KR20210102334A - 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도 - Google Patents

트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210102334A
KR20210102334A KR1020217021306A KR20217021306A KR20210102334A KR 20210102334 A KR20210102334 A KR 20210102334A KR 1020217021306 A KR1020217021306 A KR 1020217021306A KR 20217021306 A KR20217021306 A KR 20217021306A KR 20210102334 A KR20210102334 A KR 20210102334A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acids
replaced
heavy chain
amino acid
Prior art date
Application number
KR1020217021306A
Other languages
English (en)
Inventor
파벨 스트롭
체타나 라오-나이크
샤오디 뎅
폴 오. 셰퍼드
숀 매튜 웨스트
제이슨 마이클 호건
사유미 야마조에
Original Assignee
브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 filed Critical 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Publication of KR20210102334A publication Critical patent/KR20210102334A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Abstract

항체는 효소 트랜스글루타미나제에 의한 접합에 적용가능하게 하기 위해, 중쇄 CH1, CH2, 또는 CH3 또는 경쇄 불변 영역 내의 아미노산을 선택된 대체 글루타민-함유 서열로 대체하는 것에 의해 변형된다.

Description

트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 35 U.S.C. §119(e) 하에 2018년 12월 12일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/778,437의 이익을 주장하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본원에 개시된 핵산 및/또는 아미노산 서열을 포함하는, 서열식별번호(SEQ ID NO): 1 내지 서열식별번호: 103을 포함하는 "181031_SEQT_13143WOPCT_YC.txt"로 명명된 서열 목록은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 서열 목록은 EFS-웹을 통해 ASCII 텍스트 포맷으로 본원과 함께 제출되었고, 따라서 이는 서면 및 그의 컴퓨터 판독가능한 형태 둘 다로 구성된다. 서열 목록은 2018년 10월 31일에 PatentIn 3.5를 사용하여 처음 생성되었고, 대략 39 KB 크기이다.
본 개시내용은 효소 트랜스글루타미나제에 의해 접합가능한 변형된 항체 및 이러한 항체로부터 제조된 접합체에 관한 것이다.
현재 큰 관심을 끌고 있는 생물제제의 유형은 항체가 파트너 분자에 공유 연결된 것 ("항체-약물 접합체", "ADC", "접합체" 또는 "면역접합체")이다. 이에 따라, 접합체는 3개의 성분: (1) 항체, (2) 파트너 분자, 및 (3) 앞의 2개의 성분을 공유 연결하는 링커를 포함한다.
파트너 분자는 치료제, 예컨대 항암 약물, 아주반트, 또 다른 단백질, 또는 방사성동위원소일 수 있다. 항체는 표적 세포 또는 조직에 의해 발현된 항원에 대한 것이다. 항체는 항원에 대한 그의 결합을 통해 접합체를 표적에 전달하는 역할을 한다. 그 곳에서, 공유 연결의 절단 또는 항체의 분해는 표적 위치에의 치료제의 방출을 발생시킨다. 반대로, 접합체가 혈액계에서 순환하는 동안, 치료제는 항체에 대한 그의 공유 연결로 인해 불활성으로 유지되어, 부작용의 위험이 감소된다. 항암 치료에서의 접합체의 검토를 위해, 문헌 [Gerber et al., 2013]을 참조한다.
치료제에 대해 대안적으로, 파트너 분자는 질환 부위의 진단, 위치 확인, 또는 의학적 상태의 모니터링을 위한 검정 작용제일 수 있다. 이러한 경우에, 검정 작용제는, 예를 들어 비오틴, 형광 표지, 방사성 표지, 또는 중수소화된 중합체일 수 있다. 문헌 [Smith et al., 2019]은 MRI 영상화를 위한 중수소화된 중합체를 포함하는 접합체를 개시한다. 이러한 경우에, 표적 부위에서의 링커의 절단은 필요하지 않고, 사실상 바람직하지 않을 수 있다. 이러한 용도를 위해, 링커는 비-절단가능한 유형이도록 설계될 수 있다.
접합체의 제조에서의 주요 단계는 접합 단계로도 지칭되는 공유 연결 단계이다. 접합을 수행하기 위한 많은 방법이 개시되어 있다. 실질적으로 현재 관심을 끌고 있는 것은 효소 트랜스글루타미나제 (EC 2.3.2.13)에 의해 매개된 접합이다.
상이한 유기체에 의해 자연적으로 생산되거나 또는 생물공학에 의해 제조된 많은 트랜스글루타미나제 변이체가 공지되어 있다. 단백질을 텍스쳐링하기 위해 식품 산업에서 통상적으로 사용되는 것은 발효 또는 재조합 발현에 의해 수득되는 스트렙토미세스 모바라엔시스(Streptomyces mobaraensis) 트랜스글루타미나제이다. 본원에서, 용어 "트랜스글루타미나제"는 특정 유형 또는 공급원이 표시되지 않는 한 일반적으로 사용된다.
트랜스글루타미나제는 글루타민의 카르복스아미드 측쇄 (아민 수용자, 또는 상호적으로 아실 공여자)와 리신의 ε-아미노 기 (아민 공여자, 또는 상호적으로 아실 수용자) 사이에 아미드 결합을 형성한다. 특이성 측면에서, 트랜스글루타미나제는 글루타민 잔기와 관련하여 선택적이어서, 단백질 루프의 가요성 부분에 위치하고 특정 아미노산과 플랭킹되는 것을 필요로 하지만, 리신 잔기와 관련하여서는 무차별적이어서, 예를 들어 알킬렌아미노 화합물의 아미노 기를 리신 ε-아미노 대용물로서 용이하게 수용한다. 문헌 [Fontana et al., 2008]을 참조한다.
전형적인 트랜스글루타미나제-매개된 접합에서, 하기 제시된 바와 같이, 글루타민 잔기는 항체 상에 위치하고, 아미노 기는 링커-파트너 분자 모이어티 상에 위치한다:
Figure pct00001
폴리펩티드 쇄 상의 글루타민 잔기의 위치는 아민 수용자로서의 그의 이용가능성에 큰 영향을 미친다. 통상적으로, 항체 상의 글루타민 잔기 중 어떠한 것도 이용가능하지 않고, 항체를 이용가능하게 하기 위해 항체의 일부 변형이 필요하다. 전형적으로, 항체는 중쇄의 아스파라긴 297 (N297)에서 글리코실화된다 (N-연결된 글리코실화). 문헌 [Jeger et al., 2010]은 N297A 치환을 통한 글리코실화 부위의 제거 또는 번역후 효소적 탈글리코실화에 의한 항체의 탈글리코실화가 근처의 글루타민 295 (Q295)를 에스. 모바라엔시스 트랜스글루타미나제에 의한 아미드교환에 이용가능하게 한다는 것을 발견하였다. 이는 추가로, N297Q 치환이 글리코실화를 제거할 뿐만 아니라, 마찬가지의 아민 수용자인 제2 글루타민 잔기를 (위치 297에) 도입한다는 것을 제시하였다. 따라서, 간단한 탈글리코실화는 항체당 2개의 트랜스글루타미나제 반응성 글루타민 잔기를 (중쇄당 1개, Q295에) 생성하며, N297Q 치환을 갖는 항체는 4개의 이러한 글루타민 잔기를 (중쇄당 2개, 위치 Q295 및 Q297에) 갖는다.
문헌 [Jeger et al., 2010]에 개시된 N297A 및 N297Q 치환에 더하여, 항체 또는 또 다른 단백질을 변형시켜 이를 트랜스글루타미나제에 대한 기질로 만드는 것에 대한 다른 개시내용이 존재하였다.
(a) 문헌 [Strop et al., 2017 및 Farias et al., 2016]은 글루타민-함유 태그, 예컨대 LLQGG, LSLSQG, GGGLLQGG, GLLQG 등으로 조작된 항체 Fc 영역을 개시하며, 여기서 태그 내의 글루타민은 아민 수용자로서 작용할 수 있고, 이는 카르복시 말단을 포함하여 항체 중쇄 또는 경쇄의 다양한 위치에 위치할 수 있다.
(b) 문헌 [Chen et al., 2005]은 태그 QSKVX를 사용한 단백질의 변형을 개시하며, 여기서 X는 L 또는 I이고, 상기 단백질은 이어서 트랜스글루타미나제와 접합될 수 있다.
(c) 문헌 [Fischer et al., 2015]은 Fc 도메인이 결여된 항체 단편 내로의 화학식
(Q)-NH-(C)-X-L-(V-(Y-(M 또는 Z)z)q)r
의 글루타민 (Q) 함유 태그의 혼입을 개시한다.
(d) 문헌 [Rao-Naik et al., 2018]은 글루타민-함유 중쇄 C-말단 연장부를 항체에 부가하여 이를 트랜스글루타미나제-반응성이 되게 하는 것을 개시한다.
트랜스글루타미나제-반응성이 되도록 항체를 변형시키는 것에 대한 상보적인 접근법으로, 문헌 [Rao-Naik et al., 2017]은 야생형 항체에 접합시킬 수 있도록 트랜스글루타미나제를 변형시키는 것을 개시한다.
또한 소형 펩티드-함유 분자를 사용한 트랜스글루타미나제의 기질 특이성에 대한 연구가 존재하였다: 문헌 [Ando et al., 1989, Kamiya et al., 2011, Ohtsuka et al., 2000].
트랜스글루타미나제를 사용한 항체 또는 다른 단백질의 접합에 관한 다른 개시내용은 문헌 [Bregeon 2016, Bregeon et al., 2016, Bregeon et al., 2017, Dennler et al., 2014, Innate Pharma 2013, Lin et al., 2006, Mero et al., 2009, Mindt et al., 2008, Sato 2002, Sato et al., 2001, Schibli et al., 2007, 및 Sugimura et al., 2007]이 있다.
또한 말레이미드 기에 대한 마이클 첨가를 통해 접합을 수행할 목적으로 시스테인-함유 말단 연장부를 항체에 부착시키는 것이 공지되어 있다. 문헌 [Liu et al., 2014]은 이러한 연장부를 중쇄의 C-말단에 부착시키는 것을 개시한다. 문헌 [Babcook et al., 2017]은 이러한 연장부를 경쇄의 C-말단에 부착시키는 것을 개시한다.
제1 저자 또는 발명자 및 연도에 의해 본원에 인용된 문헌에 대한 전체 인용문은 본 명세서의 말미에 열거된다.
본 발명자들은 항체의 중쇄 및 경쇄의 불변 영역 내의 루프가 트랜스글루타미나제에 의한 접합 (아미드교환)에 적용가능한 항체를 제조하기 위한 변형을 위해 유리한 위치임을 발견하였다.
따라서, 한 실시양태에서,
(i) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 및 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
(ii) 중쇄의 EU 160 내지 164의 아미노산이 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17의 아미노산으로 대체된 것;
(iii) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 또는 서열식별번호: 20의 아미노산으로 대체된 것;
(iv) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 또는 서열식별번호: 24의 아미노산으로 대체된 것;
(v) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
(vi) 중쇄의 EU 280 내지 284의 아미노산이 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 또는 서열식별번호: 31의 아미노산으로 대체된 것;
(vii) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
(viii) 중쇄의 EU 314 내지 319의 아미노산이 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49 또는 서열식별번호: 50의 아미노산으로 대체된 것;
(ix) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
(x) 중쇄의 EU 358 내지 362의 아미노산이 서열식별번호: 54 또는 서열식별번호: 55의 아미노산으로 대체된 것;
(xi) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 63 또는 서열식별번호: 64의 아미노산으로 대체된 것;
(xii) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 66, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 68, 또는 서열식별번호: 69의 아미노산으로 대체된 것;
(xiii) 경쇄의 EU 122 내지 126의 아미노산이 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 또는 서열식별번호: 72의 아미노산으로 대체된 것;
(xiv) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
(xv) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 79, 서열식별번호: 81, 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것;
(xvi) 경쇄의 EU 182 내지 190의 아미노산이 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 84, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 86, 또는 서열식별번호: 87의 아미노산으로 대체된 것; 및
(xvii) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 90, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 95, 또는 서열식별번호: 96의 아미노산으로 대체된 것
으로 이루어진 군으로부터 선택된 대체 서열을 갖는 IgG 전장 항체가 제공된다.
또 다른 실시양태에서,
(I) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
(II) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18의 아미노산으로 대체된 것;
(III) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22의 아미노산으로 대체된 것;
(IV) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
(V) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
(VI) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
(VII) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 또는 서열식별번호: 63의 아미노산으로 대체된 것;
(VIII) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 66 또는 서열식별번호: 68의 아미노산으로 대체된 것;
(IX) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
(X) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 78 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것; 및
(XI) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93 또는 서열식별번호: 94의 아미노산으로 대체된 것
으로 이루어진 군으로부터 선택된 대체 서열을 갖는 IgG 전장 항체가 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 명세서는 화학식 (IV)의 접합체를 제공하며
Figure pct00002
여기서
Ab는 상기 하위단락 (i)-(xvii)에 따른 대체 서열을 갖는 전장 항체이고;
L은 대체 서열 내의 글루타민에 대한 아미드 결합
Figure pct00003
을 통해 Ab에 결합된 링커 모이어티이고;
D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 명세서는
(a) 상기 하위단락 (i)-(xvii)에 따른 대체 서열을 갖는 전장 항체를 트랜스글루타미나제의 존재 하에 1급 아민, 및 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 포함하는 아민 공여자 화합물과 혼합하는 단계; 및
(b) 트랜스글루타미나제가 대체 서열의 글루타민의 측쇄 카르복스아미드와 아민 공여자 화합물의 1급 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 촉매하도록 하여, 항체 접합체를 제조하는 단계
를 포함하는, 항체 접합체를 제조하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 명세서는
(a) 상기 하위단락 (i)-(xvii)에 따른 대체 서열을 갖는 전장 항체를 트랜스글루타미나제의 존재 하에 1급 아민 및 제1 반응성 관능기를 갖는 아민 공여자 화합물인 제1 화합물과 혼합하는 단계;
(b) 트랜스글루타미나제가 대체 서열의 글루타민의 측쇄 카르복스아미드와 제1 화합물의 1급 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 촉매하도록 하여, 항체 및 제1 화합물의 부가물을 제조하는 단계;
(c) 부가물을 제2 반응성 관능기, 및 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 갖는 제2 화합물과 접촉시키는 단계이며; 제2 반응성 관능기는 제1 반응성 관능기와 반응하여 그 사이에 공유 결합을 형성할 수 있는 것인 단계; 및
