JP2003532370A - 新規なＴｈ２特異的分子およびその使用方法 - Google Patents

新規なＴｈ２特異的分子およびその使用方法

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JP2003532370A JP2000573349A JP2000573349A JP2003532370A JP 2003532370 A JP2003532370 A JP 2003532370A JP 2000573349 A JP2000573349 A JP 2000573349A JP 2000573349 A JP2000573349 A JP 2000573349A JP 2003532370 A JP2003532370 A JP 2003532370A
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Abstract

(57)【要約】 新規なＴｈ特異的ポリペプチド、タンパク質核酸分子が開示される。単離された全長Ｔｈ２特異的タンパク質に加えて、本発明はさらに、単離されたＴｈ２特異的融合タンパク質、抗原性ペプチド、および抗Ｔｈ２特異的抗体を提供する。本発明はまた、Ｔｈ２特異的核酸分子、本発明の核酸分子を含む組換え発現ベクター、発現ベクターが導入された宿主細胞、およびＴｈ２特異的遺伝子が導入されるかまたは妨害された非ヒトトランスジェニック動物を提供する。本発明の組成物を利用する診断方法、スクリーニング方法、および治療方法もまた提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新規なＴｈ２特異的核酸配列およびタンパク質に関する。ベクター
、宿主細胞、およびこの新規な分子を作製およびこれを使用するための組換え方
法もまた提供される。
【０００２】 （発明の背景） Ｔリンパ球の２つの異なる型が認識されている：ＣＤ８-細胞傷害性Ｔリンパ
球（ＣＴＬ）およびＣＤ４+ヘルパーＴリンパ球（Ｔｈ細胞）。ＣＴＬは、クラ
スＩ主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子とともに、外来抗原をそれらの細胞表
面に提示する細胞を認識し、そして殺傷する。この認識プロセスは、前駆体ＣＴ
Ｌの活性化、成熟、および増殖を誘発し、その結果、外来物質として認識された
細胞を破壊しうるＣＴＬクローンを生じる。
【０００３】 Ｔ細胞活性化は、２工程のプロセスを包含する。抗原特異的シグナルは、ＴＣ
Ｒ／ＣＤ３複合体（認識の特異性を規定する）、次いで、リンホカインの発現お
よび増殖を調節すると考えられるアクセサリ細胞により送達される第２のシグナ
ル（ＣＤ２８）によって生成される（Ｍｅｕｌｌｅｒら（１９８９）Ａｎｎ．Ｒ
ｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：４４５；Ｋｏｈｎｏら（１９９０）Ｃｅｌｌ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１３１：１）。ＣＤ２８は、ＣＤ４-胸腺細胞およびＣＤ８+胸腺細
胞の表面（Ｍａｒｔｉｎら（１９８６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３２８２
）ならびに大部分のＴ細胞（Ｈａｒａら（１９８５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６
１：１５１３）に発現される、４４ｋＤａのジスルフィド結合されたホモダイマ
ーである。構造的に、ＣＤ２８は、単一の免疫グロブリン様ドメインおよび５１
アミノ酸の細胞質テールから構成される（Ａｒｕｆｆｏら（１９８７）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：８５７３）。ＣＤ２８シグナル
伝達は、最初に種々のリンホカインについてのｍＲＮＡを安定化し、次いで、転
写を増加させる（Ｌｉｎｄｓｔｅｎら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：３
３９）。
【０００４】 これらの細胞は、エフェクター免疫応答の体液性形態および細胞媒介性形態に
関与する。細胞媒介性、すなわち細胞性免疫応答は、細胞内位置に存在する微生
物を中和するように機能する。例えば、ウイルス抗原のような外来抗原は、感染
細胞内で合成され、そしてクラスＩＭＨＣと会合してこのような細胞の表面に提
示される。このことにより、ＣＤ８+クラスＩＭＨＣ拘束ＣＴＬの刺激が導かれ
る。体液性、すなわち抗体免疫応答に関しては、抗体は、Ｔｈ細胞との相互作用
を通じてＢリンパ球により生成される。具体的には、細胞外抗原が、抗原提示細
胞（ＡＰＣ）によりエンドサイトーシスされ、プロセシングされ、そしてクラス
ＩＩ ＭＨＣ分子と優先的に会合して、ＣＤ４+ ＭＨＣ拘束Ｔｈ細胞に提示さ
れる。これらのＴｈ細胞は、次いで、Ｂ細胞を活性化し、結果として抗体生成を
生じる。
【０００５】 免疫応答の過程の間に、Ｔ細胞は、サイトカイン分泌および免疫調節特性のそ
れらのパターンによって規定されたＴｈ表現型に分化する（Ａｂｂａｓら（１９
９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８３：７８７）。この細胞は、少なくとも２つの異なる
亜集団（Ｔｈ１およびＴｈ２細胞亜集団とよばれる）から構成される（Ｍｏｓｍ
ａｎｎら（１９８９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１４５；Ｄｅｌ
Ｐｒｅｔｅら（１９９１）．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８８：３４６；Ｗｉ
ｅｒｎｅｎｇａら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：４６５１；Ｙａｍ
ａｍｕｒａら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：２７７，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ
ら（１９９３）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２：３１３
）。Ｔｈ１およびＴｈ２細胞は、免疫系の異なるエフェクター機能の一部として
機能するようである（Ｍｏｓｍａｎｎら（１９８９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．７：１４５）。具体的には、Ｔｈ１細胞は、細胞媒介性免疫の発生を方
向付け、ファゴサイト媒介宿主防御を誘発し、そして遅延型過敏症と関連づけら
れる。従って、細胞内微生物の感染は、Ｔｈ１型応答を誘導する傾向がある。Ｔ
ｈ２細胞は、体液性免疫応答を駆動し、これは、例えば、特定の寄生性寄生生物
（ｈｅｌｍｉｎｔｈｉｃ ｐａｒａｓｉｔｅ）に対する防御と関連づけられ、そ
して抗体およびアレルギー性応答に関与する。
【０００６】 Ｔｈ１細胞は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターフェロン−γ（
ＩＦＮ−γ）、および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を分泌する。これらのサ
イトカインは、炎症性の細胞媒介性応答を増強し、そして自己免疫疾患の発症に
病理的役割を有する。Ｔｈ２細胞は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、イン
ターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、およ
びインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）を分泌する。これらのサイトカインは
、炎症性応答を抑制する一方で、体液性免疫を増強し、そして疾患進行を制御お
よび逆転させる（Ｓｃｏｔｔら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：７３；Ｓｍ
ｉｔｈら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：４８４１；Ａｂｂａｓら（
１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８３：７８７）。刺激の際のサイトカイン放出の異
なる型が、疾患進行の中心であることが実証された（ＣｈｕおよびＬｏｎｄｅｉ
（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：２６８５；Ｈｓｉｅｈら（１９９３
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：５４７）。
【０００７】 可溶性ＣＤ２８アンタゴニストを用いた動物モデルでのインビボ処置は、移植
片拒絶および自己免疫を抑制しうる。この阻害性効果は、ＩＬ−２生成および炎
症性応答を生成するに必要なクローン性増殖の阻害の結果であることが最初に実
証された（Ｐａｄｒｉｄら（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８：４５３；およびＬｅｎｓｃｈｏｗら（１９９２）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５７：７８９）。最近、ＣＤ２８レセプターによる差次的シグナル
伝達がＴｈ２サイトカイン（Ｉｌ−４およびＩＬ−５を含む）の生成に対して異
なる効果を有するという研究が記載された。一般に、ＣＤ２８シグナル伝達は、
ＩＬ−４生成を調節することによりＴｈ２細胞の発生を増強しうるが、Ｔｈ１細
胞の発生には必須ではない（Ｒｅｉｌｉｆｓｏｎら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１５８：６５８）。
【０００８】 一旦Ｔｈ１およびＴｈ２亜集団が増殖されると、この細胞型は、各々に対して
独特のサイトカインの作用を通じて互いを負に調節する傾向がある。例えば、Ｔ
ｈ１が生成するＩＦＮ−γは、Ｔｈ２細胞を負に調節するが、Ｔｈ２が生成する
ＩＬ−１０はＴｈ１細胞を負に調節する。さらに、Ｔｈ１およびＴｈ２によって
生成されるサイトカインは、互いのエフェクター機能と拮抗する（Ｍｏｓｍａｎ
ｎら（１９９１）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １２：４９）。さらに、移植片
および自己免疫疾患の両方における抵抗性の誘導および維持は、Ｔｈ１細胞の損
失における増強したＴｈ２活性の直接的な結果である（Ｓｔｒｏｍら（１９９６
）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６８８）。
【０００９】 感染プロセスを制御または解決できないことは、しばしば、不十分な免疫応答
よりむしろ、不適切な免疫応答から生じ、そして種々の明らかな免疫学的障害が
根底にあり得る。このような障害としては、例えば、喘息のようなアトピー状態
（すなわち、ＩｇＥ媒介性アレルギー状態）、アレルギー性鼻炎を含むアレルギ
ー、乾癬を含む皮膚炎、病原体感受性、慢性炎症疾患、器官特異的自己免疫、移
植片拒絶および対宿主性移植片病が挙げられる。例えば、非治癒性形態のヒトお
よびマウスのリーシュマニア症は、強力であるが、意図とは逆の結果を招くＴｈ
２様支配性（Ｔｈ２−ｌｉｋｅ−ｄｏｍｉｎａｔｅｄ）免疫応答から生じる。ラ
イ腫ライはまた、優性であるが不適切なＴｈ２様応答を特徴とするようである。
Ｔｈ−１様細胞 対 他のＴｈ細胞亜集団の比の低下は、ＨＩＶ感染における疾
患症状に向かって進行することに重要な役割を果たしうる。
【００１０】 さらに、多くの病原微生物に対するＴｈ１媒介性炎症応答は有益である一方、
自己抗原に対するこのような応答は、通常有害である。Ｔｈ１様応答の優先的な
活性は、多発性硬化症およびインスリン依存性糖尿病のようなヒト炎症性自己免
疫疾患の病理の中心であることが示唆された。例えば、Ｔｈ１型サイトカインは
、多発性硬化症を有する患者の脳脊髄液、インスリン依存性糖尿病患者の膵臓、
橋本甲状腺炎の甲状腺、およびクローン病患者の腸において優勢であり、このこ
とは、このような患者が、このような障害の原因病理に関与する抗原に対して、
Ｔｈ２様ではなくＴｈ１様の応答を増大させることが示唆される。
【００１１】 天然の免疫応答のプロファイル（具体的には、ナチュラルキラー細胞または好
塩基系列の細胞によりサイトカイン生成）は、その後の免疫応答の表現型を決定
する。従って、免疫応答を調節する、特にＴｈ１またはＴｈ２応答を調節するた
めの方法が必要である。Ｔ細胞の２つのサブセットの間で差次的に発現された遺
伝子およびタンパク質は、その後の免疫応答の表現型を決定する際に役割を果た
しうる。
【００１２】 （発明の要旨） Ｔｈ２特異的核酸配列に対応する単離された核酸分子が提供される。さらに、
ポリヌクレオチドに対応するアミノ酸が包含される。特に、本発明は、配列番号
２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列
番号１４、および配列番号１６に示されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチ
ド配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０３３０２、ＡＴＣＣ受託番号２０３５６９
、ＡＴＣＣ受託番号２０３７９７として細菌宿主において寄託されるＤＮＡ配列
をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。さらに、
本明細書中に記載される核酸分子によりコードされるアミノ酸配列を有するＴｈ
２特異的ポリペプチドが提供される。
【００１３】 本発明はまた、ベクターおよび本明細書中に記載される核酸分子の組換え発現
のための宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞を作製する方法
ならびに組換え技術により本発明のポリペプチドまたはペプチドの生成のために
それらを用いるための方法を提供する。
【００１４】 本発明のＴｈ２特異的分子は、免疫および呼吸器応答の表現型を調節するため
に、特に、Ｔｈ１またはＴｈ２応答を調節するために有用である。この分子は、
炎症性障害および呼吸器障害の診断および処置のために、特に、Ｔリンパ球関連
障害の処置および診断のために有用である。これらの障害としては、喘息および
アレルギーのようなアトピー状態（アレルギー性鼻炎を含む）、乾癬、病原体感
染の効果、慢性炎症疾患、器官特異的自己免疫、移植片拒絶および対宿主性移植
片病が挙げられるが、これらに限定されない。従って、１つの局面において、本
発明は、Ｔｈ２特異的タンパク質または生物学的に活性なその部分をコードする
単離された核酸分子、ならびにＴｈ２特異的コード核酸の検出のためのプライマ
ーおよびハイブリダイゼーションプローブとして適切な核酸フラグメントを提供
する。
【００１５】 本発明の別の局面は、単離されたか、または組換えのＴｈ２特異的タンパク質
およびポリペプチドを特徴とする。好ましいＴｈ２特異的タンパク質およびポリ
ペプチドは、天然に存在するＴｈ２特異的タンパク質により保有される、少なく
とも１つの生物学的活性を有する。
【００１６】 配列表に示されるヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に対して実質的に相同
な改変核酸分子およびポリペプチドは、本発明に包含される。さらに、このヌク
レオチド配列およびアミノ酸配列のフラグメントおよび実質的に相同なフラグメ
ントが提供される。
【００１７】 Ｔｈ２特異的ポリペプチドおよびフラグメントを選択的に結合する抗体および
抗体フラグメントが提供される。このような抗体は、Ｔｈ２特異的ポリペプチド
を検出する際に、およびＴ細胞免疫応答を調節する際に有用である。
【００１８】 別の局面において、本発明は、生物学的サンプルと、Ｔｈ２特異的活性の指標
を検出し得る薬剤とを接触させることにより、この生物学的サンプル中のＴｈ２
特異的活性または発現の存在を検出するための方法を提供する。この結果、Ｔｈ
２特異的活性の存在が、生物学的サンプル中で検出される。
【００１９】 なお別の局面において、本発明は、Ｔｈ２特異的活性を調節する方法を提供し
、この方法は、細胞と、Ｔｈ２特異的活性または発現を調節する（阻害するか、
または刺激する）薬剤とを接触させ、その結果、この細胞中のＴｈ２特異的活性
または発現が調節される工程を包含する。１つの実施態様において、この薬剤は
、Ｔｈ２特異的タンパク質に特異的に結合する抗体である。別の実施態様におい
て、この薬剤は、Ｔｈ２特異的遺伝子の転写、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡのスプライ
シング、またはＴｈ２特異的ｍＲＮＡの翻訳を調節することにより、Ｔｈ２特異
的タンパク質の発現を調節する。なお別の実施態様において、この薬剤は、Ｔｈ
２特異的ｍＲＮＡまたはＴｈ２特異的遺伝子のコード鎖に対してアンチセンスで
あるヌクレオチド配列を有する核酸分子である。
【００２０】 １つの実施態様において、本発明の方法は、異常なＴｈ２特異的タンパク質活
性または核酸発現により特徴付けられる障害を有する被験体にＴｈ２特異的モジ
ュレーターである薬剤を投与することにより、この被験体を処置するために使用
される。１つの実施態様において、このＴｈ２特異的モジュレーターは、Ｔｈ２
特異的タンパク質である。別の実施態様において、このＴｈ２特異的モジュレー
ターは、Ｔｈ２特異的核酸分子である。他の実施態様において、このＴｈ２特異
的モジュレーターは、ペプチド、ペプチド模倣物、または他の低分子である。
【００２１】 本発明はまた、以下のうちの少なくとも１つにより特徴付けられる遺伝的病変
または変異の存在または非存在を同定するための診断アッセイを提供する：（１
）Ｔｈ２特異的タンパク質をコードする遺伝子の異常な改変または変異；（２）
Ｔｈ２特異的タンパク質をコードする遺伝子の誤調節；および（３）Ｔｈ２特異
的タンパク質の異常な翻訳後修飾。ここで、野生型形態の遺伝子は、Ｔｈ２特異
的活性を有するタンパク質をコードする。
【００２２】 別の局面において、本発明は、Ｔｈ２特異的タンパク質に結合するか、または
その活性を調節する化合物を同定する方法を提供する。一般に、このような方法
は、試験化合物の存在下または非存在下でＴｈ２特異的タンパク質の生物学的活
性を測定する工程、およびＴｈ２特異的タンパク質の活性を改変するそれらの化
合物を同定する工程を包含する、 本発明はまた、化合物の存在下または非存在下でＴｈ２特異的配列の発現を測
定することにより、Ｔｈ２特異的遺伝子の発現を調節する化合物を同定するため
の方法を提供する。
【００２３】 本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から
明らかである。
【００２４】 （発明の詳細な説明） 本発明は、アミノ酸配列が、それぞれ、配列番号２、４、６、８、１０、１２
、１４、および１６において与えられるＴｈ２特異的ポリペプチド、あるいはこ
のポリペプチドの改変体またはフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含
む、単離された核酸分子を提供する。本発明のＴｈ２特異的タンパク質をコード
するヌクレオチド配列は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、および１
５に示される。
【００２５】 本発明は、免疫障害および呼吸障害、特にＴヘルパー（Ｔｈ）細胞障害および
Ｔｈ細胞様関連障害の調節、診断、および処置のための方法および組成物に関す
る。このような免疫障害としては、慢性炎症性疾患および障害（例えば、クロー
ン病、反応性関節炎（ライム病を含む）、インスリン依存性糖尿病、器官特異的
自己免疫（多発性硬化症を含む、橋本甲状腺炎およびグレーヴズ病を含む）、接
触皮膚炎、乾癬、移植片拒絶、対宿主性移植片病、サルコイドーシス、アトピー
状態（例えば、喘息およびアレルギー（アレルギー性鼻炎、胃腸アレルギー（食
物アレルギーを含む））、好酸球増加症、アレルゲン誘発（ａｌｌｅｒｇｅｎ−
ｐｒｏｖｏｋｅｄ）気道炎症、および結膜炎）、糸球体腎炎、特定の病原体感受
性（例えば、蠕虫（例えば、リーシュマニア症）、特定のウイルス感染（ＨＩＶ
を含む）、ならびに細菌感染（結核およびらい腫らいを含む）が挙げられるがこ
れらに限定されない。
【００２６】 呼吸障害としては、無呼吸、喘息、特定の気管支喘息、および関連した気道応
答性亢進、レベリリウム（ｒｅｂｅｒｉｌｌｉｍ）病、気管支拡張症、気管支炎
、気管支肺炎、嚢胞性線維症、ジフテリア、呼吸困難、気腫、慢性閉塞性肺疾患
、アレルギー性肺アスペルギルス症、肺炎、急性肺水腫、百日咳、咽頭炎、無気
肺、ヴェーゲナー肉芽腫症、レジオネラ症、胸膜炎、リウマチ熱、および静脈洞
炎が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２７】 ３つの新規なヒト遺伝子（ｈ１４１９、ｈ１０２２、およびｈ１２２８）、な
らびにそれらのマウスオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇｕｅ）（ｍ１４１９、ｍ１
０２２、およびｍ１２２８）が、提供される。この遺伝子は、Ｔヘルパー細胞の
Ｔｈ２サブセットにおいて差示的に発現される。このような配列は、「Ｔｈ２特
異的」といわれ、これは、遺伝子がＴヘルパー細胞のＴｈ２サブセットにおいて
発現されるが、Ｔｈ１サブセットにおいて発現されないか、または非常に低レベ
ルで発現されるのみであることを示す。これらの遺伝子は、ＣＤ３／ＴＣＲ活性
化Ｔｈ２細胞において過剰発現される。
【００２８】 本発明の分子（例えば、核酸分子、ポリペプチド、アンチセンス分子、抗体）
は、免疫応答を調節するために使用され得る。「調節する」により、免疫応答の
アップレギュレーションおよびダウンレギュレーションが意図される。１つの実
施態様において、免疫応答は、Ｔ細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞（例えば、Ｔｈ
１および／またはＴｈ２細胞））応答である。Ｔ細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞
）応答は、例えば、リンホカイン産生、細胞増殖、シグナル伝達事象、および他
のエフェクター機能によって顕示され得る。例えば、Ｔｈ１細胞応答は、ＩＬ−
２、腫瘍壊死因子β、およびインターフェロンγの産生を含み得る。一般に、Ｔ
ｈ１細胞は、自己免疫疾患の発症における病因的役割を有する。別の実施態様に
おいて、Ｔｈ２細胞応答は、ＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｉ
Ｌ−１０、および／またはＩＬ−１３の生成、ならびに／あるいは抗体（例えば
、ＩｇＥ抗体）の産生（例えば、Ｂ細胞の発生および／または機能を調節するこ
とによって）、ならびに／あるいは好酸球の産生、移動、機能および／または分
化（例えば、最終分化）を含み得る。さらなるＴｈ１細胞応答およびＴｈ２細胞
応答は、ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＣｏｙｌｅ（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １５：３２４〜３３２（
この内容は、本明細書によって参考として援用される）に見出され得る。代表的
には、Ｔｈ２細胞は、疾患の進化を制御し、そして逆転にする。従って、免疫応
答の調節は、本明細書中に記載される１以上のＴｈ１細胞応答および／またはＴ
ｈ２細胞応答の調節に関与し得る。
【００２９】 これらのＴｈ２特異的遺伝子のうちの第１であるｈ１４１９は、３８４アミノ
酸のタンパク質（配列番号１６）をコードする。ｈ１４１９に対するヌクレオチ
ド配列は、配列番号１５に提供される。Ｐｒｏｓｉｔｅプログラム分析は、ｈ１
４１９タンパク質内の種々の部位を推定するために使用された。Ｎグリコシル化
部位は、アミノ酸（ａａ）２１４〜２１７、２２９〜２３２、およびａａ２６０
〜２６３と推定された。ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼおよびｃＧＭＰ依存
性プロテインキナーゼのリン酸化部位は、ａａ６１〜６４、２５８〜２６１、お
よび３０８〜３１１と推定された。プロテインキナーゼＣリン酸化部位は、４７
〜４９、８６〜８８、１１６〜１１８、１５８〜１６０、１７４〜１７６、２５
６〜２５８、２８１〜２８３、３０１〜３０３、および３０４〜３０６と推定さ
れた。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は、ａａ１７〜２０、４７〜５０、１
３０〜１３３、２１６〜２１９、２５１〜２５４、２８１〜２８４、３１７〜３
２０、３２２〜３２５、および３４３〜３４６と推定された。Ｎ−ミリストイル
化（Ｎ−ｍｙｒｉｓｔｏｙｌａｔｉｏｎ）部位は、ａａ２９〜３４、１１２〜１
１７、１６６〜１７１、１７７〜１８２、１８３〜１８８、２７０〜２７５、お
よび３６４〜３６９と推定された。
【００３０】 マウスオルソログｍ１４１９は、配列番号１に示される対応するｃＤＮＡを有
する、３．６Ｋｂの転写物をコードする。この転写物は、およそ４２．８ｋＤａ
（翻訳後修飾を除く）の分子量を有する３９２アミノ酸のタンパク質（配列番号
２）をコードする。Ｎグリコシル化部位は、アミノ酸（ａａ）２３０〜２３３お
よびａａ２６１〜２６４と推定された。ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼおよ
びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼのリン酸化部位は、ａａ６１〜６４、２５
９〜２６２、および３１６〜３１９と推定された。プロテインキナーゼＣのリン
酸化部位は、ａａ４７〜４９、８６〜８８、１１６〜１１８、１５８〜１６０、
１７４〜１７６、２５７〜２５９、２８９〜２９１、３０９〜３１１、および３
１２〜３１４と推定された。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は、ａａ１７〜
２０、４７〜５０、１３０〜１３３、２１７〜２２０、２５２〜２５５、３２５
〜３２８、３３０〜３３３、および３５１〜３５４と推定された。Ｎ−ミリスト
イル化部位は、ａａ２９〜３４、１１２〜１１７、１６６〜１７１、１７７〜１
８２、１８３〜１８８、２７１〜２７６、および３７２〜３７７と推定された。
このタンパク質は、機能が未知である推定Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌ
ｅｇａｎｓ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＢ００５９０）によってコード
される推定タンパク質配列に対して、相同性（１４０アミノ酸の重複にわたって
、少なくとも４０％〜約４４％の同一性）を示す。
【００３１】 ｈ１４１９ｃＤＮＡインサートを含むプラスミド（Ｐ１４１９と命名された）
は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａに１９９９
年２月２５日に寄託され、そして受託番号２０３７９７を割り当てられた。この
寄託物は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の規
約の下に維持される。この寄託は、単に、当業者に対する便宜として行われた。
そしてこれは、寄託物が米国特許法第１１２条の下で要求されるということの承
認ではない。
【００３２】 これらのＴｈ２特異的遺伝子の第２であるｈ１０２２は、４８１アミノ酸のタ
ンパク質（配列番号１４）をコードする。ｈ１０２２についてのヌクレオチド配
列は、配列番号１３に示される。ｈ１０２２の分析は、Ｎ末端の７０アミノ酸が
シグナルペプチドを示すことを推定した。アミノ酸（ａａ）７〜２３の膜貫通セ
グメントは、ＭＥＭＳＡＴによって推定された。Ｐｒｏｓｉｔｅプログラム分析
は、このｈ１０２２タンパク質内の種々の部位を推定するために使用された。Ｎ
グリコシル化部位は、ａａ２９３〜２９６およびａａ３９７〜４００と推定され
た。Ｎグリコシル化された部位は、ａａ２９３〜２９６、および３９７〜４００
と推定された。グリコサミノグリカン結合部位は、ａａ２０〜２３および２３６
〜２３９と推定された。プロテインキナーゼＣリン酸化部位は、ａａ１１７〜１
１９、１４８〜１５０、１７６〜１７８、２２６〜２２８、２７６〜２７８、４
３０〜４３２、および４６６〜４６９に推定された。カゼインキナーゼＩＩリン
酸化部位は、ａａ１４３〜１４６、１５６〜１５９、２４０〜２４３、２４８〜
２５１、２８４〜２８７、３０６〜３０９、４４９〜４５２、および４６６〜４
６８に推定された。チロシンキナーゼリン酸化部位は、ａａ６７〜７３に推定さ
れた。Ｎ−ミリストイル化部位は、ａａ１０〜１５、１１２〜１１７、２３７〜
２４２、２６６〜２７１、４０６〜４１１、および４２０〜４２５に推定された
。アミド化部位は、ａａ９４〜９７に推定された。ＥＦハンドカルシウム結合ド
メインは、ａａ１５８〜１７１に推定された。
【００３３】 マウスオルソログｍ１０２２は、２つの転写物（配列番号３に示される対応す
るマウスｃＤＮＡ有する、より短い１．６Ｋｂの形態、および配列番号５に示さ
れる対応するマウスｃＤＮＡを有する、より長い４．４Ｋｂの形態）をコードす
る。両方の転写物は、およそ５４．２ｋＤａの分子量（翻訳後修飾を除く）を有
する、４６４アミノ酸のタンパク質（配列番号４および６）をコードする。この
ｍ１０２２タンパク質は、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ（ＧｅｎＢａ
ｎｋ登録番号ＣＡＡ４３２８６）由来のＤＮＡポリメラーゼのαコアサブユニッ
トに相同（全体で、約２０〜２５％の同一性）である。ｍ１０２２の分析により
、Ｎ末端の７０アミノ酸（ａａ）がシグナルペプチドを示すことが推定された。
ａａ７〜２３の膜貫通セグメントは、ＭＥＭＳＡＴにより推定された。Ｐｒｏｓ
ｉｔｅプログラム分析は、このｍ１０２２タンパク質内の種々の部位を推定する
ために使用された。Ｎグリコシル化部位は、ａａ２７６〜２７９およびａａ３８
０〜３８３に推定された。グリコサミノグリカン結合部位は、ａａ２１９〜２２
２に推定された。プロテインキナーゼＣリン酸化部位は、ａａ１１７〜１１９、
１４７〜１４９、２１９〜２２１、２５９〜２６１、４１３〜４１５、および４
４９〜４５１に推定された。カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は、ａａ１４２
〜１４５、１５５〜１５８、１６３〜１６６、２６７〜２７０、２８９〜２９２
、４３２〜４３５、および４４９〜４５２に推定された。チロシンキナーゼリン
酸化部位は、ａａ６７〜７３および２２３〜２３０に推定された。Ｎ−ミリスト
イル化部位は、ａａ６〜１１、１１２〜１１７、２４９〜２５４、３８９〜３９
４、および４０３〜４０８に推定された。アミド化部位は、ａａ９４〜９７に推
定された。
【００３４】 Ｐ１０２２と命名された、ｈ１０２２ ｃＤＮＡインサートを含むプラスミド
を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａに１９９
９年１月８日に寄託した。これは、受託番号第２０３５６９号を割り当てられた
。この寄託物は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条
約の規約の下で維持される。この寄託は、単に、当業者に対する便宜として行わ
れた。そしてこれは、寄託物が米国特許法第１１２条の下で要求されるというこ
との承認ではない。
【００３５】 第３のこれらのＴｈ２特異的遺伝子であるｈ１２２８は、１９８アミノ酸のタ
ンパク質（配列番号１２）をコードする。ｈ１２２８のヌクレオチド配列は、配
列番号１１に示される。このタンパク質は、ｈＣＤ２８に対して３３％の相同性
およびｈＣＬＴＡ−４に対して２６％の相同性を有する、Ｉｇスーパーファミリ
ーのメンバーである。このアミノ酸配列の試験は、細胞外ドメインにおける４つ
の保存されたシステイン残基（配列番号１２のアミノ酸４１、６２、８２、およ
び１３５）ならびに保存されたＰＰＰモチーフ（ＦＤＰＰＰＦとして表される（
配列番号１２のアミノ酸１１３〜１１８））（これは、ＣＤ２８およびその関連
のホモログであるＣＴＬＡ−４に共通である）を明らかにした。ｈ１２２８配列
はさらに、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４において共通なホスホチロシンに基づく
モチーフｐＹＭＮＭ（これはＣＤ２８媒介性ＰＩ−３Ｋ活性に必要とされるよう
である）と類似したＹＭＦＭモチーフ（配列番号１２のアミノ酸残基１７８〜１
８１）を含む。１２２８を介したシグナル伝達は、Ｔｈ２サイトカイン産生に必
要とされる。さらに、喘息のマウスモデルにおける１２２８の阻害は、Ｔｈ２粘
膜炎症および気道応答性亢進(ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）を減
衰させる。１２２８は、効率的にＣＤ２８シグナルを置換し、そしてＴｈ２効果
細胞からのサイトカイン産生に特異的な共刺激性シグナルを提供し得る。
【００３６】 マウスのオルソログｍ１２２８は、より短い２．１Ｋｂ形態（配列番号７に示
される対応ｃＤＮＡ配列を有する）、およびより長い３．３Ｋｂ形態（配列番号
９に示される対応ｃＤＮＡ配列を有する）の２つの転写物をコードする。両方の
転写物は、約２２．７ｋＤａの分子量（翻訳後修飾を除いて）を有する２００ア
ミノ酸のタンパク質（配列番号８および１０）をコードする。このタンパク質は
、ｈ１２２８と６９％の同一性、ｍＣＤ２８と３６．５％の同一性、およびｍＣ
ＴＬＡ−４と３８．５％の同一性を共有する。
【００３７】 Ｐ１２２８と命名された、ｈ１２２８ ｃＤＮＡインサートを含むプラスミド
を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、１０８０１ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａに１９９
８年１０月２日に寄託した。これは、受託番号第２０３３０２号を割り当てられ
た。この寄託物は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト
条約の規約の下で維持される。この寄託は、単に、当業者に対する便宜として行
われた。そしてこれは、寄託物が米国特許法第１１２条の下で要求されるという
ことの承認ではない。
【００３８】 本発明のＴｈ２特異的配列は、保存された機能的特徴を有する分子のファミリ
ー（「Ｔｈ２特異的ファミリー」）のメンバーである。用語「ファミリー」は、
本発明のタンパク質および核酸分子をいう場合、本明細書中で規定されるような
十分なアミノ酸配列同一性またはヌクレオチド配列同一性を有する、２つ以上の
タンパク質または核酸分子を意味することが意図される。このようなファミリー
のメンバーは天然に存在し得、そして同一種または異なる種のいずれかに由来し
得る。例えば、１つのファミリーが、マウス起源の第１タンパク質およびそのタ
ンパク質のヒト起源のホモログ、ならびにヒト起源の第２の異なるタンパク質お
よびそのタンパク質のマウスホモログを含み得る。１つのファミリーのメンバー
はまた、共通の機能的特徴を有し得る。
【００３９】 本発明の好ましいＴｈ２特異的ポリペプチドは、配列番号２、４、６、８、１
０、１２、１４、または１６のアミノ酸配列に対して十分に同一なアミノ酸配列
を有する。用語「十分に同一な」は、本明細書中で、第２のアミノ酸配列または
ヌクレオチド配列に対して十分または最少の数の同一または等価な（例えば、類
似の側鎖を有する）アミノ酸残基またはヌクレオチドを含む第１のアミノ酸配列
またはヌクレオチド配列であって、その結果、この第１および第２のアミノ酸配
列またはヌクレオチド配列が共通の機能的ドメインおよび／または共通の機能的
活性を有する、第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列をいうために使用さ
れる。例えば、少なくとも約４５％、５５％、または６５％の同一性、好ましく
は７５％の同一性、より好ましくは８５％、９５％、または９８％の同一性を有
する共通の機能的ドメインを含むアミノ酸配列またはヌクレオチド配列は、十分
に同一であるとして本明細書中で規定される。
【００４０】 ２つのアミノ酸配列または２つの核酸のパーセント同一性を決定するため、配
列を、最適比較の目的のために整列させる。２つの配列間のパーセント同一性は
、この配列によって共有される同一な位置の数の関数である（すなわち、パーセ
ント同一性＝同一な位置の数／位置の総数（例えば、重複している位置）×１０
０）。１つの実施態様では、２つの配列は同一の長さである。２つの配列間のパ
ーセント同一性は、ギャップを許容することを伴ってかまたは伴わずに、以下に
記載の技術と類似の技術を使用して決定され得る。パーセント同一性を算出する
際には、正確な一致のみを計数する。
【００４１】 ２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達
成され得る。２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの好まし
い非制限的な例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４のアルゴリズムであり
、これは、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７においてのように改
変される。このようなアルゴリズムを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム
に組み込み得る。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明のＴｈ２特異的核酸分
子に対して相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム（ス
コア＝１００、ワード長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）＝１２）で実施され得る。Ｂ
ＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のＴｈ２特異的タンパク質分子に対して相同
なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム（スコア＝５０、ワード
長＝３）で実施され得る。比較目的のためにギャップのある整列を得るためには
、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９に記載のように利用し得る。あるいは
、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠縁関係を検出する累積（ｉｔｅｒ
ａｔｅ）検索を実施し得る。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）前出、を参照のこ
と。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログ
ラムを利用する場合、個々のプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡ
ＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用し得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂ
ｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照のこと。配列の比較のために利用される数
学的アルゴリズムの別の好ましい非制限的な例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅ
ｒ（１９８８）ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−１７のアルゴリズムである。このよう
なアルゴリズムを、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）（これは、ＧＣ
Ｇ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部である）に組込む。アミノ
酸配列の比較のためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重の
残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナ
ルティー（ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ）、および４のギャップペナ
ルティーが使用され得る。
【００４２】 従って、本発明の別の実施態様は、Ｔｈ２特異的タンパク質活性を有する、単
離されたＴｈ２特異的タンパク質およびポリペプチドを特徴付ける。本明細書中
で交換可能に使用される場合、「Ｔｈ２特異的タンパク質活性」「Ｔｈ２特異的
タンパク質の生物学的活性」または「Ｔｈ２特異的タンパク質の機能的活性」は
、標準的アッセイ技術に従ってインビボまたはインビトロで決定されるような、
Ｔｈ２特異的応答細胞に対してＴｈ２特異的タンパク質、ポリペプチド、または
核酸分子により及ぼされる活性をいう。Ｔｈ２特異的活性は、直接的な活性（例
えば、第２のタンパク質との会合または第２のタンパク質に対する酵素的活性）
、または間接的な活性（例えば、Ｔｈ２特異的タンパク質の第２のタンパク質と
の相互作用により媒介される細胞シグナル伝達活性）であり得る。好ましい実施
態様では、Ｔｈ２特異的活性は、少なくとも１つ以上の以下の活性を含む：（１
）細胞の増殖、分化、および／または機能を調節すること（刺激すること、およ
び／または増強すること、もしくは阻害すること）（特に、免疫細胞（例えば、
白血球））；（２）Ｔｈ２特異的免疫応答を調節すること；（３）Ｔｈ１免疫応
答を阻害すること；（４）移植および自己免疫疾患の両方において、寛容を誘導
することおよび／または維持すること；（５）Ｔｈ２特異的リガンドを結合する
こと；あるいは（６）Ｔｈ２特異的特異的サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、Ｉ
ｌｌ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３）を調節すること。
【００４３】 「単離された」または「精製された」Ｔｈ２特異的核酸分子もしくはタンパク
質、またはその生物学的に活性な部分は、組換え技術により生成される場合に、
他の細胞性物質または培養培地を実質的に含まないか、あるいは化学的に合成さ
れる場合に、化学的前駆物質または他の化学薬品を実質的に含まない。好ましく
は、「単離された」核酸は、この核酸が由来する生物体のゲノムＤＮＡにおいて
、この核酸に天然で隣接する配列（すなわち、この核酸の５’末端および３’末
端に位置付けられる配列）（好ましくは、タンパク質コード配列）を含まない。
本発明の目的のために、「単離された」は、核酸分子をいうために使用される場
合には、単離された染色体を除外する。例えば、種々の実施態様では、単離され
たＴｈ２特異的核酸分子は、この核酸が由来する細胞のゲノムＤＮＡにおいて、
この核酸分子に天然で隣接する約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０
．５ｋｂ、または０．１ｋｂ未満のヌクレオチド配列を含み得る。細胞性物質を
実質的に含まないＴｈ２特異的タンパク質は、約３０％、２０％、１０％、また
は５％（乾燥重量による）未満の非Ｔｈ２特異的タンパク質（本明細書中で、「
夾雑タンパク質」としても言及される）を有する、Ｔｈ２特異的タンパク質の調
製物を含む。Ｔｈ２特異的タンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え
的に生成される場合、好ましくは、培養培地が、タンパク質調製物の容量の約３
０％、２０％、１０％、または５％未満を表す。Ｔｈ２特異的タンパク質が化学
的合成により生成される場合、好ましくは、タンパク質調製物は、約３０％、２
０％、１０％、または５％（乾燥重量による）未満の化学的前駆体または非Ｔｈ
２特異的化学薬品を有する。
【００４４】 本発明の種々の局面を、以下の小節において、さらに詳細に説明する。
【００４５】 （Ｉ．単離された核酸分子） 本発明の１つの局面は、Ｔｈ２特異的タンパク質をコードするヌクレオチド配
列を含む単離された核酸分子、またはその生物学的に活性な部分、ならびにＴｈ
２特異的コード核酸（例えば、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブ
リダイゼーションプローブとしての使用のために十分な核酸分子、およびＴｈ２
特異的核酸分子の増幅または変異のためのＰＣＲプライマーとしての使用のため
のフラグメントに関する。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、
ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）およびＲＮＡ分子（例えば
、ｍＲＮＡ）、ならびにヌクレオチドアナログを使用して作製されるＤＮＡまた
はＲＮＡのアナログを含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖
であり得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００４６】 本発明のＴｈ２特異的タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号
１、３、５、７、９、１１、１３、および１５に示される配列、受託番号２０３
３０２、２０３５６９、および２０３７９７としてＡＴＣＣに寄託されたプラス
ミドのｃＤＮＡインサート（「ＡＴＣＣ ２０３３０２のｃＤＮＡ」、「ＡＴＣ
Ｃ ２０３５６９のｃＤＮＡ」、または「ＡＴＣＣ ２０３７９７のｃＤＮＡ」
として言及される）のヌクレオチド配列、およびそれらの相補体を含む。「相補
体」とは、所定のヌクレオチド配列に対して十分に相補的であり、その結果、所
定のヌクレオチド配列にハイブリダイズし得、それにより安定な二重鎖を形成し
得る、ヌクレオチド配列を意図する。これらのヌクレオチド配列によりコードさ
れるＴｈ２特異的タンパク質について対応するアミノ酸配列を、それぞれ、配列
番号２、４、６、８、１０、１２、１４、および１６に示す。
【００４７】 これらのＴｈ２特異的ヌクレオチド配列のフラグメントである核酸分子もまた
、本発明により包含される。「フラグメント」とは、本発明のＴｈ２特異的タン
パク質をコードするヌクレオチド配列の一部分を意図する。Ｔｈ２特異的ヌクレ
オチド配列のフラグメントは、Ｔｈ２特異的タンパク質の生物学的に活性な部分
をコードし得るか、またはこれは、以下に開示される方法を使用する、ハイブリ
ダイゼーションプローブまたはＰＣＲプライマーとして使用され得るフラグメン
トであり得る。Ｔｈ２特異的タンパク質の生物学的に活性な部分は、本発明のＴ
ｈ２特異的ヌクレオチド配列のうちの１つの一部分を単離すること、Ｔｈ２特異
的タンパク質のコード部分を発現させること（例えば、インビトロでの組換え発
現により）、およびＴｈ２特異的タンパク質のコード部分の活性を評価すること
により、調製され得る。一般的に、Ｔｈ２特異的ヌクレオチド配列のフラグメン
トである核酸分子は、意図される用途に依存して、少なくとも１５、２０、５０
、７５、１００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、
５５０、６００、６５０、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、
１，２００、１，３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、もしくは
１５５０ヌクレオチド、または本明細書中に開示される全長Ｔｈ２特異的ヌクレ
オチド配列に存在するヌクレオチドの数（例えば、配列番号１、３、５、７、９
、１１、１３、または１５について、それぞれ、３６３１、１５８７、４３８２
、２０８０、３２６６、２７０３、１７９５、または３８６８ヌクレオチド）ま
でを含む。
【００４８】 単離されたフラグメントは、本発明より以前には開示されていない任意の連続
配列、ならびに実質的に同一であるが開示されていない配列を含むことが理解さ
れる。従って、フラグメントが本発明より前に開示されている場合、このフラグ
メントは、本発明により包含することを意図しない。配列が本発明より以前には
開示されていない場合、単離された核酸フラグメントは、少なくとも約１２、１
５、２０、２５、または３０の連続ヌクレオチドである。ヌクレオチド配列の他
の領域は、以前に開示された配列との潜在的な相同性に基づいて、種々のサイズ
のフラグメントを含み得る。
【００４９】 ｈ１０２２について、例えば、ヌクレオチド配列１〜約２１０および約５６５
〜約６０２は、本発明より以前には開示されていない。ヌクレオチド配列の約１
〜約３２５は、２０、２１、または２５ヌクレオチドより長いフラグメントを含
み；ヌクレオチド配列の約３０６〜約６０２は、約１４８、１５０、または１６
０ヌクレオチドより長いフラグメントを含み；ヌクレオチド配列の約６００〜約
８５０は、約２１２、２１５、または２２０ヌクレオチドより長いフラグメント
を含み；ヌクレオチド配列の約８１５〜約１００６は、約５４、５８、６０、ま
たは７０ヌクレオチドより長いフラグメントを含み；ヌクレオチド配列の約１０
０６〜約１２８１は、約３２、３５、または４０ヌクレオチドより長いフラグメ
ントを含み；そして、ヌクレオチド配列の約１２００〜約１７９５は、約４９０
または５００ヌクレオチドより長いフラグメントを含む。
【００５０】 ｈ１４１９について、例えば、ヌクレオチド配列１〜約１２７４、約１３８５
〜約２１４６、約２１９０〜約２２０２、約２４０４〜約２４３４、約２５６３
〜約２６７８、および約３４２５〜約３７９０は、本発明より以前には開示され
ていない。ヌクレオチド配列の約１〜約２１４６は、約１７、２０、２５ヌクレ
オチドより長いフラグメントを含み；ヌクレオチド配列の約２１４０〜約２８０
６は、約２１、２３、または２５ヌクレオチドより長いフラグメントを含み；ヌ
クレオチド配列の約２８０６〜約３４０６は、約２６３、２６５、または２７５
ヌクレオチドより長いフラグメントを含み；そして、ヌクレオチド配列の約３４
０６〜約３８６８は、約３７、３８、４０、または４５ヌクレオチドより長いフ
ラグメントを含む。
【００５１】 本発明のＴｈ２特異的タンパク質の生物学的に活性な部分をコードする、Ｔｈ
２特異的ヌクレオチド配列のフラグメントは、少なくとも１５、２５、３０、５
０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０
の連続したアミノ酸、または本発明の全長Ｔｈ２特異的タンパク質に存在するア
ミノ酸の総数まで（例えば、配列番号２、４、および６、８、ならびに１０、１
２、１４、または１６について、それぞれ、３９２、４６４、２００、１９８、
４８１、または３８４アミノ酸）をコードする。ＰＣＲプライマーのためのハイ
ブリダイゼーションプローブとして有用なＴｈ２特異的ヌクレオチド配列のフラ
グメントは、一般に、Ｔｈ２特異的タンパク質の生物学的に活性な部分をコード
する必要はない。
【００５２】 本明細書中に開示されるＴｈ２特異的ヌクレオチド配列の改変体である核酸分
子もまた、本発明によって包含される。Ｔｈ２特異的ヌクレオチド配列の「改変
体」は、本明細書中に開示されるＴｈ２特異的タンパク質をコードするが、遺伝
暗号の縮重が理由で保存的に異なるそれらの配列を含む。これらの天然に存在す
る対立遺伝子改変体を、周知の分子生物学的技術（例えば、以下に概説されるよ
うな、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）およびハイブリダイゼーション技術）を
使用して同定し得る。改変体ヌクレオチド配列はまた、例えば、部位特異的変異
誘発を使用することにより生成されたが、以下で考察されるように、本発明にお
いて開示されるＴｈ２特異的タンパク質をなおコードする、合成的に誘導された
ヌクレオチド配列を含む。一般的に、本発明のヌクレオチド配列改変体は、本明
細書中で開示されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも４５％、５５％、６
５％、７５％、８５％、９５％、または９８％の同一性を有する。改変体Ｔｈ２
特異的ヌクレオチド配列は、本明細書中で開示されるＴｈ２特異的タンパク質の
アミノ酸配列に対して、少なくとも４５％、５５％、６５％、７５％、８５％、
９５％、または９８％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＴｈ２特異的タン
パク質をコードする。
【００５３】 配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、および１５に示されるＴｈ２特異
的ヌクレオチド配列、ＡＴＣＣ ２０３３０２のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、
ＡＴＣＣ ２３０５６９のｃＤＮＡのヌクレオチド配列、およびＡＴＣＣ ２０
３７９７のｃＤＮＡのヌクレオチド配列に加えて、Ｔｈ２特異的タンパク質のア
ミノ酸配列中の変化を導くＤＮＡ配列多型性が、集団（例えば、ヒト集団）内に
存在し得ることは、当業者によって理解される。Ｔｈ２特異的遺伝子におけるこ
のような遺伝的多型性は、天然の対立遺伝子改変に起因して、集団内の個体の間
で存在し得る。対立遺伝子は、所定の遺伝子座で代替的に生じる一群の遺伝子の
うちの１つである。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」および「組換
え遺伝子」は、Ｔｈ２特異的タンパク質、好ましくは哺乳動物Ｔｈ２特異的タン
パク質をコードするオープンリーディングフレームを含む核酸分子をいう。本明
細書中で使用される場合、句「対立遺伝子改変体」は、Ｔｈ２特異的遺伝子座で
生じるヌクレオチド配列、またはこのヌクレオチド配列によりコードされるポリ
ペプチドをいう。このような天然の対立遺伝子改変は、代表的に、Ｔｈ２特異的
遺伝子のヌクレオチド配列において１〜５％の分散を生じ得る。天然の対立遺伝
子改変の結果であり、かつＴｈ２特異的タンパク質の機能的活性を改変しない、
Ｔｈ２特異的配列における任意およびすべてのこのようなヌクレオチドの変動お
よび結果として生じるアミノ酸の多型性または変動は、本発明の範囲内であると
意図される。
【００５４】 さらに、本明細書中に開示されるＴｈ２特異的配列のヌクレオチド配列とは異
なるヌクレオチド配列を有する、他の種由来のＴｈ２特異的タンパク質（Ｔｈ２
特異的ホモログ）をコードする核酸分子が、本発明の範囲内であると意図される
。本発明のＴｈ２特異的ｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対
応する核酸分子を、本明細書中に開示されるマウスＴｈ２特異的核酸に対するそ
れらの同一性に基づき、以下に開示されるようなストリンジェントなハイブリダ
イゼーション条件下での標準的ハイブリダイゼーション技術に従うハイブリダイ
ゼーションプローブとしてマウスｃＤＮＡまたはその一部分を使用して単離し得
る。
【００５５】 集団中に存在し得るＴｈ２特異的配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加
えて、当業者は、Ｔｈ２特異的タンパク質の生物学的活性を改変することなく、
コードされるＴｈ２特異的タンパク質のアミノ酸配列中に変化を導く、本発明の
ヌクレオチド配列内への変異により変化を導入し得ることをさらに理解する。従
って、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、または１６の配列とは異な
る配列を有するＴｈ２特異的タンパク質をコードする単離された核酸分子を、本
明細書中に開示されるヌクレオチド配列内に１つ以上のヌクレオチドの置換、付
加、または欠失を導入することにより作製し得、その結果、１つ以上のアミノ酸
の置換、付加、または欠失が、コードされるタンパク質中に導入される。変異を
、標準的技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）により
導入し得る。このような改変体ヌクレオチド配列もまた、本発明により包含され
る。
【００５６】 例えば、好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１つ以上の推定（好ましくは、
非必須）のアミノ酸残基でなされ得る。「非必須」のアミノ酸残基は、生物学的
活性を改変することなく、Ｔｈ２特異的タンパク質の野生型の配列（例えば、配
列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、または１６の配列）から改変され得
る残基である。一方、「必須」のアミノ酸残基は、生物学的活性のために必要と
される。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミ
ノ酸残基で置き換える置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリ
ーは、当該分野において規定されている。これらのファミリーとしては、以下が
挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒス
チジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸
）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グ
ルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有する
アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フ
ェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分枝側鎖を有するアミノ
酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するア
ミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）
。このような置換は、クローン１２２８のシステイン残基のような保存されたア
ミノ酸残基、１２２８のＰＰＰモチーフ（ＦＤＰＰＰＦ（配列番号１２のアミノ
酸１１３〜１１８）として表される）およびＹＭＦＭモチーフ（配列番号１２の
アミノ酸１７８〜１８１）のような保存されたモチーフ中に存在するアミノ酸残
基（ここで、このような残基は、タンパク質活性に必須である）についてはなさ
れない。
【００５７】 あるいは、改変体Ｔｈ２特異的ヌクレオチド配列を、Ｔｈ２特異的コード配列
のすべてまたは一部分に沿って無作為に変異を導入すること（例えば、飽和変異
誘発により）により作製し得、そして結果として生じた変異体を、Ｔｈ２特異的
な生物学的活性についてスクリーニングして、活性を保持する変異体を同定し得
る。変異誘発後、コードされるタンパク質を組換え的に発現させ得、そしてこの
タンパク質の活性を標準的アッセイ技術を使用して決定し得る。
【００５８】 従って、本発明のヌクレオチド配列は、本明細書中に開示されるそれらの配列
、ならびにそれらのフラグメントおよび改変体を含む。本発明のＴｈ２特異的ヌ
クレオチド配列、ならびにそれらのフラグメントおよび改変体をプローブおよび
／またはプライマーとして使用して、他の細胞型（例えば、他の組織由来）中の
Ｔｈ２特異的ホモログ、ならびに他の哺乳動物由来のＴｈ２特異的ホモログを同
定および／またはクローン化し得る。このようなプローブを使用して、同様また
は同一のタンパク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出し得る。これら
のプローブは、例えば、被験体由来の細胞サンプル中のＴｈ２特異的コード核酸
のレベルを測定すること（例えば、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡのレベルを検出するこ
と、またはゲノムＴｈ２特異的遺伝子が変異または欠失しているか否かを決定す
ること）により、Ｔｈ２特異的タンパク質を誤発現（ｍｉｓｅｘｐｒｅｓｓ）す
る細胞または組織を同定するための診断用試験キットの部分として使用され得る
。
【００５９】 この様式では、ＰＣＲ、ハイブリダイゼーションなどのような方法を使用して
、本発明の配列に対して実質的な同一性を有するような配列を同定し得る。例え
ば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ｌａｂｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、ＮＹ）
およびＩｎｎｉｓら（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ
ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）を参照のこと。本明細書中に示されるＴｈ２特異的ヌク
レオチド配列またはそれらのフラグメントおよび改変体に対するそれらの配列同
一性に基づいて単離されたＴｈ２特異的ヌクレオチド配列は、本発明によって包
含される。
【００６０】 ハイブリダイゼーション方法では、既知のＴｈ２特異的ヌクレオチド配列のす
べてまたは一部分を使用して、ｃＤＮＡライブラリーまたはゲノムライブラリー
をスクリーニングし得る。このようなｃＤＮＡライブラリーおよびゲノムライブ
ラリーの構築方法は、当該分野において一般的に知られており、そしてＳａｍｂ
ｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、ＮＹ）において開示
されている。いわゆるハイブリダイゼーションプローブは、ゲノムＤＮＡフラグ
メント、ｃＤＮＡフラグメント、ＲＮＡフラグメント、または他のオリゴヌクレ
オチドであり得、そして32Ｐのような検出可能基、または他の放射性同位元素、
蛍光化合物、酵素、もしくは酵素補因子のような任意の他の検出可能マーカーで
標識され得る。ハイブリダイゼーションのためのプローブは、本明細書中に開示
される既知のＴｈ２特異的ヌクレオチド配列に基づく合成オリゴヌクレオチドを
標識することにより作製され得る。既知のＴｈ２特異的ヌクレオチド配列または
コードされるアミノ酸配列中の保存されたヌクレオチドまたはアミノ酸残基に基
づいて設計された縮重プライマーがさらに使用され得る。このプローブは代表的
に、本発明のＴｈ２特異的ヌクレオチド配列またはそのフラグメントもしくは改
変体の中の少なくとも約１２、好ましくは約２５、より好ましくは約５０、７５
、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、または
４００の連続するヌクレオチドに対して、ストリンジェントな条件下でハイブリ
ダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。ハイブリダイゼーションのためのプ
ローブの調製は、当該分野で一般的に知られており、そしてＳａｍｂｒｏｏｋら
（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）（本明細書
中で参考として援用される）において開示されている。
【００６１】 例えば、１つの実施態様では、以前に同定されていないＴｈ２特異的核酸分子
が、ストリンジェントな条件下で、本発明のＴｈ２特異的ヌクレオチド配列また
はそのフラグメントのうちの１つを含む核酸分子であるプローブにハイブリダイ
ズする。別の実施態様では、以前には未知のＴｈ２特異的核酸分子は、少なくと
も３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、５５０
、６００、６５０、７００、８００、９００、１０００、２，０００、３，００
０、４，０００、または５，０００ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェ
ントな条件下で、本明細書中に開示されるＴｈ２特異的ヌクレオチド配列または
そのフラグメントのうちの１つを含む核酸分子であるプローブにハイブリダイズ
する。
【００６２】 従って、別の実施態様では、本発明の単離された以前には未知のＴｈ２特異的
核酸分子は、少なくとも３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４
５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、８００、９００、１０００、
１，１００、１，２００、１，３００、または１，４００ヌクレオチド長であり
、そしてストリンジェントな条件下で、本発明のヌクレオチド配列、好ましくは
、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、または１５に示されるコード配列
、ＡＴＣＣ ２０３３０２のｃＤＮＡ、ＡＴＣＣ ２０３５６９のｃＤＮＡ、Ａ
ＴＣＣ ２０３７９７のｃＤＮＡ、またはそれらの相補体、フラグメントもしく
は改変体のうちの１つを含む核酸分子であるプローブにハイブリダイズする。
【００６３】 本明細書中で使用される場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズする」は、互いに対して少なくとも６０％、６５％、７０％、好ましくは７
５％の同一性を有するヌクレオチド配列が、代表的に、互いにハイブリダイズし
たまま残存するハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載することが意図
される。このようなストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そしてＣ
ｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９））６．３
．１−６．３．６に見出され得る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件の好ましい非制限的な例は、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（Ｓ
ＳＣ）中で約４５℃でのハイブリダイゼーション、次ぐ０．２×ＳＳＣ、０．１
％ＳＤＳ中で５０〜６５℃での１回以上の洗浄である。別の好ましい実施態様で
は、ストリンジェントな条件は、６×ＳＳＣ中で４２℃でのハイブリダイゼーシ
ョン、次ぐ１×ＳＳＣ中で５５℃での洗浄を含む。好ましくは、ストリンジェン
トな条件下で、本発明のＴｈ２特異的配列にハイブリダイズする単離された核酸
分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「
天然に存在する」核酸分子は、天然において存在する（例えば、天然のタンパク
質をコードする）ヌクレオチド配列を有するＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう
。
【００６４】 従って、本明細書中に開示されるＴｈ２特異的ヌクレオチド配列ならびにその
フラグメントおよび改変体に加えて、本発明の単離された核酸分子はまた、本明
細書中に開示されるＴｈ２特異的ヌクレオチド配列またはその改変体およびフラ
グメントから得られる完全配列または部分的配列とのハイブリダイゼーションに
より、他の細胞および／または生物体から同定および単離された相同なＤＮＡ配
列を包含する。
【００６５】 本発明はまた、アンチセンス核酸分子（すなわち、タンパク質をコードするセ
ンス核酸に対して相補的（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に対して相補
的、またはｍＲＮＡ配列に対して相補的）である分子）を包含する。従って、ア
ンチセンス核酸は、センス核酸に水素結合し得る。アンチセンス核酸は、Ｔｈ２
特異的コード鎖全体、またはその一部分（例えば、タンパク質コード領域（すな
わち、オープンリーディングフレーム）のすべてまたは一部分）のみに対して相
補的であり得る。アンチセンス核酸分子は、Ｔｈ２特異的タンパク質をコードす
るヌクレオチド配列のコード鎖の非コード領域に対してアンチセンスであり得る
。非コード領域は、コード領域に隣接する５’配列および３’配列であり、そし
てアミノ酸に翻訳されない。
【００６６】 本明細書中に開示されるＴｈ２特異的タンパク質をコードするコード鎖配列（
例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、および１５）を考慮して、
本発明のアンチセンス核酸を、ワトソンおよびクリックの塩基対形成の法則に従
って設計し得る。アンチセンス核酸分子は、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡのコード領域
全体に対して相補的であり得るが、より好ましくは、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡのコ
ード領域または非コード領域のうちの一部分のみに対してアンチセンスであるオ
リゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｔｈ２
特異的ｍＲＮＡの翻訳開始部位周辺の領域に対して相補的であり得る。アンチセ
ンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３
５、４０、４５、または５０ヌクレオチド長であり得る。本発明のアンチセンス
核酸は、当該分野において公知のキメラ合成手順および酵素的連結手順を使用し
て構築され得る。
【００６７】 例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、
天然に存在するヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を増加させるように
、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安
定性を増加させるように設計された種々の改変ヌクレオチド（例えば、ホスホロ
チオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが挙げられるが、これらに
限定されない）を使用して、化学的に合成され得る。あるいは、アンチセンス核
酸は、アンチセンス配向で核酸がサブクローニングされている発現ベクターを使
用して、生物学的に産生され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されるＲ
ＮＡは、目的の標的核酸に対してアンチセンス配向のものである（以下の小節で
さらに説明される））。
【００６８】 本発明のアンチセンス核酸分子は代表的に、被験体に投与されるかまたはイン
サイチュで産生され、その結果、それらは、Ｔｈ２特異的タンパク質をコードす
る細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするかまたは結
合し、それによりそのタンパク質の発現を阻害する（例えば、転写および／また
は翻訳を阻害することによる）。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例
としては、組織部位での直接注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分
子は、選択された細胞を標的化するように修飾され得、次いで、全身的に投与さ
れ得る。例えば、アンチセンス分子は、ペプチドまたは抗体に連結されて、選択
された細胞表面上で発現されるレセプターまたは抗原に特異的に結合する複合体
を形成し得る。アンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載されるベクター
を使用して、細胞に送達され得る。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度を達成
するために、アンチセンス核酸分子が、強力なｐｏｌ ＩＩプロモーターまたは
ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターの制御下に配置されているベクター構築物が好まし
い。
【００６９】 本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子であり得る。α−ア
ノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成する。こ
こでは、通常のβ−ユニットとは対照的に、鎖は互いに対して平行に走る（Ｇａ
ｕｌｔｉｅｒら（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６６
２５−６６４１）。アンチセンス核酸分子はまた、２’−Ｏ−メチルリボヌクレ
オチド（Ｉｎｏｕｅら（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５
：６１３１−６１４８）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（Ｉｎｏｕｅら（
１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０）を含み得る。
【００７０】 本発明はまた、それらが相補的領域を有する一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）
を切断し得るリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡ分子である、リボザイ
ムを包含する。リボザイム（例えば、ハンマーヘッド型リボザイム（Ｈａｓｅｌ
ｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５
９１に記載））を使用して、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し得、
それにより、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。Ｔｈ２特異的コード核
酸に対する特異性を有するリボザイムを、本明細書中に開示されるＴｈ２特異的
ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１
３、または１５）に基づいて設計し得る。例えば、Ｃｅｃｈら、米国特許第４，
９８７，０７１号；およびＣｅｃｈら、米国特許第５，１１６，７４２号を参照
のこと。あるいは、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡを使用して、特異的リボヌクレアーゼ
活性を有する触媒性ＲＮＡを、ＲＮＡ分子のプールから選択し得る。例えば、Ｂ
ａｒｔｅｌおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１
１−１４１８を参照のこと。
【００７１】 本発明はまた、三重ヘリックス構造を形成する核酸分子を包含する。例えば、
Ｔｈ２特異的遺伝子の発現は、Ｔｈ２特異的タンパク質の調節領域（例えば、Ｔ
ｈ２特異的プロモーターおよび／またはエンハンサー）に対して相補的なヌクレ
オチド配列を標的化して、標的細胞におけるＴｈ２特異的遺伝子の転写を妨げる
三重ヘリックス構造を形成することにより阻害され得る。一般的には、Ｈｅｌｅ
ｎｅ（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６（６）：５６９
；Ｈｅｌｅｎｅ（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７
；およびＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４（１２）：８０７を
参照のこと。
【００７２】 好ましい実施態様では、本発明の核酸分子を、例えば、分子の安定性、ハイブ
リダイゼーション、または可溶性を改善するために、塩基部分、糖部分、または
リン酸骨格で修飾し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を修飾し
て、ペプチド核酸を作製し得る（Ｈｙｒｕｐら（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉ
ｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４：５を参照のこと）。本明細
書中で使用される場合、用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリ
ボースリン酸骨格が偽ペプチド骨格により置換され、そして４つの天然の核酸塩
基（ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）のみが保持されている核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ
模倣物）をいう。ＰＮＡの中性の骨格は、低イオン強度の条件下で、ＤＮＡおよ
びＲＮＡに対する特異的ハイブリダイゼーションを可能にすることが示された。
ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐら（１９９６）、前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ
’Ｋｅｅｆｅら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
９３：１４６７０に記載のような、標準的固相ペプチド合成プロトコルを使用し
て実施され得る。
【００７３】 Ｔｈ２特異的分子のＰＮＡは、治療的適用および診断的適用において使用され
得る。例えば、ＰＮＡは、遺伝子発現の配列特異的調節（例えば、転写または翻
訳の停止を誘導すること、または複製を阻害することによる）のためのアンチセ
ンス剤またはアンチジーン（ａｎｔｉｇｅｎｅ）剤として使用され得る。本発明
のＰＮＡはまた、例えば、ＰＮＡ指向ＰＣＲクランピング（ＰＮＡ−ｄｉｒｅｃ
ｔｅｄ ＰＣＲ ｃｌａｍｐｉｎｇ）による遺伝子内の一塩基対変異の分析にお
いて、他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ）と組み合わせて使用される場合の
人工制限酵素として（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、前出）；またはＤＮＡ配列およ
びハイブリダイゼーションのプローブまたはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐ（１
９９６）、前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら（１９９６）、前出）使用され
