JP2003525634A - Ｆｃｔｒｘと命名されたタンパク質およびこれをコードする核酸 - Google Patents

Ｆｃｔｒｘと命名されたタンパク質およびこれをコードする核酸

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amino acid
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protein
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コリーヌ アー． エム． ヴェルネ，
エルマ フェルナンデス，
リチャード エイ． シムケッツ，
ジョン エル． ハールマン，
クムド マジュンダー，
ジョン マクドウガル，
ビシュヌ ミシュラ，
ピーター エス． ミジズ，
ルカ ラステリ，
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キュラジェン コーポレイション
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Abstract

(57)【要約】 ポリペプチドをコードする新規のヒト核酸配列が、本明細書中に開示される。これらの核酸配列によってコードされるポリペプチド、およびこのポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、ならびに上述のポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体の誘導体、改変体、変異体、またはフラグメントがまた、開示される。本発明は、これらの新規のヒト核酸およびタンパク質のいずれか１つに関与する障害の診断、処置、および予防のための治療方法、診断方法および研究方法をさらに開示する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の背景） 本発明は、一般に、ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、そしてベクター、
宿主細胞ならびにこれらの核酸およびポリペプチドを生成するための組換え方法
に関する。
【０００２】 （発明の要旨） 本発明は、新規ポリペプチドをコードする新規核酸配列の発見に一部基づく。
開示されたＦＣＴＲ１、ＦＣＴＲ２、ＦＣＴＲ３、ＦＣＴＲ４、ＦＣＴＲ５、Ｆ
ＣＴＲ６およびＦＣＴＲ７核酸およびこれらにコードされるポリペプチドならび
にそれらの誘導体、ホモログ、アナログおよびフラグメントは、本明細書中以降
、まとめて、「ＦＣＴＲＸ」核酸またはポリペプチド配列と称する。
【０００３】 １つの局面において、本発明は、ＦＣＴＲＸポリペプチドをコードする単離さ
れたＦＣＴＲＸ核酸分子を提供し、これは、配列番号１、３、５、７、９、１０
、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２および２４に開示される核酸に対
して同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、このＦＣＴ
ＲＸ核酸分子は、ＦＣＴＲＸ核酸配列のタンパク質コード配列を含む核酸分子に
相補的な核酸配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。本発明
はまた、ＦＣＴＲＸポリペプチド、あるいはそのフラグメント、ホモログ、アナ
ログまたは誘導体をコードする、単離された核酸を包含する。例えば、この核酸
は、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３および２５
のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して少なくとも８０％同一であるポリペ
プチドをコードし得る。この核酸は、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１
０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２および２４のいずれかの核酸配
列を含む、ゲノムＤＮＡフラグメントまたはｃＤＮＡ分子であり得る。
【０００４】 オリゴヌクレオチド（例えば、ＦＣＴＲＸ核酸（例えば、配列番号１、３、５
、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２および２４）の少
なくとも６個連続するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドまたはそのオリゴ
ヌクレオチドの相補体）もまた、本発明に含まれる。
【０００５】 実質的に精製されたＦＣＴＲＸポリペプチド（配列番号２、４、６、８、１３
、１５、１７、１９、２１、２３および２５）もまた、本発明に含まれる。特定
の実施形態において、このＦＣＴＲＸポリペプチドは、ヒトＦＣＴＲＸポリペプ
チドのアミノ酸配列に実質的に同一であるアミノ酸配列を含む。
【０００６】 本発明はまた、ＦＣＴＲＸポリペプチド、あるいはそれらのフラグメント、ホ
モログ、アナログまたは誘導体に免疫選択的に結合する抗体を特徴とする。
【０００７】 別の局面において、本発明は、治療有効量または予防有効量の治療剤および薬
学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を包含する。この治療剤は、例
えば、ＦＣＴＲＸ核酸、ＦＣＴＲＸポリペプチド、またはＦＣＴＲＸポリペプチ
ドに特異的な抗体であり得る。さらなる局面において、本発明は、１以上の容器
に、この薬学的組成物の治療有効量または予防有効量を含む。
【０００８】 さらなる局面において、本発明は、ポリペプチドを産生する方法を包含し、こ
の方法は、ＦＣＴＲＸ核酸を含む細胞を、このＤＮＡによってコードされるＦＣ
ＴＲＸポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養することによる。所望の場
合、次いで、このＦＣＴＲＸポリペプチドを回収し得る。
【０００９】 別の局面において、本発明は、サンプル中のＦＣＴＲＸポリペプチドの存在を
検出する方法を包含する。この方法において、サンプルを、このポリペプチドに
選択的に結合する化合物と、このポリペプチドとこの化合物との間での複合体の
形成を可能にする条件下で接触させる。この複合体は、存在するならば、検出さ
れ、それによって、このサンプル中のＦＣＴＲＸポリペプチドを同定する。
【００１０】 本発明はまた、ＦＣＴＲＸの発現に基づいて特定の細胞型または組織型を同定
するための方法を包含する。
【００１１】 サンプル中のＦＣＴＲＸ核酸分子の存在を検出する方法もまた本発明に包含さ
れ、この方法は、このサンプルに、ＦＣＴＲＸ核酸プローブまたはプライマーを
接触させ、そしてこの核酸プローブまたはプライマーが、このサンプル中のＦＣ
ＴＲＸ核酸分子に結合したか否かを検出することによる。
【００１２】 さらなる局面において、本発明は、ＦＣＴＲＸポリペプチドの活性を調節する
ための方法を提供し、この方法は、このＦＣＴＲＸポリペプチドを含む細胞サン
プルに、このＦＣＴＲＸポリペプチドに結合する化合物を、このポリペプチドの
活性を調節するに十分な量で接触させることによる。この化合物は、例えば、本
明細書中にさらに記載されるような、低分子（例えば、核酸、ペプチド、ポリペ
プチド、ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）、炭水化物、脂質ま
たは他の有機分子（炭素含有）または無機分子）であり得る。
【００１３】 以下を含む障害または症候群を処置または予防するための医薬の製造における
治療剤の使用もまた、本発明の範囲内にある：例えば、結腸直腸癌、線腫様結腸
ポリポーシス、骨髄性白血病、先天性新生児（ｃｅｏｎａｔａｌ）同種免疫性血
小板減少症、多発性ヒト充実性（ｓｏｌｉｄ）悪性疾患、悪性卵巣腫瘍（特に、
上皮と間質との間の接触面での）、悪性脳腫瘍、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状
細胞増加症、神経膠腫／星状細胞増加症の混合、腎細胞癌、乳房線種、卵巣癌、
黒色腫、腎細胞癌、明細胞癌および顆粒細胞癌、腫瘍細胞増殖のオートクライン
／パラクリン刺激、細胞傷害性治療に対する腫瘍細胞の生存および腫瘍細胞の耐
性のオートクライン／パラクリン刺激、それによって転移に寄与する実質（ｐａ
ｒａｎｅｃｈｍａｌ）および基底膜浸潤ならびに腫瘍細胞の移動、免疫監視機構
から逃れる腫瘍において生じるＴ細胞媒介免疫エフェクター細胞および経路の腫
瘍媒介免疫抑制、神経学的障害、神経変性障害、神経外傷、家族性脊髄形成異常
症候群、シャルコー‐マリー‐ツース神経障害、脱髄性ガードナー症候群、家族
性脊髄形成異常症候群；精神健康状態、免疫学的障害、アレルギーおよび感染、
喘息、気管支喘息、アベリーノ（Ａｖｅｌｌｉｎｏ）型好酸球増加症、肺疾患、
生殖障害、雄性不妊症、雌性生殖系障害、雄性および雌性の生殖障害、血管腫、
難聴、糖タンパク質Ｉａ欠失、デスモイド疾患、ターコット症候群、肝硬変、Ｃ
型肝炎、胃の障害、糖尿病のような膵臓の疾患、マンソン住血吸虫感染、脊髄小
脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫寄生虫血症、グレーノーＩ型角膜ジストロフ
ィー、格子状Ｉ型角膜ジストロフィー、そしてライス−バックラーズ（Ｒｅｉｓ
−Ｂｕｃｋｌｅｒｓ）角膜ジストロフィー。この治療剤は、例えば、ＦＣＴＲＸ
核酸、ＦＣＴＲＸポリペプチド、またはＦＣＴＲＸ特異的な抗体、あるいは生物
学的に活性なこれらの誘導体およびフラグメントであり得る。
【００１４】 本発明はさらに、例えば、以下を含む障害または症候群のモジュレーターにつ
いてスクリーニングするための方法を包含する。以下を含む疾患または障害の処
置または予防のための医薬の製造における治療剤の使用もまた、本発明の範囲内
にある：結腸直腸癌、線腫様結腸ポリポーシス、骨髄性白血病、先天性新生児同
種免疫性血小板減少症、多発性ヒト充実性悪性疾患、悪性卵巣腫瘍（特に、上皮
と間質との間の接触面での）、悪性脳腫瘍、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状細胞
増加症、神経膠腫／星状細胞増加症の混合、腎細胞癌、乳房線種、卵巣癌、黒色
腫、腎細胞癌、明細胞癌および顆粒細胞癌、腫瘍細胞増殖のオートクライン／パ
ラクリン刺激、細胞傷害性治療に対する腫瘍細胞の生存および腫瘍細胞の耐性の
オートクライン／パラクリン刺激、それによって転移に寄与する実質および基底
膜浸潤ならびに腫瘍細胞の移動、免疫監視機構から逃れる腫瘍において生じるＴ
細胞媒介免疫エフェクター細胞および経路の腫瘍媒介免疫抑制、神経学的障害、
神経変性障害、神経外傷、家族性脊髄形成異常症候群、シャルコー‐マリー‐ツ
ース神経障害、脱髄性ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候群；精神健康
状態、免疫学的障害、アレルギーおよび感染、喘息、気管支喘息、アベリーノ型
好酸球増加症、肺疾患、生殖障害、雄性不妊症、雌性生殖系障害、雄性および雌
性の生殖障害、血管腫、難聴、糖タンパク質Ｉａ欠失、デスモイド疾患、ターコ
ット症候群、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃の障害、糖尿病のような膵臓の疾患、マンソ
ン住血吸虫感染、脊髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫寄生虫血症、グレー
ノーＩ型角膜ジストロフィー、格子状Ｉ型角膜ジストロフィー、そしてライス−
バックラーズ角膜ジストロフィー。この方法は、試験化合物にＦＣＴＲＸポリペ
プチドを接触させる工程、およびこの試験化合物がこのＦＣＴＲＸポリペプチド
に結合するか否かを決定する工程を包含する。ＦＣＴＲＸポリペプチドへの試験
化合物の結合は、この試験化合物が、前述の障害または症候群に対する活性のモ
ジュレーターあるいは前述の障害または症候群に対する潜伏または素因のモジュ
レーターであることを示す。
【００１５】 また、本発明の範囲には、以下を含む障害または症候群の活性のモジュレータ
ー、あるいは以下を含む障害または症候群の潜伏または素因のモジュレーターに
ついてスクリーニングする方法が含まれる。以下を含む疾患または障害の処置ま
たは予防のための医薬の製造における治療剤の使用もまた、本発明の範囲内にあ
る。この方法は、以下の障害または症候群についての危険性の増大した試験動物
に試験化合物を投与することによる；例えば、結腸直腸癌、線腫様結腸ポリポー
シス、骨髄性白血病、先天性新生児同種免疫性血小板減少症、多発性ヒト充実性
悪性疾患、悪性卵巣腫瘍（特に、上皮と間質との間の接触面での）、悪性脳腫瘍
、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状細胞増加症、神経膠腫／星状細胞増加症の混合
、腎細胞癌、乳房線種、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌、明細胞癌および顆粒細胞癌
、腫瘍細胞増殖のオートクライン／パラクリン刺激、細胞傷害性治療に対する腫
瘍細胞の生存および腫瘍細胞の耐性のオートクライン／パラクリン刺激、それに
よって転移に寄与する実質および基底膜浸潤ならびに腫瘍細胞の移動、免疫監視
機構から逃れる腫瘍において生じるＴ細胞媒介免疫エフェクター細胞および経路
の腫瘍媒介免疫抑制、神経学的障害、神経変性障害、神経外傷、家族性脊髄形成
異常症候群、シャルコー‐マリー‐ツース神経障害、脱髄性ガードナー症候群、
家族性脊髄形成異常症候群；精神健康状態、免疫学的障害、アレルギーおよび感
染、喘息、気管支喘息、アベリーノ型好酸球増加症、肺疾患、生殖障害、雄性不
妊症、雌性生殖系障害、雄性および雌性の生殖障害、血管腫、難聴、糖タンパク
質Ｉａ欠失、デスモイド疾患、ターコット症候群、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃の障害
、糖尿病のような膵臓の疾患、マンソン住血吸虫感染、脊髄小脳性運動失調、熱
帯熱マラリア原虫寄生虫血症、グレーノーＩ型角膜ジストロフィー、格子状Ｉ型
角膜ジストロフィー、そしてライス−バックラーズ角膜ジストロフィー。この試
験動物は、ＦＣＴＲＸ核酸によってコードされる組換えポリペプチドを発現する
。次いで、ＦＣＴＲＸポリペプチドの発現または活性を、この試験動物において
測定し、同様に、コントロール動物（これは、ＦＣＴＲＸポリペプチドを組換え
的に発現し、かつ上記の障害または症候群についての危険性が増大していない）
におけるこのタンパク質の発現または活性を測定する。次いで、試験動物および
コントロール動物の両方におけるＦＣＴＲＸポリペプチドの発現を比較する。コ
ントロール動物と比較した、試験動物におけるＦＣＴＲＸポリペプチドの活性の
変化は、この試験化合物が、上記の障害または症候群の潜伏のモジュレーターで
あることを示す。
【００１６】 さらに別の局面において、本発明は、被験体（例えば、ヒト被験体）における
、変化したレベルのＦＣＴＲＸポリペプチド、ＦＣＴＲＸ核酸、またはその両方
に関連する疾患の存在または素因を決定するための方法を包含する。この方法は
、この被験体由来の試験サンプル中のＦＣＴＲＸポリペプチドの量を測定する工
程、およびこの試験サンプル中のポリペプチドの量と、コントロールサンプル中
に存在するＦＣＴＲＸポリペプチドの量とを比較する工程を包含する。コントロ
ールサンプルと比較した試験サンプル中のＦＣＴＲＸポリペプチドのレベルの変
化は、被験体における疾患の存在またはその素因を示す。好ましくは、素因とし
ては、例えば、以下が挙げられる。以下を含む障害または症状を処置または予防
するための医薬の製造における治療剤の使用は、本発明の範囲内である。：例え
ば、結腸直腸癌、腺腫様ポリポシス、骨髄性白血病、先天性自己免疫性新生児血
小板減少、多発性ヒト充実性悪性腫瘍、特に上皮と支質との間の境界における悪
性卵巣腫瘍、悪性脳腫瘍、乳腺癌、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、混合性神経膠腫
／星状細胞腫、腎細胞癌、胸腺癌、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌、腎臓明細胞癌お
よび顆粒細胞癌、腫瘍細胞増殖のオートクライン／パラクリン刺激、細胞障害性
治療に対して生存する腫瘍細胞よび細胞障害性治療に対して耐性の腫瘍細胞のオ
ートクライン／パラクリン刺激、腫瘍細胞の実質膜および基底膜の浸潤および運
動性（それにより、転移に寄与する）、Ｔ細胞媒介性免疫エフェクター細胞およ
び経路の腫瘍媒介性免疫抑制（免疫調査からの腫瘍の逸脱を生じる）、神経学的
障害、神経変性障害、神経外傷、家族性脊髄形成異常症候群、シャルコー−マリ
ー−ツースニューロパシー、脱髄性ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候
群；精神健康状態、免疫学的障害、アレルギーおよび感染、喘息、気管支ぜん息
、アベリノ型好酸球増加症、肺疾患、生殖障害、男性不妊、女性生殖器系障害、
男性および女性生殖器系障害、血管種、難聴、糖タンパク質Ｉａ欠乏症、類腱腫
疾患、ターコット症候群、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃障害、膵臓障害様糖尿病、マン
ソン住血吸虫感染、脊髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫寄生虫症、角膜ジ
ストロフィー−グレーノーＩ型、角膜ジストロフィー−格子Ｉ型、おならびにラ
イス−バックラー角膜ジストロフィー。また、本発明の新規のポリペプチドの発
現レベルは、様々な癌についてスクリーニングするための方法ならびに癌の段階
を決定するための方法において使用され得る。
【００１７】 さらなる局面において、本発明は、病的状態を処置または予防するのに十分な
量のＦＣＴＲＸポリオペプチド、ＦＣＴＲＸ核酸またはＦＣＴＲＸ特異的抗体を
被験体（例えば、ヒト被験体）に投与することによって、哺乳動物における障害
に関連する病的状態を処置または予防する方法を包含する。好ましい実施形態に
おいて、障害としては、例えば、以下が挙げられる。以下を含む障害または症状
を処置または予防するための医薬の製造における治療剤の使用は、本発明の範囲
内である：例えば、結腸直腸癌、腺腫様ポリポシス、骨髄性白血病、先天性自己
免疫性新生児血小板減少、多発性ヒト充実性悪性腫瘍、特に上皮と支質との間の
境界における悪性卵巣腫瘍、悪性脳腫瘍、乳腺癌、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、
混合性神経膠腫／星状細胞腫、腎細胞癌、胸腺癌、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌、
腎臓明細胞癌および顆粒細胞癌、腫瘍細胞増殖のオートクライン／パラクリン刺
激、細胞障害性治療に対して生存する腫瘍細胞よび細胞障害性治療に対して耐性
の腫瘍細胞のオートクライン／パラクリン刺激、腫瘍細胞の実質膜および基底膜
の浸潤および運動性（それにより、転移に寄与する）、Ｔ細胞媒介性免疫エフェ
クター細胞および経路の腫瘍媒介性免疫抑制（免疫調査からの腫瘍の逸脱を生じ
る）、神経学的障害、神経変性障害、神経外傷、家族性脊髄形成異常症候群、シ
ャルコー−マリー−ツースニューロパシー、脱髄性ガードナー症候群、家族性脊
髄形成異常症候群；精神健康状態、免疫学的障害、アレルギーおよび感染、喘息
、気管支ぜん息、アベリノ型好酸球増加症、肺疾患、生殖障害、男性不妊、女性
生殖器系障害、男性および女性生殖器系障害、血管種、難聴、糖タンパク質Ｉａ
欠乏症、類腱腫疾患、ターコット症候群、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃障害、膵臓障害
様糖尿病、マンソン住血吸虫感染、脊髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫寄
生虫症、角膜ジストロフィー−グレーノーＩ型、角膜ジストロフィー−格子Ｉ型
、おならびにライス−バックラー角膜ジストロフィー。
【００１８】 さらに別の局面において、本発明は、当該分野で用いられる多数の技術のいず
れか１つにより、本発明の細胞レセプターおよび下流エフェクターを同定する方
法において使用され得る。これには、ツゥーハイブリッドシステム、親和性精製
、抗体または他の特異的に相互作用する分子との同時沈降が挙げられるが、これ
らに限定されない。
【００１９】 他に規定されない限り、本明細書中で使用される全ての技術および科学用語は
、本発明が属する当業者により一般に理解されている意味と同じ意味を有する。
本明細書中で記載される方法および材料と類似または等価な方法および材料は、
本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料が以下
に記載される。本明細書中に記載される全ての刊行物、特許出願、特許および他
の参考文献は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される。矛盾の場合
、定義を含む本願は制御する。さらに、材料、方法および実施例は、例示にすぎ
ず、限定することを意図しない。
【００２０】 本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から
明らかである。
【００２１】 （詳細な説明） 本発明は、一部、新規のポリペプチドをコードする新規の核酸配列の発見に基
づく。この新規の核酸およびそれらのコードされたポリペプチドは、別個に、Ｆ
ＣＴＲ１、ＦＣＴＲ２、ＦＣＴＲ３、ＦＣＴＲ４、ＦＣＴＲ５、ＦＣＴＲ６およ
びＦＣＴＲ７と称される。核酸およびそれらのコードされたポリペプチドは、本
明細書中でまとめて「ＦＣＴＲＸ」と称される。
【００２２】 本発明の新規のＦＣＴＲＸ核酸は、その配列が表１Ａ、２Ａ、３Ａ、３Ｃ、３
Ｅ、３Ｆ、３Ｇ、３Ｈ、４Ａ、５Ａ、５Ｃ、５Ｅ、６Ａ、６Ｃおよび７Ａ（「表
１Ａ〜７Ａ」）に提供される核酸、それらのフラグメント、誘導体、アナログま
たはホモログを含む。本発明の新規のＦＣＴＲＸタンパク質は、その配列が、表
１Ｂ、２Ｂ、３Ｂ、３Ｉ、４Ｂ、５Ｂ、５Ｄ、６Ｂ、６Ｄおよび７Ｂ（表１Ｂ〜
７Ｂ」）に提供されるタンパク質フラグメントを含む。個々のＦＣＴＲＸ核酸お
よびタンパク質は、以下に記載される。本発明の範囲は、細胞のシグナル伝達経
路または代謝経路の調節に関する障害の処置または予防におけるこれらの核酸お
よびペプチドの使用方法である。
【００２３】 （ＦＣＴＲ１） 新規のＦＣＴＲ１は、フォリスタチン（ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）様遺伝子お
よびｍａｃ２５に関連する増殖因子（「ＦＣＴＲ」）タンパク質である。ＦＣＴ
Ｒ１（これはまた特許取得番号５８０９２２１３．０．３６により言及される）
は、７７１ヌクレオチドの全長クローンであり、ヌクレオチド４３８〜７５３由
来の１０５アミノ酸タンパク質の全コード配列を含む。このクローンは、甲状腺
、腎臓、胎児腎臓および脾臓組織由来であった。
【００２４】 現在決定されているようなＦＣＴＲ１のヌクレオチド配列を表１Ａに報告する
。開始コドンおよび終止コドンは、太字であり、５’および３’非翻訳領域は下
線が付いている。
【００２５】 （表１Ａ．ＦＣＴＲ１ヌクレオチド配列（配列番号１））
【００２６】
【表１】 上記のヌクレオチド配列に対応するＦＣＴＲ１タンパク質の推定アミノ酸配列
を表１Ｂに報告する。ＦＣＴＲ１を、ＳｉｇｎａｌＰｅｐおよびＰＳｏｒｔ検索
プロトコルを使用して、他のデータベースに対して検索した。このタンパク質は
、たいてい原形質膜に位置するようであり（確実度＝０．６５００）、そしてＮ
末端シグナル配列を有さないようである。ＦＣＴＲ１タンパク質の推定分子量は
、１１７１１．８ダルトンである。
【００２７】 （表１Ｂ．コードされたＦＣＴＲ１タンパク質配列（配列番号２））
【００２８】
【表２】 ＦＣＴＲ１を、フォリスタチン様プローブまたはホモログに対する独自の配列
ファイル使用して、Ｇｅｎｂａｎｋにより提供されたＧｅｎｏｍｅ Ｄａｉｌｙ
Ｆｉｌｅｓに対して実行したＴｂｌａｓｔＮにより、同定した。専有ソフトウ
エアプログラム（ＧｅｎＳｃａｎＴＭ）を使用して、核酸配列およびエキソンの
選択をさらに予測した。得られる配列を、ＢＬＡＳＴ検索を用いて類似性によっ
てさらに改変した。次いでこの配列を、見かけの不一致について手動で補正し、
それによって全長タンパク質をコードする配列を得た。
【００２９】 配列データベースの分析において、例えば、このＦＣＴＲ１核酸配列は、表１
Ｃに示されるＭｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ ＩＧＦＢＰ様タンパク質（ＴＲＥＭＢ
Ｌ登録番号：ＢＡＡ２１７２５）に対して、３１／７１塩基（４３％）同一であ
り、同様に４６／７１塩基陽性であることが見出された。本明細書中における全
てのＢＬＡＳＴアラインメントにおいて、「Ｅ値」または「期待値」の値は、確
率の数値表示であり、整列された配列は、検索されたデータベース内で、単なる
偶然にＢＬＡＳＴ照会配列に対してそれらの類似性を達し得る。例えば、１Ｃに
示されるように、ＦＣＴＲ１ ＢＬＡＳＴ分析から検索された対象（「Ｓｂｊｃ
ｔ」）（この場合、Ｍｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ ＩＧＦＢＰ様タンパク質）が、
Ｑｕｅｒｙ ＦＣＴＲ１配列と偶然に純粋に一致する確率は、１．２×１０−１ １ である。
【００３０】 （表１Ｃ．Ｍｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ ＩＧＦＢＰ様タンパク質（配列番号３
８）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ）
【００３１】
【表３】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｄに示されるＭｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕ
ｓフォリスタチン様タンパク質について、２６／５８塩基（４４％）同一であり
、そして３８／５８塩基（６５％）陽性であった。
【００３２】 （表１Ｄ．Ｍｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ ＩＧＦＢＰ様タンパク質（配列番号３
９）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ）
【００３３】
【表４】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｅに示されるＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎ
ｓ ＭＡＣ２５タンパク質について、２６／５８塩基（４４％）同一であり、そ
して３８／５８塩基（６５％）陽性であった。
【００３４】 （表１Ｅ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＭＡＣ２５タンパク質（配列番号４０
）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ）
【００３５】
【表５】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｆに示されるＭｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕ
ｓ ＭＡＣ２５タンパク質について、２６／５８塩基（４４％）同一であり、そ
して３８／５８塩基（６５％）陽性であった。
【００３６】 （表１Ｆ．Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ ＭＡＣ２５タンパク質（配列番号４１
）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ）
【００３７】
【表６】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｇに示されるＨｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎ
ｓ プロスタサイクリン刺激因子について、２６／５８塩基（４４％）同一であ
り、そして３８／５８塩基（６５％）陽性であった。
【００３８】 （表１Ｇ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓプロスタサイクリン刺激因子（配列番号
４２）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ）
【００３９】
【表７】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｈに示されるラット結腸直腸癌サプレ
ッサについて、１８／４４塩基（４０％）同一であり、そして２５／４４塩基（
５６％）陽性であった。
【００４０】 （表１Ｈ．ラット結腸直腸癌サプレッサ（配列番号４３）に対するＦＣＴＲ１
のＢＬＡＳＴＰ）
【００４１】
【表８】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｉに示されるＨｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎ
ｓ ＰＴＰσ（脳）前駆体の塩基５５〜１３７について、３２／８３塩基（３８
％）同一であり、そして４５／８３塩基（５４％）陽性であり、そしてこの前駆
体の塩基１６６〜２２５に対して、２４／６８塩基（３５％）同一であり、３７
／６８塩基（５４％）陽性であった。
【００４２】 表１Ｉ Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓＰＴＰシグマ−（脳）前駆体（配列番号４
４）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ
【００４３】
【表９】 ＦＣＴＲ１のアミノ酸配列はまた、表１Ｊに示されるＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎ
ｓ−チロシンホスファターゼシグマに対して３２／８３塩基（３８％）同一性お
よびアミノ酸５５−１３７に対して４５／８３塩基（５４％）陽性ならびに２６
／６９同一性（３７％）およびアミノ酸１６６−２３４に対して３８／６９（５
４％）陽性である。
【００４４】 表１Ｊ Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓＰＴＰシグマ−（脳）前駆体（配列番号４
５）に対するＦＣＴＲ１のＢＬＡＳＴＰ
【００４５】
【表１０】 関連するタンパク質配列と本発明のタンパク質とを比較するＣｌｕｓｔａｌＷ
分析として、表１Ｋに与えられる（ＦＣＴＲ１が２行目に示されている）。本明
細書中におけるＦＣＴＲ１タンパク質のＣｌｕｓｔａｌＷアライメントおよび全
ての他のＣｌｕｓｔａｌＷ分析において、黒線が引かれるアミノ酸残基は、保存
配列の領域を示すが（すなわち、構造的または機能的性質を保存するために必要
とされ得る領域）、非ハイライトアミノ酸残基は、保存されておらず、そしてタ
ンパク質構造または機能を改変せずに、非常に広い範囲に潜在的に変異し得る。
【００４６】 表１Ｋ ＦＣＴＲ１のＣｌｕｓｔａｌＷ分析
【００４７】
【表１１】 ＩＧＦＢＰは、神経幹細胞および発達した中枢神経系に発現している。ＭＡＣ
−２５、フォルスタチン様タンパク質は、骨肉腫細胞および髄膜腫細胞の増殖サ
プレッサーである。ＤＣＣは、多くの正常組織、特に結腸粘膜において発現する
が、結腸癌において欠損する。
【００４８】 ＦＣＴＲ１は、同様の機能を有すると考えられるこれらタンパク質（ＢＬａｓ
ｔＰ、表１Ｃ−１ＪおよびＣｌｕｓｔａｌＷ、表１Ｋにおいて示される）と類似
性を有する。従って、ＦＣＴＲ１は、１つ以上の以下：神経学的発達の腫瘍サプ
レッサー遺伝子レギュレターとして機能し得る。
【００４９】 タンパク質類似性およびタンパク質発現に基づいて、ＦＣＴＲ１は、以下の疾
患および使用において有用である： （ｉ） インビトロおよびインビボにおける腫瘍退行 （ｉｉ） 神経学的疾患、神経退行障害、神経外傷 （ｉｉｉ） 性と生殖に関する健康 （ｉｖ） 免疫学的障害、アレルギーおよび感染 （ｖ） 癌において、診断的および予測的マーカーおよびタンパク質治療とし
て。
【００５０】 （ＦＣＴＲ２） ＦＣＴＲ２（あるいは、ＡＣ０１２６１４＿１．０．１２３として本明細書中
で称される）は、ヒトＫＩＡＡ１０６１タンパク質および神経学的発達および生
殖性生理学（例えば、細胞接着分子、フォルスタチン、肥満したおよび神経質）
に関連した遺伝子に類似の配列を有する増殖因子である。ＦＣＴＲ２は、８１５
アミノ酸タンパク質の全コード配列を含む、５５０２ヌクレオチドの全長クロー
ンである。この配列は、神経膠腫、骨芽細胞、他の癌細胞、肺癌腫、小腸におい
て発現する（この配列は、脳、乳房、腎臓、膵臓、プールされた組織において発
現するＵｎｉｇｅｎｅ Ｈｓ．１２３４２０に位置する）。
【００５１】 ＦＣＴＲ２ ＯＲＦは、ヌクレオチド４２０−４２２においてＡＴＧ開始コド
ンからはじまり、そしてヌクレオチド２８６５−２８６７においてＴＧＡコドン
で終わる。開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定転写領域を、表
２Ａにおいて下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンを太文字で示した
。
【００５２】 表２Ａ．ＦＣＴＲ２ヌクレオチド配列（配列番号３）
【００５３】
【表１２】 前述のヌクレオチド配列に対応するＦＣＴＲ２タンパク質の推定アミノ酸配列
は、表２Ｂにおいて示される。ＦＣＴＲ２は、ＳｉｇｎａｌＰおよびＰＳｏｒｔ
探索プロトコルを使用して他のデータベースに対して探索された。このタンパク
質は、ミトコンドリアマトリクス空間に多くが局在しているようであり（確実度
＝０．４７１８）およびＮ末端シグナル配列を有しないようである。推定分子量
は、９０３４６．９ダルトンである。
【００５４】 表２Ｂ．ＦＣＴＲ２反配列（配列番号４）
【００５５】
【表１３】 ＢＬＡＳＴＩＮサーチにおいて、ＦＣＴＲ２核酸のヌクレオチド７８４−５５
０２が、ＫＩＡＡ１０６１タンパク質（部分ｃｄｓ）（ジーンバンク受付番号：
ＡＢ０２８９８４）に対してＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓｍＲＮＡに４７１９塩基
のうち４６７２（９９％）が同一である（表２Ｃ）。
【００５６】 表２Ｃ ＫＩＡＡ１０６１タンパク質に関するＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓｍＲ
ＮＡに対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＮ（配列番号４６）
【００５７】
【表１４】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓＫＩＡＡ１２６３タン
パク質フラグメント（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＢＡＡ８６５７
７）（配列番号４７）由来の８５０アミノ酸残基タンパク質に対して８１０アミ
ノ酸の４７３（５８％）の同一性そして８１０残基の６１６（７６％）の陽性を
有する（表２Ｄ）。
【００５８】 表２Ｄ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓＫＩＡＡ１２６３タンパク質フラグメント
（配列番号４７）に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴ
【００５９】
【表１５】 ＦＣＴＲ２のアミノ酸１２３−８１５はまた、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由来
のＫＩＡＡ１０６１の６９３アミノ酸残基タンパク質フラグメント（ｐｔｎｒ：
ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＢＡＡ８３０１３）（配列番号４８）対して６９
３アミノ酸残基の６９３（１００％）の同一性を有する（表２Ｅ）。
【００６０】 表２Ｅ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓＫＩＡＡ１２６３タンパク質［フラグメン
ト］（配列番号４８）に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴ
【００６１】
【表１６】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（フラグメント）（ｐ
ｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：ＣＡＢ７０８７７．１）由来の７７３アミ
ノ残基タンパク質仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ５５６Ｄ２３４．１（配列番号４９
）に対して７７２アミノ酸の４５１（５８％）の同一性そして７７２残基の５８
６（７５％）の陽性を有する（表２Ｆ）。
【００６２】 表２Ｆ．仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ５６６Ｄ２３４．１に対するＦＣＴＲ２の
ＢＬＡＳＴＰ（配列番号４９）
【００６３】
【表１７】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ Ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ｐｔｎｒ
：ジーンバンク受付番号：Ｑ６２６３２）由来の３０６アミノ残基タンパク質フ
ォルスチン関連タンパク質１前駆体（配列番号５０）に対して１９４アミノ酸の
６１（３１％）の同一性そして１９４残基の９０（４５％）の陽性を有する（表
２Ｇ）。
【００６４】 表２Ｇ．Ｒａｔｔｕｓ Ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のフォルスチン関連タンパ
ク質１前駆体に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ（配列番号５０）
【００６５】
【表１８】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ（ｐｔｎｒ：ジーンバ
ンク受付番号：Ｑ６２３５６）由来の３０６アミノ残基タンパク質フォルスチン
関連タンパク質１前駆体（配列番号５１）に対して１９４アミノ酸の６１（３１
％）の同一性そして１９４残基の８９（４５％）の陽性を有する（表２Ｈ）。
【００６６】 表２Ｈ．Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来のフォルスチン関連タンパク質１前駆
体に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ（配列番号５１）
【００６７】
【表１９】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、アフリカツメカエル（ジーンバンク受付番号：Ｊ
Ｇ０１８７）由来の２９９アミノ残基タンパク質フォルスチン関連タンパク質１
前駆体（配列番号５２）に対して１９３アミノ酸の６３（３２％）の同一性そし
て１９３残基の８９（４５％）の陽性を有する（表２Ｉ）。
【００６８】 表２Ｉ．アフリカツメカエル由来のフォルスチン関連タンパク質１前駆体に対
するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ（配列番号５２）
【００６９】
【表２０】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（ジーンバンク受付番
号：Ｑ１２８４１）由来の３０８アミノ残基タンパク質フォルスチン関連タンパ
ク質１前駆体（配列番号５３）に対して１９４アミノ酸の５９（３０％）の同一
性そして１９４残基の９０（４５％）の陽性を有する（表２Ｊ）。
【００７０】 表２Ｊ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由来のフォルスチン関連タンパク質１前駆
体に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ（配列番号５３）
【００７１】
【表２１】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、フリック（ｆｌｉｋ）タンパク質［Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ］（ＥＭＢＬ受付番号：ＣＡＢ４２９６８．１）（配列番号５４
）に対して６９アミノ酸の３５（５０％）の同一性そして６９残基の４５（６４
％）の陽性を有する（表２Ｋ）。
【００７２】 表２Ｋ．フリックタンパク質［Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ］に対するＦＣＴ
Ｒ２のＢＬＡＳＴＰ（配列番号５４）
【００７３】
【表２２】 ＦＣＴＲ２アミノ酸配列は、２７２−４２０アミノ酸フラグメントに対して１
５２アミノ酸の６５（４２％）の同一性そして６９残基の４５（６４％）の陽性
を有し、２４８−３２９アミノ酸フラグメントに対して８３アミノ酸の３１（３
７％）の同一性そして８３残基の４４（５２％）の陽性を有する（１３７５アミ
ノ酸残基肥満遺伝子タンパク質［Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔ
ｅｒ］（ジーンバンク受付番号：Ｔ１３８２２）（配列番号５５）の両方）（表
２Ｌ）。
【００７４】 （表２Ｌ．フラズルド遺伝子タンパク質に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ［
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ］）（配列番号５５）
【００７５】
【表２３】 ＦＣＴＲ２タンパク質のアミノ酸配列は、全てのタンパク質１３９５残基Ｒｏ
ｕｎｄａｂｏｕｔ １タンパク質［Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓ
ｔｅｒ］（ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃ：ＡＡＣ３８８４９．１）（配列番号５６）（
表２Ｍ）中の、３６６〜５３９アミノ酸フラグメントに対して、１７７アミノ酸
残基のうち５３残基が同一であり（２９％）、そして１７７残基のうち７８が陽
性であり（４３％）、２７６〜４３８アミノ酸フラグメントに対して、１７０残
基のうち５１残基が同一であり（３０％）、そして１７０残基のうち７４％が陽
性であり（４３％）、１８３から３４１アミノ酸フラグメントに対して、１６５
アミノ酸残基のうち４６残基が同一であり（２７％）、そして１６５残基のうち
７４が陽性であり、７７から２４３アミノ酸フラグメントに対して、１６７アミ
ノ酸残基のうち４８残基が同一であり（２８％）、そして１６７残基のうち７０
が陽性であり（４１％）、そして５６〜１３９アミノ酸フラグメントに対して、
８４アミノ酸残基のうち２８残基が同一であり（３３％）、そして８４アミノ酸
残基のうち２８アミノ酸残基が陽性である。
【００７６】 （表２Ｍ．Ｒｏｕｎｄａｂｏｕｔ１タンパク質に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳ
ＴＰ［Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ］）（配列番号５６）
【００７７】
【表２４】 ＦＣＴＲ２タンパク質のアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ Ｓａｐｉｅｎｓ由来の全
てのタンパク質１３９５残基Ｄｏｗｎ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅ
ｓｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｐｒｅｃｕｓｏｒ
（ＣＨＤ２）（ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃ：Ｏ６０４６９）（配列番号５７）（表２
Ｎ）中の、６２０〜７７５アミノ酸フラグメントに対して、１５７アミノ酸残基
のうち５５残基が同一であり（３５％）、そして１５７残基のうち７５が陽性で
あり（４７％）、３３５〜４９２アミノ酸フラグメントに対して、１６３アミノ
酸残基のうち４９残基が同一であり（３０％）、そして１６３残基のうち７１が
陽性であり（４３％）、１３０５〜１３８８アミノ酸フラグメントに対して、８
５残基のうち３２残基が同一であり（３７％）、そして８５残基のうち４８％が
陽性であり（５５％）、１８３から３１９アミノ酸フラグメントに対して、１４
３アミノ酸残基のうち３７残基が同一であり（２５％）、そして１４３残基のう
ち６０が陽性であり（４１％）、７１１から８８４アミノ酸フラグメントに対し
て、１７４アミノ酸残基のうち４３残基が同一であり（２４％）、そして１７４
残基のうち７０が陽性であり（３９％）、そして８３１〜８８４アミノ酸フラグ
メントに対して、１６５アミノ酸残基のうち４６残基が同一であり（２７％）、
そして１６５アミノ酸残基のうち６９アミノ酸残基が陽性である。
【００７８】 （表２Ｎ．ダウン症候群細胞接着分子の前駆体のＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴ）（
配列番号５７）
【００７９】
【表２５】 ＦＣＴＲ２タンパク質のアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由来の辺
縁系関連膜タンパク質前駆体（ＬＳＡＭＰ）（ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ Ａｃｃ：Ｑ
１３４４９）（配列番号５８）（表２０）に対して、１９４アミノ酸残基のうち
５５残基が同一であり（２８％）、そして１９４残基のうち８６残基が陽性であ
る（４４％）。
【００８０】 （表２０．辺縁系関連膜タンパク質前駆体に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ
）（配列番号５８）
【００８１】
【表２６】 ＦＣＴＲ２タンパク質のアミノン酸配列は、推定ニューロン細胞接着分子（Ｍ
ｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の短形態）（ＳＰＴＲＥＭＢＬ Ａｃｃ：Ｏ７０２
４６）（配列番号５９）（表２Ｐ）に対して、１９０アミノ酸残基のうち６８残
基が同一であり（３５％）、そして１９０残基のうち９２残基が陽性である（４
８％）。
【００８２】 （表２Ｐ．推定ニューロン細胞接着分子（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ由来の短
形態）に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴ）（配列番号５９）
【００８３】
【表２７】 ＦＣＴＲ２のタンパク質のアミノ酸配列は、ＣＨＬＡＭＰ（Ｇａｌｌｕｓ ｇ
ａｌｌｕｓ由来のＧ１１−アイソフォーム前駆体）（ＳＰＴＲＥＭＢＬ Ａｃｃ
：Ｏ０２８６９）（表２Ｑ）に対して、１９９アミノ酸残基のうち５８残基が同
一であり（２９％）、そして１９９残基のうち９１残基が陽性である（４５％）
。
【００８４】 （表２Ｑ．ＣＨＬＡＭＰ（Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ由来のＧ１１−アイソ
フォーム前駆体）に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ）（配列番号６０）
【００８５】
【表２８】 ＦＣＴＲ２のタンパク質のアミノ酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃ
ｕｓ由来の辺縁系関連膜タンパク質前駆体（ＬＳＡＭＰ）に対して、１９４アミ
ノ酸残基のうち５５残基が同一であり（２８％）、そして１９４残基のうち８６
残基同一である（４４％）。
【００８６】 （表２Ｒ．Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来の辺縁系関連膜タンパク
質前駆体（ＬＳＡＭＰ）に対するＦＣＴＲ２のＢＬＡＳＴＰ）
【００８７】
【表２９】 ＦＣＴＲタンパク質は、細胞接着分子、フォリスタチン、ラウンドアバウト（
ｒｏｕｎｄａｂｏｕｔ）およびフラズルド（ｆｒａｚｚｌｅｄ）に対して類似性
を有する（ＢｌａｓｔＰの結果を参照のこと）。これらの遺伝子は、ニューロン
の発達および生殖生理に関連する。フラズルドは、ＤＣＣ免疫グロブリンサブフ
ァミリーのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ膜をコードし、そしてＣＮＳおよび運動性軸索
ガイダンス（Ｃｅｌｌ ８７：１９７−２０４（１９９６））に必要とされる。
ラットＣ６グリオマ分泌フォリスタチン関連タンパク質（ＦＲＰ）ならびにヒト
相同体のクローニングおよび配列の特徴付けは、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
２２５：９３７−９４６（１９９４）に記載されている。このタンパク質は、細
胞の増殖および分化において、いくつかの増殖因子の作用を調節し得る。ＦＲＰ
は、ヘパリンに結合する。フォリスタチン関連タンパク質は、分泌タンパク質で
あり、そして１つのフォリスタチン様ドメインを有する。Ｆｌｉｋのクローニン
グおよび早期背部軸発現、クリックフォリスタチン遺伝子ならびに背方化誘導／
神経誘導に関連する証拠は、Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１７８：３２７−３４２（１９
９６）に示されている。ラウンドアバウトは、ＣＮＳ正中線を横切る軸索を制御
し、そしてＣｅｌｌ ９２：２０５−２１５（１９９８）に示されるように、進
化的に保存された誘導レセプターの新規なサブファミリーを規定する。ヒト辺縁
系関連膜タンパク質（ＬＡＭＰ）のｃＤＮＡクローニングおよび構造分析は、Ｇ
ｅｎｅ １７０：１８９−１９５（１９９６）に記載されている。ＬＡＭＰ（３
種の免疫グロブリン様Ｃ２タイプドメインを含むＯＢＣＡＭファミリーのタンパ
ク質）は、選択的ニューロン成長および軸索標的を媒介する。ＬＡＭＰは、辺縁
系中の軸索の発達の誘導および熟成回路の再構築に寄与する。このタンパク質は
、海馬の苔状の線維突起の正常な成長に必要不可欠である。ＬＡＭＰは、ＧＰＩ
−アンカーによって膜に付着される。ＬＡＭＰは、辺縁系の神経および線維トラ
クト上、ならびに上丘、脊髄索およびセルベルム（ｃｅｒｂｅｌｌｕｍ）の単層
において発現される。トリＫＬＧに密接に関連する、レセプタータンパク質チロ
シンキナーゼ様分子をコードするヒト全長ＰＴＫ７ ｃＤＮＡの特徴付けは、Ｊ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１１９：２３５−２３９（１９９６）に記載されている。相
同性に基づいて、ＦＣＴＲ２タンパク質および各相同性タンパク質またはペプチ
ドは、少なくともいくつかの活性を共有する。
【００８８】 （機能および治療学的使用） ＯＭＩＭ遺伝子マップにより、発明で以下の疾患への羅漢に関係するようなマ
ッピングする領域（５ｑ２１−５ｑ３１）を同定した（ＯＭＩＭ Ｉｄに下線を
引いている）： ・アレルギーおよび喘息 ・血管腫 ・キャピラリー乳児Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ感染、脊髄小脳
性運動失調に対する感受性／耐性 ・気管支ぜん息 ・熱帯熱マラリア原虫寄生虫血症 ・角膜ジストロフィーの強度、Ｇｒｏｅｎｏｕｗ１型、１２１９００；角膜ジ
ストロフィー、格子１型、１２２２００； ・Ｒｅｉｓ−Ｂｕｃｋｌｅｒｓ角膜ジストロフィー；角膜ジストロフィー、Ａ
ｖｅｌｌｉｎｏ型Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ、家族性脊髄形成異常； ・骨髄性白血病、急性弛緩性皮膚、Ｉ型、難聴、常染色体優性非症候性感音難
聴、１拘縮クモ指症、先天性自己免疫血小板減少症； ・糖タンパク質Ｉａ欠損男性不妊症 ・シャルコー−マリー−ツース神経障害、脱髄性Ｇａｒｄｎｅｒ症候群； ・腺腫様ポリープ大腸菌； ・結腸直腸癌； ・靱帯様疾患、遺伝性、１３５２９０； ・ターコット症候群、２７６３００； ・腺腫様ポリープ症ポリープ大腸菌、弱毒化 ・結腸直腸癌。
【００８９】 従って、本発明は、上記の議論の少なくとも全てを意図し、そしてこれらの疾
患のための治療学的使用を有し得る。
【００９０】 この配列は、細胞接着分子、細胞接着分子、フォリスタチン、ラウンドアバウ
トおよびフラズルドに対して類似性を有する（ＢｌａｓｔＰの結果を参照のこと
）。これらの遺伝子は、ニューロンの発達および生殖生理に関連する。従って、
この発明はまた、以下のような疾患、または以下のための治療学的使用を意図す
る： ・ニューロン変性障害、神経腫瘍、特に、精神健康的状態 ・インビトロおよびインビボで再複性された組織 ・女性生殖性障害および妊娠。
【００９１】 （ＦＣＴＲ３） ＦＣＴＲ３は、アミノ酸ＩＩ型膜、ニューロスチン様タンパク質である。１４
３０ヌクレオチドのこのＦＣＴＲ３ａ核酸（１０１２９６１２．０．１１８とも
呼ばれる）は、表３Ａに示される。ＯＲＦにより、ヌクレオチド６９−７１にお
いてＡＴＧ開始コドンで開始すること、およびヌクレオチド１２１２−１２１４
においてＴＡＧで終止することが同定された。開始コドンの上流および終止コド
ンの下流の、推定の未翻訳領域を、表３Ａにおいて下線を引き、そして開始コド
ンおよび終止コドンは、太字で示す。
【００９２】 （表３Ａ．ＦＣＴＲ３ａ核酸配列）（配列番号５）
【００９３】
【表３０】 配列番号５によってコードされたＦＣＴＲ３ポリペプチド（配列番号５）は、
３８１アミノ酸配列であり、そして表３Ｂの一文字コードを使用して示す。
【００９４】 （表３Ｂ．コードされたＦＣＴＲ３ａタンパク質配列）（配列番号６）
【００９５】
【表３１】 代替の実施形態において、ＦＣＴＲ３ａ核酸の５’末端は、表３Ｃに示される
９８２６ｂｐ ＦＣＴＲ３ｂ（本明細書において、１０１２９６１２．０．４０
５とも呼ばれる）において伸延され得る。ＯＲＦにより、ヌクレオチド２８０〜
２８２のＡＴＧ開始コドンで開始すること、およびヌクレオチド８４７９〜８４
８１のＴＡＡコドンで終止することを同定した。開始コドンの上流および終止コ
ドンの下流の、推定の未翻訳領域を、表３Ｃにおいて下線を引き、そして開始コ
ドンおよび終止コドンを、太字で示した。イタリック体の塩基１〜２０１は、以
下でさらに議論される可変性５’領域を示す。
【００９６】 （表３Ｃ．ＦＣＴＲ３ｂヌクレオチド配列）（配列番号７）
【００９７】
【表３２】 配列番号７によってコードされたＦＣＴＲ３ｂポリペプチド（配列番号８）は
、２７３３アミノ酸残基であり、そして表３Ｄの一文字コードを使用して示され
る。このタンパク質は、３０３４２４．３ダルトンの推定分子量を有する。
【００９８】 （表３Ｄ．コードされたＦＣＴＲ３ｂタンパク質配列）（配列番号８）
【００９９】
【表３３】 さらなる代替の実施形態において、表３Ｃ中のＦＣＴＲ３ｂ配列の５’末端の
イタリック体の塩基は、可変領域である。この領域は、ＦＣＴＲ３の他の実施形
態で置換され得る。９８２３ｂｐ ＦＣＴＲ３ｃのヌクレオチド領域（これはま
た、本明細書中において、１０１２９６１２．０．１５４と呼ばれる）は、イタ
リック体の領域が、表３Ｅに示される２０１塩基配列で置換されることを除いて
、ＦＣＴＲ３ｂと同一のヌクレオチド配列を有する。全ＦＣＲＴ３ｃヌクレオチ
ド配列のＯＲＦにより、ヌクレオチド２７７〜２８０においてＡＴＧ開始コドン
で開始すること、およびヌクレオチド８４７３〜８４７５においてＴＡＧコドン
で終止することを同定した。これは、ＦＣＴＲ３ｃの対応する塩基の数を有する
、表３Ｃに示される同一のオープンリーディングフレームである。このオープン
リーディングフレームは、ＦＣＴＲ３ｂに関して表３Ｃに示されるように、同一
のアミノ酸配列を翻訳する。
【０１００】 （表３Ｅ．コードされたＦＣＴＲ３ｃ ５’末端ヌクレオチド配列）（配列番
号９）
【０１０１】
【表３４】 さらなる別の実施形態において、表３Ｃ中の配列の５’末端に示されるイタリ
ック体の塩基は、表３Ｆに示される配列で置換され、９８２３ｂｐ ＦＣＴＲ３
ｄ（これはまた、１０１２９６１２．０．６７として本明細書中で呼ばれる）を
形成し得る。ＯＲＦにより、ヌクレオチド２７７〜２８０においてＡＴＧ開始コ
ドンで開始すること、およびヌクレオチド８４７３〜８４７５においてＴＡＧコ
ドンで終止することを同定した。これは、ＦＣＴＲ３ｄの対応する塩基の数を有
する、表３Ｃに示される同一のオープンリーディングフレームである。このオー
プンリーディングフレームは、ＦＣＴＲ３ｂに関して表３Ｃに示されるように、
同一のアミノ酸配列を翻訳する。
【０１０２】 （表３Ｆ．コードされたＦＣＴＲ３ｄ ５’末端ヌクレオチド配列）（配列番
号１０）
【０１０３】
【表３５】 さらなる別の実施形態において、表３Ｃ中の配列の５’末端に示されるイタリ
ック体の塩基は、表３Ｇに示される配列で置換され、９７６５ｂｐ ＦＣＴＲ３
ｅ（これはまた、１０１２９６１２．０．２５８として本明細書中で呼ばれる）
を形成し得る。ＯＲＦにより、ヌクレオチド２１０〜２１２においてＡＴＧ開始
コドンで開始すること、およびヌクレオチド８４０８〜８４１０においてＴＡＧ
コドンで終止することを同定した。これは、ＦＣＴＲ３ｅの対応する塩基の数を
有する、表３Ｃに示される同一のオープンリーディングフレームである。このオ
ープンリーディングフレームは、ＦＣＴＲ３ｂに関して表３Ｄに示されるように
、同一のアミノ酸配列を翻訳する。
【０１０４】 （表３Ｇ．コードされた、ＦＣＴＲ３ｅ ５’末端ヌクレオチド配列）（配列
番号１１）
【０１０５】
【表３６】 なお別の実施形態において、別のＦＣＴＲ３ａホモログ、ＦＣＴＲ３ｆ（これ
はまた、１０１２９６１２．０．３２５とも呼ばれる）は、表３Ｈにおいて示さ
れるような９７２９ｂｐは配列を有することが見出された。ＯＲＦにより、ヌク
レオチド２１０〜２１２においてＡＴＧ開始コドンで開始すること、およびヌク
レオチド８３８２〜８３８４においてＴＡＧコドンで終止することを同定した。
開始コドンの上流および終止コドンの下流の、推定の未翻訳領域を、表３Ｇにお
いて下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンを、太字で示す。
【０１０６】 （表３Ｈ．コードされたＦＣＴＲ３ｆ ヌクレオチド配列）（配列番号１２）
【０１０７】
【表３７】 配列番号１２によってコードされたＦＣＴＲ３ｆポリペプチド（配列番号１３
）は、２７２４アミノ酸残基長であり、そして表３Ｉにおいて一文字コードを使
用して示される。この配列は、このポリペプチド由来のアミノ酸７５８〜７６６
がない点でＦＣＴＲ３ｂと異なる。
【０１０８】 （表３Ｉ．コードされたＦＣＴＲ３ｆタンパク質配列）（配列番号１３）
【０１０９】
【表３８】 ＢＬＡＳＴＮ検索において、ＦＣＴＲ３ａ核酸が、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ
ｏｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２の３種のフラグメントに対して相同性を
有することを見出した。このＦＣＴＲ３ａ核酸は、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ
ｏｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＮＭ＿０１１
８５６．２）（表３Ｊ）の、６１４〜１２９８塩基に対して、６８５塩基のうち
６３４塩基同一（９２％）であり、１４２０〜１８５塩基に対して、４０６塩基
のうち３６５塩基同一（８９％）であり、そして１８２３〜１９２５塩基に対し
て、１０３塩基のうち９３塩基同一（９０％）である。
【０１１０】 （表３Ｊ．Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ ｏｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２
に対するＦＣＴＲ３ａのＢＬＡＳＴＮ）（配列番号６２）
【０１１１】
【表３９】 別のＢＬＡＳＴＮ検索において、ＦＣＴＲ３ａ核酸が、テネウリン−２に関し
てＧａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ ｍＲＮＡの３つのフラグメントに対して相同性
を有することを見出した。テネウリン−２に関してＧａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ
ｍＲＮＡ（ＥＭＢＬ Ａｃｃ：ＡＪ２４５７１１．１）（表３Ｋ）の、５０２
〜１１３０塩基に対して６２９塩基のうち５４１塩基同一（８６％）であり、１
３３０から１６９６塩基に対して、３６７塩基のうち３０２塩基同一（８２％）
であり、そして１７１１〜１８１３塩基に対して、１０３塩基のうち８７塩基同
一（８４％）である。
【０１１２】 （表３Ｋ．テネウリン（ｔｅｎｅｕｒｉｎ）−２についてのＧａｌｌｕｓ ｇ
ａｌｕｓに対するＦＣＴＲ３ａのＢＬＡＳＴＮ（配列番号６３））
【０１１３】
【表４０】 この検索において、ＦＣＴＲ３ｂｃｄおよびｅ核酸のフラグメントがＫＩＡＡ
１１２７タンパク質についてＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍＲＮＡの３つのフラ
グメントに対して相同性を有したことを見出した。これは、ＫＩＡＡ１１２７タ
ンパク質についてＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃ
ｃ：ＡＢ０３２９５３）の、塩基１−５５３８に同一な５５３８塩基のうちの５
５３７塩基（９９％）、塩基５６０９−６３２２に同一な７１４塩基のうちの７
０５塩基（９８％）、および塩基６３８５−６５６０に同一な１７６塩基のうち
の１７６塩基（１００％）を有する（表３Ｌ）。
【０１１４】 （表３Ｌ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｃｅ ＫＩＡＡ１１２７ ｍＲＮＡに対す
るＦＣＴＲ３ｂ、ｃ、ｄおよびｅのＢＬＡＳＴＮ（配列番号６４））
【０１１５】
【表４１】 この研究において、ＦＣＴＲ３ｂｃｄおよびｅ核酸がＴｅｎ−ｍ２についての
Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓの５つのフラグメントに対して相同性を有したことも
見出した。これは、Ｔｅｎ−ｍ２についてのＭｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ ｍＲＮ
Ａの、２５０４−８６１０塩基に同一な６１０８塩基のうちの５４９８塩基（９
０％）、塩基１０３−１２９８に同一な１１９６塩基のうちの１０９５塩基（９
１％）、塩基１４２０−２５４０に同一な１０８８塩基のうちの１０００塩基、
塩基８６５５−８７４３２に同一な８９塩基のうちの８１塩基（９１％）、およ
び塩基７−３８に同一な３２塩基のうちの３０塩基（９３％）を有する（表３Ｍ
）。
【０１１６】 （表３Ｍ．Ｔｅｎ−ｍ２ ＭｒｎａについてのＭｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ ｍ
ＲＮＡに対するＦＣＴＲ３ｂ、ｃ、ｄ、およびｅのＢＬＡＳＴＮ（配列番号６５
））
【０１１７】
【表４２】 この検索において、ＦＣＴＲ３ｂｃｄおよびｅ核酸が、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒ
ｖｅｇｉｃｕｓニューレスチン（ｎｅｕｒｅｓｔｉｎ）αの３つのフラグメント
に対して相同性を有したことも見出した。これは、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇ
ｉｃｕｓニューレスチンα（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＮＭ ０２００８８．１
）の、塩基２５２７−８６５８に同一な６１３２塩基のうちの５４９８塩基（９
８％）、塩基１２３−１３１８に同一な１１９６塩基のうちの１０８１塩基（９
０％）１４４０−２５２７に同一な１０８８塩基のうちの９９６塩基（９１％）
を有する（表３Ｎ）。
【０１１８】 （表３Ｎ．Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ Ｎｅｕｒｅｓｔｉｎ α
ｍＲＮＡに対するＦＣＴＲ３ｂ、ｃ、ｄおよびｅのＢＬＡＳＴＮ（配列番号６６
））
【０１１９】
【表４３】 この検索において、ＦＣＴＲ３ｂｃｄおよびｅ核酸が、テネウリン−２につい
てＧａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ部分ｍＲＮＡの６つのセグメントに対する相同性
を有したことも見出した。これは、テネウリン−２についてＧａｌｌｕｓ ｇａ
ｌｌｕｓ部分ｍＲＮＡ（ＥＭＢＬ Ａｃｃ：ＧＧＡ２７８０３１）の、塩基３３
８６−６８３４に同一な３４４９塩基のうちの２７８０塩基（８０％）、塩基１
４１４−３２７５に同一な１８６２塩基のうちの１５５３塩基（８３％）、塩基
５８７−１２１４に同一な６２８塩基のうちの５４０塩基（８５％）、塩基７０
８４−７８０８に同一な７２５塩基のうちの５９３塩基（８１％）、塩基７８９
５−８４０９に同一な５１５塩基のうちの４２９塩基（８３％）、および塩基２
０−４９４に同一な４７５塩基のうちの３９７塩基（８３％）を有する（表３Ｏ
）。
【０１２０】 （表３Ｏ．Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ Ｔｅｎｅｕｒｉｎ−２ ｍＲＮＡに
対するＦＣＴＲ３ｂ、ｃ、ｄおよびｅのＢＬＡＳＴＮ（配列番号６７））
【０１２１】
【表４４】 全長ＦＣＴＲ３ａアミノ酸配列はまた、Ｏｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２
（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＮＰ ０３５９８６．２
）の２７６アミノ酸残基に同一な３８３アミノ酸残基のうちの３４２アミノ酸残
基（８９％）、およびＯｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２の２７６アミノ酸残
基に陽性な３８３残基のうちの３４２残基（８９％）を有する（表３Ｐ）。
【０１２２】 （表３Ｐ．Ｏｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２に対するＦＣＴＲ３ａのＢＬ
ＡＳＴＰ（配列番号６８））
【０１２３】
【表４５】 全長ＦＣＴＲ３ｂアミノ酸配列は、２８０２アミノ酸残基テネウリン−２［Ｇ
ａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ］（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＡＪ２７９０３１）に
同一な２８０２アミノ酸残基のうちの２４４２アミノ酸残基（８７％）、および
２８０２アミノ酸残基テネウリン−２に陽性な２８０２残基のうちの２５３２残
基（９０％）を有する（配列番号６９）（表３Ｑ）。
【０１２４】
【表４６】 ＦＣＴＲ３ｂｃｄｅおよびｆアミノ酸配列は、Ｔｅｎ−ｍ４［Ｍｕｓ ｍｕｓ
ｃｕｌｕｓ］（ｐｔｎｒ：ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＢＡＡ７７３９９．１）（
配列番号７０）（表３Ｒ）のアミノ酸残基４２９〜２７７１に対して、２３５２
アミノ酸残基のうちの１５２４残基（６４％）が同一であり、そして２５３２残
基のうちの１８８１残基（７９％）が陽性であり、そしてアミノ酸残基１〜１５
５に対して、１５７残基のうちの９３残基（５９％）が同一であり、そして１５
７残基のうちの１８８残基（７４％）が陽性であり、そしてアミノ酸残基２１１
〜３６１に対して１５２残基のうちの５９残基（３８％）が同一であり、そして
１５２残基のうちの６８残基（４３％）が陽性である。
【０１２５】
【表４７】 ＦＣＴＲ３ｂｃｄｅおよびｆタンパク質の９９７〜２７３３のアミノ酸フラグ
メントはまた、１７３７アミノ酸残基のタンパク質であるＫＩＡＡ１１２７タン
パク質［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：（ＡＢ０３２
９５３）（配列番号７１）、（表３Ｓ）に対して、１７３７アミノ酸残基のうち
の１６９５残基（９７％）が同一であり、そして１７３７残基のうちの１６９５
残基（９７％）が陽性であることが見出された。
【０１２６】
【表４８】 ＦＣＴＲ３ｂｃｄｅおよびｆタンパク質のアミノ酸配列はまた、表３Ｔに示す
２７６５アミノ酸残基のニューレスチンα［Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕ
ｓ］（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＡＦ０８６６０７）（配列番号７２）に対して
、２７７４アミノ酸残基のうちの２５２８残基（９１％）が同一であり、そして
２７７４残基のうちの２５５７残基（９２％）が陽性であることが見出された。
【０１２７】
【表４９】 ＦＣＴＲ３ｂｃｄｅおよびｆタンパク質のアミノ酸配列はまた、表３Ｕに示す
２７６４アミノ酸残基のタンパク質であるＯｄｄ Ｏｚ／ｔｅｎ−ｍホモログ２
（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ：ＮＰ＿０３５９８６．２
）（配列番号６５）に対して、２７７４アミノ酸残基のうちの２５３６残基（９
１％）が同一であり、そして２７７４残基のうちの２５５８残基（９１％）が陽
性であることが見出された。
【０１２８】
【表５０】
【０１２９】
【表５１】 ＦＣＴＲ３は、ラットニューレスチン（Ｏｔａｋｉ ＪＭ，Ｆｉｒｅｓｔｅｉ
ｎ Ｓ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ １９９９年８月１；２１２（１）：１６５−８１）
に関連する。このニューレスチンは、神経発生に関与する膜貫通分子である。ニ
ューレスチンは、ヒトγ−ヒレグリン、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａレセプター型ペア
ルール遺伝子産物、Ｏｄｄ Ｏｚ（Ｏｄｚ）／Ｔｅｎ（ｍ）、およびＴｅｎ（ａ
）に対する相同性を示す。ニューレスチンは、シナプス形成および形態形成にお
いて推定の役割を有する。マウスニューレスチンホモログ（ＤＯＣ４）は、ＮＩ
Ｈ−３Ｔ３線維芽細胞から独立して単離された。ＤＯＣ４はまた、テネイシンＭ
（ＴＮＭ）、細胞外ＥＧＦ様反復を含有するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａペアルール遺
伝子ホモログとしても公知である。これらの分子、および特に、γ−ヒレグリン
に対する有意な相同性は、ＦＣＴＲ３の疾患進行に対する潜在的な寄与に関して
、重要な暗示を有する。ヒレグリンは、ＨＥＲ−２／ＥｒｂＢ２／ＮＥＵ、乳癌
および前立腺癌進行に関与するプロトオンコジーンレセプターチロシンキナーゼ
（これは、本来ラット神経芽腫／神経膠芽腫細胞株において同定された）につい
てのリガンドである。ＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳腺癌細胞におけるＨＥＲ−２／Ｅ
ｒｂＢ２／ＮＥＵの異所性発現は、ベクタートランスフェクトしたコントロール
細胞に対してタキソール誘導性アポトーシスに対する化学療法抵抗性を付与する
（Ｙｕら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＥｒｂＢ２ ｂｌｏｃｋｓ
ＴａｘｏＬ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｂｙ ｕｐ−ｒｅｇｕｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ｐ２１Ｃｉｐ１，ｗｈｉｃｈ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐ３４Ｃｄ
ｃ２ ｋｉｎａｓｅ．Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ ２：５８１−５９１（１９９８）
）。
【０１３０】 （ＦＣＴＲ３関連テネイシンおよび癌生物学） 記載したように、ＦＣＴＲ３はまた、ＤＯＣ４（ＡＫＡテネイシンＭ）（細胞
外ＥＧＦ様反復を含有するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａペアルール遺伝子ホモログ）に
対して有意な相同性を有する。テネイシンは、胚発生に重要な組織相互作用にお
いて顕著な役割を果たす細胞外マトリックスタンパク質の増大しているファミリ
ーである。テネイシンの過剰発現は、複数のヒト固形悪性癌（ｓｏｌｉｄ ｍａ
ｌｉｇｎａｎｃｙ）において記載される。
【０１３１】 関連タンパク質のテネイシンファミリーの役割は、上皮−間質相互作用を調節
し、フィブロネクチン依存性細胞接着および相互作用に関与することである。実
際に、テネイシン−Ｃ（ＴＮ）は、悪性卵巣腫瘍の間質において、特に上皮と間
質との間の境界において過剰発現され、このことにより、テネイシン−Ｃが侵襲
プロセスに関与し得るという示唆（Ｗｉｌｓｏｎら，１９９６；Ｂｒ Ｊ Ｃａ
ｎｃｅｒ ７４：９９９−１００４）が導かれる。テネイシン−Ｃは、特定の悪
性脳腫瘍に対する治療標的と考えられる（Ｇｌａｄｓｏｎ ＣＬ：Ｊ Ｎｅｕｒ
ｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １９９９年１０月；５８（１０）：１
０２９−４０）。ＤＣＩＳ（インサイチュの腺管癌）における間質の、または中
程度から強い管周辺のＴｎ−Ｃ発現は、腫瘍細胞侵襲と相関する（Ｊａｈｋｏｌ
ａら，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９８年１０月；３４（１１）：１６８７
−９２）。初期乳癌の侵入境界におけるテネイシン−Ｃ発現は、局所および遠隔
の再発の有用な予測因子である（Ｊａｈｋｏｌａ Ｔら，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅ
ｒ．１９９８年１２月；７８（１１）：１５０７−１３）。テネイシン（ＴＮ）
は、発生の間に細胞転移の領域において見出され、そして転移性神経膠腫細胞に
おいて高レベルで発現される細胞外マトリックスタンパク質である（Ｔｒｅａｓ
ｕｒｙｗａｌａ Ｓ，Ｂｅｒｅｎｓ ＭＥ Ｇｌｉａ １９９８年１０月；２４
（２）：２３６−４３）。神経膠腫細胞における移動の停止は、αＶインテグリ
ンサブユニットに依存する（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＧＲ，Ｋｒｕｓｈｅｓ ＬＡ，
Ｃｒｏｓｓｉｎ ＫＬ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １１１（Ｐｔ ８）：１０９５
−１０４（１９９８））。テネイシンのドメインは、神経膠腫の移動に関与した
。最後に、胸部および子宮内膜というホルモン依存性組織におけるテネイシン発
現は、テネイシン発現が悪性進行を反映し、そしてラット乳癌の末端分化の間に
抗黄体ホルモンによってダウンレギュレートされることを示す（Ｖｏｌｌｍｅｒ
ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９２年９月；５２（１７）：４６４２−８）。
【０１３２】 （腫瘍学的疾患の進行におけるＦＣＴＲ３の潜在的な役割） 関連する分子に対する医学文献に記載される生物活性に基づくと、ＦＣＴＲ３
は、腫瘍上皮細胞と間質成分との相互作用を変化させる腫瘍細胞生物学の１つ以
上の局面において、役割を果たし得る。考慮の際に、ＰＣＴＲ３は、以下の悪性
特徴において役割を果たし得る： 腫瘍細胞増殖のオートクリン／パラクリン刺激 細胞傷害治療に対する腫瘍細胞生存および腫瘍細胞耐性のオートクリン／パラ
クリン刺激 局所的組織再モデリング、腫瘍細胞の実質（ｐａｒａｎｅｃｈｍａｌ）および
基底膜浸潤および運動性（これらにより転移に寄与している） 免疫監視機構から腫瘍が逃れる結果となるＴ細胞媒介免疫エフェクター細胞お
よび経路の腫瘍媒介免疫抑制。
【０１３３】 （腫瘍学的指標および中枢神経系指標におけるＦＣＴＲ３を標的化する治療調
査） ４１の正常ヒト組織および５５のヒト癌細胞株の発現プロフィールからの推定
疾患指標（実施例２を参照のこと）としては、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、神経
膠腫／星状細胞腫の混合、腎臓細胞癌腫、乳腺癌、卵巣癌、黒色腫のサブセット
が挙げられる。ＦＣＴＲ３とその同種リガンドとの推定される相互作用を破壊す
るよう設計されたヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体によ
りＦＣＴＲ３を標的化することは、有意な抗腫瘍／抗転移活性および関連する総
合的症状の改善を生じ得る。ＦＣＴＲ３／レセプター相互作用により連結した（
ｅｎｇａｇｅ）下流のシグナル伝達成分を特異的／選択的に妨げる低分子の同定
はまた、有意な抗腫瘍／抗転移活性および関連する総合的症状の改善を生じると
予測される。同様に、ＦＣＴＲ３転写物／メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の
発現を減少させるよう設計された、改変したアンチセンスリボヌクレオチドまた
はアンチセンス遺伝子発現構築物（プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウ
イルス、「裸の」ＤＮＡアプローチ）は、ＦＣＴＲ３の推定特性に基づいて、抗
腫瘍影響を有すると予測される。
【０１３４】 ニューレスチンおよびヒレグリンに対する関連、ならびにその脳組織における
高レベルの発現に基づいて、ＦＣＴＲ３は、虚血、脳外傷および種々の神経変性
疾患から生じる、損傷した中枢神経系細胞の再生／修復／再髄鞘形成を促進する
ために、再髄鞘形成のためにもまた使用され得る。この仮定は、ニューレグリン
（グリア増殖因子２）が、多発性硬化症についての慢性再発モデルにおける自己
免疫脱髄を減少させ、そして再ミエリン化（ｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ）を増
強させることを示す報告に基づく（Ｃａｎｎｅｌｌａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．９５：１０１００−１０１０５（１９９８））。関連する分子
であるニューレスチンの発現は、嗅覚感覚ニューロンの再生の間に、外部房飾細
胞において誘導され得る。
【０１３５】 （ＦＣＴＲ４） ＦＣＴＲ４は、ＮＦ−κ−Ｂ Ｐ６５δ３タンパク質に関連する、原形質膜タ
ンパク質である。このクローンは、胎児肝臓組織において発現される。
【０１３６】 ６０９ヌクレオチドの新規なＦＣＴＲ４核酸（２９６９２２７５．０．１とも
また称される）を、表４Ａに示す。ＯＲＦは、ヌクレオチド９９〜１０１のＡＴ
Ｇ開始コドンで開始し、そしてヌクレオチド５２２〜５２４のＴＡＡコドンで終
止する。この開始コドンから上流およびこの終止コドンの下流の推定の未翻訳領
域は、表５４Ａにおいて下線を引かれており、そして開始コドンおよび終止コド
ンは、太字である。
【０１３７】
【表５２】 配列番号１４によってコードされるＦＣＴＲ４タンパク質は、１４１のアミノ
酸残基を有し、そして表４Ｂにおいて１文字コードを使用して表される。ＦＣＴ
Ｒ４に対するＰｓｏｒｔプロフィールは、この配列がＮ末端シグナルペプチドを
有さないこと、および０．６０００の確実性で、原形質膜に局在し得るようであ
るということを推定する。ＳｉｇｎａｌＰ結果に基づく最も起こりそうなペプチ
ドの切断部位は、アミノ酸３９と４０との間、すなわち、アミノ酸配列ＡＣＴ−
ＣＣＡにおけるダッシュの位置である。このタンパク質の推定分子量は、１６０
５１．５ダルトンである。
【０１３８】
【表５３】 推定アミノ酸配列を、公共に利用可能なＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて
検索した。ＦＣＴＲ４タンパク質は、表４Ｃに示すＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃ
ｒｕｚｉ（８６アミノ酸；ＡＣＣ：Ｑ９９２３３）の仮定の１０ｋＤタンパク質
と、３０％の同一性（７２アミノ酸のうちの２２アミノ酸）および４３％の相同
性（７２アミノ酸のうちの３１アミノ酸）を示した。ヒトタンパク質との最良の
相同性は、ＮＦ−κ−Ｂ Ｐ６５δ３タンパク質（７１アミノ酸フラグメント；
ＡＣＣ：Ｑ１３３１３）（配列番号７７）との５４％同一性（３４３アミノ酸の
うちの１１４アミノ酸）であった。
【０１３９】
【表５４】 相同性に基づいて、ＦＣＴＲ４タンパク質および各相同タンパク質またはペプ
チドは、少なくともいくつかの活性を共有し得る。
【０１４０】 （ＦＣＴＲ５） ＦＣＴＲ５は、ヒト補体Ｃ１Ｒコンポーネント前駆体と相同な配列を有する、
タンパク質である。そのクローンは、乳房、心臓、肺、胎児肺、唾液腺、副腎、
脾臓、腎臓、および胎児腎臓において発現される。
【０１４１】 １６６７ヌクレオチドの新規ＦＣＴＲ５核酸（３２１２５２４３．０．２１と
も呼ばれる）が、表５Ａに示される。ＯＲＦは、ヌクレオチド３４〜３６のＡＴ
Ｇ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１４９５〜１４９７のＴＧＡコドン
で終止する。開始コドンの上流の推定非翻訳領域および終止コドンの下流の推定
非翻訳領域が、表５Ａにおいて下線を付され、そして開始コドンおよび終止コド
ンは太字で示される。
【０１４２】 （表５Ａ．ＦＣＴＲ５ａヌクレオチド配列（配列番号１６）
【０１４３】
【表５５】 配列番号１６によりコードされるＦＣＴＲ５タンパク質は、４８７アミノ酸残
基であり、そして表５Ｂにおいて１文字コードを使用して示される。ＦＣＴＲ５
を、ＳｉｇｎａｌＰｅｐサーチプロトコルおよびＰｓｏｒｔプロトコルを使用し
て、他のデータベースに対して検索した。このＦＣＴＲ５タンパク質は、多分マ
イクロボディ（ペルオキシソーム）であり（確実性＝０．６４０６）、そしてＮ
末端シグナル配列を有さないようである。ＦＣＴＲ５タンパク質の推定分子量は
、５３５１１．９ダルトンである。
【０１４４】 （表５Ｂ．コードされるＦＣＴＲ５ａタンパク質の配列（配列番号１７））
【０１４５】
【表５６】 別の実施形態（ＦＣＴＲ５ｂ）は、表５Ｃに示される１６９１塩基配列である
。
【０１４６】 （表５Ｃ．ＦＣＴＲ５ｂヌクレオチド配列（配列番号１８））
【０１４７】
【表５７】 配列番号１８によりコードされるＦＣＴＲ５ｂタンパク質は、４８７アミノ酸
残基であり、そして表５Ｄにおいて１文字コードを使用して示される。ＦＣＴＲ
５を、ＳｉｇｎａｌＰｅｐサーチプロトコルおよびＰｓｏｒｔプロトコルを使用
して、他のデータベースに対して検索した。このＦＣＴＲ５ｂタンパク質は、多
分マイクロボディ（ペルオキシソーム）であり（確実性＝０．６４０６）、そし
てＮ末端シグナル配列を有さないようである。ＦＣＴＲ５タンパク質の推定分子
量は、５３５１１．９ダルトンである。
【０１４８】 （表５Ｄ．コードされるＦＣＴＲ５ｂタンパク質の配列（配列番号１９））
【０１４９】
【表５８】 推定アミノ酸配列を、公に利用可能なＧｅｎＢｎａｋデータベースにおいて検
索した。ＦＣＴＲ５ａタンパク質は、ヒト補体Ｃ１Ｒコンポーネント前駆体（Ｅ
Ｃ ３．４．２１．４１）（７０５ａａ；ＡＣＣ：Ｐ００７３６）と５８％同一
性（３０２アミノ酸に対して１７７アミノ酸）および７４％相同性（３０２アミ
ノ酸に対して２２６アミノ酸）を示した。相同性に基づいて、ＦＣＴＲ５タンパ
ク質および各相同タンパク質または相同ペプチドは、少なくともいくつかの活性
を共有し得る。
【０１５０】 配列データベースの検索において、例えば、ＦＣＴＲ５ａのヌクレオチド１７
〜１５９４の核酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ補体Ｃ１ｒ様プロテイナー
ゼ前駆体（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＸＭ＿００７０６１．１）（配列番号７８）
と同一な１５７５塩基を１５７８塩基中に有する（９９％）ことが見出された（
表５Ｅ）。
【０１５１】 （表５Ｅ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ補体Ｃ１ｒ様プロテイナーゼ前駆体（配
列番号７８）に対するＦＣＴＲ５ａのＢＬＡＳＴＮ）
【０１５２】
【表５９】 この検索において、ＦＣＴＲ５ａ核酸が、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ補体コン
ポーネント１（ｒサブコンポーネント）の３つのフラグメントと相同性を有する
ことが見出された。ＦＣＴＲ５ａ核酸は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ補体コンポ
ーネント１（ｒサブコンポーネント）（ＧｅｂＢａｎｋ Ａｃｃ；ＮＭ＿００１
７３３．１）の１４５８〜１７５４フラグメントと同一な１０２塩基を１１７塩
基中に有し（８７％）、２０５２〜２１４５フラグメントと同一な８２塩基を９
４塩基中に有し（８７％）、そして１６７８〜１７４０のフラグメントと同一な
５４塩基を６３塩基中（８５％）を有する（表５Ｆ）。
【０１５３】 （表５Ｆ．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ補体コンポーネント１（ｒサブコンポー
ネント）（配列番号７９）に対するＦＣＴＲ５ａのＢＬＡＳＴＮ）
【０１５４】
【表６０】 ＦＣＴＲ５ａのタンパク質のアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由来
の４８７アミノ酸補体Ｃ１ｒ様プロテイナーゼ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋ−ＡＣＣ
：ＡＡＦ４４３４９．１（配列番号８０）と同一な４８５アミノ酸残基を４８７
アミノ酸残基中に有し（９９％）、そしてポジティブな４８７残基を４８７残基
中に有する（１００％）（表５Ｇ）。
【０１５５】 （表５Ｇ．補体Ｃ１Ｒ様プロテイナーゼ前駆体（配列番号８０）に対するＦＣ
ＴＲ５ａおよびＦＣＴＲ５ｂのＢＬＡＳＴＰ）
【０１５６】
【表６１】 ＦＣＴＲ５ａのタンパク質の全アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由
来の７０５アミノ酸の補体Ｃ１Ｒコンポーネント前駆体（ＧｅｎＢａｎｋ−ＡＣ
Ｃ：ＡＡＡ５１８５１．１１）（配列番号４３）の４００〜７０１アミノ酸セグ
メントと同一な１７５アミノ酸残基を３０３アミノ酸残基中に有し（５８％）、
そしてポジティブな２２６残基を３０３残基中に有し（７４％）、アミノ酸１〜
１５５と同一な７２残基を１５７残基中に有し（４５％）そしてポジティブな９
４残基を１５７残基中に有し（５９％）、そしてアミノ酸１８８〜３１２と同一
な３６残基を１３９残基中に有し（２５％）そしてポジティブな５８残基を１３
９残基中に有する（４０％）。
【０１５７】 （表５Ｈ．補体Ｃ１Ｒコンポーネント前駆体（配列番号８１）に対するＦＣＴ
Ｒ５ａおよびＦＣＴＲ５ｂのＢＬＡＳＴＰ）
【０１５８】
【表６２】 相同性に基づいて、ＦＣＴＲ５タンパク質および各相同タンパク質または相同
ペプチドは、少なくともいくつかの活性を共有し得る。
【０１５９】 （ＦＣＴＲ６） 新規ヒト第ＸＩ血液凝固因子様タンパク質をコードする１０７８ヌクレオチド
の新規ＦＣＴＲ６ａ核酸（２７４５５１８３．０．１９とも呼ばれる）が、表６
Ａに示される。ＯＲＦは、ヌクレオチド２４３〜２４５のＡＴＧ開始コドンで始
まり、そしてヌクレオチド１０４４〜１０４６のＴＡＡコドンで終止すると同定
された。開始コドンの上流の推定非翻訳領域および終止コドンの下流の推定非翻
訳領域が、表６Ａにおいて下線を付され、そして開始コドンおよび終止コドンは
太字で示される。
【０１６０】 （表６Ａ．ＦＣＴＲ６ａヌクレオチド配列（配列番号２０）
【０１６１】
【表６３】 配列番号２０によりコードされるＦＣＴＲ６ａタンパク質は、２６７アミノ酸
残基を有し、そして表６Ｂにおいて１文字コードを使用して示される。ＦＣＴＲ
６ａを、ＳｉｇｎａｌＰｅｐサーチプロトコルおよびＰｓｏｒｔプロトコルを使
用して、他のデータベースに対して検索した。このＦＣＴＲ６ａタンパク質は、
多分ミトコンドリア基質空間にあり（確実性＝０．４３７２）、そしてＮ末端シ
グナル配列を有さないようである。ＦＣＴＲ６ａタンパク質の推定分子量は、２
９４１２．８ダルトンである。
【０１６２】 （表６Ｂ．コードされるＦＣＴＲ６ａタンパク質の配列（配列番号２１））
【０１６３】
【表６４】 別の実施形態では、ＦＣＴＲ６ｂ（２７４５５１８３．０．１４５とも呼ばれ
る）は、表６Ｃに示される１３３４残基を有する。ＯＲＦは、ヌクレオチド４９
９〜５０１のＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１３００〜１３０
２のＴＡＡコドンで終止する。開始コドンの上流の推定非翻訳領域および終止コ
ドンの下流の推定非翻訳領域が、表６Ｃにおいて下線を付され、そして開始コド
ンおよび終止コドンは太字で示される。
【０１６４】 （表６Ｃ．ＦＣＴＲ６ｂヌクレオチド配列（配列番号２２））
【０１６５】
【表６５】 配列番号２２によりコードされるＦＣＴＲ６ｂタンパク質は、２６７アミノ酸
残基であり、そして表６Ｂにおいて１文字コードを使用して示される。ＦＣＴＲ
６のＰｓｏｒｔプロフィールは、この配列がＮ末端シグナルペプチドを有さない
こと、およびミトコンドリア基質空間に位置する可能性があることを推測する（
確実性＝０．４３７２）。このタンパク質の推定分子量は、２９４９８．９ダル
トンである。
【０１６６】 （表６Ｄ．コードされるＦＣＴＲ６ｂタンパク質の配列（配列番号２３））
【０１６７】
【表６６】 配列データベースの検索において、例えば、ＦＣＴＲ６ａ核酸配列が、Ｍａｃ
ａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ脳ｃＤＮＡ（クローンＱｃｃＥ−１７０３４
（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：｜ＡＢ０４６６５１）の塩基５５１〜１４４７と同一
な８５３塩基を８９７塩基中に有し（９５％）、そして塩基１２７〜５１３と同
一な３４６塩基を３８８塩基中に有する（８９％）ことが、見いだされた。
【０１６８】 （表６Ｅ．Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ脳ｃＤＮＡクローンＱｃ
ｃＥ−１７０３４（配列番号８２）に対するＦＣＴＲ６ａのＢＬＡＳＴＮ）
【０１６９】
【表６７】 配列データベースの検索において、例えば、ＦＣＴＲ６ａ核酸が、Ｍｕｓ ｍ
ｕｓｃｕｌｕｓ成体雄性精巣ｃＤＮＡ、ＲＩＫＥＮ全長富化（ｅｎｒｉｃｈｅｄ
）（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＫ０９６６０）の塩基４１０〜７７９に、３７８
塩基中２９５塩基（７８％）の同一性を有することが見出された（表６Ｆ）。
【０１７０】 （表６Ｆ．Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ成体雄性精巣ｃＤＮＡ、ＲＩＫＥＮ全長
富化（配列番号８３）に対するＦＣＴＲ６ａのＢＬＡＳＴＮ）
【０１７１】
【表６８】 ＦＣＴＲ６ａアミノ酸は、２６７アミノ酸の仮定タンパク質［Ｍａｃａｃａ
ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＢ０４６６５１）（配列番号
８４）と、２６７アミノ酸残基中２４７アミノ酸残基（９２％）の同一性、およ
び３０７残基中２５１残基（９４％）の陽性を有する（表６Ｇ）。
【０１７２】 （表６Ｇ．仮定タンパク質［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］（配
列番号８４）に対するＦＣＴＲ６ａおよびｂのＢＬＡＳＴＰ）
【０１７３】
【表６９】 ＦＣＴＲ６ａアミノ酸は、６３８アミノ酸の血漿カリクレインＢ１前駆体（Ｇ
ＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＮＰ＿０００８８３．１）（配列番号８５）と、２０１ア
ミノ酸残基中８０アミノ酸残基（３９％）の同一性、および２０１残基中１１９
残基（５８％）の陽性を有する（表６Ｈ）。
【０１７４】 （表６Ｈ．血漿カリクレインＢ１前駆体（配列番号８５）に対するＦＣＴＲ６
ａおよびｂのＢＬＡＳＴＰ）
【０１７５】
【表７０】 ＦＣＴＲ６ａアミノ酸は、６４３アミノ酸のカリクレイン［Ｓｕｓ ｓｃｒｏ
ｆａ］（ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＢＡＡ３７１４７．１）（配列番号８６）と、
１８３アミノ酸残基中７３アミノ酸残基（３９％）の同一性、および１８３残基
中１１０残基（５９％）の陽性を有する（表６Ｉ）。
【０１７６】 （表６Ｉ．カリクレイン［Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ］（配列番号８６）に対する
ＦＣＴＲ６ａおよびｂのＢＬＡＳＴＰ）
【０１７７】
【表７１】 ＦＣＴＲ６ａアミノ酸は、６２５アミノ酸の凝固因子ＸＩ［Ｈｏｍｏ ｓａｐ
ｉｅｎｓ］（ｅｍｂＣＡＡ６４３６８．１）（配列番号８７）と、２０５アミノ
酸残基中８１アミノ酸残基（３９％）の同一性、および２０５残基中１１２残基
（５４％）の陽性を有する（表６Ｊ）。
【０１７８】 （表６Ｊ．凝固因子ＸＩ［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］（配列番号８７）に対
するＦＣＴＲ６ａおよびｂのＢＬＡＳＴＰ）
【０１７９】
【表７２】 １９９６年の米国における腎臓細胞癌の新しい症例の数は、３０，６００症例
と見積もられ、推定１２，０００人が死亡した。近位尿細管から生じた組織発生
を有する腫瘍（明細胞および色素親和性の腫瘍）は、腎臓癌の８５％に達し、一
方、結合尿細管／集合尿細管から生じた組織発生を有する腫瘍（色素親和性、腫
瘍性（ｏｎｃｏｃｙｔｉｃ）、およびベリーニ管型の腫瘍）は、たった１１％で
ある。
【０１８０】 腺癌は、明細胞癌および顆粒細胞癌に分けられ得るが、この２つの細胞型は、
いくつかの腫瘍と共に生じ得る。高度に分化した腎臓癌と腎臓腺腫との間の区別
は、難しい。診断は、通常、塊のサイズに基づいて任意に行われるが、サイズの
みでは、処置アプローチに影響しない。なぜなら、転移は、０．５ｃｍ程の小さ
い病変で生じ得るからである。
【０１８１】 局所的なリンパ節切除を伴う根治的な腎摘出は、第１段階（局所的疾患）の腎
臓細胞癌についての承認された（しばしば、治癒的な）治療であるが、約７０％
の患者が示す進行性の疾患については、利用可能な治療はほとんどない。術後ア
ジュバントとしての放射線療法は、効果的でなく、そして術前に使用した場合、
局所的な再発を減少し得るが、５年間の生存性を改善するようではない。転移性
の腎臓細胞癌の経過を有意に変更し得る化学療法剤は、同定されていない（（Ｒ
ｅｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｎｃｅｒ（ＰＤＤ（登録商標））Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
−Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ，Ｃａｎｃｅｒｎｅｔ，ＮＣＩ）
。
【０１８２】 従って、腎臓細胞癌において差次的に調節される遺伝子を同定することが必要
である。さらに、これらの遺伝子の発現を調節するための候補治療物質をアッセ
イするための方法の必要性が存在する。これらの物質は、これらの同定された遺
伝子によって発現される組換えタンパク質またはこれらの同定されたタンパク質
に結合する抗体であり得る。なおさらに、標的分子または関連する成分を同定す
るための効果的な方法の必要性が存在する。これらおよび関連する必要性および
欠点について、本発明において取り組む。
【０１８３】 （新規カリクレイン様／凝固因子ＸＩ様タンパク質およびそれをコードする核
酸） 驚くことに、ＦＣＴＲ６は、正常な隣接腎臓組織に対して、明細胞の腎臓細胞
癌組織において差次的に発現されることが見出された。本発明は、ｃＤＮＡおよ
び／またはゲノムＤＮＡによってコードされる新規タンパク質ならびにそれに類
似するタンパク質（すなわち、カリクレイン様に対する配列類似性を保持する新
規タンパク質）、これらのタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸
、および本発明のタンパク質に対して免疫特異的に結合する抗体を開示する。こ
れは、腎臓癌および肝硬変の処置における治療薬剤としての用途を有し得る。
【０１８４】 （腎臓癌のタンパク質治療におけるカリクレインファミリーメンバーの有用性
） 組換えカリクレインでの腎臓細胞癌の処置は、いくつかの潜在的機構を介して
疾患結果を改善し得る。文献は、このタンパク質ファミリーのメンバーが、脈管
形成のプロセス（腫瘍進行の重要なプロセス）に対して阻害性であることを示唆
する。腎臓細胞癌は、高度に脈管形成性の癌であることが知られている。従って
、カリクレインでの腎臓細胞癌の処置は、腫瘍への血液供給の活発な動員を効果
的にシャットダウンし得る。このタンパク質ファミリーのメンバーは、血管凝固
における役割を有することが知られている。抗脈管形成治療剤に類似して、プロ
凝固性の癌細胞によって生成される因子はまた、腫瘍血管供給を効果的に「凝固
する」ことによって、癌の増殖を阻害するよう作用し得る。さらに、そのタンパ
ク質分解活性を介して、カリクレインは、癌細胞の進行性の増殖に必要なＥＣＭ
タンパク質または増殖因子を分解し得る。以下は、癌治療におけるカリクレイン
の重要性を強調する関連する文献である。
【０１８５】 （新規ヒトカリクレイン遺伝子ファミリー：発癌における関与） Ｄｉａｍａｎｄｉｓ ＥＰ；Ｙｏｕｓｅｆ ＧＭ；Ｌｕｏ Ｉ；Ｍａｇｋｌａ
ｒａ Ｉ；Ｏｂｉｅｚｕ ＣＶ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍｏｕｎｔ Ｓｉｎａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏ
ｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ２０００ Ｍａｒ；１１
（２）：５４−６０． 要約：従来のヒトカリクレイン遺伝子ファミリーは、３つの遺伝子、すなわち
、ＫＬＫ１［ヒトカリクレイン１（ｈＫ１）すなわち膵臓／腎臓カリクレインを
コードする］、ＫＬＫ２（ヒト腺カリクレイン１として以前に公知の、ｈＫ２を
コードする）、およびＫＬＫ３［ｈＫ３すなわち前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）を
コードする］からなる。ＫＬＫ２およびＫＬＫ３は、前立腺癌診断における重要
な適用を有し、そしてより最近では、乳癌診断における重要な適用を有する。
【０１８６】 過去２〜３年間の間、ヒトカリクレイン遺伝子ファミリーの新規の推定のメン
バーが、同定され、これらには、ＰＲＳＳＬ１遺伝子［正常上皮細胞特異的１遺
伝子（ＮＥＳ１）をコードする］、ザイム（ｚｙｍｅ）／プロテアーゼＭ／ニュ
ーロシン（ｎｅｕｒｏｓｉｎ）をコードする遺伝子、プロテアーゼ／ＫＬＫ−Ｌ
１をコードする遺伝子、ならびにニューロプシン（ｎｅｕｒｏｐｓｉｎ）、角質
キモトリプシン性酵素およびトリプシン様セリンプロテアーゼをコードする遺伝
子が挙げられる。別の５つの推定カリクレイン遺伝子（暫定的に、ＫＬＫ−Ｌ２
、ＫＬＫ−Ｌ３、ＫＬＫ−Ｌ４、ＫＬＫ−Ｌ５、およびＫＬＫ−Ｌ６と名付ける
）もまた同定された。新規に同定されたカリクレイン様遺伝子の多くは、ステロ
イドホルモンによって調節され、そして少数のカリクレイン（ＮＥＳ１、プロテ
アーゼＭ、ＰＳＡ）は、乳癌および他の可能性のある癌においてダウンレギュレ
ートされることが知られている。ＮＥＳ１は、新規な乳癌腫瘍サプレッサータン
パク質であり、そしてＰＳＡは、脈管形成の強力なインヒビターであるようであ
る。この簡単な総説は、これらの新しく定義されそして拡張されたヒトカリクレ
イン遺伝子座の近年の発達および可能な適用を要約する。
【０１８７】 （肝硬変のタンパク質治療におけるカリクレイン様／凝固因子ＸＩ様ファミリ
ーメンバーの有用性） 以下の実施例Ａ、表ＣＣ３、パネル４に示される炎症に関連する結果は、パネ
ル１のデータ（表ＣＣ１）と比較した場合（ここでは、正常な成体肝臓において
ほとんどまたは全く発現が存在しない）の、肝硬変サンプルにおける２７４５５
１８３．０．１９の過剰発現を示す。パネル４は、未処置または休止状態の種々
のヒト細胞株、ならびに広範な免疫調節分子で処置した同じ細胞から作製した。
いくつかの疾患組織ならびに器官コントロールが示される。
【０１８８】 （炎症におけるＦＣＴＲ６の潜在的役割） 肝硬変は、Ｃ型肝炎患者において、およびアルコール中毒患者においてもまた
生じる。このタンパク質は、凝固因子ＸＩに４１％関連し、肝硬変におけるその
潜在的役割は、キニノーゲンの切断に関連され得る。これについての参考文献は
、以下である： Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２０００ Ｍａｙ；８３（５）：７０９−１
４ Ｈｉｇｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ ｉｓ
ｃｌｅａｖｅｄ ｂｙ ＦＸＩａ ａｔ ｔｈｒｅｅ ｓｉｔｅｓ：Ａｒｇ４
０９−Ａｒｇ４１０，Ｌｙｓ５０２−Ｔｈｒ５０３ ａｎｄ Ｌｙｓ３２５−Ｌ
ｙｓ３２６．Ｍａｕｒｏｎ Ｔ，Ｌａｍｍｌｅ Ｂ，Ｗｕｉｌｌｅｍｉｎ ＷＡ
Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｕｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｅｒｎ，Ｉｎｓｅｌｓｐｉｔａｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎ
ｄ． 要約： 著者らは、インビトロでの、活性化された凝固因子ＸＩ（ＦＸＩａ）による高
分子量キニノーゲン（ＨＫ）の切断を調査した。ＦＸＩａとのＨＫのインキュベ
ーションは、切断産物の生成を生じ、これらの産物を、ＳＤＳ−Ｐａｇｅに供し
そして銀染色、リガンドブロッティングおよび免疫ブロッティングでそれぞれ分
析した。ＦＸＩａとのインキュベーションに際して、バンドは、非還元ゲル上で
１１１、１００、８８ｋＤａで生じ、そして還元ゲル上で７６、６２および５１
ｋＤａで生じた。これらの反応混合物のアミノ酸配列分析は、Ａｒｇ４０９−Ａ
ｒｇ４１０、Ｌｙｓ５０２−Ｔｈｒ５０３およびＬｙｓ３２５−Ｌｙｓ３２６で
の３つの切断部位を明らかにした。ＦＸＩａと共に３分間、１０分間および１２
０分間インキュベートしたＨＫサンプルの分析は、ＨＫが、Ａｒｇ４０９−Ａｒ
ｇ４１０で最初に切断され、次いで、Ｌｙｓ５０２−Ｔｈｒ５０３で切断され、
そして次いで、Ｌｙｓ３２５−Ｌｙｓ３２６で切断されることを示した。結論と
して、ＨＫは、ＦＸＩａによって３つの部位で切断される。ＦＸＩａによるＨＫ
の切断は、ＨＫの表面結合部位（これは、ＨＫの不活化および接触系活性化の制
御の機構を構成し得る）の損失を生じる。
【０１８９】 （炎症におけるＦＣＴＲ６の治療標的化の影響） モノクローナル抗体でのＦＣＴＲ６の治療標的化は、キニノーゲンの分解の程
度を制限またはブロックし、それによって、肝硬変において生じる肝臓の分解を
減少することが予測される。適切な参考文献は以下である： Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ １９９９ Ｎｏｖ；８２（５）：１４２８−
３２ Ｐａｒａｌｌｅｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｌｅｖｅ
ｌｓ ｏｆ ｈｉｇｈ ａｎｄ ｌｏｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ
ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ
． Ｃｕｇｎｏ Ｍ，Ｓｃｏｔｔ ＣＦ，Ｓａｌｅｒｎｏ Ｆ，Ｌｏｒｅｎｚａｎｏ
Ｅ，Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｓｔｅｒａｌ Ｗ，Ａｇｏｓｔｏｎｉ Ａ，Ｃｏｌｍａ
ｎ ＲＷ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＩＲＣ
ＣＳ Ｍａｇｇｉｏｒｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍ
ｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ． ｍａｓｓｉｍｏ．ｃｕｇｎｏ＠ｕｎｉｍｉ．ｉｔ 要約： 肝硬変患者における、高分子量キニノーゲン（ＨＫ）および低分子量キニノー
ゲン（ＬＫ）の調節についても、肝臓機能損傷の程度に対する互いの関係につい
ても、ほとんど知られていない。本研究において、著者らは、最近記載された粒
子濃度蛍光免疫アッセイ（ＰＣＦＩＡ）によって定量的に、そしてＳＤＳ ＰＡ
ＧＥおよび免疫ブロッティング分析によって定性的に、肝臓機能の種々の損傷程
度を呈する３３人の肝硬変患者由来の血漿中のＨＫおよびＬＫを評価した。３３
人の健常な被験体が、正常なコントロールとして務めた。肝硬変患者は、正常被
験体（中央値ＨＫ ８３μｇ／ｍｌ［６５〜１１５μｇ／ｍｌの範囲］；ＬＫ
８０μｇ／ｍｌ［４５〜１２０μｇ／ｍｌ］）と比べて、有意に低いＨＫ（中央
値４９μｇ／ｍｌ［２２〜９９μｇ／ｍｌ］）およびＬＫ（５８μｇ／ｍｌ［１
５〜１００μｇ／ｍｌ］）の血漿レベルを有した（ｐ＜０．０００１）。ＨＫお
よびＬＫのこれらの血漿濃度は、コリンエステラーゼ（ｐ＜０．０００１）およ
びアルブミン（ｐ＜０．０００１およびｐ＜０．００１）の血漿レベルに直接的
に関係し、そしてＣｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈスコア（ｐ＜０．０００１）およびプロ
トロンビン時間比（ｐ＜０．０００１）（肝臓疾患における臨床的かつ実験的な