(d) 제1 및 제2 반응성 관능기가 반응하여 그 사이에 공유 결합을 형성하게 함으로써 항체 접합체를 제조하는 단계
를 포함하는, 항체 접합체를 제조하는 방법을 제공한다.
(경우에 따라 제1 화합물 또는 제2 화합물 내의) 모이어티가 단백질인 경우에, 생성된 접합체는 융합 단백질이다. 모이어티가 방사성동위원소인 경우에, 생성된 접합체는 방사선 요법 또는 방사성영상화에 사용될 수 있다. 모이어티는 검정 작용제, 예컨대 형광 표지, 중수소화 중합체, 또는 비오틴과 같은 리간드일 수 있으며, 이 경우에 접합체는 의학적 상태의 진단, 치료의 모니터링, 또는 분석 적용에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 모이어티는 의학적 치료, 특히 암의 치료에 사용될 수 있는 치료제이다 (이 경우에 생성물은 또한 항체-약물 접합체 또는 ADC로도 지칭됨).
도 1은 인간 IgG1의 CH1 영역 내의 루프의 위치를 보여주는 개략적 도면이고, 여기서 변형은 본원에 개시된 바와 같이 이루어질 수 있다.
도 2는 인간 IgG1의 CH2 영역 내의 루프의 위치를 보여주는 개략적 도면이고, 여기서 변형은 본원에 개시된 바와 같이 이루어질 수 있다.
도 3은 인간 IgG1의 CH3 영역 내의 루프의 위치를 보여주는 개략적 도면이고, 여기서 변형은 본원에 개시된 바와 같이 이루어질 수 있다.
도 4a, 도 4b, 및 도 4c는 인간 IgG1 항체 중쇄 불변 영역에 대한 서열식별번호: 1의 순차적 아미노산 넘버링과 EU 넘버링 사이의 상관관계, 플러스 그 안의 루프-연관 아미노산을 조합하여 보여준다.
도 5a 및 도 5b는 인간 IgG1 (서열식별번호: 1), IgG2 (서열식별번호: 2), IgG3 (서열식별번호: 3), 및 IgG4 (서열식별번호: 4) 불변 영역에 대한 루프 연관 아미노산의 정렬을 조합하여 보여준다.
도 6은 본원에 개시된 바와 같이 변형이 이루어질 수 있는 루프의 정렬을 보여주는, 인간 카파 및 람다 경쇄 불변 영역을 오버레이한 개략적 도면이다.
도 7은 인간 항체 카파 경쇄 불변 영역에 대한 서열식별번호: 5의 순차적 아미노산 넘버링과 EU 넘버링 사이의 상관관계, 플러스 그 안의 루프-연관 아미노산을 보여준다.
도 8은 인간 카파 (서열식별번호: 5) 및 람다 (서열식별번호: 6) 불변 영역의 루프 연관 아미노산 사이의 정렬을 보여준다.
도 9는 루프가 트랜스글루타미나제 반응성 글루타민을 함유하도록 어떻게 변형될 수 있는지를 예시한 개략적 도면이다.
도 10은 트랜스글루타미나제를 사용하여 접합체를 제조하는 1- 및 2-단계 방법을 개략적으로 비교한다.
도 11a, 도 11b, 및 도 11c는 다양한 인간 암 세포주에 대한 항-메소텔린 항체 및 그의 항체 약물 접합체 (ADC)의 결합을 비교한다.
정의
"항체"는 전체 항체 및 그의 임의의 항원 결합 단편 (즉, "항원-결합 부분") 또는 단일 쇄 변이체를 의미한다. 전체 항체는 디술피드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (VL 또는 Vk) 및 1개의 단일 도메인, CL을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. VH 및 VL 영역은 보다 보존된 프레임워크 영역 (FR)이 점재되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명되는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (Clq)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 매개할 수 있다. 항체가 5 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 1 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 6 x 10-9 M 이하, 보다 바람직하게는 3 x 10-9 M 이하, 보다 더 바람직하게는 2 x 10-9 M 이하의 KD로 항원 X에 결합하는 경우에, 항체는 항원 X에 "특이적으로 결합하는" 것으로 언급된다. 항체는 키메라, 인간화, 또는 바람직하게는, 인간 항체일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 글리코실화 유형 또는 정도에 영향을 미치도록, 항체 반감기를 연장시키도록, 이펙터 세포 또는 보체계와의 상호작용을 증진 또는 감소시키도록, 또는 일부 다른 특성을 조정하도록 조작될 수 있다. 조작은 1개 이상의 아미노산의 대체, 부가 또는 결실에 의해, 또는 도메인을 또 다른 이뮤노글로불린 유형으로부터의 도메인으로 대체하는 것에 의해, 또는 상기의 조합에 의해 달성될 수 있다.
항체의 "항원 결합 단편" 및 "항원 결합 부분" (또는 간단히 "항체 부분" 또는 "항체 단편")은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 1개 이상의 단편을 의미한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편, 예컨대 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) 힌지 영역의 일부를 갖는 본질적으로 Fab인 Fab' 단편 (예를 들어, 문헌 [Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed., Saunders Elsevier 2007] 참조); (iv) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (v) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); (vii) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR); 및 (viii) 단일 가변 도메인 및 2개의 불변 도메인을 함유하는 중쇄 가변 영역인 나노바디에 의해 수행될 수 있는 것으로 제시되었다. 바람직한 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, Fab', Fv, 및 Fd 단편이다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여, VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 쇄 (단일 쇄 Fv 또는 scFv로 공지됨)로 제조될 수 있게 하는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bird et al., (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단일 쇄 항체는 또한 용어 항체의 "항원-결합 부분" 내에 포괄된다.
달리 나타내지 않는 한 - 예를 들어 서열식별번호 목록에서 선형 넘버링을 참조한 - 항체 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 (VH 또는 VL) 내의 아미노산 위치의 넘버링에 대한 언급은 카바트 시스템 (Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest, 5th ed., Pub. No. 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991, 이하 "카바트")에 따르고, 항체 중쇄 또는 경쇄 불변 영역 (CH1, CH2, CH3, 또는 CL) 내의 아미노산 위치의 넘버링에 대한 언급은 카바트에 제시된 바와 같은 EU 인덱스에 따른다. Lazar et al., US 2008/0248028 A1을 참조하고, 그의 개시내용, 예를 들어 이러한 용법의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 추가로, 이뮤노제네틱스 인포메이션 시스템(ImMunoGeneTics Information System) (IMGT)은 그의 웹사이트에 중쇄 불변 영역에 대한 그의 넘버링 시스템, EU 넘버링, 및 카바트 넘버링 사이의 대응을 보여주는 "IMGT 사이언티픽 차트: C 넘버링 사이의 대응"이라는 표제의 표를 제공한다.
"단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 의미한다 (예를 들어, 항원 X에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 항원 X 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, 항원 X에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예컨대 다른 종으로부터의 항원 X 분자에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 단리된 항체는 인간 항원 X에 특이적으로 결합하고, 다른 (비-인간) 항원 X 항원과는 교차-반응하지 않는다. 또한, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
"모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 특정한 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타내는 단일 분자 조성의 항체 분자의 제제를 의미한다.
"인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다 (및 존재하는 경우에 불변 영역)가 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 것인 가변 영역을 갖는 항체를 의미한다. 인간 항체는 천연 또는 합성 변형을 포함한 이후의 변형을 포함할 수 있다. 인간 항체는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 그라프팅된 항체는 포함하지 않는다.
"인간 모노클로날 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다가 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 것인 가변 영역을 갖는, 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 의미한다. 한 실시양태에서, 인간 모노클로날 항체는 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 비인간 동물, 예를 들어 트랜스제닉 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
실시양태
일반적으로, 트랜스글루타미나제-반응성 글루타민은 돌출되고 - 즉, 노출되고 접근가능하고 - 가요성인 단백질 쇄의 영역에 존재할 필요가 있다. 야생형 항체 중쇄는 약 12개의 글루타민을 갖고 또 다른 6개 가량이 경쇄에 존재하지만, 문헌 [Jeger et al., 2010]에 제시된 바와 같이, 단지 1개 - 중쇄 내의 Q295만이 트랜스글루타미나제에 의해 아미드교환될 수 있다. 또한, 그렇다 하더라도, Q295 트랜스글루타민화는 위치 s297 근처에서의 글리코실화를 제거하는 것을 필요로 한다.
중쇄의 CH1, CH2, 및 CH3 도메인 및 경쇄의 불변 영역은 본 발명자들이 루프로서 지칭하는 돌출 서열을 갖는다. Q295를 제외하고, 이는 트랜스글루타미나제-반응성 글루타민을 보유하지 않지만, 본 발명자들은 이것이 그 안으로 아미드교환가능한 글루타민을 도입하기 위한 단백질 조작에 적합한 부위일 수 있다는 것을 발견하였다. 루프는 일반적으로, 적합하게 위치하는 글루타민이 존재하는 경우에, 트랜스글루타미나제에 보다 접근가능할 가능성이 있는 중쇄 및 경쇄 불변 영역 내의 돌출 영역 - 그 자체로 서브-도메인 - 이다.
본 발명자들은 변형을 위한 후보인 인간 IgG1 (hIgG1)의 CH1 도메인에서 5개의 루프를 확인하였다. 도 1은 이들 루프의 위치를 보여주는 개략적 도면이다. 본 발명자들은 또한 hIgG1의 CH2 도메인에서 6개의 이러한 루프 및 CH3 도메인에서 5개를 확인하였고, 그의 위치는 각각 도 2 및 3의 개략적 도면에 제시된다.
도 4a, 4b 및 4c는 순차적 넘버링 (서열식별번호: 1) 및 EU 넘버링을 사용하여 인간 IgG1의 아미노산 사이의 상관관계를 조합하여 보여준다. 추가적으로, 각각의 루프와 연관된 - 즉, 그 내에 있거나 또는 그와 인접한 - 아미노산이 강조된다. 4개의 인간 IgG 이소형 - IgG1 (서열식별번호: 1), IgG2 (서열식별번호: 2), IgG3 (서열식별번호: 3), 및 IgG4 (서열식별번호: 4) - 은 그의 CH1, CH2, 및 CH3 도메인에서 고도로 상동성이고, 주로 그의 힌지 영역에서 상이하다. 도 5a 및 5b에 제시된 바와 같이 EU 넘버링에 따라 정렬될 때, 4개의 이소형 사이에서 루프 연관 아미노산에서의 높은 정도의 상동성은 쉽게 명백하다. (hIgG2, hIgG3, 및 IgG4 내의 아미노산의 EU 넘버링은 도 4a-4c에서 IgG1에 대해 제공된 상관관계로부터 또는 Lazar et al., US 2008/0248028 A1과 같은 간행물을 참조하여 유도될 수 있음.) 바람직한 실시양태에서, 대체 서열은 IgG1 항체에 삽입된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 대체 서열은 IgG4 항체에 삽입된다.
트랜스글루타미나제 기질로서 이용가능한 글루타민을 제조하도록 조작될 수 있는 루프는 또한 경쇄에 존재한다. 4개의 IgG 중쇄 사이에 존재하는 것보다는 카파 및 경쇄 유형 사이에 더 적은 아미노산 서열 상동성이 존재하지만, 그럼에도 불구하고 우수한 구조적 상동성이 존재한다. 도 6은 카파 및 람다 경쇄 불변 도메인의 겹쳐진 개략적 도면 및 루프 영역이 어떻게 중첩되는지 보여준다. 도 7은 순차적 넘버링 (서열식별번호: 5) 및 EU 넘버링을 사용하여 인간 카파 경쇄 불변 도메인 (Cκ)에서의 아미노산 사이의 상관관계를 보여주고, 또한 루프 연관 아미노산은 강조된다. 도 8은 카파 및 람다 경쇄 불변 도메인의 EU 넘버링 시스템에 따른 정렬을 보여준다. (람다 쇄 불변 도메인 (Cλ) 내의 아미노산에 대한 EU 넘버는 도 7로부터 또는 Lazar et al., US 2008/0248028 A1과 같은 출처를 참조하여 유도될 수 있음.)
표 A는 EU 넘버링을 사용하여 각각의 루프에 대한 연관 아미노산을 열거한다.
Figure pct00004
트랜스글루타미나제 기질로서 작용할 수 있는 글루타민을 함유하도록 루프를 조작하는 다양한 방법이 존재한다. 조작은 루프 내에서, 또는 그의 주변부에서 일어날 수 있다.
일부 루프는 헬릭스를 포함하며, 그의 코일 속성은 CH3 루프 4의 경우에서와 같이 천연 글루타민이 존재하는 경우에도 아미드교환을 억제한다. 헬릭스의 파괴는 연장된 가요성 루프를 생성하고, 여기서 그 안의 글루타민은 아미드교환가능할 수 있다. 세린, 프롤린 또는 글리신이 루프를 파괴하는데 사용될 수 있다. 이러한 개념은 도 8에 개략적으로 예시되어 있다 (시야각은 도 3의 것과 상이함).
대체 서열 내의 글루타민은 바람직하게는 트랜스글루타미나제에 대한 바람직한 기질 모티프로서, -VLQ-와 같이, 발린 및 류신의 아미노 측면에 플랭킹된다. 따라서, 바람직한 대체 서열은 트리펩티드 -VLQ-를 포함한다.
루프에 천연적으로 존재하지만 아미드교환에 불리하게 위치하는 글루타민은 상이한 아미노산으로 대체될 수 있고, 또 다른 글루타민이 보다 유리한 위치에서 루프 내로 삽입될 수 있다. 또는, 대체 서열은 천연 글루타민을 아미드교환에 보다 유리하게 위치시키도록 설계될 수 있다.
증거로서, 본 발명자들은 Terrett et al., US 8,268,970 B2 (2012)의 항체 6A4와 동일한 중쇄 및 경쇄 CDR을 갖는 IgG1 항-메소텔린 항체를 변형시켰다. 그의 중쇄 및 경쇄 서열은 각각 서열식별번호: 98 및 서열식별번호: 99로서 제공된다. 표 B는 그의 CH1 도메인에서 이루어진 대체를 열거한다.
Figure pct00005
표 C는 그의 CH2 도메인에서 이루어진 대체를 열거한다.
Figure pct00006
Figure pct00007
표 D는 그의 CH3 도메인에서 이루어진 대체를 열거한다.
Figure pct00008
표 E는 그의 경쇄 (카파) 불변 도메인에서 이루어진 대체를 열거한다.
Figure pct00009
Figure pct00010
본 발명의 항체는 동종이량체 또는 이종이량체일 수 있다. 동종이량체인 경우에, 2개의 경쇄-중쇄 쌍은 동일하고; 즉, 각각의 경쇄-중쇄 쌍은 동일한 대체 서열 및 동일한 가변 영역을 함유한다. 이종이량체 항체는 둘 다의 경쇄-중쇄 쌍이 동일한 가변 영역을 갖지만 2개의 경쇄-중쇄 쌍 중 1개만이 대체 서열을 함유하거나 또는 각각의 경쇄-중쇄 쌍이 상이한 대체 서열을 함유한다는 의미에서 그러할 수 있다. 대안적으로, 이종이량체 항체는 이중특이적, 즉, 각각의 경쇄-중쇄 쌍이 동일한 대체 서열을 갖지만 상이한 가변 영역을 가져서 상이한 항원에 특이적으로 결합한다는 의미에서 그러할 수 있다. 마지막으로, 이종이량체 항체는 센스 둘 다에서 이종이량체일 수 있다.
