛋白恒定区的框架区没有特别限定。
当本发明的物质是一种多肽时，所述物质包括下面的多肽，其片段(寡肽)，融合多肽，其化学修饰的多肽。寡肽的例子是包括5-30个，优选5-20个氨基酸的肽。化学修饰可以根据不同目的设计，例如，体内给药的情况下提高血液半衰期，或口服的情况下在消化道中增强对降解作用的耐受性或促进消化道吸收。
下面是多肽的例子：
(1)包括AILIM的胞外区的全部或部分的多肽；
(2)包括AILIM的胞外区的全部或部分以及免疫球蛋白重链恒定区的全部或部分的融合多肽；或
(3)结合AILIM的多肽。
“非蛋白质”的例子是DNA，RNA，和化学合成的化合物。
这里，“DNA”指根据编码上述AILIM(优选人AILIM)的DNA(包括cDNA和基因组DNA)的核苷酸序列设计的可用作反义DNA药物的“包括所述DNA或其化学修饰型DNA的部分核苷酸序列的DNA”。具体地说，所述反义DNA能通过与编码AILIM的DNA或RNA杂交，抑制编码AILIM的DNA转录为mRNA，或抑制该mRNA翻译为蛋白质。
“部分核苷酸序列”在这里指包括任意区中任意个核苷酸的部分核苷酸序列。所述部分核苷酸序列由5-100个连续的核苷酸，优选5-70个连续的核苷酸，更优选5-50个连续的核苷酸，更优选5-30个连续的核苷酸组成。
当DNA被用作反义DNA药物时，可以部分化学修饰该DNA序列以延长给药后该DNA的血液半衰期(稳定性)，以提高该DNA的胞质膜渗透性，或提高口服给药时该DNA在消化器官中的抗降解性或促进吸收。化学修饰包括对磷酸酯键，核糖，核苷酸碱基，糖部分，寡核苷酸DNA结构中的3’末端和/或5’末端的修饰。
磷酸酯键的修饰包括，例如，将一个或多个磷酸酯键转化为磷酸二酯键(D-寡)，硫代磷酸酯键，二硫代磷酸酯键(S-寡)，膦酸甲酯(MP-寡)，氨基磷酸酯键，非磷酸酯键或硫代膦酸甲酯键，或它们的组合。核糖的修饰包括例如转化为2’-氟代核糖或2’-O-甲基核糖。核苷酸碱基的修饰包括例如转化为5-丙炔基尿嘧啶或2-氨基腺嘌呤。
这里，“RNA”指根据编码上述AILIM(优选人AILIM)的RNA的核苷酸序列设计的用作反义RNA药物的“包括所述RNA或其化学修饰型RNA的部分核苷酸序列的RNA”。所述反义RNA能通过与编码AILIM的DNA或RNA杂交，抑制编码AILIM的DNA转录为mRNA，或抑制mRNA翻译为蛋白质。
“部分核苷酸序列”在这里指包括任意区中任意个核苷酸的部分核苷酸序列。所述部分核苷酸序列由5-100个连续的核苷酸，优选5-70个连续的核苷酸，更优选5-50个连续的核苷酸，更优选5-30个连续的核苷酸组成。
可对反义RNA的序列进行部分化学修饰，以延长给药后该RNA的血液半衰期(稳定性)，提高该RNA的胞质膜渗透性，或提高口服时RNA在消化器官中的抗降解性或促进吸收。化学修饰的例子是适用于上述反义DNA的化学修饰。
“化学合成的化合物”的例子是除了上述DNA，RNA和蛋白质物质之外的具有约100至约1000分子量的任何化合物，优选具有约100至约800分子量，更优选约100至约600分子量的任何化合物。
包括在上文“物质”的定义中的“多肽”指构成AILIM(优选人AILIM)的多肽链的部分(片段)，优选构成AILIM的多肽的胞外区的全部或部分(可以任选地在该区的N-端和/或C-端加上1-5个氨基酸)。
本发明中涉及的AILIM是包括1或2个多肽链的穿透细胞膜的跨膜分子。
这里，“跨膜蛋白”指通过一次或几次穿透该膜的脂双层的疏水肽区与膜连接的蛋白质，并且其结构整体由三个主要的区组成，它们是胞外区，跨膜区和胞质区，正如在很多受体或细胞表面分子中见到的一样。这样一种跨膜蛋白与具有相同或不同氨基酸序列的另一条链构成单体，同型二聚体，异二聚体或寡聚体形式的受体或细胞表面分子。
这里，“胞外区”指上述跨膜蛋白的完整结构中存在于膜外的部分结构(部分区)的全部或部分。换句话说，指跨膜蛋白中除了插入膜中的区(跨膜区)和紧接跨膜区而存在于胞质中的区(胞质区)之外的区的全部或部分。
包括在上述“蛋白质物质”中的“融合多肽”指包括构成AILIM(优选人AILIM)的多肽的胞外区的全部或部分，和“免疫球蛋白重链(Ig，优选人Ig)恒定区的全部和部分”的融合多肽。优选地，所述融合多肽是包括AILIM的胞外区和人IgG重链恒定区的一部分的融合多肽，特别优选地是AILIM的胞外区与人IgG重链中包括绞链区，CH2区和CH3区的区(Fc)的融合多肽。IgG优选IgG1，AILIM优选人，小鼠或大鼠的AILIM(优选人的)。
这里使用的“人免疫球蛋白(Ig)重链的恒定区的全部或部分”指如上所述来自人的免疫球蛋白重链(H链)的恒定区或Fc区，或其一部分。免疫球蛋白可以是属于任何类和任何亚类的免疫球蛋白。具体地说，免疫球蛋白的例子是IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)，IgM，IgA(IgA1和IgA2)，IgD或IgE。优选地，免疫球蛋白是IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)，或IgM。本发明特别优选的免疫球蛋白的例子是属于来自人的IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)的那些。
免疫球蛋白具有Y-形结构单元，其中四条链由两条同源轻链(L链)和两条同源重链(H链)组成并且通过二硫键(S-S键)连接。轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。
重链恒定区由具有各类(IgG，IgM，IgA，IgD和IgE)和各亚类(IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1和IgA2)固有的氨基酸序列的一些区组成。
IgG(IgG1，IgG2，IgG3，和IgG4)的重链由VH，CH1区，绞链区，CH2区和CH3区以此顺序自N末端构成。
类似地，IgG1的重链由VH，Cγ11区，绞链区，Cγ12区和Cγ13区以此顺序自N末端构成。IgG2的重链由VH，Cγ21区，绞链区，Cγ22区和Cγ23区以此顺序自N末端构成。IgG3的重链由VH，Cγ31区，绞链区，Cγ32区和Cγ33区以此顺序自N末端构成。IgG4的重链由VH，Cγ41区，绞链区，Cγ42区和Cγ43区以此顺序自N末端构成。
IgA的重链由VH，Cα1区，绞链区，Cα2区和Cα3区以此顺序自N末端构成。
类似地，IgA1的重链由VH，Cα11区，绞链区，Cα12区和Cα13区以此顺序自N末端构成。IgA2的重链由VH，Cα21区，绞链区，Cα22区和Cα23区以此顺序自N末端构成。
IgD的重链由VH，Cδ1区，绞链区，Cδ2区和Cδ3区以此顺序自N末端构成。
IgM的重链由VH，Cμ1区，Cμ2区和Cμ3区，和Cμ4以此顺序自N末端构成，没有IgG，IgA和IgD中见到的绞链区。
IgE的重链由VH，Cε1区，Cε2区和Cε3区，和Cε4以此顺序自N末端构成，没有IgG，IgA和IgD中见到的绞链区。
如果，例如，用木瓜蛋白酶处理IgG，在绞链区中连接两条重链的二硫键以外偏N-末端处裂解产生两个同源Fab，其中由VH和CH1组成的重链片段通过二硫键与一条轻链连接，还产生一个Fc，其中由绞链区，CH2区和CH3区组成的两条同源重链片段通过二硫键连接(参见ImmunologyIllustrated，原第2版，Nankodo，p.65-75(1992)；和最新药物科学焦点(免疫系统识别机理)(Focus of Newest Medical Science‘Recognition MechanismofImmune System’)，Nankodo，p.4-7(1991)等等)。
即，上文提到的“免疫球蛋白重链的恒定区的一部分”指免疫球蛋白重链恒定区中具有如上所述结构特征的部分，优选地，是没有C1区或Fc区的恒定区。具体地说，其例子是由来自IgG，IgA，和IgD的绞链区，C2区和C3区组成的区，和由来自IgM和IgE的C2区，C3区和C4区组成的区。其特别优选的例子是来自人IgG1的Fc区。
上述融合多肽具有下面的优点，即通过利用蛋白质A与免疫球蛋白片段特异性结合的性质经亲和柱层析可以非常容易地纯化融合多肽，因为本发明的融合多肽具有免疫球蛋白例如上述IgG的恒定区的一部分(Fc)作为融合配对物。此外，由于抗各种免疫球蛋白的Fc的各种抗体是可获得的，因此可用抗Fc抗体容易地进行融合多肽的免疫测定。
上文“物质”的定义中包括的“多肽”包括“结合AILIM的多肽”。
“结合AILIM的多肽”的具体例子是构成已知的作为与AILIM相互作用的配体的B7h，B7RP-1，GL50或称为LICOS分子的多肽的全部或部分(自然(Nature)，402卷，No.6763，p.827-832，1999；天然药物(Nature Medicine)，5卷，No.12，p.1365-1369，1999；免疫学杂志(J.Immunology)，164卷，p.1653-1657，2000；当今生物学(Curr.Biol.)，10卷，No.6，p.333-336，2000)。
优选地，所述多肽是包括上述配体(B7h，B7RP-1，GL50)胞外区的全部或部分的多肽，或包括该多肽和免疫球蛋白重链(优选人免疫球蛋白)恒定区的全部或部分的融合多肽。这里，术语“胞外区”和“免疫球蛋白重链的恒定区”具有和上面相同的意义。
上述多肽，多肽的部分(片段)和融合多肽不仅可以通过下面提到的重组DNA技术制备，而且还可以通过本领域公知的方法例如化学合成方法和细胞培养方法或其改进的方法来制备。
本发明的“抗体”可以是上文定义的抗哺乳动物AILIM(特别优选人AILIM)的多克隆抗体(抗血清)或单克隆抗体，优选是单克隆抗体。
具体地，所述抗体是具有通过结合AILIM而抑制AILIM-表达细胞增殖或通过结合AILIM而抑制AILIM-表达细胞产生干扰素γ或白细胞介素4的活性的抗体。
这里“迟发型过敏反应”是细胞免疫介导的(特别是Th1-型T细胞介导的)过敏反应，即，被抗原(记忆T细胞记忆的抗原)致敏的T细胞介导的过敏反应，并且指任何过敏反应，它是当抗原致敏的活体生物再次接触该相同抗原时，约24-48小时表现过敏反应，并伴随所述记忆T细胞引起的炎症。
该迟发型过敏反应包括针对传染性致病抗原例如来自结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的结核菌素的过敏反应，针对少量蛋白的瞬时Jones-Mote迟发型过敏反应，对化学品例如苦基氯或植物毒素例如天然漆的接触型过敏反应，或在异源移植中见到的对移植物的移植排斥相关的过敏反应。
“药物组合物”这里指含有结合AILIM(优选人AILIM)或其一部分的抗体(优选人抗体)，或单克隆抗体(优选人单克隆抗体)或其一部分作为有效成分并含有“可药用载体”而作为药物使用的组合物。
“可药用载体”包括赋形剂，稀释剂，膨胀剂，分解剂，稳定剂，防腐剂，缓冲剂，乳化剂，芳香剂，着色剂，甜味剂，增粘剂，矫味剂，增溶剂或其它添加剂。
使用一种或多种这样的载体，能够将药物组合物配制成片剂，丸剂，粉末剂，颗粒剂，注射剂，溶液，胶囊，糖锭，酏剂，悬浮液，乳液或糖浆。
药物组合物可以口服或肠胃外给药。肠胃外给药的其它形式包括常规方法制备的含有一种或多种活性成分的外用溶液，直肠施用的栓剂，和阴道栓。
剂量根据患者的年龄，性别，体重和症状，治疗效果，给药途径，治疗周期，或药物组合物中含有的活性成分的类型(上述多肽或抗体)而不同。通常，对成人，可以以10微克至1000毫克(或10微克至500毫克)/每次给药的剂量施用药物组合物。根据各种条件，小于上述剂量的剂量在某些情况下可能是足够的，而大于上述剂量的剂量在另外情况下可能是必需的。
特别地，通过将抗体溶解于或悬浮于无毒的可药用载体例如生理盐水或市售注射用蒸馏水中，将浓度调节为0.1微克抗体/毫升载体至10毫克抗体/毫升载体，可以制备注射剂。
可以以1微克至100毫克/千克体重，优选50微克至50毫克/千克体重的剂量一天一次或多次对需要治疗的患者施用这样制备的注射液。给药途径的例子是药学可接受的给药途径，例如静脉注射，皮下注射，皮内注射，肌内注射，或腹膜内注射，优选静脉内注射。
也可以将注射液制备到不含水的稀释液(例如丙二醇，聚乙二醇，植物油例如橄榄油，醇例如乙醇)，悬浮剂或乳剂中。
通过用细菌不能穿透的除菌滤膜过滤，通过与杀菌剂混合或通过辐射，可将注射剂灭菌。还可将注射剂制备成使用时制备的形式。即，将其冻干成无菌固体组合物，并且在使用前可以溶解于注射用无菌蒸馏水或另一种溶剂中。
含有本发明的人抗体的药物组合物可作为药物制剂用于控制与AILIM-介导的向AILIM-表达细胞转导协同刺激信号(第二信号)相关的各种生物反应(例如AILIM表达细胞的增殖，AILIM表达细胞产生细胞因子，AILIM细胞表达的免疫胞解或死亡(凋亡)或其它)而不诱发HAMA(人抗小鼠抗体)所致宿主免疫排斥作用，和/或用于通过阻抑和抑制与AILIM-介导的信号转导相关的疾病的发生和/或进展来治疗或预防各种疾病。
术语“免疫胞解”这里指下面的一种生物现象。
通过抗体(特别是细胞-溶解抗体)以及通过与杀伤细胞结合能够诱导细胞的裂解(胞解)。细胞-溶解抗体是一种细胞毒活性抗体，其特别具有对细胞例如免疫细胞，组织细胞或精子的溶解活性。当该抗体结合细胞-表面抗原时，其引起对细胞的细胞毒作用或在补体的存在下诱导细胞溶解。
补体作用与抗体对细胞-表面抗原的特异性结合联合诱导免疫胞解。与表面抗原结合的抗体激活C1补体(C1)。接着，通过与C2-C9补体(C2-C9)的一系列补体-固定反应形成细胞损伤位点，然后从细胞释放细胞内含物从而溶解细胞。
术语“抗体-依赖性细胞介导的细胞毒活性”这里指一种生物作用，也缩写为“ADCC”，并且是效应细胞例如淋巴细胞，巨噬细胞或多形核白细胞对靶细胞的细胞毒作用，其需要的不仅是效应细胞和靶细胞，而且还有参与诱导细胞毒作用的抗体。
术语“混合淋巴细胞反应”这里指缩写为“MLR”的生物现象。该反应也称为混合的白细胞反应。
将来自不同个体的异源白细胞或淋巴细胞相互混合并且培养几天，从而使细胞形成母细胞并且在细胞中合成DNA(即细胞增殖)。该反应被称为MLR(异源MLR)。
通过抑制任一淋巴细胞的增殖可以分析DNA合成(细胞增殖)。通过辐射或丝裂霉素处理可以完成抑制。通过测定其它淋巴细胞中合成的DNA量可以进行分析。
通过测定用放射性同位素例如掺入到细胞核中的氚标记的胸腺嘧啶核苷可以分析合成的DNA的量。
根据通常使用的方法，用从编码AILIM的mRNA克隆出cDNA的方法；分离基因组DNA并剪接它们的方法；以cDNA序列或mRNA序列作为模板经PCR制备DNA的方法；或化学合成DNA的方法，能够获得本发明的编码AILIM(特别优选人AILIM)的DNA。
用上述相同的方法还能够获得根据本发明的编码AILIM配体的DNA。
通过用合适的限制酶酶切(消化)包括编码这样制备的AILIM的DNA的DNA能够制备根据本发明的编码AILIM(特别优选人AILIM)的DNA，如果需要，通过使用合适的DNA聚合酶等使所得DNA片段与接头DNA或标记相连。用相同的方法还能够制备编码AILIM配体的DNA。
下面将给出一个从mRNA克隆出编码AILIM(特别优选人AILIM；下面称该蛋白质为目的蛋白)的cDNA的例示方法。
用相同的方法还能够克隆编码AILIM配体的DNA。
首先，从表达和产生目的蛋白的组织和细胞制备编码目的蛋白的信使RNA。通过已知方法，例如硫氰酸胍方法(Chirgwin，J.M.等，生物化学(Biochemistry)，18卷，p.5294，1979)，热酚方法，或AGPC方法，从分离的总RNA可以制备mRNA，并且对其进行亲和层析(使用寡-dT纤维素或聚尿苷酸Sepharose)。
然后，使用所得mRNA作为模板，合成cDNA，例如，通过公知的使用逆转录酶的方法，例如Okayama等的方法(分子细胞生物学(Mol.Cell.Biol)，2卷，p.161(1982)；出处同上，3卷，p.280(1983))或Hoffman等的方法(基因(Gene)，25卷，p.263(1983))，并且转化为双链cDNA。通过用包含该cDNA的质粒载体，噬菌体载体或粘粒载体转化大肠杆菌或通过体外包装之后转染大肠杆菌而制备cDNA文库。
本发明中使用的质粒载体没有限制，只要它们能在宿主中维持并复制。也可以使用能在宿主中复制的任何噬菌体载体。通常使用的克隆载体的例子是pUC19，λgt10，λgt11，等等。当该载体被应用于下述免疫筛选时，优选使用包含能在宿主中表达编码本发明多肽的基因的启动子的载体。
通过，例如Maniatis等的方法(分子克隆，实验手册，第二版，冷泉港实验室，p.1.53，1989)将cDNA插入质粒中。通过，例如Hyunh等的方法(DNA克隆，操作指南，vol.1，p.49，1985)将cDNA插入噬菌体载体中。通过使用市售克隆试剂盒(例如，购自Takara Shuzo的产品)简单地进行这些方法。将这样获得的重组质粒或噬菌体载体导入合适的宿主细胞例如原核细胞(例如大肠杆菌：XLlBlue MRF’，DH5α，HB101，MC1061/P3，等)中。
将质粒导入宿主的方法有分子克隆，实验手册(第二版，冷泉港实验室，p.1.74，(1989))中描述的氯化钙方法，氯化钙/氯化铷法，和电穿孔方法。通过例如其中噬菌体DNA在体外包装后被导入培养宿主中的方法将噬菌体载体导入宿主细胞。用市售体外包装试剂盒(例如购自Stratagene或Amersham的产品)能容易进行体外包装。
通过组合通用的cDNA筛选方法能够从根据上述方法制备的cDNA文库分离编码本发明多肽的cDNA。
例如，通过已知的菌落杂交方法(Crunstein等，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)72卷，p.3961(1975))或噬菌斑杂交方法(分子克隆，实验手册，第二版，冷泉港实验室，p.2.108，1989)，使用32P-标记的化学合成的相应于本发明多肽之氨基酸序列的寡核苷酸作为探针能够筛选包含目标cDNA的克隆。或通过用合成的PCR引物经PCR扩增所述区能够筛选包含编码本发明多肽中特定区的DNA片断的克隆。
当利用以cDNA表达载体(例如λZAPII噬菌体载体)制备的cDNA文库时，通过使用抗本发明多肽的抗体经抗原-抗体反应能够筛选所需克隆。当筛选很多克隆时优选使用应用了PCR方法的筛选方法。
通过Maxam-Gilbert方法(Maxam等，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.74，p.560(1977))或使用噬菌体M13的双脱氧核苷酸合成链终止方法(Sanger等，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.74，p.5463-5467(1977))，能够测定这样获得的DNA的核苷酸序列。通过用限制酶等酶切如上所述获得的克隆能够获得编码本发明多肽的基因的全部或部分。
通过下面的方法能够从如上所述得自表达本发明多肽的细胞的基因组DNA分离编码本发明多肽的DNA。
这些细胞优选通过SDS或蛋白酶K溶解并且通过酚反复萃取将DNA脱蛋白。优选用核糖核酸酶消化RNA。用合适的限制酶对所得DNA进行部分消化，获得的DNA片段用合适的噬菌体或粘粒扩增以产生文库。含所需序列的克隆通过例如用放射性标记的DNA探针检测，编码本发明多肽的基因的全部或部分通过用限制酶等切割这些克隆而获得。
根据常规方法(“用于基因扩增的PCR技术-基础和新技术”KYORITSUSHUPPAN，1992，等)通过使用已知的编码目的蛋白的mRNA或cDNA作为模板能经PCR制备编码目的蛋白的DNA。
以编码目的蛋白的核苷酸序列为基础通过常规方法也可以化学合成编码目的蛋白的DNA。
根据包含常用基因重组技术的常规方法，使用合适的限制酶经上述方法切割编码AILIM的DNA(cDNA或含有内含子的基因组DNA)以给出编码AILIM的DNA片段，然后根据需要，用合适的DNA酶等将所得DNA片段与接头DNA或标记相连，可以制备作为重组蛋白的本发明的AILIM(特别优选人AILIM)或其一部分(优选胞外区)。
用相同的方法能制备AILIM配体(特别优选人AILIM配体)或其一部分(优选胞外区)。
下面详细说明一个具体的例子。即，将上述制备的DNA插入载体(下面将详细说明)中，得到表达载体。然后使用该表达载体来转化如下所述宿主细胞以获得转化体。培养该转化体并允许在培养上清液中产生目的蛋白。利用柱层析等能容易地纯化培养上清液中的目的蛋白。
对产生重组AILIM(或其胞外区)的表达载体的类型没有特别限制，只要该载体在各种宿主例如原核细胞和/或真核细胞中能自我复制并维持或自动产生即可。这样的表达载体包括质粒载体和噬菌体载体(克隆载体：实验手册，Elsevier，纽约，1985)。
通过常规方法将编码AILIM(或其胞外区)的DNA与本领域可获得的用于重组的载体(质粒DNA和噬菌体DNA)相连，能够容易制备表达载体。使用的用于重组的载体的具体例子是得自大肠杆菌的质粒例如pBR322，pBR325，pUC12，pUC13，和pUC19，得自酵母的质粒例如pSH19和pSH15，得自枯草芽孢杆菌的质粒，例如pUB110，pTP5和pC194。噬菌体的例子是细菌噬菌体例如λ噬菌体，和动物或昆虫病毒(pVL1393，Invitrogen)例如逆转录病毒，痘苗病毒，和核形多角体病病毒。
当要在宿主细胞中表达编码本发明的AILIM(特别优选人AILIM)或其可溶性胞外区的DNA从而在宿主表面上表达AILIM，或要产生AILIM(特别优选人AILIM)的可溶性胞外区时，可使用质粒载体。对这样的质粒载体没有特别限制，只要载体能表达编码AILIM(特别优选人AILIM)或其可溶性胞外区的基因并且在各种宿主细胞例如原核细胞和/或真核细胞中产生编码蛋白即可。例如，这样的质粒包括pMAL C2，pcDNA3.1(-)，pEF-BOS(核酸研究(Nucleic Acid Research)，Vol.18，p.5322，1990；等)，pME18S(“基因工程手册”，实验药物(Experimental Medicine)，增刊，1992；等)，等。
当使用细菌特别是大肠杆菌作为宿主时，表达载体一般至少由启动子-操纵子区，起始密码子，编码目的蛋白的DNA，终止密码子，终止子区和复制子组成。
当使用酵母，动物细胞或昆虫细胞作为宿主时，表达载体优选至少由启动子，起始密码子，编码本发明的AILIM(特别优选人AILIM)或其胞外区的DNA，和终止密码子组成。也可以包括编码信号肽的DNA，增强子序列，编码本发明AILIM的基因的5’-和3’-非翻译区，剪接连接区，聚腺苷酸化位点，选择标记区和复制子。如果需要，表达载体还可以包含通常使用的用于基因扩增(标记)的基因。
在细菌中表达本发明的AILIM(特别优选人AILIM)或其胞外区的启动子-操纵子区包括启动子，操纵子和Shine-Dalgamo(SD)序列(例如AAGG)。例如，当宿主是埃希氏菌时，其优选包括Trp启动子，lac启动子，recA启动子，λPL启动子，lpp启动子，tac启动子等等。
在酵母中表达本发明的AILIM(特别优选人AILIM)或其胞外区的启动子的例子是PH05启动子，PGK启动子，GAP启动子，ADH启动子等等。当宿主是芽孢杆菌时，其例子是SL01启动子，SP02启动子，penP启动子等等。
当宿主是真核细胞例如哺乳动物细胞时，其例子是SV40-衍生的启动子，逆转录病毒启动子，热休克启动子等等。当然，启动子不局限于上面的例子。另外，使用增强子对于表达是有效的。
优选的起始密码子是例如甲硫氨酸密码子(ATG)。
通常使用的终止密码子(例如，TAG，TGA，TAA等)可作为终止密码子的例子。
使用常用的天然或合成终止子作为终止子区。
复制子指能在宿主细胞中复制整个DNA序列的DNA，包括天然质粒，人工修饰的质粒(从天然质粒制备的DNA片段)，合成质粒等等。优选的质粒的例子是用于大肠杆菌的pBR322或其人工衍生物(通过用合适的限制酶处理pBR322获得的DNA片段)，用于酵母的酵母2μ质粒或酵母染色体DNA，用于哺乳动物细胞的pRSVneo ATCC37198，pSV2dhfr ATCC37145，pdBPV-MMTneoATCC37224，pSV2neo ATCC37149，pSV2bsr等等。
也可以使用本领域通常使用的增强子序列，聚腺苷酸化位点和剪接连接区，例如从SV40衍生的那些。
可以根据常规方法使用通常使用的选择标记。其例子是针对抗生素的抗药性基因，例如四环素，氨苄青霉素或卡那霉素抗药性基因，和胸苷激酶基因。
用于基因扩增的基因的例子是二氢叶酸还原酶(DHFR)基因，胸苷激酶基因，新霉素抗药性基因，谷氨酸合酶基因，腺苷脱氨酶基因，鸟氨酸脱羧酶基因，潮霉素-B-磷酸转移酶基因，天冬氨酸转氨甲酰酶基因等等。
通过将至少上面提到的启动子，起始密码子，编码本发明蛋白的DNA，终止密码子和终止子区与合适的复制子依次环状连接，能够制备本发明的表达载体。如果需要，可通过常规方法例如用限制酶消化或用T4 DNA连接酶连接而使用合适的DNA片段(例如接头，用其它限制酶产生的限制性酶切位点)。
通过将上述表达载体导入宿主细胞中能制备本发明的转化体。
