KR20040088572A - 제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들 - Google Patents

제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들 Download PDF

Info

Publication number
KR20040088572A
KR20040088572A KR10-2004-7013663A KR20047013663A KR20040088572A KR 20040088572 A KR20040088572 A KR 20040088572A KR 20047013663 A KR20047013663 A KR 20047013663A KR 20040088572 A KR20040088572 A KR 20040088572A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
virus
ser
antibody
lys
human
Prior art date
Application number
KR10-2004-7013663A
Other languages
English (en)
Inventor
큐젱싱
한센한스
골든베르그데이비드엠.
Original Assignee
이뮤노메딕스, 인코오포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 filed Critical 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드
Publication of KR20040088572A publication Critical patent/KR20040088572A/ko

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
    • A61K47/6897—Pre-targeting systems with two or three steps using antibody conjugates; Ligand-antiligand therapies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1084—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K51/109—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin immunoglobulins having two or more different antigen-binding sites or multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

본 발명에서, (a) CH2 도메인에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함하는 IgG에서 유래된 인간 경첩 불변영역; (b) 두개의 scFvs; 및 (c) 두개의 Fvs;를 갖는 변이 양특이성 항체(mutant bispecific antibody)가 만들어졌다. 이러한 형태의 항체는 향상된 제거 능력을 보여, 예비 표적화 방법에 매우 유용하다는 것이 발견되었다.