본 개시내용의 방법에 의해 변형 및 접합될 수 있는 항체는 하기 항원을 인식하는 것을 포함한다: 메소텔린, 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), CD19, CD22, CD30, CD70, B7H3, B7H4 (또한 O8E로도 공지됨), 단백질 티로신 키나제 7 (PTK7), 글리피칸-3, RG1, 푸코실-GM1, CTLA-4, 및 CD44. 항체는 동물 (예를 들어, 뮤린), 키메라, 인간화, 또는 바람직하게는 인간 항체일 수 있다. 항체는 바람직하게는 모노클로날, 특히 모노클로날 인간 항체이다. 상기 언급된 항원 중 일부에 대한 인간 모노클로날 항체의 제조는 Korman et al., US 8,609,816 B2 (2013; B7H4, 또한 08E로서 공지됨; 특히 항체 2A7, 1G11, 및 2F9); Rao-Naik et al., 8,097,703 B2 (2012; CD19; 특히 항체 5G7, 13F1, 46E8, 21D4, 21D4a, 47G4, 27F3, 및 3C10); King et al., US 8,481,683 B2 (2013; CD22; 특히 항체 12C5, 19A3, 16F7, 및 23C6); Keler et al., US 7,387,776 B2 (2008; CD30; 특히 항체 5F11, 2H9, 및 17G1); Terrett et al., US 8,124,738 B2 (2012; CD70; 특히 항체 2H5, 10B4, 8B5, 18E7, 및 69A7); Korman et al., US 6,984,720 B1 (2006; CTLA-4; 특히 항체 10D1, 4B6, 및 1E2); Vistica et al., US 8,383,118 B2 (2013, 푸코실-GM1, 특히 항체 5B1, 5B1a, 7D4, 7E4, 13B8, 및 18D5) Korman et al., US 8,008,449 B2 (2011; PD-1; 특히 항체 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 4A11, 7D3, 및 5F4); Huang et al., US 2009/0297438 A1 (2009; PSMA. 특히 항체 1C3, 2A10, 2F5, 2C6); Cardarelli et al., US 7,875,278 B2 (2011; PSMA; 특히 항체 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5, 및 1C3); Terrett et al., US 8,222,375 B2 (2012; PTK7; 특히 항체 3G8, 4D5, 12C6, 12C6a, 및 7C8); Terrett et al., US 8,680,247 B2 (2014; 글리피칸-3; 특히 항체 4A6, 11E7, 및 16D10); Harkins et al., US 7,335,748 B2(2008; RG1; 특히 항체 A, B, C, 및 D); Terrett et al., US 8,268,970 B2 (2012; 메소텔린; 특히 항체 3C10, 6A4, 및 7B1); Xu et al., US 2010/0092484 A1 (2010; CD44; 특히 항체 14G9.B8.B4, 2D1.A3.D12, 및 1A9.A6.B9); Deshpande et al., US 8,258,266 B2 (2012; IP10; 특히 항체 1D4, 1E1, 2G1, 3C4, 6A5, 6A8, 7C10, 8F6, 10A12, 10A12S, 및 13C4); Kuhne et al., US 8,450,464 B2 (2013; CXCR4; 특히 항체 F7, F9, D1, 및 E2); 및 Korman et al., US 7,943,743 B2 (2011; PD-L1; 특히 항체 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7, 및 13G4)에 개시되어 있고; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
화학식 (IV)의 접합체와 관련하여
Figure pct00011
(a) D는 바람직하게는 한 실시양태에서 세포독성 약물이다.
(b) 또 다른 바람직한 실시양태에서, D는 TLR7, STING, NRLP3, 또는 RIG-1 효능제이다.
(c) 바람직한 실시양태에서, L은 -(CH2)2-6-이다.
(d) 또 다른 바람직한 실시양태에서, L은
Figure pct00012
이고,
여기서
T는 자기-희생 기이고;
t는 0 또는 1이고;
AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
q는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
r은 1, 2, 3, 4, 또는 5이다.
일반적으로, 항체 접합체의 트랜스글루타미나제-매개된 제조는 도 2에 개략적으로 예시된 바와 같이 1-단계 공정 또는 2-단계 공정에 의할 수 있다. 1-단계 공정에서, 트랜스글루타미나제는 아민 수용자로서 작용하는 연장부 상의 글루타민 카르복스아미드, 및 아민 공여자 화합물 H2N-L-D를 커플링시키고, 여기서 L은 링커 모이어티이고, 파트너 분자 D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제이며, 그에 의해 접합체를 직접 형성한다. 2-단계 공정에서, 트랜스글루타미나제는 아민 수용자로서 작용하는 연장부 상의 글루타민 카르복스아미드와 아민 공여자 화합물인 제1 화합물 (H2N-L'-R') 사이의 초기 아미드교환 부가물의 형성을 촉매하며, 여기서 L'는 제1 링커 모이어티이고, R'는 제1 반응성 관능기이다. 후속적으로, 부가물을 제2 화합물 (R"-L"-D)과 반응시키며, 여기서 R"는 R'와 반응할 수 있는 제2 반응성 관능기이고, L"는 제2 링커 모이어티이고, D는 상기 정의된 바와 같다. 때때로, 1-단계 공정은 효소적 공정으로서 지칭되고, 2-단계 공정은 화학적 및 효소적 단계 둘 다를 수반하기 때문에 화학-효소적 공정으로서 지칭된다. 각각의 L, L', 및 L"는 알킬 쇄 -(CH2)m-일 수 있고, 여기서 m은 2 내지 10을 포함한 정수이거나, 또는 특히 L 및 L"의 경우에, 이는 하기 논의된 바와 같은 보다 복잡한 구조일 수 있다.
아민 공여자는, H2N-L-D이든 또는 H2N-L'-R'이든, 종종 글루타민 카르복스아미드와 항체 리신의 ε-아미노 기 사이의 바람직하지 않은 아미드교환을 억제하기 위해 매우 과량으로 사용된다. 모이어티 D가 고가이거나 수득하기 어려운 경우에, 매우 과량의 사용은 비실용적일 수 있다. 이러한 경우에, 2-단계 공정이 바람직할 수 있지만, 이는 추가의 단계를 필요로 한다.
바람직한 실시양태에서, 1-단계 공정에서의 아민 공여자 화합물은 화학식 (I)에 의해 나타내어지며:
Figure pct00013
여기서 D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 1-단계 공정을 위한 아민 공여자 화합물은 화학식 (Ia)에 의해 나타내어진 구조를 가지며:
Figure pct00014
여기서
D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제이고;
T는 자기-희생 기이고;
t는 0 또는 1이고;
AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
q는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
r은 1, 2, 3, 4, 또는 5이다.
본원의 화학식 (Ia), (Ia'), 및 (III)에서, -AAa-[AAb]p-는 그의 길이가 p의 값에 의해 결정되는 폴리펩티드를 나타낸다 (p가 1인 경우 디펩티드, p가 3인 경우 테트라펩티드 등). AAa는 폴리펩티드의 카르복시 말단에 있고, 그의 카르복실 기는 D (또는 존재하는 경우에 T)의 아민 질소와 펩티드 (아미드) 결합을 형성한다. 반대로, 마지막 AAb는 폴리펩티드의 아미노 말단에 있고, 그의 α-아미노 기는
Figure pct00015
와 펩티드 결합을 형성한다.
바람직한 폴리펩티드 -AAa-[AAb]p-는 Val-Cit, Val-Lys, Lys-Val-Ala, Asp-Val-Ala, Val-Ala, Lys-Val-Cit, Ala-Val-Cit, Val-Gly, Val-Gln, 및 Asp-Val-Cit이다 (통상적인 N-에서-C 방향으로, H2N-Val-Cit-CO2H와 같이 기재됨). 보다 바람직하게는, 폴리펩티드는 Val-Cit, Val-Lys, 또는 Val-Ala이다. 바람직하게는, 폴리펩티드 -AAa-[AAb]p-는 표적 세포 내부에서 발견되는 효소, 예를 들어 카텝신 및 특히 카텝신 B, 또는 표적 기관 또는 조직의 환경에서의 효소에 의해 절단가능하다.
아래첨자 s가 1인 경우에, 화합물 (Ia)은 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG) 기를 함유하며, 이는 유리하게는 화합물 (Ia)의 용해도를 개선시켜 - 수성 매질 중에서 수행되는 단계인 - 항체에 대한 접합을 용이하게 할 수 있다. 또한, PEG 기는 항체와 펩티드 -AAa-[AAb]p- 사이의 스페이서로서의 역할을 할 수 있어, 항체의 벌크는 펩티드-절단 효소의 작용을 입체적으로 방해하지 않는다.
0 또는 1인 아래첨자 t에 의해 표시된 바와 같이, 자기-희생 기 T는 임의로 존재한다. 자기-희생 기는 AAa 또는 AAb로부터의 절단이, 경우에 따라, 자기-희생 기를 그 자체로 D로부터 결합해제시키고 후자를 유리시켜 그의 치료 기능을 발휘하도록 하는 반응 순서를 개시하는 것이다. 존재하는 경우에, 자기-희생 기 T는 바람직하게는 p-아미노벤질 옥시카르보닐 (PABC) 기이고, 그의 구조는 하기 제시되며, 여기서 별표 (*)는 D의 아민 질소에 결합된 PABC의 단부를 나타내고, 파상선 (
Figure pct00016
)은 폴리펩티드 -AAa-[AAb]p-에 결합된 단부를 나타낸다. PABC 기는 2019년 5월 29일에 출원된 미국 출원 일련 번호 16/425,596에 개시된 바와 같이 치환될 수 있다.
Figure pct00017
사용될 수 있는 또 다른 자기-희생 기는 Feng, US 7,375,078 B2 (2008)에 개시된 바와 같은 치환된 티아졸이다.
2-단계 접합에서, 기 R' 및 R"의 많은 조합이 사용될 수 있다. R' 및 R" (또는, 그 반대로, R" 및 R')의 적합한 조합은 하기를 포함한다:
(a) 하기에서와 같은 마이클 첨가 부가물을 형성하기 위한, 말레이미드 기 및 술프히드릴 기
Figure pct00018
;
(b) 하기에서와 같은 "클릭" 화학을 통해 고리화첨가 생성물을 형성하기 위한, 디벤조시클로옥틴 기 및 아지드 기
Figure pct00019
;
(c) 하기에서와 같은 아미드를 형성하기 위한, N-히드록시숙신이미드 에스테르 및 아민
Figure pct00020
(d) 하기에서와 같은 옥심을 형성하기 위한, 알데히드 또는 케톤 (여기서 "알킬"은 바람직하게는 C1-3 알킬임) 및 히드록실아민
Figure pct00021
.
따라서, R'는
Figure pct00022
로부터 선택될 수 있고;
한편, 상호적으로, R"는
Figure pct00023
로부터 선택될 수 있다.
2-단계 공정에 적합한 아민 공여자 제1 화합물이 화학식 (II)으로 도시되며
Figure pct00024
여기서 R'는 상기 정의된 바와 같고, 바람직하게는
Figure pct00025
이다.
상응하는 적합한 화합물 R"-L"-D는 화학식 (III)으로 제시되며
Figure pct00026
여기서 R"는 상기 정의된 바와 같고, 바람직하게는
Figure pct00027
이고,
r, q, AAb, p, AAa, T, t, 및 D는 화학식 (Ia)과 관련하여 상기 정의된 바와 같다.
접합체가 암 치료에 사용하기 위해 의도되는 경우에, 치료제는 표적화된 암 세포의 사멸을 유발하는 세포독성 약물일 수 있다. 접합체에 사용될 수 있는 세포독성 약물은 하기 유형의 화합물 및 그의 유사체 및 유도체를 포함한다:
(a) 에네디인 예컨대 칼리케아미신 (예를 들어, 문헌 [Lee et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 3464 및 3466] 참조) 및 운시알라마이신 (예를 들어, Davies et al., WO 2007/038868 A2 (2007); Chowdari et al., US 8,709,431 B2 (2012); 및 Nicolaou et al., WO 2015/023879 A1 (2015) 참조);
(b) 튜부리신 (예를 들어, Domling et al., US 7,778,814 B2 (2010); Cheng et al., US 8,394,922 B2 (2013); 및 Cong et al., US 8,980,824 B2 (2015) 참조);
(c) DNA 알킬화제, 예컨대 CC-1065 및 두오카르마이신의 유사체 (예를 들어, Yang et al., US 2018/0051031 A1 (2018); Boger, US 6,5458,530 B1 (2003); Sufi et al., US 8,461,117 B2 (2013); 및 Zhang et al., US 8,852,599 B2 (2014) 참조);
(d) 에포틸론 (예를 들어, Vite et al., US 2007/0275904 A1 (2007) 및 US RE42930 E (2011) 참조);
(e) 아우리스타틴 (예를 들어, Senter et al., US 6,844,869 B2 (2005) 및 Doronina et al., US 7,498,298 B2 (2009) 참조);
(f) 벤조디아제핀 이량체 (예를 들어, Zhang et al., US 9,527,871 B2 (2016); Zhang et al., US 9,688,694 B2 (2017); McDonald et al., US 9,526,801 B2 (2016); Howard et al., US 2013/0059800 A1(2013); US 2013/0028919 A1 (2013); 및 WO 2013/041606 A1 (2013) 참조); 및
(g) 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 및 DM4 (예를 들어, Chari et al., US 5,208,020 (1993) 및 Amphlett et al., US 7,374,762 B2 (2008) 참조).
바람직하게는, 약물은 DNA 알킬화제, 튜부리신, 아우리스타틴, 피롤로벤조디아제핀, 에네디인, 또는 메이탄시노이드 화합물이다. 구체적 예는, 예시로서 및 비제한적으로:
Figure pct00028
Figure pct00029
이다.
면역계는 천연 리간드가 병원체-연관 분자 패턴 (PAMP)인 수용체를 갖는다. PAMP의 그의 동족 수용체에 대한 결합은 면역계를 활성화시켜 연관된 병원체에 의한 감염을 방어한다. 추가적으로, 이들 수용체는 또한 실제 병원체 감염 이외의 다양한 상태를 치료하는데 있어서 백신 및 면역요법제의 작용에 대해 보조 효과를 갖는 합성 효능제에 의해 활성화될 수 있다. 면역-종양학 작용제, 예컨대 이필리무맙, 니볼루맙, 및 펨브롤리주맙은 특히 이러한 보조 효과로부터 이익을 얻을 수 있다. 합성 효능제에 의해 활성화될 수 있는 수용체는 TLR3, TLR7, TLR9 (각각 톨-유사 수용체-3, -7, 및 -9), STING (인터페론 유전자의 자극제; 또한 MPYS, TMEM173, MITA 또는 ERIS로도 공지됨), NLRP3 (NOD-유사 수용체 단백질 3), 및 RIG-I (레티노산 유도성 유전자 I)를 포함한다. 따라서, 대안적 실시양태에서, 치료제는 TLR3, TLR7, TLR9, STING, NLRP3, 또는 RIG-I 효능제이다. 특히, 치료제는 Poudel et al., US 2019/0055243 A1 (2019); Young et al., US 2019/0055244 A1 (2019); Poudel et al., US 2019/0055245 A1 (2019); He et al., US 2019/0055246 A1 (2019); He et al., US 2019/0055247 A1 (2019); 및 Purandare et al., PCT 출원 PCT/US2019/028697 (2019년 4월 23일에 출원됨)에 개시된 바와 같은 TLR7 효능제일 수 있다.
실시예
본 발명의 실시는 하기 실시예를 참조하여 추가로 이해될 수 있으며, 이는 제한이 아닌 예시로서 제공된다.
실시예 1 - 변형된 항체의 접합
본원에 개시된 변형된 항체를, 항암 약물로서의 튜부리신 유사체 및 아민 공여자로서의 역할을 할 수 있는 알킬 아미노 기로 종결된 디펩티드 링커를 갖는 화합물 A (2019년 6월 11일에 출원된 Young et al., US 출원 일련 번호 16/437047)에 접합시켰다:
화합물 A
Figure pct00030
재조합 박테리아 트랜스글루타미나제를 사용하여 아민 공여자로서의 화합물 A와 본원에 기재된 바와 같이 변형된 항체의 접합을 하기 열거된 프로토콜에 의해 수행하였다.
트랜스글루타미나제를 사용하여 아민 공여자와 본원에 기재된 바와 같이 변형된 항체의 접합을 하기 열거된 프로토콜에 의해 수행하였다. 본 발명자들은 V65I 및 Y75F 점 돌연변이를 갖는 디스파제 활성화 BTGase를 사용하였다. 이를 사용 전에 제제 (완충제 20 mM 아세테이트, 10% 글리세롤 pH4)로부터 50 mM 아세트산나트륨 pH5.5로 투석하였다.
50 mM 트리스-HCl, pH 8.0, 또는 20 mM 히스티딘, 50 mM 이미다졸, 10% 수크로스, pH ~7.8 중 ~2 mg/mL의 항체를 항체당 0.2 몰 과량의 트랜스글루타미나제의 존재 하에 부위당 10-배 몰 과량의 아민 공여자와 반응시켰다. 계속 부드럽게 혼합하면서 37℃에서 밤새 반응이 진행되도록 하였다.
항체 약물 접합체를 0.2 μm 여과하고, mAb 셀렉트 슈어(Select SuRe)™ 칼럼 (지이 헬스케어(GE Healthcare))을 사용하여 정제하였다. 접합체를 50 mM 트리스-HCl, pH 8.0으로 사전-평형화된 칼럼 상에 로딩하고, 10 CV (칼럼 부피)의 평형화 완충제에 이어서 10 CV의 50 mM 트리스-HCl, 17% 아세토니트릴, pH 8.0으로 세척하여 미반응 아민 공여자를 제거하였다. 칼럼을 50 mM 트리스-HCl, pH 8.0으로 재평형화한 후, 1 mL 분획에서 0.1 M 시트레이트, pH 3.5로 용리시키고, 1 M 트리스, pH 8.0으로 1/10의 용리 부피로 중화시켰다. 목적 분획을 제제 완충제 20 mM 히스티딘, 10% 수크로스, pH 6.0 중에서 투석하고, LC-MS (ESI-QTOF), RP-HPLC 및 SDS-PAGE에 의해 순도 및 약물 대 항체 비 (DAR)에 대해 분석하였다.
실시예 2 - 접합된 변형된 항체의 특징화
트랜스글루타미나제에 의한 화합물 A에 대한 접합을 가능하게 하는 본원에 개시된 대체 서열의 성능을 평가하기 위한 모델 항체로서 Terrett et al., US 8,268,970 B2 (2012)의 항-메소텔린 항체 6A4를 사용하였다. 효소-매개 접합을 방지하기 위해, 항체는 K222R 부위 특이적 돌연변이를 함유하였다.
