CN108055842B

CN108055842B - 亚磺酰基苯基或磺亚胺酰基苯基苯并氮杂䓬

Info

Publication number: CN108055842B
Application number: CN201680053672.6A
Authority: CN
Inventors: S·霍夫斯; 王利莎; 贠红英; 张卫星; 朱伟
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2015-09-17
Filing date: 2016-09-14
Publication date: 2021-06-29
Anticipated expiration: 2036-09-14
Also published as: EP3350168A1; JP2018530539A; EP3350168B1; CN108055842A; US20180194735A1; JP6893501B2; WO2017046112A1; US10428027B2

Abstract

本发明涉及新颖的亚磺酰基苯基或磺亚胺酰基苯基苯并氮杂

化合物及其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式，其中X和R¹至R⁶如说明书和权利要求书中所定义。这些化合物为TLR激动剂，且因此可用作治疗疾病的药物，所述疾病诸如癌症、自身免疫性疾病、炎症、败血症、变态反应、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。

Description

亚磺酰基苯基或磺亚胺酰基苯基苯并氮杂䓬

技术领域

本发明涉及具有药学活性的新颖亚磺酰基苯基(sulfinylphenyl)或磺亚胺酰基苯基(sulfonimidoylphenyl)苯并氮杂

化合物、其制备、包含它们的药物组合物及其作为药物的潜在用途。

具体地，本发明涉及化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式

其中R¹至R⁶和X如下文所述。

所述化合物为TLR激动剂。更具体地，所述化合物为TLR8激动剂，并且可用于治疗和预防(例如接种)癌症、自身免疫性疾病、炎症、败血症、变态反应、哮喘、移植排斥反应、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。

背景技术

Toll样受体(TLR)是一个跨越跨膜受体家族，其不但在免疫系统的细胞如树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、T细胞、B细胞、NK细胞和肥大细胞上表达，而且在多种非免疫细胞诸如内皮细胞、上皮细胞和甚至肿瘤细胞上表达(Kawai et al.,Immunity,2011,34,637-650,Kawai et al.,Nat.Immunol.,2010,11,373-384)。识别细菌和真菌组分的TLR在细胞表面(即TLR1、2、4、5和6)上表达，而识别病毒或微生物核酸的其它TLR如TLR3、7、8和9则定位于内溶酶体/吞噬体隔室(Henessy et al.Nat.Rev.Drug Discovery 2010,9,293-307)，并且发现主要由髓系的细胞表达。TLR连接导致具有特定活化顺序的NF-κB和IRF依赖性途径的活化，和对特异性TLR和细胞类型的应答。虽然TLR7主要在所有树突细胞亚型(DC并且在pDC即浆细胞样DC中高度表达)中表达，并且可在经IFNα刺激后在B细胞中诱导(Bekeredjian-Ding et al.J.Immunology 2005,174:4043-4050)，TLR8表达仅限于单核细胞、巨噬细胞和骨髓DC。通过MyD88的TLR8信号传导可被细菌单链RNA、小分子激动剂和最近发现的微RNA活化(Chen et al.RNA 2013,19:737-739)。TLR8的活化导致产生各种促炎细胞因子诸如IL-6、IL-12和TNF-α，以及增强共刺激分子诸如CD80、CD86和趋化因子受体的表达(Cros et al.Immunity 2010,33:375-386)。此外，TLR8活化可在原代人单核细胞中诱导I型干扰素(IFNβ)(Pang et al.BMC Immunology 2011,12:55)。

已经在许多专利(即WO1992015582、WO2007024612、WO2009111337、WO2010093436、WO2011017611、WO2011068233、WO2011139348、WO2012066336、WO2012167081、WO2013033345、WO2013166110和US2013202629)中鉴定了用于TLR7和TLR8受体的小分子激动剂以及修饰用作疫苗佐剂或缀合物的类似物。主要针对TLR7激动剂已经获得临床经验，但只有很少的临床研究集中在使用高度特异性的TLR8激动剂。迄今为止，唯一的FDA(美国食品和药物管理局)批准的小分子药物是TLR7激动剂咪喹莫特(imiquimod)(ALDARA^TM)，其作为治疗生殖器疣、浅表基底细胞癌和光化性角化病的外用剂。早期的TLR7激动剂如雷美孕酮(resiquimod)的系统应用已被放弃，因为经治疗水平的整体趋化因子刺激观察到不能容忍的心脏毒性(Holldack,Drug Discovery Today,2013,1-4)。关于TLR8激动剂的知识是后进的并且主要限于早期混合的TLR7/8激动剂如雷西莫特(resiquimod)的数据。然而，对于雷西莫特激动剂，TLR7的刺激能力与TLR8的活化相比是优越的，因此，雷西莫特的大部分作用主要受TLR7活性的影响。最近，VentiRX Pharmaceuticals已经描述了TLR8特异性化合物如VTX-2337(即WO 2007024612)，其首次分析TLR8的特异性作用，而不会同时活化TLR7。目前仍然需要小分子TLR8激动剂，特别是具有改善效力或选择性的那些。

本发明涉及相对于该类型TLR8激动剂具有改善的细胞效力的苯并氮杂

其用于治疗癌症，优选实体瘤和淋巴瘤，以及用于其它用途，包括治疗某些皮肤病症或疾病，诸如特应性皮炎，治疗感染性疾病，优选病毒性疾病，以及用于配制用于癌症疗法的疫苗中的佐剂或通过在治疗自身免疫性疾病中通过连续刺激使受体脱敏。

值得注意的是，与已知TLR8激动剂诸如VTX-2337相比，这些新化合物在TLR8具有改善的细胞效能。此外，这些化合物对TLR8是高度特异性的，而对TLR7仅具有低或甚至没有活性。与组合的TLR7/8激动剂相比，由于TLR8的表达模式更受限制，导致全身施用较少的副作用，因此预期它们具有有利的性质。

发明内容

本发明涉及亚磺酰基苯基或磺亚胺酰基苯基苯并氮杂

-4-甲酰胺或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式

其中

X为C-R⁷或N；

R¹为C_3-7-烷基或C_3-7-环烷基，

R²选自C_3-7-烷基、羟基-C_1-7-烷基、C_3-7-炔基(alkinyl)、氨基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基、卤素-C_1-7-烷基和C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基；

R³和R⁴中的一个为

且R³和R⁴中另一个选自氢、C_1-7-烷基和卤素；

R⁵、R⁶和R⁷各自独立选自氢、C_1-7-烷基和卤素；

R⁸为C_1-7-烷基；且

R⁹不存在或为＝N-R¹⁰，其中R¹⁰选自氢、C_1-7-烷基、卤素-C_1-7-烷基、羟基-C_1-7-烷基和羟基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基。

本发明还涉及制备式I化合物的方法。

本发明还涉及药物组合物，其包含如上所述的式I化合物和药学上可接受的载体和/或佐剂。

本发明的另一方面是式I化合物作为治疗活性物质用于治疗可由TLR激动剂特别是TLR8激动剂介导的疾病的用途。因此，本发明涉及用于治疗可由TLR激动剂介导的疾病诸如癌症和自身免疫性疾病或感染性疾病的方法。

具体实施方式

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。此外，阐述了以下定义以说明和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。

本申请中使用的命名法基于IUPAC系统命名法，除非另有说明。

术语“本发明化合物”和“本发明的化合物”是指式I化合物及其溶剂化物或其盐(例如，药学上可接受的盐)。

术语“取代基”表示替代母体分子上的氢原子的一个原子或一组原子。

术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘，其中氟、氯和溴是特别感兴趣的。更具体地，卤素是指氟。