異常性を反映する）に対して逆方向に関連した。正常な個体に類似して、肝硬変
患者において、血漿ＨＫおよびＬＫレベルは、互いに並行し、これは、これらの
タンパク質の協調的な調節が肝臓疾患において維持されることを示唆する。肝硬
変性の血漿におけるキニノーゲンのＳＤＳ ＰＡＧＥおよび免疫ブロッティング
分析は、ＬＫについての正常なコントロールにおいて観察されたパターン（６６
ｋＤａの単一のバンド）と類似のパターンを示し、いくらか低い分子量形態が、
肝硬変性の血漿において観察された。ＨＫ切断のわずかな増加（１３０ＫＤａで
の大きいバンド、および１０７ｋＤａで弱いが増加したバンド）が示された。Ｈ
Ｋ切断の増加は、正常コントロールと比較した、より低い切断キニノーゲン指数
（ＣＫＩ）によって確認された。これらのデータは、肝臓合成における欠損およ
び肝硬変患者由来の血漿中の両方のキニノーゲンの破壊的切断の増加を示唆する
。キニノーゲンに類似する重要な調節タンパク質の減少は、凝固系およびフィブ
リン溶解系における不均衡に寄与し得、これは、しばしば、肝硬変患者において
生じる。
【０１９０】 まとめると、腎臓細胞癌におけるＦＣＴＲ６（カリクレインファミリー）の差
次的な発現は、腎臓発癌の大きい潜在性を有し得る重要な知見である。さらに、
肝硬変における上記遺伝子の過剰発現は、免疫治療標的としてのその予測される
用途を実証する。
【０１９１】 （ＦＣＴＲ７） 新規なトリプシンインヒビター様タンパク質をコードする、１４９８ヌクレオ
チドのＦＣＴＲ７（３２５９２４６６．０．６４とも称する）の新規な核酸を表
７Ａに示す。ＯＲＦは、ヌクレオチド４７０〜４７２のＡＴＧ開始コドンで始ま
り、そしてヌクレオチド１３６９〜１３７１のＴＡＡコドンで終結する。推定非
翻訳領域がある場合には、この開始コドンから上流およびこの終結コドンから下
流に見出される。
【０１９２】
【表７３】 配列番号２４によってコードされるＦＣＴＲ７タンパク質は、３００アミノ酸
残基を有し、そして表７Ｂにおいて一文字コードを使用して表される。ＦＣＴＲ
７遺伝子は、脳；生殖系細胞の腫瘍において発現されることが見出された。ＦＣ
ＴＲ７遺伝子は、ＵｎｉｇｅｎｅクラスターＨｓ．１８２３６４にマッピングさ
れる。ＵｎｉｇｅｎｅクラスターＨｓ．１８２３６４は、以下の組織において発
現される：脳、乳房、耳、生殖系細胞、心臓、肝臓、肺、胚全体、卵巣、膵臓、
プール（ｐｏｏｌｅｄ）、前立腺、胃、精巣、子宮、血管。従って、本発明にお
いて記載されたＦＣＴＲ７タンパク質もまた、上記の組織において発現される。
【０１９３】 ＦＣＴＲ７についてのＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏ
ｐａｔｈｙプロフィールは、この配列がシグナルペプチドを有し、そして０．４
２２８の信頼度で細胞外に位置付けられる可能性が高いことを予想する。Ｓｉｇ
ｎａｌＰは、アミノ酸２０と２１との間（すなわち、アミノ酸ＡＲＡ−ＩＰの配
列における破線）における切断部位を示す。ＦＣＴＲ７の推定分子量は、３４７
３９．９ダルトンである。Ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙプロフィールは、アミノ末端の
疎水性領域を示す。この領域は、シグナルペプチドとして機能し得、本発明のタ
ンパク質を分泌させるかまたは形質膜に位置付けるように標的化し得る。
【０１９４】
【表７４】 この遺伝子は、以下の表７Ｃに示されるマッピング情報を割り当てられた、Ｕ
ｎｉｇｅｎｅクラスターＨｓ．１８２３６４にマッピングされる。従って、この
遺伝子についての染色体割り当ては、Ｕｎｉｇｅｎｅクラスター１８２３６４に
ついての染色体割り当てと同じである。
【０１９５】
【表７５】 予想されたアミノ酸配列を、公的に利用可能なＧｅｎＢａｎｋデータベースに
おいて検索した。
【０１９６】 ＦＣＴＲ７タンパク質は、ヒト２５ｋＤトリプシンインヒビタータンパク質（
２５８ａａ；ＡＣＣ：Ｏ４３６９２）と、スコア＝７４３（２６１．５ ｂｉｔ
ｓ）、期待値＝１．４ｅ−７３、Ｐ＝１．４ｅ−７３、５４％同一性（２３７ア
ミノ酸にわたって１２９アミノ酸）および４３％相同性（２３７アミノ酸にわた
って１６７アミノ酸）を示した（表７Ｄ）。
【０１９７】
【表７６】 ＦＣＴＲ７のヌクレオチド配列は、２６６４ヌクレオチドのＨｏｍｏ ｓａｐ
ｉｅｎｓ推定分泌タンパク質前駆体、ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ−ＡＣＣ：ＡＦ
１４２５７３）（配列番号９３）の１〜９５７塩基セグメントに対して、９５７
残基のうち９５４残基（９９％）での同一性を有し、そして塩基１３１７〜１９
５３に対して、１７５残基のうち１７４残基（９９％）での同一性を有する（表
７Ｅ）。
【０１９８】
【表７７】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、５００アミノ酸の推定分泌タンパク質前駆体［Ｈｏ
ｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］（ＧｅｎＢａｎｋ−ＡＣＣ Ｎｏ．：ＡＦ１４２５７３
）（配列番号９４）に対して、２８５アミノ酸残基のうち２８４アミノ酸残基（
９９％）での同一性を有し、そして２８５アミノ酸残基のうち２８４アミノ酸残
基（９９％）での類似性を有する（表７Ｆ）。
【０１９９】
【表７８】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、１８８アミノ酸の妊娠後期肺タンパク質１［Ｌａｔ
ｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ］（ＧｅｎＢａｎｋ−ＡＣＣ Ｎｏ．：ＡＦ１０
９６７４）（配列番号９５）に対して、１７６アミノ酸残基のうち１３７アミノ
酸残基（７８％）での同一性を有し、そして１７６アミノ酸残基のうち１５１ア
ミノ酸残基（８６％）での類似性を有する（表７Ｇ）。
【０２００】
【表７９】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、２５８アミノ酸のＲ３Ｈドメイン含有プレプロタン
パク質；２５ｋＤトリプシンインヒビター［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］（Ｇｅ
ｎＢａｎｋ−ＡＣＣ Ｎｏ．：Ｄ４５０２７）（配列番号９６）に対して、２３
７アミノ酸残基のうち１３０アミノ酸残基（５５％）での同一性を有し、そして
２３７アミノ酸残基のうち１６５アミノ酸残基（７０％）での類似性を有する（
表７Ｈ）。
【０２０１】
【表８０】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、トリプシンインヒビター［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎ
ｓ］２５ｋＤａトリプシンインヒビター（ＥＭＢＬＡｃｃ Ｎｏ．：ＡＬ１１７
３８２）に類似した２５３アミノ酸の新規なタンパク質（配列番号９７）に対し
て、２３３アミノ酸残基のうち１０９アミノ酸残基（４７％）での同一性を有し
、そして２３３アミノ酸残基のうち１４６アミノ酸残基（６３％）での類似性を
有する（表７Ｉ）。
【０２０２】
【表８１】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由来の２５８アミノ酸の
２５ｋＤａトリプシンインヒビター（ＥＭＢＬＡｃｃ Ｎｏ．：Ｏ４３６９２）
（配列番号８８）に対して、２３７アミノ酸残基のうち１２９アミノ酸残基（５
４％）での同一性を有し、そして２３７アミノ酸残基のうち１６７アミノ酸残基
（７０％）での類似性を有する（表７Ｊ）。
【０２０３】
【表８２】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、２６６アミノ酸のグリオーム病原関連タンパク質（
ＲＴＶＰ−１タンパク質）−Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ
Ａｃｃ Ｎｏ．：４８０６０）（配列番号９０）に対して、１９３アミノ酸残基
のうち７９アミノ酸残基（４０％）での同一性を有し、そして１９３アミノ酸残
基のうち１１０アミノ酸残基（５６％）での類似性を有する（表７Ｋ）。
【０２０４】
【表８３】 ＦＣＴＲ７のアミノ酸は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ由来の１８６アミノ酸の
好中性顆粒マトリクス糖タンパク質ＳＧＰ２８前駆体（ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ Ａ
ｃｃ Ｎｏ．：Ｓ６８６９１）（配列番号９８）に対して、１８６アミノ酸残基
のうち６６アミノ酸残基（３５％）での同一性を有し、そして１８６アミノ酸残
基のうち９１アミノ酸残基（４８％）での類似性を有する（表７Ｌ）。
【０２０５】
【表８４】 腫瘍由来のトリプシンインヒビターとの相同性を有する、発達的に調節された
新規な遺伝子は、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．０：０−０（１９９９）に記載さ
れるように、肺間葉において発現される。病原関連タンパク質との類似性を有す
る新規なトリプシンインヒビターのｃＤＮＡクローニングおよびヒト脳癌細胞に
おけるその頻繁な発現は、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １３９
５：２０２−２０８（１９９８）に開示される。多様な種の遺伝子に対する配列
類似性を有する新規なヒト遺伝子であるＲＴＶＰ−１は、Ｇｅｎｅ １８０：１
２５−１３０（１９９６）に公開されたように、ニューロン起源ではなくグリア
起源の腫瘍細胞株において発現される。ヒトグリオーム病原関連タンパク質は、
植物の病原関連タンパク質（ｐｌａｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ−ｒｅｌａｔ
ｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）と構造的に関連し、そしてその遺伝子は、脳腫瘍におい
て特異的に発現される（Ｇｅｎｅ １５９：１３１−１３５（１９９５））。ヒ
トグリオーム病原関連タンパク質ＧｌｉＰＲと植物の病原関連タンパク質Ｐ１４
ａとの構造比較は、ヒト免疫系と植物防御系との間の機能的関連を示した（Ｐｒ
ｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５：２２６２−２２６６（１９
９８））。ＧｌｉＰＲは、正常な胎児脳組織でも成体脳組織でもなく、また他の
神経系腫瘍においてでもなく、ヒト脳腫瘍、多形性膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔ
ｏｍａ ｍｕｌｔｉｆｏｒｍ）／星状細胞腫において高度に発現される。Ｇｌｉ
ＰＲは、哺乳動物ＳＣＰ／ＴＲＸ１；昆虫ＡＧ３／ＡＧ５；真菌ＳＣ７／ＳＣ１
４および植物ＰＲ−１の群をなすファミリーに属する。ＳＧＰ２８は、ヒト精巣
特異的遺伝子産物およびげっ歯類精子コート糖タンパク質（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ
．３８０：２４６−２５０、１９９６）に対して類似性を有するヒト好中球の特
定の顆粒における新規なマトリクス糖タンパク質である。リアノジンレセプター
をブロックするペプチド毒素であるヘロセルミン（ｈｅｌｏｔｈｅｒｍｉｎｅ）
の一次構造および特性は、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６８：２２８０−２２８８（１
９９５）に記載される。ＧｌｉＰＲと同様に、ヘロセルミンは、哺乳動物ＳＣＰ
／ＴＲＸ１；昆虫ＡＧ３／ＡＧ５；真菌ＳＣ７／ＳＣ１４および植物ＰＲ−１の
群をなすファミリーに属する。
【０２０６】 相同性に基づいて、ＦＣＴＲ７タンパク質と、各相同なタンパク質またはペプ
チドとは、少なくともいくらかの活性を共有し得る。
【０２０７】 （治療的用途） ＦＣＴＲ７タンパク質は、トリプシンインヒビター、Ｑ９１０５５ヘロセルミ
ン、腫瘍由来のトリプシンインヒビター、グリオーム病原関連タンパク質、Ｑ９
Ｚ０Ｕ６妊娠後期肺タンパク質１に対する相同性、および哺乳動物ＳＣＰ／ＴＲ
Ｘ１；昆虫ＡＧ３／ＡＧ５；真菌ＳＣ７／ＳＣ１４および植物ＰＲ−１タンパク
質の群をなすＰｒｏｓｉｔｅファミリーに対する相同性を有する。従って、本発
明において開示されたＦＣＴＲ７タンパク質は、相同性を有するそれらのタンパ
ク質と同様に機能し得る。これらの機能としては、インビトロおよびインビボで
の組織発達、ならびに癌の病因が挙げられる。
【０２０８】 組織発現パターンに基づいて、この遺伝子は、この遺伝子が発現される組織の
疾患に結び付けられる。これらの疾患としては、以下が挙げられるが、これらに
限定されない： ・グリオーム ・癌 ・肺疾患 ・妊娠 ・雄性および雌性の生殖疾患 ・難聴 ・神経学的障害 ・胃の障害、および ・糖尿病のような、膵臓疾患。
【０２０９】 これらの物質はさらに、治療方法または診断方法において使用するための、新
規なＦＣＴＲ７物質に免疫特異的に結合する抗体の産生において有用である。こ
れらの抗体は、以下の「抗ＦＣＴＲＸ抗体」の節において記載されるような、疎
水性チャートからの予測を使用して、当該分野において公知の方法に従って産生
され得る。１つの実施形態では、意図されるＦＣＴＲ７エピトープは、ａａ（ア
ミノ酸）４０〜１２０である。別の実施形態では、ＦＣＴＲ７エピトープは、ａ
ａ１３０〜１７０である。さらなる実施形態では、ＦＣＴＲ７エピトープは、ａ
ａ２１０〜２３０、およびａａ２４０〜２８０である。
【０２１０】
【表８５】
【０２１１】
【表８６】 （ＦＣＴＲＸ核酸およびポリペプチド） 本発明の１つの局面は、ＦＣＴＲＸポリペプチドまたはその生物学的に活性な
タンパク質をコードする、単離された核酸分子に関する。また、ＦＣＴＲＸをコ
ードする核酸（例えば、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイ
ゼーションプローブとしての使用について十分な核酸フラグメント、およびＦＣ
ＴＲＸ核酸分子の増幅および／または変異のためのＰＣＲプライマーとしての使
用のためのフラグメントもまた、本発明に含まれる。本明細書中で使用される場
合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）
、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログを使用して作成され
るＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ、ならびにそれらの誘導体、フラグメントおよ
びホモログを含むことを意図する。核酸分子は一本鎖または二本鎖であり得るが
、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【０２１２】 ＦＣＴＲＸ核酸は、成熟ＦＣＴＲＸポリペプチドをコードし得る。本明細書中
で使用される場合、本発明において開示されるポリペプチドの「成熟」形態また
はタンパク質は、天然に存在するポリペプチドまたは前駆体形態またはプロプロ
テイン（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）の生成をいう。天然に存在するポリペプチドま
たは前駆体形態またはプロプロテインとしては、非限定的な例の目的のみとして
、対応する遺伝子によりコードされる全長遺伝子産物が挙げられる。あるいは、
これらは、本明細書中に開示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）に
よりコードされるポリペプチド、前駆体またはプロプロテインとして規定され得
る。生成物「成熟」形態は、また非限定的な例の目的として、１以上の天然に存
在するプロセシング工程（これらがこの遺伝子産物が生じる細胞または宿主細胞
内で起こる場合）の結果として生じる。ポリペプチドまたはタンパク質の「成熟
」形態に至るこのようなプロセシング工程の例としては、オープンリーディング
フレームの開始コドンによりコードされるＮ末端メチオニン残基の切断、または
シグナルペプチドまたはリーダー配列のタンパク質分解切断が挙げられる。従っ
て、残基１〜Ｎ（残基１がＮ末端メチオニンである場合）を有する前駆体ポリペ
プチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、Ｎ末端メチオニンの除去後に残
基２〜Ｎを有する。あるいは、残基１〜Ｎ（ここで、Ｎ末端シグナル配列（残基
１〜Ｍ）が切断される）を有する前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じ
る成熟形態は、残りの残基Ｍ＋１〜残基Ｎを有する。さらに、本明細書中で使用
される場合、ポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態は、タンパク質分解
事象ではなく、翻訳後修飾の工程から生じ得る。このようなさらなるプロセスと
しては、非限定的な例として、グリコシル化、ミリストイル化またはリン酸化が
挙げられる。一般に、成熟ポリペプチドまたはタンパク質は、これらのプロセス
の１つのみまたはこれらの任意の組み合わせの操作から生じ得る。
【０２１３】 用語「プローブ」とは、本明細書中で使用される場合、種々の長さの核酸配列
をいい、好ましくは、特定の用途に依存して、少なくとも約１０ヌクレオチド（
ｎｔ）、１００ｎｔ、または例えば、約６，０００ｎｔほどの大きさの間である
。プローブは、同一、類似または相補的な核酸配列の検出において使用される。
より長いプローブは、通常、天然供給源または組換え供給源から入手され、非常
に特異的であり、そしてより長さの短いオリゴマープローブよりもはるかに遅く
ハイブリダイズする。プローブは、一本鎖または二本鎖であり得、そしてＰＣＲ
、膜ベースのハイブリダイゼーション技術、またはＥＬＩＳＡ様の技術において
特異性を有するように設計される。
【０２１４】 用語「単離された」核酸分子は、本明細書中で使用される場合、この核酸の天
然の供給源中に存在する他の核酸分子から分離された核酸分子である。好ましく
は、「単離された」核酸は、この核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中でこの核
酸に天然に隣接する配列（すなわち、この核酸の５’末端および３’末端に位置
する配列）を含まない。例えば、種々の実施形態において、単離されたＦＣＴＲ
Ｘ核酸分子は、この核酸が由来する細胞／組織（例えば、脳、心臓、肝臓、脾臓
など）のゲノムＤＮＡ中でこの核酸に天然で隣接する、約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋ
ｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂ、または０．１ｋｂ未満のヌクレオチド配列を
含み得る。さらに、「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、組換え
技術により産生される場合、その他の細胞物質または培養培地を実質的に含まな
いか、または化学的に合成される場合、化学物質前駆体もしくはその他の化学物
質を実質的に含まないものであり得る。
【０２１５】 本発明の核酸分子、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２
、１４、１６、１８、２０、２２、および２４のヌクレオチド配列を有する核酸
分子、または上記のヌクレオチド配列の相補体は、標準的な分子生物学的技法お
よび本明細書で提供される配列情報を用いて単離され得る。ハイブリダイゼーシ
ョンプローブとして、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、
１６、１８、２０、２２、および２４の核酸の全部または一部を使用して、ＦＣ
ＴＲＸ分子は、標準的なハイブリダイゼーションおよびクローニング技術（例え
ば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ Ｌ
ＡＢＯＲＡＴＯＲＹＹ ＭＡＮＵＡＬ第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ、ＮＹ、１９８９；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（編）、ＣＵＲＲＥＮＴ
ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３に記載されるように
）を用いて単離され得る。
【０２１６】 本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技法に従って、テンプレートとしてｃＤ
ＮＡ、ｍＲＮＡあるいはゲノムＤＮＡ、および適切なオリゴヌクレオチドプライ
マーを用いて増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクター中に
クローン化され、そしてＤＮＡ配列分析により特徴付けられ得る。さらに、ＦＣ
ＴＲＸヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技術、
例えば、自動化ＤＮＡ合成機を用いることにより調製され得る。
【０２１７】 本明細書で用いられる場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、一連の連結され
たヌクレオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲ反応で用いられ
るに十分な数のヌクレオチド塩基を有する。短いオリゴヌクレオチド配列は、ゲ
ノム配列もしくはｃＤＮＡ配列に基づき得るか、またはそれから設計され得、そ
して特定の細胞もしくは組織において、同一、類似もしくは相補的ＤＮＡまたは
ＲＮＡを増幅し、確認し、もしくはその存在を示すために用いられる。オリゴヌ
クレオチドは、約１０ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ｎｔの長さ、好ましくは約
１５ｎｔ〜３０ｎｔの長さを有する核酸配列の部分を含む。本発明の１つの実施
形態では、１００ｎｔより少ない長さの核酸分子を含むオリゴヌクレオチドは、
さらに、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、
２０、２２、および２４の少なくとも６個連続するヌクレオチド、またはその相
補体を含む。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、そしてプローブとし
て用いられ得る。
【０２１８】 別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７
、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４に示され
るヌクレオチド配列またはこのヌクレオチド配列の一部分（例えば、プローブま
たはプライマーとして使用され得るフラグメント、あるいはＦＣＴＲＸポリペプ
チドの生物学的に活性な部分をコードするフラグメント）の相補体である核酸分
子を含む。配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８
、２０、２２、および２４に示されるヌクレオチド配列に相補的である核酸分子
は、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０
、２２、および２４に示されるヌクレオチド配列に十分相補的である核酸分子で
あり、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２
０、２２、および２４に示されるヌクレオチド配列に対しミスマッチがほとんど
または全くなく水素結合し得、それによって安定な二本鎖を形成する核酸分子で
ある。
【０２１９】 本明細書で用いる場合、用語「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド単位間の
Ｗａｔｓｏｎ−ＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成をいい、そして
用語「結合」は、２つのポリペプチドまたは化合物または関連ポリペプチドまた
は化合物またはその組合せ間の物理的または化学的相互作用を意味する。結合は
、イオン性、非イオン性、ファンデルワールス性、疎水性相互作用などを含む。
物理的相互作用は直接的であるかまたは間接的であり得る。間接的相互作用は、
別のポリペプチドまたは化合物を介するか、またはその効果に起因し得る。直接
的結合は、別のポリペプチドもしくは化合物を介して、またはその効果に起因し
て生じない、その他の実質的な化学的中間体がない相互作用をいう。
【０２２０】 本明細書中に提供されるフラグメントは、少なくとも６個の（連続する）核酸
配列または少なくとも４個の（連続する）アミノ酸配列（それぞれ、核酸の場合
には、特異的なハイブリダイゼーションを可能にし、またはアミノ酸の場合には
、エピトープの特異的な認識を可能にするに十分な長さ）として規定され、そし
て全長配列未満のせいぜいいくらかの部分である。フラグメントは、選択された
核酸配列またはアミノ酸配列の任意の連続する部分に由来し得る。誘導体は、直
接的にかまたは改変もしくは部分的置換によってかのいずれかでネイティブな化
合物から形成される核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、ネイティ
ブな化合物に類似する構造を有する（しかし、同一ではない）が、特定の成分ま
たは側鎖に関してそれとは異なる核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログ
は、合成物であり得るか、または進化的に異なる起源に由来し得、そして野生型
と比較して、類似の代謝活性または反対の代謝活性を有し得る。ホモログは、異
なる種由来の特定の遺伝子の核酸配列またはアミノ酸配列である。
【０２２１】 誘導体およびアナログは、以下に記載のように、誘導体またはアナログが、修
飾された核酸またはアミノ酸を含む場合、全長、または全長以外のものであり得
る。本発明の核酸またはタンパク質の誘導体またはアナログは、種々の実施形態
において、本発明の核酸もしくはタンパク質に、同一の大きさの核酸またはアミ
ノ酸配列にわたって、または整列した配列に比較した場合（この整列は、当該分
野で公知であるコンピューター相同性プログラムによって実施される）、少なく
とも約３０％、５０％、７０％、８０％、または９５％の同一性（好ましい同一
性は、８０〜９５％）で実質的に相同であるか、あるいはそのコードする核酸が
ストリンジェントの、中程度にストリンジェントの、または低いストリンジェン
トの条件下で上記のタンパク質をコードする配列の相補体にハイブリダイズし得
る、領域を含む分子を包含するが、これらに限定されない。例えば、Ａｕｓｕｂ
ｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ Ｂ
ＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ
、１９９３、および以下を参照のこと。
【０２２２】 「相同な核酸配列」もしくは「相同なアミノ酸配列」、またはその改変体とは
、上記で考察したように、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルにおける相
同性によって特徴付けられる配列をいう。相同なヌクレオチド配列は、ＦＣＴＲ
Ｘポリペプチドのアイソフォームをコードする配列をコードする。アイソフォー
ムは、例えば、ＲＮＡの選択的スプライシングの結果として、同一の生物の異な
る組織において発現され得る。あるいは、アイソフォームは、異なる遺伝子によ
ってコードされ得る。本発明において、相同なヌクレオチド配列は、ヒト以外の
種（脊椎動物が挙げられるが、これに限定されず、従って、例えば、カエル、マ
ウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマおよび他の生物が挙げられ得る
）のＦＣＴＲＸポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。相同なヌク
レオチド配列はまた、天然に生じる対立遺伝子改変体および本明細書に記載され
るヌクレオチド配列の変異体が挙げられるが、これらに限定されない。しかし、
相同的ヌクレオチド配列は、ヒトＦＣＴＲＸタンパク質をコードする正確なヌク
レオチド配列を含まない。相同核酸配列は、配列番号２、４、６、８、１３、１
５、１７、１９、２１、２３、および２５の保存的アミノ酸置換（以下を参照の
こと）、およびＦＣＴＲＸ生物学的活性を保有するポリペプチドをコードする核
酸配列を含む。ＦＣＴＲＸタンパク質の種々の生物学的活性は以下に記載されて
いる。
【０２２３】 ＦＣＴＲＸポリペプチドは、ＦＣＴＲＸ核酸のオープンリーディングフレーム
によりコードされる。ＯＲＦは、ポリペプチドに潜在的に翻訳され得るヌクレオ
チド配列に対応する。ＯＲＦを含む核酸のストレッチは、終止コドンによって途
切れない。全タンパク質についてのコード配列を表すＯＲＦは、ＡＴＧ「開始」
コドンで始まり、そして３つの「終止」コドン（すなわち、ＴＡＡ、ＴＡＧ、ま
たはＴＧＡ）のうちの１つで終結する。本発明の目的で、ＯＲＦは、開始コドン
、終止コドンまたはその両方を有するかまたは有さない、コード配列の任意の部
分であり得る。ｂｏｎａ ｆｉｄｅ細胞タンパク質のコードのための良好な候補
としてみなされるＯＲＦについて、最小サイズの要求がしばしば、例えば、５０
アミノ酸以上のタンパク質をコードするＤＮＡのストレッチを設定する。
【０２２４】 ヒトＦＣＴＲＸ遺伝子のクローニングから決定されたヌクレオチド配列は、他
の細胞型（例えば、他の組織由来）におけるＦＣＴＲＸホモログ、ならびに他の
脊椎動物由来のＦＣＴＲＸホモログを同定および／またはクローニングする際の
使用のために設計されるプローブおよびプライマーの作製を可能にする。このプ
ローブ／プライマーは、代表的には、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを
含む。このオリゴヌクレオチドは、代表的には、配列番号１、３、５、７、９、
１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４の少なくとも約
１２個、約２５個、約５０個、約１００個、約１５０個、約２００個、約２５０
個、約３００個、約３５０個または約４００個の連続するセンス鎖ヌクレオチド
配列；または配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１
８、２０、２２、および２４のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列
番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
および２４の天然に存在する変異体の少なくとも約１２個、約２５個、約５０個
、約１００個、約１５０個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個
または約４００個の連続するセンス鎖ヌクレオチド配列に、ストリンジェントな
条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。
【０２２５】 ヒトＦＣＴＲＸヌクレオチド配列に基づくプローブは、同じまたは相同なタン
パク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出するために使用され得る。種
々の実施形態において、このプローブはさらに、プローブに付着した標識基を含
み、例えば、この標識基は放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子
であり得る。このようなプローブは、ＦＣＴＲＸタンパク質を誤って発現する細
胞または組織を同定するための診断試験キットの一部として、例えば、被験体由
来の細胞のサンプル中のＦＣＴＲＸをコードする核酸のレベルを測定すること（
例えば、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡレベルを検出すること、またはゲノムＦＣＴＲＸ
遺伝子が変異しているかまたは欠失しているか否かを決定すること）によって使
用され得る。
【０２２６】 「ＦＣＴＲＸポリペプチドの生物学的に活性な部分を有するポリペプチド」は
、本発明のポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活性を示すポ
リペプチドをいい、用量依存性の有無に関わらず、特定の生物学的アッセイにお
いて測定されるような成熟形態を含む。「ＦＣＴＲＸの生物学的に活性な部分」
をコードする核酸フラグメントは、ＦＣＴＲＸの生物学的活性（ＦＣＴＲＸタン
パク質の生物学的活性は、以下に記載される）を有するポリペプチドをコードす
る、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０
、２２、および２４の一部を単離し、ＦＣＴＲＸタンパク質のコードされた部分
を発現させ（例えば、インビトロでの組換え発現によって）、そしてＦＣＴＲＸ
のコードされた部分の活性を評価することによって調製され得る。
【０２２７】 （ＦＣＴＲＸ核酸およびポリペプチド改変体） 本発明はさらに、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号１、３、５、７、９
、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４に示されるヌ
クレオチド配列とは異なる核酸分子を包含し、従って、配列番号１、３、５、７
、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４に示され
るヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同じＦＣＴＲＸタンパク
質をコードする。別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列
番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５に示さ
れるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【０２２８】 配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、
２２、および２４に示されるＦＣＴＲＸヌクレオチド配列に加えて、このＦＣＴ
ＲＸポリペプチドのアミノ酸配列における変化を導くＤＮＡ配列多型は、集団（
例えば、ヒト集団）内に存在し得ることが、当業者によって理解される。ＦＣＴ
ＲＸ遺伝子中のこのような遺伝的多型は、天然の対立遺伝子のバリエーションに
起因して、集団内の個体間に存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「
遺伝子」および「組換え遺伝子」は、ＦＣＴＲＸタンパク質、好ましくは脊椎動
物のＦＣＴＲＸタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ
）を含む核酸分子をいう。このような天然の対立遺伝子のバリエーションは、代
表的には、ＦＣＴＲＸ遺伝子のヌクレオチド配列において１〜５％の変動性を生
じ得る。天然の対立遺伝子バリエーションの結果であり、そしてこのＦＣＴＲＸ
ポリペプチドの機能的活性を変化させない、ＦＣＴＲＸポリペプチド内の任意お
よび全てのこのようなヌクレオチドのバリエーションならびに得られるアミノ酸
多型は、本発明の範囲内であると意図される。
【０２２９】 さらに、他の種由来のＦＣＴＲＸタンパク質をコードし、従って、配列番号１
、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および
２４のヒト配列とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分子は、本発明の範囲
内にあることが意図される。本発明のＦＣＴＲＸのｃＤＮＡの天然の対立遺伝子
改変体およびホモログに対応する核酸分子は、本明細書中に開示されるヒトＦＣ
ＴＲＸ核酸に対するその相同性に基づいて、ストリンジェントハイブリダイゼー
ション条件下で、標準的なハイブリダイゼーション技術に従うハイブリダイゼー
ションプローブとしてヒトｃＤＮＡまたはその一部を用いて単離され得る。
【０２３０】 従って、別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも６ヌ
クレオチド長であり、そしてストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７
、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４のヌクレ
オチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。別の実施形態では、この核酸
は、少なくとも１０、２５、５０、１００、２５０、５００、７５０、１０００
、１５００、または２０００以上のヌクレオチド長である。なお別の実施形態で
は、本発明の単離された核酸分子は、コード領域にハイブリダイズする。本明細
書中で用いられる場合、用語「ストリンジェント条件下でハイブリダイズする」
は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関して、互いに少なくとも６０％相同
なヌクレオチド配列が代表的には互いにハイブリダイズしたままである条件を記
載することを意図する。
【０２３１】 ホモログ（すなわち、ヒト以外の種由来のＦＣＴＲＸタンパク質をコードする
核酸）または他の関連配列（例えば、パラログ（ｐａｒａｌｏｇｓ））は、特定
のヒト配列の全てまたは一部をプローブとし、核酸ハイブリダイゼーションおよ
びクローニングに関して当該分野で周知の方法を使用して、低い、中程度の、ま
たは高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションによって入手され得る。
【０２３２】 本明細書で用いられる場合、語句「ストリンジェントハイブリダイゼーション
条件」は、その条件下で、プローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチドが、
その標的配列にハイブリダイズするが、その他の配列にはハイブリダイズしない
条件をいう。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、そして異なる状況で
異なる。より長い配列は、より短い配列より高い温度で特異的にハイブリダイズ
する。一般に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度およびｐＨで
、特定の配列の熱融解点（Ｔｍ）より約５℃低いように選択される。このＴｍは
、標的配列に相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリダイ
ズする（規定されたイオン強度、ｐＨおよび核酸濃度下）温度である。標的配列
は一般に過剰で存在するので、Ｔｍでは、５０％のプローブが平衡状態で占有さ
れている。代表的には、ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３で、塩
濃度が約１．０Ｍナトリウムイオンより少なく、代表的には約０．０１〜１．０
Ｍナトリウムイオン（またはその他の塩）、そして温度が短いプローブ、プライ
マーまたはオリゴヌクレオチド（例えば、１０ｎｔ〜５０ｎｔ）について少なく
とも約３０℃、そしてより長いプローブ、プライマーおよびオリゴヌクレオチド
について少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェントな条件
はまた、ホルムアミドのような、脱安定化剤の添加で達成され得る。
【０２３３】 ストリンジェント条件は、当業者に公知であり、そしてＡｕｓｕｂｅｌら（編
），ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯ
ＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．
３．１−６．３．６に見出され得る。好ましくは、この条件は、互いに少なくと
も約６５％、約７０％、約７５％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％ま
たは約９９％相同な配列が、代表的には互いにハイブリダイズしたままであるよ
うな条件である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件の非限定的な例
は、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴ
Ａ、０．０２％ ＰＶＰ、０．０２％ Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ ＢＳＡ、お
よび５００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む高塩緩衝液中での６５℃でのハ
イブリダイゼーションであり、続いて、０．２×ＳＳＣ、０．０１％ ＢＳＡ中
での５０℃での１回以上の洗浄を行う。ストリンジェント条件下で配列番号１、
３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２
４の配列にハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在す
る核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸
分子とは、天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオ
チド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【０２３４】 第２の実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４
、１６、１８、２０、２２、および２４またはそれらのフラグメント、アナログ
もしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子に、中程度のストリンジェン
シー条件下でハイブリダイズし得る核酸配列が提供される。中程度のストリンジ
ェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、５５℃での６×ＳＳＣ
、５×デンハルト溶液、０．５％ ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子
ＤＮＡ中でのハイブリダイゼーション、続いて１×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中
での３７℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る中程度のストリンジェンシ
ーの他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１
９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ Ｂ
ＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇｌ
ｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ
，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，
ＮＹを参照のこと。
【０２３５】 第３の実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４
、１６、１８、２０、２２、および２４またはそれらのフラグメント、アナログ
もしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子に、低ストリンジェンシー条
件下でハイブリダイズし得る核酸が提供される。低ストリンジェンシーハイブリ
ダイゼーション条件の非限定的な例は、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０２％ Ｐ
ＶＰ、０．０２％ Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％ ＢＳＡ、１００ｍｇ／ｍｌの変性
サケ精子ＤＮＡ、１０％（重量／容量）デキストラン硫酸中での４０℃でのハイ
ブリダイゼーション、続いて２×ＳＳＣ、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７
．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．１％ ＳＤＳ中での５０℃での１回以上の
洗浄である。用いられ得る低ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知
である（例えば、種交差ハイブリダイゼーションについて用いられるように）。
例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯ
ＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，ＮＹならびにＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳ
ＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵ
ＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒ
ｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：６７８
９−６７９２を参照のこと。
【０２３６】 （保存的変異） 集団中に存在し得る、ＦＣＴＲＸ配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加
えて、当業者は、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６
、１８、２０、２２、および２４のヌクレオチド配列への変異によって変化が導
入され得、それによって、このＦＣＴＲＸタンパク質の機能的能力を変更するこ
となく、コードされるＦＣＴＲＸタンパク質のアミノ酸配列に変化がもたらされ
ることをさらに理解する。例えば、「非必須」アミノ酸残基にてアミノ酸置換を
もたらすヌクレオチド置換は、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１
９、２１、２３、および２５の配列において行われ得る。「非必須」アミノ酸残
基は、生物学的活性を有意に変更することなく、このＦＣＴＲＸタンパク質のの
野生型配列から、変更され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、こ
のような生物学的活性に必要とされる。例えば、本発明のＦＣＴＲＸタンパク質
の間で保存されているアミノ酸残基は、特に変更を受け入れ難いと予測される。
保存的置換がなされ得るアミノ酸は、当該分野で周知である。
【０２３７】 本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基における変化を含む、
ＦＣＴＲＸタンパク質をコードする核酸分子に関する。このようなＦＣＴＲＸタ
ンパク質は、アミノ酸配列が、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１
９、２１、２３、および２５とは異なるが、生物学的活性をなお保持する。１つ
の実施形態では、単離された核酸分子は、タンパク質をコードするヌクレオチド
配列を含み、ここで、このタンパク質は、それぞれ、配列番号２、４、６、８、
１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５のアミノ酸配列に少なくとも
約４５％の相同性であるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この核酸分子によっ
てコードされるタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１
９、２１、２３、および２５に対して少なくとも約６０％相同であり；よりまし
くは配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２
５に対して少なくとも約７０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、
４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５に対してして少
なくとも約８０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、
１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５に対して少なくとも約９０％
相同であり；そして最も好ましくは、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１
７、１９、２１、２３、および２５に対して少なくとも約９５％相同である。
【０２３８】 配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５
のタンパク質に相同なＦＣＴＲＸタンパク質をコードする単離された核酸分子は
、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、
２２、および２４のヌクレオチド配列に１以上のヌクレオチドの置換、付加また
は欠失を導入することにより作製され得、その結果、１以上のアミノ酸の置換，
付加または欠失が、コードされるタンパク質に導入される。
【０２３９】 変異は、標準技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）
によって配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
び２５に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１以上の推定非必
須アミノ酸残基にて作製される。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類
似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、アミノ酸置換である。類似の側鎖
を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのフ
ァミリーとしては、以下が挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、
リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アル
パラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリ
シン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン
）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分
枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および
芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプト
ファン、ヒスチジン）。従って、ＦＣＴＲＸタンパク質中の推定された非必須ア
ミノ酸残基は、同じ側鎖のファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換される。あ
るいは、別の実施形態では、変異は、ＦＣＴＲＸコード配列の全てまたは一部に
沿って（例えば、飽和変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉ
ｓ）によって）ランダムに導入され得、そして得られる変異体は、ＦＣＴＲＸの
生物学的活性についてスクリーニングされて、活性を維持する変異体を同定し得
る。配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０
、２２、および２４の変異誘発に続いて、コードされるタンパク質は、当該分野
で公知の任意の組換え技術によって発現され得、そしてこのタンパク質の活性が
決定され得る。
【０２４０】 アミノ酸ファミリーの関連性はまた、側鎖に基づいて決定され得る。置換され
たアミノ酸は、完全に保存された「強い」残基または完全に保存された「弱い」
残基であり得る。保存されたアミノ酸残基の「強い」群は、以下の群のいずれか
であり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、Ｍ
ＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ（ここで、単一の文字のアミノ酸コードは、互いに置換さ
れ得るこれらのアミノ酸残基によりグループ化される）。同様に、保存された残
基の「弱い」群は、以下のいずれかで有り得る：ＣＳＡ、ＡＴＶ、ＳＡＧ、ＳＴ
ＮＫ、ＳＴＰＡ、ＳＧＮＤ、ＳＮＤＥＱＫ、ＮＤＥＱＨＫ、ＮＥＱＨＲＫ、ＶＬ
ＩＭ、ＨＦＹ（ここで、各群内の文字は、一文字アミノ酸コードを表する）。
【０２４１】 １つの実施形態では、変異ＦＣＴＲＸタンパク質は、以下についてアッセイさ
れ得る：（ｉ）他のＦＣＴＲＸタンパク質、他の細胞表面タンパク質、または生
物学的に活性なそれらの部分と、タンパク質：タンパク質相互作用を形成する能
力、（ｉｉ）変異ＦＣＴＲＸタンパク質と、ＦＣＴＲＸのリガンドとの間の複合
体形成；（ｉｉｉ）変異ＦＣＴＲＸタンパク質が細胞内標的タンパク質またはそ
の生物学的に活性な部分に結合する能力；（例えば、アビジンタンパク質）。
【０２４２】 なお別の実施形態において、変異体ＦＣＴＲＸタンパク質は、特定の生物学的
機能を調節する能力（例えば、インスリン放出の能力）についてアッセイされ得
る。
【０２４３】 （アンチセンス核酸） 本発明の別の局面は、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４
、１６、１８、２０、２２、および２４またはそのフラグメント、アナログもし
くは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズし得るかまたは
相補的である、単離されたアンチセンス核酸分子に関する。「アンチセンス」核
酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖
ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列に相補的である）
ヌクレオチド配列を含む。特定の局面では、少なくとも約１０、約２５、約５０
、約１００、約２５０もしくは約５００ヌクレオチドまたは全体のＦＣＴＲＸコ
ード鎖、またはそれらの一部のみに相補的な配列を含む、アンチセンス核酸分子
が提供される。配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３
、および２５のＦＣＴＲＸタンパク質のフラグメント、ホモログ、誘導体および
アナログをコードする核酸分子、または配列番号１、３、５、７、９、１０、１
１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４のＦＣＴＲＸ核酸配列に
相補的なアンチセンス核酸がさらに提供される。
【０２４４】 １つの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＦＣＴＲＸタンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」に対してアンチセンスであ
る。用語「コード領域」とは、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含む、ヌクレ
オチド配列の領域をいう。別の実施形態では、このアンチセンス核酸分子は、Ｆ
ＣＴＲＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域
」に対してアンチセンスである。用語「非コード領域」とは、コード領域に隣接
する、アミノ酸に翻訳されない、５’配列および３’配列をいう（すなわち、５
’非翻訳領域および３’非翻訳領域ともいわれる）。
【０２４５】 本明細書中に開示されるＦＣＴＲＸタンパク質をコードするコード鎖配列を考
慮すれば、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋまたは
Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎの塩基対合の規則に従って設計され得る。アンチセンス核酸
分子は、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であり得るが、より好
ましくは、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部にのみ
アンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌ
クレオチドは、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡの翻訳開始部位を取り囲む領域に相補的で
あり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、長さが約５、約１０、
約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５または約５０ヌクレ
オチドであり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を用い
て、化学的合成または酵素連結反応を用いて構築され得る。例えば、アンチセン
ス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレ
オチド、またはこの分子の生物学的安定性を増大させるように、もしくはアンチ
センス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安定性を増大させる
ように設計された種々に改変されたヌクレオチドを用いて化学的に合成され得る
（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが用い
られ得る）。
【０２４６】 アンチセンス核酸を作製するために用いられ得る改変されたヌクレオチドの例
としては以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−
クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセ
チルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシ
メチルアミノメチル２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラ
シル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルクエオシン（ｇａｌａｃｔｏｓ
ｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチ
ルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデ
ニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−
アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキ
シアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン（ｍａｎｎ
ｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−
メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル
−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、シュードウラシル、クエオシン（
ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−
チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ
酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオ
ウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（
ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あるいは、このアンチセンス核
酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた発現ベクターを用いて
生物学的に生成され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、
以下の小節にさらに記載される、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向であ
る）。
【０２４７】 本発明のアンチセンス核酸分子は、代表的には被験体に投与されるか、または
インサイチュで生成され、その結果それらは、ＦＣＴＲＸタンパク質をコードす
る細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするか、または
それに結合し、それによってこのタンパク質の発現を阻害する（例えば、転写お
よび／または翻訳を阻害することによって）。ハイブリダイゼーションは、安定
な二重鎖を形成する従来のヌクレオチド相補性によってか、または例えばＤＮＡ
二重鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二重らせんのメジャーグル
ーブ（ｍａｊｏｒ ｇｒｏｏｖｅ）における特異的相互作用を介してであり得る
。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、組織部位での直接的
注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的
化するように改変され得、次いで全身に投与される。例えば、全身投与のために
、アンチセンス分子は、それらが選択された細胞表面上に発現されたレセプター
または抗原に特異的に結合するように改変され得る（例えば、そのアンチセンス
核酸分子を細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結
することによって）。このアンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載され
るベクターを用いて細胞に送達され得る。十分な核酸分子を達成するために、ア
ンチセンス核酸分子が強力なｐｏｌ ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ ＩＩＩプ
ロモーターの制御下に置かれているベクター構築物が、好ましい。
【０２４８】 なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー
核酸分子である。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイ
ブリッドを形成し、ここで、通常のα−ユニットとは対照的に、鎖は、互いに平
行に走行する（例えば、Ｇａｕｌｔｉｅｒら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１を参照のこと）。このアンチセンス核酸分
子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８
７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６１３１〜６１４８を参照のこと）
またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，ＦＥ
ＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７〜３３０を参照のこと）を含み得る。
【０２４９】 （リボザイムおよびＰＮＡ部分） 核酸の改変としては、非制限的な例として、改変塩基、および糖リン酸バック
ボーンが改変または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの改変は、少なく
とも一部は、改変された核酸の化学的安定性を増強するために実施され、その結
果、それらは、例えば、被験体での治療的適用におけるアンチセンス結合核酸と
して使用され得る。
【０２５０】 １つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸はリボザイムである。リ
ボザイムは、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得るリボヌクレアーゼ活
性を有する触媒性ＲＮＡ分子であり、これらは、その一本鎖核酸に対して相補領
域を有する。従って、リボザイム（例えば、ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌ
ａｃｈ １９８８．Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１に記載されるハンマ
ーヘッド型リボザイム）を使用して、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切
断し、それによってＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ＦＣＴＲＸをコ
ードする核酸に特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示されるＦＣＴＲ
Ｘ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１、３、５、７、９、１
０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４）に基づいて設計
され得る。例えば、活性部位のヌクレオチド配列が、ＦＣＴＲＸをコードするｍ
ＲＮＡ内で切断されるヌクレオチド配列に相補的である、テトラヒメナＬ−１９ ＩＶＳ ＲＮＡの誘導体が構築され得る。例えば、Ｃｅｃｈらの米国特許第４
，９８７，０７１号およびＣｅｃｈらの米国特許第５，１１６，７４２号を参照
のこと。ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡをまた使用して、ＲＮＡ分子のプールから、特異
的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る。例えば、Ｂａｒｔ
ｅｌら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１１〜１４１８を参照のこと
。
【０２５１】 あるいは、ＦＣＴＲＸ遺伝子発現は、ＦＣＴＲＸ核酸の調節領域（例えば、Ｆ
ＣＴＲＸのプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド
配列を標的化し、標的細胞中でＦＣＴＲＸ遺伝子の転写を妨害する三重らせん構
造を形成することによって阻害され得る。例えば、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１．Ａ
ｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９〜８４；Ｈｅｌｅｎｅら．
１９９２．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；Ｍａｈｅ
ｒ，１９９２．Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照のこと。
【０２５２】 種々の実施形態において、ＦＣＴＲＸ核酸は、塩基部分、糖部分またはリン酸
骨格で改変され、例えば、その分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは可
溶性を改善し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を改変して、ペ
プチド核酸を生成し得る（例えば、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍ
ｅｄ Ｃｈｅｍ ４：５−２３を参照のこと）。本明細書中で使用される場合、
用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリボースリン酸骨格が偽ペ
プチド骨格によって置換され、そして４つの天然の核塩基（ｎｕｃｌｅｏｂａｓ
ｅ）のみが保持されている核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいう。ＰＮＡ
の中性の骨格は、低いイオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡに対する特異的
ハイブリダイゼーションを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの
合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９
９６．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１４６７０−１
４６７５において記載されるような標準的固相ペプチド合成プロトコルを用いて
行われ得る。
【０２５３】 ＦＣＴＲＸのＰＮＡは、治療的適用および診断的適用において使用され得る。
例えば、ＰＮＡは、例えば転写または翻訳の停止を誘導することまたは複製を阻
害することによる、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスまたは抗
遺伝子剤として使用され得る。ＦＣＴＲＸのＰＮＡはまた、例えばＰＮＡ指向性
ＰＣＲクランピングによる遺伝子における一塩基対変異の分析において；他の酵
素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ）と組み合わせて使用される場合の人工制限酵素
として（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．ら，１９９６．前出を参照のこと）；またはＤＮＡ配
列およびハイブリダイゼーションのプローブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒ
ｕｐら，１９９６，前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６，前出を参
照のこと）、使用され得る。
【０２５４】 別の実施形態において、ＦＣＴＲＸのＰＮＡは、例えば、それらの安定性また
は細胞性取り込みを増強するために、ＰＮＡに脂溶性基または他のヘルパー基を
結合することによって、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によって、またはリポソー
ムもしくは当該分野において公知の薬物送達の他の技術の使用によって改変され
得る。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を組合せ得る、ＦＣＴＲＸのＰ
ＮＡ−ＤＮＡキメラが生成され得る。ＰＮＡ部分が高い結合親和性および特異性
を提供する一方で、そのようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮａｓｅ ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）がＤＮＡ部分と相互作用するのを可能にする。
ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基のスタッキング、核塩基間の結合数および方向を
考慮して選択される適切な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒｕｐ
ら，１９９６，前出を参照のこと）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕ
ｐら，１９９６，前出およびＦｉｎｎら，１９９６，Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ ２４：３３５７−３３６３において記載されるように行われ得る。例えば
、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホラミダイトカップリング化学を用いて固体支持体
上で合成され得、そして改変されたヌクレオシドアナログ（例えば、５’−（４
−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホスホルアミダイト）
が、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間に使用され得る（Ｍａｇら，１９８９，Ｎ
ｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １７：５９７３〜５９８８を参照のこと）。次いで
、ＰＮＡモノマーが段階様式でカップリングされ、５’ＰＮＡセグメントおよび
３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎら，１９９６，
前出を参照のこと）。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメ
ントを用いて、キメラ分子が合成され得る。例えば、Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，１９
７５，）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：１１１９〜１１１２
４を参照のこと。
【０２５５】 他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下のような他の付属の基を
含み得る：ペプチド（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化するため
）、または細胞膜を横切る輸送を容易にする因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ
ら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６
５５３〜６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８〜６５２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を
参照のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３
４を参照のこと）。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション誘
発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：
９５８〜９７６を参照のこと）、またはインターカレーター剤（例えば、Ｚｏｎ
，１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を参照のこと）で改変さ
れ得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチ
ド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘発
切断剤など）に結合され得る。
【０２５６】 （ＦＣＴＲＸポリペプチド） 本発明に従うポリペプチドは、配列が配列番号２、４、６、８、１３、１５、
１７、１９、２１、２３、および２５に提供されるＦＣＴＲＸタンパク質のアミ
ノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明はまた、なおそのＦＣＴＲＸ活性お
よび生理学的機能を維持するタンパク質、またはその機能的フラグメントをコー
ドするが、その任意の残基が配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９
、２１、２３、および２５に示される対応する残基から変化し得る、変異体また
は改変体タンパク質を含む。
【０２５７】 一般に、ＦＣＴＲＸ様機能を保持するＦＣＴＲＸ改変体は、配列中の特定位置
の残基が他のアミノ酸により置換され、そしてさらに、親タンパク質の２つの残
基間にさらなる残基を挿入する可能性、および親配列から１つ以上の残基を欠失
する可能性を含む。任意のアミノ酸置換、挿入または欠失が、本発明に包含され
る。好適な状況では、この置換は、上記で規定されるような保存的置換である。
【０２５８】 本発明の１つの局面は、単離されたＦＣＴＲＸタンパク質、およびその生物学
的に活性な部分、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモ
ログに関する。抗ＦＣＴＲＸ抗体を惹起するための免疫原としての使用のために
適切なポリペプチドフラグメントもまた提供される。１つの実施形態において、
ネイティブなＦＣＴＲＸタンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を用いる適
切な精製スキームによって、細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施
形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生される
。組換え発現に代わるものとして、ＦＣＴＲＸタンパク質またはポリペプチドは
、標準的なペプチド合成技術を用いて化学合成され得る。
【０２５９】 「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはタンパク質あるいは
その生物学的に活性な部分は、ＦＣＴＲＸタンパク質の由来する細胞または組織
供給源由来の細胞性物質または他の夾雑タンパク質を実質的に含まないか、ある
いは化学合成される場合に化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。
用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、ＦＣＴＲＸタンパク質の調製物を含
み、この調製物において、ＦＣＴＲＸタンパク質が単離または組換え産生される
細胞の細胞性成分から、ＦＣＴＲＸタンパク質は分離されている。１つの実施形
態において、用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、非ＦＣＴＲＸタンパク
質（本明細書中において「夾雑タンパク質」とも呼ばれる）を約３０％未満（乾
燥重量にて）、より好ましくは非ＦＣＴＲＸタンパク質を約２０％未満、なおよ
り好ましくは非ＦＣＴＲＸタンパク質を約１０％未満、そして最も好ましくは非
ＦＣＴＲＸタンパク質を約５％未満有する、ＦＣＴＲＸタンパク質の調製物を含
む。ＦＣＴＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え産生される
場合、好ましくは、調製物はまた培養培地を実質的に含まない。すなわち、培養
培地は、そのタンパク質調製物の容量の約２０％未満、より好ましくは約１０％
未満、そして最も好ましくは約５％未満を示す。
【０２６０】 用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、タンパク質が
、そのタンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離され
ているＦＣＴＲＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「
化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、化学前駆体または非Ｆ
ＣＴＲＸの化学物質を約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは化学前駆
体または非ＦＣＴＲＸ化学物質を約２０％未満、なおより好ましくは化学前駆体
または非ＦＣＴＲＸ化学物質を約１０％未満、そして最も好ましくは化学前駆体
または非ＦＣＴＲＸ化学物質を約５％未満有する、ＦＣＴＲＸタンパク質の調製
物を含む。
【０２６１】 ＦＣＴＲＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、全長ＦＣＴＲＸタンパク質
より少ないアミノ酸を含み、そしてＦＣＴＲＸタンパク質の少なくとも１つの活
性を示す、ＦＣＴＲＸタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６
、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５に示されるアミノ酸配
列）に十分に相同なアミノ酸配列、またはＦＣＴＲＸタンパク質のアミノ酸配列
に由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。代表的には、生物学的に活性な
部分は、ＦＣＴＲＸタンパク質の少なくとも１つの活性を有するドメインまたは
モチーフを含む。ＦＣＴＲＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、長
さが１０、２５、５０、１００またはそれより多いアミノ酸残基であるポリペプ
チドであり得る。
【０２６２】 さらに、タンパク質の他の領域が欠失している他の生物学的に活性な部分は、
組換え技術によって調製され得、そしてネイティブなＦＣＴＲＸタンパク質の機
能的活性のうちの１つ以上について評価され得る。
【０２６３】 １つの実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８
、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５に示されるアミノ酸配列を
有する。他の実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質は、配列番号２、４、６
、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５に実質的に相同であり
、そして以下に詳細に議論されるように、天然の対立遺伝子改変体または変異誘
発に起因してアミノ酸配列が異なるが、配列番号２、４、６、８、１３、１５、
１７、１９、２１、２３、および２５のタンパク質の機能的活性を保持する。従
って、別の実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質は、配列番号２、４、６、
８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５のアミノ酸配列に少なく
とも約４５％相同なアミノ酸配列を含み、そして、配列番号２、４、６、８、１
３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５のＦＣＴＲＸタンパク質の機能
的活性を保持するタンパク質である。
【０２６４】 （２つ以上の配列間の相同性の決定） ２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性の百分率を決定するために、配
列は、至適な比較の目的のために整列される（例えば、ギャップは、第２のアミ
ノ酸または核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸または核酸配列に
導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのア
ミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配
列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、
分子はその位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ
酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）
。
【０２６５】 核酸配列の相同性は、２つの配列間の同一性の程度として決定され得る。相同
性は、当該分野において公知のコンピュータープログラム（例えば、ＧＣＧプロ
グラムパッケージにおいて提供されるＧＡＰソフトウェア）を用いて決定され得
る。ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，１９７０ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４８：４４３〜４５３を参照のこと。核酸配列比較のための以下の設定（ＧＡ
Ｐ作製ペナルティー、５．０、およびＧＡＰ伸長ペナルティー、０．３）を用い
てＧＣＧ ＧＡＰソフトウェアを使用すると、上記で言及される類似の核酸配列
のコード領域は、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６
、１８、２０、２２、および２４に示されるＤＮＡ配列のＣＤＳ（コード）部分
と、好ましくは少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、
９８％または９９％の同一性の程度を示す。
【０２６６】 用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列
が、特定の比較領域にわたって、残基毎を基準として同一である程度をいう。用
語「配列同一性のパーセンテージ」は、以下により算出される：この比較領域に
わたって最適に整列された２つの配列を比較すること、両方の配列において同一
の核酸塩基（例えば、核酸の場合にはＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）が存在す
る位置の数を決定し、一致した位置の数を導くこと、この一致した位置の数を、
比較領域の内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算すること、お
よびその結果を１００で乗算して、配列同一性のパーセンテージを導くこと。用
語「実質的な同一性」は、本明細書中で使用される場合、ポリヌクレオチド配列
の特徴を示し、ここでこのポリヌクレオチドは、比較領域にわたり参照配列と比
較して、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同
一性、そして頻繁には９０〜９５％の配列同一性、より通常には少なくとも９９
％の配列同一性を有する配列を含む。
【０２６７】 （キメラタンパク質および融合タンパク質） 本発明はまた、ＦＣＴＲＸキメラタンパク質または融合タンパク質を提供する
。本明細書中で使用される場合、ＦＣＴＲＸ「キメラタンパク質」またはＦＣＴ
ＲＸ「融合タンパク質」は、非ＦＣＴＲＸポリペプチドに作動可能に連結された
、ＦＣＴＲＸポリペプチドを含む。「ＦＣＴＲＸポリペプチド」は、ＦＣＴＲＸ
タンパク質（配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、
および２５）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、「非ＦＣ
ＴＲＸポリペプチド」は、ＦＣＴＲＸタンパク質に対して実質的に相同ではない
タンパク質（例えば、ＦＣＴＲＸタンパク質とは異なり、かつ同一でかまたは異
なる生物体に由来するタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドをいう。ＦＣＴＲＸ融合タンパク質において、このＦＣＴＲＸポリペプチドは
、ＦＣＴＲＸタンパク質のすべてまたは一部分に対応し得る。１つの実施形態で
は、ＦＣＴＲＸ融合タンパク質は、ＦＣＴＲＸタンパク質の少なくとも１つの生
物学的に活性な部分を含む。別の実施形態では、ＦＣＴＲＸ融合タンパク質は、
ＦＣＴＲＸタンパク質の少なくとも２つの生物学的に活性な部分を含む。なお別
の実施形態においてＦＣＴＲＸ融合タンパク質は、少なくとも３つの生物学的に
活性な部分を含む。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結された」は
、ＦＣＴＲＸポリペプチドおよび非ＦＣＴＲＸポリペプチドが、インフレームで
互いに融合されていることを示すことが意図される。非ＦＣＴＲＸポリペプチド
は、ＦＣＴＲＸポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０２６８】 １つの実施形態においては、この融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＦＣＴＲＸ融合
タンパク質であり、ここではＦＣＴＲＸ配列が、ＧＳＴ（グルタチオンＳ−トラ
ンスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。このような融合タンパク質は、組
換えＦＣＴＲＸポリペプチドの精製を容易にし得る。
【０２６９】 別の実施形態において、この融合タンパク質は、Ｎ末端に異種シグナル配列を
含むＦＣＴＲＸタンパク質である。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞
）において、ＦＣＴＲＸの発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用
を介して増加され得る。
【０２７０】 なお別の実施形態において、この融合タンパク質は、ＦＣＴＲＸ−免疫グロブ
リン融合タンパク質であり、ここで、ＦＣＴＲＸ配列が、免疫グロブリンタンパ
ク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合される。本発明のこのＦＣＴＲ
Ｘ−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に取り込まれ、そして被
験体に投与されて、細胞の表面上でＦＣＴＲＸリガントとＦＣＴＲＸタンパク質
との間の相互作用を阻害し、それによってインビボのＦＣＴＲＸ媒介信号伝達を
抑制し得る。このＦＣＴＲＸ−免疫グロブリン融合タンパク質を用い、ＦＣＴＲ
Ｘ同族リガンドの生体利用性に影響を与え得る。ＦＣＴＲＸリガンド／ＦＣＴＲ
Ｘ相互作用の阻害は、増殖障害および分化障害の両方の処置、および細胞生存を
調節（例えば、促進または阻害）することに、治療的に有用であり得る。さらに
、本発明のこのＦＣＴＲＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体中で抗Ｆ
ＣＴＲＸ抗体を産生するための免疫原として用いられ得、ＦＣＴＲＸリガンドを
精製し、そしてＦＣＴＲＸリガンドとのＦＣＴＲＸの相互作用を阻害する分子を
同定するスクリーニングアッセイで用いられ得る。
【０２７１】 本発明のＦＣＴＲＸキメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技
法により産生され得る。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフ
ラグメントを、従来の技法に従って、例えば、連結のための平滑末端または粘着
（ｓｔａｇｇｅｒ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応
じて粘着（ｃｏｈｅｓｉｖｅ）末端のフィルイン、所望しない連結を避けるため
のアルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結を採用することにより、イン
フレームで一緒に連結する。別の実施形態では、融合遺伝子を、自動化ＤＮＡ合
成機を含む従来技法により合成し得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ
増幅を、キメラ遺伝子配列を生成するために次いでアニールおよび再増幅され得
る、２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバハングを生じるアンカープ
ライマーを用いて実施し得る（例えば、Ａｕｓｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ
ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照のこと）。さらに、融合成分（例えば、
ＧＳＴポリペプチド）をすでにコードした多くの発現ベクターが市販されている
。ＦＣＴＲＸをコードする核酸は、この融合成分がＦＣＴＲＸタンパク質にイン
フレーム連結されるように、このような発現ベクター中にクローン化され得る。
【０２７２】 （ＦＣＴＲＸアゴニストおよびアンタゴニスト） 本発明はまた、ＦＣＴＲＸアゴニスト（模倣物）として、またはＦＣＴＲＸア
ンタゴニストとして機能するＦＣＴＲＸタンパク質の改変体に関する。ＦＣＴＲ
Ｘタンパク質の改変体（例えば、ＦＣＴＲＸタンパク質の離散した点変異または
短縮型）が、変異誘発により生成され得る。ＦＣＴＲＸタンパク質のアゴニスト
は、天然に存在する形態のＦＣＴＲＸタンパク質と実質的に同じ生物学的活性、
またはその生物学的活性のサブセットを保持し得る。ＦＣＴＲＸタンパク質のア
ンタゴニストは、天然に存在する形態のＦＣＴＲＸタンパク質の１つ以上の活性
を、例えば、ＦＣＴＲＸタンパク質を含む細胞シグナル伝達カスケードの下流ま
たは上流メンバーに競合的に結合することにより阻害し得る。従って、特異的生
物学的効果が、限られた機能の改変体を用いた処理により惹起され得る。１つの
実施形態では、このタンパク質の天然に存在する形態の生物学活性のサブセット
を有する改変体を用いた被験体の処置は、ＦＣＴＲＸタンパク質の天然に存在す
る形態を用いた処置に対して被験体におけるより少ない副作用を有する。
【０２７３】 ＦＣＴＲＸアゴニスト（模倣物）として、またはＦＣＴＲＸアンタゴニストの
いずれかとして機能するＦＣＴＲＸタンパク質の改変体は、ＦＣＴＲＸタンパク
質アゴニストまたはアンタゴニスト活性のためのＦＣＴＲＸタンパク質の変異体
（例えば短縮型変異体）のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする
ことにより同定され得る。１つの実施形態では、ＦＣＴＲＸ改変体の多彩なライ
ブラリーは、核酸レベルのコンビナトリアル変異誘発により生成され、そして多
彩な遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＦＣＴＲＸ改変体の多彩なライブ
ラリーは、例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、潜在的なＦＣＴＲＸ配
列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、あるいは、その中にＦＣＴＲＸ
配列のセットを含む（例えば、ファージディスプレイのための）より大きな融合
タンパク質のセットとして発現可能であるように、遺伝子配列に酵素的に連結す
ることにより産生され得る。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的なＦＣＴＲ
Ｘ改変体のライブラリーを産生するために用いられ得る種々の方法がある。縮重
遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮＡ合成機中で実施され得、次いでこの合
成遺伝子は、適切な発現ベクター中に連結される。遺伝子の縮重セットの使用は
、１つの混合物において、潜在的なＦＣＴＲＸ配列の所望のセットをコードする
配列のすべての供給を可能にする。縮重オリゴヌクレオチドを合成する方法は当
該分野で周知である。例えば、Ｎａｒａｎｇ，１９８３．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１
０５６；Ｉｋｅら，１９８３．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１：４７７を
参照のこと。
【０２７４】 （ポリペプチドライブラリー） さらに、ＦＣＴＲＸタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーを用
いて、ＦＣＴＲＸタンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のた
めのＦＣＴＲＸフラグメントの多彩な集団を生成し得る。１つの実施形態では、
コード配列フラグメントのライブラリーは、ＦＣＴＲＸコード配列の二本鎖ＰＣ
Ｒフラグメントを、１分子あたり約１つのみのニックが生じる条件下、ヌクレア
ーゼで処理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させること、異なるニック産物からの
センス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するためにこのＤＮＡを
再生すること、Ｓ１ヌクレアーゼを用いた処理により再形成された二本鎖から一
本鎖部分を除去すること、および得られるフラグメントライブラリーを発現ベク
ター中に連結することにより生成し得る。この方法により、ＦＣＴＲＸタンパク
質の種々のサイズのＮ末端および内部フラグメントをコードする発現ライブラリ
ーが派生し得る。
【０２７５】 点変異または短縮により作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産
物をスクリーニングするため、選択された性質を有する遺伝子産物のｃＤＮＡラ
イブラリーをスクリーニングするための種々の技術が当該分野で公知である。こ
のような技法を、ＦＣＴＲＸタンパク質のコンビナトリアル変異誘発により生成
された遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能である。大きな遺伝
子ライブラリーをスクリーニングするための、高スループット分析に適した最も
広く用いられる技法は、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベク
ター中にクローニングすること、得られるベクターのライブラリーで適切な細胞
を形質転換すること、およびこのコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出
が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件
下で発現することを含む。ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増大する新規
技法であるリクルーシブエンセブル変異誘発（ＲＥＭ）を、スクリーニングアッ
セイと組み合わせて用い、ＦＣＴＲＸ改変体を同定し得る。例えば、Ａｒｋｉｎ
およびＹｏｕｒｖａｎ，１９９２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら，１９９３．Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６：３２７−３３１を参照のこと。
【０２７６】 （抗ＦＣＴＲＸ抗体） 本発明は、本発明の任意のＦＣＴＲＸポリペプチドに免疫特異的に結合する、
Ｆａｂまたは（Ｆａｂ）２のような抗体または抗体フラグメントを包含する。
【０２７７】 単離されたＦＣＴＲＸタンパク質、またはその部分もしくはフラグメントは、
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体調製のための標準的な技術を用い
て、ＦＣＴＲＸポリペプチドに結合する抗体を産生するための免疫原として用い
られ得る。完全長のＦＣＴＲＸタンパク質が用いられ得るが、あるいは、本発明
は、免疫原としての使用のためのＦＣＴＲＸタンパク質の抗原性ペプチドフラグ
メントを提供する。ＦＣＴＲＸの抗原性ペプチドは、配列番号２、４、６、８、
１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５で示されるアミノ酸配列の少
なくとも４アミノ酸残基を含み、そしてこのペプチドに対して惹起された抗体が
ＦＣＴＲＸと特異的な免疫複合体を形成するように、ＦＣＴＲＸのエピトープを
含む。好ましくは、この抗原性ペプチドは、少なくとも６、８、１０、１５、２
０、または３０個のアミノ酸残基を含む。より長い抗原性ペプチドが、用途に依
存して、そして当業者に周知の方法に従い、より短い抗原性ペプチドよりもしば
しば好適である。
【０２７８】 本発明の特定の実施形態では、抗原性ペプチドに含まれる少なくとも１つのエ
ピトープは、タンパク質の表面上に位置するＦＣＴＲＸの領域、例えば、親水性
領域である。抗体産生を標的にする手段として、親水性および疎水性の領域を示
すヒドロパシープロットを、例えば、フーリエ変換を伴うかまたは伴わない、Ｋ
ｙｔｅ ＤｏｏｌｉｔｔｌｅまたはＨｏｐｐ Ｗｏｏｄｓ法を含む、当該分野で
周知の任意の方法により生成し得る。例えば、それらの全体が本明細書に参考と
して援用される、例えば、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：３８２４−３８２８；Ｋｙｔｅおよび
Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ １９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１４
２を参照のこと。この各々が、それらの全体において、本明細書中で参考として
援用される。
【０２７９】 本明細書で開示されるように、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、
１９、２１、２３、および２５のＦＣＴＲＸタンパク質配列、またはその誘導体
、フラグメント、アナログもしくはホモログを、これらのタンパク質成分に免疫
特異的に結合する抗体の産生における免疫原として利用し得る。本明細書で用い
る用語「抗体」は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的
に活性な部分、すなわち、ＦＣＴＲＸのような抗原に特異的に結合（免疫反応）
する抗原結合部位を含む分子をいう。このような抗体は、制限されずに、ポリク
ローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、ＦａｂおよびＦ（ ａｂ’）２ フラグメント、およびＦａｂ発現ライブラリーを含む。特定の実施形
態では、ヒトＦＣＴＲＸタンパク質に対する抗体が開示される。当該分野で公知
の種々の手順が、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２
３、および２５のＦＣＴＲＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラグメント
、アナログもしくはホモログに対するポリクローナルまたはモノクローナル抗体
の産生のために用いられ得る。これらのタンパク質のいくつかを以下で論議する
。
【０２８０】 ポリクローナル抗体の産生のために、種々の適切な宿主動物（例えば、ウサギ
、ヤギ、マウスまたはその他の哺乳動物）が、ネイティプタンパク質、またはそ
の合成改変体、または前述の誘導体での注射により免疫され得る。適切な免疫原
性調製物は、例えば、組換えにより発現されたＦＣＴＲＸタンパク質または化学
的に合成されたＦＣＴＲＸポリペプチドを含有し得る。この調製物は、アジュバ
ントをさらに含み得る。免疫学的応答を増大するために用いられる種々のアジュ
バントは、制限されずに、フロイントの完全および不完全アジュバント、ミネラ
ルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン
、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、ジ
ニトロフェノールなど）、Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎお
よびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのようなヒトアジュバント
、または類似の免疫刺激剤を含む。所望であれば、ＦＣＴＲＸに対して惹起され
た抗体分子は、哺乳動物（例えば、血液）から単離され、そしてさらに、ＩｇＧ
画分を得るために、プロテインＡクロマトグラフィーのような、周知の技術によ
り精製され得る。
【０２８１】 本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗
体組成物」は、ＦＣＴＲＸの特定のエピトープと免疫反応し得る、１種類の抗原
結合部位のみを含む抗体分子の集団をいう。従って、代表的には、モノクローナ
ル抗体組成物は、それと免疫反応する特定のＦＣＴＲＸタンパク質に対し、単一
の結合親和性を示す。特定のＦＣＴＲＸタンパク質、またはその誘導体、フラグ
メント、アナログもしくはホモログに対して惹起されたモノクローナル抗体の調
製には、継続的な細胞株培養による抗体分子の産生を提供する任意の技術が利用
され得る。このような技術は、制限されずに、ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋ
ｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４
９７を参照のこと）；トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術；ヒトＢ細胞ハイブリド
ーマ技術（例えば、Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ
４：７２）およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドー
マ技術（例えば、Ｃｏｌｅら、１９８５ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯ
ＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，
Ｉｎｃ．７７−９６頁を参照のこと）を含む。ヒトモノクローナル抗体を、本発
明の実施において利用し得、そしてヒトハイブリドーマを用いることによるか（
例えば、Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳ
Ａ ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、またはインビトロでヒトＢ細胞
をエプスタイン−バーウイルスで形質転換することにより（例えば、Ｃｏｔｅら
、１９８５ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣ
ＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．７７−９６頁を参照
のこと）産生し得る。上記の引用の各々は、それらの全体が参考として本明細書
に援用される。
【０２８２】 本発明によれば、技術は、ＦＣＴＲＸタンパク質に特異的な単鎖抗体の産生の
ために適合され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）
。さらに、方法は、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築のために適合されて（例えば
、Ｈｕｓｅら、１９８９ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１を参照
のこと）、ＦＣＴＲＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログ
もしくはホモログに対する所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメ
ントの迅速かつ有効な同定を可能にし得る。非ヒト抗体は、当該分野で周知の技
術により「ヒト化」され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号を参照
のこと。ＦＣＴＲＸタンパク質に対するイディオタイプを含む抗体フラグメント
を、当該分野で公知の技術により産生し得、これには、制限されないで：（ｉ）
抗体分子のペプシン消化により産生されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉ
）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより産生さ
れるＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）抗体分子のパパインおよび還元剤での処理
により産生されるＦａｂフラグメント；ならびに（ｉｖ）Ｆｖフラグメントが含
まれる。
【０２８３】 さらに、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含むキメラ抗体およびヒト化モノクロ
ーナル抗体のような、組換え抗ＦＣＴＲＸ抗体（これらは、標準的な組換えＤＮ
Ａ技術を用いて作製され得る）は、本発明の範囲内である。このようなキメラ抗
体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術によ
り産生され得る。この技術は例えば、以下に記載の方法を用いる：国際出願番号
ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；欧州特許出願番号１８４，１８７号；欧州特許
出願番号１７１，４９６；欧州特許出願番号１７３，４９４；ＰＣＴ国際公開番
号ＷＯ ８６／０１５３３；米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，
２２５，５３９号；欧州特許出願番号１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９
８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１〜１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９〜３４４３；Ｌ
ｉｕら（１９８７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１〜３５２６；Ｓｕｎ
ら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４
〜２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４７：９
９９〜１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６〜４４
９；Ｓｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１
５５３〜１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：
１２０２〜１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２
１４；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２〜５２５；Ｖｅ
ｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；ならびにＢ
ｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３〜４０６０
。上記引用の各々は、それらの全体において参考として本明細書中に援用される
。
【０２８４】 １つの実施形態において、所望の特異性を保有する抗体のスクリーニングのた
めの方法は、当該分野内で公知の酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ
）および他の免疫学的に媒介された技術を含むが、これに限定されない。特定の
実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質の特定のドメインに対して特異的であ
る抗体の選抜は、このようなドメインを所有しているＦＣＴＲＸタンパク質のフ
ラグメントに結合するハイブリドーマの生成により容易にされる。従って、ＦＣ
ＴＲＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモ
ログ内の所望のドメインについて特異的である抗体がまた、本明細書において提
供される。
【０２８５】 抗ＦＣＴＲＸ抗体は、ＦＣＴＲＸタンパク質の局在化および／または定量化に
関する当該分野で公知の方法において用いられ得る（例えば、適切な生理学的な
サンプル中のＦＣＴＲＸタンパク質のレベルを測定する使用のために、診断的方
法における使用のために、タンパク質の画像化における使用のために、など）。
所定の実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラ
グメント、アナログまたはホモログについての抗体（抗体由来の結合ドメインを
含む）は、薬理学的に活性な化合物（本明細書中、以降において「治療剤」）と
して利用される。
【０２８６】 抗ＦＣＴＲＸ抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準的技術（例えばア
フィニティークロマトグラフィまたは免疫沈降）によって、ＦＣＴＲＸポリペプ
チドを単離するために用いられ得る。抗ＦＣＴＲＸ抗体は、細胞からの天然のＦ
ＣＴＲＸポリペプチド、そして宿主細胞において発現される組換え的に産生され
たＦＣＴＲＸポリペプチドの精製を容易にし得る。さらに、抗ＦＣＴＲＸ抗体が
、（例えば、細胞の溶解産物または細胞上清における）ＦＣＴＲＸタンパク質を
検出するために用いられて、ＦＣＴＲＸタンパク質の発現のアバンダンスおよび
パターンを評価し得る。抗ＦＣＴＲＸ抗体は、例えば、所定の治療レジメンの有
効性を決定するために、臨床試験の手順の一部として、組織におけるタンパク質
レベルを診断的にモニターするために用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物
質に結合する（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易にされ得る。検出
可能物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発
光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペ
ルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチ
ルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ス
トレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍
光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソ
チオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏ
ｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィ
コエリトリンが挙げられる；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられる；
生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが
挙げられる；そして、適切な放射性物質の例としては１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５ Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０２８７】 （ＦＣＴＲＸ組換え発現ベクターおよび宿主細胞） 本発明の別の局面は、ＦＣＴＲＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメン
ト、アナログもしくはホモログをコードする核酸を含む、ベクター、好ましくは
、発現ベクターに関する。本明細書において使用する場合、用語「ベクター」は
、連結された別の核酸を輸送し得る核酸分子をいう。１つの型のベクターは、「
プラスミド」である。これはさらなるＤＮＡセグメントが連結され得る環状の二
本鎖ＤＮＡループをいう。他の型のベクターは、ウイルス性ベクターであり、こ
こでは、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムに連結され得る。特定の
ベクターは、ベクターが導入される宿主細胞中で自律複製し得る（例えば、細菌
性の複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム性哺乳動物ベクター）。
他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導
入の際、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、そして、これにより宿主ゲノムととも
に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝
子の発現を指示し得る。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクタ
ー」と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、し
ばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベ
クター」は、プラスミドが最も一般的に用いられる形態のベクターであるので、
交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、等価の機能を果たす、ウイルス性
ベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随
伴ウイルス）のような、このような他の形態の発現ベクターを含むことを意図す
る。
【０２８８】 本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態の
本発明の核酸を含む。これは、組換え発現ベクターが、発現されるべき核酸配列
に作動可能に連結されている、発現に用いられる宿主細胞に基づいて選択された
１つ以上の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクターにおいて、「作
動可能に連結する」とは、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロの
転写／翻訳系において、またはベクターが宿主細胞に導入される場合は、宿主細
胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で調節配列に連結される
ことを意味することを意図する。
【０２８９】 用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメ
ント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような調
節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣ
ＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５、Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に
記載されている。調節配列は、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の
構成的発現を指示する配列、および特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配
列の発現を指示する配列（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクター
の設計が形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなど
のような因子に依存し得ることは当業者には明白である。本発明の発現ベクター
は、宿主細胞に導入され得、それにより、本明細書に記載される核酸によってコ
ードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク質またはペプチドを含む）
（例えば、ＦＣＴＲＸタンパク質、ＦＣＴＲＸタンパク質の変異形態、融合タン
パク質など）を産生し得る。
【０２９０】 本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における、
ＦＣＴＲＸタンパク質発現のために設計され得る。例えば、ＦＣＴＲＸタンパク
質は、細菌細胞（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、昆虫細胞（バ
キュロウイルス発現ベクターを用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞において
発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳ
ＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ
１８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．
（１９９０）にさらに考察されている。あるいは、組換え型発現ベクターは、例
えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを用いて、インビトロ
で転写および翻訳され得る。
【０２９１】 原核生物におけるタンパク質の発現は、最も頻繁には、融合タンパク質または
非融合タンパク質のいずれかの発現を指示する、構成的プロモーターまたは誘導
性プロモーターを含むベクターを有するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにお
いて実施される。融合ベクターは、そこにコードされるタンパク質に、通常、組
換えタンパク質のアミノ末端に、多数のアミノ酸を付加する。このような融合ベ
クターは、代表的には、以下の３つの目的のために役立つ：（ｉ）組換えタンパ
ク質の発現を増加させるため；（ｉｉ）組換えタンパク質の可溶性を増加させる
ため；および（ｉｉｉ）アフィニティー精製においてリガンドとして作用するこ
とによって組換えタンパク質の精製の際に補助するため。しばしば、融合発現ベ
クターにおいて、タンパク質分解の切断部位が、融合部分と組換えタンパク質と
の結合部に導入されて、融合タンパク質の精製の後に融合部分から組換えタンパ
ク質を分離することを可能とする。このような酵素、およびその同族（ｃｏｇｎ
ａｔｅ）の認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼを含
む。代表的な融合発現ベクターとしては、それぞれ、グルタチオンＳ−トランス
フェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを標
的の組換えタンパク質に融合する、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ Ｉｎｃ．；ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ ６７
：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖ
ｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔ
ａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。
【０２９２】 適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例には、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａ
ｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ １１ｄ（
Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：
ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０−８９）が挙げ
られる。
【０２９３】 Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大化するための１つのストラ
テジーは、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力を欠損した宿主
細菌中でタンパク質を発現させることである。例えば、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｇ
ＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ
ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９−１２８を参照のこと。別のストラ
テジーは、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的
に利用されるコドンであるように発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変
更することである（例えば、Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．２０：２１１１−２１１８を参照のこと）。本発明の核酸配列のこ
のような変更は、標準的なＤＮＡ合成技術によって実行され得る。
【０２９４】 別の実施形態において、ＦＣＴＲＸ発現ベクターは、酵母発現ベクターである
。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のための
ベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢ
Ｏ Ｊ．６：２２９−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗ
ｉｔｚ、（１９８２）Ｃｅｌｌ ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃ
ｈｕｌｔｚら、（１９８７）Ｇｅｎｅ ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌ
ｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
【０２９５】 あるいは、ＦＣＴＲＸは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細
胞中で発現され得る。培養昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）中でのタンパク質の
発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍ
ｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２１５６−２１６５）
およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）Ｖｉ
ｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９）が挙げられる。
【０２９６】 なお別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用し
て、哺乳動物細胞中で発現される。哺乳動物発現ベクターの例には、ｐＣＤＭ８
（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（
Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ．６：１８７−１９５）が挙げられ
る。哺乳動物細胞中で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、
ウイルスの調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプロ
モーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシ
ミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方のため
に適切な他の発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９の第１６章および第１７章を参照
のこと。
【０２９７】 別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型（例え
ば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現する）中で優先的に核酸の
発現を指示し得る。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切
な組織特異的なプロモーターの非限定的な例には、アルブミンプロモーター（肝
臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１：２６８−２
７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８
）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５−２７５）、Ｔ細胞レセプターの特定
のプロモーターにおいて（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）
ＥＭＢＯ Ｊ．８：７２９−７３３）および免疫グロブリンの特定のプロモータ
ーにおいて（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７２９−７４０；
ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７４１−７
４８）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、神経フィラメントプロモータ
ー；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅ
ｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：９１２−９１６）、ならび
に乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３
，３１６号および欧州出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発達的に調
節されるプロモーターもまた含まれる（例えば、マウスｈｏｘプロモーター（Ｋ
ｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４−３
７９）およびａ−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇ
ｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３：５３７−５４６）。
【０２９８】 本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発
明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分
子は、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（Ｄ
ＮＡ分子の転写によって）を可能にする様式で調節配列に作動可能に連結される
。種々の細胞型においてアンチセンスＲＮＡ分子の持続的な発現を指示する、ア
ンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結された調節配列（例
えば、ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー）が選択され得るか
、または、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または細胞特異
的発現を指示する調節配列が、選択され得る。アンチセンス発現ベクターは、組
換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態であり得、
ここではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、その活性は
、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺伝子を使
用する遺伝子発現の調節の考察については、例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら、「
Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｏｏｌ ｆｏ
ｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ ｉ
ｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）１９８６を参照のこと。
【０２９９】 本発明の別の局面は、本発明の組換え発現べクターが導入された宿主細胞に関
する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で、交換可能
に使用される。このような用語は、特定の被験細胞をいうのみでなく、そのよう
な細胞の子孫または潜在的な子孫をもいうことが理解される。変異または環境の
影響のいずれかに起因して、特定の改変は次の世代において生じ得るので、この
ような子孫は、実際には、親の細胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細
書中で使用される場合のこの用語の範囲内に含まれる。
【０３００】 宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、Ｆ
ＣＴＲＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母ま
たは哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）または
ＣＯＳ細胞）において発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知であ
る。
【０３０１】 ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術を介して
原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場合
、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例え
ば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するために当該分野で容認されている種々の技術
をいうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈
、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、または
エレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェク
ションするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ Ｃ
ＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され
得る。
【０３０２】 安定な哺乳動物細胞のトランスフェクションのために、使用される発現ベクタ
ーおよびトランスフェクション技術に依存して、細胞のほんの一部のみが外来Ｄ
ＮＡをそのゲノムに組み込み得ることが知られている。これらの要素を同定およ
び選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードす
る遺伝子が、一般的には目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入される。種々の選
択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレ
キサート）に対する耐性を付与するものが含まれる。選択マーカーをコードする
核酸は、ＦＣＴＲＸをコードするベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入さ
れ得るか、あるいは別々のベクター上で導入され得る。導入された核酸で安定に
トランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択
マーカー遺伝子を取り込んだ細胞は生存するが、他の細胞は死滅する）。
【０３０３】 本発明の宿主細胞（例えば、培養中の原核生物宿主細胞および真核生物宿主細
胞）は、ＦＣＴＲＸタンパク質を産生（すなわち、発現）するために使用され得
る。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して、ＦＣＴＲＸタンパ
ク質を産生するための方法を提供する。１つの実施形態において、本発明の方法
は、ＦＣＴＲＸタンパク質が産生されるような適切な培地中で、本発明の宿主細
胞（ここに、ＦＣＴＲＸタンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入され
ている）を培養する工程を包含する。別の実施形態において、本発明はさらに、
培地または宿主細胞からＦＣＴＲＸタンパク質を単離する工程を包含する。
【０３０４】 （トランスジェニックＦＣＴＲＸ動物） 本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使
用され得る。例えば、１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、ＦＣＴＲ
Ｘタンパク質コード配列が導入された、受精卵母細胞または胚性幹細胞である。
次いで、このような宿主細胞は、外因性のＦＣＴＲＸ配列がゲノムに導入された
非ヒトトランスジェニック動物、または内因性のＦＣＴＲＸ配列が変更された相
同組換え動物を作製するために使用され得る。このような動物は、ＦＣＴＲＸタ
ンパク質の機能および／または活性を研究するため、ならびにＦＣＴＲＸタンパ
ク質活性のモジュレーターを同定および／または評価するために有用である。本
明細書中で使用される場合、「トランスジェニック動物」とは、非ヒト動物であ
り、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくは、ラットまたはマウスのような
齧歯類であり、ここでは、その動物の１つ以上の細胞が、導入遺伝子を含む。ト
ランスジェニック動物の他の例としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、
ヤギ、ニワトリ、両生類などが挙げられる。導入遺伝子は、細胞（この細胞から
トランスジェニック動物を発生させた）のゲノムに組み込まれかつ成熟動物のゲ
ノムに残存し、それによって、トランスジェニック動物の１つ以上の細胞型また
は組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指示する、外因性のＤＮＡであ
る。本明細書中で使用される場合、「相同（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）組換え動物
」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはマウス
であり、ここでは内因性のＦＣＴＲＸ遺伝子は、内因性の遺伝子と、その動物の
発生の前にその動物の細胞（例えば、その動物の胚細胞）に導入された外因性の
ＤＮＡ分子との間の相同組換えによって変更されている。
【０３０５】 本発明のトランスジェニック動物は、ＦＣＴＲＸをコードする核酸を、例えば
、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって、受精卵母細胞の雄
性前核に導入すること、およびその卵母細胞を偽妊娠雌性養育動物（ｆｏｓｔｅ
ｒ ａｎｉｍａｌ）中で発達させることを可能にすることによって作製され得る
。配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、
２２、および２４のヒトのＦＣＴＲＸ ｃＤＮＡ配列は、非ヒト動物のゲノムに
導入遺伝子として導入され得る。あるいは、ヒトのＦＣＴＲＸ遺伝子の非ヒトホ
モログ（例えば、マウスのＦＣＴＲＸ遺伝子）は、ヒトのＦＣＴＲＸ ｃＤＮＡ
に対するハイブリダイゼーションに基づいて単離され得（上記にさらに記載され
た）、そして導入遺伝子として使用され得る。イントロン配列およびポリアデニ
ル化シグナルもまた導入遺伝子中に含まれ得、その導入遺伝子の発現の効率を増
大させ得る。組織特異的調節配列（単数または複数）は、特定の細胞に対して、
ＦＣＴＲＸタンパク質の発現を指示するように、ＦＣＴＲＸ導入遺伝子に作動可
能に連結され得る。胚の操作およびマイクロインジェクションを介するトランス
ジェニック動物（特に、マウスのような動物）を作製するための方法は、当該分
野で慣習的になっており、そして例えば、米国特許第４，７３６，８６６号；同
第４，８７０，００９号；および同第４，８７３，１９１号；ならびにＨｏｇａ
ｎ １９８６、ＭＡＮＩＰＵＬＡＴＩＮＧ ＴＨＥ ＭＯＵＳＥ ＥＭＢＲＹＯ
，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載されている。同様の
方法が、他のトランスジェニック動物の作製のために使用される。トランスジェ
ニック創始（ｆｏｕｎｄｅｒ）動物は、そのゲノムにおけるＦＣＴＲＸ導入遺伝
子の存在および／またはその動物の組織もしくは細胞中のＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡ
の発現に基づいて同定され得る。次いで、トランスジェニック創始動物は、導入
遺伝子を有するさらなる動物を育種するために使用され得る。さらに、ＦＣＴＲ
Ｘタンパク質をコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物は、さら
に、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物に交雑され得る。
【０３０６】 相同組換え動物を作製するために、ＦＣＴＲＸ遺伝子の少なくとも一部を含む
ベクターを調製する。ここで、この遺伝子は、欠失、付加、または置換が導入さ
れ、それによってそのＦＣＴＲＸ遺伝子が変更されている（例えば、機能的に破
壊されている）。ＦＣＴＲＸ遺伝子はヒト遺伝子（例えば、配列番号１、３、５
、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、２２、および２４のｃ
ＤＮＡ）であり得るが、より好ましくは、ヒトのＦＣＴＲＸ遺伝子の非ヒトホモ
ログである。例えば、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、
１６、１８、２０、２２、および２４のヒトのＦＣＴＲＸ遺伝子のマウスホモロ
グは、マウスゲノムにおける内因性のＦＣＴＲＸ遺伝子を変更するのに適切な相
同組換えベクターを構築するために使用され得る。１つの実施形態において、そ
のベクターは、相同組換えに際して、その内因性のＦＣＴＲＸ遺伝子が、機能的
に破壊されるように設計される（すなわち、機能的タンパク質をもはやコードし
ない；「ノックアウト」ベクターともいわれる）。
【０３０７】 あるいは、このベクターは、相同組換えに際して、内因性ＦＣＴＲＸ遺伝子が
変異されるか、あるいはさもなければ、変更されるが、なお機能性タンパク質を
コードするように、設計され得る（例えば、上流の調節領域が変更され、それに
よって内因性ＦＣＴＲＸタンパク質の発現を変更し得る）。相同組換えベクター
において、ＦＣＴＲＸ遺伝子の変更された部分は、ＦＣＴＲＸ遺伝子のさらなる
核酸によって、その５’末端および３’末端で隣接されることにより、相同組換
えが、ベクターによって保有される外因性ＦＣＴＲＸ遺伝子と胚幹細胞中の内因
性ＦＣＴＲＸ遺伝子との間で起こることを可能にする。さらなる隣接するＦＣＴ
ＲＸ核酸は、内因性遺伝子との首尾よい相同組換えのために十分な長さである。
典型的に、数キロベースの隣接ＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方における
）が、ベクターに含まれる。例えば、相同組換えベクターの説明についてＴｈｏ
ｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３を参照のこと。次いで、このベク
ターは、（例えば、エレクトロポレーションによって）胚性幹細胞株に導入され
、そして導入されたＦＣＴＲＸ遺伝子が内因性ＦＣＴＲＸ遺伝子と相同組換えし
た細胞が、選択される（例えば、Ｌｉら（１９９２）Ｃｅｌｌ ６９：９１５を
参照のこと）。
【０３０８】 次いで、選択された細胞が、動物（例えば、マウス）の未分化胚芽細胞へ注入
され、凝集キメラを形成する。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９８７）のＴｅｒａ
ｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ
ｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲ
Ｌ、Ｏｘｆｏｒｄ、１１３頁〜１５２頁を参照のこと。次いで、キメラ胚が、適
切な偽妊娠雌性養育動物に移植され得、そしてその胚は分娩に到る。その生殖細
胞中に相同組換えされたＤＮＡを保有する子孫が、動物を育種するために使用さ
れ得、ここでこの動物の全ての細胞は、導入遺伝子の生殖系列伝達によって、相
同組換えされたＤＮＡを含む。相同組換えベクターおよび相同組換え動物を構築
するための方法が、さらに以下に記載される；Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕ
ｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２：８２３−８２９；ＰＣＴ国際公開
番号：ＷＯ９０／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；ＷＯ９２／０９６８；お
よびＷＯ／９３／０４１６９。
【０３０９】 別の実施形態において、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された
系を含む非ヒトトランスジェニック動物が産生され得る。このような系の１つの
例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃ
ｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の説明については、例えば、Ｌａｋｓｏら（１
９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−６
２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎ
ら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−１３５５を参照のこと・）
。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が導入遺伝子の発現を調節するために使用
される場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコード
する導入遺伝子を含む動物が必要となる。このような動物は、例えば、２つのト
ランスジェニック動物（一方は選択されたタンパク質をコードした導入遺伝子を
含み、他方はリコンビナーゼをコードした導入遺伝子を含む）を交配することに
よる「二重の」トランスジェニック動物の構築によって提供され得る。
【０３１０】 本明細書中に記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンがまた、Ｗ
ｉｌｍｕｔら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３に記載される
方法に従って、産生され得る。簡単には、トランスジェニック動物からの細胞（
例えば、体細胞）が単離され得、そして増殖サイクル（ｇｒｏｗｔｈ ｃｙｃｌ
ｅ）から出て、Ｇ０期に入るように誘導され得る。次いで、静止性細胞が、例え
ば、電気パルスの使用により、その静止性細胞が単離されたのと同種の動物から
摘出された卵母細胞へ融合され得る。次いで、この再構築された卵母細胞は培養
され、これにより、これは桑実胚または未分化胚芽細胞に発達し、次いで、偽妊
娠雌性養育動物に移される。この雌性養育動物から産まれた子孫は、その細胞（
例えば、その体細胞）が単離された動物のクローンである。
【０３１１】 （薬学的組成物） 本発明のＦＣＴＲＸ核酸分子、ＦＣＴＲＸタンパク質、および抗ＦＣＴＲＸ抗
体（これはまた、本明細書中で、「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにそれ
らの誘導体、フラグメント、アナログ、およびホモログが、投与に適した薬学的
組成物に組み込まれ得る。このような組成物は、典型的に、核酸分子、タンパク
質または抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用さ
れる場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的な投与に適合可能な、あ
らゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収
遅延剤（ｄｅｌａｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）などを含むことが意図される。適切な
キャリアは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ（当該分野の標準的参考文献であって、本明細書中に参考として援用
される）の最新版に記載される。このようなキャリアまたは希釈剤の好ましい例
としては、水、生理食塩水、フィンガー（ｆｉｎｇｅｒ）溶液、デキストロース
溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。
リポソームおよび非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）もまた、使用され得る
。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で
周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除
いて、組成物におけるその使用が意図される。補助的な活性化合物もまた、組成
物へ組み込まれ得る。
【０３１２】 本発明の薬学的組成物は、その意図される投与経路と適合可能であるように処
方される。投与経路の例には、非経口（例えば、静脈内、皮内、皮下）投与、経
口（例えば、吸入）投与、経皮（すなわち、局所的）投与、経粘膜（ｔｒａｎｓ
ｍｕｃｏｓａｌ）投与、および直腸投与が挙げられる。非経口適用、皮内適用ま
たは皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：
注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン
、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような、滅菌希釈剤；ベンジルア
ルコールまたはメチルパラベンのような、抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫
酸ナトリウムのような、抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のよう
な、キレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような、緩衝液、および
塩化ナトリウムまたはデキストロースのような、張度の調整のための薬剤。ｐＨ
は、塩酸または水酸化ナトリウムのような酸または塩基で調整され得る。非経口
調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または
多用量のバイアル中に入れられ得る。
【０３１３】 注入用途に適した薬学的組成物は、滅菌水溶液（ここでは、水溶解性）または
分散媒（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）、および滅菌注入可能溶液または分散媒の即座
の調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与において、適切なキャリアには、生
理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐ
ａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全
ての場合において、組成物は、無菌でなければならず、そして容易な注入性（ｓ
ｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。これ
は、製造および保存の条件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌
のような微生物の汚染行為に対して保護されなければならない。このキャリアは
、例えば、以下を含む溶媒または分散媒であり得る：水、エタノール、ポリオー
ル（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレング
リコールなど）ならびにそれらの適切な混合物。適切な流動性が、例えば、レシ
チンのようなコーティングの使用によって、分散媒の場合には、要求される粒子
サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持
され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラ
ベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）に
よって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、砂糖、ポリアル
コール（例えば、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトール）、塩化ナト
リウム）を含むことが好ましい。注入可能組成物の吸収期間の延長は、組成物に
吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン
）を含ませることによってもたらされ得る。
【０３１４】 滅菌注射可能溶液は、必要量のこの活性化合物（例えば、ＦＣＴＲＸタンパク
質または抗ＦＣＴＲＸ抗体））を、適切な溶媒中で、上記で列挙される成分の１
つまたは組み合わせと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することによ
って調製され得る。一般的に、分散媒は、活性化合物を、基本（ｂａｓｉｃ）の
分散媒と上記で列挙される成分から必要とされる他の成分とを含む滅菌ビヒクル
中へ組み込むことによって調製される。滅菌注射可能液剤の調製のための滅菌粉
末の場合において、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、
予め滅菌濾過されたその溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉
末を得る。
【０３１５】 経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは
、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へと圧縮され得る。経口治療
投与の目的のために、この活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、そして
錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた
、うがい薬としての使用のために流体キャリアを使用して調製され得、ここで、
この流体キャリア中のこの化合物は、経口的に適用され、そして音を立てられ（
ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の
結合剤、および／またはアジュバント物質が、この組成物の一部として含まれ得
る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、任意の以下の成分または同様
の性質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セルロース、ガムト
ラガントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩
壊剤（例えば、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはコーンス
ターチ）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔ
ｅｒｏｔｅｓ））；潤滑剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ
素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；あるいは香味剤（例え
ば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）。
【０３１６】 吸入による投与について、この化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素
のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エ
アロゾル噴霧の形態で送達される。
【０３１７】 全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または
経皮投与について、浸透される障壁に適切な浸透剤が、処方物において使用され
る。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例えば、
経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げ
られる。経粘膜投与は、鼻噴霧または坐剤の使用によって達成され得る。経皮投
与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟膏剤（ｏｉ
ｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。
【０３１８】 この化合物はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、ココアバターおよび他の
グリセリドのような従来の坐剤基剤と共に）または貯留（ｒｅｎｔｅｎｔｉｏｎ
）浣腸の形態で調製され得る。
【０３１９】 １つの実施形態において、この活性化合物は、身体からの迅速な排出に対して
この化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、制御放出処方物）、
これには、移植片およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる。酢酸エ
チレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステ
ル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。
このような処方物の調製のための方法は、当業者には明らかである。これらの物
質はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＦＣＴＲＸａ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手され得る。リポソーム懸
濁剤（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を感染させた細胞へ標的化され
るリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る
。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような、当業
者に公知の方法に従って調製され得る。
【０３２０】 投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物ま
たは非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される投
薬単位形態は、処置される被験体に対する単位投薬量として適切な物理的に個々
の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して所望の治療的
効果を生じるように計算された、所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位
形態についての詳細は、この活性化合物の固有の特徴、および達成される特定の
治療効果、ならびに個体の処置のためのこのような活性化合物を調合する分野に
固有の制限によって決定されるか、あるいはこれらに直接依存する。
【０３２１】 本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとし
て使用され得る。遺伝子治療ベクターは、被験体へ、例えば静脈内注射、局所投
与（米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）によって、または定位注射
（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ９１：３０５４−３０５７を参照のこと）によって送達され得る。遺伝子
治療ベクターの薬学的調製物には、受容可能な希釈剤中の遺伝子治療ベクターが
挙げられ得るか、または遺伝子送達ビヒクルが組み込まれる除放性マトリックス
が挙げられ得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターが組換え細胞からインタ
クトで産生され得（例えば、レトロウイルスベクター）、薬学的調製物は、遺伝
子送達系を産生する１以上の細胞を含み得る。
【０３２２】 薬学的組成物は、投与のための使用説明書と共に、容器、包装、またはディス
ペンサーに含まれ得る。
【０３２３】 （スクリーニングおよび検出の方法） 本発明の単離された核酸分子は、以下にさらに説明されるように、ＦＣＴＲＸ
タンパク質（例えば、遺伝子治療適用における宿主細胞中の組換え発現ベクター
を介する）を発現するため、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡ（例えば、生物学的サンプル
において）またはＦＣＴＲＸ遺伝子における遺伝子損傷を検出するため、ならび
にＦＣＴＲＸ活性を調節するために使用され得る。さらに、ＦＣＴＲＸタンパク
質は、ＦＣＴＲＸタンパク質の活性または発現を調節する薬物または化合物をス
クリーニングするために、ならびにＦＣＴＲＸタンパク質の不十分もしくは過剰
な産生によって、あるいはＦＣＴＲＸ野生型タンパク質と比較して減少した活性
もしくは異常な活性を有するＦＣＴＲＸタンパク質形態の産生によって特徴付け
られる障害を処置するために使用され得る。さらに、本発明の抗ＦＣＴＲＸ抗体
が、ＦＣＴＲＸタンパク質を検出および単離するため、ならびにＦＣＴＲＸ活性
を調節するために使用され得る。
【０３２４】 本発明は、さらに、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定
される新規の薬剤、および上記で本明細書中で記載されるような処置のためのそ
れらの使用に関する。
【０３２５】 （スクリーニングアッセイ） 本発明は、調節因子、すなわち、ＦＣＴＲＸタンパク質に結合するか、あるい
は例えば、ＦＣＴＲＸタンパク質の発現またはＦＣＴＲＸタンパク質の活性に対
して刺激効果または阻害効果を有する、候補または試験化合物または薬剤（例え
ば、ペプチド、ペプチド模倣物、低分子または他の薬物）を同定するための方法
（本明細書中において「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。
本発明はまた、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイにおいて同定された
化合物を含む。
【０３２６】 １実施形態において、本発明は、ＦＣＴＲＸタンパク質またはポリペプチド、
あるいはその生物学的に活性な部分の膜結合形態に結合するか、またはその膜結
合形態の活性を調節する、候補化合物もしくは試験化合物をスクリーニングする
ためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコ
ンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチのいずれかを使用して
得られ得、これには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的に位置
付け可能な並行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳を要する合成ライブラ
リー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマト
グラフィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプロー
チはペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド
、非ペプチドオリゴマーもしくは化合物の低分子ライブラリーに適用可能である
（例えば、Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ
１２：１４５を参照のこと）。
【０３２７】 本明細書中で使用される場合、「低分子」とは、約５ｋＤ未満の分子量、最も
好ましくは約４ｋＤ未満の分子量を有する組成物をいうように意味される。低分
子は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、炭水化物、脂
質または他の有機分子もしくは無機分子であり得る。化学的および／または生物
学的混合物（例えば、真菌、細菌または藻類抽出物）のライブラリーは、当該分
野で公知であり、そして本発明のアッセイのいずれかを用いてスクリーニングさ
れ得る。
【０３２８】 分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において、例えば以下
に見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（
１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４
）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧ
ａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【０３２９】 化合物のライブラリーは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１）、あるいはビーズ上（Ｌ
ａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ
（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ
米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ 米国特許第５，２３
３，４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（Ｓｃ
ｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０
；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉ
ｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：
６３７８〜６３８２；Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２
：３０１〜３１０；Ｌａｄｎｅｒ、米国特許第５，２３３，４０９号）において
提示され得る。
【０３３０】 １つの実施形態において、アッセイは細胞ベースのアッセイであり、ここで、
膜結合形態のＦＣＴＲＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分を細胞表
面上に発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物が、ＦＣ
ＴＲＸタンパク質に結合する能力が、決定される。例えば、細胞は、哺乳動物起
源または酵母細胞であり得る。この試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質に結合す
る能力の決定は、例えば、その試験化合物を放射性同位体または酵素標識とカッ
プリングさせて、その結果、この試験化合物のＦＣＴＲＸタンパク質またはその
生物学的に活性な部分に対する結合が、複合体におけるその標識化合物を検出す
ることによって決定され得ることによって達成され得る。例えば、試験化合物は
、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈで直接的または間接的のいずれかで標
識され得、そしてその放射性同位体が、放射線放射の直接の計数により、または
シンチレーション計数により、検出され得る。あるいは、試験化合物は、例えば
、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラー
ゼで酵素的に標識され得、そしてこの酵素的標識が、適切な基質の生成物への転
換を決定することにより、検出され得る。１つの実施形態において、このアッセ
イは、膜結合形態のＦＣＴＲＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分を
その細胞表面上に発現する細胞を、ＦＣＴＲＸと結合する既知の化合物と接触さ
せて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物に試験化合物を接触
させる工程、ならびにこの試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質と相互作用する能
力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質と
相互作用する能力を決定する工程によって、この試験化合物が、既知の化合物と
比較して、ＦＣＴＲＸまたはその生物学的に活性な部分と優先的に結合する能力
を決定する工程を包含する。
【０３３１】 別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、これは、
膜結合形態のＦＣＴＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を細胞表面
上で発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が
、ＦＣＴＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば
、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物が、Ｆ
ＣＴＲＸまたはその生物学的に活性な部分の活性を調節する能力の決定は、例え
ば、ＦＣＴＲＸタンパク質が、ＦＣＴＲＸ標的分子に結合またはこれら標的分子
と相互作用する能力を決定することによって、達成され得る。本明細書中におい
て使用する場合には、「標的分子」とは、ＦＣＴＲＸタンパク質が天然に結合ま
たは相互作用する分子であり、例えば、ＦＣＴＲＸ相互作用タンパク質を発現す
る細胞表面上の分子、第二の細胞表面上の分子、細胞外環境中の分子、細胞膜の
内面と会合する分子、または細胞質分子である。ＦＣＴＲＸ標的分子は、非ＦＣ
ＴＲＸ分子あるいは本発明のＦＣＴＲＸタンパク質またはポリペプチドであり得
る。１つの実施形態において、ＦＣＴＲＸ標的分子は、シグナル伝達経路の構成
要素であり、これは、細胞膜を通って細胞内への細胞外シグナル（例えば、化合
物が膜結合ＦＣＴＲＸ分子に結合することにより発生するシグナル）の伝達を促
進する。その標的は、例えば、触媒活性を有する第二の細胞内タンパク質、また
は下流シグナル伝達分子のＦＣＴＲＸとの会合を容易にするタンパク質であり得
る。
【０３３２】 ＦＣＴＲＸタンパク質がＦＣＴＲＸ標的分子に結合するかまたはその標的分子
と相互作用する能力の決定は、直接的結合を決定するための上記方法の１つによ
り、達成され得る。１つの実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質がＦＣＴＲ
Ｘ標的分子に結合するかまたはその標的分子と相互作用する能力の決定は、その
標的分子の活性を決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の
活性は、その標的の細胞性セカンドメッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ２＋ 、ジアシルグリセロール、ＩＰ３など）の誘導を検出すること、適切な基質への
標的の触媒活性／酵素活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマー
カー（例えば、ルシフェラーゼ）をコードする核酸に作動可能に連結されたＦＣ
ＴＲＸ応答性調節エレメントを含む）の誘導を検出すること、または細胞応答（
例えば、細胞生存度、細胞分化、または細胞増殖）を検出することにより、決定
され得る。
【０３３３】 なお別の実施形態において、本発明のアッセイは、無細胞（ｃｅｌｌ−ｆｒｅ
ｅ）アッセイであり、ＦＣＴＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を
試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質
またはその生物学的に活性な部分と結合する能力を決定する工程を包含する。こ
の試験化合物の、ＦＣＴＲＸタンパク質への結合は、上記のように、直接的また
は間接的にのいずれかで決定され得る。１つのこのような実施形態において、こ
のアッセイは、ＦＣＴＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＦＣ
ＴＲＸを結合する既知の化合物に接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、
このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物が
ＦＣＴＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、こ
の試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、こ
の試験化合物が、既知の化合物と比較して、ＦＣＴＲＸ、またはその生物学的に
活性な部分と優先的に結合する能力を決定する工程を包含する。
【０３３４】 なお別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ＦＣＴＲＸ
タンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触させる工程、な
らびにその試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分
の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。
この試験化合物がＦＣＴＲＸの活性を調節する能力の決定は、例えば、ＦＣＴＲ
Ｘタンパク質が、ＦＣＴＲＸ標的分子に結合する能力を、直接的結合の決定のた
めの上記方法の１つによって決定することにより、達成され得る。代替の実施形
態において、この試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質の活性を調節する能力の決
定は、ＦＣＴＲＸタンパク質が、ＦＣＴＲＸ標的分子をさらに調節する能力を決
定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の適切な基質に対する
触媒活性／酵素活性は、上記のように決定され得る。
【０３３５】 さらに別の実施形態において、無細胞アッセイは、ＦＣＴＲＸタンパク質また
はその生物学的に活性な部分を、ＦＣＴＲＸタンパク質を結合する既知の化合物
に接触させてアッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物
と接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＦＣＴＲＸタンパク質と相互作用
する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＦＣＴＲＸタンパ
ク質と相互作用する能力の決定は、ＦＣＴＲＸタンパク質が、ＦＣＴＲＸ標的分
子と優先的に結合するか、またはその標的分子の活性を優先的に調節する能力を
決定する工程を包含する。
【０３３６】 本発明の無細胞アッセイは、ＦＣＴＲＸタンパク質の、可溶性の形態または膜
結合形態の両方の使用に受け入れられる。膜結合形態のＦＣＴＲＸタンパク質を
含む無細胞アッセイの場合には、ＦＣＴＲＸタンパク質の膜結合形態が溶液中に
維持されるように、可溶化剤を利用することが所望され得る。このような可溶化
剤の例には、非イオン性界面活性剤が挙げられ、例えば、ｎ−オクチルグルコシ
ド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メ
チルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標
）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標
）、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ（Ｉｓｏｔｒｉｄｅ
ｃｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｅｔｈｅｒ）ｎ、Ｎ−ドデシ
ル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−（３
−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−１−プロパンスルホネート（３
−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ
−１−ｐｒｏｐａｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳ）、または３−（３
−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−２−ヒドロキシ−１−プロパン
スルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ａｍｍｉｎｉｏｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐａｎｅ ｓｕｌｆｏｎａ
ｔｅ）（ＣＨＡＰＳＯ）である。
【０３３７】 本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、ＦＣＴＲＸタン
パク質またはその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または
両方の非複合形態からの複合形態の分離を促進し、そしてそのアッセイの自動化
に適合させることが、所望され得る。試験化合物の、ＦＣＴＲＸタンパク質への
結合、または候補化合物の存在下および非存在下での、ＦＣＴＲＸタンパク質の
標的分子との相互作用は、これらの反応物を収容するために適切な任意の容器内
で、達成され得る。このような容器の例には、マイクロタイタープレート、試験
管、および微小遠心管が挙げられる。１実施形態において、そのタンパク質の一
方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融
合タンパク質が、提供され得る。例えば、ＧＳＴ−ＦＣＴＲＸ融合タンパク質ま
たはＧＳＴ標的融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍ
ａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化
マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いでこれらは、試験化合物と合わ
せられるか、あるいは試験化合物および未吸着標的タンパク質またはＦＣＴＲＸ
タンパク質のいずれかと合わせられ、そしてこの混合物が、複合体形成を誘導す
る条件下（例えば、塩およびｐＨに関して生理学的条件）でインキュベートされ
る。インキュベーション後、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗
浄して、結合していないあらゆる成分を除去し、ビーズの場合にはマトリックス
を固定し、例えば上記のように、複合体を直接的または間接的のいずれかで決定
する。あるいは、複合体がマトリックスから解離され得、そしてＦＣＴＲＸタン
パク質の結合レベルまたは活性レベルを、標準的な技術を使用して決定し得る。
【０３３８】 タンパク質をマトリックスに固定するための他の技術もまた、本発明のスクリ
ーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、ＦＣＴＲＸタンパク質、また
はその標的分子のいずれかが、ビオチンとストレプトアビジンとの結合を利用し
て、固定され得る。ビオチン化ＦＣＴＲＸタンパク質、または標的分子は、当該
分野において周知の技術を使用して、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド）から調製され得（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）、そしてストレプトアビジンでコ
ーティングした９６ウェルのプレート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウ
ェルに固定され得る。あるいは、ＦＣＴＲＸタンパク質、または標的分子と反応
性であるがＦＣＴＲＸタンパク質のその標的分子への結合を妨害しない抗体が、
そのプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合していない標的またはＦＣ
ＴＲＸタンパク質が、抗体の結合によってウェル内に捕捉され得る。このような
複合体を検出するための方法には、ＧＳＴ固定複合体に関しての上記で述べた方
法に加えて、ＦＣＴＲＸタンパク質または標的分子と反応性の抗体を使用する、
複合体の免疫検出、ならびにＦＣＴＲＸタンパク質、または標的分子に関する酵
素活性の検出に依存する酵素結合アッセイが挙げられる。
【０３３９】 別の実施形態において、ＦＣＴＲＸタンパク質発現のモジュレーターは、細胞
を候補化合物と接触させ、そして細胞中のＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡまたはタンパク
質の発現を決定する方法において同定される。候補化合物の存在下でのＦＣＴＲ
Ｘ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、候補化合物の非存在下でのＦＣ
ＴＲＸ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルと比較される。次いで、候補化
合物は、この比較に基づいて、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡまたはタンパク質発現のモ
ジュレーターとして同定され得る。例えば、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡまたはタンパ
ク質の発現が候補化合物の非存在下より、その存在下における方が大きい（すな
わち、統計的に有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡ
またはタンパク質の発現の刺激物質として同定される。あるいは、ＦＣＴＲＸ
ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下よりその存在下の方が
少ない（統計的に有意に少ない）場合、この候補化合物は、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮ
Ａまたはタンパク質の発現のインヒビターとして同定される。細胞中のＦＣＴＲ
Ｘ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡまたはタ
ンパク質を検出するために本明細書中に記載の方法によって決定され得る。
【０３４０】 本発明のなお別の局面において、ＦＣＴＲＸタンパク質は、ツーハイブリッド
アッセイまたはスリーハイブリッドアッセイにおいて「餌（ｂａｉｔ）タンパク
質」として使用されて（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏ
ｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２；Ｍａｄｕｒａら、１９９３ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６−１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら
、１９９３ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０−９２４；Ｉｗａｂｕ
ｃｈｉら、１９９３ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３−１６９６；およびＢｒ
ｅｎｔ ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）、ＦＣＴＲＸ（「ＦＣＴＲＸ結合
タンパク質」または「ＦＣＴＲＸ−ｂｐ」）に結合するか、またはこれと相互作
用し、そしてＦＣＴＲＸ活性を調節する他のタンパク質を同定し得る。このよう
なＦＣＴＲＸ結合タンパク質はまた、例えば、ＦＣＴＲＸ経路の上流または下流
エレメントとしてＦＣＴＲＸタンパク質によるシグナル伝達に関与する可能性が
ある。
【０３４１】 ツーハイブリッド系は、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメイン
からなる、大部分の転写因子のモジュール的性質に基づく。簡潔には、このアッ
セイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を利用する。一方の構築物においては、ＦＣ
ＴＲＸをコードする遺伝子が既知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結
合ドメインをコードする遺伝子に融合される。他方の構築物においては、ＤＮＡ
配列のライブラリー由来の、未同定タンパク質（「餌食（ｐｒｅｙ）」または「
サンプル」）をコードするＤＮＡ配列が、既知の転写因子の活性化ドメインをコ
ードする遺伝子に融合される。「餌」および「餌食」タンパク質がインビボで相
互作用して、ＦＣＴＲＸ依存性複合体を形成し得る場合、この転写因子のＤＮＡ
結合ドメインおよび活性化ドメインは、非常に近くにある。近位にあることによ
り、転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結されたレポーター遺伝子
（例えば、ＬａｃＺ）の転写が可能となる。レポーター遺伝子の発現が検出され
得、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーが、単離され得、そしてＦＣＴＲ
Ｘと相互作用するタンパク質をコードするクローニングされた遺伝子を得るため
に使用され得る。
【０３４２】 本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤
および本明細書中に記載されるような処置のためのこの薬剤の使用に関する。
【０３４３】 （検出アッセイ） 本明細書中で同定されるｃＤＮＡ配列の一部またはフラグメント（および対応
する完全な遺伝子配列）は、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法で使用され
得る。例えば、これらの配列を使用して、（ｉ）染色体上にそれぞれの遺伝子を
マッピングし得；従って遺伝病と関連する遺伝子領域を位置決定し得る；（ｉｉ
）微量の生物学的サンプルから個体を同定し得る（組織型決定）；および（ｉｉ
ｉ）生物学的サンプルの法医学的識別を助け得るが、これに限定されない。これ
らの適用は、以下の節において記載される。
【０３４４】 （染色体マッピング） 一旦遺伝子の配列（または配列の一部分）が単離されると、この配列を用いて
染色体上に遺伝子の位置をマッピングし得る。このプロセスは、染色体マッピン
グとよばれる。従って、本明細書中に記載のＦＣＴＲＸ配列の一部またはフラグ
メント、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、
２０、２２、および２４、またはそのフラグメントもしくは誘導体を用いて、そ
れぞれ、ＦＣＴＲＸ遺伝子の位置を染色体上にマッピングし得る。ＦＣＴＲＸ配
列を染色体にマッピングすることは、これらの配列と、疾患と関連する遺伝子と
を相関付ける際の重要な第一歩である。
【０３４５】 簡潔には、ＦＣＴＲＸ遺伝子は、ＦＣＴＲＸ配列からＰＣＲプライマー（好ま
しくは、１５〜２５ｂｐの長さ）を調製することにより染色体にマッピングし得
る。ＦＣＴＲＸ配列のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡにおける１つ
を超えるエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し得、従って、増幅プ
ロセスを複雑にし得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含
む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用され得る。ＦＣＴＲ
Ｘ配列に対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが増幅されたフラグメント
を生じる。
【０３４６】 体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物由来の体細胞（例えば、ヒトおよびマ
ウス細胞）を融合することにより調製される。ヒトおよびマウスのハイブリッド
が増殖および分裂するにつれ、それらは、無作為な順序で徐々にヒト染色体を失
うが、マウス染色体を維持する。マウス細胞は増殖できないが、ヒト細胞は増殖
できる培地を使用することにより、それらは特定の酵素を失うので、必要な酵素
をコードする遺伝子を含む１つのヒト染色体が維持される。種々の培地を使用す
ることによって、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネルにおける
各細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染色体いずれかおよびマウス染
色体の完全なセットを含み、これにより、個々の遺伝子を特定のヒト染色体にマ
ッピングすることが容易に可能になる（Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉｏら（１９８３）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：９１９−９２４を参照のこと）。ヒト染色体のフラグ
メントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を伴うヒト染色体
を使用することにより生成され得る。
【０３４７】 体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の染色体に特定の配列を割り
当てるためには迅速な手順である。１つのサーマルサイクラーを用いて一日に３
つ以上の配列が割り当てられ得る。ＦＣＴＲＸ配列を使用して、オリゴヌクレオ
チドプライマーを設計すると、下位位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ
）は、特定の染色体由来のフラグメントのパネルを用いて達成され得る。
【０３４８】 中期染色体スプレッドに対するＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼ
ーション（ＦＩＳＨ）をさらに使用して、一工程で正確な染色体位置を提供し得
る。染色体スプレッドは、コルセミド（染色体紡錘体を破壊する）のような化学
物質により分裂が中期においてブロックされた細胞を使用して行われ得る。この
染色体は、トリプシンで短時間処理され得、次いで、ギムザ染色され得る。薄い
バンドおよび濃いバンドのパターンが各染色体で発生し、その結果、この染色体
は、個々に同定され得る。ＦＩＳＨ技術は、５００または６００塩基ほどの短さ
のＤＮＡ配列と共に使用され得る。しかし、１，０００塩基より大きなクローン
は、簡単な検出に十分なシグナル強度で、独特の染色体位置に結合する可能性が
より高い。好ましくは、１，０００塩基、そしてより好ましくは、２，０００塩
基が妥当な時間量で良好な結果を得るために十分である。この技術の総説につい
ては、Ｖｅｒｍａら、ＨＵＭＡＮ ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ：Ａ ＭＡＮＵＡＬ
ＯＦ ＢＡＳＩＣ ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８８）を参照のこと。
【０３４９】 染色体マッピングの試薬は、単一の染色体またはその染色体上の単一部位を印
付けするために個々に使用され得るか、または試薬のパネルは複数部位および／
または複数染色体を印付けするために使用され得る。遺伝子の非コード領域に対
応する試薬は、実際に、マッピング目的のために好ましい。コード配列は、遺伝
子ファミリー内に保存されており、従って、染色体マッピングの間に交叉ハイブ
リダイゼーションの機会が増大する可能性が高い。
【０３５０】 一旦配列が正確な染色体位置にマッピングされると、その配列の染色体上の物
理的位置は、遺伝子マップデータと相関し得る。このようなデータは、例えば、
ＭｃＫｕｓｉｃｋ，ＭＥＮＤＥＬＩＡＮ ＩＮＨＥＲＩＴＡＮＣＥ ＩＮ ＭＡ
Ｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通じてオンラインで入手可能）において見いだされ
る。次いで、同じ染色体領域にマッピングされる遺伝子と疾患との間の関係は、
例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ，３２５：７８３−７８７
に記載される連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）によって同定され
得る。
【０３５１】 さらに、ＦＣＴＲＸ遺伝子と関連する疾患に罹患した個体と、この疾患に罹患
していない個体との間のＤＮＡ配列における差異が決定され得る。罹患した個体
のいくらかまたは全てにおいて変異が認められるが、非罹患個体のいずれにおい
ても認められない場合、この変異は特定の疾患の候補薬剤である可能性が高い。
罹患個体と非罹患個体の比較は、一般に、染色体における構造的変化（例えば、
染色体スプレッドから可視であるか、またはそのＤＮＡ配列に基づいたＰＣＲを
用いて検出可能な欠失または転座）を最初に探すことを包含する。最終的に、い
くらかの個体に由来する遺伝子の完全な配列決定を行って、変異の存在を確認し
、かつ多型に由来する変異を区別する。
【０３５２】 （組織型決定（ｔｉｓｓｕｅ ｔｙｐｉｎｇ）） 本発明のＦＣＴＲＸ配列はまた、わずかな生物学的サンプルから個体を識別す
るために使用され得る。この技術において、個体のゲノムＤＮＡは、１つ以上の
制限酵素で消化され、そして同定のために独特のバンドを生成するためにサザン
ブロット上でプローブされる。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７
２，０５７号に記載の「制限フラグメント長多型」）のためのさらなるＤＮＡマ
ーカーとして有用である。
【０３５３】 さらに、本発明の配列を用いて、個体のゲノムの選択された部分について実際
の塩基ごとにＤＮＡ配列を決定する代替的技術を提供し得る。従って、本明細書
中に記載のＦＣＴＲＸ配列を用いて、配列の５’末端および３’末端から２つの
ＰＣＲプライマーを調製し得る。次いで、これらのプライマーを使用して、個体
のＤＮＡを増幅し得、引き続いて、配列決定し得る。
【０３５４】 このように調製された個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が、
対立遺伝子差異に起因するこのようなＤＮＡ配列の独特のセットを有するので、
唯一の個体識別を提供し得る。本発明の配列は、個体由来および組織由来の配列
のこのような識別を得るために使用され得る。本発明のＦＣＴＲＸ配列は、ヒト
ゲノムの部分を独特に表す。対立遺伝子変異は、これらの配列のコード領域にお
いてある程度生じ、そして非コード領域においてより大きな程度に生じる。個々
のヒト間での対立遺伝子変異は、各５００塩基につき約１回の頻度で生じると見
積もられる。対立遺伝子変異の多さは、制限フラグメント長多型（ＲＦＬＰ）を
含む単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）に起因する。
【０３５５】 本明細書中で記載の配列の各々は、ある程度、標準物質（これに対して個体か
らのＤＮＡが識別の目的で比較され得る）として使用され得る。より多くの多型
が非コード領域で生じるので、個体を区別するために、それほど多くの配列が必
要であるわけではない。非コード配列は、おそらく１０〜１，０００プライマー
のパネルを用いてポジティブな個体識別を不自由なく提供し得る。これらのプラ
イマーは、各々が１００塩基の増幅された非コード配列を生じる。推定コード配
列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１
８、２０、２２、および２４における配列）が使用される場合、ポジティブな個
体識別に関するプライマーのより適切な数は、５００〜２，０００である。
【０３５６】 （予測医療） 本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏ
ｇｅｎｏｍｉｃｓ）およびモニタリング臨床試験が、予後（予測）の目的に使用
され、これによって個体を予防的に処置する、予測医療の分野に関する。従って
、本発明の１つの局面は、ＦＣＴＲＸタンパク質および／または核酸の発現、な
らびにＦＣＴＲＸの活性を、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組
織）の関連で決定するための診断アッセイに関し、これによって、異常なＦＣＴ
ＲＸの発現または活性に関連して、個体が疾患または障害に罹患するかどうか、
あるいは障害を発症するリスクがあるかどうかを決定する。また、以下を含む障
害または症候群を、処置または予防するための医薬の製造における治療薬の使用
は、本発明の範囲内である：例えば、結腸直腸の癌、腺腫様結腸ポリポーシス、
骨髄性白血病、先天性自己免疫性新生児血小板減少（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｃ
ｅｏｎａｔａｌ ａｌｌｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）
、多発性ヒト固形悪性腫瘍（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｕｍａｎ ｓｏｌｉｄ ｍａ
ｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）、悪性卵巣腫瘍（特に、上皮と支質との間の界面での）
、悪性脳腫瘍、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、混合型（ｍｉｘｅｄ）神
経膠腫／星状細胞腫、腎細胞癌、乳房腺癌、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌、明細胞
および顆粒細胞腫、腫瘍細胞増殖のオートクリン／パラクリン刺激、細胞障害性
治療に対する腫瘍細胞生存および腫瘍細胞耐性のオートクリン／パラクリン刺激
、ｐａｒａｎｅｃｈｍａｌおよび基底膜侵襲ならびに腫瘍細胞の運動性（これら
により転位に寄与する）、Ｔ細胞媒介免疫エフェクター細胞の腫瘍媒介免疫抑制
ならびに免疫サーベイランスからの腫瘍の逸脱を生じる経路、神経学的障害、神
経変性障害、神経腫、家族性脊髄形成異常症候群、シャルコー−マリー−ツース
病、脱髄性ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候群；精神衛生状態、免疫
学的障害、アレルギーおよび感染、ぜん息、気管支炎ぜん息、アヴェリーノ型好
酸球増加症、肺疾患、生殖障害、男性の不妊、女性の生殖系障害、男性および女
性の生殖障害、血管腫、難聴、糖蛋白質Ｉａ欠損、類腱腫病、ターコット症候群
、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃の障害、糖尿病のような膵臓障害、マンソン住血吸虫感
染、脊髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫、グレーノー角膜ジストロフィー
−Ｉ型、格子状角膜ジストロフィー−Ｉ型、およびＲｅｉｓ−Ｂｕｃｋｌｅｒｓ
角膜ジストロフィー。本発明はまた、個体が、ＦＣＴＲＸのタンパク質、核酸の
発現または活性と関連した障害を発症するリスクがあるかどうかを決定するため
の予後的（または予測的）アッセイを提供する。例えば、ＦＣＴＲＸの遺伝子に
おける変異が、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセ
イは、予後的または予測的な目的に使用され得、これによってＦＣＴＲＸのタン
パク質、核酸の発現または生物学的活性によって特徴付けられるかまたは関連し
た障害の発病の前に個体を予防的に処置する。
【０３５７】 本発明の別の局面は、個体におけるＦＣＴＲＸのタンパク質、核酸の発現ある
いは活性を決定するための方法を提供し、これによって、その個体についての適
切な治療的または予防的試薬（本明細書において「薬物ゲノム」とよばれる）を
選択する。薬物ゲノムは、個体の遺伝型（例えば、特定の試薬に対して応答する
個体の能力を決定するために試験された個体の遺伝型）に基づいて個体の治療的
または予防的処置のための試薬（例えば、薬物）の選択を可能にする。
【０３５８】 本発明のなお別の局面は、臨床試験におけるＦＣＴＲＸの発現または活性に対
する試薬（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることに関する。
【０３５９】 これらおよび他の試薬は、以下の節でさらに詳細に記載される。
【０３６０】 （診断アッセイ） 生物学的サンプルにおけるＦＣＴＲＸの存在または非存在を検出するための例
示的な方法は、試験被験体から生物学的サンプルを得る工程、およびその生物学
的サンプルをＦＣＴＲＸのタンパク質またはＦＣＴＲＸタンパク質をコードする
核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物もしくは薬剤とを
接触させ、その結果、ＦＣＴＲＸの存在が、その生物学的サンプルにおいて検出
される、工程を包含する。ＦＣＴＲＸのｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出す
るための薬剤は、ＦＣＴＲＸ ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡにハイブリダイズ
し得る、標識された核酸プローブである。この核酸プローブは、例えば、全長の
ＦＣＴＲＸの核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、
１４、１６、１８、２０、２２、および２４の核酸またはそれらの一部）（例え
ば、少なくとも、１５、３０、５０、１００、２５０もしくは５００ヌクレオチ
ド長のオリゴヌクレオチドであり、ストリンジェントな条件下でＦＣＴＲＸのｍ
ＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと特異的にハイブリダイズするに十分である核酸）で
あり得る。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは本
明細書において記載されている。
【０３６１】 ＦＣＴＲＸのタンパク質を検出するための薬剤は、ＦＣＴＲＸのタンパク質に
結合し得る抗体であり、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体である。抗体
は、ポリクローナルであり得るか、またはより好ましくはモノクローナル抗体で
あり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ
（ａｂ’）２）が使用され得る。用語「標識（された）」とは、プローブまたは
抗体に関して、検出可能な物質をそのプローブもしくは抗体にカップリングさせ
る（すなわち、物理的に連結する）ことによってそのプローブまたは抗体を直接
標識すること、ならびに、直接標識された別の試薬との反応性によってそのプロ
ーブもしくは抗体の間接的な標識をすることを包含することが意図される。間接
的な標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、およ
び蛍光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るようにＤＮＡプロー
ブのビオチンを用いた末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」とは、
被験体から単離された、組織、細胞および生物学的流体ならびに被験体に存在す
る組織、細胞および流体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法
を用いて、ＦＣＴＲＸのｍＲＮＡ、タンパク質またはゲノムＤＮＡを、生物学的
サンプル中で、インビトロおよびインビボで検出し得る。例えば、ＦＣＴＲＸの
ｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーシ
ョンおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。ＦＣＴＲＸのタ
ンパク質の検出のためのインビトロ技術としては、酵素連結免疫吸着アッセイ（
ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。Ｆ
ＣＴＲＸのゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイ
ブリダイゼーションが挙げられる。さらに、ＦＣＴＲＸのタンパク質の検出のた
めのインビボ技術としては、標識された抗ＦＣＴＲＸ抗体を被験体に導入するこ
とが挙げられる。例えば、その抗体は、放射性マーカーを用いて標識され得る。
被験体における放射性マーカーの存在および位置は、標準的な画像化技術によっ
て検出され得る。
【０３６２】 １つの実施形態において、この生物学的サンプルは、その試験被験体からのタ
ンパク質分子を含む。あるいは、その生物学的サンプルは、その試験被験体から
のｍＲＮＡ分子またはその試験被験体からのゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ま
しい生物学的サンプルは、被験体から従来の手段によって単離された末梢血白血
球サンプルである。
【０３６３】 別の実施形態において、本発明の方法はさらに、コントロール被験体からコン
トロール生物学的サンプルを得る工程、そのコントロールサンプルを、ＦＣＴＲ
Ｘのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物もしくは薬
剤と接触させ、その結果、ＦＣＴＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤ
ＮＡの存在がその生物学的サンプルにおいて検出される、工程、およびそのコン
トロールサンプルにおけるＦＣＴＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤ
ＮＡの存在と、その試験サンプルにおけるＦＣＴＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡも
しくはゲノムＤＮＡの存在とを比較する工程を包含する。
【０３６４】 本発明はまた、生物学的サンプルにおけるＦＣＴＲＸの存在を検出するための
キットを包含する。例えば、このキットは、以下を備え得る：生物学的サンプル
においてＦＣＴＲＸのタンパク質またはｍＲＮＡを検出し得る、標識された化合
物もしくは薬剤；そのサンプルにおいてＦＣＴＲＸの量を決定するための手段；
およびそのサンプルにおいて、標準と、ＦＣＴＲＸの量とを比較するための手段
。この化合物または薬剤は、適切な容器内に包装され得る。このキットは、さら
に、ＦＣＴＲＸのタンパク質または核酸を検出するためにキットを用いるための
指示書を備え得る。
【０３６５】 （予後アッセイ） 本明細書において記載された診断方法をさらに利用して、ＦＣＴＲＸの異常発
現または異常活性に関連した疾患もしくは障害を有するか、またはその発症の危
険性を有する被験体を同定し得る。例えば、本明細書に記載されるアッセイ（例
えば、上述の診断アッセイまたは下記のアッセイ）を利用して、ＦＣＴＲＸのタ
ンパク質、核酸の発現または活性に関連する障害を有するかまたはその発症の危
険性を有する被験体を同定し得る。あるいは、この予後アッセイを利用して、疾
患または障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。
従って、本発明は、ＦＣＴＲＸの異常発現または異常活性に関連する疾患もしく
は障害を同定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルは、被験体から
得られ、そしてＦＣＴＲＸのタンパク質または核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノム
ＤＮＡ）が検出され、ここで、ＦＣＴＲＸのタンパク質または核酸の存在は、Ｆ
ＣＴＲＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を有するかまたは
その発症の危険性を有する被験体についての診断指標である。本明細書において
