JP2023514152A

JP2023514152A - Ｉｌ－１０およびその使用

Info

Publication number: JP2023514152A
Application number: JP2022547973A
Authority: JP
Inventors: コーカー，ショデインデ; エフグラツィアーノ，ロバート; グルラジャン，ムラリ; ブイカトリンスキー，カンスタンツィン; ケイロイ，ジェイムズ; イーモーリン，ポール; エイポワソン，ブライアン; エムスパイレス，バネッサ; ヤン，ヅェン
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2020-02-06
Filing date: 2021-02-05
Publication date: 2023-04-05
Also published as: WO2021158938A1; KR20220139915A; US20230087600A1; EP4100426A1; CN115362167A

Abstract

本発明は、ＩＬ－１０ポリペプチドおよび第２のポリペプチド、例えば、Ｆｃポリペプチドを含む融合タンパク質を提供する。本発明のある面は、ＩＬ－１０融合タンパク質を投与することを含む、対象を処置する方法に関する。特定の面において、対象は、癌に罹患している。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年２月６日に出願された米国仮特許出願第６２／９７０，９５７号の３５Ｕ.Ｓ.Ｃ. セクション１１９（ｅ）に基づく利益を主張し、その開示内容を引用により本明細書中に包含させる。

配列表
“20210205_SECL_13311WOPCT_ST25.txt”と称される配列表は、その全体が引用により本明細書に包含され、これは配列番号１から配列番号４５を含み、それらは本明細書に記載の核酸配列および／またはアミノ酸配列を含む。配列表は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩテキスト形式で提出されているため、紙媒体およびコンピュータ可読形式の両方を構成している。配列表は、２０２１年２月３日に作成され、サイズは約１０４ＫＢである。

発明の背景
ＩＬ－１０は、Ｍθ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞およびＴ細胞（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびＴｒｅｇ）によって産生される多面的な免疫調節サイトカインである。ＩＬ－１０は、ＩＬ－１０受容体α（ＩＬ－１０Ｒα）と非共有結合のホモダイマーとして高親和性で結合し、ＩＬ－１０受容体β（ＩＬ－１０Ｒβ）の動員を導く。受容体との結合は、ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ１のリン酸化を含む、複雑なシグナル伝達カスケードを活性化する。この経路を介したシグナル伝達は、受容体が発現している様々な免疫細胞サブセットに対して、抗炎症作用および炎症促進作用の両方をもたらし得る。炎症促進作用には、プライミングされたＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の増殖、活性化および細胞溶解能の増強が含まれる。一方、抗炎症作用としては、骨髄系サイトカイン産生の抑制およびプライミング能力の向上が挙げられる。ＩＬ－１０分子による処置は、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の増殖および活性化を誘導し、固形腫瘍におけるＩＦＮγ依存性腫瘍殺傷機序を駆動し、ＩＯ剤または標準治療との併用で有益である可能性を有し得る（Autio，et al.， Current Oncology Reports， 2019；2 1：19）。

その二重免疫調節の役割にもかかわらず、ＩＬ－１０は抗腫瘍剤として同定されている。ＩＬ－１０ノックアウトマウスにおける初期の研究は、結腸腺癌の発生に対する系統依存的な有病率（Berg et al., J Clin Invest, 1996; 98:1010-1020）、ならびにＴ細胞が減少したＤＭＢＡ誘導皮膚腫瘍の発生率の増加（Mumm, et al, Cancer cell, 2011; 20:781-796）を明らかにした。同様に、ＩＬ－１０受容体の変異によるＩＬ－１０シグナル伝達の欠損を有するヒトは、細胞溶解性Ｔ細胞の浸潤頻度がはるかに低いリンパ腫を発症する（Neven et al., Blood, 2013; 122:3713-3722）。遺伝子的証拠にとどまらず、組換えＩＬ－１０またはペグ化ＩＬ－１０の治療的投与も、いくつかのマウスモデルにおいて抗腫瘍活性を示し、その有効性は、ＣＤ８＋Ｔ細胞および腫瘍ＭＨＣクラスＩ抗原のＩＦＮγ依存性上方制御を必要とすることが示された（Mumm, et al, Cancer cell, 2011; 20:781-796）。しかしながら、マウスでもヒトでも、サイトカインの半減期が短いため、治療効果を得るためには、多くの場合、毎日繰り返し投与する必要がある。現在臨床治験中のペグ化ヒトＩＬ－１０（ＰＥＧＩＬ－１０）は、いくつかの腫瘍適応症にわたって望ましい臨床シグナルを示しているが、それでも活性に必要な薬物動態（ＰＫ）プロファイルを維持するために毎日の反復投与を必要とする（Naing, et al., Cancer Cell, 2018; 34:775-791）。さらに、貧血および血小板減少症などの血液学的毒性は、毎日の反復投与で臨床的に観察されている（Autio, et al., Current Oncology Reports, 2019; 2 1:19; Naing, et al., Journal of Clinical Oncology, 2016; 34, 3562-3569; Sosman, et al, British Journal of Haematology, 2000; 111(1), 104-111）。したがって、より少ない投与頻度のレジメンで効力を発揮するヒトＩＬ－１０アゴニストが必要とされている。このようなより低頻度の投与は、毎日の注射の必要性をなくすだけでなく、投与間の血液学的毒性からの回復を容易にする。

発明の概要
本発明のある面は、（i）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ポリペプチド；および、（ii）第２のポリペプチドを含む、ＩＬ－１０融合タンパク質に関し、ここでＩＬ－１０融合タンパク質はＩＬ－１０活性を含む。ある面において、第２のポリペプチドは、アルブミンポリペプチドを含む。ある面において、第２のポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

本発明のある面は、（i）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ポリペプチド；および、（ii）Ｆｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む、ＩＬ－１０融合タンパク質に関し、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質が約１週間に１回以下で投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、対象に対して約２週間に１回以下で投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０融合タンパク質が約４週間に１回以下で対象に投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することができる。

ある面において、第２のポリペプチドは、ＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端に融合されている。ある面において、第２のポリペプチドは、ＩＬ－１０ポリペプチドのＣ末端に融合されている。

ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、リンカーによって第２のポリペプチドに融合されている。ある面において、リンカーは、少なくとも約４個のアミノ酸、少なくとも約５個のアミノ酸、少なくとも約６個のアミノ酸、少なくとも約７個のアミノ酸、少なくとも約８個のアミノ酸、少なくとも約９個のアミノ酸、少なくとも約１０個のアミノ酸、少なくとも約１１個のアミノ酸、少なくとも約１２個のアミノ酸、少なくとも約１３個のアミノ酸、少なくとも約１４個のアミノ酸、少なくとも約１５個のアミノ酸、少なくとも約１６個のアミノ酸、少なくとも約１７個のアミノ酸、少なくとも約１８個のアミノ酸、少なくとも約１９個のアミノ酸、少なくとも約２０個のアミノ酸、または少なくとも約２１個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約１５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約２０個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約２１個のアミノ酸を含む。

ある面において、リンカーはグリシンおよびセリンを含む。ある面において、リンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号３９）モチーフまたはＧＧＧＳ（配列番号３８）モチーフを含む。ある面において、リンカーは、配列番号３８－４５から選択されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、３個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１個の置換、挿入または欠失を有する配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、３個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１個の置換、挿入または欠失を有する配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含むＩＬ－１０二量体を含み、ここで第１のポリペプチドは本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質を含み、第２のポリペプチドは第２のＦｃポリペプチドを含む。ある面において、第２のポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドに融合された第２のＩＬ－１０ポリペプチドを含む。

ある面において、ＩＬ－１０二量体はホモ二量体である。ある面において、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、第１のポリペプチドは配列番号１４－３６から選択されるアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは配列番号１４－３６から選択されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、ＩＬ－１０二量体はヘテロ二量体である。

ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは共有結合によって連結されている。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドはジスルフィド結合によって連結されている。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、ペプチド結合によって連結されている。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、ペプチドリンカーによって連結されている。ある面において、ペプチドリンカーは開裂可能なリンカーである。

本発明のある面は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドセットに関する。

本発明のある面は、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドセットを含むベクターまたはベクターセットに関する。ある面において、ベクターはウイルスベクターである。

本発明のある面は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、または本明細書に記載のベクターもしくはベクターセットを含む宿主細胞に関する。ある面において、宿主細胞は哺乳動物細胞である。ある面において、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、マウス骨髄腫細胞（ＮＳ０およびＳｐ２／０）、サル腎臓（ＣＯＳ）細胞、ＶＥＲＯ細胞、線維肉腫ＨＴ－１０８０細胞、およびＨｅＬａ細胞から選択される。

本発明のある面は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、または本明細書に記載のベクターもしくはベクターセット、および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。

本発明のある面は、それを必要とする対象における癌を処置する方法に関し、該方法は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、本明細書に記載のベクターもしくはベクターセット、または本明細書に記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む。

本発明のある面は、それを必要とする対象において癌細胞を致死させる方法に関し、該方法は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、本明細書に記載のベクターもしくはベクターセット、または本明細書に記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む。

本発明のある面は、それを必要とする対象において癌を処置する方法に関し、該方法は、該対象に有効量のＩＬ－１０融合タンパク質を少なくとも約７日の投与間隔で投与することを含み、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質はＩＬ－１０ポリペプチドおよびアルブミンポリペプチドまたはＦｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む、方法に関する。

本発明のある面は、それを必要とする対象において癌細胞を致死させる方法に関し、該方法は、該対象に有効量のＩＬ－１０融合タンパク質を少なくとも約７日の投与間隔で投与することを含み、ここでＩＬ－１０融合タンパク質はＩＬ－１０ポリペプチドおよびアルブミンポリペプチドまたはＦｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む、方法に関する。

ある面において、第２のポリペプチドは、アルブミンポリペプチドである。ある面において、第２のポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドである。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、リンカーをさらに含む。ある面において、リンカーは本明細書に記載のリンカーを含む。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２４日間、または少なくとも約２８日間の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、２週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、３週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、４週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約７日から少なくとも約２８日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１４日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２１日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２８日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約１週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約３週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約４週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約６週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２ヶ月に１回投与される。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、単回用量として投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質の有効量は、本質的に単回用量からなるか、または単回用量からなる。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質は少なくとも約２週間の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、２週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約３週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約４週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、５週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約６週間に１回投与される。

ある面において、癌は腫瘍を含む。ある面において、癌は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸癌、腎癌、明細胞癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、前立腺癌、ホルモン抵抗性前立腺腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、膠芽腫（多形膠芽腫）、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞癌（肝細胞癌種、ＨＣＣ）、乳癌、大腸癌、頭頸部癌（または癌腫）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、黒色腫、転移性悪性黒色腫、皮膚または眼内悪性黒色腫、中皮腫、骨の腫瘍、皮膚癌、子宮癌、肛門部癌、精巣癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、副甲状腺癌、副腎腺癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、ＣＮＳ原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、アスベストによるものを含む環境誘発癌、ウイルス関連癌またはウイルス起源癌、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）関連または起源腫瘍、およびこれらの癌の組合せからなる群より選択される。

ある面において、癌は、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤色白血病、巨核球性白血病、分離顆粒球性肉腫、クロロマ、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性胸水リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系造血性腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）、ワルデンストーム・マクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（低悪性骨髄腫）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫；および、これらの癌の何れかの組合せから選択される。

ある面において、癌は、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、胃癌、ＨＣＣ、頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）および該癌の何れかの組合せから選択される。ある面において、癌は、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、胃癌、ＳＣＣＨＮおよび該癌の何れかの組合せから選択される。ある面において、癌は、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、結腸癌、ＳＣＬＣ、中皮腫、肝細胞癌腫、前立腺癌、多発性骨髄腫およびこれらの癌の組合せから選択される。

ある面において、本方法は、対象に第２の抗癌療法剤（second anticancer therapy）を投与することをさらに含む。ある面において、第２抗癌療法は、免疫療法、化学療法、放射線療法、外科手術、自然免疫細胞を活性化する薬剤、ＮＫおよび／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を増強する薬剤、Ｔｒｅｇ（Ｔ制御細胞）、ＴＡＭ（腫瘍関連マクロファージ）、ＣＡＦ（癌関連線維芽細胞）、またはＭＤＳＣ（骨髄由来抑制細胞）、およびこれらの何れかの組合せからなる群より選択される療法を含む。ある面において、第２の抗癌療法は、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＣＤ９６、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ヘルペスウイルス侵入介在物質（ＨＶＥＭ）、プログラムされた細胞死１（ＰＤ－１）、プログラムされた細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＴＬＡ－４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制剤（ＶＩＳＴＡ）、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、ＢＣＭＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＣＲ８およびこれらの何れかの組合せから選択されるタンパク質と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、ＰＤ－１と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（“抗ＰＤ－１抗体”）を含む。ある面において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブまたはペムブロリズマブを含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（“抗ＰＤ－Ｌ１抗体”）を含む。ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよびアベルマブから選択される。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、ＣＴＬＡ－４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（“抗ＣＴＬＡ－４抗体”）を含む。ある面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、トレメリムマブまたはイピリムマブを含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、ＣＴＬＡ－４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばトレメリムマブまたはイピリムマブ、およびＰＤ－１と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばニボルマブまたはペムブロリズマブを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ＣＴＬＡ－４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばトレメリムマブまたはイピリムマブ、およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント、例えばアテゾリズマブ、デュルバルマブまたはアベルマブを含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、プロテアソーム阻害剤、ＩＭｉＤ、Ｂｅｔ阻害剤、ＩＤＯアンタゴニスト、白金ベースの化学療法剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＮＬＲＰ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、およびこれらの何れかの組合せから選択される化学療法剤を含む。

ある面において、第２の療法剤は、ドキソルビシン (アドリアマイシン(登録商標))、シスプラチン、カルボプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル（リューケラン(登録商標)）、シクロホスファミド（CYTOXAN(登録商標)；NEOSAR(登録商標)）、レナリドマイド（REVLIMID(登録商標)）、ボルテゾミブ（ベルケイド(登録商標))、デキサメサゾン、ミトキサントロン、エトポシド、シタラビン、ベンダムスチン（TREANDA(登録商標)）、リツキシマブ（リツキサン(登録商標)）、イホスファミド、フォリニック酸（ロイコボリン）、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、オキサリプラチン（エロキサチン）、ＦＯＬＦＯＸ、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン（ONCOVIN(登録商標)）、フルダラビン（FLUDARA(登録商標)）、サリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ(登録商標)）、アレムツズマブ（CAMPATH(登録商標)、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、エベロリムス（AFINITOR(登録商標)、ZORTRESS(登録商標)）、およびカルフィルゾミブ（KYPROLISTM）から選択される薬剤を含む。

ある面において、第２の抗癌療法は、ペグ化ＩＬ－２、ＩＬ－１８およびＩＬ－１５などを含む薬剤から選択されるＮＫおよび／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を増強する薬剤を含む。

ある面において、第２の抗癌療法は、ＣＤ１９－標的ＣＡＲ－ＴなどのＣＡＲ－Ｔ療法を含む。

ある面において、第２の抗癌療法は、二重特異性抗体療法、例えばＣＤ３標的生物特異性抗体、例えば抗ＣＤ３／ＣＤ２０生物特異性抗体、抗ＣＤ３／ＢＣＭＡ生物特異性抗体を含む。

ある面において、第２の抗癌療法は、抗血管新生療法（例えば、ベバクジマブ、ソラフィニブなど）、または放射線などの標準療法を含む。

本発明の特定の面は、ＩＬ－１０融合タンパク質を調製する方法に関し、該方法は、本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセットまたは本明細書に記載のベクターもしくはベクターセットを適切な条件下で宿主細胞において発現させることを含む。ある面において、本方法は、ＩＬ－１０融合タンパク質を集めることをさらに含む。

図１Ａ－１Ｂは、配列番号１４を含むＦｃ－ＩＬ－１０のアミノ酸配列（１Ａ）および野生型ヒトＩＬ－１０とヒトＩｇＧ１．３ｆＦｃドメインのｃ末端の９０ｋＤａＦｃ融合体である、Ｆｃ－ＩＬ－１０（１Ｂ）のモデル図を示す。図２Ａ－２Ｂは、Ｆｃ－ＩＬ－１０、組換えＩＬ－１０またはＰＥＧ－ＩＬ－１０で７２時間処理した予活性化ヒト初代ＣＤ８＋Ｔ細胞によって、ＩＬ２と共に（図２Ｂ）、またはＩＬ２なしで（図２Ａ）分泌されたＩＦＮγ（ｐｇ／ｍＬ）レベルを示す。ＩＦＮγ（ｐｇ／ｍＬ）はＡｌｐｈａＬＩＳＡにより上清から測定した。図２Ｃ－２Ｄは、１０ｎＭの組換えヒトＩＬ－１０またはＦｃ－ＩＬ－１０で前処理した初代ヒトＮＫ細胞によって介在される、細胞溶解の割合によって測定される細胞傷害性を示す。Ｋ５６２標的細胞は、２０：１（図２Ｃ）または５：１（図２Ｄ）のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で添加された。データは、１回の実験につき２－３名のドナーを用いた２回の実験を代表する。図３Ａ－３Ｆは、マウス（図３Ａ－３Ｃ）およびヒト（図３Ｄ－３Ｆ）ＣＲＣ腫瘍組織片におけるＦｃ－ＩＬ－１０によるグランザイムＢ（図３Ｃおよび３Ｆ）およびＩＦＮγ（図３Ｂおよび３Ｅ）遺伝子発現の誘導を示す図である。小さな塊に切り刻んだマウスＭＣ３８またはヒトＣＲＣ腫瘍を、０．１ｎＭ（ｍ）Ｆｃ－ＩＬ－１０を添加したまたは添加しないＩＬ－２を含む培地中で７２時間培養し、次いで転写分析した。ＣＤ８α（図３Ａおよび３Ｄ）、ＩＦＮγ（図３Ｂおよび３Ｅ）およびグランザイムＢ（図３Ｃおよび３Ｆ）についての代表的な転写物を、対照に対する変化倍数としてプロットする。各エラーバーは、処理毎に８ウェルから集められたサンプルの４回の複製測定のＳＥＭを表す。図４Ａ－４Ｆは、ＭＣ３８腫瘍モデルにおける単回投与、漸増試験でのｍＦｃ－ｍＩＬ－１０の単剤療法効果を示す。１Ｅ６ＭＣ３８腫瘍細胞を、Ｃ５７ＢＬ６雌マウスに０日目に皮下移植した。腫瘍を測定し、腫瘍体積１００ｍｍ^３で処置のためのグループに無作為化した。ｍＦｃ－ｍＩＬ－１０を７日目に１０－０．１ｍｇ／ｋｇの範囲で単回漸増腹腔内投与（ＴＶ＝１００ｍｍ^３）した。腫瘍体積を測定し、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数を追跡した。ＭＯＰＣ－２１はアイソタイプ対照として用いた。“１／１０ＴＦ”は、合計１０匹のマウスのうち１匹が無腫瘍であったことを意味する。図５Ａ－５Ｋは、ＭＣ３８腫瘍モデルにおける単回投与、漸増試験でのｍＦｃ－ｍＩＬ－１０またはＰＥＧ－ｍＩＬ－１０の単剤療法効果を示す。ＭＣ－３８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌ雌マウスは、０．１－１０ｍｇ／ｋｇｍＦｃ－ＩＬ－１０、または同等のＩＬ－１０モル濃度の１０ｋＤＰＥＧ－ｍＩＬ１０、またはアイソタイプ対照抗ＤＴｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａをそれぞれ６日目に単回ＩＰ投与された。腫瘍体積を測定し、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数を追跡した。図６Ａ－６Ｂは、Ｋｉ６７およびグランザイムＢの陽性パーセントとしてフローサイトメトリーにより測定した、ＭＣ３８腫瘍における投与後５日目の腫瘍ＣＤ８＋Ｔ細胞（図６Ａ）およびＮＫ細胞（図６Ｂ）の増殖および活性化を示す。エラーバーは各群の標準偏差を表す。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、各群１０匹のマウス。図７Ａ－７Ｅは、ＣＴ２６腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－１と組み合わせた単回投与ｍＦｃ－ｍＩＬ－１０の効果を示す。ＣＴ２６腫瘍細胞を、ＢＡＬＢ／ｃ雌マウスに０日目に皮下移植した。抗ＰＤ－１を、７日目から開始し、１０ｍｇ／ｋｇで４日毎に３回（Ｑ４Ｄｘ３）腹腔内投与し、ｍＦＣ－ｍＩＬ－１０を、７日目に１－０．１ｍｇ／ｋｇの範囲で単回漸減投与した。腫瘍を測定し、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数を追跡した。図７Ｆは、ＣＴ２６腫瘍担持マウス（各投与群につき、ｎ＝４－６匹のマウス）において観察されたｍＦｃ－ｍＩＬ－１０の薬物濃度－時間プロファイルを示す。薬物レベル（平均薬物濃度＋ＳＤ）は、全ての群において、投与後１４日目に定量下限（ＬＬＯＱ）未満であった。図７Ｇ－７Ｉは、ｍＦｃ－ｍＩＬ－１０および抗ＰＤ－１の組合せの投与後７日目（図７Ｇ）、１４日目（図７Ｈ）および２１日目（図７Ｉ）の処置マウスのＣＴ２６腫瘍における腫瘍特異的ＡＨ１テトラマー陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。エラーバーは、各群の標準偏差を表す。７日目は３つの実験の代表であり、１４日目は２つの実験の代表であり、２１日目は１つの実験である。＊ｐ＜０．０５。図８Ａ－８Ｈは、ＣＴ２６腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－１と組み合わせた、ｍＦｃ－ＩＬ－１０の単回低用量、ＰＥＧ－ｍＩＬ－１０の単回高用量（３．０ｍｇ／ｋｇ）またはＰＥＧ－ｍＩＬ－１０の２５日用量（０．２ｍｇ／ｋｇまたは１．０ｍｇ／ｋｇ５ｋＤ）の効果を示す。１Ｅ６ＣＴ２６腫瘍細胞をＢＡＬＢ／ｃ雌マウスに０日目に皮下（ＳＣ）移植した。抗ＰＤ－１を７日目から４日毎に１０ｍｇ／ｋｇで３回（Ｑ４Ｄｘ３）腹腔内投与した。ｍＦＣ－ｍＩＬ－１０を抗ＰＤ－１と組み合わせて７日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇで単回腹腔内投与した。抗ＰＤ－１と組み合わせた５ｋＤａＰＥＧｍＩＬ－１０を、７日目から２５日間毎日、０．２ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇＩＰで投与するか、または７日目に３ｍｇ／ｋｇＩＰの単回用量として投与した。図９Ａは、ＣＴ２６腫瘍を有するマウスへの０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇ単回用量でのＩＰ投与後のｍＦｃ－ｍＩＬ－１０の薬剤濃度－時間プロファイル適合曲線を示す。図９Ｂは、０．２ｍｇ／ｋｇで２５日間毎日ＳＣ投与した、または３ｍｇ／ｋｇで単回ＳＣ投与した、ペグ化ｍＩＬ－１０の薬物濃度－時間プロファイル適合曲線を示す。記号は観察されたデータ点を表し、線はモデル適合された結果を表す。図１０Ａは、生存割合を示し、図１０Ｂ－１０Ｅは、アゾキシメタン（ＡＯＭ）／デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発大腸炎および大腸腫瘍を有するマウスにおける体重減少のパーセントを示す。マウスを、アイソタイプ対照（抗ＤＴｍＩｇＧ１＋抗ＤＴｍＩｇＧ２ａ）（図１０Ａおよび１０Ｂ）、抗ＣＴＬＡ４（図１０Ａおよび１０Ｄ）、ｍＦｃ－ＩＬ－１０（図１０Ａおよび１０Ｃ）、または抗ＣＴＬＡ４およびｍＦｃ－ＩＬ－１０の組合せ（図１０Ａおよび１０Ｅ）で処置した。ベースラインに対する重量損失パーセントを、大腸炎重症度の代替指標として用いた。図１１Ａ－１１Ｃは、それぞれ、アイソタイプ対照（ｎ＝８）およびｍＦｃ－ＩＬ－１０（ｎ＝９）で処置したマウスにおける腫瘍分析を示す。図１１Ａにおいて、ドットは個々の病変サイズを表し；図１１Ｂにおいて、各ドットは個々の動物における病変数を表し；図１１Ｃにおいて、各ドットは個々の動物における全ての腫瘍の累積サイズを表す。＊＊ｐ値＜０．０５である。