Description

제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들{BISPECIFIC ANTIBODY POINT MUTATIONS FOR ENHANCING RATE OF CLEARANCE}
표적부위의 검출에 있어서 검출시약의 시그널-대-배경 비율(signal-to-background ratio)이 높을수록 유리하다. 치료에 있어서는 치료제가 표적부위에 가능한 완전 유착될수록, 또한 흡수 및 결합이 오래 지속될수록 유리하다. 표적화 비율 및 표적부위에 전달되는 약제의 양을 증가시키기 위하여, 우선적인 국소화를 위한 표적화 성분(targeting moiety)에 접합된 진단상의 혹은 치료상의 약제를 포함하는 표적화 벡터(targeting vector)의 사용이 널리 알려져 왔다.
표적화 벡터의 예로는, 항체 또는 항체 단편들, 세포- 혹은 조직-특이 펩티드들 및 호르몬 및 다른 수용체-결합 분자들과 같은 표적화 성분과, 진단상의 혹은치료상의 약제와의 접합체들을 포함한다. 예를 들어, 병적인 혹은 정상인 세포와 연관된, 뿐만 아니라 병원성 미생물과 연관된 다른 결정인자들(determinants)에 대항하는 항체들을 다양한 병적인 상태 또는 병변의 검출 및 치료에 사용해 왔다. 이들 방법에서, 표적화 항체는 예를 들면, 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함되어 있는 Hansenet al., 미국특허 3,927,193호 및 Goldenberg, 미국특허 4,331,647호, 4,348,376호, 4,361,544호, 4,468,457호, 4,444,744호, 4,460,459호, 4,460,561호, 4,624,846호, 4,818,709호에 개시된 적절한 검출 또는 치료 약제와 직접 접합한다.
직접적인 표적화 방법들, 즉 진단상의 혹은 치료상의 약제("활성 약물")가 표적화 성분에 직접 접합하는 방법에서 나타나는 한 가지 문제점은, 실제로는 일부 접합체만이 표적부위에 결합하고, 대부분의 접합체는 순환상태로 남아 있어 표적화된 접합체의 기능을 손상시킨다는 것이다. 진단 접합체, 예를 들어 방사면역신티그래피 또는 자기공명 영상 접합체의 경우, 순환상태로 남아있는 비-표적화 접합체는 배경(background)을 증가시킬 수 있고 해상도를 감소시킬 수 있다. 항체와 같은 장시간 순환하는(long-circulating) 표적화 성분에 부착된 독성이 높은 치료제, 예를 들어 방사성 동위원소, 약물 또는 독소를 갖고 있는 치료 접합체의 경우, 순환하는 접합체가 숙주에게 용인할 수 없는 독성, 예를 들면 골수 독성(marrow toxicity) 또는 체순환성 부작용을 유발할 수 있다.
검출 또는 치료 약제의 표적:배경 비율을 증가시키기 위해 예비-표적화(pretargeting) 방법이 개발되어 왔다. 예비-표적화 및 비오틴/아비딘 접근법의 예로는, Goodwinet al., 미국특허 4,863,713호; Goodwinet al.,J. Nucl. Med. 29:226, 1988; Hnatowichet al.,J. Nucl. Med. 28:1294, 1987; Oehret al.,J. Nucl. Med. 29:728, 1988; Klibanovet al.,J. Nucl. Med. 29:1951, 1988; Sinitsynet al.,J. Nucl. Med. 30:66, 1989; Kalofonoset al.,J. Nucl. Med. 31:1791, 1990; Schechteret al.,Int. J. Cancer 48:167, 1991; Paganelliet al.,Cancer Res. 51:5960, 1991; Paganelliet al.,Nucl. Med. Commun. 12:211, 1991; 미국특허 5,256,395호; Stickneyet al.,Cancer Res. 51:6650, 1991; Yuanet al.,Cancer Res. 51:3119, 1991; 미국특허 6,077,499호; 미국출원 09/597,580호; 미국출원 10/361,026호; 미국출원 09/337,756호; 미국출원 09/823,746호; 미국출원 10/116,116호; 미국출원 09/382,186호; 미국출원 10/150,654호; 미국특허 6,090,381호; 미국특허 6,472,511호; 미국 가출원 60/386,411호; 미국 가출원 60/345,641호; 미국 가출원 60/328,835호; 미국 가출원 60/426,379호; 미국출원 09/823,746호; 미국출원 09/337,756호; 및 미국 가출원 60/342,103호에 개시되어 있으며, 이들 개시물들은 본 발명에 온전히 참고문헌으로 포함된다.
예비-표적화 방법에서는, 제 1 표적화 물질(이들은 진단상의 혹은 치료상의 약제에 결합하지 않는다)이 투여된다. 예비 표적화 물질은 표적부위에 결합하는 표적화 성분(targeting moiety)과 표적가능한 구성체의 결합부위에 결합할 수 있는 결합 성분(binding moiety)을 포함하고 있다. 일단 제 1 표적화 물질의 충분한 유착이 이루어지면, 표적가능한 구성체가 투여된다. 표적가능한 구성체는 제 1 표적화 물질의 유효 결합부위를 인식하는 결합부위와 진단상의 혹은 치료상의 약제를포함하고 있다.
예비-표적화는 직접 표적화 방법을 이용하는 것보다 상당한 이점을 제공하는 접근법이다. 예를 들면, 치료용, 예를 들어 방사성면역치료용 표적부위에 방사성핵종을 생체내(in vivo) 전달하는데에 예비-표적화 접근법을 이용하면 방사성면역접합체의 장기 순환에 기인한 골수 독성을 감소시킬 수 있다. 이것은 방사성 동위원소가 종종 장기 순환하는 물질인 제 1 표적화 분자에 직접 접합하기 보다는 빠르게 제거되는 저분자의 킬레이트로 전달되기 때문이다.
예비-표적화 방법에서 나타나는 문제점은 순환하는 제 1 표적화 물질(표적부위에 결합하지 않은 제 1 표적화 물질)이, (제 1 표적화 물질상의 결합 성분을 통해) 표적부위에 결합되어 있는 표적화 물질에, 표적가능한 접합체가 결합하는 것을 방해한다는 것이다. 따라서, 순환하는 제 1 표적화 물질의 양을 최소화하는 방법이 요구되고 있다.
순환하는 제 1 표적화 물질의 양을 최소화하려는 몇몇 시도들이 있어 왔다. 이 목표를 달성하기 위한 한 방법으로 증강된 체내 제거율을 지닌 제 1 표적화 물질을 제조하는 것이다. 예를 들면, Wardet al.(미국특허 6,165,745호)는 쥐로부터 변이 IgG1을 합성하였고, Hornicket al.The Journal of Nuclear Medicine 11355-362 (2000)은 변이 키메라 TNT-3 항체를 합성하였다. 이들 변이 항체들은 본 발명의 변이 bsAb와는 다르다. 한 가지 차이점은, 본 발명의 변이 bsAb는 양특이성(bispecific) 항체인 반면에, Hornicket al. 및 Wardet al.의 항체들은 단일특이성(monospecific) 항체들이란 것이다. 본 발명의 변이 bsAb와 Wardet al.의 쥐 항체 사이의 다른 차이점은, Wardet al.의 쥐 항체는 효과기(effector) 기능을 갖고 있지 않다는 것이다. 그러므로, Wardet al.의 항체는 보체(complement)를 고정시킬 수 없거나 ADCC(항체 의존성 세포 독성)을 나타낼 수 없는 반면에, 본 발명의 변이 bsAb는 그렇게 할 수 있다.
본 발명은 상응하는 모(parent) 양특이성 항체(bsAb) 보다 더 빠르게 환자의 몸으로부터 제거되는 변이(mutant) bsAb에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 IgG의 인간 경첩 불변영역, 두개의 scFvs 및 두개의 Fvs를 포함하는 변이 bsAb에 관한 것으로, 상기 경첩 불변영역은 CH2-CH3 도메인 공유영역에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함한다.
도 1은 hMN-14의 중쇄 cDNA와 아미노산 서열을 보여준다. VH, CH1, 경첩, CH2 및 CH3 영역들도 나타내었다. 아미노산 274 위치의 이소류신은 Edelman,et al.의 넘버링 체제에 따르면 이소류신 253에 해당된다. Edelman,et al. Biochemistry 63, 78-85 (1969) 참고.
도 2는 hMN-14의 경쇄 cDNA와 아미노산 서열을 보여준다. V??및 C??영역들도 나타내었다.
도 3은 인간 클론 종양을 지닌 쥐에서, 주사후 1, 2, 3, 4일간의 hMN-14IgGI253A-(734scFv)2의 생체내분포를 보여준다. "I253A" 표시는 253 위치의 이소류신이 알라닌으로 변했음을 의미한다. 데이터는 그램당 주사량의 중앙값 백분율(% ID/g)로 나타내었다.
도 4는 인간 클론 종양을 지닌 쥐에서, 주사후 1, 2, 3, 4일간의 hMN-14IgG-(734scFv)2의 생체내분포를 보여준다. 데이터는 그램당 주사량의 중앙값 백분율(% ID/g)로 나타내었다.
도 5는125I-hMN-14IgG-(734scFv)2를 사용한 예비표적화 실험에서 얻은 생체내분포값을 보여준다. 표적가능한 구성체는 Tc-99m-표지된 di-DTPA, IMP-192였다. 인간 클론 종양을 지닌 쥐들은 4일 동안125I-hMN-14IgG-(734scFv)2로 예비표적화하였고, 이 후에 표적가능한 접합체를 주사하였다. 데이터는 표적가능한 접합체 주사 3, 6, 24시간 경과후에 얻었다. 데이터는 그램당 주사량의 중앙값 백분율(% ID/g)로 나타내었다. 종양-대-혈액 비율은 "Blood" 기입하에 기록하였다. 차트의 좌측은125I-표지된 bsAb에 대한 데이터를 보여주고, 차트의 우측은99mTc-표지된 표적가능한 구성체에 대한 데이터를 보여주고 있다.
도 6은125I-hMN-14IgG-(734scFv)2를 사용한 예비표적화 실험에서 얻은 생체내분포값을 보여준다. 표적가능한 구성체는 Tc-99m-표지된 di-DTPA, IMP-192였다. 인간 클론 종양을 지닌 쥐들은 6일 동안125I-hMN-14IgG-(734scFv)2로 예비표적화하였고, 이 후에 표적가능한 접합체를 주사하였다. 데이터는 표적가능한 접합체 주사 3, 6, 24시간 경과후에 얻었다. 데이터는 그램당 주사량의 중앙값 백분율(% ID/g)로 나타내었다. 종양-대-혈액 비율은 "Blood" 기입하에 기록하였다. 차트의 좌측은125I-표지된 bsAb에 대한 데이터를 보여주고, 차트의 우측은99mTc-표지된 표적가능한 구성체에 대한 데이터를 보여주고 있다.
도 7은125I-hMN-14IgGI253A-(734scFv)2를 사용한 예비표적화 실험에서 얻은 생체내분포값을 보여준다. 표적가능한 구성체는 Tc-99m-표지된 di-DTPA, IMP-192였다. 인간 클론 종양을 지닌 쥐들은 4일 동안125I-hMN-14IgGI253A-(734scFv)2로 예비표적화하였고, 이 후에 표적가능한 접합체를 주사하였다. 데이터는 표적가능한 접합체 주사 3, 6, 24시간 경과후에 얻었다. 데이터는 그램당 주사량의 중앙값 백분율(% ID/g)로 나타내었다. 종양-대-혈액 비율은 "Blood" 기입하에 기록하였다. 차트의 좌측은125I-표지된 bsAb에 대한 데이터를 보여주고, 차트의 우측은99mTc-표지된 표적가능한 구성체에 대한 데이터를 보여주고 있다.
도 8은 공지된 표준 hMN-14IgGI253A-(734scFv)2의 용리곡선으로, Bio-Sil SEC 250 300㎜ㅧ 7.8㎜ HPLC 컬럼상에서 0.2Ｍ 인산 완충액 (pH6.8)을 1㎖/분으로 용리시켜 얻은 것이다.
도 9는 공지된 표준 Tc-99m IMP 192의 용리곡선으로, Bio-Sil SEC 250 300㎜ㅧ 7.8㎜ HPLC 컬럼상에서 0.2Ｍ 인산 완충액 (pH6.8)을 1㎖/분으로 용리시켜 얻은 것이다.
도 10은 hMN-14IgGI253A-(734scFv)2와 Tc-99m IMP 192와의 1:1 혼합물의 용리곡선으로, Bio-Sil SEC 250 300㎜ㅧ 7.8㎜ HPLC 컬럼상에서 0.2Ｍ 인산 완충액 (pH6.8)을 1㎖/분으로 용리시켜 얻은 것이다.
도 11은 hMN-14IgGI253A-(734scFv)2와 Tc-99m IMP 192와의 1:5 혼합물의 용리곡선으로, Bio-Sil SEC 250 300㎜ㅧ 7.8㎜ HPLC 컬럼상에서 0.2Ｍ 인산 완충액 (pH6.8)을 1㎖/분으로 용리시켜 얻은 것이다.
도 12는 hMN-14IgGI253A-(734scFv)2와 Tc-99m IMP 192와의 20:1 혼합물의 용리곡선으로, Bio-Sil SEC 250 300㎜ㅧ 7.8㎜ HPLC 컬럼상에서 0.2Ｍ 인산 완충액 (pH6.8)을 1㎖/분으로 용리시켜 얻은 것이다.
본 발명의 목적은 IgG의 인간 경첩 불변영역, 두개의 scFvs 및 두개의 Fvs를 포함하는 변이 bsAb를 제공하는 것으로, 상기 경첩 불변영역은 CH2-CH3 도메인 공유영역에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함한다. 몇몇 구현예에서, Fvs와 scFvs는 CDR-이식된 쥐 혹은 인간화된 성분들이다. 나머지 구현예에서는, Fvs와 scFvs가 인간 혹은 인간화된 성분들이다. 몇몇 구현예에서, 경첩 불변영역은 이소류신 253이 알라닌으로의 변이를 포함하고 있다. 또한, 본 발명은, Fvs가 hMN14-IgG, 인간화된 Class Ⅲ, 항-CEA mAb (미국특허 5,874,540호 참고)에서 유래된 것이고, scFvs가 734scFv이며, 경첩 불변영역에서 253 위치의 이소류신이 알라닌으로 변이된 변이 bsAb를 제공한다.
다른 언급이 없는 한, "a" 또는 "an"은 "하나 이상"을 의미한다.
Ⅰ. 개관
본 발명은 IgG의 인간 경첩 불변영역, 두개의 scFvs 및 두개의 Fvs를 포함하는 변이 bsAb에 관한 것으로, 상기 경첩 불변영역은 CH2-CH3 도메인 공유영역에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함한다. 본 발명의 변이 bsAb는 상응하는 모(parent) bsAb 보다 더 빠르게 환자의 몸으로부터 제거된다. 양특이성 항체들은 1999년 6월 22일에 출원된 미국출원 09/337,756호에 개시되어 있다. 예비표적화 방법에 사용되는 경우, 순환하는 제 1 표적화 물질(표적부위에 결합되지 않은 변이 bsAb)의 양은 최소화된다. 부가적으로, 혈액중에 포획된 표적가능한 구성체의 양도 최소화된다.
인간 경첩 불변영역은 효과기 기능을 포함할 수 있다. 항체 분자의 Fc 부분은 보체 고정과 ADCC(항체 의존성 세포 독성)와 같은 효과기 기능을 제공하며, 따라서 세포 용해(cell lysis)를 초래할 수도 있는 작용 기작을 조절한다. 그러나, 세포사멸(apoptosis)과 같은 다른 기작들이 작용하게 되면, Fc 부분은 치료 기능에는 필요하지 않을 수 있다. 그러므로, 내재된 ADCC, 세포사멸 유도 및 보체 활성화/용해도 달성될 수 있다.
scFvs는 표적가능한 구성체의 결합부위에 특이적이다. 표적가능 구성체는 운반체(carrier) 부분과 적어도 1 unit의 인식가능한 합텐(hapten)으로 구성된다. 인식가능 합텐의 예로는, 여기에 국한되는 것은 아니지만, 히스타민 숙시닐 글리신(HSG), DTPA 및 플루오레세인 이소티오시아네이트를 들 수 있다. 표적가능 구성체는 질병에 걸린 조직을 치료하거나 확인하는데에 유용한 다양한 약제에 접합시킬수 있다. 접합되는 약제의 예로는, 여기에 국한되는 것은 아니지만, 킬레이트 화합물, 금속-킬레이트 착화물, 약물, 독소(예를 들면, 리신(ricin), 아브린(abrin), 리보뉴클레아제, DNase Ⅰ, 포도상구균 장독소-A(Staphylococcalenterotoxin-A), 미국자리공(pokeweed) 항바이러스성 단백질, 겔로닌(gelonin), 디프테리아 독소(diphtherin toxin), 녹농균 외독소(Pseudomanasexotoxin), 녹농균 내독소(Pseudomanasendotoxin)) 및 다른 효과기 분자들을 들 수 있다. 접합을 위한 적절한 약물로는, 독소루비신(doxorubicin) 동족체, SN-38, 에토포사이드(etoposide), 메소트렉세이트(methotrexate), 6-머캅토퓨린(6-mercaptopurine) 또는 에토포사이드 포스페이트, 칼리케아미신(calicheamicin), 파클리탁셀(paclitaxel), 2-피롤리노독소루비신(2-pyrrolinodoxurubicin), CC-1067, 및 아도젤레신(adozelesin) 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 대표적인 약물로는, 질소 머스타드(nitrogen mustards), 에틸렌이민 유도체, 알킬설포네이트, 니트로소우레아(nitrosoureas), 트리아젠, 엽산 동족체, 안트라시클린, 탁산(taxanes), COX-2 억제제, 피리미딘 동족체, 퓨린 동족체, 항생제, 효소, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxins), 백금 배위착물, 빈카(vinca) 알카노이드, 치환된 우레아, 메틸 히드라진 유도체, 부신피질 억제제, 길항체, 엔도스타틴(endostatin), 탁솔, 캠프토테신(camptothecins), 독소루비신 및 이들의 동족체, 및 이들의 혼합물들이다. 또한, 전구약물을 활성화시키거나 약물의 표적-특이 독성을 증가시킬 수 있는 효소를 표적가능 구성체에 접합시킬 수도 있다. 따라서, 표적가능 구성체에 반응하는 scFvs를 포함한 변이 bsAb를 사용함으로써, 다양한 치료 및 진단을, 각각에 대한 새로운 bsAb를 만들지 않고도 수행할 수 있다.
또한, 본 발명은 포유 동물에서 표적 세포, 조직 또는 병원체를 검출하거나 처치(치료)하는 방법으로, IgG의 인간 경첩 불변영역, 두개의 scFvs 및 두개의 Fvs를 포함하는 변이 bsAb로, 상기 경첩 불변영역이 CH2-CH3 도메인 공유영역에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함하고 있는 변이 bsAb를 유효량 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 명세서에서, "병원체"는, 여기에 국한되는 것은 아니지만, 곰팡이균(예를 들면, 히스토플라스마(Histoplasma capsulatum), 블라스토마이세스(Blastomyces dermatitidis), 콕시디오이데스(Coccidioides immitis) 및 칸디다종), 바이러스(예를 들면, 인간면역결핍바이러스(HIV), 헤르페스(herpes)바이러스, 시토메갈로바이러스(cytomegalovirus), 광견병(rabies)바이러스, 인플루엔자 바이러스, B형 간염 바이러스, 센다이(Sendai)바이러스, 고양이(feline)백혈병 바이러스, 레오(Reo)바이러스, 폴리오(polio)바이러스, 인간혈청파르보상 바이러스, 원숭이(simian) 바이러스 40, 호흡기합포체 바이러스, 쥐 유방종양 바이러스, 수두-대상포진 바이러스, 뎅기(Dengue)바이러스, 풍진(rubella)바이러스, 홍역(measles)바이러스, 아데노바이러스, 인간 T-세포 백혈병 바이러스, 엡슈타인-바르(Epstein-Barr)바이러스, 쥐 백혈병 바이러스, 멈프스(mumps)바이러스, 수포성구염 바이러스, 신드비스(Sindbis)바이러스, 림포구맥락수막염 바이러스, wart바이러스 및 블루텅(blue tongue)바이러스), 기생충, 미생물(예를 들면, 리케차) 및 박테리아(예를 들면,스트렙토코커스 아갈라스티아(Streptococcus agalactiae),레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophilia),스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 대장균(Escherichia coli), 임균(Neisseria gonorrhoeae), 수막염균(Neisseria meaningitidis), 폐렴알균(Pneumococcus), 헤미필루스 인플루엔자 B, 매독균(Treponema pallidum), 라임병 스피로케테스(Lyme disease spirochetes), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 나병균(Mycobacterium leprae),브루셀라 아보르투스(Brucella abortus), 결핵균(Mycobacterium tuberculosis), 탄저균(Anthrax) 포자 및 파상풍(Tetanus)독소)를 포함한다. 미국특허 5,332,567호 참고.
본 명세서에서, "항체"는 (예를 들어, 천연의 또는 정상적인 면역글로불린 유전자 단편 재조합 과정을 통해 형성된) 전장(full-length)의 면역글로불린 분자(즉, IgG 항체) 또는 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인(즉, 특이적으로 결합하는) 부분, 예를 들면 항체 단편을 이르는 용어이다. 항체는 키메라, cdr-이식된(인간화된) 및 온전한(fully) 인간 항체들을 포함하는 용어이다. "IgG"는 항체, 즉 항원에 대항하여 생성되고 항원에 특이적으로 결합할 수 있는, 면역글로불린 G를 의미하는데 사용되는 용어이다. 항체는 Ab로 약칭한다. 단일클론 항체는 mAb로 약칭한다.
인간 항체는 형질전환 쥐로부터 얻어지는 항체이며, 항원의 공격에 대항하는 특이 인간 항체를 생산하기 위해 "설계되어"왔다. 이 기술에서, 인간의 중쇄 및 경쇄 유전자좌의 구성요소들은 내재의 중쇄 및 경쇄 유전자좌의 표적화된 분열을 포함하는 배아줄기세포주로부터 유래된 쥐의 균주에 삽입된다. 형질전환 쥐는 인간 항원에 특이적인 인간 항체를 합성할 수 있으며, 쥐는 인간 항체를 분비하는 하이브리도마(hybridomas)를 생산하는데 이용될 수도 있다. 형질전환 쥐로부터 인간 항체를 얻은 방법은 Greenet al.,Nature Genet.7:13 (1994), Lonberget al.,Nature 368:856 (1994) 및 Tayloret al.,Int. Immun. 6:579 (1994)에 기재되어 있다. 또한, 온전한 인간 항체는, 당분야에 공지된, 유전자 또는 염색체 형질감염법 또는 파아지-디스플레이(phage-display) 기술로도 구축할 수 있다. 예를 들면, McCaffertyet al.,Nature348:552-553 (1990)에 기재된, 면역화되지 않은 공여자에게서 얻은 면역글로불린 가변부 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 그의 단편을 시험관내(in vitro) 생산하는 방법을 참고할 수 있다. 이 기술에서, 항체 가변부 유전자는 섬사상(filamentous) 박테리오파아지의 다수 혹은 소수 표면 단백질에 프레임내(in-frame) 클론되어 파아지 입자 표면에 기능성 항체 단편으로 표시된다. 사상 입자들은 파아지 게놈의 단일사슬 DNA copy를 갖고 있기 때문에, 항체의 작용 성질에 기초하여 선별하면 이들 성질을 발현하는 항체를 코딩하는 유전자를 선별할 수도 있다. 이 방법으로, 파아지는 B 세포의 몇몇 성질을 모방하게 된다. 파아지 디스플레이는 다양한 형식으로 행해질 수 있다. 자세하게는 Johnson and Chiswell,Current Opinion in Structural Biology3:5564-571 (1993)를 참고할 수 있다.
또한, 인간 항체는 시험관내(in vitro) 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수도 있다. 미국특허 5,567,610호 및 5,229,275호를 참고할 수 있으며, 이들은 본 발명에 온전히 참고문헌으로 포함된다.
항체 단편은 F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv 등과 같은 항체의 일부분이다. 구조에 상관없이, 항체 단편은 원래(intact) 항체에 의해 인식되는 동일한 항원과 결합한다. 예를 들면, 항-CEA 단일클론 항체 단편은 CEA의 에피토프와 결합한다.
또한, "항체 단편"은 특이 항원에 결합하여 복합체를 형성함으로써 항체처럼 작용하는 합성 또는 유전자적으로 조작된 단백질도 포함한다. 예를 들면, 항체 단편은 경쇄 가변영역으로 이루어진 분리된 단편들, 중쇄 및 경쇄의 가변영역으로 이루어진 "Fv" 단편들, 경쇄 및 중쇄 가변영역들이 펩티드 연결자(peptide linker)에 의해 연결되어 있는 재조합 단일사슬 폴리펩티드 분자("scFv 단백질") 및 초가변영역을 모방한 아미노산 잔기로 이루어진 최소의 인식 유닛을 포함한다.
항체 분자의 중쇄 및 경쇄 불변영역들은 인간 항체와 같은 제 2 종족으로부터 유래된 것인 반면에, 키메라 항체는 가변부와, 설치류 항체와 같은 제 1 종족으로부터 유래된 상보성 결정영역을 포함하는 재조합 단백질이다.
항체 분자의 중쇄 및 경쇄 불변영역들은 인간 항체로부터 유래된 것인 반면에, 인간화된 항체들은 단일클론 항체의 상보성 결정영역이 쥐 면역글로불린과 같은 제 1 종족 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄 가변쇄에서 인간 중쇄 및 경쇄 가변부로 전이된 재조합 단백질이다. 인간화된 항체들은 CDR-이식된 항체들로 언급될 수도 있다.
본 명세서에서, "양특이성 항체"는 다른 두 성분, 즉 표적화된(targeted) 조직과 표적가능한 구성체(targetable construct)에 결합할 수 있는 항체를 이르는 용어이다.
본 명세서에서, 치료약제는 본 발명의 항체와 함께 적정 복용량 일정에 따라 환자에게 투여되는 또는 항체 성분에 접합하여 치료에 유용한 접합체를 형성하는 분자 또는 원자이다. 치료약제의 예로는 약물, 독소, 호르몬, 효소, 면역조절자(immunomodulators), 킬레이트, 붕소 화합물, 광활성화제(photoactive agents) 또는 광활성 염료, 및 방사성 동위원소를 들 수 있다. 대표적인 면역조절자로는 사이토카인(cytokine), 줄기세포 성장인자, 림포독소(lympotoxin), 조혈인자(hematopoietic factor), 콜로니자극인자(CSF), 인터페론(IFN), 적혈구생성촉진인자(erythropoietin), 혈소판증식인자(thromopoietin) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 특히 종양괴사인자(TNF)와 같은 림포독소, 인터류킨(IL)과 같은 조혈인자, 과립구-콜로니자극인자(granulocyte-colony stimulating facto; G-CSF) 또는 과립구 매크로파아지-콜로니자극인자(granulocyte macrophage-colony stimulating factor; GM-CSF)와 같은 콜로니자극인자, 인터페론-α, -β 또는 -γ와 같은 인터페론, 및 "S1 인자"로 지정된 줄기세포 성장인자가 유용하다. 본 발명에서는, 특히, IL-1, IL-2, IL-3, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, 인터페론-γ, TNF-α 또는 이들의 혼합물과 같은 면역조절자가 보다 유용하다. "scFv"는 항체의 경쇄 및 중쇄 가변영역이 펩티드 연결자에 의해 연결되어 있는 재조합 단일사슬 폴리펩티드 분자를 나타내는 용어이다.
"Fv"는 중쇄 및 경쇄의 가변영역들로 이루어진 단편들을 나타내는 용어이다.
"재조합 숙주"는 클로닝 벡터나 발현 벡터를 포함하는 원핵세포 또는 진핵세포일 수 있다. 또한, 이 용어는 원핵세포 또는 진핵세포, 뿐만 아니라 형질전환 동물도 포함하며, 이들은 숙주 세포의 염색체 또는 게놈 또는 숙주 세포의 세포내에 클론된 유전자를 포함하기 위해 유전자적으로 조작되어 왔다. 적당한 포유류 숙주 세포로는 SP2/0 세포와 같은 골수종세포, 및 NS0 세포, 뿐만 아니라 Chinese Hamster Ovary(CHO)세포, 하이브리도마 세포주 및 항체 발현에 유용한 다른 포유류 숙주 세포들을 포함한다. 또, mAbs와 다른 융합 단백질들을 발현하는데에는 WO 0063403 A2호에 개시된 인간세포주, PER.C6가 특히 유용한데, 이 세포주는, CHO, COS, Vero, Hela, BHK 및 SP2-세포주와 같은 통상의 포유류 세포주에 비하여, 재조합 단백질을 2 내지 200배 더 생산한다. 특히, 온전한 인간 항체를 만들기 위해서는 변형된 면역계를 지닌 특이 형질전환 동물들이 유용하다.
항원으로는 어떤 항원이든지 좋다. 대표적인 항원으로는 세포 표면 또는 종양-관련 항원일 수 있으며, 또는 미생물 또는 기생충과 연관된, 또는 질병에 걸린 조직 또는 자가면역질환과 관련되는 B- 또는 T-세포와 같이 질병을 일으키는 세포 타입과 연관된 항원일 수 있으며, 또는 심장혈관계 또는 신경계 질환의 표적 항원(예를 들면, 전자의 경우 동맥경화성 플라그 또는 색전 및 후자의 경우 알츠하이머 병과 연관된 아밀로이드)일 수 있다. 본 명세서에서, "조직"은 당분야에 있는 통상의 기술자가 이해하고 있는 조직을 의미하는 용어이다. 본 출원에서 설명된 바와 같이, 조직은 신체상의 조직 또는 유액(예를 들면, 혈액 세포)의 개개 세포 또는 세포군, 또는 세포 배양액을 의미할 수도 있다. 게다가, 조직은 피검자 내에 있을 수도 있고 또는 피검자로부터 생검된 또는 제거된 것일 수도 있다. 또한, 조직은 신체상의 기관 전체 또는 일부분일수도 있다. 게다가, 조직은 절제(excision)와 본발명의 제조공정 사이에 어떤 보존 단계도 거치지 않는, 피검자로부터 막 절제된 "신선한" 상태에 있을 수 있다. 또한 조직은 본 발명의 제조공정에 사용되기 이전에, 냉동, 급속 냉동, 파라핀 포매 및 조직 고정을 포함하는, 여기에 국한되는 것은 아니지만, 표준 조직 제법에 의해 보존될 수도 있다.
"표적화된 조직"은 표적가능한 접합체가 전달될 수 있는 조직계(system), 기관, 조직, 세포, 수용체 또는 세포기관이다. 본 발명의 치료상의 측면에서, 표적화된 조직은 감염되거나, 기능장애이거나, 이탈된 또는 이소성(異所性)일 수 있다(예를 들면, 감염된 세포, 암 세포, 자궁내막증). 골수와 같은 정상적인 조직들은 치료상의 중재에서 필요한 경우 여러 방법으로 적출될 수도 있다. 본 발명의 진단상의 측면에서는, 표적화된 조직을 검출하는 것이 바람직하다.
