JP2024518709A - Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法 - Google Patents

Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2024518709A
JP2024518709A JP2023562467A JP2023562467A JP2024518709A JP 2024518709 A JP2024518709 A JP 2024518709A JP 2023562467 A JP2023562467 A JP 2023562467A JP 2023562467 A JP2023562467 A JP 2023562467A JP 2024518709 A JP2024518709 A JP 2024518709A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
region
chain variable
amino acid
binding agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023562467A
Other languages
English (en)
Inventor
バイテン・ジャオ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Profoundbio US Co
Original Assignee
Profoundbio US Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Profoundbio US Co filed Critical Profoundbio US Co
Publication of JP2024518709A publication Critical patent/JP2024518709A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

本発明は、がんの治療に使用するための、FOLR1抗体、その抗原結合部分、他の結合剤およびそのFOLR1コンジュゲートを提供する。

Description

配列表に関する記載
本出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参照により組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は760270＿404WO＿SEQUENCE＿LISTING．txtである。テキストファイルは35．8KBで、2022年4月5日に作成され、EFS－Webを介して電子的に提出されている。
葉酸受容体アルファまたは葉酸結合タンパク質としても知られる葉酸受容体1（FOLR1）は、細胞の原形質膜上で発現されるN－グリコシル化タンパク質である。FOLR1は、葉酸およびいくつかの還元型葉酸誘導体に対して高い親和性を有する。FOLR1は、細胞の内部への生理学的葉酸塩である5－メチルテトラヒドロ葉酸塩の送達を媒介する。FOLR1は、卵巣がんの大部分、ならびに多くの子宮がん、子宮内膜がん、膵がん、腎臓がん、肺がんおよび乳がんで過剰発現されるが、正常組織でのFOLR1の発現は、腎近位尿細管、肺の肺胞肺細胞、膀胱、精巣、脈絡叢および甲状腺の上皮細胞の頂端膜に制限される（Weitman S Dら、Cancer Res 52：3396～3401（1992）；Antony A C、Annu Rev Nutr 16：501～521（1996）；Kalli K RらGynecol Oncol 108：619～626（2008））。FOLR1のこの発現パターンは、FOLR1指向性がん治療にとって望ましい標的となる。
FOLR1は様々ながん型に存在するが、FOLR1抗体およびFOLR1抗体薬物コンジュゲートを用いた臨床試験は、限られた成功しか収めていない。本発明は、この必要性およびその他の必要性を解決する。
Weitman S Dら、Cancer Res 52：3396～3401（1992） Antony A C、Annu Rev Nutr 16：501～521（1996） Kalli K RらGynecol Oncol 108：619～626（2008）
本明細書では、FOLR1抗体、その抗原結合部分および他の結合剤、ならびにこのような抗体、抗原結合部分および他の結合剤のコンジュゲートが提供される。がんおよび他の疾患を治療するためにFOLR1抗体、抗原結合部分および他の結合剤ならびにそのコンジュゲートを使用する方法も提供される。本明細書に開示される発明は、FOLR1に特異的に結合し、改善された特性を示す、FOLR1抗体、その抗原結合部分および他の結合剤ならびにそのコンジュゲートに部分的に基づく。FOLR1は、ある特定のがんの治療にとって重要かつ有利な治療標的である。FOLR1抗体、その抗原結合部分、他の結合剤およびそのコンジュゲートは、FOLR1＋がんおよび他の疾患の治療におけるこのような抗体、抗原結合部分および関連する結合剤、ならびにそのコンジュゲートの使用に基づく組成物および方法を提供する。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびにそれぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35からなる群に示されるアミノ酸配列のセットから選択されるアミノ酸配列を有する、結合剤が提供される。一部の実施形態では、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、フレームワーク領域がヒトフレームワーク領域である。
一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有し、重鎖フレームワーク領域および軽鎖フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されている。
一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；ならびにそれぞれ、配列番号21および配列番号22からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号7および配列番号8；ならびにそれぞれ、配列番号21および配列番号22からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、結合剤が抗体またはその抗原結合部分である。一部の実施形態では、結合剤が、モノクローナル抗体、Fab、Fab’、F（ab’）、Fv、scFv、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。一部の実施形態では、重鎖可変領域が重鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域がIgGアイソタイプのものである。一部の実施形態では、重鎖定常領域がIgG1定常領域である。一部の実施形態では、IgG1定常領域が、配列番号39に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、重鎖定常領域がIgG4定常領域である。一部の実施形態では、重鎖定常領域が、少なくともヒトFcガンマRIIIに対する結合親和性を低下させるアミノ酸修飾をさらに含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域が軽鎖定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、軽鎖定常領域がカッパアイソタイプのものである。一部の実施形態では、軽鎖定常領域が、配列番号40に示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、結合剤が単一特異性である。一部の実施形態では、結合剤が二価である。一部の実施形態では、結合剤が二重特異性である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される結合剤のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される結合剤のいずれかをコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される結合剤のいずれかをコードする核酸のいずれかを含むベクターが提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される結合剤のいずれかをコードするベクターのいずれか、または本明細書に記載される結合剤のいずれかをコードする核酸のいずれかを含む細胞株が提供される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される結合剤のいずれかと、結合剤に結合した少なくとも1つのリンカーと、各リンカーに結合した少なくとも1つの薬物とを含むコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、各薬物が、細胞傷害剤、免疫調節剤、核酸、増殖阻害剤、PROTAC、毒素および放射性同位体から選択される。一部の実施形態では、各リンカーが、鎖間ジスルフィド残基、リジン残基、操作されたシステイン残基、グリカン、修飾グリカン、結合剤のN末端残基または結合剤に結合したポリヒスチジンペプチドを介して結合剤に結合している。一部の実施形態では、コンジュゲートの平均薬物負荷が、約1～約8、約2、約4、約6、約8、約10、約12、約14、約16、約3～約5、約6～約8または約8～約16である。
コンジュゲートの一部の実施形態では、薬物が細胞傷害剤である。一部の実施形態では、細胞傷害剤が、アウリスタチン、メイタンシノイド、カンプトテシン、デュオカルマイシンまたはカリケアマイシンからなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞傷害剤がアウリスタチンである。一部の実施形態では、細胞傷害剤がMMAEまたはMMAFである。一部の実施形態では、細胞傷害剤がカンプトテシンである。一部の実施形態では、細胞傷害剤がエキサテカンである。一部の実施形態では、細胞傷害剤がSN－38である。一部の実施形態では、細胞傷害剤がカリケアマイシンである。一部の実施形態では、細胞傷害剤がメイタンシノイドである。一部の実施形態では、メイタンシノイドが、メイタンシン、メイタンシノール、またはDM1、DM3およびDM4のメイタンシン類似体、またはアンサマイトシン－2である。
一部の実施形態では、リンカーが、mc－VC－PAB、CL2、CL2Aまたは（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－（式中、n＝1～5である）を含む。一部の実施形態では、リンカーがmc－VC－PABを含む。一部の実施形態では、リンカーがCL2Aを含む。一部の実施形態では、リンカーがCL2を含む。一部の実施形態では、リンカーが（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－を含む。前記リンカーがエキサテカンの少なくとも1つの分子に結合している、請求項43に記載のコンジュゲート。一部の実施形態では、
一部の実施形態では、薬物が免疫調節剤である。一部の実施形態では、免疫調節剤が、TRL7アゴニスト、TLR8アゴニスト、STINGアゴニスト、またはRIG－Iアゴニストからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫調節剤がTLR7アゴニストである。一部の実施形態では、TLR7アゴニストが、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－2，2－ジオキシド、ベンゾナフチリジン、グアノシン類似体、アデノシン類似体、チミジンホモポリマー、ssRNA、CpG－A、ポリG10、およびポリG3である。一部の実施形態では、免疫調節剤がTLR8アゴニストである。一部の実施形態では、TLR8アゴニストが、イミダゾキノリン、チアゾロキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジンまたはssRNAから選択される。一部の実施形態では、免疫調節剤がSTINGアゴニストである。一部の実施形態では、免疫調節剤がRIG－Iアゴニストである。一部の実施形態では、RIG－Iアゴニストが、KIN1148、SB－9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400およびKIN2000から選択される。一部の実施形態では、リンカーが、mc－VC－PAB、CL2、CL2Aおよび（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－（式中、n＝1～5である）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲートのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が提供される。
一部の実施形態では、FOLR1＋がんを治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される結合剤のいずれか、本明細書に記載されるコンジュゲートのいずれかまたは本明細書に記載される結合剤もしくはコンジュゲートの医薬組成物のいずれかを、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、FOLR1＋がんが固形腫瘍である。一部の実施形態では、FOLR1＋がんが、肺がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵がん、および腎細胞がんから選択される。一部の実施形態では、
一部の実施形態では、方法が、免疫療法を対象に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、免疫療法がチェックポイント阻害剤を含む。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤が、ヒトPD－1、ヒトPD－L1、またはヒトCTLA4に特異的に結合する抗体から選択される。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである。一部の実施形態では、方法が、化学療法を対象に投与するステップをさらに含む。
一部の実施形態では、方法が、本明細書に記載されるコンジュゲートのいずれかまたは本明細書に記載される医薬組成物のいずれかを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、結合剤、コンジュゲートまたは医薬組成物が静脈内投与される。一部の実施形態では、結合剤、コンジュゲートまたは医薬組成物が約0．1mg／kg～約12mg／kgの用量で投与される。
方法の一部の実施形態では、対象の治療成績が改善される。一部の実施形態では、改善される治療成績が、安定（stable disease）、部分奏効または完全奏効から選択される客観的奏効である。一部の実施形態では、改善される治療成績が腫瘍量の減少である。一部の実施形態では、改善される治療成績が無増悪生存期間または無病生存期間である。
一部の実施形態では、対象のFOLR1＋がんを治療するための、本明細書に記載される結合剤のいずれかまたは本明細書に記載される結合剤の医薬組成物のいずれかの使用が提供される。一部の実施形態では、対象のFOLR1＋がんを治療するための、本明細書に記載されるコンジュゲートのいずれかまたは本明細書に記載される医薬組成物のいずれかの使用が提供される。
本発明のこれらの態様および他の態様は、以下の詳細な説明、具体的な実施形態の非限定的な例、および添付の図面を参照することによってより完全に理解され得る。
Hela細胞に結合する抗FOLR1抗体の比較を示す図である。 RPTEC／TERT1細胞に対する抗FOLR1抗体の結合能力の比較を示す図である。 Hela細胞に対する抗FOLR1抗体の用量依存的結合を示す図である。 RPTEC／TERT1細胞に対する抗FOLR1抗体の用量依存的結合を示す図である。 Hela細胞への抗FOLR1抗体の内在化を示す図である。 RPTEC／TERT1細胞への抗FOLR1抗体の内在化を示す図である。 標的FOLR1タンパク質に結合する抗FOLR－1コンジュゲートの比較を示す図である。 標的FLOR1タンパク質に結合する抗FOLR－1コンジュゲートの比較を示す図である。 Hela細胞に結合する抗FOLR－1コンジュゲートの比較を示す図である。 IGROV－1、OVCAR3およびOV90細胞に結合するan－huFOLR－1コンジュゲートの比較を示す図である。 Hela細胞に対する抗FOLR－1コンジュゲートの内在化の比較を示す図である。 OVCAR－3細胞に対する抗FOLR－1コンジュゲートの内在化の比較を示す図である。 OV90細胞に対する抗FOLR－1コンジュゲートの内在化の比較を示す図である。 IGROV－1細胞に対する抗FOLR－1コンジュゲートの内在化の比較を示す図である。 Hela細胞に対する抗huFOLR－1コンジュゲートの細胞傷害性の比較を示す図である。 OV90細胞に対する抗huFOLR－1コンジュゲートの細胞傷害性の比較を示す図である。 OVCAR－3細胞に対する抗huFOLR－1コンジュゲートの細胞傷害性の比較を示す図である。 IGROV－1細胞に対する抗huFOLR－1コンジュゲートの細胞傷害性の比較を示す図である。 抗FOLR－1コンジュゲートの薬物動態を示す図である。 体重に対する抗FOLR－1コンジュゲートの効果を示す図である。 FACSによるJEG－3に対するF131結合アッセイを示す図である。 FACSによるPC－3に対するF131結合アッセイを示す図である。 腫瘍細胞株におけるF131内在化を示す図である。 OVCAR－3に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 HCC827に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 H441に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 OVCAR－3に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 KBに対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 HCC827に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 H441に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 OV90に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 OVCAR－3に対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 KBに対するCDXにおけるF131コンジュゲートのインビボ有効性を示す図である。 F131およびコンジュゲートのラットモデルにおけるPK試験を示す図である。 F131およびコンジュゲートのラットモデルにおけるPK試験を示す図である。 パイロットカニクイザル毒性試験におけるF131－デルクステカン忍容性を示す図である。 パイロットカニクイザル毒性試験におけるF131－デルクステカン忍容性を示す図である。 パイロットカニクイザル毒性試験におけるF131－デルクステカンPKを示す図である。
定義
便宜上、本明細書、実施例および特許請求の範囲における一定の用語をここで定義する。特に明記しない限り、または文脈から暗示的でない限り、以下の用語および語句は、以下に提供される意味を有する。定義は、特定の実施形態の説明を助けるために提供され、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるので、特許請求される発明を限定することを意図するものではない。特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
本明細書で使用される場合、特に指示しない限り、「a」および「an」という用語は、「1つ」、「少なくとも1つ」または「1つまたは複数」を意味すると解釈される。文脈上特に要求されない限り、本明細書で使用される単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
文脈が明らかにそうでないことを要求しない限り、明細書および特許請求の範囲を通して、「含む（comprise）」、「含む（comprising）」などの単語は、排他的な意味でも網羅的な意味でもなく包括的な意味で；すなわち、「それだけに限らないが、～を含む」という意味で解釈されるべきである。
「減少した」、「低下する」、「低下した」、「低下」、「減少」および「阻害する」という用語は全て、本明細書においては一般に、参照と比較して統計学的に有意な量の減少を意味するために使用される。
「増加した」、「増加」または「増強する」または「活性化する」という用語は全て、本明細書においては、参照と比較して静的に有意な量の増加を一般に意味するために使用される。
本明細書で使用される場合、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、隣接する残基のα－アミノ基とカルボキシル基との間のペプチド結合によってそれぞれ互いに接続された一連のアミノ酸残基を示すために本明細書で互換的に使用される。「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語はまた、そのサイズまたは機能にかかわらず、修飾アミノ酸（例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化等）およびアミノ酸類似体を含むアミノ酸のポリマーを指す。「タンパク質」および「ポリペプチド」は、比較的大きなポリペプチドに関して使用されることが多いのに対して、「ペプチド」という用語は、小さなポリペプチドに関して使用されることが多いが、当技術分野におけるこれらの用語の使用は重複する。「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、コードされた遺伝子産物およびそのフラグメントを指す場合、本明細書では互換的に使用される。したがって、例示的なポリペプチドまたはタンパク質には、遺伝子産物、天然に存在するタンパク質、ホモログ、オルソログ、パラログ、フラグメントならびに前記のものの他の等価物、バリアント、フラグメントおよび類似体が含まれる。
FOLR1または葉酸受容体アルファは、葉酸塩および還元型葉酸誘導体に結合し、細胞内部への5－メチルテトラヒドロ葉酸塩および葉酸塩類似体の送達を媒介する細胞表面タンパク質である。これは、FR－アルファ、成人葉酸結合タンパク質、FBP、葉酸受容体1、葉酸受容体－成人、KB細胞FBPおよび卵巣腫瘍関連抗原MOv18とも呼ばれる。ヒトFOLR1ポリペプチドには、それだけに限らないが、UniProt識別子P15328－1に示されるアミノ酸配列を有するものが含まれ；この配列は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、本明細書に記載される抗体、その抗原結合部分および他の結合剤などの免疫グロブリンVH／VL対によって慣用的に結合されるアミノ酸を指す。エピトープは、タンパク質の三次折り畳みによって並置された連続アミノ酸または非連続アミノ酸のポリペプチド上に形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒での処理時に失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的配置で少なくとも3個、より通常的には少なくとも5個、約9個、または約8～10個のアミノ酸を含む。エピトープは、抗体、その抗原結合部分および他の結合剤の最小結合部位を定義し、したがって、抗体、その抗原結合部分または他の免疫グロブリン系結合剤の特異性の標的を表す。単一ドメイン抗体の場合、エピトープは、可変ドメインが単独で結合する構造単位を表す。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」は、本明細書に記載される結合剤（例えば、抗体またはその抗原結合部分）が、10－5M（10000 nM）以下、例えば10－6M、10－7M、10－8M、10－9M、10－10M、10－11M、10－12M、またはそれ未満のKDで、ヒトFOLR1などの標的に結合する能力を指す。特異的結合は、例えば、抗体、抗原結合部分または他の結合剤の親和性および結合活性ならびに標的ポリペプチドの濃度によって影響され得る。当業者であれば、適切な細胞結合アッセイでの結合剤の滴定などのあらゆる適切な方法を使用して、本明細書に記載される抗体、抗原結合部分および他の結合剤がFOLR1に選択的に結合する適切な条件を決定することができる。FOLR1に特異的に結合した結合剤は、非類似競合剤によって置き換えられない。ある特定の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、タンパク質および／または高分子の複合混合物中でその標的抗原FOLR1を優先的に認識する場合、FOLR1に特異的に結合すると言われる。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、10－5M（10000 nM）以下、例えば10－6M、10－7M、10－8M、10－9M、10－10M、10－11M、10－12M、またはそれ未満の解離定数（KDまたはKD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－5M～10－6Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－6M～10－7Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－7M～10－8Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－8M～10－9Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－9M～10－10Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－10M～10－11Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、約10－11M～10－12Mの解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、10－12M未満の解離定数（KD）でFOLR1ポリペプチドに特異的に結合する。
本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という用語は、所与の実施形態に必要な要素を指す。この用語は、その実施形態の基本的および新規なまたは機能的特性に実質的に影響を及ぼさない要素の存在を可能にする。
本明細書で使用される場合、「からなる」という用語は、実施形態のその説明に列挙されていないあらゆる要素を除外する、本明細書に記載される組成物、方法、およびそれらのそれぞれの成分を指す。
実施例以外で、または別段の指示がある場合を除き、本明細書で使用される成分または反応条件の量を表す全ての数は、全ての場合において「約」という用語によって修飾されていると理解されるべきである。「約」という用語は、百分率に関連して使用される場合、＋／－1％を意味し得る。
「統計学的に有意な」または「有意に」という用語は、統計的有意性を指し、一般に、参照値を上回るまたは下回る2標準偏差（2SD）差を意味する。
他の用語は、本発明の様々な態様の説明の範囲内で本明細書において定義される。
本明細書では、ヒトFOLR1に特異的に結合するFOLR1結合抗体（FOLR1抗体とも呼ばれる）およびその抗原結合部分ならびに他の結合剤が提供される。細胞傷害剤または免疫調節剤などの薬物に結合したFOLR1抗体および抗原結合部分ならびに他の結合剤のコンジュゲート（FOLR1コンジュゲートとも呼ばれる）も本明細書で提供される。一部の実施形態では、FOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤およびコンジュゲートが、対象のFOLR1＋細胞に特異的に結合し、その数を減少させる。一部の実施形態では、FOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤および／またはコンジュゲートが、対象のFOLR1＋がん細胞に特異的に結合し、その数を減少させる。一部の実施形態では、FOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤および／またはコンジュゲートが、対象の疾患または状態に関連するFOLR1＋細胞に特異的に結合し、その数を減少させる。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有する。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。「重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない」という句は、アミノ酸の置換も、欠失も、挿入も有さないVHおよびVL CDRを指す。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有する；FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。本明細書に記載されるように、結合剤は、FOLR1抗体またはその抗原結合部分を含み、FOLR1抗体またはその抗原結合部分に共有結合した他のペプチドまたはポリペプチドを含むことができる。これらの実施形態のいずれにおいても、結合剤がFOLR1に特異的に結合する。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有する、FOLR1に特異的に結合する結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有し；結合剤が、抗体FR107よりも高い結合親和性（低いKd）でFOLR1に特異的に結合する。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む抗体または抗原結合部分であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、（i）それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびに（ii）それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35から選択されるアミノ酸配列のセットに示されるアミノ酸配列を有する、抗体または抗原結合部分が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む抗体または抗原結合部分であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30に示されるアミノ酸配列を有する、抗体または抗原結合部分が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む抗体または抗原結合部分であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35に示されるアミノ酸配列を有する、抗体または抗原結合部分が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、（i）それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびに（ii）それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35から選択されるアミノ酸配列のセットに示されるアミノ酸配列を有する、結合剤が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30に示されるアミノ酸配列を有する、結合剤が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35に示されるアミノ酸配列を有する、結合剤が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物および方法が、インビボでのFOLR1抗体、その抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲートによる対象のFOLR1＋細胞の減少（例えば、がんまたは腫瘍におけるFOLR1＋細胞の数の減少）に関する。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物および方法が、FOLR1抗体、その抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与することによる対象のFOLR1＋がんの治療に関する。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物および方法が、FOLR1抗体、その抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与することによる対象のFOLR1＋細胞の数の減少に関する。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原、例えばヒトFOLR1に特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を指す。この用語は、一般に、完全長抗体（重鎖定常領域および軽鎖定常領域を有する）を含む、2つの免疫グロブリン重鎖可変領域および2つの免疫グロブリン軽鎖可変領域で構成される抗体を指す。
各重鎖は、可変領域（VHと略される）および定常領域で構成される。重鎖定常領域は、3つのドメインCH1、CH2およびCH3、ならびに場合により第4のドメインCH4を含み得る。各軽鎖は、可変領域（VLと略される）および定常領域で構成される。軽鎖定常領域はCLドメインである。VH領域およびVL領域は、相補性決定領域（CDR）と呼ばれる超可変領域にさらに分けられ、フレームワーク領域（FR）と呼ばれる保存された領域が散在し得る。したがって、各VH領域およびVL領域は、N末端からC末端に以下の順序で配置される3つのCDRおよび4つのFRからなる：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4。この構造は当業者に周知である。
本明細書で使用される場合、FOLR1抗体の「抗原結合部分」は、FOLR1抗体のVH配列およびVL配列またはFOLR1抗体のCDRを有し、FOLR1に特異的に結合する、本明細書に記載されるFOLR1抗体の部分を指す。抗原結合部分の例としては、Fab、Fab’、F（ab’）2、Fv、scFv、ジスルフィド結合Fv、単一ドメイン抗体（VHH、VNAR、sdAb、もしくはナノボディとも呼ばれる）またはダイアボディ（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Hustonら、Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．、85、5879～5883（1988）およびBirdら、Science 242、423～426（1988）参照）が挙げられる。本明細書で使用される場合、Fab、F（ab’）2およびFvという用語は、（i）Fabフラグメント、すなわちVL、VH、CLおよびCH1ドメインで構成される一価フラグメント；（ii）F（ab’）2フラグメント、すなわちジスルフィド架橋を介してヒンジ領域内で互いに連結された2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；および（iii）各場合でFOLR1抗体の、VLドメインおよびVHドメインで構成されるFvフラグメントを指す。Fvフラグメントの2つのドメイン、すなわちVLおよびVHは別個のコード領域によってコードされるが、これらを合成リンカー、例えばポリG4Sアミノ酸配列（配列番号38として開示される「（G4S）n」（式中、n＝1～5である））を使用して互いにさらに連結して、一価分子（一本鎖FvまたはscFvとして知られる）を形成するためにVL領域およびVH領域が結合する単一タンパク質鎖として調製することを可能にすることができる。抗体の「抗原結合部分」という用語は、このような一本鎖抗体を含むことも意図している。「ダイアボディ」などの他の形態の一本鎖抗体も同様にここに含まれる。ダイアボディは、VHドメインおよびVLドメインが単一ポリペプチド鎖上で発現されるが、2つのドメインが同じ鎖上で結合することができるには短すぎるVHドメインとVLドメインを接続するリンカーを使用して、それによって、VHドメインとVLドメインを異なる鎖の相補的ドメイン（それぞれVLおよびVH）と対合させ、2つの抗原結合部位を形成させる二価の二重特異性抗体である（例えば、Holliger，Rら（1993）Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90：64446448；Poljak，R．Jら（1994）Structure 2：1121～1123）。
単一ドメイン抗体は、単一単量体可変抗体ドメインからなる抗体部分である。単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物由来の抗体重鎖の可変ドメインから誘導され得る（例えば、ナノボディまたはVHH部分）。さらに、単一ドメイン抗体という用語は、自律性ヒト重鎖可変ドメイン（aVH）またはサメに由来するVNAR部分を含む（例えば、Haslerら、Mol．Immunol．75：28～37、2016参照）。
単一ドメイン抗体（例えば、DABまたはVHH）を作製する技術は、例えばCossinsら（2006、Prot Express Purif 51：253～259）およびLiら（Immunol．Lett．188：89～95、2017）に開示されるように、当技術分野で公知である。単一ドメイン抗体は、例えば、標準的な免疫化技術によってラクダ、アルパカまたはラマから得ることができる。（例えば、Muyldermansら、TIBS 26：230～235、2001；Yauら、J Immunol Methods 281：161－75、2003；およびMaassら、J Immunol Methods 324：13～25、2007参照）。VHHは強力な抗原結合能を有し得、従来のVH－VL対にはアクセスできない新規なエピトープと相互作用し得る（例えば、Muyldermansら、2001参照）。アルパカ血清IgGは、約50％のラクダ科動物重鎖のみのIgG抗体（HCAb）を含有する（例えば、Maassら、2007参照）。アルパカを抗原で免疫することができ、標的抗原に結合し、これを中和するVHHを単離することができる（例えば、Maassら、2007参照）。アルパカVHHコード配列を増幅するPCRプライマーが特定されており、アルパカVHHファージディスプレイライブラリーを構築するために使用することができ、これを当技術分野で周知の標準的なバイオパニング技術による抗体フラグメント単離に使用することができる（例えば、Maassら、2007参照）。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分が、二重特異性または多重特異性結合剤の一部である。二重特異性および多重特異性抗体には、scFv1－scFv2、scFv12－Fc－scFv22、IgG－scFv、DVD－Ig、triomab／クアドローマ、ツーインワンIgG、scFv2－Fc、TandAbおよびscFv－HSA－scFvが含まれる。一部の実施形態では、IgG－scFvが、IgG（H）－scFv、scFv－（H）IgG、IgG（L）－scFv、svFc－（L）IgG、2scFV－IgGまたはIgG－2scFvである。例えば、BrinkmannおよびKontermann、MAbs 9（2）：182～212（2017）；Wangら、Antibodies、2019、8、43；Dongら、2011、MAbs 3：273－88；Natsumeら、J．Biochem．140（3）：359～368、2006；Chealら、Mol．Cancer Ther．13（7）：1803～1812、2014；ならびにBatesおよびPower、Antibodies、2019、8、28を参照されたい。