本发明中使用的宿主细胞没有限制，只要与上述表达载体相容并且能够被转化。其例子是本发明技术领域中通常使用的各种细胞例如天然细胞或人工建立的重组细胞(例如细菌(埃希氏菌属或芽孢杆菌属)，酵母(糖酵母属，毕赤氏酵母属等)，动物细胞或昆虫细胞)。
优选使用大肠杆菌或动物细胞。具体的例子是大肠杆菌(DH5α，DH10B，TB1，HB101，XL-2Blue，等)，来自小鼠的细胞(COP，L，C127，SD2/0，NS-1，NIH3T3，等)，来自大鼠的细胞，来自仓鼠的细胞(BHK，CHO，等)，来自猴的细胞(COS1，COS3，COS7，CV1，Velo等)，和来自人的细胞(Hela，二倍体成纤维细胞衍生的细胞，骨髓瘤细胞，Namalwa等)。
通过已知方法能将表达载体导入(转化/转导至)宿主细胞中。
根据例如下面的方法能进行转化：当宿主是细菌(大肠杆菌，枯草芽孢杆菌等)时，Cohen等的方法(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，69卷，p.2110(1972))，原生质体方法(分子基因遗传学(Mol.Gen.Genet.)，168卷，p.111(1979))，或感受态方法(分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)，56卷，p.209(1971))；当宿主是啤酒糖酵母时，Hinnen等的方法(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，75卷，p.1927(1978))，或锂方法(J.Bacteriol.153卷，p.163(1983))；当宿主是动物细胞时，Graham的方法(病毒学(Virology)，52卷，p.456(1973))；当宿主是昆虫细胞时，Summers等的方法(分子细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)，3卷，pp.2156-2165(1983))。
通过在营养培养基中培养包含上述制备的表达载体的转化体(下文中该术语包括转导体)能够产生本发明AILIM(特别优选人AILIM)的胞外区。用相同方法能产生AILIM配体。
营养培养基优选包括宿主细胞(转化体)生长必需的碳源，无机氮源，或有机氮源。碳源的例子是葡萄糖，葡聚糖，可溶性淀粉和蔗糖，无机或有机氮源的例子是铵盐，硝酸盐，氨基酸，玉米浆，蛋白胨，酪蛋白水解物，肉提取物，大豆饼和马铃薯提取物。如果需要，它们可以含有其它营养物(例如无机盐(例如氯化钙，磷酸二氢钠和氯化镁)，维生素，抗生素(例如四环素，新霉素，氨苄青霉素，卡那霉素等))。
通过本领域公知的方法进行培养。适当选择培养条件例如温度，培养基的pH，和培养时间，使得超量产生本发明的蛋白质。
下面详细说明根据宿主细胞使用的具体培养基和培养条件。
当宿主是细菌，放线菌，酵母，丝状真菌时，包括上述营养源的液体培养基是合适的。优选使用pH5-8的培养基。
当宿主是大肠杆菌时，优选的培养基的例子是LB培养基，M9培养基(Miller等，实验分子遗传学(Exp.Mol.Genet.)，冷泉港实验室，p.431(1972))，YT培养基等。使用这些培养基，通常在14℃-43℃下培养约3-24小时，如果需要，通气并搅拌。
当宿主是芽孢杆菌时，通常在30℃-40℃下培养约16-96小时，如果需要，通气并搅拌。
当宿主是酵母时，培养基的例子是Burlholder基本培养基(Bostian，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，77卷，p.4505，1980)。pH优选为5-8。通常在20℃-35℃下培养约14-144小时，如果需要，通气并搅拌。
当宿主是动物细胞时，培养基的例子是含有5-20％胎牛血清的MEM培养基(科学(Science)，122卷，p.501(1952))，DMEM培养基(病毒学(Virology)，8卷，p.396(1959))，RPMI1640培养基(美国药物学会杂志(J，Am.Med.Assoc.)，199卷，p.519(1967))，199培养基(Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，73卷，p.1(1950))，HamF12培养基等。培养基的pH优选是约6-8。通常在约30℃-40℃下培养约15-72小时，如果需要，通气并搅拌。
当宿主是昆虫细胞时，培养基的例子是含有胎牛血清的Grace’s培养基(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，82卷，p.8404，1985)。其pH优选是约5-8。通常在约20℃-40℃下培养约15-100小时，如果需要，通气并搅拌。
通过培养上述转化的细胞(特别是动物细胞或大肠杆菌)并且使之分泌蛋白质到培养上清液中，能产生本发明的AILIM(特别优选人AILIM)的胞外区(可溶性AILIM)。即，通过例如将所得培养物过滤或离心可获得培养物滤液(上清液)，并且通过常用于纯化和分离天然或合成蛋白的方法从培养物滤液纯化和分离本发明的多肽或多肽片段。
分离和纯化方法的例子是利用特异性亲和力的方法，例如亲和层析，利用溶解度的方法，例如盐析和溶剂沉淀方法，利用分子量差异的方法，例如透析，超滤，凝胶过滤和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，利用电荷的方法，例如离子交换层析和羟基磷灰石层析，利用疏水性差异的方法，例如反相高效液相色谱，和利用等电点差异的方法，例如等电聚焦。
当培养的转化体的周质或胞质中存在目的蛋白时，首先通过常规方法例如过滤或离心收集真菌菌体或细胞并且悬浮于合适的缓冲液中。通过例如超声溶解，溶菌酶，和冻融等方法破坏细胞的细胞壁和/或细胞膜之后，通过例如离心或过滤的方法获得含有本发明多肽的膜级分。这样的膜级分用去污剂例如Triton-X100溶解获得粗提取物。最后，通过如上述常规方法从该粗提取物分离并纯化所述多肽或多肽片段。
在本发明中，术语“不溶性载体”指用来通过物理吸附或化学连接将多肽固定于其上的载体。例如，所述载体可以是(1)平板，试管，管，或具有内部空间的类似物，小珠，球，滤膜，膜，或由水不溶性材料包括塑料例如聚苯乙烯树脂，聚碳酸酯树脂，有机硅树脂或尼龙树脂，或玻璃制成的物件，和(2)亲和层析中使用的不溶性载体，例如纤维素载体，琼脂糖载体，聚丙烯酰胺载体，葡聚糖树脂，聚苯乙烯载体，聚乙烯醇载体，聚氨基酸载体，多孔硅树脂载体等。
本发明的“能给出可检测信号的标记物质”包括，例如，酶，荧光材料，发光材料，生物素，抗生物素蛋白或放射性同位素，更具体地说，酶例如过氧化物酶(例如辣根过氧化物酶)，碱性磷酸酶，β-D-半乳糖苷酶，葡糖氧化酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，乙醇脱氢酶，苹果酸脱氢酶，青霉素酶，过氧化氢酶，脱-葡萄糖氧化酶，脲酶，萤光素酶，乙酰胆碱酯酶等；荧光材料例如异硫氰酸荧光素，藻胆蛋白，稀土金属螯合剂，丹磺酰氯，异硫氰酸四甲基罗丹明等；放射性同位素例如3H，14C，125I，131I等；生物素，抗生物素蛋白和发光材料。
其中，放射性同位素或荧光材料甚至单独使用时都能给出可检测信号。另一方面，当单独使用时，酶，发光材料，生物素或抗生物素蛋白不提供可检测信号，但是当使其与一种或多种物质反应时，其能提供可检测信号。例如，当标记是一种酶时，检测时必需有至少一种底物。根据用于测定酶活性的方法的类型(比色法，荧光检查，利用生物发光或化学发光的方法等)可以使用不同类型的底物。例如，当标记是过氧化物酶时，可以使用过氧化氢作为底物。或，当标记是生物素时，通常使用抗生物素蛋白或酶-修饰的抗生物素蛋白，但是不局限于此。根据需要，可按所使用的底物的类型使用各种发光物质。
本发明中可以使用任何上述标记。但是，考虑到检测或测试的灵敏度以及操作的方便，优选的标记是酶，例如过氧化物酶或生物素。
根据本发明的“用于鉴定能结合AILIM或AILIM配体的物质的方法”建立在免疫测定的原理上。
具体地说，可以利用“免疫测定”(第三版，编著，Eiji Ishikawa等，Igakushoin，1987)中描述的各种方法的原理。
优选利用的原理有固相-一抗体方法，液相两抗体方法，固相两抗体方法，夹心方法和一锅法(one-pot)，如描述于审查公开的日本专利申请(JP-B)平2-39747。此外，利用抗原-抗体反应的测定方法有EMIT法(酶放大免疫测定技术)，酶通道免疫分析，酶调节剂介导的酶免疫分析(EMMIA)，酶抑制剂免疫分析，免疫酶计量(immunoenzymometric)测定，酶增强的免疫分析和近侧键合的免疫分析定。
在本发明中，根据目的可以适当选择所述免疫分析原理的任何一个。但是，要考虑程序的方便和/或经济利益，特别是临床通用性，优选利用夹心方法，一锅法，或固相一抗体方法，更优选夹心方法或一锅法。特别优选的是利用有很多孔的多孔微量滴定板例如96孔微滴培养板的夹心法，或利用固定有多肽的小珠并使用经酶例如过氧化物酶或经生物素标记的配对物的一锅法。
                           附图简述
图1给出利用流式细胞仪通过细胞ELISA分析的抗-人IgG抗体，抗-人Igκ抗体，和抗-人IgFc抗体对人抗-人AILIM单克隆抗体的各自反应性。
(a)-(l)组分别给出了下述测定的各自结果。
(a)组：在不存在一抗的情况下向已经平铺了野生型HPB-ALL细胞的微量培养板加入作为二抗的生物素-标记的抗-人IgG抗体的测定结果。
(b)组：在不存在一抗的情况下向已经平铺了野生型HPB-ALL细胞的微量培养板加入作为二抗的生物素-标记的抗-人Igκ抗体的测定结果。
(c)组：在不存在一抗的情况下向已经平铺了野生型HPB-ALL细胞的微量培养板加入作为二抗的生物素-标记的抗-人IgFc抗体的测定结果。
(d)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-136用作一抗并且生物素-标记的抗-人IgG抗体用作二抗的测定结果。
(e)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-136用作一抗并且生物素-标记的抗-人Igκ抗体用作二抗的测定结果。
(f)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-136用作一抗并且生物素-标记的抗-人IgFc抗体用作二抗的测定结果。
(g)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-138用作一抗并且生物素-标记的抗-人IgG抗体用作二抗的测定结果。
(h)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-138用作一抗并且生物素-标记的抗-人Igκ抗体用作二抗的测定结果。
(i)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-138用作一抗并且生物素-标记的抗-人IgFc抗体用作二抗的测定结果。
(j)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-139用作一抗并且生物素-标记的抗-人IgG抗体用作二抗的测定结果。
(k)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-139用作一抗并且生物素-标记的抗-人Igκ抗体用作二抗的测定结果。
(l)组：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab-139用作一抗并且生物素-标记的抗-人IgFc抗体用作二抗的测定结果。
各组中带有空心符号的曲线对应于用人抗-KLH单克隆抗体作为对照抗体的测定结果。
图2给出用抗-人IgG抗体经夹心ELISA测定的人IgG单克隆抗体(标准品)的标准曲线。
纵轴指示荧光强度，横轴指示标准品的浓度。
图3给出各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定的结果，“人”指对人AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定的结果。
图4给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体或作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体对人AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“人”指对人AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图5给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“人”指对人AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图6给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“人”指对人AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图7给出大鼠抗-人AILIM单克隆抗体对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“小鼠”指对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图8给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体或作为阴性对照的人抗-KLG单克隆抗体对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“小鼠”指对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图9给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“小鼠”指对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图10给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“小鼠”指对小鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图11给出各种小鼠抗-大鼠AILIM单克隆抗体对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“大鼠”指对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图12给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体或作为阴性对照的人抗-KLG单克隆抗体对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“大鼠”指对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图13给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“大鼠”指对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图14给出各种人抗-人AILIM单克隆抗体对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞或野生型CHO细胞的结合活性。
纵轴指示作为与重组细胞的结合活性指数的荧光强度，横轴指示加入的抗体的浓度。
该图中术语“CHO”指对野生型CHO细胞的结合测定结果，“大鼠”指对大鼠AILIM-过表达型重组CHO细胞的结合测定结果。
图15给出用抗-人CD3单克隆抗体和小鼠抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者A”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
图16给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者A”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
图17给出用抗-人CD3单克隆抗体和小鼠抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者B”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗-人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图18给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者B”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图19给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者B”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图20给出用抗-人CD3单克隆抗体和小鼠抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者C”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗-人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图21给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者C”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
图22给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者C”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
图23给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者C”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
图24给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者C”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图25给出用抗-人CD3单克隆抗体和小鼠抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图26给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
图27给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
图28给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
图29给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图30给出用抗-人CD3单克隆抗体和小鼠抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者E”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图31给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者E”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
图32给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者E”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
图33给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者E”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
图34给出用抗-人CD3单克隆抗体和人抗-人AILIM单克隆抗体一起包被的微量培养板分析各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，正常健康“供者E”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图35给出当单独向用抗-人CD3单克隆抗体包被的微量培养板加入小鼠抗-人AILIM单克隆抗体(于液相中)的溶液时，对各种小鼠抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性的测定中正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图36给出当单独向用抗-人CD3单克隆抗体包被的微量培养板加入人抗-人AILIM单克隆抗体(于液相中)的溶液时，对各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性的测定中正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“125”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab125。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
图37给出当单独向用抗-人CD3单克隆抗体包被的微量培养板加入人抗-人AILIM单克隆抗体(于液相中)的溶液时，对各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性的测定中正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
图38给出当单独向用抗-人CD3单克隆抗体包被的微量培养板加入人抗-人AILIM单克隆抗体(于液相中)的溶液时，对各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性的测定中正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
图39给出当单独向用抗-人CD3单克隆抗体包被的微量培养板加入人抗-人AILIM单克隆抗体(于液相中)的溶液时，对各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性的测定中正常健康“供者D”的T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷的细胞掺入的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图40给出在用小鼠抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者B”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗-人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图41给出在用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者B”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图42给出在用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者B”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图43给出在用小鼠抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者C”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“JHC1”指其中抗-人CETP单克隆抗体用作阴性对照代替小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图44给出在用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者C”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“125”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab125。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