术语“烷基”，单独或与其它基团组合，是指具有1至20个碳原子，具体为1至16个碳原子，更具体为1至10碳原子的支链或直链单价饱和脂族烃基。更具体地，术语“烷基”还包括如下所述的低级烷基。

术语“低级烷基”或“C_1-7-烷基”，单独或组合，表示具有1至7个碳原子的直链或支链烷基，具体为具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，且更具体为具有1至4个碳原子的直链或支链烷基。直链和支链C_1-7烷基的实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、异构戊基、异构己基和异构庚基，具体为甲基和乙基。术语“C_2-7-烷基”是指如上所定义的具有2至7个碳原子的直链或支链烷基，但不包括甲基或亚甲基。

术语“低级烯基”或“C_2-7-烯基”表示包含烯键和2至7个，优选3至6个，特别优选3至4个碳原子的直链或支链烃残基。烯基的实例为乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基和异丁烯基，具体为2-丙烯基(烯丙基)。

术语“低级炔基”或“C_2-7-炔基”表示包含三键和2至7个碳原子的直链或支链烃基。低级炔基的实例为乙炔基和1-丙炔基(-C≡C-CH₂)。

术语“低级烷氧基”或“C_1-7-烷氧基”是指基团R'-O-，其中R'为低级烷基且术语“低级烷基”具有先前给出的含义。低级烷氧基的实例为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基，具体为甲氧基。

术语“低级烷氧基烷基”或“C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷基，其中低级烷基的至少一个氢原子被低级烷氧基替代。其中特别感兴趣的低级烷氧基烷基为甲氧基甲基、2-甲氧基乙基和2-乙氧基乙基，其中2-乙氧基乙基最为特别感兴趣。

术语羟基(hydroxy或hydroxyl)是指基团-OH。

术语“低级羟基烷基”或“羟基-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷基，其中低级烷基的至少一个氢原子被羟基替代。其中特别令人感兴趣的低级羟烷基为羟基甲基或羟基乙基。

术语“低级羟基烷氧基烷基”或“羟基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷氧基烷基，其中低级烷氧基的至少一个氢原子被羟基替代。其中特别感兴趣的低级羟基烷氧基烷基为2-羟基乙氧基乙基。

术语“低级卤代烷基”或“卤素-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷基，其中低级烷基的至少一个氢原子被卤素原子，特别是氟或氯，最特别是氟替代。其中特别感兴趣的低级卤代烷基为三氟甲基、二氟甲基、三氟乙基、2,2-二氟乙基、氟甲基和氯甲基，其中更感兴趣的是三氟甲基。

“氨基”是指基团-NH₂。术语“C_1-7-烷基氨基”是指-NHR基团，其中R为低级烷基且术语“低级烷基”具有先前给出的含义。术语“二-C_1-7-烷基氨基”是指基团-NRR'，其中R和R'是如上定义的低级烷基。

术语“低级氨基烷基”或“氨基-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷基，其中低级烷基的至少一个氢原子被氨基替代。其中特别感兴趣的低级氨基烷基为氨基甲基或2-氨基乙基。

术语“低级氨基烷氧基烷基”或“氨基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷氧基烷基，其中低级烷氧基的至少一个氢原子被氨基替代。其中特别感兴趣的低级氨基烷氧基烷基为2-氨基乙氧基甲基或2-氨基乙氧基乙基。

术语“低级氨基烷氧基烷氧基烷基”或“氨基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基”是指如上定义的低级烷氧基烷基，其中低级烷氧基的至少一个氢原子被氨基-C_1-7-烷氧基替代。其中特别感兴趣的低级氨基烷氧基烷氧基烷基是2-氨基乙氧基乙氧基甲基或2-氨基乙氧基乙氧基乙基。

术语“药学上可接受的”表示可用于制备药物组合物的物质的属性，所述药物组合物通常是安全的、无毒的，既不是生物学不期望的也不是其它方面不期望的，并且对于兽医以及人类药物使用是可接受的。

式I化合物可形成药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指保留游离碱或游离酸的生物学有效性和性质的那些盐，其不是生物学或其它方面不期望的。药学上可接受的盐包括酸和碱加成盐。盐是例如式I化合物与生理上相容的无机酸或与有机酸的酸加成盐：无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、硫酸、亚硫酸或磷酸；有机酸诸如甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸(oxylic acid)、乳酸、三氟乙酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、丙二酸、酒石酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸(embonic acid)、琥珀酸或水杨酸。此外，药学上可接受的盐可通过向游离酸中添加无机碱或有机碱来制备。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、锌盐、铜盐、锰盐和铝盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺，其包括天然存在的经取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、哌嗪、N-乙基哌啶、哌啶和多胺树脂。式I化合物也可以两性离子的形式存在。特别感兴趣的式I化合物的药学上可接受的盐是钠盐或与叔胺的盐。

式I化合物也可被溶剂化，例如水合。溶剂化可在制备过程中进行，或者可例如作为最初无水式I化合物的吸湿性质的结果(水合)发生。术语“药学上可接受的盐”还包括生理学上可接受的溶剂合物。

术语“激动剂”表示增强另一种化合物或受体位点的活性的化合物，如在Goodmanand Gilman's“The Pharmacological Basis of Therapeutics,7th ed.”in page 35,Macmillan Publ.Company,Canada,1985中所定义。“完全激动剂”进行完全的响应，而“部分激动剂”即使占据全部受体群体也不会进行完全活化。“反向激动剂”产生与激动剂相反的作用，但与相同的受体结合位点结合。

术语“半数最大有效浓度”(EC₅₀)表示获得体内特定效果的最大值的50％所需的具体化合物的血浆浓度。

术语“治疗有效量”表示当向受试者施用时，(i)治疗或预防具体疾病、病状或病症，(ii)减轻、改善或消除具体疾病、病状或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的具体疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。治疗有效量将取决于化合物、所治疗的疾病状态、所治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、施用的途径和形式、主治医师或兽医的判断及其它因素而变化。

详言之，本发明涉及化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式

其中

X为CR⁷或N；

R¹为C_3-7-烷基或C_3-7-环烷基，

R²选自C_3-7-烷基、羟基-C_1-7-烷基、C_3-7-炔基、氨基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基、卤素-C_1-7-烷基和C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基；

R³和R⁴中的一个为

且R³和R⁴中另一个选自氢、C_1-7-烷基和卤素；

R⁵、R⁶和R⁷各自独立选自氢、C_1-7-烷基和卤素；

R⁸为C_1-7-烷基；

在一个方面，本发明涉及式I化合物，其中R¹为C_3-7-烷基。

具体地，本发明涉及式I化合物，其中R¹为丙基。

在另一方面，本发明涉及式I化合物，其中R²为C_3-7-烷基，更具体为丙基。

因此，在一个方面，本发明涉及下式化合物或其药学上可接受的盐

其中

X为CR⁷或N；

R¹为C_3-7-烷基或C_3-7-环烷基；

R²为C_3-7-烷基；

R³和R⁴中的一个为

且R³和R⁴中另一个选自氢、C_1-7-烷基和卤素；

R⁵、R⁶和R⁷各自独立选自氢、C_1-7-烷基和卤素；

R⁸为C_1-7-烷基；

具体而言，本发明涉及式I化合物，其中R¹和R²为C_3-7-烷基，具体为丙基，更具体为正丙基。

在另一方面，本发明涉及式I化合物，其中R³选自氢、C_1-7-烷基和氢，以及R⁴为

其中R⁸为C_1-7-烷基和R⁹不存在或为＝N-R¹⁰，其中R¹⁰选自氢、C_1-7-烷基、卤素-C_1-7-烷基、羟基-C_1-7-烷基和羟基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基。具体而言，在此类化合物中，R³为氢。

在另一方面，本发明涉及式I化合物，其中R⁴选自氢、C_1-7-烷基和氢，以及R³为

其中R⁸为C_1-7-烷基和R⁹不存在或为＝N-R¹⁰，其中R¹⁰选自氢、C_1-7-烷基、卤素-C_1-7-烷基、羟基-C_1-7-烷基和羟基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基。更具体而言，在此类化合物中，R⁴为氢。

此外，本发明涉及式I化合物，其中R⁵和R⁶为氢。

在一个具体方面，R⁷为氢。

在一个方面，本发明涉及式I化合物，其中R³或R⁴中的一个为

其中R⁸为C_1-7-烷基。

在另一方面，本发明涉及式I化合物，其中R³和R⁴中的一个为

其中R⁸为C_1-7-烷基；且R¹⁰选自氢、C_1-7-烷基、卤素-C_1-7-烷基、羟基-C_1-7-烷基和羟基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基。

在一个具体方面，本发明涉及式I化合物，其中R¹⁰为氢或羟基-C_1-7-烷氧基-C_1-7-烷基。

在另一方面，本发明的式I化合物为其中R⁸为甲基或乙基的化合物。

在一个方面，本发明涉及如上定义的式I化合物为其中X为C的化合物，即式I-a化合物：

其中R¹至R⁷如上定义。

在另一方面，式I化合物为其中X为N的化合物，即式I-b化合物：

其中R¹至R⁶如上定义。

本发明的具体式I化合物如下：

2-氨基-8-(4-甲基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-[4-(甲基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-[3-[N-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-S-甲基-磺亚胺酰基]苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-(5-甲基亚磺酰基-3-吡啶基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-(3-甲基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-[5-(甲基磺亚胺酰基)-3-吡啶基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-[3-(甲基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-(4-乙基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-[4-(乙基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-(3-乙基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-[3-(乙基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

及其药学上可接受的盐。

更具体而言，本发明涉及以下式I化合物：

2-氨基-8-(5-甲基亚磺酰基-3-吡啶基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-(3-甲基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

2-氨基-8-(3-乙基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺，

及其药学上可接受的盐。

应当理解，本发明中通式I的化合物可在官能团处衍生化，以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。能够在体内产生通式I的母体化合物的生理学上可接受的且代谢不稳定的衍生物也在本发明的范围内。

本发明的另一方面为制备如上所定义的式I化合物的方法，所述方法包括

使式II化合物与双(频哪醇合)二硼在碱性条件下在Pd催化剂存在下反应，

所述式II化合物为

其中R¹和R²如上定义且PG为保护基团，

以获得式III的硼酸酯

其中R¹和R²如上定义且PG为保护基团，

并使化合物III在碱性条件下在Pd催化剂存在下与下式的溴化物偶联

其中R³至R⁶和X如上定义，

并在酸性条件下除去保护基团PG以获得式I化合物

其中R¹至R⁶和X如上定义，

并且，如果需要，使所获得的化合物转化成药学上可接受的盐。

具体地，合适的保护基PG为选自Boc(叔丁氧基羰基)、苄基(Bz)和苄基氧基羰基(Cbz)的氨基保护基。具体地，所述保护基团为Boc。

“在酸性条件下除去保护基团PG”意指用在合适溶剂中的酸例如在溶剂诸如二氯甲烷(DCM)中的三氟乙酸(TFA)处理经保护的化合物。

在碱性条件下意指存在碱，具体为选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钾和氢氧化钠的碱。典型的溶剂选自1,4-二噁烷、甲苯、THF、二甲基甲酰胺以及水和有机溶剂的混合物。

术语“Pd催化剂”是指适合用于Suzuki偶联的任何Pd(0)催化剂。适用于Suzuki偶联的Pd催化剂的实例选自Pd(PPh₃)₄、PdCl₂(PPh₃)₂和Pd(dppf)₂Cl₂。

本发明还涉及可根据上述方法获得的如上定义的式I化合物。

本发明的化合物可通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物及其起始物质的合适方法在下文方案和实施例中提供。除非另有说明，否则所有取代基，具体为R¹至R⁶和Y如上所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学中普通技术人员公知的含义。

用于制备式I化合物的通用合成路线如下文方案1所示。

方案1

式I化合物可根据方案1制备。芳基溴化物II的钯催化转化得到芳基硼酸酯III。硼酸频哪醇酯III与选定的芳基溴化物或杂芳基溴化物IVx之间的Suzuki偶联得到化合物Vx。在酸性条件下化合物Vx的Boc脱保护得到式Ix化合物。

在氮气气氛下且在升高的温度，可通过使溴化物II与双(频哪醇合)二硼和Pd(dppf)₂Cl₂反应制备硼酸频哪醇酯III。反应通常在溶剂如1,4-二噁烷中运行数小时，色谱纯化后得到化合物III。

在氮气气氛下，使用典型的Suzuki偶联条件(催化的Pd(dppf)₂Cl₂、碳酸钠和升高的温度)，将硼酸频哪醇酯III与另外选择的芳基溴化物或杂芳基溴化物IVx进一步反应数小时。色谱纯化后获得化合物Vx。

式I化合物可通过用TFA/二氯甲烷脱除化合物Vx的Boc保护并随后通过制备型HPLC纯化来制备。

如果起始物质之一含有一个或多个不稳定的或在一个或多个反应步骤的反应条件下具有反应性的官能团，则可在本领域公知的关键步骤应用方法之前引入适当的保护基团(PG)(如例如T.W.Greene et al.,Protective Groups in Organic Chemistry,JohnWiley and Sons Inc.New York 1999,第3版中所述)。可使用本领域已知的标准方法在合成的后期阶段除去此类保护基团。

如果一种或多种式I化合物含有手性中心，则可获得呈非对映异构体或对映异构体的混合物形式的式I化合物，其可通过本领域公知的方法分离，例如(手性)HPLC或结晶。外消旋化合物可例如通过结晶经非对映异构体盐或通过使用手性吸附剂或手性洗脱剂的特定色谱方法分离对映体，分离成其对映体。

如前所述，本发明的式I化合物可用作治疗由TLR激动剂介导的疾病的药物，具体为用于治疗由TLR8激动剂介导的疾病。

本发明中定义的化合物是体外细胞测定中TLR8受体的激动剂。因此，预期本发明化合物是治疗可能受益于经TLR8激动剂活化免疫系统的疾病或医学病症的潜在有用的药剂。它们可用于治疗或预防疾病，诸如癌症、自身免疫性疾病、炎症、败血症、变态反应、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。

更详细地，本发明的式I化合物可用于肿瘤学，即它们可用于治疗常见癌症，包括膀胱癌、头颈癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫颈癌、肝癌、胰腺癌、肠和结肠癌、胃癌、甲状腺癌、黑素瘤、皮肤和脑肿瘤以及影响骨髓的恶性肿瘤诸如白血病和影响淋巴组织增生系统的恶性肿瘤，诸如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；包括预防(例如疫苗接种)和治疗转移性癌症和肿瘤复发以及副肿瘤综合征。

本发明的式I化合物也可用于治疗自身免疫性疾病。“自身免疫性疾病”是由个体自身的组织或器官引起的且针对个体自身的组织或器官的疾病或病症或其共分离或表现或由此导致的病状。“自身免疫性疾病”可为器官特异性疾病(即免疫应答特异性针对器官系统，诸如内分泌系统、造血系统、皮肤、心肺系统、胃肠和肝系统、肾系统、甲状腺、耳朵、神经肌肉系统、中枢神经系统等)或可影响多器官系统的系统性疾病(例如，系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、多发性肌炎等)。在一个具体方面，所述自身免疫性疾病与皮肤、肌肉组织和/或结缔组织有关。

具体的自身免疫性疾病包括自身免疫性风湿病(诸如，例如，类风湿性关节炎、干燥综合征、硬皮病、狼疮诸如SLE和狼疮性肾炎、多发性肌炎/皮肌炎、冷球蛋白血症、抗磷脂抗体综合征和牛皮癣关节炎)、自身免疫性胃肠道和肝脏病症(诸如，例如，炎性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩病)、自身免疫性胃炎和恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎和乳糜泻)、血管炎(诸如，例如，ANCA阴性血管炎和ANCA相关性血管炎，包括变应性肉芽肿性血管炎、韦格纳肉芽肿病和显微镜下血管炎)，自身免疫性神经病症(诸如，例如，多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛综合征、重症肌无力、神经性眼炎、帕金森病、阿尔茨海默病和自身免疫性多发性神经病)、肾部病症(诸如，例如，肾小球性肾炎、古德帕斯彻综合征、伯格病)、自身免疫性皮肤病(诸如，例如，牛皮癣、风疹(urticaria)、荨麻疹(hives)、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮和皮肤性红斑狼疮)、血液系统病症(诸如，例如，血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、输血后紫癜和自身免疫性溶血性贫血)、动脉粥样硬化、葡萄膜炎、自身免疫性听力疾病(诸如，例如，内耳疾病和听力丧失)、白塞病、雷诺综合征、器官移植和自身免疫性内分泌病症(诸如，例如，糖尿病相关的自身免疫性疾病诸如胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、艾迪生病和自身免疫性甲状腺疾病(例如，格雷夫斯病和甲状腺炎))、过敏性疾病和应答、食物过敏、药物过敏、昆虫过敏、罕见的过敏性疾病诸如肥大细胞增多症、过敏反应、湿疹(包括过敏性或特应性湿疹)、哮喘诸如支气管哮喘和自身免疫性哮喘、涉及骨髓细胞和T细胞的浸润及慢性炎性应答的病症。

本发明的式I化合物也可用于治疗感染性疾病。因此，它们可用于治疗病毒性疾病，具体用于由选自以下的病毒感染引起的疾病：乳头瘤病毒诸如人乳头瘤病毒(HPV)和引起生殖器疣、常见疣和足底疣的那些病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、传染性软疣病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、登革热病毒、天花病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、巨细胞病毒(CMV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、鼻病毒、肠道病毒、腺病毒、冠状病毒(例如SARS)、流感病毒、腮腺炎病毒和副流感病毒。

它们也可用于治疗细菌性疾病，具体用于由选自分枝杆菌的细菌感染引起的疾病：诸如结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)、鸟分枝杆菌(mycobacteriumavium)和麻风分枝杆菌(mycobacterium leprae)。本发明的式I化合物还可用于治疗其它感染性疾病，诸如衣原体、真菌性疾病，具体为选自念珠菌病(candidiasis)、曲霉菌病(aspergillosis)和隐球菌性脑膜炎(cryptococcal meningitis)的真菌性疾病，以及寄生虫病诸如卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis carnii pneumonia)、隐孢子虫病(cryptosporidiosis)、组织胞浆菌病(histoplasmosis)、弓形体病(toxoplasmosis)、锥体虫感染(trypanosome infection)和利什曼病(leishmaniasis)。

因此，表述“由TLR激动剂介导的疾病”意指可通过用TLR8激动剂活化免疫系统治疗的疾病，诸如癌症、自身免疫性疾病、炎症、败血症、变态反应、哮喘、移植物排斥、移植物抗体宿主病、免疫缺陷和传染病。具体地，表述“由TLR激动剂介导的疾病”意指癌症、自身免疫性疾病、炎症、败血症、变态反应、哮喘、移植排斥反应、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病。

在一个具体方面，表述“由TLR激动剂介导的”涉及选自膀胱癌、头颈癌、肝癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫颈癌、胰腺癌、肠和结肠癌、胃癌、甲状腺癌、黑素瘤、皮肤和脑肿瘤以及影响骨髓的恶性肿瘤诸如白血病和影响淋巴组织增生系统的恶性肿瘤诸如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；包括预防(例如疫苗接种)和治疗转移性癌症和肿瘤复发以及副肿瘤综合征。

本发明还涉及药物组合物，其包含如上定义的式I化合物和药学上可接受的载体和/或佐剂。更具体地，本发明涉及可用于治疗由TLR激动剂介导的疾病的药物组合物。

此外，本发明涉及如上定义的式I化合物，其用作治疗活性物质，具体用作治疗由TLR激动剂介导的疾病的治疗活性物质。具体地，本发明涉及式I化合物，其用于治疗癌症或自身免疫性疾病或感染性疾病，所述感染性疾病选自病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫病。

在另一方面，本发明涉及治疗由TLR激动剂介导的疾病的方法，所述方法包括向人或动物施用治疗活性量的式I化合物。具体地，本发明涉及治疗癌症和感染性疾病的方法，所述感染性疾病选自病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫病。

本发明还涉及如上定义的式I化合物用于治疗由TLR激动剂介导的疾病的用途。

此外，本发明涉及如上定义的式I化合物在制备用于治疗由TLR激动剂介导的疾病的药物中的用途。具体地，本发明涉及如上定义的式I化合物在制备用于治疗癌症或自身免疫性疾病或感染性疾病的药物中的用途，所述感染性疾病选自病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病和寄生虫病。

在另一方面，式I化合物可与用于治疗癌症的方案中的一种或多种另外的治疗方式组合。

除了施用本发明化合物之外，组合治疗包括辅助使用一种或多种有效治疗癌症的方式。此类方式包括但不限于化学治疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、细胞因子、激素、抗体、多核苷酸、放射和光动力治疗剂。在一个具体方面，可使用组合疗法来预防癌症的复发、抑制转移或抑制癌症的生长和/或扩散或转移。本文使用的“与…组合”意指式I化合物作为治疗方案的一部分施用，所述治疗方案包含一种或多种如上所述的另外的治疗方式。因此，本发明还涉及治疗癌症的方法，所述方法包括向人或动物施用治疗活性量的式I化合物与一种或多种其它药学活性化合物的组合。

式I化合物可单独或与一种或多种其它治疗方式组合用于治疗自身免疫性疾病。

除了施用本发明化合物外，组合疗法还包括辅助使用一种或多种有助于预防或治疗自身免疫性疾病的方式。此类方式包括但不限于化学治疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、细胞因子、激素、抗体、多核苷酸、放射和光动力治疗剂。本文使用的“与…组合”意指式I化合物作为治疗方案的一部分施用，所述治疗方案包含一种或多种如上所述的另外的治疗方式。因此，本发明还涉及治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向人或动物施用治疗活性量的式I化合物与一种或多种其它药学活性化合物的组合。

在另一方面，式I化合物可单独或与一种或多种其它治疗方式组合用于治疗感染性疾病。

除了施用本发明化合物外，组合疗法还包括辅助使用一种或多种有助于预防或治疗感染性疾病的方式。此类方式包括但不限于抗病毒剂、抗生素和抗真菌剂。本文使用的“与…组合”意指式I化合物作为治疗方案的一部分施用，所述治疗方案包含一种或多种如上所述的另外的治疗方式。因此，本发明还涉及治疗感染性疾病的方法，所述方法包括向人或动物施用治疗活性量的式I化合物与一种或多种其它药学活性化合物的组合。

药理学测试

进行以下测试以确定式I化合物的活性：

对于TLR8和TLR7活性测试，分别使用HEK-Blue人TLR8或TLR7细胞(Invivogen,SanDiego,CA,USA)。这些细胞被设计用于通过监测NF-κB的活化来研究人TLR8或TLR7的刺激。将SEAP(分泌性胚胎碱性磷酸酶)报告蛋白(reporter)基因置于与五个NF-κB和AP-1-结合位点融合的IFN-b最小启动子的控制下。因此，经人TLR8或TLR7刺激20小时后，报告蛋白表达受NF-κB启动子的调节。使用Quanti Blue试剂盒(Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长确定细胞培养物上清液SEAP报告蛋白活性，其中检测培养基在碱性磷酸酶存在下变成紫色/蓝色。

在上述测定中，式I化合物对人TLR8的活性范围(EC₅₀值)为0.01nM至0.1μM，更具体为0.01nM至0.03μM，而上述测定中对人类TLR7的活性(EC₅₀值)大于1μM，在2μM至>100μM的范围内，意味着化合物对人TLR8显示出高选择性。

例如，在上述测定中，以下化合物显示以下EC₅₀值：

药物组合物

式I化合物及其药学上可接受的盐可用作药物，例如，以用于肠内、肠胃外或局部施用的药物制剂的形式。式I化合物及其药学上可接受的盐可通过全身(例如，肠胃外)或局部(例如，局部或病灶内注射)施用来施用。在一些情况下，所述药物制剂是局部、肠胃外、口服、经阴道、子宫内、鼻内或通过吸入施用。如本文所述，某些组织可能是TLR激动剂的优选靶标。因此，向淋巴结、脾、骨髓、血液以及暴露于病毒的组织施用TLR激动剂是优选的施用位点。

在一个方面，肠胃外施用包含式I化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。肠胃外施用途径包括但不限于经皮、经粘膜、经鼻咽、经肺和直接注射。通过注射进行肠胃外施用可通过任何肠胃外注射途径，包括但不限于静脉内(IV)，包括推注和输注(例如，快速或慢速)、腹膜内(IP)、肌内(IM)、皮下(SC)和皮内(ID)途径。经皮和经粘膜施用可通过例如内含载体(例如，二甲基亚砜DMSO)、通过施加电脉冲(例如，离子电渗疗法)或其组合来实现。可使用各种可用于经皮施用的装置。适用于胃肠外施用的式I化合物的制剂通常配制在USP水或注射用水中，并且还可包含pH缓冲剂、盐、填充剂，防腐剂和其它药学上可接受的赋形剂。

通过施用能够使TLR激动剂穿透皮肤并进入血流的乳膏剂、洗剂，凝胶剂等来实现经皮施用。适用于经皮施用的组合物包括但不限于直接施用于皮肤或掺入保护性载体诸如透皮装置(所谓的“贴剂”)的药学上可接受的混悬液、油、乳膏剂和软膏剂。合适的乳膏剂、软膏剂等的实例可在例如Physician's Desk Reference中找到。经皮传输(transmission)也可通过离子电渗疗法来实现，例如使用市售的贴片，其经无破裂的皮肤连续递送其产品数天或更长时间。使用该方法允许药物组合物以相当大的浓度进行控制传输，允许输注组合药物并允许同时使用吸收促进剂。通过经皮和经粘膜途径施用可为连续的或脉冲式的。

肺部施用是通过吸入实现的，包括鼻内、经支气管和经肺泡途径等递送途径。提供了适于通过吸入施用的式I化合物的制剂，包括但不限于用于形成气溶胶的液体混悬液以及用于干粉吸入递送系统的粉末形式。适于通过吸入施用的装置包括但不限于雾化器、蒸发器、喷雾器和干粉吸入递送装置。递送到呼吸道粘膜的其它方法包括递送液体制剂，诸如通过滴鼻剂。通过吸入施用优选以离散剂量(例如经由计量的剂量吸入器)完成，但是可通过使用喷雾器来实现与输注相似的递送。

式I化合物及其药学上可接受的盐也可口服施用，例如以片剂、包衣片剂、糖锭剂(dragée)、硬和软明胶胶囊的形式给药。

药物制剂的制备可通过以下方式以本领域技术人员熟悉的方式进行：将所述式I化合物及其药学上可接受的盐任选与其它有治疗价值的物质组合引入到与合适的、无毒、惰性、治疗上相容的固体或液体载体材料以及(如果需要)常用药物佐剂一起形成的腹膜内施用形式中。

合适的载体材料不仅是无机载体材料，还包括有机载体材料。因此，例如，可使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐作为片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的载体材料。用于软明胶胶囊的合适的载体材料为，例如，植物油、蜡、脂肪和半固体和液体多元醇(然而，取决于活性成分的性质，在软明胶胶囊的情况下可能不需要载体)。用于制备溶液和糖浆的合适的载体材料为，例如，水、多元醇、蔗糖、转化糖等。用于注射溶液的合适的载体材料为，例如，水、醇、多元醇、甘油和植物油。用于栓剂的合适的载体材料为，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪和半液体或液体多元醇。用于局部制剂的合适载体材料为甘油酯、半合成和合成甘油酯、氢化油、液体蜡、液体石蜡、液体脂肪醇、固醇、聚乙二醇和纤维素衍生物。

考虑到常用的稳定剂、防腐剂、润湿和乳化剂、稠度改进剂、调味剂(flavour-improving agent)、用于改变渗透压的盐、缓冲物质、增溶剂、着色剂和掩蔽剂及抗氧化剂作为药物佐剂。

式I化合物的剂量可取决于待控制的疾病、患者的年龄和个体状况及施用方式在广泛的限度内变化，并且当然应符合每个具体病例的个体要求。对于成年患者，考虑到约1至1000mg，特别是约1至300mg的日剂量。取决于疾病的严重程度和精确的药物动力学特征，化合物可用一个或几个日剂量单位施用，例如以1至3个剂量单位施用。

药物制剂方便地含有约1-500mg，优选1-100mg式I化合物。

以下实施例C1至C3说明了本发明的典型组合物，但仅作为其代表。

实施例C1

可以常规方式制备含有以下成分的薄膜包衣片剂：

成分每片

芯(Kernel)：

薄膜包衣：

将活性成分过筛并与微晶纤维素混合，并将混合物用聚乙烯吡咯烷酮水溶液制粒。将颗粒与羟基乙酸淀粉钠和硬脂酸镁混合并压制，分别产生120mg或350mg的芯。用上述薄膜包衣的水溶液/混悬液对芯进行涂覆。

实施例C2

可以常规方式制备含有以下成分的胶囊：

将各组分过筛、混合并填充至2号胶囊中。

实施例C3

注射液具有以下组成：

将活性成分溶于聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。通过乙酸将pH调节至5.0。通过添加剩余量的水将体积调节至1.0ml。将溶液过滤，使用合适的过量(overage)填充到小瓶中并灭菌。