VH領域およびVL領域の修飾
VHアミノ酸配列およびVLアミノ酸配列に関して、当業者であれば、コードされる配列中の単一アミノ酸または少ない割合のアミノ酸を変化させる、VHもしくはVL、またはポリペプチド中のアミノ酸をコードする核酸への個々の置換、欠失または付加（挿入）が、改変が化学的に類似したアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらし（保存的アミノ酸置換）、改変されたポリペプチドがFOLR1に特異的に結合する能力を保持する「保存的修飾バリアント」であることを認識するであろう。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分の保存的修飾バリアントが、フレームワーク領域（FR）（すなわち、CDR以外）に改変を有することができる、例えば、FOLR1抗体の保存的修飾バリアントが、VHおよびVL CDRのアミノ酸配列（（i）それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびに（ii）それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35のアミノ酸配列のセットに示される）を有し、フレームワーク領域に少なくとも1個の保存的アミノ酸置換を有する。一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、FRに8個または6個または4個または2個または1個以下の保存的アミノ酸置換を集合的に有する。一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、FRに8～1個、6～1個、4～1個または2～1個の保存的アミノ酸置換を有する。これらの実施形態のいずれかのさらなる態様では、FOLR1抗体、その抗原結合部分または他の結合剤の保存的修飾バリアントが、FOLR1に対する特異的結合を示す。
保存的アミノ酸置換のために、所与のアミノ酸を、類似の物理化学的特性を有する残基によって置き換えることができる、例えば、ある脂肪族残基を別の脂肪族残基に置換する（例えば、互いにIle、Val、Leu、またはAla）、またはある極性残基を別の極性残基に置換する（例えば、LysとArgとの間；GluとAspとの間；またはGlnとAsnとの間）ことができる。他のこのような保存的アミノ酸置換、例えば、類似の疎水性特性を有する全領域の置換は周知である。保存的アミノ酸置換を含むポリペプチドを、本明細書に記載されるアッセイのいずれか1つで試験して、天然または参照ポリペプチドの所望の活性、すなわちFOLR1に対する活性、例えば抗原結合活性および特異性が保持されていることを確認することができる。
一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を、例えば、ヒトにおける治療のために、機能的活性を維持しながら、潜在的な免疫原性を減少させる、または他の機能的特性を最適化するようにさらに最適化することができる。一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含み、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が本明細書で提供される。
これらの実施形態のいずれかでは、FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の機能的活性が、FOLR1への特異的結合を含む。さらなる機能的活性には、FOLR1＋細胞（例えば、がん細胞）の枯渇が含まれる。さらに、機能的活性を有するFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、用量依存性の有無にかかわらず、例えば生物学的アッセイなどの特定のアッセイで測定した場合に、本明細書に記載される参照抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書中に記載される、（i）配列番号36に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および（ii）配列番号37に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む参照FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分またはそのバリアント）の活性と類似の活性またはそれよりも良好な活性を示すポリペプチドを意味する。用量依存性が存在する場合、それは参照抗体またはその抗原結合部分の用量依存性と同一である必要はなく、むしろ、本明細書に記載される参照抗体またはその抗原結合部分と比較して、所与の活性における用量依存性と実質的に類似であるまたはそれよりも良好である（すなわち、候補ポリペプチドが、参照抗体と比較してより大きな活性を示す）。
保存的置換の場合、アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従ってグループ分けすることができる（A．L．Lehninger、Biochemistry、第2版、73～75頁、Worth Publishers、New York（1975））：（1）非極性：Ala（A）、Val（V）、Leu（L）、Ile（I）、Pro（P）、Phe（F）、Trp（W）、Met（M）；（2）非荷電極性：Gly（G）、Ser（S）、Thr（T）、Cys（C）、Tyr（Y）、Asn（N）、Gln（Q）；（3）酸性：Asp（D）、Glu（E）；および（4）塩基性：Lys（K）、Arg（R）、His（H）。
あるいは、保存的置換の場合、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいてグループ分けすることができる：（1）疎水性：ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile；（2）中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；（3）酸性：Asp、Glu；（4）塩基性：His、Lys、Arg；（5）鎖配向に影響を及ぼす残基：Gly、Pro；および（6）芳香族：Trp、Tyr、Phe。非保存的置換は、これらのクラスまたは別のクラスの1つのメンバーを交換することを伴う。
特定の保存的置換には、例えば、；AlaからGlyまたはSer；ArgからLys；AsnからGlnもしくはHis；AspからGlu；CysからSer；GlnからAsn；GluからAsp；GlyからAlaもしくはPro；HisからAsnもしくはGln；IleからLeuもしくはVal；LeuからIleもしくはVal；LysからArg、GlnもしくはGlu；MetからLeu、TyrもしくはIle；PheからMet、LeuもしくはTyr；SerからThr；ThrからSer；TrpからTyr；TyrからTrp；および／またはPheからVal、IleもしくはLeuが含まれる。
一部の実施形態では、FOLR1抗体またはその抗原結合部分の保存的修飾バリアントが、好ましくは、参照VHまたはVL配列と少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、またはそれを超えて同一であり、VHおよびVL CDRが修飾されていない。参照配列と修飾配列との間の相同性の程度（同一性パーセント）は、例えば、ワールドワイドウェブ上でこの目的のために一般的に採用される自由に入手可能なコンピュータプログラム（例えば、デフォルト設定でBLASTpまたはBLASTn）を使用して2つの配列を比較することによって決定することができる。
一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、フレームワーク領域に8個または6個または4個または2個または1個以下の保存的アミノ酸置換を集合的に有する。一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、フレームワーク領域に8～1個、または6～1個、または4～1個、または2～1個の保存的アミノ酸置換を集合的に有する。一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、フレームワーク領域に8個または6個または4個または2個または1個以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を集合的に有する。一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、フレームワーク領域に8～1個、6～1個、4～1個、または2～1個の保存的アミノ酸置換を有する。一部の実施形態では、VHおよびVLアミノ酸配列が、非修飾VH領域およびVL領域のアミノ酸配列と比較して、8個または6個または4個または2個または1個以下のアミノ酸の置換、欠失または挿入を集合的に有する。
天然（または参照）アミノ酸配列の修飾は、当業者に公知のいくつかの技術のいずれかによって達成することができる。突然変異は、例えば、天然配列のフラグメントへのライゲーションを可能にする制限部位に隣接する所望の突然変異配列を含有するオリゴヌクレオチドを合成することによって、特定の遺伝子座に導入することができる。ライゲーション後、得られた再構築配列は、所望のアミノ酸の挿入、置換または欠失を有するバリアントをコードする。あるいは、オリゴヌクレオチド指向部位特異的突然変異誘発手順を採用して、所望の置換、欠失、または挿入に従って改変された特定のコドンを有する改変されたヌクレオチド配列を提供することができる。このような改変を行う技術は非常によく確立されており、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Walderら（Gene 42：133、1986）；Bauerら（Gene 37：73、1985）；Craik（BioTechniques、1985年1月、12～19）；Smithら（Genetic Engineering：Principles and Methods、Plenum Press、1981）；ならびに米国特許第4，518，584号明細書および米国特許第4，737，462号明細書によって開示されるものを含む。
定常領域
一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が完全ヒト定常領域を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が完全ヒト化定常領域を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が非ヒト定常領域を有する。免疫グロブリン定常領域は、重鎖定常領域または軽鎖定常領域を指す。ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域のアミノ酸配列は、当技術分野で公知である。定常領域は、免疫グロブリン、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMのクラスから選択することができる任意の適切なタイプのものであり得る。いくつかの免疫グロブリンクラスは、アイソタイプ、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、またはIgA1、およびIgA2にさらに分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域（Fc）は、それぞれα、δ、ε、γおよびμであり得る。軽鎖は、カッパ（またはκ）およびラムダ（またはλ）のいずれかのうちの1つであり得る。
一部の実施形態では、定常領域がIgG1アイソタイプを有することができる。一部の実施形態では、定常領域がIgG2アイソタイプを有することができる。一部の実施形態では、定常領域がIgG3アイソタイプを有することができる。一部の実施形態では、定常領域がIgG4アイソタイプを有することができる。一部の実施形態では、Fcドメインが、2つ以上のアイソタイプ由来の定常領域を含むハイブリッドアイソタイプを有することができる。一部の実施形態では、免疫グロブリン定常領域が、IgG1またはIgG4定常領域であり得る。一部の実施形態では、FOLR1抗体重鎖が、IgG1アイソタイプのものであり、配列番号39に示されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、FOLR1抗体軽鎖が、カッパアイソタイプのものであり、配列番号40に示されるアミノ酸配列を有する。
さらに、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、抗体または抗原結合部分と1つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドの共有結合または非共有結合によって形成されるより大きな結合剤の一部であり得る。このような結合剤に関連するのは、例えば、四量体scFv分子を調製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Kipriyanov，S．M．ら（1995）、Human Antibodies and Hybridomas 6：93－101）、ならびに二価およびビオチン化scFv分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびC末端ポリヒスチジニルペプチド、例えばヘキサヒスチジニルタグ（配列番号41として開示される「ヘキサヒスチジニルタグ」）の使用（Kipriyanov，S．M．ら（1994）Mol．Immunol．31：10471058）である。
エフェクター機能を改変するためのFcドメイン修飾
一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤のFc領域またはFcドメインが、FcyRI（CD64）、FcyRIIA（CD32a）、FcyRIIB（CD32b）、FcyRIIIA（CD16a）、およびFcyRIIIB（CD16b）から選択される少なくとも1つのFc受容体に実質的に結合しない。一部の実施形態では、Fc領域またはドメインが、FcyRI（CD64）、FcyRIIA（CD32a）、FcyRIIB（CD32b）、FcyRIIIA（CD16a）、およびFcyRIIIB（CD16b）から選択されるFc受容体のいずれにも実質的に結合しない。本明細書で使用される場合、「実質的に結合しない」は、選択された1つまたは複数のFcガンマ受容体への結合が弱いことまたは結合しないことを指す。一部の実施形態では、「実質的に結合しない」が、少なくとも1000分の1倍のFcガンマ受容体に対する結合親和性の低下（例えば、Kdの増加）を指す。一部の実施形態では、Fcドメインまたは領域がFcヌルである。本明細書で使用される場合、「Fcヌル」は、Fcガンマ受容体のいずれかに対する弱い結合を示すまたは結合を示さないFc領域またはFcドメインを指す。一部の実施形態では、Fcヌルドメインまたは領域が、少なくとも1000分の1倍のFcガンマ受容体に対する結合親和性の低下（すなわち、Kdの増加）を示す。
一部の実施形態では、Fcドメインが、エフェクター機能活性が低下している、または実質的にない。本明細書で使用される場合、「エフェクター機能活性」は、抗体依存性細胞傷害（ADCC）、抗体依存性細胞貪食（ADCP）および／または補体依存性細胞傷害（CDC）を指す。一部の実施形態では、Fcドメインが、野生型Fcドメインと比較して、低下したADCC、ADCPまたはCDC活性を示す。一部の実施形態では、Fcドメインが、野生型Fcドメインと比較して、ADCC、ADCPおよびCDCの低下を示す。一部の実施形態では、Fcドメインが、エフェクター機能（すなわち、ADCC、ADCPまたはCDCを刺激するまたはもたらす能力）を実質的に示さない。本明細書で使用される場合、「エフェクター機能が実質的にない」は、野生型または参照Fcドメインと比較して、少なくとも1000分の1倍のエフェクター機能活性の低下を指す。
一部の実施形態では、Fcドメインが、ADCC活性が低下している、またはADCC活性を有さない。本明細書で使用される場合、ADCC活性が低下している、またはADCC活性を有さないは、少なくとも10分の1倍、少なくとも20分の1倍、少なくとも30分の1倍、少なくとも50分の1倍、少なくとも100分の1倍または少なくとも500分の1倍のFcドメインのADCC活性の減少を指す。
一部の実施形態では、Fcドメインが、CDC活性が低下している、またはCDC活性を有さない。本明細書で使用される場合、CDC活性が低下している、またはCDC活性を有さないは、少なくとも10分の1倍、少なくとも20分の1倍、少なくとも30分の1倍、少なくとも50分の1倍、少なくとも100分の1倍または少なくとも500分の1倍のFcドメインのCDC活性の減少を指す。
インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ADCCおよび／またはCDC活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Fc受容体（FcR）結合アッセイを行って、抗体がFcガンマ受容体結合を欠く（したがって、おそらくADCC活性を欠く）ことを保証することができる。ADCCを媒介するための主要な細胞である、NK細胞はFcガンマRIIIのみを発現するが、単球はFcガンマRI、FcガンマRIIおよびFcガンマRIIIを発現する。造血細胞上のFcR発現は、RavetchおよびKinet、Annu．Rev．Immunol．9：457～492（1991）の464頁の表3に要約されている。目的の分子のADCC活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第5，500，362号明細書（例えば、Hellstrom，I．らProc．Nat’l Acad．Sci．USA 83：7059～7063（1986）参照）およびHellstrom，Iら、Proc．Nat’l Acad．Sci．USA 82：1499～1502（1985）；米国特許第5，821，337号明細書（Bruggemann，M．ら、J．Exp．Med．166：1351～1361（1987）参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を採用してもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのACTI（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（CellTechnology，Inc．カリフォルニア州マウンテンビュー）およびCytoTox 96（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Promega、ウィスコンシン州マディソン）参照）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（PBMC）およびナチュラルキラー（NK）細胞が含まれる。代替的または追加的に、目的の分子のADCC活性を、インビボにおいて、例えば、Clynesら、Proc．Nat’l Acad．Sci．USA 95：652～656（1998）に開示されるような動物モデルにおいて評価することができる。
C1q結合アッセイを行って、抗体またはFcドメインもしくは領域がC1qに結合することができず、したがってCDC活性を欠く、またはCDC活性が低下していることを確認することもできる。例えば、国際公開第2006／029879号パンフレットおよび国際公開第2005／100402号パンフレットのC1qおよびC3c結合ELISAを参照されたい。補体活性化を評価するために、CDCアッセイを実施することができる（例えば、Gazzano－Santoroら、J．Immunol．Methods 202：163（1996）；Cragg，M．S．ら、Blood 101：1045～1052（2003）；ならびにCragg，M．S．およびM．J．Glennie、Blood 103：2738～2743（2004）参照）。
一部の実施形態では、Fcドメインが、ADCP活性が低下している、またはADCP活性を有さない。本明細書で使用される場合、ADCP活性が低下している、またはADCP活性を有さないは、少なくとも10分の1倍、少なくとも20分の1倍、少なくとも30分の1倍、少なくとも50分の1倍、少なくとも100分の1倍または少なくとも500分の1倍のFcドメインのADCP活性の減少を指す。
ADCP結合アッセイを行って、抗体またはFcドメインもしくは領域がADCP活性を欠く、またはADCP活性が低下していることを確認することもできる。例えば、米国特許出願公開第20190079077号明細書および米国特許出願公開第20190048078号明細書ならびにそこに開示されている参考文献を参照されたい。
エフェクター機能活性が低下したFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤には、KabatのEUナンバリングに従って、例えば238、265、269、270、297、327および329などのFc領域残基の1つまたは複数の置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第6，737，056号明細書参照）。このようなFc変異体には、KabatのEU番号に従って、残基265および297がアラニンに置換されたいわゆる「DANA」Fc変異体を含む、アミノ酸265位、269位、270位、297位および327位のうちの2つ以上に置換を有するFc変異体が含まれる（米国特許第7，332，581号明細書参照）。FcRへの結合が減少したある特定の抗体バリアントも知られている。（例えば、米国特許第6，737，056号明細書；国際公開第2004／056312号パンフレット、およびShieldsら、J．Biol．Chem．9（2）：6591～6604（2001）参照）。このようなアミノ酸修飾を含有する、FcRへの結合が減少したFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を調製することができる。
一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、FcガンマR結合を減少させる1つまたは複数のアミノ酸置換、例えばFc領域の234位および235位（残基のEUナンバリング）の置換を有するFcドメインまたは領域を含む。一部の実施形態では、置換が、KabatのEU番号によると、L234AおよびL235A（LALA）である。一部の実施形態では、Fcドメインが、KabatのEUナンバリングによると、ヒトIgG1 Fc領域に由来するFc領域にD265Aおよび／またはP329Gを含む。一部の実施形態では、置換が、KabatのEUナンバリングによると、ヒトIgG1 Fc領域に由来するFc領域のL234A、L235AおよびP329G（LALA－PG）である（例えば、国際公開第2012／130831号パンフレット参照）。一部の実施形態では、置換が、KabatのEU番号によると、ヒトIgG1 Fc領域に由来するFc領域のL234A、L235AおよびD265A（LALA－DA）である。
一部の実施形態では、例えば、米国特許第6，194，551号明細書、国際公開第99／51642号パンフレット、およびIdusogieらJ．Immunol．164：4178～4184（2000）に記載されるように、C1q結合および／または補体依存性細胞傷害（CDC）の改変（すなわち、いずれが減少する）をもたらすFc領域の改変が行われる。
抗体、抗原結合部分および他の結合剤を作製する方法
様々な実施形態では、FOLR1抗体、その抗原結合部分および他の結合剤が、ヒト、マウスまたは他の動物由来細胞株で産生され得る。組換えDNA発現を使用して、FOLR1抗体、その抗原結合部分および他の結合剤を産生することができる。これにより、選択された宿主種における、FOLR1抗体ならびにある範囲のFOLR1抗原結合部分および他の結合剤（融合タンパク質を含む）の産生が可能になる。細菌、酵母、トランスジェニック動物および鶏卵におけるFOLR1抗体、その抗原結合部分および他の結合剤の産生もまた、細胞ベースの産生系の代替法である。トランスジェニック動物の主な利点は、再生可能資源からの潜在的高収率である。
一部の実施形態では、核酸が、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、または23に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20または22に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号1に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号3に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号5に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号7に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号9に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号11に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号13に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号15に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号17に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号19に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号21に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号23に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VHポリペプチドをコードする。
一部の実施形態では、核酸が、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号4に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号6に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号8に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号10に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号12に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号14に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号16に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号18に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号20に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号22に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号24に示されるアミノ酸配列を有するFOLR1 VLポリペプチドをコードする。
一部の実施形態では、核酸が、配列番号1および2に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号3および4に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号5および6に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号7および8に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号9および10に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号11および12に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号13および14に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号15および16に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号17および18に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号19および20に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号21および22に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸が、配列番号23および24に示されるアミノ酸配列を有するVHポリペプチドおよびVLポリペプチドをコードする。
本明細書で使用される場合、「核酸」または「核酸配列」または「ポリヌクレオチド配列」または「ヌクレオチド」という用語は、リボ核酸、デオキシリボ核酸またはそれらの類似体の単位を組み込んだポリマー分子を指す。核酸は、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得る。一本鎖核酸は、変性した二本鎖DNAの1本鎖の核酸であり得る。一部の実施形態では、核酸が、cDNA、例えばイントロンを欠く核酸であり得る。
FOLR1抗体のアミノ酸配列、その抗原結合部分ならびに他の結合剤をコードする核酸分子は、当技術分野で公知の様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、それだけに限らないが、FOLR1抗体、抗原結合部分または他の結合剤をコードする合成ヌクレオチド配列の調製が含まれる。さらに、オリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）突然変異誘発、PCR媒介突然変異誘発、およびカセット突然変異誘発を使用して、FOLR1抗体または抗原結合部分ならびに他の結合剤をコードするヌクレオチド配列を調製することができる。少なくとも本明細書に記載されるFOLR1抗体、その抗原結合部分、結合剤、またはそのポリペプチドをコードする核酸配列は、例えば、ライゲーションのための平滑末端または付着末端、適切な付着末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて付着末端の充填、望ましくない結合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、および適切なリガーゼによるライゲーション、または当技術分野で公知の他の技術などの従来技術に従ってベクターDNAで組み換えられ得る。このような操作のための技術は、例えば、Maniatisら、Molecular Cloning，Lab．Manual（Cold Spring Harbor Lab．Press、NY、1982および1989）、およびAusubelら、Current Protocols in Molecular Biology（John Wiley＆Sons）、1987～1993によって開示されており、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分、またはそのVHもしくはVLポリペプチド、または他の結合剤をコードする核酸配列およびベクターを構築するために使用することができる。
DNAなどの核酸分子は、それが転写および翻訳調節情報を含有するヌクレオチド配列を含有し、このような配列がポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に「作動可能に連結されている」場合、ポリペプチドを「発現することができる」と言われる。作動可能な連結は、調節DNA配列と発現されることが求められるDNA配列（例えば、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）が、回収可能な量のポリペプチドまたは抗原結合部分の遺伝子発現を可能にするように接続される連結である。遺伝子発現に必要な調節領域の正確な性質は、類似の技術分野で周知のように、生物ごとに異なり得る。例えば、Sambrookら、1989；Ausubelら、1987～1993を参照されたい。
したがって、本明細書に記載されるFOLR1抗体またはその抗原結合部分の発現は、原核細胞または真核細胞のいずれかで行われ得る。適切な宿主には、インビボもしくはインサイチューの酵母、昆虫、真菌、鳥類および哺乳動物細胞、または哺乳動物、昆虫、鳥類もしくは酵母起源の宿主細胞を含む細菌または真核生物宿主が含まれる。哺乳動物細胞または組織は、ヒト、霊長類、ハムスター、ウサギ、げっ歯類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、イヌまたはネコ起源のものであり得るが、あらゆる他の哺乳動物細胞が使用され得る。さらに、例えば酵母ユビキチンヒドロラーゼ系の使用により、ユビキチン－膜貫通ポリペプチド融合タンパク質のインビボ合成を達成することができる。このようにして産生された融合タンパク質は、インビボでプロセシング、またはインビトロで精製およびプロセシングされて、指定されるアミノ末端配列を有する、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の合成を可能にすることができる。さらに、直接酵母（または細菌）発現における開始コドン由来メチオニン残基の保持に関連する問題が回避され得る（例えば、Sabinら、7 Bio／Technol．705（1989）；Millerら、7 Bio／Technol．698（1989）参照）。酵母をグルコースに富む培地で増殖させる場合に大量に産生される解糖系酵素をコードする活発に発現される遺伝子からプロモーターエレメントおよび終止エレメントを組み込んだ一連の酵母遺伝子発現系のいずれかを利用して、組換えFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を得ることができる。既知の解糖系遺伝子も非常に効率的な転写制御シグナルを提供することができる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子のプロモーターシグナルおよびターミネーターシグナルを利用することができる。
昆虫におけるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の産生は、例えば、当業者に公知の方法によって、ポリペプチドを発現するように操作されたバキュロウイルスを昆虫宿主に感染させることによって達成することができる。Ausubelら、1987～1993を参照されたい。
一部の実施形態では、導入核酸配列（FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのポリペプチドをコードする）が、レシピエント宿主細胞において自律複製することができるプラスミドまたはウイルスベクターに組み込まれる。多種多様なベクターのいずれかをこの目的のために採用することができ、これらは当業者に公知であり入手可能である。例えば、Ausubelら、1987～1993を参照されたい。特定のプラスミドまたはウイルスベクターを選択する際の重要な因子には、ベクターを含有するレシピエント細胞が認識され、ベクターを含有しないレシピエント細胞から選択され得る容易さ；特定の宿主において望まれるベクターのコピー数；および異なる種の宿主細胞間でベクターを「シャトルする」ことができることが望ましいかどうかが含まれる。
当技術分野で公知の例示的な原核生物ベクターには、大腸菌（E．coli）で複製することができるプラスミドなどのプラスミドが含まれる。FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードするDNAの発現に有用な他の遺伝子発現エレメントには、限定されないが、（a）ウイルス転写プロモーターおよびそれらのエンハンサーエレメント、例えばSV40初期プロモーター（Okayamaら、3 Mol．Cell．Biol．280（1983））、ラウス肉腫ウイルスLTR（Gormanら、79 PNAS 6777（1982））、およびモロニーマウス白血病ウイルスLTR（Grosschedlら、41 Cell 885（1985））；（b）スプライス領域およびポリアデニル化部位、例えばSV40後期領域に由来するもの（Okayareaら、1983）、ならびに（c）ポリアデニル化部位、例えばSV40におけるもの（Okayamaら、1983）が含まれる。免疫グロブリンをコードするDNA遺伝子は、発現エレメントとしてSV40初期プロモーターおよびそのエンハンサー、マウス免疫グロブリンH鎖プロモーターエンハンサー、SV40後期領域mRNAスプライシング、ウサギSグロビン介在配列、免疫グロブリンおよびウサギSグロビンポリアデニル化部位、ならびにSV40ポリアデニル化エレメントを使用して、以下のLiuら、およびWeidleら、51 Gene 21（1987）によって記載されるように発現され得る。
ヌクレオチド配列をコードする免疫グロブリンの場合、転写プロモーターは、例えば、ヒトサイトメガロウイルスであり得、プロモーターエンハンサーは、サイトメガロウイルスおよびマウス／ヒト免疫グロブリンであり得る。
一部の実施形態では、げっ歯類細胞におけるDNAコード領域の発現のために、転写プロモーターがウイルスLTR配列であり得、転写プロモーターエンハンサーがマウス免疫グロブリン重鎖エンハンサーおよびウイルスLTRエンハンサーのいずれかまたは両方、ならびにポリアデニル化および転写終結領域であり得る。他の実施形態では、他のタンパク質をコードするDNA配列を上記の発現エレメントと組み合わせて、哺乳動物細胞におけるタンパク質の発現を達成する。