使用される場合「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られた生物学的サン
プルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）、細胞サ
ンプル、または組織であり得る。
【０３６６】 さらに、本明細書に記載される予後アッセイを使用して、被験体に薬剤（例え
ば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核
酸、低分子、または他の薬物候補）を投与してＦＣＴＲＸの異常発現または異常
活性に関連する疾患または障害を処置し得るか否かを、決定し得る。例えば、こ
のような方法を使用して、被験体が障害のための薬剤で有効に処置され得るか否
かを決定し得る。従って、本発明は、ＦＣＴＲＸの異常発現または異常活性に関
連する障害についての薬剤を用いて、被験体が有効に処置され得るか否かを決定
するための方法を提供する。ここで、試験サンプルが得られ、そしてＦＣＴＲＸ
のタンパク質または核酸が検出される（例えば、ここで、ＦＣＴＲＸのタンパク
質または核酸の存在は、この薬剤が投与されてＦＣＴＲＸの異常発現または異常
活性に関連する障害が処置され得る被験体についての、診断指標である）。
【０３６７】 本発明の方法はまた、ＦＣＴＲＸ遺伝子における遺伝的損傷を検出し、それに
よって、その損傷遺伝子を有する被験体が異常な細胞増殖および／または分化に
よって特徴付けられる障害についての危険性を有するか否かを決定するためにも
使用され得る。種々の実施形態において、この方法は、その被験体からの細胞の
サンプルにおいて、ＦＣＴＲＸタンパク質をコードする遺伝子の統合性に影響を
与える少なくとも１つの変更によって特徴付けられる遺伝的損傷の存在または非
存在、あるいはＦＣＴＲＸ遺伝子の誤発現を検出する工程を包含する。例えば、
そのような遺伝的損傷は、以下の少なくとも１つの存在を確認することによって
検出され得る：（ｉ）ＦＣＴＲＸ遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；
（ｉｉ）ＦＣＴＲＸ遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加；（ｉｉｉ）ＦＣ
ＴＲＸ遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換、（ｉｖ）ＦＣＴＲＸ遺伝子の染
色体再配置；（ｖ）ＦＣＴＲＸ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルに
おける変更、（ｖｉ）ＦＣＴＲＸ遺伝子の異常改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメ
チル化パターンの異常改変）、（ｖｉｉ）ＦＣＴＲＸ遺伝子のメッセンジャーＲ
ＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在、（ｖｉｉｉ）ＦＣＴＲＸ
タンパク質の非野生型レベル、（ｉｘ）ＦＣＴＲＸ遺伝子の対立遺伝子の欠失、
ならびに（ｘ）ＦＣＴＲＸタンパク質の不適切な翻訳後修飾。本明細書において
記載されるように、当該分野において、ＦＣＴＲＸ遺伝子における損傷を検出す
るために使用され得る、多数の公知のアッセイ技術が存在する。好ましい生物学
的サンプルは、従来手段によって被験体から単離された末梢血白血球サンプルで
ある。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプルが使用され得、これには
、例えば、頬粘膜細胞が挙げられる。
【０３６８】 特定の実施形態において、損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（
例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参
照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ ＰＣＲ）、あるいは、連
結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ ９１：３６０−３６４を参照の
こと）におけるプローブ／プライマーの使用を包含する。後者は、ＦＣＴＲＸ遺
伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る）（Ａｂｒａｖａｙａ
ら，１９９５ Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２３：６７５−６８２を参照の
こと）。この方法は、患者から細胞のサンプルを収集する工程、核酸（例えば、
ゲノム、ｍＲＮＡまたはその両方）をそのサンプルの細胞から単離する工程、Ｆ
ＣＴＲＸの遺伝子に特異的にハイブリダイズする１つ以上のプライマーとその核
酸サンプルとを、ＦＣＴＲＸ遺伝子（存在する場合）のハイブリダイゼーション
および増幅が生じるような条件下で接触させる工程、ならびに増幅産物の存在も
しくは非存在を検出する工程、またはその増幅産物のサイズを検出する工程およ
びその長さをコントロールサンプルと比較する工程を包含し得る。ＰＣＲおよび
／またはＬＣＲは、本明細書中に記載される変異を検出するために使用される技
術のいずれかとともに予備的増幅工程として使用されることが望ましくあり得る
ことが予想される。
【０３６９】 代替的な増幅方法としては、以下が挙げられる：当業者に周知な技術を用いた
、その増幅された分子の検出の前の、自己維持配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、
１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４−
１８７８を参照のこと）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３−１１７７を参照のこと）、
Ｑレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
６：１１９７を参照のこと）、または他の任意の核酸増幅方法。これらの検出ス
キームは、核酸分子が非常に極少数で存在する場合に、そのような核酸分子の検
出のために特に有用である。
【０３７０】 代替の実施形態において、サンプル細胞からのＦＣＴＲＸ遺伝子における変異
は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例えば、サンプ
ルおよびコントロールのＤＮＡが単離され、増幅され（必要に応じて）、１つ以
上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグメント長の大きさ
がゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルＤＮＡとコント
ロールＤＮＡとの間のフラグメント長の大きさにおける差異は、そのサンプルＤ
ＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的なリボザイムの使用（例えば、米
国特許第５，４９３，５３１号を参照のこと）を使用して、リボザイム切断部位
の発生または喪失によって特異的な変異の存在についてスコア付けし得る。
【０３７１】 他の実施形態において、ＦＣＴＲＸにおける遺伝子変異は、サンプル核酸およ
びコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオリ
ゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイに対してハイブリダイズさせること
によって同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎら（１９９６）Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉ
ｏｎ ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら（１９９６）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：７
５３−７５９を参照のこと）。例えば、ＦＣＴＲＸにおける遺伝子変異は、Ｃｒ
ｏｎｉｎら（前出）に記載されるように光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレ
イにおいて同定され得る。手短には、プローブの第一ハイブリダイゼーションア
レイを用いて、サンプルおよびコントロールにおける長いストレッチのＤＮＡに
わたって走査し、連続的に重複するプローブの線形アレイを作成することによっ
て、その配列間の塩基変化を同定し得る。この工程は、点変異の同定を可能にす
る。この工程に第二のハイブリダイゼーションアレイが続き、これは、検出され
る全ての改変体または変異体に相補的な、より小さな特化されたプローブアレイ
を用いることによる特定の変異の特徴付けを可能にする。各変異アレイは、一方
が野生型遺伝子に対して相補的であり、そして他方が変異遺伝子に対して相補で
ある並行プローブセットから構成される。
【０３７２】 なお別の実施形態において、当該分野で公知の種々の配列決定反応のいずれか
を使用して、ＦＣＴＲＸ遺伝子を直接配列決定し得、そしてサンプルＦＣＴＲＸ
配列と対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって、変異を
検出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１
９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ ７４：５６０または
Ｓａｎｇｅｒ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ ７
４：５４６３によって開発された技術に基づくものが挙げられる。診断アッセイ
を実施する場合、種々の自動化配列決定手順のいずれかを利用し得ることもまた
意図される（例えば、Ｎａｅｖｅら（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
１９：４４８を参照のこと）。これらには、質量分析法による配列決定法（例え
ば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａ
ｄｖ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆ
ｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３８
．：１４７−１５９を参照のこと）が含まれる。
【０３７３】 ＦＣＴＲＸ遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断剤か
らの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡもしくはＲＮＡ／ＤＮＡのヘテロ二重鎖に
基づくミスマッチ塩基を検出する方法が挙げられる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２を参照のこと）。一般に、「ミスマッチ切断
」の当該分野の技術は、野生型のＦＣＴＲＸ配列を含む（標識された）ＲＮＡま
たはＤＮＡを、組織サンプルから得られた潜在的な変異体ＲＮＡまたはＤＮＡと
ハイブリダイズさせることによって形成されるヘテロ二重鎖を提供する工程によ
って始まる。この二本鎖の二重鎖を、二重鎖の一本鎖領域（例えば、そのコント
ロールとサンプルの鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するもの）を切
断する薬剤を用いて処理する。例えば、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖を、ＲＮａｓｅを
用いて処理し得、そしてＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドを、そのミスマッチ領域を
酵素的に消化することに対して、Ｓ１ヌクレアーゼを用いて処理し得る。他の実
施形態において、ＤＮＡ／ＤＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡのいずれかの二重鎖を、
ミスマッチ領域を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウム
、およびピペリジンを用いて処理し得る。そのミスマッチ領域の消化後、次いで
、得られた物質を変性ポリアクリルアミドゲル上で、大きさにより分離して、変
異の部位を決定する。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９９２）
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２１７：２８６−２９５を参照のこと。１つ
の実施形態において、コントロールのＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識
され得る。
【０３７４】 なお別の実施形態において、ミスマッチ切断反応は、二本鎖ＤＮＡにおけるミ
スマッチ塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ
修復」酵素）を、細胞のサンプルから得られたＦＣＴＲＸ ｃＤＮＡにおける点
変異を検出およびマッピングするために規定された系において使用する。例えば
、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、そしてＨｅ
Ｌａ細胞からのチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断
する（Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ １５：１６５７〜
１６６２）。例示的な実施形態に従って、ＦＣＴＲＸ配列（例えば、野生型ＦＣ
ＴＲＸ配列）に基づくプローブは、試験細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産
物にハイブリダイズされる。二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素を用いて処理
され、そしてその切断産物（もしあれば）は、電気泳動プロトコルなどから検出
され得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。
【０３７５】 他の実施形態において、電気泳動の移動度における変化は、ＦＣＴＲＸ遺伝子
における変異を同定するために使用される。例えば、一本鎖コンホメーション多
型（ＳＳＣＰ）は、変異体と野生型核酸との間の電気泳動の移動度における差異
を検出するために使用され得る（Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ：８６：２７６６、またＣｏｔｔｏｎ（１９９３）
Ｍｕｔａｔ Ｒｅｓ ２８５：１２５〜１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇ
ｅｎｅｔ Ａｎａｌ Ｔｅｃｈ Ａｐｐｌ ９：７３〜７９を参照のこと）。サ
ンプルおよびコントロールＦＣＴＲＸ核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは、変性
され、そして再生される。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変化し、電気
泳動の移動度において得られる変化は、１つの塩基変化の検出さえも可能にする
。ＤＮＡフラグメントは、標識され得るか、または標識されたプローブを用いて
検出され得る。アッセイの感度は、ＤＮＡよりもむしろ、二次構造が配列中の変
化に対してより感受的であるＲＮＡを使用することによって増強され得る。１つ
の実施形態において、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動
の移動度における変化に基づいて二本鎖のヘテロ二重鎖分子を分離する。例えば
、Ｋｅｅｎら（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ ７：５を参照のこと。
【０３７６】 なお別の実施形態において、一定勾配の変性剤を含有するポリアクリルアミド
ゲルにおける変異体または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動
（ＤＧＧＥ）を使用してアッセイされる。例えば、Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎ
ａｔｕｒｅ ３１３：４９５を参照のこと。ＤＧＧＥが分析の方法として使用さ
れる場合、ＤＮＡは、例えば、ＰＣＲにより約４０ｂｐの高融点ＧＣリッチＤＮ
ＡのＧＣクランプを付加することによって、完全には変性されないことを確実す
るように改変される。さらなる実施形態において、温度勾配は、コントロールお
よびサンプルＤＮＡの移動度における差異を同定するために、変性剤勾配の代わ
りに使用される。例えば、ＲｏｓｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８
７）Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ ２６５：１２７５３を参照のこと。
【０３７７】 点変異を検出するための他の技術の例としては、以下が挙げられるが、これら
に限定されない：選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増
幅、または選択的プライマー伸長。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーは、
既知の変異が中心的に配置されるように調製され得、次いで、完全なマッチが見
出される場合にのみハイブリダイゼーションを許容する条件下で標的ＤＮＡにハ
イブリダイズされる。例えば、Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２４
：１６３）；Ｓａｉｋｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
ＵＳＡ ８６：６２３０を参照のこと。このような対立遺伝子特異的オリゴヌ
クレオチドは、このオリゴヌクレオチドがハイブリダイズ膜に付着され、そして
標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅された標的Ｄ
ＮＡまたは多くの異なる変異にハイブリダイズされる。
【０３７８】 あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明
と合わせて使用され得る。特異的増幅についてのプライマーとして使用されるオ
リゴヌクレオチドは、分子の中心において（その結果、増幅は、差次的ハイブリ
ダイゼーションに依存する）（Ｇｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ １７：２４３７〜２４４８）か、あるいは適切な条件下でミス
マッチが妨げられ得るかまたはポリメラーゼ伸長を減少し得る、１つのプライマ
ーの３’の最末端で、目的の変異を保有し得る（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）
Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）。さらに、切断に基づく検出を行うために、変
異領域に新規な制限部位を導入することは、切断に基づく検出を行うために望ま
しくあり得る。例えば、Ｇａｓｐａｒｉｎｉら（１９９２）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ
Ｐｒｏｂｅｓ ６：１を参照のこと。特定の実施形態において、増幅はまた、増
幅用Ｔａｑリガーゼを使用して実施され得ることが予測される。例えば、Ｂａｒ
ａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：１
８９を参照のこと。このような場合において、連結は、５’配列の３’末端に完
全なマッチが存在する場合にのみ生じ、増幅の存在または非存在を探索すること
によって、特定の部位における既知の変異の存在を検出することを可能にする。
【０３７９】 本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載れる少なくとも１
つのプローブ核酸または抗体試薬を含む、予めパッケージングされた診断キット
を利用することによって実施され得、これは、例えば、ＦＣＴＲＸ遺伝子を含む
疾患または疾病の症状または家族病歴を示す患者を診断するための臨床的設定に
おいて簡便に使用され得る。
【０３８０】 さらに、ＦＣＴＲＸが発現される任意の細胞型または組織（好ましくは、末梢
血白血球）は、本明細書中に記載される予後アッセイにおいて利用され得る。し
かし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞を含む）が
、使用され得る。
【０３８１】 （薬理ゲノム学（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）） ＦＣＴＲＸ活性（例えば、ＦＣＴＲＸ遺伝子発現）に対する刺激性または阻害
性の影響を有する因子、すなわちモジュレーターは、本明細書中に記載されるス
クリーニングアッセイによって同定されるように、障害（代謝障害を含む障害）
を（予防的または治療的に）処置するために個体に投与され得る。また、以下を
含む障害または症候群を、処置または予防するための医薬の製造における治療薬
の使用は、本発明の範囲内である：例えば、結腸直腸の癌、腺腫様結腸ポリポー
シス、骨髄性白血病、先天性自己免疫性新生児血小板減少（ｃｏｎｇｅｎｉｔａ
ｌ ｃｅｏｎａｔａｌ ａｌｌｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎ
ｉａ）、多発性ヒト固形悪性腫瘍（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｕｍａｎ ｓｏｌｉｄ
ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）、悪性卵巣腫瘍（特に、上皮と支質との間の界面
での）、悪性脳腫瘍、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、混合型（ｍｉｘｅ
ｄ）神経膠腫／星状細胞腫、腎細胞癌、乳房腺癌、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌、
明細胞および顆粒細胞腫、腫瘍細胞増殖のオートクリン／パラクリン刺激、細胞
障害性治療に対する腫瘍細胞生存および腫瘍細胞耐性のオートクリン／パラクリ
ン刺激、ｐａｒａｎｅｃｈｍａｌおよび基底膜侵襲ならびに腫瘍細胞の運動性（
これらにより転位に寄与する）、Ｔ細胞媒介免疫エフェクター細胞の腫瘍媒介免
疫抑制ならびに免疫サーベイランスからの腫瘍の逸脱を生じる経路、神経学的障
害、神経変性障害、神経腫、家族性脊髄形成異常症候群、シャルコー−マリー−
ツース病、脱髄性ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候群；精神衛生状態
、免疫学的障害、アレルギーおよび感染、ぜん息、気管支炎ぜん息、アヴェリー
ノ型好酸球増加症、肺疾患、生殖障害、男性の不妊、女性の生殖系障害、男性お
よび女性の生殖障害、血管腫、難聴、糖蛋白質Ｉａ欠損、類腱腫病、ターコット
症候群、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃の障害、糖尿病のような膵臓障害、マンソン住血
吸虫感染、脊髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫、グレーノー角膜ジストロ
フィー−Ｉ型、格子状角膜ジストロフィー−Ｉ型、およびＲｅｉｓ−Ｂｕｃｋｌ
ｅｒｓ角膜ジストロフィー。このような処置と合わせて、個体の薬理ゲノム学（
すなわち、個体の遺伝子型と外来化合物または薬物に対するその個体の応答との
間の関係についての研究）が、考慮され得る。治療剤の代謝における差異は、薬
理学的に活性な薬物の用量と血中濃度との間の関係を変更することによって、重
篤な毒性または治療の失敗を導き得る。従って、個体の薬理ゲノム学は、個体の
遺伝子型の考慮に基づく予防的または治療的処置のために有効な薬剤（例えば、
薬物）の選択を許容する。このような薬理ゲノム学は、さらに、適切な投薬量お
よび治療剤レジメンを決定するために使用され得る。従って、ＦＣＴＲＸタンパ
ク質の活性、ＦＣＴＲＸ核酸の発現、あるいは個体におけるＦＣＴＲＸ遺伝子の
変異含量が決定されて、それによって個体の治療的または予防的処置のために適
切な薬剤を選択し得る。
【０３８２】 薬理ゲノム学は、罹患した人おける変更された薬物の性質および異常な作用に
起因して、薬物に応答する臨床的に有意な遺伝性変更を扱う。例えば、Ｅｉｃｈ
ｅｌｂａｕｍ、１９９６、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ，２３：９８３〜９８５およびＬｉｎｄｅｒ、１９９７、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅ
ｍ，４３：２５４〜２６６を参照のこと。一般に、２つの型の薬理ゲノム学状態
が、区別され得る。薬物が身体に作用する方法を変更する１つの因子として伝達
される遺伝的状態（変更された薬物作用）、または身体が薬物に作用する方法を
変更する１つの因子として伝達される遺伝的状態（変更された薬物代謝）。これ
らの薬理ゲノム学状態は、稀な欠損としてか、または多型としてのいずれかで生
じ得る。例えば、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠損は
、一般的な遺伝性酵素病であり、この主な臨床的合併症は、酸化剤薬物（抗マラ
リア剤、スルホンアミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの摂食
後の溶血である。
【０３８３】 例示的な実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および持続
期間の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトラ
ンスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およ
びＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、幾人かの患者が予期される薬物効果
を得ないか、または標準的かつ安全な用量の薬物を摂取した後に過大な薬物応答
および深刻な毒性を示すことに関しての説明を提供した。これらの多型は、集団
において２つの表現型（高い代謝能を持つ人（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｍｅｔａｂ
ｏｌｉｚｅｒ）（ＥＭ）および低い代謝能を持つ人（ｐｏｏｒ ｍｅｔａｂｏｌ
ｉｚｅｒ）（ＰＭ））で表現される。ＰＭの有病率は、異なる集団の間で異なる
。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は高度に多型であり、そしていくら
かの変異がＰＭにおいて同定されており、この全ては機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存
在に至る。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の低い代謝能を持つ人は、彼らが
標準的な用量を受ける場合に、かなり頻繁に過大な薬物応答および副作用を経験
する。代謝産物が活性な治療的部分である場合、そのＣＹＰ２Ｄ６形成代謝産物
であるモルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるよう
に、ＰＭは治療的応答を示さない。他の極端なものは、標準的な用量に応答しな
い、いわゆる超迅速な代謝能を持つ人である。最近、超迅速な代謝の基準となる
分子は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因していることが同定されている。
【０３８４】 従って、ＦＣＴＲＸのタンパク質の活性、ＦＣＴＲＸの核酸の発現、あるいは
個体におけるＦＣＴＲＸの遺伝子の変異内容を決定して、それによって、その個
体の治療的または予防的処置のために適切な薬剤を選択し得る。さらに、薬理ゲ
ノム学の研究を使用して、個体の薬物応答性の表現型の同定に対して薬物代謝酵
素をコードする多型対立遺伝子の遺伝子型を適用し得る。この知見は、用量また
は薬物選択に適用される場合、有害な反応または治療の失敗を回避し得、従って
、被験体をＦＣＴＲＸの調節因子（例えば、本明細書中に記載される例示的なス
クリーニングアッセイの１つによって同定される調節因子）を用いて処置する場
合に治療的または予防的効率を増強し得る。
【０３８５】 （臨床試験中の効果のモニタリング） ＦＣＴＲＸの発現または活性（例えば、異常な細胞増殖および／または分化を
調節する能力）に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングす
ることは、基本的な薬物スクリーニングおよび臨床試験に適用され得る。例えば
、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイによって決定される、
ＦＣＴＲＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを増加するため、またはＦＣＴＲＸ
活性をアップレギュレートする薬剤の効力は、減少したＦＣＴＲＸの遺伝子発現
、タンパク質レベル、またはダウンレギュレートしたＦＣＴＲＸの活性を示す被
験体の臨床試験においてモニターされ得る。あるいは、スクリーニングアッセイ
によって決定される、ＦＣＴＲＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを減少、また
はＦＣＴＲＸの活性をダウンレギュレートする薬剤の効力は、増加したＦＣＴＲ
Ｘの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはアップレギュレートしたＦＣＴＲＸ
の活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。このような臨床試験
において、ＦＣＴＲＸの発現または活性、および好ましくは、例えば、細胞増殖
または免疫障害に関与するような他の遺伝子が、「リードアウト（読み出し）（
ｒｅａｄ ｏｕｔ）」、すなわち、特定の細胞の免疫応答性のマーカーとして使
用され得る。
【０３８６】 例えば、ＦＣＴＲＸを含む遺伝子（これは、ＦＣＴＲＸ活性（例えば、本明細
書中に記載されるようなスクリーニングアッセイにおいて同定される）を調節す
る薬剤（例えば、化合物、薬物または低分子）を用いる処置によって、細胞内で
調節される）が同定され得るが、これらに限定されない。従って、細胞性増殖障
害に対する薬剤の効果を研究するために、例えば、臨床試験において、細胞が単
離され得、そしてＲＮＡが調製され得、そしてＦＣＴＲＸおよびこの障害に関与
する他の遺伝子の発現のレベルについて分析され得る。遺伝子発現のレベル（す
なわち、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるように、ノーザンブ
ロット分析もしくはＲＴ−ＰＣＲによるか、あるいは産生されるタンパク質の量
を測定することによるか、本明細書中に記載されるような方法の１つによるか、
あるいはＦＣＴＲＸまたは他の遺伝子の活性のレベルを測定することによって、
定量され得る。この様式で、この遺伝子発現パターンは、この薬剤に対する細胞
の生理学的応答の指標であるマーカーとして作用し得る。従って、この応答状態
は、この薬剤を用いる個体の処置の前、および処置の間の種々の時点で、決定さ
れ得る。
【０３８７】 １つの実施形態において、本発明は、薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニ
スト、タンパク質、ペプチド、核酸、ペプチド模倣物、低分子、または本明細書
中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される他の薬物候補物）を
用いる、被験体の処置の効力をモニタリングするための方法を提供し、これは、
以下の工程を包含する：（ｉ）薬剤の投与の前に、被験体から投与前サンプルを
得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプルにおいて、ＦＣＴＲＸのタンパク質、ｍ
ＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）この被
験体から１つ以上の投与後サンプルを得る工程；（ｉｖ）この投与後サンプルに
おいて、ＦＣＴＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または
活性のレベルを検出する工程；（ｖ）この投与前サンプルにおけるＦＣＴＲＸの
タンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを、この
投与後サンプルにおけるＦＣＴＲＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮ
Ａの発現または活性のレベルと比較する工程；ならびに（ｖｉ）従って、この被
験体に対する薬剤の投与を変更する工程。例えば、この薬剤の増加した投与は、
検出されるよりも高いレベルにＦＣＴＲＸの発現または活性を増加することが（
すなわち、この薬剤の効力を増加すること）望ましくあり得る。あるいは、この
薬剤の減少した投与は、検出されるよりも低いレベルにＦＣＴＲＸの発現または
活性を減少することが（すなわち、この薬剤の効力を減少すること）望ましくあ
り得る。
【０３８８】 （処置方法） 本発明は、異常なＦＣＴＲＸの発現または活性に関連する障害の危険性のある
（または感受性）か、またはこの障害を有する被験体を処置する予防的および治
療的の両方の方法を提供する。このように関連する疾患または障害としては、例
えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、先天性心欠損症、大動脈狭窄症、心
房中隔欠損症（ＡＳＤ）、房室（Ａ−Ｖ）管欠損症、動脈管、肺動脈弁狭窄症、
大動脈弁下部狭窄症、心室中隔欠損症（ＶＳＤ）、弁疾患、結節硬化症、強皮症
、肥満症、移植、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、前立腺癌、新
形成；腺癌、リンパ腫、子宮癌、受胎能、血友病、凝固能亢進、特発性血小板減
少性紫斑病、免疫不全症、対宿主性移植片病、ＡＩＤＳ、気管支炎ぜん息、クー
ロン病；多発性硬化症、オールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、ならびに他
の疾患、障害および状態など。
【０３８９】 これらの治療方法は、以下により詳細に記載される。
【０３９０】 （疾患および障害） （その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）増加したレベルま
たは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を拮抗する（
すなわち、低減または阻害する）治療剤を用いて処置され得る。活性を拮抗する
治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され得る。利用され得る治療剤と
しては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）上記ペプチド、ま
たはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）上記ペプ
チドに対する抗体；（ｉｉｉ）上記ペプチドをコードする核酸；（ｉｖ）相同組
換えによって上記ペプチドの内因性機能を「ノックアウトする」ために利用され
る、アンチセンス核酸および「機能不全性」である（すなわち、上記ペプチドに
対するコード配列のコード配列内の異種挿入に起因する）核酸の投与、（例えば
、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８〜１２９２
を参照のこと）；または（ｖ）上記ペプチドとその結合パートナーとの間の相互
作用を変化させる、調節因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアン
タゴニスト（本発明のさらなるペプチド模倣物または本発明のペプチドに対して
特異的な抗体を含む））。
【０３９１】 （その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）減少したレベルま
たは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を増加させる
（すなわち、活性に対するアゴニストである）治療剤を用いて処置され得る。活
性をアップレギュレートする治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され
得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：上記ペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモロ
グ；あるいはバイオアベイラビリティーを増加させるアゴニスト。
【０３９２】 増加したレベルまたは減少したレベルは、ペプチドおよび／またはＲＮＡを定
量することによって、容易に検出され得る。この定量は、患者の組織サンプルを
（例えば、生検組織から）入手し、そしてそのサンプルを、その発現したペプチ
ド（または上記ペプチドのｍＲＮＡ）のＲＮＡレベルまたはペプチドレベル、構
造および／または活性をインビトロでアッセイすることによる。当該分野におい
て周知の方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イムノア
ッセイ（例えば、ウェスタンブロット分析、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）
ポリアクリルアミドゲル電気泳動が後に続く免疫沈降、免疫細胞化学などによる
）および／またはｍＲＮＡの発現を検出するためのハイブリダイゼーションアッ
セイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイ
ゼーションなど）。
【０３９３】 （予防的方法） １つの局面において、本発明は、被験体において異常なＦＣＴＲＸの発現また
は活性と関連する疾患または状態を、ＦＣＴＲＸの発現または少なくとも１つの
ＦＣＴＲＸ活性を調節する薬剤をこの被験体に投与することによって予防するた
めの方法を提供する。異常なＦＣＴＲＸの発現または活性によって引き起こされ
るかまたはこれらに起因する、疾患にかかる危険がある被験体は、例えば、本明
細書中に記載の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組
み合わせによって、同定され得る。予防薬剤の投与は、疾患または障害が予防さ
れるか、あるいはその進行を遅らせられるように、このＦＣＴＲＸ異常の特徴で
ある症状の発現の前に行い得る。このＦＣＴＲＸ異常の型に依存して、例えば、
ＦＣＴＲＸアゴニスト薬剤またはＦＣＴＲＸアンタゴニスト薬剤が、その被験体
を処置するために使用され得る。その適切な薬剤は、本明細書中に記載のスクリ
ーニングアッセイに基づいて決定され得る。本発明の予防方法は、以下の小節に
おいて、さらに議論される。
【０３９４】 （治療方法） 本発明の別の局面は、治療目的のためにＦＣＴＲＸの発現または活性を調節す
る方法に関する。本発明の調節方法は、細胞を、その細胞に関するＦＣＴＲＸタ
ンパク質活性の活性のうちの１つ以上を調節する薬剤と接触させる工程を包含す
る。ＦＣＴＲＸタンパク質活性を調節する薬剤は、核酸またはタンパク質、ＦＣ
ＴＲＸタンパク質の天然に存在する同族リガンド、ペプチド、ＦＣＴＲＸペプチ
ド模倣物、または他の低分子のような、本明細書中に記載されるような薬剤であ
り得る。１つの実施形態において、この薬剤は、ＦＣＴＲＸタンパク質活性のう
ちの１つ以上を刺激する。このような刺激薬剤の例としては、活性なＦＣＴＲＸ
タンパク質、およびその細胞に導入されたＦＣＴＲＸをコードする核酸分子が挙
げられる。別の実施形態において、この薬剤は、ＦＣＴＲＸタンパク質活性のう
ちの１つ以上を阻害する。このような阻害薬剤の例としては、アンチセンスＦＣ
ＴＲＸ核酸分子、および抗ＦＣＴＲＸ抗体が挙げられる。これらの調節方法は、
インビトロで（例えば、その薬剤とともにその細胞を培養することによって）、
あるいはインビボで（例えば、被験体にその薬剤を投与することによって）実施
され得る。このように、本発明は、ＦＣＴＲＸのタンパク質または核酸分子の、
異常な発現または異常な活性によって特徴付けられる、疾患または障害に罹患し
た個体を処置する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、ＦＣ
ＴＲＸの発現または活性を調節する（例えば、アップレギュレートまたはダウン
レギュレートする）薬剤（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイ
によって同定される薬剤）あるいはそのような薬剤の組み合わせを投与する工程
を包含する。別の実施形態において、この方法は、ＦＣＴＲＸのタンパク質また
は核酸分子を、低減したかまたは異常な、ＦＣＴＲＸの発現または活性を補償す
るための治療として、投与する工程を包含する。
【０３９５】 ＦＣＴＲＸ活性の刺激は、ＦＣＴＲＸが異常にダウンレギュレートされている
状況、および／またはＦＣＴＲＸ活性の増加が有益な効果を有するようである状
況において、望ましい。このような状況の１つの例は、被験体が、異常な細胞増
殖および／または細胞分化によって特徴付けられる障害（例えば、癌または免疫
関連）を有する場合である。このような状況の別の例は、被験体が妊娠性疾患（
例えば、プレクランプシア（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ））を有する場合である。
【０３９６】 （治療剤の生物学的効果の決定） 本発明の種々の実施形態において、適切なインビトロまたはインビボアッセイ
を行って、特定の治療剤の効果およびその投与が罹患組織の処置を示すか否かを
決定する。
【０３９７】 種々の特定の実施形態において、インビトロアッセイが患者の障害に関与する
代表的な細胞型で行われ、所定の治療剤がこの細胞型に対して所望の効果を発揮
するか否かを決定し得る。治療において使用する化合物は、ヒト被験体において
試験する前に適切な動物モデル系において試験され得る。これらの動物モデル系
としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ラット、マウス、ニワ
トリ、ウシ、サル、ウサギなど。同様に、インビボ試験については、当該分野で
公知の任意の動物モデル系が、ヒト被験体に対する投与の前に使用され得る。
【０３９８】 （本発明の組成物の予防的用途および治療的用途） 本発明のＦＣＴＲＸ核酸およびタンパク質は、以下を含むが、これらに限定さ
れない種々の障害に関連する強力な予防的適用および治療的適用に有用である：
（また、以下を含む障害または症候群を、処置または予防するための医薬の製造
における治療薬の使用は、本発明の範囲内である）例えば、結腸直腸の癌、腺腫
様結腸ポリポーシス、骨髄性白血病、先天性自己免疫性新生児血小板減少（ｃｏ
ｎｇｅｎｉｔａｌ ｃｅｏｎａｔａｌ ａｌｌｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏ
ｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、多発性ヒト固形悪性腫瘍（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｕｍａ
ｎ ｓｏｌｉｄ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）、悪性卵巣腫瘍（特に、上皮と支
質との間の界面での）、悪性脳腫瘍、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、混
合型（ｍｉｘｅｄ）神経膠腫／星状細胞腫、腎細胞癌、乳房腺癌、卵巣癌、黒色
腫、腎細胞癌、明細胞および顆粒細胞腫、腫瘍細胞増殖のオートクリン／パラク
リン刺激、細胞障害性治療に対する腫瘍細胞生存および腫瘍細胞耐性のオートク
リン／パラクリン刺激、ｐａｒａｎｅｃｈｍａｌおよび基底膜侵襲ならびに腫瘍
細胞の運動性（これらにより転位に寄与する）、Ｔ細胞媒介免疫エフェクター細
胞の腫瘍媒介免疫抑制ならびに免疫サーベイランスからの腫瘍の逸脱を生じる経
路、神経学的障害、神経変性障害、神経腫、家族性脊髄形成異常症候群、シャル
コー−マリー−ツース病、脱髄性ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候群
；精神衛生状態、免疫学的障害、アレルギーおよび感染、ぜん息、気管支炎ぜん
息、アヴェリーノ型好酸球増加症、肺疾患、生殖障害、男性の不妊、女性の生殖
系障害、男性および女性の生殖障害、血管腫、難聴、糖蛋白質Ｉａ欠損、類腱腫
病、ターコット症候群、肝硬変、Ｃ型肝炎、胃の障害、糖尿病のような膵臓障害
、マンソン住血吸虫感染、脊髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫、グレーノ
ー角膜ジストロフィー−Ｉ型、格子状角膜ジストロフィー−Ｉ型、およびＲｅｉ
ｓ−Ｂｕｃｋｌｅｒｓ角膜ジストロフィー。
【０３９９】 例のように、本発明のＦＣＴＲＸタンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子
治療に有用であり、そしてこのタンパク質は、遺伝子治療を必要とする被験体に
投与される場合、有用であり得る。非制限的例示として、本発明の組成物は、以
下に罹患した患者の処置についての効力を有する：（また、以下を含む障害また
は症候群を、処置または予防するための医薬の製造における治療薬の使用は、本
発明の範囲内である）例えば、結腸直腸の癌、腺腫様結腸ポリポーシス、骨髄性
白血病、先天性自己免疫性新生児血小板減少（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｃｅｏｎ
ａｔａｌ ａｌｌｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、多発
性ヒト固形悪性腫瘍（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｕｍａｎ ｓｏｌｉｄ ｍａｌｉｇ
ｎａｎｃｉｅｓ）、悪性卵巣腫瘍（特に、上皮と支質との間の界面での）、悪性
脳腫瘍、乳房腫瘍、ヒト神経膠腫、星状細胞腫、混合型（ｍｉｘｅｄ）神経膠腫
／星状細胞腫、腎細胞癌、乳房腺癌、卵巣癌、黒色腫、腎細胞癌、明細胞および
顆粒細胞腫、腫瘍細胞増殖のオートクリン／パラクリン刺激、細胞障害性治療に
対する腫瘍細胞生存および腫瘍細胞耐性のオートクリン／パラクリン刺激、ｐａ
ｒａｎｅｃｈｍａｌおよび基底膜侵襲ならびに腫瘍細胞の運動性（これらにより
転位に寄与する）、Ｔ細胞媒介免疫エフェクター細胞の腫瘍媒介免疫抑制ならび
に免疫サーベイランスからの腫瘍の逸脱を生じる経路、神経学的障害、神経変性
障害、神経腫、家族性脊髄形成異常症候群、シャルコー−マリー−ツース病、脱
髄性ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候群；精神衛生状態、免疫学的障
害、アレルギーおよび感染、ぜん息、気管支炎ぜん息、アヴェリーノ型好酸球増
加症、肺疾患、生殖障害、男性の不妊、女性の生殖系障害、男性および女性の生
殖障害、血管腫、難聴、糖蛋白質Ｉａ欠損、類腱腫病、ターコット症候群、肝硬
変、Ｃ型肝炎、胃の障害、糖尿病のような膵臓障害、マンソン住血吸虫感染、脊
髄小脳性運動失調、熱帯熱マラリア原虫、グレーノー角膜ジストロフィー−Ｉ型
、格子状角膜ジストロフィー−Ｉ型、およびＲｅｉｓ−Ｂｕｃｋｌｅｒｓ角膜ジ
ストロフィー。
【０４００】 本発明のＦＣＴＲＸタンパク質をコードする新規の核酸、およびＦＣＴＲＸタ
ンパク質の両方、またはそれらのフラグメントは、診断適用に有用で有り得る。
ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が評価される。さらなる用途は、
抗菌分子（すなわち、いくつかのペプチドは、抗菌特性を有することが見出され
ている）としての用途である。これらの材料は、治療的または診断的な方法にお
ける用途に関する本発明の新規の物質に免疫特異的に結合する抗体の生成におい
てさらに有用である。
【０４０１】 （実施例） 以下の実施例を、本発明の種々の局面の非限定の例として示す。
【０４０２】 （実施例１：核酸を同定する方法） 本発明の新規核酸を、ＧｅｎＢａｎｋによって利用可能なＧｅｎｏｍｉｃ Ｄ
ａｉｌｙ Ｆｉｌｅｓに対して実行する、所有者のある配列ファイルを用いたＴ
ｂｌａｓｔＮによって同定した。核酸を、所有者のあるソフトウェアプログラム
ＧｅｎＳｃａｎＴＭによってさらに推測した（エキソンの選択を含む）。これら
をさらに、ＢＬＡＳＴ検索を用いて類似性によって改変した。次いでこれらの配
列を明らかな不一致に関して手動で修正し、これによって全長タンパク質をコー
ドする配列を得た。
【０４０３】 （実施例２．種々の細胞および組織におけるＦＣＴＲ２の定量的発現分析） 種々のクローンの定量的発現を、種々の正常および病状由来の細胞、細胞株お
よび組織からのＲＮＡサンプルを含むマクロタイタープレートを用い、実時間定
量的ＰＣＲ（ＲＴＱ ＰＣＲ；ＴＡＱＭＡＮ（登録商標））によって評価した。
ＲＴＱ ＰＣＲを、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００配列検出システムで実行した。サンプルの種
々のコレクションを、プレート上に集合させ、パネル１（正常および癌供給源由
来の細胞および細胞株を含む）、パネル２（正常および癌供給源由来（特に外科
手術サンプル由来）の組織に由来するサンプルを含む）、パネル３（広範な種々
の癌供給源に由来するサンプルを含む）、ならびにパネル４（正常細胞および炎
症状態に関連する細胞由来の細胞および細胞株を含む）という。
【０４０４】 最初に、ＲＮＡサンプルを、β−アクチンおよびＧＡＰＤＨのような構成的に
発現される遺伝子に対して正規化した。ＲＮＡ（約５０ｎｇの合計または１ｎｇ
のポリＡ＋）を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）逆転写試薬キット（ＰＥ Ｂｉｏｓ
ｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ；カタログ番号Ｎ８０８−０２３
４）およびランダムヘキサマーを用いて製造業者らのプロトコールに従ってｃＤ
ＮＡに変換した。反応を、２０μｌで実行し、３０分間４８℃でインキュベート
した。次いでｃＤＮＡ（５μｌ）を、β−アクチンおよびＧＡＰＤＨのＴＡＱＭ
ＡＮ（登録商標）アッセイ試薬（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；それぞれ、カタ
ログ番号４３１０８８１Ｅおよび４３１０８８４Ｅ）ならびにＴＡＱＭＡＮ（登
録商標）ユニバーサルＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ；カタログ番号４３０４４４７）を用いた製造業者らのプロトコールに従う
ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）反応のために、別々のプレートに移した。反応を、以
下のパラメーター：５０℃で２分；９５℃で１０分；９５℃で１５秒／６０℃で
１分（４０サイクル）を用いて２５μｌ中で実行した。結果を、対数尺度を用い
てＣＴ値（所定のサンプルが閾値レベルの蛍光と交差するサイクル）として記録
し、所定のサンプルと最も低いＣＴ値を有するサンプルとの間のＲＮＡ濃度にお
ける差異を、ΔＣＴの２乗として示す。次いで、相対発現の割合を、このＲＮＡ
の差異の逆数をとり、１００を乗算することによって得た。β−アクチンおよび
ＧＡＰＤＨに関して得た平均ＣＴ値を使用して、ＲＮＡサンプルを正規化した。
最も高いＣＴ値を生成するＲＮＡサンプルは、さらなる希釈を必要としなかった
が、他のサンプル全てを、そのβ−アクチン／ＧＡＰＤＨ平均のＣＴ値に従って
このサンプルに対して希釈した。
【０４０５】 正規化ＲＮＡ（５μｌ）をｃＤＮＡに変換し、製造業者らの指示書に従って１
工程ＲＴ−ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ試薬（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；
カタログ番号４３０９１６９）および遺伝子特異的プライマーを用いてＴＡＱＭ
ＡＮ（登録商標）を介して分析した。プローブおよびプライマーをＰｅｒｋｉｎ