以下实施例用于更详细地说明本发明。然而，它们并不以任何方式限制其范围。

实施例

实施例中使用的缩写：

Boc₂O＝一缩二碳酸二叔丁酯，Boc＝氨基甲酸叔丁酯，CD₃OD＝氘代甲醇，d＝天，DIPEA＝N,N-二异丙基乙基胺，DCM＝二氯甲烷，DMAP：4-二甲基氨基吡啶，DMF-DMA：N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛，EA＝乙酸乙酯或EtOAc，Eaton试剂：7.7wt％五氧化二磷/甲磺酸溶液，m-CPBA：间氯过氧苯甲酸，EC₅₀＝半数最大有效浓度，EDCI＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，h或hr＝小时，HOBT＝N-羟基苯并三唑，HPLC＝高效液相色谱，HPLC-UV＝具有紫外检测器的高效液相色谱，Hz＝赫兹，mg＝毫克，MHz＝兆赫，min＝分钟，mL＝毫升，mm＝毫米，mM＝mmol/L，mmol＝毫摩尔，MS＝质谱，MW＝分子量，NMR＝核磁共振，PE＝石油醚，prep-HPLC＝制备型高效液相色谱，rt＝室温，sat.＝饱和的，TEA＝三乙胺，TFA＝三氟乙酸，THF＝四氢呋喃，μM＝微摩尔浓度，μm＝微米，UV＝紫外检测器，OD＝光密度，Pd(dppf)₂Cl₂＝[1,1′-双(二苯基膦基)-二茂铁]二氯化钯(II),TLR8＝toll样受体8，TLR7＝toll样受体7，NF-κB＝核因子活化B细胞κ轻链增强子，SEAP＝分泌性胚胎碱性磷酸酶，IFN-β＝干扰素-β。

实施例A–关键中间体G的制备

N-[8-溴-4-(二丙基氨甲酰基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯

详细的合成路线在方案2中提供。

方案2

a)化合物A的制备：

向4-溴-1-甲基-2-硝基-苯(100g,0.46mol)于DMF(1L)中的溶液中相继添加吡咯烷(39.6g,0.59mol)和DMF-DMA(70g,0.59mol)。将反应混合物在100℃搅拌4小时后，减压除去溶剂，得到1-[(E)-2-(4-溴-2-硝基-苯基)乙烯基]吡咯烷(化合物A,137g,粗制的)，其为棕色油状物，直接用于下一步骤。MS:m/z＝297(M+H)⁺。

b)化合物B的制备：

在10℃，向1-[(E)-2-(4-溴-2-硝基-苯基)乙烯基]吡咯烷(化合物A,137g,0.47mol,粗制的)于THF(1.7L)和水(2.0L)的混合溶剂中的溶液中按份添加NaIO₄(298g,1.40mol)。将反应混合物在25℃搅拌20小时后，将其过滤并用EA(3L)萃取.将分离的有机层用盐水洗涤，以无水Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。通过使用5％乙酸乙酯/PE的硅胶柱色谱纯化粗产物，得到4-溴-2-硝基-苯甲醛(化合物B,66g,61％)，其为黄色固体。MS:m/z＝230(M+H)⁺。

c)化合物C的制备：

在25℃，向4-溴-2-硝基-苯甲醛(化合物B,65g,0.28mol)于甲苯(700mL)中的溶液中添加3-氰基-2-(三苯基亚正膦基)丙酸乙酯(乙基3-cyano-2-(triphenylphosphoranylidene)propionate)(120g,0.31mol)。将反应混合物在25℃搅拌18小时后，浓缩反应混合物。然后添加甲醇(500mL)。将溶液在冰箱中保存4小时后，形成析出物并通过过滤收集，得到2-[1-(4-溴-2-硝基-苯基)-(E)-亚甲基]-3-氰基-丙酸乙酯(化合物C,75g,78％)，其为白色固体。MS:m/z＝298(M+H)⁺。

d)化合物D的制备：

在80℃，向经搅拌的2-[1-(4-溴-2-硝基-苯基)-(E)-亚甲基]-3-氰基-丙酸乙酯(化合物C,75g,0.22mol)于AcOH(1.1L)中的溶液中添加Fe(74g,1.33mol)。将反应混合物在80℃加热3小时后，经硅藻土垫滤出反应混合物。用乙酸洗涤硅藻土垫。真空浓缩合并的滤液且残余物用饱和NaHCO₃(300mL)碱化。然后添加乙酸乙酯(1L)并搅拌该混合物10分钟。进一步经硅藻土垫滤出未溶解的物质。用乙酸乙酯(800mL)洗涤硅藻土垫。分离各相后，收集有机层并用水洗涤，以Na₂SO₄干燥并真空浓缩，得到粗产物。进一步用乙醚(100mL)淋洗粗产物，得到2-氨基-8-溴-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酸乙酯(化合物D,50g,73％)，其为浅黄色固体。MS:m/z＝309(M+H)⁺。

e)化合物E的制备：

在0-5℃，向2-氨基-8-溴-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酸乙酯(化合物D,50g,0.16mol)和TEA(26.1g,0.26mol)于DCM(500mL)中的溶液中添加Boc₂O(56.6g,0.26mol)于DCM(100mL)中的溶液。将反应混合物在25℃搅拌42小时后，添加水(200mL)。分离有机相，用盐水洗涤，以Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物在EA和PE中浆化并过滤，得到8-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酸乙酯(化合物E,57g,86％)，其为黄色固体。MS:m/z＝409(M+H)⁺。

f)化合物F的制备：

向8-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酸乙酯(化合物E,10g,24.5mmol)于THF(60mL)中的溶液中添加于EtOH(18mL)和水(18mL)的混合溶剂中的LiOH(37mL,1M)。将反应混合物在25℃搅拌18小时。添加LiOH(10mL,1M)于EtOH(5mL)和水(5mL)的溶液，并将反应混合物在25℃再搅拌5小时。将反应混合物用10％柠檬酸酸化至pH＝5后，用EA(50mL×3)萃取水层。合并有机层，以无水Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到8-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酸(化合物F,9.6g,粗制的)，其为黄色固体。MS:m/z＝380(M+H)⁺。

g)化合物G的制备：

在10℃，向8-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酸(化合物F,9.6g,25.3mmol)于DCM(360mL)中的溶液中相继添加EDCI(12g,63.1mmol)、HOBT(4.1g,30.3mmol)、DIPEA(13g,101mmol)和DMAP(770mg,6.3mmol)。将反应混合物在25℃搅拌30分钟后，添加N-丙基丙-1-胺(3.8g,37.9mmol)。将反应混合物在25℃搅拌3小时。然后添加水并用DCM萃取混合物，以Na₂SO₄干燥并真空浓缩。通过硅胶色谱(PE:EA＝5:1)纯化残余物，得到N-[8-溴-4-(二丙基氨甲酰基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物G,8.6g,73％)，其为黄色固体。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δppm＝10.25-10.07(m,1H),7.44-7.24(m,3H),6.86-6.79(m,1H),3.28-3.14(m,4H),3.13-3.01(m,2H),1.62-1.45(m,4H),1.43(s,9H),1.00-0.62(m,6H)。MS:m/z＝464(M+H)⁺。

实施例1

2-氨基-8-(4-甲基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

根据方案1中所示的一般合成路线制备标题化合物。方案3提供了详细的合成路线。

方案3：

步骤1：化合物J的制备

在0℃，向1-溴-4-甲基硫基-苯(4.99g,24.6mmol)于DCM(75ml)中的溶液中添加间氯过氧苯甲酸(5.57g,25.8mmol)。反应混合物在20℃搅拌18小时后，将其用Na₂SO₃水溶液(30mL)和NaHCO₃水溶液(30mL)淬灭。分离有机层，用盐水洗涤，以无水干燥Na₂SO₄并真空浓缩得到残余物。通过研磨(EA:PE＝10mL,1:9)纯化残余物，得到期望产物1-溴-4-(甲基亚磺酰基)苯(化合物J,4.8g,77.4％)，其为白色固体。MS：计算值219(M+H)⁺，测量值219(M+H)⁺。