50 mM 이미다졸, 10% 수크로스, pH 8 중 5 mg/mL의 항체를 항체당 0.2 몰 과량의 재조합 박테리아 트랜스글루타미나제의 존재 하에 부위당 10-배 몰의 아민 공여자와 반응시켰다. 계속 부드럽게 혼합하면서 37℃에서 밤새 인큐베이션한 후, 반응 혼합물을 DAR 평가를 위해 LC-MS (ESI-QTOF)에 의해 분석하였다.
상기 절차에 의해 트랜스글루타미나제에 의해 접합된 것으로 확인된 항체를 표 F에 열거한다. 약물-항체 비 또는 DAR은 각각의 항체에 부착된 약물 모이어티 (튜부리신 유사체)의 수이다. 비글리코실화 항체는 Q295A 및 N297A 돌연변이를 가져, 야생형 N297A 글리코실화 부위를 제거하였다.
Figure pct00031
Figure pct00032
대체 서열을 갖는 항체를 선택하기 위해, 본 발명자들은 또한 Q295A 및 N297A 돌연변이를 생성하지 않고, 따라서 야생형 N297A 글리코실화 부위를 무손상으로 남김으로써 글리코실화가 존재하는 것의 DAR에 대한 효과를 조사하였다. 결과를 표 G에 제시한다.
Figure pct00033
실시예 3 - 변형된 항체의 접합체의 암 세포에 대한 결합
대체 서열 CH3-4.14, CH1-4.6, 또는 CH3-2.11로 변형된 항-메소텔린 항체 6A4를 화합물 A와 접합시켰다. 이소형 대조군으로서, 항-CD70 항체 및 화합물 A의 접합체를 제조하였다. 항-CD70 항체는 글리코실화를 제거하고 아미드교환 부위로서 근처 Q295를 유리시키기 위해 N297A 부위 특이적 치환을 가졌다.
세포주 및 배양 조건. 인간 상피 암종 세포주 H226, N87, 및 OVCAR3, 및 햄스터 난소 세포주 CHO-K1을 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC, 메릴랜드주 록빌)으로부터 입수하였다. 세포를 표준 조건 (5% CO2를 함유하는 가습 분위기의 37℃) 하에 10%의 FBS (깁코(Gibco), 미국)로 보충된 RPMI 또는 DMEM (깁코, 미국) 중에서 배양하였다. 세포는 검정 시 80% 전면생장률이었다. 트리판-블루 배제 검정을 사용하여 혈구계로 농도 및 생존율을 결정하였다.
표면 결합 항체 분석. 1% FBS를 함유하는 배양 배지를 사용하여 96-웰 플레이트에서 시험 샘플의 독립적 연속 희석물 (최종 부피 50 μL)을 이중으로 제조하였다. 세포를 셀스트리퍼(CellStripper) 해리 시약 (코닝(Corning))으로 탈착시켰다. PBS로 세척한 후, 세포를 시험 샘플의 연속 희석물과 함께 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, 검정 완충제로 원심분리에 의해 1회 세척하였다. 검정 완충제로 1:50으로 희석된 검출 시약, PE-접합된 염소 F(ab')2 항-인간 IgG (잭슨 이뮤노리서치) 중에 세포를 재현탁시켰다. 플레이트를 25℃에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 검정 완충제로 원심분리하면서 1회 세척하였다. 세포를 80 μl 검정 완충제 중에 재현탁시키고, 시토플렉스(CytoFLEX)에 의해 분석하였다.
도 11a, 11b, 및 11c는 각각 H226, OVCAR3, 및 N87 세포에 대한 3종의 접합체 (ADC)의 결합을 비접합된 항체 6A4의 결합과 비교한 것이다. 이들 3종의 세포주는 그의 세포 표면 상에 메소텔린을 발현하지만 CD70은 발현하지 않는다. 3종의 접합체의 결합은 비접합된 항체 6A4의 결합과 실질적으로 구별불가능하다는 것을 도면으로부터 관찰할 수 있다. 이들 결과는 대체 서열을 갖는 항체의 변형이 그의 항원에 대한 그의 결합에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여준다. 예상된 바와 같이, 그의 항-Cd70 항체를 갖는 이소형 대조군은 이들 세포에 결합하지 않았다.
실시예 4 - 변형된 항체의 접합체의 세포독성
N87, OVCAR3, 및 H226 세포에 대한 상기 실시예의 3종의 접합체의 시험관내 세포독성을 결정하였다. 모두 1 nM 미만의 IC50을 나타내었고, 이는 높은 효력을 나타낸다. 결과를 표 H에 제시한다.
Figure pct00034
시험관내 세포독성 검정 절차는 하기와 같았다: ADC를 N87, H226, OVCAR3, 및 CHO K1 세포 (후자는 음성 대조군임)에 대해 시험관내 효력을 평가하였다. 세포를 96-웰 편평-바닥 플레이트 내의 10% FBS를 함유하는 RPMI-1640 배지 100 μL 중에 104개 세포/웰 (N87, OVCAR3, 및 H226의 경우) 및 1000개 세포/웰 (CHO K1의 경우)로 플레이팅하였다. 세포를 37℃에서 4시간 동안 부착되도록 하였다. 각각의 ADC의 3X 농도 원액을 1:3 시리즈로 연속 희석하고, 세포에 첨가하고, 이어서 약물 처리 후에 50 μl 추가의 성장 배지를 첨가하였다. 처리된 세포를 37℃에서 7일 동안 배양하고, 프로메가(Promega)로부터의 셀 타이터-글로 (CTG) 발광 생존율 검정으로 세포 생존율을 평가하였다. 100 μL의 재구성된 CTG 시약을 10분 동안 온화하게 진탕시키면서 각각의 웰에 첨가하였다. 시테이션 5(Cytation 5) (바이오텍 인스트루먼츠(Biotek Instruments))를 사용하여 발광을 판독하였다. 퍼센트 세포 생존율을 하기 식에 의해 계산하였다: (처리된 샘플의 평균 발광/비처리된 대조군 샘플의 평균 발광) x 100. EC50 값을 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) v7.02 소프트웨어 (미국 캘리포니아주 라 졸라)에 의해 로지스틱 비-선형 회귀 분석을 사용하여 결정하였다. ADC는 메소텔린을 발현하지 않는 CHO K1 세포의 증식에 대해 억제 효과를 갖지 않았다.
실시예 5 - 변형된 항체의 접합체의 안정성
화합물 A의 항암 약물 작용제로서 작용하는 튜부리신 유사체는 아세테이트 기를 갖는다 (상기 구조 화학식의 점선 박스 참조). 가수분해에 의한 그의 손실 (탈아세틸화)은 튜부리신 유사체가 그의 세포독성을 상실하게 한다.
본원에 개시된 바와 같은 대체 서열을 갖는 항-메소텔린 항체 6A4로 제조된 접합체의 안정성을 대체 서열을 갖지 않는 동일한 항체의 안정성과 비교하였다. 2개의 파라미터를 측정하였다: (a) 탈아세틸화 속도 및 (b) 시차 주사 열량측정 (DSC)에 의해 측정된 바와 같은 항체의 열 유도된 해리에 대한 저항성. 결과를 표 I에 제시한다.
Figure pct00035
SCID 마우스 혈청 중 ADC의 튜부리신 유사체의 탈아세틸화를 하기와 같이 측정하였다: ADC를 500 μL SCID 마우스 혈청 중에 50 μg/ml의 표적 농도로 희석하고, 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 샘플 플레이트로부터, 제0일, 제1일, 제2일 및 제5일에 80 μl의 혈청 샘플을 수집하고, 즉시 동결시켰다. 모든 ADC를 "단일-친화도" 또는 "이중-친화도" 포획 방법을 사용하여 혈청으로부터 추출하고, LC-HRMS에 의해 분석하였다. 간략하게, ADC를 일반적 항-인간 F(ab')2 시약을 사용하여 혈청으로부터 포획하였다. LC-접합된 ADC (LC C-말단)의 경우에, ADC를 비드로부터 용리시키고, 이어서 쇄간 디술피드 결합의 환원을 통해 LC 및 HC를 분리하였다. HC-Fab 접합된 ADC (S190)의 경우에, 고정된 ADC를 IdeS 효소로 "온-비드" 소화시킨 후, F(ab')2를 용리시키고, 쇄간 디술피드 환원시켜, LC 및 Fd'를 분리하였다. HC-Fc 접합된 ADC (Q295, Q418, G385, HC C-말단)의 경우에, 포획된 ADC를 IdeS (비-글리코실화된 ADC) 또는 IdeS+PNGase F (N-글리칸 ADC)로 소화시켜 탈글리코실화된 Fc 단편을 방출시켰다. 비드를 폐기하고, 소화 혼합물 내에 존재하는 Fc를 항-인간 Fc 포획 시약으로 코팅된 제2의 비드 세트의 첨가에 의해 추가로 포획하였다.
본 발명의 상기 상세한 설명은 본 발명의 특정한 부분 또는 측면과 주로 또는 독점적으로 관련된 구절을 포함한다. 이는 명확성 및 편의성을 위한 것이고, 특정한 특색은 그것이 개시된 구절을 넘어 관련될 수 있으며, 본원의 개시내용은 상이한 구절에서 발견된 정보의 모든 적절한 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 유사하게, 본원의 다양한 도면 및 설명은 본 발명의 구체적 실시양태와 관련되어 있지만, 구체적 특색이 특정한 도면 또는 실시양태의 문맥에서 개시되는 경우에, 이러한 특색은 또한 적절한 정도로, 또 다른 도면 또는 실시양태의 문맥에서, 또 다른 특색과 조합되어, 또는 본 발명에서 일반적으로 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
추가로, 본 발명이 특정의 바람직한 실시양태의 면에서 구체적으로 기재되기는 하였지만, 본 발명이 이러한 바람직한 실시양태로 제한되는 것은 아니다. 오히려, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위에 의해 정의된다.
참고문헌
본 명세서에서 앞서 제1 저자 (또는 발명자) 및 날짜에 의해 축약된 방식으로 인용된 하기 참고문헌에 대한 전체 인용이 하기에 제공된다. 이들 참고문헌 각각은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
Figure pct00036
Figure pct00037
SEQUENCE LISTING <110> Bristol-Myers Squibb Company <120> ANTIBODIES MODIFIED FOR TRANSGLUTAMINASE CONJUGATION, CONJUGATES THEREOF, AND METHODS AND USES <130> 13143-WO-PCT <150> US 62/778,437 <151> 2018-12-12 <160> 103 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human IgG1 Heavy Chain Constant Region <400> 1 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 2 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human IgG2 Heavy Chain Constant Region <400> 2 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 3 <211> 377 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human IgG2 Heavy Chain Constant Region <400> 3 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 100 105 110 Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 115 120 125 Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 130 135 140 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 195 200 205 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 260 265 270 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 275 280 285 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 290 295 300 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320 Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 325 330 335 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 340 345 350 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 355 360 365 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210> 4 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human IgG4 Heavy Chain Constant Region <400> 4 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 5 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human Kappa Light Chain Constant Region <400> 5 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 6 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human Lambda Light Chain Constant Region <400> 6 Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 1 Replacement Sequence <400> 7 Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 1 Replacement Sequence <400> 8 Ser Ser Val Leu Gln Tyr Ala Ser Thr 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 1 Replacement Sequence <400> 9 Ser Ser Lys Ser Val Leu Gln Tyr Thr 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 1 Replacement Sequence <400> 10 Ser Ser Lys Ser Leu Gln Tyr Thr 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 2 Replacement Sequence <400> 11 Ser Gly Ala Leu Gln Thr 1 5 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 2 Replacement Sequence <400> 12 Ser Gly Ala Val Leu Gln Thr 1 5 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 2 Replacement Sequence <400> 13 Ser Gly Ala Leu Gln 1 5 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 2 Replacement Sequence <400> 14 Ser Gly Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 15 <400> 15 000 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 2 Replacement Sequence <400> 16 Val Leu Gln Tyr Ser Gly Ala Leu Thr 1 5 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 2 Replacement Sequence <400> 17 Leu Gln Tyr Ser Gly Ala Leu Thr 1 5 <210> 18 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 3 Replacement Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is absent <400> 18 Val Leu Gln Xaa 1 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 3 Replacement Sequence <400> 19 Val Leu Gln Tyr Ala Ser 1 5 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 3 Replacement Sequence <400> 20 Ser Val Leu Gln Tyr Ala Ser 1 5 <210> 21 <400> 21 000 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 4 Replacement Sequence <400> 22 Val Leu Gln Tyr Leu Gly Thr Gln 1 5 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 4 Replacement Sequence <400> 23 Leu Gln Tyr Leu Gly Thr Gln 1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 Loop 5 Replacement Sequence <400> 24 Pro Val Leu Gln Tyr Ala Ser 1 5 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 2 Replacement Sequence <400> 25 Leu Gln Val Ser His Glu 1 5 <210> 26 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 2 Replacement Sequence <400> 26 Leu Gln Tyr Ala His Glu 1 5 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 2 Replacement Sequence <400> 27 Val Asp Val Ser His Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 10 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 2 Replacement Sequence <400> 28 Val Asp Val Ser His Val Leu Gln Tyr 1 5 