图45给出在用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者C”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
图46给出在用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者C”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
图47给出在用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板中培养的来自正常健康“供者C”的T细胞的培养上清液中产生的IFN-γ的量。
纵轴指示IFN-γ的浓度，横轴指示小鼠抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
其它注释如下：
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图48给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者A”的T细胞与正常健康“供者D”的PBMC共同培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴是能指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中的各说明如下。
“CD80+86”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“mIgG1”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CTLA4-Ig”：人CTLA4-IgFc嵌合分子
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图49给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体在正常健康“供者A”的T细胞与正常健康“供者D”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
图50给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者D”的T细胞与正常健康“供者B”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中的各说明如下。
“CD80+86”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“mIgG1”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CTLA4-Ig”：人CTLA4-IgFc嵌合分子
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图51给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体在正常健康“供者D”的T细胞与正常健康“供者B”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
图52给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者C”的T细胞与正常健康“供者A”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中的各说明如下。
“CD80+86”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“mIgG1”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CTLA4-Ig”：人CTLA4-IgFc嵌合分子
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图53给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体在正常健康“供者C”的T细胞与正常健康“供者A”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
图54给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者E”的T细胞与正常健康“供者G”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中的各说明如下。
“对照mIgG”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CD80+86Ab”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体
“CTLA4-Ig”：人CTLA4-IgFc嵌合分子。
图55给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体在正常健康“供者E”的T细胞与正常健康“供者G”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KIH单克隆抗体。
“JMab-136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图56给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者F”的T细胞与正常健康“供者E”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中的各说明如下。
“对照mIgG”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CD80+86Ab”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体
“CTLA4-Ig”：人CTLA4-IgFc嵌合分子。
图57给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者F”的T细胞与正常健康“供者E”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中各说明如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图58给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者G”的T细胞与正常健康“供者F”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中的各说明如下。
“对照mIgG”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CD80+86Ab”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体
“CTLA4-Ig”：人CTLA4-IgFc嵌合分子。
图59给出在通过混合淋巴细胞反应(MLR)检验T细胞增殖的试验中，各种试验样品在正常健康“供者G”的T细胞与正常健康“供者F”的PBMC共培养的情况下对T细胞增殖的抑制作用。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入量，横轴指示试验样品的浓度。
附图中各说明如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图60给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种对照试验物质对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者A”的T细胞与来自正常健康“供者D”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴为指示细胞增殖程度的[3H]腺苷掺入细胞量，横轴指示试验物质的浓度。
附图中的各说明如下。
“CD80+86”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“mIgG1”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图61给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者A”的T细胞与来自正常健康“供者D”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
图62给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种对照试验物质对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者D”的T细胞与来自正常健康“供者B”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
附图中的各说明如下。
“CD80+86”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“mIgG1”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图63给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者D”的T细胞与来自正常健康“供者B”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
图64给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种对照试验物质对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者C”的T细胞与来自正常健康“供者A”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
附图中的各说明如下。
“CD80+86”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“mIgG1”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图65给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者C”的T细胞与来自正常健康“供者A”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-124”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab124。
“126”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab126。
“127”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab127。
“128”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab128。
“135”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab135。
“136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“137”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab137。
图66给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种对照试验物质对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者E”的T细胞与来自正常健康“供者G”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
附图中的各说明如下。
“对照mIgG”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CD80+86Ab”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图67给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者E”的T细胞与来自正常健康“供者G”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图68给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种对照试验物质对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者G”的T细胞与来自正常健康“供者F”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
附图中的各说明如下。
“对照mIgG”：抗-人CD34/IgG1小鼠单克隆抗体
“CD80+86Ab”：抗-CD80抗体和抗-CD86抗体的混合物
“SA12”：抗-人AILIM小鼠单克隆抗体。
图69给出在使用混合淋巴细胞反应(MLR)的测试中，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对T细胞增殖的抑制作用。来自正常健康“供者G”的T细胞与来自正常健康“供者F”的已在人CTLA4-Ig嵌合分子存在下预培养的PBMC共同培养。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示试验物质的浓度。
其它注释如下：
“抗-KLH”：作为阴性对照的人抗-KLH单克隆抗体。
“JMab-136”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136。
“138”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab138。
“139”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab139。
“140”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab140。
“141”：人抗-人AILIM单克隆抗体JMab141。
图70给出野生型CHO细胞用作靶细胞情况下，各种人抗-人AILIM单克隆抗体和对照抗体的ADCC-诱导活性。
纵轴指示抗体的ADCC-诱导活性引起的细胞毒性率，横轴指示抗体的浓度。
图71给出人AILIM-过表达型重组CHO细胞用作靶细胞情况下，各种人抗-人AILIM单克隆抗体和对照抗体的ADCC-诱导活性。
纵轴指示抗体的ADCC-诱导活性导致的细胞损伤率，横轴指示抗体的浓度。
图72给出抗-AILIM抗体对迟发型过敏反应的抑制作用。
纵轴指示作为迟发型过敏反应发生指数的红斑大小，横轴指示给予动物受试者的试验样品的类型。
图73给出用人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板测定各种人抗-人AILIM单克隆抗体转导协同刺激信号的活性时，猴T细胞的增殖活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示人抗-人AILIM单克隆抗体的浓度。
在该图中，“抗-KLH”指其中人抗-KLH单克隆抗体用作阴性对照代替人抗-人AILIM单克隆抗体的测试结果。
图74给出阴性对照抗体对可溶性AILIM配体(hB7h-IgFc)与各种浓度的可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之间的结合的抑制活性。
纵轴指示作为抑制活性指数的吸收度，横轴指示可溶性AILIM的浓度。
图75给出抗AILIM抗体对可溶性AILIM配体(hB7h-IgFc)与各种浓度的可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之间的结合的抑制活性。
纵轴指示作为抑制活性指数的吸收度，横轴指示可溶性AILIM的浓度。
图76给出各种浓度的抗AILIM抗体对可溶性AILIM配体(hB7h-IgFc)与可溶性AILIM(AILIM-IgFc)之间的结合的抑制活性。
纵轴指示作为抑制活性指数的吸收度，横轴指示可溶性AILIM的浓度。
图77给出用可溶性人AILIM配体(hB7h-IgFc)和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板测定转导协同刺激信号的活性时，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对人T细胞增殖的抑制活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示抗体的浓度。
图78给出用可溶性人AILIM配体(hB7h-IgFc)和抗-人CD3单克隆抗体一起包被的微量培养板测定转导协同刺激信号的活性时，各种人抗-人AILIM单克隆抗体对猴T细胞增殖的抑制活性。
纵轴指示作为细胞增殖程度指数的[3H]腺苷掺入细胞的量，横轴指示抗体的浓度。
实施本发明的最佳方式
下面参考实施例对本发明进行详细说明，但是这不应视为限制。
实施例1：免疫原的制备
<1-1>制备表达人AILIM的重组细胞
依照在早期公开(JP-A No.Hei 11-29599和WO98/38216)，以及本发明人之一，Tezuka的早期报告(Int.Immunology，Vol.12，No.1，p.51-55，2000)中所述方法制备过表达人AILIM的两种重组细胞(CHO细胞和HPB-ALL细胞)。具体地，此方法如下：
将含有编码人AILIM的全长ORF的cDNA(GenBank登记号：AB023135(cDNA)；BAA82129(氨基酸))插入到载体pEF-neo中。然后用GenePulser(BioRad)经常用的电穿孔法(960μF，320V)将上述所得重组表达载体引入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)和人胸腺瘤细胞系HPB-ALL细胞中。每种细胞培养在含遗传霉素(0.8mg/ml；Gibco BRL)和10％FCS的RPMI1640培养基中以挑选抗药性的转化细胞。
<1-2>选择过表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞
将在上述<1-1>中所选的抗药性HPB-ALL细胞培养液离心得到细胞沉淀。将本发明人早期建立并报导(JP-A 11-29599(实施例12)和WO98/38216(实施例12))的称为“SA12”的小鼠抗-人AILIM单克隆抗体(小鼠抗-人JTT-1抗原单克隆抗体)加入到细胞沉淀中(浓度：以100μl/105细胞的比例加入经EDTA-BSA/PBS稀释的抗体溶液(10μg/ml))。所得混合物4℃下保温30分钟。用上述EDTA-BSA/PBS(200μl)洗细胞两次，然后再加入用藻红蛋白标记的链霉抗生物素(SA-PE；100μl 500倍稀释液)。将所得混合物4℃下保温30分钟。保温后，用EDTA-BSA/PBS洗细胞3次，制备细胞悬浮液。
用流式细胞仪FACSort(Beckton-Dichinson)分析细胞悬浮液中不同细胞的人AILIM表达水平，以挑选出过表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞。在含有10％FCS和G418(1mg/ml)的RPMI1640培养基中培养所选细胞到铺满。
<1-3>对过表达人AILIM的重组CHO细胞的筛选
将在上述<1-1>中所选的抗药性CHO细胞培养液离心得到细胞沉淀。将上述已用FITC标记的小鼠抗人AILIM单克隆抗体SA12加入到每种细胞沉淀中(用EDTA-BSA/PBS稀释的抗体溶液(100μg/ml))。将所得混合物4℃下保温30分钟。用上述EDTA-BSA/PBS清洗细胞，向细胞沉淀中加入EDTA-BSA/PBS(500μl)制备细胞悬浮液。
用流式细胞仪FACSort(Beckton-Dichinson)分析细胞悬浮液中不同细胞的人AILIM表达水平，以挑选出过表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞。在含有10％FCS和G418(1mg/ml)的RPMI1640培养基中培养所选细胞到铺满。
<1-4>从过表达人AILIM的HPB-ALL细胞制备免疫原
将上述<1-2>中所得过表达人AILIM的HPB-ALL细胞离心。用磷酸缓冲液(PBS；Nikken Seibutsu)清洗回收的细胞沉淀4次，然后重悬于含蛋白酶抑制剂的缓冲液(含有25mM HEPES(pH7.4)，10mM MgCl2，0.25M蔗糖，和蛋白酶抑制剂(10U/ml抑蛋白酶肽，2μg/ml胃蛋白酶抑制剂，50μg/ml亮抑蛋白酶肽，和0.35mg/ml PMSF))。在Potter型匀浆器中处理细胞悬浮液，并低速离心(4℃下1,500rpm 10分钟)。然后将所得上清超速离心(100,000g 4℃下1小时)。回收沉淀的膜级分，并悬浮在磷酸缓冲液中(调整膜级分浓度使1ml PBS包含得自1×107个细胞的膜级分)。-80℃下保存该悬浮液。包含细胞膜级分的悬浮液用作抗原(免疫原)以制备本发明的人抗体，下面有对此的记述。
<1-5>从过表达人AILIM的CHO细胞制备免疫原
将上述<1-3>中所得过表达人AILIM的CHO细胞用刮刀分散并离心。回收的细胞沉淀用磷酸缓冲液(PBS；Nikken Seibutsu)清洗4次，然后重悬于含蛋白酶抑制剂的缓冲液(含有25mM HEPES(pH7.4)，10mM MgCl2，0.25M蔗糖，和蛋白酶抑制剂(10U/ml抑蛋白酶肽，2μg/ml胃蛋白酶抑制剂，50μg/ml亮抑蛋白酶肽，和0.35mg/ml PMSF))。在Potter型匀浆器中处理细胞悬浮液，并低速离心(4℃下1,500rpm 10分钟)。然后所得上清液超速离心(100,000g 4℃下1小时)。回收沉淀的膜级分，并悬浮在磷酸缓冲液中(调整膜级分浓度使1ml PBS包含得自1×107个细胞的膜级分)。-80℃下保存悬浮液。包含细胞膜级分的悬浮液用作抗原(免疫原)制备本发明的人抗体，下面有对此的记述。
实施例2：制备能产生人抗-人AILIM单克隆抗体的杂交瘤
在本实施例中，依照“实验医学(增刊)，细胞技术手册”(T.Kuroki等编，Yodosha，PP.66-74，1992)和“单克隆抗体实验手册”(T.Ando等，Kodansha，1991)所述典型方法进行单克隆抗体的制备。
实施例1中制备自过表达人AILIM的重组细胞的细胞膜级分用作人AILIM的免疫原。
进行免疫的动物是通过上述方法(Nature Genetics，Vol.7，p.13-21，1994；Nature Genetics，Vol.15，p.146-156，1997；公开的国际中请日语翻译件Hei4-504365；公开的国际申请日语翻译件Hei7-509137；Nikki Science，6月，pp.40-50，1995；等)产生的生产人抗体的转基因小鼠。
采用多孔微量培养板进行细胞培养。
<2-1>免疫和杂交瘤的制备
对上述产生人抗体的转基因小鼠给予上述<1-4>中(得自HPB-ALL)或<1-5>中(得自CHO)制备的免疫原(100μl/小鼠/给药)。将免疫原与wit弗氏完全佐剂(ICN/CAPPEL)一起注射进足垫作为初次免疫(0天)。
初次免疫后，以一周的间隔继续在足垫注射任一种免疫原作为第二次和/或第三次免疫。以同样方式进行末次注射，两天后，如下制备淋巴细胞。
末次免疫的两天后，从各自免疫的转基因小鼠的(腹股沟下和膝下)淋巴结和脾制备淋巴细胞。将淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞P3/X63-AG8.653(ATCC编号CRL-1580)以5∶1的比例混合，加入聚乙二醇1500(Boehringer Mannheim)作为融合剂。然后，用10倍体积的无血清基础培养基EX-CELL301(JRH Bioscience)稀释混合物。混合的细胞随后用基础培养基清洗，然后悬浮在HAT培养基(1L基础培养基中含13.61mg次黄嘌呤，176μg氨基蝶呤，和3.88mg胸苷)中。将细胞铺于96孔微量培养板上，培养10-14天完成细胞融合。细胞融合产生许多杂交瘤。
<2-2>筛选产生人单克隆抗体的杂交瘤
上述<2-1>中制备的几种杂交瘤采用下述的细胞ELISA方法进行筛选，以挑选出生产抗人AILIM人单克隆抗体的杂交瘤。
分别将上述过表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞和重组CHO细胞铺板在ELISA96孔微量培养板的每一孔中(1×105个细胞/孔)。37℃下保温2天。
随后，弃去每孔的上清，加入每种杂交瘤培养液的上清样品(50μl/孔)，保温混合物1小时。反应结束后，弃去混合的样品液，每孔用含有1％BSA(Sigma)的PBS清洗3次。
随后，在每孔加入过氧化物酶偶联的山羊抗-人免疫球蛋白(Fc)抗体(每孔50μl 2000倍稀释液；American Corex；1％BSA/PBS)以检测杂交瘤上清中的人免疫球蛋白(人单克隆抗体)重链。混合物室温下保温1小时。
另一方面，在每孔加入过氧化物酶偶联的山羊抗-人免疫球蛋白κ链抗体(每孔50μl 2000倍稀释液)以检测杂交瘤上清中的人免疫球蛋白(人单克隆抗体)轻链。混合物室温下保温15分钟。
从微量培养板的每孔除去抗-人IgFc抗体或抗-人Igκ抗体，然后用含有1％BSA的PBS清洗微量培养板的每孔3次。每孔中加入四甲联苯胺(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)，100μl/孔，BIO-RAD)，所得混合物室温下保温15分钟。
随后，每孔中加入1N H2SO4(50μl/孔)以终止反应。采用微量培养板读取仪(3550型微量培养板读取仪，BIO-RAD)在450nm波长测定吸收值以监控反应。
以上述同样的方法进行对照ELISA实验，使用下列选项：
(1)野生型HPB-ALL细胞，替代表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞；
(2)野生型CHO细胞，替代表达人AILIM的重组CHO细胞；
(3)抗人AILIM小鼠单克隆抗体(SA12或SG430；JP-A11-29599(实施例12)和WO98/38216(实施例12))替代杂交瘤上清；
(4)抗KLH(匙孔血蓝蛋白，PIERCE)的人单克隆抗体，替代杂交瘤上清。
通过用KLH(匙孔血蓝蛋白，PIERCE)免疫上述生产人抗体的转基因小鼠，以与<2-1>同样的方法制备人抗-KLH单克隆抗体。
通过所述筛选挑选能生产与人AILIM结合的人单克隆抗体的许多杂交瘤。
<2-3>杂交瘤的初次克隆
通过下列试验从<2-2>所挑选的产生抗人AILIM的人单克隆抗体的多种杂交瘤(亲本细胞系)建立多类杂交瘤单克隆。
将上述<2-2>中所选的杂交瘤分别铺板在24孔微量培养板上。通过滴度确定每孔中的杂交瘤细胞数。随后，将10％胎牛血清(FCS；TraceBioscience PTY)，1％青霉素/链霉素(Sigma)，1％HT Supplement(Gibco BRL)和2.5％ T-STIM Culture Supplemcnt(Collaborative Biomedical Products)加入含4.0mML-谷胺酰胺和脂类的EX-CELL301培养基(JRH Bioscience)。用如此改变的培养基将杂交瘤稀释到1×104细胞/ml，将细胞悬浮在每孔中。
将每孔的细胞悬浮液(300μl或600μl)与改变的培养基(150ml或300ml)充分混合，然后在多个96孔板的每孔加入200μl细胞悬浮液，使每孔含有4个杂交瘤细胞。将上述改变的培养基(50ml或100ml)新鲜加入到剩下的已充分混合的细胞悬浮液中，然后将所得的细胞悬浮液加入到其它新制备的多个96孔微量培养板的每孔中，使每孔含有两个杂交瘤细胞。
继续培养1到2周。培养后，在许多孔中发现了得自单个杂交瘤的单菌落。
采用如上<2-2>所述细胞ELISA方法，证实在含菌落的每孔的培养上清中产生了抗人AILIM的人单克隆抗体。
<2-4>杂交瘤的再次克隆
将如上<2-3>所述所得不同杂交瘤克隆的每一克隆亚克隆(再次克隆)，方法如上<2-3>所述。
96孔微量培养板中每孔的细胞密度在本实验中调整为1个细胞/孔。
筛选产生了许多生产抗人AILIM的人单克隆抗体的杂交瘤单克隆。这些克隆部分如下：
(克隆名称)
AIF34(JMab124)，AIF182(JMab-126)，AIF348(JMab-127)，AIF620(JMab-128)，AIF1052(JMab-135)，AIH5D3(JMab-136)，AIH386(JMab-137)，AII289(JMab-138)，AII394(JMab-139)，AII488(JMab-140)，AIJ40(JMab-141)，
以上名称在本发明全文中使用，即在包含本实施例的下述所有实施例中，包含本实施例所得分析结果的图表中使用。
实施例3：分析单克隆抗体的性质
<3-1>重链和轻链的分析
通过使用下述ELISA和流式细胞术证实，如上<2-4>中所述克隆的每一杂交瘤克隆产生的抗人AILIM单克隆抗体确实是人单克隆抗体。
将实施例1中制备的过表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞铺板在微量培养板的每一V形孔中(3×104个细胞/孔)。在含10％FCS的RPMI1640培养基中37℃下培养细胞。
培养完成后，将板离心(1800rpm，2分钟)以沉淀细胞，然后弃去所得上清。随后，将如上<2-4>所述克隆的每一杂交瘤培养液的上清样品(50μl/孔)，或作为对照抗体的小鼠抗-人AILIM单克隆抗体SA12(2μg/50μl)或备选地人抗-KLH单克隆抗体(50μl/孔)加入到每孔中。使该混合物在冰箱中反应30分钟。反应后，弃去样品液，用磷酸缓冲液(含5mM EDTA的0.5％BSA-PBS)清洗每孔。
随后，将下列第二抗体的任一加入到每孔中(用上述磷酸缓冲液稀释1000倍，加入量为50μl/孔)使细胞悬浮。悬浮液在冰箱中反应30分钟。
(第二抗体)
生物素标记的抗-人IgG抗体(Zymed)；
生物素标记的抗-人IgG抗体(Protos)；
生物素标记的抗-人IgFc抗体(EY Laboratories)；或
生物素标记的抗-人Igκ抗体(Vector)。
反应后，弃去第二抗体并用上述磷酸缓冲液清洗板上每一孔。随后，将藻红蛋白标记的链霉抗生物素(链霉抗生物素-PE；Pharmingen；用上述磷酸缓冲液稀释500倍，加入量为50μl/孔)加入到每孔中。混合物在冰箱中反应30分钟。反应后，用上述磷酸缓冲液清洗每孔。然后，将上述磷酸缓冲液加入到每孔中(200μl/孔)使细胞悬浮。
分析确定每一杂交瘤克隆的培养上清中的抗-人AILIM单克隆抗体对每孔中过表达人AILIM的HPB-ALL细胞的反应性。
使用下列项以与上述相同的方法进行对比实验：
(1)野生型HPB-ALL细胞，替代表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞；
(2)抗KLH(匙孔血蓝蛋白，PIERCE)人单克隆抗体，替代杂交瘤上清。
以如上<2-1>所述相同方法，通过用KLH(匙孔血蓝蛋白，PIERCE)免疫上述生产人抗体的转基因小鼠制备人抗-KLH单克隆抗体。
基于这些实验结果，上述<2-4>中所有杂交瘤克隆都被证实为由人-源重链和人源κ轻链组成的单克隆抗体。
图1显示了这些结果的一个例子，它包括对杂交瘤克隆AIH5D3(JMab-136)，AII289(JMab-138)，AII394(JMab-139)的分析结果。
<3-2>人单克隆抗体的同种型分型
鉴定在<2-4>中克隆并在<3-1>中分析的杂交瘤产生的每一种人抗-人AILIM单克隆抗体的同种型。采用人单克隆抗体同种型分型试剂盒(American Qualex)依照试剂盒所附的实验方法进行鉴定。
所有的人抗-人AILIM单克隆抗体都鉴定为IgG2/κ。
实施例4：抗人AILIM的人单克隆抗体(人抗-人AILIM单克隆抗体)的 大规模制备及其纯化
<4-1>方法1
将已在上述<2-4>中制备的产生人抗-人AILIM单克隆抗体的每一杂交瘤克隆的细胞加入到组织培养瓶(50ml，FALCON)中，在含有10％极低(UltraLow)牛IgG FBS(GIBCO-BRL)的ASF104培养基(Ajinomoto)中37℃下于5％CO2中培养至铺满。
随后，将全部培养液转移到新的组织培养摇瓶(750ml，FALCON)中，将细胞培养在含有10％极低牛IgG FBS(GIBCO-BRL)的ASF104培养基(Ajinomoto)中37℃下于5％CO2中培养至铺满。
培养10-20天后，回收每一杂交瘤的培养上清并转移到50-ml聚丙烯圆锥管(FALCON)中。将试管在500g下离心5分钟。
随后，将所得离心上清用除菌过滤组件(NALGEN)过滤，回收滤液。
以3ml/min的流速将滤液上柱到已用磷酸缓冲液(30ml)预平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap亲和柱蛋白G；Amersham Phamacia)。
随后，用磷酸缓冲液(20ml)洗柱，目的抗体用100mM柠檬酸盐缓冲液(pH2.0)以约1ml/min的低流速洗脱。随后，滤液用750mM Tris-HCl溶液(pH9.0)中和，经滤膜(Millipore)过滤除去白色沉淀。所得滤液对磷酸缓冲液透析(过夜)，并经滤膜(Millipore)过滤。这样从每一杂交瘤细胞系得到纯化的抗-AILIM人单克隆抗体。
用分光光度计测定A280的吸光度以确定蛋白浓度(1A280＝1.41mg/ml)。
<4-2>方法2
将<2-4>中制备的每一杂交瘤克隆的细胞置于含有10％极低牛IgG FBS(GIBCO-BRL)的ASF104培养基(Ajinomoto)中(每种为1-2×106个细胞/ml)，铺板并培养在Integra Cell Line 1000(INTEGRA CL1000，INTEGRABIOSCIENCE)中。培养7-10天后，当细胞密度达到l×108个/ml时，回收每一杂交瘤培养液的上清。
以3ml/min的流速将每一培养上清液上柱到已用磷酸缓冲液(30ml)预平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap亲和柱蛋白G；Amersham Phamacia)。
随后，用磷酸缓冲液(20ml)洗柱，抗体用100mM柠檬酸盐缓冲液(pH2.0)以约1ml/min的低流速洗脱。随后，滤液用750mM Tris-HCl溶液(pH9.0)中和，经滤膜(Millipore)过滤除去白色沉淀。所得滤液对磷酸缓冲液透析(过夜)，并经滤膜(Millipore)过滤。这样从每一杂交瘤细胞系得到纯化的抗-AILIM人单克隆抗体。
实施例5：人抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM的反应性，以及其对 小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反应性
采用细胞ELISA方法分析上述各种纯化的人抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM的反应性，以及对小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反应性。
<5-1>建立可测定IgG抗体浓度的ELISA系统并制备标准曲线
上述所有纯化的人抗-人AILIM单克隆抗体都是IgG(IgG2)抗体，可建立ELISA系统以确定IgG抗体的浓度。
在96孔ELISA微量培养板(Nunc)的每孔加入山羊抗-人IgG(Fc)抗体(PBS中1.2μg/ml；100μl/孔；Organon Teknika)。将培养板室温下保温2小时，使抗-IgG(Fc)抗体吸附到微量培养板上。随后，弃去上清，用含0.05％吐温20的磷酸缓冲液(PBS)洗板3次。向每孔中加入封闭试剂(含0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.1％吐温20的PBS)(200μl/孔)，将板室温下保温2 小时以封闭板上的抗-IgG(Fc)抗体-游离位点。然后，弃去封闭试剂，用PBS清洗每孔2次。
向培养板的不同孔中加入各种浓度(0-100ng/ml)的用作标准抗体的人源IgG2抗体(50μl/孔；TheBindingSite)，将板室温下保温2小时。弃去多余的标准抗体溶液，用含0.05％吐温20的磷酸缓冲液洗每孔3次。
随后，向每孔加入过氧化物酶偶联的山羊抗-人IgG/κ抗体(4000倍稀释，100μl/孔，Protos)，将板室温下保温1小时。
弃去上清，用含0.05％吐温20的磷酸缓冲液洗微量培养板3次。向每孔加入含有底物的缓冲液(组成：邻苯二胺(OPD；20mg)/柠檬酸-磷酸缓冲液(pH5.0，50ml)/30％过氧化氢水溶液(15μl))(100μl/孔)，将板室温下保温约7分钟。
随后，向每孔中加入2M硫酸(50μl/孔)终止反应。基于微量培养板读取仪490nm波长测定的吸光度结果绘制标定曲线(图2)。
单独以培养基或BSA溶液为实验物质以如上相同的方法进行对比实验。
<5-2>各种纯化的人抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM的反应性以及对小鼠AILIM和大鼠AILIM的交叉反应性的分析
<5-2-1>试剂的制备
如下制备在此细胞ELISA中所用的试剂：
<5-2-1-1>过表达小鼠AILIM的重组CHO细胞的制备
用<1-1>和<1-3>中所述方法制备并得到过表达小鼠AILIM的重组CHO细胞。
将含有小鼠AILIM全长ORF的cDNA(GenBank登记号：AB023132(cDNA)；BAA82126(氨基酸))插入到载体pEF-neo中，然后将所得重组表达载体采用Gene Pulser(BioRad)通过常用的电穿孔方法(960μF，320V)引入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)。将细胞培养在含遗传霉素(0.8mg/ml；GibcoBRL)和10％FCS的RPMI1640培养基中以挑选抗药性的转化细胞，这样就得到了过表达小鼠AILIM的重组CHO细胞。
<5-2-1-2>过表达大鼠AILIM的重组CHO细胞的制备
用<1-1>和<1-3>中所述方法制备并得到过表达大鼠AILIM的重组CHO细胞。
将含有大鼠AILIM全长ORF的cDNA(GenBank登记号：AB023134(cDNA)；BAA82128(氨基酸))插入到载体pEF-neo中，然后将所得重组表达载体采用Gene Pulser(BioRad)通过常用的电穿孔方法(960μF，320V)引入中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)。将细胞培养在含遗传霉素(0.8mg/ml；GibcoBRL)和10％FCS的RPMI1640培养基中以挑选抗药性的转化细胞，这样就得到了过表达大鼠AILIM的重组CHO细胞。
<5-2-1-3>抗小鼠AILIM单克隆抗体的制备
将如上<5-2-1-1>中制备的过表达小鼠AILIM的重组CHO细胞匀浆，进行超速离心(100000g)。回收所得含细胞膜级分的沉淀并将其悬于PBS中。将所得细胞膜级分同弗氏完全佐剂一起注射进入Wistar大鼠足垫进行初次免疫(第0天)。在初次免疫后第7天，14天，28天，进一步对大鼠足垫给予细胞膜级分抗原。末次免疫的2天后收集它们的淋巴结细胞。
将所述淋巴结细胞和小鼠骨髓瘤细胞PAI(JCR No.BO113；Res.Disclosure，Vol.217，p.155，1982)以5：1的比例组合。采用聚乙二醇4000(Boehringer Mannheim)作融合剂将所述细胞相互融合，以制备生产单克隆抗体的杂交瘤。将杂交瘤培养在含HAT，10％胎牛血清和氨基蝶呤的ASF104培养基(Ajinomoto)中以便筛选。
通过将培养上清与上述表达小鼠AILIM的CHO细胞反应，然后采用EPICS-ELITE流式细胞仪测定FITC标记型抗-大鼠IgG(Cappel)染色的细胞的荧光强度，以此测定每一杂交瘤的培养上清中的大鼠单克隆抗体对小鼠AILIM的反应性。筛选得到多个杂交瘤，它们可以生产具有对小鼠AILIM的反应性的单克隆抗体。
在这些杂交瘤中，有一杂交瘤细胞系命名为“B10.5.”。将此杂交瘤的细胞腹膜内注射(106-107个细胞/0.5ml/小鼠)给ICR nu/nu小鼠(雌性，7到8周龄)。注射10到20天后，依照常规方法于麻醉下通过剖腹术从每只小鼠收集腹水。从腹水大规模制备大鼠抗-小鼠AILIM单克隆抗体B10.5(IgG1)。
<5-2-2>抗体对人，小鼠和大鼠AILIM的反应性
基于上述<5-1>中的ELISA和标准曲线确定以下ELISA中所用人抗-人AILIM单克隆抗体和对照抗体的浓度。
实施例1中制备的过表达人AILIM的重组CHO细胞，上述<5-2-1-1>中制备的过表达小鼠AILIM的重组CHO细胞，以及上述<5-2-1-2>中所述过表达大鼠AILIM的重组CHO细胞分别铺板在96孔ELISA微量培养板的孔中(7×103个细胞/孔)，37℃下培养至铺满。
随后，弃去上清，向每孔加入如上制备的纯化的任一种人抗-人AILIM单克隆抗体或对照抗体(抗体浓度：用含1％BSA的PBS将200μl/m1的抗体稀释3倍，32倍，33倍，34倍，35倍，36倍，37倍，38倍，39倍，310倍，311倍，312倍)，加入量为50μl/孔，将板在室温下反应2小时。弃去单克隆抗体液，用含1％BSA(Sigma)的磷酸缓冲液洗孔3次。
随后，每孔加入辣根过氧化物酶偶联的抗-人IgG(Fc)抗体(稀释1000倍，50μl/孔；American Qualex)，将板室温下保温1小时。
弃去多余的标记抗体液，用含1％BSA(Sigma)的磷酸缓冲液洗板3次。向每孔加入含底物的缓冲液(组成：邻苯二胺(OPD；20mg)/柠檬酸-磷酸缓冲液(pH5.0，50ml)/过氧化氢的30％水溶液(15μl))(100μl/孔)，将板室温下保温约7分钟。
随后，向孔中加入2M硫酸(50μl/孔)以终止反应。使用微量培养板读取仪(Bio-Rad)于490nm波长下测定吸光度。
采用下列对照抗体，按照上述同样的方法进行对照ELISA检测，以评价上述抗体：
(1)抗人AILIM的小鼠单克隆抗体SA12或SG430(JP-A11-29599(实施例12)和WO98/38216(实施例12))；
(2)抗小鼠AILIM的大鼠单克隆抗体B10.5(如<5-2-1-3>所述)；
(3)抗大鼠AILIM的小鼠单克隆抗体JTT2(由1996年10月11日以国际保藏号FERM BP-5708保藏在根据布达佩斯条约的微生物国际保藏单位，通商产业省工业技术院国立生命科学和人体技术研究所)；JP-A11-29599(实施例1和2)和WO98/38216(实施例1和2))。
(4)如上制备的抗KLH(钥孔血蓝素，PIERCE)人单克隆抗体，而非杂交瘤上清。
采用下列野生型CHO细胞，而非表达AILIM的重组CHO细胞，按照上述同样的方法进行ELISA对照实验。
结果示于图3到14中。
基于结果，计算50％有效浓度(ED50：ng/ml)作为每种人抗-人AILIM单克隆抗体对人AILIM(过表达人AILIM的重组CHO细胞)，小鼠AILIM(过表达小鼠AILIM的重组CHO细胞)，大鼠AILIM(过表达大鼠AILIM的重组CHO细胞)的反应性的指标。计算所得结果列于下：
(A)过表达人AILIM的CHO的ED50值
AIF34(JMab-124)：5.3ng/ml
AIF182(JMab-126)：3.6ng/ml
AIF348(JMab-127)：9.1ng/ml
AIF620(JMab-128)：10.1ng/ml
AIF1052(JMab-135)：2.0ng/ml
AIH5D3(JMab-136)：7.5ng/ml
AIH386(JMab-137)：9.6ng/ml
AII289(JMab-138)：10.5ng/ml
AII394(JMab-139)：10.6ng/ml
AII488(JMab-140)：11.0ng/ml
AIJ40(JMab-141)：3.7ng/ml
SA12：1.8ng/ml
SG430：1.2ng/ml
(B)过表达小鼠AILIM的CHO的ED50值
AIF34(JMab-124)：42ng/ml
AIF348(JMab-127)：81ng/ml
AIF620(JMab-128)：100ng/ml
AII289(JMab-138)：53ng/ml
AII394(JMab-139)：60ng/ml
AII488(JMab-140)：70ng/ml
(C)过表达大鼠AILIM的CHO的ED50值
AIF34(JMab-124)：45ng/ml
AIF348(JMab-127)：62ng/ml
AIF620(JMab-128)：97ng/ml
AII289(JMab-138)：57ng/ml
AII394(JMab-139)：90ng/ml
AII488(JMab-140)：90ng/ml
结果表明本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体表现出对人AILIM的极高的特异性。
此外，还显示6种类型的人抗-人AILIM单克隆抗体(如上(B)和(C)所示)对小鼠AILIM和大鼠AILIM都有反应性(结合能力，交叉反应性)。
实施例6：测定人抗-人AILIM单克隆抗体对抗原(人AILIM)的亲和力 和中和活性
采用市售试剂盒Biacore X(Amersham Pahrmacia)测定如上制备的每种纯化的人抗-人AILIM单克隆抗体与人AILIM之间反应的结合速度常数(ka)，解离速度常数(kd)和解离常数(Kd)。
<6-1>制备固定在传感器芯片上的抗原
试剂盒中固定在传感器芯片上的抗原以重组嵌合抗原的形式(下文中称为“人AILIM-IgFc”)制备，其由人AILIM的胞外区和人IgG1的恒定区(Fc)组成。
将本发明人之一，Tezuka的早期文献(JP-A11-29599(实施例16(2))和WO98/38216(实施例16(2))所述方法所得的抗原进一步纯化可制备人AILIM-IgFc。
将生产人AILIM-IgFc的重组细胞的培养上清以流速3ml/min上样到已用磷酸缓冲液预平衡的HiTrap蛋白G柱(HiTrap亲和柱蛋白G；AmershamPharmacia)，以将培养上清中的人AILIM-IgFc吸附到柱上。
随后，用磷酸缓冲液(20ml)洗柱，然后用100mM柠檬酸缓冲液(pH2.0)以约1ml/min的流速洗脱人AILIM-IgFc。随后，洗脱液用750mMTris-HCl(pH9.0)中和，再对磷酸缓冲液透析(过夜)。然后，将透析过的溶液经滤膜(Millipore)过滤。这样就得到了纯化的抗-人AILIM-IgFc。
采用分光光度计测定A280吸收度来确定蛋白浓度(1A280＝1mg/ml)。人AILIM-IgFc的浓度经测定为0.28mg/ml。
依照上述同样的方法制备由大鼠AILIM胞外区和人IgG1恒定区(Fc)组成的纯化嵌合蛋白(大鼠AILIM-IgFc；JP-A11-29599(实施例16(2))和WO98/38216(实施例16(2))。所得大鼠AILIM-IgFc的浓度经测定为0.45mg/ml。
<6-2>亲和力和中和活性的测定
除下述的在传感器芯片上固定抗原(人AILIM-IgFc)的步骤外，其它实验步骤都基于市售检测试剂盒Biacore X(Amersham-Phamacia)所附的指导手册和实验方法。
使HPS缓冲液(含0.01M HEPES，0.15M NaCl，3mM EDTA和0.005％去污剂P20，(pH7.0))流过试剂盒所附Flow Cell-1，流速5μl/min。随后，加入含0.005M NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)和0.2M EDC(N-乙基-N’-(二甲基氨丙基)碳二亚胺)的溶液(15μl)以活化包被在传感器芯片表面的CM的羧基。
随后，加入23μl人AILIM-IgFc溶液(10μg/ml；溶于10mM乙酸钠缓冲液(pH5.0))中以将人AILIM-IgFc固定在传感器芯片上。随后，加入35μl 1M盐酸乙醇胺以封闭未反应的活化羧基。通过2次固定化处理固定的人AILIM-IgFc的量分别为2444RU(共振单位)和2213RU。RU对应每单位面积的质量；1RU＝1pg/mm2。
Flow Cell-2，是一个参比流槽，以如上同样的方式在没有人AILIM-IgFc的情况下进行包被处理。
使磷酸缓冲液以20μl/min的流速流过所述流槽(传感器芯片)，向其中加入上面实施例中制备的每一种纯化的人抗-人AILIM单克隆抗体(10-50μg/ml，60μl)。
测定的标准条件是：结合阶段3分钟，解离阶段10分钟。按时间进程监控每种抗体结合抗原和与抗原分离的量以得到传感图(sensorgram)。通过使PBS以20μl/min的流速流过传感器芯片而实现抗原与抗体的解离。
基于所得传感图数据，通过试剂盒所附分析软件(BIAevaluation 3.0)计算结合速度常数(ka)，解离速度常数(kd)和解离常数(Kd；Kd＝kd/ka)。
以与上述同样的方法分析上述实施例制备的小鼠单克隆抗体SA12和SG430对人AILIM的亲和力和中和活性。
所得各数值列于下。
<克隆名称>      <ka(1/M.sec)>      <kd[1/Sec]>     <Kd(M)>
AIF34(JMab-124)   1.6×104         1.0×10-4     6.3×10-9
AIF182(JMab-126)  3.2×104         2.8×10-5     8.8×10-10
AIF348(JMab-127)  1.9×104         6.4×10-5     3.4×10-9
AIF620(JMab-128)  1.1×104         1.1×10-4     1.0×10-8
AIF1052(JMab-135) 1.6×104         6.3×10-5     3.9×10-9
AIH5D3(JMab-136)  2.8×104         4.9×10-6     1.8×10-10
AIH386(JMab-137)    1.2×105      3.1×10-4    2.6×10-9
AII289(JMab-138)    3.7×104      4.2×10-5    1.1×10-9
AII394(JMab-139)    3.1×104      2.4×10-5    7.7×10-10
AII488(JMab-140)    2.3×104      3.5×10-5    1.5×10-9
AIJ40(JMab-141)     1.9×104      1.9×10-5    1.0×10-9
SA12                7.8×103      7.9×10-5    1.0×10-8
SG430               2.2×104      1.5×10-5    6.8×10-9
结果显示所有人抗-人AILIM单克隆抗体和抗-人AILIM小鼠单克隆抗体都表现出对人AILIM具有明显很高的亲和力和中和活性。
实施例7：人抗-人AILIM单克隆抗体向人T细胞中转导协同刺激信号 的活性
对本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体是否具有控制(增强和/或抑制)人T细胞应答(生产细胞因子如IFN-γ和IL-4，细胞增殖等)的能力，即所述抗体是否表现出对AILIM介导的协同刺激信号的细胞转导具有调控活性进行了分析。基于人T细胞产生的细胞因子(IFN-γ和IL-4)的量和人T细胞增殖的程度作为指标进行分析。
<7-1>抗体的稀释
用磷酸缓冲液(PBS)稀释抗-人CD3单克隆抗体OKT3(ATCC CRL-8001)使终浓度为8μg/ml。
如上制备的每一种人抗-人AILIM单克隆抗体都用PBS稀释到最终浓度为40μg/ml。抗体溶液进一步用PBS稀释以制备各种浓度的抗体(40μg/ml-0.0049μg/ml)。
<7-2>用抗体包被微量培养板
用(1)抗-人CD3单克隆抗体OKT3(8μg/ml；每孔25μl)和任一种人抗-人AILIM单克隆抗体(40μg/ml-0-0049μg/ml；每孔25μl)，或单独用(2)抗-人CD3单克隆抗体OKT3(8μg/ml；每孔25μl)包被96孔微量培养板的每孔。将板37℃下保温2小时。随后，弃去抗体液，每孔用PBS洗3次。然后，将含10％FCS的RPMI 1640培养基加入到每孔中(100μl/孔)，37℃下将板保温1小时。这样，板上不同的孔被上述(1)或(2)所述抗体包被。
依照同样的方法进行对照实验，所用板分别用下列单克隆抗体，而非人抗-人AILIM单克隆抗体作对照抗体进行包被。
(1)抗人AILIM的小鼠单克隆抗体SA12或SG430(JP-A11-29599(实施例12))和WO98/38216(实施例12))；
(2)小鼠抗-人CETP单克隆抗体JHC1(也称为JMab109；JP-A9-20800)；和
(3)人抗-KLH单克隆抗体(也称为JMab23；上述实施例)。
在下述分析中使用抗体包被的微量培养板。
<7-3>人T细胞悬浮液的制备
从每一正常健康人采集外周血(5人；供者A，B，C，D和E)。采用LymphoPrep(Nycomed)通过密度-梯度离心制备含单核细胞的级分。使用Pan-T细胞分离试剂盒(Miltenyi)和磁性分拣仪(Magnetic Sorter)按说明书从人单核细胞级分分离人T细胞。采用血细胞计数器计数T细胞。将人T细胞悬浮在含10％FCS的RPMI1640培养基中制备人T细胞悬浮液(1×106个细胞/ml)。
<7-4>细胞培养
(1)用抗-人CD3抗体和抗-人AILIM抗体包被的微量培养板进行的培养
向用上述抗体包被的微量培养板的每孔加入人T细胞悬浮液(供者A，B，C，D和E；100μl/孔；1×105个细胞/孔)，将板在CO2培养箱中于37℃下保温3天。
培养后，取所得培养液上清的等分试样(50μl)保藏于-20℃，并在后面所述分析中使用(IFNγ分析)。在采集了培养液上清的等分样品后，使用不同的微量培养板进行下列分析：
(2)单独使用抗-人CD3抗体包被的微量培养板进行的培养
人T细胞悬浮液(供者D；100μl/孔；1×105个细胞/孔)加入到用上述抗体包被的微量培养板的每孔中，然后将任一种人抗-人AILIM单克隆抗体加入其中(25μl 40μg/ml-0.0049μg/ml的抗体)。将板在CO2培养箱中于37℃下保温3天。
<7-5>测定T细胞的增殖活性
保温后，向各板的每孔加入甲基[3H]胸苷(0.5μCi/孔；Amersham-Pharmacia)，将各板在CO2培养箱中于37℃下保温6小时。然后，用细胞收集器将细胞捕获在GF/C滤膜(Packard)上。随后，将滤膜40℃下干燥3小时或更长时间，然后向其中加入Microscinti 0(20μl/孔；Packard)。用β-计数器(TOP COUNT)测定滤膜捕获的细胞中掺入的3H放射性来分析培养后T细胞增殖的程度。
结果显示于图15到39。
此分析结果显示当用抗-人AILIM单克隆抗体(人单克隆抗体或小鼠单克隆抗体)与抗-人CD3抗体一起包被微量培养板时，人T细胞根据细胞浓度显著增殖。此外，在各个供者中细胞增殖的程度有所不同。
在另一方面，当单独用抗-人CD3抗体包被各板并在细胞培养期间在溶液(液相)中使用抗-人AILIM单克隆抗体(人单克隆抗体或小鼠单克隆抗体)时人T细胞没有显著生长。
<7-6>T细胞培养上清中IFNγ的定量
对<7-4>的(1)中所述T细胞(供者B和C)的各自培养物，通过市售人IFNγELISA试剂盒(Amersham-Pharmacia；Endogen)测定培养上清中IFNγ的量。
结果显示于图40到47。
此分析结果显示IFNγ的生产随抗-人AILIM单克隆抗体(人单克隆抗体或小鼠单克隆抗体)的浓度显著提高。
实施例8：人抗-人AILIM单克隆抗体对混合淋巴细胞反应(MLR)的调 节活性
通过分析对与异源混合淋巴细胞反应(异源MLR)相关的T细胞增殖的控制活性(即，细胞中DNA的合成)作为指标，检测本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体是否能够控制(增强和/或抑制)T细胞应答(生产细胞因子如IFN-γ和IL-4，细胞增殖等)，即对AILIM介导的协同刺激信号向细胞内的转导进行调节的能力。
<8-1>人PBMC和T细胞的制备
从正常健康人(7人；供者A，B，C，D，E，F，G)采集外周血(200ml)，分散在微管(50ml；Falcon)中的Lymphoprep(15ml；Nycomed)层上。离心(1600rpm 10分钟)，回收中间层。用磷酸缓冲液将回收的细胞稀释两倍或更多，然后离心(1800rpm，10分钟)。这样，制备得到PBMC(外周血单核细胞；2×108-5×108个细胞)。采用血细胞计数器测定细胞数。取MLR分析中所用细胞的等分试样(1.08×108/9个微量培养板)并冰上保存。其它细胞用于下述T细胞的分离。
PanT分离试剂盒(Miltenyi Biotech)用于从PBMC分离T细胞。依照试剂盒所附手册，将剩余的PBMC加入到试剂盒所附的溶液中，保温所述溶液。随后，用含5mM EDTA和0.5％BSA的PBS洗涤细胞，然后重悬于PBS中。随后，将细胞悬浮液上样至已用PBS溶胀的阳性选择柱VS+(MiltenyiBiotech)，回收未吸附的级分。此外，将PBS上样至该柱，回收洗液。再同样处理一次。混合回收的溶液得到T细胞级分。T细胞级分离心后，将细胞重悬在PBS中。使用血细胞计数器测定细胞数。所述细胞用于下列检测。
<8-2>混合淋巴细胞反应(MLR)
如上所述，已知CD28与CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之间以及CTLA4与CD80(B7-1)/CD86(B7-2)之间的两个信号传递途径(已进行过详细分析)是淋巴细胞如T细胞等活化所必需的协同刺激信号传递途径。
即，通过两个已知途径中的任一个的信号转导可诱导T细胞应答混合淋巴细胞反应(MLR)而增殖。
这样，通过使用下述底物，本发明的实验可分析(1)通过阻断CTLA4-介导的信号传递途径而对MLR的抑制；(2)通过阻断CD80(B7-1)/CD86(B7-2)-介导的信号传递途径而对MLR的抑制；(3)通过同时阻断CTLA4-介导的信号传递途径和CD80(B7-1)/CD86(B7-2)-介导的信号传递途径而对MLR的抑制；(4)通过阻断与AILIM相关的第三信号传递途径而对MLR的抑制；(5)通过同时阻断CTLA4-介导途径和AILIM介导途径而对MLR的抑制。
采用下列实验底物。
(1)人抗-人AILIM单克隆抗体(如上述实施例制备)；
(2)小鼠抗-人AILIM单克隆抗体SA12(与上述实施例相同)；
(3)人抗-KLH单克隆抗体(阴性对照；与上述实施例相同)；
(4)小鼠IgG抗体(抗-人CD34；阴性对照；Immunotech)；
(5)抗-人CD80单克隆抗体(Pharmingen)和抗-人CD86单克隆抗体(Pharmingen)；
(6)人CTLA4-IgFc嵌合分子(Ancell)。
采用从<8-1>所述供者制备的PBMC和T细胞对下述组合进行混合淋巴细胞反应(MLR)：
(i)T细胞(供者A)/PBMC(供者D)
(ii)T细胞(供者D)/PBMC(供者B)
(iii)T细胞(供者C)/PBMC(供者A)
(iv)T细胞(供者E)/PBMC(供者G)
(v)T细胞(供者F)/PBMC(供者E)
(vi)T细胞(供者G)/PBMC(供者F)
如下调整实验中所用PBMC和T细胞的浓度。
将PBMC悬于PBS中，然后转移到培养平皿(60mm)。用辐射仪(HitachiMEDICO)对细胞进行X-射线照射。回收细胞，离心然后加入到含10％FCS的PRMI1640培养基中。调整细胞数量为2×105个/50μl。
所得每个供者的T细胞也加入到含10％FCS的PRMI1640培养基中，调整细胞数量为1×105个/50μl。
<8-2-1>用人抗-人AILIM单克隆抗体抑制MLR
向具有U-形孔的96孔微量培养板的每孔加入含10％FCS的PRMI1640培养基。用含10％FCS的PRMI1640培养基稀释人抗-人AILIM单克隆抗体溶液或小鼠抗-人AILIM单克隆抗体SA12溶液以制备具有多种抗体浓度的溶液。将稀释的抗体溶液加入孔中(最终浓度：0，0.31，1.25，5和20μg/ml)。随后，将T细胞加入孔中(50μl)。37℃下CO2培养箱(NAPCO)中将板保温1小时。反应完成后，孔中加入另一供者的PBMC(50μl)以引发MLR。
当使用非人抗-人AILIM单克隆抗体的抗体(如上(3)-(6)所述)作为实验物质进行MLR时，使PBMC与该实验物质一起保温后，再与另一供者的T细胞反应。
在培养的第5天，向每孔中加入用含10％FCS的PRMI1640培养基稀释的氚标记的胸苷(3H-胸苷；20μl；1μCi/孔)。继续培养1天。培养完成后，用细胞收集器(Packard)收获细胞。用β-计数器(TOP COUNT；Packard)测定细胞中掺入的3H放射性来分析培养后T细胞的增殖速度。
结果显示于图48到59。
<8-2-2>在CTLA4-介导的信号传递途径已预先阻断的MLR系统中，用人抗-人AILIM单克隆抗体抑制MLR
向具有U-形孔的96孔微量培养板的每孔加入含10％FCS的PRMI1640培养基。用含10％FCS的PRMI1640培养基稀释人抗-人AILIM单克隆抗体溶液或小鼠抗-人AILIM单克隆抗体SA12溶液以制备具有多种抗体浓度的溶液。将稀释的抗体溶液加入孔中(最终浓度：0，0.31，1.25，5和20μg/ml)。随后，将T细胞加入孔中(50μl)。37℃下CO2培养箱(NAPCO)中将板保温1小时。
除培养T细胞外，另一供者的PBMC(在含10％FCS的PRMI1640培养基中)在添加了人CTLA4-IgFc后单独培养。37℃下CO2培养箱(NAPCO)中培养1小时。在MLR开始时CTLA4-IgFc浓度调整到20μl/ml。
随后，向上述T细胞培养液中加入PBMC(50μl)以引发MLR。
当使用非人抗-人AILIM单克隆抗体的抗体(如上(3)-(5)所述)作为实验物质进行MLR时，使PBMC(已在CTLA4-IgFc存在下培养)与所述实验物质一起保温后，再与另一供者的T细胞反应。
在培养的第5天，向每孔中加入用含10％FCS的PRMI1640培养基稀释的氚标记的胸苷(3H-胸苷；20μl；1μCi/孔)。继续培养1天。培养完成后，用细胞收集器(Packard)收获细胞。用β-计数器(TOP COUNT；Packard)测定细胞中掺入的3H放射性来分析培养后T细胞的增殖速度。
结果显示于图60到69。
得自上述两个实验的实验结果总结如下：
(1)CTLA4-IgFc阻断CTLA-4介导的信号转导，并因此抑制了异源MLR-诱导的T细胞增殖。
(2)抗-CD80抗体和抗-CD86抗体抑制CD80/CD86(CTLA4和CD28的配体)介导的信号转导，这样就抑制了异源MLR-诱导的T细胞增殖。
(3)抗人AILIM的单克隆抗体，如CTLA4-IgFc，抗-CD80抗体和抗-CD86抗体以抗体浓度依赖性方式显著抑制异源MLR-诱导的与AILIM-介导的信号转导有关的T细胞增殖。
也就是说，这些结果显示除已知由CTLA4/CD80/Cd86介导的和CD28/CD80/CD86介导的途径外，由AILIM及其配体介导的第三途径作为T细胞活化必需的协同刺激信号传递途径而存在，还显示AILIM-介导的信号传递途径被抗AILIM抗体抑制。
此外，出现了这样的可能性：AILIM-介导的途径对信号转导的作用与CTLA4/CD80/Cd86介导的途径和CD28/CD80/CD86介导的途径相当。
实施例9：人抗-人AILIM单克隆抗体诱导抗体依赖性细胞介导的细胞 毒活性(ADCC)
由抗体引起的生物活性包括对抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性(ADCC)的诱导。ADCC是除效应细胞和靶细胞外，还需要抗体来诱导由效应细胞，如淋巴细胞，巨噬细胞或多形核白细胞诱发的对靶细胞的破坏的一种细胞毒作用。
如下分析了本发明的抗-人AILIM单克隆抗体诱导ADCC的活性：
51Cr(0.1mCi/106个细胞；Amersham-Phamacia)加入到上述实施例中制备的过表达人AILIM的重组HPB-ALL细胞培养中，将混合物37℃下保温2小时。用RPMI1640培养基洗涤细胞8次。所得同位素标记的细胞用作靶细胞。
采用该同位素标记的野生型人HPB-ALL细胞作为对照细胞依照上述同样的方法进行对照实验。
通过使用Lymphosepar I(IBL)，从正常健康人体的外周血分离PBMC级分。所得人PBMC用作效应细胞。
将靶细胞铺板在具有U-形孔的96孔微量培养板(Nunc)的每孔上(1×104个细胞/孔；25μl/孔)。随后，向各孔加入用含5％FBS的RPMI1640培养基(0.0001-1.0μg/ml；25μl/孔)，或只用所述培养基(25μl/孔)或用1％NonidetP-40(25μl/孔；具有细胞裂解活性的去污剂)稀释的不同浓度的人抗-人AILIM单克隆抗体，然后室温下将板保温20分钟。
使用抗-人CD3单克隆抗体OKT3(ATCC CRL-8001)作为阳性对照抗体替代抗-人AILIM抗体以上述同样的方法进行培养。
随后，各孔加入效应细胞(E/T比＝50；1×105个细胞/孔；50μl/孔)，37℃下将板在CO2培养箱中保温16小时。
培养后，将样品离心(4℃下1500rpm 10分钟)。回收所得上清。通过γ-计数器测定离心所得上清中的放射性。所述放射性代表由于ADCC造成的细胞膜损害而使51Cr从细胞中释放到培养液中的量。
假设只采用培养基的情况下观察到的放射性对应于0％细胞膜损害(0)，采用Nonidet的情况下所测放射性对应于100％细胞膜损害(0)，测定由抗-AILIM抗体或抗-CD3抗体诱导的ADCC造成的细胞膜损害的百分比。
实验结果列于图70和71。
实验结果表明，本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体表现出浓度依赖性ADCC诱导活性。
实施例10：人抗-人AILIM单克隆抗体的基因和氨基酸序列的测定及 其分析
如下所述测定了上述实施例中制备的各种人抗-人AILIM单克隆抗体的重链以及轻链的cDNA序列。还对这些基因的结构特点进行了分析。
采用Quick Prep mRNA纯化试剂盒(Amersham Pharmacia)，从如上述实施例制备的产生人抗-人AILIM单克隆抗体的各杂交瘤(克隆：AIH5D3(JMab-136)，AII289(JMab-138)，AII394(JMab-139))提取并纯化PolyA+RNA。
将杂交瘤细胞悬浮于细胞裂解缓冲液(Lysis Buffer)中，通过使用注射器使其裂解而将其溶解。将Oligo(dT)树脂加入到该已解的物质中，轻微振荡混合物。随后，冲洗Oligo(dT)树脂，然后用Elution Buffer洗脱PolyA+RNA。洗脱下来的PolyA+RNA用乙醇沉淀，再溶解在Tris-EDTA缓冲液中。在260nm波长测定吸光度确定PolyA+RNA浓度。
采用市售cDNA合成试剂盒(GIBCOBRL)依照M-MLV逆转录酶方法，以PolyA+RNA作模板，合成的寡DNA NotI-T(SEQ ID NO：1)作引物合成双链cDNA。
具体地，在含有纯化自杂交瘤的PolyA+RNA作模板(约5μg)，引物(400pmol)和M-MLV逆转录酶的溶液(约50μl)中，37℃下1小时合成单链cDNA。随后，向反应液(4μl)中加入dNTP，DNA聚合酶I，RNaseH，DNA连接酶，缓冲液和蒸馏水，使混合物16℃下保温2小时以合成双链cDNA。用酚/氯仿提取所述双链cDNA，然后用乙醇沉淀。
随后，向含有所述双链cDNA的TE缓冲液(50μl)中加入EcoRI接头DNA(约300pmole)和DNA连接酶(Ligation High；33μl；TOYOBO)，将混合物16℃下保温约80分钟以用接头DNA连接所述cDNA。所用接头DNA是由已经常规方法5’-磷酸化并相互退火的寡DNA(20adp；SEQ ID NO：2)和寡DNA(24adp；SEQ ID NO：3)组成的双链DNA。
用酚/氯仿提取DNA连接体，然后用乙醇沉淀。随后，用市售限制酶NotI(TOYOBO)消化该DNA反应物，然后与市售ATP溶液(GIBCO BRL)和T4激酶(TOYOBO)37℃一起保温30分钟以使其5’末端磷酸化。
所得DNA用乙醇沉淀，然后经聚丙烯酰胺凝胶电泳分级分离。切下含约500到2000bp的DNA片段。用UV灯在照相设备中目视观察用溴乙啶染色的DNA，进行切胶。
切下的胶打碎然后悬浮在TE缓冲液中。离心悬浮液，回收所得上清。
在市售DNA连接酶(Ligation High；TOYOBO)存在下，将回收的DNA与市售λ噬菌体载体λEXcell(0.25μg；Amersham Pharmacia)连接(16℃下30分钟)。然后，采用市售λ噬菌体包装试剂盒Gigapack III Gold(STRATAGENE)将DNA连接体包装进入λ噬菌体，所得噬菌体颗粒感染大肠杆菌NM522宿主以制备cDNA文库。所有操作依照试剂盒所附实验方法进行。
随后，如下通过噬菌斑杂交方法筛选cDNA文库(Maniatis等，“分子克隆：实验室手册”，冷泉港实验室，冷泉港，纽约)：
cDNA文库(1×104噬菌斑)铺板在琼脂平板上，采用Hybond-N尼龙膜(Amersham Pharmacia)制备其影印滤膜。按照噬菌斑杂交方法采用γ32P-ATP标记的探针在杂交缓冲液中对这些影印滤膜进行杂交处理。对抗体轻链所用的探针是HIGLC(SEQ ID NO：4)，对抗体重链所用的探针是NHCc2(SEQID NO：5)。从得自初次筛选和二次筛选的阳性克隆进行单个噬菌斑分离。
通过采用单一PCR引物和Taq PCR试剂盒(TAKARA)，以每一阳性克隆的噬菌体悬浮液作模板DNA经PCR扩增抗体的每一重链和轻链。抗体轻链所用引物对是ExcellE(SEQ ID NO：6)和ck117(SEQ ID NO：7)，抗体重链所用引物对是ExcellE(SEQ ID NO：6)和NHCc2(SEQ ID NO：5)。依照常见方法采用琼脂糖凝胶电泳对所得PCR产物分级分离。切下对应于重链和轻链的含约600bp DNA的胶段。采用DNA测序仪(373A；PE-AppliedBiosystems)，ABI PRISM测序软件(PE-Applied Biosystems)和ABI PRISM自动装配仪(PE-Applied Biosystems)分析从胶中纯化的DNA的核苷酸序列。证实每一阳性克隆的DNA具有足够长度的核苷酸序列。
用来自每一阳性克隆的噬菌斑的λ噬菌体感染大肠杆菌NP66以便体内切割目的质粒DNA，将所得丝状噬菌体铺板在含氨苄青霉素的平板上以得到菌落。随后，采用常用方法从菌落回收并纯化质粒DNA，用所述质粒转化大肠杆菌JM109。随后，将转化细胞铺板在含氨苄青霉素的营养琼脂平板上以形成菌落。
随后，将得自每一菌落的细菌在含氨苄青霉素的LB培养基中的悬浮液转移到液体营养培养基，37℃下培养24小时。从培养液中收获细菌，采用质粒纯化试剂盒(Quiagen)纯化所述质粒DNA。每一质粒DNA用限制酶EcoRI/NotI消化以证实载体DNA和插入的DNA(重链cDNA或轻链cDNA)的存在。
采用DNA测序仪(377A；PE-AppliedBiosystems)，ABI PRISM测序软件(PE-Applied Biosystems)和ABI PRISM自动装配仪(PE-AppliedBiosystems)，通过常用方法测定已插入每种纯化质粒的、编码抗体重链和轻链的每种cDNA的核苷酸序列。
用于序列测定的引物如下：
<用于测定重链cDNA的引物>
M13R引物(SEQ ID NO：8；STRATAGENE)，ExcellE(SEQ ID NO：6)，136H(SEQ ID NO：9)，138/9H(SEQ ID NO：10)，AILIMHCL(SEQ ID NO：11)，HCc1(SEQ ID NO：12)，HCc2(SEQ ID NO：5)，HCc7(SEQ ID NO：13)，HCc8(SEQ ID NO：14)，HCc3(SEQ ID NO：15)，HCc4(SEQ ID NO：16)，HCc6(SEQ ID NO：17)，HIGHC(SEQ ID NO：18)，HCc9(SEQ ID NO：19)，HCc5(SEQ ID NO：20)和polyA(SEQ ID NO：21).
<用于测定轻链cDNA的引物>
M13R引物(SEQ ID NO：8；STRATAGENE)，ExcellE(SEQ ID NO：6)，AILIMLC1(SEQ ID NO：22)，AILIMLC2(SEQ ID NO：23)，LCc1(SEQ ID NO：24)，ck117(SEQ ID NO：7)，HIGHC(SEQ ID NO：4)，LCc2(SEQ ID NO：25)，HIK(SEQ ID NO：26)和polyA(SEQ ID NO：21).
下列所列序列包括编码抗人AILIM的人单克隆抗体(由上述每一杂交瘤产生)重链和轻链的cDNA序列，以及由cDNA序列导出的氨基酸序列。
克隆AIH5D3(JMab-136)
<重链>
DNA序列：SEQ ID NO：27(信号序列：核苷酸编号69到125，V区：核苷酸编号126到419)
氨基酸序列：SEQ ID NO：28(包含信号序列：氨基酸编号1到19，可变区：氨基酸编号20到118)
<轻链>
DNA序列：SEQ ID NO：29(信号序列：核苷酸编号39到104，V区：核苷酸编号105到386)
氨基酸序列：SEQ ID NO：30(包含信号序列：氨基酸编号1到22，可变区：氨基酸编号23到116)
克隆AII289(JMab-138)
<重链>
DNA序列：SEQ ID NO：31(信号序列：核苷酸编号94到150，V区：核苷酸编号151到441)
氨基酸序列：SEQ ID NO：32(包含信号序列：氨基酸编号1到19，可变区：氨基酸编号20到116)
<轻链>
DNA序列：SEQ ID NO：33(信号序列：核苷酸编号28到87，V区：核苷酸编号88到375)
氨基酸序列：SEQ ID NO：34(包含信号序列：氨基酸编号1到20，可变区：氨基酸编号21到116)
克隆AII394(JMab-139)
<重链>
DNA序列：SEQ ID NO：35(信号序列：核苷酸编号96到152，V区：核苷酸编号153到443)
氨基酸序列：SEQ ID NO：36(包含信号序列：氨基酸编号1到19，可变区：氨基酸编号20到116)
<轻链>
DNA序列：SEQ ID NO：37(信号序列：核苷酸编号33到92，V区：核苷酸编号93到380)
氨基酸序列：SEQ ID NO：38(包含信号序列：氨基酸编号1到20，可变区：氨基酸编号21到116)
用基因序列分析软件在由Tomlinson等(Immunol.Today，Vol.16，No.5，p.237-242，1995)构建的人免疫球蛋白可变区基因的V BASE序列库中检索在此测定的每一DNA序列。
结果表明：上述人单克隆抗体的重链和轻链的V-区基因分别由下列片段构成。
<重链V-区基因>
克隆AIH5D3(JMab-136)：1-02
克隆AII289(JMab-138)：3-13
克隆AII394(JMab-139)：3-13
<轻链V-区基因>
克隆AIH5D3(JMab-136)：L5
克隆AII289(JMab-138)：A27
克隆AII394(JMab-139)：A27
实施例11：人抗-人AILIM单克隆抗体对迟发型超敏反应(DTH)的抑制 作用
免疫应答系统的功能是消除对生命体有害的抗原(致病性微生物如病毒，细菌，寄生虫，异物等)，它可以广义地分为先天性免疫和获得性免疫。
前者是基于非特异性识别的排除作用系统，包括吞噬细胞(多形核白细胞，单核细胞，巨噬细胞等)的吞噬作用，自然杀伤细胞(NK)的攻击，和补体的抗原调理作用等。
后者，获得性免疫应答，是获得了抗原特异性(活化)的淋巴细胞(主要是T细胞和B细胞)实施的排除作用系统。
此外，获得性免疫应答可广义地分为细胞免疫和体液免疫。
与依赖于抗体的体液免疫不同，细胞免疫通常是以T细胞对作为标靶的抗原的直接作用为表现的免疫应答。已知细胞免疫涉及对病毒或肿瘤的免疫应答，组织或器官移植后诱发的免疫应答，对某些药物的超敏反应，和某些自身免疫疾病。
细胞免疫最典型的现象是公知的结核菌素过敏(基本上与结核菌素超敏反应同义)。结核菌素过敏是结核杆菌感染引发的迟发型过敏。该过敏源于结核杆菌感染并且可通过对活体皮内注射结核杆菌培养上清中的结核菌素蛋白引起免疫应答而诱发。
迟发型过敏是抗原致敏的T细胞(能记忆抗原的记忆T细胞)介导的过敏性。这种过敏称为“迟发型”是因为被抗原致敏的活体再次与所述抗原接触时，需要24到48小时才表达出对记忆T细胞诱导的炎症的过敏性应答。
结核菌素过敏现象是一种有代表性的迟发型过敏，通常被用于“结核菌素试验”中以诊断在动物体内是否已经建立了对结核杆菌感染的过敏性。具体地，如下进行该试验：对动物皮内注射纯化的结核菌素(纯蛋白衍生物；PPD；普通诊断使用0.1ml的浓度为0.05μg/0.1ml(2.5TU)的所述衍生物)，它是纯化自结核杆菌培养物的结核菌素蛋白；注射的48小时后测定注射点皮肤红斑的主轴；根据所测主轴长可诊断结核杆菌感染的存在。如果红斑的主轴短于4mm，则受试体是阴性的；如果该主轴在4-9mm的范围内，则受试者为假阳性；如果主轴为10mm或更长则受试体是阳性的。
与细胞免疫相关的迟发型过敏包括，例如，少量蛋白或类似物瞬时诱发的Jones-Mote型超敏反应，对某些药物如苦基氯或植物毒素如日本漆的接触过敏，或与移植排斥(如异源移植)相关的过敏，以及上述对感染性病原体的抗原的过敏，如由上述结核杆菌引起的结核菌素过敏。
此试验中，利用上述结核菌素试验评价抗-AILIM抗体对迟发型超敏反应(迟发型过敏)的抑制作用。所述试验如下进行：
将已用BCG(卡介苗)(一种减毒的牛型结核杆菌活菌)致敏的每一只恒河猴(cynomolgus monkeys)(雄性，体重：6.0-8.5kg，Environmental BiologicalLife Science Research Center Inc.；每组3只)用盐酸氯胺酮麻醉(10mg/kg，肌肉内注射)，在其胸部的每一注射点(每只6个注射点)皮内注射0.1ml下列的任一试验样品。样品注射点间距离是3cm或更长。
(1)人抗-人AILIM单克隆抗体(JMab-136；0.2mg；每个注射点10μg)和结核菌素(4μg/1ml生理盐水)的1∶1混合溶液；
(2)人抗-人AILIM单克隆抗体(JMab-136；2mg；每个注射点100μg)和结核菌素(4μg/1ml生理盐水)的1∶1混合溶液；
(3)磷酸盐缓冲液(PBS(-))作对照；
(4)市售甾类消炎剂，强的松龙(0.2mg；每个注射点10μg)和结核菌素(4μg/1ml生理盐水)的1∶1混合溶液作为阳性对照；
(5)人抗-KLH单克隆抗体(实施例<2-2>；0.2mg；每个注射点10μg)和结核菌素(4μg/1ml生理盐水)的1∶1混合溶液作为阴性对照；
每个样品注射24小时后，测量每个注射点红斑的长轴和短轴，确定红斑面积。
所得结果示于图72。
所得结果表明与对照组和阴性对照组相比，迟发型过敏引起的红斑在接受了抗-AILIM抗体注射的组别中受到了显著抑制。此抑制作用与作为阳性对照的甾类消炎药的作用相当。
实施例12：分析在移植物抗宿主疾病(GVHD)病人的各种组织中AILIM 的表达
采用常规方法分析病人活组织检查所得多种组织中AILIM的表达，所述病人是移植了来自供者的异源移植物的受者，并在移植后经临床诊断患有急性或慢性移植物抗宿主疾病(GVHD)。用HE和如上述实施例中制备的人抗-人AILIM单克隆抗体(JMab-36)将组织染色。
使用采自急性GVHD病人(28例)各种组织的33个样品以及慢性GVHD病人(5例)的5个样品进行分析。
结果如下：AILIM-阳性反应可见于29个皮肤样品中的15个；3个胃组织样品中的1个；1个结肠组织样品中的1个，上述所有样品全部得自急性GVHD病人。AILIM-阳性反应可见于3个皮肤样品中的1个；2个结肠组织样品中的2个；这些样品全部得自慢性GVHD病人。此外，在13个观察到显著淋巴细胞浸润的样品中有10个发现AILIM-阳性反应。
实施例13：人抗-人AILIM单克隆抗体将协同刺激信号转导至猴T细 胞中的活性
实施例7中进行的试验表明本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体通过控制人T细胞应答，具体是控制AILIM介导的协同刺激信号向细胞内的转导而促进人T细胞增殖。在此试验中，如实施例7相同的方式分析了人单克隆抗体是否表现出促进猴T细胞增殖的活性。
<13-1>抗体的稀释
用磷酸缓冲液(PBS)稀释抗-人CD3单克隆抗体SP34(BD-Pharmingen)，使最终浓度为1μg/ml。
用PBS稀释如上制备的人抗-人AILIM单克隆抗体JMAb136至终浓度40μg/ml。再进一步用PBS稀释抗体溶液以制备多种浓度的抗体(40μg/ml-0.064μg/ml。
<13-2>用抗体包被微量培养板
96孔微量培养板的每一孔用抗人CD3单克隆抗体SP34(1μg/ml；每孔25μl)和人抗-人AILIM单克隆抗体JMAb136(40μg/ml-0.064μg/ml；每孔25μl)包被。将板37℃下保温2小时。随后，弃去抗体溶液，每孔用PBS洗3遍。洗后，向每孔加入含10％FCS的RPMI1640培养基(100μl/孔)，将板37℃下保温1小时。从而用上述抗体包被了板的各孔。
以相同的方法进行对照试验，板上包被的对照抗体是人抗-KLH单克隆抗体(JMAb23；参见前面的实施例)，而非人抗-人AILIM单克隆抗体。
在下面的试验中使用用所述抗体包被的微量培养板。
<13-3>猴T细胞悬浮液的制备
从恒河猴采集外周血，采用NycoPrep1.077A(Nycomed)通过密度梯度离心分离单核细胞。依照实验手册，使用抗-人CD4抗体M-T477(BD-Pharmingen)，抗-人CD8抗体RPA-T8(BD-Pharmingen)，抗-小鼠IgG微珠(Miltenyi)和磁性分拣仪从恒河猴单核细胞分离猴T细胞。采用血球计数器测定T细胞数。将猴T细胞悬在含10％FCS的RPMI1640培养基中。这样就制备得到了猴T细胞悬浮液(1×106个细胞/ml)。
<13-4>细胞培养
(1)用抗-人CD3抗体和抗-人AILIM抗体包被的微量培养板进行培养
将猿猴(Simian)T细胞悬浮液加入到用上述抗体包被的微量培养板的每孔，将板置于CO2培养箱中37℃下保温2天。
培养完成后，各板进行下列试验：
<13-5>T细胞增殖活性的测定
向保温后的每孔加入甲基[3H]胸苷(0.5μCi/孔，Amersham Pharmacia)，将板置于CO2培养箱中37℃下保温6小时。保温后，用细胞收集器将细胞捕获在GF/C滤膜(Packard)上。随后，将滤膜40℃下干燥3小时或更长时间，然后向其中加入Microscinti 0(20μl/孔；Packard)。用β-计数器(TOP COUNT)测定滤膜上捕获的细胞中所掺入的3H放射性来分析培养后T细胞增殖的程度。
结果显示于图73。
本试验结果表明当用抗-人AILIM单克隆抗体(人单克隆抗体或小鼠单克隆抗体)与抗-人CD3抗体一起包被微量培养板时，随着所述细胞浓度的增加猿猴T细胞显著增殖。
该结果也提示，本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体可与猴AILIM结合，且具有调节猴AILIM功能的活性。
实施例14：建立用于鉴定和定量能与AILIM或AILIM配体结合的物 质的方法
建立一种ELISA(酶联免疫溶剂检测)方法以鉴定或定量能与AILIM(ICOS)或AILIM配体(B7h/B7RP1/GL50/LICOS)结合的物质。
下文详述的方法的原理是基于通过ELISA估计的所述物质对可溶性AILIM(hAILIM-IgFc)和可溶性人AILIM配体(hB7h-IgFc)间结合的抑制程度。
<14-1>样品
使用下列样品：
(1)链霉抗生素-HRP(Southern Biotechnology Associates，Inc.)；
(2)可溶性人AILIM配体(人B7h的胞外区与人IgG1的恒定区之间的融合蛋白)；
所述蛋白由下述<14-2>的方法制备；
(3)生物素标记的可溶性AILIM-IgFc；
依照本发明人之一的Tezuka的较早文献(JP-A11-29599(实施例16(2))和WO98/38216(实施例16(2)))所述同样的方法所得抗原可通过进一步纯化而制备AILIM-IgFc；
(4)人抗-人AILIM单克隆抗体(JMab-136；如上所述)；
(5)人抗-KLH单克隆抗体(阴性对照抗体；JMab-23；如上所述)；
(6)磷酸盐缓冲液(PBS(-)；Nikken Seibutsu)；
(7)RPMI1640培养基(Nikken Seibutsu)；
(8)胎牛血清(FCS；JRH-Bioscience)；
(9)30％牛血清白蛋白(BSA；Sigma)；
(10)吐温20(BioRad)；
(11)TMB+底物色素原(Dako)。
<14-2>可溶性人AILIM配体(人B7h的胞外区与人IgG1的恒定区的融合蛋白(hB7h-IgFc))的制备
依照上述实施例所述同样的方式从得自人外周血的单核细胞制备总RNA。以所得总RNA(5μg)为模板并使用Preamplification System用于第一链cDNA的合成(GIBCO-BRL)的Superscript预扩增系统合成cDNA。
然后，设计并合成5’引物(5’-GAGGTCTCCGCCCTCGAGATGCGGCTGGGCAGTCC-3’，SEQ ID NO：39)，其末端具有XhoI限制性位点，3’引物(5′-CACAGGACAGCCAGGGGATCCCACGTGGCCGCG-3’，SEQ IDNO：40)，其末端具有BamHI限制性位点，通过PCR扩增编码人AILIM配体(hB7h)胞包外区的cDNA。使用所述cDNA为模板并用所述引物经PCR制备DNA，所述DNA包含编码人B7h胞外区的cDNA且在其不同末端具有XhoI和BamHI位点。所得PCR产物用XhoI和BamHI消化，通过琼脂糖凝胶电泳分级以分离得到预计编码目的胞外区的相当于约720bp cDNA片段的区带。将分离的cDNA片段亚克隆进入预先用XhoI和BamHI消化的质粒pBluescript II SK(+)(Stratagene)。采用自动荧光DNA测序仪(AppliedBiosystems)通过序列分析证实所述cDNA片段包含编码人B7h胞外区的部分。
另一方面，通过用XbaI和BamHI消化质粒(参见，细胞，Vol.61，p.1303-1313，1990；Dr.Seed等制备，马塞诸塞州总医院)来制备BamHI-XbaIDNA片段形式(约1.3kb)的编码作为融合配对物的人IgG1的Fc的DNA。所述片段包含编码人IgG1，Cγ12和Cγ13的铰链区的外显子。
将如上制备的编码人B7h(hB7h)胞外区的XhoI-BamHI片段和包含编码人IgG1的Fc(缩写为“IgFc”)的外显子的BamHI-XbaI片段亚克隆进入预先用XhoI和XbaI消化的质粒pBluescript II SK(+)(Stratagene)。
随后，用XhoI和XbaI消化所述质粒以制备约1.8kb的DNA片段，其包含人B7h与人IgFc胞外区的融合DNA。通过使用T4 DNA连接酶，将此融合DNA片段插入到表达载体pME18S(Medical Immunology，Vol.20，No.1，p.27-32，1990，和“基因工程手册，”Experimental Medicine，supplement，Yodosha，pp.101-107，1992)的XhoI和XbaI位点之间，以构建质粒phB7h-IgFc。
在含10％胎牛血清和氨苄青霉素的DMEM培养基中培养单层COS7细胞(ATCC CRL-1651)至亚铺满，用质粒phB7h-IgFc通过电穿孔转化所述细胞以产生转化细胞。
将转化细胞在无血清ASF104培养基中培养72小时以表达hB7h-IgFc。
采用蛋白G Sepharose亲和柱(Amersham Pharmacia)如下纯化HB7h-IgFc：
将上述培养上清离心得到上清。将所得上清上样到已用结合缓冲液预平衡的蛋白G Sepharose亲和柱。随后，用结合缓冲液洗柱，用洗脱缓冲液进行洗脱。回收洗脱液，然后对磷酸盐缓冲液透析。将外部透析缓冲液更换2或更多次。这样就得到了纯化的hB7h-IgFc。
<14-3>抗体和可溶性人AILIM(hAILIM-IgFc)的稀释及其反应
抗-人AILIM单克隆抗体(JMab-136)和作为阴性对照抗体的人抗-KLH单克隆抗体(JMab-23)原液系列稀释为11个水平，将每一样品(200μl)与200μl含10％FCS的RPMI1640培养基充分混合。如此制备好各种浓度的抗体溶液。向所制备的各种浓度的溶液中加入生物素标记的hAILIM-IgFc(2μl/管；终浓度1μg/ml)。将所得溶液充分混合并在室温下保温30分钟。
<14-4>抗-AILIM单克隆抗体抑制hAILIM-IgFc与hB7h-IgFc结合的活性的检测
向96孔微量培养板的每孔加入hB7h-IgFc(50μl/孔(800ng/孔))。将板密封并在37℃下保温1小时。从每孔移去溶液，用PBS(120μl)清洗每孔3次。随后，将含0.5％BSA的PBS(100μl/孔)加入到每孔中以封闭未反应的点。将板密封并在37℃下保温1小时。保温后，除去溶液，用PBS(120μl)清洗每孔3次。随后将<14-3>中制备的每一样品加入孔中(50μl/孔)。将板密封并在37℃下保温1小时。弃去溶液，用37℃下预热的含10％FCS的RPMI1640培养基(120μl)清洗每孔3次。随后，向每孔加入含3.7％福尔马林的PBS(100μl/孔)，将板冰上保温5分钟。将每孔的溶液弃去，用0.1％吐温20洗孔3次(120μl)。随后，向每孔加入链霉抗生物素-HRP(50μl/孔)。将板密封并在室温下保温30分钟。将每孔的溶液弃去，用含0.1％吐温20的PBS洗孔3次(120μl)。随后，向每孔加入TMB+底物色素原(50μl/孔)。将板室温下保温20分钟。随后，向每孔加入2N硫酸(50μl/孔)以终止反应。采用THERMO max(Molecular Devices)在450nm波长测定每孔的吸光度。
结果示于图74到76。
结果显示抗-AILIM单克隆抗体具有以剂量依赖方式抑制hAILIM-IgFc与hB7h-IgFc结合的活性。
相应地，本实施例指出一种由本发明方法阐明的检测系统可用于筛选和鉴定能与AILIM或AILIM配体结合的物质(例如，抗体或合成的低分子量化合物)。
实施例15：人抗-人AILIM单克隆抗体对与AILIM-AILIM配体介导的 协同刺激信号转导相关的人T细胞增殖进行抑制的活性
通过测定人抗-人AILIM单克隆抗体对人T细胞与AILIM配体(B7h/B7RP1/GL50/LICOS)相接触而诱发的细胞增殖的抑制效应，分析本发明的抗-人AILIM单克隆抗体是否具有调节人T细胞表面AILIM所介导的信号转导的活性。
<15-1>抗体的稀释
用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释抗-人CD3单克隆抗体OKT3(ATCCCRL-8001)到终浓度为8μg/ml。
用PBS稀释如上制备的可溶性人AILIM配体(hB7h-lgFc)到终浓度为40μg/ml。抗体溶液用PBS进一步稀释以得到多种浓度的抗体(40μg/ml-0.064μg/ml)。
<15-2>用抗体包被微量培养板
用(1)抗-人CD3单克隆抗体OKT3(8μg/ml；每孔25μl)和hB7h-1gFc(40μg/ml-0.064μg/ml；每孔25μl)包被96孔微量培养板的每一孔。将板37℃下保温2小时。随后弃去抗体溶液，每孔用PBS洗3次。清洗后，向每孔加入含10％FCS的RPMI1640培养基(100μl/孔)，将板37℃下保温1小时。使板的各孔都被包被。
<15-3>人T细胞悬浮液的制备
从正常健康人体采集外周血，采用LymphoPrep(Nycomed)通过密度梯度离心对单核细胞分级。使用Pan-T细胞分离试剂盒(Miltenyi)和磁性分拣仪，按说明书从人单核细胞分离人T细胞。采用血球计数器测定T细胞数。将人T细胞悬浮在添加了人抗-人AILIM单克隆抗体Jmab136(20μg/ml)的含10％FCS的RPMI1640培养基中。将制备好的人T细胞悬浮液(1×106个细胞/ml)室温下保温30分钟。
用人抗-人AILIM单克隆抗体JMAb23(20μg/ml)作为阴性对照抗体。
<15-4>细胞培养
依照上述同样的方式，向已用抗-人CD3抗体和hB7h-IgFc包被的微量培养板的每孔加入人T细胞悬浮液(100μl/孔；1×105个细胞/孔)，将板置于CO2培养箱中37℃下保温3天。
<15-5>T细胞增殖活性的测定
保温后，向各板的每孔加入甲基[3H]胸苷(0.5μCi/孔；Amersham-Pharmacia)，将各板在CO2培养箱中于37℃下保温6小时。然后，用细胞收集器将细胞捕获在GF/C滤膜(Packard)上。随后，将滤膜40℃下干燥3小时或更长时间，然后向其中加入Microscinti 0(20μl/孔；Packard)。用β-计数器(TOP COUNT)测定滤膜上捕获的细胞中掺入的3H放射性来分析培养后T细胞增殖的程度。
结果显示于图77。
此分析结果显示人T细胞生长显著依赖于人B7h-IgFc浓度(在使用阴性对照抗体的检测中)。此外，人抗-人AILIM单克隆抗体显著抑制人T细胞的殖。
实施例16：人抗-人AILIM单克隆抗体对与AILIM-AILIM配体介导的 协同刺激信号转导相关的猴T细胞增殖的抑制活性
以猴T细胞取代人T细胞如上实施例15所述进行同样的实验。
<16-1>抗体的稀释及其它
用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释抗-人CD3单克隆抗体SP34(BD-Pharmacia)到终浓度为1μg/ml。
用PBS稀释如上制备的人B7h-IgFc到终浓度为40μg/ml。用PBS进一步稀释抗体溶液以得到多种浓度的抗体(40μg/ml-0.064μg/ml)。
<16-2>用抗体包被微量培养板
用(1)抗-人CD3单克隆抗体SP34(BD-Pharimingen)(1μg/ml；每孔25μl)和人B7h-1gFc(40μg/ml-0.064μg/ml；每孔25μl)包被96孔微量培养板的每一孔。将板37℃下保温2小时。随后弃去抗体溶液，每孔用PBS洗3次。清洗后，向每孔加入含10％FCS的RPMI1640培养基(100μl/孔)，将板37℃下保温1小时。使板的各孔都被包被。
<16-3>猴T细胞悬浮液的制备
从恒河猴采集外周血。采用NycoPrep1.077A(Nycomed)通过密度梯度离心制备含单核细胞的级分。使用抗-人CD4抗体M-T477(BD-Pharimingen)，抗-人CD8抗体RPA-T8(BD-Pharimingen)，抗-小鼠IgG微珠(Miltenyi)和磁性分拣仪，按说明书从恒河猴单核细胞分离猴T细胞。采用血球计数器测定T细胞数。将猴T细胞悬浮在含人抗-人AILIM单克隆抗体JMab136(20μg/ml)和10％FCS的RPMI1640培养基中以制备猴T细胞悬浮液(1×106个细胞/ml)。将所述悬浮液室温下保温30分钟。
将人抗-KLH单克隆抗体JMab23(20μg/ml)用作阴性对照抗体。
<16-4>细胞培养
依照上述同样的方式，向已用抗-人CD3抗体和hB7h-IgFc包被的微量培养板的每孔加入猴T细胞悬浮液(100μl/孔；1×105个细胞/孔)，将板置于CO2培养箱中37℃下保温3天。
<16-5>T细胞增殖活性的测定
培养后，向各板的每孔加入甲基[3H]胸苷(0.5μCi/孔；Amersham-Pharmacia)，将各板在CO2培养箱中于37℃下保温6小时。然后，用细胞收集器将细胞捕获在GF/C滤膜(Packard)上。随后，将滤膜40℃下干燥3小时或更长时间，然后向其中加入Microscinti 0(20μl/孔；Packard)。用β-计数器(TOP COUNT)测定滤膜上捕获的细胞中掺入的3H放射性来分析培养后T细胞增殖的程度。
结果显示于图78。
此分析结果显示猴T细胞生长显著依赖于人B7h-IgFc浓度(在使用阴性对照抗体的检测中)。此外，抗-人AILIM单克隆抗体显著抑制猴T细胞增殖。
工业应用
本发明的能与人AILIM结合的单克隆抗体是人源的，因此这些抗体不会由于对人的抗原性，即宿主中的HAMA(人抗小鼠抗原性)，诱发严重的免疫排斥反应，所述HAMA在包含非-人哺乳动物来源的抗体，如小鼠源抗体的抗体治疗制剂中已经是一个严重的治疗性问题(副作用)。因此本发明的抗体就具有作为抗体药物的巨大价值。
所以本发明抗AILIM(具体地是人AILIM)的人单克隆抗体和含有所述人单克隆抗体的药物制剂根本不会诱发HAMA引起的宿主免疫排斥反应；所以能作为治疗剂用于控制与AILIM介导的共信号(第二信号)转导到AILIM表达细胞有关的多种生物反应(如，AILIM表达细胞的增殖，由AILIM表达细胞产生的细胞因子，引起AILIM表达细胞的免疫性细胞溶解或细胞死亡(凋亡)，诱导对AILIM表达细胞的抗体依赖性损害)；和/或用于治疗或预防与AILIM介导的信号转导有关的多种疾病，控制和抑制这些疾病的发作和/或发展。
具体地，通过提供包含本发明的人抗-人AILIM单克隆抗体或其一部分作为活性成分的药物制剂，可能能抑制或治疗和预防多种疾病(如，类风湿性关节炎，多发性硬化，自身免疫性甲状腺炎，过敏性接触型皮炎，慢性炎性疾病扁平苔癣，系统性红斑狼疮，胰岛素依赖型糖尿病，牛皮癣等)，这些疾病可分类为自身免疫病或过敏性疾病(具体地，由于细胞免疫引起的自身免疫病和迟发型过敏)；关节病(例如类风湿性关节炎(RA)，骨关节炎(OA))，炎症(如肝炎)；移植物抗宿主反应(GVH反应)；移植物抗宿主疾病(GVHD)；与组织(如皮肤，角膜和骨)或器官(肝，心，肺，肾，胰脏等)移植(同种移植或异种移植)有关的免疫排斥反应；对外来抗原或自身抗原的免疫应答(例如抗所述抗原的抗体的生产，细胞增殖，细胞因子的生产等)；可能由肠免疫异常(具体地，炎性肠疾病(特别是Crohn’s病和溃疡性结肠炎)引起的疾病；食物过敏反应等。
本发明的药物组合物使得有可能治疗或预防某些采用甾族药物作消炎药的炎症，例如，与各种关节炎性皮疹相关的炎症(类风湿性关节炎，骨关节炎等)，肺炎，肝炎(包括病毒性肝炎)，与传染性疾病相关的炎症，炎性肠疾病，肠炎，肾炎(肾小球肾炎，与肾纤维化相关的炎症，胃炎，脉管炎，胰腺炎，腹膜炎，支气管炎，心肌炎，脑炎，与局部缺血-再灌注液损伤相关的炎症(心肌缺血-再灌注损伤等)，与组织或器官移植后的免疫排斥反应有关的炎症，烫伤，各种皮肤炎症(牛皮癣，过敏性接触型皮炎，慢性炎性皮肤病扁平苔癣)，与多器官衰竭有关的炎症，PTCA或PTCR手术后炎症，与动脉粥样硬化症有关的炎症，自身免疫甲状腺炎等。
此外，在上述抑制和治疗与组织或器官移植相关的免疫排斥反应方面，本发明的药物组合物可与已知用于抑制移植治疗中的免疫排斥反应的免疫抑制剂联合使用，从而可提高已知药物对移植排斥的抑制效应。
而且，通过使用本发明的用于鉴定能与AILIM或AILIM配体结合的物质的方法，有可能通过与AILIM或AILIM配体的结合来控制与AILIM和AILIM配体间作用有关的信号转导，这样就可以筛选和选择具有治疗上述各种疾病的潜在活性的药物制剂(合成的化学化合物和抗体)。
序列表说明文字
SEQ ID NO：1
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，NotI-T。
SEQ ID NO：2
其它信息：人工序列的描述：人工合成的接头序列，20adp。
SEQ ID NO：3
其它信息：人工序列的描述：人工合成的接头序列，24adp。
SEQ ID NO：4
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HIGLC。
SEQ ID NO：5
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，NHCc2。
SEQ ID NO：6
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，ExcellE。
SEQ ID NO：7
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，ck117。
SEQ ID NO：8
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，M13R。
SEQ ID NO：9
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，136H。
SEQ ID NO：10
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，138/9H。
SEQ ID NO：11
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，AILIMHC1。
SEQ ID NO：12
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc1。
SEQ ID NO：13
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc7。
SEQ ID NO：14
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc8。
SEQ ID NO：15
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc3。
SEQ ID NO：16
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc4。
SEQ ID NO：17
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc6。
SEQ ID NO：18
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HIGHC。
SEQ ID NO：19
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc9。
SEQ ID NO：20
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HCc5。
SEQ ID NO：21
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，polyA。
SEQ ID NO：22
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，AILIMLC1。
SEQ ID NO：23
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，AILIMLC2。
SEQ ID NO：24
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，LCc1。
SEQ ID NO：25
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，LCc2。
SEQ ID NO：26
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列，HIK。
SEQ ID NO：39
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列
SEQ ID NO：40
其它信息：人工序列的描述：人工合成的引物序列
                         序列表<110>日本烟草产业株式会社(Japan Tobacco，Inc.)<120>抗协同刺激信号转导分子AILIM的人单克隆抗体及其药物用途<130>J1-A0101Y1P<140><141><150>JP P2000-147116<151>2000-05-18<150>JP P2001-99508<151>2001-03-30<160>40<170>PatentIn 2.1版<210>1<211>45<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列NotI-T<220><221>primer_bind<222>(1)..(45)<400>1aactggaagc ttcagcggcc gcagagattt tttttttttt ttttt    45<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的接头序列，20adp<400>2cgtggtgtca tggcactgcg                                 20<210>3<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的接头序列，24adp<400>3aattcgcagt gccatgacac cacg                            24<210>4<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HIGLC<220><221>primer_bind<222>(1)..(23)<400>4gtctgctttg ctcagcgtca ggg                             23<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列NHCc2<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>5caccggttcg gggaagtagt c                               21<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列ExcellE<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>6ggtgacacta tagaatacag g                               21<210>7<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列ck117<220><221>primer_bind<222>(1)..(25)<400>7gcaggcacac aacagaggca gttcc                           25<210>8<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列M13R<220><221>primer_bind<222>(1)..(20)<400>8cacaggaaac agctatgacc                                 20<210>9<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列136H<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>9cctggacaag ggcttgagtg g                               21<210>10<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列138/9H<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>10acaggaaaag gtctggagtg g                               21<210>11<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列AILIMHC1<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>11acagtaatac acggccgtgt c                               21<210>12<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc1<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>12gactacttcc ccgaaccggt g                               21<210>13<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc7<220><221>primer_bind<222>(1)..(22)<400>13gtggcaggac cgtcagtctt cc                              22<210>14<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc8<220><221>primer_bind<222>(1)..(24)<400>14aagaggaaga ctgacggtcc tgcc                            24<210>15<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc3<220><221>primer_bind<222>(1)..(23)<400>15ccgttgtgca ccaggactgg ctg                             23<210>16<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc4<220><221>primer_bind<222>(1)..(23)<400>16tgcacttgta ctccttgccg ttc                             23<210>17<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc6<220><221>primer_bind<222>(1)..(23)<400>17cagccggaga acaac tacaa gac                            23<210>18<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HIGHC<220><221>primer_bind<222>(1)..(22)<400>18tcttgtagtt gttctccggc tg                              22<210>19<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc9<220><221>primer_bind<222>(1)..(22)<400>19tacttcccag gcacccagca tg                              22<210>20<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HCc5<220><221>primer_bind<222>(1)..(23)<400>20atgctgggtg cctgggaagt atg                             23<210>21<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列polyA<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>21tcaaactatc ggccttgctg g                               21<210>22<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列AILIMLC1<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>22tagcc tggta tcagcagaaa c                              21<210>23<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列AILIMLC2<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>23gtttctgctg ataccaggct a                               21<210>24<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列LCc1<220><221>primer_bind<222>(1)..(22)<400>24gcaccatctg tcttcatctt cc                              22<210>25<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列LCc2<220><221>primer_bind<222>(1)..(21)<400>25caaagagctt caacagggga g                               21<210>26<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列HIK<220><221>primer_bind<222>(1)..(20)<400>26aggctggaac tgaggagcag                                 20<210>27<211>1616<212>DNA<213>人(Homo sapiens)<220><221>5’UTR<222>(1)..(68)<220><221>CDS<222>(69)..(1481)<220><221>3’UTR<222>(1482)..(1616)<220><221>sig_peptide<222>(69)..(125)<400>27gaattcgcag tgccatgaca ccacgcatct gtcctctaga gaatcccctg agagctccgt 60tcctcacc atg gac tgg acc tgg agg atc ctc ttc ttg gtg gca gca gcc  110
     Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala
       1               5                  10aca gga gcc cac tcc cag gtg cag ctg gtg cag tct ggg gct gag gtg   158Thr Gly Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val15                  20                  25                  30aag aag cct ggg gcc tca gtg aag gtc tcc tgc aag gct tct gga tac   206Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
             35                  40                  45acc ttc acc ggc tac tat atg cac tgg gtg cga cag gcc cct gga caa   254Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
         50                  55                  60ggg ctt gag tgg atg gga tgg atc aac cct cac agt ggt ggc aca aac   302Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro His Ser Gly Gly Thr Asn
     65                  70                  75tat gca cag aag ttt cag ggc agg gtc acc atg acc agg gac acg tcc   350Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser
 80                  85                  90atc agc aca gcc tac atg gag ctg agc agg ctg aga tcc gac gac acg   398Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr95                 100                 105                 110gcc gtg tat tac tgt gcg agg acg tat tac tat gat agt agt ggt tat   446Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr
            115                 120                 125tac cat gat gct ttt gat atc tgg ggc caa ggg aca atg gtc acc gtc    494Tyr His Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val
        130                 135                 140tct tca gcc tcc acc aag ggc cca tcg gtc ttc ccc ctg gcg ccc tgc    542Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
    145                 150                 155tcc agg agc acc tcc gag agc aca gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag    590Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
160                 165                 170gac tac ttc ccc gaa ccg gtg acg gtg tcg tgg aac tca ggc gct ctg    638Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu175                 180                 185                 190acc agc ggc gtg cac acc ttc cca gct gtc cta cag tcc tca gga ctc    686Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
            195                 200                 205tac tcc ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc agc aac ttc ggc acc    734Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr
        210                 215                 220cag acc tac acc tgc aac gta gat cac aag ccc agc aac acc aag gtg    782Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
    225                 230                 235gac aag aca gtt gag cgc aaa tgt tgt gtc gag tgc cca ccg tgc cca    830Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
240                 245                 250gca cca cct gtg gca gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc    878Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro255                 260                 265                 270aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg    926Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
            275                 280                 285gtg gac gtg agc cac gaa gac ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg    974Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
        290                 295                 300gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag cca cgg gag gag cag    1022Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
    305                 310                 315ttc aac agc acg ttc cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtt gtg cac cag    1070Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
320                 325                 330gac tgg ctg aac ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc    1118Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly335                 340                 345                 350ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa acc aaa ggg cag ccc    1166Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
            355                 360                 365cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc    1214Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
        370                 375                 380aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tac ccc agc    1262Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
    385                 390                 395gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac    1310Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
400                 405                 410aag acc aca cct ccc atg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac    1358Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr415                 420                 425                 430agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc    1406Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
            435                 440                 445tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag    1454Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
        450                 455                 460agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga gtgccacggc cggcaagccc          150lSer Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    465             470ccgctcccca ggctctcggg gtcgcgtgag gatgcttggc acgtaccccg tgtacatact 1561tcccaggcac ccagcatgga aataaagcac ccagcgctgc cctggaaaaa aaaaa      1616<210>28<211>470<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>28Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly1               5                  10                  15Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
         20                  25                  30Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
     35                  40                  45Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
 50                  55                  60Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro His Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala65                  70                  75                  80Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser
             85                  90                  95Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
        100                 105                 110Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr His
    115                 120                 125Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
130                 135                 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145                 150                 155                 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            165                 170                 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        180                 185                 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    195                 200                 205Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
210                 215                 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225                 230                 235                 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            245                 250                 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
        260                 265                 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
    275                 280                 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290                 295                 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305                 310                 315                 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