本発明の詳細な説明
本発明のある面は、（i）ＩＬ－１０ポリペプチドおよびＦｃポリペプチドを含むＩＬ－１０融合タンパク質に関し、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質はＩＬ－１０活性を含む。本発明の他の面は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質を投与することを含む、それを必要とする対象における疾患または病状、例えば、癌を処置する方法に関する。

Ｉ．用語の説明
本発明をより容易に理解できるようにするため、特定の用語を最初に定義する。本明細書で用いる以下の用語の各々は、本明細書中に明示的に異なる定義がされる場合を除き、以下に記載の意味を有するものとする。さらなる定義は、本明細書を通じて定められる。

本明細書において、ある面が用語“～を含む”を用いて説明されるとき、用語“～からなる”および／または“～から本質的になる”を用いて説明される他の類似の面も提供されることが理解される。

異なる定義がされない限り、本明細書で用いる全ての技術用語および科学用語は、本発明が関連する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; および、the Oxford Dictionary of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、当業者に対し、本明細書で用いる多くの用語の一般辞書を提供する。

単位、接頭辞および記号は、国際単位系（Systeme International de Unites）で受け入れられている形式で示される。数値範囲は、その範囲を定義する数値を包含する。特記しない限り、ヌクレオチド配列は５’から３’の方向で左から右へ記載する。アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向で左から右に記載されている。本明細書で提供される見出しは、本明細書全体を参照することによって有することができる本発明の様々な面の定義ではない。したがって、直後に定義される用語は、本明細書全体を参照することによって、より完全に定義される。

“投与する”とは、当業者に知られている様々な方法および送達システムのいずれかを用いて、治療剤を含む組成物を対象に物理的に導入することを意味する。本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質およびＩＬ－１０二量体の投与経路の例には、例えば注射または点滴による、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄または他の非経腸投与経路が含まれる。本明細書で用いる用語“非経腸投与”は、経腸投与および局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、静脈内、髄液内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、経皮、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および点滴、ならびにインビボ電気穿孔が含まれるが、これらに限定されない。他の非経腸経路としては、経口、局所、上皮または粘膜の投与経路、例えば、経鼻、膣、直腸、舌下または局所への投与が挙げられる。投与はまた、例えば、１回、複数回および／または１回以上の延長期間にわたって実施することもできる。

“抗体”（Ａｂ）としては、抗原に特異的に結合する糖タンパク質免疫グロブリンであって、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含むもの、またはその抗原結合部分が挙げられるが、これに限定されない。重鎖および軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合ドメインが含まれる。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または要素への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。

免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含むがこれらに限定されない、一般に知られているアイソタイプの何れかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスも当業者にはよく知られており、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が含まれるが、これらに限定されない。“アイソタイプ”とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を意味する。用語“抗体”とは、例示として、天然抗体および非天然抗体の両方；モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体；キメラ抗体およびヒト化抗体；ヒトまたは非ヒト抗体；完全合成抗体；ならびに、一本鎖抗体を含む。非ヒト抗体は、ヒトにおける免疫原性を低下させるために、組換え法によりヒト化することができる。明示的に記載されていない場合、および本明細書中に異なる記載がされない限り、用語“抗体”はまた、上記の免疫グロブリンの何れかの抗原結合フラグメントまたは抗原結合部分を含み、一価および二価のフラグメントまたは部分、および一本鎖抗体を含む。

用語“Ｆｃ”、“Ｆｃポリペプチド”、“Ｆｃドメイン”または“Ｆｃ領域”は、抗体のFcドメイン、またはその断片を意味する。Ｆｃは、天然（native）Ｆｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む天然Ｆｃ領域、または少なくとも１つのアミノ酸によって天然Ｆｃ領域と異なるアミノ酸配列を含む変異Ｆｃ領域であってもよい。免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメント、または領域のアミノ酸番号付けになされた言及はすべて、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる、Kabat et al, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda; MDに基づく。Ｆｃは、免疫グロブリンのヒンジ領域を有するかまたは有しない免疫グロブリンのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み得る。例示的なＦｃ変異体は、ＷＯ２００４／１０１７４０およびＷＯ２００６／０７４１９９に提供されており、引用によりその全体が本明細書に包含される。

“融合”または“キメラ”タンパク質は、天然では結合していない第２のアミノ酸配列に結合した第１のアミノ酸配列を含む。通常別個のタンパク質に存在するアミノ酸配列は、融合ポリペプチドにおいて一体とすることができ、または通常同じタンパク質に存在するアミノ酸配列は、融合ポリペプチドにおいて新しい配置にすることができ、例えばＩＬ－１０ポリペプチドおよびＦｃポリペプチドの融合が挙げられる。融合タンパク質は、例えば、化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされているポリヌクレオチドを作製し、翻訳することによって作製される。融合タンパク質は、ペプチド、ポリペプチド、またはペプチド結合、共有結合、非ペプチド結合、または非共有結合によって第１のアミノ酸配列に連結された第２のアミノ酸配列を含み得る。

本明細書で用いる用語“連結した（linked）”および“融合した（fused）”とは、互換的に、それぞれ第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に共有結合的または非共有結合的に結合した第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に直接結合または並列させることができ、あるいは介在配列が第１の配列を第２の配列に共有結合させることができる。用語“連結”は、Ｃ末端またはＮ末端で第１のアミノ酸配列が第２のアミノ酸配列に融合することのみならず、第１のアミノ酸配列（または第２のアミノ酸配列）全体が第２のアミノ酸配列（または第１のアミノ酸配列、それぞれ）中の何れか２つのアミノ酸に挿入されることも含む。一態様では、第１のアミノ酸配列は、ペプチド結合またはリンカーによって第２のアミノ酸配列に連結される。第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーによって第２のヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、ペプチドまたはポリペプチド（ポリペプチド鎖の場合）またはヌクレオチドまたはヌクレオチド鎖（ヌクレオチド鎖の場合）または何れかの化学部分（ポリペプチドおよびポリヌクレオチド鎖の両方の場合）であり得る。用語“連結”はまた、ハイフン（－）によって示される。

本明細書で用いる用語“結合する（associated with）”は、第１のアミノ酸鎖および第２のアミノ酸鎖間に形成される共有結合または非共有結合を意味する。一態様では、用語“結合する”は、共有結合、非ペプチド結合または非共有結合を意味する。この結合は、コロン、すなわち、（：）によって示すことができる。別の態様では、ペプチド結合を除く共有結合を意味する。例えば、アミノ酸システインは、第２のシステイン残基上のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成することができるチオール基を含む。ほとんどの天然ＩｇＧ分子において、ＣＨ１領域およびＣＬ領域はジスルフィド結合によって結合し、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムを用いて２３９および２４２に対応する位置（位置２２６または２２９、ＥＵ番号付けシステム）において２つのジスルフィド結合によって結合している。

本明細書で用いる“投与間隔”とは、投与間の時間間隔を意味する。投与間隔は、例えば、１日、２日、３日、７日（１週間）、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間などであってよい。

“対象”とは、何れかのヒトまたは非ヒト動物を含む。用語“非ヒト動物”とは、非ヒト霊長動物、羊、犬などの脊椎動物、およびマウス、ラット、モルモットなどの齧歯動物を含むが、これらに限定されない。好ましい面において、対象はヒトである。用語“対象”および“患者”は、本明細書中、互換的に用いられる。

また、本発明には、ポリペプチドのフラグメントまたは変異体、およびそれらの何れかの組合せが含まれる。本発明の方法で用いられるポリペプチドに言及するときの用語“フラグメント”または“変異体”は、対照ポリペプチドの特性の少なくとも一部を保持する何れかのポリペプチドを含む。ポリペプチドのフラグメントには、本明細書中の何れかに記載される特異的抗体フラグメントに加えて、タンパク質分解フラグメント、ならびに欠失フラグメントが含まれるが、天然全長ポリペプチド（または成熟ポリペプチド）は含まれない。本明細書に記載の方法で用いられるポリペプチド結合ドメインまたは結合分子の変異体には、上記のようなフラグメント、ならびにアミノ酸置換、欠失または挿入によりアミノ酸配列が変更されたポリペプチドが含まれる。変異体は、天然のものであっても、非天然のものであってもよい。非天然変異体は、当技術分野で知られている突然変異誘発技術を用いて製造することができる。変異体ポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸置換、欠失または付加を含み得る。

“保存的アミノ酸置換”は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、ポリペプチド中のアミノ酸が同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸で置換されるとき、その置換は保存的であると考えられる。

２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の“配列同一性パーセント”という用語は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入しなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮した、比較ウィンドウにわたって配列が共有する同一のマッチした位置の数を意味する。一致した位置とは、標的配列および対照配列の両方で同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が提示されている何れかの位置を意味する。標的配列に存在するギャップは、ヌクレオチドまたはアミノ酸ではないのでカウントされない。同様に、対照配列に存在するギャップは、対照配列からのヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸がカウントされるため、計数されない。

配列同一性の割合(パーセント)は、同一のアミノ酸残基または核酸塩基が両配列に出現する位置の数を決定し、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を比較ウィンドウ、標的配列または対照配列における位置の総数で割り、その結果を１００倍して配列同一性の割合を得ることにより算出される。配列の比較および２つの配列間の配列同一性パーセントの決定は、オンライン使用およびダウンロードの両方のために容易に入手可能なソフトウェアを用いて達成することができる。適切なソフトウェアプログラムは、様々な供給源から入手可能であり、タンパク質およびヌクレオチド配列の両方のアラインメントのために入手可能である。配列同一性パーセントを決定するための１つの適切なプログラムは、米国政府の国立生物工学情報センターのＢＬＡＳＴウェブサイト（blast.ncbi.nlm.nih.gov）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴスイートの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを用いて２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列の比較に用いられ、一方、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列の比較に用いられる。他の適当なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのEMBOSSスイートの一部であり、また欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）www.ebi.ac.uk/Tools/psa から入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、ＷａｔｅｒまたはＭａｔｃｈｅｒなどである。

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド対照配列とアラインする単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ独自の配列同一性パーセントを有し得る。配列同一性パーセントの値は、最も近い１０分の１の位置に四捨五入されることを特記する。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３および８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８および８０．１９は、８０．２に繰り上げられる。また、長さの値は常に整数になることも特記される。

当業者は、配列同一性パーセントの計算のための配列アライメントの生成が、一次配列データによって排他的に作成される二次配列－配列比較に限定されないことを理解し得る。配列アライメントは、多重配列アライメントから導出することができる。多重配列アライメントを生成するための１つの好適なプログラムは、www.clustal.org から入手可能なClustalW2である。もう一つの適切なプログラムはMUSCLEで、www.drive5.com/muscle/ から入手可能である。ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、代替的に、例えば、ＥＢＩから入手可能である。

また、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、突然変異の位置）または系統発生データのような異種源からのデータと統合することによって配列アラインメントを生成できることが理解され得る。異種データを統合して多重配列アライメントを生成する適切なプログラムは、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅであり、www.tcoffee.org、代替的に、例えばＥＢＩから入手可能である。また、配列同一性パーセントを計算するために用いられる最終アライメントは、自動でまたは手動でキュレーションされてもよいことが理解され得る。

ポリヌクレオチド変異体は、コード領域、非コード領域またはその両方における改変を含み得る。一態様において、ポリヌクレオチド変異体は、サイレント置換、付加または欠失を生じるが、コードされたポリペプチドの特性または活性を変化させない改変を含む。別の態様において、ヌクレオチド変異体は、遺伝暗号の縮退に起因するサイレント置換によって生成される。他の態様において、５－１０個、１－５個または１－２個のアミノ酸が何れかの組合せで置換、欠失または付加されている変異体が挙げられる。ポリヌクレオチド変異体は、様々な理由、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化するため（ヒトｍＲＮＡ中のコドンを、例えば、大腸菌のような細菌宿主のものに変えることにより）、製造され得る。

タンパク質エンジニアリングおよび組換えＤＮＡ技術の既知の方法を用いて、ポリペプチドの特性を改善または改変するために変異体を生成することができる。例えば、生物学的機能の実質的な損失なしに、分泌タンパク質のＮ末端またはＣ末端から１以上のアミノ酸を欠失させることができる。Ron et al., J. Biol. Chem. 268: 2984-2988 (1993)およびDobeli et al., J. Biotechnology 7:199-216 (1988)、いずれも引用によりその全体が本明細書に包含される。さらに、十分な証拠は、変異体がしばしば天然タンパク質と類似の生物学的活性を保持することを証明している。例えば、Gayleおよび共同研究者（J. Biol. Chem 268:22105-22111 (1993)、引用によりその内容全体を本明細書中に包含させる）は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの広範囲の変異分析を行い、“分子の大部分は、（結合または生物活性）いずれに対してもほとんど影響なく変更できる”ことを見い出した（要旨参照)。

上記のように、ポリペプチド変異体には、例えば、修飾されたポリペプチドが含まれる。修飾としては、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、リン酸イノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合性架橋形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化（myristoylation）、酸化、ペグ化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノ化、硫酸化、アルギニル化などのタンパク質への転移ＲＮＡ介在アミノ酸付加、およびユビキチン化などが挙げられる。

用語“免疫療法”は、免疫応答を誘導、増強、抑制またはその他の方法で変更することを含む方法によって、疾患に罹患した、または疾患の再発のリスクがある対象の処置を意味する。対象の“処置”または“治療”とは、疾患に関連する症状、合併症もしくは状態、または生化学的徴候の発症（onset）、進行、発展（development）、重症度もしくは再発を反転、緩和、改善、抑制、遅延または予防する目的で、対象に行われる何れかの種類の介入またはプロセス、あるいは対象に有効薬剤を投与することを意味する。

本明細書中で言及する用語“体重に基づく用量”とは、患者に投与される用量が、患者の体重に基づいて計算されることを意味する。本発明の方法および投与量に関する用語“一定用量”の使用は、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）に関係なく患者に投与される投与量を意味する。したがって、一定用量は、ｍｇ／ｋｇ用量として提供されるのではなく、薬剤の絶対量として提供される。本発明の方法に関する用語“固定用量”の使用は、単一の組成物中の２以上の異なる薬剤、例えば、Ｆｃ－ＩＬ－１０および第２の治療剤（例えば、抗体）が、組成物中に特定の（固定）比率で互いに存在することを意味する。ある面において、固定用量は、薬剤の重量（例えば、ｍｇ）に基づく。特定の面において、固定用量は、薬剤の濃度（例えば、ｍｇ／ｍｌ）に基づく。ある面において、比率は、少なくとも約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１５、約１：２０、約１：３０、約１：４０、約１：５０、約１：６０、約１：７０、約１：８０、約１：９０、約１：１００、約１：１２０、約１：１４０、約１：１６０、約１：１８０、約１：２００、約２００：１、約１８０：１、約１６０：１、約１４０：１、約１２０：１、約１００：１、約９０：１、約８０：１、約７０：１、約６０：１、約５０：１、約４０：１、約３０：１、約２０：１、約１５：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、または約２：１ｍｇの第１剤（例えば、ＩＬ－１０融合タンパク質）対ｍｇの第２の抗体（例えば、さらなる抗癌剤療法）である。

薬物または治療剤の“治療的有効量”または“治療的有効投与量”は、単独でまたは別の治療剤と組み合わせて用いたとき、対象を疾患の発症から保護するか、または疾患症状の重症度の減少、無増悪生存期間もしくは全生存期間の増加、疾患症状のない期間もしくは無増悪生存期間の頻度および期間の増加、あるいは疾患の苦痛による障害もしくは身体能力欠損（disability）の予防により証明される疾患の緩解を促進する、薬剤の何れかの量を意味する。疾患緩解を促進する治療剤の能力は、臨床治験中のヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において、またはインビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによってなど、当業者に公知の様々な方法を用いて評価することができる。

例として、“抗癌剤”は、対象における癌の緩解を促進する。ある面において、治療的有効量の薬剤は、癌を消失させる時点まで癌の緩解を促進する。“癌の緩解を促進する”とは、有効量の薬剤を単独または第２の抗癌剤と組み合わせて投与することにより、腫瘍の増殖またはサイズの減少、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増加、または疾患の苦痛による障害または身体能力欠損の予防がもたらされることを意味する。さらに、治療に関する用語“有効”および“効果”とは、薬理学的有効性および生理学的安全性の両方を含む。薬理学的有効性とは、患者の癌緩解を促進する薬剤の能力を意味する。生理的安全性とは、薬剤の投与に起因する、細胞、臓器および／または生体レベルでの毒性、免疫原性またはその他の有害な生理作用（副作用）の程度を意味する。

腫瘍の処置の例として、治療的有効量の抗癌剤は、未処置の対象と比較して、少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらに好ましくは少なくとも約６０％、さらに好ましくは少なくとも約８０％、細胞増殖または腫瘍増殖を阻害することができる。本発明の他の面において、腫瘍緩解は、少なくとも約２０日、少なくとも約４０日または少なくとも約６０日の期間観察され継続され得る。ある面において、治療的有効量の抗癌剤は、腫瘍細胞を致死させ得る。

“免疫反応”とは、当技術分野で理解されているとおりであり、一般に、異物または異常な細胞、例えば癌細胞に対する脊椎動物内の生物学的反応を意味し、この反応は、これらの物質およびこれらによって引き起こされる疾患から生体(生物)を保護する。免疫反応は、免疫系の１以上の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞または好中球）およびこれらの細胞の何れかまたは肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、補体を含む）の作用により介在され、その結果、免疫系は選択的に活性化、侵入してきた病原体、病原体に感染した細胞または組織、癌細胞またはその他の異常細胞、あるいは自己免疫または病的炎症の場合には正常なヒト細胞または組織を選択的に標的化し、結合し、損傷させ、破壊し、および／または脊椎動物の体内から排除する。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＴｒｅｇ細胞の活性化または阻害、あるいは免疫系の他の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化または阻害が含まれる。

本明細書で用いる用語“処置する（treat）”、“処置（treating）”および“処置（treatment）”とは、疾患に関連する症状、合併症、状態または生化学的指標の進行、発症、重症度または再発を逆転、緩和、改善、抑制もしくは減速させる、または防止する、あるいは全生存期間を延長する目的で対象に行われる何れか種類の介入またはプロセス、または対象に有効薬剤を投与することを意味する。処置は、疾患を有する対象または疾患を有しない対象（例えば、予防のため）であり得る。

例として、抗癌剤は、対象における癌の緩解を促進する薬物である。ある面において、治療的有効量の薬剤は、癌を消失させる時点まで癌の緩解を促進する。“癌の緩解を促進する”とは、有効量の薬剤を単独または第２の抗癌剤と組み合わせて投与することにより、腫瘍の増殖またはサイズの減少、腫瘍の壊死、少なくとも１つの疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増加、無増悪生存期間または全生存期間の延長、疾患の苦痛による障害または身体能力欠損の防止、または患者における疾患症状のその他の改善、をもたらすことを意味する。

本明細書で用いる用語“約１週間に１回”、“約２週間に１回”または他の類似の投与レジメンは、おおよその数を意味する。“約１週間に１回”とは、７日±１日毎、すなわち、６日毎～８日毎を含み得る。“約２週間に１回”とは、１４日±３日毎、すなわち、１１日毎～１７日毎を含み得る。同様の近似値が、例えば、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、および約１２週間に１回に適用される。ある面において、約６週間に１回または約１２週間に１回の投与頻度は、最初の投与が第１週の何れかの日に投与され、その後、次の投与がそれぞれ第６週または第１２週の何れかの日に投与され得ることを意味する。他の面では、約６週間に１回または約１２週間に１回の投与頻度は、最初の投与が第１週の特定の日（例えば、月曜日）に投与され、その後、次の投与が第６週または第１２週の同じ日（すなわち、月曜日）にそれぞれ投与されることを意味する。

選択用語（alternative）の使用（例えば、“または”）は、選択肢のいずれか一方、両方、またはそれらの何れかの組み合わせを意味すると理解されるべきである。本明細書で用いるように、不定冠詞“ａ”または“ａｎ”は、何れかの引用されたまたは列挙された成分の“１以上”を意味すると理解されるべきである。

用語“約”または“本質的に～を含む”は、当業者によって決定される特定の値または組成物の許容誤差範囲内にある値または組成物を意味し、これは、その値または組成物がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存し得る。例えば、“約”または“本質的に～を含む”は、当業者による１標準偏差以内または１標準偏差超を意味し得る。あるいは、“約”または“本質的に～を含む”は、１０％までの範囲内を意味し得る。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、この用語は、１桁までの範囲または５倍までの数値を意味し得る。特定の値または組成物が本願および特許請求の範囲に提供される場合、特記しない限り、“約”または“本質的に～を含む”の意味は、その特定の値または組成物の許容誤差範囲内であると推定されるべきである。

本明細書に記載されるように、何れかの濃度範囲、パーセント範囲、比率範囲または整数範囲は、特記しない限り、言及された範囲内の何れかの整数の値および適切なときにはその端数（整数の１０分の１および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。

ＩＩ．融合タンパク質
本発明の特定の面は、ＩＬ－１０ポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む、ＩＬ－１０融合タンパク質に関する。ある面において、第２のポリペプチドはＦｃポリペプチドであり得る。ある面において、第２のポリペプチドはアルブミンであり得る。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、例えば、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞においてインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を誘導することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ヒトＮＫ細胞の細胞介在性細胞傷害を誘導することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、二量体、例えば、第２のＩＬ－１０融合タンパク質とのホモ二量体またはｈＩＬ－１０タンパク質とのヘテロ二量体を形成することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０受容体を結合することができる。いくつかの面では、融合タンパク質は、Ｊａｋ１を活性化することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、Ｔｙｋ２を活性化することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＳＴＡＴ１を活性化することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＳＴＡＴ３を活性化することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＳＴＡＴ５を活性化することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、抗炎症性反応を誘発することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、炎症性反応を誘発することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０およびＦｃポリペプチドの融合物である。当技術分野で知られている何れかのＩＬ－１０ポリペプチドおよび／またはＦｃポリペプチドは、本明細書に記載の融合タンパク質に用いられ得る。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０およびアルブミンの融合体である。当技術分野で知られている何れかのＩＬ－１０ポリペプチドおよび／またはアルブミンポリペプチドは、本明細書に記載の融合タンパク質に用いられ得る。

ＩＩ．Ａ．ＩＬ－１０ポリペプチド
本明細書で用いるとき、特記しない限り、“インターロイキン－１０”および“ＩＬ－１０”は、ヒトＩＬ－１０（“ｈＩＬ－１０”；Genbank 受託番号ＮＰ－０００５６３；Ｍ３７８９７；ＮＭ＿０００５７２；UniProt －Ｐ２２３０１；または米国特許第６，２１７，８５７号）またはマウスＩＬ－１０（“ｍＩＬ－１０”）を意味し得る。ｈＩＬ－１０は、１８アミノ酸長のシグナルペプチドを含む１７８アミノ酸長のタンパク質として発現される。成熟したｈＩＬ－１０タンパク質（配列番号１；表１）は１６０アミノ酸長を有する。ｈＩＬ－１０およびｍＩＬ－１０間には８０％の相同性があるが、ｈＩＬ－１０のみがヒトおよびマウスの両方の細胞に作用し、一方でｍＩＬ－１０は種特異的な活性を有する。

ホモ二量体ＩＬ－１０は、主にＢ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球およびマクロファージなどの造血系細胞によって発現される１つのクラスの細胞表面受容体（ＩＬ－１０Ｒ）に結合する。造血細胞以外ではほとんど発現が認められない。機能的ＩＬ－１０Ｒ複合体は、２本のＩＬ－１０Ｒ１ポリペプチド鎖および２本のＩＬ－１０Ｒ２鎖からなる４量体である。ＩＬ－１０／ＩＬ－１０Ｒ相互作用により、ＩＬ－１０Ｒ１およびＩＬ－１０Ｒ２にそれぞれ結合しているチロシンキナーゼＪａｋ１およびＴｙｋ２が活性化される。受容体の関与およびチロシンリン酸化は、細胞質に局在する不活性な転写因子ＳＴＡＴ１、３および５を活性化し、転位および遺伝子活性化をもたらす。この経路を介したシグナル伝達は、抗炎症作用および炎症促進作用の両方をもたらし得る。ＩＬ－１０は、炎症性疾患、免疫関連疾患、線維性疾患および癌を含む、広範な疾患、障害および病状に関連している。

ＩＬ－１０は、比較的短いインビボ血清半減期を有する。例えば、インビトロバイオアッセイまたは敗血症ショックモデルシステムにおける有効性によって測定されるマウスにおける半減期は、約２時間から６時間である。インビボでのＩＬ－１０活性の損失は、腎臓クリアランス、タンパク質分解および血流中での単量化などいくつかの要因によると考えられる。その比較的短い半減期のために、ＩＬ－１０はポリエチレングリコールを含む様々なパートナーに複合体化されてきた。

タンパク質のＰＥＧ化は、ＰＥＧ部分がタンパク質にかなりの流体力学的半径を加えるので、腎臓クリアランスを制限することによってその血清半減期を増加させることができる。しかしながら、従来のＰＥＧ化方法論は、単量体タンパク質およびより大きくジスルフィド結合した複合体、例えば、モノクローナル抗体に向けられている。ＩＬ－１０に加えて他のサイトカインもまた、一般にモノＰＥＧ化、例えばサイトカインタンパク質上の単一残基に結合したＰＥＧ分子を介してＰＥＧ化されてきた。

ＩＬ－１０のＰＥＧ化は、ＩＬ－１０二量体が非共有結合性相互作用によって保持されているため、他のＰＥＧ化タンパク質では起こらない問題を提起する。ＩＬ－１０の解離は、ＰＥＧ化の間に促進される可能性があり、ＰＥＧ化ＩＬ－１０モノマーを生成するが、これらのモノマーはＩＬ－１０の生物学的活性を保持しない。さらに、１つのＩＬ－１０サブユニットへのモノＰＥ化は、サブユニットのシャッフリングにより、ジＰＥＧ化、モノＰＥＧ化、非ＰＥＧ化ＩＬ－１０分子の均一でない混合物をもたらす。さらに、ＰＥＧ化反応を完了まで進行させると、非特異的および多重ＰＥＧ化された標的タンパク質も許容することになり、これらのタンパク質の生物活性を低下させることになる。したがって、比較すると、ホモダイマー構造を保持し、容易に均質に製造できる融合タンパク質が有利である。

本明細書に記載のいくつかの面は、ＩＬ－１０ポリペプチドおよびＦｃポリペプチドを含む融合タンパク質に関する。当技術分野で既知の何れかのＩＬ－１０ポリペプチドが、本明細書に記載の融合タンパク質において用いられ得る。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、ｈＩＬ－１０またはその変異体を含む。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、マウスＩＬ－１０またはその変異体を含む。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、非ヒト霊長動物ＩＬ－１０またはその変異体を含む。

ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。ある面において、ＩＬ－ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に１０以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、または２個以下の置換、挿入または欠失を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、ＩＬ－ポリペプチドは、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。特定の面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。

ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドはシグナルペプチドを含む。ある面において、シグナルペプチドはＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端に融合されている。ある面において、シグナルペプチドは、配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。ある面において、シグナルペプチドは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。

ＩＩ.Ｂ. Ｆｃポリペプチド
本明細書に記載のある面は、Ｆｃドメインまたはその一部およびＩＬ－１０ポリペプチドを含む融合タンパク質に関する。Ｆｃドメインまたはその一部は、融合タンパク質の薬物動態学的または薬力学的特性を改善することができる。特定の面において、Ｆｃドメインまたはその一部は、Ｆｃドメインまたはその一部に融合された分子の半減期を延長する。

本明細書で用いる、本明細書中で互換的に用いられる用語“Ｆｃドメイン”または“Ｆｃ領域”とは、特記されない限り、ＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ）結合パートナー、またはその変異体、例えばＦｃＲへの結合が減少した、および／またはエフェクター機能が減少した変異Ｆｃを意味する。Ｆｃドメインは、天然ＩｇのＦｃドメインに対応するポリペプチドの部分、すなわち、その２本の重鎖のそれぞれのＦｃドメインの二量体結合によって形成されるような部分であってよい。天然Ｆｃドメインは、別のＦｃドメインとホモ二量体を形成する。

ある面において、“Ｆｃ領域”は、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域（すなわち、重鎖定常領域の最初の残基を１１４とすると、ＩｇＧでは残基２１６）で始まり、抗体のＣ末端で終わる、単一のＩｇ重鎖の部分を意味する。従って、完全なＦｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。

Ｉｇ定常領域のＦｃ領域は、Ｉｇアイソタイプに応じて、ヒンジ領域と同様に、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメインを含み得る。ＩｇのＦｃ領域を含む融合タンパク質は、安定性の増加、血清半減期の増加（Capon et al., 1989, Nature 337:525参照）、ならびに新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）などのＦｃ受容体への結合（米国特許第６，０８６，８７５号、同第６，４８５，７２６号、同第６，０３０，６１３号；ＷＯ０３／０７７８３４；ＵＳ２００３－０２３５５３６Ａ１３、同第４２４，５２５号）を含むいくつかの望ましい特性を融合タンパク質にもたらし、これらの文献はそれらの内容全体が引用により本明細書に包含される。

本発明において有用なＦｃ領域は、全ＩｇＧ、ＩｇＧのＦｃフラグメント、およびＦｃＲの完全な結合領域を含む他のフラグメントを含む、ＦｃＲと特異的に結合できる分子を包含する。例えば、ＦｃＲｎ受容体に結合するＩｇＧのＦｃ部分の領域は、Ｘ線結晶学に基づいて記載されている（Burmeister et al. 1994, Nature 372:379）。ＦｃのＦｃＲｎとの主要な接触部位は、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインの接合部付近である。

特異的結合とは、生理的条件下で比較的安定な複合体を形成する２つの分子を意味する。特異的結合は、通常、中程度から高いキャパシティーで低い親和性を有する非特異的結合と区別されるように、高い親和性および低から中程度のキャパシティーによって特徴づけられる。一般的に、親和定数ＫＡが１０^６Ｍ^－１以上、または１０^８Ｍ^－１以上であるとき、結合は特異的とみなされる。必要に応じて、結合条件を変えることにより、特異的結合に実質的に影響を与えることなく、非特異的結合を減少させることができる。分子の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合に許容される時間、ブロッキング剤（例えば、血清アルブミン、ミルクカゼイン）などの適切な結合条件は、常套の技術を用いて当業者によって最適化することができる。

特定の面において、本発明の融合タンパク質は、それにもかかわらずＦｃ領域にＦｃＲ結合特性を付与するのに十分である１以上の切断されたＦｃ領域を含む。例えば、ＦｃＲｎに結合するＦｃ領域の部分（すなわち、ＦｃＲｎ結合部分）は、ＩｇＧ１のアミノ酸２８２～４３８程度、ＥＵ番号付け（主要結合部位がＣＨ２ドメインのアミノ酸２４８、２５０～２５７、２７２、２８５、２８８、２９０～２９１、３０８～３１１および３１４ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５～３８７、４２８および４３３～４３６）を含む。したがって、本発明のＦｃ領域は、ＦｃＲｎ結合部分を含むか、またはＦｃＲｎ結合部分から構成され得る。

ＦｃＲ結合部分は、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む、何れかのアイソタイプの重鎖に由来し得る。ある面において、ヒトアイソタイプＩｇＧ１の抗体からのＦｃＲ結合部分が用いられる。ある面において、ヒトアイソタイプＩｇＧ２の抗体からのＦｃＲ結合部分が用いられる。ある面において、ヒトアイソタイプＩｇＧ３の抗体からのＦｃＲ結合部分が用いられる。ある面において、ヒトアイソタイプＩｇＧ４の抗体からのＦｃＲ結合部分が用いられる。

別の面において、“Ｆｃ領域”は、Ｆｃドメインのアミノ酸配列またはＦｃドメインに由来するアミノ酸配列を含む。特定の面において、Ｆｃ領域は、ヒンジ（例えば、上部、中部および／または下部のヒンジ領域）ドメイン（ＥＵ番号付けによる抗体Ｆｃ領域のアミノ酸２１６～２３０程度）、ＣＨ２ドメイン（ＥＵ番号付けによる抗体Ｆｃ領域のアミノ酸２３１～３４０程度）、ＣＨ３ドメイン（ＥＵ番号付けによる抗体Ｆｃ領域のアミノ酸３４１～４３８程度）、ＣＨ４ドメインまたはそれらの変異体、部分、フラグメントの、少なくとも１つを含む。他の面において、Ｆｃ領域は、完全なＦｃドメイン（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含む。ある面において、Ｆｃ領域は、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合したヒンジドメイン（またはその一部）、ＣＨ２ドメイン（またはその一部）に融合したヒンジドメイン（またはその一部）、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）、ヒンジドメイン（またはその一部）およびＣＨ３ドメイン（またはその一部）の両方に融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）を含む、本質的にそれからなる、またはそれから構成される。さらに他の面において、Ｆｃ領域は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を欠く。特定の面において、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号２２１～４４７に対応するアミノ酸を含むか、またはそれらから構成される。

ある面において、ポリペプチドのＦｃ領域は、ヒトＩｇに由来する。しかしながら、Ｆｃ領域は、例えば、げっ歯動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）または非ヒト霊長動物（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む他の哺乳動物種のＩｇに由来し得ることが理解される。さらに、Ｆｃドメインまたはその一部のポリペプチドは、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む何れかのＩｇクラス、ならびにＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む何れかのＩｇアイソタイプから誘導され得る。別の面において、ヒトアイソタイプのＩｇＧ１が用いられる。

特定の面において、Ｆｃポリペプチドは、野生型Ｆｃドメインを含むＦｃ領域によって付与される少なくとも１つのエフェクター機能の変化（例えば、Ｆｃ領域のＦｃ受容体への結合能力の改善または低減（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩまたはＦｃγＲＩＩＩ）、補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）、または他のＦｃ結合パートナー（例えば、ＤＣ－ＳＩＧＮ）への結合の改善または低減、あるいは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣＣ）を変更、誘発、増強または低減することを提供する。特定の面において、Ｆｃポリペプチドは、ＡＤＣＣを減少させることができる。他の面では、Ｆｃ変異体は、遺伝子操作されたシステイン残基を提供する。

本発明のＦｃ領域は、エフェクター機能および／またはＦｃＲもしくはＦｃＲｎ結合における変化（例えば、増強または減少）を付与することが知られている技術的に認識されたＦｃ変異体を用い得る。具体的には、本発明の結合分子は、例えば、国際ＰＣＴ公開公報ＷＯ８８／０７０８９、ＷＯ９６／１４３３９、ＷＯ９８／０５７８７、ＷＯ９８／２３２８９、ＷＯ９９／５１６４２、ＷＯ９９／５８５７２、ＷＯ００／０９５６０、ＷＯ００／３２７６７、ＷＯ００／４２０７２、ＷＯ０２／４４２１５、ＷＯ０２／０６０９１９、ＷＯ０３／０７４５６９、ＷＯ０４／０１６７５０、ＷＯ０４／０２９２０７、ＷＯ０４／０３５７５２、ＷＯ０４／０６３３５１、ＷＯ０４／０７４４５５、ＷＯ０４／０９９２４９、ＷＯ０５／０４０２１７、ＷＯ０４／０４４８５９、ＷＯ０５／０７０９６３、ＷＯ０５／０７７９８１、ＷＯ０５／０９２９２５、ＷＯ０５／１２３７８０、ＷＯ０６／０１９４４７、ＷＯ０６／０４７３５０およびＷＯ０６／０８５９６７；米国特許第ＵＳ２００７／０２３１３２９号、同第ＵＳ２００７／０２３１３２９号、同第ＵＳ２００７／０２３７７６５号、同第ＵＳ２００７／０２３７７６６号、同第ＵＳ２００７／０２３７７６７号、同第ＵＳ２００７／０２４３１８８号、同第ＵＳ２００７／０２４８６０３号、同第ＵＳ２００７／０２８６８５９号、同第ＵＳ２００８／００５７０５６；または、ＵＳ特許第５，６４８，２６０号；同第５，７３９，２７７号；同第５，８３４，２５０号；同第５，８６９，０４６号；同第６，０９６，８７１号；同第６，１２１，０２２号；同第６，１９４，５５１号；同第６，２４２，１９５号；同第６，２７７，３７５号；同第６，５２８，６２４号；同第６，５３８，１２４号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，９９８，２５３号；同第７，０８３，７８４号；同第７，４０４，９５６号；および、同第７，３１７，０９１号（それらは各々、その内容全体を引用により本明細書中に包含させる）に記載の１以上のアミノ酸位置における変異（例えば、置換）を含み得る。ある面において、特定の変異（例えば、当技術分野で開示される１以上のアミノ酸の特定の置換）は、記載されたアミノ酸位置の１以上で行われ得る。別の態様では、記載されたアミノ酸位置の１以上における異なる変異（例えば、当技術分野で開示された１以上のアミノ酸位置の異なる置換）を行うことができる。

Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮに結合する修飾Ｆｃフラグメントまたはその一部を得るために、部位特異的突然変異誘発などのよく知られた方法に従って修飾され得る。そのような修飾は、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合部位から離れた修飾、ならびにＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮへの結合を維持または変更する結合部位内の修飾を含む。変異はＦｃに単独で導入することができ、天然Ｆｃとは異なる１００以上のＦｃ領域を生じさせる。さらに、これらの個々の変異を２つ、３つ、またはそれ以上の組合せで導入することにより、さらに数百のＦｃ領域を生じさせ得る。さらに、本発明の構築物のＦｃ領域の一方を変異させ、構築物の他のＦｃ領域を全く変異させないことができ、または両者を変異させることができるが、異なる変異を有することが可能である。

上記の変異のうちの特定のものは、Ｆｃ領域またはＦｃＲｎ結合パートナーに新しい機能を付与することができる。例えば、一面はＮ２９７Ａを組み込み、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位を除去している。この変異は、Ｆｃ領域の循環半減期を高め、ＦｃＲｎに対する親和性を損なうことなく、Ｆｃ領域をＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよびＦｃγＲＩＩＩＡに結合できなくする（Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847; Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632; Shields et al. 1995, J.Biol．Chem. 276:6591)。上記の突然変異から生じる新しい機能のさらなる例として、ＦｃＲｎに対する親和性は、いくつかの例において野生型のそれを超えて増加され得る。この親和性の増加は、“オン”レートの増加、“オフ”レートの減少、または“オン”レートの増加および“オフ”レートの減少の両方を反映し得る。ＦｃＲｎに対する増加した親和性を付与すると考えられる変異の例としては、Ｔ２５６Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａが挙げられるが、これらに限定されない（Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591）。

さらに、少なくとも３つのヒトＦｃガンマ受容体は、下流ヒンジ領域内のＩｇＧ上の結合部位、一般にアミノ酸２３４－２３７を認識することが明らかである。したがって、例えばヒトＩｇＧ１“ＥＬＬＧ”のアミノ酸２３３－２３６をＩｇＧ２“ＰＶＡ”由来の対応する配列に置換する（１アミノ酸欠失させる）ことにより、この領域の変異から新しい機能の別の例および免疫原性の低下の可能性が生じ得る。このような変異が導入された場合、様々なエフェクター機能を媒介するＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、ＩｇＧ１に結合しないことが示されている。Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77 および Armour et al. 1999, Eur. J. Immunol. 29:2613。

ある面において、Ｆｃドメインまたはその一部は、米国特許第５，７３９，２７７号の配列番号３を含むポリペプチドである。該第５，７３９，２７７号の配列番号１１、１、２および３１から選択される配列をさらに含んでいてもよい。

特定の面において、Ｆｃドメインまたはその一部はヘミグリコシル化されており、ここで、融合タンパク質は少なくとも２つのＦｃ領域を含み、少なくとも１つのＦｃ領域がグリコシル化され（例えば、グリコシル化ＣＨ２領域）、そして少なくとも１つのＦｃ領域がグリコシル化されていない領域（aglycosylated）（例えば、非グリコシル化ＣＨ２）である。ある面において、リンカーは、グリコシル化されたＦｃ領域および非グリコシル化Ｆｃ領域の間に介在させることができる。別の態様では、Ｆｃ領域は完全にグリコシル化されており、すなわち、Ｆｃ領域の全てがグリコシル化されている。他の面では、Ｆｃ領域は非グリコシル化され得る、すなわち、Ｆｃ部分のいずれもグリコシル化されていない。

特定の面において、本発明の融合タンパク質は、Ｆｃドメインまたはその部分（例えば、Ｆｃ変異体）に対するアミノ酸置換を含み、これは、Ｆｃドメインの抗原非依存性エフェクター機能、特にタンパク質の循環半減期を変化させる。

そのようなタンパク質は、これらの置換を欠くタンパク質と比較して、ＦｃＲへの結合の増加または減少を示し、したがって、それぞれ、血清中の半減期が増加または減少する。ＦｃＲに対する親和性が改善されたＦｃ変異体は、より長い血清半減期を有すると予想され、そのような分子は、投与されたポリペプチドの長い半減期が望まれる哺乳動物の処置方法、例えば、慢性疾患または障害を処置するための方法に有益な用途を有する（例えば、米国特許第７，３４８，００４号、同第７，４０４，９５６号および同第７，８６２，８２０号を参照のこと）。対照的に、減少したＦｃＲ結合親和性を有するＦｃ変異体は、より短い半減期を有すると予期され、そのような分子は、例えば、循環時間の短縮が有利であり得る哺乳動物への投与、例えば、インビボ診断イメージング、または出発ポリペプチドが長期間循環中に存在すると毒性副作用を有する状況において有益でもある。ＦｃＲｎ結合親和性が低下したＦｃ変異体はまた、胎盤を通過しにくく、したがって、妊婦の疾患または障害の処置にも有用である。さらに、低下したＦｃＲｎ結合親和性が望まれ得る他の用途には、脳、腎臓および／または肝臓の局在が望まれる用途が含まれる。１つの例示的な面において、本発明の融合タンパク質は、脈管構造から腎臓糸球体の上皮を横切る輸送の減少を示す。別の面において、本発明の融合タンパク質は、脳から血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて、血管空間への輸送の減少を示す。ある面において、変化したＦｃＲ結合を有するタンパク質は、Ｉｇ定常領域の“ＦｃＲ結合ループ”内に１以上のアミノ酸置換を有する少なくとも１つのＦｃ領域（例えば、１つまたは２つのＦｃ領域）を含む。ＦｃＲ結合ループは、ある面において、野生型、全長、Ｆｃ領域のアミノ酸残基２８０－２９９（ＥＵ番号付けによる）から構成される。他の面では、変化したＦｃＲ結合親和性を有する本発明のキメラタンパク質におけるＩｇ定常領域またはその部分は、１５Å ＦｃＲ “コンタクト・ゾーン（contact zone）”内に１以上のアミノ酸置換を有する少なくとも１つのＦｃ領域を含む。ＦｃＲ結合活性を変化させた例示的なアミノ酸置換は、国際ＰＣＴ公開公報ＷＯ０５／０４７３２７および米国公開公報ＵＳ２０１２００３２１０（Ａ１）に開示されており、その各々は引用によりその全体が本明細書に包含される。本発明で用いるＦｃ領域は、融合タンパク質のグリコシル化を変化させる、当技術分野で認識されたアミノ酸置換を含むことも可能である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－１０ポリペプチドに結合された融合タンパク質のＦｃ領域は、変化したグリコシル化（例えば、Ｎ－またはＯ－結合グリコシル化）をもたらす変異を有するＦｃ領域を含み得、または変化したエフェクター機能を含み得る。

ある面において、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載のＩｇ定常領域またはその一部から独立して選択される２以上のその構成要素を有する遺伝的に融合したＦｃ領域（すなわち、ｓｃＦｃ領域）を含み得る。ある面において、二量体Ｆｃ領域のＦｃ領域は同じである。別の面では、Ｆｃ領域の少なくとも２つは異なっている。例えば、本発明のタンパク質のＦｃ領域は、同数のアミノ酸残基を含むか、またはそれらは１以上のアミノ酸残基によって（例えば、約５アミノ酸残基（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基）、約１０残基、約１５残基、約２０残基、約３０残基、約４０残基または約５０残基によって）長さが異なり得る。さらに他の面において、本発明のタンパク質のＦｃ領域は、１以上のアミノ酸位置において配列が異なり得る。例えば、Ｆｃ領域の少なくとも２つは、約５アミノ酸位置（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸位置）、約１０位置、約１５位置、約２０位置、約３０位置、約４０位置、または約５０位置において異なり得る。

様々なＦｃ領域遺伝子配列（例えば、ヒトＦｃ遺伝子配列）は、一般にアクセス可能な寄託形態で入手可能である。Ｆｃ配列は、特定のエフェクター機能を有する（または特定のエフェクター機能を欠く）か、または免疫原性もしくはＡＤＣＣを低減するための特定の修飾を有するものを選択することができる。抗体および抗体をコードする遺伝子の多くの配列が公開されており、適切なＦｃ領域配列は、当技術分野で認識されている技術を用いてこれらの配列から誘導することができる。その後、上記の方法の何れかを用いて得られた遺伝物質を改変または合成して、本発明の方法で用いられるキメラタンパク質を得ることができる。本発明の範囲は、定常領域ＤＮＡ配列の対立遺伝子、変異体および突然変異を包含することがさらに理解され得る。

ある面において、Ｆｃポリペプチドは、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下をもたらす１以上の修飾を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ番号付けに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｋおよびそれらの何れかの組合せから選択される１以上の置換を含むＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ置換を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３５Ｅ置換を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、Ｇ２３７Ａ置換を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、Ｐ２３８Ｋ置換を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａ置換を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、末端Ｋ残基を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、末端Ｋ残基を欠く、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、末端Ｇ残基を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、システイン架橋、例えば、システイン架橋変異体を含む、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある面において、システイン架橋変異体は、Ｎ末端ＶＥＰＫＳＣ（配列番号１３）を含む。特定の面では、Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１．３ｆＦｃ領域を含む。

ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４－１２（表２）から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％配列同一性のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、Ｆｃポリペプチドは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む。

ＩＩ．Ｃ．リンカー
特定の面において、ＩＬ－１０ポリペプチドはリンカーによってＦｃポリペプチドに連結されている。当技術分野で知られている何れかのリンカーを、本明細書に記載の融合タンパク質において用いることができる。ある面において、リンカーは化学的リンカーを含む。ある面において、リンカーは共有結合を含む。ある面において、リンカーは、ペプチド結合を含む。ある面において、リンカーは、１以上のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、ペプチドリンカーを含む。