본 명세서에서, "피검자"는 사람과 다른 영장류, 설치류(예를 들면, 생쥐, 집쥐(rat) 및 기니아 피그), lagamorphs(예를 들면, 토끼), 소과의 동물(예를 들면, 소), 양과의 동물(예를 들면, 양), 염소과의 동물(예를 들면, 염소), 돼지과의 동물(예를 들면, 돼지), 말과의 동물(예를 들면, 말), 개과의 동물(예를 들면, 개), 고양이과의 동물(예를 들면, 고양이), 가금류(예를 들면, 닭, 칠면조, 오리, 거위, 다른 순계의 새, 등등)를 포함하는, 여기에 국한되지 않는, 동물(즉, 척추동물 및 무척추동물)을 의미하며, 뿐만 아니라 유제류(예를 들면, 사슴), 곰, 물고기, lagamorphs, 설치류, 조류 등의 동물을 포함하는, 여기에 국한되지 않는, 야생 동물을 의미하는 용어이다. 이 용어가 특정 연령이나 성에 국한되지는 않는다. 따라서, 성인과 갓태어난 피검자, 뿐만 아니라 태아, 남성이든 여성이든 모두 이 용어에 포함된다.
본 명세서에서, "모(parent) bsAb"는 모(parent) bsAb의 경첩 불변영역이 CH2-CH3 도메인 공유영역에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함하고 있지 않다는 점만 제외하고는 모든 면에서 변이 bsAb와 유사한 bsAb를 의미하는 용어이다.
본 명세서에서, "경첩 불변영역"은 IgG의 C1, CH1, 경첩, CH2 및 CH3 영역을 포함한다. 중쇄 불변영역은 CH1, 경첩, CH2 및 CH3 영역을 포함하는 반면에, 경쇄 불변영역은 C1영역을 포함한다.
Ⅱ. 변이 양특이성 항체
변이 bsAb의 Fvs는 항체에서 유래된 것이며, 표적화된 조직에 특이적으로 결합한다. 대표적인 Fvs는, 예를 들면, "항-CD20 항체 및 이들의 융합 단백질 및 이용방법"으로 출원된 미국 가출원, Attorney Docket No. 18733/1073, 미국 가출원 60/356,132호, 미국 가출원 60/416,232호 및 Attorney Docket No. 18733/1155(이들의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 기재된 항-CD20 항체; 미국특허 5,874,540호(이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 개시된, Class Ⅲ 항-암태아성 항원 항체(항-CEA 항체)인, hMN-14 항체; 미국출원 10/116,116호(이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 기재된 Mu-9 항체; 미국 가출원 60/360,259호(이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 기재된 LL1 항체; 미국 가출원 60/399,707호(이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 기재된 AFP 항체; "단일클론 항체 cPAM4"로 출원된 미국 가출원, Attorney Docket No. 18733/1102(이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 기재된 PAM4 항체; 미국 가출원 60/360,229호(이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 기재된 RS7 항체; 및 미국특허 5,789,554호, 6,187,287호 및 미국출원 09/741,843호, 09/988,013호(이들의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다)에 개시된 CD22 항체에서 유래된 것이다. 참고문헌에서도 언급된 바와 같이, 조혈계 및 고형 종양의 많은 다른 종양-관련 항원들이 공지되어 있으며, 예를 들면, 국한되는 것은 아니지만, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD40, CD45, CD66, CD74, CD80, Ii, Ia, HLA-DR, PSMA, PSA, 전립선의 산성 인산화효소, 테나신(tenascin), Le(y), AFP, HCG, CEA, CSAp, PAM4, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, EGP-1, EGP-2, EGFR, HER2/neu, 인슐린 성장인자 수용체, S100, VEGF, 태반 성장인자(PIGF), 태반의 알칼리성 인산화효소, 괴사생성물, 암유전자 생성물 등을 포함한다. hMN-14의 중쇄 cDNA와 아미노산 서열은 도 1에 나타내었고, hMN-14의 경쇄 cDNA와 아미노산 서열은 도 2에 나타내었다.
Fvs를 코딩하는 cDNA는 경첩 불변영역을 코딩하는 벡터에 삽입될 수 있다. IgG1의 경첩 불변영역의 아미노산을 코딩하는 대표적인 발현 벡터, pdHL2는 Gillies S.D., Lo KM 및 Wesolowski, J.J. Immunol Methods 125191-202 (1989) 및 Losman, M.J.et al.Cancer Supplement 802660-2666 (1997)에 의해 보고되었으며, 본 발명의 변이 양특이성 항체를 구축하는데 사용될 수 있다.
Fvs는 쥐 항체, cdr-이식된 (인간화된) 항체 또는 인간 항체로부터 유래될 수 있다. Fvs는 인간 단일클론 항체, 인간 Fv-라이브러리로 형질전환된 쥐 또는 파아지/리보솜 인간 IgG 라이브러리로부터 유래될 수 있다.
Fvs가 CDR-이식된 항체로부터 유래된 경우, 항원 결합영역이 유래된 공여자(donor) 항체의 종류 또는 타입을 고려하여 적절한 가변영역 프레임워크 서열을 사용할 수 있다. 사용되는 인간 프레임워크 타입이 공여자 항체와 동일한 혹은 유사한 종류 또는 타입인 것이 바람직하다. 또한, 특히 CDR에 공간적으로 가까운 혹은 인접한 위치에서, 공여자 항체 서열과의 상동관계를 최대화 또는 최적화할 수 있는 프레임워크를 선택하는 것이 유리하다. CDR-이식된 항체를 구축하는데에 사용될 수 있는 인간 프레임워크의 예로는 LAY, POM, TUR, TEI, KOL, NEWM, REI 및 EU (Kabatet al., 1987)를 들 수 있다. KOL과 NEWM은 중쇄 구축에 적절하다. REI는 경쇄 구축에 적절하며, EU는 중쇄 및 경쇄 구축 둘 다에 적절하다.
CDR-이식된 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변영역은 적절한 인간 경쇄 또는 중쇄 불변부에 융합될 수 있다 (여기에서, "중쇄 불변부"는, 특별한 언급이 없는 한, 경첩 영역을 포함하는 것으로 이해할 수 있다). CDR-이식된 항체의 인간 불변부는 항체의 소정의 기능, 특히 요구될 수 있는 효과기 기능을 고려하여 선택할 수 있다. 예를 들면, CDR-이식된 항체를 치료 목적으로 사용하고, 항체 효과기 기능이 요구되는 경우에는, IgG1과 IgG3 동종 도메인을 사용할 수 있다. 반면에, 항체 효과기 기능이 요구되지 않는 즉, 영상, 진단 또는 세포독성 표적화를 목적으로 CDR-이식된 항체를 사용하는 경우에는, IgG2와 IgG4 동종 도메인을 사용할 수 있다. 경쇄가변영역에 융합될 수 있는 경쇄 인간 불변영역으로는 인간 ??쇄 또는, 특히 인간 ??쇄를 포함한다.
양특이성 변이 항체의 경첩 불변영역은 CH2-CH3 도메인 공유영역에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함한다. 환언하면, 양특이성 변이 항체의 인간 경첩 불변영역과 양특이성 모(parent) 항체의 인간 경첩 불변영역을 비교하는 경우, 이 영역들은 하나 이상의 아미노산 차이로 구별될 것이다.
변이(mutation)에는, 예를 들어, 치환된 아미노산이 유사한 구조적 또는 화학적 성질, 예를 들어 전하(charge)나 크기를 갖는 "보존적(conservative)"변화 (예를 들어, 류신을 이소류신으로 치환)도 포함될 수 있다. 또한, 변이에는, 예를 들어 "비-보존적" 변화(예를 들어, 글리신을 트립토판으로 치환)도 포함될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 253 위치의 아미노산(Edelman의 넘버링 체계에 따라)이 변이된다. 이 위치에서의 대표적인 변이는 이소류신을 알라닌으로 바꾸는 것이다. 몇몇 구현예에서는, 253 위치의 아미노산이, 변이 bsAb의 클리어런스(clearance) 동태가 253 위치의 아미노산이 알라닌으로 변했을 때 관찰되는 것과 유사하게 나타나는 아미노산으로 변이된다.
한 구현예에서, 양특이성 변이 항체의 경첩 불변영역은 인간 IgG1의 아미노산 서열을 포함하고 있다. 중쇄의 CH1, 경첩, CH2 및 CH3 영역들을 코딩하는 아미노산은 도 1의 아미노산 139-468로 나타내었고, C1쇄를 코딩하는 아미노산은 도 2의아미노산 128-232로 나타내었다. 이소류신 253을 확인하는데 사용된 넘버링 체계는, Edelmanet al.이, Edelmanet al.Biochemistry 63, 78-85 (1969)에, Eu 중쇄 및 경쇄를 기재할 때 사용했던 넘버링 체계와 일치한다.
양특이성 변이 항체의 scFv 성분은 표적가능한 구성체와 특이적으로 결합한다. 본 발명에서는 어떤 scFv를 사용할 지를 심사숙고하였다. 바람직한 scFv 성분으로는, (쥐의 항-HSG에서 유래된) 679 scFv와 (쥐의 항-diDTPA에서 유래된) 734scFv를 들 수 있다. scFv는 쥐 항체, cdr-이식된 (인간화된) 항체 또는 인간 항체로부터 유래될 수 있다.
scFvs가 CDR-이식된 항체에서 유래한 경우, 항원 결합영역이 유래된 공여자 항체의 종류 또는 타입을 고려하여 적절한 가변영역 프레임워크 서열을사용할 수 있다. 사용되는 인간 프레임워크 타입이 공여자 항체와 동일한 혹은 유사한 종류 또는 타입인 것이 바람직하다. 또한, 특히 CDR에 공간적으로 가까운 혹은 인접한 위치에서, 공여자 항체 서열과의 상동관계를 최대화 또는 최적화할 수 있는 프레임워크를 선택하는 것이 유리하다. CDR-이식된 항체를 구축하는데에 사용될 수 있는 인간 프레임워크의 예로는 LAY, POM, TUR, TEI, KOL, NEWM, REI 및 EU (Kabatet al., 1987)를 들 수 있다. KOL과 NEWM은 중쇄 구축에 적절하다. REI는 경쇄 구축에 적절하며, EU는 중쇄 및 경쇄 구축 둘 다에 적절하다.
CDR-이식된 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변영역은 적절한 인간 경쇄 또는 중쇄 불변부에 융합될 수 있다 (여기에서, "중쇄 불변부"는, 특별한 언급이 없는 한, 경첩 영역을 포함하는 것으로 이해할 수 있다). CDR-이식된 항체의 인간 불변부는 항체의 소정의 기능, 특히 요구될 수 있는 효과기 기능을 고려하여 선택할 수 있다. 예를 들면, CDR-이식된 항체를 치료 목적으로 사용하고, 항체 효과기 기능이 요구되는 경우에는, IgG1과 IgG3 동종 도메인을 사용할 수 있다. 반면에, 항체 효과기 기능이 요구되지 않는 즉, 영상, 진단 또는 세포독성 표적화를 목적으로 CDR-이식된 항체를 사용하는 경우에는, IgG2와 IgG4 동종 도메인을 사용할 수 있다. 경쇄 가변영역에 융합될 수 있는 경쇄 인간 불변영역으로는 인간 ??쇄 또는, 특히 인간 ??쇄를 포함한다.
바람직한 변이 bsAb는 hMN-14IgGI253A-(734scFv)2이다. 이 변이 bsAb에서, Fvs는 hMN-14IgG에서 유래된 것이고, scFvs는 (쥐의 항-diDTPA에서 유래된) 734scFv이며, 경첩 불변영역은 인간 IgG1의 아미노산 서열을 포함하고 있다.
본 발명의 구현예에서, 1 대 1 결합작용은 변이 bsAb와 표적가능한 구성체 사이에서 얻어진다. 예를 들어, 본 발명의 변이 bsAb가 두개의 DTPA 부위를 포함하고 있는 2가의 표적가능 구성체 IMP 192와 상호작용하는 경우, bsAb 한 개가 IMP 192 한 개에 결합한다. 이 상호작용은 실시예 3에 설명되어 있다.
Ⅲ. 변이 bsAb에 표적될 수 있는 구성체
몇몇 구현예에서, 본 발명의 변이 bsAb는 표적가능한 구성체와 결합한다. 바람직하게는, 변이 bsAb의 scFvs가 표적가능한 구성체와 결합한다. 표적가능한 구성체는 다양한 구조를 가질 수 있으나, 면역반응을 충분히 유도해낼 수 있고, 빠른생체내(in vivo) 제거(clearance)를 위해 선택되어야 한다. 본 발명에서 사용할 수 있는 표적가능한 구성체의 예로는, 1999년 6월 22일에 출원된 미국출원 09/337,756호 및 2001년 4월 3일에 출원된 미국출원 09/823,746호에 기재되어 있으며, 이들 개시물의 전체 내용들은 참고문헌으로서 본 발명에 포함된다.
강한 면역 반응을 유도하기 위해서는 소수성 약제들이 좋고, 반면에 빠른 생체내(in vivo) 제거를 위해서는 친수성 약제들이 바람직하다. 따라서, 소수성과 친수성 사이에 균형을 설정할 필요가 있다. 이것은 많은 유기물질들이 지닌 고유의 소수성을 상쇄시킬 수 있는 친수성 착화제(chelating agents)를 사용함으로써 부분적으로는 달성할 수 있다. 또한, 표적가능한 구성체의 서브-유닛으로, 서로 반대되는 용해성질을 지닌 것으로, 예를 들면 일부는 소수성이고 일부는 친수성인, 아미노산을 포함하는, 펩티드를 선택할 수도 있다. 펩티드 대신에, 탄화수소물을 사용할 수도 있다.
착화제와 같은 다른 성분에 연결될 수만 있다면, 적어도 두개의, 바람직하게는 2 내지 10개의 아미노산 잔기를 지닌 펩티드를 사용할 수 있다. 연결자(linker)는 킬레이트에 금속이온을 지니고 있는, 저분자량의, 바람직하게는 50,000달톤 이하, 더욱 바람직하게는 20,000달톤 이하, 10,000달톤 이하 또는 5,000달톤 이하의 분자량을 지닌 접합체(conjugate)이어야 한다. 예를 들면, 분자의 인듐-DTPA 부분에 대항하는 항체를 생성하는데에 공지된 펩티드 DTPA-Tyr-Lys(DTPA)-OH (여기에서, DTPA는 디에틸렌트리아민펜타아세트산이다)를 사용해 왔다. 그러나, 인듐을 지니지 않은 분자를 사용하고 적절한 선별단계(screening steps)를 거쳐 티로실-리신디펩티드에 대항하는 새로운 Abs를 만들 수 있다. 더욱 일반적으로, 항원 펩티드는, 예를 들면 DOTA-Phe-Lys(HSG)-Tyr-Lys(HSG)-NH2(여기에서, DOTA는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸테트라아세트산이고, HSG는 다음 구조식의 히스타민 석시닐 글리실기이다)과 같이 4개 이상의 잔기를 가질 수 있다 :
금속을 지니지 않은 펩티드도, 얻어지는 Abs가 Phe-Lys-Tyr-Lys 골격(backbone)에 대항하는 활성으로 선별된다면, 면역원으로 사용할 수 있다.
본 발명은 또한, 궁극적으로 bsAb/연결자 체제가 이용되는 경우, 연결자 부분을 인식하는 scFv 성분이 완전 특이적임을 확신할 수만 있다면, 골격구조에 D-아미노산과 같은 비-자연의 아미노산을 배합하는 것도 고려하고 있다. 나아가, 본 발명은 비-자연의 아미노산과 펩티드로부터 구축되는 다른 골격 구조체들도 고려하고 있다.
면역원으로 사용될 수 있는 펩티드는 고상 지지체를 사용하고 반복적인 직교 탈보호반응과 결합반응으로 이루어진 표준 기술을 이용하는 자동화 펩티드 합성기(automated peptide synthesizer)에서 통상적으로 합성된다. 펩티드 중의 유리 아미노기는, 이후에 킬레이트 결합에 사용되며, 아세틸기와 같은 표준 보호기들로 유리하게 차단될 수 있다. 이러한 보호기들은 당업자들에게 공지된 것들이다. Greeneand WutsProtective Groups in Organic Synthesis, 1999 (John Wiley and Sons, N.Y.) 참고. 펩티드가 이후에 변이 bsAb에 사용되도록 제조된 경우, 이들은 생체내 카르복시펩티다아제 활성을 억제하기 위해, 수지로부터 쉽게 분리되어 상응하는 C-말단 아미드를 생성한다.
면역원의 합텐은 면역원 인식성분, 예를 들면 화학물질 합텐을 포함한다. 화학물질 합텐, 바람직하게는 HSG 또는 DTPA 합텐을 사용하는 경우, 항체 연결자의 특이성이 발현된다. 이것은, HSG 또는 DTPA 합텐에 대항하여 생성된 항체들이 공지되어 있고 항체의 scFv 부분이 변이 bsAb에 쉽게 삽입될 수 있기 때문이다. 따라서, 연결자와 부속 합텐과의 결합은 scFv 성분에 대해 고도로 특이적일 수 있다.
펩티드가 2가의 펩티드인 경우, 표적가능한 구성체는 1가 또는 2가일 수 있다. 일례로 표적가능한 구성체는 IMP 192 (Ac-Lys(DTPA)-Tyr-Lys(DTPA)-Lys(TscG-Cys-)-NH2)이다. IMP 192는 진단용 Tc-99m 및 In-111과, 치료용 Re-188 및 Re-186 모두를 결합시킨다. 또, IMP 192는 티로신을 지닌 2가의 DTPA-펩티드를 결합시킨다.
본 발명의 방법에서, 표적가능한 구성체는 질병에 걸린 조직을 검출하는데 유용한 방사성 동위원소를 1종 이상 포함할 수 있다. 특히 유용한 진단상의 방사성 핵종으로는, 여기에 국한되는 것은 아니지만,18F,52Fe,62Cu,64Cu,67Cu,67Ga,68Ga,86Y,89Zr,94mTc,94Tc,99mTc,111In,123I,124I,125I,131I,154-158Gd,177Lu,32P,188Re,90Y 또는 다른 γ-, β- 또는 양전자-방사체를 포함하며, 바람직하게는 20 내지 4,000 keＶ 범위의, 보다 바람직하게는 25 내지 4,000 keＶ 범위의, 더욱 바람직하게는 20 내지 1,000 keＶ 범위의, 더욱더 바람직하게는 70 내지 700 keＶ 범위의 에너지를 지닌 것들이 좋다.
본 발명의 방법에서, 표적가능한 구성체는 질병에 걸린 조직을 치료하는데 유용한 방사성 동위원소를 1종 이상 포함할 수 있다. 특히 유용한 치료상의 방사성 핵종으로는, 여기에 국한되는 것은 아니지만,32P,33P,47Sc,64Cu,67Cu,67Ga,90Y,111Ag,111In,125I,131I,142Pr,153Sm,161Tb,166Dy,166Ho,177Lu,186Re,188Re,189Re,212Pb,212Bi,213Bi,211At,223Ra 및225Ac를 포함한다. 치료상의 방사성 핵종으로 바람직하게는 60 내지 700 keＶ 범위의 에너지를 지닌 것이 좋다.
본 발명의 방법에서, 표적가능한 구성체는 자기공명영상법(MRI)에 이용되도록 조영증강제(image enhancing agent)를 1종 이상 포함할 수 있다. 비제한적인 실시예의 형태로, 표적가능한 구성체는 1종 이상의 상자성 이온, 예를 들면 Mn, Fe 및 Gd을 포함한다.
본 발명의 방법에서, 표적가능한 구성체는 초음파법에 이용되도록 조영증강제를 1종 이상 포함할 수 있다. 비제한적인 실시예의 형태로, 표적가능한 구성체는 1종 이상의 초음파 영상화제(ultrasound imaging agents)를 포함한다. 이러한 구현예에서, 표적가능한 구성체는 리포좀 지질막의 외부 표면에 공유결합된 2가의DTPA-펩티드를 지닌 리포좀이다. 선택적으로는, 상기 리포좀이 가스로 채워져 있을 수 있다(gas-filled).
Ⅳ. 킬레이트 성분
연결자 성분에 친수성 킬레이트 성분이 존재하는 경우 빠른 생체내(in vivo) 제거를 확신할 수 있다. 친수성 외에도, 킬레이트 화합물은 그들의 금속-결합 성질 때문에 선택되며, 연결자의 bsAb 에피토프가 펩티드의 일부이거나 비-킬레이트 화학물질 합텐인 경우, 금속-킬레이트 착화물 인식은 더 이상 논쟁거리가 아니기 때문에, 임의적으로 변화된다.
특히 유용한 금속-킬레이트 착화물로는, 방사성-영상화법 및 RAIT를 위해,47Sc,52Fe,55Co,67Ga,68Ga,111In,89Zr,90Y,161Tb,177Lu,212Bi,213Bi 및225Ac와 함께 사용되는 2-벤질-DTPA 및 이의 모노메틸 및 시클로헥실 동족체를 포함한다. Mn, Fe 및 Gd와 같은 비-방사성 금속과 착화물을 이루는 경우, MRI에도, 본 발명의 변이 bsAb를 함께 사용하는 경우에는 동일한 킬레이트 화합물들을 사용할 수 있다. NOTA (1,4,7-트리아자-시클로노난-N,N',N"-트리아세트산), DOTA 및 TETA (p-브로모아세트아미도-벤질-테트라에틸아민테트라아세트산)과 같은 거대고리 킬레이트 화합물들은 다양한 금속 및 방사성 금속, 특히 Ga, Y 및 Cu의 방사성 핵종에 유용하다.
리간드가 카르복실레이트 혹은 아민기와 같은 강염기성 킬레이트화 기능을 포함하는 DTPA 및 DOTA-형 킬레이트 화합물들은 강산성 양이온, 특히 Ⅱa족 및 Ⅲa족 금속 양이온들을 킬레이트화하는데 더 효과적이다. 이러한 금속-킬레이트 착화물은 고리 크기를 대상이 된 금속에 맞춤으로써 매우 안정하게 만들어질 수 있다. 거대고리형 폴리에테르와 같은 다른 고리형 킬레이트 화합물들도 RAIT용223Ra와 같은 안정하게 결합하는 핵종에 유용하다. 포르피린 킬레이트 화합물들도 수많은 방사성 금속들과 함께 사용할 수 있고, bsAb-유도된 면역-광치료용 저온 금속 착화물로서도 유용하다. 1종 이상의 킬레이트 화합물은 운반체(carrier)에 접합하여 다가의 금속 이온들, 예를 들면 저온의 이온들, 진단상의 방사성 핵종 및/또는 치료상의 방사성 핵종을 결합시킨다. 특히 유용한 치료상의 방사성 핵종으로는, 여기에 국한되는 것은 아니지만,32P,33P,47Sc,64Cu,67Cu,67Ga,90Y,111Ag,111In,125I,131I,142Pr,153Sm,161Tb,166Dy,166Ho,177Lu,186Re,188Re,189Re,212Pb,212Bi,213Bi,211At,223Ra 및225Ac를 포함한다. 특히 유용한 진단상의 방사성 핵종으로는, 여기에 국한되는 것은 아니지만,18F,52Fe,62Cu,64Cu,67Cu,67Ga,68Ga,86Y,89Zr,94mTc,94Tc,99mTc,111In,123I,124I,125I,131I,154-158Gd 및175Lu를 포함한다.
미국특허 5,753,206호에 개시된 킬레이트 화합물들, 특히 티오세미카르바조닐글리옥실-시스테인(Tscg-Cys) 및 티오세미카르바지닐아세틸-시스테인(Tsca-Cys) 킬레이트 화합물은 Tc, Re, Bi 및 다른 전이금속의 약산성 양이온들, 란타나이드 및 약염기성 리간드, 특히 황- 또는 인-함유 리간드에 단단히 결합된 액티나이드를결합시키는데 유리하게 이용된다. 1종 이상의 킬레이트 화합물을, In(Ⅲ) 양이온의 경우 펩티드, 예를 들면 DTPA 또는 유사 킬레이트 화합물 및 Tc 양이온의 경우 티올-함유 킬레이트 화합물, 예를 들면 Tscg-Cys에 연결하는 것이 유리할 수 있다. di-DTPA 합텐에 대항하는 항체들이 공지되어 있고(Barbet '395, 상기 문헌) 표적화 항체에 쉽게 결합되어 bsAb를 형성하기 때문에, 방사성 동위원소를 표적화하기 위하여, 예비표적화 과정중에, 저온의 di-DTPA 킬레이트 화합물 및 방사성 동위원소를 결합시키기 위한 다른 킬레이트 화합물과 함께 펩티드 합텐을 사용할 수 있다. 이러한 펩티드의 일례로 Ac-Lys(DTPA)-Tyr-Lys(DTPA)-Lys(Tscg-Cys-)-NH2을 들 수 있다. 이 펩티드에 In(Ⅲ)을 미리 로드한 후 99m-Tc 양이온으로 표지하였다. In(Ⅲ) 양이온은 DTPA에 의해 우선적으로 착화되며, Tc 양이온은 티올-함유 Tscg-Cys에 우선적으로 결합한다. NOTA, DOTA, TETA 등과 같은 다른 강산성 킬레이트 화합물들을 DTPA 그룹 대신에 사용할 수 있으며, 이들에 특이적인 Mab는 항-di-DTPA Mab를 형성하는데에 이용되어 온 것과 유사한 기술을 사용하여 제조할 수 있다.
두개의 다른 강산성 또는 약산성 킬레이트 화합물을 연결자, 예를 들면 다른 크기의 킬레이트 고리를 지닌 연결자에 삽입하여 두개의 다른 강산성 또는 약산성 양이온에 우선적으로 결합시킬 수 있으며, 이는 다른 크기의 양이온들, 킬레이트 고리의 형상 및 양이온의 바람직한 외형 구조 덕분이다. 이 때문에, 둘 중 하나 또는 둘다 방사성이거나 또는 MRI 개선에 유용한 두개의 다른 금속을, 예비표적화된 bsAb에 의해 최종적으로 포획될 연결자에 삽입할 수 있다.
바람직한 킬레이트 화합물로는 NOTA, DOTA 및 Tscg 및 이들의 혼합물을 포함한다. 이들 킬레이트 화합물들은, 하기의 구조로 예시된 바와 같이, 킬레이트-펩티드 접합체에 삽입되어 왔다:
(a) DOTA-Phe-Lys(HSG)-D-Tyr-Lys(HSG)-NH2;
(b) DOTA-Phe-Lys(HSG)-Tyr-Lys(HSG)-NH2;
(c) Ac-Lys(HSG)D-Tyr-Lys(HSG)-Lys(Tscg-Cys)-NH2;
(d); 및
(e).
상기한 킬레이트-펩티드 접합체 (d)와 (e)는68Ga을 결합시킬 수 있으며, 따라서 양전자방사단층촬영(PET) 분야에 유용하다.
킬레이트 화합물들은 이하 실시예에서 상세하게 논의되는 표준 화합물을 사용하여 연결자 성분에 결합된다. 간단하게 설명하면, 펩티드 Ac-Lys(HSG)D-Tyr-Lys(HSG)-Lys(Tscg-Cys)-NH2의 합성은, 먼저 펩티드 합성기에서 Aloc-Lys(Fmoc)-OH를 Rink 아미드 수지에 부착함으로써 수행하였다. 이때 사용된 보호기 "Aloc"와 "Fmoc"는 알릴옥시카르보닐기와 플루오레닐메틸옥시 카르보닐기를 의미한다. 그런 다음, Fmoc-Cys(Trt)-OH와 TscG를 표준 Fmoc 자동화 합성 계획안에 따라 리신의 측쇄에 부가하여 펩티드: Aloc-Lys(Tscg-Cys(Trt)-rink 수지를 형성하였다. 그런 다음 Aloc를 제거하였다. 합성기에서 펩티드 합성을 계속하여 펩티드: Lys(Aloc)-D-Try-Lys(Aloc)-Lys(Tscg-Cys(Trt)-)-rink 수지를 합성하였다. 이어서 N-말단 아실화반응 및 측쇄 Aloc 보호기 제거를 수행하였다. 그런 다음 얻은 펩티드를, Kaiser test를 이용하여 수지가 아민에 대한 음성 반응이 나올 때까지, 활성화된 N-trityl-HSG-OH로 처리하였다. Karacayet al. Bioconjugate Chem.11:842-854 (2000) 참고. Ac-Lys(HSG)D-Tyr-Lys(HSG)-Lys(Tscg-Cys)-NH2의 합성, 뿐만 아니라 DOTA-Phe-Lys(HSG)-D-Tyr-Lys(HSG)-NH2의 합성 및 DOTA-Phe-Lys(HSG)-Tyr-Lys(HSG)-NH2의 합성에 대해서는 하기에서 보다 상세하게 설명한다.
Ⅴ. 금속 킬레이트의 일반 제법
킬레이트-펩티드 접합체는 오랜 기간동안 고체로 저장될 수 있다. 이들은 금속-결합반응을 위해 단위 분량으로 계량되어, 고체, 수용액 또는 준-수용액, 동결된 용액 또는 감압하에 동결건조된 제제의 형태로 단위 분량으로 저장될 수 있다. 이들은 공지된 공정에 따라 표지될 수 있다. 대표적으로, 강산성 양이온은 통상의염 용액으로 주입되어, 강산성 킬레이트 화합물에 의해, 그리고 어쩌면 약산성 킬레이트 화합물에 의해 포획된다. 그러나, 이후에 약산성 양이온을 첨가하면, 약산성 킬레이트 화합물에 의해 이들의 결합이 이루어지게 되고, 착화된 강산성 양이온들을 치환하게 된다. 예를 들어, 과량의 저온111InCl3존재하에서도, 99m-Tc(Ⅴ)글루코헵토네이트 라벨링, 또는 염화주석과 Na99m-TcO4로부터in situ생성된 Tc 양이온 라벨링은 약산성 킬레이트 화합물 상에서 정량적으로 진행된다.186Re,188Re,213Bi와 같은 다른 약산성 양이온들과, Mn, Co, Ni, Pb, Cu, Cd, Au, Fe, Ag(1가), Zn 및 Hg, 특히64Cu와67Cu 등의 2가 또는 3가의 양이온들은, 이들 중 몇몇은 방사면역진단 또는 방사면역치료에 유용하며, 유사한 기술을 사용하여 연결자 펩티드에 실을 수 있다. Re 양이온은 과레늄산염과 주석이온으로부터in situ생성될 수 있으며, 또는 미리 환원시킨 레늄 글루코헵토네이트 또는 다른 트랜스킬레이트(transchelator)를 사용할 수도 있다. 과레늄산염의 환원은 Tc의 환원에 필요한 양보다 더 많은 양의 주석이온 (전형적으로는, 최종농도 200㎍/㎖ 이상)을 필요로 하기 때문에, 고농도의 주석이온이 이황화물-고리화 펩티드에 존재하는 것과 같은 과민성 이황화물-결합을 환원시키지 않는다는 것을 확신하기 위해서는 주의가 필요하다. 레늄으로 방사성표지하는 동안, Tc-99m로 할 때와 유사한 공정이 이용된다. ReO 금속과 Tscg-Cys- 리간드와의 복합체를 제조하는 방법으로, 펩티드와ReOCl3(P(Ph3)2를 반응시키기는 것이 바람직하며, ReO(에틸렌디아민)2과 갈은 다른 환원종을 사용할 수도 있다.
Ⅵ. 항체 배양 방법
항체-펩티드 골격은 공지된 Ab 생산법에 의해 얻을 수 있다. 예를 들어, 면역성이 있는(immunocompetent) 동물에게, (펩티드)n-KLH (여기에서, KLH는 삿갓조개 혈색소(keyhole limpet hemocyanin)이며, n=1~30)를 완전 Freund 보조제에 현탁시켜 주사하고, 연이어 동일한 면역원을 불완전 Freund 보조제에 현탁시켜 2회 연속 주사한 후, 3일간 항원을 부양한 후 비장 세포를 회수한다. 그런 다음, 회수된 비장 세포를 Sp2/0-Ag14 골수종 세포와 융합시킨 후, 얻어지는 클론의 배양액 상청액을 직접-결합 ELISA법을 이용하여 항-펩티드 활성을 분석한다. 생성된 Abs의 특이성은 원래 면역원의 펩티드 단편을 사용하여 분석한다. 이들 단편들은 자동화 펩티드 합성기를 사용하여 쉽게 제조할 수 있다. Ab 생성을 위해, 효소결핍 하이브리도마를 분리하여 융합된 세포주를 선별한다. 또한, 이 기술은, 연결자, 예를 들어 In(Ⅲ)-DTPA 킬레이트를 포함하는 1종 이상의 킬레이트 화합물에 대항하는 항체를 배양하는데에도 이용할 수 있다. In(Ⅲ)-di-DTPA에 대한 단일클론 쥐 항체들은 공지되어 있다(Barbet '395, 상기 문헌).
본 발명에 사용된 변이 양특이성 항체들은 표시자(marker) 물질로서 다양한 세포 표면 또는 세포내 종양-관련 항원에 특이성을 나타낸다. 이들 표시자들은 종양에 의해 생성되는 물질이거나 종양 부위, 종양세포 표면에 또는 종양세포내에, 세포질내, 세포핵 또는 다양한 세포기관내에 또는 세포이하(sub-cellular) 구조내 어디든지, 축적되는 물질일 수도 있다. 이러한 종양-관련 표시자들 중에는, Herberman, "Immunodiagnosis of Cancer", in Fleisher ed., "The Clinical Biochemistry of Cancer", page 347 (American Association of Clinical Chemists, 1979) 및 미국특허 4,150,149호; 4,361,544호; 및 4,444,744호에 의해 개시된 것들도 있다.
종양-관련 표시자들은 앞의 문헌에서 Herberman에 의해, 수많은 카테고리로 분류되었고, 이 카테고리는 종양성태아성 항원, 태반 항원, 종양원성 또는 종양 바이러스-관련 항원, 조직-관련 항원, 기관-관련 항원, 이소성 호르몬 및 정상 항원 또는 이들의 변종을 포함한다. 경우에 따라서는, 높은 종양-특이성을 지닌 항체를 얻기 위해서 서브유닛 종양-관련 표시자, 예를 들면 β-서브유닛의 인간 융모막 성선자극호르몬(HCG) 또는 암태아항원(CEA)의 γ-영역을 사용하는 것이 유리하다. 이들은 미국특허 4,361,644호 및 4,444,744호에 개시된 비-종양 물질에 대해 크게 감소된 교차-반응성을 지닌 항체의 생산을 자극한다.
다른 표시자로서 막통과 활성체(transmembrane activator)와 CAML-중재자(TACI)도 흥미롭다. Yuet al.Nat. Immunol. 1;252-256 (2000) 참고. 간단하게 설명하면, TACI는 B-세포 악성종양 (예를 들어, 임파선암)에 대한 표시자이다. 또, TACI와 B-세포 성숙 항원(BCMA)은 종양괴사인자에 의해 결합하여 분열-유도 리간드(APRIL)를 동족화하는 것으로 알려져 있다. APRIL은 주요 B- 및 T-세포의 시험관내(in vitro) 분열을 자극하며 생체내(in vivo) B-세포 축적에 의한 비장의 무게를 증가시킨다. APRIL은 또한 TALL-I(BLyS 또는 BAFF로 불리운다)와 수용체 결합에 대해 경쟁한다. 용해성 BCMA와 TACI는 특이적으로 APRIL의 결합을 막아 APRIL-자극에 의한 주요 B-세포의 분열을 차단한다. BCMA-Fc는 또한 쥐에서 삿갓조개 혈색소 및 폐구균에 대항하는 항체의 생산을 억제하며, 이것은 체액성 면역 발생에 BCMA 및/또는 TACI를 거치는 APRIL 및/또는 TALL-I 암호화(signaling)가 필요하다는 것을 보여준다. 따라서, APRIL-TALL-I 및 BCMA-TACI는 B- 및 T-세포 기능의 자극과 관련된 두개의 리간드-두개의 수용체 경로를 형성한다.
면역원에 대항하는 항체의 초기 발생 후에, 항체들은 서열화되고, 연이어 재조합 기술에 의해 제조될 수 있다. 쥐 항체 및 항체 단편들의 인간화(humanization) 및 키메라화(chimerization)는 당업자들에게 공지되어 있다. 예를 들어, 인간화 단일클론 항체들은 쥐의 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄 가변부로부터 유래한 쥐 상보성 결정영역을 인간 가변부에 전이시킨 후 쥐의 대응부(counterpart)의 프레임워크 영역내에 인간 잔기를 치환함으로써 생성한다. 인간화된 단일클론 항체에서 유래한 항체 성분을 사용함으로써 쥐의 불변영역의 면역원성과 관련된 잠정적인 문제를 방지할 수 있다. 쥐의 면역글로불린 가변부를 클론하는 일반적인 기술은, 예를 들어, Orlandiet al.,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:3833 (1989)에 기재되어 있으며, 이의 내용은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다. 인간화된 Mabs를 생산하는 기술은, 예를 들어, Joneset al.,Nature 321:522 (1986), Riechmannet al.,Nature 332:323 (1988), Verhoeyenet al.,Science 239:1534 (1988), Carteret al.,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992), Sandhu,Crit. Rev. Biotech. 12:437 (1992) 및 Singeret al.,J. Immun. 150:2844 (1993)에 기재되어 있으며, 이들 개시물 각각은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다.
또한, 온전한 인간 항체들은 형질전환된 비-인간 동물들로부터 얻을 수도 있다. 예를 들어, Mendezet al.,Nature Genetics, 15:146-156 (1997); 미국특허 5,633,425호 참고. 예를 들면, 인간 항체들은 인간 면역글로불린 유전자좌를 보유하고 있는 형질전환 쥐로부터 회수할 수 있다. 쥐의 체액성 면역계는 내생적인 면역글로불린 유전자를 불활성화시킨 후 인간 면역글로불린 유전자좌를 삽입함으로써 인간화된다. 인간 면역글로불린 유전자좌는 굉장히 복잡하고 전체 인간 게놈의 거의 0.2%를 차지하는 수많은 불연속의 단편들을 포함한다. 형질전환 쥐가 적절한 레퍼토리의 항체들을 생산할 수 있기 위해서는, 대부분의 인간 중쇄 및 경쇄 유전자좌가 쥐 게놈에 삽입되어야 한다. 이것은 생식세포 배열에 인간 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린 유전자좌를 포함하는 효모 인공 염색체(YACs)를 형성하는 것으로 시작하는 단계적 공정에 의해 달성될 수 있다. 각 삽입물의 크기가 대략 1 Mb이기 때문에, YAC 구축에는 면역글로불린 유전자좌의 중복 단편들을 동족 재조합하는 것이 필요하다. 하나는 중쇄 유전자좌를, 다른 하나는 경쇄 유전자좌를 포함하고 있는 두 YAC는, YAC-함유 효모 포자배(spheroblast)와 쥐 배아줄기세포와의 융합을 통해 쥐에게 따로따로 삽입된다. 그런 다음, 배아줄기세포 클론을 쥐 포배에 미세주입한다. 얻어지는 키메라 수컷은 그들의 생식선(germline)을 통해 YAC를 전이시키는 능력을 지닌 것들이 선별되어, 쥐 항체 생산에 있어 쥐 결핍성을 지닌 채 배양된다. 하나는 인간 중쇄 유전자좌를, 다른 하나는 인간 경쇄 유전자좌를 포함하고 있는, 두 형질전환 균주들을 배양하면, 면역화에 대응하는 인간 항체들을 생산하는 자손(progeny)을 창출할 수 있다.
재배열되지 않은 인간 면역글로불린 유전자들도 미세세포-매개성 염색체 전이(MMCT)를 통해 쥐 배아줄기세포내에 삽입될 수 있다. 이 방법에서, 인간 염색체를 포함한 미세세포는 쥐 배아줄기세포와 융합된다. 전이된 염색체는 안정하게 보유되며, 성인 키메라들은 적절한 조직-특이 발현성을 나타낸다.
대안으로서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 조합형 면역글로불린 라이브러리로부터 분리된 인간 항체 단편에서 유래된 것일 수 있다. Barbaset al.,METHODS:A Companion to Methods in Enzymology 2:119 (1991), 및 Winteret al., Ann. Rev. Immunol. 12:433 (1994)를 참고할 수 있으며, 이들 개시물들은 본 발명에 온전히 참고문헌으로서 포함된다. B-세포 불멸화에 의해 단일클론 항체를 생산하는데에 따르는 여러 난점들은 파아지 디스플레이를 이용하여 대장균내에 항체 단편을 조작하고 발현시킴으로써 극복될 수 있다. 높은 친화성을 얻기 위해서, 조합형 면역글로불린 라이브러리에서 유래된 단일클론 항체들은 큰 레퍼토리 사이즈를 포함하고 있어야 한다. 전형적인 방법으로는, 역전사효소를 사용하여 cDNA를 합성하는데에 면역화된 쥐의 림프구 또는 비장세포에서 얻은 mRNA를 사용한다는 것이다. 중쇄 및 경쇄 유전자는 PCR에 의해 개별적으로 증폭되어 파아지 클로닝 벡터에 결찰된다. 하나는 중쇄 유전자를, 다른 하나는 경쇄 유전자를 포함하고 있는 두개의 다른 라이브러리가 생산된다. 파아지 DNA는 각 라이브러리에서 분리되며, 중쇄 및 경쇄 서열은 함께 결찰, 패키지되어 조합형 라이브러리를 형성한다. 각 파아지는 무작위로 짝을 이룬 중쇄 및 경쇄 cDNA를 포함하고 있으며, 대장균을 감염시켜 감염된 세포내에 항체 사슬의 발현을 유도한다. 목적하는 항원을 인식하는 항체를 확인하기 위하여, 파아지 라이브러리를 평판 배양하여 플라크에 존재하는 항체 분자들을 필터에 전이시킨다. 필터를 방사능 표지된 항원과 함께 배양하고, 그런다음 세척하여 과량의 결합되지 않은 리간드를 제거한다. 방사능사진 상의 방사능 스팟은 항원을 결합하는 항체를 포함하고 있는 플라크를 확인시켜 준다. 인간 면역글로불린 파아지 라이브러리를 생산하는데 유용한 클로닝 및 발현 벡터는, 예를 들면, STRATAGENE 클로닝 시스템(La Jolla, CA)으로부터 얻을 수 있다.
고-친화성 scFv를 얻는데에도 유사한 방법을 이용할 수 있다. 예를 들어, Vaughnet al.,Nat. Biotechnol., 14:309-314 (1996) 참고할 수 있다. 큰 레퍼토리를 지닌 scFv는, 공지된 VH, V??및 V??유전자 패밀리에 상응하는 PCR 프라이머를 사용하여, 면역되지 않은 인간 공여자로부터 V-유전자를 분리함으로써 구축할 수 있다. 증폭시킨 후에, V??및 V??유전자풀은 결합하여 하나의 풀을 형성한다. 이들 단편들은 파아지미드 벡터내에 결찰시킨다. 그런 다음, scFv 연결자, (Gly4, Ser)3을 VL단편의 파아지미드 상부(upstream)에 결찰시킨다. VH및 연결자-VL단편을 증폭하여 JH영역 상에 모은다. 얻은 VH-연결자-VL단편을 파아지미드 벡터내에 결찰시킨다. 파아지미드 라이브러리는 상기한 바와 같이, 필터를 사용하여 또는 면역튜브(Nunc; Maxisorp)를 사용하여 조작할 수 있다. 유사한 결과는, 면역화된 토끼의 림프구나 비장세포로부터 조합형 면역글로불린 라이브러리를 구축하고파키아 파스토리스(P. pastoris)내에 scFv 구성체를 발현시킴으로써 얻을 수 있다. Ridderet al., Biotechnology, 13:255-260 (1995) 참고. 또한, 적당한 scFv를 분린한 후, CDR3 돌연변이 및 사슬 shuffling과 같은 친화력 성숙과정(affinity maturation process)을 통해 높은 결합친화력과 더 낮은 분열속도를 지닌 항체 단편들을 얻을 수 있다. 예를 들어, Jacksonet al., Br. J. Cancer, 78:181-188 (1998); Osbournet al., Immunotechnology, 2:181-196 (1996) 참고.
다양한 재조합 방법들이 양특이성 항체 및 항체 단편들을 생산하는데 이용될 수 있다. 예를 들어, 양-특이성 항체들 및 항체 단편들은 형질전환 가축의 젖에서 생산될 수 있다. 예를 들어, Colman, A.,Biochem. Soc. Symp., 63:141-147, 1998; 미국특허 5,827,690호 참고. 짝을 이룬 면역글로불린 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 DNA 단편을 각각 포함하는 두 DNA 구성체를 준비하였다. 단편들은 유방상피세포에서 우선적으로 발현되는 프로모터 서열을 포함하는 발현 벡터내로 클론된다. 예로서, 여기에 국한되지는 않지만, 토끼, 소 및 양으로부터 유래된 프로모터, 카제인 유전자, 소 α-락토글로불린 유전자, 양 β-락토글로불린 유전자 및 쥐 유장 산 단백질 유전자가 포함된다. 바람직하게는, 삽입된 단편은 유선-특이 유전자로부터 유래된 같은 혈족의 게놈 서열에서 3'-말단에 위치한다. 이것은 폴리아데닐화 자리 및 전사-안정화 서열을 제공한다. 발현 카세트는 멸균처리된, 포유류 난자의 생식핵에함께 삽입되어, 수용체 암컷의 자궁에 이식되어 잉태된다. 분만후에, 자손은 서턴 분석에 의해 두 이식유전자의 존재에 대해 선별된다. 항체가 존재하기 위해서는, 두 중쇄 및 경쇄 유전자가 동일한 세포에서 동시에 발현되어야 한다. 유전자가 도입된 암컷의 젖은 당분야에 공지된 표준 면역법을 이용하여 항체 또는 항체 단편의 존재 및 기능성에 대해 분석된다. 항체는 당분야에 공지된 표준 방법을 이용하여 젖으로부터 정제할 수 있다.
키메라 Ab는 쥐 경쇄 가변부 및 중쇄 가변부를 코딩하는 cDNA 단편을 인간 항체에서 유래된 C 도메인을 코딩하는 단편에 결찰시킴으로써 구축된다. C 도메인은 항원 결합에 관여하지 않기 때문에, 키메라 항체는 원래의 쥐 Ab와 동일한 항원 특이성을 보유하지만, 서열에 있어서는 인간 항체에 더 근접해 있다. 그러나 키메라 Ab는 여전히 약간의 쥐 서열을 포함하고 있어, 여전히 면역원이 될 것이다. 인간화된 Ab는 항원을 인식하는데 필요한 쥐 아미노산만을 포함하고 있다. 이것은 인간 항체 프레임워크에 쥐 상보성 결정 영역으로부터 유래된 아미노산을 삽입해 넣음으로써 구축한다.
Ⅶ. 변이 양특이성 항체의 설계 및 발현에 대한 일반적인 방법(General Methods for Design and Expression of Mutant Bi-Specific Antibodies)
본 발명의 변이 bsAb를 형성하기 위하여 다양한 변이 유발기술들이 이용될 수 있다. 당업자라면 그러한 기술을 잘 알고 있을 것이다. 예를 들어, 변이 bsAb의 발현벡터는, 변이된 HC 단편(fragment)을 형성하고, 이 단편을 모(parent) bsAb를위한 발현 벡터에 서브클로닝(subcloning)하여 대응하는 야생형(wild type)의 단편과 교체한 후, 숙주 세포를 상기 벡터로 형질감염시키는 것에 의하여 얻어질 수 있다.
모 bsAb를 위한 발현벡터를 얻기 위하여, 당업자라면 이미 공지된 기술을 적용할 수 있을 것이다. 이러한 기술은 1999년 6월 22일에 출원된 미국특허출원번호 09/337,756호에 기재되어 있는 바, 그 전체 내용이 참고적으로 포함되어 있다. 간략하게, 모 bsAb의 발현벡터를 형성하기 위하여, hMN14IgG-(734 scFV)2와 같이 단일쇄 734 Fv (734scFv)를 코딩하는 유전자 부위(segment)를 형성할 수 있다. 상기 734scFv 부위는, 짧은 유연한 연결자 (short flexible linker; sL)를 코딩하기 위한 DNA 단편(Colonia & Morrison 1997 p.787/id)을 통하여 3'-인간 감마(gamma) 끝-사슬 유전자와 연결되어 CH1-경첩(Hinge)-CH2-CH3-sL-734scFv (CH-scFv)의 융합 유전자 서열을 형성할 수 있다. 상기 CH-scFv 융합 유전자 부위는, 발현벡터 hMN14pdHL2에서 hMN-14VH의 서열과 연결될 수 있는데, 이는 또한 형질감염자(transfectant) 및 상기 형질감염된 서열의 연속적인 증폭의 선정을 위한dhfr유전자뿐만 아니라 hMN-14 경쇄를 포함한다(Dorai & Moore 1987 p. 815/id and Gillies, Lo et al. 1989p. 131/id).
hMN14IgG-(734scFv)2(bsAb2pdHL2)를 인코딩하는 벡터는 융합 bsAb의 발현을 위하여 Sp2/0 골수종 세포(myeloma cell)로 형질감염될 수 있다. 상기 bsAb,hMNl4IgG-(734scFV)2는 친화성 크로마토그래피에 의하여 배양 상층액을 정제하고 SDS-PAGE에 의하여 분석될 수 있다. 모 bsAb 또는 변이 bsAb에서 다른 결합부위의 면역반응활성을 평가하기 위하여 비교 ELISA 결합 분석시험을 실행할 수 있다.
다른 특이성을 갖는 IgG-scFv의 bsAb 및 각각의 변이 bsAb 들은, IgG 및/또는 scFv의 가변영역 서열만을 다른 Ab 들의 그것으로 치환함으로써 생성될 수 있다. CDR 이식된 변이 bsAb는 IgG 또는 scFv의 가변영역 서열만을 다른 상기 CDR 이식된 Ab 들의 그것으로 치환함으로써 생성될 수 있다. 전형적으로, 이러한 "CDR-이식(CDR-grafting)" 기술은 재조합, 쥐의 CDRs, 인간 가변영역 프레임워크 및 인간 불변영역으로 이루어진 약학적 항체를 제조하는데 적용되어 왔다. (예; Riechmann, L. et al, (1988) Nature, 332, 323-327). 이러한 "새 형태의(reshaped)" 또는 "인간화된(humanized)" 항체는 키메라 항체보다 적은 쥐의 내용을 가지며, 상기 인간 불변영역이 인간 Fc 의존성의 효과기 작용의 자극에 필요하도록 유지시켜준다. 그 결과, CDR 이식된 항체들은 인간에게 투여되었을 때, 키메라 항체보다도 HAMA 반응을 유도할 가능성이 적으며, 혈관계에서 그들의 반감기는 자연적인 인간 항체의 그것에 접근하며, 그들의 면역적 또는 치료적 가치는 향상된다.
실제로, 원래의 쥐의 항체의 특이성을 간직하고 있는 효과적인 인간화된 창체의 생산을 위하여, 단순히 CDR을 치환하는 것만으로는 대체로 충분하지 못하다. 또한, 인간의 가변 영역에는 적은 수의 임계의 쥐의 항체 잔기를 포함하는 것을 필요로 한다. 이러한 잔기의 동일성은 원래의 쥐의 항체 및 수용체 인간의 항체 모두의 구조에 의존한다. 영국 특허출원번호 9019812.8호(전체 내용을 참고적으로 포함되어 있다.)는, 효과적인 항체 결합을 증진시키기에 충분한 외래 잔기의 치환의 최소수를 동정하는 방법을 기재하고 있다. 본 발명의 한 구현예에 있어서, 변이 융합 프로틴의 Fvs 및 scFvs는 CDR-이식된 쥐의 Fvs 및 scFvs이다. 본 발명의 다른 구현예에서, 상기 변이 융합 프로틴의 Fvs 및 scFvs는 인간화되었다. 하나의 구현예에서, 상기 Fvs는 hMN14-IgG로부터 유도되었으며 상기 scFvs는 734scFv에서 유도되었다. 본 발명의 바람직한 구현예에서 상기 변이 융합 프로틴은 hMN-14IgG1253A-(734scFV)2이다.
Ⅷ. 변이 bsAbs의 투여방법(Method of Administration Mutant bsAb)
본 발명은 미국특허 제 6,126,916호; 6,077,499호; 6,010,680호; 5,776,095호; 5,776,094호; 5,776,093호; 5,772,981호; 5,753,206호; 5,746,996호; 5,697,902호; 5,328,679호; 5,128,119호; 5,101,827호; 및 4,735,210호에 기재된 방법을 이용하여 정상 조직 및 기관을 치료하는 데 있어서, 본 발명의 양특이성 항체의 용도 및 표적가능한 구조체에 특히 관련되어 있다. 한편, 추가적인 방법으로는 1999년 6월 22일 출원된 미국 특허출원번호 09/337,756호 및 2001년 4월 3일에 출원된 미국 특허출원번호 09/823,746로에 기재되어 있다. 여기에서 사용된 상기 "조직(tissue)"라는 용어는 난소(ovary), 흉선(thymus), 부갑상선(parathyroid) 또는 비장(spleen)의 조직을 포함하며 여기에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 의한변이 bsAb로 치료될 수 있는 질병 또는 상태로는, 면역 조절곤란 질환(immune dysregulation disease), 자가면역 질환, 기관이식 거부(organ graft rejection) 또는 이식편대숙주 질환(graft vs. host disease) 등이 있다. B-세포를 표적으로 하는 자가면역 질환의 면역치료법은, 미국 가출원번호 60/138,284호를 우선권 주장하고 있는 WO 00/74718호에 기재되어 있는데, 그 내용은 전체적으로 여기에 삽입되어 있다. 자가면역질환의 예로는, acute idiopathic thrombocytopenic purpura, chronic idiopathic thrombocytopenic purpura, dermatomyositis, Sydenham's chorea, myasthenia gravis, systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, rheumatic fever, polyglandlar syndromes, bullous pemphigoid, diabetes mellitus, Henoch-Schonlein purpura, poststreptococcAnephritis, erythema nodosurn, Takayasu's arteritis, Addison's disease, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, sarcoidosis, ulcerative colitis, erythema multiforme, IgA nephropathy, polyarteritis nodosa, ankylosing spondylitis, Goodpasture's syndrome, thromboangitisubiterans, Sjogren's syndrome, primary biliary cirrhosis, Hashimoto's thyroiditis, thyrotoxicosis, scleroderma, chronic active hepatitis, polymyositis/dermatomyositis polychondritis, parnphigus vulgaris, Wegener's granulomatosis, membranous nephropathy, amyrotrophic lateral sclerosis, tabes dorsalis, giant cell arteritis/polymyalgia, perniciousanernia, rapidly progressive glomerulonephritis 및 fibrosing alveolitis 등이 있다.
본 발명에 의한 변이 bsAb는 예비 표적화 방법(pretargeting method)에서 제 1 표적화 물질(primary targeting species)로 이용될 수 있다. 예비표적화 방법에서 변이 bsAb가 투여된다. 상기 제 1 표적화 물질의 충분한 침착이 이루어지면, 표적가능한 구조체가 투여된다. 상기 표적가능한 구조체는 제 1 표적화 물질의 유용한 결합위치를 인식하는 결합 부위 및 면역학적 또는 치료적 제제를 포함한다. 표적가능한 구조체의 예는 상기 설명되어 있다. 제제의 복용량 및 시간과 관련하여 당업자라면 용이하게 실시할 수 수 있으며, 다만 적용되는 제제의 특성에 따른다. 예비표적화 방법은 제거제를 사용하거나 사용하지 않고 실시될 수 있다.
상기 bsAb가 질병 조직을 표적화 하기에 충분한 시간이 흐른 뒤에, 진단제가 투여된다. 상기 진단제의 투여에 이어, 영상화(imaging)가 실시된다. 신체의 동공에서 다양한 구조체를 직접 또는 간접적으로 보는 것에 의하여 종양이 검출되는데, 상기 구조체로 적절한 파장의 빛이 공급되어 모아져서 볼 수 있게된다. 비이온화되는 방사가 공급될 수 있고 이러한 구조체에서 재포집 될 수 있다면 신체의 어디에 있는 상처라도 볼 수 있다. 인간의 질병을 영상화하기 위하여 예를 들어, 고해상도의 비간섭적인 영상 기술인 PET를 본 발명의 항체와 함께 사용할 수 있다. PET에서, 양전자 방출기(positron-emitter)로서 F-18을 사용할 때, 양전자 쌍소멸(positron annihilation) 붕괴 과정에서 생성된 511 keV의 감마포톤(gamma photon)이 검출된다.
본 발명은 일반적으로 25-600 keV의 감마 입자 및/또는 양전자를 방출하는진단제의 용도에 대하여 특히 중요시한다. 그러한 제제로는18F,52Fe,62CU,64CU,67CU,67Ga,68Ga,86Y,89Zr,94mTc,94Tc,99mTc,111In,123I,124I,125I,131I,154-158Gd 및175Lu가 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
내부 작용의/내시경 탐침(intraoperative/endoscopic probe)에 의한 검출 역시, 본 발명에 의한 변이 bsAb 및 I-125에 의하여 표식된 펩타이드인 표적가능한 구조체 포함하는 방법에서 중요시된다. 이러한 방법들은 미국특허 5,716,595호 및 6,096,289호에 기재되어 있으며, 이들의 전체내용은 참고적으로 포함되어 있다.
당해 변이 bsAb는, 미국특허 6,096,289; 4,331,647; 4,818,709; 4,348,376; 4,361,544; 4,444,744; 5,851,527에서 설명된 것처럼, 광선역학요법(photodynamic therapy; PDT)에 이용될 수 있다
광선역학요법(PDT)에서, 예를 들면, 디헤마토포르피린 에테르(dihematoporphyrin ether)와 같은 헤마토프로피린 유도체(hematoporphyrin derivative)가 피검자(subject)에게 투여된다. 항-종양 활성(anti-tumor activity)는 예를들어 630nm의 빛의 사용에 의하여 개시된다. 더 긴 파장에서 유용한 것들을 포함하여 다른 감광제(photosensitizer)들이 사용될 수 있는데, 여기서 피부는 태양에 의하여 덜 감광된다. 상기 감광제로는 benzoporphyrin monoacid ring A (BPD-MA), tin etiopurpurin (SnET2), sulfonated aluminum phthalocyanine (AISPc) 및 lutetium texaphyrin (Lutex)등이 있으며 이에 한정되지 않는다.
한편, PDT에서, 진단제가 주사되는데, 예를 들면, 구조적으로 및 레이저 유도된 형광이 내시경에 의하여 이용되어, 광 활성제와 고착된 암세포의 위치를 감지한다. 예를 들면, 이는 초기 폐 종양(early lung twnors)의 형광 기관지경 노출(fluorescence bronchoscopic disclosure)에 적용되어 왔다. Doiron et al. Chest 76:32 (1979). 다른 예에서 항체 및 항체 단편이 단일 프로톤 방출에 이용될 수 있다. 예를 들면, Tc-99m-표식된 진단제가 피검자에게 투여되고, 이어 본 발명의 항체 및 항체 단편이 투여가 이어진다. 피검자는 감마 카메라(gamma camera)로 스캔되는데, 이는 단일-프로톤 방출 컴퓨터 단층 영상(single-photon emission computed tomographic image)을 생성하고 병변 또는 종양 위치를 알려준다.
치료적으로 유용한 면역접합체는 광활성(photoactive) 제제 또는 염료를 항체 복합체와 접합하여 얻어질 수 있다. 병변에 적합한 빛을 쬐는 것에 의하여, 가시광선에 민감한 포르피린(porphyrin)과 같은 형광성 및 다른 색원체, 또는 염료가 병변을 검출 및 치료하기 위하여 사용되었다. 이러한 치료에서, 이는 광방사(photoradiation), 광치료(phototherapy), 또는 광선역학요법(photodynamic therapy)으로 명명되었다(Jori et al. (eds.), Photodynamic Therapy of Tumors and Other Diseases (Libreria Progetto 1985); van den Bergh, Chem. Britain 22:430 (1986)). 또한, 광치료를 위하여 모노클로날(monoclonal) 항체는 광활성된 염료와 결합(couple)되었다. Mew et al., J. Immunol. 130:1473 (1983); idem., Cancer Res. 45:4380 (1985); Oseroff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8744 (1986); idem., Photochem. Photobiol. 46:83 (1987); Hasan et al., Prog. Clin. Biol. Res. 288.471 (1989); Tatsuta et al., Lasers Surg. Med.9:422 (1989); Pelegrin et al., Cancer 67.2529 (1991). 그러나, 이러한 초기의 연구들은 내시경 치료의 적용을 포함하지 않고 있으며, 특히 항체 단편 또는 하부 단편(subfragments)과 함께 사용하는 것을 포함하지 않고 있다. 따라서, 본 발명은 광활성 제제 및 염료를 포함하는 면역접합체의 치료적인 사용에 대하여 특히 설명한다.
연결자 부분(linker moiety)은, 표적 부위에서 프로드럭(prodrug)을 활성화시킬 수 있거나 또는 신체의 해독(detoxification)경로를 조절함으로써 일반 치료의 효율을 높일 수 있는 효소와 접합할 수도 있다. bsAb의 투여에 이어, 상기 연결자에 접합된 효소, bsAb의 두 번째 팔(arm) (scFv 성분)에 의하여 인식된 MW 합텐(hapten)이 투여된다. 효소가 표적 부위에서 예비 표적화된 후 세포독성 약제(cytotoxic drug)가 주사되는데, 이는 표적 부위에서 작용하는 것으로 알려져 있다. 상기 약제는 포유류의 통상적인 해독 과정에 의하여 해독되는 것일 것이다. 예를 들어, 상기 약제는 간에서 잠재적으로 덜 독성이 있는 글루쿠로나이드(glucuronide)로 변형될 것이다. 상기 해독된 중간체(intermediate)는, 표적 부위에서 예비 표적화된 효소에 의하여 더 독성이 있는 형태로 변형될 것이다. 반면, 투여된 프로드럭은 상기 예비 표적화된 효소에 의하여 활성 약제로 변형될 수 있다. 상기 예비 표적화된 효소는 해독된 약제를 재활용함으로써 치료 효율을 높일 수 있다. 이러한 접근법은 어떠한 효소-약제 쌍에도 적용될 수 있다.
항암 치료에 유용한 특정의 세포독성 약제들은 혈청(serum)에서 상대적으로 잘 녹지 않는다. 어떤 것들은 접합되지 않은 형태에서는 매우 독성이 강하며, 이들의 독성은 프로드럭으로의 변형에 의하여 상당히 감소된다. 난용성인 약제를 보다 더 가용성인 접합체, 예를 들면, 글루쿠로나이드(glucuronide)와 같은 친수성 산의 에스테르 또는 친수성 아민의 아마이드로 변형시키는 것은 혈청의 수상에서 용해도를 높일 것이며, 또한 정맥(venous), 동맥(arterial) 또는 모세혈관(capillary) 세포벽으로의 투과성을 높여 종양을 담고 있는 내부의 간질액(interstitial fluid)에 까지 도달하게 된다. 프로드럭의 분할(cleavage of the prodrug)은 잘 녹지 않는 약제를 표적 부위에 쌓이게 한다. 이러한 프로드럭-약제 변형(prodrug-to-drug conversion)에 대한 많은 예들은 Hansen의 미국특허 5,851,527호에 기재되어 있다.
간에서 방향족(aromatic) 또는 지환식(alicyclic) 알콜, 티올, 페놀 및 아민이 글루쿠로나이드로 변형되는 것과 이, 어떤 독성 물질이 변형되는 것은 상기 물질을 해독시키는 신체의 방법이자 기능이며, 이러한 물질이 보다 ??게 오줌으로 배출되게 하는 것이다. 그러한 기질로 변형될 수 있는 항종양 약제의 한 형태는 독소루비신의 4-에피머(4-epimer of doxorubicin (Adriamycin))인 에피루비신(epirubicin)로서, 이는 안트라사이클린 글루코시드(anthracycline glycoside)이며 또한 인간 베타-D-클루쿠로나이드의 기질임이 알려져 왔다. 예를 들어, Arcamone Cancer Res. 45:5995 (1985) 참조. 적은 수의 극성기를 갖는 다른 유사체(analogue)는 더 친유성일 것이며 그러한 접근에 보다 더 확실할 것으로 기대된다. 방향족(aromatic) 또는 지환식(alicyclic) 알콜, 티올 또는 아민기를 갖는 다른 약제 또는 독소는 그러한 접합체 형성에 적용해 볼 시험대상이 된다. 이러한 약제 또는 이들의 프로드럭 형태는 본 발명의 위치 특이적인(site-specific) 향상 방법에적용 대상으로 적합하다.
프로드럭 CPT-11(irinotecan)은 생체내에서 카르복실에스테라제(carboxylesterase)에 의하여 활성 대사산물 SN-38로 변형된다. 따라서 본 발명의 하나의 적용은 di-DTPA-carboxylesterase 접합체의 주사에 따르는, 종향 및 합텐(예를 들면, di-DTPA)에 대하여 표적화된 bsAb의 용도이다. 적절한 종양-배경 부위 (tumor-to-background localization)비율이 달성되면 상기 CPT-11이 주어지고 상기 종양부위화된(tumor-localized) 카르복실에스테라제(carboxylesterase)는 CPT-11이 종양에서 SN-38로 변형되도록 도와준다. 이것의 낮은 용해도 때문에, 활성 SN-38은 종야의 부근에 남게 될 것이며, 그 결과 항원이 표적화를 방해하는 이웃한 종양 세포에 대하여 영향을 미칠 것이다. 이는 이 방법의 다른 장점이다. 카르복실에스테라제의 변형이 설명되어 있으며 이는 본 발명의 범위에 속한다. 예를 들면, Potteret al., Cancer Res. 58:2646-2651 (1998) 및 Potter et al., Cancer Res. 58:3627-3632 (1998)참조.
에톱토시드(etoposide)는 널리 이용되는 암 치료제로서 글루쿠로나이드의 형성에 의하여 상당부분 해독되는 것으로서, 본 발명의 범위에 포함된다. 예를 들어, Hande et al. Cancer Res. 48:1829-1834 (1988) 참조.
글루쿠로나이드 접합체는 세포독성 제제로부터 제조될 수 있고 예비 표적화된 종양의 치료제로서 mAb 글루쿠로니다제(glucuronidase) 접합체와 주사될 수 있다. 예를 들어, Wang et al. Cancer Res. 52:4484-4491 (1992) 참조.
따라서, 그러한 접합체는 여기서 설명된 예비 표적화 응용 접근에 이용될 수있다. 마찬가지로, 다우노마이신(daunomycin) 및 독소루비신(doxorubicin)의 유도체에 기초하여 설계된 프로드럭은 카르복실에스테라제 및 글루쿠로니다제와 함께 사용하기 위하여 설명되었다. 예를 들어, Bakina et al. J. Med Chem. 40:4013- 4018 (1997) 참조. 본 발명에서 사용되는 다른 프로드럭/효소 쌍은, 페놀 머스타드(phenol mustard)와 베타 글루쿠로나이드의 하이드록시 유도체의 글루쿠로나이드 프로드럭; 페놀 머스타드 또는 CPT-11 및 카르복시펩티다제(carboxypeptidase); 메토트렉세이트 치환된(methotrexate-substituted) 알파 아미노산 및 카르복시펩티다제 A(carboxypeptidase A); 6-메로캅토퓨린(6-mercaptopurine) 및 베타-락타마제( beta-lactamase)와 같은 약제의 페니실린 또는 세팔로스포닌(cephalosporin) 접합체; 에포토사이드 포스페이트 및 알칼라인 포스페이트를 포함하며 여기에 한정되는 것은 아니다.
The 효소 capable of activating a 프로드럭 at the target site or improving the efficacy. of a normal therapeutic by controlling the body's detoxification pathways may alternatively be conjugated to the 합텐. The 효소-합텐 conjugate is administered to the subject following administration of the pre-targeting bsAb 및 is directed to the target site. After the 효소 is 부위화d at the target site, a cytotoxic drug is injected, which is known to act at the target site, or a 프로드럭 form thereof which is converted to the drug in situ by the pretargeted 효소. As discussed above, the drug is one which is detoxified to form an intermediate of lower toxicity, most commonlya 글루쿠로나이드, using the mammal's ordinary detoxification processes. The detoxified intermediate, e.g., the 글루쿠로나이드, is reconverted to its more toxic form by the pretargeted 효소 및 thus has enhanced cytotoxicity at the target site. This results in a recycling of the drug. Similarly, an administered 프로드럭 can be converted to an active drug through normal biological processess. The pretargeted. 효소 improves the efficacy of the treatment by recycling the detoxified drug. This approach can be adopted for use with any 효소-약제 쌍.
The invention further contemplates the use of the inventive bsAb 및 the diagnostic agent(s) in the context of Boron Neutron Capture Therapy (BNCT) protocols. 상기 BNCT is a binary system designed to deliver ionizing radiation to tumor cells by neutron irradiation of tumor-부위화d `B atoms. BNCT is based on the nuclear reaction which occurs when a stable isotope, isotopically enriched `B (present in 19.8% natural abundance), is irradiated with thermal neutrons to produce an alpha particle 및 a 'Li nucleus. These particles have a path length of about one cell diameter, resulting in high linear energy transfer. Just a few of the short-range 1.7 MeV alpha particles produced in this nuclear reaction are sufficient to target the cell nucleus 및 destroy it. Success with BNCT of cancer requires methods for localizing a high concentration of "B at tumor sites, while leaving non-target organsessentially boron-free. Compositions 및 methods for treating tumors in sub.ects using pre-targeting bsAb for BNCT are described in co-pending J Patent Appl. Serial No. 09/205,243 및 can easily be modified for the purposes of the 본 발명.
It should also be noted that scFv component of the 변이 bsAb of the 본 발명 may also be specific to an 효소.
A clearing agent may be used which is given between doses of the 변이 bsAb 및 the 표적가능한 구조체, The present inventors have discovered that a clearing agent of novel mechanistic action may be used with the invention, namely a glycosylated 항-idiotypit Fab' fragment targeted against the disease targeting arm(s) of the bsAb. 항-CEA (MN 14 Ab) x 항-peptide bsAb is given 및 allowed to accrete in disease targets to its maximum extent. To clear residual bsAb, an 항-idiotypic Ab to MN-14, termed W12, is given, preferably as a glycosylated Fab' fragment. The clearing agent binds to the bsAb in a monovalent manner, while its appended glycosyl residues direct the entire complex to the liver, where rapid metabolism takes place. Then the therapeutic which is associated with the linker moiety is given to the subject. The WI2 Ab to the MN14 arm of the bsAb has a high affinity 및 the clearance mechanism differs from other disclosed mechanisms (see Goodwin el al., ibid), as it does not involve cross-linking, because the W12-Fab' is amonovalent moiety.
The present mutant bsAb can also be used in a method of ultrasound imaging. An ultrasound enhancement agent, such as a contrast agent, may be attached to a 표적가능한 구조체, such as a bivalent DTPA peptide. By way of non-limiting example, an enhancement agent such as a liposome, preferably a gas-filled liposome may be used. In this method, the 변이 bsAb would be administered first, followed by administration of the liposome-표적가능한 구조체 complex. See Maresca, G. et al., Eur J. Radiol. Suppl. 2.S171-178 (1998); Demos, Sm. Et al. J. Drug Target 5 507-518 (1998); 및 Unger, E. et al., Am J. Cardiol. 81 58G-61G (1998).
The 변이 양특이성 항체 may be administered as one component of a multicomponent treatment regimen. The 변이 양특이성 항 may be administered before, during or after the administration of at least one therapeutic agent used to treat a disease or condition.
The use of an exemplary 변이 bsAb in a 예비표적화method, compared to the use of a parent bsAb in a 예비표적화 method is illustrated in Example 2. The data illustrates the accelerated rate of clearance of a 변이 bsAb of the 본 발명 as compared to the parent bsAb. Additionally, the data illustrates that a much larger amount of 표적가능한 구조체 is trapped in the blood when the parent bsAb is used as compared to when the 변이 bsAb is used.
도 5 및 6은 모 bsAb,125I-hMN-14IgG-(734scFv)2를 포함하는 예비표적화 방법의 결과를 보여준다. 도 7은 shows data for 예비표적화methods involving the 변이 bsAb, '251-hMN-14lgG 1211A -(734scFV)2. The "I-label allows for a determination of the amount of bsAb present in different regions of the body. A comparison of the data in Figures 5 및 7 shows that the 변이 bsAb cleared the body faster than the parent bsAb. 예를 들어, after 예비표적화with parent bsAb for 4 days (Figure 5), 및 3 hours post injection of IMP-192, the %lD/g for tumor 및 blood was 19.21 ㅁ 7.318 및 3.73 ㅁ 0.75, respectively. In contrast, after 예비표적화with 변이 bsAb for 4 days (Figure 5), 및 3 hours post injection of IMP-192, the %ID/g for tumor 및 blood was 2.42 ㅁ 0.78 및 0.07 0. 0 1, respectively.
A comparison of the tumor-to-blood ratios of "I in Figures 5 및 7 (see entry under "Blood" in Figures 5 및 7) demonstrates that a higher signal-to-background can be achieved with the 변이 bsAb. Even after 6 days of 예비표적화with parent bsAb (see Figure 4), the turnor-to-blood ratio is much less than after 4 days of 예비표적화with 변이 bsAb.
상기99mTc-label allows for a determination of the amount of 표적가능한 구조체 present in different regions of the body. A comparison of the %ID/g of IMP-192 ('Tc-labeled 표적가능한 구조체) shows that the tumor-to-blood ratiois much greater for the 예비표적화methods with 변이 bsAb. This result illustrates that less 표적가능한 구조체 is trapped in the blood in 예비표적화methods involving a 변이 bsAb. When the parent bsAb is used (see Figures 5 및 6) the 'Te-labeled 표적가능한 구조체 is trapped in the blood, rather than appearing at the tumor site. Therefore, low tumor-toblood ratios are observed. For example, the tumor-to-blood ratio of "nTc-labeled 표적가능한 구조체 is shown in Figure 5 (parent bsAb) in the left h및 side, under 'Blood". Three hours post injection, the turnor-to-blood ratio is 0.24 ㅁ 0,05. In contrast, Figure 5 (변이 bsAb) shows the tumor to blood ratio three hours post injection is 3.52±1.45
IX. 다른 응용(Other Applications)
본 발명은 미국특허 5,716,595호 및 6,096,289에서 설명된 바와 같이, 변이 bsAb의 용도 및 상기 설명된 내부 기능적이고, 혈관내에서 그리고 내시경적인 종양 및 병변 검출, 생체검사 및 치료에서 연결자 부분과 결합된 치료제를 포함한다.
상기 본 발명에 따른 변이 bsAb는 치료 또는 영상의 목적으로 적용될 수 있을 뿐 아니라 시험관 실험에서도 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 bsAb는, 표적 가능한 구조체가 하나 이상의 bsAb와 안전한 착화합물을 형성할 수 있는지 알아보기 위한 시험관 실험에 사용될 수 있다. 이러한 시험 분석은 bsAb와 안전한 착화합물을 형성하는 표적 가능한 구조체를 동정하는데 있어서 당업자에게 도움이 될 것이다. 이는 또한, 당업자가 치료 또는 영상용 제제로서 우수한 표적가능한 구조체를 동정할 수 있도록 해 준다.
이러한 시험분석은 기능이 의심스러운 표적가능한 구조체를 적어도 2 몰의 bsAb와 결합해 봄으로써 수행될 수 있다. 이어지는 배양에서, 혼합물은 크기배제 HPLC에 의하여 분석되어 상기 구조체가 상기 bsAb와 결합되었는지의 여부를 확인할 수 있다. 한편, 상기 시험 분석은 표준 결합 방법에 의하여도 수행될 수 있는데, 여기서, 다양한 bsAb 용액들이 표준 96웰(well; 공) 플레이트에 배치된다. 각각의 세포 웰에 표적가능한 구조체 용액이 투여된다. 이어, 배양 및 분석하여, 어떤 구조가 어떤 bsAb에 가장 잘 결합하는지 알 수 있다.
변이 bsAb를 표적가능한 구조체에 첨가하는 순서는 그렇게 중요한 것이 아니다; 즉, 상기 변이 bsAb가 상기 구조체에 첨가될 수도 있으며 그 역도 가능하다. 마찬가지로, 상기 변이 bsAb 혹은 상기 구조체 어느것도 반드시 용액일 필요는 없다; 즉, 이들은 가장 용이한 형태로서, 용액의 형태 또는 고상 니트(neat)형태로도 투여될 수 있다. 끝으로, 결합이 형성되었다면 결합을 분석하는 방법은 크게 중요하지 않다. 따라서, 크기배제 HPLC와 결합하여 또는 이와는 별도로 FABMS, 고자기장(high-field) NMR 또는 다른 적당한 방법을 포함하는 표준 분석법을 사용하여 결합을 분석할 수 있다.
X. 실시예(Examples)
물질 및 방법
734scFv의 설계 및 구성(Designing and construction)
734scFv는 sL-Vλ-L-VH의 구조를 가지도록 설계되었는데, 여기서 sL은 짧은 유연한 연결자, Gly-Gly-Gly-Ser (Coloma & Morrison, Nat. Biotechnol. 15: 159- 163 (1997))로서 hMN-14IgG 중쇄와 734scFv 사이의 연결 역할을 하며, L은 Gly-Gly-Gly-GlySer로 구성된 734의 Vλ와 VH사이에서의 길이가 긴 연결자이다 (Huston, Levinson, et al. PNAS 85:5879-5883 (1988)). 프라이머 쌍, 734VLscFv5'(Cys)/734VLscFv3' 및 734VHscFv5'/734VHscFv3'(SacI)는 각각 734의 VL및 VH서열을 증폭시키기 위하여 사용되었다. 결과물은 DNA 산물은, 제한효소 절단 및 결찰에 의하여 734scFv 유전자에 회합되었으며, 서열은 DNA sequencing에 의하여 확인되었다.
734VLscFv5'(Cys) 5'-TT CTC TCT GCA GAG CCC AAA TCT TGT GGT GGC GGT
TCA CAG CTG GTT GTG ACT CAG-3'
734VLscFv3' 51-A GCC TCC GCC TCC TGA TCC GCC ACC TCC TAA GAT
CTT CAG TTT GGT TCC-3'
734VHscFv5' 5'-CC GGA GGC GGT GGG AGT GAG GTG AAA CTG CAG
GAG-3'
734VHscFv3'(Sacl) 5'-AA CCT TGA GCT CGG CCG TCG CAC TCA TGA GGA GAC
GGT GAC CG-3'
hMN-14IgG-(734scFy) 2 의 발현 벡터의 구성
734scFv를 인간 중불변쇄(heavy constant chain)의 C-말단(HC)에 연결하기 위하여 새로운 프라이머 쌍, 734scFv2-5' 및 734scFv-3'이 합성되어 734scFv를 인코딩하는 DNA를 증폭하기 위하여 사용되었다. 상기 프라이머 734scFv2-5'는 734scFv가 인간 HC의 C-말단에 인프레임 연결되기 위한 정확한 서열을 제공한다. 획득된 DNA 단편은 인간 HC 서열에 결찰되어 HC-734scFv를 인코딩하기 위한 구조체를 형성하였다. hMN-14, hMN14pdHL2를 위한 발현벡터에서 일반적인 인간 HC를 인코딩하는 상기 DNA 단편은 HC-734scFv 단편으로 교체되어, 그리하여 융합 구조, hMN-l4IgG-(734scFv)2pdHL2를 위한 발현벡터를 얻었다.
734scFv2-5' 5'-TCC CCG GGT AAA GGT GGC GGT TCA CAG CTG-3'
734scFv-3' 5'-GAG CTC GGC CGT CGC AC-3'
변이 융합 bsAb, hMN-14IgG (I253A) -(734scFv) 2 의 구성
이소류신 253을 인간 HC의 CH2 영역에 위치시켰다. I253A 변이를 hMN-14IgG-(734scFV)2에 도입하기 위하여, 올리고뉴클레오티드 지향성의 위치특이적인변이에서, CH1을 인코딩하는 삽입 DNA 단편 및 부분 CH2 영역을 갖는 플라스미드 벡터 CHlkbpKS를 사용하였다. CH2에서 양생형의 서열 KDTLM253SRTPE을 KDTLM253ASRTPE로 변형시키는 올리고뉴클레오티드 1253ACH2을 돌연변이 유도 프라이머로서 설계 및 합성되었다. 상기 돌연변이는 Sculptor IVM system(Arnersham, Arlington Heights, IL)를 사용방법에 따라 사용함으로써 이루어졌다. dideoxy DNA sequencing에 의하여 서열이 확인된 후, 상기 변이된 HC. 단편은 hMN-14IgG-(734scFv)2pdHL2로 서브클론되어 대응되는 야생형의 단편을 대신하였으며, 그 결과 변이 융합 bsAb의 발현벡터 hMN-14IgG(I251A)-(734scFv)2pdHL2을 얻었다.
I253ACH2 5'-AAG GAC ACC CTC ATG GCT AGC CGG ACC CCT GAG-3'
bsAbs의 발현 및 생산
The expression vectors were transfected into SP2/0 cells by electroporation 2-5xlO6 cells were transfected using @ 30 @tg of Sall linearized DNA 및 plated into 96well cell culture plates. After 2 days, methotrexate (MTX) at a final concentration of 0.025-0.075 μM was added into the cell culture medium for the selection of transfectants. MTX-resistantcolonies emerged in 2-3 weeks 및 were screened by ELISA for secretion of human IgG. Briefly, cell culture supernatants from the surviving colonies were incubated in microwells of ELISA plate coated with goat 항-human IgG F(ab')2 specific 항 for 1시간 동안. A peroxidase-conjugated goat 항-human IgG Fc 단편 specific 항 was then added 및 incubated in the wells for 1시간 동안. The presence of human IgG in the supernatant was revealed by addition of the substrate solution containing 0.4 mg/ml of ophenylenediamine dihydrochloride 및 0.0125% 11202. From the positive clones, the best Ab-producers were 결정되고, 선택되고 더 연장되었다. hMN-14IgG-(734scFV)2 및 hMN-14lgG(I253A)-(734scFv)2 were purified from cell culture supernatant by affinity chromatography on either 프로틴 A 또는 DTPA 컬럼.
Ac-lys(DTPA)-Tyr-Lys(DTPA)-Lys(TscG-Gys-)-NH2 (IMP 192)의 합성:
제 1 아미노산, Aloc-Lys(Fmoc)-OH was attached to 0.2 1 mmol Rink amide 수지 on the peptide synthesizer followed by the addition of the Tc-99rn lig및 binding residues Fmoc-Cys(Trt)-OH 및 TscG to the side chain of the lysine using st및ard Fmoc automated synthesis protocols to form the following peptide: AlocLys(TscG-Cys(Trt)-rink 수지. The Aloc group was then removed by treatment of the 수지 with 8 ml, of a solution containing 100 mg Pd[P(Ph)3]4dissolved in 10mL CH2Cl2, 0.75 ml glacial acetic acid 및 2.5 ml diisopropylethyl amine. The 수지 mixture was then treated with 0.8 ml tributyltin hydride 및 vortex mixed for 60 min. The peptide synthesis was then continued on the synthesizer to make the following peptide: Lys(Aloc)-Tyr-Lys(A1oc)-Lys(TscG-Cys)-링크 수지. N-말단의 was acetylated by vortex mixing the 수지 for 60 mL with 8 mL of a solution containing 10 mL DMF, 3 mL acetic anhydride, 및 6 mL diisopropylethylamine. The side chain Aloc protecting groups were then removed as described above 및 the 수지 treated with piperidine using the st및ard Fmoc deprotection protocol to remove any acetic acid which may have remained on the 수지.
Activated DTPA 및 DTPA Addition: The DTPA, 5 g, was dissolved in 40 mL 1.0 M tetrabutylarrunonium hydroxide in methanol. The methanol was removed under hi-vacuum to obtain a viscous oil. The oil was dissolved in 50 mL DMF 및 the volatile solvents were removed under hi-vacuum on the rotary evaporator. The DMF treatment was repeated two more times. The viscous oil was then dissolved in 50 ml DMF 및 mixed with 5 g HBTU. An 8 ml aliquot of the activated DTPA solution was then added to the 수지 which was vortex mixed for 14 hr. The DTPA treatment was repeated until the 수지 gave a negative test for amines using the Kaiser test.
Cleavage 및 Purification: The peptide was then cleaved from the 수지 by treatment with 8 ml of a solution made from 30 ml TFA, 1 ml triisopropylsilane, 및 I nil ethanedithiol for 60 mm. The crude cleaved peptide was precipitated by pouring into 30 ml ether 및 was collected by centrifugation. The peptide was then purified by reverse phase HPLC using a 4 x 30 cm Waters preparative C-18 Delta-Pak column (15,um, iooA). The HPLC fractions were collected 및 lyophilized to obtain a fraction which contained the desired product by ESMS (MH ± 1590).
Kit Formulation: The peptide was formulated into lyophilized kits which contained 78 iLg of the peptide, 0.92 mg non-radioactive InC13, 100 1Ag stannous chloride, 3 mg gentisic acid, 및 HPCD (10 % on reconstitution).
방사표식(Radiolabeling)
60 ILg of 항 프로틴 was labeled with 1-125 using the chloramine-T method (Greenwood, Hunter, et al., Biochem. J. 89 11-123 (1963)) 및 purified using NAP-5 disalting column (Pharmacia, Piscataway, NJ).
To prepare Tc-99m labeled IMP-192, a kit containing 50 jig IMP-192 was reconstituted with 1.5 ml of a saline solution containing 20 mCi pertechnetate. The reconstituted kit was incubated at room temperature for 10 min 및 then heated for 15 min in a boiling water bath.
실시예 1: 인간 군체 종양 함유 쥐에서125I-hMN-l4IgGI253A-(734scFv)2및125I-hMN-14IgG-(734scFV)2의 생분포(biodistribution)
실험과정
125I-hMN-l4IgGI253A-(734scFv)2및125I-hMN-14IgG-(734scFV)2의 간단한 생분포 패턴이 측정되었다. Groups of nude female mice bearing GW39 human colonic cancer xenografts received Lv. injections of 20 @Lg (5 IiCi)/mouse of a '2'1SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) labeled parent or 변이 bsAb. Mice were euthanized at designed postinjection time points 및 their organs were removed, weighted 및 counted for 1-125 radioactivity.
The GW-39 human colonic 종양 cell line was propagated as serial, subcutaneous xenografts in nude mice as described elsewhere (Tu, et al. Tumour Biology 9:212-220 (1988)).
Results
The 종양 및 normal tissue 생분포 of125I-표식된 hMN-14lgG(734scFv)2 및hMN-141gG 1251A (734scFv)2 변이 was examined in human colonic 종양bearing mice 1, 2, 3 및 4 days postinjection. The results are presented in Figures 3 및 4 wherein data are expressed as a median percentage of injected dose per gram (%ID/g).
종양 섭취 of hMN-14IgG(I253A)(734sr.Fv)2는 significantly lower than thatofhMN-14IgG-(734scFV)2. This accelerated rate of clearance of hMN14IgGI253A(734scFV)2 is also seen in normal tissues such as liver, spleen, kidney, lungs, stomach, small intestine, large. intestine 및 blood. See Figures 3 및 4. The accelerated clearance of hMN-l4IgG 1211A (734scFv)2 produced higher 종양-to-organ ratios for many normal tissues, such as liver, spleen, kidney, lungs, stomach, small intestine, large intestine 및 blood. Additionally, the 종양-to-blood ratio for the hMN-14lgGwIA (734scFv)2 변이 increased at a much faster from one to four days postinjection as compared to the 종양/blood ratio for hMN-l4IgG-(734scFV)2.
실시예 2: 인간 군체 종양 함유 쥐에서125I-hMN-l4IgGI253A-(734scFv)2및125I-hMN-14IgG-(734scFV)2의 제조
실험과정
예비표적화 생분포 patterns of 변이 및 parent bsAbs were evaluated. Groups of nude female mice bearing GW39 human colonic cancer xenografts received i. V. injections of 20㎍ (5 μCi)/mouse of a125I 표식된 변이 or parent bsAb. Following the injection of 변이 or parent bsAb, a predetermined clearance time was allowed for bsAb to 부위화 to 종양 sites 및 be removed from circulation. The 9"Tclabeled divalent DTPA peptide, IMP-192, was then administered Lv. The mice were sacrificed at various time points of postinjection of the peptide 및 their organs were removed, weighted 및 counted for both I-125 및 Tc-99m radioactivities.
The GW-39 human colonic 종양 cell line was propagated as serial, subcutaneous xen ografts in nude mice as described elsewhere (Tu, et al. Tumour Biology 9:212-220 (1988)).
결과
The 종양 및 normal tissue 생분포 of "l-labeled hMN-14IgG W3A_ (734scFV)2 및 "Nabeled hMN-I4IgG-(734scFv)2 was examined in human colonic 종양bearing mice 3, 6 및 24 hours postinjection of "Tc-labeled divalent DTPA peptide, IMP192. Prior to injection of IMP-192 예비표적화with 변이 or parentbsAb was performed for four days. The 종양 및 normal tissue 생분포 of "Nabeled 변이 및 parent bsAb are shown in Figures 5-7, wherein data are expressed as a median percentage of injected dose per gram (%ID/g). Additionally, the 종양 및 normal tissue 생분포 of IMP-192 ("Tc-labeled divalent DTPA peptide) are shown in Figures 5 Accelerated clearance of the 변이 bsAb is observed. Additionally, higher 종양-to-blood ratios are observed after 예비표적화with 변이 bsAb as compared to 예비표적화with parent bsAb. It is noted that more DTPA-peptide was trapped in the blood after 예비표적화with the parent 융합 프로틴 then after 예비표적화with the 변이 융합 프로틴.
이는 당업자에게 명백한데, that various modifications 및 variations can be made to the compositions 및 processes of this invention. Thus, it is intended that the 본 발명 cover such modifications 및 variations, provided they come within the scope of the appended claims 및 their equivalents.
The disclosure of all publications cited above are expressly incorporated herein by reference in their entireties to the same extent as if each were incorporated by reference individually.
실시예 3: 펩티드를 함유하는 In-DTPA의 hMN-14IgGI253A-(734scFV)2로의 결합
The binding of In-DTPA peptides to the 항-In-DTPA 항 hMN-14IgG(113A)_(734scFV)2 was examined by size exclusion HPLC 및 by affinity blocking studies using the Biacore X.
HPL를 이용한 결합 분석
An IMP 192 kit was labeled with Tc-99m 20.9 rnCi. Aliquots from the kit were diluted 및 mixed with hMN-I4lgG11211A'-(734scFv)2 in the following molar ratios (Peptide/ab) 1: 5, 1: 1, 및 20: 1. The peptide/항 mixtures, the peptide alone 및 the 항 alone were examined on a Bio-Sil SEC 250 300 mm x 7.8 nun HPLC column elluted at ImL/rnin with 0.2 M phosphate buffer pH 6 The HPLC traces (Figures 8-12 show essentially only one peptide/항 complex is formed. A known st및ard of hMN14lgG 1251A -(734scFv)2 eluted from the column at about 9.41 minutes (Figure 8). A known st및ard of Tc-99m IMP 192'eluted from the column at about 14.85 minutes (Figure 9). When a 1:1 mixture of hMN- 14lgG (734ㄷcFV)2 to Tc-99m IMP 192 were applied to the column, onl ly one peak was observed at about 9.56 minutes (Fig. 10). In contrast, when a 1:5 mixture of hMN-14lgG 1251A_(734scFv)2 to Tc-99m IMP 192 was applied to the column, two major peaks were observed, one at about 9.56 minutes (hMN-I4IgG 1253A -(734scFV)2) 및 the other at about 14.80 minutes (Tc-99m IMP 192) (Fig. 11). When a 20:1 mixture of hMN-14IgGI251A-(734scFV)2to Tc-99m IMP 192 was appliedto the colurnn, only one peak was observed at 9.56 minutes (Fig. 12).
실시예 4: 임상적 예
실시예 4A. patient with a colon polyp has- the polyp removed, 및 it is found to be malignant. CAT scan fails to demonstrate any 종양, but the patient after three months has a rising blood CEA level. The patient is given 10 mg of hMN14-IgG[734scFv]2 by i. v. inftision. Three days later the patient is given the bivalent peptide IMP 192 labeled with 40 rnCi of Tc-99m. The next day the patient undergoes radioscintigraphy, 및 a single locus of activity is observed in a node close to the site of the resected polph. The node is resected, 및 patient remains free of disease for the next IO years.
실시예 4B. A patient with colon carcinoma undergoes resection of the primary 종양. Two years later the.patient presents with a rising CEA blood level, 및 CAT scan demonstrates multiple small metastasis in the liver, which cannot be resected. The patient is given 106 mg of hMN14-IgG[734-scFv]2 by Lv. in융합. After 3 days the patient if given the bivalent-DTPA peptide, IMP 156, labeled with 160 mCi of 1-131 by Lv. 융합. The CEA blood level slowly drops into the normal range. CAT scan demonstrates resolution of several of the metastasis, 및 the remaining lesions fail to grow for the next 9 months.
본 발명에 따른 조성 및 방법을 이용하는 다양한 변형 및 개량은 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 이러한 변형이나 개량이 본 발명의 청구범위 내에 있거나 동등한 범위라면 본 발명은 그러한 변형 및 개량에까지 그 권리가 미칠 것이다.
상기 인용된 공개공보, 특허 및 특허출원은 참고를 위하여 예시적으로 본 발명에 포함된 것이며, 전체적으로 본 발명의 내용에 포함된다고 할 수 있으며 각각 참고로 작용한다.
SEQUENCE LISTING <110> IMMUNOMEDICS, INC. <120> BISPECIFIC ANTIBODY POINT MUTATIONS FOR ENHANCING RATE OF CLEARANCE <130> 018733-1160 (FPC-0408018) <140> PCT/GB03/00871 <141> 2003-03-03 <150> 60/361,037 <151> 2002-03-01 <160> 19 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1407 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1404) <400> 1 atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca ggt 48 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 gtc cac tcc gag gtc caa ctg gtg gag agc ggt gga ggt gtt gtg caa 96 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 cct ggc cgg tcc ctg cgc ctg tcc tgc tcc gca tct ggc ttc gat ttc 144 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe 35 40 45 acc aca tat tgg atg agt tgg gtg aga cag gca cct gga aaa ggt ctt 192 Thr Thr Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg att gga gaa att cat cca gat agc agt acg att aac tat gcg 240 Glu Trp Ile Gly Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala 65 70 75 80 ccg tct cta aag gat aga ttt aca ata tcg cga gac aac gcc aag aac 288 Pro Ser Leu Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 aca ttg ttc ctg caa atg gac agc ctg aga ccc gaa gac acc ggg gtc 336 Thr Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val 100 105 110 tat ttt tgt gca agc ctt tac ttc ggc ttc ccc tgg ttt gct tat tgg 384 Tyr Phe Cys Ala Ser Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp 115 120 125 ggc caa ggg acc ccg gtc acc gtc tcc tca gcc tcc acc aag ggc cca 432 Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 tcg gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc aag agc acc tct ggg ggc aca 480 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg acg 528 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 gtg tcg tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc ccg 576 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg acc 624 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg aat 672 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc aaa tct 720 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg 768 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc 816 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc 864 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 912 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg 960 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat 1008 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc 1056 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag 1104 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc 1152 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg 1200 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct 1248 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tat agc aag ctc acc 1296 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg 1344 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg 1392 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 tct ccg ggt aaa tga 1407 Ser Pro Gly Lys 465 <210> 2 <211> 468 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe 35 40 45 Thr Thr Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala 65 70 75 80 Pro Ser Leu Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Ala Ser Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465 <210> 3 <211> 699 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(696) <400> 3 atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca ggt 48 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 gtc cac tcc gac atc cag ctg acc cag agc cca agc agc ctg agc gcc 96 Val His Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 agc gtg ggt gac aga gtg acc atc acc tgt aag gcc agt cag gat gtg 144 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val 35 40 45 ggt act tct gta gcc tgg tac cag cag aag cca ggt aag gct cca aag 192 Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 50 55 60 ctg ctg atc tac tgg aca tcc acc cgg cac act ggt gtg cca agc aga 240 Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 ttc agc ggt agc ggt agc ggt acc gac ttc acc ttc acc atc agc agc 288 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser 85 90 95 ctc cag cca gag gac atc gcc acc tac tac tgc cag caa tat agc ctc 336 Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Leu 100 105 110 tat cgg tcg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa cga act gtg 384 Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 115 120 125 gct gca cca tct gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa 432 Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 130 135 140 tct gga act gcc tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga 480 Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 145 150 155 160 gag gcc aaa gta cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac 528 Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 165 170 175 tcc cag gag agt gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc 576 Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 180 185 190 ctc agc agc acc ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa 624 Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 195 200 205 gtc tac gcc tgc gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca 672 Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 210 215 220 aag agc ttc aac agg gga gag tgt tag 699 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 4 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala 20 25 30 Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val 35 40 45 Gly Thr Ser Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser 85 90 95 Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Leu 100 105 110 Tyr Arg Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 115 120 125 Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 130 135 140 Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 145 150 155 160 Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 165 170 175 Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 180 185 190 Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 195 200 205 Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 210 215 220 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> C-term amidation <400> 5 Phe Lys Tyr Lys 1 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Phe Lys Tyr Lys 1 <210> 7 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> N-term acetylation <220> <223> C-term amidation <400> 7 Lys Tyr Lys Lys 1 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide linker <400> 8 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide linker <400> 9 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 10 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 10 ttctctctgc agagcccaaa tcttgtggtg gcggttcaca gctggttgtg actcag 56 <210> 11 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 11 agcctccgcc tcctgatccg ccacctccta agatcttcag tttggttcc 49 <210> 12 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 12 ccggaggcgg tgggagtgag gtgaaactgc aggag 35 <210> 13 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 13 aaccttgagc tcggccgtcg cactcatgag gagacggtga ccg 43 <210> 14 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 14 tccccgggta aaggtggcgg ttcacagctg 30 <210> 15 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 15 gagctcggcc gtcgcac 17 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 1 5 10 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Lys Asp Thr Leu Met Ala Ser Arg Thr Pro Glu 1 5 10 <210> 18 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Primer <400> 18 aaggacaccc tcatggctag ccggacccct gag 33 <210> 19 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 19 Lys Tyr Lys Lys 1

Claims (67)

  1. (a) IgG의 인간 경첩 불변영역;
    (b) 두개의 scFvs; 및
    (c) 두개의 Fvs;
    를 적어도 포함하며, 상기 불변 영역은 CH2 도메인에 하나 이상의 아미노산 변이를 포함하는 것을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체(mutant bispecific antibody).
  2. 제 1항에 있어서, 상기 scFvs 및 Fvs는 CDR-이식된 쥐의 scFvs 및 Fvs인 것을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 scFvs 및 Fvs는 인간화된 또는 인간의 것임을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 경첩 불변영역은 253 위치의 이소류신이 알라닌으로 교체된 변이, 또는 아미노산 변이가 알라닌으로의 변이와 동일하거나 그 이상으로 혈액 제거를 향상시키는 류신 이외의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 Fvs는 hMN14-IgG로부터 유도되었으며 상기 scFvs는 734scFv에서 유도된 것임을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 scFvs는 1가의 표적 가능한 구성체(targetable construct)와 결합하는 것을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 scFvs는 2가의 표적 가능한 구성체(targetable construct)와 결합하는 것을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 Fvs는 표적 세포에서 에피토프(epitope)와 결합하는 것을 특징으로 하는 변이 양특이성 항체.
  9. (a) 피검자에게 제 1항에 의한 변이 양특이성 항체를 피검자(subject)에게 투여하는 단계로서, 상기 Fvs는 질병 또는 그러한 상태와 결합된 표시물질(marker substance)로 지향되는 상기 변이 양특이성 항체를 투여하는 단계;
    (b) 선택적으로, 상기 피검자에게 제거용 조성물(clearing composition)을 투여하고, 상기 조성물이 순환계에서 비부위화된(non-localized) 항체 또는 항체 단편을 제거하도록 하는 단계; 및
    (c) 상기 피검자에게 2가 합텐(hapten)을 포함하는 표적 가능한 구성체를 투여하되, 상기 양쪽의 합텐 부분은 제 1항에 의한 변이 양특이성 항체의 단일 분자의 두 개의 scFvs에 결합하고, 상기 표적 가능한 구성체는 진단용 또는 치료용의 양이온(cation) 및/또는 하니 이상의 킬레이트 되거나 또는 화학적으로 결합된 치료제 또는 진단제제를 더 포함하는 표적 가능한 구성체를 투여하는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단 또는 치료, 또는 질병이나 혹은 질병으로 발전된 가능성이 있는 상태의 진단 또는 치료 방법.
  10. 제 10항에 있어서, 상기 변이 양특이성 항체는, 상기 질병 또는 상태를 치료하기 위하여 사용되는 적어도 하나의 지료제를 투여하기 전, 투여하는 동안 또는 투여 후에 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 9항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 효소를 포함하며, 상기 방법은 피검자에게 하기의 제제를 더 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (a) 상기 효소가 표적 부위에서 프로드럭(prodrug)을 약제(drug)로 변형시킬 수 있을 때, 프로드럭; 또는
    (b) 상기 피검자의 몸에서 해독되어 독성이 덜한 중간체(intermediate)를 형성할 수 있는 약제로서, 상기 효소가 상기 해독된 중간체를 독성이 있는 형태로 재변형 시킬 수 있고, 그 결과 표적 부위에서 상기 약제의 독성을 증가시키르 수 있는 특성을 갖는 약제, 또는
    (c) 상기 피검자의 몸에서 자연적인 경로에 의하여 활성되고 또한 독성이 덜한 중간체로의 변형을 거치는 약제로서, 상기 효소는 상기 해독된 중간체를 독성이 있는 형태로 재변형 시킬 수 있고, 그 결과 표적 부위에서 상기 약제의 독성을 증가시키르 수 있는 특성을 갖는 약제.
  12. 제 11항에 있어서, 상기 프로드럭은 에피루비신 글루쿠로나이드(epirubicin gulcuronide), CPT-11, 에토포시드 글루코로나이드(etoposide gulcuronide), 다우노미신 글루쿠로나이드(daunomicin gulcuronide) 및 독소루비신 글루쿠로나이드(doxorubicin gulcuronide)로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 9항에 있어서, 상기 진단제는 25-4,000 keV의 감마 입자 및/또는 양전자를 방출하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 9항에 있어서, 상기 진단제는18F,52Fe,62CU,64CU,67CU,67Ga,68Ga,86Y,89Zr,94mTc,94Tc,99mTc,111In,123I,124I,125I,131I,154-158Gd,175Lu,32P,188Re 및90Y로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 9항에 있어서, 상기 방사활성 동위원소는 양전자-방출 단층 사진(positron-emission tomography, PET)를 수행하기 위하여 사용되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 9항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 자기공명영상(magnetic resonance imaging)에 사용되어 영상을 향상 시키기 위한 제제를 하나 이상 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 16하에 있어서, 상기 제제는 Mn, Fe 및 Gd로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 9항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 초음파영상(ultrasound imaging)에 사용되어 영상을 향상시키기 위한 제제를 하나 이상 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 18항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 리포좀으로서, 상기 리포좀의 외부 표면에 2가의 DPTA-펩피트가 공유결합 형태로 부착되어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 19항에 있어서, 상기 리포좀은 가스로 채워져 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제 9항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 질병 조직을 사멸시키기에 유용한 하나 이상의 방사성 동위원소를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제 21항에 있어서, 상기 방사성 동위원소의 에너지 범위는 60 내지 700keV인 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 21항에 있어서, 상기 방사성 동위원소는32P,33P,47Sc,64Cu,67Cu,67Ga,90Y,111Ag,111In,125I,131I,142Pr,153Sm,161Tb,166Dy,166Ho,177Lu,186Re,188Re,189Re,212Pb,212Bi,213Bi,211At,223Ra 및225Ac 또는 이들의 결합으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 21항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는10B 원자를 포함하고 있으며, 상기 방법은 상기 질병 조직에서 부위화된(localized) 상기 브롬 원자를 방사하는 단계를 더 포함하여 상기 질병 조직의 BNCT에 영향을 미치는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 9항에 있어서, 상기 치료제는, 약제, 독소, 호르몬, 효소, 면역조절자, 킬레이트, 브롬 화합물, 광활성제, 염료 또는 방사성 동위원소인 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 21항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 하나 이상의 독소(toxin)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 26항에 있어서, 상기 독소는 리신(ricin), 아브린(abrin), 리보뉴클레아제, DNase Ⅰ, 포도상구균 장독소-A(Staphylococcalenterotoxin-A), 미국자리공(pokeweed) 항바이러스성 단백질, 겔로닌(gelonin), 디프테리아 독소(diphtherin toxin), 녹농균 외독소(Pseudomanasexotoxin), 녹농균 내독소(Pseudomanasendotoxin) 또는 이들의 결합으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 9항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 하나 이상의 약제(drug)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 28항에 있어서, 상기 약제는 질소 머스타드(nitrogen mustards), 에틸렌이민 유도체, 알킬설포네이트, 니트로소우레아(nitrosoureas), 트리아젠, 엽산 동족체, 안트라시클린, 탁산(taxanes), COX-2 억제제, 피리미딘 동족체, 퓨린 동족체, 항생제, 효소, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxins), 백금 배위착물, 빈카(vinca) 알카노이드, 치환된 우레아, 메틸 히드라진 유도체, 부신피질 억제제, 길항체, 엔도스타틴(endostatin), 탁솔, 캠프토테신(camptothecins), 독소루비신(doxorubicin) 및 이들의 동족체, 및 이들의 결합으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
  30. 제 9항에 있어서, 상기 표적 가능한 구조체는 하나 이상의 광선역학요법(photodynamic therapy)을 위한 제제를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 30항에 있어서, 상기 광선역학요법을 위한 제제는 감광제(photosensitizer)인 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제 31항에 있어서, 상기 감광제는 베조포르피린 단일산 고리 A(benzoporphyrin monoacid ring A; BPD-MA), 주석 에티로퓨퓨린(tin etiopurpurin; SnET2), 술폰화 알루미늄 프탈로시아닌(sulfonated almunium phthalocyanine; AISPc) 및 루테티움 텍사피린(lutetium texaphyrin; Lutex)로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 9항에 있어서, 상기 표적된 조직은 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 11항에 있어서, 상기 표적된 조직은 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 33항 또는 34항에 있어서, 상기 종양은, 콜론-특이적인 항원-p(colon- specific antigen-p; CSAp), 암배아성 항원(carcinoembryonic antigen; CEA), CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38 CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD66a-e, CD74, CD80, CD126, B7, HLA-DR, Ia, It, HM1.24, MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, Tag72, PSMA, EGP-1, EGP-2, PSA, AFP, HCG, HCG-베타, PLAP, PAP, 히스톤, VEGF, 태반 성장인자(PIGF), S100, EGFR, 인슐린류 성장인자(insulin-like growth factor), HER2/neu, 장기친화성(organotropic) 호르몬, 옹코진(oncogene) 생성물 및 사이토케라틴(cytokeratin)으로 이루어진 군에서 선택된 항원을 생산하거나 그러한 항원과 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 9항 또는 제 11항에 있어서, 상기 변이 양특이성 항체는 그룹Ⅲ 항-CEA 항체(Class Ⅲ anti-CEA antibody)의 Fv와 합체(incorporate)하는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제 9항 또는 제 11항에 있어서, 상기 변이 양특이성 항체는 Mab의 scFv와 합체(incorporate)하는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 9항 또는 제 11항에 있어서, 상기 질병은 면역 조절곤란 질환(immune dysregulation disease), 자가면역 질환, 기관이식 거부(organ graft rejection), 심장혈관 질환(cardiovascular disease), 신경계 질환(neurological disease) 또는이식편 대 숙주 질환(graft vs. host disease)인 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제 38항에 있어서, 상기 자가면역질환은 acute idiopathic thrombocytopenic purpura, chronic idiopathic thrombocytopenic purpura, dermatomyositis, Sydenham's chorea, myasthenia gravis, systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, rheumatic fever, polyglandlar syndromes, bullous pemphigoid, diabetes mellitus, Henoch-Schonlein purpura, poststreptococcAnephritis, erythema nodosurn, Takayasu's arteritis, Addison's disease, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, sarcoidosis, ulcerative colitis, erythema multiforme, IgA nephropathy, polyarteritis nodosa, ankylosing spondylitis, Goodpasture's syndrome, thromboangitisubiterans, Sjogren's syndrome, primary biliary cirrhosis, Hashimoto's thyroiditis, thyrotoxicosis, scleroderma, chronic active hepatitis, polymyositis/dermatomyositis polychondritis, parnphigus vulgaris, Wegener's granulomatosis, membranous nephropathy, amyrotrophic lateral sclerosis, tabes dorsalis, giant cell arteritis/ polymyalgia, perniciousanernia, rapidly progressive glomerulonephritis 및 fibrosing alveolitis 로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  40. 제 9항 또는 11항에 있어서, 상기 질병은 곰팡이(fungus), 바이러스(viurs), 기생충(parasite) 또는 박테리아(bacterium)에서 유발되며, 상기 변이 양특이성체의 Fv는 상기 곰팡이(fungus), 바이러스(viurs), 기생충(parasite) 또는 박테리아(bacterium)를 표적화 하는 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 제 40항에 있어서, 상기 바이러스는 인간면역결핍바이러스(HIV), 헤르페스(herpes)바이러스, 시토메갈로바이러스(cytomegalovirus), 광견병(rabies)바이러스, 인플루엔자 바이러스, B형 간염 바이러스, 센다이(Sendai)바이러스, 고양이(feline)백혈병 바이러스, 레오(Reo)바이러스, 폴리오(polio)바이러스, 인간혈청파르보상 바이러스, 원숭이(simian) 바이러스 40, 호흡기합포체 바이러스, 쥐 유방종양 바이러스, 수두-대상포진 바이러스, 뎅기(Dengue)바이러스, 풍진(rubella)바이러스, 홍역(measles)바이러스, 아데노바이러스, 인간 T-세포 백혈병 바이러스, 엡슈타인-바르(Epstein-Barr)바이러스, 쥐 백혈병 바이러스, 멈프스(mumps)바이러스, 수포성구염 바이러스, 신드비스(Sindbis)바이러스, 림포구맥락수막염 바이러스, wart바이러스 및 블루텅(blue tongue)바이러스로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  42. 제 41항에 있어서, 상기 박테리아는 탄저균 바실러스(Anthrax bacillus),스트렙토코커스 아갈라스티아(Streptococcus agalactiae),레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophilia),스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 대장균(Escherichia coli), 임균(Neisseria gonorrhoeae), 수막염균(Neisseria meaningitidis), 폐렴알균(Pneumococcus), 헤미필루스 인플루엔자 B, 매독균(Treponema pallidum), 라임병 스피로케테스(Lyme disease spirochetes), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 나병균(Mycobacterium leprae),브루셀라 아보르투스(Brucella abortus), 결핵균(Mycobacterium tuberculosis) 및 파상풍(Tetanus)독소로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  43. 제 40항에 있어서, 상기 병원균은 원생동물(protozoan)인 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제 43항에 있어서, 상기 원생동물(protozoan)은 Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Toxoplasma gondii, Trypanosoma rangeli, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rhodesiensei, Trypanosoma brucei, Schistosoma mansoni,Schistosoma japanicum, Babesia bovis,Elmeria tenella, Onchocerca volvulus, Leishmania tropica,Trichinella spiralis,Onchocerca volvulus, Theileria parva, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia saginata, Echinococcus granulosus 및 Mesocestoides corti로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
  45. 제 40항에 있어서, 상기 기생충은 연충(helminth) 또는 말라리아 기생충(malarial parasite)임을 특징으로 하는 방법.
  46. 제 40항에 있어서, 상기 박테리아는 마이코플라즈마(mycoplasma)인 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제 46항에 있어서, 상기 마이코플라즈마(mycoplasma)는 Mycoplasma arthritidis, M. hyorhinis, M. orale, M. arginini, Acholeplasma laidlawii, M. salivarum 및 M.pneumoniae로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
  48. 제 40항에 있어서, 상기 곰팡이는 히스토플라스마(Histoplasma capsulatum), 블라스토마이세스(Blastomyces dermatitidis), 콕시디오이데스(Coccidioides immitis) 및 칸디다종(species of Candida)으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
  49. 제 9항 또는 제 11항에 있어서, 상기 조직은 일반 엑토픽 조직(normal ectopic tissue)인 것을 특징으로 하는 방법.
  50. 제 49항에 있어서, 상기 조직은 난소(ovary), 흉선(thymus), 부갑상선(parathyroid) 또는 비장(spleen)으로부터 유래된 조직임을 특징으로 하는 방법.
  51. 제 9항 또는 제 11항에 있어서, 상기 피검자는 포유류인 것을 특징으로 하는 방법.
  52. 제 9항 또는 제 11항에 있어서, 상기 포유류는 인간 또는 영장류인 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 제 51항에 있어서, 상기 포유류 피검자는 설치류(rodent), 라가모르포(lagamorphs), 소과의 동물(bovines), 양과의 동물(ovines), 염소과의 동물(caprines), 돼지과의 동물(porcines), 말과의 동물(equines), 개과의 동물(canines), 고양이과의 동물(felines), 가금류(domestic fowl), 유제류(ungulates) 및 곰(bear)를 포함하는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 제 9항에 있어서, 상기 방법은 질병 조직을 동정(identify)하기 위한 내부 기능적인(intraoperative) 진단에 적용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  55. 제 9항에 있어서, 상기 방법은 질병 조직을 동정(identify)하기 위한 내시경 진단(endoscopic diagnosis)에 적용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 제 9항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서, 처방된 진단 또는 치료의 전, 중간 또는 후에 제 2의 치료제가 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제 56항에 있어서, 상기 제 2의 치료제는 약제, 처리되지 않은 항체, 면역조절자 또는 약제, 방사성 동위원소, 면역조절자 또는 독소를 함유하는 항체 접합체인 것을 특징으로 하는 방법.
  58. (a) 제 9항에 의한 변이 양특이성 항체
    (b) 선택적으로, 제 9항에 의한 제거제(clearing agent); 및
    (c) 제 11항에 의한 표적 가능한 구조체;
    를 포함하는, 피검자에게서 질병이 있는 조직을 치료 또는 동정하기 위한 키트(kit).
  59. (a) 제 11항에 의한 변이 양특이성 항체
    (b) 선택적으로, 제 11항에 의한 제거제(clearing agent);
    (c) 제 11항에 의한 표적 가능한 구조체; 및
    (d) 제 11항에 의한 프로드럭
    을 포함하는, 피검자에게서 질병이 있는 조직을 치료 또는 동정하기 위한 키트(kit).
  60. 제 25항에 있어서, 상기 면역조절자는 사이토카인(cytokine), 줄기세포 성장인자(stem cell growth factor), 림포독소(lympotoxin), 조혈인자(hematopoietic factor), 콜로니자극인자(colony stimulating factor; CSF), 인터페론(interferon; IFN), 적혈구생성촉진인자(erythropoietin), 혈소판증식인자(thromopoietin) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
  61. 제 60항에 있어서, 상기 림포독소(lympotoxin)는 종양괴사인자(tumor necrosis factor; TNF)인 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 제 60항에 있어서, 상기 조혈인자(hematopoietic factor)는 인터류킨(IL)인 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 제 60항에 있어서, 상기 콜로니자극인자(CSF)는 과립구-콜로니자극인자(granulocyte-colony stimulating facto; G-CSF) 또는 과립구 매크로파아지-콜로니자극인자(granulocyte macrophage-colony stimulating factor; GM-CSF)인 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 제 60항에 있어서, 상기 인터페론(IFN)은 인터페론-α, -β 또는 -γ인 것을 특징으로 하는 방법.
  65. 제 60항에 있어서, 상기 줄기세포 성장인자는 S1 인자(factor)인 것을 특징으로하는 방법.
  66. 제 25항에 있어서, 상기 면역조절자는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, 인터페론-γ(interferon-γ), TNF-α 또는 이들의 결합임을 특징으로하는 방법.
  67. 제 38항에 있어서, 상기 신경계 질환(neurological disease)은 알츠하이머 병(Alzheimer's Diseas)인 것을 특징으로 하는 방법.
KR10-2004-7013663A 2002-03-01 2003-03-03 제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들 KR20040088572A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36103702P 2002-03-01 2002-03-01
US60/361,037 2002-03-01
PCT/GB2003/000871 WO2003074569A2 (en) 2002-03-01 2003-03-03 Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20040088572A true KR20040088572A (ko) 2004-10-16

Family

ID=27789060

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2004-7013663A KR20040088572A (ko) 2002-03-01 2003-03-03 제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20040018557A1 (ko)
EP (1) EP1487879B1 (ko)
JP (1) JP2006502091A (ko)
KR (1) KR20040088572A (ko)
AU (1) AU2003209446B2 (ko)
CA (1) CA2478011C (ko)
WO (1) WO2003074569A2 (ko)

Families Citing this family (279)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7829084B2 (en) * 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
WO2004003019A2 (en) * 2002-06-28 2004-01-08 Domantis Limited Immunoglobin single variant antigen-binding domains and dual-specific constructs
EP1399484B1 (en) * 2001-06-28 2010-08-11 Domantis Limited Dual-specific ligand and its use
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
US7696320B2 (en) * 2004-08-24 2010-04-13 Domantis Limited Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor
US9321832B2 (en) * 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
WO2004042017A2 (en) 2002-10-31 2004-05-21 Genentech, Inc. Methods and compositions for increasing antibody production
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
ATE517638T1 (de) * 2003-01-31 2011-08-15 Immunomedics Inc Verfahren und zubereitungen zum verabreichen von therapeutischen und diagnostischen mitteln
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
WO2005004809A2 (en) * 2003-07-01 2005-01-20 Immunomedics, Inc. Multivalent carriers of bi-specific antibodies
EP1697415A1 (en) 2003-11-12 2006-09-06 Biogen Idec MA Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
US8821559B2 (en) 2004-08-27 2014-09-02 Codman & Shurtleff, Inc. Light-based implants for treating Alzheimer's disease
WO2006028936A2 (en) * 2004-09-02 2006-03-16 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
EP1853313B1 (en) 2005-03-03 2018-01-24 Immunomedics Inc. Humanized l243 antibodies
US7288108B2 (en) * 2005-03-14 2007-10-30 Codman & Shurtleff, Inc. Red light implant for treating Parkinson's disease
USRE47266E1 (en) 2005-03-14 2019-03-05 DePuy Synthes Products, Inc. Light-based implants for treating Alzheimer's disease
KR101203505B1 (ko) * 2005-04-19 2012-11-21 가부시키가이샤 에바라 세이사꾸쇼 기판 처리 장치 및 기판 처리 방법
US7351253B2 (en) * 2005-06-16 2008-04-01 Codman & Shurtleff, Inc. Intranasal red light probe for treating Alzheimer's disease
SI1912675T1 (sl) 2005-07-25 2014-07-31 Emergent Product Development Seattle, Llc zmanjšanje števila celic B z uporabo molekul, ki se specifično vežejo na CD37 in CD20
US8167920B2 (en) * 2005-10-31 2012-05-01 Codman & Shurtleff, Inc. Intranasal delivery of compounds that reduce intrancranial pressure
BRPI0619249A2 (pt) 2005-11-30 2011-09-20 Abbott Lab anticorpos anti-globulÈmeros-aß, frações que se ligam a antìgeno destes, hibridomas correspondentes, ácidos nucléicos, vetores, células hospedeiras, métodos de produzir os ditos anticorpos, composições compreendendo os ditos anticorpos, usos dos ditos anticorpos e métodos de usar os ditos anticorpos
CN101506236B (zh) 2005-11-30 2012-12-12 雅培制药有限公司 抗淀粉样β蛋白的单克隆抗体及其用途
EP1957536A2 (en) * 2005-12-01 2008-08-20 Domantis Limited Noncompetitive domain antibody formats that bind interleukin 1 receptor type 1
EP2674440B1 (en) 2005-12-16 2019-07-03 IBC Pharmaceuticals, Inc. Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies
KR101496433B1 (ko) 2006-06-07 2015-02-26 바이오얼라이언스 씨.브이. 암세포 상에서 발현되는 ｃｄ-43 및 ｃｅａ 상의 에피토프를 함유하는 탄수화물을 인식하는 항체 및 이를 이용하는 방법
MX363905B (es) * 2006-06-12 2019-04-08 Aptevo Res & Development Llc Proteinas de union multivalentes monocatenarias con funcion efectora.
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
EP2486928A1 (en) 2007-02-27 2012-08-15 Abbott GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
NZ579297A (en) * 2007-02-28 2012-03-30 Schering Corp Combination therapy comprising an il-23 antagonist and a cytokine antagonist for treatment of immune disorders
EP2164960A2 (en) * 2007-05-25 2010-03-24 North Carolina State University Viral nanoparticle cell-targeted delivery platform
MX2009012968A (es) * 2007-06-06 2010-04-01 Domantis Ltd Polipeptidos, dominios variables de anticuerpo y antagonistas.
AU2008287195A1 (en) * 2007-07-06 2009-02-19 Emergent Product Development Seattle, Llc Binding peptides having a C-terminally disposed specific binding domain
AU2008338313B2 (en) 2007-12-18 2014-01-16 Bioalliance C.V. Antibodies recognizing a carbohydrate containing epitope on CD-43 and CEA expressed on cancer cells and methods using same
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9320914B2 (en) 2008-03-03 2016-04-26 DePuy Synthes Products, Inc. Endoscopic delivery of red/NIR light to the subventricular zone
AU2009228158B2 (en) 2008-03-27 2014-02-27 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting PDGFRbeta and VEGF-A
EP2132228B1 (en) * 2008-04-11 2011-06-22 Emergent Product Development Seattle, LLC Cd37 immunotherapeutic and combination with bifunctional chemotherapeutic thereof
CN102341411A (zh) 2008-12-31 2012-02-01 比奥根艾迪克Ma公司 抗-淋巴细胞毒素抗体
US8716448B2 (en) 2009-02-03 2014-05-06 Amunix Operating Inc. Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same
US20100198316A1 (en) * 2009-02-04 2010-08-05 Richard Toselli Intracranial Red Light Treatment Device For Chronic Pain
JP5501439B2 (ja) * 2009-04-02 2014-05-21 ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト 完全長抗体と単鎖Ｆａｂフラグメントとを含む多重特異的抗体
KR101456326B1 (ko) 2009-04-07 2014-11-12 로슈 글리카트 아게 3가, 이중특이적 항체
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
CN104945509A (zh) 2009-09-16 2015-09-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 包含卷曲螺旋和/或系链的蛋白质复合体及其用途
HUE032166T2 (en) 2009-11-02 2017-09-28 Univ Washington Therapeutic nuclease preparations and methods
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
MX360403B (es) 2010-04-15 2018-10-31 Abbvie Inc Proteinas de union a amiloide beta.
EP2591006B1 (en) 2010-07-09 2019-04-24 Bioverativ Therapeutics Inc. Processable single chain molecules and polypeptides made using same
JP6147665B2 (ja) 2010-08-14 2017-06-14 アッヴィ・インコーポレイテッド アミロイドベータ結合タンパク質
CN103068846B9 (zh) 2010-08-24 2016-09-28 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 包含二硫键稳定性Fv片段的双特异性抗体
EP2655413B1 (en) 2010-12-23 2019-01-16 F.Hoffmann-La Roche Ag Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
EP2681239B8 (en) 2011-02-28 2015-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding proteins
EP2681240B1 (en) 2011-02-28 2017-08-16 F. Hoffmann-La Roche AG Monovalent antigen binding proteins
CA2833019A1 (en) 2011-04-22 2012-10-26 Emergent Product Development Seattle, Llc Prostate-specific membrane antigen binding proteins and related compositions and methods
KR102428875B1 (ko) 2011-04-29 2022-08-05 유니버시티 오브 워싱톤 스루 이츠 센터 포 커머셜리제이션 치료적 뉴클레아제 조성물 및 방법
WO2012163521A1 (en) * 2011-05-27 2012-12-06 Dutalys Removal of monomeric targets
WO2012170969A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Biogen Idec Ma Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
US9738707B2 (en) 2011-07-15 2017-08-22 Biogen Ma Inc. Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
CA2857721C (en) 2011-12-05 2022-05-31 X-Body, Inc. Pdgf receptor beta binding polypeptides
NZ626945A (en) 2012-01-12 2016-10-28 Biogen Ma Inc Chimeric factor viii polypeptides and uses thereof
BR112014019579A2 (pt) 2012-02-10 2019-10-15 Genentech, Inc Anticorpo de cadeia única, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo de cadeia única, heteromultímero e método de produção do heteromultímero
CN111548418A (zh) 2012-02-15 2020-08-18 比奥贝拉蒂治疗公司 因子viii组合物及其制备和使用方法
KR20190094480A (ko) 2012-02-15 2019-08-13 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 재조합 인자 viii 단백질
KR102367723B1 (ko) 2012-03-28 2022-02-28 사노피 브라디키닌 b1 수용체 리간드에 대한 항체
MX2014013637A (es) 2012-05-07 2015-02-05 Sanofi Sa Metodos para prevencion de la formacion de biopelicula.
WO2013175276A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
EP2858659B1 (en) 2012-06-08 2019-12-25 Bioverativ Therapeutics Inc. Procoagulant compounds
AU2013270683A1 (en) 2012-06-08 2014-12-11 Biogen Ma Inc. Chimeric clotting factors
WO2014001325A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof
RU2639287C2 (ru) 2012-06-27 2017-12-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ отбора и получения высокоселективных и мультиспецифичных нацеливающих групп с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные связывающие группировки, и их применения
EP3404105A1 (en) 2012-07-06 2018-11-21 Bioverativ Therapeutics Inc. Cell line expressing single chain factor viii polypeptides and uses thereof
PT2882450T (pt) 2012-07-11 2020-02-19 Bioverativ Therapeutics Inc Complexo de fator viii com xten e a proteína fator de von willebrand, e utilizações do mesmo
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
AU2013315499B2 (en) 2012-09-12 2018-08-09 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
SI3889173T1 (sl) 2013-02-15 2023-11-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimiran gen dejavnika VIII
EP2774930A1 (en) 2013-03-07 2014-09-10 Aptenia S.R.L. Metallocene compounds and labeled molecules comprising the same for in vivo imaging.
BR112015020885A2 (pt) 2013-03-11 2017-10-10 Genzyme Corp polipeptídeos de ligação hiperglicosilados
AU2014228938B2 (en) 2013-03-15 2019-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptide formulations
KR102033819B1 (ko) 2013-06-07 2019-10-17 노르딕 나노벡터 에이에스에이 상향조절 항원 발현 방법
EP3875106A1 (en) 2013-08-08 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. Purification of chimeric fviii molecules
PE20160244A1 (es) 2013-08-13 2016-05-10 Sanofi Sa Anticuerpos contra el inhibidor del activador de plasminogeno tipo 1 (pai-1) y usos de los mismos
TW201722994A (zh) 2013-08-13 2017-07-01 賽諾菲公司 胞漿素原活化素抑制劑-１（ｐａｉ-１）之抗體及其用途
TW202003554A (zh) 2013-08-14 2020-01-16 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
EP3903599A1 (en) 2013-09-25 2021-11-03 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
WO2015052230A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
US10988745B2 (en) 2013-10-31 2021-04-27 Resolve Therapeutics, Llc Therapeutic nuclease-albumin fusions and methods
WO2015069430A2 (en) * 2013-11-05 2015-05-14 Immunomedics, Inc. Humanized anti-ceacam5 antibody and uses thereof
WO2015070014A1 (en) 2013-11-08 2015-05-14 Biogen Idec Ma Inc. Procoagulant fusion compound
SI3091997T1 (sl) 2014-01-10 2022-10-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Himerni proteini faktorja VIII in njihova uporaba
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
ME03558B (me) 2014-03-14 2020-07-20 Novartis Ag Molekuli anti-lag-3 antiтela i njihove upotrebe
EP3593812A3 (en) 2014-03-15 2020-05-27 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
EP3129067B1 (en) 2014-03-19 2023-01-04 Genzyme Corporation Site-specific glycoengineering of targeting moieties
AU2015231155B2 (en) 2014-03-21 2020-11-12 X-Body, Inc. Bi-specific antigen-binding polypeptides
TWI726842B (zh) * 2014-04-07 2021-05-11 日商中外製藥股份有限公司 免疫活化抗原結合分子
MX2016014434A (es) 2014-05-13 2017-02-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno redirigida a celulas t para celulas que tienen funcion de inmunosupresion.
KR102127644B1 (ko) 2014-06-10 2020-06-30 삼성전자 주식회사 반도체 소자의 제조 방법
WO2016004113A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 Biogen Ma Inc. Optimized factor ix gene
US9777061B2 (en) 2014-07-21 2017-10-03 Novartis Ag Treatment of cancer using a CD33 chimeric antigen receptor
JP2017528433A (ja) 2014-07-21 2017-09-28 ノバルティス アーゲー 低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲの組み合わせ
US10174095B2 (en) 2014-07-21 2019-01-08 Novartis Ag Nucleic acid encoding a humanized anti-BCMA chimeric antigen receptor
WO2016014553A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
ES2781175T3 (es) 2014-07-31 2020-08-31 Novartis Ag Subconjunto optimizado de células T que contienen un receptor de antígeno quimérico
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
JP7084138B2 (ja) 2014-08-19 2022-06-14 ノバルティス アーゲー 癌処置に使用するための抗ｃｄ１２３キメラ抗原受容体（ｃａｒ）
CA2961636A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Boris ENGELS Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
EP3197481A1 (en) 2014-09-26 2017-08-02 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Stabilized adrenomedullin derivatives and use thereof
CA2964123C (en) 2014-10-09 2023-09-05 Genzyme Corporation Glycoengineered antibody drug conjugates
CU20170052A7 (es) 2014-10-14 2017-11-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1
PL3207130T3 (pl) 2014-10-14 2020-02-28 Halozyme, Inc. Kompozycje deaminazy adenozyny 2 (ada2), jej warianty i sposoby ich zastosowania
ES2764111T3 (es) 2014-12-03 2020-06-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos
US20180334490A1 (en) 2014-12-03 2018-11-22 Qilong H. Wu Methods for b cell preconditioning in car therapy
US11497767B2 (en) 2015-02-18 2022-11-15 Enlivex Therapeutics R&D Ltd Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
US11318163B2 (en) 2015-02-18 2022-05-03 Enlivex Therapeutics Ltd Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
US11000548B2 (en) 2015-02-18 2021-05-11 Enlivex Therapeutics Ltd Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
US11596652B2 (en) 2015-02-18 2023-03-07 Enlivex Therapeutics R&D Ltd Early apoptotic cells for use in treating sepsis
US11512289B2 (en) 2015-02-18 2022-11-29 Enlivex Therapeutics Rdo Ltd Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
US11304976B2 (en) 2015-02-18 2022-04-19 Enlivex Therapeutics Ltd Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
WO2017141243A1 (en) 2016-02-18 2017-08-24 Enlivex Therapeutics Ltd. Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
RU2021121771A (ru) 2015-04-08 2022-01-12 Новартис Аг Cd20 терапия, cd22 терапия и комбинированная терапия клетками, экспрессирующими химерный антигенный рецептор (car) к cd19
CN113106053A (zh) 2015-04-21 2021-07-13 恩立夫克治疗有限责任公司 治疗性汇集的血液凋亡细胞制剂与其用途
WO2016172583A1 (en) 2015-04-23 2016-10-27 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
WO2017019897A1 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
SI3317301T1 (sl) 2015-07-29 2021-10-29 Novartis Ag Kombinirane terapije, ki obsegajo molekule protitelesa na LAG-3
JP6909203B2 (ja) 2015-08-03 2021-07-28 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｉｘ因子融合タンパク質及びそれらの製造方法及び使用方法
CN115960230A (zh) 2015-08-07 2023-04-14 伊麦吉纳博公司 靶向分子的抗原结合构建体
US20190022092A1 (en) 2015-09-15 2019-01-24 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a BTK Inhibitor and a GITR Binding Molecule, a 4-1BB Agonist, or an OX40 Agonist
WO2017053469A2 (en) 2015-09-21 2017-03-30 Aptevo Research And Development Llc Cd3 binding polypeptides
JP6925278B2 (ja) 2015-11-18 2021-08-25 中外製薬株式会社 液性免疫応答の増強方法
JP6931329B2 (ja) 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
WO2017106810A2 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Novartis Ag Combination of c-met inhibitor with antibody molecule to pd-1 and uses thereof
JP2019503349A (ja) 2015-12-17 2019-02-07 ノバルティス アーゲー Ｐｄ−１に対する抗体分子およびその使用
US20210198368A1 (en) 2016-01-21 2021-07-01 Novartis Ag Multispecific molecules targeting cll-1
JP7217630B2 (ja) 2016-02-01 2023-02-03 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 最適化第ｖｉｉｉ因子遺伝子
BR112018067679A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-15 Novartis Ag células que expressam múltiplas moléculas do receptor de antígeno quimérico (car) e seu uso
WO2017165683A1 (en) 2016-03-23 2017-09-28 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
HRP20230457T1 (hr) 2016-04-15 2023-07-21 Novartis Ag Pripravci i postupci za selektivnu ekspresiju kimernih antigenskih receptora
EP3464375A2 (en) 2016-06-02 2019-04-10 Novartis AG Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells
JP7308034B2 (ja) 2016-07-01 2023-07-13 リゾルブ セラピューティクス， エルエルシー 最適化二重ヌクレアーゼ融合物および方法
US11091557B2 (en) 2016-07-14 2021-08-17 Genmab A/S Methods of producing multispecific antibodies against CD40 and CD137
AU2017295886C1 (en) 2016-07-15 2024-01-25 Novartis Ag Treatment and prevention of cytokine release syndrome using a chimeric antigen receptor in combination with a kinase inhibitor
US20190151365A1 (en) 2016-07-28 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies of chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors
US20190161542A1 (en) 2016-08-01 2019-05-30 Novartis Ag Treatment of cancer using a chimeric antigen receptor in combination with an inhibitor of a pro-m2 macrophage molecule
WO2018067992A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 Novartis Ag Chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
CA3045466A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
CA3044838A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of inducing immune tolerance to clotting factors
IL266972B2 (en) 2016-12-02 2024-04-01 Bioverativ Therapeutics Inc Methods for the treatment of hemophilic arthritis with the help of chimeric blood coagulation factors
KR20190104048A (ko) 2017-01-06 2019-09-05 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 (tnfrsf) 효능제를 사용한 종양 침윤 림프구 (til)의 확장 및 til과 tnfrsf 효능제의 치료 조합물
EP3565586A1 (en) 2017-01-06 2019-11-13 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes with potassium channel agonists and therapeutic uses thereof
EP4043485A1 (en) 2017-01-26 2022-08-17 Novartis AG Cd28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
CN110650974B (zh) 2017-02-10 2024-04-19 瑞泽恩制药公司 用于免疫-pet成像的放射性标记的抗-lag3抗体
WO2018160731A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Novartis Ag Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy
US20200239579A1 (en) 2017-03-09 2020-07-30 Genmab A/S Antibodies against pd-l1
MX2019011520A (es) 2017-03-31 2020-08-03 Genmab Holding B V Anticuerpos anti antigeno leucocito 37 (cd37) biespecificos, anticuerpos anti antigeno leucocito 37 (cd37) monoclonales y metodos de uso de los mismos.
EP3615055A1 (en) 2017-04-28 2020-03-04 Novartis AG Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
WO2019103857A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of peripheral blood lymphocytes (pbls) from peripheral blood
WO2018209115A1 (en) 2017-05-10 2018-11-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
WO2018237157A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag CD73 BINDING ANTIBODY MOLECULES AND USES THEREOF
CA3066747A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof
PE20200757A1 (es) 2017-07-11 2020-07-27 Compass Therapeutics Llc Anticuerpos agonistas que se unen a cd137 humano y sus usos
CN111163798A (zh) 2017-07-20 2020-05-15 诺华股份有限公司 用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途
US10730944B2 (en) 2017-07-24 2020-08-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-CD8 antibodies and uses thereof
SG11202000198QA (en) 2017-08-04 2020-02-27 Genmab As Binding agents binding to pd-l1 and cd137 and use thereof
KR20200035130A (ko) 2017-08-09 2020-04-01 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 핵산 분자 및 이의 용도
MX2020002070A (es) 2017-08-22 2020-03-24 Sanabio Llc Receptores solubles de interferon y usos de los mismos.
WO2019089753A2 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof
US20210179709A1 (en) 2017-10-31 2021-06-17 Novartis Ag Anti-car compositions and methods
CN107789631B (zh) * 2017-11-03 2021-03-16 合肥瀚科迈博生物技术有限公司 抗人ErbB2双表位抗体-药物偶联物及其应用
CA3081602A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies
EP3713961A2 (en) 2017-11-20 2020-09-30 Compass Therapeutics LLC Cd137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof
JP2021508104A (ja) 2017-12-15 2021-02-25 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の有益な投与を決定するシステム及び方法並びにその使用方法、並びに腫瘍浸潤リンパ球の有益な投与及びその使用方法
CA3090249A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
CA3090136A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Bioverativ Therapeutics, Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor viii
US20210137930A1 (en) 2018-02-13 2021-05-13 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with adenosine a2a receptor antagonists and therapeutic combinations of tils and adenosine a2a receptor antagonists
MX2020009975A (es) 2018-03-28 2020-10-12 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de fusion interleucina-2/receptor alfa de interleucina-2 y metodos de uso.
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
EP3784351A1 (en) 2018-04-27 2021-03-03 Novartis AG Car t cell therapies with enhanced efficacy
WO2019222682A1 (en) 2018-05-18 2019-11-21 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilia a
EP3797120A1 (en) 2018-05-21 2021-03-31 Compass Therapeutics LLC Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
WO2019226658A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Multispecific antigen-binding compositions and methods of use
US20210213063A1 (en) 2018-05-25 2021-07-15 Novartis Ag Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
US20210238289A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
EP3806962A1 (en) 2018-06-13 2021-04-21 Novartis AG Bcma chimeric antigen receptors and uses thereof
CA3104295A1 (en) 2018-06-19 2019-12-26 Atarga, Llc Antibody molecules to complement component 5 and uses thereof
PE20210632A1 (es) 2018-07-03 2021-03-23 Bristol Myers Squibb Co Formulaciones de fgf-21
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
BR112021002017A2 (pt) 2018-08-09 2021-05-11 Bioverativ Therapeutics Inc. moléculas de ácido nucleico e usos das mesmas para terapia genética não viral
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
CN113365698A (zh) 2018-10-04 2021-09-07 健玛保控股有限公司 包含双特异性抗cd37抗体的药物组合物
BR112021008549A2 (pt) 2018-11-05 2022-01-04 Iovance Biotherapeutics Inc Método de tratamento de carcinoma pulmonar de células não pequenas com uma população de linfócitos infiltrantes de tumor
CN113454111A (zh) 2018-11-06 2021-09-28 健玛保 抗体配制剂
US11046769B2 (en) 2018-11-13 2021-06-29 Compass Therapeutics Llc Multispecific binding constructs against checkpoint molecules and uses thereof
JP2022514315A (ja) 2018-12-20 2022-02-10 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与計画及び薬剤組み合わせ
AU2019400978A1 (en) 2018-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Extended low dose regimens for MDM2 inhibitors
JP2022516635A (ja) 2019-01-04 2022-03-01 リゾルブ セラピューティクス， エルエルシー ヌクレアーゼ融合タンパク質によるシェーグレン病の処置
KR20210129672A (ko) 2019-02-15 2021-10-28 노파르티스 아게 치환된 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체 및 이의 용도
US10871640B2 (en) 2019-02-15 2020-12-22 Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects
CA3124935A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP3927371A1 (en) 2019-02-22 2021-12-29 Novartis AG Combination therapies of egfrviii chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors
KR20210136050A (ko) 2019-03-01 2021-11-16 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 액상 종양으로부터의 종양 침윤 림프구의 확장 및 그의 치료 용도
MX2021011830A (es) 2019-03-29 2022-01-24 Atarga Llc Anticuerpo anti fgf23.
AU2020253455A1 (en) 2019-04-03 2021-11-04 Genzyme Corporation Anti-alpha beta TCR binding polypeptides with reduced fragmentation
EP3986918A1 (en) 2019-06-18 2022-04-27 Bayer Aktiengesellschaft Adrenomedullin-analogues for long-term stabilization and their use
US20210113634A1 (en) 2019-09-30 2021-04-22 Bioverativ Therapeutics Inc. Lentiviral vector formulations
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
KR20220103947A (ko) 2019-10-21 2022-07-25 노파르티스 아게 베네토클락스 및 tim-3 억제제를 사용한 조합 요법
CN114761037A (zh) 2019-11-26 2022-07-15 诺华股份有限公司 结合bcma和cd19的嵌合抗原受体及其用途
CN115052662A (zh) 2019-12-20 2022-09-13 诺华股份有限公司 抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途
EP4090762A1 (en) 2020-01-17 2022-11-23 Becton, Dickinson and Company Methods and compositions for single cell secretomics
MX2022008763A (es) 2020-01-17 2022-07-27 Novartis Ag Combinacion que comprende un inhibidor de tim-3 y un agente hipometilante para usarse en el tratamiento del sindrome mielodisplasico o leucemia mielomonocitica cronica.
WO2021155916A1 (en) 2020-02-04 2021-08-12 BioNTech SE Treatment involving antigen vaccination and binding agents binding to pd-l1 and cd137
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
WO2021173995A2 (en) 2020-02-27 2021-09-02 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
CN115515643A (zh) 2020-02-28 2022-12-23 建新公司 用于优化的药物缀合的经修饰的结合多肽
KR20220154757A (ko) 2020-03-18 2022-11-22 젠맵 에이/에스 B7h4에 결합하는 항체
JP2023531676A (ja) 2020-06-23 2023-07-25 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピぺリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与レジメン
EP4171614A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 Resolve Therapeutics, LLC Treatment of sjogren's syndrome with nuclease fusion proteins
MX2023000547A (es) 2020-07-16 2023-02-13 Novartis Ag Anticuerpos anti-betacelulina, fragmentos de los mismos, y moleculas de union multiespecificas.
WO2022026592A2 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Celltas Bio, Inc. Antibody molecules to coronavirus and uses thereof
CN111748040B (zh) * 2020-07-31 2021-09-28 杭州皓阳生物技术有限公司 多价抗体及其制备方法
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
US20230287088A1 (en) 2020-08-06 2023-09-14 BioNTech SE Binding agents for coronavirus s protein
EP4204020A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Advanced Accelerator Applications International S.A. Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4210747A1 (en) 2020-09-10 2023-07-19 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
JP2023541858A (ja) 2020-09-10 2023-10-04 ジェンマブ エー／エス 慢性リンパ球性白血病を治療するためのｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
JP2023546359A (ja) 2020-10-06 2023-11-02 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球療法によるｎｓｃｌｃ患者の治療
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022097065A2 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag ANTIBODY Fc VARIANTS
CA3198447A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Novartis Ag Combination therapies with chimeric antigen receptor (car)-expressing cells
CA3201818A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Maria Fardis Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with braf inhibitors and/or mek inhibitors
AU2021401302A1 (en) 2020-12-17 2023-07-06 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with ctla-4 and pd-1 inhibitors
US20240123067A1 (en) 2020-12-17 2024-04-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocyte therapies
TW202242085A (zh) 2020-12-31 2022-11-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 供自動生產腫瘤浸潤淋巴球的裝置和方法
TW202241508A (zh) 2021-01-29 2022-11-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 細胞介素相關之腫瘤浸潤性淋巴球組合物及方法
WO2022162569A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Novartis Ag Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof
WO2022187741A2 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor storage and cell culture compositions
CA3212439A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Michelle SIMPSON-ABELSON Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd69 selection and gene knockout in tils
EP4313122A1 (en) 2021-03-23 2024-02-07 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cish gene editing of tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
IL306072A (en) 2021-03-25 2023-11-01 Iovance Biotherapeutics Inc Methods and preparations for T-cell coculture potency assays and use with cellular therapy products
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
BR112023021665A2 (pt) 2021-04-19 2023-12-19 Iovance Biotherapeutics Inc Método para tratar um câncer, e, composição
WO2022234146A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Genmab A/S PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING BISPECIFIC ANTIBODIES BINDING TO B7H4 and CD3
WO2022245754A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Iovance Biotherapeutics, Inc. Pd-1 gene-edited tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
BR112023027006A2 (pt) 2021-06-21 2024-03-12 BioNTech SE Método para reduzir ou prevenir a progressão de um tumor ou tratar um câncer em um sujeito, e, agente de ligação
WO2023004074A2 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Method for cryopreservation of solid tumor fragments
CA3226942A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors
CA3231018A1 (en) 2021-09-09 2023-03-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating til products using pd-1 talen knockdown
WO2023044483A2 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
CA3232700A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Rafael CUBAS Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
WO2023057571A1 (en) 2021-10-08 2023-04-13 Genmab A/S Antibodies binding to cd30 and cd3
CA3235824A1 (en) 2021-10-27 2023-05-04 Frederick G. Vogt Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy
WO2023086803A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes
WO2023092004A1 (en) 2021-11-17 2023-05-25 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023147486A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads
TW202342548A (zh) 2022-02-07 2023-11-01 美商威特拉公司 抗獨特型(anti-idiotype)抗體分子及其用途
WO2023174521A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Genmab A/S Binding agents binding to epcam and cd137
WO2023196877A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
WO2023209568A1 (en) 2022-04-26 2023-11-02 Novartis Ag Multispecific antibodies targeting il-13 and il-18
WO2023220608A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with an il-15r agonist
WO2023220695A2 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
WO2024011114A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
WO2024030758A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
WO2024030976A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for crossing the blood brain barrier
WO2024062074A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Sanofi Biotechnology Humanized anti-il-1r3 antibody and methods of use
WO2024089609A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Ablynx N.V. Glycoengineered fc variant polypeptides with enhanced effector function

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3927193A (en) 1973-05-18 1975-12-16 Hoffmann La Roche Localization of tumors by radiolabelled antibodies
US4444744A (en) 1980-03-03 1984-04-24 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibodies to cell surface antigens
US4348376A (en) 1980-03-03 1982-09-07 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled anti-CEA antibody
US4361544A (en) 1980-03-03 1982-11-30 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibodies specific to intracellular tumor-associated markers
US4331647A (en) 1980-03-03 1982-05-25 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers
DE3008260A1 (de) 1980-03-04 1981-09-17 Siemens AG, 1000 Berlin und 8000 München Verfahren zum aufzeichnen von stroemungsgrenzschichten in fluessigen medien
US4818709A (en) 1983-01-21 1989-04-04 Primus Frederick J CEA-family antigens, Anti-CEA antibodies and CEA immunoassay
US4460459A (en) 1983-02-16 1984-07-17 Anschutz Mining Corporation Sequential flotation of sulfide ores
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
FR2604092B1 (fr) * 1986-09-19 1990-04-13 Immunotech Sa Immunoreactifs destines a cibler les cellules animales pour leur visualisation ou leur destruction in vivo
US5851527A (en) 1988-04-18 1998-12-22 Immunomedics, Inc. Method for antibody targeting of therapeutic agents
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5332567A (en) 1989-08-24 1994-07-26 Immunomedics Detection and treatment of infections with immunoconjugates
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993022332A2 (en) * 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
EP0643583B1 (en) 1992-05-06 2000-07-26 Immunomedics, Inc. Intraoperative, intravascular and endoscopic tumor and lesion detection and therapy
US6096289A (en) 1992-05-06 2000-08-01 Immunomedics, Inc. Intraoperative, intravascular, and endoscopic tumor and lesion detection, biopsy and therapy
US6217869B1 (en) * 1992-06-09 2001-04-17 Neorx Corporation Pretargeting methods and compounds
AU3272695A (en) 1994-08-12 1996-03-07 Immunomedics Inc. Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US5874540A (en) 1994-10-05 1999-02-23 Immunomedics, Inc. CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies
ATE458499T1 (de) * 1995-06-07 2010-03-15 Immunomedics Inc Verbesserte abgabe von diagnostischen und therapeutischen stoffen an einem zielort
US7052872B1 (en) * 1999-06-22 2006-05-30 Immunomedics, Inc. Bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy
DE69942148D1 (de) * 1998-06-22 2010-04-29 Immunomedics Inc Gebrauch von bispezifischen antikörpern in diagnose und therapie
ES2331644T3 (es) 1999-06-09 2010-01-12 Immunomedics, Inc. Inmunoterapia de trastornos autoinmunes usando anticuerpos cuya diana son celulas b.
CA2463616C (en) * 2001-10-15 2011-07-12 Immunomedics, Inc. Affinity enhancement agents
WO2005004809A2 (en) * 2003-07-01 2005-01-20 Immunomedics, Inc. Multivalent carriers of bi-specific antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
WO2003074569A3 (en) 2004-01-22
JP2006502091A (ja) 2006-01-19
WO2003074569A2 (en) 2003-09-12
AU2003209446B2 (en) 2008-09-25
US20090274649A1 (en) 2009-11-05
CA2478011A1 (en) 2003-09-12
AU2003209446A1 (en) 2003-09-16
US20040018557A1 (en) 2004-01-29
EP1487879A2 (en) 2004-12-22
CA2478011C (en) 2013-05-21
EP1487879B1 (en) 2012-12-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1487879B1 (en) Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
JP4455322B2 (ja) 二重特異性抗体ならびにキャリアペプチドと活性薬剤を含むハプテン構築物を用いる薬物プレターゲッティング
AU2010257348B2 (en) Production and use of novel peptide-based agents for use with bi-specific antibodies
US7414121B2 (en) Chimeric, human and humanized anti-CSAp monoclonal antibodies
JP4937751B2 (ja) Ｄ−アミノ酸ペプチド
AU2002256025A1 (en) Production and use of novel peptide-based agents for use with bi-specific antibodies

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid