JP3521382B2 - 細胞間接着及びシグナル伝達を媒介する細胞表面分子 - Google Patents

細胞間接着及びシグナル伝達を媒介する細胞表面分子

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、哺乳動物の新規な
細胞表面分子、該分子を構成するポリペプチド及びその
断片、該ポリペプチド断片と免疫グロブリン断片からな
る融合ポリペプチド、該ポリペプチド及び該断片をコー
ドする遺伝子、該遺伝子を含むベクター、該ベクターが
導入された形質転換体、該ポリペプチド若しくは該ポリ
ペプチドにより構成される細胞表面分子反応性を有する
抗体、該抗体を産生するハイブリドーマ、該ポリペプチ
ド断片若しくは該融合ポリペプチドを含んでなる医薬組
成物、該抗体を含有してなる医薬組成物、トランスジェ
ニックマウス、並びにノックアウトマウスに関する。
【０００２】
【従来の技術】哺乳動物の生体は、体内に侵入した病原
微生物（ウイルス、細菌、寄生虫など）や外来異物など
（以下、併せて「抗原」と呼ぶ。）を排除しようとする
免疫応答システムを有する。その１つは、自然免疫応答
システムと呼ばれ、他の１つは獲得免疫応答システムと
呼ばれるものである。前者は、食細胞（多形核白血球、
単球、マクロファージなど）による貪食、ナチュラルキ
ラー（ＮＫ）細胞による攻撃、及び補体による抗原のオ
プソニン化などのような非特異的な認識による排除機構
である。後者の獲得免疫応答システムは、該抗原に対す
る特異性を獲得（活性化）したリンパ球（主にＴ細胞、
Ｂ細胞）による排除機構である。抗原特異性を獲得した
Ｂ細胞は、該抗原に特異的な抗体を産生することにより
細胞外に存在する該抗原を攻撃する。抗原特異性を獲得
（活性化）したＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞と細胞傷害性
Ｔ細胞（cytotoxic T cell; cytotoxic lymphocyte;
CTL）に分類され、前者はＢ細胞の分化や抗体の産生を
調節するとともに食細胞と協同して該抗原を破壊する。
後者は、自らウイルス感染細胞などを攻撃する（実験医
学（別冊）・「Bio Science用語ライブラリー［免
疫］」、羊土社、p.14-17、1995）。
【０００３】このＴ細胞による抗原特異性の獲得（活性
化）は、Ｔ細胞が、マクロファージ、Ｂ細胞あるいは樹
状細胞などの抗原提示細胞（antigen-presenting cell
s: APC）により提示される抗原を認識することにより開
始される。抗原提示細胞は、取り込んだ抗原をプロセッ
シング（加工）し、この加工された抗原を主要組織適合
性抗原複合体（MHC）に結合させて抗原提示する。Ｔ細
胞は、抗原提示細胞により提示された該加工抗原を、そ
の細胞膜表面に有するＴ細胞受容体（TcR）とＣＤ３抗
原との複合体（TcR/CD3複合体）を通じて認識すること
で細胞の活性化（特異性の獲得）のための第１のシグナ
ルを受ける。
【０００４】しかしながら、このTcR/CD3複合体を介し
た第１シグナルだけでは、Ｔ細胞の十分な活性化が起こ
らないだけでなく、その後に受ける如何なる刺激に対し
ても反応しなくなる不応答状態（unresponsiveness）ま
たはクローン麻痺（clonal anergy）と呼ばれる状態に
陥る。Ｔ細胞が活性化され抗原特異的なＴ細胞クローン
に分化、増殖するためにはインターロイキン−２（IL-
2）の自己分泌（オートクリン；autocrine）が必要であ
るが、クローン麻痺の状態ではIL-2が産生及び細胞分裂
が起こらず、Ｔ細胞が不活性化された状態となる。即
ち、IL-2などのサイトカインの産生を伴うＴ細胞の活性
化には、TcR/CD3複合体を介した第１シグナルに引き続
く第２のシグナルを必要とする。この第２のシグナルは
コスティミュレイトリーシグナル（副刺激シグナル；co
stimulatory signal）と呼ばれる。
【０００５】Ｔ細胞は、Ｔ細胞表面上のTcR/CD3複合体
とは別の分子を介して抗原提示細胞上のMHCとは別の分
子と相互作用（細胞間接着）することによりこの第２の
シグナルを受けとり細胞内に伝達する。この第２のシグ
ナルにより細胞のアナジー（クローン麻痺）が回避され
るとともに細胞が活性化される。
【０００６】抗原提示細胞とＴ細胞等のリンパ球の間の
第２のシグナルの伝達のメカニズムについては未だ詳細
に解明されていない部分はあるものの、これまでの研究
から、この第２のシグナル伝達には、主にＴ細胞及び胸
腺細胞で発現する細胞表面分子であるCD28（別名：Tp4
4、T44、又は9.3抗原）と抗原提示細胞（マクロファー
ジ、単球、樹状細胞など）で発現する細胞表面分子であ
るCD80（別名：B7-1、B7、BB1、またはB7/BB1）及び同
じく抗原提示細胞状の細胞表面分子であるCD86（別名：
B7-2またはB70）との間の相互作用（即ち、それらの分
子間の結合を介した細胞間接着）が極めて重要であるこ
とが明らかにされている。さらにこの第２のシグナルに
よるＴ細胞の活性化の制御には、該第２のシグナルに依
存してその発現が増強されると考えられているCTLA-4
（Cytolytic T lymphocyte associated antigen 4）と
該CD80(B7-1)及びCD86(B7-2)との間の相互作用（即ち、
それらの分子間の結合を介した細胞間接着）も重要な役
割を担っていることが実験的に明らかにされてきてい
る。即ち、この第２のシグナルの伝達によるＴ細胞の活
性化の制御には、少なくともCD28とCD80/CD86との間の
相互作用、該相互作用に依存すると考えられるCTLA-4の
発現の増強、並びにCTLA-4とCD80/CD86との間の相互作
用が包含されることが明らかにされてきている。
【０００７】CD28は、このＴ細胞の活性化とアナジーの
回避に必要な第２のシグナル（コスティミュレイトリー
・シグナル）を伝達するコスティミュレイター分子であ
ることが明らかにされている。この分子が抗原提示細胞
上のコスティミュレイター分子であるCD80(B7-1)及びCD
86(B7-2)と結合すること（換言すれば、それらの分子間
の結合を介した細胞間接着）により伝達される第２のシ
グナルは、Th1型サイトカインのmRNAを安定化させ、そ
の結果Ｔ細胞からのIL-2、IFNγ及びTNFαなどのTh1型
サイトカインを大量の産生を促す。一方、CTLA-4は、Tc
R/CD3を通じて入る第１シグナルにより発現が誘導され
るとともに、CD28とCD80との結合により入る該第２のシ
グナルによってもその発現が増強されることが知られて
いる。CTLA-4は、それらのシグナルを受けて、CD28より
入る第２ののシグナルによるＴ細胞の活性化とは反対に
Ｔ細胞機能に対して抑制的に働くことが明らかになって
きている。
【０００８】ヒトのCD28及びCTLA-4は、各々44kD及び41
乃至43kDの分子量を有するＩ型糖蛋白質である。ともに
免疫グロブリン様ドメイン１個を有し、免疫グロブリン
スーパーファミリーに属し、細胞間接着分子としての機
能と細胞内へのシグナル伝達分子としての両方の機能を
併せ持った分子である。
【０００９】ヒトCD28はジズルフィド結合によりホモ二
量体を形成し、一方、CTLA-4は単量体で存在することが
示されている。CD28及びCTLA-4の遺伝子の染色体上に位
置は、ヒトにおいてはいずれも「２ｑ３３」、またマウ
スにおいては「１Ｃ」であり、いずれも４つのエクソン
からなる。ヒトのCD28及びCTLA-4は、リーダー配列を含
め各々２２０及び２２３個のアミノ酸から構成され、両
者のアミノ酸相同性は２０乃至３０％程度である。
【００１０】CD28及びCTLA-4のリガンドは、ヒト及びマ
ウスにおいてCD80（B7-1）及びCD86（B7-2）であること
が解明されている。CTLA-4は、いずれのリガンドに対し
てもCD28より親和性が高く、その差は約２０倍である。
CD28及びCTLA-4のCD80（B7-1）への結合には、動物種を
超えて保存されているアミノ酸配列構造である「MYPPPY
（Met-Tyr-Pro-Pro-Pro-Tyr）」が重要であることが明
らかにされている。また、CD28が刺激を受けると、その
細胞内の部分配列「YMNM（Tyr-Met-Asn-Met）」内のリ
ン酸化されたチロシン残基へPI3キナ−ゼ（phosphoinos
itide 3 kinase, PI3K）が会合することが示され、CD2
8はこの「YxxM」構造を介して細胞内シグナル伝達にお
いて重要な働きをしていることが示されてきている。ま
た、CTLA4の細胞内領域にも「YxxM」で表わされる配
列、即ち「YVKM（Tyr-Val-Lys-Met）」を有しており、
刺激を受けた後、この配列に SYP が会合することが示
されている。
【００１１】CD28は、胸腺細胞及び末梢血Ｔ細胞に限局
して発現し、一方CTLA-4は活性化Ｔ細胞に特異的に発現
することがわかってきている（細胞工学・別冊「接着分
子ハンドブック」、秀潤社発行、第93-102頁、1994年；
同誌、第120-136頁； 実験医学・別冊「BIO SCIENCE
用語ライブラリー・免疫」、羊土社発行、第94-98頁、
1995年； 実験医学・別冊「BIO SCIENCE 用語ライブラ
リー・細胞内シグナル伝達」、羊土社発行、第58-59
頁、1997年； 日本臨床、第55巻、第６号、第215-220
頁、1997年）。
【００１２】このようにしてＴ細胞機能の制御（Ｔ細胞
の活性化及び機能抑制）におけるコスティミュレイター
分子（CD28、CD80（B7-1）及びCD86（B7-2）など）並び
連動するCTLA-4などの複数の分子の間の相互作用（換言
すれば、それらの分子間の結合を介した細胞間接着）の
重要性が提唱されるようになり、それらの分子と疾患と
の関係の解明、並びにそれらの分子の機能を制御するこ
とによる疾患の治療の試みが注目されるようになってき
ている。
【００１３】前述のように、生体は、生体（自己）にと
って異物である抗原に対しては獲得免疫応答システムを
作動させるが、自己の生体成分（自己抗原）に対しては
免疫応答を示さない免疫寛容を有している。しかしなが
ら、何らかの原因で免疫寛容の破綻が起こると、自己抗
原に対する免疫応答が起こり前述と同様のメカニズムに
より自己抗原反応性Ｔ細胞が誘導され免疫異常状態に陥
り、種々の自己免疫疾患が惹起される。
【００１４】即ち、生体の免疫システムが正常な状態で
は、正常組織の無刺激の抗原提示細胞（antigen presen
ting cell; APC）はコスティミュレイトリー分子を発現
しないため、例え自己抗原に反応する自己抗原反応性Ｔ
細胞が存在していても、Ｔ細胞が不応答状態に陥ってい
るため自己寛容が維持されているが、免疫異常状態にお
いては過剰または継続的なコスティミュレイトリー分子
の発現以上により自己抗原反応性Ｔ細胞が活性化され自
己免疫疾患が惹起されるという可能性が提示されてい
る。
【００１５】このような観点から近年、コスティミュレ
イトリーシグナルの伝達、例えば前述のCD28/CTLA-4-CD
80/CD86の間のシグナル伝達を調節することにより種々
の自己免疫性疾患の治療の試みが多数なされてきてい
る。
【００１６】自己免疫性疾患である慢性関節リウマチ、
多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、アレルギー性接触
性皮膚炎、慢性炎症性皮膚疾患である扁平苔癬、及び乾
癬などではその病巣部の抗原提示細胞ではCD28やCTLA-4
のリガンドとしてのコスティミュレイトリー分子である
CD80が異常発現が確認されていることから、特にCD80の
機能を抑制することによる該種々の自己免疫性疾患の治
療の試みが多くなされてきている。
【００１７】CD80の機能をブロックする方法としては、
CD80に対する抗体、CD80のリガンドであるCD28の可溶化
蛋白、あるいは同じくCD80のリガンドであるCTLA-4の可
溶化蛋白を用いる方法が検討されてきている。中でも、
CTLA-4のCD80に対する結合親和性がCD28のそれと比べ２
０倍以上であることに基づく「可溶化CTLA-4」、具体的
には「CTLA-4」の細胞外ドメインとヒト免疫グロブリン
IgG1のＦｃ領域とからなる融合タンパク（CTLA-4-IgF
c）を用いた治療の試みが動物モデル並びに臨床試験に
おいて行われている（日本臨床、第55巻、第6号、第215
-220頁、1997年）。
【００１８】自己免疫疾患モデル動物でのCTLA-4-IgFc
による治療効果については下記乃至のような報告が
なされている。
【００１９】ヒト全身性エリテマトーデス（SLE）の
モデルである(NZB/NZW)F1マウスにおいては、発症前投
与で自己抗体産生の抑制及びループス腎炎の発症を抑制
し、また発症後の投与においても病態改善が認められた
（Science, Vol.125, p.1225-1227, 1994）。
【００２０】多発性硬化症（MS）のモデルである実験
的アレルギー性脳脊髄炎（EAE）においては、免疫直後
の短期投与により発病を阻止できた（J. Clin. Inves
t., Vol.95, p.2783-2789, 1995）。
【００２１】インスリン依存性糖尿病（IDDM）モデル
であるNOD（non-obese diabetes）マウスでは、生後２
乃至３週齢の雌に２週間投与することにより発病率が著
明に低下した（J. Exp. Med., Vol.181, p.1145-1155,
1995）。
【００２２】グッドパスチャー（Goodpasture）の腎
炎モデルである腎糸球体基底膜免疫によるラット腎炎で
は、投与により症状の改善が認められた（Eur. J. Immu
nol., Vol.24, No.6, p.1249-1254, 1994）。
【００２３】ヒト慢性関節リウマチモデルであるDBA/
1マウスを用いたタイプIIコラーゲン誘導関節炎（CIA）
では、免疫時の投与により関節炎の発症が抑制され、コ
ラーゲンに対する自己抗体（IgG1及びIgG2）の産生が抑
制された（Eur. J. Immunol., Vol.26, p.2320-2328, 1
996）。
【００２４】しかしながら、上記のような治療の試みが
なされる一方で、コスティミュレイター分子及び関連す
る分子との間の相互作用（換言すれば、それらの分子間
の結合を介した細胞間接着）によるＴ細胞の活性化のメ
カニズムの詳細な解明は未だなされておらず、またこの
メカニズムには未だ同定されていない他の分子が関与す
る可能性も残っている。
【００２５】
【発明が解決しようとする課題】前述のようなＴ細胞等
のリンパ球の活性化に必須な第２のシグナルの伝達に関
与する分子間の結合を介した細胞間接着によるＴ細胞等
のリンパ球の活性化及びリンパ球の機能の制御のメカニ
ズムの解明、並びにそのメカニズムに関与する細胞間接
着を媒介する能力とシグナルを伝達する能力を併せ持っ
た既知または未知の分子の同定及びその性状解析は、先
に述べたような種々の自己免疫疾患、アレルギー性疾
患、及び炎症性疾患等の種々の疾患の治療または予防に
おいて有用な医薬品の開発し、提供することを可能とす
る。
【００２６】即ち、本発明は、そのような細胞間接着の
媒介とシグナル伝達という両面の機能を併せ持った新規
な細胞表面分子を同定するとともにその構造的及び生物
学的な性状を明らかにすることを課題とする。さらに、
本発明は、該新規な分子または該分子に対する抗体等を
用いることによる種々の自己免疫疾患や炎症性疾患の治
療または予防に有用な医薬品を提供することを課題とす
る。
【００２７】
【課題を解決するための手段】そのような有用な分子を
同定するために、本発明者らは、自己免疫疾患やアレル
ギー疾患などにおいてはＴ細胞等のリンパ球が重要な働
きをしていること、並びに抗原提示細胞からの第２のシ
グナル（コスティミュレイトリーシグナル）のリンパ球
細胞内へのシグナル伝達には細胞間接着が必須であるこ
とに着目し、リンパ球系の細胞に特異的に発現し、且つ
細胞間接着を媒介する機能を有する細胞表面分子の単離
及び同定を行うことを考えた。
【００２８】その方法として、まず、リンパ球系細胞自
体を免疫することにより該細胞の表面に発現している種
々の細胞表面分子に対するモノクローナル抗体を取得
し、得られたモノクローナル抗体を用いて細胞間接着を
媒介する機能を有する目的の細胞表面分子を単離、同定
する手法を用いた。以下、その方法を具体的に説明す
る。
【００２９】本発明者らは、まず、ラットのリンパ球系
細胞株を免疫原としてマウスに投与して、種々のモノク
ロナール抗体の作製した。次いで、得られたモノクロナ
ール抗体を、免疫原として用いたラットリンパ球系細胞
に作用させ、該モノクローナル抗体が該細胞に与える影
響について検討した。この結果、得られたモノクローナ
ル抗体の内の一つが該ラットリンパ球系細胞を強く凝集
させる特性を有することを見出した（このモノクローナ
ル抗体を「JTT.1抗体」と命名した。）。さらに、同様
にして、作製したモノクローナル抗体の中に、該「JTT.
1抗体」により誘導されるラットリンパ球系細胞の凝集
を強く阻害するモノクローナル抗体を見出した（このモ
ノクローナル抗体を「JTT.2抗体」と命名した。）。
【００３０】「JTT.1抗体」によるラットリンパ球系細
胞の凝集が、該細胞に発現している既知の最も代表的な
細胞間接着分子であるICAM-1（Intercellular adhesio
n molecule-1）やLFA-1（Lymphocyte function-associa
ted antigen-1）に対する抗体により阻害されなかった
ことから、この凝集が細胞間接着媒介作用を有する未知
の接着分子を介した細胞間接着による凝集であると考え
た。
【００３１】次に、この２つのモノクローナル抗体によ
り各々認識される細胞表面分子（各々「JTT.1抗原」及
び「JTT.2抗原」と命名した。）の同定、単離及び性状
解析を行った。
【００３２】まず、「JTT-1抗体」及び「JTT-2抗体」を
用いた蛍光抗体法に基づくフローサイトメトリーによ
り、種々の細胞における「JTT.1抗原」及び「JTT.2抗
原」の発現パタ−ンの解析を行った。この結果、「JTT.
1抗原」及び「JTT.2抗原」がともに、胸腺細胞及び脾臓
細胞をマイトジェン（mitogen）であるコンカナバリン
Ａ（Concanavalin A; ConA）で刺激して活性化した活性
化リンパ芽球細胞（活性化Ｔリンパ芽球細胞、活性化Ｂ
リンパ芽球細胞など）、特に該活性化リンパ芽球細胞で
強く発現が確認される一方で、何らの刺激も加えていな
い脾臓細胞（このような細胞は、本発明においては、
「静止期リンパ球」と呼ばれる場合もある。）にはほと
んど発現が見られないことを見出した。また、「JTT-1
抗体」及び「JTT-2抗体」の各々により確認される分子
の発現パターンは、ほぼ同一であることを見出した。
【００３３】次いで、吸着剤に「JTT-1抗体」を吸着さ
せて作製したアフィニティーカラムを用いて、前記のラ
ットリンパ球系細胞から調製した可溶性細胞表面分子の
混合物から該「JTT-1抗体」によりトラップされる分
子、即ち「JTT-1抗原」を精製した。この精製「JTT-1抗
原」の分子量を、「JTT-1抗体」及び「JTT-2抗体」を用
いた免疫沈降法及びSDS-PAGEにより分析した。その結
果、「JTT-1抗体」及び「JTT-2抗体」の各々により免疫
沈降される分子が同一の分子であり、また該分子は、各
々異なる糖鎖修飾を有するホモダイマーであることを見
出した。具体的には、Ｎ型糖鎖の消化処理を行わない場
合には、非還元化で約47kDの１分子として、また還元化
で約24kDと約28kDの２分子として同定され、Ｎ型糖鎖の
消化処理を行った場合には、非還元化で約36kDの１分子
として、また還元化で約20kDの１分子として同定され
た。
【００３４】次いで、該精製「JTT.1抗原」をコーティ
ングしたプレートへのラット胸腺細胞の接着の解析を行
った。この結果、胸腺細胞が、「JTT.1抗体」存在下で
のみ有意にプレートに接着（即ち、「JTT.1抗原」に接
着）し、その接着は「JTT.2抗体」の共存下で有意に阻
害されることを確認し、「JTT.1抗原」が実際に細胞間
接着を媒介する細胞表面分子であることを証明した。
【００３５】次に、本発明者らは、ラット、ヒト及びマ
ウスの「JTT.1抗原」をコードする遺伝子をクロ−ニン
グし、及びその構造の解析を行った。
【００３６】具体的には、まず、「JTT.1抗体」を用い
たパニング（panning）法を利用した発現クローニング
法により、ConA刺激したラット脾臓由来リンパ芽球のcD
NAライブラリーから、「ラットJTT.1抗原」の全長をコ
ードするcDNAを単離することに成功し、 ジデオキシ法
によりその塩基配列を決定することにより、全く新規な
ラットの遺伝子を単離、同定した。さらに得られた「ラ
ットJTT.1抗原」をコードするcDNAをプローブとしたプ
ラ−クハイブリダイゼイ−ションにより、ConA刺激した
ヒト末梢血リンパ芽球のcDNAライブラリーから、「ヒト
JTT.1抗原」の全長をコードするcDNAを単離することに
成功し、 ジデオキシ法によりその塩基配列を決定する
ことにより、全く新規なヒトの遺伝子を単離、同定し
た。同様にして、ConA刺激したマウス脾臓由来リンパ芽
球のcDNAライブラリーから、「マウスJTT.1抗原」の全
長をコードするcDNAを単離することに成功し、 ジデオ
キシ法によりその塩基配列を決定することにより、全く
新規なマウスの遺伝子を単離、同定した。さらに、同様
にしてラット胸腺腫細胞株のcDNAライブラリーから、前
記の「ラットJTT.1抗原」のオールタナティブスプライ
シング変異体（alternativesplicing variant）の全長
をコードするcDNAを単離することに成功し、 ジデオキ
シ法によりその塩基配列を決定することにより、全く新
規な別のラットの遺伝子を単離、同定した。
【００３７】単離された「ヒトJTT-1抗原」のcDNAによ
りコードされるアミノ酸配列のハイドロパシーブロット
解析から「JTT.1抗原」が、シグナル配列、糖鎖修飾部
位を有する細胞外領域、膜貫通領域、及び細胞内領域か
ら構成される細胞膜貫通蛋白（即ち、細胞表面分子）で
あることを見出した。さらに、既知分子とのホモロジー
検索の結果、ラット、ヒト及びマウスのいずれの「JTT.