            325                 330                 335Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
        340                 345                 350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
    355                 360                 365Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370                 375                 380Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile385                 390                 395                 400Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
            405                 410                 415Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
        420                 425                 430Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
    435                 440                 445Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450                 455                 460Ser Leu Ser Pro Gly Lys465                 470<210>29<211>974<212>DNA<213>人(Homo sapiens)<220><221>5’UTR<222>(1)..(38)<220><221>CDS<222>(39)..(749)<220><221>3’UTR<222>(750)..(974)<220><221>sig_peptide<222>(39)..(104)<400>29gaattcgcag tgccatgaca ccacggtcag gacacagc atg gac atg agg gtc ccc 56
                                      Met Asp Met Arg Val Pro
                                        1               5gct cag ctc ctg ggg ctc ctg ctg ctc tgg ttc cca ggt tcc aga tgc   104Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro Gly Ser Arg Cys
         10                  15                  20gac atc cag atg acc cag tct cca tct tcc gtg tct gca tct gta gga   152Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
     25                  30                  35gac aga gtc acc atc act tgt cgg gcg agt cag ggt att agc agg ttg   200Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Leu
 40                  45                  50tta gcc tgg tat cag cag aaa cca ggg aaa gcc cct aaa ctc ctg atc   248Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile55                  60                  65                  70tat gtt gca tcc agt ttg caa agt ggg gtc cca tca agg ttc agc ggc   296Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
             75                  80                  85agt gga tct ggg aca gat ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag cct   344Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
         90                  95                 100gaa gat ttt gca act tac tat tgt caa cag gct aac agt ttc ccg tgg   392Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp
    105                 110                 115acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cga act gtg gct gca   440Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
120                 125                 130cca tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa tct gga   488Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly135                 140                 145                 150act gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc   536Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
            155                 160                 165aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag   584Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
        170                 175                 180gag agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc   632Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
    185                 190                 195agc acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac   680Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
200                 205                 210gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gte aca aag agc   728Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser215                 220                 225                 230ttc aac agg gga gag tgt tag agggagaagt gcccccacct gctcctcagt      779Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            235tccagcctga ccccctccca tcctttggcc tctgaccctt tttccacagg ggacctaccc 839ctattgcggt cctccagctc atctttcacc tcacccccct cctcctcctt ggctttaatt 899atgctaatgt tggaggagaa tgaataaata aagtgaatct ttgcaaaaaa aaaaaaaaaa 959aatctctgcg gccgc                                                  974<210>30<211>236<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>30Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp1               5                  10                  15Phe Pro Gly Ser Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
         20                  25                  30Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
     35                  40                  45Gln Gly Ile Ser Arg Leu Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
 50                  55                  60Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val65                  70                  75                  80Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
             85                  90                  95Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
        100                 105                 110Ala Ash Ser Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
    115                 120                 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130                 135                 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145                 150                 155                 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
            165                 170                 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
        180                 185                 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
    195                 200                 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210                 215                 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225                 230                 235<210>31<211>1708<212>DNA<213>人(Homo sapiens)<220><221>5’UTR<222>(1)..(93)<220><221>CDS<222>(94)..(1506)<220><221>3’UTR<222>(1507)..(1708)<220><221>sig_peptide<222>(94)..(150)<400>31gaattcgcag taccatgaca ccacgggagc cccagccttg ggattcccaa gtgtttgtaa 60tcagtgatca ggactgagca cacaggactc acc atg gag ttg ggg ctg agc tgg  114
                                 Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp
                                   1               5gtt ttc ctt gtt gct ata tta gaa ggt gtc cag tgt gag gtg cag ctg   162Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly Val Gln Cys Glu Val Gln Leu
     10                  15                  20gtg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg tcc etg aga ctc   210Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
 25                  30                  35tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt agc tac gac atg cac tgg   258Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met His Trp40                  45                  50                  55gtc cgc caa gct aca gga aaa ggt ctg gag tgg gtc tca gct att ggt   306Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Gly
             60                  65                  70act gct ggt gac aca tac tat cca ggc tcc gtg aag ggc cga ttc acc   354Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
         75                  80                  85atc tcc aga gaa aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt caa atg aac agc   402Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
     90                  95                 100ctg aga gcc ggg gac acg gct gtg tat tac tgt gta aga gat aat agg   450Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Asn Arg
105                 110                 115aag gtg acc cac gag cac tac tac tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc   498Lys Val Thr His Glu His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly120                 125                 130                 135caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca gcc tcc acc aag ggc cca tcg   546Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
            140                 145                 150gtc ttc ccc ctg gcg ccc tgc tcc agg agc acc tcc gag agc aca gcg   594Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
        155                 160                 165gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg acg gtg   642Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
    170                 175                 180tcg tgg aac tca ggc gct ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc cca gct   690Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
185                 190                 195gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg acc gtg   738Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val200                 205                 210                 215ccc tcc agc aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gta gat cac   786Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
            220                 225                 230aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aca gtt gag cgc aaa tgt tgt   834Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
        235                 240                 245gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga ccg tca gtc   882Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
    250                 255                 260ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg acc   930Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
265                 270                 275cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac ccc gag   978Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu280                 285                 290                 295gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag   1026Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
            300                 305                 310aca aag cca cgg gag gag cag ttc aac agc acg ttc cgt gtg gtc agc   1074Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
        315                 320                 325gtc ctc acc gtt gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag gag tac aag   1122Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
    330                 335                 340tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc   1170Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
345                 350                 355tcc aaa acc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc   1218Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro360                 365                 370                 375cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg   1266Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
            380                 385                 390gtc aaa ggc ttc tac ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat   1314Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
        395                 400                 405ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc aca cct ccc atg ctg gac tcc   1362Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
    410                 415                 420gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg   1410Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
425                 430                 435tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg   1458Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu440                 445                 450                 455cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga   1506His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
            460                 465                 470gtgccacggc cggcaagccc ccgctcccca ggctctcggg gtcgcgtgag gatgcttggc 1566acgtaccccg tgtacatact tcccaggcac ccagcatgga aataaagcac ccagcgctgc 1626cctgggcccc tgcnaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1686aaaaaaaaat ctctgcggcc gc                                          1708<210>32<211>470<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>32Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly1               5                  10                  15Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
         20                  25                  30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
     35                  40                  45Ser Ser Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu
 50                  55                  60Glu Trp Val Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly65                  70                  75                  80Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Ash Ala Lys Ash Ser
             85                  90                  95Leu Tyr Leu Gln Met Ash Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr
        100                 105                 110Tyr Cys Val Arg Asp Asn Arg Lys Val Thr His Glu His Tyr Tyr Tyr
    115                 120                 125Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
130                 135                 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145                 150                 155                 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            165                 170                 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        180                 185                 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    195                 200                 205Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
210                 215                 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225                 230                 235                 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            245                 250                 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
        260                 265                 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
    275                 280                 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290                 295                 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305                 310                 315                 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
            325                 330                 335Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
        340                 345                 350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
    355                 360                 365Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370                 375                 380Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile385                 390                 395                 400Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
            405                 410                 415Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
        420                 425                 430Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
    435                 440                 445Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450                 455                 460Ser Leu Ser Pro Gly Lys465                 470<210>33<211>948<212>DNA<213>人(Homo sapiens)<220><221>5’UTR<222>(1)..(27)<220><221>CDS<222>(28)..(738)<220><221>3’UTR<222>(739)..(948)<220><221>sig_peptide<222>(28)..(87)<400>33gaattcgcag tgccatgaca ccacgcc atg gaa acc cca gcg cag ctt ctc ttc 54
                          Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe
                            1               5ctc ctg cta ctc tgg ctc cca gat acc acc gga gaa att gtg ttg acg   102Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr10                  15                  20                  25cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg gaa aga gcc acc ctc   150Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu
             30                  35                  40tcc tgc agg gcc agt cag aat att aga agc agc tac tta gcc tgg tac   198Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr
         45                  50                  55cag cag aaa cct ggc cag gct ccc ggg ctc ctc atc tat ggt gca tcc   246Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Gly Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser
     60                  65                  70agc agg gcc act ggc atc cca gac agg ttc agt ggc agt ggg tct ggg   294Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
 75                  80                  85aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag cct gaa gat ttt gca   342Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala90                  95                 100                 105gtg tat tac tgt cag cag ttt ggt agc tca oct atg tgc agt ttt ggc   390Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro Met Cys Ser Phe Gly
            110                 115                 120cag ggg acc aag ctg gag atc aaa cga act gtg gct gca cca tct gtc   438Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
        125                 130                 135ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa tct gga act gcc tct   486Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
    140                 145                 150gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc aaa gta cag   534Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
155                 160                 165tgg aag gtg gat aac gcc crc caa tcg ggt aac tcc cag gag agt gtc   582Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val170                 175                 180                 185aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc agc acc ctg   630Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
            190                 195                 200acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gcc tgc gaa   678Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
        205                 210                 215gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc ttc aac agg   726Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
    220                 225                 230gga gag tgt tag agggagaant gcccccacct gctcctcagt tccagcctga       778Gly Glu Cys
235ccccctccca tcctttggcc tctgaccctt tttccacagg ggacctaccc ctattgcggt 838cctccagctc atctttcacc tcacccccct cctcctcctt ggctttaatt atgctaatgt 898tggaggagaa tgaataaata aagtgaatct ttgcacctgt gaaaaaaaaa            948<210>34<211>236<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>34Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro1               5                  10                  15Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser
         20                  25                  30Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn
     35                  40                  45Ile Arg Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
 50                  55                  60Pro Gly Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro65                  70                  75                  80Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
             85                  90                  95Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
        100                 105                 110Gly Ser Ser Pro Met Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
    115                 120                 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130                 135                 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Ash Ash145                 150                 155                 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
            165                 170                 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
        180                 185                 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
    195                 200                 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210                 215                 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225                 230                 235<210>35<211>1673<212>DNA<213>人(Homo sapiens)<220><221>5’UTR<222>(1)..(95)<220><221>CDS<222>(96)..(1508)<220><221>3’UTR<222>(1509)..(1673)<220><221>sig_peptide<222>(96)..(152)<400>35gaattcgcag tgccatgaca ccacggtgga gccccagcct tgggattccc aagtgtttgt 60attcagtgat caggactgaa cacacaggac tcacc atg gag ttg ggg ctg agc    113
                                   Met Glu Leu Gly Leu Ser
                                     1               5tgg gtt ttc ctt gtt gct ata tta gaa ggt gtc cag tgt gag gtg cag   161Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly Val Gln Cys Glu Val Gln
         10                  15                  20ctg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg tcc ctg aga   209Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
     25                  30                  35ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt agc tac gac atg cac   257Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met His
 40                  45                  50tgg gtc cgc caa gct aca gga aaa ggt ctg gag tgg gtc tca gct att   305Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile55                  60                  65                  70ggt act gct ggt gac aca tac tat cca ggc tcc gtg aag ggc cga ttc   353Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly Arg Phe
             75                  80                  85acc atc tcc aga gaa aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt caa atg aac   401Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn
         90                  95                 100agc ctg aga gcc ggg gac acg gct gtg tat tac tgt gta aga gat aag   449Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Lys
    105                 110                 115agg acg gtg acc cac gag cac tac tac tac tac ggt atg gac gtc tgg   497Arg Thr Val Thr His Glu His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
120                 125                 130ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca gcc tcc acc aag ggc cca   545Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro135                 140                 145                 150tcg gtc ttc ccc ctg gcg ccc tgc tcc agg agc acc tcc gag agc aca   593Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
            155                 160                 165gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg acc   641Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
        170                 175                 180gtg tcg tgg aac tca ggc gct ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc cca   689Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
    185                 190                 195gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg acc   737Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
200                 205                 210gtg ccc tcc agc aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gta gat   785Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp215                 220                 225                 230cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aca gtt gag cgc aaa tgt   833His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
            235                 240                 245tgt gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga ccg tca   881Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
        250                 255                 260gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc cgg   929Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
    265                 270                 275acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac ccc   977Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
280                 285                 290gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc   1025Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala295                 300                 305                 310aag aca aag cca cgg gag gag cag ttc aac agc acg ttc cgt gtg gtc   1073Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
            315                 320                 325agc gtc ctc acc gtt gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag gag tac   1121Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
        330                 335                 340aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc   1169Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
    345                 350                 355atc tcc aaa acc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg   1217Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
360                 365                 370ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc   1265Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys375                 380                 385                 390ctg gtc aaa ggc ttc tac ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc   1313Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
            395                 400                 405aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc aca cct ccc atg ctg gac   1361Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
        410                 415                 420tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc   1409Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
    425                 430                 435agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct   1457Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
440                 445                 450ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa   1505Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys455                 460                 465                 470tga gtgccacggc cggcaagccc ccgctcccca ggctctcggg gtcgcgtgag        1558gatgcttggc acgtaccccg tgtacatact tcccaggcac ccagcatgga aataaagcac 1618ccagcgctgc cctgggcccc tgcgaaaaaa aaaaaaaaaa aatctctgcg gccgc      1673<210>36<211>470<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>36Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly1               5                  10                  15Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