各コード領域または遺伝子融合物を、発現ベクターにアセンブルまたは挿入する。次いで、FOLR1可変領域もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を発現することができるレシピエント細胞を、FOLR1抗体もしくは抗体ポリペプチドもしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードするヌクレオチドで単独でトランスフェクトする、あるいはVHおよびVL鎖コード領域または他の結合剤をコードするポリヌクレオチドでコトランスフェクトする。トランスフェクトされたレシピエント細胞を、組み込まれたコード領域の発現を可能にする条件下で培養し、発現された抗体鎖もしくはインタクト抗体もしくは抗原結合部分または他の結合剤を培養物から回収する。
一部の実施形態では、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードするコード領域を含有する核酸を、その後レシピエント宿主細胞をコトランスフェクトするために使用される別個の発現ベクターにアセンブルする。各ベクターは、1つまたは複数の選択可能な遺伝子を含有することができる。例えば、一部の実施形態では、2つの選択可能な遺伝子が使用され、第1の選択可能な遺伝子が細菌系での選択のために設計され、第2の選択可能な遺伝子が真核生物系での選択のために設計され、各ベクターがコード領域のセットを有する。この戦略は、細菌系におけるヌクレオチド配列の産生を最初に指示し、増幅を可能にするベクターをもたらす。その後、細菌宿主においてこのように産生され、増幅されたDNAベクターを使用して、真核細胞をコトランスフェクし、所望のトランスフェクトされた核酸を有する（例えば、FOLR1抗体の重鎖および軽鎖を含有する）コトランスフェクトされた細胞の選択を可能にする。細菌系で使用するための選択可能な遺伝子の非限定的な例は、アンピシリンに対する耐性を付与する遺伝子およびクロラムフェニコールに対する耐性を付与する遺伝子である。真核生物トランスフェクタントに使用するための選択可能な遺伝子には、キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（gptと呼ばれる）およびTn5由来のホスホトランスフェラーゼ遺伝子（neoと呼ばれる）が含まれる。あるいは、VH鎖およびVL鎖をコードする融合ヌクレオチド配列を、同じ発現ベクター上でアセンブルすることができる。
発現ベクターのトランスフェクションおよびFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の産生のために、レシピエント細胞株は、チャイニーズハムスター卵巣細胞株（例えば、DG44）または骨髄腫細胞であり得る。骨髄腫細胞は、トランスフェクトされた免疫グロブリン遺伝子によってコードされる免疫グロブリンを合成、アセンブルおよび分泌することができ、免疫グロブリンのグリコシル化のための機序を有する。例えば、一部の実施形態では、レシピエント細胞が組換えIg産生骨髄腫細胞SP2／0である。SP2／0細胞は、トランスフェクトされた遺伝子によってコードされる免疫グロブリンのみを産生する。骨髄腫細胞は、培養物中またはマウスの腹膜腔で増殖させることができ、分泌された免疫グロブリンを腹水から得ることができる。
FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする発現ベクターは、形質転換、トランスフェクション、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、およびジエチルアミノエチル（DEAE）デキストランなどのポリカチオンの適用のような生化学的手段、ならびに電気穿孔、直接マイクロインジェクションおよび微粒子銃のような機械的手段を含む様々な適切な手段のいずれかによって適切な宿主細胞に導入することができる。当業者に知られている、Johnstonら、240 Science 1538（1988）。
酵母は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の産生について細菌よりも一定の利点を提供する。酵母は、グリコシル化を含む翻訳後ペプチド修飾を行う。酵母において所望のタンパク質を産生するために使用することができる強力なプロモーター配列および高コピー数プラスミドを利用するいくつかの組換えDNA戦略が存在する。酵母は、クローニング哺乳動物遺伝子産物のリーダー配列を認識し、リーダー配列を有するポリペプチドを分泌する（すなわち、プレポリペプチド）。例えば、Hitzmanら、第11版Intl．Conf．Yeast，Genetics＆Molec．Biol．（Montpelier、フランス、1982）を参照されたい。
酵母遺伝子発現系は、抗体、ならびにアセンブルされたFOLR1抗体およびその抗原結合部分および他の結合剤の産生、分泌および安定性のレベルについて日常的に評価することができる。酵母をグルコースに富む培地で増殖させる場合に大量に産生される解糖系酵素をコードする活発に発現される遺伝子からプロモーターエレメントおよび終止エレメントを組み込んだ様々な酵母遺伝子発現系を利用することができる。既知の解糖系遺伝子も非常に効率的な転写制御シグナルを提供することができる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（PGK）遺伝子のプロモーターシグナルおよびターミネーターシグナルを利用することができる。別の例は、チャイニーズハムスター細胞由来のものなどの翻訳伸長因子1アルファプロモーターである。酵母における免疫グロブリンの発現のための最適な発現プラスミドを評価するために、いくつかのアプローチをとることができる。II DNA Cloning 45、（Glover編、IRL Press、1985）および例えば米国特許出願公開第2006／0270045号明細書を参照されたい。
細菌株を、本明細書に記載される抗体分子またはその抗原結合部分および他の結合剤の産生のための宿主として利用することもできる。大腸菌W3110などの大腸菌K12株、バチルス属（Bacillus）種、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）または霊菌（Serratia marcescens）などの腸内細菌、および様々なシュードモナス属（Pseudomonas）種を使用することができる。宿主細胞と適合性の種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターが、これらの細菌宿主に関連して使用される。ベクターは、複製部位、ならびに形質転換細胞において表現型選択を提供することができる特定の遺伝子を有する。細菌におけるFOLR1抗体およびその抗原結合部分ならびに他の結合剤の産生のための発現プラスミドを評価するために、いくつかのアプローチをとることができる（Glover、1985；Ausubel、1987、1993；Sambrook、1989；Colligan、1992～1996参照）。
宿主哺乳動物細胞は、インビトロまたはインビボで増殖させることができる。哺乳動物細胞は、リーダーペプチドの除去、VH鎖およびVL鎖の折り畳みおよびアセンブリ、抗体分子のグリコシル化、ならびに機能的抗体および／もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の分泌を含む翻訳後修飾を免疫グロブリン分子に提供する。
上記のリンパ系起源の細胞に加えて、抗体タンパク質の産生のための宿主として有用となり得る哺乳動物細胞には、Vero細胞またはCHO－K1細胞などの線維芽細胞起源の細胞が含まれる。免疫グロブリンポリペプチドを発現するために使用することができる例示的な真核細胞には、それだけに限らないが、COS7細胞を含むCOS細胞；293－6E細胞を含む293細胞；CHO－SおよびDG44細胞を含むCHO細胞；PERC6（商標）細胞（Crucell）；ならびにNSO細胞が含まれる。一部の実施形態では、特定の真核宿主細胞が、重鎖および／または軽鎖に所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、一部の実施形態では、CHO細胞が、293細胞で産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。
一部の実施形態では、1つもしくは複数のFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が、任意の適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする1つまたは複数の核酸分子で操作またはトランスフェクトされた動物においてインビボで産生され得る。
一部の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Sitaramanら、Methods Mol．Biol．498：229－44（2009）；Spirin、Trends Biotechnol．22：538－45（2004）；およびEndoら、Biotechnol．Adv．21：695～713（2003）に記載されている。
多くのベクター系が、哺乳動物細胞におけるVH鎖およびVL鎖の発現のために利用可能である（Glover、1985参照）。様々なアプローチに従ってインタクト抗体を得ることができる。上に論じられるように、VH鎖およびVL鎖、ならびに場合により関連する定常領域を同じ細胞内で共発現させて、完全な四量体H2L2抗体またはその抗原結合部分へのVH鎖およびVL鎖の細胞内会合および連結を達成することが可能である。共発現は、同じ宿主において同じまたは異なるプラスミドのいずれかを使用することによって行うことができる。VH鎖およびVL鎖もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を同じプラスミドに配置することができ、次いで、これを細胞にトランスフェクトし、それによって、両鎖を発現する細胞を直接選択する。あるいは、最初に1つの鎖、例えばVL鎖をコードするプラスミドで細胞をトランスフェクトし、引き続いて第2の選択マーカーを含有するVH鎖プラスミドで、得られた細胞株をトランスフェクトすることができる。いずれかの経路を介して抗体、その抗原結合部分を産生する細胞株を、さらなる選択マーカーと併せて、ペプチド、VH、VL、またはVH＋VL鎖のさらなるコピーをコードするプラスミドでトランスフェクトして、アセンブルされたFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤のより高い産生あるいはトランスフェクトされた細胞株の安定性の増強などの、増強された特性を有する細胞株を作製することができる。
さらに、植物が、微生物または動物細胞の大規模培養に基づく組換え抗体産生のための便利で、安全かつ経済的な代替発現系として浮上している。FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤は、植物細胞培養物または従来通りに成長させた植物において発現させることができる。植物における発現は、全身性であっても、細胞内色素体に限定されても、種子（胚乳）に限定されてもよい。例えば、米国特許出願公開第第2003／0167531号明細書；米国特許第6，080，560号明細書；米国特許第6，512，162号明細書；および国際公開第0129242号パンフレットを参照されたい。いくつかの植物由来抗体は、臨床試験を含めて、進歩した開発段階に達している（例えば、Biolex，N．C．参照）。
インタクト抗体の場合、FOLR1抗体の可変領域（VH領域およびVL領域）は、典型的には、免疫グロブリン定常領域（Fc）またはドメインの少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域またはドメインの少なくとも一部に連結される。ヒト定常領域DNA配列は、不死化B細胞などの様々なヒト細胞から周知の手順に従って単離することができる（国際公開第87／02671号パンフレット）。FOLR1結合抗体は、軽鎖定常領域と重鎖定常領域の両方を含有することができる。重鎖定常領域は、CH1領域、ヒンジ領域、CH2領域、CH3領域、および場合によりCH4領域を含むことができる。一部の実施形態では、CH2ドメインが、欠失され得る、または省略され得る。
一本鎖抗体の産生について記載される技術（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第4，946，778号明細書；Bird、Science 242：423－42（1988）；Hustonら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85：5879～5883（1988）；およびWardら、Nature 334：544－54（1989）参照）を、FOLR1に特異的に結合する一本鎖抗体を産生するように適合させることができる。一本鎖抗体は、アミノ酸架橋を介してFv領域の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結して、一本鎖ポリペプチドをもたらすことによって形成される。大腸菌における機能的Fv部分のアセンブリのための技術も使用することができる（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Skerraら、Science 242：1038～1041（1988）参照）。
一部の実施形態では、抗原結合部分または他の結合剤が、1つまたは複数のscFvを含む。scFvは、例えば、10～約25個のアミノ酸の短いリンカーペプチドで接続された、抗体の重鎖（VH）可変領域と軽鎖（VL）可変領域の可変領域の融合タンパク質であり得る。リンカーは、通常、柔軟性のためにグリシンに富み、溶解性のためにセリンまたはトレオニンに富み、VHのN末端をVLのC末端と接続することができる、またはその逆も可能である。このタンパク質は、定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、元の抗体の特異性を保持する。scFv抗体は、例えばHouston，J．S．、Methods in Enzymol 203（1991）46～96に記載されている。scFv分子を作製する方法および適切なペプチドリンカーを設計する方法は、例えば、米国特許第4，704，692号明細書；米国特許第4，946，778号明細書；RaagおよびWhitlow、FASEB 9：73～80（1995）ならびにBirdおよびWalker、TIBTECH、9：132～137（1991）に記載されている。ScFv－Fcは、Sokolowska－Wedzinaら、Mol．Cancer Res．15（8）：1040～1050、2017によって記載されている。
一部の実施形態では、抗原結合部分または他の結合剤が、単一単量体可変抗体ドメインからなる抗原結合部分である単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物由来の抗体重鎖の可変ドメインから誘導され得る（例えば、ナノボディまたはVHH部分）。さらに、単一ドメイン抗体は、自律性ヒト重鎖可変ドメイン（aVH）またはサメに由来するVNAR部分であり得る（例えば、Haslerら、Mol．Immunol．75：28～37、2016参照）。
単一ドメイン抗体（DABまたはVHH）を作製するための技術は、例えばCossinsら（2006、Prot Express Purif 51：253～259）およびLiら（Immunol．Lett．188：89～95、2017）に開示されるように、当技術分野で公知である。単一ドメイン抗体は、例えば、標準的な免疫化技術によってラクダ、アルパカまたはラマから得ることができる。（例えば、Muyldermansら、TIBS 26：230～235、2001；Yauら、J Immunol Methods 281：161－75、2003；およびMaassら、J Immunol Methods 324：13～25、2007参照）。VHHは強力な抗原結合能を有し得、従来のVH－VL対にはアクセスできないエピトープと相互作用し得る（例えば、Muyldermansら、2001参照）。アルパカ血清IgGは、約50％のラクダ科動物重鎖のみのIgG抗体（HCAb）を含有する（例えば、Maassら、2007参照）。アルパカを抗原で免疫することができ、標的抗原に結合し、これを中和するVHHを単離することができる（例えば、Maassら、2007参照）。アルパカVHHコード配列を増幅するPCRプライマーが特定されており、アルパカVHHファージディスプレイライブラリーを構築するために使用することができ、これを当技術分野で周知の標準的なバイオパニング技術による抗体フラグメント単離に使用することができる（例えば、Maassら、2007参照）。
多重特異性抗体を作製する技術には、それだけに限らないが、異なる特異性を有する2つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（例えば、MilsteinおよびCuello、Nature 305：537（1983）、国際公開第93／08829号パンフレットおよびTrauneckerら、EMBO J．10：3655（1991）参照）、および「ノブインホール」技術（例えば、米国特許第5，731，168号明細書；Carter（2001）、J Immunol Methods 248、7～15参照）が含まれる。多重特異性抗体はまた、抗体Fc－ヘテロ二量体分子を作製するための静電的ステアリング（electrostatic steering）効果の操作（例えば、国際公開第2009／089004号パンフレット参照）；2種以上の抗体またはその抗原結合部分の架橋（例えば、米国特許第4，676，980号明細書およびBrennanら、Science、229：81（1985）参照）；二重特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Kostelnyら、J．Immunol．、148（5）：1547～1553（1992）参照）；二重特異性抗体部分を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Hollingerら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA、90：6444～6448（1993）参照）；および一本鎖Fv（scFv）二量体の使用（例えば、Gruberら、J．Immunol．、152：5368（1994）参照）；および例えばTuttらJ．Immunol．147：60（1991）に記載される三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。
「オクトパス抗体」を含む3つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も、結合剤となり得る（例えば、米国特許出願公開第2006／0025576号明細書参照）。
本明細書における結合剤（例えば、抗体または抗原結合部分）はまた、2つの異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用FAb」または「DAF」を含む（例えば、米国特許出願公開第2008／0069820号明細書およびBostromら、2009、Science 323：1610－14参照）。「Crossmab」抗体も本明細書に含まれる（例えば、国際公開第2009／080251号パンフレット、国際公開第2009／080252号パンフレット、国際公開第2009／080253号パンフレット、国際公開第2009／080254号パンフレットおよび国際公開第2013／026833号パンフレット参照）。
一部の実施形態では、結合剤が、Fcドメインの2つのサブユニットの一方または他方に融合された異なる抗原結合部位を含み；したがって、Fcドメインの2つのサブユニットが、2つの同一でないポリペプチド鎖に含まれ得る。これらのポリペプチドの組換え共発現およびその後の二量体化が、2つのポリペプチドのいくつかの可能な組み合わせをもたらす。したがって、組換え産生における二重特異性分子の収率および純度を改善するために、所望のポリペプチドの会合を促進する修飾を結合剤のFcドメインに導入することが有利となる。
一般に、この方法は、ホモ二量体形成が静電的に好ましくなくなるが、ヘテロ二量体化が静電的に好ましくなるように、2つのFcドメインの界面の1つまたは複数のアミノ酸残基を荷電アミノ酸残基で置換することを伴う。
一部の実施形態では、結合剤が、「二重特異性T細胞エンゲージャー」またはBiTEである（例えば、国際公開第2004／106381号パンフレット、国際公開第2005／061547号パンフレット、国際公開第2007／042261号パンフレット、および国際公開第2008／119567号パンフレット参照）。このアプローチは、単一ポリペプチド上に配置された2つの抗体可変ドメインを利用する。例えば、単一ポリペプチド鎖は、それぞれが2つのドメイン間の分子内会合を可能にするのに十分な長さのポリペプチドリンカーによって分離された可変重鎖（VH）および可変軽鎖（VL）ドメインを有する2つの一本鎖Fv（scFv）部分を含むことができる。この単一ポリペプチドは、2つのscFvの間にポリペプチドスペーサー配列をさらに含む。各scFvは異なるエピトープを認識し、これらのエピトープは異なるタンパク質に特異的であり得るので、両方のタンパク質がBiTEによって結合される。
これは単一ポリペプチドであるので、二重特異性T細胞エンゲージャーは、当技術分野で公知のあらゆる原核細胞または真核細胞発現系、例えばCHO細胞株を使用して発現され得る。しかしながら、単量体二重特異性T細胞エンゲージャーを、モノマーの意図した活性以外の生物学的活性を有し得る他の多量体種から分離するために、特異的な精製技術（例えば、欧州特許第1691833号明細書参照）が必要となり得る。1つの例示的な精製スキームでは、分泌されたポリペプチドを含有する溶液を最初に金属アフィニティークロマトグラフィーに供し、イミダゾール濃度の勾配でポリペプチドを溶出する。この溶離液を、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用してさらに精製し、塩化ナトリウム濃度の勾配を使用してポリペプチドを溶出する。最後に、この溶離液をサイズ排除クロマトグラフィーに供して、単量体を多量体種から分離する。一部の実施形態では、二重特異性抗体である結合剤が、ペプチドリンカーによって互いに融合された2つの一本鎖FV部分（scFV）を含む単一ポリペプチド鎖で構成される。
一部の実施形態では、結合剤が多重特異性であり、例えばIgG－scFVである。IgG－scFvフォーマットには、IgG（H）－scFv、scFv－（H）IgG、IgG（L）－scFv、svFc－（L）IgG、2scFV－IgGおよびIgG－2scFvが含まれる。これらのおよび他の二重特異性抗体フォーマットならびにそれらを作製する方法は、例えば、BrinkmannおよびKontermann、MAbs 9（2）：182～212（2017）；Wangら、Antibodies、2019、8、43；Dongら、2011、MAbs 3：273－88；Natsumeら、J．Biochem．140（3）：359～368、2006；Chealら、Mol．Cancer Ther．13（7）：1803～1812、2014；ならびにBatesおよびPower、Antibodies、2019、8、28に記載されている。
Igg様二重可変ドメイン抗体（DVD－Ig）は、Wuら、2007、Nat Biotechnol 25：1290－97；Haslerら、Mol．Immunol．75：28～37、2016によって、ならびに国際公開第08／024188号パンフレットおよび国際公開第07／024715号パンフレットに記載されている。Triomabは、Cheliusら、MAbs 2（3）：309～319、2010によって記載されている。2－in－1－IgGは、Kontermannら、Drug Discovery Today 20（7）：838～847、2015によって記載されている。タンデン抗体（Tanden antibody）またはTandAbは、Kontermannら、同上によって記載されている。ScFv－HSA－scFv抗体も、Kontermannら（同上）によって記載されている。
インタクト（例えば、全）抗体、それらの二量体、個々の軽鎖および重鎖、またはそれらの抗原結合部分ならびに他の結合剤は、公知の技術、例えば、免疫吸着もしくはイムノアフィニティークロマトグラフィー、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）などのクロマトグラフィー法、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、またはこれらのあらゆる組み合わせによって回収および精製することができる。一般に、Scopes、Protein Purification（Springer－Verlag、ニューヨーク、1982）を参照されたい。少なくとも約90％～95％の均質性の実質的に純粋なFOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤が有利であり、特に医薬用途の場合、98％～99％またはそれを超える均質性を有するものが有利である。部分的にまたは所望の均質性まで精製したら、インタクトFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤を治療的に、またはアッセイ手順、免疫蛍光染色などを開発および実施する際に使用することができる。一般に、Vols．I＆II Immunol．Meth．（Lefkovits＆Pernis編、Acad．Press、ニューヨーク、1979および1981）を参照されたい。
抗体薬物コンジュゲート
一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体、抗原結合部分または他の結合剤が、FOLR1抗体薬物コンジュゲート（FOLR1コンジュゲートまたはFOLR1 ADCとも呼ばれる）の一部である。一部の実施形態では、FOLR1抗体、抗原結合部分または他の結合剤が少なくとも1つのリンカーに結合しており、少なくとも1つの薬物が各リンカーに結合している。本明細書で使用される場合、コンジュゲートの文脈では、「薬物」という用語は、細胞傷害剤（化学療法剤または薬物など）、免疫調節剤、核酸（siRNAを含む）、増殖阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメント）、放射性同位体、PROTAC、および標的細胞に送達された場合にこれらの細胞に対して活性である他の化合物を指す。
細胞傷害剤
一部の実施形態では、FOLR1コンジュゲートが、細胞傷害剤である少なくとも1つの薬物を含む。「細胞傷害剤」は、細胞に対して細胞傷害効果を有する薬剤を指す。「細胞傷害効果」は、標的細胞の枯渇、排除および／または殺傷を指す。細胞傷害剤には、例えば、チューブリン破壊剤、トポイソメラーゼ阻害剤、DNA副溝結合剤およびDNAアルキル化剤が含まれる。
チューブリン破壊剤には、例えば、アウリスタチン、ドラスタチン、チューブリシン、コルヒチン、ビンカアルカロイド、タキサン、クリプトフィシン、メイタンシノイド、ヘミアステリン、ならびに他のチューブリン破壊剤が含まれる。アウリスタチンは、天然生成物ドラスタチン10の誘導体である。例示的なアウリスタチンには、MMAE（N－メチルバリン－バリン－ドライソロイシン－ドラプロイン－ノルエフェドリン）、MMAF（N－メチルバリン－バリン－ドライソロイシン－ドラプロイン－フェニルアラニン）およびAFP（国際公開第2004／010957号パンフレットおよび国際公開第2007／008603号パンフレット参照）が含まれる。他のアウリスタチン様化合物は、例えば、米国特許出願公開第2021／0008099号明細書、米国特許出願公開第2017／0121282号明細書、米国特許出願公開第2013／0309192号明細書および米国特許出願公開第2013／0157960号明細書に開示されている。ドラスタチンには、例えば、ドラスタチン10およびドラスタチン15が含まれる（例えば、Pettitら、J．Am．Chem．Soc．、1987、109、6883～6885；Pettitら、Anti－Cancer Drug Des．、1998、13、243～277；および米国特許出願公開第2001／0018422号明細書参照）。本明細書での使用が企図されるさらなるドラスタチン誘導体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第9，345，785号明細書に開示されている。
チューブリシンには、それだけに限らないが、チューブリシンD、チューブリシンM、チューブフェニルアラニン（tubuphenylalanine）およびチューブチロシン（tubutyrosine）が含まれる。国際公開第2017／096311号パンフレットおよび国際公開第2016／040684号パンフレットには、チューブリシンMを含むチューブリシン類似体が記載されている。
コルヒチンには、それだけに限らないが、コルヒチンおよびCA－4が含まれる。
ビンカアルカロイドには、それだけに限らないが、ビンブラスチン（VBL）、ビノレルビン（VRL）、ビンクリスチン（VCR）およびビンデシン（VOS）が含まれる。
タキサンには、それだけに限らないが、パクリタキセルおよびドセタキセルが含まれる。
クリプトフィシンには、それだけに限らないが、クリプトフィシン－1およびクリプトフィシン－52が含まれる。
メイタンシノイドには、それだけに限らないが、メイタンシン、メイタンシノール、DM1、DM3およびDM4のメイタンシン類似体、またはアンサマイトシン－2が含まれる。例示的なメイタンシノイド薬物部分には、C－19－デクロロ（米国特許第4，256，746号明細書）（アンサマイトシンP2の水素化アルミニウムリチウム還元によって調製される）；C－20－ヒドロキシ（またはC－20－デメチル）＋／－C－19－デクロロ（米国特許第4，361，650号明細書および同第4，307，016号明細書）（ストレプトマイセス属（Streptomyces）もしくはアクチノマイセス属（Actinomyces）を使用した脱メチル化またはLAHを使用した脱塩素によって調製される）；およびC－20－デメトキシ，C－20－アシルオキシ（－OCOR），＋／－デクロロ（米国特許第4，294，757号明細書）（塩化アシルを使用したアシル化によって調製される）などの修飾芳香環を有するもの、ならびに他の位置に修飾を有するものが含まれる。
メイタンシノイド薬物部分には、C－9－SH（米国特許第4，424，219号明細書）（メイタンシノールとH2SまたはP2S5の反応によって調製される）；C－14－アルコキシメチル（デメトキシ／CH2OR）（米国特許第4，331，598号明細書）；C－14－ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（CH2OHまたはCH2OAc）（米国特許第4，450，254号明細書）（ノカルジア属（Nocardia）から調製される）；C－15－ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第4，364，866号明細書）（ストレプトマイセス属（Streptomyces）によるメイタンシノールの変換によって調製される）；C－15－メトキシ（米国特許4，313，946号明細書および同第4，315，929号明細書）（トレウィア・ヌディフローラ（Trewia nudiflora）から単離される）；C－18－N－デメチル（米国特許第4，362，663号明細書および同第4，322，348号明細書）（ストレプトマイセス属（Streptomyces）によるメイタンシノールの脱メチル化によって調製される）；および4，5－デオキシ（米国特許第4，371，533号明細書）（メイタンシノールの三塩化チタン／LAH還元によって調製される）などの修飾を有するものも含まれる。
ヘミアステリンには、それだけに限らないが、ヘミアステリンおよびHTl－286が含まれる。
他のチューブリン破壊剤には、タッカロノリドA、タッカロノリドB、タッカロノリドAF、タッカロノリドAJ、タッカロノリドAl－エポキシド、ディスコデルモリド、エポチロンA、エポチロンB、およびラウリマリドが含まれる。
一部の実施形態では、細胞傷害剤が、カンプトテシンなどのトポイソメラーゼ阻害剤であり得る。例示的なカンプトテシンには、例えば、カンプトテシン、イリノテカン（CPT－11とも呼ばれる）、ベロテカン、（7－（2－（N－イソプロピルアミノ）エチル）カンプトテシン）、トポテカン、10－ヒドロキシ－CPT、SN－38、エキサテカンおよびエキサテカン類似体DXdが含まれる（米国特許出願公開第20150297748号明細書参照）。他のカンプトテシンは、国際公開第1996／021666号パンフレット、国際公開第00／08033号パンフレット、米国特許出願公開第2016／0229862号明細書および国際公開第2020／156189号パンフレットに開示されている。
一部の実施形態では、細胞傷害剤が、合成類似体、KW－2189およびCBI－TMIを含むデュオカルマイシンである。
免疫調節剤
一部の実施形態では、薬物が免疫調節剤である。免疫調節剤は、例えば、TLR7および／もしくはTLR8アゴニスト、STINGアゴニスト、またはRIG－Iアゴニストあるいは他の免疫調節剤であり得る。
一部の実施形態では、薬物が、TLR7および／またはTLR8アゴニストなどの免疫調節剤である。一部の実施形態では、TLR7アゴニストが、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－2，2－ジオキシド、ベンゾナフチリジン、グアノシン類似体、アデノシン類似体、チミジンホモポリマー、ssRNA、CpG－A、ポリG10、およびポリG3から選択される。一部の実施形態では、TLR7アゴニストが、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－2，2－ジオキシドまたはベンゾナフチリジンから選択される。一部の実施形態では、TLR7アゴニストが天然に存在しない化合物である。TLR7モジュレーターの例としては、GS－9620、GSK－2245035、イミキモド、レシキモド、DSR－6434、DSP－3025、IMO－4200、MCT－465、MEDI－9197、3M－051、SB－9922、3M－052、Limtop、TMX－30X、TMX－202、RG－7863、RG－7795、ならびに米国特許出願公開第20160168164号明細書（Janssen）、米国特許出願公開第20150299194号明細書（Roche）、米国特許出願公開第20110098248号明細書（Gilead Sciences）、米国特許出願公開第20100143301号明細書（Gilead Sciences）および米国特許出願公開第20090047249号明細書（Gilead Sciences）に開示されている化合物が挙げられる。
一部の実施形態では、TLR8アゴニストが、ベンザゼピン、イミダゾキノリン、チアゾロキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジンまたはssRNAから選択される。一部の実施形態では、TLR8アゴニストが、ベンザゼピン、イミダゾキノリン、チアゾロキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、およびテトラヒドロピリドピリミジンから選択される。一部の実施形態では、TLR8アゴニストが天然に存在しない化合物である。TLR8アゴニストの例としては、モトリモド、レシキモド、3M－051、3M－052、MCT－465、IMO－4200、VTX－763、VTX－1463が挙げられる。
一部の実施形態では、TLR8アゴニストが、国際公開第2018／170179号パンフレット、国際公開第2020／056198号パンフレットおよび国際公開第2020056194号パンフレットに記載される化合物のいずれかであり得る。
他のTLR7およびTLR8アゴニストは、例えば、国際公開第2016142250号パンフレット、国際公開第2017046112号パンフレット、国際公開第2007024612号パンフレット、国際公開第2011022508号パンフレット、国際公開第2011022509号パンフレット、国際公開第2012045090号パンフレット、国際公開第2012097173号パンフレット、国際公開第2012097177号パンフレット、国際公開第2017079283号パンフレット、米国特許出願公開第20160008374号明細書、米国特許出願公開第20160194350号明細書、米国特許出願公開第20160289229号明細書、米国特許第6043238号明細書、米国特許出願公開第20180086755号明細書（Gilead）、国際公開第2017216054号パンフレット（Roche）、国際公開第2017190669号パンフレット（Shanghai De Novo Pharmatech）、国際公開第2017202704号パンフレット（Roche）、国際公開第2017202703号パンフレット（Roche）、国際公開第20170071944号パンフレット（Gilead）、米国特許出願公開第20140045849号明細書（Janssen）、米国特許出願公開第20140073642号明細書（Janssen）、国際公開第2014056953号パンフレット（Janssen）、国際公開第2014076221号パンフレット（Janssen）、国際公開第2014128189号パンフレット（Janssen）、米国特許出願公開第20140350031号明細書（Janssen）、国際公開第2014023813号パンフレット（Janssen）、米国特許出願公開第20080234251号明細書（Array Biopharma）、米国特許出願公開第20080306050号明細書（Array Biopharma）、米国特許出願公開第20100029585号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20110092485号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20110118235号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20120082658号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20120219615号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20140066432号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20140088085号明細書（Ventirx Pharma）、米国特許出願公開第20140275167号明細書（Novira Therapeutics）、および米国特許出願公開第20130251673号明細書（Novira Therapeutics）、国際公開第2018198091号パンフレット（Novartis AG）、および米国特許出願公開第20170131421号明細書（Novartis AG）に開示されている。
一部の実施形態では、免疫調節剤がSTINGアゴニストである。STINGアゴニストの例としては、例えば、国際公開第2020059895号パンフレット、国際公開第2015077354号パンフレット、国際公開第2020227159号パンフレット、国際公開第2020075790号パンフレット、国際公開第2018200812号パンフレット、および国際公開第2020074004号パンフレットに開示されているものが挙げられる。
一部の実施形態では、免疫調節剤がRIG－Iアゴニストである。RIG－Iアゴニストの例としては、KIN1148、SB－9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400およびKIN2000が挙げられる。
毒素
一部の実施形態では、薬物が、それだけに限らないが、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素A鎖（緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）由来）、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシンA鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリ（Aleurites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Phytolaca americana）タンパク質（PAPI、PAPII、およびPAP－S）、ツルレイシ（momordica charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ（sapaonaria officinalis）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンを含む酵素的に活性な毒素またはそのフラグメントである。
放射性同位体
一部の実施形態では、薬物が放射性原子である。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの製造に利用可能である。例としては、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi213、P32、Pb212およびルテチウムの放射性同位体（例えば、Lu177）が挙げられる。
PROTAC
一部の実施形態では、薬物がタンパク質分解誘導キメラ分子（PROTAC）である。PROTACは、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第20210015942号明細書、同第第20210015929号明細書、同第第20200392131号明細書、同第第20200216507号明細書、米国特許出願公開第20200199247号明細書および米国特許出願公開第20190175612号明細書に記載されている。
リンカー
FOLR1コンジュゲートは、典型的には、少なくとも1つのリンカーを含み、各リンカーはそれに結合した少なくとも1つの薬物を有する。典型的には、コンジュゲートは、FOLR1抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）と薬物との間にリンカーを含む。様々な実施形態では、リンカーが、プロテアーゼ切断可能リンカー、酸切断可能リンカー、ジスルフィドリンカー、スルフィド含有リンカーもしくはスルフィド結合に隣接するジメチル基を有するジスルフィド含有リンカー（例えば、Jainら、Pharm．Res．32：3526～3540（2015）；Chariら、Cancer Res．52：127～131（1992）；米国特許第5，208，020号明細書参照）、自己安定化リンカー（例えば、国際公開第2018／031690号パンフレット；国際公開第2015／095755号パンフレットおよびJainら、Pharm．Res．32：3526～3540（2015）参照）、非切断可能リンカー（例えば、国際公開第2007／008603号パンフレット参照）、光分解性リンカー、および／または親水性リンカー（例えば、国際公開第2015／123679号パンフレット参照）であり得る。
一部の実施形態では、リンカーが、リンカーの切断により細胞内環境において抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）および／またはリンカーから薬物が放出されるように、細胞内条件下で切断可能な切断可能リンカーである。例えば、一部の実施形態では、リンカーが、細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ内）に存在する切断剤によって切断可能である。リンカーは、例えば、それだけに限らないがリソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであり得る（例えば、国際公開第2004／010957号パンフレット、米国特許出願公開第20150297748号明細書、米国特許出願公開第2008／0166363号明細書、米国特許出願公開第20120328564号明細書および米国特許出願公開第20200347075号明細書参照）。典型的には、ペプチジルリンカーが、少なくとも1アミノ酸長または少なくとも2アミノ酸長である。細胞内切断剤には、カセプシンBおよびDならびにプラスミンが含まれ得るが、これらは全て、ジペプチド薬物誘導体を加水分解して、標的細胞内で活性薬物の放出をもたらすことが知られている（例えば、DubowchikおよびWalker、1999、Pharm．Therapeutics 83：67～123参照）。最も典型的なものは、標的抗原発現細胞中に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーである。例えば、がん性組織で高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼカテプシンBによって切断可能なペプチジルリンカーを使用することができる（例えば、Phe－LeuまたはGly－Phe－Leu－Glyリンカー（配列番号42））。他のこのようなリンカーは、例えば、米国特許第6，214，345号明細書に記載されている。具体的な実施形態では、細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーが、Val－CitリンカーもしくはPhe－Lysリンカー（例えば、val－citリンカーを用いたドキソルビシンの合成を記載する米国特許第6，214，345号明細書参照）またはGly－Gly－Phe－Glyリンカー（配列番号43）（例えば、米国特許出願公開第2015／0297748号明細書参照）である。薬物の細胞内タンパク質分解性放出を使用することの1つの利点は、薬物が、典型的にはコンジュゲートされると弱毒化され、コンジュゲートの血清安定性が典型的には高いことである。米国特許第9，345，785号明細書も参照されたい。
本明細書で使用される場合、「細胞内で切断される」および「細胞内切断」という用語は、それによって薬物（例えば、細胞傷害剤）と抗体との間の共有結合、例えばリンカーが破壊され、遊離薬物または細胞内で抗体から解離したコンジュゲートの他の代謝産物が得られる、抗体薬物コンジュゲートに対する細胞内の代謝プロセスまたは反応を指す。したがって、コンジュゲートの切断された部分は細胞内代謝産物である。
一部の実施形態では、切断可能リンカーが、pH感受性である、すなわち一定のpH値で加水分解に感受性である。典型的には、pH感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソーム中で加水分解可能な酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス－アコニット酸アミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を使用することができる。（例えば、米国特許第5，122，368号明細書；同第5，824，805号明細書；および同第5，622，929号明細書；DubowchikおよびWalker、1999、Pharm．Therapeutics 83：67～123；Nevilleら、1989、Biol．Chem．264：14653～14661参照）。このようなリンカーは、血液中のpHなどの中性pH条件下で比較的安定であるが、リソソームのおおよそのpHであるpH5．5または5．0未満では不安定である。ある特定の実施形態では、加水分解性リンカーが、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して薬物に結合したチオエーテルなど）である（例えば、米国特許第5，622，929号明細書参照）。
一部の実施形態では、リンカーが、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。例えば、SATA（N－スクシンイミジル－5－アセチルチオアセテート）、SPDP（N－スクシンイミジル－3－（2－ピリジルジチオ）プロピオネート）、SPDB（N－スクシンイミジル－3－（2－ピリジルジチオ）ブチレート）およびSMPT（N－スクシンイミジル－オキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（2－ピリジル－ジチオ）トルエン）、SPDBおよびSMPTを使用して形成することができるものを含む様々なジスルフィドリンカーが公知である（例えば、Thorpeら、1987、Cancer Res．47：5924～5931；Wawrzynczakら、In lmmunoconjugates：Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer（C．W．Vogel編、Oxford U．Press、1987）参照。米国特許第4，880，935号明細書も参照されたい）。
一部の実施形態では、リンカーが、マロネートリンカー（Johnsonら、1995、Anticancer Res．、15：1387－93）、マレイミドベンゾイルリンカー（Lauら、1995、Bioorg－Med－Chem．3（10）：1299～1304）、または3’－N－アミド類似体（Lauら、1995、Bioorg－Med－Chem．3（10）：1305－12）である。一部の実施形態では、リンカー単位が切断可能ではない、例えばマレイミドカプロイルリンカーであり、薬物が抗体分解によって放出される（米国特許出願公開第2005／0238649号明細書参照）。
一部の実施形態では、リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーの文脈における「細胞外環境に対して実質的に感受性ではない」は、抗体薬物コンジュゲート（ADC）の試料中のリンカーの約20％以下、典型的には約15％以下、より典型的には約10％以下、さらにより典型的には約5％以下、約3％以下、または約1％以下が、ADCが細胞外環境（例えば、血漿中）に存在する場合に切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性ではないかどうかは、例えば、（a）ADC（「ADC試料」）と（b）等モル量の非コンジュゲート抗体または薬物（「対照試料」）の両方を血漿と独立して所定の期間（例えば、2、4、8、16、または24時間）インキュベートし、次いで、ADC試料中に存在する非コンジュゲート抗体または薬物の量を、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定される、対照試料中に存在するものと比較することによって決定することができる。
一部の実施形態では、リンカーが細胞内在化を促進する。一部の実施形態では、リンカーが、細胞傷害剤などの薬物にコンジュゲートされた場合に（すなわち、本明細書中に記載されるADCのリンカー－薬物の環境において）細胞内在化を促進する。さらに他の実施形態では、リンカーが、薬物とFOLR1抗体の両方にコンジュゲートされた場合に（すなわち、本明細書中に記載されるADCの環境において）細胞内在化を促進する。
本発明の組成物および方法で使用することができる様々なリンカーは、国際公開第2004010957号パンフレットに記載されている。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーが、チオール反応性スペーサーおよびジペプチドを含む。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーが、チオール反応性マレイミドカプロイルスペーサー、バリン－シトルリンジペプチド、およびp－アミノベンジルオキシカルボニルスペーサーからなる。
一部の実施形態では、酸切断可能リンカーが、ヒドラジンリンカーまたは第四級アンモニウムリンカーである（国際公開第2017／096311号パンフレットおよび国際公開第2016／040684号パンフレット参照）。
一部の実施形態では、リンカーが、米国特許第9，504，756号明細書に記載されるマレイミド基を含む自己安定化リンカーである。
一部の実施形態では、リンカーが、例えば、国際公開第2015／123679号パンフレットの親水性ペプチドならびに国際公開第2013／012961号パンフレットおよび国際公開第2019／213046号パンフレットに開示される糖アルコールポリマーベースのリンカーなどの親水性リンカーである。
他の実施形態では、FOLR1抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）と薬物のコンジュゲートが、N－スクシンイミジル－3－（2－ピリジルジチオ）プロピオネート（SPDP）、スクシンイミジル－4－（N－マレイミドメチル）シクロヘキサン－1－カルボキシレート（SMCC）、イミノチオラン（IT）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートHClなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（p－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（p－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン2，6－ジイソシアネートなど）、およびビス－活性フッ素化合物（1，5－ジフルオロ－2，4－ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。抗体、その抗原結合部分または他の結合剤への放射性ヌクレオチドのコンジュゲーションのためのキレート剤は、例えば国際公開第94／11026号パンフレットに記載されている。
FOLR1抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のコンジュゲートには、それだけに限らないが、（例えば、米国イリノイ州ロックフォード所在のPierce Biotechnology，Inc．から）市販されているBMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC－SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、スルホ－EMCS、スルホ－GMBS、スルホ－KMUS、スルホ－MBS、スルホ－SIAB、スルホ－SMCC、およびスルホ－SMPB、およびSVSB（スクシンイミジル－（4－ビニルスルホン）ベンゾエート）を含む架橋剤を用いて調製されるこのようなコンジュゲートが含まれる。
一部の実施形態では、リンカーが、抗体、抗原結合部分もしくは他の結合剤のアミノ酸配列の末端に結合している、または抗体、抗原結合部分もしくは他の結合剤の側鎖修飾、例えばリジン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、非天然アミノ酸残基、グルタミンもしくはグルタミン酸残基の側鎖に結合することができる。抗体、抗原結合部分または他の結合剤とリンカーまたは薬物との間の結合は、いくつかの結合、例えば、それだけに限らないが、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、炭素－窒素結合、炭素－炭素単結合、二重結合もしくは三重結合、ジスルフィド結合、またはチオエーテル結合のいずれかを介することができる。このような結合を形成することができる官能基には、例えば、シアノ基およびスクシンイミジル基およびヒドロキシル基などの脱離基に結合したアミノ基、カルボキシル基、アルデヒド基、アジド基、アルキンおよびアルケン基、ケトン、カーボネート、カルボニル官能基が含まれる。
一部の実施形態では、リンカーが、鎖間ジスルフィドで抗体、抗原結合部分または他の結合剤に結合している。一部の実施形態では、リンカーが、ヒンジシステイン残基で抗体、抗原結合部分または他の結合剤に接続している。一部の実施形態では、リンカーが、操作されたシステイン残基で抗体、抗原結合部分または他の結合剤に結合している。一部の実施形態では、リンカーが、リジン残基で抗体、抗原結合部分または他の結合剤に接続している。一部の実施形態では、リンカーが、操作されたグルタミン残基で抗体、抗原結合部分または他の結合剤に接続している。一部の実施形態では、リンカーが、重鎖に操作された非天然アミノ酸で抗体、抗原結合部分または他の結合剤に接続している。
一部の実施形態では、リンカーが、スルフヒドリル基を介して抗体、抗原結合部分または他の結合剤に結合している。一部の実施形態では、リンカーが、第一級アミンを介して抗体、抗原結合部分または他の結合剤に結合している。一部の実施形態では、リンカーが、薬物上のケトン基をアルコキシアミンで修飾することによって形成されたオキシム結合と反応することによって、抗体、抗原結合部分または他の結合剤上の非天然アミノ酸の間に作り出された結合を介して結合される。
一部の実施形態では、リンカーが、ソルターゼAリンカーを介して抗体、抗原結合部分または他の結合剤に結合している。ソルターゼAリンカーは、天然アミド結合を再生するためにLPXTG認識モチーフ（配列番号44）をN末端GGGモチーフに融合するソルターゼA酵素によって作成することができる。
例示的なリンカー薬物組み合わせ
一部の実施形態では、チューブリン破壊剤、例えばアウリスタチンなどの薬物が、リンカー（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第9，463，252号明細書に記載されるリンカー単位（LU））とアミド結合を形成するC末端カルボキシル基によってリンカーに結合している。一部の実施形態では、リンカーが少なくとも1つのアミノ酸を含む。
一部の実施形態では、リンカーが、ストレッチャー単位および／またはアミノ酸単位も含む。例示的なストレッチャー単位およびアミノ酸単位は、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第9，345，785号明細書および米国特許第9，078，931号明細書に記載されている。
一部の実施形態では、抗体薬物コンジュゲートが、mc－val－cit－PABリンカーを通してMMAEに共有結合した抗FOLR1抗体を含む。
一部の実施形態では、FOLR1コンジュゲートが、以下の式：
またはその薬学的に許容される塩（式中、mAbは、FOLR1抗体、その抗原結合部分または他の結合剤であり、Sは、抗体、抗原結合部分または他の結合剤の硫黄原子であり、Aはストレッチャー単位であり、pは約3～約5、または約3～約8である）を有する。
薬物負荷は、コンジュゲート中の抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）当たりの薬物分子（例えば、細胞傷害剤）の平均数であるpによって表される。例えば、pが約4である場合、組成物中に存在する抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）の全てを考慮した平均薬物負荷は約4である。一部の実施形態では、pが、約3～約5、約3．6～約4．4、または約3．8～約4．2の範囲である。一部の実施形態では、pが、約3、約4、または約5であり得る。一部の実施形態では、pが、約6～約8、より好ましくは約7．5～約8．4の範囲である。一部の実施形態では、pが、約6、約7、または約8であり得る。
調製物中の抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）当たりの薬物の平均数は、質量分析、ELISAアッセイ、およびHPLCなどの従来手段によって特徴付けることができる。pに関する抗体－薬物コンジュゲートの定量的分布も決定され得る。一部の例では、他の薬物負荷量を有する抗体－薬物コンジュゲートからの、pが一定の値である均質な抗体－薬物コンジュゲートの分離、精製、および特性評価が、逆相HPLCまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。
一部の実施形態では、ストレッチャー単位が、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）を、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のスルフヒドリル基を介してアミノ酸またはペプチド（例えば、バリン－シトルリンペプチド）に連結することができる。スルフヒドリル基は、例えば、FOLR1抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）の鎖間ジスルフィド結合の還元によって生成することができる。例えば、ストレッチャー単位は、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）の鎖間ジスルフィド結合の還元から生成される硫黄原子を介して抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）に連結され得る。一部の実施形態では、ストレッチャー単位が、抗体の鎖間ジスルフィド結合の還元から生成される硫黄原子のみを介して抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）に連結される。一部の実施形態では、スルフヒドリル基が、FOLR1抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のリジン部分のアミノ基と、2－イミノチオラン（トラウト試薬）または他のスルフヒドリル生成試薬の反応によって生成され得る。一部の実施形態では、FOLR1抗体（もしくは抗原結合部分またが他の結合剤）が組換え抗体であり、1つまたは複数のリジンを有するように操作される。一部の実施形態では、組換えFOLR1抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）が、追加のスルフヒドリル基、例えば操作されたシステインなどの追加のシステインを有するように操作される。
MMAEの合成および構造は、全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許第6，884，869号明細書に記載されている。例示的なストレッチャー単位の合成および構造ならびに抗体薬物コンジュゲートを作製する方法は、例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第2006／0074008号明細書および同第2009／0010945号明細書に記載されている。
代表的なストレッチャー単位は、米国特許第9，211，319号明細書の式Illaおよびlllbの角括弧内に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、FOLR1コンジュゲートが、モノメチルアウリスタチンE（MMAE）およびプロテアーゼ切断可能リンカーを含む。プロテアーゼ切断可能リンカーがチオール反応性スペーサーおよびジペプチドを含むことが企図される。様々な実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーが、チオール反応性マレイミドカプロイルスペーサー、バリン－シトルリン（val－cit）ジペプチド、およびp－アミノベンジルオキシカルボニルまたはPABスペーサーを含む。
「PAB」という略語は、自己犠牲スペーサー：
を指す。
「MC」という略語は、ストレッチャーマレイミドカプロイル：
を指す。
他の例示的な実施形態では、コンジュゲートが、以下の一般式：
Ab－［L3］－［L2］－［L1］m－AAn－薬物、
（式中、AbはFOLR1抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）であり；薬物は、例えば、チューブリン破壊剤またはトポイソメラーゼ阻害剤などの細胞傷害剤であり得；L3は、抗体カップリング部分（ストレッチャー単位など）および1つまたは複数のアセチレン（またはアジド）基を含むリンカーの成分であり；L2は、L3のアセチレン（またはアジド）部分に相補的な任意のPEG（ポリエチレングリコール）アジド（またはアセチレン）を一端に含み、カルボン酸またはヒドロキシル基などの反応性基を他端に含み；L1は、折り畳み可能な単位（例えば、自己犠牲基）、または折り畳み可能な単位に場合により結合したペプチダーゼ切断可能部分、または酸切断可能部分を含み；AAはアミノ酸であり；mは0または1の値を有する整数であり、nは0、1、2、3、または4の値を有する整数である）
を有する。このようなリンカーは、クリックケミストリーを介して組み立てることができる（例えば、米国特許第7，591，944号明細書および同第7，999，083号明細書参照）。
一部の実施形態では、薬物が、カンプトテシンまたはカンプトテシン（CPT）類似体、例えばイリノテカン（CPT－11とも呼ばれる）、ベロテカン、トポテカン、10－ヒドロキシ－CPT、エキサテカン、DXdおよび／またはSN－38である。代表的な構造を以下に示す。
コンジュゲート式Ab－［L3］－［L2］－［L1］m－AAn－薬物を参照すると、一部の実施形態では、mが0である。コンジュゲート式Ab－［L3］－［L2］－［L1］m－AAn－薬物を参照すると、一部の実施形態では、L2が非存在である。このような実施形態では、エステル部分が、グリシン、アラニン、もしくはサルコシンなどのアミノ酸（AA）のカルボン酸、またはグリシルグリシンなどのペプチドのカルボン酸と、細胞傷害剤などの薬物のヒドロキシル基との間に最初に形成される。この例では、アミノ酸またはポリペプチドのN末端が、BocまたはFmocまたはモノメトキシトリチル（MMT）誘導体として保護され得、これは細胞傷害剤のヒドロキシル基とのエステル結合の形成後に脱保護される。「モノメトキシトリチル（MMT）」は、BOC基を切断しないジクロロ酢酸などの穏やかな酸処理によって除去可能であるので、エステル形成に関与するアミノ酸またはポリペプチドのアミノ基の保護基としてMMTを使用して、追加のヒドロキシル基を含有する細胞傷害剤のヒドロキシル位のBOC保護基の存在下で、アミン保護基の選択的除去を達成することができる。薬物のヒドロキシルとエステル結合を形成するアミノ酸またはポリペプチドのアミノ基が脱マスキングされた後、アミノ基は、標準的なアミド形成条件下で、L2（存在する場合）のPEG部分のCOOH基の活性化形態と反応する。好ましい実施形態では、L3が、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のチオール基に連結するチオール反応性基を含む。チオール反応性基は、場合により、抗体のチオール基に連結するマレイミドまたはビニルスルホン、またはブロモアセトアミド、またはヨードアセトアミドである。一部の実施形態では、チオール反応性基を有する試薬が、例えば、スクシンイミジル－4－（Nマレイミドメチル）シクロヘキサン－1－カルボキシレート（SMCC）またはスクシンイミジル－（イプシロン－マレイミド）カプロエートから生成され、チオール反応性基がマレイミド基である。
別の実施形態では、mが0であり、AAが、カテプシンBなどの細胞内ペプチダーゼによって切断可能なペプチド部分、好ましくはジ、トリまたはテトラペプチドを含む。カテプシンB切断可能ペプチドの例は、Phe－Lys、Val－Cit（Dubowchick、2002）、Ala－Leu、Leu－Ala－Leu、Ala－Leu－Ala－Leu（配列番号45）（Trouetら、1982）、およびGly－Gly－Phe－Gly（配列番号43）である（例えば、国際公開第2014／057687号パンフレット参照）。
一部の実施形態では、L1が、ペプチドのC末端でp－アミノベンジルアルコール（またはp－アミノ－ベンジルオキシカルボニル）などの折り畳み可能な単位に接続されたカテプシンB切断可能ペプチドなどの細胞内切断可能ペプチドで構成され、そのベンジルアルコール部分が、クロロホルメート形態の細胞傷害剤などの薬物のヒドロキシル基に直接結合している。この実施形態では、nが0である。あるいは、「n」が非ゼロである場合、p－アミドベンジルアルコール（またはp－アミノ－ベンジルオキシカルボニル）部分のベンジルアルコール部分は、p－アミドベンジルアルコールの活性型、すなわちPNPがp－ニトロフェニルであるPABOCOPNPを通して、細胞傷害剤のヒドロキシル基で連結するアミノ酸またはペプチドのN末端に結合している。一部の実施形態では、リンカーが、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のチオール基に連結するチオール反応性基を含む。チオール反応性基は、場合により、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のチオール基に連結するマレイミドまたはビニルスルホン、またはブロモアセトアミド、またはヨードアセトアミドである。好ましい実施形態では、チオール反応性基を有する成分が、例えば、スクシンイミジル－4－（Nマレイミドメチル）シクロヘキサン－1－カルボキシレート（SMCC）またはスクシンイミジル－（イプシロン－マレイミド）カプロエートから生成され、チオール反応性基がマレイミド基である。
一部の実施形態では、薬物が20－ヒドロキシルを有するカンプトテシンまたはその類似体もしくは誘導体である場合、L1が、ペプチドのC末端で折り畳み可能なリンカーであるp－アミノベンジルアルコール（またはp－アミノ－ベンジルオキシカルボニル）に接続されたカテプシンB切断可能ペプチドなどの細胞内切断可能ペプチドで構成され、そのベンジルアルコール部分が、CPT－20－O－クロロホルメートに直接結合している。この実施形態では、nが0である。あるいは、「n」が非ゼロである場合、p－アミドベンジルアルコール部分のベンジルアルコール部分は、p－アミドベンジルアルコールの活性型、すなわちPNPがp－ニトロフェニルであるPABOCOPNPを通して、CPTの20位で連結するアミノ酸またはポリペプチドのN末端に結合している。好ましい実施形態では、リンカーが、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のチオール基に連結するチオール反応性基を含む。チオール反応性基は、場合により、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）のチオール基に連結するマレイミドまたはビニルスルホン、またはブロモアセトアミド、またはヨードアセトアミドである。好ましい実施形態では、チオール反応性基を有する成分が、例えば、スクシンイミジル－4－（Nマレイミドメチル）シクロヘキサン－1－カルボキシレート（SMCC）またはスクシンイミジル－（イプシロン－マレイミド）カプロエートから生成され、チオール反応性基がマレイミド基である。
一部の実施形態では、コンジュゲートのL2成分が存在し、最大約MW5000のサイズであり得るポリエチレングリコール（PEG）スペーサーを含有し、好ましい実施形態では、PEGが、（1～12個または1～30個の）繰り返しモノマー単位を有する定義されたPEGである。一部の実施形態では、PEGが、1～12個の繰り返しモノマー単位を有する定義されたPEGである。PEGの導入は、市販されているヘテロ二官能化PEG誘導体の使用を伴い得る。ヘテロ二官能性PEGは、典型的には、アジド基またはアセチレン基を含有する。「NHS」がスクシンイミジルである8個の繰り返しモノマー単位を含有するヘテロ二官能性の定義されたPEGの例を以下の式で以下に示す：
一部の実施形態では、L3が、2～40個、好ましくは2～20個、より好ましくは2～5個の範囲の複数のアセチレン（またはアジド）基、および単一抗体結合部分を有する。
スクシンイミドとして表される抗体（MAbと呼ばれる）との結合を有する、薬物がマレイミド含有SN－38－リンカー誘導体を用いて調製されたSN－38（CPT類似体）などの細胞傷害剤である代表的なコンジュゲートを以下に示す。ここでは、m＝0であり、SN－38に結合する20－O－AAエステルがグリシネートであり；L2とL3のアジド－アセチレンカップリング結合が、示されるようにトリアゾール部分をもたらす。
スクシンイミドとして表される抗体（MAb）との結合を有する、マレイミド含有SN－38－リンカー誘導体を用いて調製された別の代表的なコンジュゲートを以下に示す。ここでは、一般式2中、n＝0であり；「L1」が、折り畳み可能なp－アミノベンジルアルコール部分に結合したカテプシンB切断可能ジペプチドPhe－Lysを含有し、後者が、20位でカーボネート結合としてSN－38に結合しており；「L2」および「L3」部分を結合するアジド－アセチレンカップリングが、示されるようにトリアゾール部分をもたらす。
別の代表的なSN－38コンジュゲート、mAb－CL2－SN－38は、スクシンイミドとして表される抗体との結合を有する、マレイミド含有SN－38－リンカー誘導体を用いて調製され、以下に示される。ここでは、SN－38に結合している20－O－AAエステルが、p－アミノベンジルアルコール部分およびカテプシンB切断可能ジペプチドを介してL1部分に結合しているグリシネートであり；後者が、アミド結合を介して「L2」に結合しており、「L2」および「L3」部分が、アジド－アセチレン「クリックケミストリー」を介してカップリングしている。
別の代表的な例では、「L1」が、折り畳み可能なp－アミノベンジルアルコール部分に結合した単一アミノ酸を含有し、p－アミノベンジルアルコールが置換または非置換（R）であり、一般的なコンジュゲート式Ab－［L3］－［L2］－［L1］m－AAn－薬物中、m＝1およびn＝0であり、薬物がSN－38で例示される。構造を以下に表す（MAb－CLX－SN－38と呼ばれる）。AAの単一アミノ酸は、以下のL－アミノ酸：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンのいずれか1つから選択することができる。4－アミノベンジルアルコール部分の置換基Rは、水素またはC1～C10アルキル基から選択されるアルキル基である。
単一アミノ酸AAがL－リジンであり、R＝Hであり、薬物がSN－38によって例示される細胞傷害剤である、mAb－CLX－SN－38（上記）の実施形態（mAb－CL2A－SN－38と呼ばれる）を以下に示す：
他の実施形態では、薬物が、スペーサー単位（Y）に結合したアミノ酸単位（AA）に結合したストレッチャー単位（Z）を含むリンカーに結合した細胞傷害剤であり、ストレッチャー単位が抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤、AbまたはMAbと呼ばれる）に結合しており、スペーサー単位が細胞傷害剤のアミノ基に結合している。このようなリンカーは、以下の式：
Ab－Z－AA－Y－細胞傷害剤
（式中、Zは、－（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n 2－C（＝O）－－、－－CH2－－C（＝O）－－NH－－（CH2）n3－C（＝O）－－、－C（＝O）－cyc．Hex（1，4）－CH2－－（N－ly－3－diminiccuS）－、または－C（＝O）－－（CH2）n4－C（＝O）－－から選択され、n2は2～8の整数を表し、n3は1～8の整数を表し、n4は1～8の整数を表し；cyc．Hex（1，4）は1，4－シクロへキシレン基を表し；（N－ly－3－diminiccuS）－は以下の式によって表される構造：
を有する）
を有する。
一部の実施形態では、AAが2～7個のアミノ酸のペプチドである。一部の実施形態では、スペーサー単位Yが、－NH－（CH2）b－（C＝O）－または－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－であり、bが1～5の整数である。
一部の実施形態では、細胞傷害剤がエキサテカンである。一部の実施形態では、アミノ酸単位（AA）が－Gly－Gly－Phe－Gly－である。一部の実施形態では、スペーサー単位Yが－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－である。
一部の実施形態では、リンカー－細胞傷害剤が、以下の構造：
を有し、放出される細胞傷害剤がDXdである（米国特許第9，808，537号明細書参照）。
抗体、抗体結合部分および他の結合剤への薬物－リンカーの結合
リンカーを介して抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）に薬物を結合させる技術は、当技術分野で周知である。例えば、Alleyら、Current Opinion in Chemical Biology 2010 14：1～9；Senter、Cancer J．、2008、14（3）：154～169を参照されたい。一部の実施形態では、リンカーを最初に薬物（例えば、細胞傷害剤）に結合させ、次いで、薬物－リンカーを抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤に結合させる。一部の実施形態では、リンカーを最初に抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤に結合させ、次いで、薬物をリンカーに結合させる。以下の考察では、薬物－リンカーという用語が、抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤へのリンカーまたは薬物－リンカーの結合を例示するために使用される；当業者であれば、選択される結合方法が、リンカーおよび細胞傷害剤または他の薬物に従って選択され得ることを認識するであろう。一部の実施形態では、薬物を、（例えば、加水分解によって、タンパク質分解によって、または切断剤によって）コンジュゲートから放出されるまで薬物の活性を低下させる方法で、リンカーを介して抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤に結合させる。
一般に、コンジュゲートは、（1）抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）の求核基と二価リンカー試薬を反応させて、共有結合を介して抗体－リンカー中間体を形成し、引き続いて薬物（例えば、細胞傷害剤）と反応させること；および（2）薬物（例えば、細胞傷害剤）の求核基と二価リンカー試薬を反応させて、共有結合を介して薬物－リンカーを形成し、引き続いて抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤の求核基と反応させることを含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、および試薬を採用するいくつかの経路によって調製され得る。後者の経路を介してコンジュゲートを調製する例示的な方法は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる、米国特許第7，498，298号明細書に記載されている。
抗体、抗原結合部分および他の結合剤上の求核基には、それだけに限らないが、（i）N末端アミン基、（ii）側鎖アミン基、例えばリジン、（iii）側鎖チオール基、例えばシステイン、および（iv）抗体がグリコシル化されている糖ヒドロキシルまたはアミノ基が含まれる。アミン基、チオール基、およびヒドロキシル基は求核性であり、（i）NHSエステル、HOBtエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物などの活性エステル；（ii）ハロアセトアミドなどのハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル；ならびに（iii）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基およびマレイミド基を含むリンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と共有結合を形成するように反応することができる。ある特定の抗体（および抗原結合部分または他の結合剤）は、還元性鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体（および抗原結合部分ならびに他の結合剤）は、抗体が完全にまたは部分的に還元されるように、DTT（ジチオスレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（TCEP）などの還元剤で処理することによって、リンカー試薬とのコンジュゲーションに反応性にされ得る。したがって、各システイン架橋は、理論的には、2つの反応性チオール求核剤を形成する。例えば、リジン残基を2－イミノチオラン（トラウト試薬）と反応させてアミンをチオールに変換することによって、リジン残基の修飾を通して、さらなる求核基を抗体（および抗原結合部分ならびに他の結合剤）に導入することができる。反応性チオール基はまた、（例えば、1つまたは複数の非天然システインアミノ酸残基を含む抗体、抗原結合部分および他の結合剤を調製することによって）1つ、2つ、3つ、4つまたはそれを超えるシステイン残基を導入することによって、抗体（および抗原結合部分ならびに他の結合剤）に導入され得る。
コンジュゲートはまた、抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）上の求電子基、例えばアルデヒド基またはケトンカルボニル基と、リンカー試薬または薬物上の求核基との間の反応によっても生成され得る。リンカー試薬上の有用な求核基には、それだけに限らないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。一実施形態では、抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）が、リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応することができる求電子部分を導入するように修飾される。別の実施形態では、グリコシル化抗体の糖が、例えば過ヨウ素酸塩酸化試薬で酸化されて、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド基またはケトン基を形成し得る。得られたイミンシッフ塩基基は、安定な結合を形成し得る、または例えば、水素化ホウ素試薬によって還元されて安定なアミン結合を形成し得る。一実施形態では、グリコシル化抗体の炭水化物部分とガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応が、薬物上の適切な基と反応することができる抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）中のカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基をもたらし得る（例えば、Hermanson、Bioconjugate Techniques参照）。別の実施形態では、N末端セリンまたはトレオニン残基を含有する抗体が、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応し、第1のアミノ酸の代わりにアルデヒドを生成することができる（Geoghegan＆Stroh、（1992）Bioconjugate Chem．3：138～146；米国特許第5362852号明細書）。このようなアルデヒドを細胞傷害剤またはリンカーと反応させることができる。
細胞傷害剤などの薬物上の例示的な求核基には、それだけに限らないが、（i）NHSエステル、HOBtエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物などの活性エステル；（ii）ハロアセトアミドなどのハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル；（iii）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基およびマレイミド基を含むリンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と共有結合を形成するように反応することができるアミン基、チオール基、ヒドロキシル基、ヒドラジド基、オキシム基、ヒドラジン基、チオセミカルバゾン基、ヒドラジンカルボキシレート基、およびアリールヒドラジド基が含まれる。
コンジュゲートを調製するために使用され得る非限定的な例示的な架橋剤は、本明細書に記載されている、または当業者に公知である。このような架橋剤を使用して、抗体（もしくは抗原結合部分または他の結合剤）および化学的部分を含む2つの部分を連結する方法は、当技術分野で公知である。一部の実施形態では、抗体または抗原結合部分と薬物を含む融合タンパク質が、例えば組換え技術またはペプチド合成によって作製され得る。組換えDNA分子は、互いに隣接するか、またはコンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーをコードする領域によって分離された、抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）をコードする領域と、コンジュゲートの活性部分（例えば、細胞傷害性部分）をコードする領域とを含み得る。
一部の実施形態では、薬物－リンカーが、抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）の鎖間システイン残基に結合している。例えば、国際公開第2004／010957号パンフレットおよび国際公開第2005／081711号パンフレットを参照されたい。このような実施形態では、リンカーが、典型的には、鎖間ジスルフィドのシステイン残基に結合するためのマレイミド基を含む。一部の実施形態では、リンカーまたは薬物－リンカーが、米国特許第7，585，491号明細書または同第8，080250号明細書に記載されるように、抗体またはその抗原結合部分のシステイン残基に結合している。得られるコンジュゲートの薬物負荷は、典型的には1～8の範囲である。
一部の実施形態では、リンカーまたは薬物－リンカーが、国際公開第2005／037992号パンフレットまたは国際公開第2010／141566号パンフレットに記載されるように、抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）のリジンまたはシステイン残基に結合している。得られるコンジュゲートの薬物負荷は、典型的には1～8の範囲である。
一部の実施形態では、操作されたシステイン残基、ポリヒスチジン配列、グリコエンジニアリングタグ、またはトランスグルタミナーゼ認識配列が、抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤へのリンカーまたは薬物－リンカーの部位特異的結合に使用され得る。
一部の実施形態では、薬物－リンカーが、鎖間ジスルフィド以外のFc残基で操作されたシステイン残基に結合している。一部の実施形態では、薬物－リンカーが、KabatのEUナンバリングに従って、重鎖の118、221、224、227、228、230、231、223、233、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、247、249、250、258、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、275、276、278、280、281、283、285、286、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、302、305、313、318、323、324、325、327、328、329、330、331、332、333、335、336、396、および／もしくは428位のIgG（典型的にはIgG1）ならびに／または106、108、142（軽鎖）、149（軽鎖）位、および／もしくはV205位で軽鎖に導入された操作されたシステインに結合している。操作されたシステインを使用する部位特異的コンジュゲーションの例示的な置換はS239Cである（例えば、米国特許出願公開第第20100158909号明細書参照；Fc領域のナンバリングはEUインデックスに従う）。
一部の実施形態では、リンカーまたは薬物－リンカーが、国際公開第2006／034488号パンフレット、国際公開第2011／156328号パンフレットおよび／または国際公開第2016040856号パンフレットに記載されるように、抗体（もしくはその抗原結合部分または他の結合剤）の1つまたは複数の導入システイン残基に結合している。
一部の実施形態では、細菌トランスグルタミナーゼを使用した部位特異的コンジュゲーションの例示的な置換が、Fc領域のN297SまたはN297Qである。一部の実施形態では、リンカーまたは薬物－リンカーが、抗体もしくは抗原結合部分またはグリコエンジニアリング抗体（または他の結合剤）のグリカンまたは修飾グリカンに結合している。例えば、国際公開第2017／147542号パンフレット、国際公開第2020123425号パンフレット、国際公開第2014／072482号パンフレット；国際公開第2014／／065661号パンフレット、国際公開第2015／057066号パンフレットおよび国際公開第2016／022027号パンフレットを参照されたい。
医薬製剤
FOLR1抗体およびその抗原結合部分または他の結合剤ならびにこれらのいずれかのコンジュゲートの他の態様は、有効成分（すなわち、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲート、あるいは本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を含む）を含む組成物に関する。一部の実施形態では、組成物が医薬組成物である。本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、医薬品業界での使用が認められている薬学的に許容される担体と組み合わせた活性薬剤を指す。「薬学的に許容される」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、合理的な利益／リスク比に見合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応もしくは他の問題または合併症なしにヒトおよび動物の組織との接触に使用するのに適した、化合物、材料、組成物および／または剤形を指すために本明細書で採用される。
その中に溶解または分散された有効成分を含有する薬理学的組成物の調製は、当技術分野で十分に理解されており、いずれかの特定の製剤に基づいて限定される必要はない。典型的には、このような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注射可能なものとして調製される；しかしながら、使用前の液体への再水和または懸濁に適した固体形態も調製することができる。調製物はまた、乳化され得る、またはリポソーム組成物として提供され得る。FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートは、薬学的に許容され、有効成分と適合性である賦形剤と、本明細書に記載される治療方法での使用に適した量で混合することができる。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、およびこれらの組み合わせである。さらに、所望であれば、医薬組成物は、有効成分（例えば、FOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲート）の有効性を増強または維持する湿潤剤または乳化剤、pH緩衝剤などの少量の補助物質を含有することができる。本明細書に記載される医薬組成物は、その中の成分の薬学的に許容される塩を含むことができる。薬学的に許容される塩には、塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸で形成される（ポリペプチドの遊離アミノ基で形成される）酸付加塩が含まれる。遊離カルボキシル基で形成される塩は、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄などの無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、2－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導することもできる。生理学的に許容される担体は当技術分野で周知である。例示的な液体担体は、有効成分（例えば、FOLR1抗体および／もしくはその抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲート）および水を含有する滅菌水溶液であり、生理的pH値のリン酸ナトリウムなどの緩衝液、生理食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水などの両方を含有し得る。なおさらに、水性担体は、2種以上の緩衝塩、ならびに塩化ナトリウムおよび塩化カリウムなどの塩、デキストロース、ポリエチレングリコールおよび他の溶質を含有することができる。液体組成物はまた、水に加えて、および水を除いて、液相を含有することができる。このような追加の液相の例は、グリセリン、綿実油などの植物油、および水－油エマルジョンである。特定の障害または状態の治療に有効となる活性剤の量は、障害または状態の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲート、あるいは本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を含む医薬組成物が凍結乾燥物であり得る。
一部の実施形態では、治療有効量の本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲート、あるいは医薬組成物を含むシリンジが提供される。
がんの治療
一部の実施形態では、本明細書に記載されるFOLR1抗体またはその抗原結合部分、結合剤およびコンジュゲートが、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを、それを必要とする対象、例えばがんを有する対象に投与するステップを含む方法で使用され得る。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号3および配列番号4に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号5および配列番号6に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号7および配列番号8に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号9および配列番号10に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号11および配列番号12に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号13および配列番号14に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号15および配列番号16に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号17および配列番号18に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号19および配列番号20に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号21および配列番号22に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号23および配列番号24に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個の保存的アミノ酸置換で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、方法が提供される。一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域およびVL領域が、それぞれ、配列番号1および配列番号2；それぞれ、配列番号3および配列番号4；それぞれ、配列番号5および配列番号6；それぞれ、配列番号7および配列番号8；それぞれ、配列番号9および配列番号10；それぞれ、配列番号11および配列番号12；それぞれ、配列番号13および配列番号14；それぞれ、配列番号15および配列番号16；それぞれ、配列番号17および配列番号18；それぞれ、配列番号19および配列番号20；それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびにそれぞれ、配列番号23および配列番号24から選択されるアミノ酸配列のペアに示されるアミノ酸配列を有し；重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個、1～6個、1～4個または1～2個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されており、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDRが修飾されていない、方法が提供される。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、（i）それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびに（ii）それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35から選択されるアミノ酸配列のセットに示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、（i）それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを投与するステップを含む方法であって、VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35に示されるアミノ酸配列を有する、方法が提供される。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒト化フレームワーク領域を含む。一部の実施形態では、各VH領域およびVL領域がヒトフレームワーク領域を含む。
一部の実施形態では、対象が、がんおよび／または悪性腫瘍の治療を必要としている。一部の実施形態では、対象が、例えば、肺がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵がん、および腎細胞がんなどのFOLR1＋がんまたはFOLR1＋悪性腫瘍の治療を必要としている。一部の実施形態では、方法が、FOLR1＋がんまたは悪性腫瘍を有する対象を治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の肺がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の非小細胞肺がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の乳がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の卵巣がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の子宮頸がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の子宮内膜がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の腎細胞がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の子宮がんを治療するためのものである。一部の実施形態では、方法が、対象の膵がんを治療するためのものである。
本明細書に記載される方法は、治療有効量のFOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲートを、FOLR1＋がんまたは悪性腫瘍を有する対象に投与するステップを含む。本明細書で使用される場合、「治療有効量」、「有効量」または「有効用量」という句は、がんまたは悪性腫瘍の治療、管理または再発の予防において治療上の利益を提供する、本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはコンジュゲートの量、例えば、腫瘍または悪性腫瘍の少なくとも1つの症状、徴候、またはマーカーの統計学的に有意な減少を提供する量を指す。治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、治療有効量は、対象の病歴、年齢、状態、性別、ならびに対象の医学的状態の重症度および種類、ならびに他の薬学的に活性な薬剤の投与によって変化し得る。
「がん」および「悪性腫瘍」という用語は、身体の器官および系の正常な機能を妨げる細胞の制御されない増殖を指す。がんまたは悪性腫瘍は、原発性または転移性であり得る、すなわち、元の腫瘍部位から離れた組織に腫瘍増殖を播種する浸潤性になっている。「腫瘍」は、身体の器官および系の正常な機能を妨げる細胞の制御されない増殖を指す。がんを有する対象は、対象の体内に存在する客観的に測定可能ながん細胞を有する対象である。この定義には、良性腫瘍および悪性がん、ならびに潜在的休眠腫瘍および微小転移が含まれる。元の位置から移動し、他の重要な器官に播種するがんは、最終的に、罹患器官の機能低下を通して対象の死をもたらし得る。白血病およびリンパ腫などの血液悪性腫瘍（造血器がん）は、例えば、対象の正常な造血コンパートメントを打ち負かし、それによって、造血不全（貧血、血小板減少症および好中球減少症の形態）をもたらし、最終的に死を引き起こし得る。
がんの例としては、それだけに限らないが、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が挙げられる。このようながんのより具体的な例としては、それだけに限らないが、基底細胞がん、胆道がん、膀胱がん、骨がん、脳およびCNSがん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、腹膜がん、子宮頸がん；胆管癌、絨毛癌、軟骨肉腫、結腸および直腸がん（結腸直腸がん）、結合組織がん、消化器系がん、子宮内膜がん、食道がん、眼がん、頭頸部がん、胃がん（胃腸がんおよび胃がんを含む）、神経膠芽腫（GBM）、肝がん、ヘパトーマ、上皮内新生物、腎臓がんまたは腎がん（例えば、明細胞がん）、喉頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、および肺扁平上皮がん）、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔がん（例えば、唇、舌、口、および咽頭）、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、呼吸器系がん、唾液腺がん、肉腫、皮膚がん、扁平上皮がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮または子宮内膜がん、子宮漿液性がん、泌尿器系がん、外陰がん；ならびに他の癌腫および肉腫、ならびにB細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（NHL）、小リンパ球性（SL）NHL、中悪性度／濾胞性NHL、中悪性度びまん性NHL、高悪性度免疫芽球性NHL、高悪性度リンパ芽球性NHL、高悪性度小型非切れ込み核細胞性NHL、バルキー疾患NHL、マントル細胞リンパ腫、AIDS関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、および移植後リンパ増殖性障害（PTLD）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、およびMeigs症候群が挙げられる。
一部の実施形態では、がんが固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんが、それだけに限らないが、肺がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵がん、および腎細胞がんを含む固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんまたは悪性腫瘍がFOLR1陽性（FOLR1＋）である。本明細書で使用される場合、「FOLR1陽性」または「FOLR1＋」という用語が、細胞表面上でFOLR1を発現する（膜結合型FOLR1）がん細胞、がん細胞のクラスター、腫瘍塊、または転移性細胞を記載するために使用される。FOLR1陽性がんの一部の非限定的な例としては、例えば、肺がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵がん、および腎細胞がんが挙げられる。
本明細書の方法が、対象の腫瘍サイズもしくは腫瘍量を減少させる、および／または対象の転移を減少させることが企図される。様々な実施形態では、対象の腫瘍サイズが、約25～50％、約40～70％もしくは約50～90％またはそれを超えて減少する。様々な実施形態では、方法が、腫瘍サイズを10％、20％、30％またはそれを超えて減少させる。様々な実施形態では、方法が、腫瘍サイズを10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％または100％減少させる。
本明細書で使用される場合、「対象」はヒトまたは動物を指す。通常、動物は、霊長類、げっ歯類、飼育動物または狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類には、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、およびマカク、例えばアカゲザルが含まれる。げっ歯類には、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギおよびハムスターが含まれる。飼育動物および狩猟動物には、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ種、例えば飼いネコ、イヌ種、例えばイヌ、キツネ、オオカミ、鳥類種、例えばニワトリ、エミュー、ダチョウ、および魚類、例えばマス、ナマズおよびサケが含まれる。ある特定の実施形態では、対象が哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。「患者」、「個体」および「対象」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
好ましくは、対象は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、例えば、様々ながんの動物モデルとなる対象として有利に使用することができる。さらに、本明細書に記載される方法は、飼育動物および／またはペットを治療するために使用することができる。対象は男性または女性であり得る。ある特定の実施形態では、対象がヒトである。
一部の実施形態では、対象が、FOLR1＋がんと以前に診断されている、またはFOLR1＋がんに罹患しており、治療を必要としていると特定されたが、FOLR1＋がんの治療を既に受けている必要はない対象であり得る。一部の実施形態では、対象がまた、治療を必要とするFOLR1＋がんを有すると以前に診断されていない対象であり得る。一部の実施形態では、対象が、状態またはFOLR1＋がんに関連する1つもしくは複数の合併症についての1つまたは複数のリスク因子を示す対象、あるいはリスク因子を示さない対象であり得る。FOLR1＋がんの治療を「必要とする対象」は、特に、その状態を有する、またはその状態を有すると診断された対象であり得る。他の実施形態では、状態を「発症するリスクがある」対象が、状態を発症するリスクがある、またはがん（例えば、FOLR1＋がん）を再び発症するリスクがあると診断された対象を指す。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、「治療すること」または「改善」という用語は、疾患、障害または医学的状態に関して使用される場合、症状または状態の進行または重症度を逆転、緩和、改善、阻害、減速または停止させることを目的とする、状態の治療的処置を指す。「治療すること」という用語は、状態の少なくとも1つの有害効果または症状を軽減または緩和することを含む。1つまたは複数の症状または臨床マーカーが減少する場合、治療は一般に「有効」である。あるいは、状態の進行が減少または停止する場合、治療は「有効」である。すなわち、「治療」は、症状またはマーカーの改善だけでなく、治療の非存在下で予想される症状の停止または少なくとも進行もしくは悪化の減速も含む。有益なまたは所望の臨床結果には、それだけに限らないが、対象におけるFOLR1＋がん細胞の減少、1つまたは複数の症状の緩和、欠損の程度の減少、がんまたは悪性腫瘍の安定化（すなわち、悪化しない）状態、腫瘍増殖および／または転移の遅延または減速、ならびに治療の非存在下で予想される寿命と比較した寿命の延長が含まれる。本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、本明細書に記載されるFOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはコンジュゲート、あるいは本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を、FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはコンジュゲートのFOLR1＋がん細胞または悪性細胞への結合をもたらす方法または経路によって対象に提供することを指す。同様に、本明細書に記載されるFOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはコンジュゲート、あるいは本明細書に記載されるFOLR1抗体もしくはその抗原結合部分または他の結合剤をコードする核酸を含む医薬組成物を、対象において有効な治療をもたらすあらゆる適切な経路によって投与することができる。
FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは結合剤もしくはコンジュゲートの投与量範囲は、効力に依存し、所望の効果、例えば腫瘍増殖の減速または腫瘍サイズの縮小をもたらすのに十分な量を包含する。投与量は、許容できない有害な副作用を引き起こすほど多くあるべきではない。一般に、投与量は、対象の年齢、状態および性別によって異なり、当業者によって決定され得る。投与量はまた、あらゆる合併症の場合に個々の医師によって調整され得る。一部の実施形態では、投与量が0．1mg／kg体重～10mg／kg体重の範囲である。一部の実施形態では、投与量が0．5mg／kg体重～15mg／kg体重の範囲である。一部の実施形態では、用量範囲が0．5mg／kg体重～5mg／kg体重である。あるいは、用量範囲を、1 ug／mL～1000 ug／mLの間の血清レベルを維持するように定量することができる。全身投与の場合、対象に治療量、例えば、0．1mg／kg、0．5mg／kg、1．0mg／kg、2．0mg／kg、2．5mg／kg、5mg／kg、10mg／kg、12mg／kgまたはそれを超える量を投与することができる。
上に列挙される用量の投与を繰り返すことができる。好ましい実施形態では、上に列挙される用量が、数週間または数ヶ月間にわたって、毎週、隔週で、3週間毎にまたは毎月投与される。治療の持続時間は、対象の臨床的進行および治療に対する応答性に依存する。
一部の実施形態では、用量が約0．1mg／kg～約100mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約0．1mg／kg～約25mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約0．1mg／kg～約20mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約0．1mg／kg～約15mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約0．1mg／kg～約12mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約1mg／kg～約100mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約1mg／kg～約25mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約1mg／kg～約20mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約1mg／kg～約15mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約1mg／kg～約12mg／kgであり得る。一部の実施形態では、用量が約1mg／kg～約10mg／kgであり得る。
一部の実施形態では、用量が静脈内投与され得る。一部の実施形態では、静脈内投与が、約10分～約4時間の期間にわたって行われる注入であり得る。一部の実施形態では、静脈内投与が、約30分～約90分の期間にわたって行われる注入であり得る。
一部の実施形態では、用量が毎週投与され得る。一部の実施形態では、用量が隔週で投与され得る。一部の実施形態では、用量が約2週間毎に投与され得る。一部の実施形態では、用量が約3週間毎に投与され得る。一部の実施形態では、用量が約4週間毎に投与され得る。
一部の実施形態では、合計で約2～約10回の用量が対象に投与される。一部の実施形態では、合計4回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計5回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計6回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計7回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計8回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計9回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計10回の用量が投与される。一部の実施形態では、合計10回超の用量が投与される。
FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他のFOLR1結合剤またはそのFOLR1コンジュゲートを含有する医薬組成物は、単位用量で投与され得る。「単位用量」という用語は、医薬組成物に関して使用される場合、各単位が、必要な生理学的に許容される希釈剤、すなわち担体またはビヒクルと合わせて所望の治療効果をもたらすように計算された、所定量の活性材料（例えば、FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲート）を含有する、対象の単位投与量として適した物理的に別個の単位を指す。
一部の実施形態では、FOLR1結合抗体もしくはその抗原結合部分もしくは他の結合剤またはそのコンジュゲート、あるいはこれらのいずれかの医薬組成物が免疫療法と共に投与される。本明細書で使用される場合、「免疫療法」は、がんまたは悪性腫瘍と戦うために対象自身の免疫系を誘導または増強するように設計された治療戦略を指す。免疫療法の例としては、それだけに限らないが、チェックポイント阻害剤などの抗体が挙げられる。
一部の実施形態では、免疫療法がチェックポイント阻害剤の投与を伴う。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤が、CTLA－4、PD－1、PD－L1などを阻害する薬剤を含む。適切な抗CTLA－4阻害剤には、例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ、PCT公開番号、国際公開第2001／014424号パンフレットに開示されている抗体、PCT公開番号、国際公開第2004／035607号パンフレットに開示されている抗体、米国特許出願公開第2005／0201994号明細書に開示されている抗体、および特許付与された欧州特許第1212422号明細書に開示されている抗体が含まれる。追加の抗CTLA－4抗体は、米国特許第5，811，097号明細書、同第5，855，887号明細書、同第6，051，227号明細書および同第6，984，720号明細書；PCT公開番号、国際公開第01／14424号パンフレットおよび国際公開第00／37504号パンフレット；ならびに米国特許出願公開第2002／0039581号明細書および同第2002／086014号明細書に記載されている。本発明の方法で使用することができる他の抗CTLA－4抗体には、例えば、国際公開第98／42752号パンフレット；米国特許第6，682，736号明細書および同第6，207，156号明細書；Hurwitzら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA、95（17）：10067～10071（1998）；Camachoら、J．Clin．Oncology、22（145）：Abstract No．2505（2004）（抗体CP－675206）；Mokyrら、Cancer Res、58：5301～5304（1998）、米国特許第5，977，318号明細書、同第6，682，736号明細書、同第7，109，003号明細書および同第7，132，281号明細書に開示されるものが含まれる。
適切な抗PD－1阻害剤には、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、MEDI0680、およびこれらの組み合わせが含まれる。他の具体的な実施形態では、抗PD－L1治療剤には、アテゾリズマブ、BMS－936559、MEDI4736、MSB0010718C、およびこれらの組み合わせが含まれる。
適切な抗PD－1阻害剤には、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Topalianら、Immune Checkpoint Blockade：A Common Denominator Approach to Cancer Therapy、Cancer Cell 27：450－61（2015年4月13日）に記載されるものが含まれる。