1抗原」も、細胞間接着分子を含めた既知のいかなる分
子とも有意な相同性を有せず、且つ細胞間接着媒介機能
を有する全く新規な細胞表面分子であることを見出し
た。
【００３８】さらに、「ヒトJTT-1抗原」のアミノ酸配
列をもとにモチーフ検索を行った結果、「ヒトJTT-1抗
原」は、先に詳細に述べた細胞間接着を介してＴ細胞の
活性化に重要なコスティミュレイトリーシグナル伝達す
るＴ細胞等のリンパ球の細胞表面分子である「CD28」並
びに該シグナルに連動して活性化Ｔ細胞等の活性化リン
パ球の機能制御を行うＴ細胞等のリンパ球の細胞表面分
子である「CTLA-4」と下記のような構造的類似性を有し
ていることを見出した。
【００３９】即ち、システイン残基を含む２０以上の
アミノ酸残基が良く保存されている。リガンド結合領
域として必須なプロリン残基の連続する配列「Pro-Pro-
Pro（PPP）」が細胞外領域に保存されている。また、
シグナル伝達領域として必須な配列「Tyr-Xaa-Xaa-Met
（YxxM）（Xaa及びxは任意のアミノ酸を意味する。）が
細胞内領域に保存されている。
【００４０】次に、蛍光インサイチュウハイブリダイゼ
ーション（FISH）法を用いて、「マウスJTT-1抗原」を
コードする遺伝子のマウス染色体上での位置を解析した
ところ、その位置は、マウスの「CD28」及び「CTLA-4」
の位置と同じ、「１Ｃ３」であることを見出した。
【００４１】次に、「JTT-1抗原」の機能を制御するこ
とによる自己免疫疾患及びアレルギー性疾患の治療の有
効性を解析するために、前述の「JTT-2抗体」を実験的
アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）及び糸球体基底膜（GB
M）腎炎のモデルラットに投与する実験を行った。その
結果、いずれの疾患モデル動物においても、病状の有意
な抑制が見られることを発見し、「JTT-1抗原」の機能
を制御することにより自己免疫疾患やアレルギー性疾患
の治療が可能であることを見出した。
【００４２】さらに、「ヒトJTT-1抗原」に対するモノ
クローナル抗体が、ヒト末梢血リンパ球を有意に増殖さ
せること、またその増殖は、Ｔ細胞の活性化に必須な抗
原提示細胞からの第１のシグナルを受け取るＴ細胞上の
TcR/CD3複合体を構成するCD3に対するモノクローナル抗
体を共存させることによりさらに高い増殖が見られるこ
とを発見し、「JTT-1抗原」がリンパ球へのシグナル伝
達に関与する細胞表面分子であることを見出した。
【００４３】さらに、「JTT-1抗原」及び／またはその
リガンドの機能を制御することによる自己免疫疾患、ア
レルギー性疾患または炎症性疾患の治療のための医薬品
として有用な、「ヒトJTT-1抗原」の細胞外領域とヒト
免疫グロブリンのＦｃ領域からなる融合ポリペプチドを
製造することに成功した。
【００４４】さらに、「JTT-1抗原」の詳細な機能を解
析し、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び炎症性疾患
の治療のための医薬品を開発するために有用な、他の動
物種の「JTT-1抗原」をコードする遺伝子が導入された
トランスジェニックマウス、並びに「マウスJTT-1抗
原」をコードする内在性遺伝子が不活性化されたノック
アウトマウスを作製することに成功した。
【００４５】即ち、本発明は、上述のようにして単離、
同定された新規な哺乳動物の「JTT-1抗原」に関係する
ポリペプチド、遺伝子、抗体、ベクター、形質転換体、
医薬組成物、トランスジェニックマウス、及びノックア
ウトマウス等に関する。具体的には、下記（１）乃至
（３６）に記載される発明に関する。
【００４６】（１）下記の特徴を有する細胞表面分子を
構成するポリペプチド： （ａ）少なくとも胸腺細胞及びマイトジェン（mitoge
n）で刺激したリンパ芽球細胞で発現する； （ｂ）該細胞表面分子に反応性を有する抗体は、マイト
ジェンで刺激したリンパ芽球細胞間の接着を誘導する； （ｃ）該細胞表面分子に反応性を有する抗体は、ＣＤ３
に反応性を有する抗体との共存下で末梢血リンパ球の増
殖を誘導する； （ｄ）細胞外領域にPhe-Asp-Pro-Pro-Pro-Pheで表わさ
れる部分アミノ酸配列を有する；及び （ｅ）細胞内領域にTyr-Met-Phe-Metで表わされる部分
アミノ酸配列を有する。
【００４７】（２）該ポリペプチドが、配列番号２に記
載のアミノ酸配列、または配列番号２に記載のアミノ酸
配列中のアミノ酸において１もしくは数個のアミノ酸が
置換、欠失もしくは付加されたアミノ酸配列を有するこ
とを特徴とする前記（１）に記載のポリペプチド。
【００４８】（３）該ポリペプチドが、配列番号１に記
載の塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件
下でハイブリダイズするＤＮＡによりコードされること
を特徴とする前記（１）に記載のポリペプチド。
【００４９】（４）該ポリペプチドが、配列番号２に記
載のアミノ酸配列と６０％以上の相同性を有するアミノ
酸配列を有することを特徴とする前記（１）に記載のポ
リペプチド。
【００５０】（５）該細胞表面分子が、ヒト由来の細胞
表面分子であることを特徴とする前記（１）乃至前記
（４）のいずれかに記載のポリペプチド。
【００５１】（６）前記（１）乃至前記（５）のいずれ
かに記載のポリペプチドをコードする遺伝子。
【００５２】（７）該遺伝子が、ｃＤＮＡであることを
特徴とする前記（６）に記載の遺伝子。
【００５３】（８）該ｃＤＮＡが、配列番号１に記載の
塩基配列を有することを特徴とする前記（７）に記載の
遺伝子。
【００５４】（９）該ｃＤＮＡが、配列番号３の塩基番
号26乃至625に記載の塩基配列、配列番号４の塩基番号3
5乃至637に記載の塩基配列、配列番号５の塩基番号1乃
至603に記載の塩基配列、または配列番号６の塩基番号3
5乃至685に記載の塩基配列のいずれかを含むことを特徴
とする前記（７）に記載の遺伝子。
【００５５】（１０）前記（６）乃至前記（９）のいず
れかに記載の遺伝子を含有するベクター。
【００５６】（１１）前記（１０）に記載のベクターが
導入された形質転換体。
【００５７】（１２）国際寄託番号FERM BP-5725で識別
される形質転換体。
【００５８】（１３）前記（１）乃至前記（５）のいず
れかに記載のポリペプチドの細胞外領域からなるポリペ
プチド断片。
【００５９】（１４）該ポリペプチドが、配列番号２に
記載されるアミノ酸配列を有するヒト由来のポリペプチ
ドであることを特徴とする前記（１３）に記載のポリペ
プチド断片。
【００６０】（１５）前記（１３）または前記（１４）
に記載のポリペプチド断片をコードする遺伝子。
【００６１】（１６）前記（１）乃至前記（５）のいず
れかに記載のポリペプチドの細胞外領域からなるポリペ
プチド断片がジスルフィド結合により結合して形成され
るホモダイマー分子。
【００６２】（１７）該ポリペプチドが、配列番号２に
記載されるアミノ酸配列を有するヒト由来のポリペプチ
ドであることを特徴とする前記（１６）に記載のホモダ
イマー分子。
【００６３】（１８）前記（１４）に記載のポリペプチ
ド断片若しくは前記（１７）に記載のホモダイマー分子
のいずれか一方または両方と薬学的に許容されうる担体
を含んでなる医薬組成物。
【００６４】（１９）前記（１）乃至前記（５）のいず
れかに記載のポリペプチドの細胞外領域とヒトの免疫グ
ロブリン（Ｉｇ）の重鎖の定常領域または定常領域の一
部とからなる融合ポリペプチド。
【００６５】（２０）免疫グロブリンが、ＩｇＧである
ことを特徴とする前記（１９）に記載の融合ポリペプチ
ド。
【００６６】（２１）定常領域の一部が、ＩｇＧのヒン
ジ領域、Ｃ２ドメイン及びＣ３ドメインからなることを
特徴とする前記（１９）に記載の融合ポリペプチド。
【００６７】（２２）該ポリペプチドが、配列番号２に
記載されるアミノ酸配列を有するヒト由来のポリペプチ
ドであることを特徴とする前記（１９）乃至前記（２
１）のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【００６８】（２３）前記（１９）乃至前記（２２）の
いずれかに記載の融合ポリペプチドがジスルフィド結合
により結合して形成されるホモダイマー分子。
【００６９】（２４）前記（２２）に記載の融合ポリペ
プチドがジスルフィド結合により結合して形成されるホ
モダイマー分子。
【００７０】（２５）前記（２２）に記載の融合ポリペ
プチド若しくは前記（２４）に記載のホモダイマー分子
のいずれか一方または両方と薬学的に許容されうる担体
を含んでなる医薬組成物。
【００７１】（２６）該医薬組成物が、自己免疫疾患ま
たはアレルギー性疾患の治療または該疾患症状の抑制に
用いられることを特徴とする前記（２５）に記載の医薬
組成物。
【００７２】（２７）前記（１）乃至前記（５）のいず
れかに記載のポリペプチド、前記（１３）若しくは前記
（１４）に記載のポリペプチド断片または該ポリペプチ
ドにより構成される細胞表面分子に反応性を有する抗体
またはその一部。
【００７３】（２８）該抗体が、モノクローナル抗体で
あることを特徴とする前記（２７）に記載の抗体または
その一部。
【００７４】（２９）配列番号２に記載されるアミノ酸
配列を有するポリペプチド、前記（１４）に記載のポリ
ペプチド断片または該ポリペプチドから構成されるヒト
由来の細胞表面分子に反応性を有するモノクローナル抗
体またはその一部。
【００７５】（３０）前記（１）乃至前記（５）のいず
れかに記載のポリペプチドまたは該ポリペプチドにより
構成される細胞表面分子に反応性を有するモノクローナ
ル抗体であって、該モノクローナル抗体のマイトジェン
で刺激したリンパ芽球細胞への作用が、国際寄託番号 F
ERM BP-5707で識別されるハイブリドーマが産生するモ
ノクローナル抗体がマイトジェンで刺激したラットリン
パ芽球細胞に示す作用と実質的に同一であるモノクロー
ナル抗体またはその一部。
【００７６】（３１）前記（１）乃至前記（５）のいず
れかに記載のポリペプチドまたは該ポリペプチドにより
構成される細胞表面分子に反応性を有するモノクローナ
ル抗体であって、該モノクローナル抗体のマイトジェン
で刺激したリンパ芽球細胞への作用が、国際寄託番号 F
ERM BP-5708で識別されるハイブリドーマが産生するモ
ノクローナル抗体がマイトジェンで刺激したラットリン
パ芽球細胞に示す作用と実質的に同一であるモノクロー
ナル抗体またはその一部。
【００７７】（３２）前記（２９）に記載のモノクロー
ナル抗体またはその一部と薬学的に許容されうる担体を
含んでなる医薬組成物。
【００７８】（３３）該医薬組成物が、自己免疫疾患ま
たはアレルギー性疾患の治療または該疾患症状の抑制に
用いられることを特徴とする前記（３２）に記載の医薬
組成物。
【００７９】（３４）前記（２８）乃至前記（３１）の
いずれかに記載のモノクローナル抗体を産生するハイブ
リドーマ。
【００８０】（３５）前記（１）に記載のポリペプチド
をコードする遺伝子であって、配列番号１に記載される
塩基配列を含むヒト由来の遺伝子または配列番号４の塩
基番号35乃至637に記載される塩基配列を含むラット由
来の遺伝子が、マウスの内在性遺伝子に組み込まれてい
ることを特徴とするトランスジェニックマウス。
【００８１】（３６）前記（１）に記載のポリペプチド
であって配列番号５に記載される遺伝子によりコードさ
れるアミノ酸配列を有するマウス由来のポリペプチドが
産生されないように、該ポリペプチドをコードするマウ
スの内在性遺伝子が不活性化されていることを特徴とす
るノックアウトマウス。
【００８２】
【発明の実施の形態】上述のように本発明の細胞表面分
子（即ち、「JTT-1抗原」）は、該分子を介した細胞間
接着、並びにＴ細胞等のリンパ球へのシグナルの伝達及
び活性化リンパ球の機能制御において役割を担う側面を
有する。そこで、そのような生物学的事象の一般的理解
に役立てるためのみの目的で、リンパ球系細胞、細胞間
接着分子、及びそれらと疾患との関係についての一般的
知見を下記に記載する。従って、下記に記載する一般的
な知見は、本発明を限定的に解釈するためのものではな
い。
【００８３】リンパ球は、大別してT細胞とB細胞の2種
類に分けられる。骨髄の多能性幹細胞からリンパ球系幹
細胞が分化すると、その一部は血流に乗って胸腺に到達
する。胸腺で分化成熟したリンパ球はT細胞（Thymus-de
rived cell：T cell）と呼ばれ、再び血中に入り全身を
巡る。成熟したT細胞はCD3と呼ばれる分子を表面に持っ
ており、この分子を持っていることがその細胞が成熟T
細胞であるかどうかを区別する目印になる。CD3は有力
なT細胞マーカーである。その他、T細胞はCD4またはCD8
などを発現している。T細胞はさらに、Bリンパ球の抗体
産生を補助するヘルパーT細胞（Th細胞：helper T cel
l）、標的細胞にとりついて直接にそれを破壊する細胞
障害性T細胞（Tc細胞：cytotoxic T cell：CTL）あるい
はキラーT細胞、Bリンパ球の抗体産生を抑制するサプレ
ッサーT細胞、リンフォカインなどの効果物質を分泌し
て遅延型アレルギーを起こすエフェクターT細胞（effec
torT cell）などがある。
【００８４】リンパ球系幹細胞のうち骨髄の中でそのま
ま分化成熟するのがB細胞である。B細胞は、適切な刺激
があれば抗体を産生するようになる細胞で、抗体産生前
駆細胞である。表面にはB細胞内で合成された免疫グロ
ブリンがあり、抗原レセプターとして機能している。成
熟したB細胞の表面にはIgMとIgDがともにあり、抗原刺
激とT細胞からのシグナルで分化するとIgMの産生が増加
し、C末端部の細胞膜結合部分が変わって分泌されるよ
うになる。十分な刺激があると表面の免疫グロブリンも
IgGやIgE、IgAに変化するとともに、それぞれのクラス
の免疫グロブリンを分泌するようになる。B細胞表面の
免疫グロブリンは、表面のIgということでsIgとか、細
胞膜のIgということでmIgと表現されることもある。一
つのB細胞の表面にあるIgはすべて同じ抗原結合部位を
有する。
【００８５】T細胞でもなくB細胞でもないリンパ球で、
LGL（laege granular lymphocute）あるいはヌルセル
（null cell）と呼ばれるものがある。この細胞には、
腫瘍細胞やウイルス感染細胞の障害能力があるが、細胞
障害性T細胞の場合と異なり、あらかじめ抗原刺激をし
ておく必要がない。そのためナチュラルキラー細胞（NK
細胞：natural killer cell）ともいわれる。
【００８６】上記のT細胞の内、CD4陽性T細胞は、抗原
提供細胞によって提示された抗原に反応すると、いろい
ろなサイトカインを分泌し、それらのサイトカインに対
するレセプターなどが新たに発現し、細胞自身も大きく
なり、分裂を始め、増殖する。このような細胞レベルの
反応に先立って、それぞれのT細胞に特有の抗原レセプ
ター（T cell antigen receptor：TCR）に抗原提供細胞
上の抗原ペプチドとMHCクラスII分子の複合体が結合
し、それによって細胞内ではいろいろな生化学的変化が
生じて核内にシグナルが伝わり、特定のDNAの転写が始
まり、それぞれのタンパク質が合成される。その結果と
して、細胞レベルの反応が見られるようになるわけであ
る。また、CD8陽性T細胞に関しては例えば、あるウイル
スに感染した細胞を考えると、この感染した細胞はウイ
ルスタンパク質を合成し、そのタンパク質が細胞質内の
プロテアゾームで分解され、一部のペプチドがTAPを経
て小胞体内に入り、合成されたばかりのMHCクラスI分子
と安定した複合体を形成して細胞表面にでる。これを特
異的なCD8陽性T細胞が認識するが、この段階ではまだそ
の細胞を破壊することはない。抗原に反応したこのT細
胞はIL-2レセプター（IL-2R）を発現し、それにIL-2が
作用すると細胞障害活性を持つCTLに分化し、次に同じ
抗原ペプチド／MHCクラスI複合体に出会った時にその標
的細胞を破壊して殺すことになる。CTLへ分化するのに
必要なサイトカインはIL-2ばかりでなく、IFNγやその
他のサイトカインにも類似の作用があるといわれる。こ
のように、CTLへの分化にはT細胞の分泌するリンフォカ
インが必要であるが、それらのリンフォカインはCD4陽
性Th1細胞（IL-2やIFNγなどを分泌するCD4陽性T細胞）
が同じウイルスに由来する抗原のペプチドをクラスII分
子とともに認識して産生している。CD4陽性T細胞の助け
がなくても、CD8陽性T細胞が抗原に反応してIL-2などを
産生している場合もある。CD8陽性T細胞がCTLに分化す
ると、細胞質内に顆粒が増加してくる。この顆粒のなか
にはいろいろな高分子タンパク質が含まれており、パー
フォリンはその代表である。パーフォリンは補体の第5-
9成分で構成される膜侵襲複合体（membrane attack com
plex：MAC）によく似ており、標的細胞の細胞膜に穴を
あける作用がある。その他、セリンプロテアーゼやLT、
プロテオグリカン（proteoglycan）なども含まれてい
る。また、CTLに分化して抗原刺激を受けるとIFNγ、L
T、TNFあるいはIL-2などのリンフォカインも分泌する。
また、T細胞は汎血球凝集素（植物凝集素、PHA）やコン
カナバリンA（Con A）に反応して芽球化現象を示す。
【００８７】また、まだ何も刺激を受けていない状態の
成熟T細胞は、静止期T細胞（resting T cell）と呼ば
れ、細胞の大きさが小さく、寿命も数日で短い。刺激を
受けると、すでに述べたように細胞は大きくなり、いろ
いろな刺激に対してさらに反応しやすくなる。このよう
なT細胞を活性化T細胞（activated T cell）と呼ぶ。一
部の活性化T細胞は、記憶T細胞（memory T cell）とな
り、同じ抗原刺激を受けると二次免疫反応をもたらすこ
とになる。記憶T細胞は数年あるいは数十年も体内を循
環し続けるといわれている。
【００８８】B細胞でまだ何も刺激を受けていない状態
のものを、T細胞の場合と同じように静止期B細胞（rest
ing B cell）といい、多価の抗原やCD40Lで刺激され、
増殖を起こしたようなB細胞を活性化B細胞（activated
B cell）という。静止期B細胞には、B7-1（CD80）やB7-
2（CD86）のようなコスティミュレーター分子（TCRを介
したシグナルとともにT細胞を刺激する分子）がなく、
静止期T細胞に抗原を提供してもTCRを刺激するだけで、
CD40リガンド（CD40L）を発現させたり、リンフォカイ
ンを産生させたりすることができないといわれている。
そのため、ほかの抗原提供細胞によって抗原刺激され、
活性化されたヘルパーT細胞が静止期B細胞の抗原提示に
反応するものと考えられている。すなわち、抗原が侵入
してきた場合には、まずB7分子を発現している樹状細胞
（著しい樹状の突起を有する細胞）や微生物に反応して
活性化されたマクロファージがその抗原を提示して、休
止期ヘルパーT細胞を刺激し、CD40Lを発現させるなど活
性化してから、同じ抗原を提示する静止期B細胞に結合
してそのCD40を刺激すると考えられている。多価の抗原
やCD40Lで刺激されて一度活性化されると、B細胞もB7分
子を発現し、TCRとともに表面のCD28を刺激してそのヘ
ルパーT細胞を活性化し、CD40Lを発現させたり、リンフ
ォカインを産生させたりすることができる。また、刺激
を受けて細胞が大きくなるなどの変化は見られるもの
の、抗体の分泌はほとんど見られない状態のB細胞を活
性化B細胞（activated B cell）という。さらに成熟B細
胞になって抗原に出会うと、T細胞からの刺激も加わっ
てIgMの産生が高まり、産生するIgMが膜型から分泌型に
変わって分泌されるようになる。さらに、T細胞からの
液性因子によってIgMからIgGなどのほかのアイソタイプ
の抗体を産生するようになる。これをアイソタイプスイ
ッチあるいはクラススイッチという。抗体を分泌するよ
うになったB細胞は抗体分泌細胞（antibody-secreting
cell）と呼ばれるようになり、一部は形態学的にも特徴
のある細胞となり、形質細胞（plasma cell）と呼ばれ
る（免疫学の知識、オーム社(1996)）。
【００８９】ところで免疫系の様々な反応において、白
血球はそのサブポピュレーション、即ち、Tリンパ球、B
リンパ球、NK、好中球などがそれぞれ異なった動態を示
す場合が多い。また、上記のように同じリンパ球であっ
ても、その細胞の状態、即ち、活性化しているか、静止
期にあるかにより、それぞれ異なった動態を示す。これ
らの事実は、白血球のサブポピュレーション特異的な認
識機構、さらには細胞の状態に特異的な認識機構、特に
細胞接着分子（細胞接着タンパク質）の存在を示唆する
ものである。
【００９０】細胞接着分子、即ち、細胞接着タンパク質
は、一般に、個体の発生・分化の際に、あるいは細胞の
局所への遊走の際に、細胞同士を互いに接着させる機能
を有する分子であり、生体の有機的かつ機能的な連絡に
とって必須の分子であることが知られている。
【００９１】細胞接着分子は、その構造的特徴から大き
く免疫グロブリンスーパーファミリー、インテグリンフ
ァミリー、セクレチンファミリー、カドヘリンファミリ
ー、CD44ファミリーの5つに分類されている。免疫グロ
ブリンスーパーファミリーに属する接着分子は、ジスル
フィド結合で形成されるループ様ドメインを繰り返し持
つことを特徴としており、「ICAM-1」（intercellular
adhesion molecule-1）、「VCAM-1」（vascular cell a
dhesion molecule-1）などの分子が知られている。ま
た、インテグリンファミリーに属する接着分子は、α/
βヘテロダイマー構造を特徴とし、「VLA-1〜6」（very
late antigen-1〜6）、「LFA-1」（lymphocyte functi
on-associated antigen-1）、「Mac-1」、「p150/90」
などが知られている。セクレチンファミリーに属する分
子は、N末端から順に、レクチン様ドメイン、EGF様ドメ
イン、補体ドメインを有し、「E-セレクチン」,「P-セ
レクチン」などが知られている。さらに、カドヘリンフ
ァミリーとしては、「E-カドヘリン」、「N-カドヘリ
ン」、「P-カドヘリン」が、CD44ファミリーには、「CD
44」が知られている。
【００９２】これら接着分子の具体的な機能としては、
白血球の血管内皮細胞への接着やリンパ球の抗原提示細
胞への接着などが知られているが、近年における様々な
研究から、これらの機能のみならず種々の疾患にも関係
していることが徐々に明らかとなってきた。
【００９３】特に、疾患と接着分子の発現異常に関して
は、多くの報告がなされている。例えば、慢性関節リウ
マチ（RA）については、RA滑膜細胞において、「Mac-
1」と「p150/95」の両者の発現が増強していることが報
告されている（Allen,C et al.Arthritis Rheum.,32,94
7(1989)）。また、RA滑膜では、様々な細胞が「ICAM-
1」を強く、かつ異所性に発現していることが報告され
ている（Hale,L.et al.Arthritis Rheum.,32,22(198
9)）。さらに、「ELAM-1」も好中球と血管内皮細胞の接
着に関与しており、これら分子の過剰発現は、RA関節液
中に見られる好中球の浸潤（特に関節液中への）に関与
していることが示唆されている（Laffon,A.,etal.Arthr
itis Rheum.,32,386(1989)）。さらに、「CD44」もRA滑
膜において、血管内皮細胞、A型滑膜細胞に強く発現し
ていることが報告されている（Heynes,B.et al.Arthrit
is Rheum.,34,1434(1991)）。
【００９４】また、全身性エリデマトーデス（SLE）と
接着分子の発現異常との関係についても例があり、例え
ば、SLE患者ではTリンパ球の培養血管内皮細胞に対する
接着能が健康人と比較すると低下していることが報告さ
れている。また、SLE患者の抹消リンパ球における接着
分子の発現検討では、「ICAM-1」、「VLA-4」、「IFA-
1」の増強傾向が見られている（Haskard, D.O. et al,
Rheumatol. Int, 9, 33(1989)）。
【００９５】自己免疫性甲状腺疾患については、甲状腺
濾胞細胞をインターフェロン-γ、インターロイキン-
1、腫瘍壊死因子で刺激すると「ICAM-1」が発現するこ
と、濾胞細胞と単核細胞とのクラスター形成が、抗「IC
AM-1」抗体により抑制されることが報告されている（We
etman,A.P.,et al.Eur.J.Immunol.,20,271(1990)）。
【００９６】肝炎では、肝細胞と炎症細胞間の接着が
「ICAM-1」と「LFA-3」、「LFA-1」と「CD2」という2つ
の経路で行なわれることでその機会を増加させ、抗原の
提示や炎症細胞の活性化が促進されると考えられてい
る。特に、B型肝炎における検討では「LFA-3」がウイル
ス増殖の盛んな肝細胞に強く発現し、「ICAM-1」が肝炎
の程度によく相関していることから、「LFA-3」がウイ
ルスの排除に関与し、また「ICAM-1」がT細胞への抗原
提示を促進させ炎症反応を調節していることが示唆され
ている。「ICAM-1」陰性でHBc抗原陽性の肝細胞の場合
はリンパ球との細胞間相互作用が起こらずウイルス感染
の慢性化という一種の免疫不応答の状態が生じるのでは
ないかと考えられる。急性肝炎や慢性活動性肝炎、肝硬
変患者の血清「ICAM-1」濃度が健常者や慢性持続性肝炎
患者よりも高く、また活動性肝炎患者のうちでも組織学
的に進行した症例で高値を認めることから慢性肝疾患に
おける血清「ICAM-1」が肝細胞の障害の程度と相関する
との報告もなされている（Mod.Phys.15,(1),73-76(199
5)）。
【００９７】動脈硬化のモデル動物では、その病変発症
のごく初期において血管内皮への単球やリンパ球の接
着、侵入が認められ、これら血球細胞と内皮の相互作用
が動脈硬化発症の第一段階と考えられている。また、実
際の動脈硬化巣における接着分子の発現については、種
々の報告がなされている。例えば、ヒト動脈硬化巣にお
ける「ICAM-1」の発現（Poston RN,et al.Am J Patol,1
40,665(1992)）や高コレステロール血症ウサギの動脈硬
化巣における「VCAM-1」の発現（Cybulsky MI,Gimbrone
MA Jr.Science,251,788(1991)）について報告例があ
る。さらに最近、ヒトの動脈硬化巣においても「VCAM-
1」が発現していることが観察されており、その発現が
特に内膜に遊走した平滑筋細胞と単球／マクロファージ
に強く認められたことが報告されている。また、ウサギ
およびヒト動脈硬化巣において「MCP-1」の発現亢進が
認められており、「MCP-1」が単球／マクロファージの
遊走を介して動脈硬化巣の形成を促進しているという示
唆もある（カレントテラピー,12,(8),1485-1488(199
4)）。
【００９８】さらに、癌転移と接着分子異常の関係につ
いても報告がある。例えば、E-カドヘリンの低下した癌
細胞は、強い侵襲性を示すが、これにE-カドヘリンのcD
NAを導入すると侵襲性が抑制され、さらに、E-カドヘリ
ン抗血清を添加すると侵襲性が回復することが見出され
ており、E-カドヘリンの発現低下と癌細胞の侵襲性の密
接な関連が示唆されている（Frixen,U.H.,et al.113,17
3(1991)）。実際の臨床例においても、肝癌、食道癌、
胃癌、乳癌など種々の癌でE-カドヘリンの発現低下と転
移との関係が指摘されている。また、「VCAM-1」のリガ
ンドである「VLA-4」は転移性メラノーマ、胃癌、乳癌
などで高発現することが報告されており、これらが転移
に際して血管内皮細胞への着床に利用される可能性が示
唆されている。また、種々の癌細胞株を用いた実験から
胃癌、大腸癌、肺癌、肝癌、膵癌などの上皮性の癌はE-
セレクチンを介して血管内皮細胞に接着するとの報告も
なされている（Takada,A.,et al.Cancer Res.,53,354(1
993)）。
【００９９】一方、これら接着分子を標的とした疾患治
療の試みもなされている。例えば、抗ラット「ICAM-1」
抗体がラット自己免疫性関節炎モデルでの炎症反応を強
く抑えることが報告されている。また、RAの動物モデル
の一つとされるアジュバンド滑膜炎では、抗「ICAM-1」
抗体を投与することにより、関節炎の発症が抑制される
ことが報告されている（日本臨床免疫学会誌、14,(6),5
71-577(1991)）。さらに、一部のインテグリンが認識し
結合する細胞外マトリックス蛋白上のアミノ酸配列であ
るREG配列のペプチドを多量に胆癌マウスへ投与する
と、接種腫瘍の転移形成が顕著に抑制され、またインビ
トロの系では、RGDペプチドや抗β1サブユニット抗体が
癌細胞の運動や浸潤を抑制することが報告されている
（Yamada,K.M.,et al.Cancer Res,50,4485,(1990)）。
【０１００】以下、本発明で用いる語句の意味並びに本
発明のポリペプチド、融合ポリペプチド、遺伝子、抗
体、トランスジェニックマウス、ノックアウトマウス等
の一般的製造方法を明らかにすることにより本発明を詳
細に説明する。しかしながら、該用語の意味がそのよう
な定義を以て限定的に解釈されるものではないことは言
うまでもない。
【０１０１】本発明における「マイトジェン」とは、分
裂促進剤とも呼ばれ、細胞分裂を誘起する物質を指す。
免疫学的には、抗原非特異的（ポリクローナル）にリン
パ球を幼弱化し分裂を誘起させるものを意味する。例え
ば、PHAやPWMなどのレクチン、コンカナバリンＡ（Conc
anavalin A; ConA）、リポ多糖、ストレプトリシンＳ、
抗リンパ球抗体などが挙げられる。コンカナバリンＡや
PHAは、Ｔリンパ球のみに作用し、リポ多糖はＢリンパ
球のみに作用し、PWMは両リンパ球に作用することが知
られている。
【０１０２】本願明細書中で用いられる「リンパ芽球細
胞」なる用語は、大リンパ球、リンホブラスト（lympho
blast）あるいは免疫芽細胞とも呼ばれ、リンパ性組織
（リンパ節、脾臓、胸腺、骨髄、リンパ管、扁桃腺な
ど）や血液中に存在するリンパ球の内の大リンパ球に属
するリンパ球を指す。
【０１０３】本願明細書中で用いられる「活性化リンパ
球」なる用語は、例えば下記のようなリンパ球を意味す
るがこの限りではない。例えば、何らかの刺激により活
性化されたリンパ球を指す。前述のとおりリンパ球は、
T細胞、B細胞、およびナチュラルキラー細胞に分類さ
れ、さらにT細胞についてはCD4陽性細胞とCD8陽性細胞
に分類することができる。従って、本発明の「活性化リ
ンパ球」には、主に活性化T細胞、活性化B細胞、および
活性化ナチュラルキラー細胞が含まれ、さらに活性化T
細胞には活性化CD4陽性細胞と活性化CD8陽性細胞が含ま
れる。
【０１０４】CD4陽性T細胞は、抗原提供細胞によって提
示された抗原に反応すると、いろいろなサイトカインを
分泌し、それらのサイトカインに対するレセプターなど
が新たに発現し、細胞自身も大きくなり、分裂を始め、
増殖して活性化される。活性化CD4陽性T細胞とは、この
ような状態のCD4陽性T細胞を指す。
【０１０５】CD8陽性T細胞は、抗原に反応するとIL-2R
を発現し、それにIL-2が作用すると細胞障害性をもつCT
Lに分化し、次に同じ抗原ペプチド／MHCクラスI複合体
に出会った時にその標的細胞を破壊して殺すようにな
る。CD8陽性T細胞がCTLに分化すると、細胞質内に顆粒
が増加してくる。この顆粒の中にはいろいろな高分子タ
ンパク質が含まれており、パーフォリンはその代表であ
る。パーフォリンは補体の第5-9成分で構成されるMACに
よく似ており、標的細胞の細胞膜に穴をあける作用があ
る。その他、セリンプロテアーゼやLT、プロテオグリカ
ン（proteoglycan）なども含まれている。また、CTLに
分化して抗原刺激を受けるとIFNγ、LT、TNFあるいはIL
-2などのリンフォカインも分泌する。活性化CD8陽性T細
胞とは、このような状態のCD8陽性T細胞を指す。
【０１０６】T細胞は汎血球凝集素（植物凝集素、PHA）
やコンカナバリンA（Con A）に反応して芽球化現象を示
すが、このような状態のT細胞も活性化T細胞に含まれ
る。
【０１０７】B細胞では、B7分子を発現し、TCRとともに
表面のCD28を刺激してそのヘルパーT細胞を活性化し、C
D40Lを発現させたり、リンフォカインを産生したりし、
刺激を受けて細胞が大きくなったり、増殖を起こすなど
の変化が見られる。活性化B細胞とは、このような状態
のB細胞を指し、本発明においては、抗体を分泌するよ
うになったB細胞（抗体分泌細胞(antibody-secreting c
ell)及び形質細胞(plasma cell)）も活性化B細胞に含ま
れる。
【０１０８】活性化ナチュラルキラー細胞とは、前述の
とおり腫瘍細胞やウイルス感染細胞の障害作用を示すナ
チュラルキラー細胞を指す。なお、本発明においては、
コンカナバリンA（Con A）で刺激された胸腺細胞も活性
化リンパ球に含まれる。
【０１０９】本発明において用いられる「活性化リンパ
芽球細胞」には、前記のような「リンパ芽球」が、コン
カナバリンＡのような前記「マイトジェン」で刺激を受
けて活性化されたリンパ芽球が含まれる。
【０１１０】本願明細書で場合によって用いられる「静
止期リンパ球」なる用語は、前述の活性化リンパ球と対
照的に、細胞の活性化のための刺激を受けていない非活
性化状態のリンパ球を指す。
【０１１１】本発明における「遺伝子」には、ゲノミッ
クDNAおよびcDNAが含まれる。
【０１１２】本発明において「ヒト由来」とは、ヒトの
生体成分（臓器、組織、細胞、体液など）から単離され
た天然の物質、遺伝子組換え技術を用いて作製される組
み換え物質を含み、また該物質がタンパク質あるいはポ
リペプチドである場合には、それらのアミノ酸配列中の
アミノ酸の1もしくは数個のアミノ酸配列が置換、欠失
もしくは付加したアミノ酸配列を有する人工のタンパク
質及びポリペプチドも含まれる。
【０１１３】本発明の「細胞表面分子」とは、ヒト、ラ
ット、マウス、モルモット及びウサギなどの哺乳動物に
由来する細胞表面分子であり、好ましくはヒト、ラット
またはマウスに由来する細胞表面分子であり、より好ま
しくはヒト由来の細胞表面分子である。
【０１１４】本発明の「細胞表面分子」は、具体的に
は、少なくとも下記の性質を有することを特徴とする細
胞表面分子である。 （ａ）少なくとも胸腺細胞及びマイトジェン（mitoge
n）で刺激したリンパ芽球細胞で発現する； （ｂ）該細胞表面分子に反応性を有する抗体は、マイト
ジェンで刺激したリンパ芽球細胞間の接着を誘導する； （ｃ）該細胞表面分子に反応性を有する抗体は、ＣＤ３
に反応性を有する抗体との共存下で末梢血リンパ球の増
殖を誘導する； （ｄ）細胞外領域にPhe-Asp-Pro-Pro-Pro-Pheで表わさ
れる部分アミノ酸配列を有する；及び （ｅ）細胞内領域にTyr-Met-Phe-Metで表わされる部分
アミノ酸配列を有する。
【０１１５】好ましい態様としては後述する本発明の
「ポリペプチド」から構成される細胞表面分子である。
【０１１６】本発明の「ポリペプチド」とは、上記の本
発明の「細胞表面分子」を構成するポリペプチドであ
り、具体的には下記が挙げられる。 （１）配列番号１に記載の塩基配列からなるＤＮＡにス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡに
よりコードされるポリペプチド。 （２）配列番号２に記載のアミノ酸配列と６０％以上の
相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド。 （３）配列番号２に記載されるアミノ酸配列または該ア
ミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチド（即ち、「ヒトJTT-1抗原」を構成するポリペ
プチド及びその誘導体）。 （４）配列番号３の塩基番号26乃至625に記載の塩基配
列によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「ヒトJTT-1抗原」を構成するポリペプチド及
びその誘導体）。 （５）配列番号４の塩基番号35乃至637に記載の塩基配
列によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「ラットJTT-1抗原」を構成するポリペプチド
及びその誘導体）。 （６）配列番号５の塩基番号1乃至603に記載の塩基配列
によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配列
と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「マウスJTT-1抗原」を構成するポリペプチド
及びその誘導体）。 （７）配列番号６の塩基番号35乃至685に記載の塩基配
列によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「ラットJTT-1抗原の変異体」を構成するポリ
ペプチド及びその誘導体）。 （８）国際寄託番号FERM BP-5725識別される形質転換体
に導入された本発明の細胞表面分子を構成するポリペプ
チドをコードするＤＮＡによりコードされるアミノ酸配
列または該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
を有するポリペプチド（即ち、「ヒトJTT-1抗原」を構
成するポリペプチド及びその誘導体）。
【０１１７】ここで「ストリンジェントな条件下」とし
ては、例えば、次のような条件を挙げることができる。
例えば、５０塩基以上のプローブを用い、0.9％NaCl下
でハイブリダイゼーションを行う場合には、、50％の解
離を生ずる温度（Ｔｍ）の目安を下記計算式から求め、
ハイブリダイゼーションの温度を下記計算式のように設
定することができる。
【０１１８】Ｔｍ＝82.3℃＋0.41×（G+C）％−500／ｎ
−0.61×（フォルムアミド）％ （ｎはプローブの塩基数を示す。） 温度＝Ｔｍ−25℃ また、100塩基以上のプローブ（G+C=40〜50%の場合）を
用いる場合には、Ｔｍが下記（１）及び（２）のように
変化することを目安する。
【０１１９】（１）１％ミスマッチ毎に、Ｔｍが約１℃
下がる。
【０１２０】（２）フォルムアミド１％毎に、Ｔｍが0.
