CN113453678A - Hiv感染的联合治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于治疗HIV的联合疗法。本发明的联合疗法旨在逆转HIV潜伏期并最终治愈该疾病。本发明的联合疗法涉及使用IAP抑制剂和使用免疫检查点抑制剂。

Description

HIV感染的联合治疗
技术领域
本发明属于医学和药学领域。更具体而言，它提供了用于HIV感染联合治疗的药物化合物和组合物。
背景技术
HIV治疗包括服用减缓病毒在体内进展的药物。HIV是一种称为逆转录病毒的病毒。目前，HIV患者通常使用2种以上具有不同病毒靶点的抗逆转录病毒药物(ARV)的组合进行治疗。这种治疗方法被称为联合抗逆转录病毒疗法(ART)。通常用于药物组合的包括一种或多种核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂、整合酶抑制剂和/或蛋白酶抑制剂。超过10种此类固定剂量组合已获得上市许可。这种固定剂量的药物组合可以实现多年对HIV感染的永久抑制，从而大大延长HIV患者的预期寿命。这些ART药物中的许多自1990年代中期开始使用，这也是过去20年每年与艾滋病相关的死亡人数下降的原因。
美国卫生与公众服务部(HHS)艾滋病研究咨询委员会办公室(OARAC)发布了成人和青少年HIV感染者使用抗逆转录病毒药物的指南(https://aidsinfo.nih.gov/contentfiles/lvguidelines/adultandadolescentgl.pdf)，其目的是根据当前对抗逆转录病毒药物(ARV)的认知为美国的HIV护理从业者提供建议。同样，在欧洲，欧洲艾滋病临床学会(EACS)的使命是促进HIV感染和相关合并感染的卓越护理标准(SOC)，发布了欧洲HIV阳性成人治疗指南(http://www.eacsociety.org/files/2018_guidelines-9.1-english.pdf)。
迄今为止，HIV无法治愈。ART减少血液和体液中的病毒量(或病毒载量)。病毒持续存在于不产生任何病毒的休眠CD4+细胞中，在各种器官中形成潜伏库，并在常规抗逆转录病毒治疗停止后由于某些细胞打破休眠并再激活病毒复制而导致复发。在休眠状态下，这些库无法通过当前的疗法消除，因为受感染的细胞确实包含HIV基因组，但不会产生任何会导致细胞病变效应或被免疫系统消除的病毒。因此，要彻底治愈HIV，必须逆转受感染的CD4+细胞的休眠状态，使其对抗病毒治疗易感。
因此，HIV治愈研究的一个重要方面是开发适合逆转HIV潜伏期的药物。此类药物通常称为潜伏逆转药物或LRA。目前正在研究不同种类的药物作为LRA，包括组蛋白去乙酰化酶抑制剂、蛋白激酶C激动剂、溴结构域抑制剂和DNA甲基转移酶抑制剂。
凋亡抑制剂(IAP)蛋白形成了一个调节程序性细胞死亡的蛋白家族。它们可能有助于癌细胞的存活。因此，目前正在研究IAP蛋白抑制剂在治疗癌症的药物中可能有用，通常与另一种诱导细胞凋亡的治疗联合使用。所述IAP抑制剂也被讨论为治疗HIV感染的潜在有用药物。特别是，它们有望通过与IAP蛋白家族的BIRC2和BIRC3成员(分别另称为细胞凋亡抑制剂1(cIAP-1)和2(cIAP-2))结合来逆转HIV潜伏期，从而调节NF-κB信号，并由此刺激HIV复制(Pache等，Cell Host&Microbe 18，345–353，2015(http：//dx.doi.org/10.1016/j.chom.2015.08.009)，Rasmussen等，Curr Opin HIV AIDS，2017年1月；12(1)：96–104.doi：10.1097/COH.0000000000000328，和Pache等，WO 2015/187998 A)。在Stevenson等US2009/0010941和Wang等WO 2008/128171中发现了对在HIV治疗中使用IAP抑制剂的可能性的进一步参考。
仅逆转潜伏期不足以治愈HIV感染。还需要根除再激活的HIV感染细胞。这种逆转潜伏期和杀死再激活细胞的组合方法有时被称为“休克和杀死”方法。
不同类别的试剂被讨论为可能适用于杀死方面：常规ART中使用的药物和药物组合可能在这方面有用。Toll样受体激动剂是为此目的讨论的另一类试剂。
众所周知，HIV感染的细胞可能会在其表面表现出更高水平的免疫检查点分子。这可能有助于受感染的细胞逃避免疫系统的破坏，这种效应有时被称为T细胞耗竭。免疫检查点抑制剂(ICI)主要被研究并用作治疗癌症的一种有前途的方法，但它们也被讨论为治疗HIV的休克和杀死方法中潜在有用的药物。
上述方法包括免疫检查点抑制剂、IAP抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、蛋白激酶C激动剂、溴结构域抑制剂、DNA甲基转移酶抑制剂、凋亡诱导剂和Toll样受体激动剂均在Rasmussen等的综述中讨论过：Curr Opin HIV AIDS，2017年1月；12(1)：96–104.doi：10.1097/COH.0000000000000328。
IAP抑制剂用于治疗HIV感染的用途描述于US 2017/196879A1和S.-I.Hattori等，FRONTIERS IN MICROBIOLOGY，第9卷，2018，DOI：10.3389/fmicb.2018.02022。抗PD-1抗体在治疗HIV感染中的用途描述于V.Velu等，RETROVIROLOGY，BIOMED CENTRAL LTD.，LONDON，GB，第12卷，第1期，2015年2月8日，第14页，DOI：10.1186/812977-015-0144-X；和A.Serrao等，ANNALS OF HEMATOLOGY，BERLIN，DE，第98卷，第6期，第1505-1506页，DOI：10.1007/800277-018-3541-0。Debio 1143与抗PD-1抑制剂一起用于治疗癌症的用途描述于A.Attinger等，检索自互联网：URL：https://cancerres.aacrjournals.org/content/78/13_Supplement/4703。Debio 1143作为潜伏逆转剂的适用性描述于M.Bobardt等，PLOSONE，https://doi.org/10.1371/journal.pone.0211746。该文件是在本申请的优先权日之后和本申请的申请日之前公开的。
尽管有这么多有希望的替代治疗方法，但今天仍然没有有效的HIV感染治愈方法。
发明内容
因此，本发明旨在通过提供用于治疗和优选治愈HIV感染的更有效的疗法来解决现有技术的问题。特别是，本发明提供了一种用于治疗HIV感染的组合产品和联合疗法，其在减少病毒库方面表现出优异的功效，同时在杀死从休眠状态再激活的HIV复制细胞方面显示出优异的功效，从而有助于治愈HIV的最终目标。关于杀死HIV复制细胞的后一方面，可以在效果的幅度和/或持续时间方面实现优异的效果。
本发明进一步提供了适用于上述联合治疗的药物组合物，从而在逆转HIV潜伏期和/或杀死复苏的HIV复制细胞方面达到上述效果，因此最终有助于所需的HIV治愈。
本发明还提供了通过上述联合疗法治疗HIV感染患者的方法。这方面还涉及实现上述在逆转HIV潜伏期和/或杀死复活的HIV复制细胞方面的优越功效的益处，从而有助于治愈HIV的最终目标。
上述目的是通过所附权利要求中规定的化合物、组合产品、组合物、用途和方法来实现的。
附图说明
图1：实施例1中描述的HIV再激活实验结果的图示，其中Debio 1143单独以不同浓度施用至JLat 10.6-GFP细胞。
图2：实施例1中描述的HIV再激活实验结果图示，其中Debio 1143以不同浓度与富马酸替诺福韦酯、恩曲他滨和雷特格韦一起施用至JLat 10.6-GFP细胞。
图3：实施例1中描述的HIV再激活实验结果的图示，其中Debio 1143单独以不同浓度施用至2D10细胞。
图4：实施例1中描述的HIV再激活实验结果的图示，其中Debio 1143以不同浓度与富马酸替诺福韦酯、恩曲他滨和雷特格韦一起施用至2D10细胞。
图5：实施例1中描述的HIV再激活实验结果的图示，Debio 1143单独以不同浓度施用至5A8细胞。
图6：实施例1中描述的HIV再激活实验结果的图示，其中Debio 1143以不同浓度与富马酸替诺福韦酯、恩曲他滨和雷特格韦一起施用至5A8细胞。
图7：实施例2中描述的细胞毒性实验结果的图示，其中Debio 1143、Debio 1143与ART的组合以及对照化合物在JLat 10.6GFP+细胞中在LDH测定中测试3天。
图8：实施例2中描述的细胞毒性实验结果的图示，其中Debio 1143、Debio 1143与ART的组合以及对照化合物在原代CD4+ T-淋巴细胞中在LDH测定中测试3天。
图9：实施例2中描述的细胞毒性实验结果的图示，其中Debio 1143、Debio 1143与ART的组合以及对照化合物在JLat 10.6GFP+细胞中在Celltiter Glo测定中测试3天。
图10：实施例2中描述的细胞毒性实验结果的图示，其中Debio 1143、Debio 1143与ART的组合以及对照化合物在CD4+ T-淋巴细胞中在Celltiter Glo测定中测试3天。
图11：在静息CD4+ T淋巴细胞中HIV再激活结果的图示，这些CD4+ T-淋巴细胞来源于使用单独的Debio 1143的HIV ART治疗的患者#1。
图12：在静息CD4+ T淋巴细胞中HIV再激活结果的图示，这些CD4+ T-淋巴细胞来源于使用Debio 1143与ART组合的HIV ART治疗的患者#1。
图13：在静息CD4+ T淋巴细胞中HIV再激活结果的图示，这些CD4+ T-淋巴细胞来源于使用单独的Debio 1143的HIV ART治疗的患者#2。
图14：在静息CD4+ T淋巴细胞中HIV再激活结果的图示，这些CD4+ T-淋巴细胞来源于使用Debio 1143与ART组合的HIV ART治疗的患者#2。
图15：用Debio 1143或其他LRA作为单一试剂在2D10细胞中再激活HIV的结果的图示。
图16：用Debio 1143或其他LRA作为单一试剂处理的2D10细胞中LDH测定的细胞毒性结果的图示。
图17：用Debio 1143与其他LRA组合处理的2D10细胞中HIV再激活结果的图示。
图18：Debio 1143对HIV-1潜伏2D10细胞系(A)或293T细胞系(B)或CD4+ T-淋巴细胞(C)中cIAP1降解和NF-kB调节的影响结果的图示。
图19：Debio 1143对CD8+ T细胞和NK细胞在24小时共培养中对HIV感染的静息CD4+ T细胞(rCD4)裂解的影响结果图示。
图20：Debio 1143对CD8+ T细胞和NK细胞在48小时共培养中对HIV感染的静息CD4+ T细胞(rCD4)裂解的影响结果图示。
图21：实施例4中描述的HIV-1感染的人源化BLT小鼠的功效研究结果的图示，其中在感染后12周开始单独施用Debio 1143或抗PD-1或联合施用持续4周，并且每周通过病毒RNA的qPCR检测确定病毒血滴度。黑色箭头表示治疗期。显示平均值。N＝8只小鼠/组。
图22：实施例4中描述的HIV-1感染的人源化BLT小鼠的功效研究结果的图示，其中在感染后12周开始单独施用Debio 1143或抗PD-1或联合施用持续4周以及每周通过流式细胞术检测PD-1确定的耗尽循环CD8+ T细胞的频率。黑色箭头表示治疗期。显示平均值。N＝8只小鼠/组。
图23：实施例4中描述的HIV-1感染的人源化BLT小鼠的功效研究结果的图示，其中在感染后12周开始单独施用Debio 1143或抗PD-1或联合施用持续4周，并且在治疗完成后2周，通过病毒RNA的qPCR检测确定从各种器官分离的CD4+ T细胞中的病毒滴度。显示平均值。N＝5只小鼠/组。
具体实施方式
5.1.定义
提供以下定义以帮助读者。除非另有定义，本文中使用的所有技术术语、符号和其他科学或医学术语或术语旨在具有化学和医学领域的技术人员通常理解的含义。在某些情况下，为了清楚和/或便于参考，本文定义了具有普遍理解含义的术语，并且在本文中包含这样的定义不应被解释为代表与本领域通常理解的术语定义的实质性差异。
对互联网页面的引用是指对2018年11月26日可访问的版本中指定页面的引用。在维基百科页面的情况下，这些页面的内容可以通过修订历史功能获取，否则可以通过互联网档案馆如回溯机(可在https://archive.org/web/下访问)等获取。
在某些实施方式中，术语“约”是指与所述值的±10％的偏差。当“约”一词在本文中用于指代数字时，应当理解的是，本发明的又一实施方式包括未因“约”一词的存在而修改的数字。
对患者“施用”或“施以”药物(以及该短语的语法等价物)是指直接施用，可以是医疗专业人员施用于患者，也可以是自我施用，和/或间接施用，这可能是开药的行为。例如，指导患者自行施用或为患者提供药物处方的医生正在向患者施用药物。
“抗体”是一种免疫球蛋白分子，能够通过位于免疫球蛋白分子可变区的至少一个抗原识别位点特异性结合靶标，如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文所用，术语“抗体”不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，而且除非另有说明，还包括与完整抗体竞争特异性结合包含抗原-结合部分的融合蛋白(例如，抗体-药物缀合物)的任何抗原结合片段或其抗体片段、包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型、具有多表位特异性的抗体组合物和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。然而，完整的(即非片段化的)单克隆抗体是优选的。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中分泌的Ig与某些细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)结合，使这些细胞毒性效应细胞与携带抗原的靶细胞特异性结合，随后用细胞毒素杀死靶细胞。抗体武装细胞毒性细胞，且是通过这种机制杀死靶细胞所必需的。介导ADCC的主要细胞，NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch&Kinet,1991.Annu Rev Immunol 9：457-92，第464页的表3总结了造血细胞上的Fc表达。
术语“抗原结合片段”是指与抗原结合的完整抗体的一部分。抗原结合片段可包含完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、和Fv片段，线性抗体和单链抗体。
上文发明内容中指出，本发明提供了联合疗法、组合产品及其在治疗有需要的患者的方法中的用途。然而，为了简单和简要，本公开有时仅指本发明的联合疗法，或仅指本发明的组合产品等。除非上下文另有说明，所有此类指示应理解为对本发明所有方面的引用(即联合疗法、组合产品、使用组合产品的治疗方法以及本发明的任何其他用途或应用，如本文所述)。
术语“组合产品”可以指(i)由物理、化学或以其他方式组合或混合并作为单一实体生产的两种以上受解调组分组成的产品；(ii)两个以上单独的产品包装在一个单一的包装中或作为一个单元，由药品和器械产品、器械和生物制品、或生物和药品产品组成；(iii)单独包装的药物、器械或生物制品，根据其研究计划或拟议标签，仅旨在与经批准的单独指定的药物、器械或生物制品一起使用，两者都需要实现预期用途、适应症或效果，并且在批准拟议产品后，批准产品的标签需要更改，例如，以反映预期用途、剂型、强度、施用途径的变化或剂量的显着变化；或者(iv)任何单独包装的研究药物、器械或生物制品，根据其拟议标签，仅可与另一种单独指定的研究药物、器械或生物制品一起使用，两者都需要实现预期用途、适应症或效果。
如本文所用，“联合疗法”、“联合治疗”、“与…组合”、“与…一起”或“与…结合”表示具有至少两种不同治疗方式(即化合物、组分、靶向剂或治疗剂)的任何形式的同时、平行、同时、连续或间歇性治疗。因此，该术语是指在向受试者施用另一种治疗方式之前、期间或之后施用一种治疗方式。组合的方式可以以任何顺序施用。治疗活性形式一起(例如，同时在相同或分开的组合物、制剂或单位剂型中)或分开(例如，在同一天或不同天，并以任何顺序根据单独的组合物、制剂或单位剂型的适当给药方案)以由医疗照顾者或根据监管机构所开具的方式和给药方案施用。一般而言，每种治疗方式将以针对该治疗方式确定的剂量和/或时间表施用。可选地，可以在联合疗法中使用三种以上方式。此外，本文提供的联合疗法可以与其他类型的治疗结合使用。以下公开有时依赖于诸如“本发明的联合疗法”等表述。除非上下文另有说明，否则这些指示应理解为不仅指代所描述的联合疗法，而且还应理解为用于此目的的材料上下文中各自特征的公开，即以特定方式使用的相应化合物，用于特定用途的所得药物组合，包括用于特定用途的试剂盒和组合产品。当然，对“本发明的联合疗法”的描述也应理解为对有需要的HIV患者的治疗方法的描述。