Ｅｌｍｅｒ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍのＰｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｓｏｆｔ
ｗａｒｅパッケージ（Ａｐｐｌｅ ＣｏｍｐｕｔｅｒのＭａｃｉｎｔｏｓｈ Ｐ
ｏｗｅｒ ＰＣ用の第Ｉ版）または標的配列を入力として使用する類似のアルゴ
リズムに従って、各アッセイに関して設計した。反応条件に対してデフォルト設
定を使用し、そして以下のパラメーターをプライマーを選択する前に設定した：
プライマー濃度＝２５０ｎＭ、プライマー融解温度（Ｔｍ）範囲＝５８℃〜６０
℃、プライマー最適Ｔｍ＝５９℃、最大プライマー差異＝２℃、プローブは、５
’Ｇを有さない、プローブＴｍは、プライマーＴｍよりも１０℃高くなければな
らず、アンプリコンサイズは、７５ｂｐ〜１００ｂｐ。選択したプローブおよび
プライマー（以下を参照のこと）を、Ｓｙｎｔｈｅｇｅｎ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔ
Ｘ，ＵＳＡ）によって合成した。プローブを、未結合色素を取り除くためにＨＰ
ＬＣによって二重に精製し、レポーター色素および消光色素のそれぞれプローブ
の５’末端および３’末端に対する結合を確認するために質量分析法によって評
価した。これらの最終濃度は、順方向プライマーおよび逆方向プライマーが各々
９００ｎＭであり、プローブが２００ｎＭであった。
【０４０６】 ＰＣＲ条件：各組織および各細胞株由来の正規化ＲＮＡを、９６ウェルのＰＣ
Ｒプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の各ウェルに
スポットした。２つのプローブ（標的クローンに特異的なプローブおよび標的プ
ローブと複合体化した別の遺伝子特異的プローブ）を含むＰＣＲカクテルを、Ｐ
Ｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７７００のための１×ＴａｑＭａｎＴＭ ＰＣＲ
Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、５ｍＭ ＭｇＣ１２、ｄＮＴＰ（ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、ｄ
Ｕを１：１：１：２の比）、０．２５Ｕ／ｍｌ ＡｍｐｌｉＴａｑ ＧｏｌｄＴ Ｍ （ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、および０．４Ｕ／μｌ ＲＮａｓｅインヒ
ビター、および０．２５Ｕ／μｌ 逆転写酵素を用いて設定した。逆転写を、４
８℃で３０分間、続いて増幅／ＰＣＲサイクルを以下：９５℃で１０分間、次い
で、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間を４０サイクルのように実行した。
【０４０７】 パネル１のに関する結果において、以下の略語を使用する： ｃａ．＝癌腫、 ＊＝転移から確立された、 ｍｅｔ＝転移、 ｓ ｃｅｌｌ ｖａｒ＝小細胞改変体、 ｎｏｎ−ｓ＝ｎｏｎ−ｓｍ＝小さくない、 ｓｑｕａｍ＝扁平上皮、 ｐｌ．ｅｆｆ＝ｐｌ ｅｆｆｕｓｉｏｎ＝胸膜滲出、 ｇｌｉｏ＝神経膠腫、 ａｓｔｒｏ＝星状細胞腫、および ｎｅｕｒｏ＝神経芽細胞腫。
【０４０８】 （パネル２） パネル２のプレートは、概して、国立癌研究所のＣｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｈ
ｕｍａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＨＴＮ）またはＮａｔｉｏｎａｌ
Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＮＤＲＩ）との
同族的会社における外科医の作業によって獲得されたヒト組織から単離した、Ｒ
ＮＡまたはｃＤＮＡを構成する２個のコントロールウェルおよび９４個の試験サ
ンプルを含む。これらの組織はヒト悪性腫瘍に由来し、示された多くの悪性組織
が「匹敵する縁（ｍａｔｃｈｅｄ ｍａｒｇｉｎ）」を有した場合、その腫瘍に
ちょうど隣接する非癌性組織から得た。これらを正常な隣接組織と命名し、以下
の結果には「ＮＡＴ」と示す。腫瘍組織および「匹敵する縁」を、２つの独立し
た病状によって評価した（外科的病状そしてまたＮＤＲＩまたはＣＨＴＮにおけ
る病理学者による）。この分析によって、腫瘍分化グレードの総体の組織病理学
的評価が提供される。さらに、ほとんどのサンプルは、その患者の臨床段階に関
する情報を提供する本来の外科的病状の報告を含む。これらの匹敵する縁は、手
術の領域を取巻く（すなわち、すぐに隣接する）組織から採取する（表ＲＲにお
いて正常な隣接組織に関して「ＮＡＴ」と示す）。さらに、ＲＮＡおよびｃＤＮ
Ａサンプルを、初老期の人または急に亡くなった犠牲者（事故など）に対して実
行した検死に由来する種々のヒト組織から得た。これらの組織は、疾患を有さな
いことを確認し、そして、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのような種々
の市販の供給源から購入した。
【０４０９】 全てのサンプルからのＲＮＡの完全性を、基準として２８Ｓおよび１８Ｓリボ
ソームＲＮＡ染色の完全性（２８ｓ：１８ｓが、２：１〜２．５：１）を用いる
アガロースゲル電気泳動の視覚的な評価による質、分解産物の指標である低分子
量ＲＮＡの存在対して調節する。サンプルを、単一エキソンの距離をわたって増
幅するように設計したプローブおよびプライマーのセットを用いた逆転写酵素の
非存在下で実行するＲＴＱ ＰＣＲ反応によって、ゲノムＤＮＡの夾雑に対して
調節する。
【０４１０】 （パネル４） パネル４は、炎症性状態に関連する種々のヒト細胞株または組織から単離され
たＲＮＡ（パネル４ｒ）またはｃＤＮＡ（パネル４ｄ）からなる、９６ウェルプ
レート（２つのコントロールウェル、９４の試験サンプル）上のサンプルを含む
。コントロール正常組織（例えば、結腸および肺（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ
Ｊｏｌｌａ，ＣＡ））ならびに胸腺および腎臓（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）由来の総
ＲＮＡを用いた。肝硬変患者からの肝臓組織および狼瘡患者からの腎臓由来の総
ＲＮＡを、ＢｉｏＣｈａｉｎ（Ｂｉｏｃｈａｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ
．，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）から入手した。クローン病および潰瘍性結腸炎を有
すると診断された患者由来のＲＮＡ腸生物のための腸管組織を、Ｎａｔｉｏｎａ
ｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（ＮＤＲＩ）
（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）から入手した。
【０４１１】 星状細胞、肺線維芽細胞、真皮線維芽細胞、冠動脈平滑筋細胞、小気道上皮、
気管支上皮、微小血管真皮内皮細胞、微小血管肺内皮細胞、ヒト肺大動脈内皮細
胞、ヒト臍帯血管内皮細胞を、全てＣｌｏｎｅｔｉｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌ
ｌｅ，ＭＤ）から購入し、そしてＣｌｏｎｅｔｉｃｓによってこれらの細胞型の
ために供給される培地で増殖した。これらの一次細胞型を、示されるように、６
および／または１２〜１４時間、種々のサイトカインまたはサイトカインの組み
合わせを用いて活性化した。以下のサイトカインを使用した；ＩＬ−１βを約１
〜５ｎｇ／ｍｌ、ＴＮＦαを約５〜１０ｎｇ／ｍｌ、ＩＦＮγを約２０〜５０ｎ
ｇ／ｍｌ、ＩＬ−４を約５〜１０ｎｇ／ｍｌ、ＩＬ−９を約５〜１０ｎｇ／ｍｌ
、ＩＬ−１３を約５〜１０ｎｇ／ｍｌ。内皮細胞を、０．１％の血清を用いてＣ
ｌｏｎｅｔｉｃｓからの基本培地中での培養によって、種々の時間について時々
餓死させた。
【０４１２】 単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌを使用して、ＣｕｒａＧｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎの従業員の血液から調製した。ＬＡＫ細胞を、ＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙ
ｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウ
ム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、
および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、ならびにインターロイキン２中で
４〜６日培養することによって、これらの細胞から調製した。次いで、細胞を、
１０〜２０ｎｇ／ｍｌ ＰＭＡおよび１〜２μｇ／ｍｌ イオノマイシン、ＩＬ
−１２を５〜１０ｎｇ／ｍｌ、ＩＦＮγを２０〜５０ｎｇ／ｍｌおよびＩＬ−１
８を５−１０ｎｇ／ｍｌのいずれかで６時間活性化した。いくつかの場合、単核
細胞を、ＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸
（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタ
ノール５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉ
ｂｃｏ）、ならびにＰＨＡ（フィトヘマグルチニン）またはＰＷＭ（ヤマゴボウ
マイトジェン）を約５μｇ／ｍｌ中で４〜５日培養した。サンプルを、ＲＮＡ調
製のために２４、４８および７２時間で採取した。ＭＬＲ（混合リンパ球反応）
サンプルを、２人のドナーから血液を採取し、Ｆｉｃｏｌｌを使用して単核細胞
を単離し、そして単離した単核細胞をＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）
、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇ
ｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール（５．５×１０−５Ｍ）（Ｇｉｂｃｏ）、お
よび１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で約２×１０６細胞／ｍｌの最終濃
度で１：１で混合することによって、得た。このＭＬＲを培養し、そしてＲＮＡ
調製のために、１〜７日の範囲の種々の時点でサンプルを採取した。
【０４１３】 単球を、製造者の指示に従ってＣＤ１４ Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｅａｄｓ、＋
ｖｅ ＶＳ選択カラム、およびＶａｒｉｏ Ｍａｇｎｅｔを使用して単核細胞か
ら単離した。単球を、ＤＭＥＭ ５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ
，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピル
ビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５×１０−５Ｍ（
Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、５０ｎｇ／ｍｌ
ＧＭＣＳＦならびに５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４で５〜７日間培養することによって
、樹状細胞へと分化させた。マクロファージを、ＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃ
ｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナト
リウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ
）、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）および１０％ＡＢヒト血清またはＭＣ
ＳＦ約５０ｎｇ／ｍｌ中での単球の５〜７日間の培養によって調製した。単球、
マクロファージおよび樹状細胞を、リポ多糖体（ＬＰＳ）１００ｎｇ／ｍｌを用
いて６および１２〜１４時間刺激した。樹状細胞をまた、抗ＣＤ４０モノクロー
ナル抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）１０μｇ／ｍｌで６および１２〜１４時間刺
激した。
【０４１４】 ＣＤ４リンパ球、ＣＤ８リンパ球およびＮＫ細胞をまた、製造者の指示に従っ
て、ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ５６のＭｉｌｔｅｎｙｉビーズ、陽性ＶＳ選択カ
ラムおよびＶａｒｉｏ Ｍａｇｎｅｔを使用して単核細胞から単離した。ＣＤ４
５ＲＡおよびＣＤ４５ＲＯ ＣＤ４リンパ球を、ＣＤ８、ＣＤ５６、ＣＤ１４お
よびＣＤ１９のＭｉｌｔｅｎｙｉビーズおよび＋ｖｅ選択を使用して、ＣＤ８、
ＣＤ５６、ＣＤ１４およびＣＤ１９細胞の単核細胞を枯渇することによって単離
した。次いでＣＤ４５ＲＯビーズを、ＣＤ４５ＲＯ ＣＤ４リンパ球を単離する
ために使用し、そして残りの細胞はＣＤ４５ＲＡ ＣＤ４リンパ球である。ＣＤ
４５ＲＡ ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＯ ＣＤ４およびＣＤ８リンパ球を、ＤＭＥＭ
５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１
ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５×１０ −５ Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）に配置し、
そしてＰＢＳ中の０．５μｇ／ｍｌ抗ＣＤ２８（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および
３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３，ＡＴＣＣ）で一晩コーティングしたＦａｌ
ｃｏｎ６ウェル組織培養プレートに１０６細胞／ｍｌでプレーティングした。６
および２４時間後に、この細胞をＲＮＡ調製のために収集した。慢性的に活性化
したＣＤ８リンパ球を調製するために、本発明者らは、単離したＣＤ８リンパ球
を抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３コーティングプレート上で４日間活性化させ、次い
でこの細胞を収集し、そしてＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００
μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ
）、メルカプトエタノール５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）ならびにＩＬ−２中でこれらの増殖した。次いで、
増殖したＣＤ８細胞を、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を結合したプレートで再び４
日間活性化し、そして以前と同様に増殖した。ＲＮＡを、第２の活性化の６およ
び２４時間後、および第２の増殖培地の４日後に単離した。単離したＮＫ細胞を
、ＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉ
ｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール
５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ
）ならびにＩＬ−２中で、ＲＮＡを調製する前に４〜６日間培養した。
【０４１５】 Ｂ細胞を得るために、扁桃腺をＮＤＲＩから得た。この扁桃腺を滅菌解剖用は
さみで切断し、次いで篩を通した。次いで、扁桃細胞を遠心沈殿し、そしてＤＭ
ＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ
）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５
×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で
１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。この細胞を活性化するために、本発明者らは、
ＰＷＭ ５μｇ／ｍｌまたは抗ＣＤ４０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）約１０μｇ／
ｍｌおよびＩＬ−４ ５〜１０ｎｇ／ｍｌを使用した。細胞を、ＲＮＡ調製のた
めに２４、４８および７２時間で収集した。
【０４１６】 一次および二次のＴｈ１／Ｔｈ２およびＴｒ１細胞を調製するために、６ウェ
ルＦａｌｃｏｎプレートを、１０μｇ／ｍｌ抗ＣＤ２８（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ
）および２μｇ／ｍｌ ＯＫＴ３（ＡＴＣＣ）で一晩コーティングし、次いでＰ
ＢＳで２度洗浄した。臍帯血ＣＤ４リンパ球（Ｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ
，Ｇｅｒｍａｎ Ｔｏｗｎ，ＭＤ）を、ＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ
）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（
Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５×１０５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍ
Ｍ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）およびＩＬ−２（４ｎｇ／ｍｌ）中、１０５〜１
０６細胞／ｍｌで培養した。ＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）および抗ＩＬ４（１μ
ｇ／ｍｌ）を、Ｔｈ１を指向するために使用したが、ＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）
および抗ＩＦＮγ（１μｇ／ｍｌ）を、Ｔｈ２を指向するために使用し、そして
ＩＬ−１０ ５ｎｇ／ｍｌを、Ｔｒ１を指向するために使用した。４〜５日後に
、活性化Ｔｈ１、Ｔｈ２およびＴｒ１リンパ球を、ＤＭＥＭ中で１度洗浄し、そ
してＤＭＥＭ ５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇ
ｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノー
ル５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）お
よびＩＬ−２（１ｎｇ／ｍｌ）中で４〜７日間増殖させた。これに続いて、活性
化したＴｈ１、Ｔｈ２およびＴｒ１リンパ球を、上記のように、しかしアポトー
シスを防ぐためにＣＤ９５Ｌ（１μｇ／ｍｌ）を添加して、抗ＣＤ２８／ＯＫＴ
３およびサイトカインを用いて５日間再刺激した。４〜５日後、Ｔｈ１、Ｔｈ２
およびＴｒ１リンパ球を洗浄し、次いでＩＬ−２を用いて４〜７日間再び増殖さ
せた。活性化したＴｈ１およびＴｈ２リンパ球を、最大３サイクルの間このよう
に維持した。プレート結合抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ｍＡｂを用いる第２および
第３の活性化およびインターロイキン２中での４日間の第２および第３の増殖後
に、ＲＮＡを、一次および二次Ｔｈ１、Ｔｈ２およびＴｒ１から６および２４時
間後に調製した。
【０４１７】 以下の白血球細胞株を、ＡＴＣＣから得た：Ｒａｍｏｓ、ＥＯＬ−１、ＫＵ−
８１２。ＥＯＬ細胞を、０．１ｍＭ ｄｂｃＡＭＰ ５×１０５細胞／ｍｌ中で
８日間培養し、培地を３日毎に交換し、そして細胞濃度を５×１０５細胞／ｍｌ
に調節することによって、さらに分化させた。これらの細胞の培養のために、本
発明者らは、５％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉ
ｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール
５．５×１０−５Ｍ（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）を添
加したＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ（ＡＴＣＣによって推奨されるように）を使用し
た。ＲＮＡは、得られた細胞から調製したか、またはＰＭＡ １０ｎｇ／ｍｌお
よびイノマイシン１μｇ／ｍｌで６および１４時間活性化した細胞から調製した
かのいずれかであった。ケラチノサイト株ＣＣＤ１０６および気道上皮腫瘍株Ｎ
ＣＩ−Ｈ２９２をまた、ＡＴＣＣから入手した。この両方を、ＤＭＥＭ ５％Ｆ
ＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピ
ルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール５．５×１０−５Ｍ
（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。Ｃ
ＣＤ１１０６細胞を、約５ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦαおよび１ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１
βで６および１４時間活性化したが、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞は、以下のサイトカ
インで６および１４時間活性化した：５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４、５ｎｇ／ｍｌ
ＩＬ−９、５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１３および２５ｎｇ／ｍｌ ＩＦＮγ。
【０４１８】 これらの細胞株および血球のために、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を
使用して約１０７細胞／ｍｌを溶解することによって、ＲＮＡを調製した。手短
に言うと、１／１０容量のブロモクロロプロパン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をＲＮＡサンプルに加え、攪拌し、そし
て室温で１０分後に、このチューブをＳｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローターにおい
て１４，０００ｒｐｍで回転させた。この水相を取り出し、そして１５ｍｌのＦ
ａｌｃｏｎチューブに入れた。等量のイソプロパノールを加え、そして−２０℃
で一晩放置した。沈殿したＲＮＡをＳｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローターにおいて
９，０００ｒｐｍで１５分間遠心沈殿し、そして７０％エタノールで洗浄した。
このペレットを３００μｌのＲＮＡｓｅを含まない水および３５μｌの緩衝液（
Ｐｒｏｍｅｇａ）５μｌ ＤＴＴ中に再溶解し、７μｌのＲＮＡｓｉｎおよび８
μｌのＤＮＡｓｅを加えた。このチューブを３７℃で３０分間インキュベートし
て混入ゲノムＤＮＡを除去し、そしてフェノールクロロホルムで１度抽出し、そ
して１／１０容量の３Ｍ酢酸ナトリウムおよび２容量の１００％エタノールを用
いて再沈殿した。このＲＮＡを遠心沈殿し、そしてＲＮＡｓｅを含まない水に入
れた。ＲＮＡを−８０℃で保存した。
【０４１９】 上記に詳述した手順を行って、目的のクローンのｔａｑｍａｎプロフィールを
得た。
【０４２０】 以下のクローンについてのプライマーおよびＴａｑｍａｎの結果を以下に示す
： ５８０９２２１３．０．３６−プローブ名：Ａｇ８０９（表９および表１０） ２９６９２２７５．０．１−プローブ名：Ａｇ２７７３（表１１および表１２
） ３２１２５２４３．０．２１−プローブ名：Ａｇ４２７（表１３および表１４
） ２７４５５１８３．０．１９−プローブ名：Ａｇ１５４１（表１５および表１
６，１７，１８）。
【０４２１】
【表８７】
【０４２２】
【表８８】 表９に示したＴａｑｍａｎの結果は、ｃＦＣＴＲ１が腫瘍細胞株によって高度
に発現され、そしてまた腫瘍組織、特に正常隣接組織（ＮＡＴ）と比較して胸部
腫瘍および卵巣腫瘍において過剰発現されることを示している。ホリスタチン（
ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）が、腫瘍増殖の修飾因子として作用し得、そしてその
発現がまた、多嚢胞性卵巣症候群、卵巣腫瘍の良性形態に関連していることが報
告されている。
【０４２３】
【表８９】
【０４２４】
【表９０】 表１２は、Ｎｏｒｍａｌ Ａｄｊａｃｅｎｔ Ｔｉｓｓｕｅ（ＮＡＴ）と比較
して卵巣癌で過剰発現を示すクローンＦＣＴＲ４のＴａｑｍａｎの結果を示す。
さらに、増大した発現は、卵巣癌細胞株において、抗体が卵巣癌の処置に用いら
れ得ることを示唆することを示す。
【０４２５】
【表９１】
【０４２６】
【表９２】 表１４のＴａｑｍａｎの結果は、膀胱、肝、および副腎におけるクローンＦＣ
ＴＲ５の高発現がこれらの組織を含む疾患の処置においての潜在的役割を示唆す
ることを示す。
【０４２７】
【表９３】
【０４２８】
【表９４】
【０４２９】
【表９５】
【０４３０】
【表９６】 表１８のＴａｑｍａｎの結果は、クローンＦＣＴＲ６が、隣接した腎臓組織に
対して明細胞腎細胞癌組織で異なった発現をすることを示し、従って腎細胞癌の
処置において潜在的は役割を有し得ること示す。
【０４３１】 （同等物） 特定の実施形態が本明細書中で詳細に開示されてきたが、これらの説明目的の
みのための実施例の方法で行われたものであり、添付の請求項の範囲に関して限
定を意図するものではない。特に、様々な置換、変化、および改変が、請求項で
規定した本発明の精神および範囲を逸脱することなく行われ得ることを発明者ら
は意図する。この核酸出発物質、目的のクローン、ライブラリーの種類の選択は
、本明細書中で記載した実施例の知識の分野における当業者にとって慣習的な事
柄である。他の局面、利点、および改変が請求項の範囲内と考えられる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 1/18 ４Ｃ０８５ 1/16 3/10 ４Ｃ０８６ 1/18 7/04 ４Ｈ０４５ 3/10 11/00 7/04 11/06 11/00 15/00 11/06 19/08 15/00 25/00 19/08 27/16 25/00 31/00 27/16 31/20 31/00 33/06 31/20 33/12 33/06 35/00 33/12 35/02 35/00 37/00 35/02 37/08 37/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/08 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/21 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/50 Ｚ 1/68 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｍ 33/50 33/566 33/53 33/577 Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ 33/577 Ｂ Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ６０／１８７，２９３ (32)優先日 平成12年３月６日(2000．3．6) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１８７，２９４ (32)優先日 平成12年３月６日(2000．3．6) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１９０，４００ (32)優先日 平成12年３月17日(2000．3．17) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１９６，０１８ (32)優先日 平成12年４月７日(2000．4．7) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／２５９，５４８ (32)優先日 平成13年１月３日(2001．1．3) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 フェルナンデス， エルマ アメリカ合衆国 コネチカット 06405， ブランフォード， フローレンス ロー ド 77， ナンバー２ (72)発明者 シムケッツ， リチャード エイ． アメリカ合衆国 コネチカット 06516， ウエスト ヘイブン， リート ストリ ート 191 (72)発明者 ハールマン， ジョン エル． アメリカ合衆国 コネチカット 06437， ギルフォード， バーンシェド レーン 78 (72)発明者 マジュンダー， クムド アメリカ合衆国 コネチカット 06905， スタンフォード， シルバー ヒル レ ーン 140 (72)発明者 マクドウガル， ジョン アメリカ合衆国 コネチカット 06517， ハムデン， ラッセル ストリート 17 (72)発明者 ミシュラ， ビシュヌ アメリカ合衆国 コネチカット 06405， ブランフォード， イースト メイン ストリート 309， ナンバー306 (72)発明者 ミジズ， ピーター エス． アメリカ合衆国 コネチカット 06371， オールド ライム， クラークス レー ン ７ (72)発明者 ラステリ， ルカ アメリカ合衆国 コネチカット 06437， ギルフォード， ペッパーブッシュ レ ーン 52 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA40 BA13 BB03 BB20 CA25 CA26 CB01 CB21 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 FB04 4B024 AA01 AA11 BA61 CA04 DA01 DA02 DA05 DA11 EA04 HA08 HA11 4B063 QA01 QA18 QQ02 QQ08 QQ42 QR20 QR32 QR42 QR50 QR62 QR72 QR77 4B065 AA01X AA57X AA87X AA93Y AB01 AB02 BA02 BA08 CA23 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 BA01 BA21 CA25 CA31 CA32 DC50 NA14 ZA012 ZA182 ZA332 ZA342 ZA532 ZA592 ZA662 ZA812 ZB072 ZB112 ZB262 ZB272 ZB312 ZB332 ZB372 ZC352 4C085 AA13 AA14 BB11 CC04 CC05 DD22 DD33 FF02 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 NA14 ZA01 ZA18 ZA33 ZA34 ZA53 ZA59 ZA66 ZA81 ZB07 ZB11 ZB26 ZB27 ZB31 ZB33 ZB37 ZC35 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA09 CA40 DA75 EA20 EA50 FA72 FA73 FA74

Claims (49)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態； （ｂ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、こ
    こで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異な
    り、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のう
    ちの１５％以下において異なる、改変体； （ｃ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列；ならびに （ｄ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改
    変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし
    、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下におい
    て異なる、改変体； からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
  2. 【請求項２】 請求項１に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドが
    、配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、および２５
    からなる群より選択されるアミノ酸配列の天然に存在する対立遺伝子改変体のア
    ミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
  3. 【請求項３】 請求項２に記載のポリペプチドであって、ここで、前記対立
    遺伝子改変体が、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６
    、１８、２０、２２、および２４からなる群から選択される核酸配列と単一ヌク
    レオチドで異なる核酸配列の翻訳であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
  4. 【請求項４】 前記改変体のアミノ酸配列が、保存的アミノ酸置換含む、請
    求項１に記載のポリペプチド。
  5. 【請求項５】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群から選択されるアミノ酸配列の成熟形態； （ｂ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、こ
    こで、該改変体の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり
    、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうち
    の１５％以下において異なる、改変体； （ｃ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列； （ｄ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改
    変体の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、
    該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下において
    異なる、改変体； （ｅ）配列番号２、４、６、８、１３、１５、１７、１９、２１、２３、およ
    び２５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは該ポリ
    ペプチドの改変体の、少なくとも一部をコードする核酸フラグメントであって、
    ここで、該改変体の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異な
    り、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％
    以下において異なる、核酸フラグメント；ならびに （ｆ） （ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）の相補体を含む、核酸
    分子、 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸配
    列を含む、核酸分子。
  6. 【請求項６】 請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が
    天然に存在する対立遺伝子核酸改変体のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
  7. 【請求項７】 請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が
    、天然に存在するポリペプチド改変体のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコー
    ドする、核酸分子。
  8. 【請求項８】 請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が
    、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０、
    ２２、および２４からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異な
    る、核酸分子。
  9. 【請求項９】 請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が
    以下： （ａ）配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、
    ２０、２２、および２４からなる群より選択されるヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、
    ２０、２２、および２４からなる群より選択されるヌクレオチド配列と１つ以上
    のヌクレオチドで異なる、ヌクレオチド配列であって、ただし、そのヌクレオチ
    ドの２０％以下が、該ヌクレオチド配列と異なる、ヌクレオチド配列； （ｃ）（ａ）の核酸フラグメント；ならびに （ｄ）（ｂ）の核酸フラグメント； からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
  10. 【請求項１０】 請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子
    が、配列番号１、３、５、７、９、１０、１１、１２、１４、１６、１８、２０
    、２２、および２４からなる群より選択されるヌクレオチド配列または該ヌクレ
    オチド配列の相補鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸分
    子。
  11. 【請求項１１】 請求項５に記載の核酸分子であって、該核酸分子は、以下
    ： （ａ）第１ヌクレオチド配列であって、前記アミノ酸配列をコードするコード
    配列と１以上のヌクレオチド配列で異なるコード配列を含み、ただし、該第１ヌ
    クレオチド配列中のコード配列におけるヌクレオチドの２０％以下が、該コード
    配列と異なる、第１ヌクレオチド配列； （ｂ）該第１ポリヌクレオチドの相補体である、単離された第２ポリヌクレオ
    チド；ならびに （ｃ）（ａ）または（ｂ）の核酸フラグメント； からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
  12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
  13. 【請求項１３】 前記核酸分子に作動可能に連結されたプロモーターをさら
    に含む、請求項１２に記載のベクター。
  14. 【請求項１４】 請求項１２に記載のベクターを含む、細胞。
  15. 【請求項１５】 請求項１に記載のポリペプチドに免疫特異的に結合する、
    抗体。
  16. 【請求項１６】 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１５に記載
    の抗体。
  17. 【請求項１７】 前記抗体がヒト化抗体である、請求項１５に記載の抗体。
  18. 【請求項１８】 サンプル中の請求項１に記載のポリペプチドの存在または
    量を決定するための方法であって、該方法は、以下： （ａ）該サンプルを提供する工程； （ｂ）該サンプルを、該ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体と接触させ
    る工程；および （ｃ）該ポリペプチドに結合した抗体の存在または量を決定して、それによっ
    て該サンプル中のポリペプチドの存在または量を決定する工程、 を包含する、方法。
  19. 【請求項１９】 サンプル中の請求項５に記載の核酸分子の存在または量を
    決定するための方法であって、該方法は、以下： （ａ）該サンプルを提供する工程； （ｂ）該サンプルを、該核酸分子に結合するプローブと接触させる工程；およ
    び （ｃ）該核酸分子に結合した該プローブの存在または量を決定して、それによ
    って該サンプル中の該核酸分子の存在または量を決定する工程、 を包含する、方法。
  20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、前記核酸分子の存在ま
    たは量が、細胞型または組織型についてのマーカーとして使用される、方法。
  21. 【請求項２１】 前記細胞型または組織型が癌性である、請求項２０に記載
    の方法。
  22. 【請求項２２】 請求項１に記載のポリペプチドに結合する因子を同定する
    方法であって、該方法は、以下： （ａ）該ポリペプチドを該因子と接触させる工程；および （ｂ）該因子が該ポリペプチドに結合するか否かを決定する工程； を包含する、方法。
  23. 【請求項２３】 前記因子が、細胞レセプターまたは下流エフェクターであ
    る、請求項２２に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 請求項１のポリペプチドの発現または活性を調節する因子
    を同定するための方法であって、該方法は、以下： （ａ）該ポリペプチドを発現する細胞を提供する工程； （ｂ）該因子と該細胞を接触させる工程；および （ｃ）該因子が、該ポリペプチドの発現または活性を調節するか否かを決定す
    る工程、 を包含し、それによって、該ペプチドの発現または活性における変化は、外因
    子が、該ポリペプチドの発現または活性を調節することを示す、方法。
  25. 【請求項２５】 請求項１に記載のポリペプチドの活性を調節するための方
    法であって、該方法は、請求項１に記載のポリペプチドを発現する細胞サンプル
    を、該ポリペプチドの活性を調節するのに十分な量で、該ポリペプチドに結合す
    る化合物とを接触させる工程を包含する、方法。
  26. 【請求項２６】 ＦＣＴＲＸ関連障害を処置または予防する方法であって、
    該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における
    該ＦＣＴＲＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１に記載のポ
    リペプチドを投与する工程を包含する、方法。
  27. 【請求項２７】 前記障害が神経変性障害である、請求項２６に記載の方法
    。
  28. 【請求項２８】 前記障害が、細胞シグナルのプロセシングおよび代謝経路
    の調節に関連する、請求項２６に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 前記被験体がヒトである、請求項２６に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 ＦＣＴＲＸ関連障害を処置または予防する方法であって、
    該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における
    該ＦＣＴＲＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項５に記載の核
    酸を投与する工程を包含する、方法。
  31. 【請求項３１】 前記障害が神経変性障害である、請求項３０に記載の方法
    。
  32. 【請求項３２】 前記障害が、細胞シグナルのプロセシングおよび代謝経路
    の調節に関連する、請求項３０に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 前記被験体がヒトである、請求項３０に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 ＦＣＴＲＸ関連障害を処置または予防する方法であって、
    該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における
    該ＦＣＴＲＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１５に記載の
    抗体を投与する工程を包含する、方法。
  35. 【請求項３５】 請求項３４に記載の方法であって、前記障害が、例えば、
    以下からなる群より選択され、これらを含む障害または症候群を処置または予防
    するための医薬の製造における治療剤の使用がまた、本発明の範囲内である、方
    法：結腸直腸癌、腺腫様大腸菌ポリープ症、骨髄性白血病、先天性新生児自己免
    疫性血小板減少症、多発性ヒト固体腫瘍、特に上皮と支質との界面の悪性卵巣腫
    瘍、悪性脳腫瘍、乳腺癌（ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ）、ヒト神経膠腫、星状
    細胞腫、混合した神経膠腫／星状細胞腫、腎細胞癌、乳腺癌（ｂｒｅａｓｔ ａ
    ｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、卵巣癌、黒色腫、腎臓細胞癌、明細胞および顆
    粒細胞癌、腫瘍細胞増殖のオートクライン／パラクリン刺激、腫瘍細胞生存のオ
    ートクライン／パラクリン刺激および細胞傷害性療法に対する腫瘍細胞耐性、柔
    組織（ｐａｒａｎｅｃｈｍａｌ）膜侵襲および基底膜侵襲ならびにそれにより転
    移に寄与する腫瘍細胞の運動性、Ｔ細胞媒介免疫エフェクター細胞の腫瘍媒介免
    疫抑制および免疫監察から腫瘍の逃避を生じる経路、神経学的障害、神経変性障
    害、神経外傷、家族性脊髄形成異常症候群、シャルコー−マリー−ツース神経障
    害、脱髄ガードナー症候群、家族性脊髄形成異常症候群；精神健康状態、免疫学
    的障害、アレルギーおよび感染、喘息、気管支喘息、アベリノ型好酸球増加、肺
    疾患、生殖障害、男性不妊症、女性生殖系障害、男性生殖疾患および女性生殖疾
    患、血管腫、難聴、糖タンパク質Ｉａ欠損、類腱疾患、ターコット症候群、肝硬
    変、Ｃ型肝炎、胃障害、膵臓障害様糖尿病、マンソン住血吸虫感染、脊髄小脳性
    運動失調、熱帯熱マラリア原虫寄生虫血症、Ｉ型グレーノー角膜ジストロフィー
    、Ｉ型格子状角膜ジストロフィー、およびレイス−バックラー角膜ジストロフィ
    ー。
  36. 【請求項３６】 前記障害が、細胞シグナルのプロセシングおよび代謝経路
    の調節に関連する、請求項３４に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 前記被験体がヒトである、請求項３４に記載の方法。
  38. 【請求項３８】 請求項１に記載のポリペプチドおよび薬学的に受容可能な
    キャリアを含有する、薬学的組成物。
  39. 【請求項３９】 請求項５に記載の核酸分子および薬学的に受容可能なキャ
    リアを含有する、薬学的組成物。
  40. 【請求項４０】 請求項１５に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリ
    アを含有する、薬学的組成物。
  41. 【請求項４１】 請求項３８に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む
    、キット。
  42. 【請求項４２】 請求項３９に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む
    、キット。
  43. 【請求項４３】 請求項４０に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む
    、キット。
  44. 【請求項４４】 第１の哺乳動物被験体における請求項１に記載のポリペプ
    チドの変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定す
    るための方法であって、該方法は、以下： （ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中の該ポリペプチドの発現レベ
    ルを測定する工程；および （ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該ポリペプチドの量を、該疾患を有さないこ
    とが既知であるかまたは該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被
    験体由来のコントロールサンプル中に存在する該ポリペプチドの量と比較する工
    程、 を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の該第１の被験体
    における該ポリペプチドの発現レベルにおける変化が、該疾患の存在または該疾
    患に対する素因を示す、方法。
  45. 【請求項４５】 前記素因が癌に対するものである、請求項４４に記載の方
    法。
  46. 【請求項４６】 第１の哺乳動物被験体における請求項５に記載の核酸分子
    の変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するた
    めの方法であって、該方法は、以下： （ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中の該核酸の量を測定する工程
    ；および （ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該核酸の量を、該疾患を有さないことが既知
    であるかまたは該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来
    のコントロールサンプル中に存在する該核酸の量と比較する工程、 を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の該第１の被験体
    における該核酸のレベルにおける変化が、該疾患の存在または該疾患に対する素
    因を示す、方法。
  47. 【請求項４７】 前記素因が癌に対するものである、請求項４６に記載の方
    法。
  48. 【請求項４８】 哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、
    該方法は、該病理状態を緩和するに十分な量でポリペプチドを該哺乳動物に投与
    する工程を包含し、ここで、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１３
    、１５、１７、１９、２１、２３、および２５のうちの少なくとも１つのアミノ
    酸配列を含むポリペプチドまたはそれらの生物学的に活性なフラグメントと、少
    なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドである、方法。
  49. 【請求項４９】 哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、
    該方法は、該病理学的状態を緩和するに十分な量で請求項１５に記載の抗体を該
    哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
JP2001565901A 2000-03-03 2001-03-05 Ｆｃｔｒｘと命名されたタンパク質およびこれをコードする核酸 Pending JP2003525634A (ja)

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