6〜0.7℃下がる。
【０１２１】従って、完全相補鎖の組み合わせの場合の
温度条件は下記のようにすることができる。
【０１２２】（Ａ）65〜75℃（フォルムアミド無添加） （Ｂ）35〜45℃（50％フォルムアミド存在下） また、不完全相補鎖の組み合わせの場合の温度条件は下
記のようにすることができる。
【０１２３】（Ａ）45〜55℃（フォルムアミド無添加） （Ｂ）35〜42℃（30％フォルムアミド存在下） また、23塩基以下のプローブを用いる場合の温度条件
は、３７℃とすることもできるし、また下記計算式を目
安とすることもできる。
【０１２４】 温度＝２℃×（A+Tの数）＋４℃×（C+Gの数）−５℃ ここで「実質的に同一のアミノ酸配列を有する」とは、
配列表に記載されるアミノ酸配列を有するポリペプチド
と実質的に同等の生物学的性質を有する限り、該アミノ
酸配列中の複数個のアミノ酸、好ましくは１乃至１０個
のアミノ酸、特に好ましくは１乃至５個のアミノ酸が置
換、欠失及び／または修飾されているアミノ酸配列を有
するポリペプチド、並びに該アミノ酸配列に、複数個の
アミノ酸、好ましくは１乃至１０個のアミノ酸、特に好
ましくは１乃至５個のアミノ酸が付加されたアミノ酸配
列を有するポリペプチドをも包含することを意味する。
【０１２５】そのようなアミノ酸の置換、欠失、または
挿入は常法に従って行うことができる（実験医学別冊・
「遺伝子工学ハンドブック」(1992)など）。
【０１２６】例えば、合成オリゴヌクレオチド指定突然
変異導入法（gapped duplex）法、亜硝酸あるいは亜硫
酸処理によってランダムに点突然変異を導入する方法、
Ba131酵素等により欠失変異体を作製する方法、カセッ
ト変異法、リンカースキャニング法、ミスインコーポレ
ーション法、ミスマッチプライマー法、DNAセグメント
合成法などを挙げることができる。
【０１２７】合成オリゴヌクレオチド指定突然変異導入
（gapped duplex）法は、例えば下記のように行うこと
ができる。アンバー変異をもつM13ファージベクターに
変異誘起を希望する領域をクローニングし、一本鎖ファ
ージDNAを調製する。アンバー変異をもたないM13ベクタ
ーのRFIDNAを制限酵素処理により線状とし、上記の一本
鎖ファージDNAと混合して変性後、アニールさせ、「gap
ped duplex DNA」を形成させる。これに変異を導入した
合成オリゴヌクレオチドをハイブリダイズさせ、DNAポ
リメラーゼとDNAリガーゼの反応により閉環状2本鎖DNA
とする。このDNAをミスマッチ修飾能が欠損している大
腸菌mutS株にトランスフェクションし、増殖したファー
ジをサプレッサー機能のない大腸菌に感染させ、アンバ
ー変異を持たないファージだけを選択する。
【０１２８】また、亜硝酸による点突然変異を導入する
方法は、例えば下記のような原理を利用する。DNAを亜
硝酸処理すると塩基が脱アミノ化されて、アデニンはヒ
ポキサンチンに、シトシンはウラシルに、グアニンはキ
サンチンになる。脱アミノ化されたDNAを細胞に導入す
ると、DNA複製時にヒポキサンチンはシトシンと、ウラ
シルはアデニンとキサンチンはチミンと塩基対を形成す
るため、「A:T」が「G:C」へ、「G:C」が「A:T」へと置
換する。実際には亜硝酸処理した一本鎖DNA断片を「gap
ped duplex DNA」にハイブリダイズさせ、以下、合成オ
リゴヌクレオチド指定突然変異導入（gapped duplex）
法と同様に操作して変異株を分離すればよい。
【０１２９】なお、本願明細書または図面においてアミ
ノ酸を表記するために用いられるアルファベットの三文
字あるいは一文字は、各々次に示すアミノ酸を意味す
る。（Gly／G）グリシン、（Ala／A）アラニン、（Val
／V）バリン、（Leu／L）ロイシン、（Ile／I）イソロ
イシン、（Ser／S）セリン、（Thr／T）スレオニン、
（Asp／D）アスパラギン酸、（Glu／E）グルタミン酸、
（Asn／N）アスパラギン、（Glu／Q）グルタミン、（Ly
s／K）リジン、（Arg／R）アルギニン、（Cys／C）シス
テイン、（Met／M）メチオニン、（Phe／F）フェニルア
ラニン、（Tyr／Y）チロシン、（Trp／W）トリプトファ
ン、（His／H）ヒスチジン、（Pro／P）プロリン。
【０１３０】前述した本発明の「細胞表面分子」を構成
する「ポリペプチド」は、細胞膜を貫通する細胞膜貫通
蛋白であり、この細胞膜貫通ポリペプチドの１または２
により該「細胞表面分子」が構成される。
【０１３１】ここで「細胞膜貫通蛋白」とは、多くの受
容体あるいは細胞膜表面分子に見られるように、膜の脂
質二重層を１回または数回貫通する疎水性ペプチド領域
により膜と連結し、全体として細胞外領域(extracellul
ar region)、膜貫通領域(transmembrane region)及び細
胞質領域(cytoplasmic region)の３つの主領域から構成
される構造をとる蛋白を指す。さらにそのような膜貫通
性蛋白は、モノマ−(monomer）として、または、同一の
アミノ酸配列を有するもう１本の鎖あるいは異なるアミ
ノ酸配列を有する鎖とともにそれぞれホモダイマ−(hom
odimer) 、ヘテロダイマ−(heterodimer) あるいはオリ
ゴマ−(origomer)を形成して存在することにより、各々
の受容体や細胞表面分子を構成する。
【０１３２】本発明の「ポリペプチド断片」とは、前述
に定義した本発明の「ポリペプチド」のポリペプチド断
片であり、好ましくは該ポリペプチドの細胞外領域であ
る。該領域は所望応じそのＮ末端及び／またはＣ末端に
１乃至５のアミノ酸が付加されていてもよい。
【０１３３】ここで「細胞外領域」とは、前述のような
細胞膜膜貫通蛋白の全体構造のうち、該膜蛋白が連結し
ている膜の外界側に存在する部分構造（部分領域）の全
部または一部を意味し、換言すれば、膜内に取り込まれ
ている領域（膜貫通領域）及び該膜内の領域に引き続い
て細胞質内に存在する領域（細胞内領域）以外の領域の
全部または一部を意味する。
【０１３４】本発明における「ヒトの免疫グロブリン
（Ｉｇ）の重鎖の定常領域または定常領域の一部」と
は、前述のようなヒト由来の免疫グロブリンの重鎖（He
avy Chain，Ｈ鎖）の 定常領域（Constant region）、
Ｆｃ領域またはそれらの一部を意味する。該免疫グロブ
リンは、どのようなクラス及びサブクラスに属する免疫
グロブリンであってもよく、具体的には、ＩｇＧ（Ｉｇ
Ｇ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）、ＩｇＭ、Ｉ
ｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、ＩｇＤ及びＩｇＥを挙
げることができる。好ましくは、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、Ｉ
ｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４）またはＩｇＭであ
る。本発明における特に好ましい例としては、ヒト由来
のＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇ
Ｇ４）に属する免疫グロブリンである。
【０１３５】免疫グロブリンは、２つの相同な軽鎖（Li
ght Chain，Ｌ鎖）と２つの相同な重鎖（Heavy Chai
n，Ｈ鎖）の４つの鎖が、 ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結
合）で結合したＹ字形の構造単位を有する。軽鎖は、軽
鎖可変領域（ＶL）及び軽鎖定常領域（ＣL）から構成さ
れる。重鎖は、重鎖可変領域（ＶH）と重鎖定常領域
（ＣH）から構成される。
【０１３６】重鎖定常領域は、クラス（ＩｇＧ、Ｉｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ）並びにサブクラス（Ｉ
ｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及び
ＩｇＡ２）毎に各々固有のアミノ酸配列を有するいくつ
かのドメインから構成される。
【０１３７】ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及
びＩｇＧ４）の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、ＣH１ド
メイン、ヒンジ領域、ＣH２ドメイン及びＣH３ドメイン
から構成される。
【０１３８】同様にＩｇＧ１の重鎖は、Ｎ末端から順
に、ＶH、Ｃγ1１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ1２ドメ
イン及びＣγ1３ドメインから構成される。ＩｇＧ２の
重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、Ｃγ2１ドメイン、ヒン
ジ領域、Ｃγ2２ドメイン及びＣγ2３ドメインから構成
される。ＩｇＧ３の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、Ｃ
γ3１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ3２ドメイン及びＣγ
3３ドメインから構成される。ＩｇＧ４の重鎖は、Ｎ末
端から順に、ＶH、Ｃγ4１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ
4２ドメイン及びＣγ4３ドメインから構成される。
【０１３９】ＩｇＡの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、
Ｃα１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃα２ドメイン及びＣα
３ドメインから構成される。
【０１４０】同様にＩｇＡ１の重鎖は、Ｎ末端から順
に、ＶH、Ｃα1１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃα1２ドメ
イン及びＣα1３ドメインから構成される。ＩｇＡ２の
重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、Ｃα2１ドメイン、ヒン
ジ領域、Ｃα2２ドメイン及びＣα2３ドメインから構成
される。
【０１４１】ＩｇＤの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、
Ｃδ１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃδ２ドメイン及びＣδ
３ドメインから構成される。
【０１４２】ＩｇＭの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、
Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメイン及び
Ｃμ４ドメインから構成され、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇ
Ｄに見られるようなヒンジ領域を有しない。
【０１４３】ＩｇＥの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶH、
Ｃε１ドメイン、Ｃε２ドメイン、Ｃε３ドメイン及び
Ｃε４ドメインから構成され、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇ
Ｄに見られるようなヒンジ領域を有しない。
【０１４４】さらに、ＩｇＧを例に挙げるならば、Ｉｇ
Ｇをパパインで処理すると、２つの重鎖を連結させてい
るヒンジ領域中に存在するジスルフィド結合のややＮ末
端側で切断されて、ＶH及びＣH１からなる重鎖断片と１
つの軽鎖がジスルフィド結合で連結した２つの相同なＦ
ａｂ、並びにヒンジ領域、ＣH２ドメイン及びＣH３ドメ
インからなる２つの相同な重鎖断片がジスルフィド結合
で連結した１つのＦｃを生ずる（以上、「免疫学イラス
トレイテッド」、原書第２版、第65〜75頁、１９９２
年、南江堂発行、及び「最新医科学の焦点「免疫系の認
識機構」」、第4〜7頁、１９９１年、南江堂発行など参
照）。
【０１４５】即ち、本発明における「免疫グロブリンの
重鎖の定常領域の一部」とは、上述のような構造的特徴
を有する免疫グロブリンの重鎖の定常領域一部を意味
し、好ましくは、Ｃ１ドメインを欠く定常領域またはＦ
ｃ領域である。具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇ
Ｄの場合には、各々のヒンジ領域、Ｃ２ドメイン及びＣ
３ドメインからなる領域が挙げられ、ＩｇＭまたはＩｇ
Ｅの場合には、各々のＣ２ドメイン、Ｃ３ドメイン及び
Ｃ４ドメインからなる領域が挙げられる。とりわけ好ま
しい例としては、ヒト由来のＩｇＧ１のＦｃ領域を挙げ
ることができる。
【０１４６】本発明の「融合ポリペプチド」とは、前記
の定義されるとおりの本発明の「細胞表面分子」を構成
する「ポリペプチド」の細胞外領域と「ヒトの免疫グロ
ブリン（Ｉｇ）の重鎖の定常領域または定常領域の一
部」とからなる融合ポリペプチドである。好ましくは本
発明のポリペプチドの細胞外領域とヒトＩｇＧの重鎖の
定常領域の一部との融合ポリペプチドであり、特に好ま
しくは本発明のポリペプチドの細胞外領域とヒトＩｇＧ
の重鎖のヒンジ領域、ＣH２ドメイン及びＣH３ドメイン
からなる領域（Ｆｃ）との融合ポリペプチドである。な
お、ＩｇＧとしては、ＩｇＧ１が好ましい。また、本発
明のポリペプチドとしては、ヒト、マウスまたはラット
（好ましくはヒト）に由来するポリペプチドが好まし
い。
【０１４７】本発明の融合ポリペプチドは、前述のよう
なＩｇＧ等の免疫グロリンの定常領域の一部（例えば、
Ｆｃ）を融合パートナーとして有することから、該免疫
グロブリン断片に特異的に結合するというプロテインＡ
の性質を用いたアフィニティーカラムクロマトグラフィ
ーを用いることにより該融合ポリペプチドを極めて容易
に精製することが可能であるという点で利点を有する。
さらに、種々の免疫グロブリンのＦｃに対する種々の抗
体が提供されていることから、該Ｆｃに対する抗体を用
いて、該融合ポリペプチドのイムノアッセイを簡便に行
うことができる。
【０１４８】本発明のポリペプチド、ポリペプチド断片
及び融合ポリペプチドは、後述するような遺伝子組換え
技術のほか、化学的合成法、細胞培養方法等のような当
該技術的分野において知られる公知の方法あるいはその
修飾方法を適宜用いることにより製造することができ
る。
【０１４９】本発明の「遺伝子」は、前述の本発明のポ
リペプチドまたはポリペプチド断片をコードするＤＮＡ
からなる遺伝子であって、本発明のポリペプチドまたは
ポリペプチド断片をコードし得るいかなる塩基配列を有
する遺伝子をも包含する。
【０１５０】具体的な態様としては、下記ポリペプチド
またはそのポリペプチド断片をコードする遺伝子であ
る。 （１）配列番号１に記載の塩基配列からなるＤＮＡにス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡに
よりコードされるポリペプチド。 （２）配列番号２に記載のアミノ酸配列と６０％以上の
相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド。 （３）配列番号２に記載されるアミノ酸配列または該ア
ミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチド（即ち、「ヒトJTT-1抗原」を構成するポリペ
プチド及びその誘導体）。 （４）配列番号３の塩基番号26乃至625に記載の塩基配
列によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「ヒトJTT-1抗原」を構成するポリペプチド及
びその誘導体）。 （５）配列番号４の塩基番号35乃至637に記載の塩基配
列によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「ラットJTT-1抗原」を構成するポリペプチド
及びその誘導体）。 （６）配列番号５の塩基番号1乃至603に記載の塩基配列
によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配列
と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「マウスJTT-1抗原」を構成するポリペプチド
及びその誘導体）。 （７）配列番号６の塩基番号35乃至685に記載の塩基配
列によりコードされるアミノ酸配列または該アミノ酸配
列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド
（即ち、「ラットJTT-1抗原の変異体」を構成するポリ
ペプチド及びその誘導体）。 （８）国際寄託番号FERM BP-5725識別される形質転換体
に導入された本発明の細胞表面分子を構成するポリペプ
チドをコードするＤＮＡによりコードされるアミノ酸配
列または該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
を有するポリペプチド（即ち、「ヒトJTT-1抗原」を構
成するポリペプチド及びその誘導体）。
【０１５１】ここで「実質的に同一のアミノ酸配列を有
する」とは、前記に定義したような意味を有する。
【０１５２】さらに具体的な態様としては、下記ＤＮＡ
またはその断片が挙げられる。 （１）配列番号１に記載の塩基配列からなるＤＮＡ、並
びに該ＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするＤＮＡ。 （４）配列番号３の塩基番号26乃至625に記載の塩基配
列を含むＤＮＡ。 （５）配列番号４の塩基番号35乃至637に記載の塩基配
列を含むＤＮＡ。 （６）配列番号５の塩基番号1乃至603に記載の塩基配列
を含むＤＮＡ。 （７）配列番号６の塩基番号35乃至685に記載の塩基配
列を含むＤＮＡ。 （８）国際寄託番号FERM BP-5725識別される形質転換体
に導入された本発明の細胞表面分子を構成するポリペプ
チドをコードするＤＮＡ。
【０１５３】また、本発明における融合ポリペプチドの
一部である免疫グロブリンの重鎖の定常領域の一部をコ
ードするＤＮＡとしては、ｃＤＮＡであっても良いし、
また各エクソン（例えば、ＣH１ドメイン、ヒンジ領
域、ＣH２ドメイン、ＣH３ドメイン、ＣH４ドメインな
どをコードするＤＮＡ）の間にイントロンを含むような
ゲノミックＤＮＡであっても良い。
【０１５４】本発明においては、同一のアミノ酸をコー
ドするコドンであればどのようなコドンから構成される
ＤＮＡを含む。
【０１５５】また、本発明のＤＮＡは、いかなる方法で
得られるものであってもよい。例えばｍＲＮＡから調製
される相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、ゲノムＤＮＡから調製
されるＤＮＡ、化学合成によって得られるＤＮＡ、ＲＮ
ＡまたはＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ法で増幅させて得ら
れるＤＮＡおよびこれらの方法を適当に組み合わせて構
築されるＤＮＡをも全て包含するものである。
【０１５６】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
は、常法に従って本発明のポリペプチドのｍＲＮＡから
ｃＤＮＡをクローン化する方法、ゲノムＤＮＡを単離し
てスプライシング処理する方法、化学合成する方法等に
より取得することができる。
【０１５７】（１）例えば、本発明のポリペプチドのｍ
ＲＮＡからｃＤＮＡをクローン化する 方法としては、
以下の方法が例示される。
【０１５８】まず、本発明の細胞表面分子（ポリペプチ
ド）を発現・産生する組織あるいは細胞（例えば、胸腺
細胞やConA刺激した脾臓由来リンパ芽球細胞）から該本
発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを調製する。
ｍＲＮＡの調製は、例えばグアニジンチオシアネート法
（Chirgwin J.M. et al, Biochemistry, Vol.18, p.529
4, 1979）、熱フェノール法もしくはＡＧＰＣ法等の公
知の方法を用いて調製した全ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）セ
ルロースやポリＵ−セファロース等によるアフィニティ
クロマトグラフィーにかけることによって行うことがで
きる。
【０１５９】次いで得られたｍＲＮＡを鋳型として、例
えば逆転写酵素を用いる等の公知の方法、例えばオカヤ
マらの方法（モレキュラーセルバイオロジー（Mol.Cel
l.Biol.）、第２巻、第１６１頁、１９８２年及び同誌
第３巻、第２８０頁、１９８３年）やホフマン（Hoffma
n）らの方法（ジーン（Gene）、第２５巻、第２６３
頁、１９８３年）等によりｃＤＮＡ鎖を合成し、ｃＤＮ
Ａの二本鎖ｃＤＮＡへの変換を行う。このｃＤＮＡをプ
ラスミドベクター、ファージベクターまたはコスミドベ
クターに組み込み、大腸菌を形質転換して、あるいはイ
ンビトロパッケージング後、大腸菌に形質移入（トラン
スフェクト）することによりｃＤＮＡライブラリーを作
製する。
【０１６０】ここで用いられるプラスミドベクターとし
ては、宿主内で複製保持されるものであれば特に制限さ
れず、また用いられるファージベクターとしても宿主内
で増殖できるものであれば良い。常法的に用いられるク
ローニング用ベクターとしてpME18S、λZAPII（lZAPI
I）、pUC19、λgt10、λgt11等が例示される。ただし、
後述の免疫学的スクリーニングに供する場合は、宿主内
で本発明のポリペプチドをコードする遺伝子を発現させ
うるプロモーターを有したベクターであることが好まし
い。
【０１６１】プラスミドにｃＤＮＡを組み込む方法とし
ては、例えばマニアティス（Maniatis）らの方法（モレ
キュラークローニング、ア・ラボラトリー・マニュアル
（Molecular Cloning, A Laboratory Manual, second e
dition）、コールドスプリングハーバーラボラトリー
（Cold Spring Harbor Laboratory）、第1.53頁、１９
８９年） に記載の方法などが挙げられる。また、ファ
ージベクターにｃＤＮＡを組み込む方法としては、ヒュ
ン（Hyunh） らの方法（ＤＮＡクローニング、プラクテ
ィカルアプローチ（DNA Cloning, a practical approac
h）、第1巻、第49頁、１９８５年）などが挙げられる。
簡便には、市販のクローニングキット（例えば、宝酒造
製等）を用いることもできる。このようにして得られる
組換えプラスミドやファージベクターは、原核細胞（例
えば、Ｅ．ｃｏｌｉ：XL1Blue MRF'、DH5α、HB101また
はMC1061/P3等）等の適当な宿主に導入する。
【０１６２】プラスミドを宿主に導入する方法として
は、（モレキュラークローニング、ア・ラボラトリー・
マニュアル（Molecular Cloning, A Laboratory Manua
l, second edition）、コールドスプリングハーバーラ
ボラトリー（Cold Spring HarborLaboratory）、第1.74
頁、１９８９年）に記載の塩化カルシウム法または塩化
カルシウム／塩化ルビジウム法、エレクトロポレーショ
ン法等が挙げられる。また、ファージベクターを宿主に
導入する方法としてはファージＤＮＡをインビトロパッ
ケージングした後、増殖させた宿主に導入する方法等が
例示される。インビトロパッケージングは、市販のイン
ビトロパッケージングキット（例えば、ストラタジーン
製、アマシャム製等）を用いることによって簡便に行う
ことができる。
【０１６３】上記の方法によって作製されたｃＤＮＡラ
イブラリーから、本発明のポリペプチドをコードするｃ
ＤＮＡを単離する方法は、一般的なｃＤＮＡスクリーニ
ング法を組み合わせることによって行うことができる。
【０１６４】例えば、別個に本発明のポリペプチドのア
ミノ酸配列に対応すると考えられるオリゴヌクレオチド
を化学合成したのち、これを32Ｐでラベルしてプローブ
となし、公知のコロニーハイブリダイゼーション法（ク
ランシュタイン（Crunstein）ら 、プロシーディングス
オブナショナルアカデミーオブサイエンス（Proc. Nat
l. Acid. Sci. USA）、第７２巻、第３９６１頁、１９
７５年）またはプラークハイブリダイゼーション法（Mo
lecular Cloning, A Laboratory Manual, second editi
on , Cold Spring Harbor Laboratory、第2.108 頁、１
９８９年）により、目的のｃＤＮＡを含有するクローン
をスクリーニングする方法、ＰＣＲプライマーを作製し
本発明のポリペプチドの特定領域をＰＣＲ法により増幅
し、該領域をコードするＤＮＡ断片を有するクローンを
選択する方法等が挙げられる。
【０１６５】また、ｃＤＮＡを発現しうるベクター（例
えば、λZAPIIファージベクター）を用いて作製したｃ
ＤＮＡライブラリーを用いる場合には、本発明のポリペ
プチドに反応性を有する抗体を用いる抗原抗体反応を利
用して、目的のクローンを選択することができる。大量
にクローンを処理する場合には、ＰＣＲ法を利用したス
クリーニング法を用いることが好ましい。
【０１６６】この様にして得られたＤＮＡの塩基配列は
マキサム・ギルバート法（マキサム（Maxam）ら、Proc.
Natl. Acad. Sci. USA.、第７４巻、第５６０頁、１９
７７年）あるいはファージＭ１３を用いたジデオキシヌ
クレオチド合成鎖停止の方法（サンガー（Sanger）ら、
Proc. Natl. Acad. Sci. USA.、第７４巻、第５４６３
〜５４６７頁、１９７７年）によって決定することがで
きる。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子は、そ
の全部または一部を上記のようにして得られるクローン
から制限酵素等により切り出すことにより取得できる。
【０１６７】（２）また、前述のような本発明のポリペ
プチドを発現する細胞に由来するゲノムＤＮＡから本発
明のポリペプチドをコードするＤＮＡを単離することに
よる調製方法としては、例えば以下の方法が例示され
る。
【０１６８】該細胞を好ましくはＳＤＳまたはプロテナ
ーゼＫ等を用いて溶解し、フェノールによる抽出を反復
してＤＮＡの脱蛋白質を行う。ＲＮＡを好ましくはリボ
ヌクレアーゼにより消化する。得られるＤＮＡを適当な
制限酵素により部分消化し、得られるＤＮＡ断片を適当
なファージまたはコスミドで増幅しライブラリーを作成
する。そして目的の配列を有するクローンを、例えば放
射性標識されたＤＮＡプローブを用いる方法等により検
出し、該クローンから本発明のポリペプチドをコードす
る遺伝子の全部または一部を制限酵素等により切り出し
取得する。
【０１６９】ヒト由来のポリペプチドをコードするｃＤ
ＮＡを取得する場合には、さらにヒトゲノムＤＮＡ（染
色体ＤＮＡ）が導入されたコスミドライスラリーを作製
（「ラボマニュアルヒトゲノムマッピング」、丸善出
版）し、該コスミドライブラリーをスクリーニングする
ことにより、目的タンパクのコーディング領域のＤＮＡ
を含む陽性クローンを得、該陽性クローンから切り出し
たコーディングＤＮＡをプローブとして用い、前述のｃ
ＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより調
製することもできる。
【０１７０】（３） また、化学的合成による本発明の
ＤＮＡの製造は、配列番号１、３、４、５または６に記
載される塩基配列をもとにして、常法に従って行うこと
ができる。
【０１７１】さらに本発明は、上述の本発明の細胞表面
分子（ポリペプチド）をコードするＤＮＡを含有する組
換えベクターに関する。本発明の組換えベクターとして
は、原核細胞及び／または真核細胞の各種の宿主内で複
製保持または自己増殖できるものであれば特に制限され
ず、プラスミドベクターおよびファージベクターが包含
される。
【０１７２】当該組換えベクターは、簡便には当業界に
おいて入手可能な組換え用ベクター（プラスミドＤＮＡ
およびバクテリアファージＤＮＡ）に本発明のポリペプ
チドをコードするＤＮＡを常法により連結することによ
って調製することができる。用いられる組換え用ベクタ
ーとして具体的には、大腸菌由来のプラスミドとして例
えばpBR322、pBR325、pUC12、pUC13、pUC19など、酵母
由来プラスミドとして例えばpSH19、pSH15など、枯草菌
由来プラスミドとして例えばpUB110、pTP5、pC194など
が例示される。また、ファージとしては、λファージな
どのバクテリ オファージが、さらにレトロウイルス、
ワクシニヤウイルス、核多角体ウイルスなどの動物や昆
虫のウイルス（pVL1393、インビトロゲン製）が例示さ
れる。
【０１７３】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
を発現させ本発明のポリペプチドを生産させる目的にお
いては、発現ベクターが有用である。発現ベクターとし
ては、原核細胞および／または真核細胞の各種の宿主細
胞中で本発明のポリペプチドをコードする遺伝子を発現
し、これら蛋白質を生産する機能を有するものであれば
特に制限されない。例えば、pEFneo（Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA, 91, 158-162, 1994）、pEF-BOS（Nucleic
Acid Research, 18, 5322, 1990）、pME18S（実験医学
別冊「遺伝子工学ハンドブック」、１９９２年等）ある
いはpMAL C2 等を挙げることができる。
【０１７４】宿主細胞として細菌、特に大腸菌を用いる
場合、一般に発現ベクターは少なくともプロモーター／
オペレーター領域、開始コドン、本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡ、終止コドン、ターミネーター領域
および複製可能単位から構成される。
【０１７５】宿主として酵母、動物細胞または昆虫細胞
を用いる場合、発現ベクターは少なくともプロモータ
ー、開始コドン、本発明のポリペプチドをコードするＤ
ＮＡ、終止コドンを含んでいることが好ましい。またシ
グナルペプチドをコードするＤＮＡ、エンハンサー配
列、本発明のポリペプチドをコードする遺伝子の５’側
および３’側の非翻訳領域、スプライシング接合部、ポ
リアデニレーション部位、選択マーカー領域または複製
可能単位などを含んでいてもよい。また、目的に応じて
通常用いられる遺伝子増幅遺伝子（マーカー）を含んで
いてもよい。
【０１７６】細菌中で本発明のポリペプチドを発現させ
るためのプロモーター／オペレータ−領域は、プロモー
ター、オペレーターおよび Shine-Dalgarno(SD) 配列
（例えば、ＡＡＧＧなど）を含むものである。例えば宿
主がエシェリキア属菌の場合、好適にはＴｒｐプロモー
ター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λ
ＰＬプロモーター、ｌｐｐプロモーター、ｔａｃプロモ
ーターなどを含むものが例示される。酵母中で本発明の
ポリペプチドを発現させるためのプロモーターとして
は、ＰＨ０５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡ
Ｐプロモーター、ＡＤＨプロモーターが挙げられ、宿主
がバチルス属菌の場合は、ＳＬ０１プロモーター、ＳＰ
０２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなどが挙げら
れる。また、宿主が哺乳動物細胞等の真核細胞である場
合、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプ
ロモーター、ヒートショックプロモーター、ＥＦプロモ
ーターなどが挙げられる。好ましくは、ＳＶ−４０、Ｓ
Ｒα、レトロウイルスである。しかし、特にこれらに限
定されるものではない。また、発現にはエンハンサーの
利用も効果的な方法である。
【０１７７】好適な開始コドンとしては、メチオニンコ
ドン（ＡＴＧ）が例示される。
【０１７８】終止コドンとしては、常用の終止コドン
（例えば、ＴＡＧ、ＴＧＡ、ＴＡＡなど）が例示され
る。
【０１７９】ターミネーター領域としては、通常用いら
れる天然または合成のターミネーターを用いることがで
きる。
【０１８０】複製可能単位とは、宿主細胞中でその全Ｄ
ＮＡ配列を複製することができる能力をもつＤＮＡを言
い、天然のプラスミド、人工的に修飾されたプラスミド
（天然のプラスミドから調製されたＤＮＡフラグメン
ト）および合成プラスミド等が含まれる。好適なプラス
ミドとしては、E. coli ではプラスミドｐＢＲ３２２、
もしくはその人工的修飾物（ｐＢＲ３２２を適当な制限
酵素で処理して得られるＤＮＡフラグメント）が、酵母
では酵母２μプラスミド、もしくは酵母染色体ＤＮＡ
が、また哺乳動物細胞ではプラスミドpEFneo、pME18S、
pRSVneo ATCC 37198、プラスミドpSV2dhfr ATCC 3714
5、プラスミドpdBPV-MMTneo ATCC 37224、プラスミドpS
V2neo ATCC 37149等があげられる。
【０１８１】エンハンサー配列、ポリアデニレーション
部位およびスプライシング接合部位については、例えば
それぞれＳＶ４０に由来するもの等、当業者において通
常使用されるものを用いることができる。
【０１８２】選択マーカーとしては、通常使用されるも
のを常法により用いることができる。例えばテトラサイ
クリン、ネオマイシン、アンピシリン、またはカナマイ
シン等の抗生物質耐性遺伝子等あるいはチミジンキナー
ゼ遺伝子が例示される。
【０１８３】遺伝子増幅遺伝子としては、ジヒドロ葉酸
レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子、チミジンキナーゼ遺
伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、グルタミン酸合成酵素
遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子、オルニチンデ
カルボキシラーゼ遺伝子、ヒグロマイシン−Ｂ−ホスホ
トランスフェラーゼ遺伝子、アスパルラートトランスカ
ルバミラーゼ遺伝子等を例示することができる。
【０１８４】本発明の発現ベクターは、少なくとも、上
述のプロモーター、開始コドン、本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡ（遺伝子）、終止コドンおよびター
ミネーター領域を連続的かつ環状に適当な複製可能単位
に連結することによって調製することができる。またこ
の際、所望により制限酵素での消化やＴ４ＤＮＡリガー
ゼを用いるライゲーション等の常法により適当なＤＮＡ
フラグメント（例えば、リンカー、他のリストリクショ
ンサイトなど）を用いることができる。
【０１８５】本発明の形質転換細胞は、上述の発現ベク
ターを宿主細胞に導入することにより調製することがで
きる。
【０１８６】本発明で用いられる宿主細胞としては、前
記の発現ベクターに適合し、形質転換されうるものであ
れば特に限定されず、本発明の技術分野において通常使
用される天然細胞あるいは人工的に樹立された組換細胞
など種々の細胞（例えば、細菌（エシェリキア属菌、バ
チルス属菌）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属な
ど）、動物細胞または昆虫細胞など）が例示される。
【０１８７】好ましくは大腸菌あるいは動物細胞であ
り、具体的には大腸菌（ＤＨ５α、XL1Blue MRF'、ＴＢ
１、ＨＢ１０１等）、マウス由来細胞（ＣＯＰ、Ｌ、Ｃ
１２７、Ｓｐ２／０、ＮＳ−１またはＮＩＨ3 Ｔ3
等）、ラット由来細胞、ハムスター由来細胞（ＢＨ
Ｋ、CHO-K1およびＣＨＯ等）、サル由来細胞（ＣＯＳ
１、ＣＯＳ３、ＣＯＳ７、ＣＶ１およびＶｅｌｏ等）お
よびヒト由来細胞（HEK293、Ｈｅｌａ、２倍体線維芽細
胞に由来する細胞、ミエローマ細胞およびＮａｍａｌｗ
ａ等）などが例示される。
【０１８８】発現ベクターの宿主細胞への導入（形質転
換（形質移入））は従来公知の方法を用いて行うことが
できる。
【０１８９】例えば、細菌（E.coli、Bacillus subtili
s 等）の場合は、例えばCohenらの方法（Proc. Natl. A
cad. Sci. USA.、第６９巻、第２１１０頁、１９７２年
）、プロトプラスト法（Mol. Gen. Genet.、 第１６８
巻、第１１１頁、１９７ ９年）やコンピテント法（ジ
ャーナルオブモレキュラーバイオロジー（J. Mol. Bio
l.）、第５６巻、第２０９頁、１９７１年）によって、
Saccharomyces cerevisiaeの場合は、例えばハイネン
（Hinnen）らの方法（Proc. Natl. Acad. Sci. USA.、
第７５巻、第１９２７頁、１９７８年）やリチウム法
（J. Bacteriol.、第１５３巻、第１６３頁、１９８３
年）によって、動物細胞の場合は、例えばグラハム（Gr
aham）の方法（バイロロジー（Virology）、第５２巻、
第４５６頁、１９７３年）、昆虫細胞の場合は、例えば
サマーズ（Summers）らの方法（Mol. Cell. Biol.、第
３巻、第２１５６〜第２１６５頁、１９８３年）によっ
てそれぞれ形質転換することができる。
【０１９０】本発明のポリペプチドは、上記の如く調製
される発現ベクターを含む形質転換細胞（以下、形質移
入体を包含する意味で使用する。）を栄養培地で培養す
ることによって製造することができる。
【０１９１】栄養培地は、宿主細胞（形質転換体）の生
育に必要な炭素源、無機窒素源もしくは有機窒素源を含
でいることが好ましい。炭素源としては、例えばグルコ
ース、デキストラン、可溶性デンプン、ショ糖などが、
無機窒素源もしくは有機窒素源としては、例えばアンモ
ニウム塩類、硝酸塩類、アミノ酸、コーンスチープ・リ
カー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイ
ショ抽出液などが例示される。また所望により他の栄養
素（例えば、無機塩（例えば塩化カルシウム、リン酸二
水素ナトリウム、塩化マグネシウム）、ビタミン類、抗
生物質（例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、アン
ピシリン、カナマイシン等）など）を含んでいてもよ
い。
【０１９２】培養は当業界において知られている方法に
より行われる。培養条件、例えば温度、培地のｐＨおよ
び培養時間は、本発明のポリペプチドが大量に生産され
るように適宜選択される。
【０１９３】なお、下記に宿主細胞に応じて用いられる
具体的な培地および培養条件を例示するが、何らこれら
に限定されるものではない。
【０１９４】宿主が細菌、放線菌、酵母、糸状菌である
場合、例えば上記栄養源を含有する液体培地が適当であ
る。好ましくは、ｐＨが５〜８である培地である。
【０１９５】宿主がE. coli の場合、好ましい培地とし
てＬＢ培地、Ｍ９培地（ミラー（Miller）ら、 Exp. Mo
l. Genet、Cold Spring Harbor Laboratory、第４３１
頁、１９７２年）等が例示される。かかる場合、培養
は、必要により通気、攪拌しながら、通常１４〜４３
℃、約３〜２４時間行うことができる。
【０１９６】宿主がBacillus属菌の場合、必要により通
気、攪拌をしながら、通常３０〜４０℃、約１６〜９６
時間行うことができる。
【０１９７】宿主が酵母である場合、培地として、例え
ばBurkholder最小培（ボスチアン（Bostian）、Proc. N
atl. Acad. Sci. USA、第７７巻、第４５０５頁、１９
８ ０年）が挙げられ、ｐＨは５〜８であることが望ま
しい。培養は通常約２０〜３５℃で約１４〜１４４時間
行なわれ、必要により通気や攪拌を行うこともできる。
【０１９８】宿主が動物細胞の場合、培地として例えば
約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地（サイエン
ス（Science）、第１２２巻、第５０１頁、１９５２
年）、ＤＭＥＭ培地（バイロロジー（Virology）、第８
巻、 第３９６頁、１９５９ 年）、ＲＰＭＩ１６４０培
地（J. Am. Med. Assoc.、第１９９巻、第５１９頁、１
９６７年）、１９９培地（proc. Soc. Exp. Biol. Me
d.、第７３巻、第１頁、１９５０年）等を用いることが
できる。培地のｐＨは約６〜８であるのが好ましく、培
養は通常約３０〜４０℃で約１５〜７２時間行なわれ、
必要により通気や攪拌を行うこともできる。
【０１９９】宿主が昆虫細胞の場合、例えば胎児牛血清
を含むGrace's 培地（Proc. Natl.Acad. Sci. USA、第
８２巻、第８４０４頁、１９８５年）等が挙げられ、そ
のｐＨは約５〜８であるのが好ましい。培養は通常約２
０〜４０℃で１５〜１００時間行なわれ、必要により通
気や攪拌を行うこともできる。
【０２００】本発明のポリペプチドは、上述のような形
質転換細胞、特に動物細胞を培養することにより、その
細胞表面に目的分子を高発現させることが可能である。
【０２０１】一方、本発明のポリペプチドを、細胞外領
域断片のような可溶性ポリペプチド断片として製造する
場合には、当該細胞外領域あるいは各ドメインをコード
するＤＮＡを用いて上述のように形質転換体を調製し、
外形質転換体を培養することにより培養上清中に分泌さ
せることにより製造することができる。また、本発明の
融合ポリペプチドについても同様にして作製することが
できる。
【０２０２】すなわち、得られた培養物を濾過または遠
心分離等の方法で培養濾液（上清）を得、該培養濾液か
ら天然または合成蛋白質を精製並びに単離するために一
般に用いられる常法に従って該本発明のポリペプチドま
たはポリペプチド断片を精製、単離する。
【０２０３】単離、精製方法としては、例えば塩析、溶
媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、
ゲル濾過、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動など分子量の差を利用する方法、イオン
交換クロマトグラフィーやヒドロキシルアパタイトクロ
マトグラフィーなどの荷電を利用する方法、アフィニテ
ィークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する
方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の
差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を
利用する方法などが挙げられる。
【０２０４】一方、本発明のポリペプチドまたはポリペ
プチド断片が培養された形質転換体のペリプラズムまた
は細胞質内に存在する場合は、培養物を濾過または遠心
分離などの常法に付して菌体あるいは細胞を集め、適当
な緩衝液に懸濁し、例えば超音波やリゾチーム及び凍結
融解などの方法で細胞等の細胞壁および／または細胞膜
を破壊した後、遠心分離やろ過などの方法で本発明のポ
リペプチドを含有する膜画分を得る。該膜画分をトライ
トン−Ｘ１００等の界面活性剤を用いて可溶化して粗溶
液を得る。そして、当該粗溶液を先に例示したような常
法を用いることにより、単離、精製することができる。
【０２０５】本発明における「トランスジェニックマウ
ス」は、上述のような方法に従って調製できる本発明の
マウス以外の動物種のポリペプチド（非自己のポリペプ
チド）をコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡまたはゲノミック
ＤＮＡ）がマウスの内在性遺伝子座上にインテグレート
（integrate）されているトラ ンスジェニックマウスマ
ウスであり、該トランスジェニックマウスは、体内に該
非自己のポリペプチドを発現、分泌する。
【０２０６】該トランスジェニックマウスは、トランス
ジェニック動物の製造において通常使用されるような常
法（例えば、最新動物細胞実験マニュアル、エル・アイ
・シー発行、第７章、第３６１〜第４０８頁、１９９０
年を参照）に従って作製することが可能である。
【０２０７】具体的には、例えば、正常マウス胚盤胞
（blastcyst）のか ら取得した胚性幹細胞（Embryonic
Stem Cell, ES Cell）を、例えば、ヒト由来の本発明の
ポリペプチド（即ち「ヒトJTT-1抗原」）をコードする
遺伝子が発現可能なように挿入された発現ベクターで形
質転換する。該本発明のヒト由来のポリペプチドをコー
ドする遺伝子が内在性遺伝子上にインテグレートされた
ＥＳ細胞を常法により選別する。次いで、選別したＥＳ
細胞を、別の正常マウスから取得した受精卵（肺盤胞）
にマイクロインジェクションする（Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, Vol.77, No.12, pp.7380-7384, 1980；米国
特許第4,873,191号公報）。該胚盤胞を仮親としての別
の正常マウスの子宮に移植する。そうして該仮親マウス
から、ファウンダーマウス（子マウス）が生まれる。該
ファウンダーマウスを正常マウスと交配させることによ
りヘテロトランスジェニックマウスを得る。該ヘテロ
（heterogeneic）トランスジェニックマウス同士を交配
することにより、メンデルの法則に従って、ホモ（homo
geneic）トランスジェニックマウスが得られる。
【０２０８】本発明の「ノックアウトマウス」は、マウ
ス由来の本発明のポリペプチド（即ち「マウスJTT-1抗
原）をコードする内在性遺伝子がノックアウト（不活性
化）されたマウスであり、例えば相同組換えを応用した
ポジティブネガティブセレクション法を用いて作製する
ことができる（米国特許第5,464,764号公報、同5,487,9
92号公報、同5,627,059号公報、Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA, Vol.86, 8932-8935, 1989、Nature, Vol.342,
435-438, 1989など）。
【０２０９】本発明における「抗体」とは、ポリクロー
ナル抗体（抗血清）あるいはモノクローナル抗体を意味
し、好ましくはモノクローナル抗体である。
【０２１０】具体的には、前述の本発明のポリペプチド
またはポリペプチド断片に反応性を有する抗体である。
【０２１１】本発明の「抗体」は、本発明の「細胞表面
分子」を発現する細胞（天然の細胞、株化細胞、腫瘍細
胞など）、遺伝子組換技術を用いて作製される本発明の
ポリペプチドまたは細胞表面分子をその細胞表面に高発
現させた形質転換体、あるいは本発明の「ポリペプチド
断片」若しくは「融合ポリペプチド」を抗原として、該
抗原をマウス、ラット、ハムスター、モルモットあるい
はウサギ等の哺乳動物に免疫して得られる天然型抗体、
遺伝子組換技術を用いて製造され得るキメラ抗体及びヒ
ト型抗体（CDR-grafted抗体）、並びにヒト抗体産生ト
ランスジェニック動物等を用いて製造され得るヒト抗体
も包含する。
【０２１２】またモノクローナル抗体の場合には、Ｉｇ
Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤあるいはＩｇＥ等のいずれ
のアイソタイプを有するモノクローナル抗体をも包含す
る。好ましくは、ＩｇＧまたはＩｇＭである。
【０２１３】本発明で言うポリクローナル抗体（抗血
清）あるいはモノクローナル抗体は、既存の一般的な製
造方法によって製造することができる。即ち、例えば、
前述のような抗原を、必要に応じてフロイントアジュバ
ント（Freund's Adjuvant）とともに、哺乳動物、好ま
しくは、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウ
サギ、ネコ、イヌ、ブタ、ヤギ、ウマあるいはウシ、よ
り好ましくはマウス、ラット、ハムスター、モルモット
またはウサギに免疫する。
【０２１４】ポリクローナル抗体は、該免疫感作動物か
ら得た血清から取得することができる。またモノクロー
ナル抗体は、該免疫感作動物から得た該抗体産生細胞と
自己抗体産生能のない骨髄腫系細胞（ミエローマ細胞）
からハイブリドーマを調製し、該ハイブリドーマをクロ
ーン化し、哺乳動物の免疫に用いた抗原に対して特異的
親和性を示すモノクローナル抗体を産生するクローンを
選択することによって製造される。
【０２１５】モノクローナル抗体は、具体的には下記の
ようにして製造することができる。即ち、前述のような
抗原を免疫原とし、該免疫原を、必要に応じてフロイン
トアジュバント（Freund's Adjuvant）とともに、非ヒ
ト哺乳動物、具体的 には、マウス、ラット、ハムスタ
ー、モルモ ットあるいはウサギ、好ましくは マウス、
ラットあるいはハムスター（後述するヒト抗体産生トラ
ンスジェニックマウスのような他の動物由来の抗体を産
生するように作出されたトランスジェニック動物を含
む）の皮下内、筋肉内、静脈内、フッドパッド内あるい
は腹腔内に１乃至数回注射するかあるいは移植すること
により免疫感作を施す。通常、初回免疫から約１乃至１
４日毎に１乃至４回免疫を行って、最終免疫より約１乃
至５日後に免疫感作された該哺乳動物から抗体産生細胞
が取得される。免疫を施す回数及び時間的インターバル
は、使用する免疫原の性質などにより、適宜変更するこ
とができる。 モノクローナル抗体を分泌するハイブリ
ドーマの調製は、ケーラー及びミルシュタインらの方法
（ネイチャー(Nature)、第２５６巻、第４９５〜第４９
７頁、１９７５年）及びそれに準じる修飾方法に従って
行うことができる。即ち、前述の如く免疫感作された非
ヒト哺乳動物から取得される脾臓、リンパ節、骨髄ある
いは扁桃等、好ましくは脾臓に含まれる抗体産生細胞
と、好ましくはマウス、ラット、モルモット、ハムスタ
ー、ウサギまたはヒト等の哺乳動物、より好ましくはマ
ウス、ラットまたはヒト由来の自己抗体産生能のないミ
エローマ細胞との細胞融合させることにより調製され
る。
【０２１６】細胞融合に用いられるミエローマ細胞とし
ては、例えばマウス由来ミエローマP3/X63-AG8.653（６
５３）、P3/NSI/1-Ag4-1（ＮＳ−１）、P3/X63-Ag8.U1
（Ｐ３Ｕ１）、SP2/0-Ag14（Ｓｐ２／Ｏ、Ｓｐ２）、PA
I、F0あるいはBW5147、ラット由来ミエローマ210RCY3-A
g.2.3.、ヒト由来ミエローマU-266AR1、GM1500-6TG-A1-
2、UC729-6、CEM-AGR、D1R11あるいはCEM-T15を使用す
ることができる。
【０２１７】モノクローナル抗体を産生するハイブリド
ーマクローンのスクリーニングは、ハイブリドーマを、
例えばマイクロタイタープレート中で培養し、増殖の見
られたウェルの培養上清の前述の免疫感作で用いた免疫
抗原に対する反応性を、例えばＲＩＡやＥＬＩＳＡ等の
酵素免疫測定法によって測定することにより行なうこと
ができる。
【０２１８】ハイブリドーマからのモノクローナル抗体
の製造は、ハイブリドーマをインビトロ、またはマウ
ス、ラット、モルモット、ハムスターまたはウサギ等、
好ましくはマウスまたはラット、より好ましくはマウス
の腹水中等でのインビボで行い、得られた培養上清、ま
たは哺乳動物の腹水から単離することにより行うことが
できる。
【０２１９】インビトロで培養する場合には、培養する
細胞種の特性、試験研究の目的及び培養方法等の種々条
件に合わせて、ハイブリドーマを増殖、維持及び保存さ
せ、培養上清中にモノクローナル抗体を産生させるため
に用いられるような既知栄養培地あるいは既知の基本培
地から誘導調製されるあらゆる栄養培地を用いて実施す
ることが可能である。
【０２２０】基本培地としては、例えば、Ｈａｍ’Ｆ１
２培地、ＭＣＤＢ１５３培地あるいは低カルシウムＭＥ
Ｍ培地等の低カルシウム培地及びＭＣＤＢ１０４培地、
ＭＥＭ培地、Ｄ−ＭＥＭ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地、
ＡＳＦ１０４培地あるいはＲＤ培地等の高カルシウム培
地等が挙げられ、該基本培地は、目的に応じて、例えば
血清、ホルモン、サイトカイン及び／または種々無機あ
るいは有機物質等を含有することができる。
【０２２１】モノクローナル抗体の単離、精製は、上述
の培養上清あるいは腹水を、飽和硫酸アンモニウム、ユ
ーグロブリン沈澱法、カプロイン酸法、カプリル酸法、
イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたはＤＥ５
２等）、抗イムノグロブリンカラムあるいはプロテイン
Ａカラム等のアフィニティカラムクロマトグラフィーに
供すること等により行うことができる。
【０２２２】本発明のモノクローナル抗体としては、好
ましくは下記のモノクローナル抗体が挙げられる。
【０２２３】（１）配列番号２に記載されるアミノ酸配
列を有するポリペプチド、該ポリペプチドに由来するポ
リペプチド断片または該ポリペプチドから構成されるヒ
ト由来の細胞表面分子に反応性を有するモノクローナル
抗体。
【０２２４】（２）本発明のポリペプチド、該ポリペプ
チドに由来するポリペプチド断片または該ポリペプチド
により構成される細胞表面分子に反応性を有するモノク
ローナル抗体であって、該モノクローナル抗体のマイト
ジェン（mitogen）で刺激したリンパ芽球細胞への作用
が、国際寄託番号FERM BP-5707で識別されるハイブリド
ーマが産生するモノクローナル抗体がマイトジェンで刺
激したラットリンパ芽球細胞に示す作用と実質的に同一
であるモノクローナル抗体。
【０２２５】（３）本発明のポリペプチド、該ポリペプ
チドに由来するポリペプチド断片または該ポリペプチド
により構成される細胞表面分子に反応性を有するモノク
ローナル抗体であって、該モノクローナル抗体のマイト
ジェン（mitogen）で刺激したリンパ芽球細胞への作用
が、国際寄託番号FERM BP-5708で識別されるハイブリド
ーマが産生するモノクローナル抗体がマイトジェンで刺
激したラットリンパ芽球細胞に示す作用と実質的に同一
であるモノクローナル抗体。
【０２２６】また、本発明のモノクローナル抗体には、
国際寄託番号 FERM BP-5707及び FERM BP-5708で各々識
別されるのハイブリドーマが産生するモノクローナル抗
体も包含する。
【０２２７】本発明における「キメラモノクローナル抗
体」は、遺伝子工学的に作製されるモノクローナル抗体
であって、具体的には、その可変領域が、非ヒト哺乳動
物（マウス、ラット、ハムスターなど）のイムノグロブ
リン由来の可変領域であり、かつその定常領域がヒトイ
ムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴とする
マウス／ヒトキメラモノクローナル抗体等のキメラモノ
クローナル抗体を意味する。
【０２２８】ヒトイムノグロブリン由来の定常領域は、
ＩｇＧ（IgG1, IgG2, IgG3, IgG4）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、
ＩｇＤ及びＩｇＥ等のアイソタイプにより各々固有のア
ミノ酸配列を有するが、本発明における組換キメラモノ
クローナル抗体の定常領域はいずれのアイソタイプに属
するヒトイムノグログリンの定常領域であってもよい。
好ましくは、ヒトＩｇＧの定常領域である。
【０２２９】本発明におけるキメラモノクローナル抗体
は、例えば以下のようにして製造することができる。し
かしながら、そのような製造方法に限定されるものでな
いことは言うまでもない。
【０２３０】例えば、マウス／ヒトキメラモノクローナ
ル抗体は、実験医学（臨時増刊号）、第１．６巻、第１
０号、１９８８年及び特公平３−７３２８０号公報等を
参照しながら作製することができる。即ち、マウスモノ
クローナル抗体を産生するハイブリドーマから単離した
該マウスモノクローナル抗体をコードするＤＮＡから取
得した活性なＶH遺伝子（Ｈ鎖可変領域をコードする再
配列されたＶＤＪ遺伝子）の下流に、ヒトイムノグロム
リンをコードするＤＮＡから取得したＣH遺伝子（Ｈ鎖
定常領域をコードするＣ遺伝子）を、また該ハイブリド
ーマから単離したマウスモノクローナル抗体をコードす
るＤＮＡから取得した活性なＶL遺伝子（Ｌ鎖可変領域
をコードする再配列されたＶＪ遺伝子）の下流にヒトイ
ムノグロムリンをコードするＤＮＡから取得したＣL遺
伝子（Ｌ鎖定常領域をコードするＣ遺伝子）を、各々発
現可能なように配列して１つ又は別々の発現ベクターに
挿入し、該発現ベクターで宿主細胞を形質転換し、該形
質転換細胞を培養することにより作製することができ
る。
【０２３１】具体的には、まず、マウスモノクローナル
抗体産生ハイブリドーマから常法によりＤＮＡを抽出
後、該ＤＮＡを適切な制限酵素（例えばＥｃｏＲＩ、Ｈ
ｉｎｄIII等）を用いて消化し、電気泳動に付して（例
えば０．７％アガロースゲル使用）サザンブロット法を
行う。泳動したゲルを例えばエチジウムブロマイド等で
染色し、写真撮影後、マーカーの位置を付し、ゲルを２
回水洗し、０．２５ＭＨＣｌ溶液に１５分間浸す。次い
で、０．４ＮのＮａＯＨ溶液に１０分間浸し、その間緩
やかに振盪する。常法により、フィルターに移し、４時
間後フィルターを回収して２×ＳＳＣで２回洗浄する。
フィルターを十分乾燥した後、ベイキング（７５℃、３
時間）を行う。ベイキング終了後に、該フィルターを
０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ溶液に入れ、６５℃で
３０分間処理する。次いで、３×ＳＳＣ／０．１％ＳＤ
Ｓ溶液に浸す。得られたフィルターをプレハイブリダイ
ゼーション液と共にビニール袋に入れ、６５℃で３〜４
時間処理する。
【０２３２】次に、この中に32Ｐ標識したプローブＤＮ
Ａ及びハイブリダイゼーション液を入れ、６５℃で１２
時間程度反応させる。ハイブリダイゼーション終了後、
適切な塩濃度、反応温度および時間（例えば、２×ＳＳ
Ｃ−０．１％ＳＤＳ溶液、室温、１０分間）のもとで、
フィルターを洗う。該フィルターをビニール袋に入れ、
２×ＳＳＣを少量加え、密封し、オートラジオグラフィ
ーを行う。
【０２３３】上記サザンブロット法により、マウスモノ
クローナル抗体のＨ鎖及びＬ鎖を各々コードする再配列
されたＶＤＪ遺伝子及びＶＪ遺伝子を同定する。同定し
たＤＮＡ断片を含む領域をショ糖密度勾配遠心にて分画
し、ファージベクター（例えば、Charon 4A、 Charon 2
8、 λＥＭＢＬ３、λＥＭＢＬ４等）に組み込み、該フ
ァージベクターで大腸菌（例えば、LE392、 NM539等)
を形質転換し、ゲノムライブラリーを作製する。そのゲ
ノムライブラリーを適当なプローブ（Ｈ鎖Ｊ遺伝子、Ｌ
鎖（κ）Ｊ遺伝子等）を用いて、例えばベントンデイビ
ス法（サイエンス(Science)、第１９６巻、第１８０〜
第１８２頁、１９７７年）に従って、プラークハイブリ
ダイゼーションを行い、再配列されたＶＤＪ遺伝子ある
いはＶＪ遺伝子を各々含むポジティブクローンを得る。
得られたクローンの制限酵素地図を作製し、塩基配列を
決定し、目的とする再配列されたＶH(VDJ)遺伝子あるい
はＶL(VJ)遺伝子を含む遺伝子が得られていることを確
認する。
【０２３４】一方、キメラ化に用いるヒトＣH遺伝子及
びヒトＣL遺伝子を別に単離する。例えば、ヒトＩｇＧ1
とのキメラ抗体を作製する場合には、ＣH遺伝子である
Ｃγ1遺伝子とＣL遺伝子であるＣκ遺伝子を単離する。
これらの遺伝子はマウス免疫グロブリン遺伝子とヒト免
疫グロブリン遺伝子の塩基配列の高い相同性を利用して
ヒトＣγ1遺伝子及びヒトＣκ遺伝子に相当するマウス
Ｃγ1遺伝子及びマウスＣκ遺伝子をプローブとして用
い、ヒトゲノムライブラリーから単離することによって
得ることができる。
【０２３５】具体的には、例えば、クローンＩｇ１４６
（プロシーディングスナショナルアカデミーオブサイエ
ンス(Proc. Natl. Acad. Sci. USA)、第７５巻、第４７
０９〜第４７１３頁、１９７８年）からの３ｋｂのＨｉ
ｎｄIII−ＢａｍＨＩ断片とクローンＭＥＰ１０（プロ
シーディングスナショナルアカデミーオブサイエンス(P
roc. Natl. Acad. Sci. USA)、第７８巻、第４７４〜第
４７８頁、１９８１年）からの６．８ｋｂのＥｃｏＲＩ
断片をプローブとして用い、ヒトのラムダCharon 4A の
ＨａｅIII−ＡｌｕＩゲノムライブラリー（セル(Cel
l)、第１５巻、第１１５７〜第１１７４頁、１９７８
年）中から、ヒトＣκ遺伝子を含み、エンハンサー領域
を保持しているＤＮＡ断片を単離する。また、ヒトＣγ
1遺伝子は、例えばヒト胎児肝細胞ＤＮＡをＨｉｎｄIII
で切断し、アガロースゲル電気泳動で分画した後、５．
９ｋｂのバンドをλ７８８に挿入し、前記のプローブを
用いて単離する。
【０２３６】このようにして単離されたマウスＶH遺伝
子とマウスＶL遺伝子、及びヒトＣH遺伝子とヒトＣL遺
伝子を用いて、プロモーター領域及びエンハンサー領域
などを考慮しながらマウスＶH遺伝子の下流にヒトＣH遺
伝子を、またマウスＶL遺伝子の下流にヒトＣL遺伝子
を、適切な制限酵素及びＤＮＡリガーゼを用いて、例え
ばｐＳＶ２ｇｐｔあるいはｐＳＶ２ｎｅｏ等の発現ベク
ターに常法に従って組み込む。この際、マウスＶH遺伝
子／ヒトＣH遺伝子とマウスＶL遺伝子／ヒトＣL遺伝子
のキメラ遺伝子は、一つの発現ベクターに同時に配置さ
れてもよいし、各々別個の発現ベクターに配置すること
もできる。
【０２３７】このようにして作製したキメラ遺伝子挿入
発現ベクターを、例えばP3X63・Ag8・653細胞あるいは SP
210細胞といった、自らは抗体を産生していない骨髄腫
細胞にプロトプラスト融合法、ＤＥＡＥ−デキストラン
法、リン酸カルシウム法あるいは電気穿孔法等により導
入する。形質転換細胞は、発現ベクターに導入された薬
物耐性遺伝子に対応する薬物含有培地中での培養により
選別し、目的とするキメラモノクローナル抗体産生細胞
を取得する。
【０２３８】このようにして選別された抗体産生細胞の
培養上清中から目的のキメラモノクローナル抗体を取得
する。
【０２３９】本発明における「ヒト型モノクローナル抗
体（CDR-grafted抗体）」は、遺伝子工学的に作製され
るモノクローナル抗体であって、具体的には、その超可
変領域の相補性決定領域の一部または全部が非ヒト哺乳
動物（マウス、ラット、ハムスターなど）のモノクロー
ナル抗体に由来する超可変領域の相補性決定領域であ
り、その可変領域の枠組領域がヒトイムノグロブリン由
来の可変領域の枠組領域であり、かつその定常領域がヒ
トイムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴と
するヒト型モノクローナル抗体を意味する。
【０２４０】ここで、超可変領域の相補性決定領域と
は、抗体の可変領域中の超可変領域に存在し、抗原と相
補的に直接結合する部位である３つの領域（Complement
arity-determining residue；ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、Ｃ
ＤＲ３）を指し、また可変領域の枠組領域とは、該３つ
相補性決定領域の前後に介在する比較的保存された４つ
の領域（Framework；ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ
４）を指す。
【０２４１】換言すれば、非ヒト哺乳動物由来のモノク
ローナル抗体の超可変領域の相補性決定領域の一部また
は全部以外の全ての領域が、ヒトイムノグロブリンの対
応領域と置き代わったモノクローナル抗体を意味する。
【０２４２】ヒトイムノグロブリン由来の定常領域は、
ＩｇＧ（IgG1, IgG2, IgG3, IgG4）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、
ＩｇＤ及びＩｇＥ等のアイソタイプにより各々固有のア
ミノ酸配列を有するが、本発明におけるヒト型モノクロ
ーナル抗体の定常領域はいずれのアイソタイプに属する
ヒトイムノグログリンの定常領域であってもよい。好ま
しくは、ヒトＩｇＧの定常領域である。また、ヒトイム
ノグロブリン由来の可変領域の枠組領域についても限定
されるものではない。
【０２４３】本発明におけるヒト型モノクローナル抗体
は、例えば以下のようにして製造することができる。し
かしながら、そのような製造方法に限定されるものでな
いことは言うまでもない。
【０２４４】例えば、マウスモノクローナル抗体に由来
する組換ヒト型モノクローナル抗体は、特表平４−５０
６４５８号公報及び特開昭６２−２９６８９０号公報等
を参照して、遺伝子工学的に作製することができる。即
ち、マウスモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マから、少なくとも１つのマウスＨ鎖ＣＤＲ遺伝子と該
マウスＨ鎖ＣＤＲ遺伝子に対応する少なくとも１つのマ
ウスＬ鎖ＣＤＲ遺伝子を単離し、またヒトイムノグロブ
リン遺伝子から前記マウスＨ鎖ＣＤＲに対応するヒトＨ
鎖ＣＤＲ以外の全領域をコードするヒトＨ鎖遺伝子と、
前マウスＬ鎖ＣＤＲに対応するヒトＬ鎖ＣＤＲ以外の全
領域をコードするヒトＬ鎖遺伝子を単離する。
【０２４５】単離した該マウスＨ鎖ＣＤＲ遺伝子と該ヒ
トＨ鎖遺伝子を発現可能なように適当な発現ベクターに
導入し、同様に該マウスＬ鎖ＣＤＲ遺伝子と該ヒトＬ鎖
遺伝子を発現可能なように適当なもう１つの発現ベクタ
ーに導入する。または、該マウスＨ鎖ＣＤＲ遺伝子／ヒ
トＨ鎖遺伝子とマウスＬ鎖ＣＤＲ遺伝子／ヒトＬ鎖遺伝
子を同一の発現ベクターに発現可能なように導入するこ
ともできる。このようにして作製された発現ベクターで
宿主細胞を形質転換することによりヒト型モノクローナ
ル抗体産生形質転換細胞を得、該形質転換細胞を培養す
ることにより培養上清中から目的のヒト型モノクローナ
ル抗体を得る。
【０２４６】本発明における「ヒトモノクローナル抗
体」とは、イムノグロブリンを構成するＨ鎖の可変領域
及びＨ鎖の定常領域並びにＬ鎖の可変領域及びＬ鎖の定
常領域を含む全ての領域がヒトイムノグロブリンをコー
ドする遺伝子に由来するイムノグロブリンである。
【０２４７】ヒト抗体は、常法に従って、例えば、少な
くともヒトイムノグロブリン遺伝子をマウス等のヒト以
外の哺乳動物の遺伝子座中に組込むことにより作製され
たトランスジェニック動物を、抗原で免疫感作すること
により、前述したポリクローナル抗体あるいはモノクロ
ーナル抗体の作製法と同様にして製造することができ
る。
【０２４８】例えば、ヒト抗体を産生するトランスジェ
ニックマウスは、Nature Genetics,Vol.7, p.13-21, 19
94；Nature Genetics, Vol.15, p.146-156, 1997；特
表平4-504365号公報；特表平7-509137号公報；日経サイ
エンス、６月号、第４０〜第５０頁、１９９５年；国際
出願公開ＷＯ９４／２５５８５号公報；Nature, Vol.36
8, p.856-859, 1994；及び特表平６−５００２３３号公
報などに記載の方法に従って作製することができる。
【０２４９】また、昨今開発された技術であるトランス
ジェニックなウシやブタのミルク中からヒト由来タンパ
クを製造方法を適用することも可能である（日系サイエ
ンス、1997年４月号、第７８頁乃至８４頁）。
【０２５０】本発明における「抗体の一部」とは、前述
のようなモノクローナル抗体の一部分の領域を意味し、
具体的にはF(ab')2 、Fab'、Fab 、Ｆｖ（variable fr
agment of antibody）、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ（disulphi
de stabilised Fv）あるいはｄＡｂ（single domain
antibody）などを意味する（エキスパート・オピニオ
ン・オン・テラピューティック・パテンツ(Exp. Opin.