术语“CTLA-4拮抗剂”或“CTLA-4抑制剂”是指能够与CTLA-4结合从而阻断或至少降低CTLA-4的功能的物质。这可以是抗体(即抗CTLA-4抗体)或小分子。“抗CTLA-4抗体”是指与人CTLA-4结合从而破坏CTLA-4与人B7受体的相互作用的抗体或其抗原结合片段。与B7结合后，CTLA4可抑制小鼠和人T细胞的活化，对T细胞的活化起负调节作用。如本文所用，除非特别说明，所述B7是指B7-1和/或B7-2；并且它们的特定蛋白质序列是指本领域已知的序列。可参考文献或GenBank中公开的序列，例如B7-1(CD80，NCBI Gene ID：941)、B7-2(CD86，NCBI Gene ID：942)。
术语“Debio 1143”、“AT-406”或“SM-406”是指(5S,8S,10aR)-N-二苯甲基-5-((S)-2-(甲氨基)丙酰氨基)-3-(3-甲基丁酰基)-6-氧代十氢吡咯并[1,2-a][1,5]二氮芳辛-8-甲酰胺(CAS注册号：1071992-99-8)和/或其药学上可接受的盐。优选地，Debio 1143的游离碱形式用于本发明的任何方面。其合成之前已有描述(Cai等，2011.J Med Chem.54(8)：2714-26和WO 2008/128171-实施例16)。Debio 1143的类似物可例如被认为是在Debio1143中存在的相同位置中含有至少70％、优选80％、更优选至少90％的原子和/或显示出至少70％、优选80％、更优选至少90％的Debio 1143对cIAP1的效果的化合物。这意味着在Debio 1143的类似物中保守取代是可能的。同样，可以纳入其他取代基，只要其对上述活动没有显着影响。
“剂”和“剂量”是指用于施用的特定量的活性剂或治疗剂。此类量包含在“剂型”中，“剂型”是指适合作为人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的物理离散单位，每个单位包含经计算以产生所需起效、耐受性和治疗效果的预定量的活性剂，其与一种或多种合适的药物赋形剂(如载体)结合。
“HIV”是人类免疫缺陷病毒的缩写。当前文本使用首字母缩略词HIV在其既定含义的意义上，例如维基百科条目“HIV”，2018年11月1日版本，或者S.Lucas和A.M.Nelson描述于：J Pathol.2015年1月；235(2)：229-41.doi：10.1002/path.4449。在本申请的优选实施方式中，对HIV的指代应理解为对HIV-1的指代，例如，J.Hemelaar，Trends Mol Med.,2012年3月；18(3)：182-92.doi：10.1016/j.molmed.2011.12.001(Epub2012年1月11日)中所讨论，以及A.Engelman和P.Cherepanov，Nat Rev Microbiol.，2012年3月16日；10(4)：279-90.doi：10.1038/nrmicro2747中所讨论。
“HIV潜伏期”的特征是在接受抗逆转录病毒疗法(ART)治疗的患者中，尽管进行了治疗，病毒库仍然存在，并在ART中断时导致病毒迅速反弹。HIV潜伏期是由于HIV RNA基因组的DNA拷贝整合到宿主细胞DNA基因组中。在这个阶段，细胞通常对ART不敏感。HIV潜伏期在例如M.S.Dahabieh等，Annu Rev Med.2015；66：407-21.doi：10.1146/annurev-med-092112-152941以及其中引用的参考文献中有讨论。
“人抗体”是具有与由人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列和/或已经使用如本文公开的用于制备人抗体的任何技术制备的抗体。人抗体的这一定义特别排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库(参见例如Hoogenboom&Winter，1991.JMB.227：381；Marks等，1991.JMB.222：581)。也可用于制备人单克隆抗体的方法描述于Cole等，1985.Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy，Alan R.Liss，page 77；Boerner等，1991.J Immunol.147(l)：86；vanDijk&van de Winkel，2001.Curr Opin Pharmacol.5：368)。可以通过将抗原施用于转基因动物来制备人抗体，该转基因动物已被修饰以产生此类抗体以响应抗原性挑战但其内源基因座已被禁用，例如免疫异种体(参见例如美国专利号6,075,181；和6,150,584关于XENOMOUSE技术)。也参见，例如，Li等，2006.PNAS USA.103：3557，关于通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。
术语“IAP抑制剂”在本文中用于表征能够抑制、阻断、减慢或降低IAP蛋白功能的物质。IAP蛋白是调节(抑制)细胞凋亡的蛋白质。它们的特征在于存在至少一个BIR结构域，例如XIAP、cIAP1、cIAP2、Cp-IAP、NAIP和Op-IAP。IAP蛋白例如在J.Silke和P.Meier，ColdSpring Harb Perspect Biol 2013；5：a008730和其中引用的参考文献中所描述。本发明意义上的IAP抑制剂是能够抑制这些IAP蛋白中的至少一种、优选两种以上IAP蛋白并且最优选为cIAP1和/或cIAP2的物质。Smac(Diablo)蛋白是IAP蛋白的内源性拮抗剂。IAP抑制剂因此在某些情况下被称为Smac模拟物。此类Smac模拟物旨在包含在术语“IAP抑制剂”中。然而，本发明也可以用不是Smac模拟物的IAP抑制剂成功地实施，例如，因为它们的结构明显不同。IAP抑制剂与IAP蛋白的BIR3结构域之间存在相互作用。为了本发明的目的，特别感兴趣的是IAP抑制剂与cIAP1和/或cIAP2之间的相互作用导致这些蛋白质的降解和随后的NF-κB调节。实施例#6中给出了一个实例。在某些实施方式中，该效果可用于测试化合物的IAP抑制活性：用测试化合物重现实施例#6的实验。效果是用合适的技术确定的，包括但不限于在体外对用化合物处理的细胞进行Western印迹分析。对于IAP抑制剂，应在低于10μM、优选<1μM的浓度下观察到对cIAP1的影响。对cIAP1的影响可以例如通过Cai等，2011.J MedChem.54(8)：2714-26的图6的基于Western印迹的降解实验来确定。或者，当进行基于上述Cai等的公开的图4的实验时，IAP抑制剂可以被鉴定为对XIAP BIR3、cIAP1 BIR3和/或cIAP2 BIR3具有<1μM的Ki的化合物。
表述“免疫检查点抑制剂”(ICI)用于指称一类干扰免疫系统检查点机制的物质。这是一种调节针对自身材料的免疫反应的机制。在治疗、尤其是癌症治疗的背景下，免疫检查点抑制剂是一类相对较新的活性化合物，可放大T细胞介导的针对癌细胞的免疫反应。免疫系统依靠T细胞来对抗癌症。这些特化细胞非常强大，有可能损害健康细胞。T细胞活性是通过“免疫检查点”控制的，它可以是阳性的也可以是阴性的。阳性免疫检查点帮助T细胞继续工作，而阴性免疫检查点(例如，CTLA-4和PD-1)则关闭T细胞。在本发明的上下文中，抑制性检查点分子和刺激性检查点分子都是感兴趣的靶标。抑制性检查点分子和刺激性检查点分子例如https://en.wikipedia.org/wiki/Immune_checkpoint中所定义和描述。抑制性检查点分子包括程序性死亡1受体(PD-1)及其配体(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)、淋巴细胞激活基因3(LAG-3)、T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(Tim-3)及其任意组合。这种抑制性检查点分子的抑制剂包括抗体以及小分子。N.Villanueva和L.Bazhenova在Ther Adv Respir Dis.2018年1-12月；12：1753466618794133(2018年9月14日在线发表)doi：[10.1177/1753466618794133]及其中引用文献中描述和讨论了此类免疫检查点抑制剂。免疫检查点抑制剂应表现出与其靶标的高亲和力结合。亲和力应理解为ICI的单个结合位点与其结合结合伴侣之间非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对成员(例如抗体和抗原)之间1：1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)表示，它是解离和结合速率常数(分别为koff和kon)的比率。因此，等效亲和力可以包括不同的速率常数，只要速率常数的比率保持相同。亲和力可以通过本领域已知的常用方法测量，包括本文所述的那些，包括表面等离子体共振(SPR，例如在BIAcore仪器上分析)(Liljeblad等，Glyco J 17，323-329(2000))，和传统结合测定(Heeley，Endocr Res 28，217-229(2002)。适用于本发明的ICI可具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM的解离常数(Kd)(例如10-7M以下，例如10-7M至10-13M，例如10-9M至10-13M)，更优选具有更小的解离常数。
“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。在某些实施方式中，基本的4链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本异源四聚体单元以及称为J链的额外多肽组成，并包含10个抗原结合位点，而IgA抗体包含2-5个基本4链单元，可聚合形成与J链结合的多价组合体。在IgG的情况下，4链单元通常约为150,000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键与一条H链连接，而两条H链通过一个或多个二硫键相互连接，具体取决于H链的同种型。每条H和L链还具有规则间隔的链内二硫键。每条H链在N端都有一个可变域(VH)，随后是三个恒定域(CH)，分别用于α和γ链，以及四个CH域用于μ和ε同种型。每条L链的N端都有一个可变域(VL)，其另一端是一个恒定域。VL与VH对齐，CL与重链的第一个恒定域(CH1)对齐。据信特定氨基酸残基在轻链和重链可变域之间形成界面。VH和VL的配对一起形成单个抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和特性，参见例如Basic and Clinical Immunology，第8版，Sties等(编)，Appleton&Lange，Norwalk，CT，1994，第71页，第6章。根据它们恒定域的氨基酸序列，可以将任何脊椎动物物种的L链归为两种明显不同的类型之一，称为κ和λ。根据其重链(CH)恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被分配到不同的类别或同种型。在人血清中发现了五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，它们的重链分别命名为α、δ、ε、γ和μ。γ和α类根据CH序列和功能的相对较小差异进一步分为亚类，例如，人类表达以下亚类：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。
术语“个体”、“患者”或“受试者”在本申请中可互换使用，并不意味着以任何方式进行限制。“个体”、“患者”或“受试者”可以是任何年龄、性别和身体状况。优选地，本发明的治疗方法和组合产品用于人类患者。换而言之，个体、患者或受试者优选是人。
“输入”或“输注”是指为了治疗目的通过静脉将含药物的溶液引入体内。通常，这是通过静脉输液袋实现的。
本发明上下文中的“有需要的患者”是感染了HIV的患者。在某些实施方式中，它是感染了HIV、优选HIV-1的患者，其特征在于HIV感染的CD4+ T细胞表现出在其表面的PD-1、TIGIT、LAG-3(如T.A.Rasmussen，Curr Opin HIV AIDS.2017年1月；12(1)：96–104.doi：10.1097/COH.0000000000000328，和R.Fromentin等，PLOS Pathogens，2016年7月14日，https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1005761中所讨论)、CTLA-4(如F.Wightman等，Curr Opin HIV AIDS.2017年1月；12(1)：96–104.doi：10.1097/COH.0000000000000328中所讨论)和/或其他免疫检查点分子水平升高。此外，或可选地，患者的特征可能在于患者CD8+ T细胞表面的Tim-3水平增加(如R.B.Jones等，J.Exp.Med.第205卷第12期2763-2779，www.jem.org/cgi/doi/10.1084/jem.20081398中所述)。
术语“PD-1”或“PD-1受体”是指程序性死亡-1蛋白，一种T细胞协同抑制剂，也称为CD279。人全长PD-1蛋白的氨基酸序列在例如GenBank登录号NP_005009.2中列出。PD-1是一种288个氨基酸的蛋白质，具有类似IgV的胞外N端结构域、跨膜结构域和包含免疫受体酪氨酸抑制(ITIM)基序和免疫受体酪氨酸开关(ITSM)基序的胞内结构域(Chattopadhyay等，Immunol Rev，2009，229(1)：356-386)。术语“PD-1”包括重组PD-1或其片段，或其变体。PD-1受体有两个配体，PD-配体-1(PD-L1)和PD-配体-2(PD-L2)。
术语“PD-1抑制剂”是指能够与PD-1受体结合从而其免疫调节功能被完全阻断或至少抑制到足以使该物质作为治疗剂是有用的程度的物质。为此目的，PD-1抑制剂应与其靶标具有结合亲和力，如上文关于免疫检查点抑制剂所定义。PD-1抑制剂可以是抗体(抗PD-1抗体)或小分子。术语“抗PD-1抗体”或“结合PD-1的抗体”是指能够以足够的亲和力特异性结合PD-1的抗体，使得该抗体作为靶向PD-1的治疗剂是有用的，或以足够的亲和力结合PD-1的其抗原结合片段，使得该片段作为治疗剂是有用的。人PD-1氨基酸序列可见于NCBI Locus No.：NP 005009。
术语“PD-L1抑制剂”是指能够与PD-L1配体结合从而其免疫调节功能被完全阻断或至少抑制到足以使该物质作为治疗剂是有用的程度的物质。为此目的，PD-L1抑制剂应与其目标具有结合亲和力，如上文关于免疫检查点抑制剂所定义。PD-L1抑制剂可以是抗体(抗PD-L1抗体)或小分子。术语“抗PD-L1抗体”或“与PD-L1结合的抗体”是指能够以足够的亲和力特异性结合PD-L1从而该抗体作为靶向PD-L1的治疗剂是有用的，或其与PD-L1结合的抗原结合片段。人PD-L1氨基酸序列可见于NCBI Locus No.：NP_054862。
术语“药学上可接受的佐剂”是指增强身体对抗原的免疫反应的任何和所有物质。药学上可接受的佐剂的非限制性实例是：明矾、弗氏不完全佐剂、MF59、dsRNA的合成类似物如poly(I:C)、细菌LPS、细菌鞭毛蛋白、咪唑喹啉、含有特定CpG基序的寡脱氧核苷酸、细菌细胞壁片段如胞壁酰二肽和
Figure BDA0003172952420000131