得る。 別の実施態様では、Ｔｈ２特異的分子のＰＮＡは、例えば、それらの安
定性、特異性、または細胞取り込みを増加させるために、ＰＮＡに対して親油性
基または他のヘルパー基（ｈｅｌｐｅｒ ｇｒｏｕｐ）を付着させることにより
、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成により、またはリポソームもしくは当該分野にお
いて公知の他の薬物送達技術の使用により修飾され得る。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラ
の合成は、Ｈｙｒｕｐ（１９９６）、前出；Ｆｉｎｎら（１９９６）Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２４（１７）：３３５７−６３；Ｍａｇら（１９８
９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：５９７３；およびＰｅｔｅｒ
ｓｅｒら（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５
：１１１９に記載のように実施され得る。
【００７４】 （ＩＩ．単離されたＴｈ２特異的タンパク質および抗Ｔｈ２特異的抗体） Ｔｈ２特異的タンパク質もまた、本発明に包含される。「Ｔｈ２特異的タンパ
ク質」により、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、または１６に示さ
れるアミノ酸配列を有するタンパク質、ならびにそれらのフラグメント、生物学
的に活性な部分、および改変体が意図される。
【００７５】 「フラグメント」または「生物学的に活性な部分」は、抗Ｔｈ２特異的抗体を
惹起するための免疫原として使用するために適切なポリペプチドフラグメントを
含む。フラグメントは、本発明のＴｈ２特異的タンパク質のアミノ酸配列と十分
に同一であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含み、かつＴｈ２特異的タ
ンパク質の少なくとも１つの活性を示すペプチドを含むが、これは、本明細書中
に開示される全長Ｔｈ２特異的タンパク質よりも少ないアミノ酸を含む。代表的
には、生物学的に活性な部分は、Ｔｈ２特異的タンパク質の少なくとも１つの活
性を有するドメインまたはモチーフを含む。Ｔｈ２特異的タンパク質の生物学的
に活性な部分は、例えば、１０、２５、５０、１００、またはそれ以上のアミノ
酸の長さであるポリペプチドであり得る。このような生物学的に活性な部分は、
組換え技術により調製され得、そしてネイティブのＴｈ２特異的タンパク質の１
つ以上の機能的活性について評価され得る。
【００７６】 「改変体」により、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、または１６
のアミノ酸配列に対して、少なくとも約４５％、５５％、６５％、好ましくは約
７５％、８５％、９５％、または９８％同一であるアミノ酸配列を有するタンパ
ク質またはポリペプチドが意図される。改変体はまた、受託番号２０３３０２、
ＡＴＣＣ受託番号２０３５６９、もしくはＡＴＣＣ受託番号２０３７９７として
ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによってコードされるポ
リペプチド、あるいはストリンジェントな条件下で、配列番号１、３、５、７、
９、１１、１３、もしくは１５の核酸分子またはそれらの相補体にハイブリダイ
ズする核酸分子によってコードされるポリペプチドを含む。このような改変体は
、一般的に、本発明のＴｈ２特異的タンパク質の機能的活性を保持する。改変体
は、天然の対立遺伝子変動または変異誘発に起因して、アミノ酸配列において異
なるポリペプチドを含む。
【００７７】 本発明はまた、Ｔｈ２特異的キメラタンパク質または融合タンパク質を提供す
る。本明細書中で使用される場合、Ｔｈ２特異的「キメラタンパク質」または「
融合タンパク質」は、非Ｔｈ２特異的ポリペプチドに作動可能に連結されたＴｈ
２特異的ポリペプチドを含む。「Ｔｈ２特異的ポリペプチド」は、Ｔｈ２特異的
タンパク質に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、「非Ｔｈ２
特異的ポリペプチド」は、Ｔｈ２特異的タンパク質に対して実質的に同一ではな
いタンパク質（例えば、Ｔｈ２特異的タンパク質とは異なり、かつ同一または異
なる生物体に由来するタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドをいう。Ｔｈ２特異的融合タンパク質において、Ｔｈ２特異的ポリペプチドは
、Ｔｈ２特異的タンパク質のすべてまたは一部分、好ましくは、Ｔｈ２特異的タ
ンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分に対応し得る。融合タンパク
質において、用語「作動可能に連結された」は、Ｔｈ２特異的ポリペプチドおよ
び非Ｔｈ２特異的ポリペプチドが、互いにインフレームで融合されていることを
示すことが意図される。非Ｔｈ２特異的ポリペプチドは、Ｔｈ２特異的ポリペプ
チドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【００７８】 １つの有用な融合タンパク質はＧＳＴ−Ｔｈ２特異的融合タンパク質であり、
ここでＴｈ２特異的配列は、ＧＳＴ配列のＣ末端に融合される。このような融合
タンパク質は、組換えＴｈ２特異的タンパク質の精製を容易にし得る。
【００７９】 さらに別の実施態様では、融合タンパク質はＴｈ２特異的−免疫グロブリン融
合タンパク質であり、ここでＴｈ２特異的タンパク質のすべてまたは一部分は、
免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合される。
本発明のＴｈ２特異的−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に組
込まれ得る。そしてこれは、被験体に投与されて、細胞表面上でのＴｈ２特異的
リガントとＴｈ２特異的タンパク質との間の相互作用を阻害し得、それによって
Ｔｈ２特異的媒介性シグナル伝達をインビボで抑制し得る。Ｔｈ２特異的免疫グ
ロブリン融合タンパク質を使用して、Ｔｈ２特異的同族リガンドのバイオアベイ
ラビリティに影響し得る。Ｔｈ２特異的リガンド／Ｔｈ２特異的相互作用の阻害
は、増殖障害および分化障害を処置するため、ならびに細胞生存を調節する（例
えば、促進または阻害する）ための両方のために、治療上有用であり得る。さら
に、本発明のＴｈ２特異的−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体において
抗Ｔｈ２特異的抗体を産生するため、Ｔｈ２特異的リガンドを精製するため、お
よびスクリーニングアッセイにおいて、Ｔｈ２特異的リガンドとＴｈ２特異的タ
ンパク質の相互作用を阻害する分子を同定するための免疫原として使用され得る
。
【００８０】 好ましくは、本発明のＴｈ２特異的キメラタンパク質または融合タンパク質は
、標準的組換えＤＮＡ技術により生成される。例えば、異なるポリペプチド配列
をコードするＤＮＡフラグメントを、共にインフレームで連結し得るか、または
融合遺伝子を、例えば、自動化ＤＮＡ合成装置を用いて合成し得る。あるいは、
遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を、２つの連続した遺伝子フラグメント間の補
完的オーバーハング（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を生じさせるアンカープライマーを使
用して実施し得、これを引き続いて、アニールおよび再増幅してキメラ遺伝子配
列を作製し得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照のこと
）（Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓ
ｃｉｅｎｃｅ、ＮＹ）。さらに、Ｔｈ２特異的コード核酸を、既存の融合部分に
インフレームで連結されるように市販の発現ベクター中にクローン化し得る。
【００８１】 Ｔｈ２特異的タンパク質の改変体は、Ｔｈ２特異的アゴニスト（模擬体）また
はＴｈ２特異的アンタゴニストのいずれかとして機能し得る。Ｔｈ２特異的タン
パク質の改変体を、変異誘発（例えば、Ｔｈ２特異的タンパク質の個別の点変異
または短縮化（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ））により作製し得る。Ｔｈ２特異的タン
パク質のアゴニストは、天然に存在する形態のＴｈ２特異的タンパク質の生物学
的活性と実質的に同一な活性か、またはそのサブセットを保持し得る。Ｔｈ２特
異的タンパク質のアンタゴニストは、天然に存在する形態のＴｈ２特異的タンパ
ク質の１つ以上の活性を、例えば、このＴｈ２特異的タンパク質を含む細胞シグ
ナルカスケードの上流または下流のメンバーに対して競合的結合することによっ
て阻害し得る。従って、特定の生物学的効果を、制限された機能の改変体で処理
することにより誘発し得る。このタンパク質の天然に存在する形態の生物学的活
性のサブセットを有する改変体での被験体の処置は、天然に存在する形態のＴｈ
２特異的タンパク質での処置と比較して、被験体においてより少ない副作用を有
し得る。
【００８２】 Ｔｈ−２特異的アゴニストまたはＴｈ−２特異的アンタゴニストのいずれかと
して機能するＴｈ−２タンパク質の改変体は、変異体（例えば、Ｔｈ−２特異的
タンパク質アゴニストまたはアンタゴニスト活性についてのＴｈ−２特異的タン
パク質の短縮型変異体）のコンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによ
って同定され得る。１つの実施態様において、Ｔｈ−２特異的改変体の多様なラ
イブラリーは、核酸レベルにおけるコンビナトリアル変異誘発によって生成され
、そして多様な遺伝子ライブラリーによってコードされる。Ｔｈ−２特異的改変
体の多様なライブラリーは、例えば、遺伝子配列に合成ヌクレオチドの混合物を
酵素的に連結することによって産生され得、その結果、潜在的なＴｈ−２特異的
配列の縮重セットが個々のポリペプチドとして、または代替的に、そこにＴｈ−
２特異的配列のセットを含む、より大きな融合タンパク質のセットとして（例え
ば、ファージディスプレイのために）発現可能である。縮重オリゴヌクレオチド
配列から潜在的なＴｈ−２特異的改変体のライブラリーを産生するために使用し
得る種々の方法が存在する。縮重遺伝子配列の化学合成は、自動化ＤＮＡ合成機
において実行され、次いで合成遺伝子は、適切な発現ベクターに連結され得る。
遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＴｈ−２特異的
配列の所望のセットをコードする配列のすべての提供を可能にする。縮重オリゴ
ヌクレオチドを合成するための方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｎａｒ
ａｎｇ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９：３，Ｉｔａｋｕｒａら（１
９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら
（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６；Ｉｋｅら（１９８３）Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと）。
【００８３】 さらに、Ｔｈ−２特異的タンパク質コード配列のフラグメントのライブラリー
は、Ｔｈ−２特異的タンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択の
ためにＴｈ−２特異的フラグメントの多様な集団を生成するために使用され得る
。１つの実施態様において、コード配列フラグメントのライブラリーは、Ｔｈ−
２特異的コード配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、ニックが１分子あたり約１
つだけ生じる条件下でヌクレアーゼで処理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させる
こと、ＤＮＡを再生させて、異なるニックを有する生成物からセンス／アンチセ
ンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成すること、Ｓ１ヌクレアーゼを用いる処理
によって、再形成された二重鎖から一本鎖部分を除去すること、および得られる
フラグメントライブラリーを発現ベクターに連結すること、によって生成され得
る。この方法によって、Ｔｈ−２特異的タンパク質のＮ末端および種々のサイズ
の内部フラグメントをコードする発現ライブラリーを誘導し得る。
【００８４】 点変異および短縮化によって作製されるコンビナトリアルライブラリーの遺伝
子産物をスクリーニングするため、および選択された特性を有する遺伝子産物に
ついてのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技術が、
当該分野で公知である。このような技術は、Ｔｈ−２特異的タンパク質のコンビ
ナトリアル変位誘発によって生成される遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニン
グのために適合可能である。高スループット分析に従う、大きい遺伝子ライブラ
リーのスクリーニングのための最も広範に使用される技術は、代表的には、複製
可能な発現ベクターへの遺伝子ライブラリーのクローニング、得られるベクター
のライブラリーでの適切な細胞の形質転換、および所望の活性の検出が、遺伝子
産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下でのコ
ンビナトリアル遺伝子の発現を含む。帰納的アンサンブル変異誘発（ｒｅｃｕｒ
ｓｉｖｅ ｅｎｓａｍｂｌｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（ＲＥＭ）は、ライブ
ラリーにおける機能的変異体の頻度を高める技術であり、Ｔｈ−２特異的改変体
を同定するためにスクリーニングアッセイと組み合わせて使用され得る（Ａｒｋ
ｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら（１９９３）Ｐｒｏ
ｔｅｉｎ Ｅｎｇｅｅｒｉｎｇ ６（３）：３２７−３３１）。
【００８５】 単離された本発明のＴｈ−２特異的ポリペプチドは、ポリクローナルおよびモ
ノクローナル抗体調製のための標準的な技術を使用して、Ｔｈ２−特異的タンパ
ク質を結合する対応する抗体を生成するための免疫原として使用され得る。「対
応する抗体」によって、その抗体が、免疫原として使用される特定のＴｈ２−特
異的タンパク質に結合することが意図される。全長Ｔｈ２−特異的タンパク質が
使用され得るか、または代替的に、本発明は、免疫原としての使用のためのＴｈ
２−特異的タンパク質の抗原性ペプチドフラグメントを提供する。Ｔｈ２−特異
的タンパク質の抗原性ペプチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４
、または１６に示されるアミノ酸配列の少なくとも８、好ましくは１０、１５、
２０、または３０アミノ酸残基を含み、そしてＴｈ２−特異的タンパク質のエピ
トープを含み、その結果、そのペプチドに対して惹起された抗体は、Ｔｈ２−特
異的タンパク質との特異的な免疫複合体を形成する。その抗原性ペプチドによっ
て含まれる好ましいエピトープは、そのタンパク質の表面に位置するＴｈ２−特
異的タンパク質の領域（例えば、親水性領域）である。
【００８６】 従って、本発明の別の局面は、Ｔｈ２−特異的タンパク質に結合する、抗Ｔｈ
２−特異的ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体に関する。ポリクロー
ナル抗Ｔｈ２−特異的抗体は、Ｔｈ２−特異的免疫原で適切な被験体（例えば、
ウサギ、ヤギ、マウス、または他の哺乳動物）を免疫することによって調製され
得る。免疫した被験体における抗Ｔｈ２−特異的抗体力価は、標準的な技術によ
って（例えば、固定化されたＴｈ２−特異的タンパク質を使用する、酵素結合免
疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて）長時間モニタリングされ得る。免疫後
の適切な時間に（例えば、抗Ｔｈ２−特異的抗体力価が最高であるときに）、抗
体産生細胞は、被験体から得られ得、そして標準的な技術（例えば、Ｋｏｈｌｅ
ｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７
によってもともと記載されたハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技
術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２）、Ｅ
ＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌ
ｄおよびＳｅｌｌ編（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
ＮＹ）７７−９６頁）、またはトリオーマ技術）によってモノクローナル抗体を
調製するために使用され得る。ハイブリドーマを産生するための技術は周知であ
る（一般的には、Ｃｏｌｉｇａｎら編（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ
，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）；Ｇａｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕ
ｒｅ ２６６：５５０−５２；Ｋｅｎｎｅｔｈ（１９８０）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃ
ｏｒｐ．，ＮＹ）；およびＬｅｒｎｅｒ（１９８１）Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｍｅｄ．，５４：３８７−４０２を参照のこと）。
【００８７】 モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマの調製に対する代替手段として、Ｔｈ
２−特異的タンパク質を用いて（それによってＴｈ２−特異的タンパク質に結合
する免疫グロブリンライブラリーメンバーを単離するために）、組換えコンビナ
トリアル免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディスプレイライ
ブラリー）をスクリーニングすることによって、モノクローナル抗Ｔｈ２−特異
的抗体が同定および単離され得る。ファージディスプレイライブラリーを生成お
よびスクリーニングするためのキットは市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｈａｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅ
ｍ，カタログ番号２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｓｕｒ
ｆＺＡＰTM Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｋｉｔ、カタログ番号２４０６１２
）。さらに、抗体ディスプレイライブラリーを生成およびスクリーニングする際
の使用に特に受け入れられる方法および試薬の例は、例えば、米国特許第５，２
２３，４０９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１
；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ
９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕ
ｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０−１３７２
；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：
８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２
８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５−７３４
において見出され得る。
【００８８】 さらに、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る組換え抗Ｔｈ２−特
異的抗体（例えば、キメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体
（ヒト部分および非ヒト部分の両方を含む））は、本発明の範囲内にある。この
ようなキメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野
で公知の組換えＤＮＡ技術によって産生され得、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８
６１０１５３３およびＷＯ８７／０２６７１；欧州特許出願番号１８４，１８７
、同１７１，４９６、同１２５，０２３、および同１７３，４９４；米国特許第
４，８１６，５６７号および同第５，２２５，５３９号；欧州特許出願１２５，
０２３；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０
４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９
：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃ
ａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１４：４４６−４４９；Ｓｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら（１９８６）Ｂｉｏ／Ｔｅ
ｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２
１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３
９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４
１：４０５３−４０６０に記載される方法を使用する。
【００８９】 完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置のために特に所望される。このよう
な抗体は、内因性の免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子を発現し得ないが、
ヒトの重鎖および軽鎖の遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを使用し
て産生し得る。例えば、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ
．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３；および米国特許第５，６２５，
１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；５，６６１
，０１６号；および同第５，５４５，８０６号を参照のこと。さらに、Ａｂｇｅ
ｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）のような企業は、上記に記載した
技術と同様の技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体を提供すること
に従事し得る。
【００９０】 選択されたエピトープを認識する完全なヒト抗体は、「誘導型選択」といわれ
る技術を使用して生成され得る。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモ
ノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトープを認識する完全な
ヒト抗体の選択を誘導するために使用される。この技術は、Ｊｅｓｐｅｒｓら（
１９９４）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３によって記載
される。
【００９１】 抗Ｔｈ２−特異的抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準的な技術（例
えば、アフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降）によってＴｈ２−特
異的タンパク質を単離するために使用され得る。抗Ｔｈ２−特異的抗体は、細胞
由来の天然のＴｈ２−特異的タンパク質、および宿主細胞において発現された、
組換え的に産生されたＴｈ２−特異的タンパク質の精製を容易にし得る。さらに
、抗Ｔｈ２−特異的抗体は、Ｔｈ２−特異的タンパク質の発現の量およびパター
ンを評価するために、（例えば、細胞溶解物または細胞上清において）Ｔｈ２−
特異的タンパク質を検出するために使用され得る。抗Ｔｈ２−特異的抗体は、例
えば、所定の処置レジメの効力を決定するために、臨床試験の手順の一部として
、組織におけるタンパク質レベルを診断的にモニターするために使用され得る。
検出は、抗体を検出可能な物質と結合させることによって容易にされ得る。検出
可能な物質の例は、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生体発光物
質、および放射活性物質を含む。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダ
ーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリン
エステラーゼが含まれ；適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン
／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれ；適切な蛍光物質の例には、ウン
ベリフェロン（ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ）、フルオレセイン、フルオレセイ
ンイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイ
ン、ダンシルクロライド、またはフィコエリトリンが含まれ；発光物質の例には
、ルミノールが含まれ；生体発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン
、およびエクオリンが含まれ；ならびに、適切な放射活性物質の例には、125Ｉ
、131Ｉ、35Ｓ、または3Ｈが含まれる。
【００９２】 さらに、抗体（またはそのフラグメント）は、治療的部分（例えば、サイトト
キシン、治療薬剤、または放射活性金属イオン）と結合体化され得る。サイトト
キシンまたは細胞毒性薬剤には、細胞に対して有害である任意の薬剤が含まれる
。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウ
ム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビ
ンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシア
ントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、
１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン
、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにこれらのア
ナログまたはホモログが含まれる。治療剤としては、代謝拮抗剤（例えば、メト
トレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フ
ルオロウラシル、ダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（
例えば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルフ
ァラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホ
スファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマ
ンニトール、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）、マイトマイ
シンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）
、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およ
びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマ
イシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ
））、抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）を含むが
これらに限定されない。本発明の結合体は、所定の生物学的応答を修飾するため
に使用され得、薬物部分は、古典的な化学治療剤に限定されるように解釈されな
い。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペ
プチドであり得る。このようなタンパク質は、例えば、毒素（例えば、アブリン
、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素）；タンパク質（例
えば、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長
因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン活性化因子）、または、生物学
的応答修飾因子（例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」
）、インターロイキンー２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−
６」）、顆粒球マクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｓｅ）コロニー刺激因子（「
ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」））、または他の
成長因子を含み得る。
【００９３】 抗体にこのような治療用部分を結合体化するための技術は当該分野で周知であ
る。例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎ
ｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）２４３−５６頁
（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）６
２３−５３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐ
ｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇ
ｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ；Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」Ｍｏｎｏ
ｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）４
７５−５０６頁（１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ
Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆ
ｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄ
ｗｉｎら（編）３０３−１６頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、
およびＴｈｏｒｐｅら「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔ
ｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８（１９８２
）を参照のこと。あるいは、抗体は、Ｓｅｇｅｌによって、米国特許第４，６７
６，９８０号において記載されるように、第２の抗体と結合体化されて抗体ヘテ
ロ結合体を形成し得る。
【００９４】 本発明の抗体関連分子（すなわち、Ｔｈ２−特異的タンパク質に結合する対応
する抗体および治療用部分に結合体化されたこのような対応する抗体）は、単独
で、または治療用部分とともにもしくは治療用部分なしで組み合わせて、所望の
生物学的応答を修飾するために（例えば、本発明の方法に従って、Ｔｈ２−応答
を調節するために）使用され得る。従って、例えば、所定の生物学的応答の調節
は、本発明の抗体関連分子を被験体に投与することによって達成される。この投
与には以下が含まれるがこれらに限定されない：１）少なくとも１つの本発明の
抗体、２）少なくとも１つの本発明の抗体および少なくとも１つの遊離の（すな
わち、抗体と結合体化されていない）治療用部分、３）治療用部分と結合体化さ
れた少なくとも１つの本発明の抗体、４）少なくとも１つの本発明の抗体および
治療用部分と結合体化された少なくとも１つの本発明の抗体、５）治療用部分と
結合体化された少なくとも１つの本発明の抗体、および少なくとも１つの遊離の
治療用部分、または６）少なくとも１つの本発明の抗体、治療用部分と結合体化
された少なくとも１つの本発明の抗体、および少なくとも１つの遊離の治療用部
分。これらの抗体関連分子は、互いに別々に、同時にかまたは異なる時間でのい
ずれかで被験体に投与され得る。あるいは、これらの抗体関連分子は、混合物（
例えば、本発明の抗体および治療用部分に結合体化された抗体の両方を含む混合
物、または上記のような本発明の抗体関連分子の任意の組み合わせを含む混合物
）中で同時に投与され得る。
【００９５】 （ＩＩＩ．組換え発現ベクターおよび宿主細胞） 本発明の別の局面は、ベクター、好ましくは、Ｔｈ２−特異的タンパク質（ま
たはその部分）をコードする核酸を含む発現ベクターに関する。「ベクター」と
は、それに連結されている別の核酸を輸送し得る核酸分子をいい、例えば、さら
なるＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループである「プラスミ
ド」、またはさらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得るウイル
スベクターである。ベクターは、宿主細胞における自律的複製のために有用であ
るか、または宿主細胞への導入に際して宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それ
によって宿主ゲノムに沿って複製される（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベク
ター）。発現ベクターは、それに作動可能に連結された遺伝子の発現を指示し得
る。一般的に、組換えＤＮＡ技術における有用な発現ベクターは、しばしば、プ
ラスミド（ベクター）の形態である。しかし、本発明は、等価な機能を提供する
、ウイルスベクターのような発現ベクターのこのような他の形態（例えば、複製
欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含むこと
を意図する。
【００９６】 本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中での核酸の発現のために適切な形
態である本発明の核酸を含む。このことは、組換え発現ベクターが１つ以上の調
節配列を含み、この調節配列は、発現される核酸配列に作動可能に連結された、
発現のために使用される宿主細胞に基づいて選択されることを意味する。「作動
可能に連結される」とは、目的のヌクレオチド配列が、そのヌクレオチド配列の
発現を可能にする様式で調節配列（単数または複数）に（例えば、インビトロ転
写／複製系において、またはベクターが宿主細胞に導入される場合の宿主細胞に
おいて）連結されることを意味することが意図される。用語「調節配列」は、プ
ロモーター、エンハンサー、および他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデ
ニル化シグナル）を含むことが意図される。例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（１９９０
）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を参照のこと。調節配列は、多くの型の宿主細胞において
ヌクレオチド配列の構成的発現を指示する配列および特定の宿主細胞においての
みヌクレオチド配列の発現を指示する配列（例えば、組織特異的調節配列）を含
む。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞、所望されるタンパク質の
発現のレベルなどの選択のような因子に依存し得ることが当業者に理解される。
本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され、それによって、本明細書中に記
載されるような核酸によってコードされる融合タンパク質またはペプチドを含む
タンパク質またはペプチド（例えば、Ｔｈ２−特異的タンパク質、Ｔｈ２−特異
的タンパク質の変異型、融合タンパク質など）を産生し得る。
【００９７】 本発明の組換え発現ベクターは、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞に
おけるＴｈ２−特異的タンパク質の発現のために設計され得る。原核生物におけ
るタンパク質発現は、融合タンパク質または非融合タンパク質のいずれかの発現
を指示する構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含むベクターでＥ．
ｃｏｌｉ中で、最も頻繁に実行される。融合ベクターは、そこにコ−ドされるタ
ンパク質に、通常、組み換えタンパク質のアミノ末端に多数のアミノ酸を付加す
る。代表的な融合発現ベクターには、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ Ｉｎｃ．；ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ ６
７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅ
ｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗ
ａｙ，ＮＪ）が含まれ、これらはそれぞれグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ
（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを、標的組換え
タンパク質に融合させる。適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例に
は、ｐＴｒｃ（Ａｍａｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）お
よびｐＥＴ１１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら（１９９０）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
１８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、６０−
８９頁）が含まれる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質の発現を最大化す
るためのストラテジーは、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ（１９９０）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＣＡ）、１１９−１２８頁お
よびＷａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：２１
１１−２１１８に見出され得る。ｐＴｒｃベクターからの標的遺伝子発現は、ハ
イブリッドｔｒｐ−ｌａｃ融合プロモーターからの宿主ＲＮＡポリメラーゼ転写
に依存する。
【００９８】 適切な真核生物宿主には、昆虫細胞（培養昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）に
おけるタンパク質の発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターの例には
、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３
：２１５６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍ
ｅｒｓ（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９）が含まれる）；酵
母細胞（酵母Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける発現のためのベクターの例には
、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：２２９
−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ（１９８２）
Ｃｅｌｌ ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら（１９８
７）Ｇｅｎｅ ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、およびｐＰｉｃＺ（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））
；または哺乳動物（哺乳動物発現ベクターには、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ（１９８
７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４９）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら（
１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７：１９５）が含まれる）が挙げられる。適
切な哺乳動物細胞には、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯ
Ｓ細胞が挙げられる。哺乳動物細胞において、発現ベクターの制御機能は、しば
しばウイルス調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプ
ロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、および
シミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞両方につい
ての他の適切な発現系については、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版
、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）の第１６章および第１７章を参照のこと。Ｇｏｅ
ｄｄｅｌ（１９９０）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を参照のこと。あるいは、組換え発現
ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを使用
して、インビトロで転写および翻訳され得る。
【００９９】 用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で交換可能に用い
られる。このような用語は、特定の対象の細胞をいうのみではなく、このような
細胞の子孫または潜在的な子孫をいうことが理解される。変異または環境的影響
による特定の改変は次の世代に生じ得るので、このような子孫は、実際、親の細
胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細書中で使用されるような用語の範
囲内に含まれる。
【０１００】 １つの実施態様において、発現ベクターは、特定の細胞型において優先的に核
酸の発現を指向する組織特異的調節エレメントを含む、組換え哺乳動物発現ベク
ターである。適切な組織特異的プロモーターとしては、アルブミンプロモーター
（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １：２６８
−２７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９
８８）Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４３：２３５−２７５）、Ｔ細胞レセプターの
特定のプロモーターにおいて（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８
９）ＥＭＢＯ Ｊ ８：７２９−７３３）および免疫グロブリン（Ｂａｎｅｒｊ
ｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔ
ｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７４１−７４８）、ニューロン特異的
プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモーター；Ｂｙｒｎｅおよび
Ｒｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８
５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：９１２−９１６）、および乳腺特異的プロモータ
ー（例えば、ミルク乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および
欧州出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発生的に調節されるプロモー
ターもまた含まれる（例えば、マウスホックス（ｍｕｒｉｎｅ ｈｏｘ）プロモ
ーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：
３７４−３７９）およびα−フェトタンパク質プロモーター（Ｃａｍｐｅｓおよ
びＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ ３：５３７−５４６など
）。
【０１０１】 本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発
明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分
子は、Ｔｈ２−特異的ｍＲＮＡに対するアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（
ＤＮＡ分子の転写によって）を可能にする様式で調節配列に作動可能に連結され
る。アンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結される調節配
列が選択されて、種々の細胞型におけるアンチセンスＲＮＡ分子の連続的な発現
を指示し得る。例えば、ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー、
または調節配列が選択されて、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発
現、または細胞特異的発現を指示し得る。アンチセンス発現ベクターは、組換え
プラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態であり得、ここ
ではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、その活性は、ベ
クターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺伝子を使用す
る遺伝子発現の調節の議論については、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら（１９８６）Ｒｅ
ｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）を参照のこ
と。
【０１０２】 ベクターＤＮＡは、従来的な形質転換またはトランスフェクション技術を介し
て原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場
合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例
えば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するための当該分野で認識される種々の技術を
いうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムもしくは塩化カルシウム共沈
殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、また
はエレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェ
クションするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版
、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．）および他の実験室マニュアルに見出され得る
。
【０１０３】 安定な哺乳動物細胞のトランスフェクションのために、使用される発現ベクタ
ーおよびトランスフェクション技術に依存して、細胞のほんの一部のみが外来Ｄ
ＮＡをそのゲノムに組み込み得ることが知られている。これらの要素を同定およ
び選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードす
る遺伝子が、一般的には目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入される。好ましい
選択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトト
レキサート）に対する耐性を付与するものが含まれる。選択マーカーをコードす
る核酸は、Ｔｈ２−特異的タンパク質をコードするベクターと同じベクター上で
宿主細胞に導入され得るか、あるいは別々のベクター上で導入され得る。導入さ
れた核酸を用いて安定にトランスフェクトされる細胞は、薬物選択によって同定
され得る（例えば、選択マーカー遺伝子を取り込んだ細胞は生存し、一方他の細
胞は死滅する）。
【０１０４】 本発明の宿主細胞（例えば、培養中の原核生物細胞および真核生物細胞）は、
Ｔｈ２−特異的タンパク質を産生（すなわち、発現）するために使用され得る。
従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して、Ｔｈ２−特異的タンパ
ク質を産生するための方法を提供する。１つの実施態様において、この方法は、
Ｔｈ２−特異的タンパク質が産生されるような適切な培地中で、Ｔｈ２−特異的
タンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入された本発明の宿主細胞を培
養する工程を包含する。別の実施態様において、本方法はさらに、培地または宿
主細胞からＴｈ２−特異的タンパク質を単離する工程を包含する。
【０１０５】 本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使
用され得る。例えば、１つの実施態様において、本発明の宿主細胞は、Ｔｈ２−
特異的コード配列が導入される、受精した卵母細胞または胚性幹細胞である。次
いで、このような宿主細胞は、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために
使用され得、ここで外因性のＴｈ２−特異的配列は、それらのゲノムまたは相同
組換え動物に導入され、ここで内因性のＴｈ２−特異的配列は変更された。この
ような動物は、Ｔｈ２−特異的遺伝子およびタンパク質の機能および／または活
性を研究するため、ならびにＴｈ２−特異的活性のモジュレーターを同定および
／または評価するために有用である。本明細書中で使用される場合、「トランス
ジェニック動物」とは、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物であり、より好ましく
は、ラットまたはマウスのような齧歯動物であり、ここで１つ以上の動物の細胞
は、トランスジーンを含む。トランスジェニック動物の他の例には、非ヒト霊長
類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などを含む。トランスジーン
は、細胞（この細胞からトランスジェニック動物が発生する）のゲノムに組み込
まれ、そして成熟動物のゲノムに残存する外因性のＤＮＡであり、それによって
、トランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織においてコードされた
遺伝子産物の発現を指示する。本明細書中で使用される場合、「相同組換え動物
」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物、より好ましくはマウスであり
、ここで内因性のＴｈ２−特異的遺伝子は、内因性の遺伝子と、動物の発生の前
に動物の細胞（例えば、動物の胚細胞）に導入された外因性のＤＮＡ分子との間
の相同組換えによって変更された。
【０１０６】 本発明のトランスジェニック動物は、Ｔｈ２を特異的にコードする核酸を受精
卵母細胞の雄性前核へ導入すること（例えば、マイクロインジェクション、レト
ロウイルス感染によって）、および卵母細胞が偽妊娠の雌性フォスター動物にお
いて発達するのを可能にすることによって作製され得る。Ｔｈ２特異的なｃＤＮ
Ａ配列は、非ヒト動物のゲノムに導入遺伝子として導入され得る。あるいは、マ
ウスのＴｈ２特異的遺伝子のホモログは、ハイブリダイゼーションに基づいて単
離され得、そして導入遺伝子として用い得る。イントロン配列およびポリアデニ
ル化シグナルもまた、導入遺伝子の発現の効率を上昇させるために導入遺伝子内
に含まれ得る。組織特異的な調節配列は、特定の細胞へＴｈ２特異的タンパク質
の発現を指向するために、Ｔｈ２特異的導入遺伝子に作動可能に連結され得る。
胚操作およびマイクロインジェクションを介するトランスジェニック動物（特に
マウスのような動物）を産生する方法は、当該分野において慣習的になり、そし
て例えば、米国特許番号第４、７３６、８６６号、第４、８７０、００９号、お
よび第４、８７３、１９１号に、そしてＨｏｇａｎ（１９８６） Ｍａｎｉｐｕ
ｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８６）に記載される。類似の方法は、他のトランスジ
ェニック動物の産生に用いられる。トランスジェニックファウンダー（ｆｏｕｎ
ｄｅｒ）動物は、そのゲノム中のＴｈ２特異的導入遺伝子の存在および／または
その動物の組織中または細胞中でのＴｈ２特異的ｍＲＮＡの発現に基づいて同定
され得る。次いでトランスジェニックファウンダー動物は、その導入遺伝子を運
ぶさらなる動物を繁殖するために用い得る。さらに、Ｔｈ２特異的遺伝子をコー
ドする導入遺伝子を運ぶトランスジェニック動物は、他の導入遺伝子を運ぶ他の
トランスジェニック動物へ繁殖され得る。
【０１０７】 相同組換え動物を作製するために、欠失、付加、または置換が導入されて、そ
れによってＴｈ２特異的遺伝子を改変する（例えば、機能的に破壊する）Ｔｈ２
特異的遺伝子またはこの遺伝子のホモログの少なくとも一部分を含むベクターが
調製される。好ましい実施態様において、相同組換えに際して、内因性のＴｈ２
特異的遺伝子を機能的に破壊する（すなわち、もはや機能的タンパク質をコード
しない；「ノックアウト」ベクターとも呼ばれる）ようにベクターを設計し得る
。あるいは、相同組換えに際して、内因性のＴｈ２特異的遺伝子が変異または別
の改変をされるがなお機能的タンパク質をコードするように、ベクターを、設計
し得る（例えば、上流調節領域が改変され、それによって内因性のＴｈ２特異的
タンパク質の発現を改変し得る）。相同組換えベクターにおいて、Ｔｈ２特異的
遺伝子の改変された部分は、相同組換えがベクターによって運ばれる外因性のＴ
ｈ２特異的遺伝子と胚幹細胞中の内因性のＴｈ２特異的遺伝子との間に生じるの
を可能にするために、Ｔｈ２特異的遺伝子のさらなる核酸がその５’末端および
３’末端に隣接する。さらなる隣接するＴｈ２特異的核酸は、内因性遺伝子との
首尾良い相同組換えを可能にするに十分な長さである。代表的には、数キロベー
スの隣接するＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方）は、ベクター内に含まれ
る（例えば、相同組換えベクターの説明について、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅ
ｃｃｈｉ（１９８７） Ｃｅｌｌ ５１：５０３を参照のこと）。このベクター
は、胚幹細胞株内へ（例えば、エレクトロポレーションによって）導入され、そ
して導入されたＴｈ２特異的遺伝子を内因性のＴｈ２特異的遺伝子と相同的に組
換えた細胞が、選択される（例えば、Ｌｉら（１９９２） Ｃｅｌｌ ６９：９
１５を参照のこと）。次いで選択された細胞は、キメラの凝集を形成するように
動物（例えば、マウス）の胚盤胞へ注入される（例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９
８７）、Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓ
ｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｒｏｂｅｒ
ｔｓｏｎ編（ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｄ）、１１３〜１５２頁を参照のこと）。次い
でキメラの胚は、適切な偽妊娠の雌性フォスター動物へ移植され得、この胚は誕
生に至り得る。相同的に組換えられたＤＮＡがその生殖細胞中に宿る子孫は、そ
の動物のすべての細胞が導入遺伝子の生殖系列伝達によって相同的に組換えられ
たＤＮＡを含む動物を繁殖するのに用い得る。相同的な組換えベクターの構築お
よび相同組換え動物の構築の方法は、さらにＢｒａｄｌｅｙ（１９９１） Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：８２
３〜８２９ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／１１３５４、ＷＯ９１／０１１４
０、ＷＯ９２／０９６８、およびにＷＯ９３／０４１６９に記載される。
【０１０８】 別の実施態様において、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された
系を含むトランスジェニック非ヒト動物は、産生され得る。このような系の一つ
の例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。
ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記述に関しては、例えばＬａｋｓｏら（１
９９２） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２〜
６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら（
１９９１） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１〜１３５５）である。ｃｒｅ／
ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が導入遺伝子の発現を調節するのに用いられるのなら
ば、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入
遺伝子を含む動物が、要求される。このような動物は、「二重の」トランスジェ
ニック動物の構築（例えば、一方が選択されたタンパク質をコードする導入遺伝
子を含み、他方がリコンビナーゼをコードする導入遺伝子を含む二つのトランス
ジェニック動物を交配することによって）を通じて供給され得る。
【０１０９】 本明細書中に記載の非ヒトトランスジェニック動物のクローンはまた、Ｗｉｌ
ｍｕｔら（１９９７） Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０〜８１３ならびにＰＣＴ
公開番号ＷＯ９７／０７６６８およびＷＯ９７／０７６６９に記載の方法によっ
て産生され得る。
【０１１０】 （ＩＶ 薬学的組成物） 本発明のＴｈ２特異的核酸分子、Ｔｈ２特異的タンパク質、および抗Ｔｈ２特
異的抗体（本明細書中で「活性な化合物」としても言及する）は、投与に好適な
薬学的組成物中に組み込まれ得る。代表的には、このような組成物は、核酸分子
、タンパク質、または抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書
中で用いられるような言葉「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的な投与に
適合性の任意およびすべての溶媒、分散媒（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ ｍｅｄｉａ
）、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張性の薬剤および吸収遅延剤、な
どを含むことを企図される。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体および
薬剤の使用は、当該分野において周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活
性な化合物と非適合性であるような場合を除いて、組成物におけるその使用は、
企図される。補足の活性な化合物もまた、この組成物中に組み込まれ得る。
【０１１１】 本発明の組成物は、本明細書中で述べられた任意の障害を処置するのに有用で
ある。この組成物は、治療的に有効な量で提供される。「治療的に有効な量」は
、所望の応答を調節しまたは所望の応答を引き起こすのに十分な量を企図する。
例えば、Ｔｈ２応答が調節されるべきである場合、本発明の組成物の治療的に有
効な量は、Ｔｈ２応答を調節するのに十分な量である。本明細書中で規定するよ
うに、タンパク質またはポリペプチドの治療的に有効な量（すなわち、有効な投
薬量）は、約０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、好ましくは約０．
０１〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、
そしてずっとさらに好ましくは約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、２〜９ｍｇ／ｋｇ、３〜
８ｍｇ／ｋｇ、４〜７ｍｇ／ｋｇ、または５〜６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【０１１２】 当業者は、特定の因子（疾患または障害の重篤度、最近の処置、その被験体の
一般的な健康および／または年齢、および他の疾患の存在を含むがそれに限定さ
れない）が被験体を効果的に処置するのに要求される投薬量に影響を及ぼし得る
ことを認める。さらに、タンパク質、ポリペプチド、または抗体の治療的に有効
な量での被験体の処置は、単一の処置を含み得、または、好ましくは、一連の処
置を含み得る。好ましい例において、被験体は、約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重
の間の範囲の抗体、タンパク質、またはポリペプチドを用いて、１〜１０週間の
間にわたって、好ましくは２〜８週間、さらに好ましくは約３〜７週間、そして
さらにより好ましくは約４、５、または６週間にわたって一週間に一回で処置さ
れる。処置に用いられた抗体、タンパク質、またはポリペプチドの有効な投薬量
が、特定の処置の経過にわたって増加または減少し得ることもまた、理解される
。投薬量の変化が、生じ得、そして本明細書中に記載されるような診断的アッセ
イの結果から明らかになり得る。
【０１１３】 本発明は、発現または活性を調節する薬剤を含む。例えば、薬剤は、低分子で
あり得る。例えば、このような低分子は、ペプチド、ペプチド模倣物、アミノ酸
、アミノ酸アナログ、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドアナログ、ヌクレオ
チド、ヌクレオチドアナログ、一モル当たり約１０，０００グラム未満の分子量
を有する有機化合物または無機化合物（すなわち、ヘテロ有機化合物および有機
金属化合物を含む）、一モル当たり約５，０００グラム未満の分子量を有する有
機化合物または無機化合物、一モル当たり約１，０００グラム未満の分子量を有
する有機化合物または無機化合物、一モル当たり約５００グラム未満の分子量を
有する有機化合物または無機化合物、ならびにこのような化合物の塩、エステル
、および他の薬学的に受容可能な型を含むが、それに限定されない。
【０１１４】 低分子剤の適切な用量が当該分野の内科医、獣医師、または研究者の知識内の
多くの因子に依存することは、理解されている。低分子の用量は、例えば、処置
された被験体またはサンプルの個性、大きさおよび状態に依存して変動し、もし
適用可能ならば、組成物が投与されるべき経路にさらに依存して、そして本発明
の核酸またはポリペプチドに対する効果をこの低分子が有することを開業医が所
望するような効果にさらに依存して変動する。模範的な用量は、被験体またはサ
ンプルの重さ１ｋｇ当たりミリグラムまたはマイクログラムの量のこの低分子を
含む（例えば、約１μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約
５ｍｇ／ｋｇ、または１μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）。低分子の適切な用量
が、調節される発現または活性に関するこの低分子の効力に依存するということ
は、さらに理解されている。このような適切な用量は、本明細書中に記載される
アッセイを用いて決定され得る。本発明のポリペプチドまたは核酸の発現または
活性を調節するために一つ以上のこれらの低分子が動物（例えば、ヒト）に投与
されるべきである場合、内科医、獣医師、または研究者は、例えば、最初比較的
低い用量を処方し得、適切な応答が得られるまで引き続き用量を増加する。さら
に、任意の特定の動物被験体に対する特異的な用量レベルが、種々の因子（使用
した特定の化合物の活性、被験体の年齢、体重、一般的健康、性別、および食事
、投与の時間、投与の経路、排泄の割合、任意の薬物の組合せ、ならびに調節さ
れるべき発現の程度または活性の程度を含む）に依存することが理解されている
。
【０１１５】 本発明の薬学的組成物は、企図される投与の経路と適合されて処方される。投
与の経路の例は、非経口的（例えば、静脈内投与）、皮内投与、皮下投与、経口
（例えば、吸入）投与、経皮投与（局所的な）、経粘膜投与および直腸投与を含
む。非経口的、皮内的、または皮下的な適用に用いる溶液および懸濁液は、以下
の成分を含み得る：注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコー
ル、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような滅菌した希
釈液；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤； アスコルビ
ン酸または亜硫酸水素ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸の
ようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝液および塩
化ナトリウムまたはデキストロースのような緊張（ｔｏｎｉｃｉｔｙ）調節剤。
ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムのような酸または塩基を用いて調節し得る
。非経口的な調製物は、アンプル、使い捨てのシリンジ、またはガラス製または
プラスチック製の多回用量のバイアル中に封入され得る。
【０１１６】 注射用途に好適な薬学的組成物は、滅菌した水溶液（水溶性の）または分散お
よび滅菌した注射用溶液または分散の即時調製のための滅菌した粉末を含む。静
脈内の投与に関して、好適なキャリアは、生理食塩水、静菌性の水、Ｃｒｅｍｏ
ｐｈｏｒ ＥＬTM（ＢＡＳＦ；Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）またはリン酸緩衝
化生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、この組成物は、滅菌で
なければならなく、そして容易な注射可能性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が
存在する程度にまで液状であるべきである。この組成物は、製造および貯蔵の条
件下で安定でなければならず、そして細菌および真菌のような微生物の混入作用
に逆らって保存されなければならない。このキャリアは、例えば、水、エタノー
ル、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポ
リエチレングリコール、など）、およびその好適な混合物を含む溶媒または分散
媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用
によって、分散の場合において要求される粒子の大きさの維持によって、および
界面活性物質の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌
剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコ
ルビン酸、チメロサール、など）によって達成され得る。多くの場合において、
組成物中に等張性剤（例えば、糖、マンニトールのようなポリアルコール、ソル
ビトール、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射用組成物の延長した吸
収は、吸収を遅延する薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラ
チン）を組成物中に含ませることによってもたらされ得る。
【０１１７】 滅菌した注射用溶液は、上に列挙された成分のひとつまたは組合せとともに、
活性な化合物（例えば、Ｔｈ２特異的タンパク質または抗Ｔｈ２特異的抗体）を
、適切な溶媒中に要求される量で組み込み、求められるならば、濾過滅菌するこ
とによって調製され得る。一般には、分散は、基本分散媒および上に列挙された
ものから要求される他の成分を含む滅菌されたビヒクルの中に活性な化合物を組
み込むことによって調製される。滅菌した注射用溶液の調製のための滅菌した粉
末の場合において、調製の好ましい方法は、以前に滅菌濾過されたその溶液から
活性な成分に加えて任意のさらに所望される成分の粉末を得る真空乾燥および凍
結乾燥である。
【０１１８】 一般には、経口的な組成物は、不活性の希釈液または食用のキャリアを含む。
これらは、ゼラチンカプセル中に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得る。
経口的な治療的な投与の目的のために、この活性な化合物は、賦形剤とともに組
込まれ得、そして錠剤、トローチ、またはカプセルの形で用いられ得る。経口的
な組成物はまた、うがい薬のような使用のために液体のキャリアを用いて調製さ
れ得、ここでこの液体キャリア中の組成物は、経口的に適用され、そしてピュー
と音を立て（ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出すかまたは飲み込まれる。薬学的に適
合性の結合剤、および／またはアジュバント物質は、組成物の一部として含まれ
得る。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、任意の以下の成分、または類似
の性質の化合物を含み得る：微結晶性のセルロース、トラガントゴム、またはゼ
ラチンのような結合剤；デンプンまたはラクトースのような賦形剤、アルギン酸
、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはコーンスターチのような崩壊剤；ス
テアリン酸マグネシウムまたはステロート（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）のような滑沢剤
；コロイド状二酸化ケイ素のような滑面剤（ｇｌｉｄａｎｔ）；スクロースまた
はサッカリンのような甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、または
オレンジ香味料のような人工香味料。吸入による投与に関して、この組成物は、
加圧容器または好適な噴霧剤（例えば、二酸化炭素のような気体）を含むディス
ペンサー、または噴霧器からエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０１１９】 全身性の投与はまた、経粘膜的または経皮的手段により得る。経粘膜的または
経皮的投与に関して、障壁を浸透するのに適切な浸透剤（ｐｅｎｅｔｒａｎｔ）
は、その処方物において用いられる。このような浸透剤は、一般には当該分野に
おいて公知であり、そして例えば、経粘膜的投与に関しては、界面活性剤、胆汁
酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、経鼻スプレーまたは坐剤
の使用を通じて達成され得る。経皮的な投与に関して、活性な組成物は、当該分
野において一般に公知の軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル
、またはクリームに処方される。この組成物はまた、直腸送達のための坐剤（例
えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤ベースと共に）ま
たは停留浣腸の形で調製され得る。
【０１２０】 一つの実施態様において、この活性な化合物は、移植物およびマイクロカプセ
ルに入れられた送達系を含む制御放出処方物のように、身体からの急激な排除か
ら化合物を保護するキャリアを用いて調製される。エチレンビニルアセテート、
ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ
乳酸のような、生分解性で生体適合性なポリマーが、用いられ得る。このような
処方物の調製の方法は、当業者に明らかである。この物質もまた、Ａｌｚａ Ｃ
ｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎ
ｃから商業的に入手され得る。リポソームの懸濁液（ウイルス抗原に対するモノ
クローナル抗体を含む感染した細胞に標的されるリポソームを含む）はまた、薬
学的に受容可能なキャリアとして用い得る。これらは、当業者に公知の方法（例
えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載のように）によって調製され得る
。
【０１２１】 投与の容易さまたは投薬の均一性のための投薬量単位の形式において、経口的
または非経口的組成物を処方することは、特に有利である。本明細書中において
用いるような投薬量単位の形式は、被験体が、要求される薬学的なキャリアと組
み合わせて、所望の治療的効果を生じるように計算された活性な化合物の、所定
の量を含む各々の単位で処置されるための単位投薬として好適な物理的に別個の
単位に言及する。疾患の型および重篤度に依存して、約１μｇ／ｋｇ〜約１５ｍ
ｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体は、例えば、一回以上に分
けた投与によるか、または連続する注入によるかのいずれであろうと、患者への
投与に関して最初の候補投薬量である。代表的な毎日の投薬量は、上述の因子に
依存して、約１μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であり得
る。状態に依存して、数日またはそれ以上にわたる反復投与に関して、所望の疾
患の症状の抑制が生じるまで、この処置は続けられる。しかし、他の投薬レジメ
ンが、有用であり得る。この治療の進行は、従来技術およびアッセイによって容
易にモニターされる。模範的な投薬レジメンは、ＷＯ９４／０４１８８に開示さ
れる。本発明の投薬量単位の形式に関する詳細は、以下によって指示され、そし
て以下に直接依存する：この活性な化合物の独特の特徴および達成される特定の
治療効果、ならびに個体の処置のためのこのような活性な化合物を調合する当該
分野に固有の制限。
【０１２２】 本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとし
て用い得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（米国特許
第５，３２８，４７０号）によって、または定位的な注射（例えば、Ｃｈｅｎら
（１９９４） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３０５
４−３０５７を参照のこと）によって被験体に送達され得る。遺伝子治療ベクタ
ーの薬学的調製物は、受容可能な希釈液中に遺伝子治療ベクターを含み得るか、
または遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれる遅延放出マトリックスを含み得る。あ
るいは、完全な遺伝子送達ベクターが組換え細胞から無傷で産生され得る場合（
例えば、レトロウイルスベクター）、薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する
一つ以上の細胞を含み得る。
【０１２３】 この薬学的組成物は、投与のための説明書と共に、容器、包装、またはディス
ペンサーに含まれ得る。
【０１２４】 （Ｖ 本発明の使用および方法） 本明細書中に記載の核酸分子、タンパク質、タンパク質ホモログ、および抗体
は、一つ以上の以下の方法において用い得る：（ａ）スクリーニングアッセイ；
（ｂ）検出アッセイ（例えば、染色体のマッピング、組織のタイピング、法医生
物学）；（ｃ）予防医学（例えば、診断的アッセイ、予後的アッセイ、臨床試験
のモニタリング、および薬理遺伝学（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ））；
および（ｄ）処置の方法（例えば、治療的および予防的）。本発明の単離された
核酸分子は、Ｔｈ２特異的タンパク質を発現する（例えば、遺伝子治療の適用に
おいて宿主細胞において組換え発現ベクターを介して）ために、Ｔｈ２特異的ｍ
ＲＮＡ（例えば、生物学的サンプルにおいて）またはＴｈ２特異的遺伝子中の遺
伝的損傷を検出するために、およびＴｈ２特異的活性を調節するために用い得る
。さらに、Ｔｈ２特異的タンパク質は、免疫応答を調節する薬物または化合物を
スクリーニングするために、およびＴｈ２特異的タンパク質の不十分なまたは過
剰な産生、またはＴｈ２特異的野生型タンパク質と比較して減少した活性または
異常な活性を有するＴｈ２特異的タンパク質形態の産生によって特徴付けられた
障害を処置するために用いられ得る。さらに、本発明の抗Ｔｈ２特異的抗体は、
Ｔｈ２特異的タンパク質を検出および単離するのに用いられ得、そしてＴｈ２特
異的活性を調節するのに用いられ得る。
【０１２５】 （Ａ スクリーニングアッセイ） 本発明は、Ｔｈ２特異的タンパク質に結合するまたは、例えば、Ｔｈ２特異的
発現もしくはＴｈ２特異的活性に対して刺激性効果もしくは抑制性効果を有する
モジュレーター、すなわち、候補化合物もしくは試験化合物または薬剤（例えば
、ペプチド、ペプチド分解性物、低分子、または他の薬物）を同定するための方
法（本明細書中において「スクリーニングアッセイ」とも呼ばれる）を提供する
。
【０１２６】 本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナトリアルライブラリ
ー法の任意の多数のアプローチ（生物学的ライブラリー、空間的にアドレス可能
な平行固相ライブラリーまたは液相ライブラリー、デコンボリューションを必要
とする合成ライブラリー法、「一ビーズ一化合物」ライブラリー法、およびアフ
ィニティクロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリー法を含む）を用いて
得うる。この生物学的ライブラリーアプローチは、ペプチドライブラリーに限定
され、一方他の四つのアプローチは、化合物のペプチドライブラリー、非ペプチ
ドライブラリー、オリゴマーライブラリー、または低分子ライブラリーに適用可
能である（Ｌａｍ（１９９７） Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１
２：１４５）。
【０１２７】 分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において見出され得る
。例えば、ＤｅＷｉｔｔら（１９９３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｃ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９
４）．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３） Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４） Ａｎｇｅｗ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４
） Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；および
Ｇａｌｌｏｐら（１９９４） Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【０１２８】 化合物のライブラリーは、溶液中（例えばＨｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２） Ｂ
ｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２−４２１）、またはビーズ上（Ｌａ
ｍ（１９９１） Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２−８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ
（１９９３） Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５−５５６）、細菌上（米国特許第
５，２２３，４０９号）、胞子上（米国特許第５，５７１，６９８号；同第５，
４０３，４８４号；および同第５，２２３，４０９号）、プラスミド上（Ｃｕｌ
ｌら（１９９２） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１
８６５−１８６９）、またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９
０） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４−４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０） Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６３７８−６３８２、およ
びＦｅｌｉｃｉ（１９９１） Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０
）に提示され得る。
【０１２９】 試験化合物がＴｈ２特異的タンパク質に結合する能力を決定することは、例え
ば、試験化合物のＴｈ２特異的タンパク質またはその生物学的に活性な部分への
結合が、複合体中の標識化合物を検出することによって決定され得るように、試
験化合物を放射性同位体または酵素的標識と連結することによって達成され得る
。例えば、試験化合物は、直接的または間接的のいずれかで125Ｉ、35Ｓ、14Ｃ
、または3Ｈで標識され得、そして放射性同位体は放射性放出（ｒａｄｉｏｅｍ
ｍｉｓｓｉｏｎ）の直接計測によってまたはシンチレーション計測によって検出
され得る。さらに、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アル
カリホスファターゼ、またはルシフェラーゼによって酵素的に標識され得、そし
てこの酵素的標識は、生成物への適切な基質の変換の決定によって検出され得る
。
【０１３０】 類似の様式において、Ｔｈ２特異的標的分子へ結合するまたはＴｈ２特異的標
的分子と相互作用するＴｈ２特異的タンパク質の能力が決定され得る。「標的分
子」とは、Ｔｈ２特異的タンパク質が天然に結合するまたは相互作用する分子を
意味する。好ましい実施態様において、Ｔｈ２特異的標的分子へ結合するまたは
Ｔｈ２特異的標的分子と相互作用するＴｈ２特異的タンパク質の能力は、その標
的分子の活性をモニタリングすることによって決定され得る。例えば、その標的
分子の活性は、以下によってモニターされ得る：その標的の細胞性セカンドメッ
センジャー（例えば、細胞内Ｃａ2+、ジアシルグリセロール、ＩＰ３、など）の
誘導を検出すること、適切な基質に対する標的の触媒的／酵素的活性を検出する
こと、レポーター遺伝子（例えば、検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラー
ゼ）をコードする核酸に作動可能に連結されたＴｈ２特異的応答性調節エレメン
ト）の誘導を検出すること、または細胞性応答（例えば、細胞性分化もしくは細
胞増殖）を検出すること。
【０１３１】 さらに別の実施態様において、本発明のアッセイは、以下を含む無細胞アッセ
イである：Ｔｈ２特異的タンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合
物と接触すること、およびＴｈ２特異的タンパク質またはその生物学的に活性な
部分に結合する試験化合物の能力を決定すること。Ｔｈ２特異的タンパク質への
試験化合物の結合は、上述のように直接的または間接的のいずれかで決定され得
る。好ましい実施態様において、アッセイは、以下を含む：Ｔｈ２特異的タンパ
ク質またはその生物学的に活性な部分を、Ｔｈ２特異的タンパク質を結合する公
知の化合物と接触し、アッセイ混合物を形成すること、アッセイ混合物を試験化
合物と接触すること、および公知の化合物と比較してＴｈ２特異的タンパク質ま
たはその生物学的に活性な部分に優先的に結合する試験化合物の能力を決定する
こと。
【０１３２】 別の実施態様において、アッセイは、以下を含む無細胞アッセイである：Ｔｈ
２特異的タンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触するこ
と、およびＴｈ２特異的タンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調
節する（例えば、刺激するまたは阻害する）試験化合物の能力を決定すること。
Ｔｈ２特異的タンパク質の活性を調節する試験化合物の能力を決定することは、
例えば、直接的な結合を決定するために上述のようなＴｈ２特異的標的分子に結
合するＴｈ２特異的タンパク質の能力を決定することによって達成され得る。代
替の実施態様において、Ｔｈ２特異的タンパク質の活性を調節する試験化合物の
能力を決定することは、Ｔｈ２特異的標的分子をさらに調節するＴｈ２特異的タ
ンパク質の能力を決定することによって達成され得る。例えば、適切な基質に対
する標的分子の触媒的／酵素的活性は、先に記載されたように決定され得る。
【０１３３】 さらに別の実施態様において、この無細胞アッセイは以下を含む：Ｔｈ２特異
的タンパク質またはその生物学的に活性な部分を、Ｔｈ２特異的タンパク質に結
合する公知の化合物と接触させて、アッセイ混合物を形成すること、このアッセ
イ混合物を試験化合物と接触させること、Ｔｈ２特異的標的分子に優先的に結合
するまたはＴｈ２特異的標的分子の活性を調節する試験化合物の能力を決定する
こと。
【０１３４】 上述のアッセイにおいて、Ｔｈ２特異的タンパク質またはその標的分子のいず
れかを固定化し、一方または両方のタンパク質の非複合体形態からの複合体形態
の分離を容易にすること、ならびにアッセイの自動化を適応することが望ましく
あり得る。一つの実施態様において、一方または両方のタンパク質がマトリック
スに結合することを可能にするドメインを加える融合タンパク質が、提供され得
る。例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／Ｔｈ２特異的融合タンパ
ク質またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／標的融合タンパク質は、グ
ルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕ
ｉｓ、ＭＯ）上またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着
され得、次いでこれらは、試験化合物または試験化合物および吸着されなかった
標的タンパク質もしくは吸着されなかったＴｈ２特異的タンパク質のいずれかと
組み合わせられ、そしてこの混合物は、複合体形成を誘導する条件下において（
例えば、塩およびｐＨについて生理的な条件において）インキュベートした。イ
ンキュベートに続いて、このビーズまたはマルチタイタープレートウェルは、任
意の非結合成分を取り除くために洗浄され、そして複合体形成は、例えば、上述
のように直接的または間接的のいずれかで測定される。あるいは、この複合体は
、マトリックスから分離され得、そしてＴｈ２特異的結合または活性のレベルは
、標準技術を用いて決定され得る。
【０１３５】 タンパク質をマトリクス上に固定するための他の技術もまた、本発明のスクリ
ーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、Ｔｈ２特異的タンパク質また
はその標的分子のいずれかは、ビオチンおよびストレプトアビジンの結合を利用
して固定化され得る。ビオチン化されたＴｈ２特異的分子または標的分子は、当
該分野で周知の技術（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌｓ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用してビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキ
シ−スクシンイミド）から調製され、そしてストレプトアビジンをコートした９
６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）のウェル中に固定化さ
れ得る。あるいは、Ｔｈ２特異的タンパク質または標的分子との抗体反応（しか
し、これは、その標的分子に対するＴｈ２特異的タンパク質の結合を干渉しない
）は、このプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合されない標的または
Ｔｈ２特異的タンパク質は、抗体結合によってウェル中に捕捉され得る。ＧＳＴ
固定化複合体について上記に記載される方法に加えて、このような複合体を検出
するための方法は、Ｔｈ２特異的タンパク質または標的分子との抗体反応を使用
する複合体の免疫検出、ならびにＴｈ２特異的タンパク質または標的分子に関連
する酵素活性の検出に依存する酵素連結アッセイを含む。
【０１３６】 別の実施態様において、Ｔｈ２特異的発現のモジュレーターは、細胞を候補化
合物に接触させて、そして細胞中のＴｈ２特異的ｍＲＮＡまたはＴｈ２特異的タ
ンパク質の発現を、その候補化合物の非存在下での細胞中のＴｈ２特異的ｍＲＮ
ＡまたはＴｈ２特異的タンパク質の発現と比較して決定する方法において同定さ
れる。発現が、候補化合物の非存在下より候補化合物の存在下でより大きい（統
計学的に有意により大きい）場合、この候補化合物は、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡま
たはＴｈ２特異的タンパク質の発現の刺激因子として同定される。あるいは、発
現が、候補化合物の非存在下より候補化合物の存在下でより少ない（統計学的に
有意により少ない）場合、この候補化合物は、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡまたはＴｈ
２特異的タンパク質の発現のインヒビターとして同定される。細胞中のＴｈ２特
異的ｍＲＮＡまたはＴｈ２特異的タンパク質の発現レベルは、Ｔｈ２特異的ｍＲ
ＮＡまたはＴｈ２特異的タンパク質を検出するための本明細書中に記載の方法に
よって決定され得る。
【０１３７】 本発明のなお別の局面において、Ｔｈ２特異的タンパク質を、ツーハイブリッ
ドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイ（例えば、米国特許第５，２８３
，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２；Ｍ
ａｄｕｒａら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６−１２
０５４：Ｂａｒｔｅｌら（１９９３）Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９
２０−９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９
３−１６９６；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）にお
ける「ベイト（ｂａｉｔ）タンパク質」として使用し、Ｔｈ２特異的タンパク質
（「Ｔｈ２特異的結合タンパク質」または「Ｔｈ２特異的ｂｐ」）に結合するか
、またはそれと相互作用して、Ｔｈ２特異的活性を調節する、他のタンパク質を
同定し得る。このようなＴｈ２特異的結合タンパク質はまた、例えば、Ｔｈ２特
異的経路の上流エレメントまたは下流エレメントとして、Ｔｈ２特異的タンパク
質によるシグナル伝達に関与するようである。
【０１３８】 本発明はさらに、上記スクリーニングアッセイによって同定された新規薬剤お
よび本明細書中に記載のような処置のためのそれらの使用に関する。
【０１３９】 （Ｂ．検出アッセイ） 本明細書中に同定されたｃＤＮＡ配列（および対応する完全遺伝子配列）の部
分またはフラグメントは、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法において使用
され得る。例えば、これらの配列は、（１）染色体上のそれらの各遺伝子をマッ
ピングするため；（２）微量の生物学的サンプルから個体を同定（組織型決定）
するため；および（３）生物学的サンプルの法医学的同定を補助するために使用
され得る。これらの適用は、以下の小節に記載される。
【０１４０】 （１ 染色体マッピング） 本発明の単離された完全または部分Ｔｈ２特異的遺伝子配列を使用して、染色
体上のそれらの各Ｔｈ２特異的遺伝子をマッピングし得、これによって、遺伝的
疾患に関連する遺伝子領域の位置付けを容易にする。Ｔｈ２特異的配列のコンピ
ューター分析を使用して、ゲノムＤＮＡ中の１つのエキソンを超えてわたらない
ＰＣＲプライマー（好ましくは、１５〜２５ｂｐ長）を迅速に選択し得、これに
よって、増幅プロセスを単純化する。次いで、これらのプライマーを、個々のヒ
ト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用し得る
。Ｔｈ２特異的配列に対応するヒト遺伝子を含むこれらのハイブリッドのみが、
増幅フラグメントを生じる。
【０１４１】 体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物由来の体細胞（例えば、ヒトおよびマ
ウスの細胞）を融合することによって調製される。ヒトおよびマウスの細胞のハ
イブリッドが、増殖および分裂するにつれて、これらは徐々に、ランダムな順序
でヒト染色体を損失するが、マウス染色体は維持する。マウス細胞が（それらマ
ウス細胞が、特定の酵素を欠失するために）増殖し得ないが、ヒト細胞は増殖し
得る培地を使用することによって、その必要な酵素をコードする遺伝子を保持す
る１つのヒト染色体が、維持される。種々の培地を使用することによって、ハイ
ブリッド細胞株の集団を樹立し得る。ある集団の各細胞株は、単一のヒト染色体
または少数のヒト染色体のいずれか、および完全セットのマウス染色体を保持し
、特異的ヒト染色体への個々の遺伝子の容易なマッピングを可能にする（Ｄ’Ｅ
ｕｓｔａｃｈｉｏら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：９１９−９２４）。
ヒト染色体のフラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転移および欠
失を有するヒト染色体を使用することによって生成され得る。
【０１４２】 Ｔｈ２特異的配列をその染色体にマッピングするために同様に使用され得る他
のマッピングストラテジーとしては、インサイチュハイブリダイゼーション（Ｆ
ａｎら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６
２２３−２７）、標識化されてフロー識別された染色体の前スクリーニング、お
よび染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーへのハイブリダイゼーションによる前選
択が挙げられる。さらに、中期染色体スプレッドに対するＤＮＡ配列の蛍光イン
サイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して、１工程で正確な染色
体位置を提供し得る。この技術の概論については、Ｖｅｒｍａら、（１９８８）
Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）を参照のこと。
ＦＩＳＨ技術は、５００または６００塩基程度のＤＮＡ配列を用いて使用され得
る。しかし、１，０００塩基より大きいクローンは、単純な検出のために十分な
シグナル強度を伴い、固有の染色体位置に、より結合するようである。好ましく
は、１，０００塩基、そしてより好ましくは２，０００塩基は、適度な時間で良
好な結果を得るのに十分である。
【０１４３】 染色体マッピングのための試薬は、単一の染色体またはその染色体の単一の部
位を印付けために個々に使用され得るか、または複数の試薬が、複数の部位およ
び／または複数の染色体を印付けするために使用され得る。実際に、遺伝子の非
コード領域に対応する試薬は、マッピング目的に好ましい。コード配列は、遺伝
子ファミリー内に保存されている傾向が強く、従って、染色体マッピングの間の
クロスハイブリダイゼーションの機会を増加させる。
【０１４４】 一旦、正確な染色体位置に配列がマッピングされると、その染色体上のその配
列の物理的位置が、遺伝子マップデータと相関付けられ得る（このようなデータ
は、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ，Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎ
ｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅ
ｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通じてオンラインで入手可能）に見
出される）。次いで、同じ染色体領域にマッピングされた、遺伝子と疾患との間
の関係が、例えば、Ｅｇｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２５：７８３
−７８７に記載される、連鎖解析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）によっ
て同定され得る。
【０１４５】 さらに、Ｔｈ２特異的遺伝子に関連する疾患に罹患した個体と罹患していない
個体との間のＤＮＡ配列の差異を決定し得る。変異が、この罹患した個体のいく
らかまたは全てにおいて観察されるが、罹患していない個体のいずれにおいても
観察されない場合、この変異は、特定の疾患の原因因子でありそうである。罹患
した個体と罹患していない個体との比較は、一般に、染色体スプレッドから可視
的であるか、またはそのＤＮＡ配列に基づくＰＣＲを使用して検出可能である、
染色体における構造変化（例えば、欠失または転移）を最初に探索する工程を含
む。最終的に、いくつかの個体由来の遺伝子の完全な配列決定を実行して、変異
の存在を確認し、そして多型由来の変異を区別し得る。
【０１４６】 （２．組織型決定） 本発明のＴｈ２特異的配列はまた、微量の生物学的サンプルから個体を同定す
るために使用され得る。例えば、米軍は、その人物の同定のために制限フラグメ
ント長多型（ＲＦＬＰ）の使用を検討している。この技術において、個体のゲノ
ムＤＮＡを、１以上の制限酵素で消化して、そしてサザンブロット上にプローブ
して同定のための固有のバンドを生じさせる。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国
特許第５，２７２，０５７号に記載される）のためのさらなるＤＮＡマーカーと
して有用である。
【０１４７】 さらに、本発明の配列は、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩基ごとの
ＤＮＡ配列を決定するための代替的技術を提供するために使用され得る。従って
、本発明のＴｈ２特異的配列を使用して、この配列の５’末端および３’末端由
来の２つのＰＣＲプライマーを調製し得る。次いで、これらのプライマーを使用
して、個体のＤＮＡを増幅し、それに続きこのＤＮＡを配列決定し得る。
【０１４８】 この様式で調製された、個体由来の対応するＤＮＡ配列の集団は、固有の個体
の同定を提供し得る。なぜなら、各個体は、対立遺伝子の差異に起因する、この
ようなＤＮＡ配列の固有のセットを有するからである。本発明のＴｈ２特異的配
列は、ヒトゲノムの部分を固有に表示する。対立遺伝子変異は、これらの配列の
コード領域においてある程度、そして非コード領域においてより高い程度で生じ
る。個々のヒトの間の対立遺伝子変異は、各５００塩基あたり約１回の頻度で生
じることが推定される。本明細書中に記載される配列の各々は、個体由来のＤＮ
Ａが同定目的のために比較され得るスタンダードとして、ある程度で、使用され
得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３または１５の非コード配列は、
その各々が１００塩基の増幅された非コード配列を生じる１０〜１，０００プラ
イマーの集団を用いて、ポジティブな個体同定を快適に提供し得る。推定コード
配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３または１５の配列）を
使用する場合、ポジティブな個体同定のためにより適切なプライマーの数は、５
００〜２，０００である。
【０１４９】 （３．法医学的生物学における部分的なＴｈ２特異的配列の使用） ＤＮＡに基づく同定技術もまた、法医学的生物学において使用され得る。この
様式において、ＰＣＲ技術を使用して、組織（例えば、毛または皮膚）あるいは
体液（例えば、犯罪現場で見出された血液、唾液または精液）のような、非常に
少量の生物学的サンプルから採取されたＤＮＡ配列を増幅し得る。次いで、この
増幅された配列は、スタンダードと比較され得、それによってこの生物学的サン
プルの起源の同定を可能にする。
【０１５０】 本発明の配列は、ヒトゲノム中の特定の遺伝子座に標的化されるポリヌクレオ
チド試薬（例えば、ＰＣＲプライマー）を提供するために使用され得る。このポ
リヌクレオチド試薬は、例えば、特定の個体に固有の別の「同定マーカー」を提
供することによって、ＤＮＡに基づく法医学的同定の信頼性を増強し得る。上記
のように、実際の塩基配列情報が、制限酵素によって生成されたフラグメントに
よって形成されるパターンに対する、正確な代替物として、同定のために使用さ
れ得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３または１５の非コード領域に
標的化された配列は、より多数の多型がこの非コード領域中に存在し、この技術
を使用する個体の識別をより容易にするので、この用途に特に適切である。ポリ
ヌクレオチド試薬の例としては、Ｔｈ２特異的配列またはその部分（例えば、少
なくとも２０または３０塩基の長さを有する、配列番号１、３、５、７、９、１
１、１３または１５のの非コード領域由来のフラグメント）が挙げられる。
【０１５１】 本明細書に記載されるＴｈ２特異的配列はさらに、特定の組織を同定するため
のポリヌクレオチド試薬（例えば、標識されたプローブまたは標識可能なプロー
ブ（例えば、インサイチュハイブリダイゼーション技術において使用され得る）
）を提供するために使用され得る。これは、法医学病理学者が、未知の起源の組
織に遭遇する場合に非常に有用であり得る。このようなＴｈ２特異的プローブの
集団は、種および／または器官型によって組織を同定するために使用され得る。
【０１５２】 同様に様式で、これらの試薬（例えば、Ｔｈ２特異的プライマーまたはプロー
ブ）は、組織培養物を混入についてスクリーニングするため（すなわち、培養物
中の異なる型の細胞の混合物の存在についてスクリーニングするため）に使用さ
れ得る。
【０１５３】 （Ｃ．予測的医学） 本発明はまた、予測的医学の分野に関し、ここで、診断アッセイ、予後アッセ
イ、薬物動態学、およびモニタリング臨床試験（ｔｒａｉｌ）が、予後（予測的
）目的のために使用され、それによって個体を予防的に処置する。これらの適用
を、以下の小節に記載する。
【０１５４】 （１．診断アッセイ） 本発明の１つの局面は、生物学的サンプルの状況下での、Ｔｈ２特異的タンパ
ク質および／またはＴｈ２特異的核酸の発現、ならびにＴｈ２特異的活性を検出
するための診断アッセイに関する。生物学的サンプル中のＴｈ２特異的タンパク
質の存在または非存在を検出するための例示的方法は、試験被験体由来の生物学
的サンプルを得る工程、およびこの生物学的サンプルに、Ｔｈ２特異的タンパク
質またはＴｈ２特異的タンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノム
ＤＮＡ）を検出し得る、化合物または薬剤を接触させる工程を包含し、その結果
、Ｔｈ２特異的タンパク質の存在は、この生物学的サンプル中で検出される。こ
の試験被験体由来の生物学的サンプルを用いて得られる結果は、コントロール被
験体由来の生物学的サンプルを用いて得られる結果と比較され得る。
【０１５５】 Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡまたはＴｈ２特異的ゲノムＤＮＡを検出するための好ま
しい薬剤は、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡまたはＴｈ２特異的ゲノムＤＮＡにハイブリ
ダイズし得る、標識された核酸プローブである。この核酸プローブは、例えば、
全長Ｔｈ２特異的核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３また
は１５の核酸）またはその部分（例えば、少なくとも１５、３０、５０、１００
、２５０または５００ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェント条件下で
Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡまたはＴｈ２特異的ゲノムＤＮＡに特異的にハイブリダイ
ズするのに十分である核酸分子）であり得る。本発明の診断アッセイにおける使
用のための他の適切なプローブは、本明細書中に記載される。
【０１５６】 Ｔｈ２特異的タンパク質を検出するための好ましい薬剤は、Ｔｈ２特異的タン
パク質に結合し得る抗体、好ましくは検出可能な標識を有する抗体である。抗体
は、ポリクローナルであり得るか、またはより好ましくは、モノクローナルであ
り得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（
ａｂ’）2）が使用され得る。プローブまたは抗体に関して、用語「標識された
」とは、検出可能な基質をプローブまたは抗体にカップリングさせる（すなわち
、物理的に連結させる）ことによる、プローブまたは抗体の直接的標識、ならび
に直接的に標識される別の試薬との反応性による、プローブまたは抗体の間接的
標識を包含することが意図される。間接的標識の例としては、蛍光標識された二
次抗体を使用する一次抗体の検出、およびＤＮＡプローブのビオチンでの末端標
識（その結果、これは、蛍光標識されたストレプトアビジンで検出され得る）が
挙げられる。
【０１５７】 用語「生物学的サンプル」とは、被験体から単離された組織、細胞および生物
学的体液、ならびに被験体内に存在する組織、細胞および体液を含むことが意図
される。つまり、本発明の検出方法を使用して、インビトロおよびインビボで、
生物学的サンプル中のＴｈ２特異的ｍＲＮＡ、Ｔｈ２特異的タンパク質またはＴ
ｈ２特異的ゲノムＤＮＡを検出し得る。例えば、Ｔｈ２特異的ｍＲＮＡの検出の
ためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサ
イチュハイブリダイゼーションが挙げられる。Ｔｈ２特異的タンパク質の検出の
ためのインビトロ技術としては、酵素酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩ
ＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。Ｔｈ２特
異的ゲノムＤＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイ
ゼーションが挙げられる。さらに、Ｔｈ２特異的タンパク質の検出のためのイン
ビトロ技術としては、被験体への標識された抗Ｔｈ２特異的抗体の導入が挙げら
れる。例えば、この抗体は、放射性マーカーで標識され得、そのマーカーの被験
体における存在および位置が、標準的な画像化技術によって検出され得る。
【０１５８】 １つの実施態様において、この生物学的サンプルは、試験被験体由来のタンパ
ク質分子を含む。あるいは、この生物学的サンプルは、試験被験体由来のｍＲＮ
Ａ分子または試験被験体由来のゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的
サンプルは、被験体から従来の手段によって単離された、末梢血白血球サンプル
である。
【０１５９】 本発明はまた、生物学的サンプル（試験サンプル）におけるＴｈ２特異的タン
パク質の存在を検出するためのキットを包含する。このようなキットを使用して
、被験体が、Ｔｈ２特異的タンパク質の異常な発現に関連する障害（例えば、免
疫学的障害）に罹患しているか、またはこのような障害を発症する危険性が増加
しているか否かを決定し得る。例えば、このキットは、生物学的サンプル中のＴ
ｈ２特異的タンパク質またはＴｈ２特異的ｍＲＮＡを検出し得る、標識された化
合物または薬剤、およびそのサンプル中のＴｈ２特異的タンパク質の量を測定す
るための手段（例えば、抗Ｔｈ２特異的抗体、またはＴｈ２特異的タンパク質を
コードするＤＮＡ（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３または１
５）に結合するオリゴヌクレオチドプローブ）を備え得る。キットはまた、Ｔｈ
２特異的タンパク質またはＴｈ２特異的ｍＲＮＡの量が、正常レベルより高いか
、または低い場合に、その試験された被験体は、Ｔｈ２特異的配列の異常な発現
に関連する障害に罹患されるか、またはそのような障害の危険性があることを観
察するための説明書を備え得る。
【０１６０】 抗体に基づくキットについて、このキットは、例えば、以下を備え得る：（１
）Ｔｈ２特異的タンパク質に結合する第１の抗体（例えば、固体支持体に付着さ
れる）；そして必要に応じて（２）Ｔｈ２特異的タンパク質または第１の抗体に
結合し、そして検出可能な薬剤に結合体化される、第２の、異なる抗体。オリゴ
ヌクレオチドに基づくキットについて、このキットは、例えば、以下を備え得る
：（１）Ｔｈ２特異的核酸配列にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド（例え
ば、検出可能に標識されたオリゴヌクレオチド）、または（２）Ｔｈ２特異的核
酸分子を増幅するために有用なプライマー対。
【０１６１】 このキットはまた、例えば、緩衝剤、保存剤、またはタンパク質安定化剤を備
え得る。このキットはまた、検出可能な薬剤（例えば、酵素または基質）を検出
するために必要な成分を備え得る。このキットはまた、アッセイされ、そして含
まれる試験サンプルと比較され得る、コントロールサンプルまたは一連のコント
ロールサンプルを備え得る。キットの各成分は、通常、個々の容器内に封入され
、そしてこの種々の容器の全ては、試験された被験体が、Ｔｈ２特異的タンパク
質の異常な発現に関連する障害に罹患されるか、またはそのような障害を発症す
る危険性があるか否かを観察するための説明書と共に、単一のパッケージ内にあ
る。
【０１６２】 （２．予後アッセイ） 本明細書中に記載の方法は、さらに、試験された被験体は、Ｔｈ２特異的タン
パク質、Ｔｈ２特異的核酸発現またはＴｈ２特異的活性に関連する疾患または障
害を罹患するか、またはそのような疾患または障害を発症する危険性がある被験
体を同定するための、診断アッセイまたは予後アッセイとして利用され得る。予
後アッセイは、予防目的または予測目的のために使用されて、Ｔｈ２特異的タン
パク質、Ｔｈ２特異的核酸発現、またはＴｈ２特異的活性によって特徴付けられ
るか、またはそれらに関連する障害の発症前に、個体を予防的に処置し得る。
【０１６３】 従って、本発明は、試験サンプルを被験体から得て、そしてＴｈ２特異的タン
パク質またはＴｈ２特異的核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出する
方法を提供し、ここで、Ｔｈ２特異的タンパク質またはＴｈ２特異的核酸の存在
は、異常なＴｈ２特異的発現または活性に関連する疾患または障害を罹患するか
、またはそれらの発症する危険性のある被験体について診断的である。本明細書
中で使用される場合、「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られた生物学
的サンプルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的体液（例えば、血清）、
細胞サンプル、または組織であり得る。
【０１６４】 さらに、本明細書中に記載される予後アッセイを使用して、本発明は、被験体
が、特定の薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タン
パク質、ペプチド、核酸、低分子、または他の薬物候補物）または薬剤のクラス
（例えば、Ｔｈ２特異的活性を減少させる型の薬剤）を投与されて、異常なＴｈ
２特異的発現またはＴｈ２特異的活性に関連する、疾患または障害を効果的に処
置し得るか否かを決定するための方法を提供する。この様式において、試験サン
プルを得て、そしてＴｈ２特異的タンパク質またはＴｈ２特異的核酸を検出する
。Ｔｈ２特異的タンパク質またはＴｈ２特異的核酸の存在は、その薬剤が投与さ
れて、異常なＴｈ２特異的発現またはＴｈ２特異的活性に関連する障害を処置さ
れ得る被験体について診断的である。
【０１６５】 本発明の方法はまた、Ｔｈ２特異的遺伝子における遺伝子損傷または遺伝子変
異を検出し、それによって、その損傷遺伝子を有する被験体は、異常な細胞増殖
および／または細胞分化によって特徴付けられる障害の危険性があるか否かを決
定するために使用され得る。好ましい実施態様において、この方法は、被験体由
来のサンプルまたは細胞において、Ｔｈ２特異的タンパク質をコードする遺伝子
の完全性、またはＴｈ２特異的遺伝子の誤発現をもたらす、少なくとも１つの変
化によって特徴付けられる、遺伝子損傷または遺伝子変異の存在または非存在を
検出する工程を包含する。例えば、このような遺伝子損傷または遺伝子変異は、
以下の少なくとも１つの存在を確認することによって検出され得る：（１）Ｔｈ
２特異的遺伝子からの１以上のヌクレオチドの欠失；（２）Ｔｈ２特異的遺伝子
に対する１以上のヌクレオチドの付加；（３）Ｔｈ２特異的遺伝子の１以上のヌ
クレオチドの置換；（４）Ｔｈ２特異的遺伝子の染色体再構成；（５）Ｔｈ２特
異的遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルの変化；（６）Ｔｈ２特異的
遺伝子の異常な改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パターンの異常な改変）
；（７）Ｔｈ２特異的遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非野生型スプライ