Ther. Patents)，第６巻，第５号，第441〜456頁，1996
年）。
【０２５１】ここで、「F(ab')2」及び「Fab'」とは、
イムノグロブリン（モノクローナル抗体）を、蛋白分解
酵素であるペプシンあるいはパパイン等で処理すること
により製造され、ヒンジ領域中の２本のＨ鎖間に存在す
るジスルフィド結合の前後で消化されて生成される抗体
フラグメントを意味する。例えば、ＩｇＧをパパインで
処理すると、ヒンジ領域中の２本のＨ鎖間に存在するジ
スルフィド結合の上流で切断されてＶL（Ｌ鎖可変領
域）とＣL（Ｌ鎖定常領域）からなるＬ鎖、及びＶH（Ｈ
鎖可変領域）とＣHγ1（Ｈ鎖定常領域中のγ1領域）と
からなるＨ鎖フラグメントがＣ末端領域でジスルフィド
結合により結合した相同な２つの抗体フラグメントを製
造することができる。これら２つの相同な抗体フラグメ
ントを各々Fab'という。またＩｇＧをペプシンで処理す
ると、ヒンジ領域中の２本のＨ鎖間に存在するジスルフ
ィド結合の下流で切断されて前記２つのFab'がヒンジ領
域でつながったものよりやや大きい抗体フラグメントを
製造することができる。この抗体フラグメントをF(ab')
2という。
【０２５２】本発明の「医薬組成物」とは、前記で定義
される本発明の「ポリペプチド」、該ポリペプチドから
構成される「ホモダイマー分子」、「ポリペプチド断
片」または「融合ポリペプチド」、該融合ポリペプチド
から構成される「ホモダイマー分子」、「抗体」または
「抗体の一部」のいずれかと、薬学的に許容され得る担
体とからなる医薬組成物である。
【０２５３】ここで「薬学的に許容され得る担体」と
は、賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存
剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味剤、粘稠
剤、矯味剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等が挙
げられる。そのような担体の一つ以上を用いることによ
り、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、注射剤、液剤、カプセ
ル剤、トロー剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤あるいは
シロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができ
る。これらの医薬組成物は、経口あるいは非経口的に投
与することができる。非経口投与のためのその他の形態
としては、一つまたはそれ以上の活性物質を含み、常法
により処方される外用液剤、腸溶内投与のための坐剤お
よびペッサリーなどが含まれる。
【０２５４】投与量は、患者の年齢、性別、体重及び症
状、治療効果、投与方法、処理時間、あるいは該医薬組
成物に含有される活性成分（前記ポリペプチドや抗体な
ど）の種類などにより異なるが、通常成人一人当たり、
一回につき10μgから1000mg（あるいは10μgから500m
g）の範囲で投与することができる。しかしながら、投
与量は種々の条件により変動するため、上記投与量より
少ない量で十分な場合もあり、また上記の範囲を越える
投与量が必要な場合もある。
【０２５５】とりわけ注射剤の場合には、例えば生理食
塩水あるいは市販の注射用蒸留水等の非毒性の薬学的に
許容され得る担体中に０．１μｇ抗体／ｍｌ担体〜１０
ｍｇ抗体／ｍｌ担体の濃度となるように溶解または懸濁
することにより製造することができる。このようにして
製造された注射剤は、処置を必要とするヒト患者に対
し、１回の投与において１ｋｇ体重あたり、１μｇ〜１
００ｍｇの割合で、好ましくは５０μｇ〜５０ｍｇの割
合で、１日あたり１回〜数回投与することができる。投
与の形態としては、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、
筋肉内注射あるいは腹腔内注射のような医療上適当な投
与形態が例示できる。好ましくは静脈内注射である。
【０２５６】また、注射剤は、場合により、非水性の希
釈剤（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール、オリーブ油のような植物油、エタノールのよう
なアルコール類など）、懸濁剤あるいは乳濁剤として調
製することもできる。
【０２５７】そのような注射剤の無菌化は、バクテリア
保留フィルターを通す濾過滅菌、殺菌剤の配合または照
射により行うことができる。注射剤は、用時調製の形態
として製造することができる。即ち、凍結乾燥法などに
よって無菌の固体組成物とし、使用前に無菌の注射用蒸
留水または他の溶媒に溶解して使用することができる。
【０２５８】本発明の医薬組成物は、Ｔ細胞等のリンパ
球の活性化並びに活性化リンパ球の機能制御の異常に起
因する種々の自己免疫性疾患、アレルギー性疾患または
炎症性疾患の治療及び予防に適用が可能である。該疾患
としては慢性関節リウマチ、多発性硬化症、自己免疫性
甲状腺炎、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性皮膚
疾患である扁平苔癬、全身性エリテマトーデス、インス
リン依存性糖尿病及び乾癬などが挙げられる。
【０２５９】また、本発明の医薬組成物の種々疾患症状
の治療効果については、常法に従って、既知の疾患モデ
ル動物に投与することにより試験、検討することができ
る。
【０２６０】例えば、ヒト全身性エリテマトーデス
（SLE）のモデルである(NZB/NZW)F1マウス（Science, V
ol.125, p.1225-1227, 1994）、多発性硬化症（MS）
としての実験的アレルギー性脳脊髄炎（EAE）のモデル
（J. Clin. Invest., Vol.95, p.2783-2789, 1995）、
インスリン依存性糖尿病（IDDM）モデルであるNOD（n
on-obese diabetes）マウス（J. Exp. Med., Vol.181,
p.1145-1155, 1995）、グッドパスチャー（Goodpastu
re）の腎炎モデルである腎糸球体基底膜免疫によるラッ
ト腎炎モデル（Eur. J. Immunol., Vol.24, No.6, p.12
49-1254, 1994）、ヒト慢性関節リウマチモデルであ
るDBA/1マウス（Eur. J. Immunol., Vol.26, p.2320-23
28, 1996）を用いることが可能である。
【０２６１】以下、本発明を実施例によりさらに詳細に
説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるもので
はない。
【０２６２】
【実施例】
［実施例１］ モノクローナル抗体の調製 以下に述べる抗体産生ハイブリドーマの調製は、ケーラ
ー（Kohler）らの方法（Blood、第81巻、101-111ペ−
ジ、1993年、大森ら）を参照しながら行い、また、モノ
クロ−ナル抗体の調製は神奈木らの方法（Handbook of
Experimental Immunology、第4巻、117.21-117.21ペ−
ジ、1986年）を参照しながら行った。
【０２６３】まず、ラット胸腺腫細胞株FTL435細胞を免
疫感作抗原として、該抗原をBALB/cマウスに0日目（107
細胞/匹）、7日目、14日目および28日目という間隔及び
量でフットパッド投与した。初回免疫のみ該抗原をフロ
イント完全アジュバントと混和したものを投与した。最
後の免疫感作から2日後に該マウスのリンパ節を採取
し、常法によりマウスミエロ−マ細胞PAI（JCR No.B011
3; Res. Disclosure, Vol.217, p.155, 1982, Stocker,
J.W.et al. ）と融合させ、多数のモノクローナル抗体
産生ハイブリドーマを得た。 ［実施例２］ ハイブリドーマのスクリーニング及びモ
ノクローナル抗体の性状解析 実施例１で調製した各種ハイブリドーマの培養上清中に
生成されたモノクロ−ナル抗体の免疫原であるFTL435細
胞におよぼす効果を解析することによりハイブリドーマ
をスクリーニングした。
【０２６４】96穴マイクロタイタ−プレ−トの各ウエル
にFTL435細胞（5×106cell/mlを0.1ml）を播種し、各ハ
イブリドーマの培養上清（それぞれ10μg/ml）を加え、
37℃で1時間培養した。その内のハイブリドーマクロー
ン「JTT-1」及びクローン「JTT-2」についての結果を図
１及び図２に示す。
【０２６５】ハイブリドーマクローン「JTT-1」が産生
するモノクローナル抗体（「JTT-1抗体」）は、FTL435
細胞を強く凝集させる作用を持つことが確認された（図
1(b)、及び図2(c)）。一方、「JTT-1抗体」とともに「J
TT-2抗体」を加えることにより、「JTT.1抗体」刺激に
よるFTL435細胞の凝集が強く抑制されることが確認され
た（図1(d)）。なお、いずれのハイブリドーマ上清も加
えない系を対照とした（図1(a)及び図2(a)）。
【０２６６】この「JTT-1抗体」刺激によるFTL435細胞
の凝集が、代表的な既知の接着分子経路であるICAM-1
（Intercellular adhesion molecule-1）とLFA-1（Lym
phocyte function-associated antigen-1）の間の細胞
接着によるものか否かを確認するため、「JTT-1抗体」
ともに抗ラットICAM-1抗体1A29（10μg/ml；IgG1）また
は抗ラットLFA-1抗体（10μg/ml；IgG2a）を加えて37℃
で1時間培養した。
【０２６７】「JTT-1抗体」刺激によるFTL435細胞の凝
集は、抗ICAM-1抗体及び抗LFA-1抗体のいずれによって
も抑制されなかった（［抗ICAM-1抗体］：図1(c)及び図
2(f)、及び［抗LFA-1抗体］：図2(d)）。
【０２６８】「JTT-1抗体」の細胞凝集能に関するさら
なる性状解析にために、コンカナバリンＡで刺激して活
性化したラット活性化リンパ芽球細胞に対する凝集能を
前述と同様にして解析した。結果を図２に示す。
【０２６９】FTL435細胞に対する作用と同様に、「JTT-
1抗体」の刺激により活性化リンパ芽球細胞の凝集が誘
導された（図2(i)）。しかしながら、活性化リンパ芽球
細胞に対しては、「JTT-1抗体」刺激による細胞凝集の
多くは、抗LFA-1抗体（図2(j)）および抗ICAM-1抗体
（図2(l)）により抑制された（但し、部分的凝集が残っ
た）。
【０２７０】対照であるいずれの抗体も加えない系（図
2(g)）から明らかなように、活性化リンパ芽球等の活性
化リンパ球は、PMA（Phorbol myristate acetate：LFA-
1を活性化させる機能を有する）（図2(h)）や「JTT-1抗
体」（図2(i)）による刺激を受けない限り何らの細胞接
着による凝集は起こらない。従って、抗LFA-1抗体によ
り「JTT-1抗体」刺激による細胞凝集の部分的に抑制さ
れた事実は、活性化リンパ芽球細胞においては、「JTT-
1抗体」の刺激によりLFA-1が活性化されていることを示
すものである。これは、「JTT-1抗体」により認識され
る分子が何らかのシグナルの伝達に関与する機能を有し
ていることを示すものである。
【０２７１】なお、ハイブリドーマクローン「JTT-1」
及び「JTT-2」は、1996年10月11日付でブダペスト条約
の下で認定された国際寄託機関である日本国通産省工業
技術院生命工学工業技術研究所に国際寄託した（［JTT-
1］：国際寄託番号FERM BP-5707、［JTT-2］：国際寄託
番号FERM BP-5708）。
【０２７２】マウスモノクロ−ナル抗体アイソタイプ同
定キット（Amersham社製）を用いた解析により、各々の
ハイブリドーマから産生させるモノクローナル抗体（JT
T-1抗体及びJTT-2抗体）のアイソタイプはともにIgG1と
決定された。 ［実施例３］ 「JTT.1抗体」及び「JTT.2抗体」の各種
細胞に対する反応性 各種細胞における「JTT.1抗体」及び「JTT.2抗体」の認
識する分子の発現パタ−ンを解析する目的で、各種細胞
に対する該抗体の反応性を確認した。なお、「JTT-1抗
体」が認識する分子を「JTT-1抗原」と、また「JTT-2抗
体」が認識する分子を「JTT-2抗原」と命名する。
【０２７３】5乃至10週齢のウイスタ−ラット（150乃至
250g）をジエチルエ−テルにて麻酔死させた。外科的手
術により開腹して胸部及び腹部から各々胸腺及び脾臓を
摘出し、すりつぶして細胞浮遊液を調製した。更に、脾
臓細胞をコンカナバリンA（2μg/ml）及び10％FCSを含
むRPMI1640培地中で37℃で、3日間培養することによ
り、活性化リンパ芽球を調製した。
【０２７４】FTL435細胞、胸腺細胞、脾臓細胞及び活性
化リンパ芽球（各5×105個）を「JTT.1抗体」または「J
TT.2抗体」と反応させ、次いでFITC標識抗マウスIgG（C
appel社製）反応させた後、染色された細胞の蛍光強度
をエピックスエリ−ト（EPICS-Elite）フロ−サイトメ
−タ−を用いて測定した。
【０２７５】結果を図３に示す。FTL435細胞では、「JT
T.1抗原」及び「JTT.2抗原」の強い発現がみられた。胸
腺細胞でも同分子の発現がみられたが、脾臓細胞ではわ
ずかにしか発現していなかった。しかし、脾臓細胞をコ
ンカナバリンAで刺激して得た活性化リンパ芽球では、
「JTT.1抗原」及び「JTT.2抗原」の強い発現がみられる
ようになった。また各々の細胞種において「JTT.1抗
原」及び「JTT.2抗原」の発現パタ−ンは、一致してい
た。この結果は「JTT-1抗原」及び「JTT-2抗原」が同一
の分子であることを示唆するものである。 ［実施例４］ 「JTT.1抗体」の種々リンパ系細胞に対
する反応性 種々リンパ系細胞での「JTT.1抗体」の認識する分子
（「JTT-1抗原」）の発現パタ−ンを解析する目的で、
２種類のラット（Wistarラット、及びF344ラット）のリ
ンパ節、脾臓由来Ｔリンパ芽球、及び脾臓由来Ｂリンパ
芽球に対する「JTT-1抗体」の反応性を解析した。
【０２７６】5乃至10週齢のWistarラット及びF344ラッ
ト（150乃至250g）をジエチルエ−テルにて麻酔死させ
た。各々のラットを外科的手術により開腹してリンパ節
及び脾臓を摘出し、すりつぶして細胞浮遊液を調製し
た。更に、脾臓の細胞調製物をコンカナバリンA（Con
A；2μg/ml）及び10％FCSを含むRPMI1640培地中で37℃
で、３日間培養した。各々のラットについて、１日間培
養後及び３日間培養後に、活性化Ｔリンパ芽球、及び活
性化Ｂリンパ芽球を取得した。また、対照として、リン
パ節細胞およびConAを加える前（０日）に取得した脾臓
由来Ｔリンパ芽球、及びＢリンパ芽球を用いた。
【０２７７】各々の細胞（各５×１０5個）を、ビオチ
ン標識抗ラットＴ細胞抗体またはビオチン標識抗ラット
Ｂ細胞抗体（10μg/ml，生化学工業製）と反応させた
後、ピコエリスリン標識ストレプトアビジンと反応させ
た。次いで、FITC標識した「JTT-1抗体」（10μg/ml）
と反応させ、染色された細胞の蛍光強度をエピックスエ
リート（EPICS-Elite）フローサイトメーターを用いて
測定した。
【０２７８】結果を図４に示す。Wistarラット及びF344
ラットともに、活性化Ｔリンパ芽球、及び活性化Ｂリン
パ芽球のいずれにおいてもConA刺激による活性化の１日
目から「JTT.1抗原」の強い発現がみられた。また各々
の細胞種における「JTT.1抗原」の発現パタ−ンは、ほ
ぼ一致していた。 ［実施例５］ 免疫沈降実験による「JTT.1抗原」及び
「JTT.2抗原」の性状解析 「JTT.1抗原」及び「JTT.2抗原」の性状を解析する目的
で、FTL435細胞を用いて免疫沈降実験を行った。 （１）ビオチン化可溶性細胞表面分子の調製 FTL435細胞をPBSで洗浄した後、100μg/mlのNHS-ビオチ
ンを含む0.1Mヘペス含有生理食塩水（pH8.0）に1×107
細胞/mlになるよう懸濁し、室温で40分間反応させた。
細胞をPBSで3回洗浄した後、可溶化バッファ−（1%NP-4
0、10mMTris-HCl(pH7.4)、0.15MNaCl）を5×107cells/m
lになるように添加し、4℃、30分間反応させ細胞を溶解
した。得られた細胞溶解物を遠心し、ビオチン化可溶性
細胞表面分子を含む遠心上清を−80℃で保存した。 （２）免疫沈降及びSDS-PAGE解析 実施例1で調製したハイブリドーマクローン「JTT-1」の
培養上清から常法により精製した「JTT.1抗体」の精製
標品を、2mg/mlになるようにプロテインG-セファロ−ス
ビーズと混合し、4℃で1時間反応させビーズに抗体を結
合させた。ビ−ズを洗浄し、10μlのビ−ズに対しビオ
チン化FTL435細胞可溶化物を500μl添加し、4℃で2時間
反応させた。ビ−ズを可溶化バッファ−で３回洗浄し、
50μlのグリカナ−ゼバッファ−（0.15%SDS含有ナトリ
ウムリン酸バッファ−(pH7.0)）を加え煮沸することに
より抗体結合ビーズにトラップされた結合分子を溶出さ
せた。溶出サンプルの一部に1.25%NP-40とN-グリカナ−
ゼ（20U/ml）を添加し一晩反応させ、N型糖鎖を消化し
た。
【０２７９】溶出サンプル5μlに2-メルカプトエタノ−
ル存在下あるいは非存在下でSDS-ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（SDS-PAGE）用サンプルバッファ−（Enprot
ech社製）を等量添加して煮沸し、電気泳動後、PVDF膜
に転写した。転写膜を 3% BSA-PBS でブロッキングを行
い、次いでペルオキシダ−ゼ標識ストレプトアビジンと
反応させた後、使用説明書の記載に従いECLシステム（A
mersham社製）を用いて「JTT-1抗体」によりトラップさ
れたビオチン化可溶性細胞膜表面分子を検出した。
【０２８０】図５に結果を示す。「JTT.1抗体」により
認識されるFTL435細胞上の分子（「JTT-1抗原」）は、
非還元下（図５中に「(-)」で示した）で約47kDの分子
量を有し、また還元下（図５中に「(+)」で示した）で
約24kDおよび約28kDの分子量を有していた。またN型糖
鎖を消化を行うことにより（図５中に「+N-gly」で示し
た）、「JTT.1抗原」は、非還元下で約36kD、また還元
下で約20kDの１本のバンドに収束した。以上の結果か
ら、「JTT.1抗原」は、糖鎖修飾が異なりコア蛋白が同
一の分子からなるダイマ−を形成していると推定され
た。なお、「JTT.2抗体」を用いて上述と同様にして行
った試験においても全く同様の結果が得られた。この結
果と実施例３及び後述の実施例７の結果を考え合わせる
と、「JTT.1抗原」（「JTT-1抗体」により認識される分
子）及び「JTT.2抗原」（「JTT-2抗体」により認識され
る分子）は全く同一の分子であると考えられた。 ［実施例６］ 精製「JTT.1抗原」に対するラット胸腺
細胞の接着実験並びにＮ末端アミノ酸解析 「JTT.1抗体」が認識する分子（「JTT-1抗原」）が接着
分子としての機能を有しているか否かを解析するため以
下の実験を行った。また、Ｎ末端アミノ酸解析を行っ
た。 （１）「JTT.1抗体」アフィニティーカラムの調製 実施例１で調製したハイブリドーマクローン「JTT-1」
の培養上清から常法により精製した「JTT.1抗体」の精
製標品2mg(2ml)を1mlのプロテインG-セファロ−ス樹脂
と混合し、４℃で１時間反応させた。樹脂を200mMのト
リエタノ−ルアミン（pH8.2）で３回洗浄した。さら
に、10mMジメチルピメリミデイト（DMP）を含むトリエ
タノ−ルアミン（pH8.2）中で室温下１時間インキュベ
−トすることにより、樹脂に「JTT.1抗体」を共有結合
させた。 （２）「JTT.1抗原」の精製 FTL435細胞を10%FCS含有RPMI1640培地を用いて培養し
た。細胞を遠心操作により回収し、ペレットをPBSにて3
回洗浄した。洗浄後のペレットに可溶化バッファ−（1%
NP-40、10mMTris-HCl(pH7.4)、0.15MNaCl）を5×107cel
ls/mlになるように添加し、4℃で30分間反応させ細胞を
溶解した。得られた細胞溶解物を遠心し、可溶性細胞表
面分子を含む遠心上清を-80℃で保存した。
【０２８１】可溶化物400mlを「JTT.1抗体」アフィニテ
ィーカラムに添加した。カラムを可溶化バッファ−50ml
及びPBS20mlで洗浄した後、0.2Mグリシンバッファ−（p
H2.8）で「JTT-1抗原」を溶出させた。溶出した「JTT-1
抗原」に1Mトリスバッファーを添加して中和した。得ら
れた「JTT.1抗原」は、マイナス80℃で保存した。 （３）N末端のアミノ酸配列の決定 得られた精製「JTT-1抗原」を、SDS-PAGEで展開後、常
法によりN末端のアミノ酸配列を決定し、Glu-Leu-Asn-A
sp-Leu-Ala-Asn-His-Argのアミノ酸配列を含むことが明
らかとなった。 （４）接着実験 5乃至10週齢のウイスタ−ラット（150乃至250g）をジエ
チルエ−テルにて麻酔死させた。外科的手術により胸部
を開腹して胸腺を摘出し、すりつぶして胸腺細胞浮遊液
を調製した。細胞浮遊液に、2',7'-ビス（カルボキシエ
チル）カルボキシフルオレインテトラセトキシメチルエ
ステル（BCECF-AM; Molecular Probes社製）10μMを添
加し、37℃で30分間培養することにより、蛍光標識を行
った。細胞をPBSで洗浄した後、10%FCSを含むRPMI1640
培地中に、2×107cell/mlの濃度になるように再浮遊さ
せた。
【０２８２】96穴ELISAプレ−トに、（2）で得た精製
「JTT.1抗原」を10μl/wellで１晩コ−ティングした。
プレ−トをPBSで洗浄した後、3%BSAを含むPBSを200μl/
well添加し2時間ブロッキングを行った。プレ−トをPBS
で洗浄した後、各ウエルに蛍光標識胸腺細胞（2×107
cells/mlを0.1ml）のみ、蛍光標識胸腺細胞（同濃
度）及び常法により調製した「JTT.1抗体」のFab断片
（5μg/ml）、並びに蛍光標識胸腺細胞（同濃度）、
該「JTT.1抗体」のFab断片（同濃度）及び「JTT.2抗
体」（10μg/ml）を加え、37℃で１時間培養した。結合
していない細胞を除去するために、各ウエルを10%FCSを
含むRPMI1640培地にて１回洗浄した。各ウエルを光学顕
微鏡で観察した。次いで、各ウェルに0.1%NP-40溶液100
μlを添加してプレートに結合している細胞をで溶解し
た。フルオロスキャンIIマイクロプレ−ト・フルオロメ
−タ−（Flow Laboratories社製）を用いて、538nm（48
5nmで励起）の波長での蛍光強度を測定することによ
り、各ウエルに結合した蛍光標識胸腺細胞の相対細胞数
を計数した。なお、精製「JTT-1抗原」をコーティング
しない系を対照とした。
【０２８３】光学顕微鏡観察の結果を図６に示す。
【０２８４】胸腺細胞は、「JTT.1抗体」のFab断片存在
下でのみ有意に精製「JTT.1抗原」に接着した（図6
(c)）。またその接着は、「JTT.2抗体」により有意に阻
害された（図6(d)）。
【０２８５】なお、各ウェルにコーティングした「JTT.
1抗原」に接着した胸腺細胞の相対細胞数を蛍光強度に
より測定した結果を図７に示した。
【０２８６】以上の結果により、「JTT.1抗原」は、接
着分子としての機能を有していることが確認された。 ［実施例７］ ラット「JTT.1抗原」をコードするcDNA
のクロ−ニング １．cDNAライブラリ−の作製 １−（１） ConA刺激ラットリンパ芽球からのpoly(A)+
RNAの抽出 ConAで刺激したラット脾臓由来リンパ芽球（Con A blas
t）（約1×106cells/ml）を４℃で5分間（2,000×g）遠
心して、沈殿した細胞をISOGEN（ニッポンジ−ン社製）
を用いて懸濁し、クロロホルムで浸とう抽出して上清を
回収した。得られた上清にイソプロパノ−ルを添加して
室温で10分間放置した後、4℃で10分間、12,000×gにて
遠心し、RNAを沈殿させた。沈殿したRNAをエタノ−ルで
洗浄した後、TE緩衝液に溶解した。得られた全RNAか
ら、「mRNA Purification Kit」(Pharmacia社製)を用い
てpoly(A)+RNAを精製した。 １−（２） cDNAの調製 調製したpoly(A)+RNA5μgを鋳型とし、「Time Saver cD
NA Synthesis Kit」（Pharmacia社製）を用いてcDNAを
合成した。スクリ−ニングの効率を上げるため、Not I
切断部位を有する「oligo dTプライマ−」（Pharmacia
社製）を用いた。次いでEcoRIをアダプタ−付加し、Not
I消化を行い、単一方向性を有するcDNAを得た。更にス
パンカラム（Pharmacia社製）を用いてサイズ分画を行
った。 １−（３） ベクタ−への組み込み 得られたEcoRIおよびNotI末端を有するcDNAを、EcoRIお
よびNotI処理したベクタ−pME18S（Hara,T. and Miyaji
ma,A. EMBOJ.,11,1875-1884,1992)に連結した。連結反
応には「DNA ligation Kit」（宝酒造社製）を用いた。
得られた反応生成物を用いてE.coli DH5(東洋紡社製)を
形質転換した。形質転換体はO.D.値（600nm）が0.6にな
るまで培養した後集菌し、ライブラリ−を含むプラスミ
ドDNAを回収した。プラスミドDNAの精製にはQUIAGEN-Ti
p（QUIAGEN社製）を用いた。 ２． cDNAライブラリ−のスクリニ−ング スクリ−ニング法はパニング法（Seed,B. et al. Proc.