如本文所用，“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的稀释剂”是指与药物施用相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂。此类介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域公知的。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且不限制本发明的范围，其包括：额外的缓冲剂；防腐剂；共溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；螯合剂，如EDTA；金属络合物(如锌-蛋白质络合物)；可生物降解聚合物，如聚酯；成盐反离子，如钠、多元糖醇；氨基酸，如丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸和苏氨酸；有机糖或糖醇，如乳糖醇、水苏糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌糖、肌醇、半乳糖、半乳糖醇、甘油、环醇类(例如肌醇)、聚乙二醇；含硫还原剂，如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、巯基乙酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油、硫代硫酸钠；低分子蛋白质，如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或其他免疫球蛋白；以及亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮。其他药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，如Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编(1980)中所述的那些也可以包含在本文所述的药物组合物中，条件是它们不会不利地影响药物组合物的所需特性。包含Debio 1143的药物组合物优选包含淀粉1500(参考质量标准：Ph.Eur.01/2010：1267)作为药学上可接受的赋形剂。
术语“药学上可接受的盐”旨在包括用酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于在本文所述的化合物上出现的特定取代基。当本发明的化合物含有酸性官能团时，可以通过使此类化合物的中性形式与足量的所需碱接触，无论是纯的还是在合适的惰性溶剂中，获得碱加成盐。源自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、三价锰、二价锰、钾、钠、锌等。源自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，其包括取代胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、氨基甲酸酯、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物含有碱性官能团时，酸加成盐可以通过使这些化合物的中性形式与足量的所需酸接触，无论是纯的还是在合适的惰性溶剂中。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸(如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等)的那些，以及衍生自相对无毒的有机酸(如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等)的盐。还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及有机酸(如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等)的盐(参见，例如，Berge，S.M.等，“Pharmaceutical Salts”，Journal ofPharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些特定化合物同时包含碱性和酸性官能团，这使得化合物能够转化为碱或酸加成盐。本申请中对活性物质包括但不限于IAP抑制剂和免疫检查点抑制剂等的所有指代，均应理解为也指代相应的特定活性物质的药学上可接受的盐。
表述“CD8+ T细胞的刺激”在本文中用于表征其中CD8+效应免疫细胞的活性增加从而它们消除受感染细胞的能力增加的效果。
术语“治疗有效量”是指Debio 1143和/或其抗体或其抗原结合片段在HIV感染的治疗中具有治疗作用的量。特别是，治疗有效量的药物或药物组合导致逆转HIV潜伏期和/或杀死HIV感染细胞，并且优选这两种治疗效果。
本申请中使用的术语“治疗”和“疗法”是指一组卫生、药理学、手术和/或物理手段，其目的是治愈和/或减轻疾病和/或症状，目的是治疗健康问题。术语“治疗”和“疗法”包括预防和治疗方法，因为两者都涉及维持和/或重建个体或动物的健康。不管症状、疾病和残疾的起源如何，施用合适的药物以减轻和/或治愈健康问题应被解释为本申请上下文中的一种治疗或疗法。
如本文所用，“单位剂型”是指适用于待治疗受试者的物理上离散的治疗制剂单位。然而，应当理解的是，本发明组合物的每日总用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何特定受试者或生物体的特定有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用特定活性剂的活性；所用特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间和所用特定活性剂的排泄率；治疗持续时间；药物和/或与所用特定化合物组合或同时使用的额外疗法，以及医学领域众所周知的类似因素。
抗体的“可变区”或“可变域”是指抗体重链或轻链的氨基末端域。重链和轻链的可变域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是抗体中变化最大的部分(相对于同一类别的其他抗体)并包含抗原结合位点。
5.2.概述
本发明提供了用于治疗HIV感染的联合疗法，其包括治疗方法以及用于该用途的药物、药物组合和试剂盒。这种联合疗法依赖于使用至少一种IAP抑制剂和至少一种免疫检查点抑制剂。与已建立的ART疗法不同，本发明旨在治愈HIV或至少减少患者的潜在HIV感染细胞负担。为了实现该目标，本发明提供了能够实现特别有益的治疗效果的药物组合：
1.逆转HIV潜伏期：本申请中的数据表明IAP抑制剂作为单一试剂再激活细胞系和HIV感染患者血液中的HIV转录。
2.增强的免疫反应：本申请中的数据表明，IAP抑制剂即使作为单一试剂使用，也能在体外刺激CD8+ T细胞以消除HIV感染的CD4+ T细胞。
3.增强的免疫反应：目前的数据表明，HIV感染会诱导CD8+ T细胞中耗竭标志物PD-1的表达，从而阻碍免疫系统消除感染的能力。至少一种免疫检查点抑制剂的共同施用再激活耗尽的CD8+ T细胞。
4.增强的免疫反应：IAP抑制剂和ICI具有对免疫系统的互补机制，导致免疫反应增强。目前的数据表明，将IAP抑制剂与免疫检查点抑制剂组合使用，可通过再激活潜伏的HIV和增强CD8+ T细胞的抗HIV免疫反应来增强效果。
5.可接受和/或可控制的毒性：本发明的联合疗法以可接受和/或可控制的毒性水平实现其效果。
6.增强逆转HIV潜伏期：作为另选，如果逆转HIV潜伏期的功效要进一步增加，本发明允许通过共同施用已知潜伏期逆转剂来这样做。目前的数据证实IAP抑制剂与第二种潜伏期逆转剂的组合导致潜伏期逆转效应的进一步增强。
因此，本发明依赖于特定药物组合的使用，该组合允许实现个体治疗效果的特别有利的组合，这反过来导致提高的治愈HIV的功效。
本发明的联合疗法可以有利地与已建立的ART疗法联合，从而进一步增强治疗效果。这可以包括本发明的联合疗法与ART中使用的任何一种单独药物化合物的组合，并且优选还包括本发明的联合疗法与ART中使用的任何一种药物组合的组合。
5.3.IAP抑制剂
为了实施本发明的目的，可以使用能够充当IAP抑制剂的任何化合物。这可能包括单价IAP拮抗剂，如Debio 1143(Debiopharm，CAS号1071992-99-8)，LCL-161(Novartis，CAS号：1005342-46-0)和CUDC 427/GDC 0917(Curis/Genentec，CAS号1446182-94-0)。或者，可以使用二价IAP拮抗剂，如TL-32711/Birinapant(Medivir，CAS号：1260251-31-7)，AZD5582(AstraZeneca；CAS号1258392-53-8)和APG-1387(Ascentage Pharma，SM-1387，CAS号1570231-89-8)。其他有用的IAP抑制剂包括ASTX660(Astex，CAS号1799328-86-1)，SBP-0636457(Sandford Burnham Prebys Medical Discovery Institute，CAS号1422180-49-1)和JP1201(Joyant Pharmaceuticals)，其结构在以下文献的图5和图6中显示：Finlay D，Teriete P，Vamos M等“Inducing death in tumor cells：roles of the inhibitor ofapoptosis proteins”[第1版；审稿人：3个同意]。F1000Research 2017，6(F1000 FacultyRev)：587(https://doi.org/10.12688/f1000research.10625.1)。IAP拮抗剂也适用，无论它们是单价的还是二价的。该组包括Boehringer Ingelheim开发的IAP抑制剂(参见WO2013/127729、WO 2015/025018、WO 2015/025019、WO 2016/023858、或WO 2018/178250)，特别是称为BI 891065的IAP抑制剂。当然，在本发明中也可以使用两种以上不同IAP抑制剂的组合。在这种情况下，每个IAP抑制剂可以独立地选自如本文所述的可用IAP抑制剂。
其他合适的IAP抑制剂描述于例如WO 2008/128171 A、WO 2014/031487 A、WO2011/050068A、WO 2008/014240 A、WO 2007/131366 A、WO 2007/130626 A、WO 2011/057099、WO 2009/140447、EP 2698158、WO 2008/014229 A、WO 2017/117684 A1、WO 2016/079527 A1和WO 2018/178250 A1，以及WO 2017/143449 A的表1中，这些化合物被称为Smac模拟化合物。另一种合适的IAP抑制剂是如WO 2010/142994 A1所述的AZD5582(AstraZeneca，CAS号1258392-53-8)。文献中已知的所有此类IAP抑制剂均可用于本发明。
T.W.Owens等在J Carcinog Mutagen.2013年4月27日；增刊14：S14-004(2013年5月27日在线发布.doi：[10.4172/2157-2518.S14-004])的文章也提供了关于合适的IAP抑制剂的信息，尤其是在其表2中和其中引用的文献中。
当然也可以使用两种以上IAP抑制剂的组合。在这种情况下，可以独立地选择每个IAP抑制剂。
5.4.免疫检查点抑制剂
在本发明中，可以使用任何能够抑制免疫检查点PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT、LAG-3和Tim-3的免疫调节作用的免疫检查点抑制剂。
合适的免疫检查点抑制剂包括WO 2017/143449 A1表4中列出的那些和/或WO2016/054555 A2中描述的免疫检查点分子。本发明还考虑了在DNA或RNA水平上的免疫检查点抑制，如WO 2016/054555 A2的第50页所述。M.J.Pianko在Stem Cell Investig.2017；4：32，doi：[10.21037/sci.2017.03.04]中也讨论了合适的免疫检查点抑制剂。从本文引用的文献(和/或其他文献)中已知为上述免疫检查点分子的抑制剂的所有免疫检查点抑制剂均可用于本发明。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂，尤其是抗PD-1抗体。在某些实施方式中，结合PD-1的抗体或其抗原结合片段包括但不限于派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)和匹地利珠单抗(pidilizumab)。在某些实施方式中，结合PD-1的抗体或其抗原结合片段与派姆单抗、纳武单抗或匹地利珠单抗高度相似，并且与特定抗PD-1抗体相比在安全性和有效性方面没有临床意义的差异。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含有ADCC感受态的Fc区。特别是，抗PD-1抗体是指阻断或抑制在HIV感染细胞上表达的PD-1与PD-L1结合的抗体。在治疗人类受试者的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，抗PD-1抗体特异性结合人PD-1并阻断或抑制人PD-L1与人PD-1的结合。抗体可以是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体和/或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在某些实施方式中，人恒定区选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选实施方式中，人恒定区是IgGl或IgG4恒定区。在某些实施方式中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。此类抑制剂例如在以下中进行了描述：WO 2016/054555 A；O.Hamid等，New England Journalof Medicine 2013，369(2)：134-44；WO 2009/114335、US 8,609,089、US 2010/028330、US2012/114649、US 8,354,509、US 7,521,051、US 8,008,449、WO 2018/183408 A1和WO2008/156712。抗PD-1抗体组特别包括派姆单抗、匹地利珠单抗、AMP514(Medi0680，Amplimmune)、REGN2810(Regeneron)和纳武单抗。它还包括例如在WO 2010/027827和WO 2011/066342中描述的PD-1结合性融合蛋白。抗PD-1融合蛋白的一个实例是AMP-224(MedImmune，GSK)，它是一种重组B7-DC Fc融合蛋白，由PD-1配体程序性细胞死亡配体2(PD-L2,B7-DC)的胞外域和人免疫球蛋白(Ig)G1的Fc区组成(F.Smothers等，Annals of Oncology，第24卷，增刊1，2013年3月1日，第17页，https://doi.org/10.1093/annonc/mdt042.6)。另一种可能性是使用双特异性抗体，例如在US 2018/0326054中描述的。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂选自PD-L1抑制剂，尤其是抗PD-L1抗体及其抗原结合片段。在某些实施方式中，结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段包括但不限于阿维单抗(avelumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)、得瓦鲁单抗(durvalumab)、CX-072(CytomX Therapeutics)、BMS-936559(MDX-1105，BMS)。在某些实施方式中，抗PD-L1抗体是阿维单抗(以商品名
Figure BDA0003172952420000181