リンカーは、如何なる長さであってもよい。ある面において、リンカーは、少なくとも約１個～少なくとも約１００個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約７５個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約５０個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約４０個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約３０個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約２５個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約２０個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約１５個のアミノ酸、少なくとも約１個～少なくとも約１０個のアミノ酸、または少なくとも約１個～少なくとも約５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約５個～少なくとも約１００個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約７５個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約５０個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約４０個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約３０個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約２５個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約２０個のアミノ酸、少なくとも約５個～少なくとも約１５個のアミノ酸、または少なくとも約５個～少なくとも約１０個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約１０個～少なくとも約１００個のアミノ酸、少なくとも約１０個～少なくとも約７５個のアミノ酸、少なくとも約１０個～少なくとも約５０個のアミノ酸、少なくとも約１０個～少なくとも約４０個のアミノ酸、少なくとも約１０個～少なくとも約３０個のアミノ酸、少なくとも約１０個～少なくとも約２５個のアミノ酸、少なくとも約１０個～少なくとも約２０個のアミノ酸、または少なくとも約１０個～少なくとも約１５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約５個から少なくとも約２５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約１０個～少なくとも約２５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約１０個～少なくとも約２０個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも約１５個～少なくとも約２５個のアミノ酸を含む。

ある面において、リンカーは、少なくとも約４個のアミノ酸、少なくとも約５個のアミノ酸、少なくとも約６個のアミノ酸、少なくとも約７個のアミノ酸、少なくとも約８個のアミノ酸、少なくとも約９個のアミノ酸、少なくとも約１０個のアミノ酸、少なくとも約１１個のアミノ酸、少なくとも約１２個のアミノ酸、少なくとも約１３個のアミノ酸、少なくとも約１４個のアミノ酸から構成される。少なくとも約１５個のアミノ酸、少なくとも約１６個のアミノ酸、少なくとも約１７個のアミノ酸、少なくとも約１８個のアミノ酸、少なくとも約１９個のアミノ酸、少なくとも約２０個のアミノ酸、少なくとも約２１個のアミノ酸、少なくとも約２２個のアミノ酸、少なくとも約２３個のアミノ酸、少なくとも約２４個のアミノ酸、少なくとも約２５個のアミノ酸、または少なくとも約３０個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約４個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約８個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約１０個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約１１個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約１５個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約２０個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約２１個のアミノ酸を含む。ある面において、リンカーは、約２２個のアミノ酸を含む。

様々なペプチドリンカーが当技術分野で知られており、本発明の融合タンパク質で使用可能であり。ある面において、リンカーは、グリシン－セリンリンカー、例えば、少なくとも１つのグリシン残基および少なくとも１つのセリン残基を含むリンカーを含む。グリシン残基およびセリン残基の何れかの組合せが用いられ得る。ある面において、リンカーは、Ｇ－Ｓを含む。ある面において、リンカーは、Ｇ－Ｇ－Ｓを含む。ある面において、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号３８）を含む。ある面において、リンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号３９）を含む。ある面において、リンカーは、ＧＧＧＧＧＳ（配列番号４０）を含む。ある面において、リンカーは、少なくとも１つのＧＧＧＳ（配列番号３８）モチーフを含む。ある面において、リンカーは、少なくとも２つのＧＧＧＳ（配列番号３８）モチーフを含む。ある面において、リンカーは、少なくとも３つのＧＧＧＳ（配列番号３８）モチーフを含む。ある面において、リンカーは、少なくとも４つのＧＧＧＳ（配列番号３８）モチーフを含む。

ある面において、リンカーは、少なくとも１つのＧＧＧＧＳ(配列番号３９)モチーフを含む。ある面において、リンカーは、少なくとも２つのＧＧＧＧＳ(配列番号３９)モチーフを含む。ある面において、リンカーは、少なくとも３つのＧＧＧＧＳ（配列番号３９）モチーフを含む。ある面において、リンカーは、少なくとも４つのＧＧＧＧＳ（配列番号３９）モチーフを含む。

特定の面において、リンカーは配列番号４１～４５(表３)から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、リンカーは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、リンカーは、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、リンカーは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、リンカーは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、リンカーは、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む。

ある面において、リンカーは開裂可能なリンカーである。ある面において、リンカーは、酵素的開裂部位を含む。ある面において、リンカーは、標的組織に存在する１以上の酵素によって切断され得る。ある面において、リンカーの開裂は、ＦｃポリペプチドからのＩＬ－１０ポリペプチドの放出をもたらす。当技術分野で知られている何れかの切断可能なリンカーは、単独で、または本明細書に記載の１以上の他のリンカーと組み合わせて使用できる。

ＩＩ．Ｄ．ＩＬ－１０融合タンパク質
本発明のある面は、本明細書に記載のＩＬ－１０ポリペプチドおよび本明細書に記載のＦｃポリペプチドを含む融合タンパク質に関する。ある面において、融合タンパク質はＩＬ－１０機能を有する。ある面において、融合タンパク質は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）レベルを増強することができる。特定の面において、融合タンパク質は、例えば、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞においてＩＦＮγを誘導することができる。ある面において、融合タンパク質は、ヒトＮＫ細胞の細胞介在性細胞傷害を誘導することができる。ある面において、融合タンパク質は、二量体、例えば、第２の融合タンパク質とのホモ二量体またはｈＩＬ－１０タンパク質とのヘテロ二量体を形成することが可能である。ある面において、融合タンパク質は、ＩＬ－１０受容体に結合することができる。ある面において、融合タンパク質は、Ｊａｋ１を活性化することができる。ある面において、融合タンパク質は、Ｔｙｋ２を活性化することができる。ある面において、融合タンパク質は、ＳＴＡＴ１を活性化することができる。ある面において、融合タンパク質は、ＳＴＡＴ３を活性化することができる。ある面において、融合タンパク質は、ＳＴＡＴ５を活性化することができる。ある面において、融合タンパク質は、抗炎症性応答を誘発することができる。ある面において、融合タンパク質は、炎症促進性応答を誘発することができる。

ＩＬ－１０ポリペプチドおよびＦｃポリペプチドの何れかの配向(orientation)が、本発明によって企図される。したがって、ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端は、ＦｃポリペプチドのＣ末端に（直接的または間接的に）連結されており、例えば、Ｆｃ－ＩＬ－１０である。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端は、ＦｃポリペプチドのＣ末端に直接、例えば、ペプチドリンカーなしで連結される。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端は、１以上のアミノ酸によってＦｃポリペプチドのＣ末端に連結される。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端は、ペプチドリンカーによって、例えば、本明細書に記載の何れかのペプチドリンカーによって、ＦｃポリペプチドのＣ末端に連結される。

ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４～３２（表４）から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、配列番号３３－３６（表４）から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下の置換、挿入または欠失を有する配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む。

ある面において、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む。ある面において、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む。

ＩＩ.Ｅ．ＩＬ－１０融合タンパク質の二量体
特定の面において、融合タンパク質は、ＩＬ－１０二量体を含む。ある面において、ＩＬ－１０二量体は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、ここで、該第１のポリペプチドは、本明細書に記載の何れかのＩＬ－１０融合タンパク質を含み、第２のポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドを含み。特定の面において、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドは、共有結合によって結合または会合している。ある面において、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドは、ペプチド結合によって結合または会合している。別の面において、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結または会合している。ある面において、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドは、１以上のアミノ酸によって結合または会合している。ある面において、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドは、ペプチドリンカーによって結合または会合される。当技術分野で知られているおよび／または本明細書に記載の何れかのリンカーは、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドを連結するために用いられ得る。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、第１のＦｃポリペプチドおよび第２のＦｃポリペプチドの間のジスルフィド結合により連結される。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、第１のＦｃポリペプチドのＣ末端と第２のＦｃポリペプチドのＮ末端との間のペプチドリンカーによって連結されている。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、第１のＦｃポリペプチドのＮ末端と第２のＦｃポリペプチドのＣ末端との間のペプチドリンカーによって連結される。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、第１のＦｃポリペプチドのＣ末端と第２のＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端との間のペプチドリンカーによって連結される。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、第１のＦｃポリペプチドのＮ末端と第２のＩＬ－１０ポリペプチドのＣ末端との間のペプチドリンカーによって連結される。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、一本鎖Ｆｃ領域によって連結される。ある面において、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの間のリンカーは、切断可能なリンカーである。

ある面において、第２のポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドに融合した第２のＩＬ－１０ポリペプチドを含む。ある面において、第１のポリペプチドのＩＬ－１０ポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドと同じである。ある面において、第１のポリペプチドのＩＬ－１０ポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドと異なる。ある面において、第１のポリペプチドのＦｃポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドと同じである。ある面において、第１のポリペプチドのＦｃポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドと異なる。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドと同じであり、Ｆｃポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドと同じである。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドと同じであり、Ｆｃポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドと異なる。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドと異なり、Ｆｃポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドと同じである。ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドと異なり、Ｆｃポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドと異なる。ある面において、二量体はホモ二量体である。ある面において、二量体はヘテロ二量体である。

ある面において、ＩＬ－１０二量体は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、ここで、該第１のポリペプチドは、本明細書に記載の何れかのＩＬ－１０融合タンパク質を含み、第２のポリペプチドは、第２のＩＬ－１０ポリペプチドを含む。ある面において、第２のポリペプチドは、第２のＦｃポリペプチドを含まない。

ＩＩ.Ｆ．ポリヌクレオチド
特定の面において、本明細書中、ＩＬ－１０活性を有する本明細書に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ、ならびにかかるポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば宿主細胞、例えば哺乳動物細胞におけるそれらの効率的発現のための発現ベクターなどを提供する。ある面において、本明細書中、配列番号１４－３６から選択されるポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。

本明細書で用いる“単離された”ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然源（例えば、マウスまたはヒト）中に存在する他の核酸分子から分離されたものである。さらに、ｃＤＮＡ分子などの“単離された”核酸分子は、組換え技術によって製造されたとき、他の細胞材料、または培養液を実質的に含まず、化学的に合成されたとき、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まないものであり得る。例えば、用語“実質的に含まない(free)”とは、他の材料、例えば細胞材料、培養液、他の核酸分子、化学前駆体および／または他の化学物質を約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％または０．１％未満（特に約１０％未満）有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。特定の面において、本明細書に記載の融合タンパク質をコードする核酸分子（複数可）は、単離または精製される。

ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の何れかの方法によって得ることができ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。本明細書に記載の融合タンパク質、例えば表４に記載の融合タンパク質、およびこれらの融合タンパク質の改変体をコードするヌクレオチド配列は、当技術分野で周知の方法、すなわち特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンを、融合タンパク質をコードする核酸を生成するように組み立てる方法で決定することができる。このような融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、Kutmeier G et al., (1994). BioTechniques 17: 242-6に記載のように）、これは、要するに、融合タンパク質をコードする配列の一部を含む重複するオリゴヌクレオチドの合成、それらオリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、ならびに連結されたオリゴヌクレオチドのＰＣＲによる増幅を含む。

特定の融合タンパク質をコードする核酸を含むクローンが入手できないが、融合タンパク質分子の配列が既知である場合、融合タンパク質をコードする核酸を化学的に合成するか、または適切な供給源（例えば、ｃＤＮＡライブラリー、本明細書に記載の融合タンパク質の一部を発現する哺乳動物細胞のような、目的のタンパク質を発現する何れかの組織または細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリー、あるいはそれらから単離された核酸、ある面ではポリＡ＋ＲＮＡ）を、配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズできる合成プライマーによるＰＣＲ増幅して、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いてクローニングして特定し、例えば、融合タンパク質の少なくとも一部をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定する。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、当技術分野で周知の何れかの方法を用いて複製可能なクローニングベクターにクローニングすることができる。

本明細書に記載の融合タンパク質をコードするＤＮＡは、従来の方法を用いて（例えば、本明細書に記載の融合タンパク質をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いて）容易に単離および配列決定することができる。ヒト細胞は、そのようなＤＮＡの供給源として機能し得る。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに組込まれ、次いで、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、CHO GS SYSTEM^(商標)（Lonza）からのＣＨＯ細胞）、または他の方法で融合タンパク質を生成しないミエローマ細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞における融合タンパク質の合成が行われうる。

本明細書に記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、融合タンパク質の翻訳を助けるさらなる要素を含み得ることがさらに認識される。そのような配列には、例えば、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’末端に結合したＫｏｚａｋ配列が含まれる。

ＩＩ.Ｇ．細胞およびベクター
特定の面において、本明細書にて、本明細書に記載の融合タンパク質を発現（例えば、組換え）する細胞（例えば、宿主細胞）、および本明細書に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。本明細書にて、宿主細胞における組換え発現のための融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）を提供する

ある面において、宿主細胞は、本明細書に記載の核酸を含む。

ある面において、宿主細胞は真核生物細胞である。ある面において、宿主細胞は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、トランスジェニック哺乳動物細胞および植物細胞からなる群より選択される。ある面において、宿主細胞は原核細胞である。ある面において、原核生物細胞は細菌細胞である。

ある面において、宿主細胞は哺乳動物細胞である。そのような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（内因性にいかなる免疫グロブリン鎖も産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ.Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の面において、融合タンパク質はＨＥＫ２９３細胞で発現される。特定の面において、融合タンパク質はＣＨＯ細胞において発現される。

本明細書で用いる発現ベクターとは、適切な宿主細胞に導入されたときに、挿入されたコード配列の転写および翻訳に必要な要素、またはＲＮＡウイルスベクターの場合には複製および翻訳に必要な要素を含む何れかの核酸構築物を意味する。発現ベクターには、プラスミド、ファージミド、ウイルスおよびそれらの誘導体が含まれ得る。

本明細書で用いる遺伝子発現制御配列は、それが作動可能に連結されているコーディング核酸の効率的な転写および翻訳を促進する、プロモーター配列またはプロモーター－エンハンサーの組合せなどの何れかの調節ヌクレオチド配列である。遺伝子発現制御配列は、例えば、構成的または誘導的プロモーターのような哺乳動物またはウイルスプロモーターであってもよい。

本発明の目的のために、多数の発現ベクター系を採用することができる。これらの発現ベクターは、一般的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分として、宿主生物において複製可能である。発現ベクターは、プロモーター（例えば、天然関連プロモーターまたは異種プロモーター）、エンハンサー、シグナル配列、スプライシングシグナル、エンハンサー要素および転写終結配列を含むが、これらに限定されない発現制御配列を含み得る。ある面において、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができるベクター中の真核生物プロモーター系である。発現ベクターは、ウシ乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ、ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素も利用可能である。その他に、内部リボソーム結合部位を有する多シストロン性システム（polycistronic systems）の使用も含まれる。

一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にする選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性またはネオマイシン耐性）を含む（例えば、Itakura et al., 米国特許第４，７０４，３６２号を参照のこと）。ＤＮＡをその染色体に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１以上のマーカーを導入することによって選択することができる。マーカーは、従属栄養宿主へのプロトトロフィー、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅などの重金属に対する耐性を提供することができる。選択マーカー遺伝子は、発現させるＤＮＡ配列に直接連結するか、または共形質転換により同一細胞内に導入することができる。

他の面において、本発明のポリペプチドは、多シストロン性構築物を用いて発現される。これらの発現系では、多量体結合タンパク質の複数のポリペプチドのような目的の複数の遺伝子産物が、単一の多シストロン性構築物から産生され得る。これらのシステムでは、真核生物宿主細胞において比較的高いレベルのポリペプチドを提供するために、有利には内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を用いる。適合するＩＲＥＳ配列は、米国特許第６，１９３，９８０号に開示されている。

より一般的には、ポリペプチドをコードするベクターまたはＤＮＡ配列が調製されると、その発現ベクターを適切な宿主細胞に導入することができる。すなわち、宿主細胞を形質転換することができる。宿主細胞へのプラスミドの導入は、上記のように、当業者によく知られた様々な技術によって達成することができる。形質転換された細胞は、融合タンパク質の産生に適した条件下で培養され、融合タンパク質合成についてアッセイされる。例示的なアッセイ技術としては、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または蛍光活性化セルソーター分析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学等が挙げられる。

ＩＩ．Ｈ．医薬組成物
ＩＬ－１０ポリペプチドおよびＦｃポリペプチドを含む本明細書に記載の様々な融合タンパク質は、投与に適した医薬組成物に組み入れられ得る。そのような組成物は、一般的には、融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む。本明細書で用いる用語“薬学的に許容される担体”とは、薬学的投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などを含むことを意図している。薬学的活性物質に対するこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野において周知である。

ある面において、（a）本明細書に記載の融合タンパク質および（b）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が開示される。

ある面において、（a）本明細書に記載の核酸または核酸のセット、および（b）薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物が開示される。

ある面において、（a）本明細書に記載のベクターまたはベクターセット、および（b）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を開示する。

ある面において、（a）本明細書に記載の宿主細胞および（b）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を開示する。

本発明の医薬組成物は、その意図する投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経腸、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、および経粘膜が挙げられる。さらに、治療的有効量の医薬組成物を、処置を必要とする部位に局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、手術中の局所または局部注入または灌流、局所適用、注射、カテーテル、坐薬またはインプラント（例えば、唾液腺膜または繊維などの膜を含む、多孔質、非孔質またはゼラチン質材料から形成されたインプラント）などにより達成され得る。別の面では、治療的有効量の医薬組成物は、リポソームなどのビークルにて送達される（例えば、Langer, Science 249:1527-33, 1990 および Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein and Fidler (eds.), Liss, N.Y., pp. 353-65, 1989を参照のこと）。

許容される担体、賦形剤または安定化剤は、用いられる用量および濃度においてレシピエントに対して無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；および／またはTWEEN^(商標)、PLURONICS^(商標)またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

非経腸製剤に用いられる薬学的に許容される担体としては、水性ビークル、非水性ビークル、抗菌剤、等張化剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁剤および分散剤、乳化剤、封鎖剤およびキレート剤、その他の薬学的に許容される物質が挙げられる。水性ビークルの例には、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロースおよび乳酸リンゲル注射液が含まれる。非水系非経腸ビークルとしては、植物由来の固定油、綿実油、コーン油、ゴマ油、ピーナッツ油などが挙げられる。多数回投与用容器に包装された非経腸製剤には、静菌または殺菌濃度の抗菌剤を添加することができ、これにはフェノールまたはクレゾール、水銀、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムが含まれる。等張化剤としては、塩化ナトリウムおよびデキストロースが挙げられる。緩衝剤としては、リン酸塩およびクエン酸塩が挙げられる。抗酸化剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局所麻酔剤としては、塩酸プロカインが挙げられる。懸濁剤および分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ(登録商標) ８０）が挙げられる。金属イオンの封鎖剤またはキレート剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。また、医薬用担体としては、水混和性ビークルとしてエチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール；ｐＨ調整用として水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸が挙げられる。

非経腸適用、皮内適用または皮下適用に用いられる溶液または懸濁液は、以下の成分のいずれかを含み得る：注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤；塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張力調節剤。ｐＨの調整は、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で行うことができる。非経腸製剤は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または多数回投与用バイアルに封入することができる。

注射用に適した医薬組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液の即席調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与のために、適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、クレモフォールＥＬＳ（ＢＡＳＦ；Parsippany, NJ）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。いずれの場合も、組成物は無菌でなければならず、容易にシリンジ通過できる程度に流動的でなければならない。また、製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適当な混合物を含む溶媒または分散媒とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、分散液の場合には必要な粒子径の維持、界面活性剤の使用などによって維持することができる。微生物の作用の予防は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等の各種抗菌剤および抗真菌剤により達成することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、マンニトールのような多価アルコール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の延長は、組成物中に吸収を遅延させる物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含むことによってもたらされ得る。

滅菌注射液は、融合タンパク質を適切な溶媒中に必要量、必要に応じて上に列挙した成分の１つまたは組み合わせで取り込み、次いで濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒と上記に列挙した成分の中から必要な他の成分を含む無菌ビークルに融合タンパク質を組み入れることによって調製される。無菌注射液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、活性成分、例えば、融合タンパク質の凍結乾燥粉末と、その以前に無菌ろ過した溶液からの何らかのさらなる所望の成分が得られる。ある面において、融合タンパク質は、保存のために凍結乾燥され、それを必要とする対象への投与の前に再構成され得る。

吸入による投与のために、化合物は、適切な噴射剤、例えば二酸化炭素のようなガスを含む加圧容器またはディスペンサー、またはネブライザーからエアゾールスプレーの形態で送達される。全身投与はまた、経粘膜または経皮的手段によることも可能である。

１つの面において、融合タンパク質は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤のような、身体からの急速な排除に対してそれを保護する担体と共に調製することができる。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を用いることができる。このような製剤の調製方法は、当業者には明らかであり得る。リポソーム懸濁液はまた、薬学的に許容される担体として用いられ得る。

非経腸組成物を投与量単位形態で製剤化することは、投与の容易さおよび投与量の均一性のために特に有利である。本明細書で用いる投与量単位形態とは、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を各単位が含む、処置すべき対象に対する単位投与量として適した物理的に離散した単位を意味する。本発明の投与量単位形態の仕様は、融合タンパク質の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果によって規定され、それに直接依存する。医薬組成物は、投与のための指示書とともに、容器、パックまたはディスペンサーに含まれ得る。

ＩＩＩ．処置方法
本発明の特定の面は、本明細書に記載の融合タンパク質を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における疾患または病状を処置する方法に関する。本発明のいくつかの面は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における癌を処置する方法に関する。本発明のいくつかの面は、それを必要とする対象において癌細胞を致死させる方法であって、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質の有効量を対象に投与することを含む方法に関する。

本発明の特定の面は、それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、対象に有効量のＩＬ－１０融合タンパク質を少なくとも約７日の投与間隔で投与することを含み、ここでＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０ポリペプチドおよび第２のポリペプチド（これはアルブミンポリペプチドまたはＦｃポリペプチドを含む）を含む方法に関する。本発明の特定の面は、それを必要とする対象における癌細胞の細胞致死の方法であって、対象に有効量のＩＬ－１０融合タンパク質を少なくとも約７日の投与間隔で投与することを含み、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０ポリペプチドおよびアルブミンポリペプチドまたはＦｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む方法に関する。ある面において、第２のポリペプチドは、アルブミンポリペプチドである。ある面において、第２のポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドである。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、リンカーをさらに含む。

ある面において、ＩＬ－１０ポリペプチドおよびＦｃポリペプチドを含む本明細書に記載の融合タンパク質は、ヒト対象に投与したとき、Ｆｃポリペプチドと融合していないＩＬ－１０（例えば、野生型ヒトＩＬ－１０）よりも長い半減期を有する。ある面において、融合タンパク質の半減期は、Ｆｃポリペプチドと融合していないＩＬ－１０（例えば、野生型ヒトＩＬ－１０）よりも少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、または少なくとも約４０倍長い。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、Ｆｃ－ＩＬ－１０融合タンパク質である。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０－Ｆｃ融合タンパク質である。

本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質の半減期は、他のＩＬ－１０タンパク質の半減期よりも長いので、対象が経験する臨床的利益は、他の既知のＩＬ－１０タンパク質よりも長い持続時間を有する。その結果、本明細書に記載の融合タンパク質は、他の既知のＩＬ－１０タンパク質よりも少ない頻度で、例えば、長い投与間隔で、投与することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約７日～少なくとも約２８日、少なくとも約７日～少なくとも約２１日、少なくとも約７日～少なくとも約１４日、少なくとも約１０日～少なくとも約２８日、少なくとも約１０日～少なくとも約２１日、少なくとも約１０日～少なくとも約１４日、少なくとも約１４日～少なくとも約２８日、少なくとも約１４日～少なくとも約２１日、または少なくとも約２１日～少なくとも約２８日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約７日～少なくとも約１４日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１４日～少なくとも約２８日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１４日～少なくとも約２１日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２１日～少なくとも約２８日の投与間隔で投与される。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約１５日、少なくとも約１６日、少なくとも約１７日、少なくとも約１８日、少なくとも約１９日、少なくとも約２０日、少なくとも約２１日、少なくとも約２２日、少なくとも約２３日、少なくとも約２４日、少なくとも約２５日、少なくとも約２６日、少なくとも約２７日、少なくとも約２８日、少なくとも約２９日、または少なくとも約３０日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約７日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約８日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約９日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１０日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１１日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１２日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１３日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１４日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１５日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１６日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１７日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１８日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約１９日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２０日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２１日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２２日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２３日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２４日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２５日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２６日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２７日の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約２８日の投与間隔で投与される。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１週間に１回以下、２週間に１回以下、３週間に１回以下、または４週間に１回以下投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、２週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、３週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、４週間に１回以上投与されない。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１ヶ月に１回以上投与されることはない。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約１週間に１回、約２週間に１回、約３週間に１回、約４週間に１回、約５週間に１回、約６週間に１回、約７週間に１回、または約８週間に１回、投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１週間に１回程度投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約３週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約４週間に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約１ヶ月に１回投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２ヶ月に１回投与される。

本明細書におけるＩＬ－１０融合タンパク質の開示は、単回投与または複数回投与として投与することができる。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、単回投与として投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質の有効量は、本質的に単回投与からなるか、または単回投与からなる。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、１週間に１回または２週、３週、４週、５週、６週、７週もしくは８週間毎に１回、０．００１ｍｇ／ｋｇ～１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、１週間に１回または２週、３週もしくは４週間毎に１回、０．００２ｍｇ／ｋｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇまでの範囲の用量で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．２ｍｇ／ｋｇまでの範囲の用量で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約０．１８ｍｇ／ｋｇ、約０．１８ｍｇ／ｋｇ～約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約０．３ｍｇ／ｋｇ、または約０．３ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇまでの範囲の用量で投与される。他の面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．００６ｍｇ／ｋｇ、約０．００７ｍｇ／ｋｇ、約０．００８ｍｇ／ｋｇ、約０．００９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１１ｍｇ／ｋｇ、約０．１２ｍｇ／ｋｇ、約０．１３ｍｇ／ｋｇ、約０．１４ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１６ｍｇ／ｋｇ、約０．１７ｍｇ／ｋｇ、約０．１８ｍｇ／ｋｇ、約０．１９ｍｇ／ｋｇ、約０．２０ｍｇ／ｋｇ、約０．２１ｍｇ／ｋｇ、約０．２２ｍｇ／ｋｇ、約０．２３ｍｇ／ｋｇ、約０．２４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２６ｍｇ／ｋｇ、約０．２７ｍｇ／ｋｇ、約０．２８ｍｇ／ｋｇ、約０．２９ｍｇ／ｋｇ、約０．３０ｍｇ／ｋｇ、約０．３１ｍｇ／ｋｇ、約０．３２ｍｇ／ｋｇ、約０．３３ｍｇ／ｋｇ、約０．３４ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ、約０．３８ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇ体重を、１週間に１回または２週、３週、４週もしくは８週間毎に１回、投与される。

他の面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１１ｍｇ／ｋｇ、約０．１２ｍｇ／ｋｇ、約０．１３ｍｇ／ｋｇ、約０．１４ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１６ｍｇ／ｋｇ、約０．１７ｍｇ／ｋｇ、約０．１８ｍｇ／ｋｇ、約０．１９ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．２１ｍｇ／ｋｇ、約０．２２ｍｇ／ｋｇ、約０．２３ｍｇ／ｋｇ、約０．２４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２６ｍｇ／ｋｇ、約０．２７ｍｇ／ｋｇ、約０．２８ｍｇ／ｋｇ、約０．２９ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇまたは約０．５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で、２週間毎に１回投与される。他の面では、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１１ｍｇ／ｋｇ、約０．１２ｍｇ／ｋｇ、約０．１３ｍｇ／ｋｇ、約０．１４ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１６ｍｇ／ｋｇ、約０．１７ｍｇ／ｋｇ、約０．１８ｍｇ／ｋｇ、約０．１９ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．２１ｍｇ／ｋｇ、約０．２２ｍｇ／ｋｇ、約０．２３ｍｇ／ｋｇ、約０．２４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２６ｍｇ／ｋｇ、約０．２７ｍｇ／ｋｇ、約０．２８ｍｇ／ｋｇ、約０．２９ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、または約０．５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で、３週間毎に１回投与される。他の面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１１ｍｇ／ｋｇ、約０．１２ｍｇ／ｋｇ、約０．１３ｍｇ／ｋｇ、約０．１４ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１６ｍｇ／ｋｇ、約０．１７ｍｇ／ｋｇ、約０．１８ｍｇ／ｋｇ、約０．１９ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．２１ｍｇ／ｋｇ、約０．２２ｍｇ／ｋｇ、約０．２３ｍｇ／ｋｇ、約０．２４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２６ｍｇ／ｋｇ、約０．２７ｍｇ／ｋｇ、約０．２８ｍｇ／ｋｇ、約０．２９ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇまたは約０．５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で４週間毎に１回投与される。他の面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１１ｍｇ／ｋｇ、約０．１２ｍｇ／ｋｇ、約０．１３ｍｇ／ｋｇ、約０．１４ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１６ｍｇ／ｋｇ、約０．１７ｍｇ／ｋｇ、約０．１８ｍｇ／ｋｇ、約０．１９ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．２１ｍｇ／ｋｇ、約０．２２ｍｇ／ｋｇ、約０．２３ｍｇ／ｋｇ、約０．２４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２６ｍｇ／ｋｇ、約０．２７ｍｇ／ｋｇ、約０．２８ｍｇ／ｋｇ、約０．２９ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、または約０．５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で約６週間毎に１回投与される。一面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、約１週間に１回投与される。一面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間に１回、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約３週間に１回、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約４週間に１回、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

本発明に有用なＩＬ－１０融合タンパク質は、一定用量として投与され得る。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇ、約０．５ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約２ｍｇ～約５０ｍｇ、約２ｍｇ～約４０ｍｇ、約２ｍｇ～約３０ｍｇ、約２ｍｇ～約２０ｍｇ、約２ｍｇ～約１５ｍｇ、約２ｍｇ～約１０ｍｇ、約３ｍｇ～約３０ｍｇ、約３ｍｇ～約２０ｍｇ、約３ｍｇ～約１５ｍｇ、約３ｍｇ～約１０ｍｇ、約４ｍｇ～約３０ｍｇ、約４ｍｇ～約２０ｍｇ、約４ｍｇ～約１５ｍｇ、または約４ｍｇ～約１０ｍｇの範囲の一定用量で投与される。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．５ｍｇ～約１ｍｇ、約１ｍｇ～約２ｍｇ、約２ｍｇ～約３ｍｇ、約３ｍｇ～約４ｍｇ、約４ｍｇ～約５ｍｇ、約５ｍｇ～約６ｍｇ、約６ｍｇ～約７ｍｇ、約７ｍｇ～約８ｍｇ、約８ｍｇ～約９ｍｇ、約９ｍｇ～約１０ｍｇ、約１０ｍｇ～約１１ｍｇ、約１１ｍｇ～約１２ｍｇ、約１２ｍｇ～約１３ｍｇ、約１３ｍｇ～約１４ｍｇ、約１４ｍｇ～約１５ｍｇ、約１５ｍｇ～約１６ｍｇ、約１６ｍｇ～約１７ｍｇ、約１７ｍｇ～約１８ｍｇ、約１８ｍｇ～約２０ｍｇ、または約２０ｍｇ～約２５ｍｇの範囲の一定用量で投与される。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約０．１ｍｇ～約０．８ｍｇ、約０．８ｍｇ～約２ｍｇ、約２ｍｇ～約５ｍｇ、約５ｍｇ～約１０ｍｇ、約１０ｍｇ～約１５ｍｇ、約１５ｍｇ～約２０ｍｇ、約２０ｍｇ～約２５ｍｇ、約２５ｍｇ～約３０ｍｇ、約３０ｍｇ～約３５ｍｇ、約３５ｍｇ～約４０ｍｇ、約４０ｍｇ～約４５ｍｇ、約４５ｍｇ～約５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約６０ｍｇ、約６０ｍｇ～約１００ｍｇの範囲の一定用量で投与される。

一面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、少なくとも約０．５ｍｇ、少なくとも約１ｍｇ、少なくとも約２ｍｇ、少なくとも約３ｍｇ、少なくとも約４ｍｇ、少なくとも約５ｍｇ、少なくとも約６ｍｇ、少なくとも約７ｍｇ、少なくとも約８ｍｇ、少なくとも約９ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、少なくとも約１１ｍｇ、少なくとも約１２ｍｇ、少なくとも約１３ｍｇ、少なくとも約１４ｍｇ、少なくとも約１５ｍｇ、少なくとも約１６ｍｇ、少なくとも約１７ｍｇ、少なくとも約１８ｍｇ、少なくとも約１９ｍｇ、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約２１ｍｇ、少なくとも約２２ｍｇ、少なくとも約２３ｍｇ、少なくとも約２４ｍｇ、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約２６ｍｇ、少なくとも約２７ｍｇ、少なくとも約２８ｍｇ、または少なくとも約２９ｍｇ、少なくとも約３０ｍｇ、少なくとも約３５ｍｇ、少なくとも約４０ｍｇ、少なくとも約４５ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、または少なくとも約６０ｍｇの一定用量で、約１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週または１０週間の投与間隔で投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間毎に１回、一定用量として投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約３週間毎に１回、一定用量として投与される。ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約４週間毎に１回、一定用量として投与される。

ある面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週、３週または４週間毎に１回、約１ｍｇの一定用量として投与される。他の面では、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間、３週間または４週間毎に約１回、約５ｍｇの一定用量として投与される。他の面では、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間、３週間または４週間に１回、約１０ｍｇの一定用量として投与される。他の面では、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間、３週間または４週間毎に１回、約１５ｍｇの一定用量として投与される。特定の面において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、約２週間、３週間または４週間に１回、約２０ｍｇの一定用量として投与される。

ＩＩＩ．Ａ．癌の処置方法
本発明の特定の面は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質を投与することを含む、それを必要とする対象における疾患または病状を処置する方法に関する。ある面において、疾患または病状は、癌を含む。本明細書に記載の組成物および方法は、当技術分野において既知の何れかの癌を処置するために用いられ得る。ある面において、癌は腫瘍を含む。ある面において、癌は固形腫瘍を含む。ある面において、癌は、血液ベースの癌、例えば、白血病またはリンパ腫を含む。

ある面において、癌は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸癌、腎臓癌、明細胞癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、前立腺癌、ホルモン抵抗性前立腺腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、膠芽腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞癌（hepatocellular carcinoma）、乳癌、大腸癌、頭頸部癌（または癌腫）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣまたはＳＣＣＨＮ）、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、黒色腫、転移性悪性黒色腫、皮膚または眼内悪性黒色腫、中皮腫、骨腫瘍、皮膚癌、子宮体癌、肛門部癌、精巣癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰部癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、副甲状腺癌、副腎腺癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、ＣＮＳ原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、アスベストによって誘発されるものを含む環境誘発癌、ウイルス関連またはウイルス起源の癌、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）関連またはヒト乳頭腫ウイルス起源の腫瘍、および前記癌の組合せが挙げられる。

ある面において、癌は、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤色白血病、巨核球性白血病、分離顆粒球性肉腫、クロロマ、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫; 末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性胸水リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系造血性腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）、ウォルデンストームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（低悪性骨髄腫）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫；および、これらの癌の何れかの組合せから選択される。

特定の面において、癌は、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、胃癌、ＨＣＣ、ＳＣＣＨＮ、および前記癌の何れかの組合せから選択される。ある面において、癌は、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、結腸癌、ＳＣＬＣ、中皮腫、肝細胞癌、前立腺癌、多発性骨髄腫、およびこれらの癌の何れかの組合せから選択される。ある面において、癌はＲＣＣを含む。ある面において、癌はＮＳＣＬＣを含む。ある面において、癌は胃癌を含む。ある面において、癌はＨＣＣを含む。ある面において、癌はＳＣＣＨＮを含む。ある面において、癌は黒色腫を含む。ある面において、癌はリンパ腫を含む。ある面において、癌は白血病を含む。ある面において、癌は膀胱癌を含む。ある面において、癌は膵臓癌を含む。ある面において、癌は結腸癌を含む。ある面において、癌はＳＣＬＣを含む。ある面において、癌は中皮腫を含む。ある面において、癌は肝細胞癌を含む。ある面において、癌は前立腺癌を含む。ある面において、癌は多発性骨髄腫を含む。

ある面において、癌は難治性である。ある面において、癌は再発性である。ある面において、癌は転移性である。ある面において、癌は進行性である。ある面において、癌は局所的に進行している。

ある面において、対象は、癌を処置するために以前に治療を受けた。ある面において、以前の療法は、特定の癌の処置のための標準的な治療法であった。ある面において、以前の療法は、免疫療法、化学療法、またはそれらの組合せを含む。ある面において、以前の療法は、自家幹細胞移植を含む。ある面において、以前の療法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）療法を含む。ある面において、以前の療法は、ステロイド、細胞毒性剤、免疫調節剤またはそれらの何れかの組合せを含む。

ある面において、対象は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、または少なくとも１０個の以前の療法を受けた。

ＩＩＩ．Ｂ．組合せ療法
本発明の特定の面において、方法は、第２の治療剤、例えば第２の抗癌療法と組み合わせて、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む。ある面において、第２の治療剤は、免疫療法、化学療法、放射線療法、外科手術、自然免疫細胞を活性化する薬剤、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を増強する薬剤、ならびにそれらの何れかの組合せから選択され得る。ある面において、第２の治療剤は、例えば、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＣＤ９６、グルココルチコイド誘導型ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、およびヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、プログラムされた細胞死－１（ＰＤ－１）、プログラムされた細胞死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＴＬＡ－４、ＢおよびＴリンパ球アテヌーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムシンドメイン－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ１６０、ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制剤（ＶＩＳＴＡ）、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２、ＳＬＡＭＦ７、ＢＣＭＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＣＲ８およびそれらの何れかの組合せから選択されるタンパク質と特異的に結合する、有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

ある面において、免疫療法は、チェックポイント阻害剤などの免疫モジュレーターを投与することを含む。当技術分野で知られている何れかの免疫モジュレーターを、本明細書に記載の方法で用いることができる。ある面において、チェックポイント阻害剤は、１以上のチェックポイントタンパク質の活性を調節する、すなわち、阻止、阻害、低減または増加させる何れかの試薬である。ある面において、チェックポイントタンパク質は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－８、ＩＬ－２、ＣＤ９６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＧＩＴＲおよびそれらの何れかの組合せからなる群より選択される。ある面において、チェックポイント阻害剤またはアゴニストは、ＰＤ－１の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＮＫＧ２ａの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＩＣＯＳの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ１３７の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＴＧＦβの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＩＬ－８の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＩＬ－２の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ９６の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ４の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、Ｆａｓリガンドの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＸＣＲ４の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、メソセリンの活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ２７の活性を調節する。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＧＩＴＲの活性を調節する。

何れかのチェックポイント阻害剤を、本明細書に記載の方法で用いることができる。ある面において、チェックポイント阻害剤は低分子である。ある面において、チェックポイント阻害剤はタンパク質である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１を特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＮＫＧ２ａを特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＩＣＯＳと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ１３７と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＫＩＲと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＴＧＦβと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＩＬ－８と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、IL-２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ９６と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、Ｆａｓリガンドと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＸＣＲ４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、メソセリンと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ２７と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＧＩＴＲと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢを特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＣＣＲ８と特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。ある面において、チェックポイント阻害剤は、ＢＣＭＡと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。

ある面において、対象は併用療法剤を投与され、例えば、対象は本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質およびチェックポイント阻害剤を投与される。ある面において、対象は、併用療法剤を投与され、例えば、対象は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体を投与される。ある面において、対象は、併用療法剤を投与され、例えば、対象は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与される。ある面において、対象は、併用療法剤を投与され、例えば、対象は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質および抗ＣＴＬＡ－４抗体を投与される。ある面において、対象は、併用療法剤を投与され、例えば、対象は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質および抗ＬＡＧ－３抗体を投与される。ある面において、対象は、併用療法剤、例えば、対象が（i）本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、（ii）抗ＰＤ－１抗体、および（iii）抗ＣＴＬＡ－４抗体を投与される。ある面において、対象は、併用療法剤を投与され、例えば、対象は、（i）本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、（ii）抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および（iii）抗ＣＴＬＡ－４抗体を投与される。併用療法における抗癌剤は、同時または順次、何れかの順序で投与され得る。ある面において、対象は、さらなる抗癌療法、例えば、化学療法、放射線療法、ＣＡＲ－Ｔ療法、遺伝子療法、および／または外科手術をさらに投与される。

ＩＩＩ．Ｂ．１．本発明に有用な抗ＰＤ－１抗体
当技術分野で知られている抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に記載の組成物および方法において使用することができる。ＰＤ－１に高親和性で特異的に結合する様々なヒトモノクローナル抗体が、米国特許第８，００８，４４９号に開示されている。米国特許第８，００８，４４９号に開示された抗ＰＤ－１ヒト抗体は、以下の特性のうちの１以上を示すことが証明されている：(a）Biacoreバイオセンサーシステムを用いた表面プラズモン共鳴によって決定される１×１０^－７M以下のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する；（b）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；（c）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増大する；（d）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン－γ産生を増大する；(e）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる；（f）ヒトＰＤ－１およびカニクイザルＰＤ－１に結合する；（g）ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合を阻害する；（h）抗原特異的メモリー応答を刺激する；（i）抗体応答を刺激する；および、（j）インビボで腫瘍細胞の増殖を阻害する。本発明で使用可能な抗ＰＤ－１抗体には、ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、上記の特性のうち少なくとも１つ、ある面において、少なくとも５つを示すモノクローナル抗体が含まれる。

他の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，１６８，７５７号および同第８，３５４，５０９号、米国公開番号２０１６／０２７２７０８、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２００８／１５６７１２、ＷＯ２０１５／１１２９００、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１５／１１２８００、ＷＯ２０１４／２０６１０７、ＷＯ２０１５／３５６０６、ＷＯ２０１５／０８５８４７、ＷＯ２０１４／１７９６６４、ＷＯ２０１７／０２０２９１、ＷＯ２０１７／０２０８５８、ＷＯ２０１６／１９７３６７、ＷＯ２０１７／０２４５１５、ＷＯ２０１７／０２５０５１、ＷＯ２０１７／１２３５５７、ＷＯ２０１６／１０６１５９、ＷＯ２０１４／１９４３０２、ＷＯ２０１７／０４０７９０、ＷＯ２０１７／１３３５４０、ＷＯ２０１７／１３２８２７、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１０６０６１、ＷＯ２０１７／１９８４６、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５およびＷＯ２０１７／１３３５４０に記載されており、それらは各々、引用によりその内容全体を本明細書中に包含される。

ある面において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ（OPDIVO(登録商標)）、５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６およびＯＮＯ－４５３８としても知られる）、ペムブロリズマブ（Merck；KEYTRUDA(登録商標)、ランブロリズマブ、およびＭＫ－３４７５としても知られる；ＷＯ２００８／１５６７１２参照）、ＰＤＲ００１（Novartis；ＷＯ２０１５／１１２９００参照）、ＭＥＤＩ－０６８０（AstraZeneca；ＡＭＰ－５１４としても知られている；ＷＯ２０１２／１４５４９３参照）、セミプリマブ（Regenon；ＲＥＧＮ－２８１０としても知られている；ＷＯ２０１５／１１２８００参照）、ＪＳ００１（TAIZHOU JUNSHI PHARMA；トリパリマブとしても知られている；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)）、ＢＧＢ－Ａ３１７（Beigene；チスレリズマブとしても知られる；ＷＯ２０１５／３５，６０６およびＵＳ２０１５／００７９１０９参照）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Jiangsu Hengrui Medicine；ＳＨＲ－１２１０としても知られている；ＷＯ２０１５／０８５８４７；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)）、ＴＳＲ－０４２（Tesaro Biopharmaceutical；ＡＮＢ０１１としても知られている；ＷＯ２０１４／１７９６６４参照）、ＧＬＳ－０１０（Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals；ＷＢＰ３０５５としても知られている；Si-Yang Liu et al, J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)）、ＡＭ－０００１（Armo）、ＳＴＩ－１１１０（Sorrento Therapeutics；ＷＯ２０１４／１９４３０２参照）、ＡＧＥＮ２０３４（Agenus；ＷＯ２０１７／０４０７９０参照）、ＭＧＡ０１２（Macrogenics；ＷＯ２０１７／１９８４６参照）、ＢＣＤ－１００（Biocad；Kaplon et al., mAbs 10(2):183-203 (2018)、およびＩＢＩ３０８ (Innovent; ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５、およびＷＯ２０１７／１３３５４０参照)からなる群より選択される。

一面において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブは、完全ヒト型ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害抗体であり、これはＰＤ－１リガンド（ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）の相互作用を選択的に阻害し、抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を阻害する（米国特許第８，００８，４４９号）。

別の面において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号および同第８，９００，５８７号に記載されている。

本明細書に記載の組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－１抗体としては、ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、本明細書に記載の何れかの抗ＰＤ－１抗体、例えばニボルマブとヒトＰＤ－１への結合について交差競合する単離抗体が挙げられる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号および第８，７７９，１０５号；ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照のこと）。ある面において、抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１抗体の何れか、例えばニボルマブと同じエピトープを結合する。交差競合抗体は、Biacore分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的なＰＤ－１結合アッセイにおいてニボルマブと交差競合する能力に基づいて容易に同定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照）。

特定の面において、ヒトＰＤ－１への結合についてヒトＰＤ－１抗体であるニボルマブと交差競合する、または同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒトに投与するとき、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、人工抗体(engineered antibody)またはヒト化抗体もしくはヒト抗体である。本明細書に記載の組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－１抗体はまた、上記抗体の抗原結合部分を含む。

ある面において、抗ＰＤ－１抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎または８週間毎に１回投与され、例えば、２、３または４週間毎に１回、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０．０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。他の面において、抗ＰＤ－１抗体は、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、２週間毎に１回投与される。他の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、約３週間毎に１回、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一面において、抗ＰＤ－１抗体は、約３週間に毎１回、約５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。別の面において、抗ＰＤ－１抗体、例えば、ニボルマブは、約２週間毎に１回、約１ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。他の面において、抗ＰＤ－１抗体、例えば、ペムブロリズマブは、約３週間毎に１回、約２ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

本発明に有用な抗ＰＤ－１抗体は、一定用量として投与され得る。ある面において、抗ＰＤ－１抗体は、約１００ｍｇから約１０００ｍｇ、約１００ｍｇから約９００ｍｇ、約１００ｍｇから約８００ｍｇ、約１００ｍｇから約７００ｍｇ、約１００ｍｇから約６００ｍｇ、約１００ｍｇから約５００ｍｇ、約２００ｍｇから約１０００ｍｇ、約２００ｍｇから約９００ｍｇ、約２００ｍｇから約８００ｍｇ、約２００ｍｇから約７００ｍｇ、約２００ｍｇから約６００ｍｇ、約２００ｍｇから約５００ｍｇ、約２００ｍｇから約４８０ｍｇ、または約２４０ｍｇから約４８０ｍｇの一定用量で投与される。一面において、抗ＰＤ－１抗体は、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２２０ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約２６０ｍｇ、少なくとも約２８０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３２０ｍｇ、少なくとも約３４０ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約３８０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約４２０ｍｇ、少なくとも約４４０ｍｇ、少なくとも約４６０ｍｇ、少なくとも約４８０ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇ、少なくとも約５２０ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、少なくとも約５５０ｍｇ、少なくとも約５６０ｍｇ、少なくとも約５８０ｍｇ、少なくとも約６００ｍｇ、少なくとも約６２０ｍｇ、少なくとも約６４０ｍｇ、少なくとも約６６０ｍｇ、少なくとも約６８０ｍｇ、少なくとも約７００ｍｇ、または少なくとも約７２０ｍｇの一定用量で、約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間または１０週間の投与間隔で投与される。別の面において、抗ＰＤ－１抗体は、約２００ｍｇ～約８００ｍｇ、約２００ｍｇ～約７００ｍｇ、約２００ｍｇ～約６００ｍｇ、約２００ｍｇ～約５００ｍｇの一定用量として、約１週間、２週間、３週間または４週間の投与間隔で投与される。

ある面において、抗ＰＤ－１抗体は、約３週間毎に１回、約２００ｍｇの一定用量として投与される。他の面では、抗ＰＤ－１抗体は、約２週間毎に１回、約２００ｍｇの一定用量として投与される。他の面では、抗ＰＤ－１抗体は、約２４０ｍｇの一定用量として、約２週間毎に１回投与される。特定の面において、抗ＰＤ－１抗体は、約３週間に１回、約４８０ｍｇの一定用量として投与される。特定の面において、抗ＰＤ－１抗体は、約４週間毎に１回、約４８０ｍｇの一定用量として投与される。

ある面において、ニボルマブは、約２週間に１回、約２４０ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、ニボルマブは、約３週間に１回、約２４０ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、ニボルマブは、約２週間に１回、約３６０ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、ニボルマブは、約３週間に１回、約３６０ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、ニボルマブは、約４週間に１回、約４８０ｍｇの一定用量で投与される。

ある面において、ペムブロリズマブは、約２週間に１回、約２００ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、ペムブロリズマブは、約３週間に１回、約２００ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、ペムブロリズマブは、約４週間に１回、約４００ｍｇの一定用量で投与される。

ＩＩＩ．Ｂ．２．本発明に有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体
特定の面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載の方法の何れかにおいて抗ＰＤ－１抗体に置き換えられる。当技術分野で公知の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本発明の組成物および方法において用いられ得る。本発明の組成物および方法において有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体の例としては、米国特許第９，５８０，５０７号に記載の抗体が挙げられる。米国特許第９，５８０，５０７号に記載の抗ＰＤ－Ｌ１ヒトモノクローナル抗体は、以下の特性の１以上を示すことが証明されている：（a）Biacore バイオセンサーシステムを用いた表面プラズモン共鳴によって決定される、１×１０^－７Ｍ以下のＫＤでヒトＰＤ－Ｌ１に結合すること； (b) 混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させること；(c）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン－γ産生を増加させること；（d）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させること；（e）抗体応答を刺激すること；および、（f）Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞に対するＴ制御細胞の作用を逆転させること。本発明で使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記の特徴のうち少なくとも１つ、ある面において少なくとも５つを示すモノクローナル抗体を含む。

特定の面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５としても知られている；例えば、米国特許第７，９４３，７４３号およびＷＯ２０１３／１７３２２３参照）、アテゾリズマブ（Roche；TECENTRIQ(登録商標)としても知られる；ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６；ＵＳ８，２１７，１４９参照）、デュルバルマブ（AstraZeneca；IMFINZI(商標)、ＭＥＤＩ－４７３６として知られている；ＷＯ２０１１／０６６３８９参照）、アベルマブ（Pfizer；BAVENCIO(登録商標)、ＭＳＢ－００１０７１８Cとしても知られる；ＷＯ２０１３／０７９１７４参照）、ＳＴＩ－１０１４（Sorrento；ＷＯ２０１３／１８１６３４参照）、ＣＸ－０７２（Cytomx；ＷＯ２０１６／１４９２０１参照）、ＫＮ０３５（3D Med/Alphamab；Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017)参照）、ＬＹ３３０００５４（Eli Lilly Co.；例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６参照）、ＢＧＢ－Ａ３３３（BeiGene；Desai et al., JCO 36 (15suppl):TPS3113 (2018)）、およびＣＫ－３０１（Checkpoint Therapeutics；Gorelik et al., AACR:Abstract 4606 (Apr 2016)参照）からなる群より選択される。

特定の面において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（TECENTRIQ(登録商標））である。アテゾリズマブは、完全ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

特定の面において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ（IMFINZI(商標））である。デュルバルマブは、ヒトＩｇＧ１カッパモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

特定の面において、ＰＤ－Ｌ１抗体はアベルマブ（BAVENCIO(登録商標））である。アベルマブは、ヒトＩｇＧ１ラムダモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

開示された組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、本明細書に記載の何れかの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブとヒトＰＤ－Ｌ１との結合について交差競合する単離された抗体もまた挙げられる。ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載の何れかの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブと同じエピトープに結合する。交差競合抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的なＰＤ－Ｌ１結合アッセイにおいてアテゾリズマブおよび／またはアベルマブと交差競合するそれらの能力に基づいて容易に同定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照のこと）。特定の面において、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよび／またはアベルマブと、ヒトＰＤ－Ｌ１への結合について交差競合する、あるいはヒトＰＤ－Ｌ１抗体の同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象に投与するとき、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、人工抗体、またはヒト化抗体もしくはヒト抗体である。本発明の開示された組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体はまた、上記抗体の抗原結合部分を含む。

ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇから約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で、約２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間毎に１回、投与される。

ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、約３週間に１回投与される。他の面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、約２週間に１回投与される。

他の面において、本発明に有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、一定用量である。ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約２００ｍｇ～約１６００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１５００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１４００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１３００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１２００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１１００ｍｇ、約２００ｍｇ～約１０００ｍｇ、約２００ｍｇ～約９００ｍｇ、約２００ｍｇ～約８００ｍｇ、約２００ｍｇ～約７００ｍｇ、約２００ｍｇ～約６００ｍｇ、約７００ｍｇ～約１３００ｍｇ、約８００ｍｇ～約１２００ｍｇ、約７００ｍｇ～約９００ｍｇ、または約１１００ｍｇ～約１３００ｍｇの一定用量として投与される。ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３２０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約４８０ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇ、少なくとも約５６０ｍｇ、少なくとも約６００ｍｇ、少なくとも約６４０ｍｇ、少なくとも約７００ｍｇ、少なくとも約７２０ｍｇ、少なくとも約８００ｍｇ、少なくとも約８４０ｍｇ、少なくとも約８８０ｍｇ、少なくとも約９００ｍｇ、少なくとも約９６０ｍｇ、少なくとも約１０００ｍｇ、少なくとも約１０４０ｍｇ、少なくとも約１１００ｍｇ、少なくとも約１１２０ｍｇ、少なくとも約１２００ｍｇ、少なくとも約１２８０ｍｇ、少なくとも約１３００ｍｇ、少なくとも約１３６０ｍｇ、または少なくとも約１４００ｍｇの一定用量として、約１週間、２週間、３週間または４週間の投与間隔で投与される。ある面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約３週間毎に１回、約１２００ｍｇの一定用量で投与される。他の面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約２週間毎に１回、約８００ｍｇの一定用量で投与される。他の面において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、約２週間毎に１回、約８４０ｍｇの一定用量で投与される。

ある面において、アテゾリズマブは、約３週間に１回、約１２００ｍｇの一定用量として投与される。ある面において、アテゾリズマブは、約２週間に１回、約８４０ｍｇの一定用量として投与される。ある面において、アテゾリズマブは、約３週間に１回、約１２００ｍｇの一定用量として投与される。ある面において、アテゾリズマブは、約４週間に１回、約１６８０ｍｇの一定用量として投与される。

ある面において、アベルマブは、約８００ｍｇを約２週間に１回の一定用量として投与される。

ある面において、デュルバルマブは、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で約２週間に１回投与される。ある面において、デュルバルマブは、約２週間に１回、約８００ｍｇ／ｋｇの一定量として投与される。ある面において、デュルバルマブは、約３週間に１回、約１２００ｍｇ／ｋｇの一定用量として投与される。

ＩＩＩ．Ｂ．３．抗ＣＴＬＡ－４抗体
当技術分野で知られている抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本発明の組成物および方法において使用することができる。本発明の抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４とヒトＢ７受容体との相互作用を破壊するように、ヒトＣＴＬＡ－４に結合する。ＣＴＬＡ－４とＢ７との相互作用は、ＣＴＬＡ－４受容体を有するＴ細胞の不活性化をもたらすシグナルを伝達するため、相互作用の破壊は、そのようなＴ細胞の活性化を効果的に誘導、強化または延長し、それによって免疫応答を誘導、強化または延長する。

ＣＴＬＡ－４に高親和性で特異的に結合するヒトモノクローナル抗体は、米国特許第６，９８４，７２０号に開示されている。他の抗ＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第５，９７７，３１８号、第６，０５１，２２７号、第６，６８２，７３６号および第７，０３４，１２１号ならびに国際公開ＷＯ２０１２／１２２４４４、ＷＯ２００７／１１３６４８、ＷＯ２０１６／１９６２３７、およびＷＯ２０００／０３７５０４に記載されており、それらは各々、引用によりその内容全体が本明細書に包含される。米国特許第６，９８４，７２０号に記載の抗ＣＴＬＡ－４ヒトモノクローナル抗体は、以下の特性のうちの１以上を示すことが証明されている：(a）Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって決定される、少なくとも約１０^７Ｍ^－１、または約１０^９Ｍ^－１、または約１０^１０Ｍ^－１～１０^１１Ｍ^－１以上の平衡会合定数（Ｋａ）によって反映される結合親和性でヒトＣＴＬＡ－４に特異的に結合する；（ｂ）少なくとも約１０^３、約１０^４、または約１０^５ｍ^－１ｓ^－１の動力学的会合定数（ｋａ）；（ｃ）少なくとも約１０３、約１０４、または約１０５ｍ－１ｓ－１の動力学的解離定数（ｋｄ）；および、（ｄ）ＣＴＬＡ－４のＢ７－１（ＣＤ８０）およびＢ７－２（ＣＤ８６）への結合を阻害する。本発明に有用な抗ＣＴＬＡ－４抗体には、ヒトＣＴＬＡ－４に特異的に結合し、上記の特性のうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを示すモノクローナル抗体が含まれる。

特定の面において、ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（YERVOY(登録商標)、ＭＤＸ－０１０、１０Ｄ１としても知られている；米国特許第６，９８４，７２０）、ＭＫ－１３０８（Merck）、ＡＧＥＮ－１８８４（Agenus Inc.；ＷＯ２０１６／１９６２３７参照）、およびトレメリムマブ（AstraZeneca；チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６としても知られる；ＷＯ２０００／０３７５０４およびRibas、 Update Cancer Ther. 2(3): 133-39 (2007)を参照のこと)からなる群より選択される。ある面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体はイピリムマブである。

ある面において、ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書に記載の組成物および方法において使用するためのイピリムマブである。

ある面において、ＣＴＬＡ－４抗体はトレメリムマブである。

ある面において、ＣＴＬＡ－４抗体はＭＫ－１３０８である。

ある面において、ＣＴＬＡ－４抗体は、ＡＧＥＮ－１８８４である。

開示された組成物および方法において使用可能な抗ＣＴＬＡ－４抗体には、ヒトＣＴＬＡ－４に特異的に結合し、本明細書に記載の何れかの抗ＣＴＬＡ－４抗体、例えばイピリムマブおよび／またはトレメリムマブとヒトＣＴＬＡ－４の結合について交差競合する、単離された抗体もまた含まれる。ある面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書に記載の何れかの抗ＣＴＬＡ－４抗体、例えばイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと同じエピトープを結合する。交差競合抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的なＣＴＬＡ－４結合アッセイにおいてイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する能力に基づいて容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照のこと）。

特定の面において、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブとヒトＣＴＬＡ－４への結合について交差競合する、あるいはヒトＣＴＬＡ－４抗体と同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒトに投与するとき、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、人工抗体、またはヒト化抗体もしくはヒト抗体である。本発明の組成物および方法において使用可能な抗ＣＴＬＡ－４抗体はまた、上記抗体の抗原結合部分を含む。

ある面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間毎に１回、０．１ｍｇ／ｋｇから１０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で投与される。ある面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、３週間、４週間、５週間または６週間毎に１回、投与される。一面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、２週間、３週間、４週間または６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。別の面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、２週間、３週間、４週間または６週間毎に１回、１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。別の面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、２週間、３週間、４週間または６週間毎に１回、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

ある面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、一定用量として投与される。いくつかの態様において、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、約１０ｍｇから約１０００ｍｇ、約１０ｍｇから約９００ｍｇ、約１０ｍｇから約８００ｍｇ、約１０ｍｇから約７００ｍｇ、約１０ｍｇから約６００ｍｇ、約１０ｍｇから約５００ｍｇ、約５０ｍｇから約１０００ｍｇ、約５０ｍｇから約９００ｍｇ、約５０ｍｇから約８００ｍｇ、約５０ｍｇから約７００ｍｇ、約５０ｍｇから約６００ｍｇ、約５０ｍｇから約５００ｍｇ、約１００ｍｇから約４８０ｍｇ、または約２４０ｍｇから約４８０ｍｇの範囲の一定用量で投与される。一面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも約６０ｍｇ、少なくとも約８０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１４０ｍｇ、少なくとも約１６０ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２２０ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約２６０ｍｇ、少なくとも約２８０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３２０ｍｇ、少なくとも約３４０ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約３８０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約４２０ｍｇ、少なくとも約４４０ｍｇ、少なくとも約４６０ｍｇ、少なくとも約４８０ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇ、少なくとも約５２０ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、少なくとも約５５０ｍｇ、少なくとも約５６０ｍｇ、少なくとも約５８０ｍｇ、少なくとも約６００ｍｇ、少なくとも約６２０ｍｇ、少なくとも約６４０ｍｇ、少なくとも約６６０ｍｇ、少なくとも約６８０ｍｇ、少なくとも約７００ｍｇまたは少なくとも約７２０ｍｇの一定用量として投与される。別の面において、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間毎に１回、一定用量として投与される。

ある面において、イピリムマブは、約３週間に１回、約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。ある面において、イピリムマブは、約３週間に１回、約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。ある面において、イピリムマブは、約３週間に１回、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。ある面において、イピリムマブは、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、約１２週間に１回投与される。ある面において、イピリムマブは、４用量投与される。

ＩＩＩ．Ｂ．４．抗ＬＡＧ－３抗体
本発明で使用する、ＬＡＧ－３アンタゴニストとしては、ＬＡＧ－３結合剤、例えば、ＬＡＧ－３抗体、および可溶性ＬＡＧ－３ポリペプチド、例えば、ＬＡＧ－３の細胞外部分を含む融合タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。

ある面において、ＬＡＧ－３阻害剤は、可溶性ＬＡＧ－３ポリペプチド、例えば、ＭＨＣクラスＩＩに結合することができるＬＡＧ－３－Ｆｃ融合ポリペプチドである。

ある面において、ＬＡＧ－３アンタゴニストは、ＩＭＰ３２１（エフティラギモドα）を含む。

ある面において、ＬＡＧ－３アンタゴニストは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合フラグメント（“抗ＬＡＧ－３抗体”）である。

本発明での使用に適した抗ＬＡＧ－３抗体（またはそれに由来するＶＨ／ＶＬドメイン）は、当技術分野で周知の方法を用いて生成することができる。あるいは、技術的に認識された抗ＬＡＧ－３抗体を用いることができる。

ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒトモノクローナル抗体、またはその一部である。他の面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。

ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、リラトリマブ、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１３／４８９９９に記載のＢＭＳ－９８６０１６であり、その教示は、引用により本明細書中に包含される。

他の面において、抗体は、レラトリマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を有する。従って、一面において、抗体は、レラトリマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにレラトリマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の面において、抗体は、レラトリマブのＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む。ある面において、抗体は、抗ＬＡＧ－３抗体は、ヒトＬＡＧ－３への結合についてレラトリマブと交差競合する。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、レラトリマブと同じエピトープに結合する。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、レラトリマブのバイオシミラーである。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、ＬＡＧ－５２５、ＭＫ－４２８０、ＲＥＧＮ３７６７、ＴＳＲ－０３３、ＴＳＲ－０７５、Ｓｙｍ０２２、ＦＳ－１１８またはそれらの何れかの組合せである。何れかの当技術分野で認識された抗ＬＡＧ－３抗体を、本発明の治療方法において用いることができる。例えば、引用により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１１／０１５０８９２Ａ１に記載され、モノクローナル抗体２５Ｆ７（“２５Ｆ７”および“ＬＡＧ－３．１”とも知られている）と称される、抗ヒトＬＡＧ－３抗体が使用され得る。使用することができる他の当技術分野で認識された抗ＬＡＧ－３抗体には、ＵＳ２０１１／００７０２３に記載されたＩＭＰ７３１（Ｈ５Ｌ７ＢＷ）、ＷＯ２０１６０２８６７２に記載されたＭＫ－４２８０（２８Ｇ－１０）、Journal for ImmunoTherapy of cancer、（2016）Vol.4、Supp. Supplement 1 Abstract Number: P195に記載のREGN３７６７、WO２０１７/０１９８９４に記載のＢＡＰ０５０、ＩＭＰ－７０１（ＬＡＧ－５２５）、ａＬＡＧ３（０４１４）、ａＬＡＧ３（０４１６）、Ｓｙｍ０２２、ＴＳＲ－０３３、ＴＳＲ－０７５、ＸｍＡｂ２２８４１、ＭＧＤ０１３、ＢＩ７５４１１１、ＦＳ１１８、Ｐ１３Ｂ０２－３０、ＡＶＡ－０１７およびＧＳＫ２８３１７８１が含まれる。本発明において有用なこれらおよび他の抗ＬＡＧ－３抗体は、例えば、以下の文献に見出すことができる：ＵＳ１０，１８８，７３０、ＷＯ２０１６／０２８６７２、ＷＯ２０１７／１０６１２９、ＷＯ２０１７／０６２８８８、ＷＯ２００９／０４４２７３、ＷＯ２０１８／０６９５００、ＷＯ２０１６／１２６８５８、ＷＯ２０１４／１７９６６４、ＷＯ２０１６／２００７８２、ＷＯ２０１５／２００１１９、ＷＯ２０１７／０１９８４６、ＷＯ２０１７／１９８７４１、ＷＯ２０１７／２２０５５５、ＷＯ２０１７／２２０５６９、ＷＯ２０１８／０７１５００、ＷＯ２０１７／０１５５６０、ＷＯ２０１７／０２５４９８、ＷＯ２０１７／０８７５８９、ＷＯ２０１７／０８７９０１、ＷＯ２０１８／０８３０８７、ＷＯ２０１７／１４９１４３、ＷＯ２０１７／２１９９９５、ＵＳ２０１７／０２６０２７１、ＷＯ２０１７／０８６３６７、ＷＯ２０１７／０８６４１９、ＷＯ２０１８／０３４２２７、ＷＯ１８／１８５０４６、ＷＯ１８／１８５０４３、ＷＯ２０１８／２１７９４０、ＷＯ１９／０１１３０６、ＷＯ２０１８／２０８８６８およびＷＯ２０１４／１４０１８。これらの各文献の内容は、その全体が引用により本明細書中に包含される。ＬＡＧ－３への結合について当技術分野で認識されている抗体のいずれかと競合する抗体も使用可能である。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、本明細書に記載される、または当技術分野で公知の抗ＬＡＧ－３抗体と交差競合する、それと同じエピトープに結合する、またはそのバイオシミラーである。

ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は、約０．１ｍｇ／ｋｇから約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重の用量範囲で、約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間毎に１回、投与される。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間毎に１回、投与される。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は一定用量で投与される。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体は、約２０ｍｇから約２０００ｍｇの一定用量で投与される。一面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも約８０ｍｇまたは少なくとも約１６０ｍｇの一定用量として投与される。別の面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は、約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間毎に１回、一定用量で投与される。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は一定用量で投与される。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は、約８０ｍｇの一定用量で投与される。ある面において、抗ＬＡＧ－３抗体またはその抗原結合部分は、約１６０ｍｇの一定用量で投与される。

ＩＩＩ．Ｂ．５．さらなる抗癌療法剤
本発明の特定の面において、方法は、本明細書に記載のＩＬ－１０融合タンパク質およびさらなる抗癌療法剤を投与することを含む。さらなる抗癌療法剤は、本明細書に記載のように、対象における腫瘍の処置のために当技術分野で知られている何れかの療法剤、および／または何れかの標準療法を含み得る。ある面において、さらなる抗癌療法剤は、外科手術、放射線療法、化学療法、免疫療法またはそれらの何れかの組合せを含む。ある面において、さらなる抗癌療法剤は、本明細書に記載の何れかの化学療法剤を含む。ある面において、さらなる抗癌療法剤は、さらなる免疫療法剤を含む。ある面において、さらなる抗癌療法剤は、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＳＬＡＭＦ７、ＢＣＭＡ、ＣＣＲ８またはそれらの何れかの組合せに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を投与することを含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、化学療法剤を含む。ある面において、化学療法剤は、プロテアソーム阻害剤、ＩＭｉＤ、Ｂｅｔ阻害剤、ＩＤＯアンタゴニスト、白金ベースの化学療法剤、およびそれらの何れかの組合せから選択される。特定の面において、第２の抗癌療法剤は、白金ベースの化学療法剤を含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、ドキソルビシン（ADRIAMYCIN(登録商標)）、シスプラチン、カルボプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブチル（LEUKERAN(登録商標)）、シクロホスファミド（CYTOXAN(登録商標); NEOSAR(登録商標)）、レナリドマイド（REVLIMID(登録商標)）、ボルテゾミブ（VELCADE(登録商標)）、デキサメサゾン、ミトキサントロン、エトポシド、シタラビン、ベンダムスチン（TREANDA(登録商標)）、リツキシマブ（RITUXAN(登録商標)）、イホスファミド、フォリン酸（ロイコボリン）、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、オキサリプラチン（エロキサチン）、ＦＯＬＦＯＸ、パクリタキセル、ナノ粒子アルブミン結合（ｎａｂ）パクリタキセル（ABRAXANE(登録商標)）、ドセタキセル、ビンクリスチン（ONCOVIN(登録商標)）、フルダラビン（FLUDARA(登録商標)）、サリドマイド（THALOMID(登録商標)）、アレムツズマブ（CAMPATH(登録商標)、オファツムマブ（ARZERRA(登録商標)）、エベロリムス（AFINITOR(登録商標)、ZORTRESS(登録商標)）、カーフィルゾミブ（KYPROLISTM）、モノリモド、マリゾミブ、ポマリドマイド、リンロドスタット、バシルスカルメットゲリン、カボザンチニブ、ベンペガルデスロイキン、エロツズマブ、ダラツムマブ、およびこれらの何れかの組合せを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ドキソルビシン（ADRIAMYCIN(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、シスプラチンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、カルボプラチンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、硫酸ブレオマイシンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、カルムスチンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、クロラムブシル（LEUKERAN(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、シクロホスファミド（CYTOXAN(登録商標)；NEOSAR(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、レナリドマイド（REVLIMID(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ボルテゾミブ（VELCADE(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、デキサメサゾンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ミトキサントロンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、エトポシドを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、シタラビンを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ベンダムスチン（TREANDA(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、リツキシマブ（RITUXAN(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、イホスファミドを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、フォリン酸（ロイコボリン）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、フルオロウラシル（５－ＦＵ）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、オキサリプラチン（エロキサチン）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ＦＯＬＦＯＸを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、パクリタキセルを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ドセタキセルを含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、ビンクリスチン（ONCOVIN(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、フルダラビン（FLUDARA(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、サリドマイド（THALOMID(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、アレムツズマブ（CAMPATH(登録商標)、オファツムマブ（ARZERRA(登録商標)））を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、エベロリムス（AFINITOR(登録商標)、ZORTRESS(登録商標)）を含む。ある面において、第２の抗癌療法剤は、カルフィルゾミブ（KYPROLISTM）を含む。

ある面において、第２の抗癌療法剤は、ペグ化ＩＬ－２、ＩＬ－１８およびＩＬ－１５から選択されるＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を増強する薬剤を含む。