Natl.Acad.Sci USA, 84, 3365-3369, 1987）に準じて行
った。 ２−（１） COS細胞への遺伝子導入 得られたライブラリ−をエレクトロポレ−ション法（Po
tter,H.et al. Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 85, 2288-
2292）によりCOS7細胞に導入した。導入後60時間培し、
上清を除去しPBSで3回洗浄した。次いでPBS（0.5mM EDT
A）で処理（37℃、30分）した後ピペッティング操作に
より細胞を剥がした。さらに「Lymphprep」(NYCOMED社
製)を用いて生細胞のみを回収した。 ２−（２） パニングによる遺伝子発現細胞の濃縮 得られた生細胞をPBS（5%FCS、0.5mM EDTA）に懸濁し
た。細胞懸濁液を「JTT.1抗体」をコ−トした培養皿に
移し、室温で3時間作用させた。培養皿への非結合細胞
を除去し、培養皿をPBSで3回洗浄した後、培養皿に結合
した細胞からHirt法（Hirt,B.J.Mol.Biol.,26.365-369)
によりプラスミドDNAを回収した。得られたプラスミドD
NAを用いてE.coli DH10B(GIEBCO BRL社製)を形質転換し
た。形質転換体を用いて前記1-(3)と同様にプラスミドD
NAを増幅、精製した。得られたDNAを用いて、前記(1)及
び本(2)に記載の操作を更に2回繰り返し行った。 ２−（３） ポジティブクロ−ンの単離 3回目のパニング後、形質転換したE.coli DH10Bをアン
ピシリン含有LB plateで終夜培養しコロニ−を得た。薬
剤耐性コロニ−20個を培養しアルカリ・ミニプレップ法
（Maniatis,T.et al.Molecular Cloning;A Larolatory
Mnual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Ha
rbor,New York）でプラスミドDNAを回収し挿入されたＤ
ＮＡ（インサ−トDNA）を解析した。アガロ−スゲル電
気泳動の結果、約0.9kbのcDNAを有するクロ−ン（以
下、このクローンを「T132A7」と称する）が濃縮されて
いることが明らかとなった。
【０２８７】前記(1)に記載の方法を用いて、「T132A
7」を再びCOS7細胞で一過性に発現させた。「T132A7」
導入細胞を、「JTT.1抗体」または「JTT.2抗体」と反応
させ、次いでFITC標識抗マウスIgG（Cappel社製）反応
させた後、染色された細胞の蛍光強度をEPICS-Eliteフ
ロ−サイトメ−タ−（Coulter社製）を用いて測定し
た。「JTT.1抗体」及び「JTT.2抗体」は「T132A7」遺伝
子産物を強く認識していた。結果を図８に示す。 ３． 塩基配列及びアミノ酸配列の決定 クロ−ン「T132A7」の塩基配列を、ジデオキシ法により
「Auto Read Sequencing Kit」（Pharmacia社製）と
「A.L.F.DNA sequencer」（Pharmacia社製）を用いて決
定した。また、該塩基配列がコードする「ラットJTT.1
抗原」の推定アミノ酸配列を遺伝子解析ソフト「GENEWO
RKS」（IntelliGenetics社製）を用いて解析した。該塩
基配列及び推定アミノ酸配列を、配列番号４に記載す
る。
【０２８８】クローニングした遺伝子から演繹されるア
ミノ酸配列（２００アミノ酸残基から構成される）に
は、実施例6-(3)で決定したＮ末端アミノ酸配列と同一
のアミノ酸配列を含んでいた。クロ−ン「T132A7」導入
細胞が、「JTT-1抗体」に強く反応することを考え合わ
せると、クロ−ン「T132A7」は「ラットJTT.1抗原」を
コードするcDNAを含んでいると結論できる。 ４． コンピューター解析 「JTT.1抗原」の推定アミノ酸配列の一次構造につい
て、KiteとDoolittleの方法（Kite，J．&Doolittle，
R．F．J．Mol．Biol．157，105-132，1982）に従ってハ
イドロパシー・ブロット解析を行った（図９）。その結
果、「JTT.1抗原」はＮ末端にシグナル配列を有する細
胞膜貫通蛋白質であることが明らかとなった。また、モ
チーフ解析の結果、「JTT.1抗原」の細胞外ドメインに
２カ所のアスパラギン結合型糖鎖結合部位を有し、また
細胞内ドメインに２カ所のカゼインキナーゼリン酸化部
位並びに１カ所のプロテインキナーゼＣリン酸化部位を
有していることが明らかとなった。なお、図９中の「CH
O」はN型糖鎖結合部位を示し、「P」はリン酸化部位を
示し、「CKII」はカゼインキナーゼIIを示し、「PKC」
はプロテインキナーゼCを示す。 ［実施例８］ 「ヒトJTT.1抗原」cDNAのクロ−ニング １． プロ−ブの作製 実施例７で得たクロ−ン「T132A7」を制限酵素EcoRIお
よびNotIで消化して、「ラットJTT.1抗原」をコードす
るcDNA約0.9kbを切り出し、アガロ−スゲル電気泳動に
より分離した。分離したDNA断片を「QUIAEX gel extrac
tion kit」（QUIATEN社製）を用いて精製し、得られたD
NA断片を「Ready-To-Go DNA labelling kit」（Pharmac
ia社製）を用いて32Ｐで標識した。この標識DNA断片を
プラ−クハイブリダイゼイ−ション用のプロ−ブとして
用いた。 ２． cDNAライブラリ−の作製 ２−（１） poly(A)+RNAの抽出 実施例7-1-(1)と同様にして、ConAで刺激したヒト末梢
血由来のリンパ芽球（Con A blast）からpoly(A)+RNAを
抽出した。 ２−（２） cDNAの調製 調製したpoly(A)+RNA5μgを鋳型とし、「oligo dTプラ
イマ−」（Pharmacia社製）と「Time Saver cDNA Synth
esis Kit」（Phramacia社製）を用いてcDNAを合成し
た。次いで、EcoRIアダプタ−を付加した後、スパンカ
ラム（Pharamacia社製）を用いてサイズ分画を行った。 ２−（３） ベクタ−への組み込み及びパッケ−ジング 得られたEcoRI末端を有するcDNAを、EcoRIで処理したベ
クタ−「λZAPII」（Stratagene社製）に連結した。連
結反応には「DNA ligation Kit」（宝酒造社製）を用い
た。これを「GIGA PACK II GOLD」（Strategene社製）
を用いてインビトロパッケージング（in vitro packagi
ng）した後、得られたファ−ジ粒子を用いて、E coli X
L1Blue MRF'（Strategene社製）を宿主として組換えフ
ァ−ジを含有するプラ−クからなるcDNAライブラリ−を
作製した。 ３． cDNAライブラリ−のスクリ−ニング スクリ−ニングは「Rapid hybridization buffer」（Am
ersham社製）を用いたプラ−クハイブリダイゼ−ション
法（Maniatis,T.et al.Molecular Cloning:A Labolator
y Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring
Harbor,New York）に従い行った。得られたcDNAライブ
ラリ−（1×104個）を寒天プレ−トにまき、「Hybond-N
nylon menbrane」（Amersham社製）を用いてレプリカ
を作製した。レプリカと前記実施例8-1で作製した32Ｐ
標識プロ−ブを用い、「Rapid hybridization buffer」
（Amersham社製）中でプラ−クハイブリダイゼイ−ショ
ンを行った。１次スクリ−ニング及び２次スクリ−ニン
グを行い、８個のポジティブ・クロ−ンを得た。各クロ
−ンをシングルプラ−クで単離後、マニュアル（Strate
gene社）に従ってインビボエキサイション（in vivo Ex
cision）に供し、７つのポジティブクロ−ンをプラスミ
ドDNAとして回収した。 ４． 塩基配列決定 ７個のクロ−ンの塩基配列を、ジデオキシ法により、
「Auto Read SequencingKit」（Pharmacia社製）と「A.
L.F.DNA sequencer」（Pharmacia社製）を用いて決定し
た。７個のクロ−ンはすべて同じ塩基配列を含んでい
た。このうちクロ−ン「pBSh41」は、「ヒトJTT-1抗
原」の全長をコ−ドしていることが確認された。「ヒト
JTT-1抗原」の読取り枠（open reading frame; ORF）に
対応するcDNAの塩基配列を配列番号１に、また「ヒトJT
T.1抗原」の推定全長アミノ酸配列を配列番号２、また
5'及び3'配列を含む塩基配列を配列番号３（ORFは、塩
基番号26乃至625）に示す。該クローンに含まれる塩基
配列が、「ヒトJTT-1抗原」の全長をコードするもので
あることは、該塩基配列から演繹されるアミノ酸配列
（１９９アミノ酸残基から構成される）が、「ラットJT
T.1抗原」のアミノ酸配列と有意な相同性を示すことか
ら明らかである（図１０）。また、図１０に示されると
おり、ヒト及びラットの「JTT.1抗原」のアミノ酸配列
相同性は、６０％以上である。
【０２８９】なお、クローン「pBSh41」により形質転換
したE.coli.DH10B（GIBCO BRL社製）を、1996年10月25
日付でブダペスト条約の下で認定された国際寄託機関で
ある日本国通産省工業技術院生命工学技術研究所に寄託
した（寄託番号：FERM BP-5725）。 ５． 「JTT-1抗原」の構造的特徴及び生物学的機能 演繹される「ヒトJTT-1抗原」のアミノ酸配列につい
て、既知ヒトタンパクとのモチーフ検索を行った結果、
「ヒトJTT-1抗原」は、先に詳細に述べた免疫グロブリ
ンスーパーファミリーに属するヒト由来の細胞膜分子で
ある「CD28」及び「CTLA-4」と次の点で構造的類似性を
有していることが確認された（図１１及び図１２）。前
述したとおり、「CD28」及び「CTLA-4」は、Ｔ細胞の活
性化及び抑制を制御する免疫系において極めて重要な分
子である。
【０２９０】即ち、システイン残基を含む２０以上の
アミノ酸残基が良く保存されている。：CD28及びCTLA
-4におけるリガンド結合領域として必須なプロリン残基
の連続する配列「Pro-Pro-Pro（PPP）」が保存されてい
る。また、：細胞内ドメインに、CD28及びCTLA-4にお
けるシグナル伝達領域として必須な配列「Tyr-Xaa-Xaa-
Met（YxxM）（Xaa及びxは任意のアミノ酸を意味す
る。）が保存されている。
【０２９１】本発明の「JTT-1抗原」は、そのような免
疫反応の主役であるＴ細胞の活性化の制御において重要
な役割を担う「CD28」及び「CTLA-4」に特徴的な構造と
同一の構造を有することから、本発明の「JTT-1抗原」
は、それらの分子と同様に免疫反応の主体であるＴ細胞
をはじめとしたリンパ球の活性化の制御において重要な
役割も果たす分子であることが推測される ［実施例９］ 「マウスJTT-1抗原」をコードするcDNA
のクローニング １． プローブの作製 実施例７で得たクロ−ン「T132A7」を制限酵素EcoRIお
よびNotIで消化して、「ラットJTT.1抗原」をコードす
るcDNA約0.9kbを切り出し、アガロ−スゲル電気泳動に
より分離した。分離したDNA断片を「QUIAEX gel extrac
tion kit」（QUIATEN社製）を用いて精製し、得られたD
NA断片を「Ready-To-Go DNA labelling kit」（Pharmac
ia社製）を用いて32Ｐで標識した。この標識DNA断片を
プラ−クハイブリダイゼイ−ション用のプロ−ブとして
用いた。 ２． cDNAライブラリーの作製 ２−（１） poly (A)+RNAの抽出 実施例7-1-(1)と同様にして、ConAで刺激したマウス脾
臓由来リンパ芽球（約1×106cells/ml）からのpoly (A)
+RNAを抽出した。 ２−（２） cDNAライブラリーの作製 前記で調製したpoly (A)+RNA 5mgを鋳型とし、oligo dT
プライマー（Pharmacia社製）及び「Time Saver cDNA
Synthesis Kit」（Pharmacia社製）を用いてcDNAを合成
した。該cDNAにEcoRIアダプター付加した後、スパンカ
ラム（Pharmacia社製）を用いてサイズ分画を行った。 ２−（３） ベクターへの組み込み及びパッケージング 前記で得られたEcoRI末端を有するcDNAを、EcoRIで処理
したベクターlZAPII（Stratagene社製）に連結した。連
結反応には「DNA ligation Kit」（宝酒造社製）を用い
た。これをGIGA PACK II GOLD（Stratagene社製）を用
いてin vitro packagingした後、得られたファージ粒子
を用いて、E coli XL1Blue MRF'（Stratagene社製）を
宿主として組み換えファージを含有するプラークからな
るcDNAライブラリーを作製した。 ３． cDNAライブラリーのスクリーニング スクリーニングはRapid hybridization buffer（Amersh
am社製）を用いたプラークハイブリダイゼーション法
（Maniatis, T. et al. Molecular Cloning: A Labolat
ory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Sp
ring Harbor, NewYork）に従い行った。
【０２９２】前記で得られたcDNAライブラリー（1×104
個）を寒天プレートに播種し、Hybond-N nylon menbran
e（Amersham社製）を用いてレプリカを作製した。レプ
リカ及び前記9-1で作製した32Ｐ標識プローブを用い、R
apid hybridization buffer（Amersham社製）中でプラ
ークハイブリダイゼーションを行った。１次スクリーニ
ング及び２次スクリーニングを行い、５個のポジティブ
・クローンを得た。各クローンをシングルプラークで単
離後、Stratagene社Instruction Manualに従ってin viv
o Excisionに供し、５クローンをplasmid DNAとして回
収した。 ４． 塩基配列決定 ５個のクローンの各々について、 ジデオキシ（dideox
y）法により、「Auto Read Sequencing Kit」（Pharmac
ia社製）及び「A.L.F.DNA sequencer」（Pharmacia社
製）を用いて塩基配列を決定した。該５クローン中の４
個のクローンはすべて同じ塩基配列を含んでいた。「マ
ウスJTT-1抗原」の全長をコードするcDNAの塩基配列及
び推定アミノ酸配列を配列番号５に記載する。
【０２９３】図１０から明らかなように、「マウスJTT-
1抗原」は、「ラットJTT-1抗原」と同様に２００アミノ
酸残基から構成され、またマウス、ラット及びヒトの
「JTT-1抗原」は、各々の間で有意なアミノ酸配列相同
性（６０％以上）を有していた。 ５． 「マウスJTT-1抗原」の遺伝子の染色体上の位置
の解析 「マウスJTT-1抗原」をコードする遺伝子 の染色体上
の位置を、蛍光インサイチュウ（in situ）ハイブリダ
イゼーション法により解析した。
【０２９４】得られた「マウスJTT-1抗原」をコードす
るcDNAを32Ｐで標識して常法に従ってハイブリダイゼー
ション用プローブを作製した。このプローブを用いて、
129SVJ マウスゲノミックDNAライブラリー（STRATAGENE
社製）をスクリーニングし、「マウスJTT-1抗原」をコ
ードするエクソンを含むマウスゲノミックDNAクローン
を取得した。該ゲノミックDNAの構造を模式的に示した
図を図１３に示す。
【０２９５】前記で得たゲノミックDNAクローンをニッ
クトランスレーションにより、ジゴキシゲニンdUTP（di
goxigenin dUTP）で標識しプローブとした。該標識プロ
ーブを分断したマウスDNAを結合させた後、50%ホルムア
ルデヒド、10%硫酸デキストラン及び２×SSCを含む溶液
中で、マウス胚性線維芽細胞由来の正常な細胞分裂中期
（metaphase）染色体にハイブリダイズさせた。特異的
ハイブリダイゼーションシグナルは、ハイブリダイゼー
ション用スライドを蛍光標識した抗ジゴキシゲニン抗体
中でインキュベートした後、DAPIで染色することにより
検出した。初回の試験においては、そのDNAサイズ及び
現れたバンドの状況から、１番染色体と思われる最も巨
大な染色体の近傍部分に特異的標識がなされた。この情
報に基づき、１番染色体のセントロメア領域に特異的な
プローブとともに前記ゲノミックDNAクローンを共ハイ
ブリダーゼーションさせた。この結果、１番染色体のセ
ントロメア領域とその近傍の領域が特異的に標識され
た。特異的ハイブリダーゼーションが見られた１番染色
体（１０サンプル）を解析した結果、前記ゲノミックDN
Aクローンはヘテロクロマチンとユークロマチンとの境
界から１番染色体のテロメアまでの距離の３３％の位
置、即ち、マウス「CD28」及び「CTLA-4」の遺伝子の染
色体上の位置と同一のバンド「１Ｃ３」に存在すること
が明らかとなった。総計８０個の細胞分裂中期の細胞に
ついて解析した結果、７９個の細胞で該位置に特異的標
識が確認された。
【０２９６】この結果と実施例８で得られた結果、即ち
「JTT-1抗原」と「CD28」及び「CTLA-4」との構造的類
似性を考え合わせると、「JTT-1抗原」が「CD28」や「C
TLA-4」と同様なコスティミュレイトリーシグナルの伝
達及び／またはリンパ球の活性化の制御に関与する重要
な分子であることが推察される。 ［実施例１０］ 「ラットJTT-1抗原」の変異体をコー
ドするcDNAのクローニング 実施例７でクローニングした「ラットJTT-1抗原」のオ
ールタナティブ・スプライシング変異体（alternative
splicing variant）をコードするものと考えられる他の
１つのcDNAを下記のようにクローニングした。 １． プローブの作製 実施例７で得たクロ−ン「T132A7」を制限酵素EcoRIお
よびNotIで消化して、「ラットJTT.1抗原」をコードす
るcDNA約0.9kbを切り出し、アガロ−スゲル電気泳動に
より分離した。分離したDNA断片を「QUIAEX gel extrac
tion kit」（QUIATEN社製）を用いて精製し、得られたD
NA断片を「Ready-To-Go DNA labelling kit」（Pharmac
ia社製）を用いて32Ｐで標識した。この標識DNA断片を
プラ−クハイブリダイゼイ−ション用のプロ−ブとして
用いた。 ２． cDNAライブラリーの作製 ２−（１）poly (A)+RNAの抽出 実施例7-1-(1)と同様にして、ラット胸腺腫細胞株FTL43
5（約1×106cells/ml）からのpoly(A)+RNAを抽出した。 ２−（２） cDNAライブラリーの作製 前記のように調製したpoly (A)+RNA 5mgを鋳型とし、ol
igo dT プライマー（Pharmacia社製）及び「Time Saver
cDNA Synthesis Kit」（Pharmacia社製）を用いてcDNA
を合成した。該cDNAにEcoRIアダプターを付加した後、
スパンカラム（Pharmacia社製）を用いてサイズ分画を
行った。 ２−（３） ベクターへの組み込み及びパッケージング 前述のようにして得られたEcoRI末端を有するcDNAを、E
coRIで処理したベクターlZAPII（Stratagene社製）に連
結した。連結反応には「DNA ligation Kit」（宝酒造社
製）を用いた。これをGIGA PACK II GOLD（Stratagene
社製）を用いてin vitro packagingした後、得られたフ
ァージ粒子をもちいて、E coli XL1BlueMRF'（Stratage
ne社製）を宿主として組み換えファージを含有するプラ
ークからなるcDNAライブラリーを作製した。 ３． cDNAライブラリーのスクリーニング スクリーニングはRapid hybridization buffer（Amersh
am社製）を用いてプラークハイブリダイゼーション法
（Maniatis, T. et al. Molecular Cloning: A Labolat
ory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Sp
ring Harbor, NewYork）に従い行った。
【０２９７】前記で調製したでcDNAライブラリー（1×1
04個）を寒天プレートにまき、Hybond-N nylon menbran
e（Amersham社製）を用いてレプリカを作製した。該レ
プリカ及び前記10-1で作製した32Ｐ標識プローブを用
い、Rapid hybridization buffer（Amersham社製）中で
プラークハイブリダイゼーションを行った。１次スクリ
ーニング及び２次スクリーニングを行い、２個のポジテ
ィブ・クローンを得た。各クローンをシングルプラーク
で単離後、Stratagene社Instruction Manualに従ってin
vivo Excisionに供し、２クローンをplasmid DNAとし
て回収した。 ４． 塩基配列決定 ２個のクローンの各々について、ジデオキシ（dideox
y）法により「Auto ReadSequencing Kit」（Pharmacia
社製）及びA.L.F.DNA sequencer（Pharmacia社製）を用
いて 塩基配列を決定した。２個のクローンはすべて同
じ塩基配列を含んでいた。得られた「ラットJTT-1抗
原」の全長をコードするcDNAの塩基配列及び推定アミノ
酸配列を配列番号６に記載する。得られたcDNA配列から
演繹されるアミノ酸配列（配列番号６）を、実施例７で
クローニングした「ラットJTT-1抗原」をコードするcDN
A配列から演繹されるアミノ酸配列（配列番号４）と比
較した（図１４）。その結果、図１４から明らかなよう
に、本試験でクローニングされたcDNAによりコードされ
るアミノ酸配列は、実施例７で得られた「ラットJTT.1
抗原」をコードするcDNAによりコードされるアミノ酸配
列と比べ、Ｃ末端の３つの連続するアミノ酸配列（Me
t-Thr-Ser）がThr-Ala-Proに変化している点、並びに
該Thr-Ala-Proに続いてさらに１６の連続するアミノ酸
残基（Leu-Arg-Ala-Leu-Gly-Arg-Gly-Glu-His-Ser-Ser-
Cys-Gln-Asp-Arg-Asn）が延長されているという２つの
相違点以外は、全く同一のアミノ酸配列であった。この
ことからの本試験でクローニングされたcDNAは、実施例
７で得られた「ラットJTT.1抗原」のオールタナティブ
・スプライシング変異体（alternative splicing valia
nt）をコードしていると考えられる。 ［実施例１１］ 組換え「ヒトJTT-1抗原」発現細胞の
調製 実施例８で取得したプラスミドクロ−ンpBSh41を、制限
酵素EcoRIで消化して、「ヒトJTT-1抗原」の全長をコー
ドするcDNAを含むDNA断片を切り出した。このDNA断片
を、DNAライゲーションキット（宝酒造社製）を用い
て、同じく制限酵素EcoRIで処理したプラスミドpEFneo
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 91, 158-162, 1994）に挿
入し発現ベクターを作製した。エレクトロポレーション
により、該ベクターでCHO-K1細胞（ATCC: CCL-61）を形
質転換した。細胞を、Geneticin（0.8 mg/ml; GIBCO BR
L製）及び10%ウシ胎児血清（fetal calf serum）を含有
するRPMI1640培地中で約２週間培養することにより、Ge
neticin耐性形質転換細胞を選別した。組換え「ヒトJTT
-1抗原」の発現は、常法によりノーザンブロティングに
より確認した。 ［実施例１２］ 「ヒトJTT.1抗原」に対するモノクロ
ーナル抗体の調製 実施例１１で調製した組換え「ヒトJTT-1抗原」を発現
する形質転換細胞を、ホモジナイズし、超遠心分離（10
0,000×ｇ）して、細胞膜画分を含む遠心残さを回収
し、PBSに懸濁させた。得られた細胞膜画分を、完全フ
ロインドアジュバントとともにBALB/cマウスのフッドパ
ッド内に注射することにより初回免疫（０日）した。さ
らに該細胞膜画分抗原を7日目、14日目および28日目と
いう間隔でフットパッド内に投与した。最後の免疫から
２日後にリンパ節細胞を採取した。該リンパ節細胞とマ
ウスミエローマ細胞PAI（JCR No.B0113; Res. Disclosu
re,Vol.217, p.155, 1982）とを５：１で混合し、融合
剤としてポリエチレングリコール4000（GIBCO製）を用
いて細胞融合させることによりモノクローナル抗体産生
ハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマの選択は、
１０％ウシ胎児血清とアミノプテリンを含有するＨＡＴ
含有ASF104培地（味の素製）中で培養することにより行
った。各々のハイブリドーマの培養上清中に生成された
モノクローナル抗体の「ヒトJTT-1抗原」に対する反応
性は、各々の培養上清を実施例１１で調製した組換え
「ヒトJTT-1抗原」を発現する形質転換細胞と反応させ
た後、FITC標識抗マウスIgG（Cappel製）と反応させる
ことにより染色された細胞の蛍光強度をEPICS-ELITEフ
ローサトメーターで測定することにより確認した。この
結果、「ヒトJTT-1抗原」に反応性を有するモノクロー
ナル抗体を産生する１０種以上のハイブリドーマが得ら
れたことが確認された。
【０２９８】これらのハイブリドーマの内の２種類（各
々クローンSA12及びSG430命名）の各々（１０6乃至１０
7個／0.5ml／マウス）を、ICR nu/nuマウス（雌、７乃
至８週齢）の腹腔内に注射した。１０乃至２０日後、マ
ウスを麻酔下で開腹し、常法に従って採取した腹水から
「ヒトJTT-1抗原」に反応性を有する２種類のモノクロ
ーナル抗体（SA12及びSG430）を大量調製した。 ［実施例１３］ 「ヒトJTT-1抗原」に対するモノクロ
ーナル抗体のヒト末梢血リンパ球に対する効果 実施例８で述べたとおり、「JTT-1抗原」は「CD28」や
「CTLA-4」と同様に免疫反応におけるリンパ球細胞の活
性化の制御に関与する可能性を有すると考えられる。こ
の可能性を実証するため、「ヒトJTT-1抗原」に対する
モノクローナル抗体のヒトリンパ球に対する効果を細胞
の増殖を指標として解析した。
【０２９９】９６穴マクロタイタープレートの各ウェル
に実施例１２で調製した「ヒトJTT-1抗原」に対する
モノクローナル抗体SA12若しくはSG430のいずれか一方
（１μg/ml）のみ、またはモノクローナル抗体SA12若
しくはSG430のいずれか一方（１μg/ml）とリンパ球の
活性化における第１シグナル付与のための抗CD3モノク
ローナル抗体OKT-3（１μg/ml、オーソ・ダイアノステ
ィック・システムズ社製）との混合溶液を加えて37℃で
１時間培養して各ウェルを該抗体でコーティングした。
プレートをRPMI1640培地で洗浄した後、各ウェルに正常
ヒト末梢血リンパ球（1×105cells/well）を加え、10%
ウシ胎児血清を含むRPMI1640培地中で３日間培養した。
必要に応じてPMA（phorbol myristate acetate：1 ng/m
l）を添加した。次いで、各ウェルに［3Ｈ］チミジン
（3.7μkBq/ウェル）を添加して、３７℃で６時間培養
した。細胞を回収（ハーベスト）し、DNA内に取り込ま
れた［3Ｈ］チミジンの量を液体シンチレーションカウ
ンター（ベックマン製）を用いて測定した。なお、いず
れの抗体も加えない培養系を対照とした。結果を図１５
に示した。
【０３００】モノクローナル抗体SA12またはSG430のい
ずれかの単独で処理した場合には、いずれの抗体を用い
た場合にも対照に比べリンパ球が約１０倍に増殖した。
さらに、OKT3との併用の場合には、モノクローナル抗体
SA12またはSG430のいずれを用いた場合にもリンパ球が
約１００倍に増殖した。
【０３０１】この結果は、「JTT-1抗原」が、リンパ球
の活性化の制御において機能することを示すものであ
る。また、OKT3との併用により細胞増殖率が増幅された
ことから、「JTT-1抗原」が「CD28」や「CTLA-4」と同
様のコスティミュレイトリー・シグナルの伝達を担うこ
とを示すものである。 ［実施例１４］ 実験的アレルギー性脳脊髄炎（EAE）
に対する「JTT-2抗体」の効果 先に詳細に述べたように、近年、CD28/CTLA-4-CD80/CD8
6の間のシグナル伝達を調節することにより種々の自己
免疫性疾患（慢性関節リウマチ、多発性硬化症、自己免
疫性甲状腺炎、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性
皮膚疾患である扁平苔癬、全身性エリテマトーデス、イ
ンスリン依存性糖尿病及び乾癬など）の治療の試みが多
数なされてきている。既に、種々の自己免疫疾患モデル
動物（ヒト全身性エリテマトーデス（SLE）のモデ
ル、多発性硬化症（MS）のモデルである実験的アレル
ギー性脳脊髄炎（EAE）、インスリン依存性糖尿病（I
DDM）モデル、グッドパスチャー（Goodpasture）の腎
炎モデル、ヒト慢性関節リウマチモデル）でその効果
が確認されている。
【０３０２】本発明の「JTT-1抗原」が「CD28」や「CTL
A-4」のようなリンパ球の活性化あるいはその抑制に関
与する分子であるか否かを確認するため、多発性硬化症
（MS）のモデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎（EA
E）モデルラットを作製し、該モデルにおける「JTT-1抗
原」に対するモノクローナル抗体の効果を解析した。
【０３０３】Hartleyモルモットの脳脊髄ホモジネート
（800mg/ml生理食塩水）を等量のフロインド完全アジュ
バントと混和して免疫感作抗原としてのエマルジョンを
調製した。該エマルジョンを、ルイスラット（雌、６週
齢、１５匹）の左右の足趾に各々0.25mlずつ皮内投与す
ることにより免疫感作した。なお、該投与は、該ホモジ
ネートの投与量がラット１匹あたり200mgとなるように
行った。この免疫感作により、アレルギー性脳脊髄炎
（EAE）を誘導させることができる。
【０３０４】免疫感作したラットを５匹ずつの３群に分
け、各群毎に、次の乃至のいずれかを、免疫感作直
後（０日）並びに該免疫感作から３日目、６日目、９日
目及び１２日目に静脈内投与した。
【０３０５】実施例２で作製した「ラットJTT-1抗
原」に対するモノクローナル抗体「JTT-2抗体」（投与
量：2mg/ml PBS, 5mg/kg）； ステロイド剤プレドニゾロン（投与量：4mg/ml PBS,
10mg/kg）；及び 「ラットJTT-1抗原」に反応しない対照抗体（投与
量：2mg/ml PBS, 5mg/kg）。
【０３０６】免疫感作から経時的に症状を観察し、EAE
発症が認められた時点からその症状を次の基準にてスコ
ア化することにより症状の程度を評価した。
【０３０７】（スコア１）尾の緊張の消失； （スコア２）後肢のひきずり、及び軽度の麻痺； （スコア３）後肢のひきずり、及び重度の麻痺；及び （スコア４）全身の麻痺または死亡。
【０３０８】結果を図１６に示す。対照抗体を投与した
群では、免疫感作から11乃至15日目にEAE症状がピーク
（スコア最大）となり、その後漸次回復した。一方、
「JTT-2抗体」投与群では、感作後11日目のEAE症状の発
症が有意に抑制された。この抑制効果はプレドニゾロン
投与群に比べ有意に高いものであった。
【０３０９】この結果は、「JTT-1抗原」は、外来抗原
による免疫感作により惹起されるリンパ球の活性化をは
じめとした免疫応答の誘導において機能する分子であ
り、「JTT-1抗原」あるいはそのリガンドの機能を制御
することにより種々の自己免疫疾患の症状を抑制できる
ことを示すものである。 ［実施例１５］ 糸球体腎炎に対する「JTT-2抗体」の
効果 実施例１４と同様の目的のために、糸球体基底膜（GB
M）腎炎モデルラットを作製し、該モデルにおける「JTT
-1抗原」に対するモノクローナル抗体の効果を解析し
た。
【０３１０】コラゲナーゼにより消化したウシ糸球体基
底膜（重井医学研究所製）を生理食塩水で200μg/mlの
濃度に希釈した後、フロインド完全アジュバントと混和
して免疫感作抗原としてのエマルジョンを調製した。エ
ーテル麻酔下で、ウィスター・キョート系ラット（wist
er kyoto，約200ｇ，48匹）の両後肢足底皮内に各々約
0.2ml（抗原量：約15μg）ずつ投与することにより免疫
感作した。この免疫感作により糸球体基底膜（GBM）腎
炎が誘導される。
【０３１１】免疫感作したラットを６匹ずつの８群に分
け、各群毎に、次の乃至のいずれかを、免疫感作直
後（０日）並びにその後１週間に３回ずつ５週間に渡り
投与した。
【０３１２】実施例２で作製した「ラットJTT-1抗
原」に対するモノクローナル抗体「JTT-2抗体」（投与
量：3mg/kg (2ml PBS/kg)，静脈内投与）； 陽性対照としてのステロイド剤プレドニゾロン（0.5%
CMC（カルボキシメチルセルロース）中に懸濁）（投与
量：3mg/kg (5ml/kg) ，経口投与）；及び 陰性対照としての0.5% CMC（投与量：5ml/kg，経口投
与）。
【０３１３】被験物質の投与後、各々のラットに滅菌水
（25ml/kg）を強制経口投与し、１匹ずつ代謝ケージ内
に入れ絶食絶水下で５時間に渡り尿を採取した。採取し
た尿の量を測定後、尿中蛋白濃度をトネインTP-II（大
塚製薬製）を用いて測定し、５時間あたりの尿中蛋白排
泄量（単位：mg蛋白/5時間）を算出した。前記尿採取並
びに尿中蛋白量の測定は、免疫感作（０日目）から１週
間目、２週間目、３週間目及び４週間目の各時点で同様
にして行った。
【０３１４】結果を図１７に示した。対照群に比べ、
「JTT-2抗体」投与群では、免疫感作から３週間目の尿
中蛋白蛋白排泄量を有意に減少させた。
【０３１５】この結果は、「JTT-1抗原」は、外来抗原
による免疫感作により惹起されるリンパ球の活性化をは
じめとした免疫応答の誘導において機能する分子であ
り、「JTT-1抗原」あるいはそのリガンドの機能を制御
することにより種々の自己免疫疾患の症状を抑制できる
ことを示すものである。 ［実施例１６］ 「JTT-1抗原」とＩｇＦｃとの融合蛋
白の調製 実施例８、１３乃至１５で述べたように、本発明の「JT
T-1抗原」は、「CD28」や「CTLA-4」のようなリンパ球
の活性化の制御に係わるコスティミュレイトリー・シグ
ナル伝達に関与する分子であると考えられる。また、実
施例１４で述べたとおり、「CTLA-4」の細胞外ドメイン
とヒト免疫グロブリンIgG1のＦｃ領域とからなる融合タ
ンパク（CTLA-4-IgFc）は、種々の自己免疫疾患の治療
効果を有することが報告されている。本実施例では、CT
LA-4-IgFcと同様の可溶化JTT-1抗原の種々自己免疫疾患
の治療への適用可能性を確認するため「JTT-1抗原」の
細胞外領域をヒトIgGFcとからなる融合蛋白を下記のよ
うに調製した。 （１）「ラットJTT-1抗原」とヒトIgG1-Fcとの融合蛋白
（rJTT-1-IgFc）の調製 「ラットJTT-1抗原」の細胞外領域をコードするcDNAを
ＰＣＲで増幅するために、末端にXhoI切断部位を有する
5'プライマー（5'-CTGCTCGAGATGAAGCCCTACTTCTCG-3'、
配列番号７）及びBamHI切断部位を有する3'プライマー
（5'-ACCCTACGGGTAACGGATCCTTCAGCTGGCAA-3'、配列番号
８）を設計、合成した。実施例７で取得した「ラットJT
T-1抗原」の全長をコードするcDNAをクロ−ン「T132A
7」を鋳型として該プライマーを用いてＰＣＲを行い、
両端にXhoI及びBamHI切断部位を各々有する「ラットJTT
-1抗原」の細胞外領域をコードするcDNAを含むcDNAを調
製した。得られたＰＣＲ産物をXhoI及びBamHIで消化
し、アガロースゲル電気泳動し、目的の細胞外領域をコ
ードするcDNA断片と予測される約450bpのサイズのバン
ドを単離した。単離されたcDNA断片を、XhoI及びBamHI
で切断したプラスミドpBluescript II SK(+)（Stratage
ne製）中にサブクローニングした。自動蛍光DNAシーク
エンサー（Applied Biosystems製）による配列解析によ
り、該cDNA断片は、「ラットJTT-1 抗原」（配列番号
４）のアミノ酸番号１乃至１４１迄の領域をコードする
領域を含むことを確認した。
【０３１６】一方、融合パートナーとしてのヒトIgG1の
ＦｃをコードするDNAは、プラスミド（Cell, Vol.61,
p.1303-1313, 1990参照。マサチューセッツ・ゼネラル
・ホスピタルのシード博士（B. Seed）らにより作製）
を、BamHI及びXbaIで消化することによりBamHI-XbaIＤ
ＮＡ断片（約1.3kb）として切り出した。この断片に
は、ヒトIgG1のヒンジ領域、Ｃγ1２、及びＣγ1３の各
々コードするエクソンが含まれる。
【０３１７】前記のようにして作製した「ラットJTT-1
抗原」の細胞外領域をコードするXhoI-BamHI断片、及び
ヒトIgG1のFc（「IgFc」と略記する）をコードするエク
ソンを含むBamHI-XbaI断片を、XhoI及びXbaIで切断した
プラスミドpBluescript II SK(+)（Stratagene製）中に
サブクローニングした。
【０３１８】次いで、該プラスミドをXhoI及びXbaIで消
化し、「ラットJTT-1抗原」の細胞外領域とヒトIgFcと
からなる融合DNAを含む約1.8kbのDNA断片を切りだし
た。この融合DNA断片を、T4 DNAリガーゼを用いて、発
現ベクターpME18S（Medical Immunology, Vol.20, No.