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 3 Replacement Sequence <400> 29 Val Leu Gln Tyr Ala Glu Val 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 3 Replacement Sequence <400> 30 Asp Gly Val Leu Gln Tyr Ala Glu Val 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 3 Replacement Sequence <400> 31 Asp Gly Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 32 <400> 32 000 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 33 Arg Glu Glu Ala Tyr Gln 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 34 Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Asn 1 5 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 35 Arg Glu Glu Val Leu Gln Tyr Asn 1 5 <210> 36 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 36 Arg Leu Gln Tyr Ala Asn 1 5 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 37 Arg Leu Gln Gln Ala Asn 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 38 Arg Leu Gln Gln Tyr Ala 1 5 <210> 39 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 39 Val Leu Gln Tyr Ala Asn 1 5 <210> 40 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 40 Arg Glu Val Leu Gln Asn 1 5 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 41 Arg Glu Val Leu Gln Tyr Asn 1 5 <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 42 Arg Glu Val Leu Gln Ala 1 5 <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 43 Arg Glu Val Leu Gln Gln 1 5 <210> 44 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 44 Arg Glu Glu Ala Val Leu Gln Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 45 Arg Glu Glu Ala Val Leu Gln Tyr Asn 1 5 <210> 46 <400> 46 000 <210> 47 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 47 Arg Glu Leu Gln Tyr Asn 1 5 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 5 Replacement Sequence <400> 48 Val Leu Gln Gly Lys Glu Tyr 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 5 Replacement Sequence <400> 49 Leu Val Leu Gln Gly Lys Glu Tyr 1 5 <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 5 Replacement Sequence <400> 50 Leu Asn Gly Lys Val Leu Gln Tyr 1 5 <210> 51 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 6 Replacement Sequence <400> 51 Leu Gln Ala Pro 1 <210> 52 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 6 Replacement Sequence <400> 52 Val Leu Gln Ala Pro 1 5 <210> 53 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 6 Replacement Sequence <400> 53 Val Leu Gln Tyr Ala Pro 1 5 <210> 54 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 1 Replacement Sequence <400> 54 Glu Gln Tyr Ala Gln 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 1 Replacement Sequence <400> 55 Met Thr Lys Val Leu Gln Tyr Ala Ser 1 5 <210> 56 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 56 Val Leu Gln Tyr Ala Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 1 5 10 15 Ser Asp Gly <210> 57 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 57 Asn Val Leu Gln Gly Ser Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 1 5 10 15 Val Leu Asp Ser Asp Gly 20 <210> 58 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 58 Asn Val Leu Gln Tyr Ala Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 1 5 10 15 Val Leu Asp Ser Asp Gly 20 <210> 59 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 59 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Val Leu Gln Tyr Ala Lys Thr Thr Pro Pro 1 5 10 15 Val Leu Asp Ser Asp Gly 20 <210> 60 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 60 Asn Gly Gln Pro Glu Val Leu Gln Tyr Ala Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 1 5 10 15 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 20 <210> 61 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 61 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Gln 1 5 10 15 Tyr Ala Gly <210> 62 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 62 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Val 1 5 10 15 Leu Gln Tyr Ala Asp Gly 20 <210> 63 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 63 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 1 5 10 15 Ser Val Leu Gln Tyr Ala Gly 20 <210> 64 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 2/3 Replacement Sequence <400> 64 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Val Leu Gln Tyr 1 5 10 15 Ala Ser Thr <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 4 Replacement Sequence <400> 65 Val Leu Gln Tyr Ala Arg Trp Asn Asn 1 5 <210> 66 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 4 Replacement Sequence <400> 66 Val Leu Gln Tyr Ala Ser Arg Trp Asn Asn 1 5 10 <210> 67 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 4 Replacement Sequence <400> 67 Lys Ser Arg Trp Asn Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 10 <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 4 Replacement Sequence <400> 68 Lys Ser Arg Gly Asn Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 10 <210> 69 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 Loop 4 Replacement Sequence <400> 69 Lys Ser Arg Val Leu Gln 1 5 <210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 1 Replacement Sequence <400> 70 Asp Glu Gln Leu Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 71 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 1 Replacement Sequence <400> 71 Ser Gly Gly Val Leu Gln Tyr Ala Gly Gly 1 5 10 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 1 Replacement Sequence <400> 72 Ser Gly Val Leu Gln Tyr Ala Gly 1 5 <210> 73 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 2 Replacement Sequence <400> 73 Gly Val Leu Gln Tyr Ala Gly Ala Leu Asn 1 5 10 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 2 Replacement Sequence <400> 74 Asn Ala Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 2 Replacement Sequence <400> 75 Asn Ala Gly Gly Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 76 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 3 Replacement Sequence <400> 76 Asp Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 3 Replacement Sequence <400> 77 Asp Val Leu Gln Tyr Ala Asp 1 5 <210> 78 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 3 Replacement Sequence <400> 78 Asp Ser Val Leu Gln Tyr Ala Asp 1 5 <210> 79 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 3 Replacement Sequence <400> 79 Gly Ser Val Leu Gln Tyr Ala Gly 1 5 <210> 80 <400> 80 000 <210> 81 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 3 Replacement Sequence <400> 81 Asp Ser Val Leu Gln Tyr Lys Asp 1 5 <210> 82 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 3 Replacement Sequence <400> 82 Asp Ser Leu Gln Tyr Lys Asp 1 5 <210> 83 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 4 Replacement Sequence <400> 83 Ser Val Leu Gln Tyr Ala Asp Tyr Glu Lys His 1 5 10 <210> 84 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 4 Replacement Sequence <400> 84 Val Leu Gln Tyr Ala Asp Tyr Glu Lys His 1 5 10 <210> 85 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 4 Replacement Sequence <400> 85 Ser Gly Gly Val Leu Gln Tyr Ala Ser Gly Gly His 1 5 10 <210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 4 Replacement Sequence <400> 86 Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Val Leu Gln Tyr His Lys 1 5 10 <210> 87 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 4 Replacement Sequence <400> 87 Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Val Leu Gln Tyr Lys 1 5 10 <210> 88 <400> 88 000 <210> 89 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 89 Gln Gly Val Val Gln Tyr 1 5 <210> 90 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 90 Leu Gly Gln Tyr Ser Pro 1 5 <210> 91 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 91 Gln Gly Leu Gln Tyr Ser Pro 1 5 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 92 Gln Val Leu Gln Tyr Ser Pro 1 5 <210> 93 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 93 Gln Val Leu Gln Tyr Ala Ser Pro 1 5 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 94 Asn Val Leu Gln Tyr Ser Pro 1 5 <210> 95 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 95 Val Leu Gln Tyr Ala Ser Pro 1 5 <210> 96 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Kappa Loop 5 Replacement Sequence <400> 96 Val Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro 1 5 <210> 97 <400> 97 000 <210> 98 <211> 451 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Anti-mesothelin antibody heavy chain <400> 98 Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Arg Ile Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 99 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Anti-mesothelin antibody light chain <400> 99 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 100 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 100 Arg Glu Glu Val Leu Gln Tyr Ala 1 5 <210> 101 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 101 Arg Glu Val Leu Gln Ala 1 5 <210> 102 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 102 Arg Glu Glu Ala Val Leu Gln Tyr Ala Ala 1 5 10 <210> 103 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 Loop 4 Replacement Sequence <400> 103 Arg Glu Glu Ala Val Leu Gln Tyr Ala 1 5

Claims (24)

  1. (i) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 및 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (ii) 중쇄의 EU 160 내지 164의 아미노산이 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17의 아미노산으로 대체된 것;
    (iii) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 또는 서열식별번호: 20의 아미노산으로 대체된 것;
    (iv) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 또는 서열식별번호: 24의 아미노산으로 대체된 것;
    (v) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (vi) 중쇄의 EU 280 내지 284의 아미노산이 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 또는 서열식별번호: 31의 아미노산으로 대체된 것;
    (vii) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (viii) 중쇄의 EU 314 내지 319의 아미노산이 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49 또는 서열식별번호: 50의 아미노산으로 대체된 것;
    (ix) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (x) 중쇄의 EU 358 내지 362의 아미노산이 서열식별번호: 54 또는 서열식별번호: 55의 아미노산으로 대체된 것;
    (xi) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 63 또는 서열식별번호: 64의 아미노산으로 대체된 것;
    (xii) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 66, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 68, 또는 서열식별번호: 69의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiii) 경쇄의 EU 122 내지 126의 아미노산이 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 또는 서열식별번호: 72의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiv) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (xv) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 79, 서열식별번호: 81, 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것;
    (xvi) 경쇄의 EU 182 내지 190의 아미노산이 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 84, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 86, 또는 서열식별번호: 87의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (xvii) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 90, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 95, 또는 서열식별번호: 96의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 갖는 전장 IgG 항체.
  2. 제1항에 있어서, IgG1 항체인 항체.
  3. 제2항에 있어서, 변형이 중쇄 내에 존재하는 것인 항체.
  4. 제2항에 있어서, 변형이
    (I) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (II) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18의 아미노산으로 대체된 것;
    (III) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22의 아미노산으로 대체된 것;
    (IV) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (V) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (VI) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (VII) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 또는 서열식별번호: 63의 아미노산으로 대체된 것;
    (VIII) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 66 또는 서열식별번호: 68의 아미노산으로 대체된 것;
    (IX) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (X) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 78 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (XI) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93 또는 서열식별번호: 94의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 항체.
  5. 제2항에 있어서, 변형이 카파 경쇄 내에 존재하는 것인 항체.
  6. 제2항에 있어서, 대체 서열이 트리펩티드 -VLQ-를 포함하는 것인 항체.
  7. 화학식 (IV)의 접합체.
    Figure pct00038