以下の例は、例示のために提供されるものであり、限定するためのものではない。

実施例
実施例１．ＩＬ－１０およびＦｃ融合体
ヒトＩｇＧ１．３ｆＦｃドメイン（配列番号４）とＧｌｙ－Ｓｅｒリッチポリペプチドリンカー（ＧＧＧＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号４１）を融合させ、そしてそのＣ－末端に野生型ヒトＩＬ－１０（配列番号１）を融合させて、ＦｃおよびＩＬ－１０融合タンパク質を構築した（Ｆｃ－ＩＬ－１０、配列番号１４）（図１Ａおよび図１Ｂ）。また、ヒトＩｇＧ１．３ｆＦｃドメインと、Ｇｌｙ－ＳｅｒリッチポリペプチドリンカーをそのＮ末端に有する野生型ヒトＩＬ－１０を融合することにより、別の融合タンパク質を製造した（ＩＬ－１０－Ｆｃ、配列番号３３）。ＩｇＧ１．３ｆのＦｃドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能の低下をもたらすために選択され、一方リンカーは、ＩＬ－１０をＦｃドメインから分離して活性を高め、ＩＬ－１０がＦｃに結合した状態で機能的二量体を形成することを可能にする。Ｆｃ二量体を共有結合する２つの天然ジスルフィド結合は、低濃度および低ｐＨでのＩＬ－１０ホモ二量体ドメインの解離を防ぐのに役立つように保持されていた。野生型ヒトＩＬ－１０配列は、免疫原性リスクを最小化し、タンパク質の天然の機能（複数可）を最大化するために、さらなる改変なしに用いられた。

本明細書に記載の融合タンパク質は、当技術分野で知られている常套の手順を用いて発現させ、製造することができる。

実施例２．初代ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ分泌の誘導およびＮＫ細胞傷害性
初代ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞上のＦｃ－ＩＬ－１０によるＩＦＮγの誘導を、Perkin Elmer ＩＦＮγ ＡｌｐｈａＬＩＳＡ検出キットを用いて測定した。これは、健康なドナーからのヒト全血から、Lympholyte H（Ceadarlane）を用いた密度勾配遠心分離を用いてＰＢＭＣを単離して実施した。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット (Miltenyi)を用いてネガティブに分離した。単離したＣＤ８＋Ｔ細胞を、完全培地（ＡＩＭＶ培地（Gibco）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Gibco））中でプレート結合抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８により、３７℃にて、５％ＣＯ_２で７２時間刺激した。インキュベーション後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（Gibco）で洗浄し、完全培地に播種し、３７℃にて、５％ＣＯ_２で３時間静置した後、完全培地中のＦｃ－ＩＬ－１０または対照と２０Ｕ／ｍＬ Recombinant Human IL-2 （Peprotech）を併用してまたは併用せず、７２時間刺激した。上清を、Perkin Elmer IFNγ AlphaLISA検出キットを用いてＩＦＮγを分析した。組換えヒトＩＬ－１０、ペグ化ヒトＩＬ－１０（ＰＥＧ－ＩＬ－１０）およびＦｃ－ＩＬ－１０は全て、初代ＣＤ８＋Ｔ細胞によってＩＦＮγ分泌を誘導した（図２Ａ－２Ｂ）。

初代ヒトＮＫ細胞に対するＦｃ－ＩＬ－１０による細胞介在性細胞傷害の誘導を、Perkin Elmer DELFIA(登録商標) EuTDA細胞傷害試薬（Perkin Elmer）を用いて測定した。要するに、健康なドナーのヒト全血から密度勾配遠心法（Lympholyte H（Ceadarlane））を用いてＰＢＭＣを分離した。ヒト初代ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞分離キット（Miltenyi）を用いてネガティブ分離した。それとは別に、Ｋ５６２細胞にリガンドＴＤＡ（Perkin Elmer）を添加し、漏出を防ぐために２ｍＭプロベネシドで洗浄した。ＮＫ細胞を１０ｎＭのＩＬ－１０またはＦｃ－ＩＬ－１０で４８時間前処理した後、ＴＤＡ標識したＫ５６２標的細胞にＥ：Ｔ比２０：１または５：１で添加した。混合物を３７℃にて、５％ＣＯ_２で２時間インキュベートした。上清をユーロピウム溶液（Perkin Elmer）に加え、時間分解蛍光測定器（EnVision）で蛍光を測定した。測定されたシグナルは、溶解した細胞の量と直接的に相関している。細胞毒性を測定し、溶解パーセント（percentage lysis）としてプロットした。Ｆｃ－ＩＬ－１０で前処理したヒトＮＫ細胞は、Ｋ５６２標的殺傷アッセイにおいて細胞毒性の増加を示し（図２Ｃ－２Ｄ）、Ｆｃ－ＩＬ－１０がＮＫ介在細胞傷害性を増強することが示された。

実施例３．初代免疫細胞におけるＳＴＡＴ３のリン酸化
ヒトインビトロｐＳＴＡＴ３評価：ヒト全血中のＴ細胞（ＣＤ３＋）およびＢ細胞（ＣＤ１９＋）上のＦｃ－ＩＬ－１０によるＳＴＡＴ３リン酸化を、フローサイトメトリーを用いて測定した。フローサイトメトリーパネルは以下の通りである：ＣＤ３［ＵＣＨＴ１；Biolegend］、ＣＤ１９［ＨＩＢ１９； Biolegend］、ＳＴＡＴ３（ｐＹ７０５）［４/Ｐ－ＳＴＡＴ３； BD Biosciences］。すなわち、健康なドナーからのヒト全血をＦｃ－ＩＬ－１０または対照（ｈＩＬ－１０および５ＫＰＥＧ－ｈＩＬ－１０（５ＫＤＰＥＧに結合したヒトＩＬ－１０））で刺激した。予め温めたPhosflow Lyse/Fix buffer（BD biosciences）を添加して刺激を停止し、FAC Buffer（Dulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）(Gibco)および０．５％ウシ胎血清（ＦＢＳ）(Gibco))で洗浄した。サンプルを表面マーカー（ＣＤ３およびＣＤ１９）の抗体で染色し、Phosflow Perm Buffer III [BD Biosciences] で透過処理を行い、ｐＳＴＡＴ３抗体で内部マーカーを染色した。３０分間のインキュベーション後、サンプルを洗浄し、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁し、FACSCantoX^（商標）フローサイトメトリーで分析した。

マウスインビトロｐＳＴＡＴ３評価：Ｃ５７ＢＬ／６マウス脾臓細胞からのＴ細胞（ＣＤ３＋）およびＢ細胞（ＣＤ４５Ｒ＋）におけるｍＩｇＧ１－Ｄ２６５Ａ－Ｆｃ－（Ｇ４Ｓ）４－ｍＩＬ－１０（“ｍＦｃ－ＩＬ－１０”）（配列番号３７）によるＳＴＡＴ３リン酸化を、フローサイトメトリーを用いて測定した。フローサイトメトリーパネルは以下の通りである：ＣＤ３ [17A2; BD Biosciences]、ＣＤ４５Ｒ [RA3-6B2; BD Biosciences]およびＳＴＡＴ３（ｐＹ７０５）[4/P-STAT3; BD Biosciences]。要するに、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓細胞を機械的に破砕し、ＲＰＭＩ－１６４０ [Gibco]中に再懸濁し、７０μｍのフィルターで濾過した。赤血球の溶解後[Sigma]、脾臓細胞を９６ウェルＵ底プレートに播種し、ｍＦｃ－ｍＩＬ１０または対照で刺激した。冷ＦＡＣバッファー（Dulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ） [Gibco] ＋０．５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ） [Gibco] ）を各ウェルに添加して刺激を停止させた。その後、サンプルを固定（BD Cytofix［BD Biosciences］）し、Phosflow Perm Buffer III［BD Biosciences］）で透過性にし、非特異的結合のブロッキングを行い（BD mouse FC block［BD Biosciences］）、抗体（ＣＤ３、ＣＤ４５Ｒ、ｐＳＴＡＴ３）による染色を行った。３０分のインキュベーション後、サンプルを洗浄し、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁し、FACSCantoX^(商標)フローサイトメトリーで分析した。

Ｆｃ－ＩＬ－１０による処置は、初代免疫細胞における標的結合（engagement）およびシグナル伝達の近接した生物学的リードアウトとしてのＳＴＡＴ３のリン酸化の誘導をもたらし、ペグ化ＩＬ－１０と同等の効力を有していた（表５）。

実施例４．マウスおよびヒトＣＲＣ腫瘍組織片の転写解析
マウスから採取したマウスＣＲＣ腫瘍（ＭＣ３８）（ｎ＝３）プール、またはヒトＣＲＣ腫瘍（ｎ＝１）を小片に切り、培地に浸し、９６ウェルプレートのウェルに入れた（各処理につき８ウェル）。その後、プレートを３７℃に２時間保った。２５ｎｇ／ｍｌ（マウスＭＣ３８腫瘍用）または２０ｎｇ／ｍｌ（ヒトＣＲＣ腫瘍用）のＩＬ－２を新たに添加した１００ｕｌのリンパ球増殖培地を各ウェルに添加した。次いで、１ｎＭＦｃ－ＩＬ－１０（ヒトＣＲＣ腫瘍用）または０．１ｎＭｍＦｃ－ＩＬ－１０（マウスＭＣ３８腫瘍用）を添加した、または非添加の、１００μｌの培地を適切なウェルに加え、さらにプレートを３７℃にて７２時間インキュベートし、ウェルから上清を除去した。ＲＮＡ溶解バッファー（RNA Easy kit, Qiagenに従って準備）をそれぞれのウェルに添加して、組織および細胞からＲＮＡを採取した。RNA Easy kit（Qiagen）を用いて各サンプルからＲＮＡを分離し、逆転写キット（Invitrogen）を用いて定量したＲＮＡを用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡをＤＮａｓｅおよびＲＮａｓｅ不含有の水で４倍に希釈した。そして、希釈したｃＤＮＡを１複製物（replicate）あたり１μｌ用いて定量ＰＣＲを行い、ＣＤ８α、ＩＦＮγ、グランザイムＢ、ＧＡＰＤＨの遺伝子発現量を測定した。

Ｆｃ－ＩＬ－１０は、マウスおよびヒトの初代腫瘍組織片培養物の両方において、ＣＤ８α、グランザイムＢおよびＩＦＮγの発現をエクスビボで誘導した（図３Ａ－３Ｆを参照）。

実施例５．動物モデルにおける腫瘍の処置
雌のＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌマウスを繁殖させ、Charles River Laboratoriesから出荷した (ＭＣ３８－２５５、ＭＣ３８－３３７用)。雌のＢａｌｂ／ｃＡｎＮＨｓｄマウスを繁殖させ、Envigoから出荷した（ＣＴ２６－２１０、ＣＴ２６－２１３用）。マウスは、配送時に６から８週齢であり、到着後１ヶ月以内に移植された。

マウスは、１ｅ７細胞／ｍＬの濃度の単一細胞懸濁液中の１ｅ６生存ＭＣ－３８またはＣＴ－２６細胞の右脇腹への皮下注射による腫瘍移植を受けた。移植した日を０日目とした。移植された動物は、腫瘍体積によって選別され、腫瘍がおおよその目標開始サイズである１００ｍｍ^３に達した時点でグループに無作為化した。処方された化合物の投与を受けるマウスは、各投与の直前に個別に重量を測定した。投与量は、腹腔内（ＩＰ）注射の場合は１０ｍＬ／ｋｇ体重、皮下（ＳＣ）注射の場合は５ｍＬ／ｋｇ体重で投与した。

ｍＦｃ－ＩＬ１０曝露の薬物動態（ＰＫ）解析のために、全血１０μＬを尾静脈からテールニックで採血し、９０μＬのREXXIP Buffer A（Gyros）に入れ、直ちに湿氷上に置き、３，０００ｇ、４℃にて、３０分間遠心分離した。６５μＬの上清をプレーティングし、さらなる分析まで－２０℃で保存した。

腫瘍応答を、週２回のノギスによる腫瘍の測定によって決定した。動物は、個々の腫瘍が、その後の２回の測定で１cm^３の所定の目標サイズに達するまで、研究中とした。腫瘍体積［mm3］は、以下の式で計算した：
腫瘍体積［mm3］＝（長さ［mm］×幅［mm］²）／2

腫瘍が完全な退縮に達し、０ｍｍ^３を測定した動物を、腫瘍の再発について毎週モニタリングした。完全退縮を有する動物は、研究上の全ての腫瘍が完全に退縮するか、または腫瘍負荷に達した４５日後に無腫瘍（cured）とみなされた。

ｍＦｃ－ＩＬ－１０の単回投与で処置したＭＣ３８
ＭＣ－３８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌ雌マウスに、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇまたは０ｍｇ／ｋｇの平衡アイソタイプ対照ＭＯＰＣ－２１（マウスＩｇＧ１、BioXCell）と組み合わせた０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇｍＦｃ－ＩＬ－１０（合計１０ｍｇ／ｋｇ）を７日目に単独ＩＰ投与（ＱＤｘ１ＩＰ）した。個々の腫瘍体積を測定・記録した（１群あたりｎ＝１０）。腫瘍のないマウスの数は、それぞれ０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのｍＦｃ－ＩＬ－１０を投与した群から、０％（０／１０）、１０％（１／１０）、７０％（７／１０）、９０％（９／１０）、１００％（１０／１０）および１００％（１０／１０）をもたらした（図４Ａ－４Ｆ）。したがって、Ｆｃ－ｍＩＬ１０による単回用量単剤療法は、用量依存的な腫瘍効力を誘発する。

ｍＦｃ－ＩＬ－１０またはＰＥＧ－ｍＩＬ－１０の単回用量で処置したＭＣ－３８
ＭＣ－３８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌ雌マウスは、６日目に以下の単回ＩＰ投与を受けた：０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇのｍＦｃ－ＩＬ－１０、または同等のＩＬ－１０モル濃度の１０ｋＤＰＥＧ－ｍＩＬ１０をそれぞれ０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．１３ｍｇ／ｋｇ、０．４３ｍｇ／ｋｇ、１．２８ｍｇ／ｋｇもしくは４．２８ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇイソ型対照抗ＤＴｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａ。Ｆｃ－ｍＩＬ１０を投与された動物は、９．９ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇまたは０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗ＤＴｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａの組合せで（合計１０ｍｇ／ｋｇまで）バランスをとった。腫瘍量の有効性および腫瘍免疫モニタリングのために、１群あたり１０匹のマウス（ｎ＝１０）を割り付けた。ＰＫマイクロサンプリング用の血液は、免疫モニタリングに割り当てられた動物から採取した。

８０～１００％の無腫瘍率が、１．０ｍｇ／ｋｇと低いｍＦｃ－ＩＬ１０単回投与を受けた群で見いだされた（図５Ａ－５Ｆ）；しかし、１０ｋＤＰＥＧ－ｍＩＬ１０単回投与を受けた群のいずれにおいても無腫瘍動物は存在しなかった(図５Ｇ－５Ｋ)。したがって、Ｆｃ－ＩＬ－１０の単回低用量処置は、強力な効力を有する一方、ＰＥＧ－ＩＬ－１０の単回高用量は、最小限の効力であった。

免疫モニタリング
ＭＣ－３８マウスモデル由来の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）におけるｍＦｃ－ＩＬ－１０による、ｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａ抗ＰＤ１を含む、または含まないで、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）およびＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＮＫ１．１＋）の活性化を、フローサイトメトリーによりＫｉ６７およびグランザイムＢの陽性率として測定した。フローサイトメトリーパネルは以下の通りである：ＣＤ４５（３０－Ｆ１１； ThermoFisher)、ＣＤ３（１４５－２Ｃ１１； Biolegend）、ＣＤ４（ＲＭ４－５； Biolegend）、ＣＤ８（５３－６．７； ThermoFisher）、ＮＫ１．１（ＰＫ１３６； Biolegend）、Ｋｉ６７（１６Ａ８； Biolegend）、グランザイムＢ（ＮＧＺＢ； ThermoFisher）、ＩＦＮγ（ＸＭＧ１．２； Biolegend）および Viability dye (ThermoFisher)。Ｋｉ６７レベルは増殖と相関し、グランザイムＢレベルはＴＩＬにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化と相関している。

要するに、腫瘍を有するマウスからのマウスＣＲＣ腫瘍（ＭＣ－３８）を、処置の５日後に収集した。腫瘍は、Tumor dissociation kit（Miltenyi）を用いて酵素的に消化した。解離した細胞を７０μｍのフィルターでろ過し、タンパク質輸送阻害剤であるBrefeldin Aの存在下でＰＭＡおよびイオノマイシンで刺激し、Dulbeccoのリン酸緩衝塩水（ＤＰＢＳ）（Gibco）で洗浄し、致死細胞標識試薬（Viability dye）で染めた。その後、サンプルを非特異的結合のためにブロッキングし（BD mouse FC block, BD Biosciences）、外部マーカー（ＣＤ４５、ＣＤ８、ＮＫ１．１）を染色し、ＦＯＸｐ３／転写因子染色緩衝液セット (E-Bioscience) を用いて固定および透過化し、内部マーカー（ＣＤ３、Ｋｉ６７、グランザイムＢおよびＩＦＮγ)で染色した。３０分間のインキュベーション後、サンプルを洗浄し、ＦＡＣＳバッファー（Dulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（Gibco）＋０．５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Gibco））に再懸濁し、FACSCantoX(商標）フローサイトメトリーにより分析した。Ｆｃ－ＩＬ－１０で処理すると、ＴＩＬにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化および増殖が増加した（図６Ａ－６Ｂ）。

抗ＰＤ１との組合せでｍＦｃ－ＩＬ－１０で処置したＣＴ－２６：
ＣＴ－２６腫瘍を担持するＢａｌｂ／ＣＡｎＮＨｓｄ雌マウスに、７日目に、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇまたは１．０ｍｇ／ｋｇｍＦｃ－ＩＬ－１０をＱＤｘ１ＩＰ、または１．０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗ジフテリア毒素（抗ＤＴ）ｍＩｇＧ１をＱＤｘ１ＩＰ投与した。マウスはまた、７日目から開始して、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａ（“抗ＰＤ１”）、Ｑ４Ｄｘ３ＩＰ（４日に１回、３回腹腔内投与）、または１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗ＤＴｍＩｇＧ１、Ｑ４Ｄｘ３ＩＰを組み合わせて投与された。個々の腫瘍体積を測定し、記録した。

１群あたり８匹のマウス（ｎ＝８）を腫瘍体積の有効性のために割り当てた；収集日ごとに１群あたりｎ＝７を、１４日目、２１日目および２８日目（それぞれ、最初の投与の７日後、１４日後および２１日後）の特定の群の腫瘍免疫モニタのために割り当てた。ＰＫマイクロサンプリング用の血液は、免疫モニタリング用に割り当てられた動物から採取した。

腫瘍のないマウスの数は、対照群から０％；抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａと組み合わせたｍＦｃ－ＩＬ１０の０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇおよび１．０ｍｇ／ｋｇをそれぞれ受容した群から０％（０／８）、６２．５％（５／８）、１００％（８／８）、および１００ｍｇ／ｋｇ（８／８）が得られた（図７Ａ－７Ｅ）。

０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇのｍＦｃ－ＩＬ－１０でそれぞれ処置したＣＴ２６腫瘍保持マウスにおいて、循環中の検出可能な薬剤濃度は、種々の用量レベルにわたって投与１４日後にＬＬＯＱ以下であった（図７Ｆ）。

免疫モニタリング
ｍＦｃ－ＩＬ－１０＋ｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａ抗ＰＤ１（“抗ＰＤ１”）で処置したＣＴ２６マウスモデルからのＴＩＬにおける抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を、フローサイトメトリーを用いて測定した。フローサイトメトリーパネルは以下の通りである：ＣＤ４５（３０－Ｆ１１； ThermoFisher)、ＣＤ３（１４５－２Ｃ１１； Biolegend）、ＣＤ８（５３－６．７； ThermoFisher）、ＡＨ１四量体（ＭＢＬ）および死細胞標識試薬 (ThermoFisher)。

要するに、腫瘍を担持するマウスからのＣＴ２６腫瘍を、処置後７日、１４日および２１日目に収集し、Miltenyi GentleMAC Octo Dissociatorを用いて手動で解離させた。解離した細胞を７０μｍのフィルターで濾過し、タンパク質輸送阻害剤カクテルの存在下でＰＭＡおよびイオノマイシンで刺激した。次に、サンプルをDulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（Gibco）で洗浄し、死細胞標識試薬で染色した。サンプルは非特異的結合をブロッキングし（BD mouse FC block, BD Biosciences）、ＡＨ１四量体を染色した後、抗体（それぞれＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８に対して）と共にインキュベートした。３０分間のインキュベーション後、サンプルを洗浄し、ＦＡＣＳバッファー（Dulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（Gibco)＋０．５％牛胎仔血清（ＦＢＳ）（Gibco））に再懸濁し、FACSCantoX(商標)フローサイトメトリーで分析した。腫瘍特異的ＡＨ１テトラマー陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞は、抗ＰＤ１単独治療と比較して、抗ＰＤ１と組み合わせてｍＦｃ－ＩＬ－１０で処置したマウスのＣＴ２６腫瘍において増加した（図７Ｇ～７Ｉ）。

抗ＰＤ１と組み合わせてｍＦｃ－ＩＬ－１０またはＰＥＧ－ｍＩＬ１０で処置したＣＴ－２６
ＣＴ－２６腫瘍を担持するＢａｌｂ／ＣＡｎＮＨｓｄ雌マウスに、７日目から開始して、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇもしくは０．３ｍｇ／ｋｇｍＦｃ－ＩＬ１０を、単回ＩＰ投与（ＱＤｘ１ＩＰ）、または０．２ｍｇ／ｋｇもしくは１．０ｍｇ／ｋｇ５ｋＤＰＥＧ－ｍＩＬ１０，ＱＤｘ２５ＳＣ（２５日間毎日皮下投与）、あるいは３．０ｍｇ／ｋｇ５ｋＤＰＥＧ－ｍＩＬ１０，ＱＤｘ１ＳＣ（単回の皮下投与）のいずれかを投与した。マウスはまた、７日目から、１０ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５ＡをＩＰＱ４Ｄｘ３、または１０ｍｇ／ｋｇアイソタイプ対照抗ＤＴｍＩｇＧ１, ＩＰＱ４Ｄｘ３を組み合わせて投与された。個々の腫瘍体積を測定し記録した。

腫瘍体積の有効性について１群あたり１０匹のマウス（ｎ＝１０）を割り当てた；１４日目（最初の投与から７日後）の血液および腫瘍免疫モニタリングについて１群あたりｎ＝６を割り当てた。

腫瘍のないマウスの数は、対照群から０％（０／１０）、抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａのみを受けた動物から３０％（３／１０）が得られた（図８Ａ－８Ｅ）。

ｍＦｃ－ＩＬ１０を投与した群からは、抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａと組み合わせて、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇおよび０．３０ｍｇ／ｋｇのＦｃ－ｍＩＬ１０をそれぞれ単回ＩＰ投与したときに、４０％（４／１０）、８０％（８／１０）および８０％（８／１０）という腫瘍のないマウスが得られた（図８Ａ－８Ｅ）。

これに対し、ＰＥＧ－ｍＩＬ１０を３．０ｍｇ／ｋｇで単回皮下投与し、抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａと併用したとき、腫瘍のないマウスは２０％（２／１０）しか得られなかった（図８Ｆ）（一方、抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａのみを投与した対照群では３０％が腫瘍なしとなった）。抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａと組み合わせた０．２０ｍｇ／ｋｇＰＥＧ－ｍＩＬ１０を毎日２５回皮下投与したところ、８０％（８／１０）の腫瘍のないマウスが得られた（図８Ｇ）。抗ＰＤ１ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａと組み合わせて１．０ｍｇ／ｋｇＰＥＧ－ｍＩＬ１０、ＱＤｘ２５ＳＣを受けると、９０％（９/１０）が腫瘍がなく、さらに１０％の無増悪がもたらされた（図８Ｈ）。