1, p.27-32, 1990、及び実験医学（別冊）：「遺伝子工
学ハンドブック」、羊土社、第101-107頁、1992年）のX
hoI及びXbaI部位に挿入し、プラスミドprJTT-1-IgFcを
構築した。
【０３１９】エレクトロポレーション法により、10%ウ
シ胎児血清及びアンピシリンを含むDMEM培地中でサブコ
ンフルエントに単層培養したHEK293細胞（ATCC CRL157
3）を、プラスミドprJTT-1-IgFcで形質転換し、形質転
換細胞を取得した。
【０３２０】形質転換細胞を、無血清ASF104培地中で72
時間培養することによりrJTT-1-IgFcを発現させた。
【０３２１】rJTT-1-IgFcは、Protein G Sepharoseアフ
ィニティ−カラム（Pharmacia製）を用いて次のように
精製した。
【０３２２】前記培養上清を遠心分離して得た遠心上清
を、予め結合緩衝液（binding buffer）で平衡化したPr
otein G Sepharoseアフィニティーカラムに加えた。次
いで、カラムを結合緩衝液で洗浄した後、溶出緩衝液
（elution buffer）で溶出させた。溶出液を回収し、リ
ン酸緩衝液で２回以上外液交換することにより透析し、
精製rJTT-1-IgFcを得た。
【０３２３】アフィニティーカラムクロマトグラフィー
の結果を図１８に、また得られた精製rJTT-1-IgFcのSDS
-PAGEの結果を図１９に示す。 （２）「ヒトJTT-1抗原」とヒトIgG1-Fcとの融合蛋白
（hJTT-1-IgFc）の調製 ＰＣＲ用における鋳型としてのcDNA及びプライマーを除
いては、前記（１）と同様にして調製した。本試験で
は、鋳型としては、実施例８で作製した「ヒトJTT-1抗
原」の全長をコードするcDNAを含むクローン「pBSh41」
を用い、また5'プライマーとしては5'-TAACTGTTTCTCGAG
AACATGAAGTCAGGC-3'（配列番号９）を、3'プライマーと
しては5'-ATCCTATGGGTAACGGATCCTTCAGCTGGC-3'（配列番
号１０）を用いた。
【０３２４】アフィニティーカラムクロマトグラフィー
の結果を図２０に、また得られた精製hJTT-1-IgFcのSDS
-PAGEの結果を図２１に示す。 ［実施例１７］ 「ラットJTT-1抗原」をコードするcDN
A導入トランスジェニックマウスの作製 実施例７で取得した「ラットJTT-1抗原」の全長をコー
ドするｃＤＮＡを、ニワトリβアクチンプローモーター
を有する発現ベクターpCAGGS（ Gene, Vol.108, p.193-
200, 1991）に、ＤＮＡ末端平滑化キット（タカラ社
製）を用いて挿入し、プラスミドprJTT-1を得た。トラ
ンスジェニックマウス作製のために、prJTT-1を制限酵
素処理して直鎖状にした。
【０３２５】仮親マウスには、白色ＩＣＲマウス（雌、
日本エスエルシー社製）と精管結紮した白色ＩＣＲマウ
ス（雄、日本エスエルシー社製）とを交配して得られた
プラグ（または腟栓）を有する雌ＩＣＲマウスを用い
た。また、「ラットJTT-1抗原」遺伝子を導入するため
の受精卵を得るための採卵用マウスは、PEAMEX（５ユニ
ット、三共ゾーキ社製）及びプレグニール（５ユニッ
ト、オルガノン社製）を投与することにより過剰排卵さ
せたBDF-1マウス（雌、日本エスエルシー社製）をBDF-1
マウス（雄、日本エスエルシー社製）と交配させて作製
した。交配後、BDF-1マウス （雌）から卵管部を摘出
し、ヒアルロニダーゼ処理により受精卵のみを得、培地
中で保存した。
【０３２６】受精卵への「ラットJTT-1抗原」遺伝子の
導入は、顕微鏡下でマニピュレーターを用いて常法によ
り行った。受精卵を保定針で固定し、３７℃条件下、ト
リスＥＤＴＡ緩衝液で希釈した「ラットJTT-1抗原」を
コードする前記直鎖状遺伝子を含有する溶液を、ＤＮＡ
導入針を用いて受精卵の雄性前核内に注入（マイクロイ
ンジェクション）した。
【０３２７】遺伝子導入後、正常な状態を保持する受精
卵のみを選別し、仮親マウス（白色ＩＣＲマウス）の卵
巣内にある卵管采に、「ラットJTT-1抗原」遺伝子導入
受精卵を挿入した。
【０３２８】仮親から生まれた子マウス（ファウンダ
ー）の尾を切取りゲノム遺伝子を回収し、ＰＣＲにより
マウスゲノム内に「ラットJTT-1抗原」遺伝子が導入さ
れていることを確認した。次いで、このファウンダーを
正常マウスと交配させることにより「ラットJTT-1抗
原」を高発現するヘテロトランスジェニックマウスを作
製した。該ヘテロマウス同士を掛け合わせることにより
ホモマウスを作製できる。
【０３２９】マイクロインジェクションした「ラットJT
T-1抗原」遺伝子を含むコンストラクトの模式図を図２
２に示す。 ［実施例１８］ 「マウスJTT-1抗原」をコードする内
在性遺伝子を不活性化したノックアウトマウスの作製 （１）ターゲティングベクターの構築 「マウスJTT-1抗原」をコードする内在性遺伝子を相同
組換え（日経サイエンス、1994年５月号、第52-62頁）
により不活性化（ノックアウト）するためのターゲティ
ングベクターを下記のようにして構築した。
【０３３０】実施例９−５でクローニングした「マウス
JTT-1抗原」をコードする領域を含むマウスゲノミックD
NAクローンを、PstI及びHindIIIで消化して得たPstI-Hi
ndIII断片（「相同DNA」）を、プラスミドpGEM-3（プ
ロメガ製）にサブクローニングした。次いで、pGEM-3を
XhoIで開環し、プラスミドpMC1-neo-polyA（Stratagene
製）をXhoI及びSalIで処理して切り出したネオマイシン
耐性遺伝子（「neo」）を、該「相同DNA」の上流に挿
入、連結した。
【０３３１】前記マウスゲノミックDNAクローンをXhoI
及びNotIで消化して、上述の「相同DNA」より上流に
位置する約5.5kbの遺伝子（「相同DNA」）を切り出し
た。一方、前述の「neo−相同DNA」を挿入したpGEM-3
を、XhoI及びHindIIIで消化して「neo−相同DNA」を
切り出した。得られた「相同DNA」と「neo−相同DNA
」を、NotI及びHindIIIで開環したプラスミドpSEAP2-
CONT（クロ−ンテック製）にサブクローニングした。
【０３３２】得られたプラスミド（「相同DNA−neo−
相同DNA」が挿入されている）を、NruIを用いて「相
同DNA」の下流で消化、開環した後、プラスミドpMC1-
TK（Stratagene製）をPvuIIで消化して得たチミジンキ
ナーゼ遺伝子（「TK」）を、「相同DNA」の下流に挿
入、連結し、ターゲティングベクター（「相同DNA−n
eo−相同DNA−TK」が挿入されている）を得た。 （２）ターゲティングベクターのＥＳ細胞への導入 15%ウシ胎児血清を含有するDMEM培地中で培養したマウ
ス胚性幹細胞（ES細胞；embryonic stem cell）（Natur
e, Vol.362, p.255-258, 1993及びNature, Vol.326, p.
292-295, 1987）をトリプシンで処理して単一細胞とし
た後、リン酸緩衝液で３回洗浄して細胞濃度を１×１０
7細胞／mlに調製した。細胞懸濁液１mlあたり25μgの前
記ターゲティングベクターを加え、350V/cm（25μF）の
条件下で電気パルスを１回かけた。次いで、シャーレ
（10cm）に１×１０7細胞のES細胞を播種し維持培地中
で１日培養した後、培地を選択培地（G418(250μg/ml)
及び2μMのガンシクロビルを含有する）に交換した。以
後２日毎に培地交換を行い培養した。ターゲティングベ
クター導入から１０日目に、マイクロピペットを用い
て、顕微鏡下で573個のネオマイシン耐性ES細胞クロー
ンを取得した。得られたES細胞クローンを、Feeder細胞
を敷いた24穴プレートで各々別々に培養することによ
り、768個のネオマイシン耐性ES細胞のレプリカを取得
した。 （３）ノックアウトＥＳ細胞のスクリーニング 得られたネオマイシン耐性ES細胞の各々について、相同
組換えによる「マウスJTT-1抗原」をコードする内在性
遺伝子の破壊（ノックアウト）が起こっているか否かを
ＰＣＲにより確認した。
【０３３３】ＰＣＲには、（１）前記ネオマイシン耐性
遺伝子（「neo」）の配列に基づいて設計、合成したプ
ライマー（5'-CGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGC-
3'、配列番号１１））及び前記「相同DNA」の配列
に基づいて設計、合成したプライマー（5'-CATTCAAGTTT
CAGGGAACTAGTCCATGCGTTTC-3'、配列番号１２）を用い
た。
【０３３４】各々のネオマイシン耐性ES細胞について、
ゲノミックDNAを抽出し、それらを鋳型とし、該プライ
マーを用いてＰＣＲを行った。ＰＣＲは、９４℃で３分
の反応を１サイクル、９４℃で１分、６０℃で１分及び
７２℃で３分３０秒の３つの反応からなる反応を３０サ
イクル、並びに７２℃で１０分の反応を１サイクル行っ
た後、４℃で保存した。このＰＣＲにより約４ｋｂ弱の
フラグメントが増幅される場合には、そのＥＳ細胞クロ
ーンでは相同組換えによる「マウスJTT-1抗原」をコー
ドする内在性遺伝子の破壊（ノックアウト）が起こって
いると判断できる。
【０３３５】その結果、試験した７６８個のES細胞クロ
ーンのうち、３クローンにおいて目的のＰＣＲ産物が得
られた。これら３クローンについてゲノミックサザンブ
ロッティングを行い、さらに選抜及び確認をした。該３
クローンのゲノミックDNAを抽出し、制限酵素BamHIで消
化後、アガロースゲルで電気泳動を行った。これをナイ
ロンメンブランにトランスファーし、「マウスJTT-1」
のゲノミックDNA配列により作製したプローブを用い
て、ハイブリダイゼーションを行った。該プローブは、
相同組み換えが起こる部位より外側の配列であって、変
異型ゲノムと通常型ゲノムをサイズ的に見分けられるよ
うな部位の配列を基に設計した。その結果、３クローン
の内の１クローンで、変異型と通常型の２本のバンドが
確認された。このES細胞クローンを下記に述べるノック
アウトマウスの作製に用いた。 （４）ノックアウトマウスの作製 前記で得た「マウスJTT-1抗原」をコードする内在性遺
伝子が相同組換えにより不活性化（ノックアウト）され
たES細胞を、C57BL6マウス（日本チャールズリバー製）
の雄雌を交配して得た胚盤胞に１胚あたり１５個ずつ注
入（マイクロインジェクション）した。注入直後に、偽
妊娠処理してから2.5日目の仮親ICRマウス（日本クレア
製）の子宮に子宮の片側あたり約１０個ずつの胚盤胞を
移植した。その結果、合計３８匹の産児を得、その内の
１８匹が目的のキメラマウスでった。毛色への貢献度が
80％以上のキメラマウスは、１１匹であった。
【０３３６】次いで得られたキメラマウスを正常C57BL6
マウスと交配し、ES細胞由来の毛色遺伝子によるアグー
チ（agouti）色のマウスを得た。 ［実施例１９］ 抗体医薬組成物の調製 実施例１で調製した「ラットJTT-1抗原」に対するモノ
クローナル抗体「JTT-1抗体」及び「JTT-2抗体」の各
々、並びに実施例１２で調製した「ヒトJTT-1抗原」に
対するモノクローナル抗体「SA12」及び「SG430」の各
々（５０〜１５０μｇ／ｍｌ）を注射用蒸留水（１０ｍ
ｌ）に加え注射剤とした。
【０３３７】
【発明の効果】本発明により提供される、ヒト、マウス
及びラットなどの哺乳動物由来の新規な細胞表面分子
（「JTT-1抗原」と呼ぶ）は下記のような特徴を有する
ものである。
【０３３８】（１）Ｔ細胞の活性化に重要なコスティミ
ュレイトリーシグナルを細胞間接着を介して伝達するＴ
細胞等のリンパ球の細胞表面分子である「CD28」並びに
該シグナルに連動して活性化Ｔ細胞等の活性化リンパ球
の機能制御を行うＴ細胞等のリンパ球の細胞表面分子で
ある「CTLA-4」と下記のような類似性を有する。
【０３３９】システイン残基を含む２０以上のアミノ
酸残基が良く保存されている。
【０３４０】リガンド結合領域として必須なプロリン
残基の連続する配列「Pro-Pro-Pro（PPP）」が細胞外領
域に保存されている。
【０３４１】シグナル伝達領域として必須な配列「Ty
r-Xaa-Xaa-Met（YxxM）（Xaa及びxは任意のアミノ酸を
意味する。）が細胞内領域に保存されている。
【０３４２】「マウスJTT-1抗原」をコードする遺伝
子のマウス染色体上での位置は、マウスの「CD28」及び
「CTLA-4」の位置と同く、「１Ｃ３」である。 （２）細胞間接着を媒介する機能を有する「CD28」及び
「CTLA-4」と同様に、「JTT-1抗原」は胸腺細胞、ConA
などのマイトジェンで刺激したリンパ芽球及び胸腺腫細
胞の細胞間接着を媒介する能力を有する。 （３）少なくとも胸腺細胞、ConAなどのマイトジェンで
刺激したリンパ芽球細胞（活性化Ｔリンパ芽球細胞や活
性化Ｂリンパ芽球細胞）、末梢血リンパ球及び胸腺腫細
胞で強く発現する。 （４）「JTT-1抗原」に体する抗体は、ヒト末梢血リン
パ球を有意に増殖させ、またその増殖は、Ｔ細胞の活性
化に必須な抗原提示細胞からの第１のシグナルを受け取
るＴ細胞上のTcR/CD3複合体を構成するCD3に対するモノ
クローナル抗体を共存させることによりさらに高い増殖
を誘導する。 （５）「JTT-1抗原」に体する抗体を、実験的アレルギ
ー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に投与することにより、その病
状が有意に抑制がされる。 （６）「JTT-1抗原」に体する抗体を、糸球体基底膜（G
BM）腎炎のモデルラットに投与することにより、その病
状が有意に抑制がされる。
【０３４３】このような特徴から、本発明の「JTT-1抗
原」は、前記「CD28」や「CTLA-4」と同様に、Ｔ細胞等
のリンパ球の活性化に必須な第２のシグナル（コスティ
ミュレイトリーシグナル）の伝達、並びに該シグナルに
連動して活性化Ｔ細胞等の活性化リンパ球の機能制御を
行う分子であると考えられる。
【０３４４】従って、そのような細胞表面分子を構成す
る本発明のポリペプチド、ポリペプチド断片、融合ポリ
ペプチド及び抗体は、Ｔ細胞等のリンパ球の活性化並び
に活性化リンパ球の機能制御の異常に起因する種々の自
己免疫性疾患、アレルギー性疾患または炎症性疾患、具
体的には、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、自己免疫
性甲状腺炎、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性皮
膚疾患である扁平苔癬、全身性エリテマトーデス、イン
スリン依存性糖尿病及び乾癬などの治療または予防に極
めて有用な医薬品を提供することが可能である。
【０３４５】同様に、本発明のポリペプチドあるいはポ
リペプチド断片をコードする遺伝子は、該種々疾患の遺
伝子治療を可能とするだけでなく、アンチセンス医薬品
を提供することが可能である。
【０３４６】本発明の抗体の中でも、ヒトモノクローナ
ル抗体及びその医薬組成物は、マウス由来の抗体等の非
ヒト哺乳動物由来の抗体からなる抗体医薬品の治療上の
大きな問題点（副作用）であったヒトに対する抗原性を
全く有しないことから、医薬品としての価値を劇的に増
大させるものである。
【０３４７】また、本発明の遺伝子（ＤＮＡ）、ポリペ
プチド、ポリペプチド断片及び抗体は、医薬品として有
用なだけでなく、本発明の細胞表面分子と相互作用を有
する分子（リガンド）の探索、該リガンドの機能の解
明、並びに該リガンドをターゲットとした治療薬を開発
するための試薬として有用である。
【０３４８】また、本発明のトランスジェニックマウス
は、本発明の細胞表面分子である「JTT-1抗原」の生理
学的機能を解明するためのモデル動物として有用である
だけでなく、「JTT-1抗原」の機能を制御（阻害、抑
制、活性化、刺激など）する活性を有する種々の医薬
（低分子化合物、抗体、アンチセンス、ポリペプチドな
ど）をスクリーニングするためのツールといして極めて
有用である。即ち、そのような被験物質を該トランスジ
ェニックマウスに投与し、該マウスの生体に起こる種々
の生理学的、生物学的あるいは薬理学的パラメーターを
測定、解析することにより投与された被験物質の活性を
評価することが可能である。
【０３４９】また、本発明のノックアウトマウスは、該
マウスの特徴を種々の側面（生理学的、生物学的、薬理
学的、病理学的及び遺伝子的等の側面）から分析するこ
とにより、本発明の細胞表面分子の機能を解明すること
を可能とする。
【０３５０】
【配列表】
（１）出願人の氏名又は名称： 日本たばこ産業株式会
社 （２）発明の名称： 細胞間接着及びシグナル伝達を媒
介する細胞表面分子 （３）整理番号： Ｊ１−８０２ＤＰ１ （４）出願番号： （５）出願日： （６）優先権のもととなった出願をした国名及び出願の
番号 日本国 平成９年特許願第０６２２９０号 （７）優先日： 平成９年２月２７日 （８）配列の数： １２ 配列番号：1 配列の長さ：600 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 起源 生物名：ヒト（human） 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1 .. 600 特徴を決定した方法：E 配列： ATG AAG TCA GGC CTC TGG TAT TTC TTT CTC 30 Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu 1 5 10 TTC TGC TTG CGC ATT AAA GTT TTA ACA GGA 60 Phe Cys Leu Arg Ile Lys Val Leu Thr Gly 15 20 GAA ATC AAT GGT TCT GCC AAT TAT GAG ATG 90 Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met 25 30 TTT ATA TTT CAC AAC GGA GGT GTA CAA ATT 120 Phe Ile Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile 35 40 TTA TGC AAA TAT CCT GAC ATT GTC CAG CAA 150 Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val Gln Gln 45 50 TTT AAA ATG CAG TTG CTG AAA GGG GGG CAA 180 Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln 55 60 ATA CTC TGC GAT CTC ACT AAG ACA AAA GGA 210 Ile Leu Cys Asp Leu Thr Lys Thr Lys Gly 65 70 AGT GGA AAC ACA GTG TCC ATT AAG AGT CTG 240 Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu 75 80 AAA TTC TGC CAT TCT CAG TTA TCC AAC AAC 270 Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn 85 90 AGT GTC TCT TTT TTT CTA TAC AAC TTG GAC 300 Ser Val Ser Phe Phe Leu Tyr Asn Leu Asp 95 100 CAT TCT CAT GCC AAC TAT TAC TTC TGC AAC 330 His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn 105 110 CTA TCA ATT TTT GAT CCT CCT CCT TTT AAA 360 Leu Ser Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys 115 120 GTA ACT CTT ACA GGA GGA TAT TTG CAT ATT 390 Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu His Ile 125 130 TAT GAA TCA CAA CTT TGT TGC CAG CTG AAG 420 Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys 135 140 TTC TGG TTA CCC ATA GGA TGT GCA GCC TTT 450 Phe Trp Leu Pro Ile Gly Cys Ala Ala Phe 145 150 GTT GTA GTC TGC ATT TTG GGA TGC ATA CTT 480 Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu 155 160 ATT TGT TGG CTT ACA AAA AAG AAG TAT TCA 510 Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser 165 170 TCC AGT GTG CAC GAC CCT AAC GGT GAA TAC 540 Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr 175 180 ATG TTC ATG AGA GCA GTG AAC ACA GCC AAA 570 Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys 185 190 AAA TCT AGA CTC ACA GAT GTG ACC CTA TAA 600 Lys Ser Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu 195 配列番号：2 配列の長さ：199 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト（human） 配列番号：3 配列の長さ：2610 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（3'及び5'末端塩基配列を含むcD
NA） 起源 生物名：ヒト（human） 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：26 .. 625 特徴を決定した方法：E 配列： GGACTGTTAA CTGTTTCTGG CAAAC 25 ATG AAG TCA GGC CTC TGG TAT TTC TTT CTC 55 Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu 5 10 TTC TGC TTG CGC ATT AAA GTT TTA ACA GGA 85 Phe Cys Leu Arg Ile Lys Val Leu Thr Gly 15 20 GAA ATC AAT GGT TCT GCC AAT TAT GAG ATG 115 Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met 25 30 TTT ATA TTT CAC AAC GGA GGT GTA CAA ATT 145 Phe Ile Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile 35 40 TTA TGC AAA TAT CCT GAC ATT GTC CAG CAA 175 Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val Gln Gln 45 50 TTT AAA ATG CAG TTG CTG AAA GGG GGG CAA 205 Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln 55 60 ATA CTC TGC GAT CTC ACT AAG ACA AAA GGA 235 Ile Leu Cys Asp Leu Thr Lys Thr Lys Gly 65 70 AGT GGA AAC ACA GTG TCC ATT AAG AGT CTG 265 Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu 75 80 AAA TTC TGC CAT TCT CAG TTA TCC AAC AAC 295 Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn 85 90 AGT GTC TCT TTT TTT CTA TAC AAC TTG GAC 325 Ser Val Ser Phe Phe Leu Tyr Asn Leu Asp 95 100 CAT TCT CAT GCC AAC TAT TAC TTC TGC AAC 355 His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn 105 110 CTA TCA ATT TTT GAT CCT CCT CCT TTT AAA 385 Leu Ser Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys 115 120 GTA ACT CTT ACA GGA GGA TAT TTG CAT ATT 415 Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu His Ile 125 130 TAT GAA TCA CAA CTT TGT TGC CAG CTG AAG 445 Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys 135 140 TTC TGG TTA CCC ATA GGA TGT GCA GCC TTT 475 Phe Trp Leu Pro Ile Gly Cys Ala Ala Phe 145 150 GTT GTA GTC TGC ATT TTG GGA TGC ATA CTT 505 Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu 155 160 ATT TGT TGG CTT ACA AAA AAG AAG TAT TCA 535 Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser 165 170 TCC AGT GTG CAC GAC CCT AAC GGT GAA TAC 565 Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr 175 180 ATG TTC ATG AGA GCA GTG AAC ACA GCC AAA 595 Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys 185 190 AAA TCT AGA CTC ACA GAT GTG ACC CTA TAA 625 Lys Ser Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu 195 TATGGAACTC TGGCACCCAG GCATGAAGCA CGTTGGCCAG TTTTCCTCAA 675 CTTGAAGTGC AAGATTCTCT TATTTCCGGG ACCACGGAGA GTCTGACTTA 725 ACTACATACA TCTTCTGCTG GTGTTTTGTT CAATCTGGAA GAATGACTGT 775 ATCAGTCAAT GGGGATTTTA ACAGACTGCC TTGGTACTGC CGAGTCCTCT 825 CAAAACAAAC ACCCTCTTGC AACCAGCTTT GGAGAAAGCC CAGCTCCTGT 875 GTGCTCACTG GGAGTGGAAT CCCTGTCTCC ACATCTGCTC CTAGCAGTGC 925 ATCAGCCAGT AAAACAAACA CATTTACAAG AAAAATGTTT TAAAGATGCC 975 AGGGGTACTG AATCTGCAAA GCAAATGAGC AGCCAAGGAC CAGCATCTGT 1025 CCGCATTTCA CTATCATACT ACCTCTTCTT TCTGTAGGGR TGAGAATTCC 1075 TCTTTTAATC AGTCAAGGGA GATGCTTCAA AGCTGGRGCT ATTTTATTTC 1125 TGAGATGTTG ATGTGAACTG TACATTAGTA CATACTCAGT ACTCTCCTTC 1175 AATTGCTGAA CCCCAGTTGA CCATTTTACC AAGACTTTAG ATGCTTTCTT 1225 GTGCCCTCAA TTTTCTTTTT AAAAATACTT CTACATGACT GCTTGACAGC 1275 CCAACAGCCA CTCTCAATAG AGAGCTATGT CTTACATTCT TTCCTCTGCT 1325 GCTCAATAGT TTTATATATC TATGCATACA TATATACACA CATATGTATA 1375 TAAAATTCAT AATGAATATA TTTGCCTATA TTCTCCCTAC AAGAATATTT 1425 TTGCTCCAGA AAGACATGTT CTTTTCTCAA ATTCAGTTAA AATGGTTTAC 1475 TTTGTTCAAG TTAGTGGTAG GAAACATTGC CCGGAATTGA AAGCAAATTT 1525 AWWTTATTAT CCTATTTTCT ACCATTATCT ATGTTTTCAT GGTGCTATTA 1575 ATTACAAGTT TAGTTCTTTT TGTAGATCAT ATTAAAATTG CAAACAAAAT 1625 CATCTTTAAT GGGCCAGCAT TCTCATGGGG TAGAGCAGAA TATTCATTTA 1675 GCCTGAAAGC TGCAGTTACT ATAGGTTGCT GTCAGACTAT ACCCATGGTG 1725 CCTCTGGGCT TGACAGGTCA AAATGGTCCC CATCAGCCTG GAGCAGCCCT 1775 CCAGACCTGG GTGGAATTCC AGGGTTGAGA GACTCCCCTG AGCCAGAGGC 1825 CACTAGGTAT TCTTGCTCCC AGAGGCTGAA GTCACCCTGG GAATCACAGT 1875 GGTCTACCTG CATTCATAAT TCCAGGATCT GTGAAGAGCA CATATGTGTC 1925 AGGGCACAAT TCCCTCTCAT AAAAACCACA CAGCCTGGAA ATTGGCCCTG 1975 GCCCTTCAAG ATAGCCTTCT TTAGAATATG ATTTGGCTAG AAAGATTCTT 2025 AAATATGTGG AATATGATTA TTCTTAGCTG GAATATTTTC TCTACTTCCT 2075 GTCTGCATGC CCAAGGCTTC TGAAGCAGCC AATGTCGATG CAACAACATT 2125 TGTAACTTTA GGTAAACTGG GATTATGTTG TAGTTTAACA TTTTGTAACT 2175 GTGTGCTTAT AGTTTACAAG TGAGACCCGA TATGTCATTA TGCATACTTA 2225 TATTATCTTA AGCATGTGTA ATGCTGGATG TGTACAGTAC AGTACWTAAC 2275 TTGTAATTTG AATCTAGTAT GGTGTTCTGT TTTCAGCTGA CTTGGACAAC 2325 CTGACTGGCT TTGCACAGGT GTTCCCTGAG TTGTTTGCAG GTTTCTGTGT 2375 GTGGGGTGGG GTATGGGGAG GAGAACCTTC ATGGTGGCCC ACCTGGCCTG 2425 GTTGTCCAAG CTGTGCCTCG ACACATCCTC ATCCCAAGCA TGGGACACCT 2475 CAAGATGAAT AATAATTCAC AAAATTTCTG TGAAATCAAA TCCAGTTTTA 2525 AGAGGAGCCA CTTATCAAAG AGATTTTAAC AGTAGTAAGA AGGCAAAGAA 2575 TAAACATTTG ATATTCAGCA ACTGAAAAAA AAAAA 2610 配列番号：4 配列の長さ：2072 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（3'及び5'末端塩基配列を含むcD