    여기서
    Ab는
    (i) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 및 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (ii) 중쇄의 EU 160 내지 164의 아미노산이 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17의 아미노산으로 대체된 것;
    (iii) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 또는 서열식별번호: 20의 아미노산으로 대체된 것;
    (iv) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 또는 서열식별번호: 24의 아미노산으로 대체된 것;
    (v) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (vi) 중쇄의 EU 280 내지 284의 아미노산이 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 또는 서열식별번호: 31의 아미노산으로 대체된 것;
    (vii) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (viii) 중쇄의 EU 314 내지 319의 아미노산이 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49 또는 서열식별번호: 50의 아미노산으로 대체된 것;
    (ix) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (x) 중쇄의 EU 358 내지 362의 아미노산이 서열식별번호: 54 또는 서열식별번호: 55의 아미노산으로 대체된 것;
    (xi) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 63 또는 서열식별번호: 64의 아미노산으로 대체된 것;
    (xii) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 66, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 68, 또는 서열식별번호: 69의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiii) 경쇄의 EU 122 내지 126의 아미노산이 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 또는 서열식별번호: 72의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiv) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (xv) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 79, 서열식별번호: 81, 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것;
    (xvi) 경쇄의 EU 182 내지 190의 아미노산이 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 84, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 86, 또는 서열식별번호: 87의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (xvii) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 90, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 95, 또는 서열식별번호: 96의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 대체 서열을 갖는 전장 항체이고;
    L은 대체 서열 내의 글루타민에 대한 아미드 결합
    Figure pct00039

    을 통해 Ab에 결합된 링커 모이어티이고;
    D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  8. 제7항에 있어서, D가 치료제인 접합체.
  9. 제7항에 있어서, D가 TLR3, TLR7, TLR9, STING, NLRP3, 또는 RIG-I 효능제인 접합체.
  10. 제7항에 있어서, L이
    Figure pct00040

    이고,
    여기서
    T는 자기-희생 기이고;
    t는 0 또는 1이고;
    AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
    q는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
    r은 1, 2, 3, 4, 또는 5인
    접합체.
  11. 제7항에 있어서, 항체가
    (I) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (II) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18의 아미노산으로 대체된 것;
    (III) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22의 아미노산으로 대체된 것;
    (IV) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (V) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (VI) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (VII) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 또는 서열식별번호: 63의 아미노산으로 대체된 것;
    (VIII) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 66 또는 서열식별번호: 68의 아미노산으로 대체된 것;
    (IX) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (X) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 78 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (XI) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93 또는 서열식별번호: 94의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 포함하는 것인 접합체.
  12. (a) 전장 항체를 트랜스글루타미나제의 존재 하에 1급 아민, 및 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 포함하는 아민 공여자 화합물과 혼합하는 단계이며; 여기서 항체는
    (i) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 및 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (ii) 중쇄의 EU 160 내지 164의 아미노산이 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17의 아미노산으로 대체된 것;
    (iii) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 또는 서열식별번호: 20의 아미노산으로 대체된 것;
    (iv) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 또는 서열식별번호: 24의 아미노산으로 대체된 것;
    (v) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (vi) 중쇄의 EU 280 내지 284의 아미노산이 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 또는 서열식별번호: 31의 아미노산으로 대체된 것;
    (vii) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (viii) 중쇄의 EU 314 내지 319의 아미노산이 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49 또는 서열식별번호: 50의 아미노산으로 대체된 것;
    (ix) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (x) 중쇄의 EU 358 내지 362의 아미노산이 서열식별번호: 54 또는 서열식별번호: 55의 아미노산으로 대체된 것;
    (xi) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 63 또는 서열식별번호: 64의 아미노산으로 대체된 것;
    (xii) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 66, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 68, 또는 서열식별번호: 69의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiii) 경쇄의 EU 122 내지 126의 아미노산이 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 또는 서열식별번호: 72의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiv) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (xv) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 79, 서열식별번호: 81, 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것;
    (xvi) 경쇄의 EU 182 내지 190의 아미노산이 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 84, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 86, 또는 서열식별번호: 87의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (xvii) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 90, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 95, 또는 서열식별번호: 96의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 대체 서열을 갖는 것인 단계;
    및
    (b) 트랜스글루타미나제가 대체 서열의 글루타민의 측쇄 카르복스아미드와 아민 공여자 화합물의 1급 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 촉매하도록 하여, 항체 접합체를 제조하는 단계
    를 포함하는, 항체 접합체를 제조하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 아민 공여자 화합물이 하기 구조를 갖고
    H2N-L-D
    여기서 L은 링커 모이어티이고, D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 아민 공여자 화합물이 하기 구조를 갖는 것인 방법.
    Figure pct00041
  15. 제12항에 있어서, 아민 공여자 화합물이 화학식 (Ia)에 의해 나타내어진 구조를 갖고
    Figure pct00042

    여기서
    D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제이고;
    T는 자기-희생 기이고;
    t는 0 또는 1이고;
    AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
    q는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
    r은 1, 2, 3, 4, 또는 5인
    방법.
  16. 제12항에 있어서, 모이어티가 치료제인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 치료제가 TLR3, TLR7, TLR9, STING, NLRP3, 또는 RIG-I 효능제인 접합체.
  18. 제16항에 있어서, 항체가
    (I) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (II) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18의 아미노산으로 대체된 것;
    (III) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22의 아미노산으로 대체된 것;
    (IV) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (V) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (VI) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (VII) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 또는 서열식별번호: 63의 아미노산으로 대체된 것;
    (VIII) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 66 또는 서열식별번호: 68의 아미노산으로 대체된 것;
    (IX) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (X) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 78 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (XI) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93 또는 서열식별번호: 94의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 갖는 것인 방법.
  19. (a) 전장 항체를 트랜스글루타미나제의 존재 하에 1급 아민 및 제1 반응성 관능기를 갖는 아민 공여자 화합물인 제1 화합물과 혼합하는 단계이며; 여기서 항체는
    (i) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 및 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (ii) 중쇄의 EU 160 내지 164의 아미노산이 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 16, 또는 서열식별번호: 17의 아미노산으로 대체된 것;
    (iii) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19, 또는 서열식별번호: 20의 아미노산으로 대체된 것;
    (iv) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 또는 서열식별번호: 24의 아미노산으로 대체된 것;
    (v) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (vi) 중쇄의 EU 280 내지 284의 아미노산이 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 또는 서열식별번호: 31의 아미노산으로 대체된 것;
    (vii) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (viii) 중쇄의 EU 314 내지 319의 아미노산이 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49 또는 서열식별번호: 50의 아미노산으로 대체된 것;
    (ix) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (x) 중쇄의 EU 358 내지 362의 아미노산이 서열식별번호: 54 또는 서열식별번호: 55의 아미노산으로 대체된 것;
    (xi) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 61, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 63 또는 서열식별번호: 64의 아미노산으로 대체된 것;
    (xii) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 66, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 68, 또는 서열식별번호: 69의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiii) 경쇄의 EU 122 내지 126의 아미노산이 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 또는 서열식별번호: 72의 아미노산으로 대체된 것;
    (xiv) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (xv) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 79, 서열식별번호: 81, 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것;
    (xvi) 경쇄의 EU 182 내지 190의 아미노산이 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 84, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 86, 또는 서열식별번호: 87의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (xvii) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 90, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 95, 또는 서열식별번호: 96의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 대체 서열을 갖는 것인 단계;
    (b) 트랜스글루타미나제가 대체 서열의 글루타민의 측쇄 카르복스아미드와 제1 화합물의 1급 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 촉매하도록 하여, 항체 및 제1 화합물의 부가물을 제조하는 단계;
    (c) 부가물을 제2 반응성 관능기, 및 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 및 치료제로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 갖는 제2 화합물과 접촉시키는 단계이며; 제2 반응성 관능기는 제1 반응성 관능기와 반응하여 그 사이에 공유 결합을 형성할 수 있는 것인 단계; 및
    (d) 제1 및 제2 반응성 관능기가 반응하여 그 사이에 공유 결합을 형성하게 함으로써 항체 접합체를 제조하는 단계
    를 포함하는, 항체 접합체를 제조하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 제1 화합물이 하기 구조를 갖고
    H2N-L'-R'
    여기서 L'는 제1 링커 모이어티이고, R'는 제1 반응성 관능기이고, 제2 화합물은 하기 구조를 갖고
    R"-L"-D
    여기서 R"는 R'와 반응할 수 있는 제2 반응성 관능기이고, L"는 제2 링커 모이어티이고, D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제인 방법.
  21. 제20항에 있어서, R'가
    Figure pct00043