在美国销售)。阿维单抗在国际专利公开号WO 2013/079174中公开，其公开内容通过引用以其整体并入本文。阿维单抗(以前称为MSB0010718C)是免疫球蛋白(Ig)G1同种型的全人单克隆抗体(参见例如WO 2013/079174)。阿维单抗选择性地结合PD-L1并竞争性地阻断其与PD-1的相互作用。阿维单抗的作用机制依赖于PD-1/PD-L1相互作用的抑制和基于自然杀伤(NK)的ADCC(参见例如，Boyerinas等，2015.CancerImmunol Res.3：1148)。在某些实施方式中，结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段与阿维单抗、阿特朱单抗、得瓦鲁单抗、CX-072(CytomX Therapeutics)、或BMS-936559(MDX-1105，BMS)高度相似，并且没有与特定的抗PD-L1抗体相比，在安全性和有效性方面具有临床意义的差异。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含ADCC感受态的Fc区。特别是，抗PD-L1抗体是指阻断或抑制在HIV感染细胞上表达的PD-1与PD-L1结合的抗体。在治疗人类受试者的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，抗PD-L1抗体特异性结合人PD-L1并阻断或抑制人PD-L1与人PD-1的结合。抗体可以是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体和/或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在某些实施方式中，人恒定区选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选实施方式中，人恒定区是IgGl或IgG4恒定区。在某些实施方式中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。结合人PD-L1，并且在本发明的治疗方法、药物和用途中是有用的单克隆抗体的实例描述于WO 2007/005874、WO 2010/036959、WO 2010/077634、WO 2010/089411、WO 2013/019906、WO 2013/079174、WO 2014/100079、WO 2015/061668、WO 2018/183408 A1和美国专利号8,552,154、8,779,108和8,383,796。用作本发明的治疗方法、药物和用途中的PD-L1抗体的特定抗人PD-L1单克隆抗体包括，例如但不限于，阿维单抗(MSB0010718C)、MPDL3280A(一种IgG1工程化的抗PD-L1抗体)、BMS-936559(一种全人源、抗PD-L1、IgG4单克隆抗体)、MEDI4736(一种工程化的IgG1κ单克隆抗体，在Fc域中具有三重突变，以消除抗体依赖性的细胞介导的细胞毒活性)，以及分别包含WO 2013/019906的SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:21的重链和轻链可变区的抗体。在某些实施方式中，PD-L1抑制剂可以是小分子，如CA-170(AUPM-170，Curis，Aurigene，例如描述于，J.J.Lee等，Journal of Clinical Oncology 35，增刊15，DOI：10.1200/JCO.2017.35.15_suppl.TPS3099)。可用于本发明的其他PD-1/PD-L1相互作用的小分子抑制剂描述于WO2018/195321 A。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂选自CTLA-4抑制剂，尤其是抗CTLA-4抗体及其抗原结合片段。在某些实施方式中，结合CTLA-4的抗体或其抗原结合片段包括但不限于人单克隆抗体10D1，现称为伊匹单抗，并以YervoyTM销售，如美国专利号6,984,720中所公开。在另一实施方式中，抗CTLA-4抗体是曲美木单抗(CP-675,206)，其是在US 2012/263677、WO 2012/122444或2007/113648A2中描述的IgG2单克隆抗体。在本发明的治疗方法、组合物和用途的其他实施方式中，抗CTLA4抗体、其抗原结合片段、其组合或变体如WO 2018/183408 A1和WO 2018/035710 A1中所述。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂选自具有Ig和ITIM结构域(TIGIT)的T细胞免疫受体抑制剂，尤其是抗TIGIT抗体及其抗原结合片段。在某些实施方式中，结合TIGIT的抗体或其抗原结合片段包括但不限于OMP-313M32(mAb，OncoMed)。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂选自淋巴细胞活化基因3(LAG-3)抑制剂，尤其是抗LAG-3抗体及其抗原结合片段。在某些实施方式中，结合LAG-3的抗体或其抗原结合片段包括但不限于BMS-986016/Relatlimab(mAb Bristol Myers)、LAG525(mAb，Novartis)、MGD013(mAb，Macro-genics)、REGN3767(mAb，Regeneron Pharma)、TSR-033(mAb，Tesaro)、和INCAGN022385(mAb，Incyte Corp.)。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂选自T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(Tim-3)的抑制剂，尤其是抗Tim-3抗体及其抗原结合片段。在某些实施方式中，结合Tim-3的抗体或其抗原结合片段包括但不限于LY3321367(mAb，Eli Lilly andCompany)、MBG453(mAb，Novartis)、和TSR-022(mAb，Tesaro)。
当然也可以使用两种以上免疫检查点抑制剂的组合。在这种情况下，可以独立选择每种免疫检查点抑制剂。此类选择尤其应涉及针对两种以上不同靶标免疫检查点分子的两种以上免疫检查点抑制剂。
5.5.联合疗法
IAP抑制剂和免疫检查点抑制剂的组合
本发明依赖于至少一种IAP抑制剂与至少一种对PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT、LAG-3和/或Tim-3有活性的免疫检查点抑制剂的组合的应用。在本发明的某些有利实施方式中，本发明的联合疗法至少包括以下药物组合：
(a)Debio 1143或Debio-1143类似物与抗PD-1抗体组合；
(b)Debio 1143或Debio-1143类似物与抗PD-L1抗体组合；
(c)Debio 1143或Debio-1143类似物与抗CTLA-4抗体组合；
(d)Debio 1143或Debio-1143类似物与抗TIGIT抗体组合；
(e)Debio 1143或Debio-1143类似物与抗LAG-3抗体组合；
(f)Debio 1143或Debio-1143类似物与抗Tim-3抗体组合；
(g)Debio 1143与抗PD-1抗体组合；
(h)Debio 1143与抗PD-L1抗体组合；
(i)Debio 1143与抗CTLA-4抗体组合；
(j)Debio 1143与抗TIGIT抗体组合；
(k)Debio 1143与抗LAG-3抗体组合；
(l)Debio 1143与抗Tim-3抗体组合；
(m)Debio 1143与选自派姆单抗、纳武单抗、AMP514(Medi0680，Amplimmune)、REGN2810(Regeneron)、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗和匹地利珠单抗的抗PD-1抗体组合；
(n)Debio 1143与选自阿维单抗、阿特朱单抗、得瓦鲁单抗、CX-072(CytomXTherapeutics)、BMS-936559(MDX-1105，BMS)的抗PD-L1抗体组合；
(o)Debio 1143与选自伊匹单抗和曲美木单抗的抗CTLA-4抗体组合；
(p)Debio 1143与抗TIGIT(为OMP-313M32(mAb，OncoMed))组合；
(q)Debio 1143与选自BMS-986016(mAb Bristol Myers)、LAG525(mAb，Novartis)、MGD013(mAb，Macro-genics)、REGN3767(mAb，Regeneron Pharma)、TSR-033(mAb，Tesaro)和INCAGN022385(mAb，Incyte Corp.)的抗LAG-3抗体组合；
(r)Debio 1143与选自LY3321367(mAb，Eli Lilly and Company)、MBG453(mAb，Novartis)和TSR-022(mAb，Tesaro)的抗Tim-3抗体组合；
(s)Debio 1143与OARAC成人和青少年HIV感染者使用抗逆转录病毒药物指南和/或EACS欧洲HIV阳性成人治疗指南中建议或推荐的任何其他疗法组合使用。
其他优选的组合涉及IAP抑制剂LCL 161或其类似物。
(a')LCL 161或LCL 161类似物与抗PD-1抗体组合；
(b')LCL 161或LCL 161类似物与抗PD-L1抗体组合；
(c')LCL 161或LCL 161类似物与抗CTLA-4抗体组合；
(d')LCL 161或LCL 161类似物与抗TIGIT抗体组合；
(e')LCL 161或LCL 161类似物与抗LAG-3抗体组合；
(f')LCL 161或LCL 161类似物或Debio-1143类似物与抗Tim-3抗体组合；
(g')LCL 161与抗PD-1抗体组合；
(h')LCL 161与抗PD-L1抗体组合；
(i')LCL 161与抗CTLA-4抗体组合；
(j')LCL 161与抗TIGIT抗体组合；
(k')LCL 161与抗LAG-3抗体组合；
(l')LCL 161与抗Tim-3抗体组合；
(m')LCL 161与选自派姆单抗、纳武单抗、AMP514(Medi0680，Amplimmune)，REGN2810(Regeneron)、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗和匹地利珠单抗的抗PD-1抗体组合；
(n')LCL 161与选自阿维单抗、阿特朱单抗、得瓦鲁单抗、CX-072(CytomXTherapeutics)、BMS-936559(MDX-1105，BMS)的抗PD-L1抗体组合；
(o')LCL 161与选自伊匹单抗和曲美木单抗的抗CTLA-4抗体组合；
(p')LCL 161与抗TIGIT(为OMP-313M32(mAb，OncoMed))的组合；
(q')LCL 161与选自BMS-986016(mAb Bristol Myers)、LAG525(mAb，Novartis)，MGD013(mAb，Macro-genics)、REGN3767(mAb，Regeneron Pharma)、TSR-033(mAb，Tesaro)和INCAGN022385(mAb，Incyte Corp.)的抗LAG-3抗体组合；
(r')LCL 161与选自LY3321367(mAb，Eli Lilly and Company)、MBG453(mAb，Novartis)和TSR-022(mAb，Tesaro)的抗Tim-3抗体组合；
(s')LCL 161与OARAC成人和青少年HIV感染者使用抗逆转录病毒药物指南和/或EACS欧洲HIV阳性成人治疗指南中建议或推荐的任何其他疗法组合使用。
其他优选的组合涉及IAP抑制剂CUDC-427：
(a”)CUDC-427或CUDC-427类似物与抗PD-1抗体组合；
(b”)CUDC-427或CUDC-427类似物与抗PD-L1抗体组合；
(c”)CUDC-427或CUDC-427类似物与抗CTLA-4抗体组合；
(d”)CUDC-427或CUDC-427类似物与抗TIGIT抗体组合；
(e”)CUDC-427或CUDC-427类似物与抗LAG-3抗体组合；
(f”)CUDC-427或CUDC-427类似物或Debio-1143类似物与抗Tim-3抗体组合；
(g”)CUDC-427与抗PD-1抗体组合；
(h”)CUDC-427与抗PD-L1抗体组合；
(i”)CUDC-427与抗CTLA-4抗体组合；
(j”)CUDC-427与抗TIGIT抗体组合；
(k”)CUDC-427与抗LAG-3抗体组合；
(l”)CUDC-427与抗Tim-3抗体组合；
(m”)CUDC-427与选自派姆单抗、纳武单抗、AMP514(Medi0680，Amplimmune)，REGN2810(Regeneron)、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗和匹地利珠单抗的抗PD-1抗体组合；
(n”)CUDC-427与选自阿维单抗、阿特朱单抗、得瓦鲁单抗、CX-072(CytomXTherapeutics)、BMS-936559(MDX-1105，BMS)的抗PD-L1抗体组合；
(o”)CUDC-427与选自伊匹单抗和曲美木单抗的抗CTLA-4抗体组合；
(p”)CUDC-427与抗TIGIT(为OMP-313M32(mAb，OncoMed))的组合；
(q”)CUDC-427与选自BMS-986016(mAb Bristol Myers)、LAG525(mAb，Novartis)、MGD013(mAb，Macro-genics)、REGN3767(mAb，Regeneron Pharma)，TSR-033(mAb，Tesaro)和INCAGN022385(mAb，Incyte Corp.)的抗LAG-3抗体组合；
(r”)CUDC-427与选自LY3321367(mAb，Eli Lilly and Company)、MBG453(mAb，Novartis)和TSR-022(mAb，Tesaro)的抗Tim-3抗体组合；
(s”)CUDC-427与OARAC成人和青少年HIV感染者使用抗逆转录病毒药物指南和/或EACS欧洲HIV阳性成人治疗指南中建议或推荐的任何其他疗法组合使用。
其他优选的组合涉及IAP抑制剂Birinapant：
(a”')Birinapant或Birinapant类似物与抗PD-1抗体组合；
(b”')Birinapant或Birinapant类似物与抗PD-L1抗体组合；
(c”')Birinapant或Birinapant类似物与抗CTLA-4抗体组合；
(d”')Birinapant或Birinapant类似物与抗TIGIT抗体组合；
(e”')Birinapant或Birinapant类似物与抗LAG-3抗体组合；
(f”')Birinapant或Birinapant类似物或Debio-1143类似物与抗Tim-3抗体组合；
(g”')Birinapant与抗PD-1抗体组合；
(h”')Birinapant与抗PD-L1抗体组合；
(i”')Birinapant与抗CTLA-4抗体组合；
(j”')Birinapant与抗TIGIT抗体组合；
(k”')Birinapant与抗LAG-3抗体组合；
(l”')Birinapant与抗Tim-3抗体组合；
(m”')Birinapant与选自派姆单抗、纳武单抗、AMP514(Medi0680，Amplimmune)，REGN2810(Regeneron)、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗和匹地利珠单抗的抗PD-1抗体组合；
(n”')Birinapant与选自阿维单抗、阿特朱单抗、得瓦鲁单抗、CX-072(CytomXTherapeutics)、BMS-936559(MDX-1105，BMS)的抗PD-L1抗体组合；
(o”')Birinapant与选自伊匹单抗和曲美木单抗的抗CTLA-4抗体组合；
(p”')Birinapant与抗TIGIT(为OMP-313M32(mAb，OncoMed))的组合；
(q”')Birinapant与选自BMS-986016(mAb Bristol Myers)、AG525(mAb，Novartis)、MGD013(mAb，Macro-genics)、REGN3767(mAb，Regeneron Pharma)、TSR-033(mAb，Tesaro)和INCAGN022385(mAb，Incyte Corp.)的抗LAG-3抗体组合；