NA） 起源 生物名：ラット（rat） 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：35 .. 637 特徴を決定した方法：E 配列： CTGGAGGGGA AGAGTGCAGC TGTTCCTGGC AGAC 34 ATG AAG CCC TAC TTC TCG TGC GTC TTT GTC 64 Met Lys Pro Tyr Phe Ser Cys Val Phe Val 1 5 10 TTC TGC TTC CTA ATC AAA CTT TTA ACA GGA 94 Phe Cys Phe Leu Ile Lys Leu Leu Thr Gly 15 20 GAA CTC AAT GAC TTG GCC AAT CAC AGG ATG 124 Glu Leu Asn Asp Leu Ala Asn His Arg Met 25 30 TTT TCG TTT CAC GAT GGA GGT GTA CAG ATT 154 Phe Ser Phe His Asp Gly Gly Val Gln Ile 35 40 TCT TGT AAC TAC CCT GAG ACT GTC CAG CAG 184 Ser Cys Asn Tyr Pro Glu Thr Val Gln Gln 45 50 TTA AAA ATG CAG TTG TTC AAA GAC AGA GAA 214 Leu Lys Met Gln Leu Phe Lys Asp Arg Glu 55 60 GTC CTC TGC GAC CTC ACC AAG ACC AAG GGA 244 Val Leu Cys Asp Leu Thr Lys Thr Lys Gly 65 70 AGC GGA AAC ACC GTG TCC ATC AAG AAT CCG 274 Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Asn Pro 75 80 ATG TCC TGT CCA TAT CAG CTG TCC AAC AAC 304 Met Ser Cys Pro Tyr Gln Leu Ser Asn Asn 85 90 AGT GTC TCT TTT TTC CTA GAC AAC GCA GAC 334 Ser Val Ser Phe Phe Leu Asp Asn Ala Asp 95 100 AGC TCC CAG GGC AGC TAC TTT TTA TGC AGC 364 Ser Ser Gln Gly Ser Tyr Phe Leu Cys Ser 105 110 CTG TCG ATT TTC GAC CCA CCC CCT TTT CAA 394 Leu Ser Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Gln 115 120 GAA AAG AAC CTT AGT GGA GGA TAT TTG CTT 424 Glu Lys Asn Leu Ser Gly Gly Tyr Leu Leu 125 130 ATT TAT GAA TCC CAG CTT TGT TGC CAG CTG 454 Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu 135 140 AAG CTT TGG TTA CCC GTA GGG TGT GCA GCT 484 Lys Leu Trp Leu Pro Val Gly Cys Ala Ala 145 150 TTT GTG GCA GCG CTC CTT TTT GGA TGC ATA 514 Phe Val Ala Ala Leu Leu Phe Gly Cys Ile 155 160 TTT ATC GTC TGG TTT GCA AAA AAG AAG TAC 544 Phe Ile Val Trp Phe Ala Lys Lys Lys Tyr 165 170 AGA TCC AGT GTG CAC GAC CCT AAT AGC GAG 574 Arg Ser Ser Val His Asp Pro Asn Ser Glu 175 180 TAC ATG TTC ATG GCG GCA GTC AAC ACA AAC 604 Tyr Met Phe Met Ala Ala Val Asn Thr Asn 185 190 AAA AAG TCC AGA CTT GCA GGT ATG ACC TCA 634 Lys Lys Ser Arg Leu Ala Gly Met Thr Ser 195 200 TAA 637 TCTGGAACAC GGGAACCCAT GGAGGAACTA CACTGTCTAG TTCCCCTGAA 687 ACTTGAATGG AGAAAGTCTT CTATTTTCTG GACCACAGGG CATCTGACTT 737 GATTAACTAC TGATACCTCC TTTTGGKGTT TTGTTTGTCT GGATCAGTGA 787 CTATCAGTCA CTCGGAATTT CAGCAGACTG CCCTGGGTTT GCTGAGTCCT 837 TTTAAGGCAA ACCCCTTCTT ATAGAAGACC CGGCTCATAT GTATTCAACA 887 AACAGACCTC ACTGGGATAC AATCCCCTCT TTCTGCGCCT GCTTCTAGCT 937 ATGCACCGGC CAGCAAGACA AACATATCTC CAGCATTTTT ACAAAAATGC 987 CAGGGTATGA ATCTGTAAAG TACACAGGCA GCCATTGACC ACCGTCTGTC 1037 CTCGTTTTTT CAGATTCTAT TTTTTTCCAT AGAGATCAGC ATTCCTTCTA 1087 GAATCAGACA GTAGAGGGAG ATGCTTCACA ACAGAAGCTC TTATGTTTCT 1137 GAGATGTTGA TGAATTCATG CTTTAGTACC ACCATGTTCT CTAACAACTT 1187 CTATATTCCA GCTGATCACT GCTTCAGGGC TTAGATGCCT GCTTTTGCCT 1237 TCAAGTCTCC CCTTAAAGAT ACTCCCACAG GTCTACTTGG TGGCCTGCAG 1287 CCACTCTGAA TAGGAAGTTT GGTCTACAAT TTCCCCCCTC TGCTGCTCAA 1337 AAAAAAAAAT TAGTAGATAT GATTTTCCCA TATTCTCCCT GCCAAAGTAA 1387 TTTTTTCCAG CAAAGACATC TAAATTCAGT TAATATGGTT TACTGTGTTG 1437 ATATTAGTGG CAGTAAACAT TTCTCAGAAT CAAAAGCAAA TTAATTTTGC 1487 GGTGGTGTTT TTCTACCATT ATCTTGGGTT TCCATGGTGC TATTACTCAC 1537 AAGTTTAGCT ATTTTTTTAT GCATCATATT AAAGTTGCAA GCAAGCAGAG 1587 CAACCCTCGG TTAATGGGCA AACATTCTCC TGGGGTAGAA TGAATTGTCT 1637 ATTTAGCCCG AAAACTGCAG TTTCTGTGGG TGGCTGCCAG ACTACAGCCG 1687 TGCTTTGCTC TGGCTTTGAC AGGTTGAAAT AGYCCCCATG ASCSTGGAAC 1737 AGWACTCCAG ACTGTGCTGG AGTCCCAAAG TTAGGAGGGC CATGGAGCCT 1787 GGGACAGGCT GCTGCTTTGG TCTTTAGGAT CTAGGAARAA TTACAGAGGG 1837 GCCAAGACAG AGTTCCCTCC CCTAGAAACT GTGCAGCCTG GAAGTCAGCC 1887 CTGGCACTTT AAGATAGCCT TCTTTAGAAC ATGAGTTAGT TGGTAGTATT 1937 CTGACGTGTA AACAGCCTAT KGTTGCTCGG AGCTGGACCA TTTTCTCCAC 1987 TTCCCTGTCT GCATGCCTAA GACTTCTAGA GCAGCCAACG TATATGCAAC 2037 ATTAAAGAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAA 2072 配列番号：5 配列の長さ：603 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 起源 生物名：マウス（mouse） 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1 .. 603 特徴を決定した方法：E 配列： ATG AAG CCG TAC TTC TGC CAT GTC TTT GTC 30 Met Lys Pro Tyr Phe Cys His Val Phe Val 1 5 10 TTC TGC TTC CTA ATC AGA CTT TTA ACA GGA 60 Phe Cys Phe Leu Ile Arg Leu Leu Thr Gly 15 20 GAA ATC AAT GGC TCG GCC GAT CAT AGG ATG 90 Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asp His Arg Met 25 30 TTT TCA TTT CAC AAT GGA GGT GTA CAG ATT 120 Phe Ser Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile 35 40 TCT TGT AAA TAC CCT GAG ACT GTC CAG CAG 150 Ser Cys Lys Tyr Pro Glu Thr Val Gln Gln 45 50 TTA AAA ATG CGA TTG TTC AGA GAG AGA GAA 180 Leu Lys Met Arg Leu Phe Arg Glu Arg Glu 55 60 GTC CTC TGC GAA CTC ACC AAG ACC AAG GGA 210 Val Leu Cys Glu Leu Thr Lys Thr Lys Gly 65 70 AGC GGA AAT GCG GTG TCC ATC AAG AAT CCA 240 Ser Gly Asn Ala Val Ser Ile Lys Asn Pro 75 80 ATG CTC TGT CTA TAT CAT CTG TCA AAC AAC 270 Met Leu Cys Leu Tyr His Leu Ser Asn Asn 85 90 AGC GTC TCT TTT TTC CTA AAC AAC CCA GAC 300 Ser Val Ser Phe Phe Leu Asn Asn Pro Asp 95 100 AGC TCC CAG GGA AGC TAT TAC TTC TGC AGC 330 Ser Ser Gln Gly Ser Tyr Tyr Phe Cys Ser 105 110 CTG TCC ATT TTT GAC CCA CCT CCT TTT CAA 360 Leu Ser Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Gln 115 120 GAA AGG AAC CTT AGT GGA GGA TAT TTG CAT 390 Glu Arg Asn Leu Ser Gly Gly Tyr Leu His 125 130 ATT TAT GAA TCC CAG CTC TGC TGC CAG CTG 420 Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu 135 140 AAG CTC TGG CTA CCC GTA GGG TTG CCA GCT 450 Lys Leu Trp Leu Pro Val Gly Leu Pro Ala 145 150 TTC GTT GTG GTA CTC CTT TTT GGA TGC ATA 480 Phe Val Val Val Leu Leu Phe Gly Cys Ile 155 160 CTT ATC ATC TGG TTT TCA AAA AAG AAA TAC 510 Leu Ile Ile Trp Phe Ser Lys Lys Lys Tyr 165 170 GGA TCC AGT GTG CAT GAC CCT AAT AGT GAA 540 Gly Ser Ser Val His Asp Pro Asn Ser Glu 175 180 TAC ATG TTC ATG GCG GCA GTC AAC ACA AAC 570 Tyr Met Phe Met Ala Ala Val Asn Thr Asn 185 190 AAA AAG TCT AGA CTT GCA GGT GTG ACC TCA 600 Lys Lys Ser Arg Leu Ala Gly Val Thr Ser 195 200 TAA 603 配列番号：6 配列の長さ：836 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（3'及び5'末端塩基配列を含むcD
NA） 起源 生物名：ラット（rat） 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：35 .. 685 特徴を決定した方法：E 配列： CTGGAGGGGA AGAGTGCAGC TGTTCCTGGC AGAC 34 ATG AAG CCC TAC TTC TCG TGC GTC TTT GTC 64 Met Lys Pro Tyr Phe Ser Cys Val Phe Val 1 5 10 TTC TGC TTC CTA ATC AAA CTT TTA ACA GGA 94 Phe Cys Phe Leu Ile Lys Leu Leu The Gly 15 20 GAA CTC AAT GAC TTG GCC AAT CAC AGG ATG 124 Glu Leu Asn Asp Leu Ala Asn His Arg Met 25 30 TTT TCG TTT CAC GAT GGA GGT GTA CAG ATT 154 Phe Ser Phe His Asp Gly Gly Val Gln Ile 35 40 TCT TGT AAC TAC CCT GAG ACT GTC CAG CAG 184 Ser Cys Asn Tyr Pro Glu Thr Val Gln Gln 45 50 TTA AAA ATG CAG TTG TTC AAA GAC AGA GAA 214 Leu Lys Met Gln Leu Phe Lys Asp Arg Glu 55 60 GTC CTC TGC GAC CTC ACC AAG ACC AAG GGA 244 Val Leu Cys Asp Leu Thr Lys Thr Lys Gly 65 70 AGC GGA AAC ACC GTG TCC ATC AAG AAT CCG 274 Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Asn Pro 75 80 ATG TCC TGT CCA TAT CAG CTG TCC AAC AAC 304 Met Ser Cys Pro Tyr Gln Leu Ser Asn Asn 85 90 AGT GTC TCT TTT TTC CTA GAC AAC GCA GAC 334 Ser Val Ser Phe Phe Leu Asp Asn Ala Asp 95 100 AGC TCC CAG GGC AGC TAC TTT TTA TGC AGC 364 Ser Ser Gln Gly Ser Tyr Phe Leu Cys Ser 105 110 CTG TCG ATT TTC GAC CCA CCC CCT TTT CAA 394 Leu Ser Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Gln 115 120 GAA AAG AAC CTT AGT GGA GGA TAT TTG CTT 424 Glu Lys Asn Leu Ser Gly Gly Tyr Leu Leu 125 130 ATT TAT GAA TCC CAG CTT TGT TGC CAG CTG 454 Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu 135 140 AAG CTT TGG TTA CCC GTA GGG TGT GCA GCT 484 Lys Leu Trp Leu Pro Val Gly Cys Ala Ala 145 150 TTT GTG GCA GCG CTC CTT TTT GGA TGC ATA 514 Phe Val Ala Ala Leu Leu Phe Gly Cys Ile 155 160 TTT ATC GTC TGG TTT GCA AAA AAG AAG TAC 544 Phe Ile Val Trp Phe Ala Lys Lys Lys Tyr 165 170 AGA TCC AGT GTG CAC GAC CCT AAT AGC GAG 574 Arg Ser Ser Val His Asp Pro Asn Ser Glu 175 180 TAC ATG TTC ATG GCG GCA GTC AAC ACA AAC 604 Tyr Met Phe Met Ala Ala Val Asn Thr Asn 185 190 AAA AAG TCC AGA CTT GCA GGT ACA GCA CCC 634 Lys Lys Ser Arg Leu Ala Gly Thr Ala Pro 195 200 CTT AGG GCT TTG GGG AGA GGA GAA CAC TCT 664 Leu Arg Ala Leu Gly Arg Gly Glu His Ser 205 210 TCA TGT CAA GAC CGG AAT TAA 685 Ser Cys Gln Asp Arg Asn 215 TTTGTTTATT TCTATTTTAA AAGAAAGACA TTTTTTCCCC TAAAGATAAT 735 TTTTGTATTT TTATGTGAAA GTCTGAATCT TCATTTTAAC TCGACTTATA 785 TACTCTGTGG TATATTAAAA ATAATGTTTG TGAAAAAAAA AAAAAAAAAA 835 A 836 配列番号：7 配列の長さ：27 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列の特徴 特徴を表す記号：primer bind 存在位置：1 .. 27 特徴を決定した方法：E 配列： CTGCTCGAGA TGAAGCCCTA CTTCTCG 27 配列番号：8 配列の長さ：32 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列の特徴 特徴を表す記号：primer bind 存在位置：1 .. 32 特徴を決定した方法：E 配列： ACCCTACGGG TAACGGATCC TTCAGCTGGC AA 32 配列番号：9 配列の長さ：30 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列の特徴 特徴を表す記号：primer bind 存在位置：1 .. 30 特徴を決定した方法：E 配列： TAACTGTTTC TCGAGAACAT GAAGTCAGGC 30 配列番号：10 配列の長さ：30 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列の特徴 特徴を表す記号：primer bind 存在位置：1 .. 30 特徴を決定した方法：E 配列： ATCCTATGGG TAACGGATCC TTCAGCTGGC 30 配列番号：11 配列の長さ：35 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列の特徴 特徴を表す記号：primer bind 存在位置：1 .. 35 特徴を決定した方法：E 配列： CGTGATATTG CTGAAGAGCT TGGCGGCGAA TGGGC 35 配列番号：12 配列の長さ：34 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列の特徴 特徴を表す記号：primer bind 存在位置：1 .. 34 特徴を決定した方法：E 配列： CATTCAAGTT TCAGGGAACT AGTCCATGCG TTTC 34
【図面の簡単な説明】
【図１】「JTT.1抗体」により誘導されるFTL435細胞の
細胞凝集の状態、並びに「JTT.2抗体」による該細胞凝
集の阻害の状態を示す顕微鏡写真である。分図（ａ）は
いずれのハイブリドーマ上清も加えない場合の細胞の状
態を示し、分図（ｂ）は「JTT-1抗体」による細胞凝集
の状態を示し、分図（ｃ）は「JTT-1抗体」とともに
「抗ICAM-1抗体」を加えた場合の細胞凝集の状態を示
し、また分図（ｄ）は「JTT-1抗体」とともに「JTT-2抗
体」を加えて場合の細胞凝集の状態を示す。
【図２】「JTT.1抗体」により誘導されるFTL435細胞及
びラット活性化リンパ芽球の細胞凝集の状態、並びに
「JTT.2抗体」による該細胞凝集の阻害の状態を示す顕
微鏡写真である。分図（ａ）はいずれの抗体も加えない
場合のFTL435細胞の細胞の状態を示し、分図（ｂ）はPM
Aを加えた場合のFTL435細胞の細胞の状態を示し、分図
（ｃ）は「JTT-1抗体」を加えた場合のFTL435細胞の細
胞の状態を示し、分図（ｄ）は「JTT-1抗体」とともに
抗LFA-1抗体を加えた場合のFTL435細胞の細胞の状態を
示し、分図（ｅ）は「JTT-1抗体」とともに抗CD18抗体
を加えた場合のFTL435細胞の細胞の状態を示し、分図
（ｆ）は「JTT-1抗体」とともに抗ICAM-1抗体を加えた
場合のFTL435細胞の細胞の状態を示し、分図（ｇ）はい
ずれの抗体も加えない場合の活性化リンパ芽球の細胞の
状態を示し、分図（ｈ）はPMAを加えた場合の活性化リ
ンパ芽球の細胞の状態を示し、分図（ｉ）は「JTT-1抗
体」を加えた場合の活性化リンパ芽球の細胞の状態を示
し、分図（ｊ）は「JTT-1抗体」とともに抗LFA-1抗体を
加えた場合の活性化リンパ芽球の細胞の状態を示し、分
図（ｋ）は「JTT-1抗体」とともに抗CD18抗体を加えた
場合の活性化リンパ芽球の細胞の状態を示し、また分図
（ｌ）は「JTT-1抗体」とともに抗ICAM-1抗体を加えた
場合の活性化リンパ芽球の細胞の状態を示す。
【図３】フロ−サイトメ−タ−を用いて測定した各種細
胞における「JTT.1抗原」及び「JTT.2抗原」の発現の状
態を示す図である。
【図４】フロ−サイトメ−タ−を用いて測定した各種リ
ンパ球系細胞における「JTT.1抗原」の発現の状態を示
す図である。
【図５】SDS-PAGEによる電気泳動により解析した「JTT.
1抗原」の電気泳動像を示す写真である。
【図６】「JTT.1抗体」の共存下で誘導される精製「JT
T.1抗原」をコートしたマイクロプレートへのラット胸
腺細胞の接着の状態、並びに「JTT.2抗体」による該細
胞接着の阻害の状態を示す顕微鏡写真である。分図
（ａ）は「JTT-1抗原」をコーティングしていないプレ
ートへの細胞の接着の状態を示し、分図（ｂ）はいずれ
の抗体も加えない場合の「JTT-1抗原」をコーティング
したプレートへの細胞の接着の状態を示し、分図（ｃ）
は「JTT-1抗体」のFab断片を加えた場合の「JTT-1抗
原」をコーティングしたプレートへの細胞の接着の状態
を示し、また分図（ｄ）は「JTT-1抗体」のFab断片とと
もに「JTT-2抗体」を加えた場合の「JTT-1抗原」をコー
ティングしたプレートへの細胞の接着の状態を示す。
【図７】精製「JTT.1抗原」をコーティングしたプレー
トに接着した胸腺細胞の蛍光強度に基づく相対細胞数を
示す図である。「Ag(-)」は「JTT-1抗原」をコーティン
グしていないプレートにおける相対細胞数を示し、「Ag
(+)」はいずれの抗体も加えない場合の「JTT-1抗原」を
コーティングしたプレートにおける相対細胞数を示し、
「Ag(+)+JTT.1 Fab」は「JTT-1抗体」のFab断片を加え
た場合の「JTT-1抗原」をコーティングしたプレートに
おける相対細胞数を示し、また「Ag(+)+JTT.1 Fab+JTT.
2」は「JTT-1抗体」のFab断片とともに「JTT-2抗体」を
加えた場合の「JTT-1抗原」をコーティングしたプレー
トにおける相対細胞数を示す。
【図８】フロ−サイトメ−タ−を用いて測定した「ラッ
トJTT-1抗原」をコードするcDNAで形質転換したCOS細胞
での「ラットJTT-1抗原」及び「ラットJTT-2抗原」の発
現状態を示す図である。
【図９】ハイドロパシーブロット解析による「JTT.1抗
原」のアミノ酸配列の構造的特徴を示す図である。
【図１０】ヒト、ラット、及びマウスの「JTT.1抗原」
並びに「ラットJTT-1抗原」の変異体の各々のアミノ酸
配列の相同性を示す図である。
【図１１】「ヒトJTT-1抗原」、「ヒトCD28分子」及び
「ヒトCTLA-4分子」のアミノ酸配列におけるアミノ酸配
列相同性並びにモチーフの保存状態を示す図である。
【図１２】「ヒトJTT-1抗原」、「ヒトCD28分子」及び
「ヒトCTLA-4分子」の蛋白二次構造及びその類似性を模
式的に示す図である。
【図１３】「マウスJTT-1抗原」をコードするゲノミッ
クDNAの構造を模式的に示す図である。
【図１４】「ラットJTT-1抗原」及びそのオールタナテ
ィブスプライシング変異体の各々のアミノ酸配列の差異
を示す図である。
【図１５】［3Ｈ］チミジン取込み試験により測定した
「ヒトJTT-1抗原」に対するモノクローナル抗体により
誘導されるヒト末梢血リンパ球の増殖の程度を示す図で
ある。縦軸は、細胞内への［3Ｈ］チミジンの取込み量
（dpm）を示す。
【図１６】疾患モデルラットにおける実験的アレルギー
性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の「JTT-1抗原」に対するモノク
ローナル抗体による治療効果を示す図である。縦軸はス
コア化した疾患症状の程度を示し、また横軸はＥＡＥ誘
導のための免疫感作後の経過日数を示す。
【図１７】疾患モデルラットにおける糸球体腎炎の「JT
T-1抗原」に対するモノクローナル抗体による治療効果
を示す図である。縦軸は尿中蛋白排泄量を示し、また横
軸は糸球体腎炎誘導のための免疫感作後の経過時間
（週）を示す。
【図１８】プロテインＡセファロースカラムによる「ラ
ットJTT-1抗原」の細胞外領域とヒトIgFcとの融合ポリ
ペプチド（rJTT-1-IgFc）の精製におけるカラムヒスト
グラムを示す図である。
【図１９】SDS-PAGEによる電気泳動により解析したrJTT
-1-IgFcの電気泳動像を示す写真である。
【図２０】プロテインＡセファロースカラムによる「ヒ
トJTT-1抗原」の細胞外領域とヒトIgFc（hJTT-1-IgFc）
との融合ポリペプチドの精製におけるカラムヒストグラ
ムを示す図である。
【図２１】SDS-PAGEによる電気泳動により解析したhJTT
-1-IgFcの電気泳動像を示す写真である。
【図２２】「ラットJTT-1抗原」をコードするcDNAを導
入したトランスジェニックマウス作製のための遺伝子導
入用ベクターの構造を模式的に示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 37/02 Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 15/02 21/08 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:19 Ｃ１２Ｐ 21/02 1:91 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/02 //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:19） 15/00 Ｃ (Ｃ１２Ｎ 5/10 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (56)参考文献 Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．1996, Ｖｏｌ．26，Ｎｏ．11，ｐ．2781−2789 Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏ ｌ．1995，Ｖｏｌ．７，Ｎｏ．３，ｐ. 289−395 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＥＵＲＯＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ ｅｑ ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ ｅｎｅＳｅｑ

Claims (20)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 下記（１）または（２）のポリペプチ
    ド： （１）配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するポリペ
    プチド； （２）配列番号２に記載のアミノ酸配列中のアミノ酸に
    おいて１もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失もしくは
    付加されたアミノ酸配列を有するポリペプチドであっ
    て、 下記のいずれかの特徴を有する細胞表面分子を構成
    するポリペプチド：（ a ） 該細胞表面分子に反応性を有する抗体は、マイト
    ジェンで刺激したリンパ芽球細胞間の接着を誘導する；（ b ） 該細胞表面分子に反応性を有する抗体は、ＣＤ３
    に反応性を有する抗体との共存下で末梢血リンパ球の増
    殖を誘導する。
  2. 【請求項２】 該ポリペプチドが、配列番号１に記載の
    塩基配列からなるＤＮＡにストリンジェントな条件下で
    ハイブリダイズするＤＮＡによりコードされることを特
    徴とする請求項１に記載のポリペプチド。
  3. 【請求項３】 該細胞表面分子が、ヒト由来の細胞表面
    分子であることを特徴とする請求項１または請求項２に
    記載のポリペプチド。
  4. 【請求項４】 請求項１乃至請求項３のいずれかに記載
    のポリペプチドをコードする遺伝子。
  5. 【請求項５】 該遺伝子が、ｃＤＮＡであることを特徴
    とする請求項４に記載の遺伝子。
  6. 【請求項６】 該ｃＤＮＡが、配列番号１に記載の塩基
    配列を有することを特徴とする請求項５に記載の遺伝
    子。
  7. 【請求項７】 該ｃＤＮＡが、配列番号３の塩基番号26
    乃至625に記載の塩基配列を含むことを特徴とする請求
    項５に記載の遺伝子。
  8. 【請求項８】 請求項４乃至請求項７のいずれかに記載
    の遺伝子を含有するベクター。
  9. 【請求項９】 請求項８に記載のベクターが導入された
    形質転換体。
  10. 【請求項１０】 国際寄託番号FERM BP-5725で識別さ
    れる請求項９に記載の形質転換体。
  11. 【請求項１１】 請求項１乃至請求項３のいずれかに記
    載のポリペプチドがジスルフィド結合により結合して形
    成されるホモダイマー分子。
  12. 【請求項１２】 請求項１乃至請求項３のいずれかに記
    載のポリペプチドまたは該ポリペプチドにより構成され
    る細胞表面分子を含む免疫原（ここで、該免疫原には、
    該ポリペプチドもしくは該細胞表面分子を発現する細胞
    及び該細胞の膜画分が包含される。）を用いて製造し
    た、前記ポリペプチドまたは細胞表面分子に反応性を有
    する抗体、またはF(ab')2 、 Fab' 、 Fab 、Ｆｖ（ variable
    fragment of antibody ）、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ（ disu
    lphide stabilised Fv ）あるいはｄＡｂ（ single do
    main antibody ）から選ばれる該抗体の一部。
  13. 【請求項１３】 該抗体が、マウス、ラット、モルモッ
    ト、ウサギまたはヤギに由来することを特徴とする請求
    項１２に記載の抗体、または F(ab')2 、 Fab' 、 Fab 、Ｆｖ
    （ variable fragment of antibody ）、ｓＦｖ、ｄｓ
    Ｆｖ（ disulphide stabilised Fv ）あるいはｄＡｂ
    （ single domain antibody ）から選ばれる該抗体の一
    部。
  14. 【請求項１４】 該抗体が、キメラ抗体、ヒト型抗体ま
    たはヒト抗体であうることを特徴とする請求項１２に記
    載の抗体、または F(ab')2 、 Fab' 、 Fab 、Ｆｖ（ variable
    fragment of antibody ）、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ（ disu
    lphide stabilised Fv ）あるいはｄＡｂ（ single do
    main antibody ）から選ばれる該抗体の一部。
  15. 【請求項１５】 該抗体が、モノクローナル抗体である
    ことを特徴とする請求項１２乃至請求項１４のいずれか
    に記載の抗体、またはF(ab')2 、 Fab' 、 Fab 、Ｆｖ（ vari
    able fragment of antibody ）、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ
    （ disulphide stabilised Fv ）あるいはｄＡｂ（ sing
    le domain antibody ）から選ばれる該抗体の一部。
  16. 【請求項１６】 請求項１乃至請求項３のいずれかに記
    載のポリペプチドまたは該ポリペプチドにより構成され
    る細胞表面分子を含む免疫原（ここで、該免疫原には、
    該ポリペプチドもしくは該細胞表面分子を発現する細胞
    及び該細胞の膜画分が包含される。）を用いて製造し
    た、前記ポリペプチドまたは細胞表面分子に反応性を有
    するモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗
    体のマイトジェンで刺激したリンパ芽球細胞への作用
    が、国際寄託番号 FERM BP-5707で識別されるハイブリ
    ドーマが産生するモノクローナル抗体がマイトジェンで
    刺激したラットリンパ芽球細胞に示す作用と実質的に同
    一であるモノクローナル抗体、またはF(ab')2 、 Fab' 、 F
    ab 、Ｆｖ（ variable fragment of antibody ）、ｓＦ
    ｖ、ｄｓＦｖ（ disulphide stabilised Fv ）あるいは
    ｄＡｂ（ single domain antibody ）から選ばれる該抗
    体の一部。
  17. 【請求項１７】 請求項１乃至請求項３のいずれかに記
    載のポリペプチドまたは該ポリペプチドにより構成され
    る細胞表面分子を含む免疫原（ここで、該免疫原には、
    該ポリペプチドもしくは該細胞表面分子を発現する細胞
    及び該細胞の膜画分が包含される。）を用いて製造し
    た、前記ポリペプチドまたは細胞表面分子に反応性を有
    するモノクローナル抗体であって、該モノクローナル抗
    体のマイトジェンで刺激したリンパ芽球細胞への作用
    が、国際寄託番号 FERM BP-5708で識別されるハイブリ
    ドーマが産生するモノクローナル抗体がマイトジェンで
    刺激したラットリンパ芽球細胞に示す作用と実質的に同
    一であるモノクローナル抗体、またはF(ab')2 、 Fab' 、 F
    ab 、Ｆｖ（ variable fragment of antibody ）、ｓＦ
    ｖ、ｄｓＦｖ（ disulphide stabilised Fv ）あるいは
    ｄＡｂ（ single domain antibody ）から選ばれる該抗
    体の一部。
  18. 【請求項１８】 請求項１５乃至請求項１７のいずれか
    に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
    マ。
  19. 【請求項１９】 請求項１２乃至請求項１７のいずれか
    に記載の抗体及び薬学的に許容されうる担体を含んでな
    る医薬組成物。
  20. 【請求項２０】 請求項４または請求項５に記載の遺伝
    子が、マウスの内在性遺伝子に組み込まれていることを
    特徴とするトランスジェニックマウス。
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