シングパターンの存在；（８）非野生型レベルのＴｈ２特異的タンパク質；（９
）Ｔｈ２特異的遺伝子の対立遺伝子欠失；および（１０）Ｔｈ２特異的タンパク
質の不適切な翻訳後修飾。本明細書中に記載されるように、Ｔｈ２特異的遺伝子
における損傷を検出するために使用され得る、当該分野で公知の多くのアッセイ
技術が存在する。Ｔｈ２特異的タンパク質が発現される、任意の細胞型または組
織（好ましくは、末梢血白血球）は、本明細書中に記載される予後アッセイにお
いて利用され得る。
【０１６６】 特定の実施態様において、損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（
例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参
照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ ＰＣＲ）、あるいはリガ
ーゼ（ｌｉｇａｔｉｏｎ）連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら
（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚ
ａｗａら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：
３６０−３６４を参照のこと）における、プローブ／プライマーの使用を含む。
この後者は、Ｔｈ２特異的遺伝子における点変異を検出するために特に有用であ
り得る（例えば、Ａｂｒａｖａｙａら（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．２３：６７５−６８２を参照のこと）。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲ
は、本明細書中に記載の変異を検出するために使用される技術のいずれかと組み
合わせて、予備的増幅工程として使用するために所望され得る。
【０１６７】 代替的増幅方法としては、自己持続性配列複製（ｓｅｌｆ ｓｕｓｔａｉｎｅ
ｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（Ｇｕａｔｅｌｌｉら（１９
９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４−１８
７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら（１９８９）Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−Ｂｅｔａ Ｒｅｐｌｉｃａｓ
ｅ（Ｌｉｚａｒｄｉら（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１１９
７）または任意の他の核酸増幅方法、それに続く、当業者に周知の技術を使用す
るその増幅された分子の検出が挙げられる。これらの検出スキームは、核酸分子
が、非常に低量で存在する場合に、そのような分子の検出に特に有用である。
【０１６８】 代替的実施態様において、サンプル細胞由来のＴｈ２特異的遺伝子における変
異は、１以上の制限エンドヌクレアーゼで消化された単離された試験サンプルお
よびコントロールＤＮＡの制限酵素切断パターンにおける変化によって同定され
得る。さらに、配列特異的リボザイムの使用（例えば、米国特許第５，４９８，
５３１号を参照のこと）を使用して、リボザイム切断部位の発生または損失によ
る特異的変異の存在についてスコア付けし得る。
【０１６９】 他の実施態様において、Ｔｈ２特異的分子における遺伝子変異は、サンプル核
酸およびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を数百または数千の
オリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイ（Ｃｒｏｎｉｎら（１９９６）
Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら（１９９６
）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：７５３−７５９）にハイブリダイズさ
せることによって同定され得る。なお別の実施態様において、当該分野で公知の
任意の種々の配列決定反応を使用して、Ｔｈ２特異的遺伝子を直接的に配列決定
し、そしてサンプルのＴｈ２特異的遺伝子の配列を対応する野生型（コントロー
ル）配列と比較することによって変異を検出し得る。配列決定反応の例としては
、ＭａｘｉｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５６０）またはＳａｎｇｅｒ（（１９９７）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５４６３）によって開発され
た技術に基づく配列決定反応が挙げられる。任意の種々の自動配列決定手順が、
質量分析法による配列決定（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／１６１０１；Ｃ
ｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．３６：１２７−１６２
；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌ．３８：１４７−１５９を参照のこと）を含む、診断アッセイ（（１
９９５）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９：４４８）を実施する場合に使用
され得ることもまた意図される。
【０１７０】 Ｔｈ２特異的遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断剤
からの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡヘテロ二重鎖にお
けるミスマッチ塩基を検出する方法（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３０：１２４２）が挙げられる。Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９
９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６−２９５もまた参照の
こと。好ましい実施態様において、コントロールのＤＮＡまたはＲＮＡが、検出
のために標識され得る。
【０１７１】 さらに別の実施態様において、ミスマッチ切断反応は、１以上の「ＤＮＡミス
マッチ修復」酵素を使用し、これらの酵素は、細胞のサンプルから得られたＴｈ
２特異的ｃＤＮＡにおける点変異を検出およびマッピングするための規定された
系において、二本鎖ＤＮＡ中のミスマッチ塩基対を認識する。例えば、Ｈｓｕら
（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ １５：１６５７−１６６２を参照
のこと。例示的な実施態様に従って、Ｔｈ２特異的配列（例えば、野生型Ｔｈ２
特異的配列）に基づくプローブを、試験細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産
物にハイブリダイズさせる。この二重鎖をＤＮＡミスマッチ修復酵素で処理し、
そして、もし存在する場合に、この切断産物を電気泳動プロトコルなどから検出
し得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。
【０１７２】 他の実施態様において、電気泳動移動度における変化を使用して、Ｔｈ２特異
的遺伝子における変異を同定する。例えば、一本鎖配座多型（ｓｉｎｇｌｅ−ｓ
ｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）（ＳＳＣ
Ｐ）を使用して、変異体核酸と野生型核酸との間の電気泳動移動度における差異
を検出し得る（Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８６：２７６６；またＣｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ．Ｒｅ
ｓ．２８５：１２５−１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａ
ｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３−７９を参照のこと）。このアッセイの感度
は、（ＤＮＡよりむしろ）ＲＮＡを使用することによって増強され得、ここで、
その二次構造が、配列における変化に対してより感受性である。好ましい実施態
様において、この方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動移動度におけ
る変化に基づく二本鎖へテロ二重鎖分子を分離する（Ｋｅｅｎら（１９９１）Ｔ
ｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔｓ．７：５）。
【０１７３】 なお別の実施態様において、変性剤の勾配を含むポリアクリルアミドゲル中の
変異体または野生型のフラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ
）（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３：４９６）を使用してアッ
セイされる。ＤＧＧＥが分析方法として使用される場合、ＤＮＡは、例えば、Ｐ
ＣＲによって高い融解性のＧＣリッチなＤＮＡの約４０ｐのＧＣクランプを付加
することによって、ＤＮＡが完全には変性しないことを確証するように修飾され
る。さらなる実施態様において、温度勾配を、変性勾配の代わりに用いて、コン
トロールＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの移動度における差異を同定する（Ｒｏｓ
ｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．
２６５：１２７５３）。
【０１７４】 点変異を検出するための他の技術の例としては、選択的オリゴヌクレオチドハ
イブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸長が挙げられる
が、これらに限定されない。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーは、既知の
変異が中央に配置され、次いで完全な一致が見出される場合のみにハイブリダイ
ゼーションを可能にする条件下で標的ＤＮＡにハイブリダイズされるように調製
され得る（Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２４：１６３；Ｓａｉｋ
ｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６２
３０）。このような対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオ
チドが、ハイブリダイズしているメンブランに付着され、そして標識化標的ＤＮ
Ａとハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅される標的ＤＮＡ、または多数の
異なる変異体にハイブリダイズされる。
【０１７５】 あるいは、対立遺伝子特異的増幅技術は（これは、選択的ＰＣＲ増幅に依存す
る）本発明と共に用いられ得る。特異的増幅のためのプライマーとして用いられ
るオリゴヌクレオチドは、分子の中央において目的の変異を実施し得、その結果
、増幅は、示差的ハイブリダイゼーション（Ｇｉｂｂｓら、（１９８９）Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：２４３７−２４４８）、または適切な条
件下で、ミスマッチがポリメラーゼ伸長を防止もしくは減少させ得る（Ｐｒｏｓ
ｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）、１つのプライマーのい
ちばん端の３’末端に依存する。さらに、変異の領域に新規の制限部位を導入し
て、切断に基づく検出を作り出すことが好適であり得る（Ｇａｓｐａｒｉｎｉら
（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．プローブ６：１）。特定の実施態様において、
増幅はまた、増幅のためのＴａｑリガーゼを用いて行われ得ることが予測される
（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８８：１８９）。このような場合において、連結は、５’配列の３’末端での完
全一致が存在し、特定の部位での既知の変異の存在を、増幅の存在または非存在
を探すことによって検出可能にする場合にのみ生じる。
【０１７６】 本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載される少なくとも
１つのプローブ核酸または抗体試薬を含むパッケージ化された診断キットを利用
することによって、行われ得る。このキットは、例えば、臨床的設定において、
Ｔｈ２−特異的遺伝子に関する疾患もしくは疾病の症状または家族歴を示す患者
を診断するために、都合良く使用され得る。 （薬理遺伝学） 本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定されるような、
ＴＨ２−特異的活性（例えば、Ｔｈ２−特異的遺伝子発現）に対する刺激または
阻害効果を有する試薬もしくはモジュレーターは、個体に投与されて、異常なＴ
ｈ２−特異的活性と関連する（予防的または治療的）障害を処置し、かつ免疫応
答の表現型を調節し得る。このような処置と共に、薬理遺伝学（すなわち、個体
の遺伝子型の間の関連性、および外来の化合物もしくは薬物に対する個体の応答
の間の関連性の研究）が、考察され得る。治療薬の代謝における差異は、薬理学
的に活性な薬物の用量と血中濃度との間の関連性を変化させることによって、重
篤な毒性または治療的失敗を引き起こし得る。従って、個体の薬理遺伝学は、個
体の遺伝子型の考察に基づいて、予防的または治療的な処置のための有効な薬剤
（例えば、薬物）の選択を可能にする。このような薬理遺伝学をさらに用いて、
適切な投薬量および治療法を決定し得る。従って、個体における、Ｔｈ２−特異
的タンパク質の活性、Ｔｈ２−特異的核酸の発現、またはＴｈ２−特異的遺伝子
の変異量を決定して、それによって個体の治療的または予防的な処置のための適
切な薬剤を選択する。
【０１７７】 薬理遺伝学は、罹患した人における薬物蓄積および異常な作用を変化させるこ
とにより、薬物に対する応答における臨床的に有意な遺伝的変動を扱う。例えば
、Ｌｉｎｄｅｒ（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３（２）：２５４−２６６
を参照のこと。一般に、２つの型の薬理遺伝的状態は異なり得る。身体に対する
薬物作用の様式を変化させる単一の因子として伝えられる遺伝状態は、「変化さ
れた薬物作用」といわれる。薬物に対する身体作用の様式を変化させる単一の因
子として薬物伝えられる遺伝状態は、「変化した薬物代謝」といわれる。これら
の薬理遺伝的状態は、まれな欠損または多型のいずれかとして生じ得る。例えば
、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症（Ｇ６ＰＤ）は、一般的な遺
伝酵素病である。この主な臨床的合併症は、酸化薬物（抗マラリア剤、スルホン
アミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの消費の後の溶血である
。
【０１７８】 例示的な実施態様として、酵素を代謝する薬物の活性は、薬物作用の効力およ
び持続時間の両方の主な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチル
トランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）、ならびにシトクロムＰ４５０酵素のＣＹＰ
２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、何人かの患者が、薬物の
標準的かつ安全な用量を得た後に、予想される薬物効果を得ないか、または悪化
した薬物応答および重篤な毒性を示す理由に関しての説明を提供した。これらの
多型は、集団における２つの表現型（高代謝群（ｈｉｇｈ ｍｅｔａｂｏｌｉｚ
ｅｒ）（ＥＭ）および低代謝群（ＰＭ）（ｐｏｏｒ ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）
）で表される。ＰＭの罹患率は、種々の集団について異なる。例えば、ＣＹＰ２
Ｄ６をコードする遺伝子は、高度な多型であり、かついくつかの変異がＰＭにお
いて同定されており、これは、全て機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存在を導く。ＣＹＰ
２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の低代謝群は、それらが、標準的な用量を受ける時
に、悪化した薬物応答および副作用を、きわめて頻繁に経験する。代謝産物が、
活性な治療用分子である場合、ＰＭは、そのＣＹＰ２Ｄ６型代謝産物であるモル
ヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるような、治療的
応答を示さない。他の極端なものは、いわゆる、標準的な用量に応答しない超迅
速代謝群（ｕｌｔｒａ−ｒａｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）である。最近、
超迅速代謝の分子的な基礎は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅によるものであることが
確認された。
【０１７９】 従って、個体における、Ｔｈ２−特異的タンパク質の活性、Ｔｈ−２特異的核
酸の発現、Ｔｈ−２特異的遺伝子の変量を決定して、それによって個体の治療的
または予防的な処置のための適切な薬剤を選択し得る。さらに、薬理遺伝的研究
を用いて、個体の薬物応答性表現型の同定に、薬物代謝酵素をコードする多型対
立遺伝子の遺伝子型決定を適用し得る。この知見は、投薬または薬物の選択に適
用する場合に、有害な反応または治療的失敗を避け得、従って被検体をＴｈ２−
特異的モジュレーター（例えば、本明細書中に記載される例示的スクリーニング
アッセイの１つによって同定されるモジュレーター）を用いて処置する場合に、
治療的または予防的な効果を増大させる。 （４．臨床試験の間の効果のモニタリング） ＴＨ２−特異的遺伝子の発現または活性に対する薬剤（例えば、薬物、化合物
）の影響（例えば、異常な細胞増殖および／または分化を調節する能力）をモニ
ターすることは、基本的薬物スクリーニングにおいてのみならず、臨床試験にお
いても適用され得る。例えば、Ｔｈ−２特異的遺伝子発現、タンパク質レベル、
またはタンパク質活性を、増大または低下させることに対する、本明細書中に記
載されるようなスクリーニングアッセイによって決定されるような、薬剤の有効
性は、低下または増大したＴｈ−２特異的遺伝子発現、タンパク質レベル、もし
くはタンパク質活性を示す被検体の臨床試験においてモニターされ得る。このよ
うな臨床試験において、Ｔｈ−２特異的発現または活性、および好ましくは、例
えば、細胞増殖障害に関与する他の遺伝子の発現または活性は、特定の細胞の免
疫応答性のマーカーとして用いられ得る。
【０１８０】 例えば、そして限定を意味しないが、Ｔｈ２−特異的活性を調節する薬剤（例
えば、化合物、薬物、または低分子）での処理によって細胞において調節される
遺伝子が、（例えば、本明細書中に記載されているスクリーニングのアッセイに
おいて同定されるように）同定され得る。従って、細胞増殖障害に対する薬剤の
効果を研究するために、例えば、臨床試験において、細胞は、単離され得、そし
てＲＮＡが調製され、そしてＴｈ２−特異的遺伝子、およびこの障害に関与する
他の遺伝子の発現のレベルについて分析される。遺伝子発現のレベル（すなわち
、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるような、ノーザンブロット
分析もしくはＲＴ−ＰＣＲによって定量され得るか、あるいは産生されるタンパ
ク質の量を測定することによって、本明細書中に記載されるような方法の１つに
よって、またはＴｈ２−特異的遺伝子もしくは他の遺伝子のレベルを測定するこ
とによって、定量され得る。この方法において、遺伝子発現パターンは、薬剤に
対する細胞の生理学的応答を示す、マーカーとして役立ち得る。従って、この応
答状態は、薬剤での個体の処置の前、およびその間の様々な時点で測定され得る
。
【０１８１】 好ましい実施態様において、本発明は、薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴ
ニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子、または本明細
書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される他の薬物候補）で
の被験体の処置の有効性をモニタリングするための方法を提供する。この方法は
、（１）薬剤の投与の前に被検体由来の投与前サンプルを得る工程；（２）投与
前サンプルにおいて、Ｔｈ２−特異的タンパク質、ｍＲＮＡ、もしくはゲノムＤ
ＮＡの発現のレベルを検出する工程；（３）被検体由来の１つ以上の投与前サン
プルを得る工程；（４）投与後のサンプルにおいてＴｈ−２特異的タンパク質、
ｍＲＮＡ、もしくはゲノムＤＮＡの発現もしくは活性のレベルを検出する工程；
（５）投与後のサンプルにおけるＴｈ２−特異的タンパク質、ｍＲＮＡ、ゲノム
ＤＮＡと、投与前サンプルにおけるＴｈ２−特異的タンパク質、ｍＲＮＡ、ゲノ
ムＤＮＡの発現もしくは活性のレベルを比較する工程；ならびに（ｉｖ）被験体
への薬剤の投与を変化させて、結果的に所望の効果（すなわち、例えば、Ｔｈ２
−特異的タンパク質の発現または活性の増加もしくは減少）をもたらす工程、を
包含する。 （Ｃ．処置の方法） 本発明は、異常なＴｈ２−特異的発現または活性と関連する障害の危険性のあ
る（もしくは障害に感受性である）、またはその障害を有する、被検体を処置す
る予防的および治療的な方法の両方を提供する。さらに、本発明の組成物は、Ｔ
リンパ球応答を調節することにおける用途を見出す。従って、免疫障害および呼
吸障害に対する療法は、本明細書中に包含される。 （１．予防法） １つの局面において、本発明は、Ｔｈ２−特異的発現、または少なくとも１つ
のＴｈ２−特異的遺伝子活性を調節する薬剤を被験体に投与することによって、
異常なＴｈ２−特異的発現もしくは活性と関連する疾患または状態を、患者にお
いて防止する方法を提供する。異常なＴｈ２−特異的発現もしくは活性によって
、引き起こされるか、または異常なＴｈ２−特異的発現もしくは活性に寄与する
、疾患の危険性のある被検体は、例えば、本明細書中ようなアッセイを診断また
は予防のアッセイのいずれか、もしくは組合せによって同定され得る。予防的薬
剤の投与は、Ｔｈ２−特異的異常性の特徴的な症状の徴候の前に起こり、その結
果疾患または障害は、その進行において予防され得るか、または遅らされ得る。
Ｔｈ２−特異的異常性の型に依存して、例えば、Ｔｈ２−特異的アゴニストまた
はＴｈ２−特異的アンタゴニストは、被検体を処置するために用いれられ得る。
適切な薬剤は、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイに基づいて、決
定され得る。 （２．治療法） 本発明の別の局面は、治療目的のためのＴＨ２−特異的な発現または活性を調
節する方法に関する。本発明の調節方法は、細胞と関連するＴｈ２−特異的タン
パク質活性の１つ以上の活性を調節する薬剤と、細胞とを接触させる工程を包含
する。Ｔｈ２−特異的タンパク質活性を調節する薬剤は、本明細書中に記載され
る薬剤（例えば、核酸もしくはタンパク質、Ｔｈ２−特異的タンパク質の天然に
存在する同族リガンド、ペプチド、Ｔｈ２−特異的ペプチド模倣物、または他の
低分子）であり得る。１つの実施態様において、この薬剤は、Ｔｈ２−特異的タ
ンパク質の生物学的活性の１つ以上を刺激する。このような刺激性薬剤の例とし
ては、活性なＴｈ２−特異的タンパク質および細胞に導入されたＴｈ２−特異的
タンパク質をコードする核酸分子が挙げられる。別の実施態様において、この薬
剤は、Ｔｈ２−特異的タンパク質の生物学的活性の１つ以上を阻害する。このよ
うな阻害性薬剤の例としては、アンチセンスＴｈ２−特異的核酸分子および抗Ｔ
ｈ２−特異的抗体が挙げられる。
【０１８２】 これらの調節効果は、（例えば、この薬剤で細胞を培養することによって）イ
ンビトロで、あるいは（例えば、被検体にこの薬剤を投与することによって）イ
ンビトロで行われ得る。このように、本発明は、Ｔｈ２−特異的なタンパク質ま
たは核酸分子の異常な発現もしくは活性によって特徴付けられる疾患または障害
に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つの実施態様において、本方法は
、Ｔｈ２−特異的な発現または活性を調節する（例えば、アップレギュレートす
るか、もしくはダウンレギュレートする）、薬剤（例えば、本明細書中に記載さ
れるスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）、または薬剤の組合せを
投与することを包含する。別の実施態様において、本方法は、治療としてＴｈ２
−特異的なタンパク質または核酸を投与して、低下したまたは異常なＴｈ２−特
異的な発現もしくは活性を補償することを包含する。
【０１８３】 Ｔｈ２−特異的活性の刺激は、Ｔｈ２−特異的タンパク質が異常にダウンレギ
ュレートされる状況、および／または増大したＴｈ２−特異的活性が有益な効果
を有するようである状況において望ましい。対照的に、Ｔｈ２−特異的活性の阻
害は、Ｔｈ２−特異的活性が異常にアップレギュレートされる状況、および／ま
たは低下したＴｈ２−特異的活性が有益な効果を有するようである状況において
望ましい。
【０１８４】 本発明は、以下の実施例によってさらに例示される。これは限定として解釈さ
れるべきではない。
【０１８５】 （実施例） Ｔ細胞活性化のインビトロおよびインビボ研究は、ＭＨＣ−ＩＩ／ペプチド複
合体によってＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）に送達されるシグナルに加えて、抗原
提示細胞（ＡＰＣ）による同時刺激シグナルは、完全な免疫活性化のために重要
であり、このシグナルの非存在は、頓挫性の免疫応答を生じるという、広く受け
入れられる仮説を導いた（Ｓｃｈｗａｒｔｚ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ４９
６１：１３４９−５６）。休止Ｔ細胞に送達される最も重要な同時刺激シグナル
は、Ｂ７分子によるＣＤ２８結合の際に生じる（Ｊｅｎｋｉｎｓら（１９９１）
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：２４６１−６；Ｈａｒｄｉｎｇら、（１９９２）Ｎａ
ｔｕｒｅ ６３７０：６０７−９）。ＣＤ２８と対照的に、このファミリーの分
子の第２のメンバーであるＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８媒介同時刺激に対抗して、
活性化Ｔ細胞に負のシグナルを送達する（Ｗａｌｕｎａｓら（１９９４）Ｉｍｍ
ｕｎｉｔｙ １（５）：４０５−４１３）。
【０１８６】 最近のインビトロでの実験は、ＣＤ２８／Ｂ７媒介同時刺激への依存性は、Ｔ
細胞の抗原性経験により非常に影響されることを示唆した。従って、ナイーブな
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＬ−２産生およびクローン増殖のためのＣＤ２８媒介シグ
ナル伝達を必要とする（Ｓｅｄｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１：２
９９−３０４；ＭｃＫｎｉｇｈｔら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：５
２２０−５）が、最近の活性化Ｔヘルパーサブセットの最適な活性化は、ＣＤ２
８連結とは無関係に生じる（ＳｃｈｗｅｉｔｚｅｒおよびＳｈａｒｐｅ（１９９
８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ６：２７６２−７１）。さらに、ＣＤ２８刺激は、イ
ンビトロで、Ｔｈ２表現型への分化を促進することが報告されている（Ｒｕｌｉ
ｆｓｏｎら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：６５８−６５）が、ＣＤ２
８遺伝子標的化マウスにおいて行われる研究は、少なくともいくつかの環境下で
、正常なＴｈ２エフェクター免疫応答が生成され得ることが実証されており、こ
のことは他の同時刺激シグナルはＴｈ２エフェクター機能に重要であることを示
唆する（Ｂｒｏｗｎら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．３：８０３−１０；Ｇ
ａｕｓｅら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：４０８２−７；Ｗｕら（
１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１５１−１１５６）。
【０１８７】 Ｔヘルパーエフェクター細胞の同時刺激因子として機能し得る新規の候補遺伝
子を同定する試みにおいて、活性化マウスのＴｈ１クローン対Ｔｈ２クローン由
来の差し引きライブラリーを作成した。マウスのＴｈ２ ｍＲＮＡ対Ｔｈ１ ｍ
ＲＮＡにおいて、差し引きハイブリダイゼーション−ＰＣＲアプローチを用いて
、Ｔヘルパー細胞のＴｈ２サブセットにおいて示差的に発現される３つの新規の
ヒト遺伝子に対するマウスオルソログを同定した。第１のこれらのオルソログで
あるｍ１４１９は、ＣＤ３／ＴＣＲ活性化Ｔｈ２細胞において過剰発現される３
．６Ｋｂの転写物（配列番号１に示されるｃＤＮＡセットに対応する）をコード
する。この転写物のオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド１２６−１３
０４）は、予想される３２９アミノ酸である４２．８ｋＤａタンパク質（配列番
号２）をコードする。ヌクレオチドおよびタンパク質データベースの検索は、ｍ
１４１９ ｃＤＮＡが新規であることを示した。検出された唯一の有意な相同性
は、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録
番号ＡＡＢ００５９０；ＦｕｌｔｏｎおよびＧａｔｔｕｎｇ（１９９４）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３６８：３２−３８；Ｗａｔｅｒｓｔｏｎ，Ｒ．，Ｄｉｒｅｃｔ Ｓｕ
ｂｍｉｓｓｉｏｎ，１９９６年５月１９日、Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎ
ｇ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｗａｓｈ
ｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，６３１１０
ＵＳＡ）に対するものであった。ｍ１４１９についてのアミノ酸配列は、これら
のＣ．ｅｌｅｇａｎｓ配列の１つの推定の翻訳物と１４０アミノ酸にわたって約
４０％の同一性を示した。対応するヒトＴｈ２−特異的遺伝子であるｈ１４１９
（配列番号１５）についてのｃＤＮＡ（３．９Ｋｂ転写物に対応する）を単離し
た；このｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド３２５−１４
７９）は、３４８アミノ酸タンパク質（配列番号１６）をコードする。
【０１８８】 第２のこれらのマウスオルソログであるｍ１０２２は、２つの転写物をコード
する（より短い１．６Ｋｂ形態（配列番号３に示すｃＤＮＡに対応する）および
より長い４．４Ｋｂ形態（配列番号５に示すｃＤＮＡに対応する））。これらは
、ＣＤ３／ＴＣＲ活性化Ｔｈ２細胞において過剰発現される。これらの配列は、
それらの３’非翻訳領域においてのみ異なり、ここで、より短い形態は、より長
い形態のヌクレオチド１〜１５８７に対応する。両転写物のオープンリーディン
グフレーム（ヌクレオチド３６〜１４３０）は、４６４アミノ酸の５４．２ＫＤ
ａタンパク質（配列番号４および６）をコードする。これは、Ｔｒｙｐａｎｏｓ
ｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ由来のＤＮＡポリメラーゼのαコアサブユニット（Ｌｅｅ
ｇｗａｔｅｒ，Ｄｉｒｅｃｔ Ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ，１９９１年７月１９日、
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ，私書箱３０７０９、Ｎａｉｒｏｂｉ
，Ｋｅｎｙａ；Ｌｅｅｇｗａｔｅｒら（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１９：６４１１−６４４７）をコードする、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号
ＣＡＡ４３２８６と相同である（６０アミノ酸重複にわたって、４８．３％の同
一性；図１を参照のこと）。対応するヒトＴｈ２−特異的遺伝子であるｈ１０２
２（配列番号１３）についてのｃＤＮＡ（１．８Ｋｂ転写物に対応する）を単離
した；このｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド５７〜１５
０２）は、４８１アミノ酸タンパク質（配列番号１４）をコードする。
【０１８９】 第３のマウスオルソログであるｍ１２２８は、２つの転写物をコードする（よ
り短い２．１Ｋｂ形態（配列番号７に示すｃＤＮＡに対応する）およびより長い
３．３Ｋｂ形態（配列番号９に示すｃＤＮＡに対応する））。これらは、ＣＤ３
／ＴＣＲ活性化Ｔｈ２細胞において過剰発現される。これらの配列は、それらの
３’非翻訳領域においてのみ異なり、ここで、より短い形態は、より長い形態の
ヌクレオチド１〜２０８０に対応する。両転写物のオープンリーディングフレー
ム（ヌクレオチド４０〜６４２）は、予測された２００アミノ酸の２２．７ＫＤ
ａタンパク質（配列番号８および１０）をコードする。ヒトＴｈ２−特異的遺伝
子に対応するｃＤＮＡ（２．７ Ｋｂ転写物に対応する）であるｈ１２２８（配
列番号１１）を単離した；このｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム（ヌク
レオチド１１５７１１）（配列番号１２）は、１９８アミノ酸タンパク質をコー
ドする。ｈ１２２８タンパク質および対応するｍ１２２タンパク質は、Ｉｇスー
パーファミリーメンバーである。これは、それらの全長アミノ酸配列にわたって
、６９％の同一性を共有する。
【０１９０】 予想されるｈ１２２８およびｍ１２２８ タンパク質は、ヒトならびにマウス
のＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４の両方と相同性を共有する（図２を参照のこと）
。ｈ１２２８配列は、ＣＤ２８と３３％の同一性、およびｈＣＴＬＡ−４と２６
％の同一性を共有する。マウスオルソログｍ１２２８は、ｍＣＤ２８と３６．５
％の同一性およびｍＣＴＬＡ−４と３８．５％の同一性を共有する。ｍ１２２８
のヒトホモログは、最近ＩＣＯＳ（ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーの第３の
メンバー）と命名されている（Ｈｕｔｌｏｆｆら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ ６
７１６：２６３）。ｍ１２２８遺伝子およびタンパク質は、このように、以下の
実施例６においてｍＩＣＯＳとも呼ばれている。ｍ１２２８およびｈ１２２８の
アミノ酸配列の試験は、４つの保存されたシステイン残基を示した（配列番号８
および１０の、アミノ酸残基４２、６３、８３、および１３７；配列番号１２の
、アミノ酸残基４１、６２、８２、および１３５）。これらは、ＣＤ２８、およ
びその関連するホモログＣＴＬＡ−４に共通する保存されたＰＰＰモチーフであ
る。このモチーフ（これは細胞外ドメインにある）を、以下において見出した：
ヒトＣＤ２８のＭＹＰＰＰＹ（配列番号１９のアミノ酸残基１１７−１２２）、
ヒトＣＴＬＡ−４のＭＹＰＰＰＹ（配列番号２１のアミノ酸残基１３４−１３９
）、ｍ１２２８ のＦＤＰＰＰＦ（配列番号８および１０のアミノ酸残基１１４
−１１９）、ならびにｈ１２２８のＦＤＰＰＰＦ（配列番号１２のアミノ酸残基
１１３−１１８）。さらに、１２２８配列は、ＣＤ２８媒介ホスファチジルイノ
シトール３−キナーゼ（ＰＩ−３Ｋ）活性に必要とされるようである、ＣＤ２８
およびＣＴＬＡ−４に共通するＹＸＸＭモチーフ（ここでＸは任意のアミノ酸で
あり得る）を含む。このモチーフ（これは、ＣＤ２８および１２２８の細胞内ド
メインにある）は、シグナル伝達経路に関与する。この配列を、以下において見
出した：ヒトＣＤ２８のＹＭＮＭ（配列番号１９のアミノ酸残基１９１−１９４
）、ヒトＣＴＬＡ−４のＹＶＫＭ（配列番号２１のアミノ酸残基２０１−２０４
）、ｍ１２２８のＹＭＦＭ（配列番号８および１０のアミノ酸残基１８１−１８
４）、ならびにｈ１２２８のＹＭＦＭ（配列番号１２のアミノ酸残基１７８−１
８１）。まとめると、これらのデータは、ｈ１２２８および対応するｍ１２２８
が、新規のＴｈ２特異的同時刺激分子として機能することを示唆する。
【０１９１】 マウスオルソログおよび対応するヒト遺伝子を同定するため、ならびにそれら
の発現パターンの特徴付けのために採用した方法は、以下の実施例に記載される
。
【０１９２】 （実施例１：Ｔｈ１およびＴｈ２ ｍＲＮＡ産生） ＤＯ１１．１０ αβ−ＴＣＲ（これは、Ｉ−Ａdと関連するニワトリオボア
ルブミン（ＯＶＡ）の残基３２３−３３９認識する）についての導入遺伝子を発
現するマウスを、ＢＡＬＢ／ｃ生育環境において維持した。このマウスを、施設
および国のガイドラインに従って、無病原体状態下で、極小隔離飼育器ケージ（
ｍｉｃｒｏｉｓｏｌａｔｏｒ ｃａｇｅ）中で、動物施設において飼育した。
【０１９３】 ＤＯ１１．１０ ＴＣＲ−トランスジェニックＣＤ４+Ｔ細胞を、ＯＶＡ ３
２３−３３９（１ｍＭ）およびマイトマイシンＣ−処理ＢＡＬＢ／ｃ脾臓細胞を
有する完全ＲＰＭＩ １６４０において培養した。Ｔｈ１表現型発生のために、
１０ｎｇ／ｍｌの組換えマウスＩＬ−１２（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）およ
び中和抗−ＩＬ−４ ｍＡｂ（１１Ｂ１１）（１０μｇ／ｍｌ）を添加し、そし
てＴｈ２表現型の発生のために、組換えマウスＩＬ−４（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔ
ｅｍｓ）および中和ポリクローナル抗−マウスＩＬ−１２（１０μｇ／ｍｌ）（
ＴＯＳＨ−２，Ｅｎｄｏｇｅｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を添加し、そして
抗原性ペプチドＯＶＡ３２２−３３９を用いて刺激した。細胞を極性条件下で３
回の抗原性刺激のために培養した。次いで、細胞を洗浄し、そしてｍＩＬ−２（
１０ｎｇ／ｍｌ）において４８時間培養した。次いで、死細胞を、勾配遠心分離
によって取り除き、そして細胞（５×１０6／ウェル）をｈＩＬ−２の存在下で
、６ウェルプレート上に固定したＣＤ３（２Ｃ１１、１０μｇ／ｍｌ）に６、２
４または４８時間プレートした。休止細胞を、刺激せずに、ＩＬ−２において４
８時間培養し、そして非活性化コントロール細胞として用いた。 （実施例２：差し引きハイブリダイゼーションプロトコル） Ｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡを、ＦａｓｔＴｒａｃｋ ｍＲＮＡ単離キット（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）を用いて単離した。Ｔｈ２−特
異的ライブラリーを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ ＰＣＲ−Ｓｅｌｅｃｔ ｃＤＮＡ Ｓ
ｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ
）を用いて、添付のプロトコルに従って作成した。活性化Ｔｈ２細胞由来の２．
０μｇのｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡを、「テスター」として用い、そして活性化Ｔ
ｈ１細胞由来の２．０ μｇのｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡを、「ドライバー」とし
て用いた。得られたライブラリー由来のＰＣＲ産物を、ＰＣＲＩＩクローニング
ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）にクローン化し
た。個々のクローン由来のプラスミドＤＮＡを、ナイロンフィルター上にスポッ
トし、そしてＤＮＡを、１．５Ｍ ＮａＣ１、０．５Ｍ ＮａＯＨ、次いで１．
５Ｍ ＮａＣ１、０．５Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ ８．０に連続してフィルターを浸
漬することによって変性させた。一本鎖プローブを、２つの細胞集団に由来する
Ｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡから、32Ｐ標識ｄＣＴＰを用いる逆転写によって調製し
た。Ｔｈ２対Ｔｈ １ｃＤＮＡに対する示差的ハイブリダイゼーションを示すク
ローンを、選択し、そして配列決定した。さらなる分析の際に、ｍ１４１９、ｍ
１０２２、およびｍ１２２８と名付けたｃＤＮＡクローンを、同定した。 （実施例３： ｃＤＮＡクローンｍ１４１９、ｍ１０２２、およびｍ１２２８の
ｍＲＮＡ発現） このライブラリー由来の、得られた３つのマウスｃＤＮＡクローンの各々の示
差的発現を、０．１−１．０ μｇのｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡ、または５．０μ
ｇの総ＲＮＡ（これらは、上記のように分極化したＴｈ１およびＴｈ２細胞の２
つの独立した調整物から精製した）を用いて、標準的技術を使用するノーザンブ
ロット分析（Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉ
ｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ，ＮＹ））によって確認した。各クローンについて、ｃＤＮＡプロー
ブを、標準的な技術（Ｍａｎｉａｔｉｓら、前出）を用いて32Ｐ−ｄＣＴＰで標
識した。クローンｍ１４１９（配列番号１）についてのプローブは、全長ｍ１４
１９ ｃＤＮＡのヌクレオチド２，３１０〜ヌクレオチド３，０００に由来する
領域からなる７１３ｂｐのｃＤＮＡである。クローンｍ１０２２（配列番号３お
よび５）についてのプローブは、全長ｍ１０２２ ｃＤＮＡのヌクレオチド４７
０〜ヌクレオチド９７０に由来する領域からなる４８２ｂｐのｃＤＮＡのもので
ある。クローンｍ１２２８（配列番号７および９）についてのプローブは、完全
長ｍ１２２８ ｃＤＮＡのヌクレオチド８７〜ヌクレオチド１０５１に由来する
領域からなる９６５ｂｐのｃＤＮＡである。
【０１９４】 これらの３つのクローンの各々についてのｍＲＮＡの発現を、（ａ）ＣＤ３／
ＴＣＲ架橋の４８時間後のＴｈ１およびＴｈ２のｍＲＮＡか、または（ｂ）Ｔｈ
１およびＴｈ２集団における、休止細胞ならびにＣＤ３活性化の６ 時間後にお
いて決定した。休止Ｔｈ１およびＴｈ２細胞の両方は、ｍ１４１９ ｍＲＮＡを
発現したが、この転写物をＴｈ２集団において明らかにアップレギュレートし、
かつＴｈ１集団においてダウンレギュレートした。
【０１９５】 これらの３つのクローンのｍＲＮＡの各々についてのｍＲＮＡの発現をまた、
正常な未処置またはＬＰＳ−処置動物由来のマウス組織において分析した。ノー
ザンブロット分析を、以下の組織由来の０．５μｌのｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡを
用いて行った：肝臓、肺、脳、腎臓、心臓、骨格筋、皮膚、骨、リンパ節、脾臓
および胸腺。ｍ１４１９ ｍＲＮＡを、活性化リンパ節、およびより少ない程度
で脳において検出した。クローンｍ１０２２の発現を、正常なマウス組織または
ＬＰＳ処置動物由来の組織のいずれにおいても検出しなかった。
【０１９６】 （実施例４：全長ｃＤＮＡクローニング） ｃＤＮＡライブラリーを、上記の差し引きＴｈ２ライブラリーのために用いた
ものと同じｐｏｌｙ−Ａ＋ ＲＮＡ由来のマウスＴｈ２細胞から調製した。ｃＤ
ＮＡを、ＳａＩＩおよびＮｏｔＩクローニング部位を用いて、λファージ発現ベ
クターであるγＺＩＰＬＯＸ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ
，ＭＤ）にクローン化した。それぞれ、ｍ１４１９、ｍ１Ｏ２２、およびｍ１２
２８ プローブを用いて、同定された転写物に対応するｃＤＮＡを、このライブ
ラリーから単離した。 （実施例５：ｈ１２２８、１０２２、および１４１９の単離） ヒト１２２８クローン（配列番号１１に示すｃＤＮＡ）、ヒト１０２２クロー
ン（配列番号１３に示すｃＤＮＡ）、およびヒト１４１９クローン（配列番号１
５に示すｃＤＮＡ）を、対応するマウスプローブを用いてヒト混合リンパ球ライ
ブラリーをスクリーニングすることによって得た。このライブラリーを作成する
ための材料と方法は、ＲＮＡの供給源を除き、マウスクローンを得るために用い
た方法と同一であった。このライブラリーを、１２２８（配列番号９，ヌクレオ
チド４０−６４２）、１０２２（配列番号５、ヌクレオチド３６〜１４３０）、
または１４１９（配列番号１、ヌクレオチド１２６〜１３０４）のいずれかにつ
いてのマウス遺伝子のコード領域全体を含むプローブを用いてスクリーニングし
た。ハイブリダイゼーションを、４０℃（６５℃の代わりに）にて行い、そして
フィルターを、低ストリンジェンシー下（室温にて、０．５×ＳＳＣ、０．１％
ＳＤＳ）で洗浄した。
【０１９７】 （実施例６：ｍ１２２８クローンのさらなる特徴付け） ｍ１２２８として同定されたマウスクローン（以下ｍＩＣＯＳといわれる）を
、Ｔｈ２免疫応答におけるその役割のさらなる特徴付けのために選択した。
【０１９８】 （材料および方法） （ｍＩＣＯＳの発現） ｍＩＣＯＳ発現の制限パターンを、リアルタイム定量ＰＣＲ分析（Ｔａｑｍａ
ｎTM）を用いて伸長させた。簡単には、オリゴヌクレオチドプローブを、２つの
ＰＣＲプライマー間でｍＩＣＯＳ遺伝子にアニールするように設計した。次いで
、このプローブを、５’末端でＦＡＭ（レポーター色素）で、そして３’末端で
ＴＡＭＲＡ（消光色素）で蛍光標識した。類似のプローブおよびＰＣＲプライマ
ーをｍＧＡＰＤＨについて設計した。この遺伝子についてのプローブは、ＶＩＣ
をレポーター色素として取り込んだ。種々の細胞および組織から作製されたｃＤ
ＮＡと同様に、これらの２つの遺伝子についてのプライマーおよびプローブを含
んだＰＣＲ反応を実行した。ポリメラーゼが反応の間に遺伝子にわたって移動す
るにつれて、これは、各プローブの一方の末端からこの色素を切断し、このこと
により、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ ７７００により測定される蛍光
発光が生じる。次いで、各ｃＤＮＡについて記録された発光を、ｍＧＡＰＤＨの
発現に正規化されたｍＩＣＯＳについての発現のレベルに転換され得る。脾臓Ｃ
Ｄ４、ＣＤ８、およびＣＤ３細胞をネガティブ選択（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）
によって精製した。Ｂ細胞を、ラット抗ＣＤ１９を用いて細胞を標識化し、そし
てラットＩＧ結合ビーズ（ＭＡＣＳ Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ Ｍｉｌｔｅｎｙｉ
Ｂｉｏｔｅｃ，ＣＡ）を用いてこの細胞を分離することによるポジティブ選択
によって単離した。好中球を、チオグリコール酸処理後の腹膜から入手し、そし
てマクロファージを、腹膜細胞の付着性画分として入手した。最後に、好酸球（
９２％純度）を、ＩＬ−５トランスジェニックマウスから入手した腹膜細胞の非
付着性集団として単離した。
【０１９９】 （第１染色体に対するｍＩＣＯＳのマッピング） ｍＩＣＯＳ特異的プライマー（順方向−ＡＡＣＣＴＴＣＴＡＧＴＣＣＴＴＴＧ
ＧＴＣＴＧＣ、配列番号２３；逆方向−ＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＴＧ
、配列番号２４）を使用して、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊおよび野生型のＭｕｓ ｓｐｒ
ｅｔｕｓ ＳＰＲＥＴ／ＥｉＪ株の両方から１５９ｂｐのＰＣＲ産物を増幅した
。一本鎖高次構造多型（ＳＳＣＰ）分析は、Ｃ５７ＢＬ／６ＪおよびＭ．ｓｐｒ
ｅｔｕｓの間の多型を同定した。Ｍ．ｓｐｒｅｔｕｓ対立遺伝子の遺伝的分離を
、（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ×Ｍ．ｓｐｒｅｔｕｓ）×Ｃ５７ＢＬ／６の１８１の子孫
のマッピングパネルをＳＳＣＰによって追跡した。Ｍ．ｓｐｒｅｔｕｓ対立遺伝
子の遺伝的分離パターンを、この戻し交雑パネルにおいてマッピングした３５９
の他の遺伝子座の分離パターンと比較した。ｍＩＣＯＳは、マウス第１染色体に
、マイクロサテライトマーカーＤ１ＭＩＴ４に対しておよそ１６．２±２．７５
ｃＭ遠位で、かつマーカーＤ１ＭＩＴ８に１５．９１±２．７６ｃＭ近位でマッ
ピングした。さらに、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４遺伝子の公開配列から設計し
たＳＳＣＰマーカーを使用して、ｍＩＣＯＳが、この遺伝子マッピングパネル上
でこれらの遺伝子と完全に共分離することが見出された（いずれの組み合わせも
３つの遺伝子全ての間で検出可能でなかった）。
【０２００】 （ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ融合タンパク質の生成） ｍＩＣＯＳの細胞外ドメインを含有するＤＮＡ配列をＰＣＲ増幅し、そしてＣ
Ｄ５シグナル配列およびヒトＩｇＧ１定常領域を含むベクターにクローニングし
た（ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ）。ＣＯＳ細胞を、リポフェクタミンTM（ＧＩＢＣＯ）を
用いて一過的にトランスフェクトし、そして組換えタンパク質をプロテインＡカ
ラムによって精製した。続いて、ＩＣＯＳ−Ｉｇの純度を、クーマシー染色ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥによって評価し、そして９０％より多いことを決定した。ＩＣＯＳ
−Ｉｇの同一性を、理論的トリプシン消化物に対する抽出ゲルバンドから生成し
たトリプシンペプチドを比較することにより、質量分析によってさらに確認した
（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析によるペプチド質量フィンガープリンティング）。
【０２０１】 （トランスフェクタントおよび抗原提示細胞（ＡＰＣ）へのＩＣＯＳ−Ｉｇの
結合） マウスＢ７−１またはＢ７−２を発現するＥＬ−４細胞株を、ＦｃＢｌｏｃｋTM （Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）とのプレインキュベーション後に、１００μｇ／ｍ
ｌのＩＣＯＳ−Ｉｇ、１０μｇ／ｍｌのＣＤ２８−Ｉｇまたは１μｇ／ｍｌのＣ
ＴＬＡ−４−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と、４℃で３０分間インキュベー
トした。ヒトＩｇを、結合についてのネガティブコントロールとして使用した。
次いで、細胞を、ラット抗ヒトＩｇ−ＦＩＴＣとインキュベートし、そして蛍光
を、生存細胞に対してゲートすることにより、フローサイトメトリー（ＦＡＣｓ
ｔａｒ Ｖａｎｔａｇｅ、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）によって決定し
た。さらに、本発明者らは、他で詳細に記載（Ｉｎａｂａら（１９９２）Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．６：１６９３−１７０２）されるように調製したか、または精製
脾臓Ｂ細胞上の骨髄由来樹状細胞へのＩＣＯＳ−Ｉｇの結合を調査した。結合を
、休止細胞上、または可溶性抗ＣＤ４０ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）による活性化
２４時間後に決定した。
【０２０２】 （ｍＩＣＯＳを発現する安定なＪｕｒｋａｔ細胞の生成） Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）においてサブク
ローニングした２μｇ ｍＩＣＯＳ−Ｆｌａｇ ＤＮＡによるエレクトロポレー
ションによってトランスフェクトした。２週間の薬物選択後、高Ｆｌａｇポジテ
ィブ発現細胞をフローサイトメトリー（ＦＡＣｓｔａｒ Ｖａｎｔａｇｅ、Ｂｅ
ｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）によって分別し、サブクローン化し、そして安
定な株を生成した。次いで、ｍＩＣＯＳおよび空ベクター細胞を、ｈＣＤ３およ
びｈＣＤ２８の比較可能な表面発現に基づいて選択した。
【０２０３】 （免疫沈降および免疫ブロッティング） 免疫沈降のために、Ｊｕｒｋａｔ ｍＩＣＯＳ−Ｆｌａｇベクタートランスフ
ェクト細胞および空ベクタートランスフェクト細胞を、未刺激のままで置くか、
または抗ＣＤ２８（１０μｇ／ｍｌ、４Ｂ１０）または抗Ｆｌａｇ ｍＡｂ（１
０μｇ／ｍｌ）で２分間、およびウサギ抗マウス抗体（５μｇ／ｍｌ）で７．５
分間、刺激するかのいずれかを行った。次いで、細胞を、氷冷溶解緩衝液（２０
ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ中に１％Ｔｒｉｔ
ｏｎＸ−１００（ｖ／ｖ）を含有する）中に溶解した。この溶解緩衝液は、１ｍ
Ｍ ＰＭＳＦ、１ｍＭ Ｎａ4ＶＯ3、１０ｍＭ ＮａＦ、および１ｍＭ Ｎａ4
Ｐ2Ｏ7を含有した。溶解物を、氷上で２０分間インキュベートし、その後、１，
５００×ｇで４℃で１５分間遠心分離した。後核溶解物（ｐｏｓｔｎｕｃｌｅａ
ｒ ｌｙｓａｔｅ）を、示されたモノクローナル抗体と共に、４℃で攪拌しなが
ら１時間インキュベートした。溶解緩衝液中で膨張させ、そして洗浄したプロテ
インＡ−セファロースビーズ（３０μｌ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を添加し、そし
て４℃で１時間インキュベートした。ビーズを、氷冷緩衝液中で３回洗浄し、そ
してタンパク質をＳＤＳサンプル緩衝液中で５分間煮沸することによって溶出し
、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、そして免疫ブロッティングのためにニトロセ
ルロースに転写した。このメンブレンを、ＴＢＳ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．６），１５０ｍＭ ＮａＣｌ）中５％乳汁でブロックし、ｐ８５抗血
清とインキュベートした。結合抗体を、増強化学発光（ＥＣＬ、Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ）を用いる西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化抗ウサギ抗体によ
って明らかにした。結果を以下に要約する。
【０２０４】 （脂質キナーゼアッセイ） Ｊｕｒｋａｔ ｍＩＣＯＳ−Ｆｌａｇベクタートランスフェクト細胞および空
ベクタートランスフェクト細胞を、未刺激のままで置くか、または抗ＣＤ２８（
１０μｇ／ｍｌ、４Ｂ１０）または抗Ｆｌａｇ ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）で２
分間、およびウサギ抗マウス抗体（５μｇ／ｍｌ）で７．５分間、刺激するかの
いずれかを行った。次いで、細胞を、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ｖ／ｖ）ベ
ースの溶解緩衝液（プロテアーゼインヒビターおよびホスファターゼインヒビタ
ーを有する）中に溶解し、そして上記のように沈降に供した。免疫複合体を、溶
解緩衝液で３回洗浄し、１００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）（０．５ｍ
ＬｉＣｌを有する）で３回洗浄し、そしてＴＮＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および１ｍＭ ＥＧＴＡ）で２回洗
浄した。脂質キナーゼ反応を、以前に記載（Ｐｒａｓａｄら（１９９４）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２８３４−２８３８）のよう
に、ダイズＰＩリポソームおよびγ［32］ＡＴＰ［２０μＣｉ］を用いてビーズ
上で行った。
【０２０５】 （ｍＩＣＯＳ−ＩｇによるＴエフェクター機能の阻害） エフェクター細胞の活性化におけるｍＩＣＯＳの効果を決定するために、ＣＤ
４細胞を、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞に分化し、次いでマイトマイシンＣ処理
した１×１０5脾臓細胞／ウェルと一緒に９６ウェルプレート（５×１０4／ウェ
ル）中で再活性化し、そしてｈＩｇまたはｍＩＣＯＳ−ＩＧ（１〜１００μｇ／
ｍｌ）のいずれかの存在下で１０μｇ／ｍｌ ＯＶＡペプチドで刺激した。ＩＬ
−４、ＩＬ−５、およびＩＦＮ−γを特異的ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２０６】 （二次Ｔ細胞依存性Ｂ細胞免疫応答） 雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇ）を、４ｍｇミョウバン中の１０μｇ
ＯＶＡで、０日目に足蹠に免疫した。８日目に、マウスを、１００μｇ ＯＶ
Ａ／ミョウバンを皮下投与してブーストした。ＩＣＯＳ−ＩｇまたはヒトＩｇＧ
（１００μｇ／マウス）を、７、８、および９日目に腹腔内注射した。１８日目
に、マウスを採血し、そして抗原特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ１を特異的ＥＬＩＳ
Ａ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって測定した。
【０２０７】 （エアロアレルゲン（ａｅｒｏａｌｌｅｒｇｅｎ）チャレンジについての能動
的免疫プロトコル） 雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇ）を、４ｍｇミョウバン（Ｓｅｒｖａ
、Ｈｅｉｄｅｌｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中の１０μｇのＯＶＡで、０日目お
よび１４日目に腹腔内で免疫した。２１日目に、マウスをエアロゾル化ＯＶＡ（
５０ｍｇ／ｍｌ）で２０分間チャレンジした。コントロールマウスをＯＶＡの代
わりにＰＢＳでチャレンジした。抗原感作およびチャレンジの１時間前、マウス
に１００μｇのＣＴＬＡ−４−Ｉｇ、ＩＣＯＳ−Ｉｇ、またはヒトＩｇを鼻腔内
注射した。４８時間後、気管にカニューレ挿入し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を
行った。細胞遠心分離（Ｃｙｔｏｓｐｉｎ）調製物を調製し、そしてギムザ試薬
で染色し、そして総計２００細胞を標準的な形態学的規準を用いて示差的に計数
した。
【０２０８】 （インビボにおける抗原特異的Ｔ細胞の養子移入） レシピエントの正常Ｂａｌｂ／ｃマウスに、２×１０6のＴｈ１またはＴｈ２
のエフェクター細胞を静脈内注射した。２４時間後、マウスを、２日連続して、
２０分間、オボアルブミン（５０ｍｇ／ｍｌ）のエアロゾルに曝露した。アレル
ゲン曝露の１時間前に、レシピエントマウスを、１００μｇのｍＩＣＯＳ−Ｉｇ
、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ、またはｈＩｇ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）
のいずれかを静脈内注射した。２４時間後、ＢＡＬを実施し、そして洗浄液中の
サイトカインレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。肺を抗原チャレンジの２４
時間後に摘出し、１０％中性緩衝化ホルマリンで膨張させ、そしてパラフィン包
埋した。４ミクロン切片を、２４時間プレハイブリダイズし、その後、35Ｓ標識
ｍＩＣＯＳセンスおよびアンチセンスリボプローブ（１．２×１０６ｃｐｍ／ス
ライド）を添加し、そして一晩ハイブリダイズさせた。スライドを、エマルジョ
ン中に浸漬し、そして２週間曝露し、発色させ、そしてヘマトキシリンで対比染
色した。
【０２０９】 （気道反応性亢進の測定） 最後のエアロゾルチャレンジの２４時間後、Ｔｈ１レシピエントマウスおよび
Ｔｈ２レシピエントマウスにおいて、１分間吸入させた２０ｍｇ／ｍｌのメタコ
リンに応じる全身プレチスモグラフィ（Ｂｕｘｃｏ、ＥＭＫＡ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）によって呼吸圧曲線を記録することによって、気道
反応性亢進を測定した。気道反応性亢進を、強調停止（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐａ
ｕｓｅ；Ｐｅｎｈ）、計算値（これは、気道抵抗性の測定値と相関する）、イン
ピーダンス、および同じマウス中の胸内圧で表した。Ｐｅｎｈ＝（Ｔｅ／ＴＲ１
）×Ｐｅｆ／Ｐｉｆ（Ｔｅ＝呼気時間、Ｔｒ＝緩和時間、Ｐｅｆ＝呼気流ピーク
、Ｐｉｆ＝吸気流ピーク）、これは、他に詳細に記載される（Ｔｓｕｙｕｋｉら
、（１９７７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．９：１６７１−１６７９；Ｈａｍｅｌｍａ
ｎｎら（１９７７）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１
５６：７６６−７７５）。
【０２１０】 （結果および考察） （ｍＩＣＯＳの発現） マウスＩＣＯＳ（ｍＩＣＯＳ）は、ヒト遺伝子に対して６９％の相同性を示す
（図２）。ＣＤ２８（Ｔヘルパーサブセットにおいて比較可能なレベルで発現さ
れる）と異なり、ノーザンブロット分析は、ナイロンマイクロアレイ特異的ハイ
ブリダイゼーションデータを確認し、そしてｍＩＣＯＳが、Ｔｈ２クローンにお
いて構成的に発現されるが、Ｔｈ１クローンでは発現されないことを示した。同
様に、ｍＩＣＯＳは、活性化Ｔｈ１細胞と比較した場合、共通Ｔヘルパー前駆（
Ｔｈｐ）細胞由来のＴｈ２細胞におけるＣＤ３／ＴＣＲ架橋の際に過剰発現され
た。ｍＩＣＯＳは、リアルタイム定量ＰＣＲ分析（ＴａｑｍａｎTM、Ｐｅｒｋｉ
ｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて決定されるように、Ｂ細胞、休止ＣＤ４、ＣＤ８、マ
クロファージ、好中球、または好酸球によって発現されなかった（図４）。一本
鎖高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）を用いて、ｍＩＣＯＳは、第１染色体にマッピ
ングした。これは、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４と共分離し、ＩＣＯＳがＣＤ２
８ファミリーの第三のメンバーを表すという要求をさらに支持する。
【０２１１】 （ＩＣＯＳは、活性化Ｂ細胞および樹状細胞上の非Ｂ７対レセプター（ｃｏｕ
ｎｔｅｒｒｅｃｅｐｔｏｒ）に結合する） ｍＩＣＯＳは、そのヒト対応物と同様に、１１４位から１１９位にＦＤＰＰＰ
Ｆモチーフを有する。これは、ＣＤ２８とＣＴＬＡ−４との両方において見出さ
れる推定Ｂ７ ＭＹＰＰＰＹ結合ドメインの代わりとなる。しかし、ＣＤ２８と
ｍＩＣＯＳとの間の相同性にも関わらず、ｍＩＣＯＳの細胞外部分およびヒトＩ
ｇＧ１からなる可溶性タンパク質は、ｍＢ７−１またはｍＢ７−２の安定性トラ
ンスフェクト体のいずれに対する結合も示さなかった（図５）。これらの所見は
、ＣＤ２８の推定Ｂ７ ＭＹＰＰＰＹ結合ドメインのチロシン残基の、ｍＩＣＯ
Ｓの対応する１１５位および１１９位でのフェニルアラニンへの変異が、Ｂ７結
合の完全な喪失を生じる以前の報告（Ｋａｒｉｖら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１：２９−３８）を支持する。しかし、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇの推定結合部位
は、ＣＤ４０刺激したＢ細胞において同定されたが、休止Ｂ細胞では同定されず
（図６Ａ）、そして骨髄由来樹状細胞（図６Ｂ）で同定されたが、休止細胞また
は活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞では同定されなかった。
【０２１２】 （ＩＣＯＳおよびＣＤ２８は、いくつかの共通のシグナル伝達機構を共有する
） ｍＩＣＯＳとＣＤ２８とのさらなる比較において、レセプターを、それらが細
胞内シグナル伝達タンパク質と相互作用する能力について比較した。ＣＤ２８は
、ホスホチロシンベースのモチーフ（ｐＹＭＮＭ；これは、ＰＩ−３ＫのＳｒｃ
相同性ドメイン（ＳＨ２ドメイン）についての結合ドメインとして働く）によっ
て、脂質キナーゼホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ−３Ｋ）に結
合することが、以前に示されている（Ｔｒｕｉｔｔら（１９９４）Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．３：１０７１−１０７６；Ｐａｓａｄら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２８３４−２８３８）。ＣＤ２８への結
合の際に、次いで、ＰＩ−３Ｋを形質膜の内側面に隔絶する（ｓｅｑｕｅｓｔｅ
ｒ）。ここで、ＰＩ−３Ｋは、その標的基質に対して作用し得る。ｍＩＣＯＳは
、同様のＹＭＦＭモチーフ（残基１８１〜１８４）を保有し、そして従って、ま
たＰ１−３Ｋのｐ８５サブユニットへの結合について潜在的に適切である。ｍＩ
ＣＯＳの免疫沈降は、ＣＤ２８と同様に、抗ｐ８５免疫ブロッティングによって
検出されるようにＰＩ−３Ｋのｐ８５サブユニットに対応する８５ｋＤａバンド
を同時沈降し、そしてＣＤ２８と同様に、ｍＩＣＯＳ−Ｆｌａｇエピトープを架
橋する際に脂質キナーゼ活性を増大した。ｍＩＣＯＳトランスフェクタントにお
ける細胞質テイル（ｍＩＣＯＳ ｄ１８０Ｃ）の欠失は、ＰＩ−３Ｋ会合および
脂質キナーゼ活性の両方を除去した。これらのデータは、ＣＤ２８およびｍＩＣ
ＯＳがいくつかの共通の下流シグナル伝達エレメントを共有することを示す。し
かし、ＣＤ２８ ｐＹＭＮＭ部位もまた、ＰＩ−３Ｋより１０倍低いとはいえ、
Ｇｒｂ−２のＳＨ２ドメインに結合するので、ｍＩＣＯＳは、Ｇｒｂ−２を補充
できなかった。このことは、１９１位でのアルギニン残基がＧｒｂ−２会合のた
めに必要であるという以前のデータ（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（１９９５）Ｅｕｒ
．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：１０４４−１０５０）を支持する。にもかかわらず
、いくつかの共通のシグナル伝達機構にもかかわらず、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇは、Ｃ
ＴＬＡ−４−Ｉｇとは異なり、いずれの抗原特異的増殖も阻害せず、そして抗原
刺激したナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞からのＩＬ−２分泌に対してわずかな効果のみ
を有した。このことは、ｍＩＣＯＳが、Ｔ細胞活性化におけるＣＤ２８とは異な
る役割を演じることを示唆する（表１）。
【０２１３】 表１．ＩＣＯＳではなくＣＤ２８によるシグナル伝達は、抗原特異的増殖およ
びＩＬ−２産生に必要である。ＣＤ４＋抗原特異的細胞を、ｈＩｇＧ、ＣＴＬＡ
−４−Ｉｇ、またはｍＩＣＯＳ−Ｉｇ（１００μｇ／ｍｌ）のいずれかの存在下
でのＯＶＡペプチド（１０μｇ／ｍｌ）で刺激した。増殖を、3Ｈチミジン取り
込みを用いる刺激後の１日目、２日目、３日目、および４日目に測定した。ＩＬ
−２レベルを、特異的ＥＬＩＳＡによって３日目の上清中で測定した。有意性を
、スチューデントＴ検定によって決定した；ｐ＜０．０５の値を有意であるとみ
なし、そして*によって示す。
【０２１４】
【表１】 （ＩＣＯＳの阻害は、インビトロでＴｈ２サイトカイン産生を減弱する） ＣＴＬＡ−４−Ｉｇを用いるインビトロでの研究は、ＣＤ２８／Ｂ７同時刺激
が、ＩＬ−２産生にだけでなく、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４産生についてナイー
ブなＣＤ４＋Ｔ細胞をプライミングするためにも必要であることを示唆した（Ｓ
ｅｄｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１：２９９−３０４；ＭｃＫｎｉ
ｇｈｔら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：５２２０−５２２５）。しか
し、ＣＤ２８により送達されたシグナルは、近年活性化されたＴヘルパーエフェ
クターサブセットからのＩＦＮ−γまたはＩＬ−４のいずれの最適な分泌につい
ても必要ではない（ＳｃｈｗｅｉｔｚｅｒおよびＳｈａｒｐｅ（１９９８）Ｊ．
Ｉｍｍｕ８ｎｏｌ．６：２７６２−２７７１）。Ｔｈ２エフェクター細胞におけ
るｍＩＣＯＳの過剰発現を考慮すると、ｍＩＣＯＳは、Ｔｈ２エフェクター細胞
に特異的であるが、Ｔｈ１エフェクター細胞には特異的でないＣＤ２８非依存性
同時刺激シグナルを提供し得ると仮定された。
【０２１５】 この問題に取り組むために、Ｔｈ１エフェクター細胞およびＴｈ２エフェクタ
ー細胞を、ＩＬ−１２＋抗ＩＬ−４ｍＡｂおよびＩＬ−４＋抗ＩＬ−１２ｍＡｂ
のそれぞれの影響下で共通の抗原特異的Ｔｈｐ細胞から生成した。ｍＩＣＯＳが
シグナル伝達分子として本質的な役割を演じるか否かを決定するために、膜結合
ｍＩＣＯＳと、その推定リガンドへの結合について直接的に競合し、従ってｍＩ
ＣＯＳシグナル伝達をブロックするｍＩＣＯＳ−Ｉｇ融合タンパク質を用いて、
実験を実施した。ｍＩＣＯＳ−Ｉｇは用量依存様式でＴｈ２細胞からのＩＬ−４
およびＩＬ−５の産生を阻害した（図７Ａ）が、ｈＩＧ処理細胞に比較した場合
（黒棒）、Ｔｈ１エフェクター細胞からのＩＦＮ−γ分泌を改変しなかった（図
７Ｂ）。これらのデータは、ｍＩＣＯＳがＣＤ２８シグナルを有効に置換し、そ
してＴｈ２エフェクター細胞からのサイトカイン産生に特異的な同時刺激シグナ
ルを提供し得ることを示唆する。まとめると、これらのデータは、ＣＤ２８につ
いての代替リガンドの存在を支持しないＣＤ２８遺伝子標的化マウスにおいて生
成された以前の所見（Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ６：５０１
−５０８）を支持し、そして同時にＴｈ２免疫偏向におけるＣＤ２８／Ｂ７軸の
限定された役割（Ｂｒｏｗｎら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．３：８０３−
８１０）を調和させる。
【０２１６】 （ＩＣＯＳによるＴ細胞依存性Ｂ細胞抗体産生の調節） ＣＴＬＡ−４−Ｉｇが、初期Ｔ細胞活性化の時点で投与された場合、インビボ
において多くの免疫応答を阻害するのに有効であるが、一方、いくつかの状況で
は、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ処理の遅延が、有効でないことが報告されている（Ｃｏ
ｒｒｙら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４１４２−４１４８；Ｓａｙｅ
ｇｈら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．５：１８６９−１８７４）。同様に、
ＣＴＬＡ−４−Ｉｇが一次免疫応答の阻害において有効であるが（Ｌｕら（１９
９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：１０７８−１０８７；Ｈａｒｒｉｓら（１
９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１）：３１１−３１６）、いくつ
かの研究は、二次免疫応答が、エフェクター細胞のＢ７非依存性活性化と一致し
て、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇの投与によって完全に抑制され得ないことを示した（Ｔ
ａｎｇら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１１７−１２５；Ｇａｕｓｅら
（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：４０８２−７；Ｈａｒｒｉｓら（１
９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１）：３１１−３１６）。
【０２１７】 ＩＣＯＳはエフェクター応答を調節し得るか否かに取り組むために、ＩＣＯＳ
−Ｉｇ融合タンパク質を用いる一連のインビボ実験を行った。最初に、二次免疫
応答におけるＩＣＯＳのＴ細胞依存性Ｂ細胞抗体産生の寄与を、可溶性抗原／ア
ジュバント免疫後に抗原特異的抗体を測定することにより研究した。ＩＣＯＳ−
Ｉｇの投与は、抗原特異的ＩｇＥの顕著な減弱を生じ、そしてＩｇＧ１レベルを
約１０倍穏やかに減少した（図８）。ＩｇＥ／ＩｇＧ１の産生がＩＬ−４によっ
て調節されるので（Ｓｎａｐｐｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７
：１８３−１９６；Ｆｉｎｋｅｌｍａｎら（１９９０）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．８：３０３−３３３；Ｋｏｐｆら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ １８
：３６２、２４５−２４８）、これらのデータは、ＩＣＯＳがＴ細胞依存性体液
性免疫応答を調節し得る、一番目のインビボの証拠を提供する。
【０２１８】 （ＩＣＯＳ−Ｉｇによる肺粘膜炎症の減弱） 感作したマウスのアレルゲン誘発は、Ｔｈ２依存性肺炎応答を生じる。ＣＴＬ
Ａ−４Ｉｇは、気道の好酸球炎症、それに続くエアロアレルゲン誘発（Ｔｓｕｙ
ｕｋｉら（１９９７）ＨＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．９：１６７１−１６７９）および
その他（Ｐａｄｒｉｄら（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．４：４５３−４６２；Ｋｅａｎｅ−Ｍｙｅｒｓら（１９９７）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：２０４２−２０４９）によって特徴付けられる肺粘
膜免疫応答を阻害し得ることが、以前に報告されている。ＩＣＯＳおよびＣＤ２
８の役割を直接比較するために、ＩＣＯＳ−ＩｇまたはＣＴＬＡ−４−Ｉｇのい
ずれかを、アレルゲンチャレンジの１時間前に、肺に直接投与した。次いで、肺
炎の程度を、気管支肺胞洗浄液の細胞組成の分析によって測定した。これらの環
境下では、ＩＣＯＳ−Ｉｇは、気道炎症の抑制においてＣＴＬＡ−４−Ｉｇと少
なくとも同程度に有効であり、好酸球の数は７０％より多く減少した（図９）。
粘膜炎症のこの活性モデルの複雑度および関係している異なる経路の数（概説と
して、ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＣｏｙｌｅ（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１５：３２４−３３２；Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ（１９９９
）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：２５５−２８１）のために、イン
ビトロで生成した抗原特異的細胞の活性化によりもっぱら媒介される、インビボ
の肺粘膜免疫応答へのｍＩＣＯＳの寄与は、肺粘膜免疫のＴｈ１およびＴｈ２細
胞養子移入モデルにおいて取り組まれた（Ｃｈｏｎら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１０：１７３７−１７４７）。抗原特異的Ｔｈ１またはＴｈ２を輸液さ
れたマウスのエアロアレルゲン誘発は、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−５のいずれかお
よびＩＬ−４の分泌に至り、そしてそれぞれ、好中球または好酸球のいずれかの
肺粘膜炎症応答と関連する（Ｃｈｏｎら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１０
：１７３７−１７４７）。ｍＩＣＯＳアンチセンスリボプローブを用いるインサ
イチュハイブリダイゼーションは、Ｔｈ２の抗原チャレンジ後に肺においてｍＩ
ＣＯＳおよびｍＲＮＡの顕著な誘導を明らかにしたが、Ｔｈ１レシピエントマウ
スでは見られなかった。ＯＶＡ曝露Ｔｈ２レシピエントマウスにおけるｍＩＣＯ
Ｓ−Ｉｇの全身投与は、ＩＬ−５の産生を阻害し、そして気道の好酸球炎症を８
０％より多く顕著に抑制した（図１０Ｂ）。著しく対照的に、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ
の阻害は、ＩＦＮ−γ分泌またはＴｈ１媒介好中球肺炎のいずれかによって明ら
かにされるように、Ｔｈ１エフェクター応答を改変しなかった（図１０Ａ）。こ
れらのデータは、ＩＣＯＳを選択的に阻害することは、アレルギー性肺粘膜炎症
応答の間の抗原特異的Ｔｈ２エフェクター細胞の活性化の病理学的結果を排除し
、しかし、Ｔｈ１エフェクター細胞ではそうでないことを示唆する。対照的に、
ＣＴＬＡ−４−Ｉｇの投与は、Ｔｈ１およびＴｈ２媒介炎症とサイトカイン産生
との両方を阻害した。後者は、抑制に対してＴｈ１媒介炎症よりも感受性である
。
【０２１９】 （ＩＣＯＳは、Ｔｈ２媒介の気道応答性の改変に重要であるが、Ｔｈ１媒介で
はそうではない） 非特異的刺激（例えば、メタコリン）に対する気道反応性亢進は、気管支ぜん
息の特徴的な性質である。長期の（７〜１０日）エアロアレルゲンは、Ｔｈ２レ
シピエントマウスにおいてのみ気道反応性亢進を生じており（Ｃｏｈｎら（１９
９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１０：１７３７−１７４７）、一方、急性エアロチ
ャレンジ（２日）は、劇的なＴｈ１細胞媒介気道反応性亢進を生じ、そしてより
低い程度でＴｈ２媒介気道反応性亢進を生じる（それぞれ図１１Ａおよび１１Ｂ
）。ＩＬ−１３がＴｈ２依存性気道反応性亢進を媒介するという証拠が出現して
おり（Ｃｏｈｎら（１９９７）前出；Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐｓら（１９９８）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２８２：２２５８−２２６１）、一方、以前の研究は、ＬＰＳへ
の気道の曝露が、肺における好中球蓄積を生じ、これがまた、ＩＬ−４、ＩＬ−
５、またはＩＬ−１３のいずれかの不在下での気道反応性亢進を（Ｌｅｆｏｒｔ
ら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４７４−４８０）、および好酸球
炎症を生じることを示したが、このＴｈ１媒介肺炎の基礎となる機構は不明であ
る。関与する正確な機構が何であれ、この系は、吸入メタコリンに対する気道応
答性におけるＴｈ１およびＴｈ２媒介変化へのＣＤ２８／ＩＣＯＳの相対的寄与
を分析するために使用されている。ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ処置は、Ｔｈ１およびＴ
ｈ２媒介炎症に対するＣＤ２８の遮断の効果と一致して、Ｔｈ１およびＴｈ２の
両方の媒介の高められた気道感受性を抑制した。対照的に、ＩＣＯＳ−Ｉｇは、
Ｔｈ１媒介気道反応性亢進のいかなる抑制効果もなく、Ｔｈ２細胞媒介気道反応
性亢進のみを抑制した（図１１）。
【０２２０】 これらの研究は、誘導性ＩＣＯＳ遺伝子によって媒介されるＴｈ２サブセット
特異的同時刺激の存在についての直接の証拠を提供する。ナイーブＴ細胞のクロ
ーン増殖は、ＣＤ２８の不在下では制限され得るが、エフェクター応答はなお、
最近の所見によって示唆されるように発達し得る。この所見は、アネルギー細胞
においてクローン増殖が制限されるにもかかわらず、Ｔヘルパーエフェクター機
能は妨げられないことを示している（Ｍａｌｖｅｙら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．５：２１６８−２１７７）。ＣＤ２８の不在下で、Ｔｈ２エフェクター
細胞に対するＩＣＯＳ連結（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、ＣＤ２８に対する代替
のシグナル伝達経路として使用されることが提案される。最終的に、これらのデ
ータは、疾患（例えば、喘息およびアレルギー）においてｍＩＣＯＳの抑制を介
して不適当なＴｈ２応答を選択的に弱め、一方、細菌および細胞内寄生生物に対
する防御的Ｔｈ１免疫は完全なままにしておくという治療上の利益を強調する。
【０２２１】 当業者は、本明細書中に記載の本発明の特定の実施態様に対する多くの等価物
を認識するか、または慣用にすぎない実験を用いて確認し得る。このような等価
物は、上述の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【０２２２】 本明細書中で言及した全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する技術分
野の当業者の水準を示す。全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊
行物または特許出願が、詳細にかつ個々に参照によって援用されると示されるの
と同程度に、参照によって本明細書中に援用される。
【０２２３】 前述の発明は、理解を明確にする目的で、説明および例示によって幾分か詳細
に記載されているが、特定の変更および改変が、上述の特許請求の範囲の範囲内
で実施され得ることは明らかである。
【０２２４】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、マウス１０２２（配列番号５）によってコードされるタンパク質（ｍ
１０２２；配列番号６）、およびヒト１０２２（配列番号１３）によってコード
されるタンパク質（ｈ１０２２；配列番号１４）に対する、ＤＮＡポリメラーゼ
のＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ αコアサブユニット（ＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号ＣＡＡ４３２８６、配列番号１７）とのアミノ酸配列のアライメント
を示す。
【図２】 図２は、マウス１２２８（配列番号９）によってコードされるタンパク質（ｍ
ＩＣＯＳといわれる、ｍ１２２８；配列番号１０）、およびヒト１２２８（配列
番号１１）によってコードされるタンパク質（ｈＩＣＯＳといわれる、ｈ１２２
８；配列番号１８）について、マウス糖タンパク質ＣＤ２８前駆体（ｍＣＤ２８
；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＡ３７３９５；配列番号１８）、ヒトＴ細胞特異
的表面糖タンパク質ＣＤ２８前駆体（ｈＣＤ２８；ＳＰ登録番号Ｐ１０７４７；
配列番号１９）、マウス細胞傷害性Ｔ−リンパ球タンパク質４前駆体（ｍＣＴＬ
Ａ−４；ＳＰ登録番号Ｐ０９７９３；配列番号２０）、およびヒト細胞傷害性ｔ
−リンパ球タンパク質４前駆体（ｈＣＴＬＡ−４；ＧＩ登録番号４８８５１６７
；配列番号２１）とのアミノ酸配列アライメントを示す。これらの配列の推定膜
貫通ドメインは、囲みで示される。
【図３】 図３は、マウス１４１９（配列番号１）によってコードされるタンパク質（ｍ
１４１９；配列番号２）、およびヒト１４１９（配列番号１５）によってコード
されるタンパク質（ｈ１４１９；配列番号１６）について、Ｃａｅｎｏｒｈａｂ
ｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ Ｃ５４Ｈ２．１遺伝子産物（配列Ｕ５８７２８番
号１３２６２６８；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＢ００５９０；配列番号２２）
とのアミノ酸配列のアライメントを示す。
【図４】 図４は、休止している白血球および活性化白血球におけるｍＩＣＯＳ発現のリ
アルタイムＰＣＲ分析（ＴａｑｍａｎTM）を示す。
【図５】 図５は、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ（１００μｇ／ｍｌ）（太い実線）が、ｍＢ７−１
またはｍＢ７−２ ＥＬ−４のいずれかのトランスフェクタントに結合し得ない
が、一方、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（１μｇ／ｍｌ）（薄線（ｌｉｇｈｔ ｌｉｎｅ
））およびＣＤ２８０−Ｉｇ（１０μｇ／ｍｌ）（破線）は、１０〜１０００倍
より低い濃度で結合することを実証する。ヒトＩｇで処理した細胞（点線）は、
比較のために示される。
【図６Ａ】 図６は、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ（１０μｇ／ｍｌ）がＣＤ４０活性化に結合するが
、休止していないＢ細胞（Ａ）、および休止しかつＣＤ４０刺激された骨髄由来
樹状細胞（Ｂ）に結合することを実証する。
【図６Ｂ】 図６は、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ（１０μｇ／ｍｌ）がＣＤ４０活性化に結合するが
、休止していないＢ細胞（Ａ）、および休止しかつＣＤ４０刺激された骨髄由来
樹状細胞（Ｂ）に結合することを実証する。
【図７】 図７は、ｍＩＣＯＳシグナル伝達がＴｈ２エフェクター細胞の活性化に重要で
あるが、Ｔｈ１エフェクター細胞には重要ではないことを実証する。ＤＯ１１．
１０αβ−ＴＣＲトランスジェニックマウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔｈ１ま
たはＴｈ２エフェクター集団に分化された。次いで、細胞を、ｍＩＣＯＳ−Ｉｇ
（１〜１００μｇ／ｍｌ）（白四角）またはｈＩｇ（閉鎖バー）の存在下で再び
活性化された。データは、三連ウェルの平均±ｓ．ｅ．ｍ．差として示され、そ
して４つの異なる実験を表す。
【図８】 図８は、ＩＣＯＳ−Ｉｇによる液性応答の阻害を実証する。マウスは、０日目
にＯＶＡ／ミョウバンを用いてフットパッドに免疫され、８日目に皮下でブース
トされた。１０日後に、血液を、尾静脈から採取し、そして抗原特異的ＩｇＥ（
Ａ）およびＩｇＧ１（Ｂ）の血清力価が、特異的ＥＬＩＳＡによって測定された
。マウスは、７日目、８日目、および９日目に、ＩＣＯＳ−Ｉｇ（１００μｇ／
マウス）（黒四角）または適切なコントロールとしてのｈＩｇ（白四角）を用い
て腹腔内処置された。データは、血清の系列希釈にて、平均±ｓ．ｅ．ｍ．の吸
光度（Ｏ．Ｄ．）として示され、そしてｎ＝５〜６の個々の動物からのデータを
表す。
【図９】 図９は、ＩＣＯＳ−ＩｇおよびＣＴＬＡ−４Ｉｇによる能動的な免疫モデルに
おける気道の好酸性炎症の阻害を実証する。アレルゲンチャレンジの１時間前に
、免疫したマウスは、ＩＣＯＳ−Ｉｇ（白柱）、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（影付柱）
または適切なアイソタイプコントロールとしてのｈＩｇ（黒柱）のいずれかを１
００μｇ用いて鼻腔内に処置した。データは、ｎ＝５の動物について、１ｍｌあ
たりの平均±ｓ．ｅ．ｍ．の好酸球×１０3として示される。統計学的な有意性
（ｐ＜０．０５）は、スチューデントＴ検定によって決定され、そして*によっ
て示される。
【図１０Ａ】 図１０は、ｍＩＣＯＳ−ＩｇによるＴｈ２媒介性粘膜炎症の減衰作用を実証す
るが、Ｔｈ１媒介性粘膜炎症の減衰作用を実証しない。養子移入後のＴｈ１（Ａ
）またはＴｈ２（Ｂ）レシピエントのエアロアレルゲン（ａｅｒｏａｌｌｅｒｇ
ｅｎ）チャレンジは、それぞれ、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−５分泌と関連した好中
球性応答または好酸球性応答を生じる。ｍＩＣＯＳ−ＩｇまたはＣＴＬＡ−４−
Ｉｇ（白いバー）での予備処置は、Ｔｈ２媒介性炎症を阻害した。対照的に、Ｉ
ＣＯＳ−ＩｇではなくＣＴＬＡ−４−Ｉｇは、ｈＩｇで処置したマウス（黒いバ
ー）と比較して、Ｔｈ１媒介性炎症を阻害した。データは、ｎ−４〜６のマウス
の平均±ｓ．ｅ．ｍ．として示され、そして３つの異なる実験を表す。有意性（* ）は、スチューデントＴ検定によって決定され、そしてｐ＜０．０５の値が、
有意であるとみなされた。
【図１０Ｂ】 図１０は、ｍＩＣＯＳ−ＩｇによるＴｈ２媒介性粘膜炎症の減衰作用を実証す
るが、Ｔｈ１媒介性粘膜炎症の減衰作用を実証しない。養子移入後のＴｈ１（Ａ
）またはＴｈ２（Ｂ）レシピエントのエアロアレルゲン（ａｅｒｏａｌｌｅｒｇ
ｅｎ）チャレンジは、それぞれ、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−５分泌と関連した好中
球性応答または好酸球性応答を生じる。ｍＩＣＯＳ−ＩｇまたはＣＴＬＡ−４−
Ｉｇ（白いバー）での予備処置は、Ｔｈ２媒介性炎症を阻害した。対照的に、Ｉ
ＣＯＳ−ＩｇではなくＣＴＬＡ−４−Ｉｇは、ｈＩｇで処置したマウス（黒いバ
ー）と比較して、Ｔｈ１媒介性炎症を阻害した。データは、ｎ−４〜６のマウス
の平均±ｓ．ｅ．ｍ．として示され、そして３つの異なる実験を表す。有意性（* ）は、スチューデントＴ検定によって決定され、そしてｐ＜０．０５の値が、
有意であるとみなされた。
【図１１Ａ】 図１１は、ＩＣＯＳ−Ｉｇによる気道の応答性亢進のＴｈ２に媒介される変化
の選択的抑制を実証する。（Ａ）Ｔｈ１レシピエントマウスおよび（Ｂ）Ｔｈ２
レシピエントマウスの両方にＯＶＡを曝すことは、ＰＢＳに曝されたマウスと比
較して、メタコリン（２０ｍｇ／ｍｌ）に対する気道の応答性亢進の増大を生じ
る。ベースラインの応答は、白いバーで示され、そして吸入したメタコリンに対
する最大応答は、黒いバーで示される。有意性（＃）は、スチューデントＴ検定
によって決定され、そしてｐ＜０．０５の値が、有意であるとみなされた。コン
トロールマウスは、適切なアイソタイプコントロールとしてｈＩｇを受けた。デ
ータは、ｎ＝３〜６のマウスの平均±ｓ．ｅ．ｍ．として示され、そして２つの
異なる実験を表す。ＩｇＩｇ処置したマウスからの有意性（*）は、スチューデ
ントＴ検定によって決定され、そしてｐ＜０．０５の値が、有意であるとみなさ
れた。
【図１１Ｂ】 図１１は、ＩＣＯＳ−Ｉｇによる気道の応答性亢進のＴｈ２に媒介される変化
の選択的抑制を実証する。（Ａ）Ｔｈ１レシピエントマウスおよび（Ｂ）Ｔｈ２
レシピエントマウスの両方にＯＶＡを曝すことは、ＰＢＳに曝されたマウスと比
較して、メタコリン（２０ｍｇ／ｍｌ）に対する気道の応答性亢進の増大を生じ
る。ベースラインの応答は、白いバーで示され、そして吸入したメタコリンに対
する最大応答は、黒いバーで示される。有意性（＃）は、スチューデントＴ検定
によって決定され、そしてｐ＜０．０５の値が、有意であるとみなされた。コン
トロールマウスは、適切なアイソタイプコントロールとしてｈＩｇを受けた。デ
ータは、ｎ＝３〜６のマウスの平均±ｓ．ｅ．ｍ．として示され、そして２つの
異なる実験を表す。ＩｇＩｇ処置したマウスからの有意性（*）は、スチューデ
ントＴ検定によって決定され、そしてｐ＜０．０５の値が、有意であるとみなさ
れた。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/04 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ ４Ｃ０８４ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｑ 1/02 ４Ｃ０８５ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ０７Ｋ 16/18 33/50 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ｂ // Ｃ０７Ｋ 16/18 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ０９／４１３，１３６ (32)優先日 平成11年10月６日(1999．10．6) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 マニング， ステファン アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02474， アーリントン， アパートメン ト エム５， ミスティック ストリート 151 (72)発明者 コイル， アンソニー ジェイ． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02116， ボストン， クラレンドン ス トリート 30 (72)発明者 グティエルレツ−ラモス， ホセ−カルロ ス アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01907， スワンプスコット， リトルズ ポイント ロード 31 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA36 FB03 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 CA09 HA14 HA17 4B063 QA18 QQ79 QR48 QR77 QX02 4B064 AG31 CA19 DA08 DA13 4B065 AA92Y AA94Y CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 BA22 CA18 DA12 DA16 DA17 NA14 ZA591 ZB051 ZB071 ZB111 ZB212 ZC412 4C085 AA13 AA14 BB07 BB23 CC03 DD62 EE01 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA42 DA01 EA29 EA52 FA74

Claims (19)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番
    号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５のヌクレオチド配列、受託番
    号２０３３０２としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサート、
    受託番号２０３５６９としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサ
    ート、受託番号２０３７９７としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡ
    インサートを含む単離された核酸分子、またはその相補体。
  2. 【請求項２】 ベクターの核酸配列をさらに含む、請求項１に記載の単離さ
    れた核酸分子。
  3. 【請求項３】 異種ポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、請求
    項１に記載の単離された核酸分子。
  4. 【請求項４】 請求項１に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
  5. 【請求項５】 哺乳動物細胞である、請求項４に記載の宿主細胞。
  6. 【請求項６】 請求項１に記載の核酸分子を含む、非ヒト哺乳動物宿主細胞
    。
  7. 【請求項７】 配列番号１４のアミノ酸配列または受託番号２０３５６９と
    してＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされる
    アミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
  8. 【請求項８】 異種アミノ酸配列をさらに含む、請求項７に記載のポリペプ
    チド。
  9. 【請求項９】 配列番号１４のアミノ酸配列または受託番号２０３５６９と
    してＡＴＣＣに寄託されるプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされる
    アミノ酸配列を含むポリペプチドを生成するための方法であって、該方法は、配
    列番号１３のヌクレオチド配列または受託番号２０３５６９としてＡＴＣＣに寄
    託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートを含む核酸分子を含む宿主細胞を、該
    核酸分子が発現される条件下で培養する工程を包含する、方法。
  10. 【請求項１０】 サンプルにおける請求項７に記載のポリペプチドの存在を
    検出するための方法であって、該方法は、 ａ）サンプルと、請求項７に記載のポリペプチドに選択的に結合する化合物と
    を接触させる工程；および ｂ）該化合物が、該サンプル中の該ポリペプチドに結合するか否かを決定する
    工程、 を包含する、方法。
  11. 【請求項１１】 前記ポリペプチドに結合する前記化合物が、抗体である、
    請求項１０に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 請求項７に記載のポリペプチドに結合する化合物を同定す
    るための方法であって、該方法は、 ａ）請求項７に記載のポリペプチドまたはポリペプチドを発現する細胞と、試
    験化合物とを接触させる工程；および ｂ）該ポリペプチドが該試験化合物に結合するか否かを決定する工程、 を包含する、方法。
  13. 【請求項１３】 前記試験化合物のポリペプチドに対する結合が、 ａ）試験化合物／ポリペプチドの結合の直接検出による結合の検出； ｂ）競合結合アッセイを用いる、結合の検出； ｃ）Ｔｈ２特異的媒介シグナル伝達についてのアッセイを用いる、結合の検出
    、 からなる群より選択される方法により検出される、請求項１２に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 請求項７に記載のポリペプチドの活性を調節するための方
    法であって、該方法は、該ポリペプチドまたは該ポリペプチドを発現する細胞と
    、該ポリペプチドの活性を調節するに十分な濃度で該ポリペプチドに結合する化
    合物とを接触させる工程を包含する、方法。
  15. 【請求項１５】 請求項７に記載のポリペプチドの活性を調節する化合物を
    同定する方法であって、該方法は、 ａ）請求項７に記載のポリペプチドと、試験化合物とを接触させる工程；およ
    び ｂ）該ポリペプチドの活性に対する該試験化合物の効果を決定し、それにより
    該ポリペプチドの活性を調節する化合物を同定する工程、 を包含する、方法。
  16. 【請求項１６】 哺乳動物におけるＴｈ２応答を調節するための方法であっ
    て、該方法は、治療的に有効な量のポリペプチドまたは対応する抗体を該哺乳動
    物に投与する工程を包含し、ここで、該ポリペプチドが、 ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、または配列番号１６のアミノ酸配列を含むポリペプチ
    ドのフラグメントであって、ここで該フラグメントが、配列番号２、配列番号４
    、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、また
    は配列番号１６に記載の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含むフラグメント
    である、フラグメント; ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、配列番号１６のアミノ酸配列、受託番号２０３３０２
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列、受託番号２０３５６９としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミド
    のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列、受託番号２０３７９７
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列を含む、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体であっ
    て、ここで、該ポリペプチドが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番
    号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５を含む核酸に、
    またはストリンジェントな条件下でその相補体にハイブリダイズする核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体；ならびに ｃ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番
    号１１、配列番号１３、配列番号１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子、また
    はその相補体に少なくとも４５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチド、 からなる群より選択される、方法。
  17. 【請求項１７】 哺乳動物における免疫応答を調節するための方法であって
    、該方法は、前記ポリペプチドもしくは該ポリペプチドに対応する抗体の治療的
    に有効な量を該哺乳動物に投与する工程、または該ポリペプチドをコードするヌ
    クレオチド配列の哺乳動物における発現を調節する工程により、該哺乳動物にお
    けるポリペプチドの活性を変化させる工程を包含し、ここで該ポリペプチドは、 ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、または配列番号１６のアミノ酸配列を含むポリペプチ
    ドのフラグメントであって、ここで該フラグメントが、配列番号２、配列番号４
    、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、また
    は配列番号１６に記載の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含むフラグメント
    である、フラグメント; ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、配列番号１６のアミノ酸配列、受託番号２０３３０２
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列、受託番号２０３５６９としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミド
    のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列、受託番号２０３７９７
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列を含む、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体であっ
    て、ここで、該ポリペプチドが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番
    号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５を含む核酸に、
    またはストリンジェントな条件下でその相補体にハイブリダイズする核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体；ならびに ｃ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番
    号１１、配列番号１３、配列番号１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子、また
    はその相補体に少なくとも４５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチド、 からなる群より選択される、方法。
  18. 【請求項１８】 哺乳動物における気道の炎症を抑制するための方法であっ
    て、該方法は、前記ポリペプチドに対応する抗体の治療的に有効な量を該哺乳動
    物に投与する工程、または該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の該哺
    乳動物における発現を調節する工程により、該哺乳動物におけるポリペプチドの
    活性を変化させる工程を包含し、ここで該ポリペプチドは、 ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、または配列番号１６のアミノ酸配列を含むポリペプチ
    ドのフラグメントであって、ここで該フラグメントが、配列番号２、配列番号４
    、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、また
    は配列番号１６に記載の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含むフラグメント
    である、フラグメント; ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、配列番号１６のアミノ酸配列、受託番号２０３３０２
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列、受託番号２０３５６９としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミド
    のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列、受託番号２０３７９７
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列を含む、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体であっ
    て、ここで、該ポリペプチドが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番
    号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５を含む核酸に、
    またはストリンジェントな条件下でその相補体にハイブリダイズする核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体；ならびに ｃ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番
    号１１、配列番号１３、配列番号１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子、また
    はその相補体に少なくとも４５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチド、 からなる群より選択される、方法。
  19. 【請求項１９】 哺乳動物における気道の応答性亢進を抑制するための方法
    であって、該方法は、前記ポリペプチドに対応する抗体の治療的に有効な量を該
    哺乳動物に投与する工程、または該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
    の該哺乳動物における発現を調節する工程により、該哺乳動物におけるポリペプ
    チドの活性を変化させる工程を包含し、ここで該ポリペプチドは、 ａ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、または配列番号１６のアミノ酸配列を含むポリペプチ
    ドのフラグメントであって、ここで該フラグメントが、配列番号２、配列番号４
    、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、また
    は配列番号１６に記載の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含むフラグメント
    である、フラグメント; ｂ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列
    番号１２、配列番号１４、配列番号１６のアミノ酸配列、受託番号２０３３０２
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列、受託番号２０３５６９としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミド
    のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列、受託番号２０３７９７
    としてＡＴＣＣに寄託されたプラスミドのｃＤＮＡインサートによりコードされ
    るアミノ酸配列を含む、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体であっ
    て、ここで、該ポリペプチドが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番
    号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５を含む核酸に、
    またはストリンジェントな条件下でその相補体にハイブリダイズする核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体；ならびに ｃ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番
    号１１、配列番号１３、配列番号１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子、また
    はその相補体に少なくとも４５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸分子に
    よりコードされる、ポリペプチド、 からなる群より選択される、方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP3521382B2 (ja) 1997-02-27 2004-04-19 日本たばこ産業株式会社 細胞間接着及びシグナル伝達を媒介する細胞表面分子
US7112655B1 (en) 1997-02-27 2006-09-26 Japan Tobacco, Inc. JTT-1 protein and methods of inhibiting lymphocyte activation
DE19821060A1 (de) * 1997-09-23 1999-04-15 Bundesrepublik Deutschland Let Ko-stimulierendes Polypeptid von T-Zellen, monoklonale Antikörper sowie die Herstellung und deren Verwendung
JP3871503B2 (ja) 1999-08-30 2007-01-24 日本たばこ産業株式会社 免疫性疾患治療剤
JP4210454B2 (ja) 2001-03-27 2009-01-21 日本たばこ産業株式会社 炎症性腸疾患治療剤
JP3597140B2 (ja) 2000-05-18 2004-12-02 日本たばこ産業株式会社 副刺激伝達分子ａｉｌｉｍに対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途
CN101498731A (zh) * 2000-05-18 2009-08-05 日本烟草产业株式会社 抗协同刺激信号转导分子ailim的人单克隆抗体及其药物用途
CN101255192A (zh) * 2000-05-26 2008-09-03 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 可溶性ctla4突变体分子及其应用
ES2536653T3 (es) * 2000-11-28 2015-05-27 Amgen Inc. Polipéptidos implicados en la respuesta inmunitaria
JP4212278B2 (ja) 2001-03-01 2009-01-21 日本たばこ産業株式会社 移植片拒絶反応抑制剤
CA2497661A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-25 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis of immune related diseases using pro71061
EP1618132A2 (en) * 2003-04-29 2006-01-25 Genentech, Inc. Composition and methods for the treatment of immune disorders
EP1740617B1 (en) 2004-04-23 2013-10-16 BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND letztvertreten durch das Robert Koch-Institut vertreten durch seinen Präsidenten Method for the treatment of t cell mediated conditions by depletion of icos-positive cells in vivo
MA41414A (fr) 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5783182A (en) * 1996-01-30 1998-07-21 Baylor College Of Medicine Method for identifying metastatic sequences
DE69734141T2 (de) * 1996-06-05 2006-07-13 Bml Inc. PROTEIN, DAS FÜR MENSCHLICHE Th2-ZELLEN SPEZIFISCH IST, DAFÜR KODIERENDES GEN UND KORRESPONDIERENDE TRANSFORMANTE, REKOMBINANTER VEKTOR UND MONOKLONALER ANTKÖRPER
JP3521382B2 (ja) * 1997-02-27 2004-04-19 日本たばこ産業株式会社 細胞間接着及びシグナル伝達を媒介する細胞表面分子
US6190909B1 (en) * 1997-04-17 2001-02-20 Millennium Pharmaceuticals, Inc. TH2-specific gene
DE19821060A1 (de) * 1997-09-23 1999-04-15 Bundesrepublik Deutschland Let Ko-stimulierendes Polypeptid von T-Zellen, monoklonale Antikörper sowie die Herstellung und deren Verwendung
US7259247B1 (en) * 1997-09-23 2007-08-21 Bundersrespublik Deutschaland Letztvertreten Durch Den Direktor Des Robert-Koch-Institutes Anti-human T-cell costimulating polypeptide monoclonal antibodies

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012050440A (ja) * 2011-09-16 2012-03-15 Chiba Univ ヒトＴｈ１／Ｔｈ２分化誘導の評価方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA2346496A1 (en) 2000-04-13
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