上記処置したマウスにおけるｍＦｃ－ｍＩＬ－１０およびペグ化ｍＩＬ－１０の薬物濃度－時間プロファイルの比較を、図９Ａおよび図９Ｂに示す。マウスへの腹腔内（ＩＰ）投与後のｍＦｃ－ｍＩＬ－１０の薬物動態（ＰＫ）データを、ＳＡＡＭＩＩソフトウェア（version 2.3.1, The Epsilon Group, Charlottesville, VA, USA）を用いて一次吸収（first-order absorption）を３つのコンパートメントモデルに適合させた。ｍＦｃ－ｍＩＬ－１０の薬物動態モデルの模式図を以下に示す：

薬物動態モデルに使用される微分方程式は、以下のように記載される：

式中、Ｃ_ｐは中央コンパートメントの薬物濃度；Ｖ_ｃは中央コンパートメントの分布容積；Ａ_注射部位、Ａ_末梢1、Ａ_末梢2はそれぞれ、注射部位、末梢コンパートメントNo.１および２における薬物の量；ｋ_ａは吸収速度定数；ｋ１２、ｋ２１、ｋ１３およびｋ３１は中央コンパートメントおよび末梢コンパートメント間の移動速度定数；ｋ１０は非標的媒介性排泄速度定数；Ｖmaxは最大標的媒介性排泄速度定数；Ｋｍは標的媒介性排泄速度定数がＶmaxの半分となる時のミカエリス－メンテン定数である；時間ゼロでは、Ａ_注射部位は投与された用量に等しく、それ以外のコンパートメントの薬物量または濃度はゼロに等しい。パラメーター推定を補助するため、ＶmaxおよびＫmの決定にはベイズ推定を用いた。

ＰＥＧ－ｍＩＬ－１０の毎日の皮下（ＳＣ）投与後のＰＫデータを、ＳＡＡＭＩＩソフトウェアを用いて一次吸収を伴う１つのコンパートメントモデルで適合させた。ＰＥＧ－ｍＩＬ－１０の薬物動態モデルの模式図は以下のとおりである：

薬物動態モデルに用いた微分方程式を以下に記載する：

式中、ｋｄは排泄速度定数であり、０．２ｍｇ／ｋｇＳＣ毎日投与群および３ｍｇ／ｋｇ単回投与群について個別に適合させた。時間ゼロでは、Ａ_注射部位は投与された用量と等しく、中央コンパートメント内の薬物濃度はゼロに等しい。毎日の投与に伴うＰＥＧ－ｍＩＬ－１０への曝露の減少を考慮するために、投与量を以下の式を用いて調整した：毎日の投与量＝投与の名目値×e-0.002375×時間（時刻ゼロから2週間まで）；毎日の投与量＝投与の平均値（nominal value）×ｅ^{-0.002375×336時間}（２週間以降）。適合度は、目的関数の最小化、ＡｋａｉｋｅおよびＳｃｈｗａｒｚ－Ｂａｙｅｓｉａｎ情報量基準、フィッティングプロットおよび残差プロットの目視、ならびに推定パラメーターの精度によって評価された。

ＰＥＧ－ｍＩＬ－１０は０．２ｍｇ／ｋｇを毎日２５日間ＳＣ投与されると薬理活性を示し、投与期間中循環薬物濃度は維持されたが、３ｍｇ／ｋｇの単回ＳＣ投与では４日目までに薬物濃度がＬＬＯＱ以下になり、不活性化された。一方、ｍＦｃ－ｍＩＬ－１０は、０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇで単回ＩＰ投与したとき、それぞれ投与後８日目および１２日目までに薬物濃度がＬＬＯＱまで低下したにもかかわらず、薬理学的に活性であった。

実施例６．さらなるマウス腫瘍モデル
マウスサロゲートＦｃ－ＩＬ－１０分子であるｍＦｃ－ＩＬ－１０を、単剤療法として、またはチェックポイント遮断薬と組み合わせて、複数のマウス腫瘍モデルで試験した。治療的投与を腫瘍体積１００ｍｍ^３以下で開始し、予防的投与は腫瘍移植の１－２日前に開始した。ｍＦｃ－ＩＬ－１０は、ＭＣ３８およびＣＴ２６に加えて、Ｊ５５８Ｌ骨髄腫モデルおよび１９５６肉腫モデルにおいて単回投与としてロバストな抗腫瘍効果を示し、さらにＢ１６－Ｆ１０および４Ｔ１を含むより耐性腫瘍モデルにおいてチェックポイント阻害薬と組み合わせたときに有意な単回投与活性を示した（表６）。

実施例７．化学的に誘導された大腸炎モデルにおけるＦｃ－ＩＬ－１０および抗ＣＴＬＡ４
アゾキシメタン（ＡＯＭ）／デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発マウスを、大腸炎関連結腸直腸癌の前臨床モデル（Thaker, A. I., et al, J Vis Exp., 2012; (67): 4100)を用いて、抗ＣＴＬＡ４などの免疫チェックポイント阻害剤の役割、およびＦｃ－ＩＬ－１０処置の大腸炎発症における効果を明らかにした。このモデルでは、ＡＯＭ／ＤＳＳ処置マウスは、慢性腸炎および大腸の腺癌を発症する。

大腸炎および結腸腫瘍を誘発するために、８週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウスを、ＡＯＭ（１０ｍｇ／ｋｇ）の単回腹腔内投与に続いて、１０週間にわたってＤＳＳ（蒸留水中２．５％）の３回の７日間サイクル経口投与で処理した（Thaker, A. I., et al.、J Vis Exp., 2012; (67): 4100)。７０日目に、マウスを体重別で無作為化し、生物製剤（アイソタイプ対照抗ＤＴｍＩｇＧ１＋抗ＤＴｍＩｇＧ２ａ、抗ＣＴＬＡ４、ｍＦｃ－ＩＬ－１０、またはそれらの組合せ）で５日毎に、合計６回の注射を行った。ベースラインに対する体重減少率を、大腸炎の重症度の代替指標として用いた。２０％を超える体重減少、または２－３日の下痢および直腸出血を有するマウスは、生存エンドポイントを満たさないものとみなし、安楽死させた。生存している動物を、処置開始後４０日目に集めた。治療の抗腫瘍効果を決定するために、集めた動物の結腸における腫瘍の数および大きさを評価した。

ｍＦｃ－ＩＬ－１０で処理したマウスは、アイソタイプ対照群と比較して、同様の生存率および体重減少を示した（図１０Ａ）。抗ＣＴＬＡ４処置群では、アイソタイプ対照群と比較して、生存率が急速に低下し、より多くのマウスが速い体重減少を示した。これに対し、抗ＣＴＬＡ４およびｍＦｃ－ＩＬ－１０の組合せで処置したマウスは、抗ＣＴＬＡ４のみで処理したマウスと比較して、体重減少の開始が遅れ、２５日目までの生存率が増加した（図１０Ａ－１０Ｅ）。このように、Ｆｃ－ＩＬ－１０は抗ＣＴＬＡ４による大腸炎の増悪を緩和した。Ｆｃ－ＩＬ－１０処置はまた、アイソタイプ対照と比較して、ＡＯＭ／ＤＳＳ誘発マウスにおける結腸の腫瘍の減少をもたらした（図１１Ａ－１１Ｃ）。

実施例８．カニクイザルにおける反復投与試験
貧血および血小板減少症は、ＩＬ１０処置に関連する予想される有害事象である（Fedorak, R. N., et al., Gastroenterology, 2000; 119: 1473-1482）。現在臨床治験中のＰＥＧ－ＩＬ－１０であるペギロデカキン（ＡＭ００１０）は、グレード３の血液学的有害事象を回避するために５日間オン、２日間オフのスケジュールで投与される（Hecht, J. R., et al., J. of Clinical Oncology, 2018; 36:4_supl, 374-374）。

安全性評価の一環として、Ｆｃ－ＩＬ－１０を皮下（ＳＣ；０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇで週１回×３）または静脈内（ＩＶ）注射（０．０６ｍｇ／ｋｇおよび０．１８ｍｇ／ｋｇで週２回×３または０．０６ｍｇ／ｋｇで週４回×２）でカニクイザル（Ｎ＝３／投与）に反復投与試験で投与した。性別混合で約３歳のカニクイザル（Mauritius）を無作為に投与群に分け、ビークル（２０ｍＭＴｒｉｓ、２５０ｍＭスクロース、０．０５ｍＭＤＴＰＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．５）またはＦｃ－ＩＬ－１０を肩甲骨間の背正中にＳＣ注射するか、静脈内投与で留置カテーテルを介して伏在静脈内にゆっくりとボーラス投与した。動物は、少なくともプレテスト中、投与後１時間、採血時点および／または毎日、状態および行動の変化について観察された。表７のスケジュールに従い、薬物動態（Ｋ２ＥＤＴＡチューブに０．５ｍＬ）、血液学（Ｋ２ＥＤＴＡチューブに１．０ｍＬ）または血清化学（血清分離チューブに１．５ｍＬ）用に大腿静脈から血液試料を収集した。ＢＭＳ－９８６３３３を投与されたサルの毒性学的観察結果を表８に、血液学的な主な変化を表９に示す。まとめると、Ｆｃ－ＩＬ－１０を週１回投与したサルにおいて、０．１ｍｇ／ｋｇで３匹中１匹に用量制限有害事象（投与前と比較してHct 0.5× および血小板0.4×）、０．３ｍｇ／ｋｇで死亡が見られた（投与前と比較してHct 0.15× および血小板 0.06×）。Ｆｃ－ＩＬ－１０を０．０６ｍｇ／ｋｇで（週２回または週４回）、０．１８ｍｇ／ｋｇで週２回投与した結果、赤血球数および血小板数に対する影響は中等度であり、忍容性は良好であった（Hct 0.65×，platelet 0.22-0.3×：投与前と比較）。

処置誘発性ＡＤＡ応答は、反復投与試験におけるＦｃ－ＩＬ－１０曝露を制限し、血液学的パラメーターに対するＦｃ－ＩＬ－１０の影響を過小評価し得る投与後約７日から１４日にＦｃ－ＩＬ－１０を投与した全てのサルで検出された。

特定の面の上記の説明は、他者が、当業者の知識を適用することによって、過度の実験をすることなく、本発明の一般概念から逸脱することなく、そのような特定の面を容易に修正および／または様々な用途に適合させることができるように、本発明の一般性を十分に明らかにするものである。したがって、そのような適合および修正は、本明細書に記載された教示およびガイダンスに基づいて、開示された面の意味および等価物の範囲内にあることが意図される。本明細書の用語または語句は、教示およびガイダンスに照らして当業者によって解釈されるように、説明のためのものであり、限定するためのものではないことが理解される。

本発明の他の面は、本明細書に開示された明細書および実施例の検討から当業者には明らかであり得る。本明細書および実施例は、例示的なものとしてのみ考慮されることが意図され、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示される。

本明細書に記載の全ての刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許または特許出願が引用により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に引用により本明細書中に包含される。

Claims

(i) 配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ポリペプチド；および、(ii) 第２のポリペプチドを含む、ＩＬ－１０融合タンパク質であって、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質が、ＩＬ－１０活性を含む、ＩＬ－１０融合タンパク質。
第２のポリペプチドがアルブミンポリペプチドを含む、請求項１に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
第２のポリペプチドがＦｃポリペプチドを含む、請求項１に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
Ｆｃポリペプチドが、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
第２のポリペプチドがＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端に融合されている、請求項１から４のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
第２のポリペプチドが、ＩＬ－１０ポリペプチドのＣ末端に融合されている、請求項１から５のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
ＩＬ－１０ポリペプチドが、リンカーによって第２のポリペプチドに融合されている、請求項１から６のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーが、少なくとも約４個のアミノ酸、少なくとも約５個のアミノ酸、少なくとも約６個のアミノ酸、少なくとも約７個のアミノ酸、少なくとも約８個のアミノ酸、少なくとも約９個のアミノ酸、少なくとも約１０個のアミノ酸、少なくとも約１１個のアミノ酸、少なくとも約１２個のアミノ酸、少なくとも約１３個のアミノ酸、少なくとも約１４個のアミノ酸、少なくとも約１５個のアミノ酸、少なくとも約１６個のアミノ酸、少なくとも約１７個のアミノ酸、少なくとも約１８個のアミノ酸、少なくとも約１９個のアミノ酸、少なくとも約２０個のアミノ酸、または少なくとも約２１個のアミノ酸を含む、請求項７に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーが少なくとも約１５個のアミノ酸を含む、請求項７または８に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーが少なくとも約２０個のアミノ酸を含む、請求項７から９のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーが少なくとも約２１個のアミノ酸を含む、請求項７から１０のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーがグリシンおよびセリンを含む、請求項７から１１のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーがＧＧＧＧＳ（配列番号３９）モチーフまたはＧＧＧＳ（配列番号３８）モチーフを含む、請求項７から１２のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
リンカーが、配列番号３８－４５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７から１３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
ＩＬ－１０ポリペプチドが、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
ＩＬ－１０ポリペプチドが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
Ｆｃポリペプチドが、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３から１６のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
Ｆｃポリペプチドが、配列番号４－１２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３から１７のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から１９のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から２０のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
３個以下の置換、挿入または欠失を有する、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から２１のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
２個以下の置換、挿入、または欠失を有する、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から２２のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
１個の置換、挿入または欠失を有する、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から２３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３から５および７から２４のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４および６から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４、６から１８および２６のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４、６から１８および２７のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
３個以下の置換、挿入または欠失を有する、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４、６から１８および２７から２８のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
２個以下の置換、挿入または欠失を有する、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４、６から１８および２６から２９のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
１個の置換、挿入または欠失を有する、配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４、６から１８および２６から３０のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
配列番号３３－３６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、３、４、６から１８および２６から３１のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
１週間に１回以下の投与で、それを必要とする対象において癌を処置することが可能である、請求項１から３２のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約２週間に１回投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することが可能である、請求項３３に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約３週間に１回投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することが可能である、請求項３４に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約４週間に１回投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することが可能である、請求項３５に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約５週間に１回投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することが可能である、請求項３６に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約６週間に１回投与されるとき、それを必要とする対象において癌を処置することが可能である、請求項３７に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で対象に投与される、請求項３３から３８のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．０５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で対象に投与される、請求項３３から３９のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で対象に投与される、請求項３３から４０のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で対象に投与される、請求項３３から４１のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
約０．２ｍｇ／ｋｇ～約０．３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で対象に投与される、請求項３３から４２のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質。
請求項１から４３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドセット。
請求項４４に記載のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドセットを含むベクターまたはベクターセット。
ウイルスベクターである、請求項４５に記載のベクターまたはベクターセット。
請求項１から４３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、請求項４４に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、または請求項４５もしくは４６に記載のベクターもしくはベクターセットを含んでなる、宿主細胞。
哺乳動物細胞である、請求項４７に記載の宿主細胞。
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、マウス骨髄腫細胞（ＮＳ０およびＳｐ２／０）、サル腎臓（ＣＯＳ）細胞、ＶＥＲＯ細胞、線維肉腫ＨＴ－１０８０細胞およびＨｅＬａ細胞から選択される、請求項４７または４８に記載の宿主細胞。
請求項１から４３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、請求項４４に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、または請求項４５もしくは４６に記載のベクターもしくはベクターセット、および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
請求項１から４３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、請求項４４に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、請求項４５もしくは４６に記載のベクターもしくはベクターセット、または請求項５０に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における癌を処置する方法。
請求項１から４３のいずれか一項に記載のＩＬ－１０融合タンパク質、請求項４４に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、請求項４５もしくは４６に記載のベクターもしくはベクターセット、または請求項５０の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象において癌細胞を致死させる方法。
それを必要とする対象において癌を処置する方法であって、該対象に有効量のＩＬ－１０融合タンパク質を少なくとも約７日の投与間隔で投与することを含み、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質がＩＬ－１０ポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、この第２のポリペプチドはアルブミンポリペプチドまたはＦｃポリペプチドを含む、方法。
それを必要とする対象において癌細胞を致死させる方法であって、該対象に有効量のＩＬ－１０融合タンパク質を少なくとも約７日の投与間隔で投与することを含み、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質は、ＩＬ－１０ポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、この第２のポリペプチドはアルブミンポリペプチドまたはＦｃポリペプチドを含む、方法。
第２のポリペプチドがアルブミンポリペプチドである、請求項５３または５４に記載の方法。
第２のポリペプチドがＦｃポリペプチドである、請求項５３または５４に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、リンカーをさらに含む、請求項５３から５６のいずれか一項に記載の方法。
リンカーが、請求項８から１４のいずれか一項に記載のリンカーを含む、請求項５７に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、少なくとも約７日、少なくとも約１０日、少なくとも約１４日、少なくとも約１７日、少なくとも約２１日、少なくとも約２４日、または少なくとも約２８日の投与間隔で投与される、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、１週間に１回以下で投与される、請求項５１から５９のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、２週間毎に１回以下で投与される、請求項５１から６０のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、３週間毎に１回以下で投与される、請求項５１から６１のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、４週間毎に１回以下で投与される、請求項５１から６２のいずれか一項記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、少なくとも約７日から少なくとも約２８日の投与間隔で投与される、請求項５１から６３のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、少なくとも約１４日の投与間隔で投与される、請求項６４に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、少なくとも約２１日の投与間隔で投与される、請求項６４に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約１週間に１回投与される、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約２週間毎に１回投与される、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約３週間毎に１回投与される、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約４週間毎に１回投与される、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約６週間毎に１回投与される、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約０．００１ｍｇ／ｋｇから約０．５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される、請求項５１から７１のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、０．０１ｍｇ／ｋｇから０．２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される、請求項５１から７１のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ＩＬ－１０融合タンパク質が１週間に１回以上投与されない、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、配列番号１４－３２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７４に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項７４または７５に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約２週間毎に１回投与される、請求項７４から７６のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約３週間毎に１回投与される、請求項７４から７６のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約４週間毎に１回投与される、請求項７４から７６のいずれか一項に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質が、約６週間毎に１回投与される、請求項７４から７６のいずれか一項に記載の方法。
癌が腫瘍を含む、請求項５１、５３および５５から８０のいずれか一項に記載の方法。
癌が、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸癌、腎癌、明細胞癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）、前立腺癌、ホルモン抵抗性前立腺腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、膠芽腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝癌（肝細胞癌）、乳癌、大腸癌、頭頸部癌（または癌腫）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、黒色腫、転移性悪性黒色腫、皮膚または眼内悪性黒色腫、中皮腫、骨の腫瘍、皮膚癌、子宮癌、肛門部癌、精巣癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、副甲状腺癌、副腎腺癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、ＣＮＳ原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、アスベストによるものを含む環境誘発癌、ウイルス関連癌またはウイルス起源癌、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）関連または起源腫瘍、および前記癌の組合せからなる群より選択される、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の方法。
癌が、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤色白血病、巨核球性白血病、分離顆粒球性肉腫、クロロマ、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫；末梢性Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性胸水リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系造血性腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）、ウォルデンストームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（低悪性骨髄腫）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫；および、これらの癌の何れかの組合せから選択される、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の方法
癌が、ＲＣＣ、ＮＳＣＬＣ、胃癌、ＳＣＣＨＮおよび前記癌の何れかの組合せから選択される、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の方法。
癌が、黒色腫、膀胱癌、膵臓癌、ＨＣＣ、結腸癌、ＳＣＬＣ、中皮腫、肝細胞癌、前立腺癌、多発性骨髄腫およびこれらの癌の組合せから選択される、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の方法。
対象に第２の抗癌療法を投与することをさらに含む、請求項５１から８５のいずれか一項に記載の方法。
第２の抗癌療法が、免疫療法、化学療法、ＣＡＲ－Ｔ療法、遺伝子療法、放射線療法、外科手術、自然免疫細胞を活性化する薬剤、ＮＫおよび／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞の生存を増強する薬剤、ならびにこれらの何れかの組合せからなる群より選択される療法を含む、請求項８６に記載の方法。
第２の抗癌療法が、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ７３、ＣＤ９６、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＢＣＭＡ、ＣＣＲ８およびヘルペスウイルス侵入介在物質（ＨＶＥＭ）、プログラムされた細胞死１（ＰＤ－１）、プログラムされた細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＴＬＡ－４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、およびＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制剤（ＶＩＳＴＡ）、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソセリン、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２およびこれらの何れかの組合せから選択されるタンパク質と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を含む、請求項８６または８７に記載の方法。
第２の抗癌療法が、ＰＤ－１を特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（抗ＰＤ－１抗体）を含む、請求項８６から８８のいずれか一項に記載の方法。
抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブを含む、請求項８９に記載の方法。
第２の抗癌療法が、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含む、請求項８６から９０のいずれか一項に記載の方法。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブおよびアベルマブから選択される、請求項９１に記載の方法。
第２の抗癌療法が、ＣＴＬＡ－４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（抗ＣＴＬＡ－４抗体）を含む、請求項８６から９２のいずれか一項に記載の方法。
抗ＣＴＬＡ－４抗体が、トレメリムマブまたはイピリムマブを含む、請求項９３に記載の方法。
第２の抗癌療法が、プロテアソーム阻害剤、ＩＭｉＤ、Ｂｅｔ阻害剤、ＩＤＯアンタゴニスト、白金系化学療法、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＮＬＲＰ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、およびそれら何れかの組合せから選択される化学療法を含む、請求項８６から９４のいずれか一項に記載の方法。
第２の療法が、ドキソルビシン（アドリアマイシン(登録商標)）、シスプラチン、カルボプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル（リューケラン(登録商標））、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ(登録商標)；ＮＥＯＳＡＲ(登録商標)）、レナリドマイド（レブラミド(登録商標)）、ボルテゾミブ（ベルケイド(登録商標)）、デキサメサゾン、ミトキサントロン、エトポシド、シタラビン、ベンダムスチン（トレアンダ(登録商標)）、リツキシマブ（リツキサン(登録商標)）、イホスファミド、フォリン酸（ロイコボリン）、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、オキサリプラチン（エロキサチン）、ＦＯＬＦＯＸ、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン（オンコビン(登録商標)）、フルダラビン（フルダラ(登録商標)）、サリドマイド（サロミド(登録商標)）、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ(登録商標)）、オクタムマブ（アーゼラ(登録商標)）、エベロリムス（アフィニトール(登録商標)、ゾレス(登録商標)）およびカルフィルゾミブ（ＫＹＰＲＯＬＩＳＴＭ）から選択される薬剤を含む、請求項８６から９５のいずれか一項に記載の方法。
第２の抗癌療法が、ＩＬ－２およびペグ化ＩＬ－２から選択される、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を増強する薬剤を含む、請求項８６から９６のいずれか一項に記載の方法。
対象に第３の抗癌療法を投与することをさらに含む、請求項８６から９７のいずれか一項に記載の方法。
第２の抗癌療法が、ＣＴＬＡ－４と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（抗ＣＴＬＡ－４抗体）を含む、請求項９８に記載の方法。
第２の抗癌療法が抗ＰＤ－１抗体を含み、第３の抗癌療法が抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む、請求項９９に記載の方法。
抗ＣＴＬＡ－４抗体が、トレメリムマブまたはイピリムマブを含む、請求項９９または１００に記載の方法。
抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１００または１０１に記載の方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質を調製する方法であって、請求項４４に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドセット、または請求項４５もしくは４６に記載のベクターもしくはベクターセットを適切な条件下で宿主細胞内で発現させることを含む、方法。
ＩＬ－１０融合タンパク質を集めることをさらに含む、請求項１０３に記載の方法。