步骤2：化合物H的制备

在氮气气氛下，向经搅拌的N-[8-溴-4-(二丙基氨甲酰基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物G,5.0g,10.7mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中添加双(频哪醇合)二硼(3.0g,11.8mmol)、乙酸钾(2.1g,21.4mmol)和Pd(dppf)Cl₂(787mg,1.0mmol)。反应混合物在90℃搅拌3小时后，添加水。将溶液用EA萃取并真空浓缩。残余物通过快速HPLC纯化，得到N-[4-(二丙基氨甲酰基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物H,3.5g,64％)，其为黄色固体。MS:m/z＝512(M+H)⁺，测量值512(M+H)⁺。

步骤3：化合物K的制备

在氮气气氛下，向N-[4-(二丙基氨甲酰基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物H,400mg,0.78mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加1-溴-4-甲基亚磺酰基-苯(化合物I,187mg,0.86mmol)、碳酸钠(207mg,1.96mmol)、水(2mL)和Pd(dppf)Cl₂(57mg,0.078mmol)。反应混合物在50℃搅拌18小时后，滤出未溶解的物质。滤液用水(10mL)和EtOAc(20mL)稀释。分离有机层，以Na₂SO₄干燥并浓缩，得到粗产物。粗产物通过快速HPLC纯化，得到(4-(二丙基氨甲酰基)-8-(4-(甲基亚磺酰基)苯基)-3H-苯并[b]氮杂

-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物K,150mg,37％)。MS：计算值524(M+H)+，测量值524(M+H)+。

步骤4：实施例1的制备

在0℃，向N-[4-(二丙基氨甲酰基)-8-(4-甲基亚磺酰基苯基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物J,150mg)于DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL)于DCM(0.5mL)。反应混合物在25℃搅拌1.5小时后，除去溶剂且残余物通过制备型HPLC纯化，得到2-氨基-N,N-二丙基-8-(4-甲基亚磺酰基苯基)-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺(实施例1)，其为白色固体(22mg)。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δppm＝7.99-7.93(m,2H),7.90-7.84(m,2H),7.80-7.75(m,1H),7.73-7.66(m,2H),7.13-7.09(m,1H),3.57-3.43(m,4H),3.40-3.37(m,2H),2.88(s,3H),1.79-1.64(m,4H),1.10–0.84(m,6H)。MS：计算值424(M+H)⁺，测量值424(M+H)⁺。

实施例2

2-氨基-8-[4-(甲基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

根据方案1中所示的一般合成路线制备标题化合物。方案4提供了详细的合成路线。

方案4：

向(4-(二丙基氨甲酰基)-8-(4-(甲基亚磺酰基)苯基)-3H-苯并[b]氮杂

-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物J,150.0mg,0.28mmol)于Eaton试剂(1.5mL)中的溶液中添加NaN₃(55.8mg,0.86mmol)。反应混合物在50℃搅拌20分钟后，在0℃将其倾倒入1M氢氧化铵溶液。混合物用DCM(30mL x 2)萃取。有机层用盐水洗涤，以无水Na₂SO₄干燥，过滤并通过制备型HPLC纯化，得到2-氨基-8-[4-(甲基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺(实施例2,18.0mg)，其为白色固体。1H NMR(甲醇-d4,400MHz)δppm＝8.12-8.09(m,2H),7.94-7.92(m,2H),7.49-7.42(m,3H),6.91(s,1H),3.47-3.44(m,4H),3.3(s,2H),2.91(s,3H),1.71-1.69(m,4H),0.92(m,6H)。MS：计算值439(M+H)⁺，测量值439(M+H)⁺。

实施例3

-4-甲酰胺

根据方案1中所示的一般合成路线制备标题化合物。方案5提供了详细的合成路线。

方案5：

步骤1：化合物3B的制备

在16℃，向经搅拌的二甘醇(化合物3A,10.0g,94.2mmol)、Et₃N(2.86g,28.3mmol)于DCM(50mL)中的溶液中缓慢添加4-甲基苯磺酰氯(4.49g,23.6mmol)于DCM(50mL)中的溶液。然后将反应混合物在16℃搅拌18小时。TLC(PE:EA＝1:1)显示反应完成。反应混合物用饱和NaHCO₃(50mL x 2)洗涤。有机层以无水干燥Na₂SO₄并真空浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(PE:EA＝5:1～1:1)纯化粗产物，得到4-甲基苯磺酸2-(2-羟基乙氧基)乙基酯(化合物3B,2.4g,39％)，其为无色油状物。MS：计算值278(M+H₂O)⁺，测量值278(M+H₂O)⁺。

步骤2：化合物3C的制备

历经5分钟，在20℃，将二氢吡喃(2.5g,29.7mmol)逐滴添加至经搅拌的4-甲基苯磺酸2-(2-羟基乙氧基)乙基酯(化合物3B,2.40g,9.2mmol)和对甲苯磺酸一水合物(125mg,0.66mmol)于无水二噁烷(25mL)中的溶液中。搅拌20分钟后，添加饱和Na₂CO₃直至溶液为弱碱性。减压浓缩混合物。将残余物溶于CH₂Cl₂(50mL)，用盐水(2x 50mL)洗涤，以Na₂SO₄干燥并真空浓缩。通过硅胶柱色谱(PE:EA＝20:1～10:1)纯化残余物，得到4-甲基苯磺酸2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基酯(化合物3C,2.3g,72.4％)，其为无色油状物。MS：计算值262.1(M+H₂O)⁺,267(M+Na⁺)；测量值262.2(M+H₂O)⁺,267(M+Na⁺)。

步骤3：化合物3D的制备

在0℃，向(3-溴苯基)(甲基)硫烷(5.0g,24.7mmol)于DCM(75ml)中的溶液中添加m-CPBA(4.47g,25.9mmol)。反应混合物在20℃搅拌18小时后，将其用NaHSO₃水溶液(30mL)和NaHCO₃水溶液(30mL)淬灭。分离有机层，用盐水洗涤并以无水Na₂SO₄干燥。真空浓缩有机层并通过研磨(PE:EA＝10mL,1:9)纯化残余物，得到1-溴-3-(甲基亚磺酰基)苯(化合物3D,3.8g,71.1％)，其为白色固体。MS：计算值219(M+H)⁺，测量值219(M+H)⁺。

步骤4：化合物3E的制备

向1-溴-3-(甲基亚磺酰基)苯(化合物3D,3.8g,17.4mmol)于Eaton试剂(30mL)中的溶液中添加NaN₃(3.4mg,52.3mmol)。反应混合物在60℃搅拌20分钟后，在0℃将其倾倒入1M氢氧化铵溶液。混合物用DCM(30mL x 2)萃取。有机层用盐水洗涤，以无水Na₂SO₄干燥并浓缩，得到1-溴-3-(S-甲基磺亚胺酰基)苯(化合物3E,2.0g,48.7％)，其为黄色固体。MS：计算值234(M+H)⁺；测量值234(M+H)⁺。

步骤5：化合物3F的制备

在0℃，向1-溴-3-(S-甲基磺亚胺酰基)苯(化合物3E,500mg,2.14mmol)于DME(15mL)中的溶液中添加KH(269mg,2.35mmol)。混合物在16℃在氮气气氛下搅拌3小时后，将于DME(10mL)中的四丁基溴化铵(28mg,0.10mmol)和4-甲基苯磺酸2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基酯(化合物3C,737mg,2.14mmol)添加至反应混合物中。混合物在30℃搅拌16小时后，将其倾倒入水(30mL)中。混合物用EA(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，以无水Na₂SO₄干燥并浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(PE:EA＝4:1～2:1～1:1)纯化粗产物，得到(3-溴苯基)-甲基-氧代-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙基亚氨基]-硫烷(化合物3F,240mg,27.6％)，其为棕色油状物。MS：计算值406(M+H)⁺；测量值406(M+H)⁺。

步骤6：化合物3G的制备

将N-[4-(二丙基氨甲酰基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-3H-1-苯并氮杂

-2-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物H,310mg,0.606mmol)、(3-溴苯基)-甲基-氧代-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙基亚氨基]-硫烷(化合物3F,190mg,0.467mmol)、Na₂CO₃(141mg,1.333mmol)和Pd(dppf)Cl₂(58mg,0.079mmol)于二噁烷/H₂O(7.5mL/1.5mL)中的溶液在50℃在氮气气氛下搅拌16小时。用EA(10mL)稀释残余物并滤出析出物。真空除去溶剂并通过硅胶色谱(PE:EA＝1:1～100％EA)纯化残余物，得到(4-(二丙基氨甲酰基)-8-(3-(S-甲基-N-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基)磺亚胺酰基)苯基)-3H-苯并[b]氮杂

-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3G,160mg)，为棕色半固体。MS：计算值711(M+H)⁺；测量值711(M+H)⁺。

步骤7：实施例3的制备

在0℃，将TFA(513mg,4.5mmol)于DCM(0.5mL)中的溶液逐滴添加至(4-(二丙基氨甲酰基)-8-(3-(S-甲基-N-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙基)磺亚胺酰基)苯基)-3H-苯并[b]氮杂

-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3G,160mg,0.225mmol)于DCM(2mL)中的溶液中。然后将混合物在20℃搅拌3小时。用NaHCO₃(约450mg)中和该溶液并滤出析出物。浓缩滤液并通过制备型HPLC(碱系统)纯化残余物，得到2-氨基-8-[3-[N-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-S-甲基-磺亚胺酰基]苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺(实施例3,10.3mg)，其为黄色固体。¹HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝8.21(s,1H),8.06-7.98(m,1H)7.96-7.91(m,1H),7.78-7.70(m,1H),7.46(d,J＝12.30Hz,2H),7.42-7.35(m,1H),6.93-6.86(m,1H),3.69-3.49(m,7H),3.48-3.39(m,4H),3.24(s,3H),3.18-3.10(m,1H),3.09-2.99(m,1H),2.92-2.83(m,1H),1.75-1.62(m,4H),1.05–0.78(m,6H)。MS：计算值527(M+H)⁺，测量值527(M+H)⁺。

实施例4

2-氨基-8-(5-甲基亚磺酰基-3-吡啶基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用3-溴-5-甲基硫基-吡啶代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例1类似的方式制备标题化合物。获得实施例4，其为黄色固体(4.7mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝9.06(d,J＝2.0Hz,1H),8.78-8.93(m,1H),8.45(t,J＝2.1Hz,1H),7.36-7.56(m,3H),6.92(s,1H),3.38-3.51(m,6H),2.85-3.04(m,3H),1.53-1.78(m,4H),0.53-1.13ppm(m,6H)。MS：计算值425(M+H)⁺，测量值425(M+H)⁺。

实施例5

2-氨基-8-(3-甲基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用1-溴-3-甲基硫基-苯代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例1类似的方式制备标题化合物。获得实施例5，其为黄色固体(40mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝8.02(s,1H),7.85-7.93(m,1H),7.64-7.76(m,2H),7.32-7.49(m,3H),6.90(s,1H),3.45(m,6H),2.74(s,3H),1.54-1.75(m,4H),0.57-1.14ppm(m,6H)。MS：计算值424(M+H)⁺，测量值424(M+H)⁺。

实施例6

-4-甲酰胺

通过使用3-溴-5-甲基硫基-吡啶代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例2类似的方式制备标题化合物。获得实施例6，其为黄色固体(8mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝9.14-9.25(m,2H),8.66(t,J＝2.1Hz,1H),7.54-7.81(m,3H),6.99-7.11(m,1H),3.39-3.56(m,6H),3.26(s,3H),1.72(m,4H),0.96ppm(m,6H)。MS：计算值440(M+H)⁺，测量值440(M+H)⁺。

实施例7

22-氨基-8-[3-(甲基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用1-溴-3-甲基硫基-苯代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例2类似的方式制备标题化合物。获得实施例7，其为黄色固体(8.3mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝8.34(t,J＝1.6Hz,2H),8.01-8.15(m,2H),7.59-7.84(m,3H),7.10(s,1H),3.41-3.59(m,6H),3.25(s,3H),1.72(sxt,J＝7.5Hz,4H),0.97ppm(br.s.,6H)。MS：计算值439(M+H)⁺，测量值439(M+H)⁺。

实施例8

2-氨基-8-(4-乙基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用1-溴-4-乙基硫基-苯代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例1类似的方式制备标题化合物。获得实施例8，其为黄色固体(45mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝7.91-8.01(m,2H),7.56-7.86(m,5H),7.03-7.15(m,1H),3.49(br.s.,4H),3.35-3.40(m,2H),2.80-2.98(m,2H),1.62-1.82(m,4H),1.14-1.30(m,3H),0.97ppm(br.s,6H)。MS：计算值438(M+H)⁺，测量值438(M+H)⁺。

实施例9

2-氨基-8-[4-(乙基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用1-溴-4-乙基硫基-苯代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例2类似的方式制备标题化合物。获得实施例9，其为黄色固体(5mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝8.09(d,J＝8.3Hz,2H),7.87-8.02(m,2H),7.55-7.77(m,3H),7.07(s,1H),3.40-3.60(m,4H),3.22-3.31(m,2H),2.66-2.77(m,2H),1.72(sxt,J＝7.5Hz,4H),1.13-1.33(m,3H),0.97ppm(br.s.,6H)。MS：计算值453(M+H)⁺，测量值453(M+H)⁺。

实施例10

2-氨基-8-(3-乙基亚磺酰基苯基)-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用1-溴-3-乙基硫基-苯代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例1类似的方式制备标题化合物。获得实施例10，其为黄色固体(29mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝7.85-8.08(m,2H),7.53-7.79(m,5H),6.94-7.13(m,1H),3.49(br.s.,4H),3.05-3.20(m,2H),2.77-3.04(m,2H),1.54-1.83(m,4H),1.14-1.32(m,3H),0.97ppm(br.s.,6H)。MS：计算值438(M+H)⁺，测量值438(M+H)⁺。

实施例11

2-氨基-8-[3-(乙基磺亚胺酰基)苯基]-N,N-二丙基-3H-1-苯并氮杂

-4-甲酰胺

通过使用1-溴-3-乙基硫基-苯代替1-溴-4-甲基硫基-苯，以与实施例2类似的方式制备标题化合物。获得实施例11，其为黄色固体(5mg)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm＝8.30(t,J＝1.6Hz,1H),8.09(dd,J＝15.6,8.3Hz,2H),7.59-7.85(m,4H),7.12(s,1H),3.50(br.s.,4H),3.36-3.44(m,4H),2.64-2.77(m,2H),1.73(sxt,J＝7.4Hz,3H),1.18-1.32(m,2H),0.97ppm(br.s.,6H)。MS：计算值453(M+H)⁺，测量值453(M+H)⁺。