一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ（Yervoy）、ニボルマブ（Opdivo）、ペンブロリズマブ（Keytruda）、アテゾリズマブ（Tecentriq）、アベルマブ（Bavencio）、またはデュルバルマブ（Imfinzi）である。
一部の実施形態では、免疫療法を受けている対象の治療成績を改善する方法が提供される。本方法は一般に、有効量の免疫療法を、がんを有する対象に投与するステップと；治療有効量のFOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤もしくはそのコンジュゲートまたはその医薬組成物を対象に投与するステップとを含み、FOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲートは、FOLR1＋がん細胞に特異的に結合し；免疫療法単独の投与と比較して、対象の治療成績が改善される。一部の実施形態では、FOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲートが、本明細書に記載されるFOLR1抗体、抗原結合部分、他の結合剤またはそのコンジュゲートの実施形態のいずれかを含む。一部の実施形態では、結合剤が抗体またはその抗原結合部分である。一部の実施形態では、結合剤が、モノクローナル抗体、Fab、Fab’、F（ab’）、Fv、scFv、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。一部の実施形態では、結合剤が、FOLR1モノクローナル抗体、Fab、Fab’、F（ab’）、Fv、scFv、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体のコンジュゲートである。
一部の実施形態では、改善される治療成績が、治療されているがんについての標準的な医学的基準によって決定される、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的奏効である。一部の実施形態では、改善される治療成績が腫瘍量の減少である。一部の実施形態では、改善される治療成績が無増悪生存期間または無病生存期間である。
本発明は、限定として解釈されるべきではない以下の実施形態によってさらに説明される。
1．重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域
を含む結合剤であって、
VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、VHおよびVL CDRが、
それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびに
それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35
からなる群に示されるアミノ酸配列のセットから選択されるアミノ酸配列を有する、結合剤。
2．VH領域およびVL領域が、
それぞれ、配列番号1および配列番号2；
それぞれ、配列番号3および配列番号4；
それぞれ、配列番号5および配列番号6；
それぞれ、配列番号7および配列番号8；
それぞれ、配列番号9および配列番号10；
それぞれ、配列番号11および配列番号12；
それぞれ、配列番号13および配列番号14；
それぞれ、配列番号15および配列番号16；
それぞれ、配列番号17および配列番号18；
それぞれ、配列番号19および配列番号20；
それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびに
それぞれ、配列番号23および配列番号24
からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有し、
重鎖フレームワーク領域および軽鎖フレームワーク領域が、フレームワーク領域内の1～8個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されている、実施形態1に記載の結合剤。
3．VH領域およびVL領域が、
それぞれ、配列番号1および配列番号2；
それぞれ、配列番号3および配列番号4；
それぞれ、配列番号5および配列番号6；
それぞれ、配列番号7および配列番号8；
それぞれ、配列番号9および配列番号10；
それぞれ、配列番号11および配列番号12；
それぞれ、配列番号13および配列番号14；
それぞれ、配列番号15および配列番号16；
それぞれ、配列番号17および配列番号18；
それぞれ、配列番号19および配列番号20；
それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびに
それぞれ、配列番号23および配列番号24
からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態1または2に記載の結合剤。
4．VH領域およびVL領域が、
それぞれ、配列番号3および配列番号4；
それぞれ、配列番号7および配列番号8；
それぞれ、配列番号9および配列番号10；
それぞれ、配列番号11および配列番号12；
それぞれ、配列番号15および配列番号16；
それぞれ、配列番号17および配列番号18；
それぞれ、配列番号19および配列番号20；ならびに
それぞれ、配列番号21および配列番号22
からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態1から3のいずれか1つに記載の結合剤。
5．VH領域およびVL領域が、
それぞれ、配列番号3および配列番号4；
それぞれ、配列番号7および配列番号8；ならびに
それぞれ、配列番号21および配列番号22
からなる群に示されるアミノ酸配列のペアから選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態1から4のいずれか1つに記載の結合剤。
6．フレームワーク領域がヒトフレームワーク領域である、実施形態1に記載の結合剤。
7．抗体またはその抗原結合部分である、実施形態1から6のいずれか1つに記載の結合剤。
8．モノクローナル抗体、Fab、Fab’、F（ab’）、Fv、scFv、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、実施形態1から7のいずれか1つに記載の結合剤。
9．重鎖可変領域が重鎖定常領域をさらに含む、実施形態1から8のいずれか1つに記載の結合剤。
10．重鎖定常領域がIgGアイソタイプのものである、実施形態7に記載の結合剤。
11．重鎖定常領域がIgG1定常領域である、実施形態10に記載の結合剤。
12．重鎖定常領域がIgG4定常領域である、実施形態10に記載の結合剤。
13．IgG1定常領域が、配列番号39に示されるアミノ酸配列を有する、実施形態11に記載の結合剤。
14．軽鎖可変領域が軽鎖定常領域をさらに含む、実施形態1から13のいずれか1つに記載の結合剤。
15．軽鎖定常領域がカッパアイソタイプのものである、実施形態14に記載の結合剤。
16．軽鎖定常領域が、配列番号40に示されるアミノ酸配列を有する、実施形態15に記載の結合剤。
17．重鎖定常領域が、少なくともヒトFcガンマRIIIに対する結合親和性を低下させるアミノ酸修飾をさらに含む、実施形態9から16のいずれか1つに記載の結合剤。
18．単一特異性である、実施形態1から17のいずれか1つに記載の結合剤。
19．二価である、実施形態1から18のいずれか1つに記載の結合剤。
20．二重特異性である、実施形態1から17のいずれか1つに記載の結合剤。
21．実施形態1から20のいずれか1つに記載の結合剤と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
22．実施形態1から20のいずれか1つに記載の結合剤をコードする核酸。
23．実施形態22に記載の核酸を含むベクター。
24．実施形態22に記載のベクターまたは実施形態21に記載の核酸を含む細胞株。
25．実施形態1から20のいずれか1つに記載の結合剤と、
結合剤に結合した少なくとも1つのリンカーと、
各リンカーに結合した少なくとも1つの薬物と
を含むコンジュゲート。
26．各薬物が、細胞傷害剤、免疫調節剤、核酸、増殖阻害剤、PROTAC、毒素および放射性同位体から選択される、実施形態25に記載のコンジュゲート。
27．各リンカーが、鎖間ジスルフィド残基、リジン残基、操作されたシステイン残基、グリカン、修飾グリカン、結合剤のN末端残基または結合剤に結合したポリヒスチジンペプチドを介して結合剤に結合している、実施形態25から26のいずれか1つに記載のコンジュゲート。
28．コンジュゲートの平均薬物負荷が、約1～約8、約2、約4、約6、約8、約10、約12、約14、約16、約3～約5、約6～約8または約8～約16である、実施形態25から27のいずれか1つに記載のコンジュゲート。
29．薬物が細胞傷害剤である、実施形態25から28のいずれか1つに記載のコンジュゲート。
30．細胞傷害剤が、アウリスタチン、メイタンシノイド、カンプトテシン、デュオカルマイシンまたはカリケアマイシンからなる群から選択される、実施形態29に記載のコンジュゲート。
31．細胞傷害剤がアウリスタチンである、実施形態30に記載のコンジュゲート。
32．細胞傷害剤がMMAEまたはMMAFである、実施形態31に記載のコンジュゲート。
33．細胞傷害剤がカンプトテシンである、実施形態30に記載のコンジュゲート。
34．細胞傷害剤がエキサテカンである、実施形態33に記載のコンジュゲート。
35．細胞傷害剤がSN－38である、実施形態33に記載のコンジュゲート。
36．細胞傷害剤がカリケアマイシンである、実施形態30に記載のコンジュゲート。
37．細胞傷害剤がメイタンシノイドである、実施形態30に記載のコンジュゲート。
38．メイタンシノイドが、メイタンシン、メイタンシノール、またはDM1、DM3およびDM4のメイタンシン類似体、またはアンサマイトシン－2である、実施形態37に記載のコンジュゲート。
39．リンカーが、mc－VC－PAB、CL2、CL2Aまたは（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－（式中、n＝1～5である）を含む、実施形態25から38のいずれか1つに記載のコンジュゲート。
40．リンカーがmc－VC－PABを含む、実施形態39に記載のコンジュゲート。
41．リンカーがCL2Aを含む、実施形態39に記載のコンジュゲート。
42．リンカーがCL2を含む、実施形態39に記載のコンジュゲート。
43．リンカーが（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－を含む、実施形態39に記載のコンジュゲート。
44．リンカーがエキサテカンの少なくとも1つの分子に結合している、実施形態43に記載のコンジュゲート。
45．薬物が免疫調節剤である、実施形態25から28のいずれか1つに記載のコンジュゲート。
46．免疫調節剤が、TRL7アゴニスト、TLR8アゴニスト、STINGアゴニスト、またはRIG－Iアゴニストからなる群から選択される、実施形態45に記載のコンジュゲート。
47．免疫調節剤がTLR7アゴニストである、実施形態46に記載のコンジュゲート。
48．TLR7アゴニストが、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－2，2－ジオキシド、ベンゾナフチリジン、グアノシン類似体、アデノシン類似体、チミジンホモポリマー、ssRNA、CpG－A、ポリG10、およびポリG3である、実施形態47に記載のコンジュゲート。
49．免疫調節剤がTLR8アゴニストである、実施形態46に記載のコンジュゲート。
50．TLR8アゴニストが、イミダゾキノリン、チアゾロキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジンまたはssRNAから選択される、実施形態49に記載のコンジュゲート。
51．免疫調節剤がSTINGアゴニストである、実施形態46に記載のコンジュゲート。
52．免疫調節剤がRIG－Iアゴニストである、実施形態46に記載のコンジュゲート。
53．RIG－Iアゴニストが、KIN1148、SB－9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400およびKIN2000から選択される、実施形態52に記載のコンジュゲート。
54．リンカーが、mc－VC－PAB、CL2、CL2Aおよび（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－（式中、n＝1～5である）からなる群から選択される、実施形態45から53のいずれか1つに記載のコンジュゲート。
55．実施形態25から54のいずれか1つに記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
56．FOLR1＋がんを治療する方法であって、治療有効量の実施形態1から20のいずれか1つに記載の結合剤、実施形態25から54のいずれか1つに記載のコンジュゲートまたは実施形態21もしくは55に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
57．FOLR1＋がんが固形腫瘍である、実施形態56に記載の方法。
58．FOLR1＋がんが、肺がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵がん、および腎細胞がんから選択される、実施形態57に記載の方法。
59．免疫療法を対象に投与するステップをさらに含む、実施形態56から58のいずれか1つに記載の方法。
60．免疫療法がチェックポイント阻害剤を含む、実施形態59に記載の方法。
61．チェックポイント阻害剤が、ヒトPD－1、ヒトPD－L1、またはヒトCTLA4に特異的に結合する抗体から選択される、実施形態60に記載の方法。
62．チェックポイント阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである、実施形態61に記載の方法。
63．化学療法を対象に投与するステップをさらに含む、実施形態56から62のいずれか1つに記載の方法。
64．実施形態25から54のいずれか1つに記載のコンジュゲートまたは実施形態55に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、実施形態56から63のいずれか1つに記載の方法。
65．結合剤、コンジュゲートまたは医薬組成物が静脈内投与される、実施形態56から64のいずれか1つに記載の方法。
66．結合剤、コンジュゲートまたは医薬組成物が約0．1mg／kg～約12mg／kgの用量で投与される、実施形態6に記載の方法。
67．対象の治療成績が改善される、実施形態56から66のいずれか1つに記載の方法。
68．改善される治療成績が、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的奏効である、実施形態67に記載の方法。
69．改善される治療成績が腫瘍量の減少である、実施形態67に記載の方法。
70．改善される治療成績が無増悪生存期間または無病生存期間である、実施形態67に記載の方法。
71．対象のFOLR1＋がんを治療するための、実施形態1から20のいずれか1つに記載の結合剤または実施形態21に記載の医薬組成物の使用。
72．対象のFOLR1＋がんを治療するための、実施形態25から54のいずれか1つに記載のコンジュゲートまたは実施形態55に記載の医薬組成物の使用。
本開示の実施形態の説明は、網羅的であることを意図するものでも、本開示を開示される正確な形態に限定することを意図するものでもない。本開示の具体的な実施形態および例が、例示目的で本明細書に記載されているが、当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な等価な修正が可能である。本明細書で提供される開示の教示は、必要に応じて他の手順または方法に適用することができる。本明細書に記載される様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本開示の態様は、必要に応じて、本開示のなおさらなる実施形態を提供するために上記の参考文献および出願の組成、機能および概念を採用するように修正することができる。詳細な説明に照らして、これらの変更および他の変更を本開示に対して行うことができる。
前記実施形態のいずれかの特定の要素を他の実施形態の要素と組み合わせる、または他の実施形態の要素に置き換えることができる。さらに、本開示のある特定の実施形態に関連する利点をこれらの実施形態の文脈で説明してきたが、他の実施形態もこのような利点を示すことができ、全ての実施形態が、本開示の範囲内に入るためにこのような利点を必ずしも示す必要はない。
特定される全ての特許および他の刊行物は、例えば、本発明に関連して使用され得るこのような刊行物に記載される方法論を説明および開示する目的で、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。これらの刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示のためにのみ提供される。この点に関するいかなるものも、本発明者らが先行発明によって、またはあらゆる他の理由でこのような開示に先行する権利がないことの自認として解釈されるべきではない。これらの文書の日付に関する全ての記述または内容に関する表現は、出願人が入手可能な情報に基づいており、これらの文書の日付または内容の正確さに関するいかなる自認も構成しない。
実施例
実施例1：ヒトFOLR1に対するヒト抗体の作製
ヒトFOLR－1を標的とする抗体を、完全ヒト抗体ライブラリーを使用してスクリーニングした。このライブラリーは、Fabがファージ表面に提示された半合成ヒト抗体ライブラリーである。
ライブラリーのパニングについては標準プロトコルに従った。具体的には、PolySorpまたはMaxiSorp Nunc－Immuno Tubes（Nunc－MG Scientific）を、0．5mlの6μg／ml（パニング概要、表1を参照）のヒトFOLR1（ACRO－FO1－H52H1）抗原でコーティングし、冷蔵庫に一晩入れた。チューブをPBSで1回洗浄し、1％BSA／PBSでブロッキングし、RT（室温）で1時間置いた。チューブを示される量（CFU、パニング概要、表1を参照）のライブラリーファージ試料と共にRTで1時間インキュベートした。チューブをPBST緩衝液で10回洗浄した。結合したファージを溶出させるために、0．5mlの100mM TEA（トリエチルアミン）を添加し、RTで2分間インキュベートし、溶離液を新たなチューブに移し、混合しながら0．25mlの1．0 M Tris－HCL、pH8．0を添加することによって直ちに中和した。溶離液（0．75ml）を10mlの対数増殖期大腸菌TG1（OD600～0．5）に添加し、十分に混合し、37℃（水浴）で振盪せずに30分間インキュベートした。培養物の10倍希釈物を2xTY培地で作製し、10μlの各希釈物をTYE／amp／gluプレートにプレーティングし、30℃で一晩インキュベートした。翌日、各希釈物のコロニー数を計数し、パニングアウトプットのCFU（コロニー形成単位）を計算した。残りの培養物を2，800gで15分間遠心分離し、0．5mlの2×TY培地に再懸濁し、2枚の150mm TYE／amp／gluプレートにプレーティングし、30℃で一晩インキュベートした。翌日、3～5mlの2xTY／amp／glu培地を各プレートに添加し、細菌をセルスプレッダーでプレートから掻き取った。1．5mlの細菌と0．5mlの80％グリセロールを混合することによってグリセロールストックを作製し、ストックを－80℃に置いた。
次の選択ラウンドのためのファージ粒子を調製するために、OD600約0．01～0．05から開始して、グリセロールストックを40mlの2xTY／amp／glu培地に接種した。培養物を、OD600が0．4～0．6に達するまで、振盪（300rpm）しながら37℃で増殖させた。ヘルパーファージCM13をヘルパーファージ：細菌比5～10：1で培養物に添加することによって培養物を感染させた。培養物を、時々混合して水浴中で静置しながら37℃で30分間インキュベートし、引き続いて37℃で30分間振盪した。細菌培養物を3000rpmで20分間遠心分離し、上清を除去した。ペレットを100mLの2xTY／amp／kanに再懸濁し、次いで、30℃で一晩振盪しながら増殖させた。6，000gで30分間遠心分離することによって培養物を収穫した。1／5体積のPEG溶液を上清に添加し、引き続いて氷上で1時間インキュベートし、引き続いて4，000gで、4℃で20分間遠心分離することによって、ファージ粒子を沈殿させた。上清を完全に捨てた。ファージペレットを1～2mlの冷PBSに再懸濁した。残留細菌を、4℃で5分間の最高速度での微量遠心分離によって除去した。このようにして調製されたファージは、選択のために直ちに使用することができる、または10％グリセロールを含むアリコートで－80℃で保存することができる。100ulの対数増殖期大腸菌TG1に、10倍希釈のファージ溶液（2xTYで、10－11まで低下）を感染させることによって、ファージ調製物の力価を決定した。選択を、ステップ1から開始して合計3～4ラウンドにわたって繰り返した。
合計4回のパニングを実施した。2回、3回および4回の洗浄緩衝液PBS－Tween20の濃度を、それぞれ0．2％、0．3％および0．4％まで徐々に増加させた。
4回のスクリーニング後、標的陽性濃縮率は1．5×104に達し、表1に示されるように、ブランク対照との有意差があった。ファージELISA検証のために、2つの96ウェルプレートからのクローンを採取した；FOLR－1との高い結合性を有するクローンを配列決定するために選択した。
合計で69個のクローンを配列決定し、12個のユニークなVH配列を得た。これらの12個のVH配列を分析したところ、表2および表4に示されるように、2個の固有のHCDR3セットを有していた。12個のユニークなVH配列を有するクローンについて、VL配列を次に決定した。表3および表4に示されるように、固有のLCDR3の2つの群を用いて、2つの固有のVL配列を得た。
CDR領域のKabatシステムを使用したクローン配列のさらなる分析は、表5に示されるように、クローンF1／8／9／26／48／50／100／112／123／131／138が同じHCDRおよびLCDRを有するが、異なる重鎖フレームワーク（HFR）および軽鎖フレームワーク（LFR）配列を有することを示した。クローンF40は、表5に示されるように、異なるHCDRおよびLCDRを有し、異なるHFRおよびLFRを有する。
実施例2：HEK293細胞によって産生された抗体の検証
（上記のように）抗体クローンの配列を得た後、完全IgG分子を使用してさらなる分析を行った。最初に、IgG1 Fcによる完全長抗体分子の発現を48ウェルまたは96ウェルマイクロプレートで実施し、発現レベルおよび抗原または細胞結合能の検出のために上清を回収した。
2．1 48または96ウェルプレートにおける抗体発現．
抗体F1、F8、F26、F40、F48、F50、F100、F112、F123、F131およびF138の重鎖および軽鎖をコードするcDNA配列をベクターPTT5に構築した。HEK293細胞を回収し、1×106／mlの細胞密度に調整し、後の使用のために5％CO2の37℃インキュベーター内で200または400μL／ウェルで48／96ウェル細胞培養プレートにプレーティングした。96ウェルプレートでのトランスフェクションのために、0．5μgのプラスミドを20μLのOPTI培地で希釈し、十分に混合し、2．5μLのトランスフェクション試薬T1（プラスミド：T1＝1：5）を20μLのOPTI培地で希釈し、十分に混合し、室温で5分間インキュベートした。トランスフェクション試薬T1希釈剤をDNAに添加し、十分に混合し、室温で30分間インキュベートした。インキュベーション中にトランスフェクション複合体が形成された。トランスフェクション複合体を細胞に添加し、十分に混合し、5％CO2インキュベーター中、37℃で48時間インキュベートした。48ウェルプレートでトランスフェクトする場合、プラスミドおよびトランスフェクション試薬の量を二倍にした。トランスフェクション後2日目に、上清を回収して、ELISAまたはFACSで抗体生物活性を検出した。
2．2 IgG発現レベル．
96ウェルにおける抗体発現レベルを、標準的なELISAによって試験した。手短に言えば、抗ヒトIgG Fc抗体（Sigma、18885－2ML）をpH9．6の炭酸コーティング溶液で5μg／mlに希釈し、100μLを96ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに4℃で一晩コーティングした。ウェル中の液体を捨て、ウェルをPBSTで3回洗浄し、4％脱脂粉乳－PBS（Sigma、D5652－1L）、300μL／ウェルでブロッキングし、37℃で1時間インキュベートした。ウェル中の液体を捨て、次いで、ウェルをPBSで3回洗浄した。試料を、100μL／ウェルを使用して96ウェルマイクロタイタープレートに添加した。PBSを対照群に添加した。プレートを37℃で1時間インキュベートし、次いで、液体を捨て、ウェルをPBSTで3回洗浄した。HRP－ヤギ抗ヒトIgG（Sigma、I18885－2ML）を、100μL／ウェルを使用して添加し（1：5000希釈）、プレートを37℃で1時間インキュベートした。次いで、プレート中の液体を捨て、プレートをPBSTで5回洗浄した。TMB溶液を、100μL／ウェルを使用して添加した。次いで、2M H2SO4を、50μL／ウェルを使用して各ウェルに添加して、10～15分後に反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを使用してA450値を読み取った。結果を表6に示す。クローンF50を除いて、全ての抗体が正常な発現を有していた。
2．3 ヒトおよびカニクイザルFOLR1タンパク質に結合する抗体．
ヒトFOLR1タンパク質に結合する、またはカニクイザルFOLR1タンパク質に交差結合する抗体の能力を、標準的なELISAによって試験した。手短に言えば、Hisタグを有するヒトFOLR1タンパク質（ACRO－FO1－H52H1）またはカニクイザルFOLR1タンパク質（ACRO、F01－C52H8）をpH9．6の炭酸コーティング溶液で5μg／mlに希釈し、100μLの抗原を96ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに4℃で一晩コーティングした。ウェル中の液体を捨て、ウェルをPBSTで3回洗浄した。次いで、ウェルを、300μL／ウェルを使用して、4％脱脂粉乳－PBS（Sigma、D5652－1L）でブロッキングし、プレートを37℃で1時間インキュベートした。ウェル中の液体を捨て、ウェルをPBSで3回洗浄した。試料を、100μl／ウェルを使用して添加した；PBSを対照群に添加した。プレートを37℃で1時間インキュベートした。ウェル中の液体を捨て、ウェルをPBSTで3回洗浄した。HRP－ヤギ抗ヒトIgG（Sigma、I18885－2ML）を添加し（1：5000希釈、100μ／ウェル）、プレートを37℃で1時間インキュベートした。次いで、ウェル中の液体を捨て、ウェルをPBSTで5回洗浄した。TMB溶液を、100μL／ウェルを使用して添加した。2M H2SO4を、50μLを使用して各ウェルに添加して、10～15分後に反応を停止させた。マイクロプレートリーダーを使用してA450値を読み取った。
マイクロタイタープレートにおけるIgGの発現レベルおよびヒトFOLR1タンパク質への結合を表6に示す。クローンF50を除く全ての抗体が、ヒトFOLR1タンパク質に対する正常な結合を有していた。
カニクイザルFOLR1タンパク質に対する抗FOLR1抗体交差結合の結果を表7に示す。クローンF50を除く全ての抗体が、カニクイザルFOLR1タンパク質に対する良好な交差結合を有していた。
2．4 高いFOLR1を発現する腫瘍細胞株への抗体結合．
Hela細胞（COBIOERによって提供される、ATCC（登録商標）CCL－2）およびRPTEC／TERT1細胞（COBIOERによって提供される、ATCC（登録商標）CRL－4031）に対する抗体の結合活性を、トランスフェクション上清を使用してフローサイトメトリーによって試験した。手短に言えば、標的細胞を0．02％EDTA－2Naで消化し、1500rpmで3分間遠心分離し、PBSで再懸濁した。計数後、細胞を1×106細胞／管で1．5ml遠心管に添加し、1500rpmで5分間遠心分離し、上清を捨てた。次いで、全ての操作を氷浴で行った。100μLのトランスフェクション上清を各1．5ml遠心管に添加した。ブランク細胞、ブランク細胞＋二次抗体、培地およびHEK293上清を対照として設定した。反応を氷浴で1時間実施した。次いで、細胞をペレット化し、PBSで2回洗浄した。二次抗体、ヤギ抗ヒトIgG（PE、abcam、ab98596）を希釈し（1：200）、管1本当たり100μLを使用して添加した。反応を暗所中、氷浴で1時間実施した。細胞を再度ペレット化し、PBSで2回洗浄し、300μLのPBSに再懸濁し、FL2蛍光読み取り値をサイトメトリーによって測定した。結果をFlowJoTM10ソフトウェアによって分析した。
Hela細胞への抗FOLR1抗体の結合の結果を図1に示す。結果は、クローンF50がHela細胞結合について陰性であったことを実証している。クローンF40およびF138は、Hela細胞結合について弱陽性であった。残りの8つのクローンは、Hela細胞結合について陽性であった。
RPTEC／TERT1細胞への抗FOLR1抗体の結合の結果を図2に示す。結果は、クローンF50がRPTEC／TERT1細胞結合について陰性であったことを実証している。クローンF138は、RPTEC／TERT1細胞結合について弱陽性であった。残りの9つのクローンは、RPTEC／TERT1細胞結合について陽性であった。
Figure 2024518709000020
実施例3：振盪フラスコにおいてHEK293細胞発現によって産生された抗ヒトFOLR1抗体の特性評価
抗FOLR1抗体を浮遊細胞で発現させることにより十分な量のタンパク質を得ることによって、抗FOLR1抗体の結合を定量的に試験した。プラスミドを発現のために浮遊細胞にトランスフェクトした。抗体精製のために上清を回収した。高純度抗体を使用して、高いFOLR1タンパク質レベルを有する腫瘍細胞上の抗体の結合および内在化を定量的に検出した。
3．1 抗体の発現および精製．
抗体F8、F26、F40、F48、F100、F112、F123およびF131をコードするプラスミドをHEK293細胞にトランスフェクトした。手短に言えば、HEK293細胞を回収し、1×106／mlの細胞密度に調整し、後の使用のために、5％CO2で37℃の振盪機内の125mL振盪フラスコ中30mL培地で培養した。トランスフェクションのために、30ugのプラスミドを1500μLのKPM培地で希釈し、十分に混合し、150μLのトランスフェクション試薬T1（プラスミド：T1＝1：5）を1500μLのKPM培地で希釈し、十分に混合し、室温で5分間インキュベートした。トランスフェクション試薬T1希釈剤をDNAに添加し、十分に混合し、室温で30分間インキュベートしてトランスフェクション複合体を形成した。トランスフェクション複合体を細胞に添加し、十分に混合し、120rpmの5％CO2振盪機中、37℃で48時間インキュベートした。TN1溶液を24時間後に0．5％の最終濃度まで添加した。トランスフェクション後6日目に、上清を回収し、精製した。
プロテインAまたはプロテインGを使用する標準的なプロセスによって抗体精製を行った。手短に言えば、各上清を0．22μm濾過膜を通して濾過し、結合緩衝液（PB、pH7．2）で平衡化したカラムにロードした。280nmで吸光度のない安定したベースラインが得られるまで、カラムを結合緩衝液で洗浄した。0．15M NaCl、pH3．4を含有する0．1Mクエン酸緩衝液で、流量1ml／分を用いて抗体を溶出した。およそ1．5～3．5mlの画分を回収し、10％体積の1M Tris－HCl、pH9．0の添加によって中和した。次いで、抗体試料を一晩1×PBSに対して2回透析し、0．2μm濾過膜を通して濾過することによって滅菌した。12％SDS－PAGEを使用して純度を試験した。
発現レベルおよび精製結果を表8に示す。抗体F8、F26およびF131はより高い発現レベルを有し、抗体F100は最も低い発現レベルを有した。全ての抗体が高純度を有した（データは示さず）。
3．2 高いFOLR1レベルを有する腫瘍細胞株への抗体結合．
Hela細胞およびRPTEC／TERT1細胞への抗FOLR1抗体結合をFACSによって試験した。試験を上記のように行った。結果を図3および図4に示す。全ての抗体が、Hela細胞およびRPTEC／TERT1細胞に用量依存的に結合する。
3．3 内在化率の特性評価．
抗FOLR1抗体F8、F26、F40、F48、F100、F112、F123およびF131を、抗体をpHAb蛍光色素で標識したpHAbアッセイを使用して、FOLR－1発現腫瘍細胞株HelaおよびRPTEC／TERT1に内在化する能力について試験した。抗体標識はキットの説明書に従って実施した。具体的には、50μLの磁気ビーズを1．5mlのEPチューブに添加した。EPチューブを磁気スタンド上に10秒間置き、磁気ビーズ上の保護溶液を除去した。磁気ビーズの各チューブを250μLのPBで洗浄し、100ugの抗体を磁気ビーズの各チューブに添加した（緩衝系：クエン酸／Tris－HClナトリウム（pH6．0））。体積をPBで1mlにし、反応溶液を混合し、室温で1時間回転させた。次いで、磁気ビーズを250μLのPBで洗浄し、250μLのNaHCO3で平衡化した。100μLのNaHCO3および1．2μLの調製したpHAb色素（使用前に調製）を各チューブに添加し、反応物を暗所に1時間置いた。各チューブを250μLのPBで2回洗浄した。50mMグリシンを、100μLを使用して室温で5分間各チューブに添加し、次いで、標識抗体を溶出した。次いで、2M Tris緩衝液を中和のために溶出液に添加した。最終標識抗体を、後の使用のために暗所で保存した。
Hela細胞またはRPTEC／TERT1細胞を1ウェル当たり15，000個細胞で100μLで播種し、5％CO2インキュベーター中37℃で20～24時間培養した。pHAb標識試験抗体を10μg／mlの濃度でウェルに添加した。次いで、プレートを、それぞれ0時間、1時間、4時間、6時間および23時間で520nmの励起波長および570nmの吸収波長を用いてThermo VARIOSKAN FLASHで読み取った。
結果を図5および図6に示す。試験した全ての抗FOLR1抗体が、FOLR1発現Hela細胞およびRPTEC／TERT1細胞においてpHAb蛍光の時間依存的増加を示した。この結果は、各抗体がHela細胞およびRPTEC／TERT1細胞に内在化し、抗体F8およびF131が最も強い内在化率を有することを示している。
実施例4：抗FOLR－1イムノコンジュゲートの特性評価
イムノコンジュゲートとしての抗FOLR－1抗体のさらなる特性評価を実施した。
4．1 参照抗体ならびに抗体F8、F26およびF131の発現
ImmunoGen Inc．の抗FOLR－1抗体ミルベツキシマブ（huFR107）を対照として使用した。huFR107のVH領域およびVL領域のアミノ酸配列を米国特許第8，557，966号明細書から得て（それぞれ配列番号36および37）、コドン最適化した。huFR107をコードし、抗体F8、F26およびF131をコードする最適化cDNAをベクターpcDNA3．4において構築した。次いで、プラスミドを、三角フラスコにおいて標準的なExpiFectamine CHO Transfection手順（Gibco、A29129）を使用してExpiCHO－S細胞に一過的にトランスフェクトした。懸濁した一過的トランスフェクションを10日間インキュベートし、次いで、清澄化した上清をプロテインAカラムによって精製し、引き続いて上記のようにSDS－PAGEを行った。
4．2 抗FOLR－1イムノコンジュゲートの調製
0．5Mリン酸二ナトリウムを添加することによって、抗体溶液のpHをpH7．0～7．5の範囲内に調整した。示される量の0．5M EDTAを添加して、抗体溶液中5mMの最終EDTA濃度を達成した。示される量の10mM TCEP（トリス（2－クロロエチル）ホスフェート）溶液を添加して、所望のTCEP／mAbモル比を達成した。還元反応物をRTで90分間置いた。次いで、DMSOを添加して10％v／vを達成した。薬物－リンカーmc－VC－PAB－MMAEをDMSOに溶解して10mMの最終濃度を達成し、示される量を、利用可能なシステインチオールのモル数と比較して30～50％のモル過剰で反応溶液に添加した。コンジュゲーション反応物をRTで30分間置いた。NAC（N－アセチル－L－システイン）ストック溶液を添加して、NAC／Mc－VC－PAB－MMAEモル比5を達成した。クエンチした反応物をRTで15分間置いた。精製をPD10カラムによって行った。
抗FOLR－1イムノコンジュゲートの純度を、Waters HPLC E2695＆2489システムを使用して、TSKゲルG3000SWXL、7．8×300mmカラム（Tosoh Bioscience）で、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）により評価した。操作は、50mM Na2PO4（pH6．7）および10％IPAの移動相を使用して25℃で行い、0．8mL／分の流量で20分間実行した。表9を参照すると、4種全てのADCが高い純度を有していた。
抗FOLR－1イムノコンジュゲートの疎水性を、Waters HPLC E2695＆2489システムを使用して、疎水性相互作用TosoHaas TSKゲルButyl－NPRカラム（内径4．6mm×3．5cm、粒径2．5μm）で疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）により評価した。手短に言えば、HPLCシステムを、移動相A：50mM Na2PO4／1．5M（NH4）2SO4 pH7．0および移動相B：50mM Na2PO4／25％IPA、pH7．0を用いて25℃で操作した。移動相を、0．22μmメンブレンフィルタ（Millipore）を通して濾過し、流量0．5mLで30分間実行した。線形勾配のパラメータを表10に示す。抗FOLR－1イムノコンジュゲートのDAR（薬物抗体比）をHICデータに従って決定したところ、3～4の範囲内であった（データは示さず）。
実施例5：イムノコンジュゲートの結合特性評価
FOLR1－hisまたはFOLR1高発現腫瘍細胞株への抗FOLR1コンジュゲート結合の比較を、標準的なELISAまたはFACSによって実施した。
5．1 ELISA試験．
組換えHisタグ付きFOLR1を、PBS中96ウェルマイクロプレート（Thermo、カタログ番号：468667）上に2μg／ml、100μL／ウェルで一晩コーティングした。コーティング溶液を除去し、ウェルを350μL／ウェルのTBSTで充填することによってプレートを2回洗浄した。1ウェル当たり200μLのブロッキング緩衝液（2％ BSA／TBST）を添加することによってプレートをブロッキングした。プレートを37℃で2時間置いた。プレートを350μL／ウェルのTBSTで2回洗浄した。試料を10μg／mlの出発濃度で添加し、1：3段階希釈で滴定した。プレートを室温で1時間置いた。溶液を除去し、350μL／ウェルのTBSTで2回洗浄した。ヤギ抗ヒトIgG Fc HRP（abcam、ab98624）をブロッキング緩衝液で1：20000に希釈し、1ウェル当たり100μLでプレートに添加した。プレートを室温で1時間インキュベートした。プレートを350μL／ウェルのTBSTで4回洗浄した。100μLのTMB（溶液A：溶液B、1：1）溶液を各ウェルに添加し、反応物を暗所に3～10分間置いた。50uLの停止溶液（2M H2SO4）を添加し、450nmおよび630nmでの光学濃度を読み取った。データをGraphPadPrism5ソフトウェアで分析した。