         20                 25                  30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
     35                  40                  45Ser Ser Tyr Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu
 50                  55                  60Glu Trp Val Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly65                  70                  75                  80Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser
             85                  90                  95Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr
        100                 105                 110Tyr Cys Val Arg Asp Lys Arg Thr Val Thr His Glu His Tyr Tyr Tyr
    115                 120                 125Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
130                 135                 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145                 150                 155                 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            165                 170                 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        180                 185                 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    195                 200                 205Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
210                 215                 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225                 230                 235                 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            245                 250                 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
        260                 265                 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
    275                 280                 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290                 295                 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305                 310                 315                 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
            325                 330                 335Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
        340                 345                  350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
    355                 360                 365Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370                 375                 380Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile385                 390                 395                 400Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
            405                 410                 415Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
        420                 425                 430Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
    435                 440                 445Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450                 455                 460Ser Leu Ser Pro Gly Lys465                 470<210>37<211>970<212>DNA<213>人(Homo sapiens)<220><221>5’UTR<222>(1)..(32)<220><221>CDS<222>(33)..(743)<220><221>3’UTR<222>(744)..(970)<220><221>sig_peptide<222>(33)..(92)<400>37gaattcgcag tgccatgaca ccacggggaa cc atg gaa acc cca gcg cag ctt   53
                                Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu
                                  1               5ctc ttc ctc ctg cta ctc tgg ctc cca gat acc acc gga gaa att gtg   101Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val
     10                  15                  20ttg acg cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg gaa aga gcc   149Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
 25                  30                  35acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt att agc agc agc tcc tta gcc   197Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Ser Leu Ala40                  45                  50                  55tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc ggg ctc ctc atc ttt ggt   245Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Gly Leu Leu Ile Phe Gly
             60                  65                  70gca tcc agc agg gcc act ggc atc cca gac agg ttc agt ggc agt ggg   293Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
         75                  80                  85tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag cct gaa gat   341Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp
     90                  95                 100ttt gca gtg tat tac tgt cag cag ttt ggt agc tca cct atg tgc agt   389Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro Met Cys Ser
105                 110                 115ttt ggc cag ggg acc aag ctg gag atc aaa cga act gtg gct gca cca   437Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro120                 125                 130                 135tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa tct gga act   485Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
            140                 145                 150gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc aaa   533Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
        155                 160                 165gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag gag   581Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
    170                 175                 180agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc agc   629Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
185                 190                 195acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gcc   677Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala200                 205                 210                 215tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc ttc   725Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
            220                 225                 230aac agg gga gag tgt tag agggagaagt gcccccacct gctcctcagt          773Asn Arg Gly Glu Cys
        235tccagcctga ccccctccca tcctttggcc tctgaccctt tttccacagg ggacctaccc 833ctattgcggt cctccagctc atctttcacc tcacccccct cctcctcctt ggctttaatt 893atgctaatgt tggaggagaa tgaataaata aagtgaatct ttgcaaaaaa aaaaaaaaaa 953aaaatctctg cggccgc                                                970<210>38<211>236<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>38Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro1               5                  10                  15Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser
         20                  25                  30Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
     35                  40                  45Ile Ser Ser Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
 50                  55                  60Pro Gly Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro65                  70                  75                  80Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser GIy Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
             85                  90                  95Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
        100                 105                 110Gly Ser Ser Pro Met Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
    115                 120                 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130                 135                 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145                 150                 155                 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
            165                 170                 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
        180                 185                 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
    195                 200                 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210                 215                 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225                 230                 235<210>39<211>35<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列<220><221>primer_bind<222>(1)..(35)<400>39gaggtctccg ccctcgagat gcggctgggc agtcc                35<210>40<211>33<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述：人工合成的引物序列<220><221>primer_bind<222>(1)..(33)<400>40cacaggacag ccaggggatc ccacgtggcc gcg                  33

Claims (108)

1.一种与AILIM结合的人抗体。
2.权利要求1人抗体，其中所述AILIM来自人。
3.与AILIM或其一部分结合的人单克隆抗体。
4.权利要求3的人单克隆抗体或其一部分，其中所述AILIM得自人。
5.权利要求3或4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有可抑制由AILIM介导的将信号转导到细胞内的活性。
6.权利要求5的人单克隆抗体或其一部分，其中所述抑制信号转导的活性是下列的(a)或(b)：
(a)抑制AILIM表达细胞增殖的活性，或
(b)抑制从AILIM表达细胞产生细胞因子的活性。
7.权利要求6的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是Th1-型或Th2-型T细胞产生的细胞因子之一。
8.权利要求7的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是干扰素γ或白细胞介素4。
9.权利要求5的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有阻止混合淋巴细胞反应的活性。
10.权利要求3或4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有诱导由AILIM介导的信号转导进入细胞的活性。
11.权利要求10的人单克隆抗体或其一部分，其中所述诱导信号转导的活性是下列的(a)或(b)：
(a)诱导AILIM表达细胞增殖的活性，或
(b)诱导从AILIM表达细胞产生细胞因子的活性。
12.权利要求11的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是由Th1-型或Th2-型T细胞产生的细胞因子之一。
13.权利要求12的人单克隆抗体或其一部分，其中所述细胞因子是干扰素γ或白细胞介素4。
14.权利要求3或4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有诱导对AILIM表达细胞的抗体依赖性细胞毒活性，和/或AILIM表达细胞的免疫胞解或凋亡的活性。
15.权利要求3或4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述单克隆抗体与AILIM间结合速度常数(ka)是1.0×103(1/M.秒)或更多。
16.权利要求15的人单克隆抗体或其一部分，其中所述结合速度常数(ka)是1.0×104(1/M.秒)或更多。
17.权利要求16的人单克隆抗体或其一部分，其中所述结合速度常数(ka)是1.0×105(1/M.秒)或更多。
18.权利要求3或4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述单克隆抗体与AILIM间解离速度常数(kd)是1.0×10-3(1/秒)或更少。
19.权利要求18的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离速度常数(kd)是1.0×10-4(1/秒)或更少。
20.权利要求19的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离速度常数(kd)是1.0×10-5(1/秒)或更少。
21.权利要求3或4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述单克隆抗体与AILIM间解离常数(Kd)是1.0×10-6(M)或更少。
22.权利要求21的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离常数(Kd)是1.0×10-7(M)或更少。
23.权利要求22的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离常数(Kd)是1.0×10-8(M)或更少。
24.权利要求23的人单克隆抗体或其一部分，其中所述解离常数(Kd)是1.0×10-9(M)或更少。
25.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体重链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白重链V基因片段1-02或3-13。
26.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体轻链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白轻链V基因片段L5或A27。
27.权利要求25或26的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体重链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白重链V基因片段1-02或3-13，其中编码所述人单克隆抗体轻链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白轻链V基因片段L5或A27。
28.权利要求27的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体重链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白重链V基因片段1-02，编码所述人单克隆抗体轻链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白轻链V基因片段L5。
29.权利要求27的人单克隆抗体或其一部分，其中编码所述人单克隆抗体重链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白重链V基因片段3-13，编码所述人单克隆抗体轻链可变区的V区DNA得自人免疫球蛋白轻链V基因片段A27。
30.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体重链可变区具有由下列(a)到(f)中任一项定义的氨基酸序列：
(a)含有SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，
(b)含有SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(c)含有SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列，
(d)含有SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(e)含有SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列，或
(f)含有SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸。
31.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的重链多肽具有由下列(a)到(f)中任一项定义的氨基酸序列：
(a)含有SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(b)含有SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(c)含有SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列，
(d)含有SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(e)含有SEQ ID NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列，或
(f)含有SEQ ID NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸。
32.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的轻链可变区具有由下列(a)到(f)中任一项定义的氨基酸序列：
(a)含有SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列，
(b)含有SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(c)含有SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列，
(d)含有SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(e)含有SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列，或
(f)含有SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸。
33.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体的轻链多肽具有由下列(a)到(f)中任一项定义的氨基酸序列：
(a)含有SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列，
(b)含有SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(c)含有SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列，
(d)含有SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸，
(e)含有SEQ IDNO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列，或
(f)含有SEQ ID NO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列，其中有一或多个氨基酸被缺失或取代，或已插入或添加一或多个氨基酸。
34.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下列(a)和(b)的特征：
(a)一种重链可变区具有含SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列，
(b)一种轻链可变区具有含SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列。
35.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下列(a)和(b)的特征：
(a)一种重链多肽具有SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列。
(b)一种轻链多肽具有SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列。
36.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下列(a)和(b)的特征：
(a)一种重链可变区具有含SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列。
(b)一种轻链可变区具有含SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列。
37.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下列(a)和(b)的特征：
(a)一种重链多肽具有含SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列。
(b)一种轻链多肽具有含SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列。
38.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下列(a)和(b)的特征：
(a)一种重链可变区具有含SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列。
(b)一种轻链可变区具有含SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列。
39.权利要求4的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体具有下列(a)和(b)的特征：
(a)一种重链多肽具有含SEQ ID NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列。
(b)一种轻链多肽具有含SEQ ID NO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列。
40.权利要求3到29任一项的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体是得自能够产生人抗体的转基因非人哺乳动物的单克隆抗体。
41.权利要求40的人单克隆抗体或其一部分，其中所述人单克隆抗体是通过用AILIM表达细胞，从所述细胞得到的膜级分，构成AILIM的整个分子或其一部分，或编码AILIM的基因或其一部分免疫能够产生人抗体的转基因非人哺乳动物而得到的。
42.权利要求40或41的人单克隆抗体或其一部分，其中所述转基因非人哺乳动物是转基因小鼠。
43.编码选自下列(a)到(f)的多肽的DNA或其一部分：
(a)含SEQ ID NO：28的20-117位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(b)含SEQ ID NO：30的23-116位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(c)含SEQ ID NO：32的20-116位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(d)含SEQ ID NO：34的21-116位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(e)含SEQ ID NO：36的20-116位氨基酸的氨基酸序列的多肽，和
(f)含SEQ ID NO：38的21-116位氨基酸的氨基酸序列的多肽。
44.编码选自下列由(a)到(f)的多肽的DNA或其一部分：
(a)含SEQ ID NO：28的20-470位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(b)含SEQ ID NO：30的23-236位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(c)含SEQ ID NO：32的20-470位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(d)含SEQ ID NO：34的21-236位氨基酸的氨基酸序列的多肽，
(e)含SEQ ID NO：36的20-470位氨基酸的氨基酸序列的多肽，和
(f)含SEQ ID NO：38的21-236位氨基酸的氨基酸序列的多肽。
45.选自下列由(a)到(f)的DNA或其一部分：
(a)含SEQ ID NO：27的126-419位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：29的105-386位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(c)含SEQ ID NO：31的151-441位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(d)含SEQ ID NO：33的88-375位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(e)含SEQ ID NO：35的153-443位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(f)含SEQ ID NO：37的93-380位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
46.选自下列由(a)到(f)的DNA或其一部分：
(a)含SEQ ID NO：27的69-1481位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：29的39-749位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(c)含SEQ ID NO：31的94-1506位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(d)含SEQ ID NO：33的28-738位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(e)含SEQ ID NO：35的96-1508位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(f)含SEQ ID NO：37的33-743位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
47.含有权利要求43到46任一项的DNA的载体。
48.权利要求47的载体，其包含下列(a)到(c)任一项的DNA：
(a)含SEQ ID NO：27的126-419位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：31的151-441位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(c)含SEQ ID NO：35的153-443位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
49.权利要求47的载体，其包含下列(a)到(c)任一项的DNA：
(a)含SEQ ID NO：27的69-1481位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：31的94-1506位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(c)含SEQ ID NO：35的96-1508位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
50.权利要求47的载体，其包含下列(a)到(c)任一项的DNA：
(a)含SEQ ID NO：29的105-386位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：33的88-375位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(c)含SEQ ID NO：37的93-380位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
51.权利要求47的载体，其包含下列(a)到(c)任一项的DNA：
(a)含SEQ ID NO：29的39-749位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：33的28-738位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(c)含SEQ ID NO：37的33-743位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
52.权利要求47的载体，其包含下列(a)和(b)的DNA：
(a)含SEQ ID NO：27的126-419位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：29的105-386位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
53.权利要求47的载体，其包含下列(a)和(b)的DNA：
(a)含SEQ ID NO：27的69-1481位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：29的39-749位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
54.权利要求47的载体，其包含下列(a)和(b)的DNA：
(a)含SEQ ID NO：31的151-441位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：33的88-375位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
55.权利要求47的载体，其包含下列(a)和(b)的DNA：
(a)含SEQ ID NO：31的94-1506位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：33的28-738位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
56.权利要求47的载体，其包含下列(a)和(b)的DNA：
(a)含SEQ ID NO：35的153-443位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：37的93-380位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
57.权利要求47的载体，其包含下列(a)和(b)的DNA：
(a)含SEQ ID NO：35的96-1508位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)含SEQ ID NO：37的33-743位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
58.生产权利要求3到42任一项的人单克隆抗体的细胞。
59.权利要求58的细胞，其中所述细胞是将得自能产生所述人单克隆抗体的哺乳动物的B细胞与得自哺乳动物的骨髓瘤细胞融合而得的融合细胞。
60.通过转移下列(a)中所述DNA或含该DNA的载体，下列(b)中所述DNA或含此DNA的载体，或下列(a)和(b)中所述DNA或同时含此两种DNA的载体而转化的基因重组宿主：
(a)编码与人AILIM结合的单克隆抗体的重链多肽或其一部分的DNA；或
(b)编码与人AILIM结合的单克隆抗体的轻链多肽或其一部分的DNA。
61.权利要求60的基因重组宿主，其中所述单克隆抗体是人单克隆抗体。
62.权利要求60或61的基因重组宿主，其中所述宿主是哺乳动物细胞。
63.权利要求60或61的基因重组宿主，其中所述宿主是哺乳动物受精卵。
64.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链多肽是选自下列(a)到(c)之一的重链多肽：
(a)含有SEQ ID NO：28的20到117位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：32的20到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(c)含有SEQ ID NO：36的20到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽。
65.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链多肽是选自下列(a)到(c)之一的重链多肽：
(a)含有SEQ ID NO：28的20到470位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：32的20到470位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(c)含有SEQ ID NO：36的20到470位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽。
66.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述轻链多肽是选自下列(a)到(c)之一的轻链多肽：
(a)含有SEQ ID NO：30的23到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：34的21到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(c)含有SEQ ID NO：38的21到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽。
67.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述轻链多肽是选自下列(a)到(c)之一的轻链多肽：
(a)含有SEQ ID NO：30的23到236位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽，
(b)含有SEQ IDNO：34的21到236位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽，
(c)含有SEQ IDNO：38的21到236位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
68.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别由下列(a)和(b)定义：
(a)含有SEQ ID NO：28的20到117位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：30的23到116位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
69.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别由下列(a)和(b)定义：
(a)含有SEQ ID NO：28的20到470位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：30的23到236位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
70.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别由下列(a)和(b)定义：
(a)含有SEQ ID NO：32的20到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：34的21到116位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
71.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别由下列(a)和(b)定义：
(a)含有SEQ ID NO：32的20到470位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：34的21到236位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
72.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别由下列(a)和(b)定义：
(a)含有SEQ ID NO：36的20到116位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：38的21到116位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
73.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中所述重链和轻链多肽分别由下列(a)和(b)定义：
(a)含有SEQ ID NO：36的20到470位氨基酸的氨基酸序列的重链多肽，
(b)含有SEQ ID NO：38的21到236位氨基酸的氨基酸序列的轻链多肽。
74.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下列(a)到(c)任一项定义的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：27的126到419位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：31的151到441位核苷酸的核苷酸序列的DNA，和
(c)包含SEQ ID NO：35的153到443位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
75.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下列(a)到(c)任一项定义的DNA：
(a)包含SEQ ID N0：27的69到1481位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ IDNO：31的94到1506位核苷酸的核苷酸序列的DNA，和
(c)包含SEQ ID NO：35的96到1508位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
76.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述轻链多肽的DNA是下列(a)到(c)任一项定义的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：29的105到386位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：33的88到375位核苷酸的核苷酸序列的DNA，和
(c)包含SEQ ID NO：37的93到380位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
77.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述轻链多肽的DNA是下列(a)到(c)任一项定义的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：29的39到749位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：33的28到738位核苷酸的核苷酸序列的DNA，和
(c)包含SEQ ID NO：37的33到743位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
78.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下述(a)的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下述(b)的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：27的126到419位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：29的105到386位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
79.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下述(a)的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下述(b)的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：27的69到1481位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：29的39到749位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
80.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下述(a)的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下述(b)的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：31的151到441位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：33的88到375位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
81.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下述(a)的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下述(b)的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：31的94到1506位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：33的28到738位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
82.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下述(a)的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下述(b)的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：35的153到443位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：37的93到380位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
83.权利要求60到63任一项的基因重组宿主，其中编码所述重链多肽的DNA是下述(a)的DNA，编码所述轻链多肽的DNA是下述(b)的DNA：
(a)包含SEQ ID NO：35的96到1508位核苷酸的核苷酸序列的DNA，
(b)包含SEQ ID NO：37的33到743位核苷酸的核苷酸序列的DNA。
84.权利要求60到62任一项，或权利要求64到83任一项的基因重组宿主(排除所述宿主是受精卵的情况)产生的人单克隆抗体或其一部分。
85.包含权利要求1或2的人抗体和可药用载体的药用组合物。
86.包含权利要求3到42任一项的人单克隆抗体或其一部分和可药用载体的药用组合物。
87.包含权利要求84的人单克隆抗体或其一部分和可药用载体的药用组合物。
88.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于抑制由AILIM介导的信号转导进入细胞。
89.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于阻止AILIM表达细胞的增殖。
90.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于阻止从AILIM表达细胞产生细胞因子。
91.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于诱导由AILIM介导的信号转导进入细胞。
92.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于诱导AILIM表达细胞的增殖。
93.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于诱导从AILIM表达细胞产生细胞因子。
94.权利要求85到87任一项的药用组合物，其中所述药用组合物用于诱导对AILIM表达细胞的抗体依赖性细胞毒活性，和/或AILIM表达细胞的免疫胞解或凋亡。
95.用于阻止，治疗或预防迟发型变态反应的药用组合物，其包含具有调节由AILIM介导的信号转导的活性的物质，以及可药用的载体。
96.权利要求95的药用组合物，其中所述物质是蛋白物质。
97.权利要求96的药用组合物，其中所述蛋白物质选自下列：
(a)与AILIM或其一部分结合的抗体；
(b)包含AILIM胞外区的全部或一部分的多肽；
(c)包含AILIM胞外区的全部或一部分，以及免疫球蛋白重链的恒定区的全部或一部分的融合多肽；和
(d)与AILIM结合的多肽。
98.权利要求97的药用组合物，其中与AILIM结合的所述抗体是权利要求1或2的人抗体。
99.权利要求97的药用组合物，其中与AILIM结合的所述抗体是权利要求3到42任一项的人单克隆抗体。
100.权利要求97的药用组合物，其中所述抗AILIM抗体是权利要求84的人单克隆抗体。
101.权利要求95的药用组合物，其中所述物质是非蛋白物质。
102.权利要求101的药用组合物，其中所述非蛋白物质是DNA，RNA，或化学合成的化合物。
103.鉴定与AILIM或AILIM配体结合的物质的方法，包括下列步骤：
(a)制备不溶性载体，AILIM的整个胞外区或其一部分固定于该载体上；
(b)制备包含AILIM配体的整个胞外区或其一部分的多肽，用能发出可检测信号的标记物质对其进行标记；
(c)将步骤(a)中不溶性载体与步骤(b)中的多肽反应；
(d)将步骤(a)中不溶性载体，步骤(b)中多肽以及所述物质以任意次序相互反应；
(e)分别检测步骤(c)产生的复合物中所述标记物质发出的信号，以及步骤(d)产生的复合物中所述标记物质发出的信号；然后
(f)对比步骤(e)中检测到的各个信号的大小。
104.鉴定与AILIM或AILIM配体结合的物质的方法，包括下列步骤：
(a)制备不溶性载体，AILIM配体的整个胞外区或其一部分固定于该载体上；
(b)制备包含AILIM的整个胞外区或其一部分的多肽，用能发出可检测信号的标记物质对其进行标记。
(c)将步骤(a)中不溶性载体与步骤(b)中的多肽反应；
(d)将步骤(a)中不溶性载体，步骤(b)中多肽以及所述物质以任意次序相互反应；
(e)分别检测步骤(c)产生的复合物中所述标记物质发出的信号，以及步骤(d)产生的复合物中所述标记物质发出的信号；然后
(f)对比步骤(e)中检测到的各个信号的大小。
105.权利要求103或104的方法，其中包含AILIM的整个胞外区或其一部分的所述多肽是包含AILIM的整个胞外区或其一部分，以及免疫球蛋白重链恒定区的全部或其一部分的多肽的融合多肽。
106.权利要求103或104的方法，其中包含AILIM配体的整个胞外区或其一部分的所述多肽是包含AILIM配体的整个胞外区或其一部分，以及免疫球蛋白重链恒定区的全部或其一部分的多肽的融合多肽。
107.权利要求103到106任一项的方法，其中所述AILIM是人AILIM。
108.权利要求103到107任一项的方法，其中所述AILIM配体是人AILIM配体。
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