(r”')Birinapant与选自LY3321367(mAb，Eli Lilly and Company)、MBG453(mAb，Novartis)和TSR-022(mAb，Tesaro)的抗Tim-3抗体组合；
(s”')Birinapant与OARAC成人和青少年HIV感染者使用抗逆转录病毒药物指南和/或EACS欧洲HIV阳性成人治疗指南中建议或推荐的任何其他疗法组合使用。
在项目(a)至(s)下列出的这些特定组合中的任何一种都可以与本文所述的其他药物组合。同样，本文所提供的关于患者、施用方式、剂量等的指示当然也适用于(a)至(s)项下列出的特定组合。
联合疗法的其他组成部分：
如上所述，本发明的联合疗法有利地与指南中的护理治疗标准联合，特别是与完善的抗逆转录病毒疗法(ART)或联合抗逆转录病毒疗法(cART)组合。这些疗法通常涉及施用选自以下类别的两种以上药物：
·核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)，如齐多夫定(Retrovir，AZT)、去羟肌苷(Videx，Videx EC，ddI)、司坦夫定(Zerit，d4T)、拉米夫定(Epivir，3TC)、阿巴卡韦(Ziagen，ABC)，核苷酸类似物替诺福韦、特别是其前药形式(即，替诺福韦酯和替诺福韦艾拉酚胺形式)(Viread，Vemlidy)；
·非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)，如奈韦拉平(Viramune，NVP)、地拉韦定(Rescriptor，DLV)、依非韦伦(Sustiva或Stocrin，EFV，也是Atripla的一部分)、依曲韦林(Intelence，ETR)、利匹韦林(Edurant，RPV，也是Complera或Epivlera的一部分)；
·蛋白酶抑制剂(PI)，如沙奎那韦(Invirase，SQV)、茚地那韦(Crixivan，IDV)、利托那韦(Norvir，RTV)、奈非那韦(Viracept，NFV)、安普那韦(Agenerase，APV)、洛匹那韦/利托那韦(Kaletra或Aluvia，LPV/RTV)、阿扎那韦(Reyataz，ATZ)、膦沙那韦(Lexiva，Telzir，FPV)、替拉那韦(Aptivus，TPV)、地瑞那韦(Prezista，DRV)；
·进入抑制剂，如恩夫韦地(Fuzeon，ENF，T-20)、马拉韦罗(Selzentry或Celsentri，MVC)；
·HIV整合酶抑制剂，如雷特格韦(Isentress，RAL)、埃替格韦(EVG，组合Stribild的一部分)，Dolutegravir(Tivicay，DTG)。
涉及本发明联合疗法的可能治疗方案如下：
1.ART数周/月(例如2周至12个月的任何持续时间)直至低血浆HIV-1水平或血浆HIV-1水平低于临床检测的检出限(例如，<50个拷贝/mL)，继续ART并添加ICI+IAP抑制剂
2.ART数周/月(例如2周至12个月的任何持续时间)直至低血浆HIV-1水平或血浆HIV-1水平低于临床检测的检出限(例如，<50个拷贝/mL)，继续ART并添加ICI+IAP抑制剂+LRA
3.ART数周/月(例如2周至12个月的任何持续时间)直至血浆HIV-1水平低于临床检测的检出限(例如，<50个拷贝/mL)，停止ART并施用ICI+IAP抑制剂
4.ART数周/月(例如2周至12个月的任何持续时间)直至血浆HIV-1水平低于临床检测的检出限(例如，<50个拷贝/mL)，停止ART并施用ICI+IAP抑制剂+LRA
5.ICI+IAP抑制剂(此方案优选用于ART难治性患者)
6.ICI+IAP抑制剂+LRA(其中，LRA可立即添加或在血浆HIV-1水平低于临床检测的检出限后添加(例如，<50个拷贝/mL；该方案也优选用于ART难治性患者)
其中：
ART：现有的抗逆转录病毒疗法
ICI：免疫检查点抑制剂
IAP inh：IAP抑制剂
LRA：潜伏逆转试剂：HDAC抑制剂、PKC激动剂、双硫仑等
在某些实施方式中，本发明的联合疗法除上述基本成分ICI和IAP抑制剂外还包括至少一种NRTI、至少一种NNRTI和可选的其他类别的其他药物。
在某些实施方式中，将IAP抑制剂掺入进一步包含一种或多种上述ART药物的单一单位剂型中。
本发明的联合疗法还可以与以下一种或多种治疗方法组合使用(基于例如如下讨论的信息：G.Darcis等，Trends in Immunology，March 2017，第38卷，第3期http：//dx.doi.org/10.1016/j.it.2016.12.003)：
·PKC调节剂，如苔藓抑素；
·RIG-I-诱导剂，如阿维A(Acitretin)；
·BCL-2抑制剂，如维奈托克、奥巴托克(obatoclax)；
·PI3K/Akt抑制剂，如库潘尼西(BAY 80-6946)、MK-2206、AZD5363、ARQ 751、TAS-117或BAY 1125976；
·HDAC抑制剂，如罗米地辛、伏立诺他、帕比司他；
·组蛋白甲基化抑制剂(HMTi)，如毛壳素和BIX-01294；
·核苷类似物甲基化抑制剂，如5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AzadC，商品名Dacogen)；
·DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)，
·溴结构域和末端外(BET)结构域蛋白(BETi)的抑制剂；
·双硫仑；
·巨大戟醇酯的衍生物，特别是巨大戟醇B和巨大戟醇-3-当归酸酯；
·toll样受体激动剂，如MGN1703、GS-9620和GS-986；
·治疗性疫苗，
·也可以同时施用广泛中和抗体。这些抗体在被动施用时能够广泛中和HIV-1感染的不同毒株，例如如下所讨论的：R.Kumar等，Ther Adv Vaccines Immunother.2018 Oct12；6(4)：61-68.doi：10.1177/2515135518800689。
5.6.药物组合物和试剂盒
本文描述的适合用于本发明的任何药物化合物可以单独施用或作为药物组合物的一部分施用。然而，这种可能性当然仅限于那些情况，其中组合的不同成分适用于相同的施用方式。例如，Debio 1143优选口服施用。将Debio 1143与需要静脉注射的免疫检查点抑制剂联合使用是不合适的。本发明因此特别考虑可以通过相同途径施用的包含如本文所述的药物化合物的药物组合物。这些组合物是例如包含适合于口服施用的IAP抑制剂(如Debio 1143)并且进一步包含一种或多种用于ART治疗的药物化合物的药物组合物。本发明还考虑了用于静脉内施用的药物组合物，其包含免疫检查点抑制剂和适于静脉内施用的IAP抑制剂(如birinapant)。本发明的药物组合物还可包含使用说明书。
鉴于上述施用途径的差异，本发明还提供了试剂盒，其中两种以上药物以两种以上单独的药物组合物提供，每种药物组合物被配制用于不同的施用途径。本发明的试剂盒还可包含使用说明书。
本发明的某些实施方式涉及仅包含两种基本成分中的一种的药物组合物，即仅包含IAP抑制剂或仅包含免疫检查点抑制剂，但其中所述药物组合物必要时提供有用于涉及共同施用另一种基本组分(即免疫检查点抑制剂或IAP抑制剂)的HIV治疗的使用说明书。此类使用说明书可以以印刷的患者传单、产品标签等形式给出，或者通过治疗医师的口头或书面说明给出。授予两种基本组分之一与另一种基本成分组合用于治疗HIV的上市许可也可被视为本发明的实施方式。
在本发明的某些实施方式中，上述药物组合物，即包含两种基本组分的药物组合物或仅包含一种基本组分的药物组合物，可以包含另外的活性剂或活性剂组合。例如，预期提供用于治疗HIV的药物组合物，该治疗与免疫检查点抑制剂组合，其中该药物组合物包含Debio 1143以及一种或多种用于ART的药物。
5.7.HIV治疗
5.7.1.患者特征
原则上，本发明的联合疗法、药物组合和治疗方法适用于感染HIV的任何患者。患者可以是未接受过治疗的或ART后病毒学失败(例如不完全抑制：在之前未接受ART或反弹的人中的HIV病毒载量在开始治疗后6个月时>200个拷贝/mL：例如在先前检测不到HIV-VL的人中确认HIV-VL>50个拷贝/mL)，如欧洲指南所定义。患者也可以正接受ART并保持稳定的低HIV病毒载量。
患者可能患有与其他疾病相关的HIV感染，如癌症(如卡波西肉瘤、淋巴瘤等)或其他合并感染(如结核病、巨细胞病毒、HBV等)。在某些实施方式中，患者是感染了HIV-1的患者。在某些有利的实施方式中，患者的CD4+ T细胞在其表面显示出一种或多种选自PD-1、CTLA-4、TIGIT和/或LAG-3的免疫检查点分子的水平增加。在某些其他有利的实施方式中，患者的CD8+ T细胞在其表面显示出增加的Tim-3免疫检查点分子水平。
本发明的联合疗法可能特别适用于也患有卡波西肉瘤或淋巴瘤的HIV患者。在该患者亚群中，本发明的联合疗法可用于治疗/治愈HIV，本发明的联合疗法可用于治疗/治愈卡波西肉瘤或淋巴瘤，或者本发明的联合疗法可同时用于治疗/治愈HIV和卡波西肉瘤。
5.7.2.施用形式和剂量
本发明的联合疗法不限于任何特定类型的施用。相反，为联合疗法的每个组分确定和选择合适的施用形式是有利的。
在某些实施方式中，IAP抑制剂是Debio 1143。在某些具体实施方式中，Debio1143经口施用。在某些实施方式中，Debio 1143以胶囊形式或片剂形式施用。在某些实施方式中，Debio 1143作为含有75、100、125、150、175、200、225、250、300、400、500、600、700、750、800、900、或1000、1500或2000mg Debio 1143的胶囊经口施用。在某些实施方式中，Debio 1143作为含有75、100、125、150、175、200、225或250mg Debio 1143的片剂经口施用。
Debio 1143的治疗有效量通常为约75至约250mg/天。优选地，Debio 1143的治疗有效量为约75-100、75-125、75-150、75-175、75-200、75-225、100-125、100-150、100-175、100-200、100-225、125-150、125-175、125-200、125-225、150-175、150-200、150-225、175-200、175-225、200-225、200-300、225-300、300-400、300-500、400-500、400-600、500-600、500-700、600-700、600-750、700-750、700-800、750-800、750-900、800-900、800-1000、900-1000、200-400、200-600、200-800、200-1000、400-600、400-800、400-1000、600-800或600-1000mg/天。在某些实施方式中，Debio 1143的治疗有效量为约75、100、125、150、175、200、225、250、300、400、500、600、700、750、800、900、或1000mg/天。
在某些实施方式中，治疗有效量的Debio 1143作为一剂每天施用一次。在某些实施方式中，治疗有效量的Debio 1143被分成多剂，作为多剂每天两次、三次或四次施用。
在某些实施方式中，Debio 1143每天施用，连续10天。在某些实施方式中，Debio1143每天施用一次，连续10天。在某些实施方式中，治疗方法包括28天循环，包括连续10天施用Debio 1143，随后连续4天不施用Debio 1143。在其他实施方式中，Debio 1143可以以连续n天施用间隔以m天不施用的多个周期施用，其中n独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8和9，并且m独立地选自1、2、3和4。
上述信息也适用于Debio 1143类似物。如果使用其他IAP抑制剂，给药形式、剂量和给药方案可以从文献中得出或由技术人员根据常规药物剂量确定程序确定。
在本发明的某些实施方式中，免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1抗体)通过静脉内途径施用。
在某些实施方式中，给药方案将包括在整个治疗过程中以约14天(±2天)或约21天(±2天)或约30天(±2天)的间隔以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/kg或固定剂量的剂量施用免疫检查点抑制剂(即每两周240mg纳武单抗或每3周200mg派姆单抗)。在联合疗法中采用免疫检查点抑制剂的其他实施方式中，给药方案将包括以约0.005mg/kg至约10mg/kg的剂量施用免疫检查点抑制剂，患者内剂量递增。在某些实施方式中，免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1抗体)或其抗原结合片段的治疗有效量为约10mg/kg。在某些实施方式中，静脉内施用免疫检查点抑制剂(例如，抗PD-1抗体)、其抗原结合片段。在某些实施方式中，抗PD-1抗体是纳武单抗或派姆单抗。纳武单抗的合适剂量和治疗方案包括适用于癌症治疗的所有剂量和治疗方案，例如，每2周在30分钟内静脉内输注240mg或每4周在60分钟内静脉内输注480mg。派姆单抗的合适剂量和治疗方案包括适用于癌症治疗的所有剂量和治疗方案，例如，每3周30分钟内静脉内输注200mg。
在某些实施方式中，ICI、尤其是纳武单抗或派姆单抗每两周施用一次。在某些实施方式中，在28天周期的第1天和第15天施用ICI，尤其是纳武单抗或派姆单抗。在某些实施方式中，静脉内施用ICI，尤其是纳武单抗或派姆单抗。在某些实施方式中，免疫检查点抑制剂以每1-4周约1-10mg/kg体重的剂量静脉内施用20-80分钟。在更优选的实施方式中，剂量为4-8mg/kg体重，每1-4周静脉输注30分钟至1小时。考虑到输液泵因站点而异，允许负10分钟和正20分钟的时间窗口。
如果ICI是阿维单抗，则优选每2周(Q2W)以10mg/kg体重1小时静脉输注施用。药代动力学研究表明，10mg/kg剂量的阿维单抗实现了出色的受体占有率，并具有可预测的药代动力学特征(参见例如，Heery等，2015.Proc ASCO Annual Meeting：摘要3055)。该剂量具有良好的耐受性，并且已经观察到抗肿瘤活性的迹象，包括持久的反应。
由于管理原因，ICI可在每个周期的预定给药日之前或之后最多3天施用。
在本发明的其他实施方式中，免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体，其施用使得每个单剂量包含150mg至300mg量的抗体，优选200mg至240mg。
在本发明的其他实施方式中，免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体，其施用使得每个单剂量含有5mg至300mg量的抗体，优选10mg至200mg。如果CTLA-4抑制剂是伊匹单抗(商品名Yervoy)，则推荐的YERVOY给药方案是每3周在90分钟内静脉内施用3mg/kg，共4次。
通常，如果在本发明的联合疗法的上下文中对免疫检查点抑制剂的施用有任何疑问，建议依据通过相应免疫检查点抑制剂针对癌症治疗建立的剂量和施用频率的说明书。
关于施用本发明联合疗法的两种基本组分的相对时间点没有特别限制。即，两种组分可以同时施用，或者一种组分可以在另一种成分之前或之后施用，使得两种组分都在不超过28天、优选不超过10天的时间段内施用。
更具体地，在本发明的上下文中，以下选项中的每一个都是可能的：
·首剂IAP抑制剂在首剂免疫检查点抑制剂之前施用。
·首剂IAP抑制剂在首剂免疫检查点抑制剂之后施用。
·首剂IAP抑制剂与首剂免疫检查点抑制剂同时施用。
在正在进行的治疗期间，本发明联合疗法的两种基本组分的相对施用时间由选择的施用频率(和施用间隔期，如果存在)决定。
治疗的总持续时间没有特别限制。两种基本组分中的每一种的单次施用到两种组分的长时间施用之间可以为任何时间段，持续数周、数月甚至数年。这主要取决于血浆HIV病毒载量。在优选的实施方式中，在与ART组合的情况下，本发明的联合疗法在10天至90天、更优选14天至42天、特别是14天至28天的时间段内施用。如果在没有ART的情况下使用这两种基本组分，则治疗持续时间可长达12个月。
实施例
实施例1：使用潜伏报告细胞系再激活HIV
实验分析了DEBIO-1143使用三种充分表征的潜伏T细胞系-JLat 10.6-GFP、2D10和5A8(Jordan A，Bisgrove D，Verdin E(2003)EMBO J 22(8)：1868–1877.doi：10.1093/emboj/cdg188.PMID：12682019；Sakane N，Kwon HS，Pagans S，Kaehlcke K，Mizusawa Y，Kamada M等，(2011)PLoS Pathog 7(8)：e1002184.PMID：21876670；Pearson R，Kim YK，Hokello J，Lassen K，Friedman J，Tyagi M等，(2008)J Virol 82(24)：12291–12303.PMID：18829756)。这些细胞系包含部分HIV基因组和GFP报告基因，无法产生感染性HIV颗粒。进行了药物滴定和动力学研究。Debio-1143单独或与当前的抗逆转录病毒疗法(ART)结合进行了测试，该疗法由20μM富马酸替诺福韦酯[TDF]、10μM恩曲他滨[FTC]和1μM雷特格韦[RAL]组成。ART和DEBIO-1143同时添加到细胞中。
方法：将浓度递增的DEBIO-1143(0至20.5μM)单独使用或与ART组合使用(见上文)，将细胞(100,000个细胞/100μL)一式三份处理0和72小时。将ART和DEBIO-1143同时添加到细胞中。在指定的时间点通过流式细胞术分析细胞的GFP表达，计数每份的所有细胞，并报告为％GFP+细胞。
结果和讨论：实验结果如图1至图6所示。很明显，DEBIO-1143作为单一试剂具有激活潜伏GFP报告细胞系中潜伏HIV的能力。再激活的程度取决于所使用的细胞系并且依赖于药物浓度。ART不会影响DEBIO-1143潜伏期逆转的程度，并且已知单独的ART不会导致这些细胞系中的HIV再激活(此处未测试单独的ART)。与其他两种细胞系相比，潜伏的HIV细胞系2D10在没有刺激的情况下显示出较低的GFP背景，并显示出最佳的DEBIO-1143对HIV再激活的程度。总而言之，这些数据表明，Debio 1143是一种强潜伏逆转剂，可以与预防新一轮感染所需的ART治疗相结合。
实施例2：DEBIO-1143的细胞毒性分析
该实验检测了单独的DEBIO-1143和DEBIO-1143+ART对人CD4+ T细胞系JLat10.6的细胞毒性。DEBIO-1143也在人原代CD4+ T淋巴细胞上进行了测试。进行了药物滴定和动力学研究。
方法：将浓度递增的DEBIO-1143(0至20μM)单独使用或与ART(20μM TDF、10μM FTC和1μM雷特格韦)组合使用，将细胞(100,000个细胞/100μL)一式三份处理72小时。将ART和DEBIO-1143同时添加到细胞中。由于皂苷(0.5％)能够诱导细胞死亡，因此将其用作阳性对照。通过乳酸脱氢酶(LDH)测定和CellTiter Glo测定分析细胞的细胞毒性。
LDH测定：LDH是一种氧化还原酶，可催化丙酮酸和乳酸的相互转化。细胞在组织损伤或红细胞溶血后将LDH释放到血流中。由于LDH是一种相当稳定的酶，它已被广泛用于评估组织和细胞的损伤和毒性的存在。在这个特定的检测中，LDH将NAD还原为NADH，这可以通过比色(490nm)检测进行特异性检测。
CellTiter Glo检测：
Figure BDA0003172952420000321
2.0检测通过量化ATP来确定培养物中的活细胞数量，这表明存在代谢活性细胞。发光读数与培养物中的活细胞数成正比。数据以发光(RLU)表示，一式三份。
结果和讨论：实验结果如图7至图10所示。发现DEBIO-1143即使在高浓度(20μM)下，也具有对CD4+ T细胞系JLat 10.6以及原代CD4+ T淋巴细胞无显着细胞毒性的优势。
实施例3：来自接受ART治疗的HIV患者的静息CD4+ T淋巴细胞中的HIV再激活
本实施例的实验分析了DEBIO-1143在从目前接受抗病毒治疗的HIV患者的外周血单核细胞(PBMC)中分离出的静息CD4+ T淋巴细胞中再激活潜伏HIV的能力。进行了药物滴定和动力学研究。Debio-1143单独或与ART结合进行了测试。
方法：使用EasySepTM人静息CD4+ T细胞分离试剂盒分离静息CD4+ T细胞，该试剂盒旨在通过免疫磁性阴性选择从新鲜或先前冷冻的PBMC中分离静息CD4+ T细胞。EasySepTM程序包括用抗体复合物和磁性颗粒标记不需要的细胞。通过使用EasySepTM磁铁，只需将所需细胞倒入或移液到新管中，即可将磁性标记的细胞与未接触的所需细胞分离。分离的静息CD4+ T细胞(50,000个细胞/50μL)分别用浓度递增的单独使用的或与ART(20μM TDF、10μM FTC和1μM雷特格韦)组合使用的DEBIO-1143(0至20.5μM)处理0、24、48、72h，一式两份。根据制造商的说明，通过使用一步逆转录酶定量实时PCR(ABI custom TaqMan Assays-by-Design)量化细胞培养物上清液中的HIV RNA水平(HIV RNA拷贝数/mL)，在指定的时间点量化从细胞释放的病毒颗粒数量)。引物是5-CATGTTTTCAGCATTATCAGAAGGA-3和5-TGCTTGATGTCCCCCCACT-3，和MGB探针5-FAM-CCACCCCACAAGATTTAAACACCATGCTAA-Q-3，其中FAM是6-羧基荧光素。
结果和讨论：结果如图11至图14所示。值得注意的是，DEBIO-1143具有再激活静息CD4+T细胞中潜伏HIV的能力，这些CD4+T细胞是从目前正在接受ART治疗的两名HIV患者的PBMC中分离出来的。再激活是药物剂量依赖性的，并且在DEBIO-1143治疗24小时后已经达到最大值。ART不影响DEBIO-1143潜伏期逆转的程度。这表明Debio 1143有可能不仅在报告细胞系中发挥其有益的潜伏期逆转作用，而且在更生理的环境中，在来自接受ART治疗的个体的静息CD4+ T细胞中发挥其有益的潜伏期逆转作用，这是防止新一轮感染所必需的。
实施例4：Debio-1143单独或与抗程序性死亡1(抗PD-1)抗体组合在人源化BLT小鼠的HIV-1潜伏模型中的安全性和有效性研究
1.人源化骨髓/肝/胸腺(BLT)小鼠的创建
方法：通过将人胚胎肝脏和胸腺组织植入免疫缺陷型NOD scidγ(NSG＝NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠的肾囊下，然后施用自体人胚胎肝CD34+细胞来产生人源化BLT小鼠(人造血干细胞)。在BLT小鼠中，T细胞教育发生在人类胸腺组织中，导致所有主要人类造血谱系(包括T、B、单核细胞/巨噬细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞)的完全系统重建。用人类淋巴细胞进行的广泛全身和生殖器粘膜重建使雌性人源化BLT小鼠容易受到阴道和直肠HIV感染。
通过在Scripps Research Institute(TSRI)培育的6至8周龄雌性NSG小鼠(Jackson Laboratories)的肾囊下植入1mm3的人胚胎肝和胸腺组织(AdvancedBioscience Resources)来生成人源化BLT小鼠。每个队列都是用来自单个供体的组织产生的。CD34+HSPC从自体胚胎肝组织中纯化，通过磁珠选择CD34+细胞(Miltenyi)进行分离，通过细胞计数法对移植成功(CD34+、HLA DR-)进行表型分析，并冷冻保存直至在胸腺/肝脏植入后3周注射(200,000 CD34+细胞)到小鼠体内。通过小鼠外周血中的流式细胞术(CD45+、CD3+、CD4+和CD8+)验证了人体重建。
R5 HIV(JR-CSF)由293T转染产生并通过p24 ELISA定量。使人源化小鼠感染JR-CSF(200ng p24)，每周通过qPCR量化病毒复制，持续长达16周。
2.耐受性预研
方法：将Debio-1143(100mg/kg；QD(每天)1-5，p.o.(口服))与抗PD-1抗体(Bio XCell；200μg/剂，BIW(每两周一次)，ip(腹腔注射))一起施用于3只感染HIV-1的BLT小鼠。在Debio-1143和抗PD1抗体施用前的第0天和第7天分析体重、血液中的HIV-1载量(qPCR分析)和CD8+ T细胞上的PD-1表达(PBMC分离、抗体染色和流式细胞术分析)。
结果和讨论：分析表明，HIV-1感染的BLT小鼠对1周的联合治疗具有良好的耐受性。在治疗时或之后没有观察到毒性或体重减轻的临床症状。
3.功效研究
方法：三十二只BLT小鼠感染了HIV-1。12周后，小鼠被分成4组(n＝8)，用不同的方案处理并分析6周。A组接受4周的两种载体4周。B组接受4周的Debio-1143(100mg/kg；QD1-5，口服)(Debio-1143每周给药5天，持续4周)。C组接受4周的抗PD-1抗体(200μg/剂，腹腔注射，BIW)。D组接受4周的Debio-1143(100mg/kg；QD1-5，口服)与抗PD-1抗体(200μg/剂，腹腔注射，BIW)的组合。每周分析一次体重、HIV-1载量和CD8+ T细胞上的PD-1表达。治疗4周后，每组处死三只小鼠进行生物分析评估。在治疗完成后2周处死剩余的小鼠(4x5＝20)，并通过qPCR量化器官库(脾、胸腺类器官、肺、脾、淋巴结和肝脏)中的病毒RNA水平。
结果和讨论：单独使用抗PD-1可降低血液中的HIV滴度，但在所有个体中仍可检测到低病毒水平。单独Debio 1143增加了病毒滴度(可能表明如先前在体外所发现的潜伏期逆转)；抗PD-1与Debio 1143的组合进一步降低了病毒血液滴度，8只小鼠中有5只在治疗4周后具有不可检测的水平(图21)。在治疗后2周观察结束时观察到类似的结果，其中在抗PD-1组的5只动物中有5只发现HIV血液滴度降低但可检测到，并且组合组中的滴度进一步降低(5只动物中有2只没有检测到病毒)。
CD8+ T细胞在控制包括HIV在内的病毒感染方面发挥着重要作用；然而，慢性感染导致CD8+ T细胞上共抑制性免疫检查点分子(如PD-1)的表达及其功能衰竭，表现为增殖、细胞因子产生和细胞毒性能力降低。这为在HIV感染中使用免疫检查点抑制剂来刺激持续的抗病毒免疫反应提供了依据。值得注意的是，此处使用的BLT小鼠模型确实概括了这种以PD-1表达为特征的功能性T细胞耗竭，并且已公布的CD8+ T细胞中PD-1表达动力学为实验设计提供了信息，以允许T细胞耗竭的表现在感染后持续12周，确保在相关情况下开始抗PD-1治疗。(D.M.Brainard等，JOURNAL OF VIROLOGY，2009年7月，第7305-7321页，doi：10.1128/JVI.02207-08)。
在感染后12周，使用流式细胞术在治疗开始前确认T细胞耗竭，结果与公布的数据一致，即大约60％的CD8+ T细胞在该时间点表达PD-1(D.M.Brainard等，JOURNAL OFVIROLOGY，2009年7月，第7305-7321，doi：10.1128/JVI.02207-08)。治疗4周后对CD8+ T细胞中PD-1表达的评估表明，虽然载体治疗没有影响，但单独使用抗PD-1可将循环中耗尽的CD8+ T细胞的百分比降低至46％。令人惊讶的是，抗PD-1与Debio 1143的组合大大增强了这种效果，协同将表达PD-1的CD8+ T细胞的比例降低到仅18％(图22)。这些结果表明，该组合对负责对抗HIV感染的免疫细胞群的激活状态具有积极影响。
重要的是，治疗完成后2周，器官库(脾、胸腺类器官、肺、脾、淋巴结和肝脏中的CD4+细胞)中病毒RNA水平的PCR定量表明，单独使用Debio 1143没有效果，而单独使用抗PD-1减少器官中的HIV载量，但组合对所有个体和器官的HIV器官滴度的影响要大得多(图23)。令人惊讶的是，与单独的抗PD-1相比，该组合能够使某些个体的某些器官完全无病毒(表1)。这一发现有力地表明，以优化的剂量方案使用联合治疗，有可能从接受治疗的个体的所有器官中消除病毒，从而治愈HIV感染。
表1：以病毒RNA拷贝数对数/100,000 CD4+细胞显示的第18周的组织HIV载量。
Figure BDA0003172952420000351
实施例5：Debio 1143或不同潜伏再激活剂(LRA)单独或组合的体外HIV-1再激活效力和细胞毒性
我们将Debio-1143在逆转HIV-1潜伏期方面的功效与其他LRA的功效进行了比较。然后我们分析了Debio-1143与其他LRA对2D10细胞的细胞毒性。进行药物滴定。
方法：将HIV-1潜伏GFP报告基因2D10细胞(100,000个细胞/100μL)一式三份处理48小时，仅使用浓度增加的Debio-1143或LRA(2000nM或20000nM)，或使用Debio 1143(2000nM或20000nM)与单一预定浓度的LRA组合(见表2)。通过流式细胞术通过GFP表达分析HIV再激活。
为了分析细胞活力，将细胞(100,000个细胞/100μL)用浓度增加的Debio-1143或其他已知LRA(0至20μM)一式三份处理48小时。通过乳酸脱氢酶(LDH)测定法分析细胞的细胞毒性。LDH是一种氧化还原酶，可催化丙酮酸和乳酸的相互转化。细胞在组织损伤或红细胞溶血后将LDH释放到血流中。由于LDH是一种相当稳定的酶，它已被广泛用于评估组织和细胞的损伤和毒性的存在。在这种情况下，LDH将NAD还原为NADH，这可以通过比色(490nm)测定进行特异性检测。
表2：与Debio 1143组合使用的LRA浓度。
LRA 分类 使用的浓度[nM]
帕比司他 pan-HDAC 2
恩替诺特 HDAC I类特异性 1000
伏立诺他 HDAC I、II和IV类 1000
毛壳素 DMTs 100
PH02 未知(Hashemi等,2017) 2000
苔藓抑素-1 PKC 500
JQ1 BRDs 1000
结果和讨论：Debio-1143以及作为单一试剂测试的所有其他LRA逆转了GFP报告基因2D10细胞中的HIV-1潜伏期。DMSO也在测试的最高浓度下显示出HIV再激活。我们发现Debio-1143是最有效的LRA之一。该实验的结果如图15所示。
此外还发现，Debio-1143即使在高浓度(20μM)下也没有表现出任何细胞毒性。相比之下，其他某些LRA具有剧毒，包括帕比司他、毛壳素、苔藓抑素-1和JQ1。该实验的结果如图16所示。
关于Debio 1143与其他LRA(帕比司他、恩替诺特、伏立诺他、毛壳素、PH01、苔藓抑素-1和JQ-1)的组合，所有测试的LRA的再激活程度取决于浓度。除了最低测试浓度的DMSO和两个测试浓度的毛壳素外，所有药物组合在2μM Debio 1143浓度下都显示出高度的HIV再激活。该实验的结果如图17所示。
实施例6：HIV-1潜伏2D10细胞系中的cIAP1降解和NF-κB调节
研究了Debio-1143是否通过作用于NF-κB通路来逆转HIV-1潜伏期。经典和非经典NF-κB信号通路在潜伏HIV-1的再激活中发挥重要作用，暗示其调节是潜伏逆转的重要治疗策略。我们质询Debio-1143是否通过非经典NF-κB信号激活HIV-1长末端重复序列(LTR)，因为Debio-1143已被证明可以结合并降解非经典NF-κB信号的负调节因子-BIRC2。
方法：将2D10(A)或293T(B)和CD4+ T细胞(C)用DMSO、Debio-1143(1μM)和TNFα(10ng/ml)处理指定时间，并通过Western印迹法分析BIRC2，使用特异性检测人BIRC2、人IkBα或人CypA的抗体，例如市售抗体(例如来自R&D Systems、Cell Signaling、Santa CruzBiotechnology或其他来源)来分析BIRC2和IkBα蛋白表达。
结果和讨论：结果如图18所示。Debio-1143在2D10和293T细胞中触发快速(<15分钟)BIRC2降解，但TNFα没有。相比之下，TNFα触发IkBα降解并在2小时后反弹，而Debio-1143没有影响(A,B)。这与IkBα降解是典型NF-κB信号激活的标志的观点一致。在CD4+ T细胞中分析了BIRC2降解，发现它是剂量依赖性的(C)。相似水平的亲环蛋白A(CypA)表明分析了相似量的细胞裂解物。
这些数据有力表明，Debio-1143通过触发BIRC2(非经典NF-κB信号传导的负调节因子)的快速降解来激活非经典NF-κB信号传导，从而导致i)HIV-1LTR的激活；ii)病毒转录；iii)逆转HIV-1潜伏期。
实施例7：Debio-1143在体外对CD8+ T细胞和NK细胞对HIV感染的静息CD4+ T细胞(rCD4)裂解的杀伤作用
研究了Debio-1143诱导的HIV-1潜伏期逆转，通过恢复rCD4中HIV-1蛋白的产生，将允许病毒肽暴露于受感染的rCD4+ T细胞上的MHC，并允许通过CD8+ T细胞和/或NK细胞的识别和裂解。