ELISAの結果を図7および図8に示す。データは、標的FOLR1タンパク質への結合におけるコンジュゲートの活性がコンジュゲーション後に影響を受けず、組換えタンパク質FOLR－1への結合において3種のADC間に有意差がないことを示した。
5．2 FACS試験．
FOLR1発現Hela細胞、OVCAR3細胞（COBIOERによって提供される、ATCC（登録商標）HTB－161（商標））、OV90細胞（COBIOERによって提供される、ATCC（登録商標）CRL－11732（商標））およびIGROV－1（COBIOERによって提供される）を、様々な濃度の抗FOLR－1コンジュゲートと共にインキュベートした。各抗体コンジュゲートを0．1mlのFACS緩衝液（0．1％BSAを補充したPBS）中で0．5時間インキュベートした。次いで、細胞をペレット化し、洗浄し、0．1mlのPEコンジュゲートヤギ抗ヒトIgG抗体（Abcam、Ab98596）と共に0．5時間インキュベートした。細胞を再びペレット化し、PBSで洗浄し、100μLのPBSに再懸濁した。CytoFLEX（Beckman）を使用して試料を分析した。
結果を図9および図10に示す。参照抗体コンジュゲートと比較して、3種の抗体コンジュゲートによる細胞株への結合に有意差はなかった。3種全ての抗FOLR1コンジュゲートが、IGROV－1細胞への結合またはOV90細胞株への結合よりも強いOVCAR3への結合を有していた。
実施例6：抗FOLR1イムノコンジュゲートの内在化
抗FOLR1コンジュゲート（F8－ADC、F26－ADC、F131－ADCおよび対照FR107－ADC）を、免疫蛍光染色アッセイを使用して、FOLR1発現Hela、OVCAR3、IGROV－1およびOV90腫瘍細胞へ内在化する能力について試験した。
具体的には、0．25％トリプシン／EDTAで処理することによって組織培養フラスコから3×105個の細胞を収穫し、次いで、FACS緩衝液（0．1％BSAを含有する1×PBS）中10マイクログラム／mlで各イムノコンジュゲートと共に4℃で30分間インキュベートした。ヒトIgG1アイソタイプ対照を陰性対照として使用した。細胞を洗浄して未結合物質を除去し、4℃でインキュベートした、または37℃に移した。設定時点（0時間、4時間、24時間）で、細胞を4℃で30分間、PEコンジュゲート抗ヒトFc抗体（Abcam、Ab98596）で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。4℃のMFIから37℃のMFIを差し引くことによって内在化比を決定し、次いで、4℃のMFIと比較した。
図11および図12は、4時間または24時間の経過にわたって4℃に保たれたHela細胞株およびOVCAR3細胞株におけるイムノコンジュゲートまたはアイソタイプ対照の表面レベルの変化を示す。細胞がアッセイの経過にわたって37℃に移行した場合、イムノコンジュゲートの表面レベルは有意に低下した。この所見は、3種の試験された抗FOLR1イムノコンジュゲート、ならびに参照抗体コンジュゲートの2つの腫瘍細胞株における内在化に有意差がなかったことを示唆している。
図13は、腫瘍細胞株OV90での抗FOLR1イムノコンジュゲートの内在化結果を示す。結果は、F8－ADCの内在化がOV90細胞株での他のADCの内在化よりも良好であることを示した。図14に示される結果から、IGROV－1腫瘍細胞株での内在化を決定することができなかった。
Hela、OVCAR3およびOV90での抗FOLR1コンジュゲートの内在化結果を表11に要約する。
実施例7：インビトロ細胞傷害性アッセイ
F8、F26、F131およびFR107コンジュゲートが細胞増殖を阻害する能力を、インビトロ細胞傷害性アッセイを使用して測定した。以下の方法を使用した。
細胞を収穫し、抗FOLR1コンジュゲートを添加する前に、示される量（細胞増殖速度に応じて）で96ウェル固形白色平底プレートに播種した。翌日、細胞を、複製ウェルを用いて、1：3連続希釈を使用して、30マイクログラム／ml～0．37マイクログラム／mlまたは100マイクログラム／ml～0．015マイクログラム／mlの薬物範囲のコンジュゲートに曝露した。プレートを37℃で120時間インキュベートした。次いで、1ウェル当たり40μLのCTG（Promega、G7572）をプレートに添加し、5分間のインキュベーション後にプレートをMD I3Xリーダーで読み取った。増殖阻害を、Microsoft ExcelおよびPrismソフトウェアを使用して、未処理細胞に対する増殖パーセントとして測定した。
結果を図15～図18および表12に示す。図15および図18に示されるように、3種全ての抗FOLR1コンジュゲート（F8－ADC、F26－ADCおよびF131－ADC）が、参照抗体コンジュゲート（FR107－ADC）よりもわずかに良好なHela細胞およびIGROV－1細胞に対する細胞傷害性を有していた。さらに、F131－ADCは、IGROV－1細胞株に対してF8－ADCおよびF26－ADCよりも幾分良好な細胞増殖阻害活性を有していた。
実施例8：マウスモデルにおける抗FOLR－1イムノコンジュゲートの薬物動態（PK）および安全性
8．1 PK
BALB／c正常マウスは、JOINN Laboratories（Suzhou）から購入し、収容1週間後に使用した。マウスを滅菌ケージに群で収容し、病原体フリーの条件下で維持した。実験室において、環境条件は以下の通りであった：温度20℃～22℃および湿度59％～78％、12時間の人工照明。マウスケージは325mm×210mm×180mmの仕様を有するポリスルホンボックスとし、オートクレーブ処理後に使用した。各ボックスで最大5匹の動物を飼育し、実験番号、実験開始時間、プロジェクトリーダー、実験要員、動物供給源、群および動物番号をケージカードに示した。実験動物に耳マークを付けた。マウスにFR－2食を与え、水道水（オートクレーブ処理後に使用）を与えた。マウスの体重は、投与時におよそ20～22gであった。
1群当たり6匹のマウスを含む4つの群を、3mg／kgのF8、F26、F131およびFR107イムノコンジュゲートの単回投与で静脈内（IV）処置した。イムノコンジュゲート投与の10分後、4時間後、1日後、4日後、7日後、10日後、14日後および21日後に血液試料を回収し、引き続いて遠心分離（4℃、10000×g、3分）して血清を分離した。血清中の各コンジュゲートの総抗体濃度をELISAによって検出し、Winnonlin 8．2ソフトウェアによって分析した。
ヤギ抗ヒトIgG Fc（Invitrogen、31125）を、2マイクログラム／mlで、PBS中96ウェルマイクロプレート（Thermo、カタログ番号：468667）上に、100μL／ウェルを使用して4℃で一晩コーティングした。翌日、溶液を除去し、プレートを350μL／ウェルのTBSTで2回洗浄した。200μL／ウェルのブロッキング緩衝液（3％BSA／TBST）を添加することによってプレートをブロッキングした。プレートを37℃で2時間置き、350μL／ウェルのTBSTで2回洗浄した。一連の濃度の標準および試料を各ウェルに添加し、プレートを室温で2時間置いた。溶液を除去し、ウェルを350μL／ウェルのTBSTで2回洗浄した。ヤギ抗ヒトカッパ軽鎖（HRP）（abcam、ab202549）をブロッキング緩衝液で希釈し、1ウェル当たり100μLで添加した。プレートを室温で1時間インキュベートした。次いで、プレートを350μL／ウェルのTBSTで4回洗浄した。100μLのTMB（溶液A：溶液B、1：1）溶液を各ウェルに添加し、プレートを暗所に3～10分間置いた。50μLの停止溶液（2M H2SO4）を添加し、450nmおよび630nmでの光学濃度を読み取った。データをGraphPadPrism5ソフトウェアで分析した。
結果を図19に示す。FR107－ADCは、F8－ADCおよびF131－ADCよりも高い血清クリアランスを有していた。
8．2 マウスに対する安全性効果．
安全性試験で使用したマウスは前記の通りである。各群6匹のマウスを含む5つの群を、30mg／kgのF8、F26、F131およびFR107イムノコンジュゲートの単回投与で静脈内（IV）処置した。摂食、飲水および活動、体重増加／減少（体重は2日毎に1回測定した）、目／毛のもつれおよび他の異常な効果について動物を毎日確認し、死亡および観察される臨床徴候を記録した。
体重の結果は図20に示される通りである。データは、処置マウスにおいて体重の有意な増加も減少も示さなかった。
実施例9：BLIによって試験されたFOLRファミリータンパク質に対するF131の親和性データ
Hisタグに連結されたFOLRファミリータンパク質の細胞外ドメインからなる組換えタンパク質を購入した（ACRO systemsから）、または社内で合成した。バイオレイヤー干渉法（BLI）を介した結合試験のために、F131（16．67nM）を抗ヒトIgG Fcバイオセンサーチップ（Fortebio）に固定した。溶液中の様々な濃度（500nMから7．8nMまで）の組換え抗原タンパク質を使用する結合アッセイを、Octet RED（Fortebio）を使用して実施した。会合時間を180秒に設定し、解離時間を300秒に設定した。ForteBio Data Acquisition 6．3ソフトウェア（ForteBio）を使用して結合親和性を計算し、グローバルフィッティングアルゴリズムを利用して、動力学データを1：1ラングミュア結合モデルに当てはめることによって親和性を導出した。F131は、ヒトFOLR1に対する高い親和性を示したが、ヒトFOLR2に対する低い応答を有し、ヒトFOLR3に対する応答を有さず、F131の結合特異性を実証した（表13）。F131は、ヒトおよびカニクイザルFOLR1に対する高い結合親和性を示し、平衡解離定数（KD）はそれぞれ1．5nMおよび8．1nMであった。F131は、ラットFOLR1に対する交差反応性を示さず、マウスFOLR1に対する低い交差反応性を示した（KD＝2．9μM）。
実施例10：F131結合アッセイデータ
F131の結合活性を、高いFOLR1標的発現を有する細胞株（JEG－3）またはFOLR1標的発現を有さない細胞株（PC－3）を用いてフローサイトメトリー（Beckman、Cytoflex）によって評価した。1ウェル当たり3×105個細胞を96ウェルプレートに播種し、連続希釈で100μlのF131と共にインキュベートした。4℃で30分間インキュベートした後、細胞をPBSで2回洗浄し、100μlのFACS緩衝液（1％BSAを含有する1×PBS）中1：200希釈PEコンジュゲート抗ヒトFcで染色し、次いで、4℃で30分間インキュベートした。次いで、細胞をPBSで2回洗浄し、フローサイトメトリー分析によって分析した。F131は、ヒトFOLR1陽性細胞株、JEG－3に対する強い結合を示し（図21）、ヒトFOLR1陰性細胞株、PC－3に対する結合を示さなかった（図22）。
実施例11：腫瘍細胞株におけるF131内在化
内在化アッセイを経時的に行った。3×105個細胞を、FACS緩衝液（0．1％BSAを含有する1×PBS）中10ug／mlのF131と共に4℃で30分間インキュベートした。細胞を4℃で洗浄して未結合物質を除去し、必要に応じて氷上に保った、または37℃に移した。進行中の時点（0時間、0．5時間、1時間、2時間、3時間、4時間）で、細胞を4℃で30分間、PEコンジュゲート抗ヒトFcで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。内在化率を、時間0における4℃での細胞表面結合抗体の平均蛍光強度（MFI）から各時点での37℃での細胞表面結合抗体のMFIを差し引き、次いで、時間0における4℃での細胞表面結合抗体のMFIで割ることによって計算した。F131は、FOLR1発現細胞株（OVCAR－3、KB、JEG－3、NCI－H441、OV90）で迅速な内在化を示したが、FOLR1非発現細胞（PC－3）では内在化を示さなかった（図23）。
実施例12：F131コンジュゲートのインビボ有効性
細胞株由来異種移植片（CDX）モデルにおいて、様々なベンチマーキングリンカー薬物とのコンジュゲート（表15）におけるF131の抗腫瘍活性を評価した。F131－ソラフタンシンを調製するために：スルホ－SPDB－DM4の溶液（DMSO中10mg／mL）を2mLの抗体の溶液（5mM EDTA pH7．4を含有する50mMリン酸緩衝液中10mg／mL）に添加し、スルホ－SPDB－DM4のmAbに対するモル比は6．0とする。25℃で6時間反応を行う。過剰のスルホ－SPDB－DM4およびその不純物を50mMリン酸ナトリウム緩衝液を用いた限外濾過によって除去した。ADCを、UFDFによって6％スクロースおよび0．02％（w／V）Tween 20を含有する20mMヒスチジン緩衝液中で保存した。SEC－HPLCの純度は97．9％であり、DAR値はLC－MSに基づいて3．5であった。F131－デルクステカンを調製するために、5mM EDTAを含有する50mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH＝6．9）中2mLの抗体（10mg／mL）を、10mM TCEP HCl水溶液（トリス（2－カルボキシエチル）ホスフィンHCl）に添加し、TCEPのmAbに対するモル比は8．0とする。25℃で2時間還元反応を行う。デルクステカンをDMSOに20mg／mLの濃度で溶解し、これを還元抗体に12（デルウクテカン／mAb）のモル比で添加する。カップリング反応物を25℃で8時間撹拌する。過剰のデルクステカンおよびその不純物を50mMリン酸ナトリウム緩衝液を用いた限外濾過によって除去した。ADCを、UFDFによって6％スクロースおよび0．02％（w／V）Tween 20を含有する20mMヒスチジン緩衝液中で保存した。SEC－HPLCの純度は97．5％であり、DAR値はLC－MSに基づいて7．7であった。F131－ベドチンを調製するために、5mM EDTAを含有する50mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH＝6．9）中2mLの抗体（10mg／mL）を、10mM TCEP HCl水溶液（トリス（2－カルボキシエチル）ホスフィンHCl）に添加し、TCEPのmAbに対するモル比は2．2とする。25℃で2時間還元反応を行う。ベドチンをDMSOに20mg／mLの濃度で溶解し、これを還元抗体に5．0（ベドチン／mAb）のモル比で添加する。カップリング反応物を25℃で2時間撹拌する。過剰のベドチンおよびその不純物を50mMリン酸ナトリウム緩衝液を用いた限外濾過によって除去した。ADCを、UFDFによって6％スクロースおよび0．02％（w／V）Tween 20を含有する20mMヒスチジン緩衝液中で保存した。SEC－HPLCの純度は97．5％であり、DAR値はHIC－HPLCに基づいて3．9であった。1細胞当たりの標的（FOLR1）コピー数（結合部位）の特性評価のために（表15）：QIFIKIT（DAKO、K0078）アッセイキットの説明書に従ってアッセイを行った。手短に言えば、細胞をヒトFOLR1に対する一次マウスモノクローナル抗体で標識した。次いで、細胞、セットアップビーズおよび較正ビーズを、フルオレセインコンジュゲート抗マウス二次抗体と並行して標識した。試料をフローサイトメトリーで分析し、検量線に基づいてコピー数を計算した。F131コンジュゲートを用いたCDX試験のために：Matrigel／培地（1：1）または培地のいずれかに懸濁した適切な量の細胞を皮下で雌BALB／cヌードマウスに。腫瘍接種後6～26日目に、平均腫瘍サイズ110～180mm3のマウスを選択し、腫瘍体積に基づく層別ランダム化を使用して処置群（1群当たりn＝6～9）に割り当てた。F131コンジュゲートまたはビヒクル対照の静脈内注射による処置を、ランダム化後1日目に開始し、単回投与（1日目、図24、図25、図26、図32、図33）モデルまたは複数回投与（1、4、8、11日目）モデル（図27、図28、図29、図30、図31）のいずれかとした。腫瘍サイズを、標準的な方法を使用して1週間に2回測定した。動物の体重を毒性の間接的尺度として監視した。処置期間中、罹患も死亡も処置群のいずれにおいても観察されなかった。ビヒクル対照と比較して、F131コンジュゲートは、試験した全てのモデルにおいて実質的な腫瘍増殖阻害を与えた。
実施例13：F131およびコンジュゲートのラットモデルにおけるPK試験
F131およびそのコンジュゲートを、3mg／kgの単回投与で雄sprague dawleyラットに静脈内投与した（n＝3／群）。投与後の様々な時点で各ラットから眼窩血液をサンプリングした。（血漿中のF131およびそのコンジュゲートを検出する際の）総Ab濃度をELISAキット（Genscript）によって分析し、Winnonlin 8．2ソフトウェアを使用して計算した。F131－デルクステカンは、親mAbと区別がつかない優れたPKをラットにおいて示した（図34）。F131－ベドチンはラットにおいて安定なPKを示したが、クリアランスは親mAbよりも幾分速いようである（図35）。
実施例14：パイロットカニクイザル毒性試験におけるF131－デルクステカンPKおよび忍容性
F131－デルクステカンを、1日目に60mg／kgの単回投与で雄1匹および雌1匹のカニクイザルに静脈内投与した。臨床徴候、体重、食物消費、および臨床病理を試験全体を通して監視した。22日目に剖検を予定した。投与終了後0時間、24時間、72時間、120時間、336時間および504時間で各動物から毒物動態学的試料を回収した。血漿中のF131およびF131コンジュゲートを表す際の総Ab濃度をELISAキット（Genscript製）によって分析し、Winnonlin 8．2ソフトウェアを使用して計算した。両動物は予定された剖検まで生存した。臨床所見、血液学および臨床化学を表16ならびに図36および図37に示す。全ての変化が、22日目までに回復の傾向を示した。体重、体温、凝固、尿検査、または肉眼的剖検で毒性学的異常は認められなかった。F131－デルクステカンは、カニクイザル血漿において安定した薬物動態特性を示した（図38）。
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な修正が、前記説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。このような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
特許、特許出願公開、および科学文献を含む様々な刊行物が本明細書に引用され、その開示はあらゆる目的のために全体が参照により組み込まれる。
［配列表］
配列番号1 F1 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号2 F1 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号3 F8 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQHGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号4 F8 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号5 F9 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQLGGPDSPVQPLDSPFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号6 F9 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号7 F26 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQRGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLPMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号8 F26 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号9 F40 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFIISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARPTYVFTYTGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号10 F40 VLアミノ酸配列
DIQVTQSPSSLSASLGDTVSITCRASRGLTDSVAWYQQKPGQAPKLLIYAASTLQSGVPSRFGGSGSGSYFTLTITSLQPEDVATYYCQNYKSAPWTFGQGTKVEIK
配列番号11 F48 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号12 F48 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号13 F50 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQRGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号14－F50 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号15 F100 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRPNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号16 F100 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号17 F112 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRHNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号18 F112 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号19 F123 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPERSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRANSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号20 F123 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号21 F131 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRANSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号22 F131 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号23 F138 VHアミノ酸配列
EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISTHNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPRAYYGAYGSSFDYWGQGTQVTVSS
配列番号24 F138 VLアミノ酸配列
EIVMTQSPSSVSASVGDRVAITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVDIK
配列番号25 HCDR1アミノ酸配列
SYGMH
配列番号26 HCDR2アミノ酸配列
VISYDGSNKYYADSVKG
配列番号27 HCDR3アミノ酸配列
PRAYYGAYGSSFDY
配列番号28 LCDR1アミノ酸配列
RASQGISSWLA
配列番号29 LCDR2アミノ酸配列
AASSLQS
配列番号30 LCDR3アミノ酸配列
QQSYSTPLT
配列番号31 HCDR1アミノ酸配列
SYAMH
配列番号32 HCDR3アミノ酸配列
PTYVFTYTGSSFDY
配列番号33 LCDR1アミノ酸配列
RASRGLTDSVA
配列番号34 LCDR2アミノ酸配列
AASTLQS
配列番号35 LCDR3アミノ酸配列
QNYKSAPW
配列番号36 huFR107 VHアミノ酸配列
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSS
配列番号37 huFR107 VLアミノ酸配列
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIK
配列番号38
（GGGGS）
配列番号39ヒトIgG1重鎖UniProt P01857－1
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP
KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS
HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK
EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC
LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW
QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
配列番号40ヒトカッパ軽鎖UniProt P01834－1
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG
NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK
SFNRGEC
配列番号41ヘキサ－ヒスチジン
HHHHHH
配列番号42
GFLG
配列番号43
GGFG
配列番号44
LPXTG
配列番号45
ALAL

Claims (72)

  1. 重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含む結合剤であって、
    前記VH領域が、重鎖可変領域フレームワーク領域に配置された相補性決定領域HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含み、前記VL領域が、軽鎖可変領域フレームワーク領域に配置されたLCDR1、LCDRおよびLCDR3を含み、前記VHおよびVL CDRが、
    a．それぞれ、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29および配列番号30；ならびに
    b．それぞれ、配列番号31、配列番号26、配列番号32、配列番号33、配列番号34および配列番号35
    からなる群に示されるアミノ酸配列のセットから選択されるアミノ酸配列を有する、結合剤。
  2. 前記VH領域および前記VL領域が、
    a．それぞれ、配列番号1および配列番号2；
    b．それぞれ、配列番号3および配列番号4；
    c．それぞれ、配列番号5および配列番号6；
    d．それぞれ、配列番号7および配列番号8；
    e．それぞれ、配列番号9および配列番号10；
    f．それぞれ、配列番号11および配列番号12；
    g．それぞれ、配列番号13および配列番号14；
    h．それぞれ、配列番号15および配列番号16；
    i．それぞれ、配列番号17および配列番号18；
    j．それぞれ、配列番号19および配列番号20；
    k．それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびに
    l．それぞれ、配列番号23および配列番号24
    からなる群に示されるアミノ酸配列セットのペアから選択されるアミノ酸配列を有し、
    前記重鎖フレームワーク領域および前記軽鎖フレームワーク領域が、前記フレームワーク領域内の1～8個のアミノ酸の置換、欠失または挿入で場合により修飾されている、請求項1に記載の結合剤。
  3. 前記VH領域および前記VL領域が、
    a．それぞれ、配列番号1および配列番号2；
    b．それぞれ、配列番号3および配列番号4；
    c．それぞれ、配列番号5および配列番号6；
    d．それぞれ、配列番号7および配列番号8；
    e．それぞれ、配列番号9および配列番号10；
    f．それぞれ、配列番号11および配列番号12；
    g．それぞれ、配列番号13および配列番号14；
    h．それぞれ、配列番号15および配列番号16；
    i．それぞれ、配列番号17および配列番号18；
    j．それぞれ、配列番号19および配列番号20；
    k．それぞれ、配列番号21および配列番号22；ならびに
    l．それぞれ、配列番号23および配列番号24
    からなる群に示されるアミノ酸配列セットのペアから選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1または2に記載の結合剤。
  4. 前記VH領域および前記VL領域が、
    a．それぞれ、配列番号3および配列番号4；
    b．それぞれ、配列番号7および配列番号8；
    c．それぞれ、配列番号9および配列番号10；
    d．それぞれ、配列番号11および配列番号12；
    e．それぞれ、配列番号15および配列番号16；
    f．それぞれ、配列番号17および配列番号18；
    g．それぞれ、配列番号19および配列番号20；ならびに
    h．それぞれ、配列番号21および配列番号22
    からなる群に示されるアミノ酸配列セットのペアから選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1から3のいずれか一項に記載の結合剤。
  5. 前記VH領域および前記VL領域が、
    a．それぞれ、配列番号3および配列番号4；
    b．それぞれ、配列番号7および配列番号8；ならびに
    c．それぞれ、配列番号21および配列番号22
    からなる群に示されるアミノ酸配列セットのペアから選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1から4のいずれか一項に記載の結合剤。
  6. 前記フレームワーク領域がヒトフレームワーク領域である、請求項1に記載の結合剤。
  7. 抗体またはその抗原結合部分である、請求項1から6のいずれか一項に記載の結合剤。
  8. モノクローナル抗体、Fab、Fab’、F（ab’）、Fv、scFv、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である、請求項1から7のいずれか一項に記載の結合剤。
  9. 前記重鎖可変領域が重鎖定常領域をさらに含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の結合剤。
  10. 前記重鎖定常領域がIgGアイソタイプのものである、請求項7に記載の結合剤。
  11. 前記重鎖定常領域がIgG1定常領域である、請求項10に記載の結合剤。
  12. 前記重鎖定常領域がIgG4定常領域である、請求項10に記載の結合剤。
  13. 前記IgG1定常領域が、配列番号39に示されるアミノ酸配列を有する、請求項11に記載の結合剤。
  14. 前記軽鎖可変領域が軽鎖定常領域をさらに含む、請求項1から13のいずれか一項に記載の結合剤。
  15. 前記軽鎖定常領域がカッパアイソタイプのものである、請求項14に記載の結合剤。
  16. 前記軽鎖定常領域が、配列番号40に示されるアミノ酸配列を有する、請求項15に記載の結合剤。
  17. 前記重鎖定常領域が、少なくともヒトFcガンマRIIIに対する結合親和性を低下させるアミノ酸修飾をさらに含む、請求項9から16のいずれか一項に記載の結合剤。
  18. 単一特異性である、請求項1から17のいずれか一項に記載の結合剤。
  19. 二価である、請求項1から18のいずれか一項に記載の結合剤。
  20. 二重特異性である、請求項1から17のいずれか一項に記載の結合剤。
  21. 請求項1から20のいずれか一項に記載の結合剤と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  22. 請求項1から20のいずれか一項に記載の結合剤をコードする核酸。
  23. 請求項22に記載の核酸を含むベクター。
  24. 請求項22に記載のベクターまたは請求項21に記載の核酸を含む細胞株。
  25. 請求項1から20のいずれか一項に記載の結合剤と、
    前記結合剤に結合した少なくとも1つのリンカーと、
    各リンカーに結合した少なくとも1つの薬物と
    を含むコンジュゲート。
  26. 各薬物が、細胞傷害剤、免疫調節剤、核酸、増殖阻害剤、PROTAC、毒素および放射性同位体から選択される、請求項25に記載のコンジュゲート。
  27. 各リンカーが、鎖間ジスルフィド残基、リジン残基、操作されたシステイン残基、グリカン、修飾グリカン、前記結合剤のN末端残基または前記結合剤に結合したポリヒスチジンペプチドを介して前記結合剤に結合している、請求項25から26のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  28. コンジュゲートの平均薬物負荷が、約1～約8、約2、約4、約6、約8、約10、約12、約14、約16、約3～約5、約6～約8または約8～約16である、請求項25から27のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  29. 前記薬物が細胞傷害剤である、請求項25から28のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  30. 前記細胞傷害剤が、アウリスタチン、メイタンシノイド、カンプトテシン、デュオカルマイシンまたはカリケアマイシンからなる群から選択される、請求項29に記載のコンジュゲート。
  31. 前記細胞傷害剤がアウリスタチンである、請求項30に記載のコンジュゲート。
  32. 前記細胞傷害剤がMMAEまたはMMAFである、請求項31に記載のコンジュゲート。
  33. 前記細胞傷害剤がカンプトテシンである、請求項30に記載のコンジュゲート。
  34. 前記細胞傷害剤がエキサテカンである、請求項33に記載のコンジュゲート。
  35. 前記細胞傷害剤がSN－38である、請求項33に記載のコンジュゲート。
  36. 前記細胞傷害剤がカリケアマイシンである、請求項30に記載のコンジュゲート。
  37. 前記細胞傷害剤がメイタンシノイドである、請求項30に記載のコンジュゲート。
  38. 前記メイタンシノイドが、メイタンシン、メイタンシノール、またはDM1、DM3およびDM4のメイタンシン類似体、またはアンサマイトシン－2である、請求項37に記載のコンジュゲート。
  39. 前記リンカーが、mc－VC－PAB、CL2、CL2Aまたは（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－（式中、n＝1～5である）を含む、請求項25から38のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  40. 前記リンカーがmc－VC－PABを含む、請求項39に記載のコンジュゲート。
  41. 前記リンカーがCL2Aを含む、請求項39に記載のコンジュゲート。
  42. 前記リンカーがCL2を含む、請求項39に記載のコンジュゲート。
  43. 前記リンカーが（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－を含む、請求項39に記載のコンジュゲート。
  44. 前記リンカーがエキサテカンの少なくとも1つの分子に結合している、請求項43に記載のコンジュゲート。
  45. 前記薬物が免疫調節剤である、請求項25から28のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  46. 前記免疫調節剤が、TRL7アゴニスト、TLR8アゴニスト、STINGアゴニスト、またはRIG－Iアゴニストからなる群から選択される、請求項45に記載のコンジュゲート。
  47. 前記免疫調節剤がTLR7アゴニストである、請求項46に記載のコンジュゲート。
  48. 前記TLR7アゴニストが、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－2，2－ジオキシド、ベンゾナフチリジン、グアノシン類似体、アデノシン類似体、チミジンホモポリマー、ssRNA、CpG－A、ポリG10、およびポリG3である、請求項47に記載のコンジュゲート。
  49. 前記免疫調節剤がTLR8アゴニストである、請求項46に記載のコンジュゲート。
  50. 前記TLR8アゴニストが、イミダゾキノリン、チアゾロキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［3，2－d］ピリミジン－2，4－ジアミン、ピリミジン－2，4－ジアミン、2－アミノイミダゾール、1－アルキル－1H－ベンゾイミダゾール－2－アミン、テトラヒドロピリドピリミジンまたはssRNAから選択される、請求項49に記載のコンジュゲート。
  51. 前記免疫調節剤がSTINGアゴニストである、請求項46に記載のコンジュゲート。
  52. 前記免疫調節剤がRIG－Iアゴニストである、請求項46に記載のコンジュゲート。
  53. 前記RIG－Iアゴニストが、KIN1148、SB－9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400およびKIN2000から選択される、請求項52に記載のコンジュゲート。
  54. 前記リンカーが、mc－VC－PAB、CL2、CL2Aおよび（スクシンイミド－3－イル－N）－（CH2）n－C（＝O）－Gly－Gly－Phe－Gly－NH－CH2－O－CH2－（C＝O）－（式中、n＝1～5である）からなる群から選択される、請求項45から53のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  55. 請求項25から54のいずれか一項に記載のコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  56. FOLR1＋がんを治療する方法であって、治療有効量の請求項1から20のいずれか一項に記載の結合剤、請求項25から54のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項21もしくは55に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
  57. 前記FOLR1＋がんが固形腫瘍である、請求項56に記載の方法。
  58. 前記FOLR1＋がんが、肺がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、膵がん、および腎細胞がんから選択される、請求項57に記載の方法。