    로부터 선택되고;
    상호적으로, R"가
    Figure pct00044

    로부터 선택된 것인 방법.
  22. 제20항에 있어서, 제1 화합물이 화학식 (II)에 의해 나타내어진 구조를 갖고
    Figure pct00045

    제2 화합물이 화학식 (III)에 의해 나타내어진 구조를 갖고
    Figure pct00046

    여기서
    R'는 제1 반응성 관능기이고;
    R"는 R'와 반응할 수 있는 제2 반응성 관능기이고;
    D는 단백질, 방사성동위원소, 검정 작용제, 또는 치료제이고;
    T는 자기-희생 기이고;
    t는 0 또는 1이고;
    AAa 및 각각의 AAb는 독립적으로 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    p는 1, 2, 3, 또는 4이고;
    q는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
    r은 1, 2, 3, 4, 또는 5인
    방법.
  23. 제22항에 있어서, R'가
    Figure pct00047

    로부터 선택되고;
    상호적으로, R"가
    Figure pct00048

    로부터 선택된 것인 방법.
  24. 제19항에 있어서, 항체가
    (I) 중쇄의 EU 131 내지 135의 아미노산이 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 10의 아미노산으로 대체된 것;
    (II) 중쇄의 EU 175 내지 177의 아미노산이 서열식별번호: 18의 아미노산으로 대체된 것;
    (III) 중쇄의 EU 190 내지 196의 아미노산이 서열식별번호: 22의 아미노산으로 대체된 것;
    (IV) 중쇄의 EU 264 내지 269의 아미노산이 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 28의 아미노산으로 대체된 것;
    (V) 중쇄의 EU 292 내지 297의 아미노산이 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 102, 또는 서열식별번호: 103의 아미노산으로 대체된 것;
    (VI) 중쇄의 EU 330 내지 331의 아미노산이 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산으로 대체된 것;
    (VII) 중쇄의 EU 384 내지 402의 아미노산이 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 58, 또는 서열식별번호: 63의 아미노산으로 대체된 것;
    (VIII) 중쇄의 EU 414 내지 419의 아미노산이 서열식별번호: 66 또는 서열식별번호: 68의 아미노산으로 대체된 것;
    (IX) 경쇄의 EU 152 내지 155의 아미노산이 서열식별번호: 73 또는 서열식별번호: 75의 아미노산으로 대체된 것;
    (X) 경쇄의 EU 167 내지 170의 아미노산이 서열식별번호: 78 또는 서열식별번호: 82의 아미노산으로 대체된 것; 및
    (XI) 경쇄의 EU 199 내지 204의 아미노산이 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 93 또는 서열식별번호: 94의 아미노산으로 대체된 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 포함하는 것인 방법.
KR1020217021306A 2018-12-12 2019-12-10 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도 KR20210102334A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862778437P 2018-12-12 2018-12-12
US62/778,437 2018-12-12
PCT/US2019/065340 WO2020123425A2 (en) 2018-12-12 2019-12-10 Antibodies modified for transglutaminase conjugation, conjugates thereof, and methods and uses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210102334A true KR20210102334A (ko) 2021-08-19

Family

ID=69138006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217021306A KR20210102334A (ko) 2018-12-12 2019-12-10 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20220031860A1 (ko)
EP (1) EP3894443A2 (ko)
JP (1) JP2022512481A (ko)
KR (1) KR20210102334A (ko)
CN (1) CN113544155A (ko)
WO (1) WO2020123425A2 (ko)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230149857A (ko) 2016-07-07 2023-10-27 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 항체-애쥬번트 접합체
KR20220004634A (ko) 2019-03-15 2022-01-11 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 Her2를 표적으로 하는 면역접합체
JP2024518709A (ja) 2021-04-10 2024-05-02 プロファウンドバイオ ユーエス カンパニー Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
AU2022262644A1 (en) 2021-04-23 2023-11-09 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4201430A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Modified antibody for site-specific conjugation and its diagnostic use
EP4201956A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Kutzneria albida (kalbtg) transglutaminase used for antibody conjugations

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6322996B1 (en) 1994-08-23 2001-11-27 Drug Delivery System Institute, Ltd. Protein modification method
JP2003527561A (ja) 1999-01-22 2003-09-16 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 蛋白の部位特異的標識化方法およびそのための使用
JP4118462B2 (ja) 1999-07-19 2008-07-16 株式会社リコー 携帯電子機器
CN1371416B (zh) 1999-08-24 2012-10-10 梅达里克斯公司 人ctla-4抗体及其应用
JP4562395B2 (ja) 2002-01-09 2010-10-13 メダレックス， インク． Ｃｄ３０に対するヒトモノクローナル抗体
MX369959B (es) 2003-05-14 2019-11-27 Immunogen Inc Composicion de farmaco conjugado.
US20070184537A1 (en) 2003-06-03 2007-08-09 Paul Scherrer Institut Method for the linkage of bifunctional chelating agents and (radioactive) transition metal complexes to proteins and peptides
PE20050712A1 (es) 2003-07-22 2005-11-02 Schering Ag Anticuerpos rg1
SG195524A1 (en) 2003-11-06 2013-12-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
DK1691837T3 (da) 2003-12-10 2012-10-01 Medarex Inc IP-10-antistoffer og anvendelse heraf
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
AU2005227326B2 (en) 2004-03-24 2009-12-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
US7778814B2 (en) 2004-03-30 2010-08-17 Siemens Aktiengesellschaft Method and device for simulating an automation system
BRPI0607796A2 (pt) 2005-02-18 2009-06-13 Medarex Inc composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, processo para preparação e uso do mesmo, e, composição farmacêutica
CA2598522A1 (en) 2005-02-18 2006-08-24 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to prostate specific membrane antigen (psma)
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
CA2611814A1 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
JP5252635B2 (ja) 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
ES2527961T3 (es) 2005-09-26 2015-02-02 Medarex, L.L.C. Anticuerpos monoclonales humanos para CD70
WO2007038868A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 The University Of British Columbia Novel enediyne compound and uses thereof
JP5714212B2 (ja) 2005-12-08 2015-05-07 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＭｅｄａｒｅｘ， Ｌ．Ｌ．Ｃ． Ｏ８ｅに対するヒトモノクローナル抗体
SG177194A1 (en) 2005-12-08 2012-01-30 Medarex Inc Human monoclonal antibodies to protein tyrosine kinase 7 (ptk7) and methods for using anti-ptk7 antibodies
EA017491B1 (ru) 2005-12-08 2012-12-28 Медарекс, Инк. Человеческие моноклональные антитела к фукозил-gm1 и способы применения антифукозил-gm1 антител
AR062448A1 (es) 2006-05-25 2008-11-12 Endocyte Inc Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos
AR061181A1 (es) 2006-05-25 2008-08-13 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de aziridinil-epotilona
HUE027165T2 (en) 2006-10-02 2016-08-29 Squibb & Sons Llc Human antibodies that bind to CXCR4 and their uses
KR20150067395A (ko) 2006-12-01 2015-06-17 메다렉스, 엘.엘.시. 씨디22에 결합하는 인간 항체 및 이의 용도
UY30776A1 (es) 2006-12-21 2008-07-03 Medarex Inc Anticuerpos cd44
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
ES2562790T3 (es) 2007-07-17 2016-03-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos monoclonales contra Glipicano-3
PL2195017T3 (pl) 2007-10-01 2015-03-31 Bristol Myers Squibb Co Ludzkie antyciała, które wiążą mezotelinę i ich zastosowania
JPWO2010002042A1 (ja) 2008-07-04 2011-12-22 国立大学法人九州大学 タンパク質ラベル化用酵素基質
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
NZ602933A (en) 2010-04-15 2014-09-26 Seattle Genetics Inc Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
KR101671360B1 (ko) 2010-04-15 2016-11-01 시애틀 지네틱스, 인크. 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체
CA2813411C (en) 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
BR112014006703A8 (pt) 2011-09-20 2018-01-09 Spirogen Sarl "pirrolobenzodiazepinas
WO2013092998A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Innate Pharma Enzymatic conjugation of antibodies
EA027925B1 (ru) 2012-02-13 2017-09-29 Бристол-Майерс Сквибб Компани Ендиины, их конъюгаты и способы их получения и применения
US9333271B2 (en) 2012-05-30 2016-05-10 University Of Massachusetts Coated up-conversion nanoparticles
WO2014072482A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
ES2628156T3 (es) 2013-02-14 2017-08-01 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de tubulisina, métodos para su fabricación y su uso
EP3010547B1 (en) 2013-06-20 2021-04-21 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
KR20160042871A (ko) 2013-06-21 2016-04-20 이나뜨 파르마, 에스.아. 폴리펩티드의 효소적 콘쥬게이션
EP3027224B1 (en) 2013-07-31 2020-06-03 Rinat Neuroscience Corp. Engineered polypeptide conjugates using transglutaminase
CA2921401A1 (en) 2013-08-14 2015-02-19 William Marsh Rice University Derivatives of uncialamycin, methods of synthesis and their use as antitumor agents
CA2973354A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
CA2973355A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Heteroarylene-bridged benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
JP2018510864A (ja) 2015-03-10 2018-04-19 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ トランスグルタミナーゼによって結合可能な抗体およびそれによって製造される結合体
CA2990030A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic benzodiazepine dimers, conjugates thereof, preparation and uses
US20180265851A1 (en) 2015-10-02 2018-09-20 Bristol-Myers Squibb Company Transglutaminase variants for conjugating antibodies
US10287291B2 (en) 2016-08-19 2019-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Seco-cyclopropapyrroloindole compounds, antibody-drug conjugates thereof, and methods of making and use
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020123425A3 (en) 2020-08-20
CN113544155A (zh) 2021-10-22
US20220031860A1 (en) 2022-02-03
JP2022512481A (ja) 2022-02-04
EP3894443A2 (en) 2021-10-20
WO2020123425A2 (en) 2020-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210102334A (ko) 트랜스글루타미나제 접합을 위해 변형된 항체, 그의 접합체, 및 방법 및 용도
KR20160091961A (ko) Her2를 표적화하는 이중특이성 항원-결합 작제물
KR20190133233A (ko) 항체-약물 접합체를 제조하는 방법
JP6585600B2 (ja) Ｃ末端軽鎖ポリペプチド伸長を含有する抗体、ならびにその複合体及びその使用方法
CN106459204B (zh) Igf-1r抗体及其作为定位载体用于治疗癌症的用途
EP3102606A2 (en) Antibody-drug conjugates and immunotoxins
EP3668545A2 (en) Prodruggable antibodies, prodrugs thereof, and methods of use and making
KR20220041851A (ko) 접합을 위한 폴리펩티드 복합체 및 이의 용도
EP3886914B1 (en) Antibody comprising a glutamine-containing light chain c-terminal extension, conjugates thereof, and methods and uses
JP2019505575A (ja) 部位特異的な結合のための変異型抗体
TWI822740B (zh) 抗her2雙互補位抗體-藥物結合物及使用方法
JP2020532523A (ja) 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）及びその使用
WO2022232612A1 (en) Lassa virus-specific nanobodies and methods of their use
EA045916B1 (ru) Антитело, содержащее глутаминсодержащее с-концевое удлинение легкой цепи, его конъюгаты, способы и пути применения
CN114025795A (zh) 使用靶向her2的双特异性抗原结合构建体治疗胆道癌的方法
JP2020532543A (ja) 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）及びその使用
Dennler Microbial Transglutaminase as a Versatile Tool for Site-Specific Protein Modification
NZ624989B2 (en) Antigen binding protein and its use as addressing product for the treatment cancer