JP2003520828A - Ｃｔｌａ４（ｃｄ１５２）に対する抗体、これを含む結合体、およびその使用 - Google Patents

Ｃｔｌａ４（ｃｄ１５２）に対する抗体、これを含む結合体、およびその使用

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キャサリン ターナー，
メアリー コリンズ，
ギャリー エス． グレイ，
ドナ モリス，
デニス オハラ，
ポール ヒントン，
ナオヤ ツルシタ，
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ジェネティクス インスティテュート，エルエルシー
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、抗体−毒性部分結合体を提供し、この結合体は、Ｔ細胞上のみに発現される、Ｔ細胞の表面上に発現される分子（そしてこれはＴ細胞活性化の際にＴ細胞上に過渡的に発現される）を特異的に認識する抗体を含む。好ましくは、このＴ細胞分子はＣＴＬＡ４である。本発明はさらに、抗ＣＴＬＡ４抗体およびそのヒト化形態を提供する。これらの抗体を使用することによって、Ｔ細胞の活性化が調節され得、それにより免疫応答が調節され得る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願） 本出願は、２０００年１月２７日に提出された米国仮出願番号第６０／１７８
，４７３号の利益を主張し、この内容は本明細書中でその全体において参考とし
て援用される。
【０００２】 （発明の背景） Ｔ細胞が外来タンパク質に応答するためには、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による
二つのシグナルが静止Ｔリンパ球に与えられなければならない（Ｊｅｎｋｉｎｓ
，Ｍ．およびＳｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．（１９８７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６５
，３０２−３１９；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｄ．Ｌ．，ら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１４４，３７０１−３７０９）。第一のシグナルは、免疫応答に特異性を
付与するものであり、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）の存在の状況において、
外来の抗原性ペプチドを認識した後に、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を介して形
質導入される。第二のシグナル（これは、共刺激と称される）は、Ｔ細胞の増殖
を誘導し、そして機能的にする（Ｌｅｎｓｃｈｏｗら（１９９６）Ａｎｎｕ．Ｒ
ｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３）。共刺激は、抗原特異的でもなく、また
ＭＨＣ限定的でもなく、ＡＰＣによって発現される１個以上の異なる細胞表面分
子によって提供されると考えられる（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｍ．Ｋ．ら（１９８８）
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０，３３２４−３３３０；Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．
，ら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３，７２１−７３０；Ｇｉｍｍｉ，
Ｃ．Ｄ．，ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８
８，６５７５−６５７９；Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｗ．，ら（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ
．Ｉｎｖｅｓｔ．９０，２２９−２７３；Ｋｏｕｌｏｖａ，Ｌ．，ら（１９９１
）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３，７５９−７６２；Ｒｅｉｓｅｒ，Ｈ．，ら（１
９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９，２７１−２７
５；ｖａｎ−Ｓｅｖｅｎｔｅｒ，Ｇ．Ａ．，ら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１４４，４５７９−４５８６；ＬａＳａｌｌｅ，Ｊ．Ｍ．，ら（１９９１）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７，７７４−８０；Ｄｕｓｔｉｎ，Ｍ．Ｉ．，ら（１９
８９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９，５０３；Ａｒｍｉｔａｇｅ，Ｒ．Ｊ．，ら
（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３５７，８０−８２；Ｌｉｕ，Ｙ．，ら（１９９２
）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５，４３７−４４５）。
【０００３】 ＣＤ８０（Ｂ７−１）およびＣＤ８６（Ｂ７−２）のタンパク質は、ＡＰＣ上
に発現される、決定的な共刺激分子である（Ｆｒｅｅｍａｎら（１９９１）Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：６２５；Ｆｒｅｅｍａｎら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１４３：２７１４；Ａｚｕｍａら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６６：
７６；Ｆｒｅｅｍａｎら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２：９０９）。Ｂ７
−２は、一次免疫応答の間に主な役割を果たしていると思われる。他方、Ｂ７−
１（これは、免疫応答過程の後期にアップレギュレートされる）は、Ｔ細胞の一
次応答の延長またはＴ細胞の二次応答への共刺激において重要であり得る（Ｂｌ
ｕｅｓｔｏｎｅ（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２：５５５）。
【０００４】 Ｂ７−１およびＢ７−２が結合するリガンドの一つであるＣＤ２８は、静止Ｔ
細胞上に構成的に発現され、活性化後に発現が増大する。Ｔ細胞レセプターを介
するシグナル伝達の後に、ＣＤ２８の連結および共刺激シグナルの伝達は、Ｔ細
胞の増殖およびＩＬ−２の分泌を誘発させる（Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．，ら（
１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３，７２１−７３０；Ｇｉｍｍｉ，Ｃ．Ｄ
．，ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８，６
５７５−６５７９；Ｊｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．，ら（１９９０）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏ
ｄａｙ １１，２１１−６；Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｆ．Ａ．，ら（１９９２）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３５６，６０７−６０９））。第二のリガンド（ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５
２）と称される）は、ＣＤ２８と相同であるが、静止Ｔ細胞上に発現されておら
ず、Ｔ細胞が活性化された後に出現する（Ｂｒｕｎｅｔ，Ｊ．Ｆ．ら（１９８７
）Ｎａｔｕｒｅ ３２８，２６７−２７０）。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞応答の負の
制御をする上で決定的なものと思われる（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９５）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：９８５）。ＣＴＬＡ４を遮断すると抑制シグナルは除
去され、他方ＣＴＬＡ４が集合するとＴ細胞応答をダウンレギュレートする抑制
シグナルが提供されることが見出されている（ＡｌｌｉｓｏｎおよびＫｒｕｍｍ
ｅｌ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：９３２）。Ｂ７分子は、ＣＤ２８に
対してよりもＣＴＬＡ４に対して高い親和性を有し（Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．
，ら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４，５６１−５６９）、そしてＢ７
−１およびＢ７−２は、ＣＴＬＡ４分子の異なる領域に結合し、ＣＴＬＡ４に対
して異なる結合動力学を有することが見出されている（Ｌｉｎｓｌｅｙら（１９
９４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：７９３）。ＣＤ２８およびＣＴＬＡ４に関係する
新しい分子としてＩＣＯＳが同定されている（Ｈｕｔｌｏｆｆら（１９９９）Ｎ
ａｔｕｒｅ ３９７：２６３；ＷＯ ９８／３８２１６）。Ｔ細胞がＴ細胞レセ
プターを介してのみ刺激され、付加的な共刺激シグナルを受容しない場合、Ｔ細
胞は非応答性、アネルギー性となるか、または死滅し、免疫応答の下方調節を生
じる。
【０００５】 Ｂ７：ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４共刺激経路の重要性は、インビトロおよびいくつ
かのインビボのモデル系で証明されてきた。この共刺激経路を遮断すると、結果
としてマウスおよびヒト系において抗原特異的な耐性が発生する（Ｈａｒｄｉｎ
ｇ，Ｆ．Ａ．，ら（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ．３５６，６０７−６０９；Ｌｅｎ
ｓｃｈｏｗ，Ｄ．Ｊ．，ら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ．２５７，７８９−７９
２；Ｔｕｒｋａ，Ｌ．Ａ．，ら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ．８９，１１１０２−１１１０５；Ｇｉｍｍｉ，Ｃ．Ｄ．，ら（１
９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６５８６−６
５９０；Ｂｏｕｓｓｉｏｉｓ，Ｖ．，ら（１９９３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７
８，１７５３−１７６３）。反対に、Ｂ７陰性のマウス腫瘍細胞によるＢ７の発
現は、Ｔ細胞が媒介する特異的な免疫を誘発し、腫瘍拒絶および腫瘍の攻撃に対
する持続的な防護を伴う（Ｃｈｅｎ，Ｌ．，ら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７１，１
０９３−１１０２；Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｓ．Ｅ．およびＡｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ
．（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９，３６８−３７０；Ｂａｓｋａｒ，Ｓ．
，ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０，５６８７−５
６９０）。したがって、この共刺激経路の操作は、ヒトにおける免疫応答を刺激
または抑制する大きな可能性が得られる。
【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、少なくともその一部は、抗体の毒性部分結合体化形態の開発に基づ
く。この抗体は、活性化Ｔ細胞に特異的に結合し、Ｔ細胞上でのみ短時間発現す
る分子（例えばＣＴＬＡ４）を標的にすることによってその活性Ｔ細胞を抑制す
る。さらに、本発明は、ＣＴＬＡ４を認識する抗体パネルを提供し、それを特徴
づける。ＣＴＬＡ４に対する抗体は、刺激または抑制といった異なる機能を有し
、この機能は、例えば、抗体が結合するＣＴＬＡ４分子の領域、または抗体が一
価型形態（例えば可溶性）であるか多価型形態（例えば架橋性）であるかに依存
する。したがって、これらの抗体を使用すれば、Ｔ細胞の活性化が調節され得、
それにより免疫応答が調節され得る。
【０００７】 １つの局面において、本発明は、抗体−毒性部分結合体に関し、結合体は、活
性Ｔ細胞上にのみ発現する分子を特異的に認識する抗体、またはその抗原結合部
ならびに毒性部分を含有する。
【０００８】 １つの実施形態において、抗体はＣＴＬＡ４と特異的に反応する。好ましい実
施形態において、抗体はヒトＣＴＬＡ４と特異的に反応する。
【０００９】 別の実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。
【００１０】 １つの実施形態において、抗体はＣＴＬＡ４分子のある領域に結合し、ＣＴＬ
Ａ４がＣＤ８０またはＣＤ８６に結合するのを阻止する。別の実施形態において
、抗体は、共刺激分子へのＣＴＬＡ４の結合部位に空間的に接近しているＣＴＬ
Ａ４の領域に結合する。
【００１１】 １つの実施形態において、配列番号２に示すヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列に
おいてアミノ酸８３を置換すると、その抗体の結合が調節される。
【００１２】 １つの実施形態において、毒性部分は炭化水素である。好ましい実施形態にお
いて、炭化水素はカリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）である。別の
実施形態において、毒性部分は天然に存在する細菌産物である。さらに別の実施
形態において、毒性部分はリシンＡ鎖およびサポリンからなる群から選択される
。
【００１３】 １つの実施形態において、抗体は、以下からなる群から選択されるハイブリド
ーマによって生産される：ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣ
Ｃ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ
）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハ
イブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録
番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、
およびＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）。
【００１４】 １つの実施形態において、抗体はヒト化される。
【００１５】 別の局面において、本発明は、ヒトＣＴＬＡ４と特異的に反応するヒト化抗体
に関し、この抗体は配列番号８に示すアミノ酸配列を含有する。
【００１６】 なお別の局面において、本発明は、ヒトＣＴＬＡ４と特異的に反応するヒト化
抗体に関し、その抗体は配列番号１０に示すアミノ酸配列を含有する。
【００１７】 さらに別の局面において、本発明は、免疫応答を調節する方法に関し、この方
法は細胞を請求項２の抗体−毒性部分結合体に接触させる工程を包含する。
【００１８】 １つの実施形態において、抗体−毒性部分結合体は被験体に投与され、接触工
程はインビボで行われる。１つの実施形態において、この被験体が自己免疫障害
、移植片に対する免疫応答、アレルギー反応、治療用タンパク質に対する免疫応
答からなる群から選択される障害または状態に罹患するが、それらは進行中の免
疫応答の下方調節により有利なものとなる。別の実施形態において、接触工程は
インビトロで行われる。
【００１９】 なお別の実施形態において、本発明は、免疫応答を調節する方法に関し、その
方法は細胞をＣＴＬＡ４と特異的に反応する抗体に接触させる工程を包含し、こ
こでその抗体は、以下からなる群から選択されるハイブリドーマによって生産さ
れる：ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハ
イブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録
番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、
ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリ
ドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、およびＡＴＣＣ登録
番号＿＿（ハイブリドーマ ）。別の実施形態において、抗体は配列番号８に示
すアミノ酸配列を含有する。さらに別の実施形態において、抗体は配列番号１０
に示すアミノ酸配列を含有する。
【００２０】 別の実施形態において、本発明は、免疫応答を下方調節する方法に関し、この
方法は細胞を抗体−毒性部分結合体に接触させる工程を包含し、ここでこの抗体
はＣＴＬＡ４を特異的に認識する。
【００２１】 （発明の詳細な説明） 上記概説のごとく、本発明は、少なくともその一部は、抗ＣＴＬＡ４抗体なら
びに複合体型の抗ＣＴＬＡ４抗体または他の抗ＣＴＬＡ抗体の同定と特徴付けに
関し、そしてこのような抗体を使用して免疫応答を調節する方法に関する。
【００２２】 本発明の各種の局面を以下のサブセクションでさらに詳細に説明する。
【００２３】 （Ｉ．定義） 本明細書において用いる場合、「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞お
よびＣＤ８陽性Ｔ細胞を包含する。さらにＴ細胞という用語は、Ｔヘルパー１型
Ｔ細胞およびＴヘルパー２型Ｔ細胞の両方を包含する。「抗原提示細胞」という
用語は、専門的な抗原提示細胞（例えば、Ｂリンパ球、単球、樹状細胞、ランゲ
ルハンス細胞）ならびに他の抗原提示細胞（例えば、ケラチノサイト、内皮細胞
、星状細胞、線維芽細胞、希突起膠細胞）を包含する。
【００２４】 本明細書において使用される場合、「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞共刺激
の調節に影響されるＴ細胞媒介および／またはＢ細胞媒介の免疫応答を包含する
。典型的な免疫応答には、Ｔ細胞応答（例えば、増殖、サイトカイン産生、およ
び細胞性細胞毒性）が包含される。さらに免疫応答という用語は、Ｔ細胞の活性
化により間接的に影響を受ける免疫応答（例えば、抗体産生（体液性応答））な
らびにサイトカイン応答細胞（例えば、マクロファージ）の活性化を包含する。
【００２５】 本明細書において用いる場合、「共刺激レセプター」という用語は、共刺激シ
グナルを免疫細胞（例えば、ＣＤ２８）に伝達するレセプタを包含する。本明細
書において用いる場合、「阻害性レセプター」という用語は、負のシグナルを免
疫細胞（例えば、ＣＴＬＡ４）に伝達するレセプターを包含する。阻害性レセプ
ターによって導入された阻害性シグナルは、たとえ共刺激レセプター（ＣＤ２８
のような）が免疫細胞上に存在しない場合でも発生する。したがって、このシグ
ナルは共刺激分子の結合に対する阻害性レセプターと共刺激レセプターとの間の
競合では機能しない（Ｆａｌｌａｒｉｎｏら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．
１８８：２０５）。免疫細胞への阻害性シグナルの伝達によって、結果的には免
疫細胞は非応答あるいはアネルギーあるいはプログラム化された細胞死に至る。
【００２６】 細胞表面のレセプターに結合する分子の形態に応じて、シグナルは細胞に（例
えば、多価型の共刺激分子またはレセプターの架橋を生じる架橋型抗体によって
）伝達され得るか、または細胞中で、（例えば、可溶性で一価型の共刺激分子ま
たは抗体によって）例えば（レセプターに結合するための）活性型の共刺激分子
と競合することにより阻害され得る。しかしながら、可溶性分子が刺激性であり
得る例がある。例えば、可溶型の抗体が阻害性レセプターの共刺激分子への結合
を阻止し、また負のシグナルの伝達を阻止する。各種調節剤の効果は、本明細書
に記載の慣用的なスクリーニングアッセイを使用して容易に実証することができ
る。
【００２７】 本明細書において用いる場合、活性Ｔ細胞に関して「共刺激する」という用語
は、増殖またはエフェクター機能を誘発する第２の非活性レセプターが媒介する
シグナル（「共刺激シグナル」）を供給するという共刺激分子の能力を包含する
。例えば、共刺激シグナルにより、例えば、Ｔ細胞レセプター媒介シグナルを受
容したＴ細胞において、サイトカインが分泌される結果となり得る。細胞レセプ
ター媒介シグナルを、例えば活性レセプターを介して（例えば、抗原またはポリ
クローナルアクチベータにより）受容した免疫細胞を、本明細書では「活性化Ｔ
細胞」と称する。
【００２８】 本明細書において用いる場合、「活性化レセプター」という用語は、抗原、複
合抗原（例えば、ＭＨＣ分子の関与において）に結合するか、あるいは抗体に結
合する免疫細胞レセプターを包含する。このような活性化レセプターは、Ｔ細胞
レセプター（ＴＣＲ）、Ｂ細胞レセプター（ＢＣＲ）、サイトカインレセプター
、ＬＰＳレセプター、補体レセプター、およびＦｃレセプターを包含する。
【００２９】 例えば、Ｔ細胞レセプターはＴ細胞上にあり、ＣＤ３分子に関与する。Ｔ細胞
レセプターは、ＭＨＣ分子の場合、抗原によって（およびポリクローナルＴ細胞
活性化試薬によって）刺激される。ＴＣＲを介してＴ細胞を活性化すると、多数
の変化（例えば、タンパク質のリン酸化、膜脂質の変化、イオン流入、環状ヌク
レオチドの改質、ＲＮＡ転写の変化、タンパク質合成の変化、および細胞体積の
変化）、および活性化マーカー（例えば、ＣＴＬＡ４）の発現が生じる結果とな
る。
【００３０】 共刺激シグナルのＴ細胞への伝達には、シクロスポリンＡによって阻害されな
いシグナル経路が含まれる。さらに、共刺激シグナルは、Ｔ細胞におけるサイト
カイン分泌（例えば、ＩＬ−２および／またはＩＬ１０）を誘発することができ
、および／または、抗原に対する非応答性、アネルギーの誘発、またはＴ細胞に
おける細胞死の誘発を阻止し得る。
【００３１】 本明細書において用いる場合、「阻害性シグナル」という用語は、免疫細胞上
の阻害性レセプター（例えば、ＣＴＬＡ４）を介して伝達されたシグナルを指す
。そのようなシグナルは、活性化レセプターを介して（例えばＴＣＲを介して）
伝達されたシグナルに拮抗し（例えば、第２メッセンジャーの発生を阻害し）、
増殖を阻害し、免疫細胞のエフェクター機能を阻害し（例えば、細胞性細胞毒性
の減少）、免疫細胞がメディエーター（例えば、ＩＬ−２などのサイトカインお
よび／またはアレルギー反応）の産生に失敗するか、あるいはアネルギーが発生
する結果となり得る。
【００３２】 本明細書において用いる場合、「非応答性」という用語は、刺激（例えば、活
性化レセプターまたはサイトカインを介する刺激）に対する免疫細胞の不応性を
包含する。非応答性は、例えば免疫抑制剤に曝露されるか、または高投与量の抗
原に曝露されると起こり得る。本明細書において用いる場合、「アネルギー」あ
るいは「耐性」という用語は、活性化レセプター媒介刺激に対する不応性を包含
する。このような不応性は抗原特異的であり、寛容抗原への曝露が終わった後も
持続する。例えば、Ｔ細胞のアネルギー（非応答性に対して）の特徴は、ＩＬ−
２などのサイトカインを産生しないことである。Ｔ細胞のアネルギーは、Ｔ細胞
が抗原に曝露され、第二のシグナル（共刺激シグナル）の非存在下にて、第一の
シグナル（Ｔ細胞レセプターまたはＣＤ−３媒介シグナル）を受容するときに発
生する。これらの条件下で細胞が同一の抗原に再曝露されると（共刺激分子の存
在下にて再曝露されたとしても）、サイトカインの産生に失敗し、したがって増
殖に失敗する結果となる。しかしながら、アネルギーＴ細胞は無関係な抗原に対
しては応答性を備えることができ、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）とともに
培養する場合、増殖可能である。例えば、Ｔ細胞アネルギーは、ＥＬＩＳＡまた
は指標細胞系を用いた増殖アッセイによって測定されたように、Ｔリンパ球によ
るＩＬ−２産生の不足により、観察することもできる。あるいは、レポータ遺伝
子構築物を使用することができる。例えば、アネルギーＴ細胞は、５’ＩＬ−２
遺伝子エンハンサーの制御下にて、異種プロモータによって、または当該エンハ
ンサー内に存在し得るＡＰ１配列の多量体によって、誘発されるＩＬ−２遺伝子
の転写を開始できない（Ｋａｎｇら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：１１
３４）。
【００３３】 本明細書において用いる場合、ポリペプチドに関して「活性」という用語は、
ポリペプチドの構造に固有な活性を包含する。ＣＴＬＡ４に関して、「活性」と
いう用語は、ＣＴＬＡ４ポリペプチドが共刺激分子に結合する能力、および／ま
たは活性化免疫細胞において、例えば、抗原提示細胞上の天然リガンドに関与す
ることによって、阻害性シグナルを調節する能力を包含する。ＣＴＬＡ４は阻害
性シグナルをＴ細胞に伝達する。Ｔ細胞において阻害性シグナルを調節すると、
Ｔ細胞による増殖調節および／またはサイトカイン分泌という結果となる。ＣＴ
ＬＡ４はまた、共刺激分子（例えば、ＣＴＬＡ４）への結合を共刺激レセプター
と競合することにより、共刺激シグナルを調節することができる。したがって、
「ＣＴＬＡ４活性」という用語は、ＣＴＬＡ４ポリペプチドがその天然リガンド
（単数または複数）に結合する能力、免疫細胞の共刺激シグナルまたは阻害性シ
グナルを調整する能力、免疫応答を調節する能力を包含する。
【００３４】 本明細書において用いる場合、「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖
、すなわちジスルフィド結合により分子内結合する２本の重鎖（Ｈ）および２本
の軽鎖（Ｌ）から構成される免疫グロブリン分子を指すことを意図する。各重鎖
は重鎖可変領域（本明細書において、ＨＣＶＲまたはＶＨと略記）および重鎖定
常ドメインから構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、
およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は軽鎖可変域（本明細書において、ＬＣＶ
ＲまたはＶＬと略記）および軽鎖定常ドメインから構成される。軽鎖定常領域は
、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域はさらに超可変領域
に細分され、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称され、枠組領域（ＦＲ）と言われる
、より保存された領域が点在している。ＶＨおよびＶＬはそれぞれ３つのＣＤＲ
と４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって次の順序
で配列される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ
４。「相補性決定領域」（ＣＤＲ）という語句は、抗原結合部位を含有する抗体
分子の領域を包含する。
【００３５】 抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のようなＩｇＧ抗体で
もよく、あるいはＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＤアイソタイプでもよい
。抗体重鎖の定常ドメインは、所望のエフェクター機能に応じて選択してよい。
軽鎖定常ドメインはκまたはλ定常ドメインでよい。
【００３６】 本明細書において用いる場合、「抗体」という用語はまた、抗体の「抗原結合
部位」（または単に「抗体部位」）を包含する。「抗原結合部位」という用語は
、本明細書において用いる場合、抗原（例えばｈＣＴＬＡ４）に特異的に結合す
る能力を保持している抗体フラグメントを言う。抗体の抗原結合機能は、全長抗
体のフラグメントによって果たされることが判っている。抗体の「抗原結合部位
」という用語に包含される結合フラグメントの例として、（ｉ）Ｆａｂフラグメ
ント，すなわちＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインから構成される一価の
フラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、すなわちヒンジ領域にお
けるジスルフィド架橋により結合した２つのＦａｂフラグメントを含有する二価
のフラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから構成されるＦｄフラ
グメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＨおよびＶＨドメインから構成される
Ｆｖフラグメント、（ｖ）ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔ
ｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）、これはＶＨドメインから構成される、なら
びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を挙げることができる。さら
に、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、すなわちＶＬとＶＨは別個の遺伝子に
コードされているが、両者は遺伝子組換え法を用いて、合成リンカーによって結
合することができる。ここで、その合成リンカーによって両者は単一のタンパク
質鎖となり、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価分子を形成する（一価鎖とし
て既知のＦｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４２：４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。こ
のような単一鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部位」という用語の中に包含され
る。単一鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）も包含
される。ダイアボディは二価の二重特異性抗体であり、ＶＨおよびＶＬドメイン
は１本のペプチド鎖上に発現されているが、同一鎖上にて、２つのドメイン間で
対合するにはリンカーが短いため、別の鎖の相補ドメインと対を成すドメインに
焦点が合わされ、その結果２つの抗原結合部位が生じている（例えば、Ｈｏｌｌ
ｉｎｇｅｒ，Ｐ．，ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ９０：６４４４−６４４８； Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ら（１９９４）
Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３を参照のこと）。
【００３７】 さらに、抗体またはその抗原結合部位は、より大きい免疫接合分子の一部分と
なり得、これは、抗体または抗体部位が１つまたはそれ以上の他のタンパク質ま
たはペプチドと共有結合または非共有的に結合することにより形成される。この
ような免疫接合分子の例として、ストレプトアビジンのコア領域を使用して四量
体ｓｃＦｖ分子を作成すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ら（１９９
５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６：
９３−１０１）およびシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒス
チジンｔａｇを使用して二価のビオチニル化ｓｃＦｖ分子を作成すること（Ｋｉ
ｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．，ら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：
１０４７−１０５８）が挙げられる。ＦａｂやＦ（ａｂ’）２フラグメントのよ
うな抗体の一部は、抗体全体から、それぞれ従来の技術（例えば、パパインまた
はペプシンによる消化）を使用して、調製することができる。さらに、抗体、抗
体の一部、および免疫接合分子は、本明細書で記載するように、標準的な組換え
ＤＮＡ技術を使用して得ることができる。
【００３８】 抗体は、ポリクローナルでもモノクローナルでもよく、異種間、同種間、また
は同種異系間でもよく、あるいはこれらの改変型、例えばヒト化、キメラ等であ
ってもよい。好ましくは、本発明の抗体はＣＴＬＡ４分子に特異的にまたは実質
特異的に結合する。本明細書において用いる場合、「モノクローナル抗体」およ
び「モノクローナル抗体組成物」という用語は、特定の抗原エピトープと免疫反
応可能な唯一種の抗原結合部位を含有する一群の抗体分子を言う。これに対し、
「モノクローナル抗体」および「モノクローナル抗体組成物」という用語は、特
定の抗原と相互作用可能な多種の抗原結合部位を含有する一群の抗体分子を言う
。モノクローナル抗体組成物は、免疫反応の相手である特定の抗原に対し単一の
結合親和性を典型的に発揮する。
【００３９】 本明細書において用いる場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト細胞から作
製された場合の抗体により酷似するように偏向が加えられてきたその可変領域お
よび定常領域を有する非ヒト細胞によって作製された抗体を包含することを意図
する。例えば、ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に存在するアミノ酸を組み入
れるように、非ヒト抗体のアミノ酸配列に変更を加えることにより、本発明のヒ
ト化抗体は、ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列がコードしていないアミノ酸残
基（例えば、インビトロで無作為なまたは部位特異的な突然変異による、あるい
はインビボでの体細胞変異により導入される変異）を含み得る。それは例えば、
ＣＤＲにおいてである。本明細書において用いる場合、「ヒト化抗体」という用
語はまた、マウスのような別の哺乳動物種の生殖系列から誘導されたＣＤＲ配列
がヒトのフレームワーク配列に継ぎ足されている抗体を含む。
【００４０】 本明細書において使用されているように、「単離された抗体」とは、異なる抗
原特異性を有する他の抗体を実質的に夾雑していない抗体を言うことを意図して
いる（例えば、ＣＴＬＡ４と特異的に結合する単離された抗体はＣＴＬＡ４以外
の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に夾雑していない）。さらに、単離され
た抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に夾雑していなくてよ
い。
【００４１】 「ＣＴＬＡ４ブロッキング抗体」とは、ＣＴＬＡ４タンパク質の細胞外ドメイ
ンに特異的に結合し、ＣＴＬＡ４がそのカウンターレセプター（例えば、ＣＤ８
０、ＣＤ８６等）に結合するのをブロックする抗体である。ＣＴＬＡ４ブロッキ
ング抗体は、共刺激分子に結合するＣＴＬＡ４の結合部位に空間的に近接した部
位にてＣＴＬＡ４の部位に結合することができる。例えば、ＣＴＬＡ４が共刺激
分子に結合するのを立体的に妨害するのに十分なだけこの共刺激結合部位に近接
している。このようなブロッキング抗体は、ＣＴＬＡ４を介する抑制シグナルの
伝達をブロックするので、その可溶型において、Ｔ細胞の増殖を増強する働きを
する。「ＣＴＬＡ４活性化抗体」とは、ＣＴＬＡ４タンパク質の細胞外ドメイン
におけるある部位にて、ＣＴＬＡ４タンパク質の細胞外領域に特異的に結合する
抗体であり、多価型において、ＣＴＬＡ４を介して負のシグナルを伝達する。こ
れらの活性化抗体は、ＣＴＬＡ４がそのカウンターレセプター（例えば、ＣＤ８
０またはＣＤ８６）に結合するのをブロックしない。このような抗体がＣＴＬＡ
４に結合すると、ＣＴＬＡ４を介する抑制シグナルの伝達を生じ、従って、Ｔ細
胞増殖の減少を生じる。ＣＴＬＡ４のブロッキング抗体および活性抗体とも、そ
れらが多価型（例えば、架橋）の場合には、ＣＴＬＡ４を介して負のシグナルを
伝達する。
【００４２】 抗体の結合、認識、または反応性に関する成句「特異的に」は、活性化Ｔ細胞
上にのみ一過的に発現される天然に存在する分子に結合する抗体が包含される。
詳細には、ＣＴＬＡ４に関して、抗体の結合、認識、反応性に関する「特異的に
」という用語には、ＣＴＬＡ４の天然に存在する型に結合するが、ＣＤ２８およ
び免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーのようなＣＴＬＡ４関連分
子に対し実質的に非反応性の抗ＣＴＬＡ４抗体が包含される。成句「実質的に非
反応性」は、ＣＴＬＡ４非関連分子（例えばＣＤ２７）と比較してＣＴＬＡ４関
連分子（例えばＣＤ２８（但し、ＣＴＬＡ４を含まない））に対してより大きい
結合を示さない抗体が包含される。好ましくはこのような抗体は、ＣＴＬＡ４関
連分子（但し、ＣＴＬＡ４を含まない）は単なるバックグラウンドの結合にて結
合する。１つの起源由来のＣＴＬＡ４（例えばヒトＣＴＬＡ４）に特異的な抗体
は、他種由来のＣＴＬＡ４分子に反応性であるか、または反応性でなくてもよい
。天然に存在するＣＴＬＡ４に特異的な抗体は、このような分子の変異型に結合
してもよいししなくてもよい。一実施形態において、天然に存在するＣＴＬＡ４
分子のアミノ酸配列に起きる変異により、ＣＴＬＡ４分子に対する抗体の結合の
調節（例えば、増加または減少した結合）を生じる。ＣＴＬＡ４に対する抗体は
この基準を満たす能力について簡単にスクリーニングされ得る。結合の親和性と
特異性を測定するアッセイは、当該分野で既知であり、競合および非競合アッセ
イが含まれる。目的のアッセイとしては、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、フローサイトメ
トリー等が挙げられる。結合アッセイは、精製または半精製したＣＴＬＡ４タン
パク質を使用し得、あるいは、ＣＴＬＡ４を発現する細胞（例えば、ＣＴＬＡ４
について発現構築物でトランスフェクトした細胞）；ＣＤ３およびＣＤ２８の架
橋を介して刺激されたＴ細胞；照射を受けた同種異系細胞の添加等を使用しても
よい。結合アッセイの一例として、精製ＣＴＬＡ４タンパク質を不溶性担体、例
えばマイクロタイタープレート、磁気ビーズ等に結合させる。候補抗体および可
溶性の標識されたＣＤ８０またはＣＤ８６を細胞に加え、次に非結合成分を洗い
去る。ＣＴＬＡ４への結合をめぐって抗体がＣＤ８０およびＣＤ８６と競合する
能力を、結合した標識ＣＤ８０またはＣＤ８６を定量することにより測定する。
ＣＤ２８をＣＴＬＡ４と置換する類似のアッセイによりブロッキング剤がＣＤ２
８と交差反応しないことを確認することができる。しかし、ヒトＣＴＬＡ４に特
異的に結合する単離した抗体が、他の抗原、例えば他種由来のＣＴＬＡ４分子に
交差反応性を有していることがある。
【００４３】 本明細書において使用されているように、「毒素」および「毒性部分」という
用語には、タンパク様または非タンパク様でありかつ、例えば、真核細胞等の細
胞に対して毒性のある天然に存在する（ならびにこれらの誘導体または化学修飾
体）または合成分子または一部分が包含される。「毒性部分」には、例えば毒性
の性質を保持している天然に存在する毒素の一部分（例えばビパルテートトキシ
ン（ｂｉｐａｒｔａｔｅ ｔｏｘｉｎ）の毒性部分（例えばＡ鎖など））が包含
される。「毒性部分」という用語にはまた、細胞性細胞毒性の効果を有する抗生
物質分子あるいは他の薬剤（例えば化学療法剤）が包含される。毒性部分は、種
々のメカニズムのいずれかによって、例えば細胞内への内部移行後に細胞機構に
作用したり、または細胞膜に穴を形成したりすることによって細胞死をもたらす
。本明細書において例示的に毒性部分について詳細に説明する。本発明の抗体−
毒性部分結合体には、抗体またはそのフラグメントが結合する細胞に毒性部分分
子を特異的に送達するための毒性部分分子に結合する抗体またはその抗原結合部
分が挙げられる。
【００４４】 本明細書において使用されているように、「天然に存在する」核酸分子とは、
天然に存在する（例えば天然タンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有す
るＲＮＡまたはＤＮＡ分子を言う。
【００４５】 本明細書において使用されているように、「コード領域」という用語は、アミ
ノ酸残基に翻訳されるコドンを含有するヌクレオチド配列の領域を言う。これに
対し、「非コード領域」という用語は、アミノ酸に翻訳されないヌクレオチド配
列の領域を言う（例えば、５’および３’非翻訳領域）。
【００４６】 本明細書において使用されているように、「ベクター」という用語は、これが
連結される別の核酸分子を運搬し得る核酸分子を言う。ベクターの１つのタイプ
は「プラスミド」であり、これは環状二本鎖ＤＮＡループを言い、この中にさら
なるＤＮＡセグメントが連結され得る。ベクターの別のタイプはウイルスベクタ
ーであり、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスのゲノム中に連結され得る。あ
るベクターは、導入された宿主細胞における自己複製が可能である（例えば、細
菌ベクターで、細菌の複製起点とともに哺乳動物のエピソームベクターを有する
もの）。他のベクター（例えば、哺乳動物の非エピソームベクター）は宿主細胞
に導入するにあたり、宿主細胞のゲノム内に組み込まれることにより、宿主ゲノ
ムとともに複製される。さらに、あるベクターは、作動可能に連結した遺伝子の
発現を指揮することができる。そのようなベクターを本明細書において「組換え
発現ベクター」または単に「発現ベクター」と呼称する。一般に、組換えＤＮＡ
技術で有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態をしている。プラスミ
ドは最も一般的に使用されるベクターの形態なので、本明細書では、「プラスミ
ド」および「ベクター」を交換可能に使用し得る。しかし、本発明では、ウイル
スベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ
随伴ウイルス）のような他の形態の発現ベクターも包含することが意図される。
これは等価の機能を果たす。
【００４７】 本明細書において使用されているように、「宿主細胞」という用語は、本発明
の組換え発現ベクターのような本発明の核酸分子を導入された細胞を言う。「宿
主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本発明において交換可能に使
用される。これらの用語は特定の被験体細胞だけでなく、このような細胞の子孫
または潜在的な子孫についても言われるものと理解するべきである。変異または
環境の影響のいずれかに起因して、後続の世代にある変更が生じ得るので、実際
にはこのような子孫の細胞が親細胞とは同一にならないかもしれないが、なお本
明細書で使用する語の範囲に包含される。
【００４８】 本明細書において使用されているように、「単離されたタンパク質」とは、細
胞から単離されたかまたは組換えＤＮＡ技術により生産された場合には他のタン
パク質、細胞材料、および培地を実質的に含まない、あるいは化学合成された場
合には化学的前駆体や他の化学物質を実質的に含まないタンパク質を言う。「単
離された」または「精製された」タンパク質またはその生物活性部分は、ＣＴＬ
Ａ４タンパク質が誘導された細胞または組織供給源に由来する細胞材料や他の汚
染タンパク質を実質的に含まず、あるいは化学合成された場合には化学的前駆体
や他の化学物質を実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」の言葉に
は、タンパク質が単離されたかまたは組換え的に産生された細胞の細胞成分から
分離されたＣＴＬＡ４タンパク質の調製物を含む。一つの実施形態において、「
細胞材料を実質的に含まない」の言葉には、ＣＴＬＡ４タンパク質の調製物であ
って、非ＣＴＬＡ４タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも言う）を
約３０％（乾燥重量）未満、より好ましくは非ＣＴＬＡ４タンパク質を約２０％
未満、なおさらに好ましくは非ＣＴＬＡ４タンパク質を約１０％未満、そして最
も好ましくは非ＣＴＬＡ４タンパク質を約５％未満含有するものが包まれる。Ｃ
ＴＬＡ４タンパク質またはその生物学的に活性な部分を組換え的に産生した場合
にも、培地を実質的に含まないことがまた好ましい。すなわち、培地は、このタ
ンパク質調製物の容量中に約２０％未満、さらに好ましくは約１０％未満、そし
て最も好ましくは約５％未満を示す。
【００４９】 「化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」の言葉には、そのタ
ンパク質が化学的前駆体またはタンパク質の合成に関与する他の化学物質から分
離される、ＣＴＬＡ４タンパク質の調製物を含む。一つの実施形態において、「
化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」の言葉には、化学的前駆
体または非ＣＴＬＡ４化学物質の約３０％（乾燥重量）未満、より好ましくは化
学的前駆体または非ＣＴＬＡ４化学物質の約２０％未満、なおさらに好ましくは
化学的前駆体または非ＣＴＬＡ４化学物質の約１０％未満、最も好ましくは化学
的前駆体または非ＣＴＬＡ４化学物質の約５％未満を有するＣＴＬＡ４タンパク
質の調製物が含まれる。
【００５０】 特定タンパク質のアミノ酸配列とタンパク質をコードし得るヌクレオチド配列
との間には、遺伝子コード（下記）によって規定されるように、既知の明確な対
応がある。同様に、特定核酸分子のヌクレオチド配列とこの核酸分子によってコ
ードされるアミノ酸配列との間には、遺伝子コードによって規定されるように、
既知の明確な対応がある。
【００５１】
【表１】 遺伝子コードの重要かつ周知の特徴はその重複性である。それによりタンパク
質を構成するために使用されるアミノ酸の大部分のものについて、１つ以上のコ
ードするヌクレオチドトリプレットが使用され得る（上記）。したがって、いく
つかの異なるヌクレオチド配列が所定のアミノ酸配列をコードし得る。このよう
なヌクレオチド配列は、すべての生物体において同一のアミノ酸配列を産生する
ので、機能的には同等であると考えられる（ある生物体は、他の生物体よりもよ
り効果的にいくつかの配列を翻訳し得るが）。さらに時折、プリンまたはピリミ
ジンのメチル化変異体が所定のヌクレオチド配列中に見出され得る。このような
メチル化はトリヌクレオチドのコドンとその対応アミノ酸との間のコード関係に
影響しない。
【００５２】 上述を考慮して、ＣＴＬＡ４ポリペプチドまたは本発明のＣＴＬＡ４抗体（ま
たはその任意の部分）をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ分子のヌクレオチド配列
を使用し、ＣＴＬＡ４ポリペプチドまたはＣＴＬＡ４抗体分子をアミノ酸配列に
翻訳するための遺伝子コードを用いて、ＣＴＬＡ４ポリペプチドまたはＣＴＬＡ
４抗体アミノ酸配列を駆動することができる。同様に、任意のＣＴＬＡ４ポリペ
プチドまたはＣＴＬＡ４抗体アミノ酸配列に関して、ＣＴＬＡ４ポリペプチドま
たは抗ＣＴＬＡ４抗体タンパク質をコードし得る対応するヌクレオチド配列は、
遺伝子コード（これは、遺伝子コードの重複性のために、任意の所定のアミノ酸
配列に対して複数の核酸配列を生成する）から推定することができる。したがっ
て、ＣＴＬＡ４ポリペプチドまたは抗ＣＴＬＡ４抗体ヌクレオチド配列について
の明細書の記述および／または開示には、ヌクレオチド配列によってコードされ
るアミノ酸配列についての記述および／または開示も包含されると考えられるべ
きである。同様に、ＣＴＬＡ４ポリペプチドまたはＣＴＬＡ４抗体アミノ酸配列
についての明細書の記述および／または開示には、アミノ酸配列をコードできる
全てのありうるヌクレオチド配列についての記述および／または開示もまた包含
されると考えられるべきである。
【００５３】 （ＩＩ．ＣＴＬＡ４免疫原） 本発明の一つの局面は、抗ＣＴＬＡ４抗体に関する。ＣＴＬＡ４に対する抗体
は被験体（例えば哺乳動物）をＣＴＬＡ４ポリペプチドまたはＣＴＬＡ４ポリペ
プチドをコードする核酸分子またはその部分で免疫することにより作製され得る
。一つの実施形態において、ネイティブなＣＴＬＡ４タンパク質、またはその免
疫原性部分を細胞または組織供給源から、標準的なタンパク質精製技術を用いる
適切な精製スキームによって単離できる。他の実施形態において、ＣＴＬＡ４タ
ンパク質またはその免疫原部分を組換えＤＮＡ技術によって生産できる。組換え
発現とは別に、ＣＴＬＡ４タンパク質またはその免疫原部分を標準的なペプチド
合成技術により化学的に合成することができる。あるいは、ＣＴＬＡ４分子また
はその部分をコードする核酸分子を免疫原として使用することができる。ＣＴＬ
Ａ４を発現する細胞全体を免疫原として使用して抗ＣＴＬＡ４抗体を生産するこ
とができる。例えば、ｃＤＮＡでトランスフェクションするかまたはリン脂質ア
ンカードメインを利用することにより、細胞はＣＴＬＡ４を発現させることがで
きる。
【００５４】 免疫原の起源はマウス、ヒト、ラット、サル等であり得る。一般に宿主動物の
種は免疫原の種とは別にする。例えば、マウスＣＴＬＡ４を使用してハムスター
を免疫し、ヒトＣＴＬＡ４を使用してマウスを免疫する等である。ヒトとマウス
のＣＴＬＡ４には、細胞外ドメインに高度に保存されたストレッチを含む（Ｈａ
ｒｐｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１０３７−１０４４）。
このような高度に保存された領域から誘導されたペプチドを免疫原として使用し
て、交差特異的な抗体を生成し得る。種々の供給源由来のＣＴＬＡ４のヌクレオ
チドとアミノ酸の配列は当該分野で公知である。例えば、ヒトＣＴＬＡ４のヌク
レオチドおよびアミノ酸配列はＤａｒｉａｖａｃｈら（１９８８）Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１９０１；Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１
７４：５６１、または、Ｍｅｔｚｌｅｒら（１９９７）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．
Ｂｉｏｌ．４：５２５、または、Ｈａｒｐｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４７：１０３７に見出することができ、あるいは種々の公的または私的な
データベース（例えばＧｅｎＢａｎｋ）のいずれかでアクセスすることができる
。ヒトＣＴＬＡ４分子をコードするヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、それぞ
れ配列番号１および２に示される。
【００５５】 一つの実施形態において、免疫原は、完全タンパク質またはそのフラグメント
およびそれらの誘導体を含有し得る。好ましい免疫原には、ヒトＣＴＬＡ４の細
胞外ドメインの全部又は一部（例えば、配列番号２のおよそアミノ酸残基３６−
１６１あるいはおよそアミノ酸３８−１６１）が含有されており、これらの残基
には、ネイティブなＣＴＬＡ４で見出される翻訳後の改変、例えばグリコシル化
が包含される。細胞外ドメインを含有する免疫原は、当分野で公知の種々の方法
、例えば従来の組換え方法を用いるクローン化遺伝子の発現、Ｔ細胞からの単離
、高レベルのＣＴＬＡ４を発現する選別した細胞集団等、で生産される。他の実
施形態では、免疫原にＣＴＬＡ４分子またはその部分をコードするＤＮＡが含有
されている可能性がある。例えば、添付の実施例に記載のごとく、組換えヒトＣ
ＴＬＡ４の細胞外ドメインをコードするｃＤＮＡ２μｇを免疫原として使用する
ことができた。
【００５６】 好ましい実施形態では、免疫原はヒトＣＴＬＡ４分子である。好ましくは、Ｃ
ＴＬＡ４タンパク質には配列番号１またはその断片によってコードされるアミノ
酸配列が含有される。別の好ましい実施形態では、タンパク質に配列番号２また
はそのフラグメントのアミノ酸配列が含有される。例えば、ＣＴＬＡ４分子のア
ミノ酸配列は配列番号２に示されるものと異なり得、例えば供給源が異なり得る
か、あるいは改変されて免疫原性を増加し得る。一つの実施形態では、タンパク
質は、配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、さらにより好
ましくは少なくとも約９０％または９５％のアミノ酸同一性を有する。
【００５７】 ２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するため
に、配列を比較目的に最適となるように整列させる（例えば、最適な整列のため
に第１および第２のアミノ酸または核酸の配列の一方または両方に隙間を入れて
、そして非相同配列は比較目的について無視される）。好ましい実施形態では、
比較目的のために整列される参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３
０％、好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、なお
さらに好ましくは少なくとも６０％、そしてさらに好ましくは少なくとも７０％
、８０％または９０％である。次に対応する位置の残基を比較し、一方の配列の
ある位置と他方の配列の対応する位置とが同一の残基により占められている場合
は、その位置で分子は同一である。したがって、２つの配列間の同一性パーセン
トは、２つの配列が占める同一位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同
一位置数／全位置数×１００）。２つの配列間の同一性パーセントはこれらの配
列が占める同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適な整列のために導入す
ることが必要な隙間の数と各隙間の長さを考慮する。本明細書において使用され
る場合、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」
と等価である。
【００５８】 配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学アルゴリズ
ムを使って達成され得る。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一
性パーセントを決定するにあたり、ＧＡＰプログラムをＧＣＧソフトウェアパッ
ケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）で使用し、Ｂｌｏ
ｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかを使用し、
かつ隙間量を１６、１４、１２、１０、８、６または４とし、長さ量を１、２、
３、４、５または６にしている。さらに別の好ましい実施形態で、２つのヌクレ
オチド配列間の同一性パーセントを決定するにあたり、ＧＡＰプログラムをＧＣ
Ｇソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能
）で使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ、ＣＭＰマトリックスを使用し、かつ隙間重量
を４０、５０、６０、７０または８０とし、長さ重量を１、２、３、４、５また
は６にしている。
【００５９】 ＣＴＬＡ４の核酸およびタンパク質配列を「問合せ配列」として使用して公的
データーベースを検索すれば、例えば他のファミリーメンバーあるいは関連配列
を同定することができる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ら（１９９０
）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡ
ＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ２．０）を使用して実行できる。ＢＬＡＳＴヌ
クレオチド探索をＮＢＬＡＳＴプログラム、ｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅ
ｎｇｔｈ＝１２で実行すれば、本発明のＣＴＬＡ４核酸分子に相同なヌクレオチ
ド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質探索をＸＢＬＡＳＴプログラ
ム、ｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３で実行すれば、本発明のＣＴ
ＬＡ４タンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。Ｇａｐｐｅｄ
ＢＬＡＳＴをＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載のように利用すれば、比較目
的のための隙間整列を得ることができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄＢＬＡ
ＳＴプログラムを利用する際に、各プログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよび
ＮＢＬＡＳＴ）デフォルトパラメータを使用できる。例えば、本発明のヌクレオ
チド配列を分析するにあたり、ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｉｅｓをｅｘｉｓｔｅｎｃ
ｅ１１およびｅｘｔｅｎｓｉｏｎ１に設定してｄｅｆａｕｌｔ Ｂｌａｓｔｎマ
トリックス１−３を使用した。本発明のアミノ酸配列を分析するにあたり、ｇａ
ｐ ｐｅｎａｌｔｉｅｓをｅｘｉｓｔｅｎｃｅ１１およびｅｘｔｅｎｓｉｏｎ１
に設定したＢｌｏｓｕｍ６２ マトリックスというデフォルト設定を使用した。
ｈｔｔｐ／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．参照。
【００６０】 ＣＴＬＡ４キメラもしくは融合タンパク質またはこれらをコードする核酸分子
はまた、免疫原として使用され得る。本明細書においてＣＴＬＡ４「キメラタン
パク質」または「融合タンパク質」は、非ＣＴＬＡ４ポリペプチドに作動可能に
結合されたＣＴＬＡ４ポリペプチドを含む。「ＣＴＬＡ４ポリペプチド」は、Ｃ
ＴＬＡ４ポリペプチドに対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、
「非ＣＴＬＡ４ポリペプチド」は、ＣＴＬＡ４タンパク質に実質的に相同ではな
いタンパク質（例えば、ＣＴＬＡ４タンパク質と異なり、かつ同一または異なる
生物から誘発したタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドを
いう。ＣＴＬＡ４融合タンパク質の範囲内で、ＣＴＬＡ４ポリペプチドは、ＣＴ
ＬＡ４タンパク質の全てまたは一部に対応し得る。好ましい実施形態で、ＣＴＬ
Ａ４融合タンパク質は、ＣＴＬＡ４タンパク質の少なくとも一つの生化学的活性
部分（例えば、ＣＴＬＡ４タンパク質の細胞外ドメイン）を含む。融合タンパク
質の範囲内で、用語「作動可能に結合された」は、ＣＴＬＡ４ポリペプチドおよ
び非ＣＴＬＡ４ポリペプチドが相互にインフレームで融合することを意味するこ
とが意図される。非ＣＴＬＡ４ポリペプチドは、ＣＴＬＡ４ポリペプチドのＮ末
端またはＣ末端に融合され得る。
【００６１】 好ましくは、ＣＴＬＡ４融合タンパク質、またはＣＴＬＡ４融合タンパク質を
コードする核酸分子は、標準的な組換えＤＮＡ技術によって産生される。例えば
、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントは、例えば、連結、
制限酵素消化のための平滑末端化またはスタッガー末端化を使用する従来の技術
に従ってともにインフレームで連結して、適切な末端、接着末端の適切な導入、
所望でない連結を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結
を提供する。他の実施形態では、融合遺伝子は、自動化ＤＮＡ合成等の従来の技
術によって合成され得る。もしくは、引き続いてアニールされかつ再増幅されて
キメラ遺伝子配列を生じ得る、２つの連続する遺伝子フラグメントの間に相補的
なオーバーハングを招来するアンカープライマーを使用して、遺伝子フラグメン
トのＰＣＲ増幅は、実施され得る（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈ
ｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：１９９２を参照のこと）。さらに、融合部分（
例えば、ＧＳＴポリペプチドまたはＨＡエピトープタグ）をすでにコードする多
数の発現ベクターが、市販されている。ＣＴＬＡ４をコードする核酸は、融合部
分がＣＴＬＡ４タンパク質にインフレームで連結されるような発現ベクターにク
ローニングされ得る。このような融合部分は、ＣＴＬＡ４タンパク質またはその
一部のＣ末端またはＮ末端に連結され得る。
【００６２】 ＣＴＬＡ４タンパク質の改変体は、突然変異誘発（例えば、ＣＴＬＡ４タンパ
ク質での個々の点変異誘発または短縮化によって作製され得、そして免疫原とし
て使用され得る。一実施形態では、ＣＴＬＡ４タンパク質の変異体（例えば、短
縮化変異体）のコンビナトリアルライブラリーをＣＴＬＡ４タンパク質のアゴニ
スト活性またはアンタゴニスト活性についてスクリーニングすることにより、Ｃ
ＴＬＡ４タンパク質の改変体は、同定され得る。一実施形態では、ＣＴＬＡ４改
変体の多様なライブラリーは、コンビナトリアル変異誘発によって核酸レベルで
作製され、そして多様な遺伝子ライブラリーによってコードされる。ＣＴＬＡ４
改変体の多様なライブラリーは、例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を遺
伝子配列に酵素的に連結して、潜在的ＣＴＬＡ４配列の変性したセットが個々の
ポリペプチドとしてあるいはＣＴＬＡ４配列のセットをそこに含有するより大き
な融合タンパク質のセット（例えばファージディスプレイについて）として発現
されるようにすることによって産生され得る。変性オリゴヌクレオチド配列から
潜在的なＣＴＬＡ４改変体のライブラリーを作製するために使用され得る多数の
方法が、存在する。変性遺伝子配列の化学合成は、自動化ＤＮＡ合成機で実施さ
れ得、次いで、合成遺伝子は、適当な発現ベクターに連結され得る。変性遺伝子
セットの使用は、一回の混合で所望の潜在的なＣＴＬＡ４配列セットをコードす
る配列を全て供給し得る。変性オリゴヌクレオチドの合成方法は、当該分野にお
いて公知である（例えば、Ｎａｒａｎｇ，Ｓ．Ａ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８
：１０５６；Ｉｋｅら（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１１：
４７７を参照のこと）。
【００６３】 さらに、ＣＴＬＡ４タンパク質をコードする配列のフラグメントのライブラリ
ーを使用して、スリーニング、引き続くＣＴＬＡ４タンパク質の改変体の選択の
ための、ＣＴＬＡ４フラグメントの多様な集団を作製し得る。一実施形態では、
コード配列フラグメントのライブラリーは、ＣＴＬＡ４コード配列の二重鎖ＰＣ
Ｒフラグメントを分子当たり約１回のみのニッキングが生じる条件下にてヌクレ
アーゼで処理する工程、二重鎖ＤＮＡを変性する工程、異なるニック産物からセ
ンス／アンチセンス対を含み得る二重鎖ＤＮＡを再生する工程、Ｓ１ヌクレアー
ゼでの処理によって一本鎖部分が二重鎖体から除去される工程、および、生じた
フラグメントライブラリーを発現ベクターに連結する工程によって生成され得る
。この方法により、種々のサイズのＣＴＬＡ４タンパク質のＮ末端フラグメント
、Ｃ末端フラグメントおよび内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが
、誘導され得る。
【００６４】 点変異誘発または短縮化によって作製されたコンビナトリアルライブラリーの
遺伝子産物をスクリーニングするため、および選択された特性を有する遺伝子産
物についてｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技術が
、当分野で公知である。このような技術は、ＣＴＬＡ４タンパク質のコンビナト
リアル変異誘発によって作製された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニング
に適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーをスリーニングするために、最も
広範に使用されており、しかも高スループット分析に受容可能な技術としては、
以下が挙げられる：遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクローニン
グすること；生じたのベクターライブラリーで適切な細胞を形質転換すること；
所望の活性がその産物が検出される遺伝子をコードするベクターの単離を容易に
する条件下でコンビナトリアル遺伝子を発現させること。ライブラリーにおける
機能的変異体の頻度を増強する新しい技術である、反復アンサンブル変異（ｒｅ
ｃｕｒｓｉｖｅ ｅｎｓｅｍｂｌｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（ＲＥＭ）は、
スクリーニングアッセイと組合わせて使用して、ＣＴＬＡ４変異体を同定し得る
（ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｖａｎ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７８１１−７８１５：Ｄｅｌａｇｒａｖｅら（１９９３
）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６（３）：３２７−３３１）。
【００６５】 一実施形態では、細胞ベースのアッセイが、多様なＣＴＬＡ４ライブラリーを
分析するために使用され得る。例えば、発現ベクターのライブラリーは、通常Ｃ
ＴＬＡ４を合成かつ分泌する細胞系にトランスフェクトされ得る。次いで、形質
導入された細胞が培養され、その結果、ＣＴＬＡ４および特定の変異ＣＴＬＡ４
が分泌され、そして変異体の発現が細胞上清中のＣＴＬＡ４活性に及ぼす効果が
、例えば多数の酵素的アッセイのいずれかによって検出され得る。次いで、プラ
スミドＤＮＡは、ＣＴＬＡ４活性の抑制、あるいは増強についてスコア付けする
細胞から回収され得、そして個々のクローンはさらに、特徴付けられ得る。
【００６６】 単離されたＣＴＬＡ４タンパク質またはその部分もしくはフラグメント、ある
いはその一部のＣＴＬＡ４ポリペプチドをコードする核酸分子を免疫原として使
用して、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の製造についての標準的
な技術を用いてＣＴＬＡ４を結合する抗体を生成し得る。一実施形態では、完全
長のＣＴＬＡ４タンパク質、または完全長ＣＴＬＡ４タンパク質をコードする核
酸分子が、使用され得る。あるいは、ＣＴＬＡ４ポリペプチドの抗原性ペプチド
フラグメント（すなわち、抗原性応答を促進し得るフラグメント）、またはＣＴ
ＬＡ４ポリペプチドフラグメントをコードする核酸分子は、免疫抗原として使用
され得る。ＣＴＬＡ４ポリペプチドの抗原性ペプチドフラグメントは、典型的に
は、少なくとも８個のアミノ酸残基（例えば、配列番号２に示されるアミノ酸配
列の少なくとも８個のアミノ酸残基）を含み、そしてＣＴＬＡ４ポリペプチドの
エピトープを含み、その結果、そのペプチドに対して惹起された抗体は、ＣＴＬ
Ａ４分子との免疫複合体を形成する。抗原性ペプチドによって含まれる好ましい
エピトープは、タンパク質表面に位置されるＣＴＬＡ４ポリペプチドの領域、例
えば親水性領域である。他の実施形態で、抗体は、ＣＴＬＡ４ポリペプチドに特
異的に結合する。好ましい実施形態では，ＣＴＬＡ４ポリペプチドは、ヒトＣＴ
ＬＡ４ポリペプチドである。
【００６７】 好ましくは、抗原性ペプチドには、少なくとも約１０個のアミノ酸残基、より
好ましくは少なくとも約１５個のアミノ酸残基、さらにより好ましくは少なくと
も約２０個のアミノ酸残基、そして最も好ましくは少なくとも約３０個のアミノ
酸残基を含む。抗原性ペプチドによって含まれる好ましいエピトープは、タンパ
ク質表面（例えば、親水性領域）に位置されかつＣＴＬＡ４ポリペプチドに独特
であるＣＴＬＡ４の領域である。一実施形態において、このようなエピトープは
、マウスまたはヒトのようなある種に由来するＣＴＬＡ４タンパク質に特異的で
あり得る（すなわち、種にわたって保存されないＣＴＬＡ４ポリペプチドの領域
に広がる抗原性ペプチドは免疫原として使用される；このような保存されない残
基はアミノ酸配列を使用して（例えば、上記のプログラムのうち１つを使用して
）決定され得る）。ＣＴＬＡ４タンパク質の標準的な疎水性分析を実施して、親
水性領域を同定し得る。
【００６８】 典型的には、ＣＴＬＡ４免疫原を使用して、この免疫原で適切な対象体（例え
ば、ウサギ、ヤギ、マウス、または他の哺乳動物）を免疫することによって抗体
を調製する。適切な免疫原調製物には、例えば、ＣＴＬＡ４免疫原をコードする
核酸分子、組換え的に発現されるＣＴＬＡ４タンパク質、または化学的に合成さ
れたＣＴＬＡ４免疫原を含み得る。この調製物はさらに、フロイント完全アジュ
バントまたは不完全アジュバントのようなアジュバント、アルミニウム（ａｌｕ
ｍ）、サイトカイン、あるいは同様の免疫刺激性因子を含み得る。適切な対象体
の免疫原性ＣＴＬＡ４調製物での免疫は、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体の応
答が誘導する。
【００６９】 （ＩＩＩ．抗ＣＴＬＡ４抗体） 本発明の別の局面は、抗ＣＴＬＡ４抗体に関する。抗体は、典型的にはジスル
フィド結合によって互いに連結される二本の重鎖、および二本の軽鎖を含む。各
軽鎖は、ジスルフィド結合によりそれぞれの重鎖に連結される。各重鎖は、一方
の端に可変ドメイン、続いて多数の定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の端
に可変ドメイン、他方の端に定常ドメインを有する。軽鎖の可変ドメインは、重
鎖の可変ドメインと整列される。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一の定常ドメ
インと整列される。軽鎖および重鎖の定常ドメインは、抗体を抗原に結合するこ
とに直接的には関与しない。軽鎖および重鎖の各対の可変ドメインは、抗原結合
部位を形成する。
【００７０】 軽鎖および重鎖の上のドメインは、同一の一般構造を有し、そして各ドメイン
は、４つの領域の枠組を含み、それらの配列は比較的保存され、３つの相補性決
定領域（ＣＤＲ）によって連結される。４つの枠組領域は、概してベータシート
コンフォーメーションをとり、そしてＣＤＲは、ループを形成してベータシート
構造に連結し、ある場合にはその構造の一部となる。ＣＤＲは、枠組領域によっ
て近接して保持され、そして他のドメインからのＣＤＲとともに抗原結合部位の
形成に寄与する。抗体のＣＤＲおよび枠組領域は、Ｋａｂａｔら（「Ｓｅｑｕｅ
ｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔ
ｅｒｅｓｔ」ＵＳ Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅ
ｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ
，１９８７）に対する参照によって決定され得る。
【００７１】 ポリクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体は、前記のごとく適切な対象体をＣＴＬＡ４
免疫原で免疫することにより調製され得る。免疫化被験体における抗ＣＴＬＡ４
抗体の力価は、標準的な方法、例えば、固定化ＣＴＬＡ４ポリペプチドを使用す
る酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）で長期にわたりモニターされ得る。所
望であれば、ＣＴＬＡ４ポリペプチドに対する抗体分子は、哺乳動物（例えば、
血液）から単離され得、さらに周知の方法（例えば、ＩｇＧ画分を得るためのプ
ロテインＡクロマトグラフィー）で精製され得る。免疫化後の適切な時点で、例
えば、抗ＣＴＬＡ４抗体力価が最高の場合に、抗体産生細胞が、被験体から取得
され得、そしてこれを使用して標準的技術（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，ａｎｄ Ｍ
ｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７）によって
初めて記載されたハイブリドーマ技術（Ｂｒｏｗｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１２７：５３９−４６；Ｂｒｏｕｗｎら（１９８０）Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２５５：４９８０−８３；Ｙｅｈら（１９７６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７６：２９２７−３１；およびＹｅｈら（１９８２
）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ２９：２６９−７５もまた参照のこと）、より最
近のヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｏｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２）、ＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら（１９
８５），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ
Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７−９６）、あるい
はトリオーマ技術によってモノクローナル抗体を調製し得る。モノクローナル抗
体ハイブリドーマを生産する方法は、周知である（概して、Ｒ．Ｈ．Ｋｅｎｎｅ
ｔｈ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉ
ｍｅｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕ
ｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
（１９８０）；Ｅ．Ａ．Ｌｅｒｎｅｒ（１９８１）Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍ
ｅｄ．，５４：３８７−４０２；Ｍ．Ｌ．Ｇｅｆｔｅｒら（１９７７）Ｓｏｍａ
ｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．，３：２３１−３６を参照のこと）。概略すれ
ば、不死化細胞株（典型的には、ミエローマ）は、上記のＣＴＬＡ４免疫原で免
疫された哺乳動物由来のリンパ球（典型的には、脾細胞）に融合され、そして生
じたハイブリドーマ細胞の培養上清をスクリーニングして、ＣＴＬＡ４ポリペプ
チドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを同定す
る。
【００７２】 リンパ球と不死化細胞株を融合するのに使用される多数の周知のプロトコール
のいずれかは、抗ＣＴＬＡ４モノクローナル抗体を生成する目的に適用され得る
（例えば、Ｇ．Ｇｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６６：５５０５２；
Ｇｅｆｔｅｒら、Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．，上記で引用；Ｌｅ
ｒｎｅｒ，Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，上記で引用；Ｋｅｎｎｅｔｈ，
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，上記で引用、を参照のこと）。
さらに当業者は、このような方法の変型で有用なものが多数存在することを理解
する。典型的には、不死化細胞株（例えば、ミエローマ細胞株）は、リンパ球と
同一の哺乳動物種から誘導される。例えば、マウスのハイブリドーマが、本発明
の免疫原性調製物で免疫されたマウス由来のリンパ球を不死化マウス細胞株と融
合することによって作製され得る。好ましい不死化細胞株は、ヒポキサンチン、
アミノプテリンおよびチミジン含有の培養培地（「ＨＡＴ培地」）に感受性であ
るマウスのミエローマ細胞株である。多数のミエローマ細胞株（例えば、Ｐ３−
ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３、あるいはＳｐ２／Ｏ
−Ａｇ１４ミエローマ系のいずれか）は、標準的な技術に従って融合パートナー
として使用され得る。これらのミエローマ株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍ
ｄ．から入手可能である。典型的には、ＨＡＴ感受性マウスミエローマ細胞は、
ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を使用してマウス脾細胞に融合される。
次いで、融合により得られたハイブリドーマ細胞は、ＨＡＴ培地を使用して選択
される。この培地は、非融合ミエローマ細胞、および産生性のない融合ミエロー
マ細胞を殺滅する（非融合の脾細胞は形質転換されていないので、数日後に死滅
する）。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、例えば
標準的なＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＣＴＬＡ４分子を結合する抗体につい
てハイブリドーマ培養上清をスクリーニングすることによって検出される。
【００７３】 抗ＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４分子のどの部分にも結合し得る。好ましくは
、抗ＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４分子の細胞外ドメインに結合する。好ましい
抗体は、ＣＴＬＡ４分子に、そのＣＤ８０／ＣＤ８６の結合部位に空間的に近接
した部位で結合する。一実施形態において、ＣＴＬＡ４分子の位置４６のグルタ
ミン酸残基の置換によって、抗ＣＴＬＡ４抗体は、影響される。別の実施形態に
おいて、ＣＴＬＡ４分子の位置８５のアルギニンの置換によって、好ましい抗体
は、影響される。
【００７４】 好ましい抗体は、本明細書中に記載される抗ヒトＣＴＬＡ４モノクローナル抗
体の番号２５、２６、２７、２９、３３、３４、３５、３６、または３８である
。これらの抗体は、ＩｇＧ１のアイソタイプであることが判明した。これらの抗
体の調製および特徴は、添付の実施例において詳細に記載される。ハイブリドー
マ細胞は、ブダペスト条約の要件を充足するＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ
ｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに以下の登録番号で 年 月 日に寄
託された：ＡＴＣＣ登録番号＿＿（抗体２５またはハイブリドーマ ）、ＡＴＣ
Ｃ登録番号＿＿（抗体２６またはハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（
抗体２７またはハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（抗体２９またはハ
イブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（抗体３３またはハイブリドーマ ）
、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（抗体３４またはハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番
号＿＿（抗体３５またはハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（抗体３６
またはハイブリドーマ ）、およびＡＴＣＣ登録番号＿＿（抗体３８またはハイ
ブリドーマ ）。
【００７５】 特に好ましい抗ヒトＣＴＬＡ４抗体は、抗体２６であり、これは添付の実施例
において詳細に記載され、そしてＣＤ８０／ＣＤ８６への結合をブロックし、し
たがって、ＣＴＬＡ４を介する負のシグナルの伝達のブロックを生じる。抗体２
６のＶＨ領域およびＶＫ領域のアミノ酸配列は、実施例６に示される。抗体２６
のヒト化型のアミノ酸配列は、実施例７に提示される。
【００７６】 モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代替として、組換コンビナ
トリアル免疫グロブリンライブラリー（例えば抗体ファージディスプレイライブ
ラリー）をＣＴＬＡ４でスクリーニングし、それによりＣＴＬＡ４ポリペプチド
に結合する免疫グロブリンライブラリーのメンバーを単離することによって、モ
ノクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体は、同定および単離され得る。ファージディスプ
レイライブラリーを作成およびスクリーニングするためのキットは、市販されて
いる（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社のＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｈａｇｅ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅｍ（カタログ番号２７−９４００−０１）、Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ社のＳｕｒｆＺＡＰＴＭ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｋｉ
ｔ（カタログ番号２４０６１２））。さらに、抗体ディスプレイライブラリーを
作成およびスクリーニングするのに特に使用可能な方法および試薬の例は、例え
ば、（Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇらの国際公
開番号ＷＯ９２／１８６１９号；Ｄｏｗｅｒらの国際公開番号ＷＯ９１／１７２
７１号；Ｗｉｎｔｅｒらの国際公開番号ＷＯ９２／２０７９１号；Ｍａｒｋｌａ
ｎｄらの国際公開番号ＷＯ９２／１５６７９号；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇらの国際公
開番号ＷＯ９３／０１２８８号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの国際公開番号ＷＯ９
２／０１０４７号；Ｇａｒｒａｒｄらの国際公開番号ＷＯ９２／０９６９０号；
Ｌａｄｎｅｒらの国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ
らの米国特許第６，１７２，１９７号；Ｊｏｈｎｓｏｎらの米国特許第６，１４
０，４７１号；Ｊｅｓｐｅｒｓらの米国特許第６，０１７，７３２号；Ｇｒｉｆ
ｆｉｔｈｓらの米国特許第６，０１０，８８４号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの米
国特許第５，９６９，１０８号；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓらの米国特許第５，９６２
，２５５号；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓらの米国特許第５，８８５，７９３号；Ｂｏｒ
ｒｅｂａｅｃｋらの米国特許第６，０２７，９３０号；Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋら
の米国特許第５，７１２，０８９号；Ｆｕｃｈｓらの（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：１３６９−１３７２；Ｊｅｓｐｅｒｓらの（１９９
４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）１２：８９９−９０３；Ｈａｙら（１
９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１−８５；Ｈ
ｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆ
ｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎ
ｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｒｋ
ｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１
９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：３５７６−３
５８０；Ｇａｒｒａｒｄら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９
：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓら（１９９１）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７９７８−７９８２；
およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５
５４）に見出され得る。
【００７７】 Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂのような抗体フラグメントは、インタクト
なタンパク質の切断によって、例えばプロテアーゼまたは化学的切断によって調
製され得る。あるいは、短縮化遺伝子が設計される。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フ
ラグメントの一部をコードするキメラ遺伝子は、ＣＨ１ドメインおよびＨ鎖のヒ
ンジ領域をコードするＤＮＡ配列、引き続く短縮化分子を得るための翻訳停止コ
ドンを含む。例えば、ＨとＬのＪ領域の共通配列を使用してプライマーとして用
いるためのオリゴヌクレオチドを設計し、Ｖ領域セグメントをヒトＣ領域セグメ
ントに引き続いて連結させるのに有用な制限部位をＪ領域に導入し得る。Ｃ領域
ｃＤＮＡを部位特異的変異誘発によって改変して、ヒト配列における類似の位置
に制限部位を配置し得る。 抗体は、通常の多量体構造とする代わりに、単鎖として作製してもよい。単鎖
抗体は、Ｊｏｓｔら（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２６２６７
−７３他に記載されている。重鎖の可変領域および軽鎖の可変領域をコードする
ＤＮＡ配列を、グリシンおよび／またはセリンを含む小さな中性アミノ酸の少な
くとも約４個のアミノ酸をコードするスペーサーに連結する。この融合でコード
されるタンパク質によって、本来の抗体の特異性と親和性を保持する機能的な可
変領域を組立てることが可能になる。
【００７８】 インビボでの使用のために、特にヒトへの注入のために、阻止剤の抗原性を低
減させるのが望ましい。阻止剤に対するレシピエントの免疫応答により、治療の
有効期間が短くなる可能性がある。抗体をヒト化する方法は当分野で公知である
。ヒト化抗体は、トランスジェニックヒト免疫グロブリン定常領域遺伝子を持つ
動物の生産物とすることができる（例えば国際特許出願ＷＯ第９０／１００７７
号およびＷＯ第９０／０４０３６号を参照）。また、ヒト化抗体は、ＣＨ１、Ｃ
Ｈ２、ＣＨ３、ヒンジドメイン、および／または枠組ドメインを対応するヒト配
列で置換する組換えＤＮＡ技術によって操作されてもよい（ＷＯ第９２／０２１
９０号を参照）。
【００７９】 キメラ免疫グロブリン遺伝子を構築するのにＩｇ ｃＤＮＡを使用するのは、
当該分野で公知である（Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８４：３４３９および（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３
９：３５２１）。ｍＲＮＡは、抗体を産生するハイブリドーマまたは他の細胞か
ら単離し、ｃＤＮＡを産生するのに使用される。当該ｃＤＮＡは特異的なプライ
マーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって増幅してよい（米国特許第４，６
８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号）。代替的に、ライブラリーを
作製しスクリーニングして、当該配列を単離する。次に、抗体の可変領域をコー
ドするＤＮＡ配列をヒト定常領域配列に融合する。ヒト定常領域遺伝子の配列は
、Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏ
ｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎ．Ｉ．Ｈ．ｐｕｂｌｉ
ｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１−３２４２で見られる。ヒトＣ領域遺伝子は公知クロ
ーンから容易に得られる。アイソタイプの選定は、補体結合のような所望のエフ
ェクター機能、あるいは抗体依存性の細胞毒性における活性によって導かれる。
好ましいアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４である。ヒト軽
鎖定常領域のκまたはλのどちらかを使用できる。次に、キメラのヒト化抗体を
通常の方法で発現する。
【００８０】 キメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技
術によって、例えば（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０
２２６９；Ａｋｉｒａらの欧州特許出願第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈ
ｉ，Ｍ．，の欧州特許出願第１７１，４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎらの欧州特許
出願第１７３，４９４号；ＮｅｕｂｅｒｇｅｒらのＰＣＴ出願国際公開８６／０
１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌ
ｙらの欧州特許出願第１２５，０２３号；Ｈａｒｄｍａｎらの米国特許出願第５
，８４３，７０８号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１
０４１−１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９：３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４−２１８；Ｂｅｎｄｉｎｇ，Ｍ．Ｍ
．ら（１９９５）「Ｒｏｄｅｎｔ ｔｏ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｂｙ ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ」Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
；Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ編、Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄ．Ｊ．
，ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｊ．およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．ＩＲＬ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ．Ｐ１４７；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃ
．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３
１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．（
１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら（１９８６）
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；Ｗｉｎｔｅｒ 米国特許第５，２２
５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−５２
５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；な
らびにＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−
４０６０）に記載の方法を使用して作製することができる。さらに、ヒト化抗体
は、米国特許第５，７７７，０８５号、同第５，５３０，１０１号、同第５，６
９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，８８２，６４４号、同第
５，８３４，５９７号、同第５，９３２，４４８号、同第５，５６５，３３２号
に開示される標準プロトコールに従って作製することができる。
【００８１】 完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体は、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（１９９５
）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３；Ｌｏｎｂｅｒｇらの米
国特許第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，
３１８号、同第５，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６
６１，０１６号、第５，６３３，４２５号、第５，６２５，１２６号、第５，５
６９，８２５号、第５，５４５，８０６号：Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらの米国
特許第６，１６２，９６３号、同第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５
９８号、同第６，０７５，１８１号の方法を使用して、ヒト免疫グロブリン遺伝
子が導入された動物（例えばマウス）を免疫化することによって作製してもよい
。
【００８２】 例えば、例えばＥＰ−Ａ−０２３９４００に従って、所望のＣＤＲをヒト枠組
の上に移植して、抗体をヒト化してもよい。よって所望の作り直し抗体をコード
するＤＮＡ配列は、作り直しを所望するＣＤＲが存在するヒトＤＮＡから始まる
よう作製することができる。所望のＣＤＲを含有する、げっ歯類動物の可変ドメ
インアミノ酸配列は、選定したヒト抗体可変ドメイン配列のアミノ酸配列と比較
される。ヒト可変ドメインがげっ歯類動物のＣＤＲを組み込むようするために、
げっ歯類動物の対応する残部に変更する必要があるヒト可変ドメインの残基は、
標識される。また、置換、例えばヒト配列に追加またはヒト配列から除去する必
要のある残部があるかもしれない。オリゴヌクレオチドを合成し、これを使用し
てヒト可変ドメイン枠組を変異誘発して所望の残部を含むようにすることができ
る。それらのオリゴヌクレオチドのサイズは適宜でよい。
【００８３】 代替的に、ヒト化は、ＷＯ第９２／０７０７５号組換えポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）法を使って達成することもできる。この方法を使って、ヒト抗体の枠
組領域の間にＣＤＲをスプライスすることができる。一般に、ＷＯ第９２／０７
０７５号技術は、２つのヒト枠組領域ＡＢおよびＣＤ、そしてそれらの間の、供
与（ｄｏｎｏｒ）ＣＤＲで置換されるＣＤＲを含む鋳型を使用して行うことがで
きる。プライマーＡおよびＢを使用して枠組領域ＡＢを増幅し、プライマーＣお
よびＤを使用して枠組領域ＣＤを増幅する。しかし、プライマーＢおよびＣは、
それぞれ５’端に、供与ＣＤＲ配列の全部又は少なくとも部分に対応する追加配
列も含んでいる。プライマーＢおよびＣは十分な長さオーバーラップして、５’
端を互いに、ＰＣＲを実行できる条件でアニーリングすることができる。かくて
、増幅された領域ＡＢおよびＣＤは、オーバーラップの進展により遺伝子のスプ
ライシングを受けて、単一の反応の中でヒト化産物を産生し得る。
【００８４】 一つの方法において、ＣＴＬＡ４に結合可能な免疫グロブリンの部分をコード
するポリヌクレオチドを、適切なヒト枠組領域をコードするポリヌクレオチドに
結合することによって、ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体を作製することができる。典型
的なヒト化方法は、例えば（ｉｎ Ｑｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９または、米国特許第５，５８
５，０８９号、同第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５
，５３０，１０１号）に見ることができ、それらの教示は全体として本発明書中
に援用される。ヒト枠組領域の選択には、ＣＤＲ供与非ヒト免疫グロブリンの枠
組または可変領域のアミノ酸配列を、ヒト免疫グロブリン配列コレクションの中
の対応配列と比較し、相同性の高い配列を選択する。選択にあたっての原則は、
受容体として、ヒト化すべきドナー免疫グロブリンに異常に相同的な特定のヒト
免疫グロブリン由来の枠組を使用するか、または多数のヒト抗体由来のコンセン
サス枠組を使用することである。例えば、マウスの重（または軽）鎖可変領域の
配列をデータバンク（例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ
ｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ）のヒト重（または軽）鎖可変領域と比較すると、
異なるヒト領域に対する相同性の程度は、大幅に、典型的には約４０％から約６
０−７０％変動することが判明する。ドナーの免疫グロブリンの重（または軽）
鎖可変領域に最も相同性があるヒト重（または軽）鎖可変領域の免疫グロブリン
を受容体として選択することにより、ドナー免疫グロブリンからヒト化免疫グロ
ブリンに移行する際に変更の必要があるアミノ酸の数が少なくなる。したがって
、ＣＤＲ近傍のアミノ酸の変更であって、ＣＤＲの配座をゆがめる機会がますま
す小さくなる。さらに、ヒト化免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体の厳密な全体
の形は、ドナー抗体の形にますます近似し、またＣＤＲをゆがめる機会が減少す
る。コドンの縮重および非重要アミノ酸の置換に起因して、以下で詳述するよう
に、他のポリヌクレオチド配列をこれらの配列の代わりに容易に代用することが
できる。
【００８５】 ヒト化抗体を作製する際に、使用するヒトＩｇのアミノ酸（ヒト受容体配列）
は、それらがＣＤＲ内のものであれば、非ヒト原料Ｉｇ（ドナーの配列）由来の
対応アミノ酸で置換することができる。
【００８６】 本発明の別の実施形態で、上記の段階と関連してまたは別途に、受容体の免疫
グロブリン鎖における付加的なアミノ酸がＣＤＲドナーの免疫グロブリン鎖由来
のアミノ酸で置換され得る。さらに詳細に言えば、受容体の免疫グロブリンのヒ
ト枠組アミノ酸が、以下のカテゴリーの一以上に該当する位置で、ドナーの免疫
グロブリン由来の対応アミノ酸でさらに置換され得る： （１）受容体の免疫グロブリンのヒト枠組領域中のアミノ酸がヒト免疫グロブリ
ン配列の該当位置に存在することは稀れまたは異例であり、ドナーの免疫グロブ
リン中の対応アミノ酸がヒト免疫グロブリン配列の該当位置に通常存在する； （２）アミノ酸がＣＤＲの一つに直接に隣接している； （３）アミノ酸は、免疫グロブリンの三次元モデルにおいてＣＤＲの約３オング
ストローム以内に存在すると予見され、かつ抗原との、あるいはドナーまたはヒ
ト化免疫グロブリンのＣＤＲとの相互作用が可能である。
【００８７】 さらに、以下の場合に、受容体の配列中のアミノ酸が、該当位置でヒト配列に
特徴的なアミノ酸で任意に置換される可能性がある： （４）受容体の免疫グロブリン中のアミノ酸が該当位置に存在することは稀であ
り、ドナーの免疫グロブリンに存する対応アミノ酸も、他のヒト配列に比べると
、稀である。
【００８８】 ヒト化免疫グロブリン鎖には通常、ＣＤＲに加えてドナー免疫グロブリン由来
の少なくとも約３個のアミノ酸が含まれており、通常はその内の少なくとも１個
がドナー免疫グロブリンのＣＤＲに直接に隣接している。重鎖および軽鎖はそれ
ぞれ三つの位置基準のいずれか１または３全部を使用して設計され得る。
【００８９】 本発明のヒト化軽鎖および重鎖は、完全（ｉｎｔａｃｔ）抗体の中に組み込ん
だ場合、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、抗原（タンパク質、あるいは
エピトープ含む他の化合物等）に対しドナー免疫グロブリンと実質的に同一の親
和性を保持している。これらの親和性のレベルは約１０８／Ｍ−１以上から変動
し、ドナー免疫グロブリンの約４倍以内、好ましくは約２倍以内であり得る。ヒ
ト化抗体は、抗原に対しドナー免疫グロブリンの本来の親和性の少なくとも約６
０〜９０％の親和性レベルを示すのが理想である。
【００９０】 通常、少なくとも約１０から２０個の異なるヒト重鎖の代表的なコレクション
の中の最も相同的な３ないし５個の重鎖可変領域配列から１個を、重鎖枠組を与
える受容体として選定する。軽鎖についても同様の選定を行う。好ましくは、１
ないし３個の最も相同的な可変領域の中の１個を使用する。選定された受容体免
疫グロブリン鎖には、その枠組領域においてドナー免疫グロブリンに対して少な
くとも約６５％の相同性があるのが最も好ましい。
【００９１】 多くの場合に、受容体配列として同一のヒト抗体由来の軽鎖および重鎖を使用
し、確実にそのヒト化軽鎖および重鎖が有利な相互接触をするのが好ましいと考
えられるかもしれない。この場合、ドナーの軽鎖および重鎖は、全配列が公知の
ヒト抗体、例えばＥｕ、Ｌａｙ、Ｐｏｍ、Ｗｏｌ、Ｓｉｅ、Ｇａｌ、Ｏｕ、ＷＥ
Ａ抗体に由来する鎖に対してのみ比較される（例えば、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓ
ｔ」Ｋａｂａｔ，Ｅ．ら Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ
ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８７）を参照）。時折、ヒト
鎖の最後のアミノ酸数個が未知で、他のヒト抗体への相同によって推定されなけ
ればならない。ヒト抗体は、その軽鎖および重鎖の可変領域配列が、総合して、
ドナーの軽鎖および重鎖の可変領域配列に全体的に最も相同的なものが選定され
る。時折、重鎖配列により大きなウエイトが与えられる。この場合に選定された
ヒト抗体は軽鎖および重鎖受容体配列の両方を与える。実際に、ヒトＥｕ抗体は
この役割をすることがしばしば見られる。
【００９２】 受容体免疫グロブリンの選定方法に関係なく、ヒト化免疫グロブリン鎖の枠組
に存在する少数のアミノ酸を、受容体よりもむしろドナーにおける該当位置のア
ミノ酸と同一となるよう選択することにより、高い親和性が達成される可能性が
ある。第二の原則は、どのようなアミノ酸をドナーから選択したらよいかが以下
のカテゴリーにより明瞭になることである。次のカテゴリーの一つにある多くの
または全てのアミノ酸位置にドナーのアミノ酸が実際に選択されるのが好ましい
。
【００９３】 カテゴリー１：ＣＤＲ中のアミノ酸位置は以下により定義される。例えば、「
Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ
ａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」 Ｋａｂａｔ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａ
ｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，
（１９８７）を参照。
【００９４】 カテゴリー２：ヒト受容体免疫グロブリンの枠組中のアミノ酸が異例（すなわ
ち「稀れ」、これは本明細書中で用いられるように、アミノ酸が、代表的なデー
タバンクにあるヒト重（軽）鎖Ｖ領域配列の約２０％未満、普通は約１０％未満
において該当位置に発生することを意味する）であり、かつ該当位置のドナーの
アミノ酸がヒト配列について特徴的（すなわち、「一般的」、これは本明細書中
で用いられるように、アミノ酸が代表的なデータバンクにある配列の約２５％よ
り多く、普通は約５０％より多くにおいて発生することを意味する）である場合
には、受容体よりもむしろドナーのアミノ酸を選択するのがよい。この規準は、
ヒト枠組の異常なアミノ酸が抗体構造を崩壊しないことを確実にするのに役立つ
。さらに、異例なアミノ酸を、ドナー抗体由来のアミノ酸であってヒト抗体にた
またま特徴的なアミノ酸で置換することにより、ヒト化抗体の免疫原性をより少
なくすることができる。
【００９５】 ヒト軽鎖および重鎖の可変領域配列は全てそれぞれ、相互に特に相同的でかつ
特定の重要な位置に同一のアミノ酸を有する配列の「サブグループ」に分けられ
る（例えば、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ら，Ｕ．Ｓ．Ｄｅ
ｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ
ｓ，（１９８７）を参照）。ヒト受容体配列のアミノ酸がヒト配列の中で「稀れ
」であるかまたは「一般的」であるかを決定する際には、受容体配列と同一のサ
ブグループに属するヒト配列のみを考慮するのがしばしば好ましい。
【００９６】 カテゴリー３：ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列における３つのＣＤＲのう
ち１以上に直接的に隣接する位置には、受容体ミノ酸よりもドナーアミノ酸を選
択するのがよい。これらのアミノ酸は、ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用し、それ
らが受容体から選択される場合にはドナーのＣＤＲを捻じ曲げ、親和性を低下す
る可能性が特に高い。さらに、隣接アミノ酸は抗原と直接に相互作用する可能性
があり（Ａｍｉｔら，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２３３，７４７−７５３（１９８６）、
この記載内容は参照により本明細書中に援用される）、これらのアミノ酸をドナ
ーから選択することは、元の抗体中で親和性を提供するすべての抗原接触を維持
するために望ましい場合がある。
【００９７】 カテゴリー４：典型的には元のドナー抗体の三次元モデルが、ＣＤＲの外側の
特定のアミノ酸はＣＤＲに接近しており、ＣＤＲのアミノ酸と水素結合、ファン
デルワールス力、疎水的相互作用等によって相互作用する確率が十分あることを
示す。それらのアミノ酸位置には、受容体免疫グロブリンアミノ酸よりもむしろ
ドナー免疫グロブリンアミノ酸が選択されるのがよい。一般にこの規範によるア
ミノ酸では、側鎖の原子が、ＣＤＲのある原子の約３オングストローム単位以内
にあり、上に挙げたような確立した化学的な力によってＣＤＲ原子との相互作用
が可能な原子を含まなければならない。水素結合を形成できる原子の場合、相互
の核の間が３オングストロームあるが、結合を形成しない原子の場合、相互のフ
ァンデルワールス表面の間が３オングストロームある。したがって、後者の場合
には、原子が相互作用可能と考えられるためには核は約６オングストローム（３
＋ファンデルワールス半径の合計）以内に存在しなければならない。多くの場合
、核は４または５から６オングストローム離れている。アミノ酸がＣＤＲと相互
作用可能かどうかを判断する際には、重鎖ＣＤＲ２の最後の８個のアミノ酸はＣ
ＤＲの構成部分とは考えないのが好ましい。理由は、構造的観点からこれら８個
のアミノ酸はむしろ枠組の構成部分として行動するからである。
【００９８】 ＣＤＲアミノ酸と相互作用可能な、したがってカテゴリー４に属する、枠組中
のアミノ酸は、別の方法で区別するのがよい。各枠組アミノ酸の溶媒に接触可能
な表面積を計算するには二つの方法がある。すなわち、（１）完全抗体において
、（２）ＣＤＲを除去した抗体からなる仮定分子において、である。両者の数字
の間には約１０平方オングストロームの有意差があることから、枠組アミノ酸の
溶媒に対する接触は少なくとも部分的にＣＤＲに阻止されており、したがってア
ミノ酸はＣＤＲと接触していることが判る。アミノ酸の溶媒に接触可能な表面積
は、抗体の三次元モデルを基に当分野で公知のアルゴリズムを用いて計算できる
（例えばＣｏｎｎｏｌｌｙ，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．１６，５４８（１９８
３）ならびにＬｅｅおよびＲｉｃｈａｒｄｓ（１９７１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．５５：３７９、両者とも参照により本明細書中に援用される）。また枠組アミ
ノ酸は、他の枠組アミノ酸の配座に影響を及ぼし次にそのアミノ酸がＣＤＲに接
触するということにより、間接的にＣＤＲと相互作用をすることがしばしばある
。
【００９９】 枠組の数カ所の位置のアミノ酸は、多くの抗体のＣＤＲと相互作用可能である
ことが知られており（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．１９６：９０１：Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４
２：８７７；およびＴｒａｍｏｎｔａｎｏら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．２１５：７５、これらは全て参照により本明細書中に援用される）、特に軽鎖
の位置２、４８、６４、７１および重鎖の位置２６〜３０、７１、９４（ナンバ
リングはＫａｂａｔ，ｏｐ．ｃｉｔ．による）では顕著であり、したがって、こ
れらのアミノ酸は一般にカテゴリー４に入る。本発明のヒト化免疫グロブリンに
は、これらのアミノ酸以外にカテゴリー４のドナーアミノ酸（異なる場合）が典
型的に含まれている。
【０１００】 抗体のようなタンパク質のモデルを作るコンピュータプログラムは一般に入手
可能であり、当業者に周知である（Ｌｅｖｙら（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ ２８：７１６８−７１７５；Ｂｒｕｃｃｏｌｅｒｉら（１９８８）Ｎａ
ｔｕｒｅ ３３５：５６４−５６８；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８６）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２３３：７５５−７５８を参照。これらは全て参照により本明細書中に援
用される）。実際、抗体は全て類似の構造をしているので、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅ
ｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋから入手可能な公知の抗体構造を、他
の抗体のラフモデルとして必要に応じ使用することができる。市販品で入手可能
なコンピュータプログラムを使用して、これらのモデルをコンピュータモニタ上
に表示し、原子間距離を計算し、異なるアミノ酸の相互作用の可能性を予測する
ことができる（Ｆｅｒｒｉｎら（１９８８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｇｒａｐｈｉｃｓ ６
：１３−２７を参照）。
【０１０１】 ヒト化免疫グロブリンのアミノ酸をドナーから採取する場合を述べている上記
カテゴリー以外に、ヒト化免疫グロブリンのある種のアミノ酸が次のカテゴリー
に相当する場合には、このアミノ酸をドナーからも受容体からも採取できない。
【０１０２】 カテゴリー５：ドナー免疫グロブリンのある位置のアミノ酸がヒト配列には「
稀れ」であり、また受容体免疫グロブリンの該当位置のアミノ酸もヒト配列には
「稀れ」である場合には、上記に定義したように、ヒト化免疫グロブリンの該当
位置のアミノ酸は、ヒト配列の「典型的な」あるアミノ酸であるように選択する
のがよい。好ましい選択は、受容体配列と同一のサブグループに属する公知ヒト
配列の該当位置に最も高頻度で発生するアミノ酸である。
【０１０３】 ヒト定常領域ＤＮＡ配列は、周知の手順に従って各種のヒト細胞から、好まし
くは不死化Ｂ細胞から単離し得る（例えば、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」Ｋａｂ
ａｔ，Ｅ．，ら，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ
Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８７）および国際公開第８７／０２６
７１号を参照）。本発明の免疫グロブリンを生産するためのＣＤＲは、ＣＴＬＡ
４に結合可能なモノクローナル抗体から同様に得られ、周知方法で抗体産生可能
なマウス、ラット、ウサギ、その他脊椎動物を含む任意の好適な哺乳動物起源で
産生される。ポリヌクレオチド配列のための適切な起源の細胞、および免疫グロ
ブリンの発現と分泌のための宿主細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｌｉ
ｎｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｆｉｆｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８
５）Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．、これは参考として本明細書中
において援用される）などの多数の出所から入手し得る。
【０１０４】 他の実施形態において、抗体鎖または特異的な結合対のメンバーは、特異的結
合対メンバーの融合ポリペプチド鎖および複製可能な遺伝子ディスプレイパッケ
ージの成分をコードする核酸分子を含むベクターと、単結合対メンバーの２番目
のポリペプチド鎖をコードする核酸分子を含むベクターとの間の組換えによって
、例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，８７１，９０７号、同第
５，８５８，６５７号、または同第５，７３３，７４３号に記載されるような当
分野で公知の技術を使用して産生し得る。
【０１０５】 （ＩＶ．免疫毒素） 本発明の抗体または抗体部分は誘導体化されるか、あるいは他の機能性分子（
例えば、ペプチドまたはポリペプチド）と結合し得る。従って、本発明の抗体ま
たは抗体部分は、本明細書に記載される抗ＣＴＬＡ４抗体の誘導体化された形態
、さもなくば変性された形態を含むことを意図とし、例えば、他の分子（例えば
他のＴ細胞マーカーＴ細胞に結合する抗体またはポリペプチド）に結合する抗体
を含む。例えば、本発明の抗体または抗体部分は、他の抗体（例えば、二特異性
抗体またはダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）を作製する）、検出可能な試薬、細
胞毒性剤（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｇｅｎｔ）、薬剤、および／または他の分子
（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなど）と抗体または抗
体分子との結合を媒介し得るタンパク質またはペプチドなどの、１つまたは複数
の他の分子種に機能的に（化学結合、遺伝的融合、非共有的会合または他の方法
で）結合し得る。
【０１０６】 誘導体化抗体の１種は、２つ以上の抗体（例えば、二特異的抗体を作製するた
めの同じタイプまたは異なったタイプ）を架橋して産生される。適した架橋剤と
しては、適当なスペーサー（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステル）またはホモ二官能性（例えば、ジスクシンイミジル
スベリン酸塩）によって分離された２つの別個の反応性基を有するヘテロ二官能
性であるものが挙げられる。このようなリンカーはＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬから入手可能である。
【０１０７】 本発明の抗体または抗体部分が誘導体化され得る有用な検出可能な試薬として
は、蛍光性化合物が挙げられる。蛍光性検出可能試薬の例としては、フルオレセ
イン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−
１−ナフタレンスルホニルクロライド、フィコエリトリンなどが挙げられる。抗
体はまた、アルカリホスファターゼ、西洋ホースラディッシュパーオキシダーゼ
、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素で誘導体化され得る。抗体が検
出可能な酵素で誘導体化される場合、酵素により検出可能な酵素反応生産物を産
生することが、さらなる試薬を添加することによって検出される。例えば、検出
可能な試薬、ホースラディッシュパーオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素
およびジアミノベンジジンの添加により検出可能な着色反応生成物となる。抗体
はビオチンで誘導体化され得、アビジンまたはストレプトアビジンの結合を間接
的な測定により検出され得る。
【０１０８】 １つの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、被験体に
注入して、活性化Ｔ細胞の破壊をもたらす。ＣＴＬＡ４は、活性化Ｔ細胞上でも
っぱら発現する。すなわち、ＣＴＬ４Ａは活性化Ｔ細胞上にのみ存在するから、
ＣＴＬ４Ａに結合し、かつ、ＣＴＬ４Ａを標的とする免疫毒素は、これらの特異
的細胞を欠乏（ｄｅｐｌｅｔｅ）させるために使用され得る（例えば、抗体へ毒
性部分を結合により切除することによって）。
【０１０９】 広範囲の毒性分子が当該技術分野で既知であり、本発明の抗体と結合し得る（
Ｈｅｒｔｌｅｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｋｅｌ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏ
ｌ．７：１９３２−１９４２）。例えば、毒性部分は内部移行しないで細胞膜を
破壊し、毒性部分は非特異的機能により内部移行するか、あるいは毒性部分は、
例えば細胞上の特異的レセプタータンパク質との直接相互作用によって特異的に
内部移行し得る。請求の本発明に使用する毒性部分は、例えば天然または合成の
ものである。毒性部分は、タンパク質性または非タンパク質性（例えば、オリゴ
糖）であり得る。その例としては、多くの有用な植物、菌、または細菌由来の毒
性部分が挙げられ、一例として、種々のＡ鎖毒性部分、特にリシンＡ鎖、サポリ
ンまたはゲロニンなどのリボソーム不活性タンパク質、α−サルシン（ｓａｒｃ
ｉｎ）、アスペルギリン、レストリクトシン、胎盤リボヌクレアーゼなどのリボ
ヌクレアーゼ、血管新生剤、ジフテリア毒素、およびシュードモナス菌外毒素、
ならびにカリケアミシンが挙げられ、以下により詳細に説明する。
【０１１０】 例えば、１つの実施形態では、毒性部分の例としては、定義によりリボソーム
翻訳機構を直接に抑制し得る「リボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）」が挙げ
られる。ヘテロ二量体ペプチドリシンは、トウゴマ植物（Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏ
ｍｍｕｎｉｓ）から誘導され、このような毒性部分の１つの例である。リシンの
毒性活性は、そのサブユニット（リシンＡ鎖）の１つに全体的に見られる。１つ
の実施形態では、請求の本発明に使用する毒性部分は、毒素分子の活性サブユニ
ットである。リシンＡ鎖は、２８ＳｒＲＮＡの４３２４位に１つのアデニンを特
異的に脱プリン化することにより、リボソーム機能を不活性化すると考えられる
（Ｃｈｅｎら（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７：１１６０５，Ｋｏ
ｅｈｌｅｒら（１９９４）Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １
３：５７１−５７５；Ｄｕｋｅ−Ｃｏｈａｎら（１９９３）Ｂｌｏｏｄ ８２：
２２２４−３４）。他の二連（ｂｉｐａｒｔｉｔｅ）ＲＩＰ毒性部分はアブリン
であり、これは、トウアズキ（Ａｂｒｕｓ ｐｒｅｃａｔｏｒｉｕｓ）由来であ
り、リシンＡと同じ機構でタンパク質翻訳を不活性化することが公知である（Ｋ
ｒｕｐａｋａｒら（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３８：２７３−２７９）
。本発明と関連して使用し得る他のＲＩＰは、植物性細胞毒素サポリンおよびゲ
ロニンを含む。カビＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓからサルシン
Ａ毒性分子が誘導されるように（Ｌａｃａｄｅｎａら（１９９９）Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ３７：４７４−４８４）、微生物Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉ
ａｅ由来のＳｈｉｇａ−Ａ毒性部分もまたＲＩＰとして機能する（Ｆｒａｓｅｒ
，Ｍ．Ｅ．（１９９４）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌ．１：５９−
６４）。リシンＡを含み、毒性部分に類似した抗体−毒性部分複合体は、以前に
米国特許第４，５９０，０１７号、第４，９０６，４６９号、第４，９１９，９
２７号および第５，９８０，８９６号に記載されている（これらは、本明細書中
で参考として特に援用される）。
【０１１１】 タンパク質伸長因子２（ＥＦ−２）（例えば細菌ジフテリア毒素（Ｃｏｒｙｎ
ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ由来）をＡＤＰ−リボシル化し
、タンパク質合成を阻害する毒性部分（Ｆｏｌｅｙら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７０：２３２１８−２３２２５）もまた、本発明の抗体−毒性部
分結合体に使用し得る。ジフテリア毒素を含む抗体−毒性部分結合体またはＥＦ
−２をＡＤＰ−リボシル化する関連毒性部分は、米国特許第４，５４５，９８５
号に以前に記述されている。
【０１１２】 他の潜在的毒性部分は、微小管機能を妨げることによって真核生物細胞死をも
たらすことができ、その結果、分裂停止を生じる（Ｉｗａｓａｋｉ（１９９８）
Ｙａｋｕｇａｋｕ Ｚａｓｓｈｉ １１８：１１２−１２６）。このような毒性
部分の例は、ある蘚類（例えば、ｍａｙｔｅｎｕｓ ｂｕｃｈａｎａｎｉｉ；Ｌ
ａｒｓｏｎら（１９９９）Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．６２：３６１−３６３）に見
出されるマイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）化合物（Ｔａｋａｈａ
ｓｈｉら（１９８９）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２０：５３−５９）であ
る。マイタンシノイドを含む抗体−毒性部分結合体は、米国特許第５，２０８，
０２０号に以前に記載されている。
【０１１３】 なおも他の毒性部分は、アデニレートシクラーゼｃＡＴＰシステムを活性化す
ることができ、膜を通してアニオンおよびカチオンの未制御輸送を生じる。この
種の毒性部分の例としては、液体分泌および腸内細胞の出血を生じさせる微生物
であるＶｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ由来のコレラ毒素（ｄｅ Ｈａａｎら（
１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．７６：２７０−２７９）があ
る。
【０１１４】 細菌百日咳毒素（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来）は、サイ
トカインとホルモンレセプターによって誘導されるものを含めて、多くの細胞外
シグナル経路への形質導入において主要要素である真核細胞Ｇタンパク質複合体
を特異的に標的とし得る。百日咳毒素は、Ｇタンパク質複合体のサブユニットを
ＡＤＰリボシル化することができ、その制御活性の脱共役（ｕｎｃｏｕｌｉｎｇ
）を生じる（Ｌｏｃｈｔ ａｎｄ Ａｎｔｏｉｎｅ （１９９５）Ｂｉｏｃｈｉ
ｍｉｅ ７７：３３３−３４０）。
【０１１５】 １つの実施形態では、本発明の抗体−毒性部分結合体に使用する毒性部分はオ
リゴ糖である。例えば、オリゴ糖、カリケアミシンは、ＤＮＡの副溝（ｍｉｎｏ
ｒ ｇｒｏｏｖｅ）に優先的に結合する炭水化物の１分類のうちの１つとして同
定された細菌産物である（Ｋａｈｎｅ（１９９５）Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：７
−１２）。カリケアミシンは、ＤＮＡデオキシリボース基の４’炭素から水素原
子を非特異的に抽出し、正常な細胞修復機構に対して耐性を示す末端３’−ホス
ホグリコール酸基を有する２本鎖ＤＮＡ切断を生じさせることが知られている（
Ｃｈａｕｄｈｒｙら（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５７：
５３１−５３８）。カリケアミシンは、本発明とともに使用するのに好ましい毒
性分子である。抗体カリケアミシン結合体は既に記載されている（Ｓｉｅｖｅｒ
ｓら（１９９９）Ｂｌｏｏｄ ９３：３６７８−３６８４；Ｌｏｄｅら（１９９
８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８）。ＣＣ−１０６５など
の他の合成細胞毒化合物は、カリケアミシンと同様なＤＮＡ分裂機構を有し、当
該技術分野で既知である（Ｇｕｎｚ ａｎｄ Ｎａｅｇｅｌｉ （１９９６）Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５２：４４７−４５３）。カリケアミシン
がジスルフィド結合で抗体に共有結合している抗体−毒性部分結合体は、以前に
米国特許第５，７７３，００１号および第５，７３９，１１６号に記載されてい
る。
【０１１６】 毒性部分の他の分類例としては、真核生物膜中に致死穴（ｌｅｔｈａｌ ｈｏ
ｌｅ）を形成することができ、その結果、エンドサイトーシス内部移行を必要と
しないで細胞死をもたらす細菌毒性部分がある。アエロリジンがこのような毒性
部分の１つの例である。アエロリジンは細胞表面へ結合するときに膜中にヘパト
マー（ｈｅｐａｔｏｍｅｒ）チャネルを形成し得る（Ｐａｒｋｅｒら（１９９６
）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９：２０５−２１２；Ｂｕｃｋｌｅｙ（１９
９１）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉａ ４７：４１８−４１９）。アエロリジンを含
む分子結合体は以前に米国特許第５，８２４，７７６号および第５，８１７，７
７１号に記載されている。
【０１１７】 毒成部分活性が抗体の細胞への結合時に適切に送達されるように、抗体に対し
て毒性部分を結合するために、当該技術分野で多くの既知方法が存在する（Ｇｈ
ｏｓｅ ａｎｄ Ｂｌａｉｒ（１９８７）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕ
ｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．３：２６３−３５９；Ｈｅｒｍｅｎｔｉｎ ａ
ｎｄ Ｓｅｉｌｅｒ（１９８８）Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．８２：
１９７−２１５）。例えば、細胞毒性剤がタンパク質であり、第２成分が未処置
免疫グロブリンである場合、その結合はヘテロ二官能性架橋剤（例えばＳＰＤＰ
、カーボジイミド、グルタルアルデヒドなど）を通して行われ得る。種々の免疫
毒素の産生は、当該技術分野で周知であり、例えば、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｉｍｉｎｇ ｔｈｅ
Ｍａｇｉｃ Ｂｕｌｌｅｔ）」Ｔｈｏｒｐｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１６８−１９０（１９８２）に見出され得る（これは
本明細書中において参考として援用される）。この化合物は遺伝子で結合され得
る（Ｃｈａｕｄｈａｒｙら，Ｎａｔｕｒｅ ３３９，３９４（１９８９）（これ
は、参考として本明細書中で援用される）。抗体に毒性部分を結合する別な方法
は、例えば、Ａｒｎｏｎら（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ
Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編，Ａ
ｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．ｐｐ．２４３−２５６；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら
（１９８７）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）
」ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２版、Ｒｏｂ
ｉｎｓｏｎら編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．ｐｐ．６２３−６５３
；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃ
ｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ
Ｒｅｖｉｅｗ」ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら編，ｐｐ．４７５−５０６；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅ
ｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄ
ｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら編，Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．３０３−３１６，１９８５；およびＴｈｏｒｐ
ｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−１５８
にも見られる。
【０１１８】 例えば、１つの実施形態では、共有結合は抗体と毒性部分の間に形成し得る。
いくつかの場合、毒性部分の既存の細胞結合部分はまず除去されるか、またはそ
の非特異的活性を抑制するように変更されなければならない（Ｈｅｒｔｌｅｒ
ａｎｄ Ｆｒａｎｋｅｌ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７：１９３２
−１９４２）。毒性部分への抗体の共有結合は、一般的にはチオエステルまたは
ジスルフィド結合の形成を伴う。例えば、結合体化合物は、抗体と毒性分子の間
のジスルフィド結合を生成し得る、Ｎ−スクシンイミジル−３−２（ピリジルジ
チオ）プロピロネートを使用して調製し得る（Ｃｏｌｏｍｂａｔｔｉら（１９８
３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３１：３０９１−３０９５）。ポリペプチド
と毒性部分を結合するために首尾よく使用し得る、多くの種類のジスルフィド結
合含有リンカーが公知である。
【０１１９】 １つの実施形態では、抗体に毒性部分を結合するために使用するリンカーは、
加水分解可能である（米国特許第５，７１４，５８６号および第５，７１２，３
７４号およびＥＰ０６８９８４５参照）。例えば、このような加水分解性リンカ
ーは２つの官能性基を含み得る。一つの基は、代表的に、抗体と反応するために
使用されるカルボン酸である。適当に活性化された場合、酸性官能基は、抗体の
遊離アミン基（例えば抗体のリジン残基の側鎖にあるアミノ基）とアミド結合を
形成し得る。他の官能性基は通常、毒性部分のヒドラジド基と反応してヒドラゾ
ン結合を形成するカルボニル基（例えばアルデヒドまたはケトン）である。この
結合は標的細胞（例えば抗体−毒性部分複合体に接触している細胞）で加水分解
可能であり、抗体−毒性部分複合体からの毒性薬剤を放出する。１つの実施形態
では、立体的に「障害（ｈｉｎｄｒｅｄ）」されるジスルフィド結合を含むリン
カーが、インビボでのより大きな安定性に起因して好ましく、従って、作用部位
に結合する前まで毒性部分の放出を抑制する。
【０１２０】 抗体−毒性部分結合体を形成する他の方法は、米国特許第４，８９４，４４３
号、第５，２０８，０２１号、第４，３４０，５３５号、第５，８７７，２９６
号、第５，７７３，００１号、第５，７６７，２８５号、第５，７３９，１１６
号、第５，７１４，５８６号、第５，０５３，３９４号および第５，７１２，３
７４号、ならびにＥＰ ４４１６７およびＥＰ ０６８９８４５に記載されるも
のなど、当該技術分野で公知である。
【０１２１】 （Ｖ．抗体の発現） 本発明の抗体または抗原結合部分は、宿主細胞中での免疫グロブリン軽鎖およ
び重鎖遺伝子の組換え発現によって調製し得る。抗体を組換えによって発現する
ために、宿主細胞に、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡ
断片を保有する１種以上の組換え発現ベクターを形質導入して、軽鎖および重鎖
を宿主細胞中で発現させ、好ましくは宿主細胞が培養される培地中へ分泌させ、
その培地から抗体を回収する。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ（編），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８９）、Ａｕｓｂｅｌ，Ｆ．Ｍら（編
）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９
８９）およびＢｏｓｓら米国特許第４，８１６，３９７号に記載されるものなど
、標準的組換えＤＮＡ方法論は、抗体の重鎖および軽鎖遺伝子を得て、組換え発
現ベクター中にこれらの遺伝子を組み込み、かつこのベクターを宿主細胞中へ導
入するために使用される。
【０１２２】 抗ＣＴＬＡ４抗体を発現するために、軽鎖および重鎖可変領域をコードするＤ
ＮＡ断片をまず得る。これらのＤＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使
用して、生殖系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）軽鎖および重鎖可変領域配列の増幅およ
び変性によって得ることができる。ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系
列ＤＮＡ配列は、当該技術分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖
系列配列データベース；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）「Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅ
ｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ」米国健康保険省、ＮＩＨ刊行物第９１
−３２４２号参照；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ら（１９９２）「Ｔｈｅ Ｒ
ｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｒｍｌｉｎｅ ＶＨ Ｓｅｑｕｅ
ｎｃｅｓ Ｒｅｖｅａｌｓ ａｂｏｕｔ Ｆｉｆｔｙ Ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ Ｖ Ｈ Ｓｅｇｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａ
ｂｌｅ Ｌｏｏｐｓ」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７７６−７９８；およ
びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ら（１９９４）「Ａ Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｕ
ｍａｎ Ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ ＶＫ Ｓｅｇｍｅｎｔｓ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ
Ｓｔｒｏｎｇ Ｂｉａｓ ｉｎ ｔｈｅｉｒ Ｕｓａｇｅ）」Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６（これらのそれぞれの内容は、特に本明細書
中において参考として援用される）を参照のこと）。
【０１２３】 本発明の抗体、または抗原結合部分を発現するために、上記したようにして得
た部分的または完全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、発現ベクター中
に挿入して、遺伝子を転写および翻訳制御配列に作動的に結合する。これに関し
て、「作動的に結合する」との用語は、抗体遺伝子がベクター中に連結して、ベ
クター内の転写および翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写および翻訳を規制する意
図的機能を果たすことを意味するよう意図される。発現ベクターおよび発現制御
配列は、使用する発現宿主細胞と適合性を有するように選択される。抗体軽鎖遺
伝子および抗体重鎖遺伝子は、別々のベクター中に挿入されるか、あるいはより
典型的には、両遺伝子は同じ発現ベクター中に挿入され得る。抗体遺伝子は、標
準的方法で発現ベクター中へ挿入される（例えば、抗体遺伝子断片とベクターの
相補的制限部位の連結、または制限部位が存在しないなら、平滑末端連結）。抗
体関連軽鎖または重鎖配列の挿入の前に、発現ベクターは、抗体恒常領域配列を
既に保有し得る。例えば、抗体関連ＶＨおよびＶＬ配列を全長の抗体遺伝子に変
換する１つの方法は、それぞれ重鎖定常領域および軽鎖定常領域をすでにコード
する発現ベクター中にこれらを挿入して、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセ
グメントに作動的に結合し、かつ、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメン
トに作動的に結合することにある。追加的または代替的に、組換え発現ベクター
は、宿主細胞から抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードし得る。
抗体鎖遺伝子はベクター中にクローニングして、シグナルペプチドは抗体鎖遺伝
子のアミノ末端に読み取り枠内で結合する。シグナルペプチドは免疫グロブリン
シグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタ
ンパク質から得たシグナルペプチド）であり得る。
【０１２４】 所望ヒト化抗体を究極的に発現し得る本発明の核酸配列は、種々の異なったポ
リヌクレオチド（ゲノムまたはｃＤＮＡ、ＲＮＡ、合成オリゴヌクレオチドなど
）および構成成分（例えば、Ｖ、Ｊ、ＤおよびＣ領域）から、ならびに種々の異
なった技術によって形成し得る。適当なゲノムおよび合成配列の結合は、現在、
最も一般的な産生方法であるが、ｃＤＮＡ配列もまた使用し得る（欧州特許公報
第０２３９４００号およびＲｅｉｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２
，３２３−３２７（１９８８）、この両方は本明細書中において参考として援用
される）。
【０１２５】 抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは宿主細胞中での抗体鎖
遺伝子の発現を制御する調節配列を保有する。「調節配列」との用語は、プロモ
ーター、エンハンサーおよび抗体鎖遺伝子の転写および翻訳を制御する他の発現
制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。このような調節配
列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；「Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５」Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に記載される
。制御配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択
、所望タンパク質発現の程度などの要素に依存することは当業者には理解される
であろう。哺乳動物宿主細胞発現の好ましい制御配列としては、サイトメガロウ
イルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、シミアン・ウイ
ルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウ
イルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ）およびポ
リオーマなどから由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーなど、哺乳動
物細胞での高濃度のタンパク質発現を行うウイルス性要素が挙げられる。ウイル
ス性制御要素およびその配列については、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，
１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号およびＳ
ｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号に記載されている。
【０１２６】 抗体鎖遺伝子および制御配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主
細胞中でのベクターの複製を制御する配列（例えば、複製起点）および選択マー
カー遺伝子など、さらなる配列を保有してもよい。選択マーカー遺伝子はベクタ
ーが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、すべてＡｘｅｌらに
よる米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号および第５，１
７９．０１７号を参照のこと）。例えば、代表的には、選択マーカー遺伝子は、
ベクターが導入されている宿主細胞上の薬剤（Ｇ４１８、ヒグロマイシンまたは
メトトレキセートなど）に対する耐性を与える。好ましい選択マーカー遺伝子と
しては、ジヒドロフォレートレダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセー
ト選択／増幅を使用して、ｄｈｆｒ−宿主細胞中での使用）およびｎｅｏ遺伝子
（Ｇ４１８選択）が挙げられる。
【０１２７】 軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターが
標準的技術によって宿主細胞中へトランスフェクトされる。「トランスフェクシ
ョン」との用語の種々の形は、原核生物または真核生物宿主細胞中へ外来性ＤＮ
Ａを導入するために一般的に使用する広範囲な技術（例えば、エレクトロポレー
ション、リン酸カルシウム沈降、ＤＥＡＥキデストラントランスフェクション）
を包含することを意図する。原核生物または真核生物宿主細胞で本発明の抗体を
発現することは理論的には可能であるが、真核生物細胞、最も好ましくは哺乳動
物宿主細胞での抗体発現が最も好ましい。なぜなら、このような真核生物細胞、
特に、哺乳動物細胞は、適当に折りたたまれ、かつ、免疫学的に活性な抗体を構
築してかつ分泌するためには、原核生物細胞よりもより好ましいからである。抗
体遺伝子の原核生物発現は、高収量の活性抗体を産生するには、効果がないと報
告されている（Ｂｏｓｓ，Ｍ．Ａ．およびＷｏｏｄ，Ｃ．Ｒ．（１９８５）Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇ Ｔｏｄａｙ ６：１２−１３）。
【０１２８】 本発明の組換え抗体を発現する好ましい哺乳動物宿主細胞としては、チャイニ
ーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ
Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１
に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用する、Ｕｒｌａｕｂ
ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ７７：４２１６−４２２０に記載されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、
ＮＳ０ミエローマ細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子
をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中へ導入される場合、宿主
細胞中での抗体発現が可能であり、より好ましくは宿主細胞が成長する培養培地
中へ抗体を分泌することが可能である十分な時間、宿主細胞を培養することによ
り、抗体が産生される。抗体は標準的タンパク質精製方法を使用して培養培地か
ら回収することができる。
【０１２９】 宿主細胞は、ＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子などのインタクトな抗体
の部分を産生するためにも使用できる。上記方法における変更は本発明の範囲内
にあることが理解される。例えば、本発明の抗体の軽鎖または重鎖（両方ではな
い）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい。組
換えＤＮＡ技術は、ＣＴＬＡ４に結合する必要のない軽鎖および重鎖のいずれか
あるいは両方をコードするＤＮＡのいくらかあるいは全てを除去するために使用
してもよい。このような短縮型ＤＮＡ分子から発現した分子もまた、本発明の抗
体に包含される。さらに、本発明の抗体を標準的化学架橋法によって第２抗体に
架橋することにより、１つの重鎖および１つの軽鎖が本発明の抗体であり、他の
重鎖および軽鎖がＣＴＬＡ４以外の抗原に対して特異的である二官能性抗体を産
生してもよい。
【０１３０】 本発明の抗体またはその抗原結合部位の組換え発現の好ましいシステムでは、
抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターは、リン酸カル
シウム媒介トランスフェクションによって、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中へ導入され
る。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、エンハン
サー／プロモーター制御エレメント（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰ
プロモーター制御エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモー
ター制御エレメントなどのＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウルスなどに由来）に操作
的に結合して、遺伝子の高い程度の転写をもたらす。組換え発現ベクターは、Ｄ
ＨＦＲ遺伝子も保有する。これはメトトレキセート選択／増幅を使用するベクタ
ーをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能とする。選択された形質転換
宿主細胞は、抗体の重鎖および軽鎖の発現を可能とする培養物であり、インタク
トな抗体が培養培地から回収される。標準的分子生物学技術を用いて、組換え発
現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿
主細胞を培養し、かつ、培養培地から抗体を回収する。
【０１３１】 抗体（例えば、本発明の全抗体、その二量体、個々の軽鎖および重鎖、または
他の免疫グロブリン形態）は、硫酸アンモニウム沈降、アフィニティーカラム、
カラムクロマトフラフィー、ゲル電気泳動などの当該技術分野で標準的な手法に
よって精製することができる（一般的には、Ｒ．Ｓｃｏｐｅｓ，「Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（
１９８２）を参照のこと）。少なくとも９０〜９５％の均一性を有する実質的に
純粋なイムノグロブリンが好ましく、また医薬用途には９８〜９９％またはそれ
以上の均一性が最も好ましい。一旦、部分的にまたは所望の均一性にまで精製す
ると、次いで、ポリペプチドは治療に（体外を含めて）、またはアッセイ手順、
免疫蛍光染色などを開発および実施するために使用してもよい（一般的には、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，第１巻および第２巻，Ｌｅｆｋｏ
ｖｉｔｓおよびＰｅｒｎｉｓ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９７９および１９８１）を参照のこと）。
【０１３２】 上記の点から見て、本発明の他の局面は、本発明の抗体および抗体部分を組換
え発現するために使用することができる核酸、ベクターおよび宿主細胞組成物に
関連する。例えば、抗体２６の重鎖可変領域の好ましい部分は、ＦＲ１、アミノ
酸１〜２８；ＣＤＲ１、アミノ酸２９〜３５；ＦＲ２、アミノ酸３６〜４９；Ｃ
ＤＲ２、アミノ酸５０〜６６；ＦＲ３、アミノ酸６７〜９７、ＣＤＲ３、アミノ
酸９８〜１１１；ＦＲ４、アミノ酸１１２〜１２３を含む。抗体２６の軽鎖可変
領域のうち、種々の領域は、ＦＲ１、アミノ酸１〜２３；ＣＤＲ１、アミノ酸２
４〜３３；ＦＲ２、アミノ酸３４〜４８；ＣＤＲ２、アミノ酸４９〜５５；ＦＲ
３、アミノ酸５６〜７７；ＣＤＲ３、アミノ酸７８〜８７；ＦＲ４、アミノ酸８
８〜１０６を含む。
【０１３３】 一つの局面では、本発明は配列番号３（マウス抗体２６ＶＨ配列）、５（マウ
ス抗体２６ＶＫ配列）、７（ヒト化抗体２６ＶＫ配列）または９（ヒト化抗体２
６ＶＨ配列）に示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子に関する。
【０１３４】 別の局面では、本発明は配列番号４（マウス抗体２６ＶＨ配列）、６（マウス
抗体２６ＶＫ配列）、８（ヒト化抗体２６ＶＫ配列）または１０（ヒト化抗体２
６ＶＨ配列）に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関する。
【０１３５】 抗体またはその部分（例えば、ＣＤＲ３ドメインなどのＣＤＲドメイン）をコ
ードするヌクレオチド配列は、遺伝子コードおよび標準分子生物学的技術を使用
して、抗体をコードするヌクレオチド配列由来であり得ることが当業者には理解
される。
【０１３６】 本発明はまた、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクタ
ーを提供する。例えば、１つの実施形態では、本発明は、 ａ）抗体２６またはそのヒト化形態に見られる可変領域を有する抗体軽鎖； および ｂ）抗体２６またはそのヒト化形態に見られる可変領域を有する抗体重鎖、 をコードする組換え発現ベクターを提供する。
【０１３７】 本発明はまた、本発明の組換え発現ベクターの１つまたは複数が導入された宿
主細胞も提供する。好ましくは、宿主細胞は哺乳動物宿主細胞であり、より好ま
しくは、宿主細胞はＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞またはＣＯＳ細胞である。
【０１３８】 さらにまた、本発明は、本発明の組換えヒト抗体が合成されるまで、適切な培
養培地中で本発明の宿主細胞を培養することにより、本発明の組換えヒト抗体を
合成する方法を提供する。この方法はさらに培養培地から組換えヒト抗体を単離
する工程を包含し得る。
【０１３９】 １つの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は多価形態で投与され得る（例えば、
免疫反応を下方制御する）ことができ、ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分
は、被験体に導入時に、細胞外環境に暴露する表面上でそれらを発現するか、あ
るいは表面へそれらを結合することによって、免疫反応を下方制御するために構
築物中へ組み込むことができる。この方法では、抗体の抗原結合部分は、構築物
が投与された被験体のＴ細胞上に発現した適当な分子に結合することができる状
態にある。
【０１４０】 このような構築物はＣＴＬＡ４に結合する抗体の抗原結合部分を固定するよう
に作用する表面を含む。種々の異なった表面は、本発明の構築物を作成するため
に使用することができる。例えば、１つの実施形態では、抗体結合部分は露出表
面を含むポリマーに結合することができる。ポリマーの例としては、ポリサッカ
リド、アクリル系ポリマー（例えば、ポリアクロレインまたはポリスチレンまた
はポリ（α−ヒドロキシ酸））、乳酸ポリマー、または乳酸とグリコール酸のポ
リマーなどのコポリマーが挙げられる。抗ＣＴＬＡ４抗体の抗原結語部分が結合
できる表面を含むビーズまたはマイクロビーズは、当該技術分野で公知である（
例えば、米国特許第５，８７１，７４７号など参照のこと）。
【０１４１】 他の実施形態では、このような構築物は脂質二重層を含み得る。例えば、構築
物は無細胞構築物、例えば、リポソームまたはミセルである。なおも別の実施形
態では、本発明に使用する構築物は、原核生物または真核生物細胞などの細胞で
ある。細胞は任意の組織または器官由来であり得る。代表的な細胞は末梢血由来
である。好ましい細胞は培養中に維持できる細胞を含む。
【０１４２】 １つの実施形態では、本発明の構築物に使用する細胞は同系細胞である。他の
実施形態では、本発明の構築物に使用する細胞は同種異系（ａｌｌｏｇｅｎｅｉ
ｃ）である。なおも他の実施形態では、本発明の構築物に使用する細胞は外来性
（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ）細胞である。１つの実施形態では、例えば細胞が同種異
系または外来性である場合、該細胞は被験体での機能の欠失または減少をもたら
すように選択する。例えば、肝臓細胞の移植から利益を得る被験体の場合には、
肝臓細胞を被験体の構築物に使用することができる。
【０１４３】 本発明の構築物に使用する細胞は、野生型（天然に存在する）細胞であるか、
または目的の構築物でのその使用を最適化する変更を含むことができる。他の実
施形態では、このような細胞は、例えば、細胞を接着分子を発現するように変化
させることによって、被験体のＴ細胞に結合する能力を増大させる分子を発現す
るように変化させることができる。例えば、このような細胞は、免疫賦活を促進
する分子（例えば、ＣＤ２８またはサイトカイン）の発現を排除するように変化
させることができる。別の実施形態では、このような細胞は抗原をプロセシング
するこのような細胞の能力を修飾するように変化させて、細胞が呈示するペプチ
ドを制御することができる（例えば、抗原プロセシングにおける欠失を導入する
ことによって（例えば、米国特許第５，７３１，１６０号を参照のこと））。
【０１４４】 表面結合抗ＣＴＬＡ４抗体は、種々の当該技術分野で認められている技術、例
えば米国特許第６，０４６，１７３号を使用して、露出表面に結合することがで
きる。例えば、１つの実施形態では、結合する分子は、例えば、共有結合により
構築物の露出表面と結合することができる。共有結合は、例えば、二官能性結合
試薬による結合および酸化結合を含む。１つの実施形態では、結合する分子は、
露出表面に直接に結合することができる（例えば表面自体）。別の実施形態では
、分子は露出表面に間接的に結合（例えば、脂質（例えば、脂肪酸鎖またはプレ
ニル基）またはポリペプチドなどの他の分子に結合）することができる。
【０１４５】 多くの二官能性試薬は、抗体分子を含めて、タンパク質に種々のタイプの官能
基を有する有機分子を連結するために有用である。抗体特異性を有するタンパク
質を含めて、タンパク質に有機分子を結合することは当該技術分野で既知であり
、例えば、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，「Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ
ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓ
ｔｅｒｄａｍ，１９８５）、ｐｐ．２７９−２９６に記載される（これは本明細
書中で参考として援用される）。
【０１４６】 簡単には、カルボシキシル基を含む有機分子またはカルボキシル化され得る有
機分子は、混合酸無水物反応によって、水可溶性カルボジイミドとの反応によっ
て、またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドとのエステル化によって連結すること
ができる。カルボキシル化はハロエステルとの酸素または窒素置換体のアルキル
化、続いてのエステルの加水分解、またはステロイドのヒドロキシル基またはケ
トン基におけるヘミサクシン酸エステルまたはカルボキシメチルオキシムの形成
などの反応によって実施され得る。
【０１４７】 アミノ基またはアミノ基に還元するニトロ基を有する有機分子は、ジアゾニウ
ム塩に変化して、芳香族アミンにとって温和なアルカリｐＨでタンパク質と反応
する。脂肪族アミンを有する有機分子は、カルボジイミドとの反応、ホモ二官能
性試薬であるトリレン−２，４−ジイソシアネートとの反応、またはマレイミド
化合物との反応を含む種々の方法で、タンパク質と結合することができる。脂肪
族アミンはｐ−ニトロベンゾイルクロライドとの反応およびｐ−アミノベンゾイ
ルアミドへの続いての還元によって、芳香族アミンに変換することもできる。こ
れは、次いでジアゾ化後にタンパク質に結合することができる。また、ジメチル
ピメリン酸イミダート、ジメチルアジピン酸イミダート、またはジメチルスベリ
ン酸イミダートなどの二官能性イミド酸エステルは、タンパク質へアミノ基含有
有機物分子を結合するために使用することができる。
【０１４８】 チオール含有有機分子は、４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−
１−カルボン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどのマレイミドを使用
して、タンパク質に結合することができる。
【０１４９】 ヒドロキシル基を有する有機分子では、アルコール官能性基をヘミスクシネー
トに変換し、結合を可能にするカルボキシル基を導入する。または、二官能性試
薬であるセバコルジクロライド（ｓｅｂａｃｏｙｌｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）はア
ルコールを酸塩化物に変換し、次いでタンパク質と反応する。
【０１５０】 フェノールはジアゾ化ｐ−アミノ安息香酸で活性化され、これはカルボキシル
基を導入し、次いで、混合酸無水物反応によって、タンパク質と反応することが
できる。糖類はｐ−ニトロフェニルグルコシドの形成、続いてアミノ基へのニト
ロ基の還元およびジアゾ化による結合によって活性化することができる。他の方
法は、過沃素酸塩との反応によるアルデヒドへの糖類の隣接グリコールの開裂、
続いての水素化ホウ素ナトリウムを使用する還元アルキル化によるアミンへの結
合を含む。または、ヒドロキシル含有有機分子は、ホスゲンとの反応によるクロ
ロ炭酸塩への変換後に結合することができる。
【０１５１】 アルデヒドまたはケトン基を有する有機分子では、カルボキシル基はＯ−カル
ボキシメチルオキシムの形成により導入することができる。ケトン基もまた、ｐ
−ヒドラジノ安息香酸で誘発体化されてカルボキシル基を生成する。
【０１５２】 アルデヒド含有有機分子は、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤との反応に
よって安定化されたシッフ塩基の形成により直接に結合することができる。
【０１５３】 酸化的結合もまた使用することができる。酸化的結合は放射性沃素を抗体に結
合する場合、特に有用である。好適な方法としては、（１）クロラミン−Ｔを使
用する化学酸化；（２）ヨードゲン（１，３，４，６−テトラクロロ−３α，６
α―ジフェニルグリコルリル）を使用する化学酸化；（３）酵素ラクトペルオキ
シダーゼによる酸化が挙げられる。酸化的方法ではないが、沃素で標識する他の
有用な方法は、ボルトン−ハンター（Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ）試薬として
一般に知られている１２５Ｉ Ｎ−スクシンイミジル３−（４−ヒドロキシフェ
ニルプロピオネート）を使用する方法である。これらの技術は、例えば、Ｅ．Ｈ
ａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８
），ｐｐ．３２４−３３９に記載されている。
【０１５４】 別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、膜貫通ドメイン（例えば、完全（ｉ
ｎｔｅｇｒａｌ）膜タンパク質の膜貫通領域）を経由して結合することができる
。このようなドメインは結合するタンパク質に、または異なったタンパク質から
誘発することができる。例えば、膜貫通ドメインが誘発され得る完全膜タンパク
質は、細胞表面レセプター（例えば、成長因子レセプター）、接着性分子（例え
ば、インテグリンまたはセレクチン）、またはＣＤ抗原を含む。例えば、膜貫通
ドメインは約２５個の疎水性アミノ酸残基を含み、通常、塩基性アミノ酸のクラ
スターが続く（例えば、ＣＤ２、ＣＤ４０、またはＩＬ−４レセプターに見られ
るように）Ｉ型ドメインであり得る。ＩＩ型膜貫通ドメインもまた使用すること
ができる。ポリペプチドのカルボキシ末端部分が細胞外であるように、ＩＩ型ド
メインは膜を通過する（例えば、ＣＤ７２の場合）。ＩＩＩ型膜貫通ドメインも
また使用することもできる。このようなドメインは多数回、脂質二重層を通過す
る（例えば、Ｇタンパク質結合レセプターの場合）。
【０１５５】 別の実施形態では、分子は分子のカルボキシ末端残基に結合したグリコシルホ
スファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーを使用して、対象構築物に結合す
ることができる。例えば、ＧＰＩアンカーはヒト胎盤アルカリホスファターゼか
ら誘導することができる（例えば、Ｗｈｉｔｅｈｏｒｎら、１９９５ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：１２１５−１２１９参照）。ＧＰＩ固定分子は開裂
し、かつ、ＧＰＩアンカーで置換したそれらのカルボキシ末端でシグナル配列を
有していてもよい（例えば、米国特許第５，８９１，４３２号を参照のこと）。
【０１５６】 他の実施形態では，細胞はＣＴＬＡ４結合分子を含む分子（例えば、抗ＣＬＴ
Ａ４抗体またはその抗原結合部分）を発現させることができる。例えば、上記し
たように、活性分子は細胞ならびに他の表面と結合して、本発明の構成物を形成
する。さらに、細胞は種々の核酸処置方法で活性分子の発現を引き起こす。
【０１５７】 核酸処置のための技術は既知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，（１９８
９）；Ａｕｓｂｅｌら（１９８７）およびＡｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６１：１３１−１５６（１９９２）を参照のこと
）。このような技術に使用する制限酵素などの有用な試薬は、当該技術分野で広
く知られており、多くの供給業者から市販されている。
【０１５８】 本発明の発現のための選択分子をコードする核酸配列は、分子クローニングお
よび好適な宿主細胞中でその配列を保有するベクターまたはプラスミドを複製す
る既知の方法を使用して得てもよい。
【０１５９】 本発明で使用する核酸配列は、化学合成、例えば、ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣ
ａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２（１
９８１）に記載されるホスホアミダイト法、またはトリエステル法（Ｍａｔｔｅ
ｕｃｃｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０３：３１８５（１９８１）によ
って、部分的にまたは全体的に産生することができ、また、市販の自動化オリゴ
ヌクレオチド合成器で産生してもよい。２本鎖フラグメントは相補鎖を合成し、
適当な条件下にて鎖を互いにアニールすること、あるいは適当なプライマー配列
とともにＤＮＡポリメラーゼを使用する相補鎖を合成することのいずれかによっ
て、化学合成による１本鎖産物から得てもよい。
【０１６０】 所望の配列をコードする天然または合成核酸フラグメントは、原核細胞または
真核細胞中に導入でき、かつそれら細胞中で複製できるベクター中に組込んでも
よい。通常、ベクターは酵母または細菌などの単細胞宿主での複製に適している
が、ゲノム内に組み込むか、あるいは組み込まないで培養される哺乳動物または
植物または他の真核細胞系中に導入してもよい。ベクターは代表的に、所望のポ
リペプチドをコードする意図的組換え核酸フラグメントを含む、宿主細胞が認識
する発現系を含む。ベクターは、選択マーカー、すなわちベクターで形質転換し
た宿主細胞の生存または成長に必要であるタンパク質をコードする遺伝子も含む
。この遺伝子の存在は、目的の挿入核酸を発現する宿主細胞のみの成長を確実に
する。代表的な選択遺伝子は、１）抗生物質または他の毒性物質、例えばアンピ
リシン、ネオマイシン、メトトレキセートなどに対する耐性を与え；ｂ）栄養素
要求性欠乏を補完し、またはｃ）複合培地から入手できない重要栄養素を供給す
る（例えば、バチルス属菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）に関してはＤ−アラニンラセマー
ゼをコードする遺伝子）タンパク質をコードする。適当な選択マーカーの選択は
宿主細胞に依存し、異なる宿主に対する適当なマーカーは当該技術分野で周知で
ある。このようなベクターは当該技術分野で周知である標準的組換え技術によっ
て調製してもよい（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，（１９８９）；Ａｕｓｂｅｌら，（１
９８７））。
【０１６１】 選択分子を発現する細胞中への遺伝子移入では、核酸は「裸の」核酸の形態に
て、例えば、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション法により、リ
ン酸カルシウム−ＤＮＡゲルとして、ＤＥＡＥデキストランを使用して、または
カプセル形態で、例えば、リポソームなどの小胞で、または適当なウイルス性ベ
クターにてエキソビボで直接導入してもよい。
【０１６２】 発現のための所望の分子をコードする核酸を含むベクターは、好ましくは、高
レベルの遺伝子発現が生じ得、挿入核酸配列の転写と翻訳における適当な調節配
列を含む組換え発現ベクターである。調節配列は、遺伝子発現（遺伝子の転写、
およびメッセンジャＲＮＡの翻訳、スプライシング、安定性などを含む）に影響
を与える座位のコード領域に通常関連する配列（例えば、５０ｋｂ以内）をいう
。転写調節領域は、プロモーター配列、エンハンサー配列および転写因子結合部
位を含む転写に必要なすべての要素を包括する。制御調節は特に、スプライス部
位およびポリアデニル化部位も含む。内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ
）配列は、組換えコード配列の間に配置され得、１つのプロモーターと共に１よ
り多くのコード配列の発現を可能にする。
【０１６３】 転写制御領域の例としては、ＳＶ４０初期プロモーター領域、サイトメガロウ
イルス（ＣＭＶ）プロモーター（ヒトＣＭＶ ＩＥ９４プロモーター領域（Ｂｏ
ｓｈａｒｔら，Ｃｅｌｌ，４１：５２１−５３０（１９８５））；ラウス肉腫ウ
イルスまたは他のレトロウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター；ヘ
ルペスチミジンキナーゼプロモーター；メタロチオネイン遺伝子の調節配列；ヒ
トＩＬ−２遺伝子からの領域（Ｆｕｊｉｔａら，Ｃｅｌｌ，４６：４０１−４０
７（１９８６））；ヒトＩＦＮ遺伝子からの領域（Ｃｉｃｃａｒｏｎｅら，Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：７２５−７３０（１９９０））；ヒトＩＦＮ遺伝子か
らの領域（Ｓｈｏｅｍａｋｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８７：９６５０−９６５４（１９９０））；ヒトＩＬ−４遺伝子からの領
域（Ａｒａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：２７４−２８２（１９８９））
；ヒトリンホトキシン遺伝子からの領域（Ｎｅｄｗｉｎら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ．ｒｅｓ １３：６３６１−６３７３（１９８５））；ヒト顆粒球マクロファ
ージＣＳＦ遺伝子（ＧＭ−ＣＳＦ）からの領域（Ｍｉｙａｔａｋｅら，ＥＭＢＯ
Ｊ．４：２５６１−２５６８（１９８５））などが挙げられる。ウイルスベク
ターが使用される場合、組換えコード配列はベクター内に位置され得、それらの
発現は、ウイルスベクター内の天然に存在するプロモーターなど調節配列により
制御される。
【０１６４】 さらに、操作エレメントは、リーダー配列、終止コドン、および挿入核酸配列
の適当な転写およびそれに続く翻訳に必要であるか、または好ましい他の配列を
含んでもよい。
【０１６５】 ネイティブなタンパク質由来あるいは同じまたは関連種の他の分泌ポリペプチ
ド由来のいずれかの分泌シグナルがまた含まれ得、これは、分子を細胞膜に入ら
せて、機能的コンフォメーションを達成する。
【０１６６】 発現制御エレメントの正しい組み合わせが、分子を発現するために選択された
レシピエント（「宿主」）細胞に依存することは、当業者には理解されるであろ
う。発現ベクターは、宿主細胞に挿入核酸配列を含む発現ベクターの移送とそれ
に続く複製に必要であるさらなるエレメントを含むべきである。このようなエレ
メントの例としては、複製起点および選択マーカーが挙げられるが、これらに限
定されない。
【０１６７】 ベクターは挿入核酸を保有する細胞の選択を可能にする少なくとも１つのポジ
ティブマーカーを含んでもよい。選択可能な分子は、細胞中に導入したとき、遺
伝子を保有する細胞のポジティブ選択を可能とする優性の表現型を発現する遺伝
子であってもよい。この型の遺伝子は、当該技術分野で公知であり、例えば抗生
物質Ｇ４１８に対して耐性を示すハイグロマイシン−Ｂホスホトランスフェラー
ゼ（ｈｐｈ）などの薬剤耐性遺伝子；抗生物質Ｇ４１８に対する耐性をコードす
るＴｎ５由来のアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏまた
はａｐｈ）；ジヒドロキシ葉酸還元酵素（ＤＨＲＦ）遺伝子；アデノシンデアミ
ナーゼ遺伝子（ＡＤＡ）および多薬剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子が挙げられる。
【０１６８】 本発明の好適なベクターは、バキュロウイルス、アデノウイルス、ポックスウ
イルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、およびＭＭＬＶ系複製無能ベクターｐ
ＭＶ−７（Ｋｉｒｓｃｈｍｅｉｅｒら．，ＤＮＡ ７：２１９−２２５（１９８
８））などのレトロウイルスベクター（Ｐｒｉｃｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：１５６−１６０（１９８７）、ならびにヒトお
よび酵母人工染色体（ＨＡＣおよびＹＡＣ）を含むプラスミドまたはウイルスベ
クターであってもよい。プラスミド発現ベクターとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵ
ＣまたはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＴＭ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を含むプラスミドが挙げられる。ベクターの例は、例えば
米国特許第６，０４０，１４７号；同第６，０３３，９０８号；同第６，０３７
，１７２号；同第６，０２７，７２２号；同第５，７４１，４８６号；同第５，
６５６，４６５号に記載される。
【０１６９】 組換えウイルスベクターは、標準的感染条件を使用して細胞中に導入される。
細胞中へ遺伝子を送達するために組換え感染性ウイルス粒子を使用する感染技術
が開発されている。この方法で使用するウイルスベクターとしては、シミアンウ
イルス４０（ＳＶ４０；Ｋａｒｌｓｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１５８（１９８５）：アデノウイルス（Ｋａｒｌｓｓｏ
ｎら，ＥＭＢＯ Ｊ．，５：２３７７（１９８６））；ＡＡＶ（Ｃａｒｔｅｒ，
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３：５
３３−５３９（１９９２））；ワクシニアウイルス（Ｍｏｓｓら，Ｖａｃｃｉｎ
ｅ，６：１６１−３（１９８８））；およびレトロウイルス（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｗ
ｅｉｓｓら（編），ＲＮＡ Ｔｕｍｏｒ Ｖｉｒｕｓｅｓ，第２編，Ｖｏｌ．２
，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１７−
７１頁（１９８５））から誘導されたベクターが挙げられる。
【０１７０】 レトロウイルスベクターでは、遺伝子はレトロウイルス長末端反復（ＬＴＲ）
に組み込まれたプロモーターの転写制御下にあるように、またはＬＴＲ間に挿入
された異種プロモーターの制御下に配置するように挿入される。この後者戦略は
、ベクター中の優性な選択マーカー遺伝子を共発現する１つの方法を提供し、従
って、特異的ベクター配列を発現している細胞の選択を可能とする。
【０１７１】 非複製ウイルスベクターは、感染性であるが複製欠損であるウイルス粒子を産
生し、このウイルス粒子をキャプシド形成可能な相補的遺伝情報を欠く細胞中へ
核酸を導入するための有用なベクターにする、パッケージング株を産生し得る（
Ｍａｎｎらｃｅｌｌ ３３：１５３（１９８３）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｂｕ
ｔｔｉｍｏｒｅ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５（１９８６）（Ｐ
Ａ３１７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ９０７８）。ヒトおよび他の種起源の細胞を形質導
入することができるアンホトロピックパッケジング遺伝子を含むパッケジング細
胞株が好ましい。
【０１７２】 挿入遺伝子またはコード配列を含むＤＮＡベクターは、エレクトロポレーショ
ン、リポソーム調製物、Ｃａ−ＰＨ−ＤＮＡゲル、ＤＥＡＥ−デキストラン、核
酸粒子「銃」および他の好適な方法などの標準的方法を使用して細胞中へ導入さ
れる。
【０１７３】 一般には、選択分子をコードする核酸は、適当な転写および翻訳制御配列（レ
シピエント宿主で組換え遺伝子の発現を生じる、遺伝子配列に作動可能に連結さ
れた開始配列を含む）を含むベクター中に標準的組換えＤＮＡ方法により挿入さ
れる。作動可能に連結されたとは、構成成分がその意図する様式で機能すること
を可能にする関係にある並置をいう。例えば、プロモーターがその転写または発
現に影響を与える場合、プロモーターは、コード配列作動可能に連結される。
【０１７４】 発現のために選択されたタンパク質またはタンパク質フラグメントをコードす
る核酸配列は、１個のベクターへ、または別個のベクターへ挿入してもよい。選
択ポリペプチドまたはその部分をコードする１より多くの遺伝子は、１つのベク
ターまたは別個のベクターへ挿入してもよい。
【０１７５】 ＡＰＣ中へ導入後、目的の組換え遺伝子の発現は、タンパク質産物の機能的活
性についての免疫アッセイまたは生物学的アッセイによって確認する。例えば、
細胞中へ導入した分子の発現は、ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別装置）またはＥ
ＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）などの当該技術分野で周知であるアッセイ
を使用して、細胞への分子特異的標識抗体の結合性を検出することにより確認し
てもよい。
【０１７６】 操作した細胞の生物学的活性は、例えばインビトロアッセイで実証することが
できる。例えばＣＴＬＡ４に結合し、免疫反応を下方調節する、所望通りに機能
する本発明の細胞の能力は、インビトロおよび／またはインビボアッセイにて標
準品を使用して試験してもよい。
【０１７７】 （ＶＩ．薬学的組成物） 本発明のＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分（抗体または抗体結合部分毒
性部分結合体を含む）が、組成物（例えば、投与に適切な薬学的組成物）中に取
り込まれ得る。このような組成物は、代表的には、核酸分子、タンパク質、また
は抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場
合において、「薬学的に受容可能なキャリア」という用語は、薬学的な投与と適
合性である、任意のおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、およ
び抗真菌剤、等張剤、および吸収遅延剤などを含むように意図される。薬学的に
活性な物質についてのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で既知であ
る。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である範囲を除いて、組
成物中でのそれらの使用が意図される。追加の活性化合物もまた、組成物中に取
り込まれ得る。
【０１７８】 本発明の薬学的組成物は、その意図される投与経路と適合性であるように処方
される。投与経路の例として、非経口（例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投
与、経口投与（例えば、吸入）、経皮投与（局所的）、経粘膜投与、および直腸
投与）による投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下での適用のために使
用される溶液または懸濁物は、以下の成分を含有し得る：滅菌の希釈剤（例えば
、注射のための水、生理食塩溶液、不揮発性の油、ポリエチレングリコール、グ
リセリン、プロピレングリコール、または他の合成の溶媒）；抗菌剤（例えば、
ベンジルアルコール、またはメチルパラベン）；酸化防止剤（例えば、アスコル
ビン酸、または重亜硫酸ナトリウム）；キレート化剤（例えば、エチレンジアミ
ン四酢酸）；緩衝液（例えば、アセテート、シトレート、またはホスフェート）
、および張性の調整のための薬剤（例えば、塩化ナトリウム、またはデキストロ
ース）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸、または水酸化ナトリウム）を用
いて調整され得る。非経口的な調製物は、ガラスまたはプラスチックで作られた
、アンプル、使い捨てのシリンジ、または複数の用量バイアル中に封入され得る
。
【０１７９】 注射可能な用途に適切な薬学的組成物として、滅菌の水溶液（水溶性である場
合）、または滅菌の注射用溶液もしくは分散剤の即座の調製のための分散剤およ
び滅菌散剤が挙げられる。静脈内投与については、適切なキャリアとして、生理
食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐ
ａｎｙ，ＮＪ）、またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全て
の場合において、組成物は滅菌でなければならず、そして容易な注射可能性が存
在する程度に流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定
でなければならず、そして細菌および真菌のような微生物の混入作用に対して保
護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（
例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体のポリエチレングリ
コールなど）、およびそれらの適切な混合物を含有している、溶媒または分散媒
体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用
によって、分散の場合においては必要とされる粒子の大きさの維持によって、そ
して界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の
抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ア
スコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合において
は、組成物中に等張剤（例えば、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール）
、ソルビトール、塩化ナトリウム））を含むことが、好ましい。注射用組成物の
持効性吸収は、吸収を遅らせる試薬（例えば、モノステアリン酸アルミニウムお
よびゼラチン）を組成物中に含むことによって、もたらされ得る。
【０１８０】 滅菌の注射用溶液は、上記に列挙される成分の１つまたは組合せを有する適切
な溶媒中に、必要とされる量の活性化合物（例えば、ＣＴＬＡ４タンパク質また
は抗ＣＴＬＡ４抗体）を取りこむことによって、必要に応じて続いて濾過滅菌す
ることによって調製され得る。一般的には、分散剤は、活性化合物を、塩基性分
散媒体および上記に列挙されているもの由来の必要な他の成分を含有している滅
菌のビヒクル中に取りこむことによって、調製される。滅菌の注射用溶液の調製
のための滅菌粉末剤の場合においては、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍
結乾燥であり、これによって、活性成分およびその予め滅菌濾過された溶液から
任意のさらなる所望の成分の散剤を生じる。
【０１８１】 経口用の組成物は、一般的には、不活性な希釈剤または食用のキャリアを含む
。これらは、ゼラチンカプセル中に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得る
。経口的な治療の投与の目的のためには、活性化合物は、賦形剤とともに取り込
まれ、そして錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用され得る。経口用の
組成物はまた、口内洗浄剤としての使用のための流体のキャリアを使用して調製
され得る。ここでは、流体のキャリア中の化合物は、経口によって適用され、そ
して舐め回され（ｓｗｉｓｈｅｄ）、そして吐き出されるか、または飲みこまれ
得る。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料は、組成物の
一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、任意の以下の
成分、または同様の性質の化合物を含有し得る：結合剤（例えば、微晶質セルロ
ース、トラガカントガム、またはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプン、また
はラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコー
ンスターチ）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、またはＳｔｅｒｏ
ｔｅｓ）；滑沢剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状の二酸化ケイ素）；
甘味剤（例えば、スクロース、またはサッカリン）；あるいは香料（例えば、ペ
パーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料）。
【０１８２】 吸入による投与のためには、化合物は、適切な推進剤（例えば、二酸化炭素の
ような気体）を含有している加圧された容器またはディスペンサー、あるいはネ
ブライザーからのエアゾールスプレーの形態で送達される。
【０１８３】 全身的な投与はまた、経粘膜または経皮的な手段により得る。経粘膜または経
皮的な投与については、浸透されるバリアについて適切な浸透剤が、処方物中で
使用される。このような浸透剤は、一般的には、当該分野で公知であり、例えば
、経粘膜的な投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体
が挙げられる。経粘膜的な投与は、鼻腔スプレーまたは坐剤の使用を通じて達成
され得る。経皮的な投与については、活性化合物は、当該分野で一般的に公知で
あるように、軟膏、膏薬、ゲル、またはクリーム中に処方される。
【０１８４】 化合物はまた、坐剤（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従
来の坐剤基剤を用いる）または直腸送達のための保持浣腸剤の形態に、調製され
得る。
【０１８５】 一実施形態においては、活性化合物は、体からの迅速な排泄に対して化合物を
防御するキャリアを用いて調製される（例えば、インプラントおよび微小カプセ
ル化送達システムを含む、制御放出処方物）。生体分解性の、生体適合性のポリ
マー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コ
ラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）が、使用され得る。このよう
な処方物の調製のための方法は、当業者に明らかである。材料はまた、Ａｌｚａ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｎｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手することが可能である。リポソーム懸濁物（ウイ
ルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染させられた細胞に対して標的化され
たリポソームを含む）もまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る
。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように
、当業者に既知の方法に従って調製され得る。
【０１８６】 投与の容易さおよび投与量の均質性のために、投薬量単位形態で、経口または
非経口組成物を処方することが、特に有利である。本明細書中で使用される投薬
量単位形態は、処置される被験体についての単位投薬量として適切な、物理的に
独立した単位を指す；それぞれの単位は、必要な薬学的なキャリアと関係して、
所望の治療効果を生じるように計算された予め決定された量の活性化合物を含有
している。本発明の投薬量単位形態についての説明は、活性化合物の特有の特徴
、および達成される特定の治療効果、ならびに個体の処置のための活性化合物の
ような調剤の分野での本来の限定によって指示され、そしてそれらに直接依存す
る。
【０１８７】 このような化合物の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％
の致死量）およびＥＤ５０（集団の５０％における治療有効量）を決定するため
の、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され得る
。毒性と治療効果との間での用量比は、治療指数であり、そしてこれは、比ＬＤ
５０／ＥＤ５０として表され得る。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。毒
性の副作用を示す化合物が使用され得るが、治療は、感染していない細胞に対す
る可能性のある損傷を最小にし、それによって副作用が減少するように、患部組
織の部位に対してそのような化合物を標的化する送達システムを設計するように
、行われるべきである。
【０１８８】 細胞培養アッセイおよび動物実験によって得られたデータは、ヒトでの使用の
ための投与量の範囲を処方する際に使用され得る。このような化合物の投与量は
、好ましくは、わずかな毒性を有するかまたは毒性を全く有さないでＥＤ５０を
含む、流動濃度の範囲内である。投与量は、使用される投薬量形態および利用さ
れる投与の経路に依存して、この範囲内で変化し得る。本発明の方法において使
用される任意の化合物については、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初
に概算され得る。用量は、細胞培養物中で決定されるような、ＩＣ５０（すなわ
ち、症状の最大半減の抑制を達成する試験化合物の濃度）を含む流動血漿濃度の
範囲を達成するように、動物モデルにおいて処方し得る。このような情報は、ヒ
トにおける有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中でのレ
ベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０１８９】 本発明の一実施形態においては、ＣＴＬＡ４タンパク質に対する抗体の治療有
効量が、被験体に対して投与される。本明細書中で定義される場合には、抗体の
治療有効量（すなわち、有効用量）は、約０．００１から３０ｍｇ／ｋｇ体重ま
で、好ましくは約０．０１から２５ｍｇ／ｋｇ体重まで、より好ましくは約０．
１から２０ｍｇ／ｋｇ体重まで、およびさらにより好ましくは約１から１０ｍｇ
／ｋｇまで、２から９ｍｇ／ｋｇまで、３から８ｍｇ／ｋｇまで、４から７ｍｇ
／ｋｇまで、または５から６ｍｇ／ｋｇ体重までの範囲である。疾患または障害
の重篤度、事前の処置、被験体の一般的な健康状態および／または年齢、ならび
に他の疾患の存在を含むがこれらに限定されない特定の因子が、被験体を有効に
処置するために必要な投与量に影響を与え得ることが、当業者に明らかである。
さらに、治療有効量の抗体での被験体の処置は、単回の処置を含み得るか、また
は好ましくは、一連の処置を含み得る。好ましい例においては、被験体は、約０
．１から２０ｍｇ／ｋｇ体重の間の範囲の抗体を用いて、約１から１０週間の間
、好ましくは２から８週間の間、より好ましくは約３から７週間の間、およびさ
らにより好ましくは約４、５、または６週間の間、１週間に１回、処置される。
処置のために使用される抗体の有効投与量が、特定の処置の経過にわたって増大
し得るかまたは減少し得ることもまた、明らかである。投与量の変更は、本明細
書中に記載されているような診断アッセイの結果から生じ得る。
【０１９０】 一実施形態においては、注射のための薬学的組成物は、１ｍｌの滅菌の緩衝化
された水、および１から５０ｍｇの抗体を含むように作成され得る。静脈内への
注入のための代表的な組成物は、２５０ｍｌの滅菌のＲｉｎｇｅｒの溶液および
１５０ｍｇの抗体を含むように作成され得る。非経口的に投与可能な組成物を調
製するための実際の方法は既知であるか、または当業者に明らかであり、例えば
、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、
第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，
Ｐａ．（１９８０）（これは、本明細書中で参考として援用されている）の中で
詳細に記載されている。本発明のヒト様抗体またはそれらの混合物を含有してい
る組成物は、予防的および／または治療的な処置のために投与され得る。治療用
の適用においては、組成物は、疾患およびその合併症を治療するかまたは少なく
とも部分的に停止させるために十分な量で、疾患をすでに罹患している患者に対
して投与される。これを達成するために適切な量は、「治療有効用量」として定
義される。この使用について有効である量は、感染の重篤度、および患者自身の
免疫システムの一般的な状態に依存するが、一般的には、１回の用量あたり約１
から約２００ｍｇまでの抗体の範囲であり、５から２５ｍｇまでの投与量がより
一般的に使用される。本発明の材料が、重篤な疾患状態、すなわち、生命を脅か
しているかまたは生命を脅かす可能性のある状態において一般的に使用され得る
ことを心に留められなければならない。このような症例においては、本発明のヒ
ト様抗体によって達成される外来物質の最小化および「外来物質」の拒絶の低い
可能性に関して、これらの抗体の実質的に過剰な量を投与するように医師が処置
することが可能であり所望され得る。予防的な適用においては、本発明の抗体ま
たはそれらの混合物を含有している組成物が、患者の耐性を増強するために、ま
だ疾患状態ではない患者に対して投与される。このような量は、「予防的に有効
な用量」として定義される。この使用においては、正確な量は、再び患者の健康
状態および一般的な免疫のレベルに依存するが、一般的には、０．１から２５ｍ
ｇ／用量、特に、０．５から２．５ｍｇ／用量の範囲である。好ましい予防的な
使用は、腎臓移植の拒絶の予防のためである。組成物の単回または複数回の投与
が、処置を行う医師によって選択された用量レベルおよびパターンで行われ得る
。全ての症例において、薬学的配合物は、患者を有効に処置するために十分であ
る本発明の抗体（単数または複数）の量を提供するはずである。 薬学的組成物は、投与のための説明書とともに、容器、パック、またはディス
ペンサー中に含まれ得る。本発明の実施のためのキットもまた、提供される。例
えば、このような診断用キットは、毒性部分に対して結合させられたＣＴＬＡ４
と反応する抗体を含む。キットはさらに、抗体複合体を投与するための手段（例
えば、１つ以上のシリンジ）を含み得る。キットは、使用のための説明書ととも
にパッケージされ得る。
【０１９１】 （ＶＩＩ．本発明の使用および方法） 本明細書中に記載されている抗体またはその抗原結合部分（毒素部分複合体を
含む）は、例えば、免疫応答をアップモジュレートまたはダウンモジュレートす
る、以下の処置方法の１つ以上において使用され得る。このような方法は、本発
明の抗体をＴ細胞と接触させることを含む。接触の工程は、インビトロまたはイ
ンビボのいずれかで行われ得る。以下に記載される治療方法に加えて、本発明の
抗体は、研究の目的（例えば、ＣＴＬＡ４を保有している細胞についての染色に
おける、例えば検出可能な標識で標識されている抗体の形態による、または検出
可能な標識に対して結合させられた二次抗体を使用することによる）のために使
用され得る。さらに、別の実施形態においては、被検抗体は、ＣＴＬＡ４を保有
している細胞を単離する方法において、ならびに例えば、アフィニティーカラム
を使用してＣＴＬＡ４を均質に精製する方法において、使用され得る。
【０１９２】 （Ａ．処置方法：） 本発明は、異常なまたは所望されないＣＴＬＡ４の発現または活性に関係して
いる障害の危険性（またはそのような障害に対するかかりやすさ）があるか、あ
るいはそのような障害を有している被験体を処置する、予防方法および治療方法
の両方を提供する。
【０１９３】 （１．予防方法） １つの局面においては、本発明は、被験体における異常なＣＴＬＡ４の発現ま
たは活性、あるいは異常なＴ細胞の活性化に関係している疾患または症状を妨げ
るための、被験体に対して、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその複合体、あるいはＣＴ
ＬＡ４ポリペプチドの発現または少なくとも１つのＣＴＬＡ４もしくはＴ細胞活
性調節剤を投与することによる方法を提供する。異常なまたは所望されないＣＴ
ＬＡ４の発現もしくは活性、または所望されないＴ細胞の活性化によって引き起
こされるかまたはそれに寄与する疾患の危険性がある被験体は、例えば、当該分
野で既知の診断または予防アッセイの任意のものまたはそれらの組合せによって
、同定され得る。予防剤の投与は、それについてのＣＴＬＡ４活性の調節が有用
である症状の発現の前に行われ、その結果、疾患または障害が予防されるか、あ
るいはその進行が遅延させられる。ＣＴＬＡ４の異常または状態のタイプに依存
して、種々の形態の抗ＣＴＬＡ４抗体が投与され得る。例えば、可溶性の一価の
形態の抗ＣＴＬＡ４抗体、または活性化もしくはブロッキング抗ＣＴＬＡ４抗体
の多価の架橋された形態が、被験体を処置するために使用され得る。さらに、Ｃ
ＴＬＡ４を保有している細胞の過剰発現または過剰な活性に関係している障害の
進行を妨げるかまたは遅延させるために毒性の部分に対して結合させられている
、抗ＣＴＬＡ４抗体を使用しての排除のためには、ＣＴＬＡ４を保有している細
胞の集団を標的化することが可能である。
【０１９４】 （２．治療方法） 本発明の別の態様は、治療目的のためにＣＴＬＡ４の発現または活性を調節す
る方法に関する。ＣＴＬＡ４は、共刺激分子と抗原提示細胞上で結合する際に、
細胞を免疫化する抑制性のシグナルを伝達することが実証されている。従って、
ＣＴＬＡ４の活性および／または発現、ならびにＣＴＬＡ４と共刺激分子との間
での相互作用が、免疫応答を調節するために調節され得る。
【０１９５】 本発明の調節方法は、Ｔ細胞を、ＣＴＬＡ４またはその毒性部分複合体を認識
する抗体と接触させることを含む。
【０１９６】 これらの抗体は、インビトロで（例えば、細胞を試薬と接触させることによっ
て）、あるいはインビボで（例えば、被験体に対して試薬を投与することによっ
て）投与され得る。このように、本発明は、ＣＴＬＡ４タンパク質の活性の調節
から利点を得る疾患または障害（例えば、免疫応答の上方調節または下方調節か
ら利点を受けるか、あるいはＣＴＬＡ４タンパク質または核酸分子の異常な発現
または活性によって特徴づけられる、障害）に罹患している個体を処置する方法
を提供する。一実施形態においては、この方法は、ＣＴＬＡ４の発現もしくは活
性、またはＴ細胞の活性を調節する（例えば、アップレギュレートするかまたは
ダウンレギュレートする）抗体または複数の抗体の組合せを投与することを含む
。好ましくは、Ｔ細胞の共刺激が調節され、それによって、免疫応答の調節を生
じる。
【０１９７】 ＣＴＬＡ４活性の刺激は、ＣＴＬＡ４が異常にダウンレギュレートされ、およ
び／または増大したＣＴＬＡ４活性がおそらく有用な効果を有する状況において
、所望される。同様に、ＣＴＬＡ４活性の抑制は、ＣＴＬＡ４が異常にアップレ
ギュレートされ、および／または減少したＣＴＬＡ４活性がおそらく有用な効果
を有する状況において、所望される。
【０１９８】 （３．ＣＴＬＡ４の調節による免疫応答のダウンレギュレーション） ＣＴＬＡ４ポリペプチドの抑制機能が促進されて、それによって免疫応答をダ
ウンレギュレートされ得る、多数の手段が存在する。一実施形態においては、可
溶性の形態でＣＴＬＡ４アンタゴニストとして作用する抗ＣＴＬＡ４活性化抗体
は、ＣＴＬＡ４を通じてＴ細胞に対してネガティブなシグナルを伝達するために
使用される。
【０１９９】 別の実施形態においては、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、ビーズ上に
提示されるか、または抗ＣＴＬＡ４抗体を認識する二次抗体と架橋され、その結
果、Ｔ細胞の表面上のＣＴＬＡ４分子が架橋される、多価の形態で使用される。
【０２００】 ＣＴＬＡ４分子は、単独で、活性化されたＴ細胞上にのみ存在し、従って、毒
性部分に対して結合させられた抗ＣＴＬＡ４抗体は、活性化されたＴ細胞の崩壊
を標的化する手段である。さらに、免疫応答は、活性化されたＣＴＬＡ４を保有
しているＴ細胞を選択的に排除するために、毒性部分の分子に対して結合させら
れた抗ＣＴＬＡ４抗体の使用によって下方調節され得る。ダウンレギュレーショ
ンは、すでに進行している免疫応答を抑制するかまたは阻止する形態であり得る
か、あるいは免疫応答の誘発を妨げることを含み得る。活性化されたＴ細胞の機
能は、免疫細胞の応答をダウンレギュレートすることによって、または免疫細胞
中での特異的なアネルギー性を誘発することによって、あるいはそれらの両方に
よって、抑制され得る。
【０２０１】 本発明の一実施形態においては、ＣＴＬＡ４活性またはＴ細胞の活性をダウン
モジュレートするために使用される抗体は、二重特異的抗体である。例えば、こ
のような抗体は、ＣＴＬＡ４結合部位、およびＴ細胞上の細胞表面レセプターを
標的化する別の結合部位を含み得る。例えば、一実施形態においては、このよう
な抗体は、ＣＴＬＡ４結合部位を包含することに加えて、例えば、特異的な細胞
の集団に対して分子をより効率的に標的化するためのＴ細胞抗原レセプターと結
合する結合部位をさらに含み得る。
【０２０２】 共刺激分子とのＣＴＬＡ４の相互作用を模倣する抗体（例えば、ＣＴＬＡ４活
性化抗体または多価提示抗体）は、免疫細胞の増殖および／またはエフェクター
機能を抑制するか、あるいはインビトロのアッセイに添加された場合にはアネル
ギーを誘発するそれらの能力によって、同定され得る。例えば、細胞は、活性化
レセプターを通じてシグナル伝達を刺激する試薬の存在下で培養され得る。多数
の当該分野で認識されている細胞の活性化の量が、ネガティブなシグナルを伝達
する抗体の能力を測定するために、例えば、活性化因子の存在下での細胞増殖ま
たはＴ細胞のエフェクター機能（例えば、サイトカインの産生）に対するそれら
の影響を測定することによって、使用され得る。この活性化を阻止する試験剤の
能力は、測定される増殖またはエフェクター機能の減少を達成する試薬の能力を
測定することによって、容易に決定され得る。
【０２０３】 本発明の一実施形態においては、寛容性は、抗ＣＴＬＡ４抗体との抗原の同時
投与によって、特異的な抗原に対して誘発される。例えば、寛容性は、特異的な
タンパク質（例えば、治療用のタンパク質）に対して誘発され得る。一実施形態
においては、それに対する免疫応答が所望されないアレルゲンまたは外来タンパ
ク質に対する免疫応答が、抑制され得る。例えば、第ＶＩＩＩ因子を受容する患
者は、頻繁にこの凝固因子に対する抗体を作成する。抗ＣＴＬＡ４抗体またはそ
の毒性部分複合体の抑制性の形態の、組換えの第ＶＩＩＩ因子と組合せた同時投
与（または例えば架橋によって、第ＶＩＩＩ因子に対して物理的に連結させるこ
とによる）は、免疫応答の下方調節を生じ得る。
【０２０４】 他の免疫調節剤が、被検抗体または複合体と組合せて投与され得る。他の免疫
調節試薬の例として、共刺激シグナル（例えば、ＣＤ２８に対する、ＩＣＯＳ）
、他の免疫細胞マーカーに対する抗体（例えば、ＣＤ４０に対する、ＣＤ４０リ
ガンドに対する、またはサイトカインに対する）、融合タンパク質（例えば、Ｃ
ＴＬＡ４−Ｆｃ）、および免疫抑制剤（例えば、ラパマイシン、シクロスポリン
Ａ、またはＦＫ５０６）を阻止する抗体が、挙げられる。
【０２０５】 ＣＴＬＡ４の抑制性の機能の活性化（例えば、ＣＴＬＡ４のネガティブなシグ
ナル伝達機能の刺激、または抗体複合体でのＣＴＬＡ４の標的化による）は、例
えば、組織、皮膚、および器官の移植の状況において、移植片対宿主疾患（ＧＶ
ＨＤ）において、または全身性エリテマトーデスおよび多発性硬化症のような自
己免疫疾患において、免疫応答を下方調節するために有用である。例えば、免疫
細胞機能の遮断は、組織の移植における組織の崩壊の減少を生じる。代表的には
、組織の移植においては、移植片の拒絶は、免疫細胞によるその外来であるとの
認識によって開始され、移植片を崩壊させる免疫反応が続く。ＣＴＬＡ４分子を
活性化する抗体、またはＣＴＬＡ４に対して結合する抗体−毒性部分複合体の、
単独で、または別の下方調節する薬剤と組み合わせての、移植の前または移植時
での投与は、免疫応答を抑制し得る。さらに、ＣＴＬＡ４の抑制性のシグナルの
促進もまた、免疫細胞をアネルギー化するために十分であり、それによって被験
体において寛容性を誘発し得る。一実施形態においては、抗ＣＴＬＡ４は、被験
体において長期間の寛容性を誘発し、そしてこれらのブロッキング試薬の繰り返
される投与の必要性を回避し得る。
【０２０６】 被験体における十分な免疫抑制または寛容性を達成するためには、他の分子の
共刺激機能を阻止することもまた所望され得る。例えば、これらの抗原のそれぞ
れ、またはこれらの抗原に対するブロッキング抗体の活性を有しているペプチド
の組合せの可溶性の形態を（別々に、または単一の組成物中でともに）、移植の
前または移植時に投与することによって、Ｂ７−１、Ｂ７−２、またはＢ７−１
およびＢ７−２の機能を阻止することが所望され得る。あるいは、ＣＴＬＡ４の
抑制活性を促進し、そしてＢ７−１および／またはＢ７−２の共刺激活性を抑制
することが、所望され得る。本発明の下方調節方法と組合せて使用され得る他の
下方調節薬剤として、例えば、ＣＴＬＡ４の可溶性の形態、他の免疫細胞マーカ
ーに対するブロッキング抗体、または他のレセプターリガンド対の可溶性の形態
（例えば、ＣＤ４０とＣＤ４０リガンドとの間の相互作用を崩壊させる試薬（例
えば、抗ＣＤ４０リガンド抗体））、サイトカインに対する抗体、あるいは免疫
抑制薬剤が挙げられる。
【０２０７】 ＣＴＬＡ４の抑制性機能を活性化すること、または抗体毒性部分複合体を用い
てＴ細胞を標的化することもまた、自己免疫疾患を処置することにおいて有用で
ある。多くの自己免疫障害が、自己組織に対して反応性である免疫細胞の不適切
な活性化の結果であり、これは、サイトカインおよび疾患の病理学に関係してい
る自己抗体の産生を促進する。自己反応性の免疫細胞の活性化を妨げることは、
疾患の症状を軽減し得るかまたは排除し得る。ＣＴＬＡ４または抗ＣＴＬＡ４毒
性部分複合体を通じてネガティブなシグナルを伝達するＣＴＬＡ４活性化抗体の
投与は、免疫細胞の活性化を抑制するため、および疾患のプロセスに関係し得る
自己抗体またはサイトカインの産生を妨げるために、有用である。さらに、ＣＴ
ＬＡ４の抑制性機能を促進する薬剤は、疾患からの長期間の鎮静を導き得る、自
己反応性の免疫細胞の抗原特異的寛容性を誘発し得る。自己免疫障害を予防する
かまたは緩和することにおける試薬の効率は、ヒトの自己免疫疾患の多数の十分
に特徴付けられた動物モデルを使用して決定され得る。例として、マウスの実験
用の自己免疫性脳炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮＺＢハイブリッド
マウスにおけるマウス全身性エリテマトーデス、マウスの自己免疫性のコラーゲ
ン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける真性糖尿病、ならびにマウス
の実験用の重症筋無力症が挙げられる（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９
，８４０−８５６頁を参照のこと）。
【０２０８】 免疫細胞の活性化の抑制は、アレルギーおよびアレルギー性の反応の処置にお
いて（例えば、ＩｇＥの産生を抑制することによって）治療的に有用である。Ｃ
ＴＬＡ４の抑制性機能または抗ＣＴＬＡ４毒性部分複合体を促進する薬剤が、被
験体における免疫細胞媒介性アレルギー性の応答を抑制するために、アレルギー
性の被験体に対して投与され得る。ＣＴＬＡ４の活性化もまた、アレルギーを処
置することにおいて有用であり得る。ＣＴＬＡ４の抑制性の経路の刺激は、適切
なＭＨＣ分子と組合せてアレルゲンに対する暴露が伴い得る。アレルギー反応は
、アレルゲンの侵入経路、および肥満細胞または好塩基球上へのＩｇＥの沈着の
パターンに依存して、性質において全身的または局所的であり得る。従って、免
疫細胞媒介性アレルギー性の応答の抑制は、ＣＴＬＡ４または抗ＣＴＬＡ４−毒
性部分複合体の抑制性機能を促進する抗体の抑制性の形態の投与によって、局所
的または全身的に達成され得る。
【０２０９】 ＣＴＬＡ４の抑制性の活性の刺激を通じる免疫細胞の活性化の抑制もまた、免
疫細胞のウイルス感染において治療的に重要であり得る。例えば、後天性免疫不
全症候群（ＡＩＤＳ）においては、ウイルスの複製は、免疫細胞の活性化によっ
て刺激される。ＣＴＬＡ４の抑制性機能の刺激は、ウイルスの複製の抑制を生じ
、そしてそれによってＡＩＤＳの経過を緩和し得る。
【０２１０】 （４．ＣＴＬＡ４の調節による免疫応答のアップレギュレーション） 免疫応答のアップレギュレーションの手段としてのＣＴＬＡ４の抑制性の活性
の遮断もまた、治療において有用である。それによってＣＴＬＡ４ポリペプチド
の抑制性の機能が阻止され、それによって免疫応答がアップレギュレートされ得
る多数の手段が存在している。一実施形態においては、その天然に存在している
リガンド（例えば、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６）とのＣＴＬＡ４の相互作
用を阻止する抗ＣＴＬＡ４ブロッキング抗体は、可溶性の形態でＣＴＬＡ４アン
タゴニストとして作用し、そしてＣＴＬＡ４を通じてＴ細胞に対するネガティブ
なシグナルの伝達を抑制するために使用される。
【０２１１】 免疫応答のアップレギュレーションは、存在している免疫応答を増強する形態
であり得るか、または最初の免疫応答を誘発する形態であり得る。例えば、ＣＴ
ＬＡ４の抑制性活性を阻止することにより免疫応答を増強することは、微生物（
例えば、細菌、ウイルス、または寄生生物）による感染の症例において有用であ
る。例えば、一実施形態において、共刺激分子（例えば、ＣＴＬＡ４に対する不
活性化抗体）とのＣＴＬＡ４の相互作用を抑制する抗体が、抗体および細胞媒介
性応答のアップレギュレーション（ウイルスのより迅速であるかまたは徹底的な
除去を生じる）が有益である状況において、治療的に有用である。例として、ウ
イルス性の皮膚疾患（例えば、ヘルペス、または帯状ヘルペス）が挙げられる。
これらの症例では、このような薬剤は、皮膚に対して局所的に送達され得る。さ
らに、全身的なウイルス性の疾患（例えば、インフルエンザ、一般的な感冒、お
よび脳炎）は、このような薬剤の全身的な投与によって緩和され得る。
【０２１２】 特定の例においては、免疫応答をアップレギュレートする他の薬剤（例えば、
共刺激レセプターを介してシグナルを伝達するＢ７ファミリーの成員の形態）を
、免疫応答をさらに増強させるためにさらに投与することが、所望され得る。
【０２１３】 あるいは、免疫応答は、患者から免疫細胞を除去すること、ＣＴＬＡ４を介す
る抑制シグナル伝達を阻害する抗体と免疫細胞をインビトロで接触させること、
およびその患者にインビトロで刺激した免疫細胞を再度導入することによって、
感染した患者において増強させられ得る。
【０２１４】 ＣＴＬＡ４を介する抑制シグナル伝達を阻害する抗体は、種々のポリペプチド
（例えば、病原体に由来するポリペプチド）に対するワクチンにおいて、予防的
に使用され得る。病原体（例えば、ウイルス）に対する免疫は、適切なアジュバ
ント中で、ＣＴＬＡ４を介する抑制シグナル伝達を阻害する抗体とともにウイル
スタンパク質を用いてワクチン接種することによって、導入され得る。
【０２１５】 別の実施形態において、免疫応答は、共刺激分子（例えば、ＣＴＬＡ４）と結
合する抑制レセプターを介するシグナル伝達を阻害することによって刺激され得
、その結果、予め存在する寛容性が克服される。例えば、それに対して被験体が
有意な免疫応答を高めることができない抗原（例えば、腫瘍特異的抗原）に対す
る免疫応答は、ＣＴＬＡ４の抑制活性を阻害する薬剤を投与することによって、
誘発され得る。ＣＴＬＡ４アンタゴニストは、活性な免疫化のプロセスにおいて
外来抗原に対する応答をブーストするためのアジュバントとして使用され得る。
【０２１６】 一実施形態においては、免疫細胞は被験体から得られ、そして免疫細胞の集団
を拡大させるために、ＣＴＬＡ４抑制シグナルを阻害する抗体の存在下でエキソ
ビボで培養される。さらなる実施形態において、免疫細胞は、その後、被験体に
対して投与される。免疫細胞は、例えば、一次活性化シグナルおよび共刺激シグ
ナルを、当該分野で既知であるように、免疫細胞に対して提供することによって
、インビトロで増殖するように刺激され得る。共刺激分子は、例えば、可溶性で
あり得、細胞膜に対して付着され得るか、または、ビーズのような固体の表面に
対して付着され得る。ＣＴＬＡ４を介するシグナル伝達を阻害する抗体もまた、
免疫細胞の増殖を共刺激するために使用され得る。一実施形態においては、免疫
細胞は、ＰＣＴ国際公開番号第９４／２９４３６号に記載されている方法に従っ
てエキソビボで培養される。
【０２１７】 （ＶＩＩＩ．ＣＴＬＡ４調節剤の投与） 本発明のＣＴＬＡ４調節剤（例えば、刺激性抗体および抑制抗体またはその抗
原結合部分、ならびに毒性部分に対して結合した抗体またはその抗原結合部分）
は、Ｔ細胞媒介性免疫応答を増強するかまたは抑制するかのいずれかのために、
インビボでの薬学的投与のために適切な生物学的に適合性のある形態で被験体に
対して投与される。「インビボでの投与のために適切な生物学的に適合性の形態
」によって、いかなる毒性効果もタンパク質の治療効果に上回られる、投与され
るタンパク質の形態が意味される。被験体という用語は、その中の免疫応答が誘
発され得る生存している生物（例えば、哺乳動物）を含むように意図される。被
験体の例として、ヒト、ウマ、家畜動物、外来種である動物、イヌ、ネコ、マウ
ス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が挙げられる。本明細書中で
記載される薬剤の投与は、単独でかまたは薬学的に受容可能なキャリアと組合せ
て、治療的に活性な量の薬剤を含有している任意の薬学的な形態であり得る。
【０２１８】 本発明の治療用組成物の治療的に活性な量の投与は、所望の結果を達成するた
めに必要な投与量および時間で有効な量として定義される。例えば、ＣＴＬＡ４
抗体の治療的に活性な量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならび
に個体中で所望の応答を誘発するペプチドの能力のような因子に従って、変化し
得る。投与量レジメは、最適な治療応答を提供するように調節され得る。例えば
、いくつかの分けられた用量が毎日投与され得るか、または用量は、治療の状況
の緊急性によって示されるように比例的に減少され得る。
【０２１９】 抗ＣＴＬＡ４調節薬（例えば、刺激性または抑制抗体）は、注射（皮下、静脈
内など）、経口投与、吸入、経皮的塗布、または直腸投与のような、便利な様式
で投与され得る。投与の経路に依存して、活性化合物は、酵素、酸、および化合
物を不活化し得る他の天然条件からその化合物を保護するように、材料中にコー
ティングされ得る。例えば、非経口投与以外の投与によってＣＴＬＡ４調節剤を
投与するためには、その不活化を妨ぐための材料でペプチドをコーティングする
か、またはその材料とともにそのペプチドを同時に投与することが必要であり得
る。
【０２２０】 ＣＴＬＡ４調節剤は、適切なキャリア、希釈剤、またはアジュバント中で個体
に投与され得るか、酵素インヒビターとともに同時に投与され得るか、またはリ
ポソームのような適切なキャリア中で投与され得る。薬学的に受容可能な希釈剤
として、生理食塩水および水性緩衝溶液が挙げられる。アジュバントは、その最
も広い意味において使用され、そしてインターフェロンのような任意の免疫刺激
化合物を含む。本明細書中で意図されるアジュバントの他の例として、ミョウバ
ン、レゾルシノール、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンオレ
イルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテル）、細菌由来の産物
（または病原体の弱毒化形態）が挙げられる。酵素インヒビターとして、膵トリ
プシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＥＥＰ）、およ
びトラジロール（ｔｒａｓｙｌｏｌ）が挙げられる。リポソームとして、水中油
中水エマルジョン、ならびに従来のリポソームが挙げられる（Ｓｔｅｒｎａら（
１９８４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７：２７）。
【０２２１】 活性化合物はまた、非経口投与もまたは腹腔内投与もされ得る。分散剤はまた
、グリセロール、液体のポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中にて
、ならびに油中にて、調製され得る。通常の保存および使用の条件下では、これ
らの調製物は、微生物の増殖を防ぐために保存剤を含有し得る。
【０２２２】 注射用途に適切な薬学的組成物として、滅菌水溶液（水溶性である場合）もし
くは滅菌分散剤、または滅菌注射用溶液もしくは滅菌分散物を即時調製するため
のおよび滅菌散剤が挙げられる。全ての場合において、組成物は滅菌状態でなけ
ればならず、そして容易な注射可能性が存在する程度に液性でなければならない
。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして細菌および
真菌のような微生物の混入作用に対して保護されなければならない。キャリアは
、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレング
リコール、および液体のポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な
混合物を含有する、溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、
レシチンのようなコーティングの使用によって、分散の場合においては必要とさ
れる粒子径の維持によって、そして界面活性剤の使用によって、維持され得る。
微生物の作用からの保護は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、
クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって
達成され得る。多くの場合においては、組成物中に等張剤（例えば、糖、ポリア
ルコール（例えば，マニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム））を含むこと
が好ましい。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノス
テアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に含むことによって、もた
らされ得る。
【０２２３】 滅菌注射用溶液は、必要に応じて上記に列挙される成分の１つまたは組合せを
有する適切な溶媒中に、必要とされる量の活性化合物（例えば、ＣＴＬＡ４調節
剤）を取りこむこと、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に
は、分散剤は、塩基性の分散媒体を含有する滅菌ビヒクル中に、活性化合物、お
よび上記に列挙されるなかから必要とされる他の成分を取りこむことによって、
調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌散剤の場合においては、好まし
い調製方法は、減圧乾燥および凍結乾燥であり、これによって、活性成分（例え
ば、ペプチド）および予め滅菌濾過されたその溶液に由来する任意のさらなる所
望される成分の散剤を生じる。
【０２２４】 活性化合物が上記に記載されているように適切に保護される場合には、タンパ
ク質は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用キャリアとともに、経口的
に投与され得る。本明細書中で使用される場合には、「薬学的に受容可能なキャ
リア」として、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、および抗真菌剤、等張
剤、および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に活性な物質についてのこのよ
うな媒体および薬剤の使用は、当該分野で既知である。任意の従来の媒体または
薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、治療用の組成物中でのそれらの
使用が意図される。補助的な活性化合物もまた、組成物中に取り込まれ得る。
【０２２５】 投与の容易さおよび投与量の均質性のために、投与量単位形態で、非経口組成
物を処方することが、特に有利である。本明細書中で使用される場合には、投与
量単位形態は、処置される哺乳類被験体についての単位投与量として適切な、物
理的に独立した単位をいい、それぞれの単位は、必要とされる薬学的なキャリア
と関連して、所望される治療効果を生じるように計算された活性化合物の予め決
定された量を含有している。本発明の投与量単位形態についての仕様は、（ａ）
活性化合物の特有の特徴、および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個
体における感受性の処置のためにこのような活性化合物を調剤する分野に固有の
限定によって決定され、そしてそれらに直接依存する。
【０２２６】 本発明の抗体はさらに、インビトロでの広範囲の種々の有用性を見出し得る。
例として、抗体は、Ｔ細胞を分類するため、特異的ＩＬ−２レセプター保有細胞
またはそのレセプターのフラグメントを単離するため、ワクチンの調製のためな
どに、利用され得る。ＣＴＬＡ４活性またはＴ細胞活性（または一般的には、免
疫応答）を減少させるかまたはダウンレギュレートすることについてのスクリー
ニングアッセイによって決定される薬剤の有効性は、被験体の臨床試験において
モニターされ得る。
【０２２７】 一実施形態においては、発現が共刺激経路の調節によって、または特にＣＴＬ
Ａ４の調節によって調節され、ＣＴＬＡ４の活性の調節の指標として使用され得
る遺伝子が、同定され得る。従って、例えば、臨床試験において被検抗体の効果
を調査するために、Ｔ細胞が単離され、そしてＲＮＡが調製されて、それぞれ、
Ｔ細胞の活性化（例えば、ＣＴＬＡ４抑制シグナルを阻止する際に調節される）
の指標である遺伝子またはＴ細胞の抑制（例えば、ＣＴＬＡ４抑制シグナルの伝
達の際に調節される）の指標である遺伝子の発現のレベルについて、分析され得
る。遺伝子発現のレベル（すなわち、遺伝子の発現パターン）は、本明細書中で
記載されているように、ノーザンブロット分析またはＲＴ−ＰＣＲによって定量
され得るか、あるいは、本明細書中に記載されている方法の１つによって産生さ
れたタンパク質の量を測定することによってか、またはＣＴＬＡ４遺伝子もしく
は他の遺伝子の活性のレベルを測定することによって、定量され得る。このよう
にして、遺伝子の発現パターンは、薬剤に対する細胞の生理学的応答の指標であ
るマーカーとして役立ち得る。従って、この応答の状態は、薬剤での個体の処置
の前に、および処置の間の種々の時点で決定され得る。好ましい実施形態におい
ては、本発明は、免疫応答に対する、またはＴ細胞の活性化もしくは詳細にはＴ
細胞の数に対する、抗体または毒性部分結合体の効果を測定することによって、
抗体または毒性部分結合体での被験体の処置の有効性をモニターするための方法
を提供する。例えば、標準的な方法論が、例えば、Ｔ細胞の増殖、部位カインの
産生、活性化Ｔ細胞の数、抗体の産生、または遅延型過敏性をアッセイするため
に使用され得る。さらに、または、あるいは、、処置が施されている特定の条件
における改善が、モニターされ得る。
【０２２８】 本発明は、限定としては解釈されるべきではない以下の実施例によってさらに
説明される。本出願全体を通して引用されている全ての参考文献、特許、および
公開されている特許出願の内容、ならびに図面および配列表は、本明細書中で参
考として援用される。
【０２２９】 （実施例） （実施例１：抗ＣＴＬＡ４抗体の生産） マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｍａｉｎｅ）５匹のグループに、ｒｈｕ
ＣＴＬＡ４の細胞外ドメインをコードするｃＤＮＡを２μｇ注入した。精製プラ
スミドｃＤＮＡを金ビーズ上に濃度ｃＤＮＡ １μｇ／金０．５ｍｇとなるよう
に沈着させた。金ビーズおよび沈着ｃＤＮＡを、ほぼ１１週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ
マウスの腹腔内に皮内で重ならない毎月２回の注射でＨｅｌｉｏｓチャージした
（ｃｈａｒｇｅｄ）遺伝子を用いて送達した。これらの動物を４週毎に免疫し、
脾臓を動物から摘出した。
【０２３０】 脾臓を処理してリンパ球の懸濁液を得、得た懸濁液を、ミエローマ細胞系６５
３／Ｐ３と、５０％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール１５００（Ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用い確立済みので融合した（Ｏｉ ＆ Ｈｅｒ
ｚｅｎｂｅｒｇ，１９８０、Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌ
ｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｂ．Ｍｉｓｈｅｌ ＆ Ｓ．Ｓｃｈｉｉｇ
ｉ，編，Ｗ．Ｊ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ
，ｐ３５１）によって融合した。融合細胞を９６ウェルのマイクロタイタープレ
ートに密度２×１０５細胞／ウェルで植え付け、２４時間後にＨＡＴ選択にかけ
た（Ｌｉｔｔｌｅｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｗ．（１９６４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １４５：
７０９）。
【０２３１】 推定抗ＣＴＬＡ４抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を、ｇｐｉアンカー型Ｃ
ＴＬＡ４を発現するＣＨＯ細胞および活性化Ｔ細胞に対する、固相および液相Ｅ
ＬＩＳＡ、ならびにフロー部位メトリーによる細胞内および細胞外染色によって
、同定した。交差反応性を、ｃｙｎｏＰＨＡ芽球を用いてアッセイした。エピト
ープマッピングを、フロー部位メトリーおよびＥＬＩＳＡ、ならびにＢｉａｃｏ
ｒｅにより測定した親和性決定により行った。上記アッセイに陽性なハイブリド
ーマを含むウェルを、さらなる研究のために増殖した。増殖時にこれらの培養物
は安定であった。そして細胞系を限界限希釈法でクローン化し低温保存した。
【０２３２】 Ｍａｂのアイソタイプを、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。精製ｒｈＣＴＬ
Ａ４ＩｇＧ１Ｆｃを９６ウェルのマイクロタイタープレート上にコートし、抗体
を加え、異なるアイソタイプ特異的ビオチン結合体化ヤギ抗マウス免疫グロブリ
ン（Ｚｙｍｅｄ）によって検出した。ホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｈ
ＲＰ）と結合したストレプトアビジンを加え、特異的に結合した酵素を比色分析
用基質を用いて測定した。抗体２５、２６、２７、２９、３３、３４、３５、３
６、３８が同定された。この固相アッセイの結果は、テストした抗体が全てＩｇ
Ｇ１アイソタイプであることを示す。抗体２６をサブクローン化した。これを、
抗体２６Ｂと呼ぶ。
【０２３３】 （実施例２：抗ＣＴＬ４抗体は、ＣＤ８０／ＣＤ８６へのＣＴＬＡ４の結合に
を阻害する能力が変化した） ＥＬＩＳＡプレートを１０μｇ／ｍｌのヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇとともに一夜イ
ンキュベートした。プレートをＰＢＳ／１％ＢＳＡで洗浄し、連続希釈した一次
抗体と室温（ＲＴ）で２時間インキュベートした。洗浄後、飽和濃度のＡＰ結合
体化ヤギ抗マウス抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。結合していな
いヤギ抗体をＰＢＳ／１％ＢＳＡで洗浄した。ＡＢＴＳを用いてこのアッセイを
発色させた。図１Ａないし図１Ｃは、テストした９個の抗体のパネルで各抗体が
ＣＴＬＡ４と結合することを示す。データはＯＤ４０５吸収値として表してある
。
【０２３４】 抑制アッセイを実施し、ＣＴＬＡ４へのＣＤ８０およびＣＤ８６の結合をこれ
ら抗体が阻止する能力を測定した。ＥＬＩＳＡを改良を加えて、上記のごとく実
施した。一次抗体と室温で２時間インキュベーション後、固定濃度（０．６６μ
ｇ／ｍｌ）のビオチン結合体化ＣＤ８０−ＩｇまたはＣＤ８６−Ｉｇを加え、さ
らに室温１時間インキュベートした。洗浄後、飽和濃度のニュートラビジン−Ａ
Ｐを加え、室温で１時間インキュベートした。結合してないニュートラビジン−
ＡＰをＰＢＳ／１％ＢＳＡで洗浄した。ＡＢＴＳを用いてこのアッセイを発色さ
せた。抑制パーセントをＹ軸に表す。ＣＤ８６結合の抑制結果を図１Ｄないし図
１Ｆに示す。ＣＤ８０結合についての結果を図１Ｇないし図１Ｉに示す。これら
のデータから、抗体２９および３３は、ＣＤ８０およびＣＤ８６へのＣＴＬＡ４
の結合を阻止できなかったことが判る。
【０２３５】 （実施例３：抗ｈＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４分子上の三つの異なる部位の
認識に基づきグループ化され得る） ＣＴＬＡ４−Ｉｇ変異体分子のパネルを部位特異的変異誘発により作製した。
ＣＴＬＡ４のＮＭＲ１構造（Ｍｅｔｚｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕ
ｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９７）４：５２７）に基づき、１１個の残基を変
異誘発のために選定し、アラニンで置換した。変異体タンパク質をＣＨＯ細胞上
に一過的に発現させ、４８時間で上清を採取した。ＣＴＬＡ４変異体分子を含む
上清をＥＬＩＳＡで定量し標準化した。１０μｇ／ｍｌの抗体（２５、２６、ま
たは２９）でコートしたプレートを、約０．５μｇ／ｍｌ変異体ＣＴＬＡ４分子
を含む上清とともにインキュベートした。室温で２時間のインキュベーション後
、プレートを洗浄し、ＡＰ結合体化ヤギ抗ヒトＦｃ特異的ＩｇＧとともに１時間
インキュベートした。上記のようにこのアッセイを発色させた。
【０２３６】 図２に示すデータから、抗ｈＣＴＬＡ４抗体の結合は、ＣＴＬＡ４分子に導入
された各種の変異によって各種の影響をうけることが判る。バックグラウンドを
超える光学密度の読みは、プレートに結合したＣＴＬＡ４分子への抗体の結合を
示す。抗体２５、２６、および２９は、この９個の抗体により同定される結合部
位を持つ抗体の典型である。位置４６（配列番号２の位置８３。配列番号２は、
配列番号２のアミノ酸１−３７に示されるシグナル配列を含む）のグルタミン酸
（Ｅ）をアラニン（Ａ）に置換すると、抗体２６、２７、３４、３５、３６、及
び３８の結合は強烈な影響をうける。反対に、抗体２９、３３では同じ置換をし
ても、影響は（たとえあるとしても）ほとんどない。しかし、ＣＴＬＡ４への抗
体２９、３３の結合は、位置８５のアルギニン（配列番号２のアミノ酸１２０）
をアラニンに置換すると影響を受ける。抗体２５は導入したいずれの変異の影響
も受けない。位置４６に置換を導入しても、ＣＴＬＡ４へのＣＤ８０およびＣＤ
８６の結合は影響を受けることが以前に証明されている（Ｍｅｔｚｌｅｒ ｅｔ
ａｌ．（１９９７）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌ．（１９９７）
４：５２７）。したがって、このパネルに記載した抗体のいくつか（位置４６で
の置換により影響を受けるもの、すなわち抗体番号２６、２７、３４、３５、３
６、及び３８）は、ＣＤ８０／ＣＤ８６の結合部位に空間的に近接する部位でＣ
ＴＬＡ４に結合する。
【０２３７】 （実施例４：ＣＴＬＡ４への結合の結果、Ｔ細胞応答が減少する） ２つのドナー由来のＴ細胞における増殖およびＩＬ−２産生に対する、ＣＴＬ
Ａ４に対する架橋形態の抗体の効果を試験した。
【０２３８】 ＣＤ４＋Ｔ細胞（２．５×１０４細胞／ウェル）を、抗ｈＣＤ３＋／−抗ＣＴ
ＬＡ４でコートしたトシルビーズで刺激した。７２時間後、３Ｈ−チミジン取込
みによって増殖を測定した。取込まれた放射能は、ＬＫＢ １２０５プレートリ
ーダーを用いて決定した。パネルＡでは、最上部横列の数字は、抗ＣＴＬＡ５の
非存在下（培地）にて刺激された細胞に対する増殖応答の抑制パーセントを示す
。図３Ａに示すように、試験した抗体のうちのほとんど（抗体番号３６を除く）
が、Ｔ細胞増殖を減少させる結果となった。
【０２３９】 ｈＣＴＬＡ４発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、可溶性抗ｈＣＤ２８抗体の存在下
にて抗ｈＣＤ３＋／−抗ＣＴＬＡ４でコートしたトシルビーズで刺激した。７２
時間後に上清を収集して、ＩＬ−２産生を市販のｈＩＬ−２ ＥＬＩＳＡキット
（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡ）を用いて評価した。最上部横列の数字は、抗
ＣＴＬＡ４の非存在下（培地）にて刺激された細胞に対する抑制パーセントを示
す。図３Ｂに示すように、試験した全ての抗体は、このアッセイにおいてＴ細胞
によるＩＬ−２産生を減少させる結果となった。
【０２４０】 （実施例５：抗体番号２６によるＣＤ８０／ＣＤ８６のＣＴＬＡ４結合の阻止
は増強された増殖およびＩＬ−２産生を生じる） 混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を、レスポンダーとしてＣＤ４＋Ｔ細胞（２．５
×１０４細胞／ウェル）および刺激因子としてＥＢＶリンパ芽球細胞株（２．５
×１０４細胞／ウェル）を用いて実施した。可溶性抗体２６またはＩｇＧ１コン
トロール抗体を、各種の濃度で培養の開始時に加えた。５日後、増殖を、３Ｈチ
ミジンの取込みによって測定した。取り込まれた放射活性を、ＬＫＢ １２０５
プレートリーダで測定した。図４Ａは、培地への抗体番号２６の添加が、コント
ロール抗体で観察されたレベルよりも高いレベルの増殖を生じることを示す。抗
体２６は、初代Ｔ細胞の増殖を増強することが見出された、パネル中の唯一の抗
ＣＴＬＡ４抗体であった。
【０２４１】 ＩＬ−２産生に対する他の抗ＣＴＬＡ４抗体の効果もまた、測定した。ｈＣＴ
ＬＡ４でトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（１０６細胞／ｍｌ）を、
可溶性抗ＣＴＬＡ４抗体またはＩｇＧコントロールの存在下または不存在下で、
抗ｈＣＤ３＋ＣＤ８６−Ｉｇをコートしたラテックスビーズで刺激した。上清を
、７２時間で採取し、そしてＩＬ−２産生を、市販のｈＩＬ−２ ＥＬＩＳＡキ
ット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡ）を使用してアッセイした。図４Ｂは、種
々の抗体の存在下でこれらの培養物によって産生されたＩＬ−２のレベルを示す
。
【０２４２】 （実施例６：抗体番号２６の重鎖（ＶＨ）可変領域および軽鎖（Ｖκ）可変領
域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列） 全ＲＮＡを、ＴＲＩｚｏｌプロトコール（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ）に従って６ＣＴＬＡ４／１．１．１．６細胞から抽出し、続いてｃＤＮＡ合
成およびｄＧテーリング（ｄＧ−ｔａｉｌｉｎｇ）（Ｃｏら（１９９２）Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４）を行った。この得られたｃＤＮ
Ａを、テンプレートとして使用し、そしてｐｏｌｙＧテールにアニーリングする
特異的プライマーおよび重鎖または軽鎖遺伝子の定常領域にアニーリングする特
異的プライマーを用いて、重鎖および軽鎖の可変領域を、ＰＣＲを使用して増幅
した。このＰＣＲ産物（約４５０〜５００ｂｐ）を、ゲル精製し（Ｇｅｎｅｃｌ
ｅａｎＩＩ キット、ＢＩＯ１０１）、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩでの消化
に供した。その後、ＶＬおよびＶＨに対するＰＣＲフラグメントを、上記と同じ
酵素で消化したｐＵＣ１９ベクター中にサブクローニングした。このクローン化
した領域を、配列決定をした。ＶＨおよびＶＬ遺伝子の各々の複数のクローンを
、配列決定をした。これらのＶ遺伝子のクローニングおよび配列決定を独立して
繰り返し、その決定した配列の正確性を確認した。これらの配列を、コンピュー
タモデリングに供した。
【０２４３】 番号２６の重鎖の部分ヌクレオチド配列（これは、このＯＲＦの５’末端で開
始しそしてこの可変領域を通して伸長する）を、以下に示す：
【０２４４】
【化１】 （実施例７：抗体２６のヒト化バージョンの調製） ヒトフレームワークＩＣ４を、抗体２６の軽鎖および重鎖Ｖ遺伝子の両方のヒ
ト化のために選択した。ＩＣ４−Ｖκは、ヒトサブクラスＶκ−１のものあり、
そのフレームワークにおいて、ＣＴＬＡ４−２６ＢのＶκとの６３％のアミノ酸
配列同一性を有する。ＩＣ４−ＶＨは、ヒトサブクラスＶＨ−２のものであり、
そのフレームワークにおいて、ＣＴＬＡ４−２６ＢのＶＨとの６９％のアミノ酸
配列同一性を有する。軽鎖および重鎖Ｖ遺伝子の両方の３ＣＤＲ領域は、このヒ
ト化バージョンにおいて変化させない。ＣＤＲと有意な接触を有すると予測され
る特定のフレームワーク残基または構造的完全性の維持において重要な機能を有
する特定のフレームワーク残基もまた、未変化のままである。さらに、それらの
それぞれのヒトサブグループについてのその位置では異例または稀少なものとし
て同定された多数のアミノ酸を、その同じ位置でコンセンサスアミノ酸に変化さ
せた。軽鎖および重鎖の可変領域の最終的なヒト化配列を、以下に示す。
【０２４５】 ＶＨおよびＶＬの各々に対する８個の長いオリゴデオキシヌクレオチドを、合
成および構築し、Ｋｌｅｎｏｗ伸長を介して全体のＶＨ配列またはＶＬ配列を得
た（Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９−１０３５）。
次いで、この最終産物を、ＰＣＲによって増幅しそしてＸｂａＩで消化した。こ
のＶＨフラグメントを、ｐＶγ１、ｐＶγ２ｍ３、およびｐＶγ４発現ベクター
（Ｃｏら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４；Ｃｏ
ｌｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：３６１３−３６２１）中にサ
ブクローニングして、それぞれ、プラスミドｐＶγ１ＨＣ、ｐＶγ２ｍ３ＨＣ、
およびｐＶγ４ＨＣを得た。ＶＬフラグメントを、ｐＶκの発現ベクターにサブ
クローニングして、プラスミドｐＶκＬＣを得た。
【０２４６】 ヒト化抗ＣＴＬＡ４プラスミドでのＣＯＳ−７細胞の一過的トランスフェクシ
ョンを、それぞれ１．５μｇおよび３．０μｇの、軽鎖プラスミドおよび重鎖プ
ラスミドを用いて行った。軽鎖および重鎖の全ての組み合わせを、構成した（ｐ
ＶκＬＣ＋ｐＶγ１ＨＣ、ｐＶγ２ｍ３ＨＣ、およびｐＶγ４ＨＣ）。使用した
増殖培地は、低Ｉｇ増殖培地（ＤＭＥＭ＋２％低Ｉｇ ＦＢＳ＋Ｌ−Ｇｌｕ）で
あった。上清を用いてＦＡＣＳアッセイし、ＣＴＬＡ４への結合を測定した。一
過的に発現された抗体の産生レベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２４７】 ｐＶκＬＣ＋ｐＶγ１ＨＣおよびｐＶκＬＣ＋ｐＶγ４ＨＣでのＣＯＳ−７細
胞の一過的トランスフェクションの上清を、ＦＡＣＳアッセイに使用して、これ
らのヒト化抗体の力価点を、マウス抗ＣＴＬＡ４と比較して測定した。これは、
定性的アッセイであるが、これは、ヒト化抗体の結合の一般的指標を与え、そし
てこれらのヒト化抗体がマウスＡｂ結合の３倍〜１０倍の範囲にあるか否かを定
性的に示す。この試験を実施するために、上清を、最も低い通常濃度（ＥＬＩＳ
Ａアッセイで決定した）に希釈した。
【０２４８】 安定なトランスフェクションをまた、より定量的な実験における使用のための
精製のために、より高い収率のヒト化抗体を得るために種々のプラスミドの組み
合わせ（ｐＶκＬＣ＋ｐＶγ１ＨＣ、ｐＶγ２ｍ３ＨＣ、ｐＶγ４ＨＣ）を用い
て実施した。ｐＶγ４ＨＣを除く全てのプラスミドを、ＦｓｐＩで線状化し、ｐ
Ｖγ４ＨＣは、ＢｓｔＺＩ７１で線状化した。Ｃｏら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４に記載されるように、３０μｇの軽鎖プラ
スミドおよび６０μｇの重鎖プラスミドを、線状化しそしてエレクトロポレーシ
ョンによるＳｐ２／０細胞への安定なトランスフェクションに使用した。
【０２４９】 ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体番号２６のＶＫ領域のヌクレオチド配列およびアミノ
酸配列を、図９（配列番号７および８）に示す。ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体番号２
６のＶＨ領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図１０（配列番号９お
よび１０）に示す。
【０２５０】 マウスおよびヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体番号２６のＶＨ領域およびＶＫ領域の比
較を、以下に示す：
【０２５１】
【化２】
【０２５２】
【化３】 （実施例８：ＣＴＬＡ４Ｉｇへの結合能についてのヒト化抗ＣＴＬＡ４の３つ
のアイソタイプとのマウス抗ヒトＣＴＬＡ４のＥＬＩＳＡによる比較） ＣＴＬＡ４に対するヒト化抗ＣＴＬＡ４（ｈＣＴＬＡ４−２６Ｂ）およびとマ
ウス抗ＣＴＬＡ４（ｍＣＴＬＡ４−２６Ｂ）の相対的親和性を、競合ＥＬＩＳＡ
を使用してアッセイした。プレートを、ヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇ（１０μｇ／ｍｌ
）で一晩コートし、翌日洗浄し、そしてＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）
で室温にて１５分間ブロックした。プレートを、１×ＰＢＳ／０．１％ Ｔｗｅ
ｅｎ ２０で３回、そして１ＸＰＢＳで３回洗浄した。
【０２５３】 別の混合プレートに、１５ｎｇ／ｍｌのビオチン化したヒト化ＣＴＬＡ４Ｉｇ
［ｈＩｇＧ１アイソタイプ］またはヒト化ＣＴＬＡ４Ｉｇ４［ｈＩｇＧ４アイソ
タイプ］を、調製した。１００μｌの抗体混合物を、ヒトＣＴＬＡ４コートＥＬ
ＩＳＡプレートに移し、そして室温で２時間揺動した。プレートを、上記のよう
に洗浄し、そしてＰＢＴ緩衝液（１×ＰＢＳ、１％ ＢＳＡ、０．１％ Ｔｗｅ
ｅｎ ２０）中の二次試薬（ストレプトアビジンペルオキシダーゼ結合体（１：
１０００希釈））を添加した。プレートを、室温で１時間振盪しながらインキュ
ベートした。プレートを、上記のように洗浄しそして室温で１０分間ＡＢＴＳ＋
Ｈ２０２（１００μｌ／ウェル）を用いて発色させ、そしてこの反応を、２％シ
ュウ酸（１００μｌ／ウェル）で停止した。
【０２５４】 図５に示されるように、抗ＣＴＬＡ４のヒト化バージョン（ＩｇＧ１、ＩｇＧ
４、およびＩｇＧ２ｍ３（２変異化３）アイソタイプ）は、ヒトＣＴＬＡ４Ｉｇ
への結合についてビオチン化マウスＣＴＬＡ４−２６Ｂと競合し得る。これらの
データは、ヒト化抗体の親和性が、マウス抗体の親和性と非常に類似（マウス抗
ＣＴＬＡ４抗体の少なくとも１０倍以内）することを示す。
【０２５５】 ＦＡＣＳ分析のために、ＦＩＴＣ標識化マウスＣＴＬＡ４−２６Ｂの飽和下濃
度を、ＣＴＬＡ４発現ＣＨＯ細胞を用いて測定した。１２５ｎｇのＦＩＴＣ標識
化マウス抗ＣＴＬＡ４を、ＣＴＬＡ４発現ＣＨＯ細胞を用いて、種々の濃度の非
標識競合体（マウス抗ＣＴＬＡ４およびヒト化抗ＣＴＬＡ４ＩｇＧ１アイソタイ
プ（ＩｇＧ１／κ）を含む）と合わせた。非標識化競合体の出発濃度は、２００
０ｎｇであり、そして１００ｎｇまで２倍ずつ段階希釈した。ＩｇＧ１アイソタ
イプのヒト化抗体２６は、マウス抗体の３倍以内の結合親和性を示した。
【０２５６】 マウス抗ＣＴＬＡ４抗体の親和性は、約Ｋｄ＝１．７×１０−９であると計算
された。これらのヒト化バージョンは、ＩｇＧ１アイソタイプについては約２×
１０−９、ＩｇＧ４アイソタイプについては１．１×１０−９、そしてＩｇＧ２
ｍ３アイソタイプについては約１．２×１０−９の親和性を有することが計算さ
れた。
【０２５７】 （実施例８：小分子または毒性部分に結合体化させた抗ＣＴＬＡ４抗体を使用
する活性化Ｔ細胞の排除） Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、空ベクター（Ａ）またはＣＴＬＡ４発現ベクター（
Ｂ）でトランスフェクトした。細胞を、ハイグロマイシン耐性について選択し、
そしてＣＴＬＡ４の発現を、ＦＡＣＳで確認した。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、ア
ミド結合または炭水化物ベースの結合を用いて小分子（カリケアミシン）に結合
体化させた種々の濃度の抗ＣＴＬＡ４抗体（番号２６または３３）と共にインキ
ュベートした。同じ小分子に結合体化させたコントロール抗体（ＭＰＨＡＮＴ）
もまた、使用した。細胞増殖を、培養の最後の１２時間にチミジンで標識するこ
とによって、４８時間の培養後に測定した。
【０２５８】 ＣＴＬＡ４を発現する細胞は、抗ＣＴＬＡ４−毒性部分結合体の存在下で、増
殖の減少を示した。カリケアミシンに結合化したコントロールＭＰＨＡＮＴ抗体
は、トランスフェクトしていないＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞およびトランスフェクト
したＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞のいずれの増殖に対しても効果を有さなかった。従っ
て、これらのデータは、活性化Ｔ細胞が、抗ＣＴＬＡ４特異的抗体を使用して標
的化され得ることを示す。
【０２５９】 （実施例９：ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体によるＣＴＬＡ４結合の阻止はＴ細胞応
答の増強を生じる） ｈＣＴＬＡ４（１０６細胞／ｍｌ）をトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ Ｔ
細胞を、漸増濃度の可溶性抗ＣＴＬＡ４抗体（５〜２０μｇ／ｍｌ）またはＩｇ
Ｇコントロール（２０μｇ／ｍｌ）の存在下または不存在下で、抗ｈＣＤ３＋Ｃ
Ｄ８６−Ｉｇでコートしたラテックスビーズで刺激した。上清を、７２時間で収
集し、ＩＬ−２の産生を、市販のｈＩＬ−２ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙ
ｓｔｅｍｓ，ＭＡ）を使用して測定した。
【０２６０】 可溶性ヒト化抗ＣＴＬＡ４−２６Ｂ（Ｈｕ−２６Ｂ）は、ＣＴＬＡ４の、その
天然リガンド（ＣＤ８６）との相互作用を抑制し、従って、ＩＬ−２産生により
評価されるように、Ｔ細胞応答を増強する。ＩＬ−２産生のレベルの増加は、Ｈ
ｕ−２６Ｂの存在下（コントロールＩｇと比較して）で得られた。Ｔ細胞応答を
機能的に増強するこのヒト化抗体の能力は、それが由来するマウス抗体（Ｍｕ−
２６Ｂ）の能力に匹敵する（図１１）。
【０２６１】 （等価物） 当業者は、慣用的に過ぎない実験を使用して、本明細書中に記載した特定の実
施形態に対する多くの等価物を認識するかまたは確認し得る。このような等価物
は、上記特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】 図１Ａ〜１Ｃは、各種抗体のＣＴＬＡ４への結合を示す。図１Ａは抗体２５、
２６、および２７について示す。
【図１Ｂ】 図１Ａ〜１Ｃは、各種抗体のＣＴＬＡ４への結合を示す。図１Ｂは抗体２９、
３３、および３４について示す。
【図１Ｃ】 図１Ａ〜１Ｃは、各種抗体のＣＴＬＡ４への結合を示す。図１Ｃは抗体３５、
３６、および３８について示す。
【図１Ｄ】 図１Ｄ〜１Ｆは、ＣＴＬＡ４がＣＤ８６に結合するのを阻止する各種抗体の能
力を示す。図１Ｄは抗体２５、２６、および２７について示す。
【図１Ｅ】 図１Ｄ〜１Ｆは、ＣＴＬＡ４がＣＤ８６に結合するのを阻止する各種抗体の能
力を示す。図１Ｅは抗体２９、３３、および３４について示す。抗体番号２９お
よび３３はＣＴＬＡ４のＣＤ８６への結合を阻止しない。
【図１Ｆ】 図１Ｄ〜１Ｆは、ＣＴＬＡ４がＣＤ８６に結合するのを阻止する各種抗体の能
力を示す。図１Ｆは抗体３５、３６、および３８について示す。
【図１Ｇ】 図１Ｇ〜１Ｉは、ＣＴＬＡ４がＣＤ８０に結合するのを阻止する各種抗体の能
力を示す。図１Ｇは抗体２５、２６、および２７について示す。
【図１Ｈ】 図１Ｇ〜１Ｉは、ＣＴＬＡ４がＣＤ８０に結合するのを阻止する各種抗体の能
力を示す。図１Ｈは抗体２９、３３、および３４について示す。抗体番号２９お
よび３３はＣＴＬＡ４のＣＤ８０への結合を阻止しない。
【図１Ｉ】 図１Ｇ〜１Ｉは、ＣＴＬＡ４がＣＤ８０に結合するのを阻止する各種抗体の能
力を示す。図１Ｉは抗体３５、３６、および３８について示す。
【図２Ａ】 図２は、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列に導入された各種変異が各種抗ＣＴＬ
Ａ４抗体のＣＴＬＡ４に対する結合能力に及ぼす効果を示す。抗体番号２５につ
いて図２Ａに示す。
【図２Ｂ】 図２は、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列に導入された各種変異が各種抗ＣＴＬ
Ａ４抗体のＣＴＬＡ４に対する結合能力に及ぼす効果を示す。抗体番号２６につ
いて図２Ｂに示す。
【図２Ｃ】 図２は、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列に導入された各種変異が各種抗ＣＴＬ
Ａ４抗体のＣＴＬＡ４に対する結合能力に及ぼす効果を示す。抗体番号２９につ
いて図２Ｃに示す。
【図３Ａ】 図３は、架橋型の抗ＣＴＬＡ４抗体がＴ細胞の増殖およびＩＬ−２産生に及ぼ
す効果を示す。一次Ｔ細胞の増殖を図３Ａに示す。Ｔ細胞は抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２
８によって刺激された。
【図３Ｂ】 図３は、架橋型の抗ＣＴＬＡ４抗体がＴ細胞の増殖およびＩＬ−２産生に及ぼ
す効果を示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞によるＩＬ−２産生を図３Ｂに示す。Ｔ細胞は
抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８によって刺激された。
【図４Ａ】 図４は、可溶型の抗ＣＴＬＡ４抗体がＴ細胞の増殖およびサイトカイン産生に
及ぼす効果を示す。抗体番号２６は、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において一次
Ｔ細胞の増殖を促進する（図４Ａ）。
【図４Ｂ】 図４は、可溶型の抗ＣＴＬＡ４抗体がＴ細胞の増殖およびサイトカイン産生に
及ぼす効果を示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞によるＩＬ−２産生に及ぼす各種抗ＣＴＬ
Ａ４抗体の効果を図４Ｂに示す。
【図５】 図５は、マウス型抗ＣＴＬＡ４抗体番号２６、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ４、
およびＩｇＧ２ｍ３ヒト化型抗体２６（ｈＣＴＬＡ４−２６Ｂ）がＣＴＬＡ４に
対し類似の親和性を持って結合することを示す。データはコールドＣＴＬＡ４−
２６Ｂ抗体に対するＥＬＩＳＡ競合アッセイによる。
【図６Ａ】 図６Ａ〜６Ｃは、ＦＩＴＣ標識したマウス抗ＣＴＬＡ４を使用するＦＡＣＳ競
合アッセイを示し、コールドマウス抗ＣＴＬＡ４またはヒト化抗ＣＴＬＡ４ Ｉ
ｇＧ１のいずれかの量を変えて行われている。
【図６Ｂ】 図６Ａ〜６Ｃは、ＦＩＴＣ標識したマウス抗ＣＴＬＡ４を使用するＦＡＣＳ競
合アッセイを示し、コールドマウス抗ＣＴＬＡ４またはヒト化抗ＣＴＬＡ４ Ｉ
ｇＧ１のいずれかの量を変えて行われている。
【図６Ｃ】 図６Ａ〜６Ｃは、ＦＩＴＣ標識したマウス抗ＣＴＬＡ４を使用するＦＡＣＳ競
合アッセイを示し、コールドマウス抗ＣＴＬＡ４またはヒト化抗ＣＴＬＡ４ Ｉ
ｇＧ１のいずれかの量を変えて行われている。
【図６Ｄ】 図６Ｄは、細胞株、一次Ａｂ、競合物を示す。
【図７Ａ】 図７Ａ〜７Ｅは、コールド競合物（マウス抗ＣＴＬＡ４、ヒト化抗ＣＴＬＡ４
ＩｇＧ１）のヒストグラムを示し、結合親和性を相対的に比較するために同一濃
度で整列してある。
【図７Ｂ】 図７Ａ〜７Ｅは、コールド競合物（マウス抗ＣＴＬＡ４、ヒト化抗ＣＴＬＡ４
ＩｇＧ１）のヒストグラムを示し、結合親和性を相対的に比較するために同一濃
度で整列してある。
【図７Ｃ】 図７Ａ〜７Ｅは、コールド競合物（マウス抗ＣＴＬＡ４、ヒト化抗ＣＴＬＡ４
ＩｇＧ１）のヒストグラムを示し、結合親和性を相対的に比較するために同一濃
度で整列してある。
【図７Ｄ】 図７Ａ〜７Ｅは、コールド競合物（マウス抗ＣＴＬＡ４、ヒト化抗ＣＴＬＡ４
ＩｇＧ１）のヒストグラムを示し、結合親和性を相対的に比較するために同一濃
度で整列してある。
【図７Ｅ】 図７Ａ〜７Ｅは、コールド競合物（マウス抗ＣＴＬＡ４、ヒト化抗ＣＴＬＡ４
ＩｇＧ１）のヒストグラムを示し、結合親和性を相対的に比較するために同一濃
度で整列してある。
【図８Ａ】 図８は、ＣＴＬＡ４を認識する毒性部分結合抗体がＣＴＬＡ４を有するＪｕｒ
ｋａｔ細胞の増殖を抑制する能力を示す（図８Ｂ）。これらの抗体はＣＴＬＡ４
陰性のＪｕｒｋａｔ細胞の増殖を阻害しない（図８Ａ）。
【図８Ｂ】 図８は、ＣＴＬＡ４を認識する毒性部分結合抗体がＣＴＬＡ４を有するＪｕｒ
ｋａｔ細胞の増殖を抑制する能力を示す（図８Ｂ）。これらの抗体はＣＴＬＡ４
陰性のＪｕｒｋａｔ細胞の増殖を阻害しない（図８Ａ）。
【図９】 図９は、ヒト化抗ＣＴＬＡ４の軽鎖のｃＤＮＡと推定アミノ酸配列を示す。ア
ミノ酸は一文字コードで示す。ＣＤＲには青の下線を付し、構造を完成するため
に保持されるマウス残基は下線付き一文字アミノ酸残基とし、二重下線付き一文
字アミノ酸残基は、既知のヒト可変配列の選択された組において該当位置に見出
されるコンセンサスなアミノ酸を表示する。
【図１０】 図１０は、ヒト化抗ＣＴＬＡ４の重鎖のｃＤＮＡおよび推定アミノ酸配列を示
す。アミノ酸は一文字コードで示す。ＣＤＲには青の下線を付し、構造を完成す
るために保持されるマウス残基は下線付き一文字アミノ酸残基とし、二重下線付
き一文字アミノ酸残基は、既知のヒト変異配列の選択された組において該当位置
に見出されるコンセンサスなアミノ酸を表示する。
【図１１】 図１１は、ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体（Ｈｕ−２６Ｂ）またはマウス抗ＣＴＬＡ
４抗体（Ｍｕ−２６Ｂ）の濃度増加がＴ細胞応答に及ぼす効果を示す。これはＪ
ｕｒｋａｔＣＴＬＡ４陽性細胞によるＩＬ−２産生によって測定した。
【手続補正書】
【提出日】平成１４年１０月３１日（２００２．１０．３１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図９】 図９は、ヒト化抗ＣＴＬＡ４の軽鎖のｃＤＮＡ（配列番号７）と推定アミノ酸
配列（配列番号８）を示す。アミノ酸は一文字コードで示す。ＣＤＲには青の下
線を付し、構造を完成するために保持されるマウス残基は下線付き一文字アミノ
酸残基とし、二重下線付き一文字アミノ酸残基は、既知のヒト可変配列の選択さ
れた組において該当位置に見出されるコンセンサスなアミノ酸を表示する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１０】 図１０は、ヒト化抗ＣＴＬＡ４の重鎖のｃＤＮＡ（配列番号９）および推定ア
ミノ酸配列（配列番号１０）を示す。アミノ酸は一文字コードで示す。ＣＤＲに
は青の下線を付し、構造を完成するために保持されるマウス残基は下線付き一文
字アミノ酸残基とし、二重下線付き一文字アミノ酸残基は、既知のヒト変異配列
の選択された組において該当位置に見出されるコンセンサスなアミノ酸を表示す
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｎ 15/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ウッド， クリーブ アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02114， ボストン， ホウソーン プレ イス ナンバー17アール ２ (72)発明者 ターナー， キャサリン アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01720， アクトン， ヘイゼルナット ストリート ４ (72)発明者 コリンズ， メアリー アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01760， ナティック， ラスバーン ロ ード 54 (72)発明者 グレイ， ギャリー エス． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02146， ブルックライン， ミルトン ロード 32 (72)発明者 モリス， ドナ アメリカ合衆国 ニューハンプシャー 03079， サレム、 タミー ストリート 13 (72)発明者 オハラ， デニス アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01867， リーディング， ジェレ ロー ド ８ (72)発明者 ヒントン， ポール アメリカ合衆国 カリフォルニア 94536， フレモント， ヘリテイジ テラス ナ ンバー247 3825 (72)発明者 ツルシタ， ナオヤ アメリカ合衆国 カリフォルニア 94306， パロ アルト， レッドウッド サーク ル 3719 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA44 GA03 HA15 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 4C076 AA95 CC03 CC07 EE59 4C085 AA13 AA14 BB11 GG01 GG02 GG08 4H045 AA11 BA50 CA40 DA76 DA83 EA22 EA50 FA72

Claims (23)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 抗体−毒性部分結合体であって、該結合体は、以下：活性化
    Ｔ細胞上のみに発現される分子を特異的に認識する抗体および毒性部分、を含む
    、結合体。
  2. 【請求項２】 前記抗体が、ＣＴＬＡ４と特異的に反応する、請求項１に記
    載の抗体−毒性部分結合体。
  3. 【請求項３】 前記抗体が、ヒトＣＴＬＡ４と特異的に反応する、請求項２
    に記載の抗体−毒性部分結合体。
  4. 【請求項４】 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２に記載の
    抗体−毒性部分結合体。
  5. 【請求項５】 前記抗体が、ＣＤ８０またはＣＤ８６へのＣＴＬＡ４の結合
    をブロックするＣＴＬＡ４分子の領域に結合する、請求項２に記載の抗体−毒性
    部分結合体。
  6. 【請求項６】 前記抗体が、共刺激分子へのＣＴＬＡ４の結合部位に空間的
    に近接したＣＴＬＡ４の領域に結合する、請求項２に記載の抗体−毒性部分結合
    体。
  7. 【請求項７】 配列番号２に示されるヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列におけ
    るアミノ酸８３の置換が、前記抗体の結合の改変を生じる、請求項２に記載の抗
    体−毒性部分結合体。
  8. 【請求項８】 前記毒性部分が炭水化物である、請求項２に記載の抗体−毒
    性部分結合体。
  9. 【請求項９】 前記炭水化物がカリケアミシンである、請求項８に記載の抗
    体−毒性部分結合体。
  10. 【請求項１０】 前記毒性部分が、天然に存在する細菌産物である、請求項
    ２に記載の抗体−毒性部分結合体。
  11. 【請求項１１】 前記毒性部分が、リシンＡ鎖およびサポニンからなる群か
    ら選択される、請求項１０に記載の抗体−毒性部分結合体。
  12. 【請求項１２】 前記抗体が、以下：ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドー
    マ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（
    ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登
    録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）
    、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブ
    リドーマ ）、およびＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）からなる群か
    ら選択されるハイブリドーマによって産生される、請求項２に記載の抗体−毒性
    部分結合体。
  13. 【請求項１３】 前記抗体がヒト化されている、請求項２に記載の抗体−毒
    性部分結合体。
  14. 【請求項１４】 ヒトＣＬＴＡ４と特異的に反応するヒト化抗体であって、
    ここで、該抗体は、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、ヒト化抗体。
  15. 【請求項１５】 ヒトＣＬＴＡ４と特異的に反応するヒト化抗体であって、
    ここで、該抗体は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む、ヒト化抗体、
  16. 【請求項１６】 免疫応答を調節する方法であって、該方法は、細胞を、請
    求項２に記載の抗体−毒性部分結合体と接触させる工程を包含する、方法。
  17. 【請求項１７】 前記抗体−毒性部分結合体が被験体に投与され、そして前
    記接触させる工程がインビボで行われる、請求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記被験体が、継続中の免疫応答の下方調節によって利益
    を得る障害または状態に罹患している、請求項１７に記載の方法であって、ここ
    で、該障害または状態が、以下：自己免疫障害、移植片に対する免疫応答、アレ
    ルギー応答、治療タンパク質に対する免疫応答からなる群から選択される、方法
    。
  19. 【請求項１９】 前記接触させる工程がインビトロで行われる、請求項１６
    に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 免疫応答を調節する方法であって、該方法は、細胞を、Ｃ
    ＴＬＡ４と特異的に反応する抗体と接触させる工程を包含し、ここで、該抗体は
    、以下：ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（
    ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登
    録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）
    、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブ
    リドーマ ）、ＡＴＣＣ登録番号＿＿（ハイブリドーマ ）、およびＡＴＣＣ登
    録番号＿＿（ハイブリドーマ ）からなる群から選択されるハイブリドーマによ
    って産生される、方法。
  21. 【請求項２１】 免疫応答を調節する方法であって、該方法は、細胞を、ヒ
    トＣＬＴＡ４と特異的に反応する抗体と接触させる工程を包含し、ここで、該抗
    体が、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、方法。
  22. 【請求項２２】 免疫応答を調節する方法であって、該方法は、細胞を、ヒ
    トＣＬＴＡ４と特異的に反応する抗体と接触させる工程を包含し、ここで、該抗
    体が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む、方法。
  23. 【請求項２３】 免疫応答を下方調節する方法であって、該方法は、細胞を
    、抗体−毒性部分結合体と接触させる工程を包含し、ここで、該抗体が、ＣＴＬ
    Ａ４を特異的に認識する、方法。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007537753A (ja) * 2004-05-17 2007-12-27 ボード・オブ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・イリノイ 抗原でパルスされた、二重特異性抗体（ＢｉＡｂ）でコーティングされた樹状細胞の使用
JP2009532030A (ja) * 2006-03-30 2009-09-10 ユニバーシティー オブ カリフォルニア 抗ｃｔｌａ−４抗体の限局性分泌のための方法および組成物
JP2014512809A (ja) * 2011-03-09 2014-05-29 アンチトープ・リミテッド ヒト化抗ｃｔｌａ４抗体
JP2019532619A (ja) * 2016-08-02 2019-11-14 アデュロ・バイオテック・ホールディングス・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップＡｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ， Ｅｕｒｏｐｅ Ｂ．Ｖ． ヒトｃｔｌａ−４に対する抗体
JP2020513819A (ja) * 2017-03-15 2020-05-21 スージョウ ギャラクシー バイオファーマ カンパニー リミテッド Ｃｔｌａ４抗体、医薬組成物およびその使用

Families Citing this family (240)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6887471B1 (en) 1991-06-27 2005-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Method to inhibit T cell interactions with soluble B7
US7605238B2 (en) * 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
US7094874B2 (en) 2000-05-26 2006-08-22 Bristol-Myers Squibb Co. Soluble CTLA4 mutant molecules
US20040022787A1 (en) 2000-07-03 2004-02-05 Robert Cohen Methods for treating an autoimmune disease using a soluble CTLA4 molecule and a DMARD or NSAID
SI1935427T1 (en) 2000-07-03 2018-05-31 Bristol-Myers Squibb Company USE OF HEATED CTLA4 MUTANT MOLECULES
US20020108132A1 (en) * 2001-02-02 2002-08-08 Avigenics Inc. Production of a monoclonal antibody by a transgenic chicken
PT1397153E (pt) 2001-05-23 2008-06-12 Bristol Myers Squibb Co Métodos para proteger um transplante alogénico de ilhéus utilizando moléculas mutantes de ctla4 solúveis
US6578724B1 (en) * 2001-12-29 2003-06-17 United States Can Company Connector for use in packaging aerosol containers
AU2003234736B2 (en) 2002-04-12 2008-09-25 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Methods of treatment using CTLA-4 antibodies
WO2004003544A1 (en) * 2002-06-26 2004-01-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the diagnosis and treatment of demyelinating inflammatory disorders
US20060159687A1 (en) * 2003-03-03 2006-07-20 Buckley J T Modified aerolysin and methods of use for treating lung cancer
US7465446B2 (en) * 2003-05-30 2008-12-16 Medarex, Inc. Surrogate therapeutic endpoint for anti-CTLA4-based immunotherapy of disease
AR046833A1 (es) * 2003-11-10 2005-12-28 Schering Corp Anticuerpos anti-interleuquina-10
CA2547034C (en) * 2003-11-28 2014-02-18 National Research Council Of Canada Anticarcinoma antibodies and uses thereof
NZ563193A (en) 2005-05-09 2010-05-28 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
NZ568016A (en) 2005-12-07 2011-12-22 Medarex Inc CTLA-4 antibody dosage escalation regimens
JP2011509299A (ja) 2008-01-08 2011-03-24 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 増殖性疾患治療のための、抗ｃｔｌａ−４抗体とチューブリン調節剤との組み合わせ
AU2009223161B2 (en) 2008-03-14 2014-10-30 Allergan, Inc. Immuno-based botulinum toxin serotype A activity assays
US20090311187A1 (en) * 2008-05-29 2009-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods for predicting patient response to modulation of the Co-stimulatory pathway
WO2010014784A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-ctla4 antibody with diverse therapeutic regimens for the synergistic treatment of proliferative diseases
EP3502256A3 (en) 2008-09-26 2019-09-25 Tocagen Inc. Recombinant vectors
WO2010042433A1 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Bristol-Myers Squibb Company Combination of cd137 antibody and ctla-4 antibody for the treatment of proliferative diseases
MX2011004748A (es) * 2008-11-20 2011-05-25 Genentech Inc Formulaciones de proteina terapeutica.
DK3281953T3 (da) 2009-03-13 2020-01-20 Allergan Inc Immun-baserede omdirigerede endopeptidase-aktivitetsassays
DK2769737T3 (en) 2009-07-20 2017-07-24 Bristol Myers Squibb Co COMBINATION OF ANTI-CTLA4 ANTIBODY WITH ETOPOSIDE FOR SYNERGISTIC TREATMENT OF PROLIFERATIVE DISEASES
WO2011036467A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Russell David Keenan Products useful in the treatment of haemophilia
CN106432474A (zh) 2010-03-12 2017-02-22 艾伯维生物医疗股份有限公司 Ctla4蛋白和其用途
WO2011119773A1 (en) 2010-03-23 2011-09-29 Roeth Jeremiah F Vectors conditionally expressing therapeutic proteins, host cells comprising the vectors, and uses thereof
WO2011146382A1 (en) 2010-05-17 2011-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Improved immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof
EP2643694B1 (en) 2010-11-24 2018-01-03 Litron Laboratories Ltd. Rapid in vivo gene mutation assay based on the pig-a gene
EP2655409A4 (en) 2010-12-22 2015-07-01 Univ Leland Stanford Junior SUPERAGONISTS AND ANTAGONISTS OF INTERLEUKIN-2
EP2663579B1 (en) 2011-01-14 2017-04-26 The Regents of the University of California Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same
JP6240063B2 (ja) 2011-04-28 2017-11-29 ザ ブロード インスティテュート， インコーポレイテッド ヒストンデアセチラーゼ阻害剤
WO2013138702A2 (en) 2012-03-15 2013-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods for predicting gastrointestinal immune-related adverse events (gi-irae) in patients treated with modulation of the co-stimulatory pathway
WO2013142796A2 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treatments using ctla4 antibodies
WO2013169971A1 (en) 2012-05-10 2013-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Anti-tumor antibodies as predictive or prognostic biomarkers of efficacy and survival in ipilimumab-treated patients
SG11201407190TA (en) 2012-05-15 2014-12-30 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
US9790184B2 (en) 2012-07-27 2017-10-17 The Broad Institute, Inc. Inhibitors of histone deacetylase
US10034939B2 (en) 2012-10-26 2018-07-31 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
CA2925421C (en) 2013-09-24 2023-08-29 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
BR112016010224A2 (pt) 2013-11-05 2018-05-02 Cognate Bioservices, Inc. combinações de inibidores do ponto de verificação e produtos terapêuticos para tratar o câncer.
US20160264670A1 (en) 2013-11-06 2016-09-15 Bristol-Myers Squibb Company Immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof
CN105980405A (zh) 2013-12-08 2016-09-28 派特塞尔有限公司 Hiv抗原和抗体及其组合物、方法和用途
US20170088626A1 (en) 2014-03-05 2017-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and another anti-cancer agent
EP3134102B1 (en) 2014-04-24 2019-07-03 The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
KR20230144099A (ko) 2014-05-15 2023-10-13 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체 및 또 다른 항암제의 조합물을 사용한 폐암의 치료
SG11201609721WA (en) 2014-05-28 2016-12-29 Agenus Inc Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
CN105296433B (zh) 2014-08-01 2018-02-09 中山康方生物医药有限公司 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途
DK3180018T3 (da) 2014-08-12 2019-10-28 Massachusetts Inst Technology Synergistisk tumorbehandling med IL-2 og integrinbindende Fc-fusionsprotein
US20170224777A1 (en) 2014-08-12 2017-08-10 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
CN115040532A (zh) 2014-10-10 2022-09-13 伊黛拉制药有限公司 使用tlr9激动剂与检查点抑制剂对癌症的治疗
JP2017537927A (ja) 2014-12-04 2017-12-21 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ がん（骨髄腫）を処置するための抗ｃｓ１および抗ｐｄ１抗体の併用
CN108271359B (zh) * 2015-02-13 2021-11-09 索伦托药业有限公司 结合ctla4的抗体治疗剂
WO2016146143A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Amal Therapeutics Sa Cell penetrating peptides and complexes comprising the same
EP3273974A4 (en) 2015-03-26 2018-11-07 Women and Infants Hospital of Rhode Island Inc. Therapy for malignant disease
US11215616B2 (en) 2015-04-10 2022-01-04 National Institutes Of Health (Nih), (Dhhs), U.S. Government Methods of determining patient populations amenable to immunomodulatory treatment of cancer
AU2016249395B2 (en) 2015-04-17 2022-04-07 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-PD-1 antibody and another antibody
JP2018514550A (ja) 2015-04-28 2018-06-07 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体および抗ｃｔｌａ−４抗体を使用するｐｄ−ｌ１陰性黒色腫の処置
US20160362489A1 (en) 2015-04-28 2016-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of PD-L1-Positive Melanoma Using an Anti-PD-1 Antibody
EP3297672B1 (en) 2015-05-21 2021-09-01 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific binding proteins and methods of use
AU2016267059B2 (en) 2015-05-22 2020-08-13 Translational Drug Development Llc Benzamide and active compound compositions and methods of use
US20180155429A1 (en) 2015-05-28 2018-06-07 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of pd-l1 positive lung cancer using an anti-pd-1 antibody
US11078278B2 (en) 2015-05-29 2021-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
MA53355A (fr) 2015-05-29 2022-03-16 Agenus Inc Anticorps anti-ctla-4 et leurs procédés d'utilisation
PT3313528T (pt) 2015-06-29 2021-09-16 Bristol Myers Squibb Co Regimes de dosagem imunoterapêuticos compreendendo pomalidomida e um anticorpo anti-cs1 para tratamento do cancro
EP3858859A1 (en) 2015-07-14 2021-08-04 Bristol-Myers Squibb Company Method of treating cancer using immune checkpoint inhibitor; antibody that binds to programmed death-1 receptor (pd-1) or programmed death ligand 1 (pd-l1)
CN108136025B (zh) 2015-07-16 2022-09-06 比奥克斯塞尔医疗股份有限公司 一种使用免疫调节治疗癌症的新颖方法
KR20180063881A (ko) 2015-07-16 2018-06-12 바이오카인 테라퓨틱스 리미티드 암 치료용 조성물 및 방법
EP3328896A4 (en) 2015-07-31 2019-08-07 University of Florida Research Foundation, Inc. HEMATOPOIETIC STEM CELLS IN COMBINATORY THERAPY WITH IMMUNCHECKPOINT INHIBITORS AGAINST CANCER
EP3331917A1 (en) 2015-08-04 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination treatments and uses and methods thereof
US20180230431A1 (en) 2015-08-07 2018-08-16 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination Therapy
JP7525980B2 (ja) * 2015-08-28 2024-07-31 アレクトル エルエルシー 抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体及びその使用方法
CN114605548A (zh) 2015-09-01 2022-06-10 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
TWI795347B (zh) 2015-11-18 2023-03-11 美商必治妥施貴寶公司 使用抗ｐｄ-１抗體與抗ｃｔｌａ-４抗體之組合以治療肺癌
IL299072A (en) 2015-12-02 2023-02-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies and methods for using them
KR102424513B1 (ko) 2015-12-14 2022-07-25 마크로제닉스, 인크. Pd-1 및 ctla-4과의 면역반응성을 가진 이중특이적 분자, 및 이것의 사용 방법
US20190241658A1 (en) 2016-01-10 2019-08-08 Modernatx, Inc. Therapeutic mRNAs encoding anti CTLA-4 antibodies
WO2017160599A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of cd300b antagonists to treat sepsis and septic shock
EP3429693B1 (en) 2016-03-15 2023-08-23 Mersana Therapeutics, Inc. Napi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof
AU2017234192B2 (en) 2016-03-16 2024-04-04 Amal Therapeutics Sa Combination of an immune checkpoint modulator and a complex comprising a cell penetrating peptide, a cargo and a TLR peptide agonist for use in medicine
WO2017165742A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating gastrointestinal immune-related adverse events in anti-ctla4 anti-pd-1 combination treatments
US11760803B2 (en) 2016-03-24 2023-09-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods of treating gastrointestinal immune-related adverse events in immune oncology treatments
WO2017176925A1 (en) 2016-04-05 2017-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Cytokine profiling analysis for predicting prognosis of a patient in need of an anti-cancer treatment
US20190298824A1 (en) 2016-05-04 2019-10-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Serv Albumin-binding immunomodulatory compositions and methods of use thereof
JP2019519516A (ja) 2016-05-18 2019-07-11 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド がんの治療のためのｍＲＮＡ併用療法
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
ES2912131T3 (es) 2016-05-20 2022-05-24 Biohaven Therapeutics Ltd Uso de agentes moduladores del glutamato con inmunoterapias para tratar el cáncer
WO2017205875A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Dnatrix, Inc. Adenovirus and immunomodulator combination therapy
CN109641044A (zh) 2016-05-30 2019-04-16 吉奥瓦科斯公司 用于产生对乙型肝炎病毒的免疫应答的组合物和方法
WO2017210453A1 (en) 2016-06-02 2017-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Pd-1 blockade with nivolumab in refractory hodgkin's lymphoma
KR102515509B1 (ko) 2016-06-03 2023-03-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 결장직장암을 갖는 환자의 치료에서의 항-pd-1 항체의 용도
WO2017210631A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Anti-pd-1 antibody for use in a method of treatment of recurrent small cell lung cancer
EP3471753A1 (en) 2016-06-20 2019-04-24 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
KR20190035714A (ko) 2016-06-30 2019-04-03 온코루스, 인크. 치료 폴리펩티드의 위형된 종양용해성 바이러스 전달
US20190233534A1 (en) 2016-07-14 2019-08-01 Fred Hutchinson Cancer Research Center Multiple bi-specific binding domain constructs with different epitope binding to treat cancer
US11649289B2 (en) 2016-08-04 2023-05-16 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-ICOS and anti-PD-1 antibody combination therapy
WO2018035710A1 (en) 2016-08-23 2018-03-01 Akeso Biopharma, Inc. Anti-ctla4 antibodies
KR20230131498A (ko) 2016-09-21 2023-09-13 아말 테라퓨틱스 에스에이 암 치료를 위한, 세포 투과 펩타이드, 멀티 에피토프 및 tlr 펩타이드 작용제를 포함하는 융합체
WO2018069927A1 (en) 2016-10-10 2018-04-19 The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. Non-cytotoxic modified cells and use thereof
AU2017343621B2 (en) 2016-10-11 2021-12-02 Agenus Inc. Anti-LAG-3 antibodies and methods of use thereof
EP3532504A1 (en) 2016-10-28 2019-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
EP3544601B1 (en) 2016-11-23 2024-03-20 Translational Drug Development, LLC A composition comprising a benzamide and a tnfrsf agonist binding to 4-1bb or gitr, and the use thereof in the treatment of cancer.
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
BR112019010878A2 (pt) 2016-11-29 2019-10-01 Lindhofer Horst combinação de anticorpos multifuncionais de redirecionamento de células t com moduladores de ponto de verificação imunológico e usos dos mesmos
AU2017369994A1 (en) 2016-12-01 2019-06-13 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination therapy
KR20190090822A (ko) 2016-12-01 2019-08-02 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 조합 요법
PT3551660T (pt) 2016-12-07 2023-11-30 Ludwig Inst For Cancer Res Ltd Anticorpos anti-ctla-4 e métodos de uso dos mesmos
AU2017371498B2 (en) 2016-12-09 2020-10-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for sequencing T cell receptors and uses thereof
US20200095301A1 (en) 2016-12-14 2020-03-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Il-13 superkine: immune cell targeting constructs and methods of use thereof
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
EP3568150A4 (en) 2017-01-10 2020-12-02 Xcella Biosciences, Inc. POLYTHERAPY FOR TUMOR TREATMENT WITH INTEGRIN-BOUND FC FUSION PROTEIN AND IMMUNE MODULATOR
WO2018160538A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
IL269026B1 (en) 2017-03-31 2024-08-01 Bristol Myers Squibb Co Anti-PD-1 antibodies for the treatment of tumors in patients with a high tumor mutational burden (TMB)
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
KR20190137911A (ko) 2017-04-21 2019-12-11 신라젠(주) 항암 백시니아 바이러스와 관문 저해제 병용 요법
CA3063359A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
CA3060989A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
EP3634584B1 (en) 2017-06-09 2024-09-18 Providence Health & Services - Oregon Tumor-infiltrating t-cells for use in the treatment of cancer
CA3067909A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Medicenna Therapeutics Inc. Uses and methods for il-2 superagonists, agonists, and fusions thereof
JP2020536051A (ja) 2017-09-20 2020-12-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 腫瘍が高いパッセンジャー遺伝子変異量を担持する患者の免疫療法剤
JP7066837B2 (ja) 2017-10-13 2022-05-13 ハープーン セラピューティクス，インク． Ｂ細胞成熟抗原結合タンパク質
WO2019075468A1 (en) 2017-10-15 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company TUMOR TREATMENT METHODS
WO2019104289A1 (en) 2017-11-27 2019-05-31 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
KR102476887B1 (ko) * 2017-12-20 2022-12-13 하버 바이오메드 (상하이) 컴퍼니 리미티드 Ctla-4에 결합하는 항체 및 이의 용도
TW201929908A (zh) 2017-12-21 2019-08-01 美商梅爾莎納醫療公司 吡咯并苯并二氮呯抗體共軛物
WO2019133847A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Oncorus, Inc. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
US20210177781A9 (en) 2018-01-12 2021-06-17 KDAc Therapeutics, Inc. Combination of a selective histone deacetylase 3 (hdac3) inhibitor and an immunotherapy agent for the treatment of cancer
KR20200109339A (ko) 2018-01-16 2020-09-22 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tim3에 대한 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법
CA3093742A1 (en) 2018-03-12 2019-09-19 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Use of caloric restriction mimetics for potentiating chemo-immunotherapy for the treatment of cancers
TW202003565A (zh) 2018-03-23 2020-01-16 美商必治妥美雅史谷比公司 抗mica及/或micb抗體及其用途
KR20200139724A (ko) 2018-03-30 2020-12-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
TW202017569A (zh) 2018-05-31 2020-05-16 美商佩樂敦治療公司 用於抑制cd73之組合物及方法
GB201809050D0 (en) 2018-06-01 2018-07-18 E Therapeutics Plc Modulators of tryptophan catabolism
AU2019285344A1 (en) 2018-06-15 2020-12-10 Mina Therapeutics Limited Combination therapies comprising C/EBP alpha saRNA
AU2019287765A1 (en) 2018-06-15 2021-01-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors
WO2020014583A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Bristol-Myers Squibb Company Ox-40 agonist, pd-1 pathway inhibitor and ctla-4 inhibitor combination for use in a mehtod of treating a cancer or a solid tumor
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES
WO2020048942A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for enhancing cytotoxic t lymphocyte-dependent immune responses
WO2020058372A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy
WO2020069028A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
CN112771071A (zh) 2018-09-28 2021-05-07 麻省理工学院 胶原蛋白定位的免疫调节分子及其方法
US20220040183A1 (en) 2018-10-01 2022-02-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of inhibitors of stress granule formation for targeting the regulation of immune responses
WO2020086724A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
EP3873534A1 (en) 2018-10-29 2021-09-08 Mersana Therapeutics, Inc. Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
US20220008515A1 (en) 2018-11-16 2022-01-13 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and an immune checkpoint inhibitor
WO2020102501A1 (en) 2018-11-16 2020-05-22 Bristol-Myers Squibb Company Anti-nkg2a antibodies and uses thereof
ES2971964T3 (es) 2018-11-28 2024-06-10 Inst Nat Sante Rech Med Métodos y kit para someter a ensayo el potencial lítico de células efectoras inmunitarias
WO2020115262A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of cd26 and cd39 as new phenotypic markers for assessing maturation of foxp3+ t cells and uses thereof for diagnostic purposes
MA54448A (fr) 2018-12-11 2021-10-20 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Dérivés naphthyridine et quinoléine en tant qu'inhibiteurs de alk5
WO2020127059A1 (en) 2018-12-17 2020-06-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of sulconazole as a furin inhibitor
SG11202107606VA (en) 2019-01-15 2021-08-30 Inst Nat Sante Rech Med Mutated interleukin-34 (il-34) polypeptides and uses thereof in therapy
US11235032B2 (en) 2019-01-23 2022-02-01 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
WO2020169472A2 (en) 2019-02-18 2020-08-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of inducing phenotypic changes in macrophages
KR20210146349A (ko) 2019-03-28 2021-12-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
EP3946625A1 (en) 2019-03-28 2022-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP2022527972A (ja) 2019-04-02 2022-06-07 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 前悪性病変を有する患者において癌を予測及び予防する方法
WO2020208060A1 (en) 2019-04-09 2020-10-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of sk2 inhibitors in combination with immune checkpoint blockade therapy for the treatment of cancer
US20220220480A1 (en) 2019-04-17 2022-07-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treatment of nlrp3 inflammasome mediated il-1beta dependent disorders
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
WO2020236253A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Massachusetts Institute Of Technology Boronic ester prodrugs and uses thereof
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
WO2020243570A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
WO2020243563A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
WO2020252264A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 AskGene Pharma, Inc. Novel il-15 prodrugs and methods of use thereof
JP2022538974A (ja) 2019-06-26 2022-09-07 マサチューセッツ インスチテュート オブ テクノロジー 免疫調節融合タンパク質－金属水酸化物錯体およびその方法
MX2021015433A (es) 2019-07-02 2022-06-08 Hutchinson Fred Cancer Res Vectores ad35 recombinantes y mejoras de la terapia génica relacionadas.
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
GB201912107D0 (en) 2019-08-22 2019-10-09 Amazentis Sa Combination
WO2021055994A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
EP3800201A1 (en) 2019-10-01 2021-04-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd28h stimulation enhances nk cell killing activities
EP4037710A1 (en) 2019-10-04 2022-08-10 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
US11459389B2 (en) 2019-10-24 2022-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Monoclonal antibodies that bind human CD161
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
AU2020380384A1 (en) 2019-11-08 2022-05-26 Bristol-Myers Squibb Company LAG-3 antagonist therapy for melanoma
CN114728941A (zh) 2019-11-22 2022-07-08 施万生物制药研发Ip有限责任公司 作为alk5抑制剂的经取代的1,5-萘啶或喹啉
JP2023509359A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法
WO2021127554A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 Bristol-Myers Squibb Company Combinations of dgk inhibitors and checkpoint antagonists
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
EP4126824A1 (en) 2020-03-31 2023-02-08 Theravance Biopharma R&D IP, LLC Substituted pyrimidines and methods of use
US20230149560A1 (en) 2020-04-20 2023-05-18 Massachusetts Institute Of Technology Lipid compositions for delivery of sting agonist compounds and uses thereof
CA3175499A1 (en) 2020-04-21 2021-10-28 University Of Rochester Inhibitors of human epididymus protein 4
CA3176356A1 (en) 2020-04-22 2021-10-28 Anne BROOKS Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy
WO2021245071A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Mv Biotherapeutics Sa Combination of an atp-hydrolyzing enzyme and an immune checkpoint modulator and uses thereof
US20210387983A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Crystalline alk5 inhibitors and uses thereof
EP4172323A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer
WO2022003156A1 (en) 2020-07-02 2022-01-06 Oncurious Nv Ccr8 non-blocking binders
CA3184940A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Jennifer Donglan WU Mic antibodies and binding agents and methods of using the same
MX2023000197A (es) 2020-07-07 2023-02-22 BioNTech SE Arn terapeutico para el cancer positivo para vph.
US20230295146A1 (en) 2020-07-24 2023-09-21 The University Of Rochester Inhibitors of interleukin-1 receptor-associated kinases 1 and 4
AU2021331476A1 (en) 2020-08-28 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
JP2023538955A (ja) 2020-08-31 2023-09-12 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 細胞局在シグネチャーおよび免疫療法
MX2023004493A (es) 2020-10-23 2023-05-10 Bristol Myers Squibb Co Terapia de agonista del gen-3 de activacion del linfocito (lag-3) para cancer de pulmon.
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
WO2022130206A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Pfizer Inc. TGFβr1 INHIBITOR COMBINATION THERAPIES
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022136647A1 (en) 2020-12-24 2022-06-30 Oncurious Nv Human ccr8 binders
CA3206124A1 (en) 2020-12-24 2022-06-30 Vib Vzw Non-blocking human ccr8 binders
WO2022136650A1 (en) 2020-12-24 2022-06-30 Oncurious Nv Murine cross-reactive human ccr8 binders
WO2022146948A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
WO2022146947A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2022159575A1 (en) 2021-01-20 2022-07-28 Bioentre Llc Ctla4-binding proteins and methods of treating cancer
US11993657B2 (en) 2021-03-16 2024-05-28 Jn Biosciences Llc Bifunctional molecules for treatment of immune disorders
KR20230165276A (ko) 2021-03-31 2023-12-05 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 타노트랜스미션 폴리펩티드 및 암의 치료에서의 이의 용도
WO2022212876A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
TW202304524A (zh) 2021-04-10 2023-02-01 美商普方生物製藥美國公司 Folr1結合劑、其結合物及使用方法
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
WO2022229644A1 (en) 2021-04-28 2022-11-03 Mina Therapeutics Limited Combination therapies comprising c/ebp alpha sarna
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
CA3218590A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 Providence Health & Services - Oregon Cxcr5, pd-1, and icos expressing tumor reactive cd4 t cells and their use
AU2022303363A1 (en) 2021-06-29 2024-01-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
WO2023280790A1 (en) 2021-07-05 2023-01-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Gene signatures for predicting survival time in patients suffering from renal cell carcinoma
KR20240046323A (ko) 2021-07-13 2024-04-08 비온테크 에스이 암에 대한 병용 요법에 있어서 cd40 및 cd137에 대한 다중특이 결합제
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
CA3234821A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Suman Kumar VODNALA Methods for culturing immune cells
MX2024005053A (es) 2021-10-29 2024-05-10 Bristol Myers Squibb Co Terapia con antagonista del gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) para cancer hematologico.
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023130081A1 (en) 2021-12-30 2023-07-06 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and vegf antagonist
MX2024008831A (es) 2022-01-26 2024-07-25 Bristol Myers Squibb Company Terapia combinada para carcinoma hepatocelular.
WO2023161453A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Amazentis Sa Uses of urolithins
AU2023226078A1 (en) 2022-02-25 2024-08-22 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma.
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2023240287A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Bioentre Llc Combinations of ctla4 binding proteins and methods of treating cancer
WO2024040175A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Pulmatrix Operating Company, Inc. Methods for treating cancer using inhaled angiogenesis inhibitor
WO2024052356A1 (en) 2022-09-06 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitors of the ceramide metabolic pathway for overcoming immunotherapy resistance in cancer
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer
WO2024088424A1 (zh) * 2022-10-28 2024-05-02 嘉和生物药业有限公司 新型抗ctla4抗体
WO2024102722A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Neoimmunetech, Inc. Methods of treating a tumor with an unmethylated mgmt promoter
WO2024112571A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
WO2024126457A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors
WO2024137776A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for lung cancer
US20240269251A1 (en) 2023-01-09 2024-08-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5821332A (en) * 1993-11-03 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4
US5773001A (en) * 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
JP2001523958A (ja) * 1997-03-21 2001-11-27 ブライハム アンド ウィミンズ ホスピタル，インコーポレイテッド 免疫療法のｃｔｌａ−４結合ペプチド
WO1998056417A1 (en) 1997-06-11 1998-12-17 The United States Of America, Represented By The Secretary Of The U.S. Department Of The Navy Composition and method to prevent graft rejection and other counter-adaptive t lymphocyte mediated immune responses
US5994511A (en) * 1997-07-02 1999-11-30 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides
EE05627B1 (et) * 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
EP3214175A1 (en) * 1999-08-24 2017-09-06 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human ctla-4 antibodies and their uses
US7605238B2 (en) * 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007537753A (ja) * 2004-05-17 2007-12-27 ボード・オブ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・イリノイ 抗原でパルスされた、二重特異性抗体（ＢｉＡｂ）でコーティングされた樹状細胞の使用
JP2009532030A (ja) * 2006-03-30 2009-09-10 ユニバーシティー オブ カリフォルニア 抗ｃｔｌａ−４抗体の限局性分泌のための方法および組成物
JP2016147898A (ja) * 2006-03-30 2016-08-18 ユニバーシティー オブ カリフォルニア 抗ｃｔｌａ−４抗体の限局性分泌のための方法および組成物
JP2014512809A (ja) * 2011-03-09 2014-05-29 アンチトープ・リミテッド ヒト化抗ｃｔｌａ４抗体
US9714290B2 (en) 2011-03-09 2017-07-25 Antitope Limited Humanised anti CTLA-4 antibodies
JP2019532619A (ja) * 2016-08-02 2019-11-14 アデュロ・バイオテック・ホールディングス・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップＡｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ， Ｅｕｒｏｐｅ Ｂ．Ｖ． ヒトｃｔｌａ−４に対する抗体
JP2022008982A (ja) * 2016-08-02 2022-01-14 アデュロ・バイオテック・ホールディングス・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップ ヒトｃｔｌａ－４に対する抗体
JP7214623B2 (ja) 2016-08-02 2023-01-30 サイロパ・ベスローテン・フエンノートシャップ ヒトｃｔｌａ－４に対する抗体
JP7440473B2 (ja) 2016-08-02 2024-02-28 サイロパ・ベスローテン・フエンノートシャップ ヒトｃｔｌａ－４に対する抗体
JP2020513819A (ja) * 2017-03-15 2020-05-21 スージョウ ギャラクシー バイオファーマ カンパニー リミテッド Ｃｔｌａ４抗体、医薬組成物およびその使用

Also Published As

Publication number Publication date
US7034121B2 (en) 2006-04-25
US20060165706A1 (en) 2006-07-27
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