方法：根据制造商的说明(用特定抗体包被的珠)从一名献血者(500mL)中分离人CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和NK细胞。90％的CD4+ T细胞被HIV-1(JR-CSF)(1μgp24)感染，孵育4天以建立感染，然后用ART处理3天。通过上清液中的p24 ELISA验证了复制的抑制。然后根据制造商的说明分离rCD4。感染和ART处理的rCD4与未感染的CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和NK细胞以1:1的比例(100,000个细胞)混合24和48小时，一式三份。每个细胞群的单一培养物用作对照。将DMSO或Debio-1143(0、1和10μM)添加到单一或共培养物中培养24和48小时。通过LDH活性量化细胞杀伤。
结果和讨论：在除rCD4:CD8+ T细胞共培养外的所有单培养和共培养中均观察到低细胞死亡，这表明Debio-1143触发病毒肽暴露于受感染的rCD4上，允许它们被CD8+ T细胞识别和裂解。这些结果如图19和图20所示。
实施例8：其他组合的潜伏逆转效应的体外测定
实施例8.1：来自ART治疗的HIV患者的rCD4+和CD8+细胞的离体共培养物中IAPa、ICI或IAPa/ICI组合的体外HIV-1再激活效力
IAPa、ICI或IAPa/ICI组合在逆转HIV-1潜伏期方面的功效在HIV-1感染的rCD4+细胞与来自同一供体的CD8+细胞共培养48小时进行了测试。
方法：根据制造商的说明(来自Biolegend的MojoSortTM人类细胞分离试剂盒)，收集了一名接受ART治疗的HIV-1感染患者的血液(500mL)，并使用涂有特定抗体的珠分离CD4+和CD8+细胞。CD4+ T细胞用HIV-1(JR-CSF)(1μg p24)重新感染，培养3天以建立感染，并用ART(FTC 150mg/kg+TDF 150mg/kg+雷特格韦80mg/kg)处理7天，以确保培养物中存在足够的潜伏HIV CD4+细胞(rCD4+)。去除ART后，然后按照制造商的说明(EasySepTM人静息CD4+ T细胞分离试剂盒)分离rCD4。将分离的rCD4与自体(来自同一患者)未感染的CD8+ T细胞以1:1的比例(100,000个细胞)混合，并用不同的IAPa(1μM)或ICI(10μg/ml)单药处理或IAPa/ICI组合一式两份孵育48小时。根据制造商的说明，通过使用一步逆转录酶定量实时PCR(ABI custom TaqMan Assays-by-Design)量化细胞培养物上清液中的HIV RNA水平(HIVRNA拷贝/mL)，在指定时间点量化从细胞释放的病毒颗粒的数量。引物是5-CATGTTTTCAGCATTATCAGAAGGA-3和5-GCTTGATGTCCCCCCACT-3，及MGB探针5-FAM-CCACCCCACAAGATTTAAACACCATGCTAA-Q-3，其中FAM是6-羧基荧光素。
在本实验中测试了以下试剂：
免疫检查点抑制剂：
抗PD-L1
试剂：Invitrogen CD274(PD-L1，B7-H1)单克隆抗体(MIH1)
来源：eBioscience
http://www.thermofisher.com/antibody/product/CD274-PD-L1-B7-H1-Antibody-clone-MIH1-Monoclonal/14-5983-80
参考文献：Tian，X.等The upregulation of LAG 3on T cells defines asubpopulation with functional exhaustion and correlates with diseaseprogression in HIV infected subjects.J.Immunol.194，3873–3882(2015).https：//www.jimmunol.org/content/194/8/3873.long
抗CTLA4
试剂：纯化的小鼠抗人CD152，克隆BNI3
来源：BD Biosciences
http://www.bdbiosciences.com/us/applications/research/t-cell-immunology/regulatory-t-cells/surface-markers/human/purified-mouse-anti-human-cd152-bni3/p/555851
参考文献：Kaufmann，D.E.等Upregulation of CTLA 4 by HIV-specific CD4+Tcells correlates with disease progression and defines a reversible immunedysfunction.Nat.Immunol.8，1246–1254(2007).
抗TIGIT
试剂：Ultra-LEAFTM纯化的抗人TIGIT(VSTM3)抗体，克隆A15153G
来源：BioLegend
https://www.biolegend.com/en-us/products/ultra-leaf-purified-anti-human-tigit-vstm3-antibody-14287
参考文献：Chew，G.M.等TIGIT marks exhausted T cells，correlates withdisease progression，and serves as a target for immune restoration in HIV andSIV Infection.PloS Pathog.12，e1005349(2016).
抗TIM3
试剂：纯化的抗人CD366(Tim-3)抗体，α-TIM-3(F38-2E2；345003)
来源：BioLegend
https://www.biolegend.com/en-us/search-results/purified-anti-human-cd366-tim-3-antibody-6119
参考文献：Lichtenegger FS，Rothe M，Schnorfeil FM,等Targeting LAG-3andPD-1to Enhance T Cell Activation by Antigen-Presenting Cells.FrontImmunol.2018；9：385.Published 2018Feb 27.Doi：10.3389/fimmu.2018.00385
https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5835137/#B21
IAP抑制剂：
试剂：Debio 1143
来源：根据已发表的文献程序在内部合成(WO 2008/128171的实施例16)
试剂：LCL 161
来源：MedChem Express HY-15518
https://www.medchemexpress.com/LCL161.html？src＝google-product&gclid＝Cj0KCQjwkK_qBRD8ARIsAOteukCztQzDsXbOSAgx7Ui2I4IrkVv_2fb4HZzkKUVmvGw-hemlJKb9V80aAsDvEALw_wcB
试剂：CUDC-427
来源：MedChem Express HY-15835
https://www.medchemexpress.com/CUDC-427.html
试剂：Birinapant
来源：Medchem Express HY-16591
https://www.medchemexpress.com/Birinapant.html
结果和讨论：结果总结在下表3和4中。从这些表中可以得出，受试组合在逆转HIV潜伏期方面表现出显着提高的功效。
表3
无IAPa 1μM D1143 1μM LCL161 1μM CUDC-427
0.1％DMSO 0* 3 3 3
对照IgG2 0* 3 3 3
对照IgG1 0* 3 2 3
抗PD-L1 6** 13 12 6
抗CTLA4 16 24 25 20
抗TIGIT 6 14 12 13
抗TIM3 6 14 13 13
*：在3个对照条件下未检测到RNA拷贝
**：检测到所有其他RNA水平并将其分类为不同的延迟逆转类别。至多500 RNA拷贝/ml被归类为“0”。501到1000 RNA拷贝/ml之间被归类为“1”。随后的类别相应地以500RNA拷贝/ml的步长进行定义。
表4
无IAPa 1μM Birinapant
0.1％DMSO 0* 3
对照IgG2 0* 3
对照IgG1 0* 3
抗PD-L1 5** 12
抗CTLA4 14 24
抗TIGIT 5 14
抗TIM3 6 14
*：在3个对照条件下未检测到RNA拷贝
**：检测到所有其他RNA水平并将其分类为不同的延迟逆转类别。至多500 RNA拷贝/ml被归类为“0”。501到1000 RNA拷贝/ml之间被归类为“1”。随后的类别相应地以500RNA拷贝/ml的步长进行定义。
实施例8.2：IAPa、ICI或IAPa/ICI组合在来自三名接受ART治疗的HIV患者的离体处理的PBMC中的体外HIV-1再激活效力
本实施例的实验分析了IAPa、ICIs或IAPa/ICI组合在从目前接受ART的HIV患者的外周血单核细胞(PBMC)中分离出的静息CD4+ T淋巴细胞中再激活潜伏HIV的能力。
方法：通过阴性选择和磁分离(来自STEMCELL Technologies的Easysep小鼠/人类嵌合体分离试剂盒)从三名接受ART治疗的HIV患者的PBMC中分离静息CD4+ T细胞。分离的静息CD4+ T细胞(50,000个细胞/50μL)用不同的IAPa(1μM)或ICI(10μg/ml)单药处理或IAPa/ICI组合一式两份处理48小时。根据制造商的说明，通过使用一步逆转录酶定量实时PCR(ABI custom TaqMan Assays-by-Design)量化细胞培养物上清液中的HIV RNA水平(HIV RNA拷贝数/mL)，在指定的时间点量化从细胞释放的病毒粒子的数量。引物是5-CATGTTTTCAGCATTATCAGAAGGA-3和5-GCTTGATGTCCCCCCACT-3，及MGB探针5-FAM-CCACCCCACAAGATTTAAACACCATGCTAA-Q-3，其中FAM是6-羧基荧光素。
使用与上述实施例8.1相同的试剂进行实验(除了不使用birinapant)。
结果和结论：该测定的结果总结在下表5中。对于本发明的药物组合，它们显示出显着增加的HIV潜伏期逆转水平的相同趋势。
表5
无IAPa 1μM D1143 1μM LCL161 1μM CUDC-427
0.1％DMSO 0* 1 1 1
对照IgG2 0* 1 1 1
对照IgG1 0* 1 1 1
抗PD-L1 2** 6 6 3
抗CTLA4 8 11 12 10
抗TIGIT 2 7 6 6
抗TIM3 3 7 6 6
*：在3个对照条件下未检测到RNA拷贝
**：检测到所有其他RNA水平并将其分类为不同的延迟逆转类别。至多500 RNA拷贝/ml被归类为“0”。501到1000 RNA拷贝/ml之间被归类为“1”。随后的类别相应地以500RNA拷贝/ml的步长进行定义。
实施例8.3：来自ART治疗的BLT小鼠的PBMC中IAPa、ICI或IAPa/ICI组合的离体HIV-1再激活效力
IAPa、ICI或IAPa/ICI组合在逆转HIV-1潜伏期方面的功效在来自ART治疗的HIV-1感染的人源化BLT小鼠的静息CD4+ T细胞中进行了测试。
方法：BLT小鼠用JR-CSF(200ng p24)感染并每天接受ART(FTC 150mg/kg+TDF150mg/kg+雷特格韦80mg/kg)治疗，直至HIV-1 RNA水平显着降低。从血液、胸腺类器官、肺、脾、骨髓、淋巴结和肝脏中分离出来自十只小鼠的人静息CD4+ T细胞。将分离的人静息CD4+T细胞合并、计数、分裂并用不同的IAPa(1μM)或ICI(10μg/ml)单药处理或IAPa/ICI组合一式两份处理48小时。根据制造商的说明，通过使用一步逆转录酶定量实时PCR(ABI customTaqMan Assays-by-Design)量化细胞培养物上清液中的HIV RNA水平(HIV RNA拷贝/mL)，在指定时间点量化从细胞释放的病毒粒子的数量。引物是5-CATGTTTTCAGCATTATCAGAAGGA-3和5-GCTTGATGTCCCCCCACT-3，及MGB探针5-FAM-CCACCCCACAAGATTTAAACACCATGCTAA-Q-3，其中FAM是6-羧基荧光素。
使用与上述实施例8.1相同的试剂进行实验(除了不使用birinapant)。
结果和结论：结果总结在下表6中。源自从体内小鼠治疗环境中分离的HIV-1感染细胞的数据与上述实施例8.1和8.2中提供的源自从HIV-1感染的人类患者分离的细胞的数据一致(并因此确证)。将IAP抑制剂与ICI组合使用时，HIV潜伏期逆转效应显着增加。
表6
无IAPa 1μM D1143 1μM LCL161 1μM CUDC-427
0.1％DMSO 0* 2 2 2
对照IgG2 0* 2 2 2
对照IgG1 0* 2 2 2
抗PD-L1 3** 6 6 3
抗CTLA4 7 10 11 10
抗TIGIT 3 6 6 6
抗TIM3 3 7 6 6
*：在3个对照条件下未检测到RNA拷贝
**：检测到所有其他RNA水平并将其分类为不同的延迟逆转类别。0个RNA拷贝/ml被归类为“0”。至多2500 RNA拷贝/ml被归类为“1”。2501到5000 RNA拷贝/ml之间被归类为“1”。随后的类别相应地以2500 RNA拷贝/ml的步长进行定义。
使用不同浓度的活性剂可能获得更显着的效果，尤其是在使用除上述实验中所用活性剂之外的活性剂时。
序列表
<110> 德彪药业国际股份公司
<120> HIV感染的联合治疗
<130> 208 946
<160> 4
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 1
catgttttca gcattatcag aagga 25
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 2
tgcttgatgt ccccccact 19
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MGB探针
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="6-carboxyfluorescein "
<220>
<221> misc_feature
<222> 30
<223> /note="MGB quencher"
<400> 3
ccaccccaca agatttaaac accatgctaa 30
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 4
gcttgatgtc cccccact 18

Claims (35)

1.一种应用于治疗患者的HIV感染的方法中的IAP抑制剂，所述方法包括将所述IAP抑制剂与免疫检查点抑制剂一起施用于所述患者，其中，所述IAP抑制剂优选选自Debio1143、LCL-161、TL-32711/birinapant、CUDC 427/GDC 0917、APG-1387、ASTX660、SBP-0636457、JP1201、AZD5582和BI 891065，且所述免疫检查点抑制剂优选选自CTLA-4拮抗剂、PD-1抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、Tim-3抑制剂和PDL-1抑制剂。
2.如权利要求1所述应用的IAP抑制剂，其中，所述IAP抑制剂是Debio-1143。
3.如权利要求1或2所述应用的IAP抑制剂，其中，所述免疫检查点抑制剂是PD-1或PD-L1的抑制剂。
4.如权利要求3所述应用的IAP抑制剂，其中，所述免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗、匹地利珠单抗、AMP514、REGN2810、AMP-224、斯巴达珠单抗、阿维单抗、阿特朱单抗、CX-072、BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、CA-170和得瓦鲁单抗。