  59. 免疫療法を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項56から58のいずれか一項に記載の方法。
  60. 前記免疫療法がチェックポイント阻害剤を含む、請求項59に記載の方法。
  61. 前記チェックポイント阻害剤が、ヒトPD－1、ヒトPD－L1、またはヒトCTLA4に特異的に結合する抗体から選択される、請求項60に記載の方法。
  62. 前記チェックポイント阻害剤が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブまたはイピリムマブである、請求項61に記載の方法。
  63. 化学療法を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項56から62のいずれか一項に記載の方法。
  64. 請求項25から54のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項55に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、請求項56から63のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記結合剤、コンジュゲートまたは医薬組成物が静脈内投与される、請求項56から64のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記結合剤、コンジュゲートまたは医薬組成物が約0．1mg／kg～約12mg／kgの用量で投与される、請求項6に記載の方法。
  67. 前記対象の治療成績が改善される、請求項56から66のいずれか一項に記載の方法。
  68. 前記改善される治療成績が、安定、部分奏効または完全奏効から選択される客観的奏効である、請求項67に記載の方法。
  69. 前記改善される治療成績が腫瘍量の減少である、請求項67に記載の方法。
  70. 前記改善される治療成績が無増悪生存期間または無病生存期間である、請求項67に記載の方法。
  71. 対象のFOLR1＋がんを治療するための、請求項1から20のいずれか一項に記載の結合剤または請求項21に記載の医薬組成物の使用。
  72. 対象のFOLR1＋がんを治療するための、請求項25から54のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項55に記載の医薬組成物の使用。
JP2023562467A 2021-04-10 2022-04-08 Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法 Pending JP2024518709A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163173406P 2021-04-10 2021-04-10
US63/173,406 2021-04-10
PCT/US2022/023969 WO2022217022A1 (en) 2021-04-10 2022-04-08 Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024518709A true JP2024518709A (ja) 2024-05-02

Family

ID=81749085

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023562467A Pending JP2024518709A (ja) 2021-04-10 2022-04-08 Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP4319820A1 (ja)
JP (1) JP2024518709A (ja)
CN (1) CN117279664A (ja)
AU (1) AU2022253902A1 (ja)
CA (1) CA3215049A1 (ja)
TW (1) TW202304524A (ja)
WO (1) WO2022217022A1 (ja)

Family Cites Families (171)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR107M (fr) 1960-08-04 1961-01-13 Rhone Poulenc Sa Nouveaux dérivés de la phénothiazine.
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4737462A (en) 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
US4518584A (en) 1983-04-15 1985-05-21 Cetus Corporation Human recombinant interleukin-2 muteins
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
EP0247091B1 (en) 1985-11-01 1993-09-29 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4704692A (en) 1986-09-02 1987-11-03 Ladner Robert C Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
EP0752248B1 (en) 1992-11-13 2000-09-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US6080560A (en) 1994-07-25 2000-06-27 Monsanto Company Method for producing antibodies in plant cells
KR960029336A (ko) 1995-01-09 1996-08-17 김충환 캄토테신 유도체, 그의 제조 방법 및 이를 함유하는 항암제
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5855887A (en) 1995-07-25 1999-01-05 The Regents Of The University Of California Blockade of lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
WO1997023243A1 (en) 1995-12-22 1997-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Branched hydrazone linkers
ATE216366T1 (de) 1996-08-16 2002-05-15 Pfizer 2-aminobenzazepin-derivate und ihre verwendung für die behandlung von immunosuppression
AU6703198A (en) 1997-03-21 1998-10-20 Brigham And Women's Hospital Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK1068241T3 (da) 1998-04-02 2008-02-04 Genentech Inc Antistofvarianter og fragmenter deraf
US5985837A (en) 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US20030167531A1 (en) 1998-07-10 2003-09-04 Russell Douglas A. Expression and purification of bioactive, authentic polypeptides from plants
US6512162B2 (en) 1998-07-10 2003-01-28 Calgene Llc Expression of eukaryotic peptides in plant plastids
US6204257B1 (en) 1998-08-07 2001-03-20 Universtiy Of Kansas Water soluble prodrugs of hindered alcohols
US7109003B2 (en) 1998-12-23 2006-09-19 Abgenix, Inc. Methods for expressing and recovering human monoclonal antibodies to CTLA-4
ES2340745T3 (es) 1998-12-23 2010-06-08 Pfizer Inc. Anticuerpos monoclonales humanos contra ctla-4.
EE05627B1 (et) 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP1212422B1 (en) 1999-08-24 2007-02-21 Medarex, Inc. Human ctla-4 antibodies and their uses
AU1573601A (en) 1999-10-21 2001-04-30 Monsanto Company Post-translational modification of recombinant proteins produced in plants
JP2003520828A (ja) 2000-01-27 2003-07-08 ジェネティクス インスティテュート，エルエルシー Ｃｔｌａ４（ｃｄ１５２）に対する抗体、これを含む結合体、およびその使用
NZ521540A (en) 2000-04-11 2004-09-24 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses therefor
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2003062176A1 (en) 2002-01-23 2003-07-31 Johnson Matthey Plc Sulphided ion exchange resins
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
EP2357006B1 (en) 2002-07-31 2015-09-16 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
EP2330130B1 (en) 2002-10-17 2014-08-27 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD20
AU2003288467A1 (en) 2002-12-13 2004-07-09 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
EP1572744B1 (en) 2002-12-16 2010-06-09 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
US7662387B2 (en) 2003-02-20 2010-02-16 Seattle Genetics Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
JP2008501621A (ja) 2003-05-31 2008-01-24 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｂ細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗ｃｄ３、抗ｃｄ１９抗体構築物を含む薬学的組成物
WO2005040395A1 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Keck Graduate Institute Methods of synthesizing heteromultimeric polypeptides in yeast using a haploid mating strategy
BR122018071968B8 (pt) 2003-11-06 2021-07-27 Seattle Genetics Inc conjugado de anticorpo-droga, composição farmacêutica, artigo de manufatura e uso de um conjugado de anticorpo-droga
DK1691833T3 (da) 2003-11-28 2010-05-03 Micromet Ag Præparater der omfatter polypeptider
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
JP4942643B2 (ja) 2004-03-02 2012-05-30 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 部分的に付加された抗体およびそれらの結合体化方法
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
EP2722051B1 (en) 2005-07-07 2018-11-07 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the C-terminus
AU2006283532B2 (en) 2005-08-19 2012-04-26 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
TWI382019B (zh) 2005-08-19 2013-01-11 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之胺基二氮雜呯
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
TWI404537B (zh) 2005-08-19 2013-08-11 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之８-經取代苯并氮雜呯
CA2625440C (en) 2005-10-11 2023-06-13 Micromet Ag Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
PL2099823T5 (pl) 2006-12-01 2023-02-20 Seagen Inc. Wariant środków wiążących cel i jego zastosowania
JP2010524851A (ja) 2007-04-03 2010-07-22 マイクロメット アーゲー 種間特異的結合ドメイン
MX2009013832A (es) 2007-06-29 2010-03-10 Gilead Sciences Inc Derivados de purina y su uso como moduladores del receptor 7 similar a un puente.
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
WO2009089004A1 (en) 2008-01-07 2009-07-16 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
EP2842575B1 (en) 2008-03-18 2017-09-27 Seattle Genetics, Inc. Auristatin drug linker conjugates
JP5600104B2 (ja) 2008-08-01 2014-10-01 ベンティアールエックス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト処方物およびその使用
EP2364314B1 (en) 2008-12-09 2014-03-12 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptors
EP2376110B1 (en) 2009-01-09 2019-03-13 Seattle Genetics, Inc. Weekly dosing regimens for anti-cd30 vc-pab-mmae antibody drug-conjugates
PT3903829T (pt) 2009-02-13 2023-06-02 Immunomedics Inc Imunoconjugados com uma ligação intracelular clivável
KR102444399B1 (ko) 2009-06-03 2022-09-16 이뮤노젠 아이엔씨 메이탄시노이드의 제조방법
EP2467380B1 (en) 2009-08-18 2016-11-30 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Substituted benzoazepines as toll-like receptor modulators
CN105669553A (zh) 2009-08-18 2016-06-15 文蒂雷克斯药品公司 作为toll样受体调节剂的取代的苯并氮杂*
JP5694345B2 (ja) 2009-10-22 2015-04-01 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｔｏｌｌ様受容体の調節因子
SG10201501342UA (en) 2010-02-24 2015-04-29 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CN114246952A (zh) 2010-06-08 2022-03-29 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
EP2579887B1 (de) 2010-06-10 2014-11-12 Seattle Genetics, Inc. Neue auristatin-derivate und ihre verwendung
LT2621526T (lt) 2010-09-29 2018-09-25 Agensys, Inc. Antikūno-vaisto konjugatai (adc), kurie jungiasi prie 191p4d12 baltymų
RU2587061C2 (ru) 2010-10-01 2016-06-10 Вентиркс Фармасьютикалз, Инк. Способы лечения аллергических заболеваний
SG10201601089UA (en) 2010-10-01 2016-03-30 Ventirx Pharmaceuticals Inc Therapeutic Use Of A TLR Agonist And Combination Therapy
MX346387B (es) 2011-01-12 2017-03-02 Ventirx Pharmaceuticals Inc Benzoazepinas sustituidas como moduladores de receptores tipo toll.
MX348935B (es) 2011-01-12 2017-07-03 Ventirx Pharmaceuticals Inc Benzoazepinas sustituidas como moduladores de receptores tipo toll.
EP3590965A1 (en) 2011-03-29 2020-01-08 Roche Glycart AG Antibody fc variants
EP2694484B1 (en) 2011-04-08 2018-07-18 Janssen Sciences Ireland UC Pyrimidine derivatives for the treatment of viral infections
EP2709989B8 (en) 2011-05-18 2018-04-18 Janssen Sciences Ireland UC Quinazoline derivatives for the treatment of viral infections and further diseases
WO2012171020A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
CN104066451B (zh) 2011-07-19 2017-04-05 希默赛生物技术有限责任公司 新交联试剂、大分子、治疗用偶联物及其合成方法
HUE038225T2 (hu) 2011-08-23 2018-10-29 Roche Glycart Ag Bispecifikus, T-sejtaktiváló antigénkötõ, molekulák
TWI622578B (zh) 2011-12-21 2018-05-01 諾維拉治療公司 Ｂ型肝炎抗病毒劑
AU2013218072B2 (en) 2012-02-08 2017-08-31 Janssen Sciences Ireland Uc Piperidino-pyrimidine derivatives for the treatment of viral infections
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
MX369417B (es) 2012-08-10 2019-11-07 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de alquilpirimidina para el tratamiento de infecciones víricas y otras enfermedades.
HUE037064T2 (hu) 2012-10-10 2018-08-28 Janssen Sciences Ireland Uc Pirrolo[3,2-d]-pirimidin származékok vírusos fertõzések és egyéb betegségek kezelésére
EP3632471A1 (en) 2012-10-11 2020-04-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate
CN110201186A (zh) 2012-10-23 2019-09-06 西纳福克斯股份有限公司 经修饰的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
US10036010B2 (en) 2012-11-09 2018-07-31 Innate Pharma Recognition tags for TGase-mediated conjugation
US9663474B2 (en) 2012-11-16 2017-05-30 Janssen Sciences Ireland Uc Heterocyclic substituted 2-amino quinazoline derivatives for the treatment of viral infections
ES2733361T3 (es) 2013-02-21 2019-11-28 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Derivados de 2-aminopirimidina para el tratamiento de infecciones víricas
WO2014165128A2 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Novira Therapeutics, Inc. Hepatitis b antiviral agents
KR102322425B1 (ko) 2013-07-30 2021-11-05 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니 바이러스 감염의 치료를 위한 티에노[3,2-d]피리미딘 유도체
TWI526446B (zh) 2013-09-27 2016-03-21 中國醫藥大學附設醫院 喜樹鹼的新穎２０（ｓ）－磺基脒衍生物及其抗腫瘤劑的用途
CN105829543B (zh) 2013-10-14 2021-06-01 西纳福克斯股份有限公司 糖基改造的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
US20160287623A1 (en) 2013-11-19 2016-10-06 The University Of Chicago Use of sting agonist as cancer treatment
AU2014369019B2 (en) 2013-12-19 2020-09-17 Seagen Inc. Methylene carbamate linkers for use with targeted-drug conjugates
US10933112B2 (en) 2014-02-17 2021-03-02 Seagen Inc. Hydrophilic antibody-drug conjugates
MA39898B1 (fr) 2014-04-22 2020-08-31 Hoffmann La Roche Composés 4-amino-imidazoquinoline
MX2016016515A (es) 2014-06-13 2017-04-27 Novartis Ag Derivados de auristatina y conjugados de los mismos.
NZ728072A (en) 2014-07-11 2018-06-29 Gilead Sciences Inc Modulators of toll-like receptors for the treatment of hiv
JP2017528124A (ja) 2014-08-04 2017-09-28 シンアフィックス ビー．ブイ． ベータ−（１，４）−ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ又はその突然変異体を用いる糖タンパク質の改変方法
JP6473226B2 (ja) 2014-09-11 2019-02-20 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 第３級アミン含有薬物物質の標的送達
KR20170052600A (ko) 2014-09-12 2017-05-12 제넨테크, 인크. 시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트
CA2963717C (en) 2014-12-08 2023-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection
US9694084B2 (en) 2014-12-23 2017-07-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce targeted protein degradation through bifunctional molecules
KR101756050B1 (ko) 2015-03-04 2017-07-07 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 톨 유사 수용체 조정제 화합물
CR20170394A (es) 2015-03-06 2017-09-25 Hoffmann La Roche Compuestos de dicarboxamida de benzazepinas
AU2016232705C1 (en) 2015-03-18 2021-06-17 Arvinas, Inc. Compounds and methods for the enhanced degradation of targeted proteins
CN108055842B (zh) 2015-09-17 2021-06-29 豪夫迈·罗氏有限公司 亚磺酰基苯基或磺亚胺酰基苯基苯并氮杂䓬
EP3368229B1 (en) 2015-10-27 2021-12-08 Koninklijke Philips N.V. Anti-fouling system , controller and method of controlling the anti-fouling system
CA3003948A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Use of tlr8 agonists to treat cancer
US10393904B2 (en) 2015-11-06 2019-08-27 Weatherford Technology Holdings, Llc Predicting stress-induced anisotropy effect on acoustic tool response
US11229708B2 (en) 2015-12-04 2022-01-25 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
WO2017147542A2 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
HUE054726T2 (hu) * 2016-03-02 2021-09-28 Eisai R&D Man Co Ltd Eribulinalapú antitest-gyógyszer konjugátumok és alkalmazási eljárások
DK3430397T3 (da) 2016-03-14 2022-05-02 Biogen Int Neuroscience Gmbh Antistofafhængig cellemedieret fagocytoseassay til pålidelig måling af optagelse af aggregerede proteiner
CA3023154C (en) 2016-05-06 2021-01-12 Shanghai De Novo Pharmatech Co., Ltd. Benzazepine derivative, preparation method, pharmaceutical composition and use thereof
PL3458101T3 (pl) 2016-05-20 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania
JP6918838B2 (ja) 2016-05-23 2021-08-11 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 第三級アミド基を有するベンズアゼピンジカルボキサミド化合物
WO2017202703A1 (en) 2016-05-23 2017-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Benzazepine dicarboxamide compounds with secondary amide function
WO2017216054A1 (en) 2016-06-12 2017-12-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Dihydropyrimidinyl benzazepine carboxamide compounds
CN109562152B (zh) 2016-08-09 2024-04-02 西雅图基因公司 含有具有改善的生理化学性质的自稳定性接头的药物缀合物
US10640499B2 (en) 2016-09-02 2020-05-05 Gilead Sciences, Inc. Toll like receptor modulator compounds
US10239862B2 (en) 2017-03-15 2019-03-26 Silverback Therapeutics, Inc. Benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AR113224A1 (es) 2017-04-28 2020-02-19 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo que comprenden un agonista de sting
JP2020523319A (ja) 2017-06-07 2020-08-06 シルバーバック セラピューティックス インコーポレイテッド 免疫調節化合物の抗体コンジュゲートおよびその使用
CN111032688A (zh) 2017-08-11 2020-04-17 研究发展基金会 用于延长的血清半衰期的工程化抗体fc变体
KR20200099123A (ko) 2017-12-15 2020-08-21 쓰촨 케룬-바이오테크 바이오파마수티컬 컴퍼니 리미티드 생체활성 접합체, 이의 제조 방법 및 용도
US20210015942A1 (en) 2018-01-10 2021-01-21 Development Center For Biotechnology Antibody protac conjugates
EP3755707A1 (en) 2018-02-20 2020-12-30 Seagen Inc. Hydrophobic auristatin f compounds and conjugates thereof
WO2019213046A1 (en) 2018-05-01 2019-11-07 Cellmosaic Inc. Branched sugar alcohol-based compounds, and compositions and methods thereof
WO2020056194A1 (en) 2018-09-12 2020-03-19 Silverback Therapeutics, Inc. Benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
AU2019337654A1 (en) 2018-09-12 2021-04-08 Silverback Therapeutics, Inc. Substituted benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
JP2021535930A (ja) 2018-09-17 2021-12-23 キュラティス インコーポレイティッド Ｓｔｉｎｇアゴニストを含む抗原性補強剤及びワクチン組成物
TW202028212A (zh) 2018-10-11 2020-08-01 日商小野藥品工業股份有限公司 Ｓｔｉｎｇ促效化合物
US11401295B2 (en) 2018-10-12 2022-08-02 Shanghai Jemincare Pharmaceuticals Co., Ltd. Cyclic dinucleotide compound and uses thereof
WO2020123425A2 (en) 2018-12-12 2020-06-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies modified for transglutaminase conjugation, conjugates thereof, and methods and uses
US10781239B2 (en) 2018-12-28 2020-09-22 Vividion Therapeutics, Inc. In vivo engineered cereblon protein
CN113286796A (zh) 2019-01-30 2021-08-20 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 喜树碱衍生物及其水溶性前药、包含其的药物组合物及其制备方法和用途
EP3962493A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity/level of irf or sting or of treating cancer, comprising the administration of a sting modulator and/or purinergic receptor modulator or postcellular signaling factor

Also Published As

Publication number Publication date
CN117279664A (zh) 2023-12-22
EP4319820A1 (en) 2024-02-14
AU2022253902A9 (en) 2023-11-16
WO2022217022A1 (en) 2022-10-13
CA3215049A1 (en) 2022-10-13
TW202304524A (zh) 2023-02-01
AU2022253902A1 (en) 2023-11-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11419945B2 (en) Antigen binding proteins
CA2833820C (en) Bcma (cd269/tnfrsf17) -binding proteins
US11834498B2 (en) Biparatopic FR-alpha antibodies and immunoconjugates
JP2023552290A (ja) Ｇｐｃ３結合剤、そのコンジュゲートおよびその使用方法
JP2024516631A (ja) 抗ｃｄ７０抗体、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
WO2022082068A1 (en) Anti-msln binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
JP2024518709A (ja) Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
JP2023546293A (ja) 抗ｃｓｐｇ４結合剤、そのコンジュゲートおよびその使用方法
WO2023092099A1 (en) Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
NZ616433B2 (en) Bcma (cd269/tnfrsf17) -binding proteins

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20231211

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20231211