5.如权利要求4所述应用的IAP抑制剂，其中，所述免疫检查点抑制剂是派姆单抗或纳武单抗。
6.如权利要求1至5中任一项所述应用的IAP抑制剂，其中，在施用所述免疫检查点抑制剂之前、同时或之后向所述患者施用所述IAP抑制剂。
7.如权利要求1至6中任一项所述应用的IAP抑制剂，其中，所述治疗方法导致CD8+T细胞的刺激。
8.如权利要求1至7中任一项所述应用的IAP抑制剂，其中，所述方法逆转病毒潜伏期。
9.如权利要求1至7中任一项所述应用的IAP抑制剂，其中，所述方法涉及施用选自下组的一种或多种其他药物：NRTI，例如，齐多夫定(Retrovir，AZT)、去羟肌苷(Videx，VidexEC，ddI)、司坦夫定(Zerit，d4T)、拉米夫定(Epivir，3TC)、阿巴卡韦(Ziagen，ABC)、核苷酸类似物替诺福韦(Viread，TDF)；NNRTI，例如，奈韦拉平(Viramune，NVP)、地拉韦定(Rescriptor，DLV)、依非韦伦(Sustiva或Stocrin，EFV，也是Atripla的一部分)、依曲韦林(Intelence，ETR)、利匹韦林(Edurant，RPV，也是Complera或Epivlera的一部分)；整合酶抑制剂，例如，雷特格韦(Isentress，RAL)、埃替格韦(EVG，组合Stribild的一部分)、度鲁特韦(Tivicay，DTG)；蛋白酶抑制剂，例如，沙奎那韦(Invirase，SQV)、茚地那韦(Crixivan，IDV)、利托那韦(Norvir，RTV)、奈非那韦(Viracept，NFV)、安普那韦(Agenerase，APV)、洛匹那韦/利托那韦(Kaletra或Aluvia，LPV/RTV)、阿扎那韦(Reyataz，ATZ)、膦沙那韦(Lexiva，Telzir，FPV)、替拉那韦(Aptivus，TPV)、地瑞那韦(Prezista，DRV)；进入抑制剂，例如，恩夫韦地(Fuzeon，ENF，T-20)、马拉韦罗(Selzentry或Celsentri，MVC)；PKC调节剂，例如，苔藓抑素；RIG-I-诱导剂，例如，阿维A；BCL-2抑制剂，例如，维奈托克、奥巴托克；PI3K/Akt抑制剂，例如，库潘尼西(BAY 80-6946)、MK-2206、AZD5363、ARQ 751、TAS-117或BAY 1125976；HDAC抑制剂，例如，罗米地辛、伏立诺他、帕比司他；组蛋白甲基化抑制剂(HMTi)，例如，毛壳素和BIX-01294；核苷类似物甲基化抑制剂，例如，5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AzadC，商品名Dacogen)；DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)，溴结构域和末端外(BET)结构域蛋白抑制剂(BETi)；双硫仑；巨大戟醇酯的衍生物，特别是巨大戟醇B和巨大戟醇-3-当归酸酯；toll样受体激动剂，例如，MGN1703、GS-9620和GS-986；治疗性疫苗，以及广泛的中和抗体。
10.一种应用于治疗患者的HIV感染的方法中的免疫检查点抑制剂，所述方法包括将所述免疫检查点抑制剂与IAP抑制剂一起施用于所述患者，其中，所述IAP抑制剂优选选自Debio 1143、LCL-161、TL-32711/birinapant、CUDC 427/GDC 0917、APG-1387、ASTX660、SBP-0636457、JP1201、AZD5582和BI 891065，并且所述免疫检查点抑制剂优选选自CTLA-4拮抗剂、PD-1抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、Tim-3抑制剂和PDL-1抑制剂。
11.如权利要求10所述应用的IAP抑制剂，其中，所述IAP抑制剂是Debio-1143。
12.如权利要求10或11所述应用的IAP抑制剂，其中，所述免疫检查点抑制剂是PD-1或PD-L1的抑制剂。
13.如权利要求12所述应用的IAP抑制剂，其中，所述免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗、匹地利珠单抗、AMP514、REGN2810、AMP-224、斯巴达珠单抗、阿维单抗、阿特朱单抗、CX-072、BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、CA-170和得瓦鲁单抗。
14.如权利要求13所述应用的IAP抑制剂，其中，所述免疫检查点抑制剂是派姆单抗或纳武单抗。
15.如权利要求10至14中任一项所述应用的免疫检查点抑制剂，其中，在施用所述免疫检查点抑制剂之前、同时或之后向所述患者施用所述IAP抑制剂。
16.如权利要求10至15中任一项所述应用的免疫检查点抑制剂，其中，所述治疗方法导致CD8+T细胞的刺激。
17.如权利要求10至16中任一项所述应用的免疫检查点抑制剂，其中，所述方法逆转病毒潜伏期。
18.如权利要求10至17中任一项所述应用的免疫检查点抑制剂，其中，所述方法涉及施用选自下组的一种或多种其他药物：NRTI，例如，齐多夫定(Retrovir，AZT)、去羟肌苷(Videx，Videx EC，ddI)、司坦夫定(Zerit，d4T)、拉米夫定(Epivir，3TC)、阿巴卡韦(Ziagen，ABC)、核苷酸类似物替诺福韦(Viread，TDF)；NNRTI，例如，奈韦拉平(Viramune，NVP)、地拉韦定(Rescriptor，DLV)、依非韦伦(Sustiva或Stocrin，EFV，也是Atripla的一部分)、依曲韦林(Intelence，ETR)、利匹韦林(Edurant，RPV，也是Complera或Epivlera的一部分)；整合酶抑制剂，例如，雷特格韦(Isentress，RAL)、埃替格韦(EVG，组合Stribild的一部分)、度鲁特韦(Tivicay，DTG)；蛋白酶抑制剂，例如，沙奎那韦(Invirase，SQV)、茚地那韦(Crixivan，IDV)、利托那韦(Norvir，RTV)、奈非那韦(Viracept，NFV)、安普那韦(Agenerase，APV)、洛匹那韦/利托那韦(Kaletra或Aluvia，LPV/RTV)、阿扎那韦(Reyataz，ATZ)、膦沙那韦(Lexiva，Telzir，FPV)、替拉那韦(Aptivus，TPV)、地瑞那韦(Prezista，DRV)；进入抑制剂，例如，恩夫韦地(Fuzeon，ENF，T-20)、马拉韦罗(Selzentry或Celsentri，MVC)；PKC调节剂，例如，苔藓抑素；RIG-I-诱导剂，例如，阿维A；BCL-2抑制剂，例如，维奈托克、奥巴托克；PI3K/Akt抑制剂，例如，库潘尼西(BAY 80-6946)、MK-2206、AZD5363、ARQ751、TAS-117或BAY 1125976；HDAC抑制剂，例如，罗米地辛、伏立诺他、帕比司他；组蛋白甲基化抑制剂(HMTi)，例如，毛壳素和BIX-01294；核苷类似物甲基化抑制剂，例如，5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AzadC，商品名Dacogen)；DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)，溴结构域和末端外(BET)结构域蛋白抑制剂(BETi)；双硫仑；巨大戟醇酯的衍生物，特别是巨大戟醇B和巨大戟醇-3-当归酸酯；toll样受体激动剂，例如，MGN1703、GS-9620和GS-986；治疗性疫苗，以及广泛的中和抗体。
19.一种应用于治疗患者的HIV感染的方法中的包含IAP抑制剂和免疫检查点抑制剂的药物组合物，其中，所述IAP抑制剂优选选自Debio 1143、Debio 1143类似物、LCL-161、TL-32711/birinapant、CUDC 427/GDC 0917、APG-1387、ASTX660、SBP-0636457、JP1201、AZD5582和BI 891065，并且所述免疫检查点抑制剂优选选自CTLA-4拮抗剂、PD-1抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、Tim-3抑制剂和PDL-1抑制剂。
20.如权利要求19所述的药物组合物，其中，所述IAP抑制剂是Debio-1143。
21.如权利要求18或19所述应用的药物组合物，其中，所述免疫检查点抑制剂是PD-1或PD-L1的抑制剂。
22.如权利要求20所述应用的药物组合物，其中，所述免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗、匹地利珠单抗、AMP514、REGN2810、AMP-224、斯巴达珠单抗、阿维单抗、阿特朱单抗、CX-072、BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、CA-170和得瓦鲁单抗。
23.如权利要求21所述应用的药物组合物，其中，所述免疫检查点抑制剂是派姆单抗或纳武单抗。
24.如权利要求18至22中任一项所述应用的药物组合物，其中，所述治疗方法导致CD8+T细胞的刺激。
25.如权利要求18至23中任一项所述应用的药物组合物，其中，所述方法逆转病毒潜伏期。
26.如权利要求19至25中任一项所述应用的药物组合物，其中，所述方法涉及施用选自下组的一种或多种其他药物：NRTI，例如，齐多夫定(Retrovir，AZT)、去羟肌苷(Videx，Videx EC，ddI)、司坦夫定(Zerit，d4T)、拉米夫定(Epivir，3TC)、阿巴卡韦(Ziagen，ABC)、核苷酸类似物替诺福韦(Viread，TDF)；NNRTI，例如，奈韦拉平(Viramune，NVP)、地拉韦定(Rescriptor，DLV)、依非韦伦(Sustiva或Stocrin，EFV，也是Atripla的一部分)、依曲韦林(Intelence，ETR)、利匹韦林(Edurant，RPV，也是Complera或Epivlera的一部分)；整合酶抑制剂，例如，雷特格韦(Isentress，RAL)、埃替格韦(EVG，组合Stribild的一部分)、度鲁特韦(Tivicay，DTG)；蛋白酶抑制剂，例如，沙奎那韦(Invirase，SQV)、茚地那韦(Crixivan，IDV)、利托那韦(Norvir，RTV)、奈非那韦(Viracept，NFV)、安普那韦(Agenerase，APV)、洛匹那韦/利托那韦(Kaletra或Aluvia，LPV/RTV)、阿扎那韦(Reyataz，ATZ)、膦沙那韦(Lexiva，Telzir，FPV)、替拉那韦(Aptivus，TPV)、地瑞那韦(Prezista，DRV)；进入抑制剂，例如，恩夫韦地(Fuzeon，ENF，T-20)、马拉韦罗(Selzentry或Celsentri，MVC)；PKC调节剂，例如，苔藓抑素；RIG-I-诱导剂，例如，阿维A；BCL-2抑制剂，例如，维奈托克、奥巴托克；PI3K/Akt抑制剂，例如，库潘尼西(BAY 80-6946)、MK-2206、AZD5363、ARQ 751、TAS-117或BAY 1125976；HDAC抑制剂，例如，罗米地辛、伏立诺他、帕比司他；组蛋白甲基化抑制剂(HMTi)，例如，毛壳素和BIX-01294；核苷类似物甲基化抑制剂，例如，5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AzadC，商品名Dacogen)；DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)，溴结构域和末端外(BET)结构域蛋白抑制剂(BETi)；双硫仑；巨大戟醇酯的衍生物，特别是巨大戟醇B和巨大戟醇-3-当归酸酯；toll样受体激动剂，例如，MGN1703、GS-9620和GS-986；治疗性疫苗，以及广泛的中和抗体。
27.一种在有需要的患者中治疗HIV感染的方法，所述方法包括向所述患者施用IAP抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中，所述IAP抑制剂优选选自Debio 1143、LCL-161、TL-32711/birinapant、CUDC 427/GDC 0917、APG-1387、ASTX660、SBP-0636457、JP1201、AZD5582和BI891065，并且所述免疫检查点抑制剂优选选自CTLA-4拮抗剂、PD-1抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、Tim-3抑制剂和PDL-1抑制剂。
28.如权利要求27所述的方法，其中，所述IAP抑制剂是Debio-1143。
29.如权利要求27或28所述的方法，其中，所述免疫检查点抑制剂是PD-1或PD-L1的抑制剂。
30.如权利要求29所述的方法，其中，所述免疫检查点抑制剂选自派姆单抗、纳武单抗、斯巴达珠单抗、替雷利珠单抗、匹地利珠单抗、AMP514、REGN2810、AMP-224、斯巴达珠单抗、阿维单抗、阿特朱单抗、CX-072、BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、CA-170和得瓦鲁单抗。
31.如权利要求30所述的方法，其中，所述免疫检查点抑制剂是派姆单抗或纳武单抗。
32.如权利要求27至31中任一项所述的方法，其中，在施用所述免疫检查点抑制剂之前、同时或之后向所述患者施用所述IAP抑制剂。
33.如权利要求27至32中任一项所述的方法，其中，所述治疗方法导致CD8+T细胞的刺激。
34.如权利要求27至33中任一项所述的方法，其中，所述方法逆转病毒潜伏期。
35.如权利要求27至34中任一项所述的方法，其中，所述方法涉及施用选自下组的一种或多种其他药物：NRTI，例如，齐多夫定(Retrovir，AZT)、去羟肌苷(Videx，Videx EC，ddI)、司坦夫定(Zerit，d4T)、拉米夫定(Epivir，3TC)、阿巴卡韦(Ziagen，ABC)、核苷酸类似物替诺福韦(Viread，TDF)；NNRTI，例如，奈韦拉平(Viramune，NVP)、地拉韦定(Rescriptor，DLV)、依非韦伦(Sustiva或Stocrin，EFV，也是Atripla的一部分)、依曲韦林(Intelence，ETR)、利匹韦林(Edurant，RPV，也是Complera或Epivlera的一部分)；整合酶抑制剂，例如，雷特格韦(Isentress，RAL)、埃替格韦(EVG，组合Stribild的一部分)、度鲁特韦(Tivicay，DTG)；蛋白酶抑制剂，例如，沙奎那韦(Invirase，SQV)、茚地那韦(Crixivan，IDV)、利托那韦(Norvir，RTV)、奈非那韦(Viracept，NFV)、安普那韦(Agenerase，APV)、洛匹那韦/利托那韦(Kaletra或Aluvia，LPV/RTV)、阿扎那韦(Reyataz，ATZ)、膦沙那韦(Lexiva，Telzir，FPV)、替拉那韦(Aptivus，TPV)、地瑞那韦(Prezista，DRV)；进入抑制剂，例如，恩夫韦地(Fuzeon，ENF，T-20)、马拉韦罗(Selzentry或Celsentri，MVC)；PKC调节剂，例如，苔藓抑素；RIG-I-诱导剂，例如，阿维A；BCL-2抑制剂，例如，维奈托克、奥巴托克；PI3K/Akt抑制剂，例如，库潘尼西(BAY 80-6946)、MK-2206、AZD5363、ARQ 751、TAS-117或BAY 1125976；HDAC抑制剂，例如，罗米地辛、伏立诺他、帕比司他；组蛋白甲基化抑制剂(HMTi)，例如，毛壳素和BIX-01294；核苷类似物甲基化抑制剂，例如，5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AzadC，商品名Dacogen)；DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)，溴结构域和末端外(BET)结构域蛋白抑制剂(BETi)；双硫仑；巨大戟醇酯的衍生物，特别是巨大戟醇B和巨大戟醇-3-当归酸酯；toll样受体激动剂，例如，MGN1703、GS-9620和GS-986；治疗性疫苗，以及广泛